(57)【要約】【課題】血液中の血液細胞の細胞機能測定において、血液を採取した後すぐに測定を実施しない場合でも、採血直後に測定した結果と同様の測定結果を得ることを可能とする細胞機能測定方法を提供する。【解決手段】血液中の血液細胞の細胞機能を測定する方法であって、採血された血液を０〜２１℃の低温に保存する工程と、測定に先立って低温保存した血液を体温に近い温度に加温し、低温保存中に低下した細胞活動度を回復させる工程と、細胞活動度を回復させた後、血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる工程と、産生された生理活性物質量を測定する工程とを備える、細胞機能測定方法。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液中の血液細胞の細胞機能を測定する方法であって、
採血された血液を０〜２１℃の低温に保存する工程と、
測定に先立って低温保存した前記血液を体温に近い温度に加温し、低温保存中に低下した細胞活動度を回復させる工程と、
細胞活動度を回復させた後、血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる工程と、
産生された生理活性物質量を測定する工程とを備えることを特徴とする、細胞機能測定方法。  
【請求項２】
前記低温に保存する工程において血漿中カリウム濃度が増加され、
前記細胞活動度を回復させる工程において血漿中カリウム濃度が減少され、
前記細胞活動度の回復する度合いが血漿中カリウム濃度によって表わされることを特徴とする、請求項１に記載の細胞機能測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液中の細胞機能を測定する方法に関し、より詳細には、採取した血液を低温で保存した後に測定が行なわれ、信頼性に優れた測定結果を得ることを可能とする細胞機能測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近の免疫学の研究により、血液細胞である顆粒球、単球、マクロファージ、リンパ球等の白血球は、血液中や各臓器、器官において、炎症反応、免疫反応などの種々の生体防御反応において様々な役割を担っていることが明らかになってきている。これらの細胞は、感染症；肝炎や腎炎などの炎症性疾患；慢性関節リウマチや喘息などの免疫・アレルギー性疾患；癌などの種々の病態において重要な働きをしており、病態の変動と共にこれらの細胞の機能が抑制されたり、増強されたりすることも知られている。また、これらの疾患の治療に、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫増強剤、抗癌剤等の種々の薬剤が用いられており、その際にもこれらの細胞の機能が抑制されたり、または増強されたりすることもまた知られている。そのため、各種疾患の病態や薬剤の効果あるいは副作用を把握し、治療指針や薬剤の投与量及びタイミングを決定するために、これらの細胞の機能を調べることが重要である。
【０００３】
従来、病院の検査室や検査センターでは、上記のような理由から、このような細胞機能を測定するため、顆粒球貪食機能試験、顆粒球殺菌能（活性酸素産生能）試験、リンパ球幼若化試験等が行われてきた。また、最近では、フローサイトメトリー装置と各種免疫担当細胞表面抗原に対する蛍光標識モノクローナル抗体を用いた表面抗原試験等が行われるようになってきた。
【０００４】
しかしながら、上記の試験法には、細胞分離、細胞培養、顕微鏡測定等の特殊な技術が要求され、測定に時間がかかり、ＲＩ施設やフローサイトメトリーなどの高価な装置が必要であった。
【０００５】
最近では、従来の試験法を改良した方法として、血液や血液から分離した白血球からのサイトカイン産生機能を調べる種々の方法も報告されている。例えば、下記の特許文献１〜３には、血液にリポ多糖（ＬＰＳ）やレクチンを反応させ、産生誘導された腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）などのサイトカインを測定する方法が開示されている。
【０００６】
ところで、細胞機能の測定に際しては、血液を採取した後すぐに測定を実施できない場合があり、採血した血液を一定期間保存した後に細胞機能の測定が行なわれることがあった。この場合、採血直後に細胞機能を測定した結果と、採血した血液を一定期間保存した後に細胞機能を測定した結果との相関が十分に得られないことがあった。
【０００７】
特許文献１〜３には、採血後すぐに細胞機能を測定を実施しない場合において、血液検体の保存方法と、保存後の細胞機能の詳細な測定方法は示されていない。
【０００８】
他方、下記の特許文献４には、採血された血液を低温で保存し、低温で保存された血液を測定に先立って体温に近い温度に加温してから血液細胞と刺激剤（例、エンドトキシン）とを反応させて生理活性物質（例、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α））を産生させる細胞機能測定方法が開示されている。
【０００９】
しかしながら、特許文献４に記載の細胞機能測定方法においても、採血直後に血液の細胞機能を測定した結果と、低温保存した後の血液の細胞機能を測定した結果との相関が十分に得られないことがあった。
【特許文献１】特表平１−５０３３３１号公報
【特許文献２】特開平２−１９６９６１号公報
【特許文献３】特開平３−２８５６９２号公報
【特許文献４】特開平１１−１４２４０１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、血液中の血液細胞の細胞機能測定において、血液を採取した後すぐに測定を実施しない場合でも、採血直後に測定した結果と同様の測定結果を得ることを可能とする細胞機能測定方法を提供することにある。  
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、血液中の血液細胞の細胞機能を測定する方法であって、採血された血液を０〜２１℃の低温に保存する工程と、測定に先立って低温保存した血液を体温に近い温度に加温し、低温保存中に低下した細胞活動度を回復させる工程と、細胞活動度を回復させた後、血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる工程と、産生された生理活性物質量を測定する工程とを備えることを特徴とする。  
【００１２】
本発明に係る細胞機能測定方法のある特定の局面では、低温に保存する工程において血漿中カリウム濃度が増加され、細胞活動度を回復させる工程において血漿中カリウム濃度が減少され、細胞活動度の回復する度合いが血漿中カリウム濃度によって表わされる。
【００１３】
以下、本発明の細胞機能測定方法について詳しく説明する。
【００１４】
本願発明者らは、血液中の血液細胞の細胞機能測定において、血液を採取した後すぐに測定を実施しない場合でも、採血直後に測定した結果と同様の測定結果が得られる細胞機能測定方法、特に血液検体の保存条件と保存後の測定条件について、鋭意研究を重ねた結果、上述した特許文献４（特開平１１−１４２４０１号公報）に記載されているように、単に、採血された血液を低温に保存し、低温保存された血液を測定に先立って体温近い温度に加温するだけでは、保存後の血液において、必ずしも採血直後に測定した結果と同様の測定結果を得ることができないことを見出した。
【００１５】
さらに、本願発明者らは、低温保存中に細胞活動度が低下することを見出し、加えて測定に先だって体温近い温度まで血液を加温することによって、低温保存により一旦低下した細胞活動度を可逆的に回復させることができ、この回復度合いと生理活性物質産生能、特にＬＰＳ刺激によるＴＮＦ−α産生能とが相関することを見出した。
【００１６】
また、本願発明者らは、低温保存中に特に血漿中カリウム濃度が増加することを見出し、加えて測定に先だって体温近い温度まで血液を加温することによって、低温保存により一旦増加した血漿中カリウム濃度を可逆的に減少させることができ、この血漿中カリウム濃度の増加量に対する減少量、すなわち血漿中カリウム濃度の回復度合いと生理活性物質産生能、特にＬＰＳ刺激によるＴＮＦ−α産生能とが相関することを見出した。
【００１７】
本発明では、採血された後、細胞機能の測定を行う前に、血液を低温に保存する。低温とは、体温よりも低い温度を指し、本発明では０〜２１℃、好ましくは４〜１５℃の低温で血液を保存する。
【００１８】
保存温度が０℃よりも低くなると、細胞が凍結してしまうため、採血直後と保存後の生理活性物質の産生量に差が生じるおそれがある。保存温度が２１℃を超えると、血液中のグルコース濃度の低下が著しく、血漿中カリウム濃度を可逆的に減少させることができなくなるため、採血直後と保存後との生理活性物質の産生量に差がでてしまう欠点がある。
【００１９】
血液を低温に保存する方法としては、血液を０〜２１℃に保つことができる方法であれば、特に限定されず、例えば、冷蔵庫内での保存、保冷剤を用いる方法、保冷箱を用いる方法などが挙げられる。
【００２０】
本発明では、測定に先立って低温で保存された血液を体温に近い温度に加温し、低温保存中に低下した細胞活動度を回復させる。本発明では、低温に保存する工程において血漿中カリウム濃度が増加され、細胞活動度を回復させる工程において血漿中カリウム濃度が減少され、細胞活動度の回復する度合いが血漿中カリウム濃度によって表わされることが好ましい。
【００２１】
低温で保存された血液を体温に近い温度に加温する際の加温温度としては、好ましくは３２〜４２℃、より好ましくは３５〜３９℃である。加温温度が３２℃未満であると、Ｎａ―Ｋ−ＡＴＰアーゼの酵素活性が低下するため、血漿中カリウム濃度の低下を可逆的に回復できなくなり、採血直後の血液を用いた場合よりも血液細胞からの生理活性物質の産生量が低くなる。また、加温温度が４２℃を超える場合は、血液細胞への熱ショックストレスから、生理活性物質の産生量が低下する。
【００２２】
また、上記体温に近い温度に加温する時間としては、３０〜２７０分が好ましく、より好ましくは６０〜１８０分である。加温時間が３０分よりも短くなると、血漿中カリウム濃度の低下の可逆的な回復が十分でないため、血液細胞からの生理活性物質の産生量が採血直後の血液を用いた場合よりも少なくなることがある。加温時間が２７０分よりも長くなると、血液中のグルコース濃度の低下が著しく、血漿中カリウム濃度を回復した状態に維持することができなくなるため、採血直後と保存後の生理活性物質の産生量に差が生じることがある。
【００２３】
低温保存した血液を加温する方法としては、血液を体温に近い温度、例えば３２〜４２℃に保つことができる方法であれば、特に限定されず、例えば、恒温槽を用いる方法、恒温水槽を用いる方法などが挙げられる。
【００２４】
また、加温中は、血液が血球と血漿とに分離しないように静置せず、血液を緩やかに混和しながら加温することがより望ましい。
【００２５】
本発明では、細胞活動度を回復させた血液、好ましくは血漿中カリウム濃度を回復させた血液と刺激剤とを接触させ、上記血液中の血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる。血液細胞と刺激剤との反応は、例えば反応容器を用いて行なわれる。
【００２６】
上記刺激剤としては、血液細胞と反応し生理活性物質を産生させる材料のことを言い、例えば、ＢＣＧ死菌やコリネバクテリウム属などの種々の微生物、微生物由来の細胞壁多糖（リポポリサッカライド）からなるエンドトキシン；合成リピドＡ；ピランコポリマー；フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−Ｌ及びＰＨＡ−Ｐ）、コンカナバリンＡ、ポークウィードマイトゲンなどのレクチン；ポリＩ：ポリＣ；精製無蛋白ツベルクリン；ＯＫ４３２（ピシバニール）；ＰＳＫ（クレスチン）；レンチナン；ザイモザン；インターフェロンなどのサイトカイン；などが挙げられる。また、これらの材料を種々の天然、合成高分子材料に公知の固定化方法によって固定化した材料なども用いられる。
【００２７】
上記刺激剤の形状としては、通常、粉末状、又は、該刺激剤が水などの溶媒に溶解された液状のものが挙げられる。また、繊維状、中空糸状、膜状等いずれの公知の形状のものでもよい。
【００２８】
上記刺激剤の反応容器内での存在状態は、固体状であってもよく、また、ゲル状、液体状であってもよい。該刺激剤は、水溶性の場合、適当な溶媒に溶解されて反応容器の内壁面に塗布、あるいは添加された後、粉末状にされてもよい。
【００２９】
上記溶媒としては、例えば、リン酸緩衝液、ハンクス緩衝液などの緩衝液やＭＥＭ、ＲＰＭＩ−１６４０等の通常の培地や注射用水（ＬＰＳフリー水、大塚製薬社製）、生理食塩水など、いずれも用いることができる。
【００３０】
測定に用いられる血液としては、採血された全血の他に、必要に応じて、上記の緩衝液や培地で希釈された血液を用いてもよい。
【００３１】
本発明でいう生理活性物質とは、上述した刺激剤で刺激した時、血液細胞から産生されるものである。生理活性物質としては、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＮＦ−γ、Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｃｏｌｏｎｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＲＡＮＴＥＳなどのサイトカイン；ＰＧＥ２、ＰＧ１２などのプロスタグランジン；ＬＴＢ４、ＬＴＣ４などのロイコトリエン；一酸化窒素、活性酸素、ヒスタミン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）などの種々のケミカルメディエーター；などが挙げられる。また、可溶性ＩＣＡＭＩなどの接着因子；可溶性ＩＬ−２レセプターなどの可溶性サイトカインレセプター；ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｅ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＥＣＰ）、ｍａｊｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＭＢＰ）、ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ（ＥＤＮ）、ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｅ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＥＰＯ）などの顆粒タンパク質も挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３２】
また、本発明の細胞機能測定方法に用いる血液の採血に際しては、血液が凝固しないように、血液抗凝固剤を用いる必要がある。上記血液抗凝固剤としては、例えば、ヘパリン化合物、クエン酸化合物、シュウ酸化合物などが挙げられ、ヘパリンナトリウムなどが細胞の生物学的反応を阻害しないので好ましい。
【００３３】
本発明の細胞機能測定方法に用いる血液を採血する際には、真空採血管、注射用シリンジなどの採血器具が用いられる。
【００３４】
上記採血器具としては、好ましくは、血液細胞に非特異的に生理活性物質の産生を誘導するような物質、例えば、ＬＰＳ（エンドトキシン）、β−１，３グルカン、抗原などを混入していないものが好ましく用いられる。
【００３５】
上記真空採血管においては、その内部の減圧を維持するために、通常、栓体が使用される。栓体の材質としては、例えばブチルゴム、塩素化ブチルゴム、熱可塑性エラストマー等が挙げられる。
【００３６】
本発明では、血液中の血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる工程においては、血液細胞が凝固しないように、反応容器中に血液抗凝固剤を存在させるのが好ましい。血液抗凝固剤としては、上述のものが挙げられ、例えば、ヘパリンナトリウムの場合であれば、反応容器に血液が収容された時に、その血液を含む全液中のヘパリンナトリウムの濃度が低くなると血液凝固のおそれがあり、高くなると細胞に不測の活性化や不活性化を起こすおそれがあるので、６〜２０Ｕ／ｍｌになるようにヘパリンナトリウムが反応容器に収容されるのが好ましい。
【００３７】
上記血液中の血液細胞と刺激剤とを反応させる工程で使用される反応容器の材質としては、例えば、プラスチックまたはガラスが挙げられるが、生理活性物質の産生反応後、該生理活性物質を測定するための遠心分離操作に耐えられるだけの強度を有するものが好ましい。
【００３８】
上記プラスチックとしては、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂のいずれもが用いられ得る。熱可塑性樹脂としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレンテレフタレート、スチレン−アクリロニトリル共重合体、スチレン−無水マレイン酸共重合体、スチレン−アクリル酸共重合体、スチレン−メチルメタクリレート共重合体、エチレン−プロピレン共重合体、エチレン−アクリル酸共重合体、エチレン−アクリル酸エステル共重合体等が挙げられる。熱硬化性樹脂としては、例えば、不飽和ポリエステル樹脂、エポキシ樹脂、エポキシ−アクリレート樹脂等が挙げられる。
【００３９】
本発明では、特に限定されないが、通常、低温保存した血液を加温した後、刺激剤が所定量収容された反応容器に、血液を添加して反応させる方法が行なわれる。上記刺激剤が所定量収容された反応容器内を予め減圧にし、ゴム栓体などで密封しておくと、該反応容器内と測定する血液の入った容器内とをマルチプル注射針などで接続することにより、血液をより安全に該反応容器内に移すことができる。
【００４０】
また、本発明で使用される反応容器として、採血時に用いられた真空採血管がそのまま用いられてもよい。この場合の一例としては、血液抗凝固剤が所定量入れられた真空採血管に、血液を採取し、これを低温で保存しておき、測定の開始に先立って体温に近い温度に加温した後、これに刺激剤を所定量添加し、血液細胞と刺激剤とを反応させる方法が挙げられる。
【００４１】
本発明の方法で細胞機能を測定する際の血液量は、反応容器の容積によって異なるが、通常、４〜５ｍｌの容積の反応容器を用いる場合であれば、０．５〜２ｍｌ程度でよい。
【００４２】
血液中の血液細胞と刺激剤とを反応させて生理活性物質を産生させる際の反応温度としては、上記生理活性物質の産生が効率的に行われ、過度の溶血を引き起こさない温度である３２〜４２℃が好ましく、より好ましくは、３５〜３９℃である。反応時間としては、上記生理活性物質の産生が効率的に行われ、過度の溶血を引き起こさない反応時間である１〜４８時間が好ましく、より好ましくは、２〜２４時間である。上記反応に際しては、血液、刺激剤および血液抗凝固剤が収容された反応容器を振とうするのが好ましい。
【００４３】
本発明では、次に、産生された生理活性物質量を測定する。
【００４４】
産生された生理活性物質量を測定する方法としては、例えば、測定しようとする上記生理活性物質に対するモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼなどの酵素及び各々の酵素の発色基質を利用した酵素免疫測定方法；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）方法などが挙げられるが、これに限らず、それぞれの生理活性物質における公知の測定方法を用いてもよい。
【発明の効果】
【００４５】
本発明の細胞機能測定方法の構成は、上記の通りであり、本方法を用いると、血液を用いる細胞機能測定において、採血した血液を測定を行うまで低温で保存するので、安定に保存することができ、採血直後に測定する必要がないために、検体処理効率を上げることができる。また、測定に先立って低温で保存された血液を体温に近い温度に加温するので、低温で保存された血液であっても、精度良く細胞機能を測定することができる。よって、本発明によれば、信頼性に優れた測定結果を得ることができる細胞機能測定方法が提供される。
【００４６】
低温に保存する工程において血漿中カリウム濃度が増加され、細胞活動度を回復させる工程において血漿中カリウム濃度が減少され、細胞活動度の回復する度合いが血漿中カリウム濃度によって表わされる場合には、血漿中カリウム濃度の増加量に対する減少量、すなわち血漿中カリウム濃度の回復度合いと生理活性物質産生能、特にＬＰＳ刺激によるＴＮＦ−α産生能との相関が非常に高く、より一層信頼性に優れた測定結果を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
次に、本発明の実施例及び比較例を挙げることにより、本発明をさらに詳細に述べる。本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４８】
以下の実施例及び比較例において、刺激剤としてはエンドトキシン（ＬＰＳ）を用いた。また、血液細胞に産生させて測定する生理活性物質をＴＮＦ−αとした。細胞機能測定用反応器の製造方法、および、ＴＮＦ−αの産生反応とその産生量の測定方法は以下の通りとした。
【００４９】
（１）細胞機能測定用反応器の製造方法
ポリエチレンテレフタレート製のＬＰＳフリー採血管（積水化学工業社製、１２．６φ×７５ｍｍ）、にＬＰＳ（ＬＢＬ社製）の２０００ＥＵ（国際エンドトキシンユニット）／ｍｌ生理食塩水（大塚製薬社製）溶液を０．０５ｍｌ添加し、細胞機能測定用反応器を製造した。
【００５０】
（２）ＴＮＦ−αの産生反応とその産生量の測定方法
以下の実施例及び比較例では、それぞれ１０本の測定サンプルを用意した。
【００５１】
健常人ボランティアの１０人から、ポリエチレンテレフタレート製のＬＰＳフリー採血管（積水化学工業社製、１２．６φ×７５ｍｍ）１０本に、それぞれヘパリン加採血した。採血した血液を以下に示す実施例または比較例の各条件にて保存及び／又は加温処理を行った後、上記の細胞機能測定用反応器にエンドトキシン（ＬＰＳ）１ｍｌを添加し、３７℃、４時間、振とう培養した。しかる後、４℃、２５００ｒｐｍ×１０分の条件で遠心分離し、上澄みの血漿を採取した。採取した血漿中のＴＮＦ−α量を酵素免疫測定キット（Ｒ＆Ｄ社製）を用いて測定した。尚、この測定方法の検出限界濃度は１６ｐｇ／ｍｌであった。
【００５２】
（３）血漿中カリウム濃度の測定方法
以下の実施例及び比較例では、それぞれ１０本の測定サンプルを用意した。
【００５３】
上記（２）ＴＮＦ−αの産生反応とその産生量の測定方法と同様の方法により血漿を採取し、採取した血漿中カリウム濃度をイオン電極法によって測定した。
【００５４】
（比較例１）
採血された血液を４℃、１５℃または２５℃の各条件で２４時間保存した後、予備加温せずに、ＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。
【００５５】
また、比較対象として、採血直後の血液のＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。図１にＴＮＦ−α産生量の測定結果、図２に血漿中カリウム濃度の測定結果をそれぞれ示した。
【００５６】
（比較例２）
採血された血液を２５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後、ＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。
【００５７】
また、比較対象として、採血直後の血液、及び採血された血液を２５℃で２４時間保存した後に加温しなかったものについてＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。図３にＴＮＦ−α産生量の測定結果、図４に血漿中カリウム濃度の測定結果をそれぞれ示した。
【００５８】
（実施例１）
採血された血液を１５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後、ＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。
【００５９】
また、比較対象として、採血直後の血液、及び採血された血液を１５℃で２４時間保存した後に加温しなかったものについてＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。図５にＴＮＦ−α産生量の測定結果、図６に血漿中カリウム濃度の測定結果をそれぞれ示した。
【００６０】
（実施例２）
採血された血液を４℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後、ＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。
【００６１】
また、比較対象として、採血直後の血液、及び採血された血液を４℃で２４時間保存した後に加温しなかったものについてＴＮＦ−α産生量と、血漿中カリウム濃度とを上記方法に従って測定した。図７にＴＮＦ−α産生量の測定結果、図８に血漿中カリウム濃度の測定結果をそれぞれ示した。
【００６２】
図１〜８に示すように、採血後、低温で保存した血液の細胞機能を測定するに際して、０〜２１℃の低温で保存した血液を測定に先立って体温近い温度に加温することによって、低温保存中に低下した血漿中カリウム濃度を回復させることができ、採血直後と同様に細胞機能を精度よく測定することができることが分かった。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】血液を４℃、１５℃または２５℃の各条件で２４時間保存した後、予備加温せずにＴＮＦ−α産生量を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果を示す図。
【図２】血液を４℃、１５℃または２５℃の各条件で２４時間保存した後、予備加温せずに血漿中カリウム濃度を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後に血漿中カリウム濃度を測定した結果を示す図。
【図３】血液を２５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を２５℃で２４時間保存した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果を示す図。
【図４】血液を２５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を２５℃で２４時間保存した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果を示す図。
【図５】血液を１５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を１５℃で２４時間保存した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果を示す図。
【図６】血液を１５℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を１５℃で２４時間保存した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果を示す図。
【図７】血液を４℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を４℃で２４時間保存した後にＴＮＦ−α産生量を測定した結果を示す図。
【図８】血液を４℃で２４時間保存した後、３７℃で６０分または３７℃で１８０分の各条件で予備加温した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果、並びに比較対象として、採血直後及び血液を４℃で２４時間保存した後に血漿中カリウム濃度を測定した結果を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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