(57)【要約】      （修正有）【課題】  エリスロマイシン耐性肺炎球菌等に対し優れた抗菌活性を有し、かつヒト型Cyp3A4代謝に対し安定な化合物の工業スケールで実施可能な新規製造法と、製造上有用な中間体を提供する。【解決手段】  式2007077047.tif 000013で示される化合物の製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2007077047.tif 000009
（式中、Rは水酸基の保護基を示す）で表される化合物および式
【化２】
2007077047.tif 000010
（式中、Xは脱離基を示す。）で表される化合物を反応させることを特徴とする、式
【化３】
2007077047.tif 000011
（式中、Ｒは前述と同義）で示される化合物の製造方法。
【請求項２】
水酸基の保護基がアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基またはt-ブチルジメチルシリル基である請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
脱離基がヨウ素原子、臭素原子、塩素原子、トルエンスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフロロメチルスルホニルオキシ基である請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
式
【化４】
2007077047.tif 000012
（式中、Rは水酸基の保護基を示す）で表される化合物。
【請求項５】
水酸基の保護基がアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基またはt-ブチルジメチルシリル基である請求項４記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マクロライド系抗菌剤に分類される、エリスロマイシンA誘導体の新規製造方法及びその中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
クラリスリマイシンおよびアジスロマイシンに代表される第２世代マクロライド系抗菌剤は、1990年代前半に登場し、その優れた治療効果により、現在では呼吸器感染症の治療薬として広く臨床の場で用いられている。しかし、近年これらマクロライド系抗菌剤が使用されている呼吸器感染症領域において、エリスロマイシン耐性肺炎球菌等の増加が治療上の大きな問題となりつつあり、これら耐性菌に対して強い活性を有する新規マクロライド系抗菌剤の研究開発が活発に行われた。その結果、エリスロマイシン耐性肺炎球菌等に対して強い活性を有するマクロライド化合物として、テリスロマイシン（HMR3647，特許文献１）、セスロマイシン（ABT-773，特許文献２）等が見出され、さらに薬効増強を図った２−フルオロケトライド（特許文献３）等も報告されるに至った。
【０００３】
この2−フルオロケトライド化合物群の中から、耐性菌活性のみならず、薬物相互作用の観点から、長年にわたってマクロライド系抗菌剤の問題とされてきたヒト型Cyp3A4代謝に対する安定性を改善したケトライド化合物として、5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１1−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートが見出された（特許文献４）。
【０００４】
【特許文献１】EP680967号
【特許文献２】WO98/09978号
【特許文献３】WO02/32919号
【特許文献４】PCT/JP2005/4510
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
この5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１1−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートの一般的な製造方法は、最終工程において6位側鎖上の芳香環部分を、パラジウム触媒等を用いて導入するため、最終生成物中に金属、試薬、試薬由来の分解物等が多く混在してしまうことから、最終目的物の単離精製が煩雑となり、工業スケールでの実施が困難なものとなっている。
【０００６】
本発明の目的は、エリスロマイシン耐性肺炎球菌等に対し優れた抗菌活性を有し、かつヒト型Cyp3A4代謝に対し安定な5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１1−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートの工業スケールで実施可能な新規製造法と、製造上有用な中間体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、種々製造法を検討した結果、
式（I）
【０００８】
【化１】
2007077047.tif 000002
【０００９】
（式中、Rは水酸基の保護基を示し、好ましくはアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基またはt-ブチルジメチルシリル基を示す）で表される化合物を鍵中間体として経由することにより、高純度の目的化合物を工業スケールで製造可能であることを見出し本発明を完成した。
【００１０】
すなわち本発明は
（１）式
【００１１】
【化２】
2007077047.tif 000003
【００１２】
（式中、Rは水酸基の保護基を示し、好ましくはアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基又はt-ブチルジメチルシリル基を示す）で表される化合物および式
【００１３】
【化３】
2007077047.tif 000004
【００１４】
（式中、Xは脱離基、好ましくはヨウ素原子、臭素原子、塩素原子、トルエンスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフロロメチルスルホニルオキシ基を示す。）で表される化合物を反応させることを特徴とする、式
【００１５】
【化４】
2007077047.tif 000005
【００１６】
（式中、Ｒは前述と同義）で示される化合物の製造方法。
（２）式
【００１７】
【化５】
2007077047.tif 000006
【００１８】
（式中、Rは水酸基の保護基を示す）で表される化合物。
である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の製造方法及び化合物により、5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１1−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを工業的に可能な方法で、高い純度で製造することができた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明で、水酸基の保護基とはこの分野で利用できる水酸基の保護基を意味し、好ましいものとしてはアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基またはt-ブチルジメチルシリル基をあげることができる。
【００２１】
本発明で、脱離基とはこの分野で利用できる一般的な脱離基を意味し、好ましいものとしてヨウ素原子、臭素原子、塩素原子、トルエンスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフロロメチルスルホニルオキシ基をあげることができる。
【００２２】
本発明では、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー  第46巻10号1796頁（2003年）記載の、式（II）
【００２３】
【化６】
2007077047.tif 000007
【００２４】
（式中、Rは前記と同義である。）で表される化合物と、式（III）
2007077047.tif 000008
【００２５】
（式中、Xは脱離基、好ましくはヨウ素原子、臭素原子、塩素原子、トルエンスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフロロメチルスルホニルオキシ基を示す。）で表される化合物をトリエチルアミン等の塩基存在下、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド等のパラジウム試薬と共に、アセトニトリル等の不活性溶媒中、室温から加熱還流の条件で作用させ式(I)で示される化合物を得る。
【００２６】
得られた式(I)で示される化合物は続いて、例えばメタノール中、室温又は加熱還流させる方法などにより２´位の脱保護を行い、式（I）におけるＲが水素原子である、5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを得ることができる。
【００２７】
本製造法においては、式（I）で示される化合物において不溶物の濾去、水溶液の液性の違いを利用した有機溶媒による抽出精製等を行うことが可能なため、続く２´位保護基を除去した後、結晶化により高純度の5−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１1−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを工業スケールで製造することが可能である。
【００２８】
実施例
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
参考例１
（１）カリウムt-ブトキシド8.9g(80mmol)をTHF 50mlに溶解し氷冷下３−メチルピリダジン5g(53mmol)のTHF溶液（10ml）を約5分かけて滴下した。反応混合物を室温で1.5時間攪拌した後、氷冷下亜硝酸t-ブチル 12.6ml(106mmol)のTHF溶液(10ml)を約5分かけて滴下し、その後室温で19時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し水20mlを加え、その後4N-塩酸水溶液を加え中和した。この混合物を減圧濃縮し、析出した結晶を濾取して３−ピリダジンアルドキシムの高極性異性体 1.8gを得た。母液は塩析して酢酸エチルで抽出（５０ml、２回）、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮した。残渣にヘキサンを加え、得られた粉末を濾取して、３−ピリダジンアルドキシムの低極性・高極性の異性体混合物2.8gを得た。合計4.6g(収率71%)の３−ピリダジンアルドキシムを得た。
【００２９】
低極性異性体
MS(ESI)  m/z  145.9[M+Na]+
1H-NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 7.79(dd, J=9.01, 5.05Hz, 1H)，7.84(s, 1H)，8.57(dd, J=8.79,1.76Hz, 1H), 9.23(dd, J=4.83,1.76Hz, 2H)，12.43(s, 1H)
【００３０】
高極性異性体
MS(ESI)  m/z  145.9[M+Na]+
1H-NMR(200 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 7.72(m, 1H)，8.02 (dd, J=8.79,1.76Hz, 1H), 8.34(s, 1H)，9.20(dd, J=4.83,1.76Hz, 1H)，12.1(s, 1H)
【００３１】
（２）300mlナスフラスコに、上記３−ピリダジンアルドキシム異性体混合物3.7g(30mmol)、酢酸エチル100ml、トリブチルエチニルスズ8.5ml（d 1.09, 25mmol）、炭酸水素ナトリウム6.3g（75mmol）、水5ml、N-クロロコハク酸イミド4.0g（30mmol）を順次加え、室温で16時間攪拌した。水5mlをさらに加え4時間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液100mlを加え分液した。水層を酢酸エチルで抽出後有機層を合わせ、飽和食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮の後ヘキサンを加え析出した粉末を濾別し、母液を減圧濃縮してトリ−ｎ−ブチル−｛［３−（ピリダジン−３−イル）］イソキサゾール−５−イル｝スズの粗生成物を得た。
【００３２】
この粗生成物をTHF100mlに溶解し、ヨウ素3.2g(25.2mmol)を一度に加えた。反応混合物を室温で35分攪拌した後反応混合物を6%チオ硫酸ナトリウム水溶液にあけ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、残渣にヘキサンを加え析出している結晶を濾取した。この結晶をヘキサンで洗浄、乾燥して３−(５−ヨードイソキサゾール−3−イル)ピリダジン 2.9gを得た。
MS(ESI)  m/z  295.9[M+Na]+
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δppm 7.36(s, 1H) 7.62(dd, J=8.35, 4.83Hz, 1H) 8.22(dd, J=8.35,1.76Hz, 1H) 9.26(dd, J=4.83,1.76Hz, 1H)
【実施例１】
【００３３】
５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートの合成 
【００３４】
（１）ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー  第46巻10号1795頁〜1798頁（2003年）記載の方法により合成した２´−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−３−オキソ−６−Ｏ−プロパルギルエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート 7.59g (10.0mmol)、参考例１により合成した３−(５−ヨードイソキサゾール−3−イル)ピリダジン 2.73g (10.0mmol)、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロリド（II） 351mg(0.5mmol)、アセトニトリル152ml、トリエチルアミン76mlを混合し、60℃で8時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮して得られた残渣に、酢酸イソプロピル22.8mlおよびメチルt-ブチルエーテル152mlを加え撹拌後、析出した不溶物を濾去した。濾液に2mol/lの塩酸50mlを加え撹拌後分液した。有機層を2mol/lの塩酸20mlで再抽出した後、水層を合わせメチルt-ブチルエーテル20mlで洗浄した。水層に酢酸イソプロピル100mlを加えたのち、4 mol/l水酸化ナトリウム水溶液を加えｐH12とした。分液後、有機層を飽和食塩水23mlで洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮することにより、２´−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート7.46g（収率82.5%）を得た。
MS(ESI)  m/z  904.3[M+H]+ 
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δppm 0.90(t,J=7.46Hz,3H) 2.27(s,6H) 3.69(s,1H) 3.78(d,J=17.55Hz,1H) 3.88(d,J=17.55Hz,1H) 4.57(d,J=7.50Hz,1H) 5.70(s,1H) 7.42-7.50(m,2H) 7.49(s,1H) 7.55-7.63(m,1H) 7.60(dd, J=8.40,5.10Hz,1H) 8.01-8.07(m,2H) 8.28(dd,J=8.40,1.80Hz,1H) 9.24(dd,J=5.10,1.80Hz,1H)
【００３５】
（２）上記（１）で得た化合物7.46g(8.25mmol)をメタノール37.3mlに溶解させ9時間加熱還流させた後、減圧濃縮した。濃縮残渣にイソプロピルアルコール22.4mlを加え50℃に加熱した後、ヘプタン22.4mlを加えた。2時間氷冷した後、析出物を濾取し、イソプロピルアルコール7.5mlとヘプタン7.5mlの混合溶媒で洗浄した。得られた粉末をイソプロピルアルコール75mlに加熱溶解し不要物を濾過した後、常圧下で溶媒を55ml加熱留去した。一晩撹拌放冷後、2時間氷浴に浸し、析出物を濾取した。イソプロピルアルコール5mlで洗浄し、50℃で真空乾燥させることにより、５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート4.27g（収率65%）を得た。
【実施例２】
【００３６】
２´−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートの合成
（１）参考例１（１）の方法で合成した３−ピリダジンアルドキシム1.23g(10mmol)、炭酸水素ナトリウム2.10g(25mmol)、酢酸エチル19.7ml、水1.23mlをアルゴンガス雰囲気下で混合し、ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー  第107巻, 7号, 2023頁-2032頁（1985年）記載の方法に従い合成した1,1-ジブロモエテン 6.5mlおよびN−クロロコハク酸イミド1.34g(10mmol)を加えた。室温下で一晩撹拌した後、不溶物を濾去し、濾液の上層を分取し、水20mlで洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトン：ヘキサン：トリエチルアミン＝６：10：0.2）により精製し、３−(５−ブロモイソキサゾール−3−イル)ピリダジン 115ｍg（収率５%）を得た。
MS(ESI)  m/z  225.8 [M+H]+
1H NMR (300MHz,CDCl3) δppm 7.20 (s,1H) 7.63 (dd,J=8.70,5.10 Hz,1H) 8.22 (dd,J=8.70,1.80Hz,1H) 9.27 (dd,J=5.10,1.80Hz,1H)
【００３７】
（２）ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー  第46巻10号1795頁〜1798頁（2003年）記載の方法により合成した２´−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−３−オキソ−６−Ｏ−プロパルギルエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート152mg (0.20mmol)、上記（１）で合成した３−(５−ブロモイソキサゾール−3−イル)ピリダジン54.2mg (0.24mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム11.6mg(0.01mmol)、アセトニトリル1.5ml、トリエチルアミン0.8mlを混合し、60℃で5時間攪拌した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム34.8mg(0.03mmol)を追加し、60℃で更に12時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮後、定法に従い後処理を行い、実施例１の（１）で得た化合物147ｍg（収率81%）を得た。
【００３８】
参考例２：抗菌活性試験
被験化合物として５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを用い、エリスロマイシン耐性肺炎球菌、エリスロマイシン耐性連鎖球菌に対する抗菌活性を、National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) guidelinesに準じた微量液体希釈法による最小発育阻止濃度（MIC）で評価した。
【００３９】
羊血液寒天培地およびチョコレート寒天培地で一夜培養した肺炎球菌をMueller-Hinton broth （MHB）で0.5 McFarand相当に懸濁し、これらを10倍に希釈（約107 CFU/ml）して接種用菌液とした。これらの菌液５mlを３%馬溶血液添加の２価イオン濃度調整済みMHBおよびHaemophilus test mediumに約5×105 CFU/mlの菌量となるように感受性試験用マイクロプレートに接種した。これらを３５℃、通常環境下で20時間培養後に各化合物のMICを測定した。
【００４０】
その結果、被験化合物のＭＩＣは、耐性肺炎球菌(erm(B)遺伝子)には0.008μg/ml、耐性連鎖球菌(erm遺伝子)には0.03μg/mlであった。
【００４１】
参考例３：Cyp阻害試験
Cyp阻害試験は被験化合物を添加した後、蛍光基質を添加する前に45分間のプレインキュベーションを行った。その他はCrespiらの方法（Crespi CL, et al., Analyt. Biochem. 1997, 248, 188-190）に準拠して行った。
【００４２】
被験化合物としては、５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを用いた。
【００４３】
被験化合物のCyp3A4に対する阻害の強さは、それぞれ0.96μＭであり、Cyp3A4阻害作用が弱く、安全性に優れることが確認された。
【００４４】
参考例４：従来製法
WO99/21871号およびUS6124269号に記した方法により合成した５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−３−オキソ−６−Ｏ−プロパルギルエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート0.8g (1.22mmol)、３−(５−ヨードイソキサゾール−3−イル)ピリダジン 0.4g (1.46mmol)、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムクロリド（II） 0.04g (0.06mmol)、アセトニトリル10ml、トリエチルアミン5mlを混合し、系内をアルゴン置換した後、６０℃で１４時間攪拌した。
【００４５】
反応混合物を減圧濃縮して得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：２５％アンモニア水＝19：1：0.1）により精製し、ジエチルエーテル-ヘキサンにて固化、濾取、乾燥して５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメート  0.59g（収率60%）を得た。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明により、５−Ｏ−デソサミニル−３，１１−ジデオキシ−２−フルオロ−１１−アミノ−６−Ｏ−[３−[３−（３−ピリダジル）イソキサゾリル−５−イル]−２−プロピニル]−３−オキソエリスロノリドＡ  １１，１２−サイクリックカーバメートを工業的に可能な方法で、高い純度で製造することができたので、医薬品製造に有用である。