(57)【要約】【課題】精製前粗油中成分の分析方法において、極性の夾雑成分あるいは脂肪酸、又はその両方を除去する。【解決手段】精製前粗油中残留農薬分析法は、前処理工程に水洗浄工程とＰＳＡ固相カラム処理工程を加えるものであり、水洗浄工程によって極性の夾雑成分を除去し、ＰＳＡ固相カラム処理によって脂肪酸を除去する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製前粗油を水洗浄にて極性の夾雑成分を除去する工程と、
前記水洗浄溶液を液液分配にて脱脂する工程と、
前記脱脂した溶液からＰＳＡ固相カラム処理にて脂肪酸を除去する工程と、
前記脂肪酸を除去した溶液をカラムクロマトグラフィー処理にて精製する工程とを含む前処理を行い、
前記前処理で抽出した溶出液をＧＣ／ＭＳ分析により精製前粗油中の成分を分析することを特徴とする、精製前粗油中成分分析法。
【請求項２】
前記水洗浄は、ヘキサンに溶解した精製前粗油にヘキサンと同量の水を加えて振とうする工程と、振とう後に得られるヘキサン層を無水の硫酸ナトリウムにて脱水する工程を含むことを特徴とする、請求項１に記載の精製前粗油中成分分析法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製前粗油中成分分析法に関し、特に、食品残留農薬等の精製前粗油中に残留する農薬の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
食品への農薬残留については食品衛生法によって残留基準が設定され、残留基準が設定されていない農薬が残留する食品の流通を制限する制度としてポジティブリスト制が知られている。ポジティブリスト制は、残留基準が設定されていない農薬の残留を禁止し、残留を認めるもののみを一覧表として示す方式である。
【０００３】
農産物中に残留する農薬を分析する方法として、例えば、厚生労働省ポジティブ制度によるＧＣ／ＭＳ（ガスクロマトグラフ・質量分析計）一斉分析法が提案されている（非特許文献１）。
【０００４】
上記したＧＣ／ＭＳ一斉分析法を適用することにより、精製前粗油中に残留する農薬等の成分を分析することが考えられる。図８は上記したＧＣ／ＭＳ一斉分析法を適用した精製前粗油中成分の分析手順のフローチャートを示している。
【０００５】
図８に示すフローチャートでは、例えば、５０ｍＬの遠沈管に分析対象である精製前粗油を０．２ｇ採取する（Ｓ１０１）。採取した精製前粗油にヘキサン飽和アセトニトリル／ヘキサンを加えて、例えば１０分間振とうして、液々分配にて脂肪分を分離し脱脂し（Ｓ１０２）、分離したアセトニトリル層を４０℃以下で減圧濃縮する（Ｓ１０３）。
【０００６】
次に、カラムクロマトグラフィーにて精製する。このカラムクロマトグラフィーによる精製では、例えば、ＥＮＶＩ−Ｃａｒｂ／ＬＣ−ＮＨ２を用い、２５％のトルエン／アセトニトリル２０ｍＬでコンディショニングする（Ｓ１０４）。
【０００７】
この溶出液を分取して、５０％アセトン／ヘキサン１ｍＬに溶解して試験溶液を得て（Ｓ１０５）、ＧＣ／ＭＳ（ガスクロマトグラフ・質量分析）により目的とする成分を測定する（Ｓ１０６）。
【０００８】
なお、油脂に関する用語では、粗油は油糧原料から圧搾または抽出した状態の油を言い、精製油は粗油に含まれる夾雑物を除去した油をいう。
【非特許文献１】食品に残留する農薬等のポジティブ制度に係る分析法の検討状況について  厚生労働省医薬食品局  平成１７年８月２５日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記したような、従来技術を適用した精製前粗油中成分の分析における前処理方法では、抽出溶液には粗油由来の成分が非常に多く残留してしまい、測定対象の農薬が検出できないという問題がある。特に、粗油由来の成分に含まれる極性成分や脂肪酸などの妨害成分を除去する過程が無いため、これらの極性成分や脂肪酸が抽出溶液に残留し、ガスクロマトグラフでは測定対象の農薬の成分とピークが重なるマトリックス状態となり、成分検出が困難である。
【００１０】
そこで、本発明は上記課題を解決して、精製前粗油中成分の分析方法において、極性の夾雑成分あるいは脂肪酸、又はその両方を除去することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の精製前粗油中残留農薬分析法は、前処理工程に水洗浄工程とＰＳＡ固相カラム処理工程を加えるものであり、水洗浄工程によって極性の夾雑成分を除去し、ＰＳＡ固相カラム処理によって脂肪酸を除去する。
【００１２】
本発明の精製前粗油中残留農薬分析法は、前処理、精製前粗油を水洗浄にて極性の夾雑成分を除去する工程と、この水洗浄溶液を液液分配にて脱脂する工程と、前記工程で脱脂した溶液からＰＳＡ（Primary/Secondary Amine）固相カラム処理にて脂肪酸を除去する工程と、前記工程で脂肪酸を除去した溶液をカラムクロマトグラフィー処理にて精製する工程とを含み、この前処理で抽出した溶出液をＧＣ／ＭＳ分析により精製前粗油中の成分を分析する。より詳細には、水洗浄は、ヘキサンに溶解した精製前粗油にヘキサンと同量の水を加えて振とうする工程と、振とう後に得られるヘキサン層を無水の硫酸ナトリウムにて脱水する工程を含む。
【００１３】
本発明の前処理によれば、水洗浄工程により極性の夾雑成分を除去することができ、また、ＰＳＡ固相カラム処理工程によって脂肪酸を除去することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の前処理によれば、精製前粗油中成分の分析方法において、極性の夾雑成分あるいは脂肪酸、又はその両方を除去することができる。
【００１５】
本発明の前処理によれば、従来法と比較して粗油試料に対し高いクリーンアップ効果が得られ、これにより従来技術による前処理では夾雑成分に埋もれてしまって検出できなかった農薬を検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について、図を参照しながら詳細に説明する。
【００１７】
図１は、本発明の精製前粗油中残留農薬分析法の工程を説明するためのフローチャートである。図１のフローチャートにおいて、精製前粗油の試料を採取し（Ｓ１）、採取した試料を水洗浄工程によって、試料中に含まれる極性の夾雑成分を除去する（Ｓ２）。
【００１８】
前記水洗浄工程で極性の夾雑成分を除去した溶液を脱脂し（Ｓ３）、濃縮した後（Ｓ４）、ＰＳＡ（Primary/Secondary Amine）固相カラム処理にて脂肪酸を除去する（Ｓ５）。
【００１９】
抽出液をカラムクロマトグラフィーで精製し（Ｓ６）、溶出液を分取して試験溶液を抽出する（Ｓ７）。前記Ｓ２〜Ｓ６の前処理で抽出した試験溶液をＧＣ／ＭＳ（ガスクロマトグラフ質量分析）で測定する（Ｓ９）。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明の精製前粗油中残留農薬分析法の一実施例について説明する。図２は、本発明の精製前粗油中残留農薬分析法の一実施例を説明するためのフローチャートである。
【００２１】
採取した試料について、試料量０．２ｇにヘキサン２０ｍＬを加え（Ｓ１１）、ヘキサン量と同量の水を加えて１０分間振とうして水洗浄する（Ｓ１２）。水洗浄した溶液のうち、ヘキサン層を採取し、硫酸ナトリウム（無水）にて脱水する（Ｓ１３）。
【００２２】
脱水して得られた溶液にヘキサン飽和アセトニトリル２０ｍＬを加えて液液分配にて脂肪分を分離し脱脂する工程を２回繰り返す（Ｓ１４）。
【００２３】
液々分配にて脱脂した溶液のアセトニトリル層をＣ１８カラム（オクタデシルシリル化シリカゲル）に通して濃縮する。Ｃ１８カラムの充填量は、実施例では１０００ｍｇとする（Ｓ１５）。
【００２４】
次に、２５％トルエン／アセトニトリルを２０ｍ用いて、ＬＥＮＶＩ−Ｃａｒｂ／ＬＣ−ＮＨ２（グラファイトカーボンブラック／アミノプロピル基）とＰＳＡ（Primary/Secondary Amine）固相カラムの連結カラムにて精製する。ＰＳＡ固相カラムは、例えば、エチレンジアミン−Ｎ−プロピルシリル化シリカゲルを用いる。ＰＳＡ固相カラムは、実施例では５００ｍｇとする（Ｓ１６）。
【００２５】
精製した溶液を５０％アセトン／ヘキサン１ｍＬに溶解し（Ｓ１７）、得られた試験溶液をＧＣ／ＭＳ（ガスクロマトグラフ・質量分析）により目的とする成分を測定する（Ｓ１８）。
【００２６】
なお、上記した試料量、溶媒量、混合溶媒の溶媒比率、添加する水の量、固相カラム  充填量は一例であり、試料中の妨害となる成分の種類と量により異なる。
【００２７】
前処理工程に試料の水洗浄工程とＰＳＡ固相カラム処理を加えることで、測定の妨害となった極性の夾雑成分や脂肪酸が取り除かれ測定対象農薬分析が可能となる。
【００２８】
以下に、実施例による分析結果を示す。
【００２９】
精製前粗油にα−ＢＨＣ、γ−ＢＨＣ、ダイアジノン、マラソン、パラチオン、ｐ，ｐ’ＤＤＥ、ｏ，ｐ’ＤＤＴ、ＥＤＤＰ、ＥＰＮの９農薬を添加し、従来法に示した前処理を行った分析結果と本発明法による分析結果を、それぞれ図３、図４に比較して示す。
【００３０】
図３は、従来法による粗油抽出溶液のＧＣ／ＭＳスキャン測定によるトータルイオンクロマトグラムを示している。このクロマトグラムによれば、従来法による前処理では保持時間約８〜１８分まで広範囲にわたる夾雑成分ピークが検出される。
【００３１】
一方、図４は、本発明による粗油抽出溶液のＧＣ／ＭＳスキャン測定によるトータルイオンクロマトグラムを示している。このクロマトグラムによれば、本発明による前処理では、保持時間約１４〜１５分に大きな夾雑成分ピークが見られる。
【００３２】
図５は、これらを強度軸を同一スケールにてクロマトグラムを描き比較して示している。図５において、同一強度で比較を行うと、本発明の前処理によれば、保持時間約８〜１８分の夾雑成分の除去効果が確認できる。
【００３３】
以下、農薬を添加した粗油について、従来法により前処理した試料をスキャン測定結果と、本発明により前処理した試料をスキャン測定結果とを比較する。
【００３４】
この比較では、表１に示す農薬１〜９を精製前粗油試料に添加したものを試料とする。なお、表１では、ＧＣ／ＭＳスキャン測定した際に農薬から検出される特徴的な質量数と各農薬の保持時間を示している。
【００３５】
【表１】
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【００３６】
図６は、農薬を添加した粗油を従来法により前処理した試料をスキャン測定した際に得られる、添加農薬各成分のマスクロマトグラムを示している。なお、図６のＮｏ．１〜Ｎｏ．９は、表１の１〜９の農薬と対応している。
【００３７】
図６のＮｏ．１〜Ｎｏ．５の農薬に関してはマスクロマトグラムによる検出が可能であるが、Ｎｏ．５〜Ｎｏ．９は夾雑成分の影響によりピークが埋もれてしまい検出できない。
【００３８】
図７は、農薬を添加した粗油を本発明により前処理した試料をスキャン測定した際に得られる、添加農薬各成分のマスクロマトグラムを示している。なお、図７のＮｏ．１〜Ｎｏ．９は、表１の１〜９の農薬と対応している。
【００３９】
図７のＮｏ．１〜Ｎｏ．９の全農薬に関してマスクロマトグラムによる検出が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】本発明の精製前粗油中残留農薬分析法の工程を説明するためのフローチャートである。
【図２】本発明の精製前粗油中残留農薬分析法の一実施例を説明するためのフローチャートである。
【図３】従来法による粗油抽出溶液のＧＣ／ＭＳスキャン測定によるトータルイオンクロマトグラムである。
【図４】本発明による粗油抽出溶液のＧＣ／ＭＳスキャン測定によるトータルイオンクロマトグラムである。
【図５】強度軸を同一スケールとしたクロマトグラムである。
【図６】従来法により前処理した試料の添加農薬各成分のマスクロマトグラムである。
【図７】本発明法により前処理した試料の添加農薬各成分のマスクロマトグラムである。
【図８】ＧＣ／ＭＳ一斉分析法を適用した精製前粗油中成分の分析手順のフローチャートである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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