(57)【要約】【課題】  本発明が解決すべき課題は、天然有機化合物であって良好な抗薬剤耐性菌活性と抗酸化作用を有するものを提供することにある。【解決手段】  本発明のポリフェノール化合物は、下記式（Ｉ）を有するものである：【化１】2007051099.tif 000014［式中、Ｘ1およびＸ2は少なくとも１の水酸基を置換基として有するアリール基等を示し、Ｙは共有単結合等を示し、Ｒは低級アルキル基等を示す。］【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるポリフェノール化合物：
【化１】
2007051099.tif 000010
［式中、
Ｘ1およびＸ2は、それぞれ独立して、少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
ＹとＲは、一体となって、隣接する炭素原子および酸素原子と共に下記エチレンオキサイド構造を形成し、
【化２】
2007051099.tif 000011
上記エチレンオキサイド構造中、Ｘ3は少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
或いは、Ｙは共有単結合を示し、且つＲは水素原子、低級アルキル基または低級アルカノイル基を示し、
置換基（ｉ）は、低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよい低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいアリール基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいヘテロアリール基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示し、
置換基（ｉｉ）は、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基、水酸基、オキソ基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示す。］
【請求項２】
下記式（Ｉａ）で表されるポリフェノール化合物：
【化３】
2007051099.tif 000012
［式中、
Ｘ1およびＸ2は、それぞれ独立して、少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
Ｒは水素原子、低級アルキル基または低級アルカノイル基を示し、
置換基（ｉ）は、低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよい低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいアリール基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいヘテロアリール基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示し、
置換基（ｉｉ）は、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基、水酸基、オキソ基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示す。］
【請求項３】
下記式（Ｉｂ）で表されるポリフェノール化合物：
【化４】
2007051099.tif 000013
［式中、
Ｘ1、Ｘ2およびＸ3は、それぞれ独立して、少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
置換基（ｉ）は、低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよい低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいアリール基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいヘテロアリール基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示し、
置換基（ｉｉ）は、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基、水酸基、オキソ基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示す。］
【請求項４】
２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−２−メトキシベンゾフラン−３−オン、
３−フロログルシノイル−２，３−エポキシフラバノン、
３−クエルセチニル−２，３−エポキシフラバノン、および
３−［３−（２，４，６−トリヒドロキシ−１−メチルグリオキシレートフェニル）］−２，３−エポキシフラバノン、
から選択されるポリフェノール化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載のポリフェノール化合物を含むことを特徴とする医薬。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載のポリフェノール化合物を含むことを特徴とする健康食品。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれかに記載のポリフェノール化合物を含むことを特徴とする抗薬剤耐性菌剤。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれかに記載のポリフェノール化合物を含むことを特徴とする抗酸化作用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＲＳＡなどの薬剤耐性菌に対する抗菌活性および抗酸化作用を有する新規なポリフェノール化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、活性酸素などのフリーラジカルが生体に与える悪影響が指摘されている。例えば、生体内で発生したフリーラジカルはＤＮＡを損傷し、細胞の増殖バランスを乱して癌を誘発したり、免疫力を低下させる上に、老化の原因となるとされている。
【０００３】
そこで、フリーラジカルを消滅させることができる抗酸化物質を含む食品や飲料が注目されるようになった。例えば、ビタミンＥやＣ、カロチンなどの抗酸化物質を多く含む健康食品が市販されており、老化防止や癌予防などの効能がうたわれている。また、赤ワインにはアントシアニン等のフラボノイドが多く含まれており、強い抗酸化作用を有するものとして注目されたのも有名である。
【０００４】
さらにタマネギの外皮など、これまで廃棄されていたものにも強い抗酸化作用が見出され、健康食品に利用されている。例えば非特許文献１には、タマネギの外皮には主にアントシアニンとフラバノールに分類されるフラバノイドが含まれており、これが抗酸化作用、抗癌作用、抗菌活性等を有することが記載されている。
【０００５】
また、近年、抗生物質の使用量の増加に伴って、ＭＲＳＡ（メシチリン耐性黄色ブドウ球菌）など一般的な抗生物質に耐性を示す細菌が問題となっている。斯かる薬剤耐性菌は感染力等が弱く健康な者にとっては問題とならないが、病人など免疫力が低下している者には脅威であり、病院内感染による死者まで出している。そこで、従来、薬剤耐性菌に対して抗菌活性を有する化合物が検討されている。
【０００６】
例えば特許文献１には、ある種のフラボノイドが薬剤耐性菌のβ−ラクタム剤耐性を抑制して抗生物質に対する感受性を高めること、また、フラボノイドが薬剤耐性菌に対して抗菌活性を有することが開示されている。
【非特許文献１】Griffiths，G．ら，「タマネギ−健康に対する広い利点」，フィトセラピー・リサーチ（Phytother．Res．），第１６巻，第６０３〜６１５頁（２００２年）
【特許文献１】特開平１５−１７１２７４号公報（［特許請求の範囲］、段落［０００３］）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した様に、ある種のフラボノイドが薬剤耐性菌に対する抗菌活性や抗酸化作用を有することは知られていた。しかし、より良好な活性や作用を有する化合物が求められていた。そこで、本発明が解決すべき課題は、天然有機化合物であって良好な抗薬剤耐性菌活性と抗酸化作用を有するものを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、すでに健康食品として利用されているタマネギ外皮に含まれる化合物を単離精製してその化学構造を決定し、抗薬剤耐性菌活性と抗酸化作用につき試験した。その結果、本発明化合物が優れた効果を有することを見出して、本発明を完成した。
【０００９】
本発明のポリフェノール化合物は、下記式（Ｉ）で表されるものである：
【００１０】
【化１】
2007051099.tif 000002
【００１１】
［式中、
Ｘ1およびＸ2は、それぞれ独立して、少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
ＹとＲは、一体となって、隣接する炭素原子および酸素原子と共に下記エチレンオキサイド構造を形成し、
【００１２】
【化２】
2007051099.tif 000003
【００１３】
上記エチレンオキサイド構造中、Ｘ3は少なくとも１の水酸基を置換基として有し、さらに後述する置換基（ｉ）を有してもよいアリール基またはヘテロアリール基を示し、
或いは、Ｙは共有単結合を示し、且つＲは水素原子、低級アルキル基または低級アルカノイル基を示し、
置換基（ｉ）は、低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよい低級アルキル基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいアリール基、後述する置換基（ｉｉ）を有してもよいヘテロアリール基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示し、
置換基（ｉｉ）は、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルカノイル基、水酸基、オキソ基およびアミノ基よりなる群から選択される置換基を示す。］
【００１４】
上記定義の通り、本発明のポリフェノール化合物（Ｉ）には、以下の化合物（Ｉａ）と（Ｉｂ）が含まれる。
【００１５】
【化３】
2007051099.tif 000004
［上記式中、Ｘ1〜Ｘ3、Ｒおよび置換基は、前述したものと同義を示す］
【００１６】
本発明において、「アリール基」は芳香族炭化水素基を意味する。例えば、フェニル、ナフチル、インデニル等であり、好ましくはＣ６−Ｃ１０アリール基、より好ましくはフェニルである。
【００１７】
「ヘテロアリール基」は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子等のヘテロ原子を少なくとも１個有する５員、６員または縮合芳香族ヘテロシクリル基を意味する。「ヘテロアリール基」としては、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、テトラゾリル、チエニル、フリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル等の５員ヘテロアリール基；ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル等の６員ヘテロアリール基；およびインドリル、イソインドリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、クロマニル、クロメニル、クロモニル（１−ベンゾピラン−４（４Ｈ）−オン−イル）、ベンゾチエニル、テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン等の縮合ポリサイクリックヘテロアリール基が含まれる。
【００１８】
「低級」の語は、特に断らない限り炭素数１〜６を意味する。
【００１９】
よって、「低級アルキル基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素を意味する。例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル等であり、好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基、より好ましくはＣ１−Ｃ２アルキル基、最も好ましくはメチルである。
【００２０】
「低級アルカノイル基」は、ホルミルおよび、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基を意味する。例えば、ホルミルの他、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘイサノイル等である。好適にはＣ１−Ｃ４アシルであり、より好ましくはＣ１−Ｃ２アシルであり、最も好ましくはアセチルである。
【００２１】
「低級アルコキシ基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素オキシ基を意味する。例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソシキ等であり、好ましくはＣ１−Ｃ４アルコキシであり、より好ましくはＣ１−Ｃ２アルコキシであり、最も好ましくはメトキシである。
【００２２】
「アミノ基」は、−ＮＨ2、１個の低級アルキル基により置換されているアミノ基（低級アルキルアミノ基）、および２個の低級アルキル基により置換されているアミノ基（ジ（低級アルキル）アミノ基）を示す。これらの中では、−ＮＨ2が好適である。
【００２３】
上記アリール基、ヘテロアリール基または低級アルキル基上に複数の置換基が存在する場合、或いは化合物中に複数の置換基が存在する場合には、それらは同一であってもよいし異なっていてもよい。例えば、１つのエチル基に２つのオキシ基と１つのメトキシ基が置換しているメチルグリオキシレート基も本発明の置換基に含まれる。ただし、アリール基またはヘテロアリール基の置換基としては、水酸基が好適である。
【００２４】
上記化合物（Ｉ）としては、
２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−２−メトキシベンゾフラン−３−オン、
３−フロログルシノイル−２，３−エポキシフラバノン、
３−クエルセチニル−２，３−エポキシフラバノン、および
３−［３−（２，４，６−トリヒドロキシ−１−メチルグリオキシレートフェニル）］−２，３−エポキシフラバノン、
から選択されるポリフェノール化合物が好適である。
【００２５】
本発明に係る医薬、健康食品、抗薬剤耐性菌剤および抗酸化作用剤は、上記化合物（Ｉ）を含むことを特徴とする。ここで、抗薬剤耐性菌剤の対象となる薬剤耐性菌は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）、カルバペネム耐性セラチア菌など、従来の抗生物質に耐性を示す病原菌をいう。本発明の化合物（Ｉ）は、特にＭＲＳＡに対して良好な抗菌活性を示す。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の化合物（Ｉ）は良好な抗薬剤耐性菌活性を示すことから、ＭＲＳＡなど薬剤耐性菌感染症の治療薬となり得る。また、優れた抗酸化作用を有することから、癌、循環系疾患などの成人病、老化などの予防剤や治療剤となり得る。さらに、本発明の化合物（Ｉ）はタマネギ外皮から単離された天然化合物であることから、生体に与える悪影響は極めて少ないと考えられる。よって本発明の化合物（Ｉ）は、医薬や健康食品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
上記本発明化合物（Ｉ）は、常法に従ってタマネギ外皮から単離精製することができる。
【００２８】
原料として使用するタマネギの種類は特に制限されず、黄タマネギ、紫タマネギ、白タマネギのいずれでも用いることができるが、黄タマネギが特に好適である。これらタマネギの外皮を洗浄し、乾燥して粉末状等にした上で、化合物（Ｉ）を抽出すればよい。
【００２９】
本発明化合物（Ｉ）は、複数のアリール基やヘテロアリール基を有することから、酢酸エチルやクロロホルムなど溶解性の高い有機溶媒に溶解性を示す。その一方で、粗抽出物など他の化合物との混合物の段階では水溶性も示す。従って、水や低級アルコールなどの水系溶媒や、酢酸エチルなどの有機溶媒を組合わせて抽出することによって、本発明化合物（Ｉ）を含む抽出物を得ることができる。
【００３０】
より具体的には、例えば、先ず抽出溶媒として水を用い、８０〜１００℃で６〜２４時間程度加熱することにより抽出する。次いで、当該抽出物の中で油溶性も示す化合物を、酢酸エチル、クロロホルム、ジクロロメタンなどでさらに抽出すればよい。当該抽出は、これら有機溶媒と水、さらにはブタノールなどとの間で分液し、有機溶媒相を分離することにより行なってもよい。また、当該抽出の前に、メタノールやエタノールなどで予備的な抽出を行なってもよい。
【００３１】
得られた粗抽出物に対して、クロロホルムとメタノールなど極性の低い溶媒と高い溶媒との混合溶液で段階的に濃度勾配を設けたものを溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィ、ゲル浸透クロマトグラフィ、および高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）などの公知の精製方法を組合わせたり繰り返すことによって、化合物を単離精製する。
【００３２】
本発明者らは、米ワシントン州産Ｙｅｌｌｏｗ種のタマネギ外皮から十数種の化合物を単離精製し、ＮＭＲ等により構造を決定した上で活性試験を行なうことによって、抗薬剤耐性菌活性と抗酸化作用を有する下記ポリフェノール化合物１〜４を見出した。
【００３３】
【化４】
2007051099.tif 000005
【００３４】
また、本発明者らは、下記化合物５も単離精製した。
【００３５】
【化５】
2007051099.tif 000006
【００３６】
本発明の化合物（Ｉ）は、抗薬剤耐性菌活性と抗酸化作用を有することから医薬や健康食品として利用することができる。例えば、基剤、助剤、賦形剤や他の薬剤と共に、軟膏剤や硬膏剤、テープ剤、パップ剤などの外用剤；液剤や懸濁剤などの注射用製剤；噴霧剤；カプセル剤、錠剤、散剤などの経口剤等とすることができる。また、一般的な健康食品へ添加してもよい。
【００３７】
患者に本発明化合物を投与する場合、投与量は患者の年齢や性別、疾患の重度などにより異なるが、本発明化合物は水溶性が高く安全な天然有機化合物であるので、通常の抗生物質等によりも多く投与できると考えられる。
【００３８】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例により制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００３９】
実施例１  化合物１〜５の単離
米ワシントン州産Ｙｅｌｌｏｗ種のタマネギ外皮エキス（太邦株式会社（兵庫県西宮市）製造品、１２ｋｇ）を２４０Ｌの水に投入し、９０℃で１２時間加熱した後に濾過した。濾液を減圧濃縮することによって、６６６ｇの粗抽出物を得た。当該粗抽出物をさらにメタノールで抽出し、減圧濃縮することによって、固体状残渣（２２４ｇ）を得た。このメタノール抽出物を、酢酸エチル、ブタノールおよび水との間で分液した。酢酸エチル相を減圧濃縮し、得られた残渣（１３０．２ｇ）を、クロロホルム／：メタノール（１００／０から０／１００までグラディエント）を溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィ（関東化学社製、シリカゲル６０Ｎ）によって、フラクション１〜９（Ｆ１〜Ｆ９）を得た。Ｆ６（３２ｇ）を、クロロホルム／：メタノール（９５／５から０／１００までグラディエント）を溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィ（関東化学社製、シリカゲル６０Ｎ）によって、フラクション１〜８（Ｆ６．１〜Ｆ６．８）を得た。Ｆ６．７（１．８２ｇ）を、メタノールを溶出液とするゲル浸透クロマトグラフィ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０）によって、フラクション１〜７（Ｆ６．７．１〜Ｆ６．７．７）を得た。Ｆ６．７．１（９３ｍｇ）、Ｆ６．７．３（１３０ｍｇ）および６．７．５（３６８ｍｇ）を、ＧＰＣ−ＨＰＬＣ（Ｓｈｏｄｅｘ社製、Ａｓａｈｉｐａｃｋ  ＧＳ３１０−２Ｇ、溶出液：メタノール）で精製することによって、それぞれのフラクションから化合物５（３３ｍｇ）、１（２８ｍｇ）および２（３６ｍｇ）を得た。また、Ｆ６．６を、メタノールを溶出液とするゲル浸透クロマトグラフィ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０）によって、フラクション１〜１９（Ｆ６．６．１〜Ｆ６．６．１９）を得た。Ｆ６．６．１７は、化合物３（３１ｍｇ）であった。
【００４０】
実施例２  化合物１〜５の同定
上記実施例１で単離した化合物１〜５の各項目について、下記により分析した。
【００４１】
旋光度  −  ＪＡＳＣＯ  ＤＩＰ−３７０
ＵＶスペクトル  −  島津製作所製、ＵＶ２１００  ＵＶ−ｖｉｓ
ＩＲスペクトル  −  ＪＡＳＣＯ社製  ＦＴ／ＩＲ−４２０
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）、13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）  −  Ｂｒｕｃｋｅｒ社製  ＡＶＡＮＣＥ４００、溶媒：ＣＤ3ＯＤ
ＦＡＢ−ＭＡＳスペクトル  −  ＳＸ−１０２Ａ
測定結果は、以下の通りであった。
【００４２】
化合物１
旋光度  −  ［α］D−４．３°（メタノール，ｃ０．５）
ＩＲスペクトル  −  ν（ＫＢｒ）３２１７，１６８７，１６２８，１２９２，１１６１ｃｍ-1
ＵＶスペクトル  −  λmax（ｌｏｇε）３２１（３．１０），２９２（３．４０）ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲデータ  −  表１に示す
13Ｃ−ＮＭＲデータ  −  表２に示す
分子イオンピーク  −  ３０３．０５２２［Ｍ−Ｈ］+、３０４．０５５５［Ｍ］+
対応する化学式：  Ｃ15Ｈ12Ｏ7  ３０４．０５８３
以上の結果から、化合物１を２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−２−メトキシベンゾフラン−３−オンと判断した。なお、ＮＭＲデータによる同定は、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣにより確認した。以下でも同様である。
【００４３】
化合物２
旋光度  −  ［α］D＋４４．９°（アセトン，ｃ０．０７）
ＩＲスペクトル  −  ν（ＫＢｒ）３２４９，１６３５，１２９２，１１６９ｃｍ-1
ＵＶスペクトル  −  λmax（ｌｏｇε）３２７（３．５４），２９１（３．７９）ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲデータ  −  表１に示す
13Ｃ−ＮＭＲデータ  −  表２に示す
分子イオンピーク  −  ４２６．０５１１［Ｍ］+
対応する化学式：  Ｃ21Ｈ14Ｏ10  ４２６．０５８７
以上の結果から、化合物２を３−フロログルシノイル−２，３−エポキシフラバノンと同定した。
【００４４】
化合物３
旋光度  −  ［α］D＋１７．５°（アセトン，ｃ０．８）
ＩＲスペクトル  −  ν（ＫＢｒ）３３３０，２９２７，１６３７，１４５８，１３００ｃｍ-1
ＵＶスペクトル  −  λmax（ｌｏｇε）３７８（３．３６），２９８（３．４４），２５６（３．５４）ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲデータ  −  表１に示す
13Ｃ−ＮＭＲデータ  −  表２に示す
分子イオンピーク  −  ６０２．０５２５［Ｍ］+
対応する化学式：  Ｃ30Ｈ18Ｏ14  ６０２．０６９７
以上の結果から、化合物３を３−クエルセチニル−２，３−エポキシフラバノンと同定した。
【００４５】
化合物４
旋光度  −  ［α］D＋１９．３°（アセトン，ｃ０．０１５）
ＩＲスペクトル  −  ν（ＫＢｒ）３６２９，１６７４，１３００，１１７４ｃｍ-1
ＵＶスペクトル  −  λmax（ｌｏｇε）２８９（３．５５），２２８（３．５１）ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲデータ  −  表１に示す
13Ｃ−ＮＭＲデータ  −  表２に示す
分子イオンピーク  −  ５１２．０６６４［Ｍ］-
対応する化学式：  Ｃ24Ｈ16Ｏ13  ５１２．０５９１
以上の結果から、化合物４を３−［３−（２，４，６−トリヒドロキシ−１−メチルグリオキシレートフェニル）］−２，３−エポキシフラバノンと同定した。
【００４６】
化合物５
ＩＲスペクトル  −  ν（ＫＢｒ）３９０３，１６１０，１５０８，１２３６，１０７６ｃｍ-1
ＵＶスペクトル  −  λmax（ｌｏｇε）２９０（２．２７），２７９（２．６２），２７４（２．６５）ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲデータ  −  7.09（d，2，8.4Hz，H-3，H-5），7.06（dd，1，7.8，7.7Hz，H-5’），7.00（d，2，8.4Hz，H-2，H-6），6.69（d，1，7.7Hz，H-6’），6.62（s，1，H-2’），6.60（d，1，7.8 Hz，H-4’），4.89（1H，HODシングレットと重複，H-1’’’），3.91（d，1，12.1Hz，H-6’’’eq），3.71（dd，1，12.1，3.6Hz，H-6’’’ax），3.45（m，4，H-2’’’−H-5’’’），2.82（m，4，H7a，H7b，H8a，H8b)
13Ｃ−ＮＭＲデータ  −  158.3（C-3’），157.4（C-4），144.6（C-1’），137.1（C-1），130.4（C-2，C-6），130.3（C-5’），120.9（C-6’），117.7（C-3，C-5），116.4（C-2’），113.8（C-4’），102.5（C-1’’’），78.1（C-3’’’），78.0（C-5’’’），75.0（C-2’’’），71.4（C-4’’’），62.6（C-6’’’），39.2（C-8），38.1（C-7)
分子イオンピーク  −  ３７６．１５２２［Ｍ］+
対応する化学式：  Ｃ20Ｈ24Ｏ7  ３７６．１５２２
以上の結果から、化合物５をルヌラリン−４−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと同定した。
【００４７】
【表１】
2007051099.tif 000007
【００４８】
【表２】
2007051099.tif 000008
【００４９】
実施例３  抗ＭＲＳＡ活性試験
本実験に供したＭＲＳＡ＃５菌とＭＲＳＡ  ＣＯＬ株は、徳島大学薬学部微生物薬品化学研究室の保存株を使用した。その内ＭＲＳＡ  ＣＯＬ株は、John  J．Iandolo教授（オークランド大学ヘルスサイエンスセンター）から分与されたものである。
【００５０】
ペーパーディスクとしてWhatman  AA  disc（直径６．０ｍｍ）を用い、化合物３をジメチルスルホキシド（関東化学社製）に溶解して１０ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、滅菌したペーパーディスク上に１００μｇ添加した。別途、Mueller−Hinton  II  agar（ＢＢＬ社製）に抗生物質であるオキサシリン（Sigma社製）を１０μｇ／ｍＬの割合で添加した培地２０ｍＬの平板培地を、角シャーレ（栄研化学社製、２号）に作製した。また、オキサシリンを添加しない培地も同様に作製した。この平板培地へ、ＭＲＳＡ＃５菌とＭＲＳＡ  ＣＯＬ株をそれぞれ１０5ＣＦＵ／ｍＬとなる様に懸濁した半流動培地（Difco社製，Mueller−Hinton  broth）を８ｍＬ重層した。各シャーレに上記ペーパーディスクを置いて３７℃で２４時間培養し、増殖阻止帯の直径を測った。また、比較のために、ＭＲＳＡに対する抗菌活性を有さない抗生物質であるセファプリンを２０μｇ／ディスクで添加したペーパーディスクについても、同様の実験を行なった。結果を表３に示す。
【００５１】
【表３】
2007051099.tif 000009
【００５２】
当該結果より、本発明化合物であるポリフェノール化合物３は、良好な抗ＭＲＳＡ活性を有することが実証された。また、オキサシリンと組合わせることによりさらに効果は高まることから、本発明のポリフェノール化合物３は、他の抗生物質と併用することによって、より優れた抗ＭＲＳＡ活性を示すことが分かった。
【００５３】
実施例４  抗酸化作用試験
本発明のポリフェノール化合物１〜４の２．５ｍＭエタノール溶液を段階的に希釈することによって、濃度０〜１００μＭのエタノール溶液を調製した。また、別途１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（以下、「ＤＰＰＨ」という）の１００μＭエタノール溶液を調製した。両溶液を３２０μＬのエタノールに加え、室温で３０分間反応させた後、残存するＤＰＰＨラジカルの濃度を電子スピン共鳴法により計測した。また、抗酸化活性の指標として、下記反応によりＤＰＰＨラジカルと１対１で反応するＬ−システインを用いた（ＤＰＰＨ＊＋システイン−ＳＨ→ＤＰＰＨ：Ｈ＋システイン−Ｓ＊）。なお、安定性の問題から、Ｌ−システインは５０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）で溶解して実験に用いた。結果を図１に示す。
【００５４】
図１の結果の通り、Ｌ−システインはＤＰＰＨと１対１で反応するために、ＤＰＰＨに対するシステインの濃度比（比：Ｌ−システイン／ＤＰＰＨ）が１．０でＤＰＰＨラジカルを１００％消去している。一方、本発明のポリフェノール化合物１〜４では、ＤＰＰＨに対する各化合物の濃度比（比：化合物１〜４／ＤＰＰＨ）が０．２〜０．４の時点でＤＰＰＨラジカルをほぼ１００％消去している。よって、本発明のポリフェノール化合物は優れた抗酸化作用を有することが明らかにされた。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】各化合物による抗酸化作用、即ちＤＰＰＨラジカルの消去能を測定した結果である。ＤＰＰＨと１対１で反応してＤＰＰＨラジカルを消失させるＬ−システインに比べて、本発明のポリフェノール化合物１〜４が明らかに優れた抗酸化作用を有していることが分かる。
【図１】
2007051099.tif 000015