(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒトＤＮＡ修復蛋白Ｏ6−アルキルグアニン−ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ）の不活性化に有用な化合物の提供。【解決手段】下記式（１）で表されるＡＧＴ不活性化化合物の有効量を哺乳動物に投与すること、およびグアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することによる、腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法。2007077157.tif 000038【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2007077157.tif 000029
〔式中、Ｒ1はＮＯ2またはＮＯであり、Ｒ2は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物および医薬上許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項３】
医薬上許容される担体および式
【化２】
2007077157.tif 000030
〔式中、Ｒは水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アシル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ1（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
【請求項４】
式
【化３】
2007077157.tif 000031
〔式中、Ｒは水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アシル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ1（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を含有する医薬組成物。
【請求項５】
式
【化４】
2007077157.tif 000032
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物。
【請求項６】
式
【化５】
2007077157.tif 000033
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物。
【請求項７】
医薬上許容される担体および式
【化６】
2007077157.tif 000034
で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
【請求項８】
医薬上許容される担体および式
【化７】
2007077157.tif 000035
で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
【請求項９】
式
【化８】
2007077157.tif 000036
で表される化合物、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を含有する医薬組成物。
【請求項１０】
式
【化９】
2007077157.tif 000037
で表される化合物、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を含有する医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１、５および６のいずれかに記載の化合物を含有する、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤による哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療の増強用医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、置換されたＯ6−ベンジルグアニン、Ｏ6−ベンジル−８−アザグアニン、および６（４）−ベンジルオキシピリミジン、かかる化合物を含有する医薬組成物、ならびにかかる化合物の使用方法に関する。本発明の化合物は、特に、ヒトＤＮＡ修復蛋白Ｏ6−アルキルグアニン−ＤＮＡ  アルキルトランスフェラーゼの不活性化に有用である。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
Ｏ6−ベンジルグアニンによるヒトＤＮＡ修復蛋白Ｏ6−アルキルグアニン−ＤＮＡ  アルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ）の不活性化は、化学療法薬（その作用機作がＤＮＡグアニン残基のＯ6−位の改変を含むもの）に対するヒト腫瘍細胞および腫瘍異種移植片の細胞毒性反応の劇的な増強をもたらす(Dolan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87, 5368-5372 (1990); Dolan et al., Cancer Res., 51, 3367-3372 (1991); Dolan et al., Cancer Commun., 2, 371-377 (1990); Mitchell et al., Cancer Res., 52, 1171-1175 (1992); Friedman et al., J. Natl. Cancer Inst., 84, 1926-1931 (1992); Felker et al., Cancer Chem. Pharmacol., 32, 471-476 (1993); Dolan et al., Cancer Chem. Pharmacol., 32, 221-225 (1993); Dolan et al., Biochem. Pharmacol., 46, 285-290 (1993))。多数のＯ6−ベンジルグアニン類縁体のＡＧＴ不活性化活性が、置換基のタイプとそれら置換基がＡＧＴ−不活性化活性を著しく低下させることなくＯ6−ベンジルグアニンに結合できる位置とに関する情報を得る目的で比較されている(Moschel et al., J. Med. Chem., 35, 4486-4491 (1992); Chae et al., J. Med. Chem., 37, 342-347 (1994))。これらの研究から、Ｏ6−ベンジルグアニンと同等の活性あるいはそれより幾らか弱い活性をもつ種々の類縁体が製造されたが、これらの類縁体の中でＯ6−ベンジルグアニンよりよいものはなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
このように、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷(cytotoxic lesions)を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強することができるさらに別の化合物が必要とされている。本発明は、このような化合物ならびに関連する医薬組成物および治療方法を提供する。これらの目的および本発明のその他の目的ならびに有益な点は、さらなる発明的特徴と同様に、ここに記載する発明の説明から明らかとなるだろう。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の簡単な要旨
本発明は、有効なＡＧＴ不活性化剤であることが見出された７−および８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、７，８−ジ置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、７，９−ジ置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、および４（６）−置換  ２−アミノ−５−ニトロ−６（４）−ベンジルオキシピリミジンおよび２−アミノ−５−ニトロソ−６（４）−ベンジルオキシピリミジン誘導体、ならびにかかる誘導体を医薬的に許容される担体と共に含有する医薬組成物を提供する。本発明はさらに、前記誘導体の１つ、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ｓ−トリアジン、５−置換  ２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン、または８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンの有効量を哺乳動物に投与すること、およびグアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することによる、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
好適な実施態様の説明
本発明は、式Ｉ
【０００６】
【化１】
2007077157.tif 000002
【０００７】
〔式中、Ｒ1はアミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノおよびＣ1−Ｃ4アシルアミノからなる群より選ばれる置換基（しかし、後記で詳述するように、この２位は他の置換基で置換することができる）、Ｒ2は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、Ｃ1−Ｃ4カルバモイルアルキル、Ｃ1−Ｃ4ピバロイルアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、カルボＣ1−Ｃ4アルコキシアルキル、リボース、２’−デオキシリボース、Ｃ1−Ｃ4カルボキシアルキルの共役酸の形態およびナトリウム塩としてのＣ1−Ｃ4カルボキシアルキルのカルボキシレートアニオンからなる群より選ばれる置換基（しかし、後記で詳述するように、このＮ9位は他の置換基で置換することができる）、ならびにＲ3は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、Ｃ1−Ｃ4アミノアシル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノメチル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。但し、Ｒ2およびＲ3の両方が水素原子である時、Ｒ1はアミノではなく、Ｒ2がリボースまたは２’−デオキシリボースで、Ｒ3が水素原子である時、Ｒ1はアミノまたはメチルアミノではない。〕で表される化合物を提供する。本明細書では置換基を、その置換基の結合位置から最も遠い基から最初に命名するように定義している。例示すると、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルはピバロイルオキシメチルを含む。
【０００８】
上記式で表される適当な化合物には、Ｒ1がアミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノおよびＣ1−Ｃ4アルキルカルボニルアミノからなる群より選ばれ、Ｒ2が水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれ、ならびにＲ3がアミノ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる化合物が含まれる。他の適当な化合物には、Ｒ1がアミノ、ヒドロキシ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアセチルアミノからなる群より選ばれ、Ｒ2が水素原子、メチルおよびピバロイルオキシメチルからなる群より選ばれ、ならびにＲ3がアミノ、ブロモ、メチル、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる化合物が含まれる。適当な化合物の例には、８−アミノ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−メチル−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−ヒドロキシ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−ブロモ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−トリフルオロメチル−Ｏ6−ベンジルグアニン、Ｏ6−ベンジルキサンチン、Ｏ6−ベンジル尿酸、Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2−メチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチル−９−メチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−９−メチルグアニンおよびＯ6−ベンジル−８−ブロモ−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニンが含まれる。
【０００９】
本発明はまた、式II
【００１０】
【化２】
2007077157.tif 000003
【００１１】
〔式中、Ｒ1はＮＯ2またはＮＯであり、Ｒ2は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物を提供する。適当な化合物には、Ｒ1がＮＯ2であり、Ｒ2が水素原子またはＣ1−Ｃ4アルキルである化合物が含まれる。適当な化合物の例には、２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジンおよび２−アミノ−４−ベンジルオキシ−６−メチル−５−ニトロピリミジンが含まれる。
【００１２】
本発明はさらに、式III
【００１３】
【化３】
2007077157.tif 000004
【００１４】
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物を提供する。上記式で表される適当な化合物には、ＲがＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる化合物が含まれる。適当な化合物の例には、８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−メチルグアニンおよび８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニンが含まれる。
【００１５】
本発明はさらに、式IV
【００１６】
【化４】
2007077157.tif 000005
【００１７】
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物を提供する。適当な化合物には、ＲがＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルである化合物が含まれる。適当な化合物の例は８−アザ−Ｏ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンである。
【００１８】
本発明はさらに、式Ｖ
【００１９】
【化５】
2007077157.tif 000006
【００２０】
（式中、Ｒ1は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、ハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれ、Ｒ2はＣ1−Ｃ4アルキル、ハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。但し、Ｒ1が水素原子の時、Ｒ2はハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ2−Ｃ4アルキル、シアノＣ2−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ2−Ｃ4アルキルおよびヒドロキシＣ1−Ｃ3アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物を提供する。適当な化合物には、Ｒ1が水素原子またはハロゲンであり、Ｒ2がＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルである化合物が含まれる。適当な化合物の例には、Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンおよびＯ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンが含まれる。
【００２１】
本発明はさらに、本発明のＯ6−置換化合物の１つまたはそれ以上を含有する医薬組成物によって一般的に投与される治療方法を提供する。特に、本発明は、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、該方法は、前述の式Ｉ−Ｖの本発明化合物の１つまたはそれ以上の有効量を哺乳動物に投与すること、およびグアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、該方法は、
(i)哺乳動物に
(a)８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン
【００２２】
【化６】
2007077157.tif 000007
【００２３】
(b)式VI
【００２４】
【化７】
2007077157.tif 000008
【００２５】
〔式中、Ｒは水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロメチル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物、または
(c)２，４−ジアミノ−Ｏ6−ベンジル−ｓ−トリアジンの有効量を投与すること、および
(ii)グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法を包含する。
【００２６】
本発明の化合物において、また本発明の方法に関連して有用な化合物において、これらの化合物の有効性を維持しながら、種々の置換が可能である。特に、式Ｉの化合物および８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンのＮ9位、ならびに式Ｉ−VIの化合物の２−および／または４−位を種々の置換基で置換できる（該置換基はこれらの位置に存在するどの置換基の代わりにも使用できる）。かかる置換は、アリール、置換アリールを含み、ここでアリール置換基は以下のものからなる群より選ばれる。Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ニトロ、ハロゲン、２〜４個の芳香族環を有する多環式芳香族アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ6ヒドロキシアルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロヒドロキシ  アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシ、アルキルがＣ1−Ｃ6であるアルキルカルボニルオキシアルキル、カルボキシ、アルキルがＣ1−Ｃ6であるカルボキシアルキルの酸または塩の形態、カルボニル、カルバモイル、アルキルがＣ1−Ｃ6であるカルバモイルアルキル、ヒドラジノカルボニル、クロロカルボニル、シアノ、Ｃ2−Ｃ9シアノアルキル、Ｃ−ホルミル、アルコキシがＣ1−Ｃ6であるジアルコキシメチル、Ｃ−アルキルカルボニル、アルキルとアルコキシがＣ1−Ｃ6であるアルコキシ  ヒドロキシアルキル、カルボキシメチルチオ、アルコシキとアルキルがＣ1−Ｃ6であるカルボアルコキシアルキル、アルキルがＣ1−Ｃ6であるモノアルキルアミノ  ヒドロキシアルキル、アルキルがＣ1−Ｃ6であるジアルキルアミノ  ヒドロキシアルキル、アルキルがＣ1−Ｃ6であるアミノ  ヒドロキシアルキル、Ｌ−セリンのβ−ラクトンまたは関連のアミノ酸に由来するペプチド、アルドテトロース、アルドペントースおよびアルドヘキソースからなる群より選ばれるモノサッカライド、スクロース、ラクトース、マルトースおよびセロビオースからなる群より選ばれるポリサッカライド、核酸セグメント、テストステロン、ノルテストステロンおよびジヒドロテストステロンからなる群より選ばれるステロイド、およびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’はＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキルまたはアリールである）。
【００２７】
ベンジル基のベンゼン環はまた、次のような適当な置換基の１つまたはそれ以上で置換されていてもよい。例えば、水素原子、ハロゲン、ニトロ、ニトロソ、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、多環式芳香族アリールアルキル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アリールオキシ、アルキルカルボニルオキシ、アルキルカルボニルオキシアルキル、オキソ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドラジノ、ヒドロキシアミノ、アシルアミノ、ウレイド、チオウレイド、アミジノ、グアニジノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、ヒドラジノカルボニル、クロロカルボニル、シアノ、シアノアルキル、Ｃ−ホルミル、ジアルコキシメチル、Ｃ−アルキルカルボニル、シアナト、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、カルボキシメチルチオ、アミノアルキル、アルキルアミノ、アミノカルボキシアルキル、ペプチド、炭水化物、ポリサッカライド、ステロイド、複素環、芳香族複素環、核酸誘導体、およびＳＯnＲ1（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ1は水素原子、アルキルまたはアリールである）である。アルキル、アルコキシ、アミノアルキル、アルキルアミノなどのような炭化水素置換基は、典型的にはＣ1−Ｃ6であり、より典型的にはＣ1−Ｃ4である。
【００２８】
出願人の関連米国特許出願SN 08/255,190および下記で言及するように、式Ｉ−VIの化合物上の特定の位置において有用であることがわかった置換基の範囲は、一般的に電子求引性である。本発明のＡＧＴを低下させる化合物について有用な置換基に関するさらなる情報は、米国特許第5,091,430号、同第5,358,952号、同第5,352,669号にも述べられている。本発明に関連して有用な前記化合物をひとまとめにして、ここではＯ6−置換化合物という。
【００２９】
幾つかのＯ6−置換化合物を、ヒトＤＮＡ修復蛋白、Ｏ6−アルキルグアニン−ＤＮＡ  アルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ，アルキルトランスフェラーゼ）を不活性化する能力について試験した。２つのクラスの化合物が、Ｏ6−ベンジルグアニン（原型の低分子量不活性化剤）に比べて、ヒトＨＴ２９結腸腫瘍細胞抽出物中のＡＧＴ不活性化について非常に優れていることが確認された。これらは、８−位に電子求引性基を有する８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン、および５−位に電子求引性基を有する５−置換  ２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジンであった。後者の誘導体はまた、無傷ＨＴ２９結腸腫瘍細胞内のＡＧＴ不活性化についても、Ｏ6−ベンジルグアニンに比べてより有効であった。どちらのタイプの化合物も、培地で培養した結腸癌細胞、乳癌細胞および前立腺癌細胞の１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）による細胞殺傷を増大させることについて、Ｏ6−ベンジルグアニンと同等あるいはそれより有効であった。８−位に電子求引性置換基を有する８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、および５−位に電子求引性置換基を有する５−置換  ２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジンが望ましくない毒性を示さなければ、それらは、抗腫瘍剤（その作用機作がＤＮＡグアニン残基のＯ6−位の改変を含むもの）の有効性を増強するための化学療法補助剤として、Ｏ6−ベンジルグアニンより優れているはずである。ＡＧＴ不活性化活性を試験した具体的な化合物を以下に図示する。
【００３０】
【化８】
2007077157.tif 000009
【００３１】
【化９】
2007077157.tif 000010
【００３２】
８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体、８−アミノ−Ｏ6−ベンジルグアニン（１ａ）およびＯ6−ベンジル−８−メチルグアニン（１ｂ）の製造は、それぞれ２，８−ジアミノ−６−クロロプリンおよび２−アミノ−６−クロロ−８−メチルプリンを、ベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドと処理することにより行った。Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（Ｏ6−ベンジル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアニン，１ｃ）は、１，１’−カルボニルジイミダゾールを２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジンと反応させることにより製造した(Pfleiderer et al., Chem. Ber., 94, 12-18, (1961))。便宜上、この化合物は８−ヒドロキシ互変異性体の形で図示するが、溶液中で７−窒素原子に水素が結合した８−ケト体で存在している可能性が最も高い。Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニン（１ｄ）は、Ｏ6−ベンジルグアニンの臭素化により製造した。Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチルグアニン（１ｅ）は、２−アミノ−６−クロロ−８−トリフルオロメチルプリンをベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドと反応させることにより製造した。８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（２）は、２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジンの亜硝酸処理を経て製造した。化合物２は、以前に別のルートにより製造されている(Shealy et al., J. Org. Chem., 27, 4518-4523 (1962))。
【００３３】
ピリミジン誘導体（３ａ−ｆ）に関して、４−アミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ａ）は、４−アミノ−６−クロロ−５−ニトロピリミジン(Boon et al., J. Chem. Soc., 96-102 (1951))をベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドで処理することにより製造した。誘導体３ｂ−ｄは、Pfleiderer et al. (Chem. Ber., 94, 12-18 (1961))の方法により製造した。２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ｅ）および２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ブロモピリミジン（３ｆ）は、以前にKosary et al. (Acta Pharm. Hung., 49, 241-247 (1989))により製造された。
【００３４】
プリン類、Ｏ6−ベンジルキサンチン（４ａ）およびＯ6−ベンジル尿酸（４ｂ）は、それぞれＯ6−ベンジルグアニンおよびＯ6−ベンジル−８−オキソグアニンの亜硝酸脱アミノ化により製造した。Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアニン）（４ｄ）は、Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（１ｃ）のアセチル化を経て製造した。Ｏ6−ベンジル−２−フルオロヒポキサンチン（４ｃ）は、以前にRobins and Robins (J. Org. Chem., 34, 2160-2163, (1969))により製造された。この物質をメチルアミンおよびジメチルアミンで処理して、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2−メチルグアニン（４ｅ）およびＯ6−ベンジル−Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアニン（４ｆ）がそれぞれ生成する。
【００３５】
化合物５ａ（２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン）および５ｂ（２−アミノ−４−ベンジルオキシ−６−メチル−５−ニトロピリミジン）は、２−アミノ−４−クロロ−５−ニトロピリミジンおよび２−アミノ−４−クロロ−６−メチル−５−ニトロピリミジン(Boon et al., J. Chem. Soc., 96-102 (1951)) をそれぞれ、ベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドで処理することにより製造した。化合物６（２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ｓ−トリアジン）は、以前に同様の条件下(Wakabayashi et al., Nippon Dojo-Hiryyogaku Zasshi, 41, 193-200 (1970))で製造された。Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチル−９−メチルグアニン（７）は、１ｅのアニオンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中でヨウ化メチルで処理することにより製造した。
【００３６】
化合物８ａは、メチル化剤としてヨウ化メチルを用い、８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンのナトリウム塩をメチル化することにより製造した。化合物８ｂおよび９は、８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンのナトリウム塩とピバル酸クロロメチルとの反応により製造した。化合物１０ａはＯ6−ベンジル−９−メチルグアニンの直接臭素化により製造した。化合物１０ｂおよび１１は、Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニンのナトリウム塩とピバル酸クロロメチルとの反応により製造した。化合物１２は、Ｏ6−ベンジルグアニンのナトリウム塩とピバル酸クロロメチルとの反応により製造した。
【００３７】
これらの化合物の、ＨＴ２９ヒト結腸腫瘍細胞抽出物における、および無傷ＨＴ２９細胞におけるＡＧＴ蛋白を不活性化する能力を表１および２にまとめて示す。データは、３０分間インキュベーションしたときの細胞非含有抽出物中で、あるいは４時間インキュベーションしたときの細胞内で５０％不活性化するのに必要な化合物の用量を示す。
【００３８】
【表１−１】
2007077157.tif 000011
【００３９】
【表１−２】
2007077157.tif 000012
【００４０】
これらの一連の化合物の中で、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2−メチル−およびＯ6−ベンジル−Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアニン（４ｅおよび４ｆ）が、それぞれ、ＨＴ２９細胞抽出物におけるＡＧＴの不活性化のＥＤ50値、１６０μＭおよび２００μＭを示し、最も活性の低い薬剤であった。比較のために、Ｏ6−ベンジルグアニンが示すＥＤ50値は０．２μＭ（表１）であった。他の２−および／または８−置換  ６−ベンジルオキシプリン、Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（４ｄ）、Ｏ6−ベンジルキサンチン（４ａ）、Ｏ6−ベンジル−２−フルオロヒポキサンチン（４ｃ）およびＯ6−ベンジル尿酸（４ｂ）は、置換ピリミジン、４−アミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ａ）および２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（３ｂ）と共に、６５から１５μＭの範囲の中間のＥＤ50値を示す、より活性が増大したＡＧＴ不活性化剤のグループを構成する。２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ｓ−トリアジン（６）および２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ブロモピリミジン（３ｆ）は３ｂよりかなり活性が高く、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン誘導体の５位の電子求引性基が、効果的なＡＧＴ不活性化にプラスに寄与することを示している。これはさらに、強い電子求引性基であるニトロソおよびニトロ置換基をそれぞれ有する、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロソピリミジン（３ｄ）および２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ｅ）により示される非常に高い活性により強調される。これら２つの誘導体は、現在まで試験した中で最も高い活性のＡＧＴ不活性化剤である。２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（５ａ）が３ａに比べてかなり高い活性であることは、６（４）−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン誘導体の高活性には２−アミノ基が重要であることを示す。４（６）位にさらにアルキル基を有する（例えば、５ｂにおけるように）ことが、活性を５ａより著しく増強することはないが、４（６）位のアミノ基は活性を著しく増強する。このように、ＡＧＴ活性は実質上、５ａ＝５ｂ＜３ｄ＝３ｅの順で増大する。これらの考察を考慮すると、２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（３ｃ）の活性は例外的と考えられ、現在のところ、その相対的に高い活性の理由は明らかでない。また、ピリミジン類５ａおよび５ｂが細胞内でかなり活性であることは重要である。これは、それらの化合物の対応するＨＴ２９細胞抽出物中での活性からは、全く予測されない。
【００４１】
全てのＯ6−ベンジルグアニン類縁体１ａ−ｄは、４ａ−ｆの一連のプリン類に比べてよりいっそう活性であり、１ａ−ｄの中での活性の相違も電子求引性基の導入による増強を反映している。このように、活性は８−アミノ−Ｏ6−ベンジルグアニン（１ａ）＜Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（１ｃ）＜Ｏ6−ベンジル−８−メチルグアニン（１ｂ）＜Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニン（１ｄ）＜８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（２）の順で増大した。実際、誘導体１ｄおよび２は、細胞非含有抽出物中でピリミジン類３ｄおよび３ｅと実質的に同等の活性であるが、１ｄおよび２は、それらの細胞非含有抽出物中での活性から予測されるよりも、細胞内では幾らか活性が低い。
【００４２】
表２に挙げた化合物もまた細胞非含有抽出物中および細胞内におけるＡＧＴ不活性化活性を有していた。７、８ａおよび１０ａの細胞内での活性は、細胞非含有抽出物中でのそれらの活性に比べて著しく高い。このように、誘導体１ｄ、１ｅおよび２の場合、細胞非含有抽出物中／無傷細胞内のＥＤ50値の比はそれぞれ１．６、１．６、１．１である（表１）。この比は、対応のメチル化誘導体１０ａ、７および８ａの場合、それぞれ７．２、６．３、６．３まで増大する。細胞内におけるメチル化誘導体のより高い活性は、これらの化合物がプリン環系のイミダゾール部分に容易に解離可能な水素を有しておらず、そのために中性分子として容易に細胞内に入ることができるという事実によると考えられる。
【００４３】
【表２】
2007077157.tif 000013
【００４４】
ＢＣＮＵ（４０μＭ）によるヒトＨＴ２９結腸癌細胞、ＤＵ−１４５前立腺癌細胞、およびＭＣＦ−７１乳癌細胞の殺傷を増強する能力を１ａ−ｄ、２、および３ｃ−ｅの濃度を増加させながら試験した結果を、それぞれ表３、４、および５に示す。データは、Dolan et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 87, 5368-5372 (1990))に記載されているように、ＡＧＴ不活性化剤単独に曝した後、またはＢＣＮＵに曝す２時間前にＡＧＴ不活性化剤に曝した後、結果として生じる細胞コロニー数を反映する。Ｏ6−ベンジルグアニンについてのデータを比較のために入れた。１０μＭ濃度のところに示すように、１ａを除いた全ての８−置換プリン類が、ＢＣＮＵ（４０μＭ）の細胞毒性の増強にＯ6−ベンジルグアニンと同程度の効果を有する。このような処理は実質的に全ての腫瘍細胞を死滅させる。改変された８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン単独、またはＢＣＮＵ単独による細胞の処理は、細胞コロニー数に対し著しい効果がなかった。乳癌細胞以外の全てにおいて１ａの活性が比較的低いことは、１ａが他のタイプの腫瘍細胞内に輸送されにくいこと、あるいは１ａが効力のないＡＧＴ不活性化剤に速やかに代謝変換されることを反映しているのかもしれない。１ａがＢＣＮＵ細胞毒性の増強に有効でないことは、１ａが結腸腫瘍細胞内で相対的にＡＧＴ不活性化能が低いこと（表１）と対応する。
【００４５】
試験したピリミジン類の場合、２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（３ｃ）が８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体と同等の活性であり、Ｏ6−ベンジルグアニン自身はＢＣＮＵ毒性を増強するが、ニトロソ−およびニトロピリミジン誘導体（３ｄおよび３ｅ）は４倍低用量で同様の活性であった。
【００４６】
【表３】
2007077157.tif 000014
【００４７】
【表４】
2007077157.tif 000015
【００４８】
【表５】
2007077157.tif 000016
【００４９】
ヒトアルキルトランスフェラーゼは、Ｏ6−ベンジルグアニンおよび上記した種々の化合物による不活性化に対して非常に感受性が高いが、Ｏ6−ベンジルグアニンに耐性である幾つかの変異体が生じている(Crone and Pegg, Cancer Res., 53, 4750-4753 (1993))。この耐性は、おそらくアルキルトランスフェラーゼの活性部位を取り囲む空間が減少し、これがＯ6−ベンジルグアニンへの接近を制限していることによると考えられる。これらの変異体は、アルキルトランスフェラーゼの１個または２個のアミノ酸の変換を起こす、アルキルトランスフェラーゼＤＮＡ−コーディング配列のたった１個の塩基変換により生じる(Crone and Pegg, Cancer Res., 53, 4750-4753 (1993))。従って、表６に示すように、１４０番目のプロリン残基のアラニンへの変換（蛋白Ｐ１４０Ａ）または１５６番目のグリシン残基のアラニンへの変換（蛋白Ｇ１５６Ａ）は、Ｏ6−ベンジルグアニンに対する耐性をそれぞれ２０倍および２４０倍に増大させる。１３８番目のプロリン残基の代わりにアルギニンを、１４０番目のプロリン残基の代わりにアルギニンを含有するアルキルトランスフェラーゼ（蛋白Ｐ１３８Ａ／Ｐ１４０Ａ）は、Ｏ6−ベンジルグアニンによる不活性化に対する耐性が８８倍である。このような耐性変異体は、Ｏ6−ベンジルグアニンとアルキル化剤の併用処置により生じる淘汰圧（selective pressure）下において腫瘍中に生じる、あるいは淘汰されて残る可能性がある。より強力な阻害剤および／または、変異体アルキルトランスフェラーゼの活性部位の空間によりフィットしやすい、より小さいサイズの阻害剤が、この耐性の克服を有利に行うために使用されうる。
【００５０】
【表６】
2007077157.tif 000017
【００５１】
表６に示すように、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロソピリミジン（３ｄ）は、変異体アルキルトランスフェラーゼの不活性化がＯ6−ベンジルグアニンの５０から６０倍高かった。従って、５μＭより高い細胞内濃度にする２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロソピリミジンの用量が、このような耐性アルキルトランスフェラーゼを不活性化するのに有効だろう。このような不活性化を達成するために、Ｏ6−ベンジルグアニンは２００μＭより高い濃度が必要であると考えられ、これは現在の処方に含まれているこの化合物によって達成しうる濃度よりはるかに高い。しかしながら、Ｏ6−ベンジルグアニンより著しく活性の高い８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体は、それらの誘導体が要求される細胞内濃度を達成しうるならば変異体アルキルトランスフェラーゼの不活性化に有用となりうる。変異体アルキルトランスフェラーゼ不活性化についてのこれらのデータおよび前に示されたデータは、５−位に電子求引性基を有するピリミジン誘導体ならびに８−位に電子求引性基を有する置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体が、薬剤（その作用機作が、ＢＣＮＵの作用機作と同様にＤＮＡグアニン残基のＯ6−位の改変を含むもの）を用いる化学療法において補助剤として使用するのに、Ｏ6−ベンジルグアニンよりも優れていることを示す。
【００５２】
電子求引性の８−置換基（例えば、ＮＯ2）を有する他の８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体が容易に入手できる。例えば、Ｏ6−ベンジル−８−ニトログアニンは以下のようにして製造できる。８−ニトログアニン(Jones and Robins, J. Am. Chem. Soc., 82, 3773-3779 (1960))を塩化ホスホリルで処理して２−アミノ−６−クロロ−８−ニトロプリンを製造し、これをベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドと処理すると所望のＯ6−ベンジル−８−ニトログアニンが得られるだろう。
【００５３】
さらに、ハロゲン基またはニトロ基以外の電子求引性基（例えば、ホルミル基またはシアノ基）を有する２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン誘導体も容易に入手できる。公知化合物、２，４−ジアミノ−５−ホルミル−６−ヒドロキシピリミジン(Delia and Otteman, Heterocycles, 20, 1805-1809 (1983))を塩化ホスホリルで処理して２，４−ジアミノ−６−クロロ−５−ホルミルピリミジン中間体を得ることができ、これをベンジルアルコール中でナトリウムベンジルオキシドと処理すると２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ホルミルピリミジンを得る。このホルミルピリミジンをヒドロキシアミンで処理することにより、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−シアノピリミジンを得る。多数の５−置換６（４）−ベンジルオキシピリミジンまたは８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体を製造することが、複素環芳香族化合物の合成の分野の当業者に可能である(D.J. Brown, “The Pyrimidines,” in The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol.16, A. Weissberger, Ed., Wiley Interscience, New York, 1962; D.J. Brown, “The Pyrimidines,” Supplement I, in The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol.16, A. Weissberger and E.C. Taylor, Eds., Wiley Interscience, New York, 1970; J.H. Lister, “Fused Pyrimidines Part II Purines,” in The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol.24, Part II, A. Weissberger and E.C. Taylor, Eds., Wiley Interscience, New York, 1971)。
【００５４】
多くの９−置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体が優れたＡＧＴ不活性化特性を示すので(Moschel et al., J. Med. Chem., 35, 4486-4491 (1992); Chae et al., J. Med. Chem., 37, 342-347 (1994))、８，９−ジ置換類縁体が同様に活性であると予測される。これらの化合物は以下のようにして容易に製造できる。８−置換Ｏ6−ベンジルグアニン類（例えば、１ａ−ｅ）のアニオン、または８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（２）のアニオンを、既に報告されている化合物の範囲のいずれ(Moschel et al, J. Med. Chem., 35, 4486-4491 (1992); Chae et al., J. Med. Chem., 37, 342-347 (1994))とでも反応させて、異性体である７，８−および８，９−ジ置換Ｏ6−ベンジルグアニン誘導体の混合物を得る。所望の８，９−ジ置換誘導体は、既に報告されているシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって単離および精製することができる(Moschel et al, J. Med. Chem., 35, 4486-4491 (1992); Chae et al., J. Med. Chem., 37, 342-347 (1994))。化合物７は化合物１ｅのアニオンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中でヨウ化メチルで処理することにより製造した。化合物８−１２は同様の手法を用いて製造した。
【００５５】
本発明のＯ6−置換化合物は、特定の癌の化学療法治療を増強する目的で、哺乳動物に対しどんな適当な方法によっても投与されうる。特定の化合物を投与するのに二以上の経路を用いてもよいが経路によっては別の経路よりも迅速かつ効果的な反応が得られる。従って、ここに記載した方法は単に例示であり、それらに限定されるものではない。
【００５６】
一般に、上記説明したような本発明のＯ6−置換化合物は、個々の癌患者に医薬組成物の形で投与されるだろう。化学療法を受けている、または受けようとしている者にＯ6−置換化合物による治療を独立して、または適宜、他の治療と組み合わせて行うことができる。治療的適用においては、組成物は、ＡＧＴ活性の有効な低下を誘導し、それにより前記化学療法治療の細胞毒性を高めるのに十分な量で患者に投与される。これを達成するのに適した量は「治療有効投与量」と定義され、また「ＡＧＴ不活性化有効量」とも定義される。治療的または予防的使用に有効な量は、例えば、治療すべき疾患の段階および重篤度、年齢、体重、および患者の健康の普通の状態、および処方する医師の判断に応じて変わりうるだろう。投与量はまた、選択されたＯ6−置換化合物、投与方法、投与の時期と頻度、および特定のＯ6−置換化合物の投与に伴うかもしれない好ましくない副作用の存在、性質および程度、ならびに所望の生理学的作用に応じても決定されるだろう。種々の疾患状態で多回投与（おそらく、投与の各回または様々な回に一連の異なるＡＧＴ不活性化剤および／または化学療法剤を使用する投与）を伴う長期の治療を必要とするかもしれないことが当業者には理解されるだろう。
【００５７】
本発明のＯ6−置換化合物と組み合わせて有効に投与される適当な化学療法剤としては、クロロエチル化剤およびメチル化剤のようなアルキル化剤が挙げられる。かかる薬剤は、Wasserman et al., Cancer, 36, pp. 1258-1268 (1975)およびPhysicians' Desk Reference, 48th ed., Edward R. Barnhart publisher (1994)に記載された慣用の手法を用いて投与されうる。例えば、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素（カルムスチンまたはＢＣＮＵ、Bristol-Myers，Evansville，IN）は、６週間毎に約１５０から２００ｍｇ／ｍ2の投与量で静脈内投与されうる。別のアルキル化剤、１−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソ尿素(ロムスチンまたはＣＣＮＵ、Bristol-Myers)は、６週間毎に約１３０ｍｇ／ｍ2の投与量で経口投与されうる。他のアルキル化剤は、熟練した医療従事者に知られている適当な投与経路を介して適当な投与量で投与されうる。
【００５８】
適当な投与量および投薬プログラムは、通常の知識を有する当業者に知られている慣用の投与量範囲決定手法により決定することができる。一般に、化合物の最適投与量より少ない、少量の投与量で治療を開始する。その後、その状況下で最適の効果に達するまで投与量を少しづつ増加する。本発明の方法は、通例、患者の体重１ｋｇ当たり、前記化合物の１つまたはそれ以上の約０．１μｇから約５０ｍｇを投与することを含むだろう。７０ｋｇの患者の場合、Ｏ6−置換化合物の約１０μｇから約２００ｍｇの投与量がより一般的に用いられ、癌特異性抗原または患者の腫瘍負荷に関連する測定可能なパラメーターを測定することにより決定されるような患者の生理的反応に応じて、おそらく、続いてさらに少ない投与量であるＯ6−置換化合物の約１μｇから約１ｍｇの投与量で数週間から数カ月にわたり投与される。
【００５９】
本発明の化合物および組成物は、通常、重篤な疾患状態、即ち、命が脅かされるあるいは実質的に命が脅かされるような状況で用いられることを留意しなけらばならない。このような場合、異物を最小限にすること、およびＯ6−置換化合物の比較的非毒性の性質を考慮して、治療する医師は、これらのＯ6−置換化合物をかなり過剰に投与することが可能であり、また望ましいと考えるかもしれない。
【００６０】
本化合物の一回または多回投与は、治療する医師により選択された投与量レベルおよびパターンで実施することができる。どんな場合でも、化学療法の細胞毒性効果を有効に増強するのに十分な量の本発明のＡＧＴ不活性化化合物が医薬製剤中に含まれているべきである。
【００６１】
治療処置用の医薬組成物は、非経口、局部、経口または局所投与用であり、通常、医薬的に許容される担体と、ＡＧＴ蛋白の活性を低下させる、好ましくは防止するのに十分な量の有効成分を含有する。担体は通常使われているものであれば何でもよく、溶解度および化合物との反応性がないことのような化学物理的な事柄、ならびに投与経路によってのみ限定される。
【００６２】
本発明の医薬組成物で使用される医薬的に許容される酸付加塩の例としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸のような無機酸、および酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびアリールスルホン酸のような有機酸が挙げられる。
【００６３】
ここで説明する医薬的に許容される賦形剤、例えば、ビヒクル、補助剤、担体または希釈剤は当業者によく知られており、一般に容易に入手可能なものである。好ましくは、医薬的に許容される担体は活性化合物に対して化学的に不活性なもので、かつ使用条件下で有害な副作用または毒性を有していないものである。このような医薬的に許容される賦形剤としては、好ましくは、食塩水（０．９％食塩水）、クレモフォールＥＬ(Cremophor EL)（これはヒマシ油とエチレンオキシドの誘導体であり、Sigma Chemical Co., St. Louis, MO から入手できる）（例、５％クレモフォールＥＬ／５％エタノール／９０％食塩水、１０％クレモフォールＥＬ／９０％食塩水、または５０％クレモフォールＥＬ／５０％エタノール）、プロピレングリコール（例、４０％プロピレングリコール／１０％エタノール／５０％水）、ポリエチレングリコール（例、４０％ＰＥＧ４００／６０％食塩水）、およびアルコール（例、４０％ ｔ−ブタノール／６０％水）が挙げられる。本発明に関連して使用される最も好ましい医薬賦形剤は、ＰＥＧ４００のようなポリエチレングリコールであり、特に４０％ＰＥＧ４００／６０％水または食塩水を含有する組成物である。
【００６４】
賦形剤の選択は、一部は選択された特定のＯ6−置換化合物、および組成物の投与に用いられる特定の方法により決定されるだろう。従って、本発明の医薬組成物の適当な製剤にはさまざまな種類がある。
【００６５】
以下の経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、直腸内、および膣内投与用の製剤は単に例示であり、それらに限定されるものではない。
【００６６】
医薬組成物は、非経口的に、例えば、静脈内、動脈内、皮下、経皮、または筋肉内投与することができる。従って、本発明は、非経口投与に適した許容される担体に溶解または懸濁したＯ6−置換化合物の溶液（水性および非水性の等張無菌注射溶液を含む）を含有する非経口投与用組成物を提供する。
【００６７】
全般的に、非経口投与組成物の有効な医薬担体に必要な要件は通常の知識を有する当業者によく知られている。Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pp. 238-250 (1982); ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pp. 622-630 (1986)参照。このような溶液剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および当該製剤を投与対象者の血液と等張にする溶質を含有してよく、また、この製剤には、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含有してもよい水性および非水性の無菌懸濁液も含まれる。本化合物は、無菌の液体または液体の混合物〔水、食塩水、デキストロースおよび関連する糖の水溶液、アルコール（エタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコールなど）、グリコール（プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）、ジメチルスルホキシド、グリセロールケタール（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールなど）、エーテル（ポリ（エチレングリコール）４００など）、油、脂肪酸、脂肪酸エステルまたはグリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドを含む〕のような医薬担体に、医薬的に許容される界面活性剤（石鹸または洗剤(detergent)など）、懸濁化剤（ペクチン、カルボマー(carbomer)、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースなど）、または乳化剤および他の医薬補助剤を添加した、または添加していない生理的に許容される希釈剤中に含ませて投与してもよい。
【００６８】
非経口投与製剤に用いられる油としては、鉱油、動物油、植物油または合成油が挙げられる。このような製剤に用いられる油の具体的な例としては、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ワセリンおよび鉱油が挙げられる。非経口投与製剤に用いられる適当な脂肪酸としては、オレイン酸、ステアリン酸およびイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルが適当な脂肪酸エステルの例である。
【００６９】
非経口投与製剤に用いられる適当な石鹸としては、脂肪酸アルカリ金属塩、アンモニウム塩およびトリエタノールアミン塩が挙げられ、適当な洗剤としては、（ａ）例えば、ハロゲン化ジメチルジアルキルアンモニウムおよびハロゲン化アルキルピリジニウムのようなカチオン性洗剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリールおよびオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテルおよびモノグリセリドスルフェート、およびスルホスクシネートのようなアニオン性洗剤、（ｃ）例えば、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミドおよびポリオキシエチレンポリプロピレン共重合体のような非イオン性洗剤、（ｄ）例えば、アルキル−β−アミノプロピオネートおよび２−アルキル−イミダゾリン第四級アンモニウム塩のような両性洗剤、および（ｅ）それらの混合物が挙げられる。
【００７０】
非経口投与製剤は、通常、溶液中に約０．５重量％から約２５重量％の有効成分を含有するだろう。保存剤および緩衝剤を用いてもよい。注射部位での刺激を最小限にするまたは除くために、このような組成物は１つまたはそれ以上の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）が約１２から約１７の非イオン性界面活性剤を含有してもよい。かかる製剤中の界面活性剤の量は、通常、約５重量％から約１５重量％の範囲である。適当な界面活性剤としては、モノオレイン酸ソルビタンのようなポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびプロピレンオキシドとプロピレングリコールの縮合によって形成される、疎水性ベース（hydrophobic base）とエチレンオキシドの高分子量付加物が挙げられる。非経口投与製剤は、単位投与量または多回投与量を封入したアンプルおよびバイアルのような容器中に入れて提供することができ、また、使用の直前に、例えば、注射用水のような無菌液体賦形剤を加えるだけでよいような凍結乾燥条件下に貯蔵することができる。用時調製の注射溶液および懸濁液は、前記のような無菌の散剤、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００７１】
局所投与製剤（経皮的薬物放出に有用な製剤を含む）は当業者によく知られており、皮膚に適用するものが本発明において適している。
【００７２】
経口投与に適した製剤は、本発明のＯ6−置換化合物の幾つかのペプチジルおよび／または炭水化物特性、ならびにもしかかる化合物を胃腸管の消化分泌液から保護することなく経口投与すればおそらく分解することについて特別に考慮する必要がある。このような製剤は、（ａ）有効量の本化合物が希釈液（例えば、水、食塩水またはオレンジ果汁）に溶解したような液体溶液；（ｂ）それぞれ所定量の有効成分を固体または顆粒として含有するカプセル、薬袋（sachet）、錠剤、舐剤(lozenge)およびトローチ；（ｃ）散剤；（ｄ）適当な液体中の懸濁剤；および（ｅ）適当な乳剤で構成される。液状製剤は、水およびアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコールおよびポリエチレンアルコール）のような希釈剤を、医薬的に許容される界面活性剤、懸濁化剤または乳化剤を添加するか、または添加することなく含有してもよい。カプセルの形態は通常の硬または軟カプセルゼラチンタイプのいずれでもよく、例えば、界面活性剤、滑沢剤および不活性賦形剤（例えば、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウムおよびコーンスターチなど）を含有するものであってもよい。錠剤の形態としては、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、グアーゴム（guar gum）、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸およびその他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、香料ならびに薬理学的に適合性の賦形剤の１つまたはそれ以上を含んでいてもよい。舐剤(lozenge)の形態は、有効成分を香料（通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカント）の中に含有していてよく、この製剤には、有効成分を不活性基剤（ゼラチンおよびグリセリンなど）、またはスクロースおよびアラビアゴムの中に含有する香錠（pastille）、有効成分に加え当該分野で公知の賦形剤を含有する乳剤、ゲル剤などが含まれる。
【００７３】
本発明のＯ6−置換化合物は、単独でまたは他の適当な成分と組み合わせて、エアロゾル剤に製剤化して吸入により投与することもできる。本化合物は好ましくは、界面活性剤および噴射剤と共に微細に分散された形態で供給される。有効化合物の割合は、通常０．０１重量％〜２０重量％、好ましくは１重量％〜１０重量％である。界面活性剤は、勿論、非毒性でなければならず、好ましくは噴射剤に可溶性のものである。このような界面活性剤の代表的な例は、６から２２の炭素原子を有する脂肪酸（カプロン酸、オクタン酸、ラウリル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸（olesteric acid）およびオレイン酸など）の脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルまたは部分エステルである。混合グリセリドまたは天然グリセリドのような混合エステルを使用してもよい。界面活性剤は、組成物中に０．１重量％〜２０重量％、好ましくは０．２５重量％〜５重量％含まれていてもよい。組成物の残りは、通常、噴射剤である。所望により、例えば、鼻内投与のためのレシチンのような担体が含まれていてもよい。これらのエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容される加圧した噴射剤に含ませることができる。これらはまた、ネブライザーまたはアトマイザーのような加圧していない製剤の医薬として製剤化してもよい。このようなスプレー製剤は粘膜にスプレーするために使用されうる。
【００７４】
さらに、本発明の方法で用いられる化合物およびポリマーは、乳化基剤または水性基剤のような種々の基剤と混合することにより坐剤に製剤化してもよい。膣内投与用の適当な製剤は、有効成分に加え当該分野で適当なものとして知られる担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫剤（フォーム）またはスプレー剤の剤形としてもよい。
【００７５】
医薬製剤中の本発明のＯ6−置換化合物の濃度は広範な範囲であってよく、即ち、約１重量％より少ない量から、通常約１０重量％または少なくとも約１０重量％、２０％ないしは５０％またはそれより多い量まで多くしてもよく、選択された特定の投与方式に従って、主として液体容量、粘度などによって選択されるだろう。
【００７６】
従って、代表的な静脈内注入用医薬組成物は、無菌リンゲル液２５０ｍｌおよびＯ6−置換化合物１００ｍｇを含有させることにより調製できた。非経口投与可能な化合物を調製する実際の方法は当業者に公知または明らかであり、例えば、Remington's Pharmaceutical Science (17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985)に詳細に記載されている。
【００７７】
当業者には、上記の医薬組成物に加えて、本発明の方法のＯ6−置換化合物をシクロデキストリン包接複合体のような包接複合体またはリポソームとして製剤化してもよいことが理解されるだろう。リポソームは、リンパ組織または癌性肝細胞のような特定の組織を化合物の標的とするのに役立つ。リポソームはまた、Ｏ6−置換化合物の半減期を延ばすために使用することができる。本発明で有用なリポソームとしては、乳剤、泡沫剤（フォーム）、ミセル、不溶性単層（insoluble monolayers）、液晶(liquid crystals)、リン脂質分散剤、ラメラ層（lamellar layers）などが挙げられる。これらの製剤において、送達されるべきＯ6−置換化合物は単独でまたは適当な化学療法剤と共にリポソームの一部として取り込まれる。従って、リポソームは所望の本発明のＯ6−置換化合物で充填され、例えば、肝細胞のような特定の組織タイプの部位に導かれ、そこでリポソームが選択された化学療法増強組成物を送達する。本発明で用いられるリポソームは、通常、中性および陰性に荷電したリン脂質およびステロール（コレステロールなど）を含む標準的な小胞形成性脂質から形成される。脂質は、通常、例えばリポソームの大きさおよび血流中でのリポソームの安定性を考慮してそれに従って選択される。リポソームの調製には種々の方法が利用でき、例えば、Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9, 467 (1980)、および米国特許第4,235,871号、同第4,501,728号、同第4,837,028号，同第5,019,369号に記載された方法が利用できる。特定の組織タイプの細胞を標的とするために、リポソームに組み入れるべきリガンドとしては、例えば、標的とする組織タイプの細胞表面決定基に特異的な抗体またはその断片が挙げられる。Ｏ6−置換化合物を含有するリポソーム懸濁液は静脈内投与、局所投与、局部投与などの経路で、投与方式、送達されるＯ6−置換化合物、治療する疾患の段階などに応じて種々の投与量で投与することができる。     
【００７８】
本発明のＯ6−置換化合物の有効性を特定のタイプの癌細胞（例えば、結腸癌細胞、前立腺癌細胞および乳癌細胞）に関して実証したが、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤で治療可能な、どんなタイプの癌の治療にも本発明は適用可能である。このような癌には、例えば、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、乳腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、ウィルムス腫瘍、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、胃腫瘍、軟組織肉腫、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫が含まれる。
【００７９】
同様に、本発明のＯ6−置換化合物の作用様式を考慮すると、このような化合物は、グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤のどんなタイプのものとでも組み合わせて使用することができる。このような抗腫瘍性アルキル化剤には、例えば、クロロエチル化剤（例、クロロエチルニトロソ尿素類およびクロロエチルトリアジン類）およびストレプトゾトシン、プロカルバジン、ダカルバジンおよびテモゾロミドのようなモノ官能基性アルキル化剤が含まれる。
【００８０】
クロロエチル化剤の中で最も頻繁に使用される化学療法薬は、１−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソ尿素（ＣＣＮＵ，ロムスチン）、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ，カルムスチン）、１−（２−クロロエチル）−３−（４−メチルシクロヘキシル）−１−ニトロソ尿素（ＭｅＣＣＮＵ，セムスチン）および１−（２−クロロエチル）−３−（４−アミノ−２−メチル−５−ピリミジニル）メチル−１−ニトロソ尿素（ＡＣＮＵ）である。これらの薬剤は、臨床的に中枢神経系の腫瘍、多発性骨髄腫、黒色腫、リンパ腫、胃腸管腫瘍およびその他の充実性腫瘍(solid tumor)に対して使用されている(Colvin and Chabner, Alkylating Agents. In: Cancer Chemotherapy: Principles and Practice, Chabner and Collins, eds., Lippincott, Philadelphia, pp. 276-313 (1990); McCormick and McElhinney, Eur. J. Cancer, 26, 207-221 (1990))。最近開発されたより副作用の少ないクロロエチル化剤は、１−（２−クロロエチル）−３−（２−ヒドロキシエチル）−１−ニトロソ尿素（ＨＥＣＮＵ）、２−クロロエチル−メチルスルホニルメタンスルホナート (クロメソン，Clomesone)および１−［Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレイド］エチルホスホン酸ジエチルエステル (フォテムスチン，Fotemustine)である(Colvin and Chabner, Alkylating Agents. In: Cancer Chemotherapy: Principles and Practice, Chabner and Collins, eds., Lippincott, Philadelphia, pp. 276-313 (1990); McCormick and McElhinney, Eur. J. Cancer, 26, 207-221 (1990))。メチル化化学療法剤には、ストレプトゾトシン（２−デオキシ−２−（３−メチル−３−ニトロソウレイド）−Ｄ−グルコピラノース）、プロカルバジン（Ｎ−（１−メチルエチル）−４−［（２−メチルヒドラジノ）メチル］ベンズアミド）、ダカルバジンまたはＤＴＩＣ（５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド）、およびテモゾロミド（８−カルバモイル−３−メチルイミダゾ［５，１−ｄ］−１，２，３，５−テトラジン−４−（３Ｈ）−オン）が含まれる。テモゾロミドは悪性黒色腫、脳腫瘍および菌状息肉腫に対して活性である。ストレプトゾトシンは膵臓腫瘍に対して有効である。プロカルバジンはホジキン病および脳腫瘍の治療に用いられ、ＤＴＩＣは黒色腫およびリンパ腫の治療に用いられる(Colvin and Chabner, Alkylating Agents. In: Cancer Chemotherapy: Principles and Practice, Chabner and Collins eds., Lippincott, Philadelphia, pp. 276-313 (1990); Longo, Semin. Concol., 17, 716-735 (1990))。
【００８１】
以下に説明する実施例は、前述の化合物の合成を記載している。これらの実施例に説明されている方法および物質に関して、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Sun 2/110 data stations を備えたVarian VXR 500S spectrometerまたはAdvanced data systemにインターフェースで接続したVarian XL 200 instrumentで記録した。試料は内部標準としてテトラメチルシランを用いＤＭＳＯ−ｄ6に溶解した。ＥＩ質量スペクトルはVG 2035 data systemにインターフェースで接続したreversed geometry VG Micromass ZAB-2F spectrometerから得た。元素分析は、ガルブレイス・ラボラトリー・インコーポレイテッド(Galbraith Laboratories, Inc., Knoxville, TN.)で行った。
【００８２】
試薬および溶媒の大部分は、Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, WI.製であった。８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（２）(Shealy et al., J. Org. Chem., 27, 4518-4523 (1962))、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（３ｂ）(Pfleiderer and Lohrmann, Chem. Ber., 94, 12-18 (1961))、２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（３ｃ）(Pfleiderer and Lohrmann, Chem, Ber., 94, 12-18 (1961))、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロソピリミジン（３ｄ）(Pfleiderer and Lohrmann, Chem. Ber., 94, 12-18 (1961))、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ｅ）(Kosary et al., Acta Pharm. Hung., 49, 241-247 (1989))、２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ブロモピリミジン（３ｆ）(Kosary et al., Acta Pharm. Hung., 49, 241-247 (1989))、４−アミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ａ）およびＯ6−ベンジル−２−フルオロヒポキサンチン（４ｃ）(Robins and Robins, J. Org. Chem., 34, 2160-2163 (1969))は以前に製造されている。これらの化合物のうちのいくつかについては、以前示されていなかった分光学的データに加えて別の合成方法を以下に記載する。ＡＧＴ不活性化の研究はMoschel et al., J. Med. Chem., 35, 4486-4491 (1992)に記載の通りに行った。ＢＣＮＵと組み合わせた様々なＡＧＴ不活性化剤に関する細胞殺傷実験は、Dolan et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87, 5368-5372 (1990))に記載の通りに行った。細胞はＢＣＮＵに曝す前にＡＧＴ不活性化剤で２時間処理した。
【００８３】
実施例１：２，８−ジアミノ−６−クロロプリン
８−アミノグアニン(Fischer, Z. Physiol. Chem., 60, 69 (1909); Beaman et al., in Zorbach and Tipson, Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, Vol. 1, pp41 - 43, John Wiley & Sons, New York, 1968)（３．０ｇ，１８．１ｍｍｏｌ）の塩化ホスホリル（９０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジエチルアニリン（３ｍＬ）中の懸濁液を３０分間還流し、過剰の塩化ホスホリルを減圧下にて留去した。得られた溶液に氷（２０ｇ）を徐々に添加し、濃水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを６に調整した。黄色固体が生成し、これを濾取し、水洗し、乾燥することにより緑色固体を得た。活性炭処理と共に水から結晶化させることにより、２，８−ジアミノ−６−クロロプリンを白色固体として得た。収量, 2.11 g (63%); 融点 >275℃ (分解); 1H NMR δ 6.09 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 6.71 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能); MS (EI)計算値 m/z C5H5N635Cl 184.0264, 測定値 184.0266; 計算値 m/z C5H5N637Cl 186.0235, 測定値186.0237.
【００８４】
実施例２：８−アミノ−Ｏ6−ベンジルグアニン（１ａ）
２，８−ジアミノ−６−クロロプリン（０．９ｇ，４．９ｍｍｏｌ）をナトリウム（０．２２ｇ，１０ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（９．０ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１３０℃の油浴中で５時間加熱し、１０分間常に攪拌しながら水（１００ｍＬ）に注いだ。不溶の固体を濾過により除去し、濾液を氷酢酸で中和した。溶液をメタノール（１００ｍＬ）と混合し、この水性メタノール溶液の半分を、１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス(Sephadex) LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。メタノール／水中の反応混合物の残りを同一の条件下で別にクロマトグラフィー処理した。所望の生成物は画分１００−１３０中に溶出した。両方のクロマトグラフィーで得た溜まった画分１００−１３０から、溶媒を留去することにより分析的に純粋な１ａを得た。収量, 0.26 g (21%); 融点 269 - 271℃ (分解); UV (pH 1) λmax 241 nm (ε = 0.699 x 104), 300 (1.109 x 104); (pH 6.9) 250 (sh) (0.447 x 104), 292 (1.027 x 104); (pH 13) 255 (sh) (0.355 x 104), 295 (0.932 x 104); 1H NMR δ 5.41 (s, 2 H, ArCH2), 5.70 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 6.18 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.25 - 7.55 (m, 5 H, ArH), 11.1 (br s, 1 H, NH, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H12N6O 256.1072, 測定値 256.1059; 元素分析 (C12H12N6O) C, H, N.
【００８５】
実施例３：２−アミノ−６−クロロ−８−メチルプリン
８−メチルグアニン(Daves et al., J. Am. Chem. Soc., 82, 2633 - 2640 (1960))（１．０ｇ，６．１ｍｍｏｌ）の塩化ホスホリル（３０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジエチルアニリン（１ｍＬ）中の懸濁液を３時間還流した。過剰の塩化ホスホリルを減圧下にて留去した。得られた褐色油を氷水に溶解し、濃水酸化ナトリウム水溶液で中和した。溶媒留去後、残渣の固体を７０ｍＬの水に懸濁した。不溶の固体を濾過し、濾液を１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。溜まった画分５０−６０を溶媒留去することにより、２−アミノ−６−クロロ−８−メチルプリンを粗製の固体として得た。活性炭処理と共にエタノール／水から結晶化させることにより、２−アミノ−６−クロロ−８−メチルプリンを白色固体として得た。収量, 0.57 g (51%); 融点 > 265℃ (分解); 1H NMR δ 2.39 (s, 3 H, CH3), 6.62 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 12.56 (s, 1 H, NH, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C6H6N535Cl 183.0312, 測定値 183.0309; 計算値 m/z C6H6N537Cl 185.0283, 測定値 185.0286.
【００８６】
実施例４：Ｏ6−ベンジル−８−メチルグアニン（１ｂ）
ナトリウム（０．１ｇ，４．４ｍｍｏｌ）を４．１ｍＬのベンジルアルコール中で、全てのナトリウムが反応するまで攪拌した。２−アミノ−６−クロロ−８−メチルプリン（０．４１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１３０℃の油浴中で５時間加熱した。室温まで冷却した後、過剰のベンジルアルコールを除去するためにエーテル４０ｍＬを添加した。生成した粘着性のある沈殿を濾取し、水（５０ｍＬ）に溶解した。この黄色溶液のｐＨを氷酢酸で５−６に調整した。この溶液をメタノール（５０ｍＬ）と混合し、１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。溜まった画分７８−９３を溶媒留去することにより、分析的に純粋な１ｂを得た。収量, 0.25 g (44%); 融点 214 - 216℃; UV (pH 1) λmax 238 nm (sh) (ε = 0.648 x 104), 290 (1.136 x 104); (pH 6.9) 242 (0.758 x 104), 284 (0.897 x 104); (pH 13) 240 (sh) (0.495 x 104), 286 (0.932 x 104); 1H NMR δ 2.33 (s, 3 H, CH3), 5.46 (s, 2 H, ArCH2), 6.17 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.34 - 7.51 (m, 5 H, ArH), 12.18 (br s, 1 H, NH, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C13H13N5O 255.1120, 測定値 255.1125; 元素分析 (C13H13N5O.1/4 H2O) C, H, N.
【００８７】
実施例５：Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（１ｃ）
２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン(Pfleiderer et al., Chem. Ber., 94, 12-18 (1961))（１．８５ｇ，８ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．３０ｇ，８ｍｍｏｌ）をアルゴン下で、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解した。この溶液を一晩室温にて攪拌し、水（２００ｍＬ）と混合することにより白色固体が沈殿した。この固体を濾取し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２５０ｍＬに溶解した。不溶の物質を濾過により除去し、濾液を氷酢酸で中和することにより白色固体が沈殿した。この固体を濾取し、水洗し、５０％水性エタノールから再結晶することにより、分析的に純粋な１ｃを得た。収量, 1.63 g (79%); 融点 256 - 257℃ (分解); UV (pH 1) λmax 243 nm (ε = 0.717 x 104), 306 (1.499 x 104); (pH 6.9) 243 (0.915 x 104), 290 (1.108 x 104); (pH 13) 249 (sh) (0.443 x 104), 293 (1.368 x 104); 1H NMR δ 5.41 (s, 2 H, ArCH2), 6.13 (s, 2 H, NH2, D2Oで交換可能), 7.33 - 7.51 (m, 5 H, ArH), 10.46 (s, 1 H, D2Oで交換可能), 11.04 (s, 1 H, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H11N5O2: 257.0912. 測定値: 257.0914. 元素分析 (C12H11N5O2. 1/2 H2O) C, N, H.
【００８８】
実施例６：Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニン（１ｄ）
Ｏ6−ベンジルグアニン（１．２０５ｇ，５．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、臭素（０．２６ｍＬ，５．１ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて、徐々に添加した。得られた深緑色溶液を一晩室温にて攪拌した。この溶液を水（７０ｍＬ）と混合すると、粗生成物が沈殿した。この生成物を濾取し、５０％水性メタノール（１００ｍＬ）に溶解した。この溶液を１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。所望の生成物は画分１１０−１９０中に溶出した。溜まった画分１１０−１９０から溶媒を留去することにより、１ｄを淡黄色固体として得た。エタノール／水（１：１）から結晶化させることにより、分析的に純粋な１ｄを得た。収量, 0.166 g (10%); 融点 135 - 137℃ (分解); UV (pH 1) λmax 236 nm (sh) (ε = 0.517 x 104), 294 (1.429 x 104); (pH 6.9) 244 (0.666 x 104), 287 (1.043 x 104); (pH 13) 245 (sh) (0.544 x 104), 289 (1.030 x 104); 1H NMR δ 5.45 (s, 2 H, ArCH2), 6.35 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.34 - 7.52 (m, 5 H, ArH), 13.08 (b s, 1 H, NH, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H10N5O79Br 319.0068, 測定値 319.0069; 計算値 m/z C12H10N5O81Br 321.0048, 測定値 321.0048; 元素分析 (C12H10N5OBr3/2 H2O) C, H, N, Br.
【００８９】
実施例７：８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（２）
アセトン（５ｍＬ）中で２，４，５−トリアミノ−６−ベンジルオキシピリミジン（０．２３１ｇ，１．０ｍｍｏｌ）および亜硝酸ナトリウム（０．０６９ｇ，１．０ｍｍｏｌ）の混合物に氷酢酸（１ｍＬ）を添加した。得られた混合物を室温にて２時間攪拌した。この溶液を攪拌しながら水（１００ｍＬ）に注ぐことにより、粗製の固体が沈殿した。固体を濾取し、風乾した。活性炭処理と共にエタノール／水（１：１）から結晶化させることにより、２を白色固体として得た。収量, 105 mg (43%); 融点 191 - 192℃ (192 - 193℃; Shealy et. al., J. Org. Chem., 27, 4518 - 4523 (1962)); 1H NMR δ 5.56 (s, 2 H, ArCH2), 7.00 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.41 - 7.58 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C11H10N6O 242.0916, 測定値 242.0924.
【００９０】
実施例８：４−アミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ａ）
４−アミノ−６−クロロ−５−ニトロピリミジン(Boon et al., J. Chem. Soc., 96-102 (1951))（１．５ｇ，８．６ｍｍｏｌ）を、ナトリウム（０．２３ｇ，９．９ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（１４ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１３０℃の油浴中で３．５時間加熱し、ベンゼン（５０ｍＬ）に注いだ。黄色固体を濾取し、ベンゼンで洗浄した。ベンゼン／エーテルから結晶化させることにより、３ａの分析的に純粋な試料を得た。収量, 0.71 g (34%); 融点 149 - 150℃; UV (pH 1) λmax 284 nm (ε = 0.368 x 104), 333 (0.488 x 104); (pH 6.9) 284 (0.329 x 104), 336 (0.470 x 104); (pH 13) 290 (0.344 x 104), 333 (0.494 x 104); 1H NMR δ 5.50 (s, 2 H, ArCH2), 7.33 - 7.49 (m, 5 H, ArH), 8.12 - 8.24 (br d, 2 H, NHa and NHb, D2Oで交換可能), 8.24(s, 1H, H-2); MS (EI) 計算値 m/z C11H10N4O3 246.0752, 測定値 246.0751; 元素分析 (C11H10N4O3) C, H, N.
【００９１】
実施例９：２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（３ｅ）
２，４−ジアミノ−６−クロロ−５−ニトロピリミジン(O'Brien et al., J. Med. Chem., 9, 573 - 575 (1966))（１．０ｇ，５．２８ｍｍｏｌ）をナトリウム（０．１４ｇ，６．０８ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（９ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１６０℃の油浴中で３．５時間加熱し、溶媒を減圧下にて留去することにより黄色固体が得られた。この固体を水洗し、風乾した。ベンゼン／エーテルから結晶化させることにより、淡黄色糸状固体を得た。収量, 0.69 g (50%); 融点 194 - 195℃ (171℃; Kosary et. al., Acta. Pharm. Hung., 49, 241 - 247 (1989)); UV (pH 1) λmax 236 nm (sh) (ε = 1.452 x 104), 264 (0.522 x 104), 321 (1.294 x 104); (pH 6.9) 242 (sh) (0.965 x 104), 337 (1.493 x 104); (pH 13) 242 (sh) (0.952 x 104), 338 (1.479 x 104); 1H NMR δ 5.43 (s, 2 H, ArCH2), 7.26 (br s, 2 H, NH2, D2Oで交換可能), 7.33 - 7.51 (m, 5 H, ArH), 7.93 (br s, 2 H, NH2, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C11H11N5O3 261.0861, 測定値 261.0866; 元素分析 (C11H11N5O3).
【００９２】
実施例１０：Ｏ6−ベンジルキサンチン（４ａ）
Ｏ6−ベンジルグアニン（０．８３ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のアセトン（１５ｍＬ）懸濁液を、１５ｍＬの水に亜硝酸ナトリウム（５ｇ）を溶解した溶液に注いだ。酢酸（８ｍＬ）をこの懸濁液に攪拌しながら添加した。懸濁している固体を溶解するために必要な最少量のアセトンを添加した。得られた淡黄緑色溶液を３時間攪拌した。生成した淡緑色沈殿を濾取し、水（２００ｍＬ）で洗浄した。風乾した固体をエタノール／水（１：１）から再結晶することにより、４ａの分析的に純粋な試料を得た。収量, 0.43 g (52%); 融点 145 - 147℃ (分解); UV (pH 1) λmax 270 nm (ε = 0.749 x 104); (pH 6.9) 286 (1.143 x 104); (pH 13) 290 (0.914 x 104); 1H NMR δ 5.49 (s, 2 H, ArCH2), 7.36 - 7.54 (m, 5 H, ArH), 8.02 (s, 1 H, H-8), 11.8 (br s, 1 H, NH, D2Oで交換可能), 13.2 (br s, 1 H, NH, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H10N4O2 242.0803, 測定値 242.0828; 元素分析 (C12H10N4O2. H2O) C, H, N.
【００９３】
実施例１１：Ｏ6−ベンジル尿酸（４ｂ）
水（５ｍＬ）に溶解した亜硝酸ナトリウム（１．５ｇ，４３ｍｍｏｌ）を、Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（１ｃ）（０．２５７ｇ，１．０ｍｍｏｌ）のアセトン（５ｍＬ）懸濁液に添加した。氷酢酸（３ｍＬ）をこの懸濁液に攪拌しながら添加した。室温にて３時間攪拌後、明黄色沈殿が生成した。懸濁液を水（１５０ｍＬ）と混合し、不溶の固体を濾過して除いた。飽和炭酸ナトリウム水溶液を濾液に添加し、ｐＨを約５に調整した。黄色沈殿（１３０ｍｇ）を回収し、水洗した。この固体を５０％水性エタノールから結晶化させることにより、４ｂの分析的に純粋な試料を得た。収量, 75 mg (29%); 融点 >230℃; UV (pH 1) λmax 236 nm (sh) (ε = 0.972 x 104), 299 (1.427 x 104); (pH 6.9) 240 (sh) (0.821 x 104), 304 (2.134 x 104); (pH 13) 245 (sh) (0.846 x 104), 297 (1.861 x 104); 1H NMR δ 5.43 (s, 2 H, ArCH2), 7.35 - 7.51 (m, 5 H, ArH), 10.76 (s, 1 H, NH, D2Oで交換可能), 11.23 (s, 1 H, NH, D2O で交換可能), 11.39 (s, 1 H, NH, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H10N4O3 258.0752, 測定値 258.0753; 元素分析 (C12H10N4O3.5/2 H2O) C, H, N.
【００９４】
実施例１２：ジアセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン
無水酢酸（２ｍＬ）をＯ6−ベンジル−８−オキソグアニン（１ｃ）（０．２５７ｇ，１．０ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（１０ｍＬ）懸濁液に添加した。懸濁液を２４時間激しく還流し、室温まで冷却した。４℃にて４時間保存した後、得られた沈殿を濾取し、ベンゼンで洗浄し、風乾することにより、ジアセチル化された生成物の分析的に純粋な試料を得た。収量, 0.287 g (84%); 融点 272 - 274℃ (分解); UV (100% MeOH) λmax 275 nm (ε = 1.313 x 104); (pH 1) 275 (1.143 x 104); (pH 6.9) 238 (0.995 x 104), 276 (1.115 x 104); (pH 13) 285 (2.138 x 104); 1H NMR δ 2.18 (s, 3 H, CH3), 2.57 (s, 3 H, CH3), 5.51 (s, 2 H, ArCH2), 7.30 - 7.57 (m, 5 H, ArH), 10.41 (s, 1 H, D2Oで交換可能), 12.30 (s, 1 H, D2O で交換可能); MS (EI)計算値 m/z C16H15N5O4: 341.1123. 測定値: 341.1130. 元素分析 (C16H15N5O4) C, N, H.
【００９５】
実施例１３：Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（４ｄ）
ジアセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン（８５ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）および水酸化アンモニウム（２８％，５ｍＬ）に溶解し、１時間放置した。透明な溶液が濁り、放置しておくと沈殿が生成した。沈殿を濾取し、水洗し、乾燥することにより４ｄの分析的に純粋な試料を得た。収量, 48 mg (65%); 融点 335 - 337℃ (分解); UV (pH 1) λmax 276 nm (ε = 1.723 x 104), 303 (sh) (0.679 x 104); (pH 6.9) 276 (1.379 x 104); (pH 13) 284 (1.683 x 104); 1H NMR δ 2.15 (s, 3 H, CH3), 5.49 (s, 2 H, ArCH2), 7.30 - 7.55 (m, 5 H, ArH), 10.21 (s, 1 H, D2Oで交換可能), 10.99 (s, 1 H, D2O で交換可能), 11.60 (s, 1 H, D2O で交換可能); MS (EI)計算値 m/z C14H13N5O3: 299.1018. 測定値: 299.1023. 元素分析 (C14H13N5O3) C, N, H.
【００９６】
実施例１４：Ｏ6−ベンジル−２−フルオロヒポキサンチン（４ｃ）
Ｏ6−ベンジルグアニン（１．２１ｇ，５ｍｍｏｌ）を−２０℃にて、１００ｍＬの４８％フルオロホウ酸に添加した。亜硝酸ナトリウム（１．２３ｇ，３５ｍｍｏｌ）を水（５ｍＬ）に溶解し、この亜硝酸ナトリウム水溶液２．５ｍＬを前記の冷フルオロホウ酸溶液に徐々に添加した。得られた混合物を−１５℃以下にて、１時間攪拌した。さらにフルオロホウ酸（２５ｍＬ）を添加し、続いて亜硝酸ナトリウム水溶液２．５ｍＬをさらに添加した。さらに、−１５℃未満で１時間攪拌後、再びフルオロホウ酸（２５ｍＬ）を添加し、攪拌を１時間続けた。得られた溶液を−２０℃にて、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、放置して室温に戻した。生成した白色沈殿を濾取し、水洗し、真空乾燥することにより粗製の４ｃを得た。収量，0.52 g，43%． 分析サンプルは１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出するセファデックスＬＨ−２０カラム（３×８０ｃｍ）上でのクロマトグラフィーにより調製した。所望の４ｃは画分６６−７７中に溶出した：融点 182 - 183℃ (184 - 185℃; Robins and Robins, J. Org. Chem., 34, 2160-2163 (1969)); UV (pH 1) λmax 256 nm (ε = 1.117 x 104); (pH 6.9) 257 (1.078 x 104); (pH 13) 264 (1.063 x 104); 1H NMR δ 5.60 (s, 2 H, ArCH2), 7.37 - 7.57 (m, 5 H, ArH), 8.40 (s, 1 H, H-8), 13.60 (s, 1 H, NH, D2O で交換可能), 19F NMR δ 23.54 (トリフルオロ酢酸標準から低磁場側); MS(EI) 計算値 m /z C12H9FN4O 244.0760, 測定値 244.0756; 元素分析 (C12H9FN4O.2/3 H2O) C, H, N.
【００９７】
実施例１５：Ｏ6−ベンジル−Ｎ2−メチルグアニン（４ｅ）
フルオロホウ酸（４８％，３０ｍＬ）をドライアイス−アセトン浴で−２０℃まで冷却した。Ｏ6−ベンジルグアニン（０．３６２ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を攪拌しながら添加した。亜硝酸ナトリウム（０．３６９ｇ，１０．５ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解し、この溶液０．５ｍＬを前記の冷フルオロホウ酸溶液に徐々に添加した。得られた溶液を−１５℃以下にて、１時間攪拌した。さらにフルオロホウ酸（５ｍＬ）を添加し、続いて亜硝酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬをさらに添加した。−１５℃以下で１時間攪拌後、再びフルオロホウ酸（５ｍＬ）を添加し、攪拌をさらに１時間続けた。それから、メチルアミン（４０％水溶液、６０ｍＬ）を−２０℃で添加し、得られた塩基性溶液を室温にて２日間攪拌した。溶媒を減圧下にて留去することにより、白色固体を得た。この固体を、１０分間攪拌しながら水５０ｍＬに懸濁させた。不溶の物質を濾取し水洗した。この固体を２８％アンモニア水溶液１．２ｍＬを添加した４０ｍＬメタノール／水（１：１）に溶解した。この溶液を１ｍＬ／分でメタノール／水／アンモニア水（３０：７０：３）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。溜まった画分１０６−１２７を溶媒留去することにより、４ｅの分析的に純粋な試料を得た。収量, 85 mg (22%); 融点 189 - 190℃; UV (pH 1) λmax 238 nm (sh) (ε = 0.665 x 104), 297 (0.904 x 104); (pH 6.9) 246 (0.898 x 104), 290 (0.676 x 104); (pH 13) 240 (sh) (0.615 x 104), 294 (0.674 x 104); 1H NMR δ 2.30 (d, 3 H, CH3), 5.50 (s, 2 H, ArCH2), 6.75 (m, 1 H, MeNH, D2Oで交換可能), 7.31 - 7.53 (m, 5 H, ArH), 7.82 (s, 1 H, H-8), 12.53 (s, 1 H, NH, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C13H13N5O 255.1120, 測定値 255.1107; 元素分析 (C13H13N5O.1/2 H2O) C, H, N.
【００９８】
実施例１６：Ｏ6−ベンジル−Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアニン（４ｆ）
フルオロホウ酸（４８％，４０ｍＬ）をドライアイス−アセトン浴で−２０℃まで冷却した。Ｏ6−ベンジルグアニン（０．４８２ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら添加した。亜硝酸ナトリウム（０．４９２ｇ，１４．０ｍｍｏｌ）を水（２ｍＬ）に溶解し、この溶液１ｍＬを前記の冷フルオロホウ酸溶液に徐々に添加した。得られた溶液を−１５℃以下にて、１時間攪拌した。さらにフルオロホウ酸（１０ｍＬ）を添加し、続いて１ｍＬの亜硝酸ナトリウム水溶液をさらに添加した。−１５℃以下で１時間攪拌後、さらにフルオロホウ酸（１０ｍＬ）を添加し、攪拌を１時間続けた。それから、ジメチルアミン（４０％水溶液、６０ｍＬ）を−２０℃で前記溶液に添加し、得られた混合物を放置して室温に戻した。懸濁液が透明溶液になり、１０分以内に沈殿が生成した。室温で一晩放置後、沈殿を濾取し水洗した。この固体を５０％水性エタノールから結晶化させることにより、４ｆの分析的に純粋な試料を得た。収量, 0.25 g (46%); 融点 220 - 221℃ (分解); UV (pH 1) λmax 248 nm (sh) (ε = 0.512 x 104), 303 (0.908 x 104); (pH 6.9) 251 (1.152 x 104), 299 (0.686 x 104); (pH 13) 248 (sh) (0.766 x 104), 299 (0.710 x 104); 1H NMRδ 3.12 (s, 6 H, CH3), 5.54(s, 2 H, ArCH2), 7.36 - 7.51 (m, 5 H, ArH), 7.84 (s, 1 H, H-8), 12.56 (s, 1 H, NH, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C14H15N5O 269.1276, 測定値 269.1254; 元素分析 (C14H15N5O) C, H, N.
【００９９】
実施例１７：２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−ブロモピリミジン（３ｆ）
２，４−ジアミノ−５−ブロモ−６−クロロピリミジン(Phillips et al., J. Org. Chem., 29, 1488 - 1490 (1963))（２．３ｇ，１０ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて、ナトリウム（０．２９ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（１０ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１３０℃の油浴中で３時間加熱し、ベンジルアルコールを減圧下にて留去することにより、白色固体を得た。この固体を水洗し、風乾した。５０％水性エタノールから結晶化させることにより、３ｆの白色針状結晶を得た。収量, 2.32 g (76%); 融点 165 - 166℃ (文献値 136℃; Kosary et. al., Acta Pharm. Hung., 49, 241 - 247 (1989)); UV (pH 1) λmax 236 nm (ε = 0.873 x 104), 291 (1.388 x 104); (pH 6.9) 236 (0.850 x 104), 277 (0.835 x 104); (pH 13) 234 (0.869 x 104), 277 (0.827 x 104); 1H NMRδ 5.30 (s, 2 H, ArCH2), 6.15 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 6.32 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.31 - 7.45 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C11H11N4O79Br 294.0115, 測定値 294.0127; 計算値 m/z C11H11N4O81Br 296.0094, 測定値 296.0083; 元素分析 (C11H11N4OBr) C, H, N.
【０１００】
実施例１８：２−アミノ−４−クロロ−５−ニトロピリミジン
２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−ニトロピリミジン（５．０ｇ，３２．１ｍｍｏｌ）の塩化ホスホリル（１００ｍＬ）懸濁液を一晩還流し、過剰の塩化ホスホリルを減圧下にて留去した。残渣を氷浴中で氷（１００ｇ）と混合し、混合物を濃炭酸ナトリウム水溶液で中和した。黄色沈殿を濾取し、水洗した。収量, 1.39 g (25%); 融点 191 - 194℃ (分解); 1H NMR δ 8.45 (br s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 9.03 (s, 1 H, H-6); MS (EI) 計算値 m/z C4H3N4O235Cl 173.9944, 測定値 173.9934; 計算値 m/z C4H3N4O237Cl 175.9915, 測定値 175.9916.
【０１０１】
実施例１９：２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジン（５ａ）
２−アミノ−４−クロロ−５−ニトロピリミジン（０．７０ｇ，４．０ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて、ナトリウム（０．１２ｇ，５．２ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（８ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１３０℃の油浴中で３時間加熱し、ベンジルアルコールの約半分を減圧下にて留去した。１０分間常に攪拌しながら残渣を水（５０ｍＬ）に注いだ。氷酢酸で中和後、生成した褐色沈殿を濾取し、水洗した。この固体をベンゼンから結晶化させることにより、５ａを金色結晶性固体として得た。収量, 126 mg (13%); 融点 164 - 167℃; UV (pH 1) λmax 262 nm (ε = 0.879 x 104), 295 (sh) (0.571 x 104); (pH 6.9) 235 (sh) (0.448 x 104), 273 (0.360 x 104), 326 (1.085 x 104); (pH 13) 273 (0.404 x 104), 327 (1.055 x 104); 1H NMR δ 5.51 (s, 2 H, ArCH2), 7.35 - 7.54 (m, 5 H, ArH), 8.05 (d, 2 H, NH2, D2Oで交換可能), 8.92 (s, 1 H, H-6); MS (EI) 計算値 m/z C11H10N4O3 246.0752, 測定値 246.0758; 元素分析 (C11H10N4O3) C, H, N.
【０１０２】
実施例２０：２−アミノ−４−ベンジルオキシ−６−メチル−５−ニトロピリミジン（５ｂ）
２−アミノ−４−クロロ−６−メチル−５−ニトロピリミジン(Boon et al., J. Chem. Soc., 96-102 (1951))（１．２４ｇ，６．５８ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて、ナトリウム（０．２１ｇ，９．１３ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（１４ｍＬ）溶液に添加した。この溶液を１３５℃の油浴中で３．５時間加熱し、１０分間常に攪拌しながら水（７０ｍＬ）に注いだ。氷酢酸で中和後、生成した黄色沈殿を濾取し、水洗した。この固体をベンゼンから結晶化させることにより、５ｂを明黄色結晶性固体として得た。収量, 0.57 g (33%); 融点 159 - 160℃; UV (pH 1) λmax 268 nm (ε = 0.783 x 104), 345 (sh) (0.104 x 104); (pH 6.9) 282 (0.564 x 104), 345 (sh) (0.338 x 104); (pH 13) 282 (0.549 x 104), 345 (sh) (0.332 x 104); 1H NMR δ 2.35 (s, 3 H, CH3), 5.44 (s, 2 H, ArCH2), 7.34 - 7.46 (m, 5 H, ArH), 7.64 (b s, 2 H, NH2, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C12H12N4O3 260.0908, 測定値 260.0913; 元素分析 (C12H12N4O3) C, H, N.
【０１０３】
実施例２１：２，４−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ｓ−トリアジン（６）
２，４−ジアミノ−６−クロロ−ｓ−トリアジン（２．２５ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて、ナトリウム（０．４３ｇ，１８．８ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（３０ｍＬ）溶液に添加した。この懸濁液を１３０℃の油浴中で３．５時間加熱した。過剰のベンジルアルコールを真空下で除去し、得られた固体をベンゼンを用いて回収し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。収量, 1.83 g (56%); 融点 184 - 185℃ (文献値 186 - 188℃; Wakabayashi et al., Nippon Dojo-Hiryogaku Zasshi, 41, 193 - 200 (1970)); UV (pH 1) λmax 233 nm (sh) (ε = 0.589 x 104); (pH 6.9) 238 (sh) (0.111 x 104); (pH 13) 240 (sh) (0.073 x 104); 1H NMR δ 5.25 (s, 2 H, ArCH2), 6.63 (s, 4 H, NH2, D2O で交換可能), 7.30 - 7.42 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C10H11N5O 217.0963, 測定値 217.0955.
【０１０４】
実施例２２：２−アミノ−６−クロロ−８−トリフルオロメチルプリン
８−トリフルオロメチルグアニン(Pfleiderer and Shanshal, Liebigs Ann. Chem., 726, 201 - 215 (1969))（２．０ｇ，９．１ｍｍｏｌ）の塩化ホスホリル（２０ｍＬ）懸濁液を３時間還流した。過剰の塩化ホスホリルを減圧下にて留去した。得られた残渣を氷水（１００ｇ）と混合し、濃水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを３−４に調整した。得られた溶液をメタノール（１００ｍＬ）と混合し、この水性メタノールの約半分（すなわち１００ｍＬ）を１ｍＬ／分でメタノール／水（１：１）で溶出させる３×８０ｃｍのセファデックス LH-20カラムに充填した。カラム溶出液を２８０ｎｍで連続してモニターし、画分（１０ｍＬずつ）を回収した。メタノール／水中の反応混合物の残りを同一の条件下で別にクロマトグラフィー処理した。所望の生成物は画分７３−８５中に溶出した。両方のクロマトグラフィーで得た溜まった画分７３−８５から、溶媒を留去することにより分析的に純粋な２−アミノ−６−クロロ−８−トリフルオロメチルプリンを得た。収量, 0.94 g (43%); 融点 >225℃ (分解); UV (pH 1) λmax 245 nm (ε = 0.501 x 104), 314 (0.746 x 104); (pH 6.9) 270 (0.265 x 104), 315 (0.612 x 104); (pH 13) 272 (0.269 x 104), 314 (0.612 x 104); 1H NMR δ 7.19 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 14.25 (br s, 1 H, NH, D2Oで交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C6H3N5F335Cl 237.0029, 測定値 237.0011;計算値 m/z C6H3N5F337Cl 239.0000, 測定値 238.9987; 元素分析 (C6H3N5F3C) C, H, N, F, Cl.
【０１０５】
実施例２３：Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチルグアニン（１ｅ）
ナトリウム（０．１０ｇ，４．３ｍｍｏｌ）を５ｍＬのベンジルアルコール中で、全てのナトリウムが反応するまで攪拌した。２−アミノ−６−クロロ−８−トリフルオロメチルプリン（０．４７５ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１３５℃の油浴中で３．５時間加熱した。ベンジルアルコールを減圧蒸留により除去することにより、褐色油を得た。この油を水（５０ｍＬ）に溶解し、氷酢酸で酸性化することにより、淡黄色沈殿を得た。この沈殿を濾取し、水洗した。粗生成物を２．５×３５ｃｍのシリカゲルカラム（Davisil grade 633, 200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。溶出を５％エタノール（クロロホルム溶液）で行うことにより、分析的に純粋なＯ6−ベンジル−８−トリフルオロメチルグアニン（１ｅ）を得た。収量, 0.42 g (67%); 融点 214 - 216℃ (分解); UV (pH 1) λmax 291 nm (ε = 1.229 x 104); (pH 6.9) 244 (0.470 x 104), 289 (1.023 x 104); (pH 13) 247 (sh) (0.393 x 104), 290 (0.923 x 104); 1H NMR δ 5.51 (s, 2 H, ArCH2), 6.82 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.38 - 7.55 (m, 5 H, ArH), 13.75 (br s, 1 H, NH, D2O で交換可能); MS (EI) 計算値 m/z C13H10N5OF3 309.0837, 測定値 309.0827; 元素分析 (C13H10N5OF3) C, H, N, F.
【０１０６】
実施例２４：Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチル−９−メチルグアニン（７）
Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチルグアニン（１ｅ）（２００ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）に、アルゴン下で１．０Ｍのナトリウムエトキシドのエタノール溶液０．６６ｍＬを添加した。この溶液を１０分間攪拌し、エタノールを真空下にて除去した。残った固体を無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、ヨウ化メチル（４９μＬ，０．７８ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。この溶液を室温にて１時間攪拌し、さらにＤＭＦ１．５ｍＬを添加した。この溶液を室温にて一晩攪拌した。溶媒を減圧下にて留去した。粗製の固体を２．５×３５ｃｍのシリカゲルカラム（Davisil grade 633，200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。溶出をクロロホルム／ヘキサン（３：１）で行うことにより、分析的に純粋なＯ6−ベンジル−８−トリフルオロメチル−９−メチルグアニン（７）を得た。収量, 95 mg (45%); 融点 86 - 89℃; UV (pH 1) λmax 244 nm (ε = 0.581 x 104), 286 (1.274 x 104); (pH 6.9) 252 (0.608 x 104), 288 (1.022 x 104); (pH 13) 252 (0.618 x 104), 288 (1.038 x 104); 1H NMR δ 3.70 (s, 3 H, CH3), 5.51 (s, 2 H, ArCH2), 6.91 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.38 - 7.54 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C14H12N5OF3 323.0994, 測定値 323.0978; 元素分析 (C14H12N5OF3) C, H, N, F.
【０１０７】
実施例２５：８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−メチルグアニン（８ａ）
８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（０．４８４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を０．５Ｍのナトリウムエトキシドのエタノール溶液４ｍＬと混合し、３０分間攪拌した。エタノールを減圧下にて留去した。残渣を無水ＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、ヨウ化メチル（０．１５ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ）を添加した。透明な溶液が１０分以内で濁り、得られた混合物を室温にて一晩攪拌した。ＤＭＦを減圧下にて留去することにより、褐色固体を得た。この固体をクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラム（Davisil grade 633，200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。生成物８ａをクロロホルムで溶出した。収量, 138 mg (27%); 融点 178 - 179℃; UV (pH 1) λmax 243 nm (sh) (ε = 0.556 x 104), 284 (1.112 x 104); (pH 6.9) 243 (0.553 x 104), 290 (0.998 x 104); (pH 13) 242 (0.549 x 104), 290 (1.010 x 104); 1H NMR δ 3.96 (s, 3 H, CH3), 5.57 (s, 2 H, ArCH2), 7.18 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.38 - 7.57 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C12H12N6O 256.1072, 測定値 256.1086; 元素分析 (C12H12N6O) C, H, N.
【０１０８】
実施例２６：８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（８ｂ）および８−アザ−Ｏ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（９）
８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニン（０．４８４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を０．５Ｍのナトリウムエトキシドのエタノール溶液４ｍＬと混合し、３０分間攪拌した。エタノールを減圧下にて留去した。残渣を無水ＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、ピバル酸クロロメチル（０．３ｍＬ，２．１ｍｍｏｌ）を添加した。透明な溶液を室温にて８時間攪拌した。ＤＭＦを減圧下にて留去することにより、褐色固体を得た。この固体をクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラム（Davisil grade 633, 200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。９−異性体（８ｂ）をカラムからクロロホルム／ヘキサン（４：１）で溶出し、続いて７−異性体（９）をクロロホルムで溶出した。８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（８ｂ）：収量, 405 mg (57%); 融点 119 - 120℃; UV (pH 1) λmax 246 nm (ε = 0.494 x 104), 286 (0.878 x 104); (pH 6.9) 247 (0.472 x 104), 288 (0.819 x 104); (pH 13)（８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンに分解する）; 1H NMR δ 1.10 (s, 9 H, C(CH3)3), 5.50 (s, 2 H, ArCH2), 6.31 (s, 2 H, CH2), 7.38 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.40 - 7.54 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C17H20N6O3 356.1596, 測定値 356.1578; 元素分析 (C17H20N6O3.1/5H2O) C, H, N.8−アザ−Ｏ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（９）：収量, 103 mg (15%); 融点 153 - 154℃; UV (pH 1) λmax 244 nm (ε = 0.820 x 104), 294 (1.249 x 104); (pH 6.9) 250 (sh) (0.296 x 104), 313 (0.503 x 104); (pH 13)（８−アザ−Ｏ6−ベンジルグアニンに分解する）； 1H NMR δ 1.12 (s, 9 H, C(CH3)3), 5.56 (s, 2 H, ArCH2), 6.40 (s, 2 H, CH2), 7.04 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.4 - 7.58 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C17H20N6O3 356.1596, 測定値 356.1602; 元素分析 (C17H20N6O3).
【０１０９】
実施例２７：Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−９−メチルグアニン（１０ａ）
Ｏ6−ベンジル−９−メチルグアニン（０．２５２ｇ，１．０ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（０．０８４ｇ，１．０ｍｍｏｌ）をアルゴン下にて無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。臭素（５２μＬ，１．０ｍｍｏｌ）を前記溶液に添加し、得られた混合物を室温にて一晩攪拌した。溶媒を減圧下にて留去した。残渣をクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラム（Davisil grade 633, 200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。生成物１０ａをクロロホルムで溶出した。収量, 180 mg (52%); 融点 150 - 152℃; UV (pH 1) λmax 248 nm (ε = 0.753 x 104), 292 (1.398 x 104); (pH 6.9) 251 (0.919 x 104), 287 (1.306 x 104); (pH 13) 251 (0.906 x 104), 287 (1.296 x 104); 1H NMR δ 3.53 (s, 3 H, CH3), 5.47 (s, 2 H, ArCH2), 6.61 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.35 - 7.52 (m, 5 H, ArH); MS (EI) 計算値 m/z C13H12N5O79Br 333.0225, 測定値 333.0228; 計算値 m/z C13H12N5O81Br 335.0205, 測定値 335.0188; 元素分析 (C13H12N5OBr) C, H, N, Br.
【０１１０】
実施例２８：Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（１０ｂ）およびＯ6−ベンジル−８−ブロモ−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（１１）
Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニン(Chae et al., J. Med. Chem., 38, 342-347 (1995))（０．４８ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を１．０Ｍのナトリウムエトキシドのエタノール溶液１．５ｍＬと混合し、２０分間攪拌した。エタノールを減圧下にて留去し、残渣の固体をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。それからピバル酸クロロメチル（０．２４ｍＬ，１．６５ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を一晩攪拌した。ＤＭＦを減圧下にて留去した。残渣をクロロホルムに溶解し、クロロホルムで溶出させるシリカゲルカラム（Davisil grade 633，200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。９−異性体（１０ｂ）はクロロホルムで７−異性体より早く溶出し、１０ｂをこれらの条件下で純粋な形態で回収した。Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（１０ｂ）：収量, 150 mg (23%); 融点 217 - 218℃; UV (pH 1) λmax 250 nm (ε = 0.944 x 104), 291 (1.166 x 104); (pH 6.9) 266 (0.916 x 104), 295 (0.916 x 104); (pH 13)  Ｏ6−ベンジル−８−ブロモグアニンに分解する; 1H NMR δ 1.13 (s, 9H, C(CH3)3), 5.48 (s, 2H, ArCH2), 5.93 (s, 2H, CH2), 6.80 (s, 2H, NH2, D2O で交換可能), 7.35 - 7.52 (m, 5H, ArH). MS (EI) 計算値 m/z C18H20N5O379Br 433.0750, 測定値 433.0725; 計算値 m/z C18H20N5O381Br 435.0729, 測定値 435.0672; 元素分析 (C18H20N5O3Br) C, H, N, Br.  回収した７−異性体（１１）を、初めにクロロホルム／ヘキサン（１：１）で、続いてクロロホルムで溶出するシリカゲルカラム（Davisil grade 633，200 - 425メッシュ，６０Å）で再びクロマトグラフィー処理することにより、Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（１１）を回収した。
【０１１１】
実施例２９：Ｏ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニン（１２）
Ｏ6−ベンジルグアニン（２．４１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を１．０Ｍのナトリウムエトキシドのエタノール溶液１０ｍＬと混合し、３０分間攪拌した。エタノールを減圧下にて留去した。残渣を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、ピバル酸クロロメチル(Aldrich)（１．５ｍＬ，１０．４ｍｍｏｌ）を添加した。透明な溶液を室温にて一晩攪拌した。ＤＭＦを減圧下にて留去することにより、淡い桃色がかった固体を得た。この固体をクロロホルム／エタノール（９：１）に溶解し、シリカゲルカラム（Davisil grade 633，200 - 425メッシュ，６０Å）に充填した。カラムをクロロホルム／エタノール（９：１）で溶出することにより、９−異性体（Chae et al.，J．Med．Chem.，37，342-347 (1994)）に続いて、７−異性体が溶出した。７−異性体（１２）を、溶出液としてクロロホルム／エタノール（９８：２）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Davisil grade 633, 200 - 425メッシュ，６０Å）によりさらに精製した。収量, 36 mg (1%); 融点 166 - 168℃ (分解); UV (pH 1) λmax 240 nm (sh) (ε = 0.656 x 104), 290 (1.164 x 104); (pH 6.9) 240 (sh) (0.635 x 104), 293 (0.528 x 104); (pH 13) Ｏ6−ベンジルグアニンに分解する; 1H NMR δ 0.98 (s, 9 H, C(CH3)3), 5.51 (s, 2 H, ArCH2), 6.07 (s, 2 H, CH2), 6.32 (s, 2 H, NH2, D2O で交換可能), 7.36-7.58 (m, 5 H, ArH), 8.25 (s, 1 H, H-8); MS (EI) 計算値 m/z C18H21N5O3 355.1644, 測定値 355.1626.
【０１１２】
本発明には以下の態様が含まれる。
［１］  式
【０１１３】
【化１０】
2007077157.tif 000018
【０１１４】
〔式中、Ｒ1はアミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノおよびＣ1−Ｃ4アシルアミノからなる群より選ばれる置換基、Ｒ2は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、Ｃ1−Ｃ4カルバモイルアルキル、Ｃ1−Ｃ4ピバロイルアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4カルボアルコキシアルキル、リボース、２’−デオキシリボース、Ｃ1−Ｃ4カルボキシアルキルの共役酸の形態およびナトリウム塩としてのＣ1−Ｃ4カルボキシアルキルのカルボキシレートアニオンからなる群より選ばれる置換基、ならびにＲ3は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。但し、Ｒ2およびＲ3の両方が水素原子である時、Ｒ1はアミノではなく、Ｒ2がリボースまたは２’−デオキシリボースで、Ｒ3が水素原子である時、Ｒ1はアミノまたはメチルアミノではない。〕で表される化合物。
［２］  Ｒ1がアミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノおよびＣ1−Ｃ4アルキルカルボニルアミノからなる群より選ばれ、Ｒ2が水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれ、ならびにＲ3がアミノ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる［１］記載の化合物。
［３］  Ｒ1がアミノ、ヒドロキシ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアセチルアミノからなる群より選ばれ、Ｒ2が水素原子、メチルおよびピバロイルオキシメチルからなる群より選ばれ、ならびにＲ3がアミノ、ブロモ、メチル、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる［２］記載の化合物。
［４］  該化合物が８−アミノ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−メチル−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−ヒドロキシ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−ブロモ−Ｏ6−ベンジルグアニン、８−トリフルオロメチル−Ｏ6−ベンジルグアニン、Ｏ6−ベンジルキサンチン、Ｏ6−ベンジル尿酸、Ｎ2−アセチル−Ｏ6−ベンジル−８−オキソグアニン、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2−メチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−８−トリフルオロメチル−９−メチルグアニン、Ｏ6−ベンジル−８−ブロモ−９−メチルグアニンおよびＯ6−ベンジル−８−ブロモ−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニンからなる群より選ばれる［３］記載の化合物。
［５］  式
【０１１５】
【化１１】
2007077157.tif 000019
【０１１６】
〔式中、Ｒ1はＮＯ2またはＮＯであり、Ｒ2は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ’（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ’は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物。
［６］  Ｒ1がＮＯ2であり、Ｒ2が水素原子およびＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる［５］記載の化合物。
［７］  該化合物が、２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−ニトロピリミジンおよび２−アミノ−４−ベンジルオキシ−６−メチル−５−ニトロピリミジンからなる群より選ばれる［６］記載の化合物。
［８］  式
【０１１７】
【化１２】
2007077157.tif 000020
【０１１８】
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物。
［９］  ＲがＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる［８］記載の化合物。
［１０］  該化合物が８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−メチルグアニンおよび８−アザ−Ｏ6−ベンジル−９−（ピバロイルオキシメチル）グアニンからなる群より選ばれる［９］記載の化合物。
［１１］  式
【０１１９】
【化１３】
2007077157.tif 000021
【０１２０】
（式中、ＲはＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物。
［１２］  ＲがＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキルである［１１］記載の化合物。
［１３］  該化合物が８−アザ−Ｏ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンである［１２］記載の化合物。
［１４］  式
【０１２１】
【化１４】
2007077157.tif 000022
【０１２２】
（式中、Ｒ1は水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、ハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれ、Ｒ2はＣ1−Ｃ4アルキル、ハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ1−Ｃ4アルキル、シアノＣ1−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、ヒドロキシＣ1−Ｃ4アルキルおよびＣ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキルからなる群より選ばれる。但し、Ｒ1が水素原子の時、Ｒ2はハロＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ4アルキルオキシカルボニルＣ1−Ｃ4アルキル、カルボキシＣ2−Ｃ4アルキル、シアノＣ2−Ｃ4アルキル、アミノカルボニルＣ2−Ｃ4アルキルおよびヒドロキシＣ1−Ｃ3アルキルからなる群より選ばれる。）で表される化合物。
［１５］  該化合物がＯ6−ベンジル−８−ブロモ−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンおよびＯ6−ベンジル−７−（ピバロイルオキシメチル）グアニンからなる群より選ばれる［１４］記載の化合物。
［１６］  医薬上許容される担体および［１］〜［１５］のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物を含有する医薬組成物。
［１７］  医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する［１６］記載の医薬組成物。
［１８］  医薬上許容される担体および式
【０１２３】
【化１５】
2007077157.tif 000023
【０１２４】
で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
［１９］  医薬上許容される担体および式
【０１２５】
【化１６】
2007077157.tif 000024
【０１２６】
〔式中、Ｒは水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アシル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ1（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
［２０］  医薬上許容される担体および式
【０１２７】
【化１７】
2007077157.tif 000025
【０１２８】
で表される化合物を含有する医薬組成物であって、前記の医薬上許容される担体がポリエチレングリコールを含有する医薬組成物。
［２１］  グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、
［１］〜［１５］のいずれかに記載の化合物の有効量を哺乳動物に投与すること、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法。
［２２］  グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、
式
【０１２９】
【化１８】
2007077157.tif 000026
【０１３０】
で表される化合物の有効量を哺乳動物に投与すること、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法。
［２３］  グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、
式
【０１３１】
【化１９】
2007077157.tif 000027
【０１３２】
〔式中、Ｒは水素原子、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ、トリフルオロメチルチオ、Ｃ1−Ｃ4チオアシル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、トリフルオロメトキシ、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、Ｃ1−Ｃ4アシルオキシ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ4アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ、トリフルオロメチルアミノ、ジトリフルオロメチルアミノ、アミノメタンスルホニル、アミノＣ1−Ｃ4アルキルカルボニル、アミノトリフルオロメチルカルボニル、ホルミルアミノ、ニトロ、ニトロソ、Ｃ1−Ｃ4アルキルジアゾ、Ｃ5−Ｃ6アリールジアゾ、トリフルオロメチル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、シアノメチル、Ｃ1−Ｃ4シアノアルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルカルボニル、フェニル、フェニルカルボニル、Ｃ1−Ｃ4アシル、ホルミル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシメチル、フェノキシメチル、Ｃ2−Ｃ4ビニル、Ｃ2−Ｃ4エチニルおよびＳＯnＲ1（ｎは０、１、２または３であり、Ｒ1は水素原子、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アミノまたはフェニルである）からなる群より選ばれる置換基である。〕で表される化合物の有効量を哺乳動物に投与すること、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法。
［２４］  グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤を用いる哺乳動物における腫瘍細胞の化学療法治療を増強する方法であって、
式
【０１３３】
【化２０】
2007077157.tif 000028
【０１３４】
で表される化合物の有効量を哺乳動物に投与すること、および
グアニンのＯ6−位で細胞毒性の損傷を引き起こす抗腫瘍性アルキル化剤の有効量を該哺乳動物に投与することを含む方法。
【０１３５】
本明細書において引用した全ての参照文献（特許、特許出願および刊行物を含む）の全体は言及により本明細書に組み入れられるものである。
【０１３６】
好ましい実施態様を強調して本発明を説明したが、好ましい実施態様の変形を用いてもよいこと、および本明細書で詳細に説明した以外でも本発明を実施できることが意図されることは、当業者には明らかであろう。従って、以下の請求の範囲で定義される本発明の精神および範囲内に含まれるすべての変形を本発明は含む。