(57)【要約】【課題】  神経膠細胞の減少に伴う胎児性アルコール症候群（ＦＡＳ）、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効な天然由来の新規な神経膠細胞増殖促進剤を提供すること。【解決手段】  カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする神経膠細胞増殖促進剤。
【請求項２】
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする神経膠細胞増殖促進組成物。
【請求項３】
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする神経膠細胞増殖促進食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アストロサイトに代表される神経膠細胞の減少に伴う疾患、例えば、胎児性アルコール症候群、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効な神経膠細胞増殖促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脳細胞は、大別して神経細胞と神経膠細胞（グリア細胞）からなることが知られている。脳細胞の研究は、これまで神経細胞について精力的に行われてきたが、近年、神経細胞の周囲に存在する神経膠細胞の機能の重要性が注目を集めている。例えば、神経膠細胞の一種であるアストロサイト（星状膠細胞）は、脳細胞の約半数を占める細胞であるが、その機能としては、神経細胞の支持・保護・栄養供給などが古くから考えられていた。しかし、最近、アストロサイトには、神経細胞の神経突起伸長・シナプス形成を促進する作用があるという興味深い報告がされている（非特許文献１）。アストロサイトの分化・増殖は、神経細胞が形成された後の胎児期に主に起こる。胎児期は、神経細胞同士が神経情報伝達回路を形成する期間であるが、アストロサイトは、この期間に神経情報伝達回路の形成を促進することが示されている。また、神経情報伝達回路の形成に欠くことのできない神経突起伸長には、アストロサイトが分泌する液性栄養因子（例えばＴＮＦ−αやＡＤＮＦなど）が関わっていることが知られている。
【０００３】
ところで、妊娠中に母親がアルコールを過剰摂取した場合、産まれた子は、生後に発達障害・行動障害などの症状を起こし、小頭になることが知られている。これを胎児性アルコール症候群（ＦＡＳ）という。ＦＡＳに対する有効な治療薬は、残念ながら未だ開発されていない。従って、ＦＡＳに対しては、現在のところ予防することが非常に重要であり、最も効果的な予防法は、母親が妊娠期にアルコールの摂取を控えるようにすることであるが、これ以外の予防法は知られていない。このようなＦＡＳの発症メカニズムの一つとして、アルコールがアストロサイトの増殖を阻害することが報告されている（非特許文献２）。この報告では、脳細胞の約半数を占めるアストロサイトの減少が小頭を誘発することが示唆されている。
また、小頭を伴う遺伝性疾患であるＲｅｔｔ症候群は、乳幼児期における脳神経系の発達障害疾患であるが、近年、本発明者らの研究グループは、Ｒｅｔｔ症候群の小頭傾向がアストロサイトの増殖異常に原因があることを示唆する報告を行っている（非特許文献３）。
また、神経膠細胞は、精神疾患患者の脳内でも減少していることが報告されている。例えば、統合失調症、双極性障害、うつ病に罹患した患者おいては、従来から神経細胞の異常が観察されていたが、これとともにアストロサイトが減少していることが報告されている（非特許文献４）。
従って、神経膠細胞の減少は、神経細胞の機能や精神機能に悪影響を与えていると考えられている。
【０００４】
以上のような知見に鑑みれば、神経膠細胞の増殖を促し、神経膠細胞の個数を減らさないこと、減少した神経膠細胞の個数を改善することは、ＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効であると考えられることから、例えば、特許文献１では、ある種の環状ホスファチジン酸を用いて神経膠細胞の増殖を促進させる方法が提案されている。しかし、神経膠細胞増殖促進作用を有する天然由来成分の報告は、これまでほとんど存在しない。
【特許文献１】特開２００２−３０８７７９号公報
【非特許文献１】Slezak et al., Trends Neuroscience, 26: 531-535, 2003
【非特許文献２】Costa et al., Toxicol. Lett., 149: 67-73, 2004
【非特許文献３】Nagai et al., Dev. Brain Res., 157: 103-106, 2005
【非特許文献４】Cotter et al., Brain Res. Bull., 55: 585-595, 2001
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで本発明は、神経膠細胞の減少に伴うＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効な天然由来の新規な神経膠細胞増殖促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の技術背景を基に鋭意研究を重ねた結果、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分に優れた神経膠細胞増殖促進作用があることを見出した。
【０００７】
上記の知見に基づいてなされた本発明の神経膠細胞増殖促進剤は、請求項１記載の通り、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の神経膠細胞増殖促進組成物は、請求項２記載の通り、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする。
また、本発明の神経膠細胞増殖促進食品は、請求項３記載の通り、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、神経膠細胞の減少に伴うＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効な天然由来の新規な神経膠細胞増殖促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の神経膠細胞増殖促進剤は、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明の神経膠細胞増殖促進剤の増殖促進対象となる神経膠細胞には、アストロサイトの他、オリゴデンドロサイトやミクログリアなどが含まれる。
【００１０】
本発明において、カバノアナタケとは、中部ヨーロッパ、シベリア、中国、日本の北部地方などの寒冷地に広く分布している耐寒性のきのこである（学術名：Ｆｕｓｃｏｐｏｒｉａ  ｏｂｌｉｑｕａ）。カバノアナタケは、シラカバやダケカンバなどのカバノキ類に多く寄生してそれらの樹木の樹液を養分にして生育し、その黒く硬い菌核は、チャーガと呼ばれ、ロシアでは古くからお茶代わりに飲用されている。脂溶性抽出成分を得るために用いるカバノアナタケは、子実体であっても菌糸体であってもよい。また、これらは、天然物であっても栽培物または培養物であってもよい。カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分は、カバノアナタケの子実体や菌糸体、またはこれらの乾燥体の破砕物や粉砕物から有機溶媒を用いた抽出操作を経て得ることができる。有機溶媒としては、エタノール、メタノール、イソプロパノール、ブタノールなどのアルコールの他、ヘキサン、クロロホルム、ベンゼン、フェノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、アセトン、トルエン、ジクロロメタンなどを用いることができる。有機溶媒は単独で用いてもよいし、複数種類を混合して用いてもよい。また、複数種類の有機溶媒を連続して用いて抽出操作を行ってもよい。有機溶媒の使用量は、使用する有機溶媒の種類や抽出効率などに基づいて適宜決定すればよい。抽出操作方法の一例としては、クロロホルム：メタノールを７：３〜９：１の割合で混合して調製した溶媒を、カバノアナタケの乾燥粉末１重量部に対して５重量部〜５０重量部用いて行う方法が挙げられる。脂溶性抽出成分は、このような抽出操作によって得られる抽出液を必要に応じて濾過を行った後、減圧濃縮などをすることで得ることができる。また、脂溶性抽出成分は、得られた抽出液をさらに分画精製して得られる脂溶性抽出画分であってもよい。
【００１１】
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分は、自体公知の方法によって顆粒剤や錠剤やカプセル剤などに製剤化し、服用することで、その優れた神経膠細胞増殖促進活性に基づいて、ＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの神経膠細胞の減少に伴う疾患の予防薬や治療薬などとして機能する。その服用量は、服用者の年齢、性別、体重、体調などによって適宜決定することができる。また、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分は、種々の形態の食品（サプリメントを含む）に、神経膠細胞増殖促進活性を発揮するに足る有効量を添加することで、ＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの神経膠細胞の減少に伴う疾患に対する予防効果や治療効果をもたらす機能性食品として食してもよい。
【実施例】
【００１２】
以下、本発明の神経膠細胞増殖促進剤について実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明は、以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１３】
実施例１：
（１）カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の調製
カバノアナタケ子実体の乾燥粉末１ｇに１０倍量のクロロホルム：メタノールを９：１の割合で混合して調製した溶媒を加え、室温で２４時間振とうさせて脂溶性成分を抽出した。抽出液と抽出残渣を分離後、得られた抽出液を減圧濃縮し、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を１２．９ｍｇ得た。
【００１４】
（２）カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果の評価（その１）
妊娠１８日目のＣ５７ＢＬ／６マウス胎児の脳から初代培養神経膠細胞を非特許文献３に記載の方法に従って調製し、９６ウェルのマイクロプレートに１００００ｃｅｌｌｓ／ウェルの密度で培養を開始した。培養は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および抗生物質としてペニシリン１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ（終濃度）とストレプトマイシン０．０１％（終濃度）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）を培地に使用し、温度３７℃、ＣＯ2濃度５％の条件で行った。２４時間後、培地を除去し、今度はＤ−ＭＥＭにカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を添加して４８時間培養した。なお、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、培地中における濃度が１０μｇ／ｍＬとなるように培地に添加した。４８時間後、生細胞定量法のＭＴＴ（同仁化学製）を用いるＭＴＴアッセイを行った。具体的には、４８時間の培養終了後、培地を除去し、細胞を２５０μｇ／ｍＬのＭＴＴの存在下でさらに２時間培養し、次いで反応停止液（２０％ＳＤＳ（ｗ／ｖ）および５０％ジメチルホルムアミド（ｖ／ｖ）を含む）を加えて反応を停止させ、生成物と細胞とを可溶化した後、５７０ｎｍでの吸光度を求めた。この吸光度をカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を添加せずに４８時間培養した場合の吸光度と比較し、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を添加せずに４８時間培養した場合の吸光度を１００とした時の相対値を求め、この相対値をカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を添加して４８時間培養した場合の相対的な生存細胞数として、神経膠細胞増殖促進効果の評価を行った。結果を図１に示す。なお、図１には、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分と同様にして得た、アガリクス由来の脂溶性抽出成分（子実体乾燥粉末１ｇあたり４３．２ｍｇ取得）、メシマコブ由来の脂溶性抽出成分（子実体乾燥粉末１ｇあたり４．１ｍｇ取得）、ヤマブシタケ由来の脂溶性抽出成分（子実体乾燥粉末１ｇあたり６７．０ｍｇ取得）を、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果の評価と同様の評価方法で評価した結果をあわせて示す。図１から明らかなように、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分には、神経膠細胞の増殖を促進させる効果が認められた。
【００１５】
（３）カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果の評価（その２）
続いて、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の添加量と神経膠細胞増殖促進効果との関係を（２）と同様の評価方法で調べた。結果を図２に示す。図２から明らかなように、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の添加量が増加するにつれて神経膠細胞増殖促進効果が増強された。
【００１６】
実施例２：カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果の評価（その３）
実施例１の（２）と同様にして、初代培養神経膠細胞を９６ウェルのマイクロプレートに５０００ｃｅｌｌｓ／ウェルの密度で培養を開始し、２４時間培養した。その後、培地を除去し、今度はＤ−ＭＥＭにエタノールを濃度が０．５％となるように添加するとともにカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を濃度が１μｇ／ｍＬとなるように添加して１週間培養した。なお、エタノールは２日ごとにその濃度が０．５％になるよう添加した。そして、実施例１の（２）と同様の評価方法により、エタノールもカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分も添加せずに培養した場合の生存細胞数に対する相対的な生存細胞数を求め、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果の評価を行った。結果を図３に示す。なお、図３には、エタノールのみを添加して培養した場合の相対的な生存細胞数をあわせて示す。図３から明らかなように、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分を添加することにより、エタノールに起因する神経膠細胞の減少を回復させることができた。
【００１７】
製剤例１：錠剤
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分４ｇ、乳糖７６ｇ、ステアリン酸マグネシウム２０ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って錠剤とした。
【００１８】
製剤例２：顆粒剤
カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分１６ｇ、澱粉２９ｇ、乳糖５５ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って顆粒剤とした。
【００１９】
製剤例３：ビスケット
薄力粉３２ｇ、全卵１８ｇ、バター１４ｇ、砂糖２４ｇ、水１０ｇ、ベーキングパウダー１ｇ、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分１ｇ、合計１００ｇを用い、常法に従ってビスケットとした。
【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明は、神経膠細胞の減少に伴うＦＡＳ、Ｒｅｔｔ症候群、各種精神疾患などの予防や治療に有効な天然由来の新規な神経膠細胞増殖促進剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】実施例１におけるカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の神経膠細胞増殖促進効果を示すグラフである。
【図２】同、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分の添加量と神経膠細胞増殖促進効果との関係を示すグラフである。
【図３】実施例２におけるカバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分のエタノールに起因する神経膠細胞の減少に対する効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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