(57)【要約】      （修正有）【課題】ニューロキニン３（ＮＫ３）レセプターアンタゴニストのin vivoでの効力を査定する方法を提供する。【解決手段】ＮＫ３レセプターアンタゴニストのin vivoでの効力を査定する方法であって、（ａ）ヒト以外の動物に、目的のＮＫ３レセプターアンタゴニストを投与する工程、（ｂ）ヒト以外の動物に、投与しようとするＮＫ３−Ｒアゴニストを投与する工程、（ｃ）投与された、ヒト以外の動物の自発運動を測定する工程、および（ｄ）投与された、ヒト以外の動物の運動に対する目的のアンタゴニストの効果とアンタゴニストのin vivo効力との相関関係を求める工程、を含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＫ３レセプターアンタゴニストのインビボでの効力を査定する方法であって、
（ａ）ヒト以外の動物を、目的のＮＫ３レセプターアンタゴニストで処理する工程、
（ｂ）ヒト以外の動物を、ＮＫ３レセプターアゴニストで処理する工程、
（ｃ）処理された、ヒト以外の動物の自発運動を測定する工程、および
（ｄ）処理された、ヒト以外の動物の自発運動に対する目的のアンタゴニストの効果と該アンタゴニストのインビボ効力との相関関係を求める工程
を含む方法。
【請求項２】
ＮＫ３−ＲアゴニストがＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−メチオニンアミドである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
アゴニストをヒト以外の動物の脳に注入する、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
アゴニストを一つまたはそれ以上の脳室に注入する、請求項１または２記載の方法。
【請求項５】
アゴニストを第三（腹側）脳室に注入する、請求項１または２記載の方法。
【請求項６】
ヒト以外の動物が齧歯類である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ヒト以外の動物がアレチネズミまたはマウスである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
タキキニンは、小ペプチド、たとえばサブスタンスＰ、ニューロキニンＡおよびニューロキニンＢのファミリーであって、Ｃ末端がアミド化された共通配列Ｐｈｅ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ―Ｍｅｔ−ＮＨ2（配列番号：１）の存在を共有することを特徴とする。その生物学的効果は、３種類の別個のレセプター、たとえばニューロキニン１（ＮＫ１）、ニューロキニン２（ＮＫ２）およびニューロキニン３（ＮＫ３）を通じて、それぞれ媒介される。タキキニンおよびそのレセプターは、過去数年以上も熱心な研究の焦点となっている。最近、選択的なＮＫ３レセプター（ＮＫ３−Ｒ）アンタゴニストであるＳＲ１４２８０１（オサネタント（Osanetant））は、統合失調症患者における二重盲検プラセボ対照の臨床試験で活性を有することが示された［Meltzer, H.Y., Arvanitis, L., Bauer, D., Rein, W., "A placebo-controlled evaluation of four novel compounds for the treatment of schizophrenia and schizoaffective disorder" Am. J. Psych., 161:975-84, 2004］。しかし、脳および行動ならびに動物モデルにおける、ＮＫ３レセプターの薬理学および機能は、充分に研究されてはいない。in vivoでのＮＫ３−Ｒの効果を査定する正確な手段に対する需要が存在する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
したがって、本発明は、ＮＫ３レセプターアンタゴニストのin vivoでの効力を査定する方法であって、
（ａ）ヒト以外の動物を、目的のＮＫ３−Ｒアンタゴニストで処理する工程、
（ｂ）ヒト以外の動物を、ＮＫ３−Ｒアゴニストで処理する工程、
（ｃ）処理された、ヒト以外の動物の自発運動を測定する工程、および
（ｄ）処理された、ヒト以外の動物の自発運動に対する目的のアンタゴニストの効果と該アンタゴニストのin vivo効力との相関関係を求める工程
を含む方法を提供する。
【０００３】
本明細書に用いられる限りでの用語「in vivoでの効力」は、ある化合物、この場合はＮＫ３−Ｒアンタゴニストの、ヒト以外の動物に所望の効果を生じて、それによって、ＮＫ３−Ｒに対するＮＫ３またはＮＫ３−Ｒアゴニストの所望の効果である効果を減殺する能力を意味する。
【０００４】
本明細書に用いられる限りでの用語「ＮＫ３−Ｒアンタゴニスト」または「アンタゴニスト」は、ＮＫ３−Ｒに対するＮＫ３またはＮＫ３−Ｒアゴニストの効果を減殺できる化合物を意味する。
【０００５】
本明細書に用いられる限りでの用語「ＮＫ３−Ｒアゴニスト」または「アゴニスト」は、ニューロキニン３レセプターを刺激できる化合物を意味する。
【０００６】
ＮＫ３アンタゴニストは、経口投与（たとえば経口ガバージュ、舌下投与または直腸投与）、血流中への直接注入（たとえば静脈内または動脈内投与）、または様々な非経口経路（たとえば腹腔内、および筋内のような皮下経路）を非限定的に包含する、公知の経腸もしくは非経口経路、エアゾールを通じての呼吸器に基づく投与、および皮下への投与（すなわち真皮貫通、皮膚貫通または経皮）はもとより、配合された目的の化合物の局所投与によってもヒト以外の動物に投与し得る。該アンタゴニストの投与の好適な形態は、経口（ＰＯ）投与または腹腔内（ＩＰ）投与である。好ましくは、該アンタゴニストは、単一用量で投与する。
【０００７】
該アンタゴニストは、代表的には、ヒト以外の動物の活性を試験する多少前の時間に投与する。時間の長さは、化合物が吸収され、血液脳関門を克服するのに要する時間に依存する。好ましくは、該アンタゴニストは、試験の１５〜２４０分前にヒト以外の動物に投与する。
【０００８】
ＮＫ３レセプターアゴニストは、ニューロキニン３レセプターのいかなるアゴニストであってもよく、好ましくは、該アゴニストは、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−メチオニンアミド（ゼンクチド（Senktide））である。該アゴニストは、ヒト以外の動物に、動物の脳内への注入によって投与し得る。より好ましくは、該アゴニストは、一つまたはそれ以上の脳室に注入する。より好ましくは、該アゴニストは、ヒト以外の動物の第三（腹側）脳室に注入する。該アゴニストは、代表的には、ヒト以外の動物の活性を試験する直前に単一用量で投与する。脳内にＮＫ３レセプターアゴニストを注入するには、通常、該ヒト以外の動物を麻酔する。好ましくは、試験は、該ヒト以外の動物が覚醒した直後に開始するが、それは、ＮＫ３−Ｒアゴニスト投与の１〜４分後であり得る。
【０００９】
ヒト以外の動物の自発運動は、歩行、走行、水泳、またはたとえば毛づくろい、舐めもしくは育児のような常同行動を非限定的に包含する。好ましくは、自発運動は、ヒト以外の動物が網羅する距離を決定することによって測定する。
【００１０】
ヒト以外の動物は、ヒト以外のいかなる動物であってもよい。好ましくは、該ヒト以外の動物は、齧歯類、より好ましくはアレチネズミまたはマウスである。最も好ましいヒト以外の動物は、スナネズミ（Meriones unguiculates）である。該ヒト以外の動物は、ヒトＮＫ３レセプターまたはアレチネズミＮＫ３レセプターに対してトランスジェニックなヒト以外の動物であってもよい。
【００１１】
本発明をここに一般的に記載し、また、具体的な実施例を添付の図面と連携して参照することによって、より充分に理解されると思われるが、この実施例は、例示の目的でのみ本明細書に含まれるにすぎず、別途指定されない限り限定しようとするものではない。
【００１２】
〔実施例〕
実施例中に参照される商業的に入手可能な試薬は、別途指示されない限り、製造者の教示に従って用いた。
【００１３】
材料および方法
動物および飼育
体重４０〜７０gの雄および雌のスナネズミ［Biological Research Laboratories, 4414 Fuellinsdorf、スイス国］を用いた。スナネズミは、研究室コロニーに到着後約４〜７日間、１ケージあたり４匹を飼育した。スナネズミは、居住用ケージ内で水道水および研究用飼料を不断摂取した。動物の居住区は、午前６時から明周期が始まる１２時間：１２時間の明暗周期で、温度（２１〜２３℃）および湿度（５５〜６５％）をともに調節して維持された。試験は、すべて、明暗周期の明期間の間に実施した。ここに記載された手順は、すべて、連邦および地方の規制の順守に基づき、バーゼル市州動物保護委員会から事前の承認を受けた。実験は、Hoffmann-La Roche Ltd.の獣医職員が監督する動物コロニー内で実施した。
【００１４】
化合物
アゴニスト：
・Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−メチオニンアミド（ゼンクチド）
アンタゴニスト：
・Ｎ−［１−［３−［（３Ｒ）−（１−ベンゾイル−３−（３，４−ジクロロフェニル）−３−ピペリジニル］プロピル］−４−フェニル−４−ピペリジニル］−Ｎ−メチルアセトアミド（ＳＲ１４２８０１）
・３−メチル−２−フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルプロピル］−４−キノリンカルボキサミド（ＳＢ２２２２００）
・３−ヒドロキシ−２−フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルプロピル］−４−キノリンカルボキサミド（タルネタント（Talnetant））
【００１５】
薬物の調製
アンタゴニストは、使用直前に調製した（ビヒクル：０．３％トゥイーン８０／生理食塩水）。アンタゴニスト性物質は、試験の３０〜２４０分前に腹腔内または経口投与した。ゼンクチドは、蒸留水中０．１％のＢＳＡに溶解し、アリコートとして、使用まで凍結し（−２０℃）、使用する場合は、脳室内（i.c.v.、ＩＣＶ）直接投与によって与えた。
【００１６】
スナネズミにおけるゼンクチドで誘導される自発運動の阻害
スナネズミを、イソフルラン／酸素混合物の吸入によって麻酔し、頭皮を露出させ、ゼンクチド（０．０１〜０．１nmol／５μl）を、第三（腹側）脳室に、ブレグマ下４．５mmの深さに垂直に挿入した折返し付き２５Ｇ注射針を通じて投与した。切開はクリップ縫合を用いて閉じ、スナネズミは、その立ち直り反射の回復を待って風防ガラスの箱に、次いで自発運動箱（Accuscan Instruments、米国）に入れた。次いで、運動を、９０分間自動的に測定した。
【００１７】
統計的解析
データは、一元分散分析、次いでダネット多重比較検定、または適切な場合は（片側）ｔ検定を用いて解析した（Statistica, Statsoft）。
【００１８】
結果
ゼンクチド（０．０１、０．０３または０．１nM／５μl、脳室内）は、０．１nM／５μl（脳室内）の用量で総移動距離の有意な増加を誘導した（図１）。
【００１９】
ＳＲ１４２８０１（１０または３０mg/kg、腹腔内、３０分の前処理時間）は、ゼンクチド（０．１nM／５μl、脳室内）で誘導された自発運動を３０mg/kgの用量で有意に低下させた（図２）。
【００２０】
タルネタント（１０または３０mg/kg、腹腔内、３０分の前処理時間）は、ゼンクチド（０．１nM／５μl、脳室内）で誘導された自発運動を３０mg/kgの用量で有意に低下させた（図２）。
【００２１】
ＳＢ２２２２００（１０または３０mg/kg、腹腔内、３０分の前処理時間）は、ゼンクチド（０．１nM／５μl、脳室内）で誘導された自発運動を３０mg/kgの用量で有意に低下させた（図２）。
【発明の効果】
【００２２】
ゼンクチドは、脳室内注入後の９０分間以上、総移動距離を用いて測定された限りでの自発運動の有意な増加を誘導した。この効果は、ＳＲ１４２８０１、タルネタントおよびＳＢ２２２２００のような選択的ＮＫ３レセプターアンタゴニストによって阻害された。これらのデータは、ゼンクチドで誘導される自発運動が、選択的ＮＫ３レセプターに媒介される効果であり、ＮＫ３レセプターアンタゴニストのin vivoでの効力を査定するのに用いることができることを示す。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−メチオニンアミド（＝ゼンクチド）の増加する用量によって誘導される自発運動のグラフによる提示を示す図である。*** ＝ビヒクルに対してｐ＜０．００１（ダネット多重比較検定）
【図２】Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニルグリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−メチオニンアミドによって誘導される自発運動に対するＮ−［１−［３−［（３Ｒ）−（１−ベンゾイル−３−（３，４−ジクロロフェニル）−３−ピペリジニル）プロピル］−４−フェニル−４−ピペリジニル］−Ｎ−メチルアセトアミド（１０または３０mg/kg、腹腔内）、３−ヒドロキシ−２−フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルプロピル］−４−キノリンカルボキサミド（１０または３０mg/kg、腹腔内）、および３−メチル−２−フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルプロピル］−４−キノリンカルボキサミド（１０または３０mg/kg、腹腔内）の効果のグラフによる提示を示す図である。# ＝ゼンクチドに対してｐ＜０．０５、### ＝ｐ＜０．００１（対応のないｔ検定）
【図１】
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【図２】
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【配列表】
2007139753000001.app
【外国語明細書】
1. Title of Invention
NK-3 Receptor in vivo assay
2. Detailed Description of Invention
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3. Brief Description of Drawings
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1.Claims
2007139753.tif 000011
1. Abstract
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2. Representative Drawing
None
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2007139753.tif 000014
【配列表】
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