(57)【要約】【課題】  ６−アミノ−６−デオキシキトサンを利用した新しい核酸導入剤とそれを用いる細胞への核酸導入方法を提供する。【解決手段】  下記の化学構造式（Ｉ）で表わされる繰り返し単位を有する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体から成る、生物細胞内に核酸を導入するための核酸導入剤。式（Ｉ）中、Ｒは好ましくは還元アミノ化またはアシル化により結合されている細胞内核酸導入促進物質（還元糖、ポリエチレングリコール、ビオチンなど）を表わす。当該核酸導入剤と核酸との複合体を細胞に投与する。【化１】2007006849.tif 000009
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学構造式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体から成ることを特徴とする、生物細胞内に核酸を導入するための核酸導入剤。
【化１】
2007006849.tif 000008
〔式（Ｉ）中、Ｒは、細胞内核酸導入促進物質を表わす。〕
【請求項２】
Ｒで表わされる細胞内核酸導入促進物質が、還元アミノ化またはアシル化により６−アミノ−６−デオキシキトサンに結合されている請求項１の核酸導入剤。
【請求項３】
Ｒで表わされる細胞内核酸導入促進物質が、還元糖またはその誘導体である請求項２の核酸導入剤。
【請求項４】
Ｒで表わされる細胞内核酸導入促進物質が、ポリエチレングリコールまたはその誘導体である請求項２の核酸導入剤。
【請求項５】
Ｒで表わされる細胞内核酸導入促進物質が、ビオチンまたはその誘導体である請求項２の核酸導入剤。
【請求項６】
ビオチンまたはその誘導体に結合したストレプトアビジンを介して核酸輸送性タンパク質が結合している請求項５の核酸導入剤。
【請求項７】
核酸輸送性タンパク質が細胞膜融合性物質であるＧＡＬＡである請求項６の核酸導入剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかの核酸導入剤と、導入対象である核酸とを混合して核酸導入剤／核酸複合体を形成させ、該複合体を細胞に投与することを特徴とする細胞内への核酸導入方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の遺伝子工学の分野への用途に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体の細胞中の遺伝情報を制御することにより治療効果を得ようとする遺伝子治療が注目されている。遺伝情報の制御を行うためには外部から細胞内に核酸を導入する技術が重要であり、その目的を達するための遺伝子導入剤（核酸導入剤）が必要となる。現在のところ導入効率が高い遺伝子導入剤は一般にウィルス由来のものである。しかし、特に安全性などの観点から非ウィルス性の遺伝子導入剤の開発は急務である（非特許文献１）。
【非特許文献１】G.Zuber etal., Adv. Drug Deliv. Rev., 52, 245-253 (2001).
【０００３】
非ウィルス性遺伝子導入剤となり得る物質のひとつにキトサンがある。キトサンはカニやエビの甲殻、昆虫の外骨格等の構成成分であるキチンをアルカリ加水分解処理して得られる多糖類で、豊富な生物資源として注目されている。キトサンは一般の有機溶媒には不溶であるが、有機酸水溶液中ではアミノ基がカチオン化して可溶となる。さらに生体親和性および生分解性を有し、かつ低毒性であることから、医用、化粧品、食品、その他の幅広い分野で使用できる材料であることが認められてきた。カチオン化したキトサンは核酸と静電的に相互作用して複合体を形成するため、遺伝子導入剤として利用できる（非特許文献２）。
【非特許文献２】F.C.MacLaughlinet al., J. Contr. Release, 56, 259-272 (1998).
【０００４】
キトサンの遺伝子導入効率はしかし十分とは言えず、化学修飾による導入効率の向上が図られている。本発明者らも下記の式（II）で示される構成単位（繰り返し単位）からなる６−アミノ−６−デオキシキトサンを合成に成功しその遺伝子導入剤としての評価を行った。その結果、遺伝子導入効率がキトサンの値（非特許文献３）を上回ることを確認したが、更なる向上が好ましい。
【０００５】
【化１】
2007006849.tif 000002
【非特許文献３】T.Satoh etal., Chem. Lett., 33, 340-341 (2004).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、６−アミノ−６−デオキシキトサンに由来する新しいタイプの遺伝子導入剤（核酸導入剤）とそれを用いる遺伝子導入方法（核酸導入方法）を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、本発明者ら自身が見出した既述の６−アミノ−６−デオキシキトサンを原料に使用し、該化合物のアミノ基を反応部位とする化学反応を行うことによって容易に種々の６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体が得られるとともに、そのような６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体が遺伝子（核酸）導入剤として機能することを見出し、本発明を完成するに至った。かくして、本発明に従えば、下記の化学構造式(Ｉ)で表される繰り返し単位（構成単位）を有することを特徴とする、生物細胞内に核酸導入するための核酸導入剤が提供される。
【０００８】
【化２】
2007006849.tif 000003
式（I）中、Ｒは細胞内核酸導入促進物質を表わす（より厳密には、細胞内核酸導入促進物質の残基を表わす）。
【０００９】
さらに、本発明は上記の核酸導入剤と、導入対象である核酸とを混合して核酸導入剤／核酸複合体を形成させ、該複合体を細胞に投与することを特徴とする細胞内への核酸導入方法が提供される。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、６−アミノ−６−デオキシキトサンを原料として利用することにより、各種の細胞内核酸導入促進物質が結合された多様な目的に適用できる新しいタイプの核酸導入剤とその用法を可能にした。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の核酸導入剤を構成する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体は、既述の式（II）で表わされる６−アミノ−６−デオキシキトサンの構成単位（繰り返し単位）の一部または全部が既述の式（I）で表わされる構造で置換された新規物質である。
【００１２】
式（I）においてＲで表わされる細胞内核酸導入促進物質とは、後記の例示からも理解されるように、細胞に特異的に結合することにより、核酸導入剤と核酸とから成る複合体を安定化させることにより、あるいは、細胞内への核酸輸送性タンパク質を結合させ得ることにより、対象の核酸の細胞内導入を促進する各種物質である。
【００１３】
本発明で用いられるキトサン誘導体は、如何なる方法によって製造されたものであっても構わないが、好適には６−アミノ−６−デオキシキトサンを原料にして図１、２に示す化学反応、すなわち、還元アミノ化またはアシル化により容易に製造できる。
【００１４】
還元アミノ化（還元的アミノ化）は、よく知られているように、アルデヒドとアミノ基の縮合反応に引き続き還元することによりアルデヒド基（ホルミル基）を有する化合物を共有結合を介して導入する反応である。還元には、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、シアン化ホウ素ナトリウムなどの還元剤が用いられる。
【００１５】
図１は、ホルミル基を有する試薬（細胞内核酸導入促進物質）と６−アミノ−６−デオキシキトサンのアミノ基との還元アミノ化により当該試薬を６−アミノ−６−デオキシキトサンに結合させることにより、本発明の６−アミノ−６−デオキシキトサンを合成する反応スキームを概示するものである。
【００１６】
図１で示される方法において６−アミノ−６−デオキシキトサンと反応させるホルミル基を有する試薬は必要に応じ任意に選択できるが、好ましいものとして、ラクトース、マルトースなどの還元末端を有する糖類（還元糖）を挙げることができる。
【００１７】
たとえば、図１で示される反応において還元糖としてラクトースを使用した場合、生成物として得られるラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンは、その構造中にガラクトース残基を含むため、肝細胞に代表されるガラクトース受容体を細胞表面に有する細胞に特異的に結合し得る。この機構により該化合物および該化合物を構成成分とする複合体の細胞内への取り込み効率が向上する。
【００１８】
図２は、アシル化反応、すなわち、６−アミノ−６−デオキシキトサンにアシル化試薬（細胞内核酸導入促進物質）を結合させることにより、本発明の６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体を合成する反応を概示するものである。図に示されるように、カルボキシル基を有するアシル化試薬を脱水縮合反応させることにより、または、ハロゲン化アシルもしくは酸無水物構造を有するアシル化試薬を用いることにより、６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体のアミノ基の水素をアシル基と置換する。
【００１９】
図２で示される反応に従い６−アミノ−６−デオキシキトサンと反応させるアシル化試薬は必要に応じ任意に選択できるが、好ましいものとして生物系の研究で多用される各種の活性エステル化試薬を挙げることができる。
【００２０】
そのような活性エステル化試薬の具体例として、ポリエチレングリコールまたはその誘導体を挙げることができる。適当な鎖長のポリエチレングリコールを有する化合物を選択した場合、得られるポリエチレングリコール修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の血清あるいは血液中に含まれるタンパク質との非特異的相互作用を顕著に軽減することができる。この効果により該化合物と核酸から成る複合体の血清培地あるいは血液中での安定性を向上させることができる。
【００２１】
また、活性エステル化試薬のその他の好ましい例としてビオチンまたはその誘導体を挙げることができる。ビオチンを有する化合物を選択した場合、得られるビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体はそれ以外の各種のビオチン修飾化合物とストレプトアビジンを介して複合体を形成することができる。
【００２２】
ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体とストレプトアビジオンを介して複合体を形成するビオチン修飾化合物の好ましい例として、各種の核酸輸送性タンパク質（ペプチドを含む）をビオチン修飾したものが挙げられる。そのような核酸輸送性タンパク質として、例えば、細胞膜表面の受容体に結合し得る化合物（例えば、トランスフェリンや上皮細胞成長因子など：非特許文献４）、エンドソームあるいはリソソーム内から細胞質中への移行に有効に作用する化合物（例えば、ＧＡＬＡなど：非特許文献５）、および核内への移行に関与する化合物（例えば、インポーティンβ、トランスポーティンなど：非特許文献６，７）などをストレプトアビジンを介してビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンに結合することができる。
【非特許文献４】M. Molas etal. Curr. Gene Ther., 3, 468-485 (2003)。
【非特許文献５】Roberta A. etal., J. Biol. Chem., 263, 4724-4730 (1988)。
【非特許文献６】E. Duvergeret al., J. Cell Sci., 108, 1325-1332 (1995)。
【非特許文献７】T. Nagasakiet al., J. Contr. Release, 103, 199-207 (2005)。
【００２３】
本発明の核酸導入剤を構成する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の原料となる６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の原料となる６−アミノ−６−デオキシキトサンは、例えば、本発明者らによる既述の非特許文献３に記載された方法により合成することができる。概述すれば、６−デオキシ−６−ハロ−キトサン誘導体をアジド化し、得られたアジド体をホスフィンイミドかした後、ヒドラジンで処理することにより、式（II）の繰り返し単位から成る６−アミノ−６−デオキシキトサンが得られる。
【００２４】
原料となる６−アミノ−６−デオキシキトサンを天然キチンより得た場合、一般にＣ−２位アミノ基の一部にアセチル基を有していることがある。また化学修飾に際してキトサンのアミノ基にアセチル基が導入されることもある。本発明において原料となる６−アミノ−６−デオキシキトサンおよび本発明で用いられる６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体はこのようにＣ−２位の一部にアセチル基を有する構造のものを含む。
【００２５】
式（Ｉ）の繰り返し単位を有する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の製造における反応条件は、原料の種類、反応性、生産性などを考慮して任意に設定できるが、６−アミノ−６−デオキシキトサンの溶解性を考慮して一般に含水溶媒中で行うことが好ましい。
【００２６】
反応後、生成した６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体は濾別、遠心分離、水溶液の凍結乾燥等、一般の単離方法を適宜選択して単離することが出来る。一般には水溶性を有する生成物は限外濾過により容易に精製できる。一方、水不溶性の生成物の場合、反応混合物をアルコール等に加えて沈澱した生成物を濾過あるいは遠心分離により単離し、アルコール等の溶媒及び水で洗浄後乾燥することにより精製できる。
【００２７】
本発明で得られる６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体を核酸導入剤（遺伝子導入剤）として使用する場合、それらの誘導体は水溶性を有していることが望ましい。それらの誘導体は精製条件によって、あるいは溶解等の目的で酢酸、塩酸等の酸性化合物と混合した場合等に、アミノ基の一部あるいは全部が４級塩の状態になるが、本発明でいう６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体はそれらの状態の構造のものを含む。
【００２８】
図１や図２の方法で得られ本発明の核酸導入剤を構成する６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体は、アミノ基が高級アミンとして残存しカチオン性を維持することから、原料である６−アミノ−６−デオキシキトサンと同様に核酸（アニオン性）と高分子電解質複合体を形成することができる。かくして、本発明に従えば、以上のような６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体から成る核酸導入剤と、導入対象の核酸とを混合して、該核酸導入剤と核酸とから成る複合体（核酸導入剤／核酸複合体）を形成させ、この複合体を細胞に投与することにより細胞内への核酸導入が実施される。核酸導入剤と核酸との混合は、室温下に生理条件に近似する環境を与えるような適当な緩衝液（例えば、Tris−エチレンジアミン緩衝液）中で行われる。
【００２９】
本発明において、細胞に導入される核酸類は特に限定されるものではなくＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ベクターＤＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、アンチジーンＤＮＡ等の核酸類が含まれる。
以下に、実施例に沿って本発明を具体的に説明する。
【実施例１】
【００３０】
ラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンの製造  非特許文献３に記載の方法で得られた６−アミノ−６−デオキシキトサン（６−アミノ−６−デオキシ化率100%、分子量10,000−30,000）10.0mgを1%乳酸水溶液（1.0mL）に溶解し、ラクトース6.1mg（６−アミノ−６−デオキシキトサンの糖単位の0.4モル当量に相当）を加えて室温で1時間撹拌した。反応溶液に水素化シアノホウ素ナトリウム1.5mg（同0.6モル当量に相当）を加え室温で24時間撹拌した後、限外ろ過フィルター（Millipore製Amicon Ultra-15、分画分子量5,000）により生成物を分離した。生成物を水、1%水酸化ナトリウム水溶液、5%酢酸水溶液、次いで水で十分に洗浄し、凍結乾燥により淡褐色粉末12.2mgを得た（図３参照）。
該化合物の元素分析の結果（表１参照）、ラクトース残基が36%導入されていることを確認した。
【００３１】
【表１】
2007006849.tif 000004
【実施例２】
【００３２】
ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンの製造  非特許文献３に記載の方法で得られた６−アミノ−６−デオキシキトサン（６−アミノ−６−デオキシ化率100%、分子量10,000−30,000）8.0mgを70%メタノール水溶液（1.0mL）に溶解し、ビオチン修飾ポリエチレングリコール活性エステル（平均分子量3,400）2.5 mg（６−アミノ−６−デオキシキトサンの糖単位の0.02モル当量に相当）のメタノール溶液（0.5mL）を加えて室温で2日撹拌した。限外ろ過フィルター（分画分子量5,000）により生成物を分離した後、生成物を5%酢酸水溶液、次いで水で十分に洗浄し、凍結乾燥により淡褐色粉末8.4 mgを得た（図４参照）。
該化合物の元素分析の結果（表２参照）、ビオチン残基が2.0%導入されていることを確認した。
【００３３】
【表２】
2007006849.tif 000005
【実施例３】
【００３４】
ビオチン修飾GALAペプチドの製造  Biotin−PEG NovaTagTM樹脂（119mg、50mmol）を用いFmoc固相合成法〔縮合条件：Fmoc−AA−OH：HBTU：HOBt：DIEA：H2N−Resin＝3：3：3：6：1；HBTU、2−1H−benzotriazole−1yl〕−1,1,3,3−tetramethyluronium
hexafluorophosphate；HOBt、1−hydroxy−benzotriazole；DIEA、diisopropylethylamine〕にて保護ペプチド鎖を伸長後N−末端を無水酢酸でアセチル化した。脱保護溶液〔フェノール200mg、チオアニソール200ml、トリフルオロ酢酸4ml〕を用い、室温で１時間撹拌後、揮発成分を留去し、エーテル(100ml)を加え、−10℃で冷却し不溶物を吸引濾過した。濾過した残渣を蒸留水（6ml）に溶解し、HPLC（ODS、0.1vol%TFA−H2O／0.1vol%TFA−CH3CN＝80／20から60／40へグラジエント）にて単離し、凍結乾燥後白色粉末の目的物（11.3mg、収率：13%）を得た。
質量分析により（表３参照）、該化合物が目的の構造（式（III）参照）を有していることが支持された。なお、式（V）中の記号はAc：アセチル基、W：トリプトファン、E：グルタミン酸、A：アラニン、L：ロイシン、H：ヒスチジンを示す。
【００３５】
【表３】
2007006849.tif 000006
【００３６】
【化３】
2007006849.tif 000007
【００３７】
該化合物の構造に含まれるGALAペプチドはpH応答性の膜融合ペプチドであり、エンドサイトーシス機構により細胞内に取り込まれたときにエンドソーム内のpH低下により構造変化を生じてエンドソーム膜と融合する性質を有する。この性質によりGALAペプチドを構成成分として含む複合体のエンドソーム内から細胞質への移行が容易になる。
【実施例４】
【００３８】
ラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンによる遺伝子導入  実験材料として下記のものを用いた。細胞：ヒト肝臓がん細胞HepG2、ヒト肺がん細胞A549、およびヒト子宮頚がん細胞HeLa D98。培地：DMEM培地（日水製薬製）+10%ウシ胎児血清。核酸導入剤：実施例１で得たラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、およびポリエチレンイミン（分子量25,000、和光純薬製）。遺伝子：ホタルルシフェラーゼ遺伝子を導入したプラスミドＤＮＡ（プロメガ社製、以下pGL3と略記する）。
【００３９】
遺伝子導入試験の実験方法について以下に説明する。まず、pGL3を溶解したTris−エチレンジアミン緩衝液にラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン水溶液を混合し、室温で15分静置して核酸導入剤−pGL3複合体を形成させた。混合溶液中のpGL3濃度は20μg/mL、ラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン量はpGL3の１塩基とラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンのアミノ基の比（N／P比）が0〜15になるようにした。また、未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンとpGL3の複合体は遺伝子発現効率が最も良好なpGL3の１塩基と６−アミノ−６−デオキシキトサンのアミノ基の比が2.5、ポリエチレンイミンとpGL3の複合体は同比が10になるように調製した。
【００４０】
細胞5万個を培地1mL中、二酸化炭素濃度5%、37℃で24時間培養後、培地を通常の1.25倍濃度のもの200μLに交換し、上記のpGL3と６−アミノ−６−デオキシキトサン複合体溶液を50μL加えた。複合体存在下で3時間培養した後、上記複合体の入った培地を新たな培地に交換して48時間培養し、pGL3を細胞内に導入した。導入されたpGL3量はルシフェラーゼ活性試験により評価し、遺伝子導入剤として未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、およびポリエチレンイミンを使用したときのルシフェラーゼ活性（相対光強度）と比較した。
【００４１】
本発明で得られたラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンを用いた系は、３種の細胞すべてに対して未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン（６ACT）およびポリエチレンイミン（PEI）の用いた系より高い導入効率を示すことが確認された（図５〜７参照）。
【実施例５】
【００４２】
ラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンとGALAペプチドの併用による遺伝子導入  実験材料として下記のものを用いた。細胞：サル腎臓がん細胞COS−1。培地：DMEM培地（日水製薬製）+10%ウシ胎児血清。核酸導入剤：実施例１で得たラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、実施例２で得たビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、および実施例３で得たビオチン修飾GALAペプチドを構成成分とする複合型核酸導入剤。遺伝子：pGL3。
【００４３】
遺伝子導入試験の実験方法について以下に説明する。まず、ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンとビオチン修飾GALAペプチドをリン酸緩衝液中で混合し、これらの結合剤としてストレプトアビジンを加えて。このとき、ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、ビオチン修飾GALAペプチド、およびストレプトアビジン（単量体として）のモル比は１：３：１とした。
【００４４】
pGL3を溶解したTris−エチレンジアミン緩衝液に上記のビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン／ビオチン修飾GALAペプチド複合型核酸導入剤、次いでラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンを加えて室温で15分静置して核酸導入剤−pGL3複合体を形成させた。混合溶液中のpGL3濃度は20μg/mL、核酸導入剤量はpGL3の１塩基と核酸導入剤のアミノ基の比が20になるようにした。また、GALAペプチドの量はpGL3 1μgあたり０〜36.3ピコモルにした。なお、細胞培養および遺伝子導入の操作は００４５項に記載の方法と同様にした。
【００４５】
本発明で得られたラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン／ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン／GALAペプチド複合型核酸導入剤を用いた系のCOS−1細胞に対する遺伝子導入効率は、pGL3 1μgあたり０〜18.2ピコモルのGALAペプチドを使用したときにラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンだけを用いた系よりも高くなることが確認された（図８参照）。
【００４６】
遺伝子導入効率はGALAペプチドの使用量の増大にしたがって一時的に低下したが、これはビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンの構造中に含まれるポリエチレングリコール部位、もしくはストレプトアビジン量の増大にともなう核酸導入剤−pGL3複合体の粒子径増加などの影響であると考えられる。これらの影響はGALAペプチドの有効性を損なうものではない。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、遺伝子治療をはじめとして種々の分野において所望の遺伝子を導入する新しい非ウイルス性の技術として利用が期待される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】還元アミノ化による６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の合成スキームを示す。
【図２】アシル化による６−アミノ−６−デオキシキトサン誘導体の合成スキームを示す。
【図３】ラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンの合成スキームを示す（実施例１）。
【図４】ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンの合成スキームを示す（実施例２）。
【図５】HepG2細胞に対するラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、およびポリエチレンイミンのトランスフェクション活性比較（実施例３）を示す。
【図６】HeLa D98細胞に対するラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンキトサン、およびポリエチレンイミンのトランスフェクション活性比較（実施例３）を示す。
【図７】A549細胞に対するラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン、未修飾６−アミノ−６−デオキシキトサンキトサン、およびポリエチレンイミンのトランスフェクション活性比較（実施例３）を示す。
【図８】COS−1細胞に対するラクトース修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン／ビオチン修飾６−アミノ−６−デオキシキトサン／GALAペプチド複合型核酸導入剤のトランスフェクション活性比較（実施例４）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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