(57)【要約】【課題】            哺乳動物の摘出臓器を長期間保存し、その保存臓器の蘇生、移植を可能にする摘出臓器の保存方法を提供する。【解決手段】        哺乳動物から摘出した臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、その臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、当該容器を１〜８℃のもとに長期間乾燥保存する工程からなる摘出臓器の保存方法であり、さらには、乾燥した臓器を水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃で保存することからなる摘出臓器の保存方法であり、保存臓器の蘇生、移植に優れた方法である。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、当該容器を１〜８℃のもとに所定期間乾燥保存する工程からなる摘出臓器の保存方法。
【請求項２】
哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、所定期間乾燥保存し、次いで乾燥した臓器を密閉容器から取り出して水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃で保存する工程からなる摘出臓器の保存方法。
【請求項３】
潅流液が酸素（５０〜９５％）−炭酸ガス（５０〜５％）の混合気体で曝気したＫＨ液である請求項１または２に記載の保存方法。
【請求項４】
潅流液がレシチン化スーパーオキシドジスムターゼまたはパーフルオロカーボンを溶解した溶液である請求項１または２に記載の保存方法。
【請求項５】
高分圧炭酸ガスが密閉容器中で３００ｈＰａ（０．３気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）の状態である請求項１または２に記載の保存方法。
【請求項６】
密閉容器中の絶対圧が１，０００ｈＰａ（１気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）である請求項１、２または５に記載の保存方法。
【請求項７】
高分圧炭酸ガスによって臓器を乾燥することにより、臓器中の水分除去率が５〜３０％である請求項１または２に記載の保存方法。
【請求項８】
不活性媒体がパーフルオロカーボン液またはシリコーンオイルである請求項２に記載の保存方法。
【請求項９】
臓器が心臓、腎臓または角膜である請求項１または２に記載の保存方法。
【請求項１０】
臓器の保存期間が心臓で１〜１０日間、腎臓で２〜１０日間、角膜で５日〜３０日間である請求項１、２または９に記載の保存方法。
【請求項１１】
請求項１または２に記載された方法により保存された摘出臓器を同種または異種の哺乳動物に移植することによる臓器移植方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の摘出臓器の保存方法に関し、さらに詳しくは、哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を高分圧炭酸ガスによって所定期間乾燥保存する方法に関する。保存された臓器は、同種または異種の哺乳動物に移植することができる。
【背景技術】
【０００２】
心臓、腎臓、肝臓などが機能不全になると薬物治療、手術治療、人工透析治療を施すが、症状が重篤になるとそれらの処置では解決されない。そこで、他人の臓器を移植する、いわゆる臨床移植治療が行われるが、臓器提供者（ドナー、donor）の不足により、臓器受領者（レシピエント、recipient）にとって十分供給されているわけではない。また、臓器移植手術後免疫調節不全を発症するため、移植する臓器の品質、親和性が重要な課題となっている。
【０００３】
現在行われている臓器移植手術に用いられている移植臓器の場合、ドナーから摘出してからレシピエントへ移植するまでの最大期間は、心臓について６時間、腎臓については１日間、角膜については１０日間が限度とされている。したがって、これらの保存期間を延長することができれば、摘出臓器をある程度の期間ストックすることが可能となり、より多数のレシピエントの期待に貢献することができる。
【０００４】
従来行われている摘出臓器の保存方法にあっては、低温保存では保存限界が４〜２４時間であり（非特許文献１）、University of Winsconsin Solution液（UWS液）を使用した場合には６〜１８時間が限度であり（非特許文献２および非特許文献３）、またUWS液とパーフルオロカーボン液とを組み合わせて用いた場合には、移植に成功したのは２４〜４８時間であったとされている（非特許文献４）。
【０００５】
特開２０００−７２６０１（特許文献１）には、トレハロース液に浸漬させた摘出臓器を、シリカゲル、モレキュラーシーブなどの脱水剤で脱水処理し、パーフルオロカーボンに浸漬し、冷蔵保存することにより、１０〜２０日間の保存が可能であると記載されている。また、国際公開ＷＯ２００２／０６９７０２（特許文献２）には、摘出臓器に混合気体を曝気したKreps-Henseleit（KH）液を潅流することにより脱血して、脱血した臓器に混合気体（酸素９５％−炭酸ガス５％）を送って水分除去率を２５〜６０％とるまで脱水した後、パーフルオロカーボン液に浸漬し、次いで所定期間冷蔵庫保存し、その後蘇生させる方法が記載されており、この方法により、２４時間保存した臓器が蘇生したとされている。
【０００６】
一方、炭酸ガスを臓器保存に用いる研究も行われているが、高濃度の炭酸ガス保存液を使用して腎の冷却保存及び潅流保存を行った結果では、腎保存における高濃度炭酸ガス保存液の有用性を示唆する結果は得られていない（非特許文献５）。また、炭酸ガスの心臓保存に及ぼす影響の研究として、心臓保存液に大気中の濃度をはるかに超える炭酸ガスを吹送した検討が行われているが、その利点は、全く認められていない（非特許文献６）。
【０００７】
また、臓器の機能維持および臓器移植の際の拒絶反応抑制効果に優れた臓器保存液として、レシチン化スーパーオキシドジスムターゼを含有する保存液が示されている（特許文献３）。
【０００８】
このように、摘出臓器の長期保存を目的とした検討が種々行われているが、短期間での保存による移植は可能であっても、長期間保存した摘出臓器を移植する場合には十分な効果が得られないため、いまだに実用化されたものはない。したがって、摘出臓器を長期間保存することができ、それを臓器移植に利用できる技術の開発が望まれているのが現状である。
【０００９】
【特許文献１】特開２０００−７２６０１号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００２／０６９７０２号公報
【特許文献３】特開２００２−６０３０１号公報
【非特許文献１】J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 107, 460-471 (1994)
【非特許文献２】Transplant Proc., 21, 1350 (1989)
【非特許文献３】Ann. Thorac. Surg., 49, 932 (1990)
【非特許文献４】Transplantation, 59, 699-701 (1995)
【非特許文献５】大阪医科大学誌、第50巻、第3、4号合冊、１９９１年１２月
【非特許文献６】環境科学総合研究所年報、第１０報、１９９１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって本発明は、心臓、腎臓、角膜などの摘出臓器を長期間保存することが可能な方法を提供し、その保存臓器を移植した場合には、移植先で十分にその臓器の機能を再度発揮することができる、摘出臓器の保存方法を提供することを課題とする。
【００１１】
上記課題を解決するべく、本発明者らは鋭意検討した結果、哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、当該容器を１〜８℃のもとに所定期間乾燥保存することからなる方法が、極めて効果的な摘出臓器の保存方法であることを新規に見出した。
【００１２】
またさらに、摘出した臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、所定期間乾燥保存し、次いで乾燥した臓器を密閉容器から取り出して、水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃で保存することが、極めて効果的な摘出臓器の保存方法になることを新規に見出した。
【００１３】
かかる方法は、摘出臓器を高分圧炭酸ガスによって乾燥すること、すなわち、水分除去を行うことにより、長期間の臓器保存を達成することができるものであり、かくして保存された臓器を、同種または異種の哺乳動物に移植することが可能となることを確認し、本発明を完成させるに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本発明は、高分圧炭酸ガスを利用することにより摘出臓器を長期間保存する方法、および当該保存臓器を、同種または異種の哺乳動物に移植する臓器移植方法を提供する。
【００１５】
より具体的には、本発明は、
（１）哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、当該容器を１〜８℃のもとに所定期間乾燥保存する工程からなる摘出臓器の保存方法；
（２）哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、所定期間乾燥保存し、次いで乾燥した臓器を密閉容器から取り出して水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃で保存する工程からなる摘出臓器の保存方法；
（３）潅流液が酸素（５０〜９５％）−炭酸ガス（５０〜５％）の混合気体で曝気したＫＨ液である上記（１）または（２）に記載の保存方法；
（４）潅流液がレシチン化スーパーオキシドジスムターゼまたはパーフルオロカーボンを溶解した溶液である上記（１）または（２）に記載の保存方法；
（５）高分圧炭酸ガスが密閉容器中で３００ｈＰａ（０．３気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）の状態である上記（１）または（２）に記載の保存方法；
（６）密閉容器中の絶対圧が１，０００ｈＰａ（１気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）である上記（１）、（２）または（５）に記載の保存方法；
（７）高分圧炭酸ガスによって臓器を乾燥することにより、臓器中の水分除去率が５〜３０％である上記（１）または（２）に記載の保存方法；
（８）不活性媒体がパーフルオロカーボン液またはシリコーンオイルである上記（２）に記載の保存方法；
（９）臓器が心臓、腎臓または角膜である上記（１）または（２）に記載の保存方法；
（１０）臓器の保存期間が心臓で１〜１０日間、腎臓で２〜１０日間、角膜で５日〜３０日間である上記（１）、（２）または（９）に記載の保存方法；
（１１）上記（１）または（２）に記載された方法により保存された摘出臓器を同種または異種の哺乳動物に移植することによる臓器移植方法；
を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明は高分圧炭酸ガスを利用した摘出臓器の保存方法であり、心臓で１０日間、腎臓で１０日間、角膜で３０日間保存が可能であり、それらの保存期間は、従来の摘出臓器の保存方法に比べて著しく長期間の保存が達成でき、臓器移植の分野において非常に有用である。
また、それらの長期間保存された臓器は移植後も良好にその臓器機能を発揮するのであり、本発明の方法により保存された摘出臓器をレシピエントに移植するために画期的な方法となる。
さらに、本発明方法は心臓、腎臓、角膜以外の臓器である肝臓、膵臓、肺臓などの臓器、ならびにリンパ球、幹細胞などの細胞、皮膚などの組織にも適用することができる利点を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明が提供する臓器の保存方法は、上記したとおり、哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、当該容器を１〜８℃のもとに所定期間乾燥保存する工程からなる摘出臓器の保存方法、さらには、哺乳動物の臓器を摘出し、摘出臓器を潅流液で潅流脱血または洗浄し、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れて高分圧炭酸ガスを送り込み、所定期間乾燥保存し、次いで乾燥した臓器を密閉容器から取り出して水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃で保存することからなる摘出臓器の保存方法である。
【００１８】
以下にその詳細を順次説明していく。
本発明において保存すべき臓器は、哺乳動物から通常の外科的手術によって摘出することができる。
【００１９】
摘出した臓器を潅流脱血するために使用される潅流液は、混合気体で曝気したＫｒｅｐｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ液）であり、混合気体としては酸素と炭酸ガスの混合であり、その混合比が５０〜９５：５０〜５であり、好ましくは７０〜９０：３０〜１０の混合比である。潅流液は、哺乳動物の体温と同じ３７℃程度に保温し、摘出臓器の腐食を防止するためにペニシリンなどの防腐効果薬剤を添加することが好ましい。潅流は、摘出臓器の大動脈にカテーテルを挿入し、ランゲンドルフ（Langendorff）式潅流装置に装着し５〜５０分間、好ましくは１０〜３０分間潅流液を潅流することにより脱血を行う。臓器が角膜である場合は前記と同様の潅流液で１０〜３０分間洗浄することにより次の工程へ進めることができる。
【００２０】
また、潅流液にレシチン化スーパーオキシドジスムターゼ（「ＰＣ−ＳＯＤ」という）またはパーフルオロカーボンを溶解することにより、臓器の機能維持を図り、また臓器移植の際の拒絶反応抑制を図ることができる。なお、ＰＣ−ＳＯＤの製造法および使用方法は、特開２００２−６０３０１公報（特許文献３）に記載されている方法により行うことができる。
【００２１】
潅流または洗浄をした後、臓器の表面に付着した水分をガーゼ等で除去し、臓器の重量を測定する。この測定値は乾燥臓器の水分除去率を計算するために用いる。
【００２２】
次いで、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れ。容器内に高分圧炭酸ガスを送り込み臓器を乾燥する。その後、乾燥状態になっている臓器が収納されている密閉容器を１〜８℃、好ましくは４℃の冷蔵庫に入れることにより臓器を所定期間乾燥保存する。また、潅流脱血または洗浄した臓器を密閉容器に入れてから高分圧炭酸ガスを送り込み、所定期間乾燥保存した後、乾燥臓器を密閉容器から取り出して水および油に不溶性の不活性媒体に浸漬して１〜８℃に保存しても良い。
【００２３】
密閉容器中の絶対圧は１，０００ｈＰａ（１気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）が好ましい。高分圧炭酸ガスの容器中の分圧は３００ｈＰａ（０．３気圧）〜５，０００ｈＰａ（５気圧）であり、好ましくは３００ｈＰａ（０．３気圧）〜４００ｈＰａ（０．４気圧）である。容器内の炭酸ガス以外の気体は酸素であり、また窒素が混合していても良い。当該分圧の炭酸ガスで乾燥保存した後の臓器の水分量は、水分除去率として５〜３０％とすることが好ましく、１０〜２０％が特に好ましい。最大の乾燥保存期間は心臓で１０日間、腎臓で１０日間、角膜で３０日間である。密閉容器は所定の圧力に耐えうるものであればいずれでもよく、形状、材質などを問うものではない。
【００２４】
所定期間乾燥保存した後に臓器を浸漬する水および油に不溶性の不活性媒体としては、パーフルオロカーボン、シリコーンオイルなどが使用される。
【００２５】
摘出臓器が心臓である場合には、所定期間乾燥保存された臓器を密閉容器から取り出し、臓器をランゲンドルフ式潅流装置に装着し、酸素と炭酸ガスの混合比が５０〜９５：５０〜５、好ましくは７０〜９０：３０〜１０の混合比の混合気体で曝気した３７℃のＫＨ液を１０〜３０分間潅流することにより、臓器を蘇生させることができる。この蘇生された心臓を臓器移植に利用することができる。蘇生のために使用するＫＨ液にＰＣ−ＳＯＤを溶解させることにより臓器の機能維持や、臓器移植の際の拒絶反応を抑制するために効果的である。
【００２６】
摘出臓器が腎臓である場合には、保存臓器を動物に移植し移植された動物の尿蛋白量を測定することにより、保存期間の適否を確認することができる。また、摘出臓器が角膜である場合には、移植後の眼球の濁り度を観察することにより、保存期間の適否を確認することができる。
【００２７】
本発明の方法に使用することができる臓器は、心臓、腎臓、角膜が好ましいが、それ以外の臓器としては肝臓、膵臓、肺臓などである。さらに、リンパ球、幹細胞などの細胞、皮膚などの組織の長期保存、体内移植に適用することができる。
【００２８】
本発明の方法によれば、臓器の最大保存期間は、心臓が１０日間、腎臓が１０日間、角膜が３０日間であるので、従来の臓器保存限界期間を大幅に上回ることができる。
【００２９】
したがって、本発明の臓器保存方法によって作製された摘出臓器は、保存期間が長いので多数のレシピエントに移植することができる。
【実施例】
【００３０】
以下に本発明の実施例について記載するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３１】
実施例１：摘出心臓の保存および蘇生
アメリカＮＩＨの実験動物基準に合わせて人工繁殖したラットＤａ／Ｈａｍ−ｂｇ（ｂｅｉｇｅ  ｒａｔ）オスの７週齢を使用した。ラットにネンブタール麻酔薬０．３ｍｌを腹腔内投与し、その後開胸してラットの心臓を摘出した。摘出心臓の大動脈にカテーテルを挿入し、ランゲンドルフ式潅流装置に装着し、１０分間潅流することにより脱血した。潅流液は３７℃のＫＨ液を用いペニシリンＧを少量添加し、さらに常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気したものを使用した。潅流後、摘出心臓の表面の水分およびカテーテルの水分を滅菌したガーゼで除去し、心臓の重量を測定した。次いで、摘出心臓を高圧密閉容器にそのまま置き、容器中に炭酸ガス２０％と酸素８０％の混合ガスを送り込み絶対圧を２，０００ｈＰａ（２気圧）とすることにより、混合ガスの分圧を酸素１，６００ｈＰａ（１．６気圧）−炭酸ガス４００ｈＰａ（０．４気圧）とした。この状態の高圧密閉容器を４℃の冷蔵庫に収納し、２４時間から１６８時間（７日間）保存した。所定期間保存後、高圧密閉容器を冷蔵庫から取り出し、さらに容器から臓器を取り出し臓器の重量を測定して高分圧炭酸ガスの混合ガスによる乾燥度合いを示す水分除去率を求めた。取り出した臓器をランゲンドルフ式潅流装置に装着し、常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気した３７℃のＫＨ液で１０〜３０分間潅流することにより、臓器を蘇生させた。
【００３２】
摘出臓器の蘇生を確認するため、心電図記録用電極を装着し生体アンプを用いて心電図を双曲誘導で連続記録し、１ｍＶ以上の電圧を示した場合を蘇生と判定した。その蘇生状態の結果を表１に示した。蘇生した臓器はいずれも心臓移植に使用することができる。
【００３３】
異所移植による心臓の蘇生の実際
ラットの心臓を摘出し、ランゲンドルフ式潅流装置に装着し、ペニシリンＧを少量添加したＫＨ液を潅流することにより脱血した。摘出心臓を炭酸ガス分圧４００ｈＰａ（０．４気圧）に１６時間乾燥させ、これを異所に移植し、心臓の蘇生を確認した。
すなわち、レシピエントとしてのラットをエーテル麻酔下に剃毛し、エタノール消毒した後、開首し、静脈にカフ取り付けた。
同時に、乾燥保存した摘出心臓をランゲンドルフにかけ蘇生させた。
次いで動脈にカフ取り付けし、動脈と摘出心臓の動脈をつなげ、さらに静脈と摘出心臓の静脈をつなげた。
この状態で、静脈次いで動脈のクリックをはずした。
摘出心臓に細動が観察され、次いで拍動が観察された。
この状態で皮膚を縫合し、傷口を消毒した。
レシピエントのラットについては、移植心臓の心電図を測定し、その振幅の確認により蘇生していることを確認した。
【００３４】
対照実験：空気乾燥の場合
臓器乾燥のために用いる高分圧炭酸ガスを大気圧下の空気に代えて用いた以外は実施例１と同様の操作を行った。その蘇生状態の結果を表１に示した。
【００３５】
【表１】
2007001883.tif 000002
【００３６】
表１に示した結果から明らかなように、実施例１の高分圧炭酸ガスで摘出臓器を乾燥することにより、２４時間〜１６８時間（７日間）の保存において摘出臓器は蘇生した。一方、空気を用いて乾燥させた場合には、４８時間以降の保存では蘇生しなかった。
【００３７】
実施例２：摘出心臓の保存（パーフルオロカーボン液浸漬）および蘇生
アメリカＮＩＨの実験動物基準に合わせて人工繁殖したラットＤａ／Ｈａｍ−ｂｇ（ｂｅｉｇｅ  ｒａｔ）オスの７週齢を使用した。ラットにネンブタール麻酔薬０．３ｍｌを腹腔内投与し、その後開胸してラットの心臓を摘出した。摘出心臓の大動脈にカテーテルを挿入し、ランゲンドルフ式潅流装置に装着し、１０分間潅流することにより脱血した。潅流液は３７℃のＫＨ液を用いペニシリンＧを少量添加し、さらに常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気したものを使用した。潅流後、摘出心臓の表面の水分およびカテーテルの水分を滅菌したガーゼで除去し、心臓の重量を測定した。次いで、摘出心臓を高圧密閉容器に入れ、容器中に炭酸ガス２０％と酸素８０％の混合ガスを送り込み絶対圧を２，０００ｈＰａ（２気圧）とすることにより、混合ガスの分圧を酸素１，６００ｈＰａ（１．６気圧）−炭酸ガス４００ｈＰａ（０．４気圧）として所定期間炭酸ガス乾燥を行った。その後、容器から臓器を取り出し、パーフルオロカーボン液に入ったシャーレに臓器を浸漬し、密閉容器に入れ４℃の冷蔵庫に収納し、所定期間保存した。炭酸ガス乾燥期間と冷蔵庫収納期間を合わせて保存期間とし、２４時間から１６８時間（７日間）の保存期間とした。所定期間保存後、高圧密閉容器を冷蔵庫から取り出し、さらにシャーレから臓器を取り出し臓器の重量を測定して水分除去率を求めた。取り出した臓器をランゲンドルフ式潅流装置に装着し、常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気した３７℃のＫＨ液で１０〜３０分間潅流することにより臓器を蘇生させた。
【００３８】
臓器の蘇生の確認は実施例１と同様に心電図測定によって行った。その蘇生状態の結果を表２に示した。蘇生した臓器はいずれも心臓移植に使用することができる。
【００３９】
【表２】
2007001883.tif 000003
【００４０】
表２に示した結果から判明するように、２４時間〜１６８時間（７日間）の保存において摘出した心臓が蘇生した。保存後の心臓は、いずれの場合でも心臓移植に利用できるものであった。
【００４１】
実施例３：摘出腎臓の保存
Ｆｉｓｈｅｒ系ラットから腎臓を摘出し、腎大動脈にカテーテルを挿入し、ランゲンドルフ式潅流装置に装着し、１０分間潅流することにより脱血した。潅流液は３７℃のＫＨ液を用いペニシリンＧを少量添加し、さらに常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気したものを使用した。潅流後、摘出腎臓の表面およびカテーテルの水分を滅菌したガーゼで除去し、腎臓の重量を測定した。次いで、腎臓を高圧密閉容器にそのまま置き、容器中に炭酸ガス３０％と酸素７０％の混合ガスを送り込み絶対圧を２，０００ｈＰａ（２気圧）とし、混合ガスの分圧を酸素１，４００ｈＰａ（１．４気圧）−炭酸ガス６００ｈＰａ（０．６気圧）とした。この状態の高圧密閉容器を４℃の冷蔵庫に収納し、３日間保存した。保存後、高圧密閉容器を冷蔵庫から取り出し、さらに容器から臓器を取り出し臓器の重量を測定したところ水分除去率が１８．５％であった。この３日間保存した腎臓器をＬｅｗｉｓ系ラットへ移植し４〜２４時間にわたって尿蛋白量を測定したところ２０ｍｇ／２４ｈｒであった。この値は、腎臓摘出後直ちにＬｅｗｉｓ系ラットに移植した場合の尿蛋白量と同等であった。
【００４２】
比較実験：炭酸ガスで乾燥しない場合
Ｆｉｓｈｅｒ系ラットから腎臓を摘出し、何の処理もせずにＫＨ液に浸漬し、４℃の冷蔵庫に２日間保存した。保存後、臓器を取り出Ｌｅｗｉｓ系ラットへ移植した。２４時間にわたる移植ラットの尿蛋白量は８０ｍｇ／２４ｈｒと著しく増加していた。
【００４３】
以上から、摘出腎臓を高分圧炭酸ガスで乾燥保存することにより、良好な臓器移植が達成されることが判明した。
【００４４】
実施例４：摘出角膜の保存
日本在来種白色家兎（ＪＷｗｈｉｔｅ）の角膜を摘出し、摘出した角膜を常時混合ガス（酸素９５％＋炭酸ガス５％）で曝気した３７℃のＫＨ液で２０分間洗浄した。洗浄後、角膜の表面の水分をガーゼで除去し、常圧の密閉容器に入れ容器中に炭酸ガス２０％と酸素８０％の混合ガスを送り込み絶対圧を１，０００ｈＰａ（１気圧）とすることにより、混合ガスの分圧を酸素８００ｈＰａ（０．８気圧）−炭酸ガス２００ｈＰａ（０．２気圧）とした。この状態の常圧密閉容器を４℃の冷蔵庫に収納し、２０日間保存した。
【００４５】
保存された角膜を取り出して拡大鏡を用いて眼球の濁りを観察したところ、摘出する前と同様に透明を維持していた。
【００４６】
一方、高分圧炭酸ガスの代わりに空気を用いて角膜を乾燥した場合には、１０日以内で眼球が白濁していた。
【００４７】
以上から、摘出角膜を高分圧炭酸ガスで乾燥保存することにより良好な臓器移植が達成されることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上記載のように、本発明の高分圧炭酸ガスを利用した摘出臓器の保存方法により、摘出臓器を潅流脱血または洗浄し、高分圧炭酸ガスで臓器を乾燥することにより長期間の臓器保存が可能であり、さらに保存後の臓器が機能できる方法が提供される。
したがって、本発明の方法は、摘出臓器を長期間保存し、保存後の臓器が十分に機能可能なため、本発明の保存方法で作製された摘出臓器は同種または異種の哺乳動物に移植できるので、臓器移植医療において極めて有用である。