(57)【要約】【課題】S-アデノシルメチオニン（ＳＡＭ)を安定化させる効果を有する物質を含有する安定化剤及び該物質を用いた安定化方法を提供すること。【解決手段】Ｓ−アデノシルメチオニンの安定剤は、リン酸化合物を有効成分として含有する。Ｓ−アデノシルメチオニンの安定化方法は、Ｓ−アデノシルメチオニンにリン酸化合物を添加することを含む。【効果】従来の方法よりも長期間にわたって効果的にＳＡＭを安定化させることができる安定剤及び安定化方法が提供された。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸化合物を有効成分として含有するS-アデノシルメチオニンの安定剤。
【請求項２】
前記リン酸化合物が、メタリン酸、リン酸、ピロリン酸及びポリリン酸並びにそれらの塩から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項１記載の安定剤。
【請求項３】
前記リン酸化合物が、リン酸、ピロリン酸及びポリリン酸並びにそれらのアルカリ金属塩から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項２記載の安定剤。
【請求項４】
前記S-アデノシルメチオニンが、S-アデノシルメチオニン産生能を有する微生物から抽出されたものである請求項１ないし３のいずれか１項に記載の安定剤。
【請求項５】
前記微生物からの抽出物が、溶液、凍結乾燥物又は乾燥物の形態にある請求項４記載の安定剤。
【請求項６】
S-アデノシルメチオニンにリン酸化合物を添加することを含むS-アデノシルメチオニンの安定化方法。
【請求項７】
前記リン酸化合物が、メタリン酸、リン酸、ピロリン酸及びポリリン酸並びにそれらの塩から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記リン酸化合物が、リン酸、ピロリン酸及びポリリン酸並びにそれらのアルカリ金属塩から成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記リン酸化合物が、前記S-アデノシルメチオニン重量に対し５〜２０倍量の重量で用いられる請求項６ないし８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記S-アデノシルメチオニンが、S-アデノシルメチオニン産生能を有する微生物から抽出されたものである請求項６ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物からの抽出物が、溶液、凍結乾燥物又は乾燥物の形態にあり、前記リン酸化合物を該抽出物に添加し、溶液状態のまま維持するか又は前記リン酸化合物を該抽出物に添加した溶液を凍結乾燥若しくは乾燥させて固体状態で維持する請求項１０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−アデノシルメチオニンを安定化させるための安定剤及び安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
S-アデノシルメチオニン(ＳＡＭ)は、近年、アルコール性肝炎その他肝臓疾患に顕著な治癒、予防効果のあることで注目されている。さらに、うつ病に対する治癒効果、骨関節症での機能回復効果、老人性痴呆症の改善効果なども報告されている（特許文献１）。
【０００３】
このＳＡＭは酵母、その中でも清酒酵母など醸造酵母が高生産する能力のあることが知られている。しかしながら、ＳＡＭは化学的に不安定な物質であり、常温においても急速に分解が進むため、ＳＡＭの効用が注目されながらも、医薬品やサプリメントとして利用する際の大きな障害となっている。米国などでは、ＳＡＭのトシル酸塩やパラトルエンスルフォン酸塩、スルフォサルチル酸塩とすることで安定化させ、一部使用されているが、これらは食品添加物として認められているものではなく、ＳＡＭをより安全なサプリメントや食品の一部として利用することができるための安定化方法がなにより望まれている。このようなＳＡＭの安定化方法として、トレハロースに、ＳＡＭを安定化させる効果のあることが報告されている(Biochemica et Biophysica Acta, 1573 (2002) pp.105-108)。また、塩酸塩の形とすることにより安定化させて販売されているＳＡＭも多い。しかし、これらの安定化効果は十分なものではなく、より安定度の高い方法の開発が必要である。
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−２６１３６１
【非特許文献１】Biochemica et Biophysica Acta, 1573 (2002) pp.105-108
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、本発明の目的は、ＳＡＭを安定化させる効果を有する物質を含有する安定化剤及び該物質を用いた安定化方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、リン酸化合物にＳＡＭを長期にわたって安定化させる効果があることを見出し、本願発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、リン酸化合物を有効成分として含有するＳ−アデノシルメチオニンの安定剤を提供する。また、本発明は、Ｓ−アデノシルメチオニンにリン酸化合物を添加することを含むＳ−アデノシルメチオニンの安定化方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、従来の方法よりも長期間にわたって効果的にＳＡＭを安定化させることができる安定剤及び安定化方法が提供された。本発明の安定剤及び安定化方法に用いられるリン酸化合物は、食品添加物としても認められているので、本発明によればＳＡＭをサプリメントや食品の一部としてより安全に利用することができる。本発明は、肝臓疾患、うつ病、骨関節症、老人性痴呆症など様々な効用が明らかでありながら、その実利用が困難であったＳＡＭについての利用の道を拓くものである。
【０００９】
本発明の安定剤及び安定化方法で用いられるリン酸化合物は、構造式中にＨ２ＰＯ４−を有する化合物若しくは水に溶解してＨ２ＰＯ４−を有する化合物を生じる化合物又はこれらの塩を言う。具体的には、メタリン酸（ＨＰＯ３）、リン酸（オルトリン酸、Ｈ３ＰＯ４）、ピロリン酸（Ｈ２ＰＯ４−Ｈ２ＰＯ３）、ポリリン酸（Ｈ２ＰＯ４−(ＨＰＯ３)ｎ−２−Ｈ２ＰＯ３（ｎ≧３））、及びこれらの塩が挙げられる。これらのうち、リン酸、ピロリン酸及びポリリン酸が好ましく、また前記の塩としてはアルカリ金属塩が好ましいが、これらに限定されない。なお、２分子以上のリン酸が脱水縮合した構造の化合物を総称してポリリン酸と言い得るが、本明細書においては、２分子のリン酸が脱水縮合した構造のものをピロリン酸、３分子以上のリン酸が脱水縮合した構造のものをポリリン酸と表現する。なお、上記リン酸化合物は、単独で用いることも２種以上を併用することも可能である。
【００１０】
本発明の安定剤は、上記のリン酸化合物を有効成分として含有するものである。該安定剤は、粉末若しくは顆粒などの固体又は水溶液等の溶液の形態で調製し得る。固体の場合は、後述する通り、例えばＳＡＭを含む溶液に添加し溶解して用いることができる。安定剤を使用する際には、安定剤中に含まれるリン酸化合物重量がＳＡＭ重量に対して好ましくは１〜１００倍量、より好ましくは５〜２０倍量となるように用いる。例えば、本発明の安定剤を１０倍量で用いる場合、安定化させるＳＡＭを含む溶液中のＳＡＭ濃度が0.2mg／mlであれば、該ＳＡＭ溶液１mlに対しリン酸化合物が２mgとなる量の安定剤を用いる。
【００１１】
本発明によって安定化されるＳＡＭは、特に限定されないが、酵母等のＳＡＭ産生能を有する微生物から抽出されたものであり得る。抽出物は、水溶液等の溶液形態であってもよく、また、該抽出物を凍結乾燥又は乾燥させた固体形態であってもよい。該抽出物が溶液形態の場合には、溶液形態の本発明の安定剤を該抽出物に添加して混合することにより、該抽出物中のＳＡＭを安定化させることができる。また、固体形態の本発明の安定剤を溶液形態の該抽出物に添加して溶解させることによっても、該抽出物中のＳＡＭを安定化させることができる。該抽出物が固体形態の場合には、溶液形態の本発明の安定剤中に該抽出物を添加して溶解させるか、又は固体形態の本発明の安定剤と該抽出物とをあらかじめ混合して若しくは順次水などの溶媒に溶解させることにより、該抽出物中のＳＡＭを安定化させることができる。なお、本発明の安定剤を溶液形態にする場合、溶媒としては、リン酸化合物を溶解することができ、人体に無害な溶媒であれば特に限定されないが、安全性及びコストの点から水が好ましい。
【００１２】
本発明により安定化されたＳＡＭは、液体状態のままでも長期にわたり良好に保存することができる。また、液体状態の該安定化されたＳＡＭを凍結乾燥又は乾燥させることにより固体状態とした場合でも、良好に保存することができる。
【００１３】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。ただし、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１４】
１．ＳＡＭの生産及び抽出
まず、酵母Saccharomyces cerevisiae K-9 (協会９号清酒酵母)を、YPD培地(酵母エキス1%、ペプトン2%、グルコース2%) を培養液として用いて、5 ml L字管にて30℃、24時間、振とうして前培養を行った。その後、ショ糖5%、酵母エキス0.3%、KH2PO4 0.4%、K2HPO4 0.2%、MgSO4・7H20 0.05%、L-メチオニン0.15%よりなる培地(以下D培地と称する) 78mlに、OD660=0.1となるように、前培養した酵母菌体を植菌し、200ml容量バッフル付三角フラスコにて、30℃、2日間、振とう培養した。このようにしてＳＡＭを多く生産蓄積させた酵母菌体を培養後、遠心分離により回収し、菌体を滅菌水にて２回洗浄した。
【００１５】
この洗浄菌体を10 mlの滅菌水に懸濁し、-30℃にて一晩凍結後、翌日それを溶解する操作により、ＳＡＭを菌体より水抽出することを行った。続いて、遠心にて上清を回収し、それを0.2μmのメンブランフィルターでろ過し、酵母菌体により生産されたＳＡＭの抽出物を得た。
【００１６】
２．ＳＡＭ分析
ＳＡＭの分析は以下の要領でキャピラリー電気泳動法により測定した。分析条件は以下のとおり。
分析装置
キャピラリーイオンアナライザー（Waters）
分析条件
キャピラリー：AccuSep、 75μm×60 cm
バッファー：40mM  リン酸ナトリウムバッファー (pH 2.5)
電圧：positive、20 kV
サンプリング：３０秒ハイドロスタティック法
温度：25℃
検出 ：UV 254nm
【００１７】
３．ＳＡＭ安定性試験(その１)(凍結乾燥保存)
前記のＳＡＭ抽出物（0.2mg/ml）に、安定化試験に供する物質をＳＡＭ重量の10倍量添加し、それぞれを一定量ずつ小分けし、その後凍結乾燥を行った。そのＳＡＭと添加物質とからなる凍結乾燥物を25℃、および37℃に暗所保存し、経時的にＳＡＭの残存量を測定した。これにより、各種添加物質の乾燥状態におけるＳＡＭの安定保存状態を調べた。なお、独立した試験をそれぞれ３回行った。
【００１８】
(i) 酵母から抽出したＳＡＭをそのまま凍結乾燥したもの（図１中「原液」と表示）、(ii) 希塩酸を0.1N HClとなるよう添加したあと凍結乾燥したもの（「0.1N HCl」と表示）、及び(iii)リン酸をＳＡＭ重量の10倍量、つまり市販のリン酸は85%純度であることより、ＳＡＭ抽出物(0.2mg/ml)に1 mlあたり2.42mg添加し凍結乾燥したもの（「リン酸」と表示）、の３つにつき、保存開始直後を0日、その後37℃にて暗所保存３日目、１週間目、1ヶ月目でのＳＡＭ残存量を調べた結果を図１に示した。
【００１９】
ＳＡＭは試薬として塩酸塩の形で販売されているものが多い。塩酸塩の形では、確かに抽出物そのままで凍結保存したものより安定であることが示されたが、リン酸を添加しリン酸塩とした状態では、塩酸塩よりさらに安定に保存されていることが示された。
【実施例２】
【００２０】
ＳＡＭ安定性試験(その２)(凍結乾燥保存)
(i) 酵母から抽出したＳＡＭをそのまま凍結乾燥したもの（図２中「原液」と表示）、(ii) 添加によりＳＡＭの保存性が向上するとの報告のあるトレハロースをＳＡＭ重量の10倍量（ＳＡＭ抽出物(0.2mg/ml) 1 ml当たり2.0mg）添加し凍結乾燥したもの、および(iii) ポリリン酸混合物（ピロリン酸85.8%含有）をＳＡＭ重量の10倍量（ＳＡＭ抽出物(0.2mg/ml) 1 ml当たり2.0mg）添加し凍結乾燥したものの３つにつき、37℃にて1週間、１ヶ月、３ヶ月間のＳＡＭ保存試験を行った結果を図２に示す。
【００２１】
上記試験の結果、トレハロースには保存性を増大させる効果は認められなかった。一方、ポリリン酸混合物の場合は、3ヶ月後もほぼ100%近くＳＡＭが残存しており、極めて良好なＳＡＭ保存効果が認められた。
【００２２】
以上、図１及び２に示したように、リン酸化合物、特にピロリン酸を主に含有するポリリン酸混合物にＳＡＭ乾燥状態で高い保存性が確認された。
【実施例３】
【００２３】
ＳＡＭ安定性試験(その３)(水溶液保存)
前記のＳＡＭ抽出物に、安定化試験に供する物質をＳＡＭ重量の10倍量添加し、それぞれを一定量ずつ小分けし、その後水溶液の状態で、37℃に暗所保存し、経時的にＳＡＭの残存量を測定した。これにより、各種添加物質の水溶液状態におけるＳＡＭの安定保存状態を調べた。なお、独立した試験をそれぞれ３回行った。
【００２４】
(i) 酵母から抽出したＳＡＭ含有水溶液（ＳＡＭ量2mg/ml）（図３中「原液」と表示）、(ii) ポリリン酸ナトリウムをＳＡＭの10倍量（すなわち20mg/ml量となるように）添加したもの、及び(iii) ピロリン酸ナトリウムをＳＡＭの10倍量（20mg/ml量）添加したものを、そのまま37℃にて暗所保存した時の、1週間、１ヶ月、３ヶ月目のＳＡＭ残存率を図３に示す。
【００２５】
酵母から抽出したＳＡＭそのものでは、１ヶ月あまりでＳＡＭがほぼ完全に分解消失していた。これに対し、ポリリン酸ナトリウム添加では３ヶ月後も80%以上、さらにピロリン酸ナトリウムにおいてはほぼ100％のＳＡＭが残存しており、水溶液状態でも安定したＳＡＭ保存性を示すことが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】安定剤として0.1N塩酸又はリン酸を添加したＳＡＭ溶液及び何も添加しないＳＡＭ溶液を種々の期間凍結乾燥状態で保存した後のＳＡＭの残存率(％)を示す図である。
【図２】安定剤としてトレハロース又はポリリン酸を添加したＳＡＭ溶液及び何も添加しないＳＡＭ溶液を種々の期間凍結乾燥状態で保存した後のＳＡＭの残存率(％)を示す図である。
【図３】安定剤としてポリリン酸ナトリウム又はピロリン酸ナトリウムを添加したＳＡＭ溶液及び何も添加しないＳＡＭ溶液を種々の期間溶液状態で保存した後のＳＡＭの残存率(％)を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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