(57)【要約】      （修正有）【課題】抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を製造する方法の提供。【解決手段】炭素源としてコーンスターチを０．５〜６．０%含有する液体培地にウスヒラタケ、ヒラタケ、エリンギ、タモギタケなどのヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、好適にはウスヒラタケＳ８２株を培養して、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用の高いヒラタケ属担子菌を生産する方法並びに担子菌の成分を含有する医薬品および飲食品。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素源としてコーンスターチを０．５〜６．０%含有する液体培地でヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を培養することを特徴とする、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するヒラタケ属担子菌の生産方法。
【請求項２】
ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである請求項１記載の生産方法。
【請求項３】
ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０２２２）である請求項２記載の生産方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の生産方法で生産されたヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の成分を含有する抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項５】
請求項４記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
【請求項６】
請求項４記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有することを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
健康志向が高まっている現在、スポーツと栄養又はスポーツと生理機能との関係についての認識が深まっている。このような中で、エネルギー補給、疲労回復、さらに瞬発力や持久力の増強、身体作りなど様々な場面でスポーツフーズが利用されている。スポーツフーズの中でも、抗疲労作用及び持久力増強作用を目的とするものは、スポーツ選手の成績向上のためのみならず、一般の人が仕事をする上でも持久力維持や、活力あふれる生活を送るためのものとして多く利用されている。
これらの抗疲労剤及び持久力増強剤の多くは、ビタミン類と生薬から成り、動物実験等の科学的根拠がないまま、古くからの伝承により効果を謳っているものが多い。また、これらの抗疲労剤等はカフェインやエチルアルコールを含有し、興奮、不眠などを伴うものが多く、真に健康を目的としたものとは言い難いのが実情である。
このような実情において、抗疲労剤及び持久力増強剤には、明確な有効性の確認と、科学的根拠が求められている。
また、以上のことは動物においても同様であり、競走馬などのレース用の動物から家畜、動物園などの施設で飼育されている動物、ペットなどの動物においても抗疲労作用及び持久力増強作用のある飲食品等が求められている。
近年、これら抗疲労作用及び持久力増強作用を有するものとして、キノコに着目した研究が進められ、冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の培養菌糸体熱水抽出物に強心作用及び抗疲労作用が見出されており（特許文献１）、また、霊芝の子実体等の抽出物に滋養強壮効果が見出されている（特許文献２）。
また、上記のキノコの他に、ヒラタケ属担子菌であるウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が抗疲労作用及び持久力増強作用を有することが見出されている（特許文献３）。
しかしながら抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するウスヒラタケの菌糸体を液体培養で製造する方法に関しては詳細な検討はまだ行われていない。
【特許文献１】国際公開第９６／００５８０号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−６３９８１号公報
【特許文献３】特願２００４−３５３０９９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物の大量製造法及びそれを含有する医薬品、栄養機能食品、健康食品又は飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は上述の問題を解決するために鋭意検討した結果、ヒラタケ属担子菌の菌糸体を液体培地で培養するときに、コーンスターチを０．５〜６．０%含有する液体培地を用いることで、ヒラタケ属担子菌の抗疲労作用及び持久力増強作用並びに収量を同時に増大させる事ができる事を見出し、本発明に到達したものである。
即ち本発明は下記のとおりである。
（１）炭素源としてコーンスターチを０．５〜６．０%含有する液体培地でヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）を培養することを特徴とする、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するヒラタケ属担子菌の生産方法。
（２）ヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）が、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）のいずれかである上記（１）記載の生産方法。
（３）ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０２２２）である上記（２）記載の生産方法。
（４）上記（１）〜（３）のいずれかに記載の生産方法で生産されたヒラタケ属担子菌（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）の成分を含有する抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（５）上記（４）記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有する医薬品。
（６）上記（４）記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物を含有することを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
【発明の効果】
【０００５】
本発明により、抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物及びそれを含有する医薬品、栄養機能食品、健康食品又は飲食品を大量に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明について、以下に具体的に説明する。
本発明に関わるヒラタケ属担子菌としては、ヒラタケ属に分類される担子菌で有れば特に制限されないが、例えば、好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ），エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｙｎｇｉｉ）、タモギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ）等が挙げられる。さらに好ましくは、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）が挙げられる。
【０００７】
本発明に関わるウスヒラタケとしては、ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、ヒジリタケ、クロアワビタケという名称でも市場に流通している。
本発明のウスヒラタケの一例として、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株が挙げられる。Ｓ８２株は自然界より単離された株であり、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−２０２２２として寄託(受理日平成１６年９月１４日)されている。
【０００８】
本発明のウスヒラタケには、さらに、これらの種の株に変異処理及び遺伝子操作を加え、目的成分の含有量や副生物の生成量を変化させた、変異体又は遺伝子組み換え体も含まれる。自然界より得られたウスヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ）の子実体より分離したＰｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株の菌学的性質は以下のとおりである。
【０００９】
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株の菌学的性質
（ａ）培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
以下の３種類のプレートにＰｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株を接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養１週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼及び実体顕微鏡ＳＺＨ１０（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はＫｏｒｎｅｒｕｐ  ａｎｄ  Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）に従った。
（１）ポテト・デキストロース寒天培地（商品名「ダイゴ」（日水製薬製））（ＰＤＡプレート）
（２）２％麦芽エキス寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）１．５％寒天（ＭＥＡプレート）
（３）オートミール寒天培地（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）１．５％寒天（ＯＡプレート）
【００１０】
２．生育温度試験
検体をＰＤＡプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で１週間培養し、巨視的観察を行った。
【００１１】
３．形態の微視的観察
菌体の微視的特徴の観察は、上記ＰＤＡプレートを用い２５℃で培養した菌体を直接採取してプレパラートを作成し、微分干渉顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス社製）で観察した。
【００１２】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
各種類の培養プレートにおける１週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面及び裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、
下記のような特徴が認められた。
（１）ＰＤＡプレート：コロニー直径は４０〜５０ｍｍ、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状（ｆｌｏｃｃｏｓｅ）。その他にコロニー表面上にＹｅｌｌｏｗｉｓｈ  Ｏｒａｎｇｅ（４Ａ−７）の浸出液の産生が認められた。
（２）ＭＥＡプレート：コロニー直径は４０〜４５ｍｍ、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状（ｆｌｏｃｃｏｓｅ）。
（３）ＯＡプレート：コロニー直径は６０〜７０ｍｍ、色調はＷｈｉｔｅ（１Ａ−１）、表面性状は羊毛状（ｆｌｏｃｃｏｓｅ）。
上記の（  ）内の数値は、Ｋｏｒｎｅｒｕｐ  ａｎｄ  Ｗａｎｓｃｈｅｒ（１９７８）で用いられている色のコード番号を示す。
【００１３】
２．生育温度試験結果
Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ  Ｓ８２株をＰＤＡプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は１２〜１７ｍｍ。
培養温度２５℃：コロニー直径は４０〜４５ｍｍ。
培養温度２７℃：コロニー直径は３０〜３４ｍｍ。
培養温度３０℃：コロニー直径は３０〜３５ｍｍ。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００１４】
３．形態の微視的観察結果
栄養菌糸（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｈｙｐｈａｅ）は、寒天表面上もしくは寒天内に形成され、無色で（ｈｙａｌｉｎｅ）、隔壁を有し、かすがい連結（ｃｌａｍｐ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）の形成が認められたが、厚壁胞子（ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅ）の形成は認められなかった。生殖器官（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｏｒｇａｎ）については、１週間以上培養した平板において分生子（ｃｏｎｉｄｉｕｍ）等の生殖器官構造の形成は認められなかった。
【００１５】
（ｂ）生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件    ｐＨ  ５〜６、温度    ２５℃
（２）生育の範囲    温度  ５〜３５℃
（３）フェノールオキシダーゼ反応  陽性
【００１６】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に用いる炭素源としては、コーンスターチが最も有効であり、通常使用される炭素源であるグルコース、マルトース、スクロースと比べて菌糸体が有する抗疲労作用及び持久力増強作用が著しく高くなる。また加えて菌糸体の成長も良くなる。
【００１７】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に用いる炭素源としてのコーンスターチの濃度は、ヒラタケ属担子菌が成長できる濃度であれば何ら制限はないが、好ましくは、０．５〜６．０％、さらに好ましくは、０．５〜４．５％、さらに好ましくは、０．５〜３．５％が良い。６．０％以上であると殺菌後の液体培地の粘度が非常に高くなり、通気や攪拌を行う培養には適さない。
【００１８】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に用いる炭素源としては、コーンスターチ単独でも良く、またコーンスターチとグルコース、マルトース、スクロース、ラクトース、澱粉、可溶性澱粉、セルロース、パルプ、マルツエキス、ビートモラセス、ケインモラセス、バレイショデンプン、キャッサバデンプン、ホエー、大豆油、オリーブ油、コーン油、綿実油、亜麻仁油等とを併用することも可能である。
【００１９】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に用いる窒素源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる窒素源であれば何ら制限はないが、好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、小麦ふすま、トウモロコシふすま、ＣＳＬ、ピーナッツミール、屠殺場廃棄物、魚粉、カツオエキス、肉エキス、酵母エキス等の有機体窒素、カゼイン由来のペプトン、肉由来のペプトン、ポリペプトン、ソイトン、カザミノ酸等のタンパク質分解物、硝酸カリウム、硝酸カルシウム等の硝酸体窒素、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモニウム体窒素、さらに好ましくは、大豆粉、ファーマメディア、酵母エキス、ＣＳＬ、さらに好ましくは、大豆粉、ファーマメディアが良い。
【００２０】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に用いるミネラル源としては、ヒラタケ属担子菌が成長できるミネラル源であれば何ら制限はないが、好ましくは、カリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、ナトリウム、クロライド等が挙げられ、さらに好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウム、鉄、コバルト、銅、亜鉛、さらに好ましくはカリウム、マグネシウム、リン、硫黄、カルシウムが良い。
【００２１】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に関わるｐＨとしては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、ｐＨ２．５〜８．５、さらに好ましくはｐＨ３．５〜７．５、さらに好ましくはｐＨ４．５〜６．５が良い。液体培地のｐＨはｐＨ２．５よりも低い場合、又はｐＨ８．５よりも高い場合、菌糸体の成長に著しく悪い影響を与える。
【００２２】
本発明のヒラタケ担子菌の培養に関わる温度としては、ヒラタケ属担子菌が成長できる範囲であれば何ら制限はないが、好ましくは、１５〜３５℃、さらに好ましくは１５〜３０℃、さらに好ましくは２０〜３０℃が良い。
【００２３】
本発明に関わる培養法は、液体培養、固体培養のいずれでもよく、培養条件の厳密なコントロールが可能な菌糸体の培養が望ましい。また、天然物及びポット培養等における子実体の栽培も同様に行うことができる。
【００２４】
本発明のヒラタケ属担子菌の抗疲労作用及び／又は持久力増強作用組成物は、飲食品としてあるいは医薬品として用いることができる。医薬品としては、抗疲労剤又は持久力増強剤がこれに相当する。
【００２５】
本発明に関わるヒラタケ属担子菌は、子実体、又は、菌糸体、培養物をそのまま飲食品、医薬品として使用することができる。あるいは、子実体、菌糸体、培養物を乾燥した乾燥体、もしくは乾燥後粉砕した粉末としても使用することができる。また、これらを水抽出、熱水抽出、酸性下での抽出、アルカリ性下での抽出、エタノール、ヘキサン又は酢酸エチル等有機溶媒で抽出した抽出物としても使用できる。
【００２６】
さらに、培地中に有効成分が放出される際には培養物が液体の場合は、培養液を濃縮して用いることもでき、また、培養液を上記の方法で抽出することによっても用いることができる。さらに、子実体、菌糸体、培養液等の各種分画操作を経て作用の強い画分のみを抽出した抽出物を用いることもできる。
【００２７】
本発明に関わる医薬品としては、組成物それ自体で、あるいは常法に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせることもでき、種々の製剤化が可能である。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、非経口投与剤としては、注射剤のほか、坐剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調整することができる。
【００２８】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。
【００２９】
本発明に関わる抗疲労組成物及び持久力増強組成物において、かかる医薬品の形態におけるヒラタケ属担子菌の粉末もしくは抽出物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００３０】
動物においても人間用と同様に製剤化すればよい。動物の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００３１】
本発明に関わる天然のヒラタケ属担子菌の子実体は、長年、食されてきたことから安全性が高いと考えられ、各種飲食品として用いることができる。飲食品としては、それ自体単独で、あるいは他の飲食品に含有させ最終形態にすることができる。
【００３２】
飲食品としては、抗疲労作用及び持久力増強を目的とする機能性食品として摂取することもできる。機能性食品は、特定保険用食品、栄養機能性食品、又は健康食品として位置付けることができる。
なお、本発明の機能性食品には、ヒラタケ属担子菌の培養菌糸体、子実体、培養物の少なくともいずれかの成分を含有し、運動における抗疲労作用を有するものであることを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付したものが含まれる。
【００３３】
本発明の食品としては、例えば、ヒラタケ属担子菌の成分に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。この機能性食品は、そのまま食用に供してもよく、また種々の食品（例えばハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、パン、バター、粉乳、菓子など）に添加して使用したり、水、酒類、果汁、牛乳、清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。
【００３４】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌の粉末もしくは抽出物の摂取量は、対象の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされる。
【００３５】
動物においても同様にヒラタケ属担子菌に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。また、飼料及びペットフードに添加して使用したり、水などの飲料水に添加してもよい。
【００３６】
かかる食品の形態における本発明のヒラタケ属担子菌の粉末もしくは抽出物の摂取量は、動物の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ／ｋｇ体重程度とされる。
【００３７】
本発明における「疲労」とは、生体がある機能を発揮した結果、その機能が低下する現象をいう。これらに限定されるものではないが例えば、「水泳をした後の肉体疲労」「長時間にわたり、知的労働をした後の精神疲労」「毎日の通常生活においても蓄積する肉体的及び精神的な複合疲労」等を挙げることができる。
「抗疲労作用」とは本発明の組成物等を飲食服用することにより、そのような「疲労」状態を軽減させる作用及び「疲労」状態よりの回復を促進する作用、あるいは「疲労」を予防し、疲れにくくする作用などをいう。
「持久力」とは、ある一定の運動状態を継続して行うことができる能力をいい、「持久力増強作用」とは、その継続してできる能力が増強される作用、例えば、具体的には継続時間が延びることにより確認することができる。
【００３８】
本発明における抗疲労作用及び持久力増強作用の評価方法は、抗疲労作用及び持久力増強作用を評価できる方法で有れば特に制限はないが、強制水泳法、京大松元式運動量測定法、自発運動測定法、限界走行時間法、水浸拘束ストレス負荷等が挙げられる。特に、後述する実施例のように、マウスを用いた強制水泳法は、動物個体における総合的な反応の変化による抗疲労作用及び持久力増強作用を評価するために常用される試験である。水を投与したコントロール群とサンプルを投与した試験群を比較した時、試験群の遊泳時間が延長した場合は、サンプルが抗疲労作用及び持久力増強作用を有すること示す。
【実施例】
【００３９】
以下に本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
［実施例１］
ウスヒラタケ菌糸体の培養と抗疲労効果の測定
（種菌の調製）
保存していたウスヒラタケの斜面培地培養菌糸体をマルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％、寒天１．５％の培地組成で作製した寒天培地に接種し、２８℃において７日間平面培養した。これを種菌として用いた。
（前培養のための液体培地の調製）
次に液体培地を作る。マルツエキス２．０％、酵母エキス０．２％の培地組成で液体培地を作製し、５００ｍＬ三角フラスコに２００ｍＬずつ分注したのちオートクレーブ滅菌した。
（前培養）
上記の前培養のための液体培地を室温まで放冷した後、種菌を内径４ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、そのディスク片６つを１．５ｍＬ容ポリプロピレン製チューブに移し、ホモジナイザーペッスルでホモジナイズ後に接種した。接種後は温度２８℃、暗条件下で５日間振とう培養（１２０ｒｐｍ）を行った。これを前培養の培養液をした。
（本培養のための液体培地の調製）
次に本培養のための液体培地を作る。コーンスターチ３．０％、大豆粉１．０％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．１％の培地組成で液体培地を作製し、１０Ｌジャーファーメンターに５Ｌずつ分注したのちオートクレーブ滅菌した。
（本培養）
上記の本培養のための液体培地を室温まで冷却した後、前培養の培養液を５．０％になるように移植した。移植後は温度２８℃、攪拌３５０ｒｐｍ、通気０．５ｖｖｍ、暗条件下でｐＨ調整用のアルカリとして２ＮのＮａＯＨ水溶液の添加のみを行う回分培養を行った。培養中は液体培地のｐＨがｐＨ５．８で一定になるように自動制御を行った。
（集菌と乾燥）
培養を始めてから５日後に、菌糸体をろ過してから集菌し、凍結乾燥を行った。その結果、ウスヒラタケ菌糸体の収量は１８．５ｇ／Ｌであった。
（試料調製）
上記凍結乾燥後の菌糸体を液体窒素で凍結後、乳鉢で粉砕し、小型のラボ用ミルで６０秒間粉砕を行った。さらにこの粉末を目開き３００μmのステンレス製ふるいを用いて分級し、このふるいを通った微粉末を試験投与群用の試料とした。
【００４０】
［比較例１］
実施例１の液体培地に含まれるコーンスターチ３．０％をグルコース３．０％に変えた以外、実施例１と同様の方法で乾燥菌糸体を作成した。その結果、ウスヒラタケ菌糸体の収量は１５．１ｇ／Ｌであった。この乾燥菌糸体を用い、比較投与群用の試料とした。
【００４１】
（抗疲労効果の測定）
５週齢の雄性ｄｄＹマウスを用い、６日間の予備飼育後、１群１０匹で３群に分けた。群構成は、試料の代わりに水を投与する対照群と、試料として実施例１及び比較例１で調製したウスヒラタケの培養菌糸体の乾燥微粉末試料４００ｍｇ／ｋｇを投与する試験投与群及び比較投与群とし、週５日間経口投与を行った。投与後２週目にマウスに体重の９．５％の重りを付加して強制水泳させ、疲労困憊し頭部が完全に７秒間水中に沈むまでの時間を測定した。その結果を図１に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊、＊＊はそれぞれ危険率５％、０．２％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔｅｓｔ）。
【００４２】
［実施例２］
本培養の液体培地に含まれるコーンスターチの濃度を０．５％にしたこと以外、実施例１と同様に試験投与群用の試料を調製した。
【００４３】
［比較例２］
実施例２の液体培地に含まれるコーンスターチ０．５％をグルコース０．５％に変えた以外、実施例２と同様の方法で乾燥菌糸体を作成した。この乾燥菌糸体を用い、比較投与群用の試料とした。
【００４４】
（抗疲労効果の測定）
抗疲労効果の測定は実施例１及び比較例１と同様に行った。その結果を図２に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊、＊＊はそれぞれ危険率５％、０．１％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔｅｓｔ）。
【００４５】
［実施例３］
本培養の液体培地に含まれるコーンスターチの濃度を５．５％にしたこと以外、実施例１と同様に試験投与群用の試料を調製した。
【００４６】
［比較例３］
実施例３の液体培地に含まれるコーンスターチ５．５％をグルコース５．５％に変えた以外、実施例３と同様の方法で乾燥菌糸体を作成した。この乾燥菌糸体を用い、比較投与群用の試料とした。
【００４７】
（抗疲労効果の測定）
抗疲労効果の測定は実施例１及び比較例１と同様に行った。その結果を図３に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊、＊＊はそれぞれ危険率５％、０．１％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔｅｓｔ）。
【００４８】
［実施例４］
本培養の液体培地に含まれるコーンスターチを可溶性澱粉（和光純薬工業株式会社「でんぷん（溶性）」）にしたこと以外、実施例１と同様に試験投与群用の試料を調製した。
【００４９】
［比較例４］
実施例４の液体培地に含まれる可溶性澱粉をグルコース３．０％に変えた以外、実施例４と同様の方法で乾燥菌糸体を作成した。この乾燥菌糸体を用い、比較投与群用の試料とした。
【００５０】
（抗疲労効果の測定）
抗疲労効果の測定は実施例１及び比較例１と同様に行った。その結果を図４に示す。
表の数値は、平均値（秒）±標準誤差を示した。表中、＊は危険率５％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔｅｓｔ）。
【００５１】
〔結果〕
炭素源としてコーンスターチを含む液体培地で培養したウスヒラタケ菌糸体を投与した試験投与群は、対照群と比較して顕著な遊泳時間の延長効果（危険率０．２％、０．１％）が認められ、さらに比較投与群と比較しても有意な遊泳時間の延長（危険率５％）が認められた。この遊泳時間の延長は、動物個体における総合的な反応の変化による抗疲労作用及び持久力増強作用を評価するために常用される試験であり、上記結果は本発明におけるウスヒラタケの組成物に該作用があることを科学的に立証できた。
以上の事から、本発明によって、ヒラタケ属担子菌の抗疲労作用及び／又は持久力増強作用並びに収量を同時に増大できる事が分かった。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】抗疲労効果の測定結果を示す図である（実施例１、比較例１）
【図２】抗疲労効果の測定結果を示す図である（実施例２、比較例２）
【図３】抗疲労効果の測定結果を示す図である（実施例３、比較例３）
【図４】抗疲労効果の測定結果を示す図である（実施例４、比較例４）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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