(57)【要約】【課題】副作用等の安全性の点で問題が少ない天然成分を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満薬、抗肥満用食品、抗肥満用飼料を提供すること。【解決手段】α−トコトリエノール、γ−トコトリエノール等のトコトリエノール若しくはその生体内代謝物であるγ−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（γ−ＣＥＨＣ）等のカルボキシエチルヒドロキシクロマン、又はパームから抽出されて製品化されているパームトコトリエノール等のトコトリエノール含有物を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤とする。この脂肪細胞分化抑制剤は抗肥満薬としても有用である。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤。
【請求項２】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤。
【請求項３】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする請求項２記載の脂肪細胞分化抑制剤。
【請求項４】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分とする抗肥満剤。
【請求項５】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分とする抗肥満剤。
【請求項６】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする請求項５記載の抗肥満剤。
【請求項７】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用がある旨が表示された食品。
【請求項８】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用がある旨が表示された食品。
【請求項９】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする請求項８記載の食品。
【請求項１０】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、抗肥満作用がある旨が表示された食品。
【請求項１１】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、抗肥満作用がある旨が表示された食品。
【請求項１２】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする請求項１１記載の食品。
【請求項１３】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された飼料。
【請求項１４】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、抗脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された飼料。
【請求項１５】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする請求項１４記載の飼料。
【請求項１６】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを脂肪細胞分化抑制剤及び／又は抗肥満剤として使用する方法。
【請求項１７】
α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を脂肪細胞分化抑制剤及び／又は脂肪細胞分化抑制剤及び／又は抗肥満剤として使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、α−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣ、又はこれらの含有物を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満薬、食品、及び、細胞分化抑制剤や抗肥満薬としての使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、トコトリエノール類に関しては、γ―トコトリエノールを含有する利尿剤、ナトリウムイオン排泄剤、高血圧予防治療剤、虚血性心疾患予防治療剤、うっ血性心不全予防治療剤又は腎疾患予防治療剤（例えば、特許文献１参照）や、動脈硬化症、癌、Ｉ型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性ネフロパシー、皮膚損傷と傷跡組織形成用、中枢神経異常と退化、例えばアルツハイマー病のように一般の神経退化、炎症用、不妊症／生殖能力不全の疾患および異常、日光暴露に関した症状、疾患および異常、加齢に関する疾患および異常、白内障の治療および予防用、抗凝固用および硝酸塩トレランスからなる群から選択される酸化ストレス関連症状、疾患および異常を予防または治療するためのビタミンＣの遅効放出製剤とビタミンＥの単調放出製剤を有することを特徴とする、ヒトまたは動物の血漿中、それらの高濃度とビタミンＣとビタミンＥ間の制御割合を与える抗酸化剤ビタミンＣとビタミンＥの経口デリバリー用の医薬デリバリーシステム（例えば、特許文献２参照）や、２，５，７，８−テトラメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン若しくはその塩及び／又は２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン若しくはその塩、又はこれらの水和物である抗酸化剤又は当該物質を含有する抗酸化剤であって、代謝酵素により２，５，７，８−テトラメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマンに変換することにより抗酸化作用を示すα―トコトリエノールを含有する抗酸化剤、又は代謝酵素により生体内で２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマンに変換することにより抗酸化作用を示すγ―トコトリエノールを含有する抗酸化剤（例えば、特許文献３参照）が知られている。
【０００３】
また、トコフェロール類を含有する食品としては、ｉ）約１０〜３０％のトコフェロール類、トコトリエノール類またはそれらの組合せ；ｉｉ）約２〜２０％の遊離ステロール類；ｉｉｉ）約２〜２０％のステロールエステル類；ｉｖ）約０．１〜１．０％のシクロアルテノール類；およびｖ）約７〜１９％の飽和脂肪を含んでなる、食用油であって、ヒト患者によるコレステロールの合成、吸収および血中レベルを減少させ、ヒト患者からコレステロールの排出を増加させ、ヒト患者の血中での過酸化物質の蓄積を減少させて、上記ヒト患者にビタミンＥの血中レベルも増加させる食用油（例えば、特許文献４参照）や、アスコルビン酸エステル及びレシチン及びｄｌ−α−トコフェロール、天然型トコフェロール類、トコトリエノール類の１種類又は２種類以上を含有する混合物を含有することを特徴とするステロール脂肪酸エステル組成物を含有する食用油、マーガリン類、菓子、調味料、乳製品などの食品（例えば、特許文献５参照）が知られている。
【０００４】
更に、トコトリエノール類含有粉末に関して、保存安定性に優れ、さらさらした流動性を有するトコトリエノール含有粉末、その製造方法及び該粉末を圧縮成型してなる錠剤であって、トコトリエノール含有油を水中でレシチン、セルロースおよび乳化剤を用いて処理して乳化液を生成させ、この乳化液に粉体物質を添加混合して懸濁液とし、懸濁液を噴霧乾燥してなる方法によって製造されたトコトリエノール含有粉末（例えば、特許文献６参照）が提案されている。
【０００５】
トコトリエノールは未だ、工業的に純品として大量に入手することはできず、実際は、パーム油、米糠油等の植物油から抽出、濃縮されたトコトリエノール含有油が一般的に用いられている。トコトリエノールはトコフェロールと分子構造においてイソプレノイド側鎖に三つの二重結合が存在するという点だけが異なり、トコフェロールよりも熱、光、酸素等の影響を受けて分解、変質し易いものである。このため、トコトリエノールを純品として工業的規模で入手することは困難であり、通常は、α、β、γ及びδ−トコトリエノールの混合物（以下、「総トコトリエノール」という）、α、β、γ及びδ−トコフェロールの混合物（以下、「総トコフェロール」という）およびそれら以外の原料由来の油成分が夾雑した混合物として市販されている。例えば、イーストマンケミカル社製のトコトリエノール製品（商品名「トコトリエノール」）は、総トコトリエノール含量が１６％以上（α−トコトリエノール８〜１０％、γ−トコトリエノール８〜１０％）、総トコフェロール１３〜１５％（α−トコフェロール）、その他のトコフェロール及びα２〜４％からなり、総トコフェロール及び総トコトリエノールの合計含量が３０％以上で表される混合物であり、トコトリエノールの分子構造および夾雑している原料由来の油成分の挙動がエマルジョン乳化安定性に悪影響を及ぼしていると考えられる。
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−３４２１３３号公報
【特許文献２】特表２００３−５０７４１９号公報
【特許文献３】特開２００２−１７９５６７号公報
【特許文献４】特表２００４−５１９２２８号公報
【特許文献５】特開２００４−１８６７８号公報
【特許文献６】国際公開ＷＯ００／２７３９３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、副作用等の安全性の点で問題が少ない天然成分を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満薬、抗肥満用食品、抗肥満用飼料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
肥満は脂肪細胞の増加に起因するが、高度に分化し、脂肪を蓄積した脂肪細胞からはアヂポサイトカインとよばれる一連の生理活性物質が分泌され、インスリン抵抗性を高めたり、高脂血症や高血圧をきたし、強いては動脈硬化を発症するといわれており、脂肪前駆細胞から脂肪細胞への分化にはインスリンが重要な役割を果たしていることが知られている。本発明者らは、トコトリエノール類の中でもα−トコトリエノールとγ−トコトリエノールがインスリンによる脂肪前駆細胞の分化を抑制するが、α−トコフェロールとβ−トコトリエノールとδ−トコトリエノールはインスリンによる脂肪前駆細胞の分化を抑制しないことを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、（１）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤や、（２）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤や、（３）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする上記（２）記載の脂肪細胞分化抑制剤や、（４）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分とする抗肥満剤や、（５）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分とする抗肥満剤や、（６）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする上記（５）記載の抗肥満剤に関する。
【００１０】
また本発明は、（７）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用がある旨が表示された食品や、（８）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用がある旨が表示された食品や、（９）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする上記（８）記載の食品や、（１０）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、抗肥満作用がある旨が表示された食品や、（１１）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、抗肥満作用がある旨が表示された食品や、（１２）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする上記（１１）記載の食品に関する。
【００１１】
さらに本発明は、（１３）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された飼料や、（１４）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を有効成分として含有し、抗脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された飼料や、（１５）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物が、パームトコトリエノールであることを特徴とする上記（１４）記載の飼料や、（１６）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣを脂肪細胞分化抑制剤及び／又は抗肥満剤として使用する方法や、（１７）α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）若しくはγ−ＣＥＨＣの含有物を脂肪細胞分化抑制剤及び／又は脂肪細胞分化抑制剤及び／又は抗肥満剤として使用する方法に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によると、副作用等の安全性の点で問題が少ない天然成分を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満薬、抗肥満用食品、抗肥満用飼料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤としては、α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はその生体内代謝物であるα−ＣＥＨＣ若しくはγ−ＣＥＨＣを有効成分とするものや、これらを含むものであれば特に制限されず、また、本発明の食品（サプリメント形態を含む）や飼料としては、α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はα−ＣＥＨＣ若しくはγ−ＣＥＨＣ、あるいは、これらの含有物を有効成分として含有し、脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された食品や飼料やであれば特に制限されず、そしてまた、本発明の使用方法としては、α−トコトリエノール若しくはγ−トコトリエノール、又はα−ＣＥＨＣ若しくはγ−ＣＥＨＣ、あるいは、これらの含有物を脂肪細胞分化抑制剤及び／又は抗肥満剤として用いる方法であれば特に制限されず、上記α−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、α−ＣＥＨＣ又はγ−ＣＥＨＣ中では、γ−トコトリエノールを好適に例示することができる。
【００１４】
より具体的には、例えば、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−｛（Ｅ，Ｅ）−４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル｝−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール（別名（＋−）−α−トコトリエノール）、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−｛Ｒ（Ｅ，Ｅ）−４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル｝−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール〔別名（Ｒ）−α−トコトリエノール〕、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール）（別名α−トコトリエノール）などのα−トコトリエノール；例えば、５−｛（３，４−ジヒドロ−２，７，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール（γ−トコトリエノール）、３，３’，４，４’−テトラヒドロ−２，２’−７，７’，８，８’−ヘキサメチル−２，２−ビス（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−（５，５’−ビ−２Ｈ−１−ベンゾピラン）−６，６’−ジオール（別名γ−トコトリエノール）、３，４−ジヒドロ２，７，８−トリメチル−２−｛（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチル３，７，１１−トリデカトリエニル｝−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール）（別名γ−トコトリエノール）などのγ−トコトリエノールをそれぞれ挙げることができる。
【００１５】
上記α−トコトリエノールやγ−トコトリエノールは、例えばパーム油のような植物油から抽出するか、あるいは化学的に合成して得ることができる。また、市販品を利用することもできる。またトコトリエノールは分子内に不斉炭素原子及び複数の二重結合を有しており、光学活性体、ラセミ体、あるいはシス体、トランス体、シス−トランス混合物等が存在するが、本発明におけるα−トコトリエノールやγ−トコトリエノールは単一の異性体には限定されず、混合物も含まれ、その混合比も限定されるものではない。
【００１６】
また、カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ）としては、α−ＣＥＨＣ、γ−ＣＥＨＣやこれらの塩を挙げることができるが、中でも２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマンとも称されるγ−ＣＥＨＣを好適に例示することができる。これらα−ＣＥＨＣやγ−ＣＥＨＣは、公知の方法により製造することができる。
【００１７】
本発明において、α−トコトリエノールやγ−トコトリエノール等の含有物としては、トコトリエノール含有植物油抽出物を好適に例示することができ、パーム、米糠、大麦、小麦、オート麦、ココナッツ、ブドウ、大豆、ひまわり、とうもろこし、ごま、なたね、落花生、オリーブ等に由来する植物油の抽出物を例示することができる。中でも、パームから抽出されて製品化されているパームトコトリエノールや、大麦焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液から得られるトコトリエノールを１５０ｍｇ／ｋｇ以上含有する大麦溝条からなる組成物（特開２００１−８６６４号公報参照）や、植物胚芽のぬか及び胚種からの抽出トコトリエノール（特表２００５−５３６１９１号公報参照）を具体的に例示することができる。また、トコトリエノール含有油を水中でレシチン、セルロース、乳化剤を用いて処理し乳化液を生成させ、この乳化液に粉体物質を添加混合して懸濁液とし、懸濁液を噴霧乾燥してなる方法によって製造されたトコトリエノール含有粉末（ＷＯ００／２７３９３）なども使用することができる。
【００１８】
上記トコトリエノール含有物としては、総トコトリエノール含量が１０重量％〜８０重量％、好ましくは２５重量％〜７５重量％、より好ましくは５０重量％〜７５重量％のものを用いることができ、このようなトコトリエノール含有油として、商業的に入手し得る製品としては、例えば、「トコトリエノール」（７６％含有品、ライオン社製）、「トコトリエノール」（３０％含有品、イーストマンケミカル社製）、「オリザトコトリエノール」（オリザ油化社製）、「トコトリエノールオイル」（７０％含有品、ゴールデンホーププランテーション ベルハド社製）、「トコトリエノールオイル」（３０％含有品、５０％含有品、カローテック製）等を挙げることができる。
【００１９】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤は、脂肪組織に蓄積し、脂肪細胞中の分化特異的遺伝子（例えば、ＰＰＡＲγ、Ｃ／ＥＢＰα、ａＰ２、ＦＡＳ、レジスチン）の発現を抑制することから、抗肥満活性を有することは明らかである。そして、本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤を医薬品として用いる場合には、経口又は非経口的に投与することができ、本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤をサプリメントとして用いる場合には、経口的に投与することができる。
【００２０】
経口投与するには、通常、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、トローチ剤等の剤形とすることができる。これらの剤形とするには通常用いられる製剤化助剤及び製剤化方法を用いることができ、例えば、賦形剤として、乳糖、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、軽質無水ケイ酸等を挙げることができ、崩壊剤としてカルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、クロスカルメロースナトリウム等を挙げることができ、結合剤としてヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等を挙げることができ、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等を挙げることができる。また、着色剤や界面活性剤等を使用することもできる。トコトリエノールは酸化を受けやすい物質であるので、特にトコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル等の抗酸化剤を少量配合することが好ましい。
【００２１】
また非経口投与するには、注射剤、坐剤、軟膏剤、経鼻剤等の剤形とすることができる。注射剤とするには、トコトリエノールが油性の物質であるため、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、マクロゴール類等の界面活性剤等を使用して乳化又は可溶化し、必要に応じて、ソルビトール、マンニトール等を添加して浸透圧を調整し、更に緩衝剤を加えてｐＨを調整するなどして製することができる。さらに、メチルパラベン等の保存剤、ベンジルアルコール等の局麻剤を配合することができる。
【００２２】
投与量は、疾病の種類、患者の体重や年齢、投与形態、症状等により適宜選定することができるが、例えば成人に投与する場合、トコトリエノールとして、１日あたり１ｍｇ〜５ｇ、好ましくは２０ｍｇ〜２ｇ、より好ましくは５０ｍｇ〜１ｇを、数回に分けてあるいは１回で投与することが望ましい。
【００２３】
本発明の脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された食品としては、本発明の脂肪細胞分化抑制剤が含まれているものであれば特に制限されず、食品の種類としてはヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜を挙げることができる。
【００２４】
また、本発明の脂肪細胞分化抑制作用及び／又は抗肥満作用がある旨が表示された飼料としては、本発明の脂肪細胞分化抑制剤が含まれている家畜・家禽用飼料やペットフードであれば特に制限されず、脂肪細胞分化抑制剤を他の飼料成分と混合して用いることもできるが、プレミックスの形態で添加することもできる。
【００２５】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２６】
＜実験材料及び実験方法＞
３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞の分化を誘導する系として、インスリンならびにパームトコトリエノール、各種ビタミンＥ同族体、γ−ＣＥＨＣを３Ｔ３−Ｌ１前駆脂肪細胞に添加し、１４日後に脂肪細胞分化特異的遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲによって測定した。また、細胞内脂質蓄積はＯｉｌ ｒｅｄ Ｏ脂質染色により形態学的に観察した。すなわち、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）を含むＤＭＥＭ培地（ＩＷＡＫＩ）に２×１０５cells/wellになるように播種し、５％ＣＯ２の存在下３７℃で３日間培養し、インスリン（US Biological）１０μｇ／ｍｌの存在下又は非存在下に、パームトコトリエノール（ライオン（株））、α−トコトリエノール（エーザイフードケミカル）、β−トコトリエノール（エーザイフードケミカル）、γ−トコトリエノール（エーザイフードケミカル）、δ−トコトリエノール（エーザイフードケミカル）をそれぞれ１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ添加し、又はγ−カルボキシエチルヒドロキシクロマン（ＣＥＨＣ：エーザイ（株））を１００μｇ／ｍｌ添加して、５％ＣＯ２の存在下３７℃で１４日間培養し、トリゾール（Invitrogen）を用いて、全ＲＮＡを抽出し、０．２μｇ／ｍｌのＲＮＡ溶液にOmniscriptTM Reverse Transcriptase（QIAGEN）を用いて０．１μｇ／ｍｌのｃＤＮＡを合成した。次に、脂肪細胞分化特異的遺伝子であるＰＰＡＲγ（peroxisome proliferator activated receptor γ）、ＦＡＳ、レジスチン（resistin）、ａＰ２、Ｃ／ＥＢＰαの各ｍＲＮＡ発現を、リアルタイムＰＣＲを用いて測定した。用いたプライマーは以下のとおりである。
【００２７】
ＰＰＡＲγ−Ｆ（配列番号１）：
５’−ＧＧＣＧＡＴＣＴＴＧＡＣＡＧＧＡＡＡＧＡＣ−３’
ＰＰＡＲγ−Ｒ（配列番号２）：
５’−ＣＣＣＴＴＧＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＡＴＧＧ−３’
ＦＡＳ−Ｆ（配列番号３）：
５’−ＴＧＣＴＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣ−３’
ＦＡＳ−Ｒ（配列番号４）：
５’−ＧＣＣＣＧＧＴＡＧＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＡ−３’
レジスチン−Ｆ（配列番号５）：
５’−ＴＣＴＴＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＴＧＴＧＧ−３’
レジスチン−Ｒ（配列番号６）：
５’−ＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＣ−３’
ａＰ２−Ｆ（配列番号７）：
５’−ＡＧＣＡＴＣＡＴＡＡＣＣＣＴＡＧＡＴＧＧＣＧ−３’
ａＰ２−Ｒ（配列番号８）：
５’−ＣＡＴＡＡＣＡＣＡＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣ−３’
Ｃ／ＥＢＰα−Ｆ（配列番号９）：
５’−ＧＧＴＴＴＴＧＣＴＣＴＧＡＴＴＣＴＴＧＣＣ−３’
Ｃ／ＥＢＰα−Ｒ（配列番号１０）：
５’−ＣＧＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＣＡＴＣＣＣ−３’
【００２８】
＜結果＞
１．パームトコトリエノールについて
インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてパームトコトリエノールを１μｇ／ｍｌの濃度で添加した場合、図１に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、パームトコトリエノールとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は８３．３±７．６％減少した（ｐ＜０．００１）。
【００２９】
また、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてパームトコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図２に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、パームトコトリエノール ０．１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は９５．６±０．８％、パームトコトリエノール １μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は９６．１±０．６％減少した（ｐ＜０．００１）。
【００３０】
さらに、他の分化特異的遺伝子、ＦＡＳ、ｒｅｓｉｓｔｉｎ、ａＰ２、Ｃ／ＥＢＰαについても、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてパームトコトリエノールを１μｇ／ｍｌの濃度で添加した場合、図３に示すように、パームトコトリエノール添加によるｍＲＮＡの減少がみとめられた。
【００３１】
パームトコトリエノール中には各種ビタミンＥ同族体が含まれている。含有されている割合について表１に示す。そこで本発明者らは、パームトコトリエノール中に含まれるα―トコフェロール、α―トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール及びδ−トコトリエノールについて、更なる検討を行った。
【表１】
2007277187.tif 000002
【００３２】
２．α―トコフェロールについて
上記の方法に従って、α―トコフェロールが脂肪細胞分化に与える影響を検討した。インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてα―トコフェロールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図４に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、α―トコフェロールを１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は２３４．６±８３．８％増加した。
【００３３】
３．α―トコトリエノールについて
上記の方法に従って、α―トコトリエノールが脂肪細胞分化に与える影響を検討した。インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてα―トコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図５に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、α―トコトリエノール１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は７８．０±４．３％減少した（ｐ＜０．００１）。
【００３４】
４．β−トコトリエノールについて
上記の方法に従って、β―トコトリエノールが脂肪細胞分化に与える影響を検討した。インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてβ―トコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図６に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、β―トコトリエノール１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量に有意差は認められなかった（ｐ＜０．００１）。
【００３５】
５．γ−トコトリエノールについて  
上記の方法に従って、γ−トコトリエノールが脂肪細胞分化に与える影響を検討した。インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてγ−トコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図７に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞に比べて、γ−トコトリエノール０．１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は４９．９±８．１％、γ−トコトリエノール１μｇ／ｍｌとインスリンを添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量は５５．０±４．１％減少した（ｐ＜０．００１）。
【００３６】
また、他の分化特異的遺伝子であるＦＡＳ、レジスチン、ａＰ２、Ｃ／ＥＢＰαについて、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてγ−トコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合につき検討を行った。結果を図８及び９に示す。その結果、レジスチンでは全ての濃度で、その他の遺伝子については０．１及び０．０１μｇ／ｍｌの濃度で、γ−トコトリエノール添加によるｍＲＮＡの減少が認められた。
【００３７】
６．δ−トコトリエノールについて
上記の方法に従って、δ−トコトリエノールが脂肪細胞分化に与える影響を検討した。インスリン（１０μｇ／ｍｌ）の存在下あるいは非存在下においてδ−トコトリエノールを１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ添加した場合、図１０に示すように、インスリンのみを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞と、δ−トコトリエノールを各濃度で添加した細胞では、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量に有意差は認められなかった（ｐ＜０．００１）。
【００３８】
７．γ−ＣＥＨＣ（Carboxy Ethyl Hydroxy Chroman）について
さらに、γ−トコトリエノールの代謝物であるγ−ＣＥＨＣが脂肪細胞分化に与える影響を、上記の方法に従いＰＰＡＲγ及びレジスチンについて検討した。結果を図１１に示す。その結果、ＰＰＡＲγｍＲＮＡの発現量の減少は、γ−ＣＥＨＣ（１００μｇ／ｍｌ）とインスリンを添加した３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞では、インスリンのみを添加したものに比べ１９．３±４５．４％であった（ｐ＜０．０１）。また、レジスチンは６０．７±３．２％であった（ｐ＜０．０１）。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明のパームトコトリエノール（１μｇ／ｍｌ）の濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図２】本発明のパームトコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図３】本発明のパームトコトリエノール（１μｇ／ｍｌ）のＦＡＳ、ｒｅｓｉｓｔｉｎ、ａＰ２、Ｃ／ＥＢＰαそれぞれの増加抑制作用を示す図である。
【図４】本発明のα−トコフェロール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図５】本発明のα−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図６】本発明のβ−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図７】本発明のγ−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図８】本発明のγ−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるレジスチン、ａＰ２それぞれの増加抑制作用を示す図である。
【図９】本発明のγ−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＦＡＳ、Ｃ／ＥＢＰαそれぞれの増加抑制作用を示す図である。
【図１０】本発明のδ−トコトリエノール（１、０．１、０．０１μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ増加抑制作用を示す図である。
【図１１】本発明のγ−ＣＥＨＣ（１００μｇ／ｍｌ）の各濃度におけるＰＰＡＲγ、レジスチンそれぞれの増加抑制作用を示す図である。
【図１】
2007277187.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2007277187.tif 000011
【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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