(57)【要約】【課題】腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類からの、腐敗菌に特有の悪臭ガスの放出を減少させる方法を提供する。【解決手段】乾燥組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数少なくとも１０９個含む乾燥組成物の有効量を人間及び他の哺乳類に摂取させ、腸管内のビフィドバクテリアの成長の促進を達成することにより、腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類からの悪臭ガスの放出を減少させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数少なくとも１０９個含む乾燥組成物の有効量を人間及び他の哺乳類に摂取させ、腸管内のビフィドバクテリアの成長の促進を達成することにより、腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類からの悪臭ガスの放出を減少させることを特徴とする悪臭ガス放出減少方法。
【請求項２】
前記組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数１０１０個含む請求項１に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項３】
前記組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数１０９〜１０１２個含む請求項１に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項４】
前記組成物がビフィドバクテリアを更に含むことを特徴とする請求項１に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項５】
前記組成物がプロピオン酸菌を８０〜９９％、ビフィドバクテリアを２０〜１％含有することを特徴とする請求項４に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項６】
前記プロピオン酸菌が、プロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌、プロピオン酸菌属シェルマン菌、プロピオン酸菌属イエンセン菌、又はプロピオン酸菌属アシデプロピオン菌に属することを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項７】
前記プロピオン酸菌が、プロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌、プロピオン酸菌属シェルマン菌、プロピオン酸菌属イエンセン菌、又はプロピオン酸菌属アシデプロピオン菌に属することを特徴とする請求項４又は５に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項８】
前記ビフィドバクテリアが、前記ビフィドバクテリアが、ビフィドバクテリウム属に属し、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌、ビフィドバクテリウム属ロンガム菌、ビフィドバクテリウム属アドレセンティス菌、ビフィドバクテリウム属ブリーヴ菌、ビフィドバクテリウム属インファンティス菌及びビフィドバクテリウム属スードロンガム菌から選択されることを特徴とする請求項４，５、及び７のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項９】
前記組成物が、毎日吸収させるべき１００ｍｇ〜１ｇのバクテリアを含む投与分ごとに分けた形で提供されることを特徴とする請求項１乃至８のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項１０】
前記組成物が、毎日吸収させるべき２００ｍｇ〜５００ｍｇのバクテリアを含む投与分ごとに分けた形で提供されることを特徴とする請求項１乃至８のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項１１】
前記組成物がカプセルの形態で提供されることを特徴とする請求項９又は１０に記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項１２】
各投与分が１０９〜１０１２個のバクテリアを含むことを特徴とする請求項９乃至１１のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【請求項１３】
各投与分が１０１０〜１０１２個のバクテリアを含むことを特徴とする請求項９乃至１１のいずれかに記載の悪臭ガス放出減少方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人間並びに哺乳類の腸管内細菌相の生物学的平衡を改善するための吸収可能な食餌組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
人間の消化管の内容物は、およそ１〜１．５ｋｇの消化中の食物に対応して、結腸内にグラムあたり約１０10個の細胞数の微生物の大集団を含むことがよく知られている。
【０００３】
この集団は異なるバクテリア群に分類され、あるものは無害または有益であるが、他のもの、とりわけ大腸菌および腐敗菌は、毒性物質の生成を招き、健康に対して悪影響を及ぼす。
【０００４】
乳酸桿菌（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）の大集団の存在が、腐敗菌類（ｐｕｔｒｅｆｙｉｎｇ ｇｅｎｅｒａ）の成長、ひいては上記毒性物質の生成を非常に厳しく抑制することを実証しようという様々な研究が、特に２０世紀初頭から、行われてきた。
【０００５】
その結果、これらのバクテリアの大集団を、特定の食物から、又は、これらの微生物の直接摂取により、体内に取り込もうという発想が全く当然のこととして生まれた。用い得る乳酸菌相（ｌａｃｔｉｃ ｆｌｏｒａ）の中で、下記のバクテリアを吸収することがとりわけ推奨されている：すなわち、（乳酸桿菌類）ブルガリア菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、（乳酸桿菌類）アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、さらには（連鎖球菌類）フェシウム菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ fａｅｃｉｕｍ）である（これらは単に例示として挙げたに過ぎず、これらがすべてであることを意味するものではない）。
【０００６】
しかしながら、腸管内微生物集団は長期的にその平衡を根本的に変更させることが困難な叢を構成する一方、乳酸桿菌を摂取することが既知の慢性病や不調を引き起こす腐敗性細菌相（ｐｕｔｒｅｆａｃｔｉｖｅ ｆｌｏｒａ）にほとんど影響を与えないことが立証できたという事実を考慮すると、これらのバクテリアを投与することは、期待された結果を導くものではなかった。
【０００７】
より最近、すなわち１７世紀には、既に示されていたように、良好な健康状態を増進することが可能なビフィド型の非乳酸菌類（ｎｏｎ−ｌａｃｔｉｃ ｇｅｎｅｒａ）を人間の食事に取り入れるという発想が生まれた。この種のフェルメント（ｆｅｒｍｅｎｔｓ）は、ビフィド相によって部分的に発酵させた乳製プディングその他の乳製品から、あるいは、生細胞を適切に投与することにより直接摂取することができる。
【０００８】
しかしながら、特に、人間の腸内、特に腸内平衡がそれほど良くない被験者に、長期的に外来ビフィドバクテリアをうまく植え付けることが非常に困難であるという事実を考慮すると、このようにしてバクテリアを取り込むことは、実用上満足できるものではないことが立証されている。
【０００９】
これらの一般的な発見を背景として、本発明の基礎となる発想はビフィド集団を増殖させることのできる手段を見つけ出すことであった。
【００１０】
その過程で、本発明者らは、プロピオン酸がビフィド相の特異的選択要素であることを証明したリール在住のヘンリ バレンス（Ｈｅｎｒｉ Ｂｅｒｒｅｎｓ）教授の研究に出会った。
【００１１】
この有機酸は、ある特定の型のバクテリアによる乳酸塩の発酵によって生じる生成物の１つであることが知られている。すなわち、乳酸桿菌類には属していないが、何世紀にも渡って人間の食事に登場していたプロピオン酸菌（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ）であり、“エメンタール”として知られているチーズの製造の際に孔を作ることを可能にするのはこのバクテリアであることが知られている。これは、工程の最後の時点でこれらのチーズにおよそ１０9細胞数／ｇのプロピオン酸菌が含まれているからである。
【００１２】
ここで注目すべきは、プロピオン酸とは別に、プロピオン酸菌による発酵によって、特に、酢酸及び二酸化炭素が生成されるということである。
【００１３】
この研究と平行して、非特許文献１により、プロピオン酸菌、特にプロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌なる種類のバクテリア、がビフィドバクテリア成長ファクターを作り出すことができることと、短連鎖脂肪酸、とりわけプロピオン酸、が多くの望ましからぬ腸内細菌の成長に対し非常に顕著な抑制作用を有しつつビフィドバクテリアの成長を促進することが立証された。
【００１４】
同様に、特許文献１には、プロピオン酸菌を食品、特にビフィドバクテリアを含む発酵乳に、これらのバクテリアの生残性を増加させる目的で加えることが既に提案されている。
【００１５】
さらに、特許文献２によれば、ビフィドバクテリア、更には、抗真菌剤として作用する少量のプロピオン酸菌を含む食物繊維、特にリンゴファイバー、を基礎とする食餌錠剤が知られている。
【００１６】
【特許文献１】特開平７−２２７２０７号公報
【特許文献２】米国特許第４，８０６，３６８９号
【非特許文献１】カネコ ツトム、モリ ヒロハル、イワタ メグミ及びメグロ サチキによる刊行物、「プロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌及びいくつかの腸内細菌により生成されるビフィドバクテリアの成長促進剤」（”Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｆｏｒ Ｂｉｄｉｆｏｂａｃｔｅｒｉａ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ａｎｄ Ｓｅｖｅｒａｌ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ”， １９９４, Ｊ． Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ． ７７：３９３−４０４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
これらの先行する発見に基づいて、本発明の発想は、容易に摂取することができる投与量の範囲内で多量のビフィド及びプロピオン酸フェルメントの混合物を直接摂取する方法を捜すことであった。
【００１８】
このような吸収方法は、チーズに孔を開ける際にこれらのフェルメントが担う役割により証明されるように、プロピオン酸発酵により多量の二酸化炭素が放出されることを考慮に入れると、全く逆の作用が予測されていたが、すべての面から有益であり、特に、腐敗性菌による通常の有害な影響をかなり減少させることが可能であることがわかった。
【００１９】
本発明の目的は、腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類からの、腐敗菌に特有の悪臭ガスの放出を減少させる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明によれば、乾燥組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数少なくとも１０９個含む乾燥組成物の有効量を人間及び他の哺乳類に摂取させ、腸管内のビフィドバクテリアの成長の促進を達成することにより、腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類からの悪臭ガスの放出を減少させることを特徴とする悪臭ガス放出減少方法が得られる。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、腸管内のビフィドバクテリアの成長を促進する処置を必要としている人間並びに哺乳類に、乾燥組成物中にプロピオン酸菌をグラムあたり細胞数少なくとも１０９個含む乾燥組成物の有効量を摂取させることにより、上述の処置をしても、腐敗菌に特有の悪臭ガスの放出を減少させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
次に本発明について詳細に説明する。
【００２３】
本発明において、前記組成物は、プロピオン酸菌及びビフィドバクテリアをグラムあたり細胞数少なくとも１０9個、好ましくはグラムあたり細胞数約１０10〜１０12個程度を含む、すなわちバクテリアが高濃度に含まれた、乾燥製剤により構成されることを特徴とする、人間並びに哺乳類の腸管内細菌相の生物学的平衡を改善するための吸収可能な食餌組成物である。
【００２４】
一般的に言えば、これらのバクテリアは、その酵素成分を破壊しないように注意を払ったかによって生きていることも死んでいることもある。
【００２５】
これらのバクテリアは、好ましくはプロピオン酸菌８０〜９９％、ビフィドバクテリア２０〜１％の割合で配合される。
【００２６】
したがって、本発明による組成物は、平均してビフィドバクテリアの１０倍ものプロピオン酸菌を含んでいる。
【００２７】
用いられるビフィドバクテリアは、原則として、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属し、好ましくは、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム属ロンガム菌（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム属アドレセンティス菌（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム属ブリーヴ菌（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム属インファンティス菌（Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム属スードロンガム菌（Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）から選択される。
【００２８】
プロピオン酸菌は、同様に通例、プロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）、プロピオン酸菌属シェルマン菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ）、プロピオン酸菌属イエンセン菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｎｓｅｎｉｉ）、又はプロピオン酸菌属アシデプロピオン菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）に属する。
【００２９】
これらのバクテリアは、純粋菌株として、又は所望に応じて菌株の混合として用いることができる。プロピオン酸菌の場合には、自己分解性の高い菌株と自己分解性がそれほど高くない菌株とをともに混合することが有用である。
【００３０】
本発明は、同様に、人間並びに哺乳類の腸管内細菌相の生物学的平衡を改善するための、そして特にビフィド集団を増殖させるための吸収可能な食餌組成物を得るための、プロピオン酸菌をグラムあたり細胞数少なくとも１０9個、好ましくはグラムあたり細胞数１０10〜１０12個程度含む乾燥製剤の使用に関する。
【００３１】
ここで、このビフィド集団は、内在バクテリアから、もしくは、上記製剤に加えられる外来バクテリアから発生させることができる。
【００３２】
この組成物は、毎日吸収させるべきおよそ１００ｍｇ〜１ｇ、好ましくは２００ｍｇ〜５００ｍｇのバクテリアを含む投与分ごとに分けた形で与えられることが好ましい。
【００３３】
これらの投与分は直接摂取させても、液体に希釈して摂取してもよい。これらは、吸収しやすい形であればどのような形態にでも調整することができる。錠剤、顆粒状または非顆粒状粉末の包等。
【００３４】
二年間にわたり＋４℃で保存したプロピオン酸菌のこの濃縮乾燥製剤は、ネイピアの対数（Ｎａｐｉｅｒｉａｎ ｌｏｇａｒｉｔｈｍ）より低い濃度低下を示すことが確かめられている。
【００３５】
胃に対する耐性かその他の性質を備えたカプセルが、特に有用な投与形態であることは経験的に証明されている。
【００３６】
本発明の別の特徴によると、各投与分は少なくとも１０9個、好ましくは１０10から１０12個程度のバクテリアを含んでいる。
【００３７】
バクテリア１０9個という値のあたりでは効果はランダムであり、これはおそらく、胃の酸性度や胆汁酸塩により結腸に到達する前にバクテリアが殺されてしまうという事実による。
【００３８】
本発明によれば、各被験者に、補助食品により、消化管の全細菌相（およそ１０14ユニット）のおよそ１０００分の１に相当する量のプロピオン酸菌を毎日吸収させることが提案される。この量は他の種類のバクテリアについて従来提案されていた量よりも格段に多い。
【００３９】
本発明によるこのような投与は何の悪影響も生じないと共に、前述の利点に加えて：
− 腐敗菌に特有の悪臭ガスの放出の著しい減少；
− 大便の色と臭気の変化、
をもたらす。
【００４０】
これらの発見は明らかに、プロピオン酸菌とビフィドバクテリアとの「共生的」作用に光明を投じた種類のものであり、プロピオン酸菌がビフィドバクテリアの成長を促進する。
【００４１】
この結果は、プロピオン酸菌属の菌株によって、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の菌株がマウスの消化管内に形成される速度が改善されるかどうか、又は、消化管の様々な部分におけるその活動レベルを増進させることが可能であるかどうかを立証する目的で行われた研究により確認された。
【００４２】
初期の段階では、マウス、無菌状態すなわち消化細菌相（ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｆｌｏｒａ）をもたないマウスの消化管にプロピオン酸菌属を長期的に定着させることは不可能であることがこの研究によって示された。
【００４３】
むしろ、培養プロピオン酸菌属をこれらのマウスの飲み水に加えると、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の菌株が消化管にコロニーを形成する速度を促進できることが証明された。
【００４４】
したがって、この科学的研究は、プロピオン酸菌の作用とビフィドバクテリアの作用の間に真の相乗効果が存在するという証拠を提供するものである。
【００４５】
更に、これらの結果は、一方で健康な被験者によるインビボ（生体内）、他方ではインビトロ（試験管内）により行われた一連の試験により立証されている。
【００４６】
インビボ 試験 これらの試験の目的は、フランス共和国カーン所在のＣＨＵ（大学病院）の病院環境において、１９人の健康な男性ボランティア被験者のグループについて、腸内環境におけるプロピオン酸菌の菌株の生残性及び／またはコロニー形成、並びにビフィド相に対するその影響を研究することであった。
【００４７】
この研究は、ＩＮＲＡ（フランス農作物研究機関）により選択され、チーズ産業界で用いられる菌株バンク（貯蔵所）から入手した、すなわち完全に人体に無害である５×１０10個のプロピオン酸菌を、各ボランティアが二週間にわたり毎日摂取することから構成されていた。
【００４８】
投与されたプロピオン酸菌はおよそ５０％ずつの２つの菌株に分けられ、これらの菌株の１つはあまり自己分解性はなく、他方は、胃の中と胆汁酸塩の作用下にある小腸の入口で自己分解性になる。
【００４９】
糞便の細菌相（ｆａｅｃａｌ ｆｌｏｒａ）の研究が、細菌相の基本の状態を得るためにプロピオン酸菌の投与前に、また、外来バクテリアがボランティア被験者の消化管内にどのくらいの期間生存することができたかを評価するために投与期間中とそれ以降に、大便の試料に対して行われた。
【００５０】
この研究は、摂取されたプロピオン酸菌とビフィドバクテリアの計数を含んでいた。
【００５１】
これらの試験の結果により、大便中のプロピオン酸菌の集団は、被験者がプロピオン酸菌を摂取していた最初のサンプリングではかなり増殖したが、この効果は一時的でバクテリアの摂取を止めるとまもなく消滅することが立証された。
【００５２】
これらの結果により、プロピオン酸菌株の一部は人体の消化管内に生残可能であるが、長期的にコロニーを形成することは不可能であることが示された。
【００５３】
ビフィド集団に対するプロピオン酸菌の効果を評価するため、（ａ）プロピオン酸菌の摂取前；（ｂ）その摂取期間中；及びそれ以降に行われたサンプリング（１週間を隔てた２回のサンプリングｃ）及びｄ））に注目した。
【００５４】
ここで、サンプリング（ｂ）は、１週間を隔てて行われた２回のサンプリングの平均である。
【００５５】
ビフィドバクテリアの計数により、これら４つの期間の集団の平均値（ネイピアの対数による）を算出することができた。
【００５６】
従って、各々の平均値は（ａ）８．４０；（ｂ）８．９０；（ｃ）９．４３；及び（ｄ）８．８９であることが分かった。経時的進行について、対象集団に対するノンパラメトリック統計テスト（ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｔｅｓｔ）、ウィルコックス−マッチドペア−符号付きランク検定（Ｗｉｌｃｏｘ ｍａｔｃｈｅｄ−ｐａｉｒｅｄ ｓｉｇｎｅｄ−ｒａｎｋｓ ｔｅｓｔ）を用いて研究された。プロピオン酸菌の摂取期間中（サンプリングｂ）、ビフィド集団は、基礎の数値（サンプリングａ）（ｐ＝０．００９６）に比べて著しく増殖し、その摂取を止めた後の最初のチェック（サンプリングｃ）（ｐ＝０．０３１）では高い値を維持している。ビフィドバクテリアの投与期間中（サンプリングｂ）と摂取停止後の最初のチェック時（一週間後）（サンプリングｃ）（ｐ＝０．１９）とでは、ビフィドバクテリアの数に差異はない。ビフィドバクテリアの集団は第二回目のチェック（サンプリングｄ）（ｐ＝０．０４９）時には、停止後の最初のチェック時（サンプリングｃ）と比較して減少し、第二回目のチェック（サンプリングｄ）とその前のサンプリング（サンプリングｃ）の間で、プロピオン酸菌の投与前のレベル（サンプリングａ）（ｐ＝０．２５）に戻る。
【００５７】
これらの結果は、高投与量のプロピオン酸菌を摂取することがビフィド相の成長を促進することを示している。この効果は迅速で最初の週から観察され、そしてプロピオン酸菌の摂取を止めた後少なくとも１週間は持続する。
【００５８】
インビトロ 試験 
これらの試験の目的は、
・ 消化「ストレス」、すなわち、胃の酸性度並びに胆汁酸塩に対するプロピオン酸菌の耐性を研究すること、
・ プロピオン酸菌の培養基がビフィドバクテリアの成長にどのような効果を与えるかを研究すること、
・ 該当する場合には、この効果の原因となる作用物質を特定することである。
【００５９】
消化「ストレス」に対するプロピオン酸菌の耐性 摂取時点と腸内細菌、特にビフィドバクテリア、と接触する場所である結腸に達する時点との間に、プロピオン酸菌はその生存に不利な多数の「ストレス」にさらされる。その代表的なものは胃の酸性度と小腸内の胆汁酸塩との接触である。
【００６０】
プロピオン酸菌がこれらの「ストレス」にどの程度の耐性をもつかを評価するために、プロピオン酸菌属フロイデンライヒ菌に属する２つの株、即ち、それほど自己分解性でないＬＳ４１０株と自己分解性の高いＬＳ２５０１株を選択した。
【００６１】
人間の場合、食物の塊の到着後の胃のｐＨ値は２〜３の間であり、胃を空にするのに要する平均時間は９０分程度である。
【００６２】
胃の酸性度に対する前述の菌株の耐性を評価するために、前記菌株を異なるｐＨ度（２、３、及び４）において９０分間３７℃でテストした。
【００６３】
下記のような観察がなされた：
ｐＨ４では、２つの株の生存度が落ちることは全くない。
【００６４】
ｐＨ３では、ＬＳ４１０株は損なわれないが、ＬＳ２５０１株は生存率が若干下がる。
【００６５】
ｐＨ２では、２つの株のほとんど全体が９０分の培養後に死滅している。
【００６６】
３７℃の胆汁酸塩に対する２つの菌株の耐性を、胆汁酸濃度１、２、及び小腸の入口における濃度にほぼ等しい、５ｇ／リットルを選択して評価した。
【００６７】
これらの研究により、最低濃度（１ｇ／リットル）ではＬＳ４１０株は、５時間半の培養期間の後でも、完全な耐性を示すことが判明した。一方、ＬＳ２５０１株はより低い耐性を示した。
【００６８】
２〜５ｇ／リットルの胆汁酸の存在下では、2つの株の生存度は急激に下がり、ＬＳ２５０１株の方がＬＳ４１０株よりも影響を受けやすい。
【００６９】
つまり、これらの試験は、研究対象の２つの菌株は、おだやかな消化「ストレス」に直面した場合には強い耐性を示すということを明らかにした。しかしながら、バクテリアの大多数は、極度な「ストレス」の状況には耐えられず、自己分解性が高い菌株（ＬＳ２５０１）ほど影響を受けやすい。
【００７０】
人間の腸管内細菌相の生物学的平衡に対する顕著な効果を得るためには、結腸の入口で菌株の十分な生残性を確保するために多量のバクテリアを摂取する必要性があることが、これらの結果により実証されている。
【００７１】
ビフィドバクテリアの成長に対するプロピオン酸菌培養の影響
これらの研究を行なうために、ビフィドバクテリアの２つの菌株、すなわちビフィドバクテリウム属ロンガム菌及びビフィドバクテリウム属ビフィズス菌、を
・ ビフィドバクテリアの成長に適した培養ブロスと、
・ プロピオン酸菌（ＬＳ４１０株又はＬＳ２５０１株）の培養、特に自己分解性ＬＳ２５０１株に関しては、若齢（４８時間）であって比較的未分解のものか、もしくは１１日過して高度分解したもの、
とを半々の割合で含む媒体の中に植え付けた。
【００７２】
その結果、ＬＳ４１０の若齢培養の存在と、やや程度は低いが、ＬＳ２５０１の存在が、対数増殖期の最後におけるビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の総固体数がより高いレベルに達するという結果を導くことが観察された。生存バクテリアの数は、ＬＳ４１０の存在下では３〜４倍多く、ＬＳ２５０１の存在下では２〜３倍多い。
【００７３】
ビフィドバクテリウム属ロンガム菌に関しては、ＬＳ４１０の培養により、成長の最後におけるビフィドバクテリウム属ロンガム菌の集団固体数は２倍になる。
【００７４】
加齢した培養の場合には、対数増殖期中のビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の成長（集団固体数が２〜３倍に増加）に対して、２つの菌株による著しく有利な効果が観察された。
【００７５】
結論として、この研究においてテストした２つのプロピオン酸菌は、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の成長に影響をもつ。これらの効果は培養の年齢により異なる：若齢の培養は成長の最後におけるビフィドの生存度の増加をもたらし、その結果、最終的な集団固体数は２〜４倍に増加する（ＬＳ４１０において、より顕著な効果がある）。一方、加齢した培養は、発生に要する時間を減少させることにより成長の開始時にのみ作用を発揮するが、最終的な集団固体数を変えることはない。
【００７６】
ビフィド成長作用の原因となる物質の特定
− プロピオン酸菌培養浮遊物（ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｗｉｍ−ｕｐｓ）の影響
− プロピオン酸の役割
バクテリアの細胞外部分を構成する培養浮遊物だけを用いた場合と、プロピオン酸を補給した比較媒体を用いた場合と両方について、上述と同様にして実験を行なった。
【００７７】
その結果、プロピオン酸菌培養浮遊物はビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の成長に対して対照と比較して、顕著な促進効果を有する（培養中で９時間経過後、生存バクテリアは３〜４倍）；この効果はＬＳ２５０１株に関しては成長の最後の時点でより顕著である。
【００７８】
このような促進効果は部分的にはプロピオン塩（ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）の影響によるものであることが確認された。ただし、プロピオン塩は、特にＬＳ２５０１株の場合には、このような効果の単独の原因ではないようである。
【００７９】
プロピオン酸も同様にビフィドバクテリウム属ロンガム菌の代謝活動に対して促進効果を有する。
【００８０】
− 細胞内媒体の影響：
プロピオン酸菌の２つの菌株の細胞内媒体の存在は、２つのビフィドの光学濃度と細胞乾燥重量をかなり増加させることが観察された。しかしながら、このような効果は、成長時の生存度及び代謝活動の両方が変化しないことから、ビフィドバクテリウム属ビフィズス菌やビフィドバクテリウム属ロンガム菌の成長の増進には関連していない。
【００８１】
− 隔壁（ｉｎｓｕｌａｔｅｄ ｗａｌｌｓ）の影響：
プロピオン酸菌の隔壁は、加水分解しているかどうかにかかわらず、ビフィドバクテリウム属ロンガム菌およびビフィドバクテリウム属ビフィズス菌の成長に何の影響も与えないことが観察された。
【００８２】
結論として、ビフィドの成長に対するプロピオン酸菌の促進効果は、その細胞内容物や隔壁のどちらにも関連していないようである。むしろ、原因化合物は主に細胞内媒体に集中している。プロピオン塩はこれらの化合物の１つである。