(57)【要約】【課題】βアミロイド斑及び神経原線維変化の標識方法の提供。【解決手段】式（Ｉ）の化合物を哺乳動物組織と接触させることを含んで成る、βアミロイド斑及び神経原線維変化をインビボ及びインビトロで標識するための方法。【選択図】図１
2007191487.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
βアミロイド斑及び神経原線維変化から成る群から選択される構造体をインビボ又はインビトロのいずれかで標識するための方法であって、脳組織を下記の式（Ｉ）の化合物と接触させることを含んで成る前記方法：
【化１】
2007191487.tif 000017
前記式中、
Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化２】
2007191487.tif 000018
から成る群から選択され、
ここでＲ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；
Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そして
Ｒ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳであり；そして
Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキル−Ｒ5 、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項２】
前記の式（Ｉ）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
βアミロイド斑及び神経原線維変化から成る群から選択される構造体をインビボ又はインビトロのいずれかで標識するための方法であって、脳組織を下記の式（II）の化合物と接触させることを含んで成る前記方法：
【化３】
2007191487.tif 000019
前記式中、
Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され、そして
Ｒ9 はアルキル、アリール又は置換アリールであり；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項４】
前記の式（II）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記の式（Ｉ）の化合物が、場合により放射性標識物を含有する２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレンが18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記の式（Ｉ）の化合物が、場合により放射性標識物を含有する２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−エチル）−メチルアミノ）−ナフタレンである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記の式（Ｉ）の化合物が、２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレンである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
蛍光顕微鏡によって前記脳組織を観察することによって、前記構造体が標識されているかどうかを決定することを更に含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物が放射性標識されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記の放射性標識された化合物の身体内の分布を検出及び描写することができる方法によって前記脳組織を観察することによって、前記構造体が標識されているかどうかを決定することを更に含んで成る、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
陽電子射出断層撮影によって前記脳組織を観察する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
患者のアルツハイマー病を診断するための方法であって、前記患者の脳組織に下記の式（Ｉ）の化合物を注射すること；及びβアミロイド斑及び神経原線維変化から成る群から選択される構造体がその式（Ｉ）の化合物によって標識されたかどうかを決定すること、を含んで成る前記方法：
【化４】
2007191487.tif 000020
前記式中、
Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化５】
2007191487.tif 000021
から成る群から選択され、
ここでＲ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；
Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そして
Ｒ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳであり；そして
Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項１４】
前記の式（Ｉ）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記の式（Ｉ）の化合物が下記の式（II）の化合物である、請求項１３に記載の方法：
【化６】
2007191487.tif 000022
前記式中、
Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され、そして
Ｒ9 はアルキル、アリール又は置換アリールである。
【請求項１６】
前記の式（II）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記の式（Ｉ）の化合物が２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記の決定過程が、前記の放射性標識された化合物の身体内の分布を検出及び描写することができる方法によって前記脳組織を観察することを含んで成る、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記脳組織を、陽電子射出断層撮影（ＰＥＴ）によって観察する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記脳組織を、単一光量子射出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）によって観察する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
βアミロイド斑をインビボ又はインビトロのいずれかで標識するための方法であって、脳組織を下記の式（Ｉ）の化合物と接触させることを含んで成る前記方法：
【化７】
2007191487.tif 000023
前記式中、
Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化８】
2007191487.tif 000024
から成る群から選択され、
ここでＲ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；
Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そして
Ｒ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳであり；そして
Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項２２】
下記の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物：
【化９】
2007191487.tif 000025
前記式中、
Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化１０】
2007191487.tif 000026
から成る群から選択され、
ここでＲ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；
Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そして
Ｒ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳであり；そして
Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、そしてＲ3 はアルキレニル−Ｒ10であり、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項２３】
前記の式（Ｉ）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
下記の式（II）の化合物、あるいはそれの医薬上容認される塩又は溶媒化合物を含有する、請求項２２に記載の組成物：
【化１１】
2007191487.tif 000027
前記式中、
Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、そしてＲ10はアルキレニル−Ｒ10であり、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され、そして
Ｒ9 はアルキル基であり；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が場合により放射性標識物によって置換される。
【請求項２５】
前記の式（II）の化合物が18Ｆ又は 123Ｉによって放射性標識される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記の式（Ｉ）の化合物が２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレンである、請求項２２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
アメリカ合衆国及びその他の先進国では、最も老齢な集団である８０才を超えた人々の約２０〜４０％がアルツハイマー病にかかっている。アルツハイマー病患者の脳における共通の特徴は、豊富な神経細胞内神経原線維変化（neurofibrillary tangles)（ＮＦＴｓ）及び細胞外の富アミロイドなβアミロイド斑である。ＮＦＴは、細胞骨格の病症状であり、過剰リン酸化タウタンパク質が、対らせん形線維（paired helical filaments）と呼ばれる周期的に制限されたアミロイド細線維内に集積した凝集体から主に成る。アミロイド斑の主成分はペプチドであり、これは、３９〜４３アミノ酸から成る小さなβアミロイドペプチドであり、より大きなアミロイド前駆体タンパク質の切断により生じる。しかし、ほぼ独占的にβアミロイドペプチドから成るび慢性老人斑を除いて、アミロイド斑は、多数の関連した細胞内産物を含む複雑病変である。４２アミノ酸型のこのペプチドの生産を増加させる変異は、常染色体優性家族性型アルツハイマー病と遺伝的に連鎖していた。βアミロイドの沈着は、臨床症状が現れるかなり前から、当疾病形成の極く初期に起きる。これらの変異は、明らかに病原性であり、しかもトランスジェニックマウスにおいてアルツハイマー病を誘発するので、当疾病においてβアミロイドが原因的な役割を果たすと広く考えられている。アミロイド沈着が原因性であろうとなかろうと、これは、確実に診断上重要である。更にアミロイド斑は当疾病の初期に出現するので、当沈着を画像化することができれば、当疾病の初期診断及び予防、並びに治療効果の監視方法のために有用なマーカーとなるだろう。
【背景技術】
【０００２】
現在、アルツハイマー病は、死後の脳から切片を切り出し、そして新皮質のアミロイド沈着の密度を定量することによって確定診断されている。残念ながら、アミロイド沈着及び／又はＮＦＴを検出する現在の方法は、死後分析又は生検分析である。例えば、インビトロでの脳切片におけるアミロイドのチオフラビン蛍光標識が、脳を評価するために現在広く用いられている方法である。潜在的な別のアミロイドプローブとしてＣｈｒｙｓａｍｉｎｅ−Ｇというコンゴレッド誘導体も開発されている。コンゴレッドは荷電分子であり、従って脳血液関門を通過して拡散するために十分な疎水性がなく、従ってインビボ標識剤としては有用ではない。Klunk et al, Neurobiology of Aging, 16 : 541-548 (1995）及びWO96／34853 を参照のこと。Ｃｈｒｙｓａｍｉｎｅ−Ｇは、コンゴレッドよりも良好に脳血液関門を通過するが、アルツハイマー病の脳のアミロイド斑を標識する能力は明かに弱い。例えばH. Han, C-G Cho and P.T. Lansbury, Jr J. Am. Chem. Soc. 118, 4506 (1996) ; N.A. Dezutter et al, J. Label. Compd. Radiopharm. 42, 309 (1999）を参照のこと。同様に、インビボでのβアミロイドの画像化のためのプローブとしてモノクローナル抗体を用いる初期の試みは、脳血液関門の通過性が制限されることにより妨害された。R.E. Majocha et al, J. Nucl. Med. 33, 2184 (1992）参照。極く最近、脳血液関門の透過性を有する１２５Ｉ−Ａβ１−４０のモノビオチニル化結合体が提唱されているが（Y. Saito et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 22, 2288 (1991))、βアミロイド及び／又はＮＦＴをインビボで標識する能力は未だに示されていない。現在利用できるプローブによる当沈着のインビボ定量は未だに実現されていない。従ってアルツハイマー病の初期診断のための有用なマーカーが求められている。
【０００３】
アルツハイマー病患者の脳機能を評価する場合、陽電子射出断層撮影（ＰＥＴ）による領域的大脳グルコース代謝速度（ｒＣＭＲＧｌ）のインビボ非侵襲性測定は、重要な手段である。２−［Ｆ−１８］フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＦＤＧ）を用いた多くの研究から、側頭頭頂及び前頭連合野における代謝低下という特徴的代謝パターンが示めされた。これらの研究のいくつかでは、ｒＧＭＲＧｌと死後の領域的神経細胞病症状とが比較されている。これらの結果、そしてアルツハイマー病の病因カスケードが不明確であることから、これらの患者におけるアミロイド及び神経原線維沈着をインビボで非侵襲的に評価する重要性が強調される。
【０００４】
発明の要旨
本発明は、構造体、例えばβアミロイド斑及び神経原線維変化をインビボ及びインビトロで標識するための方法であって、式（Ｉ）：
【化１】
2007191487.tif 000003
の化合物を哺乳動物組織に接触させることを含んで成る前記方法を提供する。
【０００５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化２】
2007191487.tif 000004
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そしてＲ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳである。
【０００６】
式（Ｉ）において、Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される。あるいは、Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換される。式（Ｉ）の化合物において、１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が、場合により放射性標識物によって置換され得る。
【０００７】
脳組織においてβアミロイド斑及び神経原線維変化をインビトロで検出するために、その斑を標識し、そして次にその脳組織を蛍光顕微鏡によって観察する。インビボで検出するために、脳組織内のβアミロイド斑及び神経原線維を標識し、好ましくは、放射性標識した式（Ｉ）の化合物を含有する溶液を注射することにより標識する。次に、標識されたβアミロイド斑及び神経原線維の位置を、身体内の前記の放射性標識化合物の分布を検出且つ描写することができる任意の方法によって観察する。
【０００８】
本発明の方法に従って、アルツハイマー病（ＡＤ）の脳組織のクライオスタット切片及びパラフィン切片において、アミロイド沈着が、チオフラビンＳと同程度の感受性レベルで標識される。しかし本発明の使用は、チオフラビンＳの使用に比べていくつかの利点を有する。すなわち、前処理が必要でない。更に、チオフラビンＳの場合と異なり、本方法は、最小限の洗浄で機能し、そしてホルマリン又はパラホルムアルデヒド固定、あるいは組織の分別を必要としない。更に、保存溶液を６か月間冷凍庫に保存することができ、チオフラビンＳ標識の場合には必要される新鮮な保存液の作成を必要とせず、それでもなお１／１００〜１／１０００希釈しても、容認される結果を得ることができる。
【０００９】
全身性に注射された本発明の組成物は、容易に脳血液関門を通過して、アミロイド沈着及び神経原線維変化を標識する。このことは、本発明の組成物がインビボでの画像化プローブとして機能し得ることを示す。本発明の方法により、生存患者の脳においてβアミロイド斑及び神経原線維変化のインビボ標識及び検出が達成される。本発明の方法により、アルツハイマー病の検出が可能となるだけでなく、当疾病の治療を受けている患者の進行度を医師が監視する方法もまた提供される。従って医師が、特定の治療方法が成功していて価値のあるものであるかどうかをより良く決定することができる。
【００１０】
更に別の態様として、本発明は、式（Ｉ）：
【化３】
2007191487.tif 000005
の化合物を含有する組成物に関する。
【００１１】
ただし前記式中、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化４】
2007191487.tif 000006
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そしてＲ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳであり；Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ5 から成る群から選択され、そしてＲ3 はアルキレニル−Ｒ5 であり、ここでＲ5 は−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択されるか、あるいはＲ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ5 、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換される。１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が、場合により放射性標識物によって置換され得る。
【００１２】
本発明は、より好ましくは、式（II）：
【化５】
2007191487.tif 000007
の化合物を含有する組成物に、並びにそれの医薬上容認される塩及び溶媒化合物に関する。
【００１３】
ただし前記式中、Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、そしてＲ3 はアルキレニル−Ｒ10であり、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択されるか、あるいはＲ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換される。そしてＲ9 は、アルキル、アリール又は置換アリール基である。１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が、場合により放射性標識物によって置換され得る。
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明は、βアミロイド斑及び神経原線維変化などの構造体をインビボ及びインビトロで標識するための方法に関する。本方法は全て、
式（Ｉ）：
【化６】
2007191487.tif 000008
の化合物を哺乳動物組織に接触させることを含んで成る。
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化７】
2007191487.tif 000009
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基である。Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基である。Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基である。Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基である。Ｒ8 は、Ｎ，Ｏ又はＳである。
【００１６】
式（Ｉ）において、Ｒ2 及びＲ3 は、互いに独立に、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される。あるいは、Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換される。式（Ｉ）の化合物において、１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が、場合により放射性標識物によって置換され得る。
【００１７】
好ましい態様では、本発明の方法は、式（II）：
【化８】
2007191487.tif 000010
の化合物を哺乳動物組織に接触させることを含んで成る。ただし式（II）において、Ｒ2 及びＲ3 は前記定義通りであり、そしてＲ9 はアルキル、アリール又は置換アリール基である。
【００１８】
本文中の用語「アルキル」とは、飽和炭素原子及び水素原子から成る直鎖状又は分鎖状の一価の基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル及びヘキシルを指す。用語「アルキレニル」とは、アルキル基の二価類似体、すなわちメチレニル（−ＣＨ2 −）、エチレニル（−ＣＨ2 ＣＨ2 ）などを指す。用語「アリール」とは単環又は多環式の置換又は未置換芳香族環を指す。
【００１９】
本文中の用語「低級アルキル」とは、１〜４個の飽和炭素原子及び水素原子を有する直鎖状又は分鎖状の一価の基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びｔ−ブチルを指す。
【００２０】
本文中の用語「複素環」とは、各々が飽和又は不飽和である３，４，５，６，７，８，９，１０，１１又は１２個の環原子から成り、その中に、窒素、酸素及びイオウから選択される１，２，３，４又は５個のヘテロ原子を含んでいる非芳香族性の単環又は二環式の基を指す。これの非限定的な例には、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン及びそれらの誘導体がある。好ましくは、これらの複素環は、アルキル基又は置換アルキル基、例えば、前記のＲ4 において定義した通りの置換基を有するアルキル基によって置換される。
【００２１】
式（Ｉ）及び式（II）の化合物において、好ましくはＲ2 及びＲ3 は互いに独立にアルキルであり、より好ましくは低級アルキルである。式（II）の化合物において、好ましくはＲ9 は低級アルキル、より好ましくはメチル又はエチルであり、あるいはアリール又は置換アリールである。本発明において使用するために特に好ましい化合物は、２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレン（ＤＤＮＰ）及び２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（エチル）（メチル）（アミノ）−ナフタレンであり、両者は場合により放射性標識され得る。別の好ましい化合物、特にインビボでの使用に適する化合物は、２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン（［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ）である。
【００２２】
本発明はまた、構造体、例えばβアミロイド斑及び神経原線維をインビトロ及びインビボで検出するための方法に関する。用語「構造体」とは、疾病症状の一部分として発生し得る、ペプチド及びその他の細胞性物質を含有する生物学的物質の凝集体を指す。用語「ペプチド」はタンパク質を含む。
【００２３】
前記化合物は、約４７０〜６１０nmの範囲に蛍光活性を有する。一例として、本発明により、脳組織のβアミロイド及び神経原線維変化を標識する。従ってインビトロでのアルツハイマー病の検出において、本化合物を脳組織に接触させ、そしてその脳組織を蛍光顕微鏡によって観察する。
【００２４】
インビボでの検出のために、好ましくは本化合物を放射性標識する。好ましい放射性標識物は、約２時間の半減期を有する18Ｆであり、これは陽電子射出断層撮影（ＰＥＴ）に用いられる。別の放射性標識物は放射性ヨウ素であり、例えば 123Ｉを単一光量子射出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）に用いる。あるいは、半減期が比較的短いためにあまり望ましくはないが、その他の放射性標識物、例えば11Ｃ，13Ｎ及び15Ｏも用いられる。本化合物中の任意の原子を適当な放射性標識物によって置換し得る。当業者に周知の方法によって放射性標識することができる。例えば、Ｋ2 ＣＯ3 （０．７５mg）及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２．２．２TM（１９mg）中の乾燥［Ｆ−１８］フッ化物イオン［18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ］を、式（Ｉ）又は式（II）の化合物の溶液（４mg／１mL  ＣＨ3 ＣＮ）に加える。この混合液を油浴中で８５℃で約１０〜４０分間加熱する。冷却し、そして水で希釈した後、放射性標識された産物を、調製的ＨＰＬＣによって精製することができる。Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２．２．２TMはクラウンエーテルであり、Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin）から入手できる。
【００２５】
次に、前記の放射性標識された化合物を含有する溶液を患者に注射する。本文中の用語「患者」とは任意の哺乳動物、例えば人間、ラット、マウス、イヌ及びネコを指す。ＭＲＩスキャンを、例えばＴｅｌａマグネットを用いて行い、次にアミロイド−ＰＥＴ及びＦＤＧ（フルオロデオキシグルコース）−ＰＥＴ上にＭＲＩスキャン像を重ね合わせることによって神経解剖学的領域を手動で決定することができる。ＰＥＴの現在の解像度は２〜３分であり、ＰＥＴにより脳内の放射性標識化合物の沈着を動力学的に決定し、そして異常な部位を検出することが可能となる。
【００２６】
前記方法により、βアミロイド斑及び神経原線維変化の集積を特徴とする疾病、例えばアルツハイマー病及び脳の悪化を伴うその他の疾病を検出することができる。
【００２７】
実施例
実施例１
下記の本発明の組成物を調製した。ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭ３６０ＷＢ又はＤＰＸ３００分光計によって得た。 1Ｈ化学シフトを、内部標準としてのＴＭＳから下流の領域で ppm単位で報告する。19Ｆ化学シフトを、外部のフルオロトリクロロメタンと比較して報告する。特に明記しない場合、溶剤として重水素クロロホルムを用いた。融点を電熱式融点測定機によって測定し、そして補正していない。Galbraith Laboratories, Inc., Knoxville, TN 又はMetka Kastelic氏、Ljubljana 大学、化学及び化学技術学部が元素分析を行った。Chromatotron (Harrison Research, 840 Moana Court, Pala Alto, CA 94306)によってラジアルクロマトグラフィーを行った。そのローターを、Harrison Research の説明通りにＥ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル（カタログ番号７７４９−３）を用いて調製した。Ａｌｌｔｅｃｈ  Ｅｃｏｎｏｓｉｌ  Ｃ−１８の５μｍ、４．６×２５０mmカラムにより、溶剤として４０：６０：２の水：アセトニトリル：トリエチルアミンの混合液を用いてＨＰＬＣを行った。２５４nmでＵＶ検出を行った。溶剤及び試薬をＦｉｓｈｅｒ，Ａｌｄｒｉｃｈ又はＦｌｕｋａから入手し、そして特に明記しない限りそのまま用いた。
【００２８】
実施例１（ａ）：２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレン（ＤＤＮＰ）の調製
【化９】
2007191487.tif 000011
【００２９】
新しく蒸留したヘキサメチルリン酸トリアミド２９ml中のジメチルアミン５．２６ｇ（１１７mmol）の溶液に、乾燥トルエン３１ml及び小片のＬｉ  ７８０mg（１１２mmol）を加えた。この混合液をアルゴン雰囲気下で室温で１．５時間撹拌した。Arsenijevic et al., Org. Synth. Coll. 1988, 6 : 34-36 の記載通りに２−アセチル−６−メトキシナフタレンを調製した。２−アセチル−６−メトキシナフタレン（５．５７ｇ、２７．８mmol）を一度に加えて、そして２０時間撹拌を続けた。この混合液を氷水浴中で冷却し、そして冷却した水／酢酸エチル混合液（各３００mL）に注いだ。完全に混合した後、層を分離させ、そしてその水層を酢酸エチル２２５mlで２回抽出した。それらの有機抽出物を混合し、乾燥し、そして蒸発させ、そして黄色固体を得た。エタノールによる再結晶化により３．６７ｇ（６４％）の２−アセチル−６−（ジメチルアミノ）ナフタレン（ＡＤＭＡＮ）を黄色固体として得た。融点は１５３．５−１５５℃であった。 1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，ＴＭＳ）δ２．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3 ），３．１５（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3 ）2 ），６．８７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５），７．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−７），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−８），７．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），８．３２（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−１），Ｊ1,3 ＝２．３Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．７Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．４Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．３Ｈｚ．ＭＳ（Ｍ+ ）２１３：実測：２１３．Ｃ14Ｈ15ＮＯ計算：Ｃ，７８．８４：Ｈ，７．０９；Ｎ，６．５７．実測Ｃ，７８．９６；Ｈ，７．１０；Ｎ，６．４５。
【００３０】
マロニトリル（４３６mg、６．６mmol）及びＡＤＭＡＮ（１．２７８ｇ、６．６mmol）の混合液を、ピリジン２０ml中で１１０℃で１９時間加熱した。冷却後、残存した赤色固体を塩化メチレン１００ml中に溶解し、新しいシリカゲル（２３０−４００メッシュ）１０ｇ上に吸着させ、そしてトルエンでクロマトグラフィーした。適当な分画を混合し、蒸発させ、そして１．１２ｇ（７２％）の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレン（ＤＤＮＰ）を得た。ベンゼン−ヘキサンによる再結晶化により赤色針状結晶を得た。融点は１５４．５−１５５℃であった。 1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ，ＴＭＳ）δ２．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．１１（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3 ）2 ），６．８５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５），７．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−７），７．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），７．６６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−８），８．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１）．Ｊ1,3 ＝２．０４Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝９．１３Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．５Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．１１Ｈｚ．ＩＲ（ＣＨＣｌ3 ）２２５０cm-1（ＣＮ  ｓｔｒｅｔｃｈｉｎｇ）．ＭＳ（Ｍ+ ）２６１：実測：２６２．Ｃ17Ｈ15Ｎ3 計算：Ｃ，７８．１３：Ｈ，５．７９；Ｎ，１８．０８．実測Ｃ，７８．１７；Ｈ，５．６８；Ｎ，１７．９１。
【００３１】
実施例１（ｂ）：２−（１−｛６［エチル−（２−｛８−［４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソブチル］−４−オキソ−１−フェニル−１，３，８−トリアザスピロ［４．５］デク−３−イル｝エチル）−アミノ］−２−ナフチル｝エチリデン）マロノニトリルの調製
【化１０】
2007191487.tif 000012
【００３２】
還流冷却器及び滴下漏斗を備えた３Ｌの二首丸底フラスコ中で、塩酸（ｄ＝１．１６）２Ｌを撹拌し、且つ加熱沸騰させた。最小量のジクロロメタン中の６．０６ｇ（３０．３mmol）の１−（６−メトキシ−２−ナフチル）−１−エタノン（Arsenijevic et al., Org. Synth. Coll. 6 : 34 (1988）の記載通りに調製した）の溶液を加え、この混合液を撹拌し、且つ２時間還流温度で加熱した。油性残査を取り除くために、この熱い溶液をミネラルウールプラグに通して濾過した。冷却後に分離した固体をガラスフリット上に濾過し、そして酢酸エチル１３０mL中に溶かした。この溶液を塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、そして５ｇ（８９％）の１−（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−１−エタノンを得た。
【００３３】
１−（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）エタノン（７４４mg、３．９２mmol）、硫酸水素ナトリウム（IV）（１．６６ｇ、１６mmol）、２−エチルアミノエタノール（２mL）及び水（５mL）の混合液を鋼製ボンベ中で１３０−１４０℃で３日間加熱した。冷却後、この混合液を水と酢酸エチルとに分配させ、その有機層を塩水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。その残査をアセトン中に溶解し、ラジアルクロマトグラフィーのために４mmの乾燥シリカ板上に添加した。このシリカ板を、石油エーテルと酢酸エチルとの１：１混合液によって溶離させた。適当な分画を集めて、蒸発させ、そして１２５mg（１２％）の１−｛６−［エチル−（２−ヒドロキシルエチル）−アミノ］−２−ナフチル｝エタノンを得た。
【００３４】
ピリジン（３．５mL）中の１−｛６−［エチル−（２−ヒドロキシルエチル）−アミノ］−２−ナフチル｝エタノン（１２５mg、０．４８６mmol）の溶液を−１５℃に冷却し、そしてアルゴン雰囲気下で撹拌しながらｐ−トルエンスルホン酸無水物（２５２mg、０．８１mmol）を加えた。この反応混合液をゆっくり室温まで暖め、そして２４時間撹拌を続けた。ＴＬＣ（シリカ、１０％酢酸エチル／石油エーテル）分析により、出発材料が依然として存在することが分ったので、更にｐ−トルエンスルホン酸無水物（２５２mg、０．８１mmol）を加え、そして更に２４時間撹拌を続けた。次にこの混合液を氷水浴中で冷却し、そして塩水とエーテルとに分配させた。その有機層を乾燥し、蒸発させ、そして油性残査を得た。本産物６−アセチル−２−（エチル−２−［（４−メチルフェニル）−スルホニルオキシ］−エチルアミノ）−ナフタレンを、ラジアルクロマトグラフィー（１mmシリカ、ジクロロメタン）により収率３０％で単離した。ＨＲＭＳ，Ｃ23Ｈ25ＮＯ4 Ｓ計算：４１１．１５０４．実測：４１１．１５１４． 1Ｈ  ＮＭＲ  δ１．２５（ｔ，３Ｈ，ＣＨ2 ＣＨ3 ），２．３３（ｓ，３Ｈ，Ｐｈ−ＣＨ3 ），２．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3 ），３．４９（ｑ，２Ｈ，ＣＨ2 ＣＨ３），３．７５（ｔ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），４．２５（ｔ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），６．９７（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．０１（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．１８及び７．２０（ｄ，２Ｈ，３’−Ｈ，５’−Ｈ），７．５６（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．６９及び７．７２（ｄ，２Ｈ，２’−Ｈ，６’−Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９３（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．２９（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝１．６Ｈｚ，Ｊ2´,6＝Ｊ3´,5＝８．５Ｈｚ，Ｊ7,5 ＝２．５Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．２Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．７Ｈｚ，Ｊ(CH2CH3)＝７．１Ｈｚ，Ｊ(NCH2CH2O)＝６．２Ｈｚ。
【００３５】
水（２mL）中の水酸化ナトリウム（１ｇ）及び硫酸水素テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（VI）（５０mg、０．１５mmol）の溶液に、スピペロンケタール（８−３［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロピル−１−フェニル−１，３，８−トリアザスピロ［４．５］デカン−４−オン（U.S. Patent No. 3,839,342, Chem Abstr. 82 : 43416 、及びKiesewetter et al., Appl. Radiat, lsot. 37 : 1181 (1986)の記載通りに調製し得る）（１５mg、０．０３４mmol）を加え、そして激しく撹拌した。１０分後に、トルエン（３mL）中の６−アセチル−２−（エチル−２−［（４−メチルフェニル）−スルホニルオキシ−エチルアミノ）−ナフタレン（１２mg、０．０３mmol）を加え、この反応混合液を撹拌し、且つ９０℃で１時間加熱した。冷却後、この反応混合液を水とジクロロメタンとに分配し、その有機層を塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させ、そして油性残査を得た。ラジアルクロマトグラフィー（１mmシリカ、２％メタノール／ジクロロメタン）により、収量５mg（２５％）の１−［６−（エチル−２−［（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−１−エン−１−イル）−オキシ］−エチルアミノ）−２−ナフチル］１−エタノン（化合物Ａ）及び１１mg（５６％）の１−［６−（エチル−［２−（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−エチル］アミノ−２−ナフチル）−１−エタノン（化合物Ｂ）を得た。
【００３６】
化合物Ａ−ＨＲＭＳ，Ｃ41Ｈ47ＦＮ4 Ｏ4 計算：６７８．３５８１．実測：６７８．３６０５． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．４５−２．２４（ｍ，１１Ｈ、スピペロンＣＨ2 ，ＣＨ2 ＣＨ3 ），２．３５−２．８４（ｍ，６Ｈ、スピペロン），２．６５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．５９（ｑ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3 ），２．３５−２．８４（Ｍ，６Ｈ、スピペロン），２．６５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．５９（ｑ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3 ），３．７６ ｉｎ ４．０５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．８５（ｔ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），４．５２（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｎ），４．９９（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．７６−６．８３９ｍ，３Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），６．９３（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），６．９５−７．０４（Ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．１９（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．２１−７．２６（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．３９−７．４５（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．６１（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９３（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３０（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝１．５Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．４Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝９．５Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．２Ｈｚ，Ｊ(CH2CH3)＝７．１Ｈｚ，Ｊ(NCH2CH2O)＝６．３Ｈｚ。
化合物Ｂ−ＨＲＭＳ，Ｃ41Ｈ47ＦＮ4 Ｏ4 計算：６７８．３５８１．実測：６７８．３６０３． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．２０−１．９４（ｍ，１７Ｈ、スピペロンＣＨ2 ，ＣＨ2 ＣＨ3 ），２．６６（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3 ），３．５６（ｑ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3 ），３．６６及び４．０２（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．７１−３．８１（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｎ），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．８２−６．９０（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），６．９４（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），６．９８−７．０４（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−７），７．２１−７．２６（ｍ，３Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．３９−７．４５（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．６０（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９３（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．２９（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝１．６Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝９．８Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．４Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝１０．４Ｈｚ，Ｊ(CH2CH3)＝７．１Ｈｚ。
【００３７】
ピリジン（３mL）中の１−［６−（エチル−［２−（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−エチル］アミノ−２−ナフチル）−１−エタノン（１３mg、０．０１８mmol）及びマロノニトリル（６mg、０．０９mmol）を、アルゴン雰囲気下で８５℃で２４時間加熱した。室温真空下でピリジンを取り除いた後、その残査を塩水とジクロロメタンとに分配し、その有機層を乾燥し、そして蒸発させた。ラジアルクロマトグラフィー（１mmシリカ、２．５％メタノール／ジクロロメタン）により本産物２−［１−（６−エチル−［２−（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアゾアスピロ［４．５］デク−２−イル）−エチル］−アミノ−２−ナフチル）−エチリデン］−マロノニトリル（１３．５mg、９７％）を単離した。
ＨＲＭＳ，Ｃ44Ｈ48ＦＮ6 Ｏ3 （Ｍ＋Ｈ）計算：７２７．３７７１９．実測：７２７．３７７２． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．２５−１．９３（ｍ，１７Ｈ、スピペロンＣＨ2 ，ＣＨ2 ＣＨ3 ），２．７０（ｓ，３Ｈ，Ｃ＝Ｃ−ＣＨ3 ），３．５７（ｑ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3 ），３．６４及び４．０３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．７１−３．７８（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｎ），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．８３−６．８８（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），６．９４（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），６．９６−７．０４（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−７），７．２１−７．２５（ｍ，３Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．３９−７．４５（ｍ，２Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），７．５６（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７６（ｄｄ，１Ｈ，９−Ｈ），８．００（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝１．９Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．８Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．４Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．３Ｈｚ，Ｊ(CH2CH3)＝７．１Ｈｚ。
【００３８】
メタノール（１mL）中の２−［１−（６−エチル−［２−（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−エチル］−アミノ−２−ナフチル）−エチリデン］−マロノニトリル（１３．５mg、０．０１８６mmol）を濃塩酸一滴と共に室温で３時間撹拌することによって、そのケタール保護基を取り除いた。この反応混合液をジクロロメタンで希釈し、そして重炭酸ナトリウム飽和溶液で洗浄した。真空下で蒸発させた後、その残査をラジアルクロマトグラフィー（１mmシリカ、２％メタノール／ジクロロメタン）により精製して、１０mg（７９％）の２−（１−６［エチル−（２−８−［４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソブチル］−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イルエチル）−アミノ］−２−ナフチルエチリデン）−マロニトリルを得た。ＦＡＢ  ＭＳ，Ｃ42Ｈ44ＦＮ6 Ｏ2 （Ｍ＋Ｈ）計算：６８３．３５．実測６８３． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．２１−３．０２（ｍ，１７Ｈ、スピペロンＣＨ2 ，ＣＨ3 ），２．７１（ｓ，３Ｈ，Ｃ＝Ｃ−ＣＨ3 ），３．５６（ｑ，２Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3 ），３．６９（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ2 Ｎ），４．６７（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．７９−７．２３（ｍ，７Ｈ、フェニル、フルオロフェニル），６．９５（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），５．１９（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．５６（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７６（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９７−８．０４（ｍ，３Ｈ、フルオロフェニル、１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝１．９Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．８Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．５Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．１Ｈｚ，Ｊ(CH2CH3)＝７．１Ｈｚ。
【００３９】
実施例１（ｃ）：２−（１−６−［４−（８−［４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソブチル］−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］−デク−２−イルメチル）−ピペリジノ］−２−ナフチルエチリデン）−マロノニトリル
【化１１】
2007191487.tif 000013
【００４０】
１−（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−１−エタノン（６５３mg、３．５mmol）（実施例１（ｂ）の記載通りに調製した）、硫酸水素ナトリウム（IV）（１．６ｇ、１５．５mmol）、４−ピペリジルメタノール（２ｇ、１７．６mmol）（Bradbury et al., J. Med. Chem. 34 : 1073 (1991）の記載通りに調製した）、及び水（６mL）を鋼製ボンベ内で１３５−１４２℃で１６日間加熱した。冷却後、この反応混合液を酢酸エチルで抽出した。その残査内にいくつかの産物が依然として存在したので、それを更に５％メタノール／ジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を混合し、乾燥し、そして蒸発させた。その残査をラジアルクロマトグラフィー（２mmシリカ、２％メタノール／ジクロロメタン）にかけ、１３９mg（１４％）の１−６−［（４−ヒドロキシメチル）−ピペリジノ］−２−ナフチル−１−エタノンを得た。酢酸エチルによる再結晶化の後、本化合物の融点は１８０−１８２℃であった。 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．４４（ｄｄｄｄ，２Ｈ，３’ａ−Ｈ，５’ａ−Ｈ），１．７６（ｍ，１Ｈ，４’ａ−Ｈ），１．９１（ｂｄ，２Ｈ，３’ｅ−Ｈ，５’ｃ−Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3 ），２．８９（ｄｄｄ，２Ｈ，２’ａ−Ｈ，６’ａ−Ｈ），３．５８（ｄ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ），３．９４（ｂｄ，２Ｈ，２’ｅ−Ｈ，６’ｅ−Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．３２（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．６６（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９４（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３２（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）Ｊ3´a,3´e ＝Ｊ5´a,5´e ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ2´a,3´a ＝Ｊ6´a,5´a ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ3´a,4´a ＝Ｊ5´a,4´a ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ2´e,3´a ＝Ｊ6´e,5´a ＝４．０Ｈｚ，Ｊ2´a,2´c ＝Ｊ6´a,6´e ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ2´a,3´e ＝Ｊ6´a,5e＝２．６Ｈｚ，Ｊ4a,OCH2 ＝６．４Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝１．９Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．９Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．３Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．０Ｈｚ。
【００４１】
ピリジン（３mL）中の１−６−［（４−ヒドロキシメチル）−ピペリジノ］−２−ナフチル−１−エタノン（５９mg、０．２mmol）を−１５℃に冷却し、そしてｐ−トルエンスルホン酸無水物（２０５mg、０．６mmol）を、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、加えた。この反応混合液を、１時間でゆっくりと室温まで温めた。それを再び冷却し、そして塩水とエーテルとに分配した。その有機層を塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させ、そして８３mg（９１％）の未精製の１−（６−アセチル−２−ナフチル）−４−［（４−メチルフェニル）−スルホニルオキシ］−メチルピペリジンを得た。
【００４２】
水（２mL）中の水酸化ナトリウム（１ｇ）及び硫酸水素テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（VI）（５０mg、０．１５mmol）の溶液に、スピペロンケタール（１００mg、０．２mmol）を加え、そして激しく撹拌した。１０分後に、トルエン（１０mL）中の１−（６−アセチル−２−ナフチル）−４−［（４−メチルフェニル）−スルホニルオキシ］−メチルピペリジン（９８mg、０．２mmol）を加え、この反応混合液を室温で１１日間撹拌した。この反応混合液を塩水とジクロロメタンとに分配し、その有機層を乾燥し、蒸発させ、そして１９０mgの油性残査を得た。ラジアルクロマトグラフィー（１mmシリカ、ジクロロメタン、次に２％メタノール／ジクロロメタン）により、２７mg（１７％）の１−［６−（４−［（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−１−エン−１−イル）−オキシル−メチルピペリジノ）−２−ナフチル］−１−エタノン（化合物３）及び９２mg（５８％）の１−（６−４−［（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−メチル］−ピペリジノ−２−ナフチル）−１−エタノン（化合物４）を得た。
【００４３】
化合物３：ＨＲＭＳ，Ｃ43Ｈ49ＦＮ４Ｏ4 計算：７０４．３７３８．実測：７０４．３７６０． 1Ｈ  ＮＭＲ  δ１．４６−１．９０（ｍ，１０Ｈ，３’ａ−Ｈ，５’ａ−Ｈ，３’ｅ−Ｈ，５’ｅ−Ｈ、スピペロン），１．８８（ｍ，１Ｈ，４’ａ−Ｈ），２．１５及び２．３８（ｂ，４Ｈ、スピペロン），２．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3 ），２．８０（ｍ，４Ｈ、スピペロン），２．９５（ｍ，２Ｈ，２’ａ−Ｈ，６’ａ−Ｈ），３．７５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．８７（ｍ，２Ｈ，２’ｅ−Ｈ，６’ｅ−Ｈ），３．９２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），４．１９（ｄ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ），４．９７（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．７−６．９（ｍ，３Ｈ，Ｐｈ），７．０１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．１１（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．２３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．３２（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．４１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．６６（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９５（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３２（ｄ  １Ｈ，１−Ｈ），Ｊ2´a,2´e ＝Ｊ6´a,6´e ＝１２．４Ｈｚ，Ｊ2´a,3´e ＝Ｊ6´a,5´e ＝２．６Ｈｚ，Ｊ4´a,OCH2＝６．１Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝．１Ｈｚ，Ｊ＝3,4 ＝８．８Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．１Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．１Ｈｚ。
化合物４：ＨＲＭＳ，Ｃ43Ｈ49ＦＮ4 Ｏ4 計算：７０４．３７３８．実測：７０４．３７１０． 1Ｈ  ＮＭＲ  δ１．５０（ｄｄｄｄ，２Ｈ，３’ａ−Ｈ，５’ａ−Ｈ），１．５５−１．７０（ｍ，４Ｈ、スピペロン），１．８４（ｂｄ，２Ｈ，３’ｅ−Ｈ，５’ｅ−Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ、スピペロン），１．９８（ｍ，１Ｈ，４’ａ−Ｈ），２．４２（ｍ，２Ｈ、スピペロン），２．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ1 ），２．６９（ｍ，２Ｈ、スピペロン），２．８３（ｍ，４Ｈ、スピペロン），２．８８（ｍ，２Ｈ，２’ａ−Ｈ，６’ａ−Ｈ），３．３５（ｄ，２Ｈ，４’−ＣＨ2 Ｎ），３．７５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．９２（ｂｄ，２Ｈ，２’ｅ−Ｈ，６’ｅ−Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．８８（ｍ，１Ｈ，Ｐｈ），６．９１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．０１（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．０８（ｂｓ，１Ｈ，５−Ｈ），７．２７（ｍ，３Ｈ，７−Ｈ，Ｐｈ），７．４３（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９４（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３２（ｂｓ，１Ｈ，１−Ｈ），Ｊ3´a,3´e ＝Ｊ5´a,5´e ＝１２．４Ｈｚ，Ｊ2´a,3´a ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ2´a,2e＝Ｊ6´a,6´e ＝１２．８Ｈｚ，Ｊ2´a,3´e ＝Ｊ6´a,5´e ＝２．４Ｈｚ，Ｊ4´a,4´−ＣＨ2 Ｎ＝７．３Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝１．９Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．８Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．１Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．２Ｈｚ。
【００４４】
２−［１−（６−エチル−［２−（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアゾアスピロ［４．５］デク−２−イル）−エチル］−アミノ−２−ナフチル）−エチリデン］−マロニトリルの合成のために実施例１（ｂ）に記載の方法を用いて、１−（６−４−［（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−メチル］−ピペリジノ−２−ナフチル）−１−エタノンを、２−［１−（６−４−［（８−３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］−プロピル−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］デク−２−イル）−メチル］−ピペリジノ−２−ナフチル）−エチリデン］マロニトリルに変換した。これを、１mmシリカ上で溶剤として２％ＭｅＯＨ／ＣＨ2 Ｃｌ2 を用いたラジアルクロマトグラフィーによって精製した。ＦＡＢ  ＨＲＭＳ，Ｃ46Ｈ50ＦＮ6 Ｏ3 （Ｍ＋Ｈ）計算：７５３．３９２８．実測：７５３．３９４０． 1Ｈ  ＮＭＲ  δ１．６０−２．１（ｍ，１１Ｈ、スピペロン、３’ａ−Ｈ，３’ｅ−Ｈ，４’ａ−Ｈ，５’ａ−Ｈ，５’ｅ−Ｈ），２．４０（ｍ，２Ｈ、スピペロン），２．７１（ｓ，３Ｈ，Ｃ＝ＣＣＨ3 ），２．６０−２．８０（ｍ，６Ｈ、スピペロン），２．９１（ｍ，２Ｈ，２’ａ−Ｈ，６’ａ−Ｈ），３．３７（ｄ，２Ｈ，４’−ＣＨ２Ｎ），３．７５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），３．９４（ｂｄ，２Ｈ，２’ｅ−Ｈ，６’ｅ−Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ），４．７２（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．８５−６．９５（ｍ，３Ｈ，Ｐｈ），７．０１（ｍ，２Ｈ、フルオロフェニル），７．０７（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．３１（ｍ，３Ｈ，７−Ｈ，Ｐｈ），７．４１（ｍ，２Ｈ、フルオロフェニル），７．５６（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），７．６９（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７７（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），８．０１（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ），Ｊ2´a,3´a ＝Ｊ5´a,6´a ＝１２．８Ｈｚ，Ｊ2´a,2´e ＝Ｊ6´a,6´e ＝１２．８Ｈｚ，Ｊ4´a,4´-CH2N ＝７．６Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝１．８Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．６Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．２Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．４Ｈｚ，Ｊ2´a,3´e ＝Ｊ5´e,6´a ＝１．８Ｈｚ，ＪH,F ＝８．７及び６．２Ｈｚ。
【００４５】
実施例１（ｂ）の記載通りにケタール保護基を取り除いて、定量的な収率で２−（１−６−［４−（８−［４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソブチル］−１−オキソ−４−フェニル−２，４，８−トリアザスピロ［４．５］−デク−２−イルメチル）−ピペリジノ］−２−ナフチルエチリデン）−マロノニトリルを得た。ＦＡＢ  ＨＲＭＳ，Ｃ44Ｈ46ＦＮ6 Ｏ2 （Ｍ＋Ｈ）計算：７０９．３６６６．実測：７０９．３６８９． 1Ｈ  ＮＭＲ  δ１．６０−２．１（ｍ，１１Ｈ、スピペロン、３’ａ−Ｈ，３’ｅ−Ｈ，４’ａ−Ｈ，５’ａ−Ｈ，５’ｅ−Ｈ），２．５−２．７１（ｍ，４Ｈ、スピペロン），２．７３（ｓ，３Ｈ，Ｃ＝Ｃ−ＣＨ3 ），２．８−３．１（ｍ，６Ｈ、スピペロン，２’ａ−Ｈ，６’ａ−Ｈ），３．３８（ｄ，２Ｈ，４’−ＣＨ2 Ｎ），３．９６（ｂｄ，２Ｈ，２’ｅ−Ｈ，６’ｅ−Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2 Ｎ），６．９１（ｍ，３Ｈ、フェニル），７．１（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．１５（ｍ，２Ｈ、フルオロフェニル），７．２４−７．３０（ｍ，２Ｈ，Ｐｈ），７．３４（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．５８（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ）７．７２（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），８．０１−８．０８（ｍ，３Ｈ、フルオロフェニル、１−Ｈ）．Ｊ1,3 ＝２．０Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．６Ｈｚ，Ｊ5,7 ＝２．４Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．２Ｈｚ，Ｊ4´a,4´-CH2N ＝７．４Ｈｚ，Ｊ2´a,2´e ＝Ｊ6´a,6´e ＝１３．０Ｈｚ，Ｊ2´a,3´a ＝Ｊ5´a,6´a ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ2´a,3´e ＝Ｊ5´e,6´a ＝１．９Ｈｚ，ＪH,F ＝８．７及び６．２Ｈｚ。
【００４６】
実施例１（ｄ）：ｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アセチル−２−ナフチル）−１−ピペラジンカルボキシレートの調製
【化１２】
2007191487.tif 000014
【００４７】
無水ピペラジン（７ｇ、８１．３mmol；真空デジケーター中でＫＯＨ−ドライエライト混合物上で３日間乾燥した）を、新しく蒸留した乾燥トルエン及びヘキサメチルリン酸アミド（ＨＭＰＡ）、各２５mlの混合液中に溶解した。アルゴン雰囲気下でこの溶液に、５５６mg（８０．１mmol）の小片に切断したリチウム棒を加え、その混合液を、全てのリチウムが溶解するまで、アルゴン雰囲気下で２４時間撹拌した。真空乾燥した１−（６−メトキシ−２−ナフチル）−１−エタノン（Arsenijevic et al., Org. Synth. Coll. 1988 6 : 34-36の記載通りに調製した）（３．５ｇ、１７．５mmol）を加え、更に６５時間撹拌を続けた。水３００mLで希釈した後、ジクロロメタン（３×３００mL）で抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そして蒸発させて、白色固体と黄色固体の混合物を得た。温メタノール３００mLでの抽出により未精製産物１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）−１−エタノンを得て、これをカラムクロマトグラフィー（７０−２３０メッシュシリカ、２５×１２０mm、５％メタノール／ジクロロメタン）により精製した。収量は１．５４ｇ（３５％）であった。酢酸エチルによる再結晶化の後、本試料の融点は１７０．５−１７２℃であった。
【００４８】
１−（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−１−エタノン（実施例１（ｂ）の記載通りに調製した）（４４１mg、２．３６mmol）を、１４０−１５０℃で、６ｇのピペラジン水和物（３０．９mmol）及び２４４mg（２．３５mmol）のＮａＨＳＯ3 と共に２４時間加熱することにより、１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）−１−エタノンも調製した。更に重亜硫酸ナトリウム（２ｇ、１９．２mmol）を加えた。更に２４時間後に、更に重亜硫酸塩（１ｇ）を加え、そして加熱を続けた（合計反応時間７２時間）。冷却後、この混合液を５０mlメタノールで２回抽出した。メタノールを蒸発させた後、その残査を５０mlの水に懸濁し、そして酢酸エチル（５×８０mL）で抽出した。混合した抽出液を乾燥し（硫酸マグネシウム）、そして蒸発させて、４３０mgの黄色固体を得た。ラジアルクロマトグラフィー（４mmシリカ、メタノール）により８３mg（１９％）の出発材料のナフトール及び２７６mg（４６％；未回収出発材料に基づくと５６％）の１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）−１−エタノンを得た。この１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）−１−エタノンは、全ての点で、前記の代替方法を用いて得た本化合物と同一であった。分析、Ｃ16Ｈ18Ｎ2 Ｏ計算：Ｃ，７５．５６；Ｈ，７．１３；Ｎ，１１．０１．実測：Ｃ，７５．８２；Ｈ，７．２７；Ｎ，１０．９２． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ２．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．０９及び３．３５（ｔ，Ｊ＝４．９５Ｈｚ，８Ｈ、ピペラジン），７．１０（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．３１（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．６９（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８３（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９５（ｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ，１−Ｈ）；Ｊ5,7 ＝２Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝８．４Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝２Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．４Ｈｚ。
【００４９】
１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）−１−エタノン（２５４mg、１mmol）を、１ｇのＮａＯＨ、１００mgの硫酸水素テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム、２mLの水及び６mLのトルエンの撹拌混合液に加え、次に２３０mg（１．０５mmol）の重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの溶液を加えた。この反応の経過をＴＬＣ（シリカ、５％メタノール／ジクロロメタン）によって追跡した。全ての出発材料が反応し終るまで１０分毎に前記重炭酸塩を追加した。合計約１．５等量を用いた。水及びジクロロメタン（各６０ml）の混合液を加え、完全に撹拌した後、層分離させた。その水層を、追加したジクロロメタン３０mlによって抽出した。混合した有機抽出液を無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。この間、その溶液の色がピンクから淡黄色に変化した。真空下の蒸発により２９５mg（８３％）のｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アセチル−２−ナフチル）−１−ピペラジンカルボキシレートを得て、これをジクロロメタン−石油エーテル混合液により再結晶化した。融点は１５３−１５４℃であった。分析、Ｃ21Ｈ26Ｎ2 Ｏ3 計算：Ｃ，７１．１６；Ｈ，７．３９；Ｎ，７．９０．実測：Ｃ，７１．２７；Ｈ，７．６０；Ｎ，７．８６． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．５０（ｓ，９Ｈ，−Ｃ（ＣＨ3 ）3 ），２．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．３３及び３．６４（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，８Ｈ、ピペラジン），７．１０（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．３１（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．７０（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８５（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），７．９７（ｄ，１Ｈ，３−Ｈ），８．３５（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）；Ｊ5,7 ＝２Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．７Ｈｚ。
【００５０】
実施例１（ｅ）：２−［１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）エチリデン］マロノニトリルの調製
【化１３】
2007191487.tif 000015
【００５１】
実施例１（ｄ）の記載通りに調製したｔｅｒｔ−ブチル−４−（６−アセチル−２−ナフチル）−１−ピペラジンカルボキシレート（１７７mg、０．５mmol）を、ピリジン４mL中の４０mg（０．６mmol）のマロノニトリルと共に１０５−１１０℃で加熱した。５．５時間後、更に２４mgのマロノニトリルを加え、合計１２時４０分間加熱を続けた。この混合液を冷却し、そして真空下で蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（７０−２３０メッシュシリカ、φ２０×１２０mm、クロロホルム）によって混合液中の極性成分を取り除き、最終的にラジアルクロマトグラフィー（シリカ、2mm、クロロホルム）によって本産物ｔｅｒｔ−ブチル−４−［６−（２，２−ジシアノ−１−メチルビニル）−２−ナフチル］−１−ピペラジンカルボキシレートを精製した。１５５mg（７７％）のｔｅｒｔ−ブチル−４−［６−（２，２−ジシアノ−１−メチルビニル）−２−ナフチル］−１−ピペラジンカルボキシレートを得て、これをジクロロメタン−石油エーテル混合液により再結晶化した。融点は１６９−１７１℃であった。分析、Ｃ24Ｈ26Ｎ4 Ｏ2 計算：Ｃ，７１．６２；Ｈ，６．５１；Ｎ，１３．９２．実測：Ｃ，７１．６２；Ｈ，６．６６；Ｎ，１３．８７． 1Ｈ  ＮＭＲ：δ１．５０（ｓ，９Ｈ，−Ｃ（ＣＨ3 ）3 ），２．７２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．３４及び３．６４（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，８Ｈ、ピペラジン），７．０９（ｄ，１Ｈ，５−Ｈ），７．３３（ｄｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．５８（ｄｄ，１Ｈ，３−Ｈ），７．７４（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），８．０２（ｄ，１Ｈ，１−Ｈ）；Ｊ5,7 ＝２Ｈｚ，Ｊ7,8 ＝９．１Ｈｚ，Ｊ1,3 ＝２Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝９．１Ｈｚ。
【００５２】
ｔｅｒｔ−ブチル−４−［６−（２，２−ジシアノ−１−メチルビニル）−２−ナフチル］−１−ピペラジンカルボキシレートを室温でＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）によって処理した場合、ＴＬＣ分析から、その反応が５分間で終了し、単一産物２−［１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）エチリデン］マロノニトリルが生じたことが分かった。室温真空下でＴＦＡを取り除いた。 1Ｈ  ＮＭＲ：δ２．７２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．５０及び３．６３（ｂｒｏａｄ，８Ｈ、ピペラジン），７．１８（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ，５−Ｈ），７．２９（ｄ，１Ｈ，７−Ｈ），７．５９（ｄ，１Ｈ，３−Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ，４−Ｈ），７．８７（ｄ，１Ｈ，８−Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ，１−Ｈ），９．０（ｂｒｏａｄ，１．５Ｈ，ＮＨ及び酸）；Ｊ7,8 ＝８．８Ｈｚ，Ｊ3,4 ＝８．４Ｈｚ．19Ｆ  ＮＭＲ：δ−７６．２（ＣＦ3 ＣＯＯ）。
【００５３】
その残査のＮＭＲ分析から、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基が除かれたこと、そしていくらかのＴＦＡが残存したことが分った（19Ｆ  ＮＭＲ）。ジクロロメタン（１０mL）を加え、この溶液を飽和ＮａＨＣＯ3 溶液で洗浄し、乾燥し、そして真空下で蒸発させた。淡黄色の油が得られたが、室温で放置したことにより暗赤色に変化した。ＴＬＣ分析から、この色の変化は、２−［１−（６−ピペラジノ−２−ナフチル）エチリデン］マロノニトリルがいくつかの産物に分解したことによることが分かった。最も強いスポットが低Ｒｆの赤−橙のスポットであった。中和後の選択された 1Ｈ  ＮＭＲシグナル：δ２．７２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ），３．０９及び３．３５（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈ、ピペラジン），７．０８（ｓ，１Ｈ，５−Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ，１−Ｈ）。
【００５４】
実施例１（ｆ）：２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン（［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ）の調製
【化１４】
2007191487.tif 000016
【００５５】
４．１５ｇ（５５．５mmol）のＮａＨＳＯ3 、３mLの水、０．７８ｇ（４．１９mmol）の１−（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−１−エタノン（実施例１（ｂ）の記載通りに調製した）、及び８mLの２−メチルアミノエタノールの混合液を、鋼製ボンベ内で１４０℃で２８時間加熱及び撹拌した。冷却後、この混合液を酢酸エチルと水（各々５００mL及び２００mL）とに分配した。その有機層を乾燥し、そして蒸発して、未精製の１−（６−（２−ヒドロキシエチル−メチルアミノ）−２−ナフチル）−１−エタノン（０．７４９ｇ、７３％）を得た。これを更にラジアルクロマトグラフィー（４mm  ＳｉＯ2 ，ＣＨ2 Ｃｌ2 ）により精製した。
【００５６】
ピリジン（６mL）中の２０１mg（０．８３mmol）の１−（６−２−ヒドロキシエチル−メチルアミノ−２−ナフチル）−１−エタノンの溶液にマロノニトリル（２３６mg、３．６mmol）を加え、この混合液を２４時間９５℃で加熱した。真空下でこの溶媒を取り除き、その残査をラジアルクロマトグラフィー（４mm  ＳｉＯ2 、１％  ＭｅＯＨ／ＣＨ2 Ｃｌ2 ）にかけ、そして１５０mg（７３％）の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−２−ヒドロキシエチル）−メチル−アミノ）−ナフタレンを得た。
【００５７】
ピリジン（５mL）中の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−ヒドロキシエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン（１２０mg、０．４１mmol）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸無水物（４４１mg、１．３５mmol）を加えた。室温で１時間撹拌した後、真空下でピリジンを取り除き、その残査をラジアルクロマトグラフィー（２mm  ＳｉＯ2 ，ＣＨ2 Ｃｌ2 ）にかけ、そして１８３mg（８０％）の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−トシルオキシエチル）−メチルアミノ−ナフタレンを得た。
【００５８】
サイクロトロンから得た放射性18Ｆ−フッ化物５２８．５mCi を、水５０μＬ及びアセトニトリル３００μＬ中の１９mg  Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２．２．２及び０．７５mg炭酸カリウムの溶液に移した。１１５℃で窒素ガス流中で水を取り除き、次にアセトニトリルによる共蒸留を行った（３×２００μＬ）。アセトニトリル１mL中の本トシレート（２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−トシルオキシエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン、４mg）を加え、この混合液を８５−８６℃で２０分間加熱した。冷却後、水１mLを加え、この混合液をＣ−１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ上に添加し、蒸留水で洗浄し（３×４mL）、そしてＣＨ2 Ｃｌ2 で溶出した。硫酸ナトリウムを充填したカラムに通過させることによって溶出液を脱水化し、そしてＨＰＬＣカラム（Whatman Partisil Silica 10, 500×10mm, mL／min, CH2Cl2：ヘキサン＝７：３、２５４nmのＵＶ検出器、放射線検出器）に添加した。溶出液を集め、適当な分画を混合し、真空下で蒸発させ、そして５０．７mCi （１７％、崩壊に基づく補正済）の表題化合物を得た。これを注射用に製剤化した。この合成は５０分間で完了した。
【００５９】
実施例２
下記の方法により、脳組織切片及びラット脳を用いて、βアミロイド斑のインビトロ及びインビボでの標識及び検出を行った。
１００％エタノール中で８mMに成る様に、２．１mg／mLのＤＤＮＰ保存溶液を調製した。この保存溶液を蒸留水により１：１００〜１０００（保存液：蒸留水）の割合に希釈することにより、ＤＤＮＰ作業溶液を調製した。
【００６０】
βアミロイド２５０μＭ（１．２５mg／mL蒸留水）を３７℃で４８時間凝集させた。その５μＬをスライド上に塗り、空気乾燥し、そして蒸留水で再水和化した。あるいは、Ａβ陽性脳組織切片を蒸留水により再水和化した。各スライドにＤＤＮＰ作業溶液を添加し、室温で３０分間放置した。このスライドを蒸留水により５分間３回洗浄した。蛍光保護性マウント剤（ＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄTM．Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を添加したスライドにカバーグラスを被せて、これを、チオフラビンＳ又はＦＩＴＣ用フィルターを付けた蛍光顕微鏡により観察した。
【００６１】
原線維を作るために、βアミロイド２５０μＭ（１．２５mg／mL蒸留水）を３７℃で４８時間凝集させ、そしてこれを塗布により確認した。３匹のラットを麻酔した。Ａβ原線維の溶液（１．２５μｇ／μＬ）３μＬを各ラットの大脳皮質の片側に注射した。（Ｂｒｅｇｍａ  ０，ＡＰ−４．１mm，ＭＬ＋２．０mm，ＤＶ−３．１mm）。次にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）３μＬを、コントロールとして各ラット脳の反対側に注射した。注射後、逆流を防ぐために５分間針をそのまま放置した。次にその頭蓋の孔を骨油で密閉した。ラット脳へのβアミロイド注射後８日目に、ＤＤＮＰ保存溶液を１．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，pH７．２溶液中に希釈することにより調製したＤＤＮＰ作業溶液（３２０μＭ）１０μＬをラットに注射した。
【００６２】
１時間後、このラットをＰＬＰ固定液（４％パラホルムアルデヒド、１％リシン／０．０５Ｍリン酸緩衝液、pH７．４）により心臓潅流した。更にラット脳をＰＬＰ固定液に４℃で一晩浸けることにより固定した。このラット脳をＰＢＳで洗浄し、そして１０％、次に２０％のスクロース中で飽和させ、そして液体窒素で冷却したイソペンテン（−７０°）中でスナップ凍結した。注射針の跡の周辺の脳からクライオスタット内で切片を作成し、これをグリセロール及び蛍光保護剤（ＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄTM）と共にカバーグラスで直接被った。この脳切片を蛍光顕微鏡で観察した。
【００６３】
図１Ａ〜１Ｆは、ＡＤ患者及びトランスジェニックマウスの脳の切片上の標識されたアミロイド斑を示し、これからＤＤＮＰがアミロイド斑を標識できることが証明された。図２Ａ〜２Ｅは、標識されたβアミロイド斑を示し、これからＤＤＮＰがラットにおいて脳血液関門を通過することが証明された。
【００６４】
ＡＤ脳組織のクライオスタット切片及びパラフィン切片において、ＤＤＮＰは、チオフラビンＳと同レベルの感受性で容易にアミロイド沈着を標識することが分かった。ＤＤＮＰの使用は、チオフラビンＳと比べていくつかの利点を有する。すなわち、ＤＤＮＰの使用は、前処理を必要とせず、そしてチオフラビンＳの場合と異なり、最小限の洗浄で機能し、且つホルマリン又はパラホルムアルデヒド固定あるいは組織の弁別なしに機能する。保存溶液を６か月間冷凍庫で保存でき、しかもなお１／１００〜１／１０００の希釈時に容認できる結果を生じる。チオフラビンＳ標識には必要である新しい保存溶液の作成を省くことができる。
【００６５】
実施例３
下記の方法により、インビボで人間のβアミロイド斑及び神経原線維変化を標識した。
脳の動態ＰＥＴ像を得るために、患者を断層撮影機内に配置した。実施例１（ｆ）の記載通りに調製した８．０mCi の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン（［Ｆ１８］ＦＤＤＮＰ）（比活性：５−１２Ci／μmol ；量：〜１nmol）を、その患者の腕に静脈注射した。同時に４７個の脳平面の動態像を２時間記録した。
【００６６】
［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰは容易に脳血液関門を通過し、βアミロイド斑及び神経原線維変化の存在に一致した通りに、脳構造を標識することが分かった。予め脳内の萎縮を観察するために、当患者に18Ｆ−フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）／陽電子射出断層撮影（ＰＥＴ）スキャン並びにＭＲＩスキャンを行った。ＭＲＩスキャンにより最大の萎縮が観察された領域（下部側頭葉及び頭頂葉）において、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＦ標識の最大集積が観察された。これらの領域では、低グルコース代謝もまた観察された（ＦＤＧ／ＰＥＴスキャンによる測定）。
【００６７】
実施例４
下記の方法によって、インビボで人間のβアミロイド斑及び神経原線維変化を標識及び検出した。合計１０人の人間、７人のアルツハイマー病患者（７１〜８０才）及び３人の対照患者（６２〜８２才）を調べた。眼窩道ラインに平行に平面画像化するＥＸＡＣＴＨＲ＋９６２断層撮影機（Ｓｉｅｍｅｎｓ−ＣＴＩ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ）内に、これらの患者を背臥状態で配置した。静脈カテーテルの導入を行い、その静脈カテーテルを介して［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ（５−１０mCi)／ヒト血清アルブミン（２５％）を一度に投与した。以下のスキャン行程：６回３０秒スキャン、４回３分スキャン、５回１０分スキャン、及び３回２０分スキャンによって、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ投与後即座に開始して、連続射出スキャンを行った。入力機能の測定及び血漿中代謝物の分析のために２人の患者において、内在カテーテルを介して静脈血液サンプルを急速採取した。
【００６８】
図３Ａは、海馬−扁桃−嗅内皮質／側頭皮質領域を通過する脳横断面におけるＰＥＴ−［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ（２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン）像を示す。この像は、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ注射後３０〜６０分に得たスキャンデータから再構成された。また図３Ｂ及び３Ｃでは、各々グルコース代謝及び横断面上の解剖学的構造に関する情報を提供するために、患者のＰＥＴ−ＦＤＧ（ＦＤＧは２−［Ｆ−１８］フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコースである）像及びＭＲＩ（プロトン緩和時間）像を各々重ねて表示した。正中側頭領域において、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＦスキャンでは明かにより暗く（清掃がより遅い）、そしてＦＤＧスキャンではより明るい（グルコース代謝がより低い）。
【００６９】
図４は、アルツハイマー病患者における［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰの概算滞留時間が、対照患者の値と異なることを示す。この滞留時間は、アルツハイマー病症状との関与が制限されていることが知られている脳橋での滞留時間を基準にしている。この滞留時間を、病変した注目領域（ＲＯＩ）及び脳橋における本トレーサーの清掃速度から以下の通りに計算した。
滞留時間＝［１／病変ＲＯＩの清掃速度］−［１／脳橋の清掃速度］
嗅内皮質、海馬、側頭皮質及び橋において個別の領域を選択した。図４に示した滞留時間の計算において、最も遅い清掃速度を有する領域を、病変ＲＯＩとして用いた。
【００７０】
静脈注射後、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰは、血流に比例して容易に脳血液関門を通過することが分かった。放射活性が集積した後、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰは、領域毎に異なって清掃される。βアミロイド斑及び神経原線維変化が集積することが確実である脳領域、特に海馬−扁桃−嗅内皮質において、そしてより進行した病症状段階では側頭皮質及び頭頂皮質において、より低速な清掃が認められた。また前記患者においてＰＥＴにより測定したｒＣＭＲＧｌは、予想されたβアミロイド斑負荷及び潜在的な神経原線維変化の存在と一致した。前記患者において低グルコース代謝を示した脳領域は、一般に［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰの高保持領域と一致した。大部分の症例で、軽症の患者においてさえも、海馬−扁桃−嗅内皮質は、放射活性（［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ）の高保持を示した。正常な８２才の老被験者は、図４に示した通り、［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰを用いたＰＥＴ検査において、海馬−扁桃−嗅内皮質に放射活性の沈着を示し、そしてＦＤＧ測定において同領域に低ｒＣＭＲＧｌを示した。これらの結果は、明らかな痴呆症状を有さない老齢者が、嗅内皮質の第二層の神経細胞における神経原線維性病症状及び海馬体における斑を有し得るという観察と一致する。症状の重症度が増加すれば常に、側頭、頭頂又は前頭皮質における放射活性の保持の増加、及びそこからの清掃の低下が認められ、これらは、前記領域における予想されたＡβ及び神経原線維変化と一致した。
【００７１】
またアルツハイマー病患者の脳標本におけるインビトロでの［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰのオートラジオグラフィーから、βアミロイド斑及び神経原線維変化の存在に一致した放射活性の分布が示された。その結合は、海馬、側頭皮質及び頭頂皮質において観察され、これは、Ａβ抗体及びタウ抗体による免疫染色の結果と一致した。また、ＤＤＮＰ及びその誘導体は蛍光性であるので、インビトロでβアミロイド斑及び神経原線維変化を標識する［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰの能力を、同一の脳標本を用いて評価した。アルツハイマー病の全ての脳標本において、ＤＤＮＰ及び［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰの両方により、神経原線維変化、アミロイドペプチド、及びび慢性アミロイドが優秀に視覚化され、それらは、同一試料におけるチオフラビンＳによる結果と一致した。
【００７２】
図５では、アルツハイマー病患者の側頭皮質のクライオスタットによる４５μｍ切片を、ＡＴ８（抗リン酸化タウ抗体）及び１０Ｇ４（抗Ａβ１−１５抗体）により１：８００希釈で免疫染色することによって、中央の像を得た。挿入図は、ＦＤＤＮＰにより染色した同じアルツハイマー病脳標本の隣接切片である。これらの像を、蛍光スキャン顕微鏡により得た。緑矢印は、免疫染色した中央の切片と比較して挿入図の大体の起源を示す。左上の角から時計まわりに、各挿入図は（１）神経炎性斑、（２）び慢性斑、（３）血管性アミロイド、（４）濃密な斑及び原線維変化、並びに（５）濃密な原線維変化を示す。
【００７３】
より広い観点での本発明は、本文の記載内容に限定されない。本発明の原理から逸脱することなく、そして主要な利点を犠牲にすることなく本発明の改変を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
本発明の特徴及び利点をよりよく説明するために以下の図を示す。
【図１】図１Ａは、アルツハイマー病患者の脳皮質において標識されたアミロイド斑の２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−ジメチルアミノナフタレン（ＤＤＮＦ）の蛍光を示す（励起４９０nm、放射５２０−５３０nm）（×４００）。  図１Ｂは、アルツハイマー病患者の脳皮質におけるＤＤＮＰによる斑の強い標識と、原線維変化の弱い標識を示す（×６４０）。  図１Ｃは、人間の脳におけるアミロイドコアを有する単一の大きな斑のＤＤＮＰによる標識を示す（×６４０）。  図１Ｄは、エージェントＴｇ２５７６  ＨｕＡＰＰｓｗトランジェニックマウスの脳におけるＤＤＮＰによる標識を示す（×５００）。  図１Ｅは、アルツハイマー病患者の脳におけるコア化斑のチオフラビンＳによる標識を示す（×６４０）。  図１Ｆは、図１Ｅと同一患者の脳スライスにおけるアミロイドβタンパク質の４Ｇ８抗体による標識を示す（×６４０）。
【図２】図２Ａは、ラット脳に注射されたアミロイドの標識を示す。この場合、一定量のβアミロイド１−４０を３７℃で８日間凝集させ、ゲラチンでコーティングしたスライド上で乾燥し、そしてＤＤＮＰで標識した。これから、アミロイドに一致した原線維の蛍光が示めされた。  図２Ｂは、ラット脳に注射されたアミロイドの標識を示す。この場合、凝集させた３μｇのβアミロイド１−４０をラット脳皮質の片側の定位に注射し、その８日後にそのラットの頸動脈に１００μＬの６４０μＭのＤＤＮＰを注射した。このラットを麻酔し、２０分間潅流を行った。その脳からクライオスタットで切片を作成し、そして蛍光の観察を行った。図２Ｂは、注射針跡の先端部でインビボでＤＤＮＰにより蛍光標識されたアミロイドを示す（×１００）。  図２Ｃは、図２Ｂに示したインビボでＤＤＮＰにより標識されたものの高倍率像（×２００）を示す。  図２Ｄは、前記の注射部位を通過する切片をギ酸処理することによってどの程度蛍光標識が除かれるかを示す（×１００）。  図２Ｅは、アミロイド注射部位の反対側でアミロイドが存在しない部位では、ＤＤＮＰ標識が弱いことを示す（×２００）。
【図３】図３Ａは、アルツハイマー病患者の海馬−扁桃−嗅内皮質／側頭皮質を通過する脳横断切片におけるＰＥＴ−［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰ（２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレン）による像である。  図３Ｂは、図３Ａに示した脳横断切片におけるＰＥＴ−ＦＤＧ（２−［Ｆ−１８］フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）による像である。  図３Ｃは、図３Ａに示した脳横断切片におけるＭＲＩ（プロトン緩和時間）による像である。
【図４】図４は、患者における概算した［Ｆ−１８］ＦＤＤＮＰの滞留時間を示したグラフである。
【図５】図５は、アルツハイマー病患者の側頭皮質のクライオスタットによる４５μｍ切片を、ＡＴ８（抗リン酸化タウ抗体）及び１０Ｇ４（抗Ａβ１−１５抗体）により１：８００希釈で免疫染色することによって得た像（中央像）を示す。挿入図は、ＦＤＤＮＰにより染色した同じアルツハイマー病脳標本の隣接切片であり、これらは、左上の角から時計まわりに、（１）神経炎性斑、（２）び慢性斑、（３）血管性アミロイド、（４）濃密な斑及び原線維変化、並びに（５）濃密な原線維変化を示す。
【図４】
2007191487.tif 000028
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年4月16日(2007.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物：
【化１】
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前記式中、
Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化２】
2007191487.tif 000034
から成る群から選択され、
ここでＲ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；
Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；
Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そして
Ｒ8 は、Ｎであり；そして
Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、そしてＲ3 はアルキレニル−Ｒ10であり、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、あるいは、
Ｒ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換され；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が放射性同位体によって置換される。
【請求項２】
前記放射性同位体が18Ｆ又は 123Ｉである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
下記の式（II）の化合物、あるいはそれの医薬上容認される塩又は溶媒化合物を含有する、請求項１に記載の組成物：
【化３】
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前記式中、
Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ10から成る群から選択され、そしてＲ10はアルキレニル−Ｒ10であり、ここでＲ10は、−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択され、そして
Ｒ9 はアルキル基であり；そして更に
１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が放射性同位体によって置換される。
【請求項４】
前記放射性同位体が18Ｆ又は 123Ｉである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記の式（Ｉ）の化合物が２−（１，１−ジシアノプロペン−２−イル）−６−（２−［18Ｆ］−フルオロエチル）−メチルアミノ）−ナフタレンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
βアミロイド班及び神経原線維変化から成る群から選択される構造体を標識するための、請求項１記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化４】
2007191487.tif 000036
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そしてＲ8 は、Ｎである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
ただし前記式中、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化５】
2007191487.tif 000037
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基であり；Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基であり；Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基であり；そしてＲ8 は、Ｎであり；Ｒ2 は、アルキル及びアルキレニル−Ｒ5 から成る群から選択され、そしてＲ3 はアルキレニル−Ｒ5 であり、ここでＲ5 は−ＯＨ，−ＯＴｓ、ハロゲン、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択されるか、あるいはＲ2 及びＲ3 が一緒に複素環を形成し、場合によりこれは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ，ＯＴｓ、ハロゲン、アルキレニル−Ｒ10 、カルボニル、スピペロン、スピペロンケタール及びスピペロン−３−イルから成る群から選択される少くとも１つの基によって置換される。１又は複数の当該水素、ハロゲン又は炭素原子が、場合により放射性標識物によって置換され得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 は、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキル、−Ｃ＝Ｃ（ＣＮ）2 −アルキレニル−Ｒ4 、
【化６】
2007191487.tif 000038
から成る群から選択され；Ｒ4 は、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから成る群から選択される基である。Ｒ5 は、−ＮＨ2 ，−ＯＨ，−ＳＨ，−ＮＨ−アルキル、−ＮＨＲ4 ，−ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｓ−アルキル、及び−Ｓ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基である。Ｒ6 は、−ＣＮ，−ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アルキレニル−Ｒ4 ，−Ｃ（Ｏ）−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2 ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキレニル−Ｒ4 から成る群から選択される基である。Ｒ7 は、Ｏ，ＮＨ、及びＳから成る群から選択される基である。Ｒ8 は、Ｎである。