(57)【要約】本発明は、対応する治療的親薬物を標的細胞または標的部位へと選択的に送達するために、好ましい部位で活性化できるプロドラッグに向けられている。従って、本発明は主に標的細胞としての腫瘍細胞に関連するが、これに限定されない。より詳細に言えば、当該プロドラッグは式  V-(W)k-(X)l-A-Z  の化合物であり：ここで、Vは指定子であり；(W)k-(X)l-Aは、延長された自己脱離性のスペーサ系であり；WおよびXは、同一または異なり、夫々が1,(4+2n)の電子カスケードスペーサであり；Aは、式(Y)mのスペーサ基であるか（ここで、Yは、1,(4+2n)の電子カスケードスペーサである）、または、環化脱離スペーサである式Uの基の何れかであり；Zは、治療剤成分または診断剤成分であり；k、lおよびmは、独立に0〜5の整数であり；nは、0〜10の整数である： 但し、Aが(Y)mであれば、k＋l＋m≧1であり、また、k＋1＋m＝1であれば、n＞1であり；AがUであれば、k＋1≧1である。【選択図】図１
2004530670.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物：
V-(W)k-(X)l-A-Z
ここで、
Vは、任意に受容体への結合の後または前に、酵素的によって除去される指定子であり；
(W)k-(X)l-Aは、延長された自己脱離性のスペーサ系であり；
WおよびXは、同一または異なり、夫々が1,(4+2n)の電子カスケードスペーサであり；
Aは、式(Y)mのスペーサ基であるか、
（ここで、Yは、1,(4+2n)の電子カスケードスペーサである）
または、環化脱離スペーサである式Uの基の何れかであり；
Zは、治療剤成分または診断剤成分であり；
k、lおよびmは、独立に0〜5の整数であり；
nは、0〜10の整数である：
但し、
・Aが(Y)mであれば、k＋l＋m≧1であり、また、
k＋1＋m＝1であれば、n＞1であり；
・AがUであれば、k＋1≧1である。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、基Uは、ω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサであり、Zは、その水酸基を介してUに結合した部分である化号物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物であって、前記電子カスケードスペーサW、XおよびYは、次式を有する化合物群から独立に選択される化合物：
【化１】
2004530670.tif 000011
ここで、
a、b、およびc は、独立して0〜5の整数であり；
I、FおよびGは、次式の化合物から独立に選択される：
【化２】
2004530670.tif 000012
ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、Cl-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状Cl-5アルキルアミノ、イミダゾリル、Cl-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(=O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(=O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O)(ORX)2)であり、ここで RX、RX1およびRX2は、Cl-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基、またはC5-20アリール基から独立に選択され、また置換基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の二以上は、任意に相互に結合されて、一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【請求項４】
請求項１または２に記載の化合物であって、前記ω-アミノ アミノカルボニル環化脱離スペーサUが次式を有する化合物である化合物。
【化３】
2004530670.tif 000013
ここで、
aは、0または1の整数であり；
bは、0または1の整数であり；
cは、0または1の整数であり；但し、
a+b+c＝2または3であり；;
またここで、
R1および／またはR2は、独立に、H、C1-6アルキルを表し、該アルキルは任意にヒドロキシ(OH)、エーテル(ORX)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状C1-5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノオキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O(ORX)2)の一以上の基で置換され；ここで RX、RX1、およびRX2は、C1-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基またはC5-20アリール基から選択され；
R3、R4、R5、R6、R7、およびR8は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、C1-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状C1-5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノオキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O(ORX)2)の一以上の基で置換され；ここで RX、RX1、およびRX2は、C1-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基またはC5-20アリール基から選択され； R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、またはR8は、任意に、相互に結合されて一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、Aは、次の構造式を有する電子カスケードスペーサである化合物：
【化４】
2004530670.tif 000014
ここで、
a、b、およびcは、独立に、０〜5の整数であり；
I、F およびG は、独立して、次式を有する化合物から選択される：
【化５】
2004530670.tif 000015
ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、Cl-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状Cl-5アルキルアミノ、イミダゾリル、Cl-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(=O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(=O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O)(ORX)2)であり、ここで RX、RX1およびRX2は、Cl-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基、またはC5-20アリール基から独立に選択され、また置換基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の二以上は、任意に相互に結合されて、一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、Zは、そのフェノール性水酸基を介してAに結合する部分である化合物。
【請求項７】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、プラスミンによって開裂され得る基質を含む化合物。
【請求項８】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、カテプシンによって開裂され得る基質を含む化合物。
【請求項９】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、カテプシンBによって開裂され得る基質を含む化合物。
【請求項１０】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、グルクロニダーゼによって開裂され得る基質、前立腺特異的抗原（PSA）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ（u-PA）、またはマトリックスメタロプロティナーゼのファミリーのメンバーを含む化合物。
【請求項１１】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、低酸素条件下での還元またはニトロレダクターゼによる還元によって除去できるニトロ（ヘテロ）芳香族部分を含む化合物。
【請求項１２】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記スペーサ系(W)k-(X)l-Aが、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノシンナミル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノフェニルペンタジエニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、またはp-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノフェニルペンタジエニルである化合物。
【請求項１３】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、前記部分Ｚが抗癌剤である化合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物であって、前記Zが、アミノ含有細胞障害性部分のダウノルビシン、ドキソルビシン、N-(5,5-ジアセトキシペンチル)ドキソルビシン、アントラサイクリン、マイトマイシンC、マイトマイシンA、9アミノカンプトセシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、N8-アセチルスペルミジン、1-(2-クロロエチル)-1,2-ジメタンスルホニル ヒドラジン、タリソマイシン(tallysomycin)、もしくはそれらの誘導体、
ヒドロキシル含有細胞障害性部分のエトポシド、カンプトセシン、イリノテカン、トポテカン、9-アミノカンプトセシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エスペラマイシン、1,8-ジヒドロキシビシクロ[7.3.1]トリデカ-4-エン-2,6-ジイン-1,3-オン、アンギジン(anguidine)、ドキソルビシン、モルホリン-ドキソルビシン、N-(5,5-ジアセトキシペンチル)ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、もしくはそれらの誘導体、
スルフヒドリル含有細胞毒性部分のエスペラマイシン、6-メルカプトプリン、もしくはそれレアの誘導体、
カルボキシル含有細胞障害性部分のメソトレキセート、カンプトセシン（ラクトンの開環形）、酪酸、レチノイン酸、もしくはそれらの誘導体である化合物。
【請求項１５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の化合物であって、前記部分Zは、その2'-水酸基を介してプロ部分V-(W)k-(X)l-U-に結合される、抗癌剤のパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体を表す化合物。
【請求項１６】
請求項１〜９の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vがトリペプチドである化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物であって、前記トリペプチド指定子部分のその直ぐ隣の部分への共有結合が、前記トリペプチド指定子部分のC末端における結合である化合物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物であって、前記C末端アミノ酸残基はアルギニンまたはリジンであり、中間のアミノ酸残基はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、シクロヘキシルグリシン、トリプトファンおよびプロリンからなる群から選択され、またN末端アミノ酸残基はD-アミノ酸残基、保護されたL-アミノ酸残基、または保護されたグリシンである化合物。
【請求項１９】
請求項１〜７の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、D-アラニルフェニルアラニルリジン、D-バリルロイシルリジン、D-アラニルロイシルリジン、D-バリルフェニルアラニルリジン、D-バリルトリプトファニルリジン、またはD-アラニルトリプトファニルリジンである化合物。
【請求項２０】
請求項１〜６、８、９の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vが、C末端をその直ぐ隣の部分に共有結合されたアミノ末端キャップされたペプチドである化合物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の化合物であって、前記アミノ末端キャップされたペプチド指定子が、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルリジン、ベンジルオキシカルボニルバリルリジン、Dフェニルアラニルフェニルアラニルリジン、ベンジルオキシカルボニルバリルシトルリン、tert-ブチルオキシカルボニルフェニルアラニルリジン、ベンジルオキシカルボニルアラニルアルギニルアルギニン、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニル-N-トシルアルギニン、2-アミノエチルチオスクシンイミドプロピオニルバリニルシトルリン、2-アミノエチルチオスクシンイミドプロピオニルリジルフェニルアラニルリジン、アセチルフェニルアラニルリジン、またはベンジルオキシカルボニルフェニルアラニル-O-ベンゾイルスレオニンである化合物。
【請求項２２】
請求項１〜４、７〜９の何れか１項に記載の化合物であって、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-アラニル-フェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニル-フェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノ-カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニル-アラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニル-リジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニル-フェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニル-アラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノ-シンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオ���シカルボニル}-9-アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)トポテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノ-シンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニル-リジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトテシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)トポテカン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチル-アミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノ-ベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)-エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミル-オキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニル-アラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニル��ラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニル-リジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノ-ベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトテシン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-バリル-ロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシ ルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、2'-O(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリル-ロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジル-オキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)トポテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)-9-アミノ-カンプトセシン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル-オキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノ-シンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノ���ンナミルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)トポテカン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドキソルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ダウノルビシン、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)マイトマイシンC、N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)-パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル)トポテカン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジルp-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトテシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセル、2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、7-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)ドセタキセル、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)カンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)-9-アミノカンプトセシン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)エトポシド、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)イリノテカン、O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)トポテカン、またはこれらの塩である化合物。
【請求項２３】
N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシンである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル)ドキソルビシンである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２５】
N-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシンである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２６】
N-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル)ドキソルビシンである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２７】
2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセルである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２８】
2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセルである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２９】
2'-O-(D-アラニルフェニルアラニルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセルである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項３０】
2'-O-(D-バリルロイシルリジル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル)パクリタキセルである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項３１】
請求項１〜３０の何れか１項に記載の化合物であって、前記部分Zが、抗生物質、抗炎症剤、または抗ウイルス剤である化合物。
【請求項３２】
請求項１〜３１の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vがポリマーを含む化合物。
【請求項３３】
ポリマー構造に結合された、請求項１〜３２の何れか１項に記載の化合物。
【請求項３４】
請求項１〜３３の何れか１項に記載の化合物であって、前記指定子Vは、ADEPT、PDEPT、VDEPT、またはGDEPTを介して標的細胞または標的組織の近傍に輸送される酵素によって除去される化合物。
【請求項３５】
指定子基と薬物分子との間に組込まれた、相互に連結された少なくとも一つの電子カスケードスペーサ基およびω-アミノ アミノカルボニル環化脱離スペーサ基を有し、前記薬物分子は、該薬物分子のヒドロキシル官能基を介して前記環化脱離スペーサ基に結合される請求項１〜３４の何れか１項に記載のプロドラッグを合成する方法であって、前記指定子基に結合された第一の電子カスケードスペーサ基を、所望であれば、前記第一の電子カスケードスペーサ基と同一または異なる少なくとも一つの第二の電子カスケードスペーサ基を介して、前記環化脱離スペーサ基に結合させることによる方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、前記薬物分子はパクリタキセルであり、第一の工程においては、4-ニトロフェニルカーボネートで活性化された薬物への遊離スペーサ-アミンの添加によるカルバメート結合を通して、環化脱離スペーサ基がその2-水酸基を介して前記パクリタキセルに結合され、続いて脱保護されてパクリタキセルに結合した環化スペーサからなる第一の断片を得、また第二の工程においては、同一もしくは異なる一以上の1,(4+2n)電子カスケードスペーサ（nは0〜10の整数）が、指定子基に結合され、続いて4-ニトロフェニルカーボネートへと活性化され、その後の第三の工程においては、前記第一および第二の行程で得られた断片が塩基性反応条件下で相互に結合される方法。
【請求項３７】
一つの電子カスケードスペーサの末端アルコール基を、カルバメート結合を介してもう一つの電子カスケードスペーサのアニリンアミノ基に結合することにより、電子カスケードスペーサが相互に結合されている請求項１〜５の何れか１項に記載のプロドラッグを合成する方法であって、前記最初に述べた電子カスケードスペーサのアルコール基を対応する4-ニトロフェニルカーボネートに変換し、この分子を、塩基の存在または不存在下において、触媒量の1-ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で前記他の電子カスケードスペーサと反応させることによる方法。
【請求項３８】
請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用であって、それを必要としている哺乳類を治療する薬学的製剤の製造のための使用。
【請求項３９】
それを必要としている哺乳類を治療する方法であって、該方法は、薬学的組成物を治療的に効果的な投与量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項４０】
経口、局所または注射のための固体または液体の処方を提供するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物を含有する薬学的組成物を製造する方法。
【請求項４１】
請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物を含有する薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
この出願は、2001年3月23日に出願されたEP-A-01201095.5の継続であり、その開示を本明細書の一部として本願に援用する。
【発明の分野】
【０００２】
本発明は、好ましい作用部位で活性化でき、対応する治療剤的もしくは診断剤的な親部分を、標的細胞もしくは標的部位に選択的に送達するためのプロドラッグに向けられている。従って、本発明は主に標的細胞としての腫瘍細胞に関するものであるが、これに限定されるものではない。
【発明の背景】
【０００３】
化学療法剤における選択性の欠如は、癌治療における主要な問題である。癌の化学療法には毒性の高い化合物が使用されるので、典型的には重篤な副作用を伴う。胃腸管毒性および骨髄毒性のような投与量を制限する副作用のため、腫瘍を完全に根絶するような薬物濃度を達成することはできない。加えて、長期治療の後、腫瘍は抗がん剤に対する耐性を獲得する可能性がある。現代の薬物開発においては、腫瘍部位への細胞毒性薬剤のターゲッティングが一つの主要な目的とみなすことが出きる。
【０００４】
腫瘍細胞または腫瘍組織についての選択性を得るための有望なアプローチは、腫瘍関連酵素の存在を活用することである。比較的高レベルの腫瘍特異的酵素は、薬理学的に不活性なプロドラッグを、当該腫瘍の近傍において対応する活性な親薬物に変換することができる。この概念により、腫瘍部位において、高濃度の毒性抗癌剤を発生させることができる。その投与量が充分に高ければ、全ての腫瘍細胞を死滅させることができ、これにより薬物耐性腫瘍細胞の発生をも減少させることができる。
【０００５】
一定の腫瘍組織に高レベルで存在する幾つかの酵素が存在する。その一例は、一定の壊死腫瘍領域から放出されるβグルクロニダーゼである。更に、幾つかのタンパク分解酵素が、腫瘍の浸潤および転移に関連することが示されている。幾つかのプロテアーゼ、例えばカテプシンや、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（u-PA）系に由来するプロテアーゼは、全てが腫瘍転移に関与している。セリンプロテアーゼプラスミンは、腫瘍の浸潤および転移において重要な役割を果たす。タンパク質分解活性形のプラスミンは、その不活性なプロ酵素形態であるプラスミノーゲンから、u-PAによって形成される。この腫瘍に関連したプラスミンの存在は、プラスミン開裂性プロドラッグをターゲッティングするために活用することができる。
【０００６】
本発明では、薬物を疾患関連または臓器特異的な組織もしくは細胞にターゲッティングするための改善されたプロドラッグ、例えば腫瘍特異的なプロドラッグを調製するために適用可能な、新規な技術が開示される。この技術は更に、親成分の放出を容易にする目的で、化合物の（非特異的な）制御放出における用途を見出すことができる。本発明は、特異的な疾患関連の生体分子によりプロドラッグを薬物に変換でき、またはプロドラッグの薬物への変換を誘導できるような、特異的な標的部位へと送達されることが必要とされる全ての薬物に適用可能であると思われる。
【発明の開示】
【発明の説明】
【０００７】
本発明の技術は、指定子（＝酵素により開裂されるプロドラッグ部分）と親薬物との間に挿入される新規なリンカー系に関する。過去に開発された非常に多くの抗癌剤プロドラッグは、自己脱離性スペーサとも称される自己脱離性のコネクタもしくはリンカーを含んでいる。このスペーサは、酵素的開裂を容易にし、従って薬物放出の速度を高めるために、（図１に示すように）指定子と薬物の間に組込まれる。指定子（これは、例えばプロテアーゼのためのオリゴペプチド基質、または例えばβグルクロニダーゼのためのβグルクロニド基質であることができる）は、部位特異的に除去されなければならず、続いて自発的なスペーサ脱離により細胞毒性の親薬物が放出される。本発明では、著しく改善されたリンカー系が開示される。これらはプロドラッグ、例えば抗癌剤プロドラッグに適用可能であり、酵素的活性化の速度を顕著に向上する。
【０００８】
より詳細に言えば、本発明は次式の化合物に関する：
V-(W)k-(X)l-A-Z
ここで、
Vは、酵素的に除去可能な指定子であり；
(W)k-(X)l-Aは、延長された自己脱離性のスペーサ系であり；
WおよびXは、同一または異なり、夫々が1,(4+2n)の電子カスケードスペーサであり；
Aは、式(Y)mのスペーサ基であるか、
（ここで、Yは、1,(4+2n)の電子カスケードスペーサである）
または、環化脱離スペーサである式Uの基の何れかであり；
Zは、治療剤成分または診断剤成分であり；
k、lおよびmは、独立に0〜5の整数であり；
nは、0〜10の整数である：
但し、
・Aが(Y)mであれば、k＋l＋m≧1であり、また、
k＋1＋m＝1であれば、n＞1であり；
・AがUであれば、k＋1≧1である。
【０００９】
これらの新規な延長リンカー系は、後述の実施例で立証されるように、改善された酵素的活性化特性を示す。本発明による活性化可能なプロドラッグは指定子Vを含み、これは部位特異的に除去でき、且つ本発明の新規な延長された自己脱離性コネクタ系(W)k-(X)l-Aを介して治療剤部分または診断剤部分Zに共有結合できる基からなることを意味している（図２）。これらの自己脱離性コネクタ系は増大した長さを有しており、これは親部分Zを指定子からの増大した距離に配置する。
【００１０】
1,(4+2n)-脱離（n＝ 0、1、2、3、4、5…10）（例えば1,6-脱離、1,8-脱離、または1,10-脱離）により自己脱離するスペーサは、以下では「電子カスケード」スペーサと称する。
【００１１】
本発明の好ましい実施例によれば、電子カスケードスペーサW、X、およびYは、次式を有する化合物群から独立に選択される。
【化６】
2004530670.tif 000003
【００１２】
ここで、
a、b、およびc は、独立して0〜5の整数であり；
I、FおよびGは、次式の化合物から独立に選択される：
【化７】
2004530670.tif 000004
【００１３】
ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、Cl-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状Cl-5アルキルアミノ、イミダゾリル、Cl-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(=O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(=O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O)(ORX)2)であり、ここで RX、RX1およびRX2は、Cl-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基、またはC5-20アリール基から独立に選択され、また置換基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の二以上は、任意に相互に結合されて、一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【００１４】
更に、1981年に開発された1,6-脱離の原理は、プロドラッグの設計に使用できる最も用途の広い自己脱離原理の一つとみなすことができる。この原理によれば、スペーサ脱離は図３に示した機構を介して進行する。この特定の脱離プロセスは、プロドラッグ概念に適用したときに非常な成功を納めることが示されている。図３に示したような電子カスケードを介して自己脱離するスペーサは、一般に、環化反応を介して脱離するスペーサよりも遥かに迅速な脱離半減期を示す。これは、環化スペーサと電子カスケードスペーサとの間の顕著な相違である。
【００１５】
以下の例においては、パラ-アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)および関連の電子カスケードスペーサ系が使用される。何故なら、それらは、ヒドロキシベンジルに基づく電子カスケードスペーサ（これはスペーサ脱離を生じさせるために該スペーサのフェニル部分に電子吸引性置換基を必要とする）と比較して、アミンのマスク除去の際に、より迅速に脱離するからである。該スペーサが非置換のヒドロキシベンジル電子カスケードスペーサであるときは、薬物放出は生じないであろう。
【００１６】
過去において、殆どの努力は、電子吸引性置換基を含む電気カスケードスペーサの合成に向けられていた。酵素的活性化が生じる部位からの電子の引抜きは、酵素的活性化の速度を向上するであろうと仮定された。しかし、スペーサ上に電子吸引基を含むプロドラッグの活性化速度は、通常、非置換の電子カスケードスペーサを含むプロドラッグの活性化速度と顕著には異ならない。例えば、アミノベンジルスペーサ上の塩素置換基は、プラスミンによる酵素的なプロドラッグ活性化速度を僅かに向上させるだけに過ぎない。βグルクロニダーゼによる活性化のためのアミノベンジルスペーサを含むアントラサイクリンプロドラッグの場合、塩素置換基または臭素置換基は僅かな効果しか示さない。また、アミノベンジルスペーサ上の電子吸引性置換基は酵素的活性化速度を増大させ得るが、スペーサ脱離速度は、このような電子的特性をもった置換基の結果として減少するであろうことを考慮しなければならない。ヒドロキシルアミノベンジル電子カスケードスペーサ世代の場合、実際には、ベンジル環上の電子供与性置換基が断片化を促進するように思える。この効果は、恐らく、これらの構造によるベンジル炭素上での正電荷発生の安定化に起因し得るものである。幾つかの場合、一以上のスペーサ置換基が過剰に電子吸引性であるときは、スペーサ脱離は全く生じないであろう。指定子に対してメタ位にニトロ置換基を含むアミノベンジルスペーサは、有利の薬物を放出するための自己脱離をしなかった。また、指定子に関してメタ位にニトロ置換基を有するヒドロキシルアミノベンジルスペーサは、このような置換ヒドロキシルアミノベンジルスペーサのうちで最も遅いスペーサ脱離を示すことが分かった。スペーサ置換基の電子吸引性は、酵素的活性化速度に対して僅かな影響しかもたないのに対して、スペーサ脱離はスペーサ置換基の電子的特性に大きく依存し、使用されるカスケードスペーサの種類に依存して、比較的狭い特徴的な電子的プロファイルでのみ生じるように思える。
【００１７】
一つの電子カスケードスペーサを含む以前に報告された幾つかのプロドラッグにおいて、異なる親薬物が同じプロ部分で結合されるとき、または親薬物がその異なる部位を介して同じプロ部分に結合されるときには、やはり酵素的活性化速度における相違を認めることができる。例えば、βグルクロニダーゼは、パクリタキセルが親薬物のときに、親薬物としてドキソルビシンを含むプロドラッグと比較して遥かに遅く、βグルクロニド-環化スペーサプロ部分からグルクロニドを開裂させる。もう一つの例において、アミノベンジルスペーサを介して結合されたパクリタキセルのジペプチド誘導体は、パクリタキセルがその7位を介して結合されたときに、その2位で結合されたときよりも容易にカテプシンBによって開裂された。加えて、ドキソルビシンまたはマイトマイシンCのプロドラッグを含んだ電子カスケードスペーサのカテプシンB開裂の半減期は、親薬物としてパクリタキセルを備えた対応するプロドラッグの半減期よりも遥かに短かった。最後に、プラスミンは、ドキソルビシンプロドラッグを含む電子カスケードスペーサからのトリペプチドを、対応するパクリタキセルプロドラッグからのトリペプチドよりも遥かに容易に開裂させる。従って、幾つかのプロドラッグ系において、言及したプロドラッグが全て一つの電子カスケードスペーサを含んでいたとしても、親薬物は、酵素的活性化の速度に対して顕著な効果を及ぼす。
【００１８】
本発明は、延長スペーサ系の存在により、プロドラッグ活性化および／またはスペーサ脱離に対するスペーサ基の置換基の影響を低下させ、またプロドラッグの酵素的活性化の速度に対する親薬物の影響を減少させることによって、上記の欠点を回避する。
【００１９】
第二の側面において、本発明は、上記式における基Uが環化スペーサであり（以下では「ω-アミノ アミノカルボニル」環化スペーサと称する）、またZが水酸基を有する分子である化合物に関する。
【００２０】
より好ましくは、本発明のω-アミノ アミノカルボニル環化脱離スペーサUは、次式を有する化合物である。
【化８】
2004530670.tif 000005
【００２１】
ここで、
aは、0または1の整数であり；
bは、0または1の整数であり；
cは、0または1の整数であり；但し、
a+b+c＝2または3であり；;
またここで、
R1および／またはR2は、独立に、H、C1-6アルキルを表し、該アルキルは任意にヒドロキシ(OH)、エーテル(ORX)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状C1-5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノオキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O(ORX)2)の一以上の基で置換され；ここで RX、RX1、およびRX2は、C1-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基またはC5-20アリール基から選択され；
R3、R4、R5、R6、R7、およびR8は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、C1-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状C1-5アルキルアミノ、イミダゾリル、C1-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノオキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O(ORX)2)の一以上の基で置換され；ここで RX、RX1、およびRX2は、C1-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基またはC5-20アリール基から選択され； R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、またはR8は、任意に、相互に結合されて一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【００２２】
第三の側面において、本発明は、スペーサ基Aが次式を有する電子カスケードスペーサであるような、上記式の化合物に関する：
【化９】
2004530670.tif 000006
【００２３】
ここで、
a、b、およびcは、独立に、０〜5の整数であり；
I、F およびG は、独立して、次式を有する化合物から選択される：
【化１０】
2004530670.tif 000007
【００２４】
ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-6アルキル、C3-20ヘテロ環、C5-20アリール、Cl-6アルコキシ、ヒドロキシ(OH)、アミノ(NH2)、一置換アミノ(NRXH)、二置換アミノ(NRX1RX2)、ニトロ(NO2)、ハロゲン、CF3、CN、CONH2、SO2Me、CONHMe、環状Cl-5アルキルアミノ、イミダゾリル、Cl-6アルキルピペラジニル、モルホリノ、チオール(SH)、チオエーテル(SRX)、テトラゾール、カルボキシ(COOH)、カルボキシレート(COORX)、スルホキシ(S(=O)2OH)、スルホネート(S(O)2ORX)、スルホニル(S(=O)2RX)、スルフィキシ(sulphixy)(S(=O)OH)、スルフィネート(S(=O)ORX)、スルフィニル(S(=O)RX)、ホスホノキシ(OP(=O)(OH)2)、およびホスフェート(OP(=O)(ORX)2)であり、ここで RX、RX1およびRX2は、Cl-6アルキル基、C3-20ヘテロ環基、またはC5-20アリール基から独立に選択され、また置換基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の二以上は、任意に相互に結合されて、一以上の脂肪族または芳香族の環構造を形成する。
【００２５】
一つの実施形態において、当該延長スペーサ系(W)k-(X)l-Aは、1,(4+2n)-脱離（n＝0、1、2、3、4、5…10）、例えば1,8-脱離（図４）を介して事故脱離する分子である。この新規なスペーサ系の長さは、例えば1,10-脱離スペーサ系に拡大することができ、ここでは一つではなく、二以上の二重結合または三重結合が当該スペーサの芳香族部分と共役している（図５）。
【００２６】
もう一つの実施太陽において、本発明のスペーサ系は、相互に連結された二以上の電子カスケードスペーサからなる。脱離基（薬物）の放出は、続いて生じる二以上のスペーサ脱離の後に起きる。
【００２７】
更にもう一つの実施態様においては、一以上の電子カスケードスペーサおよび環化スペーサの両者を含んだ、ヒドロキシル官能基を含む薬物（例えばパクリタキセル）のプロドラッグが権利請求される。
【００２８】
好ましい実施態様において、パクリタキセル分子に直接結合されるスペーサは、カルバメート結合を介してパクリタキセルの2'位に結合されるω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサである。この種のパクリタキセル誘導体への便利な合成ルートが開示される。
【００２９】
もう一つの実施態様では、当該延長電子カスケードスペーサ系が、エーテル結合を介して、薬物部分のフェノール水酸基に結合される。脱離基（即ち、薬物）がフェノール水酸基であるときは、パラ-アミノベンジルエーテルが自己脱離することが報告されている。
【００３０】
この延長スペーサ系は、改善された酵素的活性化特性を提供する。
【００３１】
本発明における自己脱離性連結系は、現在入手可能な電子カスケードスペーサ系に関して増大した長さを有する。リンカー系の一端は、指定子、例えばプラスミンの基質であるトリペプチドと反応できなければならないと認められる。典型的には、当該スペーサ系のこの末端はアミノ基または水酸基であるが、他の官能基であることもできる。当該リンカー系の他端における官能基は、当該薬物と反応できなければならない。典型的には、該スペーサ系のこの末端は水酸基であるが、他の官能基であってもよい。一つの実施態様において、この官能基は当該薬物のアミノ基と反応して、リンカーと薬物の間にカルバメート結合を形成する。更にもう一つの実施態様において、この官能基は当該薬物のカルボン酸基と反応して、リンカーと薬物の間にエステル結合を形成する。
【００３２】
典型的には、当該スペーサ系は、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミルオキシカルボニル(メチルアミノ)エチル(メチルアミノ)カルボニル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノシンナミル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、p-アミノベンジルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノシンナミルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノフェニルペンタジエニル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノシンナミル、p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノベンジル、または p-アミノフェニルペンタジエニルオキシカルボニル-p-アミノフェニルペンタジエニルである。
【００３３】
式V-(W)k-(X)l-A-Zの化合物において、指定子Vは、典型的には標的細胞、例えば腫瘍細胞の近傍に存在する酵素によって特異的に開裂される基質分子を含んでいる。より好ましくは、前記指定子Vは、身体の他の部分に比較して前記標的細胞の近傍で更に高レベルで存在する酵素によって特異的に開裂される基質を含んでおり、最も好ましくは、前記酵素は前記標的細胞の近傍にのみ存在する。
【００３４】
該指定子Vはまた、所定の標的細胞集団に付随する受容体または他の受容部分との選択的錯体形成によって、または別の機構により前記標的細胞の近傍に化合物V-(W)k-(X)l-A-Zの集積を起こすことによって、式V-(W)k-(X)l-A-Zの化合物を前記標的部位にターゲッティングする部分を含んでいる。この標的部分は、例えば、ボンベシン、トランスフェリン、ガストリン、ガストリン放出性ペプチド、αvβ3および／またはαvβ5-インテグリン受容体に特異的に結合する分子、例えばRGD-含有ペプチド、血小板由来の成長因子、IL-2、IL-6、腫瘍成長因子、ワクシニア成長位因子、インスリンおよびインスリン様成長因子I en II、抗原認識性免疫グロブリンもしくはその抗原認識性断片、または糖鎖である。好ましくは、免疫グロブリン（またはその断片）によって認識される当該抗原は、標的細胞、例えば腫瘍特異的抗原に対して特異的である。また、指定子Vは、向上した透過性および保持（EPR）の効果のために標的細胞、例えば主要細胞の近傍における化合物V-(W)k-(X)l-A-Zの蓄積を生じるポリマーを含んでもよい。
【００３５】
一つの実施態様において、指定子は、標的細胞（例えば腫瘍細胞）の近傍に存在するプロテアーゼ、例えばプラスミン、カテプシン、カテプシンB、前立腺特異的抗原（PSA）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ（u-PA）、またはマトリックスメタロプロティナーゼのファミリーのメンバーによって特異的に認識されるアミノ酸配列からなるジペプチド、トリペプチド、またはオリゴペプチドであり、或いは、もう一つの実施態様では、腫瘍細胞の近傍に存在するβグルクロニダーゼによって特異的に認識されるβグルクロニドである。更にもう一つの実施態様では、当該指定子は、低酸素条件またはニトロレダクターゼによって還元し得るニトロ芳香族部分である。ニトロ芳香族指定子の除去後に、本発明で説明したスペーサシステムの脱離が薬物の放出を導く。疾患特異的および／または臓器特異的な酵素および／または受容体による認識に続いて特異的に開裂される如何なる指定子も、本発明で権利請求されるリンカー系を含んだプロドラッグ中に組込めることを理解することができる。
【００３６】
部分Zは、治療剤部分または診断剤部分である。Zは、例えば抗癌剤、抗生物質、抗炎症剤、または抗ウイルス剤であることができる。典型的には、部分Zは抗癌剤である。好ましくは、該抗癌剤はアミノ含有のダウノルビシン、ドキソルビシン、N-(5,5-ジアセトキシペンチル)ドキソルビシン、アントラサイクリン、マイトマイシンC、マイトマイシンA、9-アミノ カンプトセシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、N8-アセチルスペルミジン、1-(2-クロロエチル)-1,2-ジメタンスルホニルヒドラジン、タリソマイシン(tallysomycin)、またはそれらの誘導体である。該抗癌剤はまた、ヒドロキシル含有のエトポシド、カンプトセシン、イリノテカン(irinotecan)、トポテカン(topotecan)、9-アミノカンプトセシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エスペラマイシン、1,8-ジヒドロキシ-ビシクロ[7.3.l]トリデカ-4-エン-2,6-ジイン-13-オン、アンギジン(anguidine)、ドキソルビシン、モルホリンドキソルビシン、N-(5,5-ジアセトキシペンチル)ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、またはそれらの誘導体であることができる。該抗癌剤はまた、スルフヒドリルを含有するエスペラマイシン、6-メルカプトプリン、またはそれらの誘導体であることができる。当該薬物はまた、カルボキシルを含有するメソトレキセート、カンプトセシン（ラクトンの開環形態）、酪酸、レチノイン酸、またはそれらの誘導体であることができる。延長スペーサ系の脱離の原理を示すために、腫瘍関連のプロテアーゼであるプラスミンにより選択的に加水分解される腫瘍特異的プロドラッグを合成した。この合成されたプロドラッグは、延長された自己脱離性スペーサを介して当該薬物に結合されるトリペプチド指定子からなっている。該トリペプチド指定子は、腫瘍関連酵素のプラスミンにより特異的に認識されるアミノ酸配列を含んでいる。これら誘導体の合成が開示される。
【００３７】
一定のプロテアーゼの産生を腫瘍の悪性とリンクさせる内容の文献が増大している。殆どは、腫瘍細胞は、それが浸潤性になって転移を形成するときに、タンパク分解活性が要求される。原発性の腫瘍は、タンパク質からなる細胞外マトリックスの中に封入される。転移を形成するためには、原発性腫瘍はこのマトリックスを破壊しなければならない。この理由のために、浸潤および転移する腫瘍細胞によるタンパク質分解酵素の増大した発現が生じる。最近の研究は、原発部位および転移部位の両方において、プロテアーゼが腫瘍発達の初期段階に関与することを示している。カテプシン、u-PA系、およびマトリックスメタロプロティナーゼのような多くのプロテアーゼが、タンパク質分解カスケードに寄与する。
【００３８】
u-PA系は、特に最近10年間において、文献中では最も広範に注目されている。幾つかの浸潤および転移性のヒト腫瘍は、正常組織と比較して、顕著に高いプラスミノーゲンアクチベータ活性を発現する。幾つかの腫瘍細胞株およびヒト固形腫瘍、例えば肺腫瘍、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および幾つかの他型の癌おいて、u-PAの増大した活性および発現が見られる。u-PAは、癌および組織再構築プロセスの両者において、細胞の伝播および浸潤のために必要なタンパク質分解反応における重要な酵素である。u-PAは、細胞表面の特異的に高い親和性の受容体と相互作用する。受容体に結合したu-PAは、内部移行を必要とすることなく、細胞表面において触媒的に活性である。それはプラスミノーゲンと相互作用してプラスミノーゲンを生成するが、これはやはり細胞表面に結合したままである。この経路を介しての高いu-PAレベルは、増大したプラスミンレベルを導く。プロテアーゼであるプラスミン自身が腫瘍の浸潤および転移において重要な役割を果たすことの実質的な証拠が存在する。プラスミン自身は、細胞外マトリックスタンパク質の分解を触媒する。こうして、プラスミノーゲンアクチベータ系は、腫瘍転移と密接に関連している。今日では新規な治療計画を開発するための重要な標的機構と看做される血管新生もまた、ウロキナーゼ依存性のプロセスである。プラスミノーゲン活性化系は、インテグリン機能を調節することによって、細胞接着プロセスに関与する可能性がある。血管新生分子である血管内皮成長因子（VEGF）は、腫瘍の進行において、u-PAと相互作用することが示唆されている。u-PAに触媒されたプラスミン生成は、動物モデルを用いた多くの実験において、腫瘍転移の重要な決定印紙であることが立証されている。
【００３９】
上記で概説した理由で、プラスミンは、抗癌剤ペプチドプロドラッグのターゲッティングのための非常に有望な酵素である可能性がある。活性なプラスミンは、癌および／またはストロマ細胞が産生するu-PAによって、不活性なプロ酵素形態のプラスミノーゲンから形成されるので、腫瘍組織に局在している。血液循環において、活性なプラスミンは、α2アンチプラスミンのように活性部位をブロックする阻害因子によって迅速に阻害される。腫瘍組織に存在するような、細胞に結合したプラスミンは阻害されない。加えて、プラスミンはタンパク質分解カスケードの最簿に生成されるので、プロドラッグの標的酵素として適している。一分子のu-PAは二分子以上のプラスミンを生成することができる。
【００４０】
プラスミン基質となるべきトリペプチドのアミノ酸配列は、それがセリンプロテアーゼプラスミンのための特異的基質であるように選択されなければならない。スペーサ-薬物部分に結合されたＣ末端アミノ酸は、アルギニンまたはリジン、好ましくはL-リジン残基である。プラスミンは、リジン残基の後で最も容易に開裂することが知られている。N末端におけるアミノ酸は、普遍的アミノペプチダーゼによるインビボ開裂を防止するために、D-コンフィギュレーションを有している。また、該N末端アミノ官能基をBocまたはFmoc基で保護することにより、欲しないペプチダーゼ開裂を防止することができる。中間のアミノ酸は、好ましくは疎水性のLアミノ酸であり、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、シクロヘキシルグリシン、トリプトファン、およびプロリンからなる群から選択される。好ましいトリペプチド配列は、D-アラニルフェニルアラニルリジン、D-バリルロイシルリジン、D-アラニルロイシルリジン、D-バリルフェニルアラニルリジン、D-バリルトリプトファニルリジン、およびD-アラニルトリプトファニルリジンである。トリペプチドの二つのアミノ基を対応するアンモニウム塩に変換することによって、このプロドラッグの水溶性は改善されるはずである。
【００４１】
本発明においては、新規な延長スペーサシステムの合成および応用が記載される。一つの態様において、このスペーサは、1,(4+2n)脱離プロセス（図４、図５）を介して自己脱離する。これらの1,(4+2n)脱離スペーサは、従来の1,6-脱離スペーサに関して延長される。1,8-脱離の原理の証明は、亜鉛および酢酸を使用した、パクリタキセルのニトロシンナミルカーボネート誘導体の化学的還元に対して提供された（図６、図７）。関連のパクリタキセルが良好な収率で単離された。最初に、二重保護されたトリペプチドが合成された（図８）。この1,8-脱離スペーサ自身は、図９に示すようにして、4-ニトロシンナミルアルコールから合成された。4-アミノシンナミルアルコールは、プラスミン活性化のために、ドキソルビシンとトリペプチドの間に組込まれた（図１０）。
【００４２】
また、本発明では、指定子と薬物との間に組込まれた、相互に結合された二以上の電子カスケードスペーサを含むプロドラッグも開示される（図１１）。この種のリンカー系を含むプロドラッグは、以前には未だ報告されたことがない。本発明のこの態様は、二つの1,6-脱離スペーサを介してドキソルビシンまたはパクリタキセルに結合されたトリペプチド指定子を含む、二つのプロドラッグを合成することによって例示された。この保護されたトリペプチドは、続いて4-アミノベンジルアルコールとカップリングされ、この得られたベンジルアルコールはクロロ蟻酸4-ニトロフェニルで活性化されて、対応する4-ニトロフェニルカーボネートを生じた（図１２）。非常に効率的な反応においては、ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）を触媒として用い、4-アミノベンジルアルコールの第二の分子がこの活性化されたカーボネートにカップリングされて、対応するトリペプチド-二重スペーサ接合体（conjugate）を生じた（図１３）。ジフェニルホスフィン酸を触媒に用いてこの反応を行なったときは、生成物が16パーセントでしか単離されなかった（図１４）。このペプチド-二重スペーサ接合体は、その後のクロロホルメートによる活性化、薬物とのカップリングおよび最後の脱保護により、ドキソルビシンプロドラッグ（図１５）およびパクリタキセルプロドラッグ（図１６）の中に組込まれた。フェニルアラニンの代りにトリプトファン残基を有する、二重スペーサ含有のドキソルビシンプロドラッグも合成された（図１７、図１８）。更なる態様に従って、第三の4-アミノベンジルアルコールスペーサを、4-ニトロフェニルカーボネートで活性化されたトリペプチド-二重スペーサ接合体と反応させて、対応のトリペプチド-三重スペーサ接合体を得た（図１９）。続いて、この化合物は、図１５および図１６に示したのと同じ経路を用いて、対応する三重電子カスケードスペーサ含有のドキソルビシンプロドラッグに変換された。
【００４３】
特許請求の範囲には、プロ部分がカルバメート結合を介して親部分Zに結合されるプロドラッグも記載されている。これらのカルバメート結合したプロドラッグは、一以上の電子カスケードスペーサおよびω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサの両方を含む延長リンカー系を含んでいる（図２０）。この種のパクリタキセル-2'-カルバメートプロドラッグは、請求項３５および請求項３６に記載の、高収率を導く新規な収斂経路を介して合成された。パクリタキセルは、一以上の(4+2n)脱離（n＝1、1、2、3、4、5…10）およびこれに続く分子内環化の後に放出されるであろう。本発明において、環化スペーサは、カルバメート結合を介してパクリタキセルの2'-OH基に結合される（図２０）。先ず、パクリタキセルは2'-位において選択的に活性化された（図２１）。次に、この2'-活性化されたパクリタキセル類縁体にモノ保護された環化スペーサを結合し、保護基を酸性条件下で除去して第一の断片を得た（図２２）。第二の断片は、1,6-脱離スペーサをトリペプチド指定子に結合し、続いて、ベンジルアルコール官能基をクロロ蟻酸4-ニトロフェニル活性化することによって合成した（図１２）。次いで、両方の断片を相互にカップリングし（図２３）、該カップリング生成物を脱保護した（図２４）。最終段階で二つのスペーサ間に化学結合が形成されるこの戦略に従って、二つの別々の断片をカップリングすることは、パクリタキセルプロドラッグへの最も効率的な経路を提供した。これは、指定子が電子カスケードスペーサ系（指定子に結合される）、および環化スペーサ（薬物に結合される）を介してヒドロキシル含有薬物に結合される、この種のプロドラッグを得るための新規な経路である。電子カスケードスペーサ系および環化スペーサの両方を含む他の二つのパクリタキセルプロドラッグの調製が、図２５〜図２７に記載されている。図２８には、一つの電子カスケードスペーサを含む、以前に報告されたプラスミンで活性化されるプロドラッグが記載されている。
【００４４】
更なる側面において、本発明は、上記で定義したプロドラッグを合成するための方法に関する。本発明は、例えば、指定子基と薬物分子との間に組込まれた、相互に連結された少なくとも一つの電子カスケードスペーサ基およびω-アミノ アミノカルボニル環化脱離スペーサ基を有し、前記薬物分子は、該薬物分子のヒドロキシル官能基を介して前記環化脱離スペーサ基に結合される上記で定義したプロドラッグを合成する方法であって、前記指定子基に結合された第一の電子カスケードスペーサ基を、所望であれば、前記第一の電子カスケードスペーサ基と同一または異なる少なくとも一つの第二の電子カスケードスペーサ基を介して、前記環化脱離スペーサ基に結合させることによる方法に関する。好ましい方法においては、前記薬物分子はパクリタキセルであり、第一の工程では、4-ニトロフェニルカーボネートで活性化された薬物への遊離スペーサ-アミンの添加によるカルバメート結合を通して、環化脱離スペーサ基がその2-水酸基を介して前記パクリタキセルに結合され、続いて脱保護されてパクリタキセルに結合した環化スペーサからなる第一の断片を得、また第二の工程では、同一もしくは異なる一以上の1,(4+2n)電子カスケードスペーサ（nは0〜10の整数）が指定子基に結合され、続いて4-ニトロフェニルカーボネートへと活性化され、その後の第三の工程において、前記第一および第二の工程で得られた断片が塩基性反応条件下で相互に結合される。
【００４５】
本発明は更に、一つの電子カスケードスペーサの末端アルコール基を、カルバメート結合を介してもう一つの電子カスケードスペーサのアニリンアミノ基に結合することにより、電子カスケードスペーサが相互に結合されている上記で定義したプロドラッグを合成する上記で定義した合成方法であって、前記最初に述べた電子カスケードスペーサのアルコール基を対応する4-ニトロフェニルカーボネートに変換し、この分子を、塩基の存在または不存在下において、触媒量の1-ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で前記他の電子カスケードスペーサと反応させることによる方法に関する。
【００４６】
更にもう一つの側面において、本発明は、上記で定義した化合物の使用であって、それを必要としている哺乳類を治療する薬学的製剤の製造のための使用に関する。本発明はまた、それを必要としている哺乳類を治療する方法であって、該方法は、薬学的組成物を治療的に効果的な投与量で前記哺乳類に投与することを含む方法に関する。
【００４７】
更なる側面において、本発明は、経口、局所または注射のための固体または液体の処方を提供するための、上記で定義した化合物を含有する薬学的組成物を製造する方法に関する。このような方法は、少なくとも、当該化合物を薬学的に許容可能なキャリアと混合する工程を具備する。
【００４８】
本発明はまた、上記で定義した本発明の化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明の化合物は、薬学的キャリアと共に生成された形態で、薬学的組成物として投与することができる。好ましい形態は、意図された投与モード、および治療的もしくは診断的用途に依存する。薬学的キャリアは、本発明の化合物を患者に送達するために適した、適合性で且つ非毒性の如何なる物質であってもよい。薬学的に許容可能なキャリアは当該技術において周知であり、例えば、（滅菌）水または緩衝生理食塩水のような水溶液、または他の溶媒もしくは担体（例えばグリコール、グリセロール）、オリーブオイルもしくは注射可能な有機エステル等のオイル、アルコール、脂肪、ワックス、および不活性固体をキャリアとして使用すればよい。薬学的に許容可能なキャリアは、更に、例えば本発明の化合物を安定化し、またはその吸収を増大させるように働く、生理学的に許容可能な化合物を含むことができる。このような生理学的に許容可能な化合物には、例えば、グルコース、蔗糖もしくはデキストラン等の炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオン等の抗酸化剤、キレート化剤、低分子量タンパク質もしくは他の安定化剤、または賦形剤が含まれる。当業者は、生理学的に許容可能な化合物を含む薬学的に許容可能なキャリアの選択が、例えば当該化合物の投与経路に依存することを知るであろう。また、薬学的に許容可能なアジュバント、緩衝剤、分散剤等も、当該薬学的組成物の中に組込むことができる。
【００４９】
経口投与については、活性成分は、カプセル、錠剤および粉末のような固体投与形態、またはエリキシール、シロップ、および懸濁液のような液体投与形態で投与される。活性成分は、グルコース、乳糖、蔗糖、マンニトール、澱粉、セルロースもしくはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルク、炭酸マグネシウム等のような不活性成分および粉末キャリアと共に、ゼラチンカプセル内に封入することができる。望ましい色、呈味性、安定性、緩衝能、分散、または他の既知の望ましい特性を提供するために添加し得る追加の不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、食用白色インク（edible white ink）等である。同様の希釈剤を使用して、圧縮錠剤を作製することができる。錠剤およびカプセルは両者共、数時間に亘って医薬の連続的な放出を提供するための持続放出製品として製造することができる。圧縮錠剤は、何等かの不快な味覚をマスクし、錠剤を大気から保護するための糖衣コーティングまたはフィルムコーティングを施すことができ、または胃腸管内で選択的に崩壊させるためのエンテリックコーティングを施すことができる。経口投与のための液体投与形態は、患者の許容性を増進するための着色剤および香料を含むことができる。
【００５０】
しかし、本発明の化合物は、好ましくは非経腸的に投与される。非経腸的投与のために、本発明の化合物の製剤は滅菌されなければならない。滅菌は、任意に凍結乾燥および再構成の前または後に、滅菌濾過膜を通して濾過することにより容易に達成される。本発明の化合物の投与のための非経腸的経路は、公知の方法に従い、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、または病巣内経路による注射または注入によって行う。本発明の化合物は、注入により連続的に、または大量瞬時注射により投与することができる。静脈注入のための典型的な組成物は、任意に20％アルブミン溶液を補充した100〜500mLの滅菌済みの0.9% NaCLまたは5% グルコース、並びに本発明の化合物の特定の種類およびその必要な投与レジメに応じて、1 mg〜10 gの本発明の化合物を含むように製造できるであろう。非経腸的に投与可能な組成物を調製するための方法は当該技術において周知であり、例えば、その全体を全ての目的で本明細書の一部として援用するRemington's Pharmaceutical Science（15thed., Mack Publishing, Easton, PA, 1980）を含む、種々の文献に更に詳細に記載されている。
【００５１】
また、本発明は、抗体指向性酵素プロドラッグ療法（ADEPT）、ポリマー指向性酵素プロドラッグ療法（PDEPT）、ウイルス指向性酵素プロドラッグ療法（VDEPT）、または遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法（GDEPT）により、標的細胞もしくは標的組織の近傍に輸送される酵素によって指定子Vが除去されるような、上記で定義した化合物に関する（例えば、米国特許第4,975,278号；Melton et al., 1996, J. NatL Can. Inst., 88(3/4):1 53-165参照）。
【００５２】
以下の実施例により、本発明を更に例示する。これらの実施例は例示の目的のために提供されるものであり、発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００５３】
例１
2'-[4-ニトロシンナミルカーボネート]-パクリタキセル１の合成
乾燥ジクロロメタン／テトラヒドロフラン中の200mg(1.12mmol，4.8当量) 4-ニトロシンナミルアルコールの溶液に、窒素雰囲気下にてピリジン(94μL，5.0当量)およびクロロ蟻酸4-ニトロフェニル(236mg，5.0当量)を添加した。この反応混合物を12時間室温で撹拌した。混合物を０℃にまで冷却し、触媒量のDMAP、数滴のトリエチルアミンおよび200mgパクリタキセル(1.0当量)を添加した。この反応混合物を室温で12時間撹拌した。溶剤を蒸発させ、残った固体をジクロロメタン中に溶解させ。有機層を、重炭酸ナトリウム飽和溶液、0.5N 重硫酸カリウムおよび塩水を用いて完全に洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶剤を蒸発させた後、残渣の黄色の油状物をカラムクロマトグラフィにより(エチル酢酸-ヘキサン；1:1)精製し、144mgの１(58％)を得た。
【００５４】
融点151℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.17(s，3H，17)，1.22(s，3H，16)，1.70(s，3H，19)，1.96(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.46(s，3H，4-OAc)，2.55(m，1H，6a)，3.82(d，1H，J＝7.0Hz，3)，4.26(d，1H，J＝8.4Hz，20b)，4.32(d，1H，J＝8.4Hz，20a)，4.39(m，1H，7)，4.87(bt，2H，CH2-spacer)，4.99(bd，1H，J＝7.9Hz，5)，5.46(d，1H，J＝2.8Hz，2')，5.72(d，1H，J＝7.1Hz，2)，6.01(m，1H，3')，6.26(bt，1H，13)，6.34(s，1H，10)，6.43(dt，1H，J＝16.0Hz，HC=CH-CH2)，6.75(d，1H，J＝16.0Hz，HC=CH-CH2)，7.35-7.67(m，1311，aromatic)，7.75(d，2H，J＝7.2Hz，aromatic)，8.15(d，2H，J＝7.2Hz，aromatic)，8.19(d，2H，J＝7Hz，ニトロフェニル) ppm；MS(FAB) m/e 1059(M+H)+，1081(M+Na)+；元素分析(C57H58N2O18・21/2H2O)計算値 C 62.01％，H 5.75％，N 2.54％，測定値 C 62.06％，H 5.31％，N 2.60％。
【００５５】
例２  1,8-脱離の原理：ニトロシンナミルカーボネート１の化学的還元
36mgの2'-[4-ニトロシンナミルカーボネート]-パクリタキセル１を8mLメタノールおよび2mL酢酸中に溶解させた。触媒量の亜鉛粉末を添加し、赤色の混合物を12時間撹拌した。ジクロロメタンを添加し、有機層を重炭酸ナトリウム飽和物、0.5N 重硫酸カリウム、塩水、および水を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶剤を蒸発させた後、残渣の黄色の膜状物をカラムクロマトグラフィにより(エチル酢酸-ヘキサン；2:1)精製し、28mgのパクリタキセル(300MHz1H-NMRによる確認)および4mgの未反応の出発化合物を得た。この化合物を亜鉛粉末存在下で同じ条件下にて撹拌すると、パクリタキセルは形成されず、亜鉛によるニトロ基の還元がパクリタキセルの放出をもたらしたことを示した。
【００５６】
例３  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-OH 9の合成
工程ａ：Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OBu 4の合成
乾燥ジクロロメタン中の2.50g Fmoc-Phe-ONSu 2(ONSu＝N-ヒドロキシスクシンイミド)(5.16mmol)の溶液に、窒素雰囲気下にて０℃で0.791mL トリエチルアミン(1.1当量)および1.92g H-Lys(Boc)-OBu・HCl ３(1.1当量)を添加した。この反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いでジクロロメタンを添加し、有機層を10％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび水を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。得られた白色の固体４(3.08g，89％)をさらに精製せずに用いた。
【００５７】
融点93℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.10-1.90(m，24H，6 CH2-Lys and 18 tert-ブチル)，3.06(m，2H，N-CH2-Lys and benzylic)，4.19(t，1H，Fmoc)，4.25-4.55(m，4H，2 Fmoc and 2 Hα)，7.19-7.78(m，13H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 672(M+H)+，694(M+Na)+；C39H49N3O7計算値 C 69.72％，H 7.35％，N 6.25％，測定値 C 69.69％，H 7.48％，N 6.22％。
【００５８】
工程b：Boc-D-Ala-Phe-Lys(Boc)-OBu ７の合成
3.08g(4.58mmol)のFmoc-Phe-Lys(Boc)-OBu ４を100mLのジオキサン／メタノール／2N 水酸化ナトリウム(70/25/5)中に溶解させ、室温で約１時間撹拌した。この反応混合物を酢酸(0.571mL)を用いて中性にし、有機溶剤を蒸発させた。水およびジオキサンを添加し、この溶液を凍結乾燥させた。ジイソプロピルエーテルを得られた固体に添加した。濾過後、濾液を蒸発させた。残渣の生成物５を乾燥ジクロロメタン中に溶解させ、乾燥ジクロロメタン中の1.19g(4.16mmol) Boc-D-Ala-ONSu６ および0.634mL(1.1当量)のトリエチルアミンの溶液に０℃で添加した。この反応混合物を一晩撹拌した後、ジクロロメタンを添加した。有機層を10％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび水を用いて洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム飽和物上で乾燥させ、蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；20/1)により精製し、2.56g(4.13mmol，99％)のBoc-D-Ala-Phe-Lys(Boc)-OBu ７を白色の泡状物で得た。
【００５９】
融点59℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.25(d，3H，CH3-Ala)，1.43(bs，27H，tert-ブチル)，1.00-1.90(m，6H，CH2-Lys)，2.80-3.30(m，4H，N-CH2-Lys and benzylic)，4.15(m，1H，Hα)，4.35(m，1H，Hα)，4.64(bd，1H，Hα)，7.15-7.35(m，5H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 621(M+H)+，643(M+Na)+；C32H52N4O8(・1/2H2O)計算値 C 61.03％，H 8.48％，N 8.90％，測定値 C 61.15％，H 8.44％，N 8.66％。
【００６０】
工程ｃ：D-Ala-Phe-Lys-OH ８の合成
2.56g(4.13mmol) Boc-D-Ala-Phe-Lys(Boc)-OBu ７を、EtOAc(3M)中のHClの溶液中で撹拌した。５時間、溶剤を蒸発させ、tert-ブタノールを添加し、二度蒸発させて残っている塩酸を除去した。得られた生成物をジオキサン／水の混合物中で凍結乾燥させ、クリーム色の粉末８を得、さらに精製せずに用いた。
【００６１】
1H-NMR(300MHz，D2O)：δ0.94(d，3H，CH3-Ala)，1.10-1.85(m，6H，CH2-Lys)，2.75-2.84(m，3H，N-CH2-Lys and benzylic)，3.09(dd，1H，benzylic)，3.54(dd，1H，Hα)，3.98(dd，1H，Hα)，4.54(q，1H，Hα)，7.10-7.22(m，5H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 365(M+H)+。
【００６２】
工程d：  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-OH 9の合成
水／アセトニトリル中の706mg(1.61mmol) D-Ala-Pbe-Lys-OH 8の溶液に、pHが9〜9.5に達するまでトリエチルアミンを添加し、次いでアセトニトリル中の704mg(2.2当量) Aloc-ONSuを添加し、この反応混合物を、トリエチルアミンを添加することにより塩基性に保った。混合物のpHが変化しなくなった後、pHが3に達するまで0.5M のHCl溶液を添加した。混合物をジクロロメタンを用いて完全に抽出した。有機層を水を用いて洗浄し、水層をジクロロメタンを用いて再び抽出した。有機層を硫酸ナトリウム飽和物上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、所望の生成物９をクリーム色の泡状物で得た(742mg，86％)。
【００６３】
融点141℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.10-1.95(m，6H，CH2-Lys)，1.21(d，3H，CH3-Ala)，2.90-3.30(m，4H，N-CH2-Lys and benzylic)，4.20(m，1H，Hα)，4.55(m，5H，Hα and 4 Aloc)，4.76(bd，1H，Hα)，5.17-5.31(m，4H，Aloc)，5.83-5.92(m，2H，Aloc)，7.20-7.28(m，5H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 533(M+H)+，555(M+Na)+；C26H36N4O3計算値C 58.63％，H 6.81％，N 10.52％，測定値 C 58.54％，H 6.81％，N 10.28％。
【００６４】
例４  4-アミノシンナミルアルコール10の合成
THF／メタノール(60mL，1:1 v/v)中の1.5g(8.37mmol)の4-ニトロシンナミルアルコールの溶液に、触媒量のラネーニッケルおよびヒドラジン一水化物(1.22mL，25.1mmol)を添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、1.5時間、さらなるヒドラジン一水化物(1.22mL)を添加した。この反応混合物をHFLO上で濾過し、減圧下で濃縮して5mLジクロロメタン(100mL)を添加し、得られた溶液を水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮して10(1.24g，8.31mmol，99％)を得た。
【００６５】
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.24(d，2H，J＝6.1Hz，CH2OH)，6.11-6.20(dt，1H，J＝6.1Hz，J＝15.8Hz，CH=CH-CH2OH)，6.48(d，1H，J＝15.8Hz，CH=CH-CH2)，6.62(d，2H，J＝11.1Hz，aromatic)，7.19(d，2H，J＝11.0Hz，aromatic) ppm；MS(EI) m/e 149(M)+。
【００６６】
例５  Fmoc-D-Ala-Phe-Lys(Fmoc)-PACA 11の合成
水およびアセトニトリルの7:3 混合物(300mL)中のD-Ala-Phe-Lys-OH 8(3.20g，8.79mmol)の溶液に、pHが8.5に達するまでトリエチルアミンを添加した。アセトニトリル(50mL)中のFmoc-OSu(5.93g，17.6mmol)の溶液を添加した。トリエチルアミンの添加により得られた溶液のpHを8.5〜9.0に保った。pHが変化しなくなった後、1N HCl 水溶液を添加して溶液を中性にした。この溶液を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去した。得られた水溶液を酢酸エチルを用いて４回抽出した。合体した有機層をNa2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジイソプロピルエーテルを用いて完全に洗浄し、極性の不純物を除去した。これにより5.54g(6.85mmol，78％)の粗成物９ｂを得た。
【００６７】
THF(50mL)中の９ｂ(500mg，0.618mmol)の溶液を−40℃にまで冷却した。次いで、N-メチルモルホリン(75μL，0.68mmol)およびクロロ蟻酸イソブチル(89μL，0.68mmol)を連続して添加した。得られた溶液を−40℃で3.5時間撹拌した。
【００６８】
THF(20mL)中のパラ-アミノシンナミルアルコール(111mg，0.742mmol)の溶液をゆっくりと添加した。この反応混合物を−20℃で５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。この粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CH2C12/MeOH；93/7)により精製した。これにより516mgの11(0.549mmol，89％)。
【００６９】
1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ1.17(d，3H，J＝6.8Hz，CH3of Ala)，1.20-2.00(m，6H，3×CH2-Lys)，2.89-3.26(m，4H，N-CH2of Lys and Ph-CH2of Phe)，3.88-4.58(m，11H，CH2and CH of Fmoc and CH2of spacer and 3×Hα)，6.21(dt，1H，J＝15.9Hz，J＝5.8Hz，CH=CH-CH2)，6.48(d，1H，J＝15.7Hz，CH=CH-CH2)，7.15-7.43(m，17H，aromatic)，7.52-7.57(m，2H，aromatic)，7.67(d，1H，J＝7.4Hz，aromatic)，7.71(d，1H，J＝7.4 Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 940(M+H)+。
【００７０】
例６  Fmoc-D-Ala-Phe-Lys(Fmoc)-PACC-PNP 12の合成
THF(15mL)中の11(800mg，0.85 1mmol)の溶液に、０℃でDIPEA(594μL，3.40mmol)、パラ-ニトロフェニルクロロ蟻酸塩(515mg，2.55mmol)、およびピリジン(17.3μL，0.213mmol)を添加した。この反応混合物を室温で２時間撹拌した後、ジクロロメタン(50mL)および水(50mL)を添加した。水層を有機層から分離させ、ジクロロメタンを用いて抽出した(3×100mL)。合体した有機層を水、NaHCO3飽和水溶液、および塩水を用いて洗浄し、無水Na2SO4を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンおよびジエチルエーテルの1:2の混合物を用いて洗浄した。これにより12(812mg，0.734mmol，86％)を得た。
【００７１】
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.95(d，3H，J＝7.8Hz，CH3of Ala)，1.05-1.90(m，6H，3×CH2of Lys)，2.90(dd，1H，J＝11.4Hz，J＝15. 0Hz，CH2of Phe)，3.11(m，2H，N-CH2of Lys)，3.26(m，1H，CH2of Phe)，4.24-4.89(m，9H，CH2and CII of Fmoc and 3×Hα)，5.24(d，2H，J＝6.6Hz，CH=CH-CH2)，6.81(dt，1H，J＝17.4Hz，J＝7.0Hz，CH=CH-CH2)，7.23(d，1H，J＝17.4Hz，CH=CH-CH2)，7.66-8.25(m，23H，aromatic)，8.44-8.48(m，4H，aromatic)，8.97(d，2H，J＝10.1Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 1105(M+H)+。
【００７２】
例７  Fmoc-D-Ala-Phe-Lys(Fmoc)-PACC-DOX 13の合成
N-メチルピロリジニノン(2mL)中の12(100mg，90.5μmol)の溶液に、トリエチルアミン(13.2μL，95.0μmol)およびドキソルビシン塩酸塩(55.1mg，95.0μmol)を添加した。この反応混合物を室温で15時間撹拌し、次いで酢酸エチル(25mL)中の10％イソプロパノール中に注いだ。得られた溶液を水を用いて洗浄し、ジクロロメタン(50mL)を用いて希釈し、無水Na2SO4を用いて乾燥させ濾過し、減圧下で濃縮した。粗成物をby カラムクロマトグラフィ(SiO2-CH2Cl2/MeOH；93/7)により精製し、続いてジエチルエーテルからの沈殿を経て13(82.3mg，54.5μmol，60％)を得た。
【００７３】
1H NMR(300MHz，DMSO-d13)δ0.98(d，3H，J＝6.8Hz，CH3of Ala)，1.12(d，3H，J＝6.7Hz，5'-Me)，1.24-2.25(m，8H，3×CH2of Lys and 2' and 8)，2.79(m，1H，CH2of Phe)，2.97(m，4H，N-CH2of Lys and 10)，3.11(m，1H，CH2of Phe)，3.47(m，1H，4')，3.74(m，1H，3')，3.97(s，3H，OCH3)，3.97-4.37 & 4.54-4.60 & 4.72 & 4.85 & 4.97 & 5.24 & 5.47(14H，CH2and CH of Fmoc and CH=CH-CH2and 1' and 5' and 7 and 14 and OH)，6.20(m，1H，CH=CH-CH2)，6.55(d，1H，J＝16.2Hz，CH=CH-CH2)，7.14-7.93(m，32H，aromatic) ppm；MS(FAB)m/e 1533(M+Na)+。
【００７４】
例８  D-Ala-Phe-Lys-PACC-DOX(-2HCl) 14の合成
DMF(2mL)中の50(40.0mg，26.5μmol)の撹拌溶液に、ピペリジン(128μL，1.30mmol)を添加した。10分後、この反応混合物を氷冷したジエチルエーテルの撹拌溶液にゆっくりと添加した。沈殿物を遠心分離により回収し、ジエチルエーテルを用いて洗浄し、酢酸エチル中に溶解させた。酢酸エチル(200μL)中のHClの約0.5M溶液を添加し、形成された沈殿物を遠心分離により回収した。残渣をtert-ブタノールおよびクロロホルムの2:1の混合物中に溶解させ、得られた溶液を減圧下で濃縮した。この手順を２回繰り返し、凍結乾燥後、51(29.4mg，25.8μmol，97％)をオレンジ色の固体で得た。
【００７５】
1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ1.22(d，3H，5'-Me)，1.29(d，3H，CH3of Ala)，1.30-2.00(m，8H，3×CH2of Lys and 2')，2.17(br.d, 1H，8)，2.39(br.d，1H，8)，2.93-3.35(m，7H，CH2of Phe and N-CH2of Lys and 10 and 4')，3.63(m，1H，3')，3.85-4.20(m，3H，5' and 2×Hα)，4.07(s，3H，OCH3)，4.50-4.78(m，5H，Hα and 14 and CH=CH-CH2)，5.25(m，1H，1')，5.48(m，1H，7)，6.15(m，1H，CH=CH-CH2)，6.56(d，1H，J＝14.6Hz，CH=CH-CH2)，7.23-7.56(m，lOH，aromatic and 3)，7.82(t，1H，J＝8.0Hz，2)，8.01(m，1H，1) ppm；MS(FAB) m/e 1065(M+H)+。
【００７６】
例９  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABA 15の合成
保護されたトリペプチドAloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-OH ９の溶液730mg(1.37mmol)を窒素雰囲気下にて乾燥THF中に溶解させ、−40℃にまで冷却した。NMM(166μL，1.1当量)およびクロロ蟻酸イソブチル(196μL，1.1当量)を添加した。この反応混合物を３時間、−30℃を下回る温度で撹拌した。乾燥THF中の4-アミノベンジルアルコール(203mg，1.2当量)およびNMM(181μL，1.2当量)の溶液を反応混合物に滴下添加した。２時間後、THF を蒸発させ、ジクロロメタンを添加した。有機層を重炭酸ナトリウム飽和物、0.5N 重硫酸カリウム溶液および塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム飽和物上で乾燥させ、蒸発させた。残渣の淡い黄色の固体をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；9/1)により精製し、812mg(93％)の所望の生成物15をクリーム色の粉末で得た。
【００７７】
融点156℃；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ0.96(d，3H，CH3-Ala)，1.10-1.85(m，6H，CH2-Lys)，2.77(dd，1H，benzylic Phe)，2.97(bd，2H，N-CH2-Lys)，3.09(dd，1H，benzylic Phe)，4.00(t，1H，Hα)，4.20-4.60(m，8H，2 Hα and 4 Aloc and CR2-OH)，5.00-5.35(m，4H，Aloc)，5.76-5.95(m，2H，Aloc)，7.05-7.30(m，7H，aromatic)，7.41(d，1H，NH)，7.56(d，2H，aromatic)，8.12(d，1H，NH)，8.18(d，1H，NH)，9.80(s，1H，NH anilide) ppm；MS(FAB) m/e 638(M+H)+；660(M+Na)+；C33H43N5O8(・1/2H2O) 計算値 C 61.29％，H 6.86％，N 10.83％，測定値 C 61.39％，H 6.54％，N 10.55％。
【００７８】
例10  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PNP 16の合成
乾燥THF／CH2Cl2中の384mg(0.602mmol)15の溶液に、窒素雰囲気下にて、クロロ蟻酸4-ニトロフェニル(182mg，1.5当量)および乾燥ピリジン(73μL，1.5当量)を添加した。この反応混合物を室温で48時間撹拌し、次いでEtOAcを添加した。有機層を10％クエン酸、塩水 および水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム飽和物上で乾燥させ、蒸発させて黄色の固体を得た。生成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CH2Cl2/MeOH；30/1)により精製し、324mg(67％)のカーボネート16を得た。
【００７９】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.21(d，3H，CH3-Ala)，1.25-2.05(m，6H，CH2-Lys)，2.95(dd，1H，benzylic Phe)，3.13(bt, 2H，N-CH2-Lys)，3.27(dd，1H，benzylic Phe)，4.08(dd，1H,時間a)，4.25(dd，1H，Hα)，4.30-4.65(m，5H，Hα and 4 Aloc)，5.04-5.35(m，4H，Aloc)，5.26(s，2H，CH2-OH)，5.65-6.00(m，2H，Aloc)，7.10-7.35(m，5H，aromatic)，7.39-7.43(2*d，4H，aromatic)，7.71(d，2H，aromatic)，8.28(d，2H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 803(M +H)+，825(M+Na)+。
【００８０】
例11  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABA 17の合成
乾燥N,N-ジメチルホルムアミド中の156mg(194μmol)の化合物16および26.3mg(1.1当量) PABA の溶液に、窒素雰囲気下にてジイソプロピルエチルアミン(34μL，1.0当量)および触媒量のN-ヒドロキベンゾトリアゾール(7.9mg，0.3当量)を添加した。反応溶液を24時間撹拌した後、10％プロパノール-2／EtOAcを用いて希釈した。有機層を飽和重炭酸ナトリウム、0.5N 硫酸水素カリウムおよび塩水を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。黄色の残渣の膜状物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；9/1)により精製し、148mg(97％)の所望の生成物17を得た。
【００８１】
融点196-197℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.20(d，3H，3J＝6.4Hz，CH3-Ala)，1.27-2.05(m，6H，3 CH2-Lys)，2.99(dd，1H，benzylic)，3.14(m，2H，N-CH2-Lys)，3.27(dd，1H，benzylic)，4.00-4.64(m，7H，3 Hα and Aloc)，4.57(s，2H，beazylic-spacer)，5.14(s，2H，benzylic-spacer)，5.06-5.37(m，4H，Aloc)，5.72(m，1H，Aloc)，5.88(m，1H，Aloc)，7.10-7.46(m，11H，aromatic)，7.64(d，2H，3J＝8.3Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 809(M+Na)+；C41H50N6O10(1/2H2O)計算値 C 61.87％，H 6.46％，N 10.56％，測定値 C 61.84％，H 6.38％，N 10.38％。
【００８２】
例12  Aloc-D-Ma-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PNP 18の合成
乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン中の80.2mg(102μmol)の化合物17、ピリジン(25μL，3.0当量)およびクロロ蟻塩4-ニトロフェニル(44.3mg，220μmol)の溶液を窒素雰囲気下にて、０℃２時間、および一晩室温で撹拌した。溶液を真空下で蒸発させ、残渣の生成物をジクロロメタン中に溶解させた。有機層を塩水および0.5N 重硫酸カリウムを用いて洗浄した後、有機層を 無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥するまで濃縮した。得られた粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；20/1)に供し、61.9mg(84％)の化合物18を得た。
【００８３】
融点69-70℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.23(d，3H，3J＝7.0Hz，CH3-Ala)，1.10-2.08(m，6H，3 CH2-Lys)，3.04(m，1H，benzylic)，3.13(m，2H，N-CH2-Lys)，3.27(bd，1H，benzylic)，4.06(m，1H，Hα)，4.26(m，1H，Hα)，4.35-4.70(m，5H，Hα and Aloc)，5.04-5.47(m，4H，Aloc)，5.14(s，2H，benzylic-spacer)，5.24(s，2H，benzylic-spacer)，5.72(m，1H，Aloc)，5.90(m，1H，Aloc)，7.10-7.46(m，13H，aromatic)，7.65(d，2H，3J＝8.3Hz，aromatic)，8.27(d，2H，3J＝9.1Hz，aromatic-PNP) ppm；MS(FAB) m/e 952(M+H)+，974(M+Na)+；C40H46N6O12(・1/4H2O) 計算値 C 59.51％，H 5.81％，N 10.41％，測定値 C 59.52％，H 5.54％，N 10.12％。
【００８４】
例13  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-DOX19の合成
N-メチル ピロリジニノン中の、4-ニトロフェニルカーボネート18(140mg，0.147mmol)およびドキソルビシン-HCl(94.1mg，1.1当量)を含んだ二重スペーサを室温でトリエチルアミン(22.5μL，1.1当量)を用いて処理した。この反応混合物を暗所にて72時間撹拌し、再びトリエチルアミン(1.1当量)を添加し、さらに24時間、この反応混合物を10％2-プロパノール／酢酸エチルを用いて希釈した。有機層を水および塩水を用いて洗浄し、乾燥させた(Na2SO4)。溶剤を蒸発させた後、粗成物をカラムクロマトグラフィ(クロロホルム-メタノール；9:1)、およびこれに続いて2mmシリカプレートを備えたクロマトロンを用いた循環クロマトグラフィ(クロロホルム-メタノール；9:1)により精製し、72mg(36％)の保護されたプロドラッグ19を得た。
【００８５】
融点129℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.22(d，3H，J＝7.1Hz，sugar CH3)，1.27(d，3H，J＝6.7Hz，CH3-Ala)，1.25-2.00(m，8H，CH2-Lys and 2')，2.15(dd，1H，8)，2.36(bd，1H，8)，3.04(bd，1H，J＝18.7Hz，10)，2.90-3.50(m，5H，benzylic Phe and N-CH2-Lys and 10)，3.37(bs，1H，4')，3.58(m，1H，3')，3.85(m，1H，Hα)，4.08(s，3H，OMe)，4.14(m，1H，Hα)，4.29(dd，1H，5')，4.37-4.68(m，5H，Hα and 4 Aloc)，4.76(s，2H，14)，4.96(s，2H，benzylic spacer)，5.11(s，2H，benzylic spacer)，5.02-5.40(m，4H，Aloc)，5.48(bs，1H，1')，5.61-6.00(m，3H，Aloc and 7)，7.08-7.39(m，9H，aromatic 5H Phe and 4H spacers)，7.33(d，2H，J＝8.3Hz，2H aromatic spacer)，7.42(d，1H，J＝8.4Hz，3)，7.62(d，2H，J＝8.0Hz，2H aromatic spacer)，7.80(t，1H，J＝8.1Hz，2)，8.03(d，1H，J＝7.5Hz，1) ppm；MS(FAB) m/e 1378(M+Na)+；元素分析(C69H77N7O22・2H2O)計算値 C 59.52％，H 5.86％，N 7.04％，測定値 C 59.34％，H 5.71％，N 6.66％。
【００８６】
例14  H-D-Ala-Phe-Lys-PABC-PABC-D0X・5.7HCl 20の合成
乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン中の48mg(0.035mmol)の保護されたプロドラッグ19の溶液に、窒素雰囲気下にてモルホリン(31μL，10当量)を触媒量のPd(PPh3)4とともに添加した。この反応混合物を１時間暗所にて撹拌した。赤色の沈殿物を遠心分離により回収した。酢酸エチルを添加し、混合物を1.0mLの0.5M 塩酸／酢酸エチルを用いて酸性にした。沈殿物を遠心分離により回収し、酢酸エチルを用いて数回洗浄した。tert-ブタノールを添加し、蒸発させ、得られた赤色の膜状物を水中で凍結乾燥させ、37mg(83％)のプロドラッグ20を得た。
【００８７】
Mp＞300℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.20(d，3H，J＝7.0Hz，sugar CH3)，1.27(d，3H，J＝6.5Hz，CH3-Ala)，1.38-2.05(m，8H，CH2-Lys and 2')，2.18(dd，1H，8)，2.36(bd，1H，8)，2.82-3.41(m，6H，benzylic Phe and N-CH2-Lys and 10)，3.37(s，1H，4')，3.60(bs，1H，3')，4.02(m，1H，Hα)，4.08(s，3H，OMe)，4.18(m，1H，Hα)，4.53(dd，1H，5')，4.66(dd，1H，Hα)，4.77(s，2H，14)，4.95(bs，2H，benzylic spacer)，5.14(s，2H，benzylic spacer)，5.27(bs，1H，1')，5.48(bs，1H，7)，7.09-7.50(m，1 1H，aromatic 5H Phe and 6H spacers and 3)，7.58(d，2H，J＝8.4Hz，2H aromatic spacer)，7.82(t，1H，J＝8.0Hz，2)，8.03(d，1H，J＝7.6Hz，1)  ppm；MS(FAB) m/e 1188(M+H)+，m/e 1210(M+Na)+；元素分析(duplo)(C61H69N7O18・5.7HCl)計算値 C 52.42％，H 5.39％，N 7.01％，測定値 C 52.38％，H 5.71％，N 7.14％。
【００８８】
例15  2'-[Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC]-パクリタキセル 21の合成
乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン中の4-ニトロフェニルカーボネート18(47.4mg，49.8mmol)およびパクリタキセル(42.3mg，1.0当量)を窒素雰囲気下にて室温でN,N-ジメチル-4-アミノピリミジン(DMAP)(6.7mg，1.1当量)を用いて処理した。この反応混合物を暗所にて48時間撹拌し、次いで乾燥するまで濃縮した。生成物をジクロロメタン中に溶解させ、有機層を飽和重炭酸ナトリウム、0.5N 重硫酸カリウムおよび塩水を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶剤を蒸発させた後、残渣の黄色の膜状物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex/MeOH；5/5/1)により精製し、67.5mg(82％)の所望の保護されたパクリタキセルプロドラッグ21を得た。
【００８９】
融点137-138℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.14(s，3H，17)，1.23(s，3H，16)，1.27(d，3H，3J＝7.1Hz，CH3-Ala)，1.05-2.10(m，6H，CH2-Lys)，1.67(s，3H，19)，1.89(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.44(s，3H，4-OAe)，2.97(m，1H，benzylic)，3.14(m，2H，N-CH2-Lys)，3.21(m，1H，benzylic)，3.81(d，1H，3J＝7.0Hz，3)，4.03(m，1H，Hα)，4.20(d，1H，2J＝8.4Hz，20b)，4.31(d，1H，23=8.4Hz，20a)，4.43(m，1H，7)，4.34-4.74(m，6H，Hα and Aloc)，4.90-5.37(m，11H，2 Ha, Aloc, 5 and 2 benzylic-spacer)，5.44(d，1H，3J＝2.9Hz，2')，5.63(m，1H，Aloc)，5.69(d，1H，3J＝7.1Hz，2)，5.87(m，1H，Aloc)，5.97(bd，1H，3J＝2.9Hz，3J＝9.2Hz，3')，6.26(m，1H，13)，6.29(m，1H，10)，7.05-7.80(m，26H，aromatic)，8.14(d，2H，3J＝7.2Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 1668(M+H)+，1689(M+Na)+；C89H99N7O25(・2H2O)計算値 C 62.78％，H 6.10％，N 5.76％，測定値 C 62.55％，H 5.82％，N 5.57％。
【００９０】
例16  2'-[H-D-Ala-Phe-Lys-PABC-PABC]-パクリタキセル(・2HCl) 22の合成
乾燥テトラヒドロフラン中の51.4mg(30.8μmol) 保護されたプロドラッグ21の溶液に、窒素雰囲気下にて氷酢酸(8.9μL，5当量)をトリブチルチンハイドライド(24.6μL，3当量)および触媒量のPd(PPh3)4とともに添加した。30分後、反応混合物に慎重に１mL 0.5M HCl/EtOAcを添加した。ジエチルエーテル添加することにより生成物を沈殿させ、白色の沈殿物を遠心分離により回収し、エーテルを用いて数回洗浄した。tert-ブタノールを添加し、再び蒸発させて過剰なHClを除去し、得られた生成物を水中に溶解させ、凍結乾燥させて46.9mg(100％)の所望のプロドラッグ22を得た。
【００９１】
融点＞192℃(dec.)；1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.15(s，3H，17)，1.21(s，3H，16)，1.10-2.00(m，9H，CH2-Lys and CH3-Ala)，1.67(s，3H，19)，1.90(s，3H，18)，2.20(s，3H，10-OAc)，2.43(s，3H，4-OAc)，2.85(m，4H，benzylic and N-CH2-Lys)，3.80(d，1H，3J＝6.9Hz，3)，4.24(d，1H，2J＝8.4Hz，20b)，4.31(d，1H，2J＝8.4Hz，20a)，4.39(dd，1H，7)，4.56(m，1H，Hα)，5.68(m，1H，Hα)，4.98(d，1H，5)，5.08(m，4H，2 benzylic-spacer)，5.43(d，1H，J＝2.7Hz，2')，5.70(d，1H，3J＝7.0Hz，2)，5.97(m，1H，3')，6.22(m，1H，13)，6.32(m，1H，10)，7.05-7.68(m，24H，aromatic)，7.71(d，1H，3J＝7.2Hz，aromatic)，8.14(d，2H，3J＝7.3Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 1499(M+H)+，1521(M+Na)+；C81H91N7O21(・3.7HCl)計算値 C 59.60％，H 5.85％，N 6.01％，測定値 C 59.60％，H 5.88％，N 5.98％。
【００９２】
例17  Fmoc-Trp-Lys(Boc)-OBu 24の合成
乾燥ジクロロメタン中の3.00g(5.73mmol) Fmoc-Trp-ONSu 23の溶液に、窒素雰囲気下にて０℃で0.791mL(1.00当量)トリエチルアミンおよび2.12g(1.10当量)H-Lys(Boc)-OBu・HClを添加した。混合物を室温で５時間撹拌し、次いでジクロロメタンを添加し、有機層を10％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。白色の固体 24(3.52g，86％)をさらに精製せずに用いた。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.10-1.92(m，24H,3 CH2-Lys and 18 t-Bu)，2.80-3.20(m，3H，N-CH2-Lys and CH2-Trp)，3.52(d，1H，CH2-Trp)，4.19(t，1H，Fmoc)，4.29-4.82(m，5H，2 Fmoc，2 Hα and NH)，6.54(d，H，Aryl)，7.06-7.76(m，12H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 1444(2M+Na)；元素分析(C41H50N4O7・4H2O) C, H, N計算値 C 62.90％，H 6.30％，N 7.15％，測定値 C 63.22％，H 6.49％，N 7.13％。
【００９３】
例18  Boc-D-Ala-Trp-Lys(Boc)-OBu 26の合成
3.52g(4.95mmol)のFmoc-Trp-Lys(Boc)-OBu 24を100mLのジオキサン／メタノール／2N 水酸化ナトリウム(70/25/5)中に溶解させ、室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸(0.570mL)を用いて中性にし、有機溶剤を蒸発させた。水およびジオキサンを添加し、溶液を凍結乾燥させた。ジイソプロピルエーテルを添加し、濾過後、濾液を蒸発させた。生成物を乾燥ジクロロメタン中に溶解させ、０℃で乾燥ジクロロメタン中の1.41g(4.93mmol) Boc-D-Ala-ONSu 6 および0.756mL(1.10当量)のトリエチルアミンの溶液に添加した。混合物を撹拌し、16時間後、ジクロロメタンを添加した。有機層を10％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィ((SiO2-始めに酢酸エチル／ヘプタン 1/1、次いでCHCl3/MeOH；9/1)により精製し、を得た2.26g(3.42mmol，69％)のトリペプチド26を白色の泡状物で得た。
【００９４】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.99-1.90(m，36H，3 CH2-Lys，CH3-Ala and 3 t-Bu)，2.80-3.50(m，4H，N-CH2-Lys and 2 CH2-Trp)，3.99(m，1H，Hα)，4.33(m，1H，Hα)，4.77(br d, 1H，Hα)，6.90-7.65(m，5H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 660(M+H)+，682(M+Na)+。元素分析(C34Hs3N5O8・H2O) C, H, N計算値 C 60.25％，H 8.17％，N 10.33％，測定値 C 60.47％，H 8.08％，N 9.73％。
【００９５】
例19  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-OH 28の合成
2.56g(4.13mmol) Boc-D-Ala-Trp-Lys(Boc)-OBu(26)を酢酸エチル(3M)中の塩酸の溶液中で撹拌した。５時間後、溶剤を蒸発させ、tert-ブタノールを添加し、二度蒸発させ残っている塩酸を除去した。生成物をジオキサン／水中で凍結乾燥させ、茶色の粉末を得た。水／アセトニトリル中の706mg(1.61mmol) D-Ala-Phe-Lys-OH 27の溶液に、pHが9〜9.5に達するまでトリエチルアミンを添加した。次いでアセトニトリル中の1.58g(2.20当量) Aloc-ONSu溶液を添加し、トリエチルアミンを添加することにより混合物を塩基性に維持した。混合物のpHが変化しなくなった後、酢酸エチル中の塩酸の0.5M 溶液を、pHが３に達するまで添加した。混合物をジクロロメタンを用いて完全に抽出した。有機層を水を用いて洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発させた。クリーム色の生成物28をさらに精製せずに用いた。
【００９６】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.00-1.80(m，9H，3 CHrLys and CH3-Ala)，2.80-3.35(m，4H，N-CH2-Lys and CH2Trp)，4.13(m，1H，Hα)，4.14(m，1H，Hα)，4.30-4.95(m，6H，4 Aloc and 2 Hα)，5.01-5.40(m，5H，4 Aloc and Hα)，5.70-6.30(m，3H，2 Aloc and NH)，6.90-7.70(m，5H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 572(M+H)+，594(M+Na)+；元素分析(C28H37N5O8・11/2・H2O)計算値 C 56.18％，H 6.44％，N 11.70％，測定値 C 56.07％，H 6.22％，N 11.21％。
【００９７】
例20  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABA 29の合成
239mg(0.419mmol) Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-OH 28の溶液を窒素雰囲気下にて乾燥テトラヒドロフラン中に溶解させ、−40℃にまで冷却した。N-メチルモルホリン(48.3μL，1.05当量)およびクロロ蟻酸イソブチル(57.0μL，1.05当量)を添加した。この反応混合物を２時間−30℃で撹拌した。乾燥THF中の4-アミノベンジルアルコール(51.5mg，1.00当量)およびN-メチルモルホリン(50.6μL，1.1当量)の溶液を反応混合物に滴添加した。２時間後、テトラヒドロフランを蒸発させ、ジクロロメタンを添加した。有機層を飽和重炭酸ナトリウム、0.5N 重炭酸カリウム溶液および塩水を用いて洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発させ、265mg(94％)の所望の生成物29をクリーム色の粉末で得た。
【００９８】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.00-1.62(m，9H，CH3-Ala and 3 CH2-Lys)，2.90-3.70(m，4H，N-CH2-Lys and CH2-Trp)，4.48-4.92(m，7H，2 Hα and 4 Aloc)，4.72(s，2H，CH2-OH)，5.00-5.50(m，5H，4 Aloc and Hα)，5.35-6.05(m，2H，Aloc)，6.80-7.83(m，9H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 677(M+H)+，699(M+Na)+。
【００９９】
例21  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PNPの合成
乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン中の384mg(0.602mmol)のAloc-D-Ala-Trp-Lys(Moc)-PABA 29の溶液に、窒素雰囲気下にてクロロ蟻酸4-ニトロフェニル(182mg，1.50当量)および乾燥ピリジン(73μL，1.50当量)を添加した。混合物を室温で48時間撹拌し、次いで酢酸エチルを添加した。有機層を10％クエン酸、塩水および水を用いて洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発させて黄色の固体を得た。生成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；30/1)により精製し、324mg(67％)のカーボネートAloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PNPをクリーム色の粉末で得た。
【０１００】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.00-2.10(m，9H，CH3-Ala and 3 CH2-Lys)，2.90-3.70(m，4H，N-CH2-Lys and CH2-Trp)，3.64(m，1H，Hα)，3.81(m，1H，Hα)，4.38-4.81(m，SH，Hα and 4 Aloc)，5.10-5.35(m，4H，Aloc)，5.21(s，2H，CH2-OH)，5.40-6.00(m，2H，Aloc)，7.00-7.85(m，11H，aromatic)，8.25(d，2H，J＝8.1，aromatic)；MS(FAB) m/e 842(M+H)+，864(M+Na)+。
【０１０１】
例22  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PABA 30の合成
乾燥N,N-ジメチルホルムアミド中の219mg(260mmol)のAloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PNPおよび35.2mg(1.1当量) 4-アミノベンジルアルコールの溶液に、窒素雰囲気下にてジイソプロピルエチルアミン(45.3μL，1.00当量)および触媒量のN-ヒドロキベンゾトリアゾール(10.5mg，0.30当量)を添加した。反応溶液を48時間撹拌した後、10％プロパノール-2/EtOAcを用いて希釈した。有機層を、飽和重炭酸ナトリウム、0.5N 重硫酸カリウムおよび塩水を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。淡い黄色の残渣の膜状物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；15/1)により精製し、192mg(89％)の所望の生成物30を得た。
【０１０２】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-2.10(m，9H，CH3-Ala and 3 CH2-Lys)，2.90-3.70(m，4H，N-CH2-Lys and CH2-Trp)，4.08(m，H，Hα)，4.40-4.86(m，6H，2 benzylic-spacer and 4 Aloc)，4.90-5.40(m，7H，2 benzylic-spacer Hα and Aloc)，5.50(m，1H，Aloc)，5.92(m，1H，Aloc)，6.72-7.82(m，13H，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 848(M+Na)+；(C43H51N7O10・23/4H2O)計算値 C 58.99％，H 6.50％，N 11.20％，測定値 C 59.15％，H 6.25％，N 11.15％。
【０１０３】
例23  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PNP 31の合成
70mg(85μmol)の化合物30、,ピリジン(17μL，2.5当量)およびクロロ蟻酸4-ニトロフェニル(34mg，2.0当量)の溶液を窒素雰囲気下にて０℃で２時間、および24時間室温で撹拌した。溶液を真空下で蒸発させ、残渣の生成物をクロロホルム中に溶解させた。有機層を塩水および0.5N 重硫酸カリウムで洗浄した後、有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥するまで濃縮した。得られた粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；20/1)に供して54mg(64％)の31を淡い黄色の固体で得た。
【０１０４】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ0.90-2.10(m，9H，CH3-Ala and 3 CH2-Lys)，2.90-3.10(m,4H，N-CH2-Lys and CH2-Trp)，3.27(bd，1H，bewylic)，4.35-4.78(m，6H，2Hα and Aloc)，4.90-5.52(m，4H，Aloc)，5.13(s，2H，benzylic-spacer)，5.60(m，1H，Aloc)，5.94(m，1H，Aloc)，7.10-7.46(m，15H，aromatic)，8.36(d，2H，aromatic-PNP) ppm；MS(FAB) m/e 991(M+H)+，1013(M+Na)+；C50H54N8O14・3/4H2O)計算値 C 59.78％，H 5.57％，N 11.15％，測定値 C 60.12％，H 5.89％，N 10.76％。
【０１０５】
例24  Aloc-D-Ala-Trp-Lys(Aloc)-PABC-PABC-DOX 32の合成
N-メチルピロリジニノン中の、二重スペーサを含んだ4-ニトロフェニルカーボネート31(41mg，0.041mmol)およびドキソルビシン-HCl(26mg，1.1当量)を室温でトリエチルアミン(6.3μL，1.1当量)を用いて処理した。この反応混合物を暗所にて48時間撹拌し、再びトリエチルアミン(1.1当量)を添加し、さらに24時間後、この反応混合物を10％2-プロパノール／酢酸エチルを用いて希釈した。有機層を水および塩水を用いて希釈し、乾燥させた(Na2SO4)。溶剤を蒸発させた後、粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；9/1)により精製し、続いて2mm シリカ・プレートを備えたクロマトロンを用いた循環クロマトグラフィ(クロロホルム-メタノール；9/1)により、45mg(78％)の保護されたプロドラッグ32を得た。
【０１０６】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ0.92-1.52(m，13H，sugar CH3, CH3-Ala，3 CH2-Lys and 2')，2.15(dd，1H，8)，2.36(bd，1H，8)，3.18(bd，1H，10)，2.90-3.10(m，5H，N-CH2-Lys and CH2-Trp and 10)，3.59(bs，1H，4')，3.82(m，1H，3')，3.85(m，1H，Hα)，4.11(s，3H，OMe)，4.21(m，1H，Hα)，4.45(dd，1H，5')，4.30-4.62(m，5H，Hα and 4 Aloc)，4.76(s，2H，14)，4.96(s，2H，benzylic spacer)，5.11(s，2H，benzylic spacer)，5.5 13-5.4(m，2H，Aloc)，5.48(bs，1H，1')，5.58(m，2H，Aloc and 7)，5.91(m，2H，Aloc)，6.70-7.39(m，11H，aromatic 5 Trp and 6 spacers)，7.41(d，1H，J＝8.4Hz，3)，7.63(d，2H，aromatic spacer)，7.78(t，1H，2)，8.03(d，1H，J＝7.6Hz，1) ppm；MS(FAB) m/e 1417(M+Na)+。
【０１０７】
例25  D-Ala-Trp-Lys-PABC-PABC-DOX(・71/2HCl) 33の合成
乾燥THF／ジクロロメタン中の36mg(0.026mmol) 保護されたプロドラッグ32の溶液に、窒素雰囲気下にてモルホリン(22μL，10当量)を触媒量のPd(PPh3)4とともに添加した。この反応混合物を１時間暗所にて撹拌した。赤色の沈殿物を遠心分離により回収した。酢酸エチルを添加し、混合物を0.5mLの1M 塩酸／酢酸エチルを用いて酸性にした。沈殿物を遠心分離により回収し、酢酸エチルを用いて数回洗浄した。tert-ブタノールを添加し、蒸発させ、得られた赤色の膜状物を水中で凍結乾燥させて28mg(72％)のドキソルビシンプロドラッグ33を得た。
【０１０８】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.10-1.96(m，13H，CH3-Ala，CH3-sugar, 3 CH2-Lys and 2')，2.09(m，1H，8)，2.35(bd，1H，J＝15.1Hz，8)，2.79-3.39(m，3H，N-CH2-Lys，CH2-Trp and 10)，3.60(s，1H，4')，4.00(bs，1H，3')，4.09(s，3H，OMe)，4.54(m，1H，5')，4.77(s，2H，14)，4.97(2*d, 2H，Bn spacer)，5.13(s，CH2，Bn spacer)，5.28(bs，1H，1')，5.48(bs，1H，7)，6.99-7.72(m，12H，5 Trp and 6 spacer)，7.62(d，1H，7.6Hz，3)，7.55(d，2H，J＝8.2Hz，aromatic spacer)，7.83(t，1H，2)，8.05(d，1H，J＝7.7Hz，1) ppm；MS(FAB) m/e 1228(M+H)+；元素分析(C63H70N8O18・7Hz，1/2HCl)計算値 C 50.42％，H 5.21％，N 7.47％，測定値 C 50.56％，H 5.48％，N 7.35％。
【０１０９】
例26  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PABA 34の合成
100mg(0.105mmol)のAloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PNP 18を乾燥N,N-ジメチルホルムアミド中に窒素雰囲気下にて溶解させ、−8℃にまで冷却した。4-アミノベンズアルコール(14.2mg，1.1当量)、DIPEA(18.3μL，1.0当量)および1-ヒドロキベンゾトリアゾール(HOBt)(4mg，0.3当量)を添加した。この反応混合物を48時間室温で撹拌し、10％2-プロパノール／酢酸エチルを用いて希釈した。有機層を水、飽和重炭酸ナトリウム、0.5N 重硫酸カリウム、および塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム(Na2SO4)上で乾燥させ、蒸発させて所望の生成物34をクリーム色の粉末86mg(88％)で得た。
【０１１０】
1H NMR(300MHz CDCl3)δ0.95-2.05(m，9H，3CH2-Lys and CH3-Ala)，2.88-3.11(m，4H，2H Bn-Phe and N-CH2-Lys)，3.95-4.62(m，7H，3Hα and 4H Aloc)，4.75(s，2H，CH2-OH)，5.12-5.21(m，6H，4 Aloc and CH2-Bn)，5.09(s，2H，CH2-Bn)，5.65-6.00(m，2H，Aloc)，6.79-7.41(m，15H，aromatic) 7.62(d，2H，aromatic) ppm；MS(FAB)m/e 959(M+Na)+。
【０１１１】
例27  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PABC-PNP 35の合成
乾燥テトラヒドロフランおよびジクロロメタン中の59mg(0.063mmol)のAloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PABA 34の溶液に、窒素雰囲気下にて−40℃で、ピリジン(13μL，2.5当量)およびクロロ蟻酸4-ニトロフェニル(25mg，2.0当量)をそれぞれ添加した。4.5時間−40℃で、および一晩6℃で撹拌した後、ピリジン(10μL，2.0当量)およびクロロ蟻酸4-ニトロフェニル(25mg，2.0当量)を再び添加した。これを、48時間6℃で撹拌した後、繰り返した。さらに48時間後、溶液を真空下で蒸発させ、残渣の生成物をクロロホルム中に溶解させた。有機層を10％クエン酸、塩水および水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム(Na2SO4)上で乾燥させ、蒸発させて黄色の固体を得た。粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；15/1)により精製して、定量的に所望の生成物35を得た。
【０１１２】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.12-1.89(m，9H，CH3-Ala and 3 CH2-Lys)，3.04(m，1H，benzylic)，3.14(m，2H，N-CH2-Lys)，3.27(bd，1H，benzylic)，4.09(m，1H，Hα)，4.28(m，1H，Hα)，4.34-4.68(m，5H，Hα and Aloc)，5.02-5.40(m，4H，Aloc)，5.14(s，2H，benzylic-spacer)，5.21(s，2H，benzylic-spacer)，5.31(s，2H，benzylic-spacer)，5.72(m，1H，Aloc)，5.90(m，1H，Aloc)，7.10-7.52(m，17H，aromatic)，7.63(d，2H，J＝8.3Hz，aromatic)，8.27(d，2H，J＝9.1Hz，aromatic PNP) ppm；MS(FAB) m/e 1102(M+H)+，1124(M+Na)+。
【０１１３】
例28  Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-PABC-DOX 36の合成
N-メチルピロリジニノン中の4-ニトロフェニルカーボネート35(69mg，0.063mmol)およびドキソルビシン-HCl(40mg，1.1当量)を室温でトリエチルアミン(9.7μL，1.1当量)を用いて処理した。この反応混合物を暗所にて24時間撹拌し、この反応混合物を10％2-プロパノール／酢酸エチルを用いて希釈した。有機層を水および塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム(Na2SO4)上で乾燥させた。溶剤を蒸発させた後、粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；9/1)により精製し、続いて2mm シリカ・プレートを備えたクロマトロンを用いた循環(circular )クロマトグラフィ(CHCl3/MeOH；9/1)により、65mg(71％)の保護されたプロドラッグ36を得た。
【０１１４】
1H-NMR(300MHz，CDCL3/CD3OD)：δ1.10-1.80(m，14H，sugar CH3, CH3-Ala, 3 CH2-Lys and 2')，2.14(dd，1H，8)，2.36(bd，1H，8)，3.18(bd，1H，10)，2.82-3.41(m，6H，benzylic Phe and N-CH2-Lys and 10)，3.37(s，1H，4')，3.60(bs，1H，3')，4.02(m，1H，Hα)，α)，4.07(s，3H，OMe)，4.29(dd，1H，5')，4.37-4.68(m，5H，Hα and 4 Aloc)，4.76(s，2H，14)，4.95(bs，2H，benzylic spacer)，5.10(s，2H，benzylic spacer)，5.14(s，2H，benzylic spacer)，5.02-5.35(m，4H，Aloc)，5.27(bs，1H，1')，5.47(bs，1H，7)，5.70(m，1H，Aloc)，5.89(m，1H，Aloc)，7.09-7.50(m，l6H，5 Phe and 10 spacers and 3)，7.64(d，2H，J＝8.4Hz，2H aromatic spacer)，7.79(t，1H，J＝8.1Hz，2)，8.06(d，1H，J＝7.5Hz，1) ppm；MS(FAB) m/e 1506(M+H)+，1528(M+Na)+。
【０１１５】
例29  D-Ala-Phe-Lys-PABC-PABC-PABC-DOX(・2HCl) 37の合成
乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン中の40mg保護されたプロドラッグ36(0.027mmol)の溶液に、窒素雰囲気下にてモルホリン(24μL，10当量)および触媒量のPd(PEh3)4を添加した。この反応混合物を１時間暗所にて撹拌した。赤色の沈殿物を遠心分離により回収し、酢酸エチルを用いて数回洗浄した。水およびジオキサンを添加し、混合物を4.4mLの0.125mM 塩酸を用いて酸性にした。凍結乾燥させ26mg(70％)のドキソルビシンプロドラッグ37を得た。1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.19(d，3H，J＝6.9Hz，sugar CH3)，1.27(d，3H，J＝6.6Hz，CH3-Ala)，1.25-2.00(m，8H，3 CH2-Lys and 2')，2.18(dd，1H，8)，2.33(br d, 1H，J＝16.1Hz，8)，2.89-3.38(m，6H，N-CH2-Lys and 10 and Bn Phe)，3.60(s，1H，4')，3.72(m，1H，3')，4.08(s，3H，OMe)，4.18(m，1H，Hα)，4.53(dd，1H，5')，4.66(m，1H，Hα)，4.77(s，2H，14)，4.96(s，2H，Bn spacer)，5.11(s，2H，Bn spacer)，5.17(s，2H，Bn spacer)，5.27(hr s, 1H，1')，5.48(hr s，1H，7)，7.05-7.35(m，16H，aromatic spacer and 3)，7.52(d，2H，J＝8.5Hz，aromatic spacer)，7.84(t，1H，2)，8.01(d，1H，J＝7.7Hz，1) ppm。
【０１１６】
例30  2'-[4-ニトロフェニルカーボネート]-パクリタキセル 38の合成
乾燥ジクロロメタン中の194mg(0.227mmol) パクリタキセルの溶液に、窒素雰囲気下にてピリジン(4滴)を添加した。−50℃で乾燥ジクロロメタン中の275mg(6.0当量) クロロ蟻酸4-ニトロフェニルを添加した。反応混合物を−50℃で撹拌し、４時間後、クロロ蟻酸4-ニトロフェニル(4.2当量)を添加した。１時間後、混合物をジクロロメタンを用いて希釈し、0.5N 重硫酸カリウムおよび塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム飽和物上で乾燥させた。溶剤を蒸発させた後、残渣の黄色の膜状物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex 1/1)により精製し、133mgの活性化パクリタキセル 38(78％，73％変換)を得た。
【０１１７】
融点161℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.14(s，3H，17)，1.25(s，3H，16)，1.68(s，3H，19)，1.92(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.49(s，3H，4-OAc)，2.55(m，1H，6a)，3.82(d，1H，3)，4.21(d，1H，20b)，4.32(d，1H，20a)，4.42(m，1H，7)，4.96(bd，1H，5)，5.53(d，1H，2')，5.69(d，1H，2)，6.09(q，1H，3')，6.29(s，1H，10)，6.34(m，1H，13)，6.90(d，1H，N-H)，7.20-7.65(m，13H，aromatic)，7.75(4, 2H，aromatic)，8.15(d，2H，aromatic)，8.25(d，2H，ニトロフェニル) ppm；MS(IFAB) m/e 1020(M+H)+，1042(M+Na)+C54H54N2O19(・11/2H2O)計算値 C 62.00％，H 5.40％，N 2.68％，測定値 C 61.89％，H 5.52％，N 2.64％。
【０１１８】
例31  2'-[H-D-Ala-Phe-Lys-PABC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]-パクリタキセル(・2HCl)43の合成
工程ａ：N(Me)-(CH2)2-N(Me)-Z 39(Z＝ベンジルオキシカルボニル)の合成
乾燥ジクロロメタン中の1.21g(13.7mmol) N,N'-ジメチルエチレンジアミンの溶液に、窒素雰囲気下にて室温で乾燥ジクロロメタン中のZ-ONSu(338mg，1.36mmol)の溶液を滴下添加した。120分の撹拌後、溶液を真空下で濃縮した。残渣の生成物をエチル酢酸中に溶解させ、有機層を塩水を用いて洗浄した。有機溶剤を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。油状の生成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；1/1) により精製して249mg(83％)の生成物39を油状物で得た。
【０１１９】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ2.42(bd，3H，3J＝13.9Hz，CH3-NH-CH2)，2.73(m，2H，CH3-NH-CH2)，2.95(s，3H，CH3-N)，3.41(bs，2H，CH2-N)，5.13(s，2H，CH2-Z)，7.25-7.40(m，5H，aromatic) ppm。
【０１２０】
工程b：2'-[Z-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]-パクリタキセル40の合成
乾燥ジクロロメタン中の114mg(112μmol) 2'-活性化パクリタキセル 38および25mg Z-保護された N,N'-ジメチルエチレンジアミンの溶液に、窒素雰囲気下にて−50℃でトリエチルアミン(20.0μL，144μmo1)を添加した。溶液を７時間−40℃撹拌し、続いて室温にまで加熱し、次いで撹拌を一晩室温で続けた。溶液をジクロロメタンを用いて希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、塩水および0.5N 重硫酸カリウムを用いて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して黄色の膜状物を得た。生成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex 2/1)により精製し、113mg(92％)の所望の生成物40を得た。
【０１２１】
融点130-131℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.12(s，3H，17)，1.21(s，3H，16)，1.70(s，3H，19)，2.00(s，3H，18)，2.26(s，3H，10-OAc)，2.60(s，3H，4-OAc)，2.90(s，3H，CH3-spacer)，2.94(s，3H，CH3-spacer)，2.97(m，1H，CH2-spacer)，3.06(m，1H，CH2-spacer)，3.54(m，1H，CH2-spacer)，3.78(m，1H，CH2-spacer)，3.84(d，1H，3J＝7.2Hz，3)，4.23(d，1H，2J＝8.4Hz，20b)，4.32(4, 1H，2J＝4Hz，20a)，4.47(m，1H，7)，4.69(d，1H，2J＝124Hz，benzylic)，4.85(d，1H，J＝12.4Hz，benzylic)，5.01(m，1H，5)，5.47(d，1H，3J＝2.9Hz，2')，5,68(d，1H，3J＝7.0Hz，2)，6.19(dd，1H，3J＝9.8Hz，3J＝2.9Hz，3')，628(s，1H，10)，6.33(m，1H，13)，6.94-7.70(m，16H，aromatic)，7.83(d，2H，3J＝7.3Hz，aromatic)，8.16(d，2H，3J＝7.1Hz，aromatic)，8.57(d，1H，3J＝9.8Hz，NH) ppm；MS(FAB) m/e 1102(M+H)+，1124(M+Na)+；C601167N3O17(・H2O)計算値 C 64.33％，H 6.21％，N 3.73％，測定値C 64.65％，H 6.11％，N 3.76％。
【０１２２】
工程c：  2'-[N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]-パクリタキセル(・7AcOH)41の合成
5％酢酸／メタノール中の61.8mg(56.1μmol)の40の溶液に触媒量の10％Pd-Cを添加した。混合物を１時間H2雰囲気下で撹拌した。Pd-Cを遠心分離により除去し、メタノールを真空下で蒸発させ、酢酸エチルを添加した。有機層を水を用いて抽出した。水層を凍結乾燥させて78.0mg(100％)の所望の生成物41を得た。
【０１２３】
工程d：2'-[Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]-パクリタキセル42の合成
乾燥テトラヒドロフラン中の152mg(95.8μmol)のパクリタキセル-スペーサ化合物41および80.7mg(101μmol)のカーボネート16の溶液に、窒素雰囲気下にてトリエチルアミン(200μL，1.44mmol)を添加した。24時間後、溶液を乾燥するまで濃縮し、残渣の生成物をジクロロメタン中に溶解させ、飽和重炭酸ナトリウムおよび塩水を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。粗成物をカラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex/MeOH；5/5/1)に供して113mg(72％)の所望の保護されたプロドラッグ42を得た。
【０１２４】
融点127-128℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.13(s，3H，17)，1.22(s，3H，16)，1.27(d，3H，3J＝5.6Hz，CH3-Ala)，1.04-2.00(m，6H，CH2-Lys)，1.69(s，3H，19)，2.00(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.59(s，3H，4-OAc)，2.90(s，3H，CH3-spacer)，2.91(s，3H，CH3-spacer)，2.76-3.46(m，6H，CH2-spacer, benzylic and N-CH2-Lys)，3.54.(m，1H，CH2-spacer)，3.74(m，1H，CH2-spacer)，3.84(d，1H，3J＝7.0Hz，3)，4.00-5.00(m，3H，3 Hα)，4.23(d，1H，2J＝4Hz，20b)，4.32(d，1H，2J＝4Hz，20a)，4.48(m，1H，7)，4.62(d，1H，2J＝12.3Hz，benzylic)，4.83(4，1H，2J＝12.4Hz，benzylic)，4.30-4.73(m，4H，Aloc)，4.93-5.39(m，5H，Aloc and 5)，5.48(d，1H，3J＝2.9Hz，2')，5.69(d，1H，3J＝7.0Hz，2)，5.54-5.78(m，1H，Aloc)，5.88(m，1H，Aloc)，6.18(bd，1H，3')，6.30(s，1H，10)，6.33(m，1H，13)，7.05-7.78(m，20H，aromatic)，7.82(d，2H，3J＝7.4Hz，aromatic)，8.16(d，2H，3J＝7.2Hz，aromatic) ppm；MS(FAB) m/e 1653(M+Na)+；C86H102N8O24計算値C 62.61％，H 6.35％，N 6.79％，測定値 C 62.40％，H 6.31％，N 6.36％。
【０１２５】
工程ｅ：2'-[H-D-Ala-Phe-Lys-PABC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]-パクリタキセル(・2HCl) 43の合成
乾燥テトラヒドロフラン中の83.0mg(50.9μmol) 保護されたプロドラッグ42の溶液に、窒素雰囲気下にて氷酢酸(12μL，4.0当量)をトリブチルチンハイドライド(41μL，3.0当量)および触媒量のPd(PPh3)4とともに添加した。30分後、ジエチルエーテルの添加により生成物を沈殿させた。白色の沈殿物を遠心分離により回収し、ジエチルエーテルを用いて数回洗浄した。tert-ブタノールを添加し、再度蒸発させて過剰なHClを除去し、得られた生成物を水／ジオキサン中に溶解させ、凍結乾燥させて56mg(70％)のプロドラッグ43を得た。
【０１２６】
融点142℃；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.13(s，3H，17)，1.21(s，3H，16)，1.26(d，3H，3J＝6.6Hz，CH3-Ala)，1.05-2.00(m，6H，CH2-Lys)，1.69(s，3H，19)，2.00(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.58(s，3H，4-OAc)，2.89(s，3H，CH3-spacer)，2.91(s，3H，CH3-spacer)，2.67-3.64(m，3H，CH2-spacer)，2.95(m，1H，benzylic)，3.07(m，2H，N-CH2-Lys)，3.15(m，1H，benzylic)，3.78(m，1H，CH2-spacer)，3.83(d，1H，3J＝7.1Hz，3)，4.10-5.05(m，2H，2 Hα)，4.22(d，1H，2J＝4Hz，20b)，4.32(d，1H，2J＝4Hz，20a)，4.46(m，1H，7)，4.60(m，1H，Hα)，4.65(d，1H，2J＝12.3Hz，benzylic-spacer)，4.80(d，1H，2J＝12.4Hz，benzylic-spacer)，4.99(bd，5H，3J＝7.4Hz，5)，5.47(d，1H，3J＝2.9Hz，2')，5.68(d，1H，3J＝6.9Hz，2)，6.17(bd，1H，3J＝2.9Hz，3J＝9.6Hz，3')，6.30(s，1H，10)，6.31(m，1H，13)，7.05-7.70(m，20H，aromatic)，7.82(d，2H，3J＝7.5Hz，aromatic)，8.16(d，2H，3J＝7.2Hz，aromatic)，8.54(d，1H，3J＝9.6Hz，NH-パクリタキセル) ppm；MS(FAB) m/e1463(M+H)+，1485(M+Na)+；C85H97N7O22(・3AcOH)計算値 C 61.04％，H 6.50％，N 6.71％，測定値 C 60.91％，H 6.45％，N 7.10％。
【０１２７】
例32  2'-O-[D-Ala-Phe-Lys-PABC-PABC-N(Me)-(CH2-N(Me)CO]パクリタキセル・2HClの合成
工程ａ：2'-O-[Aloc-D-Ala-Phe-Lys(Aloc)-PABC-PABC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]パクリタキセルの合成
THF(3mL)中のパクリタキセル-スペーサ接合体41(50mg，48.6μmol)およびペプチド-スペーサ接合体18(46.3mg，48.6μmol)の溶液にトリエチルアミン(101μL，0.730mmol)を添加した。この反応混合物を室温で15時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン中に溶解させ、溶液をNaHCO3飽和水溶液および塩水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex/MeOH；5/4/1)により44(58.2mg，32.7μmol，67％)を得た。
【０１２８】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.12(s，3H，17)，1.21(s，3H，16)，1.26(d，3H，J＝6.6Hz，CH3of Ala)，1.05-2.00(m，6H，3×CH2of Lys)，1.69(s，3H，19)，1.99(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.58(s，3H，4-OAc)，2.90(s，3H，N-CH3)，2.91(s，3H，N-CH3)，2.80-3.85(m，9H，N-CH2-CH2-N and CH2of Phe and N-CH2of Lys and 3)，4.00-5.38(m，l9H，3×Hα and 20 and 7 and 2×CH2of spacer and 5 and 2×CH2=CH-CH2)，5.46(d，1H，J＝2.7Hz，2')，5.60(m，1H，CH2=CH-CH2)，5.69(d，1H，J＝6.9Hz，2)，5.89(m，1H，CH2=CH-CH2)，6.16(dd，1H，J＝9.3Hz，J＝2.4Hz，3')，6.30(s，1H，10)，6.31(m，1H，13)，7.09-7.81(m，26H，aromatic)，8.16(d，2H，J＝7.2Hz，aromatic) ppm。
【０１２９】
工程ｂ：2'-O-P-Ala-Phe-Lys-PABC-PABC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]パクリタキセル・2HClの合成
乾燥THF(3mL)中の保護されたプロドラッグ44(50.0mg，28.1μmol)の溶液に、トリブチルチンハイドライド(22.7μL)、Pd(PPh3)4(6.5mg，5.6μmol)、および酢酸(6.5μL，0.112mmol)を添加した。30分後、この反応混合物を低温のジエチルエーテルにゆっくり添加した。白色の沈殿物を遠心分離により回収し、ジエチルエーテルを用いて二度洗浄した。残渣をエチル酢酸中に懸濁させ、酢酸エチル(0.5mL)中の0.5M HCl 溶液を勢いよく撹拌しながら添加した。白色の沈殿物を遠心分離により回収し、酢酸エチルを用いて２回洗浄した。残渣にtert-ブチルアルコールを添加し、続いて蒸発させて過剰なHClを除去した。残渣を水中に溶解させ、凍結乾燥させて45(32.0mg，19.0μmol，68％)を得た。
【０１３０】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.17(s，3H，17)，1.19(s，3H，16)，1.26(d，3H，J＝6.9Hz，CH3of Ala)，1.20-2.00(m，6H，3×CH2of Lys)，1.70(s，3H，19)，2.02(s，3H，18)，2.21(s，3H，10-OAc)，2.55(s，3H，4-OAc)，2.80-2.99(m，4H，CH2of Phe and N-CH2of Lys)，2.93(s，6H，2×N-CH3)，3.10-3.87(m，4H，N-CH2-CH2-N)，3.86(d，1H，J＝6.9Hz，3)，4.06(q，1H，J＝7.0Hz，Hα)，4.26-4.76 & 5.02(m，SH，2×Hα and 20 and 7 and CH2of spacer and 5)，5.16(s，2H，CH2of spacer)，5.45(d，1H，J＝2.5Hz，2')，5.72(d，1H，J＝7.1Hz，2)，6.10(m，1H，3')，6.26(m，1H，13)，6.40(s，1H，10)，7.08-7.62(m，24H，aromatic)，7.77(d，2H，J＝7.6Hz，aromatic)，8.14(m，2H，aromatic) ppm。
【０１３１】
例33  2'-O-[D-Ala-Phe-Lys-PACC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]パクリタキセル・2HCl 49の合成
工程a：NZ-D-Ala-Phe-Lys(NZ)-OH 9cの調製
ジクロロメタン(10mL)中のトリペプチド８(506mg，1.39mmol)の溶液に、トリメチル塩化シリル(0.568mL，4.44mmol)およびDIPEA(0.509mL，2.92mmol)を添加した。この反応混合物を還流温度で1.5時間撹拌した。次いで、この反応混合物を０℃にまで冷却した後、DIPEA(776μL，4.44mmol)およびパラ-ニトロベンジルクロロ蟻酸塩(NZ-Cl)(629mg，2.92mmol)を添加した。この反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をエチル酢酸および酢酸緩衝液(pH＝5)の間で分配した。有機層をさらなる酢酸緩衝液、水、および塩水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(SiO2-CH2Cl2/MeOH/AcOH 90/7/5)により９ｃ(620mg，0.858mmol，61％)を得た。
【０１３２】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.18(d，3H，J＝7.1Hz，CH3of Ala)，1.36-1.97(m，6H，3×CH2of Lys)，2.94(dd，1H，CH2of Phe)，3.12-3.23(m，3H，CH2of Phe and N-CH2of Lys)，4.12(m，1H，Hα)，4.42(m，1H，Hα)，4.63(m，1H，Hα)，5.17(m，4H，CH2of NZ)，7.17-7.25(m，5H，aromatic)，7.51(d，4H，J＝8.2Hz，aromatic)，8.19(d，4H，J＝8.0Hz，aromatic) ppm。
【０１３３】
工程ｂ：NZ-D-Ala-Phe-Lys(Z)-PACA 46の調製
THF(10mL)中の保護されたトリペプチド９ｃ(300mg，0.415mmol)の溶液に、−40℃でN-メチルモルホリン(50.2μL，0.457mmol)およびイソブチルクロロ蟻酸塩(62.4mg，0.457mmol)を添加した。この反応混合物を−30℃で３時間撹拌した。次いで、THF(5mL)中のスペーサ10(77.3mg，0.498mmol)およびN-メチルモルホリン(55.0μL，0.498mmol)を添加した。反応混合物を15時間撹拌し、反応温度をゆっくりと室温にまで上げた。この反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を中にジクロロメタン中に溶解させた。溶液をNaHCO3飽和水溶液、0.5M KHSO4水溶液、および塩水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；93/7)により46(267mg，0.313mmol，75％)を得た。
【０１３４】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)：δ1.22(d，3H，J＝7.2Hz，CH3of Ala)，1.40-2.04(m，6H，3×CH2of Lys)，2.96(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝14.4Hz，CH2of Phe)，3.15(m，2H，N-CH2of Lys)，3.30(dd，1H，J＝14.4Hz，J＝4.2Hz，CH2of Phe)，4.08(m，1H，Hα)，4.23(dd，2H，J＝1.1Hz，J＝5.6Hz，CH2of spacer)，4.46(m，1H，Hα)，4.56(m，1H，Hα)，4.90(d，1H，J＝13.8Hz，CH2of NZ)，4.99(d，1H，J＝13.8Hz，CH2of NZ)，5.17(s，2H，CH2of NZ)，6.26(dt，1H，J＝5.7Hz，J＝15.9Hz，CH=CH-CH2)，6.52(4，1H，J＝15.9Hz，CH=CH-CH2)，7.22-7.32(m，9H，aromatic)，7.53(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，7.61(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，8.04(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，8.19(4，2H，J＝8.6Hz，aromatic) ppm。
【０１３５】
工程ｃ：NZ-D-Ala-Phe-Lys(NZ)-PACC-PNP 47の調製
THF(15mL)中のペプチドスペーサ46(244mg，0.286mmol)の溶液に、DIPEA(0.216mL，1.24mmol)、パラ-ニトロフェニルクロロ蟻酸塩(187mg，0.927mmol)、およびピリジン(6.3μL，77.2μmol)を添加した。この反応混合物を48時間撹拌し、次いで酢酸エチル(50mL)を用いて希釈した。溶液を10％クエン酸水溶液、水、および塩水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(SiO2-CHCl3/MeOH；95/5)により47(291mg，0.286mmol，100％)を得た。
【０１３６】
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD/DMSO-d6)：δ1.23(4，3H，J＝7.1Hz，CH3of Ala)，1.38-2.03(m，6H，3x CH2of Lys)，2.97(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝14,0Hz，CH2of Phe)，3.14(m，2H，N-CH2of Lys)，3.28(dd，1H，CH2of Phe)，4.10(m，1H，Hα)，4.47(m，1H，Hα)，4.54(m，1H，Hα)，4.87-5.00(m，4H，CH2of spacer and CH2of NZ)，5.17(s，2H，CH2of NZ)，6.27(dt，1H，J＝6.8Hz，J＝15.4Hz，CH=CH-CH2)，6.70(d，1H，J＝15.4Hz，CffCH-CH2)，7.22-7.33(m，9H，aromatic)，7.47(d，2H，J＝9.2Hz，aromatic)，7.53(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，7.67(4, 2H，J＝8.6Hz，aromatic)，8.04(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，8.18(d，2H，J＝8.6Hz，aromatic)，8.30(d，2H，J＝9.2Hz，aromatic) ppm。
【０１３７】
工程ｄ：2'-O-[NZ-D-Ala-Phe-Lys(NZ)-PACC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]パクリタキセル 48の調製
THF(3mL)中のパクリタキセル-スペーサ接合体 41(50mg，48.6μmol)およびペプチド-スペーサ接合体47(54.5mg，53.5μmol)の溶液に、トリエチルアミン(101μL，0.730mmol)を添加した。この反応混合物を室温で15時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン中に溶解させ、溶液をNaHCO3飽和水溶液および塩水を用いて洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィ(SiO2-EtOAc/Hex/MeOH；5/4/1)により48(65.7mg，35.6μmol，73％)を得た。
【０１３８】
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.12(s，3H，17)，1.21(s，3H，16)，1.30(d，3H，J＝7.0Hz，CH3of Ala)，1.20-2.10(m，6H，3×CH2of Lys)，1.68(s，3H，19)，2.00(s，3H，18)，2.22(s，3H，10-OAc)，2.58(s，3H，4-OAc)，2.91(s，3H，N-CH3)，2.95(s，3H，N-CH3)，2.90-3.90(m，8H，N-CH2-CH2-N and CH2of Phe and N-CH2of Lys)，3.83(d，1H，J＝6.6Hz，3)，4.10-5.00(m，11H，3×Hα and 20 and 5 and 7 and CH=CH-CH2and CH2of NZ)，5.16(s，2H，CH2of NZ)，5.46(d，1H，J＝3.3Hz，2')，5.68(d，1H，J＝7.5Hz，2)，6.01-6.17(1H，2H，3' and CH=CH=CH2)，6.31(s，1H，10)，6.32(m，1H，13)，6.40(d，1H，J＝15.9Hz，CH=CH-CH2)，7.19-7.70(m，24H，aromatic)，7.83(d，2H，J＝7.2Hz，aromatic)，8.01(d，2H，J＝8.7Hz，aromatic)，8.15-8.19(m，4H，aromatic) ppm。
【０１３９】
工程ｅ：2'-O-[D-Ala-Phe-Lys-PACC-N(Me)-(CH2)2-N(Me)CO]パクリタキセル・2HOAc 49の調製
メタノール(5mL)中の保護されたプロドラッグ48(50.0mg，27.1μmol)の溶液に、酢酸(1.5mL)および亜鉛(88.5mg，1.35mmol)を添加した。得られた懸濁液を室温で24時間撹拌した。次いで、この反応混合物をHYFLO上で濾過した。水を添加し、メタノール減圧下で蒸発させた。得られた溶液を凍結乾燥させ、わずかに黄色の固体を得、これをジクロロメタンおよびメタノールの混合物(2mL，1:1 v/v)中に溶解させた。この溶液を低温のジイソプロピルエーテルに添加した。白色の沈殿物を遠心分離により回収し、ジイソプロピルエーテルを用いて二度洗浄し、プロドラッグ49(27.8mg，17.3μmol，64％)を得た。
【０１４０】
例34
＜二重スペーサ含有パクリタキセルプロドラッグ22および43の両者の安定性＞
これらのプロドラッグを、0.1 M Tris/HCl緩衝液（pH 7.3）中の150μM濃度で3日間インキュベートしたところ、分解生成物の形成は示されなかった（TLC、RP18；CH3CN/H20/AcOH＝19/19/2）。
【０１４１】
＜二重スペーサ含有ドキソルビシンプロドラッグ20の安定性＞
このプロドラッグを、0.1 M Tris/HC1 緩衝液（pH 7.3）中の100〜270μM濃度で90時間インキュベートしたところ、分解生成物の形成は示されなかった（TLC、RP18； CH3CN/H20/AcOH＝19/19/2）。
【０１４２】
例35
＜プラスミンによる、二重スペーサ含有プロドラッグの酵素的加水分解＞
ドキソルビシンプロドラッグの加水分解を、50または20μg/ｍLのヒトプラスミン（Fluka）の存在下において、0.1 Mトリス／塩酸緩衝液（pH 7.3）中の100μMのプロドラッグ濃度でインキュベートすることにより調べた。分析はVhromapack Microsphere-C18カラム（3μm、2×100×4.6 mm）を備えた以下のHPLCシステムによって行った。分析カラムの溶出は、7：3メタノール／50 mM Et3N-ホルメート緩衝液（pH 3.0）を用いて行った。検出は、UV検出器（λ＝500 nm）を使用して行った。
【表１】
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【０１４３】
パクリタキセルプロドラッグの加水分解は、100μg/ｍLのヒトプラスミン（Fluka）の存在下において、0.1 Mトリス／塩酸緩衝液（pH 7.3）中の200μMのプロドラッグ濃度でインキュベートすることにより調べた。全ての二重スペーサ含有パクリタキセルプロドラッグが変換されて、対応する親薬物を生じた。CE Ext.光路キャピラリー（80.5 cm、50μm）を用い、1：1のメタノール／0.05 Mリン酸ナトリウム緩衝液（pH 7.0）を溶出液に用いてキャピラリー電気泳動を行った。検出は200および254 nmで行った。
【表２】
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【０１４４】
例36
＜細胞障害性＞
7種類の十分に特徴づけされたヒト腫瘍細胞株および微小培養スルホローダミンB（SRB）試験を適用して、プロドラッグおよび親薬物の抗増殖効果をインビトロで測定した。その抗増殖効果は、1C50値で測定および表示した。この値は、インキュベーションの5日後に、対照細胞増殖と比較したときの50％阻害を与えるプロドラッグおよび薬物の濃度である。
【表３】
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表１  プロドラッグおよび親薬物のＩＤ50値ａ，ｂ
【０１４５】
ａ：未処理対照培養体に比較して細胞増殖を50％阻害する薬物投与量
ｂ：SRB細胞生存試験
細胞株：  MCF-7；乳癌、  EVSA-T；乳癌、  WIDR；結腸癌、  IGROV；卵巣癌、
M19；メラノーマ、  A498；腎臓癌、  H226；非小細胞性肺癌
【図面の簡単な説明】
【０１４６】
【図１】図１は、スペーサを含む三部分構成のプロドラッグの親薬物への変換を概略的に示している。
【図２】スペーサを含むプロドラッグの構造を概略的に示している。
【図３】図３は、1,6-脱離の原理を示している。
【図４】図４は、1,8-脱離の原理を示している。
【図５】図５は、1,10-脱離の原理を示している。
【図６】図６は、1,8-脱離の原理を照明するための、パクリタキセル含有モデル化合物の合成を示している。
【図７】図７は、還元および1,8-脱離の後のパクリタキセルの放出機構を示している。
【図８】図８は、二重にAloc保護されたD-Ala-Phe-Lysトリペプチドの合成を示している。
【図９】図９は、1,8-脱離スペーサのパラ-アミノシンナミルアルコール（PACA）の合成を示している。
【図１０】図１０は、1,8-脱離スペーサを含むプロドラッグの合成を示している。
【図１１】図１１は、二以上の電子カスケードスペーサを含むプロドラッグの構造を概略的に示している。
【図１２】図１２は、パラ-ニトロフェニル（PNP）カーボネートで活性化されたトリペプチドスペーサ複合体の合成を示している。
【図１３】図１３は、第二の電子カスケードスペーサ分子（パラ-アミノベンジルアルコール(PABA)）の、ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBｔ）の存在下における、4-ニトロフェニルカーボネートで活性化されたトリペプチドスペーサ複合体への触媒的カップリングを示している。
【図１４】図１４は、第二の電子カスケード1,6-脱離スペーサ分子を、触媒量のジフェニルホスフィン酸の存在下において、4-ニトロフェニルカーボネートで活性化されたトリペプチド-1,6-脱離スペーサ複合体にカップリングさせることにより、二つの電子カスケードスペーサ分子を化学的に結合させる反応を示している。
【図１５】図１５は、ドキソルビシン含有の二重1,6-脱離スペーサを含むプロドラッグの合成を示している。
【図１６】図１６は、パクリタキセル含有の二重1,6-脱離スペーサを含むプロドラッグの合成を示している。
【図１７】図１７は、トリプトファン含有のトリペプチド二重スペーサ複合体の合成を示している。
【図１８】図１８は、トリプトファンを含有するドキソルビシンプロドラッグの合成を示している。
【図１９】図１９は、ドキソルビシン含有の三重1,6-脱離スペーサを含むプロドラッグの合成を示している。
【図２０】図２０は、電子カスケードスペーサ、および2'-カルバメート結合を介して当該薬物に結合された環化スペーサの両方を含む、パクリタキセルのプロドラッグの構造を概略的に示している。
【図２１】図２１は、低温でクロロ蟻酸4-ニトロフェニルを用いた、2'-(4-ニトロフェニルカルボネート)で活性化されたパクリタキセルの位置選択的合成を示している。
【図２２】図２２は、酸保護されたパクリタキセル-ω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサ接合体のカップリングを示している。
【図２３】図２３は、3歩後されたパクリタキセル-ω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサ接合体の、4-ニトロフェニルカルボネート活性化されたトリペプチド-1,6-脱離スペーサ接合体へのカップリングを示している。
【図２４】図２４は、1,6-脱離スペーサおよびω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサを含むパクリタキセルプロドラッグを得るための、脱保護反応を示している。
【図２５】図２５は、二つの1,6-脱離スペーサおよびω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサを含むパクリタキセルプロドラッグの調製を示している。
【図２６】図２６は、パラ-ニトロフェニル（PNP）カーボネート-活性化された、二重にパラ-ニトロベンジルオキシカルボニル保護されたトリペプチド-スペーサ接合体の合成を示している。
【図２７】図２７は、1,8-脱離スペーサおよびω-アミノ アミノカルボニル環化スペーサを含む、パクリタキセルプロドラッグの調製を示している。
【図２８】図２８は、一つの電子カスケードスペーサを含む、先に報告されたドキソルビシンおよびパクリタキセルプロドラッグの構造を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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