(57)【要約】雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）の治療または予防のための医薬の調製／製造における、神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体の阻害薬の使用。この阻害薬は、雄性生殖器関連のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体に対して選択的である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）の治療または予防のための医薬の製造における神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）阻害薬の使用であって；該阻害薬が使用に際して雄性生殖器関連ＮＰＹに選択的である使用。
【請求項２】
ＭＥＤの治療または予防のための医薬の製造における神経ペプチドＹ  Ｙ１受容体（ＮＰＹ  Ｙ１）阻害薬の使用であって；該阻害薬が使用に際して雄性生殖器関連ＮＰＹ  Ｙ１に選択的である使用。
【請求項３】
阻害薬が使用に際して、雄性生殖器に存在するＮＰＹ／ＮＰＹ  Ｙ１に高選択的である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
阻害薬がエンドペプダーゼＮＥＰおよび／またはアンギオテンシン変換酵素に対する活性を有しないか、または実質的に有しない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
ＭＥＤの治療または予防が選択的である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
海綿体内圧の上昇がみられる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
医薬を経口投与する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
阻害薬が使用に際して、海綿体関連ＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
ＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬を性的覚醒の前および／または途中に投与する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
性的覚醒に際して海綿体内圧を選択的に上昇させるための医薬の製造における、ＮＰＹ  Ｙ１阻害薬の使用。
【請求項１１】
雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）の処置に使用するための医薬組成物であって；医薬組成物は神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）阻害薬を含み、該阻害薬は使用に際して雄性生殖器関連ＮＰＹに選択的であり；該阻害薬は医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和されていてもよい医薬組成物。
【請求項１２】
阻害薬がＮＰＹ  Ｙ１阻害薬である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ヒトまたは動物においてＭＥＤを治療または予防するための方法であって；有効量のＮＰＹｉを個体に投与することを含み；該ＮＰＹｉは使用に際して雄性生殖器関連ＮＰＹに選択的であり；該ＮＰＹｉは医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和されていてもよい方法。
【請求項１４】
阻害薬がＮＰＹ  Ｙ１阻害薬である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ヒトまたは動物においてＭＥＤを治療または予防するための方法であって；性的覚醒に際して海綿体内圧を選択的に上昇させることができるＮＰＹｉを個体に送達することを含む方法。
【請求項１６】
ＮＰＹｉがＮＰＹ  Ｙ１ｉである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＭＥＤの処置に使用できる薬剤を同定するためのアッセイ方法であって；被験薬剤が内因性勃起プロセスを直接増強できるかを判定することを含み；該増強は被験薬剤の存在下での海綿体内圧（および／または海綿体血流）の増大として定義され；被験薬剤による該増大は被験薬剤がＭＥＤの処置に有用となりうることを示し；被験薬剤はＮＰＹｉである、アッセイ方法。
【請求項１８】
被験薬剤がＮＰＹ  Ｙ１である、請求項１７に記載のアッセイ方法。
【請求項１９】
被験薬剤が生殖器関連ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体を選択的に阻害する、請求項１７または１８に記載のアッセイ方法。
【請求項２０】
下記の工程を含む方法：
（ａ）請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のアッセイを実施し；
（ｂ）ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１を阻害できる１種類以上の薬剤を同定し；そして
（ｃ）ある量の同定した１種類以上の薬剤を製造する；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【請求項２１】
さらに、工程（ｂ）で同定した１種類以上の薬剤が動脈血圧に及ぼす作用を試験し、血圧に対して作用しない、または実質的に作用しない薬剤を選択することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＭＥＤの治療または予防に使用できる薬剤を同定するためのアッセイ方法であって；ペプチド（好ましくは蛍光標識ペプチド）の代謝分解を阻害できる部分を有する被験薬剤を接触させ、該ペプチドは正常な場合はＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１により代謝されるものであり、そして一定時間後に残存するペプチドの活性および／またはレベルを測定する（たとえば蛍光分析により）ことを含み；その際、蛍光により測定したペプチドレベルの変化は被験薬剤の効力（ＩＣ５０）を示し、かつ該被験薬剤がＭＥＤの処置に有用となりうることを示し；被験薬剤はＮＰＹｉである、アッセイ方法。
【請求項２３】
被験薬剤がＮＰＹ  Ｙ１である、請求項２２に記載のアッセイ方法。
【請求項２４】
薬剤によりＭＥＤを処置する方法であって；該薬剤はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ方法においてＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１を阻害することができ；このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ方法は請求項２２または２３に記載のアッセイ方法である方法。
【請求項２５】
請求項１７〜１９のいずれか１項または請求項２２もしくは２３に記載のアッセイ方法により同定された薬剤。
【請求項２６】
ＭＥＤの治療または予防に使用するための、請求項２５に記載の薬剤。
【請求項２７】
ＭＥＤを処置するために経口投与する医薬であって；請求項２５に記載の薬剤を含む医薬。
【請求項２８】
診断方法であって；雄から試料を採取し、該試料がＭＥＤの原因となる量で存在する物質を含有するかを判定し；該物質は雄の海綿体の内因性勃起プロセスに直接的作用を有し；該物質を有益な作用が得られるように薬剤の使用により調節でき；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである、診断方法。
【請求項２９】
採取した雄試料中の物質を検出する手段を含む診断用の組成物またはキットであって；該手段は該試料がＭＥＤの原因となる物質をその原因である量で、または結果的にその原因となる量で含有するかを判定するのに使用でき；該物質は内因性勃起プロセスに直接的作用を有し；該物質を有益な作用が得られるように薬剤の使用により調節でき；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである、診断用の組成物またはキット。
【請求項３０】
ＭＥＤを処置できる薬剤を同定するための動物モデルであって；動物の骨盤神経を刺激した後の海綿体内圧および／または海綿体血流の変化を測定する手段を備えた麻酔動物を含み；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである、動物モデル。
【請求項３１】
モデルがさらに動物の動脈血圧を測定する手段を備えている、請求項３０に記載の動物モデル。
【請求項３２】
ＭＥＤを処置するために内因性勃起プロセスを直接増強できる薬剤を同定するためのアッセイ方法であって；請求項３０または３１に記載の動物モデルに被験薬剤を投与して内因性勃起プロセスの変化を測定することを含み；該変化は前記被験薬剤の存在下での動物モデルにおける海綿体内圧（および／または海綿体血流）の増大として定義され；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである、アッセイ方法。
【請求項３３】
ＭＥＤの処置のほかに、異常な飲料および食物摂取を伴う障害、特に肥満症、食欲低下、食欲異常亢進および代謝障害をも処置する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３４】
ＭＥＤの治療または予防のための医薬の製造／調製における、１種類以上のＮＰＹｉおよび１種類以上の下記の補助有効薬剤を含む組合わせの使用：
（ｉ）天然または合成のプロスタグランジンまたはそのエステル；
（ｉｉ）α−アドレナリン受容体アンタゴニスト化合物；
（ｉｉｉ）ＮＯ−供与（ＮＯ−アゴニスト）化合物；
（ｉｖ）カリウムチャンネル開放薬または調節薬；
（ｖ）ドーパミン作動薬、好ましくはアポモルフィンまたは選択的Ｄ２、Ｄ３もしくはＤ２／Ｄ3アゴニスト；
（ｖｉ）血管拡張薬；
（ｖｉｉ）トロンボキサンＡ２アゴニスト；
（ｖｉｉｉ）ＣＮＳ有効薬剤；
（ｉｘ）麦芽アルカロイド；
（ｘ）ナトリウム排泄増加因子、より具体的には心房性ナトリウム排泄増加因子（心房性ナトリウム排泄増加ペプチドとしても知られる）、Ｂ型およびＣ型ナトリウム排泄増加因子の作用を調節する化合物、たとえばニュートラルエンドペプダーゼ阻害薬；
（ｘｉ）アンギオテンシン受容体アンタゴニスト、たとえばロサルタン；
（ｘｉｉ）ＮＯ−シンターゼに対する基質、たとえばＬ−アルギニン；
（ｘｉｉｉ）カルシウムチャンネル遮断薬、たとえばアムロジピン；
（ｘｉｖ）エンドセリン受容体アンタゴニストおよびエンドセリン変換酵素阻害薬；
（ｘｖ）コレステロール降下薬、たとえばスタチン類（たとえばアトルバスタチン／リピトル−商標）およびフィブラート類；
（ｘｖｉ）抗血小板薬および抗血栓薬、たとえばｔＰＡ、ｕＰＡ、ワルファリン、ヒルジンその他のトロンビン阻害薬、ヘパリン、トロンボプラスチン活性化因子阻害薬；
（ｘｖｉｉ）インスリン増感薬、たとえばレズリン、および血糖降下薬、たとえばグリピジド；
（ｘｖｉｉｉ）Ｌ−ＤＯＰＡまたはカルビドーパ；
（ｘｉｘ）アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、たとえばドネジピル；
（ｘｘ）ステロイド系または非ステロイド系抗炎症薬；
（ｘｘｉ）エストロゲン受容体調節薬および／またはエストロゲンアゴニストおよび／またはエストロゲンアンタゴニスト；
（ｘｘｉｉ）ＰＤＥ阻害薬、より具体的にはＰＤＥ２、３、４、５、７または８阻害薬、好ましくはＰＤＥ２またはＰＤＥ５阻害薬、最も好ましくはＰＤＥ５阻害薬；
（ｘｘｉｉｉ）ＮＥＰ阻害薬；
（ｘｘｉｖ）血管作動性腸管タンパク質（ＶＩＰ）、ＶＩＰ模倣薬、ＶＩＰ類似体、より具体的には１種類以上のＶＩＰ受容体サブタイプＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣまたはＰＡＣＡＰ（下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド）、１種類以上のＶＩＰ受容体アゴニストまたはＶＩＰ類似体またはＶＩＰフラグメント、１種類以上のα−アドレナリン受容体アンタゴニストとＶＩＰの組合わせにより仲介されるもの；
（ｘｘｖ）メラノコルチン受容体アゴニストもしくは調節薬またはメラノコルチン増強薬；
（ｘｘｖｉ）セロトニン受容体のアゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬、より具体的には５ＨＴ１Ａ（ＶＭＬ  ６７０を含む）、５ＨＴ２Ａ、５ＨＴ２Ｃ、５ＨＴ３および／または５ＨＴ６受容体のアゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬；
（ｘｘｖｉｉ）テストステロン置換薬（デヒドロアンドロステンジオンを含む）、テストステルノン（トストレレ）、ジヒドロテストステロンまたはテストステロン埋込み剤；
（ｘｘｖｉｉｉ）エストロゲン、エストロゲンとメドロキシプロゲステロンもしくは酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）（すなわち併用剤として）、またはエストロゲンとメチルテストステロンホルモン置換療法薬；
（ｘｘｉｘ）ノルアドレナリン、ドーパミンおよび／またはセロトニンのトランスポーターの調節薬；
（ｘｘｘ）プリン作動性受容体アゴニストおよび／または調節薬；
（ｘｘｘｉ）ニューロキニン（ＮＫ）受容体アンタゴニスト；
（ｘｘｘｉｉ）オピオイド受容体アゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬、好ましくはＯＲＬ−１受容体アゴニスト；
（ｘｘｘｉｉｉ）オキシトシン／バソプレッシン受容体のアゴニストまたは調節薬、好ましくは選択的オキシトシンアゴニストまたは調節薬；
（ｘｘｘｉｖ）カンナビノイド受容体調節薬；
（ｘｘｘｖ）ボンベシン受容体アンタゴニスト、より具体的にはボンベシンＢＢ1、ＢＢ2またはＢＢ3受容体アンタゴニスト、好ましくはボンベシンＢＢ1阻害薬；
（ｘｘｘｖｉ）ＳＥＰ阻害薬；
（ｘｘｘｖｉｉ）個体の生殖器における中間伝導度カルシウム活性化カリウム（ＩＫCa）チャンネルの活性を調節できる薬剤。
【請求項３５】
ＭＥＤの治療または予防のための医薬の製造／調製における、１種類以上のＮＰＹｉおよび１種類以上のＰＤＥｉを含む組合わせの使用。
【請求項３６】
ＮＰＹｉがＮＰＹ  Ｙ１ｉである、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
ＰＤＥｉがＰＤＥ５ｉである、請求項３５または３６に記載の使用。
【請求項３８】
医薬を経口投与する、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
１種類以上のＮＰＹｉおよび１種類以上のＰＤＥｉを含み、医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和されていてもよい医薬組成物。
【請求項４０】
ＮＰＹｉがＮＰＹ  Ｙ１ｉである、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
ＮＰＹ  Ｙ１ｉが生殖器関連ＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的である、請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
ＰＤＥｉがＰＤＥ５ｉである、請求項３９または４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
組成物を経口投与する、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
ＭＥＤの治療または予防のための医薬の製造における、請求項３９〜４３のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、雄性性的機能障害（ＭＳＤ）、特に雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）の治療および／または予防に有用な化合物および医薬に関する。
【０００２】
本発明はまた、ＭＳＤ、特にＭＥＤを治療および／または予防する方法に関する。
本発明はまた、ＭＳＤ、特にＭＥＤの処置に有用な化合物をスクリーニングするためのアッセイ方法に関する。
【０００３】
便宜上、以下の説明に用いる略号のリストを末尾に提示する。
【０００４】
発明の背景
性的機能障害（ＳＤ）は男女両方に影響を及ぼす可能性のある臨床上重大な問題である。ＳＤの原因は器質的および心理的両方の可能性がある。器質面でのＳＤは、一般に血管系の原疾患、たとえば高血圧症もしくは糖尿病に関連するものにより、処方投薬により、および／または精神性疾患、たとえばうつ病により起きる。心因性要因には恐怖、行為不安および対人葛藤が含まれる。ＳＤは性的行為に障害を与え、自己評価を低下させ、対人関係を撹乱し、これにより人格障害が誘発される。臨床的にはＳＤ障害を雌性性的機能障害（ＦＳＤ）と雄性性的機能障害（ＭＳＤ）に分けている（Ｍｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。ＦＳＤは、女性が性的表現に満足を見出すのが困難または不能である状態と定義するのが最もよい。雄性性的機能障害（ＭＳＤ）は一般に勃起機能障害を伴い、雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）としても知られる（Ｂｅｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。
【０００５】
雄性勃起機能障害（ＭＥＤ）は雄性勃起障害としても知られ、下記のように定義される：
”満足すべき性行為のための陰茎勃起の達成および／または維持ができない状態”（ＮＩＨ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅ，１９９３）。
【０００６】
あらゆる程度の勃起機能障害（ＥＤ）（低、中および完全インポテンス）の罹患率は４０〜７０年代の男性の５２％であり、７０歳より高齢では比率がより高いと推定されている（Ｍｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。この状態は個人とそのパートナーの生活の質に著しいマイナスの影響を及ぼし、不安や緊張が高まり、このためうつ病や自己評価低下をもたらすことがしばしばある。２０年前にはＭＥＤは主に精神障害とみなされていた（Ｂｅｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）が、現在では大部分の個体について器質性の原因があることが知られている。その結果、正常な陰茎勃起機序およびＭＥＤ病態生理の同定がかなり進歩した。
【０００７】
陰茎勃起は血液動態事象であり、陰茎の海綿体平滑筋および血管の収縮と弛緩のバランスに依存する（Ｌｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。（陰茎）海綿体平滑筋（ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｒｖｅｒｎｏｓａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ）を、本明細書中では海綿体平滑筋（ｃｏｒｐｏｒａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ）、または広い意味で海綿体（ｃｏｒｐｕｓ  ｃａｒｖｅｒｎｏｓａ）とも呼ぶ。海綿体平滑筋が弛緩すると、海綿体の小柱空間内に進入する血流が増加し、それらを周囲の外被へ向かって膨張させ、排出静脈を圧迫する。これにより血圧が大幅に上昇し、射精が起きる（Ｎａｙｌｏｒ，１９９８）。
【０００８】
勃起プロセスで起きる変化は複雑であり、末梢神経系および中枢神経系ならびに内分泌系を伴う高度の協調制御が必要である（Ｎａｙｌｏｒ，１９９８）。海綿体平滑筋の収縮は、シナプス後α1アドレナリン受容体の活性化による交感神経性ノルアドレナリン作動性支配により調節される。ＭＥＤは海綿体の内因性平滑筋緊張の増大に関連すると思われる。しかし海綿体平滑筋弛緩のプロセスは一部は非アドレナリン作動性−非コリン作動性（ＮＡＮＣ）神経伝達により仲介される。陰茎にはＮＯのほか多数のＮＡＮＣ神経伝達物質が見出されている：たとえばカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）および血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）。この弛緩仲介に関与する主な弛緩因子は一酸化窒素（ＮＯ）であり、これはＬ−アルギニンから一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）により合成される（Ｔａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｃｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。海綿体平滑筋の緊張低下はＮＯが海綿体弛緩を誘発するのを補助すると考えられる。雄における性的覚醒（ｓｅｘｕａｌ  ａｒｏｕｓａｌ）に際してＮＯがニューロンおよび内皮から放出され、平滑筋細胞および内皮に存在する可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）に結合して活性化し、細胞内サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）レベルを上昇させる。このｃＧＭＰ上昇により細胞内カルシウム濃度（［Ｃａ2+］i）が低下するため、海綿体が弛緩する；この機序は分かっていないが、プロテインキナーゼＧ活性化が関与すると考えられる（Ｃａ2+ポンプの活性化およびＣａ2+−活性化されたＫ+チャンネルによると思われる；Ｃｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０００９】
最近、クエン酸シルデナフィル（ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ  ｃｉｔｒａｔｅ；Ｖｉａｇｒａ（商標）としても知られる）がファイザーにより最初のＭＥＤ療法用経口薬物として開発された。シルデナフィルは、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）を選択的に阻害し、これによりｃＧＭＰが加水分解されて５’ＧＭＰになるのを制限することにより、海綿体内のｃＧＭＰの分解を阻害する作用をもち（Ｂｏｏｌｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｊｅｒｅｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）、これにより細胞内ｃＧＭＰ濃度が上昇し、海綿体平滑筋弛緩が促進される。
【００１０】
現在、商業的に利用できる他のすべてのＭＥＤ療法、たとえばプロスタグランジン系化合物による療法、すなわち尿道内投与できるアルプロスタジル（ａｌｐｒｏｓｔａｄｉｌ；Ｖｉｖｕｓ社からＭｕｓｅ（商標）として入手できる）または細い注射針での注射によるもの（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  ＵｐｊｏｈｎからＣａｖｅｒｊｅｃｔ（商標）として入手できる）は、不便および／または侵襲性である。他の療法には、吸引収縮器具、血管作動薬注射、または陰茎補綴装置の埋込みが含まれる（Ｍｏｎｔａｇｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。注射用血管作動薬は高い有効性を示すが、陰茎疼痛、線維形成および陰茎強直などの副作用が一般にみられ、また注射療法は経口療法のように簡便でないため、現在シルデナフィルは市場で最も好ましい療法である。
【００１１】
したがって、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを処置するための新規方法を見出すことが望まれている。
【００１２】
発明の概要
本発明の独創的な知見は、性的機能障害、特にＭＥＤを伴う雄を神経ペプチドＹ阻害薬（ＮＰＹｉ）、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬（ＮＰＹ  Ｙ１ｉ）により末梢副作用なしに選択的に処置できることである。本発明者らは予想外に、神経ペプチドＹ阻害薬（以下、ＮＰＹｉと呼ぶ）によるＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１の阻害により、神経刺激性勃起プロセスが増強されることも見出した。Ｉ：ＮＰＹおよびＮＰＹｉ、ならびにＩ：ＮＰＹ  Ｙ１およびＮＰＹ  Ｙ１ｉという用語を、以下において互換性をもって用いる。
【００１３】
本明細書中で用いる”末梢副作用なしに”という用語は、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉが心臓血管系に対する作用をもたないこと、または実質的にもたないことを意味する。したがってＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉは心臓血管系において不活性であり、このためＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを全身投与（すなわち経口投与）した場合に血圧低下などの心臓血管事象の予想が軽減または排除される。末梢副作用は、生殖器および／または中枢神経系以外のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体が阻害されるため起きるものである。本発明によるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉは、生殖器のＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体への作用のほか、中枢において中枢神経系に作用し、たとえば異常な飲料および食物摂取を伴う障害、たとえば肥満症、食欲低下、食欲異常亢進および代謝障害をも効果的に処置する。しかし本発明によるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉは、使用に際して生殖器に関するもの以外の末梢活性、すなわち心臓血管系および／または消化器系に対する活性をもたず、または実質的にもたない。このように、中枢神経系においても若干の活性が起きるが、全身的に生殖器選択性がある。
【００１４】
本発明によれば、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを処置するための、使用に際して雄性生殖器関連のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体に選択的または高選択的である神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）阻害薬、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬の使用が提供される。
【００１５】
本発明によれば、神経刺激性勃起プロセスを増強するための、使用に際して雄性生殖器関連のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体に選択的または高選択的である神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）阻害薬、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬の使用が提供される。
【００１６】
本発明により雄性性的機能障害、特にＭＥＤを処置する際に使用するためのＮＰＹ／ＮＰＹ  Ｙ１阻害薬は、１００ナノモル（ｎＭ）未満、好ましくは７５ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ）未満のＩＣ50をもつことが好ましい。
【００１７】
本明細書中で用いる”選択的”という用語は、本発明によるＮＰＹ阻害薬が雄性生殖器、好ましくは海綿体のＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１受容体に対して、ＮＰＹ  Ｙ２またはＮＰＹ  Ｙ５受容体に対するより約１００倍以上、より好ましくは約３００倍以上の選択性をもつことを意味する。好ましくは、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉはエンドペプダーゼＮＥＰ  ＥＣ３．４．２４．１１および／またはアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）に対する活性をもたないか、または実質的にもたない。好ましくは、本発明によるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬はエンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）に対する活性をもたない。適切には、本発明によるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬は、ＮＰＹ／ＮＰＹ  Ｙ１に対して、ＮＥＰおよび／またはＡＣＥに対するより３００倍以上、より好ましくは５００倍以上、最も好ましくは１０００倍以上の選択性をもつ。ＮＥＰｉはＥＣＥに対するより１０００倍以上の選択性をもつことも好ましい。これにより、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉを全身投与（たとえば経口投与）した場合の心臓血管事象（たとえば血圧低下）の予想は軽減する。”選択的”という用語はこのように解釈すべきである。
【００１８】
本明細書中で用いる”高選択的”という用語は、本発明によるＮＰＹ／ＮＰＹ  Ｙ１阻害薬が、雄性生殖器（特に海綿体）のＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１受容体に対して、ＮＰＹ  Ｙ２またはＮＰＹ  Ｙ５受容体に対するより約４００倍以上の選択性、好ましくは少なくとも約５００倍の選択性、好ましくは少なくとも約６００倍の選択性、好ましくは少なくとも約７００倍の選択性、好ましくは少なくとも約８００倍の選択性、好ましくは少なくとも約９００倍の選択性、好ましくは少なくとも約１０００倍の選択性をもつことを意味する。好ましくは、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉはＮＥＰおよび／またはＡＣＥおよび／またはＥＣＥに対する活性をもたないか、または実質的にもたない。”高選択的”という用語はこのように解釈すべきである。
【００１９】
好ましくは、本発明により雄性性的機能障害、特にＭＥＤを処置する際に使用するためのＮＰＹ阻害薬、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬は、使用に際して生殖管に高選択的である。したがってＮＰＹ阻害薬、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを用いると、生殖器における局所活性が得られ、および／または心臓血管系に対する活性は生じないか、または実質的に生じない。これにより、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを全身投与（たとえば経口投与）した場合の心臓血管事象（たとえば血圧低下）の予想は軽減する。
【００２０】
さらに、ＭＥＤの選択的治療および／または選択的予防のための医薬の製造における、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用が提供される。
さらに、ＭＥＤの選択的治療および／または選択的予防のための医薬の調製における、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用が提供される。この場合、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉは、たとえば本発明による薬剤の製造工程および／または同定のための調製工程および／または修飾調製工程に使用できる。
【００２１】
陰茎において報告されているＮＰＹの機能は、陰茎レベルで勃起の持続のために起きる静脈閉鎖機序における役割である。すなわち、ＮＰＹは血管収縮物質として作用し、陰茎静脈、特に陰茎から出る血流を調節する静脈を収縮させることが報告された。よって、勃起中にＮＰＹは陰茎静脈を収縮させ、したがって陰茎海綿体から出る血流を阻止または減少させることにより勃起の持続を補助すると考えられていた。本発明以前の教示によれば、ＮＰＹの阻害は海綿体からの血流を調節する陰茎静脈を弛緩させると予想され、したがってＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉの投与は陰茎の膨張減退をもたらすと予想されたであろう。言い換えれば、本発明以前にはＮＰＹの阻害は陰茎を弛緩状態に維持すると予想されたであろう。
【００２２】
しかし予想外に、ＮＰＹ阻害薬の使用、特にＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストの使用により陰茎海綿体内圧が上昇し、これにより陰茎勃起が促進および／または誘発されることを本発明者らは見出した。ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用により起きる海綿体内圧上昇は、性的刺激に際して起きることが好ましい。
【００２３】
さらに、使用に際して、性的応答に関連する、好ましくは生殖器のＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的である阻害薬が提供される。
本発明はさらに、使用に際して、海綿体内圧上昇に関連する、海綿体のＮＰＹ受容体、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的であるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを提供する。
【００２４】
本発明はさらに、性的覚醒に際して海綿体内（ｉ．ｃ．）圧を選択的に上昇させる医薬の製造における、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用を提供する。ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉは、性的覚醒仲介によるｉ．ｃ．圧を有利に上昇させる。適切には、本発明のＮＰＹ／ＮＰＹ  Ｙ１阻害薬は、性的覚醒仲介によるｉ．ｃ．圧を選択的に上昇させる。ＮＰＹｉおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１ｉは、ｉ．ｃ．圧の上昇により、たとえば生殖器血流に作用を及ぼすことにより、ＭＥＤの処置に使用できる。
【００２５】
本発明は特に、ＭＥＤの選択的治療および／または選択的予防に使用するためのＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ化合物を提供する。
ＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬の使用に加えて、またはその代わりに、ＮＰＹ  Ｙ２受容体阻害薬を使用できる。本発明において用いるＮＰＹｉという用語にはＮＰＹ  Ｙ２阻害薬も含まれる。
【００２６】
本発明は、正常な性的覚醒応答−すなわち陰茎勃起を起こさせる陰茎血流増加の回復手段を提供するので有利である。したがって本発明は、正常な性的覚醒応答を回復または増強する手段を提供する。
【００２７】
若干のＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉ化合物を内因性勃起プロセスの増強に用いる薬剤として試験し、これらがその増強に有用であり、これによりＭＥＤの処置に有用であることが見出された。ＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉに関する若干の実験データを実験の部（後記）に提示する。
【００２８】
特定の理論に拘束されるわけではないが、ＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１を阻害することにより海綿体内および周囲のアデニル酸シクラーゼレベルを直接または間接的に上昇させうることを本発明において提唱する。これにより結果的に海綿体内および周囲のｃＡＭＰレベルが上昇する。アデニル酸シクラーゼおよび／またはｃＡＭＰレベルの上昇により、海綿体血管弛緩および生殖器の海綿体への血流を増大させることができる。
【００２９】
詳細な態様
１態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの選択的治療および／または選択的予防に使用するための（または使用する際の）、ＮＰＹｉ（好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ）化合物、ならびにＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを含む医薬組成物、ならびにＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む併用医薬に関する。医薬組成物においては、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ（およびＰＤＥｉまたはＰＤＥ５ｉ；存在する場合）を、所望により医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和する。本発明においては、組成物を（本明細書に述べる他の組成物と同様に）雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置にその後使用するために包装してもよい。
【００３０】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの選択的および高選択的処置に用いる医薬（たとえば医薬組成物）の製造における、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用に関する。
【００３１】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの選択的および高選択的処置に用いる医薬（たとえば医薬組成物）の調製における、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用に関する。
【００３２】
他の態様において本発明は、使用に際して、生殖器のＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体に選択的であるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを含む医薬に関する。
他の態様において本発明は、ヒトまたは動物においてＭＥＤを選択的または高選択的に治療または予防する方法であって；有効量のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを個体に投与することを含み；該ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉは医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和されていてもよい方法に関する。
【００３３】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを伴う雄を処置する方法であって；性的覚醒に際して末梢副作用を生じることなく海綿体内圧を選択的に上昇させることができるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを雄に送達することを含む方法に関する。
【００３４】
さらに、少なくとも１つのコンパートメントに１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを収容した１種類以上のコンパートメントを含む医薬パックが提供される。
本発明はさらに、本発明による医薬組成物の調製方法であって、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉと医薬的に許容できる希釈剤、賦形剤またはキャリヤーを混和することを含む方法を提供する。
【００３５】
本発明はさらに、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの選択的治療および／または選択的予防に用いる医薬、ならびに異常な飲料および食物摂取を伴う障害、たとえば肥満症、食欲低下、食欲異常亢進および代謝障害の治療および／または予防に用いる医薬の両方の製造または調製における、本発明によるＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用を提供する。
【００３６】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または予防するのに使用できる薬剤（以下、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉと呼ぶ）を同定するためのアッセイ方法に関する；該アッセイ方法は、被験薬剤が内因性勃起プロセスを直接増強できるかを判定することを含み；該増強は本明細書に定める被験薬剤の存在下での海綿体内（ｉ．ｃ．）圧（および／または海綿体血流）の増大として定義され；被験薬剤による該増大は被験薬剤が雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置に有用となりうることを示し；被験薬剤はＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。好ましくは該薬剤は、生殖器関連、特に海綿体関連のＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１受容体を阻害する。好ましくは、該薬剤は血圧に対する作用をもたないか、または実質的にもたない。
【００３７】
たとえば本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの治療または予防に使用できる薬剤を同定するためのアッセイであって；ペプチド（好ましくは蛍光標識ペプチド）の代謝分解を阻害できる部分を有する被験薬剤を接触させ、該ペプチドは正常な場合はＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１により代謝されるものであり、そして一定時間後に残存するペプチドの活性および／またはレベルを測定する（たとえば蛍光分析により）ことを含み；その際、蛍光により測定したペプチドレベルの変化は被験薬剤の効力（ＩＣ50）を示し、かつ該被験薬剤が雄性性的機能障害、特にＭＥＤの治療または予防に有用となりうることを示し；被験薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉであるアッセイ方法を提供する。
【００３８】
他の態様において本発明は、下記の工程を含む方法に関する：
（ａ）本発明によるアッセイ方法を実施し；
（ｂ）ＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１を阻害できる１種類以上の薬剤を同定し；そして
（ｃ）ある量の同定した１種類以上の薬剤を製造する；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
この態様に関して、工程（ｂ）で同定した薬剤を、たとえば活性が最大になるように修飾し、次いで工程（ａ）を繰り返すことができる。目的とする活性または薬物動態プロフィルが達成されるまで、これらの工程を繰り返すことができる。
【００３９】
したがって他の態様において本発明は、下記の工程を含む方法に関する：（ａ１）本発明によるアッセイ方法を実施し；（ｂ１）内因性勃起プロセスを直接増強できる１種類以上の薬剤を同定し；（ｂ２）同定した１種類以上の薬剤を修飾し；（ａ２）所望により工程（ａ１）を繰り返し；そして（ｃ）ある量の同定した１種類以上の薬剤（すなわち修飾したもの）を製造する；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４０】
他の態様において本発明は、下記の工程を含む方法に関する：
（ｉ）本発明によるアッセイ方法を実施し；
（ｉｉ）ＮＰＹ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１を阻害できる１種類以上の薬剤を同定し；
（ｉｉｉ）同定した薬剤が動脈血圧に及ぼす作用を被験動物、たとえば麻酔したウサギにおいて試験し；
（ｉｖ）動脈血圧にに対する作用をもたないか、または実質的にもたない薬剤を選択し；そして
（ｖ）ある量の選択した１種類以上の薬剤を製造する；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
この態様に関して、工程（ｂ）で同定した薬剤を、たとえば活性が最大になるように修飾し、次いで工程（ａ）を繰り返すことができる。目的とする活性または薬物動態プロフィルが達成されるまで、これらの工程を繰り返すことができる。
【００４１】
他の態様において本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏで（たとえばウサギにおいて）海綿体内圧または海綿体血流を測定しながら、神経刺激による内因性勃起プロセスを薬剤により増強することによって、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを治療または予防する方法に関する；該薬剤はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ方法において蛍光ペプチドの代謝分解を直接阻害することができ（前記に詳述）；このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ方法は本発明によるアッセイ方法であり；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４２】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するための医薬組成物の調製における薬剤の使用に関する；該薬剤は本発明によるアッセイ方法でｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイした場合、蛍光ペプチドの代謝分解を直接阻害することができ；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４３】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するための医薬組成物の製造における薬剤の使用に関する；該薬剤は本発明によるアッセイ方法でｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイした場合、蛍光ペプチドの代謝分解を直接阻害することができ；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４４】
他の態様において本発明は、雄性性的機能障害（特にＭＥＤ）を治療または予防できる薬剤の同定に用いるための動物モデルに関する；該モデルは、動物の骨盤神経を刺激した後の海綿体内圧および／または海綿体血流の変化を測定する手段を備えた麻酔した雄動物を含み；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４５】
動物モデルは、さらに動物の動脈血圧を測定する手段を備えていてもよい。
他の態様において本発明は、ＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するために内因性勃起プロセスを直接増強できる薬剤を同定するためのアッセイ方法に関する；該アッセイ方法は本発明の動物モデルに被験薬剤を投与して内因性勃起プロセスの変化を測定することを含み；該変化は被験薬剤の存在下での動物モデルにおける海綿体内圧（および／または海綿体血流）の増大として定義され；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４６】
他の態様において本発明は、ＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するために、動脈血圧に作用を及ぼさずに内因性勃起プロセスを直接増強できる薬剤を同定するためのアッセイ方法に関する；該アッセイ方法は、本発明の動物モデルに被験薬剤を投与して内因性勃起プロセスの変化を測定し；該変化は前記被験薬剤の存在下での動物モデルにおける海綿体内圧（および／または海綿体血流）の増大として定義され；動物モデルの動脈血圧を測定して血圧が変化しないこと、または実質的に変化しないことを確認することを含み；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４７】
他の態様において本発明は、診断方法に関する；該診断方法は、雄から試料を採取し、該試料が雄性性的機能障害、好ましくはＭＥＤの原因となる量で存在する物質を含有するかを判定することを含み；該物質は雄の海綿体の内因性勃起プロセスに直接的作用をもち；該物質を有益な作用が得られるように薬剤の使用により調節でき；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４８】
他の態様において本発明は、採取した雄試料中の物質を検出する手段を含む診断用の組成物またはキットに関する；該手段は該試料が雄性性的機能障害、好ましくはＭＥＤの原因となる物質をその原因である量で、または結果的にその原因となる量で含有するかを判定するのに使用でき；該物質は内因性勃起プロセスに直接的作用を有し；該物質を有益な作用が得られるように薬剤の使用により調節でき；該薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。
【００４９】
本発明者らは予想外に、ＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１をＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉで阻害すると、ＰＤＥ阻害薬、特にＰＤＥ５阻害薬が仲介する勃起プロセス増強が著しく高まることをも見出した。
【００５０】
ＮＰＹおよびＮＰＹ  Ｙ１受容体は全身に存在するので、ＮＰＹｉおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１ｉを全身投与して、許容できない（有害な）副作用、特に許容できない（有害な）末梢副作用を誘発することなく、雄性生殖器における療法応答を達成できることは、全く予想外であった。たとえば後記のｉｎ  ｖｉｖｏ（たとえばウサギにおける）結果では、ＮＰＹ  Ｙ１ｉ単独（前記のように特に選択性をもつ）およびＮＰＹｉ／ＰＤＥ５の組合わせを全身投与した場合、性的覚醒（骨盤神経刺激により模倣）に際して、心臓血管パラメーターに有害な作用を及ぼすことなく、たとえば有意の血圧低下または血圧上昇作用を引き起こすことなく、生殖器血流が増加した。
【００５１】
したがって本発明の他の態様によれば、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するための医薬の製造における、全身投与による（好ましくは経口、たとえば嚥下可能な錠剤もしくはカプセル剤、または舌下もしくは口腔製剤）ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの使用が提供される。
【００５２】
したがって本発明の他の態様によれば、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するための医薬の製造／調製における、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、および１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む組合わせの使用が提供される。
【００５３】
したがって本発明の他の態様によれば、雄性性的機能障害、特にＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防するための医薬の製造／調製における、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、および１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉからなる組合わせの使用が提供される。好ましくは、ＮＰＹｉ単独、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、特にＰＤＥ５ｉを一緒に使用する。
【００５４】
好ましくは、この併用療法は１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉと、１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉの併用を含む。より好ましくはこの併用は、ＭＥＤの処置のための、１種類以上のＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉと、１種類以上のＰＤＥｉ、特にＰＤＥ５ｉの併用投与を提供する。
【００５５】
他の態様において本発明は、ＭＥＤの治療または予防のための、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、および１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む医薬組成物（他の有効成分、たとえば他の阻害薬、たとえばニュートラルエンドペプダーゼ（ＮＥＰ）阻害薬は存在しない）の使用を提供する。好ましくはこの医薬組成物は、１種類以上のＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉと、１種類以上のＰＤＥｉ、特にＰＤＥ５ｉのみを、ＭＥＤ処置のための有効成分として含む。
【００５６】
他の態様において本発明は、ＭＥＤの治療または予防のための、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉ、およびさらに後記の１種類の補助有効薬剤を含む医薬組成物の使用を提供する。
【００５７】
他の態様によれば本発明は、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、および１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを、所望により医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和したものからなる医薬組成物を提供する。
【００５８】
本発明者らの結果は予想外に、この組合わせを最小の血圧低下で全身投与できる（好ましくは経口、たとえば嚥下可能な錠剤もしくはカプセル剤、または舌下もしくは口腔製剤）ことを示した−したがってこの組合わせを用いて雄性性的機能障害を全身処置できる。
【００５９】
本発明によるＭＥＤの選択的な治療または予防のための医薬組成物に用いるのに特に好ましいものは、有効かつ選択的なＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉと、有効かつ選択的なＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉの組合わせである。
【００６０】
したがって本発明の他の態様によれば、ＭＥＤの選択的処置のための、１種類以上のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、および１種類以上のＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む医薬組成物の使用が提供される。
【００６１】
本発明の好ましい態様において、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉの併用投与は共投与である。本明細書に定める共投与には、ＰＤＥｉ（特にＰＤＥ５ｉ）とＮＰＹｉ（特にＮＰＹ  Ｙ１ｉ）の同時（個別）投与、同時組合わせ投与、個別投与、組合わせ投与、逐次投与、および共製剤による組合わせ投与が含まれる。
【００６２】
前記に詳述したように本発明はさらに、ＰＤＥｉ（特にＰＤＥ５ｉ）とＮＰＹｉ（特にＮＰＹ  Ｙ１ｉ）の共投与により、ＰＤＥ、特にＰＤＥ５単独によるＭＥＤ療法と比較して有効性が増大することを提示する。
【００６３】
本発明の他の態様によれば、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉと、ＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉの共投与により、ＰＤＥｉまたはＰＤＥ５ｉ単独により達成されるものより速やかな作用開始が達成されることが本明細書に提示される。すなわち本発明はさらに、ＭＥＤ療法用の即効性組成物の使用を提供する。本明細書に定める即効性ＭＥＤ組成物とは、組成物（ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む）の静脈内投与後、海綿体内圧に対する最大効果に達するまでの時間が、同量のＰＤＥｉまたはＰＤＥ５ｉ単独により達成される対応する時間と対比して短縮されることを意味する。
【００６４】
したがって本発明の他の態様によれば、ＭＥＤの選択的処置に使用するための、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉを含む即効性医薬組成物が提供される。
【００６５】
本発明の他の態様によれば、ＭＥＤの選択的処置に使用するための、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉからなる即効性医薬組成物が提供される。
【００６６】
さらに本発明においては、ＮＰＹ  Ｙ１ｉ／ＰＤＥ５ｉの組合わせを用いるとＰＤＥ５ｉの効果が増強され、これにより特定の有効性を得るのに必要なＰＤＥ５阻害薬の用量を少なくできることが提示される。本明細書に定めるＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび少ない量のＰＤＥ５ｉを含む製剤とは、本発明による有効量のＮＰＹ  Ｙ１ｉと組み合わせると、特定の応答を得るのに必要なあるＰＤＥｉの量が、ＰＤＥ５ｉ単独の必要量より少ないことを意味する。ＭＥＤの処置に用いるこのように少ない用量の組成物は、ＰＤＥ５とナイトレートの相互作用の可能性を少なくする。これはさらに、軽度のＭＥＤを伴う個体、たとえばヒトにとって望ましい。これは、ＰＤＥ単独（たとえばシルデナフィル）に対する応答が低い個体に特に有利である。
【００６７】
雄性性的機能障害の選択的処置のための医薬の製造における経口投与に適した組合わせ医薬を使用し、この組合わせは、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１に対してそれぞれ１００ｎＭ未満のＩＣ50および生殖器のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体に対してアンギオテンシン変換酵素に対するより１０００以上高い選択性をもつＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬、ならびにＰＤＥ５に対して１００ｎＭ未満のＩＣ50およびＰＤＥ５に対してＰＤＥ３に対するより１００以上高い選択性をもつホスホジエステラーゼ５型酵素（ＰＤＥ５）を含む。
【００６８】
好ましくは、本発明に用いるＰＤＥ５ｉはシルデナフィル、好ましくはクエン酸シルデナフィルである。
他の態様によれば本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置に使用するための医薬（たとえば医薬組成物）の製造における、本質的に唯一の有効成分としてのＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉからなる組成物の使用に関する。
【００６９】
他の態様によれば本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置に使用するための医薬（たとえば医薬組成物）の製造における、唯一の有効成分としてのＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉからなる組成物の使用に関する。
【００７０】
本明細書中で用いる”有効成分”という用語は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置に有効である成分を意味する。
理解しやすくするために、これらおよび他の本発明の態様について以下に適宜なセクション項目に述べる。ただし各セクションに示す教示内容は必ずしもそのそれぞれのセクションに限定されない。
【００７１】
好ましい態様
本発明によりＭＥＤの選択的治療または選択的予防に使用するための薬剤は、好ましくはＮＰＹ阻害薬および／またはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬である。
【００７２】
本発明によりＭＥＤの選択的治療または選択的予防に使用するための薬剤は、使用に際して身体の他の末梢部位、たとえば心臓血管系および／または消化器系にあるＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体と比較して、生殖器のＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的であることが好ましい。
【００７３】
本発明によりＭＥＤの選択的治療または選択的予防に使用するための薬剤は、使用に際して生殖器のＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体に高選択的であるほか、中枢神経系のＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体に対して有効であり、したがってＭＥＤと食物および飲料摂取障害の両方の治療または予防に使用できる。
【００７４】
１態様において、好ましくは本発明により使用する薬剤は経口投与用である。
他の態様において、本発明により使用する薬剤は局所投与または海綿体内投与用であってもよい。
【００７５】
本発明には、本発明薬剤を性的覚醒／刺激（ａｒｏｕｓａｌ／ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）の前および／または途中に投与することが含まれる。これにより、生殖器のＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１には有効であるが、たとえば心臓血管系に対しては有効でないという全身選択的有効性が得られるので有利である。この選択性は薬理学的効果よりむしろ生理学的効果によるものと思われる。
【００７６】
たとえば本発明のある態様については、性的覚醒／刺激工程のあることがきわめて望ましい。本発明者らは、この工程が全身選択性をもたらす可能性があることを見出した。
本明細書において”性的覚醒／刺激”は視覚的覚醒／刺激、物理的覚醒／刺激、聴覚的覚醒／刺激、または思考的覚醒／刺激のうちの１以上であってよい。
【００７７】
したがって本発明薬剤は、特に経口送達用である場合、性的覚醒／刺激の前および／または途中に送達されることが好ましい。
したがってこの好ましい態様に関して本発明は、雄性性的機能障害、特にＭＥＤの選択的治療または選択的予防のための医薬の製造における薬剤の使用であって；該薬剤は末梢作用なしに個体の生殖器のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを阻害でき；該個体はこの医薬の投与の前または途中に性的覚醒／刺激される使用を提供する。
【００７８】
好ましくは、本発明の医薬は個体に経口投与される。
さらにこの好ましい態様に関して本発明は、個体の処置方法であって；末梢作用なしに個体の生殖器のＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを阻害できる薬剤を個体に送達し；該薬剤はＭＥＤを選択的に治療または選択的に予防する量であり；該薬剤は所望により医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混和され；該個体はこの医薬の投与の前または途中に性的覚醒／刺激される方法を提供する。
【００７９】
好ましくは、本発明の医薬は個体に経口投与される。
【００８０】
優れた予想外の知見
本発明は下記のような優れた予想外の知見を示す：
（ａ）ＮＰＹ受容体、特にＮＰＹ  Ｙ１受容体の阻害により、海綿体内圧が上昇し、これにより陰茎勃起が促進／誘発される；
（ｂ）ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１を阻害する薬剤は勃起プロセスの増強に有用であり、勃起機能障害、たとえばＭＥＤを、末梢副作用なしに克服するのに役立つ；
（ｃ）ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉを全身（たとえば経口）投与すると、末梢副作用なしに、特に血圧低下など有害な心臓血管事象なしに、選択的にＭＥＤが処置される；
（ｄ）本発明薬剤は生殖器に対して末梢作用する（他のいずれにも末梢作用しない）ほか中枢神経系にも作用するので、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉの全身投与はＭＥＤと食物および飲料摂取障害の両方の選択的治療または選択的予防に有用である；
（ｅ）ＮＰＹｉ、特にＮＰＹ  Ｙ１ｉによるＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１の阻害は、ＰＤＥ阻害薬、特にＰＤＥ５阻害薬仲介による勃起プロセス増強を著しく高める。
【００８１】
利点
本発明は下記の理由で有利である：
（ｉ）生殖器のＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１受容体を阻害する薬剤は、有害な心臓血管事象などの有害な副作用のリスクなしに、海綿体内圧の上昇および／または海綿体への血流増加を誘発することにより、雄の勃起プロセスなどの性的応答の障害を選択的に予防および／または選択的に治療し、および／または正常な応答を選択的に回復する手段を提供する。したがって本発明は、正常な勃起応答を回復または模倣する手段を提供する；
（ｉｉ）性的覚醒と組み合わせたＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙの阻害による海綿体内圧上昇および／または海綿体への血流増加は、海綿体を含めた生殖器に特異的であり、他の末梢系、特に心臓血管系には作用しないと思われる。この選択的ターゲティングにより、ＭＥＤを治療するために現在用いられている他のある種の血管作用性薬物に伴うリスクおよび副作用（たとえば血圧低下）が軽減および／または排除される。
【００８２】
他の利点については以上および以下の説明により明らかになる。
【００８３】
患者群
軽度ないし中等度のＭＥＤを伴う患者はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉによる治療で効果があり、重度のＭＥＤを伴う患者も応答する。しかし初期の研究で、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬／ＰＤＥ５阻害薬を併用すると、軽度、中等度および重度のＭＥＤを伴う患者の応答率が高まることが示唆された。軽度、中等度および重度のＭＥＤは当業者に知られている用語であるが、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１５１，５４−６１（１９９４年１月）に説明がある。
【００８４】
初期の研究で、下記の患者群はＮＰＹｉ／ＮＰＹ  Ｙ１ｉおよびＰＤＥ５ｉ（または前記に述べた他の組合わせ）による治療で効果のあることが示唆された。これらの患者群はＣｌｉｎｉｃａｌ  Ａｎｄｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２３，ｎｏ．４，ｐ７７３−７８２、およびＩ．Ｅｒｄｌｅｙ  ａｎｄ  Ｋ．Ｓｅｔｈｉａによる著作，”Ｅｒｅｃｔｉｌｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ−Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”（Ｍｏｓｂｙ−Ｗｏｌｆｅ発行）３章に詳述されており、下記のものである：心因性、器質性、血管性、内分泌性、神経原性、動脈原性、薬物誘発性の性的機能障害（乳腺原性；ｌａｃｔｏｇｅｎｉｃ）、および海綿体因子関連の、特に静脈原性の性的機能障害。
【００８５】
ＮＰＹ
前記のように、本発明薬剤はＮＰＹ阻害薬（ＮＰＹアンタゴニストと呼ぶこともある）として作用できる任意の適切な薬剤であってよい。
【００８６】
ＮＰＹおよびその関連受容体に関する背景技術の説明をＶｉｃｔｏｒ  Ａ．ＭｃＫｕｓｉｃｋらが作成した：
http://www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm
ＮＰＹに関する下記の文はこの情報源から抜粋したものである：
”神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）は哺乳動物神経系に多量にかつ広くみられるペプチドである。それはペプチドＹＹとの配列相同性を示し、膵臓ポリペプチド（ＰＮＰ；１６７７８０）に対して５０％を超えるアミノ酸およびヌクレオチド配列相同性をもつ。ＮＰＹは３６アミノ酸のペプチドである。Ｍｉｎｔｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）がクロム親和性細胞腫のｍＲＮＡから出発してＮＰＹ遺伝子をクローニングした。Ｔａｋｅｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５，１９８６）は、それぞれクロム親和性細胞腫および膵臓内分泌腫からＮＰＹおよびＰＮＰ遺伝子のｃＤＮＡクローンを単離した。彼らはこれらのｃＤＮＡプローブを用いてヒト−マウス体細胞ハイブリッドの染色体アサインメントパネルからゲノムＤＮＡを分析し、次いでそれらの遺伝子がシンテニックであるかという疑問について調べた。その研究から、ＮＰＹは７ｐｔｅｒ−７ｑ２２上にあり、ＰＮＰは１７ｐ１１．１−１７ｑｔｅｒ上にある非シンテニーであることが示された。Ｂａｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）はＭｕｓ  ｓｐｒｅｔｕｓとの戻し交雑試験により、相同ＮＰＹ遺伝子をマウス染色体６にマッピングした。マウス染色体６はヒト７ｑとの相同性をもつので、ヒトのＮＰＹ遺伝子は７ｃｅｎ−ｑ２２領域に局在する可能性がある。Ｍｅｉｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）は、嚢胞性線維症の遺伝子座（２１９７００）と神経ペプチドＹの遺伝子座の近接を除外した。Ｔｅｒｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）は、ＮＰＹをコードするｍＲＮＡの脳皮質ニューロン内における分布を、外科生検検体および死後脳においてｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法により調べた。彼らはＮＰＹ遺伝子転写と正常な成熟皮質ニューロンにおける発現の位置が一致することを示した。Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）は、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより、ＮＰＹ遺伝子が７ｐ１５．１に局在し、単一コピーで存在することを示した。彼らは、ＮＰＹは知られているうちでは最も高度に保存されたペプチドのひとつであり、たとえばヒトとサメの間でわずか３アミノ酸の相異しかないと述べた。神経ペプチドＹはエネルギーバランスの制御に関連するとされる神経調節物質であり、ｏｂ／ｏｂマウスの視床下部では過剰産生される。レプチン（１６４１６０）欠乏に応答するＮＰＹの役割を調べるために、Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）はＮＰＹ欠乏ｏｂ／ｏｂマウスを作製した。ｏｂ／ｏｂマウスは、ＮＰＹの不存在下では食物摂取の低下およびエネルギー消費の増大のため、肥満性が低く、糖尿病、不妊症および成長ホルモン欠乏症の罹患度が低かった。これらの結果は、ＮＰＹがレプチン欠乏症の中心的エフェクターであることを示すと解釈された。アルコール嗜好性となるように選択的に育種したラットの遺伝的連鎖解析により、ＮＰＹ遺伝子を含む染色体領域が同定された（Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。アルコール嗜好性ラットは、アルコール非嗜好性ラットと比較して幾つかの脳領域のＮＰＹレベルが低かった。したがってＴｈｉｅｌｅら（１９９８）は、ターゲティングした遺伝子撹乱（Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）によって完全にＮＰＹを欠如したマウスによるアルコール消費を調べた。彼らは、野生型マウスと比較してＮＰＹ欠乏マウスが６％、１０％および２０％（体積）エタノール含有溶液の消費増大を示すことを見出した。ＮＰＹ欠乏マウスは、血漿エタノール濃度は対照と有意差がないにもかかわらずエタノール誘発睡眠からより速やかに回復することが示すように、エタノールの鎮静／催眠作用に対する感受性も低かった。これに対し、ニューロン（ＮＰＹを通常発現する）において標識ＮＰＹ遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスは、エタノール嗜好性が低く、エタノールの鎮静／催眠作用に対して対照より感受性であった。これらのデータから、アルコールの消費および耐性は脳のＮＰＹレベルに対して反比例するという直接的証拠が得られる。肥満症の遺伝的基礎に関して現在行われている研究の一部としてＫａｖｏｎｅｎら（１９９８）は、プレ−プロ−ＮＰＹのシグナルペプチド部分の残基７においてロイシンからプロリンへの置換を生じる１１２８Ｔ−Ｃ多型を同定した。この多型は肥満症やエネルギー代謝と関連はなかったが、正常体重および肥満症のフィンランド人および肥満症のオランダ人対象における高い全コレステロールおよびＬＤＬコレステロール血清濃度と有意に一貫して関連していた。Ｕｕｓｉｔｕｐａら（１９９８）は、ｐｒｏ７多型がフィンランド人の１４％にみられるが、オランダ人ではわずか６％であることを見出した。ＮＰＹにｐｒｏ７を含む対象は、この遺伝子変異体を含まない対象より平均０．６〜１．４ｍｍｏｌ／Ｌ高い全コレステロール血清濃度をもっていた。ｐｒｏ７  ＮＰＹが血清コレステロール濃度に及ぼす影響は正常体重のオランダ人にはみられなかったので、この遺伝子変異体の影響に対しては肥満症の人の方がより感受性であると推定される。ＮＰＹにｐｒｏ７をもつ確率は、全コレステロール血清濃度が８ｍｍｏｌ／Ｌ以上の肥満症対象の５０〜６０％にも及ぶと計算された。少なくともフィンランド人においては、ｐｒｏ７形ＮＰＹは血清コレステロール濃度に影響を及ぼす最も強力な遺伝因子のひとつである。Ａｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｍ（１９８６）；Ｄｏｃｋｒａｙ（１９８６）；Ｍａｃｃａｒｒｏｎｅ；およびＭｉｎｔｈら（１９８６）も参照。”
【００８７】
前記のように、ＮＰＹおよび関連受容体に関する背景技術がＶｉｃｔｏｒ  Ａ．ＭｃＫｕｓｉｃｋら（前掲）により作成された。ＮＰＹ  Ｙ１に関する下記の文はこの情報源から抜粋したものである：
”神経ペプチドＹ（ＮＰＹ；１６２６４０）は哺乳動物神経系に最も多量にみられる神経ペプチドのひとつであり、多様にわたる重要な生理活性を示し、これには精神運動活性、食物摂取、中枢内分泌調節、および心臓血管系に対する有効な血管作動性作用が含まれる。薬理学的基準により２つの主要なサブタイプのＮＰＹ（Ｙ１およびＹ２）が定められた。ＮＰＹ  Ｙ１受容体は脳、脾臓、小腸、腎臓、精巣、胎盤および大動脈平滑筋を含めた多様な組織中に同定された。Ｙ２受容体は主に中枢神経系にみられる。Ｈｅｒｚｏｇら（１９９２）は、ヒトＮＰＹ受容体をコードするｃＤＮＡのクローニングを報告し、この受容体がＧタンパク質共役型受容体スーパーファミリーのメンバーであることを確認した。この受容体は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）またはヒト胎児腎細胞に発現した場合、特徴的なリガンド特異性を示した。腎細胞系においてこの受容体は、サイクリックＡＭＰ蓄積阻害を仲介する百日咳毒素感受性Ｇタンパク質と共役した。他方、ＣＨＯ細胞系ではこの受容体はアデニル酸シクラーゼ阻害と共役せず、細胞内カルシウム増加と共役した。したがってこのＮＰＹ受容体の第２メッセンジャー共役は細胞タイプ特異的であり、その細胞タイプおよびエフェクター系に存在するＧタンパク質の特異的レパートリーに依存していた。Ｌａｒｈａｍｍａｒら（１９９２）は、独立して神経ペプチドＹ受容体をクローニングおよび解明した。Ｈｅｒｚｏｇら（１９９３）は、ヒトＮＰＹ  Ｙ１受容体遺伝子の分子機構および調節を決定した。大部分のＧタンパク質共役型受容体遺伝子が連続構造であるのに対し、ＮＰＹ  Ｙ１受容体遺伝子は３つのエキソンをもつことを彼らは見出した。彼らは、この遺伝子の第１イントロンに共通のＰｓｔＩ多型性をも同定した。彼らは、高分解能蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによりこの遺伝子が４ｑ３１．３−ｑ３２に局在すると判定した。Ｈｅｒｚｏｇら（１９９７）は、ＮＰＹ１Ｒ遺伝子とＮＰＹ５Ｒ（６０２００１）遺伝子が染色体４ｑ３１−ｑ３２に共局在することを見出した。これら２遺伝子は共通のプロモーター領域から反対方向へ転写される。オルタナティブスプライシングされたＹ１受容体遺伝子の５−プライムエキソンのひとつは、Ｙ５受容体のコード配列の一部である。この異例の配列様式からＨｅｒｚｏｇら（１９９７）は、これら２遺伝子が遺伝子重複事象により生じ、それらが相関発現しているという示唆を得た。Ｌｕｔｚら（１９９７）は、種間戻し交雑分析により、Ｎｐｙ１ｒおよびＮｐｙ２ｒ遺伝子をそれぞれマウス染色体８および３の保存連鎖群にマッピングした。これらはヒト染色体４ｑの遠位領域に対応する。”
【００８８】
前記のように、ＮＰＹおよび関連受容体に関する背景技術がＶｉｃｔｏｒ  Ａ．ＭｃＫｕｓｉｃｋら（前掲）により作成された。ＮＰＹ  Ｙ２に関する下記の文はこの情報源から抜粋したものである：
”Ｇタンパク質共役受容体ファミリーによる神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）シグナルが脳および交感神経のニユーロンに存在する。薬理学的基準、組織分布、およびコードする遺伝子の構造に基づいて、少なくとも３つのタイプの神経ペプチドＹ受容体が同定された；１６２６４１および１６２６４３参照。Ｒｏｓｅら（１９９５）は、ＣＯＳ細胞におけるヒト２型受容体ＮＰＹ２Ｒに対するｃＤＮＡの発現クローニングを報告した。トランスフェクションした細胞は、ＮＰＹ（１６２６４０）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ；６００７８１）、およびアミノ酸１３〜３６を含むＮＰＹフラグメントに対して高い親和性を示した。この推定３８１アミノ酸のタンパク質は、Ｇタンパク質共役受容体に特徴的な７回膜貫通ドメインをもち、ヒトＹ１受容体（ＮＰＹ１Ｒ；１６２６４１）とは３１％同一であるにすぎない。４−ｋｂのｍＲＮＡが神経系の数箇所の領域から得た組織試料のノーザンブロットに検出された。Ｇｅｒａｌｄら（１９９５）は、ヒト海馬ｃＤＮＡ発現ライブラリーから放射性標識ＰＹＹ結合アッセイによりヒトＹ２受容体に対するｃＤＮＡをクローニングした。彼らはこのＹ２遺伝子をＣＯＳ−７細胞において発現させ、ホルモン結合アッセイを実施して、このＹ２受容体がＰＹＹ、ＮＰＹおよび膵臓ポリペプチド（ＰＰ；１６７７８０）ホルモンを結合する（最高から最低までの親和性）ことを示した。Ａｍｍａｒら（１９９６）は、２型ＮＰＹ受容体をコードするヒト遺伝子をクローニングおよび解明した。この転写体は９ｋｂのゲノム配列であり、２つのエキソンにコードされる。１型ＮＰＹ受容体遺伝子と同様に、ＮＰＹ２Ｒの５−プライム非翻訳領域が４．５−ｋｂの介在配列により中断されている。Ａｍｍａｒら（１９９６）は、げっ歯類−ヒト細胞ハイブリッドのサザン分析、続いて蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）により、ＮＰＹ２Ｒ遺伝子が４ｑ３１にマッピングされることを証明した。これはＮＰＹ１Ｒ遺伝子を含む領域と同じであり、これらのサブタイプが構造は異なるにもかかわらず遺伝子重複により生じた可能性を示唆する。Ｌｕｔｚら（１９９７）は、種間戻し交雑分析により、Ｎｐｙ１ｒおよびＮｐｙ２ｒ遺伝子をそれぞれマウス染色体８および３の保存連鎖群にマッピングした。これらはヒト染色体４ｑの遠位領域に対応する。”
【００８９】
ＮＰＹ配列データ
ＮＰＹおよびその受容体（たとえばＮＰＹ  Ｙ１）に関するヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は文献に記載されている。若干の配列を図４〜６に示す。
【００９０】
ＮＰＹ阻害薬および／またはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬
ＮＰＹｉ（またはＮＰＹ  Ｙ１ｉ）の同定および／または研究に適したアッセイ系の詳細を、ＮＰＹアッセイ法と題する後記セクションに記載する。これらはＷＯ−Ａ−９８／５２８９０（その９６頁２〜２８行を参照）に提示されたアッセイ法に基づく。
【００９１】
ＮＰＹ阻害薬またはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬の他の例は下記の概説報文に示されている：
【００９２】
【化１】
2004522720.tif 000002
【００９３】
【化２】
2004522720.tif 000003
【００９４】
【化３】
2004522720.tif 000004
【００９５】
【化４】
2004522720.tif 000005
【００９６】
ＮＰＹｉおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１ｉの他の例は、さらに下記の書類に開示されている：
【００９７】
【化５】
2004522720.tif 000006
【００９８】
ＮＰＹ阻害薬および／またはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬の他の例は下記の構造式から選択される：
【００９９】
【表１】
2004522720.tif 000007
【０１００】
【表２】
2004522720.tif 000008
【０１０１】
【表３】
2004522720.tif 000009
【０１０２】
【表４】
2004522720.tif 000010
【０１０３】
ＮＰＹアッセイ法
ＷＯ９８／５２８９０（その９６頁２〜２８行）に詳述されるように、化合物がＮＰＹに結合する能力は、本質的にＭ．Ｗ．Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，８：２４３８−２４４６（１９８８）に記載されたプロトコルを用いて評価できる。
【０１０４】
このアッセイ法では、細胞系ＳＫ−Ｎ−ＭＣを用いた。この細胞系はＳｌｏａｎｅ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ニューヨーク）から得られた。
【０１０５】
これらの細胞をＴ−１５０フラスコ内で、５％のウシ胎仔血清を補充したダルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）により培養した。細胞を手動でフラスコから掻き取ることにより取り出し、ペレット化し、−７０℃に保存した。
【０１０６】
このペレットをガラス製ホモジナイザーにより、２．５ｍＭの塩化カルシウム、１ｍＭの塩化マグネシウムおよび２ｇ／Ｌのバシトラシンを含有する２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）緩衝液に再懸濁した。０．１ｎＭの125Ｉ−ペプチドＹＹ（２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）および０．２〜０．４ｍｇのタンパク質を含有する最終体積２００μｌで約２時間、室温においてインキュベーションを行った。
【０１０７】
非特異的結合を、１μＭの神経ペプチドＹの存在下でインキュベートした後に組織に結合残留する放射能量と定義した。幾つかの実験で、種々の濃度の化合物をインキュベーション混合物に含有させた。
【０１０８】
９６ウェルのハーベスターを用い、予め０．３％ポリエチレンイミンに浸漬したガラス繊維フィルターで速やかに濾過することによりインキュベーションを停止した。フィルターを５ｍｌの５０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）により４℃で洗浄し、６０℃で速やかに乾燥させた。次いでフィルターを融着シンチレーションシートで処理し、フィルターに保持された放射能を計数した。結果を種々のソフトウェアパッケージにより分析した。標準クーマシータンパク質アッセイ試薬により、ウシ血清アルブミンを標準物質として用いてタンパク質濃度を測定した。
【０１０９】
併用
より詳細には、本発明はさらに、本明細書に概説した雄性性的機能障害（より具体的には雄性勃起機能障害）の処置のための本発明化合物と、１種類以上の有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）の組合わせを含む。この組合わせにより、器質性、血管性、神経原性、薬物誘発性および／または心因性の勃起機能障害を処置できる。
【０１１０】
本発明はさらに、本明細書に概説した雄性性的機能障害（より具体的には雄性勃起機能障害）の治療または予防のための医薬の製造における、本質的に本発明によるＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび２種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる組合わせの使用を含む。この組合わせにより、器質性、血管性、神経原性、薬物誘発性および／または心因性の勃起機能障害を処置できる。
【０１１１】
本発明はさらに、本明細書に概説した雄性性的機能障害（より具体的には雄性勃起機能障害）の治療または予防のための医薬の製造における、本発明によるＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび２種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる組合わせの使用を含む。この組合わせにより、器質性、血管性、神経原性、薬物誘発性および／または心因性の勃起機能障害を処置できる。
【０１１２】
本発明はさらに、本明細書に概説した雄性性的機能障害（より具体的には雄性勃起機能障害）の治療または予防のための医薬の製造における、本質的に本発明によるＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび１種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる組合わせの使用を含む。この組合わせにより、器質性、血管性、神経原性、薬物誘発性および／または心因性の勃起機能障害を処置できる。
【０１１３】
本発明はさらに、本明細書に概説した雄性性的機能障害（より具体的には雄性勃起機能障害）の治療または予防のための医薬の製造における、本発明によるＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび１種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる組合わせの使用を含む。この組合わせにより、器質性、血管性、神経原性、薬物誘発性および／または心因性の勃起機能障害を処置できる。
【０１１４】
したがって本発明の他の組合わせ態様は、本発明化合物および１種類以上の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）を含む併用医薬（同時、個別または逐次投与用）を提供する。
【０１１５】
本発明の他の組合わせ態様は、本質的にＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび２種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる併用医薬（同時、個別または逐次投与用）を提供する。
【０１１６】
本発明の他の組合わせ態様は、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび２種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる併用医薬（同時、個別または逐次投与用）を提供する。
【０１１７】
本発明の他の組合わせ態様は、本質的にＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび１種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる併用医薬（同時、個別または逐次投与用）を提供する。
【０１１８】
本発明の他の組合わせ態様は、ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉおよび１種類の補助有効薬剤（適切な例については後記の説明を参照）からなる併用医薬（同時、個別または逐次投与用）を提供する。
【０１１９】
補助有効薬剤
本発明の組合わせに使用するのに適した補助有効薬剤には下記のものが含まれる：
１）天然または合成のプロスタグランジンまたはそのエステル。本発明に用いるのに適したプロスタグランジンには下記の化合物が含まれる：アルプロスタジル（ａｌｐｒｏｓｔａｄｉｌ）、プロスタグランジンＥ1、プロスタグランジンＥ0、１３，１４−ジヒドロプロスタグランジンＥ1、プロスタグランジンＥ2、エプロスチノール（ｅｐｒｏｓｔｉｎｏｌ）、ＷＯ−０００３３８２５および／またはＵＳ６，０３７，３４６（２０００年３月１４日交付）（すべてを本明細書に援用する）に記載のものを含めた天然、合成または半合成のプロスタグランジンおよびその誘導体、ＰＧＥ0、ＰＧＥ1、ＰＧＡ1、ＰＧＢ1、ＰＧＦ1α、１９−ヒドロキシＰＧＡ1、１９−ヒドロキシＰＧＢ1、ＰＧＥ2、ＰＧＢ2、１９−ヒドロキシＰＧＡ2、１９−ヒドロキシＰＧＢ2、ＰＧＥ3α、カルボプロストトロメタミンジノプロスト、トロメタミン（ｔｒｏｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、ジノプロストン（ｄｉｎｏｐｒｏｓｔｏｎｅ）、リポプロスト（ｌｉｐｏ  ｐｒｏｓｔ）、ゲメプロスト（ｇｅｍｅｐｒｏｓｔ）、メテノプロスト（ｍｅｔｅｎｏｐｒｏｓｔ）、スルプロストン（ｓｕｌｐｒｏｓｔｕｎｅ）、チアプロスト（ｔｉａｐｒｏｓｔ）およびモキシシラート（ｍｏｘｉｓｙｌａｔｅ）；
２）α−アドレナリン受容体アンタゴニスト化合物；α−アドレナリン受容体またはα−受容体またはα−遮断薬としても知られる。本発明に用いるのに適した化合物には下記のものが含まれる：ＰＣＴ出願ＷＯ９９／３０６９７（１９９８年６月１４日公開）（そのα−アドレナリン受容体に関する開示内容を本明細書に援用する）に記載の、下記を含めたα−アドレナリン受容体遮断薬：選択的α1−アドレナリン受容体またはα2−アドレナリン受容体遮断薬および非選択的アドレナリン受容体遮断薬；適切なα1−アドレナリン受容体遮断薬には下記のものが含まれる：フェントールアミン、フェントールアミンメシラート、トラゾドン（ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）、アルフゾシン（ａｌｆｕｚｏｓｉｎ）、インドラミン（ｉｎｄｏｒａｍｉｎ）、ナフトピジル（ｎａｆｔｏｐｉｄｉｌ）、タムスロシン（ｔａｍｓｕｌｏｓｉｎ）、ダピプラゾール（ｄａｐｉｐｒａｚｏｌｅ）、フェノキシベンズアミン、イダゾキサン（ｉｄａｚｏｘａｎ）、エファラキサン（ｅｆａｒａｘａｎ）、ヨヒンビン、ラウオルフィアアルカロイド、Ｒｅｃｏｒｄａｔｉ  １５／２７３９、ＳＮＡＰ  １０６９、ＳＮＡＰ  ５０８９、ＲＳ１７０５３、ＳＬ８９．０５９１、ドキサゾシン（ｄｏｘａｚｏｓｉｎ）、テラゾシン（ｔｅｒａｚｏｓｉｎ）、アバノキル（ａｂａｎｏｑｕｉｌ）およびプラゾシン（ｐｒａｚｏｓｉｎ）；ＵＳ６，０３７，３４６［２０００年３月１４日］からのα2−遮断薬系遮断薬ジベナルニン（ｄｉｂｅｎａｒｎｉｎｅ）、トラゾリン（ｔｒａｚｏｌｉｎｅ）、トリマゾシン（ｔｒｉｍａｚｏｓｉｎ）およびジベナルニン；ＵＳＰ４，１８８，３９０；４，０２６，８９４；３，５１１，８３６；４，３１５，００７；３，５２７，７６１；３，９９７，６６６；２，５０３，０５９；４，７０３，０６３；３，３８１，００９；４，２５２，７２１および２，５９９，０００（それぞれを本明細書に援用する）に記載のα−アドレナリン受容体；α2−アドレナリン受容体遮断薬：クロニジン（ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、パパベリン、塩酸パパベリン、所望によりピルキサミ（ｐｉｒｘａｍｉｎｅ）ンなどのう食強壮薬（ｃａｒｉｏｔｏｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）の存在下で；
３）ＮＯ−供与（ＮＯ−アゴニスト）化合物。本発明に用いるのに適したＮＯ−供与化合物には下記のものが含まれる：一もしくは二硝酸塩、または下記を含めた有機硝酸エステル：三硝酸グリセリル（ニトログリセリンとしても知られる）、５−一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリトリトール、四硝酸エリトリチル、ニトロプルシッドナトリウム（ＳＮＰ）、３−モルホリノシドノンイミンモルシドミン、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）Ｓ−ニトロソ−Ｎ−グルタチオン（ＳＮＯ−ＧＬＵ）、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、硝酸アミル、リンシドミン（ｌｉｎｓｉｄｏｍｉｎｅ）、リンシドミンクロロヒドラート、（ＳＩＮ−１）Ｓ−ニトロソ−Ｎ−システイン、ジアゾニウムジオラート類、（ＮＯＮＯａｔｅ）、二硝酸１，５−ペンタン、Ｌ−アルギニン、ニンジン、タイソウ（ｚｉｚｐｈｉ  ｆｒｕｃｔｕｓ）、モルシドミン、Ｒｅ−２０４７、ニトロシル化マキシシライト（ｍａｘｉｓｙｌｙｔｅ）誘導体、たとえば公開国際特許出願ＷＯ００１２０７５に記載のＮＭＩ−６７８−１１およびＮＭＩ−９３７；
４）カリウムチャンネル開放薬または調節薬。本発明に用いるのに適したカリウムチャンネル開放薬／調節薬には下記のものが含まれる：ニコランジル（ｎｉｃｏｒａｎｄｉｌ）、クロモカリム（ｃｒｏｍｏｋａｌｉｍ）、レブクロロマカリム（ｌｅｘｃｒｏｍｏｋａｌｉｍ）、レマカリム（ｌｅｍａｋａｌｉｍ）、ピナシジル（ｐｉｎａｃｉｄｉｌ）、クリアゾキシド（ｃｌｉａｚｏｘｉｄｅ）、ミノキシジル（ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）、クラゲ毒素（ｃｈａｒｙｂｄｏｔｏｘｉｎ）、グリブリド（ｇｌｙｂｕｒｉｄｅ）、４−アミニピリジン（４−ａｍｉｎｉ  ｐｙｒｉｄｉｎｅ）、ＢａＣｌ2；
５）ドーパミン作動薬、好ましくはアポモルフィンまたは選択的Ｄ２、Ｄ３もしくはＤ２／Ｄ3アゴニスト、たとえばプラミペキソール（ｐｒａｍｉｐｅｘｏｌｅ）およびロピリノール（ｒｏｐｉｒｉｎｏｌ）（ＷＯ００２３０５６に記載）、ＰＮＵ９５６６６（ＷＯ００４０２２６に記載）；
６）血管拡張薬。本発明に用いるのに適した血管拡張薬には下記のものが含まれる：ニモデピン（ｎｉｍｏｄｅｐｉｎｅ）、ピナシジル、シクランデラート（ｃｙｃｌａｎｄｅｌａｔｅ）、イソキシスプリン（ｉｓｏｘｓｕｐｒｉｎｅ）、クロロプルマジン、ハロペリドール、Ｒｅｃ１５／２７３９、トラゾドン；
７）トロンボキサンＡ２アゴニスト；
８）ＣＮＳ有効薬剤；
９）麦芽アルカロイド；本発明に用いるのに適した麦芽アルカロイドはＵＳＰ６，０３７，３４６（２０００年３月１４日）に記載され、下記のものが含まれる：アセテルガミン、ブラゼルゴリン、ブロメルグリド、シアネルゴリン、デロルゴトリレ、ジスレルギン、マレイン酸エルゴノビン、酒石酸エルゴタミン、エチスレルギン、レルゴトリル、リセルギド、メスレルギン、メテルゴリン、メテルゴタミン、ニセルゴリン、ペルゴリド、プロピセルギド、プロテルグリドおよびテルグリド；
１０）ナトリウム排泄増加因子、より具体的には心房性ナトリウム排泄増加因子（心房性ナトリウム排泄増加ペプチドとしても知られる）、Ｂ型およびＣ型ナトリウム排泄増加因子の作用を調節する化合物、たとえばニュートラルエンドペプダーゼ阻害薬；
１１）アンギオテンシン受容体アンタゴニスト、たとえばロサルタン（ｌｏｓａｒｔａｎ）；
１２）ＮＯ−シンターゼに対する基質、たとえばＬ−アルギニン；
１３）カルシウムチャンネル遮断薬、たとえばアムロジピン（ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）；
１４）エンドセリン受容体アンタゴニストおよびエンドセリン変換酵素阻害薬；
１５）コレステロール降下薬、たとえばスタチン類（たとえばアトルバスタチン／リピトル（Ｌｉｐｉｔｏｒ−商標））およびフィブラート類；
１６）抗血小板薬および抗血栓薬、たとえばｔＰＡ、ｕＰＡ、ワルファリン、ヒルジンその他のトロンビン阻害薬、ヘパリン、トロンボプラスチン活性化因子阻害薬；
１７）インスリン増感薬、たとえばレズリン（ｒｅｚｕｌｉｎ）、および血糖降下薬、たとえばグリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）；
１８）Ｌ−ＤＯＰＡまたはカルビドーパ；
１９）アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、たとえばドネジピル（ｄｏｎｅｚｉｐｉｌ）；
２０）ステロイド系または非ステロイド系抗炎症薬；
２１）エストロゲン受容体調節薬および／またはエストロゲンアゴニストおよび／またはエストロゲンアンタゴニスト、好ましくはラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）またはラゾフォキシフェン（ｌａｓｏｆｏｘｉｆｅｎｅ）、（−）−ｃｉｓ−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オールおよびその医薬的に許容できる塩類：その製造はＷＯ９６／２１６５６に詳述；
２２）ＰＤＥ阻害薬、より具体的にはＰＤＥ２、３、４、５、７または８阻害薬、好ましくはＰＤＥ２またはＰＤＥ５阻害薬、最も好ましくはＰＤＥ５阻害薬（後記参照）、好ましくは各酵素に対して１００ｎＭ未満のＩＣ５０をもつもの（ただしＰＤＥ３および４阻害薬は局所投与または陰茎への注射によってのみ投与される）；
２３）ＮＥＰ阻害薬、好ましくはＮＥＰに対して３００ｎＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満のＩＣ５０をもつもの；
２４）血管作動性腸管タンパク質（ＶＩＰ）、ＶＩＰ模倣薬、ＶＩＰ類似体、より具体的には１種類以上のＶＩＰ受容体サブタイプＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣまたはＰＡＣＡＰ（下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド）、１種類以上のＶＩＰ受容体アゴニストまたはＶＩＰ類似体（たとえばＲｏ−１２５−１５５３）またはＶＩＰフラグメント、１種類以上のα−アドレナリン受容体アンタゴニストとＶＩＰの組合わせ（たとえばＩｎｖｉｃｏｒｐ、Ａｖｉｐｔａｄｉｌ）により仲介されるもの；
２５）メラノコルチン受容体アゴニストもしくは調節薬またはメラノコルチン増強薬、たとえばメラノタンＩＩ、ＰＴ−１４、ＰＴ−１４１またはＷＯ−０９９６４００２、ＷＯ−０００７４６７９、ＷＯ−０９９５５６７９、ＷＯ−００１０５４０１、ＷＯ−０００５８３６１、ＷＯ−００１１４８７９、ＷＯ−００１１３１１２、ＷＯ−０９９５４３５８に記載の化合物；
２６）セロトニン受容体のアゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬、より具体的には５ＨＴ１Ａ（ＶＭＬ  ６７０を含む）、５ＨＴ２Ａ、５ＨＴ２Ｃ、５ＨＴ３および／または５ＨＴ６受容体のアゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬；ＷＯ−０９９０２１５９、ＷＯ−００００２５５０および／またはＷＯ−０００２８９９３に記載のものを含む；
２７）テストステロン置換薬（デヒドロアンドロステンジオンを含む）、テストステルノン（トストレレ（Ｔｏｓｔｒｅｌｌｅ））、ジヒドロテストステロンまたはテストステロン埋込み剤；
２８）エストロゲン、エストロゲンとメドロキシプロゲステロンもしくは酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）（すなわち併用剤として）、またはエストロゲンとメチルテストステロンホルモン置換療法薬（たとえばＨＲＴ、特にＰｒｅｍａｒｉｎ、Ｃｅｎｅｓｔｉｎ、Ｏｅｓｔｒｏｆｅｍｉｎａｌ、Ｅｑｕｉｎ、Ｅｓｔｒａｃｅ、Ｅｓｔｒｏｆｅｍ、Ｅｌｌｅｓｔｅ、Ｓｏｌｏ、Ｅｓｔｒｉｎｇ、Ｅｓｔｒａｄｅｒｍ  ＴＴＳ、Ｅｓｔｒａｄｅｒｍ  Ｍａｔｒｉｘ、Ｄｅｒｍｅｓｔｒｉｌ、Ｐｒｅｍｐｈａｓｅ、Ｐｒｅｅｍｐｒｏ、Ｐｒｅｍｐａｋ、Ｐｒｅｍｉｑｕｅ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ  ＨＳ、Ｔｉｂｏｌｏｎｅ）；
２９）ノルアドレナリン、ドーパミンおよび／またはセロトニンのトランスポーターの調節薬、たとえばブプロピオン（ｂｕｐｒｏｐｉｏｎ）、ＧＷ−３２０６５９；
３０）プリン作動性受容体アゴニストおよび／または調節薬；
３１）ニューロキニン（ＮＫ）受容体アンタゴニスト；ＷＯ−０９９６４００８に記載のものを含む；
３２）オピオイド受容体アゴニスト、アンタゴニストまたは調節薬、好ましくはＯＲＬ−１受容体アゴニスト；
３３）オキシトシン／バソプレッシン受容体のアゴニストまたは調節薬、好ましくは選択的オキシトシンアゴニストまたは調節薬；
３４）カンナビノイド受容体調節薬；
３５）ボンベシン受容体アンタゴニスト、より具体的にはボンベシンＢＢ1、ＢＢ2またはＢＢ3受容体アンタゴニスト、好ましくはボンベシンＢＢ1阻害薬（後記参照）、好ましくは各酵素に対して１００ｎＭ未満のＩＣ５０をもつ阻害薬；
３６）ＳＥＰ阻害薬（ＳＥＰｉ）、たとえば１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満のＩＣ50をもつＳＥＰｉ；好ましくは、本発明によるＳＥＰ阻害薬はニュートラルエンドペプチダーゼＮＥＰ  ＥＣ３．４．２４．１１およびアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）に対するより３０倍以上、より好ましくは５０倍以上の選択性をもつ。好ましくは、ＳＥＰｉはエンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）に対するより１００倍以上の選択性をもつ；
３７）個体の生殖器における中間伝導度カルシウム活性化カリウム（ＩＫCa）チャンネルの活性を調節できる薬剤。
【０１２０】
本発明に従って使用できる、特許および特許出願明細書に含まれる化合物を引照することにより、療法有効化合物はそれらの特許請求の範囲（特に請求項１）および具体例に定められたものとする（これらのすべてを援用する）。
【０１２１】
有効薬剤の組合わせを投与する場合、それらを同時、個別または逐次投与できる。
【０１２２】
補助薬−ＰＤＥ５阻害薬
各ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬の適性は、文献法を用いてその効力および選択性を評価し、続いて医薬標準法に従ってその毒性、吸収、代謝、薬物動態などを評価することによって容易に判定できる。
【０１２３】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬のＩＣ５０値は、ＰＤＥ５アッセイ法（後記参照）により測定できる。
好ましくは、本発明による併用医薬に用いるｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬はＰＤＥ５酵素に選択的である。好ましくは（経口使用する場合）それらはＰＤＥ３に対するより選択的であり、より好ましくはＰＤＥ３およびＰＤＥ４に対するより選択的である。好ましくは（経口の場合）本発明のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬はＰＤＥ３、より好ましくはＰＤＥ３およびＰＤＥ４に対するより、１００倍、好ましくは３００倍以上の選択比をもつ。
【０１２４】
選択比は当業者が容易に測定できる。ＰＤＥ３およびＰＤＥ４酵素のＩＣ５０値は、確立された文献法を用いて測定できる；Ｓ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９９８，ｖｏｌ．１５９，ｐ．２１６４−２１７１および後記の詳細を参照。
【０１２５】
本発明に従って用いるのに適したｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬には下記のものが含まれる：
ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：ＥＰ−Ａ−０４６３７５６に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：ＥＰ−Ａ−０５２６００４に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９３／０６１０４に開示；異性体ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９３／０７１４９に開示；キナゾリン−４−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９３／１２０９５に開示；ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９４／０５６６１に開示；プリン−６−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９４／００４５３に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９８／４９１６６に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ９９／５４３３３に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン類：ＥＰ−Ａ−０９９５７５１に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ００／２４７４５に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン類：ＥＰ−Ａ−０９９５７５０に開示；公開国際特許出願ＷＯ９５／１９９７８に開示される化合物；公開国際特許出願ＷＯ９９／２４４３３に開示される化合物；公開国際特許出願ＷＯ９３／０７１２４に開示される化合物。ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ０１／２７１１２に開示；ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン類：公開国際特許出願ＷＯ０１／２７１１３に開示；ＥＰ−Ａ−１０９２７１８に開示される化合物；およびＥＰ−Ａ−１０９２７１９に開示される化合物。
【０１２６】
本発明に従って用いるのに適したＰＤＥ５阻害薬には下記のものが含まれる：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）：１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジンとしても知られる（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６参照）；５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４参照）；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９８／４９１６６参照）；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３参照）；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン：３−エチル−５−｛５−［４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル］−２−（［（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］オキシ）ピリジン−３−イル｝−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（ＷＯ９９／５４３３３参照）；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン：１−｛６−エトキシ−５−［３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル］−３−ピリジルスルホニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られる（ＷＯ０１／２７１１３、例８参照）；５−［２−ｉｓｏ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、例１５参照）；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、例６６参照）；５−［５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル］−３−エチル−２−（イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、例１２４参照）；５−［５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル］−３−エチル−２−（イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、例１３２参照）；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１）、すなわち公開国際特許出願ＷＯ９５／１９９７８の例７８および９５の化合物、ならびに例１、３、７および８の化合物；２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（バルデナフィル）：１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］−ａｓ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−エチルピペラジンとしても知られる、すなわち公開国際特許出願ＷＯ９９／２４４３３の例２０、１９、３３７および３３６の化合物；ならびに公開国際特許出願ＷＯ９３／０７１２４（ＥＩＳＡＩ）の例１１の化合物；ならびにＲｏｔｅｌｌａ  Ｄ．Ｐ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００３，４３，１２５７の化合物３および１４。
【０１２７】
さらに他のＰＤＥ５阻害薬には下記のものが含まれる：
４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミオノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸一ナトリウム塩；（＋）−ｃｉｓ−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン（ｆｕｒａｚｌｏｃｉｌｌｉｎ）；ｃｉｓ−２−ヘキシル−５−メチル３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシラート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシラート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸一ナトリウム塩；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ  Ｎｏ．４５１６（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ  Ｎｏ．５０５１（Ｂａｙｅｒ）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ  Ｎｏ．５０６４（協和発酵；ＷＯ９６／２６９４０参照）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ  Ｎｏ．５０６９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０およびＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５および３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ）ならびにＳｃｈ−５１８６６。
【０１２８】
サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）およびサイクリックアデノシン３’，５’−一リン酸（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＰＤＥ阻害活性を、それらのＩＣ50値（酵素活性を５０％阻害するのに必要な化合物濃度）測定により判定した。
【０１２９】
必要なＰＤＥ酵素は、ヒト海綿体、ヒトおよびウサギの血小板、ヒト心室、ヒト骨格筋、ならびにヒトおよびイヌの網膜を含めた多様な供給源から、本質的にＷ．Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ａｎｄ  Ｍ．Ｍ．Ａｐｐｌｅｍａｎ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７１，１０，３１１）の方法により単離された。特に、ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ５）およびｃＧＭＰ阻害ｃＡＭＰ  ＰＤＥ（ＰＤＥ３）をヒト海綿体またはヒト血小板から；ｃＧＭＰ刺激ＰＤＥ（ＰＤＥ２）をヒト海綿体およびヒト血小板から；カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ（ＰＤＥ１）をヒト心室から；ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ４）をヒト骨格筋およびヒト組換え体（ＳＦ９細胞において発現）から；光受容体ＰＤＥ（ＰＤＥ６）をヒトまたはイヌの網膜から得た。ホスホジエステラーゼ７〜１１は、ＳＦ９細胞中へトランスフェクションした全長ヒト組換えクローンから産生された。
【０１３０】
アッセイはＷ．Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７９，１８，５２２８）の”バッチ”法の改変により、またはＡｍｅｒｓｈａｍ社が製品コードＴＰＫＱ７０９０／７１００に記載したプロトコルの改変を用いるＡＭＰ／ＧＭＰ直接検出のためのシンチレーションプロキシミティアッセイ法により実施できる。要約すると、一定量の酵素を種々の濃度の阻害薬およびＩＣ50がほぼＫiとなるような低基質（ｃＧＭＰまたはｃＡＭＰ、非標識：［3Ｈ］−標識比３：１、濃度約１／３Ｋm）の存在下でアッセイすることにより、ＰＤＥ阻害薬の効果を調べた。アッセイ緩衝液［２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，５ｍＭのＭｇＣｌ2，１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン］により最終アッセイ体積を１００μｌに調整した。酵素により反応を開始し、＜３０％の基質代謝回転が得られるように３０℃で３０〜６０分間インキュベートし、５０μｌのケイ酸イットリウムＳＰＡビーズで反応停止した（ＰＤＥ９および１１については３ｍＭの各非標識サイクリックヌクレオチドを含有）。プレートを再シールし、２０分間振とうした後、暗所でビーズを３０分間沈降させ、次いでＴｏｐＣｏｕｎｔプレート読取り器（Ｐａｃｋａｒｄ、コネチカット州メリデン）により計数した。放射能単位を非阻害対照（１００％）に対する活性％に換算し、阻害薬濃度に対してプロットし、”フィット曲線”マイクロソフト、エクセルエクステンション（または家庭用対応品）により阻害薬のＩＣ50値を求めた。これらの試験から得た結果は、本発明化合物がｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ５の阻害薬であることを示す。
【０１３１】
機能活性は、ニトロプルシッドナトリウムまたは電界刺激により誘発した前収縮ウサギ海綿体組織片の弛緩を本発明化合物が増強する能力を測定することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価できる；Ｓ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９６，１１８（ｓｕｐｐｌ．），抄録１５３Ｐ）またはＳ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄら（Ｊ．Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９９８，１５９，ｐ．２１６４−２１７１）が記載したものに基づく方法による。
【０１３２】
被験動物、たとえば麻酔したウサギにおいてニトロプルシッドナトリウムの海綿体内注射により誘発した陰茎海綿体内圧上昇を化合物が静脈内投与後に増強する能力を測定し、化合物をｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニングすることができる；Ｔｒｉｇｏ−Ｒｏｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎｅｕｒｏｕｒｏｌ．ａｎｄ  Ｕｒｏｄｙｎ．，１９９４，１３，７１）が記載したものに基づく方法による。
【０１３３】
本発明の医薬組成物中にＮＰＹｉと併用するのにきわめて好ましいものは、有効かつ選択的なＰＤＥ５阻害薬である。
本発明においてきわめて好ましいものは、１種類以上の有効かつ選択的ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬と、１種類以上の高選択的ＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬の組合わせである。
【０１３４】
補助薬−ＮＥＰ阻害薬（Ｉ：ＮＥＰ＝ＮＥＰｉ）
ＮＥＰ  ＥＣ３．４．２４．１１（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２２９（１），２０６−２１０（１９８８））はエンケファリナーゼまたはネプリリシン（ｎｅｐｒｉｌｙｓｉｎ）としても知られ、亜鉛依存性ニュートラルエンドペプチダーゼである。この酵素は幾つかの生物活性オリゴペプチドの分解に関与し、ペプチド結合を疎水性アミノ酸残基のアミノ側で開裂する（Ｔ．Ｔｕｒｎｅｒ  らが概説、１９９７）。ＮＥＰにより代謝される重要な神経放出性の生物活性物質または神経ペプチドには、ナトリウム排泄増加ペプチド、たとえば心房性ナトリウム排泄増加ペプチド（ＡＮＰ）、ならびに脳ナトリウム排泄増加ペプチドおよびＣ型ナトリウム排泄増加ペプチド、ボンベシン、ブラジキニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、エンドセリン類、エンケファリン類、ニューロテンシン、サブスタンスＰおよび血管作動性腸管ペプチドが含まれる。これらのペプチドのうちあるものは、有効な血管拡張および神経ホルモン機能、利尿およびナトリウム排泄活性をもち、あるいは行動効果を仲介する。ＮＥＰに関する背景知識は、Ｖｉｃｔｏｒ  Ａ．ＭｃＫｕｓｉｃｋらが提供している：
http://www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm
各Ｉ：ＮＥＰの適性は、文献法を用いてその効力および選択性を評価し、続いて医薬標準法に従ってその毒性、吸収、代謝、薬物動態などを評価することによって容易に判定できる。
【０１３５】
好ましくは、Ｉ：ＮＥＰはＡＣＥに対するより３００倍以上の選択性をもつ。
ＩＣ５０およびＡＣＥに対する選択比は、ＥＰ１０９７７１９Ａ１に記載の方法により測定できる。
【０１３６】
ＮＥＰ阻害薬の例は下記の概説報文に提示および考察されている：
【０１３７】
【化６】
2004522720.tif 000011
【０１３８】
ＮＥＰ阻害薬の他の例は下記の書類に提示および考察されている：
【０１３９】
【化７】
2004522720.tif 000012
【０１４０】
ＮＥＰ阻害薬の他の例は、ＥＰ１０９７７１９−Ａ１、特にその化合物ＦＸＩＩ〜ＦＸＩＩＩに開示されている。
好ましいＮＥＰ阻害薬は、ＥＰ１０９７７１９−Ａ１の化合物ＦＶ〜ＦＸＩおよびＦ５７〜Ｆ６５である。
【０１４１】
補助薬−ボンベシン受容体アンタゴニスト
ボンベシン受容体アンタゴニストは雄性性的機能障害、特に薬物誘発性雄性性的機能障害、ならびに全身性不応答および老化関連性的覚醒低下に伴う心因性の雄性性的機能障害の処置に有用であることが見出された。
【０１４２】
ボンベシン受容体アンタゴニストである化合物は、特に雌に関して予測する能力をもつ、信頼性および予測性があると思われる動物モデルを用いて試験された。げっ歯類では能動的性行動（ｐｒｏｃｅｐｔｉｖｅ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）はホルモンにより制御され、能動的性行動の誘発にはエストロゲンと共にプロゲステロンが必須である（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍ．  ａｎｄ  Ｅｖｅｒｉｔｔ  Ｂ．，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（第３版），Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，オックスフォード，１９８８）。霊長類における能動的性行動のホルモン制御に関する証拠は一致してはいないが、概してエストロゲンおよび／またはアンドロゲンが能動的性行動を高めると思われる（Ｂａｕｍ  Ｍ．Ｊ．，Ｂｉｏｓｃｉ．，１９８３，３３：５７８−５８２）。ラットの能動的性行動の行動発現には、速い耳の振動を伴う”跳躍（ｈｏｐｐｉｎｇ）と突進（ｄａｒｔｉｎｇ）”運動がある。性的接触を求める欲望（性的動因）を評価する試験は能動的性行動を測るのに最適な方法であると報告されている（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  Ｂ．Ｊ．，Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ  Ｌ．Ｈ．，Ａｃｔａ  Ｐｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．，１９７３，３８９（Ｓｕｐｐｌ．）：１−８０）。ラットにおける受動的性行動（ｒｅｃｅｐｔｉｖｉｔｙ）は、雌が前屈位をとったときに証明される。これは、雄が背乗りした際に受入れた雌のわき腹を前足で圧迫したときに行われる。この行動に対する神経制御の主要部位は、腹内側核（ＶＭＮ）および中脳中心灰白質野（ＭＣＧ）である（概説についてはＷｉｌｓｏｎ  Ｃ．Ａ．，Ｓｅｘｕａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｒｉｌｅｙ  Ａ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．（編者），Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，オックスフォード，１９９３：１−５８）。
【０１４３】
ボンベシンは、欧州産カエル、ボンビナ・ボンビナ（Ｂｏｍｂｉｎａ  ｂｏｍｂｉｎａ）の皮膚から最初に単離された１４アミノ酸のペプチドである（Ａｎａｓｔａｓｉ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ，１９７１，２７：１６６）。これはＣ−末端デカペプチド領域に構造相同性をもつペプチドクラスに属する（Ｄｕｔｔａ  Ａ．Ｓ．，Ｓｍａｌｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，２章，ｐｐ６６−８２）。現在、２種類のボンベシン様哺乳動物ペプチドが同定されている：デカペプチドであるニューロメジンＢ（ＮＭＢ）および２３残基アミノ酸のガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）。
【０１４４】
ボンベシンは、異なる受容体集団における作用により、多数の中枢効果を生じる。ＢＢ1受容体はニューロメジンＢ（ＮＭＢ）をガストリン関連ペプチド（ＧＲＰ）およびニューロメジンＣ（ＮＭＣ）より高い親和性で結合し、ＢＢ2受容体はＧＲＰおよびＮＭＣをＮＭＢより高い親和性で結合する。より最近になって、ＢＢ3およびＢＢ4と表示されるさらに２つの受容体サブタイプの証拠が出されたが、薬理作用が限られるためそれらの機能については現在ほとんど分かっていない。ＢＢ1受容体とＢＢ2受容体は中枢神経系内での分布が異なり、これはこれらの受容体に対する内因性リガンドが異なる様式で神経伝達を調節する可能性を示す。ＢＢ1受容体は特に視床下部腹内側部に存在する（Ｌａｄｅｎｈｅｉｍ  Ｅ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，１９９０，５３７：２３３−２４０）。
【０１４５】
ボンベシン様の免疫反応性およびｍＲＮＡが哺乳動物の脳に検出された（Ｂｒａｕｎ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ．Ｓｃｉ．，１９７８，２３：２７２１）（Ｂａｔｔｅｙ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＮＳ，１９９１，１４：５２４）。ＮＭＢおよびＧＲＰは多様な生物作用を仲介すると考えられる（概説についてはＷＯ９８／０７７１８参照）。
【０１４６】
下記の特許出願に、ボンベシン受容体においてＮＭＢおよび／またはＧＲＰの作用に拮抗できる化合物が開示されている：
【０１４７】
【化８】
2004522720.tif 000013
【０１４８】
本発明者らは、これらの特許出願に開示された化合物を性的機能障害の予防または治療に使用できると考える。これは、上記特許出願により開示または示唆されておらず、事実、ボンベシン受容体に関するこれまでの科学刊行物のいずれにも示唆されていない処方である。
【０１４９】
ＷＯ９８／０７７１８に開示される好ましい一群のボンベシンアンタゴニストは、式（Ｉ）の化合物：
【０１５０】
【化９】
2004522720.tif 000014
【０１５１】
およびその医薬的に許容できる塩類を含む；式中：
・ｊは０または１であり；
・ｋは０または１であり；
・ｌは０、１、２または３であり；
・ｍは０または１であり；
・ｎは０、１または２であり；
・Ａｒは、フェニル、ピリジルまたはピリミジルであり、それぞれ非置換であるか、あるいはアルキル、ハロゲン、アルコキシ、アセチル、ニトロ、アミノ、−ＣＨ2ＮＲ10Ｒ11、シアノ、−ＣＦ3、−ＮＨＣＯＮＨ2、および−ＣＯ2Ｒ12から選択される１〜３個の置換基で置換されており；
・Ｒ1は、水素であるか、または炭素原子１〜７個の直鎖、分枝鎖または環式アルキルであり；
・Ｒ8は、水素であるか、またはＲ1と共に炭素原子３〜７個の環を形成し；
・Ｒ2は、水素であるか、または炭素原子１〜８個の直鎖、分枝鎖または環式アルキルであり、これらは１または２個の酸素原子または窒素原子を含むこともでき；
・Ｒ9は、水素であるか、またはＲ2と共に炭素原子３〜７個の環を形成し、これらは酸素原子または窒素原子を含むこともでき；あるいはＲ2とＲ9は一緒にカルボニルであってもよく；
・Ａｒ1は、独立してＡｒから選択され、ピリジル−Ｎ−オキシド、インドリル、イミダゾリルおよびピリジルを含めることもでき；
・Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ独立して水素および低級アルキルから選択され；Ｒ4はＲ5と共に炭素原子２または３個の共有結合を形成してもよく、これは酸素原子または窒素原子を含むこともでき；
・Ｒ3は、独立してＡｒから選択され、または水素、ヒドロキシ、−ＮＭｅ2、Ｎ−メチル−ピロリル、イミダゾリル、Ｎ−メチル−イミダゾリル、テトラゾリル、Ｎ−メチル−テトラゾリル、チアゾリル、−ＣＯＮＲ13Ｒ14、アルコキシ、
【０１５２】
【化１０】
2004522720.tif 000015
【０１５３】
であり、ここでｐは０、１または２であり、Ａｒ2はフェニルまたはピリジルであり；
・Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13およびＲ14は、それぞれ独立して水素、または炭素原子１〜７個の直鎖、分枝鎖もしくは環式アルキルから選択される。
【０１５４】
上記の群のうち特に好ましい化合物は、（Ｓ）−（１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−［１−（５−メトキシ−ピリジン−２−イル）−シクロヘキシルメチル］−２−メチル−２−［３−（４−ニトロ−フェニル）−ウレイド］−プロピオンアミドおよびその医薬的に許容できる塩類である。
【０１５５】
ＢＢ1およびＢＢ2結合アッセイ
下記の実験において、ＢＢ1およびＢＢ2結合の測定を以下のとおり行った。クローン化ヒトＮＭＢ受容体（ＢＢ1アッセイについて）およびＧＲＰ受容体（ＢＢ2アッセイについて）を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、１０％のウシ胎仔血清および２ｍＭのグルタミンを補充したＨａｍ’ｓ  Ｆ１２培地中でルーティンに増殖させた。結合実験のために、細胞をトリプシン処理により収穫し、５％のＤＭＳＯを含有するＨａｍ’ｓ  Ｆ１２培地中で必要時まで−７０℃に凍結保存した。使用当日、細胞を速やかに融解し、過剰の培地で希釈し、２０００ｇで５分間遠心した。細胞を５０ｍＭトリス−ＨＣｌアッセイ緩衝液（ｐＨ７．４、２１℃、０．０２％のＢＳＡ、４０μｇ／ｍＬのバシトラシン、２μｇ／ｍＬのキモスタチン、４μｇ／ｍＬのロイペプチン、および２μｇ／ｍＬのホスホラミドンを含有）に再懸濁し、計数し、ポリトロン処理（設定５で１０秒）後、２８，０００ｇで１０分間遠心した。最終ペレットをアッセイ緩衝液に再懸濁して、最終細胞濃度１．５×１０5個／ｍＬにした。結合アッセイのために、膜２００μＬずつを［125Ｉ］［Ｔｙｒ4］ボンベシン（＜０．１ｎＭ）と共に、被験化合物の存在下および不存在下で（最終アッセイ体積２５０μＬ）、ＮＭＢおよびＧＲＰ受容体についてそれぞれ６０分間および９０分間インキュベートした。非特異的結合を１μＭボンベシンにより測定した。０．２％ＰＥＩ中に前浸漬した（＞２時間）Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルターで真空濾過し、５０ｍＭトリス−ＨＣｌアッセイ緩衝液（ｐＨ６．９；２１℃；１ｍＬ）で洗浄することにより、アッセイを停止した。結合した放射能をガンマ計数計で測定した。
【０１５６】
競合データをすべて、Ｐｒｉｓｍ（登録商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、米国サンディエゴ）による逐次曲線プロット法を用いて非線形回帰により分析した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式によりＩＣ50値をＫj値に補正した（Ｃｈｅｎｇ  Ｙ．，Ｐｒｕｓｏｆｆ  Ｗ．Ｈ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２：３０９９−３１０８，１９７３）。
【０１５７】
補助薬−ＳＥＰ阻害薬（ＳＥＰｉ）
ＳＥＰｉはＳＥＰ活性をもつポリペプチドを阻害または選択的阻害する化合物である。
ＳＥＰは可溶性分泌型エンドペプチダーゼである。セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼおよびメタロエンドペプチダーゼを含めたエンドペプチダーゼは、ペプチド内で配列を開裂させる。
【０１５８】
亜鉛メタロプロテアーゼとして知られる重要な一群のエンドペプチダーゼは、それらの触媒部位に亜鉛イオンの結合が必要であることを特徴とする。亜鉛メタロプロテアーゼは幾つかのクラスに副分類され（概説についてはＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３５４（１９９４）ｐｐ．１−６参照）、その１つのクラスはネプリリシン（ＮＥＰ）様亜鉛メタロプロテアーゼである（ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．１１，１９９７，ｐｐ．３５５−３８４）。ＮＥＰクラスには、互いに構造が類似する少なくとも７種類の酵素が含まれる（後記参照）。それらは一般に膜結合し、大きなカルボキシ末端細胞外ドメイン、短い膜貫通領域、および短いアミノ末端細胞内ドメインを含む。このファミリーの既知のメンバーは下記のものである：ネプリリシン（ＮＥＰ、ＣＤ１０、ＣＡＬＬＡ、エンケファリナーゼまたはＥＣ３．４．２４．１１とも呼ばれる）、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ−１およびＥＣＥ−２）、ＰＥＸ、ＫＥＬＬ、Ｘ−変換酵素／損傷誘発型ニューロナルエンドペプチダーゼ（ＸＣＥ／ＤＩＮＥ）、およびげっ歯類において同定された可溶性分泌型エンドペプチダーゼ／ネプリリシンＩＩと呼ばれる酵素（ＳＥＰ／ＮＥＰＩＩ；Ｇｈａｄｄａｒ  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．３４７，２０００，ｐｐ．４１９−４２９；Ｉｋｅｄａ  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２７４，１９９９，ｐｐ．３２４６９−３２４７７；Ｔａｎｊａ  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７１，２０００，ｐｐ．５６５−５７０；国際特許出願公開ＷＯ９９／５３０７７）。このクラスのメンバーの機能は、ペプチド性信号伝達に関連すると考えられている。これは、ヒトを含めた大部分の生物において起きるプロセスであり、生理的応答の引き金を引く”メッセンジャー”としてペプチド分子が使われる。このプロセスは一般に特異的細胞によるペプチドメッセンジャーの産生と放出を伴い、これらは時には不活性前駆物質として産生され、プロテアーゼにより開裂して活性になる。次いでこの活性形ペプチドが他の細胞の表面にある特異的受容体に結合し、そこで応答の引き金を引く。次いでこのペプチドは他のプロテアーゼによる分解により不活性化される。
【０１５９】
ＮＥＰＩＩは、マウス酵素ＳＥＰのラット同等物であると思われる。これらは９１％のアミノ酸同一性をもつからである。それらはこのクラスのうちアミノ酸配列がＮＥＰに最も近似するメンバーであり、両方ともヒトＮＥＰに対し５４％同一である。両方のｍＲＮＡが精巣にきわめて多量に存在し、低レベルでは他の広範な組織中にも検出される。ＮＥＰＩＩの場合、ｍＲＮＡは比較的高い量で脳および下垂体にもみられた。哺乳動物細胞において組換え発現させると、マウスＳＥＰおよびラットＮＥＰＩＩは両方とも増殖培地中にみられる。これは、それらが循環可能な分泌型プロテアーゼであり、したがって身体の他の部位のペプチドを開裂する可能性があることを示唆する。マウスＳＥＰおよびラットＮＥＰＩＩはこのクラスの他の幾つかのメンバー、たとえばＥＣＥ−１と同様にスプライス変異を示す。マウスＳＥＰおよびラットＮＥＰＩＩの場合、このスプライス変異により膜局在および分泌に関与する配列が変化したイソ形が生じる。これの生理学的意味は分かっていないが、膜結合形、循環形および細胞内形のこれらの酵素が存在すると思われる。マウスＳＥＰは、エンケファリン、エンドセリン、ビッグエンドセリン、ブラジキニンおよびサブスタンスＰを含めた広範な重要な生理的ペプチドを開裂しうることが示された。したがってこれはＮＥＰと同様にかなり広い物質特異性をもち、異なる組織において幾つかの生理学的機能をもつと思われる。
【０１６０】
このＮＥＰクラスの酵素は、他のメタロプロテアーゼ酵素と同様に、薬物様の小分子（たとえばチオファンおよびホスホラミドン）により阻害されやすいことが示された。このため、ペプチド性信号伝達においてＮＥＰ様酵素のあるメンバーがもつ生理的機能という新たな性質と合わせて、それらは医療介入にとって魅力的なターゲットとなる。
【０１６１】
ＳＥＰ配列は、ＷＯ９９／５３０７７、ＥＰ１０６９１８８およびＷＯ００／４７７５０ならびに図７〜９（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４〜６）に示されている。
たとえばアッセイのために本明細書に述べるＳＥＰ配列には、ＷＯ９９／５３０７７、ＥＰ１０６９１８８もしくはＷＯ００／４７７５０に示された配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５もしくはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６として示す配列、またはその変異体、フラグメント、相同体、類似体もしくは誘導体のいずれか１種類以上が含まれる。
【０１６２】
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５は、それぞれヒトＳＥＰをコードするヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）を示す。ヒトＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５は５’および３’部分ベクター配列を含む。ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６はヒトＳＥＰタンパク質を示す。
【０１６３】
各ＳＥＰｉの適性は、たとえば下記のアッセイの後、医薬標準法に従ってその毒性、吸収、代謝、薬物動態などを評価することにより判定できる。
ＳＥＰ阻害薬候補を検出するのに使用できるＳＥＰアッセイ法のひとつは、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）アッセイである。より好ましくは、標識した基質ペプチドはローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ（商標）−７）−βＡｌａ−ＮＨ2である。
【０１６４】
ＳＥＰアッセイ
ＳＥＰ  ＦＲＥＴアッセイ法は、ＣａｒｖａｌｈｏらがＮＥＰ用に開発したアッセイ法に基づく（Ｃａｒｖａｌｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３７，ｐｐ．１６７−１７３（１９９６））。ＳＥＰ  ＦＲＥＴアッセイには、同様な分子内消光した蛍光原ペプチド基質を、ただし蛍光原供与色素／受容色素、具体的にはローダミングリーン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社、米国オレゴン州ユージーン）とＱＳＹ（商標）−７（以下、”ＱＳＹ−７”または”ＱＳＹ７”と略す；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）の新規な組合わせで用いる。
【０１６５】
ＳＥＰのエンドペプチダーゼ活性は、それが合成ペプチド基質ローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ７）−βＡｌａ−ＮＨ2をタンパク質分解する能力をモニターすることにより測定される。
【０１６６】
このアッセイのために選んだ２種類の発蛍光団（蛍光原色素）は重なった発光および吸光スペクトルをもつので、エネルギー伝達に適する。ローダミングリーンは供与体として作用し、４８５ｎｍで励起されると５３５ｎｍで発光し（蛍光）、次いでこれがＱＳＹ７を励起する（ＦＲＥＴが起きる）。ＱＳＹ７は蛍光を発しないので５３５ｎｍを越えると発光せず、信号はみられない（ローダミングリーンの発光が消光する）。
【０１６７】
ＳＥＰがペプチド基質のＡｒｇ−Ｖａｌペプチド結合を開裂（選択的加水分解）するとローダミングリーンとＱＳＹ７部分は離れるので、４８５ｎｍで励起してもエネルギー伝達はもはや起きない。その結果、５３５ｎｍでローダミングリーンの蛍光増強がみられる。
【０１６８】
合成ペプチド基質ローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ７）−βＡｌａ−ＮＨ2の調製
ペプチドアセンブリーは、０．２５ｍｍｏｌのＦＭＯＣ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂上で、９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）ベース合成サイクルを提供した業者（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，米国カリフォルニア州フォスター・シティー）のものを改変した固相ペプチド合成プロトコルにより作製した。本発明者らの改変サイクルでは、２０％ピペリジン／Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）で５分間ずつ２回の処理によりアミノ末端を脱保護する；少量の脱保護溶液をＵＶ吸収検出器に通し、３０１ｎｍでのＵＶ吸収によりその効果をモニターする。別個のカートリッジ内で、進入するアミノ酸を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した各０．９当量の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）により活性化する。２当量のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を添加する。次いで同時に樹脂をＮＭＰで洗浄して、脱保護副生物を除去する。洗浄液を樹脂から排液し、活性アミノ酸エステルを樹脂に移し、２０分間撹拌してアミノ末端に結合させる。残留する結合溶液を排液し、樹脂を再びＮＭＰで洗浄する。ペプチドを確実に均質にするために、ＮＭＰ中における０．４Ｍ無水酢酸／０．０４Ｍ  ＨＯＢｔの溶液および１２ｍｍｏｌのＤＩＥＡを樹脂に添加して、未反応部位があればアセチル化する。最後に樹脂をＮＭＰで洗浄し、排液し、次いで１：１  ジクロロメタン／２，２，２−トリフルオロエタノール混合物で洗浄し、排液する。これがペプチド合成の１サイクルの典型例である。合成が完了した樹脂を開裂させ、Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋ（Ｋｉｎｇｓ  Ｄ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔ．Ｒｅｓ．，３６，ｐｐ．２５５−６６）により脱保護して、２５１ｍｇ（１００％）の粗製ペプチドＣＰ１を得た；エレクトロスプレー質量分析（ＥＳＭＳ）（ｍ／ｚ計算値＝９７７．２１（ＭＨ＋平均）、実測値＝９７７．４７）。
【０１６９】
システインへのＱＳＹ−７の結合：
５０ｍｇ（５１μｍｏｌ）の粗製ＣＰ１を、４５ｍｇ（５２．４μｍｏｌ）のＱＳＹ−７マレイミドを含有する１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液に溶解した。１０分後、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析により反応は不完全と判定されたので、さらに３０ｍｇ（３０．７μｍｏｌ）の粗製ペプチドを添加した。さらに３０分後、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析により、反応が完了してすべての出発試薬が消費されたと判定された。生成物をＣ１８調製用ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより単離し、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）により目的生成物の分子量を示す画分をプールし、凍結乾燥して７３．７ｍｇ（５０％）の紫色粉末ＣＰ２を得た；ＥＳＭＳ（ｍ／ｚ計算値＝１７９７．８６（ＭＨ＋モノ同位体）、実測値＝１７９７．８６）。
【０１７０】
アミノ末端へのビス（トリフルオロアセチル）ローダミングリーンの結合
７３．７ｍｇ（４１μｍｏｌ）のＣＰ２を、３５ｍｇ（５２．８μｍｏｌ）のローダミングリーンカルボン酸トリフルオロアセトアミド・スクシンイミジルエステル（５（６）−ＣＲ１１０  ＴＦＡ，ＳＥ）”混合異性体”を含有する２％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液に溶解した。２時間後、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析により反応は完了したと判定された。生成物をＣ４調製用ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより単離し、目的生成物の分子量を示す画分（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）をプールし、凍結乾燥して７１．４ｍｇ（７４％）の紫色粉末ＣＰ３を得た。ＥＳＭＳ（ｍ／ｚ計算値＝２３４５．９２（ＭＨ＋モノ同位体）、実測値＝２３４５．４７）。
【０１７１】
ローダミングリーンからトリフルオロアセチル保護基の除去：
７１．４ｍｇ（３０．４μｍｏｌ）のＣＰ３を１０ｍｌの４：１  ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏに溶解した。これに２００ｍｇ（１８８６μｍｏｌ）のＮａ2ＣＯ3を添加した。１６時間後、渦撹拌し、上清を不溶性物質からデカントした。反応器を１ｍｌのＤＭＳＯですすいだ；これを上清と合わせ、生成物をＣ４調製用ＨＰＬＣクロマトグラフィーにより単離した。目的生成物の分子量を示す画分（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）を合わせてプールし、凍結乾燥して６４ｍｇ（９８％）の紫色粉末ＣＰ４を得た；ＥＳＭＳ（ｍ／ｚ計算値＝２１５５．５４（ＭＨ＋平均）、実測値＝２１５５．２７）。ＣＰ４は目的とする合成ペプチド：ローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ７）−βＡｌａ−ＮＨ2である。
【０１７２】
材料：
試薬はすべて、入手できる最高の商業的純度のものを購入し、さらに再精製せずに用いた。下記以外のペプチド合成試薬はすべて、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（米国カリフォルニア州フォスター・シティー）から購入された：ＱＳＹ（商標）−７マレイミド（カタログ番号Ｑ−１０２５７）およびローダミングリーンカルボン酸トリフルオロアセトアミド・スクシンイミジルエステル（５（６）−ＣＲ１１０  ＴＦＡ，ＳＥ）”混合異性体”（カタログ番号Ｒ−６１１２）はＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社（米国オレゴン州ユージーン）から購入された；ＦＭＯＣ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳはＰｅｒｃｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（米国マサチュセッツ州）（カタログ番号ＧＥＮ９１３３８４）から購入された；ＦＭＯＣ−Ｂ−アラニンおよびＦＭＯＣ−ｄ−フェニルアラニンはＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（米国カリフォルニア州）から購入された；ＦＭＯＣ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨはＡｎａＳｐｅｃ社（米国カリフォルニア州）から購入された；２，２，２−トリフルオロエタノールはＡｌｄｒｉｃｈ（米国ワイオミング州）から購入された。炭酸ナトリウムはＦｉｓｈｅｒ（米国ペンシルベニア州）から購入された。
【０１７３】
調製用ＨＰＬＣクロマトグラフィーは、Ｖｙｄａｃ（米国カリフォルニア州）Ｃ１８（カタログ番号２１８ＴＰ１０２２）またはＣ４（カタログ番号２１４ＴＰ１０２２）カラム上、１０ｍｌ／分の流速で０％〜８０％（Ａ＝５％ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ／９４．９％Ｈ2Ｏ，Ｂ＝１００％ＣＨ3ＣＮ）の直線勾配を用いて３０分間実施され、３０秒の時間画分で採集した。分析用ＨＰＬＣ−ＭＳは、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（英国マンチェスター）ＬＣＴ質量分析計（外部検量標準品に基づく質量）をＷａｔｅｒｓ（米国マサチュセッツ州）２６９０  ＨＰＬＣ導入およびＷａｔｅｒｓ  ９９６光ダイオードアレイ検出器と連結させて用いて実施され、ＶｙｄａｃＣ４（カタログ番号２１４ＴＰ５４１５）カラム上、１ｍｌ／分の流速で０％〜８０％（Ａ＝５％ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ／９４．９％Ｈ2Ｏ，Ｂ＝１００％ＣＨ3ＣＮ）の直線勾配を用いて３０分間、クロマトグラフィーを行った。Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ換算ソフトウェアを用いて多重荷電実測イオンから解析分子量を計算した。ＭＡＬＤＩ−ＭＳは、Ｐｅｒｃｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｖｏｙａｇｅ−ＤＥ線形質量分析計により、アルファ−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸マトリックス（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、米国カリフォルニア州）を用いて求められ、外部検量に基づく質量を報告した。
【０１７４】
方法（化学的試験を含む）：
ＣＰ４（＝合成ペプチド基質ローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ（商標）−７）−βＡｌａ−ＮＨ2）は、固相ペプチド合成経路で重要な中間体ＣＰ３を取り込むことにより合成される：
反応経路１：
【０１７５】
【化１１】
2004522720.tif 000016
【０１７６】
要約すると、収率および時間効率に最適化した固相ペプチド合成プロトコルを用いてＦＭＯＣ−ＰＡＬ−ＰＥＧ樹脂を作製する。これらのサイクル（先に詳述）は、２回のＦＭＯＣ脱保護、洗浄、１回のＨＢＴＵ活性化アミノ酸結合、洗浄、キャッピング、そした最後にまずＮＭＰ、次いで１：１  トリフルオロエタノール／ジクロロメタンによる洗浄を含む。これらの洗浄は、樹脂の二次構造をゆるめ、次のサイクルでの十分な脱保護、および次に進入するアミノ酸の効率的な結合を可能にするのに役立つ。
【０１７７】
ＣＰ２は反応経路２に従って合成される（先に詳述）：
【０１７８】
【化１２】
2004522720.tif 000017
【０１７９】
このＱＳＹ−７タグ取込み後、反応経路３に従ってビス−トリフルオロアセチル保護された色素として第２発蛍光団ローダミングリーンを添加する：
【０１８０】
【化１３】
2004522720.tif 000018
【０１８１】
最後に、Ｎａ2ＣＯ3で処理してトリフルオロアセチル基を除去し、目的基質ＣＰ４を得る：
【０１８２】
【化１４】
2004522720.tif 000019
【０１８３】
アッセイ
アッセイに用いる試薬をまず下記により調製する：
基質ローダミングリーン−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（ＱＳＹ７）−βＡｌａ−ＮＨ2を５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ、英国）に２μＭ濃度で再懸濁し、次いでＥＤＴＡを含有しないプロテアーゼ阻害カクテル錠（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、英国）を２５ｍｌにつき１個添加することにより、基質溶液を調製する。
【０１８４】
前記ＳＥＰ酵素のアリコートを融解し、次いで各酵素バッチに固有の予め測定した係数により、５０μｌがアッセイに際して約３０％の基質を生成物に変換するのに十分な酵素を含有するように、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）中に希釈する。
【０１８５】
４ｍｌのＤＭＳＯと９６ｍｌの５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）からなる４％ＤＭＳＯ溶液を調製する。
５００μｌの基質溶液を２５０μｌの酵素溶液＋２５０μｌの４％ＤＭＳＯ溶液に添加し、３７℃で１６時間インキュベートすることにより、生成物溶液を調製する。
【０１８６】
アッセイを下記のように設定する：
黒色の９６ウェルマイクロタイタープレート内で、１００μｌの基質溶液を５０μｌの４％ＤＭＳＯ溶液に添加する。同様な非特異的バックグラウンドブランクを設定する；この場合、５０μｌの４％ＤＭＳＯ溶液はさらに４０μＭのホスホラミドンを含有する。５０μｌの酵素溶液をこのアッセイとブランクに添加し、Ｂｉｏｌｉｓｅソフトウェアパッケージにより操作されるＢＭＧ  ｇａｌａｘｙ蛍光読取り器（ＢＭＧ  Ｌａｂ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ドイツ国オッフェンバーグ）に９６ウェルプレートを入れる。
【０１８７】
プレートを蛍光読取り器内で３７℃において１時間インキュベートし、３分毎に蛍光測定を行う（励起（Ｅｘ）４８５ｎｍ／発光（Ｅｍ）５３５ｎｍ）。ＳＥＰのタンパク質分解活性は、試料の蛍光増強率、すなわち非特異的バックグラウンドブランクに対する蛍光単位の増加率に対応する。ソフトウェアにより４つの連続読みから計算した最大速度測定値（ＭａｘＶ）をこの計算に用いる。
【０１８８】
同一マイクロタイタープレートのウェルにおいて２００μｌの生成物から得た蛍光測定値を求める。必要ならばこの数値をＳＥＰアッセイ６０分の時点で得た測定蛍光単位と一緒に用いて、１時間のインキュベーション期間中にタンパク質分解された基質の％を計算するか、あるいは測定した蛍光増強率を他の有用な単位、たとえばタンパク質分解された基質ｎｇ／分／ｍｌに換算する。
【０１８９】
このアッセイ法を用い、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｅｙｚｙｍｅ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ、Ａｔｈｅｌ  Ｃｏｒｎｉｓｈ  Ｂｏｗｄｅｎ著，１９７９（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ発行）に記載の標準原理に従って、酵素反応速度パラメーター、たとえばＶｍａｘおよびＫｍを計算できる。
【０１９０】
ＳＥＰアッセイ法を利用したＳＥＰ阻害薬の阻害パラメーターの測定
ＳＥＰ阻害薬（たとえばホスホラミドン）のＩＣ50を測定するために、５０μｌのＤＭＳＯ溶液（阻害薬の１０ｍＭ  １００％ＤＭＳＯ原液を４％ＤＭＳＯ／５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４で適宜希釈することにより調製）に含有される広範な被験阻害薬濃度について、前記に従って多数回のＳＥＰアッセイを実施する。適切な標準グラフフィッティングコンピュータープログラムを用いて、Ｓ字形用量応答曲線をＭａｘＶ（または阻害率％または活性％）に対する対数阻害薬濃度のプロットに当てはめる。ＩＣ50は、最大阻害の５０％をもたらす阻害薬濃度として計算される。一般に、あるＩＣ50測定について、半対数単位ずつ増加する少なくとも１０の異なる阻害薬濃度の範囲を用いる。
【０１９１】
ＳＥＰアッセイ法を用い、たとえばＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｅｙｚｙｍｅ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ、Ａｔｈｅｌ  Ｃｏｒｎｉｓｈ  Ｂｏｗｄｅｎ著，１９７９（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ発行）に記載の酵素学的原理に従って、Ｋｉおよび阻害様式（すなわち阻害が競合的、混合、非競合的などのいずれであるか）を判定する。
【０１９２】
補助薬−中間伝導度カルシウム活性化カリウム（ＩＫCa）チャンネルの調節
”カルシウム活性化カリウムチャンネル”という用語には、ラージ伝導度カルシウム活性化（ＢＫCa）チャンネル（Ｍａｘｉ  Ｋ＋チャンネルとも呼ばれる）、スモール伝導度カルシウム活性化（ＳＫCa）チャンネル、および中間伝導度カルシウム活性化（ＩＫCa）チャンネルが含まれる（これらはｈＳＫ4チャンネルまたはＩＫチャンネルまたはｈｌＫ1チャンネルと呼ばれることもある）。
【０１９３】
現在３つのサブタイプのカルシウム活性化カリウムチャンネルがある。これらはラージ伝導度カルシウム活性化（ＢＫCa）チャンネル（Ｍａｘｉ  Ｋ＋チャンネルとも呼ばれる）、中間カルシウム活性化（ＩＫCa）チャンネル、およびスモール伝導度カルシウム活性化（ＳＫCa）チャンネルである。これらのチャンネルは、１回の開放に際してチャンネル細孔を通るイオン伝導度の程度により特徴づけられる（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。下記のように区別される：ラージ伝導度（ＢＫ）チャンネルは内部カルシウムイオンと膜電位の協奏作用により開閉され、１００〜２２０ピコシーメンス（ｐＳ）の単位伝導度をもつ；これに対し、中間伝導度（ＩＫ）およびスモール伝導度（ＳＫ）チャンネルは内部カルシウムイオンのみにより開閉される。さらに下記のように区別される：ＩＫCaおよびＳＫCaチャンネルはそれぞれ２０〜８５ｐＳおよび２〜２０ｐＳの単位伝導度をもち、カルシウムに対してＢＫチャンネルより感受性である。各タイプのチャンネルは異なる薬理作用を示す（Ｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０１９４】
本明細書中で用いる”中間伝導度カルシウム活性化（ＩＫCa）チャンネル”という用語は、１回の開放に際してチャンネル細孔を通るイオン伝導度の程度により特徴づけられる１サブタイプのカルシウム活性化カリウムチャンネルを表わす（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。内部カルシウムイオンと膜電位の協奏作用により開閉され、１００〜２２０ピコシーメンス（ｐＳ）の単位伝導度をもつラージ伝導度（ＢＫ）チャンネルと対比して、中間伝導度（ＩＫ）チャンネルは内部カルシウムイオンのみにより開閉され、２０〜８５ｐＳの単位伝導度をもち、カルシウムに対してＢＫチャンネルより感受性である。
【０１９５】
本明細書中で用いる”ＩＫCaチャンネル活性の調節”という用語は、下記のいずれかを意味する：ＩＫCaチャンネル活性の改善、上昇、増強、作動、脱分局もしくはアップレギュレーション、またはＩＫCaチャンネルのＣａ2+感受性増大、すなわちＩＫCaチャンネル活性／開閉の開始に必要なカルシウム濃度の低下。ＩＫCaチャンネルのＣａ2+感受性増大は、直接または間接的なＩＫCaチャンネル開放により増大／増強できる。このＩＫCaチャンネルのＣａ2+感受性増大により、ＩＫCaチャンネルが早期に、および／または低い細胞内カルシウム濃度で、および／またはより長い期間、および／または高い開放時間確率で開放するなどの影響をＩＫCaチャンネル開放が受けるように、ＩＫCaチャンネル特性を変化させることができる。
【０１９６】
”ＩＫCaチャンネル活性の調節”という用語は、たとえばＩＫCaチャンネル発現を高める薬剤による、ならびに／あるいはＩＫCaチャンネル活性および／またはＩＫCaチャンネル発現の調節に損傷を与えおよび／または拮抗する物質に薬剤が及ぼす作用による、海綿体平滑筋組織におけるＩＫCaチャンネル発現のアップレギュレーションも含まれる。
【０１９７】
たとえばこの調節薬は式（Ｉ）の構造をもつ：
【０１９８】
【化１５】
2004522720.tif 000020
【０１９９】
式中：
Ｒ1は、Ｈまたは適切な置換基、たとえば置換されていてもよいアルキル基であり；
Ｒ2は、Ｈまたは適切な置換基、好ましくはＨであり；
Ｒ3は、１個以上の適切な任意置換基を表わす。
【０２００】
あるいは、この調節薬は式（１）の構造をもつものでもよい：
【０２０１】
【化１６】
2004522720.tif 000021
【０２０２】
式中：
Ｘは、ＮＲ、ＯまたはＳから選択され；ここでＲはＨまたはアルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）であり；
Ｒ1は、アルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）であり；
Ｒ2は、Ｈ、ハライド、アルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ、より好ましくはＣ１〜６アルコキシ）から選択され；
Ｒ3は、Ｈ、ハライド、アルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ、より好ましくはＣ１〜６アルコキシ）から選択され；
Ｒ4は、Ｈ、ハライド、アルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ、より好ましくはＣ１〜６アルコキシ）から選択され；
Ｒ5は、Ｈ、ハライド、アルキル（好ましくは低級アルキル、より好ましくはＣ１〜６アルキル）、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ、より好ましくはＣ１〜６アルコキシ）から選択される。
【０２０３】
式（１）においてＸ＝Ｏ（式（１ａ））またはＸ＝Ｓ（式（１ｂ））である化合物は、塩基性条件下でそれぞれ対応する親複素環式化合物（２ａ）または（２ｂ）をＮ−アルキル化することにより製造できる。親化合物は、それぞれ対応するアミノフェノール（３ａ）またはアミノチオフェノール（３ｂ）をホスゲンまたは他の適切なカルボニル化剤で処理することにより製造できる。アミノフェノール類およびアミノチオフェノール類は、通常はそれぞれ対応するニトロフェノール（４ａ）またはニトロチオフェノール（４ｂ）から還元により製造される。多数の置換ニトロフェノール（４ａ）およびニトロチオフェノール（４ｂ）が市販されている。
【０２０４】
【化１７】
2004522720.tif 000022
【０２０５】
式（１）においてＸ＝ＮＨである化合物（式（１ｃ））は、前記反応経路の改変により製造できる。これに関しては、ニトロ基還元前にそれぞれ対応するニトロアニリン（５ｃ）のアルキル化を実施してフェニルジアミン（３ｃ，Ｘ＝ＮＨ）にし、これを前記と同様なカルボニル化により環化して１ｃにする。
【０２０６】
【化１８】
2004522720.tif 000023
【０２０７】
好ましくは、調節薬はＥＢＩＯ（１−メチル−２−ベンゾイミダゾリノン）もしくはその模倣体またはそのいずれかの医薬的に許容できる塩である。ＥＢＩＯの構造は下記のとおりである：
【０２０８】
【化１９】
2004522720.tif 000024
【０２０９】
ある用途について、好ましくは本発明薬剤は３００ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、好ましくは約１００ｎＭ未満、好ましくは約７５ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ未満、好ましくは約２５ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、好ましくは約１５ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、好ましくは約５ｎＭ未満のＩＣ50値をもつ。
【０２１０】
ある用途について、好ましくは本発明薬剤は目的ターゲットに対して少なくとも約２５、５０、７５、１００倍の選択性をもち、好ましくは目的ターゲットに対して少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは目的ターゲットに対して少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは目的ターゲットに対して少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは目的ターゲットに対して少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは目的ターゲットに対して少なくとも約３５０倍の選択性をもつ。
【０２１１】
海綿体
本発明において用いる”海綿体”という用語は、特に陰茎にみられる組織塊を表わす。これに関して、陰茎本体は３つの円筒形組織塊からなり、それぞれ白膜と呼ばれる線維組織で囲まれている。一対の側背塊は陰茎海綿体（ｃｏｒｐｏｒａ  ｃａｖｅｒｎｏｓａ  ｐｅｎｉｓ；ｃｏｒｐｏｒａ＝本体；ｃａｖｅｒｎｏｓａ＝中空）と呼ばれる；小さい方の中腹側塊である尿道海綿体は海綿質尿道を包み、射精時に海綿質尿道を開放状態に維持する機能をもつ。３つの塊はすべて筋膜と皮膚に内包され、血洞が侵入した勃起組織からなる。海綿体は平滑筋細胞を含む。
【０２１２】
処置
本明細書中で述べる処置はすべて、治癒、寛解および予防処置のうちの１以上を含むと解釈すべきである。
【０２１３】
性的刺激
本発明は、前記に定めたようにＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ（およびＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉ；使用する場合）を性的刺激の前および／または途中に使用することも含む。本明細書において”性的刺激”という用語は”性的覚醒”と同義である。本発明のこの態様は全身（生理学的）選択性をもたらすので有利である。この自然カスケードは生殖器においてのみ起き、他の部位（たとえば心臓など）では起きない。したがって、本発明によるＭＥＤ処置では生殖器に対する選択的効果を達成できる。
【０２１４】
したがって本発明によれば、ある段階で性的刺激工程のあることがきわめて望ましい。本発明者らは、この工程により全身選択性を達成できることを見出した。本明細書において”性的刺激”は、視覚的刺激、物理的刺激、聴覚的刺激、または思考的刺激のうちの１以上であってよい。
【０２１５】
薬剤
本発明により雄性性的機能障害、特にＭＥＤの処置に用いる薬剤は、ＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉとして作用できる適切ないかなる薬剤であってもよく、適切な場合にはＮＰＹｉ、好ましくはＮＰＹ  Ｙ１ｉとＰＤＥｉ、好ましくはＰＤＥ５ｉの組合わせであってもよい。本明細書中で用いる”薬剤”という用語には、ＮＰＹおよび／またはＮＰＹ  Ｙ１受容体を阻害できるいかなるものも含まれる。
【０２１６】
このような薬剤（すなわち上記に定めた薬剤）はアミノ酸配列またはその化学的誘導体であってもよい。この物質はさらに有機化合物その他の化学物質であってもよい。薬剤はさらにヌクレオチド配列であってもよく、これはセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれであってよい。薬剤はさらに抗体であってもよい。
【０２１７】
したがって”薬剤”という用語には適切な供給源から入手または製造できる天然またはそれ以外の化合物が含まれるが、これらに限定されない。
薬剤は、ペプチド、および他の化合物、たとえば有機低分子（たとえばリード化合物）を含む化合物ライブラリーから設計または入手できる。
【０２１８】
たとえば本発明薬剤は下記のものであってよい：天然物質、生体高分子、または細菌、真菌もしくは動物（特に哺乳動物）の細胞もしくは組織などの生物材料から調製した抽出物、有機分子もしくは無機分子、合成薬剤、半合成薬剤、構造もしくは機能模倣体、ペプチド、ペプチド模倣体、誘導体化した薬剤、全タンパク質から開裂したペプチド、または合成ペプチド（たとえばペプチド合成装置を用いて、もしくは組換え法により、またはその組合わせにより）、組換え薬剤、抗体、天然もしくは非天然薬剤、融合タンパク質、あるいはその同等物および変異体、誘導体または組合わせ。
【０２１９】
ＡＣＥアッセイ法を後記に示す。ある用途（たとえば特定の個体）については、そのような薬剤（すなわちＡＣＥ阻害作用をも示すもの）は経口投与に適さない場合がある。好ましくは、本発明によるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬は、ＡＣＥに対する活性をもたないか、または実質的にもたない。
【０２２０】
ＥＣＥアッセイ法は当技術分野で周知である。
本明細書中で用いる”薬剤”という用語は単一薬剤であってもよく、組合わせ薬剤であってもよい。
【０２２１】
薬剤が有機化合物である場合、ある用途について−たとえば薬剤がＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである場合−その有機化合物は一般に２以上の連結した炭化水素基を含むことができる。ある用途について、好ましくは薬剤は少なくとも２つの環式基を含む−所望によりそれらの環式基のうち１つは縮合環式構造であってもよい。ある用途について、少なくとも１つの環式基は複素環式基である。ある用途について、好ましくは複素環式基は少なくとも１つのＮを環中に含む。そのような化合物の例を本明細書に示す。
【０２２２】
薬剤が有機化合物である場合、ある用途について−たとえば薬剤がＰＤＥ５ｉである場合−その有機化合物は一般に２以上の連結した炭化水素基を含むことができる。ある用途について、好ましくは薬剤は少なくとも２つの環式基を含む−所望によりそれらの環式基のうち１つは縮合環式構造であってもよい。ある用途について、好ましくは少なくとも１つの環式基は複素環式基である。ある用途について、好ましくは複素環式基は少なくとも１つのＮを環中に含む。そのような化合物の例をＰＤＥ５のセクションに示す。
【０２２３】
薬剤はハロ基を含むことができる。本明細書中で”ハロ”とは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
薬剤は１個以上のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキレンおよびアルケニレン基を含むことができ、それらは非分枝鎖または分枝鎖であってよい。
【０２２４】
医薬的に許容できる塩
薬剤は医薬的に許容できる塩−たとえば酸付加塩または塩基塩−またはその溶媒和物（その水和物を含む）の形であってもよく−および／またはその形で投与してもよい。適切な塩類の概説についてはＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６，１−１９参照。
【０２２５】
一般に医薬的に許容できる塩は、適宜目的とする酸または塩基を用いて容易に調製できる。塩は溶液から沈殿し、濾過により採集されるか、あるいは溶媒の蒸発により回収できる。
【０２２６】
適切な酸付加塩は、無毒性塩類を形成する酸から形成され、その例は塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、コハク酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモエート塩である。
【０２２７】
適切な塩基塩は、無毒性塩類を形成する塩基から形成され、その例はナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩およびジエタノールアミン塩である。
【０２２８】
多形／不斉炭素
本発明薬剤は多形で存在する可能性がある。
本発明薬剤は１個以上の不斉炭素原子を含む場合があり、したがって２以上の立体異性体の形で存在してもよい。薬剤がアルケニルまたはアルケニレン基を含む場合、シス（Ｅ）およびトランス（Ｚ）異性化が起きる可能性もある。本発明は、薬剤の個々の立体異性体および適宜その個々の互変異性体形、ならびにその混合物を含む。
【０２２９】
ジアステレオマーまたはシスおよびトランス異性体の分離は、常法により、たとえば薬剤またはその適切な塩もしくは誘導体の立体異性体混合物の分別結晶化、クロマトグラフィーまたはＨＰＬＣにより達成できる。薬剤の個々の鏡像異性体も、対応する光学的に純粋な中間体から、または分割により、たとえば適切なキラル支持体を用いて対応するラセミ体のＨＰＬＣにより、または対応するラセミ体と適切な光学活性酸もしくは塩基の反応により形成したジアステレオマー塩類の分別結晶化により、適宜製造できる。
【０２３０】
同位体変異体
本発明は、本発明薬剤またはその医薬的に許容できる塩のすべての適切な同位体変異体をも含む。本発明薬剤またはその医薬的に許容できる塩の同位体変異体は、少なくとも１つの原子が、同一原子番号をもつが原子質量は通常天然にみられる原子質量と異なる原子で置換されたものと定義される。本発明薬剤またはその医薬的に許容できる塩に取り込ませることができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体、たとえばそれぞれ2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、17Ｏ、18Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆおよび36Ｃｌが含まれる。本発明薬剤またはその医薬的に許容できる塩の特定の同位体変異体、たとえば3Ｈまたは14Ｃなどの放射性同位体を含むものは、薬物および／または基質の組織分布試験に有用である。トリチウム化、すなわち3Ｈ同位体、または炭素−１４、すなわち14Ｃ同位体は、製造の容易さおよび検出適性のため、特に好ましい。さらに、ジュウテリウム、すなわち2Ｈなどの同位体による置換は、代謝安定性がより大きいことから生じるある療法効果、たとえばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長、または用量低下をもたらす可能性があり、したがって状況によっては好ましい。本発明薬剤またはその医薬的に許容できる塩の同位体変異体は一般に、適切な試薬の適宜な同位体変異体を用いて常法により製造できる。
【０２３１】
プロドラッグ
本発明薬剤をプロドラッグから誘導できることは当業者には自明であろう。プロドラッグの例には、特定の保護基（１個以上）をもち、そのままでは薬理活性をもたないが、特定の場合、投与（たとえば経口または非経口）後に体内で代謝されて薬理活性薬剤を形成するものが含まれる。
【０２３２】
プロ部分
さらに、”プロ部分”として知られる特定の部分、たとえば”Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５（その内容を本明細書に援用する）に記載のものを、薬剤の適宜な官能基に付与することができるのは自明であろう。そのようなプロドラッグも本発明の範囲に含まれる。
【０２３３】
阻害薬／アンタゴニスト
本明細書中でＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ（適用できる場合、ＰＤＥｉまたはＰＤＥ５ｉ、および他の補助薬）に関して用いる阻害薬という用語は、アンタゴニストという用語と互換性をもつとみなすことができる。
【０２３４】
本明細書中で用いる”アンタゴニスト”という用語は、他の薬剤またはターゲットの作用を低下させる薬剤を意味する。アンタゴニスト作用は、拮抗物質の併用（化学的拮抗）、または異なるターゲットを介した反対の作用の発生（機能性拮抗または生理学的拮抗）、またはターゲット活性化に関連する中間体の結合部位に対する競合の結果（間接的拮抗）から生じる可能性がある。
【０２３５】
さらに、内因性勃起プロセスの増強という句は、内因性勃起プロセスのアップレギュレーションという句と互換性がある。
【０２３６】
医薬組成物
本発明は、療法有効量の本発明薬剤および医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤（その組合わせも含む）を含む医薬組成物をも提供する。
【０２３７】
医薬組成物はヒトおよび動物の医療においてヒトまたは動物に使用でき、一般に１種類以上の医薬的に許容できる希釈剤、キャリヤーまたは賦形剤を含む。医薬用として許容できるキャリヤーまたは希釈剤は医薬技術分野で周知であり、たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，１９８５）に記載されている。医薬用のキャリヤー、賦形剤または希釈剤は、意図する投与経路および医薬標準法に従って選択できる。医薬組成物は、キャリヤー、賦形剤または希釈剤として−またはそれらのほかに−１種類以上の適切な結合剤、滑沢剤、沈殿防止剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。
【０２３８】
保存剤、安定剤、着色剤、さらに着香剤を医薬組成物に含有させてもよい。保存剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが含まれる。酸化防止剤および沈殿防止剤も使用できる。
【０２３９】
送達システムの違いに応じて異なる組成／配合要件があるであろう。たとえば本発明の医薬組成物は下記により送達するように配合できる：ミニポンプにより、あるいは粘膜経路で、たとえば鼻スプレーまたは吸入もしくは経口摂取溶液のエアゾル剤として、あるいは非経口的に：この場合、組成物はたとえば静脈内、筋肉内または皮下経路で送達するための注射用剤形により配合される。あるいは両経路で送達するように配合物を設計できる。
【０２４０】
薬剤を消化器粘膜から粘膜投与したい場合、薬剤は消化管内を移動する間、安定に維持されなければならない；たとえば薬剤はタンパク質分解に対して抵抗性であり、酸性ｐＨで安定であり、かつ胆汁の界面活性作用に対して抵抗性でなければならない。
【０２４１】
医薬組成物は適宜、吸入により、坐剤もしくは膣坐剤の形で、局所的にローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤もしくは散粉剤の形で、皮膚パッチを用いて、賦形剤、たとえばデンプンもしくは乳糖を含有する錠剤の形で経口的に、または単独もしくは賦形剤と混合してカプセル剤もしくは卵形剤中に、または着香剤もしくは着色剤を含有するエリキシル剤、液剤または懸濁液剤の形で投与でき、あるいは医薬組成物を非経口的に、たとえば静脈内、筋肉内もしくは皮下に注射することもできる。非経口投与のためには組成物を無菌水性液剤の形で用いるのが最良であり、これは他の物質、たとえば液剤を血液と等張にするのに十分な塩類または単糖類を含有してもよい。口内または舌下投与のためには、組成物を錠剤またはトローチの形で投与でき、こりらは常法により配合できる。
【０２４２】
ある態様については、本発明薬剤をシクロデキストリンと組み合わせて用いることもできる。シクロデキストリンは薬物分子と包接および非包接複合体を形成することが知られている。薬物−シクロデキストリン複合体の形成により、薬物分子の溶解度、溶解速度、生物学的利用能および／または安定性を改良できる。薬物−シクロデキストリン複合体は一般に大部分の剤形および投与経路に有用である。薬物との複合体形成を目的とするのではなく、シクロデキストリンを補助添加剤として、たとえばキャリヤー、希釈剤または可溶化剤として用いることもできる。アルファ−、ベータ−およびガンマ−シクロデキストリンが最も一般的に用いられ、適切な例はＷＯ−Ａ−９１／１１１７２、ＷＯ−Ａ−９４／０２５１８およびＷＯ−Ａ−９８／５５１４８に記載されている。
【０２４３】
好ましい態様においては、本発明薬剤を全身（たとえば経口、口内、舌下）、より好ましくは経口送達する。
したがって、好ましくは本発明薬剤は経口送達に適した剤形である。
【０２４４】
ある態様において、好ましくは本発明薬剤は−使用に際して−生殖器に対し末梢作用するほか、中枢神経系にも作用する。
ある態様において、好ましくは本発明薬剤は−使用に際して−生殖器に存在する受容体、好ましくは海綿体関連の受容体に対して以外は末梢作用しない。
【０２４５】
投与
”投与”という用語には、ウイルス法または非ウイルス法による送達が含まれる。ウイルス送達機序にはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターおよびバキュロウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。非ウイルス送達機序には、脂質仲介トランスフェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、カチオン両親媒性界面活性剤（ＣＦＡ）、およびその組合わせが含まれる。
【０２４６】
本発明薬剤は単独で投与できるが、一般に医薬組成物として投与される−その場合、たとえば意図する投与経路および医薬標準法に従って選択した適切な医薬用賦形剤、希釈剤またはキャリヤーと薬剤を混合する。
【０２４７】
たとえば医薬を錠剤、カプセル剤、卵形剤、エリキシル剤、液剤または懸濁液剤の形で、即時、遅延、調節、持続、パルスまたは制御放出用として投与（たとえば経口または局所）でき、これらは着香剤もしくは着色剤を含有してもよい。
【０２４８】
錠剤は、賦形剤、たとえば微結晶性セルロース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウムおよびグリシン、崩壊剤、たとえばデンプン（好ましくはトウモロコシ、バレイショまたはタピオカデンプン）、グリコール酸デンプンナトリウム、クロスカルメロースナトリウムおよびある種の複合ケイ酸塩、ならびに造粒結合剤、たとえばポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ショ糖、ゼラチンおよびアラビアゴムを含有できる。さらに、滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリルおよびタルクを含有してもよい。
【０２４９】
同様なタイプの固体組成物をゼラチンカプセルの充填剤としても使用できる。これに関して好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖または高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁液剤および／またはエリキシル剤については、薬剤を各種甘味剤または着香剤、着香剤または色素、乳化剤および／または沈殿防止剤、ならびに希釈剤、たとえば水、エタノール、プロピレングリコールおよびグリセリン、ならびにその組合わせと混和できる。
【０２５０】
投与（送達）経路には下記のうち１以上が含まれるが、これらに限定されない：経口（たとえば錠剤、カプセル剤として、または経口摂取用液剤として）、局所、粘膜（たとえば鼻スプレーまたは吸入用エアゾル剤）、鼻内、非経口（たとえば注射用剤形で）、消化管内、髄腔内、腹腔内、筋肉内、静脈内、子宮内、眼内、皮内、頭蓋内、気管内、膣内、脳室内、脳内、皮下、眼（硝子体内または眼房内を含む）、経皮、直腸、口腔、陰茎、膣、硬膜外、舌下。
【０２５１】
必ずしもすべての薬剤を同一経路で投与する必要がないことを理解すべきである。同様に、組成物が１種類以上の有効成分を含有する場合、それらの成分を異なる経路で投与してもよい。本発明薬剤を非経口投与する場合、そのような投与の例には下記の１以上が含まれる：静脈内、動脈内、腹腔内、クモ膜下、心室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内または皮下への薬剤投与；および／または注入法の採用。
【０２５２】
非経口投与のためには、本発明薬剤を無菌水性液剤の形で用いるのが最良であり、これは他の物質、たとえば液剤を血液と等張にするのに十分な塩類またはブドウ糖を含有してもよい。水性液剤は、必要ならば適切に緩衝化すべきである（好ましくはｐＨ３〜９）。無菌条件下での適切な非経口配合物の調製は、当業者に周知の医薬標準法によって容易に達成できる。
【０２５３】
前記のように本発明薬剤を鼻内投与または吸入により投与でき、乾燥粉末吸入器またはエアゾルスプレー剤の形で、加圧された容器、ポンプ、噴霧器またはネブライザーから、たとえば下記の適切な噴射剤を用いて送達するのが好都合である：ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、たとえば１，１，２，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ（商標））または１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ（商標））、二酸化炭素その他の適切なガス。加圧エアゾル剤の場合、計量した量を送達するための弁を取り付けることにより投与単位を決定できる。加圧された容器、ポンプ、噴霧器またはネブライザーには、たとえば溶剤としてエタノールと噴射剤の混合物を用いた有効化合物の液剤または懸濁液剤を収容することができ、これらはさらに潤滑剤、たとえばトリオレイン酸ソルビタンを含有してもよい。吸入器または注入器に用いるためのカプセル剤およびカートリッジ（たとえばゼラチン製）は、薬剤と適切な粉末基剤、たとえば乳糖またはデンプンとの粉末ミックスを収容するように調製できる。
【０２５４】
あるいは、本発明薬剤を坐剤または膣坐剤の形で投与でき、またはゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤もしくは散粉剤の形で局所適用できる。たとえば皮膚パッチを用いて、本発明薬剤を皮膚投与または経皮投与してもよい。それらを肺または直腸経路で投与することもできる。それらを眼経路で投与してもよい。眼用としては、ｐＨ調整した等張無菌塩類溶液中の微細懸濁液剤として、またはｐＨ調整した等張無菌塩類溶液中の液剤として、所望により塩化ベンザルコニウムなどの保存剤と組み合わせて本発明化合物を配合できる。あるいはそれらをワセリンなどの軟膏中に配合してもよい。
【０２５５】
皮膚への局所適用のためには、たとえば下記のうち１種類以上を含む混合物に懸濁または溶解した有効化合物を含有する適切な軟膏剤として本発明薬剤を配合できる：鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化用のろうおよび水。あるいは、本発明薬剤をたとえば下記のうち１種類以上の混合物に懸濁または溶解した適切なローション剤またはクリーム剤として配合してもよい：鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルろう、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水。
【０２５６】
本発明組成物は直接注射により投与することもできる。
ある用途について、好ましくは本発明薬剤を経口投与する。
ある用途について、好ましくは本発明薬剤を局所投与する。
【０２５７】
投与量
一般に、各対象に適切な実際の投与量は医師が決定する。各個体についての具体的な投与量および投与回数は異なり、多様な要因に依存するであろう。これには、用いる個々の化合物の有効性、代謝安定性およびその化合物の作用時間の長さ、年齢、体重、全般的健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、排出速度、併用薬物、その症状の程度、ならびに実施されている各療法が含まれる。本発明の薬剤および／または医薬組成物は、１日１〜１０回、たとえば１日１回または２回の方式で投与できる。
【０２５８】
ヒトへの経口および非経口投与のためには、本発明薬剤の１日量を１回で、または分割して投与できる。
必要に応じて、本発明薬剤を０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ（体重）、たとえば０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で投与できる。もちろん本明細書に述べる投与量は平均的症例の例示である。これより高いか、または低い投与範囲が有益な個々の場合も当然ありうる。
【０２５９】
一般に経口１日量は、たとえば２０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜３００ｍｇである。
【０２６０】
配合物
本発明薬剤を、たとえば当技術分野で既知の方法で１種類以上の適切なキャリヤー、希釈剤または賦形剤と混合することにより、医薬組成物として配合できる。
【０２６１】
以下に配合物の幾つかの例を示す。これらは限定ではない。
配合物１：下記の成分を用いて錠剤を製造する：
2004522720.tif 000025
これらの成分をブレンドし、圧縮してそれぞれ重量６６５ｍｇの錠剤を成形する。
【０２６２】
配合物２：下記により静脈内配合物を調製できる：
薬剤                          １００ｍｇ
等張塩類溶液                １０００ｍｌ
【０２６３】
個体
本明細書中で用いる”個体”という用語は、脊椎動物、特に哺乳動物種のメンバーを表わす。この用語には家畜、スポーツ用動物、霊長類およびヒトが含まれるが、これらに限定されない。
【０２６４】
生物学的利用能
好ましくは、本発明化合物（および組合わせ）は経口投与により生物学的に利用できる。経口投与による生物学的利用能は、経口投与薬物のうち全身循環に到達した割合を表わす。薬物の経口投与による生物学的利用能を決定する因子は、溶解度、膜透過性および代謝安定性である。一般に、まずｉｎ  ｖｉｔｒｏ法、次いでｉｎ  ｖｉｖｏ法のスクリーニングカスケードを用いて経口投与による生物学的利用能を測定する。
【０２６５】
溶解度、すなわち消化管（ＧＩＴ）の水性含有物による薬物溶解は、ＧＩＴを模倣した適切なｐＨで行うｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶解度実験から推定できる。好ましくは、本発明化合物は５０ｍｃｇ／ｍｌの最小溶解度をもつ。溶解度は当技術分野で既知の標準法、たとえばＡｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，２３，３−２５，１９９７に記載の方法で測定できる。
【０２６６】
膜透過性は、ＧＩＴ細胞への化合物の透過を表わす。親油性はこれを推定するのに重要な特性であり、有機溶媒および緩衝液を用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＬｏｇＤ7.4の測定により判定される。好ましくは、本発明化合物は−２〜＋４、より好ましくは−１〜＋２のＬｏｇＤ7.4をもつ。ＬｏｇＤは当技術分野で既知の標準法、たとえばＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９０，４２：１４４に記載の方法で測定できる。
【０２６７】
細胞単層アッセイ法、たとえばｃａｃｏ−２は、排出トランスポーター、たとえばｐ−糖タンパク質の存在下での好ましい膜透過性、いわゆるｃａｃｏ−２フラックスを推定するのに実質的に役立つ。本発明化合物は、好ましくは２×１０-6ｃｍｓ-1を越える、より好ましくは５×１０-6ｃｍｓ-1を越えるｃａｃｏ−２フラックスをもつ。ｃａｃｏフラックス値は当技術分野で既知の標準法、たとえばＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９９０，７９，５９５−６００に記載の方法で測定できる。
【０２６８】
代謝安定性は、吸収過程でＧＩＴまたは肝臓が化合物を代謝する能力を表わす：初回通過効果。ミクロソーム、肝細胞などのアッセイ系から、代謝傾向を推定できる。好ましくは、実施例の化合物はこのアッセイ系において、０．５未満の肝除去率に相当する代謝安定性を示す。アッセイ系およびデータ操作の例がＣｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｄｅｖｅｌ．，２０１，４，３６−４４，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．Ｄｉｓｐ．，２０００，２８，１５１８−１５２３に記載されている。
【０２６９】
前記方法との相互関係からみて薬物がヒトにおいて経口投与により生物学的に利用できることをさらに支持するものが、動物でのｉｎ  ｖｉｖｏ実験により得られる。これらの試験では、化合物を個別にまたは混合物として経口経路で投与することにより、絶対生物学的利用能を測定する。絶対測定値（吸収率％）については、静脈内経路も採用する。動物における経口投与による生物学的利用能の評価例は、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．Ｄｉｓｐ．，２００１，２９，８２−８７；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４０，８２７−８２９；Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．Ｄｉｓｐ．，１９９９，２７，２２１−２２６にある。
【０２７０】
化学合成法
一般に、本発明による使用に適したＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ（および／またはＰＤＥｉまたはＰＤＥ５ｉ；使用する場合）は化学合成法により製造される。
【０２７１】
本発明の薬剤もしくはターゲットまたはその変異体、相同体、誘導体、フラグメントもしくは模倣体は、薬剤全体または部分を合成するための化学的方法で製造できる。たとえばペプチドは、固相法により合成し、樹脂から開裂させ、調製用高速液体クロマトグラフィーにより精製できる（たとえばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８３）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ＷＨ  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ニューヨーク州ニューヨーク）。合成ペプチドの組成はアミノ酸分析または配列決定により確認できる（たとえばエドマン分解法；Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，前掲）。
【０２７２】
本発明薬剤またはその変異体、相同体、誘導体、フラグメントもしくは模倣体の直接合成は、各種の固相法により実施でき（Ｒｏｂｅｒｇｅ  ＪＹ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６９：２０２−２０４）、自動合成はたとえばＡＢＩ  ４３  １Ａペプチド合成装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用い、製造業者が提示する指示に従って達成できる。さらに、薬剤またはその部分を含むアミノ酸配列を直接合成に際して変更し、および／または化学的方法で他のサブユニットからの配列もしくはその一部と結合させて、変異体薬剤またはターゲット、たとえば変異体ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１を製造することができる。
【０２７３】
本発明の別態様においては、本発明の薬剤、ターゲットまたはその変異体、相同体、誘導体、フラグメントもしくは模倣体のコード配列全体または部分を、当技術分野で周知の化学的方法で合成できる（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ  ＭＨ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５−２３；Ｈｏｒｎ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５−２３２参照）。
【０２７４】
模倣体
本明細書中で用いる”模倣体”という用語は、ターゲットに対して標準薬剤と質的に同じ活性または効果をもつペプチド、ポリペプチド、抗体または他の有機化合物を含めた化学物質に関するが、これらに限定されない。すなわち、模倣体は既知の薬剤に対する機能均等物であってよい。
【０２７５】
誘導体
本明細書中で用いる”誘導体”または”誘導体化された”という用語には、薬剤の化学修飾体が含まれる。そのような化学修飾体の具体例は、ハロ基、アルキル基、アシル基またはアミノ基による水素の置換である。
【０２７６】
化学修飾
本発明の１態様において、薬剤は化学修飾された薬剤であってもよい。
薬剤の化学修飾は、薬剤とターゲットの水素結合相互作用、電荷相互作用、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用または双極子相互作用を増大または低下させることができる。
【０２７７】
１態様において、同定した薬剤は他の化合物を開発するためのモデル（たとえば鋳型）として役立つ。
【０２７８】
ターゲット
本発明の１態様において、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体は、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１を阻害しうる薬剤を同定するためのスクリーニングに際してターゲットとして使用できる。これに関してターゲットは、組換えおよび／または合成手段により調製したＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３として示すヌクレオチド配列またはその変異体、相同体、誘導体もしくはフラグメント、あるいはそれを含む発現単位によりコードされるアミノ酸配列を含むことができる。
【０２７９】
あるいはＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体は、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１の阻害により海綿体内圧の上昇を仲介しうる薬剤を同定するためのターゲットとして使用できる。これに関してターゲットは、適切な組織抽出物であってよい。
【０２８０】
ターゲットはそのような組織および／または組換えターゲットの組合わせであってもよい。
【０２８１】
組換え法
一般に本発明薬剤は組換えＤＮＡ法により製造できる。
１態様において、好ましくは薬剤はＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉである。ＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉは組換えＤＮＡ法により製造できる。
【０２８２】
アミノ酸配列
本明細書中で用いる”アミノ酸配列”という用語は、用語”ポリペプチド”および／または用語”タンパク質”と同義である。場合によっては”アミノ酸配列”という用語は、用語”ペプチド”と同義である。場合によっては”アミノ酸配列”という用語は、用語”タンパク質”と同義である。
【０２８３】
アミノ酸配列は適切な供給源から単離し、あるいは合成により製造し、または組換えＤＮＡ法により製造することができる。
１態様において本発明は、１種類以上の薬剤および／またはその誘導体を同定するためのアッセイにおいてターゲットとして作用しうるアミノ酸配列を提供する。
【０２８４】
好ましくは、ターゲットはＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体である。
好ましくは、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体は、単離されたおよび／または精製されたおよび／または非天然のＮＰＹもしくはＮＰＹ  Ｙ１受容体である。
【０２８５】
本発明のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体は、実質的に単離された形であってもよい。ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体が受容体の意図する目的を妨げないキャリヤーまたは希釈剤と混合されていてもよく、これらも実質的に単離されているとみなされることは理解されるであろう。本発明のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体は実質的に純粋な形であってもよく、この場合、これは一般に調製物中にＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体を含み、その際、調製物中の９０％より多い、たとえば９５％、９８％または９９％のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体がＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１、２もしくは３またはその変異体、相同体、誘導体もしくはフラグメントの発現により得られるペプチドである。
【０２８６】
ヌクレオチド配列
本明細書中で用いる”ヌクレオチド配列”という用語は、用語”ポリヌクレオチド”と同義である。
【０２８７】
ヌクレオチド配列は、ゲノムまたは合成または組換え由来のＤＮＡまたはＲＮＡであってよい。ヌクレオチド配列は二本鎖または一本鎖であってよく、センス鎖もしくはアンチセンス鎖またはその組合わせのいずれであってもよい。
【０２８８】
ある用途について、好ましくはヌクレオチド配列はＤＮＡである。
ある用途について、好ましくはヌクレオチド配列は組換えＤＮＡ法を用いて製造される（たとえば組換えＤＮＡ）。
【０２８９】
ある用途について、好ましくはヌクレオチド配列はｃＤＮＡである。
ある用途について、好ましくはヌクレオチド配列はこの態様に関して天然形のものと同じであってもよい。
【０２９０】
１態様において本発明は、１種類以上の薬剤および／またはその誘導体を同定するためのアッセイにおいてターゲットとして作用しうる物質をコードするヌクレオチド配列を提供する。
【０２９１】
本発明の１態様において、ヌクレオチド配列はＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体をコードする。
遺伝子コードの縮重の結果として多数の異なるヌクレオチド配列が同一ターゲットをコードしうることは当業者には理解されるであろう。さらに、当業者がルーティンな技術を利用して、本発明のヌクレオチド配列がコードする活性に実質的に影響を及ぼさずに、ターゲットを発現させる予定の特定の宿主のコドン利用を反映するヌクレオチド置換をなしうると理解すべきである。したがって、添付の配列表に示したヌクレオチド配列に関して”変異体”、”相同体”または”誘導体”という用語には、本発明による機能性ターゲット（またはさらに、本発明による薬剤；薬剤がヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を含む場合）をコードする生成ヌクレオチド配列を与えるような、配列からのまたは配列に対する１個（以上の）核酸の置換、変異、修飾、置換、欠失または付加がいずれも含まれる。
【０２９２】
前記のように配列相同性に関しては、本明細書に引照したＮＰＹ配列と好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％の相同性である。より好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％の相同性がある。ヌクレオチド相同性比較は前記に従って実施できる。好ましい配列比較プログラムは、先のＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムである。デフォルト採点マトリックスは各同一ヌクレオチドについて１０、各不一致について−９の一致値をもつ。各ヌクレオチドについて、デフォルトギャップ形成ペナルティは−５０、デフォルトギャップ延長ペナルティは−３である。
【０２９３】
本発明には、本明細書に提示する配列またはその変異体、フラグメントもしくは誘導体あるいはそのいずれかの相補体に選択的にハイブリダイズしうるヌクレオチド配列も含まれる。ヌクレオチド配列は、好ましくは少なくとも１５ヌクレオチドの長さ、より好ましくは少なくとも２０、３０、４０または５０ヌクレオチドの長さである。これらの配列を、たとえば診断キットにおけるプローブとして使用できる。
【０２９４】
変異体／相同体／誘導体
本明細書に述べた具体的ヌクレオチド配列およびそれから誘導できるアミノ酸配列のほかに、本発明にはその変異体、相同体および誘導体の使用も含まれる。本明細書において”相同性”という用語は”同一性”と同一視できる。
【０２９５】
本発明に関して、相同配列は少なくとも７５、８５または９０％同一、好ましくは少なくとも９５または９８％同一であるアミノ酸配列を含むものと解釈される。特に、相同性は一般に、活性に必須であることが分かっている配列領域に関して考慮すべきである。相同性は類似性（すなわち、類似の化学的特性／機能をもつアミノ酸残基）とも考えることができるが、本発明に関しては相同性を配列同一性に関して表現することが好ましい。
【０２９６】
相同性比較は肉眼で、またはより通常は容易に利用できる配列比較プログラムを用いて実施できる。これらの市販コンピュータープログラムは、２以上の配列間の相同性％を計算できる。
【０２９７】
相同性％は連続配列について計算できる。すなわち、１つの配列を他の配列とアラインさせ、一方の各アミノ酸を他方の配列中の対応するアミノ酸と、一度に１残基ずつ直接比較する。これは”ギャップなし”アラインメントと呼ばれる。一般にこのようなギャップなしアラインメントは比較的短い数の残基についてのみ行われる。
【０２９８】
これはきわめて簡単で一貫性のある方法ではあるが、たとえば他の箇所は同一の配列対において、１個の挿入または欠失が以降のアミノ酸残基をアラインメントから除外し、したがってグローバルなアラインメントを実施した場合に相同性％が大幅に低下することを考慮していない。したがって、大部分の配列比較方法は、全般的相同性得点に過度にペナルティを課すことなく挿入および欠失の可能性を考慮した最適アラインメントを生じるように設計されている。これは、配列アラインメントに際して局部相同性を最大にするために”ギャップ”を挿入することにより達成される。
【０２９９】
ただし、より複雑なこれらの方法では、アラインメントに際して生じる各ギャップに”ギャップペナルティ”を割り当てる。これにより、同一アミノ酸が同一数であれば、可能な限りギャップの少ない配列アラインメント−２つの対比配列間の関連性がより高いことを反映する−の方がギャップの多い配列より高い得点を獲得するであろう。ギャップの存在に対して比較的高いコストを課し、ギャップ内の各後続残基にはより小さいコストを課す”アファインギャップコスト”が一般に用いられる。これは最も一般的に採用されているギャップ採点システムである。高いギャップペナルティでは、もちろんより少ないギャップで最適アラインメントが得られる。大部分のアラインメントプログラムではギャップペナルティを変更できる。しかし、そのようなソフトウェアを配列比較に用いる場合、デフォルト値を用いることが好ましい。たとえば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（後記参照）を用いる場合、アミノ酸配列に関するデフォルトギャップペナルティは１ギャップにつき−１２、各延長につき−４である。
【０３００】
したがって最大相同性％の計算には、まずギャップペナルティを考慮して最適アラインメントを求める必要がある。そのようなアラインメントの実施に適切なコンピュータープログラムはＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（米国ウィスコンシン大学；Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２：３８７）である。配列比較を実施できる他のソフトウェアの例にはＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，前掲−１８章参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０３−４１０）、およびＧＥＮＥＷＯＲＫＳスイート比較ツールが含まれるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡは両方ともオフラインおよびオンライン検索で利用できる（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，前掲，ｐ．７−５８から７−６０参照）。しかしＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを用いるのが好ましい。ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓと呼ばれる新しいツールも、タンパク質およびヌクレオチド配列の比較に利用できる（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１９９９，１７４（２）：２４７−５０；ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１９９９，１７７（１）：１８７−８およびtatiana@ncbi.nlm.nih.gov参照）。
【０３０１】
最終相同性％は同一性により測定できるが、アラインメントプロセス自体は一般に妥協を許さない対比較に基づくものではない。代わりに、化学的類似性または発生距離に基づいて得点を各対比較に割り当てる尺度付き類似性得点マトリックスが一般に用いられる。一般に用いられるそのようなマトリックスの例はＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス、すなわちＢＬＡＳＴスイートプログラムに対するデフォルトマトリックスである。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは一般にパブリックデフォルト値または提供されている場合はカスタム記号比較表を用いる（詳細についてはユーザーマニュアル参照）。ＧＣＧパッケージにはパブリックデフォルト値を、または他のソフトウェア、たとえばＢＬＯＳＵＭ６２の場合はデフォルトマトリックスを用いるのが好ましい。
【０３０２】
ソフトウェアにより最適アラインメントが得られると、相同性％、好ましくは配列同一性％を計算できる。ソフトウェアは一般にこれを配列比較の一部として行い、数値結果を出す。
【０３０３】
配列は、サイレント変化を生じ、機能均等物を与えるアミノ酸残基の欠失、挿入または置換を含むことができる。その物質の二次的結合活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいて意図的なアミノ酸置換を行うことができる。たとえば負に荷電したアミノ酸には、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれ；正に荷電したアミノ酸にはリシンおよびアルギニンが含まれ；親水値が類似した荷電していない極性ヘッド基をもつアミノ酸にはロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが含まれる。
【０３０４】
たとえば下記の表に従って保存的置換を行うことができる。第２欄の同一ブロック内にあるアミノ酸、好ましくは第３欄の同列にあるアミノ酸は、互いに置換できる。
【０３０５】
【表５】
2004522720.tif 000026
【０３０６】
本発明には相同置換（本明細書では、既存のアミノ酸残基と他の残基との入れ換えを表わすために、置換と交換の両方を用いる）も含まれる。この場合、類似−対−類似置換、たとえば塩基性から塩基性へ、酸性から酸性へ、極性から極性への置換などが起きてもよい。非相同置換、すなわちあるクラスの残基から他のクラスへの、あるいは非天然アミノ酸、たとえばオルニチン（以下、Ｚと呼ぶ）、ジアミノ酪酸オルニチン（以下、Ｂと呼ぶ）、ノルロイシンオルニチン（以下、Ｏと呼ぶ）、ピリルアラニン、チエニルアラニン、ナフチルアラニンおよびフェニルグリシンの導入を伴う置換が起きてもよい。
【０３０７】
交換は、下記を含めた非天然アミノ酸により行われてもよい：アルファ*およびアルファ−ジ置換*アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸*、乳酸*、天然アミノ酸のハロゲン誘導体、たとえばトリフルオロチロシン*、ｐ−Ｃｌ−フェニルアラニン*、ｐ−Ｂｒ−フェニルアラニン*、ｐ−Ｉ−フェニルアラニン*、Ｌ−アリル−グリシン*、β−アラニン*、Ｌ−α−アミノ酪酸*、Ｌ−γ−アミノ酪酸*、Ｌ−α−アミノイソ酪酸*、Ｌ−ε−アミノカプロン酸#、７−アミノヘプタン酸*、Ｌ−メチオニンスルホン#*、Ｌ−ノルロイシン*、Ｌ−ノルバリン*、ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン*、Ｌ−ヒドロキシプロリン#、Ｌ−チオプロリン*、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）のメチル誘導体、たとえば４−メチル−Ｐｈｅ*、ペンタメチル−Ｐｈｅ*、Ｌ−Ｐｈｅ（４−アミノ）#、Ｌ−Ｔｙｒ（メチル）*、Ｌ−Ｐｈｅ（４−イソプロピル）*、Ｌ−Ｔｉｃ（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシル酸）*、Ｌ−ジアミノプロピオン酸#、およびＬ−Ｐｈｅ（４−ベンジル）。記号*は、前記の考察（相同または非相同置換）において誘導体の疎水性を示すために用い、#は誘導体の親水性を示すために用い、#*は両親媒性を示すために用いたものである。
【０３０８】
変異アミノ酸配列は、配列の任意の２アミノ酸残基間に挿入された適切なスペーサー基を含むことができ、これにはアミノ酸スペーサー、たとえばグリシンまたはβ−アラニン残基のほかに、アルキル基、たとえばメチル、エチルまたはプロピル基が含まれる。１個以上のペプトイド形アミノ酸残基の存在を伴う他の形の変異は、当業者に周知である。誤解を避けるために、”ペプトイド形”はα−炭素置換基がα−炭素ではなく残基の窒素原子上にある変異アミノ酸残基を表わすために用いる。ペプトイド形ペプチドの製造方法は当技術分野で知られている：たとえばＳｉｍｏｎ  ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９２）８９（２０），９３６７−９３７１およびＨｏｒｗｅｌｌ  ＤＣ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９５）１３（４），１３２−１３４。
【０３０９】
ハイブリダイゼーション
本明細書中で用いる”ハイブリダイゼーション”という用語は、”核酸鎖が相補鎖と塩基対合により結合するプロセス”およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術において行われる増幅プロセスを含むものとする。
【０３１０】
本明細書に示すヌクレオチド配列またはその相補体に選択的にハイブリダイズできる本発明のヌクレオチドは、本明細書に示す対応する相補的ヌクレオチド配列に対し、少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５または３０、たとえば少なくとも４０、６０もしくは１００個またはそれ以上の連続ヌクレオチド領域にわたって、一般に少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８５〜９０％、より好ましくは少なくとも９５〜９８％相同である。
【０３１１】
”選択的にハイブリダイズできる”という用語は、プローブとして用いる場合、ターゲットヌクレオチド配列がバックグラウンドより有意に高いレベルでプローブにハイブリダイズすることが認められた条件下でヌクレオチド配列を使用することを意味する。バックグラウンドハイブリダイゼーションは、たとえばスクリーニングするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中に他のヌクレオチド配列が存在するため起きる可能性がある。その場合、バックグラウンドはプローブとライブラリー中の非特異的ＤＮＡメンバーとの相互作用により発生する信号のレベルを表わす。これは、ターゲットＤＮＡについてみられる特異的相互作用の１０倍未満、好ましくは１００倍未満の強度である。相互作用の強度は、たとえばプローブを32Ｐなどで放射性標識することにより測定できる。
【０３１２】
ハイブリダイゼーション条件は、ＢｅｒｇｅｒおよびＫｉｍｍｅｌ（１９８７，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１５２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ）に教示されるように核酸結合複合体の融解温度（Ｔｍ）に基づき、下記に説明するように一定の”ストリンジェンシー”を与える。
【０３１３】
最大ストリンジェンシーは一般に約Ｔｍ−５℃（プローブのＴｍより５℃低い）；高ストリンジェンシーは一般に約Ｔｍより約５〜１０℃低い温度；中等度ストリンジェンシーは一般に約Ｔｍより約１０〜２０℃低い温度；低ストリンジェンシーは一般に約Ｔｍより約２０〜２５℃低い温度で起きる。当業者に自明のとおり、最大ストリンジェンシーハイブリダイゼーションを利用して同一ヌクレオチド配列を同定または検出でき、一方、中等度（または低）ストリンジェンシーハイブリダイゼーションを利用して類似または関連ポリヌクレオチド配列を同定または検出できる。
【０３１４】
好ましい態様において、本発明には本発明のヌクレオチド配列にストリンジェント条件下で（たとえば６５℃および０．１×ＳＳＣ｛１×ＳＳＣ＝０．１５Ｍ  ＮａＣｌ，０．０１５Ｍ  クエン酸三ナトリウム，ｐＨ７．０｝）ハイブリダイズしうるヌクレオチド配列が含まれる。本発明のヌクレオチド配列が二本鎖である場合、二重らせんの両方の鎖（個々に、または組み合わせたもの）が本発明に含まれる。ヌクレオチド配列が一本鎖である場合、そのヌクレオチド配列の相補配列も本発明の範囲に含まれると解すべきである。
【０３１５】
本発明の配列に１００％相同ではないが本発明の範囲に含まれるヌクレオチド配列は、多数の方法で得られる。本明細書に記載する配列の他の変異体は、たとえばある範囲の供給源から調製したＤＮＡライブラリーを検査することにより得られる。さらに、他のウイルス性／細菌性、または細胞性の相同体、特に哺乳動物細胞（たとえばラット、マウス、ウシおよび霊長類の細胞）にみられる細胞性相同体を得ることができ、一般にそれらの相同体およびそのフラグメントを本明細書の配列表に示す配列に選択的にハイブリダイズさせることができる。そのような配列は、他の動物種から調製したｃＤＮＡライブラリーまたは他の動物種に由来するゲノムＤＮＡライブラリーを検査することにより得ることができる。それらのライブラリーを、本明細書に示したヌクレオチド配列の全体または部分を含むプローブにより、中等度ないし高ストリンジェンシー条件下で検査する。同様な考えは、本発明のアミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列の種相同体および対立遺伝子変異体を得るために適用できる。
【０３１６】
変異体および株／種相同体は、縮重ＰＣＲによっても得られる。これは、変異体および相同体内において、本発明配列の保存アミノ酸配列をコードする配列をターゲティングするように設計したプライマーを用いる。保存配列は、たとえば幾つかの変異体／相同体からのアミノ酸配列のアラインメントにより推定できる。配列アラインメントは、当技術分野で知られているコンピューターソフトウェアを用いて実施できる。たとえばＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＰｉｌｅＵｐプログラムが広く用いられている。縮重ＰＣＲに用いるプライマーは、１以上の縮重位置を含み、既知配列に対する単一配列プライマーにより配列をクローニングするのに用いるより低いストリンジェンシー条件下で使用できる。
【０３１７】
あるいはそのようなヌクレオチド配列は、解明されている配列、たとえば本発明の配列表のＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１または２に示したヌクレオチド配列の部位特異的変異誘発により得ることができる。これは、たとえばヌクレオチド配列を発現させる予定の特定の宿主細胞に対するコドン優先性を最適化するために、配列にサイレントコドン変化が必要な場合に有用であろう。制限酵素認識部位を導入するために、またはそのヌクレオチド配列がコードするタンパク質の活性を変更するために、他の配列変化が望まれる場合がある。
【０３１８】
本発明のヌクレオチド配列を用いて、プライマー、たとえばＰＣＲプライマー、オルタナティブ増幅反応のためのプライマー、たとえば常法により放射性または非放射性標識を用いて解明用標識で標識したプローブを調製できる。あるいは、本発明のヌクレオチド配列をベクター中へクローニングできる。そのようなプライマー、プローブその他のフラグメントは、少なくとも１５、より好ましくは少なくとも２０、たとえば少なくとも２５、３０または４０ヌクレオチドの長さであり、本明細書で用いる本発明のヌクレオチド配列という用語に含まれる。
【０３１９】
本発明によるヌクレオチド配列、たとえばＤＮＡポリヌクレオチドおよびプローブは、組換え、合成、または当業者が利用できるいずれかの手段で製造できる。それらは標準法によりクローニングすることもできる。
【０３２０】
一般にプライマーは、目的核酸配列を一度に１ヌクレオチドずつ段階的に製造する合成法により製造される。自動化された技術を用いてこれを達成する方法は当技術分野で容易に入手できる。
【０３２１】
より長いヌクレオチド配列は、一般に組換え法により、たとえばＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）クローニング技術を用いて製造される。これは、クローニングしたいターゲティング配列をフランキングする一対のプライマー（たとえば約１５〜３０ヌクレオチド）を作製し、これらのプライマーを動物またはヒトの細胞から得たｍＲＮＡまたはｃＤＮＡと接触させ、目的領域を増幅する条件下でポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施し、増幅したフラグメントを単離し（たとえば反応混合物をアガロースゲル上で精製することにより）、そして増幅したＤＮＡを回収することを伴う。プライマーは、適切な制限酵素認識部位を含むように設計できる。これにより、増幅ＤＮＡを適切なクローニングベクター中へクローニングできる。
【０３２２】
遺伝子コードが本来もつ縮重性のため、実質的に同じか、または機能同等なアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列を用いてターゲット配列をクローニングおよび発現させることができる。当業者に自明のとおり、特定の発現系については非天然コドンを含むターゲット配列を調製することが有利であろう。たとえばターゲット発現率を高めるために、または目的特性（たとえば天然配列から産生される転写体より長い半減期）をもつ組換えＲＮＡ転写体を産生するために、特定の原核または真核宿主が好むコドン（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１７：４７７−５０８）を選択できる。
【０３２３】
ベクター
本発明の１態様においては、薬剤（すなわちＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ）を個体に直接投与できる。
【０３２４】
本発明の他の態様においては、本発明の薬剤をコードするヌクレオチド配列を含むベクターを個体に投与する。
好ましくは、遺伝子ベクターを用いて組換え薬剤を産生させ、および／またはターゲット部位へ送達する。
【０３２５】
当技術分野で周知のように、ベクターはある環境から他の環境への物質伝達を可能または容易にする道具である。本発明によれば、たとえば組換えＤＮＡ法に用いるあるベクターは、ＤＮＡセグメント（たとえば異種ＤＮＡセグメント、たとえば異種ｃＤＮＡセグメント）などの物質を、本発明のヌクレオチド配列を含むベクターの複製および／または本発明のヌクレオチド配列がコードする本発明タンパク質の発現の目的で、宿主および／またはターゲット細胞へ伝達することができる。組換えＤＮＡ法に用いるベクターの例にはプラスミド、染色体、人工染色体またはウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
【０３２６】
”ベクター”という用語には、発現ベクターおよび／または形質転換ベクターが含まれる。
”発現ベクター”という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ発現可能な構築体を意味する。
【０３２７】
”形質転換ベクター”という用語は、ある種から他の種へ伝達可能な構築体を意味する。
【０３２８】
裸のＤＮＡ
ＭＳＤ、たとえばＭＥＤの処置に用いるための本発明薬剤をコードするヌクレオチド配列を含むベクターを”裸の核酸構築体”として直接投与することができ、好ましくはこれはさらに宿主細胞ゲノムに相同なフランキング配列を含む。
【０３２９】
本明細書中で用いる”裸のＤＮＡ”という用語は、本発明薬剤をコードするヌクレオチド配列をその産生を制御する短いプロモーター領域と共に含むプラスミドを表わす。これは、プラスミドがいかなる送達ビヒクルにも保有されないので、”裸の”ＤＮＡと呼ばれる。そのようなＤＮＡプラスミドが宿主細胞、たとえば真核細胞に進入すると、それがコードするタンパク質（たとえば本発明薬剤）が細胞内で転写および翻訳される。
【０３３０】
非ウイルス性送達
あるいは、本発明のヌクレオチド配列または本発明の薬剤（すなわちＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ）または本発明のターゲット（すなわちＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１）を含むベクターを、当技術分野で既知の多様な非ウイルス法、たとえばトランスフェクション、形質転換、エレクトロポレーションおよびバイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）形質転換により、適切な宿主細胞に導入できる。
【０３３１】
本明細書中で用いる”トランスフェクション”という用語は、非ウイルスベクターを用いて遺伝子をターゲット哺乳動物細胞へ送達するプロセスを表わす。
代表的なトランスフェクション法には下記のものが含まれる：エレクトロポレーション、ＤＮＡバイオリスティック、脂質仲介トランスフェクション、圧縮ＤＮＡ仲介トランスフェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、カチオン剤仲介カチオン両親媒性界面活性剤（ＣＦＡ）（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１４：５５６）、多価カチオン、たとえばスペルミン、カチオン脂質またはポリリシン、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）−コレステロール複合体（Ｗｏｌｆｆ  ａｎｄ  Ｔｒｕｂｅｔｓｋｏｙ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６：４２１）、およびその組合わせ。
【０３３２】
哺乳動物細胞による裸の核酸構築体の取込みは、たとえばトランスフェクション剤の使用を含めた幾つかの既知のトランスフェクション法によって増強される。これらのトランスフェクション剤の例には、カチオン剤（たとえばリン酸カルシウムおよびＤＥＡＥ−デキストラン）およびリポフェクタント（たとえばｌｉｐｏｆｅｃｔａｍ（商標）およびｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標））が含まれる。一般に核酸構築体をトランスフェクション剤と混合して組成物を調製する。
【０３３３】
ウイルスベクター
あるいは、本発明の薬剤もしくはターゲットまたは本発明のヌクレオチド配列を含むベクターを、当技術分野で既知の多様なウイルス法、たとえば組換えウイルスベクター（たとえばレトロウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびアデノウイルス）の感染によって適切な宿主細胞へ導入できる。
【０３３４】
好ましくは、ベクターは組換えウイルスベクターである。適切な組換えウイルスベクターにはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ポックスウイルスベクターまたはパルボウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない（Ｋｅｓｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１０（１０）：１６１９−３２参照）。ウイルスベクターの場合、本発明薬剤をコードするヌクレオチド配列の送達はターゲット細胞のウイルス感染により仲介される。
【０３３５】
ターゲティッドベクター
”ターゲティッド（ｔａｒｇｅｔｅｄ）ベクター”という用語は、細胞を感染／トランスフェクション／トランスダクションする能力あるいは宿主および／またはターゲット細胞において発現する能力が、宿主生物内の特定の細胞タイプ、通常は共通または類似の表現型をもつ細胞に限定されているベクターを表わす。
【０３３６】
複製ベクター
本発明の薬剤（すなわちＮＰＹｉもしくはＮＰＹ  Ｙ１ｉ、またはＰＤＥｉもしくはＰＤＥ５ｉ）またはターゲット（たとえばＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１）をコードするヌクレオチド配列を、組換え複製ベクターに取り込ませることができる。このベクターは、そのヌクレオチド配列を適合性宿主細胞内で複製するために使用できる。したがって本発明の１態様において本発明は、本発明のヌクレオチド配列を複製可能なベクターに導入し、このベクターを適合性宿主細胞に導入し、そしてベクターを複製しうる条件下で宿主細胞を増殖させることにより、本発明のターゲットを産生する方法を提供する。ベクターを宿主細胞から回収できる。
【０３３７】
発現ベクター
好ましくは、ベクターに導入した本発明薬剤または本発明のヌクレオチド配列または本発明のターゲットは、コード配列（たとえば本発明のＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙのコード配列）を宿主により発現させることができる制御配列に作動可能な状態で結合している。すなわち、このベクターは発現ベクターである。宿主組換え細胞により産生される本発明薬剤またはターゲットは、用いる配列および／またはベクターに応じて、分泌されてもよく、または細胞内に含有されてもよい。当業者に自明のとおり、本発明薬剤またはターゲットをコードする配列を含む発現ベクターは、本発明薬剤またはターゲットをコードする配列をその真核細胞膜または原核細胞膜から直接分泌するよう指令するシグナル配列を含むように設計できる。
【０３３８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現
後記のように本発明のベクターを適切な宿主細胞および／またはターゲット細胞に形質転換またはトランスフェクションして、本発明薬剤または本発明ターゲットを発現させることができる。このプロセスは、発現ベクターで形質転換した宿主細胞および／またはターゲット細胞を、本発明の薬剤またはターゲットをコードする配列をベクターが発現する条件下で培養し、そして所望により、発現した本発明の薬剤またはターゲットを回収することを含む。ベクターは、たとえば複製起点、所望によりポリヌクレオチド発現のためのプロモーター、および所望によりプロモーターのレギュレーターを備えた、プラスミドベクターまたはウイルスベクターであってよい。ベクターは、１種類以上の選択性マーカー遺伝子、たとえば細菌プラスミドの場合はアンピシリン耐性遺伝子、または哺乳動物ベクターについてはネオマイシン耐性遺伝子を含むことができる。本発明薬剤または本発明ターゲットの発現は、それらが連続産生されるように構成性であってもよく、あるいは発現開始に刺激を必要とする誘導性であってもよい。誘導性発現の場合、本発明の薬剤またはターゲットの産生を必要な時点で、たとえば誘導物質（たとえばデキサメタゾンまたはＩＰＴＧ）を培地に添加することにより開始できる。
【０３３９】
融合タンパク質
本発明薬剤またはＮＰＹもしくはＮＰＹ  Ｙ１受容体ターゲットの抽出および精製および／または個体への送達を補助し、および／またはそれらの薬剤のスクリーニング法の開発を容易にするために、本発明のＮＰＹもしくはＮＰＹ  Ｙ１または薬剤（すなわちＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉ）を融合タンパク質として発現させることができる。融合タンパク質パートナーの例には、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６×Ｈｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写の活性化ドメイン）およびβ−ガラクトシダーゼが含まれる。融合タンパク質配列を分離できるように、融合タンパク質パートナーと目的タンパク質配列の間にタンパク質分解性開裂部位を含有させることも好都合であろう。融合タンパク質はターゲットの活性を隠蔽しないことが好ましい。
【０３４０】
融合タンパク質は、本発明物質に融合した抗原または抗原決定因子を含むことができる。この態様において融合タンパク質は、免疫系を全般的に刺激するという意味でアジュバントとして作用しうる物質を含む非天然融合タンパク質であってもよい。抗原または抗原決定因子は、本発明物質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれに結合していてもよい。
【０３４１】
本発明の他の態様において、アミノ酸配列は融合タンパク質をコードする異種配列にライゲートしていてもよい。たとえば物質の活性に影響を及ぼすことができる薬剤についてペプチドライブラリーをスクリーニングするために、市販の抗体が認識する異種エピトープを発現するキメラ物質をコードすることが有用であろう。
【０３４２】
宿主細胞
薬剤−たとえば本発明薬剤−または本発明のＮＰＹもしくはＮＰＹ  Ｙ１受容体ターゲットをコードするヌクレオチド配列を発現させるために、多様な宿主細胞を使用できる。これらの細胞は、原核および真核いずれの宿主細胞であってもよい。適切な宿主細胞には、細菌、たとえば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母、糸状菌、昆虫細胞、哺乳動物細胞を一般に不死化したもの、たとえばマウス、ＣＨＯ、ヒトおよびサルの細胞系、ならびにその誘導株が含まれる。
【０３４３】
本発明の範囲に含まれる適切な発現宿主は下記のものである：真菌、たとえばアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属菌種（たとえばＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ−０２８４６０３に記載のもの）およびトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌種；細菌、たとえばバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属菌種（たとえばＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５に記載のもの）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属菌種およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属菌種；ならびに酵母、たとえばクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属菌種（たとえばＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０に記載のもの）およびサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属菌種。たとえば代表的な発現宿主は下記のものから選択できる：アスペルギルス・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・ニガー変異株チュービゲニス（Ａ．ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ）、アスペルギルス・ニガー変異株アワモリ（Ａ．ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・アキュレアチス（Ａ．ａｃｕｌｅａｔｉｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａ．ｏｒｙｘａｅ）、トリコデルマ・リーセイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）、バチルス・サチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リヘニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリクファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）およびサッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）。
【０３４４】
適切な宿主細胞−たとえば酵母、真菌および植物宿主細胞−を用いて、本発明の組換え発現生成物に最適生物活性を付与する必要性に応じた翻訳後修飾（たとえばミリストイル化、グリコシル化、トランケーション、脂質化、ならびにチロシン、セリンまたはトレオニンのリン酸化）を行わせることができる。
【０３４５】
好ましい宿主細胞は、発現生成物をプロセシングして適切な成熟ポリペプチドを産生することができる。プロセシングの例にはグリコシル化、ユビキチン化、ジスルフィド結合形成および一般的な翻訳後修飾が含まれるが、これらに限定されない。
【０３４６】
抗体
本発明の１態様において、薬剤は抗体であってもよい。さらに、または別態様において、ターゲットが抗体であってもよい。
【０３４７】
抗体は標準法により、たとえば本発明の物質を用いる免疫化により、またはファージディスプレイライブラリーを用いて調製できる。
本発明の目的に関して、”抗体”という用語には、別途明記しない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーにより産生されたフラグメント、およびその模倣体が含まれるが、これらに限定されない。そのようなフラグメントには、全抗体のフラグメントであってターゲット物質に対する活性を保持したもの、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）およびＦ（ａｂ’）2フラグメント、ならびに一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、抗体の抗原結合部位を含む融合タンパク質および他の合成タンパク質が含まれる。さらに、抗体およびそのフラグメントはヒト化抗体であってもよい。中和抗体、すなわち物質ポリペプチドの生物活性を阻害する抗体が、診断および療法に特に好ましい。
【０３４８】
ポリクローナル抗体を得たい場合、選択した哺乳動物（たとえばマウス、ウサギ、ヤギ、ウマなど）を、同定した本発明の薬剤および／または物質から得られるエピトープ（１以上）を保有する免疫原ポリペプチドで免疫化する。宿主の種に応じて、免疫応答を高めるために種々のアジュバントを使用できる。そのようなアジュバントにはフロイントアジュバント、鉱物ゲル、たとえば水酸化アルミニウム、および界面活性物質、たとえばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルション、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノールが含まれるが、これらに限定されない。ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｉ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）およびコリネバクテリウム・パルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）は有用となりうるヒトアジュバントであり、これらは精製した物質ポリペプチドを免疫損傷個体に全身防御刺激の目的で投与する際に使用できる。
【０３４９】
免疫化動物から血清を採集し、既知の方法で処理する。同定した本発明の薬剤および／または物質から得られるエピトープに対するポリクローナル抗体を含有する血清が他の抗原に対する抗体を含有する場合、ポリクローナル抗体を免疫アフィニティークロマトグラフィーにより精製できる。ポリクローナル抗血清の調製および処理方法は当技術分野で知られている。そのような抗体を作製できるように、本発明は動物またはヒトにおいて免疫原として使用するために他のポリペプチドに対してハプテン化した本発明のポリペプチドまたはそのフラグメントをも提供する。
【０３５０】
同定した本発明の薬剤および／または物質から得られるエピトープに対して形成されるモノクローナル抗体も、当業者が容易に調製できる。ハイブリドーマによりモノクローナル抗体を調製するための一般法は周知である。細胞融合により、また他の方法、たとえばＢリンパ球を癌遺伝子ＤＮＡで直接トランスフォーメーションし、あるいはエプスタイン・バーウイルスでトランスフェクションすることにより、不死化した抗体産生細胞系を作製できる。オービット（ｏｒｂｉｔ）エピトープに対して産生されたモノクローナル抗体のパネルを、種々の特性について、すなわちイソ形およびエピトープ親和性についてスクリーニングできる。
【０３５１】
物質および／または同定した抗体に対するモノクローナル抗体は、連続培養細胞系により抗体分子を産生するいかなる方法でも調製できる。これらには下記の方法が含まれるが、これらに限定されない：最初にＫｏｅｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７）が記載したハイブリドーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｓｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２；Ｃｏｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８０：２０２６−２０３０）およびＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ社，ｐｐ７７−９６）。さらに、”キメラ抗体”の調製のために開発された方法、すなわちマウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子にスプライスして適切な抗原特異性および生物活性をもつ分子を得る方法を採用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８１：６８５１−６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４５２−４５４）。あるいは、一本鎖抗体の調製のために記載された方法（ＵＳＰ４，９４６，７７９）を物質特異的一本鎖抗体の調製に適用できる。
【０３５２】
同定した薬剤および／または物質から得られるエピトープに対して産生されたモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体は両方とも特に診断に有用であり、中和抗体は受動免疫療法に有用である。特にモノクローナル抗体は、抗イディオタイプ抗体の形成に使用できる。抗イディオタイプ抗体は、防御を得たい物質および／または薬剤の”内部イメージ”を保有する免疫グロブリンである。抗イディオタイプ抗体を形成する方法は当技術分野で知られている。これらの抗イディオタイプ抗体も療法に有用である。
【０３５３】
抗体は、リンパ球集団におけるｉｎ  ｖｉｖｏ産生を誘導することにより、または組換え免疫グロブリンライブラリーもしくは高特異的結合試薬のパネルをスクリーニングすることによっても調製できる：Ｏｒｌａｎｄｉら（１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８６：３８３３−３８３７）、およびＷｉｎｔｅｒ  Ｇ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ．（１９９１；Ｎａｔｕｒｅ，３４９：２９３−２９９）の記載による。
【０３５４】
物質に対する特異的結合部位を含む抗体フラグメントも形成できる。たとえばそのようなフラグメントには、抗体分子のペプシン消化により形成できるＦ（ａｂ’）2フラグメント、およびＦ（ａｂ’）2フラグメントのジスルフィド橋の還元により形成できるＦａｂフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。あるいは、目的特性をもつモノクローナル抗体Ｆａｂフラグメントを迅速かつ容易に同定できるＦａｂ発現ライブラリーを構築できる（Ｈｕｓｅ  ＷＤ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２５６：１２７５−１２８１）。
【０３５５】
レポーター
多様なレポーターを本発明のアッセイ法（およびスクリーニング法）に使用できる。好ましいレポーターは、検出しやすい信号（たとえば分光法により）を与えるものである。たとえば、レポーター遺伝子は吸光特性を変化させる反応を触媒する酵素をコードしてもよい。
【０３５６】
レポーター分子の例にはβ−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、β−グルクロニダーゼ、エキソグルカナーゼおよびグルコアミラーゼが含まれるが、これらに限定されない。あるいは、放射性標識または蛍光タグ標識ヌクレオチドをナセント転写体に取り込ませ、次いでオリゴヌクレオチドプローブに結合したときこれらを同定する。
【０３５７】
好ましい１態様において、レポーター分子の産生をレポーター遺伝子生成物、たとえばβ−ガラクトシダーゼの酵素活性により判定する。
たとえばタンパク質に特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いてターゲットの発現を検出および測定するための多様なプロトコルが当技術分野で知られている。その例には、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）が含まれる。ポリペプチド上の干渉しない２つのエピトープに対して反応性であるモノクローナル抗体を用いる２部位モノクローナルベースのイムノアッセイ法が好ましいが、競合結合アッセイ法も採用できる。これらおよび他のアッセイ法は、特にＨａｍｐｔｏｎ  Ｒ．（１９９０，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，ミネソタ州セント・ポール）およびＭａｄｄｏｘ  ＤＥ．ら（１９８３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１５，８：１２１１）に記載されている。
【０３５８】
多様な標識法および結合法が当業者に既知であり、種々のアミノ酸アッセイ法に使用できる。ターゲットポリヌクレオチド配列を検出するための標識したハイブリダイゼーションプローブまたはＰＣＲプローブを調製する手段には、標識ヌクレオチドを用いるオリゴ標識法、ニックトランスレーション、末端標識法またはＰＣＲ増幅が含まれる。あるいは、ｍＲＮＡプローブ産生のために、コード配列またはそのいずれかの部分をベクター中へクローニングすることができる。そのようなベクターは当技術分野で既知であり、市販されている。これらをｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＲＮＡプローブ合成のために、適切なＲＮＡポリメラーゼ（たとえばＴ７、Ｔ３またはＳＰ６）および標識ヌクレオチドの添加により使用できる。
【０３５９】
Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ニュージャージー州ピカッタウェイ）、Ｐｒｏｍｅｇａ（ワイオミング州マディソン）およびＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．（オハイオ州クリーブランド）など多数の企業が、これらの方法に用いる商業用のキットおよびプロトコルを供給している。適切なレポーター分子または標識には、放射性核種、酵素、蛍光試薬、化学発光試薬、または色原体試薬、および基質、補因子、阻害剤、磁性粒子などが含まれる。そのような標識の使用を教示した特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ−４３６６２４１が含まれる。組換え免疫グロブリンもＵＳ−Ａ−４８１６５６７に示されるように調製できる。
【０３６０】
特定の分子の発現を定量するための他の方法には、ヌクレオチドの放射性標識法（Ｍｅｌｂｙ  ＰＣ．ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１５９：２３５−４４）またはビオチニル化法（Ｄｕｐｌａａ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２９−３６）、対照核酸の共増幅、および実験結果を内挿する標準曲線が含まれる。多重試料の定量は目的オリゴマーを種々の希釈度で提示するＥＬＩＳＡ方式でアッセイを実施することによって速度を高めることができ、分光分析または熱量測定による反応で迅速な定量が得られる。
【０３６１】
マーカー遺伝子発現の存在／不存在は目的遺伝子も存在することを示唆するが、その存在および発現を確認しなければならない。たとえばヌクレオチド配列をマーカー遺伝子配列内に挿入すると、それを含む組換え細胞はマーカー遺伝子機能の不存在により同定できる。あるいは、マーカー遺伝子をターゲットコード配列と縦列で、単一プロモーターの制御下に配置することができる。誘導または選択に応答したマーカー遺伝子発現は、通常はそのターゲットも発現されたことを示す。
【０３６２】
あるいは、ターゲットのコード配列を含み、そのターゲットコード領域を発現する宿主細胞は、当業者に既知の多様な方法で同定できる。これらの方法にはＤＮＡ−ＤＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーション法およびタンパク質のバイオアッセイ法またはイムノアッセイ法が含まれ、これらには核酸またはタンパク質の検出および／または定量のためのメンブレンベース、溶液ベースまたはチップベースの手法が含まれるが、これらに限定されない。
【０３６３】
スクリーニング
適切な１以上のターゲット−たとえばアミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列−を、多様な薬物スクリーニング法のいずれかによる、薬剤、たとえばＮＰＹｉまたはＮＰＹ  Ｙ１ｉの同定に使用できる。そのような試験に用いるターゲットは、溶液中で自由であるか、固体支持体に固定されているか、細胞表面に保有されているか、または細胞内に存在してもよい。ターゲットは動物モデル内にあってもよく、この場合ターゲットは外因性ターゲットまたは導入したターゲットであってもよい。動物モデルはヒト以外の動物モデルである。ターゲット活性の消失、またはターゲットと被験薬剤の結合複合体の形成を測定できる。
【０３６４】
薬物スクリーニング法は、ＧｅｙｓｅｎのＥＰ−Ａ−８４／０３５６４（１９８４年９月１３日公開）に記載の方法に基づくことができる。要約すると、多数の異なる小ペプチド被験化合物を、固体支持体、たとえばプラスチックピンその他の表面で合成する。ペプチド被験化合物を適切なターゲットまたはそのフラグメントと反応させ、洗浄する。次いで結合した物質を検出する−たとえば当技術分野で周知の方法を適宜適用することによる。精製ターゲットを、薬物スクリーニング法に用いるプレートに直接コーティングしてもよい。あるいは、非中和抗体を用いてペプチドを捕獲し、それを固体支持体に固定化することもできる。
【０３６５】
本発明は競合薬物スクリーニングアッセイ法の採用も考慮する。この方法では、ターゲットに特異的に結合しうる中和抗体がターゲットへの結合に対して被験化合物と競合する。
【０３６６】
他のスクリーニング法は、物質に対する適切な結合親和性をもつ薬物のハイスループットスクリーニング法（ＨＴＳ）を提供する。この方法はＷＯ８４／０３５６４に詳述される方法に基づく。
【０３６７】
本発明のアッセイ法は小規模および大規模両方の被験化合物スクリーニング、ならびに定量アッセイに適すると期待される。
好ましい態様において、本発明のスクリーニング法は少なくとも下記の工程を含む（必ずしもこの順番である必要はない）：（ａ）候補薬剤が関連活性（たとえばＮＰＹ、特にＮＰＹ  Ｙ１、たとえばイヌの腎臓からのＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１の調節）をもつかを判定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングを実施する；（ｂ）候補薬剤の選択性を判定するために、１以上の選択性スクリーニングを実施する（たとえばその薬剤がＡＣＥ阻害薬でもあるかを調べる−たとえば本明細書に示すアッセイプロトコルを採用；ならびに／あるいはその薬剤がＮＰＹ  Ｙ２および／またはＮＰＹ  Ｙ５に対して活性であるかを調べる）；および（ｃ）候補薬剤についてｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニングを実施する（たとえば機能性動物モデルを使用；その薬剤が動脈血圧に及ぼす作用の測定による薬剤の選択性判定を含む）。一般に、候補薬剤がスクリーニング（ａ）および（ｂ）に合格すれば、次いでスクリーニング（ｃ）を実施する。
【０３６８】
診断薬
本発明は、ＭＥＤに対する素因を検出するための診断用の組成物またはキットをも提供する。これに関して組成物またはキットは、被験試料中の１以上のターゲットの存在を−または１以上のターゲットの不存在をも−指示しうる物質を含む。好ましくは被験試料を陰茎から得る。
【０３６９】
たとえば診断用組成物は、本明細書に述べる１種類以上のヌクレオチド配列、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体、あるいはこれらのヌクレオチド配列の全体または部分にハイブリダイズしうる配列を含むことができる。
【０３７０】
疾病診断の基礎を得るために、ターゲットから正常値または標準値を確立すべきである。これは、正常な対象（動物またはヒト）からの体液または細胞抽出物とターゲットに対する抗体を、複合体形成に適した条件下で（当技術分野で周知）混和することにより達成できる。標準複合体形成量を、既知量の抗体と既知濃度の精製ターゲットを混和した陽性対照の希釈系列と比較することにより、定量化できる。次いで正常試料から得た標準値を、ＭＥＤ罹患の可能性がある対象からの試料より得た数値と比較する。標準値と対象値が相異すると、疾病状態の存在が確認される。
【０３７１】
ターゲット自体またはそのいずれかの部分は、診断用化合物および／または療法用化合物の基礎を提供する。診断用としては、ターゲットポリヌクレオチド配列を用いて、ＭＥＤを示唆する症状、障害または疾病における遺伝子発現を検出および定量できる。
【０３７２】
ターゲットをコードするポリヌクレオチド配列を、ターゲットの発現により起きたＭＥＤの診断に使用できる。たとえばターゲットをコードするポリヌクレオチド配列を、生検もしくは剖検により得た組織または生物学的流体のハイブリダイゼーションアッセイまたはＰＣＲアッセイに用いて、ターゲット発現の異常を検出できる。そのような定性法または定量法の形態には、サザンまたはノーザン分析、ドットブロットその他のメンブレンベースの方法；ＰＣＲ法；ディップスティック法、ピン法またはチップ法；およびＥＬＩＳＡその他の多重試料方式の方法が含まれる。これらの方法はすべて当技術分野で周知であり、実際に多くの市販診断キットの基礎である。
【０３７３】
そのようなアッセイ法を各療法処置方式の効果を評価するように調整し、動物試験、臨床試験、または個体の処置のモニタリングに利用できる。疾病診断の基礎を提供するために、ターゲット発現に関する正常または標準プロフィルを確立すべきである。これは、正常な対象（動物またはヒト）から採取した体液または細胞抽出物とターゲットまたはその部分を、ハイブリダイゼーションまたは増幅に適した条件下で混和することにより達成される。正常対象について得た数値を、同じ実験で既知量の精製ターゲットを用いて行った陽性対照試験の希釈系列と比較することにより、標準ハイブリダイゼーションを定量化できる。正常試料から得た標準値を、ターゲットコード配列の発現に関連する障害または疾病に罹患している可能性がある対象からの試料より得た数値と比較する。標準値と対象値が相異すると、疾病状態の存在が確認される。疾病が確立すると既存の療法薬を投与し、治療プロフィルまたは数値を求めることができる。最後に、このアッセイを定期的に繰り返して、数値が正常または標準パターンへ向かう、または戻るかを評価する。継続治療プロフィルを用いて、数日間または数カ月間の治療効果を示すことができる。
【０３７４】
したがって１態様において本発明は、たとえばＭＥＤにおけるターゲットレベルを検出および定量するための診断に使用できる抗ターゲット抗体の調製のための、ターゲットポリペプチド、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体の使用に関する。
【０３７５】
本発明はさらに、陽性対照として使用できる精製ターゲット、および抗ターゲット抗体を含む、細胞および組織中のターゲットを検出するための診断アッセイ法およびキットを提供する。そのような抗体は、ターゲットタンパク質の発現、、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体の発現もしくは欠失に関連する疾病状態または症状を検出するための、溶液ベース、メンブレンベースまたは組織ベースの方法に使用できる。
【０３７６】
診断キット
本発明には、下記のための診断用組成物または診断方法または診断キットも含まれる：（ｉ）生物学的流体および組織におけるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性の検出および測定；ならびに／あるいは（ｉｉ）勃起組織におけるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性の存在位置判定；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）雄性性的機能障害、たとえばＭＥＤの素因の検出。これに関して、組成物またはキットは、被験試料における１以上のターゲット（たとえばＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性）の存在−さらには１以上のターゲットの不存在−を指示しうるものを含む。好ましくは、被験試料は雄性生殖器またはその分泌物から得られる。
【０３７７】
たとえば診断用組成物は、本明細書に述べる１種類以上のヌクレオチド配列、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体を、あるいはそのヌクレオチド配列のいずれかの全体または部分にハイブリダイズしうる配列を含むことができる。
【０３７８】
診断試験
疾病診断の基礎を得るために、ターゲットから正常値または標準値を確立すべきである。これは、正常な対象（動物またはヒト）からの体液または細胞抽出物とたとえばターゲットに対する抗体とを、複合体形成に適した条件下で（当技術分野で周知）混和することにより達成できる。標準複合体形成量を、既知量の抗体と既知濃度の精製ターゲットを混和した陽性対照の希釈系列と比較することにより、定量化できる。次いで正常試料から得た標準値を、雄性性的機能障害（たとえばＭＥＤ）罹患の可能性がある対象からの試料より得た数値と比較する。標準値と対象値が相異すると、疾病状態の存在が確認される。
【０３７９】
ターゲット自体またはそのいずれかの部分は、診断用および／または予防用および／または治療用化合物の基礎を提供する。診断用としては、ターゲットポリヌクレオチド配列を用いて、雄性性的機能障害、特にＭＥＤが示唆される症状、障害または疾病における遺伝子発現を検出および定量できる。
【０３８０】
ターゲットをコードするポリヌクレオチド配列を、ターゲットの発現により起きたＳＤの診断に使用できる。たとえばターゲットをコードするポリヌクレオチド配列を、生検もしくは剖検により得た組織または生物学的流体のハイブリダイゼーションアッセイまたはＰＣＲアッセイに用いて、ターゲット発現の異常を検出できる。そのような定性法または定量法の形態には、サザンまたはノーザン分析、ドットブロットその他のメンブレンベースの方法；ＰＣＲ法；ディップスティック法、ピン法またはチップ法；およびＥＬＩＳＡその他の多重試料方式の方法が含まれる。これらの方法はすべて当技術分野で周知であり、実際に多くの市販診断キットの基礎である。
【０３８１】
そのようなアッセイ法を各療法処置方式の効果を評価するように調整し、動物試験、臨床試験、または個体の処置のモニタリングに利用できる。疾病診断の基礎を提供するために、ターゲット発現に関する正常または標準プロフィルを確立すべきである。これは、正常な対象（動物またはヒト）から採取した体液または細胞抽出物とターゲットまたはその部分とを、ハイブリダイゼーションまたは増幅に適した条件下で混和することにより達成される。正常対象について得た数値を、同じ実験で既知量の精製ターゲットを用いて行った陽性対照試験の希釈系列と比較することにより、標準ハイブリダイゼーションを定量化できる。正常試料から得た標準値を、ターゲットコード配列の発現に関連する障害または疾病に罹患している可能性がある対象からの試料より得た数値と比較する。標準値と対象値が相異すると、疾病状態の存在が確認される。疾病が確立すると既存の療法薬を投与し、治療プロフィルまたは数値を求めることができる。最後に、このアッセイを定期的に繰り返して、数値が正常または標準パターンへ向かう、または戻るかを評価する。継続治療プロフィルを用いて、数日間または数カ月間の治療効果を示すことができる。
【０３８２】
したがって１態様において本発明は、たとえば雄性性的機能障害状態におけるターゲットレベルを検出および定量するための診断に使用できる抗ターゲット抗体の調製のための、ターゲットポリペプチド、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体の使用に関する。
【０３８３】
本発明はさらに、陽性対照として使用できる精製ターゲット、および抗ターゲット抗体を含む、細胞および組織中のターゲットを検出するための診断アッセイ法およびキットを提供する。そのような抗体は、ターゲットタンパク質の発現、、またはその変異体、相同体、フラグメントもしくは誘導体の発現もしくは欠失に関連する疾病状態または症状を検出するための、溶液ベース、メンブレンベースまたは組織ベースの方法に使用できる。
【０３８４】
これらの物質を含む診断用の組成物および／またはキットは、勃起組織抽出物における、迅速な、信頼性のある、感度の高い、および特異的な、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性の測定および存在位置判定のために使用できる。状況によっては、このキットは雄性性的機能障害、たとえばＭＥＤの存在を指示することができる。
【０３８５】
アッセイ法
診断用の組成物および／または方法および／またはキットは下記を含む手法で使用できるが、これらに限定されない：競合および非競合アッセイ、ラジオイムノアッセイ、生物発光および化学発光アッセイ、蛍光測定、サンドイッチアッセイ、イムノラジオメトリーアッセイ、ドットブロット法、ＥＬＩＳＡを含めた酵素結合アッセイ、マイクロタイタープレート法、尿または血液の迅速モニタリング用の抗体被覆ストリップまたはディップスティック、免疫組織化学的および免疫細胞化学的方法。
【０３８６】
たとえば免疫組織化学的キットは、生殖器におけるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性の存在位置判定にも使用できる。この免疫組織化学的キットは光学および電子顕微鏡測定法のいずれかを用いた組織切片および培養細胞におけるＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性の存在位置判定にも使用でき、これは研究と臨床の両方の目的に利用できる。そのような情報は、診断およびおそらく療法の目的で、ＭＥＤの検出および／または予防および／または治療に有用である。各キットについて、アッセイの範囲、感度、精度、信頼性、特異性および再現性が確立している。アッセイ内およびアッセイ間の変動は、変位または活性の標準曲線上で２０％、５０％および８０％の点で確立している。
【０３８７】
プローブ
本発明の他の態様は、ターゲットコード領域、たとえばＮＰＹもしくはＮＰＹ  Ｙ１受容体、または近縁分子、たとえば対立遺伝子をコードするゲノム配列を含めたポリヌクレオチド配列を検出できる（特に選択的に選択できるもの）核酸ハイブリダイゼーションプローブまたはＰＣＲプローブを提供することである。プローブの特異性（すなわちそれが高度に保存された、保存された、または保存されていない領域またはドメインのいずれに由来するか）、およびハイブリダイゼーションまたは増幅のストリンジェンシー（高、中等度、または低）は、そのプローブが天然ターゲットコード配列のみを同定するか、あるいは関連配列を同定するかを決定する。関連核酸配列を検出するためのプローブは、ターゲットファミリーメンバーの保存された、または高度に保存されたヌクレオチド領域から選択され、そのようなプローブは縮重プローブのプールに使用できる。同一核酸配列の検出のためには、または最大特異性を目的とする場合、核酸プローブはターゲットポリヌクレオチドの保存されていないヌクレオチド領域またはユニーク領域から選択される。本明細書中で用いる”保存されていないヌクレオチド領域”という用語は、本明細書に開示するターゲットコード配列にユニークな、関連ファミリーメンバーにみられないヌクレオチド領域を表わす。
【０３８８】
ＵＳ−Ａ−４６８３１９５、ＵＳ−Ａ−４８００１９５およびＵＳ−Ａ−４９６５１８８に記載されるＰＣＲは、ターゲット配列に基づくオリゴヌクレオチドにさらに有用性を提供する。そのようなオリゴマーは一般に化学合成されるが、それらを酵素により産生するか、あるいは組換え源から産生することもできる。オリゴマーは一般に２種類のヌクレオチド配列を含む；１つはセンス配向（５’→３’）、１つはアンチセンス配向（３’←５’）であり、特異的遺伝子または条件の同定に最適な条件下で用いられる。同一の２つのオリゴマー、入れ子型オリゴマー組、またはさらに縮重プールのオリゴマーは、より低いストリンジェンシー条件下で近縁ＤＮＡまたはＲＮＡ配列の検出および／または定量に使用できる。
【０３８９】
本発明の薬剤またはターゲットに対する核酸配列を用いて、内因性ゲノム配列をマッピングするための前記ハイブリダイゼーションプローブを調製することもできる。周知の方法で、この配列を特定の染色体に、または染色体の特定領域にマッピングできる。これらには、下記に対するｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが含まれる：染色体スプレッド（Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク市）、フローソーティングした染色体標本、または人工染色体構築体、たとえばＹＡＣ、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、細菌ＰＩ構築体もしくは単一染色体ｃＤＮＡライブラリー。
【０３９０】
染色体標本へのｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよび物理的マッピング法、たとえば確立した染色体マーカーを用いる連関分析は、遺伝子地図の拡張にきわめて重要である。遺伝子地図の例はＳｃｉｅｎｃｅ（１９９５，２７０：４１０ｆおよび１９９４，２６５：１９８１）にある。あるヒト染色体のアーム数が分からない場合ですら、遺伝子を他の哺乳動物種の染色体に乗せると関連マーカーが解明されることがしばしばある。物理的マッピングにより新規配列を染色体アームまたはその部分に割り当てることができる。これにより、ポジショナルクローニングまたは他の遺伝子探索法により疾病遺伝子を探査している研究者に有用な情報が得られる。疾病または症候群が遺伝子連関によりあるゲノム領域におおまかに位置決定されると、その領域にマッピングされるいずれかの配列が以後の研究にとって関連遺伝子または調節遺伝子となる可能性がある。本発明のヌクレオチド配列は、正常個体、保因個体または罹患個体間での転座、転位などの染色体位置の相異を検出するためにも利用できる。
【０３９１】
生物
本発明に関して”生物”という用語には、前記ターゲットおよび／またはそれから得られる生成物を含む可能性のあるいかなる生物も含まれる。生物の例には、哺乳動物、真菌、酵母または植物を含めることができる。
【０３９２】
本発明に関して”トランスジェニック生物”という用語には、前記ターゲットおよび／またはそれから得られる生成物を含むいかなる生物も含まれる。
【０３９３】
宿主細胞／宿主生物の形質転換
前記のように、宿主生物は原核生物または真核生物であってよい。適切な原核宿主の例には、大腸菌およびバチルス・サチリスが含まれる。原核宿主の形質転換についての教示は当技術分野で十分な記載がある。たとえばＳａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社参照。
【０３９４】
原核宿主を用いる場合、形質転換前にヌクレオチド配列を適切に修飾する必要があるかもしれない−たとえばイントロンの除去。
他の態様において、トランスジェニック生物は酵母であってもよい。これに関して、酵母も異種遺伝子発現のビヒクルとして広く用いられている。サッカロミセス・セレビシエ種は、異種遺伝子発現のための利用を含めて工業的利用の歴史が長い。サッカロミセス・セレビシエにおける異種遺伝子の発現は、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７，Ｙｅａｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄ．Ｒ．Ｂｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．編，ｐｐ４０１−４２９，Ａｌａｎ  ａｎｄ  Ｕｒｗｉｎ，ロンドン）およびＫｉｎｇら（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ，Ｅ．Ｆ．Ｗａｌｔｏｎ  ａｎｄ  Ｇ．Ｔ．Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ編，ｐｐ１０７−１３３，Ｂｌａｃｋｉｅ，グラスゴー）が概説している。
【０３９５】
幾つかの理由でサッカロミセス・セレビシエは異種遺伝子発現に好適である。第１に、それはヒトに対して非病原性であり、特定の内毒素を産生する可能性がない。第２に、それは数世紀の商業的利用に伴い多様な目的で安全に用いられてきた長い歴史をもつ。このため一般に広く受け入れられている。第３に、この生物に向けられてきた広範な商業的利用および研究の結果、サッカロミセス・セレビシエについての豊富な遺伝学および生理学の知識と大規模発酵特性が得られている。
【０３９６】
サッカロミセス・セレビシエにおける異種遺伝子発現の原理および遺伝子生成物の分泌についての概説は、Ｅ．Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ  Ｅ．Ｋｅｎｎｅｙ（１９９３，”異種遺伝子発現のビヒクルとしての酵母”，Ｙｅａｓｔｓ，Ｖｏｌ．５，Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｈ．Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｊ．Ｓｔｕａｒｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ編，第２版，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社）が示している。
【０３９７】
下記を含めた幾つかのタイプの酵母ベクターを利用できる；その維持のために宿主ゲノムとの組換えを必要とする組込み型ベクター、および自己複製型プラスミドベクター。
トランスジェニックサッカロミセスを作製するためには、酵母における発現のために設計した構築体に本発明のヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築体を作製する。異種発現に用いられる幾つかのタイプの構築体が開発された。これらの構築体は、本発明のヌクレオチド配列に融合した酵母において活性なプロモーターを含み、通常は酵母由来のプロモーター、たとえばＧＡＬ１プロモーターを用いる。通常は酵母由来のシグナル配列、たとえばＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列を用いる。酵母において活性なターミネーターが発現系の末尾にある。
【０３９８】
酵母の形質転換のために幾つかの形質転換プロトコルが開発された。たとえば本発明によるトランスジェニックサッカロミセスは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ，７５，１９２９）；Ｂｅｇｇｓ，ＪＤ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）；およびＩｔｏ，Ｈら（１９８３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１５３，１６３−１６８）の教示に従って作製できる。
【０３９９】
形質転換した酵母細胞を種々の選択マーカーにより選択する。形質転換に用いられるマーカーには、多数の栄養要求性マーカー、たとえばＬＥＵ２、ＨＩＳ４およびＴＲＰ１、ならびに優性抗生物質耐性マーカー、たとえばアミノグリコシド系抗生物質マーカー（たとえばＧ４１８）がある。
【０４００】
他の宿主生物は植物である。遺伝子修飾植物の構築における基本原理は、挿入した遺伝子材料が安定に維持されるように遺伝情報を植物ゲノムに挿入することである。遺伝情報の挿入には幾つかの方法がある。２つの主な原理は、遺伝情報の直接導入およびベクター系を用いる遺伝情報導入である。全般的技術についての概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏ．Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［１９９１］４２：２０５−２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｒｇｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｈｉ−Ｔｅｃｈ．，１９９４年３／４月，１７−２７）による報文にみられる。植物形質転換についての教示はさらにＥＰ−Ａ−０４４９３７５にみられる。
【０４０１】
したがって本発明は、ターゲットとなる、またはターゲットを発現するためのヌクレオチドで宿主細胞を形質転換する方法をも提供する。このヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を、コードされるタンパク質の発現に適した条件下で培養し、それを細胞培養物から回収する。組換え細胞が産生したタンパク質は、用いる配列および／またはベクターに応じて、分泌されてもよく、細胞内に含有されていてもよい。当業者に自明のとおり、コード配列を含む発現ベクターは、コード配列をその原核細胞膜または真核細胞膜から直接分泌するよう指令するシグナル配列を含むように設計できる。他の組換え構築体では、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に、コード配列が結合してもよい（Ｋｒｏｌｌ  ＤＪ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１２：４４１−５３）。
【０４０２】
ＡＣＥアッセイ法
ＡＣＥに対する力価、およびＡＣＥに対比したＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１阻害薬の選択値は、下記のアッセイにより測定される。
【０４０３】
ブタおよびヒトの腎皮質からの可溶性アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の調製およびアッセイ
可溶性ＡＣＥ活性は腎皮質から得られ、ＡＣＥ基質Ａｂｚ−Ｇｌｙ−ｐ−ニトロ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＨを開裂してその蛍光生成物Ａｂｚ−Ｇｌｙを産生する速度を測定することによりアッセイされる。
【０４０４】
１．材料
すべての水を２回脱イオン処理する。
１．１  ヒト腎臓  ＩＩＡＭ（米国ペンシルベニア州）またはＵＫ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋ（英国ＨＴＢ）
１．２  ブタ腎臓ＡＣＥ  Ｓｉｇｍａ（Ａ２５８０）
１．３  ホモジナイゼーション緩衝液−１
１００ｍＭのマンニトールおよび２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．１）
２．４２ｇのトリス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｔ／Ｐ６３０／６０）を１Ｌの水に希釈し、室温で６Ｍ  ＨＣｌによりｐＨを７．１に調整する。これに１８．２２ｇのマンニトール（Ｓｉｇｍａ  Ｍ−９５４６）を添加する。
１．４  ホモジナイゼーション緩衝液−２
１００ｍＭのマンニトール、２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．１）および１０ｍＭのＭｇＣｌ2．６Ｈ2Ｏ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｍ０６００／５３）
５００ｍｌのホモジナイゼーション緩衝液−１（１．４）に１．０１７ｇのＭｇＣｌ2を添加する。
１．５  トリス緩衝液（ＡＣＥ緩衝液）
５０ｍＭのトリスおよび３００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．４）
５０ｍｌの５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ  Ｔ２６６３）および１７．５２ｇのＮａＣｌ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓ／３１６０／６０）を水中１０００ｍｌに調製する。
１．６  基質（Ａｂｚ−Ｇｌｙ−ｐ−ニトロ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ）（Ｂａｃｈｅｍ  Ｍ−１１００）
ＡＣＥ基質を粉末として−２０℃に保存する。この基質をＡＣＥ緩衝液に穏やかに再懸濁することにより２ｍＭ原液を調製する。渦撹拌または超音波処理してはならない。２ｍＭ原液を４００μｌずつで、最高１カ月間、−２０℃に保存する。
１．７  全生成物
基質代謝回転率％を測定するために（計算を参照）、基質から生成物への変換１００％に相当する試料をプレートに含める。１ｍｌの２ｍＭ基質を２０μｌの酵素原液と共に３７℃で２４時間インキュベートすることにより、全生成物を調製する。
１．８  停止溶液
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣＡＳ［６０８１／９２／６］）をＡＣＥ緩衝液に１：２５０希釈して２ｍＭ溶液を調製する。
１．９  ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
１．１０  塩化マグネシウム−ＭｇＣｌ2．６Ｈ2Ｏ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｍ０６００／５３）
１．１１  黒色９６ウェル平底アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３９１５またはＰａｃｋａｒｄ）
１．１２  Ｔｏｐｓｅａｌ  Ａ（Ｐａｃｋａｒｄ  ６００５１８５）
１．１３  遠心管
【０４０５】
２．特殊な装置
２．１  Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｂ遠心機（ＳＳ３４  ＧＳＡローター、４℃に予冷）
２．２  Ｂｒａｕｎミニプライマーミキサー
２．３  Ｂｅｃｋｍａｎ  ＣＳ−６Ｒ遠心機
２．４  ＢＭＧ  Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｇａｌａｘｙ
２．５  Ｗｅｓｂａｒｔ  １５８９振とう式インキュベーター
【０４０６】
３．方法
３．１  組織調製
３．１  ヒトＡＣＥは腎皮質から、Ｂｏｏｔｈ，Ａ．Ｇ．  ＆  Ｋｅｎｎｙ，Ａ．Ｊ．（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１４２，５７５−５８１より適用した方法により得られる。
３．３  凍結腎臓を室温で融解し、皮質を髄質から切り取る。
３．４  皮質を細かく切り、約１０体積のホモジナイゼーション緩衝液−１（１．４）中でＢｒａｕｎミニプライマー（２．２）を用いてホモジナイズする。
３．５  塩化マグネシウム（１．１１）（２０．３ｍｇ／ｇ組織）をホモジェネートに添加し、氷水浴内で１５分間撹拌する。
３．６  ホモジェネートをＢｅｃｋｍａｎ遠心機（２．３）により１，５００ｇ（３，８２０ｒｐｍ）で１２分間遠心した後、上清を新たな遠心管へ取り出し、ペレットを廃棄する。
３．７  上清をＳｏｒｖａｌｌ遠心機（２．１）により１５，０００ｇ（１２，１００ｒｐｍ）で１２分間遠心し、上清を廃棄する。
３．８  残留ペレット上の淡桃色層を取り出し、ホモジナイゼーション緩衝液−２（１．５）に再懸濁する（組織１ｇにつき緩衝液５ｍｌ）。
３．９  懸濁液をＢｅｃｋｍａｎ遠心機により２，２００ｇ（４，６３０ｒｐｍ）で１２分間遠心した後、ペレットを廃棄する。
３．１０  上清をＳｏｒｖａｌｌ遠心機により１５，０００ｇ（１２，１００ｒｐｍ）で１２分間遠心し、上清を廃棄する。
３．１１  最終ペレットをホモジナイゼーション緩衝液−２に再懸濁する（組織１ｇにつき緩衝液０．５ｍｌ）。Ｂｒａｕｎミニプライマーにより均質な懸濁液を得る。次いでこれを１００μｌずつ凍結して、ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１活性のアッセイに用いる。
【０４０７】
４．０  ＡＣＥ活性の測定
先に分取したＡＣＥがＡＣＥ特異的ペプチド基質を開裂する能力によりその活性を測定する。ブタＡＣＥ（１．２）を解凍し、ＡＣＥ緩衝液（１．６）に０．００４Ｕ／μｌで再懸濁し、これを５０μｌずつ凍結する。
４．１  ４％ＤＭＳＯ／ＡＣＥ緩衝液溶液を調製する（ＡＣＥ緩衝液９６ｍｌ中ＤＭＳＯ  ４ｍｌ）。
４．２  基質（１．７）、全生成物（１．８）および酵素（１．１、１．２、１．３）を氷上に放置して融解させる。
４．３  ５０μｌの４％ＤＭＳＯ／ＡＣＥ緩衝液溶液を各ウェルに添加する。
４．４  ２ｍＭ基質原液を１：１００希釈して、２０μＭ溶液を調製する。１００μｌの２０μＭ基質を各ウェルに添加する（アッセイにおける最終濃度１０μＭ）。
４．５  ある範囲の酵素希釈液５０μｌを添加して反応を開始する（通常は１：１００、１：２００、１：４００、１：８００、１：１６００、および１：３２００を使用）。ブランクウェルに５０μｌのＡＣＥ緩衝液を添加する。
４．６  ２ｍＭの全生成物を１：２００希釈して、１０μＭ溶液を調製する。２００μｌの１０μＭ生成物を、新たなプレートの最初の４ウェルに添加する。
４．７  プレートを振とう式インキュベーターにより３７℃で６０分間インキュベートする。
４．８  ＡＣＥ緩衝液中の２ｍＭ  ＥＤＴＡを１００μｌ添加して振とう式インキュベーターにより３７℃で２０分間インキュベートすることにより酵素反応を停止し、次いでＢＭＧ  Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｇａｌａｘｙで読み取る（ｅ×３２０／ｅｍ４２０）。
【０４０８】
５．ＡＣＥ阻害アッセイ
５．１  基質、全生成物および酵素原液を氷上に放置して融解させる。
５．２  １００％ＤＭＳＯ中に化合物原液を調製し、ＡＣＥ緩衝液中に１：２５希釈して４％ＤＭＳＯ溶液にする。以後の希釈はすべて４％ＤＭＳＯ／ＡＣＥ緩衝液溶液（ＡＣＥ緩衝液９６ｍｌ中ＤＭＳＯ  ４ｍｌ）中に行う。
５．３  ５０μｌの化合物（二重試験）を９６ウェルプレートに添加し、対照およびブランクのウェルに５０μｌの４％ＤＭＳＯ／ＡＣＥ緩衝液を添加する。
５．４  工程５．２と５．３は手動またはＰａｃｋａｒｄミニプローブロボットのいずれで実施してもよい。
５．５  ２ｍＭ基質原液をＡＣＥ緩衝液に１：１００希釈して、２０μＭ溶液を調製する（アッセイにおける最終濃度１０μＭ）（１プレートにつき、１１０μｌの２ｍＭ基質を１０．８９ｍｌの緩衝液に添加すれば十分である）。
５．６  活性検査（４．０）からの測定に従って、酵素原液をＡＣＥ緩衝液中に希釈する。
５．７  ２ｍＭの全生成物原液をＡＣＥ緩衝液に１：２００希釈して、１０μＭ溶液を調製する。２００μｌを、別のプレートの最初の４ウェルに添加する。
５．８  ０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ原液を１：２５０希釈して２ｍＭ原液を調製する（ＡＣＥ緩衝液１０．９６ｍｌにＥＤＴＡ  ４４μｌ）。
５．９  ９６ウェルプレートの各ウェルに下記の試薬を添加する：
【０４０９】
【表６】
2004522720.tif 000027
【０４１０】
５．１０  アッセイに用いる最高濃度の各化合物５０μｌを、全生成物（５．７）と同じ９６ウェルプレートに添加する（二重試験）。化合物の蛍光を測定するために、１５０μｌのＡＣＥ緩衝液を添加する。
５．１１  ＡＣＥ酵素の添加により反応を開始した後、振とう式インキュベーターにより３７℃で１時間インキュベートする。
５．１２  ２ｍＭ  ＥＤＴＡを１００μｌ添加して振とう式インキュベーターにより３７℃で２０分間インキュベートすることにより反応を停止し、次いでＢＭＧ  Ｆｌｕｏｓｔａｒ  Ｇａｌａｘｙで読み取る（ｅ×３２０／ｅｍ４２０）。
【０４１１】
６．計算
ＡＣＥ酵素活性を化合物の存在下および不存在下で測定し、％として表わす。
ＦＵ＝蛍光単位
（ｉ）対照活性％（酵素の代謝回転）：
対照の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ      ×１００
全生成物の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ
（ｉｉ）阻害薬を含む場合の活性％：
化合物の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ      ×１００
全生成物の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ
（ｉ）対照に対する％として表わした活性：
阻害薬を含む場合の活性％      ×１００
対照の活性％
または
化合物の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ    ×１００
対照の平均ＦＵ−ブランクの平均ＦＵ
（ｉｖ）阻害薬％＝１００−対照に対する％
（ｖ）蛍光化合物については、化合物を含むブランクの平均ＦＵ（５．１０）を化合物の平均ＦＵ値から演繹し、活性％の計算に用いる。
【０４１２】
Ｓ字形用量応答曲線を活性％（対照に対する％）−対−化合物濃度に当てはめ、エクセルでＬａｂＳｔａｔｓフィット曲線を用いてＩＣ50値を計算する。
本明細書で述べるＰＤＥ作用力価の値は、下記のアッセイ法により測定された：
【０４１３】
ＰＤＥ５阻害薬−試験法
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害活性
本発明に用いるのに適した好ましいＰＤＥ化合物は、有効かつ選択的なｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害薬である。サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）およびサイクリックアデノシン３’，５’−一リン酸（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ50値（酵素活性の５０％阻害に必要な化合物濃度）の測定により判定できる。
【０４１４】
必要なＰＤＥ酵素は、ヒト海綿体、ヒトおよびウサギ血小板、ヒト心室、ヒト骨格筋ならびにウシ網膜を含めた多様な供給源から、本質的にＷ．Ｊ．ＴｈｏｍｐｓｏｎおよびＭ．Ｍ．Ａｐｐｌｅｍａｎ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７１，１０，３１１）の方法により単離できる。特にｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ５）およびｃＧＭＰ阻害ｃＡＭＰ  ＰＤＥ（ＰＤＥ３）をヒト海綿体組織、ヒト血小板またはウサギ血小板から；ｃＧＭＰ刺激ＰＤＥ（ＰＤＥ２）をヒト海綿体から；カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ（ＰＤＥ１）をヒト心室から；ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ４）をヒト骨格筋から；光受容体ＰＤＥ（ＰＤＥ６）をウシ網膜から得ることができる。ホスホジエステラーゼ７〜１１は、ＳＦ９細胞中へトランスフェクションした全長ヒト組換えクローンから産生できる。
【０４１５】
アッセイはＷ．Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７９，１８，５２２８）の”バッチ”法の改変により、またはＡｍｅｒｓｈａｍ社が製品コードＴＰＫＱ７０９０／７１００に記載したプロトコルの改変を用いるＡＭＰ／ＧＭＰ直接検出のためのシンチレーションプロキシミティアッセイ法により実施できる。要約すると、一定量の酵素を種々の濃度の阻害薬およびＩＣ50がほぼＫiとなるような低基質（ｃＧＭＰまたはｃＡＭＰ、非標識：［3Ｈ］−標識比３：１、濃度約１／３Ｋm）の存在下でアッセイすることにより、ＰＤＥ阻害薬の効果を調べた。アッセイ緩衝液［２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，５ｍＭのＭｇＣｌ2，１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン］により最終アッセイ体積を１００μｌに調整した。酵素により反応を開始し、＜３０％の基質代謝回転が得られるように３０℃で３０〜６０分間インキュベートし、５０μｌのケイ酸イットリウムＳＰＡビーズで反応停止した（ＰＤＥ９および１１については３ｍＭの各非標識サイクリックヌクレオチドを含有）。プレートを再シールし、２０分間振とうした後、暗所でビーズを３０分間沈降させ、次いでＴｏｐＣｏｕｎｔプレート読取り器（Ｐａｃｋａｒｄ、コネチカット州メリデン）により計数した。放射能単位を非阻害対照（１００％）に対する活性％に換算し、阻害薬濃度に対してプロットし、”フィット曲線”マイクロソフト、エクセルエクステンションにより阻害薬のＩＣ50値を求めた。
【０４１６】
機性アッセイ
これは、本発明化合物がニトロプルシッドナトリウム誘発した前収縮ウサギ海綿体組織片の弛緩を本発明化合物が増強する能力を、Ｓ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９６，１１８（ｓｕｐｐｌ．），抄録１５３Ｐ）が記載したものに基づく方法に従って測定することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価できる。
【０４１７】
以上の説明に述べた刊行物すべてを本明細書に援用する。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、ここに記載した本発明方法および系を種々に改変および変更できることは当業者に自明であろう。本発明を特定の好ましい態様について記載したが、本発明がこれらの具体的態様に限定されないことを理解すべきである。実際に、本発明を実施するための本明細書に記載した様式の種々の改変が当業者に自明であり、これらも本発明に含まれるものとする。
【０４１８】
特許に含まれる化合物であって本発明に使用できる化合物を引照する場合、クレーム（特にクレーム１）および具体例に定められた化合物を意味する。
図面を参照して本発明を実施例によりさらに詳細に記載する。
【０４１９】
図１は、ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニストＢＩＢＰ３２２６（１〜１００μｇ／ｋｇ、静脈内）が麻酔したウサギにおいて刺激時に海綿体内圧（ＩＣＰ）に及ぼす効果を示す（*Ｐ＜０．０５、スチューデントＴ検定）。
【０４２０】
図２は、ＰＤＥ５阻害薬が麻酔したウサギにおいて刺激時に海綿体内圧（ＩＣＰ）に及ぼす効果を示す。データは対照上昇を超えるＩＣＰ上昇率％で表わされる（*Ｐ＜０．０１、対照上昇と比較した対合なしスチューデントＴ検定）。
【０４２１】
図３は、ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニストＢＩＢＰ３２２６（０．０３〜０．３ｍｇ／ｋｇ）が麻酔したウサギにおいて平均動脈血圧に及ぼす作用を示す。平均動脈血圧値を平均±ｓ．ｅ．平均として表わす（ｎ＝３）。淡灰色の棒は薬物投与前の基礎平均動脈血圧を表わし、濃灰色の棒はＢＩＢＰ３２２６投与後の平均動脈血圧を表わす。白色の棒はビヒクル対照を表わす。
【０４２２】
図４は、ヒト神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）ヌクレオチド配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１）を示す。
図５は、ヒトＮＰＹ  Ｙ１受容体ヌクレオチド配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２）を示す。
【０４２３】
図６は、ヒトＮＰＹ  Ｙ２受容体ヌクレオチド配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３）を示す。
図７および８は、ヒトＳＥＰをコードするヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）（それぞれＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５）を示す。ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５は、５’および３’側部分ベクター配列を含む。
【０４２４】
図９は、ヒトＳＥＰタンパク質のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６）を示す。
図１０は、ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニス、ＰＤＥ５阻害薬、およびＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニスとＰＤＥ５阻害薬の組合わせが、麻酔したウサギにおいて刺激時に海綿体内圧（ＩＣＰ）に及ぼす効果を示す。データは対照上昇を超えるＩＣＰ上昇率％で表わされる
【０４２５】
実施例
１．０  方法
１．１  動物試験法
１．１．１  麻酔ウサギ法
雄ニュージーランドウサギ（約２．５ｋｇ）に、マスクによる酸素供給を維持しながらメデトミジン（Ｄｏｍｉｔｏｒ（登録商標））０．５ｍｌ／ｋｇ（筋肉内）およびケタミン（Ｖｅｔａｌａｒ（登録商標））０．２５ｍｌ／ｋｇ（筋肉内）の組合わせを前投薬した。これらのウサギをＰｏｒｔｅｘ（商標）カフなし気管内チューブ３ＩＤにより気管切開し、人工呼吸器に接続し、呼吸数３０〜４０回／分の換気速度、約１８〜２０ｍｌの換気体積、および１０ｃｍＨ2Ｏの最大気道圧を維持した。次いで麻酔をイソフルランに切り換え、２ｌ／分Ｏ2で換気を続けた。右辺縁耳静脈に２３Ｇまたは２４Ｇカテーテルを挿管し、乳酸加リンゲル液を０．５ｍｌ／分で潅流した。侵襲性外科処置中はウサギを３％イソフルランに維持し、維持麻酔のために２％に低下させた。左頚静脈を露出させ、分離し、次いで薬物および化合物の注入のためにＰＶＣカテーテル（１７Ｇ）を挿管した。
【０４２６】
ウサギの左鼠径部を剃毛し、大腿に沿って長さ約５ｃｍの縦切開を行った。大腿静脈および動脈を露出させ、分離し、次いで薬物および化合物の注入のためにＰＶＣカテーテル（１７Ｇ）を挿管した。大腿動脈について挿管を繰り返し、カテーテルが確実に腹部大動脈に達するようにカテーテルを深さ１０ｃｍまで挿入した。この動脈カテーテルを血圧測定のためにＧｏｕｌｄシステムに接続した。血液ガス分析用試料もこの動脈カテーテルから採取した。収縮期および拡張期血圧を測定し、次いで式（拡張期血圧×２＋収縮期血圧）÷３により平均動脈血圧を計算した。パルス酸素濃度計およびＰｏ−ｎｅ−ｍａｈデータ取得ソフトウェアシステム（Ｐｏｎｅｍａｈ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｇｏｕｌｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により心拍数を測定した。
【０４２７】
腹腔に達する腹側正中線切開を行った。切開は陰部のすぐ上、長さ約５ｃｍであった。脂肪と筋肉を慎重に切り開いて、体腔を下降する下腹神経を露出させた。陰部上方にある大腿静脈および動脈の損傷を避けるために、陰部壁の側部彎曲に接近した状態を維持することが必須であった。坐骨神経および骨盤神経はこれより深い位置にあり、ウサギの背面をさらに切開した後にあった。坐骨神経を確認すると、骨盤神経は容易に見つかった。骨盤神経という用語はおおまかに適用される；これに関する解剖学の書籍にはこの神経について十分には記載されていない。しかしこの神経を刺激すると、海綿体内圧および海綿体血流、ならびに骨盤領域の神経支配が増大する。骨盤神経を周囲組織からはずし、Ｈａｒｖａｒｄ双極刺激電極を神経の周囲に取り付けた。神経をわずかに持ち上げて若干の張力を付与し、次いで電極を固定した。約１ｍｌの軽パラフィン油を神経と電極の周囲に置いた。これは神経に対して保護潤滑剤として作用し、かつ電極の血液汚染を防ぐ。電極をＧｒａｓｓ  Ｓ８８刺激装置に接続した。骨盤神経を下記のパラメーターにより刺激した：−５Ｖ、パルス幅０．５ｍｓ、刺激持続時間２０秒、周波数１６Ｈｚ。この神経を１５〜２０分毎に刺激した場合、再現性のある応答が得られた。上記パラメーターによる数回の刺激を行って、平均対照応答を確立した。頚静脈からＨａｒｖａｒｄ２２注入ポンプを用いて被験化合物を注入し、連続１５分間の刺激サイクルを得た。陰茎周囲の皮膚および結合組織を取り除いて陰茎を露出させた。白膜を通して左海綿体腔内へカテーテルセット（Ｉｎｓｙｔｅ−Ｗ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ２０ゲージ、１．１×４８ｍｍ）を挿入し、針を取り出し、軟質カテーテルを残留させた。このカテーテルを、圧変換器（Ｏｈｍｅｄａ  ５２９９−０４）を介してＧｏｕｌｄシステムに接続し、海綿体内圧を記録した。海綿体内圧が確立すると、カテーテルをＶｅｔｂｏｎｄ（組織接着剤、３Ｍ）によりその場にシールした。パルス酸素濃度計およびＰｏ−ｎｅ−ｍａｈデータ取得ソフトウェアシステム（Ｐｏｎｅｍａｈ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｇｏｕｌｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により心拍数を測定した。
【０４２８】
Ｐｏ−ｎｅ−ｍａｈデータ取得ソフトウェアシステム（Ｐｏｎｅｍａｈ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｇｏｕｌｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）によりＦｌｏｗｎｍｅｔｅｒから数値として直接に、またはＧｏｕｌｄチャート記録計トレースから間接的に、海綿体血流を記録した。実験開始時に目盛定めを行った（０〜１２５ｍｌ／分／１００ｇ組織）。ＮＰＹ阻害薬を塩類溶液＋１０％１Ｍ  ＮａＯＨ中に調製し、ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬を塩類溶液＋５％１Ｍ  ＨＣｌ中に調製した。これらの阻害薬およびビヒクル対照を０．１ｍｌ／秒の速度で注入した。神経刺激前に、ＮＰＹ阻害薬およびＰＤＥcAMP阻害薬を１５分間放置した。
【０４２９】
すべてのデータを平均±ｓ．ｅ．平均として報告する。有意の変化をスチューデントｔ検定により確認した。
【０４３０】
２．０  結果と考察
２．１  ＮＰＹ受容体アンタゴニスト
陰茎勃起、すなわち陰茎血流増加および海綿体内圧上昇の生理を模倣した多数の麻酔した勃起動物モデルがある。性的刺激作用は、陰茎を支配する骨盤神経の刺激により模倣される。これが、勃起機序を研究し、ＭＥＤの処置に用いる有効な療法薬を評価するためのメカニズムである。
【０４３１】
本発明により、選択的ＰＤＥ５阻害薬、たとえばシルデナフィルが動物モデルにおいて神経刺激による海綿体内圧（ＩＣＰ）を上昇させること、および神経刺激は男性における勃起プロセスを模倣することが確立された（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｔｒａｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｏｍｏｔｅ，１９９９；Ｗａｌｌｉｓ，１９９９）。このＰＤＥ５阻害薬誘発によるＩＣＰ上昇は、ＰＤＥ５阻害薬の作用機序の特徴であり、シルデナフィルのような薬剤がＭＥＤまたはインポテンスに関連する弛緩欠乏を克服する様式を説明する。これら従来の研究と一致して、以下の実施例は、麻酔ウサギに選択的ＰＤＥ５阻害薬を静脈内投与すると神経刺激によるＩＣＰ上昇を増強することを証明した（実施例２）。
【０４３２】
以下の実施例は、ＮＰＹ受容体阻害薬である選択的ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニスト（ＢＩＢＰ３２２６）が麻酔ウサギにおいて用量依存性で神経刺激による海綿体内圧上昇を増強することを証明する（実施例１）。ＮＰＹアンタゴニストについて、この試験で用いた用量で、ＰＤＥ５阻害薬についてみられた（実施例２）と同様な勃起プロセス増強がみられた。これらの例は、勃起プロセスを増強するために、したがってＭＥＤの処置のために、ＮＰＹ受容体アンタゴニスト療法を適用できることを強調する。
【０４３３】
ＮＰＹまたはＮＰＹ  Ｙ１受容体とＰＤＥ５受容体の同時阻害によって、同一用量の同一ＰＤＥ５阻害薬単独により達成されるより顕著なＩＣＰまたは勃起プロセスの増強が得られた。本発明者らはウサギ勃起モデルを用いて、ＰＤＥ５阻害薬により誘発されたＩＣＰ増強をＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストの共投与によりさらに増強しうることを証明できる。１ｍｇ／ｋｇ（静脈内）のＰＤＥ５阻害薬で、ＩＣＰの最大増強がみられた。ＩＣＰをこの最大ＰＤＥ５阻害薬仲介よりさらに増強できるという所見は全く予想外であった。これは、ＰＤＥ５阻害薬とＮＰＹ  Ｙ１受容体阻害薬の共投与には、ＰＤＥ５阻害薬療法単独に優る多数の臨床的利点があることを示す。これらの利点には、ＰＤＥ５阻害薬療法に応答しないＭＥＤサブグループ処置の効果および機会が増すことが含まれる。
【０４３４】
ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストおよびＰＤＥ５またはこれら２種類の組合わせは、刺激されていないＩＣＰには有意の効果をもたない。すなわちそれらは、性的誘導／覚醒のない状態では直接にＩＣＰ上昇を誘発しない。これはきわめて有利である。作動するために性的刺激を必要とする他の唯一の市販ＭＥＤ療法薬はシルデナフィルであり、本発明はシルデナフィルおよび他のＰＤＥ５単独ベースの薬物に代わる有用な経口療法薬を提供するからである。
【０４３５】
ＮＰＹｉ−動物モデル実施例
実施例１〜６で用いた化合物：
ＮＰＹ受容体アンタゴニスト：ＢＩＢＰ３２２６
【０４３６】
【表７】
2004522720.tif 000028
【０４３７】
ＢＩＢＰ３２２６はヒト天然ＮＰＹ  Ｙ１に対して７ｎＭのＩＣ50をもち、ＮＰＹ  Ｙ５（ヒト）よりＮＰＹ  Ｙ１（ヒト）に対する選択性は１０００を超え、ＮＰＹ  Ｙ２（ヒト）よりＮＰＹ  Ｙ１に対する選択性は１０００を超える（Ｒｕｄｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）およびＪａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）参照）。
【０４３８】
ＰＤＥ５ｉ：３−エチル−５−｛５−（４−エチルピペラジノ）スルホニル−２−プロポキシフェニル｝−２−（ピリジンメチル）−６，７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン：３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（ＷＯ９８／４９１０６６参照）。ヒト天然ＰＤＥ５に対するＩＣ50は１．１ｎＭであり、ＰＤＥ３よりＰＤＥ５（両方とも天然ヒト）に対する選択性は９０，０００を超え、ＰＤＥ４よりＰＤＥ５に対する選択性は１８，５４５を超える。
【０４３９】
引用した力価および選択性の数値はすべてヒト天然酵素に関するものである（本明細書中のアッセイ法を参照）。
【０４４０】
実施例１．ＮＰＹ  Ｙ１受容体の阻害は麻酔したウサギ勃起モデルにおいて神経刺激による海綿体内圧上昇を用量依存性で増強する
神経刺激により誘発された最大下海綿体内圧（ＩＣＰ）上昇は、漸増量の選択的ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニスト（ＢＩＢＰ３２２６）（静脈内ボーラス）の存在下で有意に増強された。この増強は３０μｇ／ｋｇ以上で有意になった。最大増強（約１２７％）は３０μｇ／ｋｇでみられた。対照刺激による上昇と比較した上昇率（％）としてデータを表わす。数値は平均±ｓ．ｅ．平均として表わされる。*Ｐ＜０．０５、対照上昇と比較した対合なしスチューデントｔ検定（図１参照）。
基礎／非刺激海綿体内圧に対しては、目立ったＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストの効果はなかった。
【０４４１】
実施例２．ＰＤＥ５阻害は麻酔したウサギ勃起モデルにおいて陰茎勃起に対するＰＤＥ５阻害薬の有効性を有意に増強する
選択的ＰＤＥ５阻害薬（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与は、神経刺激によるＩＣＰ上昇を対照上昇と比較して有意に増強した（１３３±２２％）。対照上昇を超えるＩＣＰ上昇率（％）としてデータを表わす。数値は平均±ｓ．ｅ．平均として表わされる。*Ｐ＜０．０１、対照上昇と比較した対合なしスチューデントｔ検定（図２参照）。
基礎／非刺激海綿体内圧に対しては、ＰＤＥ５阻害の効果はなかった。
【０４４２】
実施例３．海綿体内圧を上昇させる薬剤が麻酔ウサギにおいて平均動脈血圧に及ぼす作用
雄性性的機能障害、たとえばＭＥＤを処置するための新規療法を探査する際には、付随する有害な心臓血管作用、たとえば血圧または心拍数に対する作用のないことが望ましい。本発明者らの研究で、ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストＢＩＢＰ３２２６（０．０３〜０．３ｍｇ／ｋｇ）は、骨盤神経刺激による海綿体内圧上昇を増強したのと同様な用量で血圧または心拍数に対して実質的な作用のないことが見出された。
ＢＩＢＰ３２２６（選択的ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニスト）の静脈内投与は、麻酔したウサギ陰茎勃起モデルにおいて平均動脈血圧に対する実質的な作用をもたなかった。図３に示すグラフは、ＢＩＢＰ３２２６が麻酔ウサギにおいて骨盤神経刺激による海綿体内圧上昇を増強した用量で平均動脈血圧に対して有意の作用をもたないことを証明する。平均動脈血圧値（ＭＡＰ）を平均±ｓ．ｅ．平均として表わす（ｎ＝３）。淡灰色の棒は薬物投与前の基礎ＭＡＰを表わし、濃灰色の棒はＢＩＢＰ３２２６静脈内投与後のＭＡＰを表わす。白色の棒はビヒクル対照を表わす。*Ｐ＜０．０５、対照上昇と比較した対合なしスチューデントｔ検定。
【０４４３】
実施例４．ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストは麻酔したウサギ勃起モデルにおいてＰＤＥ５阻害薬が陰茎勃起を高める効果を有意に増強する
選択的ＰＤＥ５阻害薬（１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与は、神経刺激によるＩＣＰ上昇を対照上昇と比較して有意に１３３％増強した（実施例２参照）。ＢＩＢＰ３２２６の静脈内投与（選択的ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニスト、１００μｇ／ｋｇ）は、神経刺激によるＩＣＰ上昇を対照上昇と比較して有意に１１０％増強した（実施例２参照）。ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニスト仲介による上昇が持続した時点で、選択的ＰＤＥ５阻害薬（１ｍｇ／ｋｇ）を共投与すると、神経刺激によるＩＣＰ上昇をさらに増強して最大上昇率３５０％にした（図１０参照）。この増強度は、ＮＰＹ  Ｙ１アンタゴニストとＰＤＥ５阻害薬の併用について予想したものより大きいことが分かる（すなわち、３５０％と比較して、１３３％＋１１０％＝２４３％）。データは対照上昇を超えるＩＣＰ上昇率％として表わされる。
ＰＤＥ５阻害または組合わせＰＤＥ５阻害／ＮＰＹ  Ｙ１拮抗は、基礎／非刺激海綿体内圧に対して目立った作用を示さなかった。
【０４４４】
実施例５．ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストは麻酔したウサギ勃起モデルにおいてＰＤＥ５阻害薬の勃起効果を増強し、ＰＤＥ５阻害薬の作用開始を促進する
初期の研究で、ＮＰＹ  Ｙ１受容体アンタゴニストは麻酔したウサギモデルにおいてＰＤＥ５阻害薬の効果を有益に増強し、ＰＤＥ５阻害薬の作用開始を促進することが示唆された。
【０４４５】
【化２０】
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【０４４６】
【化２１】
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【０４４７】
【化２２】
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【０４４８】
【化２３】
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【０４４９】
略号
ｃＡＭＰ＝サイクリックアデノシン３’，５’−一リン酸
ｃＧＭＰ＝サイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸
ＰＤＥ＝ホスホジエステラーゼ
ＰＤＥcGMP＝ｃＧＭＰ加水分解性ＰＤＥ
ＰＤＥｉ＝ＰＤＥの阻害薬（Ｉ：ＰＤＥとしても知られる）
ＰＤＥ５＝ホスホジエステラーゼ５型
ＰＤＥ５ｉ＝ＰＤＥ５の阻害薬
ＮＰＹ＝神経ペプチドＹ
ＮＰＹｉ＝ＮＰＹの阻害薬
ＮＰＹ  Ｙ１＝神経ペプチドＹ  Ｙ１受容体
ＮＰＹ  Ｙ１ｉ＝ＮＰＹ  Ｙ１の阻害薬
ｋＤａ＝キロダルトン
ｂｐ＝塩基対
ｋｂ＝キロ塩基対
【図面の簡単な説明】
【０４５０】
【図１】グラフを示す。
【図２】グラフを示す。
【図３】グラフを示す。
【図４】ヌクレオチド配列を示す。
【図５】ヌクレオチド配列を示す。
【図６】ヌクレオチド配列を示す。
【図７】ヌクレオチド配列を示す。
【図８】ヌクレオチド配列を示す。
【図９】ヌクレオチド配列を示す。
【図１０】グラフを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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