(57)【要約】【課題】本発明は、工業的規模においても、簡便で純度が高い、３−キヌクリジノールの精製方法を提供することを課題とする。【解決手段】本発明に係る３−キヌクリジノールの精製方法は、下記工程を含む；（ｉ）３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物から、抽出溶媒Ｉで３−キヌクリジノールを抽出し、３−キヌクリジノールが溶解した抽出溶媒層Ｉを得る工程、（ｉｉ）前記抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換する工程。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程を含む３−キヌクリジノールの精製方法；
（ｉ）３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物から、抽出溶媒Ｉで３−キヌクリジノールを抽出し、３−キヌクリジノールが溶解した抽出溶媒層Ｉを得る工程、
（ｉｉ）前記抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換する工程。
【請求項２】
抽出溶媒ＩＩに対する３−キヌクリジノールの溶解度が、抽出溶媒Ｉに対する３−キヌクリジノールの溶解度よりも小さいことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抽出溶媒Ｉがｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールおよびｎ−ペンタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種であり、
前記抽出溶媒ＩＩがベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、２−メチル−４−ペンタノンおよび酢酸ブチルからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記工程（ｉ）の後、工程（ｉｉ）の前に、下記工程(a)および(b)を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法；
(a)前記抽出溶媒層Ｉを水洗したのち、該抽出溶媒層Ｉを共沸脱水し、抽出溶媒層Ｉを濃縮する工程、
(b)析出した水溶性不純物を濾過する工程。
【請求項５】
前記工程(a)において、水洗を、水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カリウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液または炭酸水素ナトリウム水溶液で行う、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物が、生物学的触媒によって得られたものである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記工程（ｉｉ）において、系内の溶媒の留出速度に合わせて抽出溶媒層ＩＩを添加する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記工程（ｉｉ）において、前記抽出溶媒Ｉが１．０％（抽出溶媒Ｉ／ＩＩ（ｖ／ｖ））以下の量になるまで、抽出溶媒ＩＩの添加および系内の溶媒の留出を行う、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−キヌクリジノールの精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
３−キヌクリジノール、特にその光学異性体は医薬品中間体として有用である。従来、３−キヌクリジノールの製造方法としては、ラセミ体を光学分割する方法（非特許文献１、特許文献９）、対応するケトンやエステルから、微生物や酵素などの生物学的触媒を用いる方法（特許文献１〜７）あるいは不斉金属触媒を用いて不斉還元する方法（特許文献８）などが知られている。このうち、生物学的触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法は、高い光学純度、簡便な反応条件の点で工業的に特に有用である。
【０００３】
製造工程により得られた３−キヌクリジノールの精製方法として、前記特許文献１には、最終的にカラムクロマトグラフィーを用いる方法が記載されているが、カラムクロマトグラフィーによる精製は工業的な生産規模（たとえばｋｇ単位あるいはｔ単位）で３−キヌクリジノールを製造する場合には適さない。また、生物学的触媒により得られた３−キヌクリジノールを塩酸塩化する溶媒抽出法も知られている（特許文献２）。しかし、該文献に開示の方法は抽出工程が多く、精製に時間がかかるとともに煩雑であり、実験室規模で精製する程度であれば大きな問題は生じないものの工業化するには適当ではなかった。また、塩酸塩化のために濃塩酸を添加するので、精製容器の腐食の進行が早くなるという問題があった。
【０００４】
また、塩酸による腐食を避けるために、精製容器として、グラスライニングなどの耐塩酸装置を使用することもできるが、アルカリに弱く、３−キヌクリジノールを水層から抽出する際には、その抽出効率を上げるために、強アルカリ条件下で抽出することが必要であるが、グラスが腐食するという問題がある。さらに、ステンレスと比べて、熱伝導率が悪く、効率的ではない。
【０００５】
溶媒抽出のみによる精製方法も知られているが工業的規模で使用するには十分な純度が得られず、あるいは、溶媒添加による晶析あるいは再結晶による精製方法も知られているが、大量製造には適さない。（特許文献３〜１０）
【０００６】
【特許文献１】特開平１１−１９６８９０号公報
【特許文献２】特開２００３−２３０３９８号公報
【特許文献３】米国特許第５，２１５，９１８号
【特許文献４】特開平１０−２１０９９７号公報
【特許文献５】特開平１０−１３６９９５号公報
【特許文献６】特開平１０−２４３７９５号公報
【特許文献７】特開２０００−２４５４９５号公報
【特許文献８】特開平９−１９４４８０号公報
【特許文献９】ドイツ特許出願１９７１５４６５号公報
【特許文献１０】特開２０００−１５３２９３号公報
【非特許文献１】Acta Pharm. Suec.16(4),281-3(1979)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
このため、本願発明者らは、工業的に適した３−キヌクリジノールの精製方法を検討した。具体的には、従来から行われている特許文献２に記載の方法をより短縮化するとともに塩酸塩化せずにフリー体を直接取り出す方法を検討した。その結果、本願明細書の参考例１にも記載のように、二種の溶媒により複数回にわたって蒸留操作を繰り返して溶媒置換を行って３−キヌクリジノールを晶析・精製する方法を見出した。
【０００８】
この方法によれば、濃塩酸の使用を除去し工程の短縮化を図ることができる。しかし塩酸塩化の過程で除かれていた不純物が残留し、得られる３−キヌクリジノールに褐色異物として混入してしまうという問題が生じた。また、当該方法では、溶媒置換の最中に容器の壁面に結晶が付着（スケーリング）し、収率の低下を招くとともに、該スケーリングを掻き取る手間が生じるという問題も生じた。
【０００９】
すなわち、本発明は、工業的規模においても、簡便で純度が高い、３−キヌクリジノールの精製方法を提供することを課題とする。より詳細には、生物学的触媒により得られる３−キヌクリジノールにもより有効に適用可能な精製方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討し、３−キヌクリジノールが溶解した抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換することにより、不純物が低減された高純度な３−キヌクリジノールの精製物を簡便に得ることができることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下を含む。
【００１１】
〔１〕下記工程を含む３−キヌクリジノールの精製方法；
（ｉ）３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物から、抽出溶媒Ｉで３−キヌクリジノールを抽出し、３−キヌクリジノールが溶解した抽出溶媒層Ｉを得る工程、
（ｉｉ）前記抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換する工程。
〔２〕抽出溶媒ＩＩに対する３−キヌクリジノールの溶解度が、抽出溶媒Ｉに対する３−キヌクリジノールの溶解度よりも小さいことを特徴とする〔１〕に記載の方法。
〔３〕前記抽出溶媒Ｉがｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールおよびｎ−ペンタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種であり、前記抽出溶媒ＩＩがベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、２−メチル−４−ペンタノンおよび酢酸ブチルからなる群から選ばれる少なくとも１種である、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕前記工程（ｉ）および（ｉｉ）の間に、下記工程(a)および(b)を含む、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の方法；
(a)前記抽出溶媒層Ｉを水洗したのち、該抽出溶媒層Ｉを共沸脱水し、抽出溶媒層Ｉを濃縮する工程、
(b)水溶性不純物を濾過する工程。
〔５〕前記工程(a)において、水洗を、水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カリウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液または炭酸水素ナトリウム水溶液で行う、〔４〕に記載の方法。
〔６〕前記３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物が、生物学的触媒を用いる３−キヌクリジノールにより得られた、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕前記工程（ｉｉ）において、系内の溶媒の留出速度に合わせて抽出溶媒層ＩＩを添加する、〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕前記工程（ｉｉ）において、前記抽出溶媒Ｉが１．０％（抽出溶媒Ｉ／ＩＩ（ｖ／ｖ））以下の量になるまで、抽出溶媒ＩＩの添加および系内の溶媒の留出を行う、〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の方法。
【００１２】
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明に係る３−キヌクリジノールの精製方法は、下記の工程を含む。
（ｉ）３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物から、抽出溶媒Ｉで３−キヌクリジノールを抽出し、３−キヌクリジノールが溶解した抽出溶媒層Ｉを得る工程、
（ｉｉ）前記抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換する工程。
【００１３】
粗反応生成物
前記反応工程（ｉ）に適用する３−キヌクリジノールの粗反応生成物は、いずれの製造方法により得られたものでもよく特に限定されない。たとえば、３−キヌクリジノールを得る方法としては、ラセミ体を光学分割する方法、対応するケトンやエステルを原料として、微生物や酵素などの生物学的触媒あるいは金属触媒を用いてアルコールに還元する方法などが挙げられる。
このうち、生物学的触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法においては、得られる３−キヌクリジノールの粗反応生成物に不純物が多く含まれうるため、特に本発明の精製方法の適用が有効である。
【００１４】
ここで前記生物学的触媒とは、対応するケトンまたはエステルから３−キヌクリジノールを生成することのできる微生物菌体、菌体培養液、菌体処理物または精製酵素等を意味する。
【００１５】
生物学的触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法としては、たとえば、３−キノクリジノンに、該３−キノクリジノンを還元（あるいは不斉還元）する能力を有する微生物菌体、菌体培養液、菌体処理物または精製酵素等の生物学的触媒を作用させて、３−キヌクリジノールを得る方法が挙げられる。あるいは３−キヌクリジノールエステルに、該３−キヌクリジノールエステルを加水分解（あるいは立体選択的加水分解）する能力を有する微生物菌体、菌体培養液、菌体処理物または精製酵素等の生物学的触媒を作用させて、３−キヌクリジノールを得る方法が挙げられる。これらの３−キヌクリジノールは光学活性体でもラセミ体でもいずれでもよい。このような生物学的触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法は、具体的にはたとえば特許文献１〜７などに記載の方法が挙げられる。
【００１６】
前記金属触媒としては、対応するケトンまたはエステルから３−キヌクリジノールを生成することのできる触媒が挙げられる。金属触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法としては、たとえば、３−キノクリジノンに、該３−キノクリジノンを還元（あるいは不斉還元）する能力を有する金属触媒を作用させて、３−キヌクリジノールを得る方法が挙げられる。あるいは３−キヌクリジノールエステルに、該３−キヌクリジノールエステルを加水分解（あるいは立体選択的加水分解）する能力を有する金属触媒、酸触媒、塩基触媒を作用させて、３−キヌクリジノールを得る方法が挙げられる。これらの３−キヌクリジノールは光学活性体でもラセミ体でもいずれでもよい。金属触媒としては、特に限定はないが、たとえばメタロセン触媒、ルテニウム触媒などが挙げられる。このような金属触媒を用いる３−キヌクリジノールの製造方法は、具体的にはたとえば特許文献８などに記載の方法が挙げられる。
【００１７】
本発明で用いる前記粗反応生成物とは、たとえば前記のような製造工程を通して得られた３−キヌクリジノールを含む反応生成物のうち、工程（ｉ）の前の段階の反応生成物を意味する。たとえば、生物学的触媒によって得られた３−キヌクリジノールを用いる場合、生物学的触媒反応により得られた反応液を、必要に応じて、除菌、ＵＦ膜処理、ｐＨ調整して得られる溶液（好ましくは水溶液）を工程（ｉ）に適用する粗反応生成物として用いることが好ましい。
【００１８】
抽出溶媒Ｉ、抽出溶媒ＩＩ
本発明では、３−キヌクリジノールを含む抽出溶媒層Ｉに抽出溶媒ＩＩを添加しながら系内の溶媒を留出させる。ここで明細書中「系内」とは、３−キヌクリジノール、抽出溶媒ＩおよびＩＩが含まれた蒸留缶内を意味する。前記系内の溶媒は抽出溶媒Ｉ、抽出溶媒ＩＩを含む。また「留出」とは、蒸留によって成分を取り出すことを意味する。
【００１９】
前記抽出溶媒Ｉおよび抽出溶媒ＩＩは、それぞれ３−キヌクリジノールを溶解しうる有機溶媒であり、３−キヌクリジノールよりも低沸点であればよい。抽出溶媒Ｉと抽出溶媒ＩＩとの沸点の関係に特に限定はないが、留出しながら最終的に抽出溶媒ＩＩに溶媒を置換するため、抽出溶媒ＩＩは抽出溶媒Ｉより高沸点であることが好ましい。このような沸点差であると、３−キヌクリジノールの抽出溶媒Ｉから抽出溶媒ＩＩへの置換効率が向上する。
【００２０】
また、３−キヌクリジノールの抽出溶媒Ｉに対する溶解度（30℃における溶解度）は、抽出溶媒ＩＩに対する溶解度（30℃における溶解度）より大きいことが好ましい。より具体的には、前記抽出溶媒Ｉに対する３−キヌクリジノールの溶解度（30℃における溶解度）と、前記抽出溶媒ＩＩに対する３−キヌクリジノールの溶解度（30℃における溶解度）との比（抽出溶媒Ｉ／抽出溶媒ＩＩ）が、好ましくは１０以上、さらに好ましくは４０以上、特に好ましくは６０〜１００である。このような溶解度であると、３−キヌクリジノールの回収率が向上し、また使用する溶媒量も少なくてすむ。
【００２１】
先の条件を満たす溶媒であれば、使用に制限はないが、前記抽出溶媒Ｉとしては、より具体的には、たとえば、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノールなどが挙げられ、このうちｎ−ブタノールが好ましい。前記抽出溶媒ＩＩとしては、より具体的には、たとえば、ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、２−メチル−４−ペンタノン、酢酸ブチルなどが挙げられ、このうち、キシレンまたはトルエンが好ましく、キシレンがさらに好ましい。キシレンとしては、混合キシレン、o−キシレン、ｐ−キシレン、ｍ−キシレンが挙げられる。
【００２２】
前記抽出溶媒ＩおよびＩＩの好ましい組み合わせとしては、ｎ−ブタノール、キシレンの組み合わせが挙げられる。
【００２３】
このような抽出溶媒を用いると、留出を効率よく実施できるとともに、３−キヌクリジノールの抽出溶媒Ｉから抽出溶媒ＩＩへの置換効率も高い。また、スケーリングがなく、連続的な溶媒置換工程における３−キヌクリジノールの晶析を効率よく実施できる。
【００２４】
工程（ｉ）、工程（ｉｉ）、工程(a)、工程(b)
工程（ｉ）は、前記３−キヌクリジノールを含む粗反応生成物から、抽出溶媒Ｉで３−キヌクリジノールを抽出する工程であるが、その抽出方法に特に限定はなく、前記粗反応生成物と同量程度の抽出溶媒Ｉで、好ましくは１回〜数回抽出し、３−キヌクリジノールを含む抽出溶媒層Ｉを得ることができる。
【００２５】
水溶液から抽出する際は、液のｐＨをアルカリ性にすることで、抽出効率を上げることができる。ここでアルカリ性とは、ｐＨが好ましくは８〜１３であることをいい、より好ましくは９〜１２、さらに好ましくは１１〜１２にする。
【００２６】
工程（ｉ）の後、工程（ｉｉ）の前に、下記の（a）および（b）の工程を行ってもよい。
(a)前記抽出溶媒層Ｉを水洗したのち、該抽出溶媒層Ｉを共沸脱水し、抽出溶媒層Ｉを濃縮する工程、
(b)水溶性不純物を濾過する工程。
【００２７】
工程(a)において、抽出溶媒層Ｉの水洗は、水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カリウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液または炭酸水素ナトリウム水溶液で行うことができる。このうち、塩化ナトリウム水溶液を用いることが好ましい。水洗の後、好ましくは、抽出溶媒層Ｉを共沸脱水して除水および抽出溶媒層Ｉの濃縮を行う。共沸脱水による濃縮は、３−キヌクリジノールが溶けている範囲でできるだけ高濃度とするほうが溶媒置換の効率が高く、２０〜３０重量％（溶液全体に対する割合）の濃度となるまで行うことが好ましい。
【００２８】
工程(a)における共沸脱水の温度は、用いる抽出溶媒層Ｉの種類にもよるが、好ましくは４０〜７０℃程度の温度範囲で行う。このような温度で行うと、含まれる不純物が熱によってタール状となったり、着色の原因となることもなく、水溶性不純物を析出させながら共沸脱水することができる。析出した水溶性不純物は濾過して除去することができる。
【００２９】
このような工程(a)、(b)を組み込むことにより、スケーリングの低減及び不純物の低減が図られ、３−キヌクリジノールの収率を向上させることができる。
【００３０】
前記工程（ｉｉ）は、前記抽出溶媒層Ｉに、抽出溶媒Ｉと異なる抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させ、溶媒層を抽出溶媒層Ｉから抽出溶媒層ＩＩに連続的に置換する工程である。
【００３１】
工程（ｉｉ）で用いる抽出溶媒層Ｉは、上記(a)および(b)を行う場合は、工程(b)を経て得られる濾液である。
このような抽出溶媒層Ｉに対して、まず、好ましくは５０〜３００重量％、さらに好ましくは５０〜２００重量％、より好ましくは等重量％の抽出溶媒ＩＩを一挙に添加することが望ましい。
その後、さらに抽出溶媒ＩＩを添加しながら、系内の溶媒を留出させることが好ましい。抽出溶媒ＩＩの添加速度は、溶媒の留出速度に合わせることが好ましい。こうすることにより液面の変動がなくなり、３−キヌクリジノールや不純物の缶壁への付着を抑え、収率が向上する。また、系内の抽出溶媒層Ｉと抽出溶媒層ＩＩとの合計量を一定に保って溶媒層の連続的な置換を行うことにより、反応管理を容易に行うことができる。
【００３２】
溶媒の留出を行う場合、必要に応じ系内を減圧してもよい。工程（ｉｉ）の温度は、好ましくは４０〜８０℃、さらに好ましくは５０〜７０℃である。減圧することで操作温度を下げることができ、熱による経時変化を抑え、３−キヌクリジノールの結晶の着色を抑えることができる。上記抽出溶媒の添加と留出は、反応系中の溶媒を攪拌しながら行うことが好ましい。
【００３３】
抽出溶媒ＩＩの添加および系内の溶媒の留出による連続的な溶媒の置換は、前記抽出溶媒Ｉが、好ましくは３．０％（抽出溶媒Ｉ／ＩＩ（ｖ／ｖ））以下、より好ましくは１．０％以下、さらに好ましくは０．３％以下の量になるまで行うことが望ましい。系内における抽出溶媒Ｉの残存量は上記範囲以下であればよいが、実質的に抽出溶媒Ｉの残存量がゼロになるまで、抽出溶媒ＩＩの添加と溶媒の留出を行ってもよい。抽出溶媒Ｉの残量を下げることで、３−キヌクリジノールの回収率を上げることができる。
【００３４】
このような操作により、スケーリングがほとんどなく、高い収率で３−キヌクリジノールを生成させることができる。
【００３５】
本発明の方法では上記のような溶媒の置換過程において、３−キヌクリジノールをほとんど晶析させることができる。溶媒の置換を行った後、たとえば、系内の溶媒をさらに冷却することにより、３−キヌクリジノールを完全に晶析させることができる。晶析した３−キヌクリジノールを分離、乾燥し、精製した３−キヌクリジノールを得ることができる。
【実施例】
【００３６】
以下実施例を用いて本発明を説明するが、本発明は実施例に何ら限定されるものではない。
【００３７】
［調整例１］
Datura stramoniumのトロピノン還元酵素−Ｉ遺伝子の取得文献 （Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 95, 4876-4881 (1998)） 記載の方法により、Datura stramoniumのトロピノン還元酵素−Ｉをコードする遺伝子を保持したpETTR1を得た。プラスミドを新たに構築するために、構造遺伝子の5'-末端、3'-末端の配列を元にプライマーDSR-ATG1（配列番号：１）、DSR-TAA1（配列番号：２）を合成した。pETTR1を鋳型として、PCR（95℃, 30秒、50℃, 1分、75℃, 3分15秒）を30サイクル行い、特異的な増幅DNAを得た。
配列番号：１：DSR-ATG1／ATACCATGGAAGAATCAAAAGTG
配列番号：２：DSR-TAA1／TGGTCTAGATTAAAACCCACCATTAGCTGTG
【００３８】
Datura stramonium由来トロピノン還元酵素−Ｉと枯草菌由来グルコース脱水素酵素遺伝子を共発現するプラスミドpSG-DSR1の構築枯草菌由来のグルコース脱水素酵素遺伝子を含むプラスミドpSE-BSG1（特開 2000-189170）をNco I、およびXba Iの２つの制限酵素で二重消化し、枯草菌由来のグルコース脱水素酵素遺伝子を含むDNA断片を調製した。このDNA断片を、調整例１で調製したDNA断片より同酵素で切り出したDatura stramonium由来のトロピノン還元酵素−Ｉ遺伝子を含むDNA断片とT4 DNAリガーゼで連結し、グルコース脱水素酵素とトロピノン還元酵素−Ｉを同時に発現可能なプラスミドpSG-DSR1(FERM P-18395)を得た。
【００３９】
このようにして、調製したpSG-DSR1で形質転換した大腸菌を2×YT培地(Tryptone 20g、Yeast extract 10 g、 NaCl 10 g、 pH 7.2 )500 mLで培養し、0.1 mMのIPTGを加えることで、酵素発現を誘導し、培養を行った。培養液から遠心分離よって集菌し、得られた菌体を 500 mMリン酸カリウム緩衝液 (pH7.5) 、10%（618.7 mM） ３−キヌクリジノン塩酸塩、927.8mM グルコースを含む500 mLの反応液に加えて、攪拌下37℃で１晩反応させ、３−キヌクリジノール塩酸塩の反応液を500g得た。
【００４０】
［参考例1］
調製例１で調製した反応液を遠心分離により除菌後、UF膜処理により除蛋白した。得られた液を55℃、40〜50Torrで減圧濃縮し、132.9gとした後、25％水酸化ナトリウム水溶液32.3gを加えて、pH12.0に調整した。これにｎ−ブタノール（なお、ｎ−ブタノールに対する３−キヌクリジノールの溶解度（30℃における溶解度）は１９．８重量％（３−キヌクリジノール／ｎ−ブタノールの重量割合）であった。）を164g添加し、１回抽出した後、バス温 60℃、40〜130Torrで共沸脱水した。脱水終了後、トルエン78gを添加し、バス温 64℃、110〜115Torrで44gになるまで、減圧蒸留を行った。（なお、トルエンに対する３−キヌクリジノールの溶解度（30℃における溶解度）は０．４５重量％（３−キヌクリジノール／トルエンの重量割合）であった。）さらに留出量と同量のトルエンを加え、同様の操作を２回繰り返すことにより、トルエンに溶媒置換した。得られたトルエン溶液に再度トルエン78gを加えて調濃し、90℃まで加温した後、徐々に4℃まで冷却し、析出した結晶をろ過した。得られた湿結晶を減圧乾燥し、３−キヌクリジノールの結晶を16.3g得た。３−キヌクリジノールの収率は69.4%、純度は99.1%であった。結晶に含まれる類縁物質の含有量は０．１６％であった。また、得られた結晶の着色度は、0.112であった（写真２）。
【００４１】
着色度は、乳鉢で磨り潰したサンプルを、精密天秤で 約 500mgを秤量し、5mL容メスフラスコにて、蒸留水で溶解メスアップした。これを測定サンプルとして、分光光度計を用いて、400nmでの吸光度を測定した。吸光度が 0.5以上の場合は、更に希釈し測定に用いた。
【００４２】
測定した吸光度は、秤量差異をなくすために、5mL中に乾燥品が 500mg 含まれる場合の吸光度として算出し、これを着色度とした。
【００４３】
サンプルの純度は、ガスクロマトグラフィーによる絶対検量線法により算出した。ガスクロマトグラフィー分析には、ユニソール10T＋KOH（10+3％）ユニポートHP 80/100メッシュ (3.2mmφ x 2.1m、ジーエルサイエンス社製) を用いた。インジェクション温度は、230℃、カラム温度は150℃、検出器温度は250℃の条件で、検出器には水素炎イオン化検出器(FID)を用いた。
【００４４】
また、３−キヌクリジノールのピーク面積に対する、３−キヌクリジノール以外に検出されたピークの総面積の比を、類縁物質として算出した。
【００４５】
以上の手続きの概要を図１に示す。また、得られた結晶の写真を図３に示す。
このうち、写真２は参考例１で得た結晶であり、写真１については、UF膜処理した液を、pH 12.0に調整後減圧濃縮し、ブタノールで抽出した以外は参考例１と同様に精製した場合の結晶である。写真１の着色度は0.770であった。
【００４６】
［実施例1］
調製例１で調製した反応液を遠心分離により除菌後、UF膜処理により除蛋白した。得られた液をバス温50〜55℃、40〜50Torrで減圧濃縮し、195gとした後、25%水酸化ナトリウム 38gを加えて、pH 12.0に調整した。これにn−ブタノールを 233g添加し、１回抽出した後、15%の塩化ナトリウム水溶液14.6gを加えて、１回水洗した。抽出液をバス温50〜55℃、10〜30Torrで減圧濃縮した後、濃縮液をろ過して不純物を除去した。得られたろ液に155gのキシレンを添加した後、50〜55℃、5〜20Torrで減圧蒸留しながら、缶液量を一定に保ちつつ、288gのキシレンを添加し、溶媒置換した。（なお、キシレンに対する３−キヌクリジノールの溶解度（30℃における溶解度）は0.40重量％（３−キヌクリジノール／キシレンの重量割合）であった。）ｎ−ブタノールの残存量は0.44重量％であった。またこの操作の過程で、３−キヌクリジノールがほとんど析出していた。さらに、得られたキシレン溶液を15℃まで徐々に冷却し、結晶をろ過した。得られた湿結晶を減圧乾燥し、３−キヌクリジノールの結晶を26.2g得た。３−キヌクリジノールの収率は89.8%、純度は100%であった。結晶に含まれる類縁物質の含有量は0％であった。得られた結晶の着色度は、0.100である。着色度、純度の測定方法は参考例１と同じである。
【００４７】
以上の手続きの概要を図２に示す。また、得られた結晶の写真を図３の写真３に示す。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明によれば、不純物が低減された３−キヌクリジノールの精製物を高収率で簡便に得ることができることができる。特に、本発明の精製方法は、工程数が少なく、スケーリングの掻き取りなどの煩雑な操作が不要であり、工業的な使用に優れている。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】参考例１の精製フローの概略を示す。
【図２】実施例１の精製フローの概略を示す。
【図３】参考例１、及び実施例１で精製された３−キヌクリジノールの結晶の写真を示す。写真２は参考例１で得た結晶であり、写真１は、UF膜処理した液を、pH 12.0に調整後減圧濃縮し、ブタノールで抽出した以外は参考例１と同様に精製した場合の結晶である。写真３は実施例１の場合の写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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