(57)【要約】【課題】皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療等に際し、細胞毒性が低くかつメラニン生成抑制効果の高いメラニン生成抑制剤を、工業的に効率よく提供すること。【解決手段】下記一般式（Ｉ）：2007186445.tif 000016（式中、Ｒは炭素数１〜１２の分岐を有していてもよいヒドロキシアルキル基を表す）で示されるレゾルシノール誘導体を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2007186445.tif 000015
（式中、Ｒは炭素数１〜１２の分岐を有していてもよいヒドロキシアルキル基を表す）
で示されるレゾルシノール誘導体を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療等に有効なメラニン生成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラニンの生成機構は複雑で多岐にわたるが、概略としては、チロシンがチロシナーゼに酸化されることにより生成したドーパが、さらにチロシナーゼにより酸化されることによりドーパキノンが生成した後、数段階の反応を経てメラニンが生成するという経路が明らかになりつつある。この経路において、チロシナーゼはメラニン生成の重要な役割を果たしていることから、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療を目的として、チロシナーゼの活性を阻害することにより、メラニン生成を抑制する物質が種々提案されている。具体的には、ビタミンＣ、ハイドロキノン、コウジ酸、チオール系化合物、動植物抽出物等が知られており、これらが配合された化粧料が開発され、商品化されている。
【０００３】
一方、４−置換レゾルシノール類、特にアルキル置換レゾルシノール類は優れたチロシナーゼ阻害活性を持つことが知られている（特許文献１参照）。他の４−置換レゾルシノール類としては、アルキルカルボン酸置換型およびそれらのエステル類（特許文献２参照）、またはシス若しくはトランス−ウンベル酸およびそのエステル（特許文献３〜５参照）が提案されている。
【特許文献１】特開平５−００４９０５号公報
【特許文献２】特開平７−３１６０３４号公報
【特許文献３】特開２０００−２２６３１３号公報
【特許文献４】特開平５−１０５６２１号公報
【特許文献５】特開平９−１４３０２２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、前記ビタミンＣ、ハイドロキノンは極性が高いため、化粧料として配合するにはその高い極性を考慮する必要がある。またコウジ酸は発ガン性が疑われており安全性に問題がある。チオール系化合物は、化粧料への配合にあたっての安定性に問題がある。更に、動植物抽出物を有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤は、その入手性・供給性に問題があるものが多い。また、化学反応レベルではチロシナーゼ活性阻害能が十分であっても、細胞においてかかる機能が充分に発現しない場合もある他、細胞毒性が発現することもあり、商品化まで至っていないものも多い。
【０００５】
また、４−ブチルレゾルシノールの様なアルキル置換型レゾルシノール類は、その活性と細胞毒性から使用にあたっては、配合量等の高度な制御が必要である。また、アルキルカルボン酸置換型レゾルシノールおよびそのエステル類は、チロシナーゼ活性を阻害することが報告されてはいるものの、細胞におけるメラニン生成抑制効果は報告されておらず、本発明者らの検討では、B16メラノーマ細胞において効果は見られないことが判明した（比較例参照）。また、シス−ウンベル酸は室温において不安定であり、トランス−ウンベル酸エステルに関しては、使用量が多く効果に関して不明確である上、トランス−ウンベル酸またはそのエステルの入手方法は収率が著しく低い化学合成による方法か、（カルベトキシメチレン）トリフェニルフォスフォラン等の入手性や廃棄物処理方法に問題のある原料を使う必要がある。
【０００６】
本発明の目的は、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療等に際し、細胞毒性が低く、かつメラニン生成抑制効果の高いメラニン生成抑制剤を、工業的に効率よく提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
すなわち、本発明は、
〔１〕  下記一般式（Ｉ）：
【０００８】
【化１】
2007186445.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒは炭素数１〜１２の分岐を有していてもよいヒドロキシアルキル基を表す）
で示されるレゾルシノール誘導体（以下、レゾルシノール誘導体（Ｉ）と称することがある）を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療等に際し、細胞毒性が低い、即ち、安全で、かつメラニン生成抑制効果の高いメラニン生成抑制剤を工業的に効率よく提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
本発明のメラニン生成抑制剤は、レゾルシノール誘導体（Ｉ）を含有することを特徴とする。かかる特徴を有することにより、本発明のメラニン生成抑制剤は、細胞においても実際に高いメラニン生成抑制作用を発揮し、かつ、細胞毒性が低いという優れた効果を奏する。さらに、本発明で使用されるレゾルシノール誘導体（Ｉ）は、高収率で調製され得ることから、本発明のメラニン生成抑制剤は、工業的に効率よく提供され得る。
【００１２】
一般式（Ｉ）において、Ｒが表す炭素数１〜１２の分岐を有していてもよいヒドロキシアルキル基としては、例えばヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシイソプロピル基、ヒドロキシ−ｎ−ブチル基、ヒドロキシイソブチル基、ヒドロキシ−ｎ−ペンチル基、ヒドロキシヘキシル基等が挙げられる。中でも、原料の入手性の観点から、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシ−ｎ−ブチル基、またはヒドロキシ−ｎ−ペンチル基がより好ましい。
【００１３】
これらの基を有するレゾルシノール誘導体（Ｉ）は、必要に応じて通常の合成法により製造され得るものである。例えば３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−１−オール（以下、化合物１と称することがある）、４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン−１−オール（以下、化合物２と称することがある）、および５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ペンタン−１−オール（以下、化合物３と称することがある）は、ウンベリフェロンを出発物質として用いて製造され得る。
【００１４】
即ち、入手の容易なウンベリフェロンより数工程で得られる３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチルを還元し、脱保護することにより３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−１−オールが得られる。４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン−１−オールは、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチルを還元後、メタンスルホニル化し、次いでシアン化ナトリウムでニトリル化後、還元、脱保護することにより得ることができる。５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ペンタン−１−オールは、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチルを還元後、メタンスルホニル化し、次いでマロン酸ジメチルと反応させ、加水分解・脱炭酸することで５−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ペンタン酸とし、これを還元後脱保護することにより得ることができる。なお、かかる合成反応の経路を図１に示す。
【００１５】
本発明のメラニン生成抑制剤におけるレゾルシノール誘導体（Ｉ）の含有量は、特に制限されず、剤型によって異なるが、メラニン生成抑制効果および保存安定性の観点から、０．００１〜１０質量％の範囲が好ましく、０．０１〜５質量％の範囲がより好ましく、０．１〜１質量％の範囲がさらに好ましい。
【００１６】
本発明のメラニン生成抑制剤には、本発明の効果を奏する範囲内で、用途に応じて他の任意成分を配合することができる。特に、従来公知の美白剤、保湿剤またはこれらの混合物を配合することにより、所望の効果を相乗的に向上させることも可能である。
【００１７】
このような成分のうち、美白剤としては、例えば、アスコルビン酸、ハイドロキノン、チオール系化合物、フラボノイド類およびその誘導体、これらを含有する動植物の抽出物またはこれらの混合物等が挙げられる。
【００１８】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール；アミノ酸；乳酸ナトリウム；ピロリドンカルボン酸ナトリウム；ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、コンドロイチン硫酸、フィブロネクチン、セラミド類、キトサン等の水溶性高分子物質；またはこれらの混合物等が挙げられる。
【００１９】
また、化粧料として一般に配合する油脂類、界面活性剤、アルコール類、防腐剤、殺菌剤、増粘剤、抗炎症剤、酸化防止剤、色素、香料、水溶性高分子、紫外線吸収剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、精製水等の他の成分を適宜配合することもできる。
【００２０】
増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、マルメロ種子抽出物、トラガントガム、デンプン等の天然高分子物質；メチルセルロース、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化セルロース等の半合成高分子物質；カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール等の合成高分子物質；またはこれらの混合物等が挙げられる。
【００２１】
防腐剤としては、例えば、安息香酸塩、ソルビン酸塩、ジヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、２，２，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４’−トリクロロカルバニド、塩化ベンザルコニウム、エタノール等が挙げられる。
【００２２】
酸化防止剤としては、例えば、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ビタミンＥ、没食子酸プロピル等が挙げられる。
【００２３】
紫外線吸収剤としては、例えば、４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、酸化チタン、カオリン、タルク等が挙げられる。
【００２４】
キレート剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、グルコン酸等が挙げられる。
【００２５】
ｐＨ調整剤としては、例えば、水酸化ナトリウム、リン酸水素カリウム、炭酸カリウム、クエン酸等が挙げられる。
【００２６】
本発明のメラニン生成抑制剤は、レゾルシノール誘導体（Ｉ）と前述の任意成分を常法により製剤化することにより得ることができる。本発明のメラニン生成抑制剤は、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療等に有用であるため、例えば、医薬品、医薬部外品または化粧料として調製することができる。具体的には、本発明のメラニン生成抑制剤は、例えば、ローション、乳液、クリーム、パック剤、皮膚洗浄剤、ハップ剤、プラスター剤、ペースト剤、軟膏、エッセンス、ゲル剤、シャンプー、リンス、パウダー、ファンデーション、化粧水、洗顔料、浴用剤等の形態で調製され得る。
この際、前述の任意成分の他に、前記の各形態に従来使用されている成分を適宜選択して配合することができる。
【００２７】
本発明において、メラニン生成抑制効果は、例えば、後述の実施例のように被検試料とともにメラノーマ細胞を培養し、該細胞のメラニン生成量を測定することにより評価できる。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例等により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。また、特に明示が無い限り、以下の製造例における「％」は、「質量％」を表す。
【００２９】
製造例１
【００３０】
【化２】
2007186445.tif 000003
【００３１】
温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに、ウンベリフェロン２０．０ｇ（１２３ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン２００ｍｌ、メタノール２００ｍｌ、および１０％パラジウムカーボン１．０ｇを加え、攪拌下に系内を水素置換した。この混合液を３０℃に加熱した後、水素雰囲気下に６時間反応させた。反応液を冷却し、パラジウムカーボンを濾過して分離した。
【００３２】
続いて、得られた濾液を温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに移し、ｐ−トルエンスルホン酸・一水和物０．１９ｇ（１ｍｍｏｌ）を加え、窒素下、還流させながら２時間攪拌した。この反応混合液を室温まで冷却した後、ナトリウムメトキシドの２８％メタノール溶液を０．３ｍｌ添加した。この反応混合液を減圧下に濃縮して残渣２５．５５ｇを得た。
【００３３】
続いて、温度計、磁気回転子、滴下漏斗および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに、上記操作で得られた残渣２５．５５ｇ、アセトン３００ｍｌおよび炭酸カリウム３４．００ｇ（２４６ｍｍｏｌ）を加え、窒素下、アセトンが還流するまで加熱攪拌した。これに臭化ベンジル４６．３９ｇ（２７０ｍｍｏｌ）を、１時間かけて滴下した。滴下終了後、還流下にさらに５時間攪拌した。この反応混合液を室温まで冷却した後、副生した塩を濾過により除去し、濾液からアセトンを減圧下に留去した。得られた残渣にトルエン２００ｍｌおよび水２００ｍｌを添加し、有機層と水層を分離した。有機層からトルエンを減圧下に留去し、得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝２０／１）を用いて精製し、目的物である３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチル４５．２ｇ（９６ｍｍｏｌ、ウンベリフェロン基準の収率：７８％）を得た。
【００３４】
製造例２
【００３５】
【化３】
2007186445.tif 000004
【００３６】
温度計、磁気回転子および滴下漏斗を装備した内容積３００ｍｌの三口フラスコに、窒素下、水素化アルミニウムリチウム０．９４ｇ（２５．０ｍｍｏｌ）を加え、溶媒としてテトラヒドロフラン１００ｍｌを加えた。この溶液を０℃に冷却し、内温を１０℃以下に保ちながら３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチル１７．１０ｇ（４５．５ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後、室温でさらに１時間攪拌した。この反応液にイソプロパノール８ｍｌを添加して、過剰の水素化アルミニウムリチウムを分解した後、１０％硫酸水溶液１００ｍｌに内温を１０〜２０℃の範囲に保ちながら滴下し、続いてトルエン１００ｍｌを加えた。この混合物から有機層を分離し、水層をトルエン５０ｍｌで抽出し、抽出液を先の有機層と合わせて水５０ｍｌで洗浄した。この有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒等の低沸成分を減圧下に留去し、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロパン−１−オール１５．０６ｇ（４３．２ｍｍｏｌ、収率：９５％）を得た。
【００３７】
製造例３
【００３８】
【化４】
2007186445.tif 000005
【００３９】
温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた１００ｍｌ三口フラスコに、製造例２記載の方法で得られた３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロパン−１−オール４．４０ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン５０ｍｌおよび１０％パラジウムカーボン０．２ｇを加えて、系内を水素置換し、室温で１０時間攪拌した。この反応混合物からパラジウムカーボンを濾過して除去し、濾液を減圧下に濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）を用いて精製することにより、目的物である３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−１−オール（化合物１）１．８０ｇ（１０．７ｍｍｏｌ、収率：８５％）を得た。
【００４０】
製造例４
【００４１】
【化５】
2007186445.tif 000006
【００４２】
温度計、滴下漏斗、磁気回転子および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに、製造例２記載の方法で得られた３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロパン−１−オール１５．２４ｇ（４３．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン８．８６ｇ（８７．６ｍｍｏｌ）およびトルエン２００ｍｌを加え、系内を窒素置換した。この混合液を０℃に冷却した後、内温を５℃以下に維持しながら、塩化メタンスルホニル６．０２ｇ（５２．６ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下した。滴下終了後、内温５℃以下でさらに１時間攪拌した。この反応混合物に水２００ｍｌを加え、水層を除去した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒等の低沸成分を減圧下に留去し、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）−１−メタンスルホニルオキシプロパン１８．２８ｇ（４２．９ｍｍｏｌ、収率：９８％）を得た。
【００４３】
製造例５
【００４４】
【化６】
2007186445.tif 000007
【００４５】
温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに、製造例４記載の方法で得られた３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）−１−メタンスルホニルオキシプロパン４６．０１ｇ（１０８ｍｍｏｌ）、シアン化ナトリウム６．６０ｇ（１３５ｍｍｏｌ）およびジメチルスルホキシド４００ｍｌを加え、系内を窒素置換した。この混合物を１００℃に加熱して１時間攪拌した後、室温まで冷却した。この反応液をトルエン８００ｍｌと水８００ｍｌの混合液中に添加し、有機層を分液して減圧下に濃縮し、目的物である４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブチロニトリルを含む残渣３４．０ｇを得た。
【００４６】
続いて、温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた５００ｍｌ三口フラスコに、上記操作にて得られた残渣３４．０ｇ、水酸化カリウム１５．１５ｇ（２７０ｍｍｏｌ）およびエチレングリコール３００ｍｌを加え、系内を窒素置換した。この混合物を２００℃に加熱して２時間攪拌した後、室温まで冷却した。この反応液を酢酸エチル８００ｍｌと水５００ｍｌの混合液中に添加し攪拌後、有機層と水層を分液した。水層を酢酸エチル３００ｍｌで抽出し、抽出液を先の有機層と合わせて水５００ｍｌで３回洗浄した。この有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に濃縮することで、褐色固体３０．４ｇを得た。この固体をトルエン２００ｍｌから再結晶することにより、目的物である４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン酸２７．４ｇ（７２．８ｍｍｏｌ、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）−１−メタンスルホニルオキシプロパン基準の収率：６７％）を得た。
【００４７】
製造例６
【００４８】
【化７】
2007186445.tif 000008
【００４９】
温度計、磁気回転子および滴下漏斗を装備した内容積３００ｍｌの三口フラスコに水素化アルミニウムリチウム１．２１ｇ（３１．９ｍｍｏｌ）を加え、溶媒としてテトラヒドロフラン２００ｍｌを加えて系内を窒素置換した。この溶液を０℃に冷却し、製造例５記載の方法で得られた４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン酸１０．０ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）を内温を１０℃以下に保ちながら滴下した。滴下終了後、室温でさらに１時間攪拌した後、イソプロパノール８ｍｌを添加して過剰の水素化アルミニウムリチウムを分解した。この反応液を１０％硫酸水溶液１００ｍｌに内温を１０〜２０℃の範囲に保ちながら滴下し、続いてトルエン２００ｍｌを加えた。この混合物から有機層を分液し、水層をトルエン５０ｍｌで抽出し、抽出液を先の有機層と合わせて水１００ｍｌで洗浄した。この有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）を用いて精製し、目的物である４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン−１−オール８．５０ｇ（２３．５ｍｍｏｌ、収率：８８％）を得た。
【００５０】
製造例７
【００５１】
【化８】
2007186445.tif 000009
【００５２】
３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロパン−１−オール４．４０ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）を製造例６記載の方法で得られた４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン−１−オール４．５７ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）に変えた以外は製造例３と同様にして反応を行い、目的物である４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン−１−オール（化合物２）１．８８ｇ（１０．３ｍｍｏｌ、収率：８２％）を得た。以下に、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータを示す。
【００５３】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、ＴＭＳ）δ：８．９７（ｓ，１Ｈ）、８．８９（ｓ，１Ｈ）、６．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）、６．２４（ｄ，１Ｈ，３．０Ｈｚ）、６．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０，７．９Ｈｚ）、４．３２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．３７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９，１１．９Ｈｚ）、２．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．４８−１．４０（ｍ，４Ｈ）
【００５４】
製造例８
【００５５】
【化９】
2007186445.tif 000010
【００５６】
温度計、磁気回転子、滴下漏斗および還流冷却器を装備した内容積２００ｍｌの三口フラスコに、６０％水素化ナトリウム２．０８ｇ（５２．１ｍｍｏｌ）を加え、溶媒としてテトラヒドロフラン１００ｍｌを加えて系内を窒素置換した。これにマロン酸ジメチル５．６８ｇ（５４．６ｍｍｏｌ）を、内温が２０℃以下に保たれるように滴下した。滴下終了後、室温にてさらに３０分攪拌し、次いで製造例４記載の方法で得られた３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）−１−メタンスルホニルオキシプロパン１９．９６ｇ（４９．６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン４０ｍｌに溶解させた溶液を、内温が２０℃以下に保たれるようにして滴下した後、２０時間還流した。反応液を室温まで冷却した後、１０％硫酸水溶液２５ｍｌを添加し、次いでトルエン３００ｍｌを添加した。混合物から有機層を分離し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒等の低沸成分を減圧下に留去し、残渣２４．６ｇを得た。
【００５７】
続いて、温度計、磁気回転子、滴下漏斗および還流冷却器を装備した内容積３００ｍｌの三口フラスコに、水５０ｍｌおよび水酸化ナトリウム６．０ｇ（１５０ｍｍｏｌ）を加えて系内を窒素置換した。これに上記操作で得られた残渣２４．６ｇをテトラヒドロフラン１００ｍｌに溶解させた溶液を滴下漏斗を用いて３０分かけて滴下した。滴下終了後、内温６０℃にて３時間攪拌し、反応液を室温まで冷却後、トルエン１００ｍｌと水１００ｍｌを添加し、有機層を除去した。水層からテトラヒドロフランを減圧下に留去し、残渣８７．０ｇを得た。
【００５８】
続いて、温度計、磁気回転子、滴下漏斗および還流冷却器を装備した内容積３００ｍｌの三口フラスコに、１０％硫酸水溶液１００ｍｌを加えた。これに上記操作で得られた残渣８７．０ｇを３０分かけて滴下した。滴下終了後、水還流下で２０時間攪拌した。この反応液を室温まで冷却後、塩化メチレン１００ｍｌで３回抽出した。抽出液を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に留去し、黄褐色固体１４．１ｇを得た。これをトルエン５０ｍｌで再結晶することにより、目的物である５−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ペンタン酸１１．０ｇ（２８．３ｍｍｏｌ、３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）−１−メタンスルホニルオキシプロパン基準の収率：５７％）を得た。
【００５９】
製造例９
【００６０】
【化１０】
2007186445.tif 000011
【００６１】
４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン酸１０．００ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）を製造例８記載の方法で得られた５−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ペンタン酸１０．３９ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）に変えた以外は製造例６と同様にして反応を行い、目的物である５−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ペンタン−１−オール９．００ｇ（２３．９ｍｍｏｌ、収率：９０％）を得た。
【００６２】
製造例１０
【００６３】
【化１１】
2007186445.tif 000012
【００６４】
３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロパン−１−オール４．４０ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）を製造例９記載の方法で得られた５−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ペンタン−１−オール４．７４ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）に変えた以外は製造例３と同様にして反応を行い、目的物である５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ペンタン−１−オール（化合物３）２．０８ｇ（１０．６ｍｍｏｌ、収率：８４％）を得た。以下に、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータを示す。
【００６５】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、ＴＭＳ）δ：８．９７（ｓ，１Ｈ）、８．８９（ｓ，１Ｈ）、６．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）、６．２４（ｄ，１Ｈ，３．０Ｈｚ）、６．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０，７．９Ｈｚ）、４．３２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、３．３６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９，１１．９Ｈｚ）、２．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．５０−１．２３（ｍ，６Ｈ）
【００６６】
製造例１１
【００６７】
【化１２】
2007186445.tif 000013
【００６８】
温度計、磁気回転子および還流冷却管を備えた１００ｍｌ三口フラスコに、水酸化ナトリウム２．７２ｇ（６９．３ｍｍｏｌ）、水２０ｇ、テトラヒドロフラン３０ｇ、および製造例１記載の方法で得られた３−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）プロピオン酸メチル８ｇ（２３．１ｍｍｏｌ）を加え、攪拌しながら４０℃で１時間反応させ、その後さらに３０分還流した。反応混合物を室温に冷却後、トルエン３０ｍｌおよび水３０ｍｌを加え３０分間攪拌した。これを分液して水層を取得し、８質量％硫酸水溶液３０ｍｌを添加して内液を酸性とした後にトルエン５０ｍｌで３回抽出した。抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、残渣にテトラヒドロフラン１００ｍｌおよび１０％パラジウムカーボン０．８ｇを加えて、室温・大気圧条件下で２４時間かけて水素添加した。パラジウムカーボンを濾過した後、濾液を減圧下に濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することで３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロピオン酸２．７２ｇを得た（１４．９ｍｍｏｌ、収率：６５％）
【００６９】
製造例１２
【００７０】
【化１３】
2007186445.tif 000014
【００７１】
製造例５記載の方法で得た４−（２，４−ジベンジルオキシフェニル）ブタン酸７．５２ｇ（２０ｍｍｏｌ）に、テトラヒドロフラン１００ｍｌおよび１０％パラジウムカーボン０．８ｇを加え、室温・大気圧条件下で２４時間かけて水素添加した。パラジウムカーボンを濾過した後、濾液を減圧下に濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することで、４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン酸３．１０ｇを得た（１５．８ｍｍｏｌ、収率：７９％）。
【００７２】
実施例１〜５および対照例１
Ｂ１６メラノーマ細胞を用いたメラニン生成抑制効果の評価
Ｂ１６メラノーマ細胞をＥＭＥＭ（Eagle's minimum essential medium、Nissui Pharmaceutical Co.製）中、１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調節した後、２４ウェルプレートに１ｍｌずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。次いで、培地を、各濃度に調整した試料のジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)溶液２μｌを９９８μｌのＥＭＥＭに添加して得た培地に交換し、４８時間同条件で培養し、再度前記の試料を含むＥＭＥＭによる培地交換を行い２４時間培養した。培地を除去後、1Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌで細胞を溶解し、プレートリーダーで４０５ｎｍの吸光度を測定し、コントロールとして、試料を添加しないＤＭＳＯ溶液を添加した場合を１００％としたときの相対値でメラニン生成量を比較した。
【００７３】
生存細胞（Ｂ１６メラノーマ細胞）数の評価
Ｂ１６メラノーマ細胞をＥＭＥＭ中、１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調節した後、２４ウェルプレートに１ｍｌずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。次いで、培地を、各濃度に調整した試料のジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)溶液２μｌを９９８μｌのＥＭＥＭに添加して得た培地に交換し、４８時間同条件で培養し、再度前記の試料を含むＥＭＥＭによる培地交換を行い、２４時間培養した。その後、培地に５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾ−２−リル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム  ブロミド）−ＰＢＳ（phosphate buffered saline）溶液を各ウェルにつき５０μｌ添加して４時間培養後、培地を除去し、ＭＴＴ溶解液（濃塩酸３４０μｌ／イソプロパノール１００ｍｌ）を１ｍｌ加え、１０分間超音波処理した。生成物が完全に溶解したことを確認した後、該溶解液について、６３０ｎｍを対照波長とし、５７０ｎｍの吸光度を測定（５７０ｎｍの吸光度−６３０ｎｍの吸光度）し、試料無添加の場合の値（コントロール）を１００％としたときの相対値を生存細胞数の相対値として評価した。
【００７４】
上記評価は、試料として、製造例３により得られた３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−１−オール（化合物１；実施例１および２）、製造例７により得られた４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン−１−オール（化合物２；実施例３および４）、製造例１０により得られた５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ペンタン−１−オール（化合物３；実施例５）のそれぞれ所定濃度の溶液の他、対照例として既にメラニン生成抑制剤として実用化されているアルブチン(arbutin)の所定濃度の溶液を用いて行い、メラニン生成量および生存細胞数を比較した。結果を図２に示す。
【００７５】
この結果、化合物１〜３はいずれもメラニン生成を有意に抑制し、アルブチンと同等またはそれ以上のメラニン生成抑制効果を有すること、また、ＭＴＴの吸光度の値より、細胞への毒性が認められないことがわかった。
【００７６】
比較例１〜５および対照例
試料として、製造例１１により得られた３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロピオン酸（化合物４、比較例１、２）、製造例１２により得られた４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン酸（化合物５、比較例３、４）を、比較化合物として、４−ヘキシルレゾルシノール（化合物Ａ、比較例５）を用いる以外は実施例１〜５と同じ操作を行い、Ｂ１６メラノーマ細胞のメラニン生成量および生存細胞数を評価した。結果を図３に示す。
【００７７】
この結果、式（Ｉ）のＲがカルボン酸である化合物４および５の場合、本発明で使用されるヒドロキシアルキルレゾルシノールと同一濃度ではメラニン抑制効果は見出されなかった。また、４−ヘキシルレゾルシノールはメラニン生成抑制効果が高いものの、細胞数も減少してしまうことから、細胞毒性も強いことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明の、特定のレゾルシノール誘導体を含有するメラニン生成抑制剤は、皮膚のシミ、ソバカス等の予防または治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】図１は、ウンベリフェロンを出発物質とした３−（２，４−ジヒドロキシフェニル）プロパン−１−オール、４−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ブタン−１−オール、および５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）ペンタン−１−オールの合成反応経路を示す。
【図２】図２は、０．２ｍＭまたは０．４ｍＭの化合物１、２、３および０．４ｍＭのアルブチンを培地中０．２％(ｖ／ｖ)添加して、Ｂ１６メラノーマ細胞を培養した場合のメラニン生成量および生存細胞数の評価の結果を示す図である。評価結果は、試料無添加の場合(図中の「control」)の値を１００％としたときの相対値で示される。
【図３】図３は、０．１ｍＭの化合物Ａ、０．２ｍＭまたは０．４ｍＭの化合物４、５、および０．４ｍＭのアルブチンを培地中０．２％(ｖ／ｖ)添加して、Ｂ１６メラノーマ細胞を培養した場合のメラニン生成量および生存細胞数の評価の結果を示す図である。評価結果は、試料無添加の場合(図中の「control」)の値を１００％としたときの相対値で示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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