(57)【要約】【目的】カンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有するエストロゲン様作用剤および抗老化用皮膚外用剤を提供する。【構成】本発明のカンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上含有物は、優れたエストロゲン様作用を発揮することにより、加齢に伴って起こるエストロゲン量の減少や欠乏状態が一因であると考えられている皮膚の萎縮やしわ、たるみ等の変化を抑制または改善させる抗老化用皮膚外用剤を提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナ、カンランおよびロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有するエストロゲン様作用剤。
【請求項２】
請求項１記載のエストロゲン様作用剤を含有する抗老化用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンナ、カンランおよびロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有するエストロゲン様作用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
エストロゲンは、糖代謝や骨、脳や血管など様々な器官に影響を及ぼしていることが知られている性ステロイドホルモンである。エストロゲンの天然の型としては、エストラジオール―１７β、エストロンおよびエストリオールなどが挙げられるが、生体で産生されるエストロゲンの中で最も作用が強いのは、エストラジオール―１７βである。
【０００３】
エストロゲンには、コラーゲンの合成を促進し、生合成されて間もない若い低架橋コラーゲンの割合を増やす効果が認められている。このことは、真皮の若さを保ち皮膚に張りを与える効果につながる。さらに、エストロゲンには紫外線ストレスの軽減効果がある。同一線量の紫外線を雌雄のマウスに照射したとき、そのダメージは雄の方が大きく、雌の有するエストロゲンが紫外線に対して抵抗性を与えることが示唆されている（非特許文献１）。また、エストロゲンの減少は、紫外線によるコラーゲン分解酵素の活性を高め、シワやタルミを引き起こすことから、女性ホルモンの分泌を促進することは、シワやタルミなどの皮膚の老化予防につながると考えられる（非特許文献２）。
【非特許文献１】河合  徳久，外１名，「イソフラボンのスキンケアへの応用」，フレグランスジャーナル  ２０００−１２，ｐ．１２９―１３１
【非特許文献２】田中  浩，外４名，「長期紫外線照射による卵巣摘出マウスの皮膚変化に及ぼすウリ科植物の影響」，第１８回和漢医薬学会大会要旨，ｐ.１２２
【０００４】
さらに閉経後の女性では、エストロゲン量が減少し、欠乏状態となることが報告されており（非特許文献３）、加齢によるエストロゲン量低下と皮膚の老化症状は密接に関係していると考えられる。
【非特許文献３】Ｓｈａｈ  ＭＧ，Ｍａｉｂａｃｈ  ＨＩ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００１；２（３）：１４３−５０
【０００５】
この様な事情により、エストロゲンには、スキンケアの分野において有用な効果が期待できるが、ホルモンそのものを人体に投与または皮膚外用剤等により投与することは、安全性や規制の面から困難であると考えられる。本発明者らは鋭意研究検討した結果、カンナ、カンランおよびロッダの抽出物がエストロゲン様作用を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明においては、エストロゲン様作用を発揮することにより、加齢によって起こる皮膚の萎縮やしわ、たるみ等の変化を抑制または改善させることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明でいうカンナには、ハナカンナ（Ｃａｎｎａ  ｇｅｎｅｒａｌｉｓ  Ｂａｉｌｅｙ）、ダンドク（Ｃａｎｎａ  ｉｎｄｉｃａ  Ｌ．  ｖａｒ．  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ  Ｈｏｏｋ．  ｆｉｌ．）およびその種間雑種あるいは属間雑種などカンナ科に含まれる植物が挙げられ、カンナやその種間雑種などは市販されている品種を、そして、ダンドクは九州などに自生するものを利用することができる。
本発明に用いるカンナの抽出物とは、植物体の葉、茎、花、実、根茎等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。好ましくは、植物体の根茎から抽出して得られるものが良い。
【０００８】
本発明でいうカンランは、学名がＣａｎａｒｉｕｍ  ａｌｂｕｍであり、南ベトナム原産の常緑小高木で、インドシナ、中国南部に分布している。果実が食べられるので、中国や台湾でも栽培され、鹿児島、沖縄地方にも植えられていることがある。民間では未熟果実を解毒薬とし、台湾では乾果を健胃薬とする。
本発明に用いるカンランの抽出物とは、植物体の葉、茎、樹皮、花、実等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。好ましくは、植物体の葉から抽出して得られるものが良い。
【０００９】
本発明に用いるロッダは、学名がＳｙｍｐｌｏｃｏｓ  ｒａｃｅｍｏｓａであり、インド原産のものは、アーユルヴェーダ生薬として、止血、下痢、目・肌の炎症、月経不順などに対して利用され、清涼剤・収斂剤としても名高い。
本発明に用いるロッダの抽出物とは、植物体の葉、茎、樹皮、花、実、根等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。好ましくは、植物体の葉、茎及び樹皮から抽出して得られるものが良い。
【００１０】
本発明のカンナ、カンランおよびロッダの抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温又は低温で抽出したものであっても良い。
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００１１】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良いし、カラム精製等を行って有効成分を濃縮したり単離してから用いても良い。
【００１２】
本発明のカンナ、カンランおよびロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有するエストロゲン様作用剤を加齢による皮膚の萎縮やしわ、たるみ等の変化を抑制または改善する目的で用いるには、通常全身的又は局所的に外用により投与される。投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間などにより異なるが、通常成人１人当たり１回に１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは２０ｍｇ〜２００ｍｇの範囲で１日１回から数回投与される。投与量は種々の条件で変動するので、上記投与範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて投与する必要のある場合もある。
【００１３】
本発明のエストロゲン様作用剤は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。
【００１４】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明のエストロゲン様作用剤あるいは抗老化用皮膚外用剤に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜５０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。５０重量％を越えて配合した場合、効果の増強はみられにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のカンナ、カンランおよびロッダの抽出物およびこれを有するエストロゲン様作用剤および抗老化用皮膚外用剤は、エストロゲン様効果を発揮することにより、加齢によって起こる皮膚の萎縮やしわ、たるみ等の変化を抑制または改善することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示し、％は重量％を示す。
【実施例１】
【００１７】
製造例１  カンナの熱水抽出物
ハナカンナの茎と葉および根茎をそれぞれ生のまま細かく切断し、各１００ｇに１０００ｍｌの水をそれぞれ加えた後に１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥してカンナの熱水抽出物を得た。茎と葉からは０．２５ｇ、そして、根茎からは０．５ｇの熱水抽出物を得た。
【００１８】
製造例２  カンナのエタノール抽出物
ハナカンナの茎と葉および根茎をそれぞれ乾燥した後に細かく切断し、各１００ｇに１０００ｍｌのエタノールをそれぞれ加えた後に５０℃で８時間還流抽出した。得られた抽出液を濾過した後に濃縮乾固してカンナのエタノール抽出物を得た。茎と葉からは２．０ｇ、そして、根茎からは４．５ｇのエタノール抽出物を得た。
【００１９】
製造例３  カンナの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
ハナカンナの根茎を生のまま細かく切断し、１００ｇに、１，３−ブチレングリコール（１，３−ＢＧ）と水の混合液（１：１）を１０００ｇ加え、室温で２日間抽出した。抽出後、その抽出液を濾過してカンナの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物を９５０ｇ得た。
【００２０】
製造例４  カンランの熱水抽出物
カンランの葉の乾燥物を細かく切断し、その１００ｇに１０００ｍｌの水を加えた後に１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥してカンランの熱水抽出物７．０ｇを得た。
【００２１】
製造例５  カンランの５０％エタノール抽出物
カンランの葉の乾燥物を細かく切断し、その１００ｇに１０００ｍｌの５０％エタノールをそれぞれ加えた後に５０℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後に乾燥してカンランの５０％エタノール抽出物を１０ｇ得た。
【００２２】
製造例６  カンランの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
カンランの葉の乾燥物を細かく切断し、その５０ｇに精製水２００ｇ及び１，３−ブチレングリコール２００ｇを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、カンランの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物を３７０ｇ得た。
【００２３】
製造例７  ロッダの熱水抽出物
ロッダの樹皮の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍｌを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮した後凍結乾燥してロッダの熱水抽出物を４．０ｇ得た。
【００２４】
製造例８  ロッダのエタノール抽出物
ロッダの樹皮の乾燥物１００ｇにエタノール１０００ｍｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ロッダのエタノール抽出物を５．８ｇ得た。
【００２５】
製造例９  ロッダの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
ロッダの樹皮の乾燥物２０ｇに精製水２００ｇ及び１，３−ブチレングリコール２００ｇを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ロッダの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物を３８０ｇ得た。
【実施例２】
【００２６】
処方例１  クリーム１
処方                                                                配合量
１．カンナの熱水抽出物（製造例１、根茎）                            １．０部
２．スクワラン                                                      ５．５
３．オリーブ油                                                      ３．０
４．ステアリン酸                                                    ２．０
５．ミツロウ                                                        ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                    ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）                ３．０
８．ベヘニルアルコール                                              １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                      ２．５
１０．香料                                                            ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                                      ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                                        ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．２
１４．精製水                                                        ６７．１５
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
処方例２  クリーム２
処方                                                                配合量
１．カンランの熱水抽出物（製造例４）                                ０．５部
２．ロッダの熱水抽出物（製造例７）                                  ０．５
３．スクワラン                                                      ５．５
４．オリーブ油                                                      ３．０
５．ステアリン酸                                                    ２．０
６．ミツロウ                                                        ２．０
７．ミリスチン酸オクチルドデシル                                    ３．５
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）                ３．０
９．ベヘニルアルコール                                              １．５
１０．モノステアリン酸グリセリン                                      ２．５
１１．香料                                                            ０．１
１２．１，３−ブチレングリコール                                      ８．５
１３．パラオキシ安息香酸エチル                                        ０．０５
１４．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．２
１５．精製水                                                        ６７．１５
［製造方法］成分３〜１０を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び２と成分１２〜１５を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１１を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２８】
処方例３  クリーム３
処方例１において、カンナの熱水抽出物を、ロッダの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例９）に置き換えたものをクリーム３とした。
【００２９】
比較例１  従来のクリーム
処方例１において、カンナの熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００３０】
処方例４  化粧水
処方                                                                配合量
１．カンランの５０％エタノール抽出物（製造例５）                    ０．１部
２．１，３−ブチレングリコール                                      ８．０
３．グリセリン                                                      ２．０
４．キサンタンガム                                                  ０．０２
５．クエン酸                                                        ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                              ０．１
７．エタノール                                                      ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                  ０．１
１０．香料                                                            ０．１
１１．精製水                                                        ８４．４７
［製造方法］成分２〜６及び１１と、成分１及び成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３１】
処方例５  乳液１
処方                                                                配合量
１．カンナの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例３）      ０．５部
２．スクワラン                                                      ５．０
３．オリーブ油                                                      ５．０
４．ホホバ油                                                        ５．０
５．セタノール                                                      １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                      ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）                ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）      ２．０
９．香料                                                            ０．１
１０．プロピレングリコール                                            １．０
１１．グリセリン                                                      ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．２
１３．精製水                                                        ７２．７
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３２】
処方例６  乳液２
処方例５において、カンナの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物０．５部をカンランの熱水抽出物（製造例４）０．２５部とロッダの熱水抽出物（製造例７）０．２５部に置き換えたものを乳液２とした。
【００３３】
処方例７  ゲル剤
処方                                                                配合量
１．ロッダの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例９）      １．０部
２．エタノール                                                      ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                  ０．１
５．香料                                                            ０．０５
６．１，３−ブチレングリコール                                      ５．０
７．グリセリン                                                      ５．０
８．キサンタンガム                                                  ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                        ０．２
１０．水酸化カリウム                                                  ０．２
１１．精製水                                                        ８３．２５
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００３４】
処方例８  パック
処方                                                                配合量
１．ロッダのエタノール抽出物（製造例８）                            ０．１部
２．カンナの熱水抽出物（製造例１、根茎）                            ０．１
３．ポリビニルアルコール                                          １２．０
４．エタノール                                                      ５．０
５．１，３−ブチレングリコール                                      ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                  ０．５
８．クエン酸                                                        ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                              ０．３
１０．香料                                                            ０．０５
１１．精製水                                                        ７３．６５
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３５】
処方例９  ファンデーション
処方                                                                配合量
１．カンナのエタノール抽出物（製造例２、根茎）                      ０．５部
２．カンランの５０％エタノール抽出物（製造例５）                    ０．５
３．ステアリン酸                                                    ２．４
４．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）    １．０
５．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）                ２．０
６．セタノール                                                      １．０
７．液状ラノリン                                                    ２．０
８．流動パラフィン                                                  ３．０
９．ミリスチン酸イソプロピル                                        ６．５
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム                            ０．１
１１．ベントナイト                                                    ０．５
１２．プロピレングリコール                                            ４．０
１３．トリエタノールアミン                                            １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．２
１５．二酸化チタン                                                    ８．０
１６．タルク                                                          ４．０
１７．ベンガラ                                                        １．０
１８．黄酸化鉄                                                        ２．０
１９．香料                                                            ０．１
２０．精製水                                                        ６０．１
［製造方法］成分３〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１、２及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３６】
処方例１０  軟膏
処方                                                                配合量
１．カンナの熱水抽出物（製造例１、根茎）                            ０．０１部
２．カンランの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例６）    ０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）                ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                                    １０．０
５．流動パラフィン                                                  ５．０
６．セタノール                                                      ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．１
８．プロピレングリコール                                          １０．０
９．精製水                                                        ６６．３９
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３７】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例３】
【００３８】
実験例１  エストロゲン受容体結合能検討
エストロゲンＲ（α）コンペチタブルスクリーニングキット（和光純薬）を用い、カンナ、カンランおよびロッダのエストロゲン受容体結合能を検討した。カンナ、カンランおよびロッダをＤＭＳＯに溶解し、Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎとの混合液をＥＲα固相化ドライマイクロプレートに移し、室温で２時間反応後、洗浄液によりフリーの蛍光試薬などを洗浄した。その後、固相化ＥＲαに結合している蛍光エストラジオール量を蛍光マルチプレートリーダースペクトロフルオロメーターを用い、Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ４８５ｎｍ、Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ５３５ｎｍ、Ｆｌａｓｈ  Ｎｕｍｂｅｒ  １０回の条件下で検出した。比較試料として、エストロゲン様作用を持つことが報告されている大豆イソフラボンを用いた。
【００３９】
これらの実験結果を表１に示した。その結果、カンナ、カンラン及びロッダの抽出物は、大豆イソフラボンと比較して優れたエストロゲン受容体結合能を示した。
【００４０】
2007191452.tif 000002
【００４１】
カンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる２種以上の混合物についても同様にエストロゲン受容体結合能を測定したところ、優れたエストロゲン受容体結合能を示した。
【００４２】
実験例２  エストロゲン様効果検討
エストロゲンが受容体に結合した後、そのｍＲＮＡ発現量が増加することが近年報告されているｃｙｃｌｉｎＤ２を指標として、カンナ、カンランおよびロッダのエストロゲン様作用を検討した（非特許文献４）。
ヒトケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を１０％  ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地にて３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。コンフルエントな状態の細胞をＰＢＳ（−）で一度洗浄した後、血清無添加のＤＭＥＭ培地に交換し１μｇ／ｍｌの各試料を添加した。コントロールとしては試料無添加の細胞を用いた。さらに３時間培養した後、ＩＳＯＧＥＮを用いて総ＲＮＡの抽出を行った。細胞から抽出した総ＲＮＡを基にリアルタイムＰＣＲ法によりｃｙｃｌｉｎＤ２  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。リアルタイムＰＣＲ法にはＴａＫａＲａ  ＳＹＢＲ  ＥｘＳｃｒｉｐｔＴＭ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ）を用いた。ｃｙｃｌｉｎＤ２用のｐｒｉｍｅｒとしては５‘ＣＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＧＣＧＧＴＡＣＴＡＡ３’および５’ＴＣＴＴＡＴＣＣＴＧＣＣＡＡＴＴＣＡＧＴＧＴＧＡ３’を用いた。逆転写反応としては、４２℃１５分の後、９５℃２分を行った。さらに、初期変性として９５℃１０秒を行った後、ＰＣＲ反応として９５℃５秒、６０℃３１秒を１ｃｙｃｌｅとして４０ｃｙｃｌｅ行った。さらにＤｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔａｇｅとして、９５℃１５秒、６０℃１分、９５℃１５秒を行った。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ｃｙｃｌｉｎＤ２  ｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現量に対する割合として求めた。
（非特許文献４）
Ｎａｏｋｏ  Ｋａｎｄａ  ａｎｄ  Ｓｈｉｎｉｃｈｉ  Ｗａｔａｎａｂｅ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １２３：３１９−３２８，２００４．
【００４３】
これらの実験結果を表１に示した。その結果、カンナ、カンラン及びロッダの抽出物は、コントロールと比較して優れたｃｙｃｌｉｎＤ２  ｍＲＮＡ発現量の増加が示された。
【００４４】
【表２】
2007191452.tif 000003
【００４５】
カンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる２種以上の混合物についても同様にｃｙｃｌｉｎＤ２  ｍＲＮＡ発現量の変化を測定したところ、優れたｃｙｃｌｉｎＤ２  ｍＲＮＡ発現量促進効果を示し、エストロゲン様作用をもつことが確認された。
【００４６】
実験例３  使用試験１
カンナの熱水抽出物、カンランの熱水抽出物、ロッダの熱水抽出物の１％水溶液を用いて、加齢による皮膚の変化を感じている女性３０人（５０才〜８０才）を対象に４ヶ月間の使用試験を行った。使用後、皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善作用をアンケートにより判定した。なお対照としては精製水を用いた。
【００４７】
これらの試験結果を表３に示した。その結果、カンナの熱水抽出物、カンランの熱水抽出物、ロッダの熱水抽出物の１％水溶液を用いた場合は、対照として精製水を用いた場合よりも、優れた皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善効果を示した。すなわち、カンナの熱水抽出物、カンランの熱水抽出物、ロッダの熱水抽出物の１％水溶液は顕著な効果を示した。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００４８】
【表３】
2007191452.tif 000004
【００４９】
カンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有するその他の水溶液についても同様に使用試験を行ったところ、安全であり、優れた皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善効果を示した。
【００５０】
実験例４  使用試験２
処方例１〜３のクリーム、比較例１の従来のクリームを用いて、加齢による皮膚の変化を感じている女性３０人（５０才〜８０才）を対象に３ヶ月間の使用試験を行った。使用後、皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善作用をアンケートにより判定した。
【００５１】
これらの試験結果を表４に示した。その結果、処方例１〜３で得られるクリームは、比較例１で得られる従来のクリームよりも、皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善効果に優れていた。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。
【００５２】
【表４】
2007191452.tif 000005
【００５３】
処方例４〜１０についても同様に使用試験を行ったところ、安全であり、優れた皮膚のたるみ、しわ及びはりの改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明のカンナ、カンラン及びロッダの抽出物から選ばれる１種又は２種以上は優れたエストロゲン様作用剤および抗老化用皮膚外用剤として用いることが出来、加齢によって起こる皮膚の萎縮やしわ、たるみ等の変化を抑制または改善させることができる。