(57)【要約】【課題】羊水等の液体で満たされた、羊膜等の膜状組織内の観察対象を観察する際に、液体を漏らすことなく観察する。【解決手段】体液で満たされた膜状組織内に配置される観察対象を観察する方法であって、膜状組織の外面にゲル状の接着剤を塗布するステップＳ２と、塗布された接着剤を介して膜状組織を切断するステップＳ３と、接着剤および膜状組織の切断部を介して対物ユニットの先端部を挿入するステップＳ４と、挿入された対物ユニットの先端部を介して観察対象を観察するステップＳ５とを備える観察方法を提供する。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液で満たされた膜状組織内に配置される観察対象を観察する方法であって、
膜状組織の外面にゲル状の接着剤を塗布するステップと、
塗布された接着剤を介して膜状組織を切断するステップと、
接着剤および膜状組織の切断部を介して対物ユニットの先端部を挿入するステップと、
挿入された対物ユニットの先端部を介して観察対象を観察するステップとを備える観察方法。
【請求項２】
前記接着剤が、透明である請求項１に記載の観察方法。
【請求項３】
対物ユニットの先端部に備えたマーキング手段により、観察を行った観察対象の部位にマーカを付与するステップをさらに備える請求項１または請求項２に記載の観察方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織を生きたままの状態（in vivo）で観察する観察方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、この種の観察方法として、例えば、特許文献１に開示されている観察方法が知られている。
この観察方法は、外筒内に対物光学系を収容してなる対物光学系ユニットを、生体組織に形成した孔に支持部材によって挿入状態に支持し、支持部材を生体組織に固定することにより、該支持部材を介して対物光学系ユニットを抜き差しして、骨髄内の同一の観察対象部位を高い再現性で観察することができる。
【０００３】
【特許文献１】特開２００５−２５３８３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１に開示されている観察方法は、体液で満たされた膜状組織等で境界された内部の観察対象を観察する場合については何ら開示していない。
すなわち、例えば、羊膜内は羊水によって満たされており、その内部に胎児が存在する場合には、羊膜を貫通して対物光学系ユニットを挿入する必要がある。また、羊膜に貫通孔を形成して観察した後には、対物光学系ユニットを引き抜いた後においても、継続して羊膜内に羊水を保持しておく必要がある。
【０００５】
しかし、単に対物光学系ユニットの先端により羊膜を貫通したのでは、羊膜内の内圧によって内部の羊水が漏れ出てしまい、羊水内に浮遊した健全な状態の胎児等の観察対象を観察することができないという不都合がある。また、羊膜に貫通孔を形成して観察した後には、対物光学系ユニットを引き抜くと、羊膜内の内圧によって内部の羊水が漏れ出てしまい、継続して羊膜内に羊水を保持しておくことができないという不都合がある。
【０００６】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、羊水等の液体で満たされた、羊膜等の膜状組織内の観察対象を観察する際に、液体を漏らすことなく観察することを可能とする観察方法を提供することを目的としている。また、観察後に対物ユニットを取り外しても、液体を漏らすことなく膜状組織内に保持し、内部の観察対象の健全性を維持することができる観察方法を提供することをも目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、体液で満たされた膜状組織内に配置される観察対象を観察する方法であって、膜状組織の外面にゲル状の接着剤を塗布するステップと、塗布された接着剤を介して膜状組織を切断するステップと、接着剤および膜状組織の切断部を介して対物ユニットの先端部を挿入するステップと、挿入された対物ユニットの先端部を介して観察対象を観察するステップとを備える観察方法を提供する。
【０００８】
本発明によれば、接着剤を塗布するステップにより塗布されたゲル状の接着剤を介して膜状組織を切断するので、接着剤が切断手段の周囲を密封し、膜状組織内の液体が漏れ出ることが防止される。また、対物ユニットの先端部も接着剤が塗布された切断部を介して膜状組織内に挿入されるので、対物ユニットの周囲が接着剤により密封され、膜状組織内の液体が漏れ出ることが防止される。
【０００９】
この状態で、対物ユニットを作動させ、先端部を介して膜状組織内の観察対象を観察することができる。その結果、観察状態においても、対物ユニットの周囲が接着剤により密封され、膜状組織内の液体が漏れ出ることが防止される。
さらに、観察後に対物ユニットを膜状組織の切断部から引き抜いても、ゲル状の接着剤が切断部を密封するので、膜状組織内の液体が漏れ出ることが防止される。
【００１０】
上記発明においては、前記接着剤が、透明であることが好ましい。
対物ユニットの先端部を接着剤を介して膜状組織内に挿入する際に接着剤が対物ユニットの先端に付着しても、接着剤が透明であれば、視界を遮ることがなく、観察対象を観察することが可能となる。
【００１１】
上記発明においては、対物ユニットの先端部にマーキング手段を備え、観察を行った観察対象の部位にマーカを付与するステップをさらに備えることとしてもよい。
このようにすることで、観察を行った観察対象の部位にマーカが付与されるので、対物ユニットの先端部を抜き差しした継続的な観察においても、マーカを目印にして、既に観察した部位を確認でき、同一の部位あるいは、既観察の部位とは異なる部位の観察を容易に行うことが可能となる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、羊水等の液体で満たされた、羊膜等の膜状組織内の観察対象を観察する際に、液体を漏らすことなく観察することができるという効果を奏する。また、観察後に対物ユニットを取り外しても、液体を漏らすことなく膜状組織内に保持し、内部の観察対象の健全性を維持することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の一実施形態に係る観察方法について、図１〜図７を参照して、以下に説明する。
本実施形態に係る観察方法は、例えば、マウスＡの胎児（観察対象）１を生きたまま観察する方法であって、図１〜図７に示されるように、表皮２等を切開するステップＳ１、接着剤３を塗布するステップＳ２、羊膜（膜状組織）４を切断するステップＳ３、対物ユニット５を挿入するステップＳ４、胎児１の観察を行うステップＳ５を備えている。マウスＡの胎児１は、図２に示されるように、羊水（体液）６で満たされた羊膜４および子宮筋膜内に配置されている。
【００１４】
表皮２等を切開するステップＳ１は、図２に示されるように、マウスＡの肋骨７間に配される表皮２および筋肉組織をメス等の切断器具８により切断し切開する。これにより、表皮２および筋肉組織の内側に配置されている羊膜４が露出させられる。
【００１５】
接着剤を塗布するステップＳ２は、図３に示されるように、ステップＳ１により露出させられた羊膜４の外表面にゲル状の接着剤３を盛りつける。ゲル状の接着剤３は、生体適合性の接着剤３であって、例えば、フィブリン系、ゼラチン系、ＧＴXIII系、シアノアクリレート系、ウレタン系、コラーゲン系、キチン系または刺激応答性ゲル蛋白質系の接着剤３またはこれにエラスチンを混合して弾性を調節したものが用いられる。
【００１６】
なお、接着剤３としてはこれらに限定されるものではなく、他の任意の生体適合性の接着剤３を用いることができる。
また、接着剤３としては、透明な材質の接着剤３を用いることが好ましい。
【００１７】
羊膜４を切断するステップＳ３は、図４に示されるように、ステップＳ２により塗布された接着剤３を貫通して、メスその他の尖端を有する穿孔器具９を挿入し、接着剤３の塗布されている領域の羊膜４に切断部１０を形成する。羊膜４内の空間は羊水６により満たされて所定の内圧を有しているので、穿孔器具９が羊膜４を貫通した瞬間に羊水６が羊膜４内から放出されようとするが、本実施形態においては、穿孔器具９の周囲がゲル状の接着剤３により取り囲まれて密封されているので、羊水６は外部に漏れ出ることがない。
【００１８】
また、羊膜４の切断が終了し、羊膜４に切断部１０が形成された後に、穿孔器具９を引き抜いても、図５に示されるように、穿孔器具９の周囲を密封していた接着剤３が、穿孔器具９の通過した跡を順次閉塞するので、羊水６が外部に漏れ出ないように保持される。
【００１９】
対物ユニット１１を挿入するステップＳ４は、図６に示されるように、前記ステップＳ３により形成された切断部１０を介して対物ユニット１１の細径先端部１１ａを羊膜４内に挿入する。対物ユニット１１は、図示しない顕微鏡観察装置に取り付けられており、先端面１１ｂから照明光、例えば、レーザ光のような励起光等を照射し、胎児１から戻る光、例えば蛍光等を集光するようになっている。
【００２０】
このステップＳ４においても、対物ユニット１１の細径先端部１１ａは、羊膜４の外面に塗布された接着剤３を通過して、ステップＳ３において形成された切断部１０に達し、切断部１０を貫通して羊膜４内に挿入される。これにより、対物ユニット１１の細径先端部１１ａの周囲が接着剤３により密封されるので、対物ユニット１１の挿入中においても、羊膜４内の羊水６が外部に漏れ出ないように保持される。
【００２１】
そして、胎児１を観察するステップＳ５において、羊水６内に挿入された対物ユニット１１の細径先端部１１ａの先端面１１ｂが観察対象である胎児１の外面に密着させられるように押し当てられ、先端面１１ｂから励起光が照射され、胎児１において発生した蛍光が集光される。これにより、胎児１の蛍光画像を取得することができる。
【００２２】
この場合において、胎児１の観察中においても、対物ユニット１１の細径先端部１１ａの周囲が接着剤３により密封されているので、羊膜４内の羊水６が外部に漏れ出ないように保持される。
また、本実施形態によれば、接着剤３として透明な接着剤３が採用されているので、盛りつけられた接着剤３を貫通してきた対物ユニット１１の先端面１１ｂに接着剤３が付着していても、励起光の照射および蛍光の集光を、さほど妨げられることなく行うことができる。
【００２３】
さらに、観察終了後には、図７に示されるように、対物ユニット１１の細径先端部１１ａが羊膜４の切断部１０から抜き出される。この場合においても、対物ユニット１１の細径先端部１１ａの周囲を密封していた接着剤３が、細径先端部１１ａの通過した跡を順次閉塞するので、羊水６が外部に漏れ出ないように保持される。したがって、観察後においても、羊水６を外部に漏れ出ないように保持し、羊水６内の胎児１等の観察対象の健全性を維持することができる。
【００２４】
このように、本実施形態に係る観察方法によれば、羊膜４内の胎児１等の観察対象を観察する際に、羊水６を外部に漏らすことなく観察することができる。したがって、胎児１を生きたままの健全な状態で観察することができるという利点がある。
【００２５】
また、観察後に対物ユニット１１を取り外しても、羊水６を漏らすことなく羊膜４内に保持することができる。したがって、観察後においても、胎児１の健全性を維持することができる。その結果、時間間隔をあけて複数回にわたり、対物ユニット１１を繰り返し抜き差ししても、胎児１の健全性を維持でき、生きたままの状態で経時的な観察を行うことができる。
【００２６】
なお、本実施形態に係る観察方法においては、マウスＡの胎児１を観察する場合に適用した例を説明したが、これに限定されるものではなく、他の任意の液体で満たされた膜状組織内に存在する観察対象を観察する場合に適用してもよい。
また、羊膜４を穿孔器具９により切断し、その後、対物ユニット１１を挿入したが、これに代えて、対物ユニット１１の先端に鋭利な切刃を配置できれば、対物ユニット１１の挿入時に、同時に羊膜４に穿孔することとしてもよい。
【００２７】
また、時間間隔をあけて、複数回にわたり、対物ユニット１１を繰り返し抜き差して経時的な観察を行う場合について説明したが、この場合に、トレーサタンパク等の任意のマーカを観察対象に付与するマーキング手段を用いることとしてもよい。このようにすることで、既に観察した部位にマーカを付与し、次回の観察時に、同一箇所あるいはそれとは異なる箇所の観察を容易に行うことができる。マーキング手段は、対物ユニット１１の細径先端部１１ａに設けられていることが好ましい。
【００２８】
また、対物ユニット１１として、細径先端部１１ａを有する硬性鏡式のものを例示したが、これに限定されるものではなく、例えば、ファイバーバンドル等を用いてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明の一実施形態に係る観察方法を説明するフローチャートである。
【図２】図１の観察方法において、表皮を切開するステップを説明する図である。
【図３】図１の観察方法において、接着剤を塗布するステップを説明する図である。
【図４】図１の観察方法において、膜状組織を切断するステップを説明する図である。
【図５】図１の観察方法において、膜状組織に切断部が形成された状態を示す図である。
【図６】図１の観察方法において、対物ユニットを挿入して観察するステップを説明する図である。
【図７】図１の観察方法において、観察後に対物ユニットを引き抜いた状態を示す図である。
【符号の説明】
【００３０】
Ｓ２  接着剤を塗布するステップ
Ｓ３  膜状組織を切断するステップ
Ｓ４  対物ユニットを挿入するステップ
Ｓ５  観察するステップ
１  胎児（観察対象）
３  接着剤
４  羊膜（膜状組織）
６  羊水（体液）
１０  切断部
１１  対物ユニット
１１ａ  細径先端部（先端部）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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