(57)【要約】本発明は、神経変性疾患に関与する抗原に対するＡ−イソタイプ及び／又はＭ−イソタイプの抗体の存在を検出するという、上記疾患を検出し管理する方法に関する。さらに本発明は、この方法を実行するためのキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体液中の神経変性疾患の発症又は進行に関与する抗体の検出方法であって、以下の段階、
−前記生体液を以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｃｈ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ−Ｈｉｓ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｐｈｅ、ＮＯ−Ａｒｇ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、ＮＯ−Ｃｒ、ＮＯ−ＢＳＡ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９：に接触させる段階、及び
−前記抗原とそれに対応する抗体の間に任意に形成される複合体を検出する段階
を含む方法。
【請求項２】
生体液中の神経変性疾患の発症又は進行に関与する抗体の検出方法であって、以下の段階、
−前記生体液を以下の抗原のいずれか１つ：ＰＩ、Ａｃｈ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９：に接触させる段階、及び
−前記抗原とそれに対応する抗体の間に任意に形成される複合体を検出する段階
を含む方法。
【請求項３】
生体液中の神経変性疾患の発症又は進行に関与する抗体の検出方法であって、以下の段階、
−前記生体液を以下の抗原のいずれか１つ：Ｏｌｅ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＦａｒＣｙｓ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６及びＩｇ１７：に接触させる段階、及び
−前記抗原とそれに対応する抗体の間に任意に形成される複合体を検出する段階
を含む方法。
【請求項４】
生体液中の神経変性疾患の発症又は進行に関与する抗体の検出方法であって、以下の段階、
−前記生体液を以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｐｈｅ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１７及びＩｇ１９：に接触させる段階、及び
−前記抗原とそれに対応する抗体の間に任意に形成される複合体を検出する段階
を含む方法。
【請求項５】
ＮＯ−ＢＳＡを除く非細菌性抗原は担体分子、好ましくはウシ血清アルブミンに結合している請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
任意に形成される複合体がＭ−イソタイプ、又は、必要であればＡ−イソタイプの抗ヒト免疫グロブリン抗体を用いて検出され、前記抗体は標識、好ましくは酵素標識されたものである請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記酵素はペルオキシダーゼである請求項６に記載の方法。
【請求項８】
固形の担体、好ましくは微量滴定プレートを用いて行う請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記神経変性疾患が多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、関節リウマチ、又は脊椎関節炎である請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法を実行するためのキットであって、以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｃｈ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ−Ｈｉｓ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９を含むキット。
【請求項１１】
請求項２に記載の方法を実行するためのキットであって、以下の抗原のいずれか１つ：ＰＩ、Ａｃｈ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９を含むキット。
【請求項１２】
請求項３に記載の方法を実行するためのキットであって、以下の抗原のいずれか１つ：Ｏｌｅ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＦａｒＣｙｓ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６及びＩｇ１７を含むキット。
【請求項１３】
請求項４に記載の方法を実行するためのキットであって、以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｐｈｅ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１７及びＩｇ１９を含むキット。
【請求項１４】
ＮＯ−ＢＳＡを除く非細菌性抗原は担体分子、好ましくはウシ血清アルブミンに結合している請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１５】
Ｍ−イソタイプの抗ヒト免疫グロブリン抗体を少なくとも１種、及び／又は、Ａ−イソタイプの抗ヒト免疫グロブリン抗体を少なくとも１種更に含む請求項１０〜１４のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の課題は神経変性疾患の管理のための方法及びキットである。
本発明は特に医療分野及び免疫学分野において適用できる。
【背景技術】
【０００２】
ここ５０年で医療が大きく進歩したにも関わらず、長年に渉って知られているか又は近年明らかになった疾患の中には、公衆衛生に多額を投じても、厳密には治癒できないままのものがある。具体的には、パーキンソン病、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、自己免疫疾患、肝炎、関節リウマチ（ＲＡ）等の萎縮性及び炎症性のリウマチ等の神経変性疾患が挙げられる。
【０００３】
上記疾患においては、疾病分類学的診断が行われ、病変過程機構及び病変期が知られているものもあり、非常に高価であることが多い兆候学的治療が行われているが、結果は期待した程ではない。
【０００４】
多発性硬化症は中枢神経系の多房性脱髄疾患であり、脳や脊髄の白質に影響を及ぼし、進行が潜行性で予測できず、非常に重い障害を与える疾患である。
【０００５】
フランスでは成人１０００人のうち１人（国民１０万人に対し４０〜６０例）、即ち、フランス国民のうち５００００人がＭＳに冒されており、毎年２０００例の新症例が計上されている。世界中では２００万例にのぼる。
【０００６】
この病気は成人初期である１５〜５０歳（特に２０〜４０歳）の間に始まる。女性の発症率は男性の２倍である。
【０００７】
ＭＳには３つの性質の異なる臨床形態がある：弛張性、進行性及び弛張進行性である。
【０００８】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又はシャルコー病は、進行が早い原因不明の神経疾患である。この疾患は脳の運動ニューロン、脳幹及び脊髄の前角を冒して変性させることが特徴であるが、一方知覚ニューロンは影響を受けず、知的機能は無傷のままである。従って患者は、病気が進行し、機能的能力が低下していくことを完全に自覚させられる。
【０００９】
ＡＬＳの有病率はＭＳの有病率に匹敵する。その率はハンチントン病の５倍高い。ＭＳやハンチントン病によるよりも多くの人がＡＬＳによって亡くなっている。
【００１０】
ＡＬＳは４５〜７０歳で最も多く発症し、女性よりも男性の方が１．５〜２倍多くこの病気に冒される。この病気の患者はどんどん若年化して、４０歳になる前に発症する症例も存在する。
【００１１】
その発病率、即ち各年の新症例数は世界中で増加傾向にあるが、その原因は不明である。フランスでは５０００〜１００００人がこの病気に冒されていると予想され、毎年約１１００の新症例が計上されている。
【００１２】
この疾患の進行は劇的であり、常に命にかかわる。つまり、この疾患は進行性悪化へと進行し、肋間筋と横隔筋を冒して寝たきりの状態及び呼吸困難を招き、急速（３〜５年以内）に死をもたらす。
【００１３】
ＡＬＳは生物学的異種と考えられるべき進行性の臨床上の異種である。
【００１４】
関節リウマチ（ＲＡ）は、昔は萎縮性関節炎と呼ばれた慢性進行性多発関節炎性炎症性疾患であって、骨軟骨破壊の原因であり、変形と強直を経て、痛みを伴う機能不全に至る。
【００１５】
従って、ＲＡは深刻な疾患となる可能性があり、兆候が表れ始めてから１０年後には半数を超える患者に重大な障害を引き起こし、彼らの平均余命を数年減少させることとなる。
【００１６】
フランスにおける有病率はおよそ１％であろう。最も多いのは慢性炎症性リウマチである。１年当たり７０００人が新しくこの疾患に冒され、まだ若い女性がこの疾患に冒されることが多い。
【００１７】
脊椎関節炎（ＳＡＲ）は、腰仙部を冒して強直を進行させるという症状を示す慢性リウマチ疾患である。この免疫学的炎症性疾患は組織適合性抗原Ｂ２７の過剰発現（症例の９０％で見られる）に繋がる。
【００１８】
従って、発病者数と公衆衛生にかかる費用の点から上記疾患の重大性は無視できない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
これまでのところ、上記疾患のステージを見極めるため及び／又は進行を予測するための生物学的試験は存在しない。唯一臨床試験によってのみ（但し補足的な試験により完成されるものでもよい）上記疾患を診断することができる。従って、自由に使えて、病院の不十分さを補う、特異的で、かつ、進歩的な診断試験を得ることが是非とも望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
出願人は、神経変性疾患が免疫担当細胞によって統合されている抗原の変性に関連して発症し、Ａ−イソタイプ及び／又はＭ−イソタイプの循環抗体を生産するという症状を示すことを明らかにした。これらの抗体は下記の表１に示す抗原に対するものである。表１は上記疾患が慢性的であることに関与する抗原の変性及び細菌性因子を示している。
【００２１】
【表１】
2004530871.tif 000002
【００２２】
従って、上記抗体の検出を、神経変性疾患の一般的な診断及び上記疾患の管理の中に加えることができる。
【００２３】
このような、生体液中の上記抗原の検出方法は、以下の段階、
−上記生体液を以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｃｈ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ−Ｈｉｓ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｐｈｅ、ＮＯ−Ａｒｇ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、ＮＯ−Ｃｒ、ＮＯ−ＢＳＡ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９：に接触させる段階、
−上記抗原とそれに対応する抗体の間に任意に形成される複合体を検出する段階
を含んでいてよい。
【００２４】
表１に示すように、細菌性抗原「Ｉｇ」に対する抗体の存在が検出される場合、この抗体はＡ−イソタイプ及び／又はＭ−イソタイプである可能性がある。
【００２５】
任意にニトロシル化されているウシ血清アルブミンを除く非細菌性抗原は、好ましく結合する。
【００２６】
本発明の意味において「結合した抗原」という語は、担体分子、好ましくはウシ血清アルブミンに、直接又はグルタルアルデヒド若しくはグルタル酸無水物を介して結合する抗原（Ｐａｌ、ＦａｒＣｙｓ、ＮＯ−Ｃｙｓ等）として理解される。このような結合は、例えばＢｏｕｌｌｅｒｎｅら（１９９５、１９９６）、Ｇｅｆｆａｒｄら（１９９８）の文献に記載されているような当業者に公知の方法によって行われる。
【００２７】
上記細菌性抗原は、表１に記載の細菌の培養物を超音波処理して得られる。
【００２８】
上記生体液は、具体的には、血清、血漿、全血液、尿、脳脊髄液であってよい。
【００２９】
方法としては、好ましくは「サンドイッチ」型の方法を用いてよい。
【００３０】
任意に形成される複合体の存在は、蛍光標識、ビオチン／ストレプトアビジン法の標識、（放射性）同位元素等の標識、又は、酵素に結合しているＡ又はＭ抗ヒト免疫グロブリン抗体を用いて明らかにされることができる。
【００３１】
本発明の方法は、好ましくは、適切な固形の担体を用いて行うことができる。
【００３２】
固形の担体としては、細胞懸濁液の取り扱いに適した手段であれば用いることができ、好ましくは、マイクロウェルを含む、チューブ、特定の磁気担体、又は、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ（塩化ビニル）若しくはニトロセルロース製の硬質の若しくは柔軟性のある微量滴定プレートを用いることができる。
【００３３】
ＮＨ２末端を有し、あらかじめ活性化させた微量滴定プレートを用いる場合、担体分子に抗原を「結合させる」ことは必須ではない。
【００３４】
「（放射性）同位元素に結合した抗体」という表現は、上記抗体が、その構造に特有の元素上、例えば構成要素であるチロシン残基上、又は、それに固定された特有のラジカル上のどちらかに放射性同位元素を有し、この放射性同位元素に付随する放射能の計数により上記抗体の測定を可能にするということを示している。
【００３５】
上記抗体が酵素に結合している場合、この酵素は、適切な試薬を用いて、上記抗体の定量を可能にする。
【００３６】
基質及び上記試薬は、上記酵素によって起こる、これらの物質を用いる１つ又は一連の反応の最終産物が、
−細胞周辺の液体媒質中に拡散し、最後に行う分光光度測定又は蛍光定量測定の被験物質である着色物質又は蛍光物質であり、
−細胞上及び細胞壁に固定的に付着し、任意的に各種標準色調と比較する場合に反射光度測定又は目視評価の被験物質である可能性がある不溶性着色物質である
ように選択される。
【００３７】
例えばヨウ素１２５等の（放射性）同位元素を用いる場合、試料に付随する放射能を適切な方法によりガンマーカウンターを用いて計数する。
【００３８】
酵素を用いる場合、上記酵素の基質と、着色物や不溶性着色物や可溶性蛍光物が上述の媒質に溶解した状態で最終的に得られるようにする１種以上の試薬とを含有する溶液を上記固形の担体に加えることにより、着色物又は蛍光物が得られる。この後、上記処理した試料から発生する光信号を、それぞれの場合に適した器具（それぞれ、透過・反射光度計又は蛍光光度計）を用いて測定した。固形の担体が微量滴定プレートである場合、光信号の測定値は同一プレートの全ウェルにおいて、生物学研究室で一般的に用いられる普通の自動読み取り装置を用いて連続して行ってよい。
【００３９】
アルカリフォスファターゼを酵素として用いてよい。その選択的基質は、最後に分光光度測定を行う場合はｐ−ニトロフェニルフォスフェート、蛍光光度測定を行う場合は４−メチルウンベリフェリルフォスフェート、不溶性着色反応産物を得る場合は５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェートである。選択的基質がｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドであるβ−ガラクトシダーゼも酵素として同様に用いてよい。
【００４０】
好ましくは、上記抗Ｉｇ抗体は従来通りペルオキシダーゼに結合させてよい。上記抗Ｉｇ抗体に結合しているペルオキシダーゼを検出するために用いる試薬は、酵素の基質である過酸化水素、及び、不溶性最終反応産物を得るためのｏ−フェニレンジアミン、３，３’−ジアミノベンジジン若しくはＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）等の、又は、更には媒質に可溶な蛍光反応産物を得るためのｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸等の適切な色原体を含有する。比色反応は硫酸を用いて停止する。
【００４１】
本発明の別の好ましい態様は、アセチルコリンエステラーゼに結合した抗免疫グロブリン抗体を用いることである。
【００４２】
アセチルコリンエステラーゼは、好ましくはフランス特許出願ＦＲ２５５０７９９号に記載の方法に由来する方法、又は、公知の方法による上記抗体断片の調製、適切な異種二価性試薬を用いた反応による上記酵素の変性、及び、最終的にこうして得られた産物を結合することを概略的に含む方法により上記抗体に結合している。
【００４３】
酵素活性の検出は、酵素の基質としてアセチルチオコリンを、かつ、色原体としてエルマン試薬（又は５，５’−ジチオ−２−ニトロ安息香酸）を用いる公知の方法によって、検討した事例に応じて方法を変えながら（例えばＡｎａｌ．Ｃｈｅｍ．５７（１９８５）１１７０−１１７３に記載の方法により）行うことが好ましい。
【００４４】
上記色原体は、そのまま又は水溶性の塩として用いる。
【００４５】
本発明の別の課題は、上記に記載の方法を実行するためのキットである。このキットは、好ましくは、
−以下の抗原のいずれか１つ：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｃｈ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ−Ｈｉｓ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｐｈｅ、ＮＯ−Ａｒｇ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、ＮＯ−Ｃｒ、ＮＯ−ＢＳＡ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１７及びＩｇ１９：、
−任意に少なくとも１種の上記Ａ−イソタイプ及び／又はＭ−イソタイプのヒト抗免疫グロブリン抗体
を含む。
【００４６】
このキットは、適切な固形の担体もまた含んでいてよい。
【００４７】
この試験は特に、
−上記疾患、特に、危険な状態の人における上記疾患の早期診断を確立すること、及び、その結果として上記疾患の治療において遅れのないようにすること、
−上記疾患の進行を管理すること、及び、その結果として上記治療を適切に行うこと
を可能にする。
【００４８】
以下の抗原：ＰＩ、Ａｃｈ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｒｐ、ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ａｓｎ、ＮＯ−Ｍｅｔ、Ｉｇ５（Ａ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１２（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１３（Ａ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１６（Ａ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１７（Ｍ−イソタイプ抗体）及びＩｇ１９（Ａ−イソタイプ抗体）：に対する抗体の検出は、特にＭＳの診断の確立を可能にする。以下の抗原：ＮＯ２−Ｔｙｒ、ＮＯ−Ｔｙｒ、Ａｃｈ及びＩｇ１６（Ａ−イソタイプ抗体）：に対する抗体の定量は、ＭＳの特定の形態（進行性、弛張性、弛張進行性）の識別を可能にする。
【００４９】
同様にして、以下の抗原：Ｏｌｅ、ＰＩ、ＭＡＤ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＦａｒＣｙｓ、Ｉｇ３（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ５（Ａ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１２（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１３（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１６（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）及びＩｇ１７（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）：に対する抗体の検出は、ＡＬＳの診断を確立すること、及び、抗体力価の関数としてこの疾患の３クラスを識別することを可能にする。
【００５０】
以下の抗原：Ｐａｌ、Ｏｌｅ、Ｍｙｒ、ＰＩ、ＭＡＤ、ＦａｒＣｙｓ、Ａｚｅ、ＮＯ−Ｃｙｓ、ＮＯ−Ｐｈｅ、Ｉｇ３（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ５（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１２（Ａ−イソタイプ抗体及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１３（Ｍ−イソタイプ抗体）及びＩｇ１９（Ａ−イソタイプ抗体）：に対する抗体の検出は、ＲＡの診断の確立を可能にする。
【００５１】
請求の範囲における記載の中で、以下の略称を用いることとする。
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
Ｇ：グルタルアルデヒド残基
ＧＡ：グルタル酸無水物残基
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ＯＰＤ：ｏ−フェニレンジアミン
Ｈ２Ｏ２：過酸化水素
Ｈ２ＳＯ４：硫酸
ＰＩ：ホスファチジルイノシトール
ＣａＣｌ２：塩化カルシウム
ＮａＣｌ：塩化ナトリウム
ＯＤ：光学濃度
ＨＳＡ：ヒト血清アルブミン
ＨＳＡ−ＥＡ：エチレンジアミン付加ヒト血清アルブミン
Ｉｇ：免疫グロブリン
Ａｃｈ：アセチルコリン
Ｏｌｅ：オレイン酸
Ｐａｌ：パルミチン酸
Ｍｙｒ：ミリスチン酸
ＦａｒＣｙｓ：ファルネシルシステイン
【００５２】
【化１】
2004530871.tif 000003
【００５３】
ＭＤＡ：マロンジアルデヒド（脂質過酸化に起因するネオエピトープ）
【００５４】
【化２】
2004530871.tif 000004
【００５５】
（Ｒ＝タンパク質）
ＮＯ−Ｃｙｓ：ＮＯ−システイン（システインのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００５６】
【化３】
2004530871.tif 000005
【００５７】
ＮＯ−Ｔｒｐ：ＮＯ−トリプトファン（トリプトファンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００５８】
【化４】
2004530871.tif 000006
【００５９】
ＮＯ−Ａｓｎ：ＮＯ−アスパラギン（アスパラギンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００６０】
【化５】
2004530871.tif 000007
【００６１】
ＮＯ−Ｔｙｒ：ＮＯ−チロシン（チロシンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００６２】
【化６】
2004530871.tif 000008
【００６３】
ＮＯ２−Ｔｙｒ：ＮＯ２−チロシン（過酸化亜硝酸（ＮＯ＋Ｏ２−）の形成に起因するネオエピトープ）
【００６４】
【化７】
2004530871.tif 000009
【００６５】
ＮＯ−Ｈｉｓ：ＮＯ−ヒスチジン（ヒスチジンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００６６】
【化８】
2004530871.tif 000010
【００６７】
ＮＯ−Ｐｈｅ：ＮＯ−フェニルアラニン（フェニルアラニンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００６８】
【化９】
2004530871.tif 000011
【００６９】
ＮＯ−Ｍｅｔ：ＮＯ−メチオニン（メチオニンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００７０】
【化１０】
2004530871.tif 000012
【００７１】
ＮＯ−Ａｒｇ：ＮＯ−アルギニン（アルギニンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００７２】
【化１１】
2004530871.tif 000013
【００７３】
ＮＯ−Ｃｒ：ＮＯ−クレアチン（クレアチンのニトロシル化に起因するネオエピトープ）
【００７４】
【化１２】
2004530871.tif 000014
【発明を実施するための最良の形態】
【００７５】
本発明は、単に例証として記載する以下の節及び実施例によってよりよく理解されるであろう。
【００７６】
＜１節：抗ＮＯ−システイン抗体の検査＞
ＭＥＲＣＫ−ＥＵＲＯＬＡＢ（ＰＯＬＹＬＡＢＯ）社より市販されている９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。ＮＯ−システイン−Ｇ−ＢＳＡ共役体（Ｂｏｕｌｌｅｒｎｅら（１９９５、１９９６）、Ｇｅｆｆａｒｄら（１９９８）の文献に記載の方法により調製）を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ−Ｇ）に１０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、プレートの光暴露を避けて撹拌しながら４℃で１晩置く。その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【００７７】
その後、被験血清をＴｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＢＳＡ−Ｇを含有するＰＢＳバッファーに１０００倍希釈したものを添加し、３７℃で２時間インキュベートする。
【００７８】
その後、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒより市販、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００７９】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２（酵素の基質）１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【００８０】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【００８１】
＜２節：抗ホスファチジルイノシトール抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。１０−２Ｍリン酸バッファーと１０−３ＭＣａＣｌ２の混合物（ｐＨ７）２０ｍＬから調製した２０μｇ／ｍＬの被覆溶液を各ウェルに添加し（Ｆａｉｄｅｒｂｅら（１９９０）、Ｂｒｏｃｈｅｔら（１９９１））、各ウェルをクロロホルムで飽和させ、ホスファチジルイノシトール（ＳＩＧＭＡより市販、Ｐ−５７６６参照）の母液４０μＬをハミルトンシリンジで、及び、ヘキサン／クロロホルム（８４／１６）混合物１００μＬを添加し、ＰＩを溶液（反応ブランク：ＢＳＡ）内に到達させる。ウェルは、白色沈殿が得られるまでボルテックスする。その後、プレートは撹拌しながら３７℃で１晩放置する。そしてプレートを少なくとも３０分間オーブンで乾燥させ、洗浄をＰＢＳで３回行う。
【００８２】
その後、以下の方法で得られる被験血清を添加する。その方法とは、検査の前夜にあらかじめ上記血清を２７ｇ／ＬのＮａＣｌを含有するＰＢＳバッファーに１０倍に希釈したものを調製し、４℃で１晩撹拌する。１００００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行う。上清を５０倍希釈する（１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＨＳＡ−ＥＡを含有するＰＢＳバッファーで最終的に５００倍に希釈したことになる）。
【００８３】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で２時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００８４】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２２０μＬ及び４％ＯＰＤ１ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【００８５】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【００８６】
＜３節：抗アセチルコリン抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ微量滴定プレートを用いる。コリン−ＧＡ−ＢＳＡ共役体（Ｓｏｕａｎら（１９８６）の文献に記載の方法により調製）を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ）に１０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＢＳＡ−ＧＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【００８７】
その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡ−ＧＡを含有するＰＢＳバッファーで１０００倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００８８】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに１００００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００８９】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【００９０】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【００９１】
＜４節：抗アゼライン酸抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ微量滴定プレートを用いる。Ａｚｅ−ＢＳＡ共役体（Ｄａｖｅｒａｔら（１９８９）の文献に記載の方法により調製）を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ）に１０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＨＳＡ−ＥＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【００９２】
その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び１ｇ／ＬのＨＳＡ−ＥＡを含有するＰＢＳバッファーで５００倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００９３】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに１００００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００９４】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【００９５】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【００９６】
＜５節：抗ファルネソール−システイン抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。ＦａｒＣｙｓ−ＢＳＡ共役体（クロロギ酸エチルでＦａｒＣｙｓを活性化した後、下記の７節に記載の脂肪酸について示す方法を用いてＢＳＡと結合させることにより調製）を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ）に２０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。洗浄をＰＢＳで３回行う。その後、２７ｇ／ＬのＮａＣｌ及び２ｇ／Ｌの脱脂ＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【００９７】
その後、２７ｇ／ＬのＮａＣｌ及び２ｇ／Ｌの脱脂ＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーで２５０倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【００９８】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【００９９】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２２０μＬ及び４％ＯＰＤ１ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【０１００】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【０１０１】
＜６節：抗ＭＤＡ抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。ＭＤＡ−ＢＳＡ共役体（Ａｍａｒａら（１９９５）の文献に記載の方法により調製）を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ）に８０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）、１０％グリセロール及び５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【０１０２】
その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）及び５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーで１０００倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。洗浄はＰＢＳで３回行う。
【０１０３】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【０１０４】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【０１０５】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【０１０６】
＜７節：抗脂肪酸抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。Ｏｌｅ−ＢＳＡ、Ｐａｌ−ＢＳＡ又はＭｙｒ−ＢＳＡ共役体（Ｍａｎｅｔａら（１９８７）、Ａｍａｒａら（１９９４ａ及びｂ）、Ｃｏｎｓｔａｎｓら（１９９５）、Ｂｏｕｌｌｅｒｎｅら（１９９６）の文献に記載の方法により調製）を１０−３ＭＣａＣｌ２含有炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：脱脂ＢＳＡ）に５０μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。洗浄は１０−３ＭＣａＣｌ２含有ＰＢＳで３回行う。
【０１０７】
その後、ＣａＣｌ２１０−３Ｍ及び１ｇ／Ｌの脱脂ＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーで１０００倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。洗浄は１０−３ＭＣａＣｌ２含有ＰＢＳで３回行う。
【０１０８】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０６１参照）をＣａＣｌ２１０−３Ｍ及び１ｇ／Ｌの脱脂ＢＳＡを含有するＳＰＢバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＳＰＢで３回洗浄する。
【０１０９】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【０１１０】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【０１１１】
＜８節：抗−抗原性細菌の抗体の検査＞
Ｍａｘｉｓｏｒｐ（Ｒ）微量滴定プレートを用いる。対応する細菌（表１参照）の培養物を超音波処理して得た細菌性抗原を炭酸バッファー（ｐＨ９．６）（反応ブランク：ＢＳＡ）に３４μｇ／ｍＬで溶解した溶液を各ウェルに添加し、撹拌しながら４℃で１晩置く。その後、５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーをウェルに添加し、３７℃で１時間後、ウェルの表面がタンパク質で飽和したものを得る。洗浄はＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回行う。
【０１１２】
その後、Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）及び２．５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーで５００倍希釈した被験血清を添加し、３７℃で２時間インキュベートする。洗浄はＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回行う。
【０１１３】
最後に、ペルオキシダーゼ標識ヒト抗ＩｇＡ又は抗ＩｇＭ抗体（ＳＡＮＯＦＩ−ＰＡＳＴＥＵＲ、７５０４１又は７５０６１参照）をＴｗｅｅｎ（Ｒ）及び２．５ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに５０００倍希釈した溶液をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートする。プレートをＴｗｅｅｎ（Ｒ）を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
【０１１４】
プレートをひっくり返してウェルの中身を出す。検出試薬を各ウェルに添加し（クエン酸・リン酸バッファー２０ｍＬに対して、Ｈ２Ｏ２１０μＬ及び４％ＯＰＤ０．５ｍＬを添加したもの）、暗所で１０分間呈色させる。４Ｎ硫酸５０μＬで反応を停止し、４９２ｎｍにおけるＯＤを測定する。
【０１１５】
結果を、以下の方法でコントロールの数に対して示す。
抗体力価＝（ＯＤｓｅｒｕｍ−ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ）／ＯＤａｖ．ｃｏｎｔｒｏｌｓ
【実施例１】
【０１１６】
＜ＭＳにおける循環抗体の定量＞
以下の表１は、前述の節に記載の方法により多数の対象について行った酵素抗体検査の結果を集めたものである。
【０１１７】
【表２】
2004530871.tif 000015
【０１１８】
ＭＳに有利であることを示す統計学的に有意な抗体反応が、３３の共役体のうち２３についてみられた。
【０１１９】
例えば、ＭＳに対する抗ＮＯ−Ｃｙｓの反応の特異性を、ラジカルの過程の関与が分かったコントロールとしての神経変性疾患（筋萎縮性側索硬化症、てんかん及びパーキンソン病）の特異性と比較した。結果は、多様な病状間のＭＳに有利なこの反応において有意差があることを示した。
【０１２０】
以下の表２は、１６の有意な共役体のうちＭＳの多様な形態（Ｐ：進行性、Ｒ：弛張性、ＲＰ：弛張進行性、ＣＯＮ：コントロール）間の関係を示す。
【０１２１】
【表３】
2004530871.tif 000016
【０１２２】
【表４】
2004530871.tif 000017
【０１２３】
ＭＳの臨床形態は、各共役体によって、それぞれ固有の方法で識別される。
・抗ＮＯ２−Ｔｙｒ抗体は、進行性形態及び弛張進行性形態を識別するために特に適切である（マン・ホイットニー、（上記２試料間のｐ）＝０．０１６７）。
・進行性ＭＳについては低い値が目立つ。
・抗ＮＯ−Ｔｒｐ抗体は、進行性形態及び弛張性形態を識別するための良好な指標である（マン・ホイットニー、ｐ＜０．０００１）。
・抗Ａｃｈ抗体は、弛張性形態を他の２つの形態から識別するために適切である（マン・ホイットニー、ｐ＜０．０００１）。
・抗Ａ−イソタイプＩｇ１６抗体は、進行性形態及び弛張性形態を識別するために適切である（マン・ホイットニー、ｐ＜０．０１）。
上記循環抗体は、ＭＳの形態及び１つの進行性形態から別の形態（弛張性形態／進行性形態）へ経過する上記全経路の識別を可能にする。この進行は、他の一般的な臨床又は調査のアプローチを用いても識別することができない。
【実施例２】
【０１２４】
＜ＡＬＳにおける循環抗体の定量＞
図２〜４は、ＡＬＳの３クラスを明示している。
・試験した血清の３９％（全１１８検体中）により構成されるクラス１は、以下の抗原の値が高いことが特徴である：ＦａｒＣｙｓ、Ｉｇ３、Ｉｇ５、Ｉｇ１６、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、及び、これらより低い値でＩｇ１７（これら全てのＩｇについて検出された抗体はＡ−イソタイプである）。図２参照。
・試験した血清の３４％により構成されるクラス２は、上記全２１種の抗原の値が低い（これらのうち１９種については平均値が０よりも小さい）ことが特徴である。ＦａｒＣｙｓ及びＰＩのみがコントロールと同じ程度の値に達している。図３参照。
・試験した血清の２７％により構成されるクラス３は、値が高く、特に以下の値が高いことが特徴である：Ｏｌｅ、Ａｚｅ、ＭＤＡ、ＰＩ、ＮＯＣｙｓ、Ｉｇ３、Ｉｇ１６、Ｉｇ１２、Ｉｇ１３、Ｉｇ１７（これら全てのＩｇについて検出された抗体はＭ−イソタイプである）、及び、これらより低い値でＩｇ５（このＩｇについて検出された抗体はＡ−イソタイプである）。図４参照。
【０１２５】
上記生物学的特徴は、進行型の様々なＡＬＳに帰属するべきものである。
【０１２６】
更に、試験した患者の８０％は、疾患が臨床的に進行する間、発症時と同じ群に属している。
【実施例３】
【０１２７】
＜ＲＡにおける循環抗体の定量＞
ＲＡ（全ステージ及び全経過）において、多くの抗体は、以下の表３に示すように、脂肪酸、アゼライン酸、ファルネシルシステイン、マロンジアルデヒド、ホスファチジルイノシトール、ＮＯ−システイン、ＮＯ−フェニルアラニン、並びに、免疫グロブリンＩｇ３（Ａ−イソタイプ及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ５（Ａ−イソタイプ及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１２（Ａ−イソタイプ及びＭ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１３（Ｍ−イソタイプ抗体）、Ｉｇ１７（Ｍ−イソタイプ抗体）及びＩｇ１９（Ａ−イソタイプ抗体）に対する抗体である。
【０１２８】
【表５】
2004530871.tif 000018
【０１２９】
これより、循環Ｍ−イソタイプ抗体の力価を調べることによって、ＲＡに起因する対象となる害の管理を補助できるということが分かる。
【０１３０】
参照
・ＡＭＡＲＡ  Ａ．，ＣＨＡＵＧＩＥＲ  Ｃ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「ＨＩＶ−１に感染している患者の血清における共役脂肪酸に対する自己抗体（Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ＨＩＶ−１  ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．）」ＡＩＤＳ，（１９９４ａ）８，７１１−７１３．
・ＡＭＡＲＡ  Ａ．，ＣＨＡＵＧＩＥＲ  Ｃ．，ＲＡＧＮＡＵＤ  Ｊ．−Ｍ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「ＨＩＶ−１に感染している患者の血清における共役脂肪酸に対する循環自己抗体（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ＨＩＶ−１  ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．）」Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（１９９４ｂ）９６，３７９−３８３．
・ＡＭＡＲＡ  Ａ．，ＣＯＮＳＴＡＮＳ  Ｊ．，ＣＨＡＵＧＩＥＲ  Ｃ．，ＳＥＢＢＡＮ  Ａ．，ＤＵＢＯＵＲＧ  Ｌ．，ＰＥＵＣＨＡＮＴ  Ｅ．，ＰＥＬＬＥＧＲＩＮ  Ｊ．Ｌ．，ＬＥＮＧ  Ｂ．，ＣＯＮＲＩ  Ｃ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「結合組織疾患及び血管炎におけるマロンジアルデヒド変性エピトープに対する自己抗体（Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｎ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ．）」Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９９５）１０１，１−６．
・ＢＯＵＬＬＥＲＮＥ  Ａ．，ＰＥＴＲＹ  Ｋ．Ｇ．，ＭＥＹＮＡＲＤ  Ｍ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「共役Ｓ−ニトロソシステインに対する循環抗体の特徴付けによる、多発性硬化症におけるＮＯの関与についての間接的証拠（Ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ＮＯ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  Ｓ−ｎｉｔｒｏｓｏｃｙｓｔｅｉｎｅ．）」Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９９５）６０，１１７−１２４．
・ＢＯＵＬＬＥＲＮＥ  Ａ．Ｉ．，ＰＥＴＲＹ  Ｋ．Ｇ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「多発性硬化症の患者の血清における共役脂肪酸に対する循環抗体（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．）」Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９９６）６５，７５−８１．
・ＢＲＯＣＨＥＴ  Ｂ．，ＦＡＩＤＥＲＢＥ  Ｓ．，ＡＵＤＨＵＹ  Ｓ．，ＧＯＳＳＥＴ  Ｉ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＯＲＧＯＧＯＺＯ  Ｊ．Ｍ．「多発性硬化症におけるホスファチジルイノシトールに対する自己抗体  多発性硬化症における現在の概念−ＥＣＴＲＩＭＳ第６回大会議事録（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ−ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ６ｔｈ  ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＥＣＴＲＩＭＳ．（Ｗｉｅｔｈｏｌｔｅｒ  Ｍ．，Ｄｉｃｈｇａｎｓ  Ｊ．））」ＭＥＲＴＩＮ  Ｊ．，Ｅｄｓ  Ｅｘｃｅｒｐｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，（１９９１）９７−１０２．
・ＣＯＮＳＴＡＮＳ  Ｊ．，ＣＯＮＲＩ  Ｃ．，ＰＥＬＬＥＧＲＩＮ  Ｊ．Ｌ．，ＳＥＲＧＥＡＮＴ  Ｃ．，ＳＩＭＯＮＯＦＦ  Ｍ．，ＰＥＵＣＨＡＮＴ  Ｅ．，ＤＵＢＯＵＲＧ  Ｌ．，ＴＨＯＭＡＳ  Ｍ．Ｊ．，ＰＥＬＬＥＧＲＩＮ  Ｉ．，ＢＲＯＳＳＡＲＤ  Ｇ．，ＢＡＲＢＥＡＵ  Ｐ．，ＡＭＡＲＡ  Ａ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＣＬＥＲＣ  Ｍ．，ＦＬＥＵＲＹ  Ｈ．，ＬＥＮＧ  Ｂ．「酸化的ストレスとＨＩＶ感染：特定されるべき概念と検討するべき治療方法（Ｓｔｒｅｓｓ  ｏｘｙｄａｔｉｆ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａ  ＶＩＨ：ｕｎｃｏｎｃｅｐｔ  ａ  ｐｒｅｃｉｓｅｒ  ａｎｄ  ｕｎｅ  ｖｏｉｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅ  ａ  ｅｘｐｌｏｒｅｒ（＜Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ：ａ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｔｏ  ｂｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ  ａｎｄ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  ｂｅ  ｅｘｐｌｏｒｅｄ＞）．Ａｎｎａｌｅｓ  ｄｅ  Ｍｅｄｅｃｉｎｅ  Ｉｎｔｅｒｎｅ，（１９９５）１４６，５１４−５２０．
・ＤＡＶＥＲＡＴ  Ｐ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＯＲＧＯＧＯＺＯ  Ｊ．Ｍ．「多発性硬化症における抗共役アゼライン酸抗体の同定と特徴付け（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｚｅｌａｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．）」Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（１９８９），２２，１２９−１３４．
・ＦＡＩＤＥＲＢＥ  Ｓ．，ＣＨＡＧＮＡＵＤ  Ｊ．Ｌ．，ＷＡＦＦＬＡＲＴ  Ｊ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．「悪性腫瘍を持つ病気対象の血清における膜リン脂質に対する自己抗体（Ａｕｔｏａｎｔｉｃｏｒｐｓ  ｄｉｒｉｇｅｓ  ｃｏｎｔｒｅ  ｕｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｅ  ｍｅｍｂｒａｎａｉｒｅ  ｄａｎｓ  ｌｅｓ  ｓｅｒｕｍｓ  ｄｅ  ｍａｌａｄｅｓ  ｐｏｒｔｅｕｒｓ  ｄｅ  ｔｕｍｅｕｒｓ  ｍａｌｉｇｎｅｓ．（＜Ａｕｔｏ−ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ｉｌｌ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｈａｖｉｎｇ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｕｒｓ＞））」ＣＲＡＳ，（１９９０）３１０，４９−５２．
・ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＢＯＤＥＴ  Ｄ．，ＣＬＡＵＤＥＰＩＥＲＲＥ  Ｐ．，ＭＥＴＺＧＥＲ  Ｊ．Ｍ．，ＳＩＢＩＬＩＡ  Ｊ．「神経疾患及びリウマチ疾患におけるＮＯ変性抗原に対する循環血清抗体（Ａｎｔｉｃｏｒｐｓ  ｓｅｒｉｑｕｅｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｔｓ  ｄｉｒｉｇｅｓ  ｃｏｎｔｒｅ  ｄｅｓ  ａｎｔｉｇｅｎｅｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｓ  ｐａｒ  ｌｅ  ＮＯ  ｄａｎｓ  ｌｅｓ  ａｆｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  ｒｈｕｍａｔｉｓｍａｌｅｓ．（＜Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ＮＯ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ＞））」，Ｉｍｍｕｎｏａｎａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｐｅｃ．，（１９９８）１３，２０９−２１７．
・ＭＡＮＥＴＡ−ＰＥＹＲＥＴ  Ｌ．，ＤＡＶＥＲＡＴ  Ｐ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＣＡＳＳＧＡＮＥ  Ｃ．，ＯＲＧＯＧＯＺＯ  Ｊ．Ｍ．「多発性硬化症における天然絹抗脂肪酸抗体（Ｎａｔｕｒａｌ  ｓｅｒｉｃ  ａｎｔｉ−ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．）」Ｎｅｕｒｏｓｃ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，（１９８７）８０，２３５−２３９．
・ＳＯＵＡＮ  Ｍ．Ｌ．，ＧＥＦＦＡＲＤ  Ｍ．，ＬＥＢＲＵＮ−ＧＲＡＮＤＩＥ  Ｐ．，ＯＲＧＯＧＯＺＯ  Ｊ．Ｍ．「筋無力症患者における抗アセチルコリン抗体の検出（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｍｙａｓｔｈｅｎｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．）」Ｎｅｕｒｏｓｃ．Ｌｅｔｔｅｒｓ．（１９８６）６４，２３−２８．
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】ＭＳの各形態及びコントロールのデータの分布を示す。
【図２】ＡＬＳクラス１について示す。
【図３】ＡＬＳクラス２について示す。
【図４】ＡＬＳクラス３について示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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