(57)【要約】非吸引性粘弾性物質、組成物、および使用方法を開示する。この非吸引性の遷移粘弾性物質は、眼のビスコサージェリー（ｖｉｓｃｏｓｕｒｇｅｒｙ）において有用な十分な粘度を有するが、ＩＯＰスパイクをほとんど生じないかまたは全く生じないで（すなわち、ＩＯＰスパイクモデルにおいて受容可能なＩＯＰスパイクプロフィールを生じる）、眼内に残され得る。本発明の組成物は、眼の外科手術における使用に適切な遷移粘性または遷移粘弾性のポリマー剤を含む。この組成物は、白内障外科手術において特に有用である。
2004530452.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶液中のポリマー剤を含む、滅菌された非炎症性の粘弾性組成物であって、該組成物は、２５℃にて少なくとも１Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を示し、該粘弾性組成物は、確認されたＩＯＰスパイクモデルで試験された場合にＩＯＰスパイクをほとんど示さないかまたは全く示さない、組成物。
【請求項２】
前記ポリマー剤が、疎水性に修飾された多糖またはムコ多糖（界面活性剤とともにまたは伴わずに）；透析した両性高分子電解質または逆に荷電した高分子電解質の透析した混合物；多糖またはムコ多糖とカチオン性親水性ポリマーとの混合物；温度に依存して配座遷移する多糖および親水性合成ポリマー；ならびにこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記溶液が、２５℃にて約５〜約１０，０００Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度および約１０００〜約２０，０００の粘度因子を示す、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリマー剤が、ＨＡ−アミド、ＨＡ−エステル、ＨＡ−アミン、ＨＡ−エーテル、ＨＡ−チオエーテル、ＨＡ−アルキル、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、疎水性に修飾された多糖である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記多糖が、オクチルアミドＨＡ、ドデシルアミドＨＡ、およびヘキサデシルアミドＨＡからなる群より選択されるＨＡ−アミドである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
眼の外科手術を実施する方法であって、
（ａ）眼の内部へのアクセスを提供するために該眼に外科的切開口を作製する工程；
（ｂ）該外科的切開口を通して請求項１に記載の粘弾性組成物を該眼の内部へ滴注する工程；および
（ｃ）該外科的切開口を閉鎖する工程、
を包含する、方法。
【請求項７】
前記粘弾性組成物が、２５℃にて約５〜約１０，０００Ｐａのゼロせん断粘度を有し、そして該粘度は、遷移粘弾性物質が約２５から約３７℃への温度変化を受けた場合に少なくとも５０％減少する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記外科的切開口が、前記粘弾性組成物を前もって外因性除去することなく閉鎖される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
有意な手術後の眼内圧スパイクを生じることなく、眼の外科手術を実施する方法であって、
（ａ）第１の治療有効量の遷移粘弾性物質を眼に滴注する工程であって、該遷移粘弾性物質が、２５℃にて少なくとも５Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を有する、滅菌された非炎症性の水溶液であり、そして該遷移粘弾性物質が、確認されたＩＯＰスパイクモデルで試験された場合にＩＯＰスパイクをほとんど示さないかまたは全く示さない、工程；および
（ｂ）第２の治療有効量の該遷移粘弾性物質を該外科手術の終了時に該眼内に残存させる工程、
を包含し、ここで、該遷移粘弾性物質の該第１および第２の治療有効量は、同じであっても異なってもよい、方法。
【請求項１０】
前記第１の治療有効量の遷移粘弾性物質が、組織保護有効量の該遷移粘弾性物質、組織操作有効量の該遷移粘弾性物質、および薬物送達有効量の該遷移粘弾性物質からなる群より選択され、そして前記第２の治療有効量の遷移粘弾性物質が、組織保護有効量の該遷移粘弾性物質および薬物送達有効量の該遷移粘弾性物質からなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記遷移粘弾性物質が疎水性に修飾されたＨＡを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記疎水性に修飾されたＨＡがＨＡであり、そしてオクチルアミドＨＡ、ドデシルアミドＨＡ、およびヘキサデシルアミドＨＡからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記外科手術が白内障外科手術である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
眼内の眼組織を、該眼組織に対する外科手術中に保護または安定化する方法であって、保護有効量または安定化有効量の滅菌された非炎症性の粘弾性組成物を該眼に滴注する工程を包含し、該粘弾性組成物は、確認されたＩＯＰスパイクモデルで試験された場合にＩＯＰスパイクをほとんど示さないかまたは全く示さない、方法。
【請求項１５】
水溶液中の疎水性に修飾された多糖を含む、滅菌された非炎症性の遷移粘弾性組成物であって、該溶液は、２５℃にて少なくとも１Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を示し、そして該溶液のゼロせん断粘度は、該溶液が約２５℃から約３７℃への温度変化を受けた場合に少なくとも５０％減少する、組成物。
【請求項１６】
前記溶液が、２５℃にて約５〜約１０，０００Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を有し、および約１０００〜約２０，０００の粘度因子を示す、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記疎水的に修飾された多糖が、ＨＡ−アミド、ＨＡ−エステル、ＨＡ−アミン、ＨＡ−エーテル、ＨＡ−チオエーテル、およびＨＡ−アルキル、ならびにそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記多糖が、オクチルアミドＨＡ、ドデシルアミドＨＡ、およびヘキサデシルアミドＨＡからなる群より選択されるＨＡ−アミドである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
眼の外科手術を実施する方法であって、
（ａ）眼の内部へのアクセスを提供するために該眼に外科的切開口を作製する工程；
（ｂ）該外科的切開口を通して遷移粘弾性物質を該眼の内部へ滴注する工程；および
（ｃ）該外科的切開口を閉鎖する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
前記遷移粘弾性物質が、２５℃にて約５〜約１０，０００Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を有し、そして該粘度は、該遷移粘弾性物質が約２５℃から約３７℃への温度変化を受けた場合に、少なくとも５０％減少する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記外科的切開口が、前記遷移粘弾性物質を前もって外因性除去することなく閉鎖される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
有意な手術後の眼内圧スパイクを生じることなく、眼の外科手術を実施する方法であって、
（ａ）第１の治療有効量の遷移粘弾性物質を眼に滴注する工程であって、該遷移粘弾性物質が、２５℃にて少なくとも５Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を有する、滅菌された非炎症性の水溶液であり、そして該粘度は、該遷移粘弾性物質が約２５℃から約３７℃への温度変化を受けた場合に、少なくとも５０％減少する、工程；および
（ｂ）第２の治療有効量の該遷移粘弾性物質を該外科手術の終了時に該眼内に残存させる工程、
を包含し、ここで、該遷移粘弾性物質の該第１および第２の治療有効量は、同じであっても異なってもよい、方法。
【請求項２３】
前記第１の治療有効量の遷移粘弾性物質が、組織保護有効量の該遷移粘弾性物質、組織操作有効量の該遷移粘弾性物質、および薬物送達有効量の該遷移粘弾性物質からなる群より選択され、そして前記第２の治療有効量の該遷移粘弾性物質が、組織保護有効量の該遷移粘弾性物質および薬物送達有効量の該遷移粘弾性物質からなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記遷移粘弾性物質が疎水性に修飾されたＨＡを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記疎水性に修飾されたＨＡがＨＡであり、そしてオクチルアミドＨＡ、ドデシルアミドＨＡ、およびヘキサデシルアミドＨＡからなる群より選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記外科手術が白内障外科手術である、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、外科手術手順における使用に適切な粘性材料および粘弾性材料の分野に関する。詳細には、（非せん断性に関連した可変の粘度を有する）遷移粘弾性物質（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｓ）を含む、非吸引粘弾性物質が開示され、これは、外科手術の終わりにインサイチュに残され得る。外科手術（特に、眼の手術）における遷移粘弾性物質の使用方法もまた開示される。
【０００２】
（発明の背景）
外科手術において使用される粘性剤または粘弾性剤は、（限定することなく）軟性組織の維持および支持、組織操作、潤滑、組織保護、および癒着防止を含む多くの異なる機能を果たし得る。これらの薬剤の異なるレオロジー特性が、これらの機能を果たす能力に必然的に影響を及ぼし、結果として、特定の外科手術手順に関するそれらの薬剤の適性に影響を及ぼすことが認識される。例えば、米国特許第５，２７３，０５６号を参照のこと。
【０００３】
白内障は、一般的に高齢者において生じる目の水晶体の混濁である。視力を改善するために、白内障の水晶体が外科手術で除去され、そして人工の眼内レンズがその場所に挿入される。これらの外科手術手順の間、粘弾性材料が、前房の崩壊を防止し、かつ身体操作より生じる損傷から組織を保護するために、代表的には前房および被膜バッグに注入される。
【０００４】
多数の粘性剤または粘弾性剤（以下「薬剤」）は、眼用手術用途に関して公知である。例えば、以下は全て白内障手術において有用である：Ｖｉｓｃｏａｔ（登録商標）（Ａｌｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）（ヒアルロン酸ナトリウムおよびコンドロイチン硫酸を含有する）；Ｈｅａｌｏｎ（登録商標）およびＨｅａｌｏｎ（登録商標）ＧＶ  （Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｃｏｒｐ．）、Ａｍｖｉｓｃ（登録商標）  ＲｅｇｕｌａｒおよびＡｍｖｉｓｃ（登録商標）  Ｐｌｕｓ  （ＩＯＬＡＢ）、ならびにＶｉｔｒａｘ（登録商標）（Ａｌｌｅｒｇａｎ）（これらは全てヒアルロン酸ナトリウムを含有する）；ならびにＣｅｌｌｕｇｅｌ（登録商標）（Ａｌｃｏｎ）（これは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含有する）。これらは、いくつかの目的（外科手術の間の前眼房の維持および眼の組織（特に、角膜内皮細胞）の保護を含む）のために、ならびに眼の組織を操作する際の補助として眼科の医師により使用される。
【０００５】
上記の薬剤の全ては、白内障の外科手術の際に使用され得るが、それぞれが特定の認識された利点および欠点を有する。米国特許第５，２７３，０５６号を参照のこと。しかし、一般的に、眼の外科手術において有用であるのに十分な粘性および擬塑性（ｐｓｅｕｄｏｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ）を有するような全ての薬剤は、外科手術の終わりに眼内に残される場合、「ＩＯＰスパイク」として知られる眼内圧（「ＩＯＰ」）の一過性の増加を生じる。（Ｏｂｓｔｂａｕｍ、Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ．Ａ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｔｓ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ、Ｊ．Ｃａｔａｒａｃｔ  Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  １８：１  （１９９２）を参照のこと）。この圧力増加は、これらの薬剤が、小柱網およびシュレム管を通る房水の通常の流出を妨害することに寄与した（Ｂｅｒｓｏｎら、Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｕｔｆｌｏｗ  ｂｙ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ｉｎ  Ｅｎｕｃｌｅａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｙｅｓ、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、９５：６６８（１９８３）；Ｏｌｉｖｉｕｓら、Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ａｆｔｅｒ  ｃａｔａｒａｃｔ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ｗｉｔｈ  Ｈｅａｌｏｎ（登録商標）；Ａｍ．Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｉｍｐｌａｎｔ  Ｓｏｃ．Ｊ．１１：４８０（１９８５）；Ｆｒｙ，Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｒｉｓｅｓ：Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｈｅａｌｏｎ、Ａｍｖｉｓ、ａｎｄ  Ｖｉｓｃｏａｔ，Ｊ．Ｃａｔａｒａｃｔ  Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  １５：４１５（１９８９）を参照のこと）。ＩＯＰスパイクは、その振幅および持続時間に依存して、感受性の眼の組織（限定することなしに、視神経が挙げられる）に対する有意な損傷および／または不可逆的損傷を引き起こし得る。
【０００６】
従って、薬剤を手術部位から（代表的には、吸引により）除去し得る容易さは、白内障手術における薬剤の有用性の全体的な評価における重要な特徴と、伝統的に考えられてきた。この薬剤を外科手術の終わる前に除去することにより、医師は、いかなる有意なＩＯＰスパイクも最少にするかまたは避けることを期待する。しかし、運悪く、（粘着性の反対で）比較的分散性であるか、または眼の組織に接着性である薬剤の除去は、しばしば困難であり、そして眼に対してさらなる外傷を生じ得る。
【０００７】
粘弾性物質の外因性希釈は、ＩＯＰスパイクを緩和すると示唆されてきた。米国特許第４，３２８，８０３号を参照のこと。しかし、使用される特定の粘弾性物質および外科手術技術に依存して、ＩＯＰスパイクは、なお問題であり得る。より最近では、眼中の従来の粘性剤または粘弾性剤を破壊するために分解性薬剤を投与することにより、ＩＯＰスパイクの発生を低減するかまたは避けられ得ることが示唆されてきた。例えば、米国特許第５，７９２，１０３号を参照のこと。このようなアプローチは、眼への第２の酵素薬剤（生体適合性でなければならないことが前提である）の投与だけでなく；特別な装置で２種類の薬剤を適切に混合するための手段も必要とする。
【０００８】
粘弾性物質はまた、その粘弾性物質が外科手術の間に適用される場合に投与される薬学的因子のための薬物送達デバイスとして推奨されてきた。例えば、米国特許第５，８１１，４５３号（Ｙａｎｎｉら）は、抗炎症性化合物を含有する粘弾性物質および白内障手術におけるこれらの増強粘弾性物質の使用方法を開示する。このアプローチは、外科手術の外傷から生じる眼の炎症を改善し得るが、このようなアプローチはなお、上記のような、ＩＯＰスパイクの問題を示すという重大な制限を有している。結果として、これらの増強された粘弾性物質は、なお外科手術の終わりに吸引されることを必要とする。
【０００９】
従って、眼の手術（特に白内障手術）における従来の粘性剤または粘弾性剤の使用に伴うＩＯＰスパイクを低減するかまたは避けるための改善された手段に対する必要性が存在する。より詳細には、分解剤を添加することなしに、その目的が手術において果たされた後に、実質的により低い粘性になるように、可変または遷移の粘度を有する、改善された粘性剤または粘弾性剤（このような薬剤を、以下本明細書中で遷移粘弾性物質という）に対する必要性を、本発明者らは認識した。有意な量のこのような遷移粘弾性物質は、次いで医師により眼に残されて、危険なＩＯＰスパイクを生じることなく、身体の自然なプロセスにより除去され得る。
【００１０】
遷移粘性は、特定の系で生じることが公知である。眼科分野では、眼に適用された後にゲルを形成する液体の系が公知である。例えば、このようなゲル化は、ｐＨ変化により開始され得る。Ｇｕｒｎｅｙら，「Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｆｏｒｍｅｄ  Ｇｅｌｓ、Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  ｐＨ」Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｏｃｕｌ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、（１９９３）８１−９０頁を参照のこと。温度感受性ゲル化系はまた、特定のイオン性界面活性剤と適切な濃度で混合された場合の特定のエチル（ヒドロキシエチル）セルロースエーテル（ＥＨＥＣ）について（Ｃａｒｌｓｓｏｎら「Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｇｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｎｉｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｅｔｈｅｒｓ  ａｎｄ  Ｉｏｎｉｃ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  ｉｎ  Ｗａｔｅｒ」Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  Ｓｕｒｆ．、第４７巻、１４７−６５頁（１９９０））および純粋なメチルエチルセルロースの系について（米国特許第５，６１８，８００号（Ｋａｂｒａら））観察された。より最近では、米国特許第６，１７７，５４４号において、眼用途用に改変されたコラーゲンが開示され、これは、変性の際に粘性を失い、除去を容易にすることが報告された。しかし、このような材料の商業的具体化で、利用可能であると考えられるものはない。異なる温度範囲への粘性移行を調節するように調整され得るカラゲナンもまた公知である（Ｖｅｒｓｃｈｕｅｒｅｎら「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎｓ  ａｓ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｖｉｓｃｏｌｙｓｅｒｓ」ＳＴＰ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｃｉ、第６巻、２０３−２１０頁（１９９６）、ａｎｄ  Ｐｉｃｕｌｌｅｌら、「Ｇｅｌｌｉｎｇ  Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎｓ」Ｆｏｏｄ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｅｄ：Ｓｔｅｐｈｅｎ、Ａ．Ｍ．、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、第６７巻、２０４−４４頁（１９９５）を参照のこと）。最後に、ゲラン（ｇｅｌｌａｎ）ゴム（Ｇｅｌｒｉｔｅ（登録商標））は、特定のもの（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ）と接触した際にゲルを形成することが公知である。Ｇｒｅａｖｅｓら「Ｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｉｃ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｌｌｉｎｇ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｉｎ  Ｍａｎ  ａｎｄ  Ｒａｂｂｉｔ」Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．、第９巻、４１５頁（１９９０）。ゲラン系は、眼用投薬のためのビヒクルとしての使用が示唆されており（Ｒｏｚｉｅｒら「Ｇｅｌｒｉｔｅ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ、Ｉｏｎ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ、Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｇｅｌｌｉｎｇ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ｆｏｒ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｖｅｈｉｃｌｅｓ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｉｍｏｌｏｌ」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、第５７巻、１６３頁（１９８９））、そしてあるゲラン系は、現在では緑内障薬としてチモロール（β遮断薬）と共に市場で売られている。
【００１１】
しかし、特に目の外科手術における、非コラーゲンベースの遷移粘性粘弾性剤の、有効な外科手術ツールとしての使用は、当該分野では開示も示唆もされていなかった。目の外科手術のツールとしての使用に最も有効となるように、所定の温度範囲にわたって所望の初期粘性遷移粘性を有することに加えて、薬剤は、好ましくは、以下の要件を満たす：生理学的に受容可能な重量オスモル濃度およびｐＨ；比較的短い粘性移行時間；透明（濁りがない）；生体適合性；および滅菌可能。本発明の遷移粘弾性物質は、これらの要件を満たすと考えられる。
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、外科手術手順（特に眼の手術手順）における使用のための改良された粘性剤または粘弾性剤に関する。より詳細には、本発明は、以下に記載されるＩＯＰスパイクモデルにおいて受容可能なＩＯＰスパイクプロフィールを生じる、所望の初期粘性を有するような任意の薬剤に関する。本発明の改善された薬剤は、眼の外科手術における使用に適切な遷移粘性または遷移粘弾性のポリマー剤を含む。本明細書中で使用される場合、用語「遷移粘弾性物質」とは、外科手術手順の間高い粘性を維持するが、危険なＩＯＰスパイクの発生を低減するかまたは避けるように、および外科手術手順の終わりにその粘弾性物質の積極的な除去の必要性を減らすかまたは防ぐように外科手術の終了後に急速に粘性を失うような薬剤を意味する。
【００１３】
外科手術の間の眼の組織の表面温度がおよそ室温かまたは約２５℃以下になることを理解して、本発明者らは、この温度では適切な粘性を維持するが、わずかに高い温度（すなわち、体温、約３７℃）において粘性を急速に失う薬剤を発見した。外因性の分解剤の添加なしに起こる粘性の損失は、外科手術が完了した後に眼を温めて体温に戻すことにより主に生じる。
【００１４】
本発明の遷移粘弾性物質の安定性は、本発明の特に重要な特徴である。この薬剤が、使用前に実質的な加水分解、酸化または他の分解を受ける場合、この薬剤は、その粘性特性を失い、そして有用でないか有用性の低い粘弾性物質を生じる。本発明の好ましい遷移粘弾性組成物は、実質的に安定であり、貯蔵温度において６ヶ月まで１％未満の分解を示す。これらの組成物は、慣例の白内障手術に使用され、そして外科手術後に眼に残された場合、ＩＯＰスパイク（以下で規定される）をほとんど生じないか全く生じない。
【００１５】
遷移粘弾性物質としての使用に適切な物質としては、限定することなく以下が挙げられる：疎水性に改変された多糖類またはムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸およびその塩）（ＨＡ）（界面活性剤を用いるかまたは用いない）；透析された両性高分子電解質または逆に荷電した高分子電解質の透析された混合物；カチオン性親水性ポリマーを伴う多糖類またはムコ多糖類（例えば、ＨＡ）；温度依存性コンホメーション変化を示す多糖類および親水性合成ポリマー；ならびにこれらの組合せ。疎水性に改変された多糖類またはムコ多糖類が好ましい。疎水性に改変されたＨＡ（特にＨＡ−アミド類）が最も好ましい。
【００１６】
（本発明の詳細な説明）
本発明は、粘弾性物質、そして特に遷移粘弾性物質、組成物および使用の方法に関する。遷移粘弾性物質の主な使用は、遷移粘弾性物質が、より粘稠状態で手術の間に適用され、手術後にインサイチュで実質的な粘性を喪失する外科適用である。遷移粘弾性物質の好ましい用途は、白内障手術であり、ここで、粘弾性物質が、ｉ）ドームを維持しそして露出した組織を保護するために、前眼房において；そして／またはｉｉ）カプセル状バッグを膨張させるために、前眼房において、滴下される。手術後、眼に残る粘弾性物質は、周囲の体温まで身体によって加熱され、その粘性を喪失し、そして眼のプロセスによって、（非遷移粘弾性物質よりも）容易に除去される。この好ましい用途における主要な利点は、他の系と共に生じ得るＩＯＰスパイクの回避である。従って、この用途の別の利点は、手術の完了後、手術部位から粘弾性物質を完全に吸引する必要があるという不利益なしで、医者に粘弾性物質の伝統的な利点を許容するということである。上記のように、このような吸引は、時間がかかり、そして患者に対してさらなる危険を提供する。
【００１７】
本発明の遷移粘弾性物質は、代表的に、実質的な加水分解なしでの、７０％以上の粘性の喪失を示し、ここで、このような物質は、およそ室温または手術温度（約１７〜２６℃）からおよそ体温（約３５〜３８℃）への温度変化を受ける。
【００１８】
上記のように、本発明の好ましい遷移粘弾性物質は、実質的に安定である。本明細書中で使用される場合、「実質的に安定な」は、加水分解、酸化、または他の分解によるこれらの疎水性側鎖の１％未満のみを喪失する粘弾性物質をいい、ここで、このような粘弾性物質は、６ヶ月まで、約４℃の冷蔵温度で貯蔵される。
【００１９】
本発明の粘弾性物質の遷移特性は、好ましくは可逆的である。好ましい実施形態の可逆的な粘度特性は、遷移粘弾性物質が、使用の前に加熱されるのを可能にし（例えば、熱滅菌）、次いで外科適用のために再冷却される。
【００２０】
本発明の遷移粘弾性物質のさらなる好ましい特性としては、以下が挙げられる：（１）手術後約２時間未満の移行時間；（２）少しの混濁を有するかまたは混濁を全く有さない光学的に透明なゲル；（３）眼球組織への安全な接着（すなわち、繊細な組織への保護コーティングを提供する能力）；および（４）生体適合性。
【００２１】
上記のように、白内障外科手順で使用される場合、本発明の遷移粘弾性物質の最も重要な特徴は、このような手術後にこれらがほとんどまたは全くＩＯＰスパイクを有さないことである。本発明の目的について、０．５ｍｌの１０％溶液（すなわち、緩衝化等張性塩溶液を含む本来の濃度の１０％に希釈された実際の製品組成物）が、以下に記載される確認されたＩＯＰスパイクモデル（「ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌ」）中の基線ＩＯＰを超えて、平均約１０ｍｍＨｇを超えないＩＯＰスパイクを生じる場合、遷移粘弾性物質は、「ほとんどまたは全くＩＯＰスパイク」を示さないと見なされる。
【００２２】
理論によって束縛されないが、本発明者らは、本発明の組成物の遷移粘弾性特徴が、所定の濃度でこのような低分子量分子から予測されるものを超える粘性を生じる、比較的低分子量分子間の物理的会合に起因し得ると仮定する。代表的には、本発明の遷移粘弾性物質は、改変された粘弾性物質であり、ここで、疎水性側鎖が、粘弾性化合物に共有結合されている。未改変の粘弾性物質は、種々の程度で、種々の部分と置換され、本発明の遷移粘弾性物質を生じ得る。例えば、全ての粘弾性物質の適切な側鎖（例えば、以下にさらに記載されるエステルおよびアミドの遷移粘弾性物質については、カルボン酸側鎖）は、置換され得る（すなわち、１００％置換）か、または少しの側鎖が置換され得る（例えば、１５％置換）。一般に、遷移粘弾性物質は、既知の粘弾性に由来するか、または上記の特性を示すように改変される。遷移粘弾性物質の調製において有用な市販の粘弾性物質の例としては、ヒアルロン酸（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ））、硫酸コンドロイチン（ＣＳ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の塩、ならびにＨＡおよびＣＳの組み合わせが挙げられる。遷移粘弾性物質を調製する際に有用な他の粘弾性物質としては、透析された両性高分子電解質（例えば、カルボキシメチルセルロース）が挙げられる。
【００２３】
遷移粘弾性物質は、種々の分子量の粘弾性ポリマーから構成され得る。一般に、未改変ポリマーの平均分子量は、５０，０００〜１，０００，０００ダルトンの範囲である。ＨＡベースの遷移粘弾性物質については、未改変ＨＡポリマー骨格の平均分子量は、好ましくは、約１２０，０００〜約４００，０００ダルトン（重量平均分子量）および約５０，０００〜約３５０，０００ダルトン（数平均分子量）の範囲である。従来の濃度でのこれらの好ましい未改変ＨＡは、好ましい外科目的について不十分な粘性を示す。粘弾性物質の分子量は、光散乱を用いてか、または屈折指標の検出を使用する既知の分子量の標準分子量に対して、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）（これはまた、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）と称される）の方法によって推定され得る。分子量は、代表的に、これらの既知の粘弾性物質の粘性の程度に影響する。本明細書中に記載される遷移粘弾性に関する全ての分子量は、他に示されない限り、遷移粘弾性物質を生じる前の、改変前の未改変粘弾性ポリマーの数平均分子量である。
【００２４】
ＨＡ（遊離酸および塩形態）は、上の特性を示すように改変され得、従って、本発明の遷移粘弾性物質として有用である。例えば、ドデシル部分は、ＨＡの骨格のカルボン酸基に共有結合され、そのドデシルエステルを形成し得る。本明細書中で使用される場合、種々の部分を有するこれらの側鎖のエステル化によって改変されたＨＡは、「ＨＡ−エステル」と称される。ＨＡのカルボン酸基上で置換され得るエステルの例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、へプタデシル、オクタデシル、ノナデシルのようなアルキル基、または３０個までの炭素を含む任意の他のアルキル基；シクロアルキル基（例えば、シクロヘキシル）；およびアリール基（例えば、フェニル）；ならびに前述の基の任意のアイソマーが挙げられるが、これらに限定されない。このような置換基は、必要に応じて、さらに置換され得、そしてＯ、ＮおよびＳからなる群より選択される原子を必要に応じてそこに含み得る。このようなＨＡエステルは、Ｆｉｄｉａ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ａｂａｎｏ  Ｔｅｒｍｅ，Ｉｔａｌｙ）より入手可能であるか、または当該分野で公知の方法（例えば、米国特許第５，４６６，４６１号；同第５，６１６，５６８号；および同第５，６５２，３４７号（これらの内容は、本明細書中に参考として援用される））によって合成され得る。このような置換の程度および型は、低せん断または見かけの粘度および低せん断粘着、ならびに上昇した温度での粘性および接着に影響する。疎水性置換基が好ましい。
【００２５】
本発明の組成物の流体力学的特性に影響するいくつかの因子（例えば、置換の型および程度、粘弾性ポリマー（未改変）の平均分子量および濃度）が存在するので、種々のパラメーターの種々の組成物は、同様の流体力学的特性を生じ得る。例えば、ドデシル化カルボキシル基で１４％置換されている２００ｋＤａｌ  ＨＡの０．８８％  ｗ／ｖ溶液、ドデシル化カルボキシル基で１１％置換された２００ｋＤａｌ  ＨＡの１．２％  ｗ／ｖ溶液、およびヘキサデシル化カルボキシル基で４％置換された２００ｋＤａｌ  ＨＡの２．５５％  ｗ／ｖ溶液は、全て、同様の粘性および遷移挙動を示す。従って、本発明の遷移粘弾性物質は、「粘度因子」（これは、以下の式によって決定される）によって特徴付けられ得る：
濃度    ×      分子量      ×    置換％      ＝  粘度因子
（ｗ／ｖ％）    （未改変ポリマー
（キロダルトン））
本発明の遷移粘弾性物質は、約２００〜約５０，０００の範囲の粘度因子を有する。本発明の好ましい遷移粘弾性は、約１０００〜約２０，０００の範囲の粘度因子を有する。最も好ましいのは、約２０００〜約１０，０００の粘度因子を有する遷移粘弾性物質である。
【００２６】
当業者は、種々のパラメーターの組成物が類似の流体力学的特性（前述のグラフを参照のこと）を生じ得ることを理解するように、同じまたは類似の粘度因子を有する組成物は、パラメーターの相互作用に起因して、有意に異なる流体力学的特性を有し得ることが理解される。粘度因子は、現在意図される目的のための粘弾性の適合性組成物の唯一の一般的な指標である。当業者は、１つ以上のパラメーターを改変することによって、所定の目的のための最適な流体力学的特性が達成され得ることをさらに理解する。
【００２７】
好ましい改変されたヒアルロン酸としては、ＨＡのアルキルアミドまたはアリールアミドを形成するための、アルキル基またはアリール基でのＨＡのカルボン酸基の部分的なアミド改変を含む。本明細書中で使用される場合、このような分子は、「ＨＡ−アミド」と称される。ＨＡのカルボン酸基上で置換され得るアミドの例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、へプタデシル、オクタデシル、ノナデシルのようなアルキル基、または３０個までの炭素を含む任意の他のアルキル基；シクロアルキル基（例えば、シクロヘキシル）；およびアリール基（例えば、フェニル）；ならびに前述の基の任意の異性体が挙げられるが、これらに限定されない。このような置換基は、必要に応じて、さらに置換され得、そしてＯ、ＮおよびＳからなる群より選択される原子を必要に応じてそこに含み得る。最も好ましいアミド置換基は、ドデシルである。
【００２８】
置換の程度はまた変化し得る。一般に、置換は、約２〜６０％である。好ましい置換レベルは、約５〜４０％である。好ましいアミド置換基は、オクチル、ドデシル、およびヘキサデシルであり；ドデシルが最も好ましい。オクチルアミドＨＡについて、好ましい変数は以下である：３０〜４０％の置換レベル；１〜３重量％のポリマー濃度；および２００〜３５０キロダルトン（「ｋＤａｌ」）（重量平均）または１２０〜２３０ｋＤａｌ（数平均）の未改変ＨＡの分子量。ドデシルアミドＨＡについて、好ましい変数は、以下である：５〜３２％、より好ましくは１５〜２５％、および最も好ましくは１０〜２０％の置換レベル；０．３５〜１．２重量％のポリマー濃度；および２００〜３５０ｋＤａｌ（重量平均）または１２０〜２３０ｋＤａｌ（数平均）の未改変ＨＡの分子量。あるいは、低分子量未改変ＨＡが使用され得る。このような低分子量遷移粘弾性物質についての好ましいパラメーターは、以下である：５０〜１５０ｋＤａｌ（重量平均）の分子量、２５〜４０％のアミド（好ましくは、ドデシル）置換レベル、および０．５〜２％（ｗｔ．／ｖ．）のポリマー濃度を有する未改変ＨＡ。ヘキサデシルアミドＨＡについて、好ましい変数は、以下である：５〜１５％の置換レベル；０．３〜０．８重量％のポリマー濃度；および２００〜３５０ｋＤａｌ（重量平均）または１２０〜２３０ｋＤａｌ（数平均）の未改変ＨＡの分子量。置換レベルは、実施例１１に記載されるように、ＮＭＲによって決定され得る。多くの場合において、本明細書中で実施例において特定される置換レベルは、ＨＡ−アミド（Ｆｉｄｉａ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ）の供給業者によって提供された。
【００２９】
本発明の遷移粘弾性組成物は、一般的に、粘性外科（ｖｉｓｃｏｓｕｒｇｉｃａｌ）手順において有用な十分なゼロせん断粘度を有する。典型的に、このようなゼロせん断粘度は、２５℃で少なくとも１Ｐａ−ｓである。２５℃で約５〜１０，０００Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を示す組成物が好ましい。２５℃で約４０〜１０００Ｐａ−ｓのゼロせん断粘度を示す組成物が、最も好ましい。
【００３０】
ＨＡ−アミドは、Ｆｉｄｉａ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ａｂａｎｏ  Ｔｅｒｍｅ，  Ｉｔａｌｙ）から商業的に得られ得、ＤａｎｉｓｈｅｆｓｋｙおよびＳｉｓｋｏｖｉｃの「Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｘｙｌ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  Ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｉｎ  Ａｍｉｄｅｓ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｅｓｔｅｒｓ」，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓ．１６巻，１９９−２０５頁（１９７１）、ＢｕｌｐｉｔｔおよびＡｅｓｃｈｌｉｍａｎｎの「Ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ」，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．４７巻，１５２−１６９頁（１９９９）によって記載される方法によって合成され得るか、または他の方法によって合成され得る。ＨＡのアミドおよびその調製のためのプロセスを開示するＷＯ  ００／０１７３３（Ｂｅｌｌｉｎｉら）は、本明細書中で参考として援用される。この参考文献は、一般的に、粘弾性手術または眼科手術において使用するための、薬物送達のためのビヒクルとしてのこのようなアミドの使用を開示するが、本発明の新規な組成物および方法を開示も示唆もしていない。
【００３１】
本発明の他の遷移粘弾性物質としては、修飾されたＨＡが挙げられ、ここで、疎水性基が、ヒドロキシル部分、Ｎ−アセトアミド部分、またはカルボキシル基を介してＨＡに結合し、変換されて、疎水性のアミン（「ＨＡ−アミン」）、エーテル（「ＨＡ−エーテル」）、チオエーテル（「ＨＡチオエーテル」）およびアルキル（「ＨＡ−アルキル」）側鎖を形成する。このような遷移粘弾性物質の例としては、ＨＡアルキルエーテル、ＨＡアルキルアミン、ＨＡアルキルチオエーテル、ＨＡアルキルカルバメート、ＨＡアルキルチオカルバメート、ＨＡアルキルチオ尿素、およびＨＡアルキル尿素が挙げられ、ここで、アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、または３０炭素までを含む任意の他のアルキル基；および、シクロアルキルおよびアリール異性体を含むアルキル基の任意の異性体であり得る。このような遷移粘弾性物質は、例えば、Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２中に開示された方法によって調製され得る。
【００３２】
変動する分子量のコンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、本発明の遷移粘弾性物質を生成するために、上述のＨＡと同様に修飾され得る。例えば、カルボキシレート基は、ＨＡを用いて上に記載された様式と類似の様式においてアミド化され得る。さらに、コンドロイチン硫酸のヒドロキシル部分またはＮ−アセトアミド部分は、同様のアルキル、シクロアルキルおよびアリール置換基を用いたＨＡに関して上述と同じ様式において、本発明の遷移粘弾性物質を生成するために、疎水性アミン、エーテル、チオエーテル、カルバメート、チオカルバメート、尿素、およびチオ尿素へと変換され得る。このような遷移粘弾性物質の例としては、ＣＳアルキルエーテル、ＣＳアルキルアミン、ＣＳアルキルチオエーテル、ＣＳアルキルカルバメート、ＣＳアルキルチオカルバメート、ＣＳアルキルチオ尿素、およびＣＳアルキル尿素が挙げられ、ここで、アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、または３０炭素までを含む任意の他のアルキル基；ならびにシクロアルキルおよびアリール異性体を含む、このような基の任意の構造異性体であり得る。このような遷移粘弾性物質は、Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２に開示される方法によって調製され得る。
【００３３】
以下の実施例１〜６は、本発明の好ましい組成物の例である。
【００３４】
（実施例１）
【００３５】
【表１】
2004530452.tif 000003
（実施例２）
【００３６】
【表２】
2004530452.tif 000004
（実施例３）
【００３７】
【表３】
2004530452.tif 000005
（実施例４）
【００３８】
【表４】
2004530452.tif 000006
（実施例５）
【００３９】
【表５】
2004530452.tif 000007
（実施例６）
【００４０】
【表６】
2004530452.tif 000008
以下の実施例７〜１８は、本発明の組成物のレオロジー特性を示す。
【００４１】
（実施例７）
本発明のＨＡ−アミド組成物のレオロジー特性を、種々の濃度にわたって、類似の非遷移のＨＡ組成物と比較した。実施例３の１０％置換されたドデシルアミド−ＨＡ処方物（０．２％、０．４％、０．６％、０．８％および１．０％ｗ／ｖ）および前駆体の非修飾ＨＡを含むコントロール組成物（０．２、０．４、０．６、０．８および１．０％）を、以下の手順に従って、調製した。種々の処方物を含む容器にふたをして、時々攪拌して、全てのドデシルアミドＨＡまたはＨＡ粉末が緩衝液中に浸されており、完全溶解が起こったことを確認しながら、５０℃で４時間加熱した。次いで、各溶液を、別個の５ｃｃシリンジに移し、ふたをして、２５００ＲＰＭで遠心分離して、泡を除いた。次いで、ロードしたシリンジを、Ｄｕａｌ−ハブアセンブリを介して各々、空の５ｃｃシリンジと、つないだ。シリンジを１時間冷却し、それぞれのアセンブリで５０の経路を用いて混合した。
【００４２】
レオロジー分析を行なうために、サンプルをＢｏｈｌｉｎ  ＣＳ−１０（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ）サンプルプレート上で２７ゲージ針を通し吸引し、２７ゲージ針を通ってサンプルをおき、装置をビスコメトリーモードにセットした。サンプルの粘度を、１６℃で１．０９〜５２．８９Ｐａのせん断応力を使用して、せん断速度に対して測定した。フルせん断速度まで近づくにつれて、可能な掃引が使用され、高せん断速度終点での求心力に起因して、可能なサンプルのロスについて考慮する。各々のサンプルに関して、次いで、１０℃〜５０℃の温度範囲および２．５℃／分の加熱速度を使用して、遷移の挙動（粘度  対  温度）を特徴付けた。各サンブルを、同一のパラメータを用いて処理した。まとめた結果は、表１に含まれる。
【００４３】
（表１：１６℃での、１０％置換されたドデシルアミン−ＨＡ  対  コントロールＨＡの粘度）
【００４４】
【表７】
2004530452.tif 000009
表１に示されるように、ドデシルアミド−ＨＡ組成物は、修飾されていないＨＡ組成物よりも非常に高い粘度であった。また、低いせん断粘度における、約５桁におよぶ増加は、デシルアミド−ＨＡ濃度の増加（すなわち、０．２％〜１．０％ｗ／ｖ）と相関関係にあった。
【００４５】
（実施例８）
実施例４の組成物を、レオロジー的に評価した。組成物を、実施例６において開示される方法と同様の方法で調製した。
【００４６】
このサンプルを、Ｂｏｈｌｉｎ  ＣＳ−１０制御された応力レオメーターを用いて、実施例６に記載されるのと同じ手順を用いて、０．４１〜３２．５８Ｐａのせん断応力範囲で、粘度  対  せん断速度に関して、レオロジー的に処理した。この結果は、表２に含まれる。
【００４７】
（表２：１６℃での、３２％置換されたオクチルアミド−ＨＡに関する粘度  対  せん断応力）
【００４８】
【表８】
2004530452.tif 000010
表２に示されるように、１％溶液は、約１０００Ｐａ−ｓの低いせん断粘度を示した。
【００４９】
類似の実験において、組成物の粘度を、１７℃〜３７℃の温度範囲にわたって、１．７８１Ｐａのせん断応力を用いて試験した。結果は、表３に報告される。
【００５０】
（表３：３２％置換されたオクチルアミド−ＨＡの１％溶液に関する、粘度  対  温度）
【００５１】
【表９】
2004530452.tif 000011
表３に示され、そして図３に図示されるように、この物質の遷移の粘度損失挙動は、温度の増加と直線的に相関する。この温度範囲にわたる総粘度損失は、約８８％であった。
【００５２】
（実施例９）
本発明の好ましい組成物の貯蔵安定性を、保持された粘度の測定として、以下の実験において観察した。実施例２のドデシルアミド−ＨＡを、４℃および室温（「ＲＴ」、すなわち、２１〜２３℃）で５．５ヶ月にわたってインキュベートした。所定の時点で、各組成物のアリコートを取り出し、サンプルのレオロジー分析（この実施例に関するせん断応力の範囲は、０．１６〜５２．８９Ｐａであった）を行った。この結果は、表４に列挙され、図４に図示される。
【００５３】
（表４：１０％置換されたドデシルアミド−ＨＡの０．８％溶液の粘度安定性）
【００５４】
【表１０】
2004530452.tif 000012
表４に示されるように、ゼロ時間（コントロール）と１ヶ月インキュベーション時点との間で、粘度において、ドデシルアミド−ＨＡ組成物は、低せん断条件で、１６Ｐａ−ｓの最初のシフトを受けた。しかし、粘度は、１ヶ月インキュベーション時点から５．５ヶ月インキュベーション時点まで安定であった。
【００５５】
５．５ヶ月にわたって４℃で貯蔵したヘキサデシルアミド−ＨＡ組成物の遷移の安定性もまた、試験した。結果は、表５に開示される。
【００５６】
（表５：４℃にてリン酸緩衝化生理食塩水中で保存された８％の置換ヘキサデシルアミド−ＨＡの、粘性  対  温度安定性分析）
【００５７】
【表１１】
2004530452.tif 000013
表５および図５に示すように、全ての組成物の粘度は、２５℃から３７℃への温度変化を通じて遷移し、２．８９Ｐａのせん断応力でその粘度の７０％〜８０％を失った。このことは、同様の出発粘度のヒアルロン酸溶液に対する、約３５％のみの粘度の喪失に匹敵する。
【００５８】
（実施例１０）
本発明のドデシルアミド−ＨＡ組成物の安定性を、以下の実験を用いて観察した。実施例７の１％（ｗ／ｖ）ドデシルアミド−ＨＡ組成物を、６ヶ月間、４℃、室温（２１〜２３℃）および３７℃でインキュベートした。適切な時点で、１アリコートの組成物を取り、ドデシルアミド−ＨＡの化学的安定性を、キャピラリーガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を使用して分析した。ＧＣを、以下のパラメータを用いて、フレームイオン化検出器（ＦＩＤ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５８９０Ａ  ＧＣシステムで実行した：
【００５９】
【表１２】
2004530452.tif 000014
使用したカラムは、Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｆｏｌｓｏｍ、ＣＡ）製のＤＢ５縮合シリカキャピラリーカラム（０．３２ｍｍの内径および１．０ｍｍの薄膜厚みを有する、長さ３０メートル）であった。
【００６０】
所定のインキュベーション時間後、サンプルを、１重量部のエタノールに対して２重量部の酢酸エチルの混合物の１当量と混合し、そして５０℃で１時間インキュベートした。この混合物に、さらに３重量部の酢酸エチル−エタノール混合物をを添加した。この第二の添加は、多糖の沈殿をもたらし、この沈殿を遠心分離して、上清を、分解疎水性基であるドデシルアミンの存在について、ＧＣによって分析した。ドデシルアミン−ＨＡの側鎖の１００％の加水分解が生じた場合、１０％の置換ドデシルアミン−ＨＡの完全な沈殿によって、上清中に４２ｐｐｍのドデシルアミンを生じた。この試験結果は、１ｐｐｍ未満のドデシルアミンが、種々の温度およびインキュベート時間を通じて、処理された組成物サンプルの上清中に存在することを示した。これらの結果は、遷移粘弾性物質のアミド結合が、緩衝化された組成物中で非常に安定であることを示した。
【００６１】
（実施例１１）
疎水性に修飾されたヒアルロン酸（ＨＭ−ＨＡ）化合物の疎水性基置換レベルの決定のためのＮＭＲ分析）
４ｍＬのガラスバイアル中に、３〜５ｍｇのＨＭ−ＨＡ物質を添加した。同じバイアル中に、０．８ｍＬの水を添加し、次いでこのバイアルを５〜１０秒間ボルテックスミキサー上で攪拌した。このサンプルバイアルを５０℃に設定したオーブン中に配置し、そして一晩（１５〜２０時間）加熱して溶解させた。次の日、ヒアルロン酸リアーゼ（６００〜９００単位／密封アンプル、カタログ番号Ｈ−１１３６、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）酵素溶液を、密封アンプルをカチッと開け、そして約９００単位の酵素（１単位／μＬ）を含むアンプルに、０．８ｍＬの水を添加することによって調製した。次いで、このバイアルに、１００μＬ（０．１ｍＬ）の酵素溶液を添加した。このバイアルにキャップをし、そして３７℃のオーブンに一晩（１５〜２０時間）配置した。
【００６２】
次の日、このバイアルをオーブンから取り出し、そして１００μＬ（０．１ｍＬ）の重水（９９．６％原子−％Ｄ、カタログ番号４２，３４５−９、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）をこのバイアルに添加した。混合後、この溶液を、ガラスの使い捨て移動ピペットを使用して、ＮＭＲチューブに移した。次いで、このサンプルを分析して、厳密なピーク信号取り込みを用いて、湿度抑制モードで作動し得る、６００ＭＨｚのＢｒｕｋｅｒ  ＮＭＲ機器で、プロトンＮＭＲスペクトルを獲得した。
【００６３】
酵素処理したＨＭ−ＨＡサンプルのＮＭＲスペクトルを使用して、疎水性置換レベルを、０．８〜１．３ｐｐｍの疎水性残基を示す３つの信号  対  Ｎ−アセチルメチル基についての２．０〜２．１ｐｐｍでの２〜４つの信号についての積分値を、一緒に加えることによって、取り込み値から計算した。
【００６４】
０．８〜１．３ｐｐｍの間の３つの信号は、疎水性基（ｎ個の炭素原子を含む）中のＣ２〜Ｃｎ炭素に結合した水素原子に由来する。このヒアルロン酸リアーゼ酵素は、疎水性基領域においてもＮ−アセチルメチル信号領域においても、干渉信号を有さない。Ｎ−アセチルメチル基は、ＨＡ構造の反復単位毎に存在するので、疎水性置換レベルは、Ｎ−アセチルメチル基の積分値に対する疎水性基の積分値の比から計算され得る。従って、ｎ個の炭素を有する、その水性置換基としての直鎖ノルマルアルキル基［−（ＣＨ２）ｎ−１ＣＨ３］で置換されたＨＭ−ＨＡ物質の置換の程度の計算を、以下の式：
％疎水性置換＝［積分０．８〜１．５ｐｐｍ／（２（ｎ−１）＋１）］／［積分２．０〜２．１ｐｐｍ／３］×１００
によって与え得る。
【００６５】
（実施例１２）
以下の実施例は、本発明のあまり好ましくない粘弾性剤の、より低い安定性を実証する。実施例１〜６の組成物と類似の組成物（ここで、この粘弾性剤は、１５％のドデシルエステル−ＨＡ、ナトリウム塩（約２００ｋＤａ）または４３％もしくは５２％のベンジルエステル−ＨＡ、ナトリウム塩（約２００ｋＤａ最終、修飾された粘弾性物質）のいずれかで置換される）を、実施例７に開示の方法と類似の様式で調製した。この組成物を、４℃、室温および３７℃で、９．５週間インキュベートした。ドデシルアルコールまたはベンジルアルコール（それぞれの疎水性エステル側鎖の分解生成物）を、実施例１０のＧＣ方法を使用して定量した。
【００６６】
所定のインキュベーション時間後、サンプルを４容量のアセトン（これは、多糖の沈殿を生じる）と混合した。次いで、沈殿した多糖を遠心分離し、そして上清を、適切なアルコールの存在について、ＧＣによって分析した。
【００６７】
ドデシルエステル−ＨＡまたはベンジルエステル−ＨＡの側鎖の完全な加水分解は、それぞれ、上清中に７０ｐｐｍのドデシルアルコールまたは４００ｐｐｍのベンジルアルコールを生じた。この結果を、表６に開示する。
【００６８】
（表６：４℃にてリン酸緩衝化生理食塩水中の保存したＨＡ−エステルの％加水分解）
【００６９】
【表１３】
2004530452.tif 000015
上に示したように、匹敵する修飾粘弾性物質の加水分解は、種々の時点において１％より高かった。粘弾性組成物が、保存安定性を有することが所望であるので（すなわち、粘弾性生成物は、代表的に、２年の有効期限満了日を必要とする）、上記の加水分解率を示す粘弾性物質は、本発明の組成物においてあまり有用でないとみなされる。
【００７０】
（実施例１３）
５０％のカルボン酸置換でのＨＡのベンジルエステル（約２００ｋＤａ）の３％溶液を、塩化ナトリウムを有するリン酸緩衝液中および平衡塩を有するクエン酸／酢酸緩衝液中で調製した。これらの溶液は、光学的に透明な粘弾性ゲル（これは、２７ゲージの針を通して容易に吸引された）を形成した。これらの溶液は、２５℃（ｋ．ｅ．、約２００Ｐａ−ｓ）で、Ｖｉｓｃｏａｔ（登録商標）またはＰｒｏｖｉｓｃ（登録商標）と匹敵する低いせん断粘弾性を有し、２５℃で、Ｐｒｏｖｉｓｃ（登録商標）またはＶｉｓｃｏａｔ（登録商標）のようにずり減粘であった。これらの溶液は、外科的温度（２５℃）で約２００Ｐａ−ｓから、体温（３７℃）で２０Ｐａ−ｓ、までの、粘度における有意な下落を示した。
【００７１】
（実施例１４）
１４．３％のカルボン酸置換でのＨＡのドデシルエステル（約２００ｋＤａ）の１％溶液を、平衡塩を有するクエン酸／酢酸緩衝液中で調製し、透明な粘弾性溶液を形成した。この溶液は、Ｐｒｏｖｉｓｃ（登録商標）またはＶｉｓｃｏａｔ（登録商標）に匹敵する流動学的プロフィールを示した。２５℃および０．０８５／ｓを下回るずり速度での粘性は、約９０Ｐａ−ｓであった。ずり減粘は、７５Ｐａ−ｓの粘度で、０．２４／ｓで開始した。５．４／ｓでの粘度は、約１６Ｐａ−ｓに低下した。３１℃で、低いずり粘度は、たった約４５Ｐａ−ｓであった。２．８９Ｐａ−ｓでの一定のせん断応力で、この処方物の粘度は、２５℃で約１００Ｐａ−ｓから、３７℃で約２５Ｐａ−ｓに下落した。
【００７２】
（実施例１５）
１４．３％のカルボン酸置換でのＨＡのドデシルエステル（約２００ｋＤａ）の０．７５％溶液を、平衡塩を有するクエン酸／酢酸緩衝液中で調製し、透明な粘弾性溶液を形成した。この溶液は、２５℃で約２５Ｐａ−ｓの低いせん断粘度を有し、そして５３４／ｓで０．１Ｐａ−ｓ未満にずり減粘であった。この処方物はまた、一定のせん断応力（１．１Ｐａ）で、２５℃で約２５Ｐａ−ｓから、３７℃で約５Ｐａ−ｓまでの粘度の減少を示した。
【００７３】
（実施例１６）
１４．３％のカルボン酸置換でのＨＡのドデシルエステル（約２００ｋＤａ）の２％溶液を、平衡塩を有するクエン酸／酢酸緩衝液中で調製し、透明な濃い溶液を形成した。この溶液（約２ｃｃ）を、１２５℃で約２０分間の露出時間にわたってオートクレーブし、ゆっくりと排気しながら冷却した。室温まで冷却した後、この処方物は、有用な粘弾性ゲルを得るに十分な粘度を維持した。
【００７４】
（実施例１７）
カルボキシメチルセルロースのヘキサデシルエーテルの５％溶液（約１００ｋＤａで、反復単糖単位の５％にエーテル結合したヘキサデシル部分を含む）を、塩化ナトリウムを有するリン酸緩衝液中で調製した。この溶液は、透明であり、そして粘性ゲルを定性的に形成した。
【００７５】
（実施例１８）
３％の硫酸コンドロイチンを有する、ＨＡ、ナトリウム塩の２０％ドデシルアミドの１．０重量％溶液を、２日間にわたって５０℃にてゆっくりと溶解させることによって、ＰＢＳ中で調製した。ＨＡ、ナトリウム塩の２０％ドデシルアミドの１．０重量％のみを含有する別のサンプルを、２日間にわたって５０℃にてゆっくりと溶解させることによって、ＰＢＳ中で同様に調製した。溶解後、これらのサンプルを各々、別個の１０ｍＬシリンジ中に移し、そして二重ハブコネクタを１００回通して別の空のシリンジに移し、適切な混合物を提供した。サンプルを遠心分離して、気泡を除去し、そして２７ゲージの針を通してＢｏｈｌｉｎ  ＣＳ−１０  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒのサンプルプレート上に吸引した。流動学的分析を実行し、両方のサンプルについて、粘度  対  ２５℃でのせん断速度のプロットを得た。両方のサンプルは、粘度  対  せん断速度のプロットの、低いせん断プラトー領域において、約９０Ｐａ−ｓの明らかな粘度値を与えた。
【００７６】
（実施例１９）
以下は、ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌの説明である。
【００７７】
（ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌ）
ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌは、（１）図７に模式的に示されるような灌流装置、ポンプおよび圧力トランスデューサー／レコーダー；（２）灌流媒体；（３）解剖されたヒトの眼；および（４）試験される粘弾性物質を使用する。
【００７８】
（１．灌流媒体）
ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌにおいて使用される灌流媒体を、５ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン溶液（ペニシリンＧからの１０，０００単位／ｍＬペニシリン（塩基）および硫酸ストレプトマイシンからの１０，０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（塩基））、ならびに０．８５ｍＬのゲンタマイシン溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、５００ｍＬの細胞培養培地（ダルベッコ改変イーグル培地、低グルコース、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンおよびピルベートを有する（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ））に添加することによって調製する。次いで、この灌流媒体を、５００ｍＬの滅菌フィルター単位（０．２μｍの孔サイズ）を使用して濾過し、そして４℃で保存する（使用前に３７度にする）。
【００７９】
（２．眼調製）
ＩＯＰ  Ｓｐｉｋｅ  Ｍｏｄｅｌにおいて有用な死体の眼は、以下でなければならない：ｉ）このモデルにおける使用のために調製される時点で、死後２４〜３６時間より古くてはならない；ｉｉ）加湿チャンバ内で全眼として保存されなければならない；ｉｉｉ）ＨＩＶ、肝炎または他の感染症ではない；そしてｉｖ）緑内障濾過、強膜折込移植またはＩＯＰ移植のような、眼の外科手術を受けていない。ヒトの眼の前区７（図１０を参照のこと）を、以下の解剖方法によって調製する：
眼を、まっすぐな微細な鋏（Ｋａｔｅｎａ  Ｎｏ．Ｋ４−７４４０）を使用して、過剰な筋肉または結合組織から、注意深く切り取り、そしてポビドンヨード溶液（１％の遊離ヨウ素）を含む容器中に、２５℃にて約２分間配置する。次いで、この眼をヨウ素溶液から取り出し、生理食塩溶液でリンスし、そして角膜３の中心が頂点にくるように配置する（図９ａを参照のこと）。図９ａおよび９ｂを参照して、次いで、強膜５に、（滅菌眼科用三日月型ナイフ（Ａｌｃｏｎ  Ｎｏ．８０６５−９４０００１）を使用して）その縁から鋸状縁に放射状に伸びる、均等に間隔を開けた２４本の直線カット９（各カットは、強膜の厚さの５０％の深さを超えず、そして約５ｍｍの長さである）で切れ目をつけて、上強膜静脈を開き、そして灌流媒体の出口経路を提供する。図９ｂを参照して、次いで眼球を、赤道面１３と強膜面１５との間のほぼ中間の水平面１１に沿って、２葉に切断する。眼の前方半分（上部）を、後方半分（下部）（これは廃棄される）から分離する。この前方半分を反転させ、その結果、角膜は下向きにされ、次いで、残りの硝子体を、Ｇｒａｅｆｅ鉗子（Ｋａｔｅｎａ  Ｎｏ．Ｋ５−４８２１）を使用して、前方半分から注意深く除去する。次いで、この小帯を、Ｗｅｓｃｏｔｔ鋏（Ｋａｔｅｎａ  Ｎｏ．Ｋ４−４１００）を用いて切断し、そしてレンズをＧｒａｅｆｅ鉗子を使用して前区から除去する。次いで、麦粒鉗子（Ｋａｔｅｎａ  Ｎｏ．Ｋ５−４０１０）を使用して、虹彩を除去し、そして脈絡膜を、Ｗｅｓｃｏｔｔ鋏を使用して、鋸状縁で円周状に切断する。次いで、強膜の内側から、全ての残りの色素を、麦粒鉗子を用いて除去する。次いで、残りの前区７を、灌流媒体で２回リンスして、色素、組織レムナントまたは他の破片を洗い流す。
【００８０】
（３．灌流装置）
ＩＯＰスパイクモデルにおいて使用した灌流装置は、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＴｓｃｈｕｍｐｅｒならびにＣｌａｒｋらの灌流システム（ＪｏｈｎｓｏｎおよびＴｓｃｈｕｍｐｅｒ、「Ｈｕｍａｎ  ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｍｅｓｈｗｏｒｋ  ｏｒｇａｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ：ａ  ｎｅｗ  ｍｅｔｈｏｄ」、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、２８：９４５−９５３（１９８７）；ならびにＣｌａｒｋｅら、「Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ−Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｙｅｓ」、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、３６（２）：４７８−４８９（１９９５））において記載される改変されたバージョンである。以前のシステムに対する重大な改変は、偽水晶体のヒト前部セグメント容積の容積により近づけるための、約０．８〜１．０ｍＬから約０．５〜０．６ｍＬへのチャンバー容積の減少および、灌流の間のチャンバーの反転である。容積の減少はチャンバーのプラットホーム上に形成される島によって達成され、これは、前部セグメントのドーム内の空間を減少させ、そして後部のデット空間（すなわち、小柱網に対して後方）における粘弾性溶液の停滞を防ぐかまたは減少させるはずである。灌流の間、チャンバーを（以前のシステムに対して）上下逆さにすることにより、粘弾性物質が、陥凹の方向に高くなる島を乗り越えて灌流することにより効果的に混合されるので、角膜の陥凹で生じる粘弾性物質の停滞が防止される。
【００８１】
灌流装置１を、図７、８および１０に示す。装置１は、ベース２、シリンダー４、島６、ｏ−リング８、複数のスクリュー１０およびキャップ１２を備える。使用時に、装置１はまた、前部セグメント７を備える。
【００８２】
ベース２は、上部２２、底部２４および側部２６を有し、そしてスクリュー１０を受ける形状および大きさのチャネル１４および１６、プラットホーム１８ならびにスレッド１９を備えるディスク型である。チャンネル１４は、側面２６の開口部２８と島６の開口部２０とを連絡する。チャンネル１６は、側面２６の開口部３０とプラットホーム１８の開口部３２とを連絡する。チャネル１４および１６は、装置１を往復する灌流媒体の正確なフロー（チャンネル１４）および厳密な圧力測定（チャンネル１６）を提供するような形状および大きさである。開口部２８は、接続金具を受けるような（注入ライン２９に接続するために）大きさおよび形状であり、そして開口部３０はまた、接続金具を受けるような（変換器ライン３１に接続するために）大きさおよび形状である。この接続金具は、チュービングまたは他の円筒型ラインを受けるために有用な当該分野で公知の標準的なコネクターである。プラットホーム１８はベース２から突き出て、側部３４を有し、そして前部セグメント７を受けるために円錐状の形状および大きさである。島６はプラットホーム１８の中央から突き出る。
【００８３】
図８および１０を参照して、シリンダー４は、ベース２の上部２２上に同軸状および持続的に設置され、そしてそこから同一平面状に延びる。島６は開口部２０を有し、チャネル１４の一部分を備え、そしてプラットホーム１８から伸びる。ｏ−リング８は、溝付きくぎ、凹面の内端部３６およびｏ−リング８を通ってスクリュー１０を受けるための大きさおよび形状の複数のホール３８を備える。端部３８は、装置１を使用する場合、ベース２に対するｏ−リング８の圧縮が、端部３６とプラットホーム１８の側部３４の間の前部セグメント７の周縁部をサンドイッチして、前部チャンバー４２を形成する大きさおよび形状である。上記のように、前部チャンバー４２の容積は、前部チャンバーとヒト目の水晶体レンズとを組み合わせた容積（一般に約０．５〜０．６ｍＬ）に近づけるために、本発明者らによって設計された。
【００８４】
図８および図１０に示すように、キャップ１２は、シリンダー４の一部分を受け、閉鎖した空間４０を形成する形状および大きさである。ＩＯＰスパイクモデルについての好ましい灌流装置は、ポリサルフォンのベース２、ポリサルフォンの島６、ポリサルフォンのｏ−リング８、ナイロンのスクリュー１０、透明なポリサルフォンのシリンダー４、医療用スチールのチャネル１４および１６ならびに透明なポリスチレンのキャップ１２を使用する。
【００８５】
（４．灌流装置のアセンブリおよび調製）
使用の前に、装置１を分解し、そして個々の部材をオートクレーブ処理するか、または低温度滅菌し、次いでスポリシジン（ｓｐｏｒｉｃｉｄｉｎ）滅菌溶液（５０ｍｌ／Ｌ  水）を用いて層状のフローチャンバーを浸し、続いて滅菌脱イオン水において一晩リンスした。
【００８６】
図７および１０を参照して、灌流媒体を、注入ライン２９（チャンネル１４を通ってチャンバー４２中に灌流培地を注入する）に順々に接続されるポンプで送り；そして変換器ライン３１を、校正圧力変換器およびチャンバー４２の圧力を記録し得る記録計とに接続する。次いで、開口部２８および３０に配置した接続金具を、それぞれ注入ラインおよび変換器ラインに最初に接続することによって、装置１を再組立てする。次いで、装置１を上部２２を上に面して再配置する。前部セグメント７をプラットホーム１８上に、角膜側を上にして配置する。次いで、わずかな灌流媒体フローをシリンジによってチャンネル１６を通して適用させ、プラットホーム１８上のセグメント７を適切に収容する。次いで、ｏ−リング８（これは、外周の直径が約１．５インチであり、内部の直径が０．７１０〜０．７３６インチである）を、セグメント７上に配置する。ｏ−リング８がセグメント７を十分に収容し、漏出を回避することが重要である（わずかに異なる直径のｏ−リング８が、収容を改善するために使用され得る）。スクリュー１０をホール３８を通してスレッド１９に挿入し、そして密接させ、ｏ−リング８が均一に収容されることを確実にする。ｏ−リング８はセグメント７の周縁部上に密接されるので、過剰な圧力が収容しているセグメント７に加わらないように、チャンネル１６を通して適用されたフローを解放する。セグメント７の周縁部を、プラットホーム１８とｏ−リング８の間にきつく（セグメント７が破裂するきつさではない）サンドイッチするように、ベース２に対してスクリュー１０を回転させる。次いで、シリンジを用いて、灌流媒体をチャンネル１４を通して押し出すが、同時に灌流媒体をチャンネル１６から開口部３０を通って引き抜き、存在するどんな気泡もチャンネル１６を経由してチャンバー４２から流出させるようにベース２を傾ける。気泡をパージした後、チャンネル１４および１６を閉めて、媒体フローを灌流させる。次いで、装置１を上部２２を上にして水平に反転させる。
【００８７】
次いで、キャップ１２をシリンダー４上に配置し、それによって空間４０を形成する。次いで装置１を底部２４が上を向くように反転させ、そして組織培養インキュベーター（Ｎｕａｉｒｅ）内（３７℃で加湿された雰囲気下（５％  ＣＯ２／９５％空気）を維持する）に置く。変換器ライン３１および注入ライン２９は、インキュベーター扉のシールに対して配置されるべきであり、扉が閉まっているときは、損傷も妨害も受けない。圧縮変換器は装置１のレベルを維持し続けるべきである。この形状において、装置１はＩＯＰスパイクモデルにおいて現在容易に使用され得る。
【００８８】
（５．初期の灌流）
灌流ラインを開け、ポンプを作動させ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｏｄｅｌ番号９４４の場合、設定「６」）、灌流媒体を開口部２８およびチャンネル１４を通して自由にフローする。このポンプを、圧力が約５〜１０ｍｍＨｇに上昇するまで働かせ、その後ポンプの速度を約２μＬ／分（設定「１２」）に下げる。セグメント７を、粘弾性物質候補物の注入より約２４時間前までに灌流する。安定な基線（１０〜４０ｍｍＨｇの間の圧力で）が２４時間以内に確立しない場合、このフロー速度は安定な基線ＩＯＰが達成するまで、２〜３ｍｌの灌流容積ごとに繰り返し調節され得る。この問題が次の２４時間にわたって解決せず、後のフロー速度の調節およびフラッシング工程が４８時間以内に処理されない場合、前部セグメント７は信用できず、そして灌流を終了するべきである。
【００８９】
（６．粘弾性物質の注入および灌流）
一旦、前方セグメント７が、少なくとも４時間にわたって１０〜４０ｍｍＨｇの間の安定な基線ＩＯＰを生成すると（約１．７５〜２．０５μＬ／分の間の灌流速度）、ＩＯＰスパイク研究の準備が整う。代表的に、このようなポイントは最初の灌流から２４時間後に達成される。このモデルを、「ポジティブ」コントールの注入により最初に確認する。ポジティブコントロールは０．５ｍＬの希釈したヒアルロン酸ナトリウム（約７５０ｋＤａｌ  Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．製、Ｃｈａｓｋａ、ＭＮ）であり、これは、緩衝化溶液の１割の３．５％  ＨＡを、同じ緩衝化溶液の９割に希釈することによって調製する。ここで、各々１ｍＬの緩衝化溶液は約０．４５ｍｇのリン酸二水素ナトリウム水和物、２．００ｍｇのリン酸１水素２ナトリウム、４．３ｍｇの塩化ナトリウム（Ｗａｔｅｒ  Ｆｏｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ＵＳＰグレード、ｑ．ｓ．を用いる）を含み、中性のｐＨを有する。ポジティブコントロールの０．５ｍＬの希釈したＨＡ（０．３５％）を、灌流ライン２９上の多弁アセンブリ３３に取り付けた同じ容積のチュービングループに注入し、多弁アセンブリ３３を切り替えて、完全なサンプルの容積を灌流装置１に流入させる。従って、注入速度は灌流速度によって決定される。ＩＯＰを持続的にモニターし、記録する。基線ＩＯＰを超えた任意のＩＯＰスパイクを観察し、記録する。ポジティブコントロールが注入の２４時間以内で基線を超えて、２０〜８０ｍｍＨｇの間のＩＯＰスパイクを生じる場合、このモデルは正当であると考慮され、そして候補の遷移粘弾性物質を試験するために使用され得る。
【００９０】
一般的に、遷移粘弾性サンプルをまた、一日の間隔で単一の前部セグメントに２回注入し得る（第１の注入はポジティブコントロールである）。サンプル粘弾性物質を、コントロールサンプルを調製するために使用したのと同じ緩衝化溶液を用いて最初の濃度の１／１０に希釈すべきである。先の粘弾性物質サンプルによって生じる任意のＩＯＰスパイクの減退によって示されるように、安定であり、かつ受容可能な基線ＩＯＰが新規の各注入の前に達成されるべきである。基線ＩＯＰが１日以内に１０〜４０ｍｍＨｇの範囲内に回復しない場合、所定の前部セグメントにおけるさらなる灌流を中止するべきである。
【００９１】
上に述べたように、本発明の遷移粘弾性物質（すなわち、ＩＯＰスパイクををほとんど生じないか、または全く生じない）は、１０ｍｍＨｇの平均スパイクを示すか、または基線超えない。
【００９２】
（実施例２０）
本発明の遷移粘弾性物質（ＡＬ−１２４８８、４３％置換ベンジルエステル改変ＨＡ（約２００ｋＤａｌ））を、上記のＩＯＰスパイクモデルにおいて試験し、そしてポジティブコントロール（Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ）および２００ｋＤａｌ  ＨＡ（Ｆｉｄｉａ社製）と比較した。この研究結果を図１１に図示する。矢印は、種々の注入を示す。注入１および４はポジティブコントロールＨＡの０．３５％であり、注入２はＦｉｄｉａ無改変ＨＡの０．３５％および注入３はＡＬ−１２４８８の０．３５％であった。すべての注入サンプルは０．５ｍｌの容積であった。アスタリスクは注入から生じた個々のＩＯＰスパイクを示す。遷移粘弾性物質（ＡＬ−１２４４８）のみがＩＯＰスパイクをほとんど示さないかまたは全く示さないように特徴付けられ得る。なぜなら、ＩＯＰスパイクモデルにおいて観察されるスパイクは、基線ＩＯＰを超えて、約１０ｍｍＨｇ以下であり、実際は約１０ｍｍＨｇにかなり満たないからである。
【００９３】
外科的手順の特定の工程に対して、所定の遷移粘弾性物質の適合性は、例えば、粘弾性物質の濃度、平均分子量、粘性、偽可塑性、弾性、硬性、接着性（被覆性（ｃｏａｔａｂｉｌｉｔｙ））、粘着性（ｃｏｈｅｓｉｖｅｎｅｓｓ）、分子電荷および溶液の浸透性に依存することを、当業者は理解する。この粘性物質の適合性はさらに、粘弾性物質により発揮されることが予期される機能および外科医によって使用される外科的技術に依存する。
【００９４】
適切な緩衝液系（例えば、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたはホウ酸ナトリウム）が、貯蔵条件下でのｐＨドリフトを防ぐために組成物に添加され得る。
【００９５】
本発明の遷移粘弾性物質の全てまたは大部分が、手術の終了した目に残され得るので、これらの粘弾性物質は、粘弾性外科手段および薬物送達装置の二重の役割を果たすことに唯一適合する。
【００９６】
本発明の組成物における使用のために適切な眼科用の薬物は、以下が挙げられるが、これらに制限されない：抗緑内障薬剤（例えば、β遮断薬（チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール（ｌｅｖｏｂｅｔａｘｏｌｏｌ）、カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、ピロカルピンを含む模倣物、炭酸脱水酵素インヒビター、プロスタグランジン、セラトニン作動薬（ｓｅｒａｔｏｎｅｒｇｉｃ）、ムスカリン作動薬、ドーパミン作動性アゴニスト、アプラクロニジンおよびブリモニジンを含むアドレナリン作動性アゴニストを含む）；抗感染剤（シプロフロキサシンのようなキノロンならびにトブラマイシンおよびゲンタマイシンのようなアミノグリコシドを含む）；非ステロイドおよびステロイド抗炎症剤（例えば、スプロフェン、ジクロフェナク、ケトロラック、リメキソロン（ｒｉｍｅｘｏｌｏｎｅ）およびテトラヒドロコルチゾール；増殖因子（例えば、ＥＧＦ）；免疫抑制剤；ならびにオロパタジンを含む抗アレルギー剤）。眼科用薬物は、薬学的に受容可能な塩（例えば、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジンまたはジクロフェナクナトリウム）の形態において存在し得る。本発明の組成物はまた、以下の（ｉ）および（ｉｉ）の組み合わせのような眼科用薬物の組み合わせを含み得る：（ｉ）ベタキソロールおよびチモロールからなる群より選択されるβ遮断薬ならびに（ｉｉ）ラタノプロスト；１５−ケトラタノプラスト；フルプロステノール（ｆｌｕｐｒｏｓｔｅｎｏｌ）イソプロピルエステル（特に、ｌＲ−［ｌα（Ｚ），２β（ｌＥ，３Ｒ＊），３α，５α］−７−［３，５−ジヒドロキシ−２−［３−ヒドロキシ−４−［３−（トリフルオロメチル）−フェノキシ］−ｌ−ブテニル］シクロペンチル］−５−ヘプテン酸，１−メチルエチルエステル）；およびイソプロピル［２Ｒ（ｌＥ，３Ｒ），３Ｓ（４Ｚ），４Ｒ］−７−［テトラヒドロ−２−［４−（３−クロロフェノキシ）−３−ヒドロキシ−１−ベテニル］−４−ヒドロキシ−３−フラニル］−４−ヘプテン酸からなる群から選択されるプロスタグランジン。
【００９７】
薬学的薬剤が遷移粘弾性物質に添加される場合には、このような薬剤は、水への溶解度を制限され得、それゆえ、組成物中に界面活性剤または他の適切な共溶媒を必要とし得る。このような共溶媒としては、代表的に以下が挙げられる：ポリエトキシ化カスター油、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ２０、６０および８０；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ  ＮＪ、ＵＳＡ）；シクロデキストリン；または当業者に公知の他の薬剤。このような共溶媒は代表的に、約０．０１〜２重量％のレベルで使用される。手術の間に粘弾性物質の可視化を改善するために、および／またはこのような組織の改善された可視化について、眼性組織（特に、白内障手術における皮膜破裂（ｃａｐｓｕｌｏｒｈｅｘｉｓ）の間の皮膜バッグ）を染色するために、薬学的に受容可能な染料を粘弾性物質に添加することがまた所望され得る。従来の粘弾性物質におけるこのような染料の使用は、ＷＯ９９／５８１６０に記載されている。好ましい染料としては、トリパンブルー、トリパンレッド、ブリリアントクライシル（ｃｒｙｓｙｌ）ブルーおよびインドシアニングリーンが挙げられる。粘弾性溶液における染料の濃度は、好ましくは約０．００１重量％と２重量％の間であり、最も好ましくは、約０．０１重量％と０．１重量％の間である。しかし、任意のこのような添加物（薬剤、共溶媒または染料）は、これらが本発明の組成物の粘弾性特性に決定的な影響を与えない程度でのみ使用され得ることが、当業者に理解される。
【００９８】
本発明の方法はまた、異なる接着特性または粘着特性を有する種々の粘弾性薬剤の使用を包含する。本発明の組成物は、種々の外科手順において熟練の外科医により使用され得ることが、当業者に認識される。
【００９９】
各々の型の粘弾性物質の利点を考慮すれば、外科医は、１回の外科手順において、本発明の種々の粘弾性組成物を使用し得る。本発明の遷移粘弾性物質の使用は、外科手術における使用についてこれまで開示されていないが、米国特許第５，２７３，０５６号（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら）は、所定の眼の外科手術の間に粘弾特性が変化する粘弾性物質を含む組成物の使用を利用する方法を開示している（この文献の全内容は、本明細書中で参考として援用される）。
【０１００】
例えば、水晶体超音波吸引および／または灌注／吸引を含む外科手順の部分（例えば、白内障外科手術）のために、比較的高い接着特性および比較的低い粘着特性を有する粘弾性薬剤を使用することが一般的に好ましい。本明細書では、このような粘弾性薬剤を「接着性」薬剤と呼ぶ。溶液中の粘弾性薬剤の粘着性は、少なくとも一部、その薬剤の平均分子量に依存すると考えられる。所定の濃度において、分子量が大きくなれば、粘着性も大きくなる。デリケートな組織の操作を含む外科手順のこれらの部分は、一般的に、比較的高い粘着特性および比較的低い接着特性を有する粘弾性薬剤によってより活かされる。本明細書では、このような薬剤を、「粘着性」薬剤と呼ぶ。保護目的と反対に、主に組織操作または維持目的で主に使用される、このような粘着性薬剤について、機能的に望ましい粘度は、熟練の外科医が、このような薬剤を、実施されている外科工程の間に目的の組織を操作または支持するための柔らかいツールとして使用することを可能にするのに十分な粘度である。
【０１０１】
組織操作目的とは反対に、主に保護目的で主に使用されている他の粘弾性薬剤（「接着性」薬剤）について、機能的に望ましい粘度は、このような薬剤の保護層が、外科工程が実施される間、目的の組織または細胞上に留まることを可能にするのに十分な粘度である。このような粘度は、代表的に、約３，０００ｃｐｓ〜約６０，０００ｃｐｓ（せん断速度２秒−１、および２５℃）であり、好ましくは、約４０，０００ｃｐｓである。このような接着性薬剤は、先に記載された保護機能を提供し得るが、保護されているデリケートな組織を危険にさらし得る不慮の除去は起こらない。残念ながら、この同一の特性により、（白内障外科手術において全てのこのような市販品に対して推奨される）外科手術の最後のこのような接着性粘弾性物質の吸引が、外科医の問題となり、そしてこの特性により、除去手順時に、コーティングされた組織が外傷にさらされ得る。本発明の遷移粘弾性物質の重要な利点は、それらが、外科手術の最後に外科部位に留められ得、それによって、罹患した柔組織に対する不必要な外傷を回避し得ることである。
【０１０２】
本発明の好ましい方法は、所定の外科手順において複数の粘弾性物質を使用し得、このような粘弾性物質の少なくとも１つは、遷移粘弾性物質である。本発明の最も好ましい実施形態において、より優れた接着特性を有する遷移粘弾性は、白内障外科手術において使用され、この外科手術の最後に、遷移粘弾性物質の一部または全てがインサイチュに留められ、そしてＩＯＰスパイクをほとんど生じないかまたは全く生じない。
【０１０３】
本発明は、特定の好ましい実施形態に言及することにより記載されているが、本発明の意図または必須の特徴から逸脱することなく、他の特定の形態またはその変形で実施され得ることが理解されるべきである。従って、上述の実施形態は、全ての局面において例示であって限定ではないとみなされ、本発明の範囲は、前述の詳細な説明ではなく添付の特許請求の範囲により示される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、本発明のドデシルアミドＨＡおよびコントロールＨＡに関する、濃度の関数としての粘度を示すグラフである。
【図２】
図２は、本発明のオクチルアミドＨＡのせん断速度の関数としての粘度を示すグラフである。
【図３】
図３は、本発明のオクチルアミドＨＡの遷移粘度を示すグラフである。
【図４】
図４は、オートクレーブで処理された本発明のドデシルアミドＨＡの粘度安定性を示すグラフである。
【図５】
図５は、本発明のヘキサデシルアミドＨＡの遷移挙動の安定性を示すグラフである。
【図６】
図６は、本発明のエステル化ＨＡの加水分解速度を示すグラフである。
【図７】
図７は、本発明のＩＯＰスパイクモデルの略図である。
【図８】
図８は、本発明の灌流装置の分解立面図である。
【図９ａ】
図９ａは、還流装置での使用のための眼の頂部平面図である。
【図９ｂ】
図９ｂは、図９ａの眼の側面図である。
【図１０】
図１０は、図８に前方の部分を含めた、本発明の灌流装置の断面図である。
【図１１】
図１１は、本発明のＩＯＰスパイクモデルを使用したＩＯＰに対する、本発明の伝統的な粘弾性物質および遷移粘弾性物質の効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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