(57)【要約】      （修正有）【課題】新規で有用なＮＦ−κＢ活性化抑制剤及び、炎症をはじめとする様々な疾病症状の緩和、及び光老化に伴う皮膚症状の予防・改善に有用な組成物を提供する。【解決手段】ＮＦ−κＢ活性化抑制効果を有するキク科ヒナギク属植物のヒナギク、キク科ヨモギ属植物のタラゴン、キク科ハハコグサ属植物のエバ−ラスティング、キク科ヤグルマギク属植物のコ−ンフラワ−、リンドウ科シマセンブリ属植物のセント−リ−からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、炎症を伴う様々な疾患，機能低下の予防・改善効果の他、皮膚の光加齢に伴う様々な症状、例えば色素沈着，しわ，たるみ等の予防・改善効果が期待できるため、その抽出物を配合することにより、外用剤組成物をはじめ、医薬品組成物、医薬部外品組成物等のあらゆる形態の製剤の提供を可能とした。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科ヒナギク属植物のヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、キク科ヨモギ属植物のタラゴン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  L.）、キク科ハハコグサ属植物のエバ−ラスティング（Ｇｎａｐｈａｌｉｕｍ  ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ  L．）、キク科ヤグルマギク属植物のコ−ンフラワ−（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ  L．）、リンドウ科シマセンブリ属植物のセント−リ−（Ｃｅｎｔａｕｒｉｕｍ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ  RAFN．）からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を含有することを特徴とするＮＦ−κＢ活性化抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載のＮＦ−κＢ活性化抑制剤を含有することを特徴とする外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症をはじめとする様々な疾病症状の緩和、及び皮膚の光老化に伴う症状の予防・改善に有用な天然物由来のＮＦ−κＢ活性化抑制剤、及びこれを含有する外用剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
転写因子NF−κＢは、免疫グロブリンκ鎖遺伝子のエンハンサ−に結合して転写を活性化するＢ細胞特異的核内因子として発見された。NF−κＢに関しては、成熟Ｂ細胞の分化や増殖に関係するほか、炎症性サイトカインであるＩＬ−１、腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α、ＩＬ−6、ＩＬ−8の産生やリンパ球の細胞接着分子であるE−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１の発現等で重要な役割を果たしていることが明らかになっている。
【０００３】
NF−κＢはｐ５０とｐ６５の２種のサブユニットからなる。ＮＦ−κＢはすべての哺乳類の細胞において同定されており、細胞質にＩ−κＢ（ｉｎｈｉＢｉｔｏｒ ｋａｐｐａ
Ｂ）との複合体として存在している。細胞がNF−κＢを活性化する刺激を受けると、その刺激が細胞内に伝わり、複数の蛋白リン酸化を引き起こし、最終的にその連鎖反応の情報により阻害サブユニットであるI−κＢがリン酸化する。その後、これらのサブユニットはプロテアソ−ムにより分解され、活性型NF−κＢ２量体が生成する。この２量体は、核に移行してＤＮＡ配列に結合し、上記で述べた炎症性サイトカインや、細胞接着分子に関する遺伝子の転写を活性化する。
【０００４】
NF−κＢ阻害物質としては、特開平１１−２７９０５７、特開２０００−１６９４７９、特開２０００−１９４２４５、特開２０００−１９４２４６などが知られているが、いづれも活性面等に問題があり、満足できるものではない。
【特許文献１】特開平１１−２７９０５７号公報
【特許文献２】特開２０００−１６９４７９号公報
【特許文献３】特開２０００−１９４２４５号公報
【特許文献３】特開２０００−１９４２４６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、本発明の目的は、新規で有用なＮＦ−κＢ活性化抑制剤及び、ＮＦ−κＢ活性化により生じる炎症が原因となる様々な疾病症状の緩和、及び皮膚の光老化に伴う症状の予防・改善に有用な組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、キク科ヒナギク属植物のヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、キク科ヨモギ属植物のタラゴン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  L.）、キク科ハハコグサ属植物のエバ−ラスティング（Ｇｎａｐｈａｌｉｕｍ  ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ  L.）、キク科ヤグルマギク属植物のコ−ンフラワ−（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ  L.）、リンドウ科シマセンブリ属植物のセント−リ−（Ｃｅｎｔａｕｒｉｕｍ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ  ＲＡＦＮ．）からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が優れたＮＦ−κＢ活性化抑制作用を有することを見いだし本発明を完成するに至った。
【０００７】
さらに、本発明は前記ＮＦ−κＢ活性化抑制剤を含有することにより、この作用に基づく優れた効果を有する外用剤組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の有効成分であるヒナギク、タラゴン、エバ−ラスティング、コ−ンフラワ−、セント−リ−から選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、優れたＮＦ−κＢ活性化抑制作用をもつことが確認された。更に、本発明品であるＮＦ−κＢ活性化抑制剤は外用剤組成物をはじめ、医薬品組成物，医薬部外品組成物等のあらゆる形態の製剤に応用が可能であり、炎症を伴う様々な疾患、機能低下の予防・改善効果の他、皮膚の光加齢に伴う様々な症状、例えば色素沈着，しわ，たるみ等の予防・改善効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明者は、紫外線により活性化されるＮＦ−κＢの活性化抑制剤として多くの天然成分をスクリ−ニングした結果、キク科ヒナギク属植物のヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓ）の花、キク科ヨモギ属植物のタラゴン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ  L.）の全草、キク科ハハコグサ属植物のエバ−ラスティング（Ｇｎａｐｈａｌｉｕｍ  ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ  L．）の全草、キク科ヤグルマギク属植物のコ−ンフラワ−（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ  L．）の全草、リンドウ科シマセンブリ属植物のセント−リ−（Ｃｅｎｔａｕｒｉｕｍ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ  RAFN．）の全草から抽出された植物抽出物が極めて有効であることを見出し本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明で使用する植物抽出物における各々の植物体の各種部位は前述した部位が好ましいが、それ以外の部位である花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根、種子又は全草等から選ばれる１種又は２種以上を用いることが出来る。また、ハ−ブとして入手可能なものはそれを利用しても良い。抽出物は、これら各種の抽出部位から溶媒を用いて直接抽出することで得られるものの他、圧搾処理を施した後に得られる圧搾液及び／又は残渣に溶媒を加えて抽出するものでも良い。
【００１１】
本発明で使用する植物抽出物を得るための抽出溶媒としては、供する製品の使用目的、種類、あるいは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、例えば、水；メチルアルコ−ル、エチルアルコ−ル等の低級１価アルコ−ル；グリセリン、プロピレングリコ−ル−１，３−ブチレングリコ−ル等の液状多価アルコ−ル；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエ−テル等のエ−テル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いて抽出し、精製して使用することが出来る。
【００１２】
抽出する植物は、使用部位を採取し、乾燥後粉砕したものを、重量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で１時間、加熱抽出しても良い。
【００１３】
以上のような条件で得られる上記各抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により精製、濾過等の処理をして、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００１４】
本発明で使用する植物抽出物の形態としては、液状、固形状、粉末状、ペ−スト状、ゲル状等いずれの形状でも良く、最終的な製品を構成する上で最適な形状を任意に選択することができる。
【００１５】
本発明のＮＦ−κＢ活性化抑制剤の剤型は任意であり、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリ−ム状、軟膏状、シ−ト状、エアゾ−ル状等の形態をとることができる。さらに、医薬品類、医薬部外品類、化粧品類又は飲食品に配合して用いることができる。特に、外皮に適用される医薬品，医薬部外品，化粧品組成物といった外用剤組成物に適用される。
【００１６】
本発明の具体的な使用形態としては、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコ−ル、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、甘味剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより外用剤組成物の化粧水、乳液、クリ−ム、パック、パウダ−、スプレ−、軟膏、分散液、洗浄料、および液体状、ペ−スト状、カプセル状、粉末状、錠剤等種々の剤型とすることができる。この他、経口剤，注射剤等の医薬品、内服用医薬部外品、タブレット等の口腔剤等が例示できる。
【００１７】
本発明のＮＦ−κＢ活性化抑制剤、外用剤組成物への植物抽出物の含有量は、期待される作用の程度によって若干異なり特に限定しないが、通常、製剤全量中、固形分換算して、０．０００１質量％以上、好ましくは０．０１〜２０．０質量％の濃度範囲とすることが有効である。
【００１８】
以下、本発明による各種抽出物のNF−κＢ活性抑制効果にかかわる試験実施例を示すと共にその素材を用いた外用剤への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。
【実施例】
【００１９】
（１）   植物抽出液の調製
ヒナギクの花、タラゴンの全草、エバ−ラスティングの全草、コ−ンフラワ−の全草、セント−リ−の全草を乾燥後粉砕したものに５０％エタノ−ル水溶液を加え、３７℃にて一週間侵漬抽出した。抽出液をろ過し、４０℃で減圧乾燥した残留物を乾燥後、乾燥物が１％になるように５０％エタノ−ル水溶液に溶解したものを試料溶液とした。
【００２０】
（２）   細胞の調製
ケラチノサイト細胞株であるＨａｃａｔ細胞を、５％ＦＢＳを添加したD−ＭＥＭ培地２０mlを添加した１５０cm2シャ−レにてコンフル−エントになるまで培養する。培地に植物抽出液のサンプルを添加し、２時間、３７℃にてインキュベ−トする。その後、培地を捨てＰＢＳ（−）溶液で細胞を洗浄する。洗浄後、東芝ＦＬ２０Ｓ・Ｅ−３０／ＤＭＲ ランプで２０mJ/cm2のUV−Ｂを照射した（UV−Ｂ ０．５０２ mW、ＵＶ−Ａ ０．１１mW）。照射後２０mlの培地を添加し、４時間、３７℃でインキュベ−トした後、細胞を０．２５％トリプシン溶液で処理して、細胞を１．５ｍｌ遠心チュ−ブに回収する。
【００２１】
（３）測定用試料の調製と測定
NF−κＢの測定はＩＭＧＥＮＥＸ社のNF−κＢ／ｐ６５ Ａｃｔｉｖｅ ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ を用いて行なった。   
採集した細胞からキット中の試薬にて細胞核抽出液を調製し、測定用試料とした。なお、細胞核抽出液中のタンパク量は、ＢＣＡ法により測定し、測定に供するタンパク量を５００μgに統一して測定した。
【００２２】
測定結果は、表１に示した。紫外線照射により、細胞核中の活性化NF−κＢは増加する。表中の数値は、照射時のNF−κＢの量を１００％、非照射時の量を０％とした場合の
百分率で示した。表中の数値が小さいほうがNF−κＢの活性化を抑制していることを示している。表１より、ヒナギクが３８％、タラゴンが３１％、エバ−ラスティングが３８％、コ−ンフラワ−が５４％、セント−リ−が１５％とそれぞれ強い効果を示した。
【００２３】
【表１】
2007176877.tif 000002
【００２４】
（４）塗布によるヒトでの効果確認試験
被験者として、各試料毎に２０〜５０歳のアトピ−皮膚炎を有する女性15名に１日２回（朝、夜）連続２ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを顔面に別々に使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、００３１で示した乳液状組成物を用い、比較品には００３１に示した化粧料からセント−リ−抽出液、タラゴン抽出液を除いた乳液状組成物を作成し、その塗布による効果について調べた。 
本発明の有効成分を配合した乳液状組成物を毎日塗布しながら肌の炎症状態を塗布開始前及び２ヶ月塗布後におけるアンケ−トで集計し、効果の確認を行った。 結果は表２に示す。表２からも明らかなように、本試験品では評点合計が４２点となり、比較品の１４点と比較して高い効果が認められた。 
【００２５】
【表２】
2007176877.tif 000003
【００２６】
【表３】
2007176877.tif 000004
【００２７】
（各種組成物の製造）
本発明による各種組成物を製造した。以下にその処方例を示すが、本発明はこれらに限定されるわけではない。
【００２８】
化粧料の処方例を以下に示す。
【００２９】
（１）クリ−ム組成物                                
（重量％）
a)ミツロウ                                           
2.0
b)ステアリルアルコ−ル                               
5.0
c)ステアリン酸                                       
8.0
d)スクワラン                          
１0.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレ−ト               
3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエ−テル(20E.O.)           １.0
g)コ−ンフラワ−抽出液                            
0.0001
h)1,3−ブチレングリコ−ル                             
5.0
i)水酸化カリウム                                     
0.3
j)防腐剤・酸化防止剤                                
適量
k)精製水                                            
残部
製法  a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜k)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００３０】
（２）クリ−ム組成剤                                
（重量％）
a)ミツロウ                 
2.0
b)ステアリルアルコ−ル                               
5.0
c)ステアリン酸                                       
8.0
d)スクワラン                                       
10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレ−ト               
3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエ−テル(20E.O.)            5.0
g)ヒナギク抽出液                          
0.001
h)エバ−ラスティング抽出液                           
1.0
i)1,3−ブチレングリコ−ル                             
5.0
j)水酸化カリウム                                     
0.3
k)防腐剤・酸化防止剤                               
適量
l)精製水                                            
残部
製法  a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００３１】
（３）乳液状組成物                                 
（重量％）
a)ミツロウ                                           
0.5
ｂ)ワセリン                                           
2.0
c)スクワラン                                         
8.0
d)ソルビタンセスキオレエ−ト                         
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエ−テル(20E.O.)          １.2
f)セント−リ−抽出液                                  
0.5
g)タラゴン抽出液                                      2.0
h)1,3−ブチレングリコ−ル                             
7.0
i)カルボキシビニルポリマ−                            
0.2
j)水酸化カリウム                                      
0.１
k)精製水                                             
残部
l)防腐剤・酸化防止剤                                  
適量
m)エタノ−ル                                         
7.0
製法  a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でm)を添加し、40℃まで冷却する。
【００３２】
（４）乳液状組成物                                 
（重量％）
a)ミツロウ                                           
0.5
b)ワセリン                                           
2.0
c)スクワラン                                         
8.0
d)ソルビタンセスキオレエ−ト                         
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエ−テル(20E.O.)          １.2
f)エバ−ラスティング抽出液                            
0.01
g)1,3−ブチレングリコ−ル                              
7.0
h)カルボキシビニルポリマ−                            
0.2
i)水酸化カリウム                                      
0.１
j)精製水                                             
残部
k)防腐剤・酸化防止剤                                  
適量
l)エタノ−ル                                         
7.0
製法  a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜k)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でl)を添加し、40℃まで冷却する。
【００３３】
（５）化粧水様組成物                                   
(重量%)
a)セント−リ−抽出液                                
0.1
b)タラゴン抽出液                                      
10.0
c)グリセリン                                           
5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ−ト(20E.O.)    １.0
e)エタノ−ル                                          
6.0
f)香料                                            
適量
g)防腐剤・酸化防止剤                             
適量
h)精製水                                       
残部
製法  a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
【００３４】
（６）育毛剤                                          
(重量%)
a)ホナギク抽出物                                       20.0
ｂ)グリセリン                                          
5.0
c)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ−ト(20E.O.)    １.0
d)エタノ−ル                                           
6.0
e)香料                                            
適量
f)防腐剤・酸化防止剤                               
適量
g)精製水                                          
残部
製法  a)〜g)までを混合し、均一に溶解する。
【００３５】
（７）パック剤                                      
(重量%)
a)コ−ンフラワ−抽出液        
＾                    
1.0
b)タラゴン抽出液                                    
2.0
c)酢酸ビニル樹脂エマルジョン                       
１5.0
d)ポリビニルアルコ−ル                             
１0.0
e)オリ−ブ油                                         
3.0
f)グリセリン                                         
5.0
g)酸化チタン                                          8.0
h)カオリン                                           
7.0
i)エタノ−ル                                         
8.0
j)香料                                              
適量
k)防腐剤・酸化防止剤                                 
適量
l)精製水                                            
残部
製法 a)〜l)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明のＮＦ−κＢ活性化抑制剤は、炎症を伴う様々な疾患，機能低下の予防・改善効果の他、皮膚の光加齢に伴う様々な症状、例えば色素沈着，しわ，たるみ等の予防・改善効果が期待できるため、外用剤組成物をはじめ、医薬品組成物，医薬部外品組成物等のあらゆる形態の製剤に応用が期待できる。