(57)【要約】【課題】新規な関節リウマチ予防用又は治療用組成物を提供すること。【解決手段】担子菌キシメジ属マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）由来成分を少なくとも含有する関節リウマチ予防又は治療用組成物を提供する。この組成物は、関節炎発症抑制作用、抗コラーゲン抗体産生抑制作用、ＩＬ−６産生抑制作用、血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇抑制作用、血清中乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）上昇抑制作用、血清中リウマトイド因子（ＲＦ）上昇抑制作用を有する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
担子菌キシメジ属マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）由来成分を少なくとも含有する関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項２】
関節炎発症抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項３】
抗コラーゲン抗体産生抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項４】
インターロイキン６（ＩＬ−６）産生抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項５】
血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項６】
血清中乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）上昇抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項７】
血清中リウマトイド因子（ＲＦ）上昇抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物。
【請求項８】
請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物を少なくとも含有する関節リウマチ予防又は治療剤。
【請求項９】
請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の関節リウマチ予防用又は治療用組成物を少なくとも含有する飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト及び動物における関節リウマチ予防用又は治療用組成物などに関する。より詳しくは、担子菌キシメジ属マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）由来成分を少なくとも含有する関節リウマチ予防用又は治療用組成物、並びにそれらの組成物を含有する関節リウマチ予防又は治療剤、及び、飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｉｏｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）は、非感染性の炎症に基づく、関節及び全身の結合組織のびらん性炎症を主徴とし、同時に多臓器を障害する全身性の疾患である。寛解と憎悪を繰り返しながら慢性に進行し、末期には、関節の破壊と変形を来し、重度の運動障害に陥る場合もある。
【０００３】
関節リウマチの発病原因については現在のところ不明であるが、膠原病の一種とされ、免疫機構が自分の関節を攻撃する自己免疫疾患の一つであるとする説が有力である。滑膜細胞、浸潤細胞から、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、プロスタグランジンなどの起炎物質が放出されて関節炎が起こる。多くの場合、血清中のサイトカインであるＩＬ−６の値が亢進し、血清中抗コラーゲン抗体価、炎症マーカーであるＣＲＰ、及び、ＬＤＨ、ＲＡ指標とされるＲＦ値が上昇する。
【０００４】
関節リウマチの予防及び完全な治癒は、現在の医学では困難である。従って、現時点での治療目標は、関節リウマチの炎症を速やかに抑制することにより、関節組織における非可逆的変化の出現やその進展を抑制し、患者の身体的、精神的、及び、社会的ＱＯＬの向上を図ることである。
【０００５】
関節リウマチの薬物療法における中心的な薬剤として、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、副腎皮質ホルモン（ステロイド）、免疫抑制剤等が用いられる。例えば、特許文献１には、非ステロイド性抗炎症剤としてＣＯＸ−２酵素阻害剤を、特許文献２には、免疫抑制剤を慢性関節リウマチの治療に適用することが、それぞれ記載されている。
【０００６】
また、関節リウマチに有効な天然物として、例えば、特許文献３には、田七人参が、特許文献４には、ユキノシタ属に属する植物、及び、アジサイ属に属する植物が、また、特許文献５には、ヒメマツタケ（学名「Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ  Ｍｕｒｉｌｌ、通称：アガリクス）が、それぞれ記載されている。
【０００７】
ここで、本発明に関連のあるマツタケについて、以下説明する。マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）は、特有の香りと歯応えのよさで、高級食材として多く食用に供されるとともに、様々な疾患予防又は治療に役立つことが報告されている。
【０００８】
マツタケを用いた薬剤として、例えば、特許文献６には血圧降下剤が、特許文献７には高脂血症治療剤が、特許文献８には糖尿病治療効果が、それぞれ記載されている。
【特許文献１】特開２００４−１３１４９５号公報
【特許文献２】特開２０００−１５４１５１号公報
【特許文献３】特開平１１−１３９９７９号公報
【特許文献４】特開２００４−１９６６９６号公報
【特許文献５】特開平１１−１３０６９０号公報
【特許文献６】特開２００５−２２５８０３号公報。
【特許文献７】特開２００５−２２５８０２号公報。
【特許文献８】特開２００５−２２５８０１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
関節リウマチは症状が重篤になる場合があるため、その発症を未然に予防できることが好ましい。また、関節リウマチを罹患した場合、関節リウマチの治療は長期に及ぶため、副作用が少なく、治療効果の高いものが好ましい。
【００１０】
そこで、本発明は、関節リウマチの予防に効果があり、また、関節リウマチを罹患した場合にも、副作用が少なく、長期間服用できる関節リウマチ予防用又は治療用組成物を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本願発明者は、上記目的を達成するために、種々の天然物を探索した。その結果、マツタケ由来成分が関節リウマチの予防及び治療に有効であることを新規に見出した。
【００１２】
そこで、本発明では、担子菌キシメジ属マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）由来成分を少なくとも含有する関節リウマチ予防用又は治療用組成物を提供する。
【００１３】
この組成物には、関節リウマチ患者で上昇がみられる種々の指標値を下げる作用がある。具体的には、この組成物は、関節炎発症抑制作用、抗コラーゲン抗体産生抑制作用、インターロイキン６（ＩＬ−６）産生抑制作用、血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇抑制作用、血清中乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）上昇抑制作用、及び、血清中リウマトイド因子（ＲＦ）上昇抑制作用を有する。従って、本発明に係るマツタケ由来成分含有組成物は、関節リウマチの予防及び治療に有効である。
【００１４】
加えて、この組成物には、以下のような有利性がある。
【００１５】
関節リウマチは進行性の疾患であるため、長期間、多種多様な薬剤を服用する必要が生じる場合がある。一方、関節リウマチの薬物療法に用いられる薬剤には一定の副作用がある場合が多いため、適用期間は短いほうが好ましい。また、定期的な検査を要したり、一定の休薬期間を設けなくてはならない薬剤もある。それに対し、本発明に係る組成物は天然由来成分であるため、副作用が少なく、それらを長期間、及び、連続的にＲＡ患者に適用できる可能性が高い。
【００１６】
また、一般的に、関節リウマチの薬物療法に用いられる薬剤は、消化器障害、腎障害、肝障害、血液障害等を併発するＲＡ患者、妊婦等に対する適用が難しい場合がある。それに対し、本発明に係る組成物は天然由来成分であるため、あらゆる患者に対してそれらを適用できる可能性が高い。
【００１７】
なお、本発明に係る組成物は、関節リウマチ予防又は治療剤、及び、飲食物に適用することができる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明に係る組成物は、天然由来成分であるため安全性が高く、かつ、関節リウマチの予防及び治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
＜本発明に係る関節リウマチ予防用又は治療用組成物について＞
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、担子菌キシメジ属マツタケ（学名「Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ」）由来成分を少なくとも含有する。マツタケの株種は、特に限定されないが、例えば、マツタケＦＰＲＭ  ＢＰ−７３０４株が好適である。
【００２０】
前記マツタケ由来成分は、菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）又は子実体のいずれの形態を用いることができる。本発明では、子実体は、胞子を含むものとする。これらは、生の状態で用いてもよく、あるいは、それらの乾燥物を用いてもよい。更には、それらの抽出物を用いてもよい。抽出物を用いる場合、その抽出方法は特に限定されないが、例えば、熱水抽出法、アルコール抽出法、アルカリ溶液抽出法、細胞壁破壊製法、循環多段式加圧抽出法、酵素処理法、超臨界抽出法等で抽出した抽出物を用いることができる。
【００２１】
＜本発明に係る関節リウマチ予防剤又は治療剤について＞
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、これを有効成分として、関節リウマチ予防又は治療剤に適用することができる。本発明に係る関節リウマチ予防又は治療剤は、本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物を含むもの全てを含有する。
【００２２】
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物を用いた関節リウマチ予防剤又は治療剤は、単独で用いることもでき、また、既存の関節リウマチ治療剤と併用することもでき、更には、既存の関節リウマチ治療剤と合剤とすることもできる。
【００２３】
該関節リウマチ予防剤又は治療剤の剤型は特に限定されない。例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、丸剤等の経口剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、外用液剤、点眼液剤、点鼻液剤、吸入剤、坐剤、スプレー等の外用剤、又は注射剤等として用いることができる。
【００２４】
経口剤は、例えば、有効成分である本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、保存剤、着色剤、矯味剤、香料、安定化剤、防腐剤、酸化防止剤等の、医薬製剤の分野で通常使用し得るすべての添加剤を含有させることができる。また、ドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）を利用して、徐放性製剤等にすることもできる。
【００２５】
外用剤は、例えば、有効成分である本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物に、基材、保存剤、乳化剤、着色剤、防腐剤、酸化防止剤等の、医薬製剤の分野で通常使用し得るすべての添加剤を含有させることができる。
【００２６】
注射剤は、例えば、有効成分である本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物に、溶剤、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、保存剤、等張化剤等の、医薬製剤の分野で通常使用し得るすべての添加剤を含有させることができる。
【００２７】
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療剤は、その有効成分が、天然由来成分であるため、他剤との併用を注意する必要もなく、また、他疾患併発患者に対しても、安心して投与することができる。更に、長期間、連続的に服用しても副作用を心配する必要が少ない。
【００２８】
＜本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物を含有する飲食物について＞
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、飲食物に適用することができる。本発明に係る飲食物は、本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物を含むもの全てを包含する。
【００２９】
例えば、保健機能食品（特定保健機能食品、栄養機能食品）やいわゆる健康食品（いずれも飲料を含む）、又は飼料に適用することができる。また、口中に一時的に含むもの、例えば、歯磨剤、染口剤、チューインガム、うがい剤等に適用することもできる。
【００３０】
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、天然由来成分であるため、飲食物との相互作用を気にすることなく、あらゆる飲食物に含有させることができ、また、安全性が高いため、長期間、連続的に摂取が可能である。
【実施例１】
【００３１】
まず、実施例１では、実施例２から実施例６で使用するマツタケ菌糸体含有のマウス用飼料の調製を、以下の通り行った。
【００３２】
株式会社クレハ・生物医学研究所で樹立、及び、維持しているマツタケＣＭ６２７１株菌糸体を滅菌済み培地（３％グルコース、０．３％酵母エキス、ｐＨ６．０）１００ｍＬの入った５００ｍＬ容三角フラスコ２０本に接種し、２２℃で２５０ｒｐｍ振盪培養機で４週間培養を行った。
【００３３】
培養終了後、培養物（Ｂｒｏｔｈ）を濾紙ろ過により、菌糸体を分離し、蒸留水で十分に洗浄した。その後、菌糸体を凍結乾燥した。得られた菌糸体乾燥物を粉砕して菌糸体粉末２０ｇを得た。
【００３４】
その後、マウス用飼料ＣＥ−２（日本クレア株式会社）の粉末１ｋｇに、得られた菌糸体粉末２０ｇを十分に混合し、２％マツタケ菌糸体含有飼料を調製した。
【実施例２】
【００３５】
実施例２では、本発明に係るマツタケ菌糸体添加飼料の関節炎発症抑制作用を、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルを用いて、以下の通り調べた。
【００３６】
ここで、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルとは、II型コラーゲン免疫によって、ヒトの慢性関節リウマチ様の関節炎誘導された、実験モデルマウスである。
【００３７】
まず、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデル作成のための関節炎の誘発を、以下の通りに行った。
【００３８】
４週齢の雄性ＤＢＡ／１ＪＮＣｒｊマウスを、日本チャールズリバー（神奈川）から購入し、温度２２±５℃、湿度５０±１０％、１２時間明暗サイクルの環境下にある飼育室で１週間、予備飼育した。
【００３９】
その後、関節炎の誘発を行った。関節炎の誘発は、Ｔｒｅｎｔｈａｍらの方法に準じ（Ｔｒｅｎｔｈａｍ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，１４６：８５７−８６８，１９７７）、ウシ鼻中隔由来のII型コラーゲン（コスモ・バイオ株式会社、ＫＥ−４１）を０．０５Ｎ酢酸溶液に溶解して、等量のフロイント完全アジュバンド（和光純薬工業株式会社）と混合してエマルジョン液とし、II型コラーゲン相当量１００μｇ／０．１ｍＬをマウス尾根部皮内に注射した。初回免疫から３週後に、“フロイント不完全アジュバント（和光純薬工業株式会社）と同量の抗原溶液”のエマルジョン液による追加免疫を行い、関節炎症状を誘発した。陰性対照として、同週齢の健常雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いた。
【００４０】
試験群を、健常Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いる陰性対照群（ａ群、ｎ＝８）、コントロールの免疫処置ＤＢＡ／１ＪＮＣｒｊマウスに免疫処置のみを行うコントロール群（ｂ群、ｎ＝８）、免疫処置ＤＢＡ／１ＪＮＣｒｊマウスに本発明に係る前記２％マツタケ菌糸体含有飼料を摂取させるマツタケ菌糸体群（ｃ群、ｎ＝８）、陽性対照の免疫処置ＤＢＡ／１ＪＮＣｒｊマウスにデキサメサゾンを投与するＤＥＸ群（ｄ群、ｎ＝８）とした。実験期間は、９週間とした。
【００４１】
次に、本発明に係る前記２％マツタケ菌糸体含有飼料を、前記で作成したマウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルのマツタケ菌糸体群（ｃ群）に、初回免疫翌日から実験終了日まで自由摂取させた。ＤＥＸ群（ｄ群）に投与するデキサメサゾン（ＤＥＸ、シグマ‐アルドリッチ）は、０．５％Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＣＭＣ）溶液に懸濁させたものを使い、１ｍｇ／ｋｇ量を週３回腹腔内投与した。
【００４２】
発症率を、“発症した四肢数／１群マウスの四肢数”×１００で表し、関節炎スコアを、各肢について、無変化を０点、１指あるいは複数指の腫脹を１点、全体に見られる発赤と腫脹を２点、全体に見られる強度の腫脹を３点、四肢の合計を１２点とし、“発症マウス全スコア／１群マウスの肢数”で評価した。なお、一肢あたりの最高点を４点とした。
【００４３】
観察期間中の関節炎発症率を表１に示す。
【表１】
2007176823.tif 000002
【００４４】
表１に示すとおり、初回免疫後の９週目の時点で、コントロール群（ｂ群）の発症率が１００％に対して、マツタケ菌糸体群（ｃ群）の発症率は７５％であり、抑制が認められた。なお、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）では、１２．５％にのみ発症を認めた。
【００４５】
観察期間中の関節炎発症スコアを表２に示す。
【表２】
2007176823.tif 000003
【００４６】
表２に示すとおり、初回免疫後の９週の関節炎のスコアは、コントロール群（ｂ群）で３．８点、マツタケ菌糸体群（ｃ群）で２．０点であり、発症率の場合と同様、マツタケ菌糸体により抑制された。なお、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）は、０．２点であった。
【００４７】
また、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルの関節における病理組織学的所見についても、以下の通り観察した。
【００４８】
病理組織学的解析のため、コントロール群（ｂ群）、マツタケ菌糸体群（ｃ群）、ＤＥＸ群（ｄ群）のマウスを、実験開始９週目に屠殺し、左膝部を摘出して中性ホルマリン液中で固定した。次いで、飽和ＥＤＴＡで脱灰、パラフィン包理後薄切し、サフラニンО染色して病理像を光学顕微鏡下で観察した。その結果を図１、図２、及び図３に示す。
【００４９】
図１はコントロール群（ｂ群）、図２はマツタケ菌糸体群（ｃ群）、図３はＤＥＸ群（ｄ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見を示している。また、図１中の符号１で表す部分は、コントロール群（ｂ群）の病変部を示す。
【００５０】
図１、および図２に示す通り、図１のコントロール群（ｂ群）の病変部１に比し、図２のマツタケ菌糸体群（ｃ群）では、滑膜細胞の重層化、骨・軟骨結合織置換、繊維芽細胞の増殖、多核白血球の増加、及び、軟骨細胞の空胞変性の程度が明らかに軽度であった。なお、図３に示す通り、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）では、滑膜細胞の重層化や骨・軟骨結合織置換のような関節所見の異常は観察されず、その他の所見も軽微であった。
【００５１】
上記、関節炎発症率、関節炎発症スコア、病理組織所見の結果より、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料は、関節炎発症抑制作用を有することが分かった。
【実施例３】
【００５２】
実施例３では、本発明に係るマツタケ菌糸体添加飼料の抗コラーゲンII抗体産生抑制作用を、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルを用いて、以下の通り調べた。
【００５３】
実施例２と同様に、試験群を、陰性対照群（ａ群、ｎ＝５）、コントロール群（ｂ群、ｎ＝５）、マツタケ菌糸体群（ｃ群、ｎ＝５）、ＤＥＸ群（ｄ群、ｎ＝５）とし、実験開始後５週目、７週目、及び、９週目に、各試験群のマウスの尾静脈から採血し、血清中の抗II型コラーゲン抗体力価をＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００５４】
具体的には、ウシII型コラーゲン溶液１０μｇ／ｍＬを９６ウエルマイクロプレートに固相化し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液でブロックして冷蔵保存されている保存プレートを室温に戻し、各ウエルをＴｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ溶液で洗浄し、２０００倍希釈した披検血清１００μＬと４℃で一晩反応させた。その後、Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ溶液で洗浄し、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識ウサギ抗マウスＩｇＧ抗体溶液１００μＬを添加し、２５℃で３時間反応させた。さらにその後、Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ溶液で洗浄し、ＡＢＴＳ（東京化成）を含む基質溶液１００μＬを加え、２５℃で３０分反応させて発色させ、硫酸５０μＬを加えて反応を停止させ、４１５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーを用いて測定した。
【００５５】
血清中の抗体価測定結果（４１５ｎｍにおける吸光度ＯＤ４１５）を表３に示す。
【表３】
2007176823.tif 000004
【００５６】
表３に示すとおり、実験開始後、コントロール群（ｂ群）の抗体価は増加し、５週目で０．７９、７週目で１．１０、９週目で１．０４の値を示した。一方、マツタケ菌糸体群（ｃ群）の抗体価は、５週目で０．５８、７週目で０．７２、９週目で０．８８を示し、コントロール群（ｂ群）と比較して低かった。なお、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）の抗体価は、実験期間中、低値で推移した。
【００５７】
上記結果より、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料は、抗コラーゲン抗体産生抑制作用を有することが分かった。これにより、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料の関節炎発症抑制作用のメカニズムとして、免疫調節作用の関与が示唆された。
【実施例４】
【００５８】
実施例４では、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料の血清ＩＬ−６産生抑制作用を、マウスII型コラーゲン誘導関節炎モデルを用いて、以下の通り調べた。
【００５９】
実施例２、及び、実施例３と同様に、試験群を、陰性対照群（ａ群、ｎ＝５）、コントロール群（ｂ群、ｎ＝５）、マツタケ菌糸体群（ｃ群、ｎ＝５）、ＤＥＸ群（ｄ群、ｎ＝５）とし、上記実験終了の９週時に、コントロール群（ｂ群）、マツタケ菌糸体群（ｃ群）、ＤＥＸ群（ｄ群）のマウスを麻酔下で採血し、遠心分離により血清を回収した。
【００６０】
得られた血清のＩＬ−６含量を、ＥＬＩＳＡキット（Ｅｎｄｏｇｅｎ社、米国）を用いて測定した。
【００６１】
血清ＩＬ−６レベルの測定結果を表４に示す。
【表４】
2007176823.tif 000005
【００６２】
表４に示すとおり、血清ＩＬ−６レベルは、コントロール群（ｂ群）では１５６０ｐｇ／ｍＬ、マツタケ菌糸体群（ｃ群）では７３８ｐｇ／ｍＬと、マツタケ菌糸体群（ｃ群）のＩＬ−６レベルは、コントロール群（ｂ群）に比して低値を示した。なお、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）は３１６ｐｇ／ｍＬであった。
【００６３】
上記結果より、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料は、ＩＬ−６産生抑制作用を有することが分かった。これにより、実施例３と同様に、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料の関節炎発症抑制作用のメカニズムとして、免疫調節作用の関与が示唆された。
【実施例５】
【００６４】
実施例５では、本発明に係るマツタケ菌糸体添加飼料の関節炎発症抑制作用を、ＳＰＦ／ＶＡＦ  ＭＲＬ／ＭｐＪ‐Ｔｎｆｒｓｆ6ｌｐｒ／Ｃｒｌｊマウス(以下、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスとする。)を用いて、以下の通り調べた。
【００６５】
ここで、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスとは、８週齢前後から急性、及び、慢性炎症がほぼ同時に起こり、関節炎等を自然発症するマウスであり、慢性関節リウマチの病態モデルとして汎用されている実験モデルマウスである。
【００６６】
まず、４週齢の雌性ＭＲＬ／ｌｐｒマウスを、日本チャールズリバー（神奈川）から購入し、温度２２±５℃、湿度５０±１０％、１２時間明暗サイクルの環境下にある飼育室で１週間、予備飼育した。
【００６７】
試験群を、無処置のＭＲＬ／ｌｐｒマウスを用いるコントロール群（ａ群、ｎ＝１０）、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスに本発明に係るマツタケ菌糸体添加飼料を与えるマツタケ菌糸体群（ｂ群、ｎ＝１０）に分けた。実験期間は、１７週間とした。
【００６８】
次に、病理組織学的解析のため、コントロール群（ａ群）、及び、マツタケ菌糸体群（ｂ群）のマウスを、実験開始１７週目に屠殺し、右前肢を摘出して中性ホルマリン液中で固定した。次いで、実施例２と同様に、飽和ＥＤＴＡで脱灰、パラフィン包理後薄切し、サフラニンО染色して病理像を光学顕微鏡下で観察した。その結果を、図４、及び、図５に示す。
【００６９】
図４はコントロール群（ａ群）、図５はマツタケ菌糸体群（ｂ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見を示している。また、図４中の符号２で表す部分は、コントロール群（ａ群）の病変部を示す。
【００７０】
図４、及び、図５に示す通り、図４のコントロール群（ａ群）の病変部２に比し、図５のマツタケ菌糸体群（ｂ群）では、滑膜細胞の重層化や、滑膜下軟部組織の浮腫性変化、肉芽による置換、リンパ球浸潤の程度が明らかに軽度であった。
【００７１】
上記結果より、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料は、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスにおいても、実施例２と同様、関節炎発症抑制作用を有することが分かった。
【実施例６】
【００７２】
実施例６では、本発明に係るマツタケ菌糸体添加飼料の血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇抑制作用、血清中乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、及び、血清中リウマトイド因子（ＲＦ）上昇抑制作用を、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスを用いて、以下の通り調べた。
【００７３】
実施例５と同様に、試験群を、ＭＲＬ／ｌｐｒマウスを、コントロール群（ａ群、ｎ＝１０）、マツタケ菌糸体群（ｂ群、ｎ＝１０）に分け、実験開始１７週目に麻酔下で採血し、遠心分離により血清を回収した。健常雌性ＩＣＲマウス（日本クレア）を陰性対照に用いた。
【００７４】
血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）レベルは、ＥＬＩＳＡキット（セティカンパニーリミテッド ＳＣＥＴＩ Ｃｏ．， ＬＴＤ．）を、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）レベルは、臨床試薬キット（和光純薬工業株式会社）を、リウマトイド因子（ＲＦ）レベルは、ラテックス凝集反応試薬（栄研化学株式会社）を用いて測定した。
【００７５】
ＣＲＰレベル、ＬＤＨレベル、ＲＦレベルの測定結果を表５に示す。
【表５】
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【００７６】
表５に示すとおり、コントロール群（ａ群）では、ＣＲＰ１．３ｍｇ／ｄＬ、ＬＤＨ４０５０ＩＵ／ｍＬ、ＲＦ２７．６ＩＵ／ｍＬを示し、マツタケ菌糸体群（ｂ群）では、ＣＲＰ０．６ｍｇ／ｄＬ、ＬＤＨ３２６０ＩＵ／ｍＬ、ＲＦ１７．８ＩＵ／ｍＬを示し、マツタケ菌糸体群（ｂ群）のレベルは、コントロール群（ａ群）に比して低値を示した。特に、血清ＣＲＰ、及び、ＲＦについては、マツタケ菌糸体群（ｂ群）のレベルは、有意差（ｐ＜０．０５）をもって、コントロール群（ａ群）に比して低値を示した。なお、陰性対照群では、血清ＣＲＰ、及び、ＲＦは検出以下であった。
【００７７】
上記結果より、本発明に係る前記マツタケ菌糸体含有飼料は、血中炎症マーカーであるＣＲＰ、及び、ＬＤＨ、ＲＡ指標とされるＲＦ値の上昇を抑制することが分かった。従って、本発明に係る前期マツタケ菌糸体含有飼料は、関節リウマチ予防効果、及び、治療効果を有することが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、関節炎発症抑制作用、抗コラーゲン抗体産生抑制作用、ＩＬ−６産生抑制作用、血清Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇抑制作用、血清中乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）上昇抑制作用、血清中リウマトイド因子（ＲＦ）上昇抑制作用を有することから、関節リウマチ予防剤又は治療剤に利用することができる。また、本発明に係る関節リウマチ予防又は治療用組成物は、天然物であるマツタケ由来成分からなるものであるため、長期間、連続的に服用しても、副作用の心配が少ない。更に、飲食物として摂取しやすい形態にすることにより、容易に摂取することができ、長期間、連続的に摂取し続けることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】実施例２の、コントロール群（ｂ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見。
【図２】実施例２の、マツタケ菌糸体群（ｃ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見。
【図３】実施例２の、陽性対照群ＤＥＸ群（ｄ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見。
【図４】実施例５の、コントロール群（ａ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見。
【図５】実施例５の、マツタケ菌糸体群（ｂ群）の光学顕微鏡下における病理組織学的所見。
【符号の説明】
【００８０】
１  実施例２の、コントロール群（ｂ群）における病変部。
２  実施例５の、コントロール群（ａ群）における病変部。
【図３】
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【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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