(57)【要約】Ｒ１、Ｒ２，Ｙ、（Ｘ）ｏ、（Ｗ）ｎ、（Ｖ）ｍ、Ｚ及びＵは、本明細書に記載されるのと同様の定義である、一般式（Ｉ）の化合物は、クルジパインの阻害剤及び他のシステインプロテアーゼの阻害剤であり、例えば、シャーガス病の、治療剤として、または治療のための標的化合物の確認に有用である。【０３９３】
2004522737.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2004522737.tif 000137
ただし、Ｒ１は、Ｃ０−７−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ１は、単に水素である）、Ｃ３−６−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ１は、単に芳香族部分Ａｒである）であり；
Ｒ２は、Ｃ１−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル；であり
Ｙは、ＣＨＲ３−ＣＯまたはＣＲ３Ｒ４−ＣＯであり、この際Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれる、またはＹは、下記を表わし：
【化２】
2004522737.tif 000138
この際、Ｌは、０〜４の数であり、ならびにＲ５及びＲ６は、独立して、ＣＲ７Ｒ８から選ばれ、この際、Ｒ７及びＲ８は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキルまたはハロゲンから選ばれ；ならびに、Ｒ５及びＲ６のそれぞれに関して、Ｒ７またはＲ８のいずれか（であるが、Ｒ７及びＲ８の双方ではない）は、さらにＯ−Ｃ０−７−アルキル、Ｏ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｏ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｓ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ３−６−シクロアルキル、ＮＨ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｎ−（Ｃ０−７−アルキル）２、Ｎ−（Ｃ３−６−シクロアルキル）２、及びＮ−（Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル）２から選ばれてもよく；
（Ｘ）ｏは、ＣＲ９Ｒ１０であり、この際、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｏは、０〜３の数であり；
（Ｗ）ｎは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）若しくはＳ（Ｏ）２、またはｏが１以上である際には、ＮＲ１１であり、この際、Ｒ１１は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｎは、０または１であり；
（Ｖ）ｍは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）２、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＲ１２Ｒ１３であり、この際、Ｒ１２及びＲ１３は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｍは、０〜３の数であり、ｍが１より大きい場合には、（Ｖ）ｍは、最大１個のカルボニルまたはスルホニル基を含み；
Ｚは、Ｏ（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドと称される）、Ｓ（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドと称される）、またはＣＨ２（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミドと称される）であり；
Ｕは、（下記に詳述されるように）飽和または不飽和のいずれかであり、０〜４個のヘテロ原子を含む、安定した５−〜７−員の一環または安定した８−〜１１−員の２環であり；
【化３】
2004522737.tif 000139
ただし、Ｒ１４は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ハロゲン、Ｏ−Ｃ０−７−アルキル、Ｏ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｏ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｓ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ３−６−シクロアルキル、ＮＨ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｎ−（Ｃ０−７−アルキル）２、Ｎ−（Ｃ３−６−シクロアルキル）２及びＮ−（Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル）２から選ばれ；
Ａは、ＣＨ２、ＣＨＲ１４、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１５から選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義であり、およびＲ１５は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ；
Ｂ、Ｄ及びＧは、独立して、ＣＲ１４から選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義である、またはＮであり；
Ｅは、ＣＨ２、ＣＨＲ１４、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１５から選ばれ、この際、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義であり；
Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４は、独立して、ＣＲ１４及びＮから選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義であり；
Ｔ５は、ＣＨから選ばれる、または、ｍ＋ｎ＋ｏ≧１の際のみ、Ｔ５は、さらにＮであってもよく；
ｑは、０〜３の数であり、これにより５−、６−または７−員環を規定する。
【請求項２】
Ｒ１は、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルを有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、水素または下記部分：
【化４】
2004522737.tif 000140
の一から選ばれる、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２は、Ｃ１−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２は、下記部分：
【化５】
2004522737.tif 000141
ただし、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義である、
の一から選ばれる、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚは、酸素原子を表わす、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４は、Ｃ０−７−アルキル若しくはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれる；またはＹは、下記基を有する：
【化６】
2004522737.tif 000142
ただし、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ、ＣＲ７Ｒ８であり、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれる、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４は、Ｃ３−６−シクロアルキルから選ばれる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｙは、下記部分：
【化７】
2004522737.tif 000143
ただし、Ｒ１４及びＲ１５及びＡｒは、上記と同様の定義である、
の一から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４は、Ａｒ−ＣＨ２−であり、この際、芳香族環は、必要であれば置換されてもよいフェニルまたは１環式ヘテロ環である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４は、単純分岐鎖のアルキル基または直鎖ヘテロアルキル鎖である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４基は、シクロヘキシルメチルを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｙは、以下：
【化８】
2004522737.tif 000144
ただし、Ｒ１４及びＡｒは、上記と同様の定義である、
から選ばれる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
基（Ｘ）ｏにおいて、Ｘは、ＣＲ８Ｒ９であり、ならびにＲ９及びＲ１０は、それぞれ、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
（Ｘ）ｏは、下記部分：
【化９】
2004522737.tif 000145
ただし、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義である、
の一である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
（Ｘ）ｏは、単純アルキル基であり、この際、ｏは、０または１である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
基（Ｗ）ｎにおいて：
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、ＳＯ、Ｃ（Ｏ）またはｏが１以上である際には、ＮＲ１１であり、この際、Ｒ１１は、Ｃ０−４−アルキルであり；ならびにｎは、０または１である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
基（Ｗ）ｎにおいて：
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、Ｃ（Ｏ）であり、およびｎは、０または１である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
基（Ｖ）ｍにおいて：
Ｖは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＨＲ１３であり、この際、Ｒ１３は、Ｃ０−４−アルキルであり；およびｍは、０または１である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
（Ｖ）ｍ及び（Ｗ）ｍの組み合わせは、下記：
【化１０】
2004522737.tif 000146
の一である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
（Ｘ）ｏ、（Ｖ）ｍ及び（Ｗ）ｍの組み合わせは、下記：
【化１１】
2004522737.tif 000147
の一である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｕは、必要であれば置換されてもよい５−若しくは６−員の飽和若しくは不飽和ヘテロ環または必要であれば置換されてもよい飽和若しくは不飽和の９−若しくは１０−員のヘテロ環である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｕは、下記：
【化１２】
2004522737.tif 000148
ただし、Ｒ１４は、上記と同様の定義である、
の一を有する、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｕは、アリールＡｒのパラ位に嵩高いアルキルまたはアリール基を有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｕは、メタまたはパラ−２アリールＡｒ−Ａｒを有し、この際、Ａｒは、上記と同様の定義である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｕは、６，６または６，５または５，６−融合芳香環を有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｕは、下記基：
【化１３】
2004522737.tif 000149
ただし、Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４は、上記と同様の定義である、
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｕは、下記基：
【化１４】
2004522737.tif 000150
ただし、Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ及びＴは、上記と同様の定義である、
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｕは、下記基：
【化１５】
2004522737.tif 000151
ただし、Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ及びＬは、上記と同様の定義である、
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
（ａ）単離された既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼへの請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物のインビトロでの結合を評価して、「潜在性」の基準を提供し；さらに必要であれば下記段階：
（ｂ）標的の及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ（例えば、トリプシン）の密接に関連する相同性プロテアーゼへの請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の結合を評価して、「選択性」の基準を提供する；
（ｃ）請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターする；および
（ｄ）請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターする、
の一以上を有する、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法。
【請求項３１】
治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認における請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
特に、病気の状態がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置することを目的として、医薬に使用される請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
病気の状態がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置するための医薬の調製における請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３４】
シャーガス病の予防または処置に使用される請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
シャーガス病の予防または処置に使用される請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
シャーガス病を予防または処置するための医薬の調製における請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
シャーガス病を予防または処置するための医薬の調製における請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３８】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の一以上の化合物及び製薬上または獣医学上許容できる担体を含む薬剤または獣医薬組成物。
【請求項３９】
例えば、混合によって、活性化合物を担体と組み合わせて取り入れることを有する、請求項３８に記載の薬剤または獣医薬組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテアーゼクルジパイン(protease cruzipain)、トリパノソーマ  クルージ寄生虫(Trypanosoma cruzi parasite)の遺伝子産物の阻害剤である化合物に関するものである。特に、本発明は、トリパノソーマ  クルージ(Trypanosomacruzi)感染の治療のための処置に有用である化合物、これらの化合物の使用、およびこれらを含む薬剤組成物を提供するものである。さらに、本発明は、広範なシステインプロテアーゼの阻害剤である化合物、これらの化合物の使用、およびこれらを含む薬剤組成物に関するものである。このような化合物は、システインプロテアーゼが関与する病気の治療のための処置に有用である。
【背景技術】
【０００２】
トリパノソーマ科の寄生虫は、ヒト及び動物の健康管理にかなりの世界的な衝撃がある(McKerrow, J. H., et al, Ann. Rev. Microbiol. 47, 821-853, 1993)。この科の寄生虫の一つである、トリパノソーマ  クルージ(Trypanosomacruzi)は、ラテン及び南アメリカで毎年２０００万人を超える人々に罹患し、これらの地域で心臓病の主要な原因であり、毎年、４５，０００人を超える人を死亡させる、シャーガス病の原因物質である（疾患制御センター(Centersfor Disease Control)及び予防ウェブサイト(prevention website)）。加えて、田舎から都会への感染集団の移動ならびに南及び中央アメリカから北アメリカへの移動の増加に伴って、感染が輸血を介して、及び誕生時に広がっている。トリパノソーマ  クルージ(Trypanosomacruzi)感染で選択される現在の処置剤である、ニフルティモックス(nifurtimox)及びベンズニダゾール(benznidazole)（ＮＡＤＨフマル酸レダクターゼ阻害剤、Turrens,JF, et al, Mol Biochem Parasitol., 82(1),125-9, 1996）が最も中等度にうまくいっており、感染急性期に約６０％の治癒を達成している（一般的な討論に関して、Docampo,R. Curr. Pharm. Design, 7, 1157-1164, 2001を参照）が、心筋障害が関連する心不全がしばしば起こる慢性期には全く処方されていない(Kirchhoff,L. V. New Engl. J. Med., 329, 639-644, 1993)。加えて、これらの２種の薬は、重篤な悪い毒性効果があり、処置中細かい医学的な監視を必要とし、シャーガス病の乳児に染色体の損傷を誘導することが示された(Gorla,N. B. et al, Mutat. Res. 206, 217-220, 1988)。したがって、トリパノソーマ  クルージ(Trypanosomacruzi)感染症の化学療法処置に有効な新規な薬剤に対する強い医療面での必要性がある。
【０００３】
従来、感染疾患の定着または伝播に重要であることが知られている酵素の同定は、アンチウィルス（例えば、ＨＩＶアスパルチルプロテアーゼ阻害剤）及び抗菌（例えば、β−ラクタム系抗生物質）等の良好な薬剤の開発を助けてきた。寄生虫感染における同様の弱点に関する調査により、多くの酵素が試験された（例えば、寄生虫のジヒドロ葉酸レダクターゼ、Chowdhury,S. F. et al, J. Med. Chem., 42(21), 4300-4312, 1999を参照；トリパノチオンレダクターゼ(trypanothionereductase)、Li, Z. et al, Bioorg. Med. Chem. Lett., 11(2), 251-254, 2001を参照；寄生虫のグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、Aranov,A. M. et al, J. Med. Chem., 41(24), 4790-4799, 1998を参照）。特に顕著な研究領域としては、寄生虫の寿命中に重要な役割を果たす、寄生虫によってコードされる、システインプロテアーゼの役割の同定がある(McKerrow,J. H., et al, Bioorg. Med. Chem., 7, 639-644, 1999)。現在まですべての遺伝子産物の約２％を構成する生物分子のかなりの群由来のプロテアーゼが、幾つかのゲノム配列決定プログラムの分析後に同定された（例えば、Southan,C. J. Pept. Sci, 6, 453-458, 2000を参照）。プロテアーゼは、天然で見出される無数のタンパク質内のペプチドアミド結合の切断によってこれらの効果を仲介する、広範な生物学的プロセスに関与するように展開してきた。この加水分解作用は、正確にプロテアーゼ触媒部位内にある切断に関する結合を並べる、タンパク質によって発揮される特定の３次元の電子表面を、まず認識した後、これに結合することによって行なわれる。次に、触媒による加水分解は、プロテアーゼ自身のアミノ酸側鎖を介して、またはプロテアーゼに結合し、これによって活性化される水分子の作用のいずれかにより切断されるアミド結合の求核性アタックにより開始する。アタックする求核試薬がＣｙｓ残基のチオール側鎖であるプロテアーゼは、システインプロテアーゼとして知られている。「システインプロテアーゼ」の一般的な分類は、ウィルス、細菌、原生動物、植物及び真菌から哺乳動物までの広範な生物にわたって見出される多くのものを含む。
【０００４】
トリパノソーマ  クルージ感染の生物学的な調査によって、寄生虫のライフサイクルの継続に重要である数多くの特定の酵素が明らかになった。このような酵素の一つである、クルジパイン(cruzipain)、カテプシンＬ様システインプロテアーゼは、シャーガス病の処置を目的とする明らかな治療標的である((a)Cazzulo, J. J. et al, Curr. Pharm. Des. 7, 1143-1156, 2001; (b) Caffrey,C. R. et al, Curr. Drug Targets, 1, 155-162, 2000)。寄生虫のライフサイクルにおけるクルジパインの正確な生物学的な役割は不明なままであるが、エピマスティゴート発達段階におけるクルジパインｍＲＮＡの上昇はリソソーム様ベシクルにおける宿主分子の栄養分解での役割を示す(Engel,J. C. et al, J. Cell. Sci, 111, 597-606, 1998)。実行可能な治療標的としてのクルジパインの確認は、複雑さが増して達成された。一般的なシステインプロテアーゼ阻害剤である、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＦＭＫをトリパノソーマ  クルージが感染した哺乳動物細胞培養物に添加すると、寄生虫の複製及び分化が遮断され、これにより寄生虫のライフサイクルが停止する(Harth,G., et al, Mol. Biochem. Parasitol. 58, 17-24, 1993)。トリパノソーマ  クルージが感染したマウス動物モデルにおけるビニルスルホン系阻害剤の投与は、マウスを致命的な感染から救うのみでなく、完全に回復させた(Engel, J. C. et al, J. Exp.Med, 188(4), 725-734, 1998)。多くの他のインビボでの研究によって、メジャーリーシュマニア(Leishmaniamajor)(Selzer, P. M. et al, Proc. Nat’l. Acad. Sci. U.S.A., 96,11015-11022, 1999)、マンソン住血吸虫(Schistosoma mansoni)及び熱帯熱マラリア原虫(Plasmodiumfalciparium)(Olson, J. E. et al, Bioorg. Med. Chem., 7, 633-638, 1999)等の別の寄生虫による感染がシステインプロテアーゼ阻害剤による処置によって停止または治癒されうることが確認された。
【０００５】
様々な合成方法が、クルジパイン阻害剤の設計について記載されてきた。しかしながら、トリパノソーマ  クルージ感染症の処置を目的として生物学的な「プルーフ−オブ−プリンシプル(proof-of-principle)」を提供するものの、現在の阻害剤は、それらの臨床での開発を妨げる多くの生化学的及び物理的な性質を示す（例えば、(a)Brinen, L. S. et al, Structure, 8, 831-840, 2000, peptidomimetic vinylsulphones, possible adverse mammalian cell toxicity（McKerrow, J. H. and Engel,J. unpublished results cited in Scheidt, K. A. et al, Bioorg. Med. Chem, 6,2477-2494, 1998を参照）；(b) Du, X. et al, Chem. Biol., 7, 733-742, 2000,aryl ureas, generally with low μM activity, and high ClogP values, thus pooraqueous solubility and probably low oral bioavailability；(c) Roush, W. R. et al,Tetrahedron, 56, 9747-9762, 2000, peptidyl epoxysuccinates, irreversibleinhibitors, with potent activity verses ハウスキーピングmammalian proteases such ascathepsin B；(d) Li, R. et al, Bioorg. Med. Chem. 4(9), 1421-1427, 1996,bisarylacylhydrazides and chalcones, polyhydroxylated aromatics；(e) US6143931,WO 9846559, non-peptide α-ketoamidesを参照）。今日までの多くの異なる酵素阻害方法のうち、クルジパインプロテアーゼ阻害剤のみがトリパノソーマ  クルージ感染の病気関連動物モデルを治癒するのに有効であることが分かっている。したがって、潜在性、選択性、低毒性及び最適化された薬物動態パラメーターの望ましい組み合わせを有するより有効なクルジパイン阻害剤の発見による、ヒトへの使用に適する、臨床上の候補へのこれらの「プルーフ−オブ−プリンシプル(proof-of-principle)」知得を続けることが明らかに医療上必要である。
【０００６】
クルジパイン及び多くの他の重要な寄生虫プロテアーゼは、パパイン様ＣＡ  Ｃ１科に属し、密接な構造上の哺乳動物の相同性を有する。システインプロテアーゼは、３次元構造での類似性またはプロテアーゼ１次配列内の触媒残基の保存配列に基づいて「クラン」に分類される。加えて、「クラン」はさらに、各プロテアーゼがプロテアーゼ活性に応答できる部分を構成するアミノ酸配列の部分を比較すると他のものとの統計学的に有意な関係を共有する「科」に分類される（徹底的な討論については、Barrett, A.J et al, in ‘Handbook of Proteolytic Enzymes’, Eds.Barrett, A. J., Rawlings, N. D., 及び Woessner, J. F. Publ. Academic Press, 1998を参照）今日まで、システインプロテアーゼは５種のクラン、ＣＡ、ＣＢ、ＣＣ、ＣＤ及びＣＥに分類される(Barrett,A. J. et al, 1998)。トロピカルパパイヤフルーツである「パパイン」のプロテアーゼは、クランＣＡの基礎を形成し、これは、現在、より多くのものが現在のゲノム配列決定の努力により予想されて、様々な配列データベースで８０種を超える別の完全な登録を有する。クランＣＡ／科Ｃ１のプロテアーゼ、例えば、カテプシンＫ（骨粗鬆症）、カテプシンＳ（自己免疫疾患）、カテプシンＬ（転移）等のヒトのプロテアーゼまたはファルシパイン(falcipain)（マラリア原虫  熱帯熱マラリア原虫(Plasmodiumfalciparum)）、クルジパイン（トリパノソーマ  クルージ感染）等の寄生虫のプロテアーゼは、多数の病気のプロセスにかかわりがある。最近、細菌のプロテアーゼ、スタフィロパイン(staphylopain)（S.aureus感染）がまた、試験的にクランＣＡに分類された。Ｘ線結晶構造が、ある範囲の阻害剤、例えば、パパイン（ＰＤＢ登録、１ｐａｄ、１ｐｅ６、１ｐｉｐ、１ｐｏｐ、４ｐａｄ、５ｐａｄ、６ｐａｄ、１ｐｐｐ、１ｔｈｅ、１ｃｓｂ、１ｈｕｃ）、カテプシンＫ（１ａｕ０、１ａｕ２、１ａｕ３、１ａｕ４、１ａｔｋ、１ｍｅｍ、１ｂｇｏ、１ａｙｗ、１ａｙｕ）、カテプシンＬ（１ｃｓ８）、カテプシンＳ（現在、待機中であるが、McGrath,M. E. et al, Protein Science, 7, 1294-1302, 1998で公表された）、クルザイン(cruzain)（クルジパインの組換え形態、Eakin,A. E. et al, 268(9), 6115-6118, 1993を参照）（１ｅｗｐ、１ａｉｍ、２ａｉｍ、１Ｆ２９、１Ｆ２Ａ、１Ｆ２Ｂ、１Ｆ２Ｃ）、スタフィロパイン(staphylopain)（１ｃｖ８）と複合したある範囲の上記プロテアーゼで利用できる。各構造は、これらの「クラン」及び「科」の分類によって予想されるように、同様の全体の活性部位のトポロジーを示し、このような構造の類似性は、ヒトへの使用に適するクルジパインの選択的な阻害剤を発見するのに伴われる困難性の一概念を具体化する。しかしながら、各ＣＡ  Ｃ１プロテアーゼの活性部位溝の深さ及び複雑な形状の点での微妙な相違が明らかであり、これは選択的な阻害剤設計で開発されてもよい。加えて、ＣＡ  Ｃ１科プロテアーゼの多くの現在の基質による阻害剤複合体は、阻害剤の潜在性に有意に寄与する、阻害剤及びプロテアーゼバックボーン間の一連の保存された水素結合を示す。主に２座水素結合がプロテアーゼＧｌｙ６６（Ｃ＝Ｏ）／阻害剤Ｎ−Ｈ及びプロテアーゼＧｌｙ６６（ＮＨ）／阻害剤（Ｃ＝Ｏ）の間で観察され、この際、阻害剤（Ｃ＝Ｏ）及び（ＮＨ）は阻害剤内のＳ２サブサイト結合要素を構成��るアミノ酸残基ＮＨＣＨＲＣＯによって提供される（プロテアーゼ結合部位の命名の記載に関しては、Berger,A. and Schecter, I. Philos. Trans. R. Soc. Lond. [Biol.], 257, 249-264,1970を参照）。アスパルギンまたはアスパルギン酸のプロテアーゼ主鎖（Ｃ＝Ｏ）（１５８〜１６３、残基の番号はプロテアーゼによって異なる）及び阻害剤（Ｎ−Ｈ）間のさらなる水素結合が多くの場合観察され、この際、阻害剤（Ｎ−Ｈ）は、阻害剤内のＳ１サブサイト結合要素によって提供される。ゆえに、モチーフＸ−ＮＨＣＨＲＣＯ−ＮＨ−Ｙが、ＣＡ  Ｃ１プロテアーゼの従来の基質に基づく阻害剤の中で広範に観察される。
【０００７】
従来技術では、ヒトに使用されるシステインプロテアーゼ阻害剤の開発が、近年、活発に行なわれる領域であった。ＣＡ  Ｃ１科のものを考慮すると、ペプチド及びペプチド様(peptidomimetic)のニトリル（例えば、ＷＯ−Ａ−０１０９９１０、ＷＯ−Ａ−００５１９９８、ＷＯ−Ａ−０１１９８１６、ＷＯ−Ａ−９９２４４６０、ＷＯ−Ａ−００４９００８、ＷＯ−Ａ−００４８９９２、ＷＯ−Ａ−００４９００７、ＷＯ−Ａ−０１３０７７２、ＷＯ−Ａ−００５５１２５、ＷＯ−Ａ−００５５１２６、ＷＯ−Ａ−０１１９８０８、ＷＯ−Ａ−０１４９２８８、ＷＯ−Ａ−０１４７８８６を参照）、直鎖及び環状ペプチド及びペプチド様ケトン（例えば、Veber, D. F. andThompson, S. K., Curr. Opin. Drug Discovery Dev., 3(4), 362-369, 2000,、ＷＯ−Ａ−０１７０２３２、ＷＯ−Ａ−０１７８７３４、ＷＯ−Ａ−０００９６５３、ＷＯ−Ａ−００６９８５５、ＷＯ−Ａ−００２９４０８、ＷＯ−Ａ−０１３４１５３からＷＯ−Ａ−０１３４１６０、ＷＯ−Ａ−００２９４０８、ＷＯ−Ａ−９９６４３９９、ＷＯ−Ａ−９８０５３３６、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３を参照）、ケトヘテロ環（例えば、ＷＯ−Ａ−００５５１４４、ＷＯ−Ａ−００５５１２４を参照）およびモノバクタム（例えば、ＷＯ−Ａ−００５９８８１、ＷＯ−Ａ−９９４８９１１、ＷＯ−Ａ−０１０９１６９を参照）の使用により、ヒトのカテプシン、主にカテプシンＫ（骨粗鬆症）、カテプシンＳ（自己免疫疾患）及びカテプシンＬ（転移）の阻害剤の開発が特に強調されてきた。従来技術では、潜在的なインビトロでの阻害剤が記載されるが、ヒトの治療剤を開発する上での多くの困難も明らかにされた。例えば、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３及びＷＯ−Ａ−００２９４０８には、環状ケトンに言及し、パパイン科のプロテアーゼ、及び最も好ましい実施態様としては、カテプシンＫを特に参照してシステインプロテアーゼの阻害剤である化合物が記載される。ＷＯ−Ａ−９８５０５３３には、良好な経口生物学的利用能を有するカテプシンＫの潜在的な阻害剤として文献に後に詳述される化合物が記載される(Witherington, J., ‘Tetrahydrofurans as Selective cathepsin KInhibitors’, RSC meeting, Burlington House, London, 1999)。ＷＯ−Ａ−９８５０５３３の化合物は、テトラヒドロフランカルボニル及び活性部位触媒性システイン残基間の可逆的な共有結合の形成によりカテプシンＫに結合することが報告された(Witherington,J., 1999)。加えて、同様の環状ケトン化合物が、特にファルシパインの阻害によるマラリアの処置について、寄生虫病に関連するシステインプロテアーゼの阻害剤の広範な説明の一部として、ＷＯ−Ａ−９９５３０３９に記載される。しかしながら、後の文献では、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３の環状ケトン化合物は、阻害剤の生理化学的な性質、α−アミノケトンキラル中心のキラル安定性が劣っていることにより、さらなる開発または十分な薬物動態評価には不適切であることが記載される(Marquis,R. W. et al, J. Med. Chem., 44(5), 725-736, 2001)。ＷＯ−Ａ−００６９８５５には、特にカテプシンＳの阻害に関する環状ケトンについても言及される化合物が記載される。ＷＯ−Ａ−００６９８５５の化合物は、環状ケトン環系のα−炭素にキラル安定性を提供する環状ケトン環系のβ−置換基の存在により、��Ｏ−Ａ−９８５０５３３の化合物より進歩していると考えられる。しかしながら、ＷＯ−Ａ−００６９８５５の化合物及びＷＯ−Ａ−９８５０５３３の化合物は、阻害剤分子のＮ末端部分を形成するアミノ酸置換基Ｒ１Ｒ２ＮＨＣＨＲ３ＣＯ−の存在が絶対的に必要であると記載され、即ち、ＣＡ  Ｃ１プロテアーゼの従来の基質による阻害剤の中で広範に観察される潜在的な水素結合モチーフＸ−ＮＨＣＨＲＣＯ−ＮＨ−Ｙを含む。文献に記載される及び市販の多くのアミノ酸は何百という可能性があるものの、多くの場合、アミノ酸のバックボーンはさらなる阻害剤の開発に必要とされる性質の適当なバランスがとれない。
【発明の開示】
【０００８】
ここで、一般式（Ｉ）で規定される、特定の化合物がトリパノソーマ  クルージ感染症の処置に有用である潜在的かつ選択的なクルジパインプロテアーゼ阻害剤であることを発見した。一般式（Ｉ）で規定される他の化合物は、広範なＣＡ  Ｃ１システインプロテアーゼのプロテアーゼ阻害剤であり、システインプロテアーゼによって引き起こされる病気の処置に有用な化合物である。一般式（Ｉ）で記載される化合物は、ＣＡ  Ｃ１プロテアーゼの従来の基質による阻害剤(substrate-based inhibitor)の中で広く観察される、Ｘ−ＮＨＣＨＲＣＯ−ＮＨ−Ｙモチーフを含まないが、驚くべきことに、一般式（Ｉ）で規定される化合物は良好な潜在性を保持する。本発明は、一般式（Ｉ）で規定される置換された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミド及び（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド化合物を提供するものである。
【０００９】
したがって、本発明の第一の態様は、一般式（Ｉ）の化合物を提供するものである。
【００１０】
【化１】
2004522737.tif 000003
【００１１】
ただし、Ｒ１は、Ｃ０−７−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ１は、単に水素である）、Ｃ３−６−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ１は、単に芳香族部分Ａｒである）であり；
Ｒ２は、Ｃ１−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル；であり
Ｙは、ＣＨＲ３−ＣＯまたはＣＲ３Ｒ４−ＣＯであり、この際Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれる、またはＹは、下記を表わし：
【００１２】
【化２】
2004522737.tif 000004
【００１３】
この際、Ｌは、０〜４の数であり、ならびにＲ５及びＲ６は、独立して、ＣＲ７Ｒ８から選ばれ、この際、Ｒ７及びＲ８は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキルまたはハロゲンから選ばれ；ならびに、Ｒ５及びＲ６のそれぞれに関して、Ｒ７またはＲ８のいずれか（であるが、Ｒ７及びＲ８の双方ではない）は、さらにＯ−Ｃ０−７−アルキル、Ｏ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｏ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｓ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ３−６−シクロアルキル、ＮＨ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｎ−（Ｃ０−７−アルキル）２、Ｎ−（Ｃ３−６−シクロアルキル）２、及びＮ−（Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル）２から選ばれてもよく；
（Ｘ）ｏは、ＣＲ９Ｒ１０であり、この際、Ｒ９及びＲ１０は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｏは、０〜３の数であり；
（Ｗ）ｎは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）若しくはＳ（Ｏ）２、またはｏが１以上である際には、ＮＲ１１であり、この際、Ｒ１１は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｎは、０または１であり；
（Ｖ）ｍは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）２、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＲ１２Ｒ１３であり、この際、Ｒ１２及びＲ１３は、独立して、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、ならびにｍは、０〜３の数であり、ｍが１より大きい場合には、（Ｖ）ｍは、最大１個のカルボニルまたはスルホニル基を含み；
Ｚは、Ｏ（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドと称される）、Ｓ（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドと称される）、またはＣＨ２（この場合、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミドと称される）であり；
Ｕは、（下記に詳述されるように）飽和または不飽和のいずれかであり、０〜４個のヘテロ原子を含む、安定した５−〜７−員の一環または安定した８−〜１１−員の２環であり；
【００１４】
【化３】
2004522737.tif 000005
【００１５】
ただし、Ｒ１４は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ハロゲン、Ｏ−Ｃ０−７−アルキル、Ｏ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｏ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ０−７−アルキル、Ｓ−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｓ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ０−７−アルキル、ＮＨ−Ｃ３−６−シクロアルキル、ＮＨ−Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル、Ｎ−（Ｃ０−７−アルキル）２、Ｎ−（Ｃ３−６−シクロアルキル）２及びＮ−（Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル）２から選ばれ；
Ａは、ＣＨ２、ＣＨＲ１４、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１５から選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義であり、およびＲ１５は、Ｃ０−７−アルキル、Ｃ３−６−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ；
Ｂ、Ｄ及びＧは、独立して、ＣＲ１４から選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義である、またはＮであり；
Ｅは、ＣＨ２、ＣＨＲ１４、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１５から選ばれ、この際、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義であり；
Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４は、独立して、ＣＲ１４及びＮから選ばれ、この際、Ｒ１４は、上記と同様の定義であり；
Ｔ５は、ＣＨから選ばれる、または、ｍ＋ｎ＋ｏ≧１の際のみ、Ｔ５は、さらにＮであってもよく；
ｑは、０〜３の数であり、これにより５−、６−または７−員環を規定する。
【００１６】
Ｂ、Ｄ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４は、さらに、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）を表わしてもよい。
【００１７】
本発明は、本発明の化合物のすべての塩、水和物、溶媒和化合物、複合体及びプロドラッグを包含する。「化合物」ということばは、特記しない限り、このようなすべての塩、水和物、溶媒和化合物、複合体及びプロドラッグを包含するものとする。
【００１８】
一般式（Ｉ）の化合物の適当な製薬上または獣医学上許容できる塩としては、有機酸、特に、以下に制限されないが、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、パントテン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタネート、グルコヘプタネート、グリセロリン酸塩、シュウ酸塩、ヘプタノエート、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、ニコチネート、パルモエート、ペクチネート、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、ラクトビオネート(lactobionate)、ピボレート(pivolate)、樟脳酸塩、ウンデカン酸塩及びコハク酸塩などの、カルボン酸、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩等の、有機スルホン酸；ならびに塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ヘミスルフェート、チオシアン酸塩、過硫酸塩、リン酸塩及びスルホン酸塩等の、無機酸の塩が挙げられる。
【００１９】
プロドラッグは、インビボで一般式（Ｉ）の活性のある親薬剤を放出する共有結合化合物である。プロドラッグは、例えば、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド、２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミド及び（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド足場に存在する環外ケトン官能性を有するアセタールまたはヘミアセタール誘導体を構成してもよい。キラル中心または他の形態の異性体中心が本発明の化合物に存在する際には、鏡像異性体及びジアステレオ異性体等の、すべての形態のこのような一つの異性体または複数の異性体は、本発明に包含される。キラル中心を含む本発明の化合物はラセミ混合物、鏡像異性体が多く含まれる混合物として使用されてもよい、またはラセミ混合物を既知の技術を用いて分離して、個々の鏡像異性体を単独で使用してもよい。
【００２０】
本明細書で適用する際の「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含むことを意味する。
【００２１】
本明細書で適用する際の「ヘテロ原子」は、Ｏ、Ｓ及びＮを含むことを意味する。
【００２２】
本明細書で適用する際の「Ｃ０−７−アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びこれらの単純異性体等の０（即ち、単純に水素）〜７炭素原子を有する安定した直鎖及び分岐鎖の脂肪族炭素鎖を含むことを意味する。加えて、Ｃ０−７−アルキルは、必要であれば、１、２または３個のハロゲン原子（上記定義と同様）でいずれかの位置で置換されて、例えば、トリフルオロメチル置換基を形成してもよい。さらに、Ｃ０−７−アルキルは、一以上のヘテロ原子（上記定義と同様）を有して、例えば、エーテル、チオエーテル、スルホン、スルホンアミド、置換アミン、アミジン、グアニジン、カルボン酸、カルボキサミドを形成してもよい。ヘテロ原子が鎖の末端に位置する際には、１または２個の水素原子で適当に置換される。ヘテロ原子またはハロゲンは、Ｃ０−７−アルキルが最小限１個の炭素原子を含む際にのみ存在する。
【００２３】
本明細書で適用する際の「Ｃ１−７−アルキル」は、最小限１個の炭素を有する置換基を記載する以外は（上記と同様の定義の）Ｃ０−７−アルキルの定義を包含することを意味する。
【００２４】
本明細書で適用する際の「Ｃ３−６−シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等の環状炭素をさらに含む「Ｃ０−７−アルキル」のいずれかのバリエーションを含むことを意味する。環状炭素は、必要であれば、一以上のハロゲン（上記定義と同様）またはヘテロ原子（上記定義と同様）で置換されて、例えば、テトラヒドロフラン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン置換基を形成してもよい。
【００２５】
本明細書で適用する際の「Ａｒ−Ｃ０−７−アルキル」は、さらに芳香環部分「Ａｒ」を含むＣ０−７−アルキルのいずれかのバリエーションを含むことを意味する。芳香環部分Ａｒは、一般式（Ｉ）におけるＵで前記したのと同様、不飽和である安定した５−若しくは６−員の一環または安定した９若しくは１０員の２環であってもよい。芳香環部分Ａｒは、（一般式（Ｉ）におけるＵで前記したのと同様）Ｒ１４で置換されてもよい。置換基Ａｒ−Ｃ０−７−アルキルでＣ＝０である場合には、置換基は単に芳香環部分Ａｒである。
【００２６】
アルキル及びシクロアルキル等のことばを含む他の表現は、上記定義に従って解されるものとする。例えば、「Ｃ１−４−アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含む以外はＣ０−７−アルキルと同様である。
【００２７】
異なる構造の異性体が存在する、および／または一以上のキラル中心が存在する際には、すべての異性体の形態を包含するものと解する。鏡像異性体は、これらのキラル中心の絶対配置によって特徴が明らかであり、Cahn, Ingold and PrelogのＲ−及びＳ−配列規則によって記載される。このような規則は当該分野においてよく知られている（例えば、‘Advanced Organic Chemistry’, 3rd edition, ed. March, J.,John Wiley and Sons, New York, 1985を参照）。
【００２８】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物としては、Ｒ１が、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルを有するものがある。ゆえに、例えば、好ましいＲ１部分としては、水素または直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、または直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、または必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖、または必要であれば置換されてもよいアリールヘテロアルキル鎖がある。
【００２９】
Ｒ１が水素またはＣ１−４−アルキルまたはＡｒ−Ｃ１−４−アルキルであることが特に好ましく、このようなＲ１置換基の例としては、以下に制限されないが、下記がある。
【００３０】
【化４】
2004522737.tif 000006
【００３１】
Ｒ２は、Ｃ１−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル、例えば、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖またはヘテロアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアラルキル鎖またはアルキルカルボン酸鎖またはＮ−（アルキルカルボニル）スルホンアミド鎖またはアルキルカルボキサミド鎖であることが好ましい。
【００３２】
特に好ましい化合物としては、Ｒ２が、Ｃ１−４−アルキルまたはＡｒ−Ｃ１−４−アルキルであるものがあり、このようなＲ２置換基の例としては、以下に制限されないが、下記がある。
【００３３】
【化５】
2004522737.tif 000007
【００３４】
ただし、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義である。
【００３５】
加えて、一般式（Ｉ）の好ましい化合物は、ＺがＯであるものを有する。
【００３６】
一例である、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド足場との置換基Ｒ１及びＲ２の好ましい例の組み合わせによって、下記化合物が得られ、これらはこのようなものの中で好ましいものである。
【００３７】
【化６】
2004522737.tif 000008
【００３８】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物において、Ｙは、ＣＨＲ４ＣＯであり、この際、Ｒ４は、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールヘテロアルキル鎖がある。加えて、一般式（Ｉ）の好ましい化合物においては、Ｒ４は、Ｃ３−６−シクロアルキルから選ばれ、例えば、シクロヘキシルメチルまたはシクロペンチルメチルがある。
【００３９】
他の一般式（Ｉ）の好ましい化合物としては、Ｙは、下記基を有するものがある。
【００４０】
【化７】
2004522737.tif 000009
【００４１】
ただし、Ｒ５及びＲ６は、それぞれ、ＣＲ７Ｒ８であり、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキルから選ばれ、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールヘテロアルキル鎖がある。
【００４２】
より好ましいＲ７及びＲ８基としては、Ｃ０−４−アルキルがあり、例えば、水素、メチル及びエチルがある。
【００４３】
好ましいＹ置換基の例としては下記がある：
【００４４】
【化８】
2004522737.tif 000010
【００４５】
ただし、Ｒ１４及びＲ１５及びＡｒは、上記と同様の定義である。
【００４６】
一般式（Ｉ）のより好ましい化合物は、ＯＨ、ＮＲ１５Ｒ１５、ＣＯＯＲ１５、若しくはＣＯＮＲ１５で置換されてもよい、Ｃ１−４−アルキル；またはアリール基がＲ１４で置換されてもよい、Ａｒ−Ｃ１−４−アルキルから選ばれるＲ４基を有する；この際、Ｒ１４及びＲ１５は、それぞれ独立して、上記と同様の定義である。
【００４７】
さらにより好ましいＲ４基は、Ａｒ−ＣＨ２−を有し、この際、芳香環は、必要であれば置換されてもよいフェニルまたは１環式ヘテロ環である。加えて、さらにより好ましいＲ４基は、イソブチル等の単純分岐鎖アルキル基またはベンジルスルファニルメチルまたはベンジルスルホニルメチル等の直鎖のヘテロアルキル鎖を有する。さらに、より好ましいＲ４基は、シクロヘキシルメチルを有する。より好ましいＹ置換基の例としては、下記がある。
【００４８】
【化９】
2004522737.tif 000011
【００４９】
ただし、Ｒ１４及びＡｒは、上記と同様の定義である。
【００５０】
基（Ｘ）ｏにおいて、Ｒ９及びＲ１０は、それぞれ、Ｃ０−７−アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−７−アルキル、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールへテロアルキル鎖から選ばれることが好ましい。
【００５１】
より好ましい（Ｘ）ｏ基は、水素から選ばれるＲ９を有する；Ｒ１０は、ＯＨ、ＮＲ１５Ｒ１５、ＣＯＯＲ１５、若しくはＣＯＮＲ１５で置換されてもよい、Ｃ１−４−アルキル；またはアリール基はＲ１４で置換されてもよい、Ａｒ−Ｃ１−４−アルキルであり、この際、Ｒ１４及びＲ１５は、それぞれ独立して、上記と同様の定義である。
【００５２】
好ましい（Ｘ）ｏ基の例としては、下記がある：
【００５３】
【化１０】
2004522737.tif 000012
【００５４】
ただし、Ｒ１４及びＲ１５は、上記と同様の定義である。
【００５５】
一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、メチレン等の単純アルキル基である（Ｘ）ｏ基を有し、この際、ｏは、０または１である。
【００５６】
基（Ｗ）ｎにおいて、
Ｗは、好ましくは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）またはｎが１以上である際には、ＮＲ１１であり、この際、Ｒ１１は、Ｃ０−４-−アルキルであり；及びｎは、０または１である。
【００５７】
一般式（Ｉ）のより好ましい化合物は、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、Ｃ（Ｏ）として規定され、およびｎは０または１である（Ｗ）ｎ基を有する。
【００５８】
基（Ｖ）ｍにおいて：
Ｖは、好ましくはＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＨＲ１３であり、この際、Ｒ１３は、Ｃ０−４−アルキルであり；およびｍは０または１である。
【００５９】
一般式（Ｉ）に包含される好ましいＶ及びＷ置換基の組み合わせとしては、以下に制限されないが、以下が挙げられる。
【００６０】
【化１１】
2004522737.tif 000013
【００６１】
一般式（Ｉ）に包含されるより好ましいＶ、Ｗ及びＸ置換基の組み合わせとしては、以下に制限されないが、以下が挙げられる。
【００６２】
【化１２】
2004522737.tif 000014
【００６３】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物において、Ｕは、必要であれば置換されてもよい５−若しくは６−員の飽和若しくは不飽和のヘテロ環若しくはＡｒ基または必要であれば置換されてもよい飽和若しくは不飽和の９−若しくは１０−員のヘテロ環若しくはＡｒ基を有する。このような好ましいＵ環の例としては、下記：
【００６４】
【化１３】
2004522737.tif 000015
【００６５】
および下記：
【００６６】
【化１４】
2004522737.tif 000016
【００６７】
ただし、Ｒ１４は、上記と同様の定義である、
がある。
【００６８】
一般式（Ｉ）のより好ましい化合物は、アリールＡｒのパラ位に嵩高いアルキルまたはアリール基を有するＵを含む。また、より好ましい化合物は、メタまたはパラ−２アリールＡｒ−Ａｒを有し、この際、Ａｒは、上記と同様の定義である。加えて、より好ましい化合物は、６，６または６，５または５，６−融合芳香環を有する。より好ましいＵ基の例としては、下記がある。
【００６９】
【化１５】
2004522737.tif 000017
【００７０】
ただし、Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４は、上記と同様の定義である。
【００７１】
特にクルジパインの阻害を目的とする、一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、パラ位に嵩高いアルキルまたはアリール基を含む６員のＡｒ環を有するＵ基を含み、この際、Ａｒは、上記と同様の定義である。
【００７２】
【化１６】
2004522737.tif 000018
【００７３】
ただし、Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ及びＴは、上記と同様の定義である。
【００７４】
一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、以下に制限されないが、以下を含むＵ基を有する。
【００７５】
【化１７】
2004522737.tif 000019
【００７６】
Ｒ１４、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ及びＬは、上記と同様の定義である。
【００７７】
ペプチド及び化学の分野で一般的に使用される略称及び記号は、Eur. J. Biochem., 158, 9-, 1984に記載されるのと同様にしてIUPAC-IUB JointCommission on Biochemical Nomenclatureによって表わされる一般的なガイドラインに従って、本発明の化合物を説明するのに本明細書において使用される。一般式（Ｉ）の化合物ならびにこれらの調製に使用される中間体及び出発材料は、特定の基が主な基として列挙するために優先度を低くした命名法のＩＵＰＡＣ規則に従って、名付けられる。一般式（Ｉ）の化合物の一例である、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はメチルであり、Ｚは酸素であり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）０は０であり、（Ｗ）ｎは酸素であり、（Ｖ）ｍはメチレンであり、およびＵは、フェニルである化合物（１）は、以下のような名称である。
【００７８】
【化１８】
2004522737.tif 000020
【００７９】
２Ｓ−ベンジルオキシ−４−メチル−ペンタン酸（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イル）−アミド
一般式（Ｉ）の化合物の第２の例である、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はメチルであり、Ｚは硫黄であり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）０は０であり、（Ｗ）ｎは酸素であり、（Ｖ）ｍはメチレンであり、およびＵはフェニルである化合物（２）は、以下のような名称である。
【００８０】
【化１９】
2004522737.tif 000021
【００８１】
２Ｓ−ベンジルオキシ−４−メチル−ペンタン酸（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３Ｒ−イル）アミド
一般式（Ｉ）の化合物の第３の例である、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はメチルであり、Ｚはメチレンであり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）０は０であり、（Ｗ）ｎは酸素であり、（Ｖ）ｍはメチレンであり、およびＵはフェニルである化合物（３）は、以下のような名称である。
【００８２】
【化２０】
2004522737.tif 000022
【００８３】
２Ｓ−ベンジルオキシ−４−メチルペンタン酸（２Ｓ−メチル−５−オキソ−シクロペント−３Ｓ−イル）アミド
本発明の化合物は、以下に制限されないが、環状ケトンの４種すべての立体異性体の組み合わせ、即ち、（２Ｓ，３Ｓ）、（２Ｒ，３Ｓ）、（２Ｓ，３Ｒ）、（２Ｒ，３Ｒ）およびＺが‘Ｏ’でありＲ１が‘Ｈ’である、下記例を包含し、また、Ｚ及びＲ１及びＲ２の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００８４】
４−メチル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−３−フェニル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−プロピオンアミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（４−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ）−プロピオンアミド
２−ベンジルオキシ−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
２−ベンジルオキシ−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
４−メチル−２−（４−チオフェン−２−イル−ベンジルオキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−３−フェニル−２−（４−チオフェン−２−イル−ベンジルオキシ）−プロピオンアミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（４−チオフェン−２−イル−ベンジルオキシ）−プロピオンアミド
【００８５】
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルオキシ）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルオキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルオキシ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
【００８６】
２−（ビフェニル−４−イルメチルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（ビフェニル−４−イルメチルスルファニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
４−メチル−２−（４−チオフェン−２−イル−ベンジルスルファニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（４−チオフェン−２−イル−ベンジルスルファニル）−プロピオンアミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
【００８７】
２−（ビフェニル−４−イルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（ビフェニル−４−イルメタンスルホニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
４−メチル−２−（４−チオフェン−２−イル−フェニルメタンスルホニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（４−チオフェン−２−イル−フェニルメタンスルホニル）−プロピオンアミド
３−フェニル−ピロール−１−カルボン酸２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
３−フェニル−ピロール−１−カルボン酸３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチルエステル
１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【００８８】
１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチルエステル
３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸２−（４−ヒドロキシフェニル）−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチルエステル
２−（４−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−４−オキソ−４−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−ブチルアミド
４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−エチル］−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４−（１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−２−（４−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−４−オキソ−ブチルアミド
２−［２−（１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−（４−ヒドロキシベンジル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−４−オキソ−ブチルアミド
２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
【００８９】
本発明のさらなる化合物は、以下に制限されないが、環状ケトンの４種すべての立体異性体の組み合わせ、即ち、（２Ｓ，３Ｓ）、（２Ｒ，３Ｓ）、（２Ｓ，３Ｒ）、（２Ｒ，３Ｒ）およびＺが‘Ｏ’でありＲ１が‘Ｈ’である、下記例を包含し、また、Ｚ及びＲ１及びＲ２の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００９０】
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−プロピオンアミド
Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニル−プロピオンアミド
２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−３−イルメトキシ）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメトキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−２−イルメトキシ）−プロピオンアミド
【００９１】
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメトキシ）−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（フラン−３−イルメトキシ）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−３−イルメトキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（フラン−２−イルメトキシ）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−２−イルメトキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメトキシ）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−３−イルメチルスルファニル）−プロピオンアミド
【００９２】
３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオンアミド
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチルスルファニル）−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（フラン−３−イルメチルスルファニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−３−イルメチルスルファニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−２−イルメチルスルファニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
【００９３】
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチルスルファニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメチルスルファニル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−３−イルメタンスルホニル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−プロピオンアミド
３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（チオフェン−２−イルメチルスルホニル）−プロピオンアミド
【００９４】
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチルスルホニル）−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（フラン−３−イルメチルスルホニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−３−イルメチルスルホニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（フラン−２−イルメチルスルホニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４，４−ジメチル−２−（チオフェン−２−イルメチルスルホニル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチルスルホニル）−４，４−ジメチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
３−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメチルスルホニル）−プロピオンアミド
モルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【００９５】
モルホリン−４−カルボン酸３，３−ジメチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチルエステル
２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
４，４−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−２−オキソ−エチル）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
【００９６】
有機化学を実施する当業者にとって、一般式（Ｉ）の化合物は、溶液中であるいは固相でのいずれかで行なわれる、数多くの化学ストラテジーによって容易に合成される（固相合成原則の一般的なレビューに関しては、Atherton,E. and Sheppard, R. C. In ‘Solid Phase Peptide Synthesis: A PracticalApproach’, Oxford University Press, Oxford, U.K. 1989を参照）。固相ストラテジーは、確立された平行合成方法により、一般的に５〜１００ｍｇのスケールで、何千という類似体を得ることができるという点で魅力的である（例えば、(a) Bastos, M.; Maeji, N. J.; Abeles, R. H. Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 92, 6738-6742, 1995を参照）。
したがって、一般式（Ｉ）の化合物の合成の一つのストラテジーとしては、下記を有する。
【００９７】
（ａ）溶液における適当に官能化され(functionalised)及び保護された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。
【００９８】
（ｂ）合成条件に安定であるが、合成終了時に容易に切断されやすいリンカーを介した固相への構成単位（ａ）の結合（固相合成に適用される「リンカー」機能について、例えば、James, I. W., Tetrahedron, 55(Report No 489),4855-4946, 1999を参照）。
【００９９】
（ｃ）残りの分子を構築するための、固相有機化学（Brown, R. D.  J. Chem. Soc., Perkin Trans.1, 19,3293-3320, 1998を参照）。
【０１００】
（ｄ）固相から溶液への化合物の切断。
【０１０１】
（ｅ）切断ウォークアップ(work-up)及び化合物の分析。
【０１０２】
一般式（Ｉ）の化合物の合成の第一段階は、官能化され及び保護された構成単位の溶液での調製である。（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（６）への具体的なスキームをスキーム１に詳述する。
【０１０３】
【化２１】
2004522737.tif 000023
【０１０４】
ＦｍＯＣ（Ｏ）は、既知のアミン保護基９−フルオレニルメトキシカルボニルを示し（Ｆｍｏｃ、Atherton, E. and Sheppard, R. C., 1989を参照）、「Ｐｇ」は、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル等の遊離ヒドロキシルまたはヒドロキシル保護基のいずれかを示す。詳細には、ジアゾメタンによる縮合によって、Ｒ１＝Ｈが形成される。
【０１０５】
段階（ａ）を考えると、合成は、様々な文献の方法、例えば、(a) Adams, Z. M., Jackson, R. F. W., Palmer, N. J., Rami, H. K.,Wythes, M. J.,  J. Chem. Soc.,Perkin Trans I, 937-947, 1999, (b) Hubschwerlen, C., et al, J. Med. Chem., 41,3972-3975, 1998, (c) Luzzio, F. A., et al, Tet. Lett., 41, 7151-7155,2000, (d) Morgan, A. J. et al, Org. Lett. 1(12), 1949-1952, 1999. (e)Zhang, H., Xia, P., Zhou, W., Tetrahedron: Asymmetry, 11, 3439-3447,2000, (f) Blaskovich, M.A., et al, J. Org. Chem., 63, 3631-3646, 1998により利用できる、適当に保護されたβ−ヒドロキシ−α−アミノ酸（４）から開始してもよい。
【０１０６】
Ｒ２がメチル置換基である最も簡単な場合では、β−ヒドロキシ−α−アミノ酸（４）は、トレオニン（Ｔｈｒ）であり、これは、４種すべての立体異性体（即ち、α’Ｒ’または’Ｓ’及びβ ’Ｒ’または’Ｓ’）が市販されている。イソブチルクロロホルメート(isobutylchloroformate)混合無水物を介して適当に保護されたβ−ヒドロキシ−α−アミノ酸（４）を活性化した後、ジアゾメタンで縮合することによって、ジアゾメチルケトン中間体（５）が得られる。ジアゾメチルケトン中間体（５）を酢酸水溶液中で塩化リチウムで処理すると、保護された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（６）が形成する。単純Ｒ１置換基の導入は、活性化された（４）をジアゾエタン（Ｒ１＝ＣＨ３）、または１−フェニルオキシジアゾエタン（Ｒ１＝ＣＨ２ＯＰｈ）等をジアゾメタンの代わりに使用して縮合することによって達成されてもよい。
【０１０７】
スキーム１で詳述された保護構成単位（（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（６）で例示された合成）は、阻害剤分子の固相合成で使用されてもよい（段階（ｂ）〜（ｅ））。段階（ｂ）、アルデヒドまたはケトンの固相結合は、様々な方法によって従来記載されてきた（例えば、(a) James, I. W., 1999, (b) Lee,A., Huang, L., Ellman, J. A., J. Am. Chem. Soc, 121(43), 9907-9914, 1999,(c) Murphy, A. M., et al, J. Am. Chem. Soc, 114, 3156-3157, 1992を参照）。（６）等のアルキルケトン官能性の可逆的な結合が可能な適当な方法は、従来記載されてきた化学の組み合わせによる。セミカルバジド(semicarbazide)、４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチルシクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（７）(Murphy, A. M., et al, J. Am.Chem. Soc, 114, 3156-3157, 1992)を、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（６）の結合で例示した、スキーム２に詳述されるように用いてもよい。
【０１０８】
【化２２】
2004522737.tif 000024
【０１０９】
構築物（８）を、エタノール／酢酸ナトリウムの水溶液中での還流によってリンカー分子（７）及び（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（６）の反応により調製する。標準的な固相技術（例えば、Atherton, E. and Sheppard, R. C., 1989を参照）を用いて、（８）の遊離カルボン酸官能性を介してアミノ官能化固相(amino-functionalisedsolid phase)に構築物を固定し、ローディングされた(loaded)構築物（９）を形成する。
【０１１０】
ローディングされた構築物（９）を、市販または文献の広範なカルボン酸と反応させて、一般式（Ｉ）の左側の部分「Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ」を導入してもよい。最も簡単な例では、一般式（Ｉ）の阻害剤の左側部分全体を、典型的な有機化学方法によって溶液中で調製し、固相上で構築物（９）にカップリングしてもよい（スキーム３〜７）。例えば（スキーム３）、亜硝酸ナトリウム／Ｈ２ＳＯ４による、（１０）で例示される、アミノ酸の溶液における処理によって、（１１）で例示される、α−ヒドロキシ酸が形成する(Degerbeck,F. et al, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1, 11-14, 1993)。α−ヒドロキシ酸、（１１）を、ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン混合物において水素化ナトリウムで処理した後、臭化ベンジルを添加することによって、２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸（１２）を形成する。（１２）を固相構築物（９）にカップリングした後、切断することによって、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘−‘、（Ｗ）ｎ＝‘Ｏ’、ｎ＝１、（Ｖ）ｍ＝‘ＣＨ２’、即ち、Ｒ１２、Ｒ１３＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝フェニルの一般式（Ｉ）の一例、（１３）を形成する。有機化学を実施する当業者にとって、（１０）等の広範なアミノ酸が、詳述した一般的な条件により（１１）等の相当するα−ヒドロキシ酸に変換される。加えて、臭化ベンジルの代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ１２Ｒ１３−ハロゲンを使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（１２）の多くのバリエーションを形成してもよい。場合によっては、アルキルハロゲン化物との反応前にメチルエステルとしてカルボン酸を一時的に保護することが好ましい（例えば、化合物（１８）、スキーム５）。次に、このエステル中間体を、簡単に酸（１２）に加水分解する。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）ｍ及びＵを調べる、（１３）の類似体が、スキーム３で詳述される一般的な条件で調製される。最終合成段階は固相に結合した化合物のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）が介する切断を含むため、置換エーテルがＴＦＡに不安定である場合には化合物を別の経路によって溶液中で調製してもよい（スキーム１０を参照）。
【０１１１】
【化２３】
2004522737.tif 000025
【０１１２】
または、構築物（９）（Ｆｍｏｃの除去後）のα−ヒドロキシ酸（１１）とのカップリングによって、多くの試薬と反応する一般式（Ｉ）の様々な固相結合中間体「Ｙ」置換基が形成する。例えば、α−ヒドロキシルを、ミツノブ条件(Mitsunobu conditions)下で反応させて(Hughes,D. L. Org. React.(N.Y), 42, 335-656, 1992)、エーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘，Ｗ＝‘Ｏ’）を得てもよい（固相上でのミツノブ反応(Mitsunobu reaction)の一例について、Grabowska, U. et al, J. Comb. Chem., 2(5), 475-490, 2000を参照）。または、α−ヒドロキシルを、カルバミルクロライドと反応させて、カルバメート（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘，Ｗ＝‘Ｏ’，Ｖ＝‘ＮＨＣ（Ｏ）’）を得てもよい。
【０１１３】
または、（スキーム４）、亜硝酸ナトリウム／Ｈ２ＳＯ４／臭化カリウムによる（１０）で例示される、アミノ酸の溶液における処理によって、立体を保持した（１４）(Souers, A. J. et al, Synthesis,4, 583-585, 1999)で例示される、α−ブロモ酸を得てもよい。ジメチルホルムアミド／トリエチルアミンにおけるフラン−２−イルメタンチオール（１５）で例示されるアルキルチオールによるα−ブロモ酸（１４）の処理によって、逆の構造を有する、３−シクロヘキシル−２Ｒ−（フラン−２−イルスルファニル）プロピオン酸（１６）が得られる。（１６）を固相構築物（９）にカップリングした後、切断することによって、（１７）、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘−‘、（Ｗ）ｎ＝‘Ｓ’、ｎ＝１、（Ｖ）ｍ＝‘ＣＨ２’、即ち、Ｒ１２、Ｒ１３＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝２−フラニルの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（１０）等の広範なアミノ酸が、詳述された一般的な条件で（１４）等の相当するα−ブロモ酸に変換される。加えて、フラン−２−イルメタンチオール（１５）の代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ１２Ｒ１３−ＳＨを使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（１６）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）ｍ及びＵを調べる、（１７）の類似体が、スキーム４で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１１４】
【化２４】
2004522737.tif 000026
【０１１５】
または、構築物（９）（Ｆｍｏｃの除去後）のα−ブロモ酸、例えば（１４）とのカップリングによって、多くの試薬と反応する一般式（Ｉ）の様々な固相結合中間体「Ｙ」置換基が形成する。例えば、α−ブロミドを、求核試薬、例えば、アルコール、チオール、カルバニオン等で置換して、エーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘Ｏ’）、チオエーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘Ｓ’）を得てもよい。チオエーテルは、必要であれば、スルホンに酸化してもよい（スキーム８を参照；即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘ＳＯ２’）（固相でのブロミドの置換及びチオエーテルの酸化の一例に関して、Grabowska, U. et al, J. Comb. Chem., 2(5), 475-490, 2000を参照）。
【０１１６】
または、（スキーム５）、（１１）で例示される、α−ヒドロキシ酸を、トリメチルシリルクロライド及びメタノールで処理することによって、メチルエステル（１８）が得られる。ジクロロメタンでのホスゲンによる遊離ヒドロキシルからクロロホルメートへの活性後にモルホリンを添加し、さらに加水分解することによって、モルホリン−４−カルボン酸−１Ｓ−カルボキシ−２−シクロヘキシルエチルエステル（１９）が形成する。（１９）を固相構築物（９）にカップリングした後切断することによって、（２０）、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘−‘、（Ｗ）ｎ＝‘Ｏ’、ｎ＝１、（Ｖ）ｍ＝‘ＣＯ‘及びＵ＝モルホリノの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（１８）等の広範なα−ヒドロキシ酸エステルが、詳述された一般的な条件で活性化クロロホルメートに変換されうる。加えて、モルホリンの代わりに、適当なアミンを使用して、詳述した一般的な条件により、カルボン酸（１９）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）ｍ及びＵを調べる、（２０）の類似体が、スキーム５で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１１７】
【化２５】
2004522737.tif 000027
【０１１８】
または、（スキーム６）、２Ｒ−シクロヘキシルメチルコハク酸１−メチルエステル（２１）で例示される広範なアルキルコハク酸エステルは、市販されているまたは既知の方法によって容易に調製される（(a) Azam et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 621-, 1996; (b) Evans et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 103,2127, 1981; (c) Oikawa et al, Tet. Lett, 37, 6169, 1996を参照）。アルキルコハク酸エステル（２１）のカルボキシル活性後にジメチルホルムアミドにおけるモルホリンを添加し、さらにエステルの加水分解を行なうことによって、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（２２）が得られる。（２２）を固相構築物（９）にカップリングした後切断することによって、（２３）、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘ＣＨ２‘、即ち、Ｒ９、Ｒ１０＝‘Ｈ’、ｏ＝１、（Ｗ）ｎ＝‘ＣＯ’、ｎ＝１、（Ｖ）ｍ＝‘−’及びＵ＝モルホリノの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（２１）等の広範なアルキルコハク酸エステルが、詳述された一般的な条件で調製され、（２２）等の相当する置換アルキルコハク酸に変換されてもよい。加えて、モルホリンの代わりに、適当なアミンを使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（２２）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｘ）ｏ、（Ｖ）ｍ及びＵを調べる、（２３）の類似体が、スキーム６で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１１９】
【化２６】
2004522737.tif 000028
【０１２０】
または、（スキーム７）、２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸（２５）で例示される、広範なビアリールアルキル酢酸は、既知の方法によって容易に利用できる（(a) DesJarlais, R. L. et al,J. Am. Chem. Soc, 120,9114-9115, 1998; (b) Oballa, R.M. et al, WO 0149288を参照）。ビアリールアルキル酢酸（２５）を固相構築物に（９）にカップリングした後切断することによって、（２６）、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘−‘、（Ｗ）ｎ＝‘−’、（Ｖ）ｍ＝‘−’及びＵ＝ｍ−ビフェニルの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（２５）等の広範なビアリールアルキル酢酸が、（２４）の遊離酸類似体のα−アニオンのアルキル化によって調製されてもよく、これはさらにフェニルボロン酸(phenylboronic acid)及び３−ブロモフェニル酢酸メチルエステルのスズキカップリング(Suzuki coupling)によって調製される。フェニルボロン酸の代わりに、スズキカップリングにおいて広範なアリールボロン酸(arylboronicacid)を使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（２５）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な基「Ｕ」を調べる（２６）の類似体が、スキーム７で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２１】
【化２７】
2004522737.tif 000029
【０１２２】
固相有機化学の多くの他の可能性（例えば、最近のＳＰＯＣ公表のレビューに関して、Brown,R. D.  J. Chem. Soc., PerkinTrans.1, 19, 3293-3320, 1998を参照）を用いて、一般式（Ｉ）の化合物に構築物（９）を誘導してもよい。例えば、一般式（Ｉ）における左側の部分の‘Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ’を、一部溶液中で構築して、構築物（９）にカップリングし、さらに固相上で修飾してもよい（スキーム８）。例えば、スキーム４の簡単な拡張を、切断前にジクロロメタンでｍ−クロロ過安息香酸を用いて、中間固相結合種の酸化により行ない、スルホン類似体（２７）を得る。スキーム４で記載されるように、カルボン酸（１６）の多くのバリエーションが、一般的な条件により調製される。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）ｍ及びＵを調べる（２７）の類似体が、スキーム４及び８で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２３】
【化２８】
2004522737.tif 000030
【０１２４】
一般式（Ｉ）の化合物は、最終的に、トリフルオロ酢酸／水で処理することによって固相から放出され、その後に、蒸発、凍結乾燥及び標準的な分析による特性化を行なう。
【０１２５】
一般式（Ｉ）の化合物の第２の合成ストラテジーは、下記を有する。
【０１２６】
（ｆ）溶液における適当に官能化及び保護された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。液相化学の好ましい保護基は、Ｎα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基及びＮα−ベンジルオキシカルボニル基である。
【０１２７】
（ｇ）構成単位（ｆ）の一般式（Ｉ）の化合物への変換に関する標準的な有機化学方法。
【０１２８】
最も簡単な例では、一般式（Ｉ）の阻害剤の完全な左側の部分を、従来の有機化学方法によって溶液中で調製し、構成単位（ｆ）にカップリングしてもよい（（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３０）の調製及び使用が例示されるスキーム９を参照）。
【０１２９】
【化２９】
2004522737.tif 000031
【０１３０】
スキーム９で詳述された一般的なストラテジーは、一般式（Ｉ）の化合物がトリフルオロ酢酸で分解されやすい置換基を含む際に特に有用であり、これは固相スキーム３〜８のそれぞれで使用された最終試薬である。例えば（スキーム１０）、ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン混合物における水素化ナトリウムによるα−ヒドロキシ酸（３２）の溶液における処理後に、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロミド(4-tert-butylbenzyl bromide)を添加することによって、２ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルオキシ）−４−メチルペンタン酸(2RS-(4-tert-butylbenzyloxy)-4-methylpentanoicacid)（３３）が形成する。（３３）を塩酸塩（３１）にカップリングすると、（３４）、Ｒ３＝‘Ｈ’、（Ｘ）ｏ＝‘−‘、（Ｗ）ｎ＝‘Ｏ’、ｎ＝１、（Ｖ）ｍ＝‘ＣＨ２’、即ち、Ｒ１２、Ｒ１３＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルである、一般式（Ｉ）の化合物の一例を得る。有機化学を実施する当業者にとって、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロミドの代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ１２Ｒ１３−ハロゲンを用いて、示された条件下で、カルボン酸（３３）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）ｍ及びＵを調べる（３４）の類似体が、スキーム１１で詳述される条件で調製される。
【０１３１】
【化３０】
2004522737.tif 000032
【０１３２】
Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙの、保護された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位への添加が多段階有機反応を伴う一般式（Ｉ）の化合物の第３の合成ストラテジーは、下記を有する。
【０１３３】
（ｈ）溶液における適当に官能化及び保護された（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。液相化学で好ましい保護基は、Ｎα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基及びＮα−ベンジルオキシカルボニル基である。
【０１３４】
（ｉ）例えば、ジメチルアセタールとしての、（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位のケトン官能性の保護。または、ケトンを、アキラル性の第２級アルコールに還元して、最終合成段階として再度酸化してもよい。
【０１３５】
（ｊ）構成単位（ｉ）の一般式（Ｉ）の化合物への変換に関する標準的な有機化学方法。
【０１３６】
中間体を溶液中で調製した後、構成単位（ｉ）にカップリングし、さらに一般式（Ｉ）の化合物に誘導してもよい（４−ヒドロキシ−２−アルキル−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３５）の調製及び使用が例示されるスキーム１１を参照）。
【０１３７】
【化３１】
2004522737.tif 000033
【０１３８】
または、一般式（Ｉ）の化合物の左側のＵ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙを構築するのに使用される化学のタイプによっては、ケトンは、例えば、ジメチルアセタールとしての、保護を必要としてもよい。このような方法は、（４，４−ジメトキシ−２−アルキル−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル（３８）の調製及び使用によってスキーム１２に詳述、例示される。
【０１３９】
【化３２】
2004522737.tif 000034
【０１４０】
本発明は、上記したような新規な中間体、およびこれらの中間前駆体からの一般式（Ｉ）の化合物の調製方法にまで拡張するものである。さらに、これらの中間前駆体からの中間体の調製方法もまた本発明の一部を形成する。
【０１４１】
一般式（Ｉ）の化合物は、実験道具として及び治療剤として有用である。実験室においては、本発明の化合物によっては、既知のまたは新たに発見されたシステインプロテアーゼが、「標的確認(target validation)」と一般的に称されるプロセスである、病気の状態の定着(establishment)または進行中の重要なまたは少なくとも有意な生化学的機能をもたらすかどうかを確立するのに有用である。
【０１４２】
本発明の第二の態様によると、（ａ）単離された既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼへの上記したような化合物のインビトロでの結合を評価して、潜在性(potency)の基準(measure)を提供し；さらに必要であれば下記段階：
（ｂ）標的の及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ(house-keeping protease)（例えば、トリプシン）の密接に関連する相同性プロテアーゼへの化合物の結合を評価して、選択性の基準を提供する；
（ｃ）化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターする；および
（ｄ）化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターする、
の一以上を有する、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法が提供される。
【０１４３】
したがって、本発明は、治療標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法を提供する。様々なアプローチ及び複雑さのレベルが特定の標的の効果的な阻害及び「確認」に適当である。第一の場合では、本方法は、単離された既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼへの一般式（Ｉ）の化合物のインビトロでの結合を評価して、「潜在性」の基準を提供する。標的の及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ（例えば、トリプシン）の密接に関連する相同性プロテアーゼへの一般式（Ｉ）の化合物の結合のさらなる評価は、「選択性」の基準を提供する。複雑さの第二のレベルは、一般式（Ｉ）の化合物の存在下で、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターすることによって評価されてもよい。例えば、「ヒト破骨細胞性吸収アッセイ」が、カテプシンＫの活性及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果をモニターするための細胞に基づく第二のインビトロの試験系として使用された（例えば、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３を参照）。「ＭＨＣ−ＩＩプロセシング−Ｔ細胞活性化アッセイ」は、カテプシンＳの活性及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果をモニターするための細胞に基づく第二のインビトロの試験系として使用された(Shi, G-P., et al, Immunity, 10, 197-206, 1999)。ウィルスまたは細菌感染を調べる際には、このようなマーカーは、単に、ウィルスの（例えば、ｍＲＮＡコピーのカウント）または細菌のローディングの機能的な評価及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果の評価であってもよい。複雑さの第三のレベルは、一般式（Ｉ）の化合物の存在下で、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターすることによって評価されてもよい。例えば、リーシュマニア(Leishmania)感染、ピー．ビンクケイ(P. vinckei)感染、マラリア（ファルシパイン(falcipain)の阻害）及びトリパノソーマ  クルージ感染（クルジパイン(cruzipain)）のマウスモデルは、病原の伝播に鍵となる役割を果たすシステインプロテアーゼの阻害が、病気の症状を阻止し、当該標的を「確認する」のに有効であることを示す。
【０１４４】
したがって、本発明は、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認における一般式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０１４５】
一般式（Ｉ）の化合物は、システインプロテアーゼが関与する病気のインビボでの処置または予防に有用である。
【０１４６】
本発明の第三の態様によると、特に、病気の状態(disease pathology)がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置するするための、医薬に使用される一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【０１４７】
本発明の第四の態様によると、病気の状態がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置するための医薬の調製における一般式（Ｉ）の化合物の使用が提供される。
【０１４８】
システインプロテアーゼによっては、ヒトを含む、動物でのタンパク質の分解の正常な生理学的なプロセスで、例えば、結合組織の破壊で機能する。しかしながら、体内でのこれらの酵素のレベルが上昇すると、病気を引き起こす病的な状態が生じうる。ゆえに、システインプロテアーゼは、以下に制限されないが、ニューモシスティス  カリニ(Pneumocystis carinii)、トリパノソーマ  クルージ(Trypsanoma cruzi)、トリパノソーマ  ブルーセイ  ブルーセイ(Trypsanomabrucei brucei)及びクリチジア  フシキュラタ(Crithidia fusiculata)による感染、さらには、骨粗鬆症、自己免疫性、住血吸虫症、マラリア、腫瘍の転移、変染色性白質ジストロフィー、筋ジストロフィー、脊髄萎縮などの、様々な病気の病態にかかわりがある。ＷＯ−Ａ−９４０４１７２及びＥＰ−Ａ−０６０３８７３ならびに双方に列挙される参考文献を参照。加えて、スタフィロパイン(staphylopain)と称される黄色ブドウ球菌(S.Aureus)から分泌される細菌性のシステインプロテアーゼは細菌力因子として関連がある(Potempa, J., et al. J. Biol. Chem, 262(6),2664-2667, 1998)。
【０１４９】
本発明は、上記したまたは上記に包含される病気の状態の予防および／または処置に有用である。本発明はまた、本発明の化合物を、必要のある動物、特に哺乳動物、最も好ましくはヒトに投与することを有する、システインプロテアーゼ、特にパパイン超科のシステインプロテアーゼの異常なレベルによって引き起こされる病気の処置または予防方法に有用である。本発明は、特に、ニューモシスティス  カリニ(Pneumocystis carinii)、トリパノソーマ  クルージ(Trypsanoma cruzi)、トリパノソーマ  ブルーセイ(Trypsanomabrucei)、メキシコリーシュマニア(Leishmania mexicana)、クロストリジウム  ヒストリチカム(Clostridiumhistolyticum)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、口蹄疫ウィルス及びクリチジア  フシキュラタ(Crithidiafusiculata)による感染；ならびに骨粗鬆症、自己免疫性、住血吸虫症、マラリア、腫瘍の転移、変染色性白質ジストロフィー、筋ジストロフィー、脊髄萎縮などの、システインプロテアーゼが関連する病気の処置方法を提供するものである。
【０１５０】
クルジパインの阻害剤、特にクルジパインに特異的な化合物は、シャーガス病の処置に有用である。
【０１５１】
本発明によると、有効量の一般式（Ｉ）の化合物が投与されて、特定の症状または病気に関連のあるプロテアーゼを阻害してもよい。いうまでもなく、この投与量はさらに、化合物の投与タイプによって修飾されるであろう。例えば、急性治療に関する「有効量」を達成するためには、一般式（Ｉ）の化合物の非経口投与が好ましい。筋肉内大量注射もまた使用できるが、水または正常生理食塩水における５％デキストロースにおける化合物、または適当な賦形剤を含む同様の配合物の静脈内注入が最も有効である。具体的には、非経口投与量は、システインプロテアーゼを阻害するのに有効な濃度で血漿中で薬剤の濃度を維持するように、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ；好ましくは０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであろう。化合物は、約０．４〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日の１日当たりの全投与量を達成するようなレベルで毎日１〜４回投与されてもよい。治療上有効である本発明の化合物の正確な量、およびこのような化合物が最良に投与される経路は、薬剤の血中レベルを治療効果を有するのに必要な濃度と比較することによって当業者によって容易に決定される。本発明の化合物のプロドラッグを適当な方法によって調製してもよい。プロドラッグ部分がケトン官能性であるこれらの化合物、特にケタールおよび／またはヘミアセタールでは、公知の方法に従って変換を行なってもよい。
【０１５２】
本発明の化合物はまた、薬剤の濃度が骨の再吸収を阻害するのにまたは本明細書に開示されるような他の治療指示を達成するのに十分であるように、患者に経口投与されてもよい。具体的には、化合物を含む薬剤組成物は、患者の状態に適合するように約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの経口投与量で投与される。好ましくは、経口投与量は、約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇである。
【０１５３】
本発明の化合物を本発明に従って投与される際に、許容できない毒性効果は予想されない。良好な生物学的利用能を有する、本発明の化合物は、所定の薬理効果を有するのに必要である化合物の濃度を決定するために幾つかの生物学的アッセイの一で試験されてもよい。
【０１５４】
本発明の第五の態様によると、一以上の一般式（Ｉ）の化合物及び製薬上または獣医学上許容できる担体を含む薬剤または獣医薬組成物が提供される。処置されるまたは予防される病気または症状に適当であるまたは勧められると考えられる場合には、他の活性材料が存在していてもよい。
【０１５５】
担体、または一以上が存在する場合には、各担体は、配合物の他の成分と適合し、レシピエントに有害でない点で許容できなければならない。
【０１５６】
配合物は、直腸内、経鼻、局所（口腔内及び舌下を含む）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）投与に適するものを含むが、好ましくは、配合物は経口投与される配合物である。配合物は、簡便に、単位投与形態(unit dosage form)、例えば、錠剤及び持続放出性カプセルで提示されてもよく、薬学の分野において既知である方法によって調製されてもよい。
【０１５７】
このような方法は、上記で規定される活性成分を担体と組み合わせて取り入れる(bringing into association with)ことを含む。通常、配合物は、活性剤を液状担体若しくは微粉砕された固体担体または双方と組み合わせて均一かつ均質に取り入れて、さらに必要であれば生成物を成形することによって調製される。本発明は、製薬上または獣医学上許容できる担体またはベヒクルと一緒に(inconjunction with)または組み合わせて(in association with)一般式（Ｉ）の化合物を取り入れてなる薬剤組成物の調製方法にまで拡張する。
【０１５８】
本発明における経口投与用の配合物は、各々所定量の活性剤を含むカプセル、カシェ剤若しくは錠剤等の離散単位(discrete unit)として；粉末若しくは顆粒として；水性液体若しくは非水性液体における活性剤の溶液若しくは懸濁液として；または水中油液状エマルジョン若しくは油中水液状エマルジョンとして；またはボーラスとしてなどとして提示されてもよい。
【０１５９】
経口投与用の組成物（例えば、錠剤及びカプセル）では、「許容できる担体」ということばは、一般的な賦形剤、例えば、結合剤、例えば、糖ミツ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース及びデンプン；充填剤及び担体、例えば、コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸２カルシウム、塩化ナトリウム及びアルギン酸；ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム及び他の金属ステアリン酸(metallic stearate)、グリセロールステアレート、ステアリン酸、シリコーン油、タルクワックス、油及びコロイドシリカ等の潤滑剤などのベヒクルを包含する。ペパーミント、ウインターグリーン油、チェリー着香剤(cherryflavouring)などの着香剤もまた使用できる。容易に同定できる投与形態にできるように着色剤を添加することが望ましい。錠剤は、当該分野において既知の方法によって被覆されてもよい。
【０１６０】
錠剤は、必要であれば一以上の補助成分と共に、圧縮または成形によって作製されてもよい。圧縮錠剤は、必要であれば、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、表面活性剤または分散剤と混合して、粉末または顆粒などの自由に流れる形態(free flowing form)で活性剤を適当な機械で圧縮することによって調製されてもよい。成形錠剤は、不活性な液状希釈剤で湿潤化された粉末の化合物の混合物を適当な機械で成形することによって作製されてもよい。錠剤は、必要であれば被覆されてもまたは刻み目を入れられてもよく、また、活性剤が緩やかにまたは制御されて放出されるように配合されてもよい。
【０１６１】
経口投与に適する他の配合剤としては、フレーバーベース、一般的には、スクロース及びアカシアまたはトラガカント内に活性剤を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアカシア等の不活性基剤内に活性剤を含む香錠；および適当な液状担体内に活性剤を含むマウスウォッシュがある。
【０１６２】
非経口配合物は通常滅菌されているであろう。
【０１６３】
本発明の第六の態様によると、例えば、混合によって、活性成分を担体と組み合わせて取り入れることを有する、上記した薬剤または獣医薬組成物の調製方法が提供される。
【０１６４】
本発明の各態様の好ましい特徴は、必要であれば変更を加えて、各態様と同様である。
【０１６５】
ここで、本発明を下記実施例により詳細に説明する。
【０１６６】
液相化学−一般的な方法
すべての溶剤は、特記しない限り、ＳｐＳまたはＨｉ−ＤｒｙグレードでROMIL Ltd(Waterbeach, Cambridge, UK)から購入した。一般的なペプチド合成試薬は、Chem-ImpexIntl. Inc.(Wood Dale IL 60191. USA)から得た。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、予め被覆されたプレート（メルクアルミニウムシートシリカ６０  Ｆ２５４(Merckaluminium sheets silica 60 F254)、part no. 5554）上で行なった。化合物の可視化は、紫外線（２５４ｎｍ）下でまたは適当な染色試薬を用いて達成された。フラッシュカラム精製は、シリカゲル６０(Merck9385)で行なった。すべての分析用ＨＰＬＣは、２１５および／または２５４ｎｍのＵＶで検出する自動化Ａｇｉｌｅｎｔシステム(automated Agilentsystem)で溶剤Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸水溶液（ＴＦＡ）及び溶剤Ｂ＝９０％アセトニトリル／１０％溶剤Ａの混合液を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ４、５μ、３００Ａ、２５０×４．６ｍｍで得られた。特記しない限り、１．５ｍＬ／分での２５分にわたる１０〜９０％  ＡにおけるＢの勾配を、全分析用ＨＰＬＣ分析で行なった。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、０．４ｍＬ／分のＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｃ８、５μ、３００Ａ、５０×２．０ｍｍで１０分にわたり１０〜９０％  ＡにおけるＢの勾配で、自動化Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム(automatedAgilent HPLC system)を用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ  ＬＣ／ＭＳＤ(Agilent 1100 series LC/MSD)で行なった。核磁気共鳴（ＮＭＲ）は、示された溶媒及び温度でＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ４００（４００ＭＨｚ  １Ｈ  周波数；ＱＸＩプローブ）で得られた。化学シフトは、部／ミリオン（δ）で表わし、溶剤の残留シグナル(residualsignal)を参考にする。カップリング定数（Ｊ）は、Ｈｚで表わす。
【０１６７】
例示阻害剤（１〜４７）は、溶液及び固相Ｆｍｏｃによる化学を組み合わせることにより調製した（一般的な説明に関しては、‘Solid Phase Peptide Synthesis’, Atherton, E. and Sheppard, R. C.,IRL Press Ltd, Oxford, UK, 1989を参照）（スキーム１〜１２）。
【０１６８】
固相化学−一般的な方法
適当に保護され官能化された構成単位は、溶液中で調製した（例えば、一般的な化合物（６）、スキーム１）後、適当なリンカーを介して固相に可逆的に結合した。次に、カップリング／脱保護／化学的修飾、例えば、酸化のラウンドを、全長の所望の分子が完了するまで行なった（スキーム２）。さらに、例示の阻害剤（１〜４７）は、固相から放出され（切断され）、分析され、精製されて、ある範囲のプロテアーゼに対する阻害についてアッセイした。
【０１６９】
通常、適当な固相表面が選択されうるものの、マルチピン(multipin)（ポリアミド１．２→１０マイクロモルのローディング、www.mimotopes.comを参照）を、固相合成に使用した。通常、１．２マイクロモルのギヤを用いて、予備スクリーニング用に小スケールの未精製例示物を得、また、１０マイクロモルのクラウンが好ましい実施例のスケールアップ合成及び精製で使用した。標準的なカップリング及びＦｍｏｃ脱保護方法を使用した（固相マルチピン方法(solidphase multipin methodology)の徹底的な説明に関しては、Grabowska, U. et al, J. Comb. Chem. 2(5),475-490, 2000を参照）。
【０１７０】
初期アセンブリの調製
構成単位−リンカー構築物（例えば、（８）、具体的には１００ｍｇ〜２ｇ）を、５分間、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、具体的には、１〜１０ｍＬ）中で２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１モル当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、１モル当量）、及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２モル当量）でカルボキシル活性化を行なった。アミノ官能化ＤＡ／ＭＤＡクラウンまたはＨＥＭＡギア（１クラウン当たり１０マイクロモル／１ギア当たり１．２マイクロモル、活性化構築物に比して０．３３モル当量の全表面アミノ官能化）を添加した後、ＤＭＦを添加して、固相表面を被覆した。ローディング反応を一晩行なった。一晩ローディングした後、クラウン／ギアについて、洗浄、Ｆｍｏｃ脱保護及びローディングの定量の標準的なサイクルを行ない（Grabowska, U. et alを参照）、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（例えば、（９））を得た。分析から、すべての実施例においてほとんど定量的なローディングが示された。
【０１７１】
カップリングサイクル
標準的なＦｍｏｃ−アミノ酸および新規なカルボン酸（例えば、（１２）スキーム３、（１６）スキーム４、（１９）スキーム５、（２２）スキーム６、（２５）スキーム７）（１０または２０モル当量）のカップリングを、５分間予め活性化して、ジメチルホルムアミド中で２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１０または２０モル当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、１０または２０モル当量）及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２０または４０モル当量）で活性化されたカルボキシルを介して行なった。活性化された物質を、合成に必要なパターンでポリプロピレン製９６ウェルプレート（Beckman, １ｍＬウェル、クラウンでは１ウェル当たり５００μＬ溶液またはギアでは１ウェル当たり２５０μＬ溶液）の適当なウェルに分取した。ローディングされた遊離アミノ構成単位−リンカー構築物（例えば、（９））を添加して、カップリング反応を一晩行なった。一晩カップリングした後、クラウン／ギアについて、洗浄、Ｆｍｏｃ脱保護の標準的なサイクルを行なった（Grabowska,U. et alを参照）。同様の活性化及びカップリング条件をある範囲のカルボン酸（Ｒ−ＣＯＯＨ）のカップリングに使用した。または、クロロホルメート、例えば、モルホリン−４−カルボニルクロライド（１０モル当量）を、ＮＭＭ（１０モル当量）を添加しながらＤＭＦ中でカップリングした。
【０１７２】
酸分解切断サイクル(Acidolytic Cleavage Cycle)
９５％  ＴＦＡ／５％水の混合液を、合成のパターンに相当するパターンでポリスチレンの９６ウェルプレート（Beckman1, １ｍＬ  ウェル、クラウンでは１ウェル当たり６００μＬ溶液またはギアでは１ウェル当たり３００μＬ溶液）に予め分取した。完了したマルチピンアセンブリを第一のプレート（マザープレート）に添加し、単位を錫箔中にカバーして、２時間切断した。次に、切断されたマルチピンアセンブリを、第一のプレートから除去して、１５分間、第二のプレート（洗浄プレート）に添加した。さらに、消費されたマルチピンアセンブリを捨て、マザー／洗浄プレートをＨＴ−４  ＧｅｎｅＶａｃプレートエバポレーター(HT-4GeneVac plate evaporator)で蒸発させた。
【０１７３】
切断された例示物の分析及び精製
（ａ）１．２マイクロモルのギアの例。１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を各切断後の乾燥した洗浄プレートのウェルに添加し、よく混合して、相当する切断後の乾燥したマザープレートのウェルに移し、再度よく混合した。１０μＬのこのＤＭＳＯ溶液を、９０％アセトニトリル／１０％  ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液で１００μＬに希釈した。２０μＬのアリコートを、ＨＰＬＣ−ＭＳ及び全分析用ＨＰＬＣ(full analytical HPLC)で分析した。それぞれの場合、未精製の例示分子は、予想された［Ｍ＋Ｈ］＋イオン及び８０％超（２１５ｎｍ  ＵＶ分析による）のＨＰＬＣピークを示した。これにより、予備的なプロテアーゼ阻害スクリーニング用に良質な未精製例示物を含む約１０ｍＭ  ＤＭＳＯストック溶液が得られた。
【０１７４】
（ｂ）１０マイクロモルのクラウンの例。５００μＬの９０％アセトニトリル／１０％  ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液を、各洗浄プレートのウェルに添加し、よく混合して、相当するマザープレートのウェルに移し、再度よく混合した。５μＬのこの溶液を、９０％アセトニトリル／１０％  ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液で１００μＬに希釈した。２０μＬのアリコートを、ＨＰＬＣ−ＭＳ及び全分析用ＨＰＬＣで分析した。それぞれの場合、未精製の例示分子は、予想された［Ｍ＋Ｈ］＋イオン及び８０％超（２１５ｎｍ  ＵＶ分析による）のＨＰＬＣピークを示した。次に、未精製例示物を含むポリスチレン単位を凍結乾燥した。
【０１７５】
（ｃ）個々の例示物（例（ｂ））を、０．１％ＴＦＡ水溶液／アセトニトリルの１：１の混合液（１ｍＬ）中に再溶解して、半予備的ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ４、５μ、３００Ａ、２５０×１０ｍｍ、２５分にわたる２５〜９０％のＡにおけるＢの勾配、４．０ｍＬ／分、２１５ｎｍ  ＵＶ検出）によって精製した。画分を、予めタールが塗布された(pre-tarred)グラスサンプルバイアル瓶中で凍結乾燥して、精製された例示物（具体的には、２〜４ｍｇ、４０〜８０％収率）を得た。
【０１７６】
（ｄ）精製された例示物を、適当な容積のＤＭＳＯに溶かして、正確なプロテアーゼ阻害スクリーニング用の、１０ｍＭのストック溶液を得た。
【０１７７】
実施例１  （２Ｓ，３Ｓ）  ２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０１７８】
【化３３】
2004522737.tif 000035
【０１７９】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ａ）を下記のような８段階で調製した。
【０１８０】
（１）（１Ｓ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０１８１】
【化３４】
2004522737.tif 000036
【０１８２】
ジクロロメタン（１４ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（１．０５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の溶液及びジクロロメタン（１４ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１．４２ｇ、１４ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、窒素雰囲気下で−１５℃で１０かけて、ジクロロメタン（７０ｍｌ）におけるＦｍｏｃ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルエーテル）−Ｌ−アロ−トレオニン（２．７８ｇ、７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。次に、エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（１１ｍｌ）／エタノール（３１ｍｌ）における水酸化ナトリウム（８．０２２ｇ）にジエチルエーテル（１１５ｍｌ）中でジアザルド(diazald)（７．１４ｇ、〜２１ｍｍｏｌ）の添加から生成］を注意深く添加し、得られた黄色の溶液を室温で９０分間攪拌した。酢酸（〜３ｍｌ）を、（泡立ちが止まるまで）注意深く添加した後、混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（７０ｍｌ）で希釈した。エーテル層を、水で洗浄し（３×７０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、（１Ｓ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが黄色の油として残り（５．４７ｇ）、これをさらに精製せずに使用した。
【０１８３】
（２）（２）（２Ｓ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルへの環化
【０１８４】
【化３５】
2004522737.tif 000037
【０１８５】
水（１０５ｍｌ）における８０％酢酸における塩化リチウム（２．９７ｇ、７０ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｓ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（５．７ｇ、〜７ｍｍｏｌ）に添加した。黄色の油状の懸濁液を２時間攪拌すると、薄黄色の溶液がガスの蒸発によって付随して形成した。溶剤を真空中で除去した後、残渣を酢酸エチル（４２ｍｌ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２×４２ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（４２ｍｌ）で洗浄した。合わせた水層を、酢酸エチルで抽出した（２×４２ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、黄色のガムが残った（４．２８ｇ）。この黄色のガムを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ９：１→７：３の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、（２Ｓ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが白色の結晶性固体として残った（１．５８ｇ、出発酸から６７％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２７、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１７．９２分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．４７分、３６０．０［Ｍ＋Ｎａ］＋、３６１．０［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０１８６】
【化３６】
2004522737.tif 000038
【０１８７】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ａ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（８ａ）に変換した。
【０１８８】
（２Ｓ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ａ）（３５４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（２１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むエタノール（９．６ｍＬ）及び水（１．４ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（３４６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量、Murphy, A. M. et al,J. Am. Chem. Soc., 114,3156-3157, 1992）を添加し、混合物を２時間還流した。クロロホルム（１００ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液で洗浄した（０．１Ｍ、１×１００ｍＬ）。酸性層をクロロホルムで洗浄し(backwash)（３×１００ｍＬ）し、合わせた有機溶液をブラインで洗浄し（１００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させることによって、リンカー構築物（８ａ）を白色固体として得た（６３０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、１つのメインピークがＲｔ＝１７．１７分で示された、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、５３５．３［Ｍ＋Ｈ］＋のメインＵＶピーク）。未精製物（８ａ）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０１８９】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（８ａ）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ａ）を提供する固相に結合させた。
【０１９０】
構成単位−リンカー構築物（８ａ）（１．０ｍｍｏｌｅ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、３７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、１５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２２０iＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（２５０×１．２iｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（２５×１０iｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、９５％超のローディングが示された。
【０１９１】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−プロピオン酸（化合物（１２）、スキーム３）を、下記のようにして調製した。
【０１９２】
（１）３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸の調製（化合物（１１）、スキーム３）
水（４０ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（１２．１ｇ、１７５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で１．５時間にわたって０．５Ｍ  硫酸（１２０ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）における（Ｓ）−α−アミノシクロヘキサンプロピオン酸水和物（５ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に滴下した。この混合物を２０時間かけて周囲温度まで加温した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×２５ｍｌ）後、エーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×２５ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣（５．３ｇ）を、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）及びヘプタン（２５ｍｌ）から再結晶化することによって、３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸を白色固体として得た、収率２．４ｇ、（５３％）。
【０１９３】
【化３７】
2004522737.tif 000039
【０１９４】
（２）２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸（化合物（１２）、スキーム３）の調製
水素化ナトリウム（２６５ｍｇの油における６０％分散液、６．６ｍｍｏｌ）を、５分にわたって０℃で３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸（０．５２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）及びジクロロメタン（５ｍｌ）の攪拌混合物に２回に分けて添加した。この混合物を０℃で５分間、次に周囲温度で４５分間攪拌した。次に、臭化ベンジル（０．４５ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）を加えた後、この混合物を、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）を添加する前に、１時間、攪拌した。４時間攪拌した後、ヨウ化カリウム（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０時間攪拌した後、５５℃で１時間加熱し、さらに周囲温度まで冷却して、水（１５ｍｌ）に注いだ。飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）を添加した後、混合物をジクロロメタン（５ｍｌ次に１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を用いて酸性化した後、ジクロロメタンで抽出した（２×１０ｍｌ）。ジクロロメタン層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣（０．５５ｇ）をジメチルホルムアミド（８ｍｌ）に溶解した後、水素化ナトリウム（１９０ｍｇの油における６０％分散液、４．７５ｍｍｏｌ）を添加する前に０℃に冷却した。この混合物を３０分間攪拌した後、ポリマー結合イソシアネート（３８０ｍｇ、２ｍｍｏｌＮｇ−１）を添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、水（１５ｍｌ）に注いだ。１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を添加した後、生成物をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジロロメタン  ０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸を無色の油として得た、収率４１ｍｇ（５．２％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．４７分、２６１．２［Ｍ−Ｈ］−、２８５．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、５４７．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０１９５】
【化３８】
2004522737.tif 000040
【０１９６】
化合物（１２）を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ａ）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例１を得た。この未精製例示物を（一般的な技術を参照）を分析した。ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．７４分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６０．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７４１．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１９７】
下記実施例（２〜１０）を、実施例１で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０１９８】
実施例２  （２Ｓ，３Ｓ）２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
【０１９９】
【化３９】
2004522737.tif 000041
【０２００】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３４分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２０１】
必要なカルボン酸構成単位、２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−フェニルプロピオン酸を、無色の油として化合物（１２）に関して記載された一般的な方法に従って調製した、収率６２ｍｇ。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．２７分、２５７．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０２０２】
【化４０】
2004522737.tif 000042
【０２０３】
実施例３  （２Ｓ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オクソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２０４】
【化４１】
2004522737.tif 000043
【０２０５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７４分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２０６】
必要なエーテルカルボン酸構成単位３−シクロヘキシル−２Ｒ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸（化合物（１６）、スキーム４）を、下記のようにして調製した。
【０２０７】
（１）（Ｓ）−a−ブロモシクロヘキサンプロピオン酸の調製
水（６ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（２．２６ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）の溶液を、水（３５ｍｌ）における（Ｓ）−a−アミノシクロヘキサンプロピオン酸（５ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）、臭化カリウム（１１．４０ｇ、９５．８ｍｍｏｌ）及び濃硫酸（３．３ｍｌ）の攪拌混合物に０℃で４時間滴下した。この混合物を０℃で５時間、次に周囲温度で１６時間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（４×５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×５０ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジクロロメタン  １：５０→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、（Ｓ）−a−ブロモシクロヘキサンプロピオン酸が薄黄色の油として残った（３．６４ｇ、５３％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．４５、ジクロロメタンにおける１０％メタノール）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．８５分、２３４．１／２３６．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のメインピーク）。
【０２０８】
【化４２】
2004522737.tif 000044
【０２０９】
（２）３−シクロヘキシル−２Ｒ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸（化合物（１６）、スキーム４）の調製
（Ｓ）−a−ブロモシクロヘキサンプロピオン酸（０．４１ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）及びフラン−２−イルメタンチオールを、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）に溶解し、窒素を１０分間流した。この溶液を０℃に冷却した後、トリエチルアミン（０．２４４ｍｌ、１．７５ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下した。この混合物を０℃で３０分間、次に周囲温度で１６時間攪拌した。溶剤を真空中で除去して、残渣をメタノール：ジクロロメタン  １：１００を溶出液として用いたシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、３−シクロヘキシル−２Ｒ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸（１６）が明るい茶色の油として残った（８６ｍｇ、１８％）。分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１８．６８分。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．４５、ジクロロメタンにおける１０％メタノール）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．４３分、２９１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインピーク）。
【０２１０】
【化４３】
2004522737.tif 000045
【０２１１】
実施例４  （２Ｓ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２１２】
【化４４】
2004522737.tif 000046
【０２１３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７４分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋，７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２１４】
必要なエーテルカルボン酸構成単位３−シクロヘキシル−２Ｓ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸（化合物（１６）の逆異性体(inverted isomer)、スキーム４）を、下記のようにして調製した。
【０２１５】
（１）（Ｒ）−a−ブロモシクロヘキサンプロピオン酸の調製
水（１．２ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（０．４５ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液を、水（７ｍｌ）における（Ｒ）−a−アミノシクロヘキサンプロピオン酸（１ｇ、５．８ｍｍｏｌ）、臭化カリウム（２．３ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）及び濃硫酸（０．６６ｍｌ）の攪拌混合物に０℃で４時間滴下した。この混合物を０℃で５時間、次に周囲温度で１６時間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで抽出したジエチルエーテル（４×２０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×５０ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジクロロメタン  １：５０→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤をが薄黄色の油として０．３７４ｇ得た、（２７％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．４５、ジクロロメタンにおける１０％メタノール）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．８８分、２３４．１／２３６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、２５７．２／２５９．２［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインピーク）。
【０２１６】
【化４５】
2004522737.tif 000047
【０２１７】
（２）３−シクロヘキシル−２Ｓ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸（化合物（１６）の逆異性体、スキーム４）の調製
（Ｒ）−a−ブロモシクロヘキサンプロピオニック（０．３７ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）及びフラン−２−イルメタンチオールを、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）に溶解し、窒素を１０分間流した。この溶液を０℃に冷却した後、トリエチルアミン（０．２２ｍｌ、１．５８ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下した。この混合物を０℃で３０分間、次に周囲温度で１６時間攪拌した。溶剤を真空中で除去して、残渣をメタノール：ジクロロメタン  １：１００を溶出液として用いたシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去することによって、３−シクロヘキシル−２Ｓ−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−プロピオン酸を明るい茶いいローディングの油として得た、収率１４２ｍｇ、（３３％）。分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１８．６８分。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．４５、ジクロロメタンにおける１０％メタノール）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．５３分、２９１．０［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインピーク）。
【０２１８】
【化４６】
2004522737.tif 000048
【０２１９】
実施例５  （２Ｓ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２２０】
【化４７】
2004522737.tif 000049
【０２２１】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６０分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋，８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２２２】
この中間のローディングされたチオエーテル（１．２μｍｏｌｅ  ギア）を、５時間、ジクロロメタン（２００μＬ）におけるｍ−クロロ過安息香酸（５当量、６５％試薬、１．６ｍｇ）で酸化した（スキーム８）後、標準的な洗浄を行ない、さらに切断して、実施例５を得た。
【０２２３】
実施例６  （２Ｓ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２２４】
【化４８】
2004522737.tif 000050
【０２２５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６２分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋，８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２２６】
実施礼４の中間のローディングされたチオエーテル（１．２μｍｏｌｅ  ギア）を、５時間、ジクロロメタン（２００μＬ）におけるｍ−クロロ過安息香酸（５当量、６５％試薬、１．６ｍｇ）で酸化した（スキーム８）後、標準的な洗浄を行ない、さらに切断して、実施例６を得た。
【０２２７】
実施例７  （２Ｓ，３Ｓ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０２２８】
【化４９】
2004522737.tif 000051
【０２２９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．１４分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ４２４．２［Ｍ＋Ｈ］＋，８６９．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２３０】
必要なカルボン酸構成単位２Ｒ−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（化合物（１６）の類似体、スキーム４）を、下記のようにして（Ｓ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸から調製した。
【０２３１】
（１）（Ｓ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸の調製
水（１５ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（５．１ｇ、７３ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で５時間にわたって水（１００ｍｌ）におけるＬ−ロイシン（８．７５ｇ、６７ｍｍｏｌ）、臭化カリウム（２９．７５ｇ、０．２５ｍｏｌ）及び濃硫酸（８．６ｍｌ）に滴下した。この混合物を０℃で３０分、次に周囲温度で２０時間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×１５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジクロロメタン  １：５０→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、（Ｓ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸が無色の油として残った（２．２２ｇ、１７％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、メタノール：ジクロロメタン１：２０）。
【０２３２】
【化５０】
2004522737.tif 000052
【０２３３】
さらなる（Ｓ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸が得られた（６．５５ｇ）が、他の成分がＴＬＣ分析（メタノール：ジクロロメタン  １：２０）によって観察された。
【０２３４】
（２）２Ｒ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸の調製
ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）における（Ｓ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸（１．１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及び［４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル］メタンチオール（１．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素を５分間流した後、０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．７９ｍｌ、５．７ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下した後、混合物を周囲温度で２日間攪拌した。溶剤を真空中で除去し、残渣をメタノール：ジクロロメタン  ０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、残渣が残り、これを、酢酸エチル：ヘプタン  ２：５で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、２Ｒ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸が無色の油として残った（２００ｍｇ、１２％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、ヘプタン：酢酸エチル５：２）、Ｒｔ＝２２．１１７分にメインピークを有する分析用ＨＰＬＣ、ＨＰＬＣ−ＭＳ（のＲｔ＝１１．０７２分、３１７．２［Ｍ＋Ｎａ］＋メインＵＶピーク）。
【０２３５】
【化５１】
2004522737.tif 000053
【０２３６】
この中間のローディングされたチオエーテル（１．２μｍｏｌｅ  ギア）を、５時間、ジクロロメタン（２００μＬ）におけるｍ−クロロ過安息香酸（５当量、６５％試薬、１．６ｍｇ）で酸化した（スキーム８）後、標準的な洗浄を行ない、さらに切断して、実施例７を得た。
【０２３７】
実施例８  （２Ｓ，３Ｓ）モルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【０２３８】
【化５２】
2004522737.tif 000054
【０２３９】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８３．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２４０】
必要なカルボン酸構成単位モルホリン−４−カルボン酸１−カルボキシ−２−シクロヘキシル−エチルエステル（化合物（１９）、スキーム５）を、下記のようにしてから調製した。
【０２４１】
（１）３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸メチルエステルの調製（化合物（１８）、スキーム５）
トリメチルシリルクロリド（１．７８ｍｌ、１４．０ｍｍｏｌ）を、メタノール（３５ｍｌ）における３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸（化合物（１１）１．３１ｇ、７．６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に滴下した。この混合物を室温で２０時間攪拌した後、溶剤を真空中で除去したところ、薄黄色の油（１．３８ｇ）が残った。この未精製油を、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル（４：１）の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸メチルエステルを無色の油として得た、収率１．２６ｇ、（８９％）．ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．４３分、１８７．１４［Ｍ＋Ｈ］＋、３９５．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインピーク）。
【０２４２】
【化５３】
2004522737.tif 000055
【０２４３】
（２）モルホリン−４−カルボン酸１−カルボキシ−２−シクロヘキシルエチルエステル（化合物（１８）、スキーム５）の調製
ホスゲンの溶液（３３．６ｍｌ、トルエンにおける２０％）を、３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸メチルエステルに添加した後、６滴のジメチルホルムアミドを加えた。この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した後、溶剤を真空中で除去した。残渣をトルエンで共沸して（３×２０ｍｌ）、無水ジクロロメタン（１１ｍｌ）に溶かした。この溶液を０℃に冷却した後、モルホリン（０．８６ｇ、９．８５ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２時間攪拌した後、ジクロロメタン（３０ｍｌ）及び０．５Ｍ  塩酸（３０ｍｌ）間で分配した。ジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を酢酸エチル：ヘプタン１：１で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、モルホリン−４−カルボン酸２Ｓ−シクロヘキシル−１−メトキシカルボニルエチルエステル（０．１３ｇ、１０％）が油として残った。水（０．７６ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（１７．５ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（１．５ｍｌ）におけるモルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−メトキシカルボニルエチルエステル（１１０ｍｇ、０．３６７ｍｍｏｌ）の氷水で冷却した溶液に添加した。この混合物を周囲温度で１時間攪拌した後、水（１０ｍｌ）で希釈した。水層をジエチルエーテル（２×１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた後、６Ｍ  塩酸でｐＨ＝２にまで酸性化した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×１０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去して、モルホリン−４−カルボン酸１−カルボキシ−２−シクロヘキシルエチルエステルを白色固体として得た、収率０．１１ｇ、（エステルから１００％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２０、メタノール：ジクロロメタン  １：９）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．６１４分、２８６．２［Ｍ＋Ｈ］＋、２８７．２［Ｍ＋２Ｈ］＋、５９３．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインピーク）。
【０２４４】
【化５４】
2004522737.tif 000056
【０２４５】
実施例９  （２Ｓ，３Ｓ）２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
【０２４６】
【化５５】
2004522737.tif 000057
【０２４７】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２４８】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（化合物（２２）、スキーム６）を、下記のようにして調製した。
【０２４９】
（１）２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステルの調製
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ＨＣｌ（１．１２ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）、次に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（０．８７ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で０℃でジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）における２Ｒ−（シクロヘキシルメチル）コハク酸１−メチルエステル（化合物（２１）、１．０ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この混合物を２５分間攪拌した後、モルホリン（０．７ｍｌ、８．７６ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下し、周囲温度で１６時間攪拌し続けた。生成物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出した後、１．０Ｍ  塩酸（３×１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３×１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）、さらに飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去して、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステルをオフホワイトの固体として得た、収率１．２２ｇ、（９４％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、２９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、６１７．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のピーク）。
【０２５０】
（２）２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（化合物（２２）、スキーム６）の調製
水（２７ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（０．５１ｇ、１２．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でテトラヒドロフラン（５５ｍｌ）及びメタノール（２７ｍｌ）における２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステル（１．２１ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この混合物を１時間周囲温度で攪拌した後、水（１００ｍｌ）で希釈した。水層をジエチルエーテルで抽出し（２×５０ｍｌ）、これを捨てた後、１Ｍ  塩酸でｐＨ＝１〜２に酸性化した。生成物をジクロロメタンで抽出した（３×５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を水（２×５０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去したところ、残渣が残った。この残渣をメタノール：ジクロロメタン１：１００→３：１００の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（２２）を白色固体として得た、収率０．８２ｇ、（７１％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝６．７６９分、２８４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、５８９．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のピーク）。
【０２５１】
【化５６】
2004522737.tif 000058
【０２５２】
実施例１０  （２Ｓ，３Ｓ）２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０２５３】
【化５７】
2004522737.tif 000059
【０２５４】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．６０分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２５５】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸（化合物（２５）、スキーム７）を、下記のようにして調製した。
【０２５６】
（１）ビフェニル−３−イル−酢酸メチルエステル（化合物（２４）、スキーム７）の調製
濃硫酸（５８８μＬ）を、メタノール（１００ｍＬ）における３−ブロモフェニル酢酸（１０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を１．５時間還流した後、周囲温度に冷却し、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。この残渣をジエチルエーテル（５００ｍＬ）に再度溶解し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに減圧下で蒸発させて、３−ブロモフェニル酢酸メチルエステル（１０．６５ｇ）を得た、この３−ブロモフェニル酢酸メチルエステルを、トルエン（１１７ｍＬ）に溶かした後、フェニルボロン酸（６．８ｇ、５５．６９ｍｍｏｌ）、次に炭酸ナトリウムの水溶液（９３ｍＬ、２Ｍ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．６ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を一晩攪拌した後、周囲温度に冷却し、飽和塩化アンモニウムの水溶液（１００ｍＬ）を添加した。この混合物を酢酸エチルで抽出し（２×２００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（３：４８）を溶出液として用いたシリカ（２００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、ビフェニル−３−イル酢酸メチルエステルを得た、収率１０．５ｇ、（９９％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２４、ヘプタンにおける１０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．５５分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．３５分、２２７．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０２５７】
【化５８】
2004522737.tif 000060
【０２５８】
（２）ビフェニル−３−イル−酢酸の調製
水（３９ｍＬ）、次に水酸化リチウム一水和物（４．２ｇ、１０１．５ｍｍｏｌ）を、メタノール（２６５ｍＬ）におけるビフェニル−３−イル酢酸メチルエステル（１１．４３ｇ、５０．５７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、有機溶液を減圧下で除去した。混合物を希釈塩酸（１Ｍ、８０ｍＬ）で酸性化し、クロロホルムで抽出し（２×１００ｍＬ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに減圧下で蒸発させて、ビフェニル−３−イル酢酸を白色固体として得た、収率１０．６ｇ、（９９％）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１６．５６５分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、２１３．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０２５９】
【化５９】
2004522737.tif 000061
【０２６０】
（３）２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸(2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpent-4-enoic acid)の調製
無水テトラヒドロフラン（８４ｍＬ）におけるビフェニル−３−イル酢酸（７．０ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃で無水テトラヒドロフラン（８４ｍＬ）におけるリチウムジイソプロピルアミド（３６．４ｍＬ、ヘキサンにおける２Ｍ溶液）の溶液に滴下した。この混合物を０℃まで加温し、４０分間攪拌した。次に、混合物を−７８℃まで冷却し、３−ブロモ−２−メチルプロペン（４．９７ｍＬ）をすばやく添加した。この混合物を、−７８℃で１時間攪拌した後、水（２８ｍＬ）を添加して、有機溶液を減圧下で除去した。さらに、混合物を塩酸（６Ｍ、１４ｍｌ）で酸性化し、酢酸エチルで抽出し（３×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。メタノール：ジクロロメタン（３：９７）を溶出液として用いたシリカ（４００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、不純物を含む２−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸（８．３ｇ）が得られた。メタノール：ジクロロメタン（１．５：９８．５）を用いたシリカ（４００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、純粋な２−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸が得られた、収率５．２７ｇ、（６０％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２８、ジクロロメタンにおける５％メタノール）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．９９分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．５７分、２６７．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０２６１】
【化６０】
2004522737.tif 000062
【０２６２】
（４）２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸（化合物（２５）、スキーム７）
炭素上のパラジウム(Palladium on carbon)（１０％、３００ｍｇ）を、０℃でエタノール（４０ｍＬ）における２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸（１ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）の溶液に一部ずつ添加した。次に、水素雰囲気を導入し、混合物を周囲温度まで加温した。この混合物を１８時間攪拌した後、水素雰囲気を除去し、混合物をセライトで瀘過し、触媒をエタノール（４０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得、これをメタノール：ジクロロメタン（１：９９）を溶出液として用いたシリカ（１５０ｇ）でフラッシュクロマトグラフィーにかけることによって、２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸（２５）を得た、収率９８０ｍｇ、（９８％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．４５、ジクロロメタンにおける５％メタノール）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．９２分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１０．１５分、２６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋、２９１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０２６３】
【化６１】
2004522737.tif 000063
【０２６４】
実施例１１  （２Ｒ，３Ｓ）２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
【０２６５】
【化６２】
2004522737.tif 000064
【０２６６】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３５分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２６７】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｂ）を、以下のようにして調製した。
【０２６８】
（１）（１Ｓ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０２６９】
【化６３】
2004522737.tif 000065
【０２７０】
ジクロロメタン（１４ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（１．０５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の溶液及びジクロロメタン（１４ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１．４２ｇ、１４ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、窒素雰囲気下で−１５℃で１０かけて、ジクロロメタン（７０ｍｌ）におけるＦｍｏｃ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルエーテル）−Ｌ−トレオニン（２．７８ｇ、７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。次に、エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（１１ｍｌ）／エタノール（３１ｍｌ）における水酸化ナトリウム（８．０２２ｇ）にジエチルエーテル（１１５ｍｌ）中でジアザルド(diazald)（７．１４ｇ、〜２１ｍｍｏｌ）の添加から生成］を注意深く添加し、得られた黄色の溶液を室温で９０分間攪拌した。酢酸（〜３ｍｌ）を、（泡立ちが止まるまで）注意深く添加した後、混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（７０ｍｌ）で希釈した。エーテル層を、水で洗浄し（３×７０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、（１Ｓ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが黄色の固体として残り（４．２８ｇ）、これをさらに精製せずに使用した。
【０２７１】
（２）（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルへの環化
【０２７２】
【化６４】
2004522737.tif 000066
【０２７３】
水（１０５ｍｌ）における８０％酢酸における塩化リチウム（２．９７ｇ、７０ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｓ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（４．２８ｇ、〜７ｍｍｏｌ）に添加した。黄色の油状の懸濁液を２時間攪拌すると、薄黄色の溶液がガスの蒸発によって付随して形成した。溶剤を真空中で除去した後、残渣を酢酸エチル（４２ｍｌ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２×４２ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（４２ｍｌ）で洗浄した。合わせた水層を、酢酸エチルで抽出した（２×４２ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、黄色のガムが残った（３．４４ｇ）。この黄色のガムを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ９：１→７：３の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが白色の結晶性固体として残った（２．９２ｇ、出発酸から６２％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２７、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１７．９６分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．４８分、３６０．０［Ｍ＋Ｎａ］＋、３６１．０［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０２７４】
【化６５】
2004522737.tif 000067
【０２７５】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｂ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（８ｂ）に変換した。
【０２７６】
（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｂ）（３５４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（２１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むエタノール（９．６ｍＬ）及び水（１．４ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（３４６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量、Murphy, A. M. et al,J. Am. Chem. Soc., 114,3156-3157, 1992）を添加し、混合物を２時間還流した。クロロホルム（１００ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液で洗浄した（０．１Ｍ、１×１００ｍＬ）。酸性層をクロロホルムで洗浄し(backwash)（３×１００ｍＬ）し、合わせた有機溶液をブラインで洗浄し（１００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させることによって、リンカー構築物（８ｂ）を白色固体として得た（６６０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、１つのメインピークがＲｔ＝１７．０１１分で示された、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９６分、５３５．３［Ｍ＋Ｈ］＋のメインＵＶピーク）。未精製物（８ｂ）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０２７７】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（８ｂ）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を提供する固相に結合させた。
【０２７８】
構成単位−リンカー構築物（８ｂ）（１．０ｍｍｏｌｅ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、３７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、１５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２２０iＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（２５０×１．２iｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（２５×１０iｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、９５％超のローディングが示された。
【０２７９】
２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−フェニルプロピオン酸を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例１１を得た。この未精製例示物を分析した（一般的な技術を参照）。ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３５分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２８０】
下記実施例（１２〜２３）を、実施例１１で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０２８１】
実施例１２  （２Ｒ，３Ｓ）４−メチル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０２８２】
【化６６】
2004522737.tif 000068
【０２８３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．８３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８８．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７９７．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２８４】
必要なカルボン酸構成単位、２ＲＳ−４−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ）−ペンタン酸を以下のようにして調製した。
【０２８５】
（１）２ＲＳ−４−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ）−ペンタン酸の調製
水素化ナトリウム（３３３ｍｇの油における６０％分散液、８．３ｍｍｏｌ）を、５分にわたって０℃で（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−メチルペンタン酸（０．５ｇ、３．８ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）及びジクロロメタン（５ｍｌ）の攪拌混合物に２回に分けて添加した。この混合物を０℃で５分間、次に周囲温度で４５分間攪拌した。次に、４−（トリフルオロメチル）臭化ベンジル（０．７３ｍｌ、４．７ｍｍｏｌ）を加えた後、この混合物を、ヨウ化カリウム（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びジメチルホルムアミド（５ｍｌ）を添加する前に、５時間、攪拌した。この混合物を２０時間攪拌した後、５５℃で１時間加熱し、さらに周囲温度まで冷却して、水（１５ｍｌ）に注いだ。飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）を添加した後、混合物をジクロロメタン（５ｍｌ次に１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を用いて酸性化した後、ジクロロメタンで抽出した（２×１０ｍｌ）。ジクロロメタン層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣（０．５２ｇ）をジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解した後、水素化ナトリウム（１６０ｍｇの油における６０％分散液、４ｍｍｏｌ）を添加する前に０℃に冷却した。この混合物を３０分間攪拌した後、ポリマー結合イソシアネート（３２０ｍｇ、２ｍｍｏｌＮｇ−１）を添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、水（１５ｍｌ）に注いだ。１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を添加した後、生成物をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジロロメタン０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２ＲＳ−４−メチル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−ペンタン酸を無色の油として得た、収率１２１ｍｇ（１１％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．６６分、２９１．１［Ｍ＋Ｈ］＋、３１３．１［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のピーク）。
【０２８６】
実施例１３  （２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２８７】
【化６７】
2004522737.tif 000069
【０２８８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７３分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２８９】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例３に詳述されたのと同様にして調製した。
【０２９０】
実施例１４  （２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０２９１】
【化６８】
2004522737.tif 000070
【０２９２】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７３分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２９３】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例４に詳述されたのと同様にして調製した。
【０２９４】
実施例１５  （２Ｒ，３Ｓ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
【０２９５】
【化６９】
2004522737.tif 000071
【０２９６】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２３．２１分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９２．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８０５．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２９７】
必要なカルボン酸構成単位２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（化合物（１６）の類似体、スキーム４）を、下記のようにして（Ｒ）−２−ブロモ−４−メチルペンタン酸から調製した。
【０２９８】
（１）２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸の調製
水（１５ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（５．１ｇ、７３ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で５時間にわたって水（１００ｍｌ）におけるＤ−ロイシン（８．７５ｇ、６７ｍｍｏｌ）、臭化カリウム（２９．７５ｇ、０．２５ｍｏｌ）及び濃硫酸（８．６ｍｌ）の攪拌混合物に滴下した。この混合物を０℃で３０分、次に周囲温度で２０時間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×１５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジクロロメタン  １：５０→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸が無色の油として残った、収率１．６０ｇ、（１２．３％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、メタノール：ジクロロメタン  １：２０）。加えて、若干不純物のある生成物の第二の収穫（５．２ｇ、４０％）が得られた。
【０２９９】
【化７０】
2004522737.tif 000072
【０３００】
（２）２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸（化合物（１６）の類似体、スキーム４）の調製
ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）における２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸（１．１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及び（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）メタンチオール（１．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素を５分間流した後、０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．７９ｍｌ、５．７ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下した後、混合物を周囲温度で２日間攪拌した。溶剤を真空中で除去し、残渣をメタノール：ジクロロメタン  ０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、残渣が残り、これを、酢酸エチル：ヘプタン  ２：５で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸が無色の油として残った、収率１５０ｍｇ、（９％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、ヘプタン：酢酸エチル５：２）、Ｒｔ＝２２．１１７分にメインピークを有する分析用ＨＰＬＣ、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１１．０７２分、３１７．２［Ｍ＋Ｎａ］＋のメインＵＶピーク）。
【０３０１】
【化７１】
2004522737.tif 000073
【０３０２】
実施例１６  （２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３０３】
【化７２】
2004522737.tif 000074
【０３０４】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６５分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３０５】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例５に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３０６】
実施例１７  （２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３０７】
【化７３】
2004522737.tif 000075
【０３０８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６１分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３０９】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例６に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３１０】
実施例１８  （２Ｒ，３Ｓ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３１１】
【化７４】
2004522737.tif 000076
【０３１２】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．１９分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ４２４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８６９．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３１３】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例７に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３１４】
実施例１９  （２Ｒ，３Ｓ）モルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【０３１５】
【化７５】
2004522737.tif 000077
【０３１６】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８３．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３１７】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例８に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３１８】
実施例２０  （２Ｒ，３Ｓ）２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
【０３１９】
【化７６】
2004522737.tif 000078
【０３２０】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２１】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例９に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３２２】
実施例２１  （２Ｒ，３Ｓ）２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３２３】
【化７７】
2004522737.tif 000079
【０３２４】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．６２分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３２５】
ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｂ）を使用する以外は、実施例１０に詳述されたのと同様にして調製した。
【０３２６】
実施例２２  （２Ｒ，３Ｓ）４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−エチル］−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３２７】
【化７８】
2004522737.tif 000080
【０３２８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．８０及び２０．１６分（１９．９及び８０．１％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９７．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８１５．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３２９】
必要なカルボン酸構成単位（２Ｒ）４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−エチル］−ペンタン酸（化合物（２２）の類似体、スキーム６）を、下記のようにして調製した。
【０３３０】
（１）４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルエステルの調製
ジエチルエーテル（４０ｍｌ）及びジメチルスルホキシド（２０ｍｌ）における４−トルエンスルホニルメチルイソシアニド（４．９ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）及びトランス−ケイ皮酸メチル（４．０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下でジエチルエーテル（１００ｍｌ）における水素化ナトリウム（６０％分散液、１．２５ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、３０分かけて滴下した。２０分後、ジメチルスルホキシド（２５ｍｌ）のさらなる部分を反応容器に添加した。この混合物を１時間攪拌した後、水（２００ｍｌ）を注意深く加えた。生成物をジクロロメタンで抽出した（１×４００ｍｌ及び１×２５０ｍｌ）後、合わせたジクロロメタン層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣を、ヘプタン：酢酸エチル：ジクロロメタン  ２：１：０→１：１：１の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルエステルが白色固体として残った（１．５５ｇ、３１％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２５、ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．８４９分、２０２．１［Ｍ＋Ｈ］＋、４２５．１［２Ｍ＋Ｎａ］＋のメインＵＶピーク）。
【０３３１】
（２）３−フェニル−１Ｈ−ピロールの調製
水（４０ｍｌ）における水酸化カリウム（４．３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の溶液を、メタノール（４０ｍｌ）における４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸メチルエステル（１．５５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。この混合物を、２時間加熱、還流した後、大部分の溶剤を、真空中で得られた溶液から留去した。残渣を、水（１００ｍｌ）で希釈し、氷（３０ｍｌ）を加えた後、混合物を塩酸（１Ｍ）でｐＨ＝１に酸性化した。沈殿物を真空中で瀘過によって集め、水（７５ｍｌ）、ジクロロメタン（７５ｍｌ）、水（２０ｍｌ）、さらにジクロロメタン（７５ｍｌ）で洗浄した。白色固体を真空中で乾燥した後、２．２５時間、窒素雰囲気下で１９０℃でエタノールアミン（１０ｍｌ）と共に加熱した。この混合物を周囲温度まで冷却し、氷（１５０ｍｌ）に注いだ。水（５０ｍｌ）を加えた後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×５０ｍｌ）。ジクロロメタン層を合わせた後、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、油が得られ（９００ｍｇ）、これを酢酸エチル：ヘプタン１：５で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、３−フェニル−１Ｈ−ピロールが黄色−緑色の油として残り、これを−８０℃で２０時間、貯蔵した後固化させた（８１０ｍｇ、７４％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２５、ヘプタン：酢酸エチル  ５：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．４９３分、１４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０３３２】
【化７９】
2004522737.tif 000081
【０３３３】
（３）（２Ｒ）イソブチル−コハク酸の調製
水（２５０μｌ）における水酸化リチウム一水和物（２６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の溶液を、１，４−ジオキサン（５００μｌ）における（２Ｒ）２−イソブチルコハク酸１−メチルエステル（１００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。次に、この混合物を２時間攪拌した後、水酸化リチウム一水和物（２６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を添加し、２４時間攪拌し続けた。大部分の溶剤を真空中で留去した後、残渣を水（５ｍｌ）に溶かし、塩酸（１Ｍ）を用いてｐＨ＝１に酸性化した。生成物を、ジクロロメタンで抽出し（５×５ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去して、（２Ｒ）２−イソブチルコハク酸（４９ｍｇ、５３％）を固体として得た。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝６．２２３分、１９７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０３３４】
（４）（２Ｒ）４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−エチル］−ペンタン酸の調製
塩化アセチル（１．２ｍｌ）における（２Ｒ）−２−イソブチルコハク酸（３５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液を、２．２時間、窒素下で加熱、還流した後、揮発成分を真空中で留去すると、（３Ｒ）−３−イソブチルジヒドロフラン−２，５−ジオンが油状の残渣として残り、これをさらに精製せずに使用した。
【０３３５】
水素化ナトリウム（１２ｍｇの油における６０％分散液、０．３ｍｍｏｌ）を、窒素下でテトラヒドロフラン（１．０ｍｌ）における３−フェニルピロール（４３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この混合物を１５分間攪拌した後、０℃でテトラヒドロフラン（１．０ｍｌ）における（３Ｒ）−３−イソブチルジヒドロフラン−２，５−ジオン（０．２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にカニューレを介して添加した。大部分の溶剤を真空中で除去した後、水（１０ｍｌ）を添加した。水層を酢酸エチル（５ｍｌ）で抽出した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）を添加し、水層を酢酸エチルのさらなる部分（５ｍｌ）で抽出した。水層を塩酸（１Ｍ）を用いてｐＨ＝１に酸性化した後、生成物を酢酸エチルで抽出し（２×５ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣をメタノール：ジクロロメタン  １：９９→３：１７の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、（２Ｒ）−４−メチル−２−［オキソ−２−（３−フェニルピロール−１−イル）エチル］ペンタン酸及び（３Ｓ）−５−メチル−３−（３−フェニル−ピロール−１−カルボニル）−ヘキサン酸（１．６ｍｇ、２％）の混合物（約１：１）が油として残った。ＴＬＣ（２個のスポット、Ｒｆ＝０．８及びＲｆ＝０．７５、メタノール：ジクロロメタン  １：９）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．０２０及び１９．１２７分の２個の非分解ピーク、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．７２４及び９．８６１分、３００．２［Ｍ＋Ｈ］＋、６２１．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の２個の非分解ＵＶピーク）。
【０３３６】
この混合物を、実施例２２の調製で直接使用した。
【０３３７】
実施例２３  （２Ｒ，３Ｓ）２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３３８】
【化８０】
2004522737.tif 000082
【０３３９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１６．０３及び１６．５３分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８７．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７９５．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３４０】
必要なエーテルカルボン酸構成単位（２Ｒ）２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（化合物（２２）の類似体、スキーム６）を、下記のようにして調製した。
【０３４１】
（１）２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸メチルエステルの調製
ジクロロメタン（２ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（３３．６４ｍｇ、０．２４６３ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（２ｍｌ）におけるＮ−メチルモルホリン（４９．８３ｍｇ、０．４９２７ｍｍｏｌ）を、同時に、窒素雰囲気下で−１５℃で５分かけて、ジクロロメタン（２ｍｌ）における（Ｒ）−２−イソブチルコハク酸１−メチルエステル（４２．１５ｍｇ、０．２２３９ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。この混合物を−１５℃で１５分間攪拌した。次に、ジクロロメタン（２ｍｌ）における１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン（２９．８３ｍｇ、０．２２３９ｍｍｏｌ）の新たに調製した溶液及びＮ−メチルモルホリン（２４．９２ｍｇ、０．２４６３ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに、この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液（１ｍｌ）に注いだ。水層をジエチルエーテルで抽出し（２×５ｍｌ）、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸でｐＨ（１〜２）に酸性化した後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×５ｍｌ）。合わせたジクロロメタン層を、水（２×５ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×５ｍｌ）で洗浄した後、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。溶剤を真空中で除去して、残渣を得、これを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ４：１で溶出してシリカゲルで精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸メチルエステルが無色の油として残った（３５ｍｇ、出発酸から５１．５％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．６、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  １：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．５４４分、３０４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、３０５．２［Ｍ＋２］＋、３０６．２［Ｍ＋３］＋、６２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０３４２】
（２）２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸の調製
水（１．５ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（０．０１４５２ｇ、０．３４６１ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でテトラヒドロフラン：メタノール２：１（９ｍｌ）における２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル（０．０３５ｇ、０．１１５４ｍｍｏｌ）の溶液に１分かけて滴下した。この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）に注いだ。水層をジエチルエーテルで抽出し（２×１０ｍｌ）、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸でｐＨ（１〜２）に酸性化した後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×１０ｍｌ）。合わせたジクロロメタン層を水（２×１０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去すると、２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸が無色の油として残った（４．０ｍｇ、１２％）。ＴＬＣ（メインスポット、Ｒｆ＝０．２、メタノール：ジクロロメタン  １：１０）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１３．２９７分。ＨＰＬＣ−ＭＳ（２９０．２［Ｍ＋１］＋、３１２．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、６０１．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋）。
【０３４３】
実施例２４  （２Ｓ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
【０３４４】
【化８１】
2004522737.tif 000083
【０３４５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３４分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４６】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｃ）を、以下のようにして調製した。
【０３４７】
（１）（１Ｒ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０３４８】
【化８２】
2004522737.tif 000084
【０３４９】
ジクロロメタン（７ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（１．０５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の溶液及びジクロロメタン（７ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１．４２ｇ、１４ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、窒素雰囲気下で−１５℃で１０かけて、ジクロロメタン（７０ｍｌ）におけるＦｍｏｃ−Ｄ−トレオニン（２．３９ｇ、７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。次に、エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（１１ｍｌ）／エタノール（３１ｍｌ）における水酸化ナトリウム（８．０２２ｇ）にジエチルエーテル（１１５ｍｌ）中でジアザルド(diazald)（７．１４ｇ、〜２１ｍｍｏｌ）の添加から生成］を注意深く添加し、得られた黄色の溶液を室温で９０分間攪拌した。酢酸（〜３ｍｌ）を、（泡立ちが止まるまで）注意深く添加した後、混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（７０ｍｌ）で希釈した。エーテル層を、水で洗浄し（３×７０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、（１Ｒ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが黄色の固体として残り（３．４３ｇ）、これをさらに精製せずに使用した。
【０３５０】
（２）（２Ｓ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルへの環化
【０３５１】
【化８３】
2004522737.tif 000085
【０３５２】
水（１０５ｍｌ）における８０％酢酸における塩化リチウム（２．９７ｇ、７０ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｒ，１’Ｓ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシｅｔｈｙｌ）−２−オキソ−プロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（３．４３ｇ、〜７ｍｍｏｌ）に添加した。黄色の油状の懸濁液を２時間攪拌すると、薄黄色の溶液がガスの蒸発によって付随して形成した。溶剤を真空中で除去した後、残渣を酢酸エチル（４２ｍｌ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２×４２ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（４２ｍｌ）で洗浄した。合わせた水層を、酢酸エチルで抽出した（２×４２ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、黄色のガムが残った（２．２６ｇ）。この黄色のガムを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ９：１→７：３の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、（２Ｓ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが白色の結晶性固体として残った（６５９ｍｇ、出発酸から２８％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２７、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１８．０２分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．４７分、３３８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、３６０．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、３６１．０［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０３５３】
【化８４】
2004522737.tif 000086
【０３５４】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｃ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（８ｃ）に変換した。
【０３５５】
（２Ｓ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｃ）（３５４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（２１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むエタノール（９．６ｍＬ）及び水（１．４ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（３４６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量、Murphy, A. M. et al,J. Am. Chem. Soc., 114,3156-3157, 1992）を添加し、混合物を２時間還流した。クロロホルム（１００ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液で洗浄した（０．１Ｍ、１×１００ｍＬ）。酸性層をクロロホルムで洗浄し(backwash)（３×１００ｍＬ）し、合わせた有機溶液をブラインで洗浄し（１００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させることによって、リンカー構築物（８ｃ）を白色固体として得た（６６０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、１つのメインピークがＲｔ＝１７．１４分で示された、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、５３５．３［Ｍ＋Ｈ］＋のメインＵＶピーク）。未精製物（８ｃ）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０３５６】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（８ｃ）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を提供する固相に結合させた。
【０３５７】
構成単位−リンカー構築物（８ｃ）（１．０ｍｍｏｌｅ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、３７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、１５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２２０iＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（２５０×１．２iｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（２５×１０iｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、９５％超のローディングが示された。
【０３５８】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要なローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を、以下のようにして固相上に作製した。
【０３５９】
２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−フェニルプロピオン酸を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｃ）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例２４を得た。この未精製例示物を分析した（一般的な技術を参照）。ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３４分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６０】
下記実施例（２５〜３４）を、実施例２４で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０３６１】
実施例２５  （２Ｓ，３Ｒ）Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−フェニル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−プロピオンアミド
【０３６２】
【化８５】
2004522737.tif 000087
【０３６３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．７３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ４２２．１［Ｍ＋Ｈ］＋、４４４．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３６４】
必要なカルボン酸、２ＲＳ−３−フェニル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−プロピオン酸を、無色の油として化合物（１２）に関して記載された一般的な方法に従って調製した、収率１２．７ｍｇ。ＨＰＬＣ−ＭＳ（単一のメインＵＶピークＲｔ＝９．５９分、３２５．１［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【０３６５】
【化８６】
2004522737.tif 000088
【０３６６】
実施例２６  （２Ｓ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３６７】
【化８７】
2004522737.tif 000089
【０３６８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．７３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６０．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７４１．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３６９】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例１に詳述したのと同様にして調製した。
【０３７０】
実施例２７  （２Ｓ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３７１】
【化８８】
2004522737.tif 000090
【０３７２】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３７３】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例３に詳述したのと同様にして調製した。
実施例２８  （２Ｓ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３７４】
【化８９】
2004522737.tif 000091
【０３７５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３７６】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例４に詳述したのと同様にして調製した。
【０３７７】
実施例２９  （２Ｓ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３７８】
【化９０】
2004522737.tif 000092
【０３７９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６３分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３８０】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例５に詳述したのと同様にして調製した。
【０３８１】
実施例３０  （２Ｓ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３８２】
【化９１】
2004522737.tif 000093
【０３８３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．９３分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３８４】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例６に詳述したのと同様にして調製した。
【０３８５】
実施例３１  （２Ｓ，３Ｒ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３８６】
【化９２】
2004522737.tif 000094
【０３８７】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．１３分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ４２４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８６９．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０３８８】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例７に詳述したのと同様にして調製した。
【０３８９】
実施例３２  （２Ｓ，３Ｒ）モルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【０３９０】
【化９３】
2004522737.tif 000095
【０３９１】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８３．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９２】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例８に詳述したのと同様にして調製した。
【０３９３】
実施例３３  （２Ｓ，３Ｒ）２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
【０３９４】
【化９４】
2004522737.tif 000096
【０３９５】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９６】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例９に詳述したのと同様にして調製した。
【０３９７】
実施例３４  （２Ｓ，３Ｒ）２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３９８】
【化９５】
2004522737.tif 000097
【０３９９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．６６分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４００】
構成単位−リンカー構築物（９ｃ）を使用する以外は、実施例１０に詳述したのと同様にして調製した。
【０４０１】
実施例３５  （２Ｒ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−フェニル−プロピオンアミド
【０４０２】
【化９６】
2004522737.tif 000098
【０４０３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３５分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、３７６．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、７２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４０４】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｄ）を、以下のようにして調製した。
【０４０５】
（１）（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０４０６】
【化９７】
2004522737.tif 000099
【０４０７】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（０．７５１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の溶液及びジクロロメタン（１０ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１．０１ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、窒素雰囲気下で−１５℃で１０かけて、ジクロロメタン（５０ｍｌ）におけるＦｍｏｃ−Ｄ−アロ−トレオニン（１．７１ｇ、５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に４回に分けて添加した。次に、エーテル性ジアゾメタン［６０℃でｎ水（１０ｍｌ）／エタノール（２０ｍｌ）における水酸化ナトリウム（５．７３ｇ）にジエチルエーテル（８２ｍｌ）中でジアザルド(diazald)（５．１ｇ、〜１５ｍｍｏｌ）の添加から生成］を注意深く添加し、得られた黄色の溶液を室温で９０分間攪拌した。酢酸（〜２ｍｌ）を、（泡立ちが止まるまで）注意深く添加した後、混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５０ｍｌ）で希釈した。エーテル層を、水で洗浄し（３×５０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが黄色の固体として残り（２．４３ｇ）、これをさらに精製せずに使用した。
【０４０８】
（２）（２Ｒ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルへの環化
【０４０９】
【化９８】
2004522737.tif 000100
【０４１０】
水（７５ｍｌ）における８０％酢酸における塩化リチウム（２．１２ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（２．４３ｇ、〜５ｍｍｏｌ）に添加した。黄色の油状の懸濁液を２時間攪拌すると、薄黄色の溶液がガスの蒸発によって付随して形成した。溶剤を真空中で除去した後、残渣を酢酸エチル（３０ｍｌ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２×３０ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）で洗浄した。合わせた水層を、酢酸エチルで抽出した（２×３０ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、黄色のガムが残った（１．５９ｇ）。この黄色のガムを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ９：１→７：３の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、（２Ｒ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルが白色の結晶性固体として残った（７９６ｍｇ、出発酸から４７％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２７、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝１８．０４分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝８．４７分、３３８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、３６０．０［Ｍ＋Ｎａ］＋、３６１．１［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０４１１】
【化９９】
2004522737.tif 000101
【０４１２】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｄ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（８ｄ）に変換した。
【０４１３】
（２Ｒ，３Ｒ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（６ｄ）（３５４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（２１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むエタノール（９．６ｍＬ）及び水（１．４ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（３４６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１当量、Murphy, A. M. et al,J. Am. Chem. Soc., 114,3156-3157, 1992）を添加し、混合物を２時間還流した。クロロホルム（１００ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液で洗浄した（０．１Ｍ、１×１００ｍＬ）。酸性層をクロロホルムで洗浄し(backwash)（３×１００ｍＬ）し、合わせた有機溶液をブラインで洗浄し（１００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させることによって、リンカー構築物（８ｄ）を白色固体として得た（６６０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、１つのメインピークがＲｔ＝１７．２０分で示された、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、５３５．３［Ｍ＋Ｈ］＋のメインＵＶピーク）。未精製物（８ｄ）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０４１４】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（８ｄ）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を提供する固相に結合させた。
【０４１５】
構成単位−リンカー構築物（８ｄ）（１．０ｍｍｏｌｅ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、３７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、１５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２２０iＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（２５０×１．２iｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（２５×１０iｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、９５％超のローディングが示された。
【０４１６】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要なローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を、以下のようにして固相上に作製した。
【０４１７】
２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−フェニルプロピオン酸を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（９ｄ）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例３５を得た。この未精製例示物を分析した（一般的な技術を参照）。ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１８．３５分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、３７６．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、７２９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４１８】
下記実施例（３６〜４７）を、実施例３５で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０４１９】
実施例３６  （２Ｒ，３Ｒ）４−メチル−２−（４−トリフルオロメチルベンジルオキシ）−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４２０】
【化１００】
2004522737.tif 000102
【０４２１】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．６９分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８８．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７９７．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４２２】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例１２に詳述したのと同様にして調製した。
【０４２３】
実施例３７  （２Ｒ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０４２４】
【化１０１】
2004522737.tif 000103
【０４２５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．７０分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６０．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７４１．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４２６】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例１に詳述したのと同様にして調製した。
【０４２７】
実施例３８  （２Ｒ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０４２８】
【化１０２】
2004522737.tif 000104
【０４２９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４３０】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例３に詳述したのと同様にして調製した。
【０４３１】
実施例３９  （２Ｒ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０４３２】
【化１０３】
2004522737.tif 000105
【０４３３】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１９．７１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４３４】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例４に詳述したのと同様にして調製した。
【０４３５】
実施例４０  （２Ｒ，３Ｒ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４３６】
【化１０４】
2004522737.tif 000106
【０４３７】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２３．２３分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９２．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８０５．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４３８】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用し、中間チオエーテルの酸化を行なわない以外は、実施例７に詳述したのと同様にして調製した。
【０４３９】
実施例４１  （２Ｒ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０４４０】
【化１０５】
2004522737.tif 000107
【０４４１】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．６７分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４４２】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例５に詳述したのと同様にして調製した。
【０４４３】
実施例４２  （２Ｒ，３Ｒ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０４４４】
【化１０６】
2004522737.tif 000108
【０４４５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．９３分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋、８１７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４４６】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例６に詳述したのと同様にして調製した。
【０４４７】
実施例４３  （２Ｒ，３Ｒ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４４８】
【化１０７】
2004522737.tif 000109
【０４４９】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．１９分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ４２４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８６９．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４５０】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例７に詳述したのと同様にして調製した。
【０４５１】
実施例４４  （２Ｒ，３Ｒ）モルホリン−４−カルボン酸２−シクロヘキシル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−エチルエステル
【０４５２】
【化１０８】
2004522737.tif 000110
【０４５３】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８３．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４５４】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例８に詳述したのと同様にして調製した。
【０４５５】
実施例４５  （２Ｒ，３Ｒ）２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
【０４５６】
【化１０９】
2004522737.tif 000111
【０４５７】
ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８１．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４５８】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例９に詳述したのと同様にして調製した。
【０４５９】
実施例４６  （２Ｒ，３Ｒ）２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４６０】
【化１１０】
2004522737.tif 000112
【０４６１】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．６２分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３６６．１［Ｍ＋Ｈ］＋、７５３．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４６２】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例１０に詳述したのと同様にして調製した。
【０４６３】
実施例４７  （２Ｒ，３Ｓ）２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４６４】
【化１１１】
2004522737.tif 000113
【０４６５】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１６．０４及び１６．５４分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３８７．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７９５．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４６６】
構成単位−リンカー構築物（９ｄ）を使用する以外は、実施例２３に詳述したのと同様にして調製した。
【０４６７】
液相合成
実施例（４８〜５１）を、標準的な液相化学によって調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。コアな構成単位、（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン  塩酸塩（化合物（３１）、スキーム９及び１０）を、以下のようにして調製した。
【０４６８】
（１）（１Ｓ，１’Ｒ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−２−オキソプロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製
【０４６９】
【化１１２】
2004522737.tif 000114
【０４７０】
ジクロロメタン（１４ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（０．９９８ｍｌ、７．７ｍｍｏｌ）の溶液及びジクロロメタン（１４ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１．５４ｍｌ、１４ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、アルゴン雰囲気下で−１５℃で１０分かけて、ジクロロメタン（７０ｍｌ）におけるＢｏｃ−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−Ｌ−トレオニン（１．９３ｇ、７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。次に、エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（１１ｍｌ）／エタノール（３１ｍｌ）における水酸化ナトリウム（８．０２ｇ）にジエチルエーテル（１１５ｍｌ）中でジアザルド(diazald)（７．１４ｇ、〜２１ｍｍｏｌ）の添加から生成］を注意深く添加し、得られた黄色の溶液を室温で９０分間攪拌した。酢酸（〜２ｍｌ）を、（泡立ちが止まるまで）注意深く添加した後、混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５０ｍｌ）で希釈した。エーテル層を、水で洗浄し（３×５０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、（１Ｓ，１’Ｒ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−２−オキソプロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルが黄色の固体として残り（２．８１ｇ）、これをさらに精製せずに使用した。
【０４７１】
（２）（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルへの環化
【０４７２】
【化１１３】
2004522737.tif 000115
【０４７３】
水（１０５ｍｌ）における８０％酢酸における塩化リチウム（２．９７ｇ、７０ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｓ，１’Ｒ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−２−オキソプロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．８１ｇ、〜７ｍｍｏｌ）に添加した。黄色の油状の懸濁液を２時間攪拌すると、薄黄色の溶液がガスの蒸発によって付随して形成した。溶剤を真空中で除去した後、残渣を酢酸エチル（４２ｍｌ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２×４２ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（４２ｍｌ）で洗浄した。合わせた水層を、酢酸エチルで抽出した（２×４２ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、黄色のガムが残った（１．１ｇ）。この黄色のガムを、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ３：１で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去することによって、（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルが白色の結晶性固体として残った（３９３ｍｇ、出発酸から２６％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．３１、ｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ２：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝６．４４８分、２３８．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、４５３．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０４７４】
【化１１４】
2004522737.tif 000116
【０４７５】
（３）（４Ｓ，５Ｒ）４−ａｍｉｎｏ−５−メチル−ジヒドロフラン−３−オン塩酸塩の調製
【０４７６】
【化１１５】
2004522737.tif 000117
【０４７７】
ジオキサン（４．０Ｍ、９ｍｌ）におけるＨＣｌを、（２Ｒ，３Ｓ）（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３ｙｌ）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．３７２ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）に、１分かけて攪拌しながら滴下した。次に、この混合物を２０分間攪拌した後、溶剤を真空中で蒸発させると、残渣が残り、これをトルエン（２×２０ｍｌ）と共沸させると、（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン塩酸塩が白色固体として残った（２６６ｍｇ、１００％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ、Ｒｔ＝０．４１９分、１１６．１［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【０４７８】
実施例４８  （２Ｒ，３Ｓ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルオキシ）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４７９】
【化１１６】
2004522737.tif 000118
【０４８０】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．４２９分、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３７６．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７７３．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４８１】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルオキシ）−４−メチル−ペンタン酸（化合物（３３）、スキーム１０）を、下記のようにして（Ｓ）−２−ヒドロキシイソカプロン酸（３２）から調製した。
【０４８２】
（１）ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルオキシ）−４−メチル−ペンタン酸（化合物（３３）、スキーム１０）の調製
ジクロロメタン（１０ｍｌ）における（Ｓ）−２−ヒドロキシイソカプロン酸（化合物（３２）０．６６ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）における水素化ナトリウム（０．４４ｇの油における６０％分散液、１１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。この混合物を０℃で０．５時間攪拌した後、ジクロロメタン（５ｍｌ）における４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロミド（１．４２ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。懸濁液を２時間攪拌した後、１Ｍ  塩酸（４０ｍｌ）を添加して、生成物をジクロロメタン（１００ｍｌ）で抽出し、さらに飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×５０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、残渣が残った。この残渣を、メタノール：ジクロロメタン  １：１００で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、２ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルオキシ）−４−メチル−ペンタン酸が黄色の油として残った（７９ｍｇ、６％）。分析用ＨＰＬＣ  ピーク  Ｒｔ＝２１．３１０分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１０．４２４分、３０１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、５７９．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のピーク）。
【０４８３】
【化１１７】
2004522737.tif 000119
【０４８４】
カルボン酸構成単位（３３）及び（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン塩酸塩（３１）を、以下のようにしてカップリングした。
【０４８５】
ジクロロメタン（２ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（２０．０９ｍｇ、０．１４７１ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（２ｍｌ）におけるＮ−メチルモルホリン（２９．７５ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）を、同時に、アルゴン下で−１５℃で５分かけて、ジクロロメタン（２ｍｌ）における（３１）（３７．２２ｍｇ、０．１３３７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。この混合物をー１５℃で１５分間攪拌した。次に、ジクロロメタン（２ｍｌ）における（３３）（２０．２７ｍｇ、０．１３３７ｍｍｏｌ）の新たに調製した溶液及び４−メチルモルホリン（１３．５２ｍｇ、０．１３３７ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに、この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。溶剤を真空中で除去して、残渣を得、これをｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ３：１から２：１の勾配で溶出してシリカゲルで精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、白色のフォームが残った（３７．１０ｍｇ、出発酸から７３．９％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．８５、ＤＣＭにおける１０％ＭｅＯＨ）、分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２１．４２９分の単一のピーク、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１０．８２９分、３７６．２［Ｍ＋Ｈ］＋、７７３．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のＵＶピーク）。
【０４８６】
【化１１８】
2004522737.tif 000120
【０４８７】
実施例４９  （２Ｒ，３Ｓ）Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニル−プロピオンアミド
【０４８８】
【化１１９】
2004522737.tif 000121
【０４８９】
分析用ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．５０分（メジャーな異性体）及び２０．６４分（マイナーな異性体）ならびにＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．７４６分、４０４．２［Ｍ＋Ｈ］＋、４２６．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、８２９．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋の単一なメジャーなＵＶピーク）。
【０４９０】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２ＲＳ−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニルプロピオン酸を、下記のようにして調製した。
【０４９１】
水素化ナトリウム（２６５ｍｇの油における６０％分散液、６．６ｍｍｏｌ）を、５分にわたって０℃で（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオン酸（０．５ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）及びジクロロメタン（５ｍｌ）の攪拌混合物に２回に分けて添加した。この混合物を０℃で５分間、次に周囲温度で３０分間攪拌した。次に、１−（クロロメチル）ナフタレン（９５％、０．５７ｍｌ、３．６ｍｍｏｌ）を添加した後、混合物をヨウ化カリウム（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加する前に５時間攪拌した。この混合物を２０時間攪拌した後、５５℃で１時間加熱し、さらに周囲温度まで冷却して、水（１５ｍｌ）に注いだ。飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）を添加した後、混合物をジクロロメタン（５ｍｌ次に１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を用いて酸性化した後、ジクロロメタンで抽出した（２×１０ｍｌ）。ジクロロメタン層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣（０．４８ｇ）をジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解した後、水素化ナトリウム（１５０ｍｇの油における６０％分散液、３．７５ｍｍｏｌ）を添加する前に０℃に冷却した。この混合物を３０分間攪拌した後、ポリマー結合イソシアネート（３００ｍｇ、２ｍｍｏｌＮｇ−１）を添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、水（１５ｍｌ）に注いだ。１Ｍ  塩酸（１０ｍｌ）を添加した後、生成物をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、塩化ナトリウム水溶液（１Ｍ、１０ｍｌ）に溶解した後、ジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出し、これを捨てた。砕いた氷を水層に添加した後、１Ｍ  塩酸（１２ｍｌ）を添加した。生成物をジクロロメタンで抽出した（２×１０ｍｌ）後、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジロロメタン０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２ＲＳ−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニルプロピオン酸（４０ｍｇ）を無色の油として得た。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．２２分、３０７．２［Ｍ＋Ｈ］＋、３２９．２［Ｍ＋Ｎａ］＋の単一のメインＵＶピーク）。
【０４９２】
【化１２０】
2004522737.tif 000122
【０４９３】
２ＲＳ−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニルプロピオン酸及び（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン塩酸塩（３１）を、以下のようにしてカップリングした。
【０４９４】
ジクロロメタン（０．６７ｍｌ）におけるイソブチルクロロホルメート（１８．６μｌ、０．１４ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（０．６７ｍｌ）における４−メチルモルホリン（３１．６μｌ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液を、同時に、アルゴン下で−１５℃で１０かけて、ジクロロメタン（０．５ｍｌ）における２ＲＳ−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニルプロピオン酸（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に滴下した。次に、この溶液を１５分間攪拌した後、（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチルジヒドロフラン−３−オン塩酸塩（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、次にジクロロメタン（０．３ｍｌ）における４−メチルモルホリン（１４．４μｌ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、添加した。この混合物を３時間にわたって０℃に加温し、周囲温度で２０時間攪拌した後、溶剤を真空中で除去した。残渣を、酢酸エチル：ヘプタン１：３→７：１３の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去したところ、（２Ｒ，３Ｓ）Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−２−（ナフタレン−１−イルメトキシ）−３−フェニル−プロピオンアミドが白色固体として残った（２８．５ｍｇ、３．５：１  ジアステレオ異性体の混合物、７０％）。ＴＬＣ（２個のスポット、Ｒｆ＝０．４５及び０．４２、酢酸エチル：ヘプタン  ７：１３）。
【０４９５】
【化１２１】
2004522737.tif 000123
【０４９６】
実施例５０  （２Ｒ，３Ｓ）２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０４９７】
【化１２２】
2004522737.tif 000124
【０４９８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２０．１７８分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ３９６．２［Ｍ＋Ｈ］＋、８１３．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０４９９】
必要なエーテルカルボン酸構成単位２ＲＳ  ２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸を、下記のようにして調製した。
【０５００】
（１）２ＲＳ−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸メチルエステルの調製
水素化ナトリウム（９８．４ｍｇの油における６０％分散液、２．４６ｍｍｏｌ）を、５分にわたって窒素雰囲気下で０℃でテトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）における２Ｓ−ヒドロキシ−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル（３００ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に２回に分けて添加した。この混合物を周囲温度で１０分間攪拌した後、４−フェニルベンジルクロライド（８３０ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）の溶液、次にヨウ化カリウム（２５ｍｇ）を添加した。この混合物を２０時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム溶液（４０ｍｌ）を添加した。生成物を酢酸エチルで抽出した（３×３０ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣（１．２ｇ）を、酢酸エチル：ヘプタン１：２０→１：９で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸メチルエステル（１１０ｍｇ、１７．１％）が無色の油として残った。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、ヘプタン：酢酸エチル  ９：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３１３．１［Ｍ＋Ｈ］＋のメインＵＶピーク。
【０５０１】
（２）２ＲＳ−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸の調製
水（３ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（０．０４４３ｇ、１．０５６ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でテトラヒドロフラン：メタノール  ２：１（１５ｍｌ）における２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸メチルエステル（０．１１ｇ、０．３５２１ｍｍｏｌ）の溶液に１分かけて滴下した。この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）に注いだ。水層をジエチルエーテル（２×１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸でｐＨ（１〜２）に酸性化した後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×１０ｍｌ）。合わせたジクロロメタン層を、水（２×１０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去すると、２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸が無色の油として残った（０．０４８ｇ、４５．６９％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．２、メタノール：ジクロロメタン  ０．５：９．５）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（２９７．１［Ｍ−１］＋、３２１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、６１９．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋）。
【０５０２】
【化１２３】
2004522737.tif 000125
【０５０３】
２ＲＳ−２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸及び（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン塩酸塩（３１）を以下のようにしてカップリングした。
【０５０４】
ジクロロメタン（２ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（１５．６１ｍｇ、０．１１４３ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（２ｍｌ）におけるＮ−メチルモルホリン（２３．１２ｍｇ、０．２２８６ｍｍｏｌ）を、同時に、アルゴン下で−１５℃で５かけて、ジクロロメタン（２ｍｌ）における２ＲＳ−２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸（３１ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。この混合物を−１５℃で１５分間攪拌した。次に、ジクロロメタン（２ｍｌ）における（３１）（１５．７５ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）の新たに調製した溶液及び４−メチルモルホリン（１１．５６ｍｇ、０．１１４３ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに、この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。溶剤を真空中で除去して、残渣を得、これをｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ３：１の勾配で溶出してシリカゲルで精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、（２Ｒ，３Ｓ）２−（ビフェニル−４−イルメトキシ）−４−メチル−ペンタン酸（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミドがオフホワイトのガムとして残った（３４ｍｇ、出発酸から８２．７％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．８５、ＤＣＭにおける１０％ＭｅＯＨ）。
【０５０５】
【化１２４】
2004522737.tif 000126
【０５０６】
実施例５１  （２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０５０７】
【化１２５】
2004522737.tif 000127
【０５０８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝１７．８５８分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ  ３５０．２［Ｍ＋Ｈ］＋、３７２．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、７２１．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０５０９】
必要なエーテルカルボン酸構成単位、２ＲＳ  ３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸を以下のようにして調製した。
【０５１０】
（１）３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸メチルエステルの調製
水素化ナトリウム（２０４ｍｇの油における６０％分散液、５．１ｍｍｏｌ）を、５分かけて窒素雰囲気下で０℃でテトラヒドロフラン（５ｍｌ）における３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸メチルエステル（１８）（７９４ｍｇ、４．２７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に２回にわけて添加した。この混合物を周囲温度で１０時間攪拌した後、テトラヒドロフラン（１ｍｌ）における３−ブロモメチルフラン（２．７５ｇ、１７．０８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。この混合物を２０時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（４０ｍｌ）を添加した。生成物を酢酸エチルで抽出した（３×３０ｍｌ）後、合わせた酢酸エチル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤を真空中で除去した。残渣（２．０ｇ）を、酢酸エチル：ヘプタン  １：４で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸メチルエステル（６４ｍｇ、６％）が無色の油としての残った。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、ヘプタン：酢酸エチル  ９：１）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１０．７０１分、２８９．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、５５５．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋のメインＵＶピーク）。
【０５１１】
（２）３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸の調製
水（３ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（０．０３０２５ｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でテトラヒドロフラン：メタノール２：１（１５ｍｌ）における３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸メチルエステル（０．０６４ｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）の溶液に１分かけて滴下した。この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）に注いだ。水層をジエチルエーテルで抽出し（２×１０ｍｌ）、これを捨てた。水層を１Ｍ  塩酸でｐＨ（１〜２）に酸性化した後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×１０ｍｌ）。合わせたジクロロメタン層を水（２×１０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに溶剤を真空中で除去すると、３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸が明るい黄色の油として残った（０．０１２ｇ、１９．８０％）。ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒｆ＝０．３５、メタノール：ジクロロメタン  １：９）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（２５２．１［Ｍ］＋、２７５．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、５２７．２［２Ｍ＋Ｎａ］＋）。
【０５１２】
２ＲＳ  ３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸及び（４Ｓ，５Ｒ）４−アミノ−５−メチル−ジヒドロ−フラン−３−オン塩酸塩（３１）を、以下のようにしてカップリングした。
【０５１３】
ジクロロメタン（２ｍｌ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（７．１５ｍｇ、０．０５２３ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（２ｍｌ）におけるＮ−メチルモルホリン（１０．５８ｍｇ、０．１０４６ｍｍｏｌ）を、同時に、アルゴン下で−１５℃で５分かけて、ジクロロメタン（２ｍｌ）における２ＲＳ  ３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−プロピオン酸（１２．００ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。この混合物を−１５℃で１５分間攪拌した。次に、ジクロロメタン（２ｍｌ）における（３１）（７．２１ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）の新たに調製した溶液及び４−メチルモルホリン（５．２９ｍｇ、０．０５２３ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに、この混合物を周囲温度で１６時間攪拌した。溶剤を真空中で除去して、残渣を得、これをｎ−ヘプタン：酢酸エチル  ３：１の勾配で溶出してシリカゲルで精製した。所望の画分を合わせて、溶剤を真空中で除去すると、（２Ｒ，３Ｓ）３−シクロヘキシル−２−（フラン−３−イルメトキシ）−Ｎ−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−プロピオンアミドがオフホワイトのガムとして残った（６ｍｇ、出発酸から３５．７７％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．８、メタノール：ジクロロメタン１：９）、分析用
【０５１４】
【化１２６】
2004522737.tif 000128
【０５１５】
実施例Ａ  システインプロテアーゼ活性に関するアッセイ
本発明の化合物を、化合物の阻害の特徴を明瞭にするように設計された数多くの文献に基づいた生化学的なアッセイの一で試験してもよい。これらのタイプのアッセイのデータから、化合物の潜在性及び反応の率を測定、定量できる。この情報は、単独であるいは他の情報と組み合わせて、所定の薬理学な効果を生じるのに必要な化合物の量が測定できるであろう。
【０５１６】
一般的な材料および方法
特記しない限り、すべての一般的な化学物質及び生化学物質は、Sigma Chemical Company, Poole, Dorset, U.K.からまたはFisher Scientific UK,Loughborough, Leicestershire, U.Kのいずれかから購入した。吸光度アッセイは、SpectraMax PLUS384 platereader (Molecular Devices, Crawley, U.K.)を用いて平底の９６ウェルプレート(Spectra; Greiner Bio−OneLtd., Stonehouse, Gloucestershire, U.K.)で行なった。蛍光高スループットアッセイ(Fluorescence highthroughput assay)は、３８４ウェルのマイクロタイタープレート(Corning Costar 3705 plates, FisherScientific)または９６ウェルの「Ｕ」底マイクロフオーＷ１マイクロタイタープレート(‘U’ bottomed Microfluor W1microtitre plate)(Thermo Labsystems, Ashford, Middlesex, U.K.)で行なった。蛍光アッセイは、SpectraMaxGemini fluorescence plate reader (Molecular Devices)を用いてモニターした。７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）または７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＡＦＣ）蛍光体のいずれかを用いる基質では、アッセイは、３６５ｎｍの励起波長及び４５０ｎｍの発光波長(emissionwavelength)でモニターし、蛍光プレートリーダーをＡＭＣで較正した。３−アミノ−ベンゾイル（Ａｂｚ）蛍光体を用いる基質では、アッセイは、３１０ｎｍの励起波長及び４４５ｎｍの発光波長でモニターし；蛍光プレートリーダーを３−アミノ−ベンズアミド(Fluka)で較正した。特記しない限り、すべてのペプチダーゼ基質は、BachemUK, St. Helens, Merseyside, UKから購入した。蛍光共鳴エネルギー転移方法(fluorescence resonanceenergy transfer methodology)を用いた基質（即ち、ＦＲＥＴ−系基質(FRET-based substrate))は、公表された方法(Atherton& Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press, Oxford, U.K., 1989)を用いてIncenta Limitedで合成され、蛍光ドナーとしてＡｂｚ（２−アミノベンゾイル）を及び蛍光消光剤として３−ニトロ−チロシン［Ｔｙｒ（ＮＯ２）］を用いた(Meldal,M. and Breddam, K., Anal. Biochem., 195, 141-147, 1991)。ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホネート（ＨＥＰＥＳ）、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）ベース、ビス−トリス−プロパン及びすべての生物界面活性剤（例えば、ＣＨＡＰＳ、チッタージェント(zwittergent)など）は、CNBiosciences UK, Beeston, Nottinghamshire, U.Kから購入した。グリセロールは、Amersham PharmaciaBiotech, Little Chalfont, Buckinghamshire, U.Kから購入した。基質または阻害剤のストック溶液は、１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）(Rathburns,Glasgow, U.K.)中で１０ｍＭ以下に作製され、適当に必要であるように希釈した。すべての場合において、アッセイ中のＤＭＳＯ濃度は１％（ｖｏｌ．／ｖｏｌ．）未満に維持した。
【０５１７】
アッセイプロトコルは、先の文献（表１；Barrett, A.J., Rawlings, N.D. 及び Woessner, J.F., 1998, Handbook ofProteolytic Enzymes, Academic Press, London及びこれの引用文献）に基づき、局所アッセイプロトコルに適するのに必要であるように修飾した。酵素を反応を開始するのに必要であるように添加し、生成物への基質の変換時の蛍光の変化によって判断される際の、活性を経時的にモニターした。すべてのアッセイは２５±１℃で行なった。
【０５１８】
【表１】
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【０５１９】
Ｉ：１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＢＴＰ、ｐＨ６．５
ＩＩ：１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１４２ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．０３５ｍＭ  チッタージェント３−１６(Zwittergent 3-16)を含む１０ｍＭ  ＢＴＰ、ｐＨ６．５
ＩＩＩ：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０％グリセロール、０．１％  ＣＨＡＰＳ、１４２ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＤＴＴ
ＩＶ：１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１０ｍＭ  Ｌ−システインを含む１００ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ６．７５
Ｖ：１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  Ｌ−システイン及び０．２５％（ｗ／ｖ）  ＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭ  トリスアセテート、ｐＨ８．４
ＶＩ：５ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０
ＶＩＩ：２ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び１００μＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５
ＶＩＩＩ：２ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び２００μＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５
ＩＸ：１０ｍＭ  Ｌ−システイン及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
Ｘ：１０ｍＭＬ−システイン；０．０５％（ｗ／ｖ）ブリッジ３５及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
ＸＩ：１０ｍＭ  Ｌ−システイン；１４２ｍＭ  塩化ナトリウム及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
【０５２０】
【化１２７】
2004522737.tif 000130
【０５２１】
トリパノソーマ  クルージ  クルジパインペプチダーゼ活性アッセイ
トリパノソーマ  クルージＤｍ２８(Trypanosoma cruzi Dm28)エピマスティゴート由来の、野生型のクルジパインは、Dr. JulioScharfstein (Instituto de Biofisica Carlos Chagas Filho, Universidade Federaldo Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil)から得た。活性アッセイは、２．５ｎＭ  酵素を用いて１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１０ｍＭ  Ｌ−システインを含む１００ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ６．７５中で行なわれた。Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約１２μＭ）及びＤ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約４μＭ）を、基質として用いた。定常的に、Ａｃ−ＦＲ−ＡＭＣを、ＫＭａｐｐと等しい濃度で使用し、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを、２５μＭの濃度で使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２２】
メキシコリーシュマニア(Leishmania mexicana)システインプロテアーゼＢ（ＣＰＢ）ペプチダーゼ活性アッセイ
Ｃ末端拡張を持たない野生型の組み換えＣＰＢ（即ち、ＣＰＢ２．８ΔＣＴＥ；Sanderson, S.J., et. al., Biochem. J., 347, 383-388， 2000）を、Dr. Jeremy Mottram (WellcomeCentre for Molecular Parasitology, The Anderson College, University of Glasgow,Glasgow, U.K.)から得た。活性アッセイは、０．２５ｎＭの酵素を用いて１ｍＭ  ＥＤＴＡ；２００ｍＭ  ＮａＣｌ及び１０ｍＭ  ＤＴＴ(Alves,L.C., et. al., Mol. Biochem. Parasitol, 116, 1-9, 2001)を含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なわれた。Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約３８μＭ）をＫＭａｐｐと等しい濃度で使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２３】
カテプシンペプチダーゼ活性アッセイ
ウシカテプシンＳ、ヒトカテプシンＬ、ヒトカテプシンＨ及びヒトカテプシンＢは、CN Biosciencesから得た。組み換えヒトカテプシンＳ、ヒトカテプシンＫ及びヒトカテプシンＸは、Dr. Boris Turk(Josef Stefan Institute, Ljubljana, Slovenia)から得た。特記しない限り、すべてのペプチダーゼ活性アッセイは、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ビス−トリス−プロパン（ＢＴＰ）、ｐＨ６．５中で行なった。ヒトカテプシンＨ活性アッセイは、１０ｍＭ  ＢＴＰ、ｐＨ６．５、１４２ｍＭ  ＮａＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０３５ｍＭ  チッタージェント３−１６中で行なった。ヒトカテプシンＫアッセイは、２０ｍＭ  Ｌ−システイン及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なった(Bossard, M.J., et. al., J. Biol. Chem., 21, 12517-12524， 1996)。ヒトカテプシンＸアッセイは、２０ｍＭ  Ｌ−システイン；０．０５％（ｗ／ｖ）  ブリッジ３５及び１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ  酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なった(Santamaria,I., et. al., J. Biol. Chem., 273, 16816-16823, 1998; Klemencic, J, et al., Eur. J. Biochem., 267,5404-5412， 2000)。アッセイに使用される最終的な酵素濃度は、０．５ｎＭ  ウシカテプシンＳ、１ｎＭ  カテプシンＬ、０．１ｎＭ  カテプシンＢ、０．２５ｎＭ  カテプシンＫ；１ｎＭ  カテプシンＸ及び１０ｎＭ  カテプシンＨであった。阻害アッセイでは、カテプシンＳ、カテプシンＬ、カテプシンＢ、カテプシンＫ及びカテプシンＨに使用される基質は、それぞれ、ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約３０μＭ）、Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約２０μＭ）、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約４０μＭ）、Ｚ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約２μＭ）；Ｂｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約１５０μＭ）であった。それぞれの場合において、各アッセイに使用される基質濃度はＫＭａｐｐに等しくした。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２４】
トリプシンペプチダーゼ活性アッセイ
ヒト膵臓トリプシン（ヨウ素化グレード；CN Biosciences）活性アッセイは、０．１ｎＭ  トリプシンを用いて５ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０中で行なった。阻害アッセイでは、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約８４μＭ）を、ＫＭａｐｐと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２５】
クロストリパインペプチダーゼ活性アッセイ
クロストリパイン(Sigma)活性アッセイは、０．３ｎＭ酵素を用いて１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＢＴＰ、ｐＨ６．５中で行なった。阻害アッセイでは、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫＭａｐｐ＝約１００μＭ）を、ＫＭａｐｐと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２６】
カルパインペプチダーゼ活性アッセイ
カルパイン(ヒト赤血球μ−カルパイン及びブタの腎臓ｍ−カルパイン；CN Biosciences）活性アッセイを、２５ｎＭのいずれかの酵素(Sasaki,et. al., J. Biol. Chem., 259,12489-12494， 1984)を用いて２ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及びＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５中で行なった。μ−カルパイン阻害アッセイでは、緩衝液に１００μＭ  ＣａＣｌ２を含ませ、Ａｂｚ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＮＯ２）−Ａｓｐ−ＮＨ２（ＫＭａｐｐ＝約２０μＭ；IncentaLimited）を基質として使用した。ｍ−カルパイン阻害アッセイでは、アッセイ緩衝液に２００μＭ  ＣａＣｌ２を含ませ、Ａｂｚ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ（ＮＯ２）−Ａｓｐ−ＮＨ２（ＫＭａｐｐ＝約２２μＭ；IncentaLimited）を基質として使用した。双方の場合において、アッセイに使用される基質濃度はＫＭａｐｐに等しくした。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２７】
細胞外S. aureus V8システインペプチダーゼ（スタフィロパイン）ペプチダーゼ活性アッセイ
S. aureus V8は、Prof. S. Arvidson, Karolinska Institute, Stockholm,Swedenから得た。細胞外S. aureus V8システインペプチダーゼ（スタフィロパイン）ペプチダーゼ活性アッセイを、部分精製されたS. aureusV8培養物の上清（Dr. Peter Lambert, Aston University, Birmingham, U.K.から得た）を用いて行なった。活性アッセイを、２倍希釈した部分精製抽出物を用いて１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭＣａＣｌ２を含む１０ｍＭ  ＢＴＰ、ｐＨ６．５中で行なった。阻害アッセイでは、Ａｂｚ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ＮＯ２）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ＫＭａｐｐ＝約１１７μＭ；IncentaLimited）を、ＫＭａｐｐと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２８】
口蹄疫リーダーペプチダーゼ（ＦＭＤＶ−ＬＰ）活性アッセイ
組み換え野生型ＦＭＤＶ−ＬＰは、Dr. Tim Skern (Institut fur Medizinische Biochemie, Abteilung furBiochemie, Universtat Wien, Wien, Austria)から得た。活性アッセイを、１０ｎＭ酵素を用いて１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  Ｌ−システイン及び０．２５％（ｗ／ｖ）  ＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭ  トリス・アセテート中で行なった。阻害アッセイでは、Ａｂｚ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ（ＮＯ２）−Ｇｌｕ−ＮＨ２（ＫＭａｐｐ＝約５１μＭ、IncentaLimited）を、ＫＭａｐｐと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５２９】
カスパーゼペプチダーゼ活性アッセイ
カスパーゼ(Caspase)１−１０は、CN BiosciencesまたはBioVision Inc. (Mountain View, CA,USA)から得、すべてのアッセイを、アッセイ当たり０．１〜１Ｕを用いて５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ；ｐＨ７．２、１０％（ｖ／ｖ）  グリセロール、０．１％（ｗ／ｖ）  ＣＨＡＰＳ、１４２ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ジチオトレイトール（ＤＴＴ）中で行なった。カスパーゼ１では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ２では、Ｚ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＡＦＣを基質として使用した；カスパーゼ３では、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ４では、Ｓｕｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ５では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ６では、Ａｃ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ７では、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ８では、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ９では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ１０では、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した(Nicholson,D.W. 及び Thornberry, N.A., TIBS, 22, 299-306, 1997; Stennicke, H.R. 及び Salvesen, G.S., J. Biol. Chem., 272(41),25719-25723, 1997; Talanian,R.V., et. al., J. Biol. Chem., 272(15), 9677-9682, 1997; Wolf, B.B. 及び Green, D.R., J.Biol. Chem., 274（１５）, 20049-20052, 1999)。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０５３０】
基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数（ＫＭａｐｐ）の測定
各基質に関する見かけの巨視的結合定数（ＫＭａｐｐ）を、基質濃度の関数としての酵素活性の依存性から、算出した。観察された比を、横座標の関連基質濃度に対して縦座標にプロットして、データを、式１を用いて直接回帰分析(Prism v 3.02; GraphPad, San Diego, USA)にあわせた(Cornish-Bowden, A.Fundamentals of enzyme kinetics Portl及び Press; 1995, 93-128)。
【０５３１】
【数１】
2004522737.tif 000131
【０５３２】
式１において、「ｖｉ」は、観察された初期率であり、「Ｖｍａｘａｐｐ」は、飽和基質濃度での観察された最大活性であり、「ＫＭａｐｐ」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数であり、「［Ｓｏ］」は、初期基質濃度である。
【０５３３】
阻害定数の測定
各化合物に関する見かけの阻害定数（Ｋｉ）を、阻害が可逆的であり、純競合メカニズム(pure-competitive mechanism)によって起こることに基づいて測定した。Ｋｉ値は、式２を用いて直接回帰分析(Prismv 3.02)によって、阻害剤濃度の関数としての酵素活性の依存性から、算出した(Cornish-Bowden, A., 1995.)。
【０５３４】
【数２】
2004522737.tif 000132
【０５３５】
式２において、「ｖｉ」は、観察された残存活性であり、「Ｖｍａｘａｐｐ」は、（即ち、阻害剤不存在下での）観察された最大活性であり、「ＫＭａｐｐ」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数であり、「［Ｓ］」は、初期基質濃度であり、「Ｋｉ」は、見かけの解離定数であり、および「［Ｉ］」は、阻害剤濃度である。
【０５３６】
見かけの解離定数（Ｋｉａｐｐ）が酵素濃度に近づくと、Ｋｉａｐｐ値は、式３に記載された形態の二次解決法(quadratic solution)を用いて算出した(Morrison, J.F. Trends Biochem. Sci.,7, 102-105, 1982; Morrison, J.F. Biochim. Biophys. Acta, 185,269-286, 1969; Stone, S.R. 及び Hofsteenge, J. Biochemistry, 25,4622-4628, 1986)。
【０５３７】
【数３】
2004522737.tif 000133
【０５３８】
式３において、「ｖｉ」は、観察された残存活性であり、「Ｆ」は、（即ち、阻害剤不存在下での）観察された最大活性及び最小酵素活性の差であり、「Ｅｏ」は、全酵素濃度であり、「Ｋｉａｐｐ」は、見かけの解離定数であり、および「Ｉｏ」は、阻害剤濃度である。曲線を、酵素濃度に関する固定値を用いて非線形回帰分析(Prism)に合わせた。式４は、基質動態を説明するのに使用され、この際、「Ｋｉ」は、阻害定数であり、「［Ｓｏ］」は、初期基質濃度であり、および「ＫＭａｐｐ」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数である(Morrison,1982)。
【０５３９】
阻害剤の酵素との反応の二次率(second-order rate)
該当する場合には、各化合物の酵素との反応の観察された率（ｋｏｂｓ）の濃度依存性を、基質の存在下での擬１次条件下での酵素不活化の割合を測定することによって分析した(Morrison, J.F., TIBS, 102-105, 1982; Tian, W.X. 及び Tsou, C.L.,Biochemistry, 21, 1028-1032,1982; Morrison, J.F. 及び Walsh, C.T., from Meister (Ed.), Advances in Enzymol., 61,201-301, 1988; Tsou, C.L., from Meister (Ed.), Advances in Enzymol., 61,381-436, 1988;)。アッセイは、様々な濃度の阻害剤を添加して、基質を含む緩衝液をアッセイすることによって行なった。アッセイを、酵素を反応混合物に添加することによって開始し、蛍光の変化を経時的にモニターした。アッセイ期間中、１０％未満の基質が消費された。
【０５４０】
【数４】
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【０５４１】
活性蛍光経過曲線(activity fluorescence progress curve)を、式５を用いて非線形回帰分析(Prism)に合わせた(Morrison,1969; Morrison, 1982)；この際、「Ｆ」は、蛍光応答であり、「ｔ」は、時間であり、「ｖｏ」は、初期速度であり、「ｖｓ」は、平衡定常状態速度であり、「ｋｏｂｓ」は、観察された擬１次速度定数であり、および「Ｄ」は、０時間での切片（即ち、曲線の縦座標変位(ordinatedisplacement)）である。２次速度定数は、阻害剤濃度（即ち、ｋｏｂｓ／［Ｉ］）に対するｋｏｂｓのプロットの線の傾斜から得られた。基質動態を修正するために、式６が使用され、この際、「［Ｓｏ］」は、初期基質濃度であり、「ＫＭａｐｐ」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数である。
【０５４２】
【数５】
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【０５４３】
本発明の化合物を、上記したアッセイによって試験したところ、クルジパイン阻害活性または１００μＭ以下のインビトロのＫｉ阻害定数を有する別のＣＡ  Ｃ１システインプロテアーゼに対する阻害活性を示すことが観察された。本発明の数多くの例示化合物に関する具体的な阻害データを表２に示す。
【０５４４】
【表２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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