(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒトを含む温血動物における骨粗鬆症、乳癌、高コレステロール血症、高脂血症またはアテローム性動脈硬化症の医学的治療および／または進行の抑制のための新規方法の提供。【解決手段】選択的エストロゲン受容体モジュレーター、特に一般式（Ｉ）2007191484.tif 000031の構造を有するもの（Ｒ１，Ｒ２は水酸基等、ｎ＝２等）、およびデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β-ジオールおよびこれらの化合物へとインビボで変換される化合物からなる群から選択される性ステロイド前駆体の投与、さらに、ビスホスホネート類と選択的エストロゲン受容体モジュレーターおよび／または性ステロイド前駆体の投与、及び医薬組成物、キットの提供。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、乳癌、子宮内膜癌、子宮癌、卵巣癌、膣乾燥および筋肉量の減少からなる群から選択される症状の治療または該症状に罹患する危険性を減ずることを必要とする患者の、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体レベルを増加させること、さらに、該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、乳癌、子宮内膜癌、子宮癌、卵巣癌、膣乾燥および筋肉量の減少からなる群から選択される症状の治療または該症状に罹患する危険性を減ずるための方法。
【請求項２】
ａ）薬学上許容される賦形剤、希釈剤または担体、
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される少なくとも１の性ステロイド前駆体の治療有効量、
ｃ）少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量
を含有する、医薬組成物。
【請求項３】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオン、およびインビボでこれら前駆体へと変換されるプロドラッグからなる群から選択される少なくとも１の性ステロイド前駆体の治療有効量を含有する第１の容器および；少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量を含有する第２の容器を含有するキット。
【請求項４】
治療有効量のビスフォスホネートを、組み合わせ療法の一部として投与することをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】
少なくとも１のさらなる容器を含有し、該容器が少なくとも１のビスフォスホネートの治療有効量を含有している、請求項３記載のキット。
【請求項６】
組成物が、さらに少なくとも１のビスフォスホネートの治療有効量を含有している、請求項２記載の組成物。
【請求項７】
さらに治療有効量のプロゲスチンを投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
該前駆体が４−アンドロステン−３，１７−ジオンではない、前記各項いずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項９】
乳癌に罹患する危険性を減ずることが望ましい患者へ、選択的エストロゲン受容体モジュレーターの予防有効量を投与することを含む、乳癌に罹患する危険性を減ずる方法。
【請求項１０】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、以下の性質：
ａ）両芳香族環が１または２の介在炭素原子により隔てられている二つの芳香族環であって、両方の芳香族環は置換されていないかまたはヒドロキシル基またはインビボでヒドロキシル基へと変換される基にて置換されいるかのいずれかである二つの芳香族環を有する；
ｂ）芳香族環および三級アミン官能基もしくはその塩を有する側鎖を有する。
【請求項１１】
側鎖が以下の群：
【化１】
2007191484.tif 000018
からなる基から選択される、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１２】
２つの芳香族環の両方がフェニルであり、側鎖がメチン、メチレン、−ＣＯ、−Ｏ―、および―Ｓ−、芳香族環および第三アミン官能基もしくはその塩からなる群から選択される、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１３】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがベンゾチオフェン誘導体、トリフェニルエチレン誘導体、インドール誘導体、ベンゾピラン誘導体、およびセントクロマン誘導体からなる群から選択される、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１４】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、以下の式：
【化２】
2007191484.tif 000019
(式中、Ｒ1およびＲ2は独立してそれぞれ水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される；
Ｒ3およびＲ4は、それぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素が共に、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる構造から選択される；
Ａは−ＣＯ−、−ＣＨＯＨ、および−ＣＨ2−からなる群から選択される；
Ｂはフェニレン、ピリジリデンおよび−シクロＣ4Ｈ2Ｎ2−からなる群から選択される)
で示されるベンゾチオフェン誘導体である、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１５】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがラロキシフェン、ＬＹ３５３３８１およびＬＹ３３５５６３からなる群から選択される、請求項１４記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１６】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下の式：
【化３】
2007191484.tif 000020
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4または−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯＨである(Ｒ３およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルであるかまたは、Ｒ３，Ｒ４、および両者が結合している窒素原子が合わせて、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される環状構造をとっている)；
ＥおよびＫはそれぞれ独立して、水素またはヒドロキシルである；
Ｊは水素またはハロゲンである)
で示されるトリフェニルエチレン誘導体である、請求項10記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１７】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがタモキシフェン、ＯＨ−タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、ヨードキシフェンおよびＧＷ５６３８からなる群から選択される、前記請求項１から９いずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１８】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下の式
【化４】
2007191484.tif 000021
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ7)Ｒ8、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮ(Ｒ7)Ｒ8、−ＣＣ−(ＣＨ2)n−Ｎ(Ｒ7)Ｒ8(Ｒ7およびＲ8はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ7、Ｒ8および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される、環状構造を形成している)；
Ｘは水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択される；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、およびインビボでヒドロキシル基に変換される基からなる群から選択される)
で示されるインドール誘導体である、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項１９】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが式：
【化５】
2007191484.tif 000022
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシル基へと変換される基である；
Ｒ5およびＲ6はそれぞれ独立して水素またはＣ1−Ｃ6アルキルである；
Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4(Ｒ3およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチルー１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される環状基を構成している)である）
で示されるセントクロマン誘導体である、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２０】
セントクロマン誘導体が、(３,４−トランス−２,２−ジメチル−３−フェニル−４−[４−(２−(２−(ピロリジン−１−イル)エトキシ)フェニル]−７−メトキシクロマン)である、請求項１９記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２１】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが下式：
【化６】
2007191484.tif 000023
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボで水素に変換される部分である；
Ｚは２価の閉鎖部分である；
Ｒ１００はＬを４-１０原子分、Ｂ−環から隔てる２価の基である；
Ｌは−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜、および−ＳＯＮ＜からなる群から選択される２価または３価の極性基である；
Ｇ1は水素、Ｃ1−Ｃ5炭化水素または、Ｇ2およびＬと結合して５−から７−員の複素環を形成させる２価の基、もしくはハロまたはこれらの不飽和誘導体からなる群から選択される；
Ｇ2は存在しないか、または水素、Ｃ1からＣ5の炭化水素、もしくはＧ1およびＬを結合して５−から７−員の複素環を形成する２価の基、およびハロまたはこれらの不飽和誘導体からなる群から選択される；
Ｇ3は水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される)
の構造を有している、請求項１０記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２２】
Ｚが−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、および−ＣＨ2−からなる群から選択される、請求項２１記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２３】
該化合物が下式：
【化７】
2007191484.tif 000024
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4(Ｒ3およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される、環状構造を形成している)である；
Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシル、およびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される)
で示されるベンゾピラン誘導体である、請求項２２記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２４】
ベンゾピラン化合物が、２位の炭素についての絶対配置がＳ型である光学活性化合物であるかまたはその薬学的に許容される塩であり、該化合物の構造が下式：
【化８】
2007191484.tif 000025
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される；
Ｒ3は飽和、不飽和もしくは置換ピロリジニル、飽和、不飽和もしくは置換ピペリジノ、飽和、不飽和もしくは置換ピペリジニル、飽和、不飽和もしくは置換モルホリノ、窒素含有環状基、窒素含有多環式基、およびＮＲａＲｂ(ＲａおよびＲｂはそれぞれ独立して水素、直鎖もしくは分岐鎖状のＣ1−Ｃ6アルキル、直鎖もしくは分岐鎖状のＣ2−Ｃ6アルケニル、および直鎖もしくは分岐鎖状のＣ2−Ｃ6アルキニルである)である)
を有するものである、請求項２３記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２５】
該化合物もしくはその塩が実質的に(２Ｒ)−エナンチオマーを含有しない、請求項２４記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２６】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下：
【化９】
2007191484.tif 000026
からなる群から選択される、請求項23記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２７】
ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、くえん酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１,５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバリン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、および吉草酸からなる群から選択される酸との塩である、請求項２３記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２８】
酸が塩酸である。請求項２７記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２９】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、式：
【化１０】
2007191484.tif 000027
であり、性ステロイド前駆体が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオールからなる群から選択される、請求項１から９いずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３０】
性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項１から９いずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３１】
インビボで性ステロイド前駆体へと変換される化合物が、
【化１１】
2007191484.tif 000028
(式中、ＸはＨ−、ＲＯＣ−、ＲＣＯ2ＣＨＲａ−およびＲｂＳＯ2−(Ｒは水素、直鎖または分岐鎖(Ｃ1−Ｃ18)アルキル、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アルケニル、直鎖または分岐鎖(Ｃ2−Ｃ18)アルキニル、アリール、フリル、直鎖または分岐鎖−(Ｃ1−Ｃ18)アルコキシ、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アクケニルオキシ、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アルキニルオキシ、アリールオキシ、フリルオキシ、およびこれらのハロゲン化物またはカルボキシル化類縁体からなる群から選択される；Ｒａは水素または(Ｃ1−Ｃ6)アルキルである；およびＲｂはヒドロキシル(またはその塩)、メチル、フェニルおよびｐ−トルイルからなる群から選択される)からなる群から選択される；
Ｙはカルボニル酸素であるかまたはＹはβ−ＯＸ(Ｘは上記と同意)およびα−Ｈを示す)
で示される一般式で示される化合物である、請求項２,３または８記載の医薬組成物またはキット。
【請求項３２】
インビボで性ステロイド前駆体へと変換される化合物が、
【化１２】
2007191484.tif 000029
からなる群から選択される、請求項２、３または８記載の医薬組成物またはキット。
【請求項３３】
薬学上許容される賦形剤、希釈剤または担体、治療有効量の
【化１３】
2007191484.tif 000030
および治療有効量のデヒドロエピアンドロステロンを含有する、医薬組成物。
【請求項３４】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがＴＳＥ４２４である、請求項１８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトを含む感受性温血動物に対する新規の組合せ療法を使用する、後天性骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症またはアテローム性動脈硬化症の可能性を処置または低減する方法に関する。特に、この組合せは、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の投与及び患者の性ステロイド前駆体のレベルの上昇を含み、この前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）およびアンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオール（５−ジオール）からなる群より選択される。本発明はまた、上記組合せの実施のためのキットおよび医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
多量の前駆体ステロイド、硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）およびデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）を分泌する副腎を有することは、いくつかの他の霊長類とともにヒトに特有である。硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびデヒドロエピアンドロステロンは、アンドロステンジオン（４−ジオン）に、次いで活性なアンドロゲンおよび／またはエストロゲンに末梢組織において変換される（Labrie et al., In: Important Advances in Oncology, Edited by V.T. de Vita, S. Hellmann, S.A. Rosenberg, J.B. Lippincott, Philadelphia, 193-217, 1985; Labrie, Mol. Cell. Endocrinol., 78: C113-C118, 1991; Labrie, et al., In Signal Transduction in Testicular Cells. Ernst Schering Research Foundation Workshop, Edited by V. Hansson, F.O. Levy, K. Tasken, Springer-Verlag, Berlin-New York (Suppl. 2), pp. 185-218, 1996; Labrie et al., Steroids, 62: 148-158, 1997）。最近の研究において（Labrie et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 2403-2409, 1997）、本発明者らは、２０〜８０才の男性および女性の両方におけるデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、硫酸ＤＨＥＡ（ＤＨＥＡ−Ｓ）、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオール（５−ジオール）、５−ジオール−Ｓ、５−ジオール脂肪酸エステルおよびアンドロステンジオンの循環レベルの劇的な減衰を記載した。
【０００３】
加齢の間に女性における内因性アンドロゲンが顕著に低下するにもかかわらず、閉経後の女性におけるアンドロゲンの使用は、主に、アンドロゲンについての好ましくない脂質プロフィールを示す以前の研究に基く心臓血管疾患の危険性の増加の恐れのために制限されていた。しかし、最近の研究によっては、エストロゲン単独に比較しての、エストロゲンおよびアンドロゲンの組合せ療法の、コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬの血清レベルおよびＨＤＬ／ＬＤＬ比に対する有意な効果は示されていない（Sherwin et al., Am. J. Obstet. Gynecol., 156: 414-419, 1987）。これらの観察に一致して、本発明者らは、優勢にアンドロゲン性の影響を有する化合物であるＤＨＥＡが血清脂質プロフィールに対する有害な影響を見かけ上有しないことを示した（Diamond, et al., J. Endocrinol., 150: S43-S50, 1996）。同様に、エストロジオール＋テストステロン移植物を用いる治療の６ヶ月後に、エストラジオール単独での処置において、コレステロール、その細画分またはトリグリセリドの濃度の変化は観察されていない（Burger et al., Br Med. J. Clin. Res. Ed., 294: 936-937, 1987）。ヒトにおける研究が、血清ＤＨＥＡ−Ｓと低密度リポタンパク質との間の逆の相関を示したことに言及しなければならない（Parker et al., Science, 208: 512-514, 1980）。より最近には、低血清テストステロンおよびＤＨＥＡおよび増加した内臓脂肪（より高い心臓血管の危険性のパラメーター）の間に相関が見出された（Tchernof et al., Metabolism, 44: 513-519, 1995）。
【０００４】
５−ジオールは、還元性１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１７β−ＨＳＤ）の作用を介してＤＨＥＡから生合成される化合物であり、弱いエストロゲンである。これは、ラット前下垂体細胞質ゾルにおけるエストロゲン受容体に対して、１７β−エストラジオール（Ｅ2）よりも８５倍低い親和性を有している（Simard and Labrie, J. Steoid Biochem., 26: 539-546, 1987）。このことはさらにヒト子宮筋層および乳癌組織における同じパラメーターについて得られたデータを確認する（Kreitmann and Bayard, J. Steroid Biochem., 11: 1589-1595; Adams et al., Cancer Res., 41: 4720-4926, 1981; Poulin and Labrie, Cancer Res., 46: 4933-4937, 1986）。しかし、成人女性において見出される血漿レベルの範囲に十分入る濃度で、５−ジオールは、ヒト乳癌ＺＲ−７５−１細胞において細胞増殖およびプロゲステロン受容体レベルを増強し（Poulin and Labrie, Cancer Res., 46: 4933-4937, 1986）、ＭＣＦ−７細胞において５２ｋＤａ糖タンパク質のエストロゲン依存性合成を増加させる（Adams et al., Cancer Res., 41: 4720-4926, 1981）。
【０００５】
上記のように、ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓおよび５−ジオールの血清レベルは年齢とともに低下し、これに対応して末梢標的組織におけるアンドロゲンおよびエストロゲンの形成が劇的に加齢依存的に低下することが知られている。このようなＤＨＥＡ−ＳおよびＤＨＥＡの分泌の変化の結果、性ステロイドによって刺激される生化学的および細胞性機能が顕著に低下する。その結果、ＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓは最近、性ステロイドのレベルの低下および／または不均衡に関連する種々の症状の処置に使用されている。
【０００６】
男性および女性の両方に影響を及ぼす症状である骨粗鬆症は、アンドロゲンおよびエストロゲンの低下に関連している。エストロゲンは骨分解速度を減少させることが示されており、一方アンドロゲンは骨量を増加させることが示されている。しかし、骨粗鬆症に対して一般に使用されているエストロゲン置換療法は、プロゲスチンを添加して、エストロゲンによって誘発される子宮内膜増殖および子宮内膜癌の危険性を防止すること必要とする。さらに、エストロゲンおよびプロゲスチンの両方は乳癌の危険性を増加させると考えられているので（Bardon et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 60: 692-697, 1985; Colditz et al., N. Engl. J. Med., 332: 1589-1593, 1995）、エストロゲン−プロゲスチン置換療法の使用は、通常短かすぎる期間での、限られた数の女性に許容されている。
【０００７】
いくつかの研究が、骨粗鬆症は男性におけるアンドロゲン欠乏の臨床的発現であることを示唆している（Baran et al., Calcif. Tissue Res. 26: 103-106, 1978; Odell and Swerdloff, West J. Med. 124: 446-475, 1976; Smith and Walker, Calif. Tissue Res. 22 (Suppl.): 225-228, 1976）。アンドロゲン療法は、ナンドロロンデカノエートについて観察されるように、閉経後の女性における脊椎骨塩量を増加させることが見出されている（Need et al., Arch. Intern. Med., 149: 57-60, 1989）。ナンドロロンを用いる閉経後の女性の治療は皮質骨塩含量を増加させる（Need et al., Clin. Orthop. 225: 273-278, 1987）。しかし、アンドロゲン性副作用が患者の５０％において記録された。現在の療法のほとんどずべては骨損失の減少に制限されており、骨量の増加は同化ステロイドであるナンドロロンの使用について見出されたので、このデータは興味深い。アンドロゲンによる骨形成の同様な刺激が性機能低下雄性において示唆された（Baran et al., Calcif. Tissue Res. 26: 103, 1978）。１２ヶ月間ＤＨＥＡで処置した閉経後の女性における骨形成の刺激がLabrie et al.（J. Clin. Endocrinol. 82: 3498-3505, 1997）に報告されている。
【０００８】
ＤＨＥＡ（４５０ｍｇ／ｋｇ,ｂ.ｗ.、１週間に３回）は、乳癌を発達させるように遺伝学的に育種されたＣ３Ｈマウスにおける乳癌の出現を顕著に遅延させた（Schwartz, Cancer Res. 39: 1129-1132, 1979）。さらに、膀胱癌の発達の危険性が、より低い血清ＤＨＥＡレベルを有する男性において増加することが見出された（Gordon et al., Cancer Res. 51: 1366-1369, 1991）。
【０００９】
米国特許出願第５,５５０,１０７号は、感受性温血動物における乳癌および子宮内膜癌の処置法に関し、この方法は外科手術手段（卵巣摘出術）または化学的手段（ＬＨＲＨアゴニスト（例えば、［Ｄ−Ｔｒｐ6,ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］ＬＨＲＨエチルアミド）またはアンタゴニストの使用）による卵巣ホルモン分泌の阻害を、組合せ療法の一部として含み得る。抗エストロゲン、アンドロゲン、プロゲスチン、性ステロイド形成（特に、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼまたはアロマターゼ触媒性の性ステロイド生産）のインヒビター、プロラクチン分泌および成長ホルモン分泌およびＡＣＴＨ分泌のインヒビターが考察されている。その対応出願が国際公開番号ＷＯ  ９０／１０４６２のもとに公開されている。
【００１０】
さらに、心臓血管疾患がＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓの血清レベルの低下に関連付けられており、ＤＨＥＡとＤＨＥＡ−Ｓの両方がこれらの症状を予防または処置することが示唆されている（Barrett-Connor et al., N. Engl. J. Med. 315: 1519-1524, 1986）。
【００１１】
加齢Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおいてSchwartz（Kent, Geriatrics 37: 157-160, 1982）は、食物摂取に影響を及ぼすことなくＤＨＥＡによって体重が６００ｇから５５０ｇに減少したことを観察した。Schwartz（Cancer 39: 1129-1132, 1979）は、ＤＨＥＡ（４５０ｍｇ／ｋｇ、１週間に３回）を投与したＣ３Ｈマウスが有意に少ない体重を獲得し、コントロール動物よりも長生きし、より低い体脂肪を有し、より活動的であったことを観察した。体重の減少は、食欲の喪失も食餌制限もなしに達成された。さらに、ＤＨＥＡは成熟期に肥満になるように育種された動物における体重獲得を防止し得た（Kent, Geriatrics 37: 157-160, 1982）。
【００１２】
痩身ＺｕｃｈｅｒラットへのＤＨＥＡ投与は、食物摂取の増加にかかわらず体重獲得を減少させた。処置された動物はより小さな脂肪パッドを有していた。総合すると、このことは、ＤＨＥＡが食物代謝を増加させ、その結果体重獲得および脂肪蓄積を低下させることを示唆する（Svec et al., Proc. 2nd Int. Conf. Cortisol and Anti-Cortisols, Las Vegas, Nevada, USA, p.56 abst., 1997）。
【００１３】
肥満症がＡvy変異体マウス（Yen et al., Lipids 12: 409-413, 1977）およびＺｕｃｈｅｒラット（Cleary and Zisk, Fed. Proc. 42: 536, 1983）において改善されたことが見出された。ＤＨＥＡ処置Ｃ３Ｈマウスはコントロールより若い外観を有していた（Schwartz, Cancer Res. 39: 1129-1132, 1979）。
【００１４】
ＤＨＥＡはコレステロールを与えたウサギにおけるアテローム性動脈硬化症の発生率を減少させた（Gordon et al., J. Clin. Invest. 82: 712-720, 1988; Arad et al., Arteriosclerosis 9: 159-166, 1989）。さらに、ＤＨＥＡ−Ｓの高血清濃度は、ヒトにおける心臓血管疾患に起因する死亡を保護することが報告された（Barett-Connor et al., N. Engl. J. Med. 315: 1519-1524, 1986）。ＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓの循環レベルが心臓血管疾患に起因する死亡率と逆に相関し（Barrett-Connor et al., N. Engl. J. Med. 315: 1519-1524, 1986）、免疫能力の衰弱と並行して低下することが見出された（Thoman and Weigle, Adv. Immunol. 46: 221-222, 1989）。ヒトにおける研究は、胎児血清ＤＨＥＡ−Ｓレベルと低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルの間の逆の相関を示している（Parker et al., Science 208: 512, 1980）。
【００１５】
ＤＨＥＡの使用ならびにアンドロゲンおよびエストロゲン療法の恩恵はＷＯ  ９４／１６７０９において考察されている。
【００１６】
先行技術において観察された相関は、本明細書に開示する組合せ療法ほど有効であるかまたは所望されない副作用がない処置法または予防法を示唆するとは考えられない。
【発明の開示】
【００１７】
従って、本発明の目的は、骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、乳癌、子宮内膜癌、子宮癌および卵巣癌の治療のための有用で、副作用の少ない方法を提供することを目的とする。
本発明の他の目的は、上記疾患に罹患する危険性を減ずるための方法を提供することである。
本発明のその他の目的は、上記方法に適したキットおよび医薬組成物を提供することである。
【００１８】
１の態様において、本発明は骨粗鬆症の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール（５−ジオール）からなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）を組み合わせ療法の一部として投与することを含む、骨粗鬆症の治療または骨粗鬆症の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００１９】
他の態様において、本発明は高コレステロール血症の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、高コレステロール血症の治療または高コレステロール血症の罹患危険性減少のための方法に関する。
他の態様において、本発明は高脂血症の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、高脂血症の治療または高脂血症の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２０】
さらに別の態様において、本発明はアテローム性動脈硬化症の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、アテローム性動脈硬化症の治療またはアテローム性動脈硬化症の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２１】
さらに別の態様において、本発明は乳癌の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、乳癌の治療または乳癌の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２２】
さらに別の態様において、本発明は子宮内膜癌の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、子宮内膜癌の治療または子宮内膜癌の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２３】
さらに別の態様において、本発明は子宮癌の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、子宮癌の治療または子宮癌の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２４】
さらに別の態様において、本発明は卵巣癌の治療もしくは罹患危険性減少の必要がある患者において、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを上昇させること、さらに該患者へ治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを組み合わせ療法の一部として投与することを含む、卵巣癌の治療または卵巣癌の罹患危険性減少のための方法に関する。
【００２５】
さらに別の態様において、本発明は、少なくとも１のデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよびこれらの前駆体へとインビボで変換される全てのプロドラッグからなる群から選択される性ステロイド前駆体の治療有効量を含有する第１容器；およびさらに少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量を含有する第２容器を含む、キットを提供する。
【００２６】
さらに別の態様において、本発明はａ）医薬上許容される賦形剤、希釈剤または担体；ｂ）少なくとも１のデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよびこれらの前駆体へとインビボで変換される全てのプロドラッグからなる群から選択される、性ステロイド前駆体の治療有効量および、ｃ）少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量を含む医薬組成物を提供する。
【００２７】
さらに別の態様において、本発明は乳癌に罹患する危険性を減少する必要のある患者に対して、予防有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレーターを投与することを含む、乳癌に罹患する危険性を減少する方法を提供する。
【００２８】
乳癌に罹患する可能性を減少する方法の１態様において、ＳＥＲＭの投与を性ステロイド前駆体の投与と組み合わせて行うのが望ましい。しかしながら、本発明にはＳＥＲＭ単独で投与する場合も含まれ、この態様によって図１および図２へ示されているように、性ステロイド前駆体を投与しなくとも有意な予防効果が示される。この目的に対して好ましいＳＥＲＭは本明細書中で他に使用するとして説明されるものと同じである。好ましい用量および投与方法もまた、同じである。
【００２９】
本明細書において、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ)は、直接またはその活性な代謝物が、エストロゲン受容体アンタゴニスト（抗エストロゲン)として乳房組織においては機能するが、エストロゲン作用のもしくはエストロゲン様作用を、骨組織および血清コレステロールレベル（即ち血清コレステロールの減少)においては示す化合物である。ヒトおよびラットの乳房組織に対してインビトロでエストロゲン受容体アンタゴニストとして機能する（特に、化合物がヒト乳癌細胞上で抗エストロゲンとして作用する)非ステロイド性化合物は、ＳＥＲＭとしての機能を示すものと予測される。反対に、ステロイド性の抗エストロゲン類は、ＳＥＲＭとしての作用を示さないものと考えられる、というのは、これらの化合物は血清コレステロールレベルに益する効果を何ら示さないからである。我々は非ステロイド性抗エストロゲン類を試験し、ＥＭ−８００、ＥＭ０１５３８、ラロキシフェン、タモキシフェンおよびドロロキシフェンがＳＥＲＭとして機能することを見出した。ステロイド性抗エストロゲンであるＩＣＩ182,780も試験したが、ＳＥＲＭとしての機能は無かった。本発明においてＳＥＲＭ類はこの化合物が抗エストロゲンとして使用される際に採用される用量として当業者に知られる用量と同じ用量を投与すればよい。
【００３０】
我々は、ＳＥＲＭ類の血清コレステロールに対する有益な効果と、骨および血清脂質に対する有益なエストロゲン作用もしくはエストロゲン様作用の相関関係に気づいた。我々の研究により、ＳＥＲＭが骨量、コレステロールおよびトリグリセライドレベルを含む全てのパラメーターに対して有益に作用することが示された。本発明を理論により限定するつもりはないが、ＳＥＲＭの多くのうちの特に１または２つの炭素原子で連結されている二つの芳香族環を含有するものは、分子のこの部分の構造によって、エストロゲン受容体も非常に良く認識されると考えられる。好ましいＳＥＲＭは側鎖を有しているものであり、これは乳房組織において選択的なアンタゴニスト作用を示し、他の組織においては有意なアンタゴニスト性を示さない。即ち、ＳＥＲＭ類は好ましくは乳房中で抗エストロゲンとして働き、一方で驚くべきことに、また好ましくは、エストロゲン（またはエストロゲン様活性を示すもの）として骨および血液中にて作用し、血液中では脂質およびコレステロール濃度について、好ましい作用を示す。コレステロールおよび脂質に対する好ましい作用は、コレステロールおよび脂質の異常レベルにより悪影響を受けるアテローム性動脈硬化症に対する好ましい作用へと翻訳される。
【００３１】
本発明により治療される全ての疾患に対して、アンドロゲンは好ましい反応をする。アンドロゲンそのものを用いずに、出願人らはＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオールまたはこれらのうちのいずれかの性ステロイド前駆体へと変換されるプロドラッグを用いた。インビボにおいてＤＨＥＡ−ＳはＤＨＥＡへと変換され、これが次いで５−ジオールへと変換される。これらのうちのいずれか１に対して好ましい反応を示す組織は、別の化合物に対しても好ましく反応する可能性が高い。活性代謝物のプロドラッグ形は当業者に良く知られている：H. Bundgaard "Design and Application of Prodrugs" (A Textbook of Drug Design and Development中、H. BundgaardとP. Krogsgaard-Larsen編集; Harwook Academic Publishers GmfH, Chur: Switzerland, 1991)を参照されたい。本文献の内容は引用によって本明細書に含まれる。特に１５４-１５５頁には、活性代謝物の様々な官能基および、インビボでこれらの官能基へと変換される適当な対応プロドラッグ基が開示されている。本発明において患者の性ステロイド前駆体のレベルを上昇させるには、該前駆体を投与するか、あるいは該前駆体のプロドラッグを投与すれば良い。アンドロゲンではなく前駆体を用いることによって、標的ではない組織においける好ましくないアンドロゲン性活性を減少させることができる。組織がＤＨＥＡなどの前駆体をアンドロゲン類に変換させるのは、天然のそして非常に調節されたしくみによる。アンドロゲンの多くの部分は局所の抹消組織において産生され、その程度は各組織により異なる。
【００３２】
本発明によって治療される癌は、エストロゲン活性に対して不利に応答する。一方、骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂結晶およびアテローム性動脈硬化症はエストロゲンもしくは硫酸エストロゲンに対して有利に応答する。本発明によってＳＥＲＭ類を用いることにより、特定の他の組織において好ましくない作用を惹起することなく標的組織に対して所望の作用が与えられる。例えば、ＳＥＲＭは骨においては(または脂質やコレステロールに対しては)好ましく作用する一方、乳房においての好ましくないエストロゲン性作用を生じない。
【００３３】
即ち、前駆体およびＳＥＲＭの両方は、標的組織において好ましく作用し、一方で特定の他の組織における好ましくない作用を最小化する。さらに、この２つを本発明により共に用いることにより、顕著な相乗作用もまた得られる。例えば、エストロゲン類およびアンドロゲン類は骨粗鬆症に対して有益な作用を、別の機構により及ぼす(エストロゲンは骨の再吸収を減少し、アンドロゲンは骨形成に寄与する)。本発明の組み合わせは骨に対してＳＥＲＭの有益なエストロゲンもしくはエストロゲン様作用を及ぼし、そして骨内での局所的な前駆体からアンドロゲンへの変換によるアンドロゲンもまた、有益な作用を及ぼす。前駆体はエストロゲンもまた供するものであると考えられている。脂質またはコレステロールの制御についても、同じことが言え、アテローム性動脈硬化症の治療もしくは予防に有用である。同様の相乗効果は、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌または子宮癌に対しても提供され、ＳＥＲＭが好ましい抗エストロゲン作用を及ぼし、前駆体が好ましいアンドロゲン作用を示す(付随して生じる前駆体のエストロゲンへの変換は、抗エストロゲンによって緩和される)。好ましくない作用もまた、本発明で採用されている組み合わせによって緩和される。本出願において議論されている全ての疾患に対して作用させる際、前駆体により(本発明に基づき前駆体をアンドロゲン作用の増強に用いた場合)生成するエストロゲン類の乳房組織に対する他のいかなる作用も乳房組織中のＳＥＲＭの抗エストロゲン活性により緩和される。
【００３４】
いくつかの態様においては、プロゲスチン類を更なるアンドロゲン作用のために添加してもよい。プロゲスチン類は低い容量で用いられ、アンドロゲン受容体以外の受容体、例えばグルココルチコイド受容体に対して不利益な作用を示さないことが当業者に知られている。プロゲスチン類はまた、比較的好ましくないアンドロゲン性副作用(女性患者の顔への発毛など)が少ない。
【００３５】
本明細書にて記載する好ましいＳＥＲＭ類は(１)本発明により影響を受けるとされる全ての疾病；(２)治療および予防の両方への適用；および(３)好ましい医薬組成物およびキットに関与する。
【００３６】
１の態様において、前駆体はＤＨＥＡである。
別の態様において、前駆体はＤＨＥＡ−Ｓである。
別の態様において、前駆体は５−ジオールである。
【００３７】
特定の疾患の治療またはその発症の危険性を減ずる必要のある患者とは、該疾患に罹患していると診断が下されたか、または該疾患に罹患しやすいと予測される患者である。
【００３８】
特に断らない限り、本発明の活性化合物の投与量(濃度および投与方法)についての好ましい用量は、治療および予防目的のいずれの場合でも同じとしてよい。明細書中に記載されている各活性成分の用量は、治療する疾患(もしくは、発症の危険性を減少させる疾患)にかかわらず同じとしてよい。
【００３９】
特に断わっている場合と、文脈から明らかな場合を除き、本明細書において用量は活性成分の重量で表記し、薬剤の賦形剤、希釈剤、担体または他の成分を含まない。ただし、かかる追加成分は好ましくは、本願実施例に示されるように含有されている。本発明において、通常製薬業界で用いられているいかなる投与形態(カプセル、錠剤、注射剤など)を用いてもよい。「賦形剤」、「希釈剤」、「担体」の語は、製薬業界で常用される製剤中に通常活性成分と共に含まれる不活性成分である。例えば、典型的なカプセル、ピル、腸溶性被覆剤、固体または液体希釈剤もしくは賦形剤、香料、保存料などを含んでいてもよい。
【００４０】
本明細書で議論された治療のいずれかにおいて用いられる活性成分は全て、１または複数の他の活性成分を含有する医薬組成物として処方してもよい。または、各活性成分を個別ではあるが、十分に近い時間に投与して、患者において各活性成分の血中濃度が同時に上昇するか、または患者が各活性成分(または戦略)の利益を同時に享有できるようにしてもよい。本発明の好ましい態様において、例えば１または複数の活性成分を単一の医薬組成物として処方してもよい。本発明の他の態様においては、少なくとも２つの容器を含み、含有される活性成分に関して、少なくとも１の容器の内容物の、全体あるいは一部が、これとは別の少なくとも１の容器の内容物と相違するキットが提供される。
【００４１】
本明細書で議論する組み合わせ療法には、活性成分(の組み合わせ)の、問題となっている疾患の治療(または危険減少)のための医薬の製造のための使用であって、該治療または予防に、本発明の組み合わせに用いられる他の活性成分が使用される場合も含まれる。例えば、ある態様として本発明は、ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオールおよびこれらの性ステロイド前駆体へとインビボで変換されるプロドラッグからなる群から選択される性ステロイド前駆体と組み合わせて、この組み合わせ療法が有用であると考えられる疾患(即ち乳癌、子宮内膜癌、子宮癌、卵巣癌、骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症およびアテローム性動脈硬化症)の治療に用いるための医薬を製造するための、ＳＥＲＭの使用を提供する。他の態様においては、本発明はＳＥＲＭと組み合わせて上記と同じ疾患の治療のために使用するための医薬を製造するための、、ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオールおよびこれらの性ステロイド前駆体へとインビボで変換されるプロドラッグからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用を提供する。
【００４２】
本発明の１の態様において、ＤＨＥＡは前駆体として用いられない。他の態様において、ＥＭ−８００はＳＥＲＭとして用いられない。別の態様において、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組み合わせは用いられない。
ある好ましい態様において、ＤＨＥＡはＥＭ−１５３８と組み合わせて用いられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４３】
エストロゲンが乳房上皮細胞の増殖を刺激することはよく知られており、細胞増殖自体は新形成を生じ得るランダムな遺伝子の誤りを蓄積させることによって癌の危険性を増加させると考えられている（Preston Martin et al., Cancer. Res. 50: 7415-21, 1990）。この概念に基いて、抗エストロゲンが、エストロゲンによって刺激される細胞分裂の速度を低下させる目的で乳癌の防止のために導入されている。
【００４４】
１０月齢後の雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて見出された卵巣周期の消失は、血清エストロゲンおよびプロラクチンのレベルの上昇ならびに血清アンドロゲンおよびプロゲステロンの濃度の低下を伴う（Lu et al., 61st Annual Meeting of the Endocrine Society 106 (abst. #134), 1979; Tang et al., Biol. Reprod. 31: 399-413, 1984; Russo et al., Monographs on Pathology of Laboratory Animals: Integument and Mammary Glands 252-266, 1989; Sortino and Wise, Endocrinology 124: 90-96, 1989; Cardy, Vet. Pathol. 28: 139-145, 1991）。加齢雌性ラットにおいて自発的に生じるこれらのホルモンの変化は、腺房／肺胞組織の多病巣性増殖および分泌活性の増加ならびに乳腺管拡張および嚢の形成に関連する（Boorman et al., 433, 1990; Cardy, Vet. Pathol. 28: 139-145, 1991）。ラット乳腺の過形成的および新形成的変化が、エストロゲンおよびプロラクチンのレベルの上昇をしばしばを伴うことに言及すべきである（Meites, J. Neural. Transm. 48: 25-42, 1980）。本発明のＳＥＲＭであるＥＭ−８００での処置は、乳腺の萎縮を誘発し、これは小葉構造のサイズおよび数の減少によって特徴付けられ、分泌活性の証拠はない。このことは乳腺におけるＥＭ−８００の強力な抗エストロゲン活性を示す（Luo et al. Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）。
【００４５】
本発明の性ステロイド前駆体であるＤＨＥＡでの処置は、血清ＤＨＥＡおよび５−ジオールの上昇を導き、血清４−ジオン、テストステロン、ジヒドロテストステロンおよびエストラジオールのレベルは中程度にのみ上昇するか、しばしば変化しないままである。このことは末梢組織におけるこの前駆体ステロイドの細胞内生体内変化を確認する（Labrie et al., Mol. Cell. Endocrinol. 78: C113-C118, 1991）。しかし、経口投与したＤＨＥＡの血清アンドロゲン（例えば、テストステロンおよびジヒドロテストステロン）に対する刺激効果は、血清エストロゲンに対する効果よりも大きい。このことは、ＤＨＥＡがこれらの動物において優勢にアンドロゲンに変換されることを示唆する。この観察は、ＤＨＥＡからのアンドロゲンの形成がＤＨＥＡのエストロゲンへの変換よりも重要な経路である女性において得られたデータと一致する（Morales et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 78: 1360-1367, 1994; Labrie et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 774: 16-28, 1995; Labrie et al., Steroids 62: 148-158, 1997）。
【００４６】
上記の、乳腺に対するＤＨＥＡの、乳腺萎縮を生じる強力な抗エストロゲン活性および優勢なアンドロゲン性効果についての知識をもって、ＳＥＲＭおよび性ステロイド前駆体の組合せで処置した動物において見られる組織形態学的変化は、ラット乳腺におけるＤＨＥＡの無競争のアンドロゲン作用によって最もよく説明される。
【００４７】
最も重要なことに、アンドロゲンがインビトロにおいてＺＲ−７５−１ヒト乳癌細胞の増殖に対する直接的な抗増殖活性を示すこと、およびアンドロゲンのこのような阻害効果が抗エストロゲンの効果に相加的であることが観察された（Poulin and Labrie, Cancer Res. 46: 4933-4937, 1986; Poulin et al., Breast Cancer Res. Treat. 12: 213-225, 1988）。同様な阻害効果が、ヌードマウスにおけるＺＲ−７５−１異種移植片についてインビボにおいて観察された（Dauvois et al., Cancer Res. 51: 3131-3135, 1991）。アンドロゲンも、ラットにおけるＤＭＢＡ誘発性乳癌の成長を阻害することが示され、この阻害は純粋な抗アンドロゲンであるフルタミドの同時投与によって逆転された（Dauvois et al., Breast Cancer Res. Treat. 14: 299-306, 1989）。総合すると、本データは乳癌に対するＤＨＥＡの阻害作用へのアンドロゲン受容体の関与を示す。
【００４８】
抗エストロゲンおよび性ステロイド前駆体は異なる機構を介して乳癌に対する阻害効果を発揮するので、図１および２に示すように、本発明はＳＥＲＭ（ＥＭ−８００）と性ステロイド前駆体（ＤＨＥＡ）の組合せが、単独で使用したそれぞれの化合物よりも強力な、ＤＭＢＡ誘発性ラット乳癌の発達に対する阻害効果を発揮することを示す。実際、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の両方を投与した動物においては実験の終了時にＤＭＢＡ誘発性腫瘍は見出されなかった。
【００４９】
本発明は、性ステロイド前駆体（ＤＨＥＡ）とＳＥＲＭ（ＥＭ−８００）の組合せが、両方の化合物を組合せた場合に、尿ヒドロキシプロリンおよびカルシウム排出のさらなる減少によって示されるように、骨形成に対するＤＨＥＡの刺激効果を維持し、骨代謝回転および骨吸収に対するＳＥＲＭ（ＥＭ−８００）単独の阻害効果を増強したことを記載する。
【００５０】
本発明者らは、ＤＨＥＡが雌性ラット（Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）および閉経後の女性（Labrie et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 82: 3498-3505, 1997）の両方において骨に対する有益な効果を有することを示した。インタクトな雌性ラットにおいて、ＤＨＥＡでの処置は、全骨格、腰椎および大腿の骨塩量（bone mineral density）（ＢＭＤ）を増加させる（Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）。
【００５１】
一方、ＥＭ−８００での処置はインタクトな動物におけるＢＭＤに対する有意な効果を有しなかったが、強力な刺激効果が卵巣摘出ラットにおいて観察された（Martel et al., 未発表データ）。ＥＭ−８００は卵巣摘出ラットにおいて全骨格、腰椎および大腿のＢＭＤに対する刺激効果を示すので、インタクトな動物においてＥＭ−８００の有意な刺激効果がないことは、インタクトな雌性ラット中に存在する性ステロイドがＢＭＤに対する最大効果を発揮するという事実に起因する可能性がある（Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）。同様に、既にＤＨＥＡを投与された卵巣摘出ラットにおけるＥＭ−８００の有意な効果がないことは、おそらく外因性ＤＨＥＡから骨細胞において合成されたアンドロゲン（およびおそらくエストロゲン）によって発揮される最大刺激効果に起因する。
【００５２】
エストロゲンは血清コレステロールを低下させるが、血清トリグリセリドレベルは増加させるかまたはそれに対して効果を有しないことが知られている（Love et al., Ann. Intern. Med. 115: 860-864, 1991; Walsh et al., New Engl. J. Med. 325: 1196-1204, 1991; Barrett-Connor, Am. J. Med. 95 (Suppl. 5A): 40S-43S, 1993; Russell et al., Atherosclerosis 100: 113-122, 1993; Black et al., J. Clin. Invest. 93: 63-69, 1994; Dipippo et al., Endocrinology 136: 1020-1033, 1995; Ke et al., Endocrinology 136: 2435-2441, 1995）。図３は、ＥＭ−８００がラットにおいて低コレステロール効果および低トリグリセリド効果の両方を有することを示し、従って、タモキシフェン（Bruning et al., Br. J. Cancer 58: 497-499, 1988; Love et al., J. Natl. Cancer Inst. 82: 1327-1332, 1990; Dipippo et al., Endocrinology 136: 1020-1033, 1995; Ke et al., Endocrinology 136: 2435-2441, 1995）、ドロロキシフェン（Ke et al., Endocrinology 136: 2435-2441, 1995）およびラロキシフェン（Black et al., J. Clin. Invest. 93: 63-69, 1994）のような他のＳＥＲＭとは見かけ上異なる血清脂質プロフィールに対する特有の作用を示す。ＤＨＥＡとＥＭ−８００の組合せはＥＭ−８００の低コレステロール効果および低トリグリセリド効果を維持した。このことはこの組合せが血清脂質に対する有益な効果を示し得ることを示唆する。
【００５３】
血清脂質プロフィールはラットとヒトの間で顕著に異なることに言及するべきである。しかし、エストロゲン受容体媒介性機構がエストロゲンおよび抗エストロゲンの低コレステロール効果に関与しているので（Lundeen et al., Endocrinology 138: 1552-1558, 1997）、ラットは依然としてヒトにおけるエストロゲンおよび「抗エストロゲン」のコレステロール低下効果研究用の有用なモデルである。
【００５４】
すなわち、上記のデータは、ＳＥＲＭ（ＥＭ−８００）および性ステロイド前駆体（ＤＨＥＡ）の組合せの、ＤＭＢＡによって誘発される乳癌の発達に対する効果、ならびに、この組合せの、骨量および血清脂質に対する保護効果を明らかに示す。このデータは、脂質プロフィールを改善する一方で骨粗鬆症を処置および防止するこの組合せのさらなる有益な効果を示唆する。
【００５５】
本発明者らは、また、ヌードマウスにおけるヒトＺＲ−７５−１乳癌異種移植片の増殖に対する新規抗エストロゲン（ＥＭ−８００）の阻害作用と性ステロイド前駆体（ＤＨＥＡ）の阻害作用との起こり得る相互作用をこの２つの薬物を組み合わせて投与することにより研究した。図４および図５は、ＤＨＥＡは、単独で、用いた投与量では、腫瘍増殖の５０〜８０％の阻害を引き起こすが、低投与量の抗エストロゲンで得られた腫瘍増殖のほぼ完全な阻害は、ＤＨＥＡの影響を受けなかったことを示している。
【００５６】
骨ミネラル密度（ＢＭＤ）測定の限界はよく知られている。例えば、ＢＭＤ測定は、ステロイド系抗エストロゲンＩＣＩ １８２７８０で処置したラットにおいては全く変化を示さなかった（Wakeling, Breast Cancer Res. Treat. 25: 1-9, 1993）が、組織体型測定により阻害の変化が見られた（Gallagher et al., Endocrinology 133: 2787-2791, 1993）。同様の差異がタモキシフェン（Tamoxifen）について報告された（Jordan et al., Breast Cancer Res. Treat. 10: 31-35, 1987；Sibonga et al., Breast Cancer Res. Treatm. 41: 71-79, 1996）。
【００５７】
骨ミネラル密度の低下は、骨強度の低下に関与する唯一の異常性ではないことが指摘されている（Guidelines for preclinical and clinical evaluation of agents used in the prevention or treatment of postmenopausal osteoporosis, Division of Metabolism and Endocrine Drug Products, FDA, 1994年5月）。かくして、種々の化合物および処置により誘発される骨代謝の生化学的パラメーターの変化を、それらの作用のより十分な知識を得るために分析することが重要である。
【００５８】
ＤＨＥＡとＥＭ−８００との組合せが骨代謝の重要な生化学的パラメーターに対して意外な有益な作用を及ぼしたことを指摘することが特に重要である。実際、ＤＨＥＡ単独では、骨吸収のマーカーである尿ヒドロキシプロリン／クレアチニン比に影響を及ぼさない。さらにまた、ＤＨＥＡの、毎日の尿カルシウムまたはリン排出に対する作用は検出されなかった（Luo et al., Endocrinology 138; 4435-4444, 1997）。他方、ＥＭ−８００は、尿ヒドロキシプロリン／クレアチニン比を４８％低下させるが、ＤＨＥＡと同様に、ＥＭ−８００の尿カルシウムまたはリン排出に対する作用はみられなかった。さらにまた、ＥＭ−８００は、骨形成のマーカーである血清アルカリホスファターゼ活性に対して影響を及ぼさなかったが、ＤＨＥＡは、該パラメーターの値を約７５％低下させた（Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）。
【００５９】
ＤＨＥＡとＥＭ−８００との組合せの意外な作用の一は、骨吸収のマーカーである尿ヒドロキシプロリン／クレアチニン比に関与しており、これは、ＤＨＥＡとＥＭ−８００とを組み合わせた場合には６９％低下し、この値は、ＥＭ−８００単独により得られる４８％阻害とは統計学的に異なる（ｐ＜０.０１）が、ＤＨＥＡ単独による影響は全く示されなかった。かくして、ＥＭ−８００にＤＨＥＡを添加すると骨吸収に対するＥＭ−８００の阻害作用が５０％上昇した。最も重要なことには、ＥＭ−８００にＤＨＥＡを添加することによるもう１つの意外な作用は、尿カルシウムが約８４％低下し（１００ｇあたり２４時間につき２３.１７±１.５５から３.７１±０.７５μｍｏｌへ（ｐ＜０.０１））、尿リンが５５％低下した（１００ｇあたり２４時間につき１３２.７２±６.０８から５９.０６±４.７６μｍｏｌへ（ｐ＜０.０１））（各々、Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）。
【００６０】
【表１】
2007191484.tif 000002
【００６１】
血清コレステロールに対するＥＭ−８００の有効な阻害作用がＤＨＥＡとの同時処置により妨げられない（Luo et al., Endocrinology 138: 4435-4444, 1997）ことに注目するのは重要なことである。
【００６２】
ラロキシフェン（Raloxifene）および同様の化合物は、骨損失を防止し、血清コレステロール（例えば、エストロゲン）を減少させるが、ラロキシフェンをＢＭＤについてプレマリン（Premarin）と比較すると、ラロキシフェンのＢＭＤに対する作用は、プレマリンの作用よりもあまり有効ではなかったことが言及されている（Minutes of the Endocrinology and Metabolism Drugs Advisory Committee, FDA Thursday, Meeting #68, 1997年11月20日）。
【００６３】
ラットにおいて得られた本結果は、明らかに、ＥＭ−８００、ラロキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の単独使用にあっては欠けている有益な効果をＤＨＥＡが与えることができることを示している。ＳＥＲＭは、骨吸収の阻害に限定された効果を与えるが、ＤＨＥＡ、５−ジオール、ＤＨＥＡ−５の添加は、骨形成を刺激する（ＳＥＲＭまたはエストロゲンにあっては見出されなかった作用）と考えられ、さらに、ＥＭ−８００を用いて得られた作用以上に骨吸収を低下させる。
【００６４】
重要なことには、卵巣摘出ラットをＥＭ−８００およびＤＨＥＡの組合せで１２ヶ月間処置すると、骨体型測定に対する有益な効果が得られる。小柱骨（trabecular bone）体積は、骨強度について、および骨折の予防に、特に重要である。かくして、上記研究において、脛骨の小柱骨体積は、ＤＨＥＡ単独にあっては卵巣摘出ラットにおいて４.１±０.７％から１１.９±０.６％に増加した（ｐ＜０.０１）が、ＤＨＥＡにＥＭ−８００を添加すると、小柱骨体積が、無傷対照において見出された値と同様の値である１４.７±１.４％にさらに増加した（図６）。
【００６５】
ＤＨＥＡで処置した結果、卵巣摘出対照と比較して卵巣摘出ラットにおける小柱骨数が０.５７±０.０８個／ｍｍの値から１３７％増加した。かくして、ＤＨＥＡの刺激作用は、１.２７±０.１個／ｍｍに達したが、ＥＭ−８００およびＤＨＥＡによる同時処置により、小柱骨数は、ＤＨＥＡ単独により得られた小柱骨数と比較してさらに２８％増加した（ｐ＜０.０１）（図７）。同様に、ＤＨＥＡにＥＭ−８００を添加した結果、小柱骨分離がＤＨＥＡ単独で得られた小柱骨分離と比較してさらに１５％低下し（ｐ＜０.０５）、かくして、無傷対照において見られた値とは異ならない値となった。
【００６６】
図６および図７にて示された数値データの補足として、図８は、卵巣摘出対照（Ｂ）と比較して、処置した卵巣摘出動物（Ｃ）におけるＤＨＥＡにより誘発された近位脛骨骨幹線の小柱骨体積の増加、およびＤＨＥＡにフルタミド（Flutamide）を添加して処置した後のＤＨＥＡの刺激作用の部分阻害（Ｄ）を例示している。他方、ＤＨＥＡをＥＭ−８００と組み合わせて投与することにより卵巣摘出誘発性オステオペニアが完全に予防され（Ｅ）、小柱骨体積は、無傷対照において見られた該体積に匹敵した（Ａ）。
【００６７】
女性の月経閉止期にみられる骨損失は、骨形成の二次的増加により完全には相殺されない骨吸収率の増加に関与していると考えられる。実際、骨形成および骨吸収の両方のパラメーターは、骨粗鬆症において増大し、骨吸収および形成は、共に、エストロゲン置換療法により阻害される。かくして、骨形成に対するエストロゲン置換の阻害作用は、骨吸収の一次エストロゲン誘発性減少が骨形成の減少を引き起こすような骨吸収および骨形成間で連結したメカニズムにより引き起こされると考えられる（Parfitt, Calcified Tissue International 36 Suppl. 1: S37-S45, 1984）。
【００６８】
海綿骨強度および二次的な骨折抵抗性は、海綿骨の全量に依存するだけでなく、小柱の数、大きさおよび分布により決定される小柱微小構造にも依存する。。月経閉止後の女性の卵巣機能の喪失は、全小柱骨体積の有意な減少を伴い（Melsen et al., Acta Pathologica & Microbiologica Scandinavia 86: 70-81, 1978；Vakamatsou et al., Calcified Tissue International 37: 594-597, 1985）、主に、小柱の数の減少および幅の減少と関係している（Weinstein and Hutson, Bone 8: 137-142, 1987）。
【００６９】
本研究において、ＤＨＥＡのアンドロゲン刺激作用は、研究されたほとんど全ての骨組織体型測定パラメーターについて観察された。かくして、ＤＨＥＡは、小柱骨体積および小柱数の有意な増加を引き起こすが、一方、小柱間面積は減少した。
【００７０】
本明細書で検討するいずれもの適応症について本発明の組合せ治療を容易にするために、本発明は、同時投与用の単一組成物中にＳＥＲＭまたはビスホスホネート化合物および性ステロイド前駆体（ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオール）の両方を含む医薬組成物を意図する。該組成物は、経口投与、皮下注射、筋肉注射または経皮投与を包含するがこれらに限定されるものではない伝統的な方法での投与に適している。他の実施態様において、分離容器中または１個の容器中に１つまたはそれ以上のＳＥＲＭまたはビスホスホネートおよび性ステロイド前駆体を含むキットが提供される。該キットは、錠剤、カプセル剤、シロップ剤などの経口投与用の適当な物質、および軟膏剤、ローション剤、ゲル剤、クリーム剤、徐放性パッチ剤などの経皮投与用の適当な物質を含んでよい。
【００７１】
本出願人は、ＳＥＲＭおよび性ステロイド前駆体の投与が骨粗鬆症、乳癌、高コレステロール血症、高脂血症またはアテローム性動脈硬化症の治療および／またはその発生の予防における利用能を有すると考えている。本発明の有効成分（ＳＥＲＭまたは前駆体またはビスホスホネートまたはその他）は、種々の方法で製剤化され、投与される。
【００７２】
経皮または経粘膜用の有効成分は、好ましくは、医薬組成物の全重量に対する０.５重量％〜２０重量％で、より好ましくは、２〜１０％で存在している。ＤＨＥＡまたは５−ジオールは、経皮投与用には少なくとも７％の濃度であるべきである。別法として、有効成分は、当該技術分野で知られている構造、例えば、EP 0279982 に記載されているような構造を有する経皮パッチ中に含まれてもよい。
【００７３】
軟膏剤、ローション剤、ゲル剤またはクリーム剤などとして製剤化する場合、活性化合物を、ヒトの皮膚または粘膜に適しており、かつ、皮膚または粘膜を介する化合物の経皮浸透を増強する適当な担体と混合する。適当な担体は、当該技術分野で知られており、Klucel HFおよびGlaxal基剤が挙げられるがこれらに限定されるものではない。市販品もあり、例えば、グラクサル・カナダ・リミテッド・カンパニー（Glaxal Canada Limited Company）から入手可能なGlaxal基剤がある。他の適当なビヒクルは、Koller and Buri, S.T.P. Pharma 3(2), 115-124, 1987 にて見つけることができる。該担体は、好ましくは、有効成分が有効成分の使用濃度で室温で可溶性であるものである。該担体は、皮膚または粘膜の局部を介して所望の臨床効果を生じるであろう血流中に前駆体を浸透させるのに十分な時間ランニングまたは蒸発させずに当該組成物を塗布した皮膚または粘膜の局部上に阻害剤を維持するのに充分な粘性を有する。該担体は、典型的には、医薬上許容される溶媒および増粘剤などのいくつかの成分の混合物である。水とエタノールのようなアルコールなどの有機溶媒と無機溶媒との混合液は、親水性および親油性の溶解性を補助することができる。
【００７４】
好ましい性ステロイド前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）（米国イリノイ州シカゴのジオシンス・インコーポレイテッド（Diosynth Inc.）から入手可能）、そのプロドラッグ（米国ニューハンプシャー州ウィルトンのステラロイズ（Steraloids）から入手可能）、５−アンドロステン−３β,１７β−ジオールならびにそのプロドラッグであるＥＭ−１３０４およびＥＭ−０１４７４−Ｄ（米国ニューハンプシャー州ウィルトンのステラロイズから入手可能）である。
【００７５】
ＥＭ−１３０４
【化１】
2007191484.tif 000003
【００７６】
ＥＭ−０１４７４−Ｄ
【化２】
2007191484.tif 000004
【００７７】
性ステロイド前駆体は、２.０〜１０％のカプリル酸−カプリン酸トリグリセリド（Neobee Ｍ−５）；１０〜２０％のヘキシレングリコール；２.０〜１０％のジエチレングリコールモノメチルエーテル（Transutol）；２.０〜１０％のCyclomethicone（Dow Corning 345）；１.０〜２％のベンジルアルコールおよび１.０〜５.０％のヒドロキシプロピルセルロース（Klucel HF）を含有するアルコール性ゲル剤として製剤化されるのが好ましい。
【００７８】
該担体は、また、軟膏剤およびローション剤にて通常用いられており、化粧品および医薬の分野でよく知られている種々の添加剤を含んでもよい。例えば、フレグランス、抗酸化剤、香料、ゲル化剤、カルボキシメチルセルロースのような増粘剤、界面活性剤、安定剤、皮膚軟化剤、着色料および他の同様の薬剤が存在してもよい。全身性疾患の処置に用いる場合、有効成分の過剰な局所濃度および性ステロイド前駆体のアンドロゲン代謝により起こり得る皮膚および皮脂腺の過剰な刺激を回避するために皮膚上の適用部位を変える。
【００７９】
経口投与用医薬組成物において、ＤＨＥＡまたは他の前駆体は、好ましくは、該組成物の全重量に対して５〜９８重量％、さらに好ましくは、５０〜９８％、特に、８０〜９８％の濃度で存在する。ＤＨＥＡのような単一の前駆体が唯一の有効成分であってもよく、また、別法として、複数の前駆体および／またはそれらのアナログを用いてもよい（例えば、ＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓ、５−ジオールの組合せ、インビボでＤＨＥＡ、ＤＨＥＡ−Ｓまたは５−ジオールに転換される２種類またはそれ以上の化合物の組合せ、またはＤＨＥＡまたは５−ジオールとインビボでＤＨＥＡもしくは５−ジオールに転換される１種類またはそれ以上のそのアナログとの組合せなど）。ＤＨＥＡの血中レベルは、適当な用量の最終基準であり、吸収および代謝における個々の変化を考慮に入れる。
【００８０】
好ましくは、所属臨床医は、特に、治療開始時に、個々の患者の全応答およびＤＨＥＡの血清レベルをモニターし（上記した好ましい血清濃度と比較）、処置に対する患者の全応答をモニターし、所定の患者の処置に対する代謝または反応が典型的ではない場合には必要に応じて用量を調節する。
【００８１】
本発明の処置は、無期限の継続に適している。ＤＨＥＡおよび／または５−ジオール処置は、月経閉止期前の女性（１リットル当たり４〜１０μｇの血清濃度）または若い成人男性（１リットル当たり４〜１０μｇの血清濃度）において自然に生じるＤＨＥＡレベルと同様の範囲内のＤＨＥＡレベルを簡単に維持すると考えられる。
【００８２】
ＳＥＲＭ化合物またはビスホスホネートおよび／または性ステロイド前駆体は、また、経口経路によって投与することができ、慣用的な医薬賦形剤、例えば、スプレイ乾燥ラクトース、微結晶性セルロース、およびステアリン酸マグネシウムを用いて経口投与用錠剤またはカプセル剤に製剤化できる。
【００８３】
有効成分は、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムまたはリン酸二カルシウムなどの固形の粉状担体物質、およびポリビニルピロリドン、ゼラチンまたはセルロース誘導体などの結合剤と混合することにより、可能であれば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、「カルボワックス」（Carbowax）またはポリエチレングリコールなどの滑沢剤もまた添加することにより錠剤または糖衣丸コアに加工することができる。もちろん、経口投与剤形の場合、味を改善する物質を添加することもできる。
【００８４】
さらなる剤形として、プラグカプセル剤、例えば、ハードゼラチンのプラグカプセル剤、および軟化剤または可塑剤、例えば、グリセリンを含む密閉型ソフトゼラチンカプセルを用いることができる。該プラグカプセル剤は、有効成分を、好ましくは、顆粒剤の剤形で、例えば、充填剤、例えば、ラクトース、サッカロース、マンニトール、デンプン、例えば、ポテトデンプンまたはアミロペクチン、セルロース誘導体または高分散ケイ酸との混合物で含有する。ソフトゼラチンカプセル剤において、活性物質は、好ましくは、植物油または液体ポリエチレングリコールなどの適当な液体に溶解または懸濁する。
【００８５】
ローション剤、軟膏剤、ゲル剤またはクリーム剤は、過剰量がはっきりと目視できないように皮膚に完全にすり込み、該皮膚は、経皮浸透の大部分が生じるまで、好ましくは、少なくとも４時間、より好ましくは、少なくとも６時間、その部分を洗浄しない。
【００８６】
経皮パッチを用いて、既知の技術に従って前駆体をデリバリーしてもよい。典型的には、非常に長期間、例えば、１〜４日間、適用されるが、典型的には、狭い表面積に有効成分を接触させ、有効成分をゆっくりと一定にデリバリーする。
【００８７】
開発されて一般に用いられている多くの経皮薬物デリバリーシステムは、本発明の有効成分のデリバリーに適している。放出速度は、典型的には、マトリックス拡散、または、有効成分の制御膜通過により制御される。
【００８８】
経皮装置の機械的な態様は、当該技術分野において十分に知られており、例えば、米国特許第5,162,037号、第5,154,922号、第5,135,480号、第4,666,441号、第4,624,665号、第3,742,951号、第3,797,444号、第4,568,343号、第5,064,654号、第5,071,644号、第5,071,657号に説明されている（出典明示により本明細書の記載とする）。付加的な背景は、欧州特許0279982およびイギリス特許出願2185187により提供される。
【００８９】
該装置は、接着マトリックスおよびリザーバー型経皮デリバリー装置を包含する当該技術分野で一般的なタイプのいずれであってもよい。該装置は、有効成分および／または担体を吸収する繊維を取込んだ薬物含有マトリックスを包含する。リザーバー型装置において、該リザーバーは、担体および有効成分を透過できない高分子膜により定義される。
【００９０】
経皮装置において、該装置自体は、所望の局所皮膚表面と接触した有効成分を維持する。かかる装置では、担体の有効成分に対する粘性は、クリーム剤またはゲル剤に関するよりもあまり関係がない。経皮装置用の溶媒系としては、例えばオレイン酸、線状アルコールラクテートおよびジプロピレングリコール、または当該技術分野で知られている他の溶媒系が挙げられる。有効成分は、担体に溶解しても、または、懸濁してもよい。
【００９１】
皮膚への付着について、中央に穴をあけた外科的絆創膏に経皮パッチを載せることができる。接着剤は、好ましくは、使用前に保護するために剥離ライナーにより覆われている。剥離に適している典型的な物質としては、ポリエチレンまたはポリエチレン塗布紙が挙げられ、好ましくは、取り外しの容易さのためにシリコーン塗布されている。該装置を適用するには、剥離ライナーは、簡単に剥ぎ取られ、接着剤が患者の皮膚に付着する。米国特許第5,135,480号において、Bannon et al. は、皮膚に装置を固定する非接着手段を有する代替装置を開示している（その開示内容は出典明示により本明細書の記載とする）。
【００９２】
本発明の経皮または経粘膜デリバリーシステムは、また、骨粗鬆症、またはアンドロゲンおよび／またはエストロゲンによる処置に対して有利に応答する他の疾患の予防および／または治療用の新規かつ改良されたデリバリーシステムとして用いることもできる。
【００９３】
本発明の選択的エストロゲン受容体モジュレーターは、以下の特徴をもつ分子式を有する：ａ）２個の芳香環が１個または２個の介在炭素原子により離間しており、両方の芳香環が非置換であるか、または、ヒドロキシル基またはインビボでヒドロキシルに転換される基により置換されている；ｂ）側鎖が芳香環および第三アミン官能基またはその塩を有している。
【００９４】
本発明の一の好ましいＳＥＲＭは、PCT/CA96/00097（WO 96/26201）に報告されているＥＭ−８００である。ＥＭ−８００の分子構造は、以下のとおりである。
【化３】
2007191484.tif 000005
【００９５】
本発明のもう１つの好ましいＳＥＲＭは、ＥＭ−０１５３８である。
【化４】
2007191484.tif 000006
【００９６】
ＥＭ−１５３８（ＥＭ−６５２ ＨＣＬとも称される）は、ＥＭ−８００と比べて有効な抗エストロゲンＥＭ−６５２の塩酸塩であり、ＥＭ−１５３８は、合成するのがより簡単かつ容易である。単離、精製が容易であり、結晶化可能であり、良好な固体状態安定性を示した。ＥＭ−８００またはＥＭ−１５３８のいずれを投与しても、インビボで同一の活性化合物を生じると考えられる。
【００９７】
本発明の他の好ましいＳＥＲＭとしては、タモキシフェン（(Ｚ)−２−[４−(１,２−ジフェニル−１−ブテニル)]−Ｎ,Ｎ−ジメチルエタンアミン）（イギリス国のゼネカ（Zeneca）から入手可能）、トレミフェン（Toremifene）（フィンランド国のオリオン−ファーモス・ファーマシューチクラ（Orion-Farmos Pharmaceuticla）またはシェリング−プラウ（Schering-Plough）から入手可能）、ドロロキシフェン（Droloxifene）およびＣＰ−３３６,１５６（シス−１Ｒ−[４'−ピロリジノ−エトキシフェニル]−２Ｓ−フェニル−６−ヒドロキシ−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン・Ｄ−(−)−酒石酸塩）（米国のファイザー・インコーポレイテッド（Pfizer Inc.））、ラロキシフェン（米国のイーライ・リリー・アンド・カンパニー（Eli Lilly and Co.））、ＬＹ ３３５５６３およびＬＹ ３５３３８１（米国のイーライ・リリー・アンド・カンパニー）、ヨードキシフェン（Iodoxifene）（米国のスミスクライン・ビーチャム（SmithKline Beecham））、レボルメロキシフェン（Levormeloxifene）（３,４−トランス−２,２−ジメチル−３−フェニル−４−[４−(２−(２−(ピロリジン−１−イル)エトキシ)フェニル]−７−メトキシクロマン）（デンマーク国のノボ・ノルディスク・アクティー・ゼルスカブ（Novo Nordisk, A/S））（Shalmi et al. のWO 97/25034、WO 97/25035、WO 97/25037、WO 97/25038；および Korsgaard et al. のWO 97/25036に開示されている）、ＧＷ５６３８（Willson et al., Endocrinology, 138(9), 3901-3911, 1997 に開示されている）およびインドール誘導体（Miller et al., EP 0802183A1 に開示されている）およびＴＳＥ ４２４（米国のワイス・エアズ（Wyeth Ayers）により開発され、JP10036347（アメリカン・ホーム・プロダクツ・コーポレーション（American Home Products Corporation））に開示されている）および非ステロイド系エストロゲン誘導体（WO 97/32837 に開示されている）が挙げられる。
【００９８】
製造者により推奨されているように、効力のために必要とされる場合に用いられるＳＥＲＭを用いることができる。適当な用量は、当該技術分野で知られている。市販のいずれもの他の非ステロイド系抗エストロゲンを本発明に従って用いることができる。いずれもの化合物は、ＳＥＲＭと同様の活性を有する（例：ラロキシフェンを用いることができる）。
【００９９】
本発明に従って投与されるＳＥＲＭは、好ましくは、経口投与する場合に平均体重の人について１日に体重１ｋｇあたり０.０１〜１０ｍｇ（好ましくは、０.０５〜１.０ｍｇ／ｋｇ）の投与範囲で、１日５ｍｇ、特に、１日１０ｍｇを、好ましくは、２等分した用量で投与され、非経口投与（すなわち、筋肉投与、皮下投与または経皮投与）する場合に平均体重の人について１日に体重１ｋｇ当たり０.００３〜３.０ｍｇ（好ましくは、０.０１５から０.３ｍｇ／ｍｌ）、１日１.５ｍｇ、特に、１日３.０ｍｇを、好ましくは、２等分した用量で投与される。好ましくは、ＳＥＲＭは、上記した医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に投与される。
【０１００】
本発明の好ましいビスホスホネートとしては、メルク・シェイプ・アンド・ドーム（Merck Shape and Dohme）からフォサマックス（Fosamax）の商品名の下に入手可能なアレンドロネート（Alendronate）［(４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン)ビスホスホン酸二ナトリウム塩・水和物］、プロクター・アンド・ギャンブル（Procter and Gamble）からジドロカル（Didrocal）およびジドロネル（Didronel）の商品名の下に入手可能なエチドロネート（Etidronate）［(１−ヒドロキシエチリデン)ビスホスホン酸２,２'−イミノビスエタノール］、ローヌ・プーラン・ローラー（Rhone-Poulenc Rorer）からボーンフォス（Bonefos）の商品名の下またはベーリンガー・マンハイム（Boehringer Mannheim）からオスタック（Ostac）の商品名の下に入手可能なクロドロネート（Clodronate）［(ジクロロメチレン)ビスホスホン酸二ナトリウム塩］、および、ガイギー（Geigy）からアレジア（Aredia）の商品名の下に入手可能なパミドロネート（Pamidronate）（(３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデン)ビスホスホン酸二ナトリウム塩）が挙げられる。リセドロネート（Risedronate）（１−ヒドロキシ−２−(３−ピリジニル)エチリデンビスホスホン酸一ナトリウム塩）は、臨床開発下にある。本発明に従って、いずれもの市販の他のビスホスホネートを、全て製造者が推奨する用量で用いることができる。同様に性ステロイド前駆体は、従来技術において推奨された用量で、好ましくは、循環レベルを年齢２０〜３０歳の健康な男性または月経閉止期前の成人女性のレベルに戻す用量で利用できる。
【０１０１】
本明細書に記載した推奨される用量の全てに関して、所属臨床医は、個々の患者の反応をモニターし、これに応じて用量を調節する。
【実施例】
【０１０２】
実施例１
材料および方法
動物
雌性Sprague-Dawleyラット［Ｃrl：ＣＤ(ＳＤ)Ｂr］をチャールズ・リバー・カナダ・インコーポレイテッド（Charles River Canada Inc.）（ケベック州セント・コンスタント）から４４〜４６日齢で入手し、照明制御（照明１２時間／日；７時１５分に点灯）および温度制御（２２±２℃）環境下、１ケージにつき２匹を入れた。動物は、Purina齧歯類用餌および水道水を任意に摂取した。動物実験は、カナディアン・カウンシル・オン・アニマル・ケア（Canadian Council on Animal Care）（CCAC）に認可された設備の中で実験動物の管理および使用に関するＣＣＡＣガイド（CCAC Guide for Care and Use of Experimental Animals）に従って行った。
【０１０３】
ＤＭＢＡによる乳癌の誘発
５０〜５２日齢でコーン油１ｍｌ中のＤＭＢＡ（ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemical Co.））２０ｍｇを一回胃内投与することにより乳癌を誘発させた。２ヶ月後、２週間ごとに腫瘍測定を行った。Asselin et al., Endocrinology 101: 666-671, 1977 の記載に従って、各腫瘍の２つの最大垂直直径をカリパスで記録して腫瘍の大きさを評価した。腫瘍の部位、大きさおよび数を記録した。
【０１０４】
処置
動物を、無作為に、対照群に動物４０匹をあてる以外は、各々ラット２０匹からなる群に分けた。動物を以下のとおり２８２日間処置した：（１）対照ビヒクル、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の両方について；（２）４％エタノール、４％ポリエチレングリコール−６００、１％ゼラチン、０.９％ＮaＣl懸濁液０.５ｍｌ中のＥＭ−８００（(＋)−７−ピバロイルオキシ−３−(４'−ピバロイルオキシフェニル)−４−メチル−２−(４''−(２'''−ピペリジノエトキシ)フェニル)−２Ｈ−ベンゾピラン）（７５μｇ、経口、１日１回）；（３）５０％エタノール、５０％プロピレングリコールの０.５ｍｌ中のＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）；および（４）ＥＭ−８００およびＤＨＥＡの両方。ＤＭＢＡの経口投与の３日前に処置を開始した。ＥＭ−８００は、本発明者らの研究室のメディカル・ケミストリー・ディビジョンにて合成したが、ＤＨＥＡは、ニューハンプシャー州ウィルトンのステラロイズ・インコーポレイテッド（Steraloids Inc.）から購入した。
【０１０５】
対照動物の多くおよびＥＭ−８００処置またはＤＨＥＡ処置動物の数匹は、腫瘍が大きすぎるためにＤＭＢＡ投与の６ヵ月後にイソフルランによる麻酔下で頚部脱臼により屠殺した。屠殺時のこれらのラットの腫瘍の大きさおよび数を、生存している動物からその後時折測定した数値と一緒に、その後の腫瘍発生、腫瘍をもつラット１匹あたりの平均腫瘍数および腫瘍をもつラット１匹あたりの平均腫瘍サイズの分析に用いた。残存動物（対照群からラット９匹および他の各群からラット１３〜１９匹）をさらに３ヶ月間処置し続けて、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の単独または組合せの長期予防効力を観察した。ＤＭＢＡ投与の２７９日後にラットを屠殺した。子宮、膣および卵巣をすぐに取り出し、結合組織および脂肪組織を除去し、計量した。
【０１０６】
試料採取および処理
代謝ケージ（ニュージャージー州アレンタウンのアレンタウン・ケージング・イクィップメント・カンパニー（Allentown Caging Equipment Co.））に移した後、実験の最後に各群の最初のラット９匹から２４時間尿試料を採取した。各動物につき異なる日に尿試料２個を採取し、分析して、毎日の変動の影響を最小化した。したがって、示された各数値は、２つの異なる日に行った２つの測定値の平均を表す。採尿管にトルエン０.５ｍｌを添加して尿の蒸発および細菌増殖を防止し、尿の容量を記録した。屠殺時に大幹血を採取し、４℃で一夜凝固させた後、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
【０１０７】
尿および血清の生化学的パラメーターの分析
尿クレアチニン、カルシウムおよびリンならびに血清全アルカリホスファターゼ（ｔＡＬＰ）活性、コレステロールおよびトリグリセリドのアッセイに新しい試料を用いた。これらの生化学的パラメーターを、製薬承認基準条件下でMonarch 2000 Chemistry System（マサチューセッツ州レキシントンのインストゥルメンテーション・ラボラトリー・カンパニー（Instrumentation Laboratory Co.））を用いて自動測定した。Podenphant et al., Clinica Chimica Acta 142: 145-148, 1984 の記載に従って、尿ヒドロキシプロリンを測定した。
【０１０８】
骨量測定
塩酸ケタミンおよびジアゼパムを各々体重１ｋｇあたり５０ｍｇおよび４ｍｇの用量でラットに腔内注射して麻酔した。全骨格および右大腿骨を、Regional High Resolution ソフトウエアを装備したデュアルエネルギーＸ線吸収計（ＤＥＸＡ；ＱＤＲ ２０００−７.１０Ｃ、マサチューセッツ州ウォールサムのホロジック（Hologic））を用いてスキャンした。全骨格および大腿骨について、各々、スキャン領域サイズは、２８.１１０×１７.８０５ｃｍおよび５.０×１.９０２ｃｍであり、分解能は、０.１５１１×０.０７６１ｃｍおよび０.０２５４×０.０１２７ｃｍであり、スキャン速度は、０.３６０８ｍｍ／秒および０.０９５６ｍｍ／秒であった。全骨格および大腿骨のスキャン画像で全骨格、腰椎および大腿骨の骨ミネラル含量（ＢＭＣ）および骨ミネラル密度（ＢＭＤ）の両方を測定した。
【０１０９】
統計学的分析
ダンカン−クラマー（Duncan-Kramer）のマルチプルレンジ検定（Biometrics 12: 307-310, 1956）に従って統計学的有意さを測定した。乳癌の発生率の分析は、フィッシャー（Fisher）の完全検定（Conover, Practical nonparametric Statistics, 2nd Edition 153-170, 1980）を用いて行った。データは、平均±Ｓ.Ｅ.Ｍ.で表した。
【０１１０】
結果
ＤＭＢＡにより誘導された乳癌の発生に対する影響
図１に示すように、ＤＭＢＡ投与から２７９日後に対照動物の９５％が触知できる乳癌を発生させた。ＤＨＥＡまたはＥＭ−８００での治療はＤＭＢＡにより誘導される乳癌の発生を部分的に防止し、その発生率はそれぞれ５７％（ｐ＜０.０１）および３８％（ｐ＜０.０１）であった。興味深いことに、２種の化合物の組み合わせは、各化合物単独の場合よりも有意に高い抑制効果を導いた（ＤＨＥＡまたはＥＭ−８００単独の場合に対してｐ＜０.０１）。実際、両方の化合物で治療された動物の群において発生した２つの腫瘍のみが実験終了前に消失した。
【０１１１】
ＤＨＥＡまたはＥＭ−８００での治療は、対照動物において、腫瘍保有動物１匹あたり平均腫瘍数を４.７±０.５個からそれぞれ３.４±０.７個（Ｎ.Ｓ.）および１.４±０.３個（ｐ＜０.０１）に減少させたが、両方の薬剤を投与された動物において実験終了時に腫瘍のないものはいなかった（３つの他の群に対してｐ＜０.０１）（図２Ａ）。後に消失した２個の腫瘍のうち１つはＤＭＢＡ投与後７９日〜２０１日目に存在していたが、他方の腫瘍は１７６日〜２５７日目に触知可能であった。図２Ｂからわかるように、ＤＨＥＡまたはＥＭ−８００は単独で、実験終了時の腫瘍保有動物１匹あたりの平均腫瘍面積を１２.８±１.３ｃｍ２からそれぞれ１０.２±２.１３ｃｍ２（Ｎ.Ｓ.）および７.７±１.８ｃｍ２（Ｎ.Ｓ.）に減少させたが、組み合わせ治療はゼロにまで減少させた（他の３つの群に対してｐ＜０.０１）。ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の両方で治療した動物の群において発生した２個の腫瘍は１ｃｍ２よりも大きくならなかった。腫瘍面積の真の値ならびに腫瘍保有動物１匹あたりの平均腫瘍数は図２に示す値よりも高いはずである。なぜなら、腫瘍サイズが過大であったために多くのラットを実験終了前に殺さなければならなかったからである。したがって、後でする計算において屠殺時の測定値をそのようなものとして含めて、いずれの場合にも他の群より有意に高いままである対照群におけるバイアスを最小にした。
【０１１２】
骨に対する効果
メスのラットへのＤＨＥＡの長期経皮投与は、全骨格、腰椎および大腿骨の骨鉱物質密度をそれぞれ６.９％（ｐ＜０.０１）、１０.６％（ｐ＜０.０１）および８.２％（ｐ＜０.０１）の増加させた（表２）。他方では、ＥＭ−８００で治療した動物においては有為な変化は見られなかった。さらにそのうえ、両方の化合物を同時投与した場合、得られた値はＤＨＥＡのみで達成された値と同等であった。
【０１１３】
ＤＨＥＡでの治療は血清中の全アルカリ性ホスファターゼ（ｔＡＬＰ）活性を７４％増加させたが（ｐ＜０.０５）、１日の尿カルシウムおよびリン排出量ならびに尿のクレアチニンに対するヒドロキシプロリンの比には影響しなかった（表３）。他方、ＥＭ−８００での治療は尿のクレアチニンに対するヒドロキシプロリンの比を４８％減少させたが（ｐ＜０.０１）、１日の尿カルシウムおよびリン排出量ならびにｔＡＬＰ活性には統計学的に有為な影響を及ぼさなかった。ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組み合わせは血清ｔＬＡＰ活性を増大させ（ｐ＜０.０１）、それはＤＨＥＡ単独で達成された結果と同様であり、さらに尿のクレアチニンに対するヒドロキシプロリンの比を６９％低下させ、その値はＥＭ−８００単独の場合よりも有意に低かった（ｐ＜０.０１）。さらに２つの薬剤の組み合わせは１日の尿カルシウムおよびリン排出量をそれぞれ８４％（ｐ＜０.０１）および５６％（ｐ＜０.０１）減少させたが、各薬剤単独では有意な変化は観察されなかった（表３）。
【０１１４】
血清脂質レベルに対する影響
ＥＭ−８００での長期治療は血清トリグリセリドおよびコレステロールレベルをそれぞれ７２％（ｐ＜０.０１）および４５％（ｐ＜０.０１）低下させたが、ＤＨＥＡの長期投与は血清トリグリセリドレベルを６０％（ｐ＜０.０１）低下させ、血清コレステロールレベルには影響しなかった。そのうえ、血清中におけるトリグリセリドおよびコレステロール濃度のそれぞれ４２％（ｐ＜０.０１）および５２％（ｐ＜０.０１）の低下がＥＭ−８００およびＤＨＥＡの両方で治療された動物において測定された（図３）。
【０１１５】
表２.メスのラットにおける大腿骨、腰椎および全骨格の骨鉱物質密度（ＢＭＤ）に対するＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮投与、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口投与、１日１回）単独あるいは組み合わせの９カ月間の効果。１群あたり９匹のラットにおいて測定を行った。対照に対する実験値について、＊はｐ＜０.０５、＊＊はｐ＜０.０１である。
【表２】
2007191484.tif 000007
【０１１６】
表３.ラットの１日の尿カルシウムおよびリン排出量、尿のクレアチニンに対するヒフォロキシプロリンの比（ＨＰ／Ｃｒ）、および血清の全アルカリ性ホスファターゼ活性（ｔＡＬＰ）におけるラットにおける骨代謝のパラメーターに対するＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮投与、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口投与、１日１回）単独あるいは組み合わせの９カ月間の効果。１群あたり９匹のラットから試料を得た。対照に対する実験値について、＊はｐ＜０.０５、＊＊はｐ＜０.０１である。
【表３】
2007191484.tif 000008
【０１１７】
実施例２
概要
乳腺において、前駆体ステロイドであるデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）からアンドロゲンが形成される。臨床的証拠は、アンドロゲンが乳癌に対して抑制効果を有することを示している。一方、エストロゲンは乳癌の発生および増殖を刺激する。我々は、卵巣切除ヌードマウスにおけるヒト乳癌細胞系ＺＲ−７５−１により形成された腫瘍異種移植物の増殖に対するＤＨＥＡ単独または新たに記載された純粋な抗エストロゲンＥＭ−８００との組み合わせの影響を調べた。
【０１１８】
卵巣切除直後から毎日皮下注射により０.５μｇのエストロン（エストロゲン作動性ホルモン）をマウスに与えた。ＥＭ−８００（１５、５０または１００μｇ）を１日１回経口投与した。ＤＨＥＡ（全用量０.３、１.０または３.０ｍｇ）を１日２回、単独でまたは１５μｇの経口用量のＥＭ−８００と組み合わせて背中の皮膚に適用した。治療に応答した腫瘍サイズの変化を、初日の測定値と比較することにより定期的に評価した。実験の終了時に、腫瘍を切除し、秤量した。
【０１１９】
エストロンを投与されなかったマウスと比較すると、エストロン単独投与された卵巣切除マウスにおいて９.５カ月で９.４倍の腫瘍サイズの増加が観察された。エストロンに１５、５０または１００μｇのＥＭ−８００を補足して投与された卵巣切除マウスはそれぞれ８８％、９３％および９４％の腫瘍サイズの抑制となった。一方、ＤＨＥＡは０.３、１.０または３.０ｍｇの用量で最終的な腫瘍重量をそれぞれ６７％、８２％および８５％抑制した。異なる用量のＤＨＥＡを経皮投与して、あるいはせずに毎日１５μｇのＥＭ−８００を経口投与した場合、同等の腫瘍の抑制が得られた。
【０１２０】
ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００は独立して、エストロンにより刺激されたヌードマウス中のＺＲ−７５−１マウス異種移植腫瘍の増殖を抑制した。限定された用量のＤＨＥＡの投与はＥＭ−８００の抑制効果を変化させない。
【０１２１】
材料および方法
ＺＲ−７５−１細胞
American Type Culture Collection（Rockville, MD）からＺＲ−７５−１ヒト乳癌細胞を得て、記載されたようにして（Poulin and Labrie, Cancer Res. 46: 4933-4937, 1986; Poulin et al., Breast Cancer Res. Treat. 12: 213-225, 1988）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１００ ＩＵペニシリン／ｍｌ、１００μｇストレプトマイシン／ｍｌ、および１０％ウシ胎児血清を補足したＲＰＭＩ １６４０培地中、９５％空気／５％ ＣＯ2の加湿雰囲気下、３７℃にて単層としてルーチンに培養した。０.０５％トリプシン：０.０２％ ＥＤＴＡ（ｗ／ｗ）で処理後、細胞を毎週継代した。この報告に記載する実験に使用する細胞培養物は９３代継代された細胞系ＺＲ−７５−１に由来するものであった。
【０１２２】
動物
メスのホモ接合Harlan Sprague-Dawley（nu/nu）胸腺切除マウス（生後２８ないし４２日）をＨＳＤ（Indianapolis, Indiana, USA）から得た。ラミナーエアーフローフード（laminar air flow hood）中エアーフィルター付き天井を有するビニール製ケージにてマウスを飼育し、病原体を制限した条件下に維持した。ケージ、寝わらおよびエサを使用前にオートクレーブした。水をオートクレーブし、酸性にしてｐＨ２.８とし、任意に飲ませた。
【０１２３】
細胞の接種
腫瘍細胞接種１週間前に、動物１匹あたり０.２５ｍｌのAvertin（アミリックアルコール：０.８ｇ／１００ｍｌ ０.９％ ＮａＣｌ；およびトリブロモエタノール：２ｇ／１００ｍｌ ０.９％ ＮａＣｌ）を腹腔内注射することにより麻酔下でマウスの両側の卵巣を切除（ＯＶＸ）した。単層を０.０５％トリプシン／０.０２％ ＥＤＴＡ（ｗ／ｗ）で処理した後、対数増殖期の１.５ｘ１０6個のＺＲ−７５−１細胞を集め、２５％ Matrigelを含む０.１ｍｌの培地に懸濁し、すでに記載されているようにして（Dauvois et al., Cancer Res. 51: 3131-3135, 1991）長さ１インチの２０−ゲージの注射針を用いて動物の両脇腹に皮下接種した。腫瘍の増殖を容易にするため、０.９％ ＮａＣｌ、５％エタノール、１％ゼラチンからなる担体中の１０μｇのエストラジオール（Ｅ2）を５週間にわたり各動物に毎日皮下注射した。触知可能なＺＲ−７５−１腫瘍の出現後、カリパスを用いて腫瘍直径を測定し、０.２ないし０.７ｃｍの直径の腫瘍を有するマウスをこの研究のために選別した。
【０１２４】
ホルモン治療
対照ＯＶＸ群マウス以外のすべての動物に、０.２ｍｌの０.９％ ＮａＣｌ、５％エタノール、１％ゼラチン中の０.５μｇのエストロン（Ｅ1）を毎日皮下注射した。示された群において、０.０２ｍｌの体積中の０.３、１.０または３.０ｍｇ／動物の用量のＤＨＥＡを、腫瘍増殖部位の外側の背中の皮膚部位に毎日２回経皮的に投与した。ＤＨＥＡを５０％エタノール、５０％プロピレングリコールに溶解した。以前記載されたようにして（Gauthier et al., J. Med. Chem. 40: 2117-2122, 1997）、Laboratory of Molecular Endocrinology of the CHUL Research CenterにおいてＥＭ−８００（（＋）−７−ピバロイルオキシ−３−（４’−ピバロイルオキシフェニル）−４−メチル−２−（４’’−（２’’−ピペリジノエトキシ）フェニル）−２Ｈ−ベンゾピラン）が合成された。ＥＭ−８００を４％（ｖ／ｖ）エタノール、４％（ｖ／ｖ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６００、１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、０.９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ中に溶解した。指示された群の動物には、１５μｇ、５０μｇ、または１００μｇのＥＭ−８００を単独で、あるいはＤＨＥＡと組み合わせて毎日経口投与し、ＯＶＸ群の動物には、担体（０.２ｍｌの４％エタノール、４％ ＰＥＧ６００、１％ゼラチン、０.９％ ＮａＣｌ）のみを与えた。１週間に１回、腫瘍をカリパスにて測定した。縦横２つの直径（ＬおよびＷ）をｃｍで記録し、式：Ｌ／２ｘＷ／２ｘπ（Dauvois et al., Cancer Res.51: 3131-3135, 1991）を用いて腫瘍面積（ｃｍ2）を計算した。治療初日に測定した面積を１００％とし、腫瘍サイズの変化を初期腫瘍面積に対するパーセンテージとして表した。皮下腫瘍の場合、一般的には、腫瘍の３次元的体積を正確に評価することは不可能なので、腫瘍面積のみを測定した。治療２９１日目（あるいは９.５カ月目）に動物を屠殺した。
【０１２５】
記載されたようにして（Dauvois et al., Breast Cancer Res. Treat 14: 299-306, 1989; Dauvois et al., Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 25: 891-897, 1989; Labrie et al., Breast Cancer Res. Treat. 33: 237-244, 1995）、応答のカテゴリーを評価した。簡単に説明すると、部分的逆行とは、元のサイズの５０％に等しいかまたは５０％より多く逆行した腫瘍についていう。安定な応答とは、元のサイズの５０％より少なく逆行、あるいは元のサイズの５０％より少なく進行した腫瘍についていい、完全な逆行とは、治療終了時に検出不可能であった腫瘍についていう。進行とは、元のサイズの５０％より多く進行した腫瘍についていう。実験終了時に、斬首によりすべての動物を殺した。腫瘍、子宮、および膣を即座に取り、結合組織および脂肪組織を除去し、秤量した。
【０１２６】
統計学的分析
ＤＨＥＡ、ＥＭ−８００による効果、および時間、ならびに治療開始時および終了時において行った同じ動物における繰り返し測定（群ファクター中の対象）を評価する分散（ＡＮＯＶＡ）の分析を用いて腫瘍サイズに対する治療効果の統計学的有意さを評価した。治療についての時間０および９.５カ月における繰り返し測定はランダム化された動物のブロックを構成する。かくして、ブロック中の効果として時間が分析されるが、両方の治療はブロック間の効果として評価される。主な効果の間のすべての相互作用がモデル中に含まれる。群中の主題をエラーターム（error term）として用いて治療ファクターおよびそれらの相互作用の有意さを分析した。データを対数変換した。ＡＮＯＶＡの基礎となる仮定は、残差の正規性および分散の均一性を仮定するものである。
【０１２７】
最小の有意差に関するFisherの検定を用いてポステリオリペアワイズ（posteriori pairwise）比較を行った。相互作用に関して標準的なツーウェイ（two-way）ＡＮＯＶＡを用いて体重および器官重量に対する治療の主な効果および相互作用を分析した。ＳＡＳプログラム（SAS Institute, Cary, NC, USA）を用いてすべてのＡＮＯＶＡを行った。５％の全レベルに関して２−テイルド（2-tailed）検定を用いて相違の有意さを宣言した。
【０１２８】
序列化されたカテゴリー応答変数（完全応答、部分的応答、安定な応答、および腫瘍の進行）に関してKruskall-Wallis検定を用いてカテゴリーのデータを分析した。治療効果の全体的評価後に、表４に示される結果の部分集合を分析し、多重比較のためにクリティカルなｐ−値を調整した。StaXactプログラム（Cytel, Cambridge, MA, USA）を用いて正確なｐ−値を計算した。
データを、各群１２〜１５匹のマウスの平均値±標準偏差（ＳＥＭ）として表す。
【０１２９】
結果
図４Ａに示すように、１日に０.５μｇの用量のエステロンを皮下注射された卵巣切除ヌードマウスにおいてヒトＺＲ−７５−１腫瘍は２９１日目に９.４倍に増大したが、担体のみを与えられた対照ＯＶＸマウスにおいては腫瘍サイズは研究期間中に元の値の３６.９％に減少した。
【０１３０】
経皮的ＤＨＥＡ投与量を増加させる治療は、Ｅ１により刺激されるＺＲ−７５−１腫瘍増殖の進行的抑制を引き起こした。動物１匹あたり１日あたり０.３ｍｇ、１.０ｍｇおよび３.０ｍｇのＤＨＥＡでの治療では、それぞれ５０.４％、７６.８％および８０.０％の抑制となった（図４Ａ）。全腫瘍負荷の減少と一致して、ＤＨＥＡでの治療は実験終了時に残存している腫瘍の平均重量の著しい減少を導いた。実際、１日につき０.３ｍｇ、１.０ｍｇおよび３.０ｍｇのＤＨＥＡを与えられた対照Ｅ１補足卵巣切除ヌードマウスの群において、平均腫瘍重量は、１.１２±０.２６ｇからそれぞれ０.３７±０.１２ｇ（ｐ＝０.００５）、０.２０±０.０６ｇ（ｐ＝０.００１）および０.１７±０.０６ｇ（ｐ＝０.０００９）に減少した（図４Ｂ）。
【０１３１】
１日の用量が１５μｇ、５０μｇおよび１００μｇの用量の抗エストロゲンＥＭ−８００は、９.５カ月目において対照動物の腫瘍サイズと比較して、エストロゲンにより刺激される腫瘍サイズをそれぞれ８７.５％（ｐ＜０.０００１）、９３.５％（ｐ＜０.０００１）および９４.０％（ｐ＝０.０００３）抑制した（図５Ａ）。
【０１３２】
３種のＥＭ−８００用量により達成された腫瘍サイズの減少は互いに有意には異ならなかった。図４Ｂに示すように、９.５カ月の研究の終了時の腫瘍重量は、１日につき１５μｇ、５０μｇおよび１００μｇの用量のＥＭ−８００で治療した対照Ｅ１補足ＯＶＸマウスにおいて、１.１２±０.２６ｇからそれぞれ０.０８±０.０３ｇ、０.０３±０.０１ｇおよび０.０４±０.０３ｇに減少した（Ｅ１補足ＯＶＸに対するすべての用量のＥＭ−８００についてｐ＜０.００１）。
【０１３３】
上記のように、１日の経口用量が１５μｇの抗エストロゲンＥＭ−８００は、９.５カ月において測定した場合、エストロゲンにより刺激された腫瘍増殖を８７.５％抑制した。３種の用量のＤＨＥＡの添加は、１日に１５μｇのＥＭ−８００ですでに達成された腫瘍サイズの著しい抑制に対して有意な効果を示さなかった（図５Ｂ）。よって、１日１５μｇの抗エストロゲンのみ、あるいは０.３、１.０および３.０ｍｇのＤＨＥＡを併用した対照エストロン補足マウスにおいて、平均腫瘍重量は、１.１２±０.２６ｇから、それぞれ０.０８±０.０３ｇ（ｐ＜０.０００１）、０.１１±０.０４ｇ（ｐ＝０.０００２）、０.１３±０.０７ｇ（ｐ＝０.０００４）および０.０８±０.０５ｇ（ｐ＜０.０００１）に劇的に減少した（当該４群の間に有意差はなかった）（図４Ｂ）。
【０１３４】
上記治療により達成された応答のカテゴリーを調べることも興味深いものであった。よって、ＤＨＥＡ用量を増加させる治療は、１日につき０.３、１.０または３.０ｍｇのＤＨＥＡで治療されたエストロン補足ＯＶＸ動物において、進行中の腫瘍の数は８７.５％からそれぞれ５０.０％、５３.３％および６６.７％に減少したが、統計学的に有意なレベルには至らなかった（ｐ＝０.０８８）（表４）。一方、１日につき０.３、１.０または３.０ｍｇのＤＨＥＡで治療されたエストロン補足マウスにおいて、完全な応答は０％からそれぞれ２８.６％、２６.７％および２０.０％に上昇した。一方、安定な応答は、それぞれの上記用量のＤＨＥＡを投与された３群の対照Ｅ１補足マウスの１２.５％、２１.４％、２０.０％および１３.３％において見られた。対照卵巣切除マウスにおいて、完全、部分的および安定な応答の割合はそれぞれ６８.８％、６.２％および１８.８％であったが、進行は６.２％の腫瘍においてのみ見られた（表４）。
【０１３５】
腫瘍の完全な応答または消失は、抗エストロゲンＥＭ−８００（ｐ＝０.０００６）単独（１５μｇ）または０.３ｍｇ、１.０ｍｇもしくは３.０ｍｇのＤＨＥＡと組み合わせを投与された動物の腫瘍のそれぞれ２９.４％、３３.３％、２６.７％および３５.３％において達成された（表４）。一方、進行は、同じ動物群において、腫瘍のそれぞれ３５.３％、４４.４％、５３.３％において見られた。ＥＭ−８００単独またはＤＨＥＡとの組み合わせで治療したＥＭ−８００治療群間に有意差はない。
【０１３６】
ＤＨＥＡまたはＥＭ−８００での治療の有意な効果は、腫瘍重量に関して調整された体重に対しては観察されなかった。エストロンでのＯＶＸマウスの治療は、ＯＶＸ対照マウスにおいて子宮重量を２８±５ｍｇから１３２±８ｍｇ（ｐ＜０.０１）に増加させたが、ＤＨＥＡ用量を増加させて高用量のＤＨＥＡを用いた場合には、エストロンの刺激効果に対する進行的であるが比較的小規模な抑制が２６％に達した（ｐ＝０.０００８）。同じ図において、１日の経口用量１５μｇ、５０μｇ、または１００μｇのＥＭ−８００を投与した対照エステロン補足マウスにおいて、エステロンにより刺激された子宮重量が１３２±８ｍｇからそれぞれ４９±３ｍｇ、３６±２ｍｇ、および３２±１ｍｇ（対照に対するすべての用量においてｐ＜０.０００１）に減少したことがわかる（全体としてｐ＜０.０００１）。１日の用量が０.３ｍｇ、１.０ｍｇまたは３.０ｍｇであるＤＨＥＡと１５μｇのＥＭ−８００とを組み合わせた場合、子宮重量はそれぞれ４６±３ｍｇ、５９±５ｍｇおよび６９±３ｍｇであった。
【０１３７】
一方、エストロンでの治療は、ＯＶＸ動物において膣重量を１４±２ｍｇから３１±２ｍｇ（ｐ＜０.０１）に増加させたが、ＤＨＥＡの添加は有意な効果を示さなかった。その後、１日に１５μｇ、５０μｇまたは１００μｇのＥＭ−８００での治療した後、膣重量は２３±１ｍｇ、１５±１ｍｇ、および１１±１ｍｇに減少した（対照に対してすべての用量において、全ｐおよびペアワイズｐ＜０.０００１）。０.３ｍｇ、１.０ｍｇまたは３.０ｍｇのＤＨＥＡおよびＥＭ−８００を組み合わせると、膣重量はそれぞれ２２±１ｍｇ、２５±２ｍｇ、および２３±１ｍｇとなった（１５μｇのＥＭ−８００に対してすべての群につき有意でない）。最高用量、すなわち１日１００μｇのＥＭ−８００を用いた場合、エストロン補足ＯＶＸ動物の子宮重量は減少し、ＯＶＸ対照動物の子宮重量の値と違いがない値になったが、膣重量はＯＶＸ対照動物の測定値未満の値に減少した（ｐ＜０.０５）。ＤＨＥＡは、おそらくそのアンドロゲン作動性効果により、子宮および膣重量に対するＥＭ−８００の効果を不完全に中和したのであろう。
【０１３８】
表４.９.５カ月間にわたるＤＨＥＡ経皮投与または単独または組み合わせＥＭ−８００経口投与の、ヌードマウスにおけるヒトＺＲ−７５−１乳癌異種移植物に対する影響
【表４】
2007191484.tif 000009
E1= エストロン; DHEA= デヒドロエピアンドロステロン; OVX=卵巣切除
【０１３９】
実施例３
本発明の好ましい化合物の、メスの卵巣切除ラットのコレステロールレベルに対する影響
動物および処理
卵巣切除時に体重約１９０ｇの生後５０ないし６０日のSprague-Dawleyラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）Ｂｒ）（Charles River Laboratory, St-Constant, Canada）を使用した。手術前に、動物を周囲の環境（温度２２±３℃；湿度５０±２０％；明１２時間−暗１２時間のサイクル、７時１５分に照明オン）に１週間馴らした。１ケージあたり３匹の動物を飼育し、水道水およびペレット状の保証された齧歯類用エサ（Lab Diet 5002, Ralston Purina, St-Louis, MC）を自由に取らせた。実験動物のケアおよび使用に関するCCACガイドに従ってCanadian Council on Animal Care認可施設において実験が行われた。
【０１４０】
研究０日目にイソフルラン麻酔下で１３６匹のメスのラットを卵巣切除し、ランダムに１７群に分けて下記研究を行った。
群 1:  OVX 対照
群 2:  OVX + EM-800 (0.01 mg/kg, po, ID)
群 3:  OVX + EM-800 (0.03 mg/kg, po, ID)
群 4:  OVX + EM-800 (0.1 mg/kg, po, ID)
群 5:  OVX + EM-800 (0.3 mg/kg, po, ID)
群 6:  OVX + EM-800 (1 mg/kg, po, ID)
群 7:  OVX + EM-01538 (0.01 mg/kg, po, ID)
群 8:  OVX + EM-01538 (0.03 mg/kg, po, ID)
群 9:  OVX + EM-01538 (0.1 mg/kg, po, ID)
群 10:  OVX + EM-01538 (0.3 mg/kg, po, ID)
群 11:  OVX + EM-01538 (1 mg/kg, po, ID)
群 12:  OVX + ラロキシフェン (EM-1105) (0.01 mg/kg, po, ID)
群 13:  OVX + ラロキシフェン (EM-1105) (0.03 mg/kg, po, ID)
群 14:  OVX + ラロキシフェン (EM-1105) (0.1 mg/kg, po, ID)
群 15:  OVX + ラロキシフェン (EM-1105) (0.3 mg/kg, po, ID)
群 16:  OVX + ラロキシフェン (EM-1105) (1 mg/kg, po, ID)
群 17:  無処理対照
【０１４１】
研究１０日目に治療薬の投与を開始し、研究１３日目まで１日１回経口栄養により投与した。０.４％メチルセルロース中に投与懸濁液を調合し、研究１０日目に記録した群の平均体重に応じて濃度を調整して、ラッット１匹あたり０.５ｍｌの投与懸濁液を与えた。最後の投与から約２４時間後に、一晩絶食した動物をイソフルラン麻酔下で腹部大動脈において全採血することにより殺し、血液試料を血清調製用に処理した。子宮を取り、残存脂肪組織を剥ぎ取って秤量した。
【０１４２】
血清コレステロールおよびトリグリセリドのアッセイ
Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systemsを用いて全血清コレステロールおよびトリグリセリドレベルを調べた。
【０１４３】
実施例４
アンドロステン−３β,１７β−ジオール（５−ジオール）は固有のエストロゲン作動性の活性を有する。さらに、性ステロイドの前駆体として、それは末梢内分泌組織において活性アンドロゲン類および／または他のエストロゲン類に変換される。骨重量に対する５−ジオール作用のアンドロゲン作動性要素およびエストロゲン作動性要素の総体的重要性を評価するために、生後２４週間のラットを卵巣切除し、１日あたり２、５または１２.５ｍｇの５−ジオール単独または抗アンドロゲン剤フルタミド（ＦＬＵ、１０ｍｇを１日１回皮下注射）、および／または抗エストロゲン剤ＥＭ−８００（１００μｇを１日１回皮下注射）と組み合わせて１２カ月治療した。治療１１カ月後に骨鉱物質密度（ＢＭＤ）を測定した。ＯＶＸ後１１カ月間に、卵巣切除（ＯＶＸ）は大腿骨ＢＭＤを１２.８％減少させたが（ｐ＜０.０１）、最高用量の５−ジオールは失われた大腿骨ＢＭＤの３４.３％を回復させた（ｐ＜０.０１）。ＦＬＵの同時投与は、大腿骨ＢＭＤに対する５−ジオールの刺激効果を妨げたが、ＥＭ−８００の添加により、５−ジオール単独と比較してさらに２８.４％の刺激を生じさせた。５−ジオール、ＦＬＵおよびＥＭ−８００の同時投与はＥＭ−８００の効果（２７％）を示しただけであった。なぜなら、５−ジオールの効果はＦＬＵによって完全にブロックされたからである。腰椎のＢＭＤに関して同等の結果を得たが、１２.５ｍｇの５−ジオール単独、１２.５ｍｇの５−ジオール＋ＥＭ−８００、または５−ジオール＋ＦＬＵ＋ＥＭ−８００を投与されたＯＶＸラットの腰椎ＢＭＤは無処理動物の値と有意に変わりない値にまで回復した。骨体積および小柱数に対する５−ジオールの刺激効果、ならびにＦＬＵにより廃止された近位脛骨幹端の続発性スポンギオーサの小柱分離に対する抑制効果が、組織形態の分析により示されたが、ＥＭ−８００により該効果はさらに促進されなかった。５−ジオールでの治療後に得られた血清アルカリ性ホスファターゼ活性に対するこの著しい刺激は、ＦＬＵの同時投与により５７％逆行した（１２.５ｍｇの５−ジオール単独に対してｐ＜０.０１）。５−ジオールでの治療は、尿のクレアチニンに対するカルシウムの割合に対しては統計学的に有意な抑制効果を示さなかった。最高用量の５−ジオールは血清コレステロールの有意な２３％（ｐ＜０.０１）の減少を引き起こしたが、ＥＭ−８００の添加は血清コレステロールを６２％減少させた（ｐ＜０.０１）。このデータは、骨形成に対する５−ジオールの刺激効果を明確に示し、５−ジオールが弱いエストロゲンであっても、骨形成に対するその刺激効果がアンドロゲン作動性効果によって優勢に維持されることを示唆する。そのうえ、ＥＭ−８００および５−ジオールの骨量に対する付加的な刺激効果は、ラットにおける抗エストロゲンＥＭ−８００の骨節約効果を示すものである。５−ジオールおよびＥＭ−８００の両方のコレステロール低下活性は、心臓血管系の疾患の予防に関して興味深い有用性がありうる。
【０１４４】
【表５】
2007191484.tif 000010
【０１４５】
実施例６
本発明の好適な化合物の合成例
(S)-(+)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-(2'''-ピペリジノエトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン塩酸塩 EM-01538 (EM-652, HCl)の合成
【０１４６】
【化５】
2007191484.tif 000011
【０１４７】
工程Ａ：ＢＦ3・Ｅｔ2Ｏ、トルエン；１００℃；１時間。
工程Ｃ：３,４−ジヒドロピラン、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物、酢酸エチル；窒素下２５℃、１６時間、ついでイソプロパノール中で結晶化。
【０１４８】
工程Ｄ、ＥおよびＦ：
（１）ピペリジン、トルエン、Dean & Stark装置、窒素下還流；（２)1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]ウンデカ-7-エン、ＤＭＦ、還流３時間；
（３）ＣＨ3ＭｇＣｌ、ＴＨＦ、−２０〜０℃、ついで室温２４時間；
工程Ｇ、Ｈ：(1S)-(+)-10-カンファースルホン酸、アセトン、水、トルエン、室温、４８時間。
【０１４９】
工程ＨＨ：９５％エタノール、７０℃、ついで室温３日間。
工程ＨＨＲ：母液の再利用および工程ＨＨの洗浄
(S)-10-カンファースルホン酸、還流；３６時間、ついで室温１６時間。
工程Ｉ：
（１）ＤＭＦ水溶液、Ｎａ2ＣＯ3、酢酸エチル；
（２）エタノール,希ＨＣｌ；
（３）水。
【０１５０】
2-テトラヒドロピラニルオキシ-4-ヒドロキシ-2'-(4''-テトラヒドロピラニルオキシフェニル)アセトフェノンの合成（４）。2,4-ジヒドロキシ-2'-(4''-ヒドロキシフェニル)アセトフェノン 3 (97.6 g, 0.4 mole)(Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansasから入手可能)の3,4-ジヒドロピラン (218 ml, 3.39 mole)および酢酸エチル (520 ml) 中の懸濁液をp-トルエンスルホン酸一水和物(0.03 g, 0.158 mmole)を用い約２５℃で処理した。該反応混合物を窒素下、外部加熱なしで、約16時間撹拌した。ついで混合物を炭酸水素ナトリウム (1 g)および塩化ナトリウム (5 g)の水 (100 ml)中の溶液で洗浄した。相分離させ、有機相 を塩水 (20 ml)で洗浄した。各洗浄を50 ml 酢酸エチルで戻し抽出した。全有機相をあわせ、硫酸ナトリウムを通して濾過した。
【０１５１】
溶媒（約６００ｍｌ）を大気圧で蒸留によって除去し、イソプロパノール（２５０ｍｌ）を加えた。さらに溶媒（約３００ｍｌ）を大気圧で蒸留し、イソプロパノール（２５０ｍｌ）を加えた。さらに溶媒（約２７５ｍｌ）を大気圧で蒸留し、イソプロパノール（２５０ｍｌ）を加えた。該溶液を撹拌しながら２５℃で冷却し、１２時間後、結晶固体を濾取し、イソプロパノールで洗浄し、乾燥させた（１１６.５ｇ、７０％）。
【０１５２】
4-ヒドロキシ-4-メチル-2-(4'-[2''-ピペリジノ]-エトキシ)フェニル-3-(4'''-テトラヒドロピラニルオキシ)フェニル-7-テトラヒドロピラニルオキシ-クロマン (10) の合成。2-テトラヒドロピラニルオキシ-4-ヒドロキシ-2'-(4''-テトラヒドロピラニルオキシフェニル)アセトフェノン 4 (1 kg、2.42 mole)、4-[2-(1-ピペリジノ)エトキシ]ベンズアルデヒド 5 (594 g、2.55 mole)(Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansasから入手可能)およびピペリジン (82.4 g, 0.97 mole) (Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis. から入手可能)のトルエン (8L)中の溶液をDean & Stark装置を用いて、一当量の水 (44 mL)が集まるまで窒素下還流した。
【０１５３】
トルエン（６.５Ｌ）を大気圧で蒸留によって除去した。ジメチルホルムアミド（６.５Ｌ）および1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]ウンデカ-7-エン (110.5g、0.726mol) を加えた。該溶液を室温で約８時間撹拌してカルコン(chalcone)８をクロマノン(chromanone)９へ異性化し、ついで水および氷（８Ｌ）ならびにトルエン（４Ｌ）の混合物を添加した。相分離させ、トルエン層を水洗浄（５Ｌ）した。混合した水性洗浄液をトルエン抽出（３×４Ｌ）した。混合したトルエン抽出液を最終的に塩水(brine)洗浄（３×４Ｌ）し、大気圧で５.５Ｌまで濃縮し、ついで−１０℃まで冷却した。
【０１５４】
引き続き外部冷却し、および窒素下撹拌し、塩化メチルマグネシウムのＴＨＦ（2.5L、7.5mole）中の３Ｍ溶液 (Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis. から入手可能) を添加し、温度を０℃以下に維持した。全てのグリニャール試薬を添加した後、外部冷却を除去し、混合物を室温まで暖めた。混合物をこの温度で約24時間撹拌した。
【０１５５】
再び混合物を約-20℃まで冷却し、引き続き外部冷却し、および撹拌しながら、飽和塩化アンモニウム溶液 (200 ml)をゆっくりと添加し、温度を２０℃以下に維持した。該混合物を２時間撹拌し、ついで飽和塩化アンモニウム溶液（２Ｌ）およびトルエン（４Ｌ）を加え、５分間撹拌した。相分離させ、水層をトルエン抽出（２ｘ４Ｌ）した。混合したトルエン抽出物を溶液が均一になるまで希塩酸で洗浄し、ついで塩水（３ｘ４Ｌ）で洗浄した。該トルエン溶液を最終的に大気圧で２Ｌまで濃縮した。該溶液を直接次の工程に用いた。
【０１５６】
(2R,S)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-[2'''-ピペリジノ]エトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン (1S)-10-カンファースルホン酸塩 (±12)の合成。4-ヒドロキシ-4-メチル-2-(4'-[-2''-ピペリジノ]-エトキシ)-フェニル-3-(4'''-テトラヒドロピラニルオキシ)フェニル-7-テトラヒドロピラニルオキシクロマン (10)のトルエン溶液に、アセトン (6 L)、水 (0.3 L)および(S)-10-カンファースルホン酸 (561 g、2.42 mole) (Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis. から入手可能)を添加した。該混合物を窒素下で48時間撹拌し、その後固体の(2R,S)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-[2'''-ピペリジノ]エトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン (1S)-10-カンファースルホン酸塩 (12)を濾過し、アセトンで洗浄し、および乾燥した(883 g)。該物質をさらに精製することなく次の（ＨＨ）工程に用いた。
【０１５７】
(2S)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-[2'''-ピペリジノ]エトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン (1S)-10-カンファースルホン酸塩 (13, (+)-EM-652(1S)-CSA塩) の合成。(2R,S)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-[2'''-ピペリジノ]エトキシ)フェニル)-2H-ベンゾピラン (1S)-10-カンファースルホン酸塩±12 (759 g)の95% エタノール中の懸濁液を撹拌しながら固体が溶解するまで約70℃へ加温した。該溶液を撹拌しながら室温まで冷却させ、ついで少量の(2S)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-[2'''-ピペリジノ]エトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン (1S)-10-カンファースルホン酸塩 13の結晶を種にした。該溶液を室温で合計約３日間撹拌した。結晶を濾過し、95% エタノールで洗浄し、乾燥させた(291 g、76%)。生産物のdeは94.2%であり、純度は98.8%であった。
【０１５８】
(S)-(+)-7-ヒドロキシ-3-(4'-ヒドロキシフェニル)-4-メチル-2-(4''-(2'''-ピペリジノエトキシ)フェニル)-2H-1-ベンゾピラン 塩酸塩 EM-01538 (EM-652, HCl) の合成。化合物１３ (EM-652-(+)-CSA塩、500 mg、0.726 mmol)のジメチルホルムアミド (11 μL, 0.15 mmol)中の懸濁液を０.５Ｍ水性炭酸ナトリウム溶液 (7.0 mL、3.6 mmol)で処理し、15分間撹拌した。該懸濁液を酢酸エチル (7.0 mL)で処理し、４時間撹拌した。ついで有機相を水性飽和炭酸ナトリウム溶液(2 x 5 mL)および塩水 (1 x 5 mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ濃縮した。その結果得られたピンク色の泡のエタノール (2 mL)中の溶液(EM-652)を2 N 塩酸 (400 μL, 0.80 mmol)で処理し、１時間撹拌し、蒸留水 (5 mL)で処理し、および30分間撹拌した。その結果得られた懸濁液を濾過し、蒸留水 (5 mL)で洗浄し、大気中および高真空下で乾燥させ(65℃)、クリーミーな粉末 (276 mg, 77%)を得た：微細なオフホワイトの粉末；熱量測定スキャン；溶解ピークは219℃で開始、△Ｈ＝83 J/g；[α]24D＝154°、メタノール中、10 mg/ml；1Ｈ ＮＭＲ (300 MHz, ＣＤ3ＯＤ) δ(ppm) 1.6 (ブロード, 2H, H-4'''), 1.85 (ブロード, 4H, H-3''''および5''''), 2.03 (s, ３Ｈ, ＣＨ3), 3.0および3.45 (ブロード, 4H, H-2''''および6''''), 3.47 (t, J=4.9Hz, 2H, H-3’’’), 4.26 (t, J=4.9Hz, 2H, H-2'''),  5.82 (s, 1H, H-2), 6.10 (d, J=2.3Hz, 1H, H-8), 6.35 (dd, J=8.4, 2.43 Hz, 1H, H-6), 6.70 (d, J=8.6 Hz, 2H, H-3',およびH-5'), 6.83 (d, J=8.7Hz, 2H, H-3''およびH-5''), 7.01 (d, J=8.5 Hz, 2H, H-2'およびH-6'), 7.12 (d, J=8.4Hz, 1H, H-5), 7.24 (d, J=8.6Hz, 2H, H-2''およびH-6''); 13Ｃ RMN (ＣＤ3ＯＤ, 75 MHz) δppm 14.84, 22.50, 23.99, 54.78, 57.03, 62.97, 81.22, 104.38, 109.11, 115.35, 116.01, 118.68, 125.78, 126.33, 130.26, 130.72, 131.29, 131.59, 134.26, 154.42, 157.56, 158.96, 159.33. 基本成分: C, H, N, Cl : 理論値 ; 70.51, 6.53, 2.84, 7.18, %, 測定値 : 70.31, 6.75, 2.65, 6.89% 。
【０１５９】
実施例７
アンドロスト-5-エン-3β，17β-ジオールのプロドラッグの生物学的利用能のインビボアッセイ
１）原理
性ステロイド前駆体のプロドラッグの生物学的利用能のアッセイを該化合物の単独の経口投与後の該化合物の血漿濃度の測定により雄性Sprague Dawleyラットにおいて実施した。
【０１６０】
ａ）動物および処置
体重275-350ｇの雄性Sprague Dawleyラット [Crl:CD(SD)Br]をCharles-River Canada社から入手し、馴化期間はケージあたり２匹を飼育し、研究期間は個々に飼育した。該動物を12時間 明: 12時間 暗 (08:00に点灯)の措置下に維持した。該動物は認証げっ歯類食餌 (Lab Diet # 5002、ペレット)を与えられ、水道水は自由摂取可能にした。投与前の夕方に開始して、ラットを絶食させた(水のみ利用)。
【０１６１】
各試験化合物を、０.４％メチルセルロース中の懸濁液として、経口胃管栄養法により、１５０μｍｇ／ラットの投与量で３動物に投与した。胃管栄養法１、２、３、４および７時間後に、一の血液試料−0.7 mlをイソフルラン誘導麻酔下のラットの頚静脈から採取した。血液試料をただちに冷凍したＥＤＴＡ含有ミクロテナー(Microtainer)に移し、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離までは氷水浴中に保持した。血液採取後、迅速に（５０分間以内に）血漿分離を実施した。ついで、血漿０.２５ｍｌの１アリコートをホウケイ酸チューブ(13 x 100)に移し、ドライアイス上で迅速に凍結させた。GC-MSによる性ステロイドまたは性ステロイド前駆体の血漿濃度の測定まで、血漿試料を−８０℃で維持した。
【０１６２】
結果：
経口吸収およびＡＵＣｓを図１２および１３に示した。
【０１６３】
医薬組成例
以下に、例示でありこれに限定されるものではないが、好適な活性SERM EM-800またはEM-1538および好適な活性性ステロイド前駆体 DHEA、EM-1304またはEM-01474-Dを利用するいくつかの医薬組成物を記載する。本発明の他の化合物またはその組成物は、EM-800またはEM-1538、DHEA、EM-1304またはEM-01474-Dに代えて（または加えて）用いることができる。活性成分の濃度は本明細書中に記載するように広い範囲で異なりうる。含まれうる他の成分の量およびタイプは同業者に周知である。
【０１６４】
例Ａ
【表６】
2007191484.tif 000012
【０１６５】
例Ｂ
【表７】
2007191484.tif 000013
【０１６６】
キット例
以下に、例示でありこれに限定されるものではないが、好適な活性SERM EM-800またはEM-1538および好適な活性性ステロイド前駆体 DHEA、EM-1304またはEM-01474-Dを利用するいくつかのキットを記載する。本発明の他の化合物またはその組成物は、EM-800またはEM-1538、DHEA、EM-1304またはEM-01474-Dに代えて（または加えて）用いることができる。活性成分の濃度は本明細書中に記載するように広い範囲で異なりうる。含まれうる他の成分の量およびタイプは同業者に周知である。
【０１６７】
例Ａ
SERは経口投与され、性ステロイド前駆体は経皮投与される。
SERM組成
【表８】
2007191484.tif 000014
【０１６８】
【表９】
2007191484.tif 000015
【０１６９】
例Ｂ
SERMおよび性ステロイド前駆体は経口投与される。
【表１０】
2007191484.tif 000016
【０１７０】
【表１１】
2007191484.tif 000017
【０１７１】
上記処方中、他のSERMをEM-800またはEM-01538と交換でき、および他の性ステロイド阻害剤をDHEA、EM-1304またはEM-01474-Dと交換できる。１以上のSERMまたは１以上の前駆体が、合計重量％が好ましくは上記例中で与えられた単独の前駆体または単独のSERMについての重量％のものである場合に包含されうる。
【０１７２】
本発明は好適な具体例および例という形で記載されているが、これらに限定されるものではない。当業者は広い適用性および本明細書中特許請求の範囲によってのみ制限される発明の範囲を容易に理解するだろう。
【図面の簡単な説明】
【０１７３】
【図１】ＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口、１日１回）の単独または組合せでの９ヶ月間の処置の、ラットにおけるＤＭＢＡ誘発性乳癌の発生率に対する２７９日の観察期間の効果を示す。データを各群の動物の総数の割合として表す。
【図２Ａ】ＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口、１日１回）の単独または組合せでの９ヶ月間の処置の、腫瘍保有動物当りの平均腫瘍数（Ａ）および腫瘍保有ラット当りの平均腫瘍サイズ（Ｂ）に対する２７９日の観察期間の効果を示す。データを平均±ＳＥＭとして表す。
【図２Ｂ】ＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口、１日１回）の単独または組合せでの９ヶ月間の処置の、腫瘍保有動物当りの平均腫瘍数（Ａ）および腫瘍保有ラット当りの平均腫瘍サイズ（Ｂ）に対する２７９日の観察期間の効果を示す。データを平均±ＳＥＭとして表す。
【図３Ａ】ＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口、１日１回）の単独または組合せでの９ヶ月間の処置の、ラットにおける血清トリグリセリド（Ａ）およびコレステロール（Ｂ）のレベルに対する効果を示す。データを平均±ＳＥＭとして表す。**：Ｐ＜０.０１実験対各コントロール。
【図３Ｂ】ＤＨＥＡ（１０ｍｇ、経皮、１日１回）またはＥＭ−８００（７５μｇ、経口、１日１回）の単独または組合せでの９ヶ月間の処置の、ラットにおける血清トリグリセリド（Ａ）およびコレステロール（Ｂ）のレベルに対する効果を示す。データを平均±ＳＥＭとして表す。**：Ｐ＜０.０１実験対各コントロール。
【図４】Ａ）エストロンを補充した卵巣摘出（ＯＶＸ）ヌードマウスにおける平均ＺＲ−７５−１腫瘍サイズに対する、１日２回経皮投与した漸増用量のＤＨＥＡ（０.３ｍｇ、１.０ｍｇまたは３.０ｍｇ）の効果を示す。ビヒクル単独を投与したコントロールＯＶＸマウスをさらなるコントロールとして使用する。開始腫瘍サイズを１００％とした。ＤＨＥＡを５０％エタノール−５０％プロピレングリコール溶液０.０２ｍｌ中で背部皮膚に経皮（ｐ.ｃ.）投与した。Ｂ）エストロンを補充したＯＶＸヌードマウスにおけるＺＲ−７５−１腫瘍重量に対する９.５ヶ月間の漸増用量のＤＨＥＡまたはＥＭ−８００の単独または組合せでの処置の効果を示す。**、ｐ＜０.０１、処置対エストロン補充コントロールＯＶＸマウス。
【図５】エストロンを補充した卵巣摘出（ＯＶＸ）ヌードマウスにおける平均ＺＲ−７５−１腫瘍サイズに対する９.５ヶ月間の、漸増経口用量の抗エストロゲンＥＭ−８００（１５μｇ、５０μｇまたは１００μｇ）（Ａ）またはＥＭ−８００（１５μｇ）と組合せた漸増用量のＤＨＥＡ（０.３、１.０または３.０ｍｇ）もしくはＥＭ−８００単独の経皮投与（Ｂ）の効果を示す。開始腫瘍サイズを１００％とした。ビヒクル単独を投与したコントロールＯＶＸマウスをさらなるコントロールとして使用した。エストロンを１日１回０.５μｇの用量で皮下投与し、ＤＨＥＡを５０％エタノール−５０％プロピレングリコールに溶解し、０.０２ｍｌの容量で１日２回背部皮膚領域に塗布した。ビヒクル単独を投与したＯＶＸ動物についても比較した。
【図６】卵巣摘出ラットにおける海綿質容積に対するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）単独またはフルタミドもしくはＥＭ−８００との組合せでの１２ヶ月の処置の効果を示す。インタクトな動物をさらなるコントロールとして追加する。データを平均±ＳＥＭとして表す。**ｐ＜０.０１対ＯＶＸコントロール。
【図７】卵巣摘出ラットにおける海綿質数に対するデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）単独またはフルタミドもしくはＥＭ−８００との組合せでの１２ヶ月の処置の効果を示す。インタクトな動物をさらなるコントロールとして追加する。データを平均±ＳＥＭとして表す。**ｐ＜０.０１対ＯＶＸコントロール。
【図８Ａ】インタクトなコントロール（Ａ）、卵巣摘出コントロール（Ｂ）およびＤＨＥＡ単独（Ｃ）またはフルタミド（Ｄ）もしくはＥＭ−８００（Ｅ）との組合せで処置した卵巣摘出ラット由来の近位脛骨骨幹端を示す。卵巣摘出コントロール動物（Ｂ）における海綿質（Ｔ）の量の減少およびＤＨＥＡ投与（Ｃ）後に誘発された海綿質容積（Ｔ）の有意な増加に留意のこと。ＤＨＥＡへのフルタミドの添加は、海綿質容積に対するＤＨＥＡの効果を部分的にブロックし（Ｄ）、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組合せは、卵巣摘出関連骨損失に対する完全な保護を提供した。改変３色マッソン−ゴールドナー（Masson-Goldner）、倍率×８０。Ｔ：海綿質、ＧＰ：成長板。
【図８Ｂ】インタクトなコントロール（Ａ）、卵巣摘出コントロール（Ｂ）およびＤＨＥＡ単独（Ｃ）またはフルタミド（Ｄ）もしくはＥＭ−８００（Ｅ）との組合せで処置した卵巣摘出ラット由来の近位脛骨骨幹端を示す。卵巣摘出コントロール動物（Ｂ）における海綿質（Ｔ）の量の減少およびＤＨＥＡ投与（Ｃ）後に誘発された海綿質容積（Ｔ）の有意な増加に留意のこと。ＤＨＥＡへのフルタミドの添加は、海綿質容積に対するＤＨＥＡの効果を部分的にブロックし（Ｄ）、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組合せは、卵巣摘出関連骨損失に対する完全な保護を提供した。改変３色マッソン−ゴールドナー（Masson-Goldner）、倍率×８０。Ｔ：海綿質、ＧＰ：成長板。
【図８Ｃ】インタクトなコントロール（Ａ）、卵巣摘出コントロール（Ｂ）およびＤＨＥＡ単独（Ｃ）またはフルタミド（Ｄ）もしくはＥＭ−８００（Ｅ）との組合せで処置した卵巣摘出ラット由来の近位脛骨骨幹端を示す。卵巣摘出コントロール動物（Ｂ）における海綿質（Ｔ）の量の減少およびＤＨＥＡ投与（Ｃ）後に誘発された海綿質容積（Ｔ）の有意な増加に留意のこと。ＤＨＥＡへのフルタミドの添加は、海綿質容積に対するＤＨＥＡの効果を部分的にブロックし（Ｄ）、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組合せは、卵巣摘出関連骨損失に対する完全な保護を提供した。改変３色マッソン−ゴールドナー（Masson-Goldner）、倍率×８０。Ｔ：海綿質、ＧＰ：成長板。
【図８Ｄ】インタクトなコントロール（Ａ）、卵巣摘出コントロール（Ｂ）およびＤＨＥＡ単独（Ｃ）またはフルタミド（Ｄ）もしくはＥＭ−８００（Ｅ）との組合せで処置した卵巣摘出ラット由来の近位脛骨骨幹端を示す。卵巣摘出コントロール動物（Ｂ）における海綿質（Ｔ）の量の減少およびＤＨＥＡ投与（Ｃ）後に誘発された海綿質容積（Ｔ）の有意な増加に留意のこと。ＤＨＥＡへのフルタミドの添加は、海綿質容積に対するＤＨＥＡの効果を部分的にブロックし（Ｄ）、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組合せは、卵巣摘出関連骨損失に対する完全な保護を提供した。改変３色マッソン−ゴールドナー（Masson-Goldner）、倍率×８０。Ｔ：海綿質、ＧＰ：成長板。
【図８Ｅ】インタクトなコントロール（Ａ）、卵巣摘出コントロール（Ｂ）およびＤＨＥＡ単独（Ｃ）またはフルタミド（Ｄ）もしくはＥＭ−８００（Ｅ）との組合せで処置した卵巣摘出ラット由来の近位脛骨骨幹端を示す。卵巣摘出コントロール動物（Ｂ）における海綿質（Ｔ）の量の減少およびＤＨＥＡ投与（Ｃ）後に誘発された海綿質容積（Ｔ）の有意な増加に留意のこと。ＤＨＥＡへのフルタミドの添加は、海綿質容積に対するＤＨＥＡの効果を部分的にブロックし（Ｄ）、ＤＨＥＡおよびＥＭ−８００の組合せは、卵巣摘出関連骨損失に対する完全な保護を提供した。改変３色マッソン−ゴールドナー（Masson-Goldner）、倍率×８０。Ｔ：海綿質、ＧＰ：成長板。
【図９】４日間毎日経口投与した漸増用量（０.０１、０.０３、０.１、０.３および１ｍｇ／ｋｇ）のＥＭ−８００、ＥＭ−１５３８およびラロキシフェン（Raloxifene）（ＥＭ−１１０５）の、卵巣摘出ラットのコレステロールレベルに対する効果を示す。
【図１０】デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）単独またはＥＭ−１５３８（ＥＭ−６５２.ＨＣｌ）との組合せでの３４週間の処置の、卵巣摘出ラットにおける腰椎ＢＭＤに対する効果を示す。インタクトな動物をさらなるコントロールとして追加する。データを平均±ＳＥＭとして表す。**ｐ＜０.０１対ＯＶＸコントロール。
【図１１】閉経パラメーターに対するＳＥＲＭ（ＥＭ−６５２）およびＤＨＥＡの組合せの効果を示す。負の効果は予想されない。
【図１２】雄性ラットにおける本発明の好ましい性ステロイド前駆体の単回経口吸収（１５０μｍｏｌ／ラット）後の時間の関数（Ｘ軸）のＤＨＥＡの血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）（Ｙ軸）を示す。箱中に、これらの化合物によって誘発されたＤＨＥＡのＡＵＣ  ２４ｈを報告する。ＥＭ−７６０          デヒドロエピアンドロステロンＥＭ−９００          アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールＥＭ−１３０４        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール３アセテートＥＭ−１３０５−ＣＳ  アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジアセテートＥＭ−１３９７        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール３アセテート１７ベンゾエートＥＭ−１４００        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジベンゾエートＥＭ−１４１０        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジプロピオネートＥＭ−１４７４−Ｄ    アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジヘミスクシネート
【図１３】雄性ラットにおける本発明の性ステロイド前駆体の単回経口吸収（１５０μｍｏｌ／ラット）後の時間の関数（Ｘ軸）のアンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオールの血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）（Ｙ軸）を示す。箱中に、これらの化合物によって誘発されたアンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオールのＡＵＣ  ２４ｈを報告する。ＥＭ−７６０          デヒドロエピアンドロステロンＥＭ−９００          アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールＥＭ−１３０４        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール３アセテートＥＭ−１３０５−ＣＳ  アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジアセテートＥＭ−１３９７        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール３アセテート１７ベンゾエートＥＭ−１４００        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジベンゾエートＥＭ−１４１０        アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジプロピオネートＥＭ−１４７４−Ｄ    アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールジヘミスクシネート
【図１】
2007191484.tif 000032
【図２Ａ】
2007191484.tif 000033
【図２Ｂ】
2007191484.tif 000034
【図３Ａ】
2007191484.tif 000035
【図３Ｂ】
2007191484.tif 000036
【図４】
2007191484.tif 000037
【図５】
2007191484.tif 000038
【図６】
2007191484.tif 000039
【図７】
2007191484.tif 000040
【図８Ａ】
2007191484.tif 000041
【図８Ｂ】
2007191484.tif 000042
【図８Ｃ】
2007191484.tif 000043
【図８Ｄ】
2007191484.tif 000044
【図８Ｅ】
2007191484.tif 000045
【図９】
2007191484.tif 000046
【図１０】
2007191484.tif 000047
【図１１】
2007191484.tif 000048
【図１２】
2007191484.tif 000049
【図１３】
2007191484.tif 000050
【手続補正書】
【提出日】平成19年4月3日(2007.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症、および乳癌からなる群から選択される症状の治療または該症状に罹患する危険性を減ずるための、
ａ）薬学上許容される賦形剤、希釈剤または担体、および、
ｂ)デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオール、４−アンドロステン−３,１７−ジオン、およびインビボでこれら性ステロイド前駆体のいずれかへと変換されるプロドラッグからなる群から選択される少なくとも１の性ステロイド前駆体の治療有効量を含有し、少なくとも一つの選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量と組み合わせて投与されるものである医薬組成物。
【請求項２】
さらに少なくとも１のビスフォスホネートの治療有効量と組み合わせて投与されるものである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
さらにプロゲスチンの治療有効量と組み合わせて投与されるものである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
骨粗鬆症、高コレステロール血症、高脂血症、および乳癌からなる群から選択される症状の治療または該症状に罹患する危険性を減ずるための、
ａ)薬学上許容される賦形剤、希釈剤または担体、
ｂ)デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオール、４−アンドロステン−３,１７−ジオン、およびインビボでこれら性ステロイド前駆体のいずれかへと変換されるプロドラッグからなる群から選択される少なくとも１の性ステロイド前駆体の治療有効量、および、
ｃ)少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量
を含有する医薬組成物。
【請求項５】
該組成物が少なくとも１のビスフォスホネートの治療有効量をさらに含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
該組成物がプロゲスチンの治療有効量をさらに含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項７】
該前駆体が４−アンドロステン−３,１７−ジオンではない、請求項１から６いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、以下の性質：
ａ)２つの芳香族環が１または２の介在炭素原子により隔てられており、両方の芳香族環が置換されていないかまたはヒドロキシル基またはインビボでヒドロキシル基へと変換される基にて置換されているかのいずれかである；
ｂ)側鎖が芳香族環および三級アミン官能基もしくはその塩を有する、
を有する分子式を有する、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
側鎖が以下の群：
【化１】
2007191484.tif 000051
からなる基から選択される、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
２つの芳香族環の両方がフェニルであり、側鎖がメチン、メチレン、−ＣＯ、−Ｏ−、および−Ｓ−、芳香族環および三級アミン官能基もしくはその塩からなる群から選択される部分を有する、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１１】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがベンゾチオフェン誘導体、トリフェニルエチレン誘導体、インドール誘導体、ベンゾピラン誘導体、およびセントクロマン誘導体からなる群から選択される、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１２】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、以下の式：
【化２】
2007191484.tif 000052
(式中、Ｒ1およびＲ2は独立してそれぞれ水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される；
Ｒ3およびＲ4は、それぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素が共に、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される構造である；
Ａは−ＣＯ−、−ＣＨＯＨ、および−ＣＨ2−からなる群から選択される；
Ｂはフェニレン、ピリジリデンおよび−シクロＣ4Ｈ2Ｎ2−からなる群から選択される)
で示されるベンゾチオフェン誘導体化合物である、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１３】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがラロキシフェン、ＬＹ３５３３８１およびＬＹ３３５５６３からなる群から選択される、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下の式：
【化３】
2007191484.tif 000053
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4または−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯＨである(Ｒ3およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルであるかまたは、Ｒ3、Ｒ4、および両者が結合している窒素原子が共に、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される環状構造をとっている)；
ＥおよびＫはそれぞれ独立して、水素またはヒドロキシルである；
Ｊは水素またはハロゲンである)
で示されるトリフェニルエチレン誘導体化合物である、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１５】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがタモキシフェン、ＯＨ−タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、ヨードキシフェンおよびＧＷ５６３８からなる群から選択される、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下の式
【化４】
2007191484.tif 000054
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ7)Ｒ8、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮ(Ｒ7)Ｒ8、−ＣＣ−(ＣＨ2)n−Ｎ(Ｒ7)Ｒ8(Ｒ7およびＲ8はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ7、Ｒ8および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される、環状構造を形成している)；
Ｘは水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択される；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、およびインビボでヒドロキシル基に変換される基からなる群から選択される)
で示されるインドール誘導体化合物である、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１７】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが式：
【化５】
2007191484.tif 000055
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシル基へと変換される基である；
Ｒ5およびＲ6はそれぞれ独立して水素またはＣ1−Ｃ6アルキルである；
Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4(Ｒ3およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチルー１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される環状基を構成している)である）
で示されるセントクロマン誘導体化合物である、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１８】
セントクロマン誘導体が、(３,４−トランス−２,２−ジメチル−３−フェニル−４−[４−(２−(２−(ピロリジン−１−イル)エトキシ)フェニル]−７−メトキシクロマン)である、請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項１９】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下の式：
【化６】
2007191484.tif 000056
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される基である；
Ｚは２価の閉鎖基である；
Ｒ１００はＬを４-１０原子分、Ｂ−環から隔てる２価の基である；
Ｌは−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜、および−ＳＯＮ＜からなる群から選択される２価または３価の極性基である；
Ｇ1は水素、Ｃ1−Ｃ5炭化水素または、Ｇ2およびＬを結合して５−から７−員の複素環を形成させる２価の基、もしくはハロまたはこれらの不飽和誘導体からなる群から選択される；
Ｇ2は存在しないか、または水素、Ｃ1−Ｃ5炭化水素、もしくはＧ1およびＬを結合して５−から７−員の複素環を形成する２価の基、およびハロまたはこれらの不飽和誘導体からなる群から選択される；
Ｇ3は水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される)
の構造を有している、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
Ｚが−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、および−ＣＨ2−からなる群から選択される、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
該化合物が以下の式：
【化７】
2007191484.tif 000057
(式中、Ｄは−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ(Ｒ3)Ｒ4(Ｒ3およびＲ4はそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4アルキルからなる群から選択されるかまたは、Ｒ3、Ｒ4および両者が結合している窒素原子が共にピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ環からなる群から選択される、環状構造を形成している)である；
Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシル、およびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される)
で示されるベンゾピラン誘導体である、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ベンゾピラン誘導体が、２位の炭素についての絶対配置がＳ型である光学活性化合物であるかまたはその薬学的に許容される塩であり、該化合物の構造が以下の式：
【化８】
2007191484.tif 000058
(式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される基からなる群から選択される；
Ｒ3は飽和、不飽和もしくは置換ピロリジニル、飽和、不飽和もしくは置換ピペリジノ、飽和、不飽和もしくは置換ピペリジニル、飽和、不飽和もしくは置換モルホリノ、窒素含有環状基、窒素含有多環式基、およびＮＲａＲｂ(ＲａおよびＲｂはそれぞれ独立して水素、直鎖もしくは分岐鎖状のＣ1−Ｃ6アルキル、直鎖もしくは分岐鎖状のＣ2−Ｃ6アルケニル、および直鎖もしくは分岐鎖状のＣ2−Ｃ6アルキニルである)である)
を有するものである、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２３】
該化合物もしくはその塩が実質的に(２Ｒ)−エナンチオマーを含有しない、請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２４】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが以下：
【化９】
2007191484.tif 000059
からなる群から選択される、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２５】
ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、くえん酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１,５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバリン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、および吉草酸からなる群から選択される酸との塩である、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２６】
酸が塩酸である、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、式：
【化１０】
2007191484.tif 000060
であり、性ステロイド前駆体が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオールからなる群から選択される、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
インビボで性ステロイド前駆体へと変換される化合物が以下の式、
【化１１】
2007191484.tif 000061
(式中、ＸはＨ−、ＲＯＣ−、ＲＣＯ2ＣＨＲａ−およびＲｂＳＯ2−(Ｒは水素、直鎖または分岐鎖(Ｃ1−Ｃ18)アルキル、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アルケニル、直鎖または分岐鎖(Ｃ2−Ｃ18)アルキニル、アリール、フリル、直鎖または分岐鎖−(Ｃ1−Ｃ18)アルコキシ、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アルケニルオキシ、直鎖または分岐鎖−(Ｃ2−Ｃ18)アルキニルオキシ、アリールオキシ、フリルオキシ、およびこれらのハロゲン化物またはカルボキシル化類縁体からなる群から選択される；Ｒａは水素または(Ｃ1−Ｃ6)アルキルである；およびＲｂはヒドロキシル(またはその塩)、メチル、フェニルおよびｐ−トルイルからなる群から選択される)からなる群から選択される；
Ｙはカルボニル酸素であるかまたはＹはβ−ＯＸ(Ｘは上記と同意)およびα−Ｈを示す)
を有するものである、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
インビボで性ステロイド前駆体へと変換される化合物が、
【化１２】
2007191484.tif 000062
からなる群から選択される、請求項１から７いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
薬学上許容される賦形剤、希釈剤または担体、治療有効量の
【化１３】
2007191484.tif 000063
および治療有効量のデヒドロエピアンドロステロンを含有する、医薬組成物。
【請求項３２】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターがＴＳＥ４２４である、請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項３３】
該組成物が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β,１７β−ジオール、４−アンドロステン−３,１７−ジオン、およびインビボでこれら前駆体のいずれかへと変換されるいずれかのプロドラッグからなる群から選択される少なくとも１の性ステロイド前駆体の治療有効量を含有する第１の容器および；少なくとも１の選択的エストロゲン受容体モジュレーターの治療有効量を含有する第２の容器を含有するキットの形態で提供されるものである、請求項４−３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
該キットが、少なくとも１のさらなる容器を含有し、該容器が少なくとも１のビスフォスホネートの治療有効量を含有している、請求項３３記載の医薬組成物。