(57)【要約】線状前駆体の固相合成によってトランクアミドAおよびその他シクロヘプタペプチド類を形成することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
線状ヘプタペプチド前駆体の固相合成によるシクロヘプタペプチドの調製。
【請求項２】
環状ペプチドの骨格の部分としての5員環複素環を含むシクロヘプタペプチドの調製方法であって、複素環形成用に構成されているまたは複素環を含んでいる前駆体として環化用に構成されている線状ペプチド前駆体を固相合成すること、および前記線状ヘプタペプチドを環化し必要なら複素環を形成することを含む方法。
【請求項３】
固相が超酸に不安定なクロロトリチルクロリド樹脂である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
ペプチド鎖をフルオレニルメチルオキシカルボニルベース法を使用して延長する、請求項2または3に記載の方法。
【請求項５】
複素環形成用に構成された線状ヘプタペプチドを環化して、複素環形成用に構成されたシクロヘプタペプチドを生成させること、および、次に複素環を形成することを含む、請求項2、3または4に記載の方法。
【請求項６】
次の段階を含み、
【化１】
2004534746.tif 000030
式中、Aaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、Aaa６はアミノ酸を表し、XはOまたはSであり、AはOまたはNHである、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
XがOまたはSであり、閉じた環がオキサゾリンまたはチアゾリンである、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
XがSであり、閉じた環がチアゾリンである、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
複素環を含む線状ヘプタペプチド前駆体を形成すること、および、次に前記線状ヘプタペプチドを環化することを含む、請求項2、3または4に記載の方法。
【請求項１０】
次の段階を含み、
【化２】
2004534746.tif 000031
式中、Fmocがフルオレニルメチルオキシカルボニルであり、ペプチドがアミノ酸を意味するAaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、Aaa６であり、球が固相であり、DがS、OまたはNHである、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
線状ヘプタペプチドの環化によって形成された複素環をさらに反応させて、芳香族複素環を形成する、請求項9または10に記載の方法。
【請求項１２】
次式(III)の化合物。
【化３】
2004534746.tif 000032
[上式で、Aaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６は、それぞれ独立に、該当するならLまたはD配置のα-アミノ酸であり、Aaa１は独立にアミノアゾール5員環複素環であり、R１、R２、R３、R４、R５、R６、R７、R８はそれぞれ独立にH、またはアルキル基、アルケニル基、アリール基、アラルキル基、およびヒドロキシ基、メルカプト基、アミノ基、グアジニノ基、ハロゲノ基で置換されたそれらの誘導体からなる群から選択された有機基であり、Xは独立にO、S、またはNHであり、Rａ、Rｂ、Rｃ、Rｄ、Rｅ、Rｆ、およびRｇはそれぞれ独立にH、またはアルキル基からなる群から選択された有機基であり、Rｇは存在しなくてもよく、Rａ-R１、Rｂ-R３、Rｃ-R５、Rｄ-R６、Rｅ-R７、およびRｆ-R８の各対は同一アルキル基の一部分を形成し、したがって対応するアミノ酸が環状アミノ酸であることが可能であり、Yは独立にCまたはCHであり、各Zはそれぞれ独立にCHまたはCH２であり、鎖線は許容される第2の結合を示し、ただし例外としてトランクアミドAおよび立体異性体はC(45)立体中心でL配置を有する]
【請求項１３】
次式(II)の化合物。
【化４】
2004534746.tif 000033
[上式で、Aaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６は、それぞれ独立に、該当するならLまたはD配置のα-アミノ酸であり、Aaa１は独立にアミノアゾール5員環複素環であり、R１、R２、R３、R４、R５、R６、R７、R８はそれぞれ独立にH、またはアルキル基、アルケニル基、アリール基、アラルキル基、およびヒドロキシ基、メルカプト基、アミノ基、グアジニノ基、ハロゲノ基で置換されたそれらの誘導体からなる群から選択された有機基であり、Xは独立にO、S、またはNHであり、Rａ、Rｂ、Rｃ、Rｄ、Rｅ、およびRｆはそれぞれ独立にH、またはアルキル基からなる群から選択された有機基であり、Rａ-R１、Rｂ-R３、Rｃ-R５、Rｄ-R６、Rｅ-R７およびRｆ-R８の各対は同一アルキル基の一部分を形成し、したがって対応するアミノ酸が環状アミノ酸であることが可能であり、Yは独立にCまたはCHであり、Zは独立にCHまたはCH２であり、ただし例外としてトランクアミドAおよび立体異性体はC(45)立体中心でL配置を有する]
【請求項１４】
請求項12または13に記載の化合物を製薬上許容される担体と共に含む薬剤組成物。
【請求項１５】
癌治療用薬剤の調製における請求項12または13に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項12または13に記載の化合物あるいは請求項14に記載の組成物を投与することを含む、癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランクアミドA(trunkamide A)および関連構造物を形成するための合成方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
トランクアミドAは、群体ホヤLissoclinum sp.から単離された環状ヘプタペプチド、シクロ[D-Phe-Tzn-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro]である。トランクアミドAはBowden他によって初めて単離され(Carroll,A.R.、Coll,J.C.、Bourne,D.J.、McLeod,J.K.、Zabriskie,T.M.、Ireland,C.M.、Bowden,B.F.、Aust.J.Chem.、1996年、49巻、659-667頁)、複素環外立体中心の絶対配置はL配置とされた。最近になって、Wipf等はまず最初の決定は誤りであったことを立証し(Wipf,P.、Uto,Y.、Tetrahedron Lett.、1999年、40巻、5165-5169頁)、後にC(45)の立体中心はD-配置を有することを明らかにした(Wipf,P.、Uto,Y.、J.Org,Chem.、2000年、65巻、1037-1049頁)。
【０００３】
それに従って、トランクアミドAの構造を以下に示す。
【０００４】
【化１】
2004534746.tif 000002
【０００５】
D-Phe-Tznは、シクロヘプタペプチドのここではアミノ酸1および7と呼ぶ2種類のアミノ酸から形成され、D-Pheはアミノ酸7である。
【０００６】
トランクアミドAは、有望な抗腫瘍活性を有し、WO9739025の主題である。
【０００７】
J.Org.Chem.、2000年、65巻、1037-1049頁の論文で、Wipf等は、溶液中でアラニンとイソロイシンとの間を閉環させることを含むトランクアミドAの合成法を提案し、チアゾリン環の代わりにオキサゾリン環を有するシクロヘプタペプチドを合成している。さらに処理を加えることによってトランクアミドAが得られる。同著者らは、その他にもプロリン/フェニルアラニンアミドなどの閉環の可能性を探ってみたが、他には見込みのある方法を見出すことができなかったと述べている。
【０００８】
また、Tetrahedron Lett.、42巻(2001年)、2573-2577頁には、McKeeverおよびPattendenによる溶液中でのトランクアミドAの合成が見受けられる。
【特許文献１】
WO9739025
【非特許文献１】
Carroll,A.R.、Coll,J.C.、Bourne,D.J.、McLeod,J.K.、Zabriskie,T.M.、Ireland,C.M.、Bowden,B.F.、Aust.J.Chem.、1996年、49巻、659-667頁
【非特許文献２】
Wipf,P.、Uto,Y.、Tetrahedron Lett.、1999年、40巻、5165-5169頁
【非特許文献３】
Wipf,P.、Uto,Y.、J.Org,Chem.、2000年、65巻、1037-1049頁
【非特許文献４】
Tetrahedron Lett.、42巻(2001年)、2573-2577頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、トランクアミドAおよび関連化合物の新規な合成法ならびに新規なトランクアミドA誘導体を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
詳細には、本発明は、線状ヘプタペプチド前駆体の固相合成によってシクロヘプタペプチドを調製することに関する。
【００１１】
本発明は、特に、アミノ酸の骨格部分としてチアゾリンなどの5員環複素環を含むシクロヘプタペプチドを調製することを対象とする。この目的のために、本発明は、線状ヘプタペプチド前駆体の固相合成を経由してシクロヘプタペプチドを調製することを含んでおり、この線状前駆体は環、または環を形成するのに都合のよい官能基を含んでいる。本発明のこの態様において、本方法は、複素環形成用に構成されているまたは複素環を含んでいる前駆体として環化用に構成されている線状ペプチド前駆体を固相合成すること、および当該線状ヘプタペプチドを環化し、必要なら複素環を形成することを含んでいる。
【００１２】
一般に、5員環複素環は次式を有する。
【００１３】
【化２】
2004534746.tif 000003
上式でXは独立にO、S、またはNHであり、それぞれのYは独立にCまたはCHであり、Zは独立にCHまたはCH２であり、RｇはHまたは有機基であるかまたは存在せず、それぞれの鎖線は許容される第2の結合を示す。
【００１４】
したがって、本発明の生成物は、次の一般式を有する。
【００１５】
【化３】
2004534746.tif 000004
上式でAaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、Aaa６は独立にα-アミノ酸残基であり、R１はHまたは有機基であり、Rｇ、X、Y、Zおよび鎖線は上で定義したと同様である。複素環はアミノ酸Aaa１とアミノ酸Aaa７との一部分が融合することによって形成される。
【００１６】
本発明の合成方法によって、次式(III)のような化合物を形成することが可能になる。
【００１７】
【化４】
2004534746.tif 000005
上式でAaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６は、それぞれ独立に、該当するならLまたはD配置のα-アミノ酸であり、Aaa１はAaa7と一緒になってアミノアゾール5員環複素環を形成し、R１、R２、R３、R４、R５、R６、R７、R８はそれぞれ独立にH、またはアルキル基、アルケニル基、アリール基、アラルキル基、およびこれらにヒドロキシ基、メルカプト基、アミノ基、グアジニノ基、ハロゲノ基が置換している誘導体からなる群から選択された有機基であり、Xは独立にO、S、またはNHであり、Rａ、Rｂ、Rｃ、Rｄ、Rｅ、Rｆ、およびRｇはそれぞれ独立にH、またはアルキル基からなる群から選択された有機基であり、またRｇは存在しなくてもよく、Rａ―R１、Rｂ-R３、Rｃ-R５、Rｄ-R６、Rｅ-R７、およびRｆ-R８の各対は同一アルキル基の一部を構成し、したがって対応するアミノ酸が環状アミノ酸であることが可能であり、Yは独立にCまたはCHであり、Zは独立にCHまたはCH２であり、鎖線は許容される第2の結合を示し、ただし例外としてトランクアミドAおよび立体異性体はC(45)立体中心でL配置を有する。
【００１８】
化合物の薬剤組成物、ならびに、その組成物調製への化合物の使用および治療方法としての化合物の使用を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
好ましい固相は超酸に不安定な塩化クロロトリチル樹脂である。固相合成は、好ましくはアミノ酸6で開始し、次に、アミノ酸5、4、3、2、1および7の順に添加する。アミノ酸の番号付けはトランクアミドAの場合に準拠する。ペプチド鎖は、好ましくはフルオレニルメチルオキシカルボニルベース法を使用して延長される。
【００２０】
本発明の方法には、線状ヘプタペプチドを環化すること、および複素環を形成することが含まれる。環化の段階は複素環形成段階の前でも後でもよい。複素環は、通常、環状ヘプタペプチドのアミノ酸1およびアミノ酸7と称する二つのアミノ酸の官能基間で形成される。本発明において、環化は一般にアミノ酸6のCOOHとアミノ酸7のNH２との間で起こり、アミノ酸1とアミノ酸7との間の融合によって形成される複素環が得られる。
【００２１】
一形態として、本方法は、複素環形成用に構成した線状ヘプタペプチドを環化して複素環形成用に構成されたシクロヘプタペプチドを得ること、および、次いで複素環を形成することを含む。このような方法は次の段階を含むことができる。
【００２２】
【化５】
2004534746.tif 000006
上式で、Aaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６はアミノ酸を表し、XはOまたはSであり、AはOまたはNHであり、Rａは前に定義したと同様で、通常はHである。R１はHまたは有機基である。次いで、中間生成物を閉環してアゾールにすることができる。C=XがC=Sである場合には、環はチアゾリンとなる。C=SをC=Oで置換えてオキサゾリンを得ることができる。イミダゾリンを得るためには、C=SをC=Oで置換え、OHをNH２で置換える。好ましくはXがOまたはS、閉じた環がオキサゾリンまたはチアゾリンであり、より好ましくはXがS、閉じた環がチアゾリンである。
【００２３】
本方法の別の形態として、本方法は、固相合成によって複素環を含んでいる線状ヘプタペプチドを形成し、次いでその線状ヘプタペプチドを環化することを含む。通常、環はアミノ酸7を付加する際に形成される。このような方法は次に示す段階を含む。
【００２４】
【化６】
2004534746.tif 000007
上式で、Fmocはフルオレニルメチルオキシカルボニルなどの保護基であり、Peptideはアミノ酸を表すAaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６であり、膨張球は固体相であり、RａおよびR１は前に定義したと同様であり、DはS、O、またはNHである。
【００２５】
この形態の一変更形態として、形成された飽和複素環をさらに反応させて芳香族複素環を形成し、Dの種類に応じてチアゾール、オキサゾールまたはイミダゾールが得られる。
【００２６】
詳細には、次の段階に従って本発明方法を進行させることができる。
【００２７】
【化７】
2004534746.tif 000008
【００２８】
本発明方法は、逆プレニル置換基を有するシクロヘプタペプチドに特に適している。
【００２９】
本発明方法は、式(III)を有する新規なトランクアミドA類似体の調製に適している。式(II)を有する化合物群が好ましい。
【００３０】
【化８】
2004534746.tif 000009
上式で、Aaa２、Aaa３、Aaa４、Aaa５、およびAaa６は、それぞれ独立に、該当するならLまたはD配置のα-アミノ酸であり、Aaa１は独立にアミノアゾール5員環複素環であり、R１、R２、R３、R４、R５、R６、R７、R８はそれぞれ独立にH、またはアルキル基、アルケニル基、アリール基、アラルキル基、およびこれらにヒドロキシ基、メルカプト基、アミノ基、グアジニノ基、ハロゲノ基が置換している誘導体からなる群から選択された有機基であり、Xは独立にO、S、またはNHであり、Rａ、Rｂ、Rｃ、Rｄ、Rｅ、およびRｆはそれぞれ独立にH、またはアルキル基からなる群から選択された有機基であり、Rａ-R１、Rｂ-R３、Rｃ-R５、Rｄ-R６、Rｅ-R７、およびRｆ-R８の各対は同一アルキル基の一部分を構成し、したがって対応するアミノ酸が環状アミノ酸であることが可能であり、Yは独立にCまたはCHであり、Zは独立にCHまたはCH２である。
【００３１】
本明細書で、用語「有機基」は、脂肪族基、環式基、または脂肪族基と環式基の結合物(たとえばアラルキル基)として分類される炭化水素基を意味する。本発明のこの文脈において、用語「脂肪族基」は、飽和もしくは不飽和の直線状または分岐状の炭化水素を意味する。この用語はたとえばアルキル、アルケニル、およびアルキニル基を含むものとして使用される。用語「アルキル基」は、飽和の直線状または分岐状炭化水素基を意味し、たとえばメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、t-ブチル、ヘプチル、デシル、オクタデシル、アミル、2-エチルヘキシル、2-メチルブチル、5-メチルヘキシルなどが含まれる。用語「アルケニル基」は、ビニル基のように1個または複数の炭素-炭素二重結合を有する不飽和の直線状または分岐状炭化水素基を意味する。用語「アルキニル基」は、1個または複数の炭素-炭素三重結合を有する不飽和の直線状または分岐状炭化水素基を意味する。用語「環式基」は、脂環式基、芳香族基、または複素環基として分類される閉じた環状の炭化水素基を意味する。用語「脂環式基」は、脂肪族基に類似した性質を有する環状の炭化水素基を意味する。用語「芳香族基」または「アリール基」は、単環式または多環式の芳香族炭化水素基を意味する。用語「複素環基」は、環中の1個または複数の原子が炭素以外の元素(たとえば、窒素、酸素、硫黄など)である閉じた環状の炭化水素を意味する。
【００３２】
本技術分野で周知のごとく、広い範囲での置換が許容されるのみならず、むしろ望ましいことも多い。本発明の化合物についても置換が行われる。本出願中で使用されるある術語の考察および説明を簡単にする手段として、用語「基」および「部分」を使用して、置換が許されるまたは置換できる化学種と、許されないまたは置換できない化学種とを区別する。したがって、化学置換基を記述するのに用語「基」を使用しているとき、記述される化学材料は、非置換の基、および鎖中にたとえばO、S、またはS原子を含む基、ならびにカルボニル基またはその他の通常の置換を有する基を含む。用語「部分」を使用して化合物または置換基を記述している場合、非置換の化学素材のみが含まれることを意味している。たとえば、「アルキル基」という言葉は、メチル、エチル、プロピル、イソブチルなど、純粋な開いた鎖状飽和炭化水素アルキル置換基のみならず、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシル、カルボキサミド、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アルキルスルフォニルなど、当技術分野で知られているさらなる置換基が付いたアルキル置換基も含まれることを意味する。したがって、「アルキル基」には、エーテル類、ハロアルキル、アルコール、チオール、カルボキシル、アミン、ヒドロキシアルキル、スルホアルキルなどが含まれる。一方、「アルキル部分」という言葉は、メチル、エチル、プロピル、イソブチルなど、純粋な開いた鎖状飽和炭化水素アルキル置換基だけの範囲に限定される。
【００３３】
Rａ-R１、Rｂ-R３、Rｃ-R５、Rｄ-R６、Rｅ-R７およびRｆ-R８のうちの1対または複数対が同一アルキル基の一部分を形成し、したがって対応するアミノ酸が環状アミノ酸である場合には、アミノ酸がプロリンまたはそれに関連したアミノ酸であることが好ましい。このような考慮は特にRｆ-R８に適用される。
【００３４】
式(II)で表される化合物の好ましい実施形態がトランクアミドA(I)である。ただし、Aaa-1はD-Phe-L-Tzn(Rａ=H、X=S、R１=ベンジル、Y=CH、Z=CH２)、Aaa-2はL-The(rPre)(Rｂ=H、R２=1,1-ジメチルアリル、R３=メチル)、Aaa-3はL-Ser(rPre)(Rｃ、R５=H、R４=1,1-ジメチルアリル)、Aaa-4はL-Ile(Rｄ=H、R６=1-メチルプロピル)、Aaa-5はL-Ala(Rｅ=H、R７=メチル)、およびAaa-6はL-Pro(Rｆ=CH２、R６=CH２-CH２)である。
【００３５】
トランクアミドAの誘導体には、R２および/またはR４が、メチル、t-ブチルなどのアルキル基、アリル基、またはベンジルなどのアラルキル基である化合物が含まれる。誘導体には更に、R１が置換アラルキル基、特にパラ置換ベンジル基、たとえばp-フルオロベンジル、p-トリフルオロメチルベンジである化合物が含まれる。他の例としては、R１が場合によってはインドール、イミダゾール、チアゾールなどの置換ヘテロアリール、または場合によってはフェニルなどの置換アリールである化合物が含まれる。
【００３６】
本方法によって作られるもう1つの化合物はモルアミド(mollamide)であるが、Aust.J.Chem.、1994年、47巻、61頁を参照されたい。
【００３７】
本発明の化合物は抗腫瘍活性を有し、罹患個体に治療上有効な量の本発明の化合物、またはその薬剤組成物を投与することを含む、癌に罹患した任意の哺乳動物、特にヒトの治療方法において有用である。
【００３８】
本発明の薬剤組成物の例としては、適切な組成を有する任意の固体(錠剤、ピル、カプセル、顆粒など)または液体(溶液、懸濁液または乳濁液)、あるいは経口、局所または非経口投与が挙げられ、これらの組成物はその化合物を単一の形で含んでいてもよいし、任意の担体または他の薬学的活性化合物と組み合わせて含んでいてもよい。非経口投与の場合には、これらの組成物を滅菌する必要があるかもしれない。
【００３９】
本発明の化合物または組成物は、静脈注入、経口製剤、腹膜、静脈投与など適切な方法で投与できる。化合物の適正投与量は、その個々の製剤、適用方式、および治療すべき個々の部位、宿主、腫瘍に応じて異なる。年齢、体重、性別、食餌、投与時刻、排泄速度、宿主の状態、薬剤の併用、反応感度、疾患の重篤度など、その他の要因も考慮される。投与は最大許容投与量の範囲内で連続的または定期的に実施できる。
【００４０】
本発明の化合物および組成物を他の薬剤と共に使用して併用療法を行うことができる。他の薬剤は、その組成物の一部分を構成してもよいし、あるいは、別個の組成物として準備し、同時または別な時間に投与することもできる。他の薬剤の種類としては特に制限はないが、適切な候補には、
a)有糸分裂効果を持つ薬剤、特に、タキサン剤(たとえばタキソール、パクリタキセル、タキソテール、ドセタキセル)、ポドフィロトキシンまたはビンカアルカロイド(ビンクリスチン、ビンブラスチン)などの微小管調節因子を含有する、細胞骨格成分を標的とする薬剤。
b)5-フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビンなどの代謝拮抗薬、ペントスタチン、メトトレキサートなどのプリン類似体。
c)ナイトロジェンマスタード(たとえばシクロホスファミドまたはイホスファミド)などのアルキル化剤。
d)アントラサイクリン剤アドリアマイシン、ドキソルビシン、ファルモルビシンまたはエピルビシンなどDNAを標的とする薬剤。
e)エトポシドなどトポイソメラーゼを標的とする薬剤。
f)エストロゲン、アンチエストロゲン(タモキシフェンおよびその関連化合物)およびアンドロゲン、フルタミド、リュープロレリン、ゴセレリン、サイプロトロン、オクトレオチドなどのホルモンおよびホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト。
g)ヘルセプチンなどの抗体誘導体を含めて、腫瘍細胞中のシグナル伝達を標的とする薬剤。
h)白金剤(シスプラチン、カルボンプラチン、オキサリプラチン、パラプラチン)またはニトロソウレアなどのアルキル化剤。
i)マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤など腫瘍転移に潜在的に影響を及ぼす薬剤。
j)遺伝子治療およびアンチセンス剤。
k)抗体療法、
l)その他海洋由来の生物活性化合物、特に、アプリジンなどのジデムニン、およびエクチナサイジン743などのエクチナサイジン類が含まれる。
【００４１】
本発明の方法を例示的にトランクアミドAの調製に適用した場合の好ましい合成方法を反応式1に示す。
【００４２】
【化９】
2004534746.tif 000010
【００４３】
上記の反応式1で示したように、トランクアミドA(I)および誘導体もしくは類似体を合成的に形成するための好ましい方法は、固相法に基づくものであり、
(a)Fmoc-アミノ酸(Aaa６)を、超酸に不安定なハンドルすなわちリンカー(たとえば、クロロトリチル、ポリアルコキシベンジルなど)を含む固体担体(たとえば、ポリスチレン、ポリスチレン上にグラフトしたポリエチレンなど)上に組み込み、エステル結合を形成する段階、
(b)Fmoc/tBu法を使用して4個のアミノ酸(Aaa５、Aaa４、Aaa３、Aaa２)でペプチド鎖を延長する段階、
(c)保護されていない側鎖ヒドロキシ官能基を有するFmoc-Ser-OHを組み込む段階、
(d)Fmoc-Phe(S)-OHをその6-ニトロベンゾトリアゾール誘導体を経由して組み込む段階、
(e)固体支持体から側鎖保護ペプチドを切り離す段階、
(f)ペプチド結合によって環化する段階、
(g)チアゾリンを形成する段階、
(h)該当するならイソプレニル以外の側鎖保護基を除去する段階
から成る一連の段階を含んでいる。
【００４４】
この方法は、合成操作の間中、組立中の分子が不溶性支持体に拘束されている固相合成法を利用しているので、エナンチオマーの構造および立体構造が制御され、かつ迅速でもある(Lloyd-Williams,P.、Albericio,F.、Giralt,E.による著書、Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins、CRC Press、Boca Raton(フロリダ州)、1997年参照)。それと共に、適切な溶媒で分子-樹脂を洗浄することによって、過剰の試薬および溶解性副産物を簡単に除去することができる。したがって、短時間で反応を完結させる目的で大過剰の溶解性試薬を使用することが可能となり、ラセミ化(該当するなら)およびその他の二次的反応を回避できる。また、この方法は自動化もし易い。
【００４５】
トランクアミドAの場合、本発明の方法には、他のAaa間での閉環に先立ってAaa-1とAaa-6との間で環化させることを含んでいる。
【００４６】
トランクアミドAの場合、本方法における環化後の最終段階はAaa-1の一部である環部分を形成することである。手順を変更して容易に他の複素環誘導体が得られる。式(II)にはチアゾリン、オキサゾリンおよびイミダゾリン、ならびに芳香族誘導体すなわちチアゾール、オキサゾール、およびイミダゾールが含まれ、一方、式(III)には更にチアゾリジン、オキサゾリジンおよびイミダゾリジンが含まれる。
【００４７】
トランクアミドAの場合、関連する反応は樹脂に拘束されたSer-ペプチドとFmoc-D-Phe(S)-Btの間の反応であり、チア化合物が得られる。オキサ誘導体の場合は、カップリング試薬(たとえば、DIPCDI)の存在下での、樹脂に拘束されたSer-ペプチドとFmoc-D-Phe-OHの間での反応である。アゾ(SまたはOの代わりにN)の場合は、樹脂に拘束されたジアミノプロピオン酸(Dapa)-ペプチドとFmoc-D-Phe-OHクロロイミデートの間の反応となる。
【００４８】
その他の環を調製する場合、鍵となる反応は、Fmoc-D-Phe-H(Fmoc-D-Phe-OHのアルデヒド誘導体)と、Sについては樹脂に拘束されたCys-ペプチドと、Oについては樹脂に拘束されたSer-ペプチドと、Nについては樹脂に拘束されたdapa-ペプチドとの間の反応である。この反応段階によって不飽和複素環が生成し、続いてMnO２を用いて芳香族とすることができる。
【００４９】
本発明の手順は、R２およびR４の一方または双方が1.1-ジメチルアリルなどの作用を受け易い置換基を有する化合物に特に適している。
【００５０】
本方法の好ましい点は、効率的で、迅速で、信頼性のある固相法を利用することである。第2に、構成ブロックであるFmoc-Ser(rPre)-OHおよびFmoc-Thr(rPre)-OHの調製方法は新規であり、スケールアップが容易である。第3に、Fmoc-D-Phe(S)-OHを導入することによってペプチド鎖上で硫化する必要がなくなる。
【００５１】
本発明の方法をWipfの提案した方法(J.Org.Chem.、2000年、65巻、1037-1049頁)と比較した場合の主な相違点は、(i)本方法はペプチド鎖の延長に固相法を採用し、Wipfは溶液法を使用、(ii)本方法での構成ブロックであるFmoc-Ser(rPre)-OHおよびFmoc-Thr(rPre)-OHの調製方法はより直接的であり、合成段階がより少なく、スケールアップがより容易であるが、Wipfはアジリジン環のレギオ選択的開環を使用、(iii)WipfはPhe残基をアミノ酸として導入、本方法ではアミノチオ酸として導入している。Wipf法では、脱水してオキサゾリンを生成させ、次いでH２Sでオキサゾリン環を開環し(本発明と同じ中間体であるチオアミドペプチドを形成するためのかなり厄介な反応)、最後にDASTを用いて脱水しなければならない。この最後の段階はどちらの方法でも共通である。
【００５２】
要約すれば、本発明はWipfが述べている方法に優る利点を提供するものである。
【００５３】
本発明の好ましい方法を反応式1に示す。反応式中に示し、また、後記実施例の中でより詳細に説明するように、本方法は以下の如く実施される。
【００５４】
該当する場合、イソプレニル型のヒドロキシ官能基を有する、Fmoc-Aaa２-OHおよびFmoc-Aaa３-OHの調製は、双方とも対応するNα-Fmoc-O-t-ブチル-アミノ酸から次の順次的反応によって実施される。すなわち、(a)アルコール、DIPCDI、およびDMAPとの反応による、トリクロロエチルエステルの形でのカルボキシル基の保護、(ii)TFA-H２O(19:1)によるt-ブチル基の除去、(iii)対応するトリクロロアセトイミデートとの反応によるエーテルの形成(Armstrong,A.、Brackenridge,I.、Jackson,R.F.W.、Kirk,J.M.、Tetrahedron Letters、1988年、29巻、20、2483-2486頁参照)、(iv)Pd/Cおよびキノリンの存在下での接触水素化による三重結合から二重結合への部分還元、(v)ZnおよびNH４OAcによるトロクロロエチルエステルの除去、である。
【００５５】
Fmoc-Aaa６-OHを、DIEAの存在下で、置換濃度を0.5ミリモル/g以下に保ちながら、好ましくはクロロトリチル-ポリスチレン樹脂(Barlos,K.、Gatos,D.、Schafer,W.、Angew.Chem.Int.Ed.Engl.、1991年、30巻、590-593頁参照)に組み込んだ。負荷量を増やすと最終産物中に連鎖停止ペプチドが存在するようになる(Chiva,C.、Vilaseca,M.、Giralt,E.、Albericio,F.、J.Pept.Sci.、1999年、5巻、131-140頁参照)。
【００５６】
Fmoc-Aaa-OHのカップリングはDMF中、DIPCDI(Fmoc-Aaa-OHに対して等モル量)を用い90分間で行った。Fmoc-Aaa５-OHおよびFmoc-Aaa４-OHには5当量の過剰量を、Fmoc-Aaa３-OHおよびFmoc-Aaa２-OHには1.7当量、Fmoc-Ser-OHには4当量を使用した。
【００５７】
Fmoc-アミノチオ酸は、6-ニトロベンゾトリアゾール誘導体の形で(Shalaby,M.A.、Grote,C.W.、Rapoport,H.、J.Org.Chem.、1996年、61巻、9045-9048頁)、3当量過剰に使用し、90分で組み込んだ。
【００５８】
Fmoc基の除去は、ピペリジン-DMF(2:8、v/v)(1分×1回、5分×3回、10分×1回)を用いて行った。カップリングの後、ニンヒドリン試験を行い、陽性の場合は同一条件で次のカップリングを行い、そうでない場合はその工程を続行した。脱保護段階、カップリング段階の繰返しの間の洗浄は、各回とも10mL/gの溶媒、DMF(0.5分×5回)およびCH２Cl２(0.5分×5回)を用いて行った。
【００５９】
保護ペプチドの開裂はHFIP-CH２Cl２(1:4、3分×4回)を用いて行った(Bollhagen,R.、Schmiedberger,M.、Barlos,K.、Grell,E.、J.Chem.Soc.,Chem.Commun.、1994年、2559-2560頁参照)。
【００６０】
環化段階はDMF中、PyAOP-DIEA(2:4当量)を用い、1時間で実施した(Albericio,F.、Cases,M.、Alsina,J.、Triolo,S.A.、Carpino、L.A.、Kates,S.A.、Tetrahedron Lett.、1997年、38巻、4853-4856頁参照)。
【００６１】
チアゾリンは、好ましくはDAST試薬によるSerのβ-ヒドロキシ基の活性化(Halasz,S.P.、Glemser,O.、Chem.Ber.、1970年、103巻、594-602頁、(b)Lafargue,P.、Guenot,P.、Lellouche,J.P.、Heterocycles、1995年、41巻、947-958頁参照)、およびそれに続く硫黄原子による置換によって形成される(Wipf,P.、Miller,C.P.、Venkatraman,S.、Fritch,P.C.、Tetrahedron Lett.、1995年、36巻、6395-6398頁参照)。Burguess試薬など(Atkins,G.M.、Burgess,E.M.、J.Am.Chem.Soc.、1968年、90巻、4744-4745頁、(b)Burguess,E.M.、Penton,H.R.、Taylor,E.A.、J.Org.Chem.、1973年、38巻、26-31頁、またはMitsunobu、Galeotti,N.、Montagne,C.、Poncet,J.、Jouin,P.、Tetrahedron Lett.、1992年、33巻、2807-2810頁参照)、その他の活性化試薬を使用しても目的の生成物を得られるが、収率は明らかに低い。
【００６２】
トランクアミドおよび誘導体の細胞毒性IC50(モル)。
【００６３】
【表１】
2004534746.tif 000011
【００６４】
発明の実施例
一般手順。Cl-TrtCl-樹脂、保護アミノ酸誘導体、HOBt、PyAOPはPerSeptive Biosystems(Framingham、マサチューセッツ州)、Bachem(Bubendorf、スイス)、Albatross(Montreal、カナダ)、およびNovaBiochem(Laufelfingen、スイス)から入手した。1-(N-Fmoc-D-チオノフェニルアラニル)-6-ニトロベンゾトリアゾールの合成は、Rapoport他によって報告されている方法を使用して行った。DIEA、DIPCDI、ピペリジン、Fmoc-Cl、NMM、クロロ蟻酸イソブチル、4-ニトロ-1,2-フェニレンジアミン、P４S１０、2-メチル-3-ブチン-2-オール、トリクロロアセトニトリル、TFA、DMAP、DCC、HFIP、DAST、10%Pd-C、CF３SO３H、2,2,2-トリクロロエタノール、およびキノリンはAldrich(Milwaukee、ウィスコンシン州)から入手した。DMF、CH２Cl２、CHCl３およびEtOAcはSDS(Peypin、フランス)から、アセトニトリル(HPLC級)およびTHFはScharlau(Barcelona、スペイン)から、ヘキサン、Et２O、およびメタノールはPanreac(Moncada i Reixac、バルセロナ)から入手した。市販の試薬および溶媒はそのまま使用したが、DMFおよびCH２Cl２については窒素でバブリングして揮発性汚染物(DMF)を除去し、4Åの活性モレキュラーシーブ(Merck、Darmstadt、ドイツ)(DMF)、またはCaCl２(CH２Cl２)上に保存し、Et２OはNa上に保存した。
【００６５】
溶液での反応は丸底フラスコ内で実施した。有機溶媒抽出液は無水MgSO４上で乾燥し、続いて40℃未満で溶媒を減圧留去した。固相反応は、ポリエチレン製多孔円盤を付したポリエチレンシリンジ(10/20mL)中で実施した。溶媒および可溶性試薬は吸引によって除去した。Fmoc基の除去はピペリジン-DMF(2:8、v/v)を用いて (1分×2回、20分×2回)実施した。脱保護段階、カップリング段階の繰返しの間の洗浄は、各回とも10mL/gの溶媒、DMF(1分×5回)およびCH２Cl２(1分×5回)を使用して実施した。ペプチドの合成的変換および洗浄は25℃で行った。HPLCカラム(Nucleosil C18逆相カラム、4.6×250mm、10μm)はScharlau(Barcelona、スペイン)より入手した。
【００６６】
HPLC分析は、2液送出ポンプ(LC-6A型)、自動インジェクター(SIL-6A型)、可変波長検出器(SPD-6A型)、システムコントローラー(SCL-6B型)、およびプロッター(C-R6A)で構成される島津製作所製の装置で実施した。UV検出を220nm、流速を1.0mL/分とし、CH３CN(+0.036%TFA)と水(+0.045%TFA)の比が、条件Aでは0:1から1:0まで、条件Bでは1:1から10:0までのリニアーグラジエントを30分に渡って行った。フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲル60 ACC50-70μm SDS(Peypin、フランス)を使用して実施した。旋光度はPerkin-Elmer 241 MC旋光計で測定した。IRスペクトルはNicolet 510 FT-IR分光計で測定した。ACHまたはDHBマトリックスを使用したPerSeptive Biosystems Voyager DE RP、およびMicromass VG-quattroスペクトロメーターでペプチド試料のMALDI-TOF-およびES-MS分析を行った。アミノ酸誘導体のCI-MS分析は、Hewlett Packard HP-5988Aスペクトロメーターで行った。１H-NMR(500MHz、200MHz)および１３C-NMR(50MHz)のスペクトルはBruker DMX-500(11.7T)およびVarian Gemini 200(4.7T)で測定した。ケミカルシフト(δ)はTMSから低磁場側にPPMで表される。カップリング定数はヘルツで表される。
【００６７】
アミノ酸に対する省略形およびペプチドの名称は、J.Biol.Chem.、1972年、247巻、977-983頁のIUPAC-IUB生化学命名委員会の規則に従うが、次の追加的な省略形も使用する。すなわち、ACH、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸;CI、化学イオン化;Cl-TrtCl-resin、塩化2-クロロトリチル-樹脂;DAST、(ジエチルアミノ)硫黄トリフルオリド;DCC、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド;DHB、2.5-ジヒドロキシ安息香酸;DIEA、N,N'-ジイソプロピルエチルアミン;DIPCDI、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド;DMAP、4-ジメチルアミノピリジン;DMF、N,N-ジメチルホルムアミド;ESMS、エレクトロスプレー質量分析;EtOAc、酢酸エチル;Fmoc、9-フルオレニルメトキシカルボニル;Fmoc-Phe(S)-NBt、1-(N-Fmoc-D-チオノフェニルアラニル)-6-ニトロベンゾトリアゾール;HFIP、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール;HPLC、高速液体クロマトグラフィー;HOBt、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール;rPr、1,1-ジメチルアリル、逆プレニル;MALDI-TOF、マトリックス支援レーザー脱離イオン化-飛行時間型;MeOH、メタノール;NMM、N-メチルモルホリン;NMR、核磁気共鳴;Oxa、オキサゾリン;PyAOP、7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N-オキシ-トリス(ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート;SPS、固相合成;Tce、トロクロロエタノール;TFA、トリフルオロ酢酸;THF、テトラヒドロフラン;TMS、トリメチルシリル;Tzn、チアゾリン;UV、紫外である。アミノ酸記号は、特記しない限りL配置を意味する。溶媒比は、特記しない限り容積/容積である。
【実施例１】
【００６８】
Fmoc-Ser-OTce(反応式2)。
Fmoc-Ser(tBu)-OH(1g、2.6ミリモル)をCH２Cl２(7ml)に溶解した。まず、DMAP(0.15g、1.3ミリモル、0.5当量)および2,2,2-トリクロロエタノール(Tce)(0.3mL、3.1ミリモル、1.2当量)を添加し、次いで、N２雰囲気下、0℃でDCC(0.63g、3.1ミリモル、1.2当量)のCH２Cl２(2.5ml)溶液を添加した。反応混合物を室温で18時間攪拌した。有機反応物を0℃まで冷却し、濾過し、濾液を真空で濃縮した。得られた粗品をEtOAc(7mL)に溶解し、10%クエン酸水溶液(10mL×2回)、飽和NaHCO３水溶液(10mL×2回)および食塩水(10mL×2回)で洗浄、乾燥(MgSO４)し、真空濃縮してFmoc-Ser(OtBu)-OTce(1.34g)を得た。本品をさらに精製することなくそのまま使用した。
【００６９】
Fmoc-Ser(tBu)-OTceをTFA-H２O(19:1,10mL)に溶解し、5時間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(EtOAc-ヘキサン、3:7)によって精製し、Fmoc-Ser-OTce(0.83g、1.8ミリモル、2段階での総括収率69%)を得た。
HPLC分析(tＲ 12.2分、条件B)。[α]Ｄ-5.6゜(c 0.01、CHCl３、23℃)。
IR(film)3407、1769、1692、1516、1209、1082cm−１。
CI-MS、C２０H１８O５NCl３に対する計算値457、実測値475[(M+NH４＋、100%)。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値458.0329、実測値458.0332。
【００７０】
【化１０】
2004534746.tif 000012
反応式2
【００７１】
【化１１】
2004534746.tif 000013
【実施例２】
【００７２】
Fmoc-Ser(rPr)-OH(反応式3)。
Fmoc-Ser-OTce(0.83g、1.8ミリモリ)をCH２Cl２-ヘキサン(2:1、4mL)に溶解し、N２雰囲気下で1,1-ジメチルプロピニルトリクロロアセトアミデート(0.41g、1.8ミリモル、1当量)およびCF３SO３H(40μl)を添加した。24時間毎に上記と同量のトリクロロアセトアミデートおよびCF３SO３Hを加えながら、反応混合物を4日間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮し、EtOAc(10mL)に溶解して、飽和NaHCO３水溶液(10mL×2回)、水(10mL×2回)および食塩水(10mL×2回)で洗浄した。有機溶液を乾燥(MgSO４)し、真空で濃縮し、Fmoc-Ser-OTceの1,1-ジメチルプロピニルエーテル(0.95g)を得た。本品をさらに精製することなくそのまま使用した。
【００７３】
Fmoc-Ser-OTceの1,1-ジメチルプロピニルエーテルをMeOH(20mL)に溶解し、N２雰囲気下で10%Pd-C(38mg、粗品重量の4%)およびキノリン(0.44mL、粗品g当たり0.45mL)を添加した。雰囲気をN２からH２に変更し2時間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(CHCl３-ヘキサン、8:2)で精製し、Fmoc-Ser(rPr)-OTce(0.38g、0.72ミリモル)を得た。
HPLC分析(tＲ 20.7分、条件B)。
[α]Ｄ-26.4゜(c 0.05、CHCl３、23℃)。
IR(film)3442、2979、1782、1506、1451cm−１。
CI-MS、C２５H２６O５NCl３に対する計算値525、実測値526[(M+H)＋、34%]543[(M+NH４)＋、100%]。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値526.0955、実測値526.0940。
【００７４】
【化１２】
2004534746.tif 000014
【００７５】
Fmoc-Ser(rPr)-OTce(0.38g,0.72ミリモル)をTHF(6mL)に溶解し、N２雰囲気下でZn粉末(1.56g、24ミリモル、33.1当量)および1M NH４OAc(1.35mL、1.3ミリモル、1.87当量)を添加した。反応混合物を14時間攪拌し、濾過して真空で濃縮した。粗品をEtOAc(10mL)に溶解し、5%KHSO４水溶液(10mL×2回)および食塩水(10mL×2回)で洗浄、乾燥(MgSO４)し、真空で濃縮して、Fmoc-Ser(rPr)-OH(0.28g、0.71ミリモル、3段階での総括収率40%)を得た。
HPLC分析(tＲ 11分、条件B)。
[α]Ｄ+11゜(c 0.009、CHCl３、23℃)。
IR(film)2977、1725、1510、1451、1209cm−１。
CI-MS、C２３H２５O５Nに対する計算値395、実測値396[(M+H)＋、18%]413[(M+NH４)＋、59%]。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値396.1811、実測値396.1814。
【００７６】
【化１３】
2004534746.tif 000015
反応式3
【００７７】
【化１４】
2004534746.tif 000016
【実施例３】
【００７８】
Fmoc-Thr-OTce。
Fmoc-Ser-OTceの合成に使用した手順に従って、Fmoc-Thr(OtBu)-OH(1g、2.5ミリモル)からFmoc-Thr-OTce(0.81g、1.7ミリモル、2段階での総括収率68%)が得られた。
HPLC分析(tＲ 14分、条件B)。
CI-MS、C２１H２０O５NCl３に対する計算値472、実測値473[(M+H)＋、76%]。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値472.0485、実測値472.0486。
【００７９】
【化１５】
2004534746.tif 000017
【実施例４】
【００８０】
Fmoc-Thr(rPr)-OH。
Fmoc-Ser(OrPr)-OTceの合成に使用した手順に従って、Fmoc-Thr-OTce(0.81g、1.7ミリモル)からFmoc-Thr(OrPr)-OTce(0.34g、0.63ミリモル)が得られた。
HPLC分析(tＲ 21.5分、条件B)。
[α]Ｄ-6.9゜(c 0.024、CHCl３、23℃)。
IR(film)2929、1732、1507、1261、1092cm−１。
ES-MS、C２６H２８O５NCl３に対する計算値539、実測値m/z540[M+H]＋。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値540.1111、実測値540.1112。
【００８１】
【化１６】
2004534746.tif 000018
【００８２】
Fmoc-Ser(rPr)-OHの合成に使用した手順に従って、Fmoc-Thr(rPr)-OTce(0.34g、0.63ミリモル)からFmoc-Thr(rPr)-OH(0.24g、0.6ミリモル、3段階での総括収率35%)が得られた。
HPLC分析(tＲ 13.4分、条件B)。
ES-MS、C２４H２７O５Nに対する計算値409、実測値m/z410[M+H]＋。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値410.1967、実測値410.1974。
[α]Ｄ18.3゜(c 0.009、CHCl３、23℃)。
IR(film)2979、1726、1506、1451、1221cm−１。
【００８３】
【化１７】
2004534746.tif 000019
【実施例５】
【００８４】
H-Pro-O-TrtCl-resin。
ポリエチレンの濾過円盤を取り付けた20mLポリエチレンシリンジ内にCl-TrtCl-樹脂(1g、1.6ミリモル/g)を入れた。次に、この樹脂をCH２Cl２で洗浄(1分×5回)し、Fmoc-Pro-OH(0.27g、0.8ミリモル、0.5当量)およびDIEA(0.28mL、1.6ミリモル、2当量)のCH２Cl２(2.5mL)溶液を添加し、混合物を1時間攪拌した。MeOH(0.8mL)を添加し、さらに10分間攪拌して反応を終了させた。引き続きFmoc-Pro-O-TrtCl-樹脂をCH２Cl２(0.5分×3回)、DMF(0.5分×3回)、ピペリジン-DMF(1:4、1分×2回、20分×2回)、DMF(1分×5回)、イソプロパノール(1分×2回)、DMF(1分×5回)、MeOH(1分×2回)、CH２Cl２(1分×3回)で洗浄/処理し、真空で乾燥した。
【実施例６】
【００８５】
H-D-Phe(S)-Ser-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro-O-TrtCl-樹脂。
上記で得られたH-Pro-O-TrtCl-樹脂に対して、Fmoc-Ala-OH(1.24g、4ミリモル、5当量)、Fmoc-Ile-OH(1.4g、4ミリモル、5当量)、Fmoc-Ser(rPr)-OH(0.54g、1.4ミリモル、1.7当量)、Fmoc-Thr(rPr)-OH(0.56g、1.4ミリモル、1.7当量)およびFmoc-Ser-OH(1.05g、3.2ミリモル、4当量)を、DIPCDI(AlaおよびIleに対しては0.62mL、4ミリモル、5当量;Ser(rPr)およびThr(rPr)に対しては0.21mL、1.4ミリモル、1.7当量;Serに対しては0.49mL、3.2ミリモル、4当量)およびHOBt(AlaおよびIleに対しては0.54g、4ミリモル、5当量;Ser(rPr)およびThr(rPr)に対しては0.18g、1,4ミリモル、1.7当量;Serに対しては0.43g、3.2ミリモル、4当量)のDMF(Ala、IleおよびSerに対して7mL)溶液またはCH２Cl２(Ser(rpr)およびThr(rPr)に対して4mL)溶液を使用して、逐次的に添加した。最後に、ペプチド樹脂にFmoc-D-Phe(S)-NBt(1.32g、2.4ミリモル、3当量)のCH２Cl２(7mL)溶液を添加した。いずれの場合も、カップリング90分でニンヒドリン試験は陰性であった。Fmoc基の除去および洗浄は、一般手順に記載したと同様に行った。
【実施例７】
【００８６】
H-D-Phe(S)-Ser-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro-OH。
HFIP-CH２Cl２(1:4、3分×4回)によって樹脂からペプチドを切り離した。濾液を一緒にして減圧下で蒸発乾固し、0.34gの標記化合物が得られた。HPLC(tＲ 21.2分、条件A)で調べてみると純度＞63%であった。
ES-MS、C４３H６７N７O１０Sに対する計算値873、実測値:m/z874[M+H]＋。
【実施例８】
【００８７】
シクロ[D-Phe(S)-Ser-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro]。
線状ペプチド粗品(0.34g、0.39ミリモル)をCH２Cl２-DMF(9:1、150mL)に溶解し、PyAOP(0.41g、0.78ミリモル、2当量)およびDIEA(0.27mL、1.55ミリモル、4当量)を添加した。混合物を1時間攪拌し、次いで溶媒を減圧下で留去した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー(CHCl３-MeOH、9.8:0.2)で精製し、標記の生成物を得た(100mg、0.12ミリモル、収率15%)。
HPLC分析(tＲ 14.7分、条件B)。
ES-MS、C４３H６５N７O９Sに対する計算値855、実測値856[M+H]＋。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値856.4642、実測値856.4637。
１H-NMR(500MHz、CDCl３)の値を表Ｉに示す。
【００８８】
【表２Ａ】
2004534746.tif 000020
【表２Ｂ】
2004534746.tif 000021
【実施例９】
【００８９】
トランクアミドA。シクロ[D-Phe-Tzn-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro]。
環状ペプチドをCH２Cl２(1mL)に溶解し、N2雰囲気下、-20℃でDAST(17μL、0.13ミリモル、1.1当量)のCH２Cl２(0.1mL)溶液を滴加した。30分後にもう一回1.1当量のDASTを同一条件で添加し、さらに30分間攪拌した。溶媒を減圧下で留去した。粗生成物を、水中のアセトニトリルが30分間で55%から70%になるリニアーグラジエントで、流量3mL/分、検出220nmであるHPLC(Vydac C１８逆相カラム、15〜20μm、250×10mm)によって精製し、標記の生成物を得た(35mg、0.04ミリモル、収率33%)。
HPLC分析(tＲ 16.2分、条件B)。
ES-MS、C４３H６３N７O８Sに対する計算値837.5、実測値m/z838.3[M+H]＋、860.3[M+Na]＋。
HRMS(FAB)ES-MS、計算値838.4537、実測値838.4556。
１H-NMR(600MHz、CDCl３:d６DMSO、7:3)の値を表IIに示す。
【００９０】
【表３Ａ】
2004534746.tif 000022
【表３Ｂ】
2004534746.tif 000023
【実施例１０】
【００９１】
シクロ[L-Phe-Tzn-Thr(rPr)-Ser(rPr)-Ile-Ala-Pro]。
実施例6のFmoc-D-Phe(S)-NBtを、Boc-L-Phe-OHから調製したFmoc-L-Phe(S)-NBtに代えたこと以外は、実施例1〜9に記載したと同様の実験手順で実施し、生成物を解析した。
HPLC分析(tＲ 18.8分、条件B)、
ES-MS、C４３H６３N７O８Sに対する計算値837.5、実測値m/z838.3[M+H]＋、860.3[M+Na]＋、
１H-NMR(500MHz、CDCl３)の値を表IIIに示す。
【００９２】
【表４Ａ】
2004534746.tif 000024
【表４Ｂ】
2004534746.tif 000025
【実施例１１】
【００９３】
シクロ[L-Phe-Tzn-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Ala-Pro]。
500mgの樹脂から出発し、実施例6のFmoc-Ser(rPr)OH、Fmoc-Thr(rPr)-OHおよびFmoc-D-Phe(S)-NBtをそれぞれFmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OHおよびFmoc-L-Phe(S)-NBtに代えたこと以外は実施例5〜9に記載したと同様の実験手順で実施し、生成物を解析した。
HPLC分析(tＲ 18.7分、条件B)、
MALDI-TOF-MS、C４１H６３N７O８Sに対する計算値813.5、実測値m/z814.6[M+H]＋、836.2[M+Na]＋、852.7[M+K]＋、
１H-NMR(500MHz、CDCl３)の値を表IVに示す。
【００９４】
【表５Ａ】
2004534746.tif 000026
【表５Ｂ】
2004534746.tif 000027
【実施例１２】
【００９５】
シクロ[L-Phe-Oxa-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ile-Ala-Pro]。
1gの樹脂から出発し、実施例6のFmoc-Ser(rPr)OH、Fmoc-Thr(rPr)-OHおよびFmoc-D-Phe(S)-NBtをそれぞれFmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OHおよびFmoc-L-Phe(O)-OHに代えたこと以外は実施例5〜9に記載したと同様の実験手順で実施し、
生成物を解析した。
HPLC分析(tＲ 21.1分、条件A)、
ES-MS、C４１H６３N７O９に対する計算値797.5、実測値m/z798.1[M+H]＋、
【００９６】
【化１８】
2004534746.tif 000028
【００９７】
１H-NMR(500MHz、CDCl３)の値を表Vに示す。
【００９８】
【表６】
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【００９９】
本明細書中で引用した各文献のすべての開示を参考として組み込む。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004534746.tif 000082
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