(57)【要約】式（Ｉ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（ここに、＊は（Ｒ）立体異性体を示し；およびＰｈはフェニル基Ｃ６Ｈ５である）を調製するための方法であって、二相系において式（Ｘ）の３−フェニルプロピオンアルデヒドをシアン化合物と、（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼの存在下で反応させることを含み、反応は１０℃未満の温度で、好ましくは、反応は−５°ないし０℃の範囲の温度で行う。調製される式（Ｉ）の化合物は、一般式（Ａ）（ここで、Ｒ’は水素またはＣ１−Ｃ２アルキルであり、Ｒ”は多数の可能性のある部分から選択される）の「プリル」として知られるＡＣＥ阻害剤のファミリーの調製において有用である。「プリル」化合物はキラル化合物であり、それらのジアステレオマーのうちの一つのみが薬理学的に活性である。キラル中間体（Ｉ）の使用は、医薬／医学用途にラセミ混合物を用いることよりもむしろ活性「プリル」ジアステレオマーを単離および精製する必要性を回避する。
2004514662.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル：
＊
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＮ　　　　（Ｉ）
の調製方法であって、ここに、＊は（Ｒ）立体異性体を示し；およびＰｈはフェニル基Ｃ６Ｈ５であり、
その方法は、二相系において、式（Ｘ）の３−フェニルプロピオンアルデヒド：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＯ　　　　　　　　　　（Ｘ）
を、シアン化合物と、（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼの存在下で反応させる工程から成り、その反応は１０℃未満の温度で実行される調製方法。
【請求項２】
反応を５℃未満の温度で行う、請求項１による方法。
【請求項３】
反応を０℃未満の温度で行う、請求項１または請求項２による方法。
【請求項４】
反応を−５°ないし０℃の範囲の温度で行う、請求項１ないし３のいずれかによる方法。
【請求項５】
シアン化合物がシアン化水素である、請求項１ないし４のいずれかによる方法。
【請求項６】
ニトリラーゼの濃度がアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり１．５ｍｇを上回る、請求項１ないし５のいずれかによる方法。
【請求項７】
ニトリラーゼの濃度がアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり２ないし２．２ｍｇの範囲にある、請求項１ないし６のいずれかによる方法。
【請求項８】
反応を４．５ないし６の範囲のｐＨで行う、請求項１ないし７のいずれかによる方法。
【請求項９】
反応を５．４ないし５．６の範囲のｐＨで行う、請求項１ないし８のいずれかによる方法。
【請求項１０】
バッファを０．３ないし１モル濃度の範囲の濃度で用いる、請求項１ないし９のいずれかによる方法。
【請求項１１】
バッファを約０．４ないし０．６モル濃度の範囲の濃度で用いる、請求項１ないし１０のいずれかによる方法。
【請求項１２】
水相の体積の有機相に対する比が１：５ないし５：１の範囲にある、請求項１ないし１１のいずれかによる方法。
【請求項１３】
有機相中のシアン化合物の濃度が体積基準で６ないし６．５％重量の範囲である（例えば、有機相１００ｍｌあたり６ないし６．５ｇのシアン化合物）、請求項１ないし１２のいずれかによる方法。
【請求項１４】
シアン化合物が、シアン化カリウムまたはシアン化ナトリウムを含むアルキル金属シアン化物と塩酸を含む鉱酸との反応によってその場で生成されるＨＣＮである、請求項１ないし１３のいずれかによる方法。
【請求項１５】
シアン化合物を有機溶媒中で調製する、請求項１ないし１４のいずれかによる方法。
【請求項１６】
シアン化合物を、ジアルキルエーテル（例えば、ジ−イソプロピルエーテル）を含むエーテルおよびアルコールから選択される有機溶媒中で調製し、および／または反応させる、請求項１ないし１５のいずれかによる方法。
【請求項１７】
反応における３−フェニルプロピオンアルデヒド（Ｘ）のシアン化合物に対するモル比が少なくとも１：３を含む１：１ないし１：６の範囲にある、請求項１ないし１６のいずれかによる方法。
【請求項１８】
請求項１ないし１７のいずれかの方法により調製された化合物（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）。
【請求項１９】
式（Ａ）の立体特異的「プリル」：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＲ’）−ＮＨ（Ｒ”）　　（Ａ）
ここに、Ｒ’は水素またはＣ１−Ｃ２アルキルであり、Ｒ”は有機部分であり、「プリル」の調製に用いるための、または用いられた化合物（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）。
【請求項２０】
式（Ａ）の立体特異的「プリル」の調製方法であって、請求項１ないし１７のいずれかによる方法による、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）の調製から成る調整方法。
【請求項２１】
請求項１ないし１７のいずれかによる方法によって調製される式（Ａ）の立体特異的「プリル」。
【請求項２２】
特定の実施例を参照して、上述した方法、化合物または使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はキラル化合物、特に、「プリル（ｐｒｉｌ）」として知られるＡＣＥ阻害剤ファミリーの合成において中間体として用いるためのキラルニトリルの合成方法に関する。
【０００２】
プリルは下記一般式（Ａ）を有し：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＲ’）−ＮＨ（Ｒ”）　　（Ａ）
ここに、Ｒ’は水素またはＣ１−Ｃ２アルキルであり、Ｒ”は多数の可能性のある部分から選択される。「プリル」の例には、リシノプリル、シラザプリル、エナラプリル、ベナゼプリル、ラミプリル、デラプリル、エナラプリラト、イミダプリル、スピラプリル、トランドラプリル等が含まれる。
【０００３】
これらの「プリル」化合物はキラル化合物であり、それらのジアステレオマーのうちの一方のみが薬理学的に活性である。したがって、医薬／医学用途には、ラセミ混合物を用いることよりも、むしろ活性ジアステレオマーを単離および精製することが必要である。
【０００４】
典型的には、ジアステレオマーの分離は優先的結晶化、例えば、米国特許明細書第５６１６７２７号に記載されるようなものによって行う。しかしながら、そのような結晶化からの収率はしばしば低く、実際、米国特許明細書第５６１６７２７号において用いられる工程からの収率は僅か６８％であった。
【０００５】
その代わりに、立体化学的合成を用いることができ、そこでは「プリル」の調製において用いられる様々な中間体もまたキラル形態で調製され、それが最終「プリル」生成物における所望のジアステレオマーの優位性を生じる。しかしながら、そのようなキラル合成は複雑であり、収率が不十分である。
【０００６】
本発明は、「プリル」化合物を作製するための中間体の改善された立体特異的合成方法に関する。この中間体は、次に、立体特異性の喪失なしに、必要とされる「プリル」異性体または他の所望の最終生成物に変換することができる。
【０００７】
「プリル」の合成における構成ブロックの１つは共通「プリル」部分Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−を含有するシアノヒドリンであり、このシアノヒドリンは次に、対応するカルボン酸エステルを介して、所望の「プリル」に変換することができる。Ｃ　Ｇ　Ｋｒｕｓｅによって“Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ　ｉｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ”（Ｅｄ．　Ｃｏｌｌｉｎｓら，１４章（１９９２））に論じられるように、キラル産業用化学薬品の製造への鏡像異性的に純粋なシアノヒドリンの構成ブロックとしての使用はおそらく成長し続けるであろう。これは、特定の生成物の光学的分解または非対称合成に関連する問題を回避する。したがって、ホモキラルシアノヒドリンへの新規経路は、精製化学産業に利用可能なキラル出発物質のプールを拡大する機会を表す。光学的に純粋なシアノヒドリンが原料として産業プロセスに採用可能となるには、その前に幾つかの基準が完全に実現されなければならない。これらは以下のものである：
（ｉ）鏡像異性体過剰率（ｅｅ）が高い一連のシアノヒドリンの製造方法の経済的に実現可能な方法での利用可能性；
（ｉｉ）引き続く化学的変換の間の光学純度の保存；および
（ｉｉｉ）シアノ基又は主有機残基のいずれかでのジアステレオ選択的反応によるキラリティー移行の可能性。
【０００８】
とりわけ上記式（Ａ）の光学的に活性の「プリル」の調製において有用である光学的に活性のシアノヒドリンを調製するために提示されている方法は、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＮ　　　（Ｉ）
の合成を含み、ここで、＊は（Ｒ）立体異性体を示し；およびＰｈはフェニル基Ｃ６Ｈ５である。
【０００９】
この方法は米国特許明細書第５００８１９２号（および欧州特許明細書第３２６０６３号）に報告されており、そこではアルデヒドとシアン化水素との反応をオキシニトリラーゼを含有する均一な水性媒体中、−５ないし＋５０℃に変化する温度および４ないし６．５の範囲のｐＨ値で行う。この方法を用いて、ニトリル（Ｉ）は９３．８％までの化学的純度および９５．１％の光学純度で生成されると言われる。しかしながら、この米国特許出願によると、「．．．たとえ少量であっても有機共溶媒（例えば、エタノール）の存在によって酵素活性がかなり低下するため、このプロセスは有機共溶媒が実質的に存在しない状態で行うべきである」。したがって、この反応においてはあらゆる有機共溶媒の回避が強く推奨されている。しかしながら、水非混和性溶媒の使用の可能性の言及はなく、それにより、二相性反応も回避されるべきであることが示される。
【００１０】
別の方法は、二相反応における立体特異的酵素（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼ（別名、（Ｒ）−オキシニトリラーゼ）の使用を含む。例えば、欧州特許明細書第５４７６５５号は、フェニルプロピオンアルデヒドとシアン化水素（ＨＣＮ）との、１０℃およびｐＨ４．５で、アルデヒドのミリモルあたり１．５ｍｇ酵素の濃度の純粋（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼの存在下およびバッファの存在下での反応を記載する。この明細書は、このプロセスが「約９０」の上記式（Ｉ）の対応（Ｒ）−シアノヒドリンの鏡像異性体過剰率（光学純度約９０％）を生じたことを報告している。
【００１１】
同じ例において、この欧州特許明細書は同様の反応条件を他の物質に適用したときに９９％までの鏡像異性体過剰率を開示するが、その反応は（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）を製造する場合には明らかに非常に成功率が低い。したがって、式（Ｉ）の「プリル」中間体の調製に欧州特許明細書第５４７６５５号のプロセスを用いる場合、望ましい（Ｒ）異性体の鏡像異性体過剰率（ｅｅ）のレベル（すなわち、少なくとも９７〜９８％のｅｅ）を得るためにさらなる精製が必要である。上述のように、このような精製は、特に製造規模では、クロマトグラフィー分離を用いる費用のかかるプロセスである。さらに、この追加工程は（Ｒ）異性体の収率を減少させる。したがって、「プリル」の合成において商業的に有利ならしめるため、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）の調製において高い初期純度が必要である。
【００１２】
したがって、我々はこのニトリルを合成する代替法の使用の可能性を調べているが、所望の高ｅｅ（例えば、９７〜９８％）；経済的な反応時間；許容し得る収率（例えば、９５〜９７％）；並びに取り扱いの全体的な容易さおよびそのプロセスの商業的な実施可能性の組合せをもたらすものはないように思われる。
【００１３】
その代わりに、我々は、驚くべきことに、新規反応条件を慎重に選択することにより、二相オキシニトリラーゼプロセスを用いて所望のｅｅを高収率かつ商業的に許容し得る条件下で得られることを見出した。
【００１４】
したがって、本発明は、式（Ｉ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリルの調製方法であって、二相系において式（Ｘ）の３−フェニルプロピオンアルデヒド：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＯ　　　　　　（Ｘ）
をシアン化合物と、（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼの存在下で反応させることを含み、ここで、反応は１０℃未満の温度で行う方法を提供する。
【００１５】
この二相系は、（ｉ）酵素の水溶液を含有する水相並びに（ｉｉ）水非混和性有機溶媒中のシアン化合物およびアルデヒド（Ｘ）の溶液を含有する有機相を含む。後述されるように、水相はｐＨ調整バッファを含有していてもよく、かつ幾らかのシアン化合物が水相に存在していてもよい。式（Ｘ）のアルデヒドとシアン化合物との反応は有機相において行われる。
【００１６】
本発明による方法において、シアン化合物は好ましくはシアン化水素である。
【００１７】
反応は、５℃未満、好ましくは０℃未満の温度で適切に行われる。特に好ましい方法においては、反応を−５℃ないし０℃の範囲の温度で行う。
【００１８】
反応は広い範囲の圧力にわたって行うことができるが、好ましくは大気圧で行う。
【００１９】
この方法は、適切には、ニトリラーゼの濃度がアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり１．５ｍｇを上回り、好ましくはアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり少なくとも２ｍｇであるように行われる。ニトリラーゼをアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり２ないし２．２ｍｇの範囲の濃度で用いることが特に有利である。
【００２０】
最適の成果のため、反応は４．５ないし６の範囲のｐＨ、好ましくは５．４ないし５．６の範囲のｐＨで適切に行なわれる。反応のｐＨは、緩衝剤を水溶液中で用いることによって上に指定される範囲内に適切に維持される。したがって、反応の水相は、好ましくは、適切な緩衝剤、例えば、酢酸バッファまたは非酢酸バッファ、例えば、クエン酸塩、グルタミン酸塩、コハク酸塩もしくはフタル酸塩を含むが、好ましくはクエン酸塩、例えば、アルカリ金属クエン酸塩、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはクエン酸カリウムを含む。
【００２１】
バッファの濃度が比較的低い場合、酵素を含有する水相のｐＨが該水相の再利用の間に変化することがあり、したがって、各サイクルの後にｐＨを調整しなければならない可能性がある。しかしながら、バッファの濃度が比較的高い場合、反応混合物の乳化が生じ、それにより相分離が生じて引き続く反応混合物の生成がより困難になることがある。したがって、バッファは０．３ないし１モル濃度、好ましくは約０．４ないし０．６モル濃度の範囲、例えば、約０．５モル濃度の濃度で適切に用いられる。
【００２２】
この指定される新規条件、特に、ここに記載される温度および酵素濃度、並びに、特に、温度だけではなくｐＨを用いて、驚くべきことに、＞９８％の式（Ｉ）の（Ｒ）異性体の鏡像異性対過剰率（ｅｅ）を、収率も重量基準で理論的収率の＞９８％で達成できることが見出されている。
【００２３】
本発明の方法において、有機相に対する水相の体積の比は適切には１：５ないし５：１であり、有機相におけるシアン化合物の濃度を制御することが重要である。これは、ＨＣＮ（シアン化合物）が両相に混和性であるためである。たとえそれが有機相に可溶であったとしても、水相における溶解度がより高い。例えば、有機相の体積を増加させ、それにもかかわらずシアン化合物（例えば、青酸）の強度を一定に保つ場合、反応は実質的に影響を受けないままである。しかしながら、有機相の体積をその相中のシアン化合物の濃度を希釈することによって増加させる場合、反応速度はかなり低下する。有機相におけるシアン化合物の強度は、適切には、体積基準で６ないし６．５％重量の範囲である（例えば、有機相１００ｍｌあたり６〜６．５ｇのシアン化合物）。
【００２４】
ここでもやはり、水相の体積を変化させることにより、有機相においてシアン化合物の濃度が変化する；したがって、水相の体積を増加させる場合、有機相におけるシアン化合物の相対強度が低下し、これは次に、反応速度を低下させる。
【００２５】
シアン化合物がＨＣＮであるとき、アルキル金属シアン化物、例えば、シアン化カリウムまたはシアン化ナトリウムと鉱酸、例えば、塩酸とを反応させることによってその場で生成させることが特に好ましい。
【００２６】
最も好ましくは、ＨＣＮを有機溶媒中で調製してＨＣＮそれ自体の取り扱いを回避し、それゆえそれ自体は反応の有機相用に有機溶媒を必要とする酵素反応における使用に備える。
【００２７】
適切な有機溶媒には、目的のために欧州特許明細書第５４７６５５号に記載されるもの、すなわち：ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルエーテル、（Ｃ１−Ｃ５）カルボン酸（Ｃ１−Ｃ５）アルキルエーテル、ジ−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルケトン、（Ｃ４−Ｃ８）脂肪族アルコール、およびこれらの溶媒同士の、または非極性希釈剤との混合液が含まれる。そのような水非混和性溶媒の好ましい例は：ジエチルエーテル、ジ−ｎ−プロピルエーテル、ジ−イソプロピルエーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、ジ−イソブチルエーテル、メチル−ｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル異性体、酢酸アミル異性体、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、およびメチルイソブチルケトンである。非極性希釈剤の適切な例は、芳香族炭化水素、脂肪族炭化水素および塩素化芳香族または脂肪族炭化水素、例えば、トルエン、キシレン、ヘキサン、シクロヘキサン、トリクロロエテンまたはクロロベンゼンである。
【００２８】
好ましい溶媒はエーテルおよびアルコール、特にはジアルキルエーテル、とりわけジ−イソプロピルエーテルである。
【００２９】
この反応における３−フェニルプロピオンアルデヒド（Ｘ）のシアン化合物に対するモル比は１：１ないし１：６の範囲、好ましくは少なくとも１：３であることが好ましい。
【００３０】
本発明の別の驚くべき利点は、ニトリラーゼを含有する水相を、引き続く反応（１つもしくは複数）において用いるため、欧州特許明細書第５４７６５５号に開示される条件を用いるときよりも高いオーダーで再利用できることである。これは、ベンズアルデヒドが基質であるとき、３回の再利用のみを記載するが、プロピオンアルデヒドが基質であればそのような条件下での再利用は成功率がより低くなるだろう。これは、この欧州特許明細書の反応条件下では化学反応は酵素反応と競合し、それが鏡像異性体純度の低下を招くという事実のためである；さらに、この後者の反応は酵素活性の損失を生じ、それにより実施することができるサイクルの数が減少する。対称的に、我々は、本発明の新規条件を用いて、少なくとも１０回、例えば１２回、水性酵素相を再利用した後にも依然として優れた結果が得られ、少なくとも９７％のｅｅが達成されることを見出している。
【００３１】
したがって、本発明は、本発明に従う方法によっていつでも調製される（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）；および式（Ａ）の立体特異的「プリル」の調製において用いるための、またはそこでいつでも用いられる化合物（Ｉ）をさらに提供する。さらに、式（Ａ）の立体特異的「プリル」を調製するための方法であって、本発明に従う方法による（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）の調製を含む方法；およびそのような方法によっていつでも調製される式（Ａ）の立体特異的「プリル」が提供される。
【００３２】
ここで、以下の非限定性の例を参照することによって本発明を説明する。
【００３３】
説明Ａ：ジ−イソプロピルエーテル中の青酸の調製
機械的攪拌機（Ｔｅｆｌｏｎ（商標）ｇｌａｎｄ）、滴下漏斗および内部温度計ポケットを備える１リットルの三首フラスコにシアン化ナトリウム顆粒（５２ｇ、１．０６モル）を入れた。５０ｍｌの水を添加して攪拌した後、３００ｍｌのジイソプロピルエーテルを添加した。その混合物を激しく攪拌し、温度を０°〜５℃に下げた。５Ｎ　ＨＣｌ（１８８ｍｌ）を、溶液のｐＨが５．４になるまで、滴下により０°〜５℃で（≒１．５時間）シアン化ナトリウム溶液に添加した（最後の２〜３ｍｌは慎重に添加した）。その反応物を１リットル分離漏斗に入れた。水層を分離し、次亜塩素酸ナトリウム溶液によって慎重に破壊した。ジイソプロピルエーテル画分を５００ｍｌの琥珀色ボトルに集め、冷凍庫内に保存した。
【００３４】
実施例１：（Ｒ）−２−ヒドロキシー４−フェニルブチロニトリルの調製
ジ−イソプロピルエーテル中の３−フェニルプロピオンアルデヒド（５０ｇ、０．３７モル）の溶液に２５０ｍｌのクエン酸バッファ（ｐＨ５．４、０．５Ｍ、５×３−フェニルプロピオンアルデヒド）を添加した。この溶液を０℃に冷却した。アーモンドから抽出したオキシニトリラーゼ酵素を添加し（３−フェニルプロピオンアルデヒドのグラムあたり２０００単位、すなわち、１６．３９ｍｇ）、ジ−イソプロピルエーテル中の、説明Ａに従って調製した６〜７％ＨＣＮ溶液（３０．２ｇ、１．１２Ｍ）を添加した。重量基準で１：２の水相：有機相比を有するこの混合物を３０分間攪拌した。有機相を分離し、減圧下で濃縮して、重量基準で９８％理論的収率の、鏡像異性体過剰率９８％の表題の化合物を得た。
【００３５】
実施例２：再利用による（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリルの調製
実施例１からの反応の水相をジ−イソプロピルエーテル中の３−フェニルプロピオンアルデヒド溶液の溶液に−５ないし０℃の範囲の温度で添加した。アーモンドから抽出した１０％エクストラオキシニトリラーゼ、次いでジ−イソプロピルエーテル中の６〜７％のＨＣＮ溶液を添加した。これが意味するところは、最初に入れた全酵素に加えて１０％のオキシニトリラーゼ酵素を単位として各サイクルにおいて添加し、その結果、最初に２０００単位の酵素が使用されると、さらに２００単位の酵素を各々のおよび全てのサイクルに入れられたことである。この混合物を３０分間攪拌した後、実施例１に記載されるように生成して、収率９８％の、鏡像異性体過剰率が９８％の表題の化合物とした。酵素は１０回再利用し、常に重量基準で理論収率の９８％の、鏡像異性体過剰率が９８％の表題の化合物が生じた。
【００３６】
実施例１および２の要約：（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル
【表１】
2004514662.tif 000003
注：ａ−酵素濃度は以下のように算出した：
酵素濃度＝ｍｇ表記の酵素／ミリモル表記のアルデヒド
酵素１２２単位＝１ｍｇ
１ｇの３−フェニルプロピオンアルデヒド（ＭＷ＝１３４）＝７．４６ミリモル
１ｇの３−フェニルプロピオンアルデヒドに対する酵素＝２０００単位＝１６．３９ｍｇ
酵素濃度＝１６．３９／７．４６＝２．１９
【００３７】
スペクトルデータ：
１．ＩＲ：ＯＨ　３４００ｃｍ−１〜３５００ｃｍ−１；ＣＮ　２２５０ｃｍ−１
２．ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３、ＴＭＳ）７．３（ｓ、５Ｈ）、４．４（ｔ、１Ｈ）、３．８−４（ｂｓ、１Ｈ）、２．７−３（ｑ、２Ｈ）、２−２．３（ｑ、２Ｈ）
３．ＨＰＬＣ：　カラム：ＣＨＩＲＥＸ−３０１４
相の説明：（Ｓ）−バリンおよび（Ｒ）−１−α−ナフチルエチルアミン
結合タイプ：共有結合２５０×４．６ｍｍ
移動相：ヘキサン：ジクロロエタン：エタノール：酢酸＝５００：１５０：５：０．６；
流速：１ｍｌ／分；波長：２５４ｎｍ
保持時間：（Ｒ）−異性体＝２３．０６分；（Ｓ）−異性体＝２４．０２分
４．ＴＬＣ：シリカゲル；アセトン：ヘキサン　１５：８５；Ｒｆ＝０．３０
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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2004514662.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成15年1月13日(2003.1.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル：
＊
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＮ　　　　（Ｉ）
の調製方法であって、ここに、＊は（Ｒ）立体異性体を示し；およびＰｈはフェニル基Ｃ６Ｈ５であり、
その方法は、二相系において、式（Ｘ）の３−フェニルプロピオンアルデヒド：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＯ　　　　　　　　　　（Ｘ）
を、（Ｒ）−ヒドロキシニトリラーゼの水溶液の存在下で水非混和性有機溶媒中にあるシアン化合物と反応させる工程から成り、
水相でのニトリラーゼの濃度がアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり１．５ｍｇより多く、そして、その反応は１０℃未満の温度で４．５ないし６の範囲のｐＨで実行されることを特徴とする調製方法。
【請求項２】
反応を５．４ないし５．６の範囲のｐＨで行う、請求項１による方法。
【請求項３】
ニトリラーゼの濃度がアルデヒド（Ｘ）のミリモルあたり２ないし２．２ｍｇの範囲にある、請求項１または２による方法。
【請求項４】
反応を５℃未満の温度で行う、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項５】
反応を０℃未満の温度で行う、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項６】
反応を−５°ないし０℃の範囲の温度で行う、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項７】
バッファを０．３ないし１モル濃度の範囲の濃度で用いる、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項８】
バッファを約０．４ないし０．６モル濃度の範囲の濃度で用いる、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項９】
シアン化合物がシアン化水素である、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１０】
水相の体積の有機相に対する比が１：５ないし５：１の範囲にある、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１１】
有機相中のシアン化合物の濃度が体積基準で６ないし６．５％重量の範囲である（例えば、有機相１００ｍｌあたり６ないし６．５ｇのシアン化合物）、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１２】
シアン化合物が、シアン化カリウムまたはシアン化ナトリウムを含むアルキル金属シアン化物と塩酸を含む鉱酸との反応によってその場で生成されるＨＣＮである、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１３】
シアン化合物を有機溶媒中で調製する、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１４】
シアン化合物を、ジアルキルエーテル（例えば、ジ−イソプロピルエーテル）を含むエーテルおよびアルコールから選択される有機溶媒中で調製し、および／または反応させる、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１５】
反応における３−フェニルプロピオンアルデヒド（Ｘ）のシアン化合物に対するモル比が少なくとも１：３を含む１：１ないし１：６の範囲にある、上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１６】
ニトリラーゼが少なくとも１０回リサイクルされる上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１７】
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリルが少なくとも９７％の鏡像異性体過剰率（ｅｅ）で用意されている上記請求項のいずれかによる方法。
【請求項１８】
請求項１ないし１７のいずれかの方法により調製された化合物（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）。
【請求項１９】
式（Ａ）の立体特異的「プリル」：
Ｐｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＲ’）−ＮＨ（Ｒ”）　　（Ａ）
ここに、Ｒ’は水素またはＣ１−Ｃ２アルキルであり、Ｒ”は有機部分であり、「プリル」の調製に用いるための、または用いられた化合物（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）。
【請求項２０】
式（Ａ）の立体特異的「プリル」の調製方法であって、請求項１ないし１７のいずれかによる方法による、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチロニトリル（Ｉ）の調製から成る調整方法。
【請求項２１】
請求項１ないし１７のいずれかによる方法によって調製される式（Ａ）の立体特異的「プリル」。
【請求項２２】
特定の実施例を参照して、上述した請求項のいずれかによる方法、化合物または使用。
【国際調査報告】
2004514662.tif 000021
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