(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）Ｂ−Ｑ−Ｘ１の化合物に関する。式中、Ｂは生物活性があり、細胞接着性仲介分子であり、Ｑは存在しない、あるいはスペーサー無機分子であり、Ｘ１は、基Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２（ｉ）、−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２（ｉｉ）、または−Ｌｙｓ−（Ｌｙｓ［−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２］２］２（ｉｉｉ）から選択されるアンカー分子であり、ｎはそれぞれ独立に０、１、２、または３であり、式中、基Ｂの遊離アミノ基は、スペーサー分子Ｑまたはアンカー分子Ｘ１の遊離カルボキシル基と、ペプチドの形で結合している、あるいは基Ｑの遊離アミノ基は、基Ｘ１の遊離カルボキシル基と、ペプチドの形で結合している。本発明はまた、その塩にも関する。本発明の化合物は、インテグリン阻害剤として、インプラントによって引き起こされる疾患、欠損、炎症、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化の治療のために、また、組織におけるインプラントまたは生体適合面の一体化プロセスの促進および増強のために使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物。
Ｂ−Ｑ−Ｘ１　　Ｉ
（上式で、
Ｂは、生物活性があり、細胞接着を仲介する分子であり、
Ｑは、存在しない、あるいはスペーサー有機分子であり、
Ｘ１は、基
−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２　（ｉ）
−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２　（ｉｉ）、または
−Ｌｙｓ−（Ｌｙｓ［−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２　　（ｉｉｉ）
から選択されるアンカー分子であり、
ｎは、各場合において互いに独立に、０、１、２、または３であり、基Ｂの遊離アミノ基と、スペーサー分子Ｑまたはアンカー分子Ｘ１の遊離カルボキシル基、あるいは基Ｑの遊離アミノ基および基Ｘ１の遊離カルボキシル基は、ペプチドやその塩と同じように互いに結合している。）
【請求項２】
基Ｂが
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｚ１）　　　（ｉｖ）、
【化１】
2004506024.tif 000005
、および
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　（ｖｉ）
Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　（ｖｉｉ）
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　（ｖｉｉｉ）
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ　（ｉｘ）
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ　（ｘ）
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ　（ｘｉ）
の群から選択され、
Ｚ１は、各場合において互いに独立に、アミノ酸残基あるいはジペプチドまたはトリペプチド残基であり、アミノ酸は、互いに独立に、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌからなる群から選択され、
（ｖ）については、
Ｘは、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ、Ｈｅｔ−ＮＨ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−、Ａ−Ｃ−（＝ＮＨ）−ＮＨ−、またはＨｅｔ−であり、
Ｙは、−（ＣＨ２）ｎ−または
【化２】
2004506024.tif 000006
、−（ＣＨ２）ｓ−ＣＨ（Ｒ４）−（ＣＨ２）ｔ−、あるいは−（ＣＨ２）ｐ−Ｈｅｔ１−（ＣＨ２）ｑ−であり、
Ｚは、Ｎ−Ｒ２またはＣＨ−Ｒ２であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ原子が１〜４個であるアルキルであり、
Ｒ３は、Ｈ、Ａｒ、Ｈｅｔ、またはＡであり、
Ｒ４は、Ｈ、Ａ、Ａｒ、ＯＨ、ＯＡ、ＯＡｒ、アリールアルキル、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、またはＯＣＦ３であり、
Ａは、ＣＯＯＨ、ＮＨ２、あるいは、非置換の、またはＣＯＯＨもしくはＮＨ２によって置換された、Ｃ原子が１〜６個であるアルキルであり、
Ａｒは、非置換型、あるいはＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、またはＨａｌで一、二、もしくは三置換されたフェニルであり、非置換または置換のビフェニルをもたらすようにＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、またはＨａｌによって一、二、もしくは三置換されたフェニルによって置換することができ、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、
Ｈｅｔは、飽和した、部分的にまたは完全に不飽和の、単環式または二環式の５〜１０員の複素環基であり、１〜３個のＮおよび／または１個のＳまたはＯ原子が存在してもよく、また、この複素環基は、ＣＮ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、ＯＡ、ＣＦ３、Ａ、ＮＯ２、Ａｒ、またはＯＣＦ３で一置換もしくは二置換されていてもよく、
Ｈｅｔ１は、１〜４個のＮおよび／またはＳ原子をもつ５員または６員の芳香族複素環であり、非置換でも、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ａ、ＯＡ、またはＯＣＦ３で一置換もしくは二置換されていてもよく、
ｎは、４、５、または６であり、
ｍ、ｏ、ｐ、ｑは、０、１、または２であり、
ｓ、ｔは０、１、２、３、４、または５である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｑが、基
［ＣＯ−（ＣＨ２）ｘ−ＮＨ−］ｍ、　（ｘｉｉ）
［ＣＯ−ＣＨ２（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］ｍ　（ｘｉｉｉ）
［ＣＯ−（ＣＨ２）ｚ−ＣＯ−］　（ｘｉｖ）
［ＮＨ−（ＣＨ２）ｚ−ＮＨ−］　（ｘｖ）
［ＣＯ−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−］　（ｘｖｉ）
［ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］　（ｘｖｉｉ）
およびそれらの組み合わせから選択され、
上式で、
ｍは、各場合において互いに独立に、１〜２０であり、
ｘは、１〜１２であり、
ｙは、１〜５０であり、
ｚは、１〜１２である、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】
Ｑが、基
［ＣＯ−（ＣＨ２）ｘ−ＮＨ−］ｍ、　（ｘｖｉｉｉ）
［ＣＯ−ＣＨ２（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］ｍ　（ｘｉｘ）
［ＣＯ−（ＣＨ２）ｚ−ＣＯ−］　（ｘｘ）
［ＮＨ−（ＣＨ２）ｚ−ＮＨ−］　（ｘｘｉ）
［ＣＯ−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−］　（ｘｘｉｉ）
［ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］　（ｘｘｉｉｉ）
およびそれらの組み合わせから選択され、
上式で、
ｍは、各場合において互いに独立に、１〜８であり、
ｘは、１〜５であり、
ｙは、１〜６であり、
ｚは、１〜６である、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の式Ｉの下記化合物：
ａ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
ｂ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］３−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
ｃ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−ＣＨ２（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）６−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
（式中、ｎは１である。）
【請求項６】
インプラントによって引き起こされる障害、欠損および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性障害、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症などの治療のための、また、インプラントあるいは生体適合面の、組織への組み込みプロセスの促進および増強のための薬物としての、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
担体マトリックスと、このマトリックスを取り囲む、生物活性があり、細胞接着を仲介する分子の層からなり、取り囲むこの層が、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物から形成され、担体マトリックスとこの化合物との間にイオン結合または吸着結合が存在することを特徴とする、ヒトおよび動物の器官に適したインプラント。
【請求項８】
担体マトリックスおよび／またはその表面が、金属または金属酸化物であることを特徴とする請求項７に記載のインプラント。
【請求項９】
担体マトリックスおよび／またはその表面が、骨または歯の置換材料であることを特徴とする請求項７に記載のインプラント。
【請求項１０】
骨または歯の置換材料がリン酸カルシウム混合物からなることを特徴とする、請求項９に記載のインプラント。
【請求項１１】
保護基が与えられていてもよい生物活性のある分子Ｂと、保護基が与えられたスペーサー−アンカー分子（Ｑ−Ｘ１）またはアンカー分子（Ｘ１）が、ペプチドの様式で互いに結合し、その後保護基が取り除かれること、および／または式Ｉの塩基性または酸性化合物が、酸または塩基を用いた処理によってその塩に転換されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、およびその塩を調製するための方法。
【請求項１２】
インプラントによって引き起こされる障害、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性障害、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療用の薬物、ならびにインプラントまたは生体適合面の、組織への組み込みプロセスの促進および増強用の薬物の生成のための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
イオン結合または吸着結合によって、ヒトおよび動物の器官用のインプラントを被覆するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、式Ｉの化合物に関する。
【０００２】
Ｂ−Ｑ−Ｘ１　　Ｉ
上式で、
Ｂは、生物活性があり、細胞接着を仲介する分子であり、
Ｑは、存在しない、あるいはスペーサー有機分子であり、
Ｘ１は、基
−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２　（ｉ）
−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２　（ｉｉ）、または
−Ｌｙｓ−（Ｌｙｓ［−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２）２　（ｉｉｉ）
から選択されるアンカー分子であり、
ｎは、各場合において互いに独立に、０、１、２、または３であり、
基Ｂの遊離アミノ基と、スペーサー分子Ｑまたはアンカー分子Ｘ１の遊離カルボキシル基、あるいは基Ｑの遊離アミノ基および基Ｘ１の遊離カルボキシル基は、ペプチドやその塩と同じように互いに結合している。
【０００３】
（背景技術）
類似の化合物が、ＤＥ　１９９３２７９６、ＤＥ　１９７５５８００、およびＤＥ　１９８３１７１０に開示されている。
【０００４】
（発明の開示）
本発明は、有用な特性をもつ新規化合物、特に薬物の生成のために使用できる化合物を発見する目的に基づくものである。
【０００５】
式Ｉの化合物およびその塩が、忍容性がよいと共に非常に有用な薬理学的特性をもつことが判明した。これらは、特に、具体的にはαＶβ３またはαＶβ５インテグリン受容体のリガンドとの相互作用、例えばフィブリノゲンのβ３インテグリン受容体への結合を阻害するインテグリン阻害剤として作用する。これらの化合物は、インテグリンαＶβ３、αＶβ５、αＩＩｂβ３、αＶβ１、αＶβ６、およびαＶβ８の場合に特別な活性を示す。
【０００６】
この作用は、例えば、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１２２６７〜１２２７１」（１９９０年）にＪ．Ｗ．Ｓｍｉｔｈ他が記載した方法に従って実証することができる。
【０００７】
血管新生の発達が、血管のインテグリンと細胞外マトリックスタンパク質との間の相互作用に依存することは、「Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６４，５６９〜７１」（１９９４年）に、Ｐ．Ｃ．Ｂｒｏｏｋｓ、Ｒ．Ａ．ＣｌａｒｋおよびＤ．Ａ．Ｃｈｅｒｅｓｈが記載している。
【０００８】
こうした相互作用の阻害、およびそれによって環状ペプチドによる新生血管細胞のアポトーシス（プログラムされた細胞死）を誘導できる可能性は、「Ｃｅｌｌ　７９，１１５７〜６４」（１９９４年）に、Ｐ．Ｃ．Ｂｒｏｏｋｓ、Ａ．Ｍ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、Ｍ．Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、Ｒ．Ａ．Ｒｅｉｓｆｅｌｄ、Ｔ．−Ｈｕ、Ｇ．Ｋｌｉｅｒ、およびＤ．Ａ．Ｃｈｅｒｅｓｈが記載している。
【０００９】
インテグリン受容体とリガンドの相互作用、例えばフィブリノゲンのフィブリノゲン受容体（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）との相互作用をブロックする式Ｉの化合物は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニストとして、転移による腫瘍細胞の広がりを予防する。このことは、次の観察によって確認されている：
局所腫瘍から血管系への腫瘍細胞の広がりは、腫瘍細胞の血小板との相互作用による微小凝集塊（微小血栓）形成を介して起こる。腫瘍細胞は、微小凝集塊中で保護されることによって覆い隠され（ｓｃｒｅｅｎ）、免疫系の細胞によって認識されない。微小凝集塊は血管壁に付着することができ、そのため、腫瘍細胞の組織へのさらなる侵入が促進される。
【００１０】
微小血栓の形成は、活性化した血小板上のフィブリノゲン受容体に結合しているフィブリノゲンによって仲介されるので、ＧＰＩＩａ／ＩＩＩｂアンタゴニストを、有効な転移阻害因子とみなすことができる。
【００１１】
ホスホン酸基は、例えば、酸化物を含有するインプラントなどの生体適合面、例えば金属表面（例としてチタンや、ＴｉＡｌ６Ｖ４などのチタン合金）や、例えば非晶質または焼結リン酸カルシウムなどの陽イオンを含有する表面（例としてヒドロキシアパタイト、骨、歯）や、リン酸カルシウムセメント（例としてＢｉｏｃｅｍｅｎｔ　Ｄ）に、ペプチドを、イオン結合あるいは吸着結合させる。
【００１２】
したがって、本発明は、詳細には、基Ｘ１の官能基を介して生体適合面にイオン結合または吸着結合させるための式Ｉの化合物に関する。
【００１３】
ここでは、本発明によるペプチドは、生体材料、特にヒトおよび動物の器官用のインプラントの生体機能化（ｂｉｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）を、生体材料を被覆することによって可能にし、主に、こうした細胞種の接着が刺激されて、各場合に、対応する生体材料の組織一体化が成し遂げられることとなる。こうした被覆を使用すると、体内への組み込み後の長期安定性を向上できるとともに、様々な生体材料／インプラントの一体化を促進かつ増強できる。
【００１４】
本発明によるペプチドは、インテグリンに選択的に結合する。これらのペプチドは、例えばインプラントなどの生体適合面に固定された後、インテグリンが存在する細胞の接着を促進する。
【００１５】
生体適合面への化合物の被覆後、細胞種は、選択的に刺激され、結合できるようになり、天然の組織への移植後に、インプラントの一体化も成し遂げられることとなる。骨芽細胞、破骨細胞、および内皮細胞では、それらは、例えばαｖインテグリンが存在する細胞種である。
【００１６】
したがって、本発明は、インプラントにおける選択的な細胞濃縮のための、インテグリン阻害剤としての式Ｉの化合物に関する。
【００１７】
式Ｉの化合物は、薬剤として活性のある化合物として生体適合面に固着した後、ヒトおよび動物の医学において、特に、例えば生体材料およびインプラントの不十分で遅延した一体化などのインプラントによって引き起こされる障害、欠損、および炎症、インプラントによって引き起こされる血栓症、骨および歯の欠損、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性障害、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症などを治療するために、また、創傷治癒の際に治癒プロセスを助けるために、また、インプラントまたは生体適合面の、組織への一体化プロセスの促進および増強のために、インテグリン阻害剤として使用することができる。
【００１８】
式Ｉの化合物は、生体材料、インプラント、カテーテル、または心臓ペースメーカーを使用する手術の際、抗菌作用のある物質として使用することができる。この化合物は、この場合防腐作用をもつ。抗菌活性の効力は、「Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２８５１〜２８５５」（１９８８年）で、Ｐ．Ｖａｌｅｎｔｉｎ−Ｗｅｉｇｕｎｄ他によって記載されている手順によって実証することができる。
【００１９】
したがって、本発明は、インプラントによって引き起こされる障害、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性障害、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療のための、また、インプラントまたは生体適合面の組織への一体化プロセスの促進および増強のための、インテグリン阻害剤としての式Ｉの化合物に関する。
【００２０】
さらに、本発明は、インプラントによって引き起こされる障害、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性障害、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療用の薬物の生成のための、また、インプラントまたは生体適合面の組織への組み込みプロセスの促進および増強のための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００２１】
リン酸アンカーをもつ、対応のペプチドは、表面に酸化物を含有する、インプラント、アフィニティクロマトグラフィ材料、またはマイクロタイタープレートなどの担体、あるいは非晶質または焼結リン酸カルシウム（例としてヒドロキシアパタイト、骨、歯）、またはリン酸カルシウムセメント（例としてＢｉｏｃｅｍｅｎｔ　Ｄ）などの陽イオンを含有する表面に、イオン結合させることができる。
【００２２】
本発明はまた、ヒトおよび動物の器官用のインプラントをイオン結合または吸着結合によって被覆するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００２３】
上で述べた、また、下で述べるアミノ酸残基の略語は、次のようなアミノ酸の基を表す：
Ａｂｕ　　４−アミノ酪酸
Ａｈａ　　６−アミノヘキサン酸、６−アミノカプロン酸
Ａｌａ　　アラニン
Ａｓｎ　　アスパラギン
Ａｓｐ　　アスパラギン酸
Ａｒｇ　　アルギニン
Ｃｙｓ　　システイン
Ｄａｂ　　２，４−ジアミノ酪酸
Ｄａｐ　　２，３−ジアミノプロピオン酸
Ｇｌｎ　　グルタミン
Ｇｌｐ　　ピログルタミン酸
Ｇｌｕ　　グルタミン酸
Ｇｌｙ　　グリシン
Ｈｉｓ　　ヒスチジン
ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ　　ホモ−フェニルアラニン
Ｉｌｅ　　イソロイシン
Ｌｅｕ　　ロイシン
Ｌｙｓ　　リジン
Ｍｅｔ　　メチオニン
Ｎｌｅ　　ノルロイシン
Ｏｒｎ　　オルニチン
Ｐｈｅ　　フェニルアラニン
Ｐｈｇ　　フェニルグリシン
４−Ｈａｌ−Ｐｈｅ　　４−ハロフェニルアラニン
Ｐｒｏ　　プロリン
Ｓｅｒ　　セリン
Ｔｈｒ　　スレオニン
Ｔｒｐ　　トリプトファン
Ｔｙｒ　　チロシン
Ｖａｌ　　バリン。
【００２４】
さらに、以下の略語の意味は次の通りである：
Ａｃ　　アセチル
ＢＯＣ　　ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＢＺまたはＺ　　ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＣＩ　　ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ　　ジメチルホルムアミド
ＥＤＣＩ　　Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ’−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ　　エチル
ＦＣＡ　　フルオレセインカルボン酸
ＦＩＴＣ　　イソチオシアン酸フルオレセイン
Ｆｍｏｃ　　９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＦＴＨ　　フルオレセインチオウレア（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｔｈｉｏｕｒｅａ）
ＨＯＢｔ　　１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍｅ　　メチル
ＭＢＨＡ　　４−メチルベンズヒドリルアミン
Ｍｔｒ　　４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルスルホニル
ＨＡＴＵ　　ヘキサフルオロリン酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム
ＨＯＮＳｕ　　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＯｔＢｕ　　ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｏｃｔ　　オクタノイル
ＯＭｅ　　メチルエステル
ＯＥｔ　　エチルエステル
ＰＯＡ　　フェノキシアセチル
Ｐｂｆ　　ペンタメチルベンゾフラニル
Ｐｍｃ　　２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
Ｓａｌ　　サリチロイル
Ｓｕ　　スクシニル
ＴＩＰＳ　　トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ　　トリフルオロ酢酸
ＴＭＳＢｒ　　臭化トリメチルシリル
Ｔｒｔ　　トリチル（トリフェニルメチル）。
【００２５】
前述のアミノ酸が、いくつかの鏡像異性の形で存在する場合、それらの全ての形およびその混合物（例えばＤＬ型）は、例えば式Ｉの化合物の一部として、上記および下記の化合物に含まれる。さらに、例えば式Ｉの化合物の一部としてのこれらのアミノ酸に、それ自体知られている対応の保護基を提供することができる。
【００２６】
特に、例えば非ペプチド性αｖβ３アンタゴニスト（例えば、Ｒ．Ｋｅｅｎａｎ他による「Ａｂｓｔｒ．Ｐａｐ．２１１ｔｈ　ＡＣＳ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ（Ｎｅｗ　Ｏｒｌｅａｎｓ，ＵＳＡ）１９９６，ＭＥＤＩ　２３６」）の場合に行われるような、アルギニンの側鎖修飾も、例えばベンズイミダゾール誘導体などシクロペプチドの場合に、グアニジン基の代わりに使用できる。
【００２７】
本発明による化合物、すなわち、例えばアルキルもしくはアシル基、糖、またはオリゴペプチドで修飾された式Ｉの化合物には、「プロドラッグ誘導体」も含まれ、これらは体内で迅速に切断されて、本発明による活性な化合物をもたらす。
【００２８】
さらに、本発明は、担体マトリックスと、このマトリックスを取り囲む、生物活性があり、細胞接着を仲介する分子の層からなり、取り囲むこの層が式Ｉの化合物から形成され、担体マトリックスとこの化合物の間にイオン結合または吸着結合が存在する、ヒトおよび動物の器官に適したインプラントに関する。
【００２９】
担体マトリックスおよび／またはその表面は、金属または金属酸化物からなることが好ましい。担体マトリックスおよび／またはその表面が、例えばリン酸カルシウム混合物など、骨または歯の置換材料からなることが特に好ましい。
【００３０】
さらに、本発明は、保護基が与えられていてもよい生物活性のある分子Ｂと、保護基が与えられたスペーサー−アンカー分子（Ｑ−Ｘ１）またはアンカー分子（Ｘ１）が、ペプチドの様式で互いに結合し、その後保護基が取り除かれることことを特徴とする、かつ／または式Ｉの塩基性または酸性化合物が、酸または塩基で処理することによってその塩の１つに転換されることを特徴とする、請求項１に記載の式Ｉの化合物、およびその塩を調製するためのプロセスに関する。
【００３１】
（発明を実施するための最良の形態）
上で述べた、また、下で述べる、基Ｂ、Ｑ、およびＸ１は、別段の記述がない限り、式Ｉの下で示した意味である。
【００３２】
Ｂは、好ましくはシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｚ１）−、
【００３３】
【化３】
2004506024.tif 000002
【００３４】
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−、
Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−、
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−、
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−、
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−、
またはＴｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−残基であり、
上式で、Ｚ１は、各場合において互いに独立に、アミノ酸残基、あるいはジまたはトリペプチド残基であり、アミノ酸は、互いに独立に、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌからなる群から選択されることが好ましい。
【００３５】
Ｑは存在しない、あるいはスペーサー有機分子である。Ｑは、［ＣＯ−（ＣＨ２）ｘ−ＮＨ−］ｍ−、［ＣＯ−ＣＨ２（Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］ｍ−、［ＣＯ−（ＣＨ２）ｚ−ＣＯ−］−、［ＮＨ−（ＣＨ２）ｚ−ＮＨ−］−、［ＣＯ−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−］−、または［ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＮＨ−］−基、およびそれらの組み合わせであることが好ましく、指数ｍ、ｘ、ｙおよびｚには、請求項３に記載されている値の範囲が適用される。ｍについては１と８の間の値、ｘについては１と５の間の値、ｙおよびｚについては１と６の間の値をとることができる前述の化合物が、特に好都合であると証明されている。
【００３６】
Ｘ１は、好ましくは、ｎが、各場合において互いに独立に、０、１、２、または３であり得る基−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２、−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２または−Ｌｙｓ−（Ｌｙｓ［−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２）２からのアンカー分子である。
【００３７】
Ｚ１についての意味で述べたアミノ酸およびアミノ酸残基も、Ｎ−メチル、Ｎ−エチル、Ｎ−プロピル、Ｎ−ベンジル、または好ましいＣα−メチル誘導体を用いて誘導体化することができる。ＡｓｐおよびＧｌｕの誘導体、特に側鎖カルボキシル基のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、またはベンジルエステル、ならびにＡｒｇの誘導体も好ましく、これらは、アセチル、ベンゾイル、メトキシカルボニル、またはエトキシカルボニル基によって、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２基で置換することができる。
【００３８】
Ｘは、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、Ｈｅｔ−ＮＨ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−、Ａ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ、またはＨｅｔ基であることが好ましい。
【００３９】
Ｙは、−（ＣＨ２）ｎ−または
【００４０】
【化４】
2004506024.tif 000003
【００４１】
−（ＣＨ２）ｓ−ＣＨ（Ｒ４）−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２）ｐ−Ｈｅｔ１−（ＣＨ２）ｑ−ラジカル
であることが好ましい。
【００４２】
Ｚは、Ｎ−Ｒ２またはＣＨ−Ｒ２であることが好ましく、Ｒ２は、好ましくはＨ原子またはＣ原子が１〜４個であるアルキル基であることができる。
【００４３】
Ｒ３は、Ｈ原子、Ａｒ、Ｈｅｔ、またはＡ基であることが好ましく、Ａ、Ａｒ、およびＨｅｔは、以前に示した、または以下で示す意味の１つに当てはまる。
【００４４】
Ｒ４は、Ｈ原子、Ａ、Ａｒ、ＯＨ、ＯＡ、ＯＡｒ、アリールアルキル、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、またはＯＣＦ３基であることが好ましい。アリールアルキルは、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、またはナフチルメチルであることが好ましく、ベンジルであることが特に好ましい。
【００４５】
Ａは、ＣＯＯＨ、ＮＨ２、あるいは１〜６個の炭素原子をもち、非置換の、またはＣＯＯＨもしくはＮＨ２によって置換されたアルキル基であることが好ましい。Ａは、メチル、さらにエチル、プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル、さらにｎ−ペンチル、１−、２−、または３−メチルブチル、１，１−、１，２−、または２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−、２−、３−、または４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−、または３，３−ジメチルブチル、１−または２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−または１，２，２−トリメチルプロピルであることが好ましい。Ａはメチルであることが特に好ましい。
【００４６】
Ａｒは、非置換またはＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、あるいはＨａｌで一、二、もしくは三置換されたフェニルであることが好ましく、非置換または置換のビフェニルをもたらすようにＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ２、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＮＯ２、またはＨａｌで一、二、もしくは三置換されたフェニルによって置換することができる。
【００４７】
したがって、Ａｒは、フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−メチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−プロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−イソプロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ｔｅｒｔブチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ヒドロキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−メトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、ｐ−トリフルオロメチルフェニル、ｏ−、ｍ−、ｐ−トリフルオロメトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−フルオロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−クロロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ブロモフェニル、ｏ−、ｍ−、ｐ−ニトロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−アミノメチルフェニルであることが好ましい。
【００４８】
Ｈｅｔは、飽和した、または部分的にまたは完全に不飽和の、単環式または二環式の５〜１０員の複素環基であり、１〜３個のＮおよび／または１個のＳまたはＯ原子が存在してもよく、また、この複素環基は、ＣＮ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＯＯＨ、ＯＡ、ＣＦ３、Ａ、ＮＯ２、Ａｒ、またはＯＣＦ３による一置換もしくは二置換されていてもよい。
【００４９】
Ｈｅｔは、好ましくはメチル、エチル、またはプロピル基、あるいはメチルアミノ、エチルアミノ、またはプロピルアミノ基［記述した芳香族複素環のすべてに関連する］によって置換されている、あるいは非置換である、ｏ、ｍ、またはｐ位で置換されたピリジル、２、４、５、または６位で置換されたピリミジル、あるいは３、４、５、または６位で置換されたピリダジル（ｐｙｒｉｄａｚｙｌ）、ならびに、非置換のまたは３−メチル、３−エチル、あるいは３−ベンジル基で置換された、あるいは非置換型の、２位で置換されたベンゾイミダゾリル、ならびに、２位で置換されたジヒドロイミダゾリル、テトラヒドロピリミジルまたはテトラヒドロピリジルであることが好ましい。
【００５０】
Ｈｅｔに含まれる好ましいものの例は、次の通りである。
【００５１】
【化５】
2004506024.tif 000004
【００５２】
Ｈｅｔ１は、１〜４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子をもつ、５員または６員の芳香族複素環であり、非置換でも、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ａ、ＯＡ、またはＯＣＦ３による一置換もしくは二置換でもよい。
【００５３】
Ｈｅｔ１は、２，４−、３，５−、または２，５−二置換ピリジル、あるいは２，４−、２，５−、２，６−、または４，６−二置換ピリミジル、あるいは２，４−または２，５−二置換の１，３−オキサゾリルまたは１，３−チアゾリルであることが好ましい。
【００５４】
ＯＡはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、またはブトキシ、さらにペンチルオキシまたはヘキシルオキシであることが好ましい。
【００５５】
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ、ならびにＩであることが好ましい。
【００５６】
指数ｎ、ｍ、ｏ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｔは、別段の記述がない限り、請求項２で示した通りの意味である。
【００５７】
式Ｉの化合物には、１つまたは複数のキラル中心があってもよく、したがって、様々な立体異性形で存在する。式Ｉは、これらの形をすべて含む。
【００５８】
したがって、本発明は、詳細には、記述した少なくとも１つの基が、上で示した好ましい意味の１つに当てはまる式Ｉの化合物に関する。
【００５９】
特に好ましい式Ｉの化合物は、以下の通りである：
ａ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
ｂ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］３−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
ｃ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−ＣＨ２（−０−ＣＨ２ＣＨ２）６−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＰＯ３Ｈ２）２］２））；
（上式で、ｎは１である）
式Ｉの化合物、ならびにその調製のための出発物質は、他に、文献（例えばＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、「Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ［Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ］」、Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔなどの標準研究（ｓｔａｎｄａｒｄ　ｗｏｒｋ）中）に記載されている方法など、それ自体、知られている方法によって、すなわち、記述した反応に適した知られている反応条件下で、調製される。この場合、自ずと分かる変形形態も使用できるが、ここではこれ以上詳細には記述しない。
【００６０】
望むなら、出発物質はまた、反応混合物から分離しないように、ｉｎ　ｓｉｔｕ形成させることができるが、直ちに反応して、さらに式Ｉの化合物をもたらす。
【００６１】
フラグメントのカップリングあるいはリガンドとリンカーとの間のカップリングは、一般に、不活性溶媒中で行い、カルボン酸フラグメント（例えばＨＯ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｐ０３（Ｃ２Ｈ５）２）２］２などのホスホン酸リンカー）は、ＨＡＴＵ、ＨＯＡｔ、および２，４，６−コリジンのＤＭＦ溶液に溶解され、アミンフラグメント（例えばｃ［Ｒ（Ｐｂｆ）Ｇ（ＯｔＢｕ）ｆＫ］などのシクロペプチド）で処理される。
【００６２】
適当な不活性溶媒は、例えば、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの炭化水素；トリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタンなどの塩素化炭化水素；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサンなどのエーテル；エチレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル（メチルグリコールまたはエチルグリコール）、エチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）などのグリコールエーテル；アセトン、ブタノンなどのケトン；アセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などのアミド；アセトニトリルなどのニトリル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、二硫化炭素などのスルホキシド；ギ酸、酢酸などのカルボン酸；ニトロメタン、ニトロベンゼンなどのニトロ化合物；酢酸エチルなどのエステル、水、あるいは記述した溶媒の混合物などである。
【００６３】
環状化合物は、例えば「ＤＥ　４３　１０　６４３」、「Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，ｌ．ｃ．，Ｖｏｌｕｍｅ　１５／ＩＩ」１〜８０６頁（１９７４年）、またはＳ．Ｚｉｍｍｅｒ、Ｅ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ、Ｇ．Ｊｕｎｇ、およびＨ．Ｋｅｓｓｌｅｒによる「Ｌｉｅｂｉｇ’ｓ　Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．１９９３」、４９７〜５０１頁に記載されているような、直鎖化合物の環化によって調製できる。
【００６４】
直鎖ペプチドは、例えばＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍｉｅ　１９８５、９７」８０１〜８１２頁に従って合成できる。
【００６５】
例えば式Ｉの化合物などの開鎖の直鎖化合物は、他に、アミノ酸およびペプチド合成の通常の方法によって調製でき、例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（例えば、Ｂ．Ｆ．ＧｙｓｉｎおよびＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４」、３０１２頁以降（１９７２年）も参照のこと）による固相合成法によって調製することもできる。
【００６６】
さらに、式Ｉの化合物は、加溶媒分解、特に加水分解によって、あるいは水素化分解によって、その官能基誘導体から遊離させることによって得ることができる。
【００６７】
加溶媒分解または水素化分解のための好ましい出発物質は、１種または複数の遊離アミノおよび／またはヒドロキシル基の代わりに、対応する保護されたアミノおよび／またはヒドロキシル基を含むものであり、Ｎ原子が結合したＨ原子の代わりに、アミノ保護基を有するもの、例えば、式Ｉに相当し、ＮＨ２基の代わりにＮＨＲ’（式中、Ｒ’は、例えばＢＯＣまたはＣＢＺなどのアミノ保護基である）を含むものであることが好ましい。
【００６８】
さらに、出発物質は、ヒドロキシル基のＨ原子の代わりにヒドロキシル保護基を有するもの、例えば、式Ｉに相当し、ヒドロキシフェニル基の代わりにＲ”Ｏ−フェニル基（式中、Ｒ”はヒドロキシル保護基である）を含むものが好ましい。
【００６９】
いくつかの同一または異なる保護されたアミノおよび／またはヒドロキシル基が、出発物質の分子中に存在してもよい。存在する保護基が互いに異なる場合、多くのケースでは、それらを選択的に取り除くことができる。
【００７０】
「アミノ保護基」という表現は、一般に知られており、アミノ基を、化学反応から（ブロックするために）保護するのに適しているが、分子内の他の位置で所望の化学反応が実施された後は、容易に除去可能である基に関する。このタイプの典型的な基は、具体的には、非置換型または置換型のアシル、アリール、アラルコキシメチル、またはアラルキル基である。保護基は、所望の反応（あるいは反応連鎖（ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ））後に取り除かれるので、その性質およびサイズは、別段重要ではない。しかし、好ましくは、Ｃ原子が１〜２０個、特に１〜８個であるものが好ましい。「アシル基」という表現は、この方法に関連して最大限に広い意味で解釈されるべきである。これには、脂肪族、芳香脂肪酸（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、芳香族または複素環カルボン酸、あるいはスルホン酸、具体的にはアルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、特にアラルコキシカルボニル基から誘導されたアシル基が含まれる。このタイプのアシル基の例は、アセチル、プロピオニル、ブチリルなどのアルカノイル；フェニルアセチルなどのアラルカノイル（ａｒａｌｋａｎｏｙｌ）；ベンゾイルまたはトルイルなどのアロイル（ａｒｏｙｌ）；ＰＯＡなどのアリールオキシアルカノイル；メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシ−カルボニル、ＢＯＣ、２−ヨードエトキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル；ＣＢＺ（「カルボベンゾキシ」）、４−メトキシ−ベンジルオキシカルボニル、ＦＭＯＣなどのアラルキルオキシカルボニル；Ｍｔｒ、Ｐｂｆ、またはＰｍｃなどのアリールスルホニルである。好ましいアミノ保護基は、ＢＯＣおよびＭｔｒ、さらにＣＢＺ、Ｆｍｏｃ、ベンジル、およびアセチルである。
【００７１】
同様に、「ヒドロキシル保護基」という表現は、一般に知られており、ヒドロキシル基を化学反応から保護するのに適しているが、分子内の他の位置で所望の化学反応が実施された後に容易に除去可能である基に関する。このタイプの典型的な基は、前述の非置換型または置換型アリール、アラルキル、またはアシル基、さらにアルキル基である。ヒドロキシル保護基は、所望の化学反応または反応連鎖の後、また取り除かれるので、その性質およびサイズは、重要ではない。１〜２０個、特に１〜１０個のＣ原子を含む基が好ましい。ヒドロキシル保護基の例は、特に、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−トルエンスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびアセチルであり、ベンジルおよびｔｅｒｔ−ブチルが特に好ましい。アスパラギン酸およびグルタミン酸中のＣＯＯＨ基は、そのｔｅｒｔ−ブチルエステル（例えばＡｓｐ（ＯｔＢｕ））の形で保護されることが好ましい。
【００７２】
式Ｉの化合物の官能基誘導体からの遊離は、使用する保護基に応じてして、例えば強酸を使用して、適切にはＴＦＡまたは過塩素酸を使用して、また、塩酸または硫酸など他の無機強酸、トリクロロ酢酸あるいはベンゼン−またはｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸など強い有機カルボン酸を使用して行われる。追加の不活性溶媒が存在可能であるが、必ずしも必要ではない。適当な不活性溶媒は、例えば、酢酸などのカルボン酸、テトラヒドロフランやジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦなどのアミド、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、さらにメタノール、エタノール、イソプロパノールなどのアルコールなど有機溶媒、ならびに水であることが好ましい。前述の溶媒の混合物が、さらに適当である。好ましくは、ＴＦＡは、過塩素酸は酢酸と７０％過塩素酸の比９：１の混合物の形で使用する。溶媒を加えることなく、過剰量で使用し、開裂のための反応温度は、適切には、約０°と約５０°の間であり、この反応は、１５〜３０°（室温）で行うことが好ましい。
【００７３】
ＦＭＯＣは、１５〜３０℃の、ジメチルアミンまたはジエチルアミンまたはピペリジンの約５〜５０％ＤＭＦ溶液を使用するのに対し、基ＢＯＣ、ＯｔＢｕ、およびＭｔｒは、例えば、好ましくはＴＦＡのジクロロメタン溶液を使用することによって、あるいは１５〜３０℃の約３〜５Ｎ　ＨＣｌのジオキサン溶液を使用することによって取り除くことができる。
【００７４】
トリチル基は、アミノ酸ヒスチジン、アスパラギン、グルタミン、およびシステインの保護のために使用される。除去は、ＴＦＡ／ｌ０％チオフェノールを使用して、所望の最終生成物に応じて行われ、トリチル基は、前述のすべてのアミノ酸から取り除かれ、ＴＦＡ／アニソール、ＴＦＡ／チオアニソール、またはＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ２Ｏを用いた場合、Ｃｙｓ側鎖の残基に比べて、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、およびＧｌｎからはトリチル基のみが取り除かれる。
【００７５】
Ａｒｇの保護のためには、Ｐｂｆ（ペンタメチルベンゾフラニル）基が使用される。除去は、例えばＴＦＡのジクロロメタン溶液を使用することによって行われる。
【００７６】
水素化分解によって除去可能な保護基（例えばＣＢＺまたはベンジル）は、例えば、触媒（例えば、適切には炭素などの担体に担持したパラジウムなどの貴金属触媒）の存在下で、水素で処理することによって取り除くことができる。この場合適当な溶媒は、上で示したものであり、具体的には、例えばメタノールやエタノールなどのアルコール、あるいはＤＭＦなどのアミドである。通常、水素化分解は、約０°と１００°の間の温度で、約１バールと２００バールの間の圧力で、好ましくは１０〜３０°、１〜１０バールで行われる。ＣＢＺ基の水素化分解は、例えば、メタノール中、５〜１０％Ｐｄ／Ｃ上で、あるいは１０〜３０°のメタノール／ＤＭＦ中、Ｐｄ／Ｃ上で、（水素の代わりに）ギ酸アンモニウムを使用して、容易に行われる。
【００７７】
式Ｉの塩基は、酸を使用して、例えば、エタノールなどの不活性溶媒中で等量の塩基と酸を反応させ、続いて蒸発させることによって、関連する酸付加塩に転換できる。この反応が可能である酸は、具体的には、生理学的に許容され得る塩をもたらすものである。無機酸としては、例えば、硫酸、硝酸、塩酸や臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、オルトリン酸などのリン酸、スルファミン酸、さらに有機酸、具体的には、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンスルホン酸またはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸およびナフタレンジスルホン酸、およびラウリル硫酸などの脂環式の、アラリファティック、芳香族または複素環一塩基または多塩基カルボン酸、スルホン酸または硫酸、を用いることができる。生理学的に許容されない酸を用いた塩、例えばピクリン酸塩などは、式Ｉの化合物の分離および／または精製のために使用できる。
【００７８】
一方、式Ｉの酸は、塩基と反応させることによって、その生理学的に許容される金属またはアンモニウム塩の１つに転換できる。この場合、適当な塩は、具体的には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、およびアンモニウム塩、さらに、例えばジメチル−、ジエチル−、またはジイソプロピルアンモニウム塩などの置換されたアンモニウム塩、モノエタノール−、ジエタノール−、またはジイソプロピルアンモニウム塩、シクロヘキシル−またはジシクロヘキシルアンモニウム塩、ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、さらに例えばアルギニンまたはリジンとの塩である。
【００７９】
（実施例）
上で述べた、また、下で述べる温度は全て、℃で示している。以下の実施例において、「慣行的な後処理」は、次を意味する：
必要であれば水を加え、必要であれば最終生成物の構造に応じて、混合物のｐＨを２と１０の間に調整し、酢酸エチルまたはジクロロメタンで抽出し、有機相を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、残留物をシリカゲルのクロマトグラフィによって、および／または結晶化によって精製する。
【００８０】
シリカゲルでのＲｆ値：溶離剤：酢酸エチル／メタノール　９：１
ＲＴ＝以下のシステムにおけるＨＰＬＣでの保持時間（分）：
［Ａ］
カラム：ＹＭＣ　ＯＤＳ　Ａ　ＲＰ　５Ｃ１８、２５０×４．６ｍｍ
溶離剤 Ａ：０．１％　ＴＦＡ水溶液
溶離剤 Ｂ：０．１％　ＴＦＡのアセトニトリル溶液
流速：１ｍｌ／分
勾配：０〜５０％　Ｂ／３０分
［Ｂ］
［Ａ］と同様；
勾配：５〜５０％　Ｂ／３０分
［Ｃ］
［Ａ］と同様；
勾配：１０〜５０％　Ｂ／３０分
質量分析（ＭＳ）：
ＥＩ（電子衝撃イオン化）Ｍ＋
ＦＡＢ（高速原子衝撃）（Ｍ＋Ｈ）＋
ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）（Ｍ＋Ｈ）＋
ＤＭＰＰ樹脂は、４−（２’，４’−ジメトキシフェニルヒドロキシ−メチル）フェノキシ樹脂を表し、これは、例えば、側鎖が保護されたペプチドの合成を可能にするものである。ＴＣＰ樹脂は、トリチルクロリド−ポリスチレン樹脂を意味する。
【００８１】
以下の実施例は、一方では、フラグメントのカップリングおよびホスホン酸エステルの開裂を、また一方では、ホスホン酸リンカーを用いた、選択されたシクロペプチド誘導体の合成を説明する。金属または骨置換材料からなる様々な成形物を被覆するためのプロセスは、実施例７〜９によって詳細に説明する。
【００８２】
実施例１：溶液中でのフラグメントのカップリング
カルボン酸フラグメント（例えばＨＯ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３（Ｃ２Ｈ５）２）２］２）などのホスホン酸リンカー）０．２ミリモル、ＨＡＴＵ　０．９８当量、ＨＯＡｔ　１．１当量、および２，４，６−コリジン　１０当量を、ＤＭＦ２ｍｌに溶解する。１．５時間後、アミンフラグメント（例えばｃ［Ｒ（Ｐｂｆ）Ｇ（ＯｔＢｕ）ｆＫ］）などのシクロペプチド）１当量を加える。この混合物を室温で２４時間攪拌し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【００８３】
実施例２：ホスホン酸リンカーでのホスホン酸エステルの開裂
超音波槽中で、ホスホン酸エステル基をもつペプチドを、無水ＣＨＣｌ３とＴＭＳＢｒの１０：１混合物に溶解させる、あるいは適宜、懸濁させる。超音波槽中で、適宜、沈殿物を時々懸濁させながら３日間攪拌した後、溶媒を蒸留する。残留物を凍結乾燥してＨ２Ｏを除く。
【００８４】
酸性側鎖保護基を、従来の技術によって除去する。
【００８５】
実施例３：ホスホン酸リンカーの合成
ホスホン酸リンカーを、Ｆｍｏｃ法（Ｇ．Ｂ．Ｆｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｌ．Ｎｏｂｉｅ、「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ．１９９０、３５」、１６１〜２１４頁を参照のこと）に従って、固相ペプチド合成法で合成した。
【００８６】
カップリングさせた最後の構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ　ｂｌｏｃｋ）は、３−ジエチルホスホノ−プロピオン酸であった。
【００８７】
３−ジエチルホスホノプロピオン酸の合成：
３−ブロモプロピオン酸ベンジル
塩化カルシウム管を備え付けた２５０ｍｌの丸底フラスコに入れた無水ＤＣＭ　１００ｍｌに、３−ブロモプロピオニルクロライド５８．３ミリモル（１０．０ｇ）とベンジルアルコール　１当量（６．３ｇ）を、攪拌しながら溶解する。２日後、この混合物にＣＨＣｌ３２００ｍｌを加え、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で有機相を２回抽出する。ＭｇＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を蒸留すると、無色の液体として生成物が得られる。
【００８８】
収量：１３．８ｇ（５６．８ミリモル、９７％）　Ｒｆ＝０．７５（Ｈ：ＥＡ　１：１）。
【００８９】
ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：
１Ｈ（２５０　ＭＨｚ）：δ＝７．３５（ｓ，５Ｈ；Ｈ　ａｒ）、５．１６（ｓ，２Ｈ；ＣＨ２−ＯＣＯ）、３．５８（ｔ，３Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝７　Ｈｚ，２Ｈ；ＣＨ２Ｂｒ）、２．９５（ｔ，３Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝７Ｈｚ，２Ｈ；ＣＨ２ＣＯ）。
ＧＣ−ＭＳ：ｍ＋＝２４２．０。
【００９０】
３−ジエチルホスホノプロピオン酸ベンジル
圧力を均一にするためにガス風船で密閉した蒸留装置内で、３−ブロモプロピオン酸ベンジル５６．８ミリモル（１３．８ｇ）と亜リン酸トリエチル１．７当量（１６．０ｇ）を、攪拌しながら１４０℃に加熱する。この反応中に形成されたブロモエタンを連続的に蒸留し、０℃に冷却した受けフラスコに集める。４時間後、残った油性残留物を、高真空中で、Ｖｉｇｒｅｕｘカラムを通して分別蒸留する。生成物は、無色のオイルである。
【００９１】
収量：１２．１ｇ（４０．３ミリモル、７１％）、わずかに不純、Ｒｆ＝０．３３（Ａ：Ｈ　２：３）。
【００９２】
純度を高めるために、この生成物をフラッシュクロマトグラフィ（溶離剤Ａ：Ｈ　２：３）で、適宜、精製することができる。
【００９３】
ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：
１Ｈ（２５０　ＭＨｚ）：δ＝７．３１（ｓ，５Ｈ；Ｈ　ａｒ）、５．１０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−ＯＣＯ）、４．０５（ｍ，４Ｈ；ＣＨ２ＯＰ）、２．６１（ｍ，２Ｈ；ＣＨ２ＣＯ）、２．０４（ｍ，２Ｈ；ＣＨ２Ｐ）、１．２６（ｔ，３Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝７　Ｈｚ，６Ｈ；ＣＨ３）。
３１Ｐ（１０１．２５６　ＭＨｚ）：δ＝２８．５（ｓ）。
ＧＣ−ＭＳ：ｍ＋＝３００．０。
【００９４】
３−ジエチルホスホノプロピオン酸
３−ジエチルホスホノプロピオン酸ベンジル４０．３ミリモル（１２．１ｇ）をエタノール１００ｍｌに溶解し、触媒（５％　Ｐｄ／Ｃ）２ｇを加える。Ｈ２雰囲気中で４時間攪拌した後、活性炭を濾過し、溶媒を蒸留する。生成物は、室温でゆっくり凝固して無色の固体となる無色のオイルとして得られる。この生成物には、３−ジエチルホスホノプロピオン酸エチルがわずかに混入しているが、これは、水およびヘキサンとともに数回振ることによって、適宜、有機相に移動させ、取り除くことができる。
【００９５】
収量：８．２ｇ（３９．０ミリモル、９７％）
ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：
１Ｈ（２５０　ＭＨｚ）：δ＝１０．６０（ｂｓ，１Ｈ；ＣＯＯＨ）、４．０７（ｍ，４Ｈ；ＣＨ２Ｏ）、２．５９（ｍ，２Ｈ；ＣＨ２ＣＯ）、２．０６（ｍ，２Ｈ；ＣＨ２Ｐ）、１．２９（ｔ，３Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝７　Ｈｚ，６Ｈ；ＣＨ３）。
１３Ｃ（６２．８９６　ＭＨｚ）：δ＝１７４．５（ｄ，Ｊ（Ｃ，Ｐ）＝１８．５　Ｈｚ；ＣＯＯＨ），６２．１（ｄ，Ｊ（Ｃ，Ｐ）＝６．６　Ｈｚ；ＣＨ２−Ｏ）、２７．１（ｄ，Ｊ（Ｃ，Ｐ）＝３．８　Ｈｚ；ＣＨ２−ＣＯＯＨ）、２．０７（ｄ，Ｊ（Ｃ，Ｐ）＝１４４．９　Ｈｚ；ＣＨ２−Ｐ）、１６．２（ｄ，Ｊ（Ｃ，Ｐ）＝６．１　Ｈｚ；ＣＨ３）。
３１Ｐ（１０１．２５６　ＭＨｚ）：δ＝２９．５（ｓ）。
【００９６】
ホスホン酸エステル（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）リンカーをもつシクロペプチドの分析データ
実施例４：（スペーサー中の２アミノヘキサン酸）
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３Ｈ２）２］２））
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ（％）：１７５６．９（１００）［ｍ−Ｈ＋］、１７７８．８（４８）［ｍ＋Ｎａ＋−２Ｈ＋］、１７９４．９（１８）［ｍ＋Ｋ＋−２Ｈ＋］
ＮＭＲ（［Ｄ６］）ＤＭＳＯ）：
３１Ｐ（１０１．２５６　ＭＨｚ）：δ＝２９．６３（ｓ，１Ｐ）、２９．５９（ｓ，１Ｐ）、２９．５７（ｓ，１Ｐ）、２９．３８（ｓ，１Ｐ）。
【００９７】
実施例５：（スペーサー中の３アミノヘキサン酸）
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］３−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３Ｈ２）２］２））
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ（％）：９３４．９（１００）［ｍ−２Ｈ＋］、１８７０．０（２７）［ｍ−Ｈ＋］
ＮＭＲ（［Ｄ６］）ＤＭＳＯ）：
３１Ｐ（１０１．２５６　ＭＨｚ）：δ＝２９．５７（ｓ，１Ｐ）、２９．５１（ｓ，２Ｐ）、２９．３３（ｓ，１Ｐ）。
【００９８】
実施例６：（スペーサー中の２ヘプタエチレングリコールアミノカルボン酸）　シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−ＣＨ２（−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）６−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３Ｈ２）２］２））
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ（％）：１０８６．４（１００）［ｍ−２Ｈ＋］、１０９７．７（７３）［ｍ＋Ｎａ＋−３Ｈ＋］
ＮＭＲ（［Ｄ６］）ＤＭＳＯ）：
３１Ｐ（１０１．２５６　ＭＨｚ）：δ＝２９．６６（ｓ，１Ｐ）、２９．６１（ｓ，１Ｐ）、２９．５９（ｓ，１Ｐ）、２９．４５（ｓ，１Ｐ）。
【００９９】
さらに、前述のペプチドをすべて、１Ｈ　ＮＭＲ分光法（２５０ＭＨｚ）によって特徴付けたところ、期待されたスペクトルが得られた。
【０１００】
実施例７：
直径１０ｍｍ、高さ１〜２ｍｍの、ＴｉまたはＴｉＡ１６Ｖ４成形物を、超音波槽中で、６０℃の蒸留水で１５分間予備洗浄し、次いで、アセトンで３０分洗浄した後蒸留水で２回洗浄し、乾燥機で８時間乾燥させた。
【０１０１】
この成形物を、４８ウェル（Ｃｏｓｔａｒ社、「ｎｏｎ−ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ」、品番３５７４）に移す。生物活性があり、細胞接着を仲介する分子Ｂ（Ｂは、請求項２に記載のシクロペプチド、ペプチドミメティック、または直鎖ペプチドであり得る）を準備した成形物に接着させるために、分子Ｂを含有するストック溶液（「Ｂ溶液」）を水性緩衝液Ｔｒｉｓ−ＨＣ１（１０ｍＭ、ｐＨ８．７）、Ｔｒｉｓ−ＨＣ１Ｏ４（１０ｍＭ、ｐＨ８．７）、またはＰＢＳ（ｐＨ７．４）のうちの１つの溶液として、最終濃度１ｍＭで調製する。次いで、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で希釈することによって、「Ｂ溶液」の最終濃度が、各１ｎｍ、１０ｎｍ、１００ｎｍ、１μｍ、１０μｍ、および１００μｍである濃度シリーズを調製する。成形物をそれぞれ、それぞれのＢ溶液２５０μｌでカバーし、次いで室温で１８〜２４時間インキュベートする。結合しなかったＢ分子を取り除くために、これらのサンプルを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄し、４℃で終夜ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に保管しておく。
【０１０２】
細胞の非特異的な結合部位は、それぞれの成形物に５％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）溶液（ｐＨ７．４）２５０μｌを加え、次いで室温で２時間インキュベートし、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で１回洗浄することによってブロックする。
【０１０３】
Ｂ溶液の代わりに、相当する緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣ１　１０ｍＭ、ｐＨ８．７；Ｔｒｉｓ−ＨＣ１Ｏ４　１０ｍＭ、ｐＨ８．７；ＰＢＳ，ｐＨ７．４）で処理したＴｉおよびＴｉＡ１６Ｖ４成形物は、陰性対象としての役割をする。
【０１０４】
成形物にもたらされた被覆の程度を、分析によって評価し、その生物活性を、細胞接着試験によってｉｎ　ｖｉｔｒｏで決定する。
【０１０５】
実施例８：
直径１０ｍｍの円柱を切断し、続いて低速鋸「Ｂｕｅｈｌｅｒ　ＩＳＯＭＥＴ」で１００μｍの厚さに切断することによって、直径１０ｍｍ、高さ１００μｍの、天然の骨置換材料のモデルとしての象牙質成形物を作成する。次いで、サンプルを、超音波槽中で、６０℃の蒸留水で１０分間浄化し、その後蒸留水で２回洗浄し、乾燥機で８時間乾燥させる。
【０１０６】
成形物をＢ溶液で被覆するのための手順は、実施例７で説明している。
【０１０７】
成形物にもたらされた被覆の程度を、分析によって評価し、その生物活性を、細胞接着試験によってｉｎ　ｖｉｔｒｏで決定する。
【０１０８】
実施例９：
直径１０ｍｍの円柱を切断し、続いて低速鋸「Ｂｕｅｈｌｅｒ　ＩＳＯＭＥＴ」で、１００μｍの厚さに切断することによって、市販品として入手できる骨置換材料である、直径１０ｍｍ、高さ１００μｍのＥｎｄｏｂｏｎ（登録商標）（Ｂｉｏｍｅｔ　Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙより）の成形物を作製する。次いでサンプルを、超音波槽中で、６０℃の蒸留水で１０分間浄化し、その後蒸留水で２回洗浄し、乾燥機で８時間乾燥させる。
【０１０９】
成形物をＢ溶液で被覆するための手順は、実施例７に説明している。
【０１１０】
成形物にもたらされた被覆の程度を、分析によって評価し、その生物活性を、細胞接着試験によってｉｎ　ｖｉｔｒｏで決定する。
【０１１１】
細胞接着試験の例
ｉｎ　ｖｉｔｒｏのマウスＭＣ３Ｔ３　Ｈ１骨芽細胞培養株の、ＲＧＤペプチドで被覆された材料表面への接着を調べた。この試験では、１ｃｍ２あたり５００００個の細胞を接種し、無血清培地で、３７℃／大気湿度９５％で１時間インキュベートした後、接着した細胞の割合を求めた。
【０１１２】
細胞接着率［％］＝接着した細胞数／接種した細胞数×１００
ペプチド：細胞接着率［％］
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］２−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３Ｈ２）２］２））：７５
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（ＮεＨ−［ＣＯ−（ＣＨ２）５−ＮＨ］３−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＯ３Ｈ２）２］２））：６２
【国際公開パンフレット】
2004506024.tif 000007
2004506024.tif 000008
2004506024.tif 000009
2004506024.tif 000010
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2004506024.tif 000038
【国際調査報告】
2004506024.tif 000039
2004506024.tif 000040
2004506024.tif 000041
2004506024.tif 000042
2004506024.tif 000043
2004506024.tif 000044