(57)【要約】本発明は配列番号２の配列に規定されるアミノ酸配列を有する嗅覚又はフェロモンＧタンパク質共役型受容体に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１と９５％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有するフェロモンＧタンパク質共役型受容体。
【請求項２】
配列番号１のアミノ酸配列又はその特異的活性部分を有するＧタンパク質共役型受容体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＧタンパク質共役型受容体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の受容体又はポリヌクレオチドのアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤。
【請求項５】
請求項３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項６】
請求項５に記載のベクターによって形質転換された細胞。
【請求項７】
請求項１又は２に記載の受容体をコードする請求項３に記載のポリヌクレオチドの部分的欠失又は完全な欠失を含む非ヒト哺乳動物、好ましくは前記ポリヌクレオチドの相同組換え「ノックアウト」を含む非ヒト哺乳動物、又は前記ポリヌクレオチドを天然レベルより多く過剰発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の受容体又はポリヌクレオチドのアゴニスト、アンタゴニスト及び阻害剤からなる群から選択される化合物。
【請求項９】
以下のステップを含む、請求項１又は２に記載の受容体に対する天然の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤であることが知られているか又は知られていない化合物をスクリーニング（検出及び所望により回収）する方法：
−　細胞、又は請求項５に記載のベクターによってトランスフェクトされた細胞からの細胞抽出物を接触させ、
−　所望により機能的応答の活性化により、前記受容体への天然の化合物の結合を許容する条件下で前記受容体に結合する前記天然の化合物を用いて細胞抽出物又は完全な細胞から膜画分を所望により単離し、及び
−　バイオアッセイにより、好ましくは受容体に対する天然の既知の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤として作用する他の分子（又は化合物）の存在下での第二メッセンジャーの生産の改変、又は受容体活性の増加により、かかる化合物の存在を検出し、それによって前記分子（又は他の化合物）を回収して前記分子（又は他の化合物）がその受容体に対する天然の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤として作用することができるかどうかを決定する。
【請求項１０】
請求項９に記載のスクリーニング方法によって同定された化合物。
【請求項１１】
適切な医薬担体、及び請求項１又は２に記載の受容体、請求項３に記載の前記受容体をコードするポリヌクレオチド、請求項４に記載のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤、又は請求項５に記載のベクター、又は請求項６に記載の細胞の十分な量を含む医薬組成物。
【請求項１２】
食品及び／又は化粧品の（又は食品及び／又は化粧品中の）存在する味及び／又は香気を改良、削除又は置換するための、請求項４に記載のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤、又は請求項１０に記載の化合物の使用方法。
【請求項１３】
細胞移行、不妊症、不安、精神分裂病、躁鬱病、鬱病を含む精神病及び神経病の如きヒトを含む哺乳動物を冒す病気の治療及び／又は予防における薬剤の製造のための、軸策成長、神経細胞連結及び神経再生を促進するための、雄及び雌の内分泌機能、ホルモン生産及び月経サイクルの調節のための、食欲の刺激又は抑制、性欲及び性的魅力の刺激又は抑制、攻撃性の刺激又は抑制の如きいくつかの哺乳動物（ヒトを含む）の行動の刺激による治療又は予防のための、及び生物間の化学的連絡の促進又は抑制のための、請求項４に記載のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤、又は請求項１０に記載の化合物の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は嗅覚リガンド（臭気物質又は前記受容体と相互作用することができるいかなる他の分子）のファミリーの新規に同定され、単離され精製されたメンバー、及びフェロモンリガンドＧタンパク質共役型（好ましくはヒトの）受容体のファミリー並びに前記受容体により実行することができる様々な使用方法に関する。
【０００２】
本発明は前記（好ましくはヒトの）受容体をコードするポリヌクレオチド配列にも関する。
【０００３】
本発明は受容体が媒介する病気において診断及び治療に適用可能な受容体ポリぺプチド及びポリヌクレオチドを用いた方法にも関する。
【０００４】
本発明は改良された香気又は香料として用いられるアゴニスト及びアンタゴニストを同定するための、並びに様々な病気の予防及び／又は治療のための受容体ポリぺプチド及びポリヌクレオチドを用いたリガンドスクリーニング方法にも関する。
【０００５】
本発明は前記嗅覚及びフェロモン受容体ポリペプチド及びポリヌクレオチドに基づいたアゴニスト及びアンタゴニスト、及び前記受容体ポリペプチドを含むバイオセンサーをも包含する。
【０００６】
本発明は本発明による受容体ポリペプチド及びポリヌクレオチドを生産する手順にも関し、好ましくはそれは遺伝子組換え方法によって行われる。
【０００７】
発明の背景
Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲｓ）は細胞内の信号伝達を担うタンパク質である。ＧＰＣＲｓは通常７つの膜貫通ドメインを有する。リガンドが細胞外部分又はＧＰＣＲの断片に結合すると、信号が細胞内を伝達され、その結果、細胞の生物学的又は生理学的特性又は挙動が変化する。ＧＰＣＲｓはＧタンパク質及びエフェクター（Ｇタンパク質によって調節される細胞内酵素及び膜チャンネル）と共に細胞内第二メッセンジャーの状況を細胞外入力に連結するモジュラー信号システムの構成要素である。
【０００８】
ＧＰＣＲ遺伝子及び遺伝子生産物は病気の潜在的原因であり、これらの受容体は中央神経系及び末梢生理学的過程の両方に対して決定的に重要であるようにみえる。
【０００９】
ＧＰＣＲタンパク質スーパーファミリーは五つのファミリ−によって表される：ファミリーＩはロドプシンによって類型化される受容体及びベータ２−アドレナリン作用受容体であり、２００以上の特異的なメンバーによって現在表されている；ファミリーＩＩはパラチロイドホルモン／カルシトニン／セクレチン受容体ファミリ−である；ファミリーＩＩＩは向代謝性グルタメート受容体ファミリーである；ファミリーＩＶはＣＡＭＰ受容体ファミリーであり、ディー・ディスコイデウム（Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）の走化性及び発達において重要である；ファミリーＶはＳＴＥ２の如き真菌の交配フェロモン受容体である。
【００１０】
Ｇタンパク質はグアニンヌクレオシドに結合するα，β及びγサブユニットからなるヘテロ三量体タンパク質のファミリーを表す。これらのタンパク質は細胞表面受容体（七つの膜貫通ドメインを含む受容体）に通常結合されている。
【００１１】
ＧＰＣＲへのリガンドの結合に続き、構造変化がＧタンパク質に伝達され、これはαサブユニットが結合ＧＤＰ分子をＧＴＰ分子と交換してβγサブユニットから解離することを引き起こす。
【００１２】
α，β及びγサブユニットのＧＴＰ結合形態はエフェクター調節成分として通常機能し、ｃＡＭＰ（例えばアデニルサイクラーゼの活性化による）、ジアシルグリセロール又はイノシトールホスフェートの如き第二メッセンジャーの生産に導く。
【００１３】
２０以上の異なるタイプのαサブユニットがヒトにおいて知られている。これらのサブユニットはβ及びγサブユニットの小さなプールと会合する。哺乳動物のＧタンパク質の例はＧｉ、Ｇｏ、Ｇｑ、Ｇｓ及びＧｔを含む。Ｇタンパク質はＬｏｄｉｓｈ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｂｏｏｋｓ　Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９５）に詳しく記述されており、この内容は参照としてここに組み入れられる。
【００１４】
既知の及び未知のＧＰＣＲｓは今や医薬作用及び開発の主要な標的を構成する。
【００１５】
３００以上のＧＰＣＲｓが今までクローニングされており、１０００以上のかかる受容体が存在すると一般的に推定されている。機構的には、全ての臨床的に関連する医薬の約５０〜６０％が様々なＧＰＣＲｓの機能を調節することによって作用する（Ｃｕｄｅｒｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．７３，ｐ５１−６３，１９９５）。
【００１６】
発明の概要
本発明は嗅覚（臭気物質／リガンド）及びフェロモン／リガンドの新規に単離され精製されて同定されたメンバー（配列番号１〜配列番号５４８）及びＧタンパク質共役型受容体に関し、並びに以下に記述する前記受容体をコードする組換え配列を含むポリヌクレオチド配列に関する。
【００１７】
本発明は以下に記述する受容体に対応する配列に相同な記述されていないヌクレオチド及び／又はアミノ酸配列にも関する。
【００１８】
相同配列は以下に記述する完全な配列と高い配列同一性（７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％より高い同一性を示す）を示す配列を意味する。
【００１９】
本発明の他の側面は前記配列の特異的活性部分又はこれらの配列の前記活性部分（リガンド結合）のライブラリーに関する。前記部分は完全なヌクレオチド又はアミノ酸配列の上の改変（規則的な突然変異）又は欠失を含む部分的な又は欠失された受容体であって前記受容体と相互作用することができる特異的リガンドの結合に必要な活性部位をなおも維持している受容体であることができる。
【００２０】
本発明による配列の相同配列は他の動物（脊椎動物、好ましくは哺乳動物）又は特定のヒト集団中に存在するが同一の生化学的経路に関与する同様の受容体を含むことができる。
【００２１】
かかる相同配列は一以上のアミノ酸又はヌクレオチドの付加、欠失又は置換であって、迅速なリガンドスクリーニングに好適な他の膜貫通タンパク質と好ましくはハイブリッドポリペプチドを形成するために本発明による受容体の機能的特性を実質的に変更しない付加、欠失又は置換を含むことができる。
【００２２】
従って、本発明は添付の配列表に示されたアミノ酸又はヌクレオチド配列（嗅覚ニューロン又は嗅覚上皮から由来する）と正確に同一のアミノ酸又はヌクレオチド配列を有する受容体及び対応するヌクレオチド配列、並びにこれらとは異なるが、本発明による受容体の基本的な定性的結合特性を保持している分子をも包含する。
【００２３】
本発明は以下に記述する完全なヌクレオチド及びアミノ酸配列によって特徴付けられる前記ヒト受容体、アゴニスト及びアンタゴニスト化合物又は阻害剤、好ましくは前記受容体に特異的に結合する抗体（即ち、他の天然に存在する抗体よりも前記受容体に対して少なくとも１０倍大きい親和性を有する抗体）又はその特異的超可変部分及び特にかかるアミノ酸配列の医薬的に許容可能な調製物を前記受容体に指向された抗体を生産することができる動物に注入することを含むプロセスによって作られる抗体に関することが好ましい。
【００２４】
例えば、本発明による受容体に対するモノクローナル抗体は前記受容体をコードするＤＮＡを含む発現プラスミドを非ヒト哺乳動物に注入し、次いでマウスの脾臓細胞をミエローマ細胞と融合させることによって得られる。
【００２５】
本発明は本発明によるポリヌクレオチドにも関し、前記ポリヌクレオチドは所望により他の発現配列に結合されており、ベクター又はかかるベクター（プラスミド、アデノウイルスの如きウイルス、リポソーム、カチオン性ビークル．．．）によって形質転換されたホスト細胞に組み入れられている。
【００２６】
本発明は当業者には周知の方法に従ってかかるホスト細胞によって生産される組換え体、好ましくは本発明による組換えヒト受容体にも関する。
【００２７】
本発明は本発明による受容体をコードする遺伝子配列の部分的又は完全な欠失を含むトランスジェニック非ヒト哺乳動物、好ましくは本発明によるヌクレオチド配列（ポリヌクレオチド）の相同組換え「ノックアウト」を含む非ヒト哺乳動物、又は前記ヌクレオチド配列（ポリヌクレオチド）を天然レベルより多く過剰発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物にも関する。
【００２８】
前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物は当業者には周知の方法によって、例えば胚性幹細胞の形質転換に基づく古典的な技術を用いる文献ＷＯ　９８／２０１１２に記述されている方法によって、好ましくはＣａｒｍｅｌｉｅｔ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３８０，ｐ．４３５−４３９，１９９６に記述されている方法に従って得ることができる。
【００２９】
好ましくは、本発明によるポリヌクレオチド又はその一部を過剰発現する前記トランスジェニック非ヒト哺乳動物はＤＮＡ構築物中に組み入れられた前記ポリヌクレオチド又はその活性部分をその過剰発現を可能にする誘導性プロモーター及び所望により組織及び他の特異的制御要素と共に含む。
【００３０】
本発明の他の側面は以下のステップを含む、本発明による受容体に対する天然の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤であることが知られているか又は知られていない（臭気物質、フェロモン又はその阻害剤）化合物をスクリーニング（検出及び所望により回収）する方法に関する：
−　細胞、又は本発明による受容体をコードするポリヌクレオチド又はその活性部分を発現するベクターによってトランスフェクトされた細胞からの細胞抽出物を接触させ、
−　所望により機能的応答の活性化（検出可能な信号を生ずる）により、前記受容体への天然の化合物の結合を許容する条件下で前記受容体に結合する前記天然の化合物を用いて細胞抽出物又は完全な細胞から膜画分を所望により単離し、及び
−　バイオアッセイにより、好ましくは本発明による受容体に対する天然の既知の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤として作用する他の分子（又は化合物）の存在下での第二メッセンジャーの生産の改変、又は受容体活性の増加により、かかる化合物の存在を検出し、それによって前記分子（又は他の化合物）を所望により回収して前記分子（又は他の化合物）がその受容体に対する天然の化合物のアゴニスト、アンタゴニスト又は阻害剤として作用することができるかどうかを決定する。好ましくは第二メッセンジャーアッセイは細胞内ｃＡＭＰ、細胞内イノシトールホスフェート、細胞内ジアシルグリセロール濃度、アラキノン酸濃度、ＭＡＰキナーゼ、又はチロシンキナーゼ経路又は細胞内カルシウム流動化の測定を含む。
【００３１】
本発明は前記スクリーニング（同定及び回収）方法によって同定された毒性であり得る分子を含む前記分子又は化合物、好ましくはフェロモン又は香料に関し、それらの製薬的な、化粧品としての及び産業的な（洗剤、石けん、シャンプー、香料、臭気物質の識別特徴、食欲抑制化合物などの製造）用途にも関する。
【００３２】
かかる分子又は化合物は哺乳動物においてその味の改変及び臭気物質、フェロモン又は香料に対するその生理学的反応の改変を得るためにも用いることができる。
【００３３】
本発明は好適な担体中に本発明の方法によって同定された化合物又は分子を含む食欲を制御するための（好ましくは鼻用の）スプレーにも関する。
【００３４】
かかる受容体の他の適用は本発明による受容体、細胞又は膜を用いることによる臭気のトラッピングであり、そこでは望ましい臭気リガンドが臭気物質受容体への臭気物質リガンドの結合により吸収される。
【００３５】
更に本発明は臭気をトラッピングするための前記方法を用いた臭気トラップに関する。
【００３６】
好ましくは、本発明による受容体上の試験される臭気物質又はフェロモンは汗、唾液、尿、膣分泌物、精液などの様々な体分泌物から選択されることが有利である。受容体上の試験される臭気物質又はフェロモンは５α−アンドロスト−１６−エン−３α−オル、５α−アンドロスト−１６−エン−３−オン、アンドロスタジエノン、以前に記述されているヒトフェロモン（Ｇｒｏｓｓｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　ｖｏｌ．２５，ｐ．２８９−２９９，２０００）及び他のアンドロステノール誘導体の如き１６−アンドロステンファミリーの群；１，３，５（１０），１６−エストラテトラエン−３−オル及びＰＣＴ／ＵＳ　９２／００２１９，ＰＣＴ／ＵＳ　９２／００２２０及びＥＰ　０５６２８４３に記述されている他のエストラジオール誘導体の如きエストレンファミリーからなる群；ヒトフェロモンプレグナー４，２０−ジエン−３，６−ジオン（Ｍｏｎｔｉ−Ｂｌｏｃｈ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．６５，ｐ．２３７−２４２）及び他のプロゲステロン誘導体の如きプロゲスティンファミリーからなる群；仮想的なヒトの膣フェロモンコピュリンを構成する酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ吉草酸及びイソカプロン酸の如き及びヒトの汗中に見出されるトランス−３−メチル−２−ヘキサノイル酸の如き小さな脂肪酸、デヒドロ−エキソ−ブレビコミンの如き及びネペタラクトンの如き既知の動物フェロモンの同族体である環式有機化合物、及びネズミのタンパク質アフロディシンのヒト同族体からなる群から選択されることが有利である。
【００３７】
かかる化合物の他の例はコカイン、マリファナ、ヘロイン、ハシーシ、合成ヘロインの如き麻薬、ガソリン、天然ガス、アルコール、腐敗した人肉、爆発物、プラスチック爆弾、小火器、火薬、有毒煙霧、有害煙霧又は危険性煙霧などから発される蒸気中に存在する分子である。
【００３８】
前記分子又は化合物は化学的連絡を促進又は抑制するためにも用いられることができる。生物又は化学化合物の外因性の源による放出に関与するすべての刺激は他の生物又は他の生物の一部の応答の見込みを改変することができる。
【００３９】
これらの分子又は化合物は例えば細胞移行、細胞死、細胞増殖、不安、精神分裂病、躁鬱病、鬱病又は筋膨隆変異（ｍｏｕｎｄ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）を含む精神病及び神経病である様々な病気の治療又は予防において用いられることができる。
【００４０】
これらの分子又は化合物は避妊薬の改良のために、軸索成長、神経連絡及び神経再生を促進する治療のために、雄及び雌の内分泌機能を改変するために、又は月経サイクルに影響を与えるために用いられることができる。実際前記受容体のいくつかは精子の表面に存在することができ、避妊適用を見出されることができるか又は不妊症／受精能力の治療／予防において用いられることができる。これらの受容体は様々な嗅覚神経ニューロン中にも存在し、それらの連結、特に嗅球上又は前記嗅覚受容体を含む他の組織上でのそれらの連絡を改良することができる。
【００４１】
それらは食欲の刺激及び／又は抑制、性欲及び性的魅力の刺激及び／又は抑制、攻撃性の刺激及び／又は抑制、警告及び防御行動の刺激及び／又は抑制、テリトリー及び臭跡マーキングの刺激及び／又は抑制、社会的制御及び認識の刺激及び／又は抑制、母子認識の刺激及び／又は抑制などの如き様々な動物又はヒトの行動の治療又は予防のためにも用いられることができる。
【００４２】
本発明によるスクリーニング方法は当業者には周知の方法によって行われることができ、既知の技術に従ってマイクロタイタープレート又はバイオチップの如き様々な固体支持体上で当業者によって行われる国際特許出願ＷＯ　００／０２０４５に記述された方法に基づく高処理量スクリーニング、診断及び投薬装置によって行われることが好ましい。
【００４３】
本発明は前記方法によって特徴付けられ及び所望により回収される分子にも関し、これは前記分子の十分な量及び特定の病気の予防及び／又は治療における医薬の調製のための医薬的に許容可能な担体又は希釈剤を含む医薬組成物を含む。
【００４４】
本発明の最後の側面は上述の特定化合物又は分子の検出のための本発明による受容体を含むバイオセンサー又はいかなる同様の技術装置に関する。
【国際公開パンフレット】
2004508843.tif 000002
2004508843.tif 000003
2004508843.tif 000004
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004508843.tif 000835
【国際調査報告】
2004508843.tif 000836
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