(57)【要約】本発明は、Ｇタンパク質共役受容体のスーパーファミリーに属する、新規に同定された受容体に関する。本発明はまた、受容体をコードするポリヌクレオチドにも関する。本発明はさらに、受容体の媒介する疾患の診断および治療の標的として、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用する方法に関する。本発明はさらに、診断および治療用のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するための、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用した薬物スクリーニング法に関する。本発明はさらに、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドをベースとしたアゴニストおよびアンタゴニストを包含する。本発明はさらに、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを製造する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１に示したアミノ酸配列、配列番号３に示したアミノ酸配列、および配列番号５に示したアミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１に示したアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列、配列番号３に示したアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列、および配列番号５に示したアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号１に示したアミノ酸配列の配列変異体であって、ストリンジェントな条件下で、配列番号２に示した核酸分子にハイブリッドする核酸分子によりコードされる配列変異体のアミノ酸配列、配列番号３に示したアミノ酸配列の配列変異体であって、ストリンジェントな条件下で、配列番号４に示した核酸分子にハイブリッドする核酸分子によりコードされる配列変異型のアミノ酸配列、および配列番号５に示したアミノ酸配列の配列変異体であって、ストリンジェントな条件下で配列番号６に示した核酸分子にハイブリッドする核酸分子によりコードされる配列変異体のアミノ酸配列と、
（ｄ）アミノ酸１〜２６４のうち少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む配列番号１に示したアミノ酸配列の断片、アミノ酸１〜２４４のうち少なくとも９つの連続したアミノ酸を含む配列番号３に示したアミノ酸配列の断片、および少なくとも８つ連続したアミノ酸を含む配列番号５に示したアミノ酸配列の断片と、
（ｅ）配列番号１に示したアミノ酸約６〜アミノ酸約３１９番目までの成熟受容体ポリペプチドのアミノ酸配列、配列番号３に示したアミノ酸約６〜アミノ酸約３３７番目までの成熟受容体ポリペプチドのアミノ酸配列、および配列番号５に示したアミノ酸約６〜アミノ酸約３７２番目までの成熟受容体ポリペプチドのアミノ酸配列と、
（ｆ）アミノ酸約１〜アミノ酸約２４番目までの配列番号１に示したポリペプチドのアミノ酸配列、アミノ酸約１〜アミノ酸約２８番目までの配列番号３に示したポリペプチドのアミノ酸配列、およびアミノ酸約１〜アミノ酸約２５番目までの配列番号５に示したポリペプチドのアミノ酸配列と、
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のポリペプチドのいずれか１つのエピトープ含有領域のアミノ酸配列と
からなる群から選択されたアミノ酸配列を有する単離ポリペプチド。
【請求項２】
請求項１のポリペプチド（ａ）〜（ｇ）に選択的に結合する単離抗体。
【請求項３】
（ａ）配列番号２に示したヌクレオチド配列、配列番号４に示したヌクレオチド配列、および配列番号６に示したヌクレオチド配列と、
（ｂ）配列番号１に示したアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、配列番号３に示したアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、および配列番号５に示したアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択されたヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子。
【請求項４】
（ａ）配列番号２に示したヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する配列番号１に示したアミノ酸配列の配列変異体のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、配列番号４に示したヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する配列番号３に示したアミノ酸配列の配列変異体のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、および、配列番号６に示したヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する配列番号５に示したアミノ酸配列の配列変異体のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択されたヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子。
【請求項５】
（ａ）アミノ酸１〜２６４のうち少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む配列番号１に示したアミノ酸配列の断片をコードするヌクレオチド配列、アミノ酸１〜２４４のうち少なくとも９つの連続したアミノ酸を含む配列番号３に示したアミノ酸配列の断片をコードするヌクレオチド配列、および、少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む配列番号５に示したアミノ酸配列の断片をコードするヌクレオチド配列と、
（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択されたヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項３〜５のいずれか一の核酸配列を含む核酸ベクター。
【請求項７】
請求項６のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８】
（ａ）〜（ｆ）のポリペプチド配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を宿主細胞に導入するステップと、タンパク質が核酸から発現される条件下で宿主細胞を培養するステップとを含む請求項１のポリペプチドのいずれかを製造する方法。
【請求項９】
サンプル中における請求項１のポリペプチドのいずれかの存在を検出する方法であって、サンプル中のポリペプチドの存在を特異的に検出できる物質とサンプルとを接触させるステップと、ポリペプチドの存在を検出するステップとを含む方法。
【請求項１０】
前記物質は、前記ポリペプチドとの選択的な物理的会合が可能である請求項９の方法。
【請求項１１】
前記物質は前記ポリペプチドに結合する請求項１０の方法。
【請求項１２】
前記物質は抗体である請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記物質はリガンドである請求項１１の方法。
【請求項１４】
請求項９の方法に使用するための試薬を含むキットであって、試薬が前記ポリペプチドに特異的に結合する物質を含むことを特徴とするキット。
【請求項１５】
サンプル中における、請求項３〜５のいずれか一の核酸配列のいずれかの存在を検出する方法であって、核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドとサンプルとを接触させるステップと、オリゴヌクレオチドがサンプル中の核酸配列に結合するかを決定するステップとを含む方法。
【請求項１６】
存在が検出される核酸はｍＲＮＡである請求項１５の方法。
【請求項１７】
請求項１５の方法に使用するための試薬を含むキットであって、試薬がストリンジェントな条件下で核酸分子のいずれかにハイブリッドする化合物を含むことを特徴とするキット。
【請求項１８】
請求項１のポリペプチドのいずれかと相互作用する物質を同定する方法であって、前記ポリペプチドが前記物質と相互作用できるように、前記ポリペプチドと前記物質の間の相互作用を可能とする細胞と前記物質とを接触させるステップと、その相互作用を測定するステップとを含む方法。
【請求項１９】
請求項１のポリペプチドのいずれかと相互作用する物質を同定するために細胞をスクリーニングする方法であって、前記ポリペプチドが前記物質と相互作用できるように、前記ポリペプチドと前記物質の間の相互作用を可能とする細胞と前記物質とを接触させるステップと、その相互作用を測定するステップとを含む方法。
【請求項２０】
細胞において請求項１のポリペプチドのいずれかのレベルまたは活性を調節する物質を同定する方法であって、前記ポリペプチドのレベルまたは活性を前記物質により前記細胞で調節できるように、前記ポリペプチドを発現できる細胞と前記物質とを接触させるステップと、前記ポリペプチドのレベルまたは活性を測定するステップとを含む方法。
【請求項２１】
細胞において請求項１のポリペプチドのいずれかのレベルまたは活性を調節する物質を同定するために細胞をスクリーニングする方法であって、前記ポリペプチドのレベルまたは活性を前記物質により前記細胞において調節できるように、前記物質を前記ポリペプチドを発現できる細胞と接触させるステップと、前記ポリペプチドのレベルまたは活性を測定するステップとを含む方法。
【請求項２２】
前記相互作用は結合である請求項１９または２０のいずれかの方法。
【請求項２３】
ポリペプチドの断片を接触させる請求項２２の方法。
【請求項２４】
請求項１におけるポリペプチドのいずれかの活性を調節する方法であって、物質がポリペプチドの活性を調節できる条件下で、請求項１のポリペプチドのいずれかを前記物質と接触させるステップを含む方法。
【請求項２５】
請求項３〜５の核酸分子のいずれかと相互作用する物質を同定する方法であって、前記核酸分子が前記物質と相互作用できるように、前記核酸分子と前記物質の間の相互作用を可能とする細胞と前記物質とを接触させるステップと、その相互作用を測定するステップとを含む方法。
【請求項２６】
請求項３〜５の核酸分子のいずれかと相互作用する物質を同定するために細胞をスクリーニングする方法であって、前記核酸分子が前記物質と相互作用できるように、前記核酸分子と前記物質の間の相互作用を可能とする細胞と前記物質とを接触させるステップと、その相互作用を測定するステップと含む方法。
【請求項２７】
細胞において請求項３〜５の核酸分子のいずれかのレベルまたは活性を調節する物質を同定する方法であって、前記核酸分子のレベルまたは活性を前記物質により前記細胞において調節できるように、前記物質を前記核酸分子を発現できる細胞と接触させるステップと、前記核酸分子のレベルまたは活性を測定するステップとを含む方法。
【請求項２８】
細胞において請求項３〜５の核酸分子のいずれかのレベルまたは活性を調節する物質を同定するために細胞をスクリーニングする方法であって、前記核酸分子のレベルまたは活性を前記物質により前記細胞において調節できるように、前記核酸分子を発現できる細胞と前記物質とを接触させるステップと、前記核酸分子のレベルまたは活性を測定するステップとを含む方法。
【請求項２９】
前記相互作用が結合である請求項２５または２６のいずれかの方法。
【請求項３０】
請求項３〜５の核酸分子のいずれかの活性を調節する方法であって、物質が核酸分子の活性を調節できる条件下で、請求項１の核酸分子のいずれかを前記物質と接触させるステップを含む方法。
【請求項３１】
医薬的に許容される担体に請求項１のポリペプチドのいずれかを含んでなる医薬組成物。
【請求項３２】
医薬的に許容される担体に請求項３〜５の核酸分子のいずれかを含んでなる医薬組成物。
【請求項３３】
非ヒトトランスジェニック動物であって、１つ以上の細胞が請求項３〜５の核酸配列のいずれかを含むトランスジェニック動物。
【請求項３４】
非ヒトトランスジェニック動物であって、１つ以上の細胞が、請求項３〜５の核酸配列のいずれかを含み、前記細胞は、請求項１のポリペプチドのいずれかを発現することを特徴とするトランスジェニック動物。
【請求項３５】
請求項３２および３３に記載のトランスジェニック動物の作成方法であって、請求項１の核酸配列のいずれかを細胞に導入するステップを含み、前記細胞は、前記動物に存在するか、または前記動物に生じることを特徴とする作成方法。
【請求項３６】
請求項１９〜２２または２５〜２８の方法のいずれかを使用して同定した物質。
【請求項３７】
請求項３１または３２のいずれかの医薬組成物を投与することを含む被検者の疾患の治療方法。
【請求項３８】
被検者における請求項１のポリペプチドのいずれかのレベルまたは発現を調節することによる被検者の疾患の治療方法。
【請求項３９】
被検者における請求項３〜５の核酸分子のいずれかのレベルまたは活性を調節することによる前記被検者の治療方法。
【請求項４０】
前記検出は、前記細胞に関与する疾患を有する被検者から得られた細胞で行われる請求項９または１５のいずれかの方法。
【請求項４１】
前記調節は、前記細胞に関与する疾患を有する被検者で行われる請求項２４または３０のいずれかの方法。
【請求項４２】
前記疾患は、貧血、好中球減少症または血小板減少症である請求項３９の方法。
【請求項４３】
前記疾患は、貧血、好中球減少症または血小板減少症である請求項４１の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、Ｇタンパク質共役受容体のスーパーファミリーに属する、新規に同定した受容体に関する。本発明はまた、受容体をコードするポリヌクレオチドにも関する。本発明はさらに、受容体媒介または関連疾患の診断および治療の標的として、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用する方法に関する。本発明はさらに、診断および治療用のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するための、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを使用した薬物スクリーニング法に関する。本発明はさらに、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドをベースとしたアゴニストおよびアンタゴニストを包含する。本発明はさらに、受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを製造する手順に関する。
【０００２】
（発明の背景）
Ｇタンパク質共役受容体
Ｇタンパク質共役受容体（Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ； ＧＰＣＲ）は、細胞内へのシグナルの伝達に関与する主要なクラスのタンパク質を構成する。ＧＰＣＲは、３つの構造ドメイン、即ち、アミノ末端細胞外ドメインと、７回膜貫通セグメント、３つの細胞外ループおよび３つの細胞内ループを含む膜貫通ドメインと、カルボキシ末端細胞内ドメインとを有する。リガンドがＧＰＣＲの細胞外部分に結合すると、シグナルが細胞内に伝達され、細胞の生物学的または生理学的特性が変化する。ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質およびエフェクター（Ｇタンパク質により調節される細胞内酵素およびチャネル）と共に、細胞内二次メッセンジャーの状態を細胞外入力に連結するモジュラーシグナル伝達系の成分である。
【０００３】
ＧＰＣＲ遺伝子および遺伝子産物は、疾病の病因の可能性がある（Ｓｐｉｅｇｅｌら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：１１１９−１１２５；ＭｃＫｕｓｉｃｋら（１９９３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．３０：１−２６）。
ロドプシン遺伝子およびＶ２バソプレッシン受容体遺伝子の特異的欠陥により、様々な形の網膜色素変性症（Ｎａｔｈａｎｓら（１９９２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２６：４０３−４２４）および腎性尿崩症（Ｈｏｌｔｚｍａｎら（１９９３）Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２：１２０１−１２０４）が引き起こされることが示された。これらの受容体は、中枢神経系および末梢生理学的プロセスの両方に非常に重要である。進化学的解析により、これらの受容体の祖先は、当初、複雑な体制プランおよび神経系と協奏して発達したことが示唆される。
【０００４】
ＧＰＣＲタンパク質スーパーファミリーは、次の５つのファミリーに分類できる。ファミリーＩ、ロドプシンおよびβ２−アドレナリン受容体を典型とし、現在２００以上の独特なメンバーにより示される受容体（Ｄｏｈｌｍａｎら（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６０：６５３−６８８）。ファミリーＩＩ、副甲状腺ホルモン／カルシトニン／セレクチン受容体ファミリー（Ｊｕｐｐｎｅｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５４：１０２４−１０２６；Ｌｉｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５４：１０２２−１０２４。ファミリーＩＩＩ、代謝指向型グルタミン酸受容体ファミリー（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５８　５９７：６０３）。ファミリーＩＶ、Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍの走化性および発達に重要なｃＡＭＰ受容体ファミリー（Ｋｌｅｉｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４１：１４６７−１４７２）。ファミリーＶ、ＳＴＥ２などの真菌接合フェロモン受容体（Ｋｕｒｊａｎ（１９９２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：１０９７−１１２９）。
【０００５】
７つの推定疎水性部を示し、ＧＰＣＲには無関係のようである他のタンパク質も少数存在する。それらはＧタンパク質に結合することが示されていない。ショウジョウバエは、十分に研究されたがＧＰＣＲである証拠を示さない、光受容体特異的タンパク質である、ｂｒｉｄｅ　ｏｆ　ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ（ｂｏｓｓ）の７回膜貫通セグメントタンパク質を発現する（Ｈａｒｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：５０４７−５０５１）。ショウジョウバエの遺伝子ｆｒｉｚｚｌｅｄ（ｆｚ）も、７回膜貫通セグメントを有するタンパク質であると考えられる。ｂｏｓｓのように、ｆｚは、Ｇタンパク質に結合することが示されていない（Ｖｉｎｓｏｎら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ　３３８：２６３−２６４）。
【０００６】
Ｇタンパク質は、グアニンヌクレオチドに結合している、α、βおよびγサブユニットからなるヘテロ三量体タンパク質のファミリーを示す。これらのタンパク質は、通常、７回膜貫通セグメントを含む受容体などの細胞表面受容体に連結している。リガンドがＧＰＣＲに結合した後に、立体構造の変化がＧタンパク質に伝達され、これによりαサブユニットは、結合しているＧＤＰ分子をＧＴＰと交換し、βγサブユニットから解離する。ＧＴＰ結合形のαサブユニットは、典型的には、エフェクター調節部分として機能し、ｃＡＭＰ（例えば、アデニル酸シクラーゼの活性化により）、ジアシルグリセロールまたはイノシトールリン酸などの二次メッセンジャーを発生する。ヒトにおいて２０以上の異なる型のαサブユニットが知られている。これらのサブユニットは、プールのより少ないβおよびγサブユニットと会合する。哺乳動物Ｇタンパク質の例は、Ｇｉ、Ｇｏ、Ｇｑ、ＧｓおよびＧｔを含む。Ｇタンパク質は、Ｌｏｄｉｓｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｂｏｏｋｓ　Ｉｎｃ．、ニューヨーク、Ｎ．Ｙ．、１９９５）に十分に記載され、その内容は参照することによって本明細書に組み込まれる。ＧＰＣＲ、Ｇタンパク質およびＧタンパク質連結エフェクターおよび二次メッセンジャー系は、Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｆａｃｔ　Ｂｏｏｋ、Ｗａｔｓｏｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９９４）に論評されている。
【０００７】
プリン受容体
プリン、および特にアデノシンおよびアデニンヌクレオチドは、細胞表面受容体を介して媒介される広範な薬理効果を有する。一般的な論評については、Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｆａｃｔ　Ｂｏｏｋにおけるアデノシンおよびアデニンヌクレオチド、Ｗａｔｓｏｎら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　１９９４、ｐ．１９−３１参照。
【０００８】
ＡＴＰの作用には、平滑筋活性の調節、腸平滑筋弛緩および膀胱収縮の刺激、血管内皮から遊離された場合のＡＤＰによる血小板活性化の刺激、および中枢神経系の興奮効果を含む。アデノシンの作用には、血管拡張、気管支収縮、免疫抑制、血小板凝集阻害、心抑制、侵害受容求心神経刺激、神経伝達物質遊離阻害、前および後シナプス抑制作用、運動活性の減少、呼吸抑制、睡眠誘導、不安寛解、およびホルモンなどの因子の遊離阻害を含む。
【０００９】
アデノシンおよびアデニンヌクレオチドに別個の受容体が存在する。メチルキサンチン類（例えばテオフィリンおよびカフェイン）などのそのような類似体の臨床作用は、アデノシン受容体と拮抗することによりその作用を達成すると考えられている。アデノシンは、アデニンヌクレオチド受容体に親和性が低く、アデニンヌクレオチドは、アデノシン受容体に親和性が低い。
【００１０】
Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、およびＡ３と称される、４つの承認されているアデノシン受容体のサブタイプが存在する。さらに、Ａ４受容体は、２−フェニルアミノアデノシンによる標識に基づいて提唱されている（Ｃｏｒｎｆｉｅｌｄら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４２：５５２−５６１）。
【００１１】
Ｐ２Ｘ受容体は、ＡＴＰ作動性カチオンチャネルである（Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　３６（１９９７）参照）。Ｐ２Ｘ受容体の提唱されている形態は、２回膜貫通領域、大きな細胞外ループ、および細胞内Ｎ末端およびＣ末端である。
【００１２】
Ｐ２Ｙと称される多くのクローニングされた受容体が、Ｇタンパク質共役ファミリーのメンバーであることが提唱されている。ＵＤＰ、ＵＴＰ、ＡＤＰおよびＡＴＰがアゴニストとして同定された。現在までに、Ｐ２Ｙ１−７は特徴づけらているが、Ｐ２Ｙ７はロイコトリエンＢ４受容体であり得ると提唱されている（Ｙｏｋｏｍｉｚｏら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ　３８７：６２０−６２４）。しかし、Ｐ２Ｙ１、２、４および６は、Ｐ２Ｙ受容体のＧタンパク質共役ファミリーのメンバーであることが広く受け入れられている。
【００１３】
造血細胞系ＨＥＬから少なくとも３つのＰ２プリン受容体が、細胞内カルシウム動員により、および光親和性標識により同定されている（Ａｋｂａｒら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７１：１８３６３−１８５６７）。
【００１４】
Ａ１アデノシン受容体は、アデニルシクラーゼの阻害能に鑑みて名付けられた。この受容体は、心臓、脂肪、腎臓、胃および膵臓などの多くの末梢組織に分布している。それらはまた、例えば、腸および輸精管などの末梢神経にも見られる。それらは、大脳皮質、海馬、小脳、視床および線条体を含む中枢神経系、並びに、いくつかの細胞系に高いレベルで存在する。アゴニストおよびアンタゴニストは、Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌｉｎｋｅｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｆａｃｔｓ　Ｂｏｏｋの２２ページに見られ、これは参照することによって本明細書に組み込まれるものとする。これらの受容体は、アデニルシクラーゼおよび電位依存性カルシウムチャネルを阻害し、Ｇｉ／Ｇｏクラスであると示唆されている百日咳毒素感受性Ｇタンパク質を介してカリウムチャネルを活性化すると報告されている。Ａ１受容体はまた、ホスホリパーゼＣの活性化を誘導し、この経路を他の受容体が活性化する能力を増強することが報告されている。
【００１５】
Ａ２Ａアデノシン受容体は、線条体、嗅結節および側坐核などの脳に見られる。末梢では、Ａ２受容体は、血管拡張、免疫抑制、血小板凝集阻害、およびグルコース生成を媒介する。アゴニストおよびアンタゴニストは、本明細書に参考として取り込んだ、上記に引用したＧ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＬＩＮＫＥＤ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　ＦＡＣＴＳ　ＢＯＯＫの２５ページに見られる。この受容体はＧ８を介してアデニルシクラーゼの活性化を媒介する。
【００１６】
Ａ２Ｂ受容体は、ヒト脳およびラット腸および膀胱に存在することが示された。アゴニストおよびアンタゴニストは、参照することにより本明細書に組み込んだ、上記に引用したＧ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｆａｃｔｓ　Ｂｏｏｋの２７ページに議論される。この受容体はＧ８を介してｃＡＭＰの刺激を媒介する。
【００１７】
Ａ３アデノシン受容体は、精巣、肺、腎臓、心臓、中枢神経系（大脳皮質、線条体および嗅球を含む）に発現される。アゴニストおよびアンタゴニストの議論は、本明細書に参考として取り込んだ、上記に引用したＧ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＬＩＮＫＥＤ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　ＦＡＣＴＳ　ＢＯＯＫの２８ページに見られる。この受容体は、Ｇｉ／Ｇｏクラスであると示唆されている百日咳毒素感受性Ｇタンパク質を介してアデニルシクラーゼの阻害を媒介する。
【００１８】
Ｐ２Ｙプリン受容体は、ＡＴＰおよびＡＤＰに類似の親和性を示すが、ＡＭＰには親和性が低い。この受容体は、ｔａｅｎｉ　ｃａｅｃｉなどの平滑筋および血管組織に見られ、ここで内皮依存性一酸化窒素の遊離により、血管拡張を誘導する。それはトリ赤血球にも示された。アゴニストおよびアンタゴニストは、本明細書に参照することにより組み込まれた、上記に引用したＧ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＬＩＮＫＥＤ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　ＦＡＣＴＳ　ＢＯＯＫの３０ページに議論される。この受容体は、Ｇｉ／Ｇｏクラスであると示唆されている百日咳毒素非感受性Ｇタンパク質を介したホスホイノシチド代謝の活性化を介して機能する。
【００１９】
従って、ＧＰＣＲ、および特にプリン受容体が、薬物作用および開発の主要な標的である。従って、以前には不明であったＧＰＣＲを同定し特徴づけることは、医薬開発分野にとって価値がある。本発明は、プリン受容体に相同性を有する、以前には同定されていなかったヒトＧＰＣＲを提供することにより従来技術を前進させる。
【００２０】
（発明の概要）
本発明の目的は、新規ＧＰＣＲを同定することである。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、ＧＰＣＲ媒介疾患の治療および診断に適用可能な受容体アッセイにおける試薬または標的として有用である、新規ＧＰＣＲポリペプチドを提供することである。
【００２２】
本発明のさらなる目的は、ＧＰＣＲ媒介疾患の治療および診断に適用可能な受容体アッセイにおける標的および試薬として有用であり、組換え法による新規受容体ポリペプチドの製造に有用な新規ＧＰＣＲ受容体ポリペプチドに対応するポリヌクレオチドを提供することである。
【００２３】
本発明の具体的な目的は、新規受容体のアゴニストおよびアンタゴニストとして作用し、新規受容体の発現を調節する化合物を同定することである。
【００２４】
本発明のさらに具体的な目的は、ＧＰＣＲ関連疾患の治療および診断のために、受容体の発現を調節する化合物を提供することである。
【００２５】
従って、本発明は、２８３８、１４６１８および１５３３４受容体と称される、新規ＧＰＣＲの同定に基づく。
【００２６】
本発明は、配列番号１に示したアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む単離２８３８受容体ポリペプチドを提供する。
本発明は、配列番号３に示したアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む単離１４６１８受容体ポリペプチドを提供する。
本発明は、配列番号５に示したアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む単離１５３３４受容体ポリペプチドを提供する。
【００２７】
本発明はまた、配列番号２に示した配列を有する単離２８３８受容体核酸分子を提供する。
本発明はまた、配列番号４に示した配列を有する単離１４６１８受容体核酸分子を提供する。
本発明はまた、配列番号６に示した配列を有する１５３３４受容体核酸分子を提供する。
【００２８】
本発明はまた、配列番号１に示したアミノ酸配列に実質的に相同であるアミノ酸配列を有する変異体ポリペプチドを提供する。
本発明はまた、配列番号３に示したアミノ酸配列に実質的に相同であるアミノ酸配列を有する変異体ポリペプチドを提供する。
本発明はまた、配列番号５に示したアミノ酸配列に実質的に相同であるアミノ酸配列を有する変異体ポリペプチドを提供する。
【００２９】
本発明はまた、配列番号２に示したヌクレオチド配列に実質的に相同である変異体核酸配列を提供する。
本発明はまた、配列番号４に示したヌクレオチド配列に実質的に相同である変異体核酸配列を提供する。
本発明はまた、配列番号６に示したヌクレオチド配列に実質的に相同である変異体核酸配列を提供する。
【００３０】
本発明は、配列番号１に示したポリペプチド断片および配列番号２に示したヌクレオチド配列、並びに、実質的に相同なポリペプチドまたは核酸の断片を提供する。
本発明はまた、配列番号３に示したポリペプチド断片および配列番号４に示したヌクレオチド配列、並びに、実質的に相同なポリペプチドまたは核酸の断片を提供する。
本発明はまた、配列番号５に示したポリペプチド断片および配列番号６に示したヌクレオチド配列、並びに、実質的に相同なポリペプチドまたは核酸の断片を提供する。
【００３１】
本発明はさらに、上記の核酸分子を含む核酸作成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明の核酸分子は、調節配列に作動可能に連鎖している。
【００３２】
本発明はまた、受容体核酸分子およびポリペプチドを発現するためのベクターおよび宿主細胞、および特に組換えベクターおよび宿主細胞を提供する。
【００３３】
本発明はまた、ベクターおよび宿主細胞の製造方法、およびそれを使用して、受容体核酸分子およびポリペプチドを調製する方法を提供する。
【００３４】
本発明はまた、受容体ポリペプチドおよび断片に選択的に結合する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００３５】
本発明はまた、受容体ポリペプチドまたは核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）の発現または活性を調節する化合物をスクリーニングする方法を提供する。
【００３６】
本発明はまた、特にスクリーニングした化合物を使用して、受容体ポリペプチドまたは核酸の発現または活性を調節する方法を提供する。受容体ポリペプチドまたは核酸の異常な活性または発現に関連した状態を治療するために調節を使用し得る。
【００３７】
本発明はまた、疾病診断を含む、生物学的サンプル中での受容体ポリペプチドまたは核酸分子の有無およびレベルを決定するためのアッセイを提供する。
【００３８】
本発明はまた、疾病診断を含む、受容体ポリペプチドまたは核酸分子における変異の存在を決定するためのアッセイを提供する。
【００３９】
またさらなる実施形態において、本発明は、本発明の核酸およびポリペプチドのヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列をそれぞれ含む、コンピューターで解読可能な手段を提供する。
【００４０】
（発明の詳細な説明）
受容体機能／シグナル伝達経路
２８３８、１４６１８および１５３３４受容体タンパク質は、シグナル伝達経路に関与するＧＰＣＲである。本明細書に使用した「シグナル伝達経路」は、リガンドがＧＰＣＲ（２８３８、１４６１８または１５３３４タンパク質）に結合した時の、細胞機能／活性の調節（例えば刺激または阻害）を意味する。このような機能の例は、例えば、ホスファチジルイノシトール４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）およびアデニル酸シクラーゼなどの、シグナル伝達経路に関与する細胞内分子の動員；形質膜の分極；分子の生成または分泌；細胞成分の構造変化；細胞増殖、例えばＤＮＡの合成；細胞移動；細胞分化；および細胞生存を含む。２８３８受容体タンパク質は、胸腺、リンパ節、脾臓、精巣、大腸および末梢血リンパ球（活性化Ｔヘルパー細胞−１、活性化Ｔヘルパー細胞−２、ＣＤ３（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）、活性化Ｂ細胞、および顆粒球を含むがこれに限定されない）に発現されるので、２８３８受容体タンパク質シグナル伝達経路に関与する細胞は、これらの組織および細胞を含むがこれに限定されない。１４６１８受容体タンパク質は、乳房、骨格筋、甲状腺、リンパ節、脾臓および末梢血リンパ球（ＣＤ３４＋細胞、休止Ｂ細胞、および巨核球を含むがこれに限定されない）に発現されるので、１４６１８受容体タンパク質シグナル伝達経路に関与する細胞は、これらの組織および細胞に由来する細胞を含むがこれに限定されない。１５３３４受容体タンパク質は、大腸、膵臓、扁桃腺、リンパ節、脾臓、胸腺、副腎、心臓および末梢血細胞（図１７に示したもの、巨核球、および赤血球を含むがこれに限定されない）に発現されるので、１５３３４受容体タンパク質シグナル伝達経路に関与する細胞は、これらの組織および細胞に由来する細胞を含むがこれに限定されない。
【００４１】
受容体タンパク質により媒介される応答は、細胞の種類により変化する。例えば、ある細胞では、リガンドの受容体タンパク質への結合は、ホスファチジルイノシトールまたはサイクリックＡＭＰ代謝および代謝回転を介して、化合物の遊離、チャネルの開閉、細胞接着、移動、分化等などの活性を刺激し得るが、別の細胞では、リガンドの結合は、異なる結果を引き起こす。受容体タンパク質により調節される細胞活性／応答に関わらず、タンパク質がＧＰＣＲであり、および、細胞において、Ｇタンパク質と相互作用して、様々な細胞内シグナル伝達経路で、例えば、ホスファチジルイノシトールまたはサイクリックＡＭＰ代謝および代謝回転を介して、１つ以上の二次シグナルを発生することは不変である。
【００４２】
本明細書に使用した「ホスファチジルイノシトール代謝回転および代謝」は、ホスファチジルイノシトール４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）の代謝回転および代謝に関与する分子、並びに、これらの分子の活性を意味する。ＰＩＰ２は、形質膜の細胞質ゾルリーフレットに見られるリン脂質である。いくつかの細胞では、リガンドの受容体への結合により、形質膜酵素ホスホリパーゼＣが活性化され、これは次いで、ＰＩＰ２を加水分解して、１，２−ジアシルグリセロ−ル（ＤＡＧ）およびイノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）を生成できる。一旦形成されたＩＰ３が、小胞体表面に拡散し得ると、そこで、ＩＰ３受容体、例えばＩＰ３結合部位を含むカルシウムチャネルタンパク質に結合できる。ＩＰ３結合は、チャネルの開口を誘導し、カルシウムイオンを細胞質に遊離できる。ＩＰ３はまた、特異的キナーゼによりリン酸化されて、イノシトール１，３，４，５−四リン酸（ＩＰ４）を形成でき、この分子は、細胞外媒体から細胞質へのカルシウム流入を引き起こすことができる。ＩＰ３およびＩＰ４は、その後、非常に迅速に、不活性産物であるイノシトール１，４−二リン酸（ＩＰ２）およびイノシトール１，３，４−三リン酸にそれぞれ加水分解され得る。これらの不活性産物は細胞によりリサイクルされてＰＩＰ２を合成できる。ＰＩＰ２の加水分解により生じる他の二次メッセンジャー、すなわち１，２−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）は、細胞膜に留まり、そこで作用して酵素プロテインキナーゼＣを活性化できる。プロテインキナーゼＣは、通常、細胞の細胞質に可溶形で見られるが、細胞内カルシウム濃度が増加すると、この酵素は、形質膜に移動し、そこでＤＡＧにより活性化され得る。異なる細胞でのプロテインキナーゼＣの活性化は、グリコーゲンシンターゼのリン酸化、または様々な転写因子（例えばＮＦ−ｋＢ）のリン酸化といった様々な細胞応答をもたらす。本明細書に使用した「ホスファチジルイノシトール活性」なる語は、ＰＩＰ２の活性またはその代謝物の活性を意味する。
【００４３】
受容体が関与し得る別のシグナル伝達経路は、ｃＡＭＰ代謝回転経路である。本明細書に使用した「サイクリックＡＭＰ代謝回転および代謝」は、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の代謝回転および代謝に関与する分子、並びに、これらの分子の活性を意味する。サイクリックＡＭＰは、特定のＧタンパク質共役受容体のリガンド誘導刺激に応答して産生される二次メッセンジャーである。ｃＡＭＰシグナル伝達経路では、リガンドのＧＰＣＲへの結合により、ｃＡＭＰの合成を触媒する、酵素アデニルシクラーゼが活性化され得る。新規に合成されたｃＡＭＰは、次に、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼを活性化できる。この活性化キナーゼは、電位作動性カリウムチャネルタンパク質または会合タンパク質をリン酸化でき、よってカリウムチャネルは活動電位中に開口できなくなる。カリウムチャネルが開口できないことにより、カリウムの外向き流は減少し、これにより通常ニューロンの膜は再分極し、長期の膜の脱分極が起こる。
【００４４】
ポリペプチド
本発明は、新規Ｇ共役タンパク質受容体の発見に基づく。特に、発現配列タグ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ； ＥＳＴ）を、Ｇタンパク質共役受容体配列に対する相同性に基づいて選択した。このＥＳＴを、それが含む配列を基にしたプライマーを設計するために使用し、Ｂ細胞ｃＤＮＡライブラリーから２８３８ｃＤＮＡ、肝臓および脾臓ｃＤＮＡライブラリーから１４６１８ｃＤＮＡ、および脾臓ｃＤＮＡライブラリーから１５３３４ｃＤＮＡを同定するために使用した。陽性クローンをシークエンスにかけ、重複断片を集合させた。集合した配列の解析により、３つのクローニングｃＤＮＡ分子がＧタンパク質共役受容体をコードすることが判明した。
【００４５】
従って、本発明は、配列番号１に示した推定アミノ酸配列を有する新規ＧＰＣＲに関する。
本発明はまた、配列番号３に示した推定アミノ酸配列を有する新規ＧＰＣＲに関する。
本発明はまた、配列番号５に示した推定アミノ酸配列を有する新規ＧＰＣＲに関する。
【００４６】
配列表は、２８３８ヌクレオチド配列（配列番号２）および推定２８３８アミノ酸配列（配列番号１）を示す。アミノ酸１〜約２４番目が、アミノ末端細胞外ドメインを構成し、アミノ酸約２５〜２９２番目が、膜貫通ドメインにおよぶ領域を構成し、アミノ酸約２９３〜３１９番目が、カルボキシ末端細胞内ドメインを構成すると予測される。膜貫通ドメインは、７回膜貫通セグメント、３つの細胞外ループおよび３つの細胞内ループを含む。膜貫通部は、アミノ酸約２５〜アミノ酸約４９番目、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７９番目、アミノ酸約１００〜アミノ酸約１１７番目、アミノ酸約１３８〜アミノ酸約１５９番目、アミノ酸約１８７〜アミノ酸約２１０番目、アミノ酸約２２４〜アミノ酸約２４８番目、およびアミノ酸約２６８〜アミノ酸約２９２番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内には、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸約５０〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約１１８〜アミノ酸約１３７番目、およびアミノ酸約２１１〜アミノ酸約２２３番目に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約８０〜アミノ酸約９９番目、アミノ酸約１６０〜アミノ酸約１８６番目、およびアミノ酸約２４９〜アミノ酸約２６７番目に見られる。
【００４７】
配列表は、１４６１８ヌクレオチド配列（配列番号４）および推定１４６１８アミノ酸配列（配列番号３）を示す。アミノ酸１〜約２８番目が、アミノ末端細胞外ドメインを構成し、アミノ酸約２９〜２９７番目が、膜貫通ドメインにおよぶ領域を構成し、アミノ酸約２９８〜３３７番目が、カルボキシ末端細胞内ドメインを構成すると予測される。膜貫通ドメインは、７回膜貫通セグメント、３つの細胞外ループおよび３つの細胞内ループを含む。膜貫通部は、アミノ酸約２９〜アミノ酸約４９番目、アミノ酸約６０〜アミノ酸約８４番目、アミノ酸約１０３〜アミノ酸約１２７番目、アミノ酸約１４２〜アミノ酸約１６１番目、アミノ酸約１９４〜アミノ酸約２１７番目、アミノ酸約２３１〜アミノ酸約２４７番目、およびアミノ酸約２７６〜アミノ酸約２９７番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内には、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸約５０〜アミノ酸約５９番目、アミノ酸約１２８〜アミノ酸約１４１、およびアミノ酸約２１８〜アミノ酸約２３０に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約８５〜アミノ酸約１０２番目、アミノ酸約１６２〜アミノ酸約１９３番目、およびアミノ酸約２４８〜アミノ酸約２７５番目に見られる。
【００４８】
配列表は、１５３３４ヌクレオチド配列（配列番号６）および推定１５３３４アミノ酸配列（配列番号５）を示す。アミノ酸１〜約２５番目が、アミノ末端細胞外ドメインを構成し、アミノ酸約２６〜２９９番目が、膜貫通ドメインにおよぶ領域を構成し、アミノ酸約３００〜３７２番目が、カルボキシ末端細胞内ドメインを構成すると予測される。膜貫通ドメインは、７回膜貫通セグメント、３つの細胞外ループおよび３つの細胞内ループを含む。膜貫通部は、アミノ酸約２６〜アミノ酸約４８番目、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７７番目、アミノ酸約９９〜アミノ酸約１１５番目、アミノ酸約１４０〜アミノ酸約１５７番目、アミノ酸約１８８〜アミノ酸約２０９番目、アミノ酸約２３５〜アミノ酸約２５９番目、アミノ酸約２７７〜アミノ酸約２９９番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内には、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸約４９〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約１１６〜アミノ酸約１３９番目、およびアミノ酸約２１０〜アミノ酸約２３４番目に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約７８〜アミノ酸約９８番目、アミノ酸約１５８〜アミノ酸約１８７番目、およびアミノ酸約２６０〜アミノ酸約２７６番目に見られる。
【００４９】
「２８３８受容体ポリペプチド」または「２８３８受容体タンパク質」は、配列番号１のポリペプチドを意味する。「１４６１８受容体ポリペプチド」または「１４６１８受容体タンパク質」は、配列番号３のポリペプチドを意味する。「１５３３４受容体ポリペプチド」または「１５３３４受容体タンパク質」は、配列番号５のポリペプチドを意味する。しかし、「受容体タンパク質」または「受容体ポリペプチド」なる語は、本明細書に記載した２８３８、１４６１８または１５３３４ポリペプチドの多くの変異体、並びに、全長２８３８、１４６１８または１５３３４ポリペプチドおよび変異体から得られた断片をさらに含む。
【００５０】
従って、本発明は、単離または精製２８３８、１４６１８および１５３３４受容体ポリペプチドおよびその変異体および断片を提供する。
【００５１】
２８３８ポリペプチドは、３つの主な構造ドメインを示す３１９残基のタンパク質である。アミノ酸末端細胞外ドメインは、配列番号１の残基１〜約２４番目に存在すると同定された。膜貫通ドメインは、配列番号１の約２５〜約２９２番目の残基内に存在すると同定された。カルボキシ末端細胞内ドメインは、配列番号１の約２９３〜３１９番目の残基内に存在すると同定された。膜貫通ドメインは、膜におよぶ７つの部分を含む。膜貫通部は、アミノ酸約２５〜アミノ酸約４９、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７９番目、アミノ酸約１００〜アミノ酸約１１７番目、アミノ酸約１３８〜アミノ酸約１５９番目、アミノ酸約１８７〜アミノ酸約２１０番目、アミノ酸約２２４〜アミノ酸約２４８番目、およびアミノ酸約２６８〜アミノ酸約２９２番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内に、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸５０〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約１１８〜アミノ酸約１３７番目、およびアミノ酸約２１１〜アミノ酸約２２３番目に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約８０〜アミノ酸約９９番目、アミノ酸約１６０〜アミノ酸約１８６番目、およびアミノ酸約２４９〜アミノ酸約２６７番目に見られる。
【００５２】
膜貫通ドメインは、ＧＰＣＲシグナル伝達サインであるＤＲＦを残基１１８〜１２０番目に含む。配列は、ＧＰＣＲにおける不変アミノ酸である、アルギニンを残基１１９に含む。
【００５３】
ＢＬＡＳＴ探索に基づき、最も高い相同性がプリン受容体に示された。
【００５４】
１４６１８ポリペプチドは、３つの主な構造ドメインを示す、３３７残基のタンパク質である。アミノ末端細胞外ドメインが、配列番号３の残基１〜約２８番目内に存在すると同定される。膜貫通ドメインが、配列番号３の約２９〜約２９７番目の残基内に存在すると同定される。カルボキシ末端細胞内ドメインが、配列番号３の約２９８〜３３７番目の残基内に存在すると同定される。膜貫通ドメインは、膜におよぶ７つの部を含む。膜貫通部は、アミノ酸約２９〜アミノ酸約４９番目、アミノ酸約８４〜アミノ酸約６０番目、アミノ酸約１０３〜アミノ酸約１２７番目、アミノ酸約１４２〜アミノ酸約１６１番目、アミノ酸約１９４〜アミノ酸約２１７番目、アミノ酸約２３１〜アミノ酸約２４７番目、およびアミノ酸約２７６〜アミノ酸約２９７番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内に、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸５０〜アミノ酸約５９番目、アミノ酸約１２８〜アミノ酸約１４１番目、およびアミノ酸約２１８〜アミノ酸約２３０番目に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約８５〜アミノ酸約１０２番目、アミノ酸約１６２〜アミノ酸約１９３番目、およびアミノ酸約２４８〜アミノ酸約２７５番目に見られる。
【００５５】
膜貫通ドメインは、ＧＰＣＲシグナル伝達サインのＦＲＣを残基１２１〜１２３番目に含む。配列は、ＧＰＣＲにおける不変アミノ酸であるアルギニンを残基１２２に含む。
【００５６】
ＢＬＡＳＴ探索に基づき、最も高い相同性がプリン受容体に示された。
【００５７】
１５３３４ポリペプチドは、３つの主な構造ドメインを示す、３７２残基のタンパク質である。アミノ末端細胞外ドメインが、配列番号５の残基１〜約２５番目内に存在すると同定される。膜貫通ドメインが、配列番号５の約２６〜約２９９番目の残基内に存在すると同定される。カルボキシ末端細胞内ドメインが、配列番号５の約３００〜３７２番目の残基内に存在すると同定される。膜貫通ドメインは、膜におよぶ７つの部を含む。膜貫通部は、アミノ酸約２６〜アミノ酸約４８番目、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７７番目、アミノ酸約９９〜アミノ酸約１１５番目、アミノ酸約１４０〜アミノ酸約１５７番目、アミノ酸約１８８〜アミノ酸約２０９番目、アミノ酸約２３５〜アミノ酸約２５９番目、およびアミノ酸約２７７〜アミノ酸約２９９番目に見られる。全膜貫通ドメインにおよぶ領域内に、３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。３つの細胞内ループが、アミノ酸４９〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約１１６〜アミノ酸約１３９番目、およびアミノ酸約２１０〜アミノ酸約２３４番目に見られる。３つの細胞外ループが、アミノ酸約７８〜アミノ酸約９８番目、アミノ酸約１５８〜アミノ酸約１８７番目、およびアミノ酸約２６０〜アミノ酸約２７６番目に見られる。
【００５８】
膜貫通ドメインは、ＧＰＣＲシグナル伝達サインのＤＲＹを残基１１８〜１２０番目に含む。配列は、ＧＰＣＲにおける不変アミノ酸であるアルギニンを残基１１９に含む。
【００５９】
ＢＬＡＳＴ探索に基づき、最も高い相同性がプリン受容体に示された。
【００６０】
本明細書に使用したように、ポリペプチドは、組換えおよび非組換え細胞から単離した場合に細胞物質を実質的に含まない場合に、または化学合成した場合に化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない場合に、「単離」または「精製」されたという。しかし、ポリペプチドを、細胞中で通常会合していない別のポリペプチドと結合でき、依然として「単離」または「精製」と考えることができる。
【００６１】
受容体ポリペプチドは精製して均一にすることができる。しかし、ポリペプチドを精製して均一にしていない調製物も有用であり、単離形のポリペプチドを含むと考えられると理解される。重要な特徴は、調製物には、かなりの量の他の成分の存在下でさえ、ポリペプチドの望む機能が可能であることである。従って、本発明は、様々な純度を包含する。
【００６２】
１つの実施形態において、「細胞物質を実質的に含まない」なる語は、約３０％以下（乾燥重量で）の他のタンパク質（すなわち、汚染タンパク質）、約２０％以下の他のタンパク質、約１０％以下の他のタンパク質、または約５％以下の他のタンパク質を有する受容体ポリペプチドの調製物を含む。受容体ポリペプチドを組換え生産した場合、それは実質的に培養培地も含まず、すなわち、培養培地は、約２０％以下、約１０％以下、または約５％以下の容量のタンパク質調製物を示す。
【００６３】
受容体ポリペプチドは、それが膜調製物の一部であるか、または精製し、次いで膜小胞またはリポソームで復元される場合に単離されたと考える。
【００６４】
「実質的に化学物質前駆体または他の化学物質を含まない」なる語は、その合成に関与する化学物質前駆体または他の化学物質から分離されている、受容体ポリペプチドの調製物を含む。１つの実施形態において、「実質的に化学物質前駆体または他の化学物質を含まない」なる語は、約３０％以下（乾燥重量で）の化学物質前駆体または他の化学物質、約２０％以下の化学物質前駆体または他の化学物質、約１０％以下の化学物質前駆体または他の化学物質、または約５％以下の化学物質前駆体または他の化学物質の調製物を含む。
【００６５】
１つの実施形態において、受容体ポリペプチドは、配列番号１に示したアミノ酸配列を含む。しかし、本発明は、配列変異体も含む。変異体は、生物の同じ遺伝子座、すなわち対立遺伝子変異体によりコードされた実質的に相同なタンパク質を含む。受容体は、ＷＩ−７９２１に近位の、第２染色体に位置する。変異体はまた、生物の他の遺伝子座から得られるが、配列番号１の２８３８受容体タンパク質に実質的に相同である、タンパク質も包含する。変異体はまた、２８３８受容体タンパク質に実質的に相同であるが、別の生物から得られた、すなわち相同分子種であるタンパク質も含む。変異体はまた、化学合成により製造された２８３８受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。変異体はまた、組換え法により製造された２８３８受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。しかし、変異体は、本発明より前に開示された全てのアミノ酸配列を排除すると理解する。
【００６６】
別の実施形態において、受容体ポリペプチドは、配列番号３に示したアミノ酸配列を含む。しかし、本発明はまた、配列変異体も包含する。変異体は対立遺伝子変異体を含む。変異体はまた、生物の他の遺伝子座から得られるが、配列番号３の１４６１８受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も包含する。変異体はまた、実質的に相同な相同分子種も含む。変異体はまた、化学合成により製造された１４６１８受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。変異体はまた、組換え法により製造された１４６１８受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。しかし、変異体は、本発明より前に開示された全てのアミノ酸配列を排除すると理解する。
【００６７】
別の実施形態において、受容体ポリペプチドは、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。しかし、本発明はまた、配列変異体も包含する。変異体は対立遺伝子変異体を含む。受容体は、ＳＨＧＣ−３０２６２に近位の第１２染色体に位置する。変異体はまた、生物の他の遺伝子座から得られるが、配列番号５の１５３３４受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も包含する。変異体はまた、実質的に相同な相同分子種も含む。変異体はまた、化学合成により製造された１５３３４受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。変異体はまた、組換え法により製造された１５３３４受容体タンパク質に実質的に相同なタンパク質も含む。しかし、変異体は、本発明より前に開示された全てのアミノ酸配列を排除すると理解する。
【００６８】
本明細書に使用したように、２つのタンパク質（またはタンパク質の領域）は、アミノ酸配列が、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも９０〜９５％またはそれ以上相同性である場合に、２８３８タンパク質に実質的に相同である。本発明による、実質的に相同なアミノ酸配列は、以下により完全に記載したようにストリンジェントな条件下で、配列番号２に示した配列の核酸配列またはその一部にハイブリッド形成する核酸配列によりコードされる。
【００６９】
本明細書に使用したように、２つのタンパク質（またはタンパク質の領域）は、アミノ酸配列が、少なくとも３５〜４０％、４０〜４５％、４５〜５０％、５５〜６０％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも９０〜９５％またはそれ以上相同性である場合に、１４６１８タンパク質に実質的に相同である。本発明による、実質的に相同なアミノ酸配列は、以下により完全に記載したようにストリンジェントな条件下で、配列番号４に示した配列の核酸配列またはその一部にハイブリッド形成する核酸配列によりコードされる。
【００７０】
本明細書に使用したように、２つのタンパク質（またはタンパク質の領域）は、アミノ酸配列が、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも９０〜９５％またはそれ以上相同性である場合に、１５３３４タンパク質に実質的に相同である。本発明による、実質的に相同なアミノ酸配列は、以下により完全に記載したようにストリンジェントな条件下で、配列番号６に示した配列の核酸配列またはその一部にハイブリッド形成する核酸配列によりコードされる。
【００７１】
２つのアミノ酸配列の、または２つの核酸の相同性％を決定するために、配列を、最適に比較するためにアラインメントを作成する（例えば、他のタンパク質または核酸と最適にアラインメントを作成するために、そのタンパク質または核酸の配列に、ギャップを導入できる）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。ある配列の位置が、他の配列の対応する位置において同じアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で相同である。本明細書に使用したように、アミノ酸または核酸「相同性」は、アミノ酸または核酸「同一性」に等価である。２つの配列間の相同性％は、配列により共有される同一位置の数の関数である（すなわち、相同性％は、同一位置の数／全位置数×１００に等価である）。
【００７２】
本発明はまた、同一度は低いが、十分な類似性を有し、よって２８３８、１４６１８または１５３３４ポリペプチドにより実施される同機能の１つ以上を実施する、ポリペプチドを包含する。類似性は、保存されたアミノ酸置換により決定される。かかる置換は、ポリペプチド中のあるアミノ酸を、類似の特徴をもつ別のアミノ酸に置換するものである。保存的置換は、表現型的にサイレントのようである。保存的置換として典型的なものは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ間の互いの置換であり；ヒドロキシル残基ＳｅｒおよびＴｈｒの交換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの交換、アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎ間の置換、塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換、並びに、芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒ間の置換である。どのアミノ酸変化が、表現型的にサイレントであるかに関する指針はＢｏｗｉｅら（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４７：１３０６−１３１０に見られる。
【００７３】
【表１】
2004500013.tif 000002
【００７４】
同一性および類似性の両方が、容易に計算できる（コンピュータ−分子生物学、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、オックスフォード大学出版、ニューヨーク、１９８８；バイオコンピューティング；情報科学およびゲノムプロジェクト、Ｓｍｉｔｈ．Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９３；配列データのコンピューター解析、第１部、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー、１９９４；分子生物学の配列解析、ｖｏｎ　Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８７；および配列解析プライマー、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編、Ｍ　Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９１）。
【００７５】
かかる数学的アルゴリズムの好ましい非制限的な例は、Ｋａｒｌｉｎら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：５８７３−５８７７に記載されている。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載のように、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴ（バージョン２．０）に取り込まれている。ＢＬＡＳＴおよびギャップを入れたＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、それぞれのプログラム（例えばＮＢＬＡＳＴ）のデフォールトパラメータを使用できる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．参照。１つの実施形態において、配列比較のパラメータは、スコア＝１００、語長＝１２で設定できるか、または不変である（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０）。
【００７６】
好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間の同一性％は、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、およびギャップ負荷１６、１４、１２、１０、８、６または４および長さ負荷１、２、３、４、５または６を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに取り込んだＮｅｅｄｌｅｍａｎら（１９７０）（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズムを使用して決定する。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間の同一性％は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよびギャップ負荷４０、５０、６０、７０または８０および長さ負荷１、２、３、４、５または６を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１２（１）：３８７）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰアルゴリズムを使用して決定する。
【００７７】
配列の比較に使用する数学的アルゴリズムの別の好ましい非制限的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＣＧＣ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮ（バージョン２．０）に取り込まれている。ＡＬＩＧＮプログラムをアミノ酸配列の比較に使用する場合、ＰＡＭ１２０負荷残基テーブル、ギャップ長さペナルティー１２、およびギャップペナルティー４を使用できる。配列解析のさらなるアルゴリズムが当分野で公知であり、Ｔｏｒｅｌｌｉｓら（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３−５に記載のＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ；およびＰｅａｒｓｏｎら（１９８８）ＰＮＡＳ　８５：２４４４−８に記載のＦＡＳＴＡを含む。
【００７８】
変異体ポリペプチドは、アミノ酸配列において、１つ以上の置換、欠失、挿入、逆位、融合、および切断短縮、或いはこれらの任意の組合せが異なり得る。
【００７９】
変異体ポリペプチドは、完全に機能し得るか、または１つ以上の活性が欠失し得る。従って、今回の場合では、変異は、例えば、リガンド結合、膜結合、Ｇタンパク質結合およびシグナル伝達に対応する１つ上の領域の機能に影響を及ぼし得る。
【００８０】
完全に機能する変異体は、典型的には、保存的変異、すなわち重要でない残基または重要でない領域の変異のみを含む。機能的変異体はまた、機能を全く変化させないかまたは取るに足りない変化をもたらす、類似アミノ酸の置換を含み得る。別に、かかる置換は、ある程度機能に正または負に影響を及ぼし得る。
【００８１】
非機能的変異体は、典型的には、１つ以上の非保存的アミノ酸置換、欠失、挿入、逆位、または切断短縮、或いは重要な残基または重量な領域の置換、挿入、逆位、または欠失を含む。
【００８２】
示したように、変異体は、天然型であっても、受容体ポリペプチドに有用で新規な特徴を付与するために、組換え手段または化学合成により製造してもよい。これは、タンパク質凝集を防ぐことにより、医薬製剤の免疫原性を防ぐことを含む。
【００８３】
有用な変異はさらに、リガンド結合特徴の変化を含む。例えば、１つの実施形態は、リガンドの結合をもたらすが、遊離または遅延放出はもたらさない、結合部位での変化を含む。同じ部位でのさらに有用な変異は、リガンドへのより高い親和性をもたらし得る。有用な変異はまた、別のリガンドへのより高い親和性を与える変化を含む。別の有用な変異は、リガンドへの結合は可能であるが、リガンドによる活性化は防ぐものである。別の有用な変異は、適切なＧタンパク質による結合の減少または増加、または、受容体が通常会合しているＧタンパク質とは異なるＧタンパク質による結合を与える、膜貫通Ｇタンパク質結合／シグナル伝達ドメインの変異を含む。別の有用な変異は、１つ以上のドメインまたは小領域が、作動可能に、別のＧタンパク質共役受容体の１つ以上のドメインまたは小領域に融合している、融合タンパク質を提供する。
【００８４】
機能に必須なアミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニン走査型変異誘発などの、当分野で公知の方法により同定できる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４４：１０８１−１０８５）。後者の手順は、分子のどの残基にも１つのアラニン変異を導入する。次いで、得られた変異分子を、受容体結合またはｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ増殖活性などの生物活性について試験する。リガンド−受容体結合に重要な部位はまた、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識などの構造解析により決定できる（Ｓｍｉｔｈら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；ｄｅ　Ｖｏｓら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５５：３０６−３１２）。
【００８５】
実質的な相同性は、全核酸またはアミノ酸配列またはこれらの配列の断片にあり得る。
【００８６】
従って、本発明は、２８３８受容体タンパク質のポリペプチド断片を含む。断片は、配列番号１に示したアミノ酸配列から得られ得る。しかし、本発明はまた、本明細書に記載した２８３８受容体タンパク質の変異体の断片も包含する。
【００８７】
従って、本発明はまた、１４６１８受容体タンパク質のポリペプチド断片も含む。断片は、配列番号３に示したアミノ酸配列から得られ得る。しかし、本発明はまた、本明細書に記載した１４６１８受容体タンパク質の変異体の断片も包含する。
【００８８】
従って、本発明はまた、１５３３４受容体タンパク質のポリペプチド断片も含む。断片は、配列番号５に示したアミノ酸配列から得られ得る。しかし、本発明はまた、本明細書に記載した１５３３４受容体タンパク質の変異体の断片も包含する。
【００８９】
しかし、本発明が関する断片は、本発明より前に開示され得る断片を含むとは捉えない。
【００９０】
断片は、例えば、Ｇタンパク質またはリガンドへの結合能などのタンパク質の１つ以上の生物活性、並びに、受容体抗体を作成するために免疫原として使用できる断片も保持し得る。
【００９１】
２８３８受容体（例えば、８、１２、１５、２０、３０、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、１００またはそれ以上のアミノ酸長であるペプチド）の生物学的に活性な断片は、例えば、細胞外または細胞内ドメインまたはループ、１つ以上の膜貫通部、またはその一部、Ｇタンパク質結合部位、またはＧＰＣＲサイン、グリコシル化部位、プロテインキナーゼＣおよびカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位、Ｎ−ミリストイル化およびアミド化部位などのドメインまたはモチーフを含む。かかるドメインまたはモチーフは、慣用的なコンピューター化相同探索手順により同定できる。
【００９２】
可能な断片は、１）配列番号１のアミノ酸１〜アミノ酸約２４番目の全アミノ末端細胞外ドメインを含む可溶性断片、またはその一部、２）配列番号１のアミノ酸約２９３〜アミノ酸３１９番目の全カルボキシ末端細胞内ドメインを含むペプチド、またはその一部、３）アミノ酸約２５〜アミノ酸約２９２番目の全膜貫通ドメインにおよぶ領域を含むペプチド、またはその一部、４）アミノ酸約２５〜アミノ酸約４９番目、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７９番目、アミノ酸約１００〜アミノ酸約１１７番目、アミノ酸約１３８〜アミノ酸約１５９番目、アミノ酸約１８７〜アミノ酸約２１０番目、アミノ酸約２２４〜アミノ酸約２４８番目、およびアミノ酸約２６８〜アミノ酸約２９２番目の特定の膜貫通部のいずれか、またはその一部、５）アミノ酸約５０〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約１１８〜アミノ酸約１３７番目、アミノ酸約２１１〜アミノ酸約２２３番目、アミノ酸約８０〜アミノ酸約９９番目、アミノ酸約１６０〜アミノ酸約１８６番目、およびアミノ酸約２４９〜アミノ酸約２６７番目の３つの細胞内または３つの細胞外ループのいずれか、またはその一部を含むがこれに限定されない。断片はさらに、１つ以上の膜貫通部および添付細胞外または細胞内ループまたは１つ以上の膜貫通部、および添付細胞内または細胞外ループとカルボキシ末端ドメインと組合せたアミノ末端ドメインなどの、上記断片の組合せを含む。従って、任意の上記断片を組合せることができる。他の断片は、アミノ酸約６〜３１９番目の成熟タンパク質を含む。他の断片は、リン酸化部位、グリコシル化部位、およびミリストイル化部位およびＧＰＣＲサイン配列を含む配列などの、本明細書に記載の様々な機能的部位を含む。断片は、例えば、機能的部位から一方または両方向に伸長して、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０または１００までのアミノ酸を包含できる。さらに、断片は、上記の特定のドメインの小断片を含み得、この小断片は、それが由来するドメインの機能を保持する。断片はまた、アミノ酸１〜アミノ酸約２６４までの７つ以上のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。断片はまた、抗原性断片および特に図２の高い抗原性係数を有することが示された断片を含む。
【００９３】
従って、可能な断片は、リガンド結合部位を規定する断片、グリコシル化部位を規定する断片、膜会合を規定する断片、リン酸化部位を規定する断片、Ｇタンパク質との相互作用およびシグナル伝達を規定する断片、およびミリストイル化部位を規定する断片を含む。これにより、関連した機能を提供するまたは関連した機能を同定できる別個の断片が意図される。好ましい実施形態において、断片はリガンド結合部位を含む。
【００９４】
１４６１８受容体の生物学的に活性な断片（例えば、９、１２、１５、２０、３０、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、１００またはそれ以上のアミノ酸長であるペプチド）は、例えば、細胞外または細胞内ドメインまたはループ、１つ以上の膜貫通部、またはその一部、Ｇタンパク質結合部位、またはＧＰＣＲサイン、グリコシル化部位、およびｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼＣ、およびカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位などのドメインまたはモチーフを含み得る。
【００９５】
可能な断片は、１）配列番号３のアミノ酸約１〜アミノ酸約２８番目の全アミノ末端細胞外ドメインを含む可溶性ペプチド、またはその一部、２）配列番号３のアミノ酸約２９８〜アミノ酸３３７番目の全カルボキシ末端細胞内ドメインを含むペプチド、またはその一部、３）アミノ酸約２９〜アミノ酸約２９７番目の全膜貫通ドメインにおよぶ領域を含むペプチド、またはその一部、４）アミノ酸約２９〜アミノ酸約４９番目、アミノ酸約６０〜アミノ酸約８４番目、アミノ酸約１０３〜アミノ酸約１２７番目、アミノ酸約１４２〜アミノ酸約１６１番目、アミノ酸約１９４〜アミノ酸約２１７番目、アミノ酸約２３１〜アミノ酸約２４７番目、およびアミノ酸約２７６〜アミノ酸約２９７番目の特定の膜貫通部のいずれか、またはその一部、５）アミノ酸約５０〜アミノ酸約５９番目、アミノ酸約１２８〜アミノ酸約１４１番目、アミノ酸約２１８〜アミノ酸約２３０番目、アミノ酸約８５〜アミノ酸約１０２番目、アミノ酸約１６２〜アミノ酸約１９３番目、およびアミノ酸約２４８〜アミノ酸約２７５番目の３つの細胞内または３つの細胞外ループのいずれか、またはその一部を含むがこれに限定されない。断片はさらに、１つ以上の膜貫通部および添付細胞外または細胞内ループまたは１つ以上の膜貫通部、および添付細胞内または細胞外ループとカルボキシ末端ドメインと組合せたアミノ末端ドメインなどの、上記断片の組合せを含む。従って、任意の上記断片を組合せることができる。他の断片は、アミノ酸約６〜３３７番目の成熟タンパク質を含む。他の断片は、リン酸化部位、グリコシル化部位、およびＧＰＣＲサイン配列を含む配列などの、本明細書に記載の様々な機能的部位を含む。断片は、例えば、機能的部位から一方または両方向に伸長して、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０または１００個までのアミノ酸を包含できる。さらに、断片は、上記の特定のドメインの小断片を含み得、この小断片は、それが由来するドメインの機能を保持する。断片はまた、アミノ酸１〜アミノ酸約２４４番目のうち８つ以上のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。
【００９６】
断片はまた、抗原性断片および特に図２の高い抗原性係数を有することが示された断片を含む。
【００９７】
従って、可能な断片は、リガンド結合部位を規定する断片、グリコシル化部位を規定する断片、膜会合を規定する断片、リン酸化部位を規定する断片、Ｇタンパク質との相互作用およびシグナル伝達を規定する断片、およびミリストイル化部位を規定する断片を含む。これにより、関連した機能を提供するまたは関連した機能を同定できる別個の断片が意図される。好ましい実施形態において、断片はリガンド結合部位を含む。
【００９８】
生物学的に活性な断片（例えば、８、１２、１５、２０、３０、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、１００個またはそれ以上のアミノ酸長であるペプチド）は、例えば、細胞外または細胞内ドメインまたはループ、１つ以上の膜貫通部、またはその一部、Ｇタンパク質結合部位、またはＧＰＣＲサイン、グリコシル化部位、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、プロテインキナーゼＣ、およびカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位、およびＮ−ミリストイル化部位などのドメインまたはモチーフを含み得る。
【００９９】
可能な断片は、１）配列番号５のアミノ酸約１〜アミノ酸約２３番目の全アミノ末端細胞外ドメインを含む可溶性ペプチド、またはその一部、２）配列番号５のアミノ酸約３００〜アミノ酸３７２番目の全カルボキシ末端細胞内ドメインを含むペプチド、またはその一部、３）アミノ酸約２６〜アミノ酸約２９９番目の全膜貫通ドメインにおよぶ領域を含むペプチド、またはその一部、４）アミノ酸約２６〜アミノ酸約４８番目、アミノ酸約５６〜アミノ酸約７７番目、アミノ酸約９９〜アミノ酸約１１５番目、アミノ酸約１４０〜アミノ酸約１５７番目、アミノ酸約１８８〜アミノ酸約２０９番目、アミノ酸約２３５〜アミノ酸約２５９番目、およびアミノ酸約２７７〜アミノ酸約２９９番目の特定の膜貫通部のいずれか、またはその一部、５）アミノ酸約４９〜アミノ酸約５５番目、アミノ酸約７８〜アミノ酸約９８番目、アミノ酸約１１６〜アミノ酸約１３９番目、アミノ酸約１５８〜アミノ酸約１８７番目、アミノ酸約２１０〜アミノ酸約２３４番目、およびアミノ酸約２６０〜アミノ酸約２７６番目の３つの細胞内または３つの細胞外ループのいずれか、またはその一部を含むがこれに限定されない。断片はさらに、１つ以上の膜貫通部および添付細胞外または細胞内ループまたは１つ以上の膜貫通部、および添付細胞内または細胞外ループとカルボキシ末端ドメインと組合せたアミノ末端ドメインなどの、上記断片の組合せを含む。従って、任意の上記断片を組合せることができる。他の断片は、アミノ酸約６〜３７２番目の成熟タンパク質を含む。他の断片は、リン酸化部位、グリコシル化部位、ミリストイル化部位およびＧＰＣＲサイン配列を含む配列などの、本明細書に記載の様々な機能的部位を含む。断片は、例えば、機能的部位から一方または両方向に伸長して、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０または１００個までのアミノ酸を包含できる。さらに、断片は、上記の特定のドメインの小断片を含み得、この小断片は、それが由来するドメインの機能を保持する。断片はまた、７つ以上のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。
【０１００】
断片はまた、抗原性断片および特に図２の高い抗原性係数を有することが示された断片を含む。
【０１０１】
これらの領域は、コンピューター化相同性解析を含む公知の方法により同定できる。
【０１０２】
従って、可能な断片は、リガンド結合部位を規定する断片、グリコシル化部位を規定する断片、膜会合を規定する断片、リン酸化部位を規定する断片、Ｇタンパク質との相互作用およびシグナル伝達を規定する断片、およびミリストイル化部位を規定する断片を含む。これにより、関連した機能を提供するまたは関連した機能を同定できる別個の断片が意図される。好ましい実施形態において、断片はリガンド結合部位を含む。
【０１０３】
本発明はまた、免疫原性特性を有する２８３８受容体断片を提供する。これらは、２８３８受容体タンパク質および変異体のエピトープ含有部分を含む。これらのエピトープ含有ペプチドは、受容体ポリペプチドまたは領域または断片に特異的に結合する抗体を生じるのに有用である。これらのペプチドは、少なくとも８、１２、少なくとも１４、または少なくとも１５〜約３０個のアミノ酸を含み得る。
【０１０４】
本発明はまた、免疫原性特性を有する１４６１８受容体断片を提供する。これらは、１４６１８受容体タンパク質および変異体のエピトープ含有部分を含む。これらのエピトープ含有ペプチドは、受容体ポリペプチドまたは領域または断片に特異的に結合する抗体を生じるのに有用である。これらのペプチドは、少なくとも９、１２、少なくとも１４、または少なくとも約１５〜約３０個のアミノ酸を含み得る。
【０１０５】
本発明はまた、免疫原性特性を有する１５３３４受容体断片を提供する。これらは、１５３３４受容体タンパク質および変異体のエピトープ含有部分を含む。これらのエピトープ含有ペプチドは、受容体ポリペプチドまたは領域または断片に特異的に結合する抗体を生じるのに有用である。これらのペプチドは、少なくとも８、１２、少なくとも１４、または少なくとも約１５〜約３０個のアミノ酸を含み得る。
【０１０６】
抗体の産生に使用できる抗原性ポリペプチドの非制限的な例は、アミノ末端細胞外ドメインまたは任意の細胞外ループから得られるペプチドを含む。高い抗原性係数を有する領域を、図２、６および１０に示す。
【０１０７】
エピトープ含有受容体およびポリペプチドは、任意の慣用的な手段により製造し得る（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：５１３１−５１３５）。同時多ペプチド合成が米国特許第４，６３１，２１１号に記載されている。
【０１０８】
断片は別個（他のアミノ酸またはポリペプチドに融合されていない）であっても、大きなポリペプチド内にあってもよい。さらに、数個の断片が、１つのより大きなポリペプチド内に含まれ得る。１つの実施形態において、宿主での発現に設計した断片は、受容体断片のアミノ末端に融合した異種プレポリペプチドおよびプロポリペプチド領域および断片のカルボキシ末端に融合した追加の領域を有し得る。
【０１０９】
従って、本発明は、キメラまたは融合タンパク質を提供する。これらは、受容体タンパク質に実質的に相同ではないアミノ酸配列を有する異種タンパク質に作動可能に連鎖した受容体タンパク質を含む。「作動可能に連鎖した」は、受容体タンパク質および異種タンパク質がインフレーム融合することを示す。異種タンパク質を、受容体タンパク質のＮ末端またはＣ末端に融合できる。
【０１１０】
１つの実施形態において、融合タンパク質は、それ自体受容体の機能に影響を及ぼさない。例えば、融合タンパク質は、受容体配列がＧＳＴ配列のＣ末端に融合している、ＧＳＴ融合タンパク質であり得る。他の種類の融合タンパク質は、酵素的融合タンパク質、例えばβ−ガラクトシダーゼ融合物、酵母二重ハイブリッド融合物、ポリＨｉｓ融合物およびＩｇ融合物を含むがこれに限定されない。かかる融合タンパク質、特にポリＨｉｓ融合物は、組換え受容体タンパク質の精製を容易にし得る。ある宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）で、タンパク質の発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用により増加し得る。それ故、別の実施形態において、融合タンパク質は、異種シグナル配列をそのＮ末端に含む。
【０１１１】
ＥＰ−Ａ−Ｏ４６４　５３３は、様々な割合の免疫グロブリン定常領域を含む融合タンパク質を開示する。Ｆｃは、治療および診断に有用であり、従って、例えば、薬物動態特性は向上する（ＥＰ−Ａ０２３２　２６２）。薬物発見において、例えば、ヒトタンパク質を、アンタゴニストを同定するためのハイスループットスクリーニングアッセイの目的で、Ｆｃタンパク質と融合させる。Ｂｅｎｎｅｔｔら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇ．８：５２−５８およびＪｏｈａｎｓｏｎら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０、１６：９４５９−９４７１。従って、本発明はまた、受容体ポリペプチド、並びに、様々な割合の様々なサブクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域を含む、可溶性融合タンパク質を包含する。免疫グロブリンとして好ましいのは、ヒトＩｇＧ、特にＩｇＧ１の重鎖の定常部であり、ここでは融合はヒンジ領域で起こる。ある用途では、例えば、融合タンパク質を免疫化の抗原として使用する場合などでは、融合タンパク質を意図する目的に使用した後にＦｃを除去することが望ましい。特定の実施形態において、Ｆｃ部は、切断配列（これも取り込まれている）により単純に除去でき、およびＸａ因子で切断できる。
【０１１２】
キメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技法により製造できる。例えば、異なるタンパク質配列をコードするＤＮＡ断片を、慣用的な技法に従って、共にインフレームで連結する。別の実施形態において、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成器を含む慣用的な技法により合成できる。別に、ＰＣＲによる遺伝子断片の増幅は、アンカープライマーを使用して実施でき、これは２つの連続的な遺伝子断片間の相補的なオーバーハングをもたらし、これは続いてアニーリングし、再増幅してキメラ遺伝子配列を作成できる（Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９２）分子生物学の現在のプロトコル参照）。さらに、すでに融合部分（例えばＧＳＴタンパク質）をコードする、多くの発現ベクターが、市販されている。受容体タンパク質をコードする核酸を、発現ベクターにクローニングして、融合部分を受容体タンパク質にインフレームで連結できる。
【０１１３】
別の形の融合タンパク質は、受容体機能に直接影響を及ぼすものである。従って、受容体ポリペプチドは、本発明により包含され、ここで１つ以上の受容体ドメイン（またはその一部）が、別のＧタンパク質共役受容体または別の種類の受容体由来の相同的ドメイン（またはその一部）により置換されている。従って、様々な順列が可能である。アミノ末端細胞外ドメイン、またはその小領域（例えばリガンド結合）は、別のリガンド結合受容体タンパク質由来のドメインまたは小領域と置換できる。別に、全膜貫通ドメイン、または７つの部またはループのいずれか、またはその一部、例えば、Ｇタンパク質結合／シグナル伝達を置換できる。最後に、カルボキシ末端細胞内ドメインまたは小領域を置換できる。従って、１つ以上の天然ドメインまたは小領域が置換されたキメラ受容体を形成できる。
【０１１４】
単離された２８３８受容体タンパク質は、リンパ節、胸腺、脾臓、精巣、大腸、および末梢血リンパ球由来などの、それを天然に発現する細胞から、並びに、活性化Ｔヘルパー細胞（１および２）、低酸素Ｈｅｐ３Ｂ細胞、ＣＤ３細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）、活性化Ｂ細胞、ジャーカット細胞などの、図１５に示したように有意に発現されている細胞から精製でき、とりわけ、それを発現するように変化させた（組換え）細胞から精製できるか、または既知のタンパク質合成法を使用して合成できる。
【０１１５】
単離された１４６１８受容体タンパク質は、乳房、骨格筋、リンパ節、脾臓および血液末梢リンパ球などの、それを天然に発現する細胞、並びに、それを発現するように変化させた（組換え）細胞から精製した細胞ＣＤ３４＋細胞および巨核球を含むがこれに限定されない、遺伝子が図１３および１４に示したように有意に発現されている組織から精製できるか、または既知のタンパク質合成法を使用して合成できる。
【０１１６】
単離された１５３３４受容体タンパク質は、大腸、胎盤、膵臓、扁桃腺、リンパ節、脾臓、末梢血細胞、胸腺、副腎および心臓などの、それを天然に発現する細胞、並びに、それを発現するように変化させた（組換え）細胞から精製した、Ｋ５６２細胞、赤芽球、および巨核球を含む、図１６〜１９に示した組織から精製できる、または既知のタンパク質合成法を使用して合成できる。
【０１１７】
１つの実施形態において、タンパク質は、組換えＤＮＡ技法により製造される。例えば、受容体ポリペプチドをコードする核酸分子を、発現ベクターにクローニングし、発現ベクターを、宿主細胞に導入し、タンパク質を宿主細胞で発現させる。次いで、タンパク質を細胞から、適切な精製スキームにより、標準的なタンパク質精製技法を使用して単離できる。
【０１１８】
ポリペプチドはしばしば、２０の天然アミノ酸と一般的に称される２０のアミノ酸以外のアミノ酸も含む。さらに、多くのアミノ酸（末端アミノ酸を含む）は、天然プロセス（例えばプロセシングおよび他の翻訳後修飾）または当分野で公知の化学修飾技法により修飾され得る。ポリペプチドで天然で起こる一般的な修飾は、基本的な教科書、詳細な研究書および研究文献に記載され、それらは当業者に公知である。
【０１１９】
従って、ポリペプチドはまた、置換アミノ酸残基が、遺伝子コードによりコードされていないものである、置換基が含まれない、成熟ポリペプチドが別の化合物（例えばポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えばポリエチレングリコール））と融合していない、または、追加のアミノ酸が成熟ポリペプチド（リーダーまたは分泌配列または成熟ポリペプチドまたはプロタンパク質配列の精製用の配列）に融合している、誘導体または類似体も包含する。
【０１２０】
既知の修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合的付着、ヘム部分の共有結合的付着、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合的付着、脂質または脂質誘導体の共有結合的付着、ホスファチジルイノシトールの共有結合的付着、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、ジメチル化、共有結合的架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解的プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫化、トランスファーＲＮＡの媒介するアミノ酸のタンパク質への付加、例えばアルギニル化、およびユビキチン結合を含むがこれに限定されない。
【０１２１】
かかる修飾は、当業者には公知であり、科学文献に非常に詳細に記載されている。数個の特に一般的な修飾、グリコシル化、脂質付着、硫化、グルタミン酸残基のγ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰリボシル化は、例えば、最も基本的な教科書、例えば、タンパク質−構造的および分子的特性、第２版、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク（１９９３）に記載されている。多くの詳細な論評が、この主題に関して、例えば、Ｗｏｌｄ，Ｆ、翻訳後共有結合的タンパク質修飾、Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク１−１２（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６−６４６）およびＲａｔｔａｎら（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８−６２により入手できる。
【０１２２】
これも公知であるように、ポリペプチドは必ずしも全体的に直鎖状ではない。例えば、ポリペプチドは、ユビキチン結合の結果として分枝し得、および、それらは一般的に、天然プロセシング事象および天然に起こらないヒトによる操作によりもたらされる事象を含む、翻訳後事象の結果として、分枝を伴いまたは伴わずに、環状であり得る。環状、分枝および分枝環状ポリペプチドは、非翻訳天然プロセスにより、および合成法により合成され得る。
【０１２３】
修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシ末端を含む、ポリペプチド中のいずれにおいても起こり得る。ポリペプチド中のアミノまたはカルボキシ基、または両方の、共有結合的修飾による遮断は、天然および合成ポリペプチドにおいて一般的である。例えば、タンパク質分解プロセシングの前の、Ｅ．コリ中で作成されたポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんど不変的にＮ−ホルミルメチオニンである。
【０１２４】
修飾は、タンパク質の調製法の関数であり得る。組換えポリペプチドでは、例えば、修飾は、宿主細胞の翻訳後修飾能およびポリペプチドのアミノ酸配列の修飾シグナルにより決定される。従って、グリコシル化を望む場合、ポリペプチドは、グリコシル化宿主、一般には真核細胞で発現すべきである。昆虫細胞はしばしば、哺乳動物細胞と同じ翻訳後グリコシル化を行うので、この理由から、昆虫細胞発現系は、天然パターンのグリコシル化を有する哺乳動物タンパク質を効率的に発現するように開発されている。類似の考慮が他の修飾にも適用される。
【０１２５】
同じ種類の修飾が、同程度または異なる程度で、あるポリペプチドの数個の部位に存在し得る。また、あるポリペプチドは、１種類以上の修飾を含み得る。
【０１２６】
ポリペプチドの使用
受容体ポリペプチドは、２８３８、１４６１８および１５３３４受容体タンパク質、領域または断片に特異的な抗体を製造するのに有用である。高い抗原性係数スコアを有する領域を図２、６および１０に示す。
【０１２７】
受容体ポリペプチド、変異体および断片（本発明より前に開示され得るものを含む）は、ＧＰＣＲに関連した生物学的アッセイに有用である。かかるアッセイは、ＧＰＣＲ関連状態の診断および治療に有用な任意の既知のＧＰＣＲ機能または活性または特性を含む。
【０１２８】
受容体ポリペプチドはまた、薬物スクリーニングアッセイ、細胞を基にしたまたは細胞非含有系に有用である。細胞を基にした系は、生検または細胞培養液中に増殖した、天然細胞であり得、すなわち、受容体タンパク質を通常発現する細胞であり得る。しかし、１つの実施形態において、細胞を基にしたアッセイは、受容体タンパク質を発現する組換え宿主細胞を含む。
【０１２９】
化合物のポリペプチドとの相互作用能の決定はまた、リガンドまたは生物学的に活性なその一部の、ポリペプチドへの結合能と比較した、試験化合物のポリペプチドへの優先的結合能を決定することを含み得る。
【０１３０】
ポリペプチドは、受容体活性を調節する化合物の同定に使用できる。かかる化合物は、例えば、既知のリガンドへの親和性または結合率を増加または減少させ得るか、リガンドと受容体への結合について競合し得るか、または受容体に結合したリガンドを置換し得る。２８３８、１４６１８および１５３３４タンパク質および適切な変異体および断片をハイスループットスクリーンに使用して、候補化合物を受容体への結合能についてアッセイできる。これらの化合物はさらに、受容体活性に対する化合物の効果を決定するために、機能的受容体に対してスクリーニングできる。所望の程度まで受容体を活性化（アゴニスト）または不活性化（アンタゴニスト）する化合物を同定できる。調節法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで（例えば物質と共に細胞を培養することにより）または別に、ｉｎ ｖｉｖｏで（例えば、物質を被検者に投与することにより）実施できる。例は、上記で議論したようなプリン類似体を含む。
【０１３１】
受容体ポリペプチドを使用して、受容体タンパク質と、受容体タンパク質と通常相互作用する標的分子の間の相互作用を刺激または阻害する能力について化合物をスクリーニングできる。標的は、受容体タンパク質が通常相互作用する、リガンドまたはシグナル経路の成分であり得る（例えば、ｃＡＭＰまたはホスファチジルイノシトール代謝回転および／またはアデニル酸シクラーゼ、またはホスホリパーゼＣ活性化に関与する、Ｇタンパク質または他の相互作用物質）。アッセイは、受容体タンパク質または断片が標的分子と相互作用でき、タンパク質と標的の間の複合体形成を検出できるか、またはＧタンパク質リン酸化、サイクリックＡＭＰまたはホスファチジルイノシトール代謝回転、およびアデニル酸シクラーゼまたはホスホリパーゼＣ活性化などのシグナル伝達の任意の会合効果といった、受容体タンパク質と標的の間の相互作用の生化学的結果を検出できる条件下で、受容体タンパク質と候補化合物を合わせる段階を含む。
【０１３２】
タンパク質の標的分子への結合能の決定はまた、リアルタイム二分子相互作用解析（ＢＩＡ）などの技術を使用して達成できる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ＳおよびＵｒｂａｎｉｃｚｋｙ，Ｃ（１９９１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６３：２３３８−２３４５およびＳｚａｂｏら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：６９９−７０５。本明細書に使用した「ＢＩＡ」は、相互作用物質を全く標識することなく、リアルタイムで生物特異的相互作用を研究する技術である（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））。光学現象表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の変化を、生物学的分子間のリアルタイム反応の指標として使用できる。
【０１３３】
本発明の試験化合物は、生物学的ライブラリー；空間的に扱うことのできる平行固相または液相ライブラリー；脱回旋の必要な合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用した合成ライブラリー法を含む、当分野で公知の組合せライブラリーの多くの任意のアプローチを使用して得ることができる。生物学的ライブラリーアプローチは、ポリペプチドライブラリーに限定され、他の４つのアプローチは、ポリペプチド、非ペプチドオリゴマー、または小分子化合物ライブラリーに適用できる（Ｌａｍ，Ｋ．Ｓ．（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓ．１２：１４５）。
【０１３４】
分子ライブラリーの合成法の例は、当分野に、例えば、ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６１：１３０３；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３に見られる。化合物ライブラリーは、溶液中（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１３：４１２−４２１）、またはビーズ（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ　３５４：８２−８４）、チップ（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ　３６４：５５５−５５６）、細菌（Ｌａｎｄｅｒ　ＵＳＰ　５，２２３，４０９）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ　ＵＳＰ　’４０９）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：１８６５−１８６９）またはファージ（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：３８６−３９０）；（Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：４０４−４０６）；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９７：６３７８−６３８２）；（Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０）；（Ｌａｄｎｅｒ上記）に提示され得る。
【０１３５】
候補化合物は、例えば、１）プリン類似体、２）Ｉｇ尾融合ペプチドを含む可溶性ペプチドなどのペプチドおよびランダムペプチドライブラリーのメンバー（例えば、Ｌａｍら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ　３５４：８２−８４；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ　３５４：８４−８６参照）およびＤおよびＬ立体配置アミノ酸から作成したコンビナトリアルケミストリー由来分子ライブラリー；３）ホスホペプチド（例えば、ランダムおよび部分変性指向ホスホペプチドライブラリーのメンバー、例えば、Ｓｏｎｇｙａｎｇら（１９９３）Ｃｅｌｌ　７２：７６７−７７８参照）；４）抗体（例えば、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、抗イディオタイプ、キメラ、および単鎖抗体、並びに、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ発現ライブラリー断片、および抗体のエピトープ結合断片）；および５）小有機および無機分子（例えばコンビナトリアルおよび天然産物ライブラリーから得られた分子）を含む。
【０１３６】
１つの候補化合物は、リガンド結合に競合する、可溶性全長受容体または断片である。他の候補化合物は、変異受容体、または、受容体機能に影響を及ぼし従ってリガンドと競合する変異を含む適切な断片を含む。従って、リガンドと例えば高い親和性で競合する断片、またはリガンドと結合するが遊離はしない断片は、本発明に包含される。
【０１３７】
本発明は、受容体活性を調節（刺激または阻害）する化合物を同定する他の末端点を提供する。アッセイは、典型的には、受容体活性を示す、シグナル伝達経路の事象のアッセイを含む。従って、受容体タンパク質依存性シグナルカスケードに応答してアップまたはダウンレギュレートされる遺伝子の発現を、アッセイできる。１つの実施形態において、かかる遺伝子の調節領域は、ルシフェラーゼなどの容易に検出可能なマーカーに作動可能に連鎖し得る。別に、受容体タンパク質のリン酸化、または受容体タンパク質標的も測定できる。
【０１３８】
化合物の結合および／または活性化はまた、アミノ末端細胞外ドメイン、またはその一部、全膜貫通ドメインまたは小領域、例えば、７回膜貫通セグメントのいずれかまたは細胞外または細胞内ループのいずれかおよびカルボキシ末端細胞内ドメイン、またはその一部が、異種ドメインまたは小領域により置換され得る、キメラ受容体タンパク質の使用によりスクリーニングできる。例えば、天然受容体により認識され、異なるＧタンパク質と相互作用する、Ｇタンパク質結合領域を使用できる。従って、異なるセットのシグナル伝達成分が、活性化の末端点アッセイとして利用できる。別に、全膜貫通部分または小領域（例えば、膜貫通部または細胞内または細胞外ループ）を、アミノ末端細胞外ドメインおよび／またはＧタンパク質結合領域の由来する宿主細胞とは異なる、宿主細胞に特異的な全膜貫通部分または小領域と置換できる。これにより、受容体が由来する特異的宿主細胞以外でアッセイを実施できる。別に、アミノ末端細胞外ドメイン（および／または他のリガンド結合領域）は、異なるリガンドに結合しているドメイン（および／または他の結合領域）により置換でき、従って、異種アミノ末端細胞外ドメイン（または領域）に相互作用するが、依然としてシグナル伝達は引き起こす試験化合物についてのアッセイが提供される。最後に、活性化は、天然シグナル伝達経路２の一部である転写調節配列に作動可能に連鎖した容易に検出可能なコード領域を含むレポーター遺伝子により検出できる。
【０１３９】
受容体ポリペプチドはまた、受容体と相互作用する化合物の発見のために設計された方法における競合的結合アッセイに有用である。従って、化合物を、化合物がポリペプチドと結合するかまたは別様に相互作用できる条件下で、受容体ポリペプチドに曝露させる。可溶性受容体ポリペプチドも混合物に加える。試験化合物が可溶性受容体ポリペプチドと相互作用すれば、形成される複合体の量または受容体標的の活性を減少させる。この種類のアッセイは、特に、受容体の特異的領域に相互作用する化合物を探索する場合に有用である。従って、標的受容体領域と競合する可溶性ポリペプチドを、目的の領域に対応するペプチド配列を含むように設計する。
【０１４０】
細胞非含有薬物スクリーニングアッセイを実施するために、受容体タンパク質、または断片、またはその標的分子を固定して、一方または両方のタンパク質の複合体非形成形からの複合体の分離を容易にし、並びに、アッセイの自動化に適応させることが望ましい。
【０１４１】
タンパク質をマトリックス上に固定する技法は、薬物スクリーニングアッセイに使用できる。１つの実施形態において、タンパク質がマトリックスに結合できるドメインの加わった融合タンパク質を提供できる。例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／２８３８、１４１６８および１５３３４融合タンパク質を、グルタチオンセファロースビーズ（シグマケミカル、セントルイス、ミズーリ州）またはグルタチオン由来マイクロタイタープレートに吸着でき、次いで細胞溶解液（例えば３５Ｓ標識）および候補化合物と合わせ、混合物を、複合体形成の実施条件下（例えば塩およびｐＨにおける生理学的条件）でインキュベートする。インキュベート後、ビーズを洗浄して全ての非結合標識を除去し、マトリックスを固定し、放射標識を直接的にまたは複合体の解離した後に上清で決定する。別に、複合体をマトリックスから解離し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ビーズ画分に見られる受容体結合タンパク質のレベルを、標準的な電気泳動技法を使用してゲルから定量できる。例えば、ポリペプチドまたはその標的分子を、当分野で公知の技法を使用して、ビオチンおよびストレプトアビジンの複合体を利用して固定できる。別に、タンパク質と反応するがタンパク質のその標的分子への結合は妨害しない抗体を、プレートのウェルに誘導体化して、タンパク質を、抗体複合体によりウェルで捕獲できる。受容体結合タンパク質および候補化合物の調製物を、受容体タンパク質提示ウェル中でインキュベートし、ウェルに捕獲された複合体の量を定量できる。ＧＳＴ固定複合体について上記した複合体に加えて、かかる複合体を検出する方法は、受容体タンパク質標的分子と反応性であるか、または受容体タンパク質と反応性で標的分子と競合する、抗体を使用した複合体の検出；並びに、標的分子に関連した酵素活性の検出に依拠した酵素結合アッセイを含む。
【０１４２】
これらの薬物スクリーニングアッセイに従って同定した受容体タンパク質活性のモジュレーターを使用して、例えば、リンパ節、胸腺、脾臓、精巣、大腸、および末梢血リンパ球（Ｔヘルパー細胞（１および２）、ＣＤ３＋（ＣＤ４およびＣＤ８）細胞、Ｂ細胞および顆粒球を含むがこれに限定されない）などにおいて、２８３８タンパク質を発現する細胞を治療することにより、受容体経路により媒介される疾患に罹患した被検者を治療できる。これらの薬物スクリーニングアッセイに従って同定した受容体タンパク質活性のモジュレーターを使用して、例えば、乳房、骨格筋、脾臓および末梢血リンパ球並びにＣＤ３４＋細胞および巨核球などにおいて、１４６１８タンパク質を発現する細胞を治療することにより、受容体経路により媒介される疾患に罹患した被検者を治療できる。これらの薬物スクリーニングアッセイに従って同定した受容体タンパク質活性のモジュレーターを使用して、例えば、リンパ節、扁桃腺、膵臓、大腸、脾臓、末梢血細胞、胸腺、副腎および心臓並びに巨核球および赤芽球などにおいて、１５３３４タンパク質を発現する細胞を治療することにより、受容体経路により媒介される疾患に罹患した被検者を治療できる。これらの治療法は、かかる治療の必要な被検者に、本明細書に記載した医薬組成物中のタンパク質活性のモジュレーターを投与する段階を含む。
【０１４３】
図１３は、様々な正常ヒト組織における１４６１８受容体の発現を示す。遺伝子は、乳房および骨格筋で高度に発現されている。従って、これらの組織に関与する疾患における遺伝子の発現は、特に関連性がある。有意な発現が、甲状腺、胎盤、胎児腎臓、胎児心臓、およびリンパ節でも生じる。従って、遺伝子の発現は、同様にこれらの組織に関与する疾患にも関連性がある。さらに、図１３に示したように、より低いレベルの発現が、様々な他の組織で見られる。従って、遺伝子の発現は、これらの組織に関与する疾患にも関連性がある。
【０１４４】
１４６１８受容体は、活性化を伴うまたは伴わない様々な造血細胞にも発現している。この遺伝子は、ＣＤ３４＋骨髄細胞にも高度に発現している。従って、この遺伝子の発現は、様々な血液細胞前駆体に関連性がある。それ故、この遺伝子の発現は、任意の主要な血液細胞型の欠損に関与する疾患、すなわち好中球減少症、血小板減少症または貧血に関連している。この遺伝子はまた、可動化末梢血細胞巨核球（Ｇ−ＣＳＦで可動化）にも高度に発現している。従って、この遺伝子の発現は、血小板減少症などの血小板機能に関与する疾患に関連がある。有意な発現が、可動化末梢血細胞リンパ球、可動化骨髄ＣＤ３４−細胞、および臍帯血ＣＤ４３４−細胞にも見られる。従って、この遺伝子の発現は、これらの細胞の機能に関連があり、それ故、免疫機能または炎症に関与する疾患にも関連がある。さらに、遺伝子の発現は、活性化末梢血単核細胞にも生じる。活性化Ｂ細胞は、異なって遺伝子を発現する。従って、遺伝子の発現は、免疫機能および／または炎症に関与する疾患に関連がある。
【０１４５】
２８３８受容体は、図１５に示した細胞および組織に発現している。高レベルの発現が、リンパ節および胸腺に示される。従って、遺伝子の発現は、特に、これらの組織に関与する疾患に関連している。極めて高い発現が、ＣＤ８細胞および活性化Ｂ細胞に見られる。高発現が、Ｔヘルパー細胞（１および２）、ＣＤ４細胞およびジャーカット細胞（Ｔ細胞系）にも生じている。発現は、活性化Ｂ細胞および活性化Ｔヘルパー細胞で異なる。発現は、これらの両方の細胞型の活性化時に増加する。従って、遺伝子の発現は、免疫機能および炎症に関与する疾患に関連がある。この遺伝子はまた、顆粒球で有意に発現している。従って、この遺伝子の発現は、これらの細胞に関与する疾患に関連がある。
【０１４６】
図１６は、正常ヒト組織における１５３３４受容体の発現を示す。この遺伝子は、リンパ節、扁桃腺および膵臓で高度に発現している。従って、この遺伝子の発現は、これらの組織に関与する疾患に特に関連している。この遺伝子の発現はまた、大腸、精巣、胎盤、胎児心臓、および脾臓でも高い。従って、この遺伝子の発現は、これらの組織に関与する疾患にも関連している。さらに、この図は、数個の他の組織における低い発現レベルを示す。従って、この遺伝子の発現は、これらの組織に関与する疾患に関連性があり得る。１５３３４受容体の発現は、様々な造血細胞でも研究されている（図１７〜１９）。極めて高い発現が、初期巨核球および赤芽球に生じる。従って、この遺伝子の発現は、赤血球分化および巨核球分化に関連し、従って、貧血および血小板減少症の治療に関連している。さらに、この遺伝子の発現は、活性化Ｂ細胞に比較して、休止Ｂ細胞で有意に増加している。従って、この遺伝子の発現は、Ｂ細胞免疫機能に関連している。さらに、低いレベルの発現が、様々な他の造血系統の細胞に見られる。図１７参照。造血細胞における系統限定的様式でのこの遺伝子の発現により、発現は、系統細胞、赤血球／赤血球、または巨核球／血小板の発達の調節に関連している。
【０１４７】
脾臓に関連した疾患は、非特異的急性脾炎、鬱血性巨脾、および脾臓梗塞を含む脾腫大；新生物、先天性異常、および破裂を含むがこれに限定されない。脾腫大に関連した疾患は、非特異的脾炎、感染性単核球症、結核、腸チフス、ブルセラ症、サイトメガロウイルス、梅毒、マラリア、ヒストプラスマ症、トキソプラスマ症、カラアザール、トリパノソーマ症、住血吸虫症、レーシュマニア症、およびエキノコックス症などの感染；肝硬変、門脈または脾静脈血栓症、および心不全などの部分高血圧に関連した鬱血性状態；ホジキン病、非ホジキンリンパ腫／白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖疾患、溶血性貧血、および血小板減少性紫斑病などのリンパ血行性疾患；慢性関節リウマチおよび全身性エリテマトーデスなどの免疫−炎症疾患；ゴーシェ病、ニーマン・ピット病、およびムコ多糖症などの沈着病；および、アミロイド症、原発性新生物および嚢胞、および続発性新生物などの他の状態を含む。
【０１４８】
肺に関連した疾患は、先天性異常；無気肺；肺鬱血および浮腫（血行力学的肺浮腫および微小血管損傷、成人呼吸促迫症候群（び慢性肺胞傷害）、肺塞栓症、出血、および梗塞により引き起こされる浮腫を含む）、および肺性高血圧および血管硬化などの、血管を起源とする疾病；肺気腫、慢性気管支炎、気管支喘息、および気管支拡張症などの慢性閉塞性肺疾患；塵肺、サルコイドーシス、特発性肺繊維症、剥離性間質性肺炎、過敏症肺臓炎、肺好酸球増加症（好酸球増加症を伴う肺浸潤）、器質性肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、び慢性肺出血症候群（グッドパスチャー症候群、特発性肺ヘモジデリン沈着症および他の出血症候群を含む）、コラーゲン血管疾患における肺併発、および肺胞蛋白症などの、散在性間質性（浸潤性、拘束性）疾病；薬物誘導肺疾患、放射線誘導肺疾患、および肺移植などの治療合併症；気管支原性癌（腫瘍随伴症候群、細気管支肺胞上皮癌、気管支カルチノイド、種々の腫瘍および転移性腫瘍などの神経内分泌腫瘍を含む）などの腫瘍；炎症性胸水、非炎症性胸水、気胸症および胸膜腫瘍（孤立性繊維症（胸膜繊維腫）および悪性中皮腫を含む）を含む、胸膜の病態を含むがこれに限定されない。
【０１４９】
大腸に関連した疾患は、閉塞症および狭窄症、メッケル憩室、先天性神経節欠損巨大大腸−ヒルシュスプルング病などの先天性異常；下痢および赤痢、感染性全腸炎（ウイルス性胃腸炎、細菌性全腸炎を含む）、壊死性全腸炎、抗生物質性大腸炎（偽膜性大腸炎）、および膠原性およびリンパ性大腸炎、種々の腸炎症疾患（寄生虫および原虫を含む）、後天性免疫不全症候群、移植、薬物誘導腸損傷、放射線全腸炎、好中球減少症大腸炎（盲腸炎）、および分流性大腸炎などの全腸炎；クローン病および潰瘍性大腸炎などの特発性炎症性腸疾患；非新生物性ポリープ、腺腫、家族性症候群、大腸直腸発癌、大腸直腸癌、およびカルチノイド腫瘍を含むがこれに限定されない。
【０１５０】
肝臓に関連した疾患は、肝臓損傷；黄疸および胆汁鬱帯、例えばビリルビンおよび胆汁形成；肝不全および肝硬変、例えば、硬変、門脈圧亢進症（腹水、門脈体静脈短絡を含む）および脾腫大；ウイルス性肝炎（Ａ〜Ｅ型肝炎感染および他の肝炎ウイルスによる汗腺を含む）、臨床病理学的症候群（例えば保因状態、無症候性汗腺、急性ウイルス肝炎、慢性ウイルス肝炎、および劇症肝炎）などの感染性疾患；自己免疫肝炎；薬物および毒素誘導肝疾患、例えばアルコール性肝疾患；先天的代謝異常および小児肝疾患、例えば血色素症、ウィルソン病、α１−アンチトリプシン欠損症、および新生児肝炎；続発性胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆道炎および胆道樹の異常などの肝内胆道疾患；肝臓への血流障害（肝動脈欠損および門脈閉塞および血栓症を含む）、肝臓を通る血流障害（受動鬱血および小葉中心性壊死および肝紫斑病を含む）、肝静脈流出閉塞（肝静脈血栓症（バッド・キアリ症候群）および静脈閉塞性疾患を含む）などの循環器疾患；子癇前症および子癇、妊娠の急性脂肪肝、および肝内胆汁鬱帯などの、妊娠に関連した肝疾患；骨髄移植後の薬物毒性、移植片宿主疾患および肝拒絶、および肝同種移植片への非免疫学的傷害などの、臓器または骨髄移植の肝合併症；結節過形成、腺腫、および悪性腫瘍（肝臓の原発性腫瘍および転移性腫瘍を含む）などの腫瘍および腫瘍状態を含むがこれに限定されない。
【０１５１】
子宮および子宮内膜の関連した疾患は、月経周期の子宮内膜組織学；無排卵周期、不適切な黄体期、経口避妊薬および誘発性子宮内膜変化、および閉経期および閉経後変化などの、機能的子宮内膜疾患；慢性子宮内膜炎などの炎症；腺筋症；子宮内膜ポリープ；子宮内膜過形成；子宮内膜癌などの悪性腫瘍；悪性混合ミュラー腫瘍などの、混合ミュラーおよび間葉腫瘍；平滑筋腫、平滑筋肉腫、および子宮内膜間質腫瘍を含む、子宮筋の腫瘍を含むがこれに限定されない。
【０１５２】
脳に関連した疾患は、ニューロンに関連した疾患、および膠細胞、星状膠細胞、乏突起膠細胞、上衣細胞、および小膠細胞などの膠細胞に関連した疾患；脳浮腫、頭蓋内圧上昇およびヘルニア形成、および水頭；神経管、前脳異常、後頭蓋窩以上、および脊髄空洞症および脊髄水腫症などの、奇形および発達疾患；出世時脳損傷；低酸素、虚血、および梗塞（低血圧、低灌流、および局所的血液供給の閉塞に由来する低流動状態−全体的脳虚血および限局的脳虚血−の梗塞を含む）、頭蓋内出血（脳内（実質細胞内）出血、クモ膜下出血およびイチゴ状動脈瘤破裂を含む）、および血管形成異常、高血圧性脳疾患（ラクナ梗塞、細隙出血および高血圧性脳症を含む）；急性髄膜炎（急性化膿（細菌）髄膜炎および急性無菌（ウイルス）髄膜炎を含む）、急性焦点化膿性感染（脳膿瘍、硬膜下膿胸、および硬膜外膿瘍を含む）、慢性細菌髄膜脳炎（結核およびマイコバクテリウム症、神経梅毒および神経ボレリア症（ライム病）を含む）、ウイルス髄膜脳炎（節足動物媒介（Ａｒｂｏ）ウイルス脳炎、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス（帯状ヘルペス）、サイトメガロウイルス、灰白髄炎、狂犬病を含む）およびヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１髄膜脳炎（亜急性脳炎）、空胞性ミエロパシー、エイズ関連ミエロパシー、末梢神経障害、および小児エイズ、進行性多巣性白質脳症、亜急性硬化性全脳炎、真菌髄膜脳炎、神経系の他の感染病などの感染；伝染性海綿様脳症（プリオン病）；脱髄疾患（多発性硬化症、多発性硬化症変形、急性散在性脳脊髄炎および急性壊死性出血性脳脊髄炎、および脱髄を伴う他の疾病；大脳皮質に影響を及ぼす変性疾患（アルツハイマー病およびピック病を含む）、大脳基底核および脳幹の変性疾患（パーキンソン症、特発性パーキンソン病（振戦麻痺）、進行性核上麻痺、皮質基底変性を含む）、多系統萎縮（線条体黒質変性、シャイ−ドレーガー症候群およびオリーブ橋小脳萎縮症およびハンチントン病を含む）などの、変性疾患；脊髄小脳失調症（フリードライヒ運動失調症および毛細血管拡張性運動失調症を含む）を含む脊髄小脳変性、運動ニューロンに影響を及ぼす変性疾患（筋萎縮性側索硬化症（運動ニューロン疾患）、延髄脊髄萎縮症（ケネディー症候群）、および進行性脊髄性筋萎縮症を含む）；白質ジストロフィー（クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質ジストロフィー、ペリツェウス・メルツバッハー病およびカナバン病を含む）、ミトコンドリア脳筋症（リー病および他のミトコンドリア脳筋症を含む）などの先天性代謝障害；ビタミン欠乏症（例えばチアミン（ビタミンＢ１）欠乏症およびビタミンＢ１２欠乏症）、神経学的代謝妨害後遺症（低血糖、高血糖、および肝性脳症を含む）、中毒疾患（一酸化炭素、メタノール、エタノールを含む）、および照射（メトトレキサートと照射の併用から誘発される損傷を含む）を含む、中毒および後天性代謝疾患；繊維性（び慢性）星状細胞腫および多型膠芽細胞腫、毛様性星状細胞腫、多形黄色星状細胞腫を含む神経膠腫、および脳幹神経膠腫、乏突起細胞腫、および上皮細胞腫および関連脳室周囲塊病変、神経腫瘍、低分化新生物（髄芽細胞腫を含む）、他の実質腫瘍（原発性脳リンパ腫を含む）、胚細胞腫瘍、および松果体実質腫瘍、髄膜腫、転移性腫瘍、腫瘍随伴症候群、末梢神経鞘腫瘍（シュワン細胞腫、神経線維腫症、および悪性末梢神経鞘腫瘍（悪性神経鞘腫）を含む）、および神経皮膚症候群（母斑症）（１型神経繊維腫症（ＮＦ１）および２型神経線維腫症（ＮＦ２）を含む神経線維腫症、結節性硬化、およびフォン・ヒッペル−リンダウ病を含む）などの腫瘍を含むがこれに限定されない。
【０１５３】
Ｔ細胞に関連した疾患は、細胞性過敏症、例えば、遅延型過敏症およびＴ細胞性細胞毒性、および移植片拒絶；自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、全身性硬化症、炎症性ミオパシー、混合性結合性組織病、および結節性多発性動脈炎および他の脈管炎；胸腺形成不全、重症複合性免疫不全疾患、およびエイズなどの、原発性免疫不全を含むがこれに限定されない、免疫不全症候群；白血球減少症；白血球増多症、急性非特異的リンパ節炎、および慢性非特異的リンパ節炎を含むがこれに限定されない、反応性（炎症性）白血球増殖；急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢Ｔ細胞および末梢Ｔ細胞リンパ腫を含むナチュラルキラー細胞新生物、分類不可能な成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、菌状息肉腫およびセザリー症候群、およびホジキン病などの、前駆Ｔ細胞新生物といったリンパ系新生物を含むがこれに限定されない、白血球の新生物による増殖を含むがこれに限定されない。
【０１５４】
皮膚の疾患は、色素沈着およびメラニン形成細胞の疾患（白斑、雀卵斑、肝斑、黒子、母斑細胞性母斑、異形成性母斑、および悪性黒色腫を含むがこれに限定されない）；上皮腫瘍（脂漏性角化症、黒色表皮腫、繊維上皮ポリープ、上皮嚢腫、角化棘細胞腫、および付属器（付属体）腫瘍を含むがこれに限定されない）；悪性前および悪性表皮腫瘍（光線性角化症、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞を含むがこれに限定されない）；真皮腫瘍（良性繊維性組織球腫、隆起性皮膚繊維肉腫、黄色腫、および真皮血管腫瘍を含むがこれに限定されない）；皮膚へ細胞移入する腫瘍（組織球症Ｘ、菌状息肉腫（皮膚Ｔ細胞リンパ腫）および肥満細胞症を含むがこれに限定されない）；表皮成熟疾患（魚鱗癬を含むがこれに限定されない）；急性炎症性皮膚疾患（蕁麻疹、急性湿疹皮膚炎、および多型紅斑を含むがこれに限定されない）；慢性炎症性皮膚疾患（乾癬、扁平苔せん、およびエリテマトーデスを含むがこれに限定されない）；水疱様膨隆（水疱性）疾患（天疱瘡、類天疱瘡、疱疹性皮膚炎および非炎症性水疱様膨隆疾患：表皮水疱症およびポルフィリン症を含むがこれに限定されない）；表皮付属器疾患（尋常性ざ瘡を含むがこれに限定されない）；皮下脂肪組織炎（結節性紅斑および硬結性紅斑を含むがこれに限定されない）；および感染および侵襲（例えば、いぼ、伝染性軟属腫、膿か疹、表在真菌感染、および節足動物咬合、刺針、および侵襲）を含むがこれに限定されない。
【０１５５】
正常な骨髄では、骨髄球シリーズ（多形核細胞）は、細胞成分の約６０％を構成し、赤血球は２０〜３０％を構成する。リンパ球、単球、細網細胞、形質細胞および巨核球は、共に１０〜２０％を構成する。リンパ球は、正常な骨髄の５〜１５％を構成する。骨髄では、細胞型を、赤血球の前駆体（赤芽球）、マクロファージ（単芽球）、血小板（巨核球）、多形核白血球（骨髄芽球）、およびリンパ球（リンパ芽球）が１つの顕微鏡視野で見えるように加えて混合する。さらに、幹細胞が、異なる細胞系のために存在し、並びに、前駆幹細胞が、異なる系統の委任前駆細胞のために存在する。様々な種類の細胞および各段階は、当業者には公知であり、例えば、免疫学、免疫病理学および免疫、第５版、Ｓｅｌｌら、ＳｉｍｏｎおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ（１９９６）の４２ページ（図２〜８）に見られ、これは骨髄に見られる細胞型のその教義のために参考として取込む。従って、本発明は、これらの細胞から生じる疾患に関する。これらの疾患は、以下を含むがこれに限定されない：造血幹細胞に関与する疾患；委任リンパ系前駆細胞；ＢおよびＴ細胞を含むリンパ球；委任骨髄前駆体（単球、顆粒球、巨核球を含む）；および委任赤血球前駆体に関する疾患。これらは、白血病（Ｂリンパ系白血病、Ｔリンパ系白血病、未分化白血病を含む）；赤白血病、巨核芽球性白血病、単球性白血病；［白血病は、分化を伴いおよび伴わずに包含される］；慢性および急性骨髄芽球性白血病、慢性および急性リンパ急性白血病、慢性および急性骨髄性白血病、リンパ腫、骨髄異常形成症候群、慢性および急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病；慢性および急性骨髄芽球性白血病、慢性および急性骨髄性白血病、慢性および急性前骨髄球性白血病、慢性および急性骨髄球性白血病、単球−マクロファージ系統の血液学的悪性疾患、例えば、若年性慢性骨髄性白血病；続発性ＡＭＬ、前駆血液学的疾患；不応性貧血；再生不良性貧血；反応性皮膚血管内リンパ腫；樹状細胞の発現変化に関連した繊維性疾患、全身性硬化を含む疾患、Ｅ−Ｍ症候群、流行性毒性油症候群、好酸球性筋膜炎局在形の強皮症、ケロイド、および繊維性大腸疾患；血管腫様悪性繊維性組織球腫；原発性頭頸部扁平上皮癌を含む癌；カポジ肉腫を含む肉腫；哺乳動物繊維腺腫を含む、繊維腺腫および葉状腫瘍；間質腫瘍；組織球腫を含む葉状腫瘍；赤芽球症；神経線維腫症；血管内皮の疾患；脱髄、特に古い病巣において；血管原性浮腫、血管疾患、アルツハイマー病およびパーキンソン病；Ｔ細胞リンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫を含むがこれに限定されない。
【０１５６】
心臓に関連した疾患は、心不全（心肥大、左側心不全および右側心不全を含むがこれに限定されない）；虚血性心疾患（狭心症、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、および急性心臓死を含むがこれに限定されない）；高血圧性心疾患（全身性（左側）高血圧性心疾患および肺性（右側）高血圧性心疾患を含むがこれに限定されない）；心臓弁膜症（石灰化大動脈狭窄、先天性二尖大動脈弁の石灰化、および僧帽状輪状石灰化などの石灰化、および僧帽弁の粘液腫性変性（僧帽弁逸脱）、リウマチ熱およびリウマチ性心疾患、感染性心内膜炎、および非感染組織過形成、例えば、非細菌性血栓性心内膜炎および全身性エリテマトーデスの心内膜炎（リブマン・ザックス病）、カルチノイド心疾患、および人工弁の合併症により引き起こされる弁変性を含むがこれに限定されない）、心筋疾患（拡張型心筋症、肥大型心筋症、収縮性心筋症、および心筋炎を含むがこれに限定されない）；心膜疾患（心膜滲出および心膜血腫および心外膜炎（急性心外膜炎および治癒心外膜炎を含む）およびリウマチ様心疾患を含むがこれに限定されない）；新生物性心疾患（原発性心腫瘍、例えば、粘液腫、脂肪腫、乳頭繊維弾性腫、横紋筋腫、および肉腫、および非心性新生物の心臓効果を含むがこれに限定されない）；鬱血性心不全（左−右短絡−後期チアノーゼ、例えば、心房中隔欠損症、心室中隔欠損症、動脈管開存、および房室中隔欠損、右−左短絡−初期チアノーゼ、例えば、ファロー四微症、大動脈転位、動脈幹、三尖弁閉鎖、および全肺静脈接続異常、閉塞性先天性異常、例えば、大動脈の縮窄、肺動脈弁狭窄および閉鎖症、および大動脈弁狭窄および閉鎖症、および心臓移植に関する疾患を含むがこれに限定されない）を含むがこれに限定されない。
【０１５７】
血管に関与する障害には、以下が含まれるが、これらに限定されない：損傷に対する血管壁の反応（内皮機能障害および内皮活性化ならびに内膜肥厚など）；先天性奇形を含む血管疾患（動静脈瘻、アテローム性動脈硬化症、および高血圧性血管疾患（高血圧など）など）（これらに限定されない）；炎症性疾患−−脈管炎（巨細胞性（側頭）動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎（古典的）、川崎病（皮膚粘膜リンパ節症候群）、微視的多発性血管炎（微視的多発性動脈炎、過敏症、または白血球破砕性血管炎）、ヴェグナー肉芽腫症、閉塞性血栓血管炎（バーガー病）、他の障害に関連する脈管炎および感染性動脈炎など）；レイノー病；動脈瘤および解離（腹部大動脈瘤、梅毒性動脈瘤、および動脈解離など）；静脈およびリンパの疾患（拡張蛇行静脈、血栓性静脈炎および静脈血栓症、上大静脈の閉塞（上大静脈症候群）、下大静脈の閉塞（下大静脈症候群）、ならびにリンパ管炎およびリンパ水腫など）；良性腫瘍および腫瘍様病態を含む腫瘍（血管腫、リンパ管腫、グロムス腫瘍（グロムス血管腫）、血管拡張症、細菌性血管腫症など）および中程度（低い悪性度の境界）の腫瘍（カポジ肉腫および血管内皮腫など）、および悪性腫瘍（血管肉腫および血管外皮細胞腫など）；および血管疾患における治療介入の病理学（バルーン血管形成および関連技術）および血管置換（冠状動脈バイパス術）が含まれる。
【０１５８】
赤血球に関連する障害には、以下の貧血が含まれるが、これらに限定されない：遺伝性球状赤血球症、赤血球酵素欠乏による溶血性疾患（グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ欠乏症）、鎌状赤血球病、サラセミア症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫溶血性貧血、および赤血球に対する外傷に起因する溶血性貧血を含む溶血性貧血；および巨赤芽球性貧血を含む赤血球生成の減少による貧血（ビタミンＢ１２欠乏による貧血（悪性貧血）；葉酸欠乏による貧血、鉄欠乏性貧血、慢性病による貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆、および他の形態の骨髄不全など）。
【０１５９】
胸腺に関与する障害には、発達障害（胸腺形成不全症または無形成症を伴うディ・ジョージ症候群）；胸腺嚢胞；胸腺形成不全症（胸腺内のリンパ濾胞の出現に関与し、リンパ濾胞過形成を発症する）；胸腺腫（生殖細胞腫を含む）、リンパ腫、ホジキン病、およびカルチノイドなどが含まれる。胸腺腫には、良性または被膜を有する胸腺腫、および胸腺癌と呼ばれる悪性胸腺腫Ｉ型（浸潤性胸腺腫）またはＩＩ型を含むことができる。
【０１６０】
Ｂ細胞に関与する障害には、Ｂ細胞前駆体新生物（リンパ芽球性白血病／リンパ腫など）が含まれるがこれらに限定されない。末梢性Ｂ細胞新生物には、以下が含まれるが、これらに限定されない：慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、び慢性大Ｂ細胞型リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞性真性物、多発性骨髄腫および関連する状態、リンパ形質細胞性リンパ腫（ヴァルデンストレームマクログロブリン血症）、外套細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫（ＭＡＬＴ腫）、および毛様細胞白血病。
【０１６１】
腎臓に関連する障害には、以下が含まれるがこれらに限定されない：先天性奇形（腎臓の嚢胞性疾患（嚢胞性腎形成異常、常染色体優性（成人）腎多嚢胞病、常染色体劣性（幼児）腎多嚢胞病）（これらに限定されない）および腎髄質の嚢胞性疾患（髄質性海綿腎、ネフロン肺結核−尿毒症性嚢胞性疾患複合体、）（これらに限定されない）；後天性（透析関連）嚢胞性疾患（孤立性嚢胞など））；糸球体損傷の病状を含む糸球体疾患（ｉｎ ｓｉｔｕ免疫複合体蓄積を含むがこれに限定されない）（抗ＧＢＭ腎炎、ヘイマン腎炎、移植抗原に対する抗体、循環免疫複合体腎炎、糸球体細胞に対する抗体、糸球体腎炎における細胞性免疫、第二経路の活性化、上皮細胞損傷、および細胞および可溶性メディエーターを含む糸球体損傷のメディエーターに関与する病態、急性糸球体腎炎（急性増殖性（連鎖球菌後、感染後）糸球体腎炎（連鎖球菌感染後糸球体腎炎および非連鎖球菌感染後急性糸球体腎炎を含むがこれらに限定されない）、急速進行性（半月体形成性）糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、膜性糸球体腎炎（膜性腎症）、微小変化疾患（リポイドネフローゼ）、巣状分節状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症（バージャー病）、層状増殖性および壊死性糸球体腎炎（層状糸球体腎炎）、遺伝性腎炎（アルポート症候群および薄膜疾患（両性家族性血尿）が含まれるがこれらに限定されない）など）、慢性糸球体腎炎、全身性疾患に関連する糸球体損傷（全身性紅斑性狼瘡、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、細菌性心内膜炎、糖尿病性糸球体硬化症、アミロイドーシス、繊維性および免疫タクトイド糸球体腎炎、ならびに他の全身性障害が含まれるがこれらに限定されない））（これらに限定されない））；急性尿細管壊死および尿細管間質性腎炎を含む細管および間質に影響を与える疾患（腎盂腎炎および逆流性腎症、急性腎盂腎炎、慢性腎盂腎炎、および逆流性腎症が含まれるがこれらに限定されない）、薬物および毒素によって誘導される尿細管間質性腎炎（急性薬物誘導性間質性腎炎、鎮痛薬乱用による腎症、非ステロイド性抗炎症薬に関連する腎症が含まれるが、これらに限定されない）、および他の尿細管間質性疾患（尿酸腎症、高カルシウム血症および腎石灰沈着症ならびに多発性骨髄腫が含まれるが、これらに限定されない）；良性腎硬化症、悪性高血圧症、および促進性腎硬化症、腎動脈狭窄症、および血栓性微小血管症を含む血管の疾患（古典的（幼児期）溶血性尿毒症症候群、成人溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、特発性ＨＵＳ／ＴＴＰが含まれるが、これらに限定されない）、他の血管疾患（アテローム硬化性虚血性腎疾患、鎌状赤血球腎症、汎発性皮質性壊死、および腎梗塞が含まれるが、これらに限定されない）；尿路閉塞（閉塞性尿路疾患）；尿路結石症（尿結石）；および腎臓腫瘍（良性腫瘍（腎乳頭腺種、腎線維腫または過誤腫（腎肥大性（ｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌａｒｙ）間細胞腫瘍）、血管筋脂肪腫、および膨大細胞腫などならびに悪性腫瘍（腎盂の尿路上皮癌を含む腎細胞癌（副腎腫、腎臓腺癌）を含む））が含まれるが、これらに限定されない）。
【０１６２】
乳房の疾患には、以下が含まれるが、これらに限定されない：発育障害；炎症（急性乳腺炎、乳管周辺の乳腺炎、乳周辺の乳腺炎（再発性乳輪下膿瘍、乳管扁平上皮細胞化生）、乳管拡張症、脂肪壊死、肉芽腫性乳腺炎、およびシリコン乳房植込みに関連する病態が含まれるが、これらに限定されない）；繊維細胞の変化；増殖性乳房疾患（上皮性過形成、硬化性腺症、および小管乳頭腫が含まれるが、これらに限定されない）；腫瘍（間質腫瘍（線維腺種、葉状腫瘍、および肉腫など）および上皮性腫瘍（大管乳頭腫など））が含まれるが、これらに限定されない）；ｉｎ ｓｉｔｕでの腺管癌（パジェット病を含む）およびｉｎ ｓｉｔｕでの小葉癌を含むｉｎ ｓｉｔｕ（非浸潤性）癌および浸潤性（浸潤）癌（浸潤性腺管癌（非特異型）、浸潤性小葉癌、髄葉癌、膠様（粘液性）癌腫、管状腺癌、および浸潤性乳頭状癌が含まれるが、これらに限定されない）、および種々の悪性新生物を含む乳癌。
【０１６３】
男性の胸部の疾患には、女性化乳房および癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６４】
精巣および精巣上体に関与する障害には、以下が含まれるが、これらに限定されない：奇形（停留睾丸など）、退行性病変（萎縮など）、炎症（（非特異性精巣上体炎および精巣炎など）、肉芽腫性（自己免疫）睾丸炎、および特異性炎症（淋病、おたふく風邪、結核、および梅毒を含むがこれらに限定されない））、ねじれを含む血管障害、生殖細胞のねじれを含む精巣腫瘍（精上皮腫、精母細胞精上皮腫、胚性癌腫、卵黄嚢腫瘍絨毛腫、奇形腫、および混合腫瘍を含むが、これらに限定されない）、性索−性腺支質の腫瘍（ライディッヒ（間質性）細胞腫瘍およびセルトーリ細胞腫瘍（男性ホルモン細胞産生腫）ならびに精巣リンパ腫を含むがこれらに制限されない）、鞘膜の週の損傷。
【０１６５】
前立腺に関与する障害には、以下が含まれるが、これらに限定されない：炎症、良性肥厚（例えば、結節性再生（良性前立腺肥大または肥厚））、および腫瘍（癌など）。
【０１６６】
甲状腺に関与する障害には、以下が含まれるが、これらに限定されない：甲状腺機能亢進症；甲状腺機能低下症（クレチン症および粘液水腫が含まれるが、これらに限定されない）；甲状腺炎（橋本病、亜急性（肉芽腫性）甲状腺炎、亜急性リンパ球性（無痛）甲状腺炎が含まれるが、これらに限定されない）；グレーヴズ病；び慢性および多結節性甲状腺炎（び慢性無毒性（単一性）甲状腺炎および多結性甲状腺炎が含まれるが、これらに限定されない）；腺腫、他の良性腫瘍、および癌を含むがこれらに限定されない甲状腺新生物（乳頭状癌、濾胞腺癌、髄様癌、および退形性癌が含まれるが、これらに限定されない）；および両性器（ｃｏｇｅｎｉｔａｌ）奇形。
【０１６７】
骨格筋に関連する障害には、横紋筋肉腫などの腫瘍が含まれる。
【０１６８】
膵臓に関連する障害には、以下が含まれる：両性器奇形などの膵外分泌機能障害（異所性膵炎が含まれるがこれに限定されない）；嚢胞（偽性嚢胞が含まれるがこれらに限定されない）；腫瘍（嚢胞性腫瘍および膵臓癌が含まれるがこれらに限定されない）；内分泌性膵臓（真性糖尿病など）；島細胞腫瘍（膵島細胞腺種、ガストリン産生腫瘍、および他の稀な島細胞腫瘍が含まれるがこれらに限定されない）。
【０１６９】
小腸に関連する障害には、以下が含まれるが、これらに限定されない：吸収不良症候群（腹腔スプルー、熱帯性スプルー（感染後スプルー）など）、ホウィップル病、ジサッカリダーゼ（ラクターゼ）欠乏症、無βリポタンパク質血症、腺腫および腺癌を含む小腸の腫瘍。
【０１７０】
血小板減少（血小板減少症）に関連する障害には、特発性血小板減少性紫斑病（優勢特発性血小板減少性紫斑病を含む）、薬物誘導性血小板減少症、ＨＩＶ関連血小板減少症、および血栓性微小血管症；血栓性血小板減少性紫斑病および溶血性尿毒症症候群が含まれる。
【０１７１】
Ｔ細胞前駆体新生物に関連する障害には、Ｔリンパ芽球前駆体白血病／リンパ腫が含まれる。末梢性Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞新生物に関連する障害には、慢性Ｔリンパ球性白血病、大顆粒球リンパ性白血病、菌状息肉腫およびセザリー症候群、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、不特定の血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫（ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫４ａ）、腸管Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、および未分化大細胞リンパ腫が含まれる。
【０１７２】
卵巣に関連する疾患には、例えば、以下が含まれる：多嚢胞卵巣、スタイン−リーヴェンサール症候群、腹膜偽粘液腫、および間質性卵胞莢膜増殖症；卵巣腫瘍（体腔上皮腫瘍、漿液性腫瘍、粘液性腫瘍、子宮内腫瘍、明細胞腺癌、嚢腺線維腫、ブレンナー腫瘍、表面上皮腫瘍など）；生殖細胞腫瘍（成熟（良性）奇形腫、単胚葉奇形腫、未熟型悪性奇形腫、未分化胚細胞腫、内胚葉洞腫瘍、絨毛癌など）；性索−吻合部腫瘍（顆粒膜細胞−卵胞膜細胞腫、テコーマ−線維腫、男性ホルモン産生細胞腫、丘細胞腫瘍、および性腺芽腫など）；および転移性腫瘍（クルーケンベルク腫瘍など）。
【０１７３】
骨形成細胞には、骨芽前駆細胞、骨芽細胞、および骨細胞が含まれる。骨疾患は、これらの細胞が任意のその発達段階の間に骨格に影響を与え得るので複雑である。したがって、骨障害は、種々の症状を有し、身体の１つ、複数、または全ての骨に関与し得る。このような障害には、以下が含まれる：先天性奇形、軟骨形成不全、および壊死性小人症、異常な基質に関連する疾患（Ｉ型コラーゲン疾患など）、骨粗鬆症、パジェット病、くる病、骨軟化症、高代謝回転骨形成異常、低代謝回転の再生不良疾患、骨壊死、化膿性骨髄炎、結核性骨髄炎、骨腫、類骨骨腫、骨芽細胞腫、骨肉腫、骨軟骨腫、軟骨腫、軟骨粘液線維腫、軟骨肉腫、線維性皮質欠損症、線維性骨異形成、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、ユーイング肉腫、未分化神経外胚葉性腫瘍、巨細胞腫、および転移性腫瘍。
【０１７４】
したがって、受容体ポリペプチドは、特に上記で開示のような受容体タンパク質の異常な発現または活性によって特徴づけられる受容体関連障害の治療に有用である。１つの実施形態では、本方法は、薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）またはタンパク質の発現もしくは活性を調節する（例えば、アップレギュレートするかダウンレギュレートする）薬剤の組み合わせの投与を包含する。別の実施形態では、本発明は、タンパク質発現の減少または異常を補正するための治療として、タンパク質を投与するステップを包含する。
【０１７５】
タンパク質活性の刺激は、タンパク質が異常にダウンレギュレートされる、そして／またはタンパク質活性の増加がおそらく有利な効果を有する条件において望ましい。同様に、タンパク質活性の阻害は、タンパク質が異常にアップレギュレートされる、そして／またはタンパク質活性の減少がおそらく有利な効果を有する条件において望ましい。このような条件の一例では、被験体は、異常な発達または細胞分裂によって特徴づけられる障害を有する。このような条件の別の例では、被験体は、異常な造血反応によって特徴づけられる増殖疾患（例えば、癌）または障害を有する。このような条件の別の例では、患者の組織再生を達成することが望ましい（例えば、被験体が脳および脊髄損傷を有する場合、調節した様式で神経組を再生することが望ましい）。
【０１７６】
本発明のさらに別の態様では、本発明のタンパク質を「おとりタンパク質（ｂａｉｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）」として、２ハイブリッドアッセイまたは３ハイブリッドアッセイ（米国特許第５，２８３，３１７号、Ｚｅｒｖｏｓら、１９９３、Ｃｅｌｌ、７２、２２３〜２３２、Ｍａｄｕｒａら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８、１２０４６〜１２０５４、Ｂａｒｔｅｌら、１９９３、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１４、９２０〜９２４、Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、８、１６９３〜１６９６、およびＢｒｅｎｔ　ＷＯ　９４／１０３００を参照のこと）で使用して、本発明のタンパク質と結合するか相互作用する他のタンパク質（捕獲タンパク質）を同定し、その活性を調節することができる。
【０１７７】
２８３８受容体ポリペプチドはまた、特に、造血細胞（ヘルパーＴ細胞（１および２）、Ｂ細胞、および顆粒球など）において受容体タンパク質によって媒介される疾患または疾患の素因の診断用の標的を獲得するのに有用である。１４６１８受容体ポリペプチドはまた、特に、乳房、骨格、筋肉、およびリンパ節ならびにＣＤ３４＋前駆細胞およびこれらの前駆体によって産生される細胞（赤血球、リンパ球、および巨核球系）において受容体タンパク質によって媒介される疾患または疾患の素因の診断用の標的を獲得するのに有用である。１５３３４受容体ポリペプチドはまた、特に、膵臓、脾臓、扁桃腺、およびリンパ節ならびに巨核球および赤芽球系において受容体タンパク質によって媒介される疾患または疾患の素因の診断用の標的を獲得するのに有用である。したがって、本方法は、細胞、組織、または器官における受容体タンパク質の存在またはそのレベルの同定を提供する。本方法には、相互作用を検出することができるような、生物学的サンプルと受容体タンパク質との相互作用が可能な化合物との接触を含む。
【０１７８】
受容体タンパク質検出用の１つの薬剤は、受容体タンパク質に選択的に結合することができる抗体である。生物学的サンプルには、被験体から単離した組織、細胞、および生物学的体液、ならびに被験体に存在する組織、細胞、および体液が含まれる。
【０１７９】
受容体タンパク質はまた、種々の受容体タンパク質を有する患者における活動性疾患または疾患の素因の診断用の標的を提供する。したがって、受容体タンパク質を生物学的サンプルから単離し、異常な受容体タンパク質となる遺伝子変異の存在についてアッセイすることができる。これには、（異常なスプライシングの結果としての）アミノ酸の置換、欠失、挿入、再配列、および不適切な翻訳後修飾が含まれる。分析法には、電気泳動での移動度の変化、トリプティックペプチドの変化、細胞ベースのアッセイまたは無細胞アッセイにおける受容体活性の変化、リガンドまたは抗体結合パターンの変化、等電点の変化、直接的アミノ酸配列決定、およびタンパク質の変異の検出に有用な任意の他の公知のアッセイ技術が含まれる。
【０１８０】
受容体タンパク質検出用のｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈澱および免疫蛍光が含まれる。あるいは、タンパク質を、被験体への標識抗受容体抗体の移入によって、被験体においてｉｎ ｖｉｖｏで検出することができる。例えば、抗体を、被験体中での存在および位置が標準的な画像技術で検出することができる放射性マーカーで標識することができる。被験体において発現する受容体タンパク質の対立遺伝子変異型を検出する方法およびサンプルにおける受容体タンパク質の断片を検出する方法が特に有用である。
【０１８１】
受容体ポリペプチドはまた、薬理ゲノム学的分析に有用である。薬理ゲノム学は、患者における薬物の性質の変化および異常な作用による、薬物反応における臨床的に有意な遺伝的変異型を取扱う。Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ、１９９７、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏ．、２３（１０−１１）、９８３〜９８５、１９９６、およびＬｉｎｄｅｒ、１９９７、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４３（２）、２５４〜２６６を参照のこと。これらの変異体の臨床的結果により、一定の個体において治療薬の毒性が増し、個体の代謝の変異型の結果として一定の個体において薬物治療が失敗する。したがって、個体の遺伝子型は、治療化合物が身体に作用する方法または身体が化合物を代謝する方法を同定することができる。さらに、薬物代謝酵素活性は、薬物作用の強度および持続時間の両方に影響を与える。したがって、個体の薬理ゲノム学により、個体の遺伝子型に基づいた予防または治療に有効な化合物およびこのような化合物の有効投薬量の選択が可能になる。いくつかの薬物代謝酵素における遺伝的多形の発見により、何故患者によって予想される薬物効果を得ることができないのか、薬物効果の悪化を示すのか、または標準的な薬物投薬量で毒性が強くなるのかが説明されている。強い代謝物の遺伝子型および弱い代謝物の遺伝子型において、多形を発現することができる。したがって、遺伝的多形により、１つの集団における１つまたは複数の受容体機能が別の集団の受容体機能と異なる受容体タンパク質の対立遺伝子タンパク質変異型を得ることができる。したがって、ポリペプチドで、標的が治療様式に影響を与えることができる遺伝的素因を確認できる。したがって、リガンドベースの治療において、多形により、アミノ末端細胞外ドメインおよび／またはリガンド結合において多少活性なリガンド結合領域、および受容体の活性化を得ることができる。したがって、リガンドの投薬量は、多形を含む所与の集団内での治療効果を最大にするために改変するする必要があるだろう。
【０１８２】
受容体ポリペプチドはまた、臨床試験および他の治療中の治療効果の監視に有用である。したがって、遺伝子発現、タンパク質レベル、または受容体活性を増加または減少させるように設計された薬剤の治療効果を、終点標的として受容体ポリペプチドを用いて、治療クールにわたり監視することができる。監視ステップは、例えば、以下であり得る：（ｉ）薬物投与前に被験体から投与前サンプルを得るステップ、（ｉｉ）投与前サンプルにおける特定のタンパク質の発現または活性レベルを検出するステップ、（ｉｉｉ）被験体から１つまたは複数の投与後サンプルを得るステップ、（ｉｖ）投与後サンプルにおけるタンパク質の発現または活性レベルを検出するステップ、（ｖ）投与前サンプルにおけるタンパク質と投与後サンプルにおけるタンパク質の発現または活性レベルを比較するステップ、（ｖｉ）以上により、被験体に対する薬剤投与を増加または減少させるステップ。
【０１８３】
受容体ポリペプチドはまた、受容体関連疾患の治療に有用である。したがって、治療法には、リガンド結合を競合する受容体タンパク質の可溶性受容体または断片の使用が含まれる。これらの受容体または断片は、有効な競合を得るためにリガンドに対する高い親和性を有し得る。
【０１８４】
抗体
本発明はまた、２８３８、１４６１８、および１５３３４受容体タンパク質およびその変異型および断片に選択的に結合する抗体を提供する。抗体は、受容体タンパク質と実質的に相同ではない他のタンパク質にも結合するとしても、選択的に結合すると考える。これらの他のタンパク質は、受容体タンパク質断片またはドメインと相同性を共有する。特異的領域におけるこの保存により、相同的配列によって両タンパク質と結合する抗体が得られる。この場合、受容体タンパク質に結合する抗体は、依然として選択的であることが理解されるであろう。
【０１８５】
抗体を作製するために、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体調製の標準的な技術を使用し、単離された受容体ポリペプチドを免疫原として使用して、抗体を作製する。全長タンパク質または抗原ペプチド断片のいずれかを使用することができる。高い抗原性指数を有する領域を、図２、図６、および図１０に示す。
【０１８６】
抗体を、これらの領域またはこれらの領域の不連続な断片から調製することが好ましい。しかし、抗体を、本明細書中に記載のペプチドの任意の領域から調製することができる。好ましい断片は、リガンド結合を減少させるか完全に阻害する抗体を作製する。受容体の全てまたは受容体の一部（例えば、細胞内カルボキシ末端ドメイン、アミノ末端細胞外ドメイン、全膜貫通ドメインもしくは特異的セグメント、任意の細胞内もしくは細胞外ループ、または上記の任意の部分）に対する抗体を産生することができる。抗体を、特定の機能部位（リガンド結合部位、Ｇタンパク結合部位、またはリン酸化、グリコシル化、もしくはミリスチル化された部位）に対して産生することもできる。
【０１８７】
抗原性２８３８断片は、典型的には、少なくとも８つの連続したアミノ酸残基を含む。しかし、抗原ペプチドは、連続する少なくとも１２、１４アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、または少なくとも３０アミノ酸残基を含むことができる。１つの実施形態では、断片は、タンパク質表面上に位置する領域（例えば、親水性領域）に対応する。しかし、これらの断片は、本発明の前に開示され得る任意の断片を包含すると解釈されない。
【０１８８】
抗原性１４１６８断片は、典型的には、少なくとも９つの連続したアミノ酸残基を含む。しかし、抗原ペプチドは、連続する少なくとも１２、１４アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、または少なくとも３０アミノ酸残基を含むことができる。１つの実施形態では、断片は、タンパク質表面上に位置する領域（例えば、親水性領域）に対応する。しかし、これらの断片は、本発明の前に開示され得る任意の断片を包含すると解釈されない。
【０１８９】
抗原性１５３３４断片は、典型的には、少なくとも８つの連続したアミノ酸残基を含む。しかし、抗原ペプチドは、連続する少なくとも１２、１４アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、または少なくとも３０アミノ酸残基を含むことができる。１つの実施形態では、断片は、タンパク質表面上に位置する領域（例えば、親水性領域）に対応する。しかし、これらの断片は、本発明の前に開示され得る任意の断片を包含すると解釈されない。
【０１９０】
抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。インタクトな抗体またはその断片（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）を使用することができる。
【０１９１】
抗体の検出可能な物質とのカップリング（すなわち、物理的結合）によって検出を容易にすることができる。検出可能な物質の例には、種々の酵素、置換基、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な置換基複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例として、ルミノールが含まれる。生物発光物質の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが含まれる。適切な放射性物質の例として、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが含まれる。
【０１９２】
適切な免疫原性調製物は、天然もしくは組換えて発現させたタンパク質もしくは化学合成ペプチド由来であり得る。
【０１９３】
抗体の用途
抗体を使用して、標準的な技術（アフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降）によって受容体タンパク質を単離することができる。抗体は、細胞由来の天然の受容体および宿主において発現させた組換えて産生させた受容体タンパク質の生成を容易にすることができる。
【０１９４】
抗体は、生物の種々の組織の間および正常な発達時の受容体の発現パターンを決定するために、細胞または組織における受容体タンパク質の存在の検出に有用である。
【０１９５】
発現量および発現パターンを評価するために、抗体を使用して、ｉｎ ｓｉｔｕ、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ、または細胞溶解物中、または上清中の受容体タンパク質を検出することができる。
【０１９６】
抗体を使用して、発達中の異常な組織の分布または異常な発現を評価することができる。
【０１９７】
全長受容体タンパク質の循環断片の抗体検出を使用して、受容体代謝回転を同定することができる。
【０１９８】
さらに、抗体を使用して、疾患の活動段階などの疾患段階または受容体機能に関連する疾患に対する素因を有する個体における受容体発現を評価することができる。不適切な組織の分布、発達の発現、または受容体タンパク質の発現レベルによって障害が起こる場合、正常な受容体タンパク質に対する抗体を調製することができる。障害が、受容体タンパク質における特異的変異によって特徴づけられる場合、この変異タンパク質に特異的な抗体を使用して、特異的変異受容体タンパク質の存在をアッセイすることができる。
【０１９９】
抗体を使用して、生物の種々の組織中の細胞の正常および異常な細胞下の局在性を評価することもできる。抗体は、全受容体または受容体の一部（例えば、アミノ末端の細胞外ドメインまたは細胞外ループの一部）に対して作製することができる。
【０２００】
診断的用途を、遺伝子試験においてだけでなく、治療様式の監視においても適用することができる。したがって、治療が受容体発現レベルまたは異常な受容体の存在および異常な組織の分布または発達発現の回収を最終目的とする場合、受容体または関連断片に指向する抗体を使用して、治療効率を監視することができる。
【０２０１】
したがって、抗体を診断に使用して、例えば、所与の治療計画の効果を同定するために、臨床試験法の一部として組織におけるタンパク質レベルを監視することができる。
【０２０２】
さらに、抗体は、薬理ゲノム学的分析に有用である。したがって、多形受容体タンパク質に対して調製した抗体を使用して、治療計画の修正が必要な個体を同定することができる。
【０２０３】
抗体はまた、電気泳動での移動度、等電点、トリプティックペプチド消化、および当業者に公知の他の物理学的アッセイによって分析される異常な受容体タンパク質用の免疫学的マーカーとしての診断ツールとして有用である。
【０２０４】
抗体はまた、組織分類に有用である。したがって、特異的受容体タンパク質が特異的組織における発現に対応している場合、この受容体タンパク質に特異的な抗体を使用して組織の型を同定することができる。
【０２０５】
抗体はまた、法医学的同定に有用である。したがって、個体が特異的多形タンパク質が得られる特異的遺伝的多形性に対応している場合、多形タンパク質に特異的なタンパク質を、同定の補助として使用することができる。
【０２０６】
抗体はまた、受容体機能の阻害（例えば、リガンド結合の阻害）に有用である。
【０２０７】
これらの用途を、治療が受容体機能の阻害を含むような治療状況に適用することができる。抗体を使用して、例えば、リガンド結合を阻害することができる。機能に必要な部位を含む特異的断片または細胞に会合したインタクトな受容体に対して抗体を調製することができる。
【０２０８】
完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療に特に望ましい。このヒト抗体作製技術の概要は、Ｌｏｎｂｅｒｇ　ａｎｄ　Ｈｕｚａｒ、１９９５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３、６５〜９３を参照こと。このヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体の作製技術およびこのような抗体の作製プロトコールの詳細な考察は、例えば、米国特許第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、および同第５，５４５，８０６号を参照のこと。
【０２０９】
本発明はまた、生物学的サンプル中の受容体タンパク質の存在を検出するための抗体を用いたキットを含む。キットは、生物学的サンプル中の受容体タンパク質検出用の抗体（標識抗体または標識可能な抗体など）および化合物または薬剤、サンプル中の受容体タンパク質の量を同定する手段、およびサンプル中の受容体タンパク質量と標準とを比較する手段を含むことができる。化合物または薬剤を、適切な容器に封入することができる。さらに、キットは、受容体タンパク質を検出するためのキットを使用するための指示を含む。
【０２１０】
ポリヌクレオチド
配列番号２のヌクレオチド配列を、ヒト全長ｃＤＮＡの配列決定によって得た。
配列番号４のヌクレオチド配列を、ヒト全長ｃＤＮＡの配列決定によって得た。
配列番号６のヌクレオチド配列を、ヒト全長ｃＤＮＡの配列決定によって得た。
【０２１１】
特別に開示したｃＤＮＡは、コード領域ならびに５’および３’非翻訳配列（配列番号２、配列番号４、および配列番号６）を含む。
【０２１２】
ヒト２８３８受容体ｃＤＮＡは、約１６１７ヌクレオチド長であり、約３１９アミノ酸残基長である全長タンパク質をコードする。核酸は、脾臓、精巣、結腸、および末梢血リンパ球ならびに図１５に記載の組織において発現する。配列番号１のアミノ酸の構造分析を、図３にヒドロパシープロットとして示す。図は、７回膜貫通セグメント、アミノ末端の細胞外ドメイン、およびカルボキシ末端の細胞内ドメインの推定構造を示す。
【０２１３】
ヒト１４６１８受容体ｃＤＮＡは、約１３５８ヌクレオチド長であり、約３３７アミノ酸残基長である全長タンパク質をコードする。核酸は、脾臓、および末梢血リンパ球、乳房、骨格筋、および図１３に記載の他の組織ならびに図１４に記載の種々の造血細胞、特に、巨核球およびＣＤ３４＋細胞において発現する。配列番号３のアミノ酸の構造分析を、図７にヒドロパシープロットとして示す。図は、７回膜貫通セグメント、アミノ末端の細胞外ドメイン、およびカルボキシ末端の細胞内ドメインの推定構造を示す。
【０２１４】
ヒト１５３３４０受容体ｃＤＮＡは、約２５５９ヌクレオチド長であり、約３７２アミノ酸残基長である全長タンパク質をコードする。核酸は、リンパ節、扁桃腺、膵臓、結腸、脾臓、末梢血細胞、胸腺、副腎、および心臓ならびに図１７〜図１９に記載の巨核球および赤血球系において発現する。配列番号５のアミノ酸の構造分析を、図１１にヒドロパシープロットとして示す。図は、７回膜貫通セグメント、アミノ末端の細胞外ドメイン、およびカルボキシ末端の細胞内ドメインの推定構造を示す。
【０２１５】
本明細書中で使用される、用語「膜貫通セグメント」は、原形質膜に渡された疎水性へリックスを含む構造アミノ酸モチーフをいう。２８３８の全膜貫通ドメインは、アミノ酸約２５〜アミノ酸約２９２番目にわたる。１４６１８の全膜貫通ドメインは、アミノ酸約２９〜アミノ酸約２９７番目にわたる。１５３３４の全膜貫通ドメインは、アミノ酸約２６〜アミノ酸約２９９番目にわたる。セグメントが７回膜をわたり、このドメイン中に３つの細胞内ループおよび３つの細胞外ループが存在する。
【０２１６】
本発明は、２８３８受容体タンパク質をコードする単離ポリペプチドを提供する。用語「２８３８ポリペプチド」または「２８３８核酸」は、配列番号２に記載の配列をいう。
【０２１７】
本発明は、１４６１８受容体タンパク質をコードする単離ポリペプチドを提供する。用語「１４６１８ポリペプチド」または「１４６１８核酸」は、配列番号４に記載の配列をいう。
【０２１８】
本発明は、１５３３４受容体タンパク質をコードする単離ポリペプチドを提供する。用語「１５３３４ポリペプチド」または「１５３３４核酸」は、配列番号６に記載の配列をいう。
【０２１９】
用語「受容体ポリヌクレオチド」または「受容体核酸」は、さらに、２８３８、１４６１８、および１５３３４ポリヌクレオチドの変異型および断片を含む。
【０２２０】
「単離」受容体核酸は、天然の受容体核酸供給源に存在する他の核酸から分離したものである。好ましくは、「単離」核酸は、核酸が誘導される生物のゲノムＤＮＡ中の核酸（すなわち、核酸の５’および３’末端に位置する配列）に天然に隣接する配列を含まない。しかし、いくつかの隣接ヌクレオチド配列（例えば、５ＫＢまで）を含むことができる。重要な点は、核酸を隣接配列から単離して、その核酸を本明細書中に記載の特定の操作（組換え発現、プローブおよびプライマーの調製など）および受容体核酸配列に特異的な他の用途に供することができることである。
【０２２１】
さらに、「単離」核酸分子（ｃＤＮＡまたはＲＮＡ分子など）は、他の細胞物質、組換え技術によって作製した場合は培養培地、または化学合成した場合は化合物の前駆体もしくは他の薬品を実質的に含まない。しかし、核酸分子を他のコード配列または調節配列と融合し、依然として「単離」とみなすことができる。
【０２２２】
例えば、ベクター中に含まれる組換えＤＮＡ分子を、「単離」とみなす。単離ＤＮＡ分子のさらなる例には、異種宿主細胞中に維持された組換えＤＮＡ分子または溶液中の（部分的または実質的に）精製されたＤＮＡ分子が含まれる。単離ＲＮＡ分子には、本発明の単離ＤＮＡ分子のｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏＲＮＡ転写物が含まれる。本発明の単離核酸分子には、さらに、このような合成分子が含まれる。
【０２２３】
いくつかの例では、単離物質は、組成物（例えば、他の物質を含む粗抽出物）、緩衝系または試薬混合物の一部を形成する。他の環境では、物質を、例えば、ＰＡＧＥまたはカラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣなど）で同定によって本質的に均質であるように精製することができる。好ましくは、単離核酸は全ての高分子種の少なくとも５０、８０、もしくは９０％（モルベースに基づく）を含む。
【０２２４】
受容体ポリヌクレオチドは、成熟タンパク質＋さらなるアミノまたはカルボキシル末端アミノ酸、または成熟ポリペプチド内のアミノ酸（例えば、成熟形態が１つを超えるポリペプチド鎖を有する場合）をコードすることができる。このような配列は、前駆体から成熟形態へのタンパク質のプロセシングに役割を果たすか、タンパク質輸送を容易にするか、タンパク質の半減期を延長または短縮するか、アッセイまたは産生のためのタンパク質の操作を容易にすることなどができる。一般的に、ｉｎ ｓｉｔｕでの場合のように、さらなるアミノ酸を、細胞酵素によって成熟タンパク質から離れてプロセシングすることができる。
【０２２５】
受容体ポリヌクレオチドには、以下が含まれるが、これらに限定されない：成熟ポリペプチドのみをコードする配列、成熟ポリペプチドおよびさらなるコード配列（リーダー配列または分泌配列（例えば、プレプロまたはプロタンパク質配列）など）をコードする配列、さらなるコード配列を含むか含まない成熟配列をコードする配列＋さらなる非コード配列（例えば、転写、ｍＲＮＡプロセシング（イントロンならびにスプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含む）、リボゾーム結合およびｍＲＮＡの安定性の役割を果たす転写するが翻訳されない配列などの非コード５’および３’配列）。さらに、ポリヌクレオチドを、例えば、精製を容易にするペプチドをコードするマーカー配列に融合することができる。
【０２２６】
受容体ポリヌクレオチドは、クローニングまたは化学合成技術またはその組み合わせによって作製されるＲＮＡの形態（ｍＲＮＡなど）またはＤＮＡの形態（ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ）で存在し得る。核酸、特にＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖核酸は、コード鎖（センス鎖）または非コード鎖（アンチセンス鎖）であり得る。
【０２２７】
１つの受容体核酸は、ヒト２８３８ｃＤＮＡに対応する配列番号２に示したヌクレオチド配列を含む。
１つの受容体核酸は、ヒト１４６１８ｃＤＮＡに対応する配列番号４に示したヌクレオチド配列を含む。
１つの受容体核酸は、ヒト１５３３４ｃＤＮＡに対応する配列番号６に示したヌクレオチド配列を含む。
【０２２８】
１つの実施形態では、受容体核酸は、コード領域のみを含む。
【０２２９】
本発明は、さらに、遺伝コードの縮重のために配列番号２に記載のヌクレオチド配列と異なり、配列番号２に示すヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同一のタンパク質をコードする、変異型受容体ポリヌクレオチドおよびその断片を提供する。
【０２３０】
本発明は、さらに、遺伝コードの縮重のために配列番号４に記載のヌクレオチド配列と異なり、配列番号４に示すヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同一のタンパク質をコードする、変異型受容体ポリヌクレオチドおよびその断片を提供する。
【０２３１】
本発明は、さらに、遺伝コードの縮重のために配列番号６に記載のヌクレオチド配列と異なり、配列番号６に示すヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同一のタンパク質をコードする、変異型受容体ポリヌクレオチドおよびその断片を提供する。
【０２３２】
本発明はまた、本明細書中に記載の変異型ポリペプチドをコードする受容体核酸分子を提供する。このようなポリヌクレオチドは、天然に存在し得るか（対立遺伝子変異型（同一の遺伝子座）、ホモログ（異なる遺伝子座）、およびオーソログ（異なる生物）など）、組換えＤＮＡ法または化学合成によって構築することができる。このような天然に存在しない変異型を、ポリヌクレオチド、細胞、または生物に適応する変異誘発技術によって作製することができる。したがって、上記のように、変異型は、ヌクレオチドの置換、欠失、逆位、および挿入を含むことができる。
【０２３３】
コード領域および非コード領域のいずれかまたは両方で変異体を得ることができる。変異体により、保存的および非保存的アミノ酸置換を得ることができる。
【０２３４】
典型的には、変異型は、配列番号２、４、および６ならびにその相補物からなる群から選択される核酸分子と実質的に同一である。
【０２３５】
オーソログ、ホモログ、および対立遺伝子変異型を、当該分野で公知の方法を用いて同定することができる。２８３８変異型は、配列番号２で示したヌクレオチド配列またはこの配列の断片に４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、少なくとも約６５％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも約９０〜９５％またはそれ以上相同な受容体をコードするヌクレオチド配列を含む。配列番号２に示すヌクレオチド配列またはその配列の断片にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成することができるこのような核酸分子を、容易に同定することができる。
【０２３６】
１４６１８変異型は、配列番号４で示したヌクレオチド配列またはこの配列の断片に４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、少なくとも約６５％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも約９０〜９５％またはそれ以上相同な受容体をコードするヌクレオチド配列を含む。配列番号４に示すヌクレオチド配列またはその配列の断片にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成することができるこのような核酸分子を、容易に同定することができる。
【０２３７】
１５３３４変異型は、配列番号６で示したヌクレオチド配列またはこの配列の断片に、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、少なくとも約６５％、典型的には少なくとも７０〜７５％、より典型的には少なくとも８０〜８５％、最も典型的には少なくとも約９０〜９５％またはそれ以上相同な受容体をコードするヌクレオチド配列を含む。配列番号６に示すヌクレオチド配列またはその配列の断片にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成することができるこのような核酸分子を、容易に同定することができる。
【０２３８】
ストリンジェントなハイブリッド形成は、それが一般的な相同性（ポリＡ配列、または全てまたはほとんどのタンパク質、すべてのＧＰＣＲ、全てのファミリーＩ　ＧＰＣＲまたは全てのプリン受容体に共通な配列など）による場合、実質的な相同性を示さないことが理解される。さらに、変異体には、本発明以前に開示されている可能性のあるいかなる核酸配列も含まれないことが理解される。
【０２３９】
本明細書中で使用される、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する」は、互いに少なくとも５０〜５５％、５５％相同な受容体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が互いに典型的にハイブリッド形成したままであるハイブリッド形成および洗浄条件を記載することを意図する。これは、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上互いに同一な配列が互いにハイブリッド形性したままのような条件であり得る。このようなストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８９、６．３．１〜６．３．６（参考として援用される）に見出すことができる。ストリンジェントなハイブリッド形成条件の一例は、約４５℃の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリッド形成およびその後の５０〜６５℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での１回または複数回の洗浄である。別の非限定的な例では、核酸分子を約４５℃の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリッド形成、その後室温での０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での低ストリンジェンシー洗浄、４２℃でのでの０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での中程度のストリンジェンシー洗浄、または６５℃でのでの０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での高ストリンジェンシー洗浄である。１つの実施形態では、ストリンジェントな条件下で配列番号２、４、および６の配列とハイブリッド形成する単離受容体核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される、用語「天然に存在する」核酸分子は、天然に存在する核酸分子（例えば、天然のタンパク質をコードする）を有するＲＮＡまたはＤＮＡをいう。
【０２４０】
当業者に理解されるように、経験的および不安定化剤（ホルムアミドなど）または変性剤（ＳＤＳなど）のイオン強度、温度、および濃度に依存して、正確な条件を同定することができる。望ましいハイブリッド形成条件同定において考慮される他の因子には、核酸配列の長さ、塩基組成、ハイブリッド形成配列と他の同一配列内の配列のサブセットの発生頻度との間のミスマッチ％が含まれる。したがって、１つまたは複数のこれらのパラメーターを変化させる一方で、２つの核酸分子について同程度の同一性および類似性を維持することによって、等価の条件を同定することができる。
【０２４１】
本発明はまた、ストリンジェントな条件下で、配列番号２、４、および６ならびに配列番号２、４、および６の相補物からなる群から選択される核酸配列とハイブリッド形成する一本鎖または二本鎖断片または部分を含む単離核酸を提供する。１つの実施形態では、核酸は、配列番号２、４、および６ならびにその相補物からなる群から選択されるヌクレオチド配列の一部からなる。本発明の核酸断片は、少なくとも約１５、好ましくは少なくとも１８、２０、２３、または２５ヌクレオチド長であり、３０、４０、５０、１００、２００、またはそれ以上のヌクレオチド長であり得る。本明細書中に記載の抗原タンパク質またはポリペプチドをコードするより長い断片（例えば、３０またはそれ以上のヌクレオチド長）が有用である。
【０２４２】
さらに、本発明は、全長受容体ポリヌクレオチドの断片を含むポリヌクレオチドを提供する。断片は、一本鎖または二本鎖であり、ＤＮＡまたはＲＮＡを含み得る。断片は、コード配列または非コード配列のいずれか由来であり得る。
【０２４３】
１つの実施形態では、１〜およそヌクレオチド９９０由来の単離２８３８受容体核酸は、少なくとも１６ヌクレオチド長であり、ストリンジェントな条件下で配列番号２のヌクレオチド配列を含む核酸分子とハイブリッド形成する。別の実施形態では、およそヌクレオチド１４８７〜１６１７由来の核酸は、少なくとも２０ヌクレオチドである。他の実施形態では、核酸は、少なくとも４０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長またはそれ以上である。
【０２４４】
別の実施形態では、およそヌクレオチド１〜およびヌクレオチド９１１のヌクレオチド由来の単離１４６１８受容体核酸は、少なくとも８ヌクレオチド長であり、ストリンジェントな条件下で配列番号４のヌクレオチド配列を含む核酸分子とハイブリッド形成する。他の実施形態では、核酸は、少なくとも４０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長またはそれ以上である。
【０２４５】
別の実施形態では、ヌクレオチド１〜およそヌクレオチド１３５５由来の単離１５３３４受容体核酸は、少なくとも１８ヌクレオチド長であり、ストリンジェントな条件下で配列番号６のヌクレオチド配列を含む核酸分子とハイブリッド形成する。別の実施形態では、およそヌクレオチド８６８〜およそヌクレオチド１３５５由来の核酸は、少なくとも１１ヌクレオチドである。他の実施形態では、核酸は、少なくとも４０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長またはそれ以上である。
【０２４６】
別の実施形態では、単離２８３８受容体核酸は、アミノ酸１〜アミノ酸３１９の全コード領域をコードする。別の実施形態では、単離２８３８受容体核酸は、およそアミノ酸６〜およそアミノ酸３１９の成熟タンパク質に対応する配列をコードする。別の実施形態では、単離１４６１８受容体核酸は、アミノ酸１〜アミノ酸３３７の全コード領域をコードする。別の実施形態では、単離１４６１８受容体核酸は、およそアミノ酸６〜およそアミノ酸３３７の成熟タンパク質に対応する配列をコードする。別の実施形態では、単離１５３３４受容体核酸は、アミノ酸１〜アミノ酸３７２の全コード領域をコードする。別の実施形態では、単離１５３３４受容体核酸は、およそアミノ酸６〜およそアミノ酸３７２の成熟タンパク質に対応する配列をコードする。
【０２４７】
３つ全ての受容体の他の断片は、本明細書中に記載のアミノ酸断片をコードするヌクレオチド配列を含む。さらに、断片は、特異的ドメインまたは本明細書中に記載の部位のサブ断片を含むことができる。断片はまた、上記の特異的アミノ酸配列またはその断片に対応する核酸配列を含む。本発明の核酸断片は、本発明以前に開示されている可能性のある断片を含むように構築されない。
【０２４８】
しかし、受容体断片には、全遺伝子を含まない任意の核酸配列を含むことが理解される。
【０２４９】
２８３８受容体核酸断片は、さらに、本明細書中に記載のドメイン、本明細書中にも記載のサブ領域、および特異的機能部位に対応する配列を含む。２８３８受容体核酸断片は、１〜およそ２４のアミノ酸残基を含むアミノ末端細胞外ドメインを含むポリペプチド、膜貫通ドメインをわたす領域を含むポリペプチド（およそ２５〜およそ２９２のアミノ酸残基）、カルボキシ末端の細胞内ドメインを含むポリペプチド（およそ２９３〜およそ３１９のアミノ酸残基）、およびＧタンパク質受容体シグナルをコードするポリペプチド（１１８〜１２０またはおよそ１０７〜およそ１２３の周囲のアミノ酸残基）をコードする核酸、任意の７回膜貫通セグメント、細胞外または細胞内ループ、グリコシル化部位、リン酸化部位、ミリスチル化部位、およびアミド化部位をコードする核酸分子を含む。
【０２５０】
１４６１８受容体核酸断片は、１〜およそ２８のアミノ酸残基を含むアミノ末端細胞外ドメインを含むポリペプチド、膜貫通ドメインをわたす領域を含むポリペプチド（およそ２９〜およそ２９７のアミノ酸残基）、カルボキシ末端の細胞内ドメインを含むペプチド（およそ２９８〜およそ３３７のアミノ酸残基）、およびＧタンパク質受容体シグナルをコードするポリペプチド（１２０〜１２２またはおよそ１１０〜およそ１３２の周囲のアミノ酸残基）をコードする核酸、任意の７回膜貫通セグメント、細胞外または細胞内ループ、グリコシル化部位、およびリン酸化部位をコードする核酸分子を含む。
【０２５１】
１５３３４受容体核酸断片は、１〜約２５番目のアミノ酸残基を含むアミノ末端細胞外ドメインを含むポリペプチド、膜貫通ドメインをわたす領域を含むポリペプチド（およそ２６〜およそ２９９番目のアミノ酸残基）、カルボキシ末端の細胞内ドメインを含むペプチド（およそ３００〜およそ３７２番目のアミノ酸残基）、およびＧタンパク質受容体シグナルをコードするポリペプチド（１１８〜１２０番目またはおよそ１１０〜およそ１３０番目の周囲のアミノ酸残基）をコードする核酸、任意の７回膜貫通セグメント、細胞外または細胞内ループ、グリコシル化部位、プロテインキナーゼＣ、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、およびカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位、およびミリスチル化部位をコードする核酸分子を含む。
【０２５２】
ドメインの位置がコンピュータ分析によって予想されている場合、当業者は、これらのドメインを構築するアミノ酸残基が、ドメインを定義するために使用した基準に依存して変化し得ることを認識するであろう。
【０２５３】
受容体核酸断片はまた、ドメイン、セグメント、ループ、および上記の他の機能的部位の組み合わせを含む。したがって、例えば、受容体核酸は、アミノ末端細胞外ドメインおよび１つの膜貫通セグメントに対応する配列を含み得る。当業者は、多くの置換が可能であることを認識しているであろう。
【０２５４】
ドメインまたは部位の位置がコンピュータ分析によって予想されている場合、当業者は、これらのドメインを構築するアミノ酸残基が、ドメインを定義するために使用した基準に依存して変化し得ることを認識するであろう。
【０２５５】
本発明はまた、本明細書中に記載の受容体領域を保有するエピトープをコードする受容体核酸断片を提供する。
【０２５６】
単離受容体ポリヌクレオチド配列、特に断片は、ＤＮＡプローブおよびプライマーとして有用である。
【０２５７】
例えば、オリゴヌクレオチドプローブを合成するために、公知のヌクレオチド配列を用いて受容体遺伝子のコード領域を単離することができる。次いで、標識プローブを使用して、ｃＤＮＡライブラリー、ゲノムＤＮＡライブラリー、またはｍＲＮＡをスクリーニングし、コード領域に対応する核酸を単離することができる。さらに、ＰＣＲ反応でプライマーを使用して、受容体遺伝子の特異的領域をクローニングすることができる。
【０２５８】
典型的には、プローブ／プライマーは、実質的に精製したオリゴヌクレオチドを含む。２８３８オリゴヌクレオチドは、典型的には、ストリンジェントな条件下で、配列番号２のセンス鎖またははアンチセンス鎖の少なくともそれぞれおよそ１６および２０個、典型的にはおよそ２５、より典型的には４０、５０、または７５個の連続したヌクレオチドとハイブリッド形成する１〜９９０番目および１４８７〜１６１７番目のヌクレオチド配列領域または他の受容体ポリヌクレオチドを含む。１４６１８オリゴヌクレオチドは、典型的には、ストリンジェントな条件下で、配列番号４のセンス鎖またははアンチセンス鎖の少なくともおよそ９、１２、典型的にはおよそ２５、より典型的には４０、５０、または７５個の連続したヌクレオチドとハイブリッド形成する１〜９１１番目のヌクレオチド配列領域または他の受容体ポリヌクレオチドを含む。１５３３４オリゴヌクレオチドは、典型的には、ストリンジェントな条件下で、配列番号６のセンス鎖またははアンチセンス鎖の少なくともおよそ１１、１２、典型的にはおよそ２５、より典型的には４０、５０、または７５個の連続したヌクレオチドとハイブリッド形成する８６８〜１３５５番目のヌクレオチド配列領域または他の受容体ポリヌクレオチドを含む。１５３３４オリゴヌクレオチドはまた、典型的には、ストリンジェントな条件下で、配列番号６のセンス鎖またははアンチセンス鎖の少なくともおよそ１８、典型的にはおよそ２５、より典型的には４０、５０、または７５個の連続したヌクレオチドとハイブリッド形成する１〜１３５５番目のヌクレオチド配列領域または他の受容体ポリヌクレオチドを含む。
【０２５９】
ポリヌクレオチドの使用
本発明の核酸配列を、さらに、「検索配列」として使用して、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列の同定のために、公的なデータベースによって検索を行うことができる。このような検索を、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５、４０３〜１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝１００、長さ＝１２）を具備したＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を行うことができる。比較用のギャップアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、２５（１７）、３３８９〜３４０２に記載のように、Ｇａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。
【０２６０】
本発明の核酸断片により、アッセイ（以下に記載のアッセイなど）におけるプローブまたはプライマーが得られる。「プローブ」は、塩基特異的様式で、核酸の相補鎖とハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドである。このようなプローブには、Ｎｉｅｌｓｅｎら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５４、１４９７〜１５００に記載のポリペプチド核酸が含まれる。典型的には、プローブは、配列番号２、４、および６ならびにその相補物からなる群から選択される核酸の少なくとも約１５、典型的には、約２０〜２５、より典型的には４０、５０、７５の連続したヌクレオチドと高ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するヌクレオチド配列領域を含む。より典型的には、プローブは、さらに、標識（例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素の補因子）を含む。
【０２６１】
本明細書中で使用される、用語「プライマー」は、周知の方法（例えば、ＰＣＲ、ＬＣＲ）（本明細書中に記載されているが、これに限定されない）を使用するテンプレート指向性ＤＮＡ合成の開始点として作用する一本鎖オリゴヌクレオチドをいう。プライマーの適切な長さは、特定の用途に依存するが、典型的には、約１５〜３０ヌクレオチドの範囲である。用語「プライマー部位」は、プライマーがハイブリッド形成する標的ＤＮＡ領域をいう。用語「プライマー対」は、増幅される核酸配列の５’末端にハイブリッド形成する５’（上流）プライマーおよび増幅される配列の相補物にハイブリッド形成する３’（下流）プライマーのセットをいう。
【０２６２】
受容体ポリヌクレオチドは、プローブ、プライマー、および生物学的アッセイに有用である。
【０２６３】
本明細書中に記載のアッセイなどにおいて、ポリヌクレオチドを使用してＧＰＣＲの性質または機能を評価する場合、全長ｃＤＮＡの全てまたはそれ未満が有用である。この場合、本発明以前に公知であり得る断片も含まれる。したがって、例えば、ＧＰＣＲ機能に特異的に指向するアッセイ（アゴニストまたはアンタゴニスト活性の評価）は、公知の断片の使用を含む。さらに、受容体機能の診断的アッセイ法を、任意の断片（本発明以前に公知であり得る断片を含む）を用いて行うこともできる。同様に、受容体機能不全の治療を含む方法では、当該分野で公知であり得る断片を含む全ての断片が含まれる。
【０２６４】
２８３８受容体ポリヌクレオチドは、配列番号１に記載のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、配列番号１に示したものと同一のポリペプチドを産生する変異型または本明細書中に記載の他の変異型に対応するｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するためのｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリッド形成プローブとして有用である。変異体を、配列番号１に示したポリペプチドを単離したものと同一の組織および生物、同一の生物由来の異なる組織、または異なる生物由来の異なる組織から単離することができる。
【０２６５】
１４６２８受容体ポリヌクレオチドは、配列番号３に記載のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、配列番号３に示したものと同一のポリペプチドを産生する変異型または本明細書中に記載の他の変異型に対応するｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するためのｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリッド形成プローブとして有用である。変異体を、配列番号３に示したポリペプチドを単離したものと同一の組織および生物、同一の生物由来の異なる組織、または異なる生物由来の異なる組織から単離することができる。
【０２６６】
１５３３４受容体ポリヌクレオチドは、配列番号５に記載のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、配列番号５に示したものと同一のポリペプチドを産生する変異型または本明細書中に記載の他の変異型に対応するｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するためのｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリッド形成プローブとして有用である。変異体を、配列番号５に示したポリペプチドを単離したものと同一の組織および生物、同一の生物由来の異なる組織、または異なる生物由来の異なる組織から単離することができる。
【０２６７】
この方法は、発達段階で調節される遺伝子およびｃＤＮＡの単離に有用であるので、生物の発達における異なる点で同一の組織または異なる組織で発現させることができる。
【０２６８】
プローブは、受容体をコードする遺伝子の全長に沿った任意の配列に対応することができる。したがって、プローブは、５’非コード領域、コード領域、および３’非コード領域由来であり得る。しかし、プローブは、本発明以前に公知であり得る任意の配列に対応するように構築されない。
【０２６９】
２８３８核酸プローブは、例えば、配列番号１の全長ｃＤＮＡまたはその断片（少なくとも１１、１６、１８、２０、３０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドなど）であり、ストリンジェントな条件下でｍＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリッド形成するのに十分であり得る。１４６１８核酸プローブは、例えば、配列番号３の全長ｃＤＮＡまたはその断片（少なくとも８、１２、１５、３０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドなど）であり、ストリンジェントな条件下でｍＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリッド形成するのに十分であり得る。１５３３４核酸プローブは、例えば、配列番号５の全長ｃＤＮＡまたはその断片（少なくとも１１、１２、１５、１８、３０、５０、１００、２５０、または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドなど）であり、ストリンジェントな条件下でｍＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリッド形成するのに十分であり得る。
【０２７０】
本明細書中に記載のポリヌクレオチドの断片はまた、本明細書中に記載のより長い断片または全長ポリヌクレオチドの合成に有用である。例えば、断片を、ｍＲＮＡの任意の部分にハイブリッド形成することができ、より長いまたは全長ｃＤＮＡを産生することができる。
【０２７１】
断片はまた、所望の長さおよび配列のアンチセンス分子の合成に有用である。
【０２７２】
本発明のアンチセンス核酸を、当該分野で公知の化学合成および酵素ライゲーション反応を用いて構築した配列番号２、４、および６のヌクレオチド配列を用いて設計することができる。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を、天然に存在するヌクレオチドまたは分子の生物学的安定性を増加させるかアンチセンス核酸とセンス各案との間に形成された二重鎖の物理学的安定性を増加させるように設計された種々の修飾ヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することができる）を用いて化学合成することができる。アンチセンスヌクレオチドの作製に使用することができる修飾ヌクレオチドの例には、以下が含まれる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルケオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルケオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メトキシチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、ケオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキサ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、核酸がアンチセンス方向（すなわち、挿入核酸から転写されたＲＮＡは、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）にサブクローニングされている発現ベクターを用いて、アンチセンス核酸を生物学的に作製することができる。
【０２７３】
さらに、本発明の核酸分子を、例えば、分子の安定性、ハイブリッド形成、または溶解性を改良するために、塩基部分、糖部分、またはリン酸塩バックボーンで改変することができる。例えば、核酸のデオキシリボースホスフェートバックボーンを、ペプチド核酸を作製するように改変することができる（Ｈｙｒｕｐら、１９９６、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　＆　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４、５を参照のこと）。本明細書中で使用される、用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースホスフェートバックボーンが偽ペプチドバックボーンと置換され、たった４つの天然の核酸塩基が残されるのみである核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡの中性バックボーンは、低イオン強度の条件下で、ＤＮＡおよびＲＮＡと特異的にハイブリッド形成されることが示されている。ＰＮＡオリゴマー合成を、Ｈｙｒｕｐら、１９９６、前出、Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３、１４６７０に記載の標準的な固相ペプチド合成プロトコールを用いて行うことができる。さらに、親油性または他の補助基との結合、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成、もしくはリポソームの使用、または当該分野で公知の他の薬物送達技術によって、ＰＮＡを、例えば、その安定性、特異性、または細胞取り込みを促進するように改変することができる。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成を、Ｈｙｒｕｐ、１９９６、前出、Ｆｉｎｎら、１９９６、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、２４（１７）、３３５７〜６３、Ｍａｇら、１９８９、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、１７、５９７３、およびＰｅｔｅｒｓｅｒら、１９７５、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、５、１１１９に記載のように行うことができる。
【０２７４】
本発明の核酸分子および断片には、ペプチドなどの他の付加基（ｉｎ ｖｉｖｏで宿主細胞受容体を標的するため）または細胞膜を通過する輸送を促進する因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６、６５５３〜６５５６、Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４、６４８〜６５２、ＰＣＴ公開番号ＷＯ　８８／０９１８を参照のこと）または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ　８９／１０１３４を参照のこと）も含まれ得る。さらに、オリゴヌクレオチドを、ハイブリッド形成誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６、９５８〜９７６を参照のこと）または挿入剤（例えば、Ｚｏｎ、１９８８、Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ．、５、５３９〜５４９を参照のこと）を用いて修飾することができる。
【０２７５】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体ポリヌクレオチドの任意の所与の領域を増幅させるためのＰＣＲプライマーとして有用である。
【０２７６】
受容体ポリヌクレオチドはまた、組換えベクターの構築に有用である。このようなベクターには、受容体ポリペプチドの一部または全部を発現する発現ベクターが含まれる。ベクターはまた、受容体遺伝子および遺伝子産物のｉｎ ｓｉｔｕ発現を変更するための別のポリヌクレオチド配列（細胞ゲノムなど）への組込みに使用されている挿入ベクターを含む。例えば、内因性受容体コード配列を、１つまたは複数の特異的に組込んだ変異を含むコード配列の全部または一部と相同組換えを介して置換することができる。
【０２７７】
受容体ポリヌクレオチドはまた、抗原ペプチドの発現に有用である。高い抗原性指数を有するペプチド領域を、図２、図６、および図１０に示す。
【０２７８】
受容体ポリヌクレオチドはまた、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成法（ＦＩＳＨ（この技術の概説として、Ｖｅｒｍａら、１９８８、Ｈｕｍａｎ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋを参照のこと）など）および体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングによる受容体ポリヌクレオチドの染色体上の位置の同定用のプローブとして有用である。染色体に対するこの配列のマッピングは、疾患に関連する遺伝子を有するこれらの関連配列における重要な最初の段階である。
【０２７９】
染色体マッピング用の試薬をそれぞれ使用して、単一の染色体またはその染色体上の単一の部位をマークすることができ、複数の部位および／または複数の染色体のマーク用に試薬のパネルを使用することができる。マッピングには、遺伝子の非コード領域に対応する試薬が好ましい。コード配列は遺伝子ファミリー内で保存される傾向が強いので、染色体マッピング中の交差ハイブリッド形成の機会が増加する。
【０２８０】
一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理学的位置は、遺伝子マップデータに対応し得る。（このようなデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ、Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ　Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ　Ｈｏｐｋｉｎｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｗｅｌｃｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｌｉｂｒａｒｙによりオンラインで利用可能である）に見出される）。次いで、同一の染色体領域にマッピングされた遺伝子および疾患との間の関係を、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ、３２５、７８３〜７８７に記載の結合分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によって同定することができる。
【０２８１】
さらに、特定の遺伝子に関する疾患を罹患している個体と罹患していない個体との間のＤＮＡ配列の相違を同定することができる。罹患個体の一部または全部で変異が認められるが、罹患していない個体には全く認められない場合、おそらく、変異は特定の疾患の原因因子である。罹患および非罹患個体の比較には、一般に、染色体における構造の変化（可視的形態の染色体であるか、そのＤＮＡ配列に基づいたＰＣＲを用いて検出可能な欠失または翻訳など）の最初の検索が含まれる。最終的に、何人かの個体由来の遺伝子の完全な配列決定を行って、変異の存在の確認および多形由来の変異の区別を行うことができる。
【０２８２】
受容体ポリヌクレオチドプローブはまた、組織分布に関する受容体およびその変異型をコードする遺伝子の存在パターン（例えば、遺伝子重複が存在するかどうかおよび重複が組織の全部または部分集合のみに存在するのかどうか）の同定に有用である。遺伝子は天然存在するか、細胞、組織、または生物に外因的に移入され得る。
【０２８３】
受容体ポリヌクレオチドはまた、本明細書中に記載のポリヌクレオチドをコードする遺伝子から作製したｍＲＮＡの全部または一部に対応するリボザイムの設計に有用である。
【０２８４】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの一部または全部を発現する宿主細胞の構築に有用である。
【０２８５】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの一部または全部を発現するトランスジェニック動物の構築に有用である。
【０２８６】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体ポリペプチドの一部または全部を発現するベクターの作製に有用である。
【０２８７】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体核酸の発現レベルの同定用のハイブリッド形成プローブとして有用である。したがって、プローブを使用して、細胞、組織、および生物における受容体核酸の存在の検出またはレベルの同定を行うことができる。そのレベルが同定される核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。したがって、本明細書中に記載のポリペプチドに対応するプローブを使用して、所与の細胞、組織、または生物における遺伝子のコピー数を評価することができる。特に、これは受容体遺伝子の増幅が存在する場合に適切である。
【０２８８】
あるいは、プローブをｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成で使用して、受容体遺伝子の増加したコピーの位置、染色体エレメント上の位置、または受容体遺伝子が正常に見出されない染色体への組込み位置（例えば、均一に染色された領域）を評価することができる。
【０２８９】
これらの用途は、正常な結果と比較した受容体発現の増加または減少に関連する疾患（増殖疾患、分化もしくは発育疾患、または造血疾患など）の診断に関する。
【０２９０】
したがって、本発明は、試験サンプルを被験体から得て、核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し、核酸の存在が核酸の異常な発現または活性に関連する疾患または障害の発症リスクを有する被験体を診断する、受容体核酸の異常な発現または活性に関連する疾患または障害の同定法を提供する。
【０２９１】
本発明の１つの態様は、個体が異常な核酸の発現または活性に関与する疾患または障害を有するかどうかまたは疾患または障害の発症のリスクを有するかどうかを同定するために、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）における核酸の発現ならびに活性を同定するための診断的アッセイに関する。このようなアッセイを、予知および予言目的で使用して、核酸分子の発現または活性に特徴づけられるか関連する障害の発症前に個体を予防的に治療することができる。
【０２９２】
ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏでの検出技術には、ノーザンハイブリッド形成およびｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成が含まれる。ＤＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏでの検出技術には、サザンハイブリッド形成およびｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成が含まれる。
【０２９３】
プローブを、被験体由来の細胞サンプル中の受容体をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡ）のレベルの測定または受容体が変異されている場合はその同定などによる、受容体タンパク質を発現する細胞または組織の同定用の診断試験キットの一部として使用することができる。
【０２９４】
核酸発現アッセイは、受容体核酸発現を調整する化合物（例えば、アンチセンス、ポリペプチド、ペプチド模倣物、小分子、または他の薬物）を同定するための薬物スクリーニングに有用である。細胞を、候補化合物と接触させ、ｍＲＮＡの発現を同定する。候補化合物の存在下での受容体ｍＲＮＡの発現レベルを、候補化合物の非存在下での受容体ｍＲＮＡの発現レベルと比較する。次いで、候補化合物を、この比較に基づいて核酸発現のモジュレーターとして同定し、例えば、これを使用して、異常な核酸発現によって特徴づけられる障害を治療することができる。モジュレーターは、核酸に直接結合するか、核酸発現に影響を与える他の細胞成分との相互作用などによって間接的に発現を調整することができる。
【０２９５】
修飾法を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、薬剤と細胞との培養による）または患者もしくはトランスジェニック動物においてｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、患者への薬剤投与による）で行うことができる。
【０２９６】
したがって、本発明は、受容体遺伝子の核酸発現に関連する障害の治療に使用することができる化合物の同定法を提供する。この方法は、典型的には、化合物の受容体核酸の発現調整能力をアッセイし、それにより、望ましくない受容体核酸発現によって特徴づけられる障害の治療に使用することができる化合物を同定するステップを包含する。
【０２９７】
アッセイを、細胞ベース系および無細胞系で行うことができる。細胞ベースのアッセイは、受容体核酸を天然に発現する細胞または特異的な核酸配列を発現するように遺伝子操作された組換え細胞を含む。
【０２９８】
あるいは、候補化合物を、患者またはトランスジェニック動物においてｉｎ ｖｉｖｏでアッセイすることができる。
【０２９９】
受容体核酸発現アッセイには、核酸レベル（ｍＲＮＡレベルなど）の直接的アッセイ、またはシグナル経路（サイクリックＡＭＰまたはホスフェチジルイノシトールの代謝回転など）に関連する付随的な化合物に対するアッセイを含むことができる。さらに、受容体タンパク質シグナル経路に対して上方またはダウンレギュレートされる遺伝発現もアッセイすることができる。この実施形態では、これらの遺伝子の調節領域を、ルシフェラーゼなどの受容体遺伝子に作動可能に連結させることができる。
【０３００】
したがって、受容体遺伝子発現のモジュレーターを、細胞を候補化合物と接触させてｍＲＮＡの発現を同定する方法において同定することができる。候補化合物の存在下での受容体ｍＲＮＡの発現レベルを、候補化合物の非存在下での受容体ｍＲＮＡの発現レベルと比較する。次いで、候補化合物を、この比較を基本とした核酸発現のモジュレーターとして同定し、これを使用して異常な核酸発現によって特徴づけられる疾患の治療に使用することができる。候補化合物の存在下でのｍＲＮＡの発現が、その非存在下での発現より統計的に有意に高い場合、候補化合物を核酸発現の刺激物質と同定する。候補化合物の存在下でのｍＲＮＡの発現が、その非損財貨での発現より統計的に有意に低い場合、候補化合物を核酸発現のインヒビターと同定する。
【０３０１】
したがって、本発明は、標的として核酸を用い、受容体核酸発現を調整するための遺伝子モジュレーターとして薬物スクリーニングによって同定された化合物を用いた治療法を提供する。調整には、アップレギュレート（すなわち、活性化または作用）またはダウンレギュレート（抑制または拮抗）または核酸活性に対する効果（例えば、核酸が変異されているか不適当に修飾されている場合）が含まれる。治療は、核酸の異常な発現または活性によって特徴づけられる障害の治療である。
【０３０２】
あるいは、受容体核酸発現のモジュレーターは、薬物または小分子が受容体核酸発現を阻害する限り、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイを用いて同定した小分子または薬物であり得る。
【０３０３】
受容体ポリヌクレオチドはまた、臨床試験または治療計画における受容体遺伝子の発現または活性に対する化合物の調整効果の監視に有用である。したがって、遺伝子発現パターンは、化合物（特に、患者が体性を示すことができる化合物）での継続的な治療効果のバロメーターとして役割を果たすことができる。遺伝子発現パターンはまた、化合物に対する罹患した細胞の生理学的反応の指標となるマーカーとしての役割を果たすことができる。したがって、このような監視により、この化合物または患者が体性を示さない別の化合物の投薬量の増加が可能である。同様に、核酸の発現レベルが所望のレベルより低下する場合、化合物の投与を適当に減少させることができる。
【０３０４】
監視ステップは、例えば、以下であり得る：（ｉ）薬物投与前に被験体から投与前サンプルを得るステップ、（ｉｉ）投与前サンプルにおける本発明の特異的ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現レベルを検出するステップ、（ｉｉｉ）被験体から１つまたは複数の投与後サンプルを得るステップ、（ｉｖ）投与後サンプルにおけるｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを検出するステップ、（ｖ）投与前サンプル中のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと投与後サンプル中のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現または活性レベルを比較するステップ、（ｖｉ）以上により、被験体に対する薬剤投与を増加または減少させるステップ。
【０３０５】
受容体ポリヌクレオチドはまた、受容体核酸における定量的変化、特に、病変を誘導する定量的変化の診断に有用である。ポリヌクレオチドを使用して、受容体遺伝子および遺伝発現産物（ｍＲＮＡなど）の変異を検出することができる。ポリヌクレオチドを、受容体遺伝子の天然に存在する遺伝子変異を検出するためのハイブリッド形成プローブとして使用することができるので、変異を有する患者に変異による障害のリスクかあるかどうかを同定することができる。変異には、遺伝子中の１つまたは複数のヌクレオチドの欠失、付加、または置換、染色体の再配列（逆位または転座など）、ゲノムＤＮＡの修飾（異常なメチル化パターンなど）、または遺伝子コピー数の変化（増幅など）が含まれる。疾患がレポータータンパク質の過剰発現、発現不良、または発現の変化に起因する場合、機能不全に関連する受容体遺伝子の変異体態の検出により、活動性疾患または疾患の感受性についての診断ツールが得られる。
【０３０６】
受容体遺伝子の変異を、種々の技術によって核酸レベルで検出することができる。ゲノムＤＮＡを、直接分析することも分析前にＰＣＲを用いて増幅することもできる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを、同一の方法で使用することができる。
【０３０７】
一定の実施形態では、変異の検出には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３、２０２号を参照のこと）（アンカーＰＣＲまたはＰＡＣＥ　ＰＣＲなど）またはライゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１、１０７７〜１０８０およびＮａｋａｚａｗａら、１９９４、ＰＮＡＳ、９１、３６０〜３６４を参照のこと）におけるプローブ／プライマーの使用が含まれる。後者は、遺伝子中の点変異の検出に特に有用であり得る（Ａｂｒａｖａｙａら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、２３、６７５〜６８２を参照のこと）。この方法には、以下のステップを含むことができる：サンプルの細胞からの核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたは両方）を単離するステップ、遺伝子のハイブリッド形成および増幅が起こる条件下で、核酸サンプルと１つまたは複数のプライマーとを接触させるステップ、および増幅産物の存在または非存在を検出するステップ、または増幅産物のサイズを検出してコントロールサンプルの長さと比較するステップ。検出および挿入を、正常な遺伝子型と比較した増幅産物のサイズの変化によって検出することができる。点変異を、増幅ＤＮＡの正常なＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡ配列とのハイブリッド形成によって同定することができる。
【０３０８】
ＰＣＲおよび／またはＬＣＲが本明細書中に記載の変異の検出に使用される任意の技術と組み合わせた予備増幅ステップとして望ましいことが意図される。
【０３０９】
代替増幅法には、以下が含まれる：自己持続配列複製（ｓｅｌｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７、１８７４〜１８７８）、転写増幅系（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）（Ｋｗｏｈら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６、１１７３〜１１７７）、Ｑ−βレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、６、１１９７）、または任意の他の核酸増幅法、およびその後の当業者に周知の技術を用いた増幅法の検出。これらの検出スキームは、核酸分子が非常に少数で存在する場合、核酸分子の検出に特に有用である。
【０３１０】
あるいは、受容体遺伝子の変異を、例えば、ゲル電気泳動によって同定された制限酵素消化バターンの変化によって直接同定することができる。
【０３１１】
さらに、配列特異的リボザイム（米国特許第５，４９８，５３１号）を使用して、リボザイム切断部位の発生または喪失による特異的変異の存在を得ることができる。
【０３１２】
完全に適合した配列を、ヌクレアーゼ切断消化アッセイまたは融点の相違によって区別することができる。
【０３１３】
特定の位置での配列変化を、ヌクレアーゼ保護アッセイ（ＲＮａｓｅおよびＳ１保護など）または化学的切断アッセイによって評価することもできる。
【０３１４】
さらに、変異株の受容体遺伝子と野生型遺伝子との間の配列の相違を、直接的ＤＮＡ配列決定によって同定することができる。診断アッセイ（１９９５、Ｂｉｏｔｈｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１９、４４８）を行う場合、種々の自動化配列決定法（質量分析法による配列決定（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ　９４／１６１０１、Ｃｏｈｅｎら、１９９６、Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、３６、１２７〜１６２、およびＧｒｉｆｆｉｎら、１９９３、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３８、１４７〜１５９を参照のこと）を含む）を利用することができる。
【０３１５】
他の遺伝子変異の検出法には、以下が含まれる：切断因子からの保護を使用してＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖における不適合塩基を検出する方法（Ｍｙｅｒｓら、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３０、１２４２）、Ｃｏｔｔｏｎら、１９８８、ＰＮＡＳ、８５、４３９７、Ｓａｌｅｅｂａら、１９９２、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２１７、２８６〜２９５、変異体および野生型核酸の電気泳動の移動度を比較する方法（Ｏｒｉｔａら、１９８９、ＰＮＡＳ、８６、２７６６、Ｃｏｔｔｏｎら、１９９３、Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．、２８５、１２５〜１４４、およびＨａｙａｓｈｉら、１９９２、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．、９、７３〜７９）、および変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドゲルにおける変異体または野生型断片の移動度を変性剤勾配ゲル電気泳動を用いて評価する方法（Ｍｙｅｒｓら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ、３１３、４９５）。アッセイの感度を、２次構造が配列の変化によってより感受性を有する（ＤＮＡよりも）ＲＮＡの使用によって増加させることができる。１つの実施形態では、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動の移動度の変化を基本として二本鎖ヘテロ二重鎖を分離する（Ｋｅｅｎら、１９９１、Ｔｒｅｎｄｓ　Ｇｅｎｅｔ．、７、５）。他の点変異の検出法には、選択的オリゴヌクレオチドハイブリッド形成、選択的増幅、および選択的プライマー伸長が含まれる。
【０３１６】
１つの実施形態では、遺伝子変異を、サンプルおよびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）の数百または数千のオリゴヌクレオチドプローブ（Ｃｒｏｎｉｎら、１９９６、Ｈｕｍａｎ　Ｍｕｔａｔｉｏｎ　７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｉら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２：７５３−７５９）を含む高密度アレイとのハイブリッド形成によって同定することができる。例えば、遺伝子変異を、Ｃｒｏｎｉｎら、前出に記載の発光ＤＮＡプローブを含む２次元アレイにおいて同定することができる。簡単に述べれば、プローブの第１のハイブリッド形成アレイを使用して、サンプルおよびコントロールにおけるＤＮＡの長い鎖をスキャンして連続的重複プローブの直鎖状アレイの作製による配列間の塩基の変化を同定することができる。このステップにより、点変異の同定が可能である。このステップの後、検出される全ての変異型または変異体に相補的な小さな特異的プローブの使用による特異的変異の特徴づけを可能にする第２のハイブリッド形成アレイを行う。各変異アレイは、平行プローブ対、野生型遺伝子に相補的な遺伝子、および変異遺伝子に相補的な遺伝子からなる。
【０３１７】
受容体ヌクレオチドはまた、疾患の発症に必要ではないが治療様式に影響を与える遺伝子型についての個体の試験に有用である。したがって、ポリヌクレオチドを使用して、個体の遺伝子型と治療に使用される化合物に対する固体の反応との間の関係を研究することができる。この場合、例えば、リガンドに対する親和性を変化させる受容体遺伝子の変異により、受容体を活性化させる標準濃度のリガンドで薬物効果が過剰となり得るかまたは薬物効果が減少し得る。したがって、本明細書中に記載の受容体ポリヌクレオチドを使用して、治療に適切な化合物または投薬計画を選択するための個体における受容体遺伝子の変異の含有量を評価することができる。
【０３１８】
治療に影響を与える遺伝子変異を示すポリヌクレオチドは、個体の治療の変更に使用することができる診断標的を提供する。したがって、これらの多形を含む組換え細胞および動物の産生により、治療化合物および投薬計画の効果的な臨床的設計が可能となる。
【０３１９】
本方法には、コントロール被験体由来のコントロール生物学的サンプルを得るステップと、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在が生物学的サンプルにおいて検出されるように、コントロールサンプルとｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または薬剤と接触させるステップと、コントロールサンプル中のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在と試験サンプル中のｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在とを比較するステップとを含む。
【０３２０】
受容体ポリヌクレオチドはまた、配列が個々の染色体を用いて染色体上の特定の位置に同定される場合、染色体同定に有用である。第１に、ＤＮＡ配列を、ｉｎ ｓｉｔｕまたは他の染色体特異的ハイブリッド形成によって染色体に適合させる。配列はまた、所望の種由来の個々の染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに使用することができるＰＣＲプライマーの調製によって特異的染色体に対応させることができる。プライマーに相同な遺伝子を含む染色体を含むハイブリッドのみが、増幅断片を産生する。染色体断片を使用して、半局在化を行うことができる。他のストラテジーには、標識流動分類染色体を用いた予備スクリーニングおよび染色体特異的ライブラリーとのハイブリッド形成による予備選択が含まれる。さらなるマッピングストラテジーには、伝統的に使用しているプローブよりも短いプローブを用いたハイブリッド形成が可能な蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成が含まれる。染色体マッピング用の試薬をそれぞれ使用して、単一の染色体または染色体上の単一の部位を作製することができ、試薬のパネルを、複数の部位および／または複数の染色体の作製に使用することができる。実際に、遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、マッピングでの使用に好ましい。コード配列は、遺伝子ファミリー内で保存される傾向が強いので、染色体マッピング中の交差ハイブリッド形成の機会を増加させる。
【０３２１】
受容体ポリヌクレオチドを使用して、小さな生物学的サンプル由来の個体を同定することもできる。これを、例えば、制限断片長の多形（ＲＦＬＰ）を用いて行って、個体を同定することができる。したがって、本明細書中に記載のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのＤＮＡマーカーとして有用である（米国特許第５，２７２，０５７号を参照のこと）。
【０３２２】
さらに、受容体配列を使用して、個体のゲノム中の選択断片の実際のＤＮＡ配列を同定する別の技術を得ることができる。したがって、本明細書中に記載の受容体配列を使用して、配列の５’および３’末端由来の２つのＰＣＲプライマーを調製することができる。次いで、これらのプライマーを使用して、その後の配列決定用の個体由来のＤＮＡを増幅することができる。
【０３２３】
この様式で調製した個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルにより、個体がこのようなＤＮＡ配列の固有のセットを有するものとしての、固有の個体の同定を得ることができる。ヒトにおける対立遺伝子変異型は、各５００塩基あたり約１つの頻度で起こると評価される。対立遺伝子変異型は、これらの配列のコード領域にいくらかの程度で起こり、非コード領域ではより高い程度で起こる。受容体配列を使用して、個体および組織由来のこのような配列を得ることができる。配列には、ヒトゲノムの固有の断片が存在する。本明細書中に記載の各配列を、いくらかの程度で、個体由来のＤＮＡを同定目的で比較することができる標準として使用することができる。
【０３２４】
配列由来の試薬のパネルを使用して、個体についての固有の同定データベースを作成する場合、これらの試薬を後に使用して個体由来の組織を同定することができる。この固有の同定データベースを使用して、生きているか死んでいる個体の正の同定を、非常に小さな組織サンプルから作製することができる。
【０３２５】
受容体ポリヌクレオチドを、法医学的同定目的に使用することもできる。ＰＣＲ技術を使用して、非常に小さな生物学的サンプル（１本の毛嚢、体液（例えば、血液、唾液、または精液））から得たＤＮＡ配列を増幅することができる。ついで、増幅配列を、サンプルの供給源の同定を可能にする標準と比較することができる。
【０３２６】
したがって、受容体ポリヌクレオチドを使用して、例えば、別の「同定マーカー」（すなわち、特定の個体に固有の別のＤＮＡ配列）の提供によってＤＮＡベースの法医学的同定の信頼性を高めることができる、ヒトゲノム中の特異的遺伝子座に標的化されたポリヌクレオチド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を得ることができる。上記のように、実際の塩基配列上方制限酵素によって得られた断片によって形成されたパターンとは別の正確なパターンとしての同定に使用することができる。非コード領域に標的化された配列は、より多数の多形が非コード領域で生じ、この技術を用いた個体の区別が容易になるので、特に有用である。断片は、少なくとも１２塩基である。
【０３２７】
さらに、受容体ポリヌクレオチドを使用して、特異的組織を同定するためのポリヌクレオチド試薬（例えば、例えば、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成技術において使用することができる標識プローブまたは標識可能なプローブ）を得ることができる。これは、法病理学者が未知の起源の組織を与えられた場合、有用である。受容体プローブのパネルを使用して、種および／または器官の型によって組織を同定することができる。
【０３２８】
類似の様式で、プライマーおよびプローブを使用して、汚染について組織培養物をスクリーニングする（すなわち、培養物中の異なる細胞型の混合物の存在をスクリーニングする）ことができる。
【０３２９】
あるいは、受容体ポリヌクレオチドを使用してアンチセンスまたはリボザイム構築物によって受容体遺伝子配列の転写または翻訳を直接阻害することができる。したがって、異常に高いか望ましくない受容体遺伝子発現によって特徴づけられる障害では、核酸を治療に直接使用することができる。
【０３３０】
したがって、受容体ポリヌクレオチドは、細胞、組織、および生物における受容体遺伝子発現をコントロールするためのアンチセンスとして有用である。ＤＮＡアンチセンスポリヌクレオチドを、転写に関与する遺伝子領域に相補的になるように設計し、転写を阻害して受容体タンパク質の産生を阻害する。アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡポリヌクレオチドはｍＲＮＡとハイブリッド形成するので、受容体タンパク質へのｍＲＮＡの翻訳が阻害される。
【０３３１】
核酸発現の阻害に有用なアンチセンス分子の例として、配列番号２、４、または６の３’非翻訳領域に相補的な開始コドンおよびアンチセンス分子も含む、配列番号２、４、または６の５’非翻訳領域の断片に相補的なアンチセンス分子が含まれる。
【０３３２】
あるいは、アンチセンス分子のクラスを使用して、受容体核酸の発現を減少させるためにｍＲＮＡを不活化することができる。したがって、これらの分子により、異常なまたは望ましくない受容体核酸発現によって特徴づけられる障害を治療することができる。この技術には、ｍＲＮＡの翻訳能力を減少させるｍＲＮＡ中の１つまたは複数の領域に相補的なヌクレオチド配列を含むリボザイムによる切断が含まれる。可能な領域には、コード領域、特に、受容体タンパク質の触媒活性および他の機能的活性（リガンド結合など）に対応するコード領域が含まれる。
【０３３３】
受容体ポリヌクレオチドによれば、受容体遺伝子発現が異常な細胞を有する患者の遺伝子治療用のベクターも得られる。したがって、ｅｘ　ｖｉｖｏで操作し、患者に戻した患者の細胞を含む組換え細胞を、患者を治療するための所望の受容体タンパク質を産生する個体に移入する。
【０３３４】
本発明はまた、生物学的サンプル中の受容体核酸の存在の検出用のキットを含む。例えば、キットは、生物学的サンプル中の受容体核酸を検出することができる標識されているか標識可能な核酸または薬剤などの試薬、サンプル中の受容体核酸の量を同定する手段、およびサンプル中の受容体核酸の量と標準とを比較する手段を含むことができる。化合物または薬剤を、適切な容器に封入することができる。キットは、さらに、受容体ｍＲＮＡまたはＤＮＡの検出用のキットの使用についての指示を含むことができる。
【０３３５】
コンピュータで読み込み可能な手段
本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を、その使用を容易にするために種々の培地中でも得られる。本明細書中で使用される、用語「提供された」は、本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を含む、単離核酸またはアミノ酸分子以外の生産物をいう。このような生産物により、当業者が天然または精製形態で存在するヌクレオチド配列またはアミノ酸配列またはそのサブセットの試験（例えばオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のサブセットに直接適用できない手段を使用して生産物を試験することができる形態でのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が得られる。
【０３３６】
この実施形態の１つの適用では、本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を、コンピュータで読み込み可能な媒体に記録することができる。本明細書中で使用される、用語「コンピュータ読み込み可能媒体」は、コンピュータで直接読み込みおよびアクセルすることができる任意の媒体をいう。このような媒体には、以下が含まれるが、これらに限定されない：磁気記憶媒体（フロッピーディスク、ハードディスク記憶媒体、および磁気テープなど）、光記憶媒体（ＣＤ−ＰＯＭなど）、電気的記憶媒体（ＲＡＭおよびＲＯＭなど）、およびこれらのカテゴリーのハイブリッド（磁気／光記憶媒体など）。当業者は、現在公知の任意のコンピュータ媒体をいかに使用して媒体に記憶された本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を有するコンピュータ読み込み可能媒体を含む生産物を製造することができるかを容易に認識する。
【０３３７】
本明細書中で使用される、用語「記録された」は、コンピュータ読み込み可能媒体上の情報の記憶プロセスをいう。当業者は、本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列情報を含む生産物の製造のために、コンピュータ読み込み可能媒体上の情報の現在公知の任意の読み込み法を容易に適用することができる。
【０３３８】
本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列情報を記憶させたコンピュータ読み込み可能媒体の製造のために、当業者は種々のデータ記憶構造を利用可能である。データ記憶構造の選択は、一般に、記憶情報のアクセスのために選択される手段に基づく。さらに、種々のデータ処理プログラムおよびフォーマットを使用して、コンピュータ読み込み可能媒体上の本発明のヌクレオチド配列情報を記憶することができる。配列情報を、市販のソフトウェア（ＷｏｒｄＰｅｒｆｅｃｔおよびＭｉｃｒｏＳｏｆｔ　Ｗｏｒｄなど）でフォーマットした文書処理テキストファイルとして処理するか、データベースアプリケーション（ＤＢ２、Ｓｙｂａｓｅ、Ｏｒａｃｌｅなど）で記憶されたＡＳＣＩＩファイルの形態で処理することができる。当業者は、本発明のヌクレオチド配列情報が記録されたコンピュータ読み込み可能媒体を得るために、任意の数のデータ処理構築フォーマット（例えば、テキストファイルまたはデータベース）を容易に適用することができる。
【０３３９】
コンピュータ読み込み可能形態でのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の獲得によって、当業者は、種々の目的に配列情報に日常的にアクセスすることができる。例えば、当業者は、データ記憶手段内に記憶された配列情報を用いて標的配列または標的構造モチーフを比較するために、コンピュータ読み込み可能形態の本発明のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を使用することができる。このような手段を使用して、特定の標的配列または標的モチーフに適合する本発明の配列の断片または領域を同定することができる。
【０３４０】
本明細書中で使用される、「標的配列」は、６つまたはそれ以上のヌクレオチドまたは２つまたはそれ以上のアミノ酸の任意のＤＮＡ配列またはアミノ酸配列であり得る。当業者は、標的配列が長いほど、標的配列はデータベースで無作為に発生しなくなることを容易に理解することができる。標的配列の最も好ましい配列長は、約１０〜１００アミノ酸または約３０〜３００ヌクレオチド残基である。しかし、遺伝子発現およびタンパク質のプロセシングに関与する配列などの商業的に重要な断片はより短くても良いことが十分に認識される。
【０３４１】
本明細書中で使用される、「標的構造モチーフ」または「モチーフ」は、配列を標的モチーフの折りたたみの際に形成される３次元高次構造に基づいて選択された任意の合理的に選択された配列または配列の組み合わせをいう。当該分野で公知の種々の標的モチーフが存在する。タンパク質標的モチーフには、酵素活性部位およびシグナル配列が含まれるが、これらに限定されない。核酸標的配列には、プロモーター配列、ヘアピン構造および誘導発現エレメント（タンパク質結合配列）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３４２】
分析および他の配列との比較用のコンピュータ読み取り可能媒体において得られる配列情報に、当業者が可能なコンピュータソフトウェアを公的に利用可能である。種々の公知のアルゴリズムが公的に開示されており、種々の市販の検索手段実行用のソフトウェアが本発明のコンピュータベースのシステムに使用するか、使用することができる。このようなソフトウェアには、ＭａｃＰａｔｔｅｒｎ（ＥＭＢＬ）、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＸ（ＮＣＢＩＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３４３】
例えば、ＳｙｂａｓｅシステムでＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５、４０３〜４１０）およびＢＬＡＺＥ（Ｂｒｕｔｌａｇら、１９９３、Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．、１７、２０３〜２０７）検索アルゴリズム実行ソフトウェアを使用して、ＯＲＦまたは他のライブラリー由来のタンパク質に相同性を有する本発明の配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を同定することができる。このようなＯＲＦは、たんぱく質コード断片であり、種々の反応で使用される酵素などの商業的に重要なタンパク質の製造および商業的に有用な代謝産物の製造に有用である。
【０３４４】
ベクター／宿主細胞
本発明はまた、受容体ポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。用語「ベクター」は、受容体ポリヌクレオチドを輸送することができる媒介物（好ましくは核酸分子）をいう。ベクターが核酸分子である場合、受容体ポリヌクレオチドをベクター核酸に共有結合させる。本発明のこの態様では、ベクターには、プラスミド、一本鎖または二本鎖ファージ、一本鎖または二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡウイルスベクター、または人工染色体（ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＹＡＣ、ＯＲ　ＭＡＣなど）が含まれる。
【０３４５】
ベクターを、受容体ポリヌクレオチドのさらなるコピーを複製および産生する染色体外エレメントとして宿主中に維持することができる。あるいは、ベクターを、宿主細胞ゲノムに組込み、宿主細胞の複製時に受容体ポリヌクレオチドのさらなるコピーを産生することができる。
【０３４６】
本発明は、受容体ポリヌクレオチドの維持用のベクター（クローニングベクター）または発現用のベクター（発現ベクター）を提供する。ベクターは、原核細胞または真核細胞またはその両方（シャトルベクター）で機能することができる。
【０３４７】
発現ベクターは、ポリヌクレオチドの転写が宿主中で行われるようにベクター中で受容体に作動可能に連結されたシス作用調節領域を含む。ポリヌクレオチドを、転写に影響を与えることができる別のポリヌクレオチドを有する宿主細胞に組込むことができる。したがって、第２のポリヌクレオチドは、ベクター由来の受容体ポリヌクレオチドの転写を可能にするシス調節制御コントロール領域と相互作用するトランス作用因子を提供することができる。あるいは、トランス作用因子を、宿主によって供給することができる。最終的にトランス作用因子を、ベクター自体から産生することができる。
【０３４８】
しかし、いくつかの実施形態では、受容体ポリヌクレオチドの転写および／または翻訳を無細胞系で得ることができることが理解される。
【０３４９】
本明細書中に記載のポリヌクレオチドを作動可能に連結することができる調節配列は、ｍＲＮＡ転写指向用のプロモーターを含む。これらには、λバクテリオファージ、ｌａｃ、ＴＲＰ、およびＴＡＣ由来のプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のプロモーター、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、ＣＭＶ媒介初期プロモーター、アデノウイルス初期および後期プロモーター、およびレトロウイルス長末端反復が含まれるが、これらに限定されない。
【０３５０】
転写を促進する調節領域に加えて、発現ベクターは、転写を調整する領域（リプレッサー結合部位およびエンハンサーなど）も含むことができる。例として、ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス前初期エンハンサー、ポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサー、およびレトロウイルスＬＴＲエンハンサーが含まれる。
【０３５１】
転写開始および調節部位を含むことに加えて、発現ベクターはまた、転写終結に必要な配列および転写領域に翻訳のためのリボゾーム結合部位を含むことができる。他の発現用の調節制御エレメントは、開始および終結コドンならびにポリアデニル化シグナルを含む。当業者は、発現ベクターにおいて有用な多数の調節配列を認識しているであろう。このような調節配列は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に記載されている。
【０３５２】
種々の発現ベクターを使用して、受容体ポリヌクレオチドを発現させることができる。このようなベクターには、以下が含まれる：染色体、エピソーム、およびウイルス由来のベクター（例えば、細菌プラスミド、バクテリオファージ、酵母エピソーム、酵母染色体エレメント（酵母人工染色体を含む）、ウイルス（バキュロウイルス、パポバウイルス（ＳＶ４０など）、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、およびレトロウイルス）由来のベクター）。ベクターはまた、これらの供給源の組み合わせ（プラスミドおよびバクテリオファージ遺伝子エレメント由来のベクター（例えば、コスミドおよびファージミド））由来であり得る。原核生物宿主および真核生物宿主用の適切なクローニングおよび発現ベクターは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に記載されている。
【０３５３】
調節配列は、温度、栄養素の添加、または外因性因子（ホルモンまたは他のリガンド）などにより１つまたは複数の宿主細胞における構築発現（すなわち、組織特異的）または１つまたは複数の細胞型における誘導発現を提供することができる。原核生物宿主および真核生物宿主における構築発現および誘導発現を得るための種々のベクターは、当業者に周知である。
【０３５４】
受容体ポリヌクレオチドを、周知の方法によってベクター核酸に挿入することができる。一般に、最終的に発現されるＤＮＡ配列を、１つまたは複数の制限酵素でのＤＮＡ配列および発現ベクターの切断および得られた断片のライゲーションによって発現ベクターに連結する。制限酵素消化およびその後のライゲーションの手順は、当業者に周知である。
【０３５５】
周知の技術を用いて、適切なポリヌクレオチドを含むベクターを、増殖または発現用の適切な宿主細胞に移入することができる。細菌細胞には、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍが含まれるが、これらに限定されない。真核細胞には、酵母、昆虫細胞（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａなど）、動物細胞（ＣＯＳおよびＣＨＯ細胞など）、および植物細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０３５６】
本明細書中に記載のように、融合タンパク質としてポリペプチドを発現することが望ましい。したがって、本発明は、受容体ポリペプチドの産生が可能な融合ベクターを提供する。融合ベクターは、組換えタンパク質発現の増加、組換えタンパク質の溶解性の増加、および例えば、親和性精製用のリガンドとしての作用によるタンパク質精製の補助が可能である。タンパク質分解部位を融合部分の結合部に移入して、所望のポリペプチドを最終的に融合部分から分離することができる。タンパク質分解酵素には、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼが含まれるが、これらに限定されない。典型的な融合発現ベクターには、標的組換えタンパク質を標的化するために、それぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡに融合するｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈら、１９８８、Ｇｅｎｅ、６７、３１〜４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）が含まれる。適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍａｎｎら、１９８８、Ｇｅｎｅ、６９、３０１〜３１５）およびｐＥＴ　１１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、１９９０、Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、６０〜８９）が含まれる。
【０３５７】
宿主細胞の組換えタンパク質分解能力を阻害されている遺伝的背景を得ることによって、宿主細胞中の組換えタンパク質発現を最小にすることができる。（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ、Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、１９９０、１１９〜１２８）。あるいは、目的のポリヌクレオチド配列を、特定の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）に使用するための好ましいコドンを得るために変化させることができる。（Ｗａｄａら、１９９２、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、２０、２１１１〜２１１８）。
【０３５８】
受容体ポリヌクレオチドを、酵母で操作可能な発現ベクターによって発現させることもできる。酵母（例えば、Ｓ，ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）での発現用のベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、１９８７、ＥＭＢＯ　Ｊ．、６、２２９〜２３４）、ｐＭＦａ（Ｋｕｒｊａｎら、１９８２、Ｃｅｌｌ、３０、９３３〜９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、１９８７、Ｇｅｎｅ、５４、１１３〜１２３）、およびｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）が含まれる。
【０３５９】
受容体ポリヌクレオチドを、例えば、バキュロウイルス発現ベクターを用いて、昆虫細胞中で発現させることもできる。培養昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）におけるタンパク質発現に利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃ系（Ｓｍｉｔｈら、１９８３、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．、３、２１５６〜２１６５）およびｐＶＬ系（Ｌｕｃｋｌｏｗら、１９８９、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７０、３１〜３９）が含まれる。
【０３６０】
本発明の一定の実施形態では、本明細書中に記載のポリヌクレオチドを、哺乳動物の発現ベクターを用いて哺乳動物細胞中で発現させる。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ、３２９、８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら、１９８７、ＥＭＢＯ　Ｊ．、６、１８７〜１９５）が含まれる。
【０３６１】
本明細書中に列挙した発現ベクターは、受容体ポリヌクレオチドの発現に有用な当業者が利用可能な周知のベクターのみによって得られる。当業者は、本明細書中に記載のポリヌクレオチドの増殖または発現の維持に適切な他のベクターを認識しているであろう。これらは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に見出される。
【０３６２】
本発明はまた、本明細書中に記載の核酸配列を逆方向でベクターにクローニングされるが、アンチセンスＲＮＡの転写が可能な調節配列に作動可能に連結されるベクターを含む。したがって、アンチセンス転写を、コード領域および非コード領域を含む、本明細書中に記載のポリヌクレオチド配列の全部または一部を作製することができる。このアンチセンスＲＮＡの発現を、センスＲＮＡの発現（調節配列、構造または誘導発現、組織特異的発現）に関連する上記の各パラメーターに供する。
【０３６３】
本発明はまた、本明細書中に記載のベクターを含む組換え宿主細胞に関する。したがって、宿主細胞には、原核細胞、下等真核細胞（酵母など）、他の真核細胞（昆虫など）、および高等真核細胞（哺乳動物細胞など）が含まれる。
【０３６４】
組換え宿主細胞を、当業者が容易に利用可能な技術によって、細胞への本明細書中に記載のベクター構築物の移入によって調製する。これらの技術には、以下が含まれるが、これらに限定されない：リン酸カリウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、陽イオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、リポフェクション、およびＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９に記載の他の技術。
【０３６５】
宿主細胞は、１つを超えるベクターを含むことができる。したがって、異なるヌクレオチド配列を同一の細胞の異なるベクターに移入することができる。同様に、受容体ポリヌクレオチドを、単独または受容体ポリヌクレオチドと無関係の他のポリヌクレオチド（発現ベクターのトランス活性化を与えるもの）と共に移入することができる。１つを超えるベクターが細胞に移入された場合、ベクターを、単独で移入するか、同時に移入されるか、受容体ポリヌクレオチドベクターと結合することができる。
【０３６６】
バクテリオファージおよびウイルスベクターの場合、これらを、標準的な感染法および形質導入法によって封入またはカプセル化されたウイルスに移入することができる。ウイルスベクターは、複製コンピテントまたは複製欠損である。ウイルス複製が欠損している場合、宿主中で欠損を補足する機能が得られるように複製される。
【０３６７】
ベクターは、一般に、組換えベクター構築物を含む細胞の亜集団の選択が可能な選択マーカーを含む。マーカーは、本明細書中に記載のポリヌクレオチドを含むベクター中に含まれるか、異なるベクター中に存在し得る。マーカーには、原核宿主細胞についてはテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子が含まれ、真核宿主細胞についてはジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性遺伝子が含まれる。しかしながら、いずれのマーカーは表現型特徴が効果的であろう選択を提供する。
【０３６８】
成熟タンパク質を、適切な調節配列の調節下で細菌、酵母、哺乳動物細胞、および他の細胞中に産生することができる一方で、無細胞転写および翻訳系を用い、本明細書中に記載のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いて、これらのタンパク質を産生することもできる。
【０３６９】
ポリペプチドの分泌を所望する場合、適切な分泌シグナルをベクターに組込む。シグナル配列は、受容体ポリペプチドに対して内因性であるか、これらのポリペプチドに対して異種であり得る。
【０３７０】
ポリペプチドが培地中に分泌されない場合、タンパク質を、標準的な破壊法（凍解、超音は処理、機械的破壊、溶解剤の使用などを含む）によって宿主細胞から単離することができる。次いで、ポリペプチドを回収して、周知の精製法（硫酸アンモニウム沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィーを含む）によって精製することとができる。
【０３７１】
本明細書中に記載のポリペプチドの組換え産生における宿主細胞に依存して、ポリペプチドは、細胞に依存して種々のグリコシル化パターンを有し、細菌で産生される場合はおそらく非グリコシル化パターンであり得ることも理解される。さらに、ポリペプチドは、宿主媒介プロセスの結果として、最初に修飾されたメチオニンを含み得る場合がある。
【０３７２】
ベクターおよび宿主細胞の使用
「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本発明の特定の細胞だけてなく、このような細胞の子孫または潜在的子孫をいう。変異または環境の影響によって後継世代に一定の修飾が起こり得るので、実際、このような子孫は、親細胞と同一ではないが、本明細書中で使用される用語の範囲内に依然として含まれることが理解される。
【０３７３】
本明細書中に記載のポリペプチドを発現する宿主細胞、特に組換え宿主細胞は、種々の用途がある。第１に、この細胞は、さらに精製して所望の量の受容体タンパク質または断片を産生することができる受容体タンパク質またはポリペプチドの産生に有用である。したがって、発現ベクターを含む宿主細胞は、ポリペプチド産生に有用である。
【０３７４】
宿主細胞はまた、受容体または受容体断片を含む細胞ベースのアッセイの構築に有用である。したがって、天然の受容体を発現する組換え宿主細胞は、受容体機能を刺激または阻害する化合物のアッセイに有用である。これには、リガンド結合、転写または翻訳レベルでの遺伝子発現、Ｇタンパク質相互作用、およびシグナル伝達経路の化合物が含まれる。
【０３７５】
宿主細胞はまた、これらの機能が影響を受ける受容体変異の同定に有用である。変異が自然発生して疾患を引き起こす場合、変異を含む宿主細胞は、天然の受容体に対するその効果によって示すことができる変異受容体に対する所望の効果（例えば、機能の刺激または阻害）を有する化合物のアッセイに有用である。
【０３７６】
組換え宿主細胞はまた、異種アミノ末端細胞外ドメイン（または他の結合領域）によって活性化を活性化または抑制する化合物を評価するための、本明細書中に記載のキメラポリペプチドの発現に有用である。あるいは、全膜貫通ドメイン（またはその一部）にわたる異種領域を使用して、任意の所与の宿主細胞に対する所望のアミノ末端細胞外ドメイン（または他の結合領域）の効果を評価することができる。この実施形態では、特異的宿主に適合する全膜貫通ドメイン（またはその一部）にわたる領域を使用してキメラベクターを作製する。あるいは、異種カルボキシ末端の細胞内（例えば、シグナル伝達）ドメインを、宿主細胞に移入することができる。
【０３７７】
さらに、１つまたは複数の種々の機能（例えば、リガンド結合またはＧタンパク質結合）を増加させるかまたは減少させるように操作し、この機能を使用して個体中の受容体タンパク質を増加または置換するように変異受容体を設計することができる。したがって、宿主細胞により、異常な受容体の置換または治療効果が得られる異常な受容体の提供によって治療の利点を得ることができる。１つの実施形態では、細胞により異常に活性な受容体が得られる。
【０３７８】
別の実施形態では、細胞により異常に不活性な受容体が得られる。これらの受容体は、個体における内因性受容体と競合することができる。
【０３７９】
別の実施形態では、リガンドの内因性受容体と競合させるために、活性化することができない受容体を発現する細胞を個体に移入する。例えば、過剰なリガンドが治療様式の一部である場合、このリガンドを治療の特定の点で不活性にする必要があり得る。リガンドと競合するが、受容体の活性化に影響を与え得ない細胞が有利であろう。
【０３８０】
宿主細胞ゲノムにおける内因性受容体ポリヌクレオチド配列のｉｎ ｓｉｔｕでの変化が可能な相同組換え宿主細胞を産生することもできる。宿主細胞には、安定な細胞株、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞、またはクローニング微生物が含まれるが、これらに限定されない。この技術は、ＷＯ　９３／０９２２２、ＷＯ　９１／１２６５０、ＷＯ　９１／０６６６７、米国特許第５，２７２，０７１号、および同第５，６４１，６７０号により完全に記載されている。簡単に述べれば、受容体遺伝子に対して近位または遠位の受容体ポリヌクレオチドまたは配列に対応する特異的ポリヌクレオチド配列を、遺伝子発現が影響を受け得る場合、相同組換えによって宿主細胞に組込む。１つの実施形態では、内因性配列の発現を増加させるか減少させる調節配列を移入する。したがって、受容体タンパク質を通常は産生しない細胞中に産生させることができる。あるいは、受容体タンパク質の発現の増加を、特定のレベルでタンパク質を正常に産生する細胞に影響を与えることができる。さらに、発現を、特異的調節配列の移入によって減少または消滅させることができる。調節配列は、受容体タンパク質配列と異種であるか、発現に影響を与える所望の変異を有する相同性配列であり得る。あるいは、全遺伝子を検出することができる。調節配列は、宿主細胞に特異的であるか、ある細胞型よりも機能し得る。なおさらに、特異的変異を、任意の所望の遺伝子領域に移入して変異受容体タンパク質を産生することができる。このような変異を、例えば、リガンド結合部位などの特異的な機能的領域に移入することができる。
【０３８１】
１つの実施形態では、宿主細胞は、受容体遺伝子の変化を含むトランスジェニック動物の作製に使用することができる、受精卵母細胞または胚幹細胞であり得る。あるいは、宿主細胞は、細胞の特異的サブセットを生じ、動物中のトランスジェニック組織の作製に使用することができる幹細胞または他の初期組織前駆体であり得る。相同組換えベクターについては、Ｔｈｏｍａｓら、１９８７、Ｃｅｌｌ、５１、５０３も参照のこと。ベクターを、胚幹細胞に移入し（例えば、エレクトロポレーションによる）、移入遺伝子が内因性受容体遺伝子で相同組換えされている細胞を選択する（例えば、Ｌｉ　ｅら、１９９２、Ｃｅｌｌ、６９、９１５を参照のこと）。次いで、選択した細胞を、動物（マウス）の芽細胞に注射して、凝集キメラを形成させる（例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ、Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ　ａｎｄ　Ｅｍｂｒｙｏｍｉｃ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ：Ａ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ、１９８７、１１３〜１５２を参照のこと）。次いで、キメラ胚を、適切な偽妊娠雌乳母に移植し、胚を出産させる。その生殖細胞に相同組換えＤＮＡを保有する子孫を使用して、この動物の全細胞が導入遺伝子の生殖系列伝達によって相同組換えＤＮＡを含む動物を繁殖させる。相同組換えベクターおよび相同組換え動物の構築法は、Ｂｒａｄｌｅｙ、１９９１、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２、８２３〜８２９およびＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９０／１１３５４、ＷＯ　９１／０１１４０、およびＷＯ　９３／０４１６９にさらに記載されている。
【０３８２】
遺伝子操作した宿主細胞を使用して、非ヒトトランスジェニック動物を作成することができる。トランスジェニック動物は、動物の１つまたは複数の細胞が導入遺伝子を含む哺乳動物（例えば、ラットまたはマウスなどのげっ歯類）であることが好ましい。導入遺伝子は、トランスジェニック動物が発生し、トランスジェニック動物の１つまたは複数の細胞型または組織における成熟動物のゲノムに残存する細胞のゲノムに組込まれる外因性ＤＮＡである。これらの動物は、受容体タンパク質機能の研究ならびに受容体タンパク質活性のモジュレーターの同定および評価に有用である。
【０３８３】
トランスジェニック動物の他の例には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、および両生類が含まれる。
【０３８４】
１つの実施形態では、宿主細胞は、受容体ポリヌクレオチド配列が移入されている受精卵母細胞または胚幹細胞である。
【０３８５】
トランスジェニック動物を、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染などによる受精卵母細胞の雄性前核への核酸の移入および偽妊娠雌乳母動物中での卵母細胞の発生によって作製することができる。任意の受容体ヌクレオチド配列を、導入遺伝子として非ヒト動物（マウスなど）のゲノムに移入することができる。
【０３８６】
任意の調節配列または発現ベクターに有用な他の配列は、トランスジェニック配列の一部を形成することができる。これには、まだ含まれていない場合、イントロン配列およびポリアデニル化シグナルを含む。特定の細胞に受容体タンパク質発現を指向させるために、組織特異的調節配列を導入遺伝子に作動可能に連結させることができる。
【０３８７】
胚操作およびマイクロインジェクションを介したトランスジェニック動物（マウスなど）の作製法は、当該分野で慣習的であり、例えば、Ｌｅｄｅｒらに付与された米国特許第４，７３６，８６６号、同第４，８７０，００９号、Ｗａｇｎｅｒらに付与された米国特許第４，８７３，１９１号、およびＨｏｇａｎ、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｍｏｕｓｅ　Ｅｍｂｒｙｏ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８６に記載されている。他のトランスジェニック動物作製用の類似の方法を使用する。初代トランスジェニック動物を、そのゲノムにおける導入遺伝子の存在および／または動物の組織または細胞中のトランスジェニックｍＲＮＡの発現に基づいて同定することができる。次いで、初代トランスジェニック動物を使用して、導入遺伝子を保有するさらなる動物を繁殖させることができる。さらに、導入遺伝子を保有するトランスジェニック動物を、他の導入遺伝子を保有する他のトランスジェニック動物とさらに繁殖させることができる。トランスジェニック動物には、全動物または動物中の組織が本明細書中に記載の相同組換え宿主細胞を用いて作製した動物も含まれる。
【０３８８】
別の実施形態では、導入遺伝子の発現の調節が可能な選択された系を含む非ヒトトランスジェニック動物を作製することができる。このような系の一例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏら、１９９２、ＰＮＡＳ、８９、６２３２〜６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１、１３５１〜１３５５）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系を使用して導入遺伝子の発現を調節する場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよびおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝を含む動物が必要である。このような動物を、例えば、一方は選択されたタンパク質をコードする導入遺伝子を含み、他方はリコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む２つの導入遺伝子動物の交配によって、「二重」導入遺伝子動物の構築物から得ることができる。
【０３８９】
本明細書中に記載の非ヒト導入遺伝子動物のクローンを、Ｗｉｌｍｕｔら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ、３８５、８１０〜８１３ならびにＰＣＴ国際公開番号ＷＯ　９７／０７６６８およびＷＯ　９７／０７６６９に記載の方法にしたがって産生することもできる。簡単に述べれば、トランスジェニック動物由来の細胞（例えば、体細胞）を単離して、増殖サイクルを抜け出てＧ０期に入るように誘導することができる。次いで、例えば、電気パルスの使用によって、静止期細胞が単離された同種の動物由来の除核卵母細胞に静止期細胞を融合させることができる。次いで、再構築した卵母細胞を培養して桑実胚または芽細胞まで発達させ、偽妊娠雌乳母動物に移す。この雌乳母から誕生した子孫は、細胞（例えば、体細胞）が単離された動物クローンである。
【０３９０】
本明細書中に記載のポリペプチドを発現する組換え細胞を含むトランスジェニック動物は、ｉｎ ｖｉｖｏでの本明細書中に記載のアッセイの構築に有用である。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで存在し、リガンド結合、受容体の活性化、およびシグナル伝達に影響を与え得る種々の生理学的因子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの無細胞または細胞ベースのアッセイからは明白ではない。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏでの受容体機能（リガンド相互作用を含む）、受容体機能およびリガンド相互作用に対する特異的変異受容体の影響、キメラ受容体の影響を評価するための非ヒトトランスジェニック動物の獲得に有用である。１つまたは複数の受容体機能を実質的または完全に除去する変異である無発現変異の影響を評価することも可能である。
【０３９１】
一般に、トランスジェニック動物の作製法は、本発明の核酸配列（トランスジェニック動物において受容体タンパク質を発現することができる核酸配列）を培養細胞またはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に移入するステップを包含する。ｉｎ ｖｉｖｏで移入した場合、核酸を、１つまたは複数の細胞型、すなわち、１つまたは複数の組織型が受容体タンパク質をコードする核酸を発現するようにインタクトな生物に移入する。あるいは、トランスジェニック動物の作製について本明細書中に記載のように、培養細胞（胚幹細胞など）のトランスフェクションによって生物中の実質的に全ての細胞に核酸を移入することができ、この細胞を用いて完全なトランスジェニック生物を作製することができる。記載のように、さらなる実施形態では、宿主細胞は、受精卵母細胞であり得る。次いで、このような細胞をメス乳母動物において発生させて、トランスジェニック生物を作製する。
【０３９２】
医薬組成物
受容体核酸分子、タンパク質（特に、アミノ末端細胞外ドメインなどの断片）、タンパク質のモジュレーター、および抗体（本明細書中で「活性化合物」ともいう）を、被験体（例えば、ヒト）への投与に適切な医薬組成物に組込むことができる。このような組成物は、典型的には、核酸分子、タンパク質、モジュレーター、または抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【０３９３】
本明細書中で使用される、用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的投与に適合する任意および全ての溶媒、分散媒、被覆物、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などを含むことを意図する。薬学的有効成分用のこのような媒体および薬剤は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合する範囲外で、このような媒体を、本発明の組成物中で使用することができる。補助的に活性な化合物を、この組成物に組込むこともできる。本発明の医薬組成物は、その意図する投与経路と適合するように処方される。投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内）、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与が含まれる。非経口、皮内、または皮下への適用に使用される溶液または懸濁液には、以下の成分が含まれる：滅菌希釈剤（注射用の水、生理食塩水、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒など）；抗菌薬（ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸など）；緩衝液（酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩など）および弾力性調整剤（塩化ナトリウムまたはデキストロースなど）。ｐＨを、酸または塩基（塩酸または水酸化ナトリウム）で調整することができる。非経口用調製物を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回投与用バイアル中に封入することができる。
【０３９４】
注射用に適切な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および滅菌注射用溶液または分散液の即席の調製用の滅菌粉末が含まれる。静脈内投与では、適切なキャリアには、生理食塩水、静菌水溶液、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ　ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）、またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合、組成物は滅菌されていなければならず、シリンジでの扱いやすい範囲の液体であるべきである。組成物は、製造および保存条件下で安定であり、微生物（細菌および真菌など）の汚染に反して保存されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリコール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含む溶媒または分散媒およびその適切な混合物であり得る。適切な流動性を、例えば、被覆物（レシチンなど）の使用、分散されている場合は必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物作用の保護を、種々の抗菌薬および抗真菌薬（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成することができる。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖、ポリアルコール（マンニトールなど）、ソルビトール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。吸収遅延剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の添加によって、注射可能な組成物の吸収を延長させることができる。
【０３９５】
滅菌注射用溶液を、上記成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶液中への、必要量の活性化合物（例えば、受容体タンパク質または抗受容体抗体）の組込み、および必要ならばその後濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液を、ベースとなる分散媒および上記の必要な他の成分を含む滅菌賦形剤への活性化合物の組込みによって調製することができる。滅菌注射用溶液調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製法は、先に滅菌濾過した溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得るための減圧乾燥および凍結乾燥である。
【０３９６】
経口用組成物には、不活性希釈剤または食用キャリアが含まれる。これらを、ゼラチンカプセルに封入するか、錠剤に圧搾することができる。経口投与では、薬剤を、胃で残存するために腸溶形態に含め、さらに公知の方法でＧＩ管の特定の領域で放出されるように被覆または混合することができる。経口治療投与の目的で、活性化合物を、補形薬と共に組込んで、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物を、うがい薬としての用途で液体キャリアを用いて調製することもでき、液体キャリア中の化合物を経口で適用し、すすいで、吐き出すか飲み込む。薬学的に適合可能な結合剤および／またはアジュバント物質を、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、以下の任意の成分または類似の性質の化合物を含むことができる：結合剤（微結晶性セルロ−ス、トラガカントガム、またはゼラチンなど）；補形薬（デンプンまたはラクトース、崩壊薬（アルギン酸など）、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチなど）；滑剤（ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなど）；潤滑剤（コロイド状シリコンジオキシドなど）；甘味料（スクロースまたはサッカリンなど）；香味料（ペパーミント、サリチル酸メチル、またはレンジ香味料など）。
【０３９７】
吸入投与では、化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素などのガス）を含む圧縮コンテナまたはディスペンサーまたは噴霧器からエアゾールスプレーの形態で送達される。
【０３９８】
全身投与はまた、経粘膜または経皮的手段であり得る。経粘膜または経皮投与では、浸透させるバリアに適切な浸透剤を処方物に使用する。一般に、このような浸透剤は公知であり、例えば、経粘膜投与では、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与を、鼻内噴霧または座薬の使用によって行うことができる。経皮投与では、活性化合物を、一般に当該分野で公知の軟膏、軟膏、ゲル、またはクリームに処方する。
【０３９９】
化合物を、直腸送達用の座薬（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を用いる）または持続的浣腸の形態に調製することもできる。
【０４００】
１つの実施形態では、活性化合物を、移植およびマイクロカプセル化送達系を含む身体の迅速な排泄から化合物を保護するキャリア（放出調節処方物など）と共に調製する。生分解性で生体適合性のポリマー（エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、およびポリ乳酸）を使用することができる。このような処方物の調製法は、当業者に明らかである。物質を、Ａｌｚａ　ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｉｎｃ．から購入することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞をターゲッティングされたリポソームを含む）を、薬学的に受容可能なキャリアとして使用することもできる。これらを、当業者に周知の方法（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号）にしたがって調製することができる。
【０４０１】
投与が容易で投薬量が均一な投薬単位形態での経口または非経口組成物を処方するのに特に有利である。本明細書中で使用される「投薬単位形態」は、治療を受ける被験体用の単位用量として適切な物理的分散単位をいう。予め秤量した量の活性化合物を含む各単位は、必要な薬学的キャリアに関連する所望の治療効果が得られるように計算した。本発明の投薬単位形態の仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療効果、ならびに個体治療用の活性化合物のような複合材の当該分野での本来の制限に影響されるか依存する。
【０４０２】
本発明の核酸分子を、ベクターに挿入し、これを遺伝子治療のベクターとして使用することができる。遺伝子治療ベクターを、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号）または定位固定注射（例えば、Ｃｈｅｎら、１９９４、ＰＮＡＳ、９１、３０５４〜３０５７を参照のこと）によって被験体に送達させることができる。遺伝子治療ベクターの薬学的調製には条件を満たした希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含むことができるか、遺伝子送達賦形剤が埋め込まれた放出遅延基質を含むことができる。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターを組換え細胞（例えば、レトロウイルスベクター）からインタクトで産生することができる場合、薬学的調製物は、遺伝子送達系が得られる１つまたは複数の細胞を含むことができる。
【０４０３】
医薬組成物には、投与の支持と共にコンテナ、パック、またはディスペンサーを含むことができる。
【０４０４】
本明細書中で定義のように、治療有効量（すなわち、有効投薬量）のタンパク質またはポリペプチドは、約０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは焼く０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜９ｍｇ／ｋｇ、３〜８ｍｇ／ｋｇ、４〜７ｍｇ／ｋｇ、または５〜６ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０４０５】
当業者は、一定の因子が、患者の効果的な治療に必要な投薬量に影響を植え得ることを認識し、この因子には、以下が含まれるが、これらに限定されない：疾患または障害の重症度、薬歴、身体全体の健康および／または被験体の年齢。さらに、治療有効量のタンパク質、ポリペプチド、または抗体での被験体の治療を、一連の治療に含むことができる。好ましい例として、被験体を、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重を１週間に１回約１週間〜１０週間、好ましくは２〜８週間、よりこのましくは３〜７週間、さらにより好ましくは約４、５、または６週間の範囲のタンパク質またはポリペプチドで治療する。治療に使用される有効量の抗体、タンパク質、またはポリペプチドを、特定の治療クールで増加または減少させることができることも認識される。投薬量が変化して、本明細書中に記載の診断アッセイの結果から明白になり得る。
【０４０６】
本発明は、発現または活性を調整する因子を含む。因子は、小分子であり得る。例えば、このような小分子には、ペプチド、ペプチド模倣物、アミノ酸、アミノ酸アナログ、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、または約１０，０００ｇ／モル未満の分子量を有する無機化合物（すなわち、ヘテロ有機化合物および有機金属化合物を含む）、５，０００ｇ／モル未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物、１，０００ｇ／モル未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物、５００ｇ／モル未満の分子量を有する有機化合物または無機化合物、および塩、エステル、ならびにこのような化合物の薬学的に受容可能な他の形態が含まれるが、これらに限定されない。
【０４０７】
適切な用量の小分子が通常の技術を有する医師、獣医、または研究者の知識の範囲内で多数の因子に依存することが認識される。小分子の用量は、例えば、治療を受けるサンプルの同一性、サイズ、および条件に依存し、さらに、組成物の投与経路、および適用できるならば、本発明の核酸またはポリペプチドを有する小分子に実施者が所望する効果に依存して変化する。例として、投与量には、ミリグラムまたはマイクログラム量の小分子／キログラムの被験体サンプルの重さ（例えば、約１μｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ）が含まれる。小分子の適切量は、調整される発現または活性に関連する小分子の効力に依存することがさらに理解される。このような適切用量を、本明細書中に記載のアッセイを用いて同定することができる。本発明のポリペプチドまたは核酸の発現または活性を調整するために、１つまたは複数のこれらの小分子が動物（例えば、ヒト）に投与される場合、医師、獣医、または研究者は、例えば、最初は比較的低用量で処方して、その後適切な反応が得られるまで段階的に増加させる。さらに、任意の特定の動物についての特定の用量レベルは使用した特異的化合物の活性、被験体の年齢、体重、身体全体の健康、性、および被験体の食事、投与時間、投与経路、排泄速度、および任意の薬物の組み合わせ、および調整される発現または活性の程度を含む種々の因子に依存することが理解される。
【０４０８】
本発明を、多くの異なる形態で実施することができるが、本明細書中に記載の実施形態に制限されることを意図しない。むしろ、この開示が当業者に本発明を完全に伝達するようにこれらの実施形態を提供する。本発明の多数の修正および他の実施形態が当業者に予想されるが、本発明は、上記の記載に示した技術の利益を有する。特定の用語を使用したが、これらは、特記しない限り当該分野で使用されている。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、Ｐｒｏｓｉｔｅデータベースのタンパク質パターンに対する２８３８受容体の比較を示し、特に、７回膜貫通セグメントロドプシンスーパーファミリーに対して高いスコアを示す。下線領域は、ＧＰＣＲサイン、および特にＧＰＣＲに保存されたアルギニン残基の位置を示す。最もよく保存されている配列は、アスパラギン酸、アルギニンおよびチロシン（ＤＲＹ）コドンである。ＤＲＹは、シグナル伝達に関与する。アルギニンは不変である。アスパラギン酸は、数個のＧＰＣＲに保存的に配置されている。今回の場合では、アルギニンが配列ＤＲＦに見られ、これはロドプシンスーパーファミリー受容体のＧＰＣＲのＤＲＹまたは不変アルギニンの位置に適合している。
【図２】
図２は、２８３８アミノ酸配列の解析：αβターンおよびコイル領域；親水性；両親媒性領域；可動領域；抗原性係数；および表面確率プロットを示す。
【図３】
図３は、２８３８受容体疎水性プロットを示す。アミノ酸は、１〜３１９に対応し、７回膜貫通セグメントを示す。
【図４】
図４は、特定の機能的部位に対応するアミノ酸の２８３８オープンリーディングフレームの解析を示す。グリコシル化部位が、アミノ酸５〜８番目に見られ、これはアミノ末端細胞外ドメインに相当する。第二のグリコシル化部位が、アミノ酸１７１〜１７４に見られ、これは第二細胞外ループに相当する。プロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ酸１３４〜１３６番目に見られ、これは第二細胞内ループにある。第二のプロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ酸１７８〜１８０番目に見られ、これは第二細胞外ループにある。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位がアミノ酸６〜９番目に見られ、これはカルボキシ末端細胞内ドメインにある。第二カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位が、アミノ酸９５〜９８番目に見られ、これは第一細胞外ループにある。Ｎ−ミリストイル化部位が、アミノ酸３４〜３９番目に見られ、これは第一膜貫通部にある。第二のＮ−ミリストイル化部位がアミノ酸１０７〜１１２番目に見られ、これは第三膜貫通部にある。第三のＮ−ミリストイル化部位がアミノ酸１４０〜１４５番目に見られ、これは第四膜貫通部にある。アミド化部位が、アミノ酸２０９〜２１２番目に見られ、これは第五膜貫通部および第三細胞内ループにおよぶ。さらに、位置がＧＰＣＲに対応し、不変アルギニンを含むアミノ酸が、アミノ酸１１８〜１２０番目の配列ＤＲＦに見られる。
【図５】
図５は、Ｐｒｏｓｉｔｅデータベースのタンパク質パターンに対する１４６１８受容体の比較を示し、特に７回膜貫通セグメントロドプシンスーパーファミリーに対して高いスコアを示す。下線領域は、ＧＰＣＲサイン、および特にＧＰＣＲに保存されたアルギニン残基の位置を示す。最もよく保存されている配列は、アスパラギン酸、アルギニン、チロシン（ＤＲＹ）コドンである。ＤＲＹは、シグナル伝達に関与する。アルギニンは不変である。アスパラギン酸は、数個のＧＰＣＲに保存的に配置されている。今回の場合では、アルギニンが配列ＤＲＦに見られ、これはロドプシンスーパーファミリー受容体のＧＰＣＲのＤＲＹまたは不変アルギニンの位置に適合している。
【図６】
図６は、１４６１８アミノ酸配列の解析：αβターンおよびコイル領域；親水性；両親媒性領域；可動領域；抗原性係数；および表面確率プロットを示す。
【図７】
図７は、１４６１８受容体疎水性プロットを示す。アミノ酸は１〜３３７番目に対応し、７回膜貫通セグメントを示す。
【図８】
図８は、特定の機能的部位に対応するアミノ酸の１４６１８オープンリーディングフレームの解析を示す。グリコシル化部位が、アミノ酸６〜９番目に見られ、これはアミノ末端細胞外ドメインに相当する。第二のグリコシル化部位が、アミノ酸１６９〜１７２番目に見られ、これは第二細胞外ループに相当する。第三のグリコシル化部位が、アミノ酸１８０〜１８３番目に見られ、これは第二の細胞外ループに相当する。第四のグリコシル化部位が、アミノ酸２２４〜２２７番目に見られ、これは第三の細胞内ループに相当する。第五のグリコシル化部位が、アミノ酸２６２〜２６５番目に見られ、これは第三の細胞外ループに相当する。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位が、アミノ酸３０４〜３０７、３１０〜３１３番目、および３２３〜３２６に見られ、全てカルボキシ末端細胞内ドメインにある。プロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ酸１３６〜１３８番目に見られ、これは第二の細胞内ループに相当する。第二および第三のプロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ酸２２０〜２２２番目および２２７〜２２９番目に見られ、両方共が、第三の細胞内ループに相当する。第四のプロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ酸３０８〜３１０番目に見られ、これはカルボキシ末端細胞内ドメインに相当する。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位がアミノ酸１３〜１６番目および１７〜２０番目に見られ、両方共がアミノ末端細胞外ドメインにある。第三のカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位が、カルボキシ末端細胞内ドメインに相当する、アミノ酸３２６〜３２９番目に見られる。微小体Ｃ末端標的シグナルが、アミノ酸３３５〜３３８番目に見られ、これはカルボキシ末端細胞内ドメインに相当する。さらに、位置がＧＰＣＲサインに対応し、不変アルギニンを含むアミノ酸が、アミノ酸１２０〜１２２番目の配列ＦＲＣに見られる。
【図９】
図９は、Ｐｒｏｓｉｔｅデータベースのタンパク質パターンに対する１５３３４受容体の比較を示し、特に７回膜貫通セグメントロドプシンスーパーファミリーに対して高いスコアを示す。下線領域は、ＧＰＣＲサイン、および特にＧＰＣＲに保存されたアルギニン残基の位置を示す。最もよく保存されている配列は、アスパラギン酸、アルギニン、チロシン（ＤＲＹ）コドンである。ＤＲＹは、シグナル伝達に関与する。アルギニンは不変である。アスパラギン酸は、数個のＧＰＣＲに保存的に配置されている。今回の場合では、アルギニンが配列ＤＲＦに見られ、これはロドプシンスーパーファミリー受容体のＧＰＣＲのＤＲＹまたは不変アルギニンの位置に適合する。
【図１０】
図１０は、１５３３４アミノ酸配列の解析：αβターンおよびコイル領域；親水性；両親媒性領域；可動領域；抗原性係数；および表面確率プロットを示す。
【図１１】
図１１は、１５３３４受容体疎水性プロットを示す。アミノ酸は７回膜貫通セグメントを示す。
【図１２】
図１２は、特定の機能的部位に対応するアミノ酸の１５３３４オープンリーディングフレームの解析を示す。グリコシル化部位が、アミノ酸４〜７番目および９〜１２番目に見られ、これはアミノ末端細胞外ドメインにある。グリコシル化部位がまた、アミノ酸２５１〜２５４番目に見られ、これは第六膜貫通部にある。さらなるグリコシル化部位が、アミノ酸３２３〜３２６番目に見られ、これはカルボキシ末端ドメインにある。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位が、アミノ酸２２９〜２３２番目に見られ、これは第三の細胞内ループにある。プロテインキナーゼＣリン酸化部位が、アミノ末端ドメインに相当する、アミノ酸２１〜２３番目、第三細胞内ループに相当する２１１〜２１３番目、２２６〜２２８および２３２〜２３４、およびカルボキシ末端細胞内ドメインに相当する３０７〜３０９番目および３３２〜３３４番目に見られる。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位が、第二細胞外ループにあるアミノ酸１７８〜１８１番目、および、カルボキシ末端細胞内ドメインにある３４２〜３４５番目に見られる。Ｎ−ミリストイル化部位が、アミノ末端細胞外ドメインにあるアミノ酸３６〜４１番目、第六膜貫通部および第三細胞外ループにおよぶ２５８〜２６３番目、並びに、カルボキシ末端細胞内ドメインに相当する３２４〜３２９番目に見られる。さらに、ＧＰＣＲサイン、ＤＲＹは、アミノ酸１１８〜１２０番目に見られ、これは第二の細胞内ループにある。
【図１３】
図１３は、様々な正常なヒト組織における１４６１８受容体の発現を示す。
【図１４】
図１４は、様々な組織および造血系の細胞における１４６１８受容体の発現を示す。
【図１５】
図１５は、造血系の細胞を含む、様々な細胞および組織における２８３８受容体の発現を示す。
【図１６】
図１６は、正常なヒト組織における１５３３４受容体の発現を示す。
【図１７】
図１７は、様々な組織および造血系細胞における１５３３４受容体の発現を示す。
【図１８】
図１８は、赤血球および巨核球を含む、様々な造血細胞／細胞系における１５３３４受容体の発現を示す。
【図１９】
図１９は、赤血球および巨核球を含む、様々な造血細胞または細胞系における１５３３４受容体の発現を示す。
【図１】
2004500013.tif 000003
【図２】
2004500013.tif 000004
【図３】
2004500013.tif 000005
【図４】
2004500013.tif 000006
【図５】
2004500013.tif 000007
【図６】
2004500013.tif 000008
【図７】
2004500013.tif 000009
【図８】
2004500013.tif 000010
【図９】
2004500013.tif 000011
【図１０】
2004500013.tif 000012
【図１１】
2004500013.tif 000013
【図１２】
2004500013.tif 000014
【図１３】
2004500013.tif 000015
【図１４】
2004500013.tif 000016
【図１５】
2004500013.tif 000017
【図１６】
2004500013.tif 000018
【図１７】
2004500013.tif 000019
【図１８】
2004500013.tif 000020
【図１９】
2004500013.tif 000021
【国際公開パンフレット】
2004500013.tif 000022
2004500013.tif 000023
2004500013.tif 000024
2004500013.tif 000025
2004500013.tif 000026
2004500013.tif 000027
2004500013.tif 000028
2004500013.tif 000029
2004500013.tif 000030
2004500013.tif 000031
2004500013.tif 000032
2004500013.tif 000033
2004500013.tif 000034
2004500013.tif 000035
2004500013.tif 000036
2004500013.tif 000037
2004500013.tif 000038
2004500013.tif 000039
2004500013.tif 000040
2004500013.tif 000041
2004500013.tif 000042
2004500013.tif 000043
2004500013.tif 000044
2004500013.tif 000045
2004500013.tif 000046
2004500013.tif 000047
2004500013.tif 000048
2004500013.tif 000049
2004500013.tif 000050
2004500013.tif 000051
2004500013.tif 000052
2004500013.tif 000053
2004500013.tif 000054
2004500013.tif 000055
2004500013.tif 000056
2004500013.tif 000057
2004500013.tif 000058
2004500013.tif 000059
2004500013.tif 000060
2004500013.tif 000061
2004500013.tif 000062
2004500013.tif 000063
2004500013.tif 000064
2004500013.tif 000065
2004500013.tif 000066
2004500013.tif 000067
2004500013.tif 000068
2004500013.tif 000069
2004500013.tif 000070
2004500013.tif 000071
2004500013.tif 000072
2004500013.tif 000073
2004500013.tif 000074
2004500013.tif 000075
2004500013.tif 000076
2004500013.tif 000077
2004500013.tif 000078
2004500013.tif 000079
2004500013.tif 000080
2004500013.tif 000081
2004500013.tif 000082
2004500013.tif 000083
2004500013.tif 000084
2004500013.tif 000085
2004500013.tif 000086
2004500013.tif 000087
2004500013.tif 000088
2004500013.tif 000089
2004500013.tif 000090
2004500013.tif 000091
2004500013.tif 000092
2004500013.tif 000093
2004500013.tif 000094
2004500013.tif 000095
2004500013.tif 000096
2004500013.tif 000097
2004500013.tif 000098
2004500013.tif 000099
2004500013.tif 000100
2004500013.tif 000101
2004500013.tif 000102
2004500013.tif 000103
2004500013.tif 000104
2004500013.tif 000105
2004500013.tif 000106
2004500013.tif 000107
2004500013.tif 000108
2004500013.tif 000109
2004500013.tif 000110
2004500013.tif 000111
2004500013.tif 000112
2004500013.tif 000113
2004500013.tif 000114
2004500013.tif 000115
2004500013.tif 000116
2004500013.tif 000117
2004500013.tif 000118
2004500013.tif 000119
2004500013.tif 000120
2004500013.tif 000121
2004500013.tif 000122
2004500013.tif 000123
2004500013.tif 000124
2004500013.tif 000125
2004500013.tif 000126
2004500013.tif 000127
2004500013.tif 000128
2004500013.tif 000129
2004500013.tif 000130
2004500013.tif 000131
2004500013.tif 000132
2004500013.tif 000133
2004500013.tif 000134
2004500013.tif 000135
2004500013.tif 000136
2004500013.tif 000137
2004500013.tif 000138
2004500013.tif 000139
2004500013.tif 000140
2004500013.tif 000141
2004500013.tif 000142
2004500013.tif 000143
2004500013.tif 000144
2004500013.tif 000145
2004500013.tif 000146
2004500013.tif 000147
2004500013.tif 000148
2004500013.tif 000149
2004500013.tif 000150
2004500013.tif 000151
2004500013.tif 000152
2004500013.tif 000153
2004500013.tif 000154
2004500013.tif 000155
2004500013.tif 000156
2004500013.tif 000157
2004500013.tif 000158
2004500013.tif 000159
2004500013.tif 000160
2004500013.tif 000161
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500013.tif 000162
2004500013.tif 000163
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500013.tif 000164
2004500013.tif 000165
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500013.tif 000166
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500013.tif 000167
2004500013.tif 000168
2004500013.tif 000169
2004500013.tif 000170
2004500013.tif 000171
2004500013.tif 000172
2004500013.tif 000173
2004500013.tif 000174
2004500013.tif 000175
2004500013.tif 000176
2004500013.tif 000177
2004500013.tif 000178
2004500013.tif 000179
2004500013.tif 000180
2004500013.tif 000181
2004500013.tif 000182
2004500013.tif 000183
2004500013.tif 000184
2004500013.tif 000185
2004500013.tif 000186
2004500013.tif 000187
2004500013.tif 000188
2004500013.tif 000189
2004500013.tif 000190
2004500013.tif 000191
2004500013.tif 000192
2004500013.tif 000193
2004500013.tif 000194
2004500013.tif 000195
2004500013.tif 000196
2004500013.tif 000197
2004500013.tif 000198
2004500013.tif 000199
2004500013.tif 000200
2004500013.tif 000201
2004500013.tif 000202
2004500013.tif 000203
2004500013.tif 000204
2004500013.tif 000205
2004500013.tif 000206
2004500013.tif 000207
2004500013.tif 000208
2004500013.tif 000209
2004500013.tif 000210
2004500013.tif 000211
2004500013.tif 000212
2004500013.tif 000213
2004500013.tif 000214
2004500013.tif 000215
2004500013.tif 000216
2004500013.tif 000217
2004500013.tif 000218
2004500013.tif 000219
2004500013.tif 000220
2004500013.tif 000221
2004500013.tif 000222
2004500013.tif 000223
2004500013.tif 000224
2004500013.tif 000225
2004500013.tif 000226
2004500013.tif 000227
2004500013.tif 000228
2004500013.tif 000229
2004500013.tif 000230
2004500013.tif 000231
2004500013.tif 000232
2004500013.tif 000233
2004500013.tif 000234
2004500013.tif 000235
2004500013.tif 000236
2004500013.tif 000237
2004500013.tif 000238
2004500013.tif 000239
2004500013.tif 000240
2004500013.tif 000241
2004500013.tif 000242
2004500013.tif 000243
2004500013.tif 000244
2004500013.tif 000245
2004500013.tif 000246
2004500013.tif 000247
2004500013.tif 000248
2004500013.tif 000249
2004500013.tif 000250
2004500013.tif 000251
2004500013.tif 000252
2004500013.tif 000253
2004500013.tif 000254
2004500013.tif 000255
2004500013.tif 000256
2004500013.tif 000257
2004500013.tif 000258
2004500013.tif 000259
2004500013.tif 000260
2004500013.tif 000261
2004500013.tif 000262
2004500013.tif 000263
2004500013.tif 000264
2004500013.tif 000265
2004500013.tif 000266
2004500013.tif 000267
2004500013.tif 000268
2004500013.tif 000269
2004500013.tif 000270
2004500013.tif 000271
2004500013.tif 000272
2004500013.tif 000273
2004500013.tif 000274
2004500013.tif 000275
2004500013.tif 000276
2004500013.tif 000277
2004500013.tif 000278
2004500013.tif 000279
2004500013.tif 000280
2004500013.tif 000281
2004500013.tif 000282
2004500013.tif 000283
2004500013.tif 000284
2004500013.tif 000285
2004500013.tif 000286
2004500013.tif 000287
2004500013.tif 000288
2004500013.tif 000289
2004500013.tif 000290
2004500013.tif 000291
2004500013.tif 000292
2004500013.tif 000293
2004500013.tif 000294
2004500013.tif 000295
2004500013.tif 000296
2004500013.tif 000297
2004500013.tif 000298
2004500013.tif 000299
2004500013.tif 000300
2004500013.tif 000301
2004500013.tif 000302
2004500013.tif 000303
2004500013.tif 000304
2004500013.tif 000305
【手続補正書】
【提出日】平成12年7月7日(2000.7.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号５に示されるアミノ酸配列と、
（ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号＿＿に含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号５に示したアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列と、
（ｄ）ＡＴＣＣ寄託番号＿＿に含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列の対立遺伝子変異体のアミノ酸配列と、
（ｅ）配列番号５に示したアミノ酸配列の配列変異体であって、ストリンジェントな条件下で、配列番号６に示した核酸分子にハイブリッド形成する核酸分子によりコードされる配列変異体のアミノ酸配列と、
（ｆ）ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列の配列変異体であって、ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡに、ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する核酸分子によりコードされる配列変異体のアミノ酸配列と、
（ｇ）少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む、配列番号５に示したアミノ酸配列の断片と、
（ｈ）ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡによりコードされる、少なくとも８つの連続したアミノ酸を含むアミノ酸配列の断片と、
（ｉ）配列番号５に示したアミノ酸６〜３７２番目の成熟受容体ポリペプチドのアミノ酸配列と、
（ｊ）ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸６〜３７２番目の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列と、
（ｋ）アミノ酸１〜２５番目の、配列番号５に示したポリペプチドのアミノ酸配列と、
（ｌ）ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのアミノ酸１〜２５番目のアミノ酸配列と、
（ｍ）（ａ）から（ｌ）までのポリペプチドのいずれか１つのエピトープ含有領域のアミノ酸配列と
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する単離ポリペプチド。
【請求項２】
請求項１の（ａ）〜（ｍ）に選択的に結合する単離抗体。
【請求項３】
（ａ）配列番号６に示したヌクレオチド配列と、
（ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号＿＿に含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド配列と、
（ｃ）配列番号５に示したアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｄ）ＡＴＣＣ寄託番号＿＿に含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する単離核酸分子。
【請求項４】
（ａ）配列番号６に示したヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成する、配列番号５に示したアミノ酸配列の配列変異体のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列の配列変異体のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、ここで、前記配列変異体の核酸配列はストリンジェントな条件下でＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡにハイブリッド形成し、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択される、ヌクレオチド配列を有する単離核酸分子。
【請求項５】
（ａ）少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む配列番号５に示したアミノ酸配列の断片をコードするヌクレオチド配列と、
（ｂ）少なくとも８つの連続したアミノ酸を含む、ＡＴＣＣ寄託番号　　に含まれるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列の断片をコードするヌクレオチド配列と、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列と
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する単離核酸分子。
【請求項６】
請求項３〜５のいずれか一に記載の核酸配列を含む核酸ベクター。
【請求項７】
請求項６のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８】
（ａ）〜（ｍ）のポリペプチド配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を宿主細胞に導入するステップと、タンパク質が核酸から発現される条件下で前記宿主細胞を培養するステップとを含む請求項１のポリペプチドのいずれかの製造方法。
【請求項９】
サンプル中の請求項１のポリペプチドのいずれかの存在を検出する方法であって、サンプル中のポリペプチドの存在の検出を特異的に可能とする物質と前記サンプルとを接触させるステップと、前記ポリペプチドの存在を検出するステップとを含む方法。
【請求項１０】
前記物質は、前記ポリペプチドとの選択的な物理的会合が可能である請求項９の方法。
【請求項１１】
前記物質は前記ポリペプチドに結合する請求項１０の方法。
【請求項１２】
前記物質は抗体である請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記物質はリガンドである請求項１１の方法。
【請求項１４】
請求項９の方法に使用するための試薬を含むキットであって、前記試薬は、前記ポリペプチドに特異的に結合する物質を含むことを特徴とするキット。
【請求項１５】
サンプル中の請求項３〜５のいずれかの核酸配列のいずれかの存在の検出方法であって、核酸配列にストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドとサンプルとを接触させるステップと、オリゴヌクレオチドがサンプル中の核酸配列と結合するかを決定するステップとを含む方法。
【請求項１６】
存在を検出する核酸は、ｍＲＮＡである請求項１５の方法。
【請求項１７】
請求項１５の方法に使用する試薬を含むキットであって、試薬が、ストリンジェントな条件下で核酸分子のいずれかにハイブリッド形成する化合物を含むことを特徴とするキット。
【請求項１８】
請求項１のポリペプチドのいずれかに結合する物質を同定する方法であって、ポリペプチドに結合する物質とポリペプチドとを接触させるステップと、ポリペプチドに結合した物質により形成された複合体をアッセイするステップとを含む方法。
【請求項１９】
ポリペプチドの断片を接触させる請求項１８の方法。
【請求項２０】
請求項１のポリペプチドのいずれかの活性を調節する方法であって、物質がポリペプチドの活性を調節できる条件下で、前記物質と請求項１のポリペプチドのいずれかとを接触させるステップを含む方法。
【国際調査報告】
2004500013.tif 000306
2004500013.tif 000307
2004500013.tif 000308
2004500013.tif 000309
2004500013.tif 000310
2004500013.tif 000311