(57)【要約】本発明はＬＸＲアゴニスト、およびそのようなＬＸＲアゴニストを用いて哺乳動物における高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）血漿レベルを上昇させ、アテローム硬化性心疾患およびその関連病態の進行を予防、停止または減速させる方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物の高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）の血漿値を上昇させる方法。
【請求項２】
該ＬＸＲアゴニストがＬＸＲαアゴニストである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
該ＬＸＲアゴニストが下記一般式で示される化合物またはその薬理学的に許容される塩である、請求項１記載の方法。
【化１】
2004500332.tif 000009
式中、Ａｒはアリール基；
Ｒ１は−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２および−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルから選ばれる基；
Ｒ２は（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリールおよびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれる基；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６はそれぞれ独立して−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ５）アルキル、−Ｆ、および−Ｃｌから選ばれる基、但し、Ｘ１からＸ６中２基を超えて−Ｈあるいは（Ｃ１−Ｃ５）アルキルであることはない；および
Ｙは−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｓ）−、および−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリール、およびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれる基で、Ｙが−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−または−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−の場合は、Ｒ１２はＡｒへの共有結合を介してＡｒに縮合した５員、６員または７員環を形成してもよい、およびｍは１〜２の整数である）から選ばれる基。
【請求項４】
該アリール基がベンゼン、ナフタレン、ピリジン、キノリン、イソキノリン、ピロール、フランおよびチオフェンから選ばれる基である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
該アリール基がベンゼンである、請求項３記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１が−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２および−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルから選ばれる基である、請求項３記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２がアリール基である、請求項３記載の方法。
【請求項８】
該アリール基がフェニルである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
該フェニル基がＹ基に結合する位置に対してオルト位またはメタ位で少なく１つの置換基で置換されている、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
Ｘ１からＸ６中２基を超えて−Ｈあるいは（Ｃ１−Ｃ５）アルキルではない、請求項３記載の方法。
【請求項１１】
該ＬＸＲアゴニストが下記式から選ばれる化合物である、請求項３記載の方法。
【化２】
2004500332.tif 000010
式中、ｎは０〜４の整数；および
各Ｒ１１はそれぞれ独立して−ＯＨ、−ＮＨ２、低級アルキル、低級アルコキシ、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ’”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＮおよび−ＮＯ２から選ばれる基（式中、Ｒ’、Ｒ”およびＲ’”はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヘテロアルキル、非置換アリール、（非置換アリール）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、および（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選ばれる基）。
【請求項１２】
該ＬＸＲアゴニストが下記式から選ばれる化合物である、請求項１１記載の方法。
【化３】
2004500332.tif 000011
【請求項１３】
該ＬＸＲアゴニストが下記式から選ばれる化合物である、請求項３記載の方法。
【化４】
2004500332.tif 000012
【請求項１４】
Ｘ１からＸ６がそれぞれＦである、請求項３記載の方法。
【請求項１５】
Ｘ１からＸ６がそれぞれ−Ｆ；Ｒ１が−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２および−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルから選ばれる基；Ｙが−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）−、および−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−から選ばれる基；およびＲ２がアリールである、請求項３記載の方法。
【請求項１６】
該ＬＸＲアゴニストが下記式の化合物である、請求項１３記載の方法。
【化５】
2004500332.tif 000013
式中、Ｒ１は−ＯＨおよび−ＮＨ２から選ばれる基；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子およびフッ素原子から選ばれる基；Ｒ１２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２はアリールである。
【請求項１７】
該ＬＸＲアゴニストが下記式の化合物である、請求項１３記載の方法。
【化６】
2004500332.tif 000014
式中、Ｒ１は−ＯＨおよび−ＮＨ２から選ばれる基；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子およびフッ素原子から選ばれる基；Ｒ１２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２は置換または非置換チエニルである。
【請求項１８】
該ＬＸＲアゴニストが下記式の化合物である、請求項１３記載の方法。
【化７】
2004500332.tif 000015
式中、Ｒ１は−ＯＨおよび−ＮＨ２から選ばれる基；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子およびフッ素原子から選ばれる基；Ｒ１２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２は置換または非置換フェニルである。
【請求項１９】
該ＬＸＲアゴニストが下記式から選ばれる化合物である、請求項１８記載の方法。
【化８】
2004500332.tif 000016
【請求項２０】
該ＬＸＲアゴニストが下記式の化合物である、請求項１９記載の方法。
【化９】
2004500332.tif 000017
【請求項２１】
該哺乳動物がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
該ヒトがアテローム性動脈硬化症の発症リスクにある、あるいはアテローム硬化症関連疾病に罹患している、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
該ヒトがアテローム性動脈硬化症に罹患している、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
該哺乳動物に、高脂血症低下剤；血漿ＨＤＬ上昇剤；高コレステロール血症低下剤；コレステロール生合成阻害剤；アシル−コエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ阻害剤；プロブコール；ニコチン酸およびその塩；ナイアシンアミド；コレステロール吸収阻害剤：胆汁酸金属イオン封鎖剤アニオン交換樹脂；低密度リポ蛋白質受容体誘導物質；クロフィブラート、フェノフィブラートおよびゲムフィブリゾール；ビタミンＢ６およびその薬理学的に許容される塩；ビタミンＢ１２；抗酸化ビタミン；βブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；血小板凝集阻害薬；フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト；およびアスピリンから選ばれる追加の活性薬剤を投与することを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
該追加の活性薬剤がコレステロール生合成阻害剤である、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
該コレステロール生合成阻害剤がＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
該ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤がロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンおよびリバスタチンから選ばれる、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
該ＬＸＲアゴニストが転写アッセイにおいて１０μＭあるいはそれ以下のＥＣ５０を持つ、請求項１記載の方法。
【請求項２９】
該ＬＸＲアゴニストが転写アッセイにおいて１．０μＭあるいはそれ以下のＥＣ５０を持つ、請求項１記載の方法。
【請求項３０】
該ＬＸＲアゴニストが２４，２５−エポキシコレステロールとの競合結合アッセイにおいて、１０μＭあるいはそれ以下のＫｉ値を持つ、請求項１記載の方法。
【請求項３１】
該ＬＸＲアゴニストが２４，２５−エポキシコレステロールとの競合結合アッセイにおいて、１．０μＭあるいはそれ以下のＫｉ値を持つ、請求項１記載の方法。
【請求項３２】
該ＬＸＲアゴニストが２４，２５−エポキシコレステロールとの競合結合アッセイにおいて、０．１μＭあるいはそれ以下のＫｉ値を持つ、請求項１記載の方法。
【請求項３３】
該ＬＸＲアゴニストが細胞毒性アッセイにおいて３０μＭあるいはそれ以上のＥＣ５０をもつ、請求項１記載の方法。
【請求項３４】
哺乳動物にＬＸＲアゴニストの有効量を投与することを特徴とする、哺乳動物のアテローム性動脈硬化症を治療する方法。
【請求項３５】
該ＬＸＲアゴニストがＬＸＲαアゴニストである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
該ＬＸＲアゴニストが請求項３記載のＬＸＲアゴニストである、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
該ＬＸＲアゴニストが下記式の化合物である、請求項３４記載の方法。
【化１０】
2004500332.tif 000018
【請求項３８】
該哺乳動物がヒトである、請求項３４記載の方法。
【請求項３９】
該哺乳動物に、高脂血症低下剤；血漿ＨＤＬ上昇剤；高コレステロール血症低下剤；コレステロール生合成阻害剤；アシル−コエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ阻害剤；プロブコール；ニコチン酸およびその塩；ナイアシンアミド；コレステロール吸収阻害剤：胆汁酸金属イオン封鎖剤アニオン交換樹脂；低密度リポ蛋白質受容体誘導物質；クロフィブラート、フェノフィブラートおよびゲムフィブリゾール；ビタミンＢ６およびその薬理学的に許容できる塩；ビタミンＢ１２；抗酸化ビタミン；βブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；血小板凝集阻害薬；フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト；およびアスピリンから選ばれる、追加の活性薬剤を投与することを特徴とする、請求項３４記載の方法。
【請求項４０】
哺乳動物にＬＸＲアゴニストの予防有効量を投与することを特徴とする、哺乳動物のアテローム性動脈硬化症あるいはアテローム硬化関連疾患の発症リスクを減少させる方法。
【請求項４１】
該ＬＸＲアゴニストが請求項３記載のＬＸＲアゴニストである、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
心筋梗塞を罹患した患者にＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量を投与することを特徴とする、心筋梗塞後治療。
【請求項４３】
該ＬＸＲアゴニストが請求項３記載のＬＸＲアゴニストである、請求項４２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明分野
本発明はＬＸＲアゴニスト、およびそのようなＬＸＲアゴニストを用いて哺乳動物における高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）血漿レベルを上昇させ、アテローム硬化性心疾患およびその関連病態の進行を予防、停止または減速させる方法に関する。
【０００２】
発明の背景技術
高脂血症は血清脂質、例えばコレステロール、トリグリセリドおよびリン脂質の異常な増加を特徴とする病態である。これらの脂質は血漿中溶液中自由に循環はせず、蛋白質に結合して、リポ蛋白質と呼ばれる高分子複合体として輸送される。リポ蛋白質はその比重の程度を基にして５種類に分類されている：カイロミクロン；超低密度リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）；低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）；中間密度リポ蛋白質（ＩＤＬ）；および高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）である。そのような分類は一般的に本分野の技術者にはよく知られており、例えば、メルク・マニュアル、１６版、１９９２（例えば１０３９−１０４０頁参照）およびＭｅｔａｂｏｌｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅ、６版、１９８９、１１２９−１１３８頁の「血漿リポ蛋白質の構造と代謝」に記載されている。
【０００３】
高脂血症の一つの形に、上昇したＬＤＬコレステロール値の存在を特徴とする高コレステロール血症がある。高コレステロール血症の初期治療ではしばしば、脂肪とコレステロールが低い食事に変更し、併せて適当な身体運動と併用し、ついでＬＤＬ低下目標が食事療法と運動療法のみでは達成されない場合は薬物療法が続く。ＬＤＬは一般的に「悪玉」コレステロールとして知られ、一方ＨＤＬは「善玉」コレステロールである。ＬＤＬコレステロールの上昇した値を低下することは望ましいが、ＨＤＬコレステロール値を上昇させることもまた望ましい。一般的に、ＨＤＬの上昇した値は冠状動脈性心臓病（ＣＨＤ）のリスク低下を伴う。例えば、ゴードンら、Ａｍ． Ｉ． Ｍｅｄ．， ６２： ７０７−７１４ （１９９７）；スタンファーら、Ｎ． Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２５： ３７３−３８１ （１９９１）；およびカーネルら、Ａｎｎ． Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄ．， ９０： ８５−９１ （１９７９）参照。ＨＤＬ上昇剤の例としてはニコチン酸があるが、ＨＤＬ上昇達成に必要な量は顔面紅潮などの望ましくない副作用を伴う。
【０００４】
近年、高脂血症およびコレステロール代謝を伴う他の疾病の治療用治療剤の開発は、関与する生化学的経路（ｐａｔｈｗａｙ）のさらに完全な解明の達成に注目されている。ごく最近では、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ、Ｌｉｖｅｒ Ｘ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）がコレステロール恒常性における重要成分であると同定された。ＬＸＲは当初そのリガンドと機能が未知の核受容体スーパーファミリーのオーファンメンバーとして同定された。２つのＬＸＲプロテイン（つまり、αおよびβ）が哺乳動物に存在することが知られている。ＬＸＲαの発現は限定され、その最高レベルが肝臓で観察され、それより低いレベルが腎臓、腸、脾臓、および副腎で見られる（ウィリーら、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． ９（９）： １０３３−４５ （１９９５）参照）。ＬＸＲβはかなり遍在していて、調べた殆どすべての組織で発見されている。ＬＸＲの最近の研究では、ＬＸＲは、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、および２４，２５（Ｓ）−エポキシコレステロールを含む、ある種の天然のコレステロール酸化誘導体により活性化されることが示されている（レーマンら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７２ （６）：３１３７−３１４０ （１９９７）参照）。ＬＸＲおよびそのオキシステロールリガンドの発現パターンから、これらの受容体がコレステロール代謝において役割を担っていることが初めて示唆された（ヤノウスキ（Ｊａｎｏｗｓｋｉ）ら、Ｎａｔｕｒｅ ３８３： ７２８−７３１ （１９９６）参照）。
【０００５】
哺乳動物におけるコレステロール代謝はステロイドホルモンあるいは胆汁酸への変換を介して生じる。コレステロール恒常性におけるＬＸＲの役割は、コレステロール７α−ヒドキシラーゼ（ＣＹＰ７Ａ）が律速的に作用する、胆汁酸合成経路に関係すると最初に仮定された。この仮定を支持するものとして、オキシステロール−およびレチノイド−依存的にＲＸＲ／ＬＸＲヘテロ二量体により活性化され得る、機能的ＬＸＲ応答エレメントをＣＹＰ７Ａプロモーターが含有することが、追加の実験により発見されたことがある。コレステロール代謝における転写コントロールポイントとしてのＬＸＲ機能の確認は、ノックアウトマウス、特にオキシステロール受容体ＬＸＲαの欠如したものを用いて行われた（ピートら、Ｃｅｌｌ ９３： ６９３−７０４ （１９９８）参照）。
【０００６】
受容体ＬＸＲαが欠損したマウス（例えば、ノックアウトあるいは（−／−）マウス）は食餌性コレステロールの増加に正常に応答するその能力を失っており、新たに合成されるものより過剰のコレステロールに耐えることが出来ない。ＬＸＲα（−／−）マウスは、追加のコレステロールを含む食餌を与えられた場合は、ＣＹＰ７αをコードする遺伝子の転写を誘発することが出来ない。これは、ＬＸＲα（−／−）マウスの肝臓においてコレステロールの大量蓄積を起こし、肝機能障害を引起こす。これらの結果により、コレステロール恒常性の必須の調節成分としてのＬＸＲαの役割が立証された。ＬＸＲαはまた脂肪酸合成に関与していると信じられている。よって、ＬＸＲの調節、特にＬＸＲαの調節により、肥満や糖尿病を含む多様な脂質障害の治療法を提供できる。
【０００７】
前述を鑑みて、ＬＸＲの調節に使用できる、言い換えると、コレステロール代謝と脂肪酸生合成の微妙なバランスの調節に使用できる化合物および方法が依然としてこの分野で求められている。特に、ＨＤＬ値の増加に使用でき、よって、胆汁酸およびコレステロール代謝に関連する疾病、例えば、コレステロール性胆石、冠状動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、脂質蓄積疾病、肥満、糖尿病等の治療に使用できる化合物および方法が依然としてこの分野で求められている。非常に驚くべきことには、本発明は、そのような化合物および方法を提示することにより、これらおよび他の要求を満たすものである。
【０００８】
発明の概要
ＬＸＲのアゴニスト、特にＬＸＲαのアゴニストであるリガンドは高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）値の上昇に有用である。従って、一つの態様では、本発明はそのような治療を要する哺乳動物におけるＨＤＬ血漿値を上昇、つまり増加させる方法を提供し、該方法は例えばヒトなどの哺乳動物にＬＸＲアゴニスト、特にＬＸＲαアゴニストのＨＤＬ上昇量を投与することを特徴とする。
【０００９】
ＬＸＲを活性化し、よってＬＸＲのアゴニストであるいかなる化合物も、本発明の方法に使用できる。特に、インビトロまたはインビボいずれの検査工程を用いてＬＸＲアゴニストであることが判明したいずれの化合物、例えばここに開示の化合物は本発明の方法に使用することができる。好ましい態様において、ＬＸＲアゴニストは下記一般式で示される。
【化１１】
2004500332.tif 000002
式Ｉ中、Ａｒはアリール基；
Ｒ１は−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２または−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキル；
Ｒ２は（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリールおよびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキル；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６はそれぞれ独立して−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ５）アルキル、−Ｆ、または−Ｃｌ、但し、Ｘ１からＸ６中２基を超えて−Ｈあるいは（Ｃ１−Ｃ５）アルキルであることはない；および
Ｙは−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｓ）−、または−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリール、およびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれる基で、Ｙが−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−または−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−の場合は、Ｒ１２はＡｒへの共有結合を介してＡｒに縮合した５員、６員または７員環を形成してもよい）；
上記Ｙ基中、インデックス「ｍ」は１〜２の整数である。
【００１０】
他の態様では、本発明はそのような治療を要する哺乳動物のアテローム硬化性心疾患およびその関連疾患の進行を予防、停止または減速する方法を提供し、該方法はＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量を該哺乳動物に投与することを特徴とする。
【００１１】
他の態様では、本発明はそのような治療を要する哺乳動物のアテローム硬化性心疾患およびその関連疾患の進行を予防、停止または減速する方法を提供し、該方法はＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量と、胆汁酸金属イオン封鎖剤、ニコチン酸、フィブリン酸誘導体、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤等の追加の活性薬剤の１つまたはそれ以上と組み合わせて該哺乳動物に投与することを特徴とする。
【００１２】
本発明の他の特徴、目的および有利性およびその好ましい態様は以下の詳細な記述から明らかになるであろう。
【００１３】
発明の詳細な説明および好ましい態様
定義
単独、あるいは他の置換基の一部としての用語「アルキル」は、特に言及しない限り、指定の数（つまり、Ｃ１−Ｃ１０は１〜１０個の炭素原子を意味する）の炭素原子を持つ、直鎖または分岐鎖の、あるいは環状の炭化水素基、あるいはそれらの組合されたもので、完全に飽和、モノ不飽和あるいはポリ不飽和の、二価および多価の基を意味する。飽和炭化水素基の例としては、これに限定されるのもではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等の同族体および異性体などが挙げられる。不飽和アルキル基としては、１個あるいはそれ以上の二重結合または三重結合を持つものである。不飽和アルキル基の例としては、これらに限定されるのもではないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル、およびその高級同族体および異性体が挙げられる。特に言及しない限り、用語「アルキル」は、以下に「シクロアルキル」および「アルキレン」としてさらに詳細に定義するアルキルの誘導体もまた意味する。単独、あるいは他の置換基の一部としての用語「アルキレン」は、例えば−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−などのアルカンから誘導される二価の基を意味する。一般的には、アルキル基は１〜２４個の炭素原子を持ち、１０個あるいはそれ以下の炭素原子のものが本発明では望ましい。「低級アルキル」あるいは「低級アルキレン」は比較的短い鎖のアルキルあるいはアルキレン基を意味し、一般的には８あるいはそれ以下の炭素原子のものを意味し、好ましくは４あるいはそれ以下の炭素原子を持つものである。
【００１４】
単独で、あるいは他の用語と組み合わされて用いられる用語「アルコキシ」とは、特に言及しない限り、酸素原子を介して分子の残りと結合した上記のアルキル基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、１−プロポキシ、２−プロポキシ、およびその高級同族体および異性体を意味する。
【００１５】
単独、あるいは他の用語と組み合わされて用いられる用語「ヘテロアルキル」は、特に言及しない限り、規定の数の炭素原子およびＯ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓから選ばれる１〜３個のヘテロ原子で構成される、安定な直鎖または分岐鎖、あるいは環状の炭化水素基、またはその組合されたものを意味し、窒素原子およびイオウ原子は酸化されていてもよく、窒素へテロ原子は４級化されていてもよい。へテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｓは、ヘテロアルキル基のどの位置にあってもよい。ヘテロ原子Ｓｉは、ヘテロアルキル基のいずれの位置にあってもよく、分子の残りにアルキル基が結合する位置であってもよい。例としては、これらに限定されないが、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられる。２個までのヘテロ原子は、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３や−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３のように連続していてもよい。用語「ヘテロアルキル」には「ヘテロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキル」として以下に詳細に述べる基も含まれる。単独、あるいは他の置換基の一部としての用語「ヘテロアルキレン」は、例えば−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−のような、ヘテロアルキルから誘導される二価の基を意味する。ヘテロアルキレン基では、ヘテロ原子がその鎖の一端あるいは両端に位置することが出来る。さらには、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基としては、ここに述べる他のすべての連結基と同様に、その連結基の特定の配向性を意味するものではない。
【００１６】
単独で、あるいは他の用語と組み合わされて用いられる用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」とは、特に言及しない限り、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状形を意味する。用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」はまたそれらの２環、３環および多環形も意味するものである。さらに、ヘテロシクロアルキルでは、ヘテロ原子はヘテロ環基が分子の残りと結合している位置を占めることができる。シクロアルキルの例としては、これらに限定されないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、アダマンチル等が挙げられ、ヘテロシクロアルキルの例としては、これらに限定されないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクト−２−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等が挙げられる。
【００１７】
単独で、あるいは他の置換基の一部として用いられる用語「ハロ」あるいは「ハロゲン」とは、特に言及しない限り、フッ素、塩素、臭素あるいはヨウ素原子を意味する。さらに、一般的には「ハロアルキル」はモノハロアルキルおよびポリハロアルキルを意味するものであるので、「フルオロアルキル」などの用語はモノフルオロアルキルおよびポリフルオロアルキルを包含するものである。
【００１８】
単独で、あるいは他の用語と組み合わされて（例えばアリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）用いられる用語「アリール」とは、特に言及しない限り、単環あるいは多環（３環まで）の、共縮合した、あるいは共有的に結合した芳香族置換基を意味する。環はそれぞれＮ、ＯおよびＳから選ばれる０〜４個のヘテロ原子を含有し、その窒素原子およびイオウ原子は酸化されていてもよく、窒素原子は４級化されていてもよい。ヘテロ原子を含有するアリール基は「ヘテロアリール」と称され、炭素原子あるいはヘテロ原子を介して分子の残りと結合することができる。アリール基の例としては、これらに限定されないが、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリルが挙げられる。上記の各アリール環系の置換基は以下に述べる許容される置換基から選ばれる。
【００１９】
用語「アリールアルキル」および「アリールヘテロアルキル」は、アリール基がアルキル基に結合した基（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチル等）やヘテロアルキル基に結合した基（例えば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、１−ナフチルオキシ−３−プロピル等）を含むものである。アリールアルキルおよびアリールヘテロアルキル基は一般的には、共有結合、あるいは環を、例えば、シクロアルキルかヘテロシクロアルキル基に縮合することにより、該アルキルあるいはヘテロアルキル部に結合した１〜３個のアリール部を含む。アリールヘテロアルキル基では、該基が分子の残りと結合している位置をヘテロ原子が占めていてもよい。例えば、用語「アリールヘテロアルキル」はベンジルオキシ、２−フェニルエトキシ、フェネチルアミン等を包含するものである。
【００２０】
上記の各用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」および「アリール」）はその基の置換および非置換形両者を含むものである。各基の好ましい置換基は以下に挙げるものである。
【００２１】
アルキルおよびヘテロアルキル基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルとしてしばしば称される基も含む）の置換基としては、以下の−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ’”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＨＣ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＮおよび−ＮＯ２から選ばれる多様な基であり、その数は０から（２Ｎ＋１）（Ｎはその基の炭素原子の総数である）個の間の数である。好ましくは、置換アルキル基は１〜６個の独立して選択した置換基を持ち、さらに好ましくは１〜４個の独立して選択した置換基を持ち、もっとも好ましくは１〜３個の独立して選択した置換基を持つ。上記に挙げた置換基のなかで、Ｒ’、Ｒ”およびＲ’”はそれぞれ独立して選択され、それらに限定されないが、以下の官能基である：水素原子、非置換（Ｃ１−Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリール、１〜３個のハロゲンで置換されたアリール、非置換のアルキル、アルコキシあるいはチオアルコキシ基、あるいはアリール−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基である。Ｒ’およびＲ”が同じ窒素原子に結合している場合は、それらは該窒素原子と結合して５員、６員または７員環を形成していてもよい。例えば、−ＮＲ’Ｒ”は１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むものである。
【００２２】
同様に、アリール基の置換基は多様で、これらに限定されるものではないが、−ハロゲン、−ＯＲ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ’”、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’”、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、パーフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、およびパーフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（Ｒ’、Ｒ”およびＲ’”はそれぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ハロアルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）ヘテロアルキル、非置換アリール、（非置換アリール）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、および（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選ばれる基である）から選ばれる基であり、その数は０からその芳香環系における開放原子価の総数の間の数である。好ましくは、置換アリール基は１〜４個のそれぞれ独立して選択した置換基を有し、さらに好ましくは、１〜３個のそれぞれ独立して選択した置換基を有し、最も好ましくは、１〜２個のそれぞれ独立して選択した置換基を有する。
【００２３】
アリール環の隣接する原子上の置換基の２個は、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｑ−Ｕ−（ＴおよびＵはそれぞれ独立して、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、あるいは単結合であり、ｑは０〜２の整数である）で示される置換基と置き換わってもよい。あるいは、アリール環の隣接する原子上の置換基の２個は、式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−（ＡおよびＢはそれぞれ独立して、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ’、あるいは単結合であり、ｒは１〜３の整数である）で示される置換基と置き換わってもよい。かくして形成される新しい環の単結合中のひとつは二重結合で置き換わってもよい。あるいは、アリール環の隣接する原子上の置換基の２個は、式−（ＣＨ２）ｓ−Ｘ−（ＣＨ２）ｔ−（ｓおよびｔはそれぞれ独立して０〜３の整数、およびＸは−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である）で示される置換基と置き換わってもよい。−ＮＲ’−と−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−の置換基Ｒ’は水素原子または非置換（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００２４】
ここで用いる用語「ヘテロ原子」は酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、イオウ（Ｓ）、およびシリコン（Ｓｉ）を意味するものである。
【００２５】
用語「薬理学的に許容される塩」とは、比較的非毒性の酸あるいは塩基（これはここで開示のＬＸＲアゴニストに見られる特殊な置換基に依存する）と活性化合物との塩を意味する。本発明化合物が相対的に酸性の官能基を持っている場合は、該化合物の中性体を十分量の所望の塩基とを、無溶媒下あるいは適当な不活性溶媒中で接触させることにより、塩基付加塩が得られる。薬理学的に許容される塩基付加塩の例としては、これらに限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、あるいはマグネシウム塩、あるいは他の同様の塩が挙げられる。本発明の化合物が相対的に塩基性の官能基を持っている場合は、該化合物の中性体を十分量の所望の酸とを、無溶媒下あるい適当な不活性溶媒中で接触させることにより、酸付加塩が得られる。薬理学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸モノ水素酸、リン酸、リン酸モノ水素酸、リン酸ジ水素酸、硫酸、硫酸モノ水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等の無機酸から誘導される塩や、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、蓚酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸等の相対的非毒性の有機酸から誘導される塩が含まれる。例えば、アルギニン塩などのアミノ酸との塩、例えば、グルクロン酸あるいはガラクツロン酸などの有機酸との塩等も含まれる（例えば、バージェら、“薬理学的塩”、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンス、６６巻、１−１９頁（１９７７）参照）。塩基性および酸性官能基の両方持つ本発明のある特殊な化合物は、塩基付加塩あるいは酸付加塩の両方に変換できる。
【００２６】
化合物の中性体は、塩を塩基あるいは酸と接触させて、常法により親化合物を単離することにより再生成できる。化合物の親形態は種々の塩形態とはある物理学的性状、例えば極性溶媒への溶解性等が異なるが、それ以外では、塩は本発明の目的にとっては化合物の親形態と同等である。
【００２７】
塩形態の他に、本発明はプロドラッグ形態の化合物も提供する。ここで述べる本化合物のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を受け式Ｉの化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは生体外環境下で化学的あるいは生化学的方法により本発明化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは適当な酵素と共に経皮用パッチ式リザーバ（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｐａｔｃｈ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）に入れておくと、本発明の化合物へとゆっくりと変換され得る。
【００２８】
本発明のある種の化合物は非溶媒和形で存在し、同様に水和形を含む溶媒和形でも存在する。一般的には、溶媒和物は非溶媒和物と同等であり、本発明範囲に包含されるものである。本発明のある種の化合物は多晶体あるいはアモルファスで存在し得る。一般的には、すべての物理的形態は本発明で意図される用途においては同等であり、本発明範囲に包含されるべきものである。
【００２９】
本発明のある化合物は不斉炭素原子（光学中心）あるいは二重結合を持ち、ラセミ体、ジアステレオマー体、幾何異性体および個々の異性体もすべて本発明範囲に包含されるものである。
【００３０】
本発明化合物は、その化合物を構成している１つまたは複数の原子上に、不自然な割合の原子同位体を含んでいてもよい。例えば、化合物は、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）や炭素−１４（１４Ｃ）のような、放射性同位元素を用いて標識できる。本発明化合物のすべてのアイソトープ異性体は、放射活性にしろ非活性にしろ、本発明範囲に包含されるものである。
【００３１】
一般的概要
本発明はアテローム性動脈硬化症の罹患のリスクを予防あるいは減少させる方法を提供し、該方法はＬＸＲαアゴニストの予防有効量、あるいは特に、ＨＤＬ上昇量を、単独であるいは一つまたは複数の追加の薬理学的活性薬剤と一緒に、哺乳動物、特にアテローム性動脈硬化症の罹患リスクにあるヒトに投与することを特徴とする。
【００３２】
ＬＸＲαアゴニストは、臨床的に明白になった場合に、アテローム硬化性疾患の進行を治療、中止あるいは減速させる方法に用いることができ、該方法はＬＸＲαアゴニストの治療有効量、あるいは特に、ＨＤＬ上昇量を、単独であるいは一つまたは複数の追加の薬理学的活性薬剤と一緒に、哺乳動物、特にアテローム硬化性疾病をすでに罹患したヒトに投与することを特徴とする。
【００３３】
アテローム性動脈硬化症は、医薬の関連分野で開業している内科医により認識・理解される血管疾患および病態を包含する。アテローム硬化性心疾患、冠状動脈性心臓病（冠動脈疾患または虚血性心疾患として知られている）、脳血管疾患および末梢血管疾患はすべてアテローム性動脈硬化症の臨床的発症であり、それゆえ、用語「アテローム性動脈硬化症」および「アテローム硬化性疾患」に包含される。
【００３４】
本発明はまた原発あるいは後発（再発の潜在性が存在する）アテローム硬化性疾病現象のリスクを予防あるいは減少させる方法を提供し、該方法はＬＸＲαアゴニストの予防有効量、あるいは特に、ＨＤＬ上昇量を、単独であるいは一つまたは複数の追加の薬理学的活性薬剤と一緒に、哺乳動物、特にアテローム硬化性疾病現象の発症リスクを有するヒトに投与することを特徴とする。ここで用いる用語「アテローム硬化性疾病現象」は、冠状動脈性心臓病現象、脳血管現象、および間欠性跛行を包含するものである。冠状動脈性心臓病現象はＣＨＤ死、心筋梗塞（例えば、心臓麻痺）および冠状動脈性血行再開後症候群を包含する。脳血管現象は虚血性または出血性脳卒中（脳血管発作として知られている）および一過性虚血性発作を包含する。間欠性跛行は末梢血管疾病の臨床的兆候である。過去に１つあるいは複数の致命的でないアテローム硬化性疾病現象を経験した人間はそのような現象の再発の潜在性を有する者である。
【００３５】
本治療法で治療される人はアテローム硬化性疾患発症のリスクを有し、アテローム硬化性疾病現象を有する者である。標準的アテローム硬化性疾患リスクファクターは医薬関連分野で開業している平均的内科医には既知である。そのようなリスクファクターとしては、これらに限定されないが、高血圧、喫煙、糖尿病、高比重リポ蛋白質コレステロールの低値、低比重リポ蛋白質コレステロールの高い値、およびアテローム硬化性心疾患の家族性歴史がある。アテローム硬化性疾患の発症リスクを有する人間を決定する為の発刊されているガイドラインは次のものに見られる：ナショナル・コレステロール・エデュケイション・プログラム、「大人における血中コレステロール高値の検知、評価および治療」に対するエキスパートパネルの第２報告（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ， Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ Ａｄｕｌｔｓ）（アダルト・トリートメント・パネルＩＩ；Ａｄｕｌｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐａｎｅｌ ＩＩ）， 国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、国立心臓、肺および血液研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＮＩＨ発行番号９３−３０９５、１９９３年９月；省略バージョン：「大人における血中コレステロール高値の検知、評価および治療」に対するエキスパートパネル、ナショナル・コレステロール・エデュケイション・プログラム（ＮＣＥＰ）の「大人における血中コレステロール高値の検知・評価および治療」に対するエキスパートパネルの第２報告の概略（アダルト・トリートメント・パネルＩＩ；Ａｄｕｌｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐａｎｅｌ ＩＩ））、ＪＡＭＡ、１９９３、２６９：３０１５−２３。上記のリスクファクターの１つまたはそれ以上を有する者として同定された人は、アテローム硬化性疾患の発症リスクにあると見なされる人間範囲に包含される。すでにアテローム性動脈硬化症を発症している人間と同様、上記のリスクファクターの１つまたはそれ以上を有する者として同定された人間は、アテローム硬化性疾患現象を持つリスクにある者として見なされた人間範囲に包含される。
【００３６】
ＬＸＲアゴニスト
上記に説明した通り、本発明は哺乳動物における高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）血漿レベルを上昇、つまり増加させる方法を提供し、該方法はＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量を該哺乳動物に投与することを特徴とする。つまり、ＬＸＲを活性化する、つまりＬＸＲアゴニストである化合物は本発明方法に使用できる。特に、インビトロまたはインビボいずれの検査工程を用いてＬＸＲアゴニストであることが判明したいずれの化合物、例えばここに開示の化合物は本発明の方法に使用することができる。
【００３７】
Ａ．典型的ＬＸＲアゴニスト
１つの態様において、本発明は本発明方法に有用なＬＸＲアゴニストを提供し、該ＬＸＲアゴニストは以下の一般式で示される。
【化１２】
2004500332.tif 000003
式Ｉにおいて、「Ａｒ」はアリール基を示す。置換あるいは非置換の両者を含む多様なアリール基が本発明のＬＸＲアゴニストで有用である。好ましいアリール基は単環あるいは縮合２環式芳香族環である。特に好ましいアリール環基は、これらに限定されないが、ベンゼン、ナフタレン、ピリジン、キノリン、イソキノリン、ピロール、フランおよびチオフェンである。さらに好ましい態様において、アリール基、つまりＡｒはベンゼンあるいはピリジン環であり、さらに好ましい態様においては、アリール基はベンゼン環である。
【００３８】
アリール基が置換芳香環（−Ｙ−Ｒ２と、Ｒ１を保持する炭素原子以外にも置換基を有する）である場合は、置換基は通常以下の官能基から選ばれる：−ＯＨ、−ＮＨ２、低級アルキル（例えば、メチル、ブチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル等）、低級アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメトキシ、ブトキシ等）、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ’”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’”、−ＮＨＣ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＮおよび−ＮＯ２（式中、Ｒ’、Ｒ”およびＲ’”はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヘテロアルキル、非置換アリール、（非置換アリール）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、および（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選ばれる基である）。
【００３９】
アリール基に結合する置換基はいかなる空間配置であってもよい。例えば、Ａｒがベンゼン環の場合、式Ｉにおける２基は好ましくは１，３−配向（メタ位）あるいは１，４−配向（パラ位）でＡｒに結合しているだろう。さらに好ましくは、式Ｉにおける２基は１，４−配向（パラ位）でベンゼンあるいはピリジン環に結合しているだろう。
【００４０】
式Ｉにおいて、「Ｒ’」は、これらに限定されないが、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２あるいは−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルから選ばれる官能基である。好ましい態様において、Ｒ１は−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２あるいは−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ５）アルキルである。さらに好ましい態様において、Ｒ１は−ＯＨである。Ｒ１がジアルキルアミノ基（−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル）２）である態様においては、アルキル基は同一または異なっていてもよい。
【００４１】
式Ｉ中の「Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５およびＸ６」はそれぞれ独立して、これらに限定されないが、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ５）アルキル、−Ｆ、および−Ｃｌから選ばれる官能基である。Ｘ１からＸ６の２基を超えてＨまたは（Ｃ１−Ｃ５）アルキルであることはない。さらに好ましい態様において、Ｘ１からＸ６中の２基を超えてＨではなく、残りが−Ｆである。最も好ましい態様においては、Ｘ１からＸ６は各々−Ｆである。
【００４２】
式Ｉにおいて、「Ｙ」は連結基であり、−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｓ）−または−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−（式中、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリール、およびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれ、Ｙが−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−または−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍＮ（Ｒ１３）−の場合は、Ｒ１２はＡｒへの共有結合を介してＡｒに縮合した５員、６員、または７員環を形成してもよい）から選ばれる基である。連結基、つまりＹ基中、インデックス「ｍ」は１〜２の整数である。好ましい態様において、Ｙは−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−、−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−または−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。最も好ましい態様においては、Ｙは−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−である。
【００４３】
上記のように、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリールおよびアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれる基であり、後者２基の場合は、置換されていてもよい。好ましい態様の１群において、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、好ましくはフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである。特に好ましいＲ１２基は２，２，２−トリフルオロエチルである。好ましい態様の他の群において、Ｒ１２はＡｒに結合して縮合環系、例えば、インドリン、テトラヒドロキノリンあるいはテトラヒドロイソキノリンを形成する。
【００４４】
式Ｉにおいて、Ｙに結合したＲ２は、これらに限定しないが、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ７）アルキルから選ばれる官能基である。そのようなＲ２基は置換されていてもよい。好ましい態様においては、Ｒ２はアリール基である。さらに好ましくは、Ｒ２はこれらに限定されないが、フェニル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリルおよびピリジルを含むアリール基である。さらに好ましい態様において、Ｒ２はフェニルあるいは２−チエニル、３−チエニルを含むチエニルである。好ましい置換されたＲ２基としては、３−クロロフェニル、３−ブロモフェニル、３−シアノフェニル、３−（トリフルオロメチル）フェニル、２−クロロ−３−チエニルおよび２，５−ジクロロ−３−チエニルが挙げられる。
【００４５】
式Ｉの範囲内において、上記列挙した官能基の或る種の組合せが好ましい。例えば、好ましい態様の１群においては、本発明のＬＸＲアゴニストは下記式で示される化合物から選ばれる。
【００４６】
【化１３】
2004500332.tif 000004
上記の各式中、インデックス「ｎ」は０〜４の整数；各「Ｒ１１」はそれぞれ独立して選択され、これらに限定しないが、−ＯＨ、−ＮＨ２、低級アルキル、低級アルコキシ、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ’”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＮおよび−ＮＯ２から選ばれる官能基であり、各Ｒ’、Ｒ”およびＲ’”はそれぞれ独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヘテロアルキル、非置換アリール、（非置換アリール）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、および（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選ばれる基である。上記式中の残りの基は、式Ｉで示したＬＸＲアゴニストに関した上記記載と同じ意味を有する。
【００４７】
他の好ましい態様において、本発明のＬＸＲアゴニストは下記式で示される化合物から選ばれる。
【化１４】
2004500332.tif 000005
好ましい態様の本群において、種々の基（例えば、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ６、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３）は式ＩのＬＸＲアゴニストに関した上記記載と同じ意味を有する。好ましくは、Ｒ１は−ＯＨあるいは−ＮＨ２、およびＸ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子またはフッ素原子である。さらに好ましいＬＸＲアゴニストは、Ｒ２が置換アリール基で、さらに好ましくは置換フェニルあるいは置換チエニル基であるものである。
【００４８】
さらに好ましい他の態様において、本発明のＬＸＲアゴニストは下記式で示される化合物から選ばれる。
【化１５】
2004500332.tif 000006
【００４９】
他の好ましい態様において、本発明のＬＸＲアゴニストは下記群の式で示される。
【化１６】
2004500332.tif 000007
【００５０】
好ましい化合物のこの群においては、上記の官能基のある種の組合せが特に好ましい。そのような態様の第１群においては、Ｒ１は−ＯＨまた−ＮＨ２；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子またはフッ素原子；Ｒ１２はフルオロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２はアリール（例えばフェニル）である。好ましい第二の態様において、Ｒ１は−ＯＨまた−ＮＨ２；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子またはフッ素原子；Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２は置換または非置換チエニルである。好ましい第三の態様においては、Ｒ１は−ＯＨまた−ＮＨ２；Ｘ１およびＸ６はそれぞれ独立して水素原子またはフッ素原子；Ｒ１２は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；およびＲ２は−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｎ（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）２から選ばれる少なくとも１つの基で置換されたフェニルである。さらに好ましくは、Ｒ１は−ＯＨ；およびＲ２は−ＣＮ、−ＣＦ３および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選ばれる少なくとも１つの基で置換されたフェニル基である。
【００５１】
さらに好ましいＬＸＲアゴニストは、ＬＸＲの、特に好ましくはＬＸＲαのリガンド結合ドメインに、少なくとも１０μＭあるいはそれ以下の親和性で、さらに好ましくは１μＭあるいはそれ以下の親和性で結合した化合物である。
【００５２】
他の態様において、本発明は上記の式Ｉの化合物（列記した各置換基は上記の意味を有する）（但し「Ｙ−Ｒ２」が−Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｍ−Ｒ２または−Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１３）−Ｒ１２で、Ａｒに結合している四級炭素原子にパラ位置で結合している場合、および「Ｒ２」が置換または非置換フェニル、ベンジル、またはベンゾイルである場合は、ｉ）Ｒ１２またはＲ１３の少なくともひとつは水素原子または非置換アルキル以外の基で、またはｉｉ）Ｒ２がアミノ、アセタミド、ジ（Ｃ１−Ｃ７）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ７）アルキルアミノ、ハロゲン、水酸基、ニトロ、あるいは（Ｃ１−Ｃ７）アルキル以外の基で置換されており、またはｉｉｉ）Ｒ２のベンゼン環部はＹ基以外に少なくとも３個の独立して選ばれる基で置換されている）を提供する。
【００５３】
本分野の技術者には容易に明白であるが、式Ｉの化合物のいくつかは立体異性体として存在することがあり、本発明はこれらの化合物のすべての活性立体異性体を包含する。光学活性異性体の場合は、そのような化合物は対応する光学活性前駆体から上記の方法で、あるいはラセミ体混合物を分割して得ることができる。分割はクロマトグラフィー、誘導した不斉塩の反復再結晶、あるいは誘導化などの様々な技術を用いて行うことができ、これらの技術はこの分野の通常の技術者にはよく知られている。
【００５４】
さらに、本発明のＬＸＲアゴニストは様々な方法で標識できる。例えば、化合物は３Ｈ（トリチウム）と１４Ｃ（炭素−１４）などの放射活性アイソトープを含有できる。同様に、本化合物は、それによりプロドラッグとして、または担体、標識、アジュバンド、共活性体、安定剤等として機能する、広範囲の他の化合物と共有結合または非共有結合で、直接的にあるいは連結分子を介して有利に結合することができる。そのような標識された、および結合した化合物は本発明範囲内に包含される。
【００５５】
Ｂ．ＬＸＲアゴニストの合成
上記の式ＩのＬＸＲアゴニストは入手容易な出発物質あるいは既知の中間体を用いて調製することができる。反応工程式Ｉは本発明のＬＸＲアゴニストの製造の為の多様な合成経路を示す。この分野の技術者であれば、他の方法も有用であることは理解するであろう。
【００５６】
反応工程式１
【化１７】
2004500332.tif 000008
【００５７】
反応工程式Ｉに示すように、アニリン（ｉ、置換アニリンおよび他のアリールアミンの代表として）はアルキル化、アシル化あるいはアリール化（Ｒ基の一般的付加）してｉｉとなり、あるいは芳香環は例えばヘキサフルオロアセトンで誘導されてｉｉｉとなる。ｉｉｉを適当なアルキル化剤、アシル化剤あるいはアリール化剤で処理してｉｖを得、これを例えば適当はスルホニルハライドでスルホニル化してｖｉを得ることが出来る。別法として、アニリン誘導体ｉｉｉをスルホニル化してｖを得、これをアルキル化あるいはアシル化して式ｖｉの化合物を得ることもできる。
【００５８】
他の本発明の他のＬＸＲアゴニストは置換されたアニリンｉｖ（あるいは別法としてｉｉｉ）をアミドｖｉｉ、カルバメートｖｉｉｉ、およびウレアｉｘの生成に適した試薬で処理して生成できる。
【００５９】
多様な試薬が上記反応工程式に有用で、例えば、マーチ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４ｔｈ Ｅｄ．， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ （１９９２）に開示されている。ＬＸＲアゴニストを合成するための好ましい試薬および条件は、出願中の米国特許出願第６０／１１５，２９２（１９９９年１月８日出願）および第６０／１２４，５２５（１９９９年３月１５日出願）に開示されており、それらの教示するところは本明細書に参照として組み込まれる。
【００６０】
Ｃ．化合物のスクリーニング
上記で説明した通り、ＬＸＲを活性化し、よってＬＸＲのアゴニストであるいかなる化合物も本発明の方法に使用できる。特に、科学的に信頼できるインビトロまたはインビボのいずれかの検査工程を用いて、ＬＸＲアゴニスト、特にＬＸＲαアゴニストであることが判明したいずれの化合物も本発明の方法に使用することができる。
【００６１】
図１はコレステロール低下剤として有用なＬＸＲαアゴニストの同定およびスクリーニングに用いることが出来る典型的戦略の説明図を例示する。初めに、ハイスループットスクリーン（ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎ：ＨＴＳ）をＬＸＲαに結合する化合物を同定するために用いる。次に、結合を示す化合物について、ＬＸＲα介在転写活性化（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）の強化能、およびＬＸＲαへの結合の特異性を試験する。次に、有利な活性を示す化合物についてその細胞毒を試験する。さらに、予想される臨床投与量範囲で非毒性である化合物について、その薬物動態（ＰＫ）および構造−活性関係（ＳＡＲ）活性を試験する。最後に、最も有利な性質を有するリード化合物について、高コレステロール血症モデルシステムでの実験を含む、動物実験で試験する。
【００６２】
特に、化合物は、ＬＸＲ受容体機能を活性化するその能力を、生化学アッセイ（出願中の米国特許出願番号第０８／９７５，６１４（１９９７年１１月２１日出願）および０９／１６３，７１３（１９９８年９月３０日出願）参照）、あるいは、レーマンら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２ （６）， ３１３７−３１４０ （１９９７）に記載のような細胞ベースアッセイを用いてインビトロで評価できる。別法として、化合物および組成物は、ウエスタン・ブロット法を用いて、ＬＸＲで調節される遺伝子発現を増加あるいは減少するその能力で評価できる。化合物のコレステロール低下能を評価するために確立された動物モデルはこの分野で既知である。例えば、スパディーら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、８１巻、３００頁（１９８８）；エバンスら、Ｊ． Ｌｉｐｉｄ． Ｒｅｓ．、３５巻、１６３４頁（１９９４）、；リンら、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、３８巻、２７７頁（１９９５）に記載の方法に類似のプロトコールを用いて、本明細書で開示の化合物は高コレステロール食餌で飼育されたハムスターのコレステロール値を低くすることが出来る。さらに、ＬＸＲα動物モデル（例えば、ＬＸＲα（＋／−）および（−／−）マウス）は本発明化合物および組成物の評価に用いることが出来る（例えば、ピートら、Ｃｅｌｌ， ９３： ６９３−７０４ （１９９８）参照）。
【００６３】
上記のアッセイを用いて、多くの化合物のＬＸＲ、特にＬＸＲαを調節、つまり活性化するその能力がスクリーニングできる。基本的には、水溶液に溶解できる化合物を用いることが多いが、いかなる化学的化合物もＬＸＲの潜在的調節剤としてスクリーニングできる。好ましい態様において、アッセイは、検査工程を自動化し、いかなる通常の供給源からの化合物を検査に提供し（これらは通常は同時に並行して実行されている（例えば、ロボットアッセイにおけるマイクロタイタープレート上のマイクロタイターフォーマットにおける））ことのより、大きな化学ライブラリーをスクリーニングするよう設計されている。多くの化学化合物の市販供給者、例えばシグマ・ケミカル社（セントルイス、ミズーリ州）、アルドリッチ・ケミカル社（セントルイス、ミズーリ州）、シグマ−アルドリッチ（セントルイス、ミズーリ州）。フルカ・ケミカ−バイオケミカ・アナライティカ（ブックス、スイス）等が存在することは、本分野の技術者には認識されるであろう。
【００６４】
好ましい１態様において、ハイスループットスクリーニング法は、多数の潜在的治療化合物（つまり、ＬＸＲアゴニスト）を含有するコンビナトリアルライブラリーを提供することを包含する。そのような「コンビナトリアル・ケミカル・ライブラリー」はここで述べる１個あるいは複数のアッセイでスクリーニングして、所望の特性活性を発揮する、つまりＬＸＲを活性化するライブラリー構成員（特に化学的スペシーズあるいはサブクラス）を同定する。こうして同定された化合物は通常の「リード化合物」の役目を果たし、あるいはそれ自身が潜在的あるいは実際の治療剤として使用され得る。
【００６５】
コンビナトリアルケミカルライブラリーは、化学合成あるいは生物学的合成により、例えば試薬などの化学的「基礎的要素（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）」の多くを集めて、生じた多様化した化学化合物の収集（コレクション）である。例えば、ポリペプチドライブラリーなどの一次（ｌｉｎｅａｒ）コンビナトリアルケミカルライブラリーは、化学的基礎的要素（アミノ酸）の１セットを、得られる化合物長さ（つまり、ポリペプチド化合物のアミノ酸数）をあらゆる可能性のある方法で集めることのより形成される。無数の化学化合物が化学的基礎的要素のこのようなコンビナトリアル混合により合成できる。
【００６６】
コンビナトリアルケミカルライブラリーの調製およびスクリーニングは本分野の技術者には良く知られている。そのようなコンビナトリアケミカルライブラリーとしては、これらに限定されないが、以下のものがある。ペプチドライブラリー（米国特許第５，０１０，１７５、フルカ、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔ． Ｐｒｏｔ． Ｒｅｓ．， ３７： ４８７−４９３ （１９９１） およびほートンら、Ｎａｔｕｒｅ， ３５４： ８４−８８ （１９９１）参照）がある。化学ダイバシティライブラリーを合成する他の化学も用いることが出来る。そのような化学としては、これらに限定されないが、ペプトイド（ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１９７３５）；コードされたペプチド（ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／２０２４２）；ランダムバイオオリゴマー（ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０００９１）；ベンゾジアゼピン（米国特許第５，２８８，５１４）；ヒダントイン、ベンゾジアゼピンおよびジペプチドなどのダイバーソマー（ＤＩＶＥＲＳＯＭＥＲ）（ホブスら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０： ６９０９−６９１３ （１９９３））；ビニル性（ｖｉｎｙｌｏｇｏｕｓ）ポリペプチド（ハギハラら、Ｊ Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１４： ６５６８ （１９９２））；β−Ｄ−グルコーススカホルディング（Ｓｃａｆｆｏｌｄｉｎｇ）とのノンペプチド性ペプチド模倣（ｎｏｎｐｅｐｔｉｄａｌ ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）（ハーシュマンら、Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１４： ９２１７−９２１８ （１９９２））； 小化合物ライブラリーの類縁有機合成（チェンら、Ｊ Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１６： ２６６１ （１９９４））；オリゴカルバメート（チョら、Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２６１： １３０３ （１９９３））；および／またはホスホン酸ペプチジル（キャンベルら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９： ６５８ （１９９４））；核酸ライブラリー（オースベル、ベーガーおよびサムブロック同上参照）；ペプチド核酸ライブラリー（米国特許第５，５３９，０８３参照）；抗体ライブラリー（ヴァーンら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １４ （３）： ３０９−３１４ （１９９６）およびＰＣＴ／ＵＳ９６／１０２８７参照）； 炭水化物ライブラリー（リャングら、Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７４： １５２０−１５２２ （１９９６）および米国特許第５５９３８５３参照）；小有機分子ライブラリー（ベンゾジアゼピン類、バームＣ＆Ｅ、ニュース，１月、１８， ３３頁 （１９９３）；イソプレノイド （米国特許第５，５６９，５８８）； チアゾリジノン類およびメタチアザノン類（米国特許第５，５４９，９７４）； ピロリジン類（米国特許第５，５２５，７３５および５，５１９，１３４）；モルホリノ化合物（米国特許第５，５０６，３３７）；ベンゾジアゼピン類（米国特許第５，２８８，５１４）等。
【００６７】
コンビナトリアルライブラリーの調製のための装置は市販品から入手できる（３５７ＭＰＳ、３９０ＭＰＳ、アドバンスド・ケム・テック、ルイスビル、ケンタッキー州、シンフォニー、レイニン、ウーバーン、マサチュッセッツ州、４３３Ａ、アプライド・バイオシステムス、フォスター・シティー、カリフォルニア州、９０５０プラス、ミリポア、ベッドフォード、マサチュッセッツ州）。さらに、多数のコンビナトリアルライブラリーがそれ自体市販されている（コムゲニックス、プリンセトン、ニュージャージー州、アシネックス、モスクワ、ロシア、トリポス・インク、セントルイス、ミズーリ州、ケムスター・リミテッド、モスクワ、ロシア、３Ｄファーマシューティカルズ、エクストン、ペンシルベニア州、マルテック・バイオサイエンシス、コロンビア、メリーランド州）。
【００６８】
多くのよく知られたロボットシステムが液相ケミストリー用に開発されている。これらのシステムは、武田薬品工業株式会社（大阪、日本）で開発された自動合成装置などのような、自動化ワークステーションと、化学者により行われる手動合成操作を模倣したロボットアームを用いる多くのロボットシステム（ザイメートＩＩ、ザイマーク・コーポレーション、ホプキントン、マサチュセッツ；オルカ、ヒューレットパッカード、パロ・アルト、カリフォルニア）を包含する。上記の装置はいずれも本発明の使用に適している。ここで述べたように作動する様に、これらの装置への変更の本質および実施は関連分野の技術者には明白である。さらに、多くのコンビナトリアルライブラリーがそれ自体市販されている（コムゲネックス、プリンストン、ニュージャージー州；アシネックス、モスクワ、ロシア；トリポス・インク、セントルイス、ミズーリ州；ケミスター・リミティッド、モスクワ、ロシア；３Ｄファーマシューティカルズ、エクストン、ペンシルベニア州；マルテック・バイオサイエンシス、コロンビア、メリーランド州等）。
【００６９】
ここに開示のインビトロアッセイを用いて、化合物はハイスループットフォーマットにおけるそのＬＸＲ活性化能を容易にスクリーニングできる。そのようなハイスループットアッセイにおいて、一日中に最大数千の異なる潜在的ＬＸＲアゴニストをスクリーニングすることが可能である。特に、マイクロタイタープレートの各ウェルは、選択した潜在的ＬＸＲ調節剤に対して異なるアッセイを行うことができ、あるいは濃度あるいはインキュベーション時間効果が観察されるなら、５〜１０分毎に一つのＬＸＲ調節剤を試験することが出来る。よって、一つの標準的マイクロタイタープレートは約１００（９６）調節剤を試験することが出来る。１５３６ウェルプレートを使用するなら、一つのプレートで約１００〜約１５００の異なる化合物を容易に試験すること出来る。一日当り多くの異なるプレートを試験することが可能であり、例えば、約６，０００〜２０，０００、約１００，０００〜１，０００，０００の異なる化合物のスクリーニングアッセイが本発明の統合されたシステムを用いて可能である。
【００７０】
ハイスループットスクリーニングシステムは市販品から入手できる（例えば、ザイマーク・コーポレーション、ホプキントン、マサチュセッツ州；エアー・テクニカル・インダストリー、メントール、オハイオ州；ベックマン・インストルーメント・インク、フラートン、カルフォルニア州；プレシション・システムズ・インク、ナティック、マサチューセッツ州等）。これらのシステムは通常、すべての試料および試薬のピペッティング、液体分配、時限のインキュベーション、およびアッセイに適した検知器でのマイクロプレートの最終解読を含む、すべての工程が自動化されている。これらの設定（変更）可能なシステムは、高度な柔軟性およびカスタマイズ化と同様、高度な処理能力（ハイスループット）と迅速な始動を提供する。このようなシステムの製造会社は様々なハイスループットシステムの詳細なプロトコールを提供している。よって、例えば、ザイマーク・コーポレーションは遺伝子転写、リガンド結合等の調節を検知するスクリーニングシステムを説明する技術的会報を提供している。
【００７１】
ＬＸＲアゴニスト組成物
本発明の化合物、つまりＬＸＲアゴニストは治療投与のための種々の製剤へ組み込むことが出来る。特に、本発明の化合物は、適当な薬理学的に許容される担体または希釈剤と混合して医薬組成物に製剤化することができる。本発明の使用に適した製剤とは、レミントンの製薬科学（マック出版社、フィラデルフィア、ペンシルベニア州、１７編（１９８５）、これは参照として本明細書に組み込まれる）に記載されている。さらに、薬物輸送の方法の簡単な参考として、ランガー、Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４９： １５２７−１５３３ （１９９０）を参照（これは参照として本明細書に組み込まれる）。
【００７２】
ここで用いられる用語「組成物」はその量が限定された特異な量の特異な構成要素（例えばＬＸＲアゴニスト）からなる生成物、およびその量が限定された特異な量の特異な構成要素の組合せから直接的または間接的に得られるいずれの生成物を包含する。
【００７３】
本発明の活性ＬＸＲアゴニスト化合物は医薬組成物として、例えば、不活性希釈剤と、あるいは同化性で食用に適する担体と経口投与でき、あるいはそれらは硬あるいは軟カプセルに封印され、あるいは錠剤に製剤化され、あるいは食餌中の食物と直接に混合されて投与される。舌下投与を含む経口治療用投与では、これらの活性化合物は賦形剤と混合され、錠剤、丸剤、カプセル剤、アンプル剤、サシュー剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤等の形態で使用することが出来る。活性化合物はまた、例えば、液体点滴あるいはスプレー剤として経鼻的に投与できる。経口投与が好ましい。そのような組成物および製剤は少なくとも０．１パーセントの活性化合物、つまりＬＸＲアゴニストを含有すべきである。これらの製剤中の活性化合物のパーセンテージは、もちろん、変更でき、通常は単位投与形重量の約２％〜約６０％の間である。
【００７４】
ＬＸＲアゴニストの治療有効量、予防有効量および／または高比重リポ蛋白質上昇量は本発明の組成物および方法への使用に適している。用語「治療有効量」は、臨床医、例えば研究者、獣医、医師、あるいは整骨療法師などが求める組織、システム、動物またはヒトの生物学的または医薬的応答を引き出す、薬剤または医薬の量を意味するものである。
【００７５】
用語「予防有効量」とは、アテローム性動脈硬化症やアテローム硬化性疾患現象の発生のリスクを予防あるいは減少させる、薬剤または医薬の量を意味するものである。
【００７６】
用語「高比重リポ蛋白質上昇量」とは、対象の血漿ＨＤＬ値を薬剤または医薬が投与される以前の値より上昇させる、薬剤または医薬の量を意味するものである。血漿ＨＤＬ値の測定は医学分野の技術者に既知の医学的に許容される工程、例えば消費者に直接使用できる様設計されたアッセイキッドを用いて行うことが出来る。
【００７７】
ＬＸＲアゴニストを用いる処方計画は、患者の型、種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療する疾病の重篤度；投与方法；患者の腎臓および肝臓機能；および使用するＬＸＲアゴニストまたはその誘導体を含む、多くのファクターによって選択される。これらのファクターの考慮は、病態の進行を予防、対抗あるいは停止させる為に要するＬＸＲアゴニストの治療有効量と同様に、ＬＸＲアゴニストの適当なＨＤＬ上昇量を決定する目的で、通常の熟練した臨床医の権限範囲である。
【００７８】
例えば、本発明の化合物は１日あたり、動物体重１ｋｇに対し、約０．１ｍｇから約１００ｍｇの範囲で、１日１回または１日２回〜６回、分割した投与形にして、あるいは持続性製剤にして投与できる。殆どの大きい動物に対しては、１日あたりの総投与量は約１．０ｍｇから約１０００ｍｇの間であり、好ましくは約１ｍｇから約５０ｍｇの間である。７０ｋｇの成人では、１日あたりの総投与量は通常は約７ｍｇから約３５０ｍｇの間である。この投与計画は至適治療応答を得るように調節できる。
【００７９】
錠剤、丸剤、カプセル剤等はトラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤；リン酸２カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；およびショ糖、乳糖またはサッカリンなどの甘味料を含有してもよい。投与単位形がカプセルの場合は、上記タイプの物質のほかに、脂肪油などの液体担体を含有してもよい。
【００８０】
他の種々の物質がコーティング剤として、或いは投与単位形の物理形状を変更するために存在していてもよい。例えば、錠剤はシェラック、糖あるいは両者で皮膜されていてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性成分の他に、甘味料としてショ糖、保存剤としてメチルおよびプロピルパラベン、色素あるいはさくらんぼあるいはオレンジ風味の風味剤を含有してもよい。
【００８１】
これらの活性化合物、つまりＬＸＲアゴニストは非経口的にも投与できる。これらの活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と水中で適当に混合して調製できる。分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびこれらの油中混合物から調製出来る。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防止するために保存剤を含有する
【００８２】
注射投与に適した医薬製剤は、無菌の注射できる溶液または分散液を即席に調製するための、無菌水性溶液あるいは分散液と無菌粉末を含有する。すべてのケースで、製剤は無菌でなくてはならず、容易にシリンジで吸い上げられる程度までは流動性でなくてはならない。製造および保存条件下では安定でなくてはならず、細菌やかびなどの微生物の汚染作用に対して保護されるべきである。担体は、例えば水、エタノール、多価アルコール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、これらの適当な混合物および植物油を含有する溶媒あるいは分散媒質である。
【００８３】
上記の方法において、ＬＸＲアゴニストは単独であるいは他の１つあるいは複数の追加の活性薬剤と共に投与することができる。組合せ治療（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）は、ＬＸＲアゴニストと１つあるいはそれ以上の活性薬剤を含有する単一の医薬製剤を投与すること、およびＬＸＲアゴニストと各活性薬剤をそれぞれ別々の医薬製剤で投与することを意味する。例えば、ＬＸＲアゴニストとＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は単一の経口投与用組成物、例えば錠剤やカプセル剤で一緒に患者に投与することができるが、あるいは各活性薬剤を別々の経口投与製剤で投与することも出来る。別々の投与製剤を使用する場合は、ＬＸＲアゴニストと１つあるいは複数の追加の活性薬剤は基本的には同時に、つまり、並行して投与でき、あるいは別々の時差的な時間で、つまり順次に投与することもできる。組合せ治療はこれらすべての投与計画を包含するものと理解される。
【００８４】
例えば、ＬＸＲアゴニストは以下の活性薬剤の１つあるいは複数と組合せて投与できる。高脂血症低下剤；血漿ＨＤＬ上昇剤；コレステロール生合成阻害剤、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤、スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤、あるいはスクアレン・シンセターゼ阻害剤（スクアレン・シンターゼ阻害剤としても知られている）などの高コレステロール血症低下剤；メリナミドなどのアシル−コエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；プロブコール；ニコチン酸およびその塩およびナイアシンアミド；βシトステロールなどのコレステロール吸収阻害剤：コレスチラミンやコレスチポールあるいは架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体などの胆汁酸金属イオン封鎖剤アニオン交換樹脂；ＬＤＬ（低密度リポ蛋白質）受容体誘導物質；クロフィブラート、フェノフィブラート、ゲムフィブリゾールなどのフィブラート；ビタミンＢ６（ピリドキシンとしても公知）および塩酸塩などのその薬理学的に許容される塩；ビタミンＢ１２（シアノコバラミンとしても公知）；ビタミンＣ、Ｅおよびβ−カロチンなどの抗酸化ビタミン；βブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；およびフィブリノーゲン受容体アンタゴニスト（つまり、グリコプロテインＩＩｂ／ＩＩＩａフィブリノーゲン受容体アンタゴニスト）およびアスピリンなどの血小板凝集阻害薬。上記のとおり、ＬＸＲアゴニストは１つあるいはそれ以上の追加の活性薬剤と組合せて投与でき、例えば、ＬＸＲアゴニストとＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤およびアスピリンと組合せて、あるいはＬＸＲアゴニストとＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤およびβブロッカーと組合せて投与できる。
【００８５】
ＬＸＲアゴニストは好ましくはコレステロール生合成阻害剤、特にＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤と投与する。用語ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害活性を有する化合物の薬理的に許容される塩、エステル、遊離酸およびラクトン型のすべてを包含し、よって、そのような塩、エステル、遊離酸およびラクトン形の使用もまた本発明範囲に包含される。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の阻害活性を有する化合物は、本分野でよく知られたアッセイを用いて容易に同定することができる。例えば、適したアッセイは米国特許第４、２３１、９３８とＷＯ８４／０２１３１（これらは参照して本明細書に組み込まれる）に記載、開示されている。適したＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の例としては、これらに限定されないが、以下のものがある。ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ、ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，２３１，９３８参照） ； シムバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ、ＺＯＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，４４４，７８４参照）； プラバスタチンナトリウム（ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ ｓｏｄｉｕｍ、ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）、米国特許第４，３４６，２２７参照）；フルバスタチンナトリウム（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ ｓｏｄｉｕｍ、ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、米国特許第５，３５４，７７２参照）； アトルバスタチンカルシウム（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２７３，９９５参照）およびリバスタチン（ｒｉｖａｓｔａｔｉｎ、セリバスタチン（ｃｅｒｉｖａｓｔａｔｉｎ）としても知られている；米国特許第５，１７７，０８０参照）。これらおよび本発明の方法に使用できる他のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の構造式はＭ．ヤルパニ、「コレステロール低下薬」Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ， ｐｐ． ８５−８９ （１９９６年２月５日）に記載されている。現在のところ好ましい態様においては、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤はロバスタチンおよびシムバスタチンから選択される。
【００８６】
数種のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤が米国で市販されているので、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の投与情報は本分野でよく知られている。特に、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の１日あたりの投与量は高コレステロール血症の治療に用いられ、内科医のデスク参照（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ （ＰＤＲ））に記載の量と同じか同等である。例えば、ＰＤＲの５０版、１９９６（メディカル・エコノミックス社）、特に２１６頁の見出し「コレステロール低下剤」、準見出し「ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤」およびそこに引用されている参照頁を参照。好ましくは、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の経口投与量は約１から２００ｍｇ／日であり、さらに好ましくは約５から１６０ｍｇ／日である。しかしながら、投与量は用いる個々のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の能力および上記の他のファクターによって変動するであろう。充分に大きな能力を持つＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤はミリグラム以下の１日当りの投与量で与えることが出来る。
【００８７】
例として、シムバスタチンの１日あたりの投与量は、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇおよび１６０ｍｇから選択される；ロバスタチンは１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇおよび８０ｍｇから選択される；フルバスタチンナトリウムは、２０ｍｇ、４０ｍｇおよび８０ｍｇから選択される；プラバスタチンナトリウムは、１０ｍｇ、２０ｍｇおよび４０ｍｇから選択される。アトルバスタチンの１日あたりの投与量は１ｍｇから１６０ｍｇの範囲であり、特に５ｍｇから８０ｍｇの範囲である。ＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は１日あたり１回の投与が好ましいが、経口投与は単回投与あるいは分割した投与で、１日２、３または４回である。
【００８８】
本発明によれば、ＬＸＲアゴニストのＨＤＬ上昇量は、哺乳動物、特にヒトの高密度リポ蛋白質の血漿レベルを上昇させるために有用な薬剤の調製に用いることが出来る。さらに、ＬＸＲアゴニストの予防有効量は、哺乳動物、特にヒトのアテローム性動脈硬化症の発生リスクを予防または減少するために、あるいは原発たは後続アテローム硬化性疾病現象を持つリスクを予防または減少するために有用な薬剤の調製に用いることが出来る。さらに、ＬＸＲアゴニストの治療有効量は、哺乳動物、特にヒトのアテローム性動脈硬化症の治療に有用な薬剤の調製に用いることが出来る。
【００８９】
さらには、上記の薬剤の調製にあたっては、ＬＸＲアゴニストは治療有効量の以下の追加の活性薬剤の１つあるいはそれ以上と混合することが出来る：ＬＤＬ低下剤；高脂血症低下剤；ＨＤＬ上昇剤；ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤、スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤；スクアレン・シンセターゼ阻害剤；アシル−コエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ阻害剤；プロブコール；ニコチン酸およびその塩；ナイアシンアミド；コレステロール吸収阻害剤；胆汁酸金属イオン封鎖剤アニオン交換樹脂；低密度リポ蛋白質受容体誘導物質；クロフィブラート、フェノフィブラート、ゲムフィブリゾール；ビタミンＢ６およびその薬理学的に許容できる塩；ビタミンＢ１２；抗酸化ビタミン；βブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト；アンギオテンシン変換酵素阻害剤；血小板凝集阻害薬；フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト；およびアスピリン。
【００９０】
特に、ＬＸＲアゴニストおよび治療有効量のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は上記記載の治療に有用な薬剤の調製に一緒に混合される。特に、ＬＸＲアゴニストと、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスチンおよびリバスタチンの薬理学的に許容されるラクトン、遊離酸、エステルおよび塩から選ばれる、治療有効量のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、上記記載の治療に有用な経口投与に適した薬剤の調製に一緒に混合される。現在のところ好ましい態様において、薬剤調製に用いられるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤はロバスタチンまたはシンバスタチンである。
【００９１】
本理論に束縛されることなく、ＬＸＲ活性化、例えばＬＸＲアゴニストによるＬＸＲ活性化とＨＤＬ値との本関連はＡＢＣファミリーメンバーのＬＸＲによる活性化により介在されると考えられている。特に、ＬＸＲアゴニストがＡＢＣファミリーメンバーの、特にステロール輸送に関与しているＡＢＣファミリーメンバーの発現を誘発できることが発見された。特に、ＬＸＲ活性化はＡＢＣファミリーメンバーの転写に劇的な増加を引き起こす。つまり、この増加したＡＢＣ活性はステロール、つまりコレステロール、および他の脂質の細胞膜を越えた輸送の増加を引き起こし、それによりＨＤＬ値の総体的増加を導く。
【００９２】
実施例
本発明は特定の実施例により非常に詳細に説明される。以下の実施例は例示の目的のために示されたものであり、いかなる方法でも本発明を限定するものではない。本分野の技術者は、本質的に同じ結果を生じるよう、変更または修正され得る、様々な非限定的パラメーターを容易に認識するであろう。
【００９３】
実施例１
ＬＸＲαアゴニストの同定および特徴付け
この実施例では、数種の化合物について、ＬＸＲαアゴニストとして作用するその能力を試験する（図１参照）。まず、化合物はＬＸＲαへのその結合能を試験した。ついで、ＬＸＲαアゴニストはついで細胞ベースハイスループットスクリーンおよびペプチドセンサーＬＸＲアッセイの両方で同定した。
【００９４】
ＬＸＲα結合能
最初に、推定のアゴニストのＬＸＲαに結合する能力を試験した。ＬＸＲαがグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）に融合した融合プロテインを調製した。放射能標識した推定のアゴニスト化合物の融合プロテインに結合する能力を次に試験した。
放射性リガンド結合アッセイの結果を図２に示す。このアッセイは、化合物Ｔ３１４４０７がＬＸＲα融合プロテインに直接結合し、ＧＳＴ単独には認めうるほどには結合しないことを示す。
化合物Ｔ３１４４０７について、ＬＸＲαに結合する他のリガンドとの競合能を試験した。様々な濃度の非標識Ｔ３１４４０７、Ｔ９００５４６、Ｔ９０１４３３または２４，２５−エポキシコレステロールの存在下、ＬＸＲαに結合した放射能標識Ｔ３１４４０７のパーセンテージを測定した。図３に示す結果より、Ｔ３１４４０７が０．２μＭのＫｉでＬＸＲαに競合的に結合することが示された。
さらなる試験では、Ｔ３１４４０７とＴ９００５４６について、ＬＸＲαへの結合に関してオキシコレステロールと競合する能力を試験した。放射能標識オキシコレステロール３Ｈ−２４，２５−エポキシコレステロールの量を、様々な濃度の非標識２４，２５−エポキシコレステロールあるいは推定のＬＸＲアゴニストのＴ９００５４６とＴ３１４４０７の存在下で比較した。図４に示すとおり、Ｔ９００５４６とＴ３１４４０７は両者共、ＬＸＲαへの結合においてオキシコレステロールと競合できた。
【００９５】
ＬＸＲαのリガンド介在構造変化
この実施例では、ペプチドセンサーアッセイを、推定のＬＸＲαアゴニストのＬＸＲαの構造変化を誘発する能力を示すために用いた。リガンド介在構造変化はＬＸＲαなどの核ホルモン受容体の共通性質であると信じられている。ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４９６９（公開番号ＷＯ９９／２７３６５）で開示のとおり実施されたペプチドセンサーアッセイはインビトロアッセイである。
図５に示すとおり、ＬＸＲαアゴニストＴ９００５４６、Ｔ３１４４０７およびＴ２８０４０４の増加する量の追加により、蛍光増加により証明される構造変化が生じた。オキシステロール２４，２５−エポキシコレステロールもまた蛍光増加を生じた。
【００９６】
実施例２
ＬＸＲα介在転写に対するＬＸＲアゴニストの効果
ＬＸＲアゴニストのＬＸＲα介在転写を刺激する能力をこの実施例で説明する実験で試験した。最初に、コアクチベーター（ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ）ＳＲＣ−１のＬＸＲαへのリクルートメントに対するアゴニストＴ３１４４０７の効果を哺乳類のツーハイブリッドアッセイ（ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ ａｓｓａｙ）で試験した。次にＴ３１４４０７のＬＸＲ介在転写活性化能を、リポーター遺伝子コトランスフェクション（ｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）アッセイで試験した。最後に、様々なＬＸＲアゴニストの転写に対する効果がＬＸＲ特異的であることが判明した。
簡単には、細胞ベースアッセイでは、非受容体転写因子ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインはＬＸＲαの推定のリガンド結合ドメインに融合した。得られた構築物は、ＧＡＬ４アップストリーム活性化配列（ＵＡＳ）のコントロール下、ルシフェラーゼリポーター構築物とともに、２９３個の細胞に導入された。トランスフェクションされた細胞をついで化合物で処理し、ルシフェラーゼ活性を測定した。個々の化合物を対照（化合物無添加）に比較して評価し、最大ルシフェラーゼ活性の５０％を達成するために必要な濃度として、ＥＣ５０を測定した。
【００９７】
ＬＸＲαアゴニストはＳＲＣ−１コアクチベーターのリクルートメントを強化する
これらの実験の初期において、ＧＬＡ４転写因子のＤＮＡ結合ドメインがＳＲＣ−１コアクチベーターに融合している融合ポリペプチドを用いた。ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメイン−ＳＲＣ−１融合プロテインを発現するプラスミドと、ＬＸＲαリガンド結合ドメインがＶＰ−１６に融合している第二の融合プロテインを発現するプラスミドを使用した。ＨｅｐＧ２細胞はｐＧ５（５つのＧＡＬ４結合サイトのコントロール下のルシフェラーゼリポーターコード配列）ルシフェラーゼリポータープラスミド（０．２５μｇ／１．５×１０５細胞）および２つの融合プロテインを発現するプラスミドと一時的にトランスフェクションした。シフェラーゼリポーター活性を、細胞をＬＸＲアゴニスト（指定した濃度の）で処理後あるいは処理せずに測定した。相対的ルシフェラーゼ活性は処理および非処理細胞間のルシフェラーゼ活性の比（βガラクトシダーゼ活性により標準化）である。
【００９８】
図６に示すとおり、推定のＬＸＲアゴニストＴ３１４４０７とＴ２８０４０４は驚異的にＳＲＣ−１コアクチベーターのＬＸＲαへのリクルートメントを刺激した。ＤＭＳＯ対照がリクルートメントを全く強化しないが、一方オキシステロール２４，２５−エポキシコレステロールもまたリクルートメントを刺激した。
【００９９】
ＬＸＲαアゴニストはＬＸＲ介在転写を活性化する
ＬＸＲαアゴニストＴ２８０４０４とＴ３１４４０７のＬＸＲ介在転写を活性化する能力を試験した。推定のアゴニスト化合物のルシフェラーゼリポーター遺伝子のＬＸＲ介在転写に対する効果を図７に示す。Ｔ２８０４０４とＴ３１４４０７の両者がＬＸＲ介在転写を活性化した。
【０１００】
ＬＸＲαアゴニストは特異的にＬＸＲ介在転写を活性化する
この実験では、ＬＸＲαおよび他の核受容体により活性化した転写に対する、ＬＸＲαアゴニストの効果を試験した。ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインを含むプラスミドｐＭ３（クローンテック・インク）に各々のコード領域を導入することにより、ＬＸＲα、ＬＸＲβ、ＣＰＦ、ＨＮＦ４、およびＲＸＲのリガンド結合ドメインの融合プロテインをコードするプラスミドを構築した。得られたプラスミドを個々に、ルシフェラーゼリポーター遺伝子をＧＡＬ４アップストリーム活性化配列のコントロール下で含有するリポータープラスミドと共に細胞内にコトランスフェクションした。推定のＬＸＲαアゴニストのＴ１７０４００、Ｔ２８０４０４、Ｔ３１４３９３、Ｔ３１４４０７、Ｔ５１３８９２、Ｔ２１０９４３、Ｔ５８８１４２、および既知のＬＸＲα調節剤２４，２５−エポキシコレステロールの存在下あるいは非存在下で、相対的ルシフェラーゼ活性を測定した。
図８に示すとおり、各推定のＬＸＲαアゴニストは強力にＬＸＲ介在転写を活性化した。ＬＸＲβ介在転写に対しては、それより少ない程度の活性化が見られた。ＬＸＲαアゴニストはＣＰＦ、ＨＮＦ４、ＦＸＲまたはＲＸＲで介在される転写を活性化しなかった。
【０１０１】
化合物Ｔ３１４４０７で、最高値の活性化が観察され、Ｔ３１４４０７はＬＸＲα介在転写を０．２μＭのＥＣ５０（ＥＣ５０は最大ルシフェラーゼ活性の５０％を達成するために要する化合物量と定義されている）で活性化した。この化合物は、上記の競合アッセイで証明されたように、０．２μｍのＫｉでＬＸＲαに直接に結合する。さらに、Ｔ３１４４０７は細胞毒性ではなく、５０μｍより大きいＥＣ５０値を示す。Ｔ３１４４０７はまた、コレステロール異化の主経路である胆汁酸合成の律速酵素であるヒトコレステロール７α−ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ７Ａ）遺伝子の発現を転写活性化（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｅ）することが示された。よって、Ｔ３１４４０７および他のＬＸＲαアゴニストはコレステロール値を低下し、他の脂質疾病の治療に有用である。
【０１０２】
Ｔ０３１４４０７の類縁体について、コレステロール低下、ＨＤＬコレステロール増加医薬として望ましい特質を試験した。いくつかの類縁体の構造、および化合物の対応する薬物動態データを図９に示す。ペプチドセンサー（ＦＰ）での化合物の活性、ルシフェラーゼ発現、細胞毒性、および血漿濃度を示す。これらの類縁体のひとつ、Ｔ０９０１３１７をインビボでの更なる実験用に選んだ。
【０１０３】
実施例３
ＬＸＲアゴニストの経口投与はインビボでＨＤＬコレステロール値を増加させる
この実施例は、ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７の経口投与による、血漿トリグリセリド値とＨＤＬコレステロール値に対する効果を測定するための実験を説明する。実験は２週間に亘って、各タイムポイントで２０匹のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６、１０雄性と１０雌性）を用いて行った。Ｔ０９０１３１７をマウスに１日１回、５または５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与した。７日目および１４日目に、マウスの血液の血漿脂質濃度および肝臓遺伝子発現を測定した。
【０１０４】
Ｔ０９０１３１７の５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの経口投与により、血漿総コレステロール値が雄性および雌性マウスの両者で増加した（図１０、左側パネル）。ＨＤＬコレステロール値もまたＬＸＲアゴニストの投与により増加した（図１０、右側パネル）。血漿総コレステロールとＨＤＬコレステロールの増加量は各投与でのＴ０９０１３１７の投与量に依存したが、投与１４日間では、投与７日間投与に比較して、効果に著明は違いは得られなかった。Ｔ０９０１３１７の経口投与により、血漿トリグリセリド値の増加が得られた（図１１）。これらの結果は、マウスを高コレステロール食事で飼育した場合でも有意に変化しなかった。
【０１０５】
これらの結果により、ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７の経口投与でマウスにおいてＨＤＬコレステロールフラクションが増加することが示される。ＨＤＬはアテローム発生に対して直接的に保護するので、これらの結果より、ＬＸＲアゴニストの投与はアテローム性動脈硬化症に対して保護出来ることが示唆される。
【０１０６】
ここに開示の実施例および態様は例示の目的のみのものであり、これらを鑑みて種々の修正や変更が本分野の技術者に提案され、それらが本出願の精神および範囲内、および添付の請求の範囲の範囲内であることは、理解されるであろう。本明細書に引用されたすべての出版物、特許および特許出願は、すべての目的のため参照して本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はコレステロール低下剤としての使用の為の、ＬＸＲαアゴニストのスクリーニング戦略の説明図を例示する。初めに、ハイスループットスクリーン（ＨＴＳ）をＬＸＲαに結合する化合物を同定するために用いる。次に、結合を示す化合物について、ＬＸＲα介在転写活性化（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）の強化能、およびＬＸＲαへの結合の特異性を試験する。次に、有利な活性を示す化合物についてその細胞毒を試験する。さらに、予想される臨床投与量範囲で非毒性である化合物について、その薬物動態（ＰＫ）および構造−活性関係（ＳＡＲ）活性を試験する。最後に、最も有利な性質を有するリード化合物について、高コレステロール血症モデルシステムでの実験を含む、動物実験で試験する。
【図２】図２は、放射能標識ＬＸＲαアゴニストＴ３１４４０７がＬＸＲαに直接結合することが示された、放射リガンド結合試験の結果を例示する。Ｔ３１４４０７のグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼのみの結合は極わずかである。
【図３】図３は、ＬＸＲαアゴニストＴ３１４４０７の、ＬＸＲαへの結合に関して他の分子との競合能を試験したリガンド競合試験の結果を例示する。ＬＸＲαへ結合した放射能標識されたＴ３１４４０７の量は、Ｔ３１４４０７自身、他のアゴニストＴ９００５４６およびＴ９０１４３３、および既知のＬＸＲαリガンド２４，２５−エポキシコレステロールにより競合的に阻害された。
【図４】図４は、ＬＸＲαアゴニストＴ９００５４６およびＴ３１４４０７が、放射能標識オキシステロール２４，２５−エポキシコレステロールのＬＸＲα受容体への結合を競合的に阻害することを例示する。
【図５】図５は、ＬＸＲαアゴニストＴ９００５４６、Ｔ３１４４０７およびＴ２８０４０４がＬＸＲαの構造変化を誘発することが証明された、ペプチドセンサーアッセイの結果を例示する。オキシステロール２４，２５−エポキシコレステロールはまたペプチドセンサーアッセイにおいて構造変化を誘発した。
【図６】図６は、ＳＲＣ−１ポリペプチドに融合したＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインと、ＶＰ１６活性化ドメインに融合したＬＸＲαリガンド結合ドメインを含んだ第２の融合プロテインを含む融合プロテインで介在される転写に対するＬＸＲαアゴニストの効果を示された、哺乳類ツーハイブリッド（ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ）アッセイの結果を例示する。ＧＡＬ４アップストリーム活性配列のコントロール下でのルシフェラーゼ遺伝子の発現量を示す。
【図７】図７は、コトランスフェクションアッセイにおけるＬＸＲ介在転写を活性化するＬＸＲαアゴニストの能力を試験したアッセイの結果を例示する。ルシフェラーゼ遺伝子の発現量を示す。
【図８】図８は、ＬＸＲαアゴニストが特異的にＬＸＲ介在転写を活性化することを実証するデータを示す。
【図９】図９は、ＬＸＲαアゴニストＴ０３１４４０７の数種の類縁体およびそれらの薬物動態データを示す。
【図１０】図１０は、マウスにおいてＬＸＲαアゴニストＴ０９０１３１７の経口投与により総コレステロールが上昇し、さらにＨＤＬコレステロールのフラクションが増加することを示す、実験の結果を例示する。
【図１１】図１１は、ＬＸＲαアゴニストＴ０９０１３１７の経口投与によりマウス血漿トリグリセリド値の増加が起こることを示すデータを例示する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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