(57)【要約】本発明は、抗菌活性を有する薬物、並びにその製造のための方法及び中間体に関する。さらに本発明は、ヒトを含む動物における細菌感染症の治療のためのかかる薬物の使用に関する。上記薬物は、バンコマイシン系抗生物質の誘導体であり、構造式Ｖ−Ｌ−Ｗ−Ｘ（式中、Ｖは、細菌におけるペプチドグリカン生合成を阻害する糖ペプチド部分であり、Ｌは連結基であり、Ｗは、天然の動物又は細菌性ペプチド抗生物質に基づく成分などのペプチド性膜関連成分であり、Ｘは水素又は膜挿入型成分である）を有するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
Ｖ−Ｌ−Ｗ−Ｘ
（式中、
Ｖは、細菌におけるペプチドグリカン生合成を阻害する糖ペプチド部分であり；
Ｌは、連結基であり；
Ｗは、ペプチド性膜関連成分であり；
Ｘは、水素又は膜挿入型成分である。）
で表される抗菌化合物。
【請求項２】
Ｖ−Ｌ−が、下記式：
【化１】
2004513132.tif 000012
（式中、
Ｙ及びＹ’は、独立に水素又はクロロであり；
Ｒは、水素、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又は式−Ｒａ−Ｌ−の基であり、ここで、Ｒａは、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニルであり、ＬはＲａのアミノ基に結合しており；
Ｒ１は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ２は、−ＮＨ２−、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＬ−、又はＮ（ＣＨ３）Ｌ−であり；
Ｒ３は、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、［ｐ−ＯＨ、ｍ−Ｃｌ］フェニル、ｐ−ラムノース−フェニル、［ｐ−ラムノース−ガラクトース］フェニル、［ｐ−ガラクトース−ガラクトース］フェニル、又は［ｐ−ＣＨ３Ｏ−ラムノース］フェニルであり；
Ｒ４は、−ＣＨ２−（ＣＯ）ＮＨ２、ベンジル、［ｐ−ＯＨ］フェニル、又は［ｐ−ＯＨ，ｍ−Ｃｌ］フェニルであり；
Ｒ５は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ６は、水素、４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアコサミニルであるか、あるいは、Ｒ６は、式Ｒｂ−Ｌ−の基であって、ここで、Ｒｂは４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアコサミニルであり、ＬはＲｂのアミノ基に結合しているか、あるいは、Ｒ６は、基Ｒｂ−Ｒ７であって、ここで、Ｒ７は、１，０００Ｄａ以下の有機側鎖部分であり；
Ｔｅｒ１は、ヒドロキシ又は−Ｌ−である；
但し、上記部分は、少なくとも１つの基−Ｌ−を含むものとする。）
で表されるもの又はその塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
有機側鎖部分が、式−ＣＨ２−Ｒ８を有するものを含み、ここでＲ８は水素、Ｃ１−Ｃ１５アルキル、Ｃ２−Ｃ１５アルケニル、Ｃ２−Ｃ１５アルキニル、Ｃ１−Ｃ７ハロアルキル、アセナフテニル、２−フルオレニル、９，１０−ジヒドロ−２−フェナントレニル、Ｒ９、Ｃ１−Ｃ１１アルキル−Ｒ９、Ｃ２−Ｃ７アルケニル−Ｒ９、Ｃ２−Ｃ７アルキニル−Ｒ９、又はＣ１−Ｃ７アルキル−Ｏ−Ｒ９であり、ここで、Ｒ９は、下記式の基である：
−Ｒ１０−［リンカー（０又は１）−Ｒ１０］（０又は１）
（式中、各Ｒ１０は、独立に、フェニル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルキル、ナフチル、又はチエニルを表し、その各々は、非置換、又は１若しくは２個の置換基で任意に置換されていてもよく、該置換基の各々は、独立に、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ２ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、ハロ、シアノ、又はニトロであり；
「リンカー」は、−Ｃ１−Ｃ３アルキレン、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｏ−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｈ又はＣ１−Ｃ３低級アルキル）−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−である。）、
請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｖが、バンコマイシン、クロロエレモマイシン、テイコプラニンＡ２−２、リストセチンＡ、エレモマイシン、バルキマイシン、アクチノジンＡ、コムプレスタニン、クロロペプチン１、キスタマイシンＡ及びアボパルシンからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｗが、リジン及びアルギニンから選択される２〜１０個の連続する残基を含む膜結合ペプチドを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
膜結合ペプチドが７〜３０個のアミノ酸を含む、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
膜結合ペプチドが、以下のペプチド：
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＧ（配列番号４）；
ＧＳＳＫＳＰＳＫＫＫＫＫＫＰＧＤ（配列番号５）；
ＳＰＳＮＥＴＰＫＫＫＫＫＲＦＳＦＫＫＳＧ（配列番号６）；
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＫ（配列番号７）；及び
ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫ（配列番号８）
からなる群より選択される、請求項５又は６記載の化合物。
【請求項８】
Ｗが膜挿入ペプチドを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
膜挿入ペプチドが、αディフェンシン、βディフェンシン及びバクテリオシンから選択される、請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
βディフェンシンがタキプレシンである、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
膜挿入ペプチドがマガイニンである、請求項８記載の化合物。
【請求項１２】
膜挿入ペプチドがマキュラチン（ｍａｃｕｌａｔｉｎ）１．１又はカエリン（ｃａｅｒｉｎ）１．１である、請求項８記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘが、以下のパラメータ：
―　６〜３０個の炭素原子を有する（芳香族環が存在する場合にはそのいずれの芳香族環の炭素原子をも含む）；
−　直線状又は分枝鎖状であり、後者の場合には１〜３個の分枝点を含む；
−　飽和又は不飽和であり、後者の場合には１〜４個の二重又は三重結合を含む；
−　Ｓ、Ｏ又はＮから独立に選択される１、２又は３個の複素原子を有する（芳香族環がある場合、その芳香族環に複素原子が存在する場合にはそれに加えて有する）；
−　任意により、１個以上、例えば２又は３個の芳香族環を含んでもよく、これらは融合されていてもよく、その各々が１、２又は３個の複素原子（存在する場合にはＳ、Ｏ又はＮから独立に選択される）を含んでいてもよい；並びに、
−　任意により、ヒドロキシ、−ＳＨ、アミノ及びハロから選択される１〜３個の置換基を有していてもよい、
を有する親油性鎖である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ヒト又は動物の身体の治療又は予防方法に使用するための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
細菌感染症の治療又は予防のための医薬を製造するための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
被験者において細菌感染症を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の有効量の抗菌剤を該被験者に投与することを含む、上記方法。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗菌活性を有する薬物、並びにその製造のための方法及び中間体に関する。さらに本発明は、ヒトを含む動物における細菌感染の治療のためのかかる薬物の使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
細菌感染によって起こる疾患は、ヒト及びその他の哺乳動物に有意な罹病率及び死亡率を有する。感染過程は、次の３つの段階：細菌の侵入及び宿主でのコロニー形成；有毒物質の出現を伴なう、宿主における細菌の侵襲及び増殖；並びに宿主の応答からなる。
【０００３】
細菌感染は、ブドウ球菌属及び連鎖球菌属などのグラム陽性菌により引き起こされるものと、大腸菌などのグラム陰性菌によって引き起こされるものに大きく分類することができる。グラム陽性菌は、丈夫な細胞壁に取り囲まれた典型的な脂質二重層細胞膜を有する。上記細胞壁は、主として、ペプチドグリカンからなり、ペプチドグリカンは、交互Ｄ−及びＬ−アミノ酸を含むペプチドで架橋されたＮ−アセチルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸のポリマーである。これに加えて、グラム陽性細菌の外側細胞壁は、多糖、タンパク質、テイコ酸、及びリポテイコ酸からなる複合体を含む。対照的に、グラム陰性菌は、はるかに薄いペプチドグリカン層、炭水化物とテイコ酸からなる複合体層が欠如したリポ多糖を含む外膜を有する。
【０００４】
抗生物質は、他の微生物の生育を抑制し、最終的にはこれらを破壊し得る様々な種の微生物（細菌、真菌）により生産される物質である。加えて、一般的な意味では、抗生物質という用語は広く、半合成抗生物質、すなわち、化学的に修飾した細菌性抗生物質、並びに合成抗菌薬（例えば、スルホンアミド）をも包含する。また、「抗生物質」という用語には、微生物によるコロニー形成又は微生物の侵襲に応答して局部的に発生する宿主防御系にみいだされる多様なペプチドも含まれる。数百種の抗生物質が同定されており、その多くが感染症の治療に有用な段階まで開発されている。
【０００５】
抗菌薬を分類及び区分するのに、複数のスキームが提案されている。最も一般的な分類は、下記のように、化学的構造、並びに提示された作用機構に基づいてなされる：（１）微生物の細胞膜に直接作用し、透過性に作用することによって、細菌内化合物の漏出を起こす薬物、例えば、デタージェント、カチオン性ペプチド、グラミシジンＡ及びポリミキシンなど；（２）細菌細胞壁の合成を阻害する、βラクタム、セファラスポリン及び糖ペプチドなどの薬物；（３）細菌のタンパク質合成に作用する薬物、例えば、テトラサイクリン及びクロラムフェニコールなど；（４）抗代謝物として作用し、細菌の葉酸合成を妨害する薬物、例えば、スルホンアミドなど；並びに、（５）核酸の合成又は活性を阻害する薬物、例えば、キノロンなど。
【０００６】
細菌膜に直接作用するペプチド抗菌薬は、細菌の細胞膜の全体的透過性化又は変質を引き起こす。これは、ペプチドと外膜表面の成分との結合によるもので、これにより膜構造の再編と、細胞内の内容物が漏出する細孔の形成が起こる。一般に、これらの特徴は、両親媒性ペプチドの特性に関連し、らせん状の二次構造と実効陽電荷が関わることが多い。この作用様式を有するペプチド抗生物質としては、マガイニン、ディフェンシン、並びに、ナイシンのようなランチビスティックスが挙げられる。このクラスの抗生物質の活性は、哺乳動物細胞よりむしろ細菌を指向する。何故なら、抗生物質の正に帯電した残基が、哺乳動物細胞膜より細菌において優勢に存在する負に帯電した脂質と相互作用するからである。
【０００７】
特に、マガイニンは、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅＶｉｓ）の皮膚にみいだされる一クラスの両親媒性α−らせんペプチドである。このクラスのペプチド（両生類由来のボンビニン［Ｇｉｂｓｏｎ， Ｂ．Ｗ．， Ｔａｎｇ， Ｄ．， Ｍａｎｄｒｅｌｌ， Ｒ． Ｋｅｌｌｙ， Ｍ． ＆ Ｓｐｉｎｄｅｌ， Ｅ． Ｒ．（１９９１）Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６６， ２２３１０３−２３１１１］、ハチ毒素由来のメリチン［Ｈａｂｅｒｍａｎｎ， Ｅ．（１９７２）Ｓｃｉｅｎｃｅ， １７７， ３１４−３２２］、及び真菌由来のアラメチシン［Ｌａｔｏｒｒｅ， Ｒ． ＆ ＡｌＶａｒｅｚ， Ｓ．（１９８１）Ｐｈｙｓｉｏｌ． ＲｅＶ．， ６１， ７７−１５０］も含まれる）は、低濃度で、膜電位の破壊を、また、より高い濃度では、挿入を介した膜溶解を引き起こす。
【０００８】
臨床上の効能のために、多方面からの関心を集めている一群の抗生物質として、糖ペプチド群の抗生物質がある。これらの薬物は、多様なアミノ糖及び非アミノ糖で置換されていることもある剛性で環状化したヘプタペプチドバックボーンからなる。このクラスにおけるいくつかのメンバーのアミノ糖部分は、Ｎ−アシル、Ｎ−アルキル、又はＮ−アリール置換を含んでいる。このクラスに含まれる２つの抗生物質は、バンコマイシンとテイコプラニンである。バンコマイシンは、インドネシア及びインドの土壌サンプルから単離される放線菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓにより生産される。この抗生物質は、その発見から間もなく精製され、その特性が記載された（ＭｃＣｏｒｍｉｃｋら、１９５６）。バンコマイシンは、分子量が約１，５００Ｄａの複雑な三環糖ペプチドである。その構造は、Ｘ線分析により下記のように決定された（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋら、１９７８）：
【化２】
2004513132.tif 000002
バンコマイシンは、主として、グラム陽性菌に対して活性である。これらの菌の菌株は、４μｇ／ｍＬ以下の最小阻害濃度で、感受性であると考えられる。エンテロコッカスｓｐｐ．の大部分の菌株がそうであるように、化膿連鎖球菌、肺炎連鎖球菌、コリネバクテリウムｓｐｐ．が高度に感受性である。放線菌ｓｐｐ．やクロストリジウムｓｐｐ．の大部分の種もバンコマイシンに対して感受性であるが、上記より高い濃度の抗生物質を要する。バンコマイシンは、重症の感染を治療するためだけに用いられ、特に、肺炎、気腫、心内膜炎、骨髄炎、及び軟組織膿瘍など、メチシリン耐性ブドウ球菌による感染のマネージメントに特に有用である。この薬物は、ペニシリン及びセファロスポリンに対しアレルギーの患者におけるブドウ球菌感染の治療にも極めて有用である。
【０００９】
バンコマイシンは、細菌の細胞壁の合成中に、ペプチドグリカンの糖成分とペプチド成分との架橋を阻止することにより、感受性細菌における細胞壁の合成を阻害する。十分な架橋がなければ、細胞壁は機械的に脆弱となり、細菌は、浸透圧の変化を受けると、溶解する。バンコマイシンは、架橋の前に、ペプチドグリカン前駆体のペンタペプチド部分のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン（Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）末端と、高い親和力で結合する。Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａジペプチドは、バンコマイシンのペプチドバックボーンとの相補的水素結合を形成する。バンコマイシン−ペプチドグリカン複合体は、トランスペプチダーゼ酵素の作用を物理的に遮断し、これによって、ペプチドグリカンを強化するペプチド架橋の形成を阻害すると考えられている。また、この活性により、細菌細胞質におけるペプチドグリカン前駆体の蓄積も起こる。
【００１０】
抗生物質に対する耐性については詳しく記載されており、耐性株は、ヒトの健康にとって大きな脅威となり得る。細菌は、薬物がその標的に到達できない；薬物が不活性化された；あるいは、標的が改変した、いずれかの理由で、抗菌薬に対して耐性となる。例えば、細胞表面中又は内に常在して、薬物を不活性化する酵素を生産する細菌もあれば、薬物の流入を妨げる不透過性細胞膜を備える細菌もある。
【００１１】
ＶａｎＡ〜Ｃ型などのバンコマイシンについては、数種の耐性が記載されている。ＶａｎＡ表現型は、バンコマイシンにより誘導可能であり、テイコプラニンとバンコマイシンの両方に対する耐性を賦与する。ＶａｎＡ表現型は、転移因子Ｔｎ１５４６、又は密接に関連する因子により媒介される（Ａｒｔｈｕｒら、１９９３）。トランスポゾンは、ピルビン酸をＤ−乳酸（Ｄ−ｌａｃ）に還元するデヒドロゲナーゼ（ＶａｎＨ）と、Ｄ−Ａｌａ及びＤ−Ｌａｃ間のエステル結合の形成を触媒する広い基質特異性のリガーゼ（ＶａｎＡ）をコードする（Ｄｕｋｔａ−Ｍａｌｅｎら、１９９０；Ｂｕｇｇら、１９９１）。結果として得られたＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ｌａｃデプシペプチドにより、ペプチドグリカン合成の経路におけるジペプチドＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａが置換される。置換により、抗生物質の結合に重要な水素結合が排除される（Ｂｕｇｇら、１９９１）。バンコマイシンに暴露すると、ＶａｎＢ表現型も誘導される；しかし、ＶａｎＡ表現型とは対照的に、これらの微生物は、テイコプラニンに対して耐性ではない。何故なら、テイコプラニンは、ＶａｎＢ細菌における耐性に必要な遺伝子の発現を誘導しないからである（Ａｒｔｈｕｒら、１９９６；ＥＶｅｒｓ及びＣｏｕＶａｌｉｎ， １９９６）。ＶａｎＢ表現型の細菌によるバンコマイシンに対する耐性は、ＶａｎＡ耐性に類似した機構、すなわち、未成熟なペプチドグリカン上の末端Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａの、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ｌａｃデプシペプチドによる置換によって起こる。Ｅ． ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ、Ｅ． ｃａｓｓｅｌｉｆｌａＶｕｓ及びＥ． ＦｌａＶｅｓｃｅｎｓの種に属する腸球菌におけるさらに別のバンコマイシン耐性表現型が記載されている（ＶａｎＣ）。これらの細菌は、低レベルのバンコマイシンに対して本来耐性であり、テイコプラニンに対して感受性である。耐性は、Ｄ−セリンで終結するペプチドグリカン前駆体の生産によって起こる（Ｂｉｌｌｏｔ−Ｋｌｅｉｎら、１９９４；Ｒｅｙｎｏｌｄｓら、１９９４）。
【００１２】
ペプチドグリカン前駆体類似体のカルボキシ末端でのＤ−ＳｅｒによるＤ−Ａｌａの置換によって、バンコマイシンに対する前駆体の親和力が低下するが、テイコプラニンに対する親和力の変化は比較的小さい（Ｂｉｌｌｏｔ−Ｋｌｅｉｎら、１９９４）。過去１０年にわたる腸球菌における糖ペプチドに対する高レベル耐性の出現及び蔓延により、効能が証明された抗生物質全てに対して耐性の臨床分離菌が発生した（Ｈａｎｄｗｅｇｅｒら、１９９２；Ｈａｎｄｗｅｇｅｒら、１９９３）。臨床分離菌における糖ペプチド耐性の発生数は増加し、腸球菌は、院内病原体及び耐性遺伝子の貯蔵庫として重要になってきた（Ｍｕｒｒａｙ １９９０；Ｗｏｏｄｆｏｒｄら、１９９５）。多薬物耐性株への院内感染は、破滅的となる恐れがあるため、新規の抗菌薬、又は細菌感染を制御する方法を開発する必要がある。
【００１３】
抗生物質耐性株の出現に対処するために用いられてきた手法として、既存の抗生物質を修飾して、耐性生物に対するそれらの効力を改善する方法、あるいは、細菌の原形質膜を透過性にすることによりその標的を殺す新規のペプチド抗生物質の発見がある。最初の手法の例は、近年、バンコマイシンのような糖ペプチドの誘導体の形成に焦点を絞っている。
【００１４】
結合剤である２−（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用いたバンコマイシンのカルボキシル末端の官能化により、溶液及び固相の両方で、短いペプチド配列を結合するのに成功している［Ｓｕｎｄｒａｍ， Ｕ． Ｎ．及びＧｒｉｆｆｉｎ， Ｊ． Ｈ．（１９９５）Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６０ １１０２−１１０３］。バンコマイシン及び関連する抗生物質のアミノ糖及び末端アミン部分も誘導体化されている。還元的アルキル化法で、バンコサミン糖（ｖａｎｃｏｓａｍｉｎｅ ｓｕｇａｒ）がアルキル化された一連の化合物が作られたが、そのいくつかは、バンコマイシン耐性細菌株に対し、非常に改善された活性を示した［Ｃｏｏｐｅｒ， Ｒ． Ｄ． Ｇ．ら（１９９６）Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ４９， ５７５−５８１；Ｒｏｄｒｉｇｅｚ， Ｍ． Ｊ．ら（１９９８）Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ５１， ５６０−５６９］。
【００１５】
ＷＯ−Ａ−９８／０２４５４には、可溶性の治療用ポリペプチドを、一般的構造：
−（Ｌ−［Ｗ］）ｎ−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（Ｉ）
（式中、各Ｌは、独立に、フレキシブルリンカー基であり、各Ｗは、独立に、ペプチド性膜結合成分であり、ｎは、１以上の整数であり、Ｘは、ペプチド又は非ペプチド性膜結合又は挿入型成分である）
の実体で修飾したポリペプチド誘導体が記載されている。
【００１６】
（Ｉ）型の構造は、膜と相互作用する成分のコンビナトリアルアレイを表し、これと可溶性ポリペプチドとの結合が、ポリペプチドと哺乳動物細胞の外側細胞膜との結合を媒介することがわかった。これによって、特に、細胞保護物質及び抗炎症薬として作用する補体活性化の調節物質の場合、治療効果が得られた（例えば、Ｄｏｎｇら（１９９９）Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３６ ９５７−９６３）。
【００１７】
（発明の概要）
本発明者らは、（Ｉ）型の構造が、真核生物より高い比率の酸性リン脂質を有し、かつより高い比率の膜関連生合成タンパク質を有する細菌膜と、より強い結合を呈示すると仮定した。そして、バンコマイシン及びその誘導体などの化合物をさらに（Ｉ）型の構造及び関連構造で誘導体化すれば、これら化合物の抗菌活性を増加できることがわかった。
【００１８】
従って、本発明の第１の態様は、化合物：
Ｖ−Ｌ−Ｗ−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（ＩＩ）
（式中、Ｖは、細菌におけるペプチドグリカン生合成を阻害する糖ペプチド部分であり；Ｌは、連結基であり；
Ｗは、ペプチド性膜関連成分であり；
Ｘは、水素又は膜挿入型成分である）
を提供する。
【００１９】
ペプチドグリカン生合成阻害物質（Ｖ）
ペプチドグリカンの最初の２つの段階は、細菌細胞内で起こる。第１の段階は、連結ペンタペプチドとＮ−アセチルムラミン酸に基づく脂質との組立からなり、このペプチドは：
Ｌ−アラニン−γ−Ｄ−グルタミン酸−Ｘａａ−Ｄ−アラニン−Ｄ−アラニン（配列番号３９）（式中、Ｘａａは通常、ｍ−Ｄ−アミノピメリン酸であるが、いくつかの種（例えば、黄色ブドウ球菌）では、Ｌ−リシンである）
である。
【００２０】
第２の段階では、脂質が、Ｎ−アセチルグルコサミンにより延長される。次に、この脂質が、細胞膜を通して輸送される。
【００２１】
第３の段階は、細菌膜の外側表面上で起こり、トランスグリコラーゼによる、脂質連結ＧｌｃＮＡｃ−ＭｕｒＮＡＣ−二糖の重合と、トランスペプチダーゼによるペプチド側鎖の架橋を含んでなる。
【００２２】
このクラスの生合成経路の阻害物質として最もよく知られている化合物は、バンコマイシンであり、これは、前述したように、細菌細胞壁ペプチドグリカン前駆体のペンタペプチドのＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａジペプチド末端との結合によってペプチドグリカン生合成を阻害し、それらのペプチドグリカンへのさらなるプロセシングを阻止することが知られている。
【００２３】
バンコマイシンの誘導体もまた、ペプチドグリカンの生合成を阻害することによって作用する。バンコサミン糖上でアルキル化した一連の化合物には、別の糖で誘導体化した類似化合物と同様、バンコマイシン耐性菌に対して活性があることが明らかにされている［Ｃｏｏｐｅｒ， Ｒ．Ｄ．Ｇ．ら（１９９６）Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ４９， ５７５−５８１；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｍ．Ｊ．ら（１９９８）Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ５１， ５６０−５６９；Ｇｅ， Ｍ．ら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４， ５０７−５１１］。
【００２４】
一般に、部分Ｖは、細菌においてペプチドグリカン生合成を阻害する糖ペプチド部分である。一般に、当業者は、このクラスの糖ペプチドをよく知っており、本発明での使用に適した糖ペプチドを選択することができる。このような糖ペプチドは、通常分子量が、１，０００〜３，０００Ｄａであり、Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａペプチド、Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−乳酸デプシペプチド、脂質ＧｌｃＮＡＣ−ＭｕｒＮＡＣ−ペンタペプチドの成分などの細菌ペプチドグリカン構造の個々の成分と相互作用することができ、４μｇ／ｍｌ以下のｍｉｃ（最小阻害濃度）で、バンコマイシン感受性標準株（例えば、下記の標準株から選択されるいずれか：黄色ブドウ球菌ＮＣＴＣ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）６５７１、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ ２５９２３（ＮＣＴＣ １２９８１）、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ ２９２１３（ＮＣＴＣ １２９７３）、肺炎連鎖球菌ＡＴＣＣ ４９６１９（ＮＣＴＣ １２９７７）、及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＡＴＣＣ ２９２１２（ＮＣＴＣ １２６９７））に対して活性である。ｍｉｃを試験するのに一般に是認されている標準的方法は、ＢＳＡＣによる推奨に従う、ＩｓｏＳｅｎｓｉｔｅｓｔ寒天上の寒天稀釈法である。これは、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９１）、第２７巻、付録Ｄに公表されている。
【００２５】
部分Ｖとして考慮される具体的バンコマイシン誘導体として、ＷＯ９６／３０４０１及びＷＯ９８／００１５３に開示されている糖ペプチドに基づく化合物、それらの塩が挙げられる。尚、これらの文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
【００２６】
従って、部分Ｖ−Ｌ−の好ましい例として、式（ＩＩＩ）を有するもの、又はそれらの塩が挙げられる：
【化３】
2004513132.tif 000003
（式中、
Ｙ及びＹ’は、独立に水素又はクロロであり；
Ｒは、水素、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又は式−Ｒａ−Ｌ−の基であり、ここで、Ｒａは、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニルで、Ｌ（式（ＩＩ）のリンカー）はＲａのアミノ基に結合しており；
Ｒ１は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ２は、−ＮＨ２−、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＬ−、又はＮ（ＣＨ３）Ｌ−であり；
Ｒ３は、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、［ｐ−ＯＨ、ｍ−Ｃｌ］フェニル、ｐ−ラムノース−フェニル、［ｐ−ラムノース−ガラクトース］フェニル、［ｐ−ガラクトース−ガラクトース］フェニル、又は［ｐ−ＣＨ３Ｏ−ラムノース］フェニルであり；
Ｒ４は、−ＣＨ２−（ＣＯ）ＮＨ２、ベンジル、［ｐ−ＯＨ］フェニル、又は［ｐ−ＯＨ，ｍ−Ｃｌ］フェニルであり；
Ｒ５は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ６は、水素、４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアスコサミニルであり；あるいは、Ｒ６は、式Ｒｂ−Ｌ−の基であって、ここで、Ｒｂは４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアスコサミニルであり、ＬはＲｂのアミノ基に結合しており；又は、Ｒ６は、基Ｒｂ−Ｒ７であって、ここで、Ｒ７は、１，０００以下、好ましくは、５００以下、さらに好ましくは、２５０以下（例えば、１５０以下など）Ｄａの有機側鎖部分であり；
Ｔｅｒ１は、ヒドロキシ又はＬ−である；
但し、上記部分は、少なくとも１つの（例えば、２又は３の）基−Ｌ−を含むものとする）。
【００２７】
有機側鎖部分の詳細な性質は、本発明を制限する特徴ではない。このような部分として、何千もの種類が当技術分野では知られており、ＷＯ９６／３０４０１及びＷＯ９８／００１５３に記載されている多数の例が挙げられる。尚、これらの文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
【００２８】
有機側鎖部分のサブグループは、式−ＣＨ２−Ｒ８を有するものを含み、式中Ｒ８は：
水素、
Ｃ１−Ｃ１５のアルキル、
Ｃ２−Ｃ１５のアルケニル、
Ｃ２−Ｃ１５のアルキニル、
Ｃ１−Ｃ７のハロアルキル、
アセナフテニル、
２−フルオレニル、
９，１０−ジヒドロ−２−フェナントレニル、
Ｒ９、
Ｃ１−Ｃ１１アルキル−Ｒ９、
Ｃ２−Ｃ７アルケニル−Ｒ９、
Ｃ２−Ｃ７アルキニル−Ｒ９、又は
Ｃ１−Ｃ７アルキル−Ｏ−Ｒ９であり、
ここで、Ｒ９は、下記式の基である：
−Ｒ１０−［リンカー（０又は１）−Ｒ１０］（０又は１）
（式中、各Ｒ１０は、独立に、フェニル、Ｃ５−Ｃ６のシクロアルキル、ナフチル、又はチエニルを示し、その各々は、非置換もしくは、１又は２の置換基で随意に置換されており、該置換基の各々は、独立に、Ｃ１−Ｃ１０のアルキル、Ｃ１−Ｃ２のハロアルキル、Ｃ１−Ｃ２のハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０のアルコキシ、ハロ、シアノ、又はニトロであり；
「リンカー」は：
−Ｃ１−Ｃ３のアルキレン、
−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキレン、
−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｏ−、
−Ｏ−、
−Ｎ（Ｈ又はＣ１−Ｃ３の低アルキル）
−Ｓ−、
−ＳＯ−、
−ＳＯ２−、
−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ＝ＣＨ−、
−Ｃ　Ｃ−、
−Ｎ＝Ｎ−、
−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、又は
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−である）。
【００２９】
「ハロ」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味し；フルオロ及びクロロが好ましい。ハロアルキル及びハロアルコキシ基は、好ましくは、一置換又は同じハロ基で二置換されているが、Ｃ１−３ハロアルキル基はペルフルオロ基であってもよい。
【００３０】
基−ＣＨ２−Ｒ８の好ましい例として、下記のものが挙げられる：
（４−フェニルベンジル）
（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）
（４−（４−メチルフェニル）ベンジル）
（４−フェノキシベンジル）
（（４−ｎ−ブチルフェニル）ベンジル）
（４−ベンジルベンジル）
式（ＩＩＩ）の化合物として、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｍ．Ｊ．ら（１９９８）Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ５１， ５６０−５６９に記載されたＬＹ ２６４８２６、ＬＹ １９１１４５及びＬＹ ３３３３２８が挙げられる。
【００３１】
部分Ｖの特に好ましい例として、限定するものではないが、バンコマイシン、クロロエレモマイシン、テイコプラニンＡ２−２、リストセチンＡ、エレモマイシン、バルキマイシン、アクチノジンＡ、コムプレスタニン、クロロペプチン１、キスタマイシンＡ及びアボパルシンが挙げられる。
【００３２】
ペプチド性膜関連成分（Ｗ）
式ＩＩの化合物のこの部分（Ｗ）は、細菌膜に関連するペプチドである。特定の理論に拘束されるわけではないが、成分Ｗと細菌膜との関連によって、糖ペプチド抗生物質の局部濃度が増加することから、耐性株に対して低下した効力が、作用部位で増加した濃度により改善されると考えられる。
【００３３】
「膜関連」という用語は、２つの基本的な作用様式、すなわち、膜との結合及び／又は膜への挿入を意味する。前者の場合には、ペプチドは、負に帯電したリン脂質のような細菌膜の表面上の成分と会合（結合）できるという特性を有する。後者の場合には、この成分は、この特性を有する抗菌ペプチドであるか、又はそのようなペプチドに基づくものでよい（例えば天然のものから得られる）。
【００３４】
ペプチドは、組換え又は合成により、例えば、段階的合成によって調製することができる。あるいは、これらのペプチドは、例えば、細菌により生産される膜関連ペプチドの場合、自然にペプチドを生産する細胞の培養物から回収することができる。
【００３５】
合成手段により生産されるペプチドは、一般に、天然のＬ−アミノ酸（すなわち、遺伝コードによりコードされるもの、すなわち、いわゆるタンパク新生アミノ酸）から構成されるが、Ｄ−アミノ酸を用いてもよい。いずれの場合でも、例えば、ｉｎ ＶｉＶｏ半減期を増強する、又は安定性を改善するために、側鎖修飾を実施することができる。側鎖修飾として、例えば、アルデヒドとの反応による還元的アルキル化後にＮａＢＨ４を用いた還元、メチルアセトイミデートを用いたアミジン化、又は無水酢酸を用いたアシル化などによるアミノ基の修飾がある。
【００３６】
アルギニン残基のグアニジノ基は、２，３−ブタンジオン又はグリオキサールのような試薬を用いた複素環縮合産物の形成により修飾することができる。スルフヒドリル基は、カルボキシメチル化のような方法により、トリプトファン残基は、インドール環の酸化又はアルキル化により、また、ヒスチジン残基のイミダゾール環は、アルキル化により、それぞれ修飾することができる。
【００３７】
カルボキシ末端及びその他のカルボキシ側鎖は、エステル基、例えば、Ｃ１−６アルキルエステルの形態、又はアミドの形態でブロックすることができる。
【００３８】
また、Ｎ−末端をブロックしてもよい。
【００３９】
アミノ酸に対する修飾について以上記載した例が全てを網羅しているわけではない。当業者は、当技術分野でそれ自体公知の化学を用いて、所望であれば、アミノ酸側鎖を修飾することができる。
【００４０】
天然に存在する供給源から回収したペプチドは、非タンパク新生アミノ酸を含んでいることがある。これらのアミノ酸は、タンパク新生アミノ酸の翻訳後修飾、又は生合成のいずれかにより生産される。
【００４１】
ペプチド性成分は、システイン又はリシン残基で終結しているか、あるいは、Ｃ末端から１又は２アミノ酸以内にこのような残基を有することにより、リンカーＬを介した基Ｖとの連結を促進することができる。しかし、その他のアミノ酸が排除されるわけではなく、連結基の性質が、他の部分との結合に適している場合には、用いてもよい。
【００４２】
ペプチド成分Ｗは、一般に、長さが５〜４０アミノ酸、好ましくは、７〜３０アミノ酸、例えば、８〜３０アミノ酸のサイズである。
【００４３】
別途記載のない限り、アミノ酸配列は、標準表記を用いて、かつ、ＮからＣ末端方向に表示する。
【００４４】
膜結合ペプチド
ペプチドが膜結合性である場合、成分（Ｗ）は、一般にアルギニン及びリシン、特にリシンから選択される複数の帯電アミノ酸を含むことにより、細菌膜に存在する帯電脂質との相互作用を促進することができる。このようなペプチドは、好ましくは、少なくとも１つの配列（Ｘａａ）ｎ（式中、ｎは、１〜１２、好ましくは、３〜１０であり、各Ｘａａは、独立に、リシン又はアルギニンである）を含む。
【００４５】
従って、前述した優先事項全体を考慮に入れると、Ｗは、リシン及びアルギニンから選択される１〜１２、より好ましくは２〜１０、例えば３〜１０個の連続した残基の少なくとも１つの配列を含む５〜４０個のアミノ酸のペプチドでよい。
【００４６】
さらにまた好ましくは、Ｗは、リシン及びアルギニンから選択される１〜１２、より好ましくは２、好ましくは３〜１０個の連続した残基の少なくとも１つの配列を含む７、好ましくは８〜３０個のアミノ酸のペプチドでよい。
【００４７】
さらに好ましくは、Ｗは、１〜１２、より好ましくは２、好ましくは３〜１０個の連続したリシン残基の少なくとも１つの配列を含む７、好ましくは８〜３０個のアミノ酸のペプチドでよい。
【００４８】
前記実施形態のすべてにおいて、ペプチドは、例えば、＋１〜＋１０の合計正電荷を有するのが好ましい。このような成分の例として、下記のものが挙げられる：
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＧ（配列番号４）；
ＧＳＳＫＳＰＳＫＫＫＫＫＫＰＧＤ（配列番号５）；
ＳＰＳＮＥＴＰＫＫＫＫＫＲＦＳＦＫＫＳＧ（配列番号６）；
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＫ（配列番号７）；及び
ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫ（配列番号８）。
【００４９】
膜挿入ペプチド
ペプチドが膜挿入性ペプチドである場合、このようなペプチドは、膜を破壊するペプチドの作用により、多くの場合、そこに細孔を形成することによって、それ自体が抗菌活性を有するものである。「抗菌活性」とは、バンコマイシンのカルボキシ末端でバンコマイシンと連結したペプチドのコンジュゲートが、前述した条件下で、前述したＥ． ｆａｅｃａｌｉｓ株に対して、０．０６４ｍｇ／ｍｌ以下、好ましくは、０．０３２ｍｇ／ｍｌ以下のｍｉｃを有することを意味する。
【００５０】
このようなペプチドの具体的例として、動物など、天然の供給源からのものが挙げられる。両生類の皮膚など、様々な供給源に由来する特定のペプチドは、往々にして抗菌性を伴なう膜挿入特性を有することが知られている。
【００５１】
多数のペプチド群が、このような活性を有することが知られており、Ｊａｃｋ及びＪｕｎｇ， Ｃｈｉｍｉａ ５２（１９８８）；４８−５５、並びに、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ， Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９９）３；６７２−６８０に記載されているペプチドなどがある。尚、これらの文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
【００５２】
ペプチドの一群は、非常に多様な動物により生産されるα−及び−ディフェンシンである。αディフェンシン類は、一般に、実質的度合いの相同性を共有し、多数のＡｒｇ残基（但し、Ｌｙｓではない）を含んでおり、ジスルフィド結合構成は一様に保存されている；ジスルフィド結合の破壊により、抗菌活性の喪失が起こる。ディフェンシンは、プレプロ−ペプチドとして生産され、恐らく、リーダー及びプロ−セグメントが、貯蔵小胞へのそれらの輸送の指令に関与しており、該ペプチドは、使用されるまでそこで待機する。−ディフェンシンＴＡＰはウシ粘膜から単離された；−ディフェンシンは、α−ディフェンシンより大きく、異なるジスルフィド構成を有する。Ａｒｇ／Ｌｙｓ含有率、ジスルフィド結合の数及び構成並びに全体長さが異なる多数の様々なディフェンシンペプチド、及び、ペプチドファミリーが単離されており、例えば、ＨＮＰ−１や、カブトガニから単離した１８−アミノ酸抗菌ペプチドであるタキプレシンがある。ペプチドＴＡＰは、タキプレシンのファミリーに属し、その一次配列は若干異なるが、そのジスルフィド結合構成及び二次構造は保存されたままである。
【００５３】
非常に多数のディフェンシン様ペプチドが現在記載されており、哺乳動物の免疫細胞、粘膜、昆虫の血液リンパ、甲殻類、並びに、植物及びそれらの種子など、多様な供給源から単離されている。
【００５４】
また、抗菌ペプチドの別の群が、細菌からも単離されている。バクテリオシン、又は細菌由来の抗菌ペプチドは多数の様々な細菌種により生産される。構造はかなり異なっており、ジスルフィド結合を有するもの、遊離システインを含むもの、システインもシスチンも含まないものなどがある。第４の群は、抗菌活性のために相補的存在を必要とする２つのペプチドから構成される。しかし、それらの構造的特徴とは関係なく、それらはすべて、感受性細菌の細胞膜に親水性細孔を形成することにより、作用する。これらの細孔又はチャネルは、細胞膜を脱分極させ、エネルギー変換及びＡＴＰ生産を破壊する。
【００５５】
よく特性が知られているバクテリオシンは、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ ＰＡＣ１．０により生産されるペジオシンＰＡ−１である。このバクテリオシンは、翻訳後の修飾を含まないが、２つの必須ジスルフィド結合、並びに、多数の他のバクテリオシンと相同的なＮ末端配列を含んでいる。
【００５６】
ランチビオティックスもバクテリオシンであり、従って、リボソームで前駆体ペプチドとして合成される。しかし、前述のバクテリオシンとは違い、ランチビオティックスは、多数の翻訳後修飾を含む；ランチオティックの名称は、チオエーテルアミノ酸ランチオニン及び３−メチルランチオニン中にそれらが含まれていることに由来する。
【００５７】
２５種以上のランチビオティックスが同定されている。大部分のランチビオティックスは、高度に修飾され、多くは、５０％（以上）の非タンパク新生αアミノ酸を含んでいる。
【００５８】
チオエーテルアミノ酸以外にも、ランチビオティックスは、その他の様々な修飾アミノ酸を含んでおり、例えば、２，３−ジデヒドロアラニン及び−ブチリン、リシノ−アラニン、２−アミノビニル−Ｄ−システイン、ヒドロキシ−アスパラギン酸、多数のＮ−末端修飾及びＤ−Ａｌａが挙げられる。全てのランチビオティックスがこれら修飾アミノ酸の各々を含むわけではない。これらが広く散在しているものもあれば、１種のランチビオティックだけに特異的であるものもある。
【００５９】
特に有用なランチビオティックスとして、エネルギーを受けた膜二重層に細孔を形成することにより、非特異的で、一時的なチャネルを細胞膜に形成するＡ型ランチビオティックスが挙げられる。Ａ型ランチビオティックスとして、ナイシン及びガリゲルミンが挙げられ、これらの配列は、Ｊａｃｋ及びＪｕｎｇ， １９９８（前掲）に記載されている。
【００６０】
下記のペプチドは、本発明で特に使用できるものの例である：配列が、
ＧＩＧＫＦＬＨＳＡＧＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫ（配列番号９）及び
ＧＩＧＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳ（配列番号１０）であるマガイニン１及び２（アフリカツメガエル）、並びに、以下の表１に挙げるペプチド。
【００６１】
【表１】
2004513132.tif 000004
表中、“Ｂ”は、ジアミノベンゾエート、”Ｏ”はオルニチン、”ｄ”はＤ鏡像体アミノ酸をそれぞれ示す。
【００６２】
これらの、及び本明細書に記載したその他の膜挿入ペプチド、又は、それらの変異体、例えば、１〜５アミノ酸の置換、挿入もしくは欠失を有し、かつ、すでに定義した活性を保持するものなどが、用いることができる成分Ｗのさらに別の群を形成する。
【００６３】
このような変異体として下記のものが挙げられる：
ＧＩＧＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＡＥＩＭＮＳ（配列番号３２）；
ＧＩＡＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＡＥＩＭＮＳ（配列番号３３）；
ＡＡＧＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＤＩＭＮＳ（配列番号３４）；
Ｇ−ＧＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳ（配列番号３５）；
Ｇ−ＧＫＦＩＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳ（配列番号３６）；
ＧＩＧＫＦＩＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳＫ（配列番号３７）；及び
ＧＩＧＡＶＬＫＶＬＴＴＧＬＰＡＬＩＳＷＩＫＲＫＲＱＱＣ（配列番号３８）、
ここで、太字は、前記の野生型マガイニン又はメリチン配列の置換、又はこれら配列への付加を示し、−は欠失を示す。
【００６４】
ペプチドは、例えば、＋１〜＋１０までの合計正電荷を有するのが好ましい。
【００６５】
連結基Ｌ
この連結基は、部分Ｖと部分Ｗとの間にあるすべての原子であり、従って、連結基は、一末端に、ペプチドグリカン生合成阻害物質（Ｖ）と連結可能な部分を、また他方の末端に、ペプチド性膜結合成分（Ｗ）と連結可能な部分を備えていなければならない。
【００６６】
本発明の化合物は、一般に、Ｗの反応性誘導体を、Ｖの反応性誘導体と反応させる（この段階の前又は後のいずれかに、基ＸをＷに結合させる）ことにより、合成されることは当業者には理解されよう。従って、本発明の化合物における構造−Ｌ−は、Ｖ及びＷ両方の反応性誘導体の一部であった原子を含むことになる。
【００６７】
糖ペプチド及びポリペプチドの反応性誘導体を調製する方法は、それ自体、当技術分野では知られており、当業者は、多様な方法から選択し、ＶをＷと連結して、基Ｌを形成することができるだろう。従って、基Ｌの詳細な性質は、本発明の本質的な特徴ではなく、一形態では、この基は、便宜的に下記のように表示する：
−Ａ−Ｒ−Ｂ−　　　　　　　　　（ＩＩＩ）
（式中、Ａは、ペプチドグリカン生合成阻害物質（Ｖ）と連結することができる基であり、Ｂは、ペプチド性膜結合成分（Ｗ）と連結することができる基であり、Ｒは、ＡとＢを連結する結合又は基である）。
【００６８】
このタイプの連結基の例として、例えば、ＥＰ−Ａ−１０９６５３、ＥＰ−Ａ−１５２７３６、ＥＰ−Ａ−１５５３８８及びＥＰ−Ａ−２８４４１３に記載されているような化学的架橋基がある。尚、これらの文献は、参照として本明細書に組み込む。
【００６９】
Ｗとの連結
ＷをそのＮ末端、又は側鎖残基上のアミン部分（例えば、リシンのε−アミノ基）を介して結合しようとする場合、Ｂは、アミン基と反応が可能な部分の基でよい。例えば、Ｂの前駆体は、カルボン酸（又はその誘導体）でよく、これは、Ｗの前駆体のＮ末端と反応すると、アミド結合でＷと連結した−Ｃ（＝Ｏ）−であるＢとなる。これらの実施形態では、Ｂ＝−Ｒ＝をＷ＝（式中、Ｗ＝は、Ｗの前駆体であり、Ｂ＝は、Ｂの前駆体で、Ｒ＝は、式ＩＩの化合物の残り部分の前駆体である）と反応させることにより、連結が形成されると考えられる。
【００７０】
あるいは、Ｂは、Ｎ−アセチル基、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｔ−（式中、カルボキシル炭素がＷのアミン基に結合しており、Ｔは、Ｏ、Ｓ、ＮＨから選択される）でよい。このような連結は、ＷのＮ−ハロアセチル誘導体を合成した後、適した前駆体Ｂ’−Ｒ＝（式中、Ｂ’は、ＯＨ、ＳＨ又はＮＨ２のいずれかである）と反応させることにより、形成することができる。
【００７１】
ＷをそのＣ末端を介して結合しようとする場合、Ｂは、カルボン酸基と反応が可能な部分の基でよく、通常、求核基である。例えば、Ｂの前駆体はアミン（又はその誘導体）でよく、これは、Ｗの前駆体のＣ末端と反応すると、アミド結合でＷと連結した−ＮＨ−であるＢとなる。これらの実施形態では、Ｂ＝−Ｒ＝をＷ＝（ここで、Ｗ＝は、Ｗの前駆体であり、Ｂ＝は、Ｂの前駆体で、Ｒ＝は、式ＩＩの化合物の残り部分の前駆体である）と反応させることにより、連結が形成されると考えられる。
【００７２】
Ｗが、システインアミノ酸で終結する場合、連結基は、好ましくは、イオウで終結し、これによって、ジスルフィド又はチオエーテル結合により、ＬがＷと結合するようにする。従って、式（ＩＩＩ）で、Ｂは−Ｓ−である。この結合は、Ｗの前駆体、又はＢの前駆体上のいずれかで、Ｓを活性化させる、例えば、チオ基と反応して所望のジスルフィド結合を形成することができる２−ピリジルジスルフィド誘導体を形成することにより、達成することができる。
【００７３】
Ｖとの連結
Ｖがバンコマイシンである場合には、アミノ末端（２）、バンコサミン糖（３）のアミン、又は、より好ましくは、カルボキシル末端（１）のいずれかから、連結基（Ｌ）の結合点が誘導される。
【００７４】
【化４】
2004513132.tif 000005
誘導体化及び連結の手段は、前述した通りである。
【００７５】
Ｖが、前記位置の一つがすでに誘導体化されているバンコマイシン誘導体である場合、結合点は、残っている利用可能な位置の１つ、又は誘導体化に適したいずれかの位置にあってよい。
【００７６】
基Ｒが結合ではなく、ＡとＢを連結する基である場合には、３〜１２個の炭素原子を含むアルキレン鎖であるのが好ましく、この鎖は、１以上の複素原子及び／又は芳香族環、例えば、ベンゼン又はピリジンによって分断されていてもよく、また、１以上の炭素−炭素二重又は三重結合を含んでいてもよく、さらには、１以上の官能基で置換されていてもよい。
【００７７】
従って、Ｒは、水と相互作用して、連結基の水溶性を維持する部分を含んでいることがあり、好適な部分として、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＭｅ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＳＯ２−、−ＣＯ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−及びＣＨ（ＣＯＯＨ）−（式中、ｍは、２以上の整数である）が挙げられる。
【００７８】
従って、Ｒの例として、−（ＣＨ２）ｒ−、−（ＣＨ２）ｐ−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−及び（ＣＨ２）ｐ＝−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）ｑ＝−が挙げられ、式中、ｒは、３〜１２の整数であり、ｐ及びｑは、独立に整数であり、その合計が３〜１２であり、ｐ＝及びｑ＝は、合計が１〜１０の整数である。
【００７９】
膜挿入型成分Ｘ
この成分は、本発明の成分上に随意に存在する。Ｗが膜結合ペプチドである場合には、膜挿入型成分の存在が好ましい。Ｗがこれらの特性を有する場合でも、さらなる挿入型成分の存在が排除されるわけではない。
【００８０】
膜挿入型特性を有する成分の範囲は、当技術分野では公知である。本発明で考えられる好ましいクラスは、炭素原子に基づく親油性鎖である。多くのこのような鎖が当技術分野では知られており、水性環境で細菌膜と接触させたとき細菌膜中に分配されるのに十分な親油性を有することができるのであれば、一次化学構造の正確な性質は本発明の本質ではない。
【００８１】
一般に、親油性鎖は、次のように定義される：
―　もし存在すれば、いかなる芳香族環のものを含めて、６〜３０、好ましくは、６〜２４個の炭素原子を有する；
−　直線状又は分枝しており、後者の場合には、１以上、例えば、２又は３個の分枝点を含む；
−　飽和又は不飽和であり、後者の場合には、１以上、例えば、２、３又は４個の二重又は三重結合を含む；
−　Ｓ、Ｏ又はＮから独立に選択される１、２又は３個の複素原子を含む（もし存在すれば、芳香族環中に存在するものに加えて、）；
−　１以上、例えば、２又は３個の芳香族環を随意に含み、これらは融合されていてもよく、その各々が、１、２又は３個の複素原子（もし存在すれば、これらは、Ｓ、Ｏ又はＮから独立に選択される）を含んでいてもよい；並びに、
−　ヒドロキシ、−ＳＨ、アミノ及びハロ（ここで、ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード）から選択された１以上（例えば、１、２又は３個）の置換基を随意に有する。
【００８２】
好ましくは、芳香族環は、６員環であり、ベンゼン及びピリジンから選択することができる。環が融合されている場合には、ナフタレン、アントラセン、キノレン及びイソキノレンから選択することができる。芳香族環のその他の例として、チオフェン及びピロールが挙げられる。
【００８３】
一実施形態では、上記成分は、少なくとも６原子、好ましくは、１２、１６又は２０個以下の炭素原子を含む非分断脂肪族炭素鎖からなる。このような化合物の一群は、構造−Ｐｈ−Ｏ−（ＣＨ２）ｔ−Ｈ（式中、Ｐｈは、ベンゼン環であり、ｔは６〜１２、１６又は２０である）を有する。
【００８４】
別の実施形態では、上記成分は脂肪酸であり、好ましくは、５〜２８炭素原子を有し、４個以下、より好ましくは、１又は２個の炭素−炭素二重結合を随意に含む。不飽和基は、構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｔ＝−Ｈ（式中、ｔ＝は５〜２７、より好ましくは、９、１１、１３、１５、１７又は１９である）を有する。
【００８５】
別の実施形態は、基−Ｃ（Ｏ）−Ｐｈ−Ｐｈ（式中、Ｐｈはフェニル基である）を含む成分であり、これを置換して、例えば、成分−Ｃ（Ｏ）−Ｐｈ−Ｐｈ−ｐ−Ｃｌを生成することもできる。
【００８６】
別の実施形態は、合計１０〜１６個の炭素原子を含む脂肪酸内のエーテル基であり、これは、１又は２個の二重結合を随意に含む。
【００８７】
別の実施形態は、式Ｐｈ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｍｅ２）の基であり、式中、Ｐｈは、パラ位置で基ＲＯ−ＣＨ２−により、また、メタ位置で基ＲＯ−により置換されたフェニレン環であり、ここで、各Ｒは、独立にＣ４−Ｃ１０アルキル鎖である。
【００８８】
薬物の投与
本発明の第２の形態は、式（ＩＩ）の化合物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物である。
【００８９】
上記製剤は、その他の治療成分又は希釈剤を随意に含んでいる。担体は、製剤の他の成分と適合性であり、その受容者に有害ではないという意味で、「許容される」ものでなければならない。
【００９０】
非経口又は筋肉内投与に適した製剤としては、抗酸化剤、バッファー、及製剤を意図する受容者の血液と等張にするび溶質を含んでいてもよい水性及び非水性滅菌注射液：並びに、水性及び非水性滅菌懸濁液（懸濁剤及び増粘剤を含有していてもよい）がある。製剤は、単位用量又は多数回用量容器、例えば、密封したアンプル及びバイアルに入っていてもよいし、フリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよく、後者の場合には、使用の直前に、注射用の滅菌液体担体、例えば、水を添加するだけでよい。注射液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒及び錠剤からすぐに調製することができる。
【００９１】
以上、特に記載した成分に加えて、上記製剤は、該当する製剤のタイプを考慮して、当技術分野で公知のその他の薬剤を含んでいてもよい。考えられる製剤については、滅菌した発熱物質非含有水性及び非水性溶液が好ましい。
【００９２】
あるいは、上記組成物は、局部適用の用途で、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏、点眼薬、点耳薬、うがい薬、含浸包帯及び縫合糸、及びエーロゾルの形態に製剤化することができ、例えば、防腐剤、薬物浸透を助ける溶剤、並びに、軟膏及びクリームの皮膚軟化薬など、好適な公知の添加剤を含有していてもよい。このような局所製剤はまた、適合性の公知の担体、例えば、クリーム又は軟膏基材、並びに、ローション用のエタノール又はオレイルアルコールを含有してもよい。このような担体は、製剤の約１重量％〜約９８重量％を占め；より一般的には、製剤の約８０重量％以下を占める。
【００９３】
本発明の組成物は、注射により投与して、留置装置の挿入直前に、関連細菌に対する全身効果を達成することができる。治療は、手術後、装置が体内にある間、継続する。さらに、組成物を用いて、細菌による創傷感染を防止する外科手術技法のための手術用カバーを拡大することもできる。
【００９４】
多くの整形外科医は、人工関節を有する患者に関して、菌血を引き起こし得る歯科治療の前に、抗生物質予防法を考慮すべきであると考えている。後期の深い感染は、重度の合併症であり、人工関節を失うことにもなりかねず、有意な罹病率及び死亡率を伴なう。従って、この場合、予防的抗生物質に代わるものとして、ペプチド又はペプチド／薬物コンジュゲートの使用を拡大することができる。
【００９５】
細菌感染は、移植片及び留置装置の臨床上の使用に関連する主要な合併症の一つである。特に、ブドウ球菌は、医療装置関連の感染に関与していることが多い（Ｄａｎｋｅｒｔら、１９８６， ＣＲＣ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ２， ２１９−３０１）。いったん樹立すると、感染は治療するのが実質的に不可能であり、その結果、インプラント不全が起こる。インプラントへのブドウ球菌付着を克服する試みとして、人工器具材料の表面の改変；例えば、ＰＴＦＥのような「非付着」材料でのコーティング、又は表面への抗生物質の結合により、タンパク質の付着を抑えるものがあった（Ｋａｍａｌら、１９９１， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｍｅｄ． Ａｓｓｏｃ． ２６５， ２３６４−２３６８）。加えて、非ステロイド性抗炎症薬を用いることにより、医療ポリマーへのブドウ球菌の付着を防止する提案もあった（Ｆａｒｂｅｒ及びＷｏｌｆｆ １９９２， Ｊ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ． １６６： ８６１−８６５）。
【００９６】
ヒト患者への投与のために、活性薬物の毎日用量レベルは、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ、典型的には、約１ｍｇ／ｋｇとなると考えられる。どんな場合でも、医師は、個々の患者に最も適した実際用量を決定するが、これは、各患者の年齢、体重、及び応答に応じて変動する。上記用量は、平均的患者の例である。もちろん、これより高い又は低い用量範囲が適している場合も考えられ、それらも本発明の範囲に含まれる。
【００９７】
以上説明してきた治療に加えて、本発明の組成物を創傷治療薬として一般に用いることにより、創傷した組織中に露出したマトリックスタンパク質、特にフィブロネクチンへの細菌の付着を防ぐと共に、抗生物質予防法に代わり、又はそれと一緒に、歯科治療で使用することができる。
【００９８】
あるいは、本発明の組成物を用いて、挿入の直前に留置装置を浸漬することもできる。活性薬物は、創傷部位又は留置装置の浸漬の場合、０．１ｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するのが好ましい。
【００９９】
本発明の組成物は、下記の生物によって起こる細菌感染の治療に用いることができるが、これらに限定されるわけではない：マイコバクテリウム属種；エンテロコッカス属種；大腸菌属種；ブドウ球菌属種；連鎖球菌属種；ビブリオ属種；ナイセリア属種；ボレリア属種；クレブシエラ属種；ヘモフィルス属種；クロストリジウム属種；シュードモナス属種；放線菌属種；肺炎球菌属種；サルモネラ属種。
【０１００】
本発明のさらに別の形態では、式（ＩＩ）の化合物を医薬品として、又は動物もしくはヒト身体の治療方法において、特に上に挙げた生物により引き起こされる細菌感染の治療のために用いることができる。式（ＩＩ）の化合物はまた、細菌感染、特に上に挙げた生物により引き起こされる感染の治療のための医薬の製造に用いることもできる。
【０１０１】
実施例
例として、本発明の実施形態を以下に詳しく説明することにする。
【０１０２】
方法
溶血アッセイ
以下のように、Ｖ型底のマイクロタイタープレートフォーマットを用いた標準的溶血アッセイにより、感作したヒツジ赤血球の溶解を測定した。
【０１０３】
Ｈｅｐｅｓバッファーで稀釈した様々な濃度の化合物５０マイクロリットルを１００マイクロリットルの感作したヒツジ赤血球と混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。サンプルを室温にて３時間１，６００ｒｐｍで回転させてから、１５０マイクロリットルの上清を平底のマイクロタイタープレートに移した後、４０５又は４１０ｎｍで吸収を測定した。０．１Ｍ　Ｈｅｐｅｓ／０．１５Ｍ　ＮａＣｌ／０．１％ゼラチンｐＨ７．４中に１：４００稀釈（アッセイ混合物の最終濃度）したヒト血清の存在下で、赤血球と一緒に血清をインキュベートすることにより、最大溶解（Ａｍａｘ）を測定した。対照としてＰＢＳを用いて、血清又は化合物の不在下で、赤血球をインキュベートすることにより、バックグラウンド溶解（Ａｏ）を測定した。溶解は、１００％全細胞溶解に対する割合として表し、ＬＣ５０は、５０％溶解を得るのに必要な化合物濃度を表すようにした。抗菌活性と比較して、赤血球の低溶解活性の抗生物質が有利である。
【０１０４】
抗菌活性アッセイ
１以上の下記の微生物を含む様々な細菌株に対する抗菌活性について、化合物を試験した：大腸菌ＴＧ１、枯草菌株１６８Ｓ、黄色ブドウ球菌Ｈ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ２０７（Ｖａｎ Ａ耐性表現型）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ２１１（バンコマイシン感受性表現型）、及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ５８３（Ｖａｎ Ｂ耐性表現型）。大腸菌及び枯草菌に対する抗菌活性についての化合物試験の場合、各細菌株の培養物を、２．５ｍＬの新鮮なＬＢブロスで、約５×１０６細胞／ｍＬに稀釈して、アッセイを行なった。試験しようとする化合物を水で稀釈してから、細菌培養物に添加し、最終濃度を２００μｇ／ｍＬ〜０．５ｎｇ／ｍＬとした。大腸菌培養物は３７℃、枯草菌培養物は３０℃で、振盪しながら、培養物を１６時間まで増殖させた。様々な培養物の混濁度の検査、並びに、波長６００ｎｍでの培養物の光学濃度の測定から、抗菌活性を測定した。Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ２１１、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対する抗菌活性についての化合物の試験には、異なる方法を用いた。これらの微生物を脳心臓／０．５％酵母抽出物（ＢＨＹ）ブロス中に培養し、３７℃で一晩インキュベートした。次に、各培養物のサンプルを新鮮なＢＨＹブロスで４０倍稀釈してから、３７℃で１時間インキュベートした。こうして得られた中央対数期（ｍｉｄ−ｌｏｇ ｐｈａｓｅ）培養物を１０６ｃｆｕ／ｍＬまで稀釈した後、９６ウェルポリプロピレンプレートのウェルに添加した。培養物含有ウェルで、バンコマイシンを連続的に２倍稀釈して１２８〜０．０１５６μｇ／ｍＬとした。次に、同様に培養物含有ウェルで、試験化合物を連続的に稀釈して５１２μｇ／ｍＬ〜０．０３μｇ／ｍＬとした。９６ウェルプレートを覆い、３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーションの後、混濁度の検査により、最小阻害濃度を測定した。
【０１０５】
実施例１．ＡＰＴ５４２の合成及び特性決定
（ＭＳＷＰ−１、ＷＯ／９８０２４５４の実施例２）。Ｓｈｅｐｐａｒｄ及びＡｔｈｅｒｔｏｎにより開発された一般的Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ法（Ｅ． Ａｔｈｅｒｔｏｎ及びＲ． Ｃ． Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， オックスフォード、１９８９）に従う固相合成を用いて、ペプチド：Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号１）を調製した。キーゼルグールで支持したポリジメチルアクリルアミド樹脂（Ｍａｃｒｏｓｏｒｂ １００）を固体支持体として用い、エチレンジアミンで誘導体化した。
【０１０６】
Ｎ，Ｎ‘−ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４倍モル過剰量）で前活性化したＮ−α−Ｆｍｏｃ保護試薬を用いて、ブロモフェノールブルーでモニターしながら結合反応を実施した。Ｆｍｏｃ切断には、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを用いた。最終切断の際にＣ末端アミドが得られるよう設計された修飾Ｒｉｎｋ連結試薬（ｐ−［（Ｒ，Ｓ）−α−［１−（９Ｈ−フルオレニ−９−イル−メトキシフォルムアミド）−２，４−ジメトキシベンジル］−フェノキシ酢酸］の結合を含む結合及び脱保護の反復サイクルにより、ペプチド鎖を組み立てる反応を実施した。個々のアミノ酸の側鎖官能基は次のように保護した：Ｓｅｒ（ｔブチル）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ａｓｐ（Ｏ−ｔブチル）、Ｃｙｓ（トリチル）。
【０１０７】
ペプチド組立の完了時に、ペプチドがまだ樹脂に結合している状態で、同じ活性化方法を用いたミリスチン酸の直接結合により、ミリストイル基をＮ末端グリシンのアミノ基に結合させた。次に、２．５％水及び２．５％トリイソプロピルシランを含むトリフルオロ酢酸での処理により、この修飾ペプチドを樹脂から切断すると同時に側鎖保護基を除去した。
【０１０８】
ｐＨ８〜９の０．０１Ｍ酢酸アンモニウム溶液中の２，２’−ジチオピリジンで粗生成物を約２時間処理した後、酢酸で酸性化し、勾配成分として０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水と０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルを用いた分離用高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。凍結乾燥の後、ペプチドは白色の非晶質粉末であり、ジメチルスルホキシド中に少なくとも１０ｍｇ／ｍｌまで可溶性であった。高速原子ボンバードメント質量分光法により、ｍ／ｅ ２１０７．８、２１２９．７及び２１４５．８で主要ピークが観察されたが、これらは、上記ペプチドの一プロトン化、一ナトリウム化及び一カリウム化分子イオンに対応する。このペプチドを０．１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ．８．０）中に約０．０３ｍＭ〜０．２ｍＭ前後まで溶解させ、ジチオトレイトールを５ｍＭまで添加して還元することにより、上記ペプチドの２−チオピリジル含有量を測定した。３４３ｎｍでの光学濃度の変化から、８０８０ｃｍ−１Ｍ−１のこの波長での吸光係数を用いて、放出されたピリジン２−チオンの量を算出した。これにより、ペプチド含有率は、乾燥重量の約６０％であることがわかった。
【０１０９】
従って、最終生成物は、下記の構造を有する：Ｎ−（ミリストイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ− Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−２−チオピリジル）−Ｃｙｓ−ＮＨ２。前記方法の項に記載したように、大腸菌株ＴＧ１及び枯草菌１６８Ｓに対する抗菌活性について、ＡＰＴ５４２を試験した。大腸菌株ＴＧ１の増殖を阻止するＡＰＴ５４２の最小阻害濃度は、６時間後０．０２２ｍｇ／ｍＬで、１６時間後は０．０６７ｍｇ／ｍＬであった。枯草菌株１６８Ｓの増殖を阻止するＡＰＴ５４２の最小阻害濃度は、６時間後０．００３ｍｇ／ｍＬで、２４時間増殖後は０．０２２ｍｇ／ｍＬであった。また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ５４２の抗菌活性も測定した。ＡＰＴ５４２の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０６４ｍｇ／ｍＬ、０．２５６ｍｇ／ｍＬ、０．０３２ｍｇ／ｍＬ、及び０．０６４ｍｇ／ｍＬであった。
【０１１０】
実施例２．ＡＰＴ５４０の合成及び特性決定
ＡＰＴ５４０は、Ｃ末端ｃｙｓ残基を通じたシステイン架橋により連結されたＡＰＴ５４２の二量体である。
【０１１１】
ＡＰＴ５４２（実施例１；ＷＯ９８／０２４５４の実施例２；５４ｍｇ）を０．１Ｍ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ８．５（２．６８ｍＬ）中に溶解させた後、水に溶解した０．３５モル当量のトリス−２−カルボキシエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）で処理した。反応を室温で３０分進行させた後、０．１％トリフルオロ酢酸中の３５％〜９０％アセトニトリルの勾配を用いたＣ１８逆相カラムを用いて、ＨＰＬＣにより分析した。反応生成物を２１０ｎｍ及び３１０ｎｍの波長でモニタリングした。注入から約１０．５分後に、カラムからのピーク溶離物としてＡＰＴ５４０を確認した。ＡＰＴ５４０化合物に対応する物質を収集し、凍結乾燥した。ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ装置を用いたサンプルの質量分光法により、ＡＰＴ５４０の理論上の分子量と一致する３９９８ダルトンの主要ピークを確認した。前記方法の項に記載したように、大腸菌株ＴＧ１及び枯草菌１６８Ｓに対する抗菌活性について、ＡＰＴ５４０を試験した。大腸菌株ＴＧ１の増殖を阻止するＡＰＴ５４０の最小阻害濃度は、６時間後０．０６７ｍｇ／ｍＬで、１６時間後は０．２ｍｇ／ｍＬであった。枯草菌株１６８Ｓの増殖を阻止するＡＰＴ５４０の最小阻害濃度は、６時間及び２４時間増殖後０．００７ｍｇ／ｍＬであった。
【０１１２】
実施例３．ＡＰＴ５４１の合成及び特性決定
ＡＰＴ５４１は、配列番号１のＮ−ミリストイル誘導体であり、これは、Ｃ末端システインの側鎖上のシステイン残基の付加により、そのＣ末端でさらに誘導体化している。
【０１１３】
ＡＰＴ５４２（実施例１；１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）中１０ｍＭ；１．３ｍＬ）を１００ｍＭシステイン（０．１ｍＬ）と混合し、２時間にわたり攪拌した。０．１％トリフルオロ酢酸中０〜１００％アセトニトリルの勾配を用いた分離用ＨＰＬＣにより、反応混合物を１０分精製した。約１０．０分で生成物が溶離し、これを収集した。揮発物質を蒸発させた後、凍結乾燥により、白色の固体としてＡＰＴ５４１を得た。ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析で、Ｃ９２Ｈ１６８Ｎ２６Ｏ２６Ｓ２は、２１１７．２Ｄａを必要とする。２１１７．３Ｄａが観察された。精製したＡＰＴ５４１を過剰の１ｍＭ　ＤＴＴで処理しても、３４３ｎｍでの吸光度に変化は観察されなかったことから、すべてのチオピリジル基が置換されていることがわかった。
【０１１４】
前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ５４１の抗菌活性も測定した。ＡＰＴ５４１の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．１２８ｍｇ／ｍＬ、０．２５６ｍｇ／ｍＬ、０．０６４ｍｇ／ｍＬ、及び０．０６４ｍｇ／ｍＬであった。
【０１１５】
実施例４．ＡＰＴ５３７の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法を用いて、配列番号２のペプチドを合成した。最も大きな違いは、リシン残基の３つをアスパラギン酸残基で置換したことである。このペプチドをそのＮ末端でミリストイル基と連結させ、Ｓ連結２−チオピリジル基を実施例１と同様に導入した。
【０１１６】
実施例５．ＡＰＴ５３９の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ５３９を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をラウリン酸で置換したことである。
【０１１７】
実施例６．ＡＰＴ５３８の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ５３８を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をデカン酸で置換したことである。
【０１１８】
実施例７．ＡＰＴ１７１の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ１７１を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をオクタン酸で置換したことである。
【０１１９】
実施例８．ＡＰＴ１７０の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ１７０を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をブタン酸で置換したことである。
【０１２０】
実施例９．ＡＰＴ２１９７の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ２１９７を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をパルミチン酸で置換したことである。
【０１２１】
実施例１０．ＡＰＴ２１９８の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ２１９８を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をオクタデカン酸で置換したことである。
【０１２２】
実施例１１．ＡＰＴ２１９９の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ２１９９を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸をエイコサン酸で置換したことである。
【０１２３】
実施例１２．ＡＰＴ２２００の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号１のペプチドを用いて、ＡＰＴ２２００を合成した。最も大きな違いは、ミリスチン酸を４−ビフェニルカルボン酸で置換したことである。
【０１２４】
実施例１３．ＡＰＴ２２３５の合成及び特性決定
実施例１で用いたのと同じ方法に従い、配列番号３のペプチドを用いて、Ｎ末端での基の結合は省くが、Ｃ末端での２−チオピリジル誘導体化は保持して、ＡＰＴ２２３５を合成した。ＬＣ５０を測定したところ、１．２μＭであった。
【０１２５】
実施例１４．ＡＰＴ２０３６ Ｎ−（ミリストイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造３）の合成
ＡＰＴ２０３６をバンコマイシンから３段階で化学的に合成した。塩酸バンコマイシン（１００ｍｇ、０．０６７３ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）及び乾燥メチルスルフォキシド（１ｍＬ）中に溶解させた。２−アミノエチル−２’−ピリジルジスルフィド二塩酸塩（３４．８ｍｇ、０．１３４６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を乾燥窒素の雰囲気下で０℃まで冷却した。２−（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（乾燥ジメチルホルアミド中の０．４５Ｍ溶液０．２３４ｍＬ、０．１ｍｍｏｌ）とヒドロキシベンゾトリアゾール（１ｍｇ、ｃａｔ．）を添加し、混合物を室温まであたため、６時間攪拌した。ＨＰＬＣにより、バンコマイシンの消失及び生成物の出現により、反応を特性決定した（ＡＰＴ２０３３−構造１、以下の表に示す通り）。バッファーＡ中の１０〜９０％バッファーＢの勾配（バッファーＡ：０．１％トリフルオロ酢酸；バッファーＢ：９０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸）と、ジュピター（Ｊｕｐｉｔｅｒ）Ｃ１８、２５０×１０ｍｍ、３００Åカラム（流量：５ｍＬ／分）を用いた分離用ＨＰＬＣにより、生成物を２０分精製した。揮発成分を真空中で除去し、水溶液を凍結乾燥することにより、白色の塩酸塩であるＡＰＴ２０３３を得た。保持時間８．４分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ７３Ｈ８６Ｃｌ３Ｎ１１Ｏ２２Ｓ２は１６４０．０Ｄａを必要とする。１６３８．５Ｄａが観察された。前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３３の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０３３の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．２５６ｍｇ／ｍＬ、０．０３２ｍｇ／ｍＬ、０．００２ｍｇ／ｍＬ、及び０．００４ｍｇ／ｍＬであった。１６６μＭの最高濃度で、ＬＣ５０溶解は観察されなかった。
【０１２６】
ＡＰＴ２０３３（９．９ｍｇ、０．００６１７ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解させ、トリス−２−カルボキシエチルホスフィン（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ４．５中の１０ｍＭ溶液１．９ｍＬ）を攪拌しながら添加した。混合物を３０分攪拌し、生成物（ＡＰＴ２０３５−構造２）を精製し、ＡＰＴ２０３３と同様に単離した。保持時間７．０分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ６８Ｈ８３Ｃｌ３Ｎ１０Ｏ２２Ｓは１５３０．９Ｄａを必要とする。１５２９．１Ｄａが観察された。また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３５の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０３５の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．１２８ｍｇ／ｍＬ、０．０１６ｍｇ／ｍＬ、０．００２ｍｇ／ｍＬ、及び０．００８ｍｇ／ｍＬであった。１６６μＭの最高濃度で、ＬＣ５０溶解は観察されなかった。
【０１２７】
ＡＰＴ２０３５（１．６２ｍｇ、０．００１０８ｍｍｏｌ）を水（０．２ｍＬ）に溶解させ、ＭＳＷＰ１（乾燥メチルスルフォキシド中の２１．６ｍＭ溶液０．０４ｍＬ、０．８７μｍｏｌ）を添加した。混合物を２時間攪拌してから、ＡＰＴ２０３３と同様に、生成物（ＡＰＴ２０３６−構造３、以下の表に示す通り）を分離用ＨＰＬＣ（２０分にわたり１０〜９０％バッファーＢ）で精製し、その塩酸塩として単離した。保持時間１３．５分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ１５７Ｈ２４４Ｃｌ３Ｎ３５Ｏ４６Ｏ２は３５２８．４Ｄａを必要とする。３５２８．１Ｄａが観察された。また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３６の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０３６の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．００８ｍｇ／ｍＬ、０．００８ｍｇ／ｍＬ、０．００８ｍｇ／ｍＬ、及び０．００４ｍｇ／ｍＬであった。ＬＣ５０ ７１ｕＭ。
【０１２８】
実施例１５．ＡＰＴ２０３７ Ｎ−（ラウロイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造４）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２０３７を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ５３９で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間１１．９分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３７の抗菌活性も測定した。ＡＰＴ２０３７の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０１６ｍｇ／ｍＬ、０．０１６ｍｇ／ｍＬ、０．００４ｍｇ／ｍＬ、及び０．００８ｍｇ／ｍＬであった。ＬＣ３０ ７１ｕＭ。
【０１２９】
実施例１６．ＡＰＴ２０３８ Ｎ−（デカノイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造５）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２０３８を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ５３８で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間１０．７分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３８の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０３８の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０６４ｍｇ／ｍｌ、０．０６４ｍｇ／ｍｌ、０．００２ｍｇ／ｍｌ、及び０．００８ｍｇ／ｍｌであった。ＬＣ１０ ７１ｕＭ。
【０１３０】
実施例１７．ＡＰＴ２０３９ Ｎ−（オクタノイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造６）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２０３９を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ１７１で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間９．０分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０３９の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０３９の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．１２８ｍｇ／ｍＬ、０．１２８ｍｇ／ｍＬ、０．００２ｍｇ／ｍＬ、及び０．００１６ｍｇ／ｍＬであった。 ７１ｕＭでＬＣ３０溶解なし。
【０１３１】
実施例１８．ＡＰＴ２０４０ Ｎ−（ｎ−ブチル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造７）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２０４０を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ１７０で置換したことであり、標題の構造が得られた。
【０１３２】
実施例１９．ＡＰＴ２０４１ Ｎ−（ミリストイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造８）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２０４１を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ５３７で置換したことであり、示した構造が得られた。保持時間１４．１分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２０４１の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２０４１の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０１６ｍｇ／ｍｌ、０．０１６ｍｇ／ｍｌ、０．００４ｍｇ／ｍｌ、及び０．００８ｍｇ／ｍｌであった。ＬＣ５０ ４．５ｕＭ。
【０１３３】
実施例２０．ＡＰＴ２２０８ Ｎ−（パルミトイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造９）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２２０８を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ２１９７で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間１５．２分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２２０８の抗菌活性も測定した。ＡＰＴ２２０８の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．００８ｍｇ／ｍｌ、０．０１６ｍｇ／ｍｌ、０．００２ｍｇ／ｍｌ、及び０．００４ｍｇ／ｍｌであった。
【０１３４】
実施例２１．ＡＰＴ２２０９ Ｎ−（オクタデカノイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造１０）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２２０９を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ２１９８で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間１６．７分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２２０９の抗菌活性も測定した。ＡＰＴ２２０９の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０３２ｍｇ／ｍｌ、０．０６４ｍｇ／ｍｌ、０．０１６ｍｇ／ｍｌ、及び０．０３２ｍｇ／ｍｌであった。
【０１３５】
実施例２２．ＡＰＴ２２１０ Ｎ−（エイコサノイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造１１）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２２１０を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ２１９９で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間１８．４５分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２２１０の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２２１０の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．１２８ｍｇ／ｍｌ、０．１２８ｍｇ／ｍｌ、０．０３２ｍｇ／ｍｌ、及び＞０．１２８ｍｇ／ｍｌであった。
【０１３６】
実施例２３．ＡＰＴ２２１１ Ｎ−（４−ビフェニルカルボキシル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−チオエチル−２−バンコマイシンカルボキサミド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造１２）の合成
実施例９で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２２１１を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ２２００で置換したことであり、標題の構造が得られた。保持時間９．３分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２２１１の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２２１１の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．００８ｍｇ／ｍｌ、０．０３２ｍｇ／ｍｌ、＜０．０３ｍｇ／ｍｌ、及び０．０００２５ｍｇ／ｍｌであった。１６６ＭでＬＣ５０溶解なし。
【０１３７】
実施例２４．ＡＰＴ２１２２ Ｎ−（ミリストイル）−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ−２−チオエチル−スクシニル−バンコマイシンバンコサミニド）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（構造１５）の合成
バンコマイシンから、３段階で、ＡＰＴ２１２２を化学的に合成した。塩酸バンコマイシン（１００ｍｇ、０．０６７３ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解させ、ＤＩＥＡ（１２．９μＬ、０．０７４２ｍｍｏｌ）を添加した。２−アミノエチル−２’−ピリジルジスルフィド二塩酸塩（０．５００ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）を水（２０ｍＬ）に溶解させ、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を添加した。１Ｍ　ＮａＯＨを滴下して添加することにより、ｐＨを１２にし、有機層を抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、ろ過した。無水コハク酸（１９３ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）とＤＩＥＡ（０．５ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間攪拌した。１．０４ｍＬのこの混合物を蒸発させ、ＤＭＦ（３００μＬ）中に溶解させた。ＰｙＢＯＰ（５７．８ｍｇ、１１１．１μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１９．３μＬ、１１１．１μｍｏｌ）を添加し、混合物を１５分攪拌した後、バンコマイシンの溶液に添加した。６時間後、ＨＰＬＣによるバンコマイシンの消失及び生成物（ＡＰＴ２１１６−構造１３）の出現により反応を特性決定する。生成物をＡＰＴ２０３６と同様に精製することにより、白色の塩酸塩としてＡＰＴ２１１６（構造９）を得た。保持時間８．２分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ７７Ｈ９０Ｃｌ３Ｎ１１Ｏ２５Ｓ２は１７４０．１Ｄａを必要とする。１７３９．４Ｄａが観察された。前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２１１６の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２１１６の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．５１２ｍｇ／ｍＬ、０．２５６ｍｇ／ｍＬ、０．０３２ｍｇ／ｍＬ、及び＞０．５１２ｍｇ／ｍＬであった。
【０１３８】
ＡＰＴ２１１６（８．３ｍｇ、０．００４７７ｍｍｏｌ）を水（０．５ｍＬ）に溶解させ、トリス−２−カルボキシエチルホスフィン（５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ４．５）中の１０ｍＭ溶液１．３ｍＬ）を攪拌しながら添加した。混合物を３０分攪拌し、得られた生成物（ＡＰＴ２１１７−構造１４）をＡＰＴ２１１６として精製及び単離した。保持時間７．１分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ７２Ｈ８７Ｃｌ３Ｎ１０Ｏ２５Ｓは１６３０．９Ｄａを必要とする。１６３２．０Ｄａが観察された。前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２１１７の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２１１７の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ＞５１２ｍｇ／ｍＬ、５１２ｍｇ／ｍＬ、０．００８ｍｇ／ｍＬ、及び０．００８ｍｇ／ｍＬであった。
【０１３９】
ＡＰＴ２１１７（１．４１ｍｇ、０．８６４ｍｍｏｌ）を水（０．２０ｍＬ）に溶解させ、ＭＳＷＰ１（乾燥メチルスルフォキシド中の２１．６ｍＭ溶液０．０２２ｍＬ、０．４７５μｍｏｌ）を添加した。混合物を２時間攪拌した後、得られた生成物（ＡＰＴ２１２２−構造１５）を、ＡＰＴ２１１６と同様に単離した。保持時間１３．８分；ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析でＣ１５７Ｈ２４３Ｃｌ２Ｎ３５Ｏ４６Ｓ２は３６２８．４Ｄａを必要とする。３６３８．４Ｄａが観察された。また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２１２２の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２１２２の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．００８ｍｇ／ｍＬ、０．０１６ｍｇ／ｍＬ、０．００８ｍｇ／ｍＬ、及び０．０１６ｍｇ／ｍＬであった。
【０１４０】
実施例２５．ＡＰＴ２２３７　Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−［（Ｓ−チオエチル−スクシニル−バンコマイシンバンコサミニド）−Ｃｙｓ］−ＮＨ２（構造１６）の合成
実施例２４で用いたのと同じ方法を用いて、ＡＰＴ２２３７を合成した。最も大きな違いは、ＡＰＴ５４２をＡＰＴ２２３５で置換したことであり、これによって標題の構造が得られた。保持時間１４．１分；また、前記方法の項に記載したように、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２０７、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ Ｖ ５８３、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ ＳＴＲ ２１１、及び黄色ブドウ球菌Ｈに対するＡＰＴ２２３７の抗菌活性を測定した。ＡＰＴ２２３７の最小阻害濃度は、各微生物について、それぞれ０．０１６ｍｇ／ｍｌ、０．０６４ｍｇ／ｍｌ、０．０１６ｍｇ／ｍｌ、及び０．００８ｍｇ／ｍｌであった。
【０１４１】
生物学的結果のまとめ
前記のように測定した抗菌活性を以下の表にまとめる。この表では、記載項目はすべて、最大阻害組成物を示し、ｍｇ／ｍｌで表す。
【０１４２】
【表２】
2004513132.tif 000006
化学構造式の表
構造式１〜１２
【化５】
2004513132.tif 000007
構造式１：ＡＰＴ ２０３３ Ｒ ＝ ２−チオピリジル
構造式２：ＡＰＴ ２０３５ Ｒ ＝ Ｈ
構造式３：ＡＰＴ ２０３６ Ｒ ＝ ミリストイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式４：ＡＰＴ ２０３７ Ｒ ＝ ラウロイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式５：ＡＰＴ ２０３８ Ｒ ＝ デカノイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式６：ＡＰＴ ２０３９ Ｒ ＝ オクタノイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式７：ＡＰＴ ２０４０ Ｒ ＝ ｎ−ブチル−配列番号１−ＮＨ２
構造式８：ＡＰＴ ２０４１ Ｒ ＝ ミリストイル−配列番号２−ＮＨ２
構造式９：ＡＰＴ ２２０８ Ｒ ＝ パルミトイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式１０：ＡＰＴ ２２０９ Ｒ ＝ オクタデカノイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式１１：ＡＰＴ ２２１０ Ｒ ＝ エイコサノイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式１２：ＡＰＴ ２２１１ Ｒ ＝ Ｎ−（４−ビフェニルカルボキシル）−配列番号１−ＮＨ２
構造式１３〜１６
【化６】
2004513132.tif 000008
構造式１３：ＡＰＴ ２１１６ Ｒ ＝ ２−チオピリジル
構造式１４：ＡＰＴ ２１１７ Ｒ ＝ Ｈ
構造式１５：ＡＰＴ ２１２２ Ｒ ＝ ミリストイル−配列番号１−ＮＨ２
構造式１６：ＡＰＴ ２２３７ Ｒ ＝ 配列番号３−ＮＨ２
【０１４３】
【配列表】
【表３】
2004513132.tif 000009
2004513132.tif 000010
2004513132.tif 000011
【国際公開パンフレット】
2004513132.tif 000013
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2004513132.tif 000072
【手続補正書】
【提出日】平成14年10月4日(2002.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｖ−Ｌ−Ｗ−Ｘ
（式中、
Ｖは、細菌におけるペプチドグリカン生合成を阻害する糖ペプチド部分であり；
Ｌは、連結基であり；
Ｗは、ペプチド性膜関連成分であり；
Ｘは、水素又は膜挿入型成分である。）
で表される抗菌化合物。
【請求項２】
Ｖ−Ｌ−が、下記式：
【化１】
2004513132.tif 000073
（式中、
Ｙ及びＹ’は、独立に水素又はクロロであり；
Ｒは、水素、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又は式−Ｒａ−Ｌ−の基であり、ここで、Ｒａは、４−エピ−バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニルであり、ＬはＲａのアミノ基に結合しており；
Ｒ１は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ２は、−ＮＨ２−、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＬ−、又はＮ（ＣＨ３）Ｌ−であり；
Ｒ３は、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、［ｐ−ＯＨ、ｍ−Ｃｌ］フェニル、ｐ−ラムノース−フェニル、［ｐ−ラムノース−ガラクトース］フェニル、［ｐ−ガラクトース−ガラクトース］フェニル、又は［ｐ−ＣＨ３Ｏ−ラムノース］フェニルであり；
Ｒ４は、−ＣＨ２−（ＣＯ）ＮＨ２、ベンジル、［ｐ−ＯＨ］フェニル、又は［ｐ−ＯＨ，ｍ−Ｃｌ］フェニルであり；
Ｒ５は、水素、又はマンノースであり；
Ｒ６は、水素、４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアコサミニルであるか、あるいは、Ｒ６は、式Ｒｂ−Ｌ−の基であって、ここで、Ｒｂは４−エピ−バンコサミニル、バンコサミニル、アクチノサミニル、リストサミニル、又はアコサミニルであり、ＬはＲｂのアミノ基に結合しているか、あるいは、Ｒ６は、基Ｒｂ−Ｒ７であって、ここで、Ｒ７は、１，０００Ｄａ以下の有機側鎖部分であり；
Ｔｅｒ１は、ヒドロキシ又は−Ｌ−である；
但し、当該化合物は、少なくとも１つの基−Ｌ−を含むものとする。）
で表されるもの又はその塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
有機側鎖部分が、式−ＣＨ２−Ｒ８を有するものを含み、ここでＲ８は水素、Ｃ１−Ｃ１５アルキル、Ｃ２−Ｃ１５アルケニル、Ｃ２−Ｃ１５アルキニル、Ｃ１−Ｃ７ハロアルキル、アセナフテニル、２−フルオレニル、９，１０−ジヒドロ−２−フェナントレニル、Ｒ９、Ｃ１−Ｃ１１アルキル−Ｒ９、Ｃ２−Ｃ７アルケニル−Ｒ９、Ｃ２−Ｃ７アルキニル−Ｒ９、又はＣ１−Ｃ７アルキル−Ｏ−Ｒ９であり、ここで、Ｒ９は、下記式の基である：
−Ｒ１０−［リンカー（０又は１）−Ｒ１０］（０又は１）
（式中、各Ｒ１０は、独立に、フェニル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルキル、ナフチル、又はチエニルを表し、その各々は、非置換、又は１若しくは２個の置換基で任意により置換されていてもよく、該置換基の各々は、独立に、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ２ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ２ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、ハロ、シアノ、又はニトロであり；
「リンカー」は、−Ｃ１−Ｃ３アルキレン、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキレン、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｏ−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｈ又はＣ１−Ｃ３低級アルキル）−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−である。）、
請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｖが、バンコマイシン、クロロエレモマイシン、テイコプラニンＡ２−２、リストセチンＡ、エレモマイシン、バルキマイシン、アクチノジンＡ、コムプレスタニン、クロロペプチン１、キスタマイシンＡ及びアボパルシンからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｗが、少なくとも１つの配列（Ｘａａ）ｎを含む膜結合ペプチドであり、ここでｎは１〜１２であり、各Ｘａａは独立にリジン又はアルギニンである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｗが、リジン及びアルギニンから選択される２〜１０個の連続する残基を含む膜結合ペプチドを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
膜結合ペプチドが７〜３０個のアミノ酸を含む、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
膜結合ペプチドが、以下のペプチド：
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＧ（配列番号４）；
ＧＳＳＫＳＰＳＫＫＫＫＫＫＰＧＤ（配列番号５）；
ＳＰＳＮＥＴＰＫＫＫＫＫＲＦＳＦＫＫＳＧ（配列番号６）；
ＤＧＰＫＫＫＫＫＫＳＰＳＫＳＳＫ（配列番号７）；及び
ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫ（配列番号８）
からなる群より選択される、請求項６又は７記載の化合物。
【請求項９】
Ｗが膜挿入ペプチドを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
膜挿入ペプチドが、αディフェンシン、βディフェンシン及びバクテリオシンから選択される、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
βディフェンシンがタキプレシンである、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
膜挿入ペプチドがマガイニンである、請求項９記載の化合物。
【請求項１３】
膜挿入ペプチドがマキュラチン（ｍａｃｕｌａｔｉｎ）１．１又はカエリン（ｃａｅｒｉｎ）１．１である、請求項９記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘが、以下のパラメータ：
―　６〜３０個の炭素原子を有する（芳香族環が存在する場合にはそのいずれの芳香族環の炭素原子をも含む）；
−　直線状又は分枝鎖状であり、後者の場合には１〜３個の分枝点を含む；
−　飽和又は不飽和であり、後者の場合には１〜４個の二重又は三重結合を含む；
−　任意により、Ｓ、Ｏ又はＮから独立に選択される１、２又は３個の複素原子を有していてもよい（芳香族環がある場合、その芳香族環に複素原子が存在する場合にはそれに加えて有する）；
−　任意により、１個以上、例えば２又は３個の芳香族環を含んでもよく、これらは融合されていてもよく、その各々が１、２又は３個の複素原子（存在する場合にはＳ、Ｏ又はＮから独立に選択される）を含んでいてもよい；並びに、
−　任意により、ヒドロキシ、−ＳＨ、アミノ及びハロから選択される１〜３個の置換基を有していてもよい、
を有する親油性鎖である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
ヒト又は動物の身体の治療又は予防方法に使用するための請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
細菌感染症の治療又は予防のための医薬を製造するための請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
被験者において細菌感染症を治療する方法であって、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の有効量の抗菌剤を該被験者に投与することを含む、上記方法。
【請求項１８】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【国際調査報告】
2004513132.tif 000074
2004513132.tif 000075
2004513132.tif 000076
2004513132.tif 000077