(57)【要約】本発明は、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害に有用な化合物を記載する。本発明はまた、そのような化合物を含む薬学的組成物、およびＦＰＴに関連する障害を処置するためにそれらを用いる方法を開示する。１つの局面において、本発明は、以下を提供する：薬学的組成物であって、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、有効量のファルネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害に有用な化合物を含む、薬学的組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化１】
2004514717.tif 000019
。
【請求項２】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化２】
2004514717.tif 000020
。
【請求項３】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化３】
2004514717.tif 000021
。
【請求項４】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化４】
2004514717.tif 000022
。
【請求項５】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化５】
2004514717.tif 000023
。
【請求項６】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化６】
2004514717.tif 000024
。
【請求項７】
以下の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩：
【化７】
2004514717.tif 000025
。
【請求項８】
ＦＰＴを阻害する方法であって、そのような処置を必要とする患者に、ＦＰＴを阻害するに有効な量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項９】
腫瘍増殖を阻害する方法であって、そのような処置を必要とする患者に、有効な腫瘍阻害量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
薬学的組成物であって、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、有効量の請求項１に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
膵臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、骨髄性白血病腫瘍細胞、甲状腺濾胞状腫瘍細胞、脊髄形成異常腫瘍細胞、表皮癌腫瘍細胞、膀胱腫瘍細胞または結腸腫瘍細胞を、これらの処置を必要とする患者において、阻害する方法であって、有効な腫瘍阻害量の請求項１に記載の化合物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
以下の化合物（４）
【化８】
2004514717.tif 000026
を産生するプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
（ａ）適切な非プロトン溶媒およびジメチルアセトアミドを含む溶媒混合物中に、以下の化合物（３）
【化９】
2004514717.tif 000027
を溶解する工程；
（ｂ）該反応混合物を、（−）１０℃〜（＋）１０℃の間の温度に冷却する工程；
（ｃ）臭化チオニルを添加する工程；
（ｄ）該反応混合物を（−）１０℃〜（＋）４０℃の間の温度で、撹拌する工程
（ｅ）該反応混合物を塩基性化する工程；および
（ｆ）該得られた溶液を、適切な有機溶媒を用いて抽出する工程；
を包含するプロセス。
【請求項１３】
請求項１２に記載のプロセスであって、前記非プロトン性溶媒が、ＣＨ２Ｃｌ２である、プロセス。
【請求項１４】
請求項１２に記載のプロセスであって、前記反応物が、０℃で４時間撹拌される、プロセス。
【請求項１５】
請求項１２に記載のプロセスであって、以下：
（ａ）ＣＨ２Ｃｌ２（３．５ｍｏｌ）およびジメチルアセトアミド（１．０ｍｏｌ）の溶媒混合物中に、化合物（３）を溶解する工程；
（ｂ）該反応混合物を、０℃の温度に冷却する工程；
（ｃ）臭化チオニルを添加する工程；
（ｄ）該反応混合物を、０℃の温度で４時間撹拌する工程
（ｅ）ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて塩基性化する工程；
（ｆ）該得られた溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて抽出する工程；および
（ｇ）該生成物を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する工程、
を包含する、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（背景）
ＷＯ９５／１０５１４号、ＷＯ９５／１０５１５号、ＷＯ９５／１０５１６号（１９９５年４月２０日公開）、ＷＯ９７／２３４７８号（１９９７年７月３日公開）、およびＷＯ９８／５７９４９号（１９９８年１２月３２日公開）は、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害に有用な三環式化合物を開示する。
【０００２】
ファルネシルプロテイントランスフェラーゼのインヒビターにおける現在の目的を考慮して、当該分野に歓迎される寄与は、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害に有用な化合物である。そのような寄与が、本発明によって提供される。
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、以下からなる群より選択される化合物を提供する：
【０００４】
【化１０】
2004514717.tif 000002
別の実施形態において、本発明は、中間化合物（４）を生成するためのプロセスを提供し：
【０００５】
【化１１】
2004514717.tif 000003
この方法は以下の工程を包含する：
（ａ）適切な非プロトン溶媒（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＣｌ３、またはベンゼン）およびジメチルアセトアミド（この非プロトン溶媒のジメチルアセトアミドに対するモル比は、約１〜１０：１．０の範囲）を含む溶媒混合物中に、化合物（３）を溶解する工程；
【０００６】
【化１２】
2004514717.tif 000004
好ましくは、この非プロトン溶媒は、ジメチルアセトアミドに対して、３．５：１．０のモル比である；
（ｂ）この反応混合物を、約（−）１０℃と約（＋）１０℃との間の温度まで冷却する工程；
（ｃ）約１０〜約４０モル当量の臭化チオニル（すなわち、ＳＯＢｒ２）を添加する工程；好ましくはこのＳＯＢｒ２は、新しく調製される（すなわち、７２時間以内に調製および使用される）。なおより好ましくは、このＳＯＢｒ２は、４８時間以内に調製および使用される）；
（ｄ）この反応混合物を、約（−）１０℃と約（＋）４０℃との間の温度で、撹拌する工程（一般的には、この反応物は、約４〜約１０時間（好ましくは約４時間）にわたり撹拌される）；
（ｅ）この反応混合物を、適切なアルカリ水溶液（例えば、ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ３、ＮＨ４ＯＨなどの溶液）を用いて塩基性化する工程。好ましくは、このアルカリ水溶液濃度は、１Ｎである；および
（ｆ）この生じた反応溶液を、適切な有機溶媒（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２、酢酸エチルなど）を用いて抽出する工程。
【０００７】
一般的に、上記プロセスより得られた中間化合物（４）を、当該分野において周知の技術（例えば、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣなど）を用いて精製する。
【０００８】
本発明の化合物は、良好な薬物速度論的安定性を有する、有効なファネシルプロテイントランスフェラーゼインヒビターである。
【０００９】
本発明の化合物は；（ｉ）インビトロで、ゲラニルゲラニルプロテイントランスフェラーゼＩでなく、ファネシルプロテイントランスフェラーゼを有効に阻害し；（ｉｉ）ゲラニルゲラニル受容体となるよう操作されたＲａｓの形質転換形態によってではなく、ファネシル受容体であるＲａｓの形質転換形態によって誘導される表現型変化を阻害し；（ｉｉｉ）ゲラニルゲラニル受容体となるよう操作されたＲａｓではなく、ファネシル受容体であるＲａｓの細胞内でのプロセシングを阻害し；そして（ｉｖ）形質転換Ｒａｓによって誘導される培養物中での異常な細胞増殖を阻害する。
【００１０】
本発明の化合物は、ファネシルプロテイントランスフェラーゼおよび癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化を阻害する。従って、本発明はさらに、有効量（例えば、治療的有効量）の以下に列挙する三環式化合物の投与によって、哺乳動物（特にヒト）においてファネシルプロテイントランスフェラーゼ（例えば、ｒａｓファネシルプロテイントランスフェラーゼ）を阻害する方法を提供する。ファネシルプロテイントランスフェラーゼを阻害するための、患者への本発明の化合物の投与は、下記の癌の処置に有用である。
【００１１】
本発明はまた、有効量（例えば、治療的有効量）の本発明の化合物を投与することによって、形質転換された細胞を含む、細胞の異常増殖を阻害または処置する方法を提供する。細胞の異常増殖とは、通常の調節機構に依存しない細胞増殖（例えば、接触阻止の欠如）をいう。これは、（１）活性化Ｒａｓ癌遺伝子を発現する腫瘍細胞（腫瘍）；（２）別の遺伝子における癌遺伝子的変異の結果としてＲａｓタンパク質が活性化される腫瘍細胞；および（３）異常なＲａｓ活性化が起こる他の増殖性疾患の良性および悪性細胞の、異常増殖を含む。
【００１２】
本発明はまた、そのような処置を必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）に、有効量（例えば、治療的有効量）の本明細書中に記載の三環式化合物を投与することによって、腫瘍増殖を阻害または処置する方法を提供する。特に、本発明は、有効量（例えば、治療的有効量）の下記の化合物を投与することによって、活性化Ｒａｓ癌遺伝子を発現する腫瘍の増殖を阻害または処置する方法を提供する。
【００１３】
阻害または処理され得る腫瘍の例としては、肺癌（例えば、肺腺癌）、膵臓癌（例えば、外分泌膵臓腫のような膵臓腫）、結腸癌（例えば、結腸腺癌および結腸腫（ｃｏｌｏｎ　ａｄｅｎｏｍａ）のような結腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ））、骨髄性白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、甲状腺小胞癌、骨髄形成異常性症候群（ＭＤＳ）、膀胱癌、表皮癌、メラノーマ、乳癌、および前立腺癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
本発明がまた、良性および悪性の両方の、増殖性疾患（ここでＲａｓタンパク質は、他の遺伝子中の癌遺伝子的変異の結果として異常に活性化される（すなわち、このＲａｓ遺伝子自体は、癌遺伝子形態への変異によって活性化されない））を阻害または処置する方法を提供すると考えられる。ここでこの阻害または処置は、そのような処置を必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）に、有効量（例えば、治療的有効量）の本明細書中に記載の三環式化合物を投与することによって達成される。例えば、良性増殖性障害神経線維腫症、またはＲａｓがチロシンキナーゼ癌遺伝子（例えば、ｎｅｕ、ｓｒｃ、ａｂｌ、ｌｃｋ、およびｆｙｎ）の変異もしくは過剰発現に起因して活性化される腫瘍は、本明細書中に記載される三環式化合物によって阻害または処置され得る。
【００１５】
本発明の方法において有用な三環式化合物は、細胞の異常増殖を阻害または処置する。理論に束縛されることを望むことなく、これらの化合物が、Ｇタンパクのイソプレニル化を阻害することによって、Ｇタンパク機能（例えばＲａｓ　ｐ２１）の阻害を介して機能し、従ってそれらが、腫瘍増殖および癌のような増殖性疾患の処置において有用となり得ると考えられる。理論に束縛されることを望まないが、これらの化合物は、ｒａｓファルネシルプロテイントランスフェラーゼを阻害し、従って、ｒａｓ形質転換細胞に対する抗増殖活性を示すと考えられる。
【００１６】
（詳細な説明）
本明細書中に使用される場合、以下の用語が、他に指定のない限り、以下に規定するように用いられる：
ＭＨ＋とは、質量分析法において水素分子を付加したイオン分子を表現する；
ＢＯＣとは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表現する；
ＣＨ２Ｃｌ２とは、ジクロロメタンを表現する；
ＣＩＭＳとは、化学的イオン化質量分析法を表現する；
ＤＥＣとは、１−（３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を表すＥＤＣｌを表現する；
ＤＭＦとは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを表現する；
Ｅｔとは、エチルを表現する；
ＥｔＯＡｃとは、酢酸エチルを表現する；
ＥｔＯＨとは、エタノールを表現する；
ＨＯＢＴとは、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物を表現する；
ＩＰＡとは、イソプロパノールを表現する；
ｉＰｒＯＨとは、イソプロパノールを表現する；
Ｍｅとは、メチルを表現する；
ＭｅＯＨとは、メタノールを表現する；
ＭＳとは、質量分析計を表現する；
ＦＡＢとは、高速原子衝撃質量分析法を表現するＦＡＢＭＳを表現する；
ＨＲＭＳとは、高分解能質量分析法を表現する；
ＮＭＭとは、Ｎ−メチルモルホリンを表現する；
Ｅｔ３Ｎとは、トリエチルアミンを表現するＴＥＡを表現する；
ｔ−ＢＵＴＹＬとは、−Ｃ−（ＣＨ３）３を表現する；
ＴＨＦとは、テトラヒドロフランを表現する；
ＦＰＴとは、ファルネシルプロテイントランスフェラーゼを表現する。
【００１７】
本発明の特定の化合物は、異なる異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、アトロプ異性体）形態で存在し得る。本発明は、ラセミ混合体を含む、純粋な形態および混合物の両方のそのような全ての異性体を意図する。エノール形態もまた含まれる。
【００１８】
特定の三環式化合物（例えば、カルボキシル基または、フェノール性ヒドロキシル基を有する化合物）は、本質的に酸性である。これらの化合物は、薬学的に受容可能な塩を形成し得る。そのような塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩、金塩、および銀塩が挙げられる。アンモニア、アルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、Ｎ−メチルグルカミン等の薬学的に受容可能なアミンを伴い形成された塩もまた、意図される。
【００１９】
特定の塩基性三環式化合物もまた、薬学的に受容可能な塩（例えば、酸添加塩）を形成する。例えば、ピリド−窒素原子は、強酸と塩を形成し得、一方でアミノ基のような塩基性置換基を有する化合物もまた、弱酸と塩を形成する。塩形成に適する酸の例は、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、および当業者に周知の他の鉱酸ならびにカルボン酸である。塩は、従来の様式で、遊離塩基形態と、塩を形成するために十分量の所望の酸とを接触させることによって調製される。この遊離塩基形態は、適切な塩基性希釈水溶液（例えば、ＮａＯＨ、炭酸カリウム、アンモニア、および炭酸水素ナトリウム希釈水溶液）を用いて塩を処理することによって再形成される。この遊離塩基形態は、その特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中の溶解性）において、それら各々の塩の形態と幾分か異なるが、この酸性塩および塩基性塩は、一方で、本発明の目的のために、それら各々の遊離塩基と等価である。
【００２０】
全てのそのような酸性塩および塩基性塩が、本発明の範囲内の薬学的に受容可能な塩であることが意図され、そして全ての酸性塩および塩基性塩が、本発明の目的のために、対応する化合物の遊離形態と等価であると考えられる。
【００２１】
本発明の化合物は、非溶媒和形態および水和形態（例えば、半水和物（ｈｅｍｉ−ｈｙｄｒａｔｅ））を含む溶媒和形態で存在し得る。一般的に、薬学的に受容可能な溶媒（例えば、水、エタノールなど）との溶媒和形態は、本発明の目的のために、非溶媒和形態と等価である。
【００２２】
以下のプロセスは、本発明の化合物を生成するために用いられ得る。
【００２３】
（実施例）
（調製の実施例１）
（工程１）
【００２４】
【化１３】
2004514717.tif 000005
２０ｇ（０．０５ｍｏｌ）の化合物（１）（米国特許第ＩＮ０５４９号の調製の実施例９工程Ｄを参照のこと）を、１Ｌの乾燥ＴＨＦ中に溶解した。この溶液を、−４０℃に冷却されたＧｒｉｇｎａｒｄ試薬溶液（ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中のＧｒｉｇｎａｒｄ試薬１．５６Ｍを８０ｍＬ（０．１２５ｍｏｌ、２．５等量））に添加した。この反応混合物を、０．５時間撹拌し、次いでＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）でクエンチした。ＴＨＦを、蒸留（１２００ｍＬ）によって取り除き、そして５００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を添加し、そしてｐＨを、１０％ＨＣｌを用いて５に調節した。この水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）で抽出し、そして有機相を水相から分離した。合わせた有機相を、飽和ＮａＨＣＯ３を用いて洗浄し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥し、そしてセライトのショートパッド（ｓｈｏｒｔ　ｐａｄ　ｏｆ　ｃｅｌｉｔｅ）に通した。次いで３００ｍＬのアセトニトリルを添加し、ＣＨ２Ｃｌ２を、３００ｍＬのみが残留するまで留去した。結晶を、沈降させ、そして収集し、そして１５．９ｇ（６４％）の標的のアザケトン（ＭＨ＋＝５０１）が得られるまで乾燥した。
【００２５】
（工程２）
【００２６】
【化１４】
2004514717.tif 000006
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の上記工程１からの化合物（３）（５．０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチルアセトアミド（９．５ｇ、１０９ｍｍｏｌ、１０ｍＬ）を添加し、そしてこの反応混合物を０℃にした。臭化チオニル（３５ｍＬをＮａＢｒおよびＳＯＣｌ２より新しく調製）をこの反応混合物へと徐々に添加した。この反応物を、４時間撹拌した。次いでこの反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３とＣＨ２ＣＨ２との間に、分配した。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥し、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１％　ＭｅＯＨ−ＮＨ３−ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製し、固体として生成物（０．８２ｇ、収率１７％）を得た；ｍｐ＝７３〜７５；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　４８３（ＭＨ＋）。
【００２７】
（工程３）
【００２８】
【化１５】
2004514717.tif 000007
トルエン（７０ｍＬ）中の、上記工程２からの化合物（４）（３．５１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２．５ｇ、２５ｍｍｏｌ、３．６ｍＬ）を徐々に添加し、そしてこの反応混合物を、還流に導いた。クロロ蟻酸エチル（３．９６ｇ、３６．５ｍｍｏｌ、３．５ｍＬ）を、この反応混合物に添加し、そして連続的に１６時間還流した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃと１Ｎ　ＮａＯＨとの間に分配した。有機相を、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％　ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって精製し、固体として生成物（３．７０ｇ、収率９４％）を得た；ｍｐ＝６３〜６４；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　５４１（ＭＨ＋）。
【００２９】
（工程４）
【００３０】
【化１６】
2004514717.tif 000008
８０ｍＬの濃ＨＣｌに、上記工程３からの化合物（５）（３．６５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、１６時間還流した。次いでそれを、冷却し、氷に注ぎ、そして５０％ＮａＯＨ水溶液でｐＨ＝１０まで塩基性化した。この水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相の濃縮により、２．０２ｇの化合物（６）を得た；ｍｐ＝８８〜８９℃；ＭＳ　ｍ／ｚ（相対強度）４６９（ＭＨ＋）。
【００３１】
（工程５）
【００３２】
【化１７】
2004514717.tif 000009
Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ　ＡＤカラムおよび溶離剤として２０％のイソプロパノール−８０％のヘキサン−０．２％のジエチルアミンを用いたＨＰＬＣ上の分離によって、エナンチオマーのアミン７および８を得た。
化合物（７）：ｍｐ＝８２〜８３；［α］２２Ｄ＝−１１６．８°（７．６４ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　４６９（ＭＨ＋）。
化合物（８）：ｍｐ＝８８〜８９；［α］２２Ｄ＝＋１５０．０°（６．０２ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　４６９（ＭＨ＋）。
【００３３】
（調製の実施例２）
（工程１）
【００３４】
【化１８】
2004514717.tif 000010
調製の実施例１、工程５からの化合物（７）（０．７４ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、酢酸ピペリジルＮ−ＢＯＣ（０．７２ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．２７ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）、ＤＥＣ（０．３９ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）、および乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）の混合物を、２５℃で、１６時間撹拌した。この混合物を、真空中で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて希釈し、そして飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）および１０％のＮａＨ２ＰＯ４（水溶液）で洗浄した。その有機相を無水ＭｇＳＯ４を通して乾燥し、そして真空中で濃縮し、固体として（−）異性体の化合物（９）（１．１９ｇ、収率１００％）生成を提供した；ｍｐ＝７３〜７４；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　６９４．２（ＭＨ＋）。
【００３５】
（工程２）
【００３６】
【化１９】
2004514717.tif 000011
化合物（９）（１．０６ｇ、上記工程１からの粗残渣の無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（４ｍＬ）の溶液を、０℃で、３時間撹拌した。この溶液を、氷水中で冷却し、そして塩基性になるまで５０％水酸化ナトリウム水溶液で徐々に処理した。この混合物を、ジクロロメタンへと注ぎ、水で洗浄した。有機相を、無水ＭｇＳＯ４を通して乾燥し、そして真空中で濃縮し、化合物（１０）（０．８２ｇ、収率１００％）を得た；ｍｐ＝９４〜９５℃；ＭＳ（ＦＡＢ）　ｍ／ｚ　５９４（ＭＨ＋）。
【００３７】
（実施例１）
（化合物（１１）の調製）
【００３８】
【化２０】
2004514717.tif 000012
化合物（７）（０．２ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）（調製の実施例１　工程５より）、酢酸ピリジルＮ−オキシド（０．１３ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．０７５ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ＤＥＣ（０．１０６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．０６ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）および乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）の混合物を、２５℃で、１６時間撹拌した。この混合物を、真空中で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、そして飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）および飽和ＮａＨ２ＰＯ４（水溶液）で洗浄した。有機相を無水ＭｇＳＯ４を通して乾燥し、真空中で濃縮して残渣を提供し、それを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５％　ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２＋ＮＨ４ＯＨ）を用いて精製し、固体として化合物（１１）を得た（０．１２ｇ、収率７３％）。ｍｐ＝１３７〜１３９；［α］２２Ｄ＝−７０．１°（１０．１ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　６０４（ＭＨ＋）。
【００３９】
（実施例２）
（化合物１２の調製）
【００４０】
【化２１】
2004514717.tif 000013
化合物（１２）を、化合物（７）の代わりに調製の実施例１、工程５の化合物（８）を用いたことを除いて、実施例１と本質的に同じ手順に従うことによって調製した。（収率８９％）；ｍｐ＝１４２〜１４３；［α］２２Ｄ＝＋７５．２°（１０．０ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　６０４（ＭＨ＋）。
【００４１】
（実施例３）
（化合物１３の調製）
【００４２】
【化２２】
2004514717.tif 000014
無水ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解した、調製の実施例１、工程５からの化合物（７）（０．１０ｇ，０．２１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０４３ｇ、０．０６ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ）に、メタンスルホニルクロリド（０．０３７ｇ、０．０３ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加した。室温で、一晩撹拌した後、この溶液を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、そして無水硫酸マグネシウムを通して乾燥した。ろ過および真空中での濃縮によって、化合物（１３）（０．１０ｇ、８９％、ｍｐ＝８４〜８５℃）を得た；［α］２２Ｄ＝−７３．１°（７ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　５４７（ＭＨ＋）。
【００４３】
（実施例４）
（化合物（１４）の調製）
【００４４】
【化２３】
2004514717.tif 000015
化合物（１４）を、化合物（７）の代わりに調製の実施例１、工程５の化合物（８）を用いたことを除いて、実施例３と本質的に同じ手順に従うことによって調製した；（収率９９％）；ｍｐ＝９１〜９２；［α］２２Ｄ＝＋９５．０°（１０．０ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　５４７（ＭＨ＋）。
【００４５】
（実施例５）
（化合物（１５）の調製）
【００４６】
【化２４】
2004514717.tif 000016
無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の、調製の実施例１工程５の化合物（７）の溶液（０．７８ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）に、トリメチルシリルイソシアネート（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｉｓｏｃｙａｎａｔｅ）（１．２１ｇ、１．４２ｍＬ、１０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃での４８時間の撹拌の後、この溶液を、ジクロロメタンに注ぎ、そして飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を、無水ＭｇＳＯ４を通して乾燥し、そして、真空中で濃縮し、灰色がかった白色の固体を得た。水酸化アンモニウムを含む５％メタノール−ジクロロメタンを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）によるさらなる精製によって、白色固体として化合物（１５）を得た（０．５６ｇ、収率６７％）。アセトンからの再結晶化によって、分析サンプルを提供した；ｍｐ＝１４６〜１４７℃；［α］２５Ｄ＝−６８．８°（８．２ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　６３７（ＭＨ＋）。
【００４７】
（実施例６）
（化合物（１６）の調製）
【００４８】
【化２５】
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化合物（１６）を、化合物（７）の代わりに調製の実施例１、工程５の化合物（８）を用いたことを除いて、実施例５と本質的に同じ手順に従うことによって調製した；（収率７４％）；ｍｐ＝１４２〜１４３；［α］２２Ｄ＝＋７８．３°（１１．８ｍｇ／２ｍＬ　ＣＨＣｌ３）；ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ　６３７（ＭＨ＋）。
【００４９】
（アッセイ）
（１．インビトロでの酵素アッセイ）
ファネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害。ファネシルプロテイントランスフェラーゼ（ＦＰＴ）を、本質的にはＹｏｋｏｙａｍａら（Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｋ．ら（１９９１）、タンパク質プレニル化特性についての示唆（Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８８：５３０２〜５３０６、この開示は、本明細書中にそれに対する参考として援用される）によって記載されたような硫酸アンモニウム分別とその後のＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｉｎｃ．）アニオン交換クロマトグラフィーによってラットの脳より部分的に精製した。ヒトファネシルプロテイントランスフェラーゼもまた、ａサブユニットおよびｂサブユニットの両方をコードするｃＤＮＡクローンを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現させた。用いた方法は、公開された方法（Ｏｍｅｒ，Ｃら、（１９９３）、組換えヒトファネシルプロテイントランスフェラーゼの特徴付け：クローニング、発現、ファネシルニリン酸結合、および酵母プレニルプロテイントランスフェラーゼとの機能的相同性（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ｆａｒｎｅｓｙｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｆａｒｎｅｓｙｌ　ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ，ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｙｅａｓｔ　ｐｒｅｎｙｌ−ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３２：５１６７〜５１７６）と類似した。ヒトファネシルプロテイントランスフェラーゼを、上記のＥ．ｃｏｌｉの可溶性タンパク質画分から部分的に精製した。本明細書中に開示する三環式ファネシルプロテイントランスフェラーゼインヒビターは、ヒト酵素およびラット酵素の両方を同様の強さで阻害する。２つの形態のｖａｌ１２−Ｈａ−Ｒａｓタンパク質を、それらのカルボキシル末端の配列が異なる、これらの酵素の基質として調製した。１つの形態は、システイン−バリン−ロイシン−セリンで終結し（Ｒａｓ−ＣＶＬＳ）、もう１つは、システイン−バリン−ロイシン−ロイシンで終結した（Ｒａｓ−ＣＶＬＬ）。Ｒａｓ−ＣＶＬＳは、ファネシルプロテイントランスフェラーゼの基質であり、一方、Ｒａｓ−ＣＶＬＬは、ゲラニルゲラニルプロテイントランスフェラーゼＩの基質である。これらのタンパク質をコードするｃＤＮＡを、そのタンパク質が、６ヒスチジン残基のアミノ末端伸長を含むように、構築した。両方のタンパク質を、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ中で発現させ、そして金属キレートアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製した。放射標識したイソプレニルピロリン酸基質（［３Ｈ］ファネシルピロリン酸および［３Ｈ］ゲラニルゲラニルピロリン酸）を、ＤｕＰｏｎｔ／Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒより購入した。
【００５０】
ファネシルプロテイントランスフェラーゼ活性を測定するためのいくつかの方法が、記載されている（Ｒｅｉｓｓら１９９０、Ｃｅｌｌ　６２：８１；Ｓｃｈａｂｅｒら１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１４７０１；Ｍａｎｎｅら１９９０、ＰＮＡＳ　８７：７５４１；ならびにＢａｒｂａｃｉｄおよびＭａｎｎｅ　１９９３、米国特許第５，１８５，２４８号）。活性を、Ｒｅｉｓｓら１９９０（Ｃｅｌｌ　６２：８１）によって記載された条件と類似の条件を用いて、Ｒａｓ−ＣＶＬＳに対する［３Ｈ］ファネシルピロリン酸からの［３Ｈ］ファネシルの変換を測定することによってアッセイした。反応混合物は、総量１００ｍＬ中に、４０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ　７．５）；２０ｍＭの塩化マグネシウム；５ｍＭのジチオトレイトール；０．２５μＭの［３Ｈ］ファネシルピロリン酸；１０ｍｌのＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ精製したファネシルプロテイントランスフェラーゼ；記載の濃度の三環式化合物またはジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）ビヒクルコントロール（最終的に５％ＤＭＳＯ）；および５ｍＭのＲａｓ−ＣＶＬＳを含む。反応を、室温で３０分間進行させ、次いで０．５ｍＬの４％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）と、その後の０．５ｍｌの３０％　冷ＴＣＡを用いて停止させた。試料を、４５分間にわたり氷上に設置し、次いで沈殿したＲａｓタンパク質を、Ｂｒａｎｄｅｌ細胞ハーベスター（ｃｅｌｌ　ｈａｒｖｅｓｔｅｒ）を用いてＧＦ／Ｃろ紙マット上に収集した。ろ紙マットを、一旦６％ＴＣＡ、２％ＳＤＳで洗浄し、そして放射能を、Ｗａｌｌａｃ　１２０４　Ｂｅｔａｐｌａｔｅ　ＢＳ　液体シンチレーションカウンターで測定した。％阻害を、ＤＭＳＯビヒクルコントロールと比較して算出した。
【００５１】
（２．ソフトアガーアッセイ：）
足場非依存増殖は、腫瘍形成細胞株の特徴である。ヒト腫瘍細胞を、０．３％アガロースおよび記載の濃度のファネシルトランスフェラーゼインヒビターを含む増殖培地中に懸濁する。この溶液を、上層と同じ濃度のファネシルトランスフェラーゼインヒビターを含む０．６％アガロースで凝固させた増殖培地上に、重層する。上層が凝固した後で、プレートを、５％のＣＯ２下、３７℃で、１０〜１６日間インキュベートし、コロニーを増殖させる。インキュベーションの後、コロニーを、ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド、チアゾリルブルー）（ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬ）の溶液を寒天に重層することによって染色する。コロニーを、計数し、ＩＣ５０を決定する。
【００５２】
アッセイの結果を、以下の表１に示す：
【００５３】
【表１】
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（投与および投薬量）
本発明によって記載される化合物から薬学的組成物を調製するための、不活性な薬学的に受容可能なキャリアは、固体または液体のいずれでもあり得る。固体形態調製物としては、粉末剤、錠剤、分散可能な顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および坐剤が挙げられる。粉末剤および錠剤には、約５〜約９５％の活性成分が含まれ得る。適切な固体キャリア（例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、またはラクトース）は、当該分野において公知である。錠剤、粉末剤、カシェ剤、およびカプセル剤は、経口投与に適する固体投薬形態として用いられ得る。薬学的に受容可能なキャリアおよび種々の組成物の製造方法の例は、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（１９９０）、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａにおいて見出され得る。
【００５４】
液体形態調製物としては、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。例として、非経口注射のための水溶液もしくは水−プロピレングリコール溶液、または経口溶液、経口懸濁液および経口エマルジョンのための甘味料および乳白剤の添加が、言及され得る。液体形態調製物としてはまた、鼻腔内投与のための溶液も挙げられる。
【００５５】
吸入に適するエアロゾル調製物としては、不活性圧縮ガス（例えば、窒素）のような、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせられ得る、溶液および粉末形態の固体が挙げられ得る。
【００５６】
経口投与または非経口投与のいずれかのために、使用直前に液体形態調製物に変換されることが意図される固体形態調製物も包含される。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。
【００５７】
本発明の化合物は、好ましくは、１日１回、経口投与される。
【００５８】
本発明の化合物はまた、経皮的にも送達可能であり得る。経皮的組成物は、クリーム、ローション剤、エアロゾル、および／またはエマルジョンの形態をとり得、そしてこの目的に関して当該分野において慣用的であるような、マトリクスまたはレザバ型の経皮パッチに含まれ得る。
【００５９】
好ましくは、薬学的調製物は、単位投薬形態にある。そのような形態においては、調製物は、適切な量の活性成分（例えば、所望の目的を達成するための有効量）を含む、適切な大きさの単位用量へと細分化される。
【００６０】
本発明の化合物は、そのような処置を必要とする患者（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト））に、有効量（例えば、治療学的有効量）で投与される。投与される量は、ＦＰＴを阻害するのに十分である。
【００６１】
単位用量の調製物中の活性化合物の量は、特定の適用に従い、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは０．０１ｍｇ〜７５０ｍｇ、より好ましくは、０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇ、そして最も好ましくは、約０．０１ｍｇ〜約２５０ｍｇで変化または調整され得る。
【００６２】
用いられる実際の投薬量は、患者の必要性および処置される状態の重篤度に依存して変化され得る。特定の状況についての適切な投薬レジメンの決定は、当該分野の技術の範囲内である。簡便には、１日の総投薬量が、分割され得、そして必要とされるように、その日にわたり一部分ずつ投与され得る。
【００６３】
本発明の化合物および／またはそれらの薬学的に受容可能な塩の投与の量および頻度は、患者の年齢、状態、および大きさ、ならびに処置されている症状の重篤度のような要素を考慮して、主治医の判断に従って、調節される。経口投与に関する、代表的な推奨される１日の投薬レジメンは、２〜４回の分割用量で、約０．０４ｍｇ／日〜約４０００ｍｇ／日の範囲にあり得る。
【００６４】
本発明は、上記の特定の実施形態に関連して記載されたが、それらの多くの代替物、改変、およびバリエーションは、当業者にとって明らかである。全てのそのような代替物、改変、およびバリエーションは、本発明の精神および範囲に含まれることが意図される。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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