(57)【要約】新規ポリペプチドをコードする核酸配列が本明細書中で開示される。これらのポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法、ならびにこれらを使用する方法をまた、開示する。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにその改変体、誘導体、ホモログ、アナログ、およびフラグメントを、本明細書において、総称して「ＮＯＶＸ」核酸配列または「ＮＯＶＸ」ポリペプチド配列と称する。別の局面において、本発明は、治療有効量または予防有効量の治療剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を包含する。この治療剤は、例えば、ＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチド、またはＮＯＶＸポリペプチドに特異的な抗体であり得る。さらなる局面において、本発明は、１以上の容器中に、この薬学的組成物の治療有効量または予防有効量を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列；ならびに
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の天然に存在する対立遺伝子改変体のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項３】
請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、前記対立遺伝子改変体が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および/または５１からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる核酸配列の翻訳であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項４】
前記改変体のアミノ酸配列が、保存的アミノ酸置換含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
単離された核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群から選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｅ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは該ポリペプチドの改変体の、少なくとも一部をコードする核酸フラグメントであって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、核酸フラグメント；ならびに
（ｆ）  （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の相補体を含む、核酸分子、
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が天然に存在する対立遺伝子核酸改変体のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、天然に存在するポリペプチド改変体のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項８】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および/または５１からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる、核酸分子。
【請求項９】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が以下：
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および/または５１からなる群より選択されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および/または５１からなる群より選択されるヌクレオチド配列と１つ以上のヌクレオチドで異なる、ヌクレオチド配列であって、ただし、そのヌクレオチドの２０％以下が、該ヌクレオチド配列と異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）の核酸フラグメント；ならびに
（ｄ）（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１０】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および/または５１からなる群より選択されるヌクレオチド配列または該ヌクレオチド配列の相補体にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸分子。
【請求項１１】
請求項５に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下：
（ａ）第１ヌクレオチド配列であって、前記アミノ酸配列をコードするコード配列と１以上のヌクレオチド配列で異なるコード配列を含み、ただし、該第１ヌクレオチド配列中のコード配列におけるヌクレオチドの２０％以下が、該コード配列と異なる、第１ヌクレオチド配列；
（ｂ）該第１ポリヌクレオチドの相補体である、単離された第２ポリヌクレオチド；および
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１２】
請求項１１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１３】
前記核酸分子に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する、抗体。
【請求項１６】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１８】
サンプル中の請求項１に記載のポリペプチドの存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と接触させる工程；および
（ｃ）該ポリペプチドに結合した抗体の存在または量を決定して、それによって該サンプル中のポリペプチドの存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１９】
サンプル中の請求項５に記載の核酸分子の存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該核酸分子に結合するプローブと接触させる工程；および
（ｃ）該核酸分子に結合した該プローブの存在または量を決定して、それによって該サンプル中の該核酸分子の存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドに結合する因子を同定する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを該因子と接触させる工程；および
（ｂ）該因子が該ポリペプチドに結合するか否かを決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載のポリペプチドの発現または活性を調節する因子を同定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを発現する細胞を提供する工程；
（ｂ）該因子と該細胞とを接触させる工程；および
（ｃ）該因子が、該ポリペプチドの発現または活性を調節するか否かを決定する工程、
を包含し、それによって、該ペプチドの発現または活性における変化が、外因子が該ポリペプチドの発現または活性を調節することを示す、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載のポリペプチドの活性を調節するための方法であって、該方法は、請求項１に記載のポリペプチドを発現する細胞サンプルを、該ポリペプチドの活性を調節するのに十分な量で、該ポリペプチドに結合する化合物とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２３】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
前記被験体がヒトである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項５に記載の核酸を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
前記被験体がヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１５に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記被験体がヒトである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１に記載のポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３０】
請求項５に記載の核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３１】
請求項１５に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３２】
請求項２９に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３３】
請求項３０に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３４】
請求項３１に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３５】
ヒト疾患に関連する症候群を処置するための医薬品の製造における治療剤の使用であって、該疾患は、ＮＯＶＸ関連障害から選択され、ここで、該治療剤は、ＮＯＶＸポリペプチド、ＮＯＶＸ核酸、およびＮＯＶＸ抗体からなる群より選択される、使用。
【請求項３６】
ＮＯＶＸ関連障害の活性もしくは潜伏のモジュレータまたはＮＯＶＸ関連障害の素因についてスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
（ａ）ＮＯＶＸ関連疾患について増大した危険にされされている試験動物に対して、試験化合物を投与する工程であって、ここで、該試験動物は、請求項１に記載のポリペプチドを組換え可能に発現する、工程；
（ｂ）工程（ａ）の化合物を投与する工程の後に、該試験動物における該ポリペプチドの活性を測定する、工程；
（ｃ）該ポリペプチドが投与されていないコントロール動物における該ポリペプチドの活性と、該試験動物における該タンパク質の活性を比較する工程であって、ここで、該コントロール動物と比較した場合の該第１の試験動物における該ポリペプチドの活性における変化が、該試験化合物がＮＯＶＸ関連疾患の潜伏のモジュレータまたはＮＯＶＸ関連疾患の素因を示す、工程
を包含する、方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であって、ここで、前記試験動物が組換え試験動物であり、該組換え試験動物は試験タンパク質導入遺伝子を発現するか、野生型試験動物と比較して増大したレベルでプロモーターの制御下において該導入遺伝子を発現し、そして、ここで該プロモーターが、該導入遺伝子のネイティブな遺伝子プロモーターではない、方法。
【請求項３８】
第１の哺乳動物被験体において請求項１に記載のポリペプチドの変化したレベルと関連する、疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプルにおいて該ポリペプチドの発現レベルを測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該ポリペプチドの量を、該疾患を有さないことが既知であるか、または該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該ポリペプチドの量と、比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体における該ポリペプチドの発現レベルにおける変化が、疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項３９】
第１の哺乳動物被験体における請求項５に記載の核酸分子の変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中において該核酸の量を測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該核酸の量を、該疾患を有さないことが既知であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該核酸の量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の、該第１の被験体における該核酸のレベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項４０】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、ポリペプチドを、該病理学的状態を緩和するに十分な量で該哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および/または５２のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、ポリペプチドまたはそれらの生物学的に活性なフラグメントと、少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドである、方法。
【請求項４１】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、請求項１５に記載の抗体を、該病理学的状態を緩和するのに十分な量で該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ポリヌクレオチドおよびこのようなポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、ならびにこれらのポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体および組換え方法、ならびにこれらを使用するための方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、概して、核酸およびそれにコードされるポリペプチドに関する。さらに具体的には、本発明は、細胞質ポリペプチド、核ポリペプチド、膜結合ポリペプチドおよび分泌型ポリペプチドをコードする核酸、ならびにこれらの核酸およびポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法に関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、一部、新規のポリペプチドをコードする核酸配列の発見に基づく。この新規の核酸およびポリペプチドを、本明細書において、ＮＯＶＸ、すなわちＮＯＶ１、ＮＯＶ２、ＮＯＶ３、ＮＯＶ４、ＮＯＶ５、ＮＯＶ６、ＮＯＶ７、ＮＯＶ８、ＮＯＶ９、ＮＯＶ１０、ＮＯＶ１１、ＮＯＶ１２、ＮＯＶ１３、ＮＯＶ１４、ＮＯＶ１５、ＮＯＶ１６、ＮＯＶ１７、ＮＯＶ１８、ＮＯＶ１９およびＮＯＶ２０の核酸およびポリペプチドという。これらの核酸およびポリペプチド、ならびにその改変体、誘導体、ホモログ、アナログ、およびフラグメントを、本明細書において以降は、総称して「ＮＯＶＸ」核酸配列または「ＮＯＶＸ」ポリペプチド配列と称する。
【０００４】
１つの局面において、本発明は、ＮＯＶＸポリペプチドをコードする単離されたＮＯＶＸ核酸分子を提供し、これは、配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ）１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１に開示される核酸に対して同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、このＮＯＶＸ核酸分子は、ＮＯＶＸ核酸配列のタンパク質コード配列を含む核酸分子に相補的な核酸配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。本発明はまた、ＮＯＶＸポリペプチド、あるいはそのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体をコードする、単離された核酸を含む。例えば、この核酸は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、および５２のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードし得る。この核酸は、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１のいずれかの核酸配列を含む、ゲノムＤＮＡフラグメントまたはｃＤＮＡ分子であり得る。
【０００５】
オリゴヌクレオチド（例えば、ＮＯＶＸ核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１）の少なくとも６個連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドまたはそのオリゴヌクレオチドの相補体）もまた、本発明に含まれる。
【０００６】
実質的に精製されたＮＯＶＸポリペプチド（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および５２）もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において、このＮＯＶＸポリペプチドは、ヒトＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列に実質的に同一であるアミノ酸配列を含む。
【０００７】
本発明はまた、ＮＯＶＸポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体に免疫選択的に結合する抗体を特徴とする。
【０００８】
別の局面において、本発明は、治療有効量または予防有効量の治療剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を包含する。この治療剤は、例えば、ＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチド、またはＮＯＶＸポリペプチドに特異的な抗体であり得る。さらなる局面において、本発明は、１以上の容器中に、この薬学的組成物の治療有効量または予防有効量を含む。
【０００９】
さらなる局面において、本発明は、ポリペプチドを産生する方法を包含し、この方法は、ＮＯＶＸ核酸を含む細胞を、このＤＮＡによってコードされるＮＯＶＸポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養することによる。所望の場合、次いで、このＮＯＶＸポリペプチドを回収し得る。
【００１０】
別の局面において、本発明は、サンプル中のＮＯＶＸポリペプチドの存在を検出する方法を包含する。この方法において、サンプルを、このポリペプチドに選択的に結合する化合物と、このポリペプチドとこの化合物との間での複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。この複合体は、存在するならば、検出され、それによって、このサンプル中のＮＯＶＸポリペプチドを同定する。
【００１１】
本発明はまた、ＮＯＶＸの発現に基づいて特定の細胞型または組織型を同定するための方法を包含する。
【００１２】
サンプル中のＮＯＶＸ核酸分子の存在を検出する方法もまた本発明に包含され、この方法は、このサンプルに、ＮＯＶＸ核酸プローブまたはプライマーを接触させ、そしてこの核酸プローブまたはプライマーが、このサンプル中のＮＯＶＸ核酸分子に結合したか否かを検出することによる。
【００１３】
さらなる局面において、本発明は、ＮＯＶＸポリペプチドの活性を調節するための方法を提供し、この方法は、このＮＯＶＸポリペプチドを含む細胞サンプルに、このポリペプチドの活性を調節するに十分な量のこのＮＯＶＸポリペプチドに結合する化合物を接触させることによる。この化合物は、例えば、本明細書中にさらに記載されるような、低分子（例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質または他の有機（炭素含有）分子または無機分子）であり得る。
【００１４】
障害または症候群（本明細書中の個々のＮＯＶＸヌクレオチドおよびＮＯＶＸポリペプチドについて記載された障害もしくは症候群、および／またはこのような他の病理状態および障害を含む）を処置または予防するための医薬の製造における治療剤の使用はまた、本発明の範囲内に包含される。
【００１５】
治療剤は、例えば、ＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチド、またはＮＯＶＸ特異的抗体、あるいはそれらの生物学的に活性な誘導体またはフラグメントであり得る。例えば、本発明の組成物は、上に開示される疾患および障害ならびに／またはこのような他の病理状態および障害に罹患する患者の処置のために効力を有する。このポリペプチドは、本発明に特異的な抗体を産生するための免疫原として、およびワクチンとして使用され得る。これらはまた、潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングするために使用され得る。例えば、ＮＯＶＸをコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＮＯＶＸは、それを必要とする被験体に投与された場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、上に開示される疾患および障害ならびに／またはこのような他の病理状態および障害に罹患する患者の処置に対する効力を有する。
【００１６】
本発明はさらに、例えば、上で開示した疾患および障害ならびに／またはこのような他の病理状態および障害を含む、障害または症候群のモジュレーター（調節因子）についてスクリーニングするための方法を包含する。この方法は、試験化合物をＮＯＶＸポリペプチドと接触させる工程、およびこの試験化合物が上記ＮＯＶＸポリペプチドに結合したか否かを決定する工程を包含する。ＮＯＶＸポペプチドペプチドに対するこの試験化合物の結合によって、この試験化合物が、活性のモジュレーター、あるいは上述の障害または症候群の潜伏または素因のモジュレーターであることが示される。
【００１７】
また、本発明の範囲には、前述の障害または症候群についての危険性の増大した試験動物に対して、試験化合物を投与することによって、活性のモジュレーター、あるいは上で開示した疾患および障害ならびに／またはこのような他の病理状態および障害を含む、障害もしくは症候群の潜伏もしくは素因のモジュレーターについてスクリーニングする方法が含まれる。試験動物は、ＮＯＶＸ核酸によってコードされる組換えポリペプチドを発現する。次いで、ＮＯＶＸポリペプチドの発現または活性を、この試験動物において測定し、同様に、コントロール動物（これは、ＮＯＶＸポリペプチドを組換え的に発現し、かつ上記の障害についての危険性も上記の症候群についての危険性も増大していない）におけるこのタンパク質の発現または活性を測定する。次いで、試験動物およびコントロール動物の両方におけるＮＯＶＸポリペプチドの発現を比較する。コントロール動物と比較した、試験動物におけるＮＯＶＸポリペプチドの活性の変化は、この試験化合物が、上記の障害または症候群の潜伏のモジュレーターであることを示す。
【００１８】
なお別の局面では、本発明は、被験体（例えば、ヒト被験体）におけるＮＯＶＸポリペプチド、ＮＯＶＸ核酸またはその両方のレベルの変化に関連した疾患の存在または素因を決定する方法を含む。この方法は、この被験体由来の試験サンプル中のＮＯＶＸポリペプチドの量を測定する工程、およびコントロールサンプル中に存在するＮＯＶＸポリペプチドの量に対して、この試験サンプル中におけるこのポリペプチドの量を比較する工程、を包含する。コントロールサンプルと比較した場合の試験サンプルにおけるＮＯＶＸポリペプチドレベルの変化は、この被験体における疾患の存在または素因を示す。好ましくは、この素因としては、例えば、上で開示された疾患および障害ならびに／または他のこのような病理状態および障害の素因が挙げられる。また、本発明の新規なポリペプチドの発現レベルは、種々の癌についてスクリーニングするための方法および癌の病期を決定するための方法において使用され得る。
【００１９】
さらなる局面では、本発明は、病理学的状態を緩和または予防するに十分な量で、被験体（例えば、ヒト被験体）にＮＯＶＸポリペプチド、ＮＯＶＸ核酸、またはＮＯＶＸ特異的抗体を投与することにより、哺乳動物における障害に関連した病理学的状態を処置または予防する方法を包含する。好ましい実施形態では、この障害としては、例えば、上で開示された疾患および障害ならびに／または他のこのような病理状態および障害が挙げられる。
【００２０】
なお別の局面において、本発明は、当該分野において一般的に使用される多数の技術のうちのいずれか１つによって、本発明の細胞性レセプターおよび下流のエフェクターを同定する方法において使用され得る。これらの技術としては、ツーハイブリッドシステム、アフィニティ精製、抗体または他の特異的相互作用分子を用いる共沈が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
他に規定されない限り、本明細書中において使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載された方法および材料と類似または等価な方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書中で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献が、それらの全体において、参考として援用される。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法および実施例は、例示にすぎず、限定されることは意図されない。
【００２２】
本発明の他の特徴および利点が、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【００２３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、新規なヌクレオチドおよびそれによってコードされるポリペプチドを提供する。新規な核酸配列およびそれらのポリペプチドが本発明に含まれる。それらの配列は、集合的に「ＮＯＶＸ核酸」または「ＮＯＶＸポリヌクレオチド」と呼ばれ、そして対応するコードされるポリペプチドは、「ＮＯＶＸポリペプチド」または「ＮＯＶＸタンパク質」と呼ばれる。他に示されない場合、「ＮＯＶＸ」は、本明細書中に開示された新規な配列のいずれかをいうことを意味する。表Ａは、ＮＯＶＸ核酸およびそれらがコードするポリペプチドの要約を提供する。
【００２４】
【表Ａ】
2004534518.tif 000002
ＮＯＶＸ核酸およびそれらがコードするポリペプチドは、種々の適用および状況において有用である。本発明に従う種々のＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドは、以前に記載されたタンパク質に対するドメインおよび配列の関連性の存在に従って、タンパク質ファミリーの新規なメンバーとして有用である。さらに、ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドはまた、ＮＯＶＸポリペプチドが属するファミリーのメンバーであるタンパク質を同定するために使用され得る。
【００２５】
ＮＯＶＸ遺伝子およびそれらの対応するコードされたタンパク質は、例えば、タンパク質治療または遺伝子治療によって医学的状態を予防するため、処置するため、または改善するために有用である。病理状態は、サンプルにおけるこれらの新規タンパク質の量を決定すること、または新規遺伝子における変異の存在を決定することによって診断され得る。１６個遺伝子の各々について、これらが最も高度に発現される組織に基づいた、特定の使用法が、記載される。使用は、種々の疾患および障害の診断または処置のための製品を開発する工程を包含する。
【００２６】
ＮＯＶＸ核酸およびポリペプチドはまた、分子（これは、ＮＯＶＸの活性または機能を阻害または増強する）についてスクリーニングするために用いられ得る。特に、本発明に従う核酸およびポリペプチドは、例えば、神経発生、細胞分化、細胞増殖、造血、創傷治癒および血管形成を調節または阻害する低分子の同定のための標的として用いられ得る。
【００２７】
本発明の１つの実施形態において、ＮＯＶＸまたはそのフラグメントもしくは誘導体は、ＮＯＶＸの発現または活性の減少に関連する障害の処置または予防のために被験体に投与され得る。このような障害の例として、これらに限定しないが、癌（例えば、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌、および特に副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、胸部、頸部、胆嚢、神経節、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、および子宮の癌）；神経学的障害（例えば、てんかん、虚血性脳血管疾患、発作、大脳新生物、アルツハイマー病、ピック病、ハンティングトン病、痴呆、パーキンソン病および他の錐体外路系障害、筋萎縮性側索硬化症および他の運動ニューロン障害、進行性神経性筋萎縮症、網膜色素変性、遺伝性運動失調、多発性硬化症および他の脱髄疾患、細菌性およびウイルス性髄膜炎、脳の膿瘍、硬膜下蓄膿、硬膜外膿瘍、化膿性頭蓋内血栓性静脈炎、脊髄炎および神経根炎、ウイルス性中枢神経系疾患、クールー、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群を含むプリオン病、致死性家族性不眠症、神経系の栄養疾患および代謝疾患、神経線維腫症、結節硬化症、小脳網膜（ｃｅｒｅｂｅｌｌｏｒｅｔｉｎａｌ）血管芽細胞腫、脳三叉神経症候群、精神遅滞および他の中枢神経系の発達障害、脳性小児麻痺、神経骨格（ｎｅｕｒｏｓｋｅｌｅｔａｌ）障害、自律神経系障害、脳神経障害、脊髄疾患、筋ジストロフィーおよび他の神経筋疾患、末梢神経系障害、皮膚筋炎および多発性筋炎、遺伝した、代謝の、内分泌の、中毒性のミオパシー、重症筋無力症、周期性四肢麻痺、気分、不安、および分裂病性障害を含む精神障害、静座不能、健忘症、緊張性昏迷、糖尿病性ニューロパシー、遅発性ジスキネジー、失調症、妄想性精神病（ｐａｒａｎｏｉｄ  ｐｓｙｃｈｏｓｅｓ）、ヘルペス後神経痛、およびツレット病）；ならびに小胞輸送の障害（例えば、嚢胞性線維症）、グルコース−ガラクトース吸収不良症候群、高コレステロール血症、糖尿病、尿崩症、高血糖症および低血糖症、グレーブス病、甲状腺腫、クッシング病、アジソン病、胃腸の障害（潰瘍性大腸炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を含む）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を含む小胞輸送の異常に関連する他の状態、アレルギー反応、自己免疫性溶血性貧血、増殖性糸球体腎炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、慢性関節リウマチ、変形性関節症、強皮症、チェディアック−東症候群、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、トキシックショック症候群、外傷性組織損傷、およびウイルス性、細菌性、真菌性、寄生虫性、および原生生物の感染、が挙げられ、そして、さらなる適応症が、個々のＮＯＶＸクローンについて列挙される。
【００２８】
本発明のＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、そして研究ツールとして有用である。これらには、特異的もしくは選択的な、核酸診断マーカーおよび／もしくは核酸予後マーカーまたはタンパク質診断マーカーおよび／もしくはタンパク質予後マーカーとして役立つものが挙げられ、ここでその核酸もしくはそのタンパク質の存在、またはその核酸もしくはそのタンパク質の量が評価される。これらには、以下のような潜在的な治療適用がまた挙げられる：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標的化抗体／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する薬剤、ならびに（ｖｉ）生物学的防御兵器。
【００２９】
本発明に従う、ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドについてのさらなる有用性が、本明細書中に開示される。
【００３０】
（ＮＯＶ１）
新規プロセシングα−１，２−マンノシダーゼ−様タンパク質をコードする２３３１ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ１核酸（配列番号１）（ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａとも呼ばれる）を、表１Ａに示す。ヌクレオチド７１〜７３のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド２２７８〜２２８０のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流に見出される推定非翻訳領域を、下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、表１Ａにおいて太字で示す。
【００３１】
【表１Ａ】
2004534518.tif 000003
2004534518.tif 000004
本発明のＮＯＶ１配列は、本発明のＤＮＡ配列の全長および／または一部にわたるｃＤＮＡフラグメントの研究室クローニングにより誘導され、そして／または公のヒト配列データベースに由来する本発明のＤＮＡ配列の全長および／または一部のインシリコ予測により誘導された。
【００３２】
配列番号１によってコードされる開示されたＮＯＶ１ポリペプチド（配列番号２）は、７１１アミノ酸残基を有し、１文字アミノ酸コードを使用して表１Ｂに表される。ＮＯＶ１は、−９．６６のＩＮＴＥＧＲＡＬ可能性を有し、ＮＯＶ１は膜貫通タンパク質であり、そしてＩＩ型（Ｎｃｙｔ  Ｃｅｘｏ）膜タンパク質のようである。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１が、シグナルペプチドを有し、そして０．７９００の確実性でおそらく細胞膜に局在するであろうことを予測する。他の実施形態において、ＮＯＶ１はまた、０．３０００の確実性でゴルジ体に、または０．３０００の確実性で核に、または０．２０００の確実性で小胞体（膜）に局在されているかもしれない。ＮＯＶ１ペプチドの最も可能性のある切断部位は、アミノ酸５２と５３との間（すなわち、アミノ酸ＣＦＧ−ＡＦの間のダッシュ）である。ＮＯＶ１は、７８４５０．２７ダルトンの分子量を持つ。
【００３３】
【表１Ｂ】
2004534518.tif 000005
2004534518.tif 000006
第３染色体上のＮＯＶ１  ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａゲノムクローンは、ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能にされたか、またはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇセンターから得られたｇｅｎｏｍｉｃ  ｄａｉｌｙ  ｆｉｌｅｓに対して、プロセシングα−１，２−マンノシダーゼおよび／またはプロセシングα−１，２−マンノシダーゼファミリーのメンバーについての、独自の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）配列ファイルを使用するＴＢＬＡＳＴＮによって同定された。これらのゲノムクローンを、推定上のエキソンすなわち推定上のコード配列である領域を同定するためのＧｅｎｓｃａｎおよびＧｒａｉｌならびに他のプログラムによって分析した。これらのクローンをまた、ＤＮＡ類似性を有するか、または目的の本来のタンパク質またはタンパク質ファミリーに対する類似性を有するタンパク質に翻訳されるゲノム領域を同定するために、ＢＡＬＳＴＮ、ＴＢＬＡＳＴＮ、ＴＦＡＳＴＮ、ＴＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸおよび／または他のプログラムによって分析した。
【００３４】
次いで、全てのアプローチによって規定された領域を、本明細書中に報告される最終的なヌクレオチド配列を得るために、手動で統合し、そして明らかな不一致（このような不一致は、例えば、推測されるエキソンの連結部と類似するタンパク質に対する予測される相同性領域との間の矛盾から生じ得る）について手動で補正した。必要な場合、ゲノムクローンを同定しそして分析するためのこのプロセスは、全長配列を得るために繰り返し行われた。従って、以下の供給源に由来する配列が、本発明中に含まれる：ＮＯＶ１  ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａ。こうして得られた、新規プロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様遺伝子またはそのスプライス形態の１つについてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列は、本明細書中にＣｕｒａＧｅｎ登録番号ＮＯＶ１  ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａとして報告される。
【００３５】
本明細書における全てのＢＬＡＳＴアライメントにおいて、「Ｅ値（Ｅ−ｖａｌｕｅ）」または「期待（Ｅｘｐｅｃｔ）」値とは、その整列された配列が、検索したデータベース内で、単なる偶然によって、ＢＬＡＳＴ問い合わせ配列に対してその類似性を達成し得た確率（可能性）の数的な指標である。期待値（Ｅｘｐｅｃｔ  ｖａｌｕｅ）（Ｅ）は、特定のサイズのデータベースを検索する場合に、全く偶然に見出すことを「期待」し得る、ヒット数を示すパラメーターである。これは、２つの配列の間のマッチに割り当てられるスコア（Ｓｃｏｒｅ）（Ｓ）に伴い、指数関数的に減少する。本質的に、このＥ値は、配列の間のマッチについて存在するランダムなバックグラウンドノイズを示す。
【００３６】
期待値（Ｅｘｐｅｃｔ  ｖａｌｕｅ）は、結果を報告するための有意な閾値を作成するための都合のよい手段として使用される。ＢＬＡＳＴを行うために使用されるデフォルト値は、代表的には、０．０００１に設定され、無用な複雑さの少ない配列を除去するためにフィルタを伴う。ＢＬＡＳＴ２．０において、この期待値をまた、Ｐ値（確率）の代わりに用いて、マッチの有意性を報告する。例えば、１ヒットに割り当てられる１であるＥ値は、現在のサイズのデータベースにおいて、類似のスコアを有する１つのマッチを単なる偶然によって見出すことを期待し得ることを意味すると解釈され得る。ゼロであるＥ値は、類似のスコアを有するいかなるマッチも単なる偶然では見出すことが期待されないことを意味する。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ＢＬＡＳＴｉｎｆｏ／を参照のこと。
【００３７】
ＢＬＡＳＴ分析は、特許または特許公報において公開された配列を含む独自のデータベースである、Ｐａｔｐデータベースに由来する配列について実行された。Ｐａｔｐの結果は、表１Ｃ中に列挙された中に挙げられる。
【００３８】
【表１Ｃ】
2004534518.tif 000007
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列は、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ０２７１５６｜ａｃｃ：ＡＦ０２７１５６  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来ｍＲＮＡ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  α  １，２−マンノシダーゼＩＢ  ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に８８５塩基中８８１塩基（９９％）同一であることが見出された。本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の６４１アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ：Ｏ６０４７６タンパク質（α−１，２−マンノシダーゼＩＢ）に、２９３アミノ酸残基中２９１残基（９９％）同一であり、２９３アミノ酸残基中２９２アミノ酸残基（９９％）類似であることが見出された。
【００３９】
公の配列データベースについてのさらなる検索は、ＮＯＶ１が、表１Ｄ中に列挙されるＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対して相同性を有することを見出した。クローンＡＫ０２３３０８（Ａｃｃ．Ｎｏ．ｇｉ｜１０４３５１８７）は、全長ＮＯＶ１ポリペプチドの７１１アミノ酸中６１８アミノ酸にわたり１００％の相同性を有することが示された。
【００４０】
【表１Ｄ】
2004534518.tif 000008
2004534518.tif 000009
これらの配列と他の配列との間の相同性は、表１Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析に図示される。ＮＯＶ１タンパク質のＣｌｕｓｔａｌＷアライメント、ならびに本明細書中の全ての他のＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、黒地に白抜きで示されるアミノ酸残基は、保存配列の領域（すなわち、構造的特性または機能的特性を保存するために必要とされ得る領域）を示し、強調していないアミノ酸残基は、それほど保存されておらず、そして潜在的に、タンパク質の構造または機能を変化することなく、非常に広範な程度まで変異され得る。ＮＯＶ１ポリペプチドが、レーン１に提供される。
【００４１】
【表１Ｅ】
2004534518.tif 000010
2004534518.tif 000011
2004534518.tif 000012
ＮＯＶ１ならびに他の全てのＮＯＶＸタンパク質における同定可能なドメインの存在は、ソフトウェアアルゴリズム（例えば、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＤＯＭＡＩＮ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、およびＰｒｉｎｔｓ）を用いる検索により決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏ数を、Ｉｎｔｅｒｐｒｏウエブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ）を使用するドメインマッチ（または数）をクロスすることによって決定した。表１Ｆに開示されるようなＮＯＶ１についてのＤＯＭＡＩＮ結果を、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＢＬＡＳＴ分析を用いて、Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴ分析ソフトウェアは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍコレクションに見出されるドメインをサンプリングする。
【００４２】
ＮＯＶ１タンパク質は、示されたヌクレオチド位置に、以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義される）を含む：アミノ酸位置６９〜４４４にドメイン名Ｇｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿４７（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）グリコシル加水分解酵素ドメイン（ＩＰＲ００１３８２）、ドメイン名。これは、本発明の配列が、これらのドメインを有することが知られている他のタンパク質と類似し、そしてこれらのドメインの性質と類似性質を有することを示す。
【００４３】
表１Ｆは、ＮＯＶ１に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメイン表示を列挙する。この表は、ＮＯＶ１配列が、これらドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似する特性を有することを示す。本明細書中の配列アライメントにおいて、完全に保存された単一の残基は、相同性の百分率を決定するために計算され、そして保存された「強い」半保存残基は、ポジティブの百分率を決定するために計算される。この保存アミノ酸残基の「強い」グループは、以下のアミノ酸のグループのいずれか１つであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ。
【００４４】
【表１Ｆ】
2004534518.tif 000013
プロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１核酸は、表１Ａに提供される核酸配列、またはそのフラグメントを包含する。本発明はまた、任意の塩基が、表１Ａに示される対応する塩基から変化され得るが、そのプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体核酸または改変体核酸、あるいはそのような核酸のフラグメントを包含する。本発明はさらに、その記載される配列に相補的である配列の核酸（その記載される核酸のいずれかに相補的である、核酸フラグメントを含む）を包含する。本発明はさらに、その構造が化学修飾を含む、核酸または核酸フラグメント、あるいはその相補体を包含する。このような修飾としては、非限定的な例として、修飾塩基、およびその糖リン酸骨格が修飾または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの修飾は、その修飾された核酸の化学安定性を増強するために、少なくとも部分的に行われ、その結果、これらは、例えば、被験体中の治療適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸または改変体核酸、ならびにそれらの相補体において、これらの塩基の約１％までが、このように変化され得る。
【００４５】
改変体配列もまた、本出願に含まれる。改変体配列は、単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を含み得る。ＳＮＰは、いくつかの例においては、ＳＮＰを含有するヌクレオチド配列がｃＤＮＡとして生じることを示すために、「ｃＳＮＰ」とよばれる。ＳＮＰは、いくつかの方法で生じ得る。例えば、ＳＮＰは、多型性部位で別のヌクレオチドへの１つのヌクレオチドの置換に起因し得る。このような置換は、トランジションまたはトランスバージョンのいずれかであり得る。ＳＮＰはまた、参照対立遺伝子と比較して、ヌクレオチドの欠失またはヌクレオチドの挿入によっても生じ得る。この場合には、多型の部位は、１つの対立遺伝子が、別の対立遺伝子中の特定のヌクレオチドに関してギャップを保有している部位である。遺伝子中に存在しているＳＮＰは、ＳＮＰの位置で遺伝子によってコードされるアミノ酸の変化を生じ得る。しかし、ＳＮＰを含むコドンが遺伝子コードの縮重の結果として同じアミノ酸をコードする場合には、遺伝子内ＳＮＰはまた、サイレントであり得る。遺伝子の領域の外側に存在している、または遺伝子内のイントロンに存在しているＳＮＰは、タンパク質のアミノ酸配列には全く変化を生じないが、発現パターンの調節の変更を生じ得、例としては、一過性発現、生理学的応答の調節、細胞型による発現調節、発現の強度および転写されたメッセージの安定性における変更が挙げられる。
【００４６】
本発明の開示されたＮＯＶ１タンパク質は、表１Ｂに提供される配列のプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質を包含する。本発明はまた、その残基のいずれかが、表１Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、そのプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体タンパク質または改変体タンパク質、あるいはそれらの機能的フラグメントを包含する。これらの変異体タンパク質または改変体タンパク質において、それらの残基の約１％までが、そのように変化され得る。
【００４７】
本発明はさらに、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を包含する。さらに、バクテリオファージ粒子のような任意のキャリア粒子（またはキャリアの表面上で生物学的に発現される）と融合されるペプチドおよびポリペプチドを含む、本発明のタンパク質のいずれかに対し高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドも、本発明の範囲に包含される。
【００４８】
マンノシダーゼは、タンパク質に連結された糖の存在およびコンカナバリンＡ−セファロースに対する酵素の特異的な結合に基づく、糖タンパク質である。精製されたマンノシダーゼは、最適にはｐＨ５．０〜ｐＨ６．０の間で活性であった。この酵素は、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マンノピラノシドにより不活性であり、そしてデオキシマンノジリマイシンによって阻害されたが、スワインソニンによっては阻害されなかった。この酵素は、１０μＭ以下の濃度で生じる半最大活性（ｈａｌｆ−ｍａｘｉｍａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を有するＣａ２＋によって、特異的に活性化され、そしてＭｎ２＋、Ｃｏ２＋、Ｂａ２＋、およびＺｎ２＋によって阻害された。カルシウムイオンは、ｐ−クロロメルクリベンゾエート（ｃｈｌｏｒｏｍｅｒｃｕｒｉｂｅｎｚｏａｔｅ）による不活性化に対して酵素を保護した。種々の基質におけるウサギ肝臓マンノシダーゼ加水分解型（ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ）α−１，２−マンノシル−マンノースの関連として、メチル−２−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシル−α−Ｄ−マンノピラノシド（Ｓｃｈｕｔｚｂａｃｈ，Ｊ．Ｓ．（１９８７）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６７，２７９−２８３）、オボアルブミン糖ペプチドＩＶ、ならびに高マンノース鎖サイログロブリンおよびフィトヘマグルチニン−Ｐが挙げられる。
【００４９】
ナチュラルキラー細胞は、標的細胞の糖タンパク質に基づいて溶解するための標的を選択する。コントロールと比較して、ゴルジマンノシダーゼＩのインヒビターであるキフネンシンで処理されたＫ−５６２細胞は、より高いマンノース型アスパラギン連結したオリゴ糖であるＭａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２を蓄積し、そしてオリゴマンノシル結合レクチンであるコンカナバリンＡをより多く結合する。さらに、ナチュラルキラー細胞は、キフネンシン処理された細胞の溶解を、コントロールよりも３４％増加した。溶解に対する増加された感度は、高マンノース型グリコシド（デオキシマンノジリマイシンおよびスワインソニン）の蓄積を促進する、他のＮ−グリカンプロセシングインヒビターによる処理の後に生じた。さらに、キフネンシン処理された細胞は、さらなるエフェクター：標的結合体を形成する。接着分子ＬＦＡ−１およびそのリガンドであるＩＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体は、コントロール標的の溶解を減縮するが、キフネンシン処理された細胞の溶解の遮断についての効果はより少なかった。Ｋ−５６２細胞は、抗ＩＣＡＭ−１に結合するが、抗ＬＦＡ−１には結合せず、そしてこの結合は、キフネンシン処理の後でも変わらない。これらのデータは、結果として、ヒトナチュラルキラー細胞中のアスパラギン連結型オリゴ糖：標的相互作用についての役割を実証する。Ｋ−５６２細胞上の高マンノース型グリカンの存在は、増加したエフェクターの結合および溶解に対するより強い感受性と一致する。これらの結果は、標的細胞のＮ−グリコシダーゼが、ＩＣＡＭ−１  ＰＭＩＤ：８０９３２４４、ＵＩ：９３１０７０３２のような接着分子により媒介されるＮＫ−標的相互作用に影響を与えるという考えを支持する。ＭａｎＩおよびＭａｎＩＩは、分泌顆粒内およびいくつかの細胞型（腸細胞、膵臓腺房細胞、杯細胞）の細胞表面において検出された。
【００５０】
本明細書中に開示されたプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質および核酸についてのタンパク質の類似性情報、発現パターン、ならびにマップ位置は、プロセシングα−１，２−マンノシダーゼが、プロセシングα−１，２−マンノシダーゼファミリーの特徴である重要な構造および／または生理学的な機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用において、そして治療適用および研究ツールとして有用である。これらは、特異的もしくは選択的な、核酸診断マーカーおよび／もしくは核酸予後マーカーまたはタンパク質診断マーカーおよび／もしくはタンパク質予後マーカーとして役立ち、ここでその核酸もしくはそのタンパク質の存在、またはその核酸もしくはそのタンパク質の量が評価され、そして、以下のような潜在的な治療適用が挙げられる：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標的抗体／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する組成物、ならびに（ｖｉ）生物防御兵器。
【００５１】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害および／または他の病理状態に関する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、炎症およびＡＩＤＳのような感染症の免疫治療、癌の治療、神経学的の疾患の処置、脳脊髄炎のような脳および／または自己免疫障害、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、内分泌障害、筋障害、炎症および創傷の修復、細菌、真菌、原生生物およびウイルスの感染（特にＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２による感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、残尿、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性の前立腺肥大、ならびに不安、精神分裂病、躁鬱病（ｍａｎｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む精神病性および神経学的障害、および／または他の病理状態および障害の患者の処置のために効力を有する。
【００５２】
上記に記載されるように、ＮＯＶ１は、プロセシングα−１，２−マンノシダーゼファミリータンパク質との広範な配列相同性を有する。この構造的類似性は、ＮＯＶ１がプロセシングα−１，２−マンノシダーゼファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書中で同定されたＮＯＶ１核酸およびＮＯＶ１タンパク質は、本明細書中に示された種々の病理状態および障害（しかし限定されない）に関する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、プロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質  ＮＯＶ１をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質  ＮＯＶ１は、それを必要とする被験体に投与される場合に、有用であり得る。本発明のプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質をコードするＮＯＶ１核酸、およびプロセシングα−１，２−マンノシダーゼ様タンパク質またはそれらのフラグメントは、診断適用においてさらに有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。さらなる疾患の適応症およびＮＯＶ１およびＮＯＶ１改変体についての組織発現が、利用できる場合、実施例に記載される。
【００５３】
本発明において開示されるプロセシングα−１，２−マンノシダーゼは、少なくとも以下の組織で発現される：副腎（Ａｄｒｅｎａｌ  Ｇｌａｎｄ）／腎上体（Ｓｕｐｒａｒｅｎａｌ  ｇｌａｎｄ）、骨髄、脳、冠状動脈、包皮、心臓、腎臓、肝臓、肺、リンパ組織、乳腺／胸部、卵巣、胎盤、前立腺、網膜、唾液腺、甲状腺、扁桃、子宮、生体全体。この情報は、本発明中に含まれる配列を有する組織の供給源の決定により得られ、独自のＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源を含む：副腎／腎上体、骨髄、脳、冠状動脈、包皮、心臓、腎臓、肝臓、肺、リンパ組織、乳腺／胸部、卵巣、胎盤、前立腺、網膜、唾液腺、甲状腺、扁桃、子宮、生体全体；および公のＰｕｂｌｉｃＥＳＴ供給源：メラノサイト、結腸の腫瘍、脳、膵臓ランゲルハンス島、神経系。
【００５４】
さらに、この配列は、密接に関連する（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：Ｇｅｎｂａｎｋ−ＩＦ：ＡＦ０２７１５６｜ａｃｃ：ＡＦ０２７１５６）｛Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓα  １，２−マンノシダーゼＩＢ  ｍＲＮＡ、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ種における完全ｃｄｓホモログに起因して、以下の組織において発現されることが予測される：副腎／腎上体、骨髄、脳、冠状動脈、包皮、心臓、腎臓、肝臓、肺、リンパ組織、乳腺／胸部、卵巣、胎盤、前立腺、網膜、唾液腺、甲状腺、扁桃、子宮、生体全体。
【００５５】
ＮＯＶ１が最も強く発現される組織に基づく、種々の疾患および障害の診断または処置のための製品開発を含む特定の使用が、それに関連する。正常組織および病気の組織におけるＮＯＶ１のさらなる特異的な発現が、実施例に示される。
【００５６】
ＮＯＶ１核酸およびＮＯＶ１ポリペプチドはさらに、治療方法または診断方法において使用するための新規ＮＯＶ１物質に免疫特異的に結合する抗体の生成において有用である。これらの抗体は、以下のセクション「抗ＮＯＶＸ抗体」に記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されるＮＯＶ１タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、これらの各々は、免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１エピトープは、およそアミノ酸１〜３５である。別の実施形態において、ＮＯＶ１エピトープは、およそアミノ酸５０〜８５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ１エピトープは、およそアミノ酸９５〜１２５、およそアミノ酸１７５〜２００、およそアミノ酸２１５〜３２５、およびおよそアミノ酸３３５〜７１１である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これらは、疾患の病理の理解および種々の障害についての新規薬物標的の開発を補助する。
【００５７】
（ＮＯＶ２）
新規イオントランスポーター様タンパク質をコードする２６９２ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ２核酸（配列番号３）（ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ｂともよばれる）を、表２Ａに示す。ヌクレオチド４１〜４３のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド２６６２〜２６６４のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流に見出される推定非翻訳領域を、下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、表２Ａに太字で示す。
【００５８】
【表２Ａ】
2004534518.tif 000014
配列番号３によってコードされる開示されるＮＯＶ２ポリペプチド（配列番号４）は、８６９アミノ酸残基を有し、表２Ｂに一文字アミノ酸コードを使用して表す。ＮＯＶ２は、おそらくＩＩＩａ型膜タンパク質（ｃｌｖ）のようである。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ２が、シグナルペプチドを有し、そして０．６４００の確実性でおそらく形質膜中に局在するであろうことを予測する。他の実施形態において、ＮＯＶ２はまた、０．４６００の確実性でゴルジ体に、０．３７００の確実性で小胞体（膜）に、または０．１０００の確実性で小胞体（管腔）に局在されているかもしれない。ＮＯＶ２ペプチドの最も可能性のある切断部位は、アミノ酸１９と２０との間、すなわちアミノ酸ＬＬＡ−ＡＳの間のダッシュの位置である。ＮＯＶ２は、９７９２９．７５ダルトンの分子量を有する。
【００５９】
【表２Ｂ】
2004534518.tif 000015
本発明の配列は、本発明のＤＮＡ配列の全長および／または一部にわたるｃＤＮＡフラグメントの研究室でのクローニングにより得られ、ならびに／あるいは公のヒト配列データベースに由来する本発明のＤＮＡ配列の全長および／または一部にわたるインシリコ予測により得られた。第３染色体上のゲノムクローンＮＯＶ２  ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ｂは、ＧｅｎＢａｎｋまたはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇセンターによって利用可能にされたｇｅｎｏｍｉｃ  ｄａｉｌｙ  ｆｉｌｅｓに対して、イオントランスポーターのメンバーおよび／またはイオントランスポーターファミリーについての独自の配列ファイルを使用するＴＢＬＡＳＴＮによって同定され、そしてＮＯＶ１について記載されるように処理された。この情報は、本発明中に含まれたＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、ゲノムクローン、および／またはＥＳＴ配列の染色体マッピングを得るためにＣｕｒａｔｏｏｌｓのＯＭＩＭおよび電気的ノーザンツールを使用して割り当てられた。
【００６０】
ＢＬＡＳＴ分析は、特許または特許公報において公開された配列を含む独自のデータベースである、Ｐａｔｐデータベースに由来する配列について実施された。Ｐａｔｐの結果は、表２Ｃ中に列挙された中に含まれる。
【００６１】
【表２Ｃ】
2004534518.tif 000016
2004534518.tif 000017
データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列は、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ１５１７９９｜ａｃｃ：ＡＦ１５１７９９のＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来ｍＲＮＡ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＣＧＩ−４０タンパク質  ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に２５４６塩基中１６９３塩基（６６％）同一であることが見出された。本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列は、８４５アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｙ３５７（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）由来タンパク質（ＣＧＩ−４０タンパク質））に、８０７アミノ酸残基中４６７残基（５７％）同一であり、８０７アミノ酸残基中５９５アミノ酸残基（７３％）類似であることが見出された。
【００６２】
公の配列データベースについてのさらなる検索は、ＮＯＶ２が、表２Ｄ中に列挙されるＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対して相同性を有することを見出した。
【００６３】
【表２Ｄ】
2004534518.tif 000018
これらの配列と他の配列との間の相同性は、表２Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析に図示される。ＮＯＶ２ポリペプチドが、レーン１に提供される。
【００６４】
【表２Ｅ】
2004534518.tif 000019
2004534518.tif 000020
2004534518.tif 000021
2004534518.tif 000022
2004534518.tif 000023
ＮＯＶ１〜ＮＯＶ２０についてのＣｌｕｓｔａｌＷ分析は、分析された全てのクローンに対して６０％の相同性値を設定し、濃淡をつけて描かれた。ＣｌｕｓｔａｌＷは、はじめの３レーンのみの配列、すなわち表２ＤのＢＬＡＳＴＰ分析に従って最も大きい相同性を示した２つクローンを有するＮＯＶ２を使用して再実行された。この反復アライメントを、表２Ｆに示す。
【００６５】
【表２Ｆ】
2004534518.tif 000024
2004534518.tif 000025
ＮＯＶ２タンパク質は、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏで規定される）以下のタンパク質のドメインを、示されたヌクレオチド位置に含む：アミノ酸位置４４１〜６６２の、ドメイン名、イオン輸送体タンパク質ドメイン（ＩＰＲ０００６３６）。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが公知である他のタンパク質の特徴と類似する特徴、およびこれらのドメインの特徴と類似する特徴を有することを示す。その他の公知のドメインは、ＤＯＭＡＩＮソフトウェア分析を使用しても、ＮＯＶ２について見出されなかった。
【００６６】
イオン輸送体様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ２核酸は、配列が表２Ａに提供される核酸を含むか、またはＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログの配列を含む、ＮＯＶ２核酸の改変体は、表２Ａに提供される。本発明はまた、任意の核酸の塩基が、表２Ａに示される対応する塩基から変えられ得るが、なおそのイオン輸送体様タンパク質の活性および生理学的機能を維持するようなタンパク質またはそのような核酸のフラグメントをコードする、変異体核酸または改変体核酸を含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載された配列と相補的な核酸を含み、これはちょうど記載された任意の核酸と相補的な核酸フラグメントを含む。さらに、本発明は、構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメント、またはその相補体を含む。非限定的な例として、そのような改変としては、改変塩基および、糖リン酸骨格が改変または誘導体化されている核酸が挙げられる。これらの改変は少なくとも一部、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実行され、そのようにして、例えば、これらは、被験体における治療的適用においてアンチセンスに結合する核酸として使用され得る。変異体核酸または改変体核酸、およびそれらの相補体において、約３４％までの塩基が、そのように変化され得る。
【００６７】
本発明の開示されたＮＯＶ２タンパク質は、配列が表２Ｂに提供されるイオン輸送体様タンパク質を含む。本発明はまた、任意の残基が、表２Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、イオン輸送体様タンパク質活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質またはその機能的フラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、約４３％までの残基が、そのように変化され得る。
【００６８】
本発明はさらに、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する、抗体および抗体フラグメントを含む。また、本発明の任意のタンパク質に対して、高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明の中に含まれ、バクテリオファージ粒子のような、任意のキャリア粒子に融合される（または、キャリアの表面上に生物学的に発現される）ようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【００６９】
本明細書中に開示されるイオン輸送体様タンパク質および核酸についてのタンパク質の類似情報、発現パターン、およびマップ位置は、このイオン輸送体が、イオン輸送体ファミリーに特徴的な、重要な構造および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断的適用および治療的適用ならびに研究ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質として、診断的マーカーおよび／または予後マーカー（ここでは、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される）、ならびに、以下のような潜在的な治療的適用：（ｉ）タンパク質治療法、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御兵器として役立つことを含む。
【００７０】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載の種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する、潜在的な診断適用および治療適用において、有用である。例えば、本発明の組成物は、例えば、炎症の免疫治療およびＡＩＤＳのような感染症、癌治療、神経系疾患の処置、脳脊髄炎のような脳障害および／もしくは自己免疫障害、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、内分泌疾患、筋障害、炎症修復および創傷修復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２によって引き起こる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗鬆症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨異栄養症の治療、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群のような）を含む精神病性障害および神経性障害、ならびに／または他の病理および障害のような患者の治療に対する効力を有する。
【００７１】
構造的類似性は、ＮＯＶ２が、イオン輸送体ファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定された、ＮＯＶ２核酸およびＮＯＶ２タンパク質は、本明細書中に示される種々の病理および障害（に限定されないが）に関与する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、イオン輸送体様タンパク質ＮＯＶ２をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、イオン輸送体様タンパク質ＮＯＶ２は、それを必要とする被験体に投与する場合、有用であり得る。イオン輸送体様タンパク質をコードするＮＯＶ２核酸、および本発明のイオン輸送体様タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに、診断的適用に有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。ＮＯＶ２およびＮＯＶ２改変体についてのさらなる疾患の適応症および組織発現は、利用可能なものについて、実施例に示される。
【００７２】
扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、脾臓、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）、子宮、全生体；ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ細胞型：脳  嗅覚  腎臓  膵臓  腫瘍  Ｂ細胞  胸部。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、得られた。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源：扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、脾臓、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）、子宮、全生体  公的なＥＳＴ供給源：脳  嗅覚  腎臓  膵臓  腫瘍  Ｂ細胞  胸部。さらに、配列は、以下の組織内に発現されると予想される。なぜなら（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ１５１７９９｜ａｃｃ：ＡＦ１５１７９９）の発現パターンが、｛Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓＣＧＩ−４０タンパク質ｍＲＮＡ、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ種の完全なｃｄｓホモログ：扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、脾臓、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）、子宮、全生物｝に密接に関連するからである。
【００７３】
ＮＯＶ２が最も高度に発現される組織に基づいて、特定の使用は、それらに関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発を含む。通常の組織および疾患の組織における、ＮＯＶ２のさらなる特異的発現は、実施例に示される。
【００７４】
ＮＯＶ２核酸およびＮＯＶ２ポリペプチドは、さらに、治療的方法または診断的方法における使用のための、新規のＮＯＶ２物質に免疫特異的に結合する抗体の産生に有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」セクションに記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って、生成され得る。開示されたＮＯＶ２タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されたＮＯＶ２エピトープは、アミノ酸約１〜２０由来である。別の実施形態において、ＮＯＶ２エピトープは、アミノ酸約２５〜９０由来である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ２エピトープは、アミノ酸約１１０〜１４５由来であり、アミノ酸約１５５〜２００由来であり、アミノ酸約２２５〜２６５由来であり、アミノ酸約２７５〜３０５由来であり、アミノ酸約３３５〜４８５由来であり、アミノ酸約５５５〜５７５由来であり、アミノ酸約６００〜６２０由来であり、アミノ酸約６３５〜６５５由来であり、アミノ酸約６８５〜７２０由来であり、アミノ酸約７９５〜８３５由来であり、アミノ酸約８６０〜８６９由来である。これらの新規のタンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析に関するアッセイ系において使用され得、これらは、疾患の病理の理解および種々の障害に関する新規の薬物標的の開発を補助する。
【００７５】
（ＮＯＶ３）
新規Ｒａｓ関連タンパク質様タンパク質をコードする、７１６ヌクレオチドの、開示されたＮＯＶ３核酸（配列番号５）は（ＧＳＡＣ０６８９９３＿Ａともいわれる）、表３Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４１〜４３のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド６５９〜６６１のＴＡＡコドンで終了することが同定された。推定非翻訳領域は、開始コドンから上流および終始コドンから下流に見出され、それらに下線を付す。開始コドンおよび終始コドンは、表３Ａに太文字で示される。
【００７６】
【表３Ａ】
2004534518.tif 000026
配列番号５によってコードされる、開示されたＮＯＶ３ポリペプチド（配列番号６）は、２０６アミノ酸残基を有し、１文字アミノ酸コードを使用して、表３Ｂに示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ３が、公知のシグナルペプチドを含まず、そして０．９７００の確実性で核に局在するであろうことを予測する。代替的な実施形態において、ＮＯＶ３は、０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス腔に局在するか、または０．１０００の確実性でリソソーム（内腔）に局在するか、または不明瞭な確実性（０．００００）で小胞体（膜）に局在する可能性がある。ＮＯＶ３は、２３４７５．６９ダルトンの分子量を有する。
【００７７】
【表３Ｂ】
2004534518.tif 000027
第１２染色体上の、ゲノムクローンＮＯＶ３  ＧＳＡＣ０６８９９３＿Ａは、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーに関する登録配列ファイルを使用して、ＴＢＬＡＳＴＮによって同定され、ＧｅｎＢａｎｋによって入手可能であるゲノムディリーファイル（ｇｅｎｏｍｉｃ  ｄａｉｌｙ  ｆｉｌｅ）またはヒトゲノムプロジェクト配列センターから得られるゲノムディリーファイルに対して行い、そしてさらに、ＮＯＶ１について記載されるように分析された。この情報は、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓからの電子ノーザンツールを使用して指定され、本発明に含まれるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、ゲノムクローン、および／またはＥＳＴ配列の染色体マッピングを導出した。
【００７８】
ＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列で実行された。これは、特許および特許公報において公表された配列を含む登録データベースである。Ｐａｔｐの結果は、表３Ｃに列挙される結果を含む。
【００７９】
【表３Ｃ】
2004534518.tif 000028
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列が、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＲＡＴＲＡＬＡ｜ａｃｃ：Ｌ１９６９８  ｍＲＮＡ（Ｒａｔ  ＧＴＰ結合タンパク質（ｒａｌＡ）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に、７１４塩基中６２６塩基（８７％）同一であることが見出された。本発明のタンパク質の完全なアミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ラット）、および（Ｒａｓ関連タンパク質ＲＡＬ−Ａ）由来の２０６アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ０５８１０タンパク質に、２０６アミノ酸中１８４アミノ酸残基（８９％）同一であり、２０６アミノ酸中１９６アミノ酸残基（９５％）類似であることが見出された。
【００８０】
公的配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ３は、表３Ｄに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【００８１】
【表３Ｄ】
2004534518.tif 000029
2004534518.tif 000030
これらおよび他の配列の相同性は、表３Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。ＮＯＶ３ポリペプチドは、レーン１に提供される。
【００８２】
【表３Ｅ】
2004534518.tif 000031
ＮＯＶ３中の同定可能なドメインの存在は、ＮＯＶ１に記載されるように決定された。さらにこのタンパク質は、示されたヌクレオチド位置に、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって規定される）以下のタンパク質のドメインを含む：アミノ酸位置２〜１７０のドメイン名ａｒｆドメイン、アミノ酸位置１６〜１９８のドメイン名ｒａｓドメイン、など。表３Ｆは、ＮＯＶ３に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの記述を列挙する。これは、ＮＯＶ３配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特徴と類似する特徴、およびこれらのドメインの特徴と類似する特徴を有することを示す。
【００８３】
【表３Ｆ】
2004534518.tif 000032
Ｒａｓ関連タンパク質様タンパク質をコードする、開示されたＮＯＶ３核酸は、配列が表３Ａに提供される核酸を含み、またはＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログの配列を含む、ＮＯＶ３核酸の改変体は、表３Ａに提供される。本発明はまた、任意の核酸の塩基が、表３Ａに示される対応する塩基から変えられ得るが、なおそのＲａｓ関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする、変異体核酸もしくは改変体核酸またはそのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載された配列と相補的な核酸を含み、ちょうど記載された任意の核酸と相補的な核酸フラグメントを含む。さらに、本発明は、構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメント、またはその相補体を含む。非限定的な例として、そのような改変は、改変された塩基および、糖リン酸骨格が改変または誘導体化されている核酸を含む。これらの改変は少なくとも一部、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実行され、そのようにして、例えば、これらは、被験体における治療的適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸または改変体核酸、およびそれらの相補体において、約１３％までの塩基が、そのように変化され得る。
【００８４】
本発明の開示されたＮＯＶ３タンパク質は、配列が表３Ｂに提供されるＲａｓ関連タンパク質様タンパク質を含む。本発明はまた、任意の残基が、表３Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、Ｒａｓ関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、またはその機能的フラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、約１１％までの残基が、そのように変化され得る。
【００８５】
本発明はさらに、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する、抗体および抗体フラグメントを含む。また、本発明の任意のタンパク質に対して、高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明の中に含まれ、バクテリオファージ粒子のような、任意のキャリア粒子に融合される（または、キャリアの表面上に生物学的に発現される）ようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【００８６】
本発明で開示されるＲａｓ関連タンパク質は、少なくとも以下の組織で発現される：結腸腫瘍、肝臓、脾臓、上皮上体腫瘍、卵巣および子宮、肺。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、得られた。公的ＥＳＴ供給源：結腸腫瘍、肝臓、脾臓、上皮上体腫瘍、卵巣および子宮、肺。さらに、配列は、以下の組織内に発現されると予想される。なぜなら（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＲＡＴＲＡＬＡ｜ａｃｃ：Ｌ１９６９８）の発現パターンが、｛ラットＧＴＰ結合タンパク質（ｒａｌＡ）ｍＲＮＡ、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｖｅｇｉｃｕｓ種における完全ｃｄｓホモログ：結腸腫瘍、肝臓、脾臓、上皮上体腫瘍、卵巣および子宮、肺｝に密接に関連するからである。
【００８７】
本明細書中に開示されるＲａｓ関連タンパク質様タンパク質および核酸についての、タンパク質の類似情報、発現パターン、およびマップ位置は、このＲａｓ関連タンパク質が、Ｒａｓ関連タンパク質ファミリーに特徴的な、重要な構造および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断的適用および治療的適用ならびに研究ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質として、診断的マーカーおよび／または予後マーカー（ここでは、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される）、ならびに、以下のような潜在的治療的適用：（ｉ）タンパク質治療法、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御兵器に役に立つことを含む。
【００８８】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載の種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する、潜在的な診断適用および治療適用において、有用である。例えば、本発明の組成物は、例えば、炎症の免疫治療およびＡＩＤＳのような感染症、癌治療、神経系疾患の処置、脳脊髄炎のような脳障害および／もしくは自己免疫障害、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、内分泌疾患、筋障害、炎症修復および創傷修復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２によって引き起こる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗鬆症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨異栄養症の治療、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群のような）を含む精神病性障害および神経性障害、ならびに／または他の病理および障害のような患者の処置に対する効力を有する。
【００８９】
構造的類似性は、ＮＯＶ３が、Ｒａｓ関連タンパク質ファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定された、ＮＯＶ３核酸およびＮＯＶ３タンパク質は、本明細書中に示される種々の病理および障害（に限定されないが）に関与する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、Ｒａｓ関連タンパク質様タンパク質ＮＯＶ３をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、Ｒａｓ関連タンパク質様タンパク質ＮＯＶ３は、それを必要とする被験体に投与する場合、有用であり得る。Ｒａｓ関連タンパク質様タンパク質をコードするＮＯＶ３核酸、および本発明のＲａｓ関連タンパク質様タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに、診断的適用に有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。ＮＯＶ３およびＮＯＶ３改変体についてのさらなる疾患の適応症および組織発現は、利用可能なものについて、実施例に示される。
【００９０】
ＮＯＶ３が最も高度に発現される組織に基づいて、特定の使用は、それらに関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発を含む。通常の組織および疾患の組織における、ＮＯＶ３の特異的発現は、実施例に示される。
【００９１】
ＮＯＶ３核酸およびＮＯＶ３ポリペプチドは、さらに、治療的方法または診断的方法における使用のための、新規のＮＯＶ３物質に免疫特異的に結合する抗体の産生に有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」セクションに記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って、生成され得る。開示されたＮＯＶ３タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されたＮＯＶ３エピトープは、アミノ酸約１〜２０由来である。別の実施形態において、ＮＯＶ３エピトープは、アミノ酸約３０〜８０由来である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ３エピトープは、アミノ酸約９５〜２０６由来である。これらの新規のタンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析に関するアッセイ系において使用され得、これらは、疾患の病理の理解および種々の障害に関する新規の薬物標的の開発を補助する。
【００９２】
（ＮＯＶ４）
新規セリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質をコードする、７２３ヌクレオチドの、開示されたＮＯＶ４核酸（配列番号７）は（ＧＳＡＣ０２２５１０＿Ａともいわれる）、表４Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド６０〜６２のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド７０２〜７０４のＴＡＡコドンで終了することが同定された。推定非翻訳領域は、開始コドンから上流および終始コドンから下流に見出され、それに下線を付す。開始コドンおよび終始コドンは、表４Ａに太文字で示される。
【００９３】
【表４Ａ】
2004534518.tif 000033
配列番号７によってコードされる、開示されたＮＯＶ４ポリペプチド（配列番号８）は、２１４アミノ酸残基を有し、１文字アミノ酸コードを使用して、表４Ｂに示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ４が、公知のシグナルペプチドを含まず、そして０．５５８４の確実性でマイクロボディ（ペルオキシソーム）に局在するであろうことを予測する。代替的な実施形態において、ＮＯＶ４は、０．４５００の確実性で細胞質に局在するか、または０．２２２６の確実性でリソソーム（内腔）に局在するか、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス腔に局在する可能性がある。ＮＯＶ４は、２４２３１．５６ダルトンの分子量を有する。
【００９４】
【表４Ｂ】
2004534518.tif 000034
第１２染色体上の、ゲノムクローンＡＣ０２２５０９は、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーに関する登録配列ファイルを使用して、ＴＢＬＡＳＴＮによって同定され、ＧｅｎＢａｎｋによって入手可能であるゲノムディリーファイルまたはヒトゲノムプロジェクト配列センターから得られるゲノムディリーファイルに対して行われ、そしてさらに、ＮＯＶ１について記載されるように分析された。この情報は、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓからの電子ノーザンツールを使用して指定され、本発明に含まれるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリの、ゲノムクローン、および／またはＥＳＴ配列染色体マッピングを導出した。
【００９５】
ＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列で実行された。これは、特許および特許公報において公表された配列を含む登録データベースである。Ｐａｔｐの結果は、表４Ｃに列挙される結果を含む。
【００９６】
【表４Ｃ】
2004534518.tif 000035
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列が、バクテリオファージλ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＬＡＭＣＧ｜ａｃｃ：Ｊ０２４５９  ｍＲＮＡ（バクテリオファージλ、完全ゲノム）に、６９７塩基中４５８塩基（６５％）同一であることが見出された。本発明のタンパク質の完全なアミノ酸配列は、バクテリオファージλ由来の２２１アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ０３７７２タンパク質（セリン／スレオニンタンパク質ホスファターゼ（ＥＣ３．１．３．１６））に、２１２アミノ酸中１２６アミノ酸残基（５９％）同一であり、２１２アミノ酸中１５０アミノ酸残基（７０％）類似であることが見出された。
【００９７】
公的配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ４は、表４Ｄに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【００９８】
【表４Ｄ】
2004534518.tif 000036
これらおよび他の配列の相同性は、表４Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。ＮＯＶ４ポリペプチドは、レーン１に提供される。
【００９９】
【表４Ｅ】
2004534518.tif 000037
2004534518.tif 000038
ＮＯＶ４中の同定可能なドメインの存在は、ＮＯＶ１に記載されるように決定された。表４Ｆは、ＮＯＶ４に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの記述を列挙する。これは、ＮＯＶ４配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特徴と類似する特徴を有することを示す。
【０１００】
【表４Ｆ】
2004534518.tif 000039
セリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質をコードする、開示されたＮＯＶ４核酸は、配列が表４Ａに提供される核酸を含み、またはＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログの配列を含む、ＮＯＶ４核酸の改変体は、表４Ａに提供される。本発明はまた、任意の核酸の塩基が、表４Ａに示される対応する塩基から変えられ得るが、なおそのセリンスレオニンタンパク質キナーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする、変異体核酸もしくは改変体核酸またはそのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載された配列と相補的な核酸を含み、ちょうど記載された任意の核酸と相補的な核酸フラグメントを含む。さらに、本発明は、構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメント、またはその相補体を含む。非限定的な例として、そのような改変は、改変された塩基および、糖リン酸骨格が改変または誘導体化されている核酸を含む。これらの改変は少なくとも一部、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実行され、そのようにして、例えば、これらは、被験体における治療的適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸または改変体核酸、およびそれらの相補体において、約３５％までの塩基が、そのように変化され得る。
【０１０１】
本発明の開示されたＮＯＶ４タンパク質は、配列が表４Ｂに提供されるセリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質を含む。本発明はまた、任意の残基が、表４Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、そのセリンスレオニンタンパク質キナーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体タンパク質または改変体タンパク質、またはその機能的フラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、約４１％までの残基が、そのように変化され得る。
【０１０２】
本発明はさらに、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する、抗体および抗体フラグメントを含む。また、本発明の任意のタンパク質に対して、高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明の中に含まれ、バクテリオファージ粒子のような、任意のキャリア粒子に融合される（または、キャリアの表面上に生物学的に発現される）ようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０１０３】
本明細書中に開示されるセリンスレオニンタンパク質ホスファターゼ様タンパク質および核酸についての、タンパク質の類似情報、発現パターン、およびマップ位置は、このセリンスレオニンタンパク質ホスファターゼが、セリンスレオニンタンパク質ホスファターゼファミリーに特徴的な、重要な構造および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断的適用および治療的適用ならびに研究ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質として、診断的マーカーおよび／または予後マーカー（ここでは、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される）ならびに、以下のような潜在的治療的適用：（ｉ）タンパク質治療法、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御兵器に役立つことを含む。
【０１０４】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載の種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する、潜在的な診断適用および治療適用において、有用である。例えば、本発明の組成物は、例えば、炎症の免疫治療およびＡＩＤＳのような感染症、癌治療、神経系疾患の処置、脳脊髄炎のような脳障害および／もしくは自己免疫障害、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、内分泌疾患、筋障害、炎症修復および創傷修復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２によって引き起こる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗鬆症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨異栄養症の治療、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群のような）を含む精神病性障害および神経性障害、ならびに／または他の病理および障害のような患者の処置に対する効力を有する。
【０１０５】
構造的類似性は、ＮＯＶ４が、セリンスレオニンタンパク質キナーゼファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定された、ＮＯＶ４核酸およびＮＯＶ４タンパク質は、本明細書中に示される種々の病理および障害（に限定されないが）に関与する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、セリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質ＮＯＶ４をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、セリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質ＮＯＶ４は、それを必要とする被験体に投与する場合、有用であり得る。セリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質をコードするＮＯＶ４核酸、および本発明のセリンスレオニンタンパク質キナーゼ様タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに、診断的適用に有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。ＮＯＶ４およびＮＯＶ４改変体についてのさらなる疾患の適応症および組織発現は、利用可能なものについて、実施例に示される。
【０１０６】
ＮＯＶ４が最も高度に発現される組織に基づいて、特定の使用は、それらに関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発を含む。通常の組織および疾患の組織における、ＮＯＶ４の特異的発現は、実施例に示される。
【０１０７】
ＮＯＶ４核酸およびＮＯＶ４ポリペプチドは、さらに、治療的方法または診断的方法における使用のための、新規のＮＯＶ４物質に免疫特異的に結合する抗体の産生に有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」セクションに記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って、生成され得る。開示されたＮＯＶ４タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されたＮＯＶ４エピトープは、アミノ酸約１〜３５由来である。別の実施形態において、ＮＯＶ４エピトープは、アミノ酸約５５〜１２５由来である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ４エピトープは、アミノ酸約１３５〜１８０由来であり、アミノ酸約１８５〜２１４由来である。これらの新規のタンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析に関するアッセイ系において使用され得、これらは、疾患の病理の理解および種々の障害に関する新規の薬物標的の開発を補助する。
【０１０８】
（ＮＯＶ５）
新規ＳＨＡＲＰ−１様タンパク質をコードする、２３０４ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ５核酸（配列番号９）は（ＧＳＡＣ０２２５０９＿Ａともいわれる）、表５Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド２３０２〜２３０４のＴＧＡコドンで終了することが同定された。推定非翻訳領域は、開始コドンから上流および終始コドンから下流に予想される。開始コドンおよび終始コドンは、表５Ａに太文字で示される。
【０１０９】
【表５Ａ】
2004534518.tif 000040
2004534518.tif 000041
配列番号９によってコードされる、開示されたＮＯＶ５ポリペプチド（配列番号１０）は、７６７アミノ酸残基を有し、１文字アミノ酸コードを使用して、表５Ｂに示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ５が、公知のシグナルペプチドを含まず、そして０．７０００の確実性で形質膜に局在するであろうことを予測する。代替的な実施形態において、ＮＯＶ５は、０．３０００の確実性で核に局在するか、または０．２０００の確実性で小胞体（膜）に局在するか、または０．１０００の確実性でミトコンドリア内膜に局在する可能性がある。ＮＯＶ５は、８０２９２．１７ダルトンの分子量を有する。
【０１１０】
【表５Ｂ】
2004534518.tif 000042
第１２染色体上の、ゲノムクローンＡＣ０２２５０９は、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーに関する登録配列ファイルを使用して、ＴＢＬＡＳＴＮによって同定され、ＧｅｎＢａｎｋによって入手可能であるゲノムディリーファイルまたはヒトゲノムプロジェクト配列センターから得られるゲノムディリーファイルに対して行われ、そしてさらに、ＮＯＶ１について記載されるように分析された。この情報は、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓからの電子ノーザンツールを使用して指定され、本発明に含まれるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリの染色体マッピング、遺伝的クローン、および／またはＥＳＴ配列を導出した。
【０１１１】
ＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列で実行された。これは、特許および特許公報において公表された配列を含む登録データベースである。Ｐａｔｐの結果は、表５Ｃに列挙される結果を含む。
【０１１２】
【表５Ｃ】
2004534518.tif 000043
2004534518.tif 000044
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列が、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ００９３２９｜ａｃｃ：ＡＦ００９３２９  ｍＲＮＡ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓエンハンサー−オブ−スプリットおよびｈａｉｒｙ関連タンパク質１（Ｓｈａｒｐ−１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に、１３５２塩基中９８８塩基（７３％）同一であることが見出された。本発明のタンパク質の完全なアミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来の２５３アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ番号：第Ｏ３５７７９タンパク質（エンハンサー−オブ−スプリットおよびｈａｉｒｙ関連タンパク質１）に、２４７アミノ酸残基中２０７アミノ酸残基（８３％）同一であり、２４７アミノ酸残基中２１８アミノ酸残基（８８％）類似であることが見出された。
【０１１３】
公的配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ５は、表５Ｄに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０１１４】
【表５Ｄ】
2004534518.tif 000045
これらおよび他の配列の相同性は、表５Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。ＮＯＶ５ポリペプチドは、レーン１に提供される。
【０１１５】
【表５Ｅ】
2004534518.tif 000046
2004534518.tif 000047
2004534518.tif 000048
ＮＯＶ５中の同定可能なドメインの存在は、ＮＯＶ１に記載されるように決定された。ＮＯＶ５タンパク質は、示されたヌクレオチド位置に、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって規定される）以下のタンパク質のドメインを含む：アミノ酸位置３３３〜３８５のドメイン名ヘリックスループヘリックスＤＮＡ結合ドメイン（ＰＦ０００１０）、アミノ酸位置３７３〜３８４のドメイン名ＳＴＡＴタンパク質ドメイン（ＰＦ０１０１７）、など。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが公知である他のタンパク質の特徴と類似する特徴およびこれらのドメインの特徴と類似する特徴を有することを示す。表５Ｆは、ＮＯＶ５に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの記述を列挙する。これは、ＮＯＶ５配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特徴と類似する特徴を有することを示す。
【０１１６】
【表５Ｆ】
2004534518.tif 000049
ＳＨＡＲＰ−１様タンパク質をコードする、開示されたＮＯＶ５核酸は、配列が表５Ａに提供される核酸を含み、またはＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログの配列を含む、ＮＯＶ５核酸の改変体は、表５Ａに提供される。本発明はまた、任意の核酸の塩基が、表５Ａに示される対応する塩基から変えられ得るが、なおそのＳＨＡＲＰ−１様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする、変異体核酸もしくは改変体核酸またはそのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載された配列と相補的な核酸を含み、ちょうど記載された任意の核酸と相補的な核酸フラグメントを含む。さらに、本発明は、構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメント、またはその相補体を含む。非限定的な例として、そのような改変は、改変された塩基および、糖リン酸骨格が改変または誘導体化されている核酸を含む。これらの改変は少なくとも一部、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実行され、そのようにして、例えば、これらは、被験体における治療的適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸または改変体核酸、およびそれらの相補体において、約２７％までの塩基が、そのように変化され得る。
【０１１７】
本発明の開示されたＮＯＶ５タンパク質は、配列が表５Ｂに提供されるＳＨＡＲＰ−１様タンパク質を含む。本発明はまた、任意の残基が、表５Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、そのＳＨＡＲＰ−１様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする、変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、またはその機能的フラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、約１７％までの残基が、そのように変化され得る。
【０１１８】
本発明はさらに、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する、抗体および抗体フラグメントを含む。また、本発明の任意のタンパク質に対して、高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明の中に含まれ、バクテリオファージ粒子のような、任意のキャリア粒子に融合される（または、キャリアの表面上に生物学的に発現される）ようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０１１９】
本明細書中に開示されるＳｈａｒｐ−１様タンパク質および核酸についての、タンパク質の類似情報、発現パターン、およびマップ位置は、このＳｈａｒｐ−１が、Ｓｈａｒｐ−１ファミリーに特徴的な、重要な構造および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断的適用および治療的適用ならびに研究ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質として、診断的マーカーおよび／または予後マーカー（ここでは、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される）ならびに、以下のような潜在的治療的適用：（ｉ）タンパク質治療法、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御兵器に役立つことを含む。
【０１２０】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載の種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する、潜在的な診断適用および治療適用において、有用である。例えば、本発明の組成物は、例えば、炎症の免疫治療およびＡＩＤＳのような感染症、癌治療、神経系疾患の処置、脳脊髄炎のような脳障害および／もしくは自己免疫障害、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、内分泌疾患、筋障害、炎症修復および創傷修復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２によって引き起こる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗鬆症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨異栄養症の治療、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群のような）を含む精神病性障害および神経性障害、ならびに／または他の病理および障害のような患者の処置に対する効力を有する。
【０１２１】
哺乳動物の中枢神経系において、塩基性ヘリックスループヘリックス（ｂＨＬＨ）タンパク質の多様な群は、前駆細胞の決定、およびそれに続いた、神経の分化の調節に関与する。本明細書で、本発明者らは、Ｓｈａｒｐ−１およびＳｈａｒｐ−２といわれる、哺乳動物の２つのエンハンサー−オブ−スプリットおよびｈａｉｒｙ関連タンパク質１によって規定される、ｂＨＬＨタンパク質の新規のサブファミリーの同定を報告する。公知のｂＨＬＨ遺伝子とは対照的に、Ｓｈａｒｐ遺伝子の検出可能な転写は、最終位置に到達した分化されたニューロンを生成する胚性生育の終始時に開始し、生後生育の進行につれて増加する。成体の場合、Ｓｈａｒｐ遺伝子は、成体の形成性に関連する、ＣＮＳの小領域で発現される。神経突起生長を研究するためのモデル系である、ＰＣ１２細胞において、Ｓｈａｒｐ遺伝子は、前初期遺伝子の運動により、ＮＧＦによって誘導され得る。同様に、インビボでのカイニン酸（ｋａｌｎｉｃ  ａｃｉｄ）の投与後１時間以内に、Ｓｈａｒｐ−２は、ラット大脳皮質全体を通してニューロン中で誘導される。これは、ニューロンのｂＨＬＨタンパク質がまた、グルタミン酸作動性刺激と連結される成熟したＣＮＳニューロンの「適応性の」変化に関連することを示唆する。ＰＭＩＤ：９５３２５８２、ＵＩ：９８１９３７６１。
【０１２２】
本発明で開示されるＳｈａｒｐ−１は、少なくとも以下の組織で発現される：脳、腎臓、肺、前立腺、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ＿疾患状態：扁平上皮癌胎児肺ＮｂＨＬ１９Ｗ、精巣ＮＨＴ、およびＢ細胞腎臓。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、得られた。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源：脳、腎臓、肺、前立腺、公的ＥＳＴ供給源：扁平上皮癌胎児肺ＮｂＨＬ１９Ｗ、精巣ＮＨＴ、およびＢ細胞腎臓。さらに、配列は、以下の組織内に発現されると予想される。なぜなら（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ００９３２９｜ａｃｃ：ＡＦ００９３２９）の発現パターンが、｛Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｖｅｇｉｃｕｓエンハンサー−オブ−スプリットおよびｈａｉｒｙ関連タンパク質１（Ｓｈａｒｐ−１）ｍＲＮＡ、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｖｅｇｉｃｕｓ種における完全ｃｄｓホモログ：胎児肺ＮｂＨＬ１９Ｗ、精巣ＮＨＴ、およびＢ細胞腎臓｝に密接に関連するからである。
【０１２３】
構造的類似性は、ＮＯＶ５が、ＳＨＡＲＰ−１ファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定された、ＮＯＶ５核酸およびＮＯＶ５タンパク質は、本明細書中に示される種々の病理および障害（に限定されないが）に関与する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、ＳＨＡＲＰ−１様タンパク質ＮＯＶ５をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、ＳＨＡＲＰ−１様タンパク質ＮＯＶ５は、それを必要とする被験体に投与する場合、有用であり得る。ＳＨＡＲＰ−１様タンパク質をコードするＮＯＶ５核酸、および本発明のＳＨＡＲＰ−１様タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに、診断的適用に有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。ＮＯＶ５およびＮＯＶ５改変体についてのさらなる疾患の適応性および組織発現は、利用可能なものについて、実施例に示される。
【０１２４】
ＮＯＶ５が最も高度に発現される組織に基づいて、特定の使用は、それらに関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発を含む。通常の組織および疾患の組織における、ＮＯＶ５の特異的発現は、実施例に示される。
【０１２５】
ＮＯＶ５核酸およびＮＯＶ５ポリペプチドは、さらに、治療的方法または診断的方法における使用のための、新規のＮＯＶ５物質に免疫特異的に結合する抗体の産生に有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」セクションに記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って、生成され得る。開示されたＮＯＶ５タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されたＮＯＶ５エピトープは、アミノ酸約１〜１００由来である。別の実施形態において、ＮＯＶ５エピトープは、アミノ酸約１０５〜１９０由来である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ５エピトープは、アミノ酸約２００〜３６０由来であり、アミノ酸約３７５〜４５５由来であり、アミノ酸約４６０〜５８０由来であり、アミノ酸約６４０〜６７０由来であり、アミノ酸約７１０〜７６７由来である。これらの新規のタンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析に関するアッセイ系において使用され得、これらは、疾患の病理の理解および種々の障害に関する新規の薬物標的の開発を補助する。
【０１２６】
（ＮＯＶ６）
新規シナプトタグミン（Ｓｉｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ）Ｘ様タンパク質をコードする、１７０２ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ６核酸（配列番号１１）（ＧＳＡＣ０２３１５８．１５＿Ａともいわれる）が、表６Ａに示される。オープンリーディングフレームはヌクレオチド７８〜８０のＡＴＧ開始コドンで始まること、およびヌクレオチド１６４７〜１６４９のＴＡＡコドンで終結することが同定された。推定の非翻訳領域は、開始コドンの上流および終止コドンの下流に見出され、そして下線で示される。この開始コドンおよび終止コドンは、表６Ａ中で太字で示される。
【０１２７】
【表６Ａ】
2004534518.tif 000050
配列番号１１によりコードされる、開示されたＮＯＶ６ポリペプチド（配列番号１２）は、５２３アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して表６Ｂに示される。１つの実施形態において、ＮＯＶ６は、予測されるＩＮＴＥＧＲＡＬ可能性−１１．３６を有する、Ｉｂ型（Ｎｅｘｏ  Ｃｃｙｔ）膜タンパク質である［膜貫通５９〜７５（４８〜８４）］。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果から、ＮＯＶ６がシグナルペプチドを有し、そして０．６０００の確実性で小胞体（膜）に位置する可能性があることが予測される。代替の実施形態において、ＮＯＶ６は、０．４６００の確実性で形質膜に、または０．３０００の確実性で核に、または０．１０００の確実性でミトコンドリア内膜に位置する可能性がある。ＮＯＶ６ペプチドの最も可能性ある切断部位は、アミノ酸３１と３２との間、つまりアミノ酸ＶＥＷ−ＥＫの間のダッシュに存在する。ＮＯＶ６は５９１２３．７２ダルトンの分子量を有する。
【０１２８】
【表６Ｂ】
2004534518.tif 000051
第１２染色体のゲノムクローンＮＯＶ６  ＧＳＡＣ０２３１５８．１５＿Ａを、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーの独自の配列ファイルを用いてＴＢＬＡＳＴＮにより同定し、ＧｅｎＢａｎｋにより利用可能となっているか、またはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇセンターから獲得されたゲノムダイアリーファイルに対して実行し、そしてＮＯＶ１について記載されるようにさらに分析した。この情報を、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓからの電子ノーザンツールを用いて割り当て、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、ゲノムクローン、および／またはＥＳＴ配列（これらは本発明中で包含される）を染色体マッピングした。
【０１２９】
ＢＬＡＳＴ分析を、特許および特許公開において公開された配列を含む、独自のデータベースである、Ｐａｔｐデータベースからの配列に対して実施した。Ｐａｔｐの結果は、表６Ｃ中に列挙された配列を含む。
【０１３０】
【表６Ｃ】
2004534518.tif 000052
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列が、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ  ＩＤ：ＡＢ０２６８０７｜ａｃｃ：ＡＢ０２６８０７のｍＲＮＡ（シナプトタグミンＸのＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｍＲＮＡ、完全コドン）に対して、１６２６塩基中１４１５塩基（８７％）の同一性を有することが見出された。本発明のタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の５２３アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｒ０Ｎ４タンパク質（シナプトタグミンＸ）に対して、５２３アミノ酸残基中４８６アミノ酸残基（９２％）の同一性、および５２３アミノ酸残基中５０２アミノ酸残基（９５％）の類似性を有することを見出した。
【０１３１】
公の配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ６は表６Ｄに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列と相同性を有することを見出した。
【０１３２】
【表６Ｄ】
2004534518.tif 000053
これらの配列または他の配列の相同性は、表６Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。ＮＯＶ６ポリペプチドは１行目に示される。
【０１３３】
【表６Ｅ】
2004534518.tif 000054
2004534518.tif 000055
2004534518.tif 000056
ＮＯＶ６において同定可能なドメインの存在を、ＮＯＶ１において記載されたように決定した。表６Ｆは、ＮＯＶ６に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの説明を記載する。このＮＯＶ６タンパク質は、示されたヌクレオチド位置で、以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏにより規定される）を含む：アミノ酸２４８〜３３４位にドメイン名Ｃ２ドメイン、アミノ酸３８０〜４６８位にドメイン名Ｃ２ドメイン、など。このことは、本発明の配列がこのドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性およびこれらのドメインの特性に類似の特性と類似の特性を有することを示す。
【０１３４】
【表６Ｆ】
2004534518.tif 000057
2004534518.tif 000058
シナプトタグミンＸ様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ６核酸として、配列が表６Ａ中に提供されている核酸、またはその改変体（この配列のＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログを含む）が挙げられる。本発明はまた、変異核酸または改変核酸であって、それらの任意の塩基が表６Ａ中に示される対応する塩基から変更され得るが、なおシナプトタグミンＸ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする変異核酸または改変核酸、またはそのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、その配列が記載された配列に相補的である核酸（その配列が記載された任意の配列に相補的である核酸フラグメントを含む）を含む。本発明はさらに、その構造に化学修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメントまたはその相補体を含む。このような修飾には、非限定的な例として、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾または誘導体化されている核酸が挙げられる。これらの修飾は、少なくとも一部、修飾された核酸の化学的安定性を増強させるために実施され、それによって、例えば、それらが被験体中での治療的適用において核酸に結合するアンチセンスとして使用され得る。この変異核酸または改変核酸、およびそれらの相補体において、約１３％までの塩基がそのように変更され得る。
【０１３５】
本発明で開示されたＮＯＶ６タンパク質は、配列が表６Ｂ中に提供される、シナプトタグミンＸ様タンパク質を含む。本発明はまた、それらの任意の残基が、表６Ｂに示される対応する残基から変更され得るが、なおそのシナプトタグミンＸ様タンパク質活性および生理機能を維持するタンパク質をコードする変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、あるいはそれらの機能的フラグメントを含む。その変異タンパク質または改変タンパク質において、約８％までの残基がそのように変更され得る。
【０１３６】
本発明は、さらに、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を包含する。また、本発明の任意のタンパク質に高い結合親和性を有する配列（バクテリオファージ粒子のような任意のキャリア粒子と融合された（またはキャリアの表面上に生物学的に発現された）ペプチドおよびポリペプチドを含む）を含むペプチドおよびポリペプチドが、本発明に包含される。
【０１３７】
このシナプトタグミンＸ様の配列は、（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＢ０２６８０７｜ａｃｃ：ＡＢ０２６８０７）密接に関連するシナプトタグミンＸのＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｍＲＮＡ、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ種における完全ｃｄｓホモログの発現パターンから、以下の組織において発現することが予測される：脳。
【０１３８】
本明細書中に開示される、シナプトタグミンＸ様のタンパク質および核酸に対するタンパク質類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このシナプトタグミンＸ様がシナプトタグミンファミリーの重要な構造的および／または生理学的な機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において有用であり、そして検索ツールとして有用である。これらとして、特異的または選択的な核酸またはタンパク質の診断および／または予防マーカーとしての機能（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用が挙げられる：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子切除）に有用な核酸、（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、ならびに（ｖｉ）生物学的防御物質。
【０１３９】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載された種々の疾患および障害、ならびに／または他の病理において実施される潜在的な診断適用または治療適用において有用である。例えば、ＡＩＤＳのような炎症疾患または感染疾患の免疫治療、癌治療、神経性疾患、脳障害および／または自己免疫障害（脳脊髄炎、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害のような）、内分泌疾患、筋肉障害、炎症および創傷の回復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、拒食症、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿閉、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症の処置、ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神障害および神経障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞およびジスキネジア（ハンチントン病もしくはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む）ならびに／または他の病理および障害の処置のような患者処置に、本発明の組成物は有効性を有する。
【０１４０】
構造類似性は、ＮＯＶ６がシナプトタグミンＸファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定されたＮＯＶ６の核酸およびタンパク質は、本明細書中に示されるような種々の病理および障害において実施される潜在的な治療的適用（しかし、それらに限定されない）に有用であり得る。例えば、シナプトタグミンＸ様タンパク質ＮＯＶ６をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そしてこのシナプトタグミンＸ様タンパク質ＮＯＶ６は、それを必要とする被験体に投与される場合に有用であり得る。本発明のシナプトタグミンＸ様タンパク質をコードするＮＯＶ６核酸、およびシナプトタグミンＸ様タンパク質、またはそれらのフラグメントはさらに、診断的適用において有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が評価され得る。ＮＯＶ６および（利用可能である場合）ＮＯＶ６改変体に関する、さらなる疾患効能および組織発現が、実施例において提供される。
【０１４１】
ＮＯＶ６が最も高度に発現する組織に基づき、特定の使用として、その組織と関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発が挙げられる。正常組織および病変組織におけるＮＯＶ６の特異的な発現は、実施例に示される。
【０１４２】
ＮＯＶ６核酸およびポリペプチドはさらに、治療方法または診断方法における使用のために、新規ＮＯＶ６基質に免疫特異的に結合する抗体の産生において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の節に記載されるように、疎水性チャートからの予測によって、当該分野で公知の方法に従って作製され得る。開示されたＮＯＶ６タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、各々の領域が免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、意図されるＮＯＶ６エピトープは、アミノ酸約１〜２０である。別の実施形態において、ＮＯＶ６エピトープは、アミノ酸約３０〜５５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ６エピトープは、アミノ酸約７５〜２４５、アミノ酸約２５０〜３３５、アミノ酸約３４０〜３６０、アミノ酸約３９０〜４４０、およびアミノ酸約４４５〜５２３である。これらの新規タンパク質は、種々のヒトの障害の機能分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新規薬物標的の開発を補助する。
【０１４３】
（ＮＯＶ７）
新規ＩＩ型サイトケラチン様タンパク質をコードする、１６１１ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ７核酸（配列番号１３）（ＧＳＡＣ０５５７１５＿Ａともいわれる）が、表７Ａに示される。オープンリーディングフレームはヌクレオチド１〜３のＡＴＧ開始コドンで始まること、およびヌクレオチド１６０９〜１６１１のＴＡＧコドンで終結することが同定された。推定の非翻訳領域は、開始コドンの上流および終止コドンの下流に見込まれる。この開始コドンおよび終止コドンは、表７Ａ中で太字で示される。
【０１４４】
【表７Ａ】
2004534518.tif 000059
配列番号１３によりコードされる、開示されたＮＯＶ７ポリペプチド（配列番号１４）は、５３６アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して表７Ｂに示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果から、ＮＯＶ７が既知のシグナルペプチドを有さず、そして０．５５００の確実性で小胞体（膜）に位置する可能性があることが予測される。代替の実施形態において、ＮＯＶ７は、０．１９００の確実性でリソソーム（内腔）に、または０．１０００の確実性で小胞体（内腔）に、または０．１０００の確実性で細胞外に位置する可能性がある。ＮＯＶ７は５８６２２．０６ダルトンの分子量を有する。
【０１４５】
【表７Ｂ】
2004534518.tif 000060
第１２染色体のゲノムクローンＮＯＶ７  ＧＳＡＣ０５５７１５＿Ａを、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーの独自の配列ファイルを用いてＴＢＬＡＳＴＮにより同定し、ＧｅｎＢａｎｋにより利用可能となっているか、またはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇセンターから獲得されたゲノムダイアリーファイルに対して実行し、そしてＮＯＶ１について記載されるようにさらに分析した。この情報を、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓからの電子ノーザンツールを用いて割り当て、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、ゲノムクローン、および／またはＥＳＴ配列（これらは本発明中で包含される）を染色体マッピングした。
【０１４６】
ＢＬＡＳＴ分析は、特許および特許公開において公開された配列を含む、独自のデータベースである、Ｐａｔｐデータベースからの配列に対して実施される。Ｐａｔｐの結果は、表７Ｃ中に列挙された結果を含む。
【０１４７】
【表７Ｃ】
2004534518.tif 000061
配列データベースの検索において、例えば、本発明の核酸配列がＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ  ＩＤ：ＡＢ０３３７４４｜ａｃｃ：ＡＢ０３３７４４  ｍＲＮＡ（ＩＩ型サイトケラチンのＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に対して、７８１塩基中６６４塩基（８５％）の同一性を有することを見出した。本発明のタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の５２４アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｒ０Ｈ５タンパク質（ＩＩ型サイトケラチン）に対して、４５６アミノ酸残基中３４６アミノ酸残基（７５％）の同一性、および４５６アミノ酸残基中３９１アミノ酸残基（８５％）の類似性を有することを見出した。
【０１４８】
公の配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ７は表７Ｄに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に対する相同性を有することを見出した。
【０１４９】
【表７Ｄ】
2004534518.tif 000062
これらの配列および他の配列の相同性は、表７Ｅ中に示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。このＮＯＶ７ポリペプチドは、１行目に提供される。
【０１５０】
【表７Ｅ】
2004534518.tif 000063
2004534518.tif 000064
ＮＯＶ７において同定可能なドメインの存在を、ＮＯＶ１において記載されたように決定した。このＮＯＶ７タンパク質は、示されるヌクレオチド位置に以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏにより規定される）を有する：アミノ酸位置２３６〜３３３にドメイン名Ｋ−ｂｏｘ（ＩＰＲ００２４８７）、アミノ酸位置５９〜３７９にドメイン名フィラメント（ＩＰＲ００１６６４）、など。表７Ｆは、ＮＯＶ７に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの説明を記載する。このことは、このＮＯＶ７配列が、これらのドメインを含むことが公知である他のタンパク質の特性に類似の特性を有することを示す。
【０１５１】
【表７Ｆ】
2004534518.tif 000065
ＩＩ型サイトケラチン様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ７核酸として、配列が表７Ａ中に提供されている核酸、またはその改変体（この配列のＳＮＰ、フラグメント、相同体、アナログを含む）が挙げられる。本発明はまた、変異核酸または改変核酸であって、それらの任意の塩基が表７Ａ中に示される対応する塩基から変更され得るが、なおＩＩ型サイトケラチン様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする変異核酸または改変核酸、またはそのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、その配列が記載された配列に相補的である核酸（その配列が記載された任意の配列に相補的である核酸フラグメントを含む）を含む。本発明はさらに、その構造に化学修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメントまたはその相補体を含む。このような修飾には、非限定的な例として、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾または誘導体化されている核酸が挙げられる。これらの修飾は、少なくとも一部、修飾された核酸の化学的安定性を増強させるために実施され、それによって、例えば、それらが被験体中での治療的適用において核酸に結合するアンチセンスとして使用され得る。この変異核酸または改変核酸、およびそれらの相補体において、約１５％までの塩基がそのように変更され得る。
【０１５２】
本発明で開示されたＮＯＶ７タンパク質は、配列が表７Ｂ中に提供される、ＩＩ型サイトケラチン様タンパク質を含む。本発明はまた、それらの任意の残基が、表７Ｂに示される対応する残基から変更され得るが、なおそのＩＩ型サイトケラチン様タンパク質活性および生理機能を維持するタンパク質をコードする変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、あるいはそれらの機能的フラグメントを含む。その変異タンパク質または改変タンパク質において、約２５％までの残基がそのように変更され得る。
【０１５３】
本発明は、さらに、本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を包含する。また、本発明の任意のタンパク質に高い結合親和性を有する配列（バクテリオファージ粒子のような任意のキャリア粒子と融合された（またはキャリアの表面上に生物学的に発現された）ペプチドおよびポリペプチドを含む）を含むペプチドおよびポリペプチドが、本発明に包含される。
【０１５４】
本発明において開示されるＩＩ型サイトケラチンは、少なくとも以下の組織で発現する：皮膚、筋肉、骨、軟骨、直腸癌腫、肺。この情報は、本発明中に包含されるこの配列の組織供給源（ＰｕｂｌｉｃＥＳＴ供給源：：皮膚、筋肉、骨、軟骨、直腸癌腫、肺）を決定することより獲得した。さらに、この配列は、密接に関連する｛ＩＩ型サイトケラチンのＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｍＲＮＡ、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ種における完全ｃｄｓホモログ（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＢ０３３７４４｜ａｃｃ：ＡＢ０３３７４４）の発現パターンから、以下の組織において発現することが予測される：：皮膚、筋肉、骨、軟骨、直腸癌腫、肺。
【０１５５】
本明細書中に開示される、ＩＩ型サイトケラチン様のタンパク質および核酸に対するタンパク質類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このＩＩ型サイトケラチンがＩＩ型サイトケラチンファミリーの重要な構造的および／または生理学的な機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において有用であり、そして検索ツールとして有用である。これらとして、特異的または選択的な核酸またはタンパク質の診断および／または予防マーカーとしての機能（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用が挙げられる：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的抗体、診断的抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子切除）に有用な核酸、（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、ならびに（ｖｉ）生物学的防御物質。
【０１５６】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載された種々の疾患および障害、ならびに／または他の病理において実施される潜在的な診断適用または治療適用において有用である。例えば、ＡＩＤＳのような炎症疾患または感染疾患の免疫治療、癌治療、神経性疾患、脳障害および／または自己免疫障害（脳脊髄炎、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害のような）、内分泌疾患、筋肉障害、炎症および創傷の回復、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、拒食症、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿閉、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症の処置、ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神障害および神経障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞およびジスキネジア（ハンチントン病もしくはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む）ならびに／または他の病理および障害の処置のような患者処置に、本発明の組成物は有効性を有する。
【０１５７】
構造類似性は、ＮＯＶ７がＩＩ型サイトケラチンファミリータンパク質のメンバーとして機能し得ることを示す。従って、本明細書で同定されたＮＯＶ７の核酸およびタンパク質は、本明細書中に示されるような種々の病理および障害において実施される潜在的な治療的適用（しかし、それらに限定されない）に有用であり得る。例えば、ＩＩ型サイトケラチン様タンパク質ＮＯＶ７をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そしてこのＩＩ型サイトケラチン様タンパク質ＮＯＶ７は、それを必要とする被験体に投与される場合に有用であり得る。本発明のＩＩ型サイトケラチン様タンパク質をコードするＮＯＶ７核酸、およびＩＩ型サイトケラチン様タンパク質、またはそれらのフラグメントはさらに、診断的適用において有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が評価され得る。ＮＯＶ７および（利用可能である場合）ＮＯＶ７改変体に関する、さらなる疾患効能および組織発現が、実施例において提供される。
【０１５８】
ＮＯＶ７が最も高度に発現する組織に基づき、特定の使用として、その組織と関連する種々の疾患および障害の診断または処置のための製品の開発が挙げられる。正常組織および病変組織におけるＮＯＶ７の特異的な発現は、実施例に示される。
【０１５９】
ＮＯＶ７核酸およびポリペプチドはさらに、治療方法または診断方法における使用のために、新規ＮＯＶ７基質に免疫特異的に結合する抗体の産生において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の節に記載されるように、疎水性チャートからの予測によって、当該分野で公知の方法に従って作製され得る。開示されたＮＯＶ７タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、各々の領域が免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、意図されるＮＯＶ７エピトープは、アミノ酸約１〜２５である。別の実施形態において、ＮＯＶ７エピトープは、アミノ酸約４０〜９０である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ７エピトープは、アミノ酸約１２５〜４４０、アミノ酸約４４５〜４９０、およびアミノ酸約４９５〜５３６である。これらの新規タンパク質は、種々のヒトの障害の機能分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新規薬物標的の開発を補助する。
【０１６０】
（ＮＯＶ８）
ＮＯＶ８は、以下に開示される、２つの新規のＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質を含む。この開示されたタンパク質は、ＮＯＶ８ａおよびＮＯＶ８ｂと名付けられた。ＮＯＶ８ａおよびＮＯＶ８ｂとして特に記載されない限り、ＮＯＶ８についての全ての言及は、全ての改変体を含むことが意図される。
【０１６１】
（ＮＯＶ８ａ）
新規ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質をコードする、３０１６ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ８ａ核酸（配列番号１５）（１３４９２９１３３＿ＥＸＴともいわれる）が、表８Ａに示される。オープンリーディングフレームはヌクレオチド１０１〜１０３のＡＴＧ開始コドンで始まること、およびヌクレオチド２９９３〜２９９５のＴＡＡコドンで終結することが同定された。推定の非翻訳領域は、開始コドンの上流および終止コドンの下流に見出され、そして下線で示される。この開始コドンおよび終止コドンは、表８Ａ中で太字で示される。
【０１６２】
【表８Ａ】
2004534518.tif 000066
2004534518.tif 000067
配列番号１５によりコードされる、開示されたＮＯＶ８ａポリペプチド（配列番号１６）は、９６４アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して表８Ｂに示される。ＮＯＶ８ａは１０４３１８．３８ダルトンの分子量を有する。
【０１６３】
【表８Ｂ】
2004534518.tif 000068
（ＮＯＶ８ｂ）
新規ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質をコードする、２９９２ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ８ｂ核酸（配列番号１７）（ＣＧ５０９７９−０２ともいわれる）が、表８Ａに示される。オープンリーディングフレームはヌクレオチド２１〜２３のＡＴＧ開始コドンで始まること、およびヌクレオチド２９８５〜２９８７のＴＡＡコドンで終結することが同定された。推定の非翻訳領域は、開始コドンの上流および終止コドンの下流に見出され、そして下線で示される。この開始コドンおよび終止コドンは、表８Ａ中で太字で示される。
【０１６４】
【表８Ｃ】
2004534518.tif 000069
2004534518.tif 000070
配列番号１７によりコードされる、開示されたＮＯＶ８ｂポリペプチド（配列番号１８）は、９８８アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して表８Ｂに示される。ＮＯＶ８は１０７８９６．４１ダルトンの分子量を有する。
【０１６５】
【表８Ｄ】
2004534518.tif 000071
（ＮＯＶ８改変体）
ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果から、ＮＯＶ８ａおよび８ｂがシグナルペプチドを有し、そして０．３７００の確実性で外側に位置する可能性があることが予測される。代替の実施形態において、ＮＯＶ８ａおよびＮＯＶ８ｂは、０．１９００の確実性でリソソーム（内腔）に、または０．１８００の確実性で核に、または０．１０００の確実性で小胞体（膜）に位置する可能性がある。ＮＯＶ８ａまたはＮＯＶ８ｂのペプチドの最も可能性のある切断部位は、アミノ酸２３と２４との間、つまりアミノ酸ＲＬＡ−ＧＧの間のダッシュに存在する。ＮＯＶ８ａおよびＮＯＶ８ｂを比較するアラインメントが以下の表８Ｅ中に示される。本明細書中の任意のＮＯＶ８改変体の配列間の残基の差異は、「ａ」改変体中の残基、「ａ」改変体に関する残基位置、および「ｂ」改変体における残基、を示すよう記載される。例えば、表８Ｅに示されるように、ＮＯＶ８ポリペプチドで異なる最初のアミノ酸残基は、Ｔ５３Ａとして表される。
【０１６６】
【表８Ｅ】
2004534518.tif 000072
2004534518.tif 000073
本発明で開示されるＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１様のＮＯＶ８遺伝子は、染色体２２ｑ１３．３１−ｑ１３．３３に位置する。第２２染色体上のＥＧＦ関連タンパク質／ＣＥＧＰ１タンパク質ゲノムクローンを、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーに関する独自の配列ファイルを用いてＴＢＬＡＳＴＮにより同定し、ＧｅｎＢａｎｋにより利用可能となっているか、またはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇセンターから獲得されたゲノムダイアリーファイルに対して実行し、そしてＮＯＶ１について記載されるようにさらに分析した。この割当を、遺伝子クローンに関連するマップ情報、開示された配列との公の遺伝子およびＥＳＴの共有配列同一性、ならびにＣｕｒａＧｅｎ社のＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ  ｔｏｏｌを使用して行った。
【０１６７】
ＢＬＡＳＴ分析は、特許および特許公開において公開された配列を含む、独自のデータベースである、Ｐａｔｐデータベースからの配列に対して実施される。Ｐａｔｐの結果は、表８Ｆ中に列挙された結果を含む。
【０１６８】
【表８Ｆ】
2004534518.tif 000074
配列データベースの検索において、例えば、このＮＯＶ８ａ核酸配列がＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＨＳＡ４００８７７｜ａｃｃ：ＡＪ４００８７７．１  ｍＲＮＡ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＡＳＣＬ３遺伝子、ＣＥＧＰ１遺伝子、Ｃ１１ｏｒｆ１４遺伝子、Ｃ１１ｏｒｆ１５遺伝子、Ｃ１１ｏｒｆ１６遺伝子およびＣ１１ｏｒｆ１７遺伝子）に、２７２塩基中１９４塩基（７１％）の同一性を有することを見出した。このＮＯＶ８ａタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）由来の９６１アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＴＲＥｍｂｌＮｅｗ−ＡＣＣ：ＡＡＧ２５９３９タンパク質（ＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１）に対して、９６０アミノ酸残基中８４８アミノ酸残基（８８％）の同一性、および９６０アミノ酸残基中８９１アミノ酸残基（９２％）の類似性を有することを見出した。さらに、例えば、本発明のＮＯＶ８ｂ核酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ２７６４２５｜ａｃｃ：ＡＦ２７６４２５．１  ｍＲＮＡ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１（Ｓｃｕｂｅ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に対して、２８０１塩基中２４３１塩基（８６％）の同一性を有することが見出された（図３Ａ）。本発明のＮＯＶ８ｂタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）由来の９６１アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂｌ−ＡＣＣ：Ｑ９ＥＱＣ６タンパク質（ＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１）に対して、９１１アミノ酸残基中８２７アミノ酸残基（９０％）の同一性、および９１１アミノ酸残基中８６４アミノ酸残基（９４％）の類似性を有することを見出した。
【０１６９】
公の配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ８ａは表８Ｇに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列と、相同性を有することを見出した。
【０１７０】
【表８Ｇ】
2004534518.tif 000075
これらの配列および他の配列の相同性は、表８Ｈに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。ＮＯＶ８ａポリペプチドは、１行目に提供される。ＮＯＶ８ａとＮＯＶ８ｂとの間で異なる残基は、（「ｏ」）で印した。
【０１７１】
【表８Ｈ】
2004534518.tif 000076
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2004534518.tif 000078
2004534518.tif 000079
ＮＯＶ８において同定可能なドメインの存在は、ＮＯＶ１において記載されたように決定された。本明細書中で開示されたこのタンパク質における同定可能なドメインの存在を、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓのようなアルゴリズムを使用して検索し、次いでＩｎｔｅｒｐｒｏウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を用いたドメインマッチ（または数）を掛け合わせることによってＩｎｔｅｒｐｒｏ数を決定することにより決定した。この結果は、このタンパク質が、示される位置に以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏにより規定される）を有することを示す：アミノ酸３７〜７２位、７８〜１１５位、１２１〜１５６位、１６６〜２０２位、２０６〜２４１位、２４５〜２８０位、２８６〜３２１位、３２７〜３６０位、３６６〜４０１位、７３７〜７７３位に、１０個のＥＧＦ様ドメイン（ＩＰＲ０００５６１）；アミノ酸７９８〜９０７位に１個のＣＵＢドメイン  ＩＰＲ０００８５９；およびアミノ酸６４９〜６８７位に１個のＴＮＦＲ／ＮＧＦＲドメイン（ＩＰＲ００１３６８）。表８Ｉは、ＮＯＶ８に対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの説明を記載する。これは、ＮＯＶ８配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性およびこれらのドメインの特性に類似の特性を有することを示す。
【０１７２】
【表８Ｉ】
2004534518.tif 000080
ＩＰＲ０００８５９：ＣＵＢドメインは、機能的に多様な大部分が発達的に調節されたタンパク質において見出された、約１１０残基の細胞外ドメインである。ほとんど全てのＣＵＢドメインは、おそらく２つのジスルフィド架橋（Ｃ１−Ｃ２、Ｃ３−Ｃ４）を形成する４つの保存性システインを含む。ＣＵＢドメインの構造は、免疫グロブリンの構造と類似するβバレル構造であると予想される。ＣＵＢドメインを含むことが見出されたタンパク質には、以下が挙げられる：哺乳動物の相補体のサブ成分Ｃ１ｓ／Ｃ１ｒ（これはカルシウム依存複合体Ｃ１を形成する、相補体系の古典的な経路の第一の成分）；ハムスターセリンプロテアーゼＣａｓｐ（これはカルシウムの存在中でＩ型およびＩＶ型のコラーゲンおよびフィブロネクチンを分解する）；Ｒａ反応性因子（ＲＡＲＦ）の哺乳動物の相補体活性化成分（相補体のＣ４成分を切断するプロテアーゼ）；脊椎動物のエンテロペプチダーゼ（腸の刷子縁のＩＩ型膜タンパク質、これはトリプシノーゲンを活性化する）；脊椎動物の骨形態形成タンパク質１（ＢＭＰ−１）（これは軟骨形成および骨形成を誘導し、そしてメタロエンドペプチダーゼ活性を発現するタンパク質である）；ウニの胞胚タンパク質ＢＰ１０およびＳｐＡＮ；Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓの仮定タンパク質Ｆ４２Ａ１０．８およびＲ１５１．５；ニューロピリン（ｎｅｕｒｏｐｉｌｌｉｎ）（Ａ５抗原）（特定の神経回路の形成の間に機能するカルシウム依存細胞の接着分子）；ウニ由来のフィブロペリン（ｆｉｂｒｏｐｅｌｌｉｎ）ＩおよびＩＩＩ；哺乳動物のヒアルロン酸結合タンパク質ＴＳＧ−６（またはＰＳ４）（血清および増殖因子誘導タンパク質）；哺乳動物の精子付着因子；およびツメガエルの胚タンパク質ＵＶＳ．２（これは背前位の発達の間に発現される）。
【０１７３】
ＩＰＲ０００５６１：表皮性増殖因子（ＥＧＦ）の配列において見出される約３０〜４０アミノ酸残基長の配列は、多少保存された形態において、多数の他の（主に動物の）タンパク質において存在することが示された。ＥＧＦ様パターンの１以上のコピーを含むことが現在知られているタンパク質のリストは、大規模かつ多様である。関連のないタンパク質であると思われるタンパク質におけるＥＧＦドメインの機能的重要性は、未だ明らかではない。しかし、共通の特徴は、これらの反復が、膜結合タンパク質の細胞外ドメインまたは分泌されることが公知のタンパク質において見出されるという点である（例外：プロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼ）。ＥＧＦドメインは、ジスルフィド結合に関与することが示されている（ＥＧＦにおいて）６個のシステイン残基を含む。この主要な構造は、二本鎖のβシートと、それに続く、Ｃ末端の短い二本鎖シートへのループである。保存されたシステインの間のサブドメインは、長さにおいて変動する。
【０１７４】
このことは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが知られている他のタンパク質の配列に類似する特性を有し、そしてこれらのドメインの特性に類似する特性を有することを示す。
【０１７５】
ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ８核酸には、以下が挙げられる：表８Ａまたは表８Ｃで提供される配列の核酸、または、ＳＮＰ、フラグメント、相同性を含む、これらの改変体、表８Ａまたは８Ｃで提供される配列のアナログ。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表８Ａまたは表８Ｃに示された対応する塩基から変化され得るが、ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸または改変体核酸、またはそのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。これは、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸または核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例によって、このような修飾は、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された、または誘導体化された核酸を含む。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に強化するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、ＮＯＶ８ａの塩基の約２９％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ８ｂの塩基の約１４％までがそのように変化され得る。
【０１７６】
本発明の開示されたＮＯＶ８タンパク質は、配列が表８Ｂまたは表８Ｄに提供されるＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表８Ｂまたは表８Ｄに示された対応する残基から変化され得るが、ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、ＮＯＶ８ａの残基の約１２％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ８ｂの残基の約１０％までがそのように変化され得る。
【０１７７】
本発明はさらに、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を包含する。本発明のいずれかのタンパク質に高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明の範囲内に包含される。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０１７８】
本発明で開示されたＥＧＦ関連タンパク質／ＣＥＧＰ１タンパク質は、少なくとも以下の組織において発現される：頚部、前立腺、上皮、肝臓、脾臓、脳、胸部、胎盤および顕微解剖された上皮内新生物形成２（ＰＩＮ２）細胞。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ（文献）情報源、および／またはＲＡＣＥ情報源を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織情報源を決定することによって導かれた。
【０１７９】
表皮性増殖因子（ＥＧＦ）に関連するいくつかのポリペプチド増殖因子は、近年確認されている。これは、形質転換増殖因子−α（ＴＧＦ−α）、アンフィアグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）（ＡＲ）、ヘパリン結合ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、およびβセルリン（ＢＴＣ）を含む。これらのペプチドは全て、ＥＧＦレセプター（ＥＧＦｒ）に結合する。ＥＧＦの繰り返しモチーフは、多様なタンパク質のスーパーファミリーを規定する。このモチーフは、３０〜４０残基のドメインに位置付けられた一連の保存性システインおよび保存性グリシンを特徴付ける。ＥＧＦ様ドメインを含むタンパク質は、しばしば１０００より多いアミノ酸からなり、ＥＧＦ様ドメインの複数コピーを有し、そして特異的なタンパク質−タンパク質相互作用に関与することが公知であるさらなるドメインを含む。ＥＧＦ様繰り返しファミリーメンバーは、主に分泌された分子または細胞表面分子であり、しばしば、細胞周期、増殖、発達過程の調節において関与され、そして多数の細胞外現象において重要な役割を行う。これは細胞接着およびレセプター−リガンドの相互作用を含む。本発明の新規のヒトＥＧＦ関連ＮＯＶ８タンパク質は、ＥＧＦドメインを含み、そして分泌されると予測される。したがって、この新規のヒトＥＧＦ関連タンパク質／ＣＥＧＰ１タンパク質様タンパク質が、他のＥＧＦ様タンパク質と類似の性質を有し、そして細胞周期、増殖、および発達過程の調節に関与し得ることが予測されている。
【０１８０】
ここで同定されたＮＯＶ８核酸およびＮＯＶ８タンパク質は、本明細書中に示されるような種々の病状および障害（しかし、これらに限定されない）に関連する、潜在的治療適用において有用であり得る。例えば、ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質ＮＯＶ８をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてこれらの必要な被験体へ投与した場合に、ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質ＮＯＶ８は有用であり得る。ＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質をコードするＮＯＶ８核酸、および本発明のＥＧＦ関連／ＣＥＧＰ１／ＳＣＵＢＥ１様タンパク質、またはこれらのフラグメントは、診断用途においてさらに有用であり得、ここで核酸またはタンパク質の存在または量は、評価される。もし利用可能な場合、ＮＯＶ８およびＮＯＶ８改変体についてのさらなる疾患徴候および組織発現は、実施例で示される。
【０１８１】
本明細書中に開示されるＥＧＦ関連タンパク質／ＣＥＧＰ１タンパク質様タンパク質および核酸に対するタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このＥＧＦ関連タンパク質／ＣＥＧＰ１タンパク質がＥＧＦファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究道具として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予後マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０１８２】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害および／または他の病状に関係する潜在的な診断用途および治療用途において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患している患者の治療に効力を有する：フォン・ヒッペル−リンドウ症候群（ＶＨＬ）、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経保護、血友病、凝固亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫不全、対宿主性移植片病、子宮内膜症、不妊症、肝硬変、移植術および他の疾患、障害およびその様な状態。
【０１８３】
本明細書中に開示されるタンパク質および核酸に対するタンパク質の類似性情報、発現パターン、細胞内局在およびマップ配置は、このＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１タンパク質がＥＧＦ関連タンパク質ＳＣＵＢＥ１ファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究道具として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予後マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）を含む。これらはまた、以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する薬剤、ならびに（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０１８４】
本発明の核酸およびタンパク質は、様々な疾患および障害の診断および／または処置における用途を有する。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患している患者の治療に効力を有する：フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ―ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経保護、血友病、凝固亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫不全、対宿主性移植片病、子宮内膜症、不妊症、肝硬変、移植術、心臓脳筋症（Ｃａｒｄｉｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、致死の乳児、チトクロムＣオキシダーゼ欠損の起因、結腸直腸癌；脊髄小脳失調−１０；ワールデンブルグ−シャー（Ｓｈａｈ）症候群；イエメン人の聾盲の低色素症候群ならびに他の疾患、障害および状態。
【０１８５】
ＮＯＶ８が、最も高く発現する組織に基づいて、特異的な使用には、それらと関連する様々な疾患および障害の診断または処置に対する生成物の開発が挙げられる。正常な組織および疾患した組織でのＮＯＶ８の特異的な発現は、実施例で示される。これらの物質は、治療方法または診断方法における使用のための本発明の新規な物質に免疫特異的に結合する抗体の産生にさらに有用である。
【０１８６】
ＮＯＶ８核酸およびＮＯＶ８ポリペプチドはさらに、新規のＮＯＶ８物質に免疫特異的に結合する、治療法または診断法で使用するための、抗体の生成において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ８タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ８ａエピトープは、およそアミノ酸１〜１０である。他の実施形態において、ＮＯＶ８ａエピトープは、およそアミノ酸２５〜２７０である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ８ａエピトープは、およそアミノ酸２７５〜３６０、およそアミノ酸３６５〜４３０、およそアミノ酸４５０〜５２０、およそアミノ酸５２５〜６２５、およそアミノ酸６３０〜８３５、およびおよそアミノ酸８５０〜９６４である。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ８ｂエピトープは、およそアミノ酸１〜１０である。他の実施形態において、ＮＯＶ８ｂエピトープは、およそアミノ酸２５〜２７０である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ８ｂエピトープは、およそアミノ酸２７５〜３６０、およそアミノ酸３６５〜４３０、およそアミノ酸４５０〜５２０、およそアミノ酸５２５〜６２５、およそアミノ酸６３０〜８３５、およびおよそアミノ酸８５０〜９８８である。これらの新規タンパク質は、疾患の病理学の理解および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発を助ける、種々のヒト障害の機能分析のためアッセイシステムにおいて使用され得る。
【０１８７】
（ＮＯＶ９）
ＮＯＶ９は、以下に開示される２つの新規のカリウムチャネル調節性サブユニット様タンパク質を含む。開示されるタンパク質は、ＮＯＶ９ａ、およびＮＯＶ９ｂと名付けられた。ＮＯＶ９ａまたはＮＯＶ９ｂとして特定して扱われない限り、任意のＮＯＶ９の言及は、全ての改変体を包含することが想定される。
【０１８８】
（ＮＯＶ９ａ）
新規のカリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質をコードする１４８９ヌクレオチド（ＧＳＡＣ０４６１３０＿Ａともいう）の開示されたＮＯＶ９ａ核酸（配列番号１９）は、表９Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４９〜５１におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１４２７〜１４２９におけるＴＡＡコドンで終了すると同定された。推定上の非翻訳領域は、開始コドンから上流および終止コドンから下流であることが見出され、そして下線を引かれる。開始コドンおよび終止コドンは、表９Ａで太文字で示される。
【０１８９】
【表９Ａ】
2004534518.tif 000081
配列番号２０によりコードされた開示されたＮＯＶ９ａポリペプチド（配列番号２０）は、４８３アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して、表９Ｂで示される。ＮＯＶ９ａは、５６８７０．６１ダルトンの分子量を有する。
【０１９０】
【表９Ｂ】
2004534518.tif 000082
（ＮＯＶ９ｂ）
本発明において、先に同定された標的配列、登録番号ＧＳＡＣ０４６１３０＿Ａ、この配列を確認するためのエキソン連結プロセスに供した。ＰＣＲプライマーを、順方向プライマーについては、利用可能な最上流の配列において開始し、そして逆方向プライマーについては、利用可能な最下流の配列において開始することによって設計した。各々の場合において、この配列を、それぞれの末端からコード配列へと内向きにウォーキングして、固有であるかまたは高度に選択的であるかのいずれかの適切な配列と遭遇するまで、あるいは、逆方向プライマーの場合、終止コドンに到達するまで、検査した。このようなプライマーは、標的配列の全長ｃＤＮＡ、ＤＮＡの一部（１つ以上のエキソン）またはタンパク質配列に対するインシリコでの予測に基づいて、あるいは、予測されるエキソンの、密接に関連するヒト配列または他の種由来の配列に対する、翻訳された相同性によって、設計される。これらの手順は、表９Ｃで報告されたＮＯＶ９ｂ配列を提供し、これは指定された登録番号ＣＧ５６０１７−０１である。これは、欠けているアミノ酸１２３〜１３２ならびに異なる１３３、１６３、１６４および１６６において先に同定されたＮＯＶ９ａ配列（登録番号ＧＳＡＣ０４６１３０＿Ａ）と異なる。
【０１９１】
新規のカリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質をコードする１４６１ヌクレオチド（ＣＧ５６０１７−０１ともいう）の開示されたＮＯＶ９ｂ核酸（配列番号２１）は、表９Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４９〜５１におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１４５９〜１４６１におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。推定上の非翻訳領域は、開始コドンから上流および終止コドンから下流であることが見出され、そして下線を引かれる。開始コドンおよび終止コドンは、表９Ａで太い文字で示される。
【０１９２】
【表９Ｃ】
2004534518.tif 000083
配列番号２１によりコードされた開示されたＮＯＶ９ｂポリペプチド（配列番号２２）は、４７０アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して、表９Ｄで示される。ＮＯＶ９ｂは、５５１３８．５６ダルトンの分子量を有する。
【０１９３】
【表９Ｄ】
2004534518.tif 000084
（ＮＯＶ９改変体）
ＮＯＶ９ａおよびＮＯＶ９ｂポリペプチドは、おそらくＩＩＩａ型の膜タンパク質（ｃｌｖ）である。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを用いたＮＯＶ９ｂの分析は、残基３２４〜３４０（３２１〜３４３）における膜貫通ドメインを有する−７．９１の可能性、残基２６０〜２７６（２４７〜２７８）における膜貫通ドメインを有する−７．７０の可能性、残基３９２〜４０８（３９１〜４１０）における膜貫通ドメインを有する−６．５３の可能性、残基８９〜１０５（８９〜１０６）における膜貫通ドメインを有する−３．０８の可能性、残基４３８〜４５４（４３７〜４５７）における膜貫通ドメインを有する−２．２３の可能性、残基６８〜８４（６７〜８４）における膜貫通ドメインを有する−１．２８の可能性において、残基２９１〜３０７（２９１〜３０７）における膜貫通ドメインを有する０．２６の可能性を予想する。ＳｉｇｎａｌＰ，Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ９タンパク質のいずれかが、シグナルペプチドを有し、そして０．６４００の確実性で原形質膜におそらく位置付けられることを予想する。代替の実施形態において、ＮＯＶ９タンパク質は、０．４６００の確実性でゴルジ体に、または０．３７００の確実性で小胞体（膜）に、あるいは０．１０００の確実性で小胞体（管腔）におそらく位置付けられる。ＮＯＶ９ペプチドに対する最もありそうな切断部位は、アミノ酸残基３０と３１の間である（すなわち、アミノ酸ＳＲＡ−ＬＲの間のダッシュ）。ＮＯＶ９ａおよびＮＯＶ９ｂを含むアラインメントは、下記の表９Ｅで示される。
【０１９４】
【表９Ｅ】
2004534518.tif 000085
2004534518.tif 000086
第１２染色体に対するＡＣ０４６１３０のゲノムクローンは、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーについての独自の配列表を使用するＴＢＬＡＳＴＮにより同定され、ＧｅｎＢａｎｋより入手できるようになるかまたはＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｃｅｎｔｅｒから得られるゲノムの毎日の表に対して開始し、そしてＮＯＶ１について記載されたようにさらに分析される。この情報は、ＯＭＩＭおよび、本発明に含まれるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｃｌｏｎｅｓ、および／またはＥＳＴ配列の染色体マッピングを誘導するＣｕｒａｔｏｏｌ由来の電気ノーザン器具を使用して、指定された。
【０１９５】
ＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列に対して実施され、これは特許および特許公報で刊行された配列を含む独自のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表９Ｆで示したものを含む。
【０１９６】
【表９Ｆ】
2004534518.tif 000087
配列データベースの検索は、例えば、ＮＯＶ９ａの核酸配列が、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＲＮＵ７８０９０｜ａｃｃ：Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のＵ７８０９０ｍＲＮＡ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ  カリウムチャネル調節因子１  ｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ）に１０４５塩基中８６６塩基（８２％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ９ａタンパク質の全アミノ酸配列は、４７４アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂ１−ＡＣＣ：Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（Ｒａｔ）由来のＯ８８７８８タンパク質（カリウムチャネル調節因子１）４８３アミノ酸残基中４０８アミノ酸残基（８４％）の同一性、そして４８３アミノ酸残基中４４０アミノ酸残基（９１％）類似性を有することが見出された。さらに、例えば、ＮＯＶ９ｂ核酸配列が、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＲＮＵ７８０９０｜ａｃｃ：Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のＵ７８０９０．１ｍＲＮＡに対して（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ  カリウムチャネル調節因子１  ｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ）１４３９塩基中１２０９塩基（８４％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ９ｂタンパク質の全アミノ酸配列は、４７４アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂ１−ＡＣＣ：Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（Ｒａｔ）由来のＯ８８７８８タンパク質（カリウムチャネル調節因子１）に対して４７１アミノ酸残基中４０８アミノ酸残基（８６％）の同一性、および４７１アミノ酸残基中４３９アミノ酸残基（９３％）類似性を有することが見出された。
【０１９７】
公の配列データベースのさらなる検索において、ＮＯＶ９ａは、表９Ｇで記載されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０１９８】
【表９Ｇ】
2004534518.tif 000088
これらの配列および他の配列の相同性を、表９Ｈで示されたＣｌｕｓｔａｌＷ分析で図解する。ＮＯＶ９ａポリペプチドは、レーン１で提供され、そしてＮＯＶ９ｂはレーン２で提供される。
【０１９９】
【表９Ｈ】
2004534518.tif 000089
2004534518.tif 000090
2004534518.tif 000091
公知でないドメインは、ＤＯＭＡＩＮ分析ソフトウェアを使用して、ＮＯＶ９で同定された。
【０２００】
カリウムチャネル調節性サブユニット様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ９核酸には、以下が挙げられる：配列が表９Ａまたは表９Ｃで提供される核酸またはこれらの改変体（表９Ａまたは表９Ｃで提供される配列のＳＮＰ、フラグメント、相同性、アナログを含む）。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表９Ａまたは表９Ｃに示された対応する塩基から変化され得るが、カリウムチャネル調節性サブユニット様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸または改変体核酸、またはそのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。これは、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸または核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例として、このような修飾としては、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された、または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に強化するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、ＮＯＶ９ａの塩基の約１８％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ９ｂの塩基の約１６％までがそのように変化され得る。
【０２０１】
本発明の開示されたＮＯＶ９タンパク質は、配列が表９Ｂまたは表９Ｄに提供されるカリウムチャネル調節性サブユニット様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表９Ｂまたは表９Ｄに示された対応する残基から変化され得るが、カリウムチャネル調節性サブユニット様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、ＮＯＶ９ａの残基の約１６％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ９ｂの残基の約１４％までがそのように変化され得る。
【０２０２】
本発明はさらに、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を包含する。本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明の範囲内に包含される。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０２０３】
小脳の顆粒ニューロンは、静止膜電位を制御し、ムスカリン性のアゴニストにより発火速度を調節する非失活するＫ＋電流を所有する。ｋｃｒ１は、抑制クローニングにより小脳のｃＤＮＡライブラリーからクローン化された。ＫＣＲ１は１２の推定上の膜貫通ドメインを含む新規のタンパク質であり、そしてＸｅｎｏｐｕｓ卵母細胞における小脳の非失活Ｋ＋電流の機能的な発現を増強する。ＫＣＲ１はまた、Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞またはＣＯＳ−７細胞において発現されたラットのＥＡＧ  Ｋ＋チャネルの活性化を促進する。ファーウェスタンブロット法（Ｆａｒ−Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）は、ＫＣＲ１およびＥＡＧタンパク質がＣ末端領域により、お互いに相互作用することを明らかにした。これらの結果はＫＣＲ１がＫ＋チャネルを非失活する調節性成物であることを示唆している。ＰＭＩＤ：９７２２５３４，ＵＩ：９８３８９７３５  １．組織培養におけるヒトの胸部癌細胞の増殖の間に活性化されたシグナル伝達経路は、調べ直される。２．ステロイドホルモンおよび成長因子は、類似の分裂促進的な経路を刺激し、そしてお互いの活性を頻繁に調節する。３．エストロゲン、プロゲスチンおよびほとんどのポリペプチド分裂促進因子に対する反応の共通性は、細胞周期の早期のＧ１期における核の転写因子ｍｙｃ、ｆｏｓおよびｊｕｎの誘導である。４．いくつかの増殖因子はまた、Ｇ１における細胞周期依存キナーゼの活性化の担う調節性タンパク質、サイクリンＤ１を刺激する。５．さらに、インシュリン、ＩＧＦ−ＩおよびＥＧＦは、チロシンキナーゼレセプターを活性化する。６．いくつかのチロシンリン酸化タンパク質は、ヒトの乳癌細胞内に生じ、そしてＥＧＦおよびエストロゲンレセプターを含む。７．サイクリックＡＭＰは、タンパク質キナーゼＡの活性化を介して、乳癌細胞増殖において重要な役割を果たし、そしてまたエストロゲンおよびプロゲステロンレセプターの活性化を調節する。８．ＥＧＦは、細胞内の無カルシウムレベルを上昇させることが公知である有一の乳癌分裂促進因子である。９．カルシウムは、乳癌細胞増殖において二重の役割を果たし、そしてカリウムチャネルの活性化を介して、カルモジュリン依存プロセスおよび細胞膜電位の調節の両方を活性化する。１０．カリウムチャネルの活性化および細胞増殖は、Ｇ１／Ｇ０細胞における脱分極された状態およびＳ期の間の過分極化された状態の間で細胞膜電位を変える、乳癌細胞に連結される。１１．ＡＴＰ感受性カリウムチャネルの活性化は、Ｇ１／Ｇ０−Ｓ遷移を受ける乳癌細胞に必要とされる。ＰＭＩＤ：８７４５１５１，ＵＩ：９６３４３０５２
本発明で開示されたカリウムチャネル調節サブユニットは、少なくとも以下の組織において発現される：生物全体、神経系、脳、卵巣、肺、骨髄性白血病細胞、精巣、頚部。この情報は、本発明に含まれる配列の組織情報源を決定することによって導かれた。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源：生物全体、神経系。Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源：脳、卵巣、肺、骨髄性白血病細胞、精巣、頚部、ＲＡＣＥ情報源：：生物全体、神経系、脳、卵巣、肺、骨髄性白血病細胞、精巣、頚部。
【０２０４】
本明細書中に開示されるカリウムチャネル調節サブユニット様ＮＯＶ９タンパク質および核酸に対するタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このカリウムチャネル調節サブユニットがカリウムチャネル調節サブユニットファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究道具として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予後マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０２０５】
本発明の核酸およびタンパク質は、下記および／または病理学で記載される様々な疾患および障害において関係づけられた潜在的な診断および／または治療的用途に有用である。例えば、本発明の組成物は、例えば炎症性疾患および感染症（例えば、ＡＩＤＳ）の免疫治療、癌治療、神経系疾患、脳障害および／または自己免疫障害（例えば、脳脊髄炎）、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫不全、および造血性障害、内分泌疾患、筋障害、炎症および創傷の修復、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２により引き起こされた感染）、疼痛、癌（以下のものが挙げられるがこれらには限らない：新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌）、摂食障害、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、低血圧、尿閉、骨粗鬆症、クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨ジストロフィーの処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大症、ならびに精神異常および神経異常、そして不安、精神分裂症、躁鬱、譫妄、痴呆、重度の精神遅滞およびジスキネジー、例えば、ハンティングトン病またはジルドラトゥレット症候群および／または他の病理学および疾患）の処置に効力を有する。
【０２０６】
ここで同定されたＮＯＶ９核酸およびＮＯＶ９タンパク質は、本明細書中に示されるような種々の病状および障害（しかし、これらに限定されない）に関連する、潜在的治療適用において有用であり得る。例えば、カリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質ＮＯＶ９をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてこれらの必要な被験体へ投与した場合に、カリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質ＮＯＶ９は有用であり得る。カリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質をコードするＮＯＶ９核酸、および本発明のカリウムチャネル調節サブユニット様タンパク質、またはこれらのフラグメントは、診断用途においてさらに有用であり得、ここで核酸またはタンパク質の存在または量は、評価される。もし利用可能な場合、ＮＯＶ９およびＮＯＶ９改変体についてのさらなる疾患徴候および組織発現は、実施例で示される。
【０２０７】
ＮＯＶ９が最も高く発現する組織に基づいて、特定の使用には、それらと関連する様々な疾患および障害の診断または処置のための生成物の開発が挙げられる。正常な組織および疾患した組織でのＮＯＶ９の特異的な発現は、実施例で示される。
【０２０８】
ＮＯＶ９核酸およびＮＯＶ９ポリペプチドはさらに、新規のＮＯＶ９物質に免疫特異的に結合する、治療法または診断法で使用するための、抗体の生成において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ９タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ９ａエピトープは、およそアミノ酸１〜１０である。他の実施形態において、ＮＯＶ９ａエピトープは、およそアミノ酸２５〜６５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ９ａエピトープは、およそアミノ酸１１０〜１３５、およそアミノ酸１６０〜１９５、およそアミノ酸２０５〜２４５、およそアミノ酸２８０〜３０５、およそアミノ酸３１５〜３３５、およそアミノ酸３４０〜３８０、およびおよそアミノ酸４５５〜４８３である。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ９ｂエピトープは、およそアミノ酸１〜１０である。他の実施形態において、ＮＯＶ９ｂエピトープは、およそアミノ酸２５〜６５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ９ｂエピトープは、およそアミノ酸１１０〜１３５、およそアミノ酸１７０〜１８５、およそアミノ酸２００〜２４０、およそアミノ酸２６０〜２９０、およそアミノ酸３０５〜３２０、およそアミノ酸３３０〜３７５、およびおよそアミノ酸４４５〜４７０である。これらの新規タンパク質は、疾患の病理学の理解および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発を助ける、種々のヒト障害の機能分析のためのアッセイシステムにおいて使用され得る。
【０２０９】
（ＮＯＶ１０）
ＮＯＶ１０は、以下に開示される２つの新規なＦａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ形成異常様タンパク質を含む。開示されるタンパク質は、ＮＯＶ１０ａ、およびＮＯＶ１０ｂと名付けられた。ＮＯＶ１０ａまたはＮＯＶ１０ｂとして特定して扱われない限り、任意のＮＯＶ１０の言及は、全ての改変体を包含することが想定される。
【０２１０】
（ＮＯＶ１０ａ）
新規のＦａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ形成異常様タンパク質をコードする２０６８ヌクレオチド（２８４７７６９４＿Ａともいう）の開示されたＮＯＶ１０ａ核酸（配列番号２３）は、表１０Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド２５〜２７におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１９９０〜１９９２におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。推定上の非翻訳領域は、開始コドンから上流および終止コドンから下流であることが見出され、そして下線を引かれる。開始コドンおよび終止コドンは、表１０Ａで太文字で示される。
【０２１１】
【表１０Ａ】
2004534518.tif 000092
2004534518.tif 000093
配列番号２３によりコードされた開示されたＮＯＶ１０ａポリペプチド（配列番号２４）は、６５５アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して、表１０Ｂで示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはヒドロパシーの結果は、ＮＯＶ１０ａが公知でない単一のペプチドを有し、そして０．３０００の確実性で微小体に局在化されるようであることを予想する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１０ａは０．３０００の確実性で核、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリックス部位、または０．１０００の確実性でリソソーム（管腔）に局在化されるようである。ＮＯＶ１０ａは、７４９６７．５５ダルトンの分子量を有する。
【０２１２】
【表１０Ｂ】
2004534518.tif 000094
（ＮＯＶ１０ｂ）
新規のＦａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ形成異常様タンパク質様タンパク質をコードする２１３５ヌクレオチド（ＣＧ１１０５１９−０１ともいう）の開示されたＮＯＶ１０ｂ核酸（配列番号２５）は、表１０Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド３４〜３６におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド２０５３〜２０５５におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。推定上の非翻訳領域は、開始コドンから上流および終止コドンから下流であることが見出され、そして下線を引かれる。開始コドンおよび終止コドンは、表１０Ａで太文字で示される。
【０２１３】
【表１０Ｃ】
2004534518.tif 000095
2004534518.tif 000096
配列番号２５によりコードされた開示されたＮＯＶ１０ｂポリペプチド（配列番号２６）は、６７３アミノ酸残基を有し、そして１文字アミノ酸コードを使用して、表１０Ｂで示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１０ｂが公知でない単一のペプチドを有し、そして０．３０００の確実性で微小体（ペロキシソーム）に局在化されるようであることを予想する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１０ｂは０．３０００の確実性で核、または０．１５６２の確実性でリソソーム（管腔）、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリックス部位に局在化されるようである。ＮＯＶ１０は、７６０８６．８８ダルトンの分子量を有する。
【０２１４】
【表１０Ｄ】
2004534518.tif 000097
（ＮＯＶ１０改変体）
ＮＯＶ１０ａおよびＮＯＶ１０ｂは、異なるＣ末端を有する。さらに、ＮＯＶ１０ｂは、ＮＯＶ１０ａと比較して３つのアミノ酸１７５Ｔ、２３０Ｓおよび２７５Ｒを欠失し、そして２つの異なるアミノ酸、すなわちＲ９９Ｔ、Ｒ１００Ｑを有する。ＮＯＶ１０ａおよびＮＯＶ１０ｂと比較するアライメントは、下記の表１０Ｅで示される。
【０２１５】
【表１０Ｅ】
2004534518.tif 000098
2004534518.tif 000099
本発明で開示される顔生殖（ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ）の形成異常タンパク質様ＮＯＶ１０タンパク質は、第６染色体に位置する。ゲノムのクローンは、Ｒａｓ関連タンパク質および／またはＲａｓ関連タンパク質ファミリーのメンバーについての独自の配列表、ＧｅｎＢｎａｋにより利用可能で作成されるか、またはヒトゲノムプロジェクト塩基配列決定センターから得られたゲノムの日常の表に対する実行、およびＮＯＶ１について記載されるようなさらなる分析を使用して、ＴＢＬＡＳＴＮにより同定された。この情報は、ＯＭＩＭおよび、本発明に含まれるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリ、Ｇｅｎｏｍｉｃ  ｃｌｏｎｅｓ、および／またはＥＳＴ配列の染色体マッピングを誘導するＣｕｒａｔｏｏｌ由来の電気ノーザン器具を使用して、指定された。
【０２１６】
ＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列に対して実施され、これは特許および特許公報で公開された配列を含む独自のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１０Ｆで示したものを含む。
【０２１７】
【表１０Ｆ】
2004534518.tif 000100
配列データベースの検索は、例えば、ＮＯＶ１０ａの核酸配列が、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ０１７３６８｜ａｃｃ：ＡＦ０１７３６８．１ｍＲＮＡ、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ顔生殖の形成異常タンパク質２（Ｆｇｄ２）ｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ）由来に対して、２００８塩基中１６５４塩基（８２％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ１０ａタンパク質の全アミノ酸配列は、７２７アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂ１−ＡＣＣ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）由来のＯ８８８４１タンパク質（Ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ  Ｄｙｓｐｌａｓｉａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２）に対して６００アミノ酸残基中４９６アミノ酸残基（８２％）の同一性、そして６００アミノ酸残基中５３０アミノ酸残基（８８％）類似性を有することが見出された。例えば、ＮＯＶ１０ｂ核酸配列が、ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ０１７３６８｜ａｃｃ：ＡＦ０１７３６８．１ｍＲＮＡ、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓの顔生殖の形成異常タンパク質２（Ｆｇｄ２）ｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ）由来に対して、１７１１塩基中１３８５塩基（８０％）の同一性を有することがまた見出された。ＮＯＶ１０ｂタンパク質の全アミノ酸配列は、７２７アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳｐｔｒＥｍｂ１−ＡＣＣ：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のＯ８８８４１タンパク質（Ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ  Ｄｙｓｐｌａｓｉａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ２）に対して６３２アミノ酸残基中５１６アミノ酸残基（８１％）の同一性、そして６３２アミノ酸残基中５５２アミノ酸残基（８７％）類似性を有することが見出された。
【０２１８】
公の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１０は、表１０Ｇで記載されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０２１９】
【表１０Ｇ】
2004534518.tif 000101
これらの配列および他の配列の相同性を、表１０Ｈで示されたＣｌｕｓｔａｌＷ分析で図解する。ＮＯＶ１０ａポリペプチドは、レーン１で提供され、そしてＮＯＶ１０ｂはレーン２で提供される。
【０２２０】
【表１０Ｈ】
2004534518.tif 000102
2004534518.tif 000103
2004534518.tif 000104
2004534518.tif 000105
ＮＯＶ１０における識別可能なドメインの存在は、ＮＯＶ１で記載されるように決定された。本明細書中で開示されるＮＯＶ１０ａにおける識別可能なドメインの存在は、アルゴリズム（例えば、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓ）を使用し、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏ  ｗｅｂｓｉｔｅ（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を使用して、ドメインの一致（又は数）を通過することによりＩｎｔｅｒｐｒｏ数を決定する検索により決定される。この結果は、このタンパク質が示された部位の以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｐｒｏで定義されるように）を含むことを示している：アミノ酸の位置１０６〜２８９のＧＥＦドメインＩＰＲ０００２１９、アミノ酸位置３２０〜４１８のプレクストリン（ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ）相同性ドメインＩＰＲ００１６０５、アミノ酸位置４５３〜５１９のＦＹＶＥドメインＩＰＲ０００３０６。表１０Ｉは、ＮＯＶ１０ｂに対するｐｆａｍ分析およびＮＯＶ１０ａに対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの記述を示す。これは、ＮＯＶ１０配列が、これらのドメインを含むことが公知な他のタンパク質の性質およびこれらのドメインの性質と類似の性質を有することを示している。
【０２２１】
【表１０Ｉ】
2004534518.tif 000106
2004534518.tif 000107
2004534518.tif 000108
顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１０核酸には、配列が表１０Ａまたは表１０Ｃで提供される核酸、またはこれらの改変体（配列が表１０Ａまたは１０Ｃで提供される核酸のＳＮＰ、フラグメント、相同性、アナログを含む）を包含する。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１０Ａに示された対応する塩基から変化されると同様に、顔面生殖器形成異常タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る、変異体核酸または改変体核酸、またはそのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。このような核酸は、は、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸または核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例として、このような修飾としては、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾されたかまたは誘導体化された核酸が挙げられる。これらの修飾は、少なくとも部分的には、例えばそれらが被験体での治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を増強するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、ＮＯＶ１０ａの塩基の約１８％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ１０ｂの塩基の約２０％までがをそのように変化され得る。
【０２２２】
本発明の開示されたＮＯＶ１０タンパク質は、配列が表１０Ｂまたは表１０Ｄに提供される顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１０Ｂまたは表１０Ｄに示された対応する残基から変化されると同様に、顔面生殖器形成異常タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、ＮＯＶ１０ａの残基の約１８％までがそのように変化され得、そしてＮＯＶ１０ｂの残基の約１９％までがをそのように変化され得る。
【０２２３】
本発明はさらに、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を包含する。本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明の範囲内に含まれる。このようなペプチドおよびポリペプチドは、任意のキャリア粒子（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合された（または、キャリアの表面上に生物学的に発現した）このようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０２２４】
この新規のタンパク質は、アールスコグ−スコット症候群に羅患する患者において初めて見出されたｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ  ｄｙｐｌａｓｉａタンパク質（ＦＧＤ１）と類似する。これらの個体は、以下を示す：両眼隔離症、前傾外鼻孔、広い上唇、特殊な陰茎陰嚢の関係（「サドルバック陰嚢」、または「ショール陰嚢」）、指の過伸展性、前反膝、偏平足、潜伏精巣症、指の拘縮、胸骨変形および多数の部位での離断性骨軟骨炎、および種々の骨格欠損（Ａａｒｓｋｏｇ  Ｄ，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．；１９７０；７７（５）：８５６−６１；Ｓｃｏｔｔ，Ｂｉｒｔｈ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  Ｏｒｉｇ．Ａｒｔ．Ｓｅｒ．；１９７１  ＶＩＩ（６）：２４０−２４６，Ｂｅｒｒｙら、１９８０，Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ．；５５：７０６−７１０；Ｇｏｒｓｋｉら；Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．；２０００  Ａｕｇ；２１８（４）：５７３−８６）。この症候群に関係するＦＧＤ１遺伝子は、２つの対立遺伝子変異体を有することが示された；その１つは、コドン４６９で未熟な翻訳終結を引き起こすと予測されるフレームシフトを生じるＦＧＤ１遺伝子中の挿入変異である（Ｐａｓｔｅｒｉｓ、Ｃｅｌｌ  ７９：  ６６９−６７８，１９９４）そして２つ目は、ＦＧＤ１遺伝子のエクソン１０中のＧ→Ａ転移に起因するタンパク質産物中のａｒｇ６１０→ｇｌｎの変化を生じる（Ｏｒｒｉｃｏら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４７８：２１６−２２０，２０００）。
【０２２５】
このタンパク質は、ＧＴＰ結合タンパク質シグナル伝達を調節するグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）ドメインおよびプレックストリン（ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ）相同性（ＰＨ）ドメインを有する。ＧＥＦドメインは、ｒａｓスーパーファミリーのＧＴＰ結合タンパク質のようなＧＴＰ結合タンパク質（シグナル伝達、細胞骨格動態、および細胞内輸送のような基本的な事象においての分子スイッチとして機能する）を使用する、シグナル伝達カスケードを正確に調節する。ＰＨドメインは、細胞内シグナル伝達に関与するまたは細胞骨格の構成成分として、広い範囲のタンパク質中に存在する、約１００残基のドメインである。異なるＰＨドメインが、異なるリガンド要求性を有し得るので、このＰＨドメインは、シグナル形質導入を調節し得る。シグナル伝達に密接に関与する多数の分子（例えば、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣアイソフォームγおよびδ、βアドレナリン作動性レセプターキナーゼ、ＰＫＣのｍｕアイソフォーム、オンコジーンνａνおよびｄｂｌならびにインシュリンレセプター基質１（ＩＲＳ）−１）が、ＰＨドメインを有することが示されている。実験は、ＦＧＤ１のＧＥＦドメインおよびＰＨドメインが、ＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼＣｄｃ４２Ｈｓに特異的に結合し得、そしてＣｄｃ４２Ｈｓのイソプレニル化形態のＧＤＰ−ＧＴＰ交換を刺激することを示した。Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３線維芽細胞中へのこれらのドメインを含むＦＧＤ１のポリペプチドのマイクロインジェクションは、末梢アクチン微小突起の形成を誘発する。これらの効果は、Ｃｄｃ４２のドミナントネガティブ変異体によってブロックされ得る；このことは、ＦＧＤ１はＣｄｃ４２Ｈｓ特異的グアニンヌクレオチド交換因子であることを示唆する。ＧＥＦドメインはまた、細胞増殖に関係する２つのキナーゼ（Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼおよびｐ７０  Ｓ６キナーゼ）を活性化することが示された（Ｚｈｅｎｇら；Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９６  Ｄｅｃ  ２７；２７１（５２）：３３１６９−７２）。従って、この新規なタンパク質は、正常な発生および疾患において重要な役割を果たし得る。このクラスの分子（ＧＥＦ）はまた、ジアシルグリセロールエステルおよびホルボールエステルのための良い薬物標的として考えられている。
【０２２６】
本発明において開示される顔面生殖器形成異常タンパク質は、少なくとも以下の組織において発現される：副腎／腎上体、骨髄、視床下部、肺、脾臓、子宮、末梢血。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給原、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ供給原、文献供給原、および／またはＲＡＣＥ供給原を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織供給原を決定することによって導かれた。さらに、この配列は、（ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＡＦ０１７３６８｜ａｃｃ：ＡＦ０１７３６８．１）（密接に関係のあるＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  顔面生殖器形成異常タンパク質２（Ｆｇｄ２）ｍＲＮＡ、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ種における完全ｃｄｓホモログ）の発現パターンに起因して、以下の組織において発現されると予想される：マウス胚、脂肪組織。
【０２２７】
本明細書中に記載される顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質および核酸に対するタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ位置は、この顔面生殖器形成異常タンパク質がグアニンヌクレオチド交換因子ファミリーに特徴的な重要な構造的機能および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究手段として有用である。これらは、特定または選択的な、核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標抗体／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御手段。
【０２２８】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関係する潜在的な診断用途および治療用途において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患している患者の治療に効力を有する：顔面生殖器形成異常  （アールスコグ−スコット症候群、炎症性疾患、癌、外傷、再生（インビトロおよびインビボ）、ウイルス／細菌／寄生虫の感染、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、子宮内膜症、受胎能、血友病、過剰凝固、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫疾患、アレルギー、免疫欠損、移植、対宿主性移植片病、貧血、喘息、気腫、強皮症、ＡＲＤＳ、神経学的疾患、ならびに他の疾患、障害および状態など。
【０２２９】
本明細書中で同定されたＮＯＶ１０核酸およびＮＯＶ１０タンパク質は、本明細書中に示されるような種々の病理および障害（限定されないが）に関係する潜在的な治療適用において有用であり得る。例えば、顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質ＮＯＶ１０をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そして顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質ＮＯＶ１０は、投与を必要とする患者に投与する場合、有用であり得る。本発明の顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質をコードするＮＯＶ１０核酸および顔面生殖器形成異常タンパク質様タンパク質、またはそれらのフラグメントは、さらに診断的用途において有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。ＮＯＶ１０およびＮＯＶ１０改変体（入手可能である場合）についての疾患の適応および組織発現は、実施例で示される。
【０２３０】
ＮＯＶ１０が最も高く発現する組織に基づいて、特異的な使用には、ＮＯＶ１０に関連する様々な疾患および障害の診断または処置のための生成物を開発することが挙げられる。正常な組織および罹患した組織でのＮＯＶ１０の特異的な発現は、利用可能である場合は、実施例で示される。
【０２３１】
ＮＯＶ１０核酸およびＮＯＶ１０ポリペプチドはさらに、治療法または診断法で使用するための、その新規ＮＯＶ１０物質に免疫特異的に結合する、抗体の生成において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１０タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１０ａエピトープは、およそアミノ酸１〜１５である。他の実施形態において、ＮＯＶ１０ａエピトープは、およそアミノ酸１０〜１４５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ１０ａエピトープは、およそアミノ酸１５５〜３４５、およそアミノ酸３６０〜５１５、およそアミノ酸５１５〜６５５である。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１０ｂエピトープは、およそアミノ酸１〜１５である。他の実施形態において、ＮＯＶ１０ｂエピトープは、およそアミノ酸１０〜１４５である。さらなる実施形態において、ＮＯＶ１０ｂエピトープは、およそアミノ酸１５５〜３４５、およそアミノ酸３６０〜５１５、およそアミノ酸５１５〜６７３である。これらの新規タンパク質は、疾患の病理学の理解および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発を助ける、種々のヒト障害の機能分析のためのアッセイ系において使用され得る。
【０２３２】
（ＮＯＶ１１）
新規のステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする１０８６ヌクレオチド（ＳＣ１１１７４３３７７＿Ａともいう）の開示されたＮＯＶ１１核酸（配列番号２７）が、表１１Ａで示される。ヌクレオチド５９〜６１におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１０２２〜１０２４におけるＴＡＡコドンで終了するオープンリーディングフレームが、同定された。開始コドンの上流の推定非翻訳領域および終止コドンの下流の推定非翻訳領域は、表１１Ａにおいて下線を引かれており、開始コドンおよび終止コドンは、表１１Ａで太字で示される。
【０２３３】
【表１１Ａ】
2004534518.tif 000109
本発明で開示されたステロイドデヒドロゲナーゼ様ＮＯＶ１１は、第１６染色体に位置する。
【０２３４】
配列番号２７によってコードされる開示されたＮＯＶ１１ポリペプチド（配列番号２８）は、３２１アミノ酸残基を有し、そして表１１Ｂに一文字コードで表される。ＮＯＶ１１ポリペプチドは、おそらく型Ｉｂ（Ｎｅｘｏ  Ｃｃｙｔ）の膜タンパク質）である。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを用いたＮＯＶ１１の分析は、残基１５７〜１７３（１５６〜１７４）における膜貫通ドメインを有する可能性−３．８８を予想する。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１１が、シグナルペプチドを有し、そして確実性０．７０００で原形質膜に局在化される可能性があることを予測する。別の実施形態において、ＮＯＶ１１は、確実性０．３６７７でマイクロボディー（ペルオキシソーム）に、または確実性０．３５００で核に、あるいは確実性０．２０００で小胞体膜に局在化される可能性がある。ＮＯＶ１１のシングルペプチドに対する最も可能性がある切断部位は、アミノ酸残基３６と３７の間（すなわち、配列ＧＧＧ−ＧＧの間のダッシュ）である。
【０２３５】
【表１１Ｂ】
2004534518.tif 000110
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１１の核酸配列が、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のｇｂ：ＧｅｎＢａｎｋ−ＩＤ：ＲＲＵ８１１８６｜ａｃｃ：Ｕ８１１８６．１ｍＲＮＡ（平滑筋特異的１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ３型ｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ）に対して３８８塩基を同一な６１７塩基中に（６２％）有することが見出された。ＮＯＶ１１タンパク質の完全アミノ酸配列は、Ａｎａｓ  ｐｌａｔｙｒｈｙｎｃｈｏｓ（アヒル）由来のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｏ５７３１４タンパク質（ＰＵＴＡＴＩＶＥ  ＳＴＥＲＯＩＤ  ＤＥＨＹＤＲＯＧＥＮＡＳＥ  ＳＰＭ２（ＥＣ１．１．１．−）に対して同一な１４１アミノ酸残基を３１２アミノ酸残基中に（４５％）有し、そして類似する１９４アミノ酸残基を３１２アミノ酸残基中に（６２％）有することが見出された。
【０２３６】
公の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１１は、表１１Ｃに記載されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０２３７】
【表１１Ｃ】
2004534518.tif 000111
多重配列アライメントが表１１Ｄ中に示され、本発明のタンパク質が、本発明のタンパク質と表１１Ｃ中に示される関連するタンパク質配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の１番目の列に示される。
【０２３８】
【表１１Ｄ】
2004534518.tif 000112
2004534518.tif 000113
他のＢＬＡＳＴの結果は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、このデータベースは特許および特許公開で公開された配列を含む私有データベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１１Ｅで示したものを含む。
【０２３９】
【表１１Ｅ】
2004534518.tif 000114
2004534518.tif 000115
本明細書中に開示されるタンパク質における同定可能なドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、続いて、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。結果は、示した位置に以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されたように）をＮＯＶ１１が含むことを示す：アミノ酸５２〜２３８に短鎖デヒドロゲナーゼドメイン（ＩＰＲ００２１９８）；アミノ酸３６〜２０５にｐｆｋＢファミリー炭水化物キナーゼドメイン（ＩＰＲ００２１７３）。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似し、かつこれらのドメインに類似する、性質を有することを示す。表１１Ｆは、ＮＯＶ１１に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０２４０】
【表１１Ｆ】
2004534518.tif 000116
ステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１１核酸は、表１１Ａに配列が提供される核酸配列またはそのフラグメントを包含する。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１１Ａに示された対応する塩基から変化されると同時に、ステロイドデヒドロゲナーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る、変異体核酸または改変体核酸、またはこのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。この核酸は、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例として、このような修飾としては、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾されたか、または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの修飾は、少なくとも部分的には、例えばそれらが被験体での治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、強化するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、その塩基の約３８％までが変化され得る。
【０２４１】
本発明の開示されたＮＯＶ１１タンパク質は、配列が表１１Ｂに提供される配列のステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１１Ｂに示された対応する残基から変化されると同時に、ステロイドデヒドロゲナーゼ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、その残基の約５５％までが変化され得る。
【０２４２】
本発明のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた、本発明の範囲内に包含される。このようなペプチドおよびポリペプチドは、任意のキャリア粒子（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合された（または、キャリアの表面上に生物学的に発現した）、このようなペプチドおよびポリペプチドを含む。ＮＯＶ１１のさらなるＳＮＰ改変体が、実施例３に開示される。
【０２４３】
本発明はさらに、治療法または診断法における使用のための本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を包含する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１１タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１１エピトープは、およそアミノ酸１〜１０である。他の実施形態において、企図されるＮＯＶ１１エピトープは、およそアミノ酸６５〜７０である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１１エピトープは、およそアミノ酸７５〜８１、およそアミノ酸８８〜９８、およそアミノ酸１１５〜１２４、およそアミノ酸１４１〜１５４、およそアミノ酸１８６〜１９１、およそアミノ酸２００〜２０６、およそアミノ酸２０８〜２２２、およそアミノ酸２４７〜２５８、およそアミノ酸２６２〜２８８、およそアミノ酸２９７〜３２１である。これらの新規タンパク質は、疾患の病理の理解および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発を助ける、種々のヒト障害の機能分析のためアッセイ系において使用され得る。
【０２４４】
本発明において開示されるステロイドデヒドロゲナーゼは、少なくとも以下の組織において発現される：副腎／腎上体、骨、骨髄、脳、真皮、表皮、毛包、海馬、視床下部、腎臓、肝臓、リンパ腺、リンパ系組織、卵巣、末梢血、下垂体、胎盤、脾臓、精巣、甲状腺、子宮、全生物体。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給原、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ供給原、文献供給原、および／またはＲＡＣＥ供給原を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織供給原を決定することによって導かれた。ＮＯＶ１１およびＮＯＶ１１改変体（利用可能である場合）に対するさらなる疾患の適応および組織発現が、実施例で示される。
【０２４５】
本明細書中に記載されるステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質および核酸に関するタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このステロイドデヒドロゲナーゼがデヒドロゲナーゼファミリーに特徴的な、重要な構造的機能および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究手段として有用である。これらは、特定もしくは選択的な核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標抗体／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御手段。
【０２４６】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関係する潜在的な診断用途および治療用途において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患している患者の治療に効力を有する：生殖障害、高血圧症、新形成、消化障害、炎症およびもともとホルモン性である癌（すなわち、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、甲状腺癌および骨肉腫癌）ならびに他の疾患、障害および状態など。
【０２４７】
（ＮＯＶ１２）
新規のＳＥＣ６様タンパク質をコードする２７５８ヌクレオチド（４４１８３５４＿０＿９＿ｄａｌともいう）の開示されたＮＯＶ１２核酸（配列番号２９が、表１２Ａで示される。ヌクレオチド１０５〜１０７におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド２３４０〜２３４２におけるＴＡＧコドンで終了するオープンリーディングフレームが同定された。開始コドンから上流の推定非翻訳領域および終止コドンの下流の推定非翻訳領域は、表１２Ａにおいて下線を引かれており、そして開始コドンおよび終止コドンは、表１２Ａで太い文字で示される。
【０２４８】
【表１２Ａ】
2004534518.tif 000117
本発明で開示されたＳＥＣ６様ＮＯＶ１２の第１の１．４ｋｂフラグメントは、第４染色体（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＣ０６０７８９、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第４染色体クローンＣＴＤ−２０１５Ｐ５）および第８染色体（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＣ０６１９７４、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１８染色体クローンＣＴＤ−２０１０Ｋ２２）に位置する。
【０２４９】
配列番号２９によってコードされる開示されたＮＯＶ１２ポリペプチド（配列番号３０）は、７４５アミノ酸残基を有し、そして表１２Ｂに一文字コードで表される。ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、この配列が、シグナルペプチドを有さず、そして確実性０．４４１７でミトコンドリアマトリックス空間に局在する可能性があるとＰＳＯＲＴにより予測する。別の実施形態において、ＮＯＶ１２は、確実性０．３０００でマイクロボディー（ペルオキシソーム）に、または確実性０．１２７７でミトコンドリア内膜に、あるいは確実性０．１２７７でミトコンドリア膜間腔に局在化される可能性がある。
【０２５０】
【表１２Ｂ】
2004534518.tif 000118
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１２の核酸配列が、ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＲ０８７８９２｜ａｃｃ：ＡＲ０８７８９２．１Ｍｒｎａ  ｆｒｏｍ  Ｕｎｋｏｗｎ（米国特許第５９８９８１８からの配列２）に対して同一である２４５９塩基を２４６３塩基中に（９９％）有することが見出された。ＮＯＶ１２タンパク質の完全アミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ＲＳＥＣ６）由来７５５アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ６２８２５タンパク質に対して同一である７０６アミノ酸残基を７４５アミノ酸残基中に（９４％）、そして類似する７２５アミノ酸残基を７４５アミノ酸残基中に（９７％）有することが見出された。
【０２５１】
公の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１２は、表１２Ｃで記載されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０２５２】
【表１２Ｃ】
2004534518.tif 000119
多重配列アライメントが表１２Ｄ中に示され、本発明のタンパク質が、本発明のタンパク質と表１２Ｃ中に示される関連するタンパク質配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の１番目の列に示される。
【０２５３】
【表１２Ｄ】
2004534518.tif 000120
2004534518.tif 000121
2004534518.tif 000122
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、このデータベースは、特許および特許公開で公開された配列を含む私有のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１２Ｅで示したものを含む。
【０２５４】
【表１２Ｅ】
2004534518.tif 000123
本明細書中に開示されるタンパク質における同定可能なドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、続いて、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定した。結果は、示した位置に以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されたように）をこのタンパク質が含むことを示す：アミノ酸４４〜５８にドメイン名ＡＴＰ−Ｓｙｎｔ＿Ａ−Ｃ（ＡＴＰシンターゼα鎖、Ｃ末端）；アミノ酸４８〜７５にドメイン名ｂｉｏｐｔｅｉｎ＿Ｈ（バイオプテリン依存性芳香族アミノ酸）。これらの２つのドメインはまた、ＲａｔホモログＲＳＥＣ６（Ｑ６２８２５）中に存在する。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の性質と類似しかつこれらのドメインに類似する性質を有することを示す。表１２Ｆは、ＮＯＶ１２に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０２５５】
【表１２Ｆ】
2004534518.tif 000124
ＳＥＣ６様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１２核酸、表１２Ａに配列が提供される核酸またはそのフラグメントを包含する。本発明はまた、あらゆる塩基が表２１Ａに示された対応する塩基から変化されると同時に、ＳＥＣ６様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る、変異体核酸または改変体核酸、またはこのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。この核酸は、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む、核酸もしくは核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例として、このような修飾としては、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾されたかまたは誘導体化された核酸が挙げられる。これらの修飾は、少なくとも部分的には、例えばそれらが被験体での治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、強化するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、その塩基の約１％までが変化され得る。
【０２５６】
本発明の開示されたＮＯＶ１２タンパク質は、配列が表１２Ｂに提供される配列のＳＥＣ６様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１２Ｂに示された対応する残基から変化され得ると同時に、ＳＥＣ６様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードし得る、変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、その残基の約６％までが変化され得る。
【０２５７】
本発明のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明の範囲内に包含される。このようなペプチドおよびポリペプチドは、任意のキャリア粒子（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合された（または、キャリアの表面上に生物学的に発現した）、このようなペプチドおよびポリペプチドを含む。ＮＯＶ１２のさたなるＳＮＰ改変体が、実施例に開示される。
【０２５８】
本発明はさらに、治療法または診断法における使用のための、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を包含する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１２タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１２エピトープは、およそアミノ酸１〜１１１である。他の実施形態において、企図されるＮＯＶ１２エピトープは、およそアミノ酸１２２〜１９３である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１２エピトープは、およそアミノ酸２１１〜２８４、およそアミノ酸３０５〜３３３、およそアミノ酸３４８〜３６１、およそアミノ酸３９４〜４２８、およそアミノ酸４３５〜４４４、およそアミノ酸４６０〜４８８、およそアミノ酸５０１〜５３３、およそアミノ酸５４４〜５６１、およそアミノ酸５７８〜６５２、およそアミノ酸６８２〜７２５、およそアミノ酸７３８〜７４５である。これらの新規タンパク質は、疾患の病理の理解および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発を助ける、種々のヒト障害の機能分析のためアッセイ系において使用され得る。
【０２５９】
半定量ＰＣＲに基づいて、本発明において開示されるＳＥＣ６は、脂肪組織よりも測定可能に高いレベルで、以下の組織において遍在的に発現される：：副腎、甲状腺、唾液腺、下垂体、脳、大脳皮質、脊髄、心臓、骨格筋、骨髄、胸腺、脾臓、リンパ腺，膵臓、胃、小腸、膀胱、気管、腎臓、肝臓、肺、乳腺、卵巣、子宮、胎盤、前立腺、精巣。本発明はまた、以下の癌細胞株において、（対応する正常組織における発現レベルと比較した場合）なおより高いレベルで発現される：乳癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、結腸癌、胃癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌，メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌。利用可能である場合、ＮＯＶ１２およびＮＯＶ１２改変体についてのさらなる疾患適応および組織発現が、実施例で示される。
【０２６０】
本明細書中に開示されるＳＥＣ６様タンパク質および核酸についてのタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ位置は、このＳＥＣ６がＳＥＣファミリーに特徴的な、重要な構造的機能および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途においておよび研究手段として有用である。これらは、特定もしくは選択的な核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療用途を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標的抗体／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御手段。
【０２６１】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関係する、潜在的な診断用途および治療用途において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患している患者の治療に効力を有する：神経変性障害、および他の疾患、障害および状態など。本発明はまた、対応する正常組織における発現レベルと比較した場合に、乳癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、結腸癌、胃癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌を含む癌細胞株において高いレベルで発現されるので、これらの癌の診断および治療において有用であり得る。
【０２６２】
（ＮＯＶ１３）
新規の２型サイトケラチン様タンパク質をコードする１６０９ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ１３核酸（ＣＧ５０１７９−０１ともいう）（配列番号３１）が、表１３Ａで示される。ヌクレオチド１８〜２０におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１５９６〜１５９８におけるＴＡＧコドンで終了するオープンリーディングフレームが、同定された。開始コドンの上流の推定非翻訳領域および終止コドンの下流の推定非翻訳領域は、表１３Ａにおいて下線を引かれており、そして開始コドンおよび終止コドンは、表１３Ａで太字で示される。
【０２６３】
【表１３Ａ】
2004534518.tif 000125
本発明で開示された２型サイトケラチン様ＮＯＶ１３は、第１２染色体に位置する。
【０２６４】
配列番号３１によってコードされる開示されたＮＯＶ１３ポリペプチド（配列番号３２）は、５２６アミノ酸残基を有し、そして表１３Ｂに一文字コードで表される。ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１３が、シグナルペプチドを有さないことを予測し、そしてＮＯＶ１３が確実性０．４５００で細胞質に局在化される可能性があると、ＰＳＯＲＴにより予測される。別の実施形態において、ＮＯＶ１３は、確実性０．３０００でマイクロボディー（ペルオキシソーム）に、または確実性０．１０００でミトコンドリアマトリックス空間に、あるいは確実性０．１０００でリソソーム内腔に局在化される可能性がある。
【０２６５】
【表１３Ｂ】
2004534518.tif 000126
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１３の核酸配列が、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０３３７４４｜ａｃｃ：ＡＢ０３３７４４．１ｍＲＮＡ（２型サイトケラチンについてのＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ）に対して同一な１３６８塩基を１６０１塩基中に（８５％）有することが見出された。ＮＯＶ１３タンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ＴＹＰＥ  ＩＩ  ＣＹＴＯＫＥＲＡＴＩＮ）由来５２４アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｒ０Ｈ５タンパク質に対して同一の４５９アミノ酸残基を５２６アミノ酸残基中に（８７％）、そして類似する４９０アミノ酸残基を５２６アミノ酸残基中に（９３％）有することが見出された。
【０２６６】
公の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１３は、表１３Ｃに記載されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０２６７】
【表１３Ｃ】
2004534518.tif 000127
多重配列アライメントが表１３Ｄ中に示され、本発明のタンパク質が、本発明のタンパク質と表１３Ｃ中に示される関連するタンパク質配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の１番目の列に示される。
【０２６８】
【表１３Ｄ】
2004534518.tif 000128
2004534518.tif 000129
2004534518.tif 000130
他のＢＬＡＳＴの結果は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、このデータベースは、特許および特許公開で公開された配列を含む私有データベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１３Ｅで示したものを含む。
【０２６９】
【表１３Ｅ】
2004534518.tif 000131
本明細書中に開示されるタンパク質における同定可能なドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、続いて、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。結果は、示した位置に以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されたように）をこのタンパク質が含むことを示す：アミノ酸１８６位〜２２４位およびアミノ酸３４９位〜３８１位にドメイン名ｂＺＩＰ（ｂＺＩＰ転写因子）、アミノ酸３００位〜３７６位にドメイン名Ｔｒａｎｓｐｏｓｅ＿８（トランスポザーゼ）、アミノ酸２３９位〜４２６位にドメイン名ＯＥＰ（外膜流出タンパク質）、アミノ酸１３１位〜４４５位にドメイン名フィラメント（中間フィラメントタンパク質）。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似しかつこれらのドメインに類似する、性質を有することを示す。表１３Ｆは、ＮＯＶ１３に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０２７０】
【表１３Ｆ】
2004534518.tif 000132
2004534518.tif 000133
タイプＩＩサイトケラチン様タンパク質をコードする、開示されるＮＯＶ１３核酸は、その配列が表１３Ａに提供される核酸またはそのフラグメントを含む。本発明はまた、その塩基のいずれかが表１３Ａに示される対応する塩基から変化され得るが、このタイプＩＩサイトケラチン様の活性および生理学的機能をなお維持するタンパク質をコードする変異体核酸もしくは改変体核酸、またはこのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、その配列が、まさに記載される核酸配列に対し相補性であって、まさに記載される任意の核酸に対して相補性である核酸フラグメントを含む核酸を含む。本発明はさらに、その構造が化学的改変を含む、核酸または核酸フラグメント、あるいはそれらに対する相補体を含む。このような改変としては、非限定的な例示の目的で、改変された塩基、および糖リン酸のバックボーンが改変または誘導体化されている核酸が挙げられる。これらの改変は、改変された核酸の化学安定性の増大させるために、少なくとも一部が実施され、その結果、例えば、被験体での治療適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸もしくは改変体核酸、およびそれらの相補体において、塩基の約１５％までが、このように変化され得る。
【０２７１】
開示される本発明のＮＯＶ１３タンパク質は、タイプＩＩサイトケラチン様タンパク質を含み、その配列は、表１３Ｂで提供される。本発明はまた、変異体タンパク質または改変体タンパク質（それらの任意の残基が、表１３Ｂに示される対応する残基から変化し得るが、なおもそのタイプＩＩサイトケラチン様の活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする）、あるいはそのフラグメントを含む。この変異体タンパク質または改変体タンパク質において、残基の約１３％までが、変化され得る。
【０２７２】
また、任意のキャリア粒子と融合される（またはキャリアの表面上に生物学的に発現される）ペプチドおよびポリペプチド（例えば、バクテリオファージ粒子）を含む本発明の任意のタンパク質に対して結合高親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明中に含まれる。
【０２７３】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のための本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を含む。これらの抗体は、以下の「抗−ＮＯＶＸ抗体」の項に記載されるように、疎水性（ｈｙｄｒｏｐｈｂｉｃｉｔｙ）チャートからの予測を用いて、当業者に公知の方法に従って産生され得る。この開示されるＮＯＶ１３タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫源として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１３エピトープは、約１〜１３のアミノ酸である。別の実施形態において、企図されるＮＯＶ１３エピトープは、約２８〜５０のアミノ酸である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１３エピトープは、約６６〜７９のアミノ酸であり、約１１６〜２６０のアミノ酸であり、約２７５〜２８０のアミノ酸であり、約２８７〜２９５のアミノ酸であり、約２９８〜４１９のアミノ酸であり、約４３３〜４５１のアミノ酸であり、そして約４９０〜５２６のアミノ酸である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能解析のためのアッセイ系において使用され得、疾患の病理学および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発の理解を助ける。
【０２７４】
本発明で開示されるタイプＩＩサイトケラチンは、少なくとも以下の組織で発現される：皮膚、筋肉、骨、軟骨、結腸癌、および肺。この情報は、本発明に含まれる配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｌｏｎｅ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない）を決定することによって導かれる。
【０２７５】
さらに、この配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓのタイプＩＩサイトケラチンについてのｍＲＮＡ（種Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓにおける完全なｃｄｓホモログ）に密接に関連する（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０３３７４４｜ａｃｃ：ＡＢ０３３７４４．１）の発現パターンに起因して、以下の組織で発現されると予測される：皮膚、筋肉、骨、軟骨、結腸癌、および肺。ＮＯＶ１３およびＮＯＶ１３改変体についてのさらなる疾患の適応症および組織発現は、利用可能である場合、実施例で示される。
【０２７６】
本明細書中に開示されるタイプＩＩサイトケラチン様タンパク質および核酸についてのそのタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマッピング位置は、このタイプＩＩサイトケラチンが、重要な構造および／またはケラチンファミリーに特徴的な生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究道具として有用である。これらは、核酸またはタンパク質の特異的または選択的な診断マーカーおよび／または予後マーカーとして（ここで、その核酸またはタンパク質の存在および量が評価される）、ならびに潜在的な治療適用（例えば、以下：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体の標的（治療標的、診断標的、薬剤標的化／細胞毒性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御対抗手段）として役立つことを含む。
【０２７７】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理学に関与する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、炎症性疾患ならびに感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ、脳脊髄炎、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、造血障害、内分泌疾患、筋肉障害、創傷修復、細菌感染、真菌感染、原虫感染およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる）、疼痛、癌（以下が挙げられるが、これらに限定されない：新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌）、食欲不振、過食症、喘息、アレルギー、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗鬆症、クローン病、多発性硬化症に罹患している患者の処置、そしてオールブライト遺伝性骨異形成症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、前立腺肥大、ならびに精神病性障害および神経学的障害（不安、精神分裂病、躁病性鬱病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞および運動異常（例えば、ハンティングトン病ならびに／または他の病理学および障害）を含む）の処置に対する効力を有する。
【０２７８】
（ＮＯＶ１４）
開示される８７６ヌクレオチドのＮＯＶ１４核酸（９５０７３８９２＿ｄａ１とも呼ばれる）（配列番号３３）は、新規タンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質をコードしており、表１４Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３でのＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド８７４〜８７６でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。その開始コドンおよび終止コドンを、表１４Ａにおいて太字で示す。
【０２７９】
【表１４Ａ】
2004534518.tif 000134
本発明に開示されるタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様ＮＯＶ１４は、２１番染色体に位置する。
【０２８０】
配列番号３３によってコードされる、開示されるＮＯＶ１４ポリペプチド（配列番号３４）は、２９１アミノ酸残基を有し、そして表１４Ｂにおいて１文字コードを用いて示される。ＮＯＶ１４ポリペプチドは、タイプＩｂ（Ｎｅｘｏ  Ｃｃｙｔ）膜タンパク質であるようである。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを用いたＮＯＶ１４の分析は、残基２０７〜２２３（２０３−２２６）で膜貫通ドメインを有する−３．１３の尤度を予測する。本明細書中で分析される場合、ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標（Ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ）は、ＰＳＯＲＴがその予測において常に正確ではないことを示唆する。Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性は、タンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質が形質膜に局在され得ると示唆するが、ＳｉｇｎａｌＰは、シグナルペプチドが存在しないことを示す。ここで予測されるタンパク質は、真核生物のタンパク質キナーゼドメインを含み、そしてそのメンバーが細胞内の亜細胞局在を有すると予想されるタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫファミリーに類似する。さらに、Ｓｎｆ１／ＡＭＰＫタンパク質キナーゼファミリーのメンバーは、細胞内に局在されることが示されている（ＥＭＢＯ  Ｊ  １９９９  Ｄｅｃ  １；１８（２３）：６６７２−８１）。従って、この新規タンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質は、同様の亜細胞局在で有効であり、そしてそれ故に、診断用プローブに、そして種々の治療適用について利用しやすい可能性がある。にもかかわらず、ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ１４が、０．７０００の確実度で形質膜に局在される可能性があることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１４は、０．４５９９の確実度で微小体（ペルオキシソーム）に、または０．２０００の確実度で小胞体膜に、または０．１０００の確実度でミトコンドリア内膜に局在される可能性がある。
【０２８１】
【表１４Ｂ】
2004534518.tif 000135
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１４の核酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＸ０２４７２９｜ａｃｃ：ＡＸ０２４７２９．１  Ｍｒｎａ（特許ＷＯ００１７２３２の配列１）に対して、８７１塩基の内８２８塩基（９５％）の同一性を有することが、見出された。ＮＯＶ１４のタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の７８６アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＮＥＷ−ＡＣＣ：Ｐ５７０５９のタンパク質（有望なセリン／スレオニンタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ（ＥＣ  ２．７．１．−））に対して、２５９アミノ酸残基の内２５６アミノ酸残基（９８％）の同一性、および２５９アミノ酸残基の内２５６アミノ酸残基（９８％）の類似性を有することが、見出された。本発明のその配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓの＞ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＮＥＷ−ＡＣＣ：Ｐ５７０５９の有望なセリン／スレオニンタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ（ＥＣ  ２．７．１．−）（７８６アミノ酸）と比較した場合、４９２アミノ酸（２６０位〜７５１位）を欠いている。本発明のその配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓの＞ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＮＥＷ  ＡＣＣ：Ｐ５７０５９の有望なセリン／スレオニンタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ（ＥＣ  ２．７．１．−）（７８６アミノ酸）と比較した場合、さらなる、より小さな差異を有する。
【０２８２】
公共の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１４は、表１４Ｃに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０２８３】
【表１４Ｃ】
2004534518.tif 000136
表１４Ｃに示される関連タンパク質配列を有する本発明のタンパク質と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析での第１列上に示されている本発明のタンパク質との複数の配列アラインメントは、表１４Ｄに示される。
【０２８４】
【表１４Ｄ】
2004534518.tif 000137
2004534518.tif 000138
2004534518.tif 000139
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベース（特許および特許公開で公開された配列を含む独自のデータベース）由来の配列を含む。Ｐａｔｐの結果は、表１４Ｅに列挙される配列を含む。
【０２８５】
【表１４Ｅ】
2004534518.tif 000140
本明細書中に開示されるタンパク質中での識別可能ドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。これらの結果は、このタンパク質が、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されるような）以下のタンパク質ドメインを示される部位で含むことを示す：アミノ酸位２７〜２５６での真核生物のタンパク質キナーゼドメイン（ＩＰＲ０００７１９）。これは、本発明の配列が、このドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性に類似し、そしてこれらのドメインの特性に類似する特性を有することを示す。表１４Ｆは、ＮＯＶ１４に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記述を列挙する。
【０２８６】
【表１４Ｆ】
2004534518.tif 000141
2004534518.tif 000142
タンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質をコードする、開示されるＮＯＶ１４核酸は、その配列が表１４Ａで提供される核酸、またはそのフラグメントを含む。本発明は変異体核酸もしくは改変体核酸（また、その塩基のいずれかが表１４Ａに示される対応する塩基から変化され得るが、なおもそのタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする）、またはこのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、その配列が、まさに記載される核酸配列に対し相補性である核酸を含み、まさに記載される任意の核酸に対して相補性である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、その構造が化学的改変を含む、核酸または核酸フラグメント、あるいはそれらに対する相補体を含む。このような改変としては、非限定的な例示の目的で、改変された塩基、および糖リン酸のバックボーンが改変または誘導体化されている核酸が挙げられる。これらの改変は、改変された核酸の化学安定性の増大させるために、少なくとも一部が実施され、その結果、例えば、被験体での治療適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸もしくは改変体核酸、およびそれらの相補体において、塩基の約５％までは、このように変化され得る。
【０２８７】
開示される本発明のＮＯＶ１４タンパク質は、その配列が表１４Ｂで提供されるタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質を含む。本発明はまた、変異体タンパク質または改変体タンパク質（それらの任意の残基が、表１４Ｂに示される対応する残基から変化され得るが、なおもそのタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様の活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする）、あるいはその機能フラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、残基の約２％までは、このように変化され得る。
【０２８８】
また、任意のキャリア粒子に融合される（またはキャリアの表面上に生物学的に発現される）ペプチドおよびポリペプチド（例えば、バクテリオファージ粒子）を含む、本発明の任意のタンパク質に対して結合高親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明中に含まれる。ＮＯＶ１４のさらなるＳＮＰ改変体は、実施例に開示される。
【０２８９】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のための本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を含む。これらの抗体は、以下の「抗−ＮＯＶＸ抗体」の項に記載されるように、疎水性チャートからの予測を用いて、当業者に公知の方法に従って産生され得る。この開示されるＮＯＶ１４タンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫源として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１４エピトープは、約１〜３０のアミノ酸である。別の実施形態において、企図されるＮＯＶ１４エピトープは、約３５〜４５のアミノ酸である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１４エピトープは、約５０〜８４のアミノ酸であり、約８７〜９２のアミノ酸であり、約９８〜１０６のアミノ酸であり、約１０９〜１６０のアミノ酸であり、約１６５〜２０６のアミノ酸であり、約２２６〜２４８のアミノ酸であり、そして約２８４〜２９１のアミノ酸である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能解析のためのアッセイ系において使用され得、疾患の病理学および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発の理解を助ける。
【０２９０】
本発明で開示されるタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫは、以下の組織の少なくともいくつかにおいて発現される：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児の脳、胎児の腎、胎児の肝，胎児の肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、睾丸、甲状腺、気管、子宮。この情報は、本発明に含まれる配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない）を決定することによって導かれる。
【０２９１】
さらに、この配列は、種Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓにおいて密接に関連するホモログであるＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＸ０２４７２９｜ａｃｃ：ＡＸ０２４７２９．１の発現パターンに起因して、ケラチノサイトで発現されると予測される。ＮＯＶ１４およびＮＯＶ１４改変体についてのさらなる疾患の適応症および組織発現は、利用可能である場合、実施例で示される。
【０２９２】
本明細書中に開示されるタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫ様タンパク質および核酸についてのそのタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマッピング位置は、このタンパク質キナーゼＳＮＦ１ＬＫが、重要な構造および／またはセリン／スレオニンタンパク質キナーゼファミリーに特徴的な生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究道具として有用である。これらは、核酸およびタンパク質の特異的または選択的な診断マーカーおよび／または予後マーカーとして（ここで、その核酸またはタンパク質の存在および量が評価される）、ならびに潜在的な治療適用（例えば、以下：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体の標的（治療標的、診断標的、薬剤標的化／細胞毒性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御対抗手段）として役立つことを含む。
【０２９３】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理学に関与する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、高血漿塩（ｈｉｇｈ  ｐｌａｓｍａ  ｓａｌｔ）およびＡＣＴＨ刺激に応答する副腎皮質の機能の調節に関連する疾患、海馬および皮質の機能不全に関連する障害、ならびに他の疾患、障害および状態などに罹患している患者の処置に対して抗力を有し得る。
【０２９４】
（ＮＯＶ１５）
ＮＯＶ１５は、新規な２つのＣＤ３９Ｌ２様タンパク質を含む。その開示される配列は、ＮＯＶ１５ａおよびＮＯＶ１５ｂと名付けられている。ＮＯＶ１５ａまたはＮＯＶ１５ｂとして特異的に呼ばれ（ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）ない場合、ＮＯＶ１５に対する任意の参照は、全ての改変体を含むと考えられる。
【０２９５】
２６９３ヌクレオチドの開示されるＮＯＶ１５ａ核酸（ｓｇｇｃ＿ｄｒａｆｔ＿ｂａ２９４ａ４＿２００００８０８またはＣＧ５０１６３−０１とも呼ばれる）（配列番号３５）は、新規ＣＤ３９Ｌ２様タンパク質をコードしており、表１５Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１３０〜１３２でのＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１５３１〜１５３３でのＴＡＧコドンで終止することが同定された。表１５Ａにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０２９６】
【表１５Ａ】
2004534518.tif 000143
本発明に開示されるこのＣＤ３９Ｌ２様ＮＯＶ１５は、２０番染色体に位置する。
【０２９７】
配列番号３５によってコードされる、開示されるＮＯＶ１５ａポリペプチド（配列番号３６）は、４６７アミノ酸残基を有し、そして表１５Ｂにおいて１文字コードを用いて示される。ＮＯＶ１５ａポリペプチドは、タイプＩＩ（Ｎｃｙｔ  Ｃｅｘｏ）膜タンパク質であるようである。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを用いたＮＯＶ１５ａの分析は、残基２７〜４３（２３〜４３）で膜貫通ドメインを有する−２．６０の尤度を予測する。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ１５ａが、０．７９００の確実度で細胞外または形質膜に局在される可能性があることを予測する。この予測は、他のファミリーメンバーが細胞外または形質膜に局在され得ると示している文献（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００年１０月２４日；３９（４２）：１２９１６−２３）からのデータによって確認される。代替の実施形態において、ＮＯＶ１５ａは、０．７４８０の確実度で微小体（ペルオキシソーム）に、または０．３０００の確実度でゴルジ体に、または０．２０００の確実度で小胞体膜に局在される可能性がある。
【０２９８】
【表１５Ｂ】
2004534518.tif 000144
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１５ａの核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０３９９１６｜ａｃｃ：ＡＦ０３９９１６．１  Ｍｒｎａ（ＣＤ３９Ｌ２）Ｍｒｎａ，完全ｃｄｓ）に対して、２５６７塩基の内２５６４塩基（９９％）の同一性を有することが、見出された。ＮＯＶ１５ａのタンパク質の全アミノ酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｏ７５３５４タンパク質（４８４アミノ酸残基）（ＣＤ３９Ｌ２）に対して、４６６アミノ酸残基の内４６５アミノ酸残基（９９％）の同一性、および４６６アミノ酸残基の内４６６アミノ酸残基（１００％）の類似性を有することが、見出された。本発明のこの配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｏ７５３５４タンパク質（ＣＤ３９Ｌ２）と比較する場合、異なる開始点および別のアミノ酸変化を有する。
【０２９９】
代替の実施形態において、ＮＯＶ１５改変体は、新規ＣＤ３９Ｌ２様タンパク質をコードする２６４８ヌクレオチドのＮＯＶ１５ｂ核酸（また、ＣＧ５０１６３−０２とも呼ばれる）（配列番号３７）であり、表１５Ｃに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１４８〜１５０でのＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１４８６〜１４８８でのＴＡＧコドンで終止することが同定された。表１５Ｃにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０３００】
【表１５Ｃ】
2004534518.tif 000145
2004534518.tif 000146
コードされるＮＯＶ１５ｂのタンパク質（配列番号３８）は、４４６アミノ酸残基を有し、表１５Ｄに１文字コードで示される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ１５ｂが、０．７２５２の確実度で微小体（ペルオキシソーム）に局在される可能性があることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１５ｂは、０．１７９３の確実度でリソソーム管腔に、または０．１０００の確実度でミトコンドリアマトリクス空間に、または０．００００（明らかでない）の確実度で小胞体膜に局在される可能性がある。
【０３０１】
【表１５Ｄ】
2004534518.tif 000147
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１５ｂの核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０３９９１６｜ａｃｃ：ＡＦ０３９９１６．１  ｍＲＮＡ（ＣＤ３９Ｌ２）ｍＲＮＡ，完全ｃｄｓ）に対して、２３８０塩基の内２３７７塩基（９９％）の同一性を有することが、見出された。ＮＯＶ１５ｂのタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＵＪＤｌタンパク質（４８４アミノ酸残基）（ＤＪ７３８Ｐ１５．２（ＣＤ３９様２、ヌクレオシドホスファターゼ））に対して、４０４アミノ酸残基の内４０３アミノ酸残基（９９％）の同一性、および４０４アミノ酸残基の内４０３アミノ酸残基（９９％）の類似性を有することが、見出された。個々のアミノ酸の差異に加えて、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＵＪＤｌタンパク質（ＤＪ７３８Ｐ１５．２（ＣＤ３９様２、ヌクレオシドホスファターゼ））と比較した場合、本発明のこの配列は、３８個の内部アミノ酸を欠いている。
【０３０２】
公共の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１５は、表１５Ｅに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０３０３】
【表１５Ｅ】
2004534518.tif 000148
表１５Ｅに示される関連タンパク質配列を有する本発明のタンパク質と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析での第１列および第２列の列上に示されている本発明のタンパク質との複数の配列アラインメントは、表１５Ｆに示される。
【０３０４】
【表１５Ｆ】
2004534518.tif 000149
2004534518.tif 000150
2004534518.tif 000151
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベース（特許および特許公開で公開された配列を含む独自のデータベース）由来の配列を含む。Ｐａｔｐ結果は、表１５Ｇに列挙される配列を含む。
【０３０５】
【表１５Ｇ】
2004534518.tif 000152
本明細書中に開示されるタンパク質中での識別可能ドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。ＮＯＶ１５ａについての結果は、このタンパク質が、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されるような）以下のタンパク質ドメインを示される部位で含むことを示す：アミノ酸位７６〜４６６でドメイン名ＧＤＡ１／ＣＤ３９（ヌクレオシドホスファターゼ）ファミリー。これは、本発明の配列が、このドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性に類似し、そしてこれらのドメインの特性に類似する特性を有することを示す。さらに、ＮＯＶ１５ｂについての結果は、このタンパク質が、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されるような）以下のタンパク質ドメインを示される部位で含むことを示す：アミノ酸部位５５〜４４５でドメイン名ＧＤＡ１／ＣＤ３９（ヌクレオシドホスファターゼ）。これは、本発明の配列が、このドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性に類似し、そしてこれらのドメインの特性に類似する特性を有することを示す。表１５Ｈは、ＮＯＶ１５に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記述を列挙する。
【０３０６】
【表１５Ｈ】
2004534518.tif 000153
ＣＤ３９Ｌ２様タンパク質をコードする、開示されるＮＯＶ１５核酸は、その配列が表１５Ａおよび表１５Ｃに提供される核酸、またはそのフラグメントを含む。本発明はまた、変異体核酸もしくは改変体核酸（その塩基のいずれかが表１５Ａまたは表１５Ｃに示される対応する塩基から変化し得るが、なおもそのＣＤ３９Ｌ２様の活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする）、またはこのような核酸のフラグメントを含む。本発明はさらに、その配列が、まさに記載される核酸に対して相補性である核酸を含み、この核酸は、まさに記載される任意の核酸に対して相補性である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、その構造が化学的改変を含む、核酸または核酸フラグメント、あるいはそれらに対する相補体を含む。このような改変としては、非限定的な例示の目的で、改変された塩基、および糖リン酸のバックボーンが改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、改変された核酸の化学安定性の増大させるために、少なくとも一部が実施され、その結果、例えば、被験体での治療適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。変異体核酸もしくは改変体核酸、およびそれらの相補体において、塩基の約１％までは、このように変化され得る。
【０３０７】
開示される本発明のＮＯＶ１５タンパク質は、その配列が表１５Ｂおよび表１５Ｄで提供されるＣＤ３９Ｌ２様タンパク質を含む。本発明はまた、変異体タンパク質または改変体タンパク質（それらの任意の残基が、表１５Ｂまたは表１５Ｄに示される対応する残基から変化し得る一方で、なおもそのＣＤ３９Ｌ２様の活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする）、あるいはその機能フラグメントを含む。この変異体タンパク質または改変体タンパク質において、残基の約１％までは、このように変化され得る。
【０３０８】
また、任意のキャリア粒子と融合される（またはキャリアの表面上に生物学的に発現される）ペプチドおよびポリペプチド（例えば、バクテリオファージ粒子）を含む本発明の任意のタンパク質に対して結合高親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドは、本発明中に含まれる。ＮＯＶ１５のさらなるＳＮＰ改変体は、実施例に開示される。
【０３０９】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のための本発明の任意のタンパク質に免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を含む。これらの抗体は、以下の「抗−ＮＯＶＸ抗体」の項に記載されるように、疎水性チャートからの予測を用いて、当業者に公知の方法に従って産生され得る。この開示されるＮＯＶ１５ａタンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫源として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ａエピトープは、約アミノ酸１〜２４である。別の実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ａエピトープは、約アミノ酸５０〜８２である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ａエピトープは、約アミノ酸９６〜１５１であり、約アミノ酸１７２〜１８８であり、約アミノ酸２５４〜２７７であり、約アミノ酸２９２〜３３７であり、約３４２〜３６６であり、約アミノ酸３９６〜４１４であり、約４３２〜４４７であり、そして約４５４〜４６７である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能解析のためのアッセイ系において使用され得、疾患の病理学および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発の理解を助ける。この開示されるＮＯＶ１５ｂタンパク質は、複数の疎水性領域を有し、その各々が、免疫源として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ｂエピトープは、約アミノ酸１〜５７である。別の実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ｂエピトープは、約アミノ酸７５〜１３２である。他の特定の実施形態において、企図されるＮＯＶ１５ｂエピトープは、約アミノ酸１５０〜１６３であり、約アミノ酸２３２〜２５７であり、約アミノ酸２７２〜３１０、約アミノ酸３２２〜３４５、約アミノ酸３７５〜３９２、約アミノ酸４０９〜４２０、そして約アミノ酸４３１〜４４６である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能解析のためのアッセイ系において使用され得、疾患の病理学および種々の障害に対する新たな薬物標的の開発の理解を助ける。
【０３１０】
本発明で開示されるＣＤ３９Ｌ２は、少なくとも以下の組織において発現される：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児の脳、胎児の腎、胎児の肝，胎児の肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮、小脳延髄／大脳白質、冠状動脈、毛包、肝臓、肺、リンパ節、卵巣，生物全体、結腸、末梢血。この情報は、本発明に含まれる配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない）を決定することによって導かれる。
【０３１１】
さらに、ＮＯＶ１５は、密接に関連する種Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓにおけるＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＣＤ３９Ｌ２（ＣＤ３９Ｌ２）Ｍｒｎａの完全なｃｄｓホモログ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０３９９１６｜ａｃｃ：ＡＦ０３９９１６．１）の発現パターンに起因して、ケラチノサイトで発現されることが予測される。ＮＯＶ１５およびＮＯＶ１５改変体についてのさらなる疾患の適応症、および組織発現は、利用可能である場合、実施例で示される。
【０３１２】
本明細書中に開示されるＣＤ３９Ｌ２様タンパク質および核酸についてのそのタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマッピング位置は、このＣＤ３９Ｌ２が、重要な構造および／またはヌクレオシドホスファターゼファミリーに特徴的な生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究道具として有用である。これらは、核酸またはタンパク質の特異的または選択的な診断マーカーおよび／または予後マーカーとして（ここで、その核酸またはタンパク質の存在および量が評価される）、ならびに潜在的な治療適用（例えば、以下：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体の標的（治療標的、診断標的、薬剤標的化／細胞毒性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御対抗手段）として役立つことを含む。
【０３１３】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理学に関与する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、血栓症、アテローム硬化症、出血性疾病素質、血小板機能の調節不全に関連する他の心臓血管疾患、痙攣、ならびに他の疾患、障害、および状態などに罹患している患者の処置に対して抗力を有し得る。
【０３１４】
（ＮＯＶ１６）
１５１５ヌクレオチドの、開示されるＮＯＶ１６核酸（６１１１６０２９＿ＧＲＡＩＬとも呼ばれる）（配列番号３９）は、新規Ｐ４５０様タンパク質をコードしており、表１６Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３でのＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１５１３〜１５１５でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。その開始コドンおよび終止コドンを、表１６Ａにおいて太字で示す。
【０３１５】
【表１６Ａ】
2004534518.tif 000154
本発明に開示されるＰ４５０様ＮＯＶ１６は、第１９染色体に位置する。
【０３１６】
配列番号３９によってコードされる、開示されるＮＯＶ１６ポリペプチド（配列番号４０）は、５０５アミノ酸残基を有し、そして表１６Ｂに１文字コードを用いて示される。ＮＯＶ１６ポリペプチドは、Ｉｂ型（Ｎｅｘｏ  Ｃｃｙｔ）膜タンパク質であるようである。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを用いたＮＯＶ１６の分析は、残基８〜２４（１〜２８）で膜貫通ドメインを有する−１０．９３の尤度を予測する。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ１６がシグナルペプチドを有し、そして０．８２００の確実度で小胞体膜に局在される可能性があることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１６は、０．３２００の確実度で微小体（ペルオキシソーム）に、または０．１９００の確実度で形質膜に、または０．１０００の確実度で小胞体腔局在される可能性がある。ＮＯＶ１６シグナルペプチドについて最も有望な切断部位は、アミノ酸２８と２９との間（すなわち、配列ＴＲＡ−ＲＧ中のダッシュ（ｄａｓｈ）部分）である。
【０３１７】
【表１６Ｂ】
2004534518.tif 000155
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１６の核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ  ＩＤ：ＨＵＭＣＹＩＩＡ４Ａ｜ａｃｃ：Ｍ３３３１７．１  Ｍｒｎａ（ヒトシトクロムＰ４５０ＩＩＡ４（ＣＹＰ２Ａ４）Ｍｒｎａ，完全ｃｄｓ）に対し、１４８４塩基の内９７３塩基（６５％）の同一性を有することが、見出された。ＮＯＶ１６のタンパク質の全アミノ酸配列が、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ０４１６７のタンパク質（シトクロムＰ４５０  ２Ｂ２（ＥＣ  １．１４．１４．１）（ＣＹＰＩＩＢ２）（Ｐ４５０Ｅ）（Ｐ４５０ＰＢ４））（４９１アミノ酸残基）に対し、４８２アミノ酸残基の内２４３アミノ酸残基（５０％）の同一性、および４８２アミノ酸残基の内３４０アミノ酸残基（７０％）の類似性を有することが、見出された。
【０３１８】
公共の配列データベースの検索において、ＮＯＶ１６は、表１６Ｃに列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０３１９】
【表１６Ｃ】
2004534518.tif 000156
表１６Ｃに示される関連タンパク質配列を有する本発明のタンパク質と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析での第１列上に示されている本発明のタンパク質との複数の配列アラインメントは、表１６Ｄに示される。
【０３２０】
【表１６Ｄ】
2004534518.tif 000157
2004534518.tif 000158
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベース（特許および特許公開で公開された配列を含む独自のデータベース）由来の配列を含む。Ｐａｔｐ結果は、表１６Ｅに列挙される配列を含む。
【０３２１】
【表１６Ｅ】
2004534518.tif 000159
本明細書中に開示されるタンパク質中での識別可能ドメインの存在は、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。この結果は、このタンパク質が、（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されるような）以下のタンパク質ドメインを示される部位で含むことを示す：アミノ酸位３３〜４９３でドメイン名ＩＰＲ００１１２８。これは、本発明の配列が、このドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性に類似し、そしてこれらのドメインの特性に類似する特性を有することを示す。表１６Ｆは、ＮＯＶ１６に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記述を列挙する。
【０３２２】
【表１６Ｆ】
2004534518.tif 000160
2004534518.tif 000161
Ｐ４５０−様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１６核酸は、表１６Ａ中に提供された配列またはそのフラグメントの核酸を含む。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１６Ａに示された対応する塩基から変化され得るが、Ｐ４５０−様タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸もしくは改変体核酸、またはそのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列が先程記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含む。これは、先程記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸もしくは核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例によって、このような修飾は、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された、または誘導体化された核酸を含む。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に強化するように行われる。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、塩基の約３５％までがそのように変化され得る。
【０３２３】
本発明の開示されたＮＯＶ１６タンパク質は、配列が表１６Ｂに提供されるＰ４５０−様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１６Ｂに示された対応する残基から変化され得るが、Ｐ４５０−様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントも含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、残基の約５０％までがそのように変化され得る。
【０３２４】
本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明の範囲内に包含される。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０３２５】
本発明はさらに、治療方法および診断方法における使用のための、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を含有する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１６タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。一つの実施形態において、予測されるＮＯＶ１６エピトープは、アミノ酸約１〜約９である。別の実施形態において、ＮＯＶ１６エピトープは、アミノ酸約２７〜約３８である。他の特定の実施形態において、予測されるＮＯＶ１６エピトープは、アミノ酸約５５〜約６０、アミノ酸約９１〜約１０９、アミノ酸約１１４〜約１７５、アミノ酸約１９５〜約２０５、アミノ酸約２１３〜約２４１、アミノ酸約２４９〜約２６８、アミノ酸約２７３〜約２９１、アミノ酸約３２１〜約３５８、アミノ酸約３７４〜約３９１、アミノ酸約４０１〜約４３６、アミノ酸約４６８〜約４７５、およびアミノ酸約４９０〜約５０５である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、このアッセイ系は、疾患の病理学の理解および種々の疾患に対する新しい薬物標的の開発を介助する。
【０３２６】
本発明において開示されたＰ４５０は、少なくとも以下の組織で発現される：肝臓。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ（文献）情報源、および／またはＲＡＣＥ情報源を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織情報源を決定することによって導かれた。
【０３２７】
さらに、この配列は、（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＵＭＣＹＩＬＡ４Ａ｜ａｃｃ：Ｍ３３３１７．１）（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ種：肝臓における完全ｃｄｓホモログに近縁のヒトシトクロムＰ４５０ＩＬＡ４（ＣＹＰ２Ａ４）Ｍｒｎａ）の発現パターンに起因して、以下の組織において発現されると予想される。さらなる疾患の兆候ならびにＮＯＶ１６およびＮＯＶ１６変異体についての組織発現は、利用可能である場合、実施例において表示される。
【０３２８】
本明細書中に開示されるＰ４５０様タンパク質および核酸に対するタンパク質の類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、このＰ４５０が、シトクロムＰ４５０ファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。よって、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究手段として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０３２９】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の症状に関係する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。
【０３３０】
（ＮＯＶ１７）
新規のＣＧ−１３３７９様タンパク質をコードする１１８５ヌクレオチド（ＡＣ００４５９６＿Ａともいう）の開示されたＮＯＶ１７核酸（配列番号４１）は、表１７Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１１８３〜１１８５におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。開始コドンおよび終止コドンは、表１７Ａで太い文字で示される。
【０３３１】
【表１７Ａ】
2004534518.tif 000162
本発明で開示されたＣＧ１３３７９様ＮＯＶ１７は、第１７染色体に位置する。
【０３３２】
配列番号４１によってコードされる開示されたＮＯＶ１７ポリペプチド（配列番号４２）は、３９４アミノ酸残基を有し、そして表１７Ｂに１文字のコードで表される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１７が、シグナルペプチドを有さず、そしてＰＳＯＲＴによって予想される０．７０００の確実性で核に位置付けられると思われる。代替の実施形態において、ＮＯＶ１７は、０．３０００の確実性でマイクロボディー（ペルオキシソーム）に、または０．１０００の確実性でミトコンドリアのマトリックス空間に、あるいは０．１０００の確実性でリソソーム管腔に位置付けられると思われる。
【０３３３】
【表１７Ｂ】
2004534518.tif 000163
配列データベースの検索において、本発明のＮＯＶ１７のアミノ酸配列は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ＣＧ１３３７９  ＰＲＯＴＥＩＮ）由来の２２３アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＶＶＲ６タンパク質に対して１３５アミノ酸残基中６０アミノ酸残基（４４％）の同一性、そして１３５アミノ酸残基中７９アミノ酸残基（５８％）類似性を有することが見出された。
【０３３４】
公開された配列データベースの検索において、ＮＯＶ１７は、表１７Ｃ中に列挙されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に対して、相同性を有することが見出された。
【０３３５】
【表１７Ｃ】
2004534518.tif 000164
マルチプル配列アライメントを、表１７Ｄに示し、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質と表１７Ｃで示される関連するタンパク質の配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析の１番目の列に示される。
【０３３６】
【表１７Ｄ】
2004534518.tif 000165
2004534518.tif 000166
2004534518.tif 000167
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、これは特許および特許出願中で公開された配列を含む独占のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１７Ｅ中に列挙されたものを含む。
【０３３７】
【表１７Ｅ】
2004534518.tif 000168
本明細書中に開示されるタンパク質中の同定可能なドメインの存在は、対ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）の検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。表１７Ｆは、ＮＯＶ１７に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０３３８】
【表１７Ｆ】
2004534518.tif 000169
ＣＧ１３３７９様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１７核酸としては、表１７Ａで提供される核酸配列またはそのフラグメントが挙げられる。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１７Ａに示された対応する塩基から変化され得るが、ＣＧ１３３７９様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸もしくは改変体核酸、またはこのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含み、これは、ちょうど記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸もしくは核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例によって、このような修飾は、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された核酸または誘導体化された核酸を含む。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に増強するために実施される。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、塩基の約５６％までが、そのように変化され得る。
【０３３９】
本発明の開示されたＮＯＶ１７タンパク質は、配列が表１７Ｂに提供される配列のＣＧ１３３７９様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１７Ｂに示された対応する残基から変化され得るが、ＣＧ１３３７９様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、残基の約５６％までがそのように変化され得る。
【０３４０】
本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた、本発明の範囲内に含まれる。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０３４１】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のための、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を含有する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１７タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。１つの実施形態において、予測されるＮＯＶ１７エピトープは、アミノ酸約１〜約５７である。別の実施形態において、予測されるＮＯＶ１７エピトープは、アミノ酸約８６〜約１０６である。他の特定の実施形態において、予測されるＮＯＶ１７エピトープは、アミノ酸約１１０〜約１３７、アミノ酸約１４２〜約２８９、およびアミノ酸約２９７〜約３９４である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新しい薬物標的の開発を介助する。
【０３４２】
本発明において開示されたＣＧ１３３７９は、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪、骨格筋、肝臓および脳。この情報は、Ｃｕｒａｇｅｎによる動物研究からの発現データから誘導された。本発明のタンパク質のコード配列に特有の制限フラグメントは、以下の代謝組織由来のｃＤＮＡにおいて発見された：肥満、高脂質血症、ＩＩ型糖尿病および代謝症候群Ｘのラットモデル。さらなる疾患の兆候ならびにＮＯＶ１７およびＮＯＶ１７変異体についての組織発現は、利用可能である場合、実施例中に表示される。
本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究手段として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０３４３】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の症状に関係する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患した患者の処置に対して有効である：異常脂質血症、インスリン耐性、肥満、高血圧および代謝症候群Ｘに関連する他の状態、ならびにこのような障害。
【０３４４】
（ＮＯＶ１８）
新規のカルシウム輸送様タンパク質をコードする２１９３ヌクレオチド（ＡＣ０７３０７９＿Ｃともいう）の開示されたＮＯＶ１８核酸（配列番号４３）は、表１８Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド２１９１〜２１９３におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。開始コドンおよび終止コドンは、表１８Ａで太い文字で示される。
【０３４５】
【表１８Ａ】
2004534518.tif 000170
本発明で開示されたカルシウム輸送様ＮＯＶ１８は、第７染色体に位置する。
【０３４６】
配列番号４３によってコードされる開示されたＮＯＶ１８ポリペプチド（配列番号４４）は、７３０アミノ酸残基を有し、そして表１８Ｂに１文字のコードで表される。ＮＯＶ１８ポリペプチドは、ＩＩＩｂ型（Ｎｅｘｏ  Ｃｃｙｔ）膜タンパク質でありそうである。ＩＮＴＥＧＲＡＬソフトウェアを使用したＮＯＶ１８の分析は、以下を予測する：−１０．１４の可能性で３７８残基〜４０３残基（３８３残基〜４１４残基）で膜輸送ドメインを有する、−８．３９の可能性で４９７残基〜５１３残基（４８６残基〜５１６残基）で膜輸送ドメインを有する、−８．０１の可能性で５６１残基〜５７７残基（５５０残基〜５８２残基）で膜輸送ドメインを有する、−４．９９の可能性で３３０残基〜３４６残基（３２７残基〜３５０残基）で膜輸送ドメインを有する、−４．３５の可能性で４２６残基〜４４２残基（４２１残基〜４４６残基）で膜輸送ドメインを有する、および−１．３８の可能性で４５２残基〜４６８残基（４５１残基〜４６９残基）で膜輸送ドメインを有する。ＳｉｇｎａｌＰ、ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１８が、０．６０００の確実性で原形質膜に位置付けられそうであるということを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１８は、０．４０００の確実性でゴルジ体に、０．３０００の確実性で小胞体膜に、または０．０３００の確実性でミトコンドリア内膜に位置付けられそうである。
【０３４７】
【表１８Ｂ】
2004534518.tif 000171
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１８の核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＳＡ２７１２０７｜ａｃｃ：ＡＪ２７１２０７．１Ｍｒｎａ（上皮カルシウムチャンネルのためのＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  Ｍｒｎａ（ＥＣＡＣ１遺伝子））に対して２１９３塩基中２１２９塩基（９７％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ１８タンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の７２９アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＮＱＡ５タンパク質（上皮カルシウムチャンネル）に対して７３０アミノ酸残基中７０８アミノ酸残基（９６％）の同一性、そして７３０アミノ酸残基中７１６アミノ酸残基（９８％）の類似性を有することが見出された。
【０３４８】
公開された配列データベースの検索において、ＮＯＶ１８は、表１８Ｃ中に列挙されたＢＬＡＳＴＰデータで示されるアミノ酸配列に相同性を有することが見出された。
【０３４９】
【表１８Ｃ】
2004534518.tif 000172
マルチプル配列アライメントを、表１８Ｄに示し、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質と表１８Ｃで示される関連したタンパク質の配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の１番目の列に示される。
【０３５０】
【表１８Ｄ】
2004534518.tif 000173
2004534518.tif 000174
他のＢＬＡＳＴ結果は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、これは、特許および特許出願中で公開された配列を含む、独占のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１８Ｅ中に列挙されるこれらを含む
【０３５１】
【表１８Ｅ】
2004534518.tif 000175
本明細書中に開示されるタンパク質中の同定可能なドメインの存在は、対ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）の検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。表１８Ｆは、ＮＯＶ１８に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０３５２】
【表１８Ｆ】
2004534518.tif 000176
2004534518.tif 000177
カルシウム輸送様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１８核酸としては、表１８Ａで提供される核酸配列またはそのフラグメントが挙げられる。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１８Ａに示された対応する塩基から変化され得るが、カルシウム輸送様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸または改変体核酸、もしくはこのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含み、これは、ちょうど記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸または核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例によって、このような修飾は、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された核酸、または誘導体化された核酸を含む。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に増強するために実施される。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、塩基の約３％までが、そのように変化され得る。
【０３５３】
本発明の開示されたＮＯＶ１８タンパク質は、配列が表１８Ｂに提供される配列のカルシウム輸送様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１８Ｂに示された対応する残基から変化され得るが、カルシウム輸送様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質あるいは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントを含む。変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質において、残基の４％までがそのように変化され得る。
【０３５４】
本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた、本発明の範囲内に含まれる。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。ＮＯＶ１８のさらなるＳＮＰ変異体は、実施例において開示される。
【０３５５】
本発明はさらに、治療方法および診断方法における使用のための、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を含有する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１８タンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。１つの実施形態において、予測されるＮＯＶ１８エピトープは、約アミノ酸１〜８４である。別の実施形態において、予測されるＮＯＶ１８エピトープは、約アミノ酸１４５〜１６５である。他の特定の実施形態において、予測されるＮＯＶ１８エピトープは、アミノ酸約１８１〜約１９３、アミノ酸約２１６〜約２４８、アミノ酸約２５５〜約２８７、アミノ酸約２９４〜約３２６、アミノ酸約３５０〜約３８６、アミノ酸約５１６〜約５２６、アミノ酸約５８１〜約６００、アミノ酸約６０８〜約６７７、およびアミノ酸約６８６〜約７３０である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新しい薬物標的の開発を介助する。
【０３５６】
本発明において開示されたカルシウム輸送は、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪、骨格筋、肝臓、腎臓および脳。この情報は、Ｃｕｒａｇｅｎによる動物研究からの発現データから誘導された。本発明のタンパク質のコード配列に特有の制限フラグメントは、以下の代謝組織由来のｃＤＮＡにおいて発見された：肥満、高脂質血症、ＩＩ型糖尿病および代謝症候群Ｘのラットモデル。さらなる疾患の兆候ならびにＮＯＶ１８およびＮＯＶ１８変異体についての組織発現は、利用可能である場合、実施例中に表示される。
本明細書中で開示されたカルシウム輸送様タンパク質および核酸についてのタンパク質類似性情報、発現パターンおよびマップ配置は、このカルシウム輸送が、カルシウム輸送ファミリーに特有の重要な構造機能および／または生理学的機能を有し得るということを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究手段として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０３５７】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の症状に関係する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患した患者の処置に対して有効である：異常脂質血症、インスリン耐性、肥満、高血圧および代謝症候群Ｘに関連する他の状態、ならびにこのような障害。
【０３５８】
（ＮＯＶ１９）
ＮＯＶ１９は、２つの新規の炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質
である。開示された配列は、ＮＯＶ１９ａおよびＮＯＶ１９ｂと命名した。ＮＯＶ１９ａまたはＮＯＶ１９ｂと特に記載しない限り、ＮＯＶ１９に対する任意の参照は、全ての変異体を含有すると想定される。
【０３５９】
新規な炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質をコードする８４７ヌクレオチド（ＭＢＮＭ＿００４０５６＿ｄａ２またはＣＧ５０１５７−０１ともいう）の開示されたＮＯＶ１９ａ核酸（配列番号４５）は、表１９Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド７７５〜７７７におけるＴＡＧコドンで終了すると同定された。推定非翻訳領域は、開始コドンの上流および終止コドンの下流であることが見出され、そして下線を引かれ、そして、開始コドンおよび終止コドンは、表１９Ａ中で太い文字で示される。
【０３６０】
【表１９Ａ】
2004534518.tif 000178
本発明中で開示された炭酸脱水素酵素関連タンパク質様ＮＯＶ１９は、第８染色体に位置する。
【０３６１】
配列番号４５によってコードされる開示されたＮＯＶ１９ａポリペプチド（配列番号４６）は、２５８アミノ酸残基を有し、そして表１９Ｂに１文字のコードで表される。ＳｉｇｎａｌＰ、ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１９ａが０．４５００の確実性で細胞質に位置付けられそうであることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ１９ａが、０．２１０４の確実性でマイクロボディー（ペルオキソーム）に、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス空間に、または０．１０００の確実性でリソソームルーメンに位置付けられそうである。
【０３６２】
【表１９Ｂ】
2004534518.tif 000179
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１９ａの核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＵＭＣＡＲＰ｜ａｃｃ：Ｌ０４６５６．１Ｍｒｎａ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ炭酸脱水素酵素タンパク質ＶＩＩＩ（ＣＡ８）Ｍｒｎａ、部分的ｃｄｓ）に対して４３２塩基中４３２塩基（１００％）の同一性を有することが見出された。本発明のタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の２９０アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ３５２１９タンパク質（炭酸脱水素酵素関連タンパク質（ＣＡＲＰ）（ＣＡ−ＶＩＩＩ））に対して１４４アミノ酸残基中１４０アミノ酸残基（９７％）の同一性、そして１４４アミノ酸残基中１４１アミノ酸残基（９７％）の類似性を有することが見出された。
【０３６３】
代替の実施形態において、ＮＯＶ１９変異体は、表１９Ｃ中に示される新規炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質をコードする８４７ヌクレオチド（ＣＧ５０１５７−０２ともいう）のＮＯＶ１９ｂ核酸である（配列番号４７）。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３で始まり、そしてヌクレオチド７７５〜７７７で終了すると同定された。オープンリーディングフレームの開始コドンおよび終止コドンは、太い文字で示される。推定非翻訳領域（下線）は、開始コドンの上流および終止コドンの下流であることが見出された。
【０３６４】
【表１９Ｃ】
2004534518.tif 000180
２５８アミノ酸残基を有するにＮＯＶ１９ｂのコード化タンパク質（配列番号４８は、表１９Ｄに１文字のコードで表される。ＰＳＯＲＴ、ＳｉｇｎａｌＰおよびｈｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１９ｂが、シグナルペプチドを有さず、そして、ＰＳＯＲＴによって予測された０．４５００の確実性で原形質に位置付けられそうであることを予測した。代替の実施形態において、ＮＯＶ１９ｂは、０．２１０４の確実性でマイクロボディー（ペルオキソーム）に、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス空間に、または０．１０００の確実性でリソソームルーメンに位置付けられそうである。ハイドロパシープロフィールは、炭酸脱水素酵素関連タンパク質ファミリーの特性である。
【０３６５】
【表１９Ｄ】
2004534518.tif 000181
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ１９ｂの核酸配列が、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＭＭＣＡＲＰ｜ａｃｃ：Ｘ６１３９７．１Ｍｒｎａ（炭酸脱水素酵素タ関連ポリペプチドに関するマウスＭｒｎａ）に対して４２２塩基中３７７塩基（８９％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ１９ｂのタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の２９０アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ３５２１９タンパク質（炭酸脱水素酵素関連タンパク質（ＣＡＲＰ）（ＣＡ−ＶＩＩＩ））に対して１４４アミノ酸残基中１４０アミノ酸残基（９７％）の同一性、そして１４４アミノ酸残基中１４１アミノ酸残基（９７％）の類似性を有することが見出された。
【０３６６】
公開配列データベースの検索において、ＮＯＶ１９は、表１９Ｅ中に列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対して相同性を有することが見出された。
【０３６７】
【表１９Ｅ】
2004534518.tif 000182
マルチプル配列アライメントが、表１９Ｆに示され、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質と表１９Ｅで示される関連したタンパク質の配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の列１および列２に示される。ＮＯＶ１９ｂは、１４０位〜１７１位で示されるように、炭酸脱水素酵素関連タンパク質のスプライシング形態を示す。
【０３６８】
【表１９Ｆ】
2004534518.tif 000183
2004534518.tif 000184
他のＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、これは特許および特許出願中で公開された配列を含む独占のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表１９Ｇ中に列挙されたものを含む。
【０３６９】
【表１９Ｇ】
2004534518.tif 000185
2004534518.tif 000186
本明細書中に開示されるタンパク質中の同定可能なドメインの存在は、対ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）の検索によって決定され、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定された。この結果は、ＮＯＶ１９ａが、示された位置で以下のタンパク質ドメインを含む（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されたように）ことを示した：アミノ酸２４位〜１３９位およびアミノ酸１４０位〜２５７位でドメイン名ｃａｒｂ＿ａｎｈｙｄｒａｓｅ。ＮＯＶ１９ｂの顕著なドメインは、表１９Ｈ中に要約する。
【０３７０】
【表１９Ｈ】
2004534518.tif 000187
真核生物型の炭酸脱水素酵素であるＩＰＲ００１１４８および炭酸脱水素酵素（ＥＣ４．２．１．１）（ＣＡ）は一般に、二酸化炭素の可逆水和を触媒する、ジンク金属酵素である。炭酸脱水素酵素の８つの酵素的および進化的関連形態は、現在、脊椎動物に存在することが知られている：サイトゾルのアイソザイム（ＣＡ−Ｉ、ＣＡ−ＩＩおよびＣＡ−ＩＩＩ）；２つの膜結合形態（ＣＡ−ＩＶおよびＣＡ−ＶＩＩ）；ミトコンドリア形態（ＣＡ−Ｖ）；分泌唾液形態（ＣＡ−ＶＩ）；および未だ特徴付けられていないアイソザイム。これは、本発明の配列が、この／これらのドメイン（単数または複数）を含むことが知られている他のタンパク質の特性、およびこれらのドメインの特性に類似した特性を有することを示す。表１９Ｉは、ＮＯＶ１９に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。
【０３７１】
【表１９Ｉ】
2004534518.tif 000188
2004534518.tif 000189
炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質をコードする開示されたＮＯＶ１９核酸としては、配列が表１９Ａおよび表１９Ｃで提供される核酸またはそのフラグメントが挙げられる。本発明はまた、それらのあらゆる塩基が表１９Ａまたは表１９Ｃに示された対応する塩基から変化され得るが、炭酸脱水素酵素関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体核酸もしくは改変体核酸、またはこのような核酸のフラグメントも含む。本発明はさらに、配列がちょうど記載されたばかりの配列と相補的である核酸を含み、これは、ちょうど記載したばかりの核酸のいずれかと相補的である核酸フラグメントを含む。本発明はさらに、それらの構造が化学的修飾を含む核酸もしくは核酸フラグメントまたはそれらの相補体を含む。非限定的な例によって、このような修飾は、修飾塩基、および糖リン酸骨格が修飾された核酸、または誘導体化された核酸を含む。これらの修飾は、例えばそれらが被験体への治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得るように、修飾された核酸の化学的安定性を、少なくとも部分的に増強するために実施される。変異体核酸または改変体核酸およびそれらの相補体において、ＮＯＶ１９ａの塩基の約０％までがそのように変化され得、そして、ＮＯＶ１９ｂの塩基の約１１％までがそのように変化され得る。
【０３７２】
本発明の開示されたＮＯＶ１９タンパク質は、配列が表１９Ｂおよび表１９Ｄに提供される配列の炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質を含む。本発明はまた、それらのあらゆる残基が表１９Ｂまたは表１９Ｄに示された対応する残基から変化され得るが、炭酸脱水素酵素関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をなおコードする変異体タンパク質もしくは改変体タンパク質、またはそれらの機能的なフラグメントを含む。変異体タンパク質または改変体タンパク質において、ＮＯＶ１９ａの残基の約３％までがそのように変化され得、そして、ＮＯＶ１９ｂの残基の約３％までがそのように変化され得る。
【０３７３】
本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた、本発明の範囲内に含まれる。これは、任意のキャリア粒子（または、キャリアの表面上に生物学的に発現したもの）（例えば、バクテリオファージ粒子）に融合されるこのようなペプチドおよびポリペプチドを含む。
【０３７４】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のための、本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２を含有する。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるような、疎水性チャートからの予測を用いる、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。開示されたＮＯＶ１９ａタンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。１つの実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ａエピトープは、アミノ酸約１〜約７２である。別の実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ａエピトープは、アミノ酸約７６〜約８９である。他の特定の実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ｂエピトープは、アミノ酸約９９〜約１４２、アミノ酸約１４６〜約１９２、およびアミノ酸約２１０〜約２５８である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新しい薬物標的の開発を介助する。開示されたＮＯＶ１９ｂタンパク質は、各々が免疫原として使用され得る、複数の親水性領域を有する。１つの実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ｂエピトープは、アミノ酸約１〜約７２である。別の実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ｂエピトープは、アミノ酸約７６〜約８９である。他の特定の実施形態において、予測されるＮＯＶ１９ａエピトープは、アミノ酸約９９〜約１４２、アミノ酸約１４６〜約１９２、およびアミノ酸約２１０〜約２５８である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新しい薬物標的の開発を介助する。
【０３７５】
本発明において開示された炭酸脱水素酵素関連タンパク質は、少なくとも以下の組織において発現される：骨髄（Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ）、脳（Ｂｒａｉｎ）、腎臓（Ｋｉｄｎｅｙ）、肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、全生物（Ｗｈｏｌｅ  Ｏｒｇａｎｉｓｍ）。ここの情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ（文献）情報源、および／またはＲＡＣＥ情報源を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織情報源を決定することによって導かれた。さらなる疾患の兆候ならびにＮＯＶ１９およびＮＯＶ１９変異体についての組織発現は、利用可能である場合、実施例中に表示される。
【０３７６】
本明細書中で開示された炭酸脱水素酵素関連タンパク質様タンパク質および核酸についてのタンパク質類似性情報、発現パターンおよびマップ配置は、この炭酸脱水素酵素関連タンパク質が、炭酸脱水素酵素ファミリーに特有の重要な構造機能および／または生理学的機能を有し得るということを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において、ならびに研究手段として有用である。これらは、特定のもしくは選択的核酸もしくはタンパク質の診断マーカーおよび／または予防マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビトロならびにインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御兵器。
【０３７７】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害および／または他の症状に関係する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患した患者の処置に対して有効である：血友病、凝固能亢進、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫疾患、アレルギー、免疫欠乏、移植、移植片対宿主病、Ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発硬化症、毛細管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経防護、糖尿病、腎動脈狭窄症、間質性腎炎、糸球体腎炎、多発性嚢胞腎疾患、全身性エリテマトーデス、尿細管性アシドーシス、ＩｇＡ腎症、肝硬変、ならびにこれらの他の疾患、障害、および状態。
【０３７８】
（ＮＯＶ２０）
ＮＯＶ２０は、２つの新規のＧＡＢＡレセプター関連様タンパク質を含む。開示された配列は、ＮＯＶ２０ａまたはＮＯＶ２０ｂと命名した。ＮＯＶ２０ａおよびＮＯＶ２０ｂと特に記載しない限り、ＮＯＶ２０に対する任意の参照は、全ての変異体を含有すると想定される。
【０３７９】
新規なＧＡＢＡレセプター関連様タンパク質をコードする３５４ヌクレオチド（ＡＣ０１８９４６．４＿ＡまたはＣＧ５６８７２−０１ともいう）の開示されたＮＯＶ２０ａ核酸（配列番号４９）は、表２０Ａで示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド３５２〜３５４におけるＴＧＡコドンで終了すると同定された。開始コドンおよび終止コドンは、表２０Ａ中で太い文字で示される。
【０３８０】
【表２０Ａ】
2004534518.tif 000190
2004534518.tif 000191
本発明中で開示されたＧＡＢＡ関連様ＮＯＶ２０は、第１５染色体に位置する。
【０３８１】
配列番号４９によってコードされる開示されたＮＯＶ２０ａポリペプチド（配列番号５０）は、１１７アミノ酸残基を有し、そして表２０Ｂに１文字のコードで表される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ２０ａがシグナルペプチドを有さず、そして、ＰＳＯＲＴによって予想された０．４５００の確実性で細胞質に位置付けられそうであることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ２０ａは、０．２９５０の確実性でマイクロボディー（ペルオキソーム）に、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス空間に、または０．１０００の確実性でリソソーム管腔に位置付けられそうである。
【０３８２】
【表２０Ｂ】
2004534518.tif 000192
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ２０ａの核酸配列が、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４１６４８｜ａｃｃ：ＡＢ０４１６４８．１Ｍｒｎａ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ脳ｃＤＮＡ、クローンＭＮＣｂ−００９１）に対して３５４塩基中３１５塩基（８８％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ２０ａのタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の１１７アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＪＪ９７タンパク質（脳ＣＤＮＡ、クローンＭＮＣＢ−００９１）に対して１１７アミノ酸残基中１０９アミノ酸残基（９３％）の同一性、そして１１７アミノ酸残基中１１３アミノ酸残基（９６％）の類似性を有することが見出された。
【０３８３】
代替の実施形態において、ＮＯＶ２０変異体は、表２０Ｃ中に示される新規ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質をコードする４１７ヌクレオチド（ＣＧ５６８７２−０２ともいう）のＮＯＶ２０ｂ核酸である（配列番号５１）。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド２６〜２８で始まり、そしてヌクレオチド３７７〜３７９で終了すると同定された。オープンリーディングフレームの開始コドンおよび終止コドンは、太い文字で示される。推定非翻訳領域（下線）は、開始コドンの上流および終止コドンの下流であることが見出された。
【０３８４】
【表２０Ｃ】
2004534518.tif 000193
2004534518.tif 000194
１１７アミノ酸残基を有するにＮＯＶ２０ｂのコード化タンパク質（配列番号５２）は、表２０Ｄに１文字のコードで表される。ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質に対するＰＳＯＲＴ、ＳｉｇｎａｌＰおよびｈｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールは、図５中に示される。この結果は、この配列が、シグナルペプチドを有さず、そして、０．４５００の確実性で細胞内に位置付けられそうであることを予測する。代替の実施形態において、ＮＯＶ２０ａは、０．２９５０の確実性でマイクロボディー（ペルオキソーム）に、または０．１０００の確実性でミトコンドリアマトリクス空間に、または０．１０００の確実性でリソソーム管腔に位置付けられそうである。
【０３８５】
【表２０Ｄ】
2004534518.tif 000195
配列データベースの検索において、例えば、ＮＯＶ２０ｂの核酸配列が、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１６１５８６｜ａｃｃ：ＡＦ１６１５８６．１Ｍｒｎａ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＧＡＢＡ−Ａレセプター関連タンパク質（ＧＡＢＡＲＡＰ）Ｍｒｎａ、完全ｃｄｓ．）に対して３４７塩基中２５７塩基（７４％）の同一性を有することが見出された。ＮＯＶ２０ｂのタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の１１７アミノ酸残基のｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｏ９５１６６タンパク質（ＭＭ４６）に対して１１６アミノ酸残基中９６アミノ酸残基（８２％）の同一性、そして１１６アミノ酸残基中１０５アミノ酸残基（９０％）の類似性を有することが見出された。
【０３８６】
公開配列データベースの検索において、ＮＯＶ２０は、表２０Ｅ中に列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対して類似性を有することが見出された。
【０３８７】
【表２０Ｅ】
2004534518.tif 000196
マルチプル配列アライメントが、表２０Ｆに示され、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質と表２０Ｅで示される関連したタンパク質の配列を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析中の列１および列２に示される。
【０３８８】
【表２０Ｆ】
2004534518.tif 000197
他のＢＬＡＳＴ分析は、Ｐａｔｐデータベースからの配列を含み、これは特許および特許出願中で公開された配列を含む独占のデータベースである。Ｐａｔｐの結果は、表２０Ｇ中に列挙されたものを含む。
【０３８９】
【表２０Ｇ】
2004534518.tif 000198
2004534518.tif 000199
本明細書中に開示されるタンパク質における識別可能なドメインの存在を、ドメインデータベース（例えば、Ｐｆａｍ、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＰｒｏＤｏｍ、ＢｌｏｃｋｓまたはＰｒｉｎｔｓ）に対する検索によって決定し、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏドメイン登録番号によって同定した。これは、本発明の配列が、この／これらのドメインおよびこれらのドメインの特性に類似のものを含むことが公知の他のタンパク質の配列と類似の特性を有することを示す。表２０Ｈは、ＮＯＶ２０に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記載を列挙する。
【０３９０】
【表２０Ｈ】
2004534518.tif 000200
ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質をコードする開示されるＮＯＶ２０核酸は、その配列が、表２０Ａおよび表２０Ｃに提供される核酸またはそのフラグメントを含む。本発明はまた、任意のその塩基が、表２０Ａまたは表２０Ｃに示される対応する塩基から変化され得る一方で、なおＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする変異核酸もしくは改変核酸、またはこのような核酸のフラグメントを含む。本発明は、その配列が任意の上記の核酸に相補的である核酸フラグメントを含む、上記の配列に相補的である核酸をさらに含む。本発明はさらに、核酸または核酸フラグメント、またはそれらに対する相補体を含み、その構造は、化学的改変を含む。このような改変としては、非限定的な例として、改変された塩基、およびその糖リン酸骨格が改変されるか、または誘導体化される核酸が挙げられる。これらの改変は改変された核酸の化学的安定性を少なくとも部分的に増強するように、実行され、その結果、これらは、例えば、被験体における治療的適用においてアンチセンスの結合核酸として使用され得る。変異核酸または改変核酸、およびその相補体において、ＮＯＶ２０ａの約１２％までの塩基が、このようにして変更されたものであり得、そしてＮＯＶ２０ｂの約２６％までの塩基が、このようにして変更されたものであり得る。
【０３９１】
本発明の開示されるＮＯＶ２０タンパク質は、その配列が、表２０Ｂおよび表２０Ｄに提供されるＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質を含む。本発明はまた、任意のその残基が、表２０Ｂまたは表２０Ｄに示される対応する残基から変化され得る一方で、なおＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様活性および生理学的機能を維持するタンパク質をコードする変異タンパク質もしくは改変タンパク質、またはその機能的フラグメントを含む。変異タンパク質または改変タンパク質において、ＮＯＶ２０ａの約７％までの残基が、このようにして変更され得、そしてＮＯＶ２０ｂの約１８％までの塩基が、このように変更され得る。
【０３９２】
本発明のタンパク質のいずれかに高い結合親和性を有する配列を含むペプチドおよびポリペプチドもまた本発明内に含まれ、任意のキャリア粒子（例えばバクテリオファージ粒子）に融合される（またはキャリアの表面上で生物学的に発現される）ようなペプチドおよびポリペプチドを含む。ＮＯＶ２０のさらなるＳＮＰ改変体が、実施例に開示される。
【０３９３】
本発明はさらに、治療方法または診断方法における使用のために本発明のタンパク質のいずれかに免疫特異的に結合する抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２）を含む。これらの抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の節に記載されるように、疎水性（ｈｙｄｒｏｐｈｂｉｃｉｔｙ）チャートからの予想を用いて当該分野において公知の方法に従って生成され得る。開示されるＮＯＶ２０ａタンパク質は、複数の親水性領域を有し、これらはそれぞれ免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ２０ａエピトープは、アミノ酸およそ１〜６８である。他の具体的な実施形態において、企図されるＮＯＶ２０ａエピトープは、アミノ酸およそ７３〜８０およびアミノ酸およそ８７〜１１７である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、これらの疾患の病理学の理解および種々の障害のための新しい薬剤標的の開発を助ける。開示されたＮＯＶ２０ｂタンパク質は、複数の親水性領域を有し、これらはそれぞれ免疫原として使用され得る。１つの実施形態において、企図されるＮＯＶ２０ｂエピトープは、アミノ酸およそ１〜６８である。他の具体的な実施形態において、企図されるＮＯＶ２０ｂエピトープは、アミノ酸およそ７３〜８０およびアミノ酸およそ８７〜１１７である。これらの新規タンパク質は、種々のヒト障害の機能的分析のためのアッセイ系において使用され得、これは、疾患の病状の理解および種々の障害のための新しい薬剤標的の開発を助ける。
【０３９４】
本発明において開示される関連のＧＡＢＡレセプターは、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪、心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓および膵臓。この情報は、Ｃｕｒａｇｅｎによって成された動物の研究からの発現データに由来した。本発明のタンパク質のコード配列に特有の制限フラグメントが、肥満、高脂血症、ＩＩ型糖尿病および代謝症候群Ｘのラットモデルにおける代謝組織に由来するｃＤＮＡにおいて発見された。ＮＯＶ２０および利用可能である場合、ＮＯＶ２０改変体についてのさらなる疾患の徴候および組織発現が、実施例に示される。
【０３９５】
タンパク質類似性の情報、発現パターン、ならびにＧＡＢＡレセプター関連様タンパク質および本明細書中に開示される核酸についてのマップの位置は、この関連のＧＡＢＡレセプターが、ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質ファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能特性を有し得ることを示唆する。それ故、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用、ならびに研究手段として有用である。これらとしては、特異的または選択的核酸またはタンパク質診断マーカーおよび／または予後マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される）ならびに以下のような潜在的治療適用が挙げられる：（ｉ）タンパク質治療薬、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療薬、診断薬、薬剤標的化／細胞毒性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療において有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切断）、および（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御手段。
【０３９６】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害および／または他の病状に関連する潜在的な診断的適用および治療的適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下に羅患した患者の処置について有効性を有する：異脂肪血症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）、インスリン耐性、肥満、代謝症候群Ｘに関連する高血圧および他の状態、心筋症、アテローム硬化症、高血圧、先天性心臓欠陥、大動脈狭窄症、心房中隔欠損症（ＡＳＤ）、房室性の（Ａ−Ｖ）管欠損、動脈管、肺動脈弁狭窄症、大動脈弁下部狭窄症、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、弁疾患、結節狭窄症、強皮症、移植、フォンヒッペルリンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、癲癇、レッシュナイハン症候群、多発性硬化症、毛細管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、痛み、神経変性、受胎能、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、喘息、気腫、アレルギー、ＡＲＤＳ、肝硬変、糖尿病、肥満、腎動脈狭窄症、間質性腎炎、糸球体腎炎、多発性嚢胞腎疾患、尿細管性アシドーシス、ＩｇＡネフロパシー、膵炎、ならびに他の疾患、障害および状態。
【０３９７】
（ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチド）
本発明の１つの局面は、ＮＯＶＸポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分をコードする単離された核酸分子に関する。ＮＯＶＸコード核酸（例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するに十分な核酸フラグメント、およびＮＯＶＸ核酸分子の増幅および／または変異のためのＰＣＲプライマーとして使用するためのフラグメントもまた本発明に含まれる。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを用いて生成されたＤＮＡもしくはＲＮＡのアナログ、ならびにこれらの誘導体、フラグメントおよびホモログを含むことが意図される。この核酸分子は、１本鎖または２本鎖であり得るが、好ましくは、２本鎖ＤＮＡを含む。
【０３９８】
ＮＯＶＸ核酸は、成熟ＮＯＶＸポリペプチドをコードし得る。本明細書中で用いられる場合、本発明において開示されるポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、天然に存在するポリペプチドまたは前駆体形態もしくはプロタンパク質の産物である。この天然に存在するポリペプチド、前駆体またはプロタンパク質としては、非限定的な例として、対応する遺伝子によりコードされる全長遺伝子産物が挙げられる。あるいは、これは、本明細書中に記載されるＯＲＦによりコードされるポリペプチド、前駆体またはプロタンパク質として規定され得る。産物の「成熟」形態は、この遺伝子産物が生じる細胞、または宿主細胞内で起こり得る場合に、１以上の自然に起こるプロセシング工程の結果として、（再び、非限定的な例として）生じる。「成熟」形態のポリペプチドまたはタンパク質をもたらすこのようなプロセシング工程の例としては、ＯＲＦの開始コドンによりコードされるＮ末端メチオニン残基の切断、またはシグナルペプチドもしくはリーダー配列のタンパク質分解切断が挙げられる。従って、残基１〜Ｎを有する（ここで、残基１は、Ｎ末端メチオニンである）前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、Ｎ末端メチオニンの除去後に残っている残基２〜Ｎを有する。あるいは、残基１〜Ｎ（ここで、残基１〜残基ＭのＮ末端シグナル配列が切断される）を有する前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、残っている残基Ｍ＋１〜残基Ｎの残基を有する。さらに、本明細書中で使用される場合、ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、タンパク質分解切断事象以外の翻訳後修飾の工程から生じ得る。このようなさらなるプロセスとしては、非限定的な例として、グリコシル化、ミリストイル化またはリン酸化が挙げられる。一般に、成熟ポリペプチドまたはタンパク質は、これらのプロセスの１つのみの操作またはこれらのプロセスのいずれかの組み合わせから生じ得る。
【０３９９】
本明細書中で用いられる場合、用語「プローブ」は、特定の用途に依存して、可変の長さ（好ましくは、少なくとも約１０ヌクレオチド（ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、ほぼ６，０００ｎｔ程度の長さ）の核酸配列をいう。プローブは、同一の、類似の、または相補的な核酸配列の検出に用いられる。より長い長さのプローブは、一般に、天然供給源または組換え供給源から得られ、より短い長さのオリゴマープローブより高度に特異的であり、かつかなりゆっくりとハイブリダイズする。プローブは、１本鎖または２本鎖であり得、そしてＰＣＲ、膜ベースのハイブリダイゼーション技術、またはＥＬＩＳＡ様技術において特異性を有するように設計され得る。
【０４００】
本明細書中で用いられる場合、用語「単離された」核酸分子は、核酸の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離される核酸分子である。好ましくは、「単離された」核酸は、その核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中の核酸に天然に隣接する配列（すなわち、核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）がない。例えば、種々の実施形態において、この単離されたＮＯＶＸ核酸分子は、核酸が由来する細胞／組織（例えば、脳、心臓、肝臓、脾臓など）のゲノムＤＮＡ中の核酸分子に天然に隣接する約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０．１ｋｂ未満のヌクレオチド配列を含み得る。さらに、ｃＤＮＡ分子のような「単離された」核酸分子は、組換え技術により生成される場合、他の細胞物質もしくは培養培地を実質的に含み得ず、または化学的に合成される場合、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含み得ない。
【０４０１】
本発明の核酸分子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１のヌクレオチド配列を有する核酸分子、またはこの前述のヌクレオチド配列の相補体）は、標準的な分子生物学技術および本明細書中で提供される配列情報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーションプローブとして配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１の核酸配列の全部または一部を用いて、ＮＯＶＸ分子は、標準的なハイブリダイゼーション技術およびクローニング技術を用いて単離され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら（編），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ  第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌ，ら（編），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９３に記載されるとおり）。
【０４０２】
本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技術に従って、テンプレートおよび適切なオリゴヌクレオチドプライマーとして、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、または代わりにゲノムＤＮＡを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクターにクローニングされ得、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられ得る。さらに、ＮＯＶＸヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技術により、例えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いて、調製され得る。
【０４０３】
本明細書中で用いられる場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結されたヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応において使用されるのに十分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲノムＤＮＡ配列またはｃＤＮＡ配列に基づき得るか、またはこれらの配列から設計され得、そして特定の細胞もしくは組織中の同一の、類似の、もしくは相補的なＤＮＡもしくはＲＮＡを増幅、確認またはこれらの存在を明らかにするために用いられる。オリゴヌクレオチドは、約１０ｎｔ長、５０ｎｔ長、または１００ｎｔ長、好ましくは、約１５ｎｔ〜３０ｎｔ長を有する、核酸配列の一部を含む。本発明の１つの実施形態において、１００ｎｔ長未満の核酸分子を含むオリゴヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１、またはその相補体の少なくとも６つの連続するヌクレオチドをさらに含む。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとしても用いられ得る。
【０４０４】
別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１に示されるヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチド配列の一部（例えば、プローブもしくはプライマーとして用いられ得るフラグメント、またはＮＯＶＸポリペプチドの生物学的に活性な部分をコードするフラグメント）の相補体である核酸分子を含む。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１に示されるヌクレオチド配列に十分相補的なものであり、これは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１に示されるヌクレオチド配列に対してほとんどまたは全くミスマッチなく水素結合し得、これにより安定な二重鎖を形成する。
【０４０５】
本明細書中で用いられる場合、用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間のワトソンクリック塩基対形成またはフーグスティーン塩基対形成をいい、そして用語「結合」は、２つのポリペプチドもしくは化合物、または関連するポリペプチドもしくは化合物、またはこれらの組み合わせの間の物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合としては、イオン性相互作用、非イオン性相互作用、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用などが挙げられる。物理的相互作用は、直接的または間接的のいずれかであり得る。間接的相互作用は、別のポリペプチドまたは化合物の効果を介し得るか、またはこの効果に起因し得る。直接的結合とは、別のポリペプチドまたは化合物の効果を介して、またはこの効果に起因して生じない相互作用をいうが、代わりに、他の実質的な化学的中間体がない。
【０４０６】
本明細書中で提供されるフラグメントは、核酸の場合は、特異的ハイブリダイゼーションを可能にするに十分な長さ、またはアミノ酸の場合には、エピトープの特異的認識を可能にするに十分な長さの、少なくとも６つの（連続する）核酸または少なくとも４つの（連続する）アミノ酸の配列としてそれぞれ規定され、このフラグメントは、全長配列より短い、多くていくつかの部分である。フラグメントは、最適な核酸配列またはアミノ酸配列の任意の連続する部分から誘導され得る。誘導体は、直接的に、または改変もしくは部分的置換のいずれかによりネイティブの化合物から形成される核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、特定の成分または側鎖に関してネイティブの化合物とは異なる以外は、ネイティブの化合物に類似であるが、同一ではない構造を有する核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、合成であり得るか、または異なる進化起源に由来し得、そして野生型と比較して、類似もしくは逆の代謝活性を有し得る。ホモログは、異なる種に由来する特定の遺伝子の核酸配列またはアミノ酸配列である。
【０４０７】
誘導体およびアナログは、以下に記載されるように、誘導体またはアナログが、改変された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長であってもよいし、全長以外のものでもよい。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：種々の実施形態において、同一のサイズの核酸配列またはアミノ酸配列に対して、または整列された配列と比較した場合に、（ここで、このアラインメントは、当該分野で公知のコンピューター相同性プログラムにより行われる）、少なくとも約７０％、８０％、または９５％同一性（好ましくは８０〜９５％の同一性を有する）で本発明の核酸またはタンパク質に実質的に相同である領域を含む分子か、またはそのコード核酸が、ストリンジェントな条件下、中程度にストリンジェントな条件下、または低いストリンジェントな条件下で前述のタンパク質をコードする配列の相補体とハイブリダイズし得る領域を含む分子。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９３、および以下を参照のこと。
【０４０８】
「相同な核酸配列」または「相同なアミノ酸配列」あるいはこれらのバリエーションとは、上記で議論されるように、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルで相同性により特徴付けられる配列をいう。相同なヌクレオチド配列は、ＮＯＶＸポリペプチドのアイソフォームをコードする配列をコードする。アイソフォームは、例えば、ＲＮＡの交互スプライシングの結果として同じ生物の異なる組織において発現され得る。あるいは、アイソフォームは、異なる遺伝子によりコードされ得る。本発明において、相同なヌクレオチド配列は、ヒト以外の種（脊椎動物が挙げられるが、これらに限定されず、従って、例えば、カエル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、および他の生物種が挙げられ得る）のＮＯＶＸポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相同なヌクレオチド配列としてはまた、天然に存在する対立遺伝子バリエーション、および本明細書中に記載されるヌクレオチド配列の変異が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、相同なヌクレオチド配列は、ヒトＮＯＶＸタンパク質をコードする正確なヌクレオチド配列を含まない。相同な核酸配列は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１における保存的アミノ酸置換（以下を参照のこと）ならびにＮＯＶＸの生物学的活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。ＮＯＶＸタンパク質の種々の生物学的活性が以下に記載される。
【０４０９】
ＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸ核酸のオープンリーディングフレーム「ＯＲＦ」によりコードされる。ＯＲＦは、ポリペプチドに潜在的に翻訳され得るヌクレオチド配列に対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止コドンにより妨げられない。完全タンパク質についてのコード配列を示すＯＲＦは、ＡＴＧ「開始」コドンで始まり、３つの「終止」コドン（すなわち、ＴＡＡ、ＴＡＧまたはＴＧＡ）の１つで終わる。本発明の目的上、ＯＲＦは、開始コドン、終止コドンまたはその両方を有するか、または有さないコード配列の任意の部分であり得る。ｂｏｎａ  ｆｉｄｅ細胞タンパク質をコードするための良好な候補と考えられるＯＲＦについては、最小のサイズ要件が、例えば、５０以上のアミノ酸のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチとして、しばしば設定される。
【０４１０】
ヒトＮＯＶＸ遺伝子のクローニングから決定されるヌクレオチド配列は、他の細胞型における（例えば、他の組織由来の）ＮＯＶＸホモログ、ならびに他の脊椎動物からのＮＯＶＸホモログの同定および／またはクローニングにおける使用のために設計されたプローブおよびプライマーの生成を可能にする。プローブ／プライマーは、代表的に、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。このオリゴヌクレオチドは、代表的には、以下の領域を含む：配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の少なくとも約１２、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００の連続したセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１の天然に存在する変異体のヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域。
【０４１１】
ヒトＮＯＶＸヌクレオチド配列に基づくプローブは、同じタンパク質または相同なタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出するために用いられ得る。種々の実施形態において、このプローブは、これらに結合する標識基をさらに含む（例えば、標識基は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る）。このようなプローブは、ＮＯＶＸタンパク質を間違って発現する細胞または組織を同定するための診断試験キットの一部として、例えば、被験体からの細胞のサンプルにおけるＮＯＶＸコード核酸のレベルを測定する（例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡレベルを検出するか、ゲノムＮＯＶＸ遺伝子が変異しているか、または欠失しているか否かを決定する）ことにより用いられ得る。
【０４１２】
「ＮＯＶＸポリペプチドの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」とは、用量依存性であってもそうでなくても、特定の生物学的アッセイにおいて測定された場合に、本発明のポリペプチドの活性に類似するが、この活性に必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチド（成熟形態を含む）をいう。「ＮＯＶＸの生物学的に活性な部分」をコードする核酸フラグメントは、ＮＯＶＸ生物学的活性（ＮＯＶＸタンパク質の生物学的活性は以下に記載される）を有するポリペプチドをコードする配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、または５１の一部分を単離し、ＮＯＶＸタンパク質のコードされた部分を発現し（例えば、インビトロでの組換え発現により）、そしてＮＯＶＸのコードされた部分の活性を評価するすることにより、調製され得る。
【０４１３】
（ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドの改変体）
本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１に示されるヌクレオチド配列とは異なり、従って、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸分子を包含する。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０４１４】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１に示されるヒトＮＯＶＸヌクレオチド配列に加えて、このＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型が、集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが、当業者によって理解される。ＮＯＶＸ遺伝子中のこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子のバリエーションに起因して、集団内の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＮＯＶＸタンパク質、好ましくは脊椎動物のＮＯＶＸタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む核酸分子をいう。このような天然の対立遺伝子のバリエーションは、代表的には、ＮＯＶＸ遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の不一致を生じ得る。天然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、かつこのＮＯＶＸポリペプチドの機能的活性を変化させない、ＮＯＶＸポリペプチド内の任意および全てのこのようなヌクレオチドのバリエーションならびに得られるアミノ酸多型は、本発明の範囲内であると意図される。
【０４１５】
さらに、他の種由来のＮＯＶＸタンパク質をコードし、従って、ヒトの配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子は、本発明の範囲内にあることが意図される。本発明のＮＯＶＸのｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるヒトＮＯＶＸ核酸に対するその相同性に基づいて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、標準的なハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイゼーションプローブとしてヒトｃＤＮＡまたはその一部を用いて単離され得る。
【０４１６】
従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも６ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形態では、この核酸は、少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、または２０００以上のヌクレオチド長である。なお別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、コード領域にハイブリダイズする。本明細書中で用いられる場合、用語「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関して、互いに少なくとも６０％相同なヌクレオチド配列が代表的には互いにハイブリダイズしたまま残る条件を記載することを意図する。
【０４１７】
ホモログ（すなわち、ヒト以外の種由来のＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸）または他の関連配列（例えば、パラログ）は、特定のヒト配列の全てまたは一部をプローブとし、核酸ハイブリダイゼーションおよびクローニングに関して当該分野で周知の方法を使用して、低い、中程度の、または高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって入手され得る。
【０４１８】
本明細書で用いられる場合、語句「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、その標的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない条件をいう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で異なる。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズする。一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで、特定の配列の熱融解点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。このＴｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が、（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下で）平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度である。標的配列は一般に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有されている。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩濃度が約１．０Ｍナトリウムイオンより低く、代表的には約０．０１〜１．０Ｍナトリウムイオン（またはその他の塩）であり、そして温度が、短いプローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）については、少なくとも約３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチドについては、少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェント条件はまた、ホルムアミドのような、不安定化剤の添加で達成され得る。
【０４１９】
ストリンジェント条件は、当業者に公知であり、そしてＡｕｓｕｂｅｌら（編），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％または約９９％相同な配列が、代表的には互いにハイブリダイズしたまま残るような条件である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％  ＢＳＡ、および５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む高塩緩衝液中での６５℃でのハイブリダイゼーションであり、これは続いて、０．２×ＳＳＣ、０．０１％  ＢＳＡ中での５０℃での１回以上の洗浄を行う。ストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１の配列にハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【０４２０】
第２の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１のヌクレオチド配列、またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体を含む核酸分子に、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸配列が提供される。中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、５５℃での６×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％  ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中でのハイブリダイゼーション、続いて１×ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ中での３７℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０；ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【０４２１】
第３の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１のヌクレオチド配列、またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体を含む核酸分子に、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％  ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）デキストラン硫酸中での４０℃でのハイブリダイゼーション、続いて２×ＳＳＣ、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．１％  ＳＤＳ中での５０℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る低ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である（例えば、種交差ハイブリダイゼーションについて用いられるような条件）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：６７８９−６７９２を参照のこと。
【０４２２】
（保存的変異）
集団中に存在し得る、ＮＯＶＸ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加えて、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、および５１のヌクレオチド配列への変異によって変化が導入され得、それによって、前記ＮＯＶＸタンパク質の機能的能力を変更することなく、コードされるＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列に変化がもたらされることを、当業者はさらに理解する。例えば、「非必須」アミノ酸残基にてアミノ酸置換をもたらすヌクレオチド置換は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２の配列において行われ得る。「非必須」アミノ酸残基は、その生物学的活性を変更することなく、このＮＯＶＸタンパク質の野生型配列から変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、このような生物学的活性に必要とされる。例えば、本発明のＮＯＶＸタンパク質の間で保存されているアミノ酸残基は、特に変更を受け入れ難いと予測される。保存的置換がなされ得るアミノ酸は、当該分野で周知である。
【０４２３】
本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化を含む、ＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸分子に関する。このようなＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および５２のアミノ酸配列とは異なるが、生物学的活性をなお保持する。１つの実施形態では、単離された核酸分子は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、このタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および５２のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子によってコードされるタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０および５２に対して少なくとも約６０％相同であり；より好ましくは配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に対して少なくとも約７０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に対してして少なくとも約８０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に対して少なくとも約９０％相同であり；そして最も好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に対して少なくとも約９５％相同である。
【０４２４】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２のタンパク質に相同なＮＯＶＸタンパク質をコードする単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１のヌクレオチド配列に１以上のヌクレオチドの置換、付加または欠失を導入することにより作製され得、その結果、１以上のアミノ酸の置換、付加または欠失が、このコードされるタンパク質に導入される。
【０４２５】
変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）によって配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必須アミノ酸残基にてなされる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、アミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、以下が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。従って、ＮＯＶＸタンパク質中の推定非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。あるいは、別の実施形態では、変異は、例えば、飽和変異誘発によりＮＯＶＸコード配列の全てまたは一部に沿ってランダムに導入され得、そして得られる変異体は、ＮＯＶＸの生物学的活性についてスクリーニングされて、活性を維持する変異体を同定し得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１の変異誘発に続いて、コードされるタンパク質は、当該分野で公知の任意の組換え技術によって発現され得、そしてこのタンパク質の活性が決定され得る。
【０４２６】
アミノ酸ファミリーの関連性はまた、側鎖の相互作用に基づいて決定され得る。置換されたアミノ酸は、完全に保存された「強い」残基または完全に保存された「弱い」残基であり得る。保存されたアミノ酸残基の「強い」群は、以下の群のいずれか１つであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ（ここで、一文字アミノ酸コードは、互いに置換され得るアミノ酸によりグループ化される）。同様に、保存された残基の「弱い」群は、以下のいずれか１つであり得る：ＣＳＡ、ＡＴＶ、ＳＡＧ、ＳＴＮＫ、ＳＴＰＡ、ＳＧＮＤ、ＳＮＤＥＱＫ、ＮＤＥＱＨＫ、ＮＥＱＨＲＫ、ＶＬＩＭ、ＨＦＹ（ここで、各群内の文字は、一文字アミノ酸コードを表す）。
【０４２７】
１つの実施形態では、変異体ＮＯＶＸタンパク質は、以下についてアッセイされ得る：（ｉ）他のＮＯＶＸタンパク質、他の細胞表面タンパク質、または生物学的に活性なこれらの部分と、タンパク質：タンパク質相互作用を形成する能力、（ｉｉ）変異体ＮＯＶＸタンパク質と、ＮＯＶＸのリガンドとの間の複合体形成；または（ｉｉｉ）変異体ＮＯＶＸタンパク質が細胞内標的タンパク質またはその生物学的に活性な部分に結合する能力；（例えば、アビジンタンパク質）。
【０４２８】
なお別の実施形態において、変異体ＮＯＶＸタンパク質は、特定の生物学的機能を調節する能力（例えば、インスリン放出の調節）についてアッセイされ得る。
【０４２９】
（アンチセンス核酸）
本発明の別の局面は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズし得るかまたは相補的である、単離されたアンチセンス核酸分子に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。特定の局面では、少なくとも約１０、約２５、約５０、約１００、約２５０もしくは約５００ヌクレオチドまたはＮＯＶＸコード鎖の全体、またはこれらの一部のみに相補的な配列を含む、アンチセンス核酸分子が提供される。配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２のＮＯＶＸタンパク質のフラグメント、ホモログ、誘導体およびアナログをコードする核酸分子、または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１のＮＯＶＸ核酸配列に相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。
【０４３０】
１つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対してアンチセンスである。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含む、ヌクレオチド配列の領域をいう。別の実施形態では、このアンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対してアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接する、アミノ酸に翻訳されない、５’配列および３’配列をいう（すなわち、５’非翻訳領域および３’非翻訳領域ともいわれる）。
【０４３１】
本明細書中に開示されるＮＯＶＸタンパク質をコードするコード鎖配列を考慮すれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対形成の規則に従って設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好ましくは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部にのみアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５または約５０ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いて、化学的合成または酵素連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはこの分子の生物学的安定性を増大させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増大させるように設計された種々に改変されたヌクレオチドを用いて化学的に合成され得る（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが用いられ得る）。
【０４３２】
アンチセンス核酸を作製するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例としては以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイド（シュード）ウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、このアンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、以下の小節にさらに記載される、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）。
【０４３３】
本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には被験体に投与されるか、またはインサイチュで生成され、その結果これらは、ＮＯＶＸタンパク質をコードする細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか、またはそれに結合し、それによってこのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって）。このハイブリダイゼーションは、安定な二重鎖を形成する従来のヌクレオチド相補性によってか、または例えばＤＮＡ二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんの主溝における特異的相互作用を介してであり得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組織部位での直接的注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的化するように改変され得、次いで全身に投与され得る。例えば、全身投与のために、アンチセンス分子は、選択された細胞表面上に発現されるレセプターまたは抗原にそれらが特異的に結合するように改変され得る（例えば、そのアンチセンス核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することによって）。このアンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載されるベクターを用いて細胞に送達され得る。十分な核酸分子を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ  ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
【０４３４】
なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子である。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで、通常のβ−ユニットとは対照的に、これらの鎖は、互いに平行に延びる。例えば、Ｇａｕｌｔｉｅｒら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１を参照のこと。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：６１３１〜６１４８を参照のこと）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２１５：３２７〜３３０を参照のこと）を含み得る。
【０４３５】
（リボザイムおよびＰＮＡ部分）
核酸の改変としては、非制限的な例として、改変塩基、および糖リン酸骨格が改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、改変された核酸の化学的安定性を少なくとも部分的に増強するために実施され、その結果、それらは、例えば、被験体での治療的適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。
【０４３６】
１つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リボザイムは、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子であり、これらは、その一本鎖核酸に対して相補領域を有する。従って、リボザイム（例えば、ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ  １９８８．Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５８５−５９１に記載されるハンマーヘッド型リボザイム）を使用して、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それによってＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＮＯＶＸをコードする核酸に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示されるＮＯＶＸ  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１）に基づいて設計され得る。例えば、活性部位のヌクレオチド配列が、ＮＯＶＸをコードするｍＲＮＡ内で切断されるヌクレオチド配列に相補的である、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）Ｌ−１９  ＩＶＳ  ＲＮＡの誘導体が構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈらに対する米国特許第４，９８７，０７１号およびＣｅｃｈらに対する米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡをまた使用して、ＲＮＡ分子のプールから、特異的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌら，（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１４１１〜１４１８を参照のこと。
【０４３７】
あるいは、ＮＯＶＸ遺伝子発現は、ＮＯＶＸ核酸の調節領域（例えば、ＮＯＶＸのプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化し、標的細胞中でＮＯＶＸ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を形成することによって阻害され得る。例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６：５６９〜８４；Ｈｅｌｅｎｅら，１９９２．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；Ｍａｈｅｒ，１９９２．Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４：８０７−１５を参照のこと。
【０４３８】
種々の実施形態において、ＮＯＶＸ核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格で改変され、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは溶解性を改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変して、ペプチド核酸を生成し得る（例えば、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格が偽ペプチド骨格によって置換され、そして４つの天然の核酸塩基のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１４６７０−１４６７５において記載されるような標準的固相ペプチド合成プロトコルを用いて実行され得る。
【０４３９】
ＮＯＶＸのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば転写または翻訳の停止を誘導することまたは複製を阻害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗遺伝子（ａｎｔｉｇｅｎｅ）剤として使用され得る。ＮＯＶＸのＰＮＡはまた、例えば、遺伝子における１塩基対変異の分析において（例えば、ＰＮＡ指向性ＰＣＲクランピング（ｃｌａｍｐｉｎｇ）；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出を参照のこと）；またはＤＮＡ配列およびハイブリダイゼーションのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６，前出を参照のこと））使用され得る。
【０４４０】
別の実施形態において、ＮＯＶＸのＰＮＡは、例えば、それらの安定性または細胞性取り込みを増強するために、ＰＮＡに親油基または他のヘルパー基を結合することによってか、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によってか、またはリポソームもしくは当該分野において公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変され得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組合せ得る、ＮＯＶＸのＰＮＡ−ＤＮＡキメラが生成され得る。このようなキメラは、ＰＮＡ部分が高い結合親和性および特異性を提供する一方で、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮａｓｅ  ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用するのを可能にする。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基のスタッキング、核酸塩基間の結合数および方向を考慮して選択される適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出を参照のこと）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出およびＦｉｎｎら，１９９６，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２４：３３５７−３３６３において記載されるように実行され得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホルアミダイトカップリング化学を用いて固体支持体上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホルアミダイト）が、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に使用され得る。例えば、Ｍａｇら，１９８９，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １７：５９７３〜５９８８を参照のこと。次いで、ＰＮＡモノマーが段階様式でカップリングされ、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する。例えば、Ｆｉｎｎら，１９９６，前出を参照のこと。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いて、キメラ分子が合成され得る。例えば、Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，１９７５、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９〜１１１２４を参照のこと。
【０４４１】
他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のような他の付属の基を含み得る：ペプチド（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するための）、または細胞膜を横切る輸送を容易にする因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら，１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら，１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）を横切る輸送を容易にする因子。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら，１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８〜９７６を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）で改変され得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤など）に結合され得る。
【０４４２】
（ＮＯＶＸポリペプチド）
本発明に従うポリペプチドは、その配列が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に提供されるＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明はまた、なおそのＮＯＶＸ活性および生理学的機能を維持するタンパク質、またはその機能的フラグメントをコードする一方で、その任意の残基が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に示される対応する残基から変化し得る、変異体または改変体タンパク質を含む。
【０４４３】
一般に、ＮＯＶＸ様機能を保持するＮＯＶＸ改変体は、配列中の特定位置の残基が他のアミノ酸により置換されている任意の改変体を含み、そしてさらに、親タンパク質の２つの残基間にさらなる残基を挿入する可能性、および親配列から１つ以上の残基を欠失する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入または欠失が、本発明に包含される。好適な状況では、この置換は、上記で規定されるような保存的置換である。
【０４４４】
本発明の１つの局面は、単離されたＮＯＶＸタンパク質、およびその生物学的に活性な部分、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに関する。抗ＮＯＶＸ抗体を惹起するための免疫原としての使用のために適切なポリペプチドフラグメントもまた提供される。１つの実施形態において、ネイティブなＮＯＶＸタンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を用いる適切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生される。組換え発現に代わるものとして、ＮＯＶＸタンパク質またはポリペプチドが、標準的なペプチド合成技術を用いて化学合成され得る。
【０４４５】
「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはタンパク質あるいはこれらの生物学的に活性な部分は、ＮＯＶＸタンパク質の由来する細胞または組織供給源由来の細胞性物質または他の夾雑タンパク質を実質的に含まないか、あるいは化学合成される場合に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、ＮＯＶＸタンパク質が単離または組換え産生される細胞の細胞性成分から、このタンパク質が分離されているＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、非ＮＯＶＸタンパク質（本明細書中において「夾雑タンパク質」ともいわれる）を（乾燥重量にて）約３０％未満、より好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約２０％未満、なおより好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約１０％未満、そして最も好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約５％未満を有する、ＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え産生される場合、好ましくは、調製物はまた培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地は、そのＮＯＶＸタンパク質調製物の体積の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、そして最も好ましくは約５％未満に相当する。
【０４４６】
用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパク質が、そのタンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離されるＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、化学前駆体または非ＮＯＶＸの化学物質の約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約２０％未満、なおより好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約１０％未満、そして最も好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約５％未満を有する、ＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。
【０４４７】
ＮＯＶＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、全長ＮＯＶＸタンパク質より少ないアミノ酸を含み、そしてＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの活性を示す、ＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に示されるアミノ酸配列）に十分に相同なアミノ酸配列、またはこのＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な部分は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含む。ＮＯＶＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、長さが１０、２５、５０、１００またはそれより多いアミノ酸残基であるポリペプチドであり得る。
【０４４８】
さらに、タンパク質の他の領域が欠失している他の生物学的に活性な部分は、組換え技術によって調製され得、そしてネイティブなＮＯＶＸタンパク質の機能的活性のうちの１つ以上について評価され得る。
【０４４９】
１つの実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に示されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２に実質的に相同であり、そして以下に詳細に記載されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘発に起因してアミノ酸配列が異なるが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２のタンパク質の機能的活性を保持する。従って、別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同なアミノ酸配列を含み、そして配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２のＮＯＶＸタンパク質の機能的活性を保持するタンパク質である。
【０４５０】
（２つ以上の配列間の相同性の決定）
２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性の百分率を決定するために、配列は、至適な比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、第２のアミノ酸または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸または核酸配列の配列中に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子は、その位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。
【０４５１】
核酸配列の相同性は、２つの配列間の同一性の程度として決定され得る。相同性は、当該分野において公知のコンピュータープログラム（例えば、ＧＣＧプログラムパッケージにおいて提供されるＧＡＰソフトウェア）を用いて決定され得る。ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，１９７０  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４８：４４３〜４５３を参照のこと。核酸配列比較のための以下の設定（ＧＡＰ作製ペナルティー、５．０、およびＧＡＰ伸長ペナルティー、０．３）を用いてＧＣＧ  ＧＡＰソフトウェアを使用すると、上記で言及される類似の核酸配列のコード領域は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１に示されるＤＮＡ配列のＣＤＳ（コード）部分と、好ましくは少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性の程度を示す。
【０４５２】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列が、特定の比較領域にわたって、残基毎を基準として同一である程度をいう。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、以下により算出される：この比較領域にわたって最適に整列された２つの配列を比較すること、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、核酸の場合にはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）が存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を導くこと、この一致した位置の数を、比較領域の内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算すること、およびその結果を１００で乗算して、配列同一性のパーセンテージを導くこと。用語「実質的な同一性」は、本明細書中で使用される場合、ポリヌクレオチド配列の特徴を示し、ここで、このポリヌクレオチドは、比較領域にわたり参照配列と比較して、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８５％の同一性、そして頻繁には９０〜９５％の配列同一性、より通常には少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【０４５３】
（キメラタンパク質および融合タンパク質）
本発明はまた、ＮＯＶＸキメラタンパク質または融合タンパク質を提供する。本明細書中で使用される場合、ＮＯＶＸ「キメラタンパク質」またはＮＯＶＸ「融合タンパク質」は、非ＮＯＶＸポリペプチドに作動可能に連結された、ＮＯＶＸポリペプチドを含む。「ＮＯＶＸポリペプチド」は、ＮＯＶＸタンパク質（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０または５２）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非ＮＯＶＸポリペプチド」は、ＮＯＶＸタンパク質に対して実質的に相同ではないタンパク質（例えば、ＮＯＶＸタンパク質とは異なり、かつ同一かまたは異なる生物体に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。ＮＯＶＸ融合タンパク質において、このＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸタンパク質のすべてまたは一部分に対応し得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む。なお別の実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも３つの生物学的に活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結された」は、ＮＯＶＸポリペプチドおよび非ＮＯＶＸポリペプチドが、インフレームで互いに融合されることを示すことが意図される。非ＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０４５４】
１つの実施形態において、融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＮＯＶＸ融合タンパク質であり、ここではＮＯＶＸ配列が、ＧＳＴ（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。このような融合タンパク質は、組換えＮＯＶＸポリペプチドの精製を容易にし得る。
【０４５５】
別の実施形態において、融合タンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配列を含むＮＯＶＸタンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ＮＯＶＸの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用を介して増加され得る。
【０４５６】
なお別の実施形態において、融合タンパク質は、ＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質であり、ここで、ＮＯＶＸ配列が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。本発明のＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込まれ、そして被験体に投与されて、細胞の表面上でＮＯＶＸリガントとＮＯＶＸタンパク質との間の相互作用を阻害し、それによってインビボのＮＯＶＸ媒介シグナル伝達を抑制し得る。ＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質を用いて、ＮＯＶＸ同族リガンドの生体利用性に影響を与え得る。ＮＯＶＸリガンド／ＮＯＶＸ相互作用の阻害は、増殖障害および分化障害の両方の処置、および細胞生存を調節（例えば、促進または阻害）するために、治療的に有用であり得る。さらに、本発明のＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗ＮＯＶＸ抗体を産生するための免疫原として用いられ、ＮＯＶＸリガンドを精製し、そしてＮＯＶＸリガンドとのＮＯＶＸの相互作用を阻害する分子を同定するスクリーニングアッセイで用いられ得る。
【０４５７】
本発明のＮＯＶＸのキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技術により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントを、従来の技術に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着（ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端のフィルイン、所望しない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を採用することにより、インフレームで一緒に連結する。別の実施形態において、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来技術により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得る、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープライマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合部分（例えば、ＧＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている。ＮＯＶＸをコードする核酸は、この融合部分がＮＯＶＸタンパク質にインフレームで連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。
【０４５８】
（ＮＯＶＸのアゴニストおよびアンタゴニスト）
本発明はまた、ＮＯＶＸアゴニスト（すなわち、模倣物）として、またはＮＯＶＸアンタゴニストのいずれかとして機能するＮＯＶＸタンパク質の改変体に関する。ＮＯＶＸタンパク質の改変体が、変異誘発（例えば、ＮＯＶＸタンパク質の離散した点変異または短縮）により生成され得る。ＮＯＶＸタンパク質のアゴニストは、天然に存在する形態のＮＯＶＸタンパク質と実質的に同じ生物学的活性、またはその生物学的活性のサブセットを保持し得る。ＮＯＶＸタンパク質のアンタゴニストは、天然に存在する形態のＮＯＶＸタンパク質の１つ以上の活性を、例えば、ＮＯＶＸタンパク質を含む細胞性シグナル伝達カスケードの下流または上流のメンバーに競合的に結合することにより阻害し得る。従って、特定の生物学的効果が、限られた機能の改変体を用いた処理により誘発され得る。１つの実施形態において、このタンパク質の天然に存在する形態の生物学活性のサブセットを有する改変体を用いた被験体の処置は、ＮＯＶＸタンパク質の天然に存在する形態を用いた処置に対して、被験体においてより少ない副作用を有する。
【０４５９】
ＮＯＶＸアゴニスト（すなわち、模倣物）、またはＮＯＶＸアンタゴニストのいずれかとして機能するＮＯＶＸタンパク質の改変体は、ＮＯＶＸタンパク質のアゴニストまたはアンタゴニスト活性についてＮＯＶＸタンパク質の変異体（例えば短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより同定され得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ改変体の多彩なライブラリーは、核酸レベルでのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＮＯＶＸ改変体の多彩なライブラリーは、例えば、潜在的なＮＯＶＸ配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＮＯＶＸ配列のセットを含む（例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合タンパク質のセットとして発現可能であるように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、遺伝子配列に酵素的に連結することによって、作製され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的なＮＯＶＸ改変体のライブラリーを産生するために用いられ得る種々の方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結される。遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＮＯＶＸ配列の所望のセットをコードする配列のすべての供給を可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当該分野において周知である。例えば、Ｎａｒａｎｇ，１９８３．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６；Ｉｋｅら，１９８３．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと。
【０４６０】
（ポリペプチドライブラリー）
さらに、ＮＯＶＸタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用いて、ＮＯＶＸタンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のためのＮＯＶＸフラグメントの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態において、コード配列フラグメントのライブラリーは、ＮＯＶＸコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、１分子あたり約１回のみのニックが生じる条件下で、ヌクレアーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からのセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにこのＤＮＡを再生すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二重鎖から一本鎖部分を除去すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結することにより生成し得る。この方法によって、ＮＯＶＸタンパク質の種々のサイズのＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが派生され得る。
【０４６１】
点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、および選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための種々の技術が当該分野で公知である。このような技術を、ＮＯＶＸタンパク質のコンビナトリアル変異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に従う最も広く用いられる技術は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細胞を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大させる新規技術であるリクルーシブアンサンブル変異誘発（ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ  ｅｎｓｅｍｂｌｅ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（ＲＥＭ）を、スクリーニングアッセイと組み合わせて用い、ＮＯＶＸ改変体を同定し得る。例えば、ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ，１９９２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら，１９９３．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６：３２７−３３１を参照のこと。
【０４６２】
（抗ＮＯＶＸ抗体）
ＮＯＶＸタンパク質、またはＮＯＶＸタンパク質のフラグメントに対する抗体がまた本発明に含まれる。用語「抗体」とは、本明細書中で使用される場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に特異的に結合（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）をいう。このような抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、およびＦ(ａｂ')2フラグメント、ならびにＦａｂ発現ライブラリーが挙げられるがこれらに限定されない。一般に、ヒトから得た抗体分子は、この分子に存在する重鎖の性質が互いに異なるクラスであるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤのいずれかに関する。特定のクラスは、同様にサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）を有する。さらに、ヒトにおいては、軽鎖は、κ鎖またはλ鎖であり得る。抗体に対する本明細書における言及は、ヒト抗体種のこのようなクラス、サブクラス、およびタイプの全てに対する言及を包含する。
【０４６３】
本発明の単離されたＮＯＶＸ関連タンパク質は、抗原、またはその部分もしくはフラグメントとして役立つように意図され得、さらに、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の調製のための標準的な技術を用いて、抗原に免疫特異的に結合する抗体を産生するための免疫原として用いられ得る。完全長のタンパク質が用いられ得るか、あるいは、本発明は、免疫原としての使用のための抗原の抗原性ペプチドフラグメントを提供する。抗原性ペプチドフラグメントは、完全長のタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも６アミノ酸残基を含み、そしてこのペプチドに対して惹起された抗体が完全長のタンパク質またはエピトープを含む任意のフラグメントと特異的な免疫複合体を形成するように、そのエピトープを含む。好ましくは、抗原性ペプチドは、少なくとも１０アミノ酸残基、または少なくとも１５アミノ酸残基、または少なくとも２０アミノ酸残基、または少なくとも３０アミノ酸残基を含む。抗原性ペプチドによって包含される好ましいエピトープは、その表面に位置するタンパク質の領域である；一般的に、これらは、親水性領域である。
【０４６４】
本発明の特定の実施形態において、抗原性ペプチドに含まれる少なくとも１つのエピトープは、タンパク質の表面上に位置するＮＯＶＸ関連タンパク質の領域、例えば、親水性領域である。ヒトＮＯＶＸ関連タンパク質配列の疎水性分析は、ＮＯＶＸ関連タンパク質のどの領域が特に親水性であり、従って、抗体産生を標的するための有用な表面残基をコードしそうであるかを示す。抗体産生を標的する手段として、親水性および疎水性の領域を示すヒドロパシープロットを、例えば、フーリエ変換を伴うかまたは伴わないかのいずれかの、Ｋｙｔｅ  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ法またはＨｏｐｐ  Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で周知の任意の方法により生成し得る（例えば、各々がその全体において本明細書に参考として援用される、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ  １９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１４２を参照のこと）。抗原性タンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ内の１つ以上のドメインに対して特異的な抗体はまた、本明細書中で提供される。
【０４６５】
本発明のタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログもしくはオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）は、これらのタンパク質成分に免疫特異的に結合する抗体の産生における免疫原として利用され得る。
【０４６６】
当該分野において公知の種々の手順が、本発明のタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログもしくはオルソログに対して指向されるポリクローナル抗体またはモノクロナール抗体の産生のために使用され得る（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。これらの抗体のうちのいくつかは、以下で考察される。
【０４６７】
（ポリクローナル抗体）
ポリクローナル抗体の産生のために、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ、ヤギ、マウスまたは他の動物）は、ネイティブなタンパク質、その合成改変体、または上記の誘導体を用いる１以上の注射によって免疫され得る。適切な免疫原性調製物は、例えば、天然に存在する免疫原性タンパク質、免疫原性タンパク質を提示する化学的に合成されたポリペプチド、または組換え的に発現される免疫原性タンパク質を含み得る。さらに、このタンパク質は、免疫されている哺乳動物において免疫原性であることが知られている第２のタンパク質に結合体化され得る。このような免疫原性タンパク質の例としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、および大豆トリプシンインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。この調製物はさらに、アジュバントを含み得る。種々のアジュバントが免疫学的応答を増加させるために使用され、このようなアジュバントとしては、フロイントのアジュバント（完全および不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、ジニトロフェノールなど）、ヒトにおいて使用可能なアジュバント（例えば、Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−ＧｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）、または類似の免疫刺激剤が挙げられるが、これらに限定されない。使用され得るアジュバントのさらなる例としては、ＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリルリピドＡ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。
【０４６８】
免疫原性タンパク質に対して指向されるポリクローナル抗体分子は、哺乳動物から（例えば、血液から）単離され得、そして周知の技術（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを用いるアフィニティクロマトグラフィー（これは、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する））によってさらに精製され得る。続いて、または代替的に、求められる免疫グロブリンの標的である特定の抗原、またはそのエピトープが、カラムに固定され、免疫アフィニティクロマトグラフィーによって免疫特異的抗体を精製し得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡより発行）、第１４巻、第８号（２０００年４月１７日）、２５〜２８頁）によって考察される。
【０４６９】
（モノクローナル抗体）
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、独特の軽鎖遺伝子産物および独特の重鎖遺伝子産物から構成される唯一の分子種の抗体分子を含む抗体分子の集団をいう。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、すべての分子の集団において同一である。従って、ＭＡｂは、抗原への独特の結合親和性によって特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応可能な抗原結合部位を含む。
【０４７０】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ方法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載されるような方法）を使用して調製され得る。ハイブリドーマ方法において、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は、免疫因子で代表的に免疫され、その免疫因子に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生し得るリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫され得る。
【０４７１】
免疫因子としては、代表的に、タンパク質抗原、そのフラグメントまたはその融合タンパク質が挙げられる。一般的には、以下のいずれかである：ヒト起源の細胞が望まれる場合は、末梢血リンパ球が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合は、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、適切な融合因子（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して、リンパ球を不死化細胞株に融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）第５９−１０３頁）。不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、１以上の物質（融合されていない不死化細胞の増殖または生存を阻害する）を含む適切な培養培地中で培養され得る。例えば、親の細胞が酵素、ヒポキサンチングアニンンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマからの培養培地は、代表的にヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠失細胞の増殖を妨げる。
【０４７２】
好ましい不死化細胞株は、効率的に融合する細胞株であり、選択された抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体の発現を支持し、そしてＨＡＴ培地のような培地に感受性である。より好ましい不死化細胞株は、マウス骨髄腫株であり、それらを、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａおよびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから入手可能である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＹ  ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８７）第５１−６３頁）。
【０４７３】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、抗原に対して指向されるモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって決定されるか、またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定される。このような技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ＭｕｎｓｏｎおよびＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード分析によって決定され得る。好ましくは、標的抗原に対する高い程度の特異性および高結合親和性を有する抗体が、単離される。
【０４７４】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈手順によって、クローンをサブクローニングし得、そして標準的な方法によって増殖し得る。この目的のために適切な培養培地としては、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）およびＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物内の腹水のようなインビボで増殖され得る。
【０４７５】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順（例えば、プロテイン質Ａセファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィー）によって、培養培地または腹水から、単離または精製され得る。
【０４７６】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される方法）によって作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され得、そして配列決定され得る。本発明のハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに配置され得、次いでそれらは、宿主細胞（例えば、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞内でのモノクローナル抗体の合成を得る。ＤＮＡはまた、例えば、相同なマウス配列の代わりにヒトの重鎖および軽鎖の定常ドメインについてのコード配列の置換（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８，８１２−１３（１９９４））によってか、または非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列のすべてまたは一部の配列をコードする免疫グロブリンへの共有結合的な連結によって改変され得る。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインに置換され得るか、または本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換され得、キメラの二価抗体を作製する。
【０４７７】
（ヒト化抗体）
本発明のタンパク質抗原に対して指向される抗体は、さらにヒト化抗体またはヒト抗体を含み得る。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒトによる免疫応答を引き起こすことなく、ヒトへの投与に適切である。抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列）であり、それらは主にヒト免疫グロブリンの配列から構成され、そして非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含む。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列に対してげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従って行われ得る。（米国特許第５，２２５，５３９号もまた参照のこと。）いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖ骨格（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエントの抗体においても、移入されたＣＤＲまたは骨格配列においても見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および代表的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含む。これらの領域内で、すべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、そしてすべてまたは実質的にすべての骨格領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、代表的には、ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む（Ｊｏｎｅｓら、１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２））。
【０４７８】
（ヒト抗体）
完全なヒト抗体とは、ＣＤＲを含む軽鎖および重鎖の両方の配列全体がヒト遺伝子から本質的に生じる抗体分子をいう。このような抗体を、「ヒト抗体」、または「完全なヒト抗体」と本明細書中で呼ぶ。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術によって調製され得る；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，第７７−９６頁を参照のこと）。ヒトモノクローナル抗体は、本発明の実施において使用され得、そしてヒトハイブリドーマの使用によってか（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロでのエプスタイン−バーウイルスを用いたヒトＢ細胞の形質転換によって（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，第７７−９６頁を参照のこと）産生され得る。
【０４７９】
さらに、ヒト抗体はまた、さらなる技術（ファージディスプレイライブラリー（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））を含む）を使用して産生され得る。同様に、ヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物（例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が、部分的または完全に不活化されているマウス）に導入することによって、ヒト抗体は作製され得る。チャレンジの際にヒト抗体の産生が観察され、このことはすべての点（遺伝子再配列、アセンブリー、および抗体レパートリーを含む）でヒトにおいて観察されたことに密接に類似する。このアプローチは、例えば、以下に記載される：米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、そしてＭａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０、７７９−７８３（１９９２））；Ｌｏｎｂｅｒｇら（Ｎａｔｕｒｅ  ３６８  ８５６−８５９（１９９４））；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ  ３６８、８１２−１３（１９９４））；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４、８４５−５１（１９９６））；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４、８２６（１９９６））；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３  ６５−９３（１９９５））。
【０４８０】
ヒト抗体は、抗原によるチャレンジに応答する動物の内因性抗体よりも完全なヒト抗体を産生するように改変されたトランスジェニック非ヒト動物を使用して、さらに産生され得る。（ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０２６０２を参照のこと。）非ヒト宿主における重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリンをコードする内因性遺伝子は、無能力にされ、そしてヒトの重鎖および軽鎖の免疫グロブリンをコードする活性な座位が、宿主のゲノムに挿入される。例えば、不可欠なヒトＤＮＡセグメントを含む酵母人工染色体を使用して、ヒト遺伝子は組み込まれる。次いで、すべての所望の改変を提供する動物を、完全な改変の相補体よりもより少ない改変の相補体を含む中間トランスジェニック動物を交配することによって子孫として得る。このような非ヒト動物の好ましい実施形態は、マウスであり、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／３３７３５およびＷＯ９６／３４０９６に開示されるようにＸｅｎｏｍｏｕｓｅＴＭと呼ばれる。この動物は、完全なヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。目的の免疫原での免疫後の動物から（例えば、ポリクローナル抗体の調製物として）、あるいは動物由来の不死化されたＢ細胞（例えば、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ）から、抗体を直接得ることが可能である。さらに、ヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子は、抗体を直接得るために回収および発現され得るか、または抗体のアナログ（例えば、単鎖Ｆｖ分子）を得るために、さらに改変され得る。
【０４８１】
内因性免疫グロブリン重鎖の発現を欠く非ヒト宿主（マウスとして例示される）を作製するための方法の例は、米国特許第５，９３９，５９８号に開示される。それを、以下の工程を包含する方法によって得ることが可能である：座位の再配列を防ぎ、そして再配列された免疫グロブリン重鎖座位の転写物の形成、および選択マーカーをコードする遺伝子を含む標的化ベクターによってもたらされる欠失を防ぐために、胚幹細胞における少なくとも１つの内因性重鎖座位由来のＪセグメント遺伝子を欠失する工程；およびトランスジェニックマウス（その体細胞および生殖細胞は、選択マーカーをコードする遺伝子を含む）を、胚幹細胞から作製する工程。
【０４８２】
目的の抗体（例えば、ヒト抗体）を産生する方法は、米国特許第５，９１６，７７１号に開示される。それは以下の工程を包含する：重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、培養中の１つの哺乳動物宿主細胞に導入する工程、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、別の哺乳動物宿主細胞に導入する工程、およびハイブリッド細胞を形成するために２つの細胞を融合する工程。ハイブリッド細胞は、重鎖および軽鎖を含む抗体を発現する。
【０４８３】
この手順のさらなる改良において、臨床的に適切な免疫原上のエピトープを同定するための方法および高親和性で適切なエピトープに免疫特異的に結合する抗体を選択するための相関的な方法が、ＰＣＴ公開ＷＯ  ９９／５３０４９において開示される。
【０４８４】
（Ｆａｂフラグメントおよび単鎖抗体）
本発明に従って、技術は、本発明の抗原性タンパク質に特異的な単鎖抗体の産生のために適合され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。さらに、方法は、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のために適合され得（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１を参照のこと）、タンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログについての所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ効果的な同定を可能にする。タンパク質抗原に対するイディオタイプを含む抗体フラグメント：（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって産生されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって産生されるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）ペプシンおよび還元剤を用いた抗体分子の処理によって産生されるＦａｂフラグメント、および（ｉｖ）Ｆｖフラグメントを含むが、これらに限定ない）は、当該分野で公知の技術によって産生され得る。
【０４８５】
（二重特異的抗体）
二重特異的抗体は、モノクローナル抗体（好ましくはヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体）であって、これらは少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する。この場合において、結合特異性の１つは、本発明の抗原性タンパク質に対してである。第２の結合標的は、任意の他の抗原であり、そして有利には細胞表面タンパク質あるいはレセプターまたはレセプターサブユニットである。
【０４８６】
二重特異的抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。伝統的に、二重特異的抗体の組換え生成は、２つの免疫グロブリンの重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここでこの２つの重鎖は異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせに起因して、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を作製し、このうち１つのみが正確な二重特異的構造を有する。この正確な分子の精製は、通常アフィニティークロマトグラフィー工程によって達成される。同様の手順は、１９９３年５月１３日公開のＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１  ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０：３６５５−３６５９において開示される。
【０４８７】
所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常領域配列に融合され得る。この融合物は、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常ドメインを有し、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも部分を含む。この融合物中の少なくとも１つに存在する軽鎖結合のために必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。この免疫グロブリン重鎖融合物、および所望の場合、この免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、そして適切な宿主生物体に同時トランスフェクトされる。二重特異的抗体の作製のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０４８８】
ＷＯ９６／２７０１１に記載される別のアプローチに従って、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの割合を最大化するために操作され得る。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法において、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さなアミノ酸側鎖は、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。大きな側鎖についての同一または同様のサイズの補償的な「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することによって、第２の抗体分子の界面上に生成される。このことは、ホモダイマーのような他の不必要な最終産物よりも、ヘテロダイマーの収量を増加するための機構を提供する。
【０４８９】
二重特異的抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異的抗体）として調製され得る。抗体フラグメントから二重特異的抗体を作製するための技術は、文献において記載される。例えば、二重特異的抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解的に切断してＦ（ａｂ’）２フラグメントを作製する手順を記載する。これらのフラグメントは、近接ジチオールを安定化し、そして分子間ジスルフィド形成を阻止するために、ジチオール錯化剤ナトリウム亜ヒ酸塩の存在下で還元される。次いで、この作製されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、メルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’−チオールに再変換され、そしてこれは等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて二重特異的抗体を形成する。生成された二重特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用され得る。
【０４９０】
さらに、Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、そして化学的にカップリングされて二重特異的抗体を形成する。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異的抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、そしてインビトロの指向性化学的カップリングに供され、二重特異的抗体を形成する。従って、形成されたこの二重特異的抗体は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合し得、そしてヒト胸部腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解性活性を誘発し得る。
【０４９１】
組換え細胞培養物から直接二重特異的抗体フラグメントを作製し、そして単離するための種々の技術が記載されてきた。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生される。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合される。この抗体ホモダイマーは、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、次いで再酸化されて抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた、抗体ホモダイマーの産生のために使用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載されるこの「ディアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異的抗体フラグメントを作製するための代替的な機構を提供した。これらのフラグメントは、短すぎて同じ鎖上の２つのドメインの間を対にできないリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対になるように強制され、これによって２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって二重特異的抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーもまた、報告されてきた。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０４９２】
２つ以上の結合価を有する抗体が意図される。例えば、三重特異的抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０４９３】
例示的な二重特異的抗体は、２つの異なるエピトープに結合し得、このうち少なくとも１つは、本発明のタンパク質抗原に起源を有する。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、Ｔ細胞レセプター分子のような白血球上の誘発分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、またはＢ７）、あるいはＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと、特定の抗原を発現する細胞に対する細胞性防御機構に焦点を合わせるように組み合わされ得る。二重特異的抗体はまた、特定の抗原を発現する細胞に対して細胞傷害性因子を指向させるために使用され得る。これらの抗体は抗原結合アーム、および細胞傷害性因子または放射性核種キレーター（例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＴＥＴＡ）に結合するアームを保有する。目的の別の二重特異的抗体は、本明細書中に記載のタンパク質抗原に結合し、そしてさらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０４９４】
（ヘテロ接合体抗体）
ヘテロ接合体抗体はまた、本発明の範囲内である。ヘテロ接合体抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不必要な細胞に標的化するために（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の処置のために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９）提案されてきた。この抗体は、インビトロで、合成タンパク質化学において公知の方法（架橋剤を含む方法を含む）を使用して調製され得ることが意図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応の使用またはチオエーテル結合の形成によって構築され得る。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば米国特許第４，６７６，９８０号において開示される試薬が挙げられる。
【０４９５】
（エフェクター機能操作）
本発明の抗体を、エフェクター機能について、例えば癌の処置における抗体の効力を増大するように改変することが所望され得る。例えば、システイン残基は、Ｆｃ領域に導入され得、これによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にする。このように、作製されるこのホモダイマー抗体は、改良されたインターナリゼーションの可能性および／または増加した補体媒介細胞死滅、ならびに抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。増大した抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、二重のＦｃ領域をする抗体は操作され得、そしてこれによって増大した補体溶解およびＡＤＣＣの可能性を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。
【０４９６】
（免疫結合体）
本発明はまた、細胞傷害性の薬剤（例えば、化学療法剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素学的に活性な毒素、あるいはそれらのフラグメント）、または放射性同位体（すなわち、放射性結合体））に結合した抗体を含む免疫結合体に関する。
【０４９７】
このような免疫結合体の作製において有用な化学療法剤は、上記に記載される。使用され得る酵素学的に活性な毒素およびそれらのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓｅｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎ）が挙げられる。種々の放射性核種は、放射性結合体化抗体の作製のために利用可能である。その例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、および１８６Ｒｅが挙げられる。
【０４９８】
抗体および細胞傷害性因子の結合体は、種々の二官能性タンパク質結合剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ）（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデート  ＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ））、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトーベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への結合体化のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
【０４９９】
別の実施形態において、腫瘍の前標的化における利用のために、この抗体は、「レセプター」（例えば、ストレプトアビジン）に結合体化され得、ここで抗体−レセプター結合体は患者に投与され、続いて除去剤を使用して結合していない結合体が循環から除去され、次いで細胞傷害性因子に次々に結合体化する「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０５００】
１つの実施形態において、所望される特異性を有する抗体のスクリーニング方法には、酵素結合イムノソルベント検出法（ＥＬＩＳＡ）および当該分野内で公知の他の免疫的媒介性技術が挙げられるが、これらに制限されない。特定の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質の特定のドメインに特異的な抗体の選択は、このようなドメインを有するＮＯＶＸタンパク質のフラグメントに結合するハイブリドーマの作製によって促進される。したがって、ＮＯＶＸタンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ内の所望されるドメインに特異的な抗体が、また本明細書中で提供される。
【０５０１】
抗ＮＯＶＸ抗体は、ＮＯＶＸタンパク質の局在および／または定量に関する分野内の公知の方法（例えば、適切な生理的サンプル内のＮＯＶＸタンパク質のレベルを測定する際の使用のため、診断的方法における使用のため、タンパク質画像化における使用のためなど）で用いられ得る。所定の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対する抗体（抗体結合ドメイン由来の抗体を含む）が、薬理的に活性な化合物（以降は「治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」）として使用される。
【０５０２】
抗ＮＯＶＸ抗体（例えばモノクローナル抗体）は、標準技術（例えば、アフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降）によって、ＮＯＶＸポリペプチドを単離するために用いられ得る。抗ＮＯＶＸ抗体は、細胞由来の天然のＮＯＶＸポリペプチドの精製および宿主細胞において発現される組換え的に産生されたＮＯＶＸポリペプチドの精製を容易にし得る。さらに、ＮＯＶＸタンパク質の発現の量およびパターンを評価するため、抗ＮＯＶＸ抗体を用いて、（例えば、細胞溶解物または細胞上清における）ＮＯＶＸタンパク質を検出し得る。抗ＮＯＶＸ抗体は、例えば、所定の処置レジメンの効力を決定するために、臨床試験手順の一部として組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物質にカップリングする（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易にされ得る。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ、適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ、発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ、そして、適切な放射性物質の例としては１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０５０３】
（ＮＯＶＸ組換え発現ベクターおよび宿主細胞）
本発明の別の局面は、ＮＯＶＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログをコードする核酸を含むベクター、好ましくは発現ベクターに関する。本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」は、これが接続された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。ベクターの１つの型は「プラスミド」であり、これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。ベクターの別の型はウイルス性ベクターであり、ここでさらなるＤＮＡセグメントはこのウイルス性ゲノムに連結され得る。特定のベクターは、中に導入される宿主細胞中で自律的に複製し得る、（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入される際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そしてこれによって宿主のゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、これが作動可能に連結される遺伝子の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書中で「発現ベクター」といわれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるので、交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、ウイルス性ベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）のような発現ベクターのこのような他の形態を含むことを意図し、これらは等価な機能を果たす。
【０５０４】
本発明の組換え発現ベクターは、本発明の核酸を、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態で含み、これは、この組換え発現ベクターが、発現のために使用される宿主細胞に基いて選択される１つ以上の調節配列（これは、発現される核酸配列に作動可能に連結される）を含むこと意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作動可能に連結」は、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列の発現を（例えば、インビトロ転写／翻訳系またはこのベクターが宿主細胞に導入される場合、宿主細胞において）可能にするような様式で調節配列に連結されることを意味することを意図する。
【０５０５】
用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列としては、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指向する配列、および特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を指向する配列（例えば、組織特異的調節配列）が挙げられる。発現ベクターの設計が、形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどのような因子に依存し得ることは、当業者に理解される。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され、それにより、本明細書に記載されるような核酸によりコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質またはペプチド）（例えば、ＮＯＶＸタンパク質、ＮＯＶＸタンパク質の変異形態、融合タンパク質など）を生成し得る。
【０５０６】
本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、ＮＯＶＸタンパク質の発現のために設計され得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）においてさらに考察される。あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて、インビトロで転写および翻訳され得る。
【０５０７】
原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現を指向する構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターを有するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおいて実行される。融合ベクターは、そこにコードされるタンパク質、通常、組換えタンパク質のアミノ末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、以下の３つの目的のために役立つ：（ｉ）組換えタンパク質の発現を増加させること；（ｉｉ）組換えタンパク質の溶解度を増加させること；および（ｉｉｉ）親和性精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の精製の際に補助すること。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解性切断部位が、融合部分の結合部に導入され、そして融合タンパク質の精製に引き続いて、組換えタンパク質が融合部分から分離されることを可能にする。このような酵素、およびその同族の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとしては、それぞれグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを、標的組換えタンパク質に融合する、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０５０８】
適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例としては、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ  １１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げられる。
【０５０９】
Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラテジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力が損なわれた宿主細菌中でタンパク質を発現させることである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラテジーは、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるものであるように、発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：２１１１−２１１８を参照のこと）。本発明の核酸配列のこのような変更は、標準的なＤＮＡ合成技術によって実行され得る。
【０５１０】
別の実施形態において、ＮＯＶＸ発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌｌ  ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ  ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
【０５１１】
あるいは、ＮＯＶＸは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞中で発現され得る。培養された昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２１５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７０：３１−３９）が挙げられる。
【０５１２】
なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：１８７−１９５）が挙げられる。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のための他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照のこと。
【０５１３】
別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型中で優先的に核酸の発現を指向し得る（例えば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切な組織特異的プロモーターの非限定的な例としては、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１：２６８−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、特に、Ｔ細胞レセプタープロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ．８：７２９−７３３）および免疫グロブリンプロモーター（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９１２−９１６）、および乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発生的に調節されるプロモーターもまた含有される（例えば、マウスホックス（ｈｏｘ）プロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３７４−３７９）およびα−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．３：５３７−５４６）。
【０５１４】
本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分子は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（ＤＮＡ分子の転写による）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される。種々の細胞型におけるアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現を指向する、アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結された調節配列が選択され得る。例えば、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞型特異的発現を指向する、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー、または調節配列が選択され得る。アンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用する遺伝子発現の調節の議論については、例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＲＮＡ  ａｓ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０５１５】
本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能に使用される。このような用語は、特定の対象の細胞をいうのみでなく、そのような細胞の子孫または潜在的な子孫もまたいうことが理解される。変異または環境的影響のいずれかに起因して、特定の改変は次の世代において生じ得るので、このような子孫は、実際、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中で使用されるような用語の範囲内に含まれ得る。
【０５１６】
宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０５１７】
ベクターＤＮＡは、従来的な形質転換技術またはトランスフェクション技術を介して原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」は、外来性の核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための当該分野で認識される種々の技術をいうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され得る。
【０５１８】
哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションについては、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来ＤＮＡをそのゲノム中に組み込み得ることが知られている。これらの組み込み体を同定および選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。種々の選択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレキセート）に対する耐性を付与するマーカーが含まれる。選択マーカーをコードする核酸は、ＮＯＶＸをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入され得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入される核酸を用いて安定にトランスフェクトされる細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生存するが、他の細胞は死滅する）。
【０５１９】
本発明の宿主細胞（例えば、培養物中の原核生物宿主細胞および真核生物宿主細胞）は、ＮＯＶＸタンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、ＮＯＶＸタンパク質を産生するための方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＮＯＶＸタンパク質が産生されるような適切な培地中で、本発明の宿主細胞（ここに、ＮＯＶＸタンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を培養する工程を包含する。別の実施形態において、この方法はさらに、培地または宿主細胞からＮＯＶＸを単離する工程を包含する。
【０５２０】
（トランスジェニックＮＯＶＸ動物）
本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使用され得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、ＮＯＶＸタンパク質コード配列が導入される、受精した卵母細胞または胚性幹細胞である。次いで、このような宿主細胞は、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使用され得、ここで外因性のＮＯＶＸ配列は、それらのゲノムまたは相同組換え動物（ここで内因性のＮＯＶＸ配列が変更されている）に導入される。このような動物は、ＮＯＶＸタンパク質の機能および／または活性を研究するため、ならびにＮＯＶＸタンパク質活性のモジュレーターを同定および／または評価するために有用である。本明細書中で使用される場合、「トランスジェニック動物」とは、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは、ラットまたはマウスのような齧歯動物であり、ここでこれらの動物の１つ以上の細胞は、導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物の他の例には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などが挙げられる。導入遺伝子は、細胞のゲノムに組み込まれ（この細胞からトランスジェニック動物が発生する）、そして成熟動物のゲノムに残存する外因性のＤＮＡであり、それによって、このトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指向する。本明細書中で使用される場合、「相同組換え動物」は、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはマウスであり、ここで、内因性ＮＯＶＸ遺伝子は、この内因性の遺伝子と、動物の発生の前に動物の細胞（例えば、動物の胚細胞）に導入された外因性ＤＮＡ分子との間の相同組換えによって、変更されている。
【０５２１】
本発明のトランスジェニック動物は、ＮＯＶＸをコードする核酸を、受精した卵母細胞の雄性前核に導入することによって（例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって）、およびこの卵母細胞が偽妊娠雌性フォスター動物（ｆｏｓｔｅｒ  ａｎｉｍａｌ）中で発生することを可能にすることによって作製され得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１，２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１のヒトＮＯＶＸ  ｃＤＮＡ配列  は、非ヒト動物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトＮＯＶＸ遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスＮＯＶＸ遺伝子）は、ヒトＮＯＶＸ  ｃＤＮＡに対するハイブリダイゼーションに基づいて単離され得（上述にさらに記載される）、そして導入遺伝子として使用され得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた導入遺伝子中に含まれ、その導入遺伝子の発現の効率を増大させ得る。組織特異的調節配列は、特定の細胞に対して、ＮＯＶＸタンパク質の発現を指向するために、ＮＯＶＸ導入遺伝子に作動可能に連結され得る。胚の操作およびマイクロインジェクションを介してトランスジェニック動物（特に、マウスのような動物）を生成するための方法は、当該分野で従来的になっており、そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；同第４，８７０，００９号；および同第４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａｎ  １９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩＮＧ  ＴＨＥ  ＭＯＵＳＥ  ＥＭＢＲＹＯ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。同様の方法は、他のトランスジェニック動物の作製のために使用される。トランスジェニック初代動物は、そのゲノムにおけるＮＯＶＸ導入遺伝子の存在および／またはその動物の組織または細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック初代動物は、導入遺伝子を有するさらなる動物を繁殖させるために使用され得る。さらに、ＮＯＶＸタンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は、さらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物へと繁殖させ得る。
【０５２２】
相同組換え動物を作製するために、欠失、付加、または置換が導入されて、それによってＮＯＶＸ遺伝子が変化（例えば、機能的に破壊）されている、ＮＯＶＸ遺伝子の少なくとも一部を含むベクターを調製する。ＮＯＶＸ遺伝子は、ヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１のｃＤＮＡ）であり得るが、より好ましくは、ヒトＮＯＶＸ遺伝子の非ヒトホモログである。例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１のヒトＮＯＶＸ遺伝子のマウスホモログは、マウスゲノム中の内因性ＮＯＶＸ遺伝子を変更するのに適切な相同組換えベクターを構築するために使用され得る。１つの実施形態において、このベクターは、相同組換えに際して、内因性ＮＯＶＸ遺伝子が、機能的に破壊される（すなわち、機能的タンパク質をもはやコードしない；「ノックアウト」ベクターともいわれる）ように設計される。
【０５２３】
あるいは、このベクターは、相同組換えの際に、内因性ＮＯＶＸ遺伝子が変異されるか、あるいはさもなければ、変更されるが、なお機能的タンパク質をコードするように設計される（例えば、上流の調節領域を変更して、それによって内因性ＮＯＶＸタンパク質の発現を変更し得る）。相同組換えベクターにおいて、ＮＯＶＸ遺伝子の変更された部分は、ＮＯＶＸ遺伝子のさらなる核酸によって、その５’末端および３’末端で隣接され、相同組換えが、ベクターによって運ばれる外因性ＮＯＶＸ遺伝子と胚性幹細胞中の内因性ＮＯＶＸ遺伝子との間で起こることを可能にする。さらなる隣接するＮＯＶＸ核酸は、内因性遺伝子との首尾よい相同組換えに十分な長さである。代表的に、（５’末端および３’末端の両方で）数キロベースの隣接するＤＮＡが、ベクターに含まれる。例えば、相同組換えベクターの記載について、Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ  ５１：５０３を参照のこと。次いで、このベクターは、胚性幹細胞株に導入され（例えば、エレクトロポレーションによって）、この導入されたＮＯＶＸ遺伝子が、内因性ＮＯＶＸ遺伝子と相同組換えされた細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６９：９１５を参照のこと）。
【０５２４】
次いで、この選択された細胞を、動物（例えば、マウス）の胚盤胞へ注入して、凝集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９８７）のＴＥＲＡＴＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡＳ  ＡＮＤ  ＥＭＢＲＹＯＮＩＣ  ＳＴＥＭ  ＣＥＬＬＳ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ  １１３頁〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚を、適切な偽妊娠雌性フォスター動物に移植し得、そしてこの胚を、出産間近にする。それらの生殖細胞中に相同組換えＤＮＡを保有する子孫を使用して、動物を繁殖し得、ここで、この動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって、この相同組換えＤＮＡを含む。相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築するための方法が、さらに以下に記載される；Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開番号：ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；およびＷＯ９３／０４１６９。
【０５２５】
別の実施形態において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含む、非ヒトトランスジェニック動物が産生され得る。このような系の１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である。Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：１３５１−１３５５を参照のこと。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発現を調節するために使用される場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が、必要となる。このような動物は、例えば、２種のトランスジェニック動物（一方は選択されたタンパク質をコードする導入遺伝子を含み、他方はリコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む）を交配することによる、「二重の」トランスジェニック動物の構築によって提供され得る。
【０５２６】
本明細書中に記載されるトランスジェニック非ヒト動物のクローンがまた、Ｗｉｌｍｕｔら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ  ３８５：８１０−８１３に記載される方法に従って、産生され得る。簡単には、トランスジェニック動物由来の細胞（例えば、体細胞）を、単離および誘導し、増殖サイクルから出し、そしてＧ０期に入らせ得る。次いで、この静止細胞を、例えば、電気パルスの使用により、静止細胞が単離される同種動物由来の、除核された卵母細胞へ融合し得る。次いで、この再構築された卵母細胞を培養し、その結果、これは桑実胚または未分化胚芽細胞に発達し、次いで、偽妊娠雌性フォスター動物に移される。この雌性フォスター動物から生まれた子孫は、細胞（例えば、体細胞）が単離される動物のクローンである。
【０５２７】
（薬学的組成物）
本発明のＮＯＶＸ核酸分子、ＮＯＶＸタンパク質、および抗ＮＯＶＸ抗体（これらはまた、本明細書中で「活性化合物」といわれる）、ならびにそれらの誘導体、フラグメント、アナログ、およびホモログが、投与に適した薬学的組成物に組み込まれ得る。このような組成物は、代表的に、核酸分子、タンパク質または抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に適合した、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤（ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。適切なキャリアは、当該分野における標準的な参考書である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版（本明細書中で参考として援用される）に記載される。このようなキャリアまたは希釈剤の好ましい例としては、水、生理食塩水、フィンガー溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）もまた、使用され得る。薬学的に活性な物質である、このような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。この活性化合物と不適合性である任意の従来の媒体または薬剤の範囲を除いて、組成物におけるその使用が、意図される。補足的な活性化合物もまた、この組成物に組み込まれ得る。
【０５２８】
本発明の薬学的組成物は、その意図される投与の経路と適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、皮内、皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮的（すなわち、局所的）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤（注射のための水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝液（例えば、アセテート、シトラートまたはホスフェート）；および張度の調整のための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いて調整され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアルに封入され得る。
【０５２９】
注射使用に適した薬学的組成物は、滅菌の水溶液（水溶性の場合）または滅菌注射可能な溶液もしくは分散液の即席調製のための分散液および滅菌粉末を含む。静脈内投与について、適切なキャリアには、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は、滅菌性であるべきであり、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度まで流動的であるべきである。これは、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されるべきである。このキャリアは、例えば、以下を含む溶媒または分散媒体であり得る：例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散に関しては、要求される粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物に含ませることによってもたらされ得る。
【０５３０】
滅菌注射可能溶液は、必要量のこの活性化合物（例えば、ＮＯＶＸタンパク質あるいは抗ＮＯＶＸ抗体）を、適切な溶媒中に、上記で列挙される成分の１つまたは組み合わせと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒体および上記で列挙される成分由来の必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクル中へ組み込むことによって調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合において、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、予め滅菌濾過されたその溶液から、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る。
【０５３１】
経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へ圧縮され得る。経口治療投与の目的のために、この活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、そして錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、マウスウォッシュ（ｍｏｕｔｈｗａｓｈ）としての使用のために流体キャリアを使用して調製され得、ここで、この流体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、そして素早く動かされ（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料が、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、以下のいずれかの成分または同様の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムトラガントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；グライダント（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０５３２】
吸入による投与について、これらの化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０５３３】
全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または経皮投与について、浸透されるべき障壁に対して適切な浸透剤が、処方物中で使用される。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤によって達成され得る。経皮投与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０５３４】
これらの化合物はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）または保持浣腸の形態で調製され得る。
【０５３５】
１つの実施形態において、これら活性化合物は、身体からの迅速な排出に対してこの化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者には明らかである。これらの材料はまた、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販され得る。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を含む、感染させた細胞へ標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０５３６】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物または非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される投薬単位形態は、処置される被験体のための単位投薬量として適切な、物理的に個別の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して、所望の治療的効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態についての詳細は、この活性化合物の固有の特性、および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合する当該分野に固有の制限によって決定されるか、あるいはこれらに直接依存する。
【０５３７】
本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとして使用され得る。遺伝子治療ベクターは、被験体へ、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）または定位固定注射（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９１：３０５４−３０５７を参照のこと）によって送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能な希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含み得、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれる徐放性マトリックスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクター（例えば、レトロウイルスベクター）が、組換え細胞からインタクトで産生され得る場合、この薬学的調製物は、遺伝子送達系を生じ１以上の細胞を含み得る。
【０５３８】
薬学的成分は、投与のための指示と共に容器、パックまたはディスペンサー中に含まれ得る。
【０５３９】
（スクリーニング方法および検出方法）
本発明の単離された核酸分子は、ＮＯＶＸタンパク質を発現するために（例えば、遺伝子治療適用において宿主細胞中の組み換え発現ベクターを介して）使用され、（例えば、生物学的サンプル中の）ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはＮＯＶＸ遺伝子中の遺伝的病変を検出し得、かつ以下にさらに記載されるようなＮＯＶＸ活性を調節し得る。さらに、ＮＯＶＸタンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の活性または発現を調節する薬物または化合物をスクリーニングするため、ならびにＮＯＶＸタンパク質の不十分かもしくは過剰な産生、またはＮＯＶＸ野生型タンパク質と比較して減少したかまたは異常な活性を有するＮＯＶＸタンパク質形態の産生によって特徴づけられる障害（例えば、糖尿病（インスリンの放出の制御）；肥満（脂質の結合および輸送）；肥満に関連した代謝障害、代謝症候群Ｘ、ならびに食欲不振および慢性病と関連した消耗病、そして様々な癌、および感染症（抗微生物活性を有する）ならびに様々な無脂肪血症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ））を処置するために使用され得る。さらに、本発明の抗ＮＯＶＸ抗体は、ＮＯＶＸタンパク質を検出および単離し、ならびにＮＯＶＸ活性を調節するために使用され得る。なおさらなる局面では、本発明は、正および負の両方の様式で、食欲、栄養素の吸収および代謝物質の性質に影響を与える方法において使用され得る。
【０５４０】
本発明は、さらに、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定された新規の薬剤、および上記される処置のためのそれらの使用に関する。
【０５４１】
（スクリーニングアッセイ）
本発明は、調節因子、すなわち、ＮＯＶＸタンパク質に結合するか、あるいは例えば、ＮＯＶＸタンパク質発現またはＮＯＶＸタンパク質活性に対して刺激効果または阻害効果を有する、候補化合物または試験化合物もしくは試験薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他の薬物）を同定するための方法（本明細書中において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。本発明はまた、本明細書中で記載されるスクリーニングアッセイにおいて同定される化合物を含む。
【０５４２】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＯＶＸのタンパク質またはポリペプチド、あるいはその生物学的に活性な部分の膜結合形態に結合するか、またはそれら膜結合形態の活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法における任意の多数のアプローチを使用して得られ得、これらのライブラリーには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的にアクセス可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、化合物のペプチドライブラリー、非ペプチドオリゴマーライブラリーもしくは低分子ライブラリーに適用可能である。Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １２：１４５を参照のこと。
【０５４３】
本明細書中で使用される場合、「低分子」とは、約５ｋＤ未満の分子量、最も好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物をいうように意味される。低分子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質または他の有機分子もしくは無機分子であり得る。化学的および／または生物学的混合物（例えば、真菌、細菌または藻類抽出物）のライブラリーは、当該分野で公知であり、そして本発明のアッセイのいずれかを用いてスクリーニングされ得る。
【０５４４】
分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０５４５】
化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２〜４２１）、あるいはビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２３３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：６３７８〜６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０；Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２３３，４０９号）において提示され得る。
【０５４６】
１つの実施形態において、アッセイは細胞ベースのアッセイであり、ここで、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上に発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物が、ＮＯＶＸタンパク質に結合する能力が、決定される。例えば、細胞は、哺乳動物起源または酵母細胞であり得る。この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質に結合する能力の決定は、例えば、その試験化合物を放射性同位体標識または酵素標識とカップリングさせることによって達成され得、その結果、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分に対する結合が、複合体中の標識化合物を検出することによって決定され得る。例えば、試験化合物は、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈで、直接的または間接的のいずれかで標識され得、そしてその放射性同位体が、放射線放射の直接の計数により、またはシンチレーション計数により、検出され得る。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識され得、そしてこの酵素的標識が、適切な基質の生成物への転換を決定することにより、検出され得る。１つの実施形態において、このアッセイは、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分をその細胞表面上に発現する細胞を、ＮＯＶＸと結合する公知の化合物と接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物に試験化合物を接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。
【０５４７】
別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上で発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物が、ＮＯＶＸまたはその生物学的に活性な部分の活性を調節する能力の決定は、例えば、ＮＯＶＸタンパク質が、ＮＯＶＸ標的分子に結合または相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。本明細書中において使用する場合には、「標的分子」は、ＮＯＶＸタンパク質が自然に結合または相互作用する分子であり、例えば、ＮＯＶＸ相互作用タンパク質を発現する細胞表面上の分子、第二の細胞表面上の分子、細胞外環境中の分子、細胞膜の内部表面と会合する分子、または細胞質分子である。ＮＯＶＸ標的分子は、非ＮＯＶＸ分子あるいは本発明のＮＯＶＸタンパク質またはポリペプチドであり得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ標的分子は、細胞膜を通って細胞内への細胞外シグナル（例えば、化合物が膜結合ＮＯＶＸ分子に結合することにより発生するシグナル）の伝達を促進する、シグナル伝達経路の構成要素である。この標的は、例えば、触媒活性を有する第二の細胞間タンパク質、または下流シグナル分子のＮＯＶＸとの会合を容易にするタンパク質であり得る。
【０５４８】
ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合するかまたは相互作用する能力の決定は、直接的結合を決定するための上記方法の１つにより、達成され得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合するかまたは相互作用する能力の決定は、その標的分子の活性を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その標的の細胞性セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３など）の誘導を検出すること、適切な基質への標的の触媒活性／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に連結されたＮＯＶＸ応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または細胞応答（例えば、細胞生存度、細胞分化、または細胞増殖）を検出することにより、決定され得る。
【０５４９】
なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞アッセイであり、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分と結合する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物の、ＮＯＶＸタンパク質への結合は、上記のように、直接的または間接的にのいずれかで決定され得る。１つのこのような実施形態において、このアッセイは、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＮＯＶＸを結合する公知の化合物に接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＮＯＶＸ、またはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。
【０５５０】
さらに別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＮＯＶＸの活性を調節する能力の決定は、例えば、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のための上記方法の１つによって決定することにより、達成され得る。代替の実施形態において、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質の活性を調節する能力の決定は、ＮＯＶＸタンパク質が、ＮＯＶＸ標的分子をさらに調節する能力を決定することにより達成され得る。例えば、この標的分子の適切な基質に対する触媒活性／酵素活性は、上記のように決定され得る。
【０５５１】
なお別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＮＯＶＸタンパク質を結合する公知の化合物に接触させてアッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力の決定は、ＮＯＶＸタンパク質が、ＮＯＶＸ標的分子と優先的に結合する能力か、またはこの標的分子の活性を優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。
【０５５２】
本発明の無細胞アッセイは、ＮＯＶＸタンパク質の、可溶性の形態または膜結合形態の両方の使用に受け入れられる。膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質を含む無細胞アッセイの場合には、ＮＯＶＸタンパク質の膜結合形態が溶液中で維持されるように、可溶化剤を利用することが望ましくあり得る。このような可溶化剤の例には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、例えば、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ（Ｉｓｏｔｒｉｄｅｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｅｔｈｅｒ）ｎ、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−１−ｐｒｏｐａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）である。
【０５５３】
本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の非複合形態からの複合形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化に適用させることが、望ましくあり得る。試験化合物の、ＮＯＶＸタンパク質への結合、または候補化合物の存在下および非存在下での、ＮＯＶＸタンパク質の標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するのに適切な任意の容器内で、達成され得る。このような容器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管が挙げられる。１実施形態において、そのタンパク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質が、提供され得る。例えば、ＧＳＴ−ＮＯＶＸ融合タンパク質またはＧＳＴ標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでこれらは、試験化合物と合わせられるか、あるいは試験化合物および吸着されない標的タンパク質、またはＮＯＶＸタンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合体形成に貢献する条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーションに続いて、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックスを固定し、例えば上記のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、そしてＮＯＶＸタンパク質の結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用して決定し得る。
【０５５４】
タンパク質をマトリックスに固定するための他の技術がまた、本発明のスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質、またはその標的分子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合を利用して、固定され得る。ビオチニル化ＮＯＶＸタンパク質、または標的分子は、当該分野において周知の技術（例えば、ビオチニル化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）を使用して、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得、そしてストレプトアビジンで被覆した９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定され得る。あるいは、ＮＯＶＸタンパク質、または標的分子と反応性であるがＮＯＶＸタンパク質のその標的分子への結合を妨害しない抗体が、そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはＮＯＶＸタンパク質が、抗体の結合によってウェルにトラップされ得る。このような複合体を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記の方法に加えて、ＮＯＶＸタンパク質または標的分子と反応性の抗体を使用する、複合体の免疫検出、ならびにＮＯＶＸタンパク質または標的分子に関連する酵素活性の検出に基づく酵素結合アッセイが挙げられる。
【０５５５】
別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質発現のモジュレーターは、細胞を候補化合物と接触させ、そして細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を決定する方法において同定される。候補化合物の存在下でのＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、候補化合物の非存在下でのＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルと比較される。次いで、候補化合物は、この比較に基づいて、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質発現のモジュレーターとして同定され得る。例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下より、その存在下における方が大きい（すなわち、統計的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の刺激物質として同定される。あるいは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下よりその存在下の方が少ない（統計的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質を検出するために本明細書中に記載の方法によって決定され得る。
【０５５６】
本発明のなお別の局面において、ＮＯＶＸタンパク質は、ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「ベイトタンパク質」として使用されて（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら、１９９３  Ｃｅｌｌ  ７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら、１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら、１９９３  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：９２０−９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８：１６９３−１６９６；およびＢｒｅｎｔ  ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）、ＮＯＶＸ（「ＮＯＶＸ結合タンパク質」または「ＮＯＶＸ−ｂｐ」）に結合するか、またはこれと相互作用し、そしてＮＯＶＸ活性を調節する他のタンパク質を同定し得る。このようなＮＯＶＸ結合タンパク質はまた、例えば、ＮＯＶＸ経路の上流または下流エレメントとしてＮＯＶＸタンパク質によるシグナル伝達に関与するようである。
【０５５７】
ツーハイブリッドシステムは、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる、大部分の転写因子のモジュール的性質に基づく。簡潔には、このアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。一方の構築物においては、ＮＯＶＸをコードする遺伝子が公知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物においては、ＤＮＡ配列のライブラリー由来の、未同定タンパク質（「プレイ」または「サンプル」）をコードするＤＮＡ配列が、公知の転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「ベイト」および「プレイ」タンパク質がインビボで相互作用して、ＮＯＶＸ依存性複合体を形成し得る場合、この転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、非常に近くにある。近位にあることにより、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子（例えば、ＬａｃＺ）の転写を可能にする。レポーター遺伝子の発現が検出され得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーが、単離され得、そしてＮＯＶＸと相互作用するタンパク質をコードするクローニングされた遺伝子を得るために使用され得る。
【０５５８】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤および本明細書中に記載されるような処置のためのこの薬剤の使用に関する。
【０５５９】
（検出アッセイ）
本明細書中で同定されるｃＤＮＡ配列の一部分またはフラグメント（および対応する完全な遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で使用され得る。例えば（限定はされない）、これらの配列を使用して、（ｉ）染色体上の各々の遺伝子をマッピングし、それによって遺伝病に関連した遺伝子領域の位置を捜し当て得る；（ｉｉ）微量の生物学的サンプルから個体を同定し得る（組織型決定）；および（ｉｉｉ）生物学的サンプルの法医学的識別を助け得る。これらの適用のうちのいくつかは、以下の節において記載される。
【０５６０】
（染色体マッピング）
一旦、遺伝子の配列（または配列の部分）が単離されると、この配列は、染色体上の遺伝子の位置をマッピングするために使用され得る。このプロセスは、染色体マッピングとよばれる。従って、ＮＯＶＸの配列の部分またはフラグメント（配列番号は１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１）またはそれらのフラグメントもしくはその誘導体はそれぞれ、染色体上のＮＯＶＸ遺伝子の位置をマッピングするために使用され得る。ＮＯＶＸ配列の染色体に対するマッピングは、これらの配列と疾患に関連する遺伝子とを関連付ける最初の重要な工程である。
【０５６１】
手短には、ＮＯＶＸ遺伝子は、ＮＯＶＸ配列からＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５ｂｐの長さ）を調製することによって染色体にマッピングされ得る。ＮＯＶＸ配列のコンピュータ分析は、ゲノムＤＮＡ中の１つより多いエキソンにまたがらず従って、増幅プロセスを複雑にしない、プライマーを素早く選択するために使用され得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用され得る。ＮＯＶＸ配列に対応するヒト遺伝子を含むこれらのハイブリッドのみが、増幅されたフラグメントを産生する。
【０５６２】
体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物（例えば、ヒトおよびマウス細胞）由来の体細胞を融合することによって調製される。ヒトおよびマウス細胞のハイブリッドが増殖および分裂する場合、これらは次第に、ランダムな順序でヒト染色体を喪失するが、マウスの染色体を保持する。特定の酵素を欠くのでマウス細胞は増殖し得ないが、ヒト細胞は増殖し得る媒地を使用することによって、必要とされる酵素をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が保持される。種々の媒地を使用することによって、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルにおける各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体のいずれか、およびマウス染色体の全セットを含み、特定のヒト染色体に対する個々の遺伝子の容易なマッピングを可能にする。例えば、Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら、１９８３  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２０：９１９−９２４を参照のこと。ヒト染色体のフラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を有するヒト染色体を使用することによって産生され得る。
【０５６３】
体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の配列を特定の染色体に割り当てるための素早い手順である。単一のサーマルサイクラー（ｔｈｅｒｍａｌ  ｃｙｃｌｅｒ）を使用して、１日当たり、３個以上の配列が割り当てられ得る。オリゴヌクレオチドプライマーを設計するために、ＮＯＶＸの配列を使用して、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて、準位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）が達成され得る。
【０５６４】
ＤＮＡ配列の中期染色体スプレッド（ｓｐｒｅａｄ）に対する蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）は、さらに、一工程で正確な染色体位置を提供するために使用され得る。染色体スプレッドは、紡錘体を破壊するコルセミドのような化合物によって中期で分裂がブロックされた細胞を使用して作製され得る。染色体は、トリプシンで簡単に処理され、次いで、Ｇｉｅｍｓａで染色される。明るいおよび暗いバンドのパターンが各染色体上で生成し、その結果、染色体が個々に同定され得る。このＦＩＳＨ技術は、５００または６００個の塩基ほどの短さのＤＮＡ配列を用いて使用され得る。しかし、１，０００個の塩基よりも大きいクローンは、サンプル検出に十分なシグナル強度を有する固有の染色体位置に結合する可能性がより高い。好ましくは、１，０００個の塩基、より好ましくは、２，０００個の塩基は、合理的な時間の間に良好な結果を得るのに十分である。この技術の総説については、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ  ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ  ＭＡＮＵＡＬ  ＯＦ  ＢＡＳＩＣ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８８）を参照のこと。
【０５６５】
染色体マッピングのための試薬は、単一の染色体またはその染色体上の単一の部位をマークするために個々に使用され得るか、あるいは試薬のパネルが複数の部位および／または複数の染色体をマークするために使用され得る。実際、遺伝子の非コード領域に対応する試薬が、マッピングの目的のために好ましい。コード配列は、遺伝子ファミリー内でより保存されているようであり、それゆえ染色体マッピングの間、クロスハイブリダイゼーションの機会が増加する。
【０５６６】
一旦、配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理的位置が遺伝子マップデータと相関され得る。このようなデータは、例えば、Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｗｅｌｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙからオンラインで入手可能な、ＭｃＫｕｓｉｃｋ、ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ  ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ  ＩＮ  ＭＡＮに見出される。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる、遺伝子と疾患との間の関係は、連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝性）によって同定され得、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ、３２５：７８３−７８７に記載される。
【０５６７】
さらに、ＮＯＶＸ遺伝子と関連する疾患に感染した個体と感染していない個体との間のＤＮＡ配列における差が決定され得る。変異が、感染した個体のいくらかのまたは全てにおいて観測されるが、感染していないいずれの個体においても観測されない場合、この変異は、特定の疾患の原因因子であるようである。感染した個体と感染していない個体との比較は、一般的に、まず、染色体スプレッドから可視であるかまたはそのＤＮＡ配列に基づくＰＣＲを使用して検出可能な欠失または転座のような、染色体における構造的変化を探すことを包含する。最終的に、数人かの個体からの遺伝子の完全な配列決定は、変異の存在を確認するため、そして多型性由来の変異を区別するために実施され得る。
【０５６８】
（組織型決定）
本発明のＮＯＶＸ配列はまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定するために使用され得る。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の制限酵素で消化され、そしてサザンブロットで検査され、同定のための独特のバンドを生成する。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号に記載される「制限フラグメント長の多型性」）についてさらなるＤＮＡマーカーとして有用である。
【０５６９】
さらに、本発明の配列は、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩基ごとのＤＮＡ配列を決定する代替の技術を提供するために使用され得る。従って、本明細書中に記載されるＮＯＶＸの配列は、配列の５’および３’末端から２つのＰＣＲプライマーを調製するために使用され得る。次いで、これらのプライマーは、個体のＤＮＡを増殖し、そして続いてそれを配列決定するために使用され得る。
【０５７０】
この方法で調製される、個体からの対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が対立遺伝子の差に起因するこのようなＤＮＡ配列の独特のセットを有するので、独特の個体同定を提供し得る。本発明の配列は、個体および組織からのこのような同定配列を得るために使用され得る。本発明のＮＯＶＸの配列は、ヒトゲノムの部分を独特に表す。対立遺伝子のバリエーションが、これらの配列のコード領域においてはある程度生じ、そして非コード領域においてはより大きな程度に生じる。個々のヒトの間の対立遺伝子のバリエーションは、各５００個の塩基当たり約１回の頻度で生じると見積もられる。対立遺伝子のバリエーションの大部分は、単一のヌクレオチド多型性（ＳＮＰ）に起因し、これは、制限フラグメント長の多型性（ＲＦＬＰ）を含む。
【０５７１】
本明細書中に記載された配列のそれぞれは、個体由来のＤＮＡが同定の目的のために比較され得る標準として、ある程度、使用され得る。より多くの数の多型性が非コード領域において生じるので、より少ない配列が個体を区別するために必要である。非コード配列は、それぞれが１００個の塩基の非コード増幅配列を産生する、およそ１０〜１，０００個のプライマーのパネルを用いてポジティブな個体の同定を満足に提供し得る。推定されたコード配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１における配列）が使用される場合、ポジティブな個体の同定のためのより適切な数のプライマーは、５００〜２，０００であり得る。
【０５７２】
（予測医療）
本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）の目的に使用され、これによって個体を予防的に処置する、予測医療の分野に関する。従って、本発明の１つの局面は、ＮＯＶＸのタンパク質および／または核酸の発現、ならびにＮＯＶＸの活性を、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）の関連で決定し、これによって、異常なＮＯＶＸの発現または活性に関連して、個体が疾患または障害に罹患するかどうか、あるいは障害を発症する危険があるかどうかを決定する。障害には、代謝障害、糖尿病、肥満、感染症、食欲不振、癌に関連する悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害および造血障害ならびに様々なディスリピデミア、肥満に関連する代謝障害、代謝性症候群Ｘならびに慢性疾患および様々な癌に関連する消耗症が挙げられる。本発明はまた、個体がＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または活性と関連した障害を発症する危険があるかどうかを決定するための予後的（または予測的）アッセイを提供する。例えば、ＮＯＶＸの遺伝子における変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイは、予後的または予測的な目的に使用され、これによってＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または生物学的活性によって特徴付けられるかまたはそれと関連した障害の発病の前に個体を予防的に処置し得る。
【０５７３】
本発明の別の局面は、個体におけるＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現あるいは活性を決定するための方法を提供し、これによって、その個体に適切な治療的または予防的試薬（本明細書において「薬物ゲノム」とよばれる）を選択する。薬物ゲノムは、個体の遺伝型（例えば、特定の試薬に対して応答する個体の能力を決定するために試験された個体の遺伝型）に基づいて個体の治療的または予防的処置のための薬剤（例えば、薬物）の選択を可能にする。
【０５７４】
本発明のなお別の局面は、臨床試験におけるＮＯＶＸの発現または活性に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。
【０５７５】
これらおよび他の試薬は、以下の節でさらに詳細に記載される。
【０５７６】
（診断アッセイ）
生物学的サンプルにおけるＮＯＶＸの存在または非存在を検出するための例示的な方法は、試験被験体から生物学的サンプルを得る工程、およびその生物学的サンプルを、ＮＯＶＸタンパク質またはＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物もしくは薬剤と接触させ、その結果ＮＯＶＸの存在が、その生物学的サンプルにおいて検出される工程を包含する。ＮＯＶＸのｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出するための薬剤は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る、標識された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、全長のＮＯＶＸの核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９および５１の核酸もしくはその一部）（例えば、少なくとも、１５、３０、５０、１００、２５０もしくは５００ヌクレオチド長であり、ストリンジェントな条件下でＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと特異的にハイブリダイズするに十分なオリゴヌクレオチド）であり得る。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは本明細書において記載されている。
【０５７７】
ＮＯＶＸタンパク質を検出するための薬剤は、ＮＯＶＸタンパク質に結合し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナル抗体であり得るか、またはより好ましくはモノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が使用され得る。用語「標識（された）」とは、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をそのプローブもしくは抗体にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結する）ことによってそのプローブまたは抗体を直接標識すること、ならびに、直接標識された別の試薬との反応性によってそのプローブもしくは抗体を間接的に標識をすることを包含することが意図される。間接的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにＤＮＡプローブのビオチンを用いた末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、被験体から単離された、組織、細胞および生物学的流体ならびに被験体に存在する組織、細胞および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を用いて、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡを、生物学的サンプル中で、インビトロおよびインビボで検出し得る。例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＮＯＶＸタンパク質の検出のためのインビトロ技術としては、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。ＮＯＶＸのゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。さらに、ＮＯＶＸのタンパク質の検出のためのインビボ技術としては、標識された抗ＮＯＶＸ抗体を被験体に導入することが挙げられる。例えば、その抗体は、放射性マーカーを用いて標識され得る。被験体における放射性マーカーの存在および位置は、標準的な画像化技術によって検出され得る。
【０５７８】
１つの実施形態において、生物学的サンプルは、試験被験体由来のタンパク質分子を含む。あるいは、生物学的サンプルは、試験被験体由来のｍＲＮＡ分子または試験被験体由来のゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された末梢血白血球サンプルである。
【０５７９】
別の実施形態において、本発明の方法はさらに、コントロール被験体からコントロール生物学的サンプルを得る工程、そのコントロールサンプルを、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物もしくは薬剤と接触させ、その結果、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的サンプルにおいて検出される、工程、およびコントロールサンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在と、試験サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在とを比較する工程を包含する。
【０５８０】
本発明はまた、生物学的サンプルにおけるＮＯＶＸの存在を検出するためのキットを包含する。例えば、このキットは、以下を備え得る：生物学的サンプルにおいてＮＯＶＸのタンパク質またはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合物もしくは薬剤；そのサンプルにおけるＮＯＶＸの量を決定するための手段；およびそのサンプルにおけるＮＯＶＸの量と標準を比較するための手段。この化合物または薬剤は、適切な容器内に包装され得る。このキットは、さらに、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸を検出するためにキットを用いるための指示書を備え得る。
【０５８１】
（予後アッセイ）
本明細書において記載された診断方法をさらに利用して、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連した疾患もしくは障害を有するかまたはその発症の危険にある被験体を同定し得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例えば、上述の診断アッセイまたは下記のアッセイ）を利用して、ＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または活性に関連する障害を有するかまたはその発症の危険に有る被験体を同定し得る。あるいは、この予後アッセイを利用して、疾患または障害を有するかまたはその発症の危険に有る被験体を同定し得る。従って、本発明は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患もしくは障害を同定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルが被験体から獲得され、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）が検出され、ここで、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸の存在は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を有するかまたはその発症の危険にある被験体についての診断指標である。本明細書において使用される「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学的サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サンプル、または組織であり得る。
【０５８２】
さらに、本明細書に記載される予後アッセイを使用して、被験体に薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補）が投与されて、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を処置され得るか否かを決定し得る。例えば、そのような方法を用いて、被験体が障害に対する薬剤を用いて有効に処置され得るか否かを決定し得る。従って、本発明は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する障害についての薬剤を用いて被験体が有効に処置され得るか否かを決定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルが得られ、そしてＮＯＶＸのタンパク質または核酸が検出される（例えば、ここで、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸の存在は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する障害を処置するための薬剤をその被験体に投与し得ることについての診断指標である）。
【０５８３】
本発明の方法はまた、ＮＯＶＸの遺伝子における遺伝的損傷を検出し、それによって、その損傷遺伝子を有する被験体が異常な細胞増殖および／または分化によって特徴付けられる障害についての危険に有するか否かを決定するためにも使用され得る。種々の実施形態において、本発明の方法は、その被験体由来の細胞のサンプルにおいて、ＮＯＶＸのタンパク質をコードする遺伝子の完全性に影響を与える少なくとも１つの変更によって特徴付けられる遺伝的損傷、あるいはＮＯＶＸの遺伝子の誤発現の存在または非存在を検出する工程を包含する。例えば、そのような遺伝的損傷は、以下の少なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：（１）ＮＯＶＸの遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；（２）ＮＯＶＸの遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；（３）ＮＯＶＸの遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、（４）ＮＯＶＸの遺伝子の染色体再配置；（５）ＮＯＶＸの遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変更、（６）ＮＯＶＸの遺伝子の異常な改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターンの異常な改変）、（７）ＮＯＶＸの遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、（８）ＮＯＶＸのタンパク質の非野生型レベル、（９）ＮＯＶＸの遺伝子の対立遺伝子の欠失、ならびに（１０）ＮＯＶＸのタンパク質の不適切な翻訳後修飾。本明細書において記載されるように、当該分野において、多数の公知のアッセイ技術が存在し、これらは、ＮＯＶＸの遺伝子における損傷を検出するために使用され得る。好ましい生物学的サンプルは、従来手段によって被験体から単離された末梢血白血球サンプルである。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプルが使用され得、これには、例えば、頬粘膜細胞が挙げられる。
【０５８４】
特定の実施形態において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ  ＰＣＲ）あるいは、連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら、１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら、１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３６０−３６４を参照のこと）におけるプローブ／プライマーの使用を包含する。後者は、ＮＯＶＸの遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る）（Ａｂｒａｖａｙａら、１９９５  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、患者から細胞のサンプルを収集する工程、核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはその両方）をそのサンプルの細胞から単離する工程、ＮＯＶＸの遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーと、その核酸サンプルとを、ＮＯＶＸの遺伝子のハイブリダイゼーションおよび増幅が（存在する場合）生じるような条件下で、接触させる工程、ならびに増幅産物の存在もしくは非存在を検出する工程、またはその増幅産物の大きさを検出する工程およびその長さをコントロールサンプルと比較する工程を包含し得る。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲは、本明細書に記載される変異を検出するために使用される技術のいずれかとともに予備的増幅工程として使用されるために所望され得ることが予想される。
【０５８５】
代替的な増幅方法としては、以下が挙げられる：自己維持型配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ、ら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１１７３−１１７７）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７）、または他の任意の核酸増幅方法、それに続く、当業者に周知な技術を用いた増幅分子の検出。これらの検出スキームは、そのような分子が非常に少数で存在する場合、核酸分子の検出のために特に有用である。
【０５８６】
代替の実施形態において、サンプル細胞からのＮＯＶＸの遺伝子における変異は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅され（必要に応じて）、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長の大きさがゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコントロールＤＮＡとの間のフラグメント長の大きさにおける差違は、そのサンプルＤＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイムの使用（例えば、米国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位の生成または喪失による特異的な変異の存在についてスコア付けし得る。
【０５８７】
他の実施形態において、ＮＯＶＸにおける遺伝的変異は、サンプル核酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイに対してハイブリダイズさせることによって同定され得る（例えば、Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６）Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ２：７５３−７５９を参照のこと）。例えば、ＮＯＶＸにおける遺伝的変異は、Ｃｒｏｎｉｎら、（前出）に記載されるように光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同定され得る。手短には、第一のプローブハイブリダイゼーションアレイを用いて、サンプルおよびコントロールにおける長いストレッチのＤＮＡを通じて走査して、連続的に重複するプローブの線形アレイを作成することによってその配列の間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程に続いて、検出される全ての改変体または変異体に相補的な、より小さな特化されたプローブアレイを用いて、特定の変異の特徴付けを可能にする第二のハイブリダイゼーションアレイがある。各変異アレイは、一方が野生型遺伝子に対して相補的であり、そして他方が変異遺伝子に対して相補的である並行プローブセットから構成される。
【０５８８】
なお別の実施形態において、当該分野で公知の種々の配列決定反応のいずれかを使用して、ＮＯＶＸの遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルのＮＯＶＸの配列と、対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって変異を検出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘｉｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。診断アッセイを実施する場合、種々の自動化配列決定手順のいずれかを利用し得ることもまた意図される（例えば、Ｎａｅｖｅら、（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９：４４８を参照のこと）。これらには、質量分析法による配列決定法（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ  ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３８  ：１４７−１５９を参照のこと）が含まれる。
【０５８９】
ＮＯＶＸの遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断薬剤からの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡもしくはＲＮＡ／ＤＮＡのヘテロ二重鎖におけるミスマッチ塩基を検出する方法が挙げられる（例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：１２４２を参照のこと）。一般に、「ミスマッチ切断」の当該分野の技術は、野生型のＮＯＶＸの配列を含む（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡを、組織サンプルから得られた潜在的な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供することによって始まる。この二本鎖二重鎖を、二重鎖の一本鎖領域（例えば、そのコントロール鎖とサンプルの鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するもの）を切断する薬剤を用いて処理する。例えば、そのミスマッチ領域を酵素で消化するために、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖をＲＮａｓｅを用いて消化し得、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドをＳ１ヌクレアーゼを用いて処理し得る。他の実施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかの二重鎖を、ミスマッチ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウムおよびピペリジンを用いて処理し得る。そのミスマッチ領域の消化後、次いで得られた材料を変性ポリアクリルアミドゲルにおいてサイズにより分離して、変異の部位を決定する。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５を参照のこと。１つの実施形態において、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０５９０】
なお別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、規定された系において二本鎖ＤＮＡにおけるミスマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）を、細胞のサンプルから得られたＮＯＶＸ  ｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマッピングするために使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅＬａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する（例えば、Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  １５：１６５７〜１６６２を参照のこと）。例示的な実施形態に従って、ＮＯＶＸの配列（例えば、野生型ＮＯＶＸの配列に基づくプローブ）は、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハイブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素を用いて処理され、そしてその切断産物は、もしあれば、電気泳動プロトコルなどから検出され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０５９１】
他の実施形態において、電気泳動の移動度における変化は、ＮＯＶＸの遺伝子における変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖配座多型（ＳＳＣＰ）は、変異体核酸と野生型核酸との間の電気泳動の移動度における差異を検出するために使用され得る（例えば、Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ：８６：２７６６；Ｃｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５〜１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３〜７９を参照のこと）。サンプルおよびコントロールのＮＯＶＸの核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントを、変性し、そして再生させる。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気泳動の移動度における結果としての変化は、１つの塩基変化さえも検出することを可能にする。ＤＮＡフラグメントは、標識され得るか、または標識されたプローブを用いて検出され得る。アッセイの感度は、（ＤＮＡよりもむしろ）ＲＮＡを使用することによって増強され得、このＲＮＡの二次構造は、配列中の変化に対してより感受性である。１つの実施形態において、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動の移動度における変化に基づいて二本鎖のヘテロ二重鎖分子を分離する（例えば、Ｋｅｅｎら（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ  ７：５を参照のこと）。
【０５９２】
なお別の実施形態において、一定勾配の変性剤を含有するポリアクリルアミドゲルにおける変異体フラグメントまたは野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる（例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１３：４９５を参照のこと）。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、例えば、ＰＣＲにより約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加することによって、完全に変性されないことを保証するようにＤＮＡを改変する。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定するために、変性剤勾配の代わりに使用される（例えば、ＲｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２７５３を参照のこと）。
【０５９３】
点変異を検出するための他の技術の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、既知の変異が中心に配置されるように調製され得、次いで、完全なマッチが見出される場合にのみハイブリダイゼーションを許容する条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされ得る（Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２４：１６３）；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６２３０）。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドがハイブリダイズする膜に付着され、そして標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多くの異なる変異にハイブリダイズされる。
【０５９４】
あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明と合わせて使用され得る。特異的増幅についてのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心において（その結果、増幅は、差次的ハイブリダイゼーションに依存する；例えばＧｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：２４３７〜２４４８）かまたは適切な条件下でミスマッチがポリメラーゼ伸長を妨げ得るかもしくは減少し得る、１つのプライマーの３’末端で、目的の変異を保有し得る（例えば、Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ．１１：２３８を参照のこと）。さらに、変異の領域において新規な制限部位を導入することは、切断に基づく検出を行うために望ましくあり得る（例えば、Ｇａｓｐａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｂｅｓ  ６：１を参照のこと）。特定の実施形態において、増幅はまた、増幅のためにＴａｑリガーゼを使用して実施され得ることが予測される（例えば、Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８９）。このような場合において、ライゲーションは、５’配列の３’末端に完全なマッチが存在する場合にのみ生じ、増幅の存在または非存在を探索することによって特定の部位における公知の変異の存在を検出することを可能にする。
【０５９５】
本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載される少なくとも１つのプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キットを利用することによって実施され得、これは、例えば、ＮＯＶＸの遺伝子が関与する疾患または疾病の症状または家族履歴を示す患者を診断するための臨床的設定において簡便に使用され得る。
【０５９６】
さらに、ＮＯＶＸが発現される任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢血白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて利用され得る。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が、使用され得る。
【０５９７】
（薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ））
本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される場合に、ＮＯＶＸの活性（例えば、ＮＯＶＸの遺伝子発現）に対する刺激性または阻害性の影響を有する因子、または調節因子は、障害（この障害としては、代謝障害、糖尿病、肥満、感染症、食欲不振、癌に関連した悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害および造血障害、ならびに様々な無脂肪血症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）、肥満に関連した代謝障害、代謝症候群Ｘならびに慢性疾患および種々の癌に関連した消耗症が挙げられる）を（予防的または治療的に）処置するために個体に投与され得る。このような処置と合わせて、個体の薬理ゲノム学（すなわち、個体の遺伝子型と外来化合物または薬物に対するその個体の応答との間の関係についての研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬理学的に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関係を変更することによって、重篤な毒性および治療の失敗をもたらし得る。従って、個体の薬理ゲノム学は、個体の遺伝子型の考慮に基づく予防的処置または治療的処置のために有効な薬剤（例えば、薬物）の選択を許容する。このような薬理ゲノム学は、さらに、適切な投薬量および治療レジメンを決定するために使用され得る。従って、個体におけるＮＯＶＸのタンパク質の活性、ＮＯＶＸの核酸の発現、またはＮＯＶＸの遺伝子の変異含量が決定されて、それによって個体の治療的処置または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。
【０５９８】
薬理ゲノム学は、罹患した人において変更された薬物の性質および異常な作用に起因する薬物への応答における臨床的に有意な遺伝性バリエーションを扱う。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９９６，２３：９８３〜９８５；Ｌｉｎｄｅｒ、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４３：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学状態が、区別され得る。薬物が身体に作用する方法を変更する１つの因子として伝達された遺伝的状態（変更された薬物作用）、または身体が薬物に作用する方法を変更する１つの因子として伝達された遺伝的状態（変更された薬物代謝）。これらの薬理ゲノム学状態は、稀な欠損としてかまたは多型としてのいずれかで生じ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損は、一般的な遺伝性酵素病であり、その主な臨床的合併症は、酸化剤薬物（抗マラリア剤、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの摂取（ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ）後の溶血である。
【０５９９】
例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および期間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、幾人かの患者が予期される薬物効果を得ないか、または標準的かつ安全な用量の薬物を摂取した後に過大な薬物応答および深刻な毒性を示す理由に関しての説明を提供してきた。これらの多型は、集団において２つの表現型（高い代謝能を持つ人（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＥＭ）および低い代謝能を持つ人（ｐｏｏｒ    ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＰＭ））で発現される。ＰＭの罹患率は、異なる集団の間で異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型であり、そしていくらかの変異がＰＭにおいて同定されており、この全ては機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在に至る。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低い代謝能を持つ人は、彼らが標準的な用量を受ける場合に、かなり頻繁に過大な薬物応答および副作用を経験する。代謝産物が活性な治療的部分である場合、そのＣＹＰ２Ｄ６形成代謝産物であるモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるように、ＰＭは治療的応答を示さない。他の極端なものは、標準的な用量に応答しない、いわゆる超急速な代謝能を持つ人である。最近、分子ベースの超急速な代謝は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因していることが同定されている。
【０６００】
従って、ＮＯＶＸのタンパク質の活性、ＮＯＶＸの核酸の発現、あるいは個体におけるＮＯＶＸの遺伝子の変異内容を決定して、それによって、その個体の治療的処置または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。さらに、薬理遺伝学の研究を使用して、個体の薬物応答性の表現型の同定に対して、薬物代謝酵素をコードする多型対立遺伝子の遺伝子型を適用し得る。この知見は、用量または薬物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、従って、被験体をＮＯＶＸの調節因子（例えば、本明細書中に記載される例示的なスクリーニングアッセイの１つによって同定される調節因子）を用いて処置する場合に治療的または予防的効率を増強し得る。
【０６０１】
（臨床試験の間の効果のモニタリング）
ＮＯＶＸの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を調節する能力）に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることは、基本的なスクリーニングにおいてのみならず、臨床試験においてもまた適用され得る。例えば、ＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを増加するか、またはＮＯＶＸの活性をアップレギュレートする、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイによって決定される薬剤の効力は、減少したＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはダウンレギュレートしたＮＯＶＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。あるいは、ＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを減少するか、またはＮＯＶＸの活性をダウンレギュレートする、スクリーニングアッセイによって決定される薬剤の効力は、増加したＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはアップレギュレートしたＮＯＶＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。このような臨床試験において、ＮＯＶＸの発現または活性、および好ましくは、例えば細胞性増殖障害または免疫障害に関与している他の遺伝子が、「読み出し（ｒｅａｄ  ｏｕｔ）」または特定の細胞の免疫応答性のマーカーとして使用され得る。
【０６０２】
限定ではなく例として、ＮＯＶＸの活性（例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同定される）を調節する薬剤（例えば、化合物、薬物または低分子）を用いる処置によって細胞内で調節される遺伝子（ＮＯＶＸを含む）が、同定され得る。従って、細胞性増殖障害に対する薬剤の効果を研究するために、例えば、臨床試験において，細胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＮＯＶＸおよびこの障害に関与する他の遺伝子の発現のレベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるように、ノーザンブロット分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによるか、あるいは産生されるタンパク質の量を測定することによるか、本明細書中に記載されるような方法の１つによるか、またはＮＯＶＸもしくは他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、定量され得る。この方法において、この遺伝子パターンは、この薬剤に対する細胞の生理学的応答の指標であるマーカーとして、作用し得る。従って、この応答状態は、この薬剤を用いる個体の処置の前に、そして処置の間の種々の時点で、決定され得る。
【０６０３】
１つの実施形態において、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣物、核酸、低分子、または本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補物）を用いる被験体の処置の有効性をモニタリングするための方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：（ｉ）薬剤の投与の前に、被験体から投与前サンプルを得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおける、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）この被験体から１つ以上の投与後サンプルを得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルにおける、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、この投与後サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡと比較する工程；ならびに（ｖｉ）それに応じて、この被験体に対する薬剤の投与を変更する工程。例えば、この薬剤の増加した投与は、検出されるよりも高いレベルにＮＯＶＸの発現または活性を増加するために（すなわち、この薬剤の効力を増加するために）望ましくあり得る。あるいは、この薬剤の減少した投与は、検出されるよりも低いレベルにＮＯＶＸの発現または活性を減少するために（すなわち、この薬剤の効力を減少するために）望ましくあり得る。
【０６０４】
（処置の方法）
本発明は、異常なＮＯＶＸの発現または活性に関連する障害の危険性がある（すなわち疑いがある）か、またはこの障害を有する被験体を処置する予防的および治療的方法の両方を提供する。障害には以下が挙げられる：心筋症、アテローム性動脈硬化、高血圧、先天性心蔵伝導欠陥、大動脈狭窄、心房中隔欠損（ＡＳＤ）、房室（Ａ−Ｖ）管欠陥、動脈管、肺動脈弁狭窄、大動脈弁下部狭窄、心室中隔欠損（ＶＳＤ）、弁の疾患、結節硬化症、硬皮症、肥満、移植、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、前立腺癌、新生物；腺癌、リンパ腫、子宮癌、受胎能、血友病、凝固能亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫欠損、対宿主性移植片病、ＡＩＤＳ、気管支喘息、クローン病；多発性硬化症、オールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、ならびに同様の他の疾患、障害および状態。これらの処置方法は、以下により完全に考察される。
【０６０５】
（疾患および障害）
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）増加したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性をアンタゴナイズする（すなわち、低減または阻害する）治療剤を用いて処置され得る。活性をアンタゴナイズする治療剤は、治療的様式または予防的様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）上述のペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上述のペプチドに対する抗体；（ｉｉｉ）上述のペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）アンチセンス核酸および「機能不全性」である（すなわち、上述のペプチドのコード配列内の異種挿入物に起因する）核酸の投与（相同組換えによって上述のペプチドの内因性機能を「ノックアウトする」ために利用される）（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）；あるいは（ｖ）上述のペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用を変化させる、調節因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに対して特異的な抗体を含む））。
【０６０６】
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）減少したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患または障害は、活性を増加させる（すなわち、活性に対するアゴニストである）治療剤を用いて処置され得る。活性をアップレギュレートする治療剤は、治療的または予防的様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：上述のペプチド、あるいはそのアナログ、誘導体、フラグメントまたはホモログ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。
【０６０７】
増加したレベルまたは減少したレベルは、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定量することによって、容易に検出され得る。この定量は、患者の組織サンプルを（例えば、生検組織から）入手し、そしてそのサンプルを、その発現したペプチドのＲＮＡレベルまたはペプチドレベル、構造および／または活性（あるいは上述のペプチドのｍＲＮＡ）をインビトロでアッセイすることによる。当該分野において周知の方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イムノアッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、免疫沈降後のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫細胞学などによる）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）。
【０６０８】
（予防的方法）
１つの局面において、本発明は、被験体において、異常なＮＯＶＸの発現または活性と関連する疾患または状態を、ＮＯＶＸの発現または少なくとも１つのＮＯＶＸの活性を調節する薬剤を被験体に投与することによって予防するための方法を提供する。異常なＮＯＶＸの発現または活性によって引き起こされるかまたはこれらに起因する、疾患にかかる危険がある被験体は、例えば、本明細書中に記載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれか、あるいはそれらの組み合わせによって、同定され得る。予防薬剤の投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいはその進行を遅らすように、ＮＯＶＸの異常を特徴とする症状の発現の前に生じ得る。ＮＯＶＸの異常性の型に依存して、例えば、ＮＯＶＸのアゴニスト薬剤、あるいはＮＯＶＸのアンタゴニスト薬剤が、その被験体を処置するために使用され得る。その適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて、決定され得る。本発明の予防方法は、以下の小区分において、さらに議論される。
【０６０９】
（治療方法）
本発明の別の局面は、治療目的のために、ＮＯＶＸの発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、細胞を、その細胞に関するＮＯＶＸのタンパク質活性の活性のうちの１つ以上を調節する薬剤と接触させる工程を包含する。ＮＯＶＸのタンパク質活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載されるような薬剤であり得る。そのような薬剤は、例えば、核酸、タンパク質、ＮＯＶＸのタンパク質の天然に存在する同属リガンド、ペプチド、ＮＯＶＸのペプチド模倣物、あるいは他の低分子である。１つの実施形態において、この薬剤は、ＮＯＶＸのタンパク質活性のうちの１つ以上を刺激する。このような刺激性薬剤の例としては、その細胞に導入された、活性なＮＯＶＸのタンパク質、およびＮＯＶＸをコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、この薬剤は、ＮＯＶＸのタンパク質活性のうちの１つ以上を阻害する。このような阻害性薬剤の例としては、ＮＯＶＸのアンチセンス核酸分子、および抗ＮＯＶＸ抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、その薬剤とともにその細胞を培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、被験体にその薬剤を投与することによって）、実施され得る。このように、本発明は、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸分子の異常な発現または異常な活性によって特徴付けられる、疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＮＯＶＸの発現または活性を調節する（例えば、アップレギュレートまたはダウンレギュレートする）、薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）あるいはそのような薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態において、この方法は、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸分子を、ＮＯＶＸの低減したかまたは異常な発現または活性を補償するための治療として、投与する工程を包含する。
【０６１０】
ＮＯＶＸの活性の刺激は、ＮＯＶＸが異常にダウンレギュレートされている状況、および／あるいはＮＯＶＸの活性の増加が有益な効果を有するようである状況において、望ましい。このような状況の１つの例は、被験体が、異常な細胞増殖および／または細胞分化によって特徴付けられる障害（例えば、癌または免疫関連障害）を有する場合である。このような状況の別の例は、被験体が妊娠疾患（例えば、子癇前症）を有する場合である。
【０６１１】
（治療剤の生物学的効果の決定）
本発明の様々な実施形態において、適切なインビトロまたはインビボのアッセイは、特定の治療剤の効果を決定するため、およびその投与が罹患組織の処置に必要とされるか否かを決定するために実施される。
【０６１２】
様々な特定の実施形態において、インビトロのアッセイは、患者の障害に含まれる代表的な細胞の型を用いて実施され、提供された治療剤が細胞型に望ましい影響を及ぼすか否かを決定し得る。治療で使用するための化合物は、ヒト被検体において試験される前に以下の適切な動物モデル系において試験され得る：ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどが挙げられるが、これに限定しない。同様に、インビボの試験には、当該分野において公知である任意の動物モデル系が、ヒト被検体に投与する前に使用され得る。
【０６１３】
（本発明の組成物の、予防的使用および治療的使用）
本発明のＮＯＶＸの核酸およびタンパク質は、以下を含むがこれらに限定されない種々の障害に関連する、潜在的な予防適用および治療適用において有益である：代謝障害、糖尿病、肥満、感染症、食欲不振、癌に関連した癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、造血障害、および様々な無脂肪血症、肥満に関連した代謝障害、代謝症候群Ｘまたは慢性病および種々の癌に関連した消耗障害。
【０６１４】
例として、本発明のＮＯＶＸのタンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてこのタンパク質は、それを必要とする被験体に投与する場合、有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、以下に罹患した患者の処置に効果を有する：代謝障害、糖尿病、肥満、感染症、食欲不振、癌に関連する悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害および造血障害ならびに種々の無脂肪血症が挙げられる。
【０６１５】
ＮＯＶＸのタンパク質をコードする新規な核酸、および本発明のＮＯＶＸのタンパク質またはそのフラグメントの両方はまた、診断適用に有用であり得、核酸またはタンパク質の存在または量が判断される。更なる用途は、抗細菌分子（すなわち、幾つかのペプチドは抗細菌特性を有することが見出されている）としての用途であり得る。これらの物質は、治療方法または診断方法において使用するための本発明の新規物質に免疫特異的に結合する抗体の生成においてさらに有用である。
【０６１６】
本発明は、以下の実施例においてさらに記載され、これらの実施例は、特許請求の範囲中に記載される本明細書の範囲を限定しない。
【０６１７】
（実施例）
（実施例１．ＮＯＶＸクローンの同定）
本発明で同定した新規のＮＯＶＸ標的配列を、配列を確認するためにエキソン連結プロセスに供した。ＰＣＲプライマーを、順方向プライマーについては入手可能な最も上流の配列で、そして逆方向プライマーについては入手可能な最も下流の配列で開始するように設計した。表２１Ａは、種々のクローンを得るために使用したＰＣＲプライマーの配列を示す。それぞれの場合について、固有であるかまたは高度に選択的であるかのいずれかである適切な配列に遭遇するまで、または逆方向プライマーの場合には終止コドンに達するまで、コード配列に向ってそれぞれの末端から内側にウォーキングすることによって、配列を試験した。このようなプライマーを、標的配列の全長のｃＤＮＡ、ＤＮＡの一部（１つ以上のエキソン）またはタンパク質配列についてのインシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）予測に基づいてか、または他の種由来の密接に関連するヒト配列に対する推定エキソンの翻訳された相同性によって、設計した。次いで、これらのプライマーを、以下のヒトｃＤＮＡのプールに基づいてＰＣＲ増幅において使用した：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児の脳、胎児の腎臓、胎児の肝臓、胎児の肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、脳下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮。通常は、得られたアンプリコンをゲル精製し、クローン化し、そして高い縮重性について配列決定した。エキソンの連結によって導いたＰＣＲ産物を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎによるｐＣＲ２．１ベクター中にクローン化した。得られた細菌クローンは、ｐＣＲ２．１ベクター中にクローン化した完全なオープンリーディングフレームを包含している挿入物を有する。全てのクローンから得られた配列を、それ自体とともに、ＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのデータベース中の他のフラグメントとともに、そして公のＥＳＴとともにまとめた。集合の別の成分とのそれらの同一性の程度が５０ｂｐにわたって少なくとも９５％である場合には、集合の構成要素としてフラグメントおよびＥＳＴを含めた。さらに、配列のトレースを手動で評価し、そして適切である場合には修正を施した。これらの手順によって本明細書中に報告する配列を提供する。
【０６１８】
【表２１Ａ】
2004534518.tif 000201
2004534518.tif 000202
物理的クローン：エキソンを相同性によって推定し、そしてイントロン／エキソンの境界を標準的な遺伝子規則を使用して決定した。エキソンを複数のＢＬＡＳＴ（例えば、ｔＢｌａｓｔＮ、ＢｌａｓｔＸ、およびＢｌａｓｔＮ）検索、およびいくつかの場合には、ＧｅｎｅＳｃａｎおよびＧｒａｉｌを使用する類似性の決定手段によって、さらに選択し、そして精緻化した。利用可能な場合、公のデータベースおよび独自データベースの両方からの発現配列もまた加え、こらの遺伝子配列をさらに定義しそして完全なものとした。次いで、ＤＮＡ配列を、明らかな不一致について手動で補正し、それによって、全長タンパク質をコードする配列を得た。
【０６１９】
【表２１Ｂ】
2004534518.tif 000203
（実施例２．種々の細胞および組織中でのクローンの定量的発現分析）
種々のクローンの定量的な発現を、種々の正常および病理状態由来の細胞、細胞株および組織由来のＲＮＡサンプルを含有しているマイクロタイタープレートを使用し、実時間定量ＰＣＲ（ＲＴＱ  ＰＣＲ）を使用して評価した。ＲＴＱ  ＰＣＲを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００またはＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７９００  ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍによって実施した。サンプルの種々のコレクションをプレート上に組み立て、そしてパネル１（正常組織および癌細胞株を含む）、パネル２（正常供給源および癌供給源由来の組織から誘導されたサンプルを含む）、パネル３（癌細胞株を含む）、パネル４（正常組織由来の細胞および細胞株ならびに炎症状態に関連する細胞を含む）、パネル５Ｄ／５Ｉ（代謝疾患に対する重要性を有するヒト組織および細胞株を含む）、ＡＩ＿包括的＿パネル（正常組織および自己炎症疾患由来のサンプルを含む）、パネルＣＮＳＤ．０１（正常脳および疾患性の脳由来のサンプルを含む）およびＣＮＳ＿神経変性＿パネル（正常脳およびアルツハイマー疾患性の脳由来のサンプルを含む）と称する。
【０６２０】
全てのサンプル由来のＲＮＡの完全性を、ガイド（２：１〜２．５：１  ２８ｓ：１８ｓ）として２８Ｓおよび１８ＳのリボソームＲＮＡ染色強度を使用する、アガロースゲル電気泳動による目視評価、および分解産物の指標である低分子量ＲＮＡの非存在によって、品質について制御する。単一エキソンの長さを横切って増幅するように設計されたプローブおよびプライマーのセットを使用する、逆転写酵素の非存在下で行うＲＴＱ  ＰＣＲ反応によって、サンプルを、ゲノムＤＮＡ混入に対して制御する。
【０６２１】
最初に、ＲＮＡサンプルを、参照核酸（例えば、構成的に発現される遺伝子（例えば、β−アクチンおよびＧＡＰＤＨ））に対して正規化した。正規化したＲＮＡ（５μｌ）をｃＤＮＡに変換し、そしてＯｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３０９１６９）および遺伝子特異的プライマーを使用し、製造業者の説明書に従って、ＲＴＱ−ＰＣＲによって分析した。
【０６２２】
他の場合において、正規化していないＲＮＡサンプルを、製造業者の指示書に従って、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号１８０６４−１４７）およびランダムヘキサマーを使用して、一本鎖ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ）に変換した。１０μｇまでの全ＲＮＡを含有する反応を、２０μｌの容量で行い、そして６０分間４２℃にてインキュベートした。この反応は、１００μｌの最終容量において５０μｇまでの全ＲＮＡにまでスケールアップされ得る。次いで、ｓｓｃＤＮＡサンプルを、製造業者の指示書に従って、１×ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３２４０２０）を使用して、以前に記載されたような参照核酸に対して正規化する。
【０６２３】
プローブおよびプライマーを、入力として標的配列を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（Ａｐｐｌｅ  ＣｏｍｐｕｔｅｒのＭａｃｉｎｔｏｓｈ  Ｐｏｗｅｒ  ＰＣ用バージョンＩ）または同様のアルゴリズムに従って、それぞれのアッセイについて設計した。デフォルト設定を反応条件について使用し、そして以下のパラメーターを、プライマーの選択の前に設定した：プライマー濃度＝２５０ｎＭ、プライマーの融点（Ｔｍ）範囲＝５８〜６０℃、プライマーの最適Ｔｍ＝５９℃、最大のプライマー差分＝２℃、プローブは５’にＧを有さず、プローブのＴｍはプライマーのＴｍよりも１０℃高くなければならず、アンプリコンの大きさは７５ｂｐから１００ｂｐである。選択したプローブおよびプライマー（下記を参照のこと）を、Ｓｙｎｔｈｅｇｅｎ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）によって合成した。プローブを、ＨＰＬＣによって二重精製して、カップリングされなかった色素を除去し、そしてプローブのそれぞれ５’末端および３’末端へのレポーターおよびクエンチャー色素のカップリングを確認するために、質量スペクトル分析によって評価した。それらの最終濃度は、順方向プライマーおよび逆方向プライマーについては、それぞれ９００ｎＭであり、そしてプローブについては、２００ｎＭであった。
【０６２４】
ＰＣＲ条件：ＲＮＡサンプルを用いて研究する場合、各組織および各細胞株由来の正規化したＲＮＡを、９６ウェルまたは３８４ウェルのＰＣＲプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の各ウェルにスポットした。ＰＣＲ混液は、単一の遺伝子特異的プローブおよびプライマーセット、または２つの多重化（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ）プローブおよびプライマーセット（標的クローンに特異的なセットおよび標的プローブと多重化する別の遺伝子特異的セット）のいずれかを含有した。ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４３１３８０３）を使用して、製造業者の指示書に従って設定した。逆転写を、４８℃で３０分間行い、続いて、以下のような増幅／ＰＣＲサイクルを行った：９５℃で１０分間、次いで、４０サイクルの、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。結果を、ＣＴ値（所定のサンプルが蛍光の閾値レベルを超えるサイクル）としてｌｏｇスケールを使用して記録し、ここで、所定のサンプルと最も低いＣＴ値を有するサンプルとの間でのＲＮＡ濃度の差分を、２のΔＣＴ乗として表す。次いで、相対的な発現の割合を、このＲＮＡ差分の逆数をとり、そして１００を乗算することによって得る。
【０６２５】
ｓｓｃＤＮＡサンプルを用いて研究する場合、正規化したｓｓｃＤＮＡを、ＲＮＡサンプルについて先に記載したように使用した。１セットまたは２セットのプローブおよびプライマーを含むＰＣＲ反応を、１×ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３２４０２０）を使用して、製造業者の指示書に従って、先に記載したように設定した。ＰＣＲ増幅を、以下のように行った：９５℃で１０分間、次いで、４０サイクルの、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。結果を、先に記載したように分析および評価した。
【０６２６】
（パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄ）
パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄのプレートは、２つのコントロールウェル（ゲノムＤＮＡコントロールおよび化学コントロール）および種々のサンプル由来のｃＤＮＡを含有する９４個のウェルを含む。これらのパネルのサンプルは、２つのクラスに分類される：培養細胞株由来のサンプルおよび初代正常細胞由来のサンプル。これらの細胞株は、以下の型の癌に由来する：肺癌、乳癌、黒色種、結腸癌、前立腺癌、ＣＮＳ癌、扁平上皮癌、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌および膵臓癌。これらのパネルにおいて使用される細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（培養細胞株の寄託機関）から広く利用可能であり、ＡＴＣＣによって推奨される条件を使用して培養される。これらのパネルにおいて見出される正常組織は、１人の成人個体または胎児の全ての主要な器官系由来のサンプルから構成される。これらのサンプルは、以下の器官由来である：成人の骨格筋、胎児の骨格筋、成人の心臓、胎児の心臓、成人の腎臓、胎児の腎臓、成人の肝臓、胎児の肝臓、成人の肺、胎児の肺、脳の種々の領域、脾臓、骨髄、リンパ節、膵臓、唾液腺、下垂体、副腎、脊髄、胸腺、胃、小腸、大腸、膀胱、気管、胸部、卵巣、子宮、胎盤、前立腺、精巣および脂肪。
【０６２７】
パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄの結果においては、以下の略号を使用する：
ｃａ．＝癌腫
＊＝転移によって確立された
ｍｅｔ＝転移
ｓ  ｃｅｌｌ  ｖａｒ＝小細胞変異株
ｎｏｎ−ｓ＝ｎｏｎ−ｓｍ＝非小
ｓｑｕａｍ＝扁平上皮細胞
ｐｌ．ｅｆｆ＝ｐｌ  ｅｆｆｕｓｉｏｎ＝胸水
ｇｌｉｏ＝神経膠腫
ａｓｔｒｏ＝星状細胞腫、および
ｎｅｕｒｏ＝神経芽細胞腫。
【０６２８】
（一般＿スクリーニング＿パネル＿ｖ１．４（Ｇｅｎｅｒａｌ＿ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ＿ｐａｎｅｌ＿ｖ１．４））
パネル１．４のプレートは、２つのコントロールウェル（ゲノムＤＮＡコントロールおよび化学コントロール）および種々のサンプル由来のｃＤＮＡを含有する９４個のウェルを含む。パネル１．４のサンプルは、２つのクラスに分類される：培養細胞株由来のサンプルおよび初代正常細胞由来のサンプル。この細胞株は、以下の型の癌に由来する：肺癌、乳癌、黒色種、結腸癌、前立腺癌、ＣＮＳ癌、扁平上皮癌、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌および膵臓癌。パネル１．４において使用される細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（培養細胞株の寄託機関）から広く利用可能であり、ＡＴＣＣによって推奨される条件を使用して培養される。パネル１．４において見出された正常組織は、２〜５人の異なる成人個体または胎児の全ての主要な器官系由来のサンプルのプールから構成される。これらのサンプルは、以下の器官由来である：成人の骨格筋、胎児の骨格筋、成人の心臓、胎児の心臓、成人の腎臓、胎児の腎臓、成人の肝臓、胎児の肝臓、成人の肺、胎児の肺、脳の種々の領域、脾臓、骨髄、リンパ節、膵臓、唾液腺、下垂体、副腎、脊髄、胸腺、胃、小腸、大腸、膀胱、気管、胸部、卵巣、子宮、胎盤、前立腺、精巣および脂肪。略語は、パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄについて記載される通りである。
【０６２９】
（パネル２Ｄおよび２．２）
パネル２Ｄおよび２．２のプレートは、一般的には、２つのコントロールのウェルと９４個の試験サンプルを含む。これは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＣｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＨＴＮ）またはＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＮＤＲＩ）との緊密な共同研究において、外科医の作業によって入手したヒト組織から単離したＲＮＡまたはｃＤＮＡから構成される。組織は、ヒトの悪性腫瘍に由来し、そして示される場合、多くの悪性組織は、腫瘍にすぐ隣接している非癌性組織から得られる「ぴったり沿った境界（ｍａｔｃｈｅｄ  ｍａｒｇｉｎ）」を有する。これらを、正常隣接組織と呼び、そして以下の結果には「ＮＡＴ」と記載する。腫瘍組織および「ぴったり沿った境界」を、２人の別々の病理学者によって評価する（外科の病理学者、およびＮＤＲＩまたはＣＨＴＮの病理学者によって再度）。この分析は、腫瘍の分化の段階の全体的な組織病理学的評価を提供する。さらに、ほとんどのサンプルは、もともとの外科の病理報告を含む。これは、患者の臨床段階に関する情報を提供する。これらのぴったり沿った境界を、外科手術領域の周辺（すなわち、すぐ隣接している）組織（表ＲＲにおいては正常な隣接組織を「ＮＡＴ」と明示する）から採取する。さらに、ＲＮＡおよびｃＤＮＡサンプルを、高齢者または突然死の被害者（事故など）について行った検死による種々のヒト組織から得た。これらの組織が疾患を有さないことを確認し、そしてこれを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのような種々の商業的な供給源から購入した。
【０６３０】
（パネル３Ｄ）
パネル３Ｄのプレートは、９４個のｃＤＮＡサンプルおよび２個のコントロールサンプルを含む。詳細には、これらのサンプルのうちの９２個は、培養されたヒトの癌細胞株に由来し、２個のサンプルはヒトの初代小脳組織であり、そして２つはコントロールである。ヒトの細胞株は、一般的には、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション）、ＮＣＩ、またはＧｅｒｍａｎ腫瘍細胞バンクから入手し、そして以下の組織グループに分ける：舌の扁平上皮細胞癌、乳癌、前立腺癌、黒色腫、類表皮癌腫、肉腫、膀胱癌、膵臓癌、腎臓癌、白血病／リンパ腫、卵巣／子宮／子宮頚癌、胃癌、結腸癌、肺癌、およびＣＮＳ癌細胞株。さらに、小脳の２つの独立したサンプルが存在する。これらの細胞の全てを、標準的な推奨される条件下で培養し、そして標準的な手順を使用してＲＮＡを抽出した。パネル３Ｄおよび１．３Ｄの細胞株は、科学技術文献において使用される最も一般的な細胞株である。
【０６３１】
（パネル４Ｄ、４Ｒおよび４．１Ｄ）
パネル４は、９６ウェルプレート（２個のコントロールのウェル、９４個の試験サンプル）上にサンプルを含む。これは、炎症状態に関連している種々のヒトの細胞株または組織から単離したＲＮＡ（パネル４Ｒ）またはｃＤＮＡ（パネル４Ｄ／４．１Ｄ）を含む。結腸および肺（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）ならびに胸腺および腎臓（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のようなコントロールの正常組織に由来する全ＲＮＡを使用した。肝硬変患者由来の肝臓組織および狼瘡患者由来の腎臓に由来する全ＲＮＡを、ＢｉｏＣｈａｉｎ（Ｂｉｏｃｈａｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）から入手した。クローン病および潰瘍性大腸炎を有すると診断された患者からのＲＮＡの調製のための腸組織を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（ＮＤＲＩ）（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）から入手した。
【０６３２】
星状細胞、肺繊維芽細胞、皮膚繊維芽細胞、冠状動脈平滑筋細胞、小気道上皮細胞、気管支上皮細胞、微小血管皮膚内皮細胞、微小血管肺内皮細胞、ヒトの肺大動脈の血管内皮細胞、ヒトの臍帯静脈の血管内皮細胞を、全て、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入し、そしてＣｌｏｎｅｔｉｃｓによってこれらの細胞型に供給される培地中で増殖させた。これらの初代細胞型を、示すように、種々のサイトカインまたはサイトカインの組合せを用いて６時間および／または１２〜１４時間の間、活性化した。以下のサイトカインを使用した：約１〜５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１β、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、約２０〜５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−９、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３。内皮細胞を、時折、０．１％の血清を有するＣｌｏｎｅｔｉｃｓによる基底培地中での培養によって種々の時間枯渇させた。
【０６３３】
単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌを使用して、ＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの従業員の血液から調製した。ＬＡＫ細胞を、ＤＭＥＭ、５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびインターロイキン２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２）中での４〜６日間の培養によって、これらの細胞から調製した。次いで、細胞を、１０〜２０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ、および１〜２μｇ／ｍｌのイオノマイシン、５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１２、２０〜５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、および５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１８のいずれかで、６時間活性化した。いくつかの場合には、単核細胞を、約５μｇ／ｍｌのＰＨＡ（フィトヘマグルチニン）またはＰＷＭ（アメリカヤマゴボウ有糸分裂促進物質）を含有する、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で、４〜５日間培養した。ＲＮＡの調製のために、サンプルを２４、４８、および７２時間で採取した。ＭＬＲ（混合リンパ球反応）サンプルを、２人のドナーからの採血、Ｆｉｃｏｌｌを使用する単核細胞の単離、および単離した単核細胞を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール（５．５×１０−５Ｍ）（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中において約２×１０６個の細胞／ｍｌの最終濃度で１：１にて混合することによって得た。このＭＬＲを培養し、そしてＲＮＡの調製のために１〜７日までの範囲の種々の時点でサンプルを採取した。
【０６３４】
単球を、製造業者の説明書に従って、ＣＤ１４  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｅａｄｓ、＋ｖｅＶＳ選択カラムおよびＶａｒｉｏ  Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞から単離した。単球を、ＤＭＥＭ  ５％のウシの胎児の血清（ＦＣＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、５０ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦ、および５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４中での５〜７日間の培養によって樹状細胞に分化させた。マクロファージを、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０％のＡＢヒト血清または約５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で５〜７日間の単球の培養によって調製した。単球、マクロファージおよび樹状細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で６時間および１２〜１４時間刺激した。樹状細胞をまた、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で６時間および１２〜１４時間刺激した。
【０６３５】
ＣＤ４リンパ球、ＣＤ８リンパ球およびＮＫ細胞をまた、製造業者の説明書に従って、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ５６のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズ、ポジティブＶＳ選択カラム、およびＶａｒｉｏ  Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞から単離した。ＣＤ４５ＲＡリンパ球およびＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球を、ＣＤ８、ＣＤ５６、ＣＤ１４およびＣＤ１９のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズおよびポジティブ選択を使用して、ＣＤ８細胞、ＣＤ５６細胞、ＣＤ１４細胞およびＣＤ１９細胞の単核細胞を除去することによって単離した。次いで、ＣＤ４５ＲＯビーズを使用してＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球を単離し、残りの細胞はＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球であった。ＣＤ４５ＲＡ  ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４およびＣＤ８のリンパ球を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中に入れ、そしてＰＢＳ中の０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、ＡＴＣＣ）で一晩コーティングしたＦａｌｃｏｎ  ６ウェル組織培養プレート上に、１０６細胞／ｍｌでプレートした。６時間および２４時間後、細胞をＲＮＡの調製のために回収した。慢性的に活性化されたＣＤ８リンパ球を調製するために、本発明者らは、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３でコーティングしたプレート上で４日間、単離したＣＤ８リンパ球を活性化し、次いで細胞を回収して、それらをＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびにＩＬ−２中で拡大させた。次いで、再び、拡大させたＣＤ８細胞を、プレートに結合させた抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で４日間活性化し、そして先のように拡大させた。ＲＮＡを２回目の活性化の６時間および２４時間後、ならびに２回目の培養物の拡大の４日後に単離した。単離したＮＫ細胞を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびにＩＬ−２中で、ＲＮＡを調製する前に４〜６日間培養した。
【０６３６】
Ｂ細胞を得るために、扁桃をＮＤＲＩによって獲得した。扁桃を、滅菌した解剖用の鋏で切断し、次いで篩を通過させた。次いで、扁桃体の細胞をスピンダウンさせ、そしてＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中に１０６個の細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を活性化するために、本発明者らは、５μｇ／ｍｌでＰＷＭ、または約１０μｇ／ｍｌで抗ＣＤ４０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および５〜１０ｎｇ／ｍｌでＩＬ−４を使用した。細胞をＲＮＡの調製のために、２４、４８、および７２時間で回収した。
【０６３７】
初代Ｔｒ１細胞ならびに２次Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞および２次Ｔｒ１細胞を調製するために、６ウェルのＦａｌｃｏｎプレートを、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および２μｇ／ｍｌのＯＫＴ３（ＡＴＣＣ）で一晩コーティングし、次いでＰＢＳで２回洗浄した。臍帯血ＣＤ４リンパ球（Ｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｅｒｍａｎ  Ｔｏｗｎ，ＭＤ）を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびＩＬ−２（４ｎｇ／ｍｌ）中で１０５〜１０６個の細胞／ｍｌで培養した。ＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＬ−４（１μｇ／ｍｌ）を、Ｔｈ１に指向させるために使用し、一方で、ＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＦＮγ（１μｇ／ｍｌ）をＴｈ２に指向させるために使用し、そして５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１０をＴｒ１に指向させるために使用した。４〜５日後、活性化させたＴｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球およびＴｒ１リンパ球を、ＤＭＥＭ中で１回洗浄し、そしてＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびＩＬ−２（１ｎｇ／ｍｌ）中で４〜７日間拡大させた。この後、活性化させたＴｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球、およびＴｒ１リンパ球を、抗ＣＤ２８／ＯＫＴ３および上記のようなサイトカインを用いて、しかしアポトーシスを防ぐために抗ＣＤ９５Ｌ（１μｇ／ｍｌ）を添加して、５日間再刺激した。４〜５日後、Ｔｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球およびＴｒ１リンパ球を洗浄し、次いで再び、ＩＬ−２を用いて４〜７日間拡大させた。活性化させたＴｈ１リンパ球およびＴｈ２リンパ球を最大３回のサイクルまで、この方法で維持した。ＲＮＡを、プレートに結合させた抗ＣＤ３  ｍＡｂおよび抗ＣＤ２８  ｍＡｂでの２回目および３回目の活性化の６時間および２４時間後、ならびにインターロイキン２中での２回目および３回目の拡大培養の４日目に、初代および２次Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｒ１から調製した。
【０６３８】
以下の白血球株をＡＴＣＣから入手した：Ｒａｍｏｓ、ＥＯＬ−１、ＫＵ−８１２。ＥＯＬ細胞を、５×１０５個の細胞／ｍｌの０．１ｍＭのｄｂｃＡＭＰ中での８日間の培養、３日毎の培地の交換、および５×１０５個の細胞／ｍｌへの細胞濃度の調節によってさらに分化させた。これらの細胞の培養のために、本発明者らは、５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）を添加した、（ＡＴＣＣによって推奨されるような）ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩを使用した。ＲＮＡを、休止細胞または１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび１μｇ／ｍｌのイオノマイシンで６時間および１４時間活性化した細胞のいずれかから調製した。ケラチノサイト株ＣＣＤ１０６および気道上皮腫瘍株ＮＣＩ−Ｈ２９２をまたＡＴＣＣから入手した。両方を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。ＣＣＤ１１０６細胞を、約５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１βで６時間および１４時間活性化し、一方、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞を、以下のサイトカインを用いて６時間および１４時間活性化した：５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−９、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３、および２５ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ。
【０６３９】
これらの細胞株および血液細胞について、約１０７個の細胞／ｍｌをＴｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を使用して溶解させることによってＲＮＡを調製した。簡潔には、１／１０容量のブロモクロロプロパン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をＲＮＡサンプルに添加し、ボルテックスし、そして室温で１０分後、チューブをＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４回転装置で１４，０００ｒｐｍで回転させた。水相を採取し、そして１５ｍｌのＦａｌｃｏｎ  Ｔｕｂｅに入れた。等量のイソプロパノールを添加し、そして−２０℃で一晩静置した。沈殿させたＲＮＡをＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４回転装置中で９，０００ｒｐｍで１５分間スピンダウンさせ、そして７０％のエタノール中で洗浄した。このペレットを３００μｌのＲＮＡｓｅを含まない水中に再度溶解させ、そして３５μｌの緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）、５μｌのＤＴＴ、７μｌのＲＮＡｓｉｎ、および８μｌのＤＮＡｓｅを添加した。チューブを、混入しているゲノムＤＮＡを除去するために３７℃で３０分間インキュベートし、フェノールクロロホルムで１回抽出し、そして１／１０容量の３Ｍの酢酸ナトリウムおよび２倍容量の１００％エタノールで再度沈殿させた。ＲＮＡをスピンダウンさせ、そしてＲＮＡｓｅを含まない水中に入れた。ＲＮＡを−８０℃で保存した。
【０６４０】
（ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０）
ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０のプレートは、２個のコントロールのウェルおよび８９個の試験サンプルを含む。これは、Ｂａｃｋｕｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）から入手した外科的な死後のヒト組織から単離されたｃＤＮＡを含む。総ＲＮＡを、ＣｕｒａＧｅｎの施設にあるＢａｃｋｕｓ病院からの組織サンプルから抽出した。他の組織由来の総ＲＮＡを、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手した。
【０６４１】
滑液、滑膜、骨および軟骨を含む関節組織を、Ｂａｃｋｕｓ病院で全ての膝または股関節部の置換手術を経験した患者から入手した。組織サンプルは、単離されたＲＮＡが最適な量で、分解されないことを確実にするように液体窒素中で瞬時に冷凍した。変形性関節症および慢性関節リウマチ結合組織のさらなるサンプルが、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手された。正常なコントロール組織がＣｌｉｎｏｍｉｃｓによって供給され、そして外傷犠牲者の死体解剖の間に得られた。
【０６４２】
乾癬組織の外科検体および隣接一致組織がＣｌｉｎｏｍｉｃｓによって総ＲＮＡとして提供された。二人の男性患者および二人の女性患者が、２５歳と４７歳の間で選択された。その患者の誰もサンプルが単離された時に薬剤を投与されていない。
【０６４３】
潰瘍性大腸炎およびクローン病に罹患した患者由来の病気にかかった結腸の外科検体および隣接一致組織が、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手された。４１歳〜６９歳の三人の女性クローン病患者および３人の男性クローン病患者由来の腸組織が使用された。他の患者がデキサメタゾン、フェノバルビタール、またはタイレノールを摂取する一方、二人の患者が処方箋を必要とする薬を摂取しなかった。潰瘍性大腸炎組織は、三人の男性患者および四人の女性患者由来である。その患者のうちの四人は、Ｌｅｂｖｉｄ（ｌｅｂｖｉｄ）を摂取し、二人は、フェノバルビタールを摂取した。
【０６４４】
疾患を有さないか、あるいは気腫、ぜん息またはＣＯＰＤを有する外傷犠牲者からの死後の肺組織由来の総ＲＮＡを、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから購入した。気腫患者は、４０歳〜７０歳の範囲であり、全てが喫煙者であり、この年齢範囲は、タバコ関連肺気腫の患者に焦点を当て、α−１アンチトリプシン欠乏の患者を避けるように選択した。気腫患者は、３６歳〜７５歳の範囲であり、ＣＯＰＤも有し得る患者であることを避けるために喫煙者を除いた。ＣＯＰＤ患者は、３５歳〜８０歳の範囲であり、喫煙者と非喫煙者の両方を含んだ。ほとんどの患者が副腎皮質ステロイド、および気管支拡張薬を摂取していた。
【０６４５】
ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０パネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＡＩ＝自己免疫
Ｓｙｎ＝滑液
Ｎｏｒｍａｌ＝見かけ上の疾患なし
Ｒｅｐ２２／Ｒｅｐ２０＝個々の患者
ＲＡ＝慢性関節リウマチ
Ｂａｃｋｕｓ＝Ｂａｃｋｕｓ病院由来
ＯＡ＝変形性関節症
（ＳＳ）（ＢＡ）（ＭＦ）＝個々の患者
Ａｄｊ＝隣接組織
Ｍａｔｃｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ＝隣接組織
−Ｍ＝男性
−Ｆ＝女性
ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患。
【０６４６】
（パネル５Ｄおよび５Ｉ）
パネル５Ｄおよび５Ｉのプレートは、代謝病に重点をおいて、２個のコントロールウェルおよびヒト組織から単離された種々のｃＤＮＡおよび細胞株を含む。代謝組織は、妊娠糖尿病研究に登録された患者から得られた。細胞は、ヒト間葉幹細胞由来の脂肪細胞の分化における異なる段階の間に得られた。ヒト膵臓島もまた得られた。
【０６４７】
妊娠糖尿病研究において、被験体は若く（１８歳〜４０歳）、慣用的な（選択的な）帝王切開を受ける妊娠糖尿病に罹患しているかまたは罹患していない、その他の点では健常な女性である。胎児の分娩後、外科的切開が修復され／閉じられ、産科医は、小さいサンプルを取り出した。
【０６４８】
患者２：ラテンアメリカ系糖尿病患者、体重超過、インスリンなし
患者７〜９：非糖尿病の白人、肥満（ＢＭＩ＞３０）
患者１０：ラテンアメリカ系糖尿病患者、体重超過、インスリン投与
患者１１：非糖尿病のアメリカ黒人、体重超過
患者１２：ラテンアメリカ系糖尿病患者、インスリン投与。
【０６４９】
脂肪細胞分化は、Ｏｓｉｒｕｓ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ／ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒの部門）から入手されたドナー前駆体細胞において、２つの複製のみ有するドナー３Ｕを除いて、三連で誘導された。Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓの科学者は、ＣｕｒａＧｅｎのために、Ｍａｒｋ  Ｆ．Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒら、Ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９年４月２日：１４３−１４７において見出される公開された手段に基づいてヒト間葉幹細胞（ＨｕＭＳＣｓ）を単離し、増殖および分化させた。Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓは、ｍＲＮＡ単離およびｄｓ  ｃＤＮＡ生成に適切なトリゾール溶解物または凍結ペレットを提供した。各ドナーの一般的な記載は、以下のとおりである：
ドナー２および３Ｕ：間葉幹細胞、未分化の脂肪
ドナー２および３ＡＭ：脂肪、分化中の脂肪
ドナー２および３ＡＤ：脂肪、分化された脂肪。
【０６５０】
ヒトの細胞株を、一般的には、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション）、ＮＣＩ、またはＧｅｒｍａｎ腫瘍細胞バンクから入手し、そして以下の組織グループに分けた：近位曲尿細管、子宮平滑筋、小腸、肝臓ＨｅｐＧ２癌細胞、心臓１次基質細胞、および副腎皮質アデノーマ細胞。これらの細胞は、全て標準の推奨条件下において培養され、そしてＲＮＡは、標準の手順を用いて抽出された。全てのサンプルは、一本鎖ｃＤＮＡを生成するためにＣｕｒａＧｅｎで処理された。
【０６５１】
パネル５Ｉは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａｍｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  ＭｅｄｉｃｉｎｅにおけるＤｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから入手した５８歳の女性患者由来の膵臓島を追加して、前に記載した全てのサンプルを含む。島組織は、外部供給源において総ＲＮＡに処理され、そしてパネル５Ｉに加えるためにＣｕｒａＧｅｎに送達された。
【０６５２】
５Ｄパネルおよび５Ｉパネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＧＯ  Ａｄｉｐｏｓｅ＝より大きい網脂肪
ＳＫ＝骨格筋
ＵＴ＝子宮
ＰＬ＝胎盤
ＡＤ＝分化された脂質
ＡＭ＝分化中の脂質
Ｕ＝分化されない幹細胞。
【０６５３】
（パネルＣＮＳＤ．０１）
パネルＣＮＳＤ．０１のプレートは、２個のコントロールのウェルおよび９４個の試験サンプルを含む。これは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒから入手した死後のヒトの脳組織から単離されたｃＤＮＡを含む。脳を、死後４時間から２４時間の間にドナーの頭蓋冠から取り出し、神経解剖学者によって断片化し、そして液体窒素蒸気中で−８０℃で凍結させた。全ての脳を断片化し、そして明確な関連する神経病理学の診断を確認するために神経病理学者によって試験した。
【０６５４】
疾患の診断を患者の記録から入手する。パネルは、以下の診断のそれぞれに由来する２つの脳、および「正常なコントロール」を含む：アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、欝状態。これらの脳のそれぞれの中で以下の領域を示す：帯状回、大脳側頭極、淡蒼球（ｇｌｏｂｕｓ  ｐａｌｌａｄｕｓ）、黒質、ブロードマン野  ４（主要な運動ストリップ（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｓｔｒｉｐ））、ブロードマン野  ７（頭頂皮質）、ブロードマン野  ９（前前頭皮質）、およびブロードマン野  １７（後頭の皮質）。全て脳の領域が、全ての症例において示されるわけではない；例えば、ハンチントン病は、淡蒼球の神経変性によって一部特徴付けられ、従って、この領域は、確立されたハンチントン病の症例からは得ることができない。同様に、パーキンソン病は、黒質の退化によって特徴付けられ、この領域を得ることをさらに困難にする。正常なコントロールの脳を神経病理学について試験し、そして神経変性に関係しているいかなる病理も含まないことを見出した。
【０６５５】
ＣＮＳパネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＰＳＰ＝進行性核上性麻痺
Ｓｕｂ  Ｎｉｇｒａ＝黒質
Ｇｌｏｂ  Ｐａｌｌａｄｕｓ＝淡蒼球
Ｔｅｍｐ  Ｐｏｌｅ＝大脳側頭極
Ｃｉｎｇ  Ｇｙｒ＝帯状回
ＢＡ  ４＝ブロードマン野  ４。
【０６５６】
（パネルＣＮＳ＿神経変性（Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）＿Ｖ１．０）
パネルＣＮＳ＿神経変性＿Ｖ１．０のプレートは、２個のコントロールウェルおよび４７個の試験サンプルを含む。これは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＭｃＬｅａｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）およびＨｕｍａｎ  Ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＶＡ  Ｇｒｅａｔｅｒ  Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）から入手した死後のヒトの脳組織から単離されたｃＤＮＡを含む。脳を、死後４時間から２４時間の間にドナーの頭蓋冠から取り出し、神経解剖学者によって断片化し、そして液体窒素蒸気中で−８０℃で凍結させた。全ての脳を断片化し、そして明確な関連する神経病理学の診断を確認するために神経病理学者によって試験した。
【０６５７】
疾患の診断を患者の記録から入手する。パネルは、アルツハイマー病（ＡＤ）患者に由来する６つの脳、および生前に痴呆の兆候を示さない「正常なコントロール」に由来する８つの脳を含む。８つの正常なコントロールの脳は、２つのカテゴリーに分けられる：痴呆もアルツハイマー様の病理症状もないコントロール（コントロール）および重症のアルツハイマー様病理症状の証拠を示す痴呆がないコントロール、（特に、老人斑負荷を０〜３のスケールでレベル３として評価した；０＝斑を示さない、３＝重症のＡＤの老人斑負荷）。これらの脳のそれぞれの範囲で、以下の領域を示す：海馬、側頭皮質（ブロードマン野２１）、体性感覚皮質（ブロードマン野７）、および後頭皮質（ブロードマン野１７）。これらの領域は、ＡＤでの神経変性のすべてのレベルを含むように選ばれた。海馬は、ＡＤでの早期かつ重症の神経欠損の領域である；側頭皮質は、海馬の後に、ＡＤでの神経変性を示すことが知られている；体性感覚皮質は、疾患の後期段階で中程度の神経の死を示す；後頭皮質は、ＡＤで残され、したがってＡＤ患者内の「コントロール」領域として働く。脳のすべての領域がすべての症例において示されるわけではない。
【０６５８】
ＣＮＳ＿神経変性＿Ｖ１．０パネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用する：
ＡＤ＝アルツハイマー病の脳；痴呆になっており、そして検死でＡＤ様の病理症状を示した患者
Ｃｏｎｔｒｏｌ＝コントロールの脳；痴呆がなく、神経病理症状を示さない患者
Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐａｔｈ）＝コントロールの脳；痴呆ではないが重症のＡＤ様の病理症状を示す患者
Ｓｕｐ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｃｔｘ＝上位の側頭皮質
Ｉｎｆ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｃｔｘ＝下位の側頭皮質。
【０６５９】
（Ａ．ＮＯＶ８）
（１３４９２９１３３＿ＥＸＴ：ＥＧＦ関連タンパク質ＣＥＧＰ１タンパク質様）
遺伝子１３４９２９１３３＿ＥＸＴの発現を、表ＡＡ、ＡＢおよびＡＣに記載される、プライマー−プローブセットＡｇ１９３１、Ａｇ３９４およびＡｇ２３１７を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＡＤ、ＡＥ、ＡＦ、ＡＧおよびＡＨに示す。
【０６６０】
【表ＡＡ】
2004534518.tif 000204
【０６６１】
【表ＡＢ】
2004534518.tif 000205
【０６６２】
【表ＡＣ】
2004534518.tif 000206
【０６６３】
【表ＡＤ】
2004534518.tif 000207
2004534518.tif 000208
【０６６４】
【表ＡＥ】
2004534518.tif 000209
2004534518.tif 000210
2004534518.tif 000211
【０６６５】
【表ＡＦ】
2004534518.tif 000212
2004534518.tif 000213
2004534518.tif 000214
【０６６６】
【表ＡＧ】
2004534518.tif 000215
2004534518.tif 000216
【０６６７】
【表ＡＨ】
2004534518.tif 000217
2004534518.tif 000218
2004534518.tif 000219
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０の概要）：Ａｇ１９３１。この遺伝子は、アルツハイマー病の脳とコントロールの脳との間の差示的発現を示さないが、このパネルは、さらなる群の患者の脳におけるこの遺伝子の発現を確証する。中枢神経系における有用性の考察についてはパネル１．３Ｄを参照のこと。
【０６６８】
（パネル１の概要）：Ａｇ３９４。この遺伝子は、健常組織において主に発現され、精巣において最も高い発現を有する（ＣＴ＝２５．６）。この遺伝子はまた、前立腺、子宮、胎盤および卵巣において有意なレベルで発現される。この遺伝子は、ＥＧＦ関連タンパク質ＣＥＧＰ１に対する相同性を有するタンパク質をコードする。この遺伝子の発現プロフィールは、このタンパク質産物が、これらの器官の正常機能および特に生殖に関与し得ることを示唆する。従って、この遺伝子の発現または機能の治療的調節は、精巣または生殖の疾患（例えば、不妊症）の処置に使用され得る。
【０６６９】
代謝機能を有する組織においては、この遺伝子は、副腎および甲状腺において中程度のレベルで発現される。従って、この遺伝子によってコードされるタンパク質は、これらの組織における疾患の処置に治療的なタンパク質であり得る。
【０６７０】
このパネル中の中枢神経系における発現は、この遺伝子産物が脳に存在することを確証する。中枢神経系における潜在的な有用性の考察についてはパネル１．３Ｄを参照のこと。
【０６７１】
（パネル１．３Ｄの概要）：Ａｇ３９４／Ａｇ２３１７。２つの異なるプローブおよびプライマーセットを用いる２つの実験は、卵巣および星状細胞腫由来の細胞株におけるこの遺伝子の最も高い発現を示す（ＣＴ＝２８）。２つの実験間の発現プロフィールの一致は、非常に良好であり、低いが有意な発現が、精巣にも見出された。卵巣および精巣における有意な発現はまた、パネル１にも見出され、そしてこれは、このタンパク質産物が、生殖において役割を果たし得ることを示唆する。従って、この遺伝子の発現または機能の治療的調節は、不妊症の処置において有効であり得る。
【０６７２】
この遺伝子は、正常脳組織と比較して、星状細胞腫株ＳＮＢ−７５およびＳＦ−５３９において、そして正常成体腎臓組織と比較して、腎臓癌細胞株（Ａ４９８）において、中程度に上昇された発現レベルを示す。従って、この遺伝子の発現は、これらの細胞株の誘導体において使用される、異なる段階／型の腎臓癌または脳の癌に対するマーカーとして使用され得る。さらに、抗体の使用による、この遺伝子の産物の活性の阻害は、癌の治療において有用であり得る。さらに、多くの癌細胞株（結腸、肺、胸部、卵巣）は、正常組織と比較して、この遺伝子を発現する能力を欠いているようである。それ故、これらの組織において、発現の欠失は、癌のマーカーとして潜在的に使用され得る。従って、ペプチドまたはタンパク質の使用を介する、この遺伝子の産物の治療的使用は、これらの癌の処置において有用であり得る。
【０６７３】
この遺伝子は、ＥＧＦ関連タンパク質ＣＥＧＰ１のホモログであり、そして胎児脳において中程度のレベルで、そして成体海馬、皮質、および脊髄において低レベルで発現される。この発現プロフィールは、このタンパク質での処置が、軸索成長またはシナプス形成を増強し得、そして神経死に関与する任意の障害（アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン秒、発作、頭部または脊髄の外傷、あるいは脊髄小脳性運動失調）の処置において有益であり得る。
【０６７４】
新規ＥＧＦ関連遺伝子であるＳｃｕｂｅ１（シグナルペプチド−ＣＵＢドメイン−ＥＧＦ関連遺伝子１）は、主に、マウスの発生中の性腺、神経系、体節、表層外胚葉および肢芽において発現される。Ｇｒｉｍｍｏｎｄ，Ｓ．ら、Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖ．，２００１  Ａｐｒ；１０２（１−２）：２０９−１１を参照のこと。密接に関連する遺伝子Ｓｃｕｂｅ２（Ｃｅｇｐ１としても公知）（マウス第７染色体の遠位領域にマッピングする）の発現パターンは、本発明において開示される。Ｓｃｕｂｅ２転写は、胚性神経外胚葉に限定されるが、成体心臓、肺および精巣においても検出可能である。
【０６７５】
（パネル２Ｄの概要）：Ａｇ２３１７。最も高いレベルの発現が、正常卵巣において見られる（ＣＴ＝２８．９７）。これは、卵巣、膀胱、甲状腺、腎臓および肺における隣接腫瘍組織よりも、正常組織において、より高いレベルで発現される。正常組織におけるこの選択的な発現パターンは、パネル１においても見られる。従って、この遺伝子の発現の欠失は、卵巣癌、膀胱癌、甲状腺癌、肺癌、腎臓癌およびいくつかの形態の乳癌に対するマーカーとして使用され得る。さらに、ペプチド、タンパク質、キメラ分子または低分子薬物の使用を介する、この遺伝子の産物の治療的活性は、これらの癌の治療において有用であり得る。
【０６７６】
正常な隣接組織と比較して、肝臓腫瘍組織において中程度に高く発現されるので、この遺伝子はまた、肝臓癌に対するマーカーとして使用され得る。従って、この遺伝子産物の阻害は、肝臓癌および乳癌の処置に効果的であり得る。
【０６７７】
（パネル４Ｄの概要）：Ａｇ２３１７。このＳＣＵＢＥ様タンパク質は、胸腺、肺および結腸において発現され、クローン病および潰瘍性大腸炎の２つサンプルにおいてより低い発現が検出される。このタンパク質は、１０個のＥＧＦドメインおよび１個のＣＵＢドメインを含み、そしておそらく、正常な腸によって産生される分泌タンパク質（弱いシグナルペプチドを有する）である。このＳＣＵＢＥ様タンパク質は、クローン病または潰瘍性大腸炎を有する患者の症状の軽減または排除に治療的であるタンパク質であり得る。
【０６７８】
（Ｂ．ＮＯＶ１０）
（２８４７７６９４＿Ａ：顔面生殖器（ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ）形成異常タンパク質様）
遺伝子２８４７７６９４＿Ａの発現を、表ＢＡに記載される、プライマー−プローブセットＡｇ２３１４を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＢＢ、ＢＣ、ＢＤおよびＢＥに示す。
【０６７９】
【表ＢＡ】
2004534518.tif 000220
2004534518.tif 000221
【０６８０】
【表ＢＢ】
2004534518.tif 000222
【０６８１】
【表ＢＣ】
2004534518.tif 000223
2004534518.tif 000224
2004534518.tif 000225
【０６８２】
【表ＢＤ】
2004534518.tif 000226
2004534518.tif 000227
【０６８３】
【表ＢＥ】
2004534518.tif 000228
2004534518.tif 000229
2004534518.tif 000230
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０の概要）：Ａｇ２３１４。この遺伝子は、アルツハイマー病の脳とコントロールの脳との間の差示的発現を示さないが、このパネルは、独立した群の患者の脳におけるこの遺伝子の発現を確証する。中枢神経系における潜在的な有用性の考察についてはパネル１．３Ｄを参照のこと。
【０６８４】
（パネル１．３の概要）：Ａｇ２３１４。この遺伝子は、主に、正常組織において発現され、リンパ節において最も高い発現を有する（ＣＴ＝３０．７）。癌性細胞株由来のサンプル中のこの遺伝子の検出可能でない発現のレベルは、この発現の非存在が癌の存在に対するマーカーとして使用され得ることを示唆する。さらに、ペプチド、キメラ分子または低分子薬物の使用を介する、この遺伝子の産物の発現の誘導は、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌および脳の癌の治療に有用であり得る。
【０６８５】
この遺伝子は、種々の代謝組織（副腎、甲状腺、胎児心臓、胎児骨格筋、成体肝臓および胎児肝臓、および脂肪を含む）において中程度で発現される（ＣＴ値＝３３〜３４）。従って、この遺伝子産物は、これらの組織のいずれかまたは全てにおける代謝疾患（肥満症および糖尿病を含む）の病因、診断および／または処置に重要であり得る。
【０６８６】
このタンパク質は、顔面生殖器（ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ）形成異常タンパク質のホモログであり、そして試験された全ての脳領域において中程度のレベルで発現される。これは、記憶形成において役割を果す、グアニンヌクレオチド交換因子のファミリーのメンバーである。従って、この遺伝子は、アルツハイマー病または任意の型の痴呆の処置に対する優れた薬物標的である。
【０６８７】
学習、記憶および忘却は、ニューロン間の連結の強度における変化を必要とすることが考えられている。シナプス強度におけるこのような変化は、以下の２つの相で生じる：初期相（これは、おそらく、既存のタンパク質に対する共有結合改変によって媒介される）および遅延相（これは、新しい遺伝子発現およびタンパク質合成に依存する）。しかし、ニューロン活性がシナプス強度における変化を導く生化学的機構は、さほど理解されていない。近年、Ｒａｓグアニンヌクレオチド放出因子（Ｒａｓ−ＧＲＦ）（小さいＧＴＰ結合タンパク質ＲａｓのＣａ（２＋）依存性アクチベーター）を欠く動物が、正常に恐怖応答を学習しないが、他の型の学習が正常であることが示された。これらの動物は、恐怖の条件付けを媒介する神経回路内の記憶形成の遅延相における、欠陥を示す。近年の研究は、Ｒａｓ−ＧＲＦが、シナプス活性を、特定の神経回路内のシナプス強度における変化を統合する分子機構に連結することを示唆する。Ｆｉｎｋｂｅｉｎｅｒ，Ｓ．およびＤａｌｖａ，Ｍ．Ｂ．，Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ，１９９８  Ｓｅｐ；２０（９）：６９１−５を参照のこと。
【０６８８】
（パネル２．２の概要）：Ａｇ２３１４。この遺伝子は、このパネルで使用されたほぼ全ての組織において低レベルで発現される。最も高いレベルの発現は、正常肝臓において見られる（ＣＴ＝３０．３６）。正常組織と比較した、肺、子宮およびいくつかの結腸癌における中程度に減少した発現のレベルは、この減少が癌性組織に対するマーカーとして使用され得ることを示唆する。この結果は、パネル１．３Ｄに見られる発現パターン（ここで、発現は、正常組織サンプルに限定されるようである）によって強化される。
【０６８９】
（パネル４Ｄの概要）：Ａｇ２３１４．このＦＤＧ１様タンパク質は、冠状動脈平滑筋細胞、およびＴＮＦ−α活性化皮膚線維芽細胞ＣＣＤ１０７０細胞（ＣＴ＝２４．６）、ならびに休止および活性化された樹状細胞および単球において発現される。ＦＤＧ１親分子は、ＣＤＣ４２活性化分子であり、これは、Ｒｈｏ−ＧＴＰａｓｅの調節に関与する。従って、この遺伝子産物は、樹状細胞および単球において関連する経路で機能し得る。樹状細胞および単球における、低分子薬物による、この遺伝子によってコードされるタンパク質の機能の阻害は、クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、ぜん息、アレルギーまたは全身性エリテマトーデスに一致する症状を有する患者における炎症を、減少または排除し得る。
【０６９０】
Ｄｂｌ（小ＧＴＰａｓｅのＲｈｏファミリーのメンバーに対するグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）は、１５個の関連するタンパク質のファミリーの原型である。ＤＨ（Ｄｂｌ相同性）ドメインを含むタンパク質の大半は、トランスフェクションアッセイにおいて癌遺伝子として単離されたが、ＤＨファミリーの２つのメンバーであるＦＧＤ１（顔面生殖器形成異常またはアールスコグ−スコット症候群の遺伝子座）およびＶａｖは、正常胚発生に必須であることが示されている。ＦＧＤ１遺伝子に対する変異誘発は、特定の骨格構造（顔面、頸椎および遠位端のエレメントを含む）を冒すヒトの発生障害を生じる。ホモ接合性Ｖａｖ−／−ノックアウトマウス胚は、胚盤胞段階以降生存可能でなく、これは、胚着床におけるＶａｖの必須の役割を示す。Ｏｌｓｏｎ，Ｍ．Ｆ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．，１９９６  Ｄｅｃ  １；６（１２）：１６２８−３３を参照のこと。
【０６９１】
この開示は、Ｓｗｉｓｓ  ３Ｔ３繊維芽細胞中へのＦＧＤ１およびＶａｖの微量注入が、アクチンの重合およびクラスター化したインテグリン複合体の構築を誘導することを示す。ＦＧＤ１は、Ｃｄｃ４２を活性化し、一方、Ｖａｖは、Ｒｈｏ、ＲａｃおよびＣｄｃ４２を活性化する。さらに、ＦＧＤ１およびＶａｖは、ｃ−ＪｕｎキナーゼＳＡＰＫ／ＪＮＫ１の活性化を導くマイトジェン活性化プロテインキナーゼカスケードを刺激する。従って、ＦＧＤ１およびＶａｖは、Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅファミリーの調節因子である。これらの標的タンパク質（Ｃｄｃ４２、ＲａｃおよびＲｈｏ）に加えて、ＦＧＤ１およびＶａｖは、胚発生の間要求される不可欠なシグナルを制御する。
【０６９２】
（Ｃ．ＮＯＶ７）
（ＧＳＡＣ０５５７１５＿Ａ：タイプ＿ＩＩ＿サイトケラチン様）
遺伝子ＧＳＡＣ０５５７１５＿Ａの発現を、表ＣＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１８５５を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＣＢ、表ＣＣおよび表ＣＤに示す。
【０６９３】
【表ＣＡ】
2004534518.tif 000231
【０６９４】
【表ＣＢ】
2004534518.tif 000232
2004534518.tif 000233
2004534518.tif 000234
【０６９５】
【表ＣＣ】
2004534518.tif 000235
2004534518.tif 000236
【０６９６】
【表ＣＤ】
2004534518.tif 000237
2004534518.tif 000238
2004534518.tif 000239
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１８５５。発現の最も高いレベルは、ＳＷ６２０（転移性結腸癌細胞株）において見られた（ＣＴ＝２９．０６）。従って、この遺伝子の発現を、正常結腸組織と比較して、結腸癌についてのマーカーとして使用し得る。
【０６９７】
（パネル２Ｄの概要）  Ａｇ１８５５。この遺伝子の発現は、このパネルで使用された少数のサンプルに限定される。発現の最も高いレベルは、肺癌において見られた（ＣＴ＝３１．７）。正常な隣接組織と比較して増強されたレベルの発現は、肺癌および膀胱癌で観察される。従って、この遺伝子の発現を、肺癌および膀胱癌のマーカーとして使用し得る。
【０６９８】
（パネル４Ｄの概要）  Ａｇ１８５５。この遺伝子は、タイプＩＩサイトケラチン様タンパク質をコードし、そしてＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βに刺激される小気管上皮で中程度に発現される（ＣＴ＝３３．９）。これは、この遺伝子産物が、潜在的に、慢性閉塞性肺疾患、ならびに喘息、アレルギー、および気腫における活性化された細胞の細胞内マーカーとして有用であり得ることを示す。さらに、この遺伝子産物はまた、慢性閉塞性肺疾患、ならびに喘息、アレルギー、および気腫における肺上皮の炎症により引き起こされる症状の低減または除去のための有用な低分子標的であり得る。
【０６９９】
（Ｄ．ＮＯＶ６）
（ＧＳＡＣ０２３１５８＿１５＿Ａ：シナプトタグミンＸ様）
遺伝子ＧＳＡＣ０２３１５８＿１５＿Ａの発現を、表ＤＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１５５７を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＤＢ、表ＤＣ、表ＤＤおよび表ＤＥに示す。
【０７００】
【表ＤＡ】
2004534518.tif 000240
【０７０１】
【表ＤＢ】
2004534518.tif 000241
【０７０２】
【表ＤＣ】
2004534518.tif 000242
2004534518.tif 000243
2004534518.tif 000244
2004534518.tif 000245
【０７０３】
【表ＤＤ】
2004534518.tif 000246
2004534518.tif 000247
2004534518.tif 000248
【０７０４】
【表ＤＥ】
2004534518.tif 000249
2004534518.tif 000250
（ＣＮＳ＿神経変性（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）＿ｖ１．０の概要）  Ａｇ１５５７。この遺伝子、シナプトタグミンホモログは、アルツハイマー病の脳とコントロールの脳との間で差示的な発現を示さないが；このパネルは、少なくとも皮質および海馬におけるこの遺伝子の発現を示す。シナプトタグミンは、シナプス前部の小胞のドッキングおよび神経伝達物質の放出に関わるシナプス前タンパク質である。このタンパク質の阻害は、神経伝達を減少させることにより処置される障害（てんかんおよび発作の障害、双極性障害、ならびに精神分裂病）における治療的用途を有し得る。
【０７０５】
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１５５７。同じプローブおよびプライマーのセットを用いた２つの実験は、乳癌細胞株および大脳皮質における最も高い発現とよく一致するという結果をもたらす（ＣＴ＝３３〜３４．６）。従って、この遺伝子の発現を、潜在的に、乳癌のためのマーカーとして使用し得る。さらに、このパネルにおける発現特性は、大脳皮質におけるこの遺伝子の発現を証明する。中枢神経系におけるこの遺伝子の潜在的な有用性についての議論については、ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０を参照されたい。
【０７０６】
この遺伝子はまた、下垂体において中程度のレベルで発現される。この遺伝子によりコードされるタンパク質は、シナプトタグミンに対して相同であり、そして下垂体分泌経路において重要であり得る。従って、この遺伝子産物は、この組織における疾患の処置において有用であり得る。
【０７０７】
（パネル２Ｄの概要）  Ａｇ１５５７。この遺伝子の発現は、同じプローブおよびプライマーのセットを用いた２つの実験の間でよい一致を示す。このパネル上の腫瘍および正常な隣接組織のペアにおいてこの遺伝子の非常に低いレベルの発現が存在する。この遺伝子の増加した発現は、正常な隣接組織と比較して、腎臓癌（ＣＴ＝３３）、肺癌および膀胱癌の単一のサンプルにおいて見られ、このことは、この遺伝子が、癌を正常な隣接組織から区別するためのマーカーとして使用され得ることを示す。さらに、低分子薬物または抗体の使用を介した、この遺伝子活性の治療的阻害は、肺癌、膀胱癌および腎臓癌の処置において有用であり得る。
【０７０８】
（パネル４Ｄの概要）  Ａｇ１５５７を、胸腺において中程度のレベル（ＣＴ＝３３．３９）で発現した（パネル４Ｄ）。この遺伝子は、胸腺内のニューロン細胞または非ニューロン細胞における小胞輸送に関与し得るシナプトタグミン様タンパク質をコードし、従って有用な低分子標的として働き得る。このシナプトタグミン様タンパク質の機能を阻害する薬物は、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデス、もしくは慢性関節リウマチを含む胸腺で発症するＴ細胞に依存する自己免疫疾患または炎症性疾患の症状を低減あるいは除去し得る。
【０７０９】
（Ｅ．ＮＯＶ４）
（ＧＳＡＣ０２２５１０＿Ａ：セリントレオニンプロテインホスファターゼ）
遺伝子ＧＳＡＣ０２２５１０＿Ａの発現を、表ＥＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１５５６を使用して評価した。
【０７１０】
【表ＥＡ】
2004534518.tif 000251
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１５５６の発現は、このパネル上の全てのサンプルにおいて低い／検出不能である。（ＣＴ＞３５）。
【０７１１】
（Ｆ．ＮＯＶ３）
（ＧＳＡＣ０６８９９３＿Ａ：ＲＡＳ関連）
遺伝子ＧＳＡＣ０６８９９３＿Ａの発現を、表ＦＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１８５９を使用して評価した。
【０７１２】
【表ＦＡ】
2004534518.tif 000252
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１８５９の発現は、このパネル上の全てのサンプルにおいて低い／検出不能である。（ＣＴ＞３５）。
【０７１３】
（パネル２Ｄの概要）  Ａｇ１８５９の発現は、このパネル上の全てのサンプルにおいて低い／検出不能である。（ＣＴ＞３５）。
【０７１４】
（パネル３Ｄの概要）  Ａｇ１８５９の発現は、このパネル上の全てのサンプルにおいて低い／検出不能である。（ＣＴ＞３５）。
【０７１５】
（パネル４Ｄの概要）  Ａｇ１８５９の発現は、このパネル上の全てのサンプルにおいて低い／検出不能である。（ＣＴ＞３５）。
【０７１６】
（Ｇ．ＮＯＶ９）
（ＧＳＡＣ０４６１３０＿ＡおよびＣＧ５６０１７−０１：カリウムチャネル調節性サブユニット様）
遺伝子ＧＳＡＣ０４６１３０＿Ａおよび改変体ＣＧ５６０１７−０１の発現を、表ＧＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１８５２を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＧＢ、表ＧＣ、表ＧＤおよび表ＧＥに示す。
【０７１７】
【表ＧＡ】
2004534518.tif 000253
【０７１８】
【表ＧＢ】
2004534518.tif 000254
【０７１９】
【表ＧＣ】
2004534518.tif 000255
2004534518.tif 000256
【０７２０】
【表ＧＤ】
2004534518.tif 000257
2004534518.tif 000258
【０７２１】
【表ＧＥ】
2004534518.tif 000259
2004534518.tif 000260
2004534518.tif 000261
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０の概要）  Ａｇ１８５２。この遺伝子における差示的な発現は、このパネル上のコントロールの死後脳およびアルツハイマー病の死後脳の間で検出されない。このパネルは、患者の独立したサンプルの脳におけるこの遺伝子の発現を証明する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．３ｄを参照されたい。
【０７２２】
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１８５２。この遺伝子は、このパネルにおけるほとんどのサンプルにおいて低〜中程度のレベルで広範に発現され、脳腫瘍において最も高い発現を有する（ＣＴ＝２８．８）。発現のレベルは、膵臓、結腸、脳、腎臓、肺、乳房および卵巣の細胞株においてわずかに高いようであり；従って、この遺伝子は、これらの組織の癌において重要な役割を果たし得る。従って、抗体、低分子薬物およびキメラ分子によるこの遺伝子産物の阻害は、これらの癌の処置において有効であり得る。
【０７２３】
この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成人および胎児の心臓、肝臓ならびに脂肪を含む、種々の代謝性組織において中程度に発現される。この遺伝子産物は、肥満症ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む、代謝性疾患の処置のための低分子薬物標的であり得る。
【０７２４】
さらに、この遺伝子は、成人の骨格筋（ＣＴ＝３５）に対して胎児の骨格筋（ＣＴ＝３０）において差示的に発現されるようであり、そしてこの組織の成人の供給源と胎児の供給源とを区別するために使用され得る。さらに、胎児の骨格筋における遺伝子の相対的な過剰発現は、このタンパク質産物が、胎児における筋肉の成長または発達を増強し得、従ってまた、成人における再生能力に作用し得ることを示す。従って、この遺伝子の治療的調節は、筋肉関連疾患の処置において有用であり得る。より詳細には、この遺伝子によりコードされるタンパク質を用いる脆弱またはジストロフィーの筋肉の処置は、筋肉の質量または機能を回復し得る。
【０７２５】
この遺伝子産物は、カリウムチャネル調節性サブユニットに対して相同性を有し、そして試験された全てのＣＮＳ領域において、低〜中程度のレベルで発現される。発作性疾患に関連する遺伝子の大部分は、イオンチャネルにおける変異であり；さらに、ほとんど全ての抗てんかん薬（ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ）は、作用の主要な部位としてイオンチャネルを有する。新規な抗てんかん薬レチガビン（ｒｅｔｉｇａｂｉｎｅ）は、カリウムチャネルを活性化することにより特異的に作用するようである。従って、この遺伝子は、活性化が抗てんかん性効果を最も有するようなので、発作性疾患のための優れた薬物標的を代表する。
【０７２６】
最近、リガンドゲートチャネルのサブユニットをコードする遺伝子における変異が、遺伝的に伝搬性の形態のてんかんを生じることが発見されている。この遺伝子、ＣＨＲＮＡ４は、ニューロンのニコチン性アセチルコリンレセプターサブユニットをコードし、そして機能的研究は、この変異により引き起こされる変更を評価するように設計された。この初期の知見以来、５つの変異が同定され、そしてそれらの機能的特性の決定が、開始されている。これらの実験は、ヘテロ接合体ヒト遺伝子型を模倣するようなコントロールおよび変異された対立遺伝子の二つ一組の発現にまで拡張された。これらの変異体の４つにおいて、これまでに同定された最も一般的な機能的特性は、アセチルコリンに対して増加した感受性であり、これらの変異体が機能の増強を引き起こし得ることを示す。代替的な可能性は、脳内の状態が、これらのより高い応答性のレセプターが、脱感作によりなりやすい傾向にあり得ることである。てんかんの原因としてイオン性チャネルの重要性は、さらに、良性の新生児てんかんとカリウムチャネルサブユニット（ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３）をコードする遺伝子における変異体との間の会合の同定と共に示された。さらなる証拠は、熱性発作を伴う全身性てんかんの形態における電位依存性ナトリウムチャネル（ＳＣＮ１Ｎ、ＳＣＮ１Ｂ）における変異の同定によりもたらされた。Ｍｏｕｌａｒｄ，Ｂ．ら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，２００１  Ｏｃｔ；３６（２−３）：２７５−８４を参照のこと。
【０７２７】
レチガビン［Ｄ−２３１２９；Ｎ−（２−アミノ−４−（４−フルオロベンジルアミノ）−フェニル）カルバミン酸エチルエステル］は、現在、臨床第ＩＩ相開発中である新規の抗てんかん薬化合物である。レチガビンは、すでにＣｈｉｎｅｓｅハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現された場合、ＫＣＮＱ２／３  Ｋ（＋）チャネルにより発生されれる電流を増強することが示されている。Ｔａｔｕｌｉａｎ，Ｌ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００１  Ａｕｇ  １；２１（１５）：５５３５−４５を参照のこと。この開示は、ＫＣＮＱ２／３電流に対するレチガビンの作用と、ＣＨＯ細胞において発現されるＫＣＮＱファミリーの他のメンバー（ホモマーのＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、およびＫＣＮＱ４のチャネル）により発生される電流に対する作用、およびＫＣＮＱ２／３チャネルにより発生されると考えられるラットの交感神経性ニューロンにおけるネイティブなＭ電流に関するレチガビンの作用とを比較する。レチガビンは、活性化曲線における最大過分極シフトによるかまたはＥＣ（５０）値によるかのいずれかとして測定され、以下の順：ＫＣＮＱ３＞ＫＣＮＱ２／３＞ＫＣＮＱ２＞ＫＣＮＱ４という差示的な効力で、ＫＣＮＱ２／３、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４の電流に対する活性化曲線の過分極シフトを生成した。対照的に、レチガビンは、心臓のＫＣＮＱ１電流を増強しなかった。レチガビンはまた、ラットの交感神経性ニューロンにおけるネイティブなＭチャネルについて活性化曲線に過分極シフトを生成した。レチガビン誘導性電流は、同様なアゴニスト効力を有するが、２５％減少した最大効果のムスカリン性レセプターの刺激により阻害された。クランプされていないニューロンにおいて、レチガビンは、過分極を生成し、そして活動電位の構造を変化することなしに、脱分極性の電流注入により生成される活動電位数を減少させた。
【０７２８】
（パネル２Ｄの概要）  Ａｇ１８５２。この遺伝子は、このパネルにおいて使用されるほとんど全ての癌組織および正常な隣接組織において低〜中程度のレベルで発現される。発現の最も高いレベルは、卵巣癌サンプルにおいて見られる（ＣＴ＝２９．１）。この遺伝子の増強された発現は、正常な隣接組織と比較される場合、子宮、卵巣、甲状腺、結腸およびいくつかの肺ならびに腎臓の癌で見られる。従って、この遺伝子の発現は、これらの組織における癌に対する診断的マーカーとして使用され得る。さらに、この遺伝子産物の治療的阻害は、これらの癌の処置において有効であり得る。
【０７２９】
（パネル４Ｄの概要）  Ａｇ１８５２。この遺伝子は、カリウムチャネル調節性サブユニット様タンパク質をコードし、そして健康および疾患における免疫応答において重要な広範囲の細胞型において中程度のレベル（ＣＴ＝２９〜３２）で発現される。低分子薬物を用いる推定チャネルの機能の阻害は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、および単球の機能をブロックし得、そして喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデス、または慢性関節リウマチのような自己免疫性疾患および炎症性疾患に苦しむ患者の症状の改善をもたらし得る。
【０７３０】
（Ｈ．ＮＯＶ２）
（ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ｂ：イオントランスポーター様）
遺伝子ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ｂの発現を、表ＨＡに記載されるように、プライマー−プローブセットＡｇ１８６４を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＨＢに示す。
【０７３１】
【表ＨＡ】
2004534518.tif 000262
【０７３２】
【表ＨＢ】
2004534518.tif 000263
2004534518.tif 000264
2004534518.tif 000265
（パネル４Ｄの概要）  この遺伝子は、イオンチャネル様タンパク質をコードし、そして休止および活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、ならびにＩＬ−４、ＩＬ−９、またはＩＬ−１３で活性化されたＮＣＩ−Ｈ２９２粘膜表皮細胞において、中程度のレベルで発現される（ＣＴ＝２８〜３１）。この遺伝子産物の機能をブロックする低分子アンタゴニストは、慢性閉塞性肺疾患、ならびに喘息、アレルギー、および気腫における肺上皮内の炎症により引き起こされる症状の低減または除去のための有用な治療薬であり得る。
【０７３３】
（Ｉ．ＮＯＶ１）
（ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａ：プロセシングα−１＿２−マンノシダーゼ）
遺伝子ＧＳＡＣ０５５７４０＿Ａの発現を、表ＩＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１８６１を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＩＢ、表ＩＣおよび表ＩＤに示す。
【０７３４】
【表ＩＡ】
2004534518.tif 000266
【０７３５】
【表ＩＢ】
2004534518.tif 000267
2004534518.tif 000268
2004534518.tif 000269
【０７３６】
【表ＩＣ】
2004534518.tif 000270
2004534518.tif 000271
【０７３７】
【表ＩＤ】
2004534518.tif 000272
2004534518.tif 000273
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ１８６１。この遺伝子は、このパネルにおける全てのサンプルにわたって広範に発現され、胎盤において最も高い発現を有する（ＣＴ＝２８．３）。代謝機能を有する組織の中で、この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成人および胎児の心臓、成人および胎児の肝臓、ならびに脂肪において中程度に発現される。この広範な発現は、この遺伝子産物が、肥満症ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む、代謝性疾患の処置のための低分子薬物標的であり得ることを示唆する。
【０７３８】
さらに、この遺伝子は、成人の骨格筋（ＣＴ＝３２）に対して胎児の骨格筋（ＣＴ＝３６）において差示的に発現され、従ってこの組織の成人の供給源および胎児の供給源とを区別するために使用され得る。
【０７３９】
この遺伝子はまた、前立腺、卵巣、肺、腎臓、結腸および膵臓に由来する癌細胞株においてわずかに増加したレベルで発現される。従って、この遺伝子は、これらの癌細胞株についてのマーカーとして使用され得る。さらに、この遺伝子産物の治療的改変は、これらの癌の処置において使用され得る。
【０７４０】
この遺伝子は、α１，２−マンノシダーゼに対して相同であり、そして試験した全ての脳の領域において中程度のレベルで発現される。α１，２−マンノシダーゼは、誤って折り畳まれたタンパク質の分解に関わる。タンパク質の誤った折り畳み、沈降および凝集は、多くの神経変性疾患（アルツハイマー、パーキンソン、ハンチントン、脊髄小脳失調、クロイツフェルト−ヤーコプ、およびＨＳＥ）において共通の特徴であるので、この遺伝子は、優れた薬物標的である。脳におけるこのタンパク質のレベルまたは効力の操作は、上記に列挙されるいずれかまたは全ての疾患における神経変性を減少させ得る。
【０７４１】
小胞体（ＥＲ）クラスＩα１，２−マンノシダーゼ（ＥＲα−マンノシダーゼＩとしても知られる）は、Ｎ−連結オリゴサッカリドおよびＥＲ−関連分解の成熟において重要な酵素である。単一のマンノース残基の切り取りは、プロテアソームによる分解に対する誤って折り畳まれた糖タンパク質を標的化するためのシグナルとして作用する。ヒトＥＲクラスＩα１，２−マンノシダーゼの触媒ドメインの結晶構造は、潜在的なインヒビター、キフネンシン（ｋｉｆｕｎｅｎｓｉｎｅ）および１−デオキシマンノジリマイシン（ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ）の存在下および非存在下の両方で決定されている。両方のインヒビターは、Ｏ−２’水酸基およびＯ−３’水酸基に配位する必須のカルシウムイオンを伴い、そして両方のインヒビターの６員環を（１）Ｃ（４）コンホメーションに安定化するように、活性部位のキャビティーの下端でタンパク質に結合する。これは、カルシウムイオンの役割の初めての直接的な証拠である。インヒビター結合の際の主要な構造変化の欠如および酵母α１，２−マンノシダーゼ酵素−産物複合体との構造的比較は、このクラスの転化（ｉｎｖｅｒｔｉｎｇ）酵素が、新規な触媒機構を有することを示す。この構造はまた、このクラスの酵素の特異性に対する洞察を提供し、そして遺伝的疾患における誤って折り畳まれたタンパク質の分解を妨げる新規なインヒビターの将来的な設計についての設計を提供する。Ｖａｌｌｅｅ，Ｆ．ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０００  Ｄｅｃ  ２９；２７５（５２）：４１２８７−９８を参照のこと。
【０７４２】
（パネル２．２の概要）  Ａｇ１８６１。この遺伝子は、このパネルにおいて使用される全ての組織において中程度のレベルで発現され、正常な子宮において最も高い発現を有する（ＣＴ＝３０．２）。この遺伝子は、正常な隣接組織と比較された場合、甲状腺癌においてわずかに増加したレベルで発現されるようである。従って、この遺伝子を、甲状腺癌に対するマーカーとして使用し得る。さらに、胃、子宮およびいくつかの肺、腎臓、卵巣および結腸のサンプル由来の正常な隣接組織は、対応する癌組織と比較された場合、わずかにより高い発現を示す。従って、この遺伝子の発現をまた、これらの癌に対するマーカーとして使用し得る。さらに、この遺伝子産物の治療的調節は、この遺伝子産物が、他の遺伝子産物の翻訳後プロセシングに影響を有し得るため、甲状腺、胃、子宮、卵巣、肺、腎臓および結腸の癌の処置において使用され得る。
【０７４３】
（パネル４Ｄの概要）  この遺伝子は、α−１，２−マンノシダーゼに相同なタンパク質をコードし、そしてＴ細胞およびＢ細胞、単球、ならびに樹状細胞を含む、健康および疾患における免疫応答において活性な多数の細胞型において、中〜高いレベル（ＣＴ＝２５〜３０）で発現される。従って、この遺伝子産物に対して指向されたアンタゴニスト低分子薬物は、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデス、もしくは慢性関節リウマチのような自己免疫性疾患および炎症性疾患に苦しむ患者の症状を低減または除去するような治療薬として有用であり得る。
【０７４４】
（Ｊ．ＮＯＶ１８）
（ＡＣ０７３０７９＿Ｃ：カルシウムトランスポーター様）
遺伝子ＡＣ０７３０７９＿Ｃの発現を、表ＪＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ２０７２を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＪＢに示す。
【０７４５】
【表ＪＡ】
2004534518.tif 000274
【０７４６】
【表ＪＢ】
2004534518.tif 000275
2004534518.tif 000276
2004534518.tif 000277
（パネル１．３Ｄの概要）  Ａｇ２０７２。この遺伝子は、カルシウム輸送タンパク質に対して相同であり、そして高い脳優先性（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ）の組織分布を示す。カルシウム取り込みの阻害は、脳虚血に応答する神経細胞死を減少させることが示されている。従って、この遺伝子は、発作の処置のための優れた薬物標的を代表する。発作直後のアンタゴニストを用いる処置は、全梗塞容量を減少させ得、そして全体的な発作の重篤度を減少させ得た。
【０７４７】
最近、Ｎａ＋−Ｃａ２＋交換体（ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）（ＮＣＸ）に対する化合物２−［４−［（２，５−ジフルオロフェニル）メトキシ］フェノキシ］−５−エトキシアニリン（ＳＥＡ０４００）の効果が、研究され、そして２−［２−［４−（４−ニトロベンジルオキシ）フェニル］エチル］イソチオ尿素（ＫＢ−Ｒ７９４３）の効果に対して比較された。さらに、インビトロおよびインビボでの再灌流障害に対するＳＥＡ０４００の効果が、試験された。ＳＥＡ０４００は、培養されたニューロン、星状細胞、および小膠細胞におけるＮａ＋依存性Ｃａ２＋の取り込みの阻害において、ＫＢ−Ｒ７９４３よりも極めて強力であった：ＳＥＡ０４００およびＫＢ−Ｒ７９４３のＩＣ５０は、それぞれ５〜３３ｎＭおよび２〜４μＭであった。ＮＣＸを阻害した濃度範囲でＳＥＡ０４００は、Ｃａ２＋チャネル、Ｎａ＋チャネル、Ｋ＋チャネル、ノルエピネフリントランスポーター、および１４個のレセプターについて無視し得る親和性を示し、そしてＮａ＋／Ｈ＋交換体、Ｎａ＋、Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋−ＡＴＰａｓｅ、および５個の酵素の活性に影響しなかった。ＫＢ−Ｒ７９４３とは異なり、ＳＥＡ０４００は、培養された星状細胞において、貯蔵量作動性（ｓｔｏｒｅ−ｏｐｅｒａｔｅ）Ｃａ２＋流入を示さなかった。ＳＥＡ０４００は、培養された星状細胞において、用量依存性の矛盾した（ｐａｒａｄｏｘｉａｌ）Ｃａ２＋惹起誘導性の活性酸素種の生成、ＤＮＡのはしご形成、および核の凝縮を減少させ、一方で、ＳＥＡ０４００は、サプシガルジン誘導性細胞傷害に影響しなかった。さらに、ＳＥＡ０４００の投与は、ラットの大脳皮質および線条における過渡的な中程度の大脳動脈閉塞の後、梗塞の容量を減少させた。これらの結果は、ＳＥＡ０４００が、ＮＣＸの最も強力かつ選択性のインヒビターであることを示し、そしてこの化合物が、虚血後の脳損傷に対して保護効果を発揮し得ることを示す。Ｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，２００１  Ｊｕｌ；２９８（１）：２４９−５６を参照のこと。
【０７４８】
（Ｋ．ＮＯＶ２０）
（ＡＣ０１８９４６＿４＿ＡおよびＣＧ５６８７２−０２：ＧＡＢＡレセプター関連様）
遺伝子ＡＣ０１８９４６＿４＿Ａおよび改変体ＣＧ５６８７２−０２の発現は、表ＫＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１９１１を使用して評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果を、表ＫＢ、ＫＣおよびＫＤに示す。
【０７４９】
【表ＫＡ】
2004534518.tif 000278
【０７５０】
【表ＫＢ】
2004534518.tif 000279
2004534518.tif 000280
【０７５１】
【表ＫＣ】
2004534518.tif 000281
2004534518.tif 000282
2004534518.tif 000283
【０７５２】
【表ＫＤ】
2004534518.tif 000284
2004534518.tif 000285
（パネル１．３Ｄ要約）：Ａｇ１９１１  この遺伝子は、海馬における最も高い発現（ＣＴ＝２８．４）を伴って、試験された全てのＣＮＳ領域において中程度のレベルで発現される。この遺伝子は、既知の脳に優先的な分布を有するＧＡＢＡ−Ａレセプター関連タンパク質と相同なタンパク質をコードする。このＧＡＢＡ系は、てんかん、双極性障害、および精神分裂症を含む、多くの神経学的障害および精神医学的障害と関係している。興味深いことに、ＧＡＢＡレベルを増加することによって作用する少なくとも1つの抗てんかん薬（バルプロ酸）はまた、双極性障害の処置に効果的である。同様に、双極性障害および精神分裂症は、減少されたグルタミン酸デカルボキシラーゼ（興奮性神経伝達物質グルタミン酸を阻害性ＧＡＢＡに転換する酵素）産生の共通の神経病理学、を共有する。従って、この遺伝子によってコードされるこのタンパク質は、脳における主要なインヒビターに対して主要なレセプターと潜在的に相互作用し得、そしてこのタンパク質は、これらの疾患のいずれかに対して良好な薬物標的である。ＧＡＢＡ流れ（ｃｕｒｒｅｎｔ）を増加するためのこのタンパク質の相乗作用はまた、上記の障害の症状を軽減することに加えて、抗不安薬として作用し得る。
【０７５３】
この遺伝子は、このパネルの癌細胞株において、低いレベルであるが有意なレベルで発現される。従って、この遺伝子の発現は、脳および前立腺癌に対するマーカーとして使用され得る。なぜならこれらの組織から誘導される細胞株は、正常組織と比較して、発現が減少されているようであるからである。この遺伝子はまた、これらの癌細胞株の神経性起源を示し得る黒色腫サンプル中に発現される。
【０７５４】
代謝機能を有する組織の間で、この遺伝子は、膵臓、甲状腺、下垂体、成人および胎児の心臓、成人および胎児の骨格筋、成人および胎児の肝臓、および脂肪において発現される。この広範な発現は、この遺伝子産物が、代謝性疾患（例えば、肥満ならびに１型および２型糖尿病）の処置に対して抗体標的であり得ることを示唆する。
【０７５５】
最近の死後研究は、精神分裂症（ＳＺ）の患者の海馬形成（ＨＩＰＰ）におけるかすかな変化を立証している。これらの変化としては、非錐体ニューロン（ＮＰ）密度の減少、ＧＡＢＡ−Ａの増加（しかし、ベンゾジアゼピンレセプターは増加しない）および神経弛緩薬投与量に関連するＧＡＤ６５−ＩＲ末端（特に、ＣＡ３セクターおよびＣＡ２セクターにおいて）の増加が挙げられる。ＧＡＢＡ−Ａレセプターの高分解能研究は、ＣＡ３の層錐体筋における脱抑制ＧＡＢＡ作動性活性の減少（すなわち、ＧＡＢＡ−ＧＡＢＡ）が、この同じセクターの層方向における減少された抑制調節（すなわち、ＧＡＢＡ−興奮性錐体ニューロン）と共存し得ることをさらに示唆している。これらの変化は、潜在的にＣＡ２における介在ニューロンに対する興奮毒性障害を含み得る；しかし、出生前の期間（ｌｉｆｅ）対出生後の期間のこのような損傷の誘導についての正確な時間枠は、利用可能なデータから未だに推測し得ない。これらの知見は、ＳＺに罹患する患者のＨＩＰＰにおける、異常な律動リズムおよび増大した基礎代謝活性の報告と一貫性がある。躁鬱病患者はまた、ＣＡ２におけるＮＰの減少を示すという事実によって、ＧＡＢＡ系の変化は、ＳＺに対する感受性遺伝子に関連しないかもしれないことが示唆される。さらには、これらの変更は、生涯における初期あるいは思春期または成人期の期間のずっと遅い時期に経験される、非特異的な因子（例えば、ストレス）に関連し得る。おそらく、ＳＺ表現型を確立することにおいてより特異的な役割を担い得る他の伝達系に関連する変化がまた、存在する（Ｂｅｎｅｓ，Ｆ．Ｍ．，Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｃｈｉａｔｒｙ，１９９９  Ｓｅｐ  １；４６（５）：５８９〜９９）。
【０７５６】
神経生物学的研究によって、双極性障害における、ドーパミン作動性神経伝達およびＧＡＢＡ作動性神経伝達の脱調節が示される。双極性障害を分離する２つの大きなファミリーが、ドーパミンβヒドロキシラーゼ、ドーパミントランスポーターＤＡＴ１、ドーパミンＤ２レセプター、ドーパミンＤ３レセプター、およびドーパミンＤ５レセプター、ならびにＧＡＢＡＡレセプターの、α−１サブユニット、α−５サブユニット、β−１サブユニットをコードする遺伝子との連鎖について調べられた。少なくとも１つの診断モデルにおいて、この２つのファミリーのうちの１つのファミリーは、ＤＡＴ１遺伝子、ＤＲＤ２遺伝子、ＤＲＤ３遺伝子，ＤＲＤ５遺伝子、ＤＢＨ遺伝子、ＧＡＢＲＡ１およびＧＡＢＡＲＢ１遺伝子についての連鎖を与えない証拠を提供したが、ＧＡＢＲＡ５遺伝子座は連鎖し得る。第２のファミリーは、ゼロ組換えで、ＧＡＢＲＡ１遺伝子座およびＧＡＢＲＡ５遺伝子座のみを与えず、ＤＢＨ遺伝子座、ＤＲＤ２遺伝子座、ＤＲＤ３遺伝子座、ＤＲＤ５遺伝子座、ＤＡＴ１遺伝子座、およびＧＡＢＡＲＢ１遺伝子座において、形式的には、連鎖を除き得ない。Ｄｅｂｒｕｙｎ，Ａ．，ら、Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ  Ｇｅｎｅｔ，１９９６  Ｓｕｍｍｅｒ；６（２）：６７−７３を参照のこと。
【０７５７】
γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）（大脳皮質における主要な阻害性神経伝達物質）は、ニューロンの興奮と反対平衡する抑制性緊張を維持する。このバランスが乱されると、続いて発作が起こり得る。ＧＡＢＡは、ＧＡＢＡ作用性軸索末端において形成され、そしてシナプスに放出され、ここで、２つの型のレセプター（細胞への塩化物の移入を制御する、ＧＡＢＡ−Ａ、およびカリウムコンダクタンスを増加させ、カルシウム移入を減少させ、そして他の伝達物質のシナプス前放出を阻害する、ＧＡＢＡ−Ｂ）のうちの１つにおいて、作用する。ＧＡＢＡ−Ａレセプター結合は、ＧＡＢＡ媒介性阻害シナプス後電位の初期の部分に影響を与え、一方でＧＡＢＡ−Ｂ結合は、後の部分に影響を与える。ＧＡＢＡは、神経膠およびシナプス前終神経の両方への取り込みによって急速に除去され、次いで、ＧＡＢＡトランスアミナーゼによって異化される。実験的な臨床試験の証拠は、ＧＡＢＡが、癲癇の機構および処置において、以下の重要な役割を有することを示す：（ａ）ＧＡＢＡ作用性機能の異常性が、癲癇の遺伝的および後天性の動物モデルにおいて観察された；（ｂ）ＧＡＢＡ媒介性阻害、グルタミン酸デカルボキシラーゼの活性、ＧＡＢＡ−Ａおよびベンゾジアゼピン部位への結合、脳脊髄液および脳組織におけるＧＡＢＡ、ならびに微量透析研究の間に検出されるＧＡＢＡの減少が、ヒト癲癇脳組織の研究において報告された；（ｃ）ＧＡＢＡアゴニストは、発作を抑制し、そしてＧＡＢＡアンタゴニストは、発作を生じる；（ｄ）ＧＡＢＡ合成を阻害する薬物は、発作を引き起こす；ならびに（ｅ）ベンゾジアゼピンおよびバルビツレートは、ＧＡＢＡ媒介性疎外を増強することによって作用する。最後に、シナプスＧＡＢＡを増加させる薬物は、強力な鎮痙薬である。最近開発された２つの鎮痙薬（ＡＥＤ）（ビガバトリン（ＶＧＢ）およびチアガビン（ｔｉａｇａｂｉｎｅ）（ＴＧＢ））が、このような薬剤の例である。しかし、これらの作用機構は、全く異なり（ＶＧＢは、ＧＡＢＡトランスアミナーゼの不可逆性自殺インヒビターであり、一方でＴＧＢは、ニューロンおよび神経膠へのＧＡＢＡの再取込みを遮断する）、このことは、薬物の副作用プロフィールにおける観察される差異を説明し得る。Ｔｒｅｉｍａｎ  Ｄ．Ｍ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２００１；４２  補遺３：８−１２を参照のこと。
【０７５８】
（パネル２Ｄ要約）Ａｇ１９１１  この遺伝子は、このパネルにおける全ての組織サンプルにおいて、低レベルで比較的遍在的に発現される。最も高い発現レベルは、腎臓癌サンプルにおいて見られる（ＣＴ＝３０．１４）。対応する癌組織よりわずかに高い発現が、結腸、腎臓、甲状腺および胃のサンプル由来の正常組織において存在する。従って、この遺伝子は、正常組織と癌性組織との間の区別のためのマーカーとして使用され得る。この分子の、シグナル伝達を調節する際の中心的役割を考慮すると、この分子は、特定の癌における治療調節のための有望な標的である。
【０７５９】
神経伝達物質ＧＡＢＡ（γ−アミノ酪酸）に対するＡ型レセプターは、阻害性神経伝達を媒介する、リガンドによりゲートされる塩化物チャンネルである。五量体レセプタータンパク質の各サブユニットは、アミノ末端細胞外ドメインにおけるリガンド結合部位および４つの膜貫通領域を有し、この膜貫通領域のうちの１つが、イオンチャンネルの壁を形成する。各サブユニットはまた、大きな細胞内ループを有し、これは、プロテインキナーゼのための標的であり得、そしておそらく細胞骨格にレセプターを固定することによる、レセプターの細胞下の標的化および膜クラスター化のために必要であり得る。神経伝達物質レセプターは、細胞膜において、その神経伝達物質を放出する終神経に対してシナプス後の部位で、高密度で位置する必要がある。リガンドによりゲートされるイオンチャンネルレセプターのスーパーファミリーの他のメンバーは、ラプシン（ｒａｐｓｙｎ）またはゲフィリン（ｇｅｐｈｙｒｉｎ）のタンパク質に結合することによって、シナプス後膜クラスターにおいて会合する。最近同定された細胞タンパク質ＧＡＢＡ（Ａ）レセプター関連タンパク質（ＧＡＢＡＲＡＰ）は、ＧＡＢＡ（Ａ）レセプターのγ２サブユニットと相互作用する。ＧＡＢＡＲＡＰは、ＧＡＢＡ（Ａ）レセプターに、インビトロとインビボとの両方で結合し、そしてＧＡＢＡ（Ａ）レセプターの点状染色と共に、培養された皮質ニューロンに同時局在化する。配列分析は、ＧＡＢＡＲＡＰと、微小管関連タンパク質１Ａおよび１Ｂの軽鎖−３との間の類似性を示す。さらに、ＧＡＢＡＲＡＰのＮ末端は、高度に正に荷電しており、そして推定のチューブリン結合モチーフを特徴とする。ＧＡＢＡ（Ａ）レセプター、ＧＡＢＡＲＡＰおよびチューブリンの間の相互作用は、ＧＡＢＡ（Ａ）レセプターの標的化およびクラスター化についての機構を示唆する。Ｗａｎｇ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９９年１月７日；３９７（６７１４）：６９−７２を参照のこと。
【０７６０】
（パネル４Ｄ要約）この遺伝子は、ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質をコードし、そしてこのパネルに示される大部分の細胞型において、中程度のレベル（ＣＴ＝３０〜３３）で発現され、最も高い発現は、胸腺においてである（ＣＴ＝２８．２）。このＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様タンパク質は、胸腺のニューロン細胞または非ニューロン細胞における、細胞内レセプター移送に関与し得る。この遺伝子産物の機能を阻害する薬物は、胸腺において発達するＴ細胞に依存する自己免疫疾患または炎症性疾患（例えば、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、または慢性関節リウマチ）の症状を、低減または排除し得る。
【０７６１】
ＧＡＢＡ（Ａ）レセプター（脳における迅速なシナプス阻害の主要な部位）は、主として、αサブユニット、βサブユニット、およびγ２サブユニットからなる。レセプターγ２サブユニットは、１７ｋＤａの微小管関連タンパク質ＧＡＢＡＲＡＰと相互作用するが、この相互作用の重要性は未知のままである。ＧＡＢＡ（Ａ）レセプターと免疫沈降するＧＡＢＡＲＡＰは、阻害性シナプスにおいて有意なレベルで見出されず、ゴルジ装置およびシナプス後槽において濃縮される。ＧＡＢＡＲＡＰは、Ｎ−エチルマレイミド感受性因子（ＮＳＦ）（細胞内膜転送事象のために重要なタンパク質）と直接結合する。ＮＳＦおよびＧＡＢＡＲＡＰの複合体は、ニューロンにおいて検出されており、そしてこれら２つのタンパク質はまた、細胞内膜区画内に同時局在する。これらの観察は、ＧＡＢＡＲＡＰが、そのＮＳＦと相互作用する能力によって、細胞内ＧＡＢＡ（Ａ）レセプター移送において役割を果たし得るが、シナプス固定においては役割を果たさないことを示唆する。従って、ＧＡＢＡＲＡＰは、ＧＡＢＡ作用性シナプスの産生において、重要な役割を有し得る。Ｋｉｔｔｌｅｒ，Ｊ．Ｔ．ら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２００１年７月；１８（１）：１３−２５を参照のこと。
【０７６２】
若年および老年のヒトの胸腺における、γ−アミノ酪酸トランスアミナーゼ（ＧＡＢＡ−ｔ）の特異的局在化は、ヒト胸腺におけるＧＡＢＡ−ｔの特異的な血管局在を示し、そしてＧＡＢＡ−ｔの量および分布は、年齢と共に変化する。最近の研究において、ヒト胸腺のサンプルが、乳児（ｎ＝３）、ならびに若年（ｎ＝３）、成人（ｎ＝３）および老年（ｎ＝３）のヒトにおける１２の剖検にわたって、採取された。ヒト胸腺の組織学的染色が、エオシンオレンジを用いて実施され、一方で神経線維の組織学的染色が、ボディアン法を用いて実施された。ＧＡＢＡ−ｔの組織化学的および生化学的実証（タンパク質投薬量を含む）が、それぞれＶａｎ  ＧｅｌｄｅｒおよびＪｕｎｇの方法によって実施された。最後に、画像の定量的分析が実施された。エオシンオレンジでの染色は、胸腺の微小環境の微小解剖学的詳細を明らかにする。ボディアン法は、神経線維および神経細線維を示す。ＧＡＢＡ−ｔについての組織化学的染色は、この酵素が年齢と共に増加すること、ならびに乳児、若年、成人、および老年のヒトにおける胸腺の神経線維における顕著な局在化、ならびにこの酵素の特異的な血管局在化を示す。最後に、スライスに対して実施された画像の定量分析は、年齢によって誘導される形態学的変化の全てを確認した。これらの研究は、ＧＡＢＡが、ヒト胸腺の阻害的神経伝達物質であり、一方でＧＡＢＡ−ｔは、ＧＡＢＡ代謝において重要な役割を果たすことを示唆する。Ｃａｖａｌｌｏｔｔｉ，Ｄ．ら、Ｈｕｍ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９年１１月；６０（１１）：１０７２−９を参照のこと。
【０７６３】
（Ｌ．ＮＯＶ１７）
（ＡＣ００４５９６＿Ａ：ＣＧ１３３７９様）
遺伝子ＡＣ００４５９６＿Ａの発現は、表ＬＡおよびＬＢに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１９０８およびＡｇ２０４５を使用して評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果を、表ＬＣおよび表ＬＤに示す。
【０７６４】
【表ＬＡ】
2004534518.tif 000286
【０７６５】
【表ＬＢ】
2004534518.tif 000287
【０７６６】
【表ＬＣ】
2004534518.tif 000288
2004534518.tif 000289
2004534518.tif 000290
【０７６７】
【表ＬＤ】
2004534518.tif 000291
2004534518.tif 000292
2004534518.tif 000293
（パネル１．３Ｄ要約）Ａｇ１９０８／２０４５  同じプローブおよびプライマーのセットを用いる２つの実験は、この遺伝子の、脳で優先的な発現を示し、大脳皮質および脳全体において、発現が最も高い（ＣＴ＝２９〜３０）。この発現プロフィールは、この遺伝子によってコードされるタンパク質が、神経学的障害および神経医学的障害の処置において有用であり得ることを示唆する。
【０７６８】
この遺伝子は、広範な種々の代謝組織（膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成人および胎児の心臓、成人および胎児の骨格筋、成人および胎児の肝臓、ならびに脂肪が挙げられる）において、中程度に発現される。従って、この遺伝子産物は、代謝疾患（肥満症ならびに１型および２型の糖尿病が挙げられる）の病因、診断、および／または処置において重要であり得る。
【０７６９】
全体として、この遺伝子は、このパネルにおいて使用された全ての組織において、低レベルで遍在的に発現する。正常な前立腺組織と比較して前立腺癌細胞株において増加した発現に対する両方の実施において、良好な一致が存在する。従って、この遺伝子の発現は、前立腺癌のマーカーとして使用され得る。全体の発現パターンは、この遺伝子が、大部分の細胞型の生存および増殖のために必要とされることを示唆する。
【０７７０】
（パネル４Ｄ要約）Ａｇ１９０８／２０４５  この遺伝子は、広範な種々の免疫細胞型および組織（Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、および樹状細胞が挙げられる）において、中程度に発現される。この広範な発現は、この遺伝子産物が、自己免疫疾患および炎症性疾患（例えば、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、または慢性関節リウマチ）の病因、診断および／または処置において重要であり得ることを示唆する。
【０７７１】
（Ｍ．ＮＯＶ１６）
（ＣＧ５９１８９−０１／６１１１６０２９＿ＧＲＡＩＬ：Ｐ４５０様）
遺伝子ＣＧ５９１８９−０１の発現は、表ＭＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ３３８９を使用して、評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果を、表ＭＢ、ＭＣおよびＭＤに示す。
【０７７２】
【表ＭＡ】
2004534518.tif 000294
【０７７３】
【表ＭＢ】
2004534518.tif 000295
2004534518.tif 000296
【０７７４】
【表ＭＣ】
2004534518.tif 000297
2004534518.tif 000298
【０７７５】
【表ＭＤ】
2004534518.tif 000299
2004534518.tif 000300
2004534518.tif 000301
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０）要約）Ａｇ３３８９  正常なコントロールと比較した場合に、アルツハイマー病患者の死後の脳におけるこの遺伝子の発現において、差異は検出されない；しかし、このパネルは、患者の独立した群のＣＮＳにおけるこの遺伝子の発現を実証する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．４を参照のこと。
【０７７６】
（一般＿スクリーニング＿パネル＿ｖ１．４（Ｇｅｎｅｒａｌ＿ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ＿ｐａｎｅｌ＿ｖ１．４）要約）Ａｇ３３８９  この遺伝子の発現は、胃癌細胞株において最も高い（ＣＴ＝２５．１）。全体として、このパネルにおける正常な組織よりも、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、腎臓癌、胃癌、脳癌、結腸癌および膵臓癌由来の癌細胞株において、より高い発現が存在する。このことは、この遺伝子産物の発現が、これらの組織の癌に対する診断マーカーとして潜在的に使用され得ることを示唆する。従って、抗体、低分子またはタンパク質薬物の使用による、この遺伝子の発現または機能の治療的阻害は、これらの癌の処置に有効であり得る。
【０７７７】
この遺伝子は、種々の代謝組織（膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成人および胎児の肝臓、ならびに脂肪が挙げられる）において、中程度に発現される。従って、この遺伝子産物は、これらの組織のいずれかまたはすべてにおける代謝疾患（肥満症および糖尿病が挙げられる）の病因、診断および／または処置において、重要であり得る。
【０７７８】
この遺伝子Ｐ４５０ホモログは、低レベルで、ＣＮＳにおいて発現される。Ｐ４５０のいくつかのアイソフォームは、脳に存在することが示されており、そしてさらに、アルツハイマー病に掛かり合いになる。従って、この遺伝子によってコードされるタンパク質は、アルツハイマー病を含む脳疾患の病因、診断および／または処置において、重要であり得る。
【０７７９】
肝臓と比較した場合、脳の異なる領域および細胞集団において発現されるシトクロムＰ４５０（Ｐ４５０、ＣＹＰ）の量が非常に小さいにもかかわらず、脳の発達、機能および可塑性への、これらの特異的な関与についての重大な証拠が存在する。それにもかかわらず、大脳シトクロムＰ４５０の発生および重要性についての現在の議論は、それらの一般的な機能の一貫しない解析によって、単一のアイソフォームに関して決定される。最近の証拠は、ラット脳におけるＣＹＰ２Ｂ１  ｍＲＮＡおよびＣＹＰ２Ｂ２  ｍＲＮＡの構成的な発現を示す。免疫細胞学および非放射性のインサイチュハイブリダイゼーション研究は、ニューロンの集団において、一貫して脳に優先的であるが、ある程度までは脳梁の星状細胞および嗅球においてである、同じ発現パターンを明らかにした。ステロイドホルモン感受性領域およびニューロン（例えば、海馬）において示される、ＣＹＰ２Ｂアイソフォームの、周知のテストステロン代謝能力および存在は、Ｐ４５０誘導環境物質によるステロイドホルモン作用を損なうための、ＣＹＰ２Ｂ１およびＣＹＰ２Ｂ２のようなアイソフォームの重要性を明らかにする。Ｒｏｓｅｎｂｒｏｃｋ，Ｈ．ら、ＰＭＩＤ：１１２０８８９６を参照のこと。
【０７８０】
データは、アルツハイマーのアミロイドペプチド（Ａｂｅｔａ）が、活性酸素種が関与する機構によって、ニューロンの変性および死を引き起こすことを示唆する。Ａｂｅｔａ媒介性酸化性損傷に関与する経路は、部分的にのみ理解されている。最近の研究は、Ａｂｅｔａペプチドへの曝露に続いて、神経芽細胞種細胞は、ＣＰ４５０ｒの明白な誘導を示すことを示した。さらに、トランスジェニックマウスの脳由来の組織切片は、アミロイド沈着物を囲むＣＰ４５０ｒに対する、強い免疫反応性を示した。ＣＰ４５０ｒの発現のパターンは、神経炎性ストレスおよび酸化的ストレスのマーカーによって示されるものに類似であった。非トランスジェニックマウス由来の切片は、検出可能な免疫反応性を示さなかった。神経病理学的に確認されたＡＤを有する４つの脳由来の切片の免疫染色は、大脳ニューロンの細胞質内のＣＰ４５０ｒに対する異常な免疫反応性によって特徴付けられたトランスジェニックマウスとは異常に異なるパターンを示した。適合する年齢のコントロール脳由来の切片において、標識化は見られなかった。従って、ＣＰ４５０ｒは、アルツハイマーアミロイドペプチドによって誘導され、そしてこのような応答は、Ａｂｅｔａが酸化的ストレスを引き起こす１つの可能な機構と見なされなければならない。Ｐａｐｐｏｌｌａ，Ｍ．Ａ．，ＰＭＩＤ：１１４３２９７９を参照のこと。
【０７８１】
（パネル４Ｄ要約）Ａｇ３３８９  この遺伝子は、シトクロムＰ４５０様タンパク質をコードし、そして多数の免疫細胞型および組織にわたって、中程度のレベルで発現され、ＴＮＦα＋ＩＬ１βで刺激された気管支上皮（ＣＴ＝２７．４３）、未処理の小気道上皮（ＣＴ＝２８．２７）、およびＴＮＦα＋ＩＬ−１βで刺激した小気道上皮（ＣＴ＝２６．８９）における発現が最も高い。この発現プロフィールは、この遺伝子産物の低分子アンタゴニストが、慢性的な閉塞性肺疾患、喘息、アレルギー、および気腫に起因する肺上皮における炎症によって引き起こされる症状を低減または排除する治療剤として有用であり得ることを示唆する。
【０７８２】
シトクロムＰ４５０は、広範な生体異物（多くの発癌物質およびいくつかの抗癌薬が挙げられる）の酸化的活性化および解毒における、中心的な役割を有する。従って、シトクロムＰ４５０酵素系は、腫瘍の発達および化学療法に対する腫瘍の応答の影響の両方において、重要な役割を果たす。胃癌は、消化管の最も通常な腫瘍の１つであり、そして環境因子（食事の要因を含む）が、この腫瘍の発達に関与している。この型の腫瘍は、乏しい予後を有し、そして現在の治療に対して乏しく応答する。最近、Ｐ４５０のいくつかの主要な形態（ＣＹＰ１Ａ、ＣＹＰ２Ｅ１およびＣＹＰ３Ａ）の存在および細胞局在が、胃癌において調査され、そして正常な胃におけるそれらの発現と比較された。胃癌において、ＣＹＰ１ＡおよびＣＹＰ３Ａの増強された発現が存在し、ＣＹＰ１Ａが症例の５１％に存在し、そしてＣＹＰ３Ａが症例の２８％に存在した。対照的に、Ｐ４５０は、正常な胃においては同定されなかった。胃癌におけるＣＹＰ１ＡおよびＣＹＰ３Ａの存在は、腫瘍におけるシトクロムＰ４５０の特定の形態の増強された発現についてのさらなる証拠を提供し、そしてＰ４５０のこれらの形態によって活性化される抗癌薬の開発のために、治療的に重要であり得る。Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．ら、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９８年４月；７７（７）：１０４０−４．ＰＭＩＤ：９５６９０３６を参照のこと。
【０７８３】
（Ｎ．ＮＯＶ１５）
（ＣＧ５０１６３−０１／ｓｇｇｃ＿ｄｒａｆｔ＿ｂａ２９４ａ４＿２００００８０８およびＣＧ５０１６３−０２：ヌクレオシドホスファターゼ）
遺伝子ＣＧ５０１６３−０１および改変体ＣＧ５０１６３−０２の発現が、表ＮＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ２３７６を使用して、評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果を、表ＮＢ、ＮＣ、ＮＤ、ＮＥおよびＮＦに示す。
【０７８４】
【表ＮＡ】
2004534518.tif 000302
【０７８５】
【表ＮＢ】
2004534518.tif 000303
【０７８６】
【表ＮＣ】
2004534518.tif 000304
2004534518.tif 000305
2004534518.tif 000306
【０７８７】
【表ＮＤ】
2004534518.tif 000307
2004534518.tif 000308
【０７８８】
【表ＮＥ】
2004534518.tif 000309
2004534518.tif 000310
2004534518.tif 000311
【０７８９】
【表ＮＦ】
2004534518.tif 000312
2004534518.tif 000313
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０）要約）Ａｇ２３７６  パネルＣＮＳ＿神経変性は、コントロールの死後の脳とアルツハイマー病患者の死後の脳との間の、この遺伝子の発現の、任意の差異を反映する。しかし、このパネルは、患者の独立した群の脳における、中程度から高レベルでの、この遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０７９０】
（パネル１．３Ｄ要約）Ａｇ２３７６  この遺伝子は、脳に優先的な発現パターンを示し、そして試験された全てのＣＮＳ領域において中程度のレベルで発現し、海馬において、発現が最も高い（ＣＴ＝２８．５）。この遺伝子は、ＣＤ３９Ｌ２のヌクレオシドホスファターゼホモログ（これは、遊離ヌクレオチドの細胞外加水分解に関与すると考えられる）をコードする。従って、この分子の標的化は、発作、睡眠／不眠症、および振せん麻痺様の筋肉硬直に関与した、脳におけるプリン作用性レセプターおよびアデノシンレセプターの活性化に影響を与えるための、間接的な方法である。従って、この遺伝子またはそのタンパク質産物の治療的改変は、これらの障害のいずれの処置においても有用であり得る。
【０７９１】
この遺伝子は、このパネルにおける癌細胞株の全てにおいて、低いが有意なレベルで発現する。この遍在的な発現は、この遺伝子が、大部分の細胞型に対する細胞生存および増殖において役割を果たすことを示唆する。
【０７９２】
この遺伝子はまた、広範な種々の代謝組織（膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成人および胎児の心臓、骨格筋、成人および胎児の肝臓、ならびに脂肪が挙げられる）において、中程度に発現される。従って、この遺伝子産物は、代謝疾患（肥満症ならびに１型および２型の糖尿病が挙げられる）の処置のための、低分子薬物標的であり得る。さらに、このＣＤ３９Ｌ２ホモログの、心臓における有意なレベルの発現は、血小板の活性化および心臓における補充を調節する際の、このタンパク質の機能的役割を支持する。
【０７９３】
ヌクレオシドの三リン酸ジホスホヒドロラーゼ６（ＮＴＰＤａｓｅ６）（表面ヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼファミリーの新規メンバー）をコードするラット脳由来のｃＤＮＡは、４５５アミノ酸残基のタンパク質をコードする１３６５ｂｐのオープンリーディングフレームを有し、その計算分子量は４９９７１Ｄａであり、そして推定Ｎ末端疎水性配列を有する。これは、ヒトＣＤ３９Ｌ２配列と８６％の配列同一性を有し、そしてヒトおよびマウスの関連する２つのヌクレオシドジホスファターゼ（ＣＤ３９Ｌ４、ＮＴＰＤａｓｅ５／ＥＲ−ＵＤＰａｓｅ）の配列と、それぞれ４８％および５１％の同一性を有する。ｍＲＮＡは、調査された全ての組織において発現され、異なるアバンダンスを有する２つの主要な転写体を明らかにした。ＰＣＲ分析は、単一のオープンリーディングフレームを示唆する。Ｍｙｃ−Ｈｉｓタグ化したＮＴＰＤａｓｅ６は、免疫学的分析およびタンパク質単離のために、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞およびＰＣ１２細胞において発現された。このタンパク質は、形質転換されたＣＨＯ細胞の膜画分に含まれ、そして細胞培養懸濁物において、可溶性形態で存在した。ＮＴＰＤａｓｅ６は、優先的に加水分解されたヌクレオシド５’−二リン酸である。異なる置換基を有するので、活性の順序は、以下であった：ＧＤＰ＞ＩＤＰ＞＞ＵＤＰ、ＣＤＰ＞＞ＡＤＰ。ヌクレオシド５’−三リン酸は、小さい程度にのみ加水分解され、そしてヌクレオシド５’−一リン酸の加水分解は、観察されなかった。この酵素は、Ｃａ（２＋）およびＭｇ（２＋）によって強く等しく活性化され、そしてＧＤＰに対して２１１μＭのＫ（ｍ）を有した。トランスフェクトされたＣＨＯ細胞およびＰＣ１２細胞の免疫組織化学的分析は、ＮＴＰＤａｓｅ６がゴルジ装置に会合し、そして小さな程度まで、原形質膜と会合することを示唆する。この酵素は、ゴルジ装置におけるグリコシル化反応を支持し得、そして細胞から放出される場合に、細胞外ヌクレオチドの加水分解を触媒し得る。Ｂｒａｕｎ，Ｎ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，２０００年１１月１日；３５１Ｐｔ３：６３９−４７を参照のこと。
【０７９４】
脳の正常な機能および病的な機能における、アデノシンＡ３レセプターの関与は、規定されていない。以前の研究は、アゴニスト［Ｎ６−（３−ヨードベンジル）−５’−Ｎ−メチルカルボキサミドアデノシンまたはＩＢ−ＭＥＣＡ］の慢性的な虚血前投与が、選択的に脆弱な脳領域におけるニューロンの有意な保護、およびその結果の死亡率の等しく有意な低下を生じることを示した。他方で、この薬物の急激な投与は、これらのパラメータの顕著な悪化を生じた。最近、ＩＢ−ＭＥＣＡの投与の効果が、病巣の傷害の発生に関する処置のタイミングに依存することが示された。従って、アデノシンＡ３レセプターアゴニストを用いる処置は、病巣の脳虚血に続く梗塞の大きさを減少させ得る。一時的な中大脳虚血の２０分前（ＭＣＡＯｔ＝３０分）の、ＩＢ−ＭＥＣＡ投与での処置は、梗塞の大きさの有意な増加を生じ（ｐ＜０．０１）、一方で虚血の２０分後の投与は、梗塞の容量の統計学的に有意な減少を生じた。虚血後の処置は、改善されたニューロン保存、減少した活性神経膠症の強度、および小グリア浸潤の顕著な減少を生じる。これらのデータは、アデノシンＡ３レセプター刺激の効果が、皮質組織のニューロンエレメントと非ニューロンエレメントとの両方（例えば、星状細胞、小グリア、および脈管構造）に対する、これらのレセプターの差示的な影響に依存することを示す。Ｖｏｎ  Ｌｕｂｉｔｚ，Ｄ．Ｋ．ら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，２００１年６月；９３９：８５−９６を参照のこと。
【０７９５】
最近の研究は、選択的アンタゴニストＳＣＨ５８２６１によるアデノシンＡ（２Ａ）レセプターの遮断が、振せん麻痺様の筋肉硬直に影響を与えるか否かを試験した。筋肉の緊張は、組み合わせられた機械的および電気的筋運動図の方法を使用して試験され、この方法は、受動的な伸長に対するラットの後肢の筋肉抵抗（ＭＭＧ）および脚関節における屈曲、ならびにその関節の拮抗筋（腓腹筋および前脛骨筋）の電気的筋運動図活性（ＥＭＧ）を同時に測定した。レセルピン（５ｍｇ／ｋｇ＋α−メチル−ｐ−チロシン、２５０ｍｇ／ｋｇ）によって生じた筋肉硬直は、ＳＣＨ５８２６１（０．１〜５ｍｇ／ｋｇ）によってアンタゴナイズされた。ＳＣＨ５８２６１（５ｍｇ／ｋｇ）はまた、腓腹筋と前脛骨筋との両方において、レセルピンにより増強される緊張性および反射ＥＭＧ活性を減少させた。さらに、１ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの用量のＳＣＨ５８２６１は、ハロペリドール（０．５ｍｇ／ｋｇ）によって誘導される筋肉の抵抗を排除した。しかし、最も高い用量のＳＣＨ５８２６１（５ｍｇ／ｋｇ）のみが、ハロペリドールによって増強した緊張性ＥＭＧ活性を低下させた。Ｌ−ＤＯＰＡ（７５ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ）の投与は、ハロペリドールによって引き起こされた筋肉の抵抗および緊張性ＥＭＧ活性を、用量依存的に低下させた。ハロペリドールにより誘導される筋肉硬直に影響を与えない用量での、ＳＣＨ５８２６１（０．１ｍｇ／ｋｇ）およびＬ−ＤＯＰＡ（５０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ投与は、顕著な相乗効果を生じた。ＳＣＨ５８２６１が振せん麻痺様筋肉硬直を低下させる能力、およびこのモデルにおけるＬ−ＤＯＰＡの効果を増強する能力は、パーキンソン病の処置におけるこの化合物の治療価値を示す。Ｗａｒｄａｓ，Ｊ．ら、Ｓｙｎａｐｓｅ，２００１年８月；４１（２）：１６０−７１を参照のこと。
【０７９６】
ウリジンが睡眠促進物質の１つであることは、十分に確立されている。新たな型の催眠性化合物が、オキソピリミジンヌクレオシドから合成された。ＣＮＳ抑制効果におけるこれらの作用機構は、レセプター理論に基づいて明らかにされる。最近、ＣＮＳ抑制特性、睡眠促進効果、特定のＣＮＳレセプターとの相互作用、およびオキソピリミジンヌクレオシドのようなウリジン誘導体のレセプター結合アッセイについての構造−活性関係が、調査された。Ｎ３−置換ウリジンの構造−活性関係の研究において、合成されたＮ３−ベンジルウリジンとＮ３−フェナシルウリジンとの両方が、マウスにおける脳室内注射によって、強力な催眠活性（立ち直り反射の損失）を示した。さらに、これらの化合物の特定の誘導体は、バルビツレートおよびベンゾジアゼピンとの相乗効果を有し、そして自発活性、運動の共調不能、および抗不安効果を、マウスにおいて低下させた。特に、Ｎ３−フェナシルウリジンは、ペントバルビタールおよびジアゼパムにより誘導される睡眠を、それぞれ６倍および７０倍、顕著に増強した。しかし、リボース部分を有さないＮ３−ベンジルウラシルおよびＮ３−フェナシルウラシルは、いずれの催眠活性をも有さず、このことは、ヌクレオシド誘導体の特異的効果を示した。従って、ラットにおける自然な睡眠に対する、Ｎ３−ベンジルウリジンの効果が、試験された。Ｎ３−ベンジルウリジンはまた、１０ｐｍｏｌの用量で皮質脳波によって評価された、睡眠促進効果を有する。Ｎ３−フェナシルウリジンの作用の機構を明らかにするために、この化合物の、ベンゾジアゼピン、ＧＡＢＡ、５−ＨＴ、またはアデノシンレセプターとの相互作用もまた、調査された。Ｎ３−フェナシルウリジンの薬理活性は高かったが、ベンゾジアゼピン、ＧＡＢＡ、５−ＨＴ、およびアデノシンレセプターに対する親和性は、かなり低かった。［３Ｈ］Ｎ３−フェナシルウリジンは、ウシ脳から調製されたシナプス膜に、濃度依存的に結合した。スキャッチャード分析は、結合部位の単一の成分を明らかにした。この結合部位は、おそらく、ウリジン誘導体の催眠活性のための新規レセプター「ウリジンレセプター」である。これらの特異的結合部位の分布のランク順序は、ラット脳において、線条＞視床＞大脳皮質＞小脳＞中脳＞延髄であることがわかった。Ｎ３−フェナシルウリジンは、マウスにおいて、（Ｒ）−形態ではなく、Ｎ３−（Ｓ）−（＋）−α−ヒドロキシ−β−フェネチルウリジンに排他的に代謝された。Ｎ３−（Ｓ）−（＋）−α−ヒドロキシ−β−フェニルエチルウリジンは、強い催眠活性のみでなく、シナプス膜のウリジンレセプターに対する高い親和性もまた有し、一方で（Ｒ）−異性体は、両方の活性が低かった。ラセミ混合物は、これらの化合物の薬理効果のための中間体であることが示された。（Ｒ）−異性体または（Ｓ）−異性体を使用するこれらの研究は、ウリジン結合部位またはウリジンレセプターが、ＣＮＳに存在し、そして催眠活性を誘導する際の誘発工程の１つとして、哺乳動物における睡眠調節において、何らかの役割を果たすことを示す。ウリジンは、核酸−核タンパク質生合成（異化作用）の工程から放出され、そして自然な睡眠を調節する脳の領域において、結合���位に達することが示唆されている。次いで、レセプターから解離したウリジンは、核酸の合成のために利用される（同化作用）。従って、睡眠の誘導は、ＣＮＳにおけるウリジンレセプターを介してウリジンによって媒介され得るが、ウリジンレセプターの構造は未だに解明されていない。Ｋｉｍｕｒａ，Ｔ．ら、Ｓｌｅｅｐ，２００１年５月１日；２４（３）：２５１−６０を参照のこと。
【０７９７】
Ｅ−ＮＴＰＤａｓｅは、ヌクレオチドを加水分解する細胞外酵素である。ヒトＥ−ＮＴＰＤａｓｅ遺伝子ファミリーは、現在、５つの報告されたメンバーからなる（ＣＤ３９、ＣＤ３９Ｌ１、ＣＤ３９Ｌ２、ＣＤ３９Ｌ３、およびＣＤ３９Ｌ４）。膜結合ファミリーメンバーと分泌ファミリーメンバーとの両方が、コードされた膜貫通モチーフおよびリーダーペプチドモチーフによって推定されている。最近、ヒトＣＤ３９Ｌ２遺伝子が、心臓において優先的に発現されることが示された。心臓からのインサイチュハイブリダイゼーション結果は、ＣＤ３９Ｌ２メッセージが、筋肉および毛細血管内皮細胞において発現されることを示す。このＣＤ３９Ｌ２遺伝子は、細胞外Ｅ−ＮＴＰＤａｓｅをコードする。フローサイトメトリー実験は、一時的に発現されるＣＤ３９Ｌ２が、ＣＯＳ−７細胞の表面に存在することを示す。トランスフェクトされた細胞もまた、培地中で組換えグリコシル化タンパク質を産生し、そしてこのプロセスは、ブレフェルジンＡ（哺乳動物の分泌経路のインヒビター）によって遮断され得る。ＣＤ３９Ｌ２の酵素学は、代表的なＥ−ＮＴＰＤａｓｅの特徴的特性を示すが、酵素基質としては、ＮＴＰよりＮＤＰについての特異性の程度のほうがずっと高い。ＡＤＰａｓｅ活性の速度論は、正の共同性を示す。心臓におけるＣＤ３９Ｌ２発現の優勢は、この器官における血小板の活性化および補充を調節する際の、機能的役割を支持する。Ｙｅｕｎｇ，Ｇ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００年１０月２４日；３９（４２）：１２９１６−２３．ＰＭＩＤ：１１０４１８５６を参照のこと。
【０７９８】
（パネル２．２要約）Ａｇ２３７６  このパネルにおける最も高レベルの発現は、肺に転移する結腸癌由来のサンプルにおいて見られる（ＣＴ＝３０．８）。以下のサンプル由来の正常な隣接組織と比較して、匹敵して高いレベルの発現は、結腸、肝臓、甲状腺、肺、３つの卵巣癌のうちの２つ、９つの腎臓癌のうちの６つ、肺に転移する黒色腫のサンプル、および肝臓に転移する眼の黒色腫のサンプルにおいて見られる。従って、この遺伝子の発現は、これらの癌の診断マーカーとして使用され得、そしてこの遺伝子の治療的阻害は、これらの癌の処置のために潜在的に使用され得る。
【０７９９】
（パネル４Ｄ要約）このタンパク質は、ヌクレオシドホスファターゼ様タンパク質をコードし、そして多数の免疫細胞型および組織において、中程度のレベルで発現される（ＣＴ＝２９〜３３）。従って、この遺伝子産物の機能を遮断する低分子アンタゴニストは、自己免疫疾患および炎症性疾患（例えば、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、または慢性関節リウマチ）に罹患する患者の症状を低減または排除する治療剤として、有用であり得る。
【０８００】
（パネルＣＮＳ＿１要約）Ａｇ２３７６  パネルＣＮＳ＿１は、コントロールの死後の脳と疾患した患者の死後の脳との間で、この遺伝子の発現においていかなる差異をも反映しない。しかし、このパネルは、患者の独立した群の脳において、中程度のレベルでのこの遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０８０１】
（Ｏ．ＮＯＶ１９）
（ＣＧ５０１５７−０１／ＭＢＮＭ＿００４０５６＿ｄａ２およびＣＧ５０１５７−０２：カルボニックアンヒドラーゼ関連タンパク質）
遺伝子ＣＧ５０１５７−０１および改変体ＣＧ５０１５７−０２の発現は、表ＯＡに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１７５５を使用して、評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果を、表ＯＢ、ＯＣ、ＯＤ、ＯＥおよびＯＦに示す。
【０８０２】
【表ＯＡ】
2004534518.tif 000314
【０８０３】
【表ＯＢ】
2004534518.tif 000315
【０８０４】
【表ＯＣ】
2004534518.tif 000316
2004534518.tif 000317
【０８０５】
【表ＯＤ】
2004534518.tif 000318
2004534518.tif 000319
2004534518.tif 000320
【０８０６】
【表ＯＥ】
2004534518.tif 000321
2004534518.tif 000322
2004534518.tif 000323
【０８０７】
【表ＯＦ】
2004534518.tif 000324
2004534518.tif 000325
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０）要約）Ａｇ１７５５  パネルＣＮＳ＿神経変性は、コントロールの死後の脳とアルツハイマー病患者の死後の脳との間で、この遺伝子の発現において、いかなる差異をも検出しない。しかし、このパネルは、患者の独立した群の脳において、中程度から高レベルでのこの遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０８０８】
（パネル１．３Ｄ要約）Ａｇ１７５５  この遺伝子（カルボニックアンヒドラーゼホモログ）は、このパネルにおいて広範に発現され、肺癌細胞株における発現が最も高い（ＣＴ＝２８．７）。肺癌細胞株のクラスターおよび黒色腫細胞株において、有意な発現が存在するようである。従って、この遺伝子の発現は、これらの癌の存在に対する診断マーカーとして使用され得る。対照的に、脳および腎臓由来の癌細胞株は、発現レベルが低い／検出不可能であり、一方で正常な脳および腎臓は、この遺伝子を、有意なレベルで発現する。このことは、発現の非存在が、これらの細胞株の細胞増殖に相関し得ることを示唆する。いくつかのカルボニックアンヒドラーゼは、細胞外の酸性ｐＨを維持し、そして癌細胞の増殖および転移を補助することによって、腫瘍の微小環境に寄与し得ることが、仮定される。従って、この遺伝子の発現または機能の治療的改変は、これらの癌の処置において効果的であり得る。
【０８０９】
この遺伝子は、種々の代謝組織（膵臓、副腎、下垂体、成体および胎児の心臓、成体および胎児の骨格筋、および脂肪）において中程度に発現される。従って、この遺伝子産物は、代謝病（肥満および１型糖尿病、２型糖尿病を含む）の処置を標的とする低分子薬剤であり得る。
【０８１０】
さらに、この遺伝子は、成体の肝臓（ＣＴ＝４０）における発現と比較した場合、胎児の肝臓（ＣＴ＝３１）において非常により高いレベルで発現され得、そしてこの組織の成体の供給源と胎児の供給源との間の区別をするために用いられ得る。さらに、胎児の肝臓におけるより高いレベルの発現は、この遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または機能の治療的調節が、この肝臓の疾患の処置に有用であり得ることを示唆する。
【０８１１】
この遺伝子は、カルボニックアンヒドラーゼに相同であるタンパク質をコードし、そして試験されるすべてのＣＮＳ領域において中程度のレベルで発現される。カルボニックアンヒドラーゼ  ａｈｓ  の活性化は、記憶を増大させることが示されている。従って、この遺伝子は、記憶増強因子としての使用または痴呆（アルツハイマー型、血管性痴呆など）の処置を標的とする優れた薬剤である。
【０８１２】
ＣＡ１錐体細胞は、ラットの海馬の切片において記録される。カルボニックアンヒドラーゼ活性化因子の存在下で、オリエン（ｏｒｉｅｎ）層からのコリン作用性インプットおよび錐体細胞層からの低い強度のγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）作用性インプットの同時微小刺激（ｃｏｍｉｃｒｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）は、過分極ＧＡＢＡ媒介阻害性のシナプス後のポテンシャルを、脱分極応答に変換した。しかし、活性化因子の非存在下では、同じ刺激は、シナプスのスイッチの引き金となるには十分ではなかった。このシナプスのスイッチは、このＧＡＢＡ作用性シナプスの機能を、興奮フィルターから増幅因子に変化させ、そしてカルボニックアンヒドラーゼインヒビターによって妨害され、ＨＣＯに対する依存を示した。これらの同じカルボニックアンヒドラーゼ活性化因子の心室内側（ｉｎｔｒａｌａｔｅｒａｌ）投与は、ラットに、Ｍｏｒｒｉｓ  ｗａｔｅｒ  ｍａｚｅ  ｔａｓｋのより高い学習を示させ、このことは、ＧＡＢＡ作用性シナプススイッチが、空間的な記憶情報の基礎をなすシナプス形成性をゲート（ｇａｔｅ）するために必要不可欠であることを示唆する。従って、増大したカルボニックアンヒドラーゼ活性はまた、時間的に関連する関連のシグナルの知覚、処理、および保存を増強し、そして学習および記憶の薬理学における重要な治療的標的を表す（Ｓｕｎ，Ｍ．Ｋ．およびＡｌｋｏｎ，Ｄ．Ｌ．、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ、２００１年  １月；２９７（３）：９６１−７を参照のこと）。
【０８１３】
カルボニックアンヒドラーゼ−９（ＣＡ９）（細胞外活性部位を有する膜貫通酵素）は、二酸化炭素のカルボン酸への可逆的代謝に関与する。最近、低酸素および低酸素誘導因子（ＨＩＦ）経路によるＣＡのアップレギュレーションが、仮定された。Ｗｙｋｏｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６０：７０７５−７０８３、２０００を参照のこと。非小細胞の肺癌におけるこの酵素の発現は、最近試験され、そして分析された１０７の奨励のうち、３９（３６．４％）が、ＣＡ９の強力な膜／細胞質発現を有し、そして陽性として分類された。染色は、壊死の周辺領域に限定され、そしてＣＡ９発現と壊死の程度との有意な関連が示された（Ｐ＝０．００４）。それにもかかわらず、集中的または広範な壊死を有する７４の症例のうち３８の症例は、ＣＡ９を発現しなかった。ＣＡ９発現は、扁平上皮細胞の組織学においてより頻度が高く（Ｐ＝０．００１）、そして高等なＴ段階（Ｐ＝０．００９）を有していた。有意なＣＡ９が、血小板由来内皮細胞増殖因子および塩基性線維芽細胞増殖因子レセプターと同時発現された。ＣＡ９と抗ＣＤ３１モノクローナル抗体の二重染色は、ＣＡ９を発現する領域において、陰性の領域（Ｐ＝０．０００５）よりも高い全体的な微小血管密度を明らかにした。３８のＣＡ９陽性の症例のうち３１の症例は、ＨＩＦ１ａ／ＨＩＦ２ａについて陽性であったが、ＨＩＦ陽性は、より一般的な事象（１０７のうち６８）であり、そしてこれらの発現パターンは、散在していた（壊死領域中に限定されなかった）。ＣＡ９の発現と表皮増殖因子レセプター、ｃ−ｅｒｂＢ−２、およびＭＵＣ１の発現との直接的関連もまた、見出された（Ｐ＜０．０４）。生存分析は、ＣＡ９発現が、乏しい予後に関連することを示した。低い血管新生を有する腫瘍中のＣＡ９発現は、高度に新脈管形成する腫瘍を有する患者の予後に類似する予後を規定した。多変量解析は、ＣＡ９発現が、新脈管形成に非依存性の重大な予後の因子であることを明らかにした。従って、ＣＡ９は、非小細胞肺癌における重要な分子であり、そのアップレギュレーションは、この腫瘍の高度な低酸素／壊死領域において生じる。ＣＡ９の発現は、新脈管形成、アポトーシス阻害、および細胞−細胞接着分裂に関与する型のタンパク質の発現に関連し、これは、ＣＡ９と乏しい結果との密接な関係を説明する。Ｇｉａｔｒｏｍａｎｏｌａｋｉ，Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００１年１１月１日；６１（２１）：７９９２−８．ＰＭＩＤ：１１６９１８２４を参照のこと。
【０８１４】
酸性の細胞外ｐＨは、悪性表現型の基本的性質である。ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）−欠損腫瘍において、この細胞表面の膜貫通カルボニックアンヒドラーゼ（ＣＡ）ＣＡ９遺伝子およびＣＡ１２遺伝子は、ｐＶＨＬの非存在に起因して過剰発現される。従って、これらの酵素は、腫瘍中の細胞外酸性ｐＨの維持に関連し得、これにより腫瘍増殖および拡散のための伝導環境を提供し得る。特定の抗体を用いるノザンブロット分析および免疫染色を用いて、本発明者らは、癌細胞集団、新しい腫瘍検体および保管された腫瘍検体、ならびに正常なヒト組織の大サンプルにおいて、ＣＡ９遺伝子およびＣＡ１２遺伝子の発現ならびにそれらの産物を分析した。発現はまた、低酸素条件下の培養細胞中で分析された。成体の正常な細胞におけるＣＡ  ＩＸおよびＣＡ  ＸＩＩの発現は、高度に特化された細胞においてのみ検出され、そしてほとんどの組織について、これらの発現は、オーバーラップしなかった。８７の癌細胞株および１８の腫瘍から単離されたＲＮＡサンプルの分析は、複数の癌における高いレベル〜中程度のレベルのＣＡ９およびＣＡ１２の発現を示した。免疫組織化学は、種々の正常な組織および複数の共通の上皮腫瘍型におけるこれらの酵素の高〜中程度の発現を示した。この免疫染色は、大部分が、この細胞表面の膜上に見出された。両方の遺伝子の発現は、腫瘍細胞および培養細胞において、低酸素条件下で著しく誘導された。従って、この細胞表面の膜貫通カルボニックアンヒドラーゼＣＡ  ＩＸおよびＣＡ  ＸＩＩは、多くの腫瘍において過剰発現され、これが、腫瘍の進行に必要とされ得る癌細胞に共通する特徴であることを示唆する。これらの酵素は、細胞外酸性ｐＨを維持することおよび癌細胞の増殖および転移を補助することによって、この腫瘍の微小環境に寄与し得る。さらに、低酸素、細胞外酸性化、およびヒト腫瘍におけるこれらの酵素の誘導または増強された発現の間に重要な因果の関係がある。Ｉｖａｎｏｆ，Ｓ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，２００１年５月；１５８（３）：９０５−１９．ＰＭＩＤ：１１２３８０３９を参照のこと。
【０８１５】
（パネル２Ｄの概要）：（Ａｇ１７５５）  この遺伝子は、このパネルにおいて、広範に発現され、卵巣癌において、最も高い発現（ＣＴ＝２７．９）を有する。この遺伝子はまた、一致した隣接腫瘍と比較した場合、正常な前立腺、胃、筋肉および腎臓において増加された発現を示す。反対に、一致した正常組織と比較して、子宮癌において発現が増加される。従って、この遺伝子の発現は、これらの癌の形態についての診断マーカーとして用いられ得る。さらに、この遺伝子産物の治療的阻害は、子宮癌の処置に有用である。
【０８１６】
（パネル３Ｄの概要）：（Ａｇ１７５５）  この遺伝子は、肺癌細胞株のクラスターにおいて中程度に発現され、肺癌細胞株ＮＣＩ−ＵＭＣ−１１において最も高い発現（ＣＴ＝２６．７）を有する。この発現のパターンは、パネル１．３Ｄ中に見出される結果を強め、いくつかの肺癌細胞株においても有意なレベルの発現が存在する。従って、この遺伝子の発現は、これらの肺癌細胞株とこのパネルの他のサンプルとの間を区別するために用いられ得る。
【０８１７】
（パネル４Ｄの概要）：（Ａｇ１７５５）  この遺伝子は、カルボニックアンヒドラーゼ関連タンパク質をコードし、そして未処理のＫＵ−８１２好塩基球において中程度のレベル（ＣＴ＝２９．３）で発現され、そしてＰＭＡ／イオノマイシンを用いて処理したＫＵ−８１２好塩基球においてより高レベル（ＣＴ＝２７．２）で発現される。これらの細胞は、種々の炎症性の肺の疾患および腸の疾患（例えば、喘息、クローン病、および潰瘍性結腸炎）に関与する炎症性細胞に関する適当なモデルである。この遺伝子産物の機能をブロックする低分子アンタゴニストは、喘息、クローン病、および潰瘍性結腸炎に罹患する患者の症状を軽減または取り除く治療薬として有用であり得る。
【０８１８】
（Ｐ．ＳＮＰ１４）
（ＣＧ５３０７２−０２：プロテインキナーゼ  ＳＮＦ１様）
遺伝子ＣＧ５３０７２−０２の発現は、プライマー−プローブセットＡｇ１５４２、Ａｇ２３６９、およびＡｇ１４８０（表ＰＡ、表ＰＢ、および表ＰＣ中に記載される）を用いて評価された。このＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果は、表ＰＤ、表ＰＥ、表ＰＦ、表ＰＧおよび表ＰＨ中に示される。
【０８１９】
【表ＰＡ】
2004534518.tif 000326
【０８２０】
【表ＰＢ】
2004534518.tif 000327
【０８２１】
【表ＰＣ】
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【０８２２】
【表ＰＤ】
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【０８２３】
【表ＰＥ】
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【０８２４】
【表ＰＦ】
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【０８２５】
【表ＰＧ】
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【０８２６】
【表ＰＨ】
2004534518.tif 000339
2004534518.tif 000340
2004534518.tif 000341
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０の概要）：（Ａｇ１５４２／Ａｇ２３６９）  ２つの異なるプローブおよびプライマーのセットを用いる２つの実験は、非常に一致する結果を生じ、アルツハイマー病を有する患者の後頭皮質において最も高い発現（ＣＴ＝２７〜２８）を有した。このパネルにおける発現プロファイルは、アルツハイマー病を有する患者の脳とコントロールの脳との間のこの遺伝子の発現の差異を全く示さないが、このパネルは、独立する群の患者における中程度のレベル〜高いレベルでのこの遺伝子の発現を、確認する。中枢神経系におけるこの遺伝子の有用性の議論に関して、パネル１．３Ｄを参照のこと。
【０８２７】
（パネル１．２の概要）：（Ａｇ１４８０）  この遺伝子（キナーゼホモログ）は、このパネルにおいて用いられるほとんどの細胞および組織において、低いレベル〜中程度のレベルで発現され、肺癌細胞株において最も高い発現（ＣＴ＝２３．２）を有する。この遍在する発現は、この遺伝子産物が、大多数の細胞型についての細胞の生存および増殖における、役割を果たすことを示唆する。さらに、正常な卵巣におけるこの遺伝子の発現（ＣＴ＝２４．１２）は、卵巣癌細胞株と比較してわずかに増加する。これは、この遺伝子の発現が、卵巣癌についての診断マーカーとして用いられ得ることを示唆する。
【０８２８】
代謝機能を有する組織の中で、この遺伝子は、副腎、成体の心臓および胎児の心臓、骨格筋、ならびに成体の肝臓および胎児の肝臓において、高度に発現される。この遺伝子はまた、膵臓、甲状腺、下垂体においても中程度に発現される。従って、このキナーゼは、代謝病（肥満および１型糖尿病および２型糖尿病を含む）の処置を標的とする低分子であり得る。
【０８２９】
中枢神経系を起源とする組織における広範な発現は、脳におけるこの遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における潜在的な有用性の議論に関しては、パネル１．３Ｄを参照のこと。
【０８３０】
（パネル１．３Ｄの概要）：（Ａｇ１５４２／２３６９）  ２つの異なるプローブおよびプライマーのセットを用いる２つの実験は、非常に良好に一致する結果を生じ、卵巣癌細胞株および腎臓癌細胞株において最も高い発現を有する。これらのパネル中の遍在する発現は、この遺伝子産物が、大多数の細胞型についての細胞の生存および増殖において、役割を果たすことを示唆する。さらに、正常な卵巣において、卵巣癌細胞株と比較してわずかに増加した発現（ＣＴ＝２４．１２）があった。これは、パネル１．２においても見出され、そしてこの遺伝子の発現が、卵巣癌についての診断マーカーとして用いられ得ることを示唆する。腎臓癌由来の細胞株における発現もまた、正常な組織と比較して増加し、従って、この遺伝子の発現はまた、腎臓癌の存在についての診断マーカーとしても用いられ得る。さらに、この遺伝子の発現および機能の治療的阻害は、これらの癌の処置のために用いられ得る。
【０８３１】
この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成体の心臓および胎児の心臓、成体の骨格筋および胎児の骨角筋、ならびに脂肪を含む広範な種々の代謝組織において、中程度に発現される。従って、このキナーゼは、代謝病（肥満および１型糖尿病、２型糖尿病を含む）の処置を標的とする低分子の薬剤であり得る。この遺伝子は、胎児の肝臓に対して成体の肝臓において表示的に発現され、そして成体の肝臓と胎児の肝臓との間を区別するために有用であり得る。
【０８３２】
この遺伝子は、セリン／トレオニンキナーゼと相同であり、そしてパネル１．２およびＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０において見出されるように、試験された全てのＣＮＳ領域において低いレベル〜中程度のレベルで発現される。セリン／トレオニンキナーゼは、抗うつ薬によって活性化される。従って、この遺伝子は、うつ病または双極性障害の処置を標的とする低分子薬剤であり得る。
【０８３３】
神経シグナル伝達系の分子成分および細胞成分における順応性、形成性変化が、抗うつ薬を用いる長期の処置の後に観察される気分および認識に対する効果と関連することは、最近、広く認めれている。タンパク質リン酸化は、ほとんどのシグナル伝達系について鍵となる工程を示し、このタンパク質リン酸化は、実質的に全ての細胞機能の調節に関連する。２つのセリン／トレオニンキナーゼ（Ｃａ２＋／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩおよびサイクリックＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ）は、抗うつ剤処置後の脳において活性化されることが示されている。キナーゼ活性の変化は、亜細胞コンパートメント（シナプス前末端および微小管）における選択されたタンパク質基質のリン酸化の変化よって反映され、次いで、この変化は、抗うつ薬を用いて観察されるシナプス伝達の調節に寄与し得る。プロテインキナーゼ活性化の分子的結果は、抗うつ薬により誘導される神経性機能のいくつかの変化を説明し、そして薬理学的介入の新規の可能なストラテジーを示唆し得る。Ｐｏｐｏｌｉ，Ｍ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，２００１年２月；８９（２）：１４９〜７０を参照のこと。
【０８３４】
（パネル２Ｄの概要）：（Ａｇ１５４２）
この遺伝子は、このパネル上で用いられる全ての癌組織および正常な組織において中程度のレベルで発現される。最も高い発現は、膀胱癌のサンプル（ＣＴ＝２５．７）において見出された。さらに、この遺伝子は、正常な隣接組織と比較した場合、膀胱癌および肝臓癌において過剰発現されることが明らかである。従って、この遺伝子の発現は、膀胱癌または肝臓癌の存在についてのマーカーとして用いられ得る。さらに、この遺伝子の発現または機能の治療的調節は、肝臓癌または膀胱癌の処置において効果的であり得る。一般的に、この遺伝子の遍在する発現は、この遺伝子によってコードされるタンパク質が、多くの型の細胞の生存および増殖のために必要とされることを示唆する。
【０８３５】
（パネル４Ｄの概要）：  ２つの異なるプローブおよびプライマーのセットを用いる２つの実験は、非常に良好に一致する結果を生じる。この遺伝子が、このパネル上のサンプルの中で遍在的に発現されることは、明らかであり、非活性（休止）（ｒｅｓｔｉｎｇ）条件下およびＩＬ−４、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、またはＩＦＮ−γによる刺激後の両方でのＮＣＩ−Ｈ２９２肺粘膜表皮細胞において最も高い発現（ＣＴ＝２５）を有する。これらの細胞は、肺の粘液分泌細胞についてのモデルを構成し、従ってこの遺伝子産物の活性は、これらの細胞の１つ以上の機能と関与し得る。従って、この遺伝子によってコードされるタンパク質の機能をブロックする低分子アンタゴニストは、喘息、アレルギー、および気腫に罹患している患者の症状を軽減または取り除くための治療薬として有効であり得る。
【０８３６】
（Ｑ．ＮＯＶ１２）
（４４１８３５４＿０＿９＿ｄａ１）：（ＳＥＣ６様）
遺伝子４４１８３５４＿０＿９＿ｄａ１の発現は、プライマー−プローブセットＡｇ２８０１、Ａｇ２８０２、Ａｇ１５６、Ａｇ８９２、およびＡｇ２８３３を用いて評価された（表ＱＡ、表ＱＢ、表ＱＣ、表ＱＤ、および表ＱＥ中に記載される）。ＲＴＱ−ＰＣＲ実行の結果は、表ＱＦ、表ＱＧ、表ＱＨ、表ＱＩ、表ＱＪおよび表ＱＫ中に示される。
【０８３７】
【表ＱＡ】
2004534518.tif 000342
【０８３８】
【表ＱＢ】
2004534518.tif 000343
【０８３９】
【表ＱＣ】
2004534518.tif 000344
【０８４０】
【表ＱＤ】
2004534518.tif 000345
【０８４１】
【表ＱＥ】
2004534518.tif 000346
【０８４２】
【表ＱＦ】
2004534518.tif 000347
2004534518.tif 000348
【０８４３】
【表ＱＧ】
2004534518.tif 000349
2004534518.tif 000350
【０８４４】
【表ＱＨ】
2004534518.tif 000351
2004534518.tif 000352
2004534518.tif 000353
【０８４５】
【表ＱＩ】
2004534518.tif 000354
2004534518.tif 000355
2004534518.tif 000356
【０８４６】
【表ＱＪ】
2004534518.tif 000357
2004534518.tif 000358
2004534518.tif 000359
2004534518.tif 000360
2004534518.tif 000361
【０８４７】
【表ＱＫ】
2004534518.tif 000362
2004534518.tif 000363
2004534518.tif 000364
2004534518.tif 000365
（ＣＮＳ＿神経変性ｖ１．０の概要）：（Ａｇ２８０１／Ａｇ２８０２）  同じプローブおよびプライマーのセットを用いた２つの実行は、首尾一貫した結果を生じ、アルツハイマー病を有する患者の側頭皮質において、両方の実行における最大の発現（ＣＴ＝２６〜２９）を有する。この発現プロファイルはアルツハイマー病患者の死後脳とコントロールの患者の死後脳との間でのこの遺伝子の発現の違いは示さないが、このパネルは、独立した群の患者における脳において、中程度のレベル〜高いレベルでのこの遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における有用性の議論に関しては、パネル１．３Ｄを参照のこと。
【０８４８】
プローブおよびプライマーのセットＡｇ２８３３を用いる第３の実験からのデータが、このパネル中の全てのサンプルにおいて低い／検出不可能な発現（ＣＴ＞３５）を示すことに注意すること。
【０８４９】
（パネル１の概要）：（Ａｇ１５６）  この遺伝子は、このパネル上の全ての組織サンプルにおいて中程度のレベル〜高いレベルで、遍在的に発現され、乳癌細胞株ＭＣＦ−７において最も高い発現を有する（ＣＴ＝２４．５）。この広範な発現は、この遺伝子産物が、ほとんど全ての細胞型の生存および増殖のために必要とされ得る。
【０８５０】
この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、心臓、骨格筋、ならびに成体および胎児の肝臓を含む種々の代謝組織において高度に発現され得る。この発現プロファイルは、この遺伝子産物が、代謝病（肥満ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む）の病源論、診断、および／または処置のために重要であり得る。
【０８５１】
この遺伝子はまた、中枢神経系を起源とする組織の中で、高いレベルで広範に発現される。中枢神経系におけるこの遺伝子の有用性に関して、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０８５２】
（パネル１．２の概要）：Ａｇ８９２は、このパネル中のほとんど全ての組織において、高いレベルで、遍在的に発現され骨格筋で最も高い発現（ＣＴ＝２２．９）を有する。この広範な発現は、この遺伝子の発現が、ほとんど全ての細胞型の生存および増殖のために必要とされ得ることを示唆する。この結果は、パネル１およびパネル１．３Ｄ中に見出される発現によって強化される。
【０８５３】
この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、心臓、骨格筋、ならびに成体および胎児の肝臓を含む種々の代謝組織において、高度に発現される（ＣＴ値＝２３〜２６）。従って、この遺伝子産物は、肥満ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む代謝病の病源論、診断、および／または処置のために重要であり得る。
【０８５４】
この遺伝子はまた、中枢神経系を起源とする組織の中でも高度なレベルで、広範に発現される。中枢神経系におけるこの遺伝子の有用性に関して、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０８５５】
（パネル１．３Ｄの概要）：（Ａｇ２８０１／２８０２／２８３３）  ３つの異なるプローブおよびプライマーのセットを用いる３つの実験は、非常に一致する結果を生じ、大脳皮質および胎児の骨格筋において最も高い発現（ＣＴ＝２６．５〜２８．５）を有する。この遺伝子は、膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成体および胎児の心臓、成体および胎児の骨格筋、成体および胎児の肝臓ならびに脂肪を含む種々の代謝組織において、高度に発現される。代謝機能を有する組織における広範な発現は、この遺伝子産物が、肥満ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む代謝病の病源論、診断、および／または処置のために重要であり得ることを示唆する。
【０８５６】
この遺伝子は、ＳＥＣ６のホモログであり、そして試験された全てのＣＮＳ領域において、中程度のレベル〜高いレベルで発現される。ＳＥＣ６は、シナプス形成において、役割を果たし、増加されたシナプス新生（ｓｙｎａｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）が所望される任意の臨床的状態（頭部外傷、発作、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびハンティングトン病、脊髄小脳性運動失調、または大脳虚血症）を標的とする薬剤を作製する。従って、増大レベルのこのタンパク質は、ＣＮＳ再生の能力を増強し得る。
【０８５７】
Ｓｅｃ６（哺乳動物の脳のエキソシスト（ｅｘｏｃｙｓｔ）複合体の必須成分）は、シナプス形成（ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）およびシナプス形成（ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ）において機能すると考えられている。神経発達の間、このＳｅｃ６遺伝子の発現は、軸索の成長およびシナプス新生と時間的に関連する。マウスＳｅｃ６遺伝子の５’非翻訳領域が、１５６０−ｂｐのイントロンによって分けられている２つのエキソンによってコードされることが、最近見出された。プライマー伸長分析は、Ｓｅｃ６遺伝子の転写が、独自の部位から開始されることを実証した。このＳｅｃ６プロモーターは、ＣｐＧの島中に包理され、そして標準のＴＡＴＡボックスまたはＣＡＡＴボックスを欠失する。この５’−隣接領域および第１のイントロンの配列分析は、転写因子（ＡＰ−１、ＡＰ−２、ＡＰ−４、ＡＴＦ、Ｃ／ＥＢＰβ、ＧＡＴＡ−１、Ｏｃｔ１、ＳＰ１、ＳＴＡＴ、およびＮＲＳＦ）のための多数の結合部位の存在を示す。Ｓｅｃ６−ルシフェラーゼ融合遺伝子を用いるトランスフェクション実験は、５’−隣接配列が、神経細胞において強力なプロモーターとして機能するが、非神経細胞においてはそのように機能しないことを示す。欠損分析は、ヌクレオチド位置−１３９と＋５３との間のコアプロモーターの存在を示し、そして５’−隣接領域および第１のイントロン配列内の２つのエンハンサーエレメントおよび４つのサイレンサーエレメントを明らかにする。これらの結果は、このＳｅｃ６遺伝子の神経性発現が、相対的に特異的なコアプロモーターに関連し、そして複数の陽性調節エレメントと陰性調節エレメントとの間で相互作用することを示す。Ｃｈｉｎ，Ｌ．Ｓ．ら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｍｏｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ、２０００年１月２３日；７９（１２）：１２７〜３７を参照のこと。
【０８５８】
軸索増殖およびシナプス形成の間の小胞の送達および蓄積のための神経形質膜上のドメインを特定する分子は、未知である。ｓｅｃ６／８複合体（酵母および上皮細胞における小胞の標的部位を特定するタンパク質のセット）が、神経膜通行において役割を果たすことが見出された。この複合体は、シナプス新生を受けている発生中のラット脳の層において見出された。培養海馬ニューロンにおいて、このｓｅｃ６／８複合体は、膜添加が進行中の領域（増殖する軸索の先端部、糸状足、および増殖錐状体）において存在した。未熟な軸索において、このｓｅｃ６／８複合体はまた、形質膜の周期的ドメインを確認するためにも用いられ得る。シナプトタグミン（ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ）、シナプシン１、ｓｅｃ６、およびＦＭ１−４３（培養ニューロン中で標識する）の分配は、ｓｅｃ６／８複合体の形質膜局在化が、シナプス性マーカーの出現を生じ、そして成熟シナプスにおいてダウンレギュレートされたことを示唆した。従って、このｓｅｃ６／８複合体は、シナプス新生の間に、軸索成長ドメインおよび潜在的に活性な領域での小胞を標的化するための部位を特定するようである。Ｈａｚｕｋａ，Ｃ．Ｄ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、１９９９年２月１５日；１９（４）：１３２４〜３４を参照のこと。
【０８５９】
パネル２Ｄの概要：Ａｇ２８０１／２８０２／２８３３。３つの異なるプローブおよびプライマーセットを用いた３つの実験結果は、よく一致する。卵巣癌、膀胱癌および子宮癌、肝臓に転移した眼性黒色腫ならびに肝臓に転移した結腸癌由来のサンプルにおいて、正常な隣接組織と比較した場合、発現の増加が生じる。従って、この遺伝子の発現は、これらの癌についての診断マーカーとして使用され得る。
【０８６０】
パネル４Ｄの概要：Ａｇ２８０１／２８０２／２８３３。この遺伝子はＳｅｃ６様タンパク質をコードし、そしてこのパネル上の多くの免疫細胞型および組織において、高レベル（ＣＴ＝２５−３０）で発現される。この遺伝子によってコードされるＳｅｃ６様タンパク質の機能をブロックする低分子アンタゴニストは、自己免疫疾患および炎症性疾患（例えば、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデスおよび慢性関節リウマチ）を患う患者の症状を低減させるか、または取り除く治療剤として有用であり得る。
【０８６１】
（Ｒ．ＮＯＶ１１）
（ＣＧ５８６０６−０１／ＳＣ１１１７４３３７７＿Ａ：ステロイドデヒドロゲナーゼ）
遺伝子ＣＧ５８６０６−０１の発現を、表ＲＡおよびＲＢに記載されるプライマー−プローブセットＡｇ２２４８およびＡｇ２５４８を用いて評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験の結果を、表ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、ＲＨ、ＲＩおよびＲＪに示す。
【０８６２】
【表ＲＡ】
2004534518.tif 000366
【０８６３】
【表ＲＢ】
2004534518.tif 000367
【０８６４】
【表ＲＣ】
2004534518.tif 000368
2004534518.tif 000369
【０８６５】
【表ＲＤ】
2004534518.tif 000370
2004534518.tif 000371
【０８６６】
【表ＲＥ】
2004534518.tif 000372
2004534518.tif 000373
2004534518.tif 000374
2004534518.tif 000375
【０８６７】
【表ＲＦ】
2004534518.tif 000376
2004534518.tif 000377
2004534518.tif 000378
【０８６８】
【表ＲＧ】
2004534518.tif 000379
2004534518.tif 000380
【０８６９】
【表ＲＨ】
2004534518.tif 000381
2004534518.tif 000382
【０８７０】
【表ＲＩ】
2004534518.tif 000383
2004534518.tif 000384
【０８７１】
【表ＲＪ】
2004534518.tif 000385
2004534518.tif 000386
ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０の概要：Ａｇ２２４８／Ａｇ２５４８。２つの異なるプローブおよびプライマーセットを使用する２つの実験による結果は、良好に一致し、コントロールの患者の脳の後頭皮質および頭頂皮質において発現が最も高い（ＣＴ＝１７〜２９）。この遺伝子がアルツハイマー病において差次的に発現されることは明らかでないが、これらの結果は、独立した群の患者の脳において、この遺伝子の中〜高レベルの発現を確認する。中枢神経系における有用性の議論については、パネル１．３ｄを参照のこと。
【０８７２】
パネル１．３Ｄの概要：Ａｇ２２４８／Ａｇ２５４８。２つの異なるプローブおよびプライマーセットを使用する２つの実験は、この遺伝子の広範な発現を示し、脳の領域において発現が最も高い（ＣＴ＝２８〜２９）。
【０８７３】
この遺伝子は、ステロイドデヒドロゲナーゼと相同なタンパク質をコードする。ステロイド処置は、多くの臨床状態（アルツハイマー病（エストロゲン）、閉経に関連する症状（エストロゲン）、多発性硬化症（グルココルチコイド）および脊髄傷害（メチルプレドニゾロン）を含む）において使用される。この遺伝子産物のアンタゴニストを用いる処置、またはこの遺伝子産物のレベルの低減を伴う処置は、ステロイドの分解を遅延させ、そして治療効果を与えるのに必要な量をより低下させ、従って、周囲の副作用を減少させる。
【０８７４】
この遺伝子は、種々の代謝性組織（膵臓、副腎、甲状腺、下垂体、成体および胎児の心臓、成体および胎児の骨格筋、胎児の肝臓、ならびに脂肪を含む）において中程度に発現される。従って、この遺伝子産物は、代謝性疾患（肥満ならびに１型糖尿病および２型糖尿病を含む）の処置のための低分子薬物標的であり得る。
【０８７５】
このパネルにおけるこの遺伝子の広範な発現はまた、この遺伝子によってコードされるタンパク質が、主要な細胞型の細胞の生存および増殖に役割を果たすことを示唆する。さらに、肺癌細胞株ＳＨＰ−７７において有意なレベルの発現が生じる。従って、この遺伝子の発現は、肺癌のいくつかの形態のための診断マーカーとして使用される可能性がある。この遺伝子産物の調節はまた、肺癌の処置における役割も担い得る。
【０８７６】
急性頸髄傷害を有する患者の処置において、高用量のメチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム（ＭＰＳＳ）とプラシーボとを比較する、予期的な、無作為化した、二重盲検研究は、傷害の８時間以内に投与される場合の、急性頸髄傷害を有する患者における高用量ＭＰＳＳの合併症を評価するために、最近、行われた。以前、ＭＰＳＳを用いた高用量治療は、急性頸髄傷害を有する患者において、運動機能の回復を改善することが証明されている。最近、４６人の患者（男性４２人および女性４人）（平均年齢、６０．６歳；範囲１８〜８４歳）を研究に含めた（ＭＰＳＳ群に２３人およびプラシーボ群に２３人）。彼らを、頸椎の脊髄傷害のための手術をせずに処置し、そして８時間以内に診断し、かつ処置を開始した場合に、臨床試験に登録した。ＭＰＳＳを用いる高用量治療の合併症を、研究期間を通して、そして傷害後２ヶ月まで、プラシーボ処置と比較した。ＭＰＳＳ群は１３人の患者（５６．５％）が合併症を有したが、プラシーボ群は８人（３４．８％）が有した。この２群間の差異は、統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．１３９）。ＭＰＳＳに伴う肺の合併症が８例（３４．８％）およびプラシーボでは１例（４．３４％）が存在した（ｐ＝０．００９）。ＭＰＳＳに伴う胃腸の合併症が４例（１７．４％）存在し、そしてプラシーボには存在しなかった（ｐ＝０．０３６）。肺の合併症は、６０歳よりも高齢の患者において、より優勢であった（ｐ＝０．０２９）。このデータは、頸髄傷害を有する高齢の患者が、ＭＰＳＳを用いた高用量治療後に、肺の副作用を有し得（Ｐ＝０．０２９）、従って、特別な治療を受けるに値する可能性がより高いことを示唆する。Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．ら、Ｓｐｉｎｅ、２００１．Ｆｅｂ  １５；２６（４）：４２６〜３０を参照のこと。
【０８７７】
米国内で、５０歳以上の生存する女性の数は約５千万人に見積もられた。これらの女性の多くは、おそらく、閉経後のホルモン置換の適格者であり、これは、子宮のない女性におけるエストロゲン置換療法（ＥＲＴ）、またはより頻繁には、子宮を有する女性におけるエストロゲン／プロゲスチンの併用治療（ＨＲＴ）のいずれかからなり得る。Ｈｏｌｉｎｋａ、Ｃ．Ｆ．、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、２００１  Ｓｅｐ；９４３：８９〜１０８を参照のこと。エストロゲン単独またはプロゲスチンを加えたホルモン置換療法は、更年期の症状および内因性エストロゲンレベルの枯渇に関連する身体的変化を軽減する。エストロゲン置換はまた、骨粗鬆症の予防において明らかに有益であることが実証されている。プロゲステロンの添加を伴うホルモン置換療法は、脊髄骨密度を維持し、閉経後の股関節骨折を防ぎ、そして治療が６０歳を超えて開始された場合でさえ、これらの利益を提供する。より最近、さらなる利益が出現した。現在のエストロゲンおよびホルモン置換療法の使用者は、結腸直腸がんの危険が３４％減少し、アルツハイマー病の危険が２０〜６０％減少する。最近まで、一連の証拠は、エストロゲン単独でのホルモン置換療法が健康な患者における心臓血管疾患の危険性を４０〜５０％減少させることを示した（３つの進行中の試験の知見がこの結論を変化させるか否かが、この最終結果の有用性を未解決にしている）。エストロゲンおよびホルモン置換療法の多くの利益は、５年以上の使用に伴う、乳癌の危険性の診断におけるわずかな増加と比較検討されなければならないが、この危険性の増加は、治療の中断後に消失する。全面的に、エストロゲンおよびホルモン置換療法は、生活の質を向上させ、そしてほとんどの閉経後の女性の推定寿命を長くする。Ｂｕｒｋｍａｎ，Ｒ．Ｔ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ，２００１  Ａｕｇ；１８５（２  Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ１３〜２３を参照のこと。
【０８７８】
（炎症性の）血液脳関門（ＢＢＢ）に対する、グルココルチコイドおよび１型インターフェロン（ＩＦＮ）（多発性硬化症（ＭＳ）に対する治療剤として同時に使用される）の薬理学的効果を、インビボで調査した。両方の薬物は、ＢＢＢの透過性を相加的に減少させたが、リポ多糖類（ＬＰＳ）によって誘導されたＢＢＢの透過性の増進を防げず、炎症促進性刺激として働く。それゆえ、ＭＳに対するグルココルチコイドおよびＩＦＮ治療の臨床的に有益な効果は、ＢＢＢのレベルで直接的作用を通して媒介されないようである。しかし、最も顕著に、１型ＩＦＮ（αおよびβ）での前処置は、グルココルチコイドの効果を２桁増強した。これは、グルココルチコイドに対して高められた感受性に関する機序により、１型ＩＦＮがＭＳに関連する機能不全のＴヘルパー１（Ｔｈ１）／Ｔｈ２バランスを改善させ得るという仮説を本発明者らに導いた。Ｇａｉｌｌａｒｄ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，２００１  Ｊｕｌ  ２０；１２（１０）：２１８９〜９３を参照のこと。
【０８７９】
パネル２Ｄの概要：Ａｇ２２４８／Ａｇ２５４８
この遺伝子の発現は、２つの独立した実験間の良好に一致を示す。高レベルの発現は、胸部癌サンプルにおいて認められた（ＣＴ＝２７〜２９）。さらに、この遺伝子は、これらの患者に由来する正常な周囲組織と比較すると、卵巣癌、胃癌、胸部癌、子宮癌、肺癌および結腸癌において、過剰な発現が認められた。それゆえ、この遺伝子の発現は、これらの癌の存在に対する診断用マーカーとして使用され得る。さらに、この遺伝子産物活性の治療的阻害が、これらの癌の治療において効果的であり得る。
【０８８０】
パネル３Ｄの概要：Ａｇ２５４８。この遺伝子は、このパネルにおいて使用される大部分の細胞および組織において、低〜中程度で発現され、小細胞肺癌細胞株ＤＭＳ−７９において最も高く発現する（ＣＴ＝２７．７９）。この遍在性の発現は、この遺伝子産物が、舌の扁平上皮細胞癌由来の細胞株を除く大部分の細胞型に対して、細胞の生存および増殖に役割を果たすことを示唆する。
【０８８１】
パネル４Ｄの概要：Ａｇ２２４８。この遺伝子は、ステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードし、そして多くの免疫細胞型および組織において中程度レベル（ＣＴ＝２８〜３２）で発現される。この遺伝子によってコードされるステロイドデヒドロゲナーゼ様タンパク質の機能をブロックする低分子アンタゴニストは、自己免疫疾患および炎症性疾患（例えば、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデスまたは慢性関節リウマチ）を患う患者の症状を低減させるか、または取り除く治療剤として有用であり得る。
【０８８２】
パネル５島（ｉｓｌｅｔ）の概要：Ａｇ２２４８。この新規のステロイドデヒドロゲナーゼ様遺伝子の発現は、肝臓ＨｅｐＧ２細胞株において最も高い（ＣＴ＝３２．１）。より低いが、なお有意なレベルの発現が、糖尿病患者由来の胎盤サンプル、子宮平滑筋、脂肪サンプル、分化した間葉系幹細胞、腎臓、および骨格筋のいくつかにおいて認められた。肝細胞および胎盤における発現は、この新規のステロイドデヒドロゲナーゼの役割が、他のステロイドデヒドロゲナーゼ（ステロイドおよび胆汁酸の代謝に関与する）の役割と類似し得ることを示唆する。この遺伝子の非常に低い発現はまた、ヒトランゲルハンス島サンプルにおいても認められる。従って、この遺伝子産物に対する低分子治療剤は、この遺伝子の発現が調節不全である疾患において、効果的であるかもしれない。
【０８８３】
パネル５Ｄの概要：Ａｇ２２４８。この遺伝子の発現は、全般的にパネル５Ｉにおけるこの遺伝子発現に類似するが、各組織における相対存在量は異なっている。このパネルは、糖尿病患者由来の胎盤において、このステロイドデヒドロゲナーゼ様遺伝子の最も高い発現を示す（ＣＴ＝３２．２）（他の胎盤サンプルでは、より低発現である）。この遺伝子の相対的な発現はまた、糖尿病患者由来の骨格筋細胞および肝臓ＨｅｐＧ２細胞において高い。低いが、有意なレベルの発現がまた、脂肪サンプルのいくつか、ならびに分化した間葉系幹細胞、腎臓および子宮において認められる。肝細胞および胎盤における発現は、この新規のステロイドデヒドロゲナーゼの役割が、他のステロイドデヒドロゲナーゼ（ステロイドおよび胆汁酸の代謝に関与する）の役割と類似し得ることを示唆する。この遺伝子産物に対する低分子治療剤は、この遺伝子の発現が調節不全である疾患において、効果的であるかもしれない。
【０８８４】
パネル  ＣＮＳ＿１の概要：Ａｇ２２４８。このパネルは、脳におけるこの遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における潜在的な有用性の議論については、パネル１．３Ｄを参照のこと。
【０８８５】
（実施例３  ＮＯＶＸクローンのＳＮＰ分析）
ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇＴＭ技術：ｃＤＮＡを、異なるドナーに由来する複数の組織型、正常および疾患状態、生理学的状態、ならびに発生状態を示す種々のヒトサンプルから導いた。サンプルを、組織全体、細胞株、初代細胞、または組織培養した初代細胞および細胞株として得た。細胞および細胞株を、遺伝子発現を調節する生物学的または化学的な試薬（例えば、成長因子、ケモカイン、ステロイド）で処理していてもよい。次いで、このように誘導したｃＤＮＡを、ＣｕｒａＧｅｎに所有権のあるＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ技術を使用して配列決定した。配列トレースを手作業によって評価し、そして適切である場合には修正を施した。全てのサンプルに由来するｃＤＮＡ配列を、それ自体および公のＥＳＴを用いて、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリのＣｕｒａＧｅｎのヒトＳｅｑＣａｌｌｉｎｇデータベースを作成するためのバイオインフォーマティックプログラムを使用してまとめた。それぞれの集合には、１つ以上のヒトのサンプルに由来する１つ以上の重複しているｃＤＮＡ配列を含んだ。集合の別の成分との同一性の程度が５０ｂｐにわたって少なくとも９５％である場合には、集合の構成要素としてフラグメントおよびＥＳＴを含んだ。それぞれの集合は、遺伝子、ならびに／あるいはスプライシング形態および／または一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）のような改変体、およびそれらの組合せのような改変体を示し得る。
【０８８６】
改変体配列が、本出願に含まれる。改変体配列は、一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を含み得る。ＳＮＰは、いくつかの例においては、ＳＮＰを含有しているヌクレオチド配列がｃＤＮＡに起源することを示す、「ｃＳＮＰ」と呼ばれる。ＳＮＰは、いくつかの様式で生じ得る。例えば、ＳＮＰは、多型部位でのあるヌクレオチドの別のヌクレオチドへの置換に起因し得る。このような置換は、トランジションまたはトランスバージョンのいずれかであり得る。ＳＮＰはまた、参照対立遺伝子と比較して、ヌクレオチドの欠失またはヌクレオチドの挿入によっても生じ得る。この場合には、多型の部位は、１つの対立遺伝子が、別の対立遺伝子中の特定のヌクレオチドに関してギャップを保有している部位である。遺伝子中に存在しているＳＮＰは、ＳＮＰの位置で遺伝子によってコードされるアミノ酸の変化を生じ得る。しかし、ＳＮＰを含むコドンが遺伝子コードの縮重の結果として同じアミノ酸をコードする場合には、遺伝子内ＳＮＰはまた、サイレントでもあり得る。遺伝子の領域の外側に存在しているＳＮＰ、または遺伝子内のイントロンに存在しているＳＮＰは、タンパク質のアミノ酸配列には全く変化を生じないが、発現パターンの調節の変更（例えば、一過性発現、生理学的応答の調節、細胞型による発現調節、発現の強度、転写されたメッセージの安定性における変更）を生じ得る。
【０８８７】
新規のＳＮＰの同定方法：ＳＮＰは、ＣｕｒａＧｅｎに所有権があるＳＮＰＴｏｏｌアルゴリズムを使用して配列の集合を分析することによって同定される。ＳＮＰＴｏｏｌは、以下の基準で集合の中の変化を同定する：ＳＮＰは、アラインメントの両方の末端上の１０塩基対は分析しない；ウィンドウの大きさ（視野（ビュー）（ｖｉｅｗ）の中の塩基数）は１０である；ウィンドウ内の許容されるミスマッチの数は２である；最少のＳＮＰ塩基量（ＰＨＲＥＤスコア）は２３である；ＳＮＰをスコアするための変化の最少の数は２／（集合の位置）である。ＳＮＰＴｏｏｌは、集合を分析し、そしてＳＮＰの位置、集合中の関連する個々の改変体配列の部位、その所定の位置での集合の深さ、推定される集合の対立遺伝子の頻度、およびＳＮＰ配列のバリエーションを示す。次いで、配列トレースが選択され、そして手作業による確認のためにビュー内に入れられる。コンセンサス集合配列は、ＳＮＰの配列のバリエーションによって生じる可能性のあるアミノ酸変化を同定するために、改変体配列の変化のとともにＣｕｒａＴｏｏｌにインポートされる。次いで、広範囲のＳＮＰデータ分析が、ＳＮＰＣａｌｌｉｎｇデータベースに送られる。
【０８８８】
新規のＳＮＰの確認方法：ＳＮＰを、Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）として公知の検証方法を使用して確認した。Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇのための詳細なプロトコルは、Ａｌｄｅｒｂｏｒｎら、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｂｙ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  Ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（２０００）．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１０、８月８日発行、１２４９−１２６５に見出される。簡潔には、Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇは、遺伝子型分類の実時間プライマーエクステンションプロセスである。このプロトコルは、ゲノムＤＮＡサンプルに由来する二本鎖のビオチン化ＰＣＲ産物を使用し、そしてそれらをストレプトアビジンビーズに結合させる。次いで、これらのビーズは、一本鎖のＤＮＡを生じるように変性させられる。ＳＮＰは、ＤＮＡ鎖の伸張の際にそれぞれのｄＮＴＰから放出されるピロリン酸（ＰＰｉ）の間接的な生体照度アッセイ（ｂｉｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）に基づく技術を利用して特徴付けられる。Ｋｌｅｎｏｗポリメラーゼによって媒介される塩基の取り込み後、ＰＰｉは放出され、そしてＡＴＰスルフリラーゼ（これは、ＡＴＰの形成を生じる）についての基質として、アデノシン５’−ホスホスルフェート（ＡＰＳ）とともに使用される。続いて、ＡＴＰは、ルシフェラーゼの作用によって、そのオキシ誘導体へのルシフェリンの転換を達成する。その後の発光は、約４個の塩基までは付加された塩基の数に比例する。この方法のプロセッシビティーを可能にするために、過剰のｄＮＴＰはアピラーゼによって分解させられる。アピラーゼもまた、最初の反応混合物中に存在し、その結果、配列決定の間にのみｄＮＴＰが鋳型に付加される。このプロセスは、完全に自動化されており、そして９６ウェル形式に適応させられている。これによって、大きなＳＮＰパネルの迅速なスクリーニングが可能である。新規の一ヌクレオチド多型による改変体のＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、報告する。改変体を個別に報告するが、全ての任意の組合せまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。さらに、改変体の塩基の位置および改変体のアミノ酸残基には、下線を付ける。
【０８８９】
（結果）
改変体を個別に報告するが、全てのあらゆる組合せまたは改変体の選択したサブセットもまた、本発明の企図されるＮＯＶＸ実施形態として含む。
【０８９０】
（ＮＯＶ５）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ＮＯＶ５  ＧＳＡＣ００２５０９＿Ａ＿のＳｈａｒｐ−１様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、この改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。改変体の塩基の位置および改変体のアミノ酸残基には下線を付す。要約すると、報告した５つの改変体が存在する。改変体１３３７５９３４は、ヌクレオチド配列の１１５８ｂｐでのＣからＴのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列に変化を生じず（サイレント）、改変体１３３７５９３５は、ヌクレオチド配列の１１８９ｂｐでのＧからＡのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸３９７でＡｌａからＴｈｒへの変化を生じ、改変体１３３７５９３６は、ヌクレオチド配列の１２４２ｂｐでのＴからＣのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列に変化を生じず（サイレント）、改変体１３３７５９３７は、ヌクレオチド配列の１２６４ｂｐでのＡからＧのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸４２２でＴｈｒからＡｌａへの変化を生じ、そして改変体１３３７５９３８は、ヌクレオチド配列の１３０６ｂｐでのＡからＧのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸４３６でＳｅｒからＧｌｙへの変化を生じる。
【０８９１】
（ＮＯＶ６）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ＧＳＡＣ０２３１５８＿１５＿Ａ＿のＳｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎＸ様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、１つの改変体が存在する。すなわち、改変体１３３７５９３３は、ヌクレオチド配列の１５６２ｂｐでのＧからＡのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸４９５でＴｒｐから終止シグナルへの変化を生じる。
【０８９２】
（ＮＯＶ７）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ＧＳＡＣ０５５７１５＿ＡのＩＩ型サイトケラチン様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、１つの改変体が存在する。すなわち、改変体１３３７５９３２は、ヌクレオチド配列の２３ｂｐでのＡからＣのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸８でＬｙｓからＴｈｒへの変化を生じる。
【０８９３】
（ＮＯＶ８）
以下のアミノ酸はＮＯＶ８ａとＮＯＶ８ｂとの間で異なる。改変体の残基は、構造的に可変性であり、そしておそらく機能的にも可変性であることが意図される：
【０８９４】
【数２２】
2004534518.tif 000387
（ＮＯＶ９）
ＧＳＡＣ０４６１３０＿Ａのカリウムチャネル調節サブユニット様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。１つの改変体１３３７４１８８の位置は、ヌクレオチド配列の１４１６ｂｐでのＴからＣのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列に変化を生じない（サイレント）。
【０８９５】
（ＮＯＶ１１）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ＳＣ１１１７４３３７７＿Ａのステロイドデヒドロゲナーゼ様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。１つの改変体１３３７５８１２の位置は、ヌクレオチド配列の２９３ｂｐでのＡからＧのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸７９でＩｌｅからＶａｌへの変化を生じる。
【０８９６】
（ＮＯＶ１２）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号４４１８３５４＿０＿９＿ｄａ１のＳＥＣ６様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、８つの改変体が存在する。改変体１３３７５９５４は、ヌクレオチド配列の９２ｂｐでのＣからＴのＳＮＰであり、このＳＮＰはアミノ酸コード領域にないので、このタンパク質配列には変化は生じない。改変体１３３７４４６０は、ヌクレオチド配列の３３４ｂｐでのＡからＧのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸７７でＧｌｎからＡｒｇへの変化を生じる。改変体１３３７５９５５は、ヌクレオチド配列の４１２ｂｐでのＴからＣのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸１０３でＶａｌからＡｌａへの変化を生じる。改変体１３３７５９５６は、ヌクレオチド配列の５５１ｂｐでのＧからＡのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列に変化を生じない（サイレント）。改変体１３３７５９５７は、ヌクレオチド配列の１１２６ｂｐでのＣからＴのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸３４１でＴｈｒからＭｅｔへの変化を生じる。改変体ｃ１１０．３９０６は、ヌクレオチド配列の２４７３ｂｐでのＴからＣのＳＮＰであり、このＳＮＰはアミノ酸コード領域にないので、このタンパク質配列には変化は生じない。改変体ｃ１１０．３９０５は、ヌクレオチド配列の２５５７ｂｐの後のヌクレオチドＧの挿入であり、このＳＮＰはアミノ酸コード領域にないので、このタンパク質配列には変化は生じない。改変体ｃ１１０．３９０４は、ヌクレオチド配列の２５５９ｂｐの後のヌクレオチドＧの挿入であり、このＳＮＰはアミノ酸コード領域にないので、このタンパク質配列には変化は生じない。
【０８９７】
（ＮＯＶ１４）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号９５０７３８９２＿ｄａ１（ＣＧ５３０７２−０２とも称される）のプロテインキナーゼＳＮＦ１ＬＫ様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、２つの改変体が存在する。挿入集合１７５０６９７９６および挿入集合１７５０６９８０３は、両方とも、標的配列ＣＧ５３０７２−０２の残基１と２０８との間のオープンリーディングフレームをコードすることが発見された。両方とも、ＣＧ５３０７２−０２配列とは１つのヌクレオチド位置および１つのアミノ酸位置で異なる。改変体１７５０６９７９６は、ヌクレオチド配列の２６３ｂｐでのＴからＣのＳＮＰであり、これは、ＣＧ５３０７２−０２タンパク質配列のアミノ酸８６でＩｌｅからＴｈｒへの変化を生じる。改変体１７５０６９８０３は、ヌクレオチド配列の４３６ｂｐでのＣからＴのＳＮＰであり、これは、ＣＧ５３０７２−０２タンパク質配列のアミノ酸１４４でＨｉｓからＴｙｒへの変化を生じる。ＣＧ５３０７２−０２とのアライメントを以下のＣｌｕｓｔａｌＷに提示する。異なるアミノ酸が白または灰色の背景を有すること、および欠失アミノ酸／挿入アミノ酸は、その位置をコードしない配列中の破線により検出され得ることに、注意されたい。
【０８９８】
【数２３】
2004534518.tif 000388
2004534518.tif 000389
2004534518.tif 000390
（ＮＯＶ１５）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ｂａ２９４ａ４＿２００００８０８のＣＤ３９Ｌ２様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、７つの改変体が存在する。改変体ｃ１１０．４０６３は、ヌクレオチド配列の２１８７ｂｐの後のヌクレオチドＣの挿入であり、改変体ｃ１１０．４０６２は、ヌクレオチド配列の２２１４ｂｐの後のヌクレオチドＧの挿入であり、改変体ｃ１１０．４０６１は、ヌクレオチド配列の２３４７ｂｐの後のヌクレオチドＣの挿入であり、改変体ｃ１１０．４０６０は、ヌクレオチド配列の２３７３ｂｐでのＴからＣへのＳＮＰであり、改変体ｃ１１０．４０５９は、ヌクレオチド配列の２４１４ｂｐの後のヌクレオチドＣの挿入であり、改変体ｃ１１０．４０５８は、ヌクレオチド配列の２５２９ｂｐの後のヌクレオチドＣの挿入であり、そして改変体ｃ１１０．４０５７は、ヌクレオチド配列の２６２１ｂｐの後のヌクレオチドＴの挿入である。全てについて、ＳＮＰはアミノ酸コード領域にないので、これらのタンパク質配列には変化は生じない。
【０８９９】
（ＮＯＶ１８）
ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．番号ＡＣ０７３０７９＿Ｃのカルシウムトランスポーター様遺伝子の、新規の一ヌクレオチド多型改変体についてのＤＮＡ配列およびタンパク質配列を、個別に報告するが、改変体の全ての任意の組み合わせまたは改変体の選択したサブセットもまた含む。要約すると、２つの改変体が存在する。改変体１３３７５９４８は、ヌクレオチド配列の３５７ｂｐでのＧからＡのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列に変化を生じない（サイレント）。改変体１３３７５９４９は、ヌクレオチド配列の４３６ｂｐでのＧからＡのＳＮＰであり、これは、タンパク質配列のアミノ酸１４６でＡｌａからＴｈｒへの変化を生じる。
【０９００】
（ＮＯＶ２０）
挿入集合２１４４５８６１６および挿入集合２１４４５８６６８は、両方とも、標的配列ＣＧ５６８７２−０３（ＧＡＢＡレセプター関連タンパク質様遺伝子）の残基１３と１１６との間のオープンリーディングフレームをコードすることが発見された。ＣＧ５６８７２−０３とのアライメントを以下のＣｌｕｓｔａｌＷに提示する。異なるアミノ酸が白または灰色の背景を有すること、および欠失アミノ酸／挿入アミノ酸は、その位置をコードしない配列中の破線により検出され得ることに、注意されたい。
【０９０１】
【数２４】
2004534518.tif 000391
2004534518.tif 000392
2004534518.tif 000393
（他の実施形態）
特定の実施形態が本明細書中で詳細に開示されているが、これは例示の目的のみのための例として行われており、そして添付される特許請求の範囲の範囲に関して限定するようには意図されない。詳細には、種々の置換、変更、および改変が、特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲を逸脱することなく本発明に対して行われ得ることが、本発明者らによって企図される。核酸の出発物質、目的のクローン、ライブラリーの型の選択は、本明細書中に記載されている実施形態の知見を考慮すると、当業者にとって慣用的な事項であると考えられる。他の局面、利点、および改変は、添付の特許請求の範囲内にあると考えられる。
【国際公開パンフレット】
2004534518.tif 000394
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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2004534518.tif 000815
【国際調査報告】
2004534518.tif 000816
2004534518.tif 000817
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