(57)【要約】本発明は、肥満細胞を枯渇させることができる化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患、より詳細には多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、強皮症、紅斑性狼瘡、皮膚筋炎、天疱瘡、多発筋炎、血管炎、ならびに移植片対宿主病からなる群より選択される疾患を治療する方法に関する。そのような化合物は、チロシンキナーゼ阻害剤、およびより詳細には非毒性の選択的で強力なc-kit阻害剤から選択されうる。好ましくは、この阻害剤は、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肥満細胞を枯渇させることができる化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法。
【請求項２】
チロシンキナーゼ阻害剤を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、請求項1に記載の自己免疫疾患を治療する方法。
【請求項３】
チロシンキナーゼ阻害剤が、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、請求項2記載の方法。
【請求項４】
c-kit阻害剤を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、請求項2に記載の自己免疫疾患を治療する方法。
【請求項５】
c-kit阻害剤が、非毒性で選択的かつ強力なc-kit阻害剤である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
阻害剤が、インドリノン、ピリミジン誘導体、ピロロピリミジン誘導体、キナゾリン誘導体、キノキサリン誘導体、ピラゾール誘導体、ビス単環式、二環式、または複素環式アリール化合物、ビニレン-アザインドール誘導体およびピリジル-キノロン誘導体、スチリル化合物、スチリル置換ピリジル化合物、セレオインドール、セレニド、三環式ポリヒドロキシル化合物、ならびにベンジルホスホン酸化合物からなる群より選択される、請求項5記載の方法。
【請求項７】
阻害剤が以下からなる群より選択される、請求項5記載の方法：
ピリミジン誘導体、より詳細にはN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体、
インドリノン誘導体、より詳細にはピロール置換インドリノン、
単環式、二環式アリール、およびヘテロアリール化合物、ならびに
キナゾリン誘導体。
【請求項８】
阻害剤が、以下の式IIを有するN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体からなる群より選択される、請求項5記載の方法：
2004536097.tif 000009
式中、R1、R2およびR3は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、または環状基もしくは複素環基、特にピリジル基から独立して選択され；
R4、R5、およびR6は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、特にメチル基から独立して選択され；
かつR7は、少なくとも一つの置換基を有するフェニル基であり、アミノ基、好ましくは以下の基のように、少なくとも一つの塩基性部位を有する：
2004536097.tif 000010
【請求項９】
阻害剤が、4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン-2-イルアミノ)フェニル]ベンズアミドである、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
c-kit阻害剤が、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、請求項4から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
c-kit阻害剤が活性化c-kitの阻害剤である、請求項4から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
阻害剤が構成的に活性化された変異体c-kitを阻害することができる、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
活性化c-kit阻害剤がSCF活性化c-kitを阻害することができる、請求項11記載の方法。
【請求項１４】
以下を含むスクリーニング法によって得ることができる、活性化c-kitの選択的で強力かつ非毒性の阻害剤である化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法：
a）成分（i）および成分（ii）が複合体を形成することができる条件下で、（i）活性化c-kitと、（ii）試験する少なくとも一つの化合物とを接触させる段階、
b）活性化c-kitを阻害する化合物を選択する段階、
c）IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、段階b）において同定された化合物のサブセットを試験して選択する段階。
【請求項１５】
スクリーニング法が、SCF活性化野生型c-kitを同様に阻害することができる変異体活性化c-kitの阻害剤である、段階b）において同定された化合物のサブセットを試験して選択することからなる段階をさらに含む、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
活性化c-kitが、段階a）のSCF活性化野生型c-kitである、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
推定の阻害剤が、段階a）において10μMより高い濃度で試験される、請求項14から16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
IL-3が、好ましくはIL-3依存的細胞の培養培地中に0.5 ng/mlから10 ng/ml、好ましくは1 ng/mlから5 ng/mlの濃度で存在する、請求項14から17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
IL-3依存的細胞が、肥満細胞、トランスフェクトした肥満細胞、BaF3およびIC-2からなる群より選択される、請求項18記載の方法。
【請求項２０】
成分（ii）が活性化c-kitを阻害する程度が、インビトロまたはインビボで測定される、請求項14から19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
1μM未満の濃度で野生型c-kitを阻害することができる化合物を試験して選択する段階からなる段階をさらに含む、請求項14から20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
試験がインビトロまたはインビボで行われる、請求項14または21に記載の方法。
【請求項２３】
活性化変異体c-kitおよび／または野生型c-kitの阻害が、免疫沈降およびウェスタンブロットのような標準的な生化学的技術を用いて測定される、請求項14から22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
c-kitリン酸化の量が測定される、請求項14から23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
同定および選択された化合物が、強力で選択的かつ非毒性の野生型c-kit阻害剤である、請求項14から24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
以下を含むスクリーニング法によって得ることができるc-kit阻害剤を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法：
a）永続的に活性化されたc-kitである変異体c-kit（例えば、トランスホスホリラーゼドメインにおいて）を発現する細胞を用いて、活性化c-kitを標的とする、それぞれがIC50＜10μMを有する候補化合物のサブセットを、細胞死の程度を測定することにより同定するために、複数の被験化合物を用いて増殖アッセイを行う段階、
b）c-kitを特異的に標的とする候補化合物のサブセットを同定するために、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞である、野生型c-kitを発現する細胞を用いて、段階（a）において同定された候補化合物のサブセットによって増殖アッセイを行う段階、
c）c-kitを発現する細胞を用いて、段階b）において同定された化合物のサブセットによって増殖アッセイを行い、それぞれがIC50＜10μMを有する、好ましくはIC50＜1μMを有する、野生型c-kitを標的とする候補化合物のサブセットを、細胞死の程度を測定することによって選択する段階。
【請求項２７】
細胞死の程度が、3Hチミジンの取り込み、トリパンブルー排除法、またはヨウ化プロピジウムによるフローサイトメトリーによって測定される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
ヒトにおける自己免疫疾患を予防および／または治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
多発性硬化症、乾癬、表皮下水疱形成障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、局所性および全身性強皮症、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、増殖性糸球体腎炎、活動性慢性肝炎、慢性疲労症候群、ならびに血管炎を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
腎臓、膵臓、肝臓、心臓、肺、および骨髄を含む、任意の臓器移植における移植片対宿主病または移植片拒絶を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
活動性慢性肝炎および慢性疲労症候群を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
紅斑性狼瘡を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
乾癬、ならびにアフタ性潰瘍、および尋常性天疱瘡、増殖性天疱瘡、落葉状天疱瘡、および紅斑性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および瘢痕状天疱瘡のようないくつかの水疱疾患を含む表皮下水疱形成障害を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
リウマチ性関節炎および多発関節炎を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
皮膚筋炎を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
潰瘍性大腸炎およびクローン病を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
多発性硬化症を治療するための、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
自己免疫疾患を治療する薬剤を製造するためのc-kit阻害剤の使用。
【請求項３９】
乾癬、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、局所性および全身性強皮症、皮膚筋炎、ならびに血管炎の治療のための、肥満細胞を枯渇させることができる化合物、好ましくはチロシンキナーゼ阻害剤、より詳細にはc-kit阻害剤を含む、局所投与に適した組成物。
【請求項４０】
多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、重症筋無力症、多発筋炎、移植片対宿主病、移植片拒絶、グレーブス病、アジソン病、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、自己免疫性甲状腺炎、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、増殖性糸球体腎炎、活動性慢性肝炎、慢性疲労症候群、ならびに血管炎の治療のための、肥満細胞を枯渇させることができる化合物、好ましくはチロシンキナーゼ阻害剤、より詳細にはc-kit阻害剤を含む、経口投与のために適した組成物。
【請求項４１】
自己免疫疾患を治療するための、肥満細胞を枯渇させることができる化合物、好ましくはチロシンキナーゼ阻害剤、より詳細にはc-kit阻害剤を含む、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、鞘内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、腸内、舌下、または直腸投与のために適した組成物。
【請求項４２】
チロシンキナーゼ阻害剤、より詳細には非毒性の選択的で強力なc-kit阻害剤のような、肥満細胞を枯渇させることができる少なくとも一つの化合物、および天疱瘡のような表皮下水疱形成障害を治療するための、同時に、個別に、または連続的に用いられる、好ましくはダプソン、アザチオプリン、エリスロマイシン、プロピオニルエリスロマイシン、ネオマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、およびメクロサイクリンから選択される、少なくとも一つの抗生物質を含む産物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肥満細胞を枯渇させることができる化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患、より詳細には多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、強皮症、紅斑性狼瘡、皮膚筋炎、天疱瘡、多発筋炎、血管炎、ならびに移植片対宿主病からなる群より選択される疾患を治療する方法に関する。そのような化合物は、チロシンキナーゼ阻害剤、およびより詳細には非毒性の選択的で強力なc-kit阻害剤から選択することができる。好ましくは、この阻害剤は、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患は、免疫系の細胞（リンパ球、マクロファージ）が「自己」に対して感作されると生じる。リンパ球THおよびCTL、Bリンパ球、ならびにマクロファージは、通常この免疫系の下で制御されている。しかし、なお説明されていない誘因のために、体内の組織に対する免疫系の間違った指示が起こる可能性がある。言い換えれば、自己免疫障害は正常な制御プロセスが破壊された場合に起こる。
【０００３】
リンパ球が「自己」を模倣する抗原を何らかの時点で認識して、免疫系の異なる成分の活性化のカスケードが起こり、最終的に組織の破壊に至るという仮説が立てられている。遺伝的素因もまた自己免疫障害に関与すると仮定されている。自己免疫疾患は結合組織に影響しうるが、神経、筋肉、内分泌系、および消化管にも影響しうる。
【０００４】
全米自己免疫関連疾患協会（AARDA）によれば、自己免疫疾患は、「統合された一つの障害群」として見なさなければならない。実際に、1人の患者に一つの自己免疫疾患が存在すれば、第二または第三の自己免疫疾患が同じ個体または同じ家族の他の構成員に起こる可能性があることを意味する。
【０００５】
AARDAによって示唆されているように、自己免疫疾患の有効な治療には、これらの疾患を引き起こすT細胞を同定して停止させる必要がある。しかし現在のところ、そのような治癒はなおも実現しにくい。
【０００６】
一般的に、これらの疾患は、免疫応答を低下させるために、コルチコステロイドおよび免疫抑制剤（シクロホスファミドまたはアザチオプリンを含む）によって治療する。さらに、米国特許第6,248,368号は、ビタミンB6に関連した自己免疫疾患を治療するためにマグネシウムを使用することを記述している。精製した抗イディオタイプ抗体を含む組成物も同様に、米国特許第6,231,856号において提唱されており、自己免疫疾患を治療するための、TNFαをコードする核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物は、米国特許第6,228,642号において言及されている。
【０００７】
しかし、上記の現在利用できる治療のいずれも、自己免疫疾患を治療するために有効かつ安全ではない。さらに、免疫抑制剤を長期間使用すると、有害な副作用および病的状態が起こる。その上、自己免疫関連障害は、生涯の看護と治療を必要とし、これは費用がかかり、しばしば患者の生活様式の破綻に至る。
【０００８】
したがって問題は、これらの疾患に罹患した多数の患者に、軽減と治癒とを提供するために代わりとなる解決策を見出すことである。
【０００９】
本発明に関連して、本発明者らは、肥満細胞が自己免疫疾患に関係する中心的な役割を果たすと提唱する。肥満細胞（MC）は、CD34、c-kit、およびCD13抗原を発現する造血幹細胞の特定のサブセットに由来する、組織要素である（Kirshenbaumら、Blood 94：2333〜2342、1999、およびIshizukaら、Curr. Opin. Immunol. 5：937〜43、1993）。未成熟なMC前駆細胞は血流の中を循環し、組織において分化する。これらの分化および増殖プロセスは、サイトカインの影響下にあり、最も重要なサイトカインの一つは、Kitリガンド（KL）、スチール因子（SL）、または肥満細胞増殖因子（MCGF）とも呼ばれる、幹細胞因子（SCF）である。SCF受容体は、III型受容体チロシンキナーゼファミリーに属する癌原遺伝子c-kitによってコードされる（BoissanおよびArock、J. Leukoc Biol. 67：135〜48、2000）。この受容体はまた、他の造血細胞または非造血細胞において発現される。SCFによるc-kit受容体のライゲーションは、その二量体形成を誘導し、その後リン酸基転移が起こり、様々な細胞質内物質が動員され、活性化される。これらの活性化物質は、細胞の増殖および活性化を担う多数の細胞内シグナル伝達経路を誘導する（BoissanおよびArock、2000）。肥満細胞は、組織での位置および構造が不均一であるのみならず、機能的および組織化学的レベルにおいても不均一であることを特徴とする（AldenborgおよびEnerback、Histochem. J. 26：587〜96、1994；Braddingら、J. Immunol. 155：297〜307、1995；Iraniら、J. Immunol. 147：247〜53、1991；Millerら、Curr. Opin. Immunol. 1：637〜42、1989；ならびにWelleら、J. Leukoc Biol. 61：233〜45、1997）。
【００１０】
自己に対する有害な免疫応答の活性化は、本明細書において、肥満細胞の脱顆粒の結果または脱顆粒から刺激された結果であると仮定される。肥満細胞によって分泌されたサイトカインにおいて、IFNγは特に興味深い。実際にIFNγは、主要組織適合複合体（MHC）関連自己免疫疾患の原因であることが認められている；Hooksら（1979）、New England J. Med. 301：5〜8。例えば、より高いIFNγレベルが、SLE患者において疾患の重症度に相関することが示された。
【００１１】
TNFは、肥満細胞によって産生されるもう一つのサイトカインである。ごく最近、肥満細胞によって産生されたTNFが自己抗体媒介血管炎の発病に関係すると報告された；Watanabe, N.ら、Blood 1999、12月1日；94(11)：3855〜63。Biedermann Tら、J. Exp. Med 2000、11月20日：192(10)：1441〜52において、肥満細胞が、TNFおよびマクロファージ炎症性タンパク質2（MIP-2）によってT細胞媒介遅延型過敏反応の際に、好中球の動員を制御することが示されている。
【００１２】
さらに肥満細胞は、三つの群に分類される異なるプロテアーゼおよびメディエータの混合物を放出することによって、組織の破壊に関与すると本明細書において仮定される：予め形成された顆粒関連メディエータ（ヒスタミン、プロテオグリカン、および中性プロテアーゼ）、脂質由来メディエータ（プロスタグランジン、トロンボキサン、およびロイコトリエン）、ならびに様々なサイトカイン（IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、TNF-α、GM-CSF、MIP-1a、MIP-1b、MIP-2、およびIFN-γ）。次に、活性化肥満細胞によるメディエータ（TNF-α、ヒスタミン、ロイコトリエン、プロスタグランジン等）ならびにプロテアーゼの遊離が、本明細書においてi）自己免疫疾患に関係する免疫成分を誘導および活性化し、かつii）組織破壊プロセスに関与すると提唱される。自己に対してTおよびBリンパ球が活性化すると、肥満細胞を刺激し、次に肥満細胞が上記の因子を放出して自己免疫反応の成分をさらに活性化する。
【００１３】
組織破壊に至るこのサイクルの形成を切断するために、本発明は、肥満細胞に対して実質的に特異的である化合物を用いて、肥満細胞を枯渇させることを提唱する。この点において、チロシンキナーゼ阻害剤、およびより詳細にはc-kit特異的キナーゼ阻害剤は、肥満細胞の増殖、生存、および活性化を阻害すると提唱される。
【００１４】
自己免疫障害の病因において役割を有する肥満細胞を破壊することからなる、自己免疫疾患の新たな治療経路が提供される。チロシンキナーゼ阻害剤およびより詳細にはc-kit阻害剤は、この目標に到達するために特に適している。
【発明の開示】
【００１５】
説明
本発明は、肥満細胞を枯渇させることができる化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法に関する。
【００１６】
自己免疫疾患を治療するこの方法は、そのような治療を必要とする哺乳類にチロシンキナーゼ阻害剤を投与する段階を含みうる。
【００１７】
チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、ビス単環式、二環式、または複素環式アリール化合物（国際公開公報第92/20642号）、ビニレン-アザインドール誘導体（国際公開公報第94/14808号）、および1-シクロプロピル-4-ピリジル-キノロン（米国特許第5,330,992号）、スチリル化合物（米国特許第5,217,999号）、スチリル置換ピリジル化合物（米国特許第5,302,606号）、セレオインドール（seleoindole）およびセレニド（国際公開公報第94/03427号）、三環式ポリヒドロキシル化合物（国際公開公報第92/21660号）、ならびにベンジルホスホン酸化合物（国際公開公報第91/15495号）、ピリミジン誘導体（米国特許第5,521,184号および国際公開公報第99/03854号）、インドリノン誘導体およびピロール置換インドリノン（米国特許第5,792,783号、欧州特許第934 931号、米国特許第5,834,504号、米国特許第5,883,116号、米国特許第5,883,113号、米国特許第5,886,020号、国際公開公報第96/40116号、および国際公開公報第00/38519号）、ならびにビス単環式、二環式アリールおよびヘテロアリール化合物（欧州特許第584 222号、米国特許第5,656,643号、および国際公開公報第92/20642号）、キナゾリン誘導体（欧州特許第602 851号、欧州特許第520 722号、米国特許第3,772,295号、および米国特許第4,343,940号）、ならびにアリールおよびヘテロアリールキナゾリン（米国特許第5,721,237号、米国特許第5,714,493号、米国特許第5,710,158号、および国際公開公報第95/15758号）から選択される。
【００１８】
好ましくは、このチロシンキナーゼ阻害剤は、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない。
【００１９】
もう一つの態様において、本発明は、c-kit阻害剤をそのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法に向けられる。
【００２０】
好ましくは、c-kit阻害剤は非毒性の選択的かつ強力なc-kit阻害剤である。そのような阻害剤は、インドリノン、ピリミジン誘導体、ピロロピリミジン誘導体、キナゾリン誘導体、キノキサリン誘導体、ピラゾール誘導体、ビス単環式、二環式、または複素環式アリール化合物、ビニレン-アザインドール誘導体およびピリジル-キノロン誘導体、スチリル化合物、スチリル置換ピリジル化合物、セレオインドール、セレニド、三環式ポリヒドロキシル化合物、ならびにベンジルホスホン酸化合物からなる群より選択することができる。
【００２１】
好ましい化合物の中でも、N-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体（米国特許第5,521,184号および国際公開公報第99/03854号）のようなピリミジン誘導体、インドリノン誘導体およびピロール置換インドリノン（米国特許第5,792,783号、欧州特許第934 931号、米国特許第5,834,504号、米国特許第5,883,116号、米国特許第5,883,113号、米国特許第5,886,020号、国際公開公報第96/40116号、および国際公開公報第00/38519号）、ならびにビス単環式、二環式アリールおよびヘテロアリール化合物（欧州特許第584 222号、米国特許第5,656,643号、および国際公開公報第92/20642号）、キナゾリン誘導体（欧州特許第602 851号、欧州特許第520 722号、米国特許第3,772,295号、および米国特許第4,343,940号）、4-アミノ置換キナゾリン（米国特許第3,470,182号）、4-チエニル-2-(1H)-キナゾロン、6,7-ジアルコキシキナゾリン（米国特許第3,800,039号）、アリールおよびヘテロアリールキナゾリン（米国特許第5,721,237号、米国特許第5,714,493号、米国特許第5,710,158号、および国際公開公報第95/15758号）、4-アニリノキナゾリン化合物（米国特許第4,464,375号）、および4-チエニル-2-(1H)-キナゾロン（米国特許第3,551,427号）に注目することは興味深い。
【００２２】
そのため、好ましくは本発明は、ピリミジン誘導体、より詳細には式IのN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体である、非毒性の強力かつ選択的なc-kit阻害剤を投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法に関する：
2004536097.tif 000002
式中、R1、R2、R3、R13〜R17基は、本明細書の説明に組み入れられる、欧州特許第564 409 B1号に記載される意味を有する。
【００２３】
好ましくは、N-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体は、式IIに対応する化合物から選択される：
2004536097.tif 000003
式中、R1、R2、およびR3は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキルまたは環状もしくは複素環基、特にピリジル基から独立して選択され；
R4、R5、およびR6は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、特にメチル基から独立して選択され；
かつR7は、少なくとも一つの置換基を有するフェニル基であり、アミノ基のように少なくとも一つの塩基性部位を有する。
【００２４】
好ましくはR7は以下の基である：
2004536097.tif 000004
これらの化合物において、以下のように定義されることが好ましい：
R1は、複素環基、特にピリジル基であり、
R2およびR3はHであり、
R4はC1-C3アルキル、特にメチル基であり、
R5およびR6はHであり、
かつR7は、少なくとも一つの置換基を有するフェニル基であり、アミノ基、例えば以下の基：
2004536097.tif 000005
のように、少なくとも一つの塩基性部位を有する。
【００２５】
したがって好ましい態様において、本発明は、以下の式に対応するCGP57148B：4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリジン-2-イルアミノ)フェニル]ベンズアミドとして当技術分野で公知である化合物の有効量を投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法に関する：
2004536097.tif 000006
【００２６】
本化合物の調製は、欧州特許第564 409号の実施例21に記載され、特に有用であるβ型は国際公開公報第99/03854号に記載されている。
【００２７】
または、c-kit阻害剤は以下から選択することができる：
インドリノン誘導体、より詳細にはピロール置換インドリノン；
単環式、二環式アリールおよびヘテロアリール化合物、キナゾリン誘導体；ならびに
2-フェニル-キナキソリン誘導体、例えば2-フェニル-6,7-ジメトキシキナキソリンのようなキナキソリン。
【００２８】
好ましい局面において、本発明は、c-kit阻害剤がIL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、上記の方法を意図する。
【００２９】
本明細書において言及される以下の自己免疫疾患が、本発明によって意図される。
‐多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、局所性および全身性強皮症、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、ならびに増殖性糸球体腎炎
‐腎臓、膵臓、肝臓、心臓、肺、および骨髄を含む任意の臓器移植における、移植片対宿主病または移植片拒絶
‐本発明によって含まれる他の自己免疫疾患、活動性慢性肝炎、および慢性疲労症候群
‐天疱瘡のような表皮下水疱形成障害
‐血管炎
【００３０】
好ましい態様において、本発明の方法は、リウマチ性関節炎および紅斑性狼瘡における組織損傷を防止して疼痛を減少させるために適用することができる。狼瘡は、免疫系が過剰反応性となり、体内で組織を攻撃する抗体を産生して、炎症、発赤、疼痛、および腫脹を引き起こす自己免疫疾患である。狼瘡は、主に若い女性が罹患する重篤な健康問題である。
【００３１】
もう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、多発性硬化症の治療に適用可能である。実際に、斑の境界域において肥満細胞の数の有意な増加が認められている。この態様は、2001年6月29日に出願人によって提出された米国特許出願第60/601,409号の主題である。
【００３２】
もう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、乾癬の治療に適用可能である。成人の約2％が乾癬を有し、その結果、皮膚の何らかの成分に対する異常な免疫応答により、皮膚がより迅速にかつより厚く増殖する。
【００３３】
もう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、リウマチ性関節炎および多発関節炎の治療に適用可能であり、これに関して本出願人は2001年6月29日に米国特許第60/301,410号を提出した。
【００３４】
もう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、潰瘍性大腸炎およびクローン病の治療に適用可能であり、これに関して本出願人は2001年6月29日に米国特許第60/301,405号を提出した。
【００３５】
もう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、炎症性筋障害とも呼ばれる後天性の筋疾患である、皮膚筋炎の治療に適用可能である。皮膚筋炎は、筋の虚弱を伴う、または筋の虚弱の前に起こることが多い、発疹を特徴とする。
【００３６】
さらにもう一つの好ましい態様において、本発明の方法は、表皮下水疱形成障害の治療に適用可能である。本明細書において参照される以下の表皮下水泡形成障害が、本発明によって意図される：アフタ性潰瘍、ならびに天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および瘢痕状類天疱瘡のようないくつかの水疱疾患。
【００３７】
上記の方法は、尋常性天疱瘡を治療するために特に有用である。この障害において、病変は口ならびに胸部、頭皮、臍周囲、および皮膚の他の様々な領域に起こる。口腔病変も認められる。この型の疾患は、中咽頭および他の粘膜表面を含みうる；これが、先に示した特定の組織に達するために適した局所投与ならびに経口投与のための組成物を、本発明が意図する理由である。
【００３８】
上記の方法は、増殖性の病変と膿疱が形成される増殖性天疱瘡を治療するために特に有用である。膿疱は、破裂した水疱の端部での重複感染の結果である。この点において、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばc-kit阻害剤と併用して抗生物質を用いることができる。抗生物質の中で好ましいものは、ダプソン、アザチオプリン、エリスロマイシン、プロピオニルエリスロマイシン、ネオマイシン、ゲンタマイシン（gentomycin）、トブラマイシン、およびメクロサイクリンから選択される。最後に、角化症、偽上皮腫性増殖症、および乳頭腫症も同様に、本疾患において認められており、従って治療されると考えられる。
【００３９】
上記の方法はまた、その症状がか皮、鱗屑、びらん、および擦過傷を含む、落葉状天疱瘡を治療するために特に有用である。
【００４０】
上記の方法はまた、紅斑性天疱瘡を治療するためにも特に有用である。本明細書において、病変は狼瘡様の蝶型紅斑、ならびに水疱および脂漏性皮膚炎様病変である。
【００４１】
上記の方法はまた、大動脈から皮膚における最も小さな血管までの、様々な大きさの血管における炎症を伴う血管炎を治療するために特に有用である。この群の疾患は、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛、ウェグナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、過敏性血管炎、リウマチ性血管炎、顕微鏡的（Microscopic）多発血管炎、バーガー病、カワサキ病、ならびに感染またはアレルギーによって引き起こされた血管炎を含む。
【００４２】
好ましくは、上記の方法は、ヒトにおける自己免疫疾患を予防および／または治療するために適用することができる。
【００４３】
さらなる態様において、上記のc-kit阻害剤は、活性化c-kitの阻害剤である。本発明の枠組みにおいて、「活性化c-kit」という表現は、点突然変異、欠失、挿入から選択される少なくとも一つの変異を含む、構成的に活性化された変異体c-kitを意味するが、天然のc-kit配列（配列番号：1）の改変および変化型も意味する。そのような変異、欠失、挿入、改変および変化は、トランスホスホリラーゼドメイン、膜近傍ドメイン、ならびにc-kit活性を直接または間接的に担う任意のドメインにおいて起こりうる。「活性化c-kit」という表現はまた、本明細書においてSCF活性化c-kitを意味する。c-kitを活性化するために好ましい、選択的なSCF濃度は、5×10-7 M〜5×10-6 Mを含み、好ましくは2×10-6 M付近である。好ましい態様において、段階a）の活性化変異体c-kitは、Y823に対して近位に、より詳細にはc-kitの自己リン酸化に関係する配列番号：1のアミノ酸800位〜850位に、少なくとも一つの変異、特にD816V、D816Y、D816F、およびD820G変異体を有する。もう一つの好ましい態様において、段階a）の活性化変異体c-kitは、c-kitの膜近傍ドメインに欠失を有する。そのような欠失は、例えば、c-kit d(573-579)と呼ばれるコドン573と579の間にある。c-kitの膜近傍ドメインに近位の点突然変異V559Gもまた重要である。
【００４４】
この点において、本発明は、以下を含むスクリーニング法によって得ることができる活性化c-kitの、選択的で強力な非毒性の阻害剤である化合物を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与する段階を含む、自己免疫疾患を治療する方法を意図する：
a）（i）活性化c-kitと（ii）試験する少なくとも一つの化合物とを、（i）と（ii）の成分が複合体を形成することができる条件下で接触させる段階、
b）活性化c-kitを阻害する化合物を選択する段階、
c）IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、段階b）で同定された化合物のサブセットを試験して選択する段階。
【００４５】
本スクリーニング法はさらに、SCF活性化野生型c-kitを阻害することもできる、活性化変異体c-kitの阻害剤（例えば、トランスホスホリラーゼドメインにおいて）である段階b）において同定された化合物のサブセットを試験して選択する段階からなる段階を含みうる。または、段階a）において活性化c-kitは、SCF活性化野生型c-kitである。
【００４６】
本発明を実施するための最良の様式は、段階a）において10μMを超える濃度で推定の阻害剤を試験する段階からなる。適切な濃度は、例えば10、15、20、25、30、35、または40μMである。
【００４７】
段階c）において、IL-3は、好ましくはIL-3依存的細胞の培養培地において、0.5 ng/ml〜10 ng/mlの濃度で、好ましくは1 ng/ml〜5 ng/mlの濃度で存在する。
【００４８】
IL-3依存的細胞の例には以下が含まれるが、これらに限定されない：
増殖および生存に関して、c-kitを本来発現してそれに依存している細胞株。そのような細胞において、以下の技法を用いてヒト肥満細胞株を確立することができる：正常なヒト肥満細胞を、c-kitシグナルペプチドとTAG配列とを含む変異体c-kitをコードする配列を含むレトロウイルスベクターに感染させることができ、それによって変異体c-kitおよび造血細胞において発現された野生型c-kitを、抗体によって区別することができる。
【００４９】
この技術は、細胞の死を誘導せず、遺伝子移入が安定であり満足できる収率（約20％）を生じることから都合がよい。純粋な正常ヒト肥満細胞は、ヒト臍帯静脈から得られた血液に由来する前駆細胞を培養することによって、日常的に得ることができる。この点において、他の血液成分から単核球を分離するために、臍帯静脈からのヘパリン処置（heparinated）血をフィコール勾配上で遠心する。次に、免疫磁気選択系MACS（Miltenyi biotech）を用いて、上記の単離細胞からCD34+前駆細胞を精製する。次に、CD34+細胞をMCCM培地（L-グルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン、5×10-5 Mβ-メルカプトエタノール、20％仔ウシ胎児血清、1％ウシ血清アルブミン、および100 ng/ml組換え型ヒトSCFを添加したα-MEM）において、105個/mlの細胞濃度で5％CO2大気中、37℃で培養する。培地を5〜7日ごとに交換する。培養物中に存在する肥満細胞の割合（％）は、メイ・グリュンワルド・ギムザ染色またはトルイジンブルー染色を用いて毎週評価する。抗トリプターゼ抗体も同様に、培養物における肥満細胞を検出するために用いることができる。培養10週間後、肥満細胞の純粋な細胞集団（＞98％）が得られる。
【００５０】
標準的な技法を用いて、上記のように確立された細胞株をトランスフェクトするために、c-kitを発現するベクターを調製することが可能である。ヒトc-kitのcDNAは、Yardenら（1987）EMBO J. 6（11）、3341〜3351に記載されている。c-kitのコード部分（3000 bp）は、以下のオリゴヌクレオチドを用いて、PCRによって増幅することができ、かつクローニングすることができる：
2004536097.tif 000007
【００５１】
NotIおよびXhoIによって消化したPCR産物を、T4リガーゼを用いてpFlag-CMVベクター（SIGMA）に挿入して、ベクターをNotIおよびXhoIによって消化して、CIP（Biolabs）を用いて脱リン酸化する。pFlag-CMV-c-kitを用いて細菌クローンXL1-blueを形質転換する。クローンの形質転換は、以下のプライマーを用いて確認する：
2004536097.tif 000008
適切なカセットを用いて、当技術分野において日常的で一般的な技法によって部位特異的変異誘発を行う。
【００５２】
ベクターMigr-1（ABC）は、成熟肥満細胞をトランスフェクトするために用いられるレトロウイルスベクターを構築するための基礎として用いることができる。このベクターは、IRESの3'末端でGFPをコードする配列を含むことから都合がよい。これらの特徴によって、蛍光血球計算器による直接分析を用いてレトロウイルスに感染した細胞を選択することができる。先に述べたように、c-kit cDNAのN末端配列は、異種のc-kitを内因性のc-kitと区別するために有用であるFlag配列を導入するために、改変することができる。
【００５３】
用いることができる他のIL-3依存的細胞株には以下が含まれるが、これらに限定されない：
‐c-kitの野生型または変異型（膜近傍および触媒部位において）を発現するBaf3マウス細胞は、Kitayamaら（1996）、Blood 88：995〜1004、およびTsujimuraら（1999）、Blood 93：1319〜1329に記述される。
‐c-kitWTまたはc-kitD814Yのいずれかを発現するIC-2マウス細胞は、Piaoら（1996）、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93：14665〜14669に示される。
【００５４】
IL-3非依存的細胞株は以下の通りである：
‐HMC-1、肥満細胞白血病患者に由来する因子非依存的細胞株は、構成的キナーゼ活性を有する膜近傍変異体c-kitポリペプチドを発現する（Furitsu Tら、J. Clin. Invest. 1993、92：1736〜1744；Butterfieldら、「Establishment of immature mast cell line from a patient with mast cell leukemia.」、Leuk Res. 1988、12：345〜355、およびNagataら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995、92：10560〜10564）。
‐P815細胞株（814位でc-kit変異を本来発現する肥満細胞腫）は、Tsujimuraら（1994）、Blood、83：2619〜2626に記述されている。
【００５５】
成分（ii）が活性化c-kitを阻害する程度は、インビトロまたはインビボで測定することができる。インビボで測定する場合、Y823に対して近位に、より詳細にはc-kit自己リン酸化に関係する配列番号：1のアミノ酸800位〜850位の間に、少なくとも一つの変異を有する活性化変異体c-kit、特にD816V、D816Y、D816F、およびD820G変異体を発現する細胞株が好ましい。活性化変異体c-kitを発現する細胞株の例は先に述べた通りである。
【００５６】
もう一つの好ましい態様において、方法はさらに、1μM未満の濃度で野生型c-kitを阻害することができる化合物を、試験して選択することからなる段階を含む。これは、インビトロまたはインビボで測定することができる。
【００５７】
したがって、上記の方法に従って同定および選択された化合物は、強力で選択的な非毒性の野生型c-kit阻害剤である。
【００５８】
または、上記のスクリーニング法はインビトロで実施することができる。この点において、免疫沈降およびウェスタンブロットのような標準的な生化学技術を用いて、活性化変異体c-kitおよび／または野生型c-kitの阻害を測定することができる。好ましくは、c-kitリン酸化の量を測定する。
【００５９】
なおさらなる態様において、本発明はスクリーニングが以下を含む、先に記載した自己免疫疾患を治療する方法を意図する：
a）それぞれがIC50＜10μMを有する、活性化c-kitを標的とする候補化合物のサブセットを、細胞死の程度を測定することによって同定するために、永続的な活性化c-kitである変異体c-kit（例えば、トランスホスホリラーゼドメインにおいて）を発現する細胞を用いて、複数の被験化合物によって増殖アッセイを行う段階、
b）特にc-kitを標的とする候補化合物のサブセットを同定するために、IL-3の存在下で培養されたIL-3依存的細胞である、野生型c-kitを発現する細胞を用いて、段階a）において同定された候補化合物のサブセットによって増殖アッセイを行う段階、
c）c-kitを発現する細胞を用いて、段階b）において同定された化合物のサブセットによって増殖アッセイを行い、それぞれがIC50＜10μM、好ましくはIC50＜1μMを有する、野生型c-kitを標的とする候補化合物のサブセットを、細胞死の程度を測定することによって選択する段階。
【００６０】
本明細書において、細胞死の程度は、3Hチミジンの取り込み、トリパンブルー排除法、またはヨウ化プロピジウムによるフローサイトメトリーによって測定することができる。これらは、当技術分野において日常的に実施される一般的な技術である。
【００６１】
本発明に従う方法には、哺乳類、特にヒトにおいて自己免疫疾患を予防する、発病を遅らせる、および／または治療する段階が含まれる。
【００６２】
上記の方法において、肥満細胞を枯渇させることができる任意の細胞を用いることができる。そのような化合物は、先に説明したように、c-kit阻害剤のようなチロシンキナーゼ阻害剤に属しうるが、この化合物が肥満細胞の枯渇能を示す限り、いかなる特定のファミリーにも限定されない。肥満細胞の枯渇は、日常的な技法を用いて、例えば先に記載した肥満細胞株の一つを用いて評価することができる。
【００６３】
最善の化合物は、最大の選択性を示す化合物である。
【００６４】
対照細胞株には、肥満細胞または関連細胞もしくは細胞株ではない、他の造血細胞が含まれる。これらの対照細胞株には、SCF非依存的増殖ヒトCD34+正常細胞が含まれる。これらの対照細胞にはまた、ヒトTリンパ球Jurkat細胞株（ATCC番号TIB-152、およびそれに由来する変異体細胞株）、ヒトBリンパ球DaudiまたはRaji細胞株（それぞれ、ATCC番号CCL-213およびCCL-86）、ヒト単球U 937細胞株（ATCC番号CRL-1593.2）、ならびにヒトHL-60細胞株（ATCC番号CCL-240）およびそれに由来する変異体細胞株（CRL-2258およびCRL-2392）が含まれる。
【００６５】
そのような化合物は、以下の段階を含む、肥満細胞以外の細胞型に対して毒性を示さない、肥満細胞を枯渇させることができる化合物を同定する方法を用いることによって同定することができる：
a）肥満細胞に適した培養培地において、インビトロで肥満細胞を培養する段階、
b）調べる少なくとも一つの化合物を培養培地に加えて、その細胞を長期間インキュベートする段階、
c）肥満細胞の死を促進する化合物を選択する段階、
d）上記の対照細胞株から選択された細胞の死を促進することができない、段階c）において選択された化合物のサブセットを同定する段階。
【００６６】
したがって、本発明は、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、皮膚筋炎、多発筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、増殖性糸球体腎炎、活動性慢性肝炎、ならびに移植片対宿主病のような自己免疫疾患を治療する薬剤を製造するために上記の化合物を用いることを含む。
【００６７】
本発明はまた、T細胞媒介疾患、好ましくは重症筋無力症、強皮症、移植片対宿主病、移植片拒絶、グレーブス病、アジソン病、自己免疫性ブドウ膜網膜炎（uveoretinitis）、自己免疫性甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、局所性および全身性強皮症、乾癬、皮膚筋炎、ならびに原発性胆汁性肝硬変からなる群より選択される疾患を治療する薬剤を製造するために、上記の化合物を用いることに向けられる。
【００６８】
より詳細には、本発明は、紅斑性狼瘡における組織損傷を治療および／または予防する薬剤を製造するため、および疼痛を軽減するために、上記の化合物を用いることに関する。
【００６９】
上記の化合物はまた、腎臓、膵臓、肝臓、心臓、肺、および骨髄を含む任意の臓器移植における、移植片対宿主病または移植片拒絶を予防または治療する薬剤を製造するために用いることができる。
【００７０】
上記の化合物はまた、多発筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、増殖性糸球体腎炎、活動性慢性肝炎、および慢性疲労症候群を予防または治療する薬剤を製造するために用いることができる。
【００７１】
上記の化合物は、アフタ性潰瘍、ならびに天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および瘢痕状類天疱瘡のようないくつかの水疱疾患を治療する薬剤を製造するために用いることができる。
【００７２】
本発明において用いられる薬学的組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、鞘内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所、舌下、または直腸手段を含むがこれらに限定されない、任意の数の経路によって投与してもよい。
【００７３】
活性成分の他に、これらの薬学的組成物は、薬学的に用いることができる調製物への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む、適切な薬学的に許容される担体を含んでもよい。製剤および投与に関する技術についてのさらなる詳細は、「Remington's Pharmaceutical Sciences」（マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州）の最新版において見いだされる。
【００７４】
経口投与のための薬学的組成物は、経口投与に適した用量で、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体を用いて調剤することができる。そのような担体によって、患者が摂取するために薬学的組成物を錠剤、丸剤、糖衣丸、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として調剤することができる。
【００７５】
より詳細には、本発明は、経口または局所投与を意図する薬学的組成物に関する。
【００７６】
局所投与に関して、本発明に従う組成物は、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、液状水性懸濁液、水性アルコール性もしくは油性溶液、ローションもしくは血清タイプの分散液、無水もしくは親油性ゲル、または水相に脂肪相を分散させるかもしくはその逆によって得られる、乳剤型の液状もしくは半固体の堅さの乳液、クリームもしくはゲルタイプの軟らかい半固体の堅さの懸濁液もしくは乳液、微小乳液、微小カプセル、微粒子、またはイオンおよび／もしくは非イオンタイプの小胞分散液の形状であってもよい。これらの組成物は、標準的な方法に従って調製される。
【００７７】
本発明に従う組成物は、皮膚科および化粧品において一般的に用いられる任意の成分を含む。これは、親水性もしくは親油性のゲル化剤、親水性もしくは親油性活性物質、保存剤、皮膚軟化剤、粘度増強ポリマー、湿潤剤、界面活性剤、抗酸化剤、溶媒および増量剤、溶媒、香料、遮へい剤、殺菌剤、臭気吸収剤、および着色物質から選択される、少なくとも一つの成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明において用いることができる油として、鉱油（液体パラフィン）、植物油（シアバター、ヒマワリ油の液体分画）、動物性油、合成油、シリコン油（シクロメチコン）、およびフッ化油が挙げられる。脂肪アルコール、脂肪酸（ステアリン酸）、およびロウ（パラフィン、カルナウバロウ、蜜ロウ）もまた、脂肪物質として用いてもよい。
【００７９】
本発明において用いることができる乳化剤として、ステアリン酸グリセロール、ポリソルベート60、およびPEG-6/PEG-32/ステアリン酸グリコール混合物が意図される。
【００８０】
親水性ゲル化剤として、カルボキシビニルポリマー（カルボマー）、アクリレート／アルキルアクリレートコポリマーのようなアクリルコポリマー、ポリアクリルアミド、ヒドロキシプロピルセルロースのような多糖類、粘土、および天然ゴムを挙げてもよく、親油性ゲル化剤として、ベントンのような改変粘土、ステアリン酸アルミニウムのような脂肪酸の金属塩および疎水性シリカ、またはエチルセルロースおよびポリエチレンを挙げてもよい。
【００８１】
親水性活性剤として、タンパク質またはタンパク質の加水分解物、アミノ酸、ポリオール、尿素、アラントイン、糖および糖誘導体、ビタミン、デンプン、ならびに植物抽出物、特にアロエ（Aloe vera）の植物抽出物を用いてもよい。
【００８２】
親油性活性物質として、レチノール（ビタミンA）およびその誘導体、トコフェロール（ビタミンE）およびその誘導体、必須脂肪酸、セラミド、ならびに精油を用いてもよい。これらの物質は、利用した際にさらなる湿潤または皮膚軟化特性を付加する。
【００８３】
さらに、チロシンキナーゼ阻害剤、好ましくはc-kit阻害剤のような肥満細胞を枯渇させることができる化合物を、より深く浸透させるために、界面活性剤を組成物に含めることができる。
【００８４】
意図される成分の中で、本発明は例えば、鉱油、水、エタノール、トリアセチン、グリセリン、およびプロピレングリコールからなる群より選択される浸透増強剤；例えばポリイソブチレン、ポリビニルアセテート、およびポリビニルアルコールからなる群より選択される粘着剤、ならびに濃縮剤を含む。
【００８５】
薬物の局所吸収を増強する化学的方法は当技術分野で周知である。例えば、浸透増強特性を有する化合物には、ラウリル硫酸ナトリウム（Dugard, P.H.およびSheuplein, R.J.、「Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis：An Electrometric Study.」、J. Invest. Dermatol. V60、pp 263〜69、1973）、ラウリル酸化アミン（Johnsonら、米国特許第4,411,893号）、アゾン（azone）（Rajadhyaksha、米国特許第4,405,616号および第3,989,816号）およびデシルメチルスルホキシド（Sekura, D.L.およびScala, J.、「The Percutaneous Absorption of Alkylmethyl Sulfides」、Pharmacology of the Skin、Advances In Biology of Skin（Appleton-Century Craft）、第12巻、pp.257〜69、1972）が含まれる。両性分子においてヘッドグループの極性を増加させると、その浸透増強特性が増加するが、皮膚刺激特性の増加が抑えられることが認められた（Cooper, E.R.およびBerner, B.、「Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues：Physiochemical Aspects.」、Surfactant Science Series、第16巻、Reiger, M.M.編（マーセルデッカー社）、pp 195〜210、1987）。
【００８６】
第二のクラスの化学的増強剤は一般的に、共溶媒と呼ばれる。これらの材料は、比較的容易に局所吸収され、多様なメカニズムによって、いくつかの薬物に関して浸透の増強を得る。エタノール（Galeら、米国特許第4,615,699号、およびCampbellら、米国特許第4,460,372号および第4,379,454号）、ジメチルスルホキシド（米国特許第3,740,420号、第3,743,727号、および米国特許第4,575,515号）、ならびにグリセリン誘導体（米国特許第4,322,433号）は、様々な化合物の吸収を増加させることができることが示されている化合物の少数の例である。
【００８７】
本明細書において言及される局所組成物は、皮膚および粘膜に影響を及ぼす疾患を治療するために特に適切である。これらの障害の例には、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、局所性および全身性強皮症、ならびに皮膚筋炎が含まれる。本組成物は、肥満細胞を枯渇させることができる化合物、好ましくはチロシンキナーゼ阻害剤、より詳細には上記のようなc-kit阻害剤を含む。
【００８８】
本明細書に記載の局所組成物はまた、それらが特に皮膚および粘膜に影響を及ぼすことから、アフタ性潰瘍、ならびに天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および瘢痕状類天疱瘡のようないくつかの水疱疾患を治療するために特に適切である。
【００８９】
上記のように、本発明はまた、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎および多発関節炎、重症筋無力症、多発筋炎、移植片対宿主病、移植片拒絶、グレーブス病、アジソン病、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、自己免疫性甲状腺炎、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸症、増殖性糸球体腎炎、活動性慢性肝炎、ならびに慢性疲労症候群を治療するための薬剤を製造するための、肥満細胞を枯渇させることができる化合物、好ましくはチロシンキナーゼ阻害剤、より詳細にはc-kit阻害剤を含む、経口投与に適した組成物を意図する。
【００９０】
本発明において用いるのに適した薬学的組成物には、チロシンキナーゼ阻害剤およびc-kit阻害剤のような肥満細胞を枯渇させる化合物が、意図する目的を達成するための有効量で含まれている組成物が含まれる。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。治療的有効量は、症状または状態を改善する活性成分の量を意味する。治療的有効量および毒性は細胞培養または実験動物において標準的な薬学的技法、例えばED50（集団の50％において治療的に有効である用量）およびLD50（集団の50％に対して致死的である用量）によって決定してもよい。毒性対治療効果の用量比が治療指数であり、これはLD50/ED50比として表記することができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。上記のように、本発明に従うチロシンキナーゼ阻害剤およびより詳細にはc-kit阻害剤は、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない。
【００９１】
本発明はまた、チロシンキナーゼ阻害剤、より詳細には非毒性の選択的で強力なc-kit阻害剤のような肥満細胞を枯渇させることができる少なくとも一つの化合物、ならびに好ましくはシクロホスファミド、メソトレキセート、ダプソン、アザチオプリン、エリスロマイシン、プロピオニルエリスロマイシン、ネオマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、およびメクロサイクリンから選択される、天疱瘡のような表皮下水泡形成障害の治療のために、同時に、個別に、または連続して用いられる少なくとも一つの抗生物質を含む、産物を意図する。
【００９２】
本発明の有用性は、以下の詳細な説明からさらに得られる。
【００９３】
実施例1
表皮下水泡形成障害の治療
天疱瘡は人種および文化の境界を越えて人々を襲う。これは、治癒しない火傷様の病変を生じ、その結果、ケラチン生成細胞間の細胞間接着が失われて水疱（疱疹）が形成される（Sharpe, R.J.、「Manual of Clinical Problems in Dermatology」、Olbricht、BigbyおよびArndt編、リトルブラウン社、ボストン、1992、56〜60頁）。尋常性天疱瘡および増殖性天疱瘡は、皮膚の基底層の上に疱疹が形成されることを特徴とする。落葉性天疱瘡および紅斑性天疱瘡では、疱疹は角質層の真下に認められる。総説として、Ruocco, E.ら、「Precautions and suggestions for pemphigus patients」、Dermatology 2001、203(3)：201〜7、およびHertl, M.、Veldman, C.、「Pemphigus-paradigm of autoantibody-mediated autoimmunity」、Int. J. Fertil Womens Med 2001、7-8月、46(4)：190〜205を参照されたい。
【００９４】
天疱瘡に関する現行の治療には、コルチコステロイド、ならびにシクロフォスファミド、アザチオプリン、メソトレキセート、およびシクロスポリン-Aのような免疫抑制剤が含まれる（Lever、J. Am. Acad. Dermatol. 1979、第1巻、2〜31頁）。しかし、症状の重症度および天疱瘡に関連した高い死亡率により、しばしば入院が必要となる。さらに、コルチコステロイドを投与した患者の大多数に臨床的に有意な骨の損失が起こり、椎骨骨折の危険性が非常に高くなる。Adachi, JD、「Corticosteroid-induced osteoporosis」、Acta Derm Venereol. 1999、9月、79(5)：351〜5を参照されたい。
【００９５】
水疱性類天疱瘡は、高齢者により多く見られ、紅斑様もしくは非紅斑様の皮膚上または蕁麻疹斑上の大きな緊張弾性の疱疹が含まれる。この疾患に関して死亡率は10％〜20％と報告されているが、このほとんどは全身性ステロイド治療の使用よる副作用が原因である。
【００９６】
瘢痕状天疱瘡は、主に粘膜に影響を与える（Baden, L.A.、「Manual of Clinical Problems in Dermatology」、リトルブラウン社、ボストン、1992、54頁）。多くの場合、この障害は、落屑性歯肉炎を併発して最終的に失明に至る。現行の治療は上記の通りであり、満足できるものではない（Bleicher、上記；Fitzpatrick, Eisen, Wolff, FreedbergおよびAusten、「Dermatology in General Medicine」、1987、第1巻、マグローヒル社、ニューヨーク、582〜584頁中の、Arndt, K.）。抗生物質も同様に、高用量コルチコステロイドと併用して用いることができる。
【００９７】
天疱瘡、水疱性類天疱瘡、瘢痕状類天疱瘡の一般的な特徴は、その病因におけるプロテアーゼの役割である（Grando、Glukhenky、Drannik、KostrominおよびChernyavsky、Int. J. Tissue React. 1989、11巻、195〜201頁）。この疾患は、特に皮膚および粘膜に影響を及ぼすプロテアーゼによって媒介されると分類される。この点において、天疱瘡の治療にいくつかのプロテナーゼ阻害剤が提唱されている。さらに、米国特許第5,637,616号において、これらの疾患を治療するためにN-アセチルシステインの全身投与が提唱されており、米国特許第5,514,714号において、天疱瘡を治療するためにヒペリシンまたはシュードヒペリシンを用いることが記述されている。
【００９８】
なおも現在のところ、上記の利用可能な治療のいずれも、表皮下水疱形成障害を治療するために有効かつ安全ではない。さらに、免疫抑制剤の持続的な使用によって、有害な副作用および病的状態が起こる。
【００９９】
かなり以前に、進行性の肥満細胞脱顆粒および遅発型の好酸球の浸潤が起こる一連の病態変化によって、肥満細胞の関与が示唆された。Wintroub BUら、「Morphologic and functional evidence for release of mast-cell products in bullous pemphigoid」、New Engl J Med 1978、2月23日、298(8)；417〜21。より最近では、異なる水疱疾患において肥満細胞のチマーゼおよびプロテアーゼが有意に変化していることが認められており、肥満細胞の関与を示唆している。しかし、これは特異的反応よりむしろ一般的な炎症の表れであると考えられた。Kaminska, R.ら、「Mast cells in developing subepidermal bullous diseases：emphasis on tryptase, chymase and protease inhibitors」、Acta Derm Venereol. 1999、9月、79(5)：351〜5。
【０１００】
皮膚および粘膜のそのような組織分解を止めるために、本発明は、肥満細胞に対して実質的に特異的である化合物を用いて、肥満細胞を枯渇させることを提唱する。この点において、肥満細胞の増殖、生存、および活性化を阻害するために、チロシンキナーゼ阻害剤、およびより詳細にはc-kit特異的キナーゼ阻害剤が提唱されている。天疱瘡に罹患した患者の疱疹または水疱において肥満細胞の局所的および完全な脱顆粒の証拠が認められた。このほかに、Bリンパ球クローンが表皮の基底膜に対する抗体を産生することが認められた。本明細書において、本発明者らは、自己に対するそのような有害な免疫応答の活性化が、肥満細胞の脱顆粒に起因しうることを提唱する。さらに、免疫の成分のこのような活性化は、組織の脱顆粒にさらに関与するプロテアーゼの放出を伴う。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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