(57)【要約】式ＩＶ（式中、Ｒ１＝Ｒ’−Ｃ（Ｏ）、Ｒ’−Ｓ（Ｏ）２、Ｒ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜４のへテロ原子を含む二環式飽和または不飽和８〜１２員環系であって、下記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）群から独立に選ばれる４までの置換基で任意に置換されているもの、またはＲ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜３のへテロ原子を含む単環式飽和または不飽和５〜７員環であって、下記（ａ）および／またはおよび（ｃ）群から選ばれる少なくとも１の置換基を有し、さらに下記（ｂ）群から選ばれる１または２の置換基を任意に有するもの、Ｒ４＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ｃ２−７アルケニル；Ｒ３＝Ｃ１−７−アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ；Ｒ５＝Ｃ１−７−アルキル、ハロゲン、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ０−３−アルキル−ＣＯＮＲ３Ｒ４または嵩張ったアミン、Ｒ６はＨ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ１−３−アルキル−ＳＯ２−Ｒｉｘ、Ｃ１−３−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲｉｘまたはＣＨ２ＸＡｒ、ｑは０または１）で示される化合物は、カテプシンＫやファルシパインなどのシステインプロテアーゼのインヒビターとして有用である。
2004520439.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＶ：
【化１】
2004520439.tif 000108
（式中、
Ｒ１＝Ｒ’Ｃ（Ｏ）、Ｒ’Ｓ（Ｏ）２
Ｒ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜４のへテロ原子を含む二環式飽和または不飽和８〜１２員環系であって、下記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）群から独立に選ばれる４までの置換基で任意に置換されているもの、または
Ｒ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜３のへテロ原子を含む単環式飽和または不飽和５〜７員環であって、下記（ａ）および／またはおよび（ｃ）群から選ばれる少なくとも１の置換基を有し、さらに（ｂ）群から選ばれる１または２の置換基を任意に有するもの、
（ａ）Ｒ’環に直接結合しているか、またはアルキル、アルキルエーテル、アルキルチオエーテル、アルキルアミン、アルキルアミド、アルキルスルホンアミド、アルキルスルホン、アルキルウレア、アルキルケトンまたはアルキルエステルリンカーを介してＲ’環に結合している環状基；または
（ｂ）Ｈ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−３アルキル、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、ハロゲン；または
（ｃ）Ｏ−Ｃ１−４アルキル、Ｓ−Ｃ１−４アルキル、ＳＯＣ１−４アルキル、ＳＯ２Ｃ１−４アルキル、ＣＯ２Ｃ０−４アルキル、ＮＨＣＯＣ０−４アルキル、ＣＯＮＨＣ０−４アルキル、ＣＯＣ０−４アルキル、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２；
Ｒ４＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ｃ２−７アルケニル；
Ｒ３＝Ｃ１−７−アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ；
Ｒ５＝Ｃ１−７−アルキル、ハロゲン、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ０−３−アルキル−ＣＯＮＲ３Ｒ４またはＲｉｖ；
Ｒｉｖは式：
【化２】
2004520439.tif 000109
（式中、ｎ＝１−３、ｍ＝１−３；
Ｒｖ、Ｒｖｉ＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル；
Ａ＝Ｎ、ＣＨ；
Ｂ＝Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ；
ＢがＯ、ＳのときはＲｖｉｉ＝不在；またはＢがＮ、ＣＨのときはＲｖｉｉ＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル；
Ｒｖｉｉｉ＝Ｏ、Ｃ１−７−アルキル）で示される基；
Ｈ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ１−３−アルキル−ＳＯ２−Ｒｉｘ、Ｃ１−３−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲｉｘまたはＣＨ２ＸＡｒ（式中、ＲｉｘはＣ１−７−アルキル、ＡｒＣ１−７−アルキルまたはＣ３−Ｃ６−シクロアルキル）；
ｑは０または１）
で示される化合物および薬理学的に許容しうるその塩。
【請求項２】
Ｒ４および／またはＲ６が水素原子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ’二環式環が、ナフチル、キノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリル、インドリニルから選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
結合がＲ’環の２位である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ’が、アルキルまたはアルキルエーテル結合により結合したモルホリンまたはＮ−メチルピペリジンで置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＲ’Ｃ（Ｏ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、２−メチルプロプ−１−エニル、ベンジルまたはとりわけｉ−ブチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３における立体化学が、天然または非天然Ｌ−アミノ酸に対応する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ５が、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２Ａｒ、ＣＨ２ＣＯＮＨ２、（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ２、ＣＨ２ＯＨ、式
【化３】
2004520439.tif 000110
で示される基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ５が、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、またはＣＨ２ＯＨである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ５およびＣ４結合がともに（Ｒ）立体化学を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ５およびＣ４結合がともに（Ｓ）立体化学を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
ｑが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
ｑが０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ’が、環状置換基で置換された単環式環である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
単環式環が、好ましくは３位または４位で置換されたピリジル、ピリミジルまたはフェニルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
環状置換基が非芳香族である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
非芳香族環状置換基が、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−メチルピペラジン−１−イル、２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ、およびピペラジン−１−イルよりなる群から選ばれる、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
カテプシンＫの活性に依存する疾患の治療または予防方法であって、該治療または予防を必要とする哺乳動物に請求項１に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２０】
該疾患が、歯周炎や変形性関節炎などの骨疾患である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
該疾患が、変形性関節炎や慢性関節リウマチなどの軟骨または基質の変性疾患である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
該疾患が新形成である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
寄生虫感染の治療または予防方法であって、該治療または予防を必要とする哺乳動物に請求項１に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２４】
無脊椎動物ベクターおよび／またはそのようなベクターの侵入しやすい部位に請求項１に記載の化合物を投与することを含む、寄生虫の制御方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の化合物の製造方法であって、適当に保護した炭水化物誘導体上の保護基を操作してアノマー位で脱酸素を行い、たとえばウィッティッヒ化学によりケトン官能基を介してＲ５置換基を導入し、Ｃ４の第二級アルコール官能基のさらなる操作により４−アミノ基を導入して保護４−アミノ−５−置換ピラノールを得、ペプチド化学を用いてアミン官能基をＮ−伸長し、ついでＲ’Ｃ（＝Ｏ）またはＲ’Ｓ（＝Ｏ）２キャッピング基を付加する工程を含み、さらにＮ−末端伸長および／またはキャッピングの前または後にピラノールを酸化する工程を含む、方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の化合物の製造方法であって、適当に誘導体化した３−アミノ−４−置換ラクトンのＯ−保護した非環状カルボン酸誘導体をジアゾ化し、生成したジアゾメチルケトンを環化して保護４−アミノ−５−置換ピラノンを得、ペプチド化学を用いてアミン官能基をＮ−伸長し、ついでＲ’Ｃ（＝Ｏ）またはＲ’Ｓ（＝Ｏ）２キャッピング基を付加する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、システインプロテアーゼのインヒビター、とりわけパパインスーパーファミリーのインヒビターに関する。本発明は、カテプシンＫなどの生理的プロテアーゼのアンバランス、またはマラリアファルシパイン（ｆａｌｃｉｐａｉｎ）などの病原性プロテアーゼによる疾患の予防または治療に有用な新規な化合物を提供する。
【０００２】
（背景技術）
システインプロテアーゼのパパインスーパーファミリーは、哺乳動物、脊椎動物、原生生物、植物および細菌を含む広範な種にわたって広く分布している。カテプシンＢ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、ＮおよびＳを含む多くの哺乳動物カテプシン酵素はこのスーパーファミリーに入れられており、その活性の不適切な制御は、関節炎、筋ジストロフィー、炎症、糸球体腎炎および腫瘍の侵襲を含む多くの代謝性疾患への関与が示唆されている。病原性カテプシン様酵素としては、細菌のジンジパイン（ｇｉｎｇｉｐａｉｎｓ）、マラリアのファルシパインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ以下、およびＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｅｉおよびｂｒｕｃｅｉ、Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ ｆｕｓｉｃｕｌａｔａ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ種からのシステインプロテアーゼが挙げられる。
【０００３】
カテプシンＫの不適切な制御は、骨粗鬆症、歯肉炎や歯周炎などの歯肉疾患、パジェット病、悪性の高カルシウム血症および代謝性骨疾患を含む多数の疾患に関与している。変形性関節症の滑膜の軟骨吸収細胞レベルが上昇していることから、カテプシンＫは軟骨や基質の過剰な分解を特徴とする疾患、たとえば変形性関節症や慢性関節リウマチに関与している。転移性の新形成細胞は、典型的に、周囲基質を分解する高レベルのタンパク質分解酵素を発現しており、それゆえカテプシンＫの阻害は新形成を治療する助けとなる。
【０００４】
（発明の開示）
（発明が解決しようとする技術的課題）
ＷＯ９８／５０５３３は、式Ｉ：
【化４】
2004520439.tif 000003
で示される化合物の使用を記載している。
この式の化合物は、プロテアーゼ、とりわけパパインスーパーファミリー、とりわけカテプシンファミリー、およびとりわけカテプシンＫに対するインヒビターとして有用であることが示唆されている。これら化合物におけるケトン含有環は自然にラセミ化する傾向があり、その臨床的な有用性を制限している。ケトンカテプシンＫインヒビターを記載する他のＳＫＢ出願としては、ＷＯ９８４６５８２、ＷＯ９９６４３９９、ＷＯ００２９４０８、ＷＯ００３８６８７およびＷＯ００４９０１１が挙げられる。しかしながら、これら出願のいずれも、ペプチドミメチック鎖への結合に近接したα−環置換基を記載していない。
【０００５】
Ｓｈｅｎａｉら（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５ ３７ ２９０００−２９０１０）は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの栄養体からのファルシパイン２として示される、主要なシステインプロテアーゼの単離を記載している。この酵素はとりわけ、酸性食胞中で赤血球ヘモグロビンを加水分解すると思われる。この刊行物はまた、Ｎ末端タグ（折り畳みの際に自触媒により除かれる）を用いた対応遺伝子の単離をも記載している。
【０００６】
ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＢｅｅｃｈａｍのＷＯ９９／５３０３９は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍからの栄養体調製物に対する広範な範囲のペプチドミメチックのシステインプロテアーゼ阻害活性を記載している。どのシステインプロテアーゼが阻害されるかについて手引きは提供されていない。殆どのペプチドミメチックは線状の構造であるが、一つの化合物（Ｒ，Ｓ）−３−［Ｎ−（３−ベンジルオキシベンゾイル）−Ｌ−ロイシニルアミノ］テトラヒドロフラン−４−オンは上記式Ｉのフラノンに属する。そのようなキラル的に不安定な構造で予期されるように、ケトン含有環はラセミ体である。
本願の優先日後に公開された本願の同時継続ＰＣＴ出願ＷＯ００／６９８５５は、単環Ｐ３充填基を含むカテプシンＳインヒビターを開示している。
【０００７】
（その解決方法）
本発明の第一の側面は、式ＩＶ：
【化５】
2004520439.tif 000004
（式中、
Ｒ１＝Ｒ’Ｃ（Ｏ）、Ｒ’Ｓ（Ｏ）２
Ｒ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜４のへテロ原子を含む二環式飽和または不飽和８〜１２員環系であって、下記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）群から独立に選ばれる４までの置換基で任意に置換されているもの、または
Ｒ’＝Ｓ、ＯおよびＮから選ばれる０〜３のへテロ原子を含む単環式飽和または不飽和５〜７員環であって、下記（ａ）および／またはおよび（ｃ）群から選ばれる少なくとも１の置換基を有し、さらに（ｂ）群から選ばれる１または２の置換基を任意に有するもの、
（ａ）Ｒ’環に直接結合しているか、またはアルキル、アルキルエーテル、アルキルチオエーテル、アルキルアミン、アルキルアミド、アルキルスルホンアミド、アルキルスルホン、アルキルウレア、アルキルケトンまたはアルキルエステルリンカーを介してＲ’環に結合している環状基；または
（ｂ）Ｈ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−３アルキル、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、ハロゲン；または
（ｃ）Ｏ−Ｃ１−４アルキル、Ｓ−Ｃ１−４アルキル、ＳＯＣ１−４アルキル、ＳＯ２Ｃ１−４アルキル、ＣＯ２Ｃ０−４アルキル、ＮＨＣＯＣ０−４アルキル、ＣＯＮＨＣ０−４アルキル、ＣＯＣ０−４アルキル、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２；
Ｒ４＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ｃ２−７アルケニル；
Ｒ３＝Ｃ１−７−アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ３−７−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ；
Ｒ５＝Ｃ１−７−アルキル、ハロゲン、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ０−３−アルキル−ＣＯＮＲ３Ｒ４またはＲｉｖ；
Ｒｉｖは式：
【化６】
2004520439.tif 000005
（式中、ｎ＝１−３、ｍ＝１−３；
Ｒｖ、Ｒｖｉ＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル；
Ａ＝Ｎ、ＣＨ；
Ｂ＝Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ；
ＢがＯ、ＳのときはＲｖｉｉ＝不在；またはＢがＮ、ＣＨのときはＲｖｉｉ＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル；
Ｒｖｉｉｉ＝Ｏ、Ｃ１−７−アルキル）で示される基；
Ｒ６＝Ｈ、Ｃ１−７−アルキル、Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル、Ｃ１−３−アルキル−ＳＯ２−Ｒｉｘ、Ｃ１−３−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲｉｘまたはＣＨ２ＸＡｒ（式中、ＲｉｘはＣ１−７−アルキル、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ１−７−アルキル）；
ｑは０（すなわち−Ｃ（Ｒ６）−は結合）または１）
で示される化合物および薬理学的に許容しうるその塩を提供する。
【０００８】
本発明の化合物は、パパインスーパーファミリーのシステインプロテアーゼ、たとえば、カテプシンＢ、Ｆ、Ｌ、ＳとりわけカテプシンＫまたはファルシパインの存在または不適切な活性を特徴とする種々の疾患の治療または予防において有用性を有する。
【０００９】
本明細書において「Ｃ１−７−アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、ヘプチルおよびその簡単な異性体などの直鎖および分枝鎖脂肪族炭素鎖を含む。さらに、Ｃ１−７−アルキルは任意に１または２のハロゲンおよび／またはへテロ原子のＳ、Ｏ、ＮＨで置換されていてよい。へテロ原子が鎖の末端に位置する場合は該原子は１または２の水素原子、たとえばヒドロキシメチルで適当に置換されている。硫黄へテロ原子はスルホン（ｓｕｌｐｈｏｎｅ）に酸化されていてよい。
【００１０】
本明細書において「Ｃ１−３−アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル（これらのいずれも上記と同様に任意に置換されていてよい）を含む。
「アミン」は、ＮＨ２、ＮＨＣ１−３−アルキルまたはＮ（Ｃ１−３−アルキル）２を含む。
本明細書において「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含み、とりわけクロロ、好ましくはフルオロである。
【００１１】
本明細書において「Ｃ３−６−シクロアルキル」（またはＣ３−Ｃ７シクロアルキル）は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−６（またはＣ３−７）炭素環をさらに含む「Ｃ１−７−アルキル」のあらゆる変形物を含む。あるいは、Ｃ３−６またはＣ３−７シクロプロピルは、介在するＣ１−Ｃ７アルキルなしに隣接する炭素原子にスピロ結合していてよい。
【００１２】
本明細書において「Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル」は、「Ｃ１−７−アルキル」（上記に定義）を介してジヒドロ−（３Ｈ）−フラノン環系に結合しているかまたはＲ２、Ｒ３またはＲ４の場合は該分子骨格に直接結合している、フェニル、ピラゾリル、ピリジル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアジノリル、イソチアジノリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、フラニルまたはチエニル芳香環（Ａｒ）を含む。任意に、芳香環Ａｒは、ハロゲン、Ｃ１−３−アルキル、ＯＨ、ＯＣ１−３−アルキル、ＳＨ、ＳＣ１−３−アルキル、アミンなどで置換されていてよい。
【００１３】
Ｒ’への環状置換基（ａ）は、飽和、不飽和または芳香族であってよく、０〜４のへテロ原子を有し、単環式環、たとえばフェニル、シクロアルケニル、たとえばシクロヘキセニルまたはシクロペンテニル、フリル、チエニル、ピラニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニルなど、または二環式環、たとえば、ナフチルおよびとりわけ上記のいずれかがフェニル環に縮合したもの、たとえば、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチエニルなどを含む。炭素環式環またはへテロ環式環の置換基は、炭素原子またはへテロ原子を介して、典型的にはたとえばＮ−ピペリジニル、Ｎ−モルホリニルなどのように窒素原子を介して結合していてよい。環置換基（ａ）は、それ自体、上記Ａｒの場合の置換基で置換されていてよい。環置換基（ａ）は（ｂ）群に定めるシクロアルキルを含まない。
【００１４】
Ｒ’と環置換基（ａ）との間の任意のアルキル、アルキルエーテル、アルキルチオエーテル、アルキルアミン、アルキルアミド、アルキルスルホンアミド、アルキルスルホン、アルキルウレア、アルキルケトンまたはアルキルエステル結合は、６までの炭素原子、一般に４までの炭素原子、たとえば１または２の炭素原子を含む。存在する場合は、エーテル、チオエーテル、アミン、アミド、スルホンアミド、スルホン、ウレア、ケトンまたはエステル成分は、Ｒ’環に隣接して（たとえば、モルホリノエトキシ置換基）、置換基の環に隣接して（たとえば、フェニルスルホンエチル置換基）または２つのアルキル基の間に（たとえば、ベンゾイルオキシメチル置換基）位置していてよい。
【００１５】
本明細書において「Ｃ１−３−アルキル−ＣＯＮＲ”’，Ｒｉｖ」は、１°、２°または３°のカルボキサミドで置換された直鎖または分枝鎖炭素鎖を含み、その際、Ｒ”’、ＲｉｖはＨおよびＭｅを含む。
本明細書において「Ｃ１−３−アルキル−ＳＯ２−Ｒｉｘ」は、スルホンで置換された直鎖または分枝鎖炭素鎖を含み、その際、Ｒｉｘは「Ｃ１−７−アルキル」、「Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル」、「Ｃ３−６−シクロアルキル」を含む。
本明細書において「Ｃ１−３−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲｉｘ」は、第二級カルボキサミドで置換された直鎖または分枝鎖炭素鎖を含み、その際、Ｒｉｘは、「Ｃ１−７−アルキル」、「Ａｒ−Ｃ１−７−アルキル」、「Ｃ３−６−シクロアルキル」を含む。
【００１６】
好ましいＲ’基は、とりわけ結合がＲ’環の２位に対するものである場合は、ナフチル、キノロイル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリルおよびインドリニルなどの二環式環を含む。
他の二環式環基としては、ナフタレニル、とりわけナフチレン−２−イル；
ベンゾ［１，３］ジオキソリル、とりわけベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル、
ベンゾフラニル、とりわけベンゾフラン−２−イル、とりわけＣ１−６アルコキシ置換ベンゾフラニル、さらにとりわけ５−（２−ピペラジン−４−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル−エトキシ）ベンゾフラン−２−イル、５−（２−モルホリノ−４−イル−エトキシ）−ベンゾフラン−２−イル、５−（２−ピペラジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾフラン−２−イル、５−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−ベンゾフラン−２−イル、７−メトキシ−ベンゾフラン−２−イル、５−メトキシ−ベンゾフラン−２−イル、５，６−ジメトキシ−ベンゾフラン−２−イル、とりわけハロゲン置換ベンゾフラニル、さらにとりわけ５−フルオロ−ベンゾフラン−２−イル、５，６−ジフルオロ−ベンゾフラン−２−イル、とりわけＣ１−６アルキル置換ベンゾフラニル、最もとりわけ３−メチル−ベンゾフラン−２−イル；
ベンゾ［ｂ］チオフェニル、とりわけベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル；とりわけＣ１−６アルコキシ置換ベンゾ［ｂ］チオフェニル、さらにとりわけ５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル、
キノリニル、とりわけキノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４−イル、キノリン−６−イル、およびキノリン−Ｓ−イル；
キノキサリニル、とりわけキノキサリン−２−イル；
１，８−ナフチリジニル、とりわけ１，８−ナフチリジン−２−イル；
インドリル、とりわけインドール−２−イル、とりわけインドール−６−イル、インドール−５−イル、とりわけＣ１−６アルキル置換インドリル、さらにとりわけＮ−メチルインドール−２−イル；
フロ［３，２−ｂ］ピリジニル、とりわけフロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル、およびＣ１−６アルキル置換フロ［３，２−ｂ］ピリジニル、とりわけ３−メチル−フロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル；
チエノ［３，２−ｂ］チオフェン、とりわけチエノ［３，２−ｂ］チオフェン−２−イル、さらにとりわけＣ１−６アルキル置換チエノ［３，２−ｂ］チオフェン−２−イル、さらにとりわけ５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチルチエノ［３，２−ｂ］チオフェン−２−イルが挙げられる。
【００１７】
単環のＲ’基は、置換ピリジル、置換ピリミジル、置換フェニル、とりわけ環状基で置換されたフェニル、たとえば、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、４−メチルピペラジン−１−イル、２−モルホリン−４−イルエチルアミノ、およびピペラジン−１−イルを含む。フェニルＲ’は、３位または４位でそのような環状基で都合よく置換される。
【００１８】
キラル中心が存在する場合は、全ての異性体が包含されることを意図している。フランの５位に対応する位置（すなわち、ペプチドミメチック鎖への結合に隣接するＲ５）の（Ｒ）および（Ｓ）の両立体化学が本発明により包含され、ある場合、たとえばカテプシンＫインヒビターやファルシパインインヒビターの場合には（Ｒ）が都合よく、とりわけピラノン４結合でのＲ立体化学と組み合わせる。あるいは、Ｒ５およびフラノン／ピラノンＣ４結合はともにＳ立体化学であるのが都合よい。
【００１９】
本発明の化合物は、特にパパインスーパーファミリーのカテプシンまたはカテプシン様プロテアーゼに対するシステインプロテアーゼインヒビターである。典型的に本発明の化合物は、生理環境の特徴であるタンパク質加水分解酵素の複合混合物中の単一のプロテアーゼに対する選択的阻害、たとえば１０倍の選択性、好ましくは１００倍以上の選択性を示す。タンパク質分解活性の不正確な制御は、高血圧、血液凝固やもっと悪い状態などの不必要な病理学的状態に導くので、阻害特異性は、最も好ましくはカテプシンファミリーなどの同じ酵素のクラスまたはファミリーの他の成員（高度のホモロジーを有する）に対して示される。このことは、薬剤の投与が長引きやすい自己免疫疾患などの疾患において特に望ましいことである。
【００２０】
しかしながら、それにも拘わらず、生理的プロテアーゼの阻害に関してある程度の無差別さ（ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ）を示す化合物も有用でありうる。たとえば、多くのカテプシンの生理機能は重複している、すなわち、ある特定のシステインプロテアーゼの阻害は、他の阻害されていないプロテアーゼまたは別の代謝経路の存在またはアップレギュレーションによって代償されることができる。あるいは、短期間の処置は一過性の毒性または他の副作用としかならないこともある。
所定の推定インヒビターについてのシステインプロテアーゼの交差特異性（すなわち、インヒビターの選択性）は、それぞれの酵素に関して平行して行う通常の酵素および細胞培養アッセイによって容易に確認することができる。
【００２１】
本発明のさらなる側面は、カテプシンＫが要因である疾患、すなわち、好ましくはパパインスーパーファミリーの他の成員の実質的な同時阻害をもたらすことなく、カテプシンＫの阻害によって緩和または修飾される疾患または状態の治療に式ＩＶの化合物を使用する方法を包含する。
本発明はさらに、カテプシンＫの阻害によって緩和または修飾される疾患または状態の治療における、および該疾患または状態の治療用医薬の製造における式ＩＶの化合物の使用を提供する。
【００２２】
本発明のさらなる側面は、必要とする哺乳動物に式ＩＶの化合物を投与することを含む、原生動物感染や細菌感染などの寄生虫性感染の治療または予防方法を提供する。さらに別の側面は、無脊椎動物ベクターおよび／またはそのようなベクターの侵入しやすい部位に条件なしで（ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｐｒｏｖｉｓｏ）式ＩＶの化合物を投与することを含む、原生動物寄生虫の制御方法を提供する。
都合よくは、原生動物または細菌寄生虫は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ種、Ｇｉａｒｄｉａ種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ種、Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ種またはＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ種である。
【００２３】
Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの治療または予防は、ファルシパインＩＩ酵素の阻害を含むのが適している。
寄生虫の治療および予防に好ましいＲ３基としては、２−メチルプロペン−１−イル；またはイソブチルまたはベンジル、とりわけＬ−ロイシンおよびＬ−フェニルアラニンの側鎖に対応する立体化学を有するものが挙げられる。
カテプシンＫ阻害のために好ましいＲ３基は、Ｌ−ロイシンに対応する側鎖を含む。
【００２４】
Ｒ５置換基は、効力の改善を含む多くの有用な性質を一般式（ＩＩ）の分子に付与し、溶解性および薬動力学的特性を改善する塩基性の官能基をインヒビター分子に付与する可能性を与える。カテプシンＫやファルシパインなどの多くのカテプシンは酸性の液胞または生理的微細環境で活性であるが、これら液胞や微細環境はこの位置での塩基性官能基にとって有利であることを記憶すべきである。さらに、式（ＩＶ）においてＲ５が単に水素原子ではなくアルキルその他の置換基である分子は、フラノン（あるいは対応するピラノン）α−炭素原子（文脈で特に断らない限り、本明細書では環の位置４またはＣ４と示す）において安定なキラル安定性を示す傾向がある。キラル安定性とは、本発明の化合物がＣ４における立体化学の異なる立体異性体の等量の混合物としてではなく優勢な立体異性体として存在することを意味する。本発明の化合物は、少なくとも９０％ジアステレオマーとして純粋であるのが好ましい。
【００２５】
ＷＯ９８／５０５３３、ＷＯ９８／４６５８２、ＷＯ９９／６４３９９、ＷＯ００／２９４０８、ＷＯ００／３８６８７およびＷＯ００／４９０１１では、式（Ｉ）の同位置に置換基が存在しないのと比べて式（ＩＩ）では置換基Ｒ５が存在する点に特に注目すべきである。
【００２６】
特にカテプシンＫインヒビターとの関連で興味のもたれる式ＩＩの化合物としては以下のものが挙げられる：
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−２−フェネチル−ベンズアミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ペンチル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−シクロペンチル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸［１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［２−シクロプロピル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【００２７】
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピロール−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
【００２８】
４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−（２，２−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−（４−アリル−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−（４−シクロプロピルメチル−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
【００２９】
１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−６−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
４−アゼパン−１−イル−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−［１，４］ジアゼパン−１−イル−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−（２−メチルアミノ−エチルアミノ）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
【００３０】
ナフタレン−１−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
５−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
５−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブト−３Ｓ−エニル］−アミド
【００３１】
４−アセチルアミノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペリジン−４−イルメチル−ベンズアミド
ピペリジン−１−カルボン酸｛４−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチルカルバモイル］−フェニル｝−アミド
【００３２】
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−Ｎ’−フェニル−テレフタルアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−Ｎ’−フェニル−テレフタルアミド
Ｎ−エチル−Ｎ’−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−テレフタルアミド
Ｎ−エチル−Ｎ’−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−テレフタルアミド
４−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
４−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
【００３３】
ビフェニル−４−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−ベンズアミド
４−グアニジノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−グアニジノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−ベンズアミド
【００３４】
５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブト−３−エニル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
４−ベンゼンスルホニルアミノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−［１，４’］ビピリジニル−４−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
【００３５】
４−（１−メチル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−（ベンジル−メチル−アミノ）−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−フェニルアミノ−ベンズアミド
４−ベンジルアミノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−６−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
および対応のＲ５がヒドロキシメチルである化合物；
および薬理学的に許容しうるその塩。
【００３６】
さらに好ましい化合物としては以下のものが挙げられる：
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド
【００３７】
４−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド
【００３８】
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
【００３９】
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［１Ｓ−（３Ｓ−エチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−３−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド
【００４０】
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−４−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド
４−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
【００４１】
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピロリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペリジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペラジン−１−イル−ベンズアミド
Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（３Ｓ−オキソ−５−プロピル−テトラヒドロ−ピラン−４Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−［（ピペリジン−４−イルメチル）−アミノ］−ベンズアミド；
上記に列記した各化合物の対応の３Ｒ，４Ｒ立体異性体；
および薬理学的に許容しうるその塩。
【００４２】
本発明の化合物は塩を形成することができ、該塩は本発明の他の側面を構成する。式ＩＩの化合物の適当な薬理学的に許容しうる塩としては、有機酸の塩、とりわけカルボン酸の塩が挙げられ、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、グルコン酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、リンゴ酸、パントテン酸、イセチオン酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、安息香酸、酪酸、ジグルコン酸、シクロペンタン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、シュウ酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、フマール酸、ニコチン酸、パルミチン酸（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸、３−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、プロピオン酸、酒石酸、ラクトビオン酸、ピボル酸（ｐｉｖｏｌａｔｅ）、ショウノウ酸、ウンデカン酸およびコハク酸の塩を含むがこれらに限られるものではない、有機スルホン酸の塩、たとえばメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸の塩；および無機酸の塩、たとえば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、重硫酸、ヘミ硫酸（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、チオシアン酸、過硫酸、リン酸およびスルホン酸の塩が挙げられる。式ＩＩの化合物は、ある場合には水和物として単離できる。
【００４３】
本発明が式ＩＩの化合物をインビボで放出するプロドラッグ、溶媒和物、複合体その他の形態に及ぶことが評価されるであろう。
活性成分を単独で投与することも可能であるが、医薬製剤の一部として配合するのが好ましい。そのような製剤は、１またはそれ以上の許容しうる担体／賦形剤および任意に他の治療成分とともに上記活性成分を含むであろう。担体は、製剤の他の成分と相溶性で服用者に害を及ぼさないという意味で許容しうるものでなければならない。
【００４４】
該製剤には、直腸経由、鼻経由、局所的（口内および舌下を含む）、膣経由または非経口的（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与のものが含まれるが、好ましくは該製剤は経口で投与する製剤である。該製剤は、単位投与剤型、たとえば、錠剤や徐放カプセル剤にて都合よく提供でき、調剤の技術分野でよく知られた方法により調製できる。
【００４５】
そのような方法には、上記活性成分を担体と混合する工程が含まれる。一般に、製剤は、活性成分を液体担体または微細に破砕した固体担体または両担体と均一かつ充分に混合し、ついで必要なら製品に成型することにより調製する。本発明は、式ＩＩの化合物または薬理学的に許容しうるその塩を薬理学的に許容しうる担体またはビヒクルと混合することを含む、医薬組成物の製造方法をも包含する。医薬製剤の調製が医薬賦形剤と塩の形態の活性成分との充分な混合を含むなら、非塩基性、すなわち酸性かまたは中性の賦形剤を用いるのがしばしば好ましい。
【００４６】
本発明における経口投与のための製剤は、それぞれ所定量の活性成分を含有するカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの個別の単位（ｄｉｓｃｒｅｔｅ ｕｎｉｔｓ）として；散剤または顆粒剤として；水性液体または非水性液体中の活性成分の液剤または懸濁剤として；または水中油液体エマルジョンまたは油中水液体エマルジョンとして、およびボーラスなどとして提供できる。
【００４７】
経口投与のための組成物（たとえば、錠剤やカプセル剤）に関しては、適当な担体なる語は、通常の賦形剤、たとえば結合剤（たとえばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ショ糖およびデンプン）；充填剤および担体（たとえば、コーンスターチ、ゼラチン、乳糖、ショ糖、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸）；および滑沢剤（たとえば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムおよび他の金属性ステアリン酸塩、ステアリン酸グリセリンエステル、ステアリン酸、シリコーン液、タルクワックス、オイルおよびコロイド状シリカ）などのビヒクルを包含する。ペパーミント、冬緑油、チェリー香料などの香料剤も用いることができる。投与剤型を容易に識別できるように着色剤を添加するのが望ましい。錠剤はまた、当該技術分野でよく知られた方法によりコーティングすることもできる。
【００４８】
錠剤は、任意に１またはそれ以上の補助成分とともに圧縮または成型により製造できる。圧縮錠剤は、適当な機械で粉末や顆粒などの自由流動形態の活性成分を任意に結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、表面活性剤または分散剤と混合して圧縮することにより調製できる。成型錠剤は、適当な機械で不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を成型することにより調製できる。錠剤は、任意にコーティングしまたは刻み目を入れることができ、活性成分の緩やかなまたは制御された放出を可能とすべく調合することができる。
【００４９】
経口投与に適した他の製剤としては、着香基剤、通常、ショ糖およびアラビアゴムまたはトラガカントゴム中に活性成分を含むトローチ；ゼラチンやグリセリンなどの不活性基剤、またはショ糖およびアラビアゴム中に活性成分を含むパステル剤；および適当な液体担体中に活性成分を含む口内洗剤が挙げられる。
【００５０】
本発明の化合物または製剤の適当な投与量は適応症および患者に依存し、通常の動物試験により容易に決定される。０．０１〜１００μＭ、さらに好ましくは０．０１〜１０μＭ、たとえば０．１〜２５μＭのオーダーの細胞内濃度（パパインスーパーファミリーの生理的プロテアーゼの阻害のために）を与える投与量が典型的に望ましく達成できる。寄生虫に対するイクスビボまたは局所投与では典型的に一層高い濃度が必要であろう。
【００５１】
本明細書において使用する「Ｎ−保護基」または「Ｎ−保護」なる語は、合成手順のあいだの所望でない反応からアミノ酸またはペプチドのＮ−末端を保護することまたはアミノ基を保護することを意味する。よく用いられるＮ−保護基はグリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（ジョン・ウイリー・アンド・サンズ、ニューヨーク、１９８１）（参照のため本明細書中に引用する）に記載されている。Ｎ−保護基としては、たとえばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなどのアシル基；ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなどのスルホニル基；ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなどのカルバメート形成基；ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなどのアルキル基；およびトリメチルシリルなどのシリル基が挙げられる。好ましいＮ−保護基としては、ホルミル、アセチル、アリル、Ｆ−ｍｏｃ、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）などが挙げられる。
【００５２】
ヒドロキシおよび／またはカルボキシ保護基もまた上記グリーンの文献に広範囲に紹介されており、メチルエーテル、置換メチルエーテル、たとえば、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチルなど、シリルエーテル、たとえば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリベンジルシリル、トリフェニルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリルなど、置換エチルエーテル、たとえば、１−エトキシメチル、１−メチル−１−メトキシエチル、ｔ−ブチル、アリル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチルなど、アラルキル基、たとえば、トリチル、およびピクシル（９−ヒドロキシ−９−フェニルキサンテン誘導体、とりわけクロライド）などのエーテルを含む。エステルヒドロキシ保護基としては、ギ酸エステル、ベンジルギ酸エステル、クロロ酢酸エステル、メトキシ酢酸エステル、フェノキシ酢酸エステル、ピバル酸エステル、アダマンタン酸エステル（ａｄａｍａｎｔｏａｔｅ）、メシト酸エステル、安息香酸エステルなどのエステルが挙げられる。カーボネートヒドロキシ保護基としては、メチルビニル、アリル、シンナミル、ベンジルなどが挙げられる。
【００５３】
化合物の合成は、液相または固相のいずれかで行う化学的方法の組み合わせにより行う。本願と同時継続中のＰＣＴ／ＧＢ００／０１８９４のスキーム１〜８に記載の合成法（ただし、適当なＲ’キャッピング基を用いる）は本発明の化合物に都合がよい。
【００５４】
スキーム１：ジヒドロ−２（３Ｈ）−５−アルキルフラノン環系の調製
スキーム１
【化７】
2004520439.tif 000006
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｃｌ、Ｎａ２ＣＯ３またはＢｏｃ２Ｏ；（ｂ）ｉＢｕＯＣＯＣｌ、ＮＭＭ、ＴＨＦ；（ｃ）Ｅｔ２Ｏ中のＣＨ２Ｎ２；（ｄ）ＡｃＯＨ；（ｅ）８０％ＡｃＯＨ中のＬｉＣｌ
【００５５】
スキーム２：（２Ｓ，３Ｓ）−β−エチルセリン（１５）を例としたキラルなβ−アルキルセリンアミノ酸の調製
【化８】
2004520439.tif 000007
【００５６】
スキーム３：（２Ｓ，３Ｓ）−β−エチルセリン（１５）を例としたキラルな−アルキルセリンアミノ酸の調製のための糖経路
【化９】
2004520439.tif 000008
【００５７】
スキーム４：アリルブロマイドとのＺｎ活性化−ヨードアラニンのＣｕＣＮ触媒クロスカップリングによる新規なＰ２ハイブリッド（同Ｄｅｘｔｅｒ ＆ Ｊａｃｋｓｏｎからの許可による）
【化１０】
2004520439.tif 000009
【００５８】
スキーム５：カテプシンのジヒドロ−２（３Ｈ）−５−アルキルフラノンインヒビターの固相合成（対応のピラノンにも適用できる）
【化１１】
2004520439.tif 000010
【００５９】
スキーム６：３（２Ｈ）−フラノンインヒビターの液相調製
【化１２】
2004520439.tif 000011
【００６０】
スキーム６Ａ：ピラノン構築ブロックの液相Ｎ−末端伸長およびキャッピング
【化１３】
2004520439.tif 000012
【００６１】
構築ブロックを得るための別の経路としては以下のものが挙げられる：
スキーム７：
【化１４】
2004520439.tif 000013
（ａ）ｉＢｕＯＣＯＣｌ、ＮＭＭ；（ｂ）Ｅｔ２Ｏ中のジアゾメタン；（ｃ）８０％酢酸中のＬｉＣｌ（１０当量）；（ｄ）ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ；（ｅ）Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏｐｆｐ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｆ）ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ；（ｇ）２−ナフトエ酸、ＨＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ＤＭＦ
【００６２】
一般式（ＩＶ）においてｑ＝０である化合物は、スキーム７に示す方法によって調製する。公知のＢｏｃ−アミノ酸１−スキーム−７をクロロギ酸イソブチルおよび４−メチルモルホリンで活性化して２−スキーム−７を得る。その後、２−スキーム−７をジアゾメタンで処理してジアゾケトン３−スキーム−７を得る。ジアゾケトン３−スキーム−７の環化は塩化リチウム／酢酸水溶液により行うことができ、ジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノン４−スキーム−７を得る。酸で処理することにより４−スキーム−７からｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を除去することができ、アミン塩５−スキーム−７を得る。アミン塩５−スキーム−７は、当該技術分野で公知の方法、たとえばＨＯＢＴおよびＮＭＭの存在下でペンタフルオロフェノール誘導体を用いたカップリングによりカルボン酸とカップリングすることができ、アミド６−スキーム−７を得る。酸、たとえばジオキサン中の塩化水素で処理することにより６−スキーム−７からｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を除去してアミン塩７−スキーム−７を得る。アミン塩７−スキーム−７は、当該技術分野で公知の方法、たとえばＨＢＴＵおよびＨＯＢＴの存在下で酸を用いたカップリングによりカルボン酸とカップリングすることができ、アミド８−スキーム−７を得る。
【００６３】
スキーム８：
【化１５】
2004520439.tif 000014
（ａ）ＯｓＯ４、ＮＭＭ；（ｂ）ＴＢＤＰＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２；（ｃ）アリルブロマイド、ＴＢＡＦ、Ｂｕ２ＳｎＯ；（ｄ）ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中のＬｉＯＨ；（ｅ）ｉＢｕＯＣＯＣｌ、ＮＭＭ；（ｆ）Ｅｔ２Ｏ中のジアゾメタン；（ｇ）８０％酢酸中のＬｉＣｌ（１０当量）；（ｈ）（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄ、ＣＨＣｌ３、ＡｃＯＨ、ＮＭＭ；（ｉ）（ＭｅＯ）３ＣＨ、ｐ−トルエンスルホン酸、ＭｅＯＨ；（ｊ）ＴｓＣｌ、ピリジン；（ｋ）Ｍｅ２ＣｕＣＮＬｉ２；（ｌ）１０％Ｐｄ／炭素、Ｈ２；（ｍ）Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏｐｆｐ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｎ）ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ；（ｏ）２−ナフトエ酸、ＨＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｐ）ＴＦＡ、ＮａＨＣＯ３
【００６４】
一般式（ＩＶ）においてｑ＝１である化合物は、スキーム８に示す方法により調製する。公知のＯｂｚ−エチルエステル１−スキーム−８を四酸化オスミウムおよび４−メチルモルホリンで処理してジオール２−スキーム−８を得る。第一級アルコールの保護はｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロライドおよびイミダゾールを用いて行うことができ、３−スキーム−８を得る。第二級アルコール３−スキーム−８の保護はアリルブロマイドを用いて行うことができ、その後にエチルエステルを塩基加水分解して４−スキーム−８を得る。酸４−スキーム−８の活性化はクロロギ酸イソブチルおよび４−メチルモルホリンを用いて行うことができ、５−スキーム−８を得る。その後に５−スキーム−８をジアゾメタンで処理してジアゾケトン６−スキーム−８を得る。ジアゾケトン６−スキーム−８の環化は塩化リチウム／酢酸水溶液により行うことができ、３−ピラノン７−スキーム−８を得る。パラジウム（０）および酸により７−スキーム−８からアリル保護基を除去してアルコール８−スキーム−８を得る。
【００６５】
ケトン８−スキーム−８からのケタール生成はオルトギ酸トリメチルおよびｐ−トルエンスルホン酸で処理することにより行うことができ、９−スキーム−８を得る。アルコール９−スキーム−８のメチル誘導体１０−スキーム−８への変換は、当該技術分野で公知の方法、たとえばトシルクロライドおよびピリジンを用いたトシル化、およびその後にメチルリチウムから調製した高次クプラート（ｈｉｇｈ ｏｒｄｅｒ ｃｕｐｒａｔｅ）との反応を用いて達成できる。１０−スキーム−８からのＣｂｚ保護基の除去は、水素の存在下で１０％Ｐｄ／炭素を用いて行うことができ、１１−スキーム−８を得る。アミン１１−スキーム−８は、当該技術分野で公知の方法、たとえばＨＯＢＴおよびＮＭＭの存在下でペンタフルオロフェノール誘導体を用いたカップリングによりカルボン酸とカップリングすることができ、アミド１２−スキーム−８を得る。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基は、酸、たとえばジオキサン中の塩化水素で処理することにより除去することができ、アミン塩をその後に公知の方法、たとえばＨＢＴＵおよびＨＯＢＴの存在下で酸を用いたカップリングによりカルボン酸とカップリングすることができ、アミド１３−スキーム−８を得る。１３−スキーム−８からのケタール官能基の除去は、炭酸水素ナトリウムの存在下でトリフルオロ酢酸を用いて行うことができ、１４−スキーム−８を得る。
【００６６】
一般式ＩＩにおいてｑ＝１である化合物はまた、スキーム９に示す方法により調製することができる。
スキーム９
【化１６】
2004520439.tif 000015
（ａ）ピリジン、無水酢酸；（ｂ）トリエチルシラン、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル；（ｃ）ナトリウムメトキシド、メタノール；（ｄ）シクロヘキサノンジエチルアセタール；（ｅ）スワーン酸化；（ｆ）ＰＰｈ３ＣＨＣＨ３、ＴＨＦ；（ｇ）Ｈ２、パラジウム／炭素、重炭酸ナトリウム；（ｈ）８０％酢酸水溶液；（ｉ）水素化ナトリウム、ベンジルブロマイド；（ｊ）メシルクロライド、ピリジン；（ｋ）アジ化ナトリウム、ＤＭＦ；（ｌ）Ｈ２、パラジウム／炭素、ジ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル；（ｍ）デス−マーチンパーヨーディナン
【００６７】
リキソース１−スキーム−９をピリジン中の無水酢酸で室温にて一夜過アセチル化して２−スキーム−９を得ることができる。３−スキーム−９を与えるアノマー中心での還元は、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの存在下でトリエチルシランを用いて行う。トリアセテート３−スキーム−９の加水分解は４−スキーム−９を与え、その際、ビシナルジオールはシクロヘキサノンアセタール５−スキーム−９として保護することができる。保護していないアルコール官能基のスワーン酸化は、必要とするＣ５ピラノン置換基の導入のための重要な中間体である６−スキーム−９を与える。ここでエチル置換を、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドとともにエチルトリフェニルホスホニウムブロマイドで０℃にて処理することにより行って、７−スキーム−９を得る。酢酸エチル中の７−スキーム−９を重炭酸ナトリウムで水素化すると、図示した立体化学を有するエチル誘導体８−スキーム−９を得る。
【００６８】
シクロヘキサノンアセタール８−スキーム−９の脱保護は、無水酢酸で一夜行うことができ、ジオール９−スキーム−９を得る。エクアトリアルヒドロキシル基の選択的ベンジル化は１０−スキーム−９を与え、ついでこれをピリジン中の塩化メシルを用いて５０℃でメシル化して１１−スキーム−９を得ることができる。８０℃のＤＭＦ中のアジ化ナトリウムを用いたメシラートアニオンのアジド置換は１２−スキーム−９を与え、これからＢＯＣ−無水物の存在下での水素化分解によりピラノール１３−スキーム−９を得ることができる。ピラノン１４−スキーム−９への酸化は、デス−マーチンパーヨーディナンを用いて行う。
【００６９】
スキーム９において、Ｃ５置換基の導入はウィッティッヒ化学、ついで水素化を用いて行うことができ、それゆえ化合物６−スキーム−９はＣ５エチル誘導体８−スキーム−９に変換される。他のＣ５置換はこの経路を用いて達成できる。たとえば、別のウィッティッヒまたはホルナー−エモンス化学は異なるアルキル置換基に導くであろう。同様の仕方でＣ５ヒドロキシメチル基を調製でき、これ自体をさらに他の基、たとえばハロゲン、アミノおよび他の塩基性基およびスルフヒドリルに誘導体化することができる。
【００７０】
Ｌ−リキソースを出発物質として、４位および５位における立体配置の４つの可能なすべての組み合わせ（すなわち４Ｓ，５Ｓ；４Ｓ，５Ｒ；４Ｒ，５Ｓおよび４Ｒ，５Ｒ）を有する種々の５−置換４−アミノ−３−ヒドロキシピラノールを調製するための一般的方法が確立されている。この方法をスキーム９Ａに例示する。ピラノールはついで本明細書に記載するようにＮ−伸長およびキャッピングし、その後、たとえばデス−マーチン過ヨウ素化反応によりケト化合物に酸化できる。
スキーム９Ａ
【化１７】
2004520439.tif 000016
【００７１】
Ｌ−リキソースは、ピリジンや他の混合有機溶媒などの有機溶媒中、酸無水物、ハロゲン化アシルなどの適当なアシル化剤を用いてアシル化し、過アシル化した化合物１−スキーム−９Ａを得ることができる。ついで、この化合物をルイス酸とともにトリアルキルシラン、たとえばトリエチルシランおよびトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを用いたアノマー還元に供することができる。該化合物を対応のハロ−、スルホ−またはチオカルボ−グリコシドに変換した後、公知の方法を用いてラジカル還元を行ってもアノマー還元をもたらすことができる。塩基性条件下で脱アシル化するとトリオール３−スキーム−９Ａが得られ、これを標準的な保護基法を用いて２，３−ヒドロキシル基を選択的に保護してケタール４−スキーム−９Ａを得ることができる。
【００７２】
４−ＯＨ基を酸化してケト官能基５−スキーム−９Ａとすることは、スワーン法、デス−マーチンまたは他の適当な酸化法を用いて行うことができる。種々の４−置換アルケン６−スキーム−９Ａは、適当なウィッティッヒ試薬、たとえばトリフェニルアルキルホスホニウムハライドまたはトリフェニルアルキルアリールホスホニウムハライドを塩基とともに用いて得ることができる。ウィッティッヒ生成物を緩衝液の存在下で接触水素化すると化合物８−スキーム−９Ａが優先的に得られる。あるいは、水素化の前にケタール保護基を除去することにより、この位置が他の立体配置である化合物１０−スキーム−９Ａを得ることができる。アルケン化合物はまたヒドロホウ素化（さらなる修飾に適したヒドロキシル基を導入する）に供することもできる。
【００７３】
４−アルキル化合物を得る他の可能性は、４−ＯＨ基を脱離基、たとえばスルホネートに変換した後、所望のアルキル基の銅（ｃｕｐｒｏｕｓ）またはグリニャール試薬により変換することである。
ケタール保護基は、１Ｍ ＨＣｌ／ＴＨＦ（１：１）などの酸性条件下に室温で、または酢酸水溶液中で８０℃に加熱することによって除去することができ、ジオール８−スキーム−９Ａを与える。２−ＯＨ基を塩基の存在下、ハロゲン化ベンジルなどのアルキル化剤または他の同様の試薬で選択的に保護すると２−Ｏ−保護化合物１１，１２−スキーム−９Ａのみをまたは優先的に得ることができる。
【００７４】
３−ＯＨはスルホネートなどの適当な脱離基に変換することができ、ついでこれを置換してアジド１３，１４−スキーム−９Ａとすることができる。別法として、ミツノブ反応を用いてアジド置換化合物を生成することができる。アジド化合物をジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートなどのカルバモイル化試薬の存在下で水素化すると、所望の１，５−アンヒドロ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジデオキシ−４−エチル−Ｄ−キシリトールおよび１，５−アンヒドロ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２，３−ジデオキシ−２−エチル−Ｌ−アラビニトールを得る。
【００７５】
炭素３が他の立体配置である一連の化合物は、当該技術分野で知られた方法により化合物１１，１２−スキーム−９Ａ中の３−ＯＨの立体配置を逆転させ、ついで上記手順、すなわち脱離基の生成およびアジド置換を行うことにより調製できる。該化合物はまた、以下の手順で調製できる。上記酸化試薬を用いた３−ＯＨのケトンへの酸化、ベンジルオキシアミンハライドなどの試薬を用いたケトンのオキシムへの変換、および最後にオキシムのアミノ官能基への還元。これは２つの異なる立体配置を有する化合物の混合物を与え、これらは公知の方法を用いて分離することができる。アミノ基のＢｏｃ保護およびベンジル保護基の還元的除去は、残りの２つの立体配置４Ｒ，５Ｓおよび４Ｒ，５Ｒを有する化合物を与える。
【００７６】
スキーム１０
【化１８】
2004520439.tif 000017
（ａ）ＴＦＡ；（ｂ）Ｍｅ３Ａｌ、ＨＣｌ．ＨＮＭｅ（ＯＭｅ）、ＤＣＭ；（ｃ）ＣＣｌ３（ＮＨ）ＯｔＢｕ、ＢＦ３．Ｅｔ２Ｏ、ＤＣＭ、シクロヘキサン；（ｄ）Ｅｔ２Ｏ中のＬＡＨ；（ｅ）ｔＢｕＯＨ、２−メチル−２−ブテン、ＮａＣｌＯ２、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｈ２Ｏ；（ｆ）ｔＢｕＯＫ、Ｅｔ２Ｏ、Ｈ２Ｏ；（ｇ）ｉＢｕＯＣＯＣｌ、ＮＭＭ、ＴＨＦ；（ｈ）Ｅｔ２Ｏ中のジアゾメタン；（ｉ）８０％酢酸中のＬｉＣｌ（１０当量）
【００７７】
一般式ＩＶにおいてｑ＝１である化合物はまた、スキーム１０に示す方法により調製する。アルコール２−スキーム−１０は、Ｊ． Ｅ． Ｂａｌｄｗｉｎらによって報告された文献記載の方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， １９９５， ５１（４３）， １１５８１）に従って調製することができる。２−スキーム−１０からのエステル官能基の除去はトリフルオロ酢酸を用いて行い、ラクトン３−スキーム−１０を得ることができる。ラクトン３−スキーム−１０は、Ｍｅ３Ａｌの存在下でＭｅＯＮＨＭｅにより開環してアルコール４−スキーム−１０を得ることができる。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基をアルコール４−スキーム−１０に導入して５−スキーム−１０を得る。ついでワインレブ（Ｗｅｉｎｒｅｂ）アミド５−スキーム−１０を水素化リチウムアルミニウムで処理してアルデヒド６−スキーム−１０を得ることができる。
【００７８】
アルデヒド６−スキーム−１０の酸化を次亜塩素酸ナトリウムにより行って酸７−スキーム−１０を得ることができる。別法として、ワインレブアミド５−スキーム−１０をついでカリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドで処理して酸７−スキーム−１０を得ることができる。酸７−スキーム−１０をクロロギ酸イソブチルおよび４−メチルモルホリンで活性化して８−スキーム−１０を得る。ついで、８−スキーム−１０をジアゾメタンで処理するとジアゾケトン９−スキーム−１０を得る。ジアゾケトン９−スキーム−１０を塩化リチウム／酢酸水溶液により環化してジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノン１０−スキーム−１０を得ることができる。
【００７９】
スキーム１０において、ピラノンのＣ５置換基の導入は、Ｊ． Ｅ． Ｂａｌｄｗｉｎら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， １９９５， ５１（４３）， １１５８１）によって概説されているようにアスパラギン酸からのベータ−ラクタムの立体選択的なアルキル化により行う。この方法を用いたピラノンの別の置換基は、アルキル化工程で親電子試薬成分を変えることにより行うことができる。それゆえ、このようにして種々のアルキルまたはアリール−Ｃ１−７アルキル置換を行うことができる。
【００８０】
式ＩＩにおいてｑが１である化合物を得るための他の閉環経路は、Ｒ５官能基を２つ有するモデル化合物と関連して下記スキーム１１に示してある。
スキーム１１
【化１９】
2004520439.tif 000018
（ａ）（ＣＦ３ＳＯ２）２Ｏ、ピリジン、ＤＣＭ；（ｂ）（ｎＢｕ）４ＮＨ３、トルエン；（ｃ）Ｈ２、１０％Ｐｄ／Ｃ、ｐＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ；（ｄ）Ｂｏｃ２Ｏ、ＮＥｔ３、ＴＨＦ；（ｅ）１Ｍ ＬｉＯＨ、ＴＨＦ；（ｆ）ＴＢＤＭＳＣｌ、ＮＥｔ３、触媒量ＤＭＡＰ、ＤＣＭ；（ｇ）ｉＢｕＯＣＯＣｌ、ＮＭＭ、ＴＨＦ；（ｈ）Ｅｔ２Ｏ中のジアゾメタン；（ｉ）８０％酢酸中のＬｉＣｌ（１０当量）
【００８１】
パントラクトン１−スキーム−１１は市販されており、最初にトリフルオロメタンスルホン酸エステル２−スキーム−１１に変換する。トリフルオロメタンスルホン酸エステル２−スキーム−１１をアジ化テトラブチルアンモニウムで置換して対応アジド３−スキーム−１１を得る。アジド３−スキーム−１１を還元してアミン塩４−スキーム−１１を得る。アミン塩４−スキーム−１１を保護して５−スキーム−１１を得る。ラクトン５−スキーム−１１を水素化リチウムで開環して酸６−スキーム−１１を得る。第一級アルコール６−スキーム−１１を塩基の存在下、テトラブチルジメチルシリルクロライドで保護して酸７−スキーム−１１を得る。酸７−スキーム−１１をクロロギ酸イソブチルおよび４−メチルモルホリンで活性化して８−スキーム−１１を得る。ついで、８−スキーム−１１をジアゾメタンで処理してジアゾケトン９−スキーム−１１を得る。ジアゾケトン９−スキーム−１１の環化は塩化リチウム／酢酸水溶液により行い、モデル化合物のジヒドロ−３（２Ｈ）−ピラノン１０−スキーム−１１を得ることができる。この例で示した閉環は、種々のＲ５官能基を有する式ＩＩの化合物にも適用できる。
【００８２】
インヒビター調製のための構築ブロックとしてのまたは他のＲ５官能基を得るための中間体としての５−メチルおよびエチルフラノンへの他の経路をスキーム１２および１３に示す。
スキーム１２
【化２０】
2004520439.tif 000019
（ａ）ｐ−ＴｏｌＣｌ、ピリジン；（ｂ）（ＣＦ３ＳＯ２）２Ｏ、ピリジン、ＤＣＭ；（ｃ）ＮａＮ３、ＤＭＦ；（ｄ）７５％ＨＣＯＯＨ；（ｅ）Ａｃ２Ｏ、ピリジン；（ｆ）ＴＭＳＯＴｆ、Ｅｔ３ＳｉＨ；（ｇ）Ｋ２ＣＯ３、ＭｅＯＨ；（ｈ）Ｈ２、１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ、Ｂｏｃ２Ｏ；（ｉ）ＴｓＣｌ、ピリジン；（ｊ）ＬｉＡｌＨ４、Ｅｔ２Ｏ
【００８３】
メチルフラノンの他の合成法をスキーム１２に示す。まず、ｐ−トルオイルクロライドおよびピリジンを用いて１，２−イソプロピリデン−Ｄ−キシロフラノシド１−スキーム−１２をｐ−トルオイルエステル２−スキーム−１２に変換する。第二級アルコール２−スキーム−１２をトリフルオロメタンスルホン酸エステル３−スキーム−１２に変換する。トリフルオロメタンスルホン酸エステル３−スキーム−１２をアジ化ナトリウムで置換して対応アジド４−スキーム−１２を得る。４−スキーム−１２の１，２−イソプロピリデンの脱保護およびその後の残基のアセチル化はジアセテート５−スキーム−１２を与える。５−スキーム−１２のアノマー中心をトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルおよびトリエチルシランで還元してモノアセテート６−スキーム−１２を得る。６−スキーム−１２から２つのエステル基を炭酸カリウムを用いて除去してアルコール７−スキーム−１２を得る。
【００８４】
アジド７−スキーム−１２を無水Ｂｏｃの存在下で還元して重要な中間体であるフラノール８−スキーム−１２を得る。フラノール８−スキーム−１２は、８−スキーム−１２の第一級アルコール官能基をトシレート９−スキーム−１２に変換し、このトシレートを今度は水素化リチウムアルミニウムで還元してメチルフラノール１０−スキーム−１２とすることにより、メチルフラノール１０−スキーム−１２に変換することができる。本明細書に記載するように、フラノール１０−スキーム−１２は、本発明のインヒビターを液相または固相で構築するのに用いることができる。固相化学は、典型的にＢｏｃ保護をＦｍｏｃ化学に変えることを必要とする。最終的な合成工程は、デス−マーチンパーヨーディナンなどの酸化剤を用いてフラノール官能基を対応フラノンに酸化することを含む。別法として、酸化はＮ末端でのその後の修飾の前に行ってもよい。重要なことは、ヒドロキシメチレンが当該技術分野で知られたその後の変換に用いることができるためにフラノール８−スキーム−１２もまたＣ−５において様々な官能基を導入する機会を与えることである。
【００８５】
スキーム１３
【化２１】
2004520439.tif 000020
（ａ）ＴｓＣｌ、ピリジン；（ｂ）Ｍｅ２ＣｕＬｉ、Ｅｔ２Ｏ、ＴＨＦ；（ｃ）（ＣＦ３ＳＯ２）２Ｏ、ピリジン、ＤＣＭ；（ｄ）ＮａＮ３、ＤＭＦ；（ｅ）ＴＭＳＯＴｆ、Ｅｔ３ＳｉＨ；（ｆ）Ｈ２、１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ；（ｇ）Ｂｏｃ２Ｏ
【００８６】
エチルフラノンの他の合成法をスキーム１３に示す。１，２−イソプロピリデン−Ｌ−キシロフラノシド１−スキーム−１３を出発物質として用い、まずトシレート２−スキーム−１３に変換する。トシレート２−スキーム−１３はクプラート化学を用いて容易に置換してエチルフラノシド３−スキーム−１３を得る。第二級アルコール３−スキーム−１３を無水トリフルオロメタンスルホン酸およびピリジンを用いてトリフルオロメタンスルホン酸エステル４−スキーム−１３に変換する。トリフルオロメタンスルホン酸エステル４−スキーム−１３をアジ化ナトリウムで置換して対応アジド５−スキーム−１３を得る。５−スキーム−１３のアノマー中心をトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルおよびトリエチルシランで還元してアルコール６−スキーム−１３を得る。アジド６−スキーム−１３を１０％パラジウム／炭素の存在下、水素で還元してアミン７−スキーム−１３を得る。アミン７−スキーム−１３を無水Ｂｏｃで保護してエチルフラノール８−スキーム−１３を得る。本明細書に記載するように、フラノール８−スキーム−１３は、インヒビターの可能性のあるものを液相または固相で構築するのに用いることができる。固相化学は、典型的にＢｏｃ保護をＦｍｏｃ化学に変えることを必要とする。最終的な合成工程は、デス−マーチンパーヨーディナンなどの酸化剤を用いてフラノール官能基を対応フラノンに酸化することを含む。別法として、酸化はＮ末端でのその後の修飾の前に行ってもよい。
【００８７】
多くのＲ３基をＬ−ロイシン、Ｌ−ノルロイシン、Ｌ−フェニルアラニンなどの市販のアミノ酸残基から調製することができる。他の分枝鎖および不飽和アミノ酸構築ブロックは、２０００年５月１７日に出願した英国特許出願ＧＢ０００２５３８６−４の優先権を主張するＭｅｄｉｖｉｒ ＵＫのＰＣＴ／ＧＢ０１／０２１６２に示してある（その内容を参照のため本明細書中に引用する）。
【００８８】
スルホニル含有Ｃ１−Ｃ７アルキルまたはＡｒＣ１−Ｃ７アルキルＲ３基、たとえばアリールアルキルＣ０−２スルホニルメチル官能基へのアクセスは、適当に保護したアミノ酸システインから得ることができる。システインのチオールとフェノールなどのアリールアルコールとのミツノブ（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ）カップリングはフェニルチオメチルＲ３側鎖を含有する保護アミノ酸を生成し、これはｍ−クロロ過安息香酸を用いて容易に酸化してＲ３側鎖フェニルスルホニルメチルを得る。ベンジルスルホニルメチルおよびフェネチルスルホニルメチルＲ３側鎖を含有するアミノ酸は、システインのチオールを臭化ベンジルおよび臭化フェネチルでそれぞれ求核置換することにより調製できる。得られたスルフィドをｍ−クロロ過安息香酸で酸化すると、ベンジルスルホニルメチルおよびフェネチルスルホニルメチルＲ３側鎖を有する適当に保護されたアミノ酸が得られる。
【００８９】
本発明の態様の詳細な説明
液相化学
実施例１
一般化学スキーム１４による。
【化２２】
2004520439.tif 000021
【００９０】
（ａ）（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（１）を例とするＮ−Ｂｏｃ保護ジアゾケトンの合成の一般法
（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニン（１．２ｇ、４．２ミリモル）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（１ｍＬ、２．２当量）を加えた。反応液を−１５℃に冷却し、アルゴン雰囲気下で攪拌した。クロロギ酸イソブチル（０．５６ｍＬ、４．３ミリモル）を加え、混合物を−１５℃で１０分間攪拌した。ジエチルエーテル中のジアゾメタンの溶液（４５ｍＬ、約４０ミリモル）を加え、反応液を室温に１時間静置して温め、ついで発泡がなくなるまで酢酸を滴下して加えた。反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×７５ｍＬ）、水（７５ｍＬ）および食塩水（７５ｍＬ）で順に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を真空乾燥して粗製の（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（１．２ｇ、〜１００％）を薄黄色の油状物として得た。上記合成を９回繰り返し、すべての粗製生成物をプールし（１２ｇ）、精製することなく次の工程に用いた。
【００９１】
（ｂ）ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２）を例とするＢｏｃ−３（２Ｈ）−フラノンの合成の一般法
８０％酢酸水溶液（４００ｍＬ）中の塩化リチウム（１３．６ｇ、３２０ミリモル）の溶液を５℃に冷却し、粗製の（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（１）（９．６ｇ）に攪拌しながら加えた。油状物を１０分間かけて溶解し、室温にゆっくりと温めながら攪拌をさらに１時間続けるとガスが発生した。溶媒を真空除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に取り、水（２５０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１００ｍＬ）および食塩水（７５ｍＬ）で順に洗浄し、ついで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：２、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル（１５０ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。２つのフラクションをプールし、速やかに溶出するフラクションを約５０ｍＬのヘプタンに真空濃縮し、静置して結晶化してジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２）を白色固体（収量４．０５ｇ、１８．８ミリモル、５８％）として得た。
【００９２】
【数１】
2004520439.tif 000022
【００９３】
（ｃ）ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルアラニル］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（３）を例とするＮ−末端伸長の一般法
ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２）（１．０ｇ、４．６ミリモル）をジオキサン（２５ｍＬ）中の４．０Ｍ ＨＣｌの溶液で室温にて１時間処理した。溶媒を真空除去し、残渣を２×トルエンで共沸して塩酸塩を白色固体として得た。
【００９４】
Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルアラニンペンタフルオロフェニルエステル（２．０ｇ、１．０５当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．７３５ｇ、１．０５当量）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、５分後に上記塩に加えた。ついで、透明な溶液をＮ−メチルモルホリン（０．５１ｇ、０．５６ｍＬ、１．１当量）で処理し、室温で２時間静置した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：３、ｖ／ｖ）、ついでＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：２、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル（５０ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。フラクションをプールし、真空濃縮してジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルアラニル］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（３）を白色固体（収量１．３１ｇ、３．８２ミリモル、８３％）として得た。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３４３（ＭＨ＋）、２８７（ＭＨ＋−５６）
この方法は、対応のＮ−Ｂｏｃ保護ピラノンまたは（１，５−アンヒドロ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジデオキシ−４−エチル−Ｄ−キシリトールに容易に適用できる。
【００９５】
（ｄ）ベンゾフラン−２−カルボン酸［３，３−ジメチル−１Ｓ−（２Ｓ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルカルバモイル）ブチル］アミド（４）を例とする、キャッピング基の付加の一般法
ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルアラニル］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（３）（１．０３ｇ、３．０ミリモル）をジオキサン（２５ｍＬ）中の４．０Ｍ ＨＣｌの溶液で室温にて１時間処理した。溶媒を真空除去し、残渣を２×トルエンで共沸して塩酸塩を白色固体として得た。
【００９６】
ベンゾフラン−２−カルボキシペンタフルオロフェニルエステル（１．０５当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．０５当量）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解し、５分後に上記塩に加えた。ついで、透明な溶液をＮ−メチルモルホリン（１．１当量）で処理し、室温で２時間静置した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３：２、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル（５０ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。フラクションをプールし、真空濃縮して標記化合物を得た。
【００９７】
実施例２：４，４−ジメチル−２Ｓ−（ベンゾフラン−２−スルホニルアミノ）ペンタン酸（２Ｓ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イル）アミド（５）
（ａ）４，４−ジメチル−２Ｓ−（ベンゾフラン−２−スルホニルアミノ）ペンタン酸（２Ｓ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イル）アミド（５）を例とする、スルホニルキャッピング基の付加の一般法
ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルアラニル］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（３）（３４ｍｇ、０．１ミリモル）をジオキサン（５ｍＬ）中の４．０Ｍ ＨＣｌの溶液で室温にて１時間処理した。溶媒を真空除去し、残渣を２×トルエンで共沸して塩酸塩を白色固体として得た。
【００９８】
塩酸塩を乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ベンゾフラン−２−スルホニルクロライドを加え、ついでジイソプロピルエチルアミン（３当量）および触媒のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２ｍｇ）を加えた。室温で２時間後、溶液をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍＬ）、水（２×２５ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で順に洗浄し、ついで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル（１５ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。フラクションをプールし、真空濃縮して標記化合物を得た。
【００９９】
キラルなβ−アルキルセリンアミノ酸の一般的合成
Ｂｌａｓｋｏｖｉｃｈ， Ｍ． Ａ．， Ｅｖｉｎｄｅｒ， Ｇ．， Ｒｏｓｅ， Ｎ． Ｇ． Ｗ． Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ， Ｓ． Ｌｕｏ， Ｙ．およびＬａｊｏｉｅ， Ｇ． Ａ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６３， ３６３１−３６４６， １９９８から採用（スキーム２による）
実施例５：（２Ｓ，３Ｓ）β−ヒドロキシノルバリン（１５）
（ａ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−セリン−３−メチル−３−（ヒドロキシメチル）オキセタンエステル（８）
Ｎ−Ｃｂｚ−Ｌ−セリン（１０ｇ、４１．８ミリモル）をＤＣＭ（４５０ｍＬ）およびＤＭＦ（１４ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却したＷＳＣ．ＨＣｌ（１２ｇ、６２．７ミリモル）、Ｎ’Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２６０ｍｇ、２．１ミリモル）および３−メチル−３−オキセタンメタノール（８４ｍＬ、０．８４ミリモル）の攪拌溶液に２．５時間かけて滴下して加えた。反応液を室温に温め、一夜攪拌した。混合物を０．１Ｍ ＨＣｌ（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）、１０％Ｎａ２ＣＯ３（２００ｍＬ×２）および水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を真空除去して薄黄色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（４：１、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）により精製し、ついで再結晶して（１：１、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）目的中間体を白色結晶固体（８．０７ｇ、６０％）として得た。
【０１００】
【数２】
2004520439.tif 000023
【０１０１】
（ｂ）１−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（１Ｓ）−１−アミノ−２−ヒドロキシエチル］−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（９）
化合物（８）（１０．２３ｇ、２８．６ミリモル）を無水ＤＣＭ（１５０ｍＬ）に溶解し、Ｎ２下で０℃に冷却した。無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の三フッ化ホウ素エーテレート（０．１０ｍＬ、０．７７ミリモル）の溶液を加え、混合物を０℃で３０分間攪拌し、ついで室温で一夜攪拌した。トリエチルアミン（１．２ｍＬ、８．３０ミリモル）を加え、濃い無色油状物に濃縮する前に反応混合物を３０分間攪拌した。カラムクロマトグラフィー（４：１、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）により精製し、ついで再結晶して（１：１、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）化合物（９）を白色結晶固体（８．０６ｇ、８０％）として得た。
【０１０２】
【数３】
2004520439.tif 000024
【０１０３】
（ｃ）１−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（１Ｓ）−１−アミノ−２−オキソエチル］−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（１０）
化合物（９）（６．４５ｇ、２０．０ミリモル）をフラスコ１中、Ｎ２下で無水ＤＣＭ（５５ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。塩化オキザリル（２．８ｍＬ、３１．９ミリモル）を別のフラスコ（フラスコ２）中で無水ＤＣＭ（８５ｍＬ）にＮ２下で加え、−７８℃に冷却した。無水ジメチルスルホキシド（４．７ｍＬ、６５．８ミリモル）を塩化オキザリル溶液に加え、混合物を−７８℃で１５分間攪拌した。アルコール溶液をカニューレで２０分間かけてフラスコ２に移し、無水ＤＣＭ（３５ｍＬ）で濯いだ。得られた濁った白色混合物を−７８℃で１．５時間攪拌した。
【０１０４】
ジイソプロピルエチルアミン（１７．４ｍＬ、９９．７ミリモル）を加え、溶液を−７８℃で３０分間、ついで０℃で１０分間攪拌した。氷冷ＤＣＭ（１４０ｍＬ）を加え、溶液を氷冷ＮＨ４Ｃｌ（２０％飽和溶液；３×１４０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を真空蒸発して黄色の固体（１０）（５．０８ｇ、７９％）を得た。
【数４】
2004520439.tif 000025
【０１０５】
（ｄ）１−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ヒドロキシブチル］−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（１１）
化合物（１０）（２ｇ、５．７３ミリモル）をＮ２下で無水ＤＣＭ：Ｅｔ２Ｏ（１：１）に溶解した。ＥｔＭｇＢｒの溶液（Ｅｔ２Ｏ中の３Ｍ溶液；７．６ｍＬ、２２．９ミリモル）を−７８℃で速やかに加え、激しく攪拌した。３０分後に５％ＮＨ４Ｃｌ（５００ｍＬ）に注ぐことにより反応を停止させた。ＤＣＭ（５００ｍＬ）を加え、有機層を分離し、３％ＮＨ４Ｃｌ（５００ｍＬ）および食塩水（５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を真空蒸発して黄色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（１：１０、ＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ）により精製し、ついで再結晶して（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）白色結晶固体（１１）（１．３２ｇ、６０％）を得た。
【０１０６】
【数５】
2004520439.tif 000026
【０１０７】
（ｅ）１−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（１Ｓ）−１−アミノ−２−オキソブチル］−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（１２）
化合物（１１）（１．３２ｇ、３．８ミリモル）をフラスコ１中、Ｎ２下で無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。塩化オキザリル（ＤＣＭ中の２Ｍ溶液；３ｍＬ、６．０ミリモル）を別のフラスコ（フラスコ２）中で無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）でＮ２下にて希釈し、−７８℃に冷却した。無水ジメチルスルホキシド（０．８８ｍＬ、１２．４ミリモル）を塩化オキザリル溶液に加え、混合物を−７８℃で１５分間攪拌した。アルコール溶液をカニューレで２０分間かけてフラスコ２に移し、無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）で濯いだ。得られた濁った白色混合物を−７８℃で２時間１５分攪拌した。ＤＩＰＥＡ（３．３ｍＬ、１８．８ミリモル）を加え、溶液を−７８℃で３０分間、ついで０℃で１０分間攪拌した。氷冷ＤＣＭ（２５ｍＬ）を加え、溶液を氷冷ＮＨ４Ｃｌ（５％飽和溶液；３×２５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を真空蒸発してオレンジ色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（２：３、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン）により精製して無色油状物（１２）（５５６ｍｇ、４５％）を得た。
【０１０８】
【数６】
2004520439.tif 000027
【０１０９】
（ｆ）１−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（１Ｓ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ヒドロキシブチル］−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（１３）
化合物（１２）（２．７７ｇ、７．９ミリモル）およびＬｉＢＨ４（１．７３ｇ、７９ミリモル）をＮ２下にて−７８℃に冷却した。ＤＣＭ：ＣＨ３ＯＨの溶液（１．５：１；３３２ｍＬ、−７８℃に冷却）を加え、溶液を−７８℃で一夜攪拌した。室温に温めた後、溶液を５％ＮＨ４Ｃｌ溶液（５００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、５％ＮＨ４Ｃｌ溶液（５００ｍＬ）および食塩水（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を真空蒸発して白色固体（１３）（２．５１ｇ、９０％）を得た。
【０１１０】
【数７】
2004520439.tif 000028
【０１１１】
（ｇ）（１Ｓ，２Ｓ）−（１−アミノ−２−ヒドロキシブチル）−４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オキセタン（１４）
化合物（１３）（２．５１ｇ、７．１ミリモル）をエタノール（２２０ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（２１８ｍｇ）を加えた。反応混合物をＨ２の存在下で一夜攪拌した。触媒をセライト濾過により除去し、溶媒を真空蒸発させて濃厚な油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（２０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）により精製して薄黄色の油状物（１４）（１．２４ｇ、９２％）を得た（このものは静置すると析出した）。
【０１１２】
【数８】
2004520439.tif 000029
【０１１３】
（ｈ）（２Ｓ，３Ｓ）β−ヒドロキシノルバリン（１５）
化合物（１４）（１．２４ｇ、５．５ミリモル）をＤＣＭ（６８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１．５８ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１．１３ｍＬ）を加えた。得られた濁った白色溶液を室温で３０分間攪拌し、溶媒を真空蒸発させた。無色の残渣をＭｅＯＨ（６６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１７ｍＬ）に溶解し、１０％Ｃｓ２ＣＯ３（９２ｍＬのＨ２Ｏ中に９．２ｇ）を加えた。室温で一夜攪拌した後、溶液を２Ｍ ＨＣｌ（〜３５ｍＬ）でｐＨ＜３の酸性にした。溶液を陽イオンカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ ５０Ｗ−Ｘ８、１００−２００メッシュ、水素型、４．５×２０ｃｍ）に負荷し、０．０１Ｍ ＨＣｌ（５００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５００ｍＬ）で洗浄し、２Ｍ ＮＨ４ＯＨ（２Ｌ）で溶出し、ついで凍結乾燥して薄黄色の固体を得た。固体をＭｅＯＨで洗浄してオフホワイトの固体（１５）（２２７ｍｇ、３０％）を得た。
【０１１４】
【数９】
2004520439.tif 000030
【０１１５】
ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−エチル−３（２Ｈ）−フラノン（１８）を例として、スキーム１に詳記した一般化学によるＦｍｏｃ−３（２Ｈ）−フラノンの合成の一般法
（ａ）Ｆｍｏｃ−（２Ｓ，３Ｓ）−β−エチルセリン（１６）の調製
（２Ｓ，３Ｓ）−ヒドロキシノルバリン（１５）（２７７ｍｇ、２．０７ミリモル）および炭酸ナトリウム（２．１当量、４６０ｍｇ）を、攪拌および氷冷しながら水（２５ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解した。ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のクロロギ酸９−フルオレニルメチル（１．０５当量、５６０ｍｇ）を４５分間かけて加え、混合物を室温にてさらに１時間攪拌した。クロロホルム（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を加え、混合物を０．１Ｎ ＨＣｌでｐＨ２の酸性にした。有機層を回収し、水性層をさらに２×１００ｍＬのクロロホルムで洗浄した。コンバインした有機物を食塩水（１×３００ｍＬ）で逆流して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。クロロホルムを真空濃縮して微細な白色固体を得た。この固体を加熱しながらｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２５ｍＬ）に溶解し、ヘプタン（７５ｍＬ）を加えて濁った溶液を得た。混合物を−２０℃に冷却し、各３０分でさらにヘプタン（７５ｍＬ）を４サイクル加えた。沈殿を濾去し、真空乾燥して微細な白色固体（１６）（５９０ｍｇ、８０．６％）を得た。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ３：１）Ｒｆ＝０．４０、エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３５６．２（ＭＨ＋）
【０１１６】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−β−エチルセリニルジアゾメタン（１７）の調製
化合物（１）についての実施例１．（ａ）で詳記した一般法に従い、Ｆｍｏｃ−（２Ｓ，３Ｓ）−  −エチルセリン（１６）（５６０ｍｇ）を黄色の固体（６００ｍｇ）（１７）に変換し、精製することなく用いた。
【０１１７】
（ｃ）ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−エチル−３（２Ｈ）−フラノン（１８）の調製
８０％酢酸水溶液（１０ｍＬ）中の塩化リチウム（１．０ｇ、２３．５ミリモル）の溶液を５℃に冷却し、粗製の（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−  −エチルセリニルジアゾメタン（１７）（０．６ｇ）に攪拌しながら加えた。油状物を１０分間かけて溶解し、ゆっくりと室温に温めながらさらに１時間攪拌を続けるとガスが発生した。溶媒を真空除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に取り、水（５０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１００ｍＬ）および食塩水（７５ｍＬ）で順に洗浄し、ついで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：３、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル（２５ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望のフラクションをプールし、残渣を真空濃縮してジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−エチル−３（２Ｈ）−フラノン（１８）を白色固体として得た（収量３２０ｍｇ、０．９１ミリモル、５８％）。
【０１１８】
【数１０】
2004520439.tif 000031
【０１１９】
（ｄ）（２Ｓ，３Ｒ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（１９）の調製
化合物（１）についての実施例１（ａ）に詳記した一般法に従い、Ｆｍｏｃ−（２Ｓ，３Ｒ）−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニン（１．９９ｇ、５ミリモル）を薄黄色の非流動性の油状物としての（２Ｓ，３Ｒ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（１９）（２．１１ｇ、１００％）に変換した。この化合物をさらに精製することなく次の工程に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ４４４（ＭＮａ＋、２０％）、３９４（ＭＨ＋−Ｎ２、７０％）および３３８（ＭＨ＋−ｔブチル−Ｎ２、１００％）
【０１２０】
（ｅ）（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｄ−トレオニルジアゾメタン（２０）の調製
化合物（１）についての実施例１（ａ）に詳記した一般法に従い、Ｆｍｏｃ−（２Ｒ，３Ｓ）−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｄ−トレオニン（０．４ｇ、１ミリモル）を薄黄色の非流動性の油状物としての（２Ｓ，３Ｒ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニルジアゾメタン（２０）（０．４８ｇ、１１１％）に変換した。この化合物をさらに精製することなく次の工程に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３９４（ＭＨ＋−Ｎ２、６０％）および３３８（ＭＨ＋−ｔブチル−Ｎ２、１００％）
【０１２１】
（ｆ）（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−アロ−トレオニルジアゾメタン（２１）の調製
化合物（１）についての実施例１（ａ）に詳記した一般法に従い、Ｆｍｏｃ−（２Ｓ，３Ｓ）−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−アロ−トレオニン（０．４ｇ、１ミリモル）を薄黄色の非流動性の油状物としての（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−アロ−トレオニルジアゾメタン（２１）（０．５３ｇ、１２３％）に変換した。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３９４（ＭＨ＋−Ｎ２、９０％）および３３８（ＭＨ＋−ｔブチル−Ｎ２、１００％）
【０１２２】
（ｉ）ジヒドロ−（４Ｒ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｒ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２２）の調製
化合物（１７）から化合物（１８）への環化について詳記した一般法に従い、ジアゾケトン（１９）を環化してジヒドロ−（４Ｒ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｒ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２２）を白色固体として単離した（収率６９％）。
【０１２３】
【数１１】
2004520439.tif 000032
【０１２４】
（ｊ）ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２３）の調製
化合物（１７）から化合物（１８）への環化について詳記した一般法に従い、ジアゾケトン（２０）を環化してジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２３）を白色固体として単離した（収率７０％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３３８（ＭＨ＋、７５％）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．６２分（９８．９％）。
【０１２５】
（ｋ）ジヒドロ−（４Ｓ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｓ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２３）の調製
化合物（１７）から化合物（１８）への環化について詳記した一般法に従い、ジアゾケトン（２１）を環化してジヒドロ−（４Ｒ−アミノ−［Ｎ−Ｆｍｏｃ］）−５Ｒ−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（２３）を白色固体として単離した（収率６４％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３３８（ＭＨ＋、１００％）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．６８分（９７．５％）。
【０１２６】
Ｎ−保護４−アミノピラノール構築ブロックの調製の一般法
この経路を４Ｓ，５Ｓエナンシオマーにより例示するが、上記の他の立体配置にも適用できる。
【化２３】
2004520439.tif 000033
【０１２７】
１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−リキソピロアノース（１）
Ｌ−リキソピラノース（２５．０ｇ、１６６ミリモル）をピリジン（１５０ｍｌ）に溶解し、氷浴上で冷却し、無水酢酸（７５ｍｌ）を加え、溶液を室温で攪拌した。２時間後、ｔｌｃ（ペンタン：酢酸エチル１：１）は出発物質の一層高い移動スポットへの完全な変換を示した。溶液を濃縮し、トルエンとともに３回共蒸発させて薄黄色のシロップを得た。
【０１２８】
【数１２】
2004520439.tif 000034
【０１２９】
２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１，５−アンヒドロ−Ｌ−アラビニトール（２）
上記工程の収量を構成するアセトニトリル（２００ｍｌ）中の粗製の１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−リキソピロアノースの溶液にトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（６０ｍｌ、３３３ミリモル）を加え、溶液を氷浴上で冷却し、トリエチルシラン（８０ｍｌ、５００ミリモル）を滴下して加えた。溶液を室温で攪拌し、反応をＧＣによりモニターした。反応が完了したら（約３時間）、溶液を炭酸水素ナトリウムで中和し、ジクロロメタンで希釈し、水洗した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ペンタン：酢酸エチル５：１、４：１、３：１）により精製して還元化合物を（３２ｇ、７４％（遊離のリキソースから））得た。
【０１３０】
【数１３】
2004520439.tif 000035
【０１３１】
１，５−アンヒドロ−３，４−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｌ−アラビニトール（３）
メタノール（１２５ｍｌ）中の１−デオキシ−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｌ−リキソピロアノース（２０．８ｇ、８０ミリモル）の溶液を触媒量の１Ｍメタノール性ナトリウムメトキシドで処理した。室温で１時間攪拌した後、ｔｌｃ（酢酸エチル：メタノール３：１）は一層低い移動スポットへの完全な変換を示していた。溶液をＤｏｗｅｘ Ｈ＋で中和し、濾過し、濃縮して無色油状物を得た。
油状物をジクロロメタン（７０ｍｌ）に懸濁し、シクロヘキサノンジエチルケタール（４１ｇ、２４０ミリモル）を加え、ついで酸性ｐＨになるまでｐ−トルエンスルホン酸を加えた。数分後に懸濁液は透明な溶液となり、これを室温で攪拌した。１８時間後、ｔｌｃ（ペンタン：酢酸エチル１：２）が一層高い移動スポットへの完全な変換を示したら、溶液をトリエチルアミンで中和し、濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル３：２、１：１）により精製して標記化合物（９．６ｇ、５６％）を白色結晶として得た。
【０１３２】
【数１４】
2004520439.tif 000036
【０１３３】
１，５−アンヒドロ−３，４−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｌ−リブロース（４）
ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の塩化オキザリル（１．７９ｍｌ、２０．５ミリモル）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中のジメチルスルホキシド（２．６５ｍｌ、３７．３ミリモル）の溶液を窒素下、−６０℃で１５分間かけて滴下して加えた。この溶液に、ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の２，３−Ｏ−シクロヘキシリデン−１−デオキシ−Ｌ−リキソピロアノース（４ｇ、１８．７ミリモル）の溶液を５分間かけて滴下して加えた。白色懸濁液が得られ、ジクロロメタンをさらに２回（１０＋３０ｍｌ）加えた。温度を−２５℃に上げると懸濁液は無色溶液になった。温度を再び−４５℃に下げ、ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のトリエチルアミン（１２．９ｍｌ、９３．３ミリモル）の溶液を加えた。１０分後、ｔｌｃ（トルエン：酢酸エチル１：１）がアルコールのケトンへの完全な変換を示したら、反応混合物を水（１００ｍｌ）中に注ぎ、水層をジクロロメタン（５０ｍｌ）で１回抽出し、コンバインした有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣のシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：ジエチルエーテル１：１）は無色固体（３．４ｇ、８６％）を与えた。
【０１３４】
酸化はまたデス−マーチン法によっても行った：
ジクロロメタン（５ｍｌ）中の２，３−Ｏ−シクロヘキシリデン−１−デオキシ−Ｌ−リキソピロアノース（０．５ｇ、２．３３ミリモル）およびおよびデス−マーチンパーヨーディナン（１．３９ｇ、３．２９ミリモル）の懸濁液を１０分間攪拌し、ついで「湿（ｗｅｔ）ジクロロメタン」（１０ｍｌのジクロロメタン中の４６ｌの水）を１５分かけて滴下して加えた。１時間後、ｔｌｃ（トルエン：酢酸エチル１：１）は出発物質の一層高い移動スポットへの完全な変換を示した。反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍｌ）で希釈し、炭酸水素ナトリウム／チオ硫酸ナトリウム１：１の水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：ジエチルエーテル１：１）により精製して標記化合物（０．４２ｇ、８４％）を結晶性固体として得た。
【０１３５】
【数１５】
2004520439.tif 000037
【０１３６】
１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−４−エチリデン−２，３−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｄ−エリスロ−ペンチトール（５）
ＴＨＦ（６０ｍｌ）中のエチルトリフェニルホスホニウムブロマイド（１１．９ｇ、３２．０ミリモル）の攪拌懸濁液に、カリウムｔ−ブトキシド（３．４１ｇ、３０．４ミリモル）を窒素下、−１０℃にて一度に加えた。得られたオレンジ−赤色の混合物を静置して室温とし、ついで再び−１０℃に冷却し、ＴＨＦ（４０ｍｌ）中の１，５−アンヒドロ−３，４−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｌ−リブロース（３．４ｇ、１６．０ミリモル）の溶液を滴下して加えた。混合物を静置して室温とした。最終添加の２０分後、ｔｌｃ（トルエン：酢酸エチル１：１）が出発物質の一層高い移動スポットへの完全な変換を示したら、反応混合物をジエチルエーテル（４００ｍｌ）と水（２００ｍｌ）とに分配した。有機層を水（１×２００ｍｌ）および食塩水（１×２００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、１０ｍｌの残渣に濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：酢酸エチル９５：５、９：１）により精製し、適当なフラクションを注意深く濃縮して（湯温２５℃）１０ｇの溶液を得、これを次の工程に直接用いた。
【０１３７】
１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−４−エチル−２，３−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｄ−リビトール（６）
上記溶液を酢酸エチル（３０ｍｌ）で希釈し、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．２ｇ）を加え、混合物を大気圧下で水素化した。４０分および９０分後にＰｄ／Ｃをさらに加えた（０．１６ｇ＋０．２０ｇ）。１００分後、ｔｌｃは出発物質の殆ど完全な消費を示した。反応混合物をセライト濾過し、液体（５ｍｌ）に濃縮し、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：酢酸エチル９５：５、９：１）により精製した。適当なフラクションを２．０８ｇに濃縮し、この溶液を次の工程に直接用いた。
【０１３８】
【数１６】
2004520439.tif 000038
【０１３９】
１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−４−エチル−Ｄ−リビトール（７）
上記１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−４−エチル−２，３−Ｏ−シクロヘキシリデン−Ｄ−リビトールを酢酸水溶液（８０％、２５ｍｌ）に溶解し、溶液を７０℃で攪拌した。１８時間後、ｔｌｃ（ペンタン：酢酸エチル９：１および１：１）が出発物質の殆ど完全な消費（〜５％残留）を示したら、溶液を濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：酢酸エチル１：１、２：３）により精製して０．９１ｇ、３９％（ケト化合物から）の無色固体を得た。
【０１４０】
【数１７】
2004520439.tif 000039
【０１４１】
１，５−アンヒドロ−２−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−４−エチル−Ｄ−リビトール（８）
ジメチルホルムアミド（７ｍｌ）中の１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−４−エチル−Ｄ−リビトール（０．５ｇ、３．４２ミリモル）の攪拌溶液に、水素化ナトリウム（６０％、０．２７ｇ、６．８４ミリモル）を窒素下、室温にて一度に加えた。３０分後、ベンジルブロマイド（０．５３ｍｌ、４．４５ミリモル）を３０分かけて滴下して加えた。２０分後、ｔｌｃ（石油エーテル：酢酸エチル４：１）がジオールの完全な変換を示したら、メタノール（１ｍｌ）を加え、混合物を２０分間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、水（３×５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、ペンタン：酢酸エチル９：１、４：１）により精製して０．５２ｇ、６４％の無色固体を得た。
【０１４２】
【数１８】
2004520439.tif 000040
【０１４３】
１，５−アンヒドロ−３−アジド−２−Ｏ−ベンジル−３，４−ジデオキシ−４−エチル−Ｄ−キシリトール（９）
ピリジン（５ｍｌ）中の１，５−アンヒドロ−２−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−４−エチル−Ｄ−リビトール（０．２８ｇ、１．１８ミリモル）の攪拌溶液に、メタンスルホニルクロライド（０．３４ｇ、２．９６ミリモル）を加えた。反応混合物を５０℃に温め、１時間攪拌した。ジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、反応混合物を１Ｍ硫酸水溶液（２×５０ｍｌ）、１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液で順に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）に溶解し、アジ化ナトリウム（０．３１ｇ、４．７４ミリモル）を加えた。得られた混合物を８０℃で一夜攪拌し、酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、水（３×５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、トルエン：酢酸エチル９５：５）により精製して０．２５ｇ、８１％の無色油状物を得た。
【０１４４】
【数１９】
2004520439.tif 000041
【０１４５】
１，５−アンヒドロ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジデオキシ−４−エチル−Ｄ−キシリトール（１０）
酢酸エチル（４ｍｌ）中の１，５−アンヒドロ−３−アジド−２−Ｏ−ベンジル−３，４−ジデオキシ−４−エチル−Ｄ−キシリトール（８８ｍｇ、０．３４ミリモル）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７７ｍｇ、０．３５ミリモル）の溶液にＰｄ／Ｃ（１０％、３０ｍｇ）を加え、混合物を水素下で攪拌した。１８時間後、ｔｌｃ（ペンタン：酢酸エチル９：１、ニンヒドライド（ｎｉｎｈｙｄｒｉｄｅ））が出発物質の完全な消費を示したら、混合物をセライト濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、トルエン：酢酸エチル４：１）により精製して無色固体を得たが、このものは１Ｈｎｍｒによりベンジル基を依然として含んでいた。この固体を酢酸エチル：エタノール１：１に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２０ｍｇ）で水素化した。１時間後、ｔｌｃ（トルエン：酢酸エチル１：１、ニンヒドライド）が出発物質の一層低い移動スポットへの完全な変換を示したら、混合物をセライト濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液、トルエン：酢酸エチル１：１、２：３）により精製して所望のモノオール５９ｍｇ、７１％を無色固体として得た。このモノオールを本明細書の記載に従ってＮ伸長およびキャッピングし、ついで対応ピラノンに酸化した。別法として、モノオールを最初に酸化し、ついでＮ伸長およびキャッピングしてもよい。
【０１４６】
【数２０】
2004520439.tif 000042
【０１４７】
構築ブロックとしての５−メチルピラノンおよび５−官能化ピラノンのための中間体の他の調製法
２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−３−メチル酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２４】
2004520439.tif 000043
２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−３−メチル酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルは、Ｊ． Ｅ． Ｂａｌｄｗｉｎら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９５， ５１（４２）， １１５８１）によって報告された方法に従って調製した。
【０１４８】
（４−メチル−２−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル
【化２５】
2004520439.tif 000044
２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−３−メチル酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．００ｇ、３ミリモル）をＴＦＡ（３０ｍＬ）に溶解した。この溶液を４５分攪拌し、ついで真空濃縮した。残留ＴＦＡをトルエンで共沸除去した。この残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して標記化合物を結晶性固体（７５０ｍｇ、８０％）として得た：ＭＳ（ＥＳ＋）２５０（Ｍ＋Ｈ）
【０１４９】
［３−ヒドロキシ−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステル４
【化２６】
2004520439.tif 000045
（４−メチル−２−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−カルバミン酸ベンジルエステルのラクトン環は、Ｍｅ３Ａｌの存在下、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩を用いて開環することができ、標記化合物を得る。
【０１５０】
［３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステル５
【化２７】
2004520439.tif 000046
［３−ヒドロキシ−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルの第一級アルコールは、ｔｅｒｔ−ブチル−２，２，２−トリクロロアセトイミデートおよび三フッ化ホウ素エーテレートを用いて保護することができ、標記化合物を得る。
【０１５１】
（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−ホルミル−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸ベンジルエステル６
【化２８】
2004520439.tif 000047
［３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−メチル−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルのワインレブアミド官能基は、エーテル中の水素化リチウムアルミニウムを用いて還元することができ、標記化合物を得る。
【０１５２】
２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メチル−酪酸７
【化２９】
2004520439.tif 000048
ｔｅｒｔ−ブチルアルコール中の（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−ホルミル−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸ベンジルエステルは、２−メチル−２−ブテンの存在下、水中の次亜塩素酸ナトリウムおよび一塩基性リン酸ナトリウムの溶液を用いて酸化することができ、標記化合物を得る。
【０１５３】
［３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−（２−ジアゾ−アセチル）−２−メチル−プロピル］カルバミン酸ベンジルエステル９
【化３０】
2004520439.tif 000049
２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−メチル−酪酸をクロロギ酸イソブチルおよび４−メチルモルホリンで活性化し、ついで活性化した酸をジアゾメタンで処理すると標記化合物を調製することができる。
【０１５４】
（３−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル）カルバミン酸ベンジルエステル１０
【化３１】
2004520439.tif 000050
ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−（２−ジアゾ−アセチル）−２−メチル−プロピル］カルバミン酸ベンジルエステルを酢酸水溶液中の塩化リチウムを用いて環化すると標記化合物を得る。ＣＢｚ保護基は通常の保護基操作によりＢｏｃやＦｍｏｃなどで容易に置換できる。
【０１５５】
キラルなβ−アルキルセリンを得るための他の経路
スキーム３に詳記した化学による。（２Ｓ，３Ｓ）−β−ヒドロキシノルバリン（１５）（（２Ｓ，３Ｓ）−β−エチルセリンとも命名できる）の合成を例示する。
（ａ）トリ−アセトン−Ｄ−マンニトール
【化３２】
2004520439.tif 000051
Ｄ−マンニトール（４９．５ｇ、０．２７ミリモル）をアセトン（６００ｍＬ、純度９９．９％）に懸濁した。この懸濁液にＨ２ＳＯ４（４．９５ｍＬ）を加え、混合物を２１℃で一夜振盪した。ついで溶液を濾過し、得られた透明な溶液をＮａＨＣＯ３の飽和溶液でｐＨ＝６まで中和した。溶媒を真空濃縮してトリ−アセトン−Ｄ−マンニトールを白色固体として得た（収量７８ｇ、９６％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３０３（ＭＨ＋）。
【０１５６】
（ｂ）３，４−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトール
【化３３】
2004520439.tif 000052
トリ−アセトン−Ｄ−マンニトール（７８ｇ、０．２６ミリモル）を最小量の７０％酢酸（４００ｍＬ）に溶解し、水浴で４２．７℃にて１．５時間攪拌した。溶媒を速やかに真空蒸発させて３，４−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトールを無色油状物（収量５７．６ｇ、９９．８％）として得た。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２２３（ＭＨ＋）。
【０１５７】
（ｃ）１，２，５，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトール（３５）
【化３４】
2004520439.tif 000053
３，４−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトール（５７．６４ｇ、０．２６モル）を塩化ベンジル（５４３ｍＬ）に溶解した。この攪拌溶液にＫＯＨ末（５００ｇ）を加え、溶液を油浴で１３３℃にて２時間加熱した。混合物を静置して室温に冷却し、３０００ｍＬ容ビーカーに注いだ。氷および水（１４００ｍＬ）を注意深く加え、混合物をＤＣＭ（８００ｍＬ）で抽出し、水相をさらにＤＣＭ（３００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾液を真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１５〜１：１０、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（３５）を無色油状物（収量７７ｇ、５１％）として得た。
【０１５８】
【数２１】
2004520439.tif 000054
【０１５９】
（ｄ）１，２，５，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−マンニトール（３６）
【化３５】
2004520439.tif 000055
冷却器を備えた２０００ｍＬ容フラスコ中で化合物（３５）（４１．１１ｇ、０．０７１モル）を７０％酢酸（７００ｍＬ）に溶解し、溶液を油浴中、１００℃で１．５時間攪拌した。真空濃縮した後、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３：７、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（３６）を薄黄色の油状物（収量２１．８ｇ、５７％）として得た。
【０１６０】
【数２２】
2004520439.tif 000056
【０１６１】
（ｅ）（２Ｒ）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジルグリセルアルデヒド（３７）
【化３６】
2004520439.tif 000057
化合物（３６）（１０．７８ｇ、０．０２ミリモル）を無水トルエン（１５０ｍＬ）に溶解した。激しく攪拌しながら四酢酸鉛（９．８３ｇ、０．０２３モル、１．１当量）を固体として加え、混合物を室温で３時間攪拌した。ついで、混合物を濾過し、濾液を真空濾過して化合物（３７）を無色油状物（収量１０．２ｇ、９５％）として得た。
【０１６２】
【数２３】
2004520439.tif 000058
【０１６３】
（ｆ）（２Ｓ）−Ｎ−（２，３−ジベンジルオキシプロピリデン）ベンジルアミン（３８）
【化３７】
2004520439.tif 000059
ベンジルアミン（４．０６ｍＬ、０．０３７モル、１当量）を無水ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。無水ジエチルエーテル（１００ｍＬ）中の化合物（３７）（９．９ｇ、０．０３７モル、１当量）の溶液に０℃にて無水硫酸マグネシウム（７．３ｇ）を加え、この溶液をアルゴン下、カニューレでアミンの溶液に移した。３時間攪拌した後、反応混合物を真空濃縮して化合物（３８）を粗製の無色油状物（収量１２．２ｇ、９６％）として得た。
【０１６４】
【数２４】
2004520439.tif 000060
【０１６５】
（ｇ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ベンジル−２，３−ジベンジルオキシ−１−フェニル−１−プロピルアミン（３９）
【化３８】
2004520439.tif 000061
フェニルマグネシウムブロマイド（２９．１７ｍＬ、０．０８７モル、３．０Ｍ、２．５当量）を無水ジエチルエーテル（１２４ｍＬ）に溶解し、溶液をアルゴン下で０℃に冷却した。無水ジエチルエーテル（１４０ｍＬ）中の化合物（３８）（１２．５ｇ、０．０３５モル）の溶液をカニューレでフェニルマグネシウムブロマイドの溶液に移し、反応混合物を室温で２時間攪拌した。この溶液をＮＨ４Ｃｌの水溶液（２００ｍＬ）に注ぎ、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２×１００ｍＬ）で抽出した。コンバインした抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。得られた粗製の油状物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：４、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（３９）を薄黄色の油状物（収量８．５ｇ、５６％）として得た。
【０１６６】
【数２５】
2004520439.tif 000062
【０１６７】
（ｈ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ベンジル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２，３−ジベンジルオキシ−１−フェニル−１−プロピルアミン（４０）
【化３９】
2004520439.tif 000063
化合物（３９）（９．２６ｇ、０．０２モル）をジオキサン（６６ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアミン（０．３７ｍＬ、０．００２１モル、０．１１当量）を加えた。この攪拌溶液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１１．２５ｇ、０．０５１６モル、２．６当量）を固体として加え、溶液を油浴で５０℃にて一夜攪拌した。混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３００ｍＬ）で処理し、１．０Ｍ ＫＨＳＯ４水溶液（６０ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。粗製の油状物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：９、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４０）を無色油状物（収量７．７ｇ、７１％）として得た。
【０１６８】
【数２６】
2004520439.tif 000064
【０１６９】
（ｉ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２，３−ヒドロキシ−１−フェニル−１−プロピルアミン（４１）
【化４０】
2004520439.tif 000065
化合物（４０）（７．６７ｇ、０．０１４モル）を無水メタノール（８０ｍＬ）に溶解した。フラスコにアルゴンを通した後、２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１０．００ｇ、Ｄｅｇｕｓｓａ型、Ｅ１０１ＮＥ／Ｗ、湿潤）を注意深く加え、混合物をＨ２下で４８時間攪拌した。混合物をセライトのパッドで注意深く濾過し、触媒をメタノール水溶液（１０：１００ Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＯＨ、ｖ／ｖ）で洗浄した。濾液を真空濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３：１、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４１）を無色油状物（収量２．７ｇ、７２％）として得た。
【０１７０】
【数２７】
2004520439.tif 000066
【０１７１】
（ｊ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２−ヒドロキシ−１−フェニル−１−プロピルアミン（４２）
【化４１】
2004520439.tif 000067
化合物（４１）（２．６７ｇ、０．０１モル）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）に溶解し、アルゴン下で攪拌した。イミダゾール（１．５ｇ、０．０２２モル、２．２当量）を加え、ついでＴＢＤＭＳＣｌ（１．６６ｇ、０．０１１モル、１．１当量）を加えた。反応混合物を室温で一夜攪拌した。混合物をエーテル（２４０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（４０ｍＬ）で洗浄し、水性層をエーテル（４×１００ｍＬ）で抽出した。コンバインした抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３：１、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４２）を無色油状物（収量３．３１ｇ、８７％）として得た。
【０１７２】
【数２８】
2004520439.tif 000068
【０１７３】
（ｋ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２−メシルオキシ−１−フェニル−１−プロピルアミン（４３）
【化４２】
2004520439.tif 000069
化合物（４２）（１．３０ｇ、３．４０ミリモル、１．０当量）を無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解した。この溶液にＴＥＡ（０．５７ｍＬ、４．０９ミリモル、１．２当量）を加え、混合物を氷浴中で０℃に冷却した。この温度およびアルゴン下、無水ＤＣＭ（３ｍＬ）中のＭｓＣｌ（０．３２ｍｌ、４．０９ミリモル、１．２当量）の溶液を加えた。この混合物を１．５時間攪拌した。反応混合物を水（２０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。水相をさらにＤＣＭ（４×６０ｍＬ）で抽出し、コンバインした有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：３、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４３）を無色油状物（収量１．３０ｇ、８３％）として得た。
【０１７４】
【数２９】
2004520439.tif 000070
【０１７５】
（ｌ）（１Ｒ，２Ｒ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２，３−エポキシ−１−プロピルアミン（４４）
【化４３】
2004520439.tif 000071
化合物（４３）（３．７９ｇ、８．２６ミリモル、１．０当量）を無水ＴＨＦ（７８ｍＬ）に溶解し、溶液を氷水浴中で０℃に冷却した。ＴＢＡＦ（１６．５２ｍＬ、ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、１６．５２ミリモル、２当量）をスポイトで滴下して加え、添加が終了したら氷浴を除去した。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、ついで水（４０ｍＬ）で処理し、ジエチルエーテル（４０ｍＬ）で抽出し、水相をさらにジエチルエーテル（３×７５ｍＬ）で抽出した。コンバインした抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をＴＢＭＥ／ヘプタン（１：６〜２：１、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４４）を白色固体（収量１．０ｇ、４８％）として得た。
【０１７６】
【数３０】
2004520439.tif 000072
【０１７７】
（ｍ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−ヒドロキシ−１−フェニル−１−ブチルアミン（４５）
【化４４】
2004520439.tif 000073
ヨウ化銅（Ｉ）（０．５７４ｇ、３．０１ミリモル、５当量）を無水ジエチルエーテル（１７ｍＬ）に分散した。懸濁液をアルゴン下、−３５℃に冷却した後、ジエチルエーテル中のＣＨ３Ｌｉ（３．７６ｍＬ、１．６Ｍ、６．０２ミリモル、１０当量）を滴下して加えた。−３５℃で３０分間攪拌した後、ジエチルエーテル（１．５ｍＬ）に溶解した化合物（４４）（０．１５ｇ、０．６０ミリモル、１．０当量）の溶液をオルガノクプラートの溶液に滴下して加え、反応混合物を−３５℃で１．５時間攪拌した。酢酸エチル（１２．５ｍＬ）を加え、ついでＮＨ４Ｃｌの飽和溶液（１０ｍＬ）および水（３ｍＬ）を注意深く加えた。混合物を静置して室温まで温め、有機相を抽出した。水相をさらに酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出し、コンバインした抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗製の油状物をＴＢＭＥ／ヘプタン（２：３、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４５）を白色固体（収量０．１４ｇ、８８％）として得た。
【０１７８】
【数３１】
2004520439.tif 000074
【０１７９】
（ｎ）（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−フェニル−１−ブチルアミン（４６）
【化４５】
2004520439.tif 000075
密封した管中、化合物（４５）（０．１１４ｇ、０．４３ミリモル）を無水ＤＣＭ（１１ｍＬ）に溶解した。攪拌を維持しながら、管をドライアイス−アセトン浴に浸し、−６０℃に冷却した。イソブチレン（１１ｍＬ）を管中に濃縮し、トリフルオロメタンスルホン酸メチル（５５Ｌ）を注意深く加えた。管を堅く密封し、浴を除去し、反応を室温で４日間進行させた。管を−６０℃に冷却し、蓋を取り、ついで浴を除去して室温に温めながら過剰のイソブチレンをゆっくりと蒸発させた。約１０℃でＴＥＡ（０．７ｍＬ）を加えて過剰の酸を中和した。溶媒を真空除去した後に得られた残渣をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（２：８、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４６）を白色固体（収量０．０２ｇ、１４％）として得た。
【０１８０】
【数３２】
2004520439.tif 000076
【０１８１】
（ｏ）（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−  −ｔｅｒｔ−ブトキシ−ノルバリン（４７）
【化４６】
2004520439.tif 000077
化合物（４６）（０．０２４ｇ、０．０７４ミリモル、１当量）をＣＣｌ４／ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏの混合物（１：１：２、ｖ／ｖ／ｖ、２．４ｍＬ）に溶解した。この攪拌２相溶液にＮａＨＣＯ３（０．１０４ｇ、１．２５ミリモル、１６．９当量）を固体として加え、ついでＮａＩＯ４（０．２８４ｇ、１．３３ミリモル、１８当量）を注意深く加えた。１０分後、ＲｕＣｌ３．３Ｈ２Ｏ（１．５ｍｇ、７．２３モル、０．１当量）を加え、反応混合物を４８時間攪拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で処理し、クエン酸（１０％）を滴下して加えてｐＨ＝３の酸性にした。有機相をさらにＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出し、コンバインした抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。得られた粗製の残渣をＭｅＯＨ／ＣＨ３Ｃｌ（０．１：１０〜１．０：１０、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して化合物（４７）を白色固体（収量０．００９ｇ、４２％）として得た。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２９０（ＭＨ＋）。
【０１８２】
（ｐ）（２Ｓ，３Ｓ）−β−ヒドロキシ−ノルバリン（１５）
【化４７】
2004520439.tif 000078
化合物（４７）（９ｍｇ、０．０３ミリモル）をジオキサン中のＨＣｌ溶液（１ｍＬ、４．０Ｍ）に溶解した。室温で３時間攪拌した後、溶媒を真空除去し、残渣をＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（４：１、ｖ／ｖ）を用いて凍結乾燥して（２Ｓ，３Ｓ）−  −ヒドロキシ−ノルバリン（１５）を白色固体（３．０ｍｇ、７５％）として得た。
【０１８３】
【数３３】
2004520439.tif 000079
【０１８４】
Ｐ２ハイブリッドアミノ酸を得るための化学
スキーム４に示した一般化学は、本発明者であるＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ、イングランドのＣＳ ＤｅｘｔｅｒおよびＲＦＷ Ｊａｃｋｓｏｎにより学術文献にまもなく完全な形で刊行されるであろう。
（ａ）亜鉛カップリング反応の一般手順
（ｂ）亜鉛活性化
亜鉛末（１５０ｍｇ、２．３ミリモル、３．０当量、Ａｌｄｒｉｃｈ）を、サイドアームを備え３路蛇口（ｔｈｒｅｅ ｗａｙ ｔａｐ）に適合した２５ｍＬ容の丸底フラスコに秤量した。亜鉛末を真空下、熱線銃で加熱し、フラスコに窒素ガスを流し、ガスを抜き、さらに３回ガスを流した。窒素ガスを充填したフラスコに乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。トリメチルシリルクロライド（３０μｌ、０．２３ミリモル、０．３当量）を加え、亜鉛スラリーをさらに３０分間激しく攪拌した。
【０１８５】
（ｃ）亜鉛挿入；Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ヨード亜鉛−Ｌ−アラニンメチルエステル（６１）
乾燥ＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解したＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ヨード−Ｌ−アラニンメチルエステル（２４７ｍｇ、０．７５ミリモル、１．０当量）を、上記で調製した０℃の活性化亜鉛スラリーにカニューレを用いて滴下して加えた。ついで、反応混合物を静置して室温に温め、１時間攪拌してオルガノ亜鉛試薬を得た。
【０１８６】
（ｄ）ＣｕＢｒ．ＳＭｅ２調製物
亜鉛挿入反応が進行している間、ＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（２０ｍｇ、０．１ミリモル、０．１３当量）を、３路蛇口に適合した２５ｍｌ容の丸底フラスコに秤量し、ＣｕＢｒ．ＳＭｅ２がその外見を褐色の粉末から変えて薄緑色の粉末を与えるまで、真空下、熱線銃で「穏やかに」乾燥した。ついで、乾燥ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加え、ついで親電子試薬（１−ブロモ−２−メチルブト−２−エン、トルエン−４−スルホン酸−（Ｅ）−２−メチル−ブト−２−エニルエステルまたは１−ブロモ−２，３−ジメチルブト−２−エン）（１．０ミリモル、１．３当量）を加えた。ついで、反応混合物を−１５℃に冷却した。
【０１８７】
（ｅ）カップリング反応
オルガノ亜鉛試薬溶液の攪拌を停止して亜鉛末を沈殿させ、上澄み液をカニューレで注意深く取り（あまりにも多くの亜鉛末を移さないように注意が必要）、親電子試薬および銅触媒の溶液に滴下して加えた。冷浴を取り除き、溶液を室温で一夜攪拌した。酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、攪拌をさらに１５分間続けた。反応混合物を分別漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）のさらなるアリコートを加えた。有機相を１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２０ｍＬ）、水（２×２０ｍＬ）、食塩水（４０ｍＬ）で順に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。溶媒を真空除去し、粗製の生成物を上記記載のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
【０１８８】
（ｆ）アルケンの水素化
アルケン（１．０ミリモル）をエタノール（１０ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム／炭素（８０ｍｇ）を加え、水素ガスを導入した。反応が完了したと思われたら水素ガスを除き、反応液をセライト濾過し、触媒をエタノール（３０ｍＬ）で洗浄した。コンバインした有機濾液を真空濃縮し、得られたアルカンを直ちに次の反応に用いた。
【０１８９】
（ｇ）メチルエステルの鹸化
メチルエステル（１．０ミリモル）をＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、攪拌しながら水（６ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１．２ミリモル、１．２当量）の溶液を滴下して加えた。反応が完了したと思われたら、ＴＨＦを真空除去し、残渣にジエチルエーテル（１０ｍＬ）を加えた。ついで、反応混合物を１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝３まで酸性にした。ついで、有機相を除去し、水性相をジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。コンバインした有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空除去してカルボン酸を得、これを直ちに次の反応に用いた。
【０１９０】
（ｈ）Ｎ−Ｂｏｃ保護基の除去
Ｎ−Ｂｏｃ保護物質（１．０ミリモル）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を滴下して加え、反応が完了したと思われたら溶媒を真空除去してアミンを得、これを直ちに次の反応に用いた。別法としては、Ｎ−Ｂｏｃ保護物質（１．０ミリモル）を０℃に冷却し、ジオキサン（５ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌを滴下して加え、反応が完了したと思われたら溶媒を真空除去してアミンを得、これを直ちに次の反応に用いた。
【０１９１】
（ｉ）アミンのＦｍｏｃ保護
１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中のアミン（１．０ミリモル）を０℃に冷却し、１０％炭酸ナトリウム（２．２ミリモル、２．２当量、２ｍＬ）を加えた。２相反応混合物を激しく攪拌し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（１．１ミリモル、１．１当量）を加えた。反応が完了したと思われたらジエチルエーテル（１０ｍＬ）を加え、反応混合物を１Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝３の酸性にした。有機相を除去し、水性相をジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。コンバインした有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空除去し、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
【０１９２】
合成例１
２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４−ジメチルヘキサン酸（６８）の調製
以下のスキームは、光学的に活性な（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（６２）がどのように調製および単離されるかを説明している。
【化４８】
2004520439.tif 000080
【０１９３】
（ａ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（６２）、２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２Ｓ−３，３−ジメチル−オキシラニル）−酪酸メチルエステル（６３）および２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２Ｒ−３，３−ジメチル−オキシラニル）−酪酸メチルエステル（６４）
亜鉛カップリング反応の一般手順に従い、１−ブロモ−３−メチルブト−２エン（１１５μＬ、１．０ミリモル）をＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（２０ｍｇ、０．１ミリモル）の存在下で化合物（６１）（２４７ｍｇ、０．７５ミリモル）にカップリングさせて残渣を得、これをＥｔＯＡｃ／４０：６０石油エーテル（１：９、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。フラクションをプールし、真空濃縮してカラムクロマトグラフィーでは分離できない位置異性体の混合物（２：１正式のＳＮ２’ｖｓ ＳＮ２）を無色油状物として得た（収量１９０ｍｇ、９３％）。
【０１９４】
クロロホルム（３ｍＬ）中の位置異性体の混合物（１９０ｍｇ、０．７ミリモル）にクロロホルム（２ｍＬ）中の３−クロロ過安息香酸（１５６ｍｇ、純度８５％、０．８ミリモル、１．１当量）を５分間かけて滴下して加えた。反応混合物を室温でさらに２時間攪拌した。ついで、反応混合物を１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ５（５ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５ｍＬ）および食塩水（１０ｍＬ）で順に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空除去し、残渣をＥｔＯＡｃ／４０：６０石油エーテル（２：８、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。３つの生成物が得られた；化合物（６２）は最初に溶出し、さらに溶出すると化合物（６３）と化合物（６４）との分離できない混合物が得られた。最初の成分のフラクションをプールし、真空濃縮して２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（６２）を透明な油状物として得た（収量９３ｍｇ、４９％）。
【０１９５】
【数３４】
2004520439.tif 000081
【０１９６】
（ｂ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４−ジメチル−ヘキサン酸メチルエステル（６５）
アルケン水素化の一般手順に従い、化合物（６２）（９３ｍｇ、０．３ミリモル）から化合物（６５）を無色油状物として得（収量９０ｍｇ、９６％）、直ちに次の反応に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）。分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２２．５５分（１００％）。
【０１９７】
（ｃ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４−ジメチル−ヘキサン酸（６６）
メチルエステル鹸化の一般手順に従い、化合物（６５）（９０ｍｇ、０．３ミリモル）から化合物（６６）を結晶として得（収量７９ｍｇ、９２％）、直ちに次の反応に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２６０（ＭＨ＋）。分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２０．９０分（１００％）。
【０１９８】
（ｄ）２Ｓ−２−アミノ−４，４−ジメチル−ヘキサン酸トリフルオロ酢酸塩（６７）
ＴＦＡを用いたＮ−Ｂｏｃ除去の一般手順に従い、化合物（６６）（７９ｍｇ、０．３ミリモル）から化合物（６７）を固体として得（収量８０ｍｇ、９６％）、直ちに次の反応に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）。
【０１９９】
（ｅ）２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４−ジメチルヘキサン酸（６８）
アミンのＦｍｏｃ保護の一般手順に従い、化合物（６７）（８０ｍｇ、０．３ミリモル）からＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ（１００：０から９６：４、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製後、２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４−ジメチルヘキサン酸（６８）を固体として得た（収量６０ｍｇ、５４％）。
【０２００】
【数３５】
2004520439.tif 000082
【０２０１】
合成例２
２Ｓ，４ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，５−ジメチルヘキサン酸（７４）の調製
光学的に活性な２Ｓ，４Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（６９）および２Ｓ，４Ｒ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（７０）を、フラッシュクロマトグラフィーにより亜鉛カップリング反応後に直ちに得た。
【化４９】
2004520439.tif 000083
【０２０２】
（ａ）２Ｓ，４Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（６９）および２Ｓ，４Ｒ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（７０）
亜鉛カップリング反応の一般手順に従い、トルエン−４−スルホン酸（Ｅ）−２−メチル−ブト−２−エニルエステル（１．４５ｍＬ、１．０ミリモル）をＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（２０ｍｇ、０．１０ミリモル）の存在下で化合物（６１）（２４７ｍｇ、０．７５ミリモル）にカップリングさせて残渣を得、ＥｔＯＡｃ／４０：６０石油エーテル（１：９、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して２つのジアステレオマーを得た。分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２２．４９分（６０％）およびＲｔ＝２２．５２分（４０％）。最初に溶出した成分のフラクションをプールしてジアステレオマーの一方を無色油状物として得た（収量３６ｍｇ、１８％）。次にジアステレオマーの混合物を無色油状物として得た（収量７５ｍｇ、３７％）。後に溶出する成分を含む純粋なフラクションをプールして他のジアステレオマーを無色油状物として得た（収量１９ｍｇ、９％）（４位での立体化学は調べなかった）。速やかに溶出するジアステレオマーで得られるスペクトルデータ：
【０２０３】
【数３６】
2004520439.tif 000084
【０２０４】
ゆっくり溶出するジアステレオマーで得られるスペクトルデータ：
【数３７】
2004520439.tif 000085
これらジアステレオマーは常法では分離されず、次の反応に混合物として用いた。
【０２０５】
（ｂ）２Ｓ，４ＲＳ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサン酸メチルエステル（７１）
アルケン水素化の一般手順に従い、化合物（６９）および化合物（７０）（１３０ｍｇ、０．４８ミリモル）から２つのジアステレオマー（７１）の混合物（分離できない）を無色油状物として得た（収量１２８ｍｇ、９８％）。分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２２．４９分、エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）。
【０２０６】
（ｃ）２Ｓ，４ＲＳ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，５−ジメチル−ヘキサン酸（７２）
メチルエステル鹸化の一般手順に従い、化合物（７１）（１２８ｍｇ、０．４７ミリモル）から化合物（７２）の分離できない混合物を無色油状物として得た（収量１０６ｍｇ、８７％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２６０（ＭＨ＋）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２０．６５分（１００％）。
【０２０７】
（ｄ）２Ｓ，４ＲＳ−２−アミノ−４，５−ジメチル−ヘキサン酸トリフルオロ酢酸塩（７３）
ＴＦＡを用いたＮ−Ｂｏｃ除去の一般手順に従い、化合物（７２）（１０６ｍｇ、０．４１ミリモル）から化合物（７３）の分離できない混合物を固体として得（収量１０７ｍｇ、９６％）、直ちに次の反応に用いた。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ１６０（ＭＨ＋）。
【０２０８】
（ｅ）２Ｓ，４ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，５−ジメチル−ヘキサン酸（７４）
アミンのＦｍｏｃ保護の一般手順に従い、化合物（７３）（１０７ｍｇ、０．３９ミリモル）からＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ（１００：０から９５：５、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製後、２Ｓ，４ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，５−ジメチル−ヘキサン酸（７４）を固体として２つのジアステレオマーの混合物として得た（収量６０ｍｇ、４０％）。分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２３．８３分（４０％）およびＲｔ＝２４．０６分（６０％）。最初に溶出したジアステレオマー：エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３８２（ＭＨ＋）。後に溶出したジアステレオマー：エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ３８２（ＭＨ＋）。
【０２０９】
合成例３
２Ｓ，５ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，６−ジメチルヘプタン酸（８０）および２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４，５−トリメチルヘキサン酸（８４）の調製
（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−５，６−ジメチル−ヘプト−５−エン酸メチルエステル（７５）および（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（７６）を、亜鉛カップリング反応後にフラッシュクロマトグラフィーにより直ちに得た。
【化５０】
2004520439.tif 000086
【０２１０】
（ａ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−５，６−ジメチル−ヘプト−５−エン酸メチルエステル（７５）および２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（７６）
亜鉛カップリング反応の一般手順に従い、１−ブロモ−２，３−ジメチル−ブト−２−エン（１６３ｍｇ、１．０ミリモル）をＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（２０ｍｇ、０．１０ミリモル）の存在下で化合物（６１）（２４７ｍｇ、０．７５ミリモル）にカップリングさせて残渣を得、ＥｔＯＡｃ／４０：６０石油エーテル（１：９）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して２つの位置異性体を得た。最初に溶出した成分は無色油状物としての化合物（７５）であり（収量６０ｍｇ、２８％）、第二に溶出した成分は無色油状物としての化合物（７６）であった（収量５１ｍｇ、２４％）。
【０２１１】
化合物（７５）について得られたスペクトルデータ：
【数３８】
2004520439.tif 000087
【０２１２】
化合物（７６）について得られたスペクトルデータ：
【数３９】
2004520439.tif 000088
【０２１３】
（ｂ）２Ｓ，５ＲＳ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５，６−ジメチル−ヘプタン酸メチルエステル（７７）
アルケン水素化の一般手順に従い、２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−５，６−ジメチル−ヘプト−５−エン酸メチルエステル（７５）（６０ｍｇ、０．２１ミリモル）から化合物（７７）を無色油状物として得た（収量５４ｍｇ、８９％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２８８（ＭＨ＋）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２４．０６分（１００％）。
【０２１４】
（ｃ）２Ｓ，５ＲＳ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５，６−ジメチル−ヘプタン酸（７８）
メチルエステル鹸化の一般手順に従い、化合物（７７）（５４ｍｇ、０．１９ミリモル）から化合物（７８）を無色油状物として得た（収量５４ｍｇ、１００％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２１．４４分（１００％）。
【０２１５】
（ｄ）２Ｓ，５ＲＳ−２−アミノ−５，６−ジメチル−ヘプタン酸塩酸塩（７９）
ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌを用いたＮ−Ｂｏｃ除去の一般手順に従い、化合物（７８）（５４ｍｇ、０．２０ミリモル）から化合物（７９）を固体として得た（収量４０ｍｇ、９７％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ１７４（ＭＨ＋）。
【０２１６】
（ｅ）２Ｓ，５ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，６−ジメチルヘプタン酸（８０）
アミンのＦｍｏｃ保護の一般手順に従い、化合物（７９）（４０ｍｇ、０．１９ミリモル）からＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ（１００：０から９５：５、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製後、２Ｓ，５ＲＳ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，６−ジメチル−ヘプタン酸（８０）を固体として得た（収量２７ｍｇ、３６％）。
【０２１７】
【数４０】
2004520439.tif 000089
カルボン酸の四重シグナルは観察されなかった。
【０２１８】
（ｆ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサン酸メチルエステル（８１）
アルケン水素化の一般手順に従い、２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（７６）（５１ｍｇ、０．１８ミリモル）から化合物（８１）を無色油状物として得た（収量４６ｍｇ、９０％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２８８（ＭＨ＋）、分析的ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２２．９１分（１００％）。
【０２１９】
（ｇ）２Ｓ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサン酸（８２）
メチルエステル鹸化の一般手順に従い、化合物（８１）（４６ｍｇ、０．１６ミリモル）から化合物（８２）を無色油状物として得た（収量４４ｍｇ、１００％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）。
【０２２０】
（ｈ）２Ｓ−２−アミノ−４，４，５−トリメチル−ヘキサン酸塩酸塩（８３）
ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌを用いたＮ−Ｂｏｃ除去の一般手順に従い、化合物（８２）（４４ｍｇ、０．１６ミリモル）から化合物（８３）を固体として得た（収量３３ｍｇ、９９％）。エレクトロスプレー−ＭＳ ｍ／ｚ１７４（ＭＨ＋）。
【０２２１】
（ｉ）２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４，５−トリメチルヘキサン酸（８４）
アミンのＦｍｏｃ保護の一般手順に従い、化合物（８３）（３３ｍｇ、０．１６ミリモル）からＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ（１００：０から９５：５、ｖ／ｖ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製後、２Ｓ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４，５−トリメチルヘキサン酸（８４）を固体として得た（収量２０ｍｇ、３２％）。
【０２２２】
【数４１】
2004520439.tif 000090
カルボン酸の四重シグナルは観察されなかった。
【０２２３】
一般的な固相法
上記で記載したピラノン構築ブロックおよび新規な保護アミノ酸を用い、Ｃｈｉｒｏｎマルチピンで以下に詳記するプロトコールに従って固相法により分子を構築した。
構築ブロック−リンカー構築物の調製
ジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノンまたはピラノン−リンカー構築物の合成のための一般法（上記スキーム５参照）
ジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノン（１８、２４〜２８）（１．０当量）を、酢酸ナトリウム三水和物（１．５当量）を含むエタノール／水（７：１ｖ／ｖ、化合物１ミリモル当たり１０ｍＬ）の混合物に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（分子量３２９．３、１．０当量）（Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ． Ｍ．ら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１４， ３１５６−３１５７， １９９２を参照）を加え、混合物を２時間、還流下で加熱した。ついで混合物を冷却し、ジクロロメタン（化合物１ミリモル当たり１００ｍＬ）中に注ぎ、水（１００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、飽和食塩水（１００ｍＬ）で逆流洗浄した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空蒸発して白色固体を得た（収率８５〜１０５％粗重量）。構築物（２９〜３４）をさらに精製することなく用いた。
【０２２４】
クラウンアセンブリーの調製
化合物の合成を、適当に負荷したＦｍｏｃ−構築ブロック−リンカー−ＤＡ／ＭＤＡ誘導体化マクロクラウン（上記参照）（クラウン（ｃｒｏｗｎ）当たり約３．５〜９．１μモルで負荷）を用いて平行して行った。合成に先立って各クラウンをそれぞれのステムに連結させ、８×１２ステムホルダーに投入した。アミノ酸のカップリングには、“固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）”、Ｅ． ＡｔｈｅｒｔｏｎおよびＲ． Ｃ． Ｓｈｅｐｐａｒｄ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｔｄ．、オックスフォード、英国、１９８９に記載された標準Ｆｍｏｃアミノ酸化学を用いた。
【０２２５】
Ｎα−Ｆｍｏｃ保護基の除去
２５０ｍＬ容の溶媒耐性浴に２００ｍＬの２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液を入れる。マルチピンアセンブリーを加え、脱保護を３０分間行う。ついで、アセンブリーを取り、余分の溶媒を少し振盪して取り除く。ついで、アセンブリーをＤＭＦ（５分間）およびＭｅＯＨ（５分間、２分間、２分間）（各２００ｍＬ）で順に洗浄し、１５分間静置して空気乾燥させる。
【０２２６】
Ｆｍｏｃ発色団放出の定量的ＵＶ測定
１ｃｍ行路長のＵＶセルに１．２ｍＬの２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液を入れ、これを用いて２９０ｎｍの波長でのＵＶ分光計の吸光度を０とする。ついで、３．２ｍＬの２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液中の５．０ｍｇのＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｐｅｐｓｙｎ ＫＡ（０．０８ミリモル／ｇ）からなるＵＶ標準を調製する。この標準はＡｂｓ２９０＝０．５５〜０．６５（室温）を与える。ついで、マルチピン脱保護溶液のアリコートを理論的Ａｂｓ２９０＝０．６となるように適当に希釈し、この値を実際に実験測定した吸光度と比較して上記カップリング反応の有効性を示すようにする。
【０２２７】
アミノ酸残基の標準カップリング
カップリング反応は、ポリプロピレン９６ウエルプレートの適当なウエルにカップリングの特定のラウンドの際に必要な活性化溶液のパターンを入れることにより行う。マクロクラウン標準カップリングはＤＭＦ（５００μｌ）中で行った。
【０２２８】
適当なウエルへのアミノ酸残基のカップリング
マルチピンアセンブリーを乾燥させる間に、カップリングの特定のラウンドに必要な適当なＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸ｐｆｐエステル（各クラウンの負荷から計算して１０当量）およびＨＯＢｔ（１０当量）を適当な容器に正確に秤量する。あるいは、適当なＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸（各クラウンの負荷から計算して１０当量）、所望のカップリング試薬、たとえばＨＢＴＵ（各クラウンの負荷から計算して９．９当量）、および活性化剤、たとえばＨＯＢｔ（各クラウンの負荷から計算して９．９当量）、ＮＭＭ（各クラウンの負荷から計算して１９．９当量）を適当な容器に正確に秤量する。
【０２２９】
ついで、保護し活性化したＦｍｏｃアミノ酸誘導体をＤＭＦ（各マクロクラウンについて５００μｌ、たとえば２０マクロクラウンでは２０×１０当量×７μモルの誘導体を１０ｍＬのＤＭＦに溶解）に溶解する。ついで、適当な誘導体を「カップリングサイクル」の開始の用意のできた適当なウエルに分配する。標準として、カップリング反応を６時間進行させる。ついで、カップリングしたアセンブリーを以下に詳記するように洗浄した。
【０２３０】
カップリング後の洗浄
２０％ピペリジン／ＤＭＦ脱保護をカップリングサイクルの直後に行うのであれば、マルチピンアセンブリーを簡単に振盪して余分の溶媒を取り除き、ＭｅＯＨ（５分間）およびＤＭＦ（５分間）（各２００ｍＬ）で順に洗浄し、脱保護する。マルチピンアセンブリーを貯蔵もしくはさらに反応させるのであれば、簡単な振盪についでＤＭＦ（５分間）およびＭｅＯＨ（５分間、２分間、２分間）で順に洗浄することからなる完全な洗浄サイクルを行う。
【０２３１】
キャッピング基の付加
マルチピンアセンブリーを乾燥させる間に、適当な酸キャッピング基（各クラウンの負荷から計算して１０当量）、所望のカップリング試薬、たとえばＨＢＴＵ（各クラウンの負荷から計算して９．９当量）、および活性化剤、たとえばＨＯＢｔ（各クラウンの負荷から計算して９．９当量）、ＮＭＭ（各クラウンの負荷から計算して１９．９当量）を適当な容器に正確に秤量する。ついで、酸誘導体／カップリング試薬をＤＭＦ（各マクロクラウンについて５００μｌ、たとえば２０マクロクラウンでは２０×１０当量の誘導体を１０ｍＬのＤＭＦに溶解）に溶解し、５分間静置して活性化する。ついで、適当な誘導体を「キャッピングサイクル」の開始の用意のできた適当なウエルに分配する。標準として、キャッピング反応を一夜、１８時間進行させる。ついで、キャッピングしたアセンブリーを上記に詳記したようにして洗浄した。
【０２３２】
分子−ピンアセンブリーの酸分解媒体開裂
酸媒体開裂プロトコールを換気フード（ｆｕｍｅ ｈｏｏｄ）内で厳密に行う。ポリスチレン９６ウエルプレート（１ｍＬ／ウエル）にラベルを付し、最も近いｍｇに秤量する。ついで、適当なウエルにトリフルオロ酢酸／水（９５：５、ｖ／ｖ、６００μｌ）開裂溶液を、開裂すべきマルチピンアセンブリーのパターンに対応するパターンにて入れる。
マルチピンアセンブリーを加え、全構築物をスズ箔で覆い、２時間静置する。ついで、マルチピンアセンブリーをトリフルオロ酢酸／水（９５：５、ｖ／ｖ、６００  ｌ）（上記）を入れた他のポリスチレン９６ウエルプレート（１ｍＬ／ウエル）に加える。
【０２３３】
開裂した分子の処理
ついで、一次ポリスチレン開裂プレート（２時間開裂）および二次ポリスチレンプレート（５分間洗浄）をＧｅｎｅＶａｃエバポレーターに入れ、溶媒を９０分間かけて除去した（最小の乾燥速度）。二次ポリスチレンプレートの中身をアセトニトリル／水（５０：５０ｖ／ｖ／ｖ）溶液（３×１５０μｌ）を用いて一次プレートの対応ウエルに移し、使用した二次プレートを廃棄する。アリコート（５〜２０  Ｌ）を分析のために取る。プレートをスズ箔で覆い、化合物を入れたウエルの上からピンで刺し、冷蔵庫に１時間入れ、ついで凍結乾燥した。
【０２３４】
分子の分析および精製
アリコート（５〜２０  Ｌ）を分析的ＨＰＬＣおよびエレクトロスプレー−ＭＳにより分析する。実質的に全ての場合に、粗純度はＨＰＬＣにより＞９０％であり、標準ｍ／ｚを有する。試料を、Ｖｙｄａｃ Ｃ４を用いて半調製的逆相ＨＰＬＣにより精製した。適当なフラクションをコンバインし、燒結（ｔａｒｅｄ）１０ｍＬ容ガラスバイアル中で凍結乾燥し、ついで再度秤量する。分子を１５〜９０μモルのスケールで調製し、２．０〜２６．０ｍｇの精製生成物を得た。各生成物の純度は分析的ＨＰＬＣにより＞９５％（２１５ｎｍ ＵＶ検出）と確認され、エレクトロスプレー質量分析により凡その［ＭＨ］＋を与えた。
【０２３５】
構築物によるマクロクラウンの負荷
ジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノン−リンカー構築物（２９〜３４）によるマルチピンの負荷のための一般的方法
アミノ官能化ＤＡ／ＭＤＡマクロクラウン（たとえば、Ｃｈｉｒｏｎ Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ、オーストラリア、９．１μモル負荷）またはアミノ官能化ＨＥＭＡギア（ｇｅａｒｓ）（たとえば、Ｃｈｉｒｏｎ Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ、オーストラリア、１．３μモル負荷）を、全ての負荷およびその後の固相合成に用いた。
【０２３６】
ジヒドロ−３（２Ｈ）−フラノン−リンカー構築物（２９〜３４）（クラウン／ギアの全表面官能化と比較して３当量）を、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（３当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３当量）およびＮ−メチルモルホリン（６当量）を用いて５分間、カルボキシル活性化した。この混合物をクラウン／ギアに加え、さらにＤＭＦを加えて反応液の表面を覆い、混合物を一夜静置した。
標準洗浄およびＦｍｏｃ脱保護の読み取り（上記手順を参照）は、典型的に、実質的に定量的な負荷を示した。
【０２３７】
上記で詳記した方法において各フラノン、Ｒ３アミノ酸およびキャッピング基を用いた方法により調製した分子の例を下記表１に示す。
2004520439.tif 000091
2004520439.tif 000092
【０２３８】
本発明の他の化合物は以下のようにして調製した：
（ｉ）Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピロリジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化５１】
2004520439.tif 000093
モデルカルボン酸の代わりに「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。これら酸は２つの反応を用いて調製した：最初のエステルをＢｕｃｈｗａｌｄ型の化学を用いて調製し、ついで該エステルの標準加水分解は所望の酸を与えた。
【０２３９】
（ａ）４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
オーブン乾燥した反応管に、乳棒と乳鉢とで細かく砕いた炭酸セシウム（２．１２ｇ、６．５１ミリモル）をアルゴン雰囲気下で入れた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４２．５ｍｇ、１．５モル％）および（Ｓ）−（−）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（４３．４ｍｇ、１．５モル％）を加え、管にアルゴンを通した。ピロリジン（０．３９ｇ、５．５８ミリモル）、４−ブロモ安息香酸メチル（１．００ｇ、４．６５ミリモル）およびトルエン（１０ｍＬ）を加え、ｈｐｌｃにより出発物質が消費されたと判断されるまで混合物を激しく攪拌しながら１００℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、エーテル（２０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製して標記化合物（０．８０ｇ、８４％）を固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０６
【０２４０】
（ｂ）４−ピロリジン−１−イル−安息香酸塩
４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル（２００ｍｇ、０．９８ミリモル）をメタノール（４ｍＬ）に溶解し、水（２ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（３９ｍｇ、０．９８ミリモル）を加えた。ｈｐｌｃにより出発物質が消費されたと判断されるまで混合物を６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）で希釈し、濾過し、凍結乾燥して標記化合物（０．２００ｇ、９７％）を固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：１９２
【０２４１】
別法を以下に記載する：
４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル（２００ｍｇ、０．９８ミリモル）を濃塩酸：水（１：１）（４ｍｌ）に溶解した。ｈｐｌｃにより出発物質が消費されたと判断されるまで混合物を加熱還流した。混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、凍結乾燥して標記化合物（０．１９０ｇ、９７％）を固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：１９２
【０２４２】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペリジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化５２】
2004520439.tif 000094
「４−ピペリジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２４３】
４−ピペリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「ピペリジン」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２０
（ａ）４−ピペリジン−１−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−ピペリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０６
【０２４４】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−モルホリン−４−イル−ベンズアミドの調製
【化５３】
2004520439.tif 000095
「４−モルホリン−４−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２４５】
４−モルホリン−４−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「モルホリン」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２２
（ａ）４−モルホリン−４−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−モルホリン−４−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０８
【０２４６】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミドの調製
【化５４】
2004520439.tif 000096
「４−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２４７】
４−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「４−メチル−ピペラジン」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２３５
（ａ）４−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２１
【０２４８】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミドの調製
【化５５】
2004520439.tif 000097
「４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２４９】
（ａ）４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「２−モルホリン−４−イル−エチルアミン」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２６５
（ｂ）４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５１
【０２５０】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−４−ピペラジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化５６】
2004520439.tif 000098
「４−（４−カルボキシ−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２５１】
（ａ）４−（４−メトキシカルボニル−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３２１
（ｂ）４−（４−カルボキシ−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−（４−メトキシカルボニル−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３０７
【０２５２】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピロリジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化５７】
2004520439.tif 000099
「２−ベンゾフラン−カルボン酸」の代わりに「３−ピロリジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２５３】
（ａ）３−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０６
（ｂ）３−ピロリジン−１−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「３−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：１９２
【０２５４】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペリジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化５８】
2004520439.tif 000100
「２−ベンゾフラン−カルボン酸」の代わりに「３−ピペリジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２５５】
（ａ）３−ピペリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「ピペリジン」を用い、「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２０
（ｂ）３−ピペリジン−１−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「３−ピペリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０６
【０２５６】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イル−ベンズアミドの調製
【化５９】
2004520439.tif 000101
「３−モルホリン−４−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２５７】
（ａ）３−モルホリン−４−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「モルホリン」を用い、「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２２
（ｂ）３−モルホリン−４−イル−安息香酸塩
「３−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「３−モルホリン−４−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２０８
【０２５８】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ベンズアミドの調製
【化６０】
2004520439.tif 000102
「２−ベンゾフラン−カルボン酸」の代わりに「３−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２５９】
（ａ）３−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「４−メチル−ピペラジン」を用い、「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２３５
（ｂ）３−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「３−メチル−ピペラジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２２１
【０２６０】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ベンズアミドの調製
【化６１】
2004520439.tif 000103
「２−ベンゾフラン−カルボン酸」の代わりに「３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２６１】
（ａ）３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「２−モルホリン−４−イル−エチルアミン」を用い、「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２６５
（ｂ）３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「３−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５１
【０２６２】
Ｎ−［３−メチル−１−（２−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−ブチル］−３−ピペラジン−１−イル−ベンズアミドの調製
【化６２】
2004520439.tif 000104
「４−（３−カルボキシ−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用いる他は実施例１の工程（ｄ）の手順に従った。
【０２６３】
（ａ）３−（４−メトキシカルボニル−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
「ピロリジン」の代わりに「ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用い、「４−ブロモ安息香酸メチル」の代わりに「３−ブロモ安息香酸メチル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３２１
（ｂ）４−（４−カルボキシ−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩
「４−ピロリジン−１−イル−安息香酸メチルエステル」の代わりに「４−（４−メトキシカルボニル−フェニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル」を用いた他は上記手順に従って標記化合物を得た：ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３０７
【０２６４】
生物学的実施例
カテプシンＫタンパク質加水分解触媒活性の決定
カテプシンＫの都合のよいアッセイをヒト組換え酵素を用いて行う。動力学定数の決定のための標準アッセイ条件には蛍光原性のペプチド基質、典型的にはＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを用い、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ ２−メルカプトエタノールを含む１００ｍＭ Ｍｅｓ／トリス（ｐＨ７．０）か、または５ｍＭ ＥＤＴＡおよび２０ｍＭシステインを含む１００ｍＭ酢酸Ｎａ（ｐＨ５．５）のいずれかで決定した。使用した酵素濃度は５ｎＭであった。ストック基質溶液はＤＭＳＯ中で１０ｍＭにて調製した。スクリーニングを６０μＭの一定の基質濃度で行い、詳細な動力学研究を２５０μＭからの基質の２倍希釈で行った。アッセイでの全ＤＭＳＯ濃度は３％未満に保持した。アッセイは全て周囲温度にて行った。生成物の蛍光（３９０ｎｍで励起、４６０ｎｍで放射）のモニターは、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ蛍光プレートリーダーで行った。生成物の進行曲線（ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｃｕｒｖｅ）をＡＭＣ生成物の生成後１５分間かけて作製した。
【０２６５】
阻害研究
インヒビターの可能性のあるものを上記アッセイを種々の濃度の被験化合物で用いてスクリーニングする。基質およびインヒビターの緩衝溶液に酵素を加えることにより反応を開始した。Ｋｉ値は式１：
【数４２】
2004520439.tif 000105
（式中、ν０は反応速度、Ｖは最大速度、Ｓは基質濃度、ＫＭはミカエリス定数、Ｉはインヒビター濃度）により計算した。
【０２６６】
このアッセイにおいて、表Ｉに示す化合物はｐＨ７において１０ｎＭ〜２５０ｎＭの範囲のＫｉ値を有し、それゆえカテプシンＫが関与する疾患、たとえば骨粗鬆症、歯肉炎や歯周炎などの歯肉疾患、パジェット病、悪性の高カルシウム血症、代謝性骨疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、および転移性の新形成の治療および予防において有用性を有する。
【０２６７】
ファルシパインＩＩのクローニングおよび発現
ファルシパイン２の生成
クローニング
デオキシオリゴヌクレオチドプライマー：
（配列番号１）
５’ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＣＣＧＡＴ−３’および
（配列番号２）
５’ＣＧＣＧＴＣＧＡＣＴＴＡＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＡＡＴＴＡＡＴＧＧＡＡＴＧＡＡＴＧＣＡＴＣＡＧＴ−３’を、Ｓａｎｇｅｒ Ｃｅｎｔｒｅ、ケンブリッジ、英国（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｐｒｏｊｅｃｔｓ／Ｐ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ／ｂｌａｓｔ ｓｅｒｖｅｒ．ｓｈｔｍｌ）に寄託された配列に基づいてデザインした。これらプライマーは、現在ファルシパイン２として知られるシステイニルプロテイナーゼのｃＤＮＡ配列の部分を増幅し、関連する末端クローニング酵素部位および停止コドンのすぐ上流にあるカルボキシ末端のヘキサヒスチジンコード配列を含むようにデザインした。
【０２６８】
上記プライマーおよび鋳型としてＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍファージライブラリーＤＮＡを用い、以下の条件でポリメラーゼ連鎖反応を行った：９４℃で２分、ついで９４℃で１０秒を３５サイクル、５０℃で１分、および６０℃で２分、この次に６０℃で５分のインキュベーション。８８０ｂｐのＰＣＲアンプリコンを精製し、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いてリン酸化した。ついで、このＤＮＡを、ＥｃｏＲＶ開裂し脱リン酸化したＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩクローニングベクターにライゲートし、ＤＨ５アルファ大腸菌に形質転換した。単離した組換え大腸菌クローン中のプラスミド挿入物のＤＮＡ配列をＡｍｅｒｓｈａｍ Ｍｅｇａｂａｃｅシークエンシング装置を用いて決定した。真正のＯＲＦを生成するため、３方ライゲーションを行って、切断したファルシパイン２のＮ末端（ＮｃｏＩ／ＮｄｅＩ）、ファルシパイン２のＣ末端（ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩ）およびベクターｐＱＥ−６０（ＮｃｏＩ／ＢａｍＨＩ）を一緒に合わせた。
【０２６９】
ＴＦ２．１０のヌクレオチド配列（配列番号３）：
ＣＣＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＣＣＧＡＴＴＴＡＡＣＴＴＡＴＣＡＴＧＡＡＴＴＴＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＡＴＣＴＴＡＧＴＴＴＡＡＧＡＴＣＴＴＣＡＡＡＡＣＣＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＣＴＡＡＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＡＴＣＡＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＡＴＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＡＴＴＴＣＧＡＴＣＡＴＧＣＡＧＣＴＴＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＣＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＡＡＣＡＣＣＴＧＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＴＧＧＡＴＣＴＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＴＴＡＧＴＡＧＴＡＴＡＧＧＴＴＣＣＧＴＡＧＡＡＴＣＡＣＡＡＴＡＴＧＣＴＡＴＣＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＴＡＡＴＡＡＣＣＴＴＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＴＴＡＧＴＡＧＡＴＴＧＴＴＣＡＴＴＴＡＡＡＡＡＴＴＡＴＧＧＴＴＧＴＡＡＴＧＧＡＧＧＴＣＴＣＡＴＴＡＡＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＡＧＧＡＴＡＴＧＡＴＴＧＡＡＣＴＴＧＧＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＴＡＴＣＣＡＴＡＴＧＴＧＡＧＴＧＡＴＧＣＴＣＣＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＡＡＣＡＴＡＧＡＴＡＧＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＡＴＡＴＧＧＡＡＴＣＡＡＡＡＡＴＴＡＴＴＴＡＴＣＣＧＴＡＣＣＡＧＡＴＡＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＡＧＣＡＣＴＴＡＧＡＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＣＴＡＴＴＡＧＴＡＴＴＡＧＴＧＴＡＧＣＣＧＴＡＴＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＴＴＴＴＴＡＣＡＡＡＧＡＡＧＧＴＡＴＴＴＴＣＧＡＴＧＧＡＧＡＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＡＴＴＡＡＡＴＣＡＴＧＣＣＧＴＴＡＴＧＣＴＴＧＴＡＧＧＴＴＴＴＧＧＴＡＴＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＡＴＣＣＡＴＴＡＡＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＡＣＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＴＡＡＧＡＡＣＴＣＡＴＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＡＴＧＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＧＴＴＴＣＡＴＡＡＡＴＡＴＴＧＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＡＴＣＡＧＧＡＴＴＡＡＴＧＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＧＡＴＴＡＧＧＴＡＣＴＧＡＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＣＣＡＴＴＡＡＴＴＧＡＡＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＴＡＡＧＴＣＧＡＣＧＣＧＡＴＣＧＡＡＴＴＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣ
【０２７０】
タンパク質のコーティング配列（配列番号４）：
【化６３】
2004520439.tif 000106
【０２７１】
ＴＦ２．１０挿入物を制限酵素ＮｃｏＩおよびＢａｍＨＩを用いてｐＱＥ−６０ベクターから切り出し、ＮｃｏＩ／ＢａｍＨＩ切断した発現ベクターｐＥＴ−１１Ｄにライゲートし、ＤＨ５アルファ大腸菌に形質転換した。単離した大腸菌中の組換え発現プラスミド（ｐＥＴ−ＴＦ２．１０）の存在は、プラスミドＤＮＡの制限酵素消化物により確認した。ＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌をｐＥＴ−ＴＦ２．１０で形質転換し、組換えシステイニルプロテイナーゼの発現に用いた。
【０２７２】
タンパク質の発現
ｐＥＴ−ＴＦ２．１０で形質転換したＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌（ＢＬＴＦ２．１０）を、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むルリアブロス中、２００ｒｐｍ、３７℃にて一夜増殖させた。ついで新たな培地を接種し、１ｍＭ ＩＰＴＧを用いてタンパク質発現を誘発する前に０．８のＯＤ６００ｎｍまで増殖させた。誘発を２００ｒｐｍ、３７℃で３時間行い、ついで細菌菌体を遠心分離により回収し、タンパク質精製を行うまで−８０℃で貯蔵した。
【０２７３】
タンパク質の精製およびリフォールディング
２５０ｍｌの培養液に相当する大腸菌菌体ペレットを可溶化緩衝液（６Ｍグアニジン塩酸塩、２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８．０）中に室温にて３０分間、再浮遊させることにより溶解した。１２０００ｇで４℃にて１０分間遠心分離した後、透明な溶解液を１ｍｌのニッケル−ＮＴＡアガロースに加え、室温で１時間振盪した。
【０２７４】
タンパク質のリフォールディング法１
ニッケル−ＮＴＡに結合したタンパク質を、６Ｍグアニジン塩酸塩、２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、２５０ｍＭ ＮａＣｌついで８Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌついで８Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ，ｐＨ８．０（３０ｍＭイミダゾールを含む）でバッチ洗浄し、１Ｍイミダゾールとともに８Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０を用いてタンパク質の溶出を行った。ついで、溶出したタンパク質をリフォールディング緩衝液（１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２０％グリセリン、２５０ｍＭ Ｌ−アルギニン、１ｍＭ還元型グルタチオン、０．１ｍＭ酸化型グルタチオン、ｐＨ８．０）で１００倍に希釈し、４℃で攪拌しながら一夜静置した。ついで、フィルター遠心分離かまたはニッケル−アガロースカラムを用いた再精製（透析してＥＤＴＡを除いた後）によりタンパク質を濃縮することができた。
【０２７５】
タンパク質のリフォールディング法２
ニッケル−ＮＴＡに結合したタンパク質を、８Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．０ついで８Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０（２０ｍＭイミダゾールを含む）、ついで２Ｍ尿素、トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０でバッチ洗浄した。ついで、１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、２５０ｍＭ Ｌ−アルギニン、１ｍＭ還元型グルタチオン、０．１ｍＭ酸化型グルタミンを加えて４℃でインキュベーションすることによりタンパク質をカラム上でリフォールディングし、１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０を０．５Ｍイミダゾールとともに用いてタンパク質の溶出を行った。
【０２７６】
タンパク質のリフォールディング法１を用い、希釈したリフォールディング酵素をフィルター遠心分離により濃縮することによって直ちに活性な（成熟）プロテイナーゼが得られた。しかしながら、この方法では自己タンパク質加水分解のために多大な酵素損失という結果となった。方法１を用いてリフォールディングしたタンパク質のニッケルカラム精製による濃縮とリフォールディング法２の使用との両者は、酵素の安定な不活性プロ形での一層多くの回収という結果となった。プロ形はまた、３７℃でインキュベーションした後に活性な成熟ファルシパイン２を生成するのに用いることができた。
【０２７７】
上記で概略を示したＣ−タグ構築物は、タンパク質のリフォールディング後の速やかな濃縮および回収を可能とし、自己タンパク質加水分解に付随する問題を回避できる。Ｓｈｅｎａｉら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５ ３７ ２９０００−２９０１０ｍに記載されたＮ−タグ構築物と異なり、本明細書に記載した構築物は不溶性マトリックスの表面上で、たとえば精製カラムに結合してリフォールディングすることができる。さらに、プロ領域は天然酵素と同様の酵素不活化配列として働き、該酵素での作業を一層予測可能なものにする、すなわち安定な不活性酵素を必要に応じて制御可能に活性化することができる。酵素のプロ領域は成熟酵素ドメインの折り畳み状態を指令すべく独立に折り畳むことができなければならないので、Ｎ−末端タグは酵素のこの通常の機能を妨げる傾向がある。本明細書に記載したタグはアフィニティー精製を可能とし、それゆえ収量を増大させ、酵素の安定なプロ形を単離する機会を促進する。
【０２７８】
それゆえ、共有結合したＣ−末端タグを含む酵素的に活性なファルシパイン２を記載する。Ｃ−末端タグは、ポリヒスチジン、たとえば４〜８残基、好ましくは６残基を含んでいてよい。上記で記載した構築物はグルタミン酸残基のＣ末端にタグを有するが、他の構築物では酵素の長さを１０残基まで、たとえば６〜８残基または２〜４残基まで短くすることができ、有用なスクリーニング活性を保持することができる。好ましい構築物は、上記で列挙した配列を本明細書に記載するように任意にＣ末端の先端を切り取って含む。
【０２７９】
ファルシパイン２タンパク質加水分解触媒活性の決定
ファルシパイン２の都合のよいアッセイは、上記で調製した組換え酵素を用いて行う。別法として、Ｓｉｊｗａｌｉら、Ｐｒｏｔ． Ｅｘｐ． Ｐｕｒｉｆ． ２２ １２８−１３４ （２００１）の記載に従ってファルシパインをアッセイする。動力学定数の決定のための標準アッセイ条件には、蛍光原性ペプチド基質、典型的にＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを用い、１００ｍＭ Ｍｅｓ／トリス／酢酸、ｐＨ７．０（１Ｍ ＮａＣｌおよび１０ｍＭ ２−メルカプトエタノールを含有）かまたは１００ｍＭリン酸Ｎａ、ｐＨ５．５（１Ｍ ＮａＣｌおよび１０ｍＭ ２−メルカプトエタノールを含有）のいずれかで決定した。使用した酵素濃度は２ｎＭであった。ストック基質溶液はＤＭＳＯ中で１０ｍＭにて調製した。スクリーニングを８０μＭの一定の基質濃度で行い、詳細な動力学研究を２５０μＭからの基質の２倍希釈で行った。アッセイでの全ＤＭＳＯ濃度は３％未満に保持した。アッセイは全て周囲温度にて行った。生成物の蛍光（３９０ｎｍで励起、４６０ｎｍで放射）のモニターは、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｆｌｕｏｒ ｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ蛍光プレートリーダーで行った。生成物の進行曲線をＡＭＣ生成物の生成後１５分間かけて作製した。
【０２８０】
阻害研究
上記アッセイを用い、インヒビターの可能性のあるものを下記表に示す化合物の種々の濃度でスクリーニングした。これら化合物は上記で概略を示した方法を用いて固相上で調製した。基質およびインヒビターの緩衝溶液に酵素を加えることにより反応を開始した。Ｋｉ値は式１：
【数４３】
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（式中、ν０は反応速度、Ｖは最大速度、Ｓは基質濃度、ＫＭはミカエリス定数、Ｉはインヒビター濃度）により計算した。
【０２８１】
下記表に示す化合物は０．５μＭ〜２．７μＭのＫｉ値（ｐＨ７にて）を示し、それゆえ寄生虫感染または侵入、たとえばマラリアの予防または治療に有用である。
ナフタレン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
３−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
４−アセチルアミノ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
４−ヒドロキシ−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−３−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアミド
ビフェニル−４−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−ベンズアミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［３−メチル−１Ｓ−（２Ｒ−メチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルカルバモイル）−ブチル］−アミド
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004520439.tif 000226
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