(57)【要約】本発明は、イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の障害に関連した疾患を診断するための、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３を検出する物質の使用に関する。本発明はまた、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能に影響を及ぼし、結果としてＮａ＋および／またはＫ＋の排泄を調節する、前述の疾患を治療するための活性成分の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れと相関関係にある疾患を診断する目的のための、真核細胞中のｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能を検出する物質の使用。
【請求項２】
イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れと相関関係にある疾患を治療する目的のための、真核細胞中ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する活性成分の使用。
【請求項３】
その作用、特にｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の阻害または活性化が、Ｎａ＋および／またはＫ＋の排泄に影響を及ぼすか、および／またはそれを制御する請求項２に記載の使用。
【請求項４】
イオンチャンネルがナトリウムチャンネルのサブタイプＥＮａＣである請求項１ないし３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
イオンチャンネルがカリウムチャンネルのサブタイプＫｖ１．３である請求項１ないし４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
活性成分がｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３に指向性である請求項２ないし５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
活性成分が、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体に指向性である請求項２ないし６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
活性成分が、キナーゼ阻害剤、好ましくはスタウロスポリンおよび／またはケレリスリンまたは他の類似体である請求項２ないし７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
活性成分が、ペプチド、好ましくはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、そのペプチドによってｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現に影響を及ぼし、好ましくはそれを抑制または活性化する請求項２ないし８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
活性成分が「小分子化合物」、好ましくは分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００の小分子化合物である請求項２ないし９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
疾患、特にナトリウムチャンネル活性の乱れと相関関係にある疾患が、動脈性高血圧、またはリドル症候群に該当する症状である請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
疾患、特にカリウムチャンネル活性の乱れと相関関係にある疾患が、てんかん、神経変性、自己免疫疾患、または免疫不全である請求項１ないし１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能を検出するための少なくとも１種の物質を含み、イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れと相関関係にある疾患を検出する目的の診断キット。
【請求項１４】
ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の過剰発現および／または過少発現と相関関係にある疾患を診断するための請求項１３に記載の診断キット。
【請求項１５】
動脈性高血圧、またはリドル症候群に該当する症状を診断するための請求項１３または請求項１４に記載の診断キット。
【請求項１６】
てんかん、神経変性、自己免疫疾患、または免疫不全を診断するための請求項１３または請求項１４に記載の診断キット。
【請求項１７】
ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する少なくとも１種の有効量の活性成分と、必要ならば薬剤用担体とを含む薬剤組成物。
【請求項１８】
活性成分がキナーゼ阻害剤、好ましくはスタウロスポリンおよび／またはケレリスリン、またはこれらの類似体である請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
活性成分が、ペプチド、好ましくはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、そのペプチドによってｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現に影響を及ぼし、好ましくはそれを抑制または活性化する請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
活性成分が「小分子化合物」、好ましくは分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００の「小分子化合物」である請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項２１】
ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する少なくとも１種の有効量の活性成分と、必要ならば薬剤用担体とを含む請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
活性成分が、ペプチド、好ましくはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、そのペプチドによってｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体の発現に影響を及ぼし、好ましくはそれを抑制または活性化する請求項２１に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
活性成分が「小分子化合物」、好ましくは分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００の「小分子化合物」である請求項２１に記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、血清およびグルココルチコイド依存性キナーゼ２および／または３（ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３）を診断的に検出する物質の使用、ならびにイオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れに相関した疾患の治療的処置のための、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３に作用する活性成分の使用に関する。対象とするｓｇｋは、転写段階でも転写後の段階でも調節されるセリン／スレオニンタンパク質キナーゼファミリーに相当する。
【０００２】
（背景技術）
細胞がその環境の範囲内で受ける様々な外的シグナルによって、原形質膜およびその受容体から細胞質および細胞核に、関連するシグナルを迅速に、可逆的に伝達できるようにする目的で、細胞内のリン酸化／脱リン酸化カスケードが引き起こされる。このようなカスケードに関与する個々のタンパク質が調節されることによって、初めに細胞の特異性および柔軟性の向上が可能になり、それによって細胞が細胞外シグナルへに迅速に応答できるようになるのである。血清およびグルココルチコイド依存性キナーゼ（ｓｇｋ）は、当初はラット乳癌細胞からクローン化された（Ｗｅｂｓｔｅｒら、１９９３ａ、１９９３ｂ）。ヒトキナーゼ（ｈｓｇｋ）は、細胞容積によって調節される遺伝子の形で肝細胞からクローン化された（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒら、１９９７）。ラットキナーゼは、上皮型Ｎａ＋チャンネル（ＥＮａＣ）を刺激することが判明している（Ｃｈｅｎら、１９９９年；Ｎａｒｙ−Ｆｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈら、１９９９年）。高血圧がＥＮａＣ活性の上昇に伴なわれることも示されている（Ｗａｒｎｏｃｋ、１９９８年）。
【０００３】
ｈｓｇｋは、脳でも発現するが（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒら、１９９７年）、そこでは電位依存性Ｋ＋チャンネルであるＫｖ１．３が、神経刺激性調節の決定的役割を担う（Ｐｏｎｇｓ、１９９２年）。Ｋｖ１．３は、細胞増殖（ＣａｈａｌａｎおよびＣｈａｎｄｙ、１９９７年）およびアポトーシス細胞死（Ｓｚａｂｏら、１９９６年；Ｌａｎｇら、１９９９年）の調節においても主要な役割を担う。Ｋｖ１．３はまた、リンパ球の増殖および機能の調節においても重要である（ＣａｈａｌａｎおよびＣｈａｎｄｙ、１９９７年）。ｓｇｋファミリーの他の２メンバー、ｓｇｋ２およびｓｇｋ３は、最近になってクローン化された（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９）。ｓｇｋ１の場合のように、ｓｇｋ２およびｓｇｋ３も、ＰＩ３キナーゼ経路を介してインスリンおよびＩＧＦ１によって活性化される。しかし、これらの新しいキナーゼの他の特徴付けまたは機能の割当ては、これまで明らかになっていない。
【０００４】
したがって、本発明は、これら２種のキナーゼ、すなわちｓｇｋ２およびｓｇｋ３を診断および治療の目的に役立たせるという課題に取り組むものである。
【０００５】
驚くことに、２電極電位クリップを使用する実験では、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３の同時発現によって、上皮型Ｎａ＋チャンネル（ＥＮａＣ）活性の非常に顕著な増大が引き起こされることが示された。ＥＮａＣは、腎臓のＮａ＋排泄において決定的役割を担い、血圧にも影響を及ぼす。ｓｇｋ３キナーゼは脳でも発現する。同様に２電極電位クリップを使用する実験では、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３の同時発現によって、Ｋ＋チャンネルＫｖ１．３の活性に非常に顕著な増大が引き起こされたことが示された。Ｋ＋チャンネルの活性化が神経興奮性の低下を引き起こすので、得られた関数データは、ｓｇｋ３による影響が、ニューロンの興奮性を低減するのに好適であることを示唆している。したがって、ｓｇｋ３の発現または機能の乱れは、てんかん発作発生の原因となるかもしれない。逆に、てんかん発作の場合に、ｓｇｋ３を発現または活性化させる刺激物質であって血液脳関門を通過するものを使用すればうまくいくという結論が正しくなる。最後に、心臓に発現したＫ＋チャンネルｍｉｎＫは、ｓｇｋ１、ｓｇｋ２、およびｓｇｋ３によって活性化されることが判明した。したがってこれらのキナーゼは、心臓の興奮性の調節において役割を担う。
【０００６】
本発明が取り組む課題は、このようなことを考慮して、独立請求項１、２、１３、および１７の主題によって解決された。好ましい実施形態は、従属請求項３〜１２、１４〜１６、および１８〜２３で述べている。これにより、すべての前記請求項の内容は、それらを参照することによって、本発明の説明内容の不可欠な一部をなしている。
【０００７】
（発明の開示）
本発明によれば、少なくとも１種の物質の使用によって、真核細胞中のｓｇｋ２もしくはｓｇｋ３の発現および／または機能が検出され、これによって特に、ナトリウムやカリウムチャンネルの活性など、イオンチャンネル活性の乱れに相関関係のあるした疾患の診断も可能になるであろう。その物質は、たとえばｓｇｋ２またはｓｇｋ３に指向性のある抗体であり、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ，エライザ）など、当分野の専門家に知られている検出方法の中で使用してよい。このようなイムノアッセイの場合では、検出する抗原（ｓｇｋ２およびｓｇｋ３）に指向性のある特定の抗体（または、抗体の定量の場合では相同的な試験抗原）は、インキュベートすると、その上に検体と共に免疫複合体が形成する担体物質（たとえば、セルロールまたはポリスチレン）に結合される。後続のステップで、これら免疫複合体は標識した抗体を受ける。塩基性の反応物に色素生産性基質を加えると、この免疫複合体に結合した酵素−基質複合体を可視化すること、あるいはこの免疫複合体に結合した標識酵素の濃度を測光法で定量し、酵素活性のわかっている標準物質と比較することによって検体中の抗原濃度を決定することが可能になる。診断的検出の目的に使用することのできる他の物質は、オリゴヌクレオチドであるが、これは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を採用すれば、あるＤＮＡ断片を選択的に増幅する分子遺伝学的方法を使用してｓｇｋ２およびｓｇｋ３の定量的検出を実現するのに適する。既知の標的タンパク質を定量的に検出する他の方法は、当分野の専門家によく知られている。
【０００８】
本発明によれば、イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れに相関関係のある疾患を治療する目的で、真核生物細胞中のｓｇｋ２およびｓｇｋ３の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する活性成分に対する特許権が請求される。ｓｇｋ２およびｓｇｋ３はキナーゼであるので、スタウロスポリン、ケレリスリンなど、既知のキナーゼ阻害剤である物質はもちろん、他の物質もこの活性成分の候補に相当する。このような阻害剤は、当分野の専門家に知られており、ＳｉｇｍａやＭｅｒｃｋなどの会社から購入できるものもある。ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の遺伝子改変変異体は、たとえば活性化因子として使用することができる。
【０００９】
本発明によれば、関与するイオンチャンネルは、ナトリウムチャンネルのサブタイプＥＮａＣでよいが、この場合、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の阻害または活性化によって、このチャンネルを介してＮａ＋輸送に影響を及ぼすことが好ましく、これがたとえば血圧に影響を及ぼす。ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現亢進または機能亢進は、腎臓のＮａ＋貯留を引き起こし、これが次には高血圧発症の原因となる。したがって血圧は、関連キナーゼを活性化または非活性化することによって調節できるといえる。
【００１０】
（発明を実施するための最良の形態）
好ましい実施形態では、関与するイオンチャンネルは、サブタイプＫｖ１．３のカリウムチャンネルである。関与する効果、特にｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の阻害または活性化は、サブタイプＫｖ１．３のカリウムチャンネルを介してＫ＋輸送に好ましく影響を及ぼすことである。他の好ましい実施形態では、関係あるイオンチャンネルは、サブタイプｍｉｎＫのカリウムチャンネルであり、この場合では、ｓｇｋ１、ｓｇｋ２、および／またはｓｇｋ３の阻害または不活性化は、サブタイプｍｉｎＫのカリウムチャンネルを介してＫ＋輸送に影響を及ぼす。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態では、活性成分は、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３自体に指向性がある。したがって関係ある活性成分は、「キナーゼ欠損変異体」と称されるアンチセンス配列、またはスタウロスポリンおよび／またはケレリスリン、またはこれらの類似体などのキナーゼ阻害剤でよい。ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現に影響を及ぼすペプチドをコードするいわゆる「小分子化合物」またはポリヌクレオチドを使用してもよい。
【００１２】
本発明の他の好ましい実施形態では、活性成分は、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、制御因子、および／または生物学的前駆体に指向性がある。このような活性化因子、阻害因子、制御因子、および／または生物学的前駆体は、ｓｇｋシグナル伝達カスケードの上流および下流のメンバー、ｓｇｋ２発現レベルおよび／またはｓｇｋ３発現レベルの原因となる転写因子、あるいは未知の分子であって、この活性成分の影響を受け、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能に関与する分子であると思われる。
【００１３】
本発明では、既知の活性成分も未知の活性成分も使用してよい。本発明の特に好ましい実施形態では、活性成分は、いわゆる「小分子化合物」、特に分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００の化合物である。関係ある「低分子量化合物」は、ＭＷが３７７．４のイミダゾール誘導体ＳＢ２０３５８０や、ＭＷが３３１．３のＳＢ２０２１９０などのキナーゼ阻害剤でもよく、これらの両阻害剤は、既知のキナーゼ発現阻害剤であり、米国カリフォルニア州サンディエゴのＣａｌｂｉｏｃｈｅｍによって市販されている。
【００１４】
本発明は、ナトリムチャンネルおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れに相関関係のあるすべての形の疾患を治療するために使用してよい。特筆すべきは、動脈性高血圧、ならびにリドル症候群に該当する症状、まれで遺伝的なＥＮａＣ機能亢進、および、したがって、血圧の大幅な上昇を伴う疾患である。
【００１５】
現在知られている限りでは、カリウムチャンネル活性、特にサブタイプＫｖ１．３および／またはｍｉｎＫのカリウムチャンネル活性の乱れに相関した疾患であって本発明によって治療可能なものには、てんかん、神経変性、自己免疫疾患、および免疫不全が含まれる。特に、ｍｉｎＫチャンネルの障害は、心臓リズムの変動を引き起こす。
【００１６】
本発明はまた、イオンチャンネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャンネル活性の乱れに相関関係のある疾患を診断する目的で、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能を検出するのに適する少なくとも１種の物質を含む診断キットに関する。このキットは、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現亢進、発現低下、機能亢進、または機能低下と相関関係のある疾患の診断にも使用してよい。その診断結果は、動脈性高血圧、リドル症候群、自己免疫疾患、および免疫不全などの疾患を検出する目的で、診断キットと関連させて利用してもよい。なおこの後者の場合では、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能の乱れを検出することによって疾患を検出する。
【００１７】
本発明はまた、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する少なくとも１種の活性成分と、好ましくは、必要ならば、薬剤用担体を含有する薬剤組成物も含む。組成物に含まれる活性成分はまた、スタウロスポリン、ケレリスリン、ＳＢ２０３５８０、ＳＢ２０２１９０、これらのうち１種の類似体または他の物質など、キナーゼ阻害剤でよい。また含まれる活性成分はまた、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現に作用し、好ましくはそれを抑制または活性化するペプチド、好ましくはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドでもよい。そのポリペプチドは、たとえば、いわゆる「キナーゼ欠損変異体」でよい。また含まれる活性成分は、いわゆる「小分子化合物」、好ましくは分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００の小分子化合物でもよい。最後に、含まれる活性成分は、アンチセンス配列、すなわちｍＲＮＡと共に二本鎖を形成し、それによってｍＲＮＡがポリペプチドへと翻訳されるのを妨げることのできる配列でもよい。たとえば強力なプロモータを有するベクターを組み込むことによってこれらのキナーゼの過剰発現を実現するために、ｓｇｋ２およびｓｇｋ３自体の配列を使用してもよい。この組成物の他の特性に関しては、この記述のこれまでの本文の関連項目を参照されたい。
【００１８】
最後に、本発明は、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に作用し、特にそれを抑制または活性化する少なくとも１種の有効量の活性成分を含有する薬剤組成物も含む。この薬剤組成物は、好ましくは薬剤用担体も含有してよい。このようなｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体は、たとえば、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の調節または活性に関与する他のキナーゼでもよい。ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の発現レベルの原因となる転写因子、ならびにｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３シグナル伝達カスケードの既知または未知の他のメンバー。またこのような組成物は、ｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子、および／または生物学的前駆体の発現に影響を及ぼし、特にそれを抑制または活性化するペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有していてもよい。好ましくは分子量ＭＷがＭＷ＜１，０００であり、かつｓｇｋ２および／またはｓｇｋ３の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体に指向性があり、それによってこのようなキナーゼの発現または機能を抑制または活性化するいわゆる「小分子化合物」を使用してもよい。
【００１９】
本発明の現存する特徴および他の特徴は、好ましい実施形態の記載から、従属請求項および図面と相俟って知らされ、その際、それら特徴は単独でも組合わされても効果があらわれるものである。
【００２０】
材料および方法
アフリカツメガエルの解剖と卵母細胞の回収および処理は、より早くから詳細に述べられている（Ｂｕｓｃｈら、１９９２年）。対象とする各卵母細胞に、α−ＥＮａＣ、β−ＥＮａＣ、およびγ−ＥＮａＣ、Ｋｖ１．３、またはｍｉｎＫからのｃＲＮＡ　１ｎｇを注入するが、その際ｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２、およびｈｓｇｋ３キナーゼを同時に注入したものとしないものがあった。２電極電位クリップおよび電流クリップでの実験は、注入してから２〜４日に行う。Ｎａ＋電流（ＥＮａＣの場合）およびＫ＋電流（Ｋｖ１．３およびｍｉｎｋの場合）を１０Ｈｚのフィルタにかけ、記録装置を使用して記録した。この実験は、標準的にｃＲＮＡ注入の後２日目に行った。浴中溶液に、９６ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、および５ｍＭのＨＥＰＥＳを入れ、ｐＨ７．５とし、電位を−８０ｍＶとした。どの実験でも、ＨＣｌまたはＮａＯＨでの滴定によって浴のｐＨを設定した。浴中液体の流速は、１０〜１５分以内で溶液を完全に変化させる２０ｍｌ／ｍｍに設定した。データは、すべて算術平均±ＳＥＭの形で出力した。
【００２１】
結果
ｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２、またはｈｓｇｋ３による影響を調査する目的で、アフリカツメガエルの卵母細胞に、それぞれのキナーゼのｍＲＮＡ、ならびに上皮型Ｎａ＋チャンネル、α−ＥＮａＣ、β−ＥＮａＣ、およびγ−ＥＮａＣ、または電位依存性Ｋ＋チャンネルＫｖ１．３もしくはｍｉｎＫチャンネルのｍＲＮＡを注入し、その後、アミロライド感受性Ｎａ＋電流ＩＮａおよび電位活性化型Ｋ＋電流ＩＫを測定した。以下の表１と図１および図２からわかるように、ｈｓｇｋ２もｈｓｇｋ３も、ＥＮａＣ活性およびＫｖ１．３活性を刺激する。ｈｓｇｋ１は、ｍｉｎＫ活性を刺激する（表１を参照）。このような刺激効果は、タンパク質キナーゼ阻害剤のスタウロスポリンおよびケレリスリンによって完全に妨げられた。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
実験１
ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３由来のｍＲＮＡを注入後、Ｎａ＋チャンネル、ｒＥＮａＣを介したアミロライド阻害性電流Ｉａｍｉｌは、ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の同時発現のためにかなり増加したことが示された（図１参照）。キナーゼ阻害剤のスタウロスポリンおよびケレリスリンは、Ｎａ＋チャンネルの活性を阻害する（図１を参照）。ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３によるＥＮａＣチャンネルへの刺激効果は、キナーゼ阻害剤スタウロスポリンおよびケレリスリンによって妨げられるので、（ａ）ｓｇｋ２もしくはｓｇｋ３の発現または機能の乱れの診断的な検出結果は、たとえば高血圧出現の原因を発見する際の重要な尺度となり、（ｂ）スタウロスポリン、ケレリスリン、他のキナーゼ阻害剤など、ｓｇｋ２阻害剤およびｓｇｋ３阻害剤は、前述の疾患の治療で使用することもできる。
【００２４】
実験２
ｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２、またはｈｓｇｋ３由来のｍＲＮＡ、ならびにＫ＋チャンネルＫｖｌ．３またはｍｉｎＫ由来のｍＲＮＡを注入後、このチャンネルのいずれかを介した電流Ｉが増大することが示された（表１を参照）。図２は、初日（ｄ１、最も左のバー）および５日目（ｄ５、最も右のバー）に得られた、ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３由来のｍＲＮＡ、ならびにＫｖ１．３由来ｍＲＮＡの注入後の、これらの実験結果を示す。Ｋ＋チャンネルの活性化は、神経興奮性の低下を引き起こすので、この関数データは、脳で発現したｈｓｇｋ３による影響が、ニューロンの興奮性を低減するのに好適であることを示唆している。したがって、ｓｇｋ３発現の乱れは、てんかん発作発生の原因となるかもしれない。逆に、ｓｇｋ３の発現または機能の刺激物質であって血液脳関門を通過するものは、てんかん発作の場合に使用できる。心臓の興奮性の乱れに影響を与える目的で、キナーゼ、特にｈｓｇｋ１を刺激または阻害することにも、この同じ考えが当てはまる。
【００２５】
実験３
図３によると、黒いバーとドット柄のバーを比較してわかるように、ヒト胚腎細胞（ＨＥＫ細胞）（Ｌｅｗｉｓら（１９８４年）、Ｐｈｉｌｌｉｐｓら（１９８２年））からウシ胎児血清（ＦＣＳ）を抜くと、細胞死のために、存在する細胞の総数が減少する。図３では、それぞれ２４時間後および４８時間後の状況を示している。この減少は、白いバーで表されるインスリン様成長因子（ＩＧＦ１）によって軽くなる。このＩＧＦ１の影響は、マルガトキシン（ｍａｒｇａｔｏｘｉｎ）（ＭＴ）を使用するＫ＋チャンネルの同時阻害によって消失するが、これを、線影をつけたバーで表わす。このデータは、Ｋ＋チャンネルが同時に阻害されると、インスリン様成長因子ＩＧＦ１が、その細胞死抑制効果を失うことを示唆している。したがって、ｓｇｋ２およびｓｇｋ３を媒介とするＫｖ１．３チャンネルの活性化は、抗アポトーシス効果を伴い、ｓｇｋ２効果およびｓｇｋ３効果の喪失は、たとえば神経変性の場合で生じるように、細胞死の増加を引き起こす。逆に、ｓｇｋ２およびｓｇｋ３の活性化因子は、神経変性の場合のアポトーシス細胞死を防ぐために使用できる。Ｋｖ１．３は、リンパ球の増殖およびリンパ球機能の調節においても主要な役割を担っているので、このキナーゼの阻害因子または活性化因子は、たとえば自己免疫疾患または免疫不全の場合において、免疫系に影響を与えるために使用できる。
【００２６】
参考文献
【００２７】
【表２】
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【００２８】
【表３】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３によるＮａ＋チャンネル，ｒＥＮａＣへの刺激を示すグラフである。
【図２】
ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３によるＫ＋チャンネル，Ｋｖ１．３への刺激を示すグラフである。
【図３】
Ｋ＋チャンネル，Ｋｖ１．３の阻害がヒト胚腎細胞（ＨＥＫ細胞）の生存に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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