(57)【要約】式（Ｉ）［式中、ＸはＨ、Ｆ、Ｎ３、ＮＨ２、−ＣＮまたは−ＯＭｅを示し；Ｘ１はＯまたはＮＲ７を示し；Ｘ２はＯ、ＮＨ、ＮＲ６またはＳを示すか、またはＸ３がＯである場合、Ｘ２は存在せず；Ｘ３は存在しないか、またはＸ１がＯである場合、Ｘ３はＯを示し；Ｒ１は水素；置換されていてもよいＣ１−６アルキル；置換されていてもよいアリール；または置換されていてもよいヘテロアリールを示し；Ｒ２はヒドロキシ、ＯＣＯＲ６またはＯＣＯ２Ｒ６を示し；Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは置換されていてもよいヘテロシクリルを示し；Ｒ４およびＲ５は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアラルキルから選択され；Ｒ６は置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し；Ｒ７はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、または置換されていてもよいアリールを示し、ここにＲ４およびＲ７が各々、アルキルである場合、それらは結合して５−または６−員環を形成していてもよく；Ｂは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）を示し、ここに、ＺはＯまたはＳを示し；Ｒ８はＨ、ハロ、Ｃ２−４アルキニル、トリフルオロメチル、Ｃ１−３アルコキシ、ヒドロキシ、メチルチオ、アミノ、ニトロまたはＣ１−３アルキルを示し、ここに、Ｃ１−３アルキルはヒドロキシ、ハロ、アミノまたはＯＲ１０によって置換されていてもよく、ここに、Ｒ１０は、それ自体置換されていてもよいアリールによって置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；Ｒ９はＨ、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ６、ＳＲ６またはＮＲ３Ｒ３を示す］で示されるプロタイド化合物は、ウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療において有用である。
2004534830.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004534830.tif 000011
［式中、ＸはＨ、Ｆ、Ｎ３、ＮＨ２、−ＣＮまたは−ＯＭｅを示し；
Ｘ１はＯまたはＮＲ７を示し；
Ｘ２はＯ、ＮＨ、ＮＲ６またはＳを示すか、またはＸ３がＯの場合、Ｘ２は存在せず；
Ｘ３は存在しないか、またはＸ１がＯの場合、Ｘ３はＯを示し；
Ｒ１は水素；置換されていてもよいＣ１−６アルキル；置換されていてもよいアリール；または置換されていてもよいヘテロアリールを示し；
Ｒ２はヒドロキシ、ＯＣＯＲ６、またはＯＣＯ２Ｒ６を示し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、または置換されていてもよいヘテロシクリルを示し；
Ｒ４およびＲ５は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ６は置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し；
Ｒ７はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し、ここに、Ｒ４およびＲ７が各々、アルキルである場合、それらは結合して５−または６−員環を形成していてもよく；
Ｂは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）：
【化２】
2004534830.tif 000012
（式中、ＺはＯまたはＳを示し；
Ｒ８はＨ、ハロ、Ｃ２−４アルキニル、トリフルオロメチル、Ｃ１−３アルコキシ、ヒドロキシ、メチルチオ、アミノ、ニトロまたはＣ１−３アルキルを示し、ここに、Ｃ１−３アルキルは、ヒドロキシ、ハロ、アミノまたはＯＲ１０によって置換されていてもよく、ここに、Ｒ１０は、それ自体置換されていてもよいアリールによって置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；
Ｒ９はＨ、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ６、ＳＲ６またはＮＲ３Ｒ３を示す）
を示す］
で示される化合物およびその塩および溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉａ）：
【化３】
2004534830.tif 000013
［式中、ＸはＨ、Ｆ、Ｎ３、ＮＨ２、−ＣＮまたは−ＯＭｅを示し；
Ｘ１はＯまたはＮＲ７を示し；
Ｘ２はＯ、ＮＨ、ＮＲ６またはＳを示すか、またはＸ３がＯである場合、Ｘ２は存在せず；
Ｘ３は存在しないか、またはＸ１がＯである場合、Ｘ３はＯを示し；
Ｒ１は水素；置換されていてもよいアリール；または置換されていてもよいヘテロアリールを示し；
Ｒ２はヒドロキシ、ＯＣＯＲ６またはＯＣＯ２Ｒ６を示し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは置換されていてもよいヘテロシクリルを示し；
Ｒ４およびＲ５は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ６は置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し；
Ｒ７はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、または置換されていてもよいアリールを示し、ここに、Ｒ４およびＲ７が各々、アルキルである場合、それらは結合して５−または６−員環を形成していてもよく；
Ｂは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）：
【化４】
2004534830.tif 000014
（式中、ＺはＯまたはＳを示し；
Ｒ８はハロ、Ｃ２−４アルキニル、トリフルオロメチル、Ｃ１−３アルコキシ、ヒドロキシ、メチルチオ、アミノ、ニトロ、またはＣ１−３アルキルを示し、ここに、Ｃ１−３アルキルはヒドロキシ、ハロ、アミノまたはＯＲ１０によって置換されていてもよく、ここに、Ｒ１０は、それ自体置換されていてもよいアリールによって置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；
Ｒ９はＨ、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ６、ＳＲ６またはＮＲ３Ｒ３を示す）
を示す］
によって示される請求項１記載の式（Ｉ）の化合物およびその塩および溶媒和物。
【請求項３】
医療において有用な請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
ウイルス感染の治療および／または予防のための医薬の製造における請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項５】
ウイルス感染がＨＣＶ感染である請求項４記載の使用。
【請求項６】
有効量の請求項１記載の式（Ｉ）の化合物をウイルス感染を有するヒトまたは動物対象に投与することを特徴とする、ウイルス感染を有するヒトまたは動物対象の治療法。
【請求項７】
ウイルス感染がＨＣＶ感染である請求項６記載の方法。
【請求項８】
式（ＩＩ）：
【化５】
2004534830.tif 000015
［式中、Ｂ、ＸおよびＲ２は式（Ｉ）に記載のとおりである］
で示される化合物と試薬Ｒ１Ｏ［Ｘ１Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ３Ｃ（Ｏ）Ｘ２（Ｒ３）］Ｐ（Ｏ）Ｃｌ（ここに、Ｒ１、Ｒ３−Ｒ５およびＸ１−Ｘ３は式（Ｉ）に記載のとおりである）との、適当な塩基を含有する適当な溶媒中における反応を特徴とする、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の調製法。
【請求項９】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物と医薬上許容される希釈剤または担体とを含んでなる医薬処方。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療上活性なヌクレオシド誘導体のプロタイド誘導体、その製造法、それを含んでなる医薬処方および治療、特に、ある特定のウイルス感染の治療または予防におけるその使用に関する。特に、発明者らは、ウイルス感染、特にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療するのに有用な化合物の一群を見出した。
【背景技術】
【０００２】
米国においては、推定４５０万人が慢性的にＨＣＶに感染している。急性感染の３０％のみが症候性であるが、感染個体の８５％以上が慢性の持続性感染を発現している。ＨＣＶ感染の治療コストは、１９９７年の米国において５４億６千万ドルと見積もられた。世界中で２億を超える人々が慢性的に感染していると推測される。ＨＣＶ感染は、全慢性肝疾患の４０−６０％および全肝臓移植の３０％の原因である。慢性ＨＣＶ感染は、米国における硬変症、末期肝疾患および肝臓癌の全体の３０％を占める。ＣＤＣは、ＨＣＶに起因する死亡数が２０１０年までに最少で年間３８，０００人に増加するであろうと予測している。
【０００３】
ウイルス表面抗原の高い可変性、複数のウイルスゲノタイプの存在、および免疫の明らかにされた特異性のため、近い将来、好結果のワクチンの開発の見込みはない。アルファ−インターフェロン（単独またはリバビリンと組み合わせて）は、慢性ＨＣＶ感染の治療に対するその認可のために、幅広く使用されている。しかしながら、一般に、不都合な副作用がこの治療に付随する：流感様症状、白血球減少症、血小板減少症、インターフェロン由来の鬱ならびにリバビリンによって誘導される躁（Lindsay, K.L. (1997) Hepatology 26 (suppl 1):71S-77S)。該治療は、他の５つの主要なＨＣＶゲノタイプによって引き起こされる感染と比べて、ＨＣＶゲノタイプ１（先進市場において全ＨＣＶ感染の〜７５％を構成する）によって引き起こされる感染に対してあまり効果がないままである。不運にも、〜５０−８０％の患者だけが該治療に応答し（血清ＨＣＶ ＲＮＡレベルにおける減少および肝臓酵素による標準化によって測定される）、治療された個体の５０−７０％が治療の停止後６ヶ月以内に再発する。近年、ＰＥＧ化インターフェロンの導入により、開始応答速度および維持応答速度が実質的に改善され、Ｐｅｇ−ＩＦＮとリバビリンの組合せ治療は、治療の優れた基準を構成する。しかしながら、組合せ治療に付随する副作用およびゲノタイプ１を有する患者における減少した応答は、該疾患の処置において改善の機会を与える。
【０００４】
１９８９年（Choo, Q-L et al (1989) Science 244:359-362）に分子クローニングによって最初に同定されたＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、現在、輸血後の非Ａ型、非Ｂ型肝炎（ＮＢＨＢ）（Kuo, G ら (1989) Science 244:362-364）を引き起こす最も一般的な作用因として幅広く認められている。そのゲノム構造および配列ホモノロジーのため、該ウイルスはフラビウイルス（Flaviviridae）科の新規な属として特定された。フラビウイルス（flavivirus）（例えば、黄熱ウイルスおよびデング熱ウイルス１−４型）およびペスチウイルス（pestivirus）（例えば、ウシウイルス性下痢症ウイルス、国境病ウイルスおよび古典的な豚コレラウイルス）（Choo, Q-L ら (1989) Science 244:359-3; Miller, R.H. および R.H. Purcell (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2057-2061）などのフラビウイルス属の他のメンバーのように、ＨＣＶは、正極性の１本鎖ＲＮＡ分子を含有する外皮で覆われたウイルスである。ＨＣＶゲノムは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）として機能する約３４０ベースの長く、高く保存された、キャップのない５’非翻訳領域（ＮＴＲ）を有する約９．６キロベース（ｋｂ）である（Wang CY ら An RNA pseudoknot is an essential structural element of the internal ribosome entry site located within the hepatitis C virus 5' noncoding region' [Article] Rna-A Publication of the Rna Society. 1(5):526-537, 1995 Jul）。該エレメントの次には、構造性および非構造性ウイルス蛋白質の両方を含む〜３０００アミノ酸よりなるポリペプチドをコードしている単一の長いオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードする領域がある。
【０００５】
細胞の細胞質中への侵入時、該ＲＮＡは直接、構造性および非構造性ウイルス蛋白質の両方を含む〜３０００アミノ酸よりなるポリペプチドに翻訳される。該巨大ポリペプチドが次いで、宿主およびウイルスにコードされるプロテイナーゼの組合せによって、個々の構造性および非構造性蛋白質にプロセッシングされる（Rice, C.M. (1996) , B.N. Fields, D.M.KnipeおよびP.M. Howley (編) Virology 2nd Edition, p931-960; Raven Press, N.Y.）。長いＯＲＦの末端の終止コドンの次に、おおよそ、３つの領域：種々のゲノタイプの間であまり保存されていない〜４０ベース領域、可変長ポリ（Ｕ）／ポリピリミジントラクトおよび「３’Ｘ−尾部」とも呼ばれる高く保存された９８ベースエレメントよりなる３’ＮＴＲがある（Kolykhalov, A. ら (1996) J. Virology 70:3363-3371; Tanaka, T. ら (1995) Biochem Biophys. Res. Commun. 215:744-749; Tanaka, T. ら (1996) J. Virology 70:3307-3312; Yamada, N. ら (1996) Virology 223:255-261）。該３’ＮＴＲは、チンパンジーにおいてＨＣＶ生育に必須の安定な２次構造を形成すると予測され、ウイルス性ＲＮＡ複製の開始および調節において機能すると考えられる。
【０００６】
ＨＣＶのＮＳ５Ｂ蛋白質（５９１アミノ酸、６５ｋＤａ）（Behrens, S.E. ら (1996) EMBO J. 15:12-22）は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）活性をコードし、他のＲＮＡウイルス性ポリメラーゼに存在する規範的なモチーフを含有する。該ＮＳ５Ｂ蛋白質は、タイプ内（１ｂ単離株にわたって〜９５−９８％アミノ酸（ａａ）同一性）およびタイプ間（ゲノタイプ１ａと１ｂ単離株との間において〜８５％ａａ同一性）の両方で公平に保存される。感染性子孫ビリオンの発生のためのＨＣＶ ＮＳ５Ｂ ＲｄＲｐ活性の不可欠性は、チンパンジーにおいて正式に証明されている（A. A. Kolykhalov ら (2000) Journal of Virology, 74(4), p.2046-2051）。かくして、ＮＳ５Ｂ ＲｄＲｐ活性の阻害（ＲＮＡ複製の阻害）は、ＨＣＶ感染を治療すると予測される。
【０００７】
前記に基づき、ＨＣＶを阻害する能力について合成または生物学的化合物を同定するための重大な要望が存在する。
ＨＩＶの治療において有用ないくつかのヌクレオシド誘導体、例えば、ＡＺＴ、３ＴＣおよびアバカビル（abacavir）は、細胞内部にリン酸誘導体を形成する場合、代謝されることが知られている。特に、３リン酸誘導体は、いくつかのウイルス標的に対して活性であることが明らかにされた。しかしながら、３リン酸化合物は、細胞膜を横切って容易に輸送されないので、それらはしばしば、患者への直接的投与に適さない。
【０００８】
この度、ある特定のヌクレオシド化合物の誘導体が、そのＨＣＶポリメラーゼ阻害能または細胞へ侵入し、そこでＨＣＶポリメラーゼを阻害する化合物に変換する能力のため、ウイルス感染、例えば、Ｃ型肝炎ウイルスの治療または予防の可能性を有することが見出された。
【発明の詳細な記載】
【０００９】
本発明の１の態様によると、発明者らは、式（Ｉ）：
【化１】
2004534830.tif 000003
【００１０】
［式中、ＸはＨ、Ｆ、Ｎ３、ＮＨ２、−ＣＮまたは−ＯＭｅを示し；
Ｘ１はＯまたはＮＲ７を示し；
Ｘ２はＯ、ＮＨ、ＮＲ６またはＳを示すか、またはＸ３がＯの場合、Ｘ２は存在せず；
Ｘ３は存在しないか、またはＸ１がＯの場合、Ｘ３はＯを示し；
Ｒ１は水素；置換されていてもよいＣ１−６アルキル；置換されていてもよいアリール；または置換されていてもよいヘテロアリールを示し；
Ｒ２はヒドロキシ、ＯＣＯＲ６、またはＯＣＯ２Ｒ６を示し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、または置換されていてもよいヘテロシクリルを示し；
Ｒ４およびＲ５は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ６は置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し；
Ｒ７はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し、ここに、Ｒ４およびＲ７が各々、アルキルである場合、それらは結合して５−または６−員環を形成していてもよく；
Ｂは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）：
【００１１】
【化２】
2004534830.tif 000004
【００１２】
（式中、ＺはＯまたはＳを示し；
Ｒ８はＨ、ハロ、Ｃ２−４アルキニル、トリフルオロメチル、Ｃ１−３アルコキシ、ヒドロキシ、メチルチオ、アミノ、ニトロまたはＣ１−３アルキルを示し、ここに、Ｃ１−３アルキルは、ヒドロキシ、ハロ、アミノまたはＯＲ１０によって置換されていてもよく、ここに、Ｒ１０は、それ自体置換されていてもよいアリールによって置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；
Ｒ９はＨ、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ６、ＳＲ６またはＮＲ３Ｒ３を示す）
を示す］
で示される化合物ならびにその塩および溶媒和物（以後、「本発明の化合物」という）を提供する。
【００１３】
本発明のさらなる態様によると、発明者らは、式（Ｉａ）：
【化３】
2004534830.tif 000005
【００１４】
［式中、ＸはＨ、Ｆ、Ｎ３、ＮＨ２、−ＣＮまたは−ＯＭｅを示し；
Ｘ１はＯまたはＮＲ７を示し；
Ｘ２はＯ、ＮＨ、ＮＲ６またはＳを示すか、またはＸ３がＯである場合、Ｘ２は存在せず；
Ｘ３は存在しないか、またはＸ１がＯである場合、Ｘ３はＯを示し；
Ｒ１は水素；置換されていてもよいアリール；または置換されていてもよいヘテロアリールを示し；
Ｒ２はヒドロキシ、ＯＣＯＲ６またはＯＣＯ２Ｒ６を示し；
Ｒ３はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリールまたは置換されていてもよいヘテロシクリルを示し；
Ｒ４およびＲ５は独立して、水素、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいアラルキルから選択され；
Ｒ６は置換されていてもよいＣ１−６アルキルまたは置換されていてもよいアリールを示し；
Ｒ７はＨ、置換されていてもよいＣ１−６アルキル、または置換されていてもよいアリールを示し、ここに、Ｒ４およびＲ７が各々、アルキルである場合、それらは結合して５−または６−員環を形成していてもよく；
Ｂは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）：
【００１５】
【化４】
2004534830.tif 000006
【００１６】
（式中、ＺはＯまたはＳを示し；
Ｒ８はハロ、Ｃ２−４アルキニル、トリフルオロメチル、Ｃ１−３アルコキシ、ヒドロキシ、メチルチオ、アミノ、ニトロ、またはＣ１−３アルキルを示し、ここに、Ｃ１−３アルキルはヒドロキシ、ハロ、アミノまたはＯＲ１０によって置換されていてもよく、ここに、Ｒ１０は、それ自体置換されていてもよいアリールによって置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；
Ｒ９はＨ、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ６、ＳＲ６またはＮＲ３Ｒ３を示す）
を示す］
によって示される化合物ならびにその塩および溶媒和物を提供する。
【００１７】
式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、１以上の不斉炭素原子を有し、本発明は、式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物のジアシテレオマーの全ておよびその混合物を包含する。
【００１８】
本発明は、また、式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物の生理学上許容される塩を包含する。式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物の適当な生理学上許容される塩は、酸性塩、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびテトラアルキルアンモニウムなど、または適当な酸、例えば、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸およびコハク酸などの有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸などの有機スルホン酸、および塩酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸などの無機酸とのモノ−もしくはジ−塩基性塩などを包含する。
【００１９】
本発明は、また、式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物の溶媒和物、例えば、水和物に関する。
【００２０】
本発明は、式（Ｉ）および（Ｉａ）によって定義されるようなプロタイド（protide）化合物（ヌクレオシド１リン酸のプロドラッグ）に関する。本明細書で使用される場合、「プロタイド」なる語は、安定化されたリン酸誘導体、例えば、Koszalka, G.W., Daluge, S.M., Boyd, F.L., Annual Rep Med Chem 1998, 33, 163-171およびその引用文献（その内容は出典明示により本明細書の一部とされる）において記載されるような誘導体をいう。プロタイドの例は、限定するものではないが、式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物のホスホルアミデートを包含する。
本明細書で使用される場合、「ホスホルアミデート」なる語は、式（Ｉ）および（Ｉａ）の１リン酸誘導体（ヌクレオチド）のリン原子に、窒素原子を介して結合した基をいう。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「アルキル」なる語は、分枝または非分枝の環状または非環状の飽和または不飽和（例えば、アルケニルまたはアルキニル）ヒドロカルビル基を包含する。「Ｍｅ」なる語はメチルを意味する。本明細書で使用される場合、「アルキニル」なる語は、分枝ならびに直鎖アルキニル、例えば、エチニルおよびプロピニルを包含する。
本明細書で使用される場合、「アリール」なる語は、置換されていてもよい５〜１４員、好ましくは６〜１０員の単環式または二環式芳香環系、例えば、フェニルを示す。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」なる語は、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む置換されていてもよい５〜１４員、好ましくは６〜１０員の単環式または二環式芳香環系を示す。
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリル」なる語は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ３、ＳＯ２Ｒ３、アリールまたはヘテロアリールによって置換されていてもよいＮ；Ｏ；および１または２個の酸素原子で置換されていてもよいＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する置換されていてもよい５または６員の飽和環状炭化水素基を示す。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「ハロ」なる語は、クロロ、ブロモ、フルオロまたはヨードを示す。
別記しないかぎり、本明細書で使用される場合、「置換されていてもよい」なる語は、アリール（例えば、フェニル）、Ｃ１−６アルキル（例えば、メチル、エチル）、ニトロ、オキソ、ＯＲ、ＣＯ２Ｒ、ＳＯ２Ｒ、ＮＲＲ、ＣＯＮＲＲ、ＳＯＮＲＲ、ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）２、およびハロを包含する。ＲはＨ、Ｃ１−６アルキルまたはアリールを示す。
【００２４】
好ましくは、ＸはＨを示し；
好ましくは、Ｘ１はＮＲ７を示し、ここに、Ｒ７はＨを示し；
好ましくは、Ｘ２はＯを示し；
好ましくは、Ｘ３は存在せず；
好ましくは、Ｒ１は置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリールを示し；
より好ましくは、Ｒ１は置換されていてもよいアリールを示し；最も好ましくは、Ｒ１はフェニルまたは４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルを示し；
好ましくは、Ｒ２はヒドロキシを示し；
好ましくは、Ｒ３は置換されていてもよいＣ１−６アルキルを示し；より好ましくは、Ｒ３はメチルまたはベンジルを示し；
【００２５】
好ましくは、Ｒ４はＨを示し；
好ましくは、Ｒ５はＣ１−６アルキルを示し；より好ましくは、Ｒ５はメチルを示し；
好ましくは、Ｂは（ｂ）または（ｃ）を示し；
好ましくは、Ｒ８はＨを示し；
好ましくは、Ｒ９はＨ、ヒドロキシまたはＮＲ３Ｒ３を示し、ここに、Ｒ３はＨを示し；
好ましくは、ＺはＯを示し；
好ましくは、糖の立体化学はベータ−Ｄ−リボフラノースである。
【００２６】
式（Ｉ）の好ましい化合物は：
３’−デオキシグアノシン５’−［４−（１，１−ジメチルエチル）フェニルＮ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−（フェニルメトキシ）エチル］ホスホルアミデート］；
３’−デオキシシチジン５’−［フェニルＮ−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］ホスホルアミデート］；および
３’−デオキシシチジン５’−［フェニルＮ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−（フェニルメトキシ）エチル］ホスホルアミデート］；
ならびにその塩および溶媒和物を包含する。
【００２７】
製法
【化５】
2004534830.tif 000007
【００２８】
式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、ピリジン、Ｎ−メチルイミダゾール、または塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムなどの適当な塩基を含有するテトラヒドロフラン、ＤＭＦまたはアセトニトリルなどの適当な溶媒中、試薬Ｒ１Ｏ［Ｘ１Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ３Ｃ（Ｏ）Ｘ２（Ｒ３）］Ｐ（Ｏ）Ｃｌを用いて、式（ＩＩ）の化合物から調製されうる。Ｒ２がヒドロキシを示し、Ｂが（ｂ）を示す場合、好ましい溶媒は、テトラヒドロフランおよびピリジンの組合せであり、好ましい塩基は、過剰に（２当量以上）用いられる塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムである。
【００２９】
式Ｒ１Ｏ［Ｘ１Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ３Ｃ（Ｏ）Ｘ２（Ｒ３）］Ｐ（Ｏ）Ｃｌの化合物は、式Ｐ（Ｏ）Ｃｌ３の化合物から、当該分野で知られた標準的な方法（例えば、Koszalka, G.W., Daluge, S.M., Boyd, F.L., Annual Rep Med Chem 1998, 33, 163-171およびその引用文献）によって調製されうる。
式（ＩＩ）の化合物は、当該分野で知られた方法、例えば、Collect. Czech. Chem. Commun. (1973) 38, 1173-78; Tetrahedron (1998) 54, 13529-46; J. Med. Chem. (1991) 34, 2195; J. Chem. Soc. Chem Commun. (1989) 14, 955-57; G.Gosselin ら, Nucleosides and Nucleotides (1995) 14, 611-617; A. Kumar ら, Nucleosides and Nucleotides (1994) 13, 1049-1057; および T-S Lin ら, J. Med. Chem. (1991) 34, 693-701に類似の方法によって調製されうる。
【００３０】
Ｒ２がヒドロキシである式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、また、Ｒ２ヒドロキシ基を適当な保護剤、例えば、エーテル（ベンジルエーテルまたはシリルエーテルを用いる）またはエステルとして保護し、次いで、ピリジン、Ｎ−メチルイミダゾールまたは塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムのような適当な塩基を含有するテトラヒドロフラン、ＤＭＦまたはアセトニトリルのような適当な溶媒中、試薬Ｒ１Ｏ［Ｘ１Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ３Ｃ（Ｏ）Ｘ２（Ｒ３）］Ｐ（Ｏ）Ｃｌと反応させ、最後に、ヒドロキシ基を脱保護することによって、式（ＩＩ）の化合物から調製されうる。適当な保護基は、限定するものではないが、TW Greene and PGM Wuts Protective Groups in Organic Synthesis', 第３版 (1999), J WileyおよびSonsに記載のものが見出されうる。
【００３１】
アッセイ
本発明の化合物がＮＳ５Ｂ野生型ＨＣＶポリメラーゼ活性を阻害する可能性は、例えば、下記の細胞ベースのアッセイを用いて証明されうる。
【００３２】
レプリコンＥＬＩＳＡ
細胞
Ｈｕｈ−７細胞（(Lohmann, V., Korner, F., Koch, J-O., Herian, U., Theilmann, L. & Bartenschlager, R., 1999, Science, 285, pp110-113）の５−１５サブラインをこれらのアッセイに用いた。これらは、選択マーカー遺伝子を付加した大部分のＨＣＶ １ｂゲノムを含むが、全構造性蛋白質および非構造性蛋白質（ＮＳ）２をコードしている遺伝子を欠くＨＣＶレプリコンで安定にトランスフェクトされたヒト肝細胞性癌細胞である。該レプリコンＲＮＡは、自己複製性であり、十分に機能的なウイルス蛋白質がそれから翻訳される。薬物の存在下における発現蛋白質の定量可能な特異的な減少は、レプリコン阻害の測定値として使用できる。
【００３３】
化合物
化合物試料のストック溶液は、ＤＭＳＯ中４０ｍＭに処方された。
方法
培養工程：
１００μｌ容量のアッセイ培地（４５００ｍｇ／Ｌグルコースを含有し、１０％胎仔ウシ血清、１００ｉｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭ Ｌ−グルタミンおよび１％非必須アミノ酸溶液を補足したダルベッコ最少必須培地（ＤＭＥＭ））を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに加えた。化合物の４０ｍＭストック溶液をさらに、アッセイ培地中で必要な最大最終濃度の二倍に希釈し、１００μｌアリコートをプレートの最上列の２つのウェル中に移した。次いで、連続２倍希釈をプレートの下方に向かって行い、底部の２列を化合物不含のまま残した。アッセイ培地中における２ｘ１０５細胞／ｍｌのＨｕｈ−７ ５−１５細胞懸濁液の１００μｌ容量を全ウェルに加えた。プレートを５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で７２時間インキュベートした。
【００３４】
ＥＬＩＳＡ工程：
生育培地をプレートから除去し、細胞単層をリン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）で静かに一回洗浄した後、アセトン：メタノールの１：１混合物で５分間固定した。プレートをＰＢＳで再び洗浄し、吸い取って乾燥させ、１００μｌのＥＬＩＳＡ希釈液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０＋２％スキムミルク粉末）を各ウェルに加えた。プレートを３７℃で３０分間インキュベートし、希釈液を除去した。次いで、化合物不含ウェルの１列を除き、各ウェルに、１μｌ／ｍｌに希釈し、非構造性蛋白質、より詳細にはＮＳ４ａに対して生じた５０μｌのネズミモノクローナル抗体を加えた。対照列に５０μｌ／ウェルの希釈液のみを加えた。プレートを２時間インキュベートし、一次抗体を除去し、細胞シートをＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で入念に洗浄した。西洋ワサビパーオキシダーゼに結合したウサギ抗−マウスポリクローナル抗体を１／１０００倍希釈し、５０μｌを全ウェルに加えた。さらに１時間インキュベーション後、二次抗体を除き、プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで入念に洗浄した。プレートを吸い取って乾燥させ、尿素バッファー中におけるオルトフェニレンジアミン／過酸化物基質５０μｌを全ウェルに加え、室温で発色させた。１ウェルあたり２５μｌの２Ｍ硫酸の添加によって反応を止め、分光測光法によって４９０ｎｍにてプレートを読み取った。
ＥＬＩＳＡ溶液をプレートから除去し、細胞シートを水で洗浄し、吸い取って乾燥させ、５％カルボール・フクシンで染色した。３０分後、染料を除去し、プレートを水で洗浄し、風乾させた。
【００３５】
データ分析
一次および二次抗体の両方を加えた全化合物不含ウェル由来の吸光度を平均化して、正の対照値を得た。一次抗体を加えなかった化合物不含ウェル由来の平均吸光度を用いて、負の（バックグラウンド）対照値を得た。各化合物濃度にて、２連のウェル由来の記録を平均化し、全値から平均バックグラウンドを減じた後、正の対照シグナルのパーセンテージとして表示した。Ｇｒａｆｉｔソフトウェアを用いて、化合物濃度に対するパーセンテージ阻害の曲線をプロットし、該化合物について５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。
【００３６】
アッセイにおける細胞毒性は、染色された細胞シートの顕微鏡検査によって評価され、いずれかの細胞性影響が見える最低化合物濃度として表示した。
したがって、本発明の化合物は、ＨＣＶの治療および予防において、潜在的な治療上の利益がある。
かくして、本発明のさらなる態様として、ヒト用または獣医学用医薬において、特に、ウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療または予防において有用な式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。本発明の化合物は、また、ＧＢＶ−Ａ、ＧＢＶ−Ｂ、ＧＢＶ−ＣおよびＨＣＶのようなヘパシウイルス（hepacivirus）、ＢＶＤＶのようなぺスチウイルス、および西ナイル熱ウイルスおよび黄熱ウイルスのようなフラビウイルスによるウイルス感染の治療および／または予防においても有用である。
【００３７】
治療に対する本明細書における言及が確立された病状の予防ならびに治療にまで及ぶことは明らかであろう。さらに、ＨＣＶ感染の治療または予防に対する本明細書における言及がＨＣＶ−関連疾患、例えば、肝繊維症、硬変および肝細胞性癌腫の治療または予防を包含することは明らかであろう。
【００３８】
本発明の別の態様によると、ウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療および／または予防のための医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物の使用が提供される。
本発明の別の態様によると、ウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療および／または予防において有用な式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。
さらなるまたは別の態様において、ウイルス感染、特にＨＣＶ感染を有するヒトまたは動物対象の治療法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物を該ヒトまたは動物対象に投与することを特徴とする方法が提供される。
【００３９】
本発明の化合物は、いずれかの常法における投与のために処方されてもよく、したがって、本発明はまた、その範囲内に、１以上の生理学上許容される希釈剤または担体と混合した式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物を含んでなる、治療において有用な医薬組成物を包含する。
本発明によると、成分を混合することを特徴とする、かかる医薬組成物の製法も提供される。
本発明によると、化合物は、例えば、経口、バッカル、非経口、局所または直腸投与用に処方されてもよい。
【００４０】
経口投与用の錠剤およびカプセルは、結合剤、例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、でんぷんの粘液またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば、ラクトース、微晶質セルロース、砂糖、トウモロコシでんぷん、リン酸カルシウムまたはソルビトール；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えば、じゃがいもでんぷん、クロスカメロースナトリウムまたはでんぷんグリコール酸ナトリウム；または湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムのような通常の賦形剤を含有していてもよい。錠剤は、当該分野でよく知られた方法にしたがって被覆されていてもよい。経口液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、または使用前に水または他の適当なビヒクルで復元するための乾燥製品として提供されてもよい。かかる液体製剤は、懸濁化剤、例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／砂糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素添加食用脂；乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム；非水性ビヒクル（食用油を包含しうる）、例えば、アーモンド油、分別ココナツ油、油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；または保存料、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルあるいはソルビン酸のような通常の添加剤を含有していてもよい。製剤は、また、バッファー塩、フレーバー、着色料および／または甘味料（例えば、マンニトール）を適宜、含有していてもよい。
【００４１】
バッカル投与の場合、組成物は、常法において処方された錠剤またはロゼンジの形態を取ってもよい。
化合物は、また、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドのような通常の座剤基剤を含有する、座剤として処方されてもよい。
【００４２】
本発明による化合物は、また、ボーラス注射または連続的注入による非経口投与のために処方されてもよく、単位投与形態において、例えば、アンプル、バイアル、少量の注入または予め充填したシリンジ、または保存料を添加した複数回投与用容器として提供されてもよい。組成物は、水性または非水性ビヒクル中における溶液、懸濁液、またはエマルジョンのような形態を取ってもよく、抗酸化剤、バッファー、抗微生物剤および／または毒性調整剤のような製剤用物質を含有していてもよい。別法では、活性成分は、使用前に適当なビヒクル、例えば、滅菌性の発熱源不含の水で復元するための粉末形態であってもよい。該乾燥固体の提供は、滅菌粉末を無菌状態で個々の滅菌容器中に充填することによって、または滅菌溶液を無菌状態で各容器中に充填し、凍結乾燥することによって行われてもよい。
【００４３】
本明細書で使用される場合、局所投与により、発明者らは、吹き込みおよび吸入による投与を包含する。局所投与用の種々の型の製剤の例は、軟膏、クリーム、ローション、粉剤、膣座剤、スプレー、エーロゾル、吸入器または吹き入れ器において有用なカプセルまたはカートリッジあるいは滴剤（例えば、目または鼻滴剤）を包含する。
【００４４】
軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性基剤を用いて、適当な濃化剤および／またはゲル化剤および／または溶媒を添加して処方してもよい。かかる基剤は、例えば、水および／または油、例えば、流動パラフィンまたは植物性油、例えば、落花生油またはひまし油あるいはポリエチレングリコールのような溶媒を包含しうる。使用されうる濃化剤は、ソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、微晶質ワックスおよび蜜蝋を包含する。
【００４５】
ローションは、水性または油性基剤で処方され、また、一般に、１以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤または濃化剤を含有する。
外用塗布用粉剤は、いずれかの適当な粉末基剤、例えば、タルク、ラクトースまたはでんぷんで処方されうる。滴剤は、１以上の分散剤、可溶化剤または懸濁化剤をも含む水性または非水性基剤で処方されうる。
【００４６】
スプレー組成物は、例えば、水性溶液または懸濁液として、または圧縮パック由来のエーロゾルとして、適当なプロペラント、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガスを用いて処方されうる。
吸入器または吹き入れ器における使用のための、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、本発明の化合物およびラクトースまたはでんぷんなどの適当な粉末基剤の粉末混合物を含有して処方されうる。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、また、他の治療剤、例えば、免疫療法（例えば、インターフェロン）、治療用ワクチン、抗繊維症剤、コルチコステロイドまたはＮＳＡＩＤなどの抗自己免疫剤、ベータ−２アドレナリン作動剤およびキサンチンなどの気管支拡張剤（例えば、テオフィリン）、粘液溶解剤、抗ムスカリン剤、抗ロイコトリエン、細胞接着の阻害剤（例えば、ＩＣＡＭアンタゴニスト）、抗酸化剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン）、サイトカインアゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、肺界面活性剤および／または抗微生物および抗ウイルス剤（例えば、リバビリンおよびアマンチジン（amantidine））と組み合わせて使用してもよい。本発明の組成物は、また、遺伝子置換療法と組み合わせて用いてもよい。
【００４８】
かくして、本発明は、さらなる態様において、式（Ｉ）の化合物またはその生理学上許容される塩もしくは溶媒和物を別の治療上活性な薬剤と一緒に含む組合せを提供する。
上記の組合せは、好都合には、医薬処方の形態において使用するために提供され、したがって、その医薬上許容される担体と共に上記の組合せを含んでなる医薬処方が、本発明のさらなる態様を示す。
かかる組合せの個々の成分は、分離した、または組み合わせた医薬処方において、連続的にまたは同時に投与されてもよい。既知の治療剤の適当な投与量は、当業者によって容易に認められるであろう。
【００４９】
本発明の化合物は、好都合には、例えば、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、適当には０．０５〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の量で、１日に１回以上経口投与されうる。正確な投与量は、もちろん、患者の年齢および病状、特定の投与経路に依存し、完全に、投与する医師の裁量に任されている。
本発明の化合物は、有用な作用持続期間を有する。
【００５０】
下記の非制限的な実施例は本発明を説明する。
【実施例】
【００５１】
中間体１
４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルホスホジクロリデート
４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（１５．０ｇ，０．１モル）およびトリエチルアミン（１３．９５ｍＬ）のエーテル（２００ｍＬ）中溶液を０℃で攪拌しながら、２時間にわたって、塩化ホスホリル（１１．１ｍＬ）のエーテル（１００ｍＬ）中溶液に滴下した。冷却浴を取り外し、混合物をさらに１８時間攪拌した。混合物をろ過し、揮発性物質をろ液から除去して、薄黄色油状物を得、それを蒸留して標題化合物を無色油状物として得た（１８．７２ｇ）。
ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ７．４３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２５Ｈｚ，２Ｈ）；１．３２（ｓ，９Ｈ）
【００５２】
中間体２
Ｌ−アラニン，Ｎ−（クロロフェノキシホスフィニル）メチルエステル
Ｌ−アラニンメチルエステル塩酸塩（１．００ｇ，７．２ミリモル）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中懸濁液をフェニルホスホロジクロリデート（１．０７ｇ，５．１ミリモル）で処理した。混合物を窒素下で攪拌し、−７８℃に冷却した。ジイソプロピルエチルアミン（２．５ｍＬ）を３０分にわたって分けて加えた。冷却浴を取り外し、混合物を室温で一晩攪拌した。揮発性物質を真空下で除去した。残渣をエーテル（２５ｍＬ）で抽出し、抽出物を濃縮して標題化合物を無色油状物として得（１．２５ｇ）、さらに精製することなく用いた。
ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ７．１−７．４（ｍ，５Ｈ）；４．０−４．３（ｍ，１Ｈ）；３．７１＋３．７２（２ｘｓ，計３Ｈ）；１．５３＋１．３９（２ｘｍ，計３Ｈ）
【００５３】
中間体３
Ｌ−アラニン，Ｎ−（クロロフェノキシホスフィニル）フェニルメチルエステル
中間体２に関して記載した手法にしたがって、Ｌ−アラニンベンジルエステル塩酸塩およびフェニルホスホロジクロリデートを用いて、標題化合物を油状物として調製した。
ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ７．１−７．４（ｍ，１０Ｈ）；５．２０＋５．２２（２ｘｓ，Ｈ）；４．９−５．１（ｍ，１Ｈ）；１．５１＋１．５２（２ｘｄ，計３Ｈ）
【００５４】
中間体４
Ｌ−アラニン，Ｎ−（クロロ−４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシホスフィニル）フェニルメチルエステル
中間体２に関して記載した手法にしたがって、Ｌ−アラニンベンジルエステル塩酸塩および中間体１を用いて、標題化合物を無色油状物として調製した。
ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ７．３２−７．４０（ｍ，７Ｈ）；７．１５（ｍ，２Ｈ）；５．２１（ｍ，２Ｈ）；４．１８−４．３６（ｍ，２Ｈ）；１．５２（２，３Ｈ）；１．３０（ｓ，９Ｈ）
【００５５】
実施例１
３’−デオキシグアノシン−５’−［４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−（フェニルメトキシ）エチル］ホスホルアミデート］
【化６】
2004534830.tif 000008
３’−デオキシグアノシン（２７ｍｇ）のピリジン（１ｍＬ）中懸濁液を窒素下で攪拌し、テトラヒドロフラン（２２０μＬ）中における１．０Ｍ  塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムで処理した。得られた溶液を２０℃で１時間攪拌し、次いで、中間体４（４５ｍｇ）のテトラヒドロフラン（０．８ｍＬ）中溶液で処理した。混合物をさらに１８時間攪拌し、次いで、蒸発乾固させた。残渣を水（１０ｍＬ）と酢酸エチル（２５ｍＬ）の間に分配した。有機相を収集し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。溶媒の除去により、無色のゴム状物質を得、それを８：１（ｖ：ｖ）ジクロロメタン：メタノールを用いるシリカゲル分取プレート上で精製して、標題化合物を固体として得た。
質量分析（エレクトロスプレー）ｍ／ｚ（Ｃ３０Ｈ３７Ｎ６Ｏ８Ｐ＋Ｈ）＋の計算値：６４１
実測値：（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４１
【００５６】
実施例２
３’−デオキシシチジン−５’−［フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］ホスホルアミデート］
【化７】
2004534830.tif 000009
３’−デオキシシチジン（２５ｍｇ）のピリジン（１ｍＬ）中懸濁液を窒素下、−１０℃にて攪拌し、テトラヒドロフラン（２６０μＬ）中における１．０Ｍ  塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムで処理した。得られた混合物をさらに２０分間攪拌し、次いで、中間体２（３７ｍｇ）のピリジン（０．６ｍＬ）中溶液で処理した。混合物を０℃で４時間攪拌し、次いで、０℃で１８時間保存した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を８：１（ｖ：ｖ）ジクロロメタン：メタノールを用いるシリカゲル分取プレート上で精製して、標題化合物を固体として得た。
質量分析（エレクトロスプレー）ｍ／ｚ（Ｃ１９Ｈ２５Ｎ４Ｏ８Ｐ＋Ｈ）＋の計算値：４６９
実測値：（Ｍ＋Ｈ）＋＝４６９
【００５７】
実施例３
３’−デオキシシチジン−５’−［フェニル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−（フェニルメトキシ）エチル］ホスホルアミデート］
【化８】
2004534830.tif 000010
３’−デオキシシチジン（２５ｍｇ，０．１１ミリモル）の乾燥ピリジン（１ｍｌ）中懸濁液に、塩化ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウム（ＴＨＦ中における１．０Ｍ溶液，３５２μｌ，０．３５ミリモル）を加えてオレンジ色の懸濁液を得、それを窒素下、周囲温度で１時間攪拌した。乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中における中間体３（０．１４ミリモル，４７．８ｍｇ）を加え、反応混合物をさらに３．５時間攪拌した。次いで、反応をメタノール（１ｍｌ）でクエンチし、揮発性物質を真空下で蒸発させた。残渣を酢酸エチルと水の間に分配し、有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、蒸発させて白色固体を得た（２９．５ｍｇ）。粗生成物を９：１（ｖ：ｖ）ジクロロメタン：メタノールを用いるシリカゲル分取プレート上で精製して、標題化合物を白色固体として得た。
質量分析（エレクトロスプレー）ｍ／ｚ（Ｃ２５Ｈ２９Ｎ４Ｏ８Ｐ＋Ｈ）＋の計算値：５４５
実測値：（Ｍ＋Ｈ）＋＝５４５
【００５８】
生物学的データ
実施例１−３の化合物を先に記載したイン・ビトロ試験において試験した。全化合物が、ＨＣＶレプリコンアッセイにおいて＜２００μＭのＩＣ５０値を有していた。
【国際公開パンフレット】
2004534830.tif 000016
2004534830.tif 000017
2004534830.tif 000018
2004534830.tif 000019
2004534830.tif 000020
2004534830.tif 000021
2004534830.tif 000022
2004534830.tif 000023
2004534830.tif 000024
2004534830.tif 000025
2004534830.tif 000026
2004534830.tif 000027
2004534830.tif 000028
2004534830.tif 000029
2004534830.tif 000030
2004534830.tif 000031
2004534830.tif 000032
2004534830.tif 000033
2004534830.tif 000034
2004534830.tif 000035
2004534830.tif 000036
【国際調査報告】
2004534830.tif 000037
2004534830.tif 000038
2004534830.tif 000039
2004534830.tif 000040