(57)【要約】ヒト、愛顔動物、及び家畜動物に対し毒性を及ぼさない殺鼠剤は、活性的な原料と囓歯類誘引物質として水保持性物質で構成される。好ましくは、この水保持性物質はセルロース性物質であることである。実施例において、水保持性物質は、α―セルロースから構成される。一つの好適実施例において、このセルロース性物質は、ＤＫ４４６、あるいは、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストなるトウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来する精製セルロースで構成される。考えられることは、このような殺鼠剤におけるユニークな選択的毒性を有する特性は、胃壁における水移行を阻害することにより惹起され、特に、盲腸において起こる（セルロースは盲腸にて消化される）。ヒトでは盲腸は痕跡臓器であり、このような物質の影響を受けない。本技術領域における殺鼠活性用の水保持性の応保物質に関する実験室でのスクリーニング方法が開示され、その検討には、胃壁での検討（埋伏や膨満）、及び盲腸での検討（埋伏）が含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
本技術分野における殺鼠活性用の水保持性候補物質に関するスクリーニング方法であって、該方法は：
候補物質として水保持性物質を供し；
実験室条件下にて前記候補物質を、囓歯類に自由に与え；
試験の初期期間中、前記囓歯類における体重減少を測定し；及び
初期体重に対し、平均値にして少なくとも１５％の体重減少を導く候補物質群を選別する；
方法で構成されるところの、スクリーニング方法。
【請求項２】
初期体重に対し、平均値にして少なくとも２０％の体重減少を導く前記候補物質群が選ばれることを特徴とする請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
初期体重に対し、平均値にして少なくとも２５％の体重減少を導く前記候補物質群が選ばれることを特徴とする請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
初期体重に対し、平均値にして少なくとも３０％の体重減少を導く前記候補物質群が選ばれることを特徴とする請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項５】
前記囓歯類が実験用ラット又は実験用マウスであることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
前記囓歯類がＲａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓであることを特徴とする請求項５に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
殺鼠活性を有する水保持性物質のクリーニング方法であって、水保持性物質を囓歯類に与え、前記水保持性物質が、前記囓歯類の胃壁を介した水移行を崩壊させるか否か、又は前記崩壊の程度を試験することを特徴とするところの、スクリーニング方法。
【請求項８】
前記水保持性物質が、前記囓歯類の前記胃壁を介したイオン輸送を崩壊させるか否か、又は前記崩壊の程度を試験することを特徴とする請求項７に記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
前記囓歯類の胸腺の大きさ又は状態に対する、前記水保持性物質の前記囓歯類による摂食の影響を試験することを特徴とする請求項７乃至８のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１０】
前記囓歯類が、胃壁の膨満、盲腸の収縮若しくは埋伏、及び小腸の収縮若しくは埋伏からなるグループより一つ以上選ばれる検討を実施されることを特徴とする請求項１乃至９のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１１】
前記水保持性物質が、自然界由来であることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１２】
前記水保持性物質が、セルロース性物質であることを特徴とする請求項１乃至１１のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１３】
前記水保持性物質が、トウモロコシ穂軸に由来することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１４】
前記囓歯類が、死後検討されることを特徴とする請求項１乃至１３のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１５】
前記水保持性物質が、本質的にヒトに毒性を及ぼさないことを特徴とする請求項１乃至１４のいずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項１６】
活性的原料として水保持性物質及び囓歯類誘引物質から構成されることを特徴とする殺鼠剤。
【請求項１７】
前記水保持性物質が、セルロース物質であることを特徴とする請求項１６に記載の殺鼠剤。
【請求項１８】
前記水保持性物質が、α―セルロースから構成されることを特徴とする請求項１７に記載の殺鼠剤。
【請求項１９】
前記セルロース物質が、ＤＫ４４６、あるいは、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストなるトウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来する精製セルロースで構成されることを特徴とする請求項１７乃至１８のいずれかに記載の殺鼠剤。
【請求項２０】
活性的原料としてセルロース性水保持性物質、及び囓歯類誘引物質から構成され、前記セルロース性水保持性物質が本質的にトウモロコシの穂軸物質を含まないことを特徴とする殺鼠剤。
【請求項２１】
活性的原料としてセルロース性水保持性物質、及び殺鼠剤誘引物質から構成され、前記セルロース性水保持性物質が、本質的に、ＤＫ４４６、あるいは、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストなるトウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来する物質を含まないことを特徴とする殺鼠剤。
【請求項２２】
さらにバインダーから構成されることを特徴とする請求項１５乃至２１のいずれかに記載の殺鼠剤。
【請求項２３】
ペレット型であることを特徴とする請求項１５乃至２２のいずれかに記載の殺鼠剤。
【請求項２４】
前記誘引物質が、甘味物質から構成されることを特徴とする請求項１５乃至２３のいずれかに記載の殺鼠剤。
【請求項２５】
前記誘引物質が、廃糖蜜で構成されることを特徴とする請求項２４に記載の殺鼠剤。
【請求項２６】
前記囓歯類の前記胃壁を介したイオン輸送を崩壊する目的に供する請求項１５乃至２５のいずれかに記載の殺鼠剤。
【請求項２７】
請求項１５乃至２６のいずれかに記載の殺鼠剤用の防湿容器。
【請求項２８】
水保持性物質と囓歯類誘引物質とを組み合わせるステップから構成される殺鼠剤を製造する方法であって、該水保持性物質が、殺鼠剤の活性的な原料であることを特徴とするところの、製造方法。
【請求項２９】
前記水保持性物質が、セルロース物質であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記水保持性物質が、α―セルロースであることを特徴とする請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記セルロース物質が、ＤＫ４４６、あるいは、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストなるトウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来する精製セルロースで構成されることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記水保持性物質が、少なくとも上昇された温度及び／又は圧力条件下にて乾燥されることを特徴とする請求項２７乃至３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
セルロース性水保持性物質と囓歯類誘引物質とを組み合わせるステップから構成される殺鼠剤の製造方法であって、前記セルロース性水保持性物質が、トウモロコシの穂軸物質を本質的に含まず、かつ、該殺鼠剤の活性的原料であることを特徴とするところの、製造方法。
【請求項３４】
前記セルロース性水保持性物質が、本質的に、ＤＫ４４６、あるいは、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストなるトウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来する物質を含まないことを特徴とする請求項３２に記載の製造方法。
【請求項３５】
前記殺鼠剤がペレット化されることを特徴とする請求項２７乃至３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
殺鼠活性に関する水保持性候補物質のスクリーニング方法であって、後述する例１又は例２に本質的に述べられていることを特徴とするところの、方法。
【請求項３７】
請求項１６に記載の殺鼠剤を、囓歯類の蔓延地域に配することで構成される囓歯類の蔓延を緩和する方法であって、前記殺鼠剤が、ヒトに毒性を及ぼさず、前記囓歯類が、前記殺鼠剤を摂食することにより、前記囓歯類の消化を崩壊することを特徴とするところの、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、殺鼠剤とその殺鼠活性に関するスクリーニング方法に関する。
【０００２】
当方の英国特許第２，３１１，４６４Ｂ号では、新しいクラスの殺鼠剤に関し開示しており、これは、とうもろこしのハイブリッド体（例えば、とうもろこしの穂軸の核）に由来するセルロース物質をベースにした、名をＤｅｋａｌｂ ＤＫ ４４６ハイブリッドとそのアゴニストである。このセルロース物質は、殺鼠材料活性体で構成され、この開示された殺鼠剤は、ヒト、愛顔動物、及び家畜動物に毒性を及ぼさない。
【０００３】
上記特許において試験動物にいくつかの症状が見られ、脂肪及び脂肪組織の排泄がその特徴的で重要な症状であるにもかかわらず、上記殺鼠剤の特定の作用機序は、いまだ不明である。本発明者により見出され本技術領域において効果的であるＤｅｋａｌｂ ＤＫ４４６ハイブリッドを除くその他のハイブリッドでは、いまだヒトや家畜動物に対し毒性を及ぼさないものは存在しない。驚くべきことに、本技術領域において殺鼠剤として効果的であるいくつかのハイブリッドは、実験室条件でラットを殺す点において効果的でない。
【０００４】
本発明の目的は、殺鼠活性を有する候補物質のスクリーニング方法を供することである（特に炭水化物や特にとうもろこしハイブリッド）。
【０００５】
判明してきたことは、上記殺鼠剤は、胃の中で水を保持し、結果として、胃壁かを介した水の移行が崩壊し、囓歯類における通常の摂食活動が阻害されるということである。細胞内への及び細胞外への水移行に関する様々な方法の中で、イオンチャネルによる方法は、重要な過程の一つである。これらチャネルは、哺乳類において様々であり、例えば、マウスにおいては最も感受性が高く、ヒトで破細胞外での水環境に最も感受性が低く、ラットではその中間である、という種差が見られる。分かってきたことは、セルロース物質は、特に囓歯類におけるイオン輸送を改変する点で効果的である。従って、囓歯類は弱り、やがて死に至る。
【０００６】
さらに、ラットにおいて、セルロースの消化は、微生物の作用の結果として盲腸において主に行われるが、ヒトでは、盲腸は痕跡器官であり、セルロースを消化する活性は持ち合わせていない。考えられることは、水保持性セルロース物質は、ラットによって消化される際、その消化を盲腸で行うことを妥協する。このような物質は、ヒトや家畜動物にはなんの影響も及ぼさない。
【０００７】
予期せぬことに分かったことは、上記セルロース物質殺鼠剤を与えたラットの免疫系を担う胸腺は、その大きさが減少するということであり、その他の水保持性の炭水化物、特にセルロースは、同様の効果を有することが予想された。これら水保持効果は、胃壁におけるイオンチャネルを介したイオン輸送を崩壊させることが考えられる。
【０００８】
従って、本発明の一面は、活性的な原料及び囓歯類の誘引物質として、水保持性物質から構成される殺鼠剤を供することである。
【０００９】
好ましくは、この水保持性物質は、セルロース物質である。
【００１０】
具体例において、この水保持性物質は、α―セルロースから構成される。一つの好適実施例において、このセルロース物質は、ＤＫ４４６トウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来、又は、ＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストに関連したハイブリッドの穂軸の核に由来する精製されたセルロースで構成される。
【００１１】
本発明は、また、囓歯類誘引物質を有する水保持性物質の組み合わせステップから構成される水保持物質殺鼠剤を合成する方法を供し、この水保持性物質は、活性的な殺鼠剤原料である。
【００１２】
セルロースは、最も水保持性の高い炭水化物複合体であり、例えば澱粉よりも水保持性が高い。さらに、セルロースは特に、胃におけるその三次元構造を保持し、それにより、微生物の生存のための中心部を供する。専門用語において分かってきたことは、このような物質は、囓歯類によって摂食された際、免疫的なコンピテントセルの数を減少するということである。特に、水保持性物質の摂食によって、囓歯類の胸腺におけるＴリンパ球の精製を阻害する。
【００１３】
これら効果のいくつかは、本発明の一面に従って、殺鼠剤の候補物質に関するスクリーニング方法の基礎として使用されている。
【００１４】
上述のように、ラットにおいて、セルロースの消化は、微生物の作用の結果として、網腸において主に行われるが、ヒトでは、盲腸は痕跡器官であり、セルロースを消化する活性は持ち合わせていない。考えられることは、ラットによって摂食されると、水保持性物質は、盲腸においてその消化が行われ、これら免疫系を減弱させる、ということである。しかしながら、実験室条件下では、免疫系に起因するラットにおける減弱は、野生型よりもより生存する可能性がある。というのも、実験ケ−ジにおける食料と水は、即座に利用可能であり、捕食者は存在しないし、感染の可能性は低いと考えられるからである。
【００１５】
典型的に、我々が発見したことは、捕食者がおらず、制限されている実験室条件下では、ラットは、本技術分野において効果的であるセルロース物質を自由に摂食し、試験開始初期においてその体重は減少し、その後回服し、試験期間を生存する、ということである。
【００１６】
さらに、我々の検討が示したことは、水保持性候補物質（好ましくはセルロース物質、特にトウモロコシハイブリッド）は、本技術分野において効果的である可能性があるということである。このことは、実験室条件下において、囓歯類（好ましくは、実験用ラット又は実験用マウスで、野生型ラットやマウスは好ましくない）が候補物質（好ましくは、トウモロコシハイブリッドより得られるセルロース物質）を自由に摂食する場合であり、試験期間の初期（例えば最初の５日間）における体重に対して少なくとも平均値にして約１５％（好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも３０％）の体重減少を示すということである。
【００１７】
従って、その他の面において、本発明は、本技術分野における殺鼠活性を有する水保持性候補物質のスクリーニング方法を供することであり、本方法は、候補物質としての水保持性物質を供し、実験室条件下において自由にこの候補物質を囓歯類に摂食させ、試験の初期期間においてこの囓歯類における体重減少を測定し、及び初期体重に対し少なくとも平均値にして１５％（好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは、少なくとも３０％）の体重減少を与える候補物質を選別する方法で構成される。
【００１８】
関連する面において、本発明は、殺鼠活性に関する水保持性物質のスクリーニング方法を供し、水保持性物質は囓歯類に摂食され、囓歯類は、この水保持性物質がその胃壁を介した水移行を崩壊するか、あるいはその程度を試験される。
【００１９】
好ましくは、この囓歯類は、この水保持性物質がその胃壁を介したイオン輸送を崩壊するか、あるいはその程度を試験される。
【００２０】
好ましくは、胸腺における大きさ及び状態に対するこの水保持性物質の摂食の効果が試験される。
【００２１】
好ましくは、前記水保持性物質は自然型由来である。
【００２２】
好ましくは、前記水保持性物質はセルロース物質である。
【００２３】
好ましくは、前記水保持性物質はトウモロコシの穂軸由来である。
【００２４】
好ましくは、前記囓歯類は、死後であることである。
【００２５】
新規に発見された作用機序において、本発明は、トウモロコシの穂軸に由来する水保持性材料に限定されない。
【００２６】
従って、本発明におけるその他の面は、活性的な原料及び囓歯類の誘引物質としてのセルロース由来の水保持性物質から構成される殺鼠剤を供することであり、前記セルロース由来の水保持性物質は、本質的にトウモロコシの穂軸物質を含まないものである。
【００２７】
この面において、本発明は、活性的な原料及び囓歯類の誘引物質としてのセルロース由来の水保持性物質から構成される殺鼠剤を供し、セルロース由来の水保持性物質は、本質的にＤＫ４４６トウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来し、又はＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストの穂軸における核に由来する物質を含まない。
【００２８】
また一面において、本発明は、殺鼠剤の製造方法をも供し、本方法は、囓歯類誘引物質を含むセルロース由来の水保持性物質を組み合わせたステップから構成され、殺鼠剤としての活性原料であるところの方法である。好ましくは、このセルロース由来の水保持性物質は、本質的に、ＤＫ４４６トウモロコシハイブリッドの穂軸の核に由来し、又はＤＫ４４６ハイブリッドのアゴニストの穂軸における核に由来する物質を含まない。
【００２９】
好ましくは、少なくともこの水保持性物質は乾燥されていることであり、好ましくは、上昇された温度及び／又は圧力下において乾燥されたものである、ということである。
【００３０】
本発明における殺鼠剤は、好ましくは、（囓歯類誘引物質として作用する）糖蜜のような甘味物質との組み合わせであり、参考として取り込まれる英国特許第２，３１１，４６４号に開示されている方法によりペレット化されていることである。このペレットは、乾燥状態を保持（従って、水吸収性を保持）し、殺鼠剤の活性を保持するために、好ましくは、湿気をはじくバックにパッケージされていることである。
【００３１】
広範で多種多様な水保持性物質は、殺鼠剤として使用するのに適するというこが考えられる。最も有用な物質は、それら高次構造に由来する水保持性を有するセルロースのような自然型由来で、（ヒトに対して）毒性を持たない物質であることが期待される。その他の適した物質は、実験によって発見される可能性がある。
【００３２】
従って、その他の面において、本発明は、殺鼠活性において、水保持性物質のスクリーニング方法を供することであり、水保持性物質が、囓歯類（実験用ラットが好ましい）に摂食され、この水保持性物質がその胃壁を介したイオン輸送を崩壊するか、あるいはどの程度崩壊させるかを試験される。
【００３３】
このような水移行の崩壊は、例えば、胃壁の検査によって検出される消化の阻害など）その効果によって検出される。
【００３４】
好ましくは、囓歯類は、死後にて検討されることである。
【００３５】
好ましくは、胃腸膨満状態にて検討されることである。
【００３６】
自由に、胸腺における大きさ又は状態に対して、この水保持性物質の消化の効果が試験される。
【００３７】
好ましくは、この水保持性物質は、ヒトに対し、本質的に毒性を有しないことである。
【００３８】
その他の好ましい特徴は、該当する請求項に定義する。
【００３９】
その他の面において、本発明は、請求項１６に述べられている殺鼠剤を、囓歯類の蔓延する領域に配することから構成される囓歯類の蔓延を緩和する方法を供し、この殺鼠剤は、ヒトに対し毒性を持たず、摂食した際、囓歯類における消化系を崩壊させる。
【００４０】
本発明に従った試験方法は、実験室条件下での試験とは独立した試験とは分離された次なる例に従った参照例とともに下記に述べる。
【００４１】
（例１）
（目的）
この試験の目的は、ノルウェーラット（学名Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）のコントロールに対するＥＲＡＤＩＭＯＵＳＥの効果を同定することである。これは、実験室での効果を同定するために、１５日間無処理の試験を行い、５日間の試験後の観察期間で行われた。
【００４２】
試験物質は、ＥＲＡＤＩＭＯＵＳＥである。これは、殺鼠剤をペレット化（５ ｍｍ（３／１６’’）の径を持つペレット）したもので、本発明者による市販品であり、ヒトや家畜動物に対して毒性を有しておらず、本技術分野において効果的であることが証明されている。これは、Ｍｏｕｎｔ Ｐｕｌａｓｋｉ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．， ９０８ Ｎ． Ｖｉｎｅ Ｓｔ．， Ｍｏｕｎｔ Ｐｕｌａｓｋｉ， Ｉｌｌｉｎｏｉｓ ６２５４８， ＵＳＡからの市販品として得られる「Ｃｏｒｎ Ｃｏｂｂ ２０−４０ ｇｒｉｎｄ」に由来するトウモロコシの穂軸に存在する白核を９５重量％含んでおり、廃糖蜜を５重量％含んでいる。また、これは、我々の英国特許第２，３１１，４６４Ｂ号に述べられている工程に従って製造される。
【００４３】
（試験工程）
種―ノルウェーラット（学名Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）。
【００４４】
系統―野生型、シカゴ、イリノイ原産、２０００年の春および夏に捕獲、野外コロニーにて飼育。
【００４５】
供給元―このラットは、適当な寸法の成育捕獲器（Ｔｏｍａｈｏｗｋ（登録商標）又は類似品）を使って、コロラド州の捕獲コロニーにて、生きたまま捕獲され、拘束ケ−ジにて飼育された。拘束されたすべてのラットは、飼料および水を自由に確保するために、日夜監視され、床敷は、一週間で二回取り替えられた。
【００４６】
選別の正当化―ワルファリン殺鼠剤に対する遺伝的耐性を有し、ラットの大部分を占めるものとして、供給源分布が確定されていることを理由に、ノルウェーラット（野生型）が使用された。
【００４７】
大きさ―０日におけるラットの平均体重は、２９７．１ ｇ（標準誤差１３．４）であった。試験グループにおいては、メスでは、平均２４６．２ ｇ（標準誤差２０．０）であり、オスでは、３３１．８ ｇ（標準誤差１６．９）であり、オスのコントロールでは、３１３．４ ｇ（標準誤差２４．２）であった。
【００４８】
齢数―最小体重の基準をクリアしている限りは、いかなる齢数のラットも許容できる。
【００４９】
性及び個体数―処置群は、１０匹のオスと１０匹のメスで構成された。コントロール群は、すべてオスであった（例数１０）。
【００５０】
生理的条件―試験動物は、健康かつ活動的であった。
【００５１】
（試験システムにおける住居、同定、及び環境条件）
住居及び環境―試験室は、本試験に使用するラットに対し占有した。ラットは、試験中、約９７２平方センチの表面を持つスクリーンボトムの金属ケ−ジにて保持した。すべてのラットは、本試験中、個々のケ−ジにて保たれた。ケ−ジ番号が試験動物に対応するように、ケ−ジはラベルされた。
【００５２】
本試験中、１２時間の明時間と、１２時間の暗時間を保たれた。赤色光は、捕獲されたラットのストレスを軽減することから（Ｆａｌｌら、１９７４）、部屋は赤色の白熱電球にて照射された。温度及び湿度は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔｈｅｒｍｏ−Ｈｙｇｒｏ測定装置を使って、日毎に記録された。
【００５３】
（試験システムにおける飼料及び水）
順応―順応期間中、及び試験期間後において、すべてのラットは、自由に、Ｆｒｅｓｈ Ｔｅｋｌａｄ Ｆ６ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ （Ｗ） ８８６４（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）を与えた。ステンレススチールシッパーチューブを配したボトルからの水は、自由に、順応期間中、試験期間中、及び試験期間後において与えた。
【００５４】
試験―ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅ試験物質は、１５日間の試験期間の間、試験群ラットに供された。コントロール群ラットは、前記のＴｅｋｌａｄ Ｆ６ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔを供した。水は、自由に与えた。
【００５５】
試験期間後―前記のＦｒｅｓｈ Ｔｅｋｌａｄ Ｆ６ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔは、５日間の試験後観察期間あるいは延長期間のすべての間、供された。ステンレススチールウォータリングチューブを配したボトルからの水は、自由に供された。
【００５６】
（実験系）
一群に占める動物の数―試験群は、２０匹のノルウェーラット（オス１０及びメス１０）で構成された。１０匹のオスラットからなる追加群は、コントロール群とした。
【００５７】
群の割当―オスラットは、コンピューターによるランダム化プログラム（Ｒａｎ３０）を使って、処置群及びコントロール群として割り当てられた。
【００５８】
飼料消費―飼料消費は、５日間の順応期間、１５日間の曝露胃肝、及び５日間の処置後の回復期間にわたってモニターされた。
【００５９】
体重―体重は、順応期間、死亡した動物が見つかった際、及び安楽死させた際、記録された。
【００６０】
検屍、微生物分析、及び組織検討―試験期間中に死亡した処置群の動物は、死亡した日に、中毒及びその他の死亡原因に関して、検屍が行われた。同様に、オスラットがいつ死亡しようとも、コントロールラットは、ランダムに選ばれ、安楽死させた。コントロールも検屍された。消化管（食道から直腸まで、漏出を阻止するために縛った）、肝臓、及び腎臓を含む臓器組織は、摘出され、ラベルを付けたプラスティックバッグに入れ、この臓器サンプルは、コロラド州立大学のＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに送られた。消化管の顔料は、クロストリジウム種用に検査され、同様に、その他の嫌気性及び好気性細菌の検査がなされた。消化管、肝臓、及び腎臓に由来する組織切片は、損傷や異常の同定のため、分析された。
【００６１】
観察―すべてのラットは、順応、曝露、及び試験後期間において、中毒、罹患、及び死亡の兆候のため、日毎観察された。
【００６２】
（統計処理）
環境、観察、死亡、及び検屍に関するデーターは、集計され、記述的に表現された。順応及び試験期間中における日毎の飼料消費データーは、２方式繰り返しＡＮＯＶＡを使って、飼料消費は、依存的変数として、飼料群（オス処置群、メス処置群、及びオスコントロール群）は、試験因子として、時間は、繰り返し因子として、分離的に分析された。
【００６３】
（結果及び考察）
試験期間中、試験室中の温度は、２０以上２９℃以下に保たれ、湿度範囲は、２９以上７２％にて保たれた。
【００６４】
飼料消費―順応期間中、処置グループのオス（１５．４ ｇ／日＋０．８標準誤差）、及びメス（１７．３ ｇ／日＋１．２標準誤差）ラットは、コントロールのオスラット（２０．７ ｇ／日＋１．４標準誤差）（Ｆ２， ２７＝５．２１、危険率１％）に比べて、飼料消費が若干下がった。後知恵比較（ターキー試験）が示したのは、オス処置群は、コントロール群に比べて、一日当たりの飼料消費量が少なかったことであるが、処置用として計画さえていたメスとコントロール群との比較では、差異は認められなかった。処置群のオスラットの一匹（ラット番号１５）は、最初の５日間の順応期間の間、１０ ｇ以下の飼料を消費し、この消費の欠除は、データーを歪めた。このラットは、順応期間の５及び６日では２６ ｇを消費したが、処置群の動物に含めた。
【００６５】
確実な期間における飼料消費に関する評価が示したのは、処置（Ｆ２， ４０５＝３．１１、危険率４．６％）、時間（Ｆ２，４０５＝４．６８、危険率０．１％以下）、及び処置と時間の関係（Ｆ２８，４０５＝３．１９、危険率０．１％）と有意な効果を示したことである。ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅ処置群における両オス及びメスでは、試験開始後、最初の４日間において、コントロールに比べて、消費量が少なかった。これらグループにおける飼料消費は、５〜１０日と比べて、相対的に等価であったが、Ｅｒａｄｉｍｏｕｓｅラットは、試験期間中の１１〜１５日では、コントロールに比べより多く消費した（図２）。ターキー試験における後知恵分析が示したのは、これらメスが、１、２、及び４日目において、コントロールに比べて、少なく消費したということである（危険率５％以下）；ところが、オスでは１日目において、コントロールに比べて少なく消費した（危険率５％以下）。オス及びメスは、それぞれの日においておおよそ、同等量を消費し（危険率５％以上）、オスメスそれぞれにおける飼料消費のパターンは似通っていた（図２）。これらのデータが明らかに示唆するのは、ラットは、ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅのおいしさを当初却下したが、空腹ゆえ、１５日間の試験の最後において、その損失を補填したということである。
【００６６】
体重―試験期間中に死亡した動物（２匹のメス及び５匹のオス）において、メスは、試験前の体重に比べて平均で３５．５％の体重減少が見られ、オスでは、３３．９％であった（併せて３４．４％＋標準誤差４．３）。１５日目において安楽死された６匹のＥｒａｄｉＭｏｕｓｅラットもまた、実質的な重量減少が見られたが（２２．１％＋２．４標準誤差）、安楽死されたラットの体重減少は、死亡したラットと同等ではなかった（ｔ＝２．３９， １１ ｄｆ， 危険率３．５６％）。試験期間中に解剖された５匹のコントロールオスラットは、試驗前の体重に比べ１．９％の減少が見られ、同日に安楽死された３匹の追加ラットでは、１．９％の減少が見られた。図２にこのデーターをまとめた。
【００６７】
観察―ラットは、試験期間のほとんどにおいて活動的であった。観察記録によると、処置ラットの１匹（番号２８）は、１４日目において瀕死であり、このラットは、初期観察後の５．７５時間で死亡した。体重減少が見られた他は、このラットは病気を示すその他の医学的兆候は見られなかった。
【００６８】
死亡―ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅを与えた７匹のラット（３５％）は、試験期間及び回復期間中に死亡した（５匹のオス及び２匹のメス）。このオスラットの５匹は、実際の試験期間中に死亡した。メスの１匹（番号７）は、回復期間の最初の日に死亡し、そのたは、試験期間の８日目に死亡した。
【００６９】
検屍―ほとんどのラットは、外的な異常を示さなかったが、番号１５のラットは、脚と胸に若干の障害を示し、番号２０のラットは、足に小さな傷があった（表２）。試験期間中に死亡したＥｒａｄｉＭｏｕｓｅ処置群の７匹のラットにおいて、６匹は、その消化管が“から”でありながら、膨満した状態であった。ラットの１匹（番号２６）は、肝臓に寄生虫が見られた。解剖されたコントロールラット１０匹のうち３匹もまた、消化管が膨満した状態又はガスが溜まった状態であったが、飼料が満たされていた。２匹のコントロールラットは、１匹では黄色の斑点が見られ、他方では寄生虫が見られることを含む肝臓に異常が見られた。
【００７０】
試験終了時（１５日目）において、９匹のラット（６匹のＥｒａｄｉＭｏｕｓｅ処置ラット及び３匹のコントロールラット）が安楽死され、検屍され、組織サンプルがＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに送られた。ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅ群の６匹のうち３匹は、肝臓に変色が見られ、６匹のうち３匹は、消化管が膨満していた。１匹のラットは、内部的な異常を示さなかった。
【００７１】
（参考文献）
Ｆａｌｌ， Ｍ．Ｗ． １９７４， Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｒｅｄ ｌｉｇｈｔ ｆｏｒ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｗｉｌｄ ｒａｔｓ．  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２４：４。
【００７２】
表１
ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅによる試験を行わなかったノルウェーラットの１５日間における体重
【００７３】
【表１】
2004517879.tif 000002
＊印は１５日目に解剖された。
【００７４】
表２
ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅによる試験期間におけるノルウェーラットの検屍結果
【００７５】
【表２】
2004517879.tif 000003
（結論）
本試験が示したのは、ＥｒａｄｉＭｏｕｓｅは、野生型ラットの摂食を阻害することであり、実験室条件下において、死亡に必須ではない体重の減少へと導く。製品の摂食は、内部的な膨満を生じるが、通常の消化における阻害の結果として腸管が膨満する。一方で、胃壁を介した水移行の崩壊に起因すると考えられる。
【００７６】
（例２）
（目的）
試験物質における効果に関し、１４日間自由に供することにより投与した差異、処置ラットにおいて死亡に至るかどうかを検討する。
【００７７】
（方法と材料）
１．試験物質
ＥＲＡＤＩＲＡＴ（ロット番号０２０９０１）
このサンプルは、白いバッグ中ペレット化された飼料であった。
【００７８】
ＥＲＡＤＩＲＡＴは、ペレット化された殺鼠剤（９ ｍｍ（３／８’’）径ペレット）であり、発明者による市販品であり、ヒト又は家畜動物に毒性を示さず、本技術分野においてその有効性が証明されたものである。これは、Ｍｏｕｎｔ Ｐｕｌａｓｋｉ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．， ９０８ Ｎ． Ｖｉｎｅ Ｓｔ．， Ｍｏｕｎｔ Ｐｕｌａｓｋｉ， Ｉｌｌｉｎｏｉｓ ６２５４８， ＵＳＡからの市販品として得られる「Ｃｏｒｎ Ｃｏｂｂ ２０−４０ ｇｒｉｎｄ」に由来するトウモロコシの穂軸に存在する白核を９４重量％含んでおり、廃糖蜜を５重量％含み、小麦粉を１重量％含んでいる。
【００７９】
２．試験動物
種：ラット（ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）
系統：Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ
供給元：Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ， インディアナポリス ＩＮ
数／性別：１０匹のオス
１０匹のメス（出産経験がなく、妊娠していない）
１０匹のコントロール（５匹オス、５匹メス）
順応及び試験期間の間、それぞれの動物は、”Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ”（ＮＲＣ， １９９６）に従って、ハウスに入れられ、保持された。すべての動物は、耳に穴を開ける方法により標識され、個々にケ−ジに入れられ、脱走しないようにされた。この動物は、一匹ずつ、ワイヤーの張られたケ−ジに入れられ、Ｐｕｒｉｎａ Ｒｏｄｅｎｔ Ｃｈｏｗ及び水を自由に与えた。記：初日、ラットは非認証のＲｏｄｅｎｔ Ｃｈｏｗを与えた。すべての動物は、試験に先立ち、７日間順応された。動物は一般的な健康体であり、期間中の試験に適していた。到着後の日、飼料及び水の消費分析が行われた。
【００８０】
３．実験方法：
順応期間の後、２０匹のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（１０匹のオス、１０匹のメス）が試験システムとして選ばれ、１０匹のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（５匹のオス、５匹のメス）がコントロールとして選ばれた。試験システムにおけるそれぞれの性別のラットは、平均体重及び許容体重限界範囲（平均体重の＋／−２０％）により選ばれた。試験動物の初期の体重は、試験するメスにおいて１３０．７以上１４８．２ ｇ以下、試験するオスにおいて１５３．０以上１６９．６ ｇ以下、コントロールのメスにおいて１３４．０以上１４５．２ ｇ以下、及びコントロールのオスにおいて１５５．５以上１６２．５ ｇ以下の範囲であった。
【００８１】
試験物質は、自由に経口で投与された。コントロール動物は認証済みのＰｕｒｉｎａ Ｒｏｄｅｎｔ Ｃｈｏｗを自由に与えられた。
【００８２】
飼料及び水消費量は、日毎算出された。それぞれの日にホッパーの中に残った飼料の量を計量し、記録した。必要であれば、自由に摂取できるようにし、追加で飼料を加え、総量を記録した。加えて、それぞれのケ−ジの下にある吸収パッド上に落ちた飼料は取り除き計量し、それぞれの動物に関し記録した。これら数値から、それぞれの動物において消費した量を計算した。
【００８３】
前日のホッパーに戻った飼料の総量（ｇ）−
ホッパーに残った飼料の重量（ｇ）−
吸収パッドから戻した飼料の重量（ｇ）＝
飼料の消費量（ｇ）
それぞれの日に水ボトルを計量し記録した。必要であれば、自由に水を飲めるよう確保し、さらに水を追加した。総量を計量し、記録した。これら値から消費量を計算した。
【００８４】
前日にボトルにあった水の総量（ｇ）−
当日のボトルに残った水の重量（ｇ）＝
水の消費量（ｇ）
記：１．０ ｇは、水１ ｍＬと等価である。
【００８５】
順応期間及び試験期間における飼料及び水の消費量に関する平均値は表５、６、及び７に示した。
【００８６】
記：試験物質、飼料、又は水が損失しないよう我々の能力の最大限にて養生を行った。試験期間中、漏出による損失は免れない。
【００８７】
動物は、毒性の兆候に関し、日二回、１４日の観察期間を通じて検討された。１４日目において、このような動物はたった一回のみ観察された。観察は、次なるものを含む：循環系、呼吸器系、自律神経系、及び中枢神経系；運動神経活性；行動パターン；身震い、痙攣、唾液分泌、昏睡、下痢の開始；肌及び毛並み；並びに目及び粘膜。
【００８８】
試験及びコントロール動物における糞便サンプルは、１、３、７、１０、及び１４日目に採取された。これらは、将来の分析の用で、凍結保存された。
【００８９】
ラットの体重（１０グラムに最も近い値で記録）は、日毎記録された。初期及び最終での体重及びその変化は、表３及び４に示した。
【００９０】
試験の終了時点、つまり１４日目には、すべてのラットは安楽死され（一酸化炭素にて）、検屍が行われた。さらなる組織化学的検討のための組織サンプルは、それぞれの試験動物に関し採取された。採取され１０％のホルマリン中で保存された組織は、両腎臓、消化管全部、及び肝臓の一部であった。検屍観察は、表１に記載した。加えて、胃の内容物が採取され、更なる検討のために凍結保存された。
【００９１】
（結果）
すべての２０匹の試験動物は、１４日間の観察を生存した；しかしながら、すべて体重減少を経験した。この減少は表３に記載した。観察結果は以下の通りである。
【００９２】
ラット番号１：１から３日目では所見なし。４から６日目において、若干の脱水症状を呈した。７から１４日目では、所見なし。
【００９３】
ラット番号２：１から３日目では所見なし。４日目において、脱水症状を呈した。５日目では所見なし。６日目では、若干の脱水症状を呈した。７から１４日目では所見なし。
【００９４】
ラット番号３：１から３日目では所見なし。４日目では、うつろな目をし、脱水症状を呈した。５日目では、脱水症状が残った。６日目では、若干の脱水症状のみみられた。７から１４日目では所見なし。
【００９５】
ラット番号４：１から３日目では所見なし。４から５日目では脱水症状であった。６から１４日目では所見なし。
【００９６】
ラット番号５：１から４日目では所見なし。５日目に若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【００９７】
ラット番号６：１から３日目では所見なし。４日目では若干の脱水症状を呈した。５日目では、うつろな目をし、脱水症状であった。６日目では若干脱水症状を呈した。７から１４日目では所見なし。
【００９８】
ラット番号８：１から３日目では所見なし。４から５日目では脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【００９９】
ラット番号９：１から３日目では所見なし。４から５日目では脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１００】
ラット番号１６：１４日間の観察期間を通じて所見なし。
【０１０１】
ラット番号１７：１から３日目では所見なし。４から５日目では若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０２】
ラット番号２１：１から３日目では所見なし。４日目ではうつろな目をし、脱水症状を呈した。５日目では、身震い、うつろな目をし、脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０３】
ラット番号２４：１から３日目では所見なし。４から５日目では、脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０４】
ラット番号２６：１から３日目では所見なし。４日目では、うつろな目をし、脱水症状を呈した。５日目では呼吸が荒く、うつろな目をし、脱水症状を呈した。６日目では若干の脱水症状を呈した。７から１４日目では所見なし。
【０１０５】
ラット番号２７：１から３日目では所見なし。４日目では、脱水症状を呈した。５から１４日目では所見なし。
【０１０６】
ラット番号２９：１から３日目では所見なし。４から５日目では脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０７】
ラット番号３０：１から３日目では所見なし。４から５日目では若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０８】
ラット番号３１：１から３日目では所見なし。４から５日目では若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１０９】
ラット番号３２：１から３日目では所見なし。４日目では、身震いをし、うつろな目をし、脱水症状を呈した。５日目では、うつろな目をし、脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１１０】
ラット番号３３：１から４日目では所見なし。５日目では若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１１１】
ラット番号３５：１から３日目では所見なし。４から５日目では若干の脱水症状を呈した。６から１４日目では所見なし。
【０１１２】
１４日間の試験期間を通じて、コントロール動物１０匹すべて生存し、体重が増加し、所見はなかった。表４にその体重増加を示した。
【０１１３】
１４日目において、試験ラット２０匹すべてを安楽死させ、検屍した。試験動物のうち３匹は小腸に溶液が満たされ、そのうち１匹は、胃内壁に１×１平方センチの黄色に着色した領域が見られた。その他の試験動物では所見はなかった。コントロール動物１０匹は、安楽死させ、検屍した。コントロール動物すべてにおいて、正常であった。試験データーの統計処理は必要無いと考えられる。
【０１１４】
表３
試験動物におけるラット体重の変化
【０１１５】
【表３】
2004517879.tif 000004
表４
コントロール動物におけるラット体重の変化
【０１１６】
【表４】
2004517879.tif 000005
表５
試験動物における飼料及び水消費に関する平均値
【０１１７】
【表５】
2004517879.tif 000006
１：ラットには、認証済みのＰｕｒｉｎａ Ｒｏｄｅｎｔ Ｃｈｏｗを与えた。
【０１１８】
２：ラットには、試験物質、ＥＲＡＤＩＲＡＴ（ロット番号０２０９０１）を与えた。
【０１１９】
３：水ボトルの漏出のため、算出は１３日目に基づいた。
【０１２０】
４：水ボトルの漏出のため、算出は６日目に基づいた。
【０１２１】
表６
コントロール動物における飼料及び水消費に関する平均値
【０１２２】
【表６】
2004517879.tif 000007
＊：ラットには、認証済みのＰｕｒｉｎａ Ｒｏｄｅｎｔ Ｃｈｏｗを与えた。
【０１２３】
表７
全動物における飼料及び水消費に関する平均値
【０１２４】
【表７】
2004517879.tif 000008
（おさらい）
ＥＲＡＤＩＲＡＴ（ロット番号０２０９０１）は、４０ ＣＦＲ １５８のＳｕｂｄｉｖｉｓｉｏｎ Ｆ、８１−１シリーズにリスト化された連邦政府の要求項目にある毒性を評価するために、２０匹のシロラット（１０匹のオス及び１０匹のメス）に投与した。動物は、１４日間にわたって観察した。死亡を含むいくつか及びすべての行動学的／診断学的異常が観察された。１４日目において、２０匹すべてのラットには、病理学的な検屍が行われた。検屍時においては、試験ラットのうち１７匹に所見はみられず、一方で、３匹には、象徴に溶液が蓄積することが観察され、そのうち１匹では胃内壁に黄色く着色したパッチが見られた。
【０１２５】
（結論）
上記の試験が示すのは、実験室条件下では死亡することはないが、ＥＲＡＤＩＲＡＴが実験用ラットの消化を阻害し、脱水症状を停止、体重減少をきたすということである。
【０１２６】
その他の実験室での検討では、（野生で捕獲したＲａｔｔｕｓ Ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓラットにおいて）本発明におけるペレット化された殺鼠剤と同様の物質の摂食による死後分析において、盲腸及び小腸の埋伏が観察された。盲腸及び象徴の埋伏は、本発明におけるペレット化された殺鼠剤と同様の物質の摂食によるその他の実験室における検討においても観察された。
【国際公開パンフレット】
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2004517879.tif 000034
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【国際調査報告】
2004517879.tif 000036
2004517879.tif 000037
2004517879.tif 000038