(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物、およびその薬学的に許容される塩に関する。該化合物は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ活性の調節によって仲介される状態の予防または治療用の薬剤の製造に用いることができ、これらの状態は、好ましくは、グルコース忍容力低下、真性糖尿病、糖尿および代謝性アシドーシスから選択される。
2004530729.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2004530729.tif 000018
（式中、
Ａは、Ｄ−アミノ酸以外のアミノ酸であり、
Ｂは、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、
Ｃは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄは、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、そして
Ｅは、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、
あるいは、
Ｃは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、Ｎ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外、およびＤ−アミノ酸以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄは、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、そして
Ｅは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸である）
で表される化合物、およびその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式中、
Ａが、Ｄ−アミノ酸以外のアミノ酸であり、
Ｂが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、
Ｃが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄが、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、そして
Ｅが、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けている、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式中、
Ａが、Ｄ−アミノ酸以外のアミノ酸であり、
Ｂが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、
Ｃが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、Ｎ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外、およびＤ−アミノ酸以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、そして
Ｅが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＡがＬ−アミノ酸である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
ＣがＬ−アミノ酸である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｅが欠けている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ＤおよびＥが欠けている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ａが、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、ＩｌｅまたはＶａｌである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
ＢがＰｒｏである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｃが、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、ＩｌｅまたはＶａｌである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｄが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸またはピペコリン酸である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物、すなわち、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙまたはｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、およびそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
化合物が、遊離酸ペプチド形またはＣ−末端アミドペプチド形である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
遊離酸ペプチド形またはＣ−末端アミドペプチド形が、ホモセリン付加、ピログルタミン酸付加、ジスルフィド結合形成、アスパラギンまたはグルタミン残基の脱アミド化、メチル化、ｔ−ブチル化、ｔ−ブチルオキシカルボニル化、４−メチルベンジル化、チオアニシル化、チオクレジル化、ベンジルオキシメチル化、４−ニトロフェニル化、ベンジルオキシカルボニル化、２−ニトロベンゾイル化、２−ニトロスルフェニル化、４−トルエンスルホニル化、ペンタフルオロフェニル化、ジフェニルメチル化、２−クロロベンジルオキシカルボニル化、２，４，５−トリクロロフェニル化、２−ブロモベンジルオキシカルボニル化、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化、トリフェニルメチル化、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル化、ヒドロキシル化、メチオニンの酸化、ホルミル化、アセチル化、アニシル化、ベンジル化、ベンゾイル化、トリフルオロアセチル化、アスパラギン酸またはグルタミン酸のカルボキシル化、リン酸化、硫酸化、システイニル化、ペントース、デオキシヘキソース、ヘキソサミン、ヘキソースまたはＮ−アセチルヘキソサミンでのグリコール化、ファルネシル化、ミリストール化、ビオチニル化、パルミトイル化、ステアロイル化、ゲラニルゲラニル化、グルタチオニル化、５´−アデノシル化、ＡＤＰ−リボシル化、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、ピリドキサルホスフェート、リポ酸、４´−ホスホパンテテイン、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドでの修飾から選択される側鎖修飾によって変えられている、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物のプロドラッグ。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物またはプロドラッグ、および薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含有する医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物またはプロドラッグ、および薬学的に許容される担体および／または希釈剤を混合することを含む医薬組成物の製造方法。
【請求項１８】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物、プロドラッグまたは組成物の、ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶ活性の調節によって仲介される状態を予防または治療する薬剤製造のための使用。
【請求項１９】
状態が、グルコース忍容力低下、真性糖尿病、糖尿および代謝性アシドーシスから選択される、請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、患者におけるジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ  ＩＶ、同義語：ＤＰＰ  ＩＶ、ＣＤ２６、ＥＣ  ３．４．１４．５）およびＤＰ  ＩＶ様酵素の機能、並びにインスリン分泌刺激ペプチドであるガストリック・インヒビトリー・ポリペプチド１−４２（ＧＩＰ１−４２）およびグルカゴン様ペプチドアミド−１（ＧＬＰ−１７−３６）および（ＧＬＰ−１７−３７）またはこれらの類似物質の血漿レベルにおけるそれらの生物学的効果に関する。本発明はさらに、内因性ペプチドホルモンの生理学的ターンオーバーを阻害する薬理学的投与量でのジペプチジルペプチダーゼＩＶのトリ−、テトラ−およびペンタペプチド基質の使用によるＤＰ  ＩＶ様酵素活性の選択的調節によって、グルコース忍容力低下、真性糖尿病、糖尿および代謝性アシドーシスを治療することに関する。
【０００２】
発明の背景
ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶ（ＤＰ  ＩＶ）は、好ましくは、端から２番目の位置にプロリン残基を含む、ペプチド鎖からＮ−末端ジペプチドを切り取るセリンプロテアーゼである。
【０００３】
ＤＰ  ＩＶ様酵素はＤＰ  ＩＶに構造的に関係のある酵素であり〔ブランコ（Ｂｌａｎｃｏ）等、１９９８〕、ＤＰ  ＩＶ配列と同族性を有する特定配列を共有しうるが、（収斂進化により）構造的に関係がなくても、端から２番目のプロリン残基の後の切断によってポリペプチドのＮ−末端からジペプチドを取り去るＤＰ  ＩＶの基質特異性を共有する。そのような酵素−−−  一方ではＤＰ  ＩＶ、ＤＰ  ＩＩ、そして他方ではアトラクチンを含む〔フカサワ（Ｆｕｋａｓａｗａ）等、２００１〕  −−−は、端から２番目にアラニン（またはセリンまたはグリシン残基）を有するジペプチドをポリペプチドのＮ−末端から取り去ることもできるが、ポスト−プロリン切断と比較して通常は触媒効果が減じる〔ヤロン（Ｙａｒｏｎ）およびナイダー（Ｎａｉｄｅｒ）、１９９３〕。それらは、標的たんぱく質のＰｒｏ−位置にＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＧｌｙまたはＶａｌのような小さい疎水性側鎖を有する他のアミノ酸も受け入れるという共通の特徴を示す。加水分解効果は、Ｐｒｏ＞Ａｌａ≫Ｓｅｒ，Ｔｈｒ≫Ｇｌｙ，Ｖａｌである。たんぱく質ＤＰＩＶ、ＤＰ  ＩＩ、ＦＡＰα〔セプラーゼ（Ｓｅｐｒａｓｅ）〕、ＤＰ６、ＤＰ８およびＤＰ９は構造的に関係があり、高い配列同族性を示すが、アトラクチンは、非常に官能的なＤＰＩＶ様酵素である〔セド（Ｓｅｄｏ）およびマリック（Ｍａｌｉｋ）、２００１〕。
【０００４】
別のＤＰＩＶ様酵素は、ＷＯ０１／１９８６６、ＷＯ０２／０４６１０、ＷＯ０２／３４９００およびＷＯ０２／３１１３４に開示されている。ＷＯ０１／１９８６６には、ＤＰＩＶおよび線維芽細胞活性化たんぱく質（ＦＡＰ）に類似の構造および機能を有するヒトジペプチジルアミノぺプチダ−ゼ８（ＤＰＰ８）が開示されている。ＷＯ０２／０４６１０のジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素は本技術分野において周知である。ジーンバンク（ＧＥＮＥ  ＢＡＮＫ）データベースでは、この酵素はＫＩＡＡ１４９２として登録されており（２００１年２月登録、２０００年４月４日提出、ＡＢ０４０９２５）、ＭＥＲＯＰＳデータベースにも登録されている。ＷＯ０２／３４９００には、ＤＰＩＶおよびＤＰＰ８のアミノ酸配列とかなりの同族性を示すジペプチジルぺプチダ−ゼ９（ＤＰＰ９）が開示されている。ＷＯ０２／３１１３４には、３つのＤＰＩＶ様酵素、ＤＰＲＰ１、ＤＰＲＰ２およびＤＰＲＰ３が開示されている。配列分析から、ＤＰＲＰ１はＷＯ０１／１９８６６に記載のようなＤＰＰ８と同一であり、ＤＰＲＰ２はＤＰＰ９と同一であり、そしてＤＰＲＰ３はＷＯ０２／０４６１０に記載のようなＫＩＡＡ１４９２と同一であることが分かった。
【０００５】
さらに最近では、ＤＰ  ＩＶはグルカゴン様ペプチド−１およびガストリック・インヒビトリー・ペプチドの切断を招き、それによってＧＬＰ−１およびＧＩＰの半減期およびそれらの循環における生理学的反応を短縮することが分かった。血清ＤＰ  ＩＶの阻害から、内分泌物の生物活性に有意な増加が見られた。内分泌物は膵臓のインスリン分泌の主な刺激物質であり、グルコース処理に直接有利に作用するので、ＤＰ  ＩＶの阻害は、グルコース忍容力低下および非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）および関連疾患、例えば糖尿および代謝性アシドーシスを治療するための魅力的な対処法である（ＤＥ１９６  １６  ４８６およびＷＯ９７／４０８３２参照）。
【０００６】
酵素ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶの基質特異性は次のようにまとめることができる：
１．  端から２番目の残基がプロリン、ヒドロキシプロリン、デヒドロプロリン、ピペコリン酸またはアラニンであるとき、ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶはオリゴペプチドおよびたんぱく質をＮ−末端から加水分解して、ジペプチド単位を取り去る。それらのＫｃａｔ／Ｋｍ値による最良の基質は、Ｐ１位置にプロリン残基を有するものである。
２．  ＤＰ  ＩＶは、Ｐ１残基とＰ２残基との間に「トランス」ペプチド結合を必要とする。
３．  基質のＮ−末端アミノ基は、ＤＰ  ＩＶに敏感であるために、プロトン化されなければならない。
４．  基質のＰ１´位置のプロリン残基は、ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶによる基質加水分解を妨げる。この酵素は、例えば、ブラジキニンからアルギニルプロリンを放たない。
【０００７】
発明の概要
本発明は、次の式（Ｉ）：
【化２】
2004530729.tif 000003
で表される化合物に関し、該化合物は後に詳述する特定の制限を伴う。
これらの化合物は、プロリン特異的ぺプチダ−ゼ、特にＤＰ  ＩＶおよび類似のＤＰ  ＩＶ様酵素活性を有する他の酵素（「ＤＰ  ＩＶ様酵素」）の基質であり、拮抗触媒作用による内因性ペプチドホルモンの生理学的ターンオーバーを阻害するＤＰ  ＩＶおよびＤＰ  ＩＶ様酵素の基質としてまたはアンタゴニストとして有用である。
式（Ｉ）の化合物は、グルコース忍容力低下、真性糖尿病、糖尿、患者において診断された代謝性アシドーシス、癌および多発性硬化症の治療に用いうる。
【０００８】
発明の詳細な説明
さらに詳しくは、本発明は次式（Ｉ）：
【化３】
2004530729.tif 000004
のペプチドに関し、式中、
Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥは、たんぱく質原性アミノ酸、非たんぱく質原性アミノ酸、Ｌ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸を含めたアミノ酸であり、ここで、Ｅおよび／またはＤあるいはＢおよび／またはＡは以下に詳記するような追加条件では不在でもよい。
【０００９】
式（Ｉ）のさらなる条件は次のとおりである：
Ａは、Ｄ−アミノ酸以外のいずれかのアミノ酸残基であり、
Ｂは、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるいずれかのアミノ酸であり、
Ｃは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄは、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、そして
Ｅは、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、
あるいは、
Ｃは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、Ｎ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外、およびＤ−アミノ酸以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄは、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるいずれかのアミノ酸であり、そして
Ｅは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸である。
【００１０】
本発明は特に、
Ａが、Ｄ−アミノ酸以外のアミノ酸であり、
Ｂが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、
Ｃが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄが、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けており、そして
Ｅが、いずれかのアミノ酸であるか、または欠けている、
式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１１】
本発明はさらに、
Ａが、Ｄ−アミノ酸以外のアミノ酸であり、
Ｂが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、
Ｃが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、Ｎ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外、およびＤ−アミノ酸以外のいずれかのアミノ酸であり、
Ｄが、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸およびピペコリン酸から選択されるアミノ酸であり、そして
Ｅが、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、アセチジン−（２）−カルボン酸、ピペコリン酸以外、およびＮ−アルキル化アミノ酸、例えばＮ−メチルバリンおよびサルコシン以外のいずれかのアミノ酸である、
式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１２】
好ましくは、ＡはＬ−アミノ酸である。
さらに好ましくは、ＣはＬ−アミノ酸であり；
さらに好ましくは、Ｅは欠けており；
さらに好ましくは、ＤおよびＥは欠けており；
さらに好ましくは、Ａは、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
特に好ましくは、Ａは、ｔ−ブチル−Ｇｌｙであり；
さらに好ましくは、ＢはＰｒｏであり；
さらに好ましくは、ＤはＰｒｏであり；
さらに好ましくは、Ｃは、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、ＩｌｅまたはＶａｌであり；
より好ましくは、Ｃは、ｔ−ブチル−ＧｌｙまたはＶａｌであり；
特に好ましくは、Ｃはｔ−ブチル−Ｇｌｙであり；
特に好ましくは、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ、ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙまたはｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｔ−ブチル−Ｇｌｙ、およびそれらの薬学的に許容される塩である。
【００１３】
本発明の化合物は遊離酸ペプチド形でもＣ−末端アミドペプチド形でもよい。
本発明の化合物は遊離Ｃ−末端酸形またはＣ−末端アミド形として存在しうる。遊離酸ペプチドまたはアミドは側鎖修飾によって変えうる。そのような側鎖修飾は、限定されるものではないが、例えば、ホモセリン付加、ピログルタミン酸付加、ジスルフィド結合形成、アスパラギンまたはグルタミン残基の脱アミド化、メチル化、ｔ−ブチル化、ｔ−ブチルオキシカルボニル化、４−メチルベンジル化、チオアニシル化、チオクレジル化、ベンジルオキシメチル化、４−ニトロフェニル化、ベンジルオキシカルボニル化、２−ニトロベンコイル化、２−ニトロスルフェニル化、４−トルエンスルホニル化、ペンタフルオロフェニル化、ジフェニルメチル化、２−クロロベンジルオキシカルボニル化、２，４，５−トリクロロフェニル化、２−ブロモベンジルオキシカルボニル化、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化、トリフェニルメチル化、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル化、ヒドロキシル化、メチオニンの酸化、ホルミル化、アセチル化、アニシル化、ベンジル化、ベンゾイル化、トリフルオロアセチル化、アスパラギン酸またはグルタミン酸のカルボキシル化、リン酸化、硫酸化、システイニル化、ペントース、デオキシヘキソース、ヘキソサミン、ヘキソースまたはＮ−アセチルヘキソサミンでのグリコール化、ファルネシル化、ミリストール化、ビオチニル化、パルミトイル化、ステアロイル化、ゲラニルゲラニル化、グルタチオニル化、５´−アデノシル化、ＡＤＰ−リボシル化、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、Ｎ−アセチルノイラミン酸、ピリドキサルホスフェート、リポ酸、４´−ホスホパンテテイン、またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドでの修飾である。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物において、アミノ酸Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥは、それぞれ、通常のように、標準命名法に従って、アミド結合で隣接アミノ酸に結合しており、その結果、アミノ酸のアミノ末端（Ｎ−末端）は左側に引っ張られ、アミノ酸のカルボキシル末端は右側に引っ張られる。
【００１５】
本発明で用いうるアミノ酸の例は、ＬおよびＤ−アミノ酸、Ｎ−メチル−アミノ−酸；ＩｌｅおよびＴｈｒのアロ−およびトレオ−形であり、これらは、例えばα−、β−またはω−アミノ酸であることができ、それらの中でα−アミノ酸が好ましい。
【００１６】
アミノ酸の例を以下に示す：
アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）およびシステイン（Ｃｙｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アラニン（Ａｌａ）、プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、ベータ−アラニン（ベータ−Ａｌａ）、２−アミノオクタン酸（Ａｏａ）、アゼチジン−（２）−カルボン酸（Ａｃｅ）、ピペコリン酸（Ｐｉｐ）、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸等、アルファ−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、サルコシン（Ｓａｒ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモアルギニン（Ｈａｒ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ブチル−Ａｌａ）、ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ブチル−Ｇｌｙ）、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−ＭｅＩｌｅ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、システイン酸（Ｃｙａ）およびメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）、アセチル−Ｌｙｓ、装飾アミノ酸、例えばホスホリル−セリン（Ｓｅｐ（Ｐ））、ベンジル−セリン（Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））およびホスホリル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｐ））、２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、アミノエチルシステイン（ＡＥＣｙｓ）、カルボキシメチルシステイン（Ｃｍｃ）、デヒドロアラニン（Ｄｈａ）、デヒドロアミノ−２−酪酸（Ｄｈｂ）、カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ヒドロキシリシン（Ｈｙｌ）、シス−ヒドロキシプロリン（ｃｉｓＨｙｐ）、トランス−ヒドロキシプロリン（ｔｒａｎｓＨｙｐ）、イソバリン（Ｉｖａ）、ピログルタミン酸（Ｐｙｒ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、２−アミノ安息香酸（２−Ａｂｚ）、３−アミノ安息香酸（３−Ａｂｚ）、４−アミノ安息香酸（４−Ａｂｚ）、４−（アミノメチル）安息香酸（Ａｍｂ）、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（４−Ａｍｃ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、２−アミノ−４−シアノ酪酸（Ｃｂａ）、シクロアルカン−カルボン酸
【００１７】
ω−アミノ酸の例は、例えば、５−Ａｒａ（アミノ吉草酸）、６−Ａｈｘ（アミノヘキサン酸）、８−Ａｏｃ（アミノオクタン酸）、９−Ａｎｃ（アミノノナン酸）、１０−Ａｄｃ（アミノデカン酸）、１１−Ａｕｎ（アミノウンデカン酸）、１２−Ａｄｏ（アミノドデカン酸）である。
【００１８】
別のアミノ酸は、インダニルグリシン（Ｉｇｌ）、インドリン−２−カルボン酸（Ｉｄｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）、ナフチルアラニン（１−Ｎａｌ）、（２−Ｎａｌ）、４−アミノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＨ２））、４−ベンゾイルフェニルアラニン（Ｂｐａ）、ジフェニルアラニン（Ｄｉｐ）、４−ブロモフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｂｒ））、２−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（２−Ｃｌ））、３−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｃｌ））、４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、３，４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ２））、３−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））、４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））、３，４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３，４−Ｆ２））、ペンタフルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（Ｆ５））、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−グアニジノ））、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）、３−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｊ））、４−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｊ））、４−メチルフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｍｅ））、４−ニトロフェニルアラニン（Ｐｈｅ−４−ＮＯ２）、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、４−ホスホノメチルフェニルアラニン（Ｐｍｐ）、シクロヘキシルグリシン（Ｇｈｇ）、３−ピリジニルアラニン（３−Ｐａｌ）、４−ピリジニルアラニン（４−Ｐａｌ）、３，４−デヒドロプロリン（Ａ−Ｐｒｏ）、４−ケトプロリン（Ｐｒｏ（４−ケト））、チオプロリン（Ｔｈｚ）、イソニペコチン酸（Ｉｎｐ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、プロパルギルグリシン（Ｐｒａ）、６−ヒドロキシノルロイシン（ＮＵ（６−ＯＨ））、ホモチロシン（ｈＴｙｒ）、３−ヨードチロシン（Ｔｙｒ（３−Ｊ））、３，５−ジヨードチロシン（Ｔｙｒ（３，５−Ｊ２））、ｄ−メチル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｍｅ））、３−ＮＯ２−チロシン（Ｔｙｒ（３−ＮＯ２））、ホスホチロシン（Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２））、アルキルグリシン、１−アミノインダン−１−カルボン酸、２−アミノインダン−２−カルボン酸（Ａｉｃ）、４−アミノ−メチルピロール−２−カルボン酸（Ｐｙ）、４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸（Ａｂｐｃ）、２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ａｔｃ）、ジアミノ酢酸（Ｇｌｙ（ＮＨ２））、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイノール−カルボン酸（Ｄｉｓｃ）、ホモシクロヘキシルアラニン（ｈＣｈａ）、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅまたはＨｏｆ）、トランス−３−フェニル−アゼチジン−２−カルボン酸、４−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、３−ピリジルアラニン（３−Ｐｙａ）、４−ピリジルアラニン（４−Ｐｙａ）、スチリルアラニン、テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸（Ｔｉｑ）、１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸（Ｔｐｉ）、β−（２−チエニル）−アラニン（Ｔｈａ）である。
【００１９】
遺伝コードにコードされる他のアミノ酸置換基も本発明の範囲のペプチド化合物に含めることができる。
【００２０】
本発明はさらに、少なくとも１種の本発明の化合物および薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
そのような医薬組成物は、少なくとも１種の本発明の化合物および薬学的に許容される担体および／または希釈剤を混合することによって製造することができる。
【００２１】
本発明の化合物および組成物は、ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶ活性の調節によって仲介される状態の予防または治療用の薬剤の製造に用いることができる。
そのような状態は、例えば、グルコース忍容力低下、真性糖尿病、糖尿および代謝性アシドーシス、癌および多発性硬化症から選択される。
【００２２】
ここで用いるように、「患者」という用語は、治療、観察または実験の対象である動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくは人を指す。
ここで用いるように、「治療に有効な量」という用語は、研究者、獣医、医者または他の臨床医によって求められる、組織系、動物または人において、治療すべき病気または障害の症状の緩和を含めた生物学的または医学的反応を引き出す活性化合物または薬剤の量を意味する。
ここで用いるように、「組成物」という用語は、治療に有効な量の少なくとも１種の本発明の化合物を含む生成物、並びに請求化合物の組み合わせから直接または間接的に得られる生成物を包含する。
【００２３】
本発明の化合物は薬学的に許容される塩の形で存在してもよい。薬学的に許容される塩は一般に、アミノ酸塩基性側鎖が無機または有機酸でプロトン化されている形を一般にとる。代表的な有機または無機酸には、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、パモエ酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、糖酸またはトリフルオロ酢酸が含まれる。
【００２４】
本発明はさらに、本発明の化合物のプロドラッグをその範囲に含める。一般に、そのようなプロドラッグは、望ましい治療活性化合物に生体内で容易に変換しうる化合物の機能性誘導体である。従って、これらの場合、本発明の使用は、１種以上の請求化合物のプロドラッグ変形体での、記載されている各種疾患の治療を包含し、これらの化合物は患者に投与した後に生体内で上述した特定の化合物に変換する。適したプロドラッグ誘導体の選択および製造の一般的な方法は、例えば、「プロドラッグの設計（Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」、編集  エイチ．ブンドガード（Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ）、エルセヴィア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、１９８５、並びに特許出願ＤＥ  １９８  ２８  １１３；ＷＯ９９／６７２７８、ＤＥ  １９８  ２８  １１４およびＷＯ９９／６７２７９（参照することによってここに記載されたものとする）に記載されている。
【００２５】
本発明の化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、それらは光学的対掌体として存在しうる。本発明の化合物が２つ以上のキラル中心を有する場合、それらはさらにジアステレオマーとして存在しうる。そのような異性体およびそれらの混合物の全てが本発明の範囲に入ることは無論のことである。さらに、化合物の結晶形のいくつかは多形体として存在し、それゆえそれらは本発明に含まれる。さらに、いくつかの化合物は水との溶媒和物（すなわち、水和物）または一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成する。そのような溶媒和物も本発明の範囲に包含される。
【００２６】
出願人による本発明までに、試験管内プロリン特異的セリンプロテアーゼジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶの公知のペプチド基質として、トリペプチドジプロチンＡ（Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ）、ジプロチンＢ（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）およびジプロチンＣ（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ）が知られている。これらの化合物自体は本発明から除外する。出願人は、ここに記載の化合物が、生体内ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶの基質として作用し、そして、薬理学的投与量で、拮抗触媒作用によって内因性ペプチドホルモンの生理学的ターンオーバーを阻害することを、意外にも見出した。
【００２７】
ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶおよびＤＰ  ＩＶ様酵素のモジュレーターとして有用な本発明の特に好ましい化合物またはプロドラッグには、ウイスターラットに血管内（ｉ．ｖ．）および／または経口（ｐ．ｏ．）投与した後に生体内ＤＰ  ＩＶ阻害に有効なＤＰ  ＩＶ結合に対するＫｉ値を示し、また、ｆａ／ｆａズッカーラットにｉ．ｖ．およびｐ．ｏ．投与した後に生体内グルコース忍容力低下を示す、これらの化合物またはプロドラッグが含まれる。
【００２８】
本発明のモジュレーターは固体相化学を用いて、あるいは、通常の溶液化学により、本技術分野で公知の一般的な方法を用いて製造しうる。
【００２９】
生体内拮抗触媒作用による内因性ペプチドホルモンの生理学的ターンオーバーを阻害するＤＰ  ＩＶ基質として作用する式（Ｉ）の化合物の有用性は、実施例３および４に記載の手順に従って測定することができる。従って、本発明は、ＤＰＩＶ活性の調節によって仲介される状態を予防または治療する方法であって、その必要のある患者に、本発明の化合物またはその医薬組成物を、その状態の治療に有効な量および投与法で投与することを含む方法を提供する。さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物の、患者におけるＤＰＩＶ活性の調節によって仲介される状態の予防または治療用の薬剤製造のための使用を含む。化合物は、静脈内、経口、皮下、筋肉内、経皮、非経口およびこれらの組み合わせ（これらに限定されない）を含めた一般的な投与ルートによって患者に投与しうる。経口投与が好ましい。
【００３０】
本発明はまた、１種以上の本発明の化合物と薬学的に許容される担体および／または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。
本発明の医薬組成物を製造するには、活性成分としての１種以上の式（Ｉ）の化合物またはそれらの塩を、一般的な薬剤配合技術により薬学的担体および／または希釈剤と均質に混合する。担体は、投与（例えば、経口投与または筋肉内のような非経口投与）に望ましい製剤の形により、広範囲な形をとりうる。経口投与形の組成物の製造には、通常のいかなる薬学的媒質をも用いうる。従って、液体経口製剤、例えば懸濁液、エリキシルおよび溶液の場合、適した担体および添加剤には、有利には、水、グリコール、油、アルコール、フレーバー剤、防腐剤、着色剤等が含まれ；固体経口製剤、例えば粉剤、カプセル、ゲルキャップおよび錠剤の場合、適した担体および添加剤には、デンプン、糖、希釈剤、粒状化剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等が含まれる。投与のしやすさから、錠剤およびカプセルが最も有利な経口投与単位形であり、それらの場合、固体の薬学的担体が用いられる。望ましいならば、錠剤を標準技術で糖コーティングしたり、または腸用コーティングしてもよい。非経口投与の場合、担体は、例えば、可溶性を助けるためにまたは防腐のために、他の成分を通して滅菌水を通常含む。
【００３１】
注射用懸濁液も製造することができ、その場合、適当な液体担体、懸濁化剤等を用いうる。ここにおける医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤、注射、茶匙１杯の量等のような投与単位当たり、上述したような有効な投与量を届けるのに必要な量の活性成分を含む。ここにおける医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤、注射、座薬、茶匙１杯の量等のような投与単位当たり、約０．０１〜約１０００ｍｇ（好ましくは約５〜約５００ｍｇ）の活性成分を含み、約０．１〜約３００ｍｇ／ｋｇ体重／日（好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量で与えてもよい。しかしながら、投与量は、患者の要件、治療すべき状態の重症度および使用化合物によって変化しうる。投与は毎日でもまたは周期後でもよい。一般に、投与量は、患者の特性、状態および望まれる治療効果に基づいて医者が調節する。
【００３２】
好ましくは、これらの組成物は、経口、非経口、鼻内、舌下もしくは直腸投与の場合、または吸入もしくは吹き付けによる投与の場合、錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、滅菌非経口溶液もしくは懸濁液、計量エーロゾルもしくは液体スプレー、ドロップ、アンプル、自己注射器デバイスまたは座薬のような単位投与形になっている。あるいは、組成物は、週に１回または月に１回の投与に適した形で提供してもよい。例えば、デカン酸塩のような活性化合物の不溶性塩を、筋肉内注射用のデポー製剤としてもよい。錠剤のような固体組成物を製造する場合、主活性成分を、理想的には、薬学的な担体、例えば、コーンスターチ、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、および水のような他の薬学的希釈剤と混合して、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の均質混合物を含有する固体予備配合組成物を形成する。これらの予備配合組成物が均質であるというとき、それは、活性成分が組成物中に理想的に均一分散されており、その結果、組成物を錠剤、ピルおよびカプセルのような等しく有効な投与形に容易に小分けしうることを意味する。この固体予備配合組成物はその後、約０．０１〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記タイプの単位投与形に小分けしうる。
【００３３】
新規組成物の錠剤またはピルは、被覆したりまたは別の方法で配合して、長期作用性の利点をもたらす投与形にしてもよい。例えば、錠剤またはピルは内部投与成分および外部投与成分からなり、後者が前者を包む形にしてもよい。２つの成分は、胃での崩壊に耐えるように作用し、そして内部成分が損なわれずにそのまま十二指腸へ通過することができたり、または放出を遅らせることができる腸内分解性層によって分けることができる。様々な物質がそのような腸内分解性層またはコーティングに用いることができる。そのような物質としては、セラック、セチルアルコールおよびセルロースアセテートのような物質と共に多くの高分子量酸が挙げられる。
【００３４】
本発明の新規組成物を経口または注射で投与するために有利に混合しうる液体形には、水溶液、適当に風味をつけたシロップ、水性もしくは油性懸濁液、および綿実油、ごま油、ココナッツ油もしくはピーナッツ油のような食用油で風味をつけたエマルジョン、並びにエリキシルおよび類似の薬学的賦形剤が含まれる。水性懸濁液に適した分散剤もしくは懸濁化剤には、合成および天然ガム、例えばトラガカント、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンが含まれる。
【００３５】
本発明の化合物の製造過程で立体異性体混合物が生じる場合、これらの異性体は調製用クロマトグラフィーのような一般的な技術によって分離しうる。化合物はラセミ形で製造しても、個々の光学的対掌体を光学対掌特異的合成または分割のいずれかによって製造してもよい。例えば、化合物は、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸および／または（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸のような光学的に活性な酸で塩を形成し、その後、分別結晶化および遊離塩基の再生によって、ジアステレオマー対を形成するような標準技術によって、それらの成分の光学的対掌体に分割しうる。化合物はまた、ジアステレオマーエステルまたはアミドを形成し、その後、クロマトグラフィー分離およびキラル助剤の除去を行なうことによって分割しうる。あるいは、化合物は、キラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。
【００３６】
本発明の化合物の製造工程中、関係分子の敏感なまたは反応性の基の保護は必要でありおよび／または望ましい。これは、一般的な保護基、例えば、「有機化学における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、編集  ジェー．エフ．ダブリュ．マコーミー（Ｊ． Ｆ． Ｗ． ＭｃＯｍｉｅ）、プレナム  プレス（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）、１９７３年；およびティー．ダブリュ．グリーン（Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ）およびピー．ジー．エム．ウッツ（Ｐ． Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ）、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、ジョン  ウィリー（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ）およびサンズ（Ｓｏｎｓ）、１９９１年（参照することによってここに記載されたものとする）に記載のような一般的な保護基によって行いうる。保護基は、本技術分野で公知の方法を用いて都合のよいその後の段階で除去しうる。
【００３７】
本発明に記載のジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶおよびＤＰ  ＩＶ様酵素によって調節される状態の治療法は、ここで定義される１種以上の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を用いて実施してもよい。医薬組成物は約０．０１〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５〜約５００または２５０ｍｇの化合物を含み、そして選択される投与方式に適したどのような形にしてもよい。担体には、必要なかつ不活性な薬学的賦形剤、例えば、これらに限定されないが、結合剤、懸濁化剤、潤滑剤、フレーバー剤、甘味剤、防腐剤、染料、およびコーティングが含まれる。経口投与に適した組成物には、固体形、例えば、ピル、錠剤、キャプレット、カプセル（それぞれ、即時放出、時間限定放出および持続放出製剤がある）、顆粒、および粉末、並びに液体形、例えば、溶液、シロップ、エリキシル、エマルジョン、および懸濁液が含まれる。非経口投与に有用な形には、滅菌溶液、エマルジョンおよび懸濁液が含まれる。
【００３８】
有利なことには、本発明の化合物は１日に１回の投与でも、あるいは１日の合計投与量を１日に２、３または４回に分けて投与してもよい。さらに、本発明の化合物は、適した鼻腔内賦形剤の局所使用、または本技術分野における当業者に周知の経皮パッチによって鼻腔内形で投与してもよい。経皮送達系の形で投与するには、もちろん、投与の間、断続的ではなく、連続的に投与し、そして投与濃度は望ましい治療効果が得られるように適宜調節する必要がある。
【００３９】
例えば、錠剤またはカプセルの形で経口投与する場合、活性薬剤成分は経口非毒性の薬学的に許容される不活性担体、例えば、エタノール、グリセロール、水等と組み合わせてもよい。さらに、望ましいまたは必要なとき、適した結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤を混合物に混入させてもよい。適した結合剤には、例えば、これらに限定されないが、デンプン、ゼラチン、天然の糖、例えばグルコースまたはベータラクトース、コーン甘味剤、天然および合成ガム、例えばアカシア、トラガカントまたはオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が含まれる。崩壊剤には、例えば、これらに限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が含まれる。
【００４０】
液体形には、適当な風味をつけた懸濁化剤または分散剤、例えばトラガカント、アカシア、メチルセルロース等のような合成および天然ガムが含まれる。非経口投与の場合、滅菌懸濁液および溶液が望ましい。静脈内投与が望ましいときには、適当な防腐剤を一般に含む等張性製剤が用いられる。
【００４１】
本発明の化合物はリポソーム送達系、例えば小さい単ラメラ小胞、大きい単ラメラ小胞、および多重ラメラ小胞の形で投与することもできる。リポソームは、本技術分野において十分に説明されている方法を用いて、様々なリン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。
【００４２】
本発明の化合物はまた、化合物分子を結合させる抗体、最も好ましくはモノクローナル抗体を個々の担体として用いることによって届けてもよい。本発明の化合物は、標的としうる薬剤担体としての可溶性ポリマーと結合させてもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンが含まれる。さらに、本発明の化合物は薬剤の放出の調整に有用なある種の生分解性ポリマー、例えば、ポリアクチック酸（ｐｏｌｙａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーに結合しうる。
【００４３】
本発明の化合物は、上記疾患の治療が必要なときはいつでも、本技術分野で確立された投与方式に従ってどのような上記組成物の形でも投与しうる。
【００４４】
生成物の１日投与量は成人で１日当たり０．０１〜１，０００ｍｇの広い範囲で変えうる。経口投与の場合、組成物は、治療を受ける患者への投与量を症状によって調節するために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０、５００および１０００ｍｇの活性成分を含有する錠剤の形で提供するのが好ましい。薬剤の有効な量は約０．１〜約３００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与レベルで通常供給される。約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲が好ましい。化合物は１日当たり１〜４回投与しうる。
【００４５】
最適投与量は、本技術分野に熟知した者であれば容易に決定でき、使用される個々の化合物、投与方式、製剤の濃度、投与方式による生物学的利用能、および病気状態の進行で変わる。さらに、治療される個々の患者に伴う要因、例えば患者の年令、体重、食事および投与時間を、投与量の調整の際に一般に考慮すべきである。
【００４６】
本発明の化合物または組成物は、食前、食事中または食後にとりうる。
食前にとるとき、本発明の化合物または組成物は食事の１時間前、好ましくは３０分前、またはさらに１５もしくは５分前にとりうる。
食事中にとるとき、本発明の化合物または組成物は食物に混ぜて、あるいは上記のような別個の投与形でとりうる。
食後にとるとき、本発明の化合物または組成物は食事を終えて５、１５または３０分後、またはさらに１時間後にとりうる。
【００４７】
本発明の実施例
実施例１
Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドの合成
一般的な手順
合成はいずれもＦｍｏｃ／ｔＢｕ法を用いるペプチド合成器ＳＰ  ６５０〔ラボルテック（Ｌａｂｏｒｔｅｃ）社〕で行った。保護アミノ酸はノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）社またはバケム（Ｂａｃｈｅｍ）社から購入した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）はメルク（Ｍｅｒｃｋ）社から購入し、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）はフルカ（Ｆｌｕｋａ）社から購入した。
【００４８】
Ｐｒｅ−を含むＦｍｏｃ−Ｙａａ−Ｗａｎｇ樹脂（２．８ｇ／置換レベル０．５７ｍｍｏｌ／ｇ）を２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を用いて脱保護した。ＤＭＦで洗浄した後、２当量（１．１ｇ）のＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨの溶液をＤＭＦ（１ｇの樹脂当たり溶媒１２ｍｌ）に溶解した。２当量（１．０４ｇ）の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロ硼酸塩（ＴＢＴＵ）および４当量（１．１１ｍｌ）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を加え、反応容器に入れた。混合物を室温で２０分間振とうした。次に、カップリングサイクルを繰り返した。その後、ＤＭＦ、ジクロロメタン、イソプロパノールおよびジエチルエーテルで洗浄した後、得られたＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｗａｎｇ樹脂を乾燥し、次に、６部に分け、その後、最後のアミノ酸誘導体をカップリングした。
【００４９】
Ｆｍｏｃ保護基は上記のように除いた。その後、ＤＭＦ中の、Ｂｏｃ−アミノ酸０．５４ｍｍｏｌ、ＴＢＴＵ０．５４ｍｍｏｌおよびＤＩＥＡ０．１０８ｍｍｏｌを２０分間振とうした。カップリングサイクルを繰り返した。最後に、ペプチド樹脂を上記のように洗浄し、乾燥した。
【００５０】
ペプチドは、次のスカベンジャーを含有するトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）混合物を用い、２．５時間で樹脂から切り取った：ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）＝９．５／０．２５／０．２５。
粗製ペプチドの収率は平均８０〜９０％であった。粗製ペプチドは、６ｍｌ／分で０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルの濃度を上げながら（４０分で５％から６５％へ）、０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏの線勾配を用いて、ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ１８カラム（７μｍ、２５０＊２１．２０ｍｍ、１００Ａ）上でＨＰＬＣにより精製した。
凍結乾燥によって純粋なペプチドが得られ、エレクトロスプレー質量分析およびＨＰＬＣ分析で同定した。
【００５１】
結果
表１：  化学合成後のＸａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドの同定
【表１】
2004530729.tif 000005
【００５２】
１［Ｍ＋Ｈ＋］は陽イオン化モードでのエレクトロスプレー質量分析によって測定した。
２ＲＰ−ＨＰＬＣ条件：
カラム：  ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ １８ （５μｍ）
１２５×４ｍｍ
検出（ＵＶ）：  ２１４ｎｍ
勾配系：  アセトニトリル（ＡＣＮ）／Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）
１５分で５％（ＡＣＮ）から５０％へ
流量：  １ｍｌ／分
ｋδ＝（ｔｒ−ｔ０）／ｔ０
ｔ０＝１．１６分
【００５３】
ｔ−ブチル−Ｇｌｙは次のように定義する：
【化４】
2004530729.tif 000006
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）およびＳｅｒ（Ｐ）はそれぞれベンジル−セリンおよびホスホリル−セリンと定義する。Ｔｙｒ（Ｐ）はホスホリル−チロシンと定義する。
【００５４】
実施例２
Ｘａａ−Ｐｒｏ−ＹａａトリペプチドのＩＣ５０およびＫｉ値の測定
方法
ＩＣ５０値の測定
１００μｌの阻害剤ストック溶液を１００μｌの緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．６）および５０μｌの基質（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ、最終濃度０．４ｍＭ）と混合し、３０℃で予備インキュベートした。反応は２０μｌの精製したブタのＤＰ  ＩＶを加えることによって開始させた。生成物ｐＮＡの形成は、ＨＴＳ７０００Ｐｌｕｓプレートリーダー〔パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社〕を用いて４０５ｎｍで１０分間測定し、勾配を計算した。最終阻害濃度は１ｍＭ〜３０ｎＭの間であった。ＩＣ５０値の計算には、グラフィット（ＧｒａＦｉｔ） ４．０．１３〔エリザカス  ソフトウェア（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）社〕を用いた。
【００５５】
Ｋｉ値の測定
Ｋｉ値の測定のために、ＤＰ  ＩＶ活性を、０．０５、０．１、０．２および０．４ｍＭの最終基質濃度およびさらにＩＣ５０濃度をカバーする７阻害剤濃度で、上記と同じ方法で測定した。計算はグラフィット ソフトウェアを用いて行った。
【００５６】
結果
表２：  Ｘａａ−Ｐｒｏ−ＹａａトリペプチドのＩＣ５０値
【表２】
2004530729.tif 000007
【００５７】
ｔ−ブチル−Ｇｌｙは次のように定義する：
【化５】
2004530729.tif 000008
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）およびＳｅｒ（Ｐ）はそれぞれベンジル−セリンおよびホスホリル−セリンと定義する。Ｔｙｒ（Ｐ）はホスホリル−チロシンと定義する。
【００５８】
表３：  Ｘａａ−Ｐｒｏ−ＹａａトリペプチドのＫｉ値
【表３】
2004530729.tif 000009
【００５９】
ｔ−ブチル−Ｇｌｙは次のように定義する：
【化６】
2004530729.tif 000010
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）およびＳｅｒ（Ｐ）はそれぞれベンジル−セリンおよびホスホリル−セリンと定義する。Ｔｙｒ（Ｐ）はホスホリル−チロシンと定義する。
【００６０】
実施例３
Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドの、ウイスターラットにおける血管内および経口投与後のＤＰＩＶの血漿活性における影響
研究計画
動物
体重３５０ｇ超のオスのウイスターラット（Ｎ＝１０）（Ｓｈｏｅ： Ｗｉｓｔ（Ｓｈｏ））はティルツヒト  シェーンヴァルデ（Ｔｉｅｒｚｕｃｈｔ Ｓｃｈｏｎｗａｌｄｅ）社（ドイツ、シェーンワルド）から購入した。
収容条件
動物は、１２／１２時間の明／暗サイクル（ＡＭ６：００に明るくする）の状態で温度調整（２２±２℃）した一般的な条件下で１つのケージに入れた。標準のペレット状の餌〔スニフ（ｓｓｎｉｆｆ、登録商標）、ゾースト（Ｓｏｅｓｔ）、ドイツ〕およびＨＣｌで酸性にした水道水は自由に摂取させた。
【００６１】
頚動脈および頚静脈へのカテーテル挿入
収容条件に適応させて１週後、カテーテルを一般的な麻酔（０．２５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ．  ロンプン（Ｒｏｍｐｕｎ、登録商標）［２％］、バイエル  バイタル（ＢａｙｅｒＶｉｔａｌ）社、ドイツおよび０．５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ．  ケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎ）１０、アタロスト（Ａｔａｒｏｓｔ）社、ドイツ、ツイストリンゲンのｉ．ｐ．注射）の下でウイスターラットの頚動脈に埋め込んだ。動物の回復を１週間待った。カテーテルをヘパリン−食塩水（１００ＩＵ／ｍｌ）で週３回洗い流した。
カテーテルが機能不良の場合、第２のカテーテルを各ラットの反対側の頚動脈に挿入した。手術から１週間回復させた後、この動物を研究に再び組み入れた。第２のカテーテルが機能不良の場合、動物は研究から除いた。新しい動物を補充し、実験は手順どおりに続け、カテーテル植え込み後、少なくとも５日で開始した。
【００６２】
実験計画
カテーテルの機能が損なわれていないラットに、試験物質をランダムな順序（各グループ  Ｎ＝３ウイスターラット）で、それぞれ血管内（動脈内）または経口投与した。正の対照として、１０ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ．イソロイシルチアゾリジン＊フマル酸塩を血管内投与した。
一晩絶食させた後、ヘパリン化動脈血試料１００μｌを−３０、−５、および０分で氷冷エッペンドルフ管（下記参照）に集めた。試験物質を１．０ｍｌ食塩水に新たに溶解し（０．１５４ｍｏｌ／ｌ）、０分で、供給管（１５ｇ、７５ｍｍ；ファイン・サイエンス・ツール社、ドイツ、ハイデルベルグ）による経口または血管内のいずれかで投与した。血管内ルートの場合、カテーテルを３０μｌの食塩水で直ちに洗い流し、追加の１ｍｌの食塩水を供給管により口から与えた。
動脈血試料はその後、５、１０（限られた数の実験のみにおいて）、２０、４０、６０および１２０分に、意識のある非拘束ラットの頚動脈カテーテルから採取し、血漿ＤＰ  ＩＶ活性によるトリペプチドのさらなる加水分解を妨げるために、１０μｌの１Ｍクエン酸塩緩衝液（ｐＨ３．０）で満たされた氷冷エッペンドルフ管〔エッペンドルフ−ネザラー−ヒンツ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ−Ｎｅｔｈｅｌｅｒ−Ｈｉｎｚ）社、ドイツ、ハンブルグ〕に常に入れた。エッペンドルフ管を直ちに遠心分離した〔２分間１２０００ｒｐｍ、ヘティヒ  ツェントリフューゲ（Ｈｅｔｔｉｃｈ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）ＥＢＡ １２、ドイツ、チューリンゲン〕：血漿フラクションは分析まで氷上で貯蔵するか、あるいは分析まで−２０℃でしっかり冷凍した。
【００６３】
分析法
血漿ＤＰＩＶ活性：  分析混合物は、８０μｌの試薬および２０μｌの血漿試料からなる。黄色生成物４−ニトロアニリン形成の動的測定は、３０℃で２分間予備インキュベートした後、３０℃で１分間３９０ｎｍで行った。活性は任意単位［ＡＵ］およびＤＰ  ＩＶ活性［ｍＵ／ｍｌ］で表した。
【００６４】
統計方法
血漿ＤＰ  ＩＶ活性の絶対値、血漿ＤＰ  ＩＶ活性の相対変化並びに最大阻害の時間および程度を計算した。データには曲線下の面積（ＡＵＣ）が含まれ、これを観察時間２時間の血漿ＤＰ  ＩＶ活性阻害程度の評価に用いた。ＡＵＣは台形法則を用いて計算した。反応性ＡＵＣのベースラインは、阻害剤投与開始０分での値である。ＤＰ  ＩＶ活性の異なる初期値の状態下でのパラメーターの相対変化を比較するために、一定の方式に従う標準化平均（値）を試験の初めに設定した（図および表参照）。
統計的評価はマイクロソフトエクセル（登録商標）９７で行った。全ての変数は平均および標準偏差（ＳＤ）として示した。治療グループはスチューデント式ｔ−検定、対のｔ−検定によるグループ内変化によって比較した。ｐ＜０．０５の両側検定値を有意と考えた。
【００６５】
結果
ＩＬＥ−ＰＲＯ−ＩＬＥの、ウイスターラットの血漿ＤＰ  ＩＶ活性における影響
Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅの投与量を１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． と増加させてウイスターラットに血管内ルートにより投与した（表１）。
Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅを血管内投与した後、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅによる投与量依存性血漿ＤＰ  ＩＶ阻害傾向がある。この阻害は１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の投与量でのみ有意であった（０分でのＤＰ  ＩＶ活性に対して）。Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＩｌｅによるＤＰ  ＩＶの阻害が急速に減少したことを示す図１を参照されたい。投与後２０分で、ジペプチジルぺプチダ−ゼＩＶ活性は初期レベルに戻った。
図２を参照すると、１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の投与量でのＤＰ  ＩＶ活性曲線の下の面積が有意に減少した（−１５９±４０ｍＵ＊分＊ｍｌ−１、ｐ＜０．０５）ことが分かる。
【００６６】
表４：  Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅを血管内投与した後のウイスターラットの血漿ＤＰ  ＩＶ活性
【表４】
2004530729.tif 000011
【００６７】
ＶＡＬ−ＰＲＯ−ＬＥＵの、ウイスターラットの血漿ＤＰ  ＩＶ活性における影響
血漿ＤＰ  ＩＶ活性の減少傾向は、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕの１０および３０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． 血管内投与後に見られた（図３）。１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の後、最低血漿活性は５分で２６．２±８．０ｍＵ／ｍｌであり（ＮＳ）、３０ｍｇ／ｋｇの後、最低血漿活性は２１．８±９．８ｍＵ／ｍｌであった（ＮＳ）。これはまた、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕの１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の後の−３４±６ｍＵ・分・ｍｌ−１、および３０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の後の−１０±１０ｍＵ・分・ｍｌ−１の、低いＤＰ  ＩＶ−ＡＵＣ０−２０分にも反映された（ＮＳ）。
図４を参照すると、血管内投与後、１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． は５分で血漿ＤＰ  ＩＶ活性を減少させ（１０．４±３．２ｍＵ／ｍｌ；ｐ＜０．０５、対０分）、従って、ＤＰ  ＩＶ−ＡＵＣ０−２０分は少し減少した（−５４±５４ｍＵ・分・ｍｌ−１；ＮＳ）。
血漿ＤＰ  ＩＶの阻害は投与後２０分で常に停止した。
【００６８】
表５：  Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕを血管内投与した後のウイスターラットの血漿ＤＰ  ＩＶ活性
【表５】
2004530729.tif 000012
【００６９】
化合物Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＩｌｅおよびＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕは、比較的高い投与量（１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．）での血管内投与後、ウイスターラットにおいて血漿ＤＰ  ＩＶ活性を阻害する。Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅでは、血管内投与後のＤＰ  ＩＶの阻害には投与量依存性があると思われる。
【００７０】
ｔ―ブチル―Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅの、ウイスターラットの血漿ＤＰ  ＩＶ活性における影響
１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． ｔ―ブチル―Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅを経口および血管内投与した。図５を参照すると、ｔ―ブチル―Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅは、経口投与したとき、４０分にわたって血漿ＤＰ  ＩＶをゆっくり減少させた。１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． の血管内投与では、５分で非常に急速に１０ｍＵ／ｍｌを下回るまで減少させた（ｐ＜０．０５）。その後、復帰（ｐ＜０．０５  ５分対４０分）が見られた。ＤＰ  ＩＶ−ＡＵＣ０−１２０分は、経口投与後（−３３６±１６２ｍＵ・分・ｍｌ−１；血管内に対してｐ＜０．０５）よりも、血管内投与後（６１７±２３４ｍＵ・分・ｍｌ−１）により大幅に減少した。
【００７１】
表６：  ウイスターラットにおけるｔ―ブチル―Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅの経口投与後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性
【表６】
2004530729.tif 000013
【００７２】
表７：  ウイスターラットにおけるｔ―ブチル―Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅの血管内投与後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性
【表７】
2004530729.tif 000014
【００７３】
表８は、選択されたＸａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドをウイスターラットへ経口および血管内投与した後のこれらのＤＰ  ＩＶおよびＤＰ  ＩＶ様酵素活性阻害潜在力試験結果である。
【００７４】
表８  結果  −  Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドをウイスターラットへ投与した後のｔｍａｘでのＤＰ  ＩＶ阻害
【表８】
2004530729.tif 000015
【００７５】
実施例４
Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドの、糖尿病ズッカーラットのグルコース忍容力における効果
研究計画
動物
平均年令１１週（５〜１２週）、平均体重３５０ｇ（１５０〜４００ｇ）のオスのズッカーラット（ｆａ／ｆａ）（Ｎ＝３０）はチャールズ・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）社（ドイツ、ズルツフェルト）から購入した。全ての脂肪過多のズッカーラットが明確な真性糖尿病の特徴を持つまで、１２週以上飼育した。
収容条件
動物は、１２／１２時間の明／暗サイクル（午前６：００に明るくする）の状態で温度調整（２２±２℃）した一般的な条件下で１つのケージに入れた。標準のペレット状の餌〔スニフ（登録商標）、ゾースト、ドイツ〕およびＨＣｌで酸性にした水道水は自由に摂取させた。
【００７６】
頚動脈へのカテーテル挿入
収容条件に適応させた年令１７〜２４週の脂肪過多のズッカーラットを試験のために準備した。カテーテルを一般的な麻酔（０．２５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ． ロンプン（登録商標）［２％］、バイエルバイタル社、ドイツおよび０．５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ． ケタミン１０、アタロスト社、ドイツ、ツイストリンゲンのｉ．ｐ．注射）の下でズッカーラットの頚動脈に埋め込んだ。動物の回復を１週間待った。カテーテルをヘパリン−食塩水（１００ＩＵ／ｍｌ）で週３回洗い流した。
カテーテルが機能不良の場合、第２のカテーテルを各ラットの反対側の頚動脈に挿入した。手術から１週間回復させた後、この動物を研究に再び組み入れた。第２のカテーテルが機能不良の場合、動物は研究から除いた。新しい動物を補充し、実験は手順どおりに続け、カテーテル植え込み後、少なくとも７日で開始した。
【００７７】
実験計画
カテーテルの機能が損なわれていない脂肪過多のズッカーラットに、偽薬（１ｍｌ食塩水、０．１５４ｍｏｌ／ｌ；対照としての動物Ｎ＝９）、正の対照としての一定投与量のイソロイシルチアゾリジン＊フマル酸塩（１ｍｌの食塩水に溶解した１０ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ． ；動物Ｎ＝６）または１ｍｌの食塩水に溶解した１００ｍｇ／ｋｇｂ．ｗ． 試験物質（各試験グループの動物Ｎ＝６）をランダムな順序で投与した。
一晩絶食させた後、脂肪過多のズッカーラットに、偽薬、正の対照および試験物質をそれぞれ供給管（１５Ｇ、７５ｍｍ；ファイン・サイエンス・ツール社、ドイツ、ハイデルベルグ）を経て−１０分に経口投与した。４０％溶液としての２ｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． グルコース〔ベー．ブラウン  メルズンゲン（Ｂ． Ｂｒａｕｎ Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ）、ドイツ、メルズンゲン〕での経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を±０分で行った。グルコースは第２の供給管を経て投与した。頚動脈カテーテルからの動脈血試料は、−３０分、−１５分、±０分でおよび５、１０、１５、２０、３０、４０、６０、９０および１２０分に、２０μｌガラス細管に集め、これらは溶血のための１ｍｌ溶液で満たされた標準管に入れた（血中グルコース測定）。
さらに、動脈血試料を−３０分、２０、４０、６０および１２０分に、意識のある非拘束脂肪過多ズッカーラットの頚動脈カテーテルから採取し、血漿ＤＰ活性測定のための１０μｌクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）で満たされた氷冷エッペンドルフ管（エッペンドルフ−ネザラー−ヒンツ社、ドイツ、ハンブルグ）に入れた。エッペンドルフ管を直ちに遠心分離した（２分間１２０００ｒｐｍ、ヘティヒ  ツェントリフューゲ ＥＢＡ １２、ドイツ、チューリンゲン）：血漿フラクションは分析まで氷上で貯蔵した。
【００７８】
分析法
血中グルコース：グルコースオキシダ−ゼ法を用いてグルコースレベルを測定した〔スーパーＧ  グルコース測定器（Ｓｕｐｅｒ Ｇ Ｇｌｕｋｏｓｅｍｅｓｓｇｅｒａｔ）；ドクター．ミューラー  ゲラテバウ（Ｄｒ． Ｍｕｌｌｅｒ Ｇｅｒａｔｅｂａｕ）、ドイツ、フライタル〕。
実施例４に従って生体内分析で試験したいくつかのトリペプチドは、ズッカ−ラットにおけるＯＧＴＴ中、経口投与した後、グルコース忍容力を有意に改善した（表９並びに図７および８参照）。
【００７９】
表９  結果  −  ズッカ−ラットにおいてＯＧＴＴ中、Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｙａａトリペプチドを投与した後のグルコース忍容力の改善
【表９】
2004530729.tif 000016
【００８０】
実施例５
ペプチド化合物と哺乳動物ペプチド輸送体との相互作用
プロリル特異的プロテアーゼの阻害剤と哺乳動物ペプチド輸送体との相互作用の分析には、２つの分析法を用いた。まず、全ての試験化合物について、形質転換イースト細胞での拮抗分析を行って、基質結合部位からの放射標識トレーサージペプチドの投与量依存性置換（ＥＣ５０値）を測定した。次に、良好な親和力を有すると認定された化合物について、哺乳動物ペプチド輸送体を発現するゼノプス（Ｘｅｎｏｐｕｓ）卵母細胞中の輸送電流を電気生理学的に分析した。機能的発現レベルは卵母細胞において異なるので、各試験化合物は、同じ卵母細胞において５ｍＭのジペプチドグリシル−Ｌ−グルタミン（Ｇｌｙ−Ｇｌｎ）によって引き出された電流と比較した。従って、試験化合物の電流は、Ｇｌｙ−Ｇｌｎによる電流に対して相対的に％ＩＧｌｙ−Ｇｌｎとして得られ、表１０に残留取り込みとして表した。
【００８１】
表１０  結果  −  ペプチド化合物と哺乳動物ペプチド輸送体との相互作用
【表１０】
2004530729.tif 000017
【００８２】
上記の詳述は本発明の原理を教示するものであるが、実施例は説明のために示したものであり、本発明の実施が本技術分野における当業者によって考えられる通常の変形、適応および／または変更の全てを包含することは無論のことである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、ウイスターラットにおいて１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅを血管内投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す。
【図２】
図２は、ウイスターラットにおいて１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ並びに正の対照としての１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． イソロイシルチアゾリンフマル酸塩を投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す（ＡＵＣ０−２０分）。
【図３】
図３は、ウイスターラットにおいて１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕを血管内投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す。
【図４】
図４は、ウイスターラットにおいて１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ並びに正の対照としての１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． イソロイシルチアゾリンフマル酸塩を投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す（ＡＵＣ０−２０分）。
【図５】
図５は、ウイスターラットにおいて１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅを経口および血管内投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す。
【図６】
図６は、ウイスターラットにおいて１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ並びに正の対照としての１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． イソロイシルチアゾリンフマル酸塩を経口および血管内投与した後の血漿ＤＰ  ＩＶ活性を示す（ＡＵＣ０−１２０分）。
【図７】
図７は、糖尿病ズッカーラットにおいて１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ並びに正の対照としての１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． イソロイシルチアゾリンフマル酸塩を経口投与した後の血漿グルコース濃度の経過を示す。
【図８】
図８は、糖尿病ズッカーラットにおいて１００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｔ−ブチル−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ並びに正の対照としての１０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ． イソロイシルチアゾリンフマル酸塩を経口投与した後の、ＯＧＴＴ中のグルコース忍容力およびＧ−ＡＵＣの改善を示す（Ｇ−ＡＵＣ０−６０分）。
【図１】
2004530729.tif 000019
【図２】
2004530729.tif 000020
【図３】
2004530729.tif 000021
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2004530729.tif 000025
【図８】
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【国際公開パンフレット】
2004530729.tif 000027
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004530729.tif 000081
【国際調査報告】
2004530729.tif 000082
2004530729.tif 000083
2004530729.tif 000084
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