(57)【要約】本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬であるヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体を提供する。その化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害薬であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。それは特に、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として、ＨＣＶ複製の阻害薬として、ないしはＣ型肝炎感染の治療に有用である。本発明はさらに、単独あるいはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性な他の薬剤との組み合わせで、そのようなヌクレオシド化合物を含む医薬組成物に関するものでもある。本発明のヌクレオシド化合物を用いたＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法も開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式Iの化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【化１】
2004520367.tif 000048
［式中、
Ｒ１は、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルまたはＣ１−４アルキルであり；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ２は、水素、フッ素、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルであり；あるいはＲ１およびＲ２がそれらが結合している炭素原子と一体となって、Ｏ、ＳおよびＮＣ０−４アルキルから選択されるヘテロ原子を有していても良い３〜６員の飽和単環式環系を形成しており；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１３Ｒ１４であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
Ｒ９は、水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１２Ｒ１２、ＣＳＮＲ１２Ｒ１２、ＣＯＯＲ１２、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）または（イミダゾール−２−イル）であり；その場合にアルキルは、未置換であるか独立にハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシおよびＣ１−３アルコキシから選択される１〜３個の基によって置換されており；
Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
各Ｒ１２は独立に、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１３およびＲ１４はそれぞれ独立に、ヒドロキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【化２】
2004520367.tif 000049
であり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであってＲ４が水素であるか、Ｒ４が−メチルであってＲ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない。］
【請求項２】
下記構造式ＩＩを有する請求項１に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【化３】
2004520367.tif 000050
［式中、
Ｒ１はＣ１−３アルキルであり；その場合にアルキルは、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されていても良く；
Ｒ２は、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノまたはＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ５は、水素、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰＯ３Ｈ２であり；
Ｒ８は、水素、アミノまたはＣ１−４アルキルアミノであり；
Ｒ９は、水素、シアノ、メチル、ハロゲンまたはＣＯＮＨ２であり；
Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノまたはＣ３−６シクロアルキルアミノであり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない。］
【請求項３】
Ｒ１が、メチル、フルオロメチル、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルまたはアミノメチルであり；
Ｒ２が、ヒドロキシ、フルオロまたはメトキシであり；
Ｒ３が、水素、フルオロ、ヒドロキシ、アミノまたはメトキシであり；
Ｒ５が、水素またはＰ３Ｏ９Ｈ４であり；
Ｒ８が、水素またはアミノであり；
Ｒ９が、水素、シアノ、メチル、ハロゲンまたはＣＯＮＨ２であり；
Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ独立に、水素、フルオロ、ヒドロキシまたはアミノであり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−メチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−ジメチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸、
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２，４−ジアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−２−フルオロ−２−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２，４−ジ−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび
４−アミノ−７−（３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ならびに相当する５′−三リン酸エステル
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物あるいは該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項５】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび
４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ならびに相当する５′−三リン酸エステル
からなる群から選択される請求項４に記載の化合物あるいは該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項６】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンである請求項５に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項７】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンである請求項５に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項８】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンである請求項５に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項９】
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンである請求項５に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項１０】
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンである請求項５に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１２】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害、ＲＮＡ依存性ＲＮＡ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼがＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼであり；前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製がＨＣＶ複製であり；前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＨＣＶ感染である請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法であって、そのような阻害を必要とする哺乳動物に対して、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する方法。
【請求項１５】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼがＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼであり；前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製がＨＣＶウィルス複製である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に対して、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する方法。
【請求項１７】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＨＣＶ感染である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
治療上有効量のＨＣＶに対して活性である別の薬剤との併用を行う、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記のＨＣＶに対して活性な薬剤が、単独あるいはリバビリンもしくはレボビリンと組み合わせたリバビリン；レボビリン；チモシンα−１；ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害薬；イノシンモノリン酸デヒドロゲナーゼの阻害薬；インターフェロン−αまたはＰＥＧインターフェロン−αである請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＣＶに対して活性な薬剤が、単独またはリバビリンと組み合わせたインターフェロン−αまたはＰＥＧインターフェロン−αである請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療での請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２３】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＣ型肝炎感染である請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害のための医薬製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２５】
哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療のための医薬製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２６】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染がＣ型肝炎感染である請求項２５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体、それらの合成、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ阻害薬としてのそれの使用に関する。本発明の化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害薬であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。それは、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として、ＨＣＶ複製の阻害薬として、ならびにＣ型肝炎感染の治療において特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）感染は、世界の人口の２〜１５％と推定される感染者のかなりの数において、肝硬変および肝細胞癌などの慢性肝臓疾患に至る主要な健康上の問題となっている。米国疾病管理センターによると、米国のみで感染者数は４５０万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界的には感染者は２億人であり、毎年少なくとも３〜４００万人が感染している。感染すると、感染者の約２０％がウィルスを排除するが、それ以外の感染者ではそれ以降の生涯にわたってＨＣＶが常在することになる。慢性感染者の１０〜２０％が、最終的に肝臓破壊性の肝硬変または癌を発症する。このウィルス疾患は、汚染された血液および血液製品、汚染された針によって非経口的に、あるいは性的に、および感染した母親またはキャリアの母親から子供へと垂直に伝染する。組換えインターフェロン−α単独またはヌクレオシド類縁体であるリバビリンと併用したものを用いた免疫療法に制限される現行のＨＣＶ感染治療は、臨床的効果が限定されたものである。さらに、ＨＣＶには確立されたワクチンがない。従って、慢性ＨＣＶ感染と効果的に戦う改良された治療薬が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染治療における最新技術について総説が出されており、各種刊行物が参照される（B. Dymock, et al., ″Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection″, Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 11: 79-96 (2000); H. Rosen, et al., ″Hepatitis C virus: current understanding and prospects for future therapies″, Molecular Medicine Today, 5: 393 399 (1999); D. Moradpour, et al., ″Current and evolving therapies for hepatitis C″, European J. Gastroenterol. Hepatol., 11: 1189-1202 (1999); R. Bartenschlager, ″Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy″, Intervirology, 40: 378-393 (1997); G. M. Lauer and B. D. Walker, ″Hepatitis C Virus Infection″, N. Engl. J. Med., 345: 41-52 (2001); B. W. Dymock, ″Emerging therapies for hepatitis C virus infection″, Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001); and C. Crabb, ″Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C″, Science: 506-507 (2001)；これらの内容はいずれも、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０００３】
ＨＣＶ療法に向けて各種アプローチが行われており、それにはウィルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼおよびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害、ならびにワクチンの開発などがある。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３０１０アミノ酸のポリ蛋白をコードする約９６００塩基の単一のオリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有するエンベロープ正鎖（positive-strand）ＲＮＡウィルスである。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産生物は、構造蛋白Ｃ、Ｅ１およびＥ２、ならびに非構造蛋白ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂ、そしてＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂからなる。非構造（ＮＳ）蛋白は、ウィルス複製の触媒機構を提供するものと考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ポリ蛋白鎖から、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出する。ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルにおける鋳型として作用する１本鎖ウィルスＲＮＡから二本鎖ＲＮＡを合成するのに必要である。従ってＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体において必須の構成要素であると考えられる［K. Ishi, et al., ″Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein: Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding″, Hepatology, 29: 1227-1235 (1999) and V. Lohmann, et al., ″Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of the Hepatitis C Virus″, Virology, 249: 108-118 (1998)参照］。ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、二本鎖ＨＣＶＲＮＡの形成を防止することから、ＨＣＶ特異的抗ウィルス療法開発に向けた注目すべきアプローチである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明のヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体がＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害薬であることが認められた。そのヌクレオシド化合物の５′−三リン酸誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬である。本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染を治療する上で有用である。
【０００６】
従って本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬として、特にはＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として有用なヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体を提供することにある。
【０００７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスの複製の阻害薬として、特にＣ型肝炎ウィルスの複製の阻害薬として有用なヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体を提供することにある。
【０００８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療において有用なヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体を提供することにある。
【０００９】
本発明の別の目的は、製薬上許容される担体とともに本発明のヌクレオシド化合物を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬として、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として使用される本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害薬として、特にＨＣＶ複製の阻害薬として使用される本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療において、特にＨＣＶ感染の治療において使用される本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対して、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組み合わせて、本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害方法、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法を提供することにある。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、特にＨＣＶ複製の阻害方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法、特にＨＣＶ感染の治療方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対して活性な他の薬剤との併用でＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染を治療する方法、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と併用してＨＣＶ感染を治療する方法を提供することにある。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療用、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染の治療用の医薬として用いられるヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体ならびにそれの医薬組成物を提供することにある。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染の治療用の医薬の製造における、本発明のヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体ならびにそれらの医薬組成物の使用を提供することにある。
【００２０】
上記および他の目的は、以下の詳細な説明から容易に明らかになろう。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、示された立体化学配置の下記構造式Iの化合物またはその化合物の製薬上許容される塩に関する。
【００２２】
【化１】
2004520367.tif 000002
式中、
Ｒ１は、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルまたはＣ１−４アルキルであり；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ２は、水素、フッ素、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルであり；あるいはＲ１およびＲ２がそれらが結合している炭素原子と一体となって、Ｏ、ＳおよびＮＣ０−４アルキルから選択されるヘテロ原子を有していても良い３〜６員の飽和単環式環系を形成しており；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１３Ｒ１４であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
Ｒ９は、水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１２Ｒ１２、ＣＳＮＲ１２Ｒ１２、ＣＯＯＲ１２、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）または（イミダゾール−２−イル）であり；その場合にアルキルは、未置換であるか独立にハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシおよびＣ１−３アルコキシから選択される１〜３個の基によって置換されており；
Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
各Ｒ１２は独立に、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１３およびＲ１４はそれぞれ独立に、ヒドロキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【００２３】
【化２】
2004520367.tif 000003
であり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであってＲ４が水素であるか、Ｒ４が−メチルであってＲ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない。
【００２４】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として有用である。それらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害薬でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用である。
【００２５】
前記化合物を単独で、またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対して、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組み合わせて含む医薬組成物、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法およびＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法も、本発明の範囲に含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本発明は、示された立体化学配置の下記構造式Iの化合物またはその化合物の製薬上許容される塩に関する。
【００２７】
【化３】
2004520367.tif 000004
式中、
Ｒ１は、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルまたはＣ１−４アルキルであり；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ２は、水素、フッ素、ヒドロキシ、メルカプト、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルであり；あるいはＲ１およびＲ２がそれらが結合している炭素原子と一体となって、Ｏ、ＳおよびＮＣ０−４アルキルから選択されるヘテロ原子を有していても良い３〜６員の飽和単環式環系を形成しており；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立に、水素、シアノ、アジド、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択され；その場合のアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰ（Ｏ）Ｒ１３Ｒ１４であり；
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立に、水素、メチル、ヒドロキシメチルまたはフルオロメチルであり；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
Ｒ９は、水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１２Ｒ１２、ＣＳＮＲ１２Ｒ１２、ＣＯＯＲ１２、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）または（イミダゾール−２−イル）であり；その場合にアルキルは、未置換であるか独立にハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシおよびＣ１−３アルコキシから選択される１〜３個の基によって置換されており；
Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノまたはＣ４−６シクロヘテロアルキルであり、それらは未置換であるか独立にハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシから選択される１〜２個の基で置換されており；
各Ｒ１２は独立に、水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１３およびＲ１４はそれぞれ独立に、ヒドロキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、ＮＨＣＨＭｅＣＯ２Ｍｅ、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、
【００２８】
【化４】
2004520367.tif 000005
であり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであってＲ４が水素であるか、Ｒ４が−メチルであってＲ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない。
【００２９】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬として有用である。それらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害薬でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。
【００３０】
構造式Ｉの化合物の１実施形態には、下記構造式ＩＩの化合物またはその化合物の製薬上許容される塩がある。
【００３１】
【化５】
2004520367.tif 000006
式中、
Ｒ１はＣ１−３アルキルであり；その場合にアルキルは、未置換であるかヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキルチオまたは１〜３個のフッ素原子によって置換されており；
Ｒ２は、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノまたはＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ５は、水素、Ｐ３Ｏ９Ｈ４、Ｐ２Ｏ６Ｈ３またはＰＯ３Ｈ２であり；
Ｒ８は、水素、アミノまたはＣ１−４アルキルアミノであり；
Ｒ９は、水素、シアノ、メチル、ハロゲンまたはＣＯＮＨ２であり；
Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノまたはＣ３−６シクロアルキルアミノであり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない。
【００３２】
構造式Ｉの化合物の第２の実施形態には、
Ｒ１が、メチル、フルオロメチル、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルまたはアミノメチルであり；
Ｒ２が、ヒドロキシ、フルオロまたはメトキシであり；
Ｒ３が、水素、フルオロ、ヒドロキシ、アミノまたはメトキシであり；
Ｒ５が、水素またはＰ３Ｏ９Ｈ４であり；
Ｒ８が、水素またはアミノであり；
Ｒ９が、水素、シアノ、メチル、ハロゲンまたはＣＯＮＨ２であり；
Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ独立に、水素、フルオロ、ヒドロキシまたはアミノであり；
ただし、Ｒ１がβ−メチルであり、Ｒ２およびＲ３がα−ヒドロキシであり、Ｒ１０がアミノであり、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１１が水素である場合、Ｒ９はシアノでもＣＯＮＨ２でもない式ＩＩの化合物がある。
【００３３】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬として有用である構造式Ｉの本発明の化合物の例には、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−メチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−ジメチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸、
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２，４−ジアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−２−フルオロ−２−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２，４−ジ−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび
４−アミノ−７−（３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
ならびに相当する５′−三リン酸エステル；
あるいはこれら化合物の製薬上許容される塩などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本発明の化合物のさらに別の例には、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび
４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ならびに相当する５′−三リン酸エステル
からなる群から選択される化合物；
あるいはそれら化合物の製薬上許容される塩がある。
【００３５】
本発明の１実施形態において、本発明のヌクレオシド化合物は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害薬として、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害薬として、ないしは正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療に有用である。この実施形態のある群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスは、フラビウィルスまたはピコルナウイルスである。この群の１小群では、前記ピコルナウイルスは、ライノウィルス、ポリオウィルスまたはＡ型肝炎ウィルスである。この群の第２の小群では、前記フラビウィルスは、Ｃ型肝炎ウィルス、黄熱病ウィルス、デング熱ウィルス、西ナイルウィルス、日本脳炎ウィルス、バンジウィルスおよびウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルスはＣ型肝炎ウィルスである。
【００３６】
本発明の別の態様は、処置を必要とする哺乳動物でのＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法であって、治療上有効量の構造式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法に関するものである。
【００３７】
本発明のこの態様の１実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼは、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼである。この実施形態の１群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼは、フラビウィルスポリメラーゼまたはピコルナウイルスポリメラーゼである。この群の１小群では、前記ピコルナウィルスポリメラーゼは、ライノウィルスポリメラーゼ、ポリオウィルスポリメラーゼまたはＡ型肝炎ウィルスポリメラーゼである。この群の第２の小群では、前記フラビウィルスポリメラーゼは、Ｃ型肝炎ウィルスポリメラーゼ、黄熱病ウィルスポリメラーゼ、デング熱ウィルスポリメラーゼ、西ナイルウィルスポリメラーゼ、日本脳炎ウィルスポリメラーゼ、バンジウィルスポリメラーゼおよびウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウィルスポリメラーゼである。
【００３８】
本発明のこの態様の第２の実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製である。この実施形態の１群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製は、フラビウィルス複製またはピコルナウィルス複製である。この群の１小群では、前記ピコルナウィルス複製は、ライノウィルス複製、ポリオウィルス複製またはＡ型肝炎ウィルス複製である。この群の第２の小群では、前記フラビウィルス複製は、Ｃ型肝炎ウィルス複製、黄熱病ウィルス複製、デング熱ウィルス複製、西ナイルウィルス複製、日本脳炎ウィルス複製、バンジウィルス複製およびウシウィルス性下痢ウィルス複製からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルス複製は、Ｃ型肝炎ウィルス複製である。
【００３９】
本発明のこの態様の第３の実施形態では、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染は、正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ウィルス感染である。この実施形態の１群では、前記正センス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染は、フラビウィルス感染またはピコルナウィルス感染である。この群の１小群では、前記ピコルナウィルス感染は、ライノウィルス感染、ポリオウィルス感染またはＡ型肝炎ウィルス感染である。この群の第２の小群では、前記フラビウィルス感染は、Ｃ型肝炎ウィルス感染、黄熱病ウィルス感染、デング熱ウィルス感染、西ナイルウィルス感染、日本脳炎ウィルス感染、バンジウィルス感染およびウシウィルス性下痢ウィルス感染からなる群から選択される。この小群の１小群では、前記フラビウィルス感染はＣ型肝炎ウィルス感染である。
【００４０】
本願を通じて、以下の用語は下記に示した意味を有する。
【００４１】
上記で記載のアルキル基は、直鎖または分岐形状を有する指定長さのアルキル基を含むものである。そのようなアルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどがある。
【００４２】
「アルケニル」という用語は、合計炭素数２〜６個またはその範囲内のいずれかの数字である直鎖または分岐のアルケンを意味するものとする（例：エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルなど）。
【００４３】
「アルキニル」という用語は、合計炭素数２〜６個またはその範囲内のいずれかの数字である直鎖または分岐のアルキンを意味するものとする（例：エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルなど）。
【００４４】
「シクロアルキル」という用語は、合計炭素数３〜８個またはその範囲内のいずれかの数字であるアルカンの環状部分を意味するものとする（すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル）。
【００４５】
「シクロヘテロアルキル」という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される１個または２個のヘテロ原子を有する非芳香族複素環を含むものである。４〜６員シクロヘテロアルキルの例には、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チアモルホリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピペラジニルなどがある。
【００４６】
「アルコキシ」という用語は、指定数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシなど］の直鎖または分岐のアルコキシドを指す。
【００４７】
「アルキルチオ」という用語は、指定数（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオなど］の直鎖または分岐のアルキルスルフィドを指す。
【００４８】
「アルキルアミノ」という用語は、指定数（例：Ｃ１−４アルキルアミノ）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノなど］の直鎖または分岐のアルキルアミンを指す。
【００４９】
「アルキルスルホニル」という用語は、指定数（例：Ｃ１−６アルキルスルホニル）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニルなど］の直鎖または分岐のアルキルスルホンを指す。
【００５０】
「アルキルオキシカルボニル」という用語は、指定数（例：Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル）またはその範囲内のいずれかの数の炭素原子［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニルまたはブチルオキシカルボニル］の本発明のカルボン酸誘導体の直鎖または分岐のエステルを指す。
【００５１】
「アリール」という用語は、フェニル、ナフチルおよびピリジルの両方を含む。アリール基は、独立にＣ１−４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−４アルキルチオから選択される１〜３個の基で置換されていても良い。
【００５２】
「ハロゲン」という用語は、ハロゲン原子であるフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含むものである。
【００５３】
「置換（された）」という用語は、指定された置換基による複数置換を含むものとする。複数の置換基部分が開示または特許請求されている場合、置換化合物は独立に、１以上の開示または特許請求された置換基部分によって１個または複数個置換されていることができる。
【００５４】
「５′−三リン酸エステル」という用語は、下記一般構造式ＩＩＩを有する本発明のヌクレオシド化合物の５′−水酸基の三リン酸エステル誘導体を指す。
【００５５】
【化６】
2004520367.tif 000007
式中、Ｒ１〜Ｒ１１は上記で定義の通りである。本発明の化合物は、その三リン酸エステルの製薬上許容される塩ならびにそれぞれ下記構造式IＶおよびＶの５′−モノリン酸エステルおよび５′−二リン酸エステルの製薬上許容される塩をも含むものとする。
【００５６】
【化７】
2004520367.tif 000008
【００５７】
「５′−（Ｓ−アシル−２−チオエチル）リン酸エステル」または「ＳＡＴＥ」という用語は、それぞれ構造式ＶIおよびＶIIの本発明の５′−モノリン酸ヌクレオシド誘導体のモノエステルもしくはジエステル誘導体、ならびに製薬上許容されるモノエステルの塩を指す。
【００５８】
【化８】
2004520367.tif 000009
【００５９】
「医薬組成物」での場合のような「組成物」という用語は、有効成分および担体を構成する不活性成分を含むもの、ならびに２以上の成分の組み合わせ、複合体化もしくは凝集、または１以上の成分の溶解、または１以上の成分の他の種類の反応もしくは相互作用によって直接または間接に得られるものを包含するものとする。従って本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と製薬上許容される担体とを混合することで得られるあらゆる組成物を包含する。
【００６０】
化合物の「投与」という用語は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを、必要とする個体に提供することを意味するものと理解すべきである。
【００６１】
本発明の別の態様は、ＨＣＶ感染の治療に有用な１以上の薬剤と併用した本発明の化合物によって、ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害する方法、ＨＣＶ複製を阻害する方法、あるいはＨＣＶ感染を治療する方法に関する。そのようなＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン（levovirin）、ビラミジン（viramidine）、チモシンα−１、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ）から入手可能なロフェロン（Roferon）インターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ａ（Pegasys（商標名））、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Schering Corp., Kenilworth, NJ）から入手可能なイントロン（Intron）−Ａインターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ｂ（PegIntron（商標名））、組換えコンセンサスインターフェロン（インターフェロン・アルファコン（alphacon）−１など）および精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。アムゲン社（Amgen）の組換えコンセンサスインターフェロンは、インフェルゲン（Infergen；登録商標）の商品名を有する。レボビリンはリバビリンのＬ−エナンチオマーであり、リバビリンと同様の免疫調節活性が示されている。ビラミジンは、ＷＯ  ０１／６０３７９（ICN Pharmaceuticalsに譲渡）に開示のリバビリンの類縁体を代表するものである。本発明のこの方法によれば、組み合わせの個々の成分は、分割または単一の組み合わせの形態で、治療の過程における異なる時点で別個に、または同時に投与することができる。従って本発明は、そのような全ての同時または交互の投与法を包含するものと理解すべきであり、「投与」という用語はそれに準じて解釈すべきである。本発明の化合物とＨＣＶ感染の治療に有用な他の薬剤との組み合わせの範囲には基本的に、ＨＣＶ感染治療用のあらゆる医薬組成物とのあらゆる組み合わせが含まれることは明らかであろう。本発明の化合物またはそれの製薬上許容される塩をＨＣＶに対して活性な第２の治療剤と併用する場合、各化合物の用量は、その化合物を単独で使用する場合と同じであるか、異なっていることができる。
【００６２】
ＨＣＶ感染の治療においては、本発明の化合物は、ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害薬である薬剤と併用して投与することもできる。ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウィルス酵素であり、ＨＣＶ複製阻害の良好な標的であることが報告されている。ＨＣＶＮＳ３プロテアーゼ阻害薬の基質性および非基質性の両方の阻害薬が、ＷＯ  ９８／２２４９６、ＷＯ  ９８／４６６３０、ＷＯ  ９９／０７７３３、ＷＯ  ９９／０７７３４、ＷＯ  ９９／３８８８８、ＷＯ  ９９／５０２３０、ＷＯ  ９９／６４４４２、ＷＯ  ００／０９５４３、ＷＯ  ００／５９９２９およびＧＢ２３３７２６２に開示されている。ＨＣＶ複製阻害薬の開発およびＨＣＶ感染治療の標的としてのＨＣＶＮＳ３プロテアーゼについては、ディモックの報告に記載されている（B. W. Dymock, ″Emerging therapies for hepatitis C virus infection″, Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001)）。
【００６３】
リバビリン、レボビリンおよびビラミジンは、細胞内酵素であるイノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介して、グアニンヌクレオチドの細胞内蓄積を調節することで、抗ＨＣＶ効果を発揮することができる。ＩＭＰＤＨは、デ・ノボのグアニンヌクレオチド生合成における生合成経路に対する速度抑制酵素である。リバビリンは細胞内で容易にリン酸エステル化され、モノリン酸エステル誘導体がＩＭＰＤＨの阻害薬である。そこでＩＭＰＤＨの阻害は、ＨＣＶ複製阻害薬を発見する上での別の有用な標的を代表するものである。従って本発明の化合物は、ＷＯ  ９７／４１２１１およびＷＯ  ０１／００６２２（Vertexに譲渡）に開示のＶＸ−４９７などのＩＭＰＤＨの阻害薬；ＷＯ  ００／２５７８０（Bristol-Myers Squibbに譲渡）に開示のものなどの別のＩＭＰＤＨ阻害薬；またはミコフェノレート・モフェチル（mofetil）［A. C. Allison and E. M. Eugui, Agents Action, 44 (Suppl.) : 165 (1993)参照］と併用して投与することもできる。
【００６４】
ＨＣＶ感染治療の場合、本発明の化合物は抗ウィルス剤であるアマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この薬剤についての詳細な説明については、J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs. 12: 1-36 (1983)参照］との併用で投与することもできる。
【００６５】
「製薬上許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤が、製剤の他の成分と適合性でなければならず、それの被投与者に対して有害であってはならないことを意味する。
【００６６】
製薬上許容される担体とともに、本発明のヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物も、本発明の範囲に含まれる。本発明の別の例には、上記のいずれかの化合物と製薬上許容される担体とを組み合わせることで製造される医薬組成物がある。本発明の別の例には、上記のいずれかの化合物および製薬上許容される担体とを組み合わせる段階を有する医薬組成物の製造方法がある。
【００６７】
本発明の範囲には、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害に有用な医薬組成物であって、有効量の本発明の化合物および製薬上許容される担体を含む組成物も含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物も本発明に含まれ、さらにはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法およびＲＮＡ依存性ウィルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も含まれる。さらに本発明は、治療上有効量のＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス、特にＨＣＶに対して活性である別の薬剤と組み合わせて、治療上有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物に関するものでもある。ＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害薬、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ならびにＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ）から入手可能なロフェロン（Roferon）インターフェロンなど）、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Schering Corp., Kenilworth, NJ）から入手可能なイントロン（Intron）−Ａインターフェロンなど）、コンセンサスインターフェロンおよび精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。リバビリンおよびそれのＨＣＶに対する活性についての議論は、サンダースらの報告（J. O. Saunders and S. A. Raybuck, ″Inosine Monophosphate Dehydrogenase: Consideration of Structure, Kinetics, and Therapeutic Potential″, Ann. Rep. Med. Chem., 35: 201-210 (2000)）を参照する。
【００６８】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬製造における、ヌクレオシド化合物およびそれの誘導体ならびにそれの医薬組成物の使用を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬としての、ヌクレオシド化合物およびそれの誘導体ならびにそれの医薬組成物を提供する。
【００６９】
本発明の医薬組成物は、有効成分としての構造式Ｉの化合物またはそれの製薬上許容される塩を含有し、製薬上許容される担体および適宜に他の治療成分を含むこともできる。
【００７０】
その組成物には、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉および静脈）、眼球（眼科）、肺（経鼻もしくは口腔吸入）または経鼻投与に好適な組成物などがある。ただし、ある場合における最も好適な経路は、治療対象となる状態の性質および重度、ならびに有効成分の性質によって決まる。その組成物は簡便には、単位製剤で提供することができ、製薬業界で公知の方法によって製造することができる。
【００７１】
実際の使用において構造式Ｉの化合物は、従来の医薬配合法に従って、医薬担体と十分に混和して有効成分として組み合わせることができる。担体は、経口または非経口（静脈投与を含む）などの投与に望まれる剤型に応じて、非常に多様な形態を取り得る。経口製剤用組成物の製造においては、通常の医薬媒体を用いることができ、それには例えば、懸濁液、エリキシル剤および液剤のような経口液体製剤の場合には、水、グリコール類、オイル類、アルコール類、香味剤、保存剤、着色剤などがあり；あるいは例えば粉剤、硬および軟カプセルおよび錠剤などの経口固体製剤の場合には、デンプン類、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体があり、液体製剤より固体製剤の方が好ましい。
【００７２】
投与が容易であることから、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位製剤を代表するものであり、その場合には固体の医薬担体を用いることは明らかである。所望に応じて、錠剤を標準的な水系もしくは非水系法によってコーティングすることができる。そのような組成物および製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含むものでなければならない。当然のことながら、その組成物注の活性化合物のパーセントは変動し得るものであり、簡便にはその単位の重量の約２％〜約６０％とすることができる。そのような治療上有用な組成物における活性化合物の量は、有効な用量が得られる程度のものである。活性化合物はまた、例えば液体滴剤または噴霧剤として経鼻投与することもできる。
【００７３】
錠剤、丸薬、カプセルなどは、トラガカントガム、アカシア、コーンスターチもしくはゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ショ糖、乳糖もしくはサッカリンなどの甘味剤も含むことができる。単位製剤がカプセルである場合にそれは、上記の種類の材料以外に、脂肪油などの液体担体を含むことができる。
【００７４】
各種の他の材料が、コーティング剤として、あるいは単位製剤の物理形状を変えるために存在していても良い。例えば錠剤は、シェラック、糖またはその両方によってコーティングすることができる。シロップまたはエリキシル剤は、有効成分以外に、甘味剤としてのショ糖、保存剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素およびチェリーもしくはオレンジ香味などの香味剤を含むことができる。
【００７５】
構造式Ｉの化合物は、非経口投与することもできる。これら活性化合物の液剤または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合して水で調製することができる。グリセリン、液体ポリエチレングリコール類およびオイル中でのそれの混合物で、分散液を調製することもできる。通常の保管および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含有する。
【００７６】
注射に好適な医薬剤型には、無菌の水溶液または分散液ならびに無菌注射溶液もしくは分散液の即時調製用の無菌粉剤などがある。いずれの場合も、その製剤は無菌でなければならず、容易に注射できる程度の流動性を有するものでなければならない。それは、製造および保管条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して防腐しなければならない。担体は、例えば水、エタノール、多価アルコール（例：グリセリン、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物ならびに植物油を含む溶媒または分散媒体であることができる。
【００７７】
哺乳動物、特にヒトに対して、有効な用量の本発明の化合物を提供するため、いずれかの好適な投与経路を用いることができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼球、肺、経鼻投与などを用いることができる。製剤には、錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、液剤、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどがある。好ましくは式Ｉの化合物は、経口投与する。
【００７８】
ヒトへの経口投与の場合に用量範囲は、分割投与で０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇである。１実施形態において用量範囲は、分割投与で０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では用量範囲は、分割投与で０．５〜２０ｍｇ／ｋｇである。経口投与の場合、組成物は好ましくは、有効成分１．０〜１０００ｍｇ、特には治療対象患者への用量を症状に応じて調節するために、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００および１０００ｍｇ含む錠剤またはカプセルの形態で提供される。
【００７９】
使用される有効成分の有効用量は、用いられる特定の化合物、投与形態、治療される状態ならびに治療される状態の重度に応じて変動し得る。そのような用量は、当業者であれば容易に確認することができる。その投与法を調節して、至適な治療応答を得ることができる。
【００８０】
本発明の化合物は１以上の不斉中心を有することから、ラセミ体およびラセミ混合物、単独のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして得られる場合がある。本発明は、下記の構造式で示したような５員フラノース環についてＤ−立体化学配置を有するヌクレオシド化合物、すなわち、５員フラノース環のＣ−１およびＣ−４での置換基がβ−立体化学配置（太字線によって示した「上」向き）を有するヌクレオシド化合物を包含するものである。
【００８１】
【化９】
2004520367.tif 000010
【００８２】
本明細書に記載の化合物の一部はオレフィン二重結合を有するものであり、別段の断りがない限り、ＥおよびＺの両方の幾何異性体を含むものである。
【００８３】
本明細書に記載の化合物の一部は、ケト−エノール互変異体などの互変異体として存在する場合がある。個々の互変異体ならびにそれらの混合物は、構造式Ｉの化合物に包含される。本発明の化合物に包含されるケト−エノール互変異体の例には、以下のものなどがある。
【００８４】
【化１０】
2004520367.tif 000011
【００８５】
構造式Ｉの化合物は、例えばメタノールもしくは酢酸エチルまたはそれらの混合物のような好適な溶媒からの分別結晶によって、あるいは光学活性固定相を用いるキラルクロマトグラフィーによって、個々のジアステレオマーに分離することができる。
【００８６】
別法として、構造式Ｉの化合物の立体異性体は、光学的に純粋な原料または配置が既知の試薬を用いる立体特異的合成によって得ることができる。
【００８７】
構造式Ｉの本発明の化合物のフラノース環のＣ−２位およびＣ−３位にある置換基の立体化学は、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が互いに独立に、α（置換基「下向き」）またはβ（置換基「上向き」）のいずれかの配置を取り得ることを意味する波線によって示してある。フラノース環のＣ−１およびＣ−４で立体化学が太字線で示してあるのは、その置換基がβ−配置（置換基「上向き」）を有することを意味している。
【００８８】
【化１１】
2004520367.tif 000012
【００８９】
本発明の化合物は、製薬上許容される塩の形で投与することができる。「製薬上許容される塩」という用語は、無機もしくは有機塩基および無機もしくは有機酸などの製薬上許容される無毒性の塩基または酸から製造される塩を指す。「製薬上許容される塩」に包含される塩基性化合物の塩は、一般に遊離塩基を好適な有機もしくは無機酸と反応させることで製造される本発明の化合物の無毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩（estolate）、エシル酸塩（esylate）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロマイド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボネート（embonate））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート（teoclate）、トシル酸塩、トリエチオジドおよび吉草酸塩などがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、それの好適な製薬上許容される塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛の塩などの無機塩基から誘導される塩などがあるが、これらに限定されるものではない。特に好ましいものは、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂の塩などがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどの塩がある。
【００９０】
さらに、本発明の化合物にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）基またはアルコール基が存在する場合、メチル、エチルもしくはピバロイルオキシメチルなどのカルボン酸誘導体の製薬上許容されるエステル、あるいは酢酸エステルもしくはマレイン酸エステルなどのアルコールのアシル誘導体を用いることができる。徐放製剤またはプロドラッグ製剤として使用するために、溶解度もしくは加水分解特性を変える上で当業界で公知のエステルおよびアシル基などがある。
【００９１】
本発明のヌクレオシド化合物および誘導体の製造
本発明のヌクレオシド化合物および誘導体は、ヌクレオシドおよびヌクレオチドの化学の実施において確立された合成法に従って製造することができる。本発明の化合物の製造において用いられる合成方法についての説明に関しては、タウンゼントの編著（″Chemistry of Nucleosides and Nucleotides″, L. B. Townsend, ed., Vols. 1-3, Plenum Press, 1988；参照によってその全内容が本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【００９２】
本発明の化合物の代表的な一般的製造方法を、下記の図式１に示してある。この図式には、フラノース環がβ−Ｄ−リボ配置を有する構造式１−７の本発明の化合物の合成を示してある。原料は、構造式１−１のメチルフラノシドなどの３，５−ビス−Ｏ−保護アルキルフラノシドである。次に、Ｃ−２水酸基を三酸化クロムまたはクロム酸塩試薬、デス−マーチンペルヨージナンなどの好適な酸化剤で、あるいはスウェルン酸化によって酸化することで、構造式１−２のＣ−２ケトンを得る。テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどの好適な有機溶媒中、１−２のカルボニル二重結合にアルキル、アルケニルもしくはアルキニルマグネシウムハライド（例えば、ＭｅＭｇＢｒ、ＥｔＭｇＢｒ、ビニルＭｇＢｒ、アリルＭｇＢｒおよびエチニルＭｇＢｒ）などのグリニャル試薬あるいはアルキル、アルケニルもしくはアルキニルリチウム（ＭｅＬｉなど）を付加させることで、構造式１−３のＣ−２三級アルコールを得る。次に、好適な有機溶媒中のハロゲン化水素、例えば酢酸中の臭化水素で式１−３のフラノシドを処理することで、フラノース糖誘導体のＣ−１（アノマー性）位に良好な脱離基（Ｃｌ、ＢｒおよびＩなど）を導入して、中間体のフラノシルハライド１−４を得る。メタンスルホネート（ＭｅＳＯ２Ｏ−）、トリフルオロメタンスルホネート（ＣＦ３ＳＯ２Ｏ−）またはｐ−トルエンスルホネート（−ＯＴｓ）などのＣ−１スルホネートも、後段階でグリコシド（ヌクレオシド）連結を形成する反応において有用な脱離基として機能し得る。ヌクレオシド連結は、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１−メチル−２−ピロリジノンもしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの好適な脱水有機溶媒中にて水素化アルカリ（水素化ナトリウムなど）、水酸化アルカリ（水酸化カリウムなど）、炭酸アルカリ（炭酸カリウムなど）もしくはアルカリヘキサメチルジシラジド（ＮａＨＭＤＳなど）で処理することでin situで発生させることができる適切に置換された１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン１−５、例えば適切に置換された４−ハロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンの金属塩（リチウム塩、ナトリウム塩またはカリウム塩）で、構造式１−４の中間体を処理することで形成される。この置換反応は、２相系（固−液または液−液）でＴＤＡ−１もしくは塩化トリエチルベンジルアンモニウムなどの相間移動触媒を用いることで触媒することができる。次に、構造式１−６の保護ヌクレオシドにおける適宜の保護基を、グリーンらの著作（T. W. Greene and P. G. M. Wuts, ″Protective Groups in Organic Synthesis″, 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999）に記載のものなどの、確立された脱保護法に従って開裂させる。アルコール性アンモニアまたは液体アンモニアなどの適切なアミンによって４−ハロ中間体１−６を処理することで、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン核の４位にアミノ基を適宜導入することにより、Ｃ−４位に１級アミン（−ＮＨ２）を形成し、アルキルアミンで処理した場合は２級アミン（−ＮＨＲ）を形成し、あるいはジアルキルアミンで処理した場合には３級アミン（−ＮＲＲ′）を形成する。水酸化ナトリウム水溶液などの水系塩基で１−６を加水分解することで、７Ｈ−ピロロ［２���３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）オン化合物を誘導することができる。１−６のアルコール分解（メタノール分解など）によってＣ−４アルコキシド（−ＯＲ）が得られ、一方でアルキルメルカプチドで処理することでＣ−４アルキルチオ（−ＳＲ）誘導体が得られる。有機化学／医薬化学の当業者には公知のその後の化学的処理を行って、本発明の所望の化合物を得る必要がある場合がある。
【００９３】
【化１２】
2004520367.tif 000013
2004520367.tif 000014
【００９４】
以下の実施例では、最終化合物あるいは本発明の最終化合物の製造で用いられる中間体の製造に関する詳細が記載された刊行物を引用している。下記の実施例に詳細に記載された手順に従って、本発明のヌクレオシド化合物を製造した。これらの実施例は、いかなる形でも本発明の範囲を限定するものではなく、そのように解釈すべきではない。ヌクレオシドおよびヌクレオチド合成の当業者には、下記の製造手順の条件および工程において公知の変更を行って、上記および他の本発明の化合物を製造可能であることは明らかであろう。別段の断りがない限り、温度は全て℃単位である。
【００９５】
（実施例１）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【００９６】
【化１３】
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【００９７】
三酸化クロム（１．５７ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（ＤＣＭ）（１０ｍＬ）溶液に０℃で、無水酢酸（１４５ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）と次にピリジン（２４５ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１５分間撹拌し、７−［３，５−Ｏ−［１，１，３，３−テトラキス（１−メチルエチル）−１，３−ジシロキサンジイル］−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン［製造に関しては、J. Am. Chem. Soc. 105: 4059 (1983)参照］（５０８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液を加えた。得られた溶液を２時間撹拌し、酢酸エチル（１０ｍＬ）に投入し、次に溶離液として酢酸エチルを用いてシリカゲルで濾過した。合わせた濾液を減圧下に溶媒留去し、ジエチルエーテル／ＴＨＦ（１：１）（２０ｍＬ）に取り、冷却して−７８℃とし、メチルマグネシウムブロマイド（３Ｍ、ＴＨＦ溶液）（３．３０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で１０分間撹拌し、室温（ｒｔ）とし、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加えることで反応停止し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相を減圧下に溶媒留去し、粗生成物を溶離液として５％メタノール／塩化メチレンを用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去した。得られた油状物をＴＨＦ（５ｍＬ）に取り、シリカに含浸させたフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）（１．１ｍｍｏｌ／ｇシリカ）（１５６ｍｇ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、濾過し、減圧下に溶媒留去した。粗生成物を、溶離液として１０％メタノール／塩化メチレンを用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の化合物（４９ｍｇ）を無色固体として得た。
【００９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０８（ｓ、３Ｈ）、３．６７（ｍ、２Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｍ、１Ｈ）、５．１９（ｍ、１Ｈ）、５．２３（ｍ、１Ｈ）、５．４８（ｍ、１Ｈ）、６．０８（１Ｈ、ｓ）、６．５０（ｍ、１Ｈ）、６．９３（ｂｓ、２Ｈ）、７．３３（ｍ、１Ｈ）、８．０２（ｓ、１Ｈ）。
【００９９】
（実施例２）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１００】
【化１４】
2004520367.tif 000016
【０１０１】
段階Ａ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
２−Ｏ−アセチル−３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース［製造については、Helv. Chim. Acta 78: 486 (1995)参照］（５２．４ｇ、０．１０ｍｏｌ）のメタノール性Ｋ２ＣＯ３（５００ｍＬ、室温で飽和）中混合物を、室温で４５分間撹拌し、減圧下に濃縮した。油状残留物をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に懸濁させ、水（３００ｍＬ＋２００ｍＬで２回）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して標題化合物（４９．０ｇ）を無色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに下記の段階Ｂで用いた。
【０１０２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．２８（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．５３（ｄ、２Ｈ、Ｊ５，４＝４．５Ｈｚ、Ｈ−５ａ、Ｈ−５ｂ）、３．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ３，４＝３．６Ｈｚ、Ｊ３，２＝６．６Ｈｚ、Ｈ−３）、３．９９（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ２，１＝４．５Ｈｚ、Ｊ２，ＯＨ−２＝９．６Ｈｚ、Ｈ−２）、４．０７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４）、４．５０（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．５２，４．６０（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１３．６Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．５４（ｄ、１Ｈ、ＯＨ−２）、４．７５（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１）、７．３２〜７．４５，７．５２〜７．５７（２ｍ、１０Ｈ、２Ｐｈ）。
【０１０３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５５．４０、６９．０５、６９．７４、７１．２９、７２．０２、７８．４１、８１．４５、１０３．４４、１２７．８３、１２７．９５、１２９．０５、１２９．２８、１３１．２７、１３１．３０、１３３．２２、１３３．２６、１３３．５５、１３３．６７、１３５．４５、１３５．９２。
【０１０４】
段階Ｂ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−エリスロ−ペントフラノス−２−ウロース
デス−マーチンペルヨージナン（５０．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）の脱水ＣＨ２Ｃｌ２（３５０ｍＬ）懸濁液をアルゴン（Ａｒ）下に氷冷しながら、それに段階Ａからの化合物（３６．２ｇ、７５ｍｍｏｌ）の脱水ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）溶液を０．５時間かけて滴下した。反応混合物を０℃で０．５時間撹拌し、次に室温で３日間撹拌した。混合物を脱水Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１８０ｇ）の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１４００ｍＬ）混合物を氷冷したものに投入した。分液を行い、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）、水（８００ｍＬ）およびブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去して標題化合物（３４．２ｇ）を無色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに下記の段階Ｃで用いた。
【０１０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ３．５０（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．７９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ５ａ，５ｂ＝１１．３Ｈｚ、Ｊ５ａ，４＝３．５Ｈｚ、Ｈ−５ａ）、３．９４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ５ｂ，４＝２．３Ｈｚ、Ｈ−５ｂ）、４．２０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ３，１＝１．３Ｈｚ、Ｊ３、４＝８．４Ｈｚ、Ｈ−３）、４．３７（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｈ−４）、４．５８，４．６９（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１３．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．８７（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１）、４．７８，５．０３（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１２．５Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、７．１９〜７．２６，７．３１〜７．４２（２ｍ、１０Ｈ、２Ｐｈ）。
【０１０６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５５．７２、６９．４１、６９．８１、６９．９８、７７．４９、７８．００、９８．５４、１２７．９９、１２８．０６、１２９．３３、１２９．３８、１３１．３６、１３１．７２、１３３．６１、１３３．６３、１３３．８５、１３３．９７、１３４．７２、１３５．３２、２０８．２１。
【０１０７】
段階Ｃ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−メチル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
ＭｅＭｇＢｒの脱水Ｅｔ２Ｏ（０．４８Ｍ、３００ｍＬ）溶液に−５５℃で、段階Ｂからの化合物（１７．４０ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）の脱水Ｅｔ２Ｏ（１２５ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を昇温させて−３０℃とし、−３０℃〜−１５℃で７時間撹拌し、氷冷水（５００ｍＬ）に投入し、混合物を室温で０．５時間高撹拌した。混合物をセライト層（１０×５ｃｍ）で濾過し、それをＥｔ２Ｏで十分に洗浄した。有機層を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物をヘキサン（約３０ｍＬ）に溶かし、シリカゲルカラム（１０×７ｃｍ、ヘキサンで充填したもの）に乗せ、ヘキサンおよびヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９／１）で溶離して、標題化合物（１６．７ｇ）を無色シロップとして得た。
【０１０８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．３６（ｄ、３Ｈ、ＪＭｅ，ＯＨ＝０．９Ｈｚ、２Ｃ−Ｍｅ）、３．３３（ｑ、１Ｈ、ＯＨ）、３．４１（ｄ、１Ｈ、Ｊ３，４＝３．３Ｈｚ）、３．４６（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．６６（ｄ、２Ｈ、Ｊ５，４＝３．７Ｈｚ、Ｈ−５ａ、Ｈ−５ｂ）、４．１８（見かけのｑ、１Ｈ、Ｈ−４）、４．５２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１）、４．６０（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．６３，４．８１（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１３．２Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、７．１９〜７．２６，７．３４〜７．４３（２ｍ、１０Ｈ、２Ｐｈ）。
【０１０９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２４．８８、５５．４５、６９．９５、７０．２４、７０．８８、７７．０６、８２．１８、８３．０１、１０７．６３、１２７．３２、１２９．３６、１３０．０１、１３０．３２、１３３．６８、１３３．７８、１３４．１３、１３４．１８、１３４．４５、１３４．５８。
【０１１０】
段階Ｄ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの化合物（９．４２ｇ、１９ｍｍｏｌ）の脱水塩化メチレン（２８５ｍＬ）溶液に０℃で、ＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液２０ｍＬ、１１４ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を０℃で１時間撹拌し、次に室温で３時間撹拌し、減圧下に溶媒留去し、脱水トルエンとともに共留去した（４０ｍＬで３回）。油状残留物を脱水アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶かし、４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのナトリウム塩のアセトニトリル溶液［４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン［製造については、J. Chem. Soc.: 131 (1960)参照］（８．７６ｇ、５７ｍｍｏｌ）の脱水アセトニトリル（１０００ｍＬ）溶液およびＮａＨ（６０％鉱油中分散品２．２８ｇ、５７ｍｍｏｌ）から、室温で４時間高撹拌した後にin situで発生］に加えた。合わせた混合物を室温で２４時間撹拌し、溶媒留去して乾固させた。残留物を水（２５０ｍＬ）に懸濁させ、ＥｔＯＡｃで抽出した（５００ｍＬで２回）。合わせた抽出液をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：３および１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラム（１０ｃｍ×１０ｃｍ）で精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物（５．０５ｇ）を無色泡状物として得た。
【０１１１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．９３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．０９（ｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．７８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ５′，５″＝１０．９Ｈｚ、Ｊ５′，４＝２．５Ｈｚ、Ｈ−５′）、３．９９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ５″，４＝２．２Ｈｚ、Ｈ−５″）、４．２３〜４．３４（ｍ、２Ｈ、Ｈ−３′，Ｈ−４′）、４．６３，４．７０（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１２．７Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．７１，４．８０（２ｄ、２Ｈ、Ｊｇｅｍ＝１２．１Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、６．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．８Ｈｚ、Ｈ−５）、７．２３〜７．４４（ｍ、１０Ｈ、２Ｐｈ）。
【０１１２】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２１．３１、６９．１０、７０．４１、７０．７７、７９．５６、８０．４１、８１．０５、９１．１１、１００．５７、１１８．２１、１２７．０４、１２７．４６、１２７．５７、１２９．７３、１２９．７７、１３０．５７、１３０．９９、１３３．５１、１３３．９９、１３４．３３、１３４．３８、１３４．７４、１３５．２１、１５１．０７、１５１．１５、１５２．４７。
【０１１３】
段階Ｅ：４−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｄからの化合物（５．４２ｇ、８．８ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１７５ｍＬ）溶液に−７８℃で、三塩化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液８８ｍＬ、８８ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で２．５時間、次に−３０℃〜−２０℃で３時間撹拌した。メタノール／塩化メチレン（１：１）（９０ｍＬ）を加えることで反応停止し、得られた混合物を−１５℃で３０分間撹拌し、０℃でアンモニア水によって中和し、室温で１５分撹拌した。固体を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、２５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を溶媒留去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２およびＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９９：１、９８：２、９５：５および９０：１０）勾配を溶離液として用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の化合物（１．７３ｇ）を無色泡状物として得た。それはＭｅＣＮで処理したところ、非晶質固体となった。
【０１１４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．６１〜３．７１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７９〜３．８８（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５″）、３．８９〜４．０１（ｍ、２Ｈ、Ｈ−３′、Ｈ−４′）、５．１５〜５．２３（ｍ、３Ｈ、２′−ＯＨ、３′−ＯＨ、５′−ＯＨ）、６．２４（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．７２（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．８Ｈｚ、Ｈ−５）、８．１３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．６５（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０１１５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２０．２０、５９．９５、７２．２９、７９．３７、８３．１６、９１．５３、１００．１７、１１７．６３、１２８．８６、１５１．１３、１５１．１９、１５１．４５。
【０１１６】
段階Ｆ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｅからの化合物（１．５４ｇ、５．１ｍｍｏｌ）に、メタノール性アンモニア（０℃で飽和；１５０ｍＬ）を加えた。混合物を、ステンレス製オートクレーブ中８５℃で１４時間加熱し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を無色泡状物（０．８ｇ）として得た。それをＭｅＣＮ処理後に非晶質固体として分離した。得られた非晶質固体をメタノール／アセトニトリルから再結晶した。融点：２２２℃。
【０１１７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．６２（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．５７〜３．６７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７５〜３．９７（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、５．００（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、５．０４（ｄ、１Ｈ、Ｊ３′ＯＨ，３′＝６．８Ｈｚ、３′−ＯＨ）、５．０６（ｔ、１Ｈ、Ｊ５′ＯＨ，５′，５″＝５．１Ｈｚ、５′−ＯＨ）、６．１１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．６Ｈｚ、Ｈ−５）、６．９７（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、７．４４（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．０２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０１１８】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２０．２６、６０．４２、７２．７２、７９．３０、８２．７５、９１．２０、１００．１３、１０３．０８、１２１．９６、１５０．３７、１５２．３３、１５８．１５。
【０１１９】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２７９．１０（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１２Ｈ１６Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２７９．１１。
【０１２０】
（実施例３）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１２１】
【化１５】
2004520367.tif 000017
【０１２２】
段階Ａ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−エチル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
−７８℃のジエチルエーテル（３００ｍＬ）に、ＥｔＭｇＢｒ（３．０Ｍ、１６．６ｍＬ）を徐々に加え、実施例２段階Ｂからの化合物（４．８０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の脱水Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、昇温させて−１５℃とし、さらに２時間撹拌し、水（３００ｍＬ）およびＥｔ２Ｏ（６００ｍＬ）の撹拌混合物に投入した。有機相を分液し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物（３．８７ｇ）を無色油状物として得た。
【０１２３】
段階Ｂ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（１．０２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（４０ｍＬ）溶液に、ＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液）（１．７５ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、減圧下に溶媒留去し、トルエン（１０ｍＬ）から２回共留去した。油状残留物をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３０７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（３３７ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）およびトリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミン（１３０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中混合物を高撹拌したものに加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌し、飽和塩化アンモニウム（１００ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）の撹拌混合物に投入した。有機層を分液し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に溶媒留去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルで精製して、所望の生成物（３０７ｍｇ）を無色泡状物として得た。
【０１２４】
段階Ｃ：４−クロロ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（３０７ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（８ｍＬ）溶液に、三塩化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液）（４．５０ｍＬ、４．５０ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次に−１０℃で３時間撹拌した。メタノール／塩化メチレン（１：１）（１０ｍＬ）を加えることで反応停止し、−１５℃で３０分間撹拌し、水酸化アンモニウム水溶液を加えることで中和した。混合物を減圧下に溶媒留去し、得られた油状物を、溶離液としてメタノール／塩化メチレン（１：９）を用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物（１１２ｍｇ）を無色泡状物として得た。
【０１２５】
段階Ｄ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの化合物（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に、飽和アンモニアのメタノール溶液（４ｍＬ）を加えた。密閉容器中、混合物を７５℃で７２時間撹拌し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてメタノール／塩化メチレン（１：９）を用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色粉末として得た（２９ｍｇ）。
【０１２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．５２（ｔ、３Ｈ）、１．０２（ｍ、２Ｈ）、４．０１〜３．２４（ｍ、６Ｈ）、５．０６（ｍ、１Ｈ）、６．０１（ｓ、１Ｈ）、６．５１（ｄ、１Ｈ）、６．９５（ｓｂｒ、２Ｈ）、６．７０（ｄ、１Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）。
【０１２７】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２９５．２（Ｍ＋Ｈ＋）；Ｃ１３Ｈ１８Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２９５．１４。
【０１２８】
（実施例４）
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
【０１２９】
【化１６】
2004520367.tif 000018
【０１３０】
段階Ａ：２−アミノ−４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２段階Ｃからの生成物（１．２７ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）溶液を氷冷し、それにＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液；３ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、減圧下に濃縮し、トルエンと共留去した（１５ｍＬで２回）。得られた油状物をアセトニトリル（ＭｅＣＮ）（１５ｍＬ）に溶解させ、２−アミノ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン［製造については、Heterocycles 35: 825 (1993)参照］（４３３ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）、ＫＯＨ（８５％、粉砕）（０．５１ｇ、７．７ｍｍｏｌ）、トリス−［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミン（１６５μＬ、０．５１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中混合物を十分に撹拌したものに滴下した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過し、溶媒留去した。残留物を、溶離液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ５／１、３／１および２／１を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を無色泡状物（０．６５ｇ）として得た。
【０１３１】
段階Ｂ：２−アミノ−４−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−３−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの生成物（６３０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に−７８℃で、三フッ化ホウ素（１Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２溶液）（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃で２時間撹拌し、次に−２０℃で２．５時間撹拌した。反応をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１）（１０ｍＬ）で停止し、−２０℃で０．５時間撹拌し、０℃でアンモニア水によって中和した。固体を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１）で洗浄し、合わせた濾液を減圧下に溶媒留去した。残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、５０／１および２０／１を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を無色泡状物として得た（２５０ｍｇ）。
【０１３２】
段階Ｃ：２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
段階Ｂからの生成物（９０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＮａＯＨ溶液（２Ｎ、９ｍＬ）中混合物を、還流温度で５時間加熱し、２Ｎ  ＨＣｌ水溶液で０℃にて中和し、溶媒留去して乾固させた。溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ５／１を用いるシリカゲルカラムでの精製によって、標題化合物を白色固体として得た（７０ｍｇ）。
【０１３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ０．８６（ｓ、３Ｈ）、３．７９（m１Ｈ）、３．９０〜４．０５（ｍ、３Ｈ）、６．０６（ｓ、１Ｈ）、６．４２（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｄ、７＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０１３４】
（実施例５）
２−アミノ−４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１３５】
【化１７】
2004520367.tif 000019
【０１３６】
２−アミノ−４−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（実施例４、段階Ｂ）（２１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のシクロプロピルアミン（０．５ｍＬ）溶液を７０℃で２日間加熱し、溶媒留去して油状残留物を得て、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ２０／１を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を白色固体として得た（１７ｍｇ）。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤ３ＣＮ）：δ０．６１（ｍ、２Ｈ）、０．８１（ｍ、２Ｈ）、０．８５（ｓ、３Ｈ）、２．８３（ｍ、１Ｈ）、３．７４〜３．８６（ｍ、１Ｈ）、３．９３〜４．０３（ｍ、２Ｈ）、４．１１（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２（ｓ、１Ｈ）、６．４９（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０１３８】
（実施例６）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル
【０１３９】
【化１８】
2004520367.tif 000020
この化合物は、ムライの報告（Y. Murai et al., Heterocycles 33: 391-404 (1992)）に記載の手順に従って製造した。
【０１４０】
（実施例７）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボキサミド
【０１４１】
【化１９】
2004520367.tif 000021
この化合物は、ムライの報告（Y. Murai et al., Heterocycles 33: 391-404 (1992)）に記載の手順に従って製造した。
【０１４２】
（実施例８）
ＳＡＴＥプロドラッグ部分を得る一般的方法
Ｓ−アシル−２−チオエチル（ＳＡＴＥ）プロヌクレオチドについては、ワグナーらの著作を参照する（C. R. Wagner, V. V. Iyer, and E. J. McIntee, ″Pronucleotides : Toward the In Vivo Delivery of Antiviral and Anticancer Nucleotides″, Med. Res. Rev., 20: 1-35 (2000)：参照によって全体が本明細書に組み込まれる）。ヌクレオシドのＳＡＴＥ誘導体も、米国特許第５７７０７２５号；同５８４９９０５号；および同６０２０４８２号（これらの各内容は、参照によって全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【０１４３】
ビス（Ｓ−アセチル−２−チオエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト
２−メルカプトエタノール（５ｇ、６４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、トリエチルアミン（７．６７ｍＬ、５７．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を氷浴で冷却して０℃とした。無水酢酸（４．５４ｍＬ、４８ｍｍｏｌ）を１０分間で滴下し、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物を、２時間かけて昇温させて室温とした。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、水（７５ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ３水溶液（７５ｍＬ）およびブライン（７５ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して油状物を得た。油状物を脱水ＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶かし、脱水トリエチルアミン（７．７６ｍＬ）を加えた。その混合物に、活性化モレキュラーシーブス（４Å）を加え、１０分間室温に維持した。反応混合物を氷浴で冷却して０℃とし、ジイソプロピルホスホルアミダス・ジクロリド（６．４７ｇ、３２．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を不活性雰囲気下にて０℃で２時間撹拌した。ヘキサン（４０ｍＬ）を反応混合物に加え、生成した沈殿を濾過した。濾液を濃縮して容量を１／４とし、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに乗せ、３％トリエチルアミンを含有し酢酸エチルの量を徐々に増加させた（０％から７％）ヘキサンで溶離することで精製して、標題化合物を油状物として得た（２．３６ｇ）。
【０１４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．１７（ｓ、６Ｈ）、１．２１（ｓ、６Ｈ）、２．３６（ｓ、６Ｈ）、３．１４（ｔ、Ｊ＝６．４４Ｈｚ）、３．５１〜３．８４（ｍ、６Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２４．４７、２４．６１、３０．４８、４２．８５、４３．１、６１．８８、６２．２３、１９５．２６；１３Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：δ１４６．９６。
【０１４５】
（実施例９）
５′−三リン酸エステル誘導体
本発明のヌクレオシド５′−三リン酸エステルを、文献（Chem. Rev. 100: 2047 (2000)）に記載の一般的手順に従って製造した。
【０１４６】
（実施例１０）
５′−三リン酸エステル誘導体の精製および純度分析
三リン酸エステル誘導体を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８の緩衝系で３０×１００ｍｍモノＱ（Mono Q）カラム（Pharmacia）を用いるアニオン交換（ＡＸ）クロマトグラフィーを用いて精製した。溶離勾配は代表的には、流量６．５ｍＬ／分で、２倍カラム容量にて４０ｍＭ  ＮａＣｌから０．８Ｍ  ＮａＣｌとした。アニオン交換クロマトグラフィーからの適切な分画を回収し、流量１０ｍＬ／分でのルナ（Luna）Ｃ１８  ２５０×２１ｍｍカラム（フェノメネックス（Phenomenex））を用いる逆相（ＲＰ）クロマトグラフィーによって脱塩を行った。溶離勾配は、一定濃度の５ｍＭ  酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＡ）にて、１４分間で１％から９５％メタノールとした。
【０１４７】
精製した三リン酸エステルの質量分析スペクトラムを、ヒューレット−パッカード（Hewlett-Packard (Palo Alto, CA)）ＭＳＤ１１００でのオンラインＨＰＣＬ質量分析を用いて得た。フェノメネックスのルナ（Ｃ１８（２））、１５０×２ｍｍと３０×２ｍｍの保護カラム、粒径３μｍを、ＲＰ  ＨＰＬＣに用いた。アセトニトリル／２０ｍＭ  ＴＥＡＡ（酢酸トリエチルアンモニウム）ｐＨ７の０％から５０％直線勾配（１５分間）を、インイオン化モードでの質量スペクトル検出を用いて連続して行った。窒素ガスおよび空気式ネブライザーを用いて、電気スプレーを発生させた。質量範囲１５０〜９００をサンプリングした。ＨＰケムステーション（HP Chemstation）分析ソフトを用いて、分子量を求めた。
【０１４８】
精製三リン酸エステルの純度を、分析用ＲＰおよびＡＸ  ＨＰＬＣによって求めた。フェノモネックス（Phenomonex）のルナもしくはジュピター（Jupiter）カラム（２５０×４．６ｍｍ）、５μｍ粒径を用いるＲＰ  ＨＰＬＣは通常は、１５分間で１００ｍＭ  ＴＥＡＡ（ｐＨ７）中２％から７０％アセトニトリルの勾配を用いて行った。ＡＸ  ＨＰＬＣは、１．６×５ｍｍモノＱカラム（Pharmacia）で行った。三リン酸エステルを、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）の一定濃度とする０Ｍから０．４Ｍ  ＮａＣｌの勾配で溶離した。三リン酸エステルの純度は＞８０％であった。
【０１４９】
（実施例１１）
５′−モノリン酸エステル誘導体
本発明のヌクレオシド５′−モノリン酸エステルを、文献（Tetrahedron Lett. 50: 5065 (1967)）に記載の一般手順に従って製造した。
【０１５０】
（実施例１２）
５′−三リン酸エステル誘導体の質量スペクトル特性決定
本発明の化合物の５′−三リン酸エステルの質量分析スペクトラムを、実施例１９に記載の方法に従って得た。以下の表に、実施例９の手順に従って製造した代表的な５′−三リン酸エステルの計算質量および実験質量を示してある。実施例番号は、５′−三リン酸エステルの親化合物に相当する。
【０１５１】
【表１】
2004520367.tif 000022
【０１５２】
（実施例１３）
［４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ジ−ピリミジン］−５′−モノリン酸エステル
【０１５３】
【化２０】
2004520367.tif 000023
【０１５４】
実施例２段階Ｆからの化合物（１４ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）（ピリジンとの共留去およびトルエンとの数回の共留去によって脱水）に、リン酸トリメチル（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を、密閉容器中で終夜撹拌した。次に、それを冷却して０℃とし、オキシ塩化リン（０．００７０ｍＬ、０．０７５ｍｍｏｌ）を注射器で加えた。混合物を０℃で３時間撹拌し、重炭酸テトラエチルアンモニウム（ＴＥＡＢ）（１Ｍ）（０．５ｍＬ）および水（５ｍＬ）を加えることで反応停止した。実施例１０に記載の手順に従って、反応混合物を精製および分析した。
【０１５５】
電子スプレー質量分析スペクトラム（ＥＳ−ＭＳ）：実測値：３５９．２（Ｍ−Ｈ＋）、Ｃ１２Ｈ１７Ｎ４Ｏ７Ｐ−Ｈ＋の計算値：３５９．１。
【０１５６】
（実施例１４）
［４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン］−５′−二リン酸エステル
【０１５７】
【化２１】
2004520367.tif 000024
【０１５８】
実施例２段階Ｆからの化合物（５６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）（ピリジンとの共留去とトルエンとの数回の共留去によって脱水）に、リン酸トリメチル（モレキュラーシーブスを入れて保存）（１．０ｍＬ）を加えた。混合物を密閉容器で終夜撹拌した。それを冷却して０℃とし、オキシ塩化リン（０．０２３ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を注射器を用いて加えた。混合物を０℃で２時間撹拌し、次にトリブチルアミン（０．２３８ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）およびリン酸トリブチルアンモニウム（ピリジン中のリン酸およびトリブチルアミンから、ピリジンおよびアセトニトリルと共沸蒸留を繰り返すことで得たもの）（アセトニトリル（３．３０ｍＬ）中１．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃でさらに３０分間撹拌し、密閉バイアルを開け、ＴＥＡＢ（１Ｍ）（１．０ｍＬ）および水（５ｍＬ）を加えることで反応停止した。実施例１０に記載の手順に従って、反応混合物を精製および分析した。
【０１５９】
ＥＳ−ＭＳ：実測値：４３９．０（Ｍ−Ｈ＋）、Ｃ１２Ｈ１８Ｎ４Ｏ１０Ｐ２−Ｈ＋の計算値：４３９．０４。
【０１６０】
（実施例１５）
［４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン］−５′−三リン酸エステル
【０１６１】
【化２２】
2004520367.tif 000025
【０１６２】
実施例２段階Ｆからの化合物（２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）（ピリジンとの共留去とトルエンとの数回の共留去によって脱水）に、リン酸トリメチル（モレキュラーシーブスを入れて保存）（０．４ｍＬ）を加えた。混合物を密閉容器で終夜撹拌した。それを冷却して０℃とし、オキシ塩化リン（０．００７０ｍＬ、０．０７５ｍｍｏｌ）を注射器を用いて加えた。混合物を０℃で３時間撹拌し、次にトリブチルアミン（０．０８３ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ）、ピロリン酸トリブチルアンモニウム（１２７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（モレキュラーシーブスを入れて保存）（０．２５ｍＬ）を加えた。混合物を０℃でさらに３０分間撹拌し、密閉バイアルを開け、ＴＥＡＢ（１Ｍ）（０．５ｍＬ）および水（５ｍＬ）を加えることで反応停止した。実施例１０に記載の手順に従って、反応混合物を精製および分析した。
【０１６３】
ＥＳ−ＭＳ：実測値：５１９．０（Ｍ−Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１０Ｎ４Ｏ１３Ｐ３−Ｈ＋の計算値：５１９．０１。
【０１６４】
（実施例１６）
７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
【０１６５】
【化２３】
2004520367.tif 000026
【０１６６】
実施例２段階Ｅからの化合物（５９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）に、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ）を加えた。混合物を１時間加熱還流し、冷却し、ＨＣｌ水溶液（２Ｍ）で中和し、減圧下に溶媒留去した。残留物を、溶離液として塩化メチレン／メタノール（４：１）を用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色油状物として得た（５３ｍｇ）。
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ０．７０（ｓ、３Ｈ）、３．３４〜４．１５（重複ｍ、７Ｈ）、６．１６（ｓ、１Ｈ）、６．５７（ｄ、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．８３（ｓ、１Ｈ）。
【０１６８】
（実施例１７）
４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１６９】
【化２４】
2004520367.tif 000027
【０１７０】
実施例２段階Ｆからの化合物（１４０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍＬ）溶液を予め冷却したもの（０℃）に、Ｎ−クロロコハク酸イミド（０．０７５ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を滴下した。溶液を室温で１時間撹拌し、メタノール（４ｍＬ）を加えることで反応停止し、減圧下に溶媒留去した。粗生成物を、溶離液としてメタノール／塩化メチレン（１：９）を用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色固体として得た（５５ｍｇ）。
【０１７１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ０．８０（ｓ、３Ｈ）、３．６５〜４．１４（重複ｍ、７Ｈ）、５．９７（ｓｂｒ、２Ｈ）、６．１７（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｓ、１Ｈ）；
ＥＳ−ＭＳ：実測値：３１５．０（Ｍ＋Ｈ＋）、Ｃ１２Ｈ１５ＣｌＮ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：３１５．０９。
【０１７２】
（実施例１８）
４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１７３】
【化２５】
2004520367.tif 000028
【０１７４】
実施例２段階Ｆからの化合物（２８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）中溶液を冷却したもの（０℃）に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（０．０１８ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を滴下した。溶液を０℃で２０分間撹拌し、次に室温で１０分間撹拌した。メタノール（４ｍＬ）を加えることで反応停止し、減圧下に溶媒留去した。粗生成物を、溶離液としてメタノール／塩化メチレン（１：９）を用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色固体として得た（１３．０ｍｇ）。
【０１７５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ０．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４６〜４．００（重複ｍ、７Ｈ）、５．８３（ｓｂｒ、２Ｈ）、６．０６（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｓ、１Ｈ）、８．０５（ｓ、１Ｈ）；
ＥＳ−ＭＳ：実測値：３５９．１（Ｍ＋Ｈ＋）、Ｃ１２Ｈ１５ＢｒＮ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：３５９．０４。
【０１７６】
（実施例１９）
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１７７】
【化２６】
2004520367.tif 000029
【０１７８】
２−アミノ−４−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（実施例４、段階Ｂ）（２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．０ｍＬ）、ピリジン（０．１ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（６ｍｇ）との混合物をＨ２（大気圧）下にて、室温で終夜撹拌した。混合物をセライト層で濾過し、その層をＥｔＯＨで十分に洗浄した。合わせた濾液を溶媒留去し、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ２０／１および１０／１を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を白色固体（１６ｍｇ）として得た。
【０１７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ０．８６（ｓ、３Ｈ、２′Ｃ−Ｍｅ）、３．８２（ｄｄ、Ｊ５′，４′＝３．６Ｈｚ、Ｊ５′，５″＝１２．７Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．９４〜４．０３（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５′、Ｈ−４′）、４．１０（ｄ、Ｊ３′，４′＝８．８Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−３′）、６．０２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．４１（ｄ、Ｊ５，６＝３．８Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−５）、７．３９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．４３（ｓ、１Ｈ、Ｈ−４）。ＥＳＭＳ：２８１．４（ＭＨ＋）。
【０１８０】
（実施例２０）
２−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
【０１８１】
【化２７】
2004520367.tif 000030
【０１８２】
段階Ａ：２−アミノ−４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２段階Ｃからの生成物（１．５７ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液を氷冷し、それにＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液；３．３ｍＬ）を滴下した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に室温で２時間撹拌し、減圧下に濃縮し、トルエンと共留去した（２０ｍＬで２回）。得られた油状物をＭｅＣＮ（２０ｍＬ）に溶解させ、２−アミノ−４−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのナトリウム塩のアセトニトリル溶液［２−アミノ−４−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン［製造については、Liebigs Ann. Chem. 1984: 708-721参照］（１．１３ｇ、６．２ｍｍｏｌ）の脱水アセトニトリル（１５０ｍＬ）溶液およびＮａＨ（鉱油中６０％品２４８ｍｇ、６．２ｍｍｏｌ）から、室温で２時間高撹拌することでin situで形成］に滴下した。合わせた混合物を室温で２４時間撹拌し、溶媒留去して乾固させた。残留物を水（１００ｍＬ）に懸濁させ、ＥｔＯＡｃで抽出した（３００＋１５０ｍＬ）。合わせた抽出液をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。粗生成物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（０％から３０％ＥｔＯＡｃの５％の段階的勾配）を用いるシリカゲルカラム（５×７ｃｍ）で精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色泡状物として得た（０．９６ｇ）。
【０１８３】
段階Ｂ：２−アミノ−４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの生成物（４７５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中混合物を氷冷し、それにＮａＨ（鉱油油中６０％品、２９ｍｇ）を加え、０℃で０．５時間撹拌した。次に、ＭｅＩ（４８μＬ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ＭｅＯＨで反応停止し、混合物を溶媒留去した。粗生成物を、溶離液としてヘキサン／酢酸エチル（９／１，７／１、５／１および３／１）を用いるシリカゲルカラム（５×３．５ｃｍ）で精製した。生成物を含む分画を合わせ、溶媒留去して、所望の化合物（２００ｍｇ）を無色泡状物として得た。
【０１８４】
段階Ｃ：２−アミノ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
段階Ｂからの生成物（２００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（２Ｎ、１５ｍＬ）中混合物を圧力瓶中で、１３５℃で終夜加熱した。混合物を冷却して０℃とし、２Ｎ  ＨＣｌ水溶液で中和し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物をＭｅＯＨに懸濁させ、濾過し、固体をＭｅＯＨで十分に洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、残留物を溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（４０／１、３０／１および２０／１）を用いるシリカゲルカラム（５×５ｃｍ）で精製して、所望の化合物（１５０ｍｇ）を無色泡状物として得た。
【０１８５】
段階Ｄ：２−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
段階Ｃからの生成物（６４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（０．２ｍＬ）溶液ならびに１０％Ｐｄ／Ｃ（２４ｍｇ）の混合物を、パールの水素化装置で、室温で１．５日間にわたり約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ）で水素化し、セライト層で濾過し、その層をＭｅＯＨで十分に洗浄した。合わせた濾液を溶媒留去し、残留物を溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（３０／１、２０／１）を用いるシリカゲルカラム（３×４ｃｍ）で精製して、２−アミノ−５−メチル−７−（５−Ｏ−ベンジル−２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オンを得た。得られた化合物（３７ｍｇ）を、１０％Ｐｄ／Ｃで、大気圧の水素下にてＥｔＯＨ（２ｍＬ）中でさらに水素化した。室温で２日間撹拌した後、反応混合物をセライト濾過し、濾液を溶媒留去し、粗生成物を溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（３０／１、２０／１および１０／１）を用いるシリカゲルカラム（１×７ｃｍ）で精製して、凍結乾燥後に標題化合物（１２ｍｇ）を得た。
【０１８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ０．８１（ｓ、３Ｈ、２′Ｃ−Ｍｅ）、２．１６（ｄ、ＪＨ−６，Ｃ５−Ｍｅ＝１．３Ｈｚ、３Ｈ、Ｃ５−Ｍｅ）、３．４１（ｓ、３Ｈ、２′−ＯＭｅ）、３．６７（ｄｄ、Ｊ５′，４′＝３．４Ｈｚ、Ｊ５′，５′＝１２．６Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．８１〜３．９１（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、６．１０（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．６６（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）；
ＥＳＭＳ：３２３．３（Ｍ−Ｈ）＋。
【０１８７】
（実施例２１）
４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１８８】
【化２８】
2004520367.tif 000031
【０１８９】
段階Ａ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２段階Ｃからの生成物（１．０６ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）溶液を氷冷し、それにＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液；２．２ｍＬ）を滴下した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、室温で２時間撹拌し、減圧下に濃縮し、トルエンと共留去した（１５ｍＬで２回）。得られた油状物をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に溶解させ、４−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのナトリウム塩のアセトニトリル溶液［４−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン［製造については、J. Med. Chem. 33: 1984(1990)参照］（０．６２ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の脱水アセトニトリル（７０ｍＬ）溶液およびＮａＨ（鉱油中６０％品１４８ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）から、室温で２時間高撹拌することでin situで形成］に滴下した。合わせた混合物を室温で２４時間撹拌し、溶媒留去して乾固させた。残留物を水（１００ｍＬ）に懸濁させ、ＥｔＯＡｃ（２５０＋１００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出液をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。粗生成物を、溶離液としてヘキサン／酢酸エチル（９／１、５／１、３／１）勾配を用いるシリカゲルカラム（５×５ｃｍ）で精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、所望の生成物を無色泡状物として得た（０．８７ｇ）。
【０１９０】
段階Ｂ：４−クロロ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（０．８７ｇ、０．９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３０ｍＬ）溶液に−７８℃で、三塩化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液９．０ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で２．５時間撹拌し、次に−３０℃〜−２０℃で３時間撹拌した。メタノール／塩化メチレン（１：１）（９ｍＬ）を加えることで反応停止し、得られた混合物を−１５℃で３０分間撹拌し、０℃でアンモニア水にて中和し、室温で１５分間撹拌した。固体を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を溶媒留去し、残留物を溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２およびＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（４０／１および３０／１）勾配を用いるシリカゲルカラム（５×５ｃｍ）で精製して、所望の化合物（０．２２ｇ）を無色泡状物として得た。
【０１９１】
段階Ｃ：４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（０．２ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）に、メタノール性アンモニア（０℃で飽和；４０ｍＬ）を加えた。混合物を、ステンレス製オートクレーブ中１００℃で１４時間加熱し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（５０／１、３０／１、２０／１）勾配を用いるシリカゲルカラム（５×５ｃｍ）で精製して、標題化合物を白色固体（０．１２ｇ）として得た。
【０１９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｓ、３Ｈ、２′Ｃ−Ｍｅ）、２．２６（ｓ、３Ｈ、５Ｃ−Ｍｅ）、３．５２〜３．６１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７０〜３．８８（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、５．００（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、４．９１〜４．９９（ｍ、３Ｈ、２′−ＯＨ、３′−ＯＨ、５′−ＯＨ）、６．０４（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．４８（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、７．１２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−６）、７．９４（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。ＥＳＭＳ：２９５．２（ＭＨ＋）。
【０１９３】
（実施例２２）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸
【０１９４】
【化２９】
2004520367.tif 000032
【０１９５】
実施例６の化合物（０．０３５ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、アンモニア水（４ｍＬ、３０重量％）および飽和メタノール性アンモニア（２ｍＬ）の混合物に溶解させ、Ｈ２Ｏ２水溶液（２ｍＬ、３５重量％）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を逆相カラム（アルテック・アルティマ（Altech Altima）Ｃ−１８、１０×２９９ｍｍ、Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル、５０分で１０％から６０％Ｂ、流量２ｍＬ／分）でのＨＰＬＣによって精製して、標題化合物（０．０１５ｇ、４１％）を白色固体として得た。
【０１９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ０．８５（ｓ、３Ｈ、Ｍｅ）、３．６１（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）３．９９〜４．８６（ｍ、２Ｈ）、６．２６（ｓ、１Ｈ）、８．１０（ｓ、２Ｈ）８．２２（ｓ、１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２０．１３、６１．３７、７３．７９、８０．４２、８４．０１、９３．００、１０２．６６、１１２．０７、１３０．０７、１５１．４０、１５２．７４、１５９．１２、１６９．３０。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ１３Ｈ１７Ｎ４Ｏ６＋の計算値３２５．１１４８、実測値３２５．１１４３。
【０１９７】
（実施例２３）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０１９８】
【化３０】
2004520367.tif 000033
【０１９９】
段階Ａ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−ビニル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
塩化セリウム・７水和物（５０ｇ、１３４．２ｍｍｏｌ）を、予備加熱した乳鉢で微粉砕し、撹拌機を取り付けた丸底フラスコに移し入れた。フラスコを高真空下に１６０℃で終夜加熱した。アルゴン下に真空を解除し、フラスコを冷却して室温とした。脱水ＴＨＦ（３００ｍＬ）をフラスコにカニューレで加えた。得られた懸濁液を室温で４時間撹拌し、冷却して−７８℃とした。ビニルマグネシウムブロマイド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液１２０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を−７８℃で２時間撹拌した。その懸濁液に、一定速度で撹拌しながら、３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−エリスロ−ペントフラノース−２−ウロース（１４ｇ、３０ｍｍｏｌ）［実施例２段階Ｂから］の脱水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を滴下した。反応液を−７８℃で４時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止し、室温とした。混合物をセライト層で濾過し、残留物をＥｔ２Ｏで洗浄した（５００ｍＬで２回）。有機層を分液し、水層をＥｔ２Ｏで抽出した（２００ｍＬで２回）。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して粘稠黄色油状物を得た。その油状物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製した。標題化合物（６．７ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を淡黄色油状物として得た。
【０２００】
段階Ｂ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（６．４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）の脱水塩化メチレン（１５０ｍＬ）溶液に−２０℃で、ＨＢｒ（３０％のＡｃＯＨ溶液２０ｍＬ、７５．６ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を−１０℃〜０℃で４時間撹拌し、減圧下に溶媒留去し、脱水トルエンと共留去した（４０ｍＬで３回）。油状残留物を脱水アセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解させ、−２０℃とした４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのナトリウム塩（５．８ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（実施例２に記載の方法に従ってin situで形成）に加えた。得られた混合物を室温とし、室温で２４時間撹拌した。混合物を溶媒留去して乾固させ、水に取り、ＥｔＯＡｃで抽出した（３００ｍＬで２回）。合わせた抽出液をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。粗混合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題化合物（１．７５ｇ）を白色泡状物として単離した。
【０２０１】
段階Ｃ：４−アミノ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（８０ｍｇ）を少量の１，４−ジオキサンに溶解させ、ステンレス製ボンベに入れた。ボンベを冷却して−７８℃とし、液体アンモニアを加えた。ボンベを密閉し、９０℃で２４時間加熱した。アンモニアを蒸発させ、残留物を濃縮して白色固体を得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０２０２】
段階Ｄ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの化合物（６０ｍｇ）の塩化メチレン溶液に−７８℃で、三塩化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液）を滴下した。混合物を−７８℃で２．５時間、次に−３０℃〜−２０℃で３時間撹拌した。メタノール／塩化メチレン（１：１）を加えることで反応停止し、得られた混合物を−１５℃で０．５時間撹拌し、０℃でアンモニア水溶液にて中和し、室温で１５分間撹拌した。固体を濾過し、メタノール／塩化メチレン（１：１）で洗浄した。合わせた濾液を溶媒留去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０．１％トリエチルアミンを含む１０％メタノール／ＥｔＯＡｃ）によって精製した。生成物を含む分画を溶媒留去して、標題化合物を白色固体として得た（１０ｍｇ）。
【０２０３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．６（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．８（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５″）、３．９（ｍｄ、１−Ｈ、Ｈ−４′）、４．３（ｔ、１Ｈ、Ｈ−３′）、４．８〜５．３（ｍ、６Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ２、２′−ＯＨ、３′−ＯＨ、５′−ＯＨ）、６．１２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−５）、７．１（ｂｒｓ、１Ｈ、ＮＨ２）、７．４３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．０１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。ＥＳ−ＭＳ：実測値：２９１．１（Ｍ−Ｈ−）；Ｃ１３Ｈ１６Ｎ４Ｏ４−Ｈ−の計算値：２９１．２。
【０２０４】
（実施例２４）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２０５】
【化３１】
2004520367.tif 000034
【０２０６】
段階Ａ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２３段階Ｂからの化合物（３００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキサイド（３００ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）および四酸化オスミウム（４％水溶液、０．３ｍＬ）を加えた。混合物を暗所で１４時間撹拌した。沈殿をセライト層での濾過によって除去し、水で希釈し（３回）、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。油状残留物を塩化メチレン（５ｍＬ）に取り、ＮａＩＯ４／シリカゲル（３ｇ、１０％ＮａＩＯ４）を入れて１２時間撹拌した。シリカゲルを濾去し、残留物を溶媒留去し、純粋エタノール（５ｍＬ）に取った。溶液を氷浴で冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（３００ｍｇ、８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。得られた混合物を室温で４時間撹拌し、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水（２０ｍＬで２回）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を留去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物（１６０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を白色フレークとして得た。
【０２０７】
段階Ｂ：４−アミノ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（１５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を少量の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解させ、ステンレス製ボンベに入れた。ボンベを冷却して−７８℃とし、液体アンモニアを加えた。ボンベを密閉し、９０℃で２４時間加熱した。アンモニアを蒸発させ、残留物を濃縮して白色固体を得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０２０８】
段階Ｃ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／塩化メチレンに溶解させ、１０％Ｐｄ−Ｃを加え、懸濁液をＨ２雰囲気下で１２時間撹拌した。触媒をセライト層での濾過によって除去し、多量のメタノールで洗浄した。合わせた濾液を減圧下に溶媒留去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０．１％トリエチルアミン含有１０％メタノール／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物（５０ｍｇ）を白色粉末として得た。
【０２０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ３．１２（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２′）、３．３３（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２″）、３．８２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．９９〜４．１（ｍ、２Ｈ、Ｈ−４′、Ｈ−５″）、４．３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−３′）、６．２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５８（ｄ、１Ｈ、Ｈ−５）、７．４５（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．０５（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０２１０】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２９７．２（Ｍ＋Ｈ＋）；Ｃ１２Ｈ１６Ｎ４Ｏ５＋Ｈ＋の計算値：２９７．３。
【０２１１】
（実施例２５）
４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２１２】
【化３２】
2004520367.tif 000035
【０２１３】
段階Ａ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２４段階Ａからの化合物（６３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の脱水塩化メチレン（５ｍＬ）溶液にアルゴン下で、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６２μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を氷浴で冷却し、ｐ−トルエンスルホニルクロライド（３０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬで２回）、水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮してピンク固体を得た。固体を脱水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、氷浴で冷却した。フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍ  ＴＨＦ溶液１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を塩化メチレンに取り、ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬで２回）、水（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。塩化メチレン層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物を白色固体として得た（２０ｍｇ）。
【０２１４】
段階Ｂ：４−アミノ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（１８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を少量の１，４−ジオキサンに溶解させ、ステンレス製ボンベに入れた。ボンベを冷却して−７８℃とし、液体アンモニアを加えた。ボンベを密閉し、９０℃で２４時間加熱した。アンモニアを蒸発させ、残留物を濃縮して白色固体を得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０２１５】
段階Ｃ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（１６ｍｇ）を１：１メタノール／塩化メチレンに溶解させ、１０％Ｐｄ−Ｃを加え、懸濁液をＨ２雰囲気下で１２時間撹拌した。触媒をセライト層での濾過によって除去し、多量のメタノールで洗浄した。合わせた濾液を減圧下に溶媒留去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０．１％トリエチルアミン含有１０％メタノール／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物（８ｍｇ）を白色粉末として得た。
【０２１６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．６〜３．７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．８〜４．３（ｍ、５Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′、ＣＨ２）、５．１２（ｔ、１Ｈ、５′−ＯＨ）、５．３５（ｄ、１Ｈ、３′−ＯＨ）、５．４８（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、６．２１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５２（ｄ、１Ｈ、Ｈ−５）、６．９８（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、７．４４（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．０２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０２１７】
１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−２３０．２（ｔ）。
【０２１８】
ＥＳ−ＭＳ：実測値：２９９．１（Ｍ＋Ｈ＋）、Ｃ１２Ｈ１５ＦＮ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２９９．２７。
【０２１９】
（実施例２６および２７）
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２２０】
【化３３】
2004520367.tif 000036
【０２２１】
段階Ａ：７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル］−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび７−［３，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ツベルシジン（５．０ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）のピリジン（７．５ｍＬ）およびＤＭＦ（１８．５ｍＬ）混合液中溶液を撹拌しながら、それに硝酸銀（６．３６ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を室温で２時間撹拌した。それを氷浴で冷却し、ＴＨＦ（３７．４ｍＬ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（５．６ｇ、３７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をセライト層で濾過し、ＴＨＦで洗浄した。濾液および洗浄液を、少量のクロロホルムを含むエーテルで希釈した。有機層を重炭酸ナトリウムおよび水（５０ｍＬで３回）の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。ピリジンをトルエンとの濃縮によって除去し、残留物を溶離液として５％から７％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、３．０ｇを得た。
【０２２２】
段階Ｂ：７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル）］−４−［ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび７−［３，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−４−（ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物の混合物（３．０ｇ、６．０ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン（３０ｍＬ）溶液に、４，４′−ジメトキシトリチルクロライド（２．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をピリジン水溶液で磨砕し、エーテルで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮して黄色泡状物を得た（５．６ｇ）。残留物を、溶離液として２０％から２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適切な分画を回収し、濃縮して、２′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−および３′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）保護ヌクレオシドを無色泡状物として得た（それぞれ、２．２ｇおよび１．０ｇ）。
【０２２３】
段階Ｃ：７−［２，５−ビス−（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−Ｏ−トシル−β−Ｄ−リボフラノシル）］−４−［ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの２′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）保護ヌクレオシド（２．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のピリジン（２２ｍＬ）溶液を氷冷し、それにｐ−トルエンスルホニルクロライド（１．９ｇ、９．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４日間撹拌した。それをピリジン水溶液（５０％、１０ｍＬ）で磨砕し、少量のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）を含むエーテルで抽出した（５０ｍＬで３回）。有機層を重炭酸ナトリウムおよび水（３０ｍＬで３回）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。ピリジンをトルエンとの共留去によって除去した（２５ｍＬで３回）。残留油状物を、溶離液としてヘキサン：酢酸エチル（７０：３０）を用いるシリカゲル層で濾過した。収量：１．４ｇ。
【０２２４】
段階Ｄ：４−［ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル］アミノ−７−［３−Ｏ−トシル−β−Ｄ−リボフラノシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの化合物（１．０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、２．５ｍＬ）とともに０．５時間撹拌した。混合物を冷却し、エーテル（５０ｍＬ）で希釈した。溶液を水で洗浄し（５０ｍＬで３回）、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して油状物を得た。残留物を、溶離液としてヘキサン：酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲル層に通すことで精製した。収量：７８０ｍｇ。
【０２２５】
段階Ｅ：４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジンおよび４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ−［２，３−ｄ］ピリミジン
ＣＨ３ＭｇＩ（３．０Ｍエーテル溶液、３．０ｍＬ）の脱水トルエン（３．７５ｍＬ）溶液を氷浴で冷却した。それに、段階Ｄからの化合物（５００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の脱水トルエン（３．７ｍＬ）溶液を加えた。得られた混合物を室温で３．５時間撹拌した。それを冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液で処理し、エーテル（ＣＨ２Ｃｌ２１０ｍＬを含有する５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分液し、ブライン（３０ｍＬで２回）および水（２５ｍＬで２回）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して油状物を得た。それを、４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、２−Ｃ−α−メチル化合物（１４９ｍｇ）および２−Ｃ−β−メチル化合物（３４ｍｇ）を得た。これらの誘導体を８０％酢酸で別個に処理し、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。酢酸を、エタノールおよびトルエンとの共留去を繰り返すことで除去した。残留物を、クロロホルムと水との間で分配した。水層をクロロホルムで洗浄し、濃縮した。溶媒留去した残留物を、溶離液として５％から１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いるシリカゲルで精製して、所望の化合物を白色固体として得た。
【０２２６】
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
（９．０ｍｇ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．７７（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３′）、２．０８（ｔ、１Ｈ、Ｈ−３″）、３．５９（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７３（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５″）、４．１５（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４′）、５．０２（ｔ、１Ｈ、ＯＨ−５′）、５．３３（ｓ、１Ｈ、ＯＨ−２′）、６．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５４（ｄ、１Ｈ、Ｈ−７）、６．９５（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、７．４７（ｄ、１Ｈ、Ｈ−８）、８．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）；ＥＳ−ＭＳ：２６３．１［Ｍ−Ｈ］。
【０２２７】
４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
（１５ｍｇ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．２３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．０８（ｄｄｄ、２Ｈ、Ｈ−３′および３″）、３．５７（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５′および５″）、４．０６（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４）、５．１０（ｓ、１Ｈ、ＯＨ−２′）、５．２４（ｔ、１Ｈ、ＯＨ−５′）、６．０１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．４９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−７）、６．８９（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、７．３５（ｄ、１Ｈ、Ｈ−８）、８．０１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。ＥＳ−ＭＳ：２６５．２［Ｍ＋Ｈ］。
【０２２８】
（実施例２８）
４−アミノ−７−（２，４−Ｃ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２２９】
【化３４】
2004520367.tif 000037
【０２３０】
段階Ａ：５−デオキシ−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−キシロフラノース
１，２−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−キシロフラノース（３８．４ｇ、０．２ｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（５ｇ）、トリエチルアミン（５５．７ｍＬ、０．４ｍｏｌ）を塩化メチレン（３００ｍＬ）に溶かした。ｐ−トルエンスルホニルクロライド（３８．１３ｇ、０．２ｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）に投入し、２層を分液した。有機層を、クエン酸水溶液（２０％、２００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒留去して固体（７０．０ｇ）を得た。固体を、脱水ＴＨＦ（３００ｍＬ）に溶解させ、ＬｉＡｌＨ４（１６．０ｇ、０．４２ｍｏｌ）を３０分かけて少量ずつ加えた。混合物を室温で１５撹拌した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を３０分かけて滴下し、混合物をシリカゲル床で濾過した。濾液を濃縮し、得られた油状物についてシリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１／４）でのクロマトグラフィーを行って、生成物を固体として得た（３２．５ｇ）。
【０２３１】
段階Ｂ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−１−Ｏ−メチル−４−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
酸化クロム（５０ｇ、０．５ｍｏｌ）、無水酢酸（５０ｍＬ、０．５３ｍｏｌ）およびピリジン（１００ｍＬ、１．２４ｍｏｌ）を、氷水浴中の塩化メチレン（１リットル）に加え、混合物を１５分間撹拌した。５−デオキシ−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−キシロフラノース（３２ｇ、０．１８ｍｏｌ）の塩化メチレン（２００ｍＬ）溶液を加え、混合物を同じ温度で３０分間撹拌した。反応溶液を酢酸エチル（１リットル）で希釈し、シリカゲル床で濾過した。濾液を濃縮して黄色油状物を得た。油状物を、１，４−ジオキサン（１リットル）およびホルムアルデヒド（３７％、２００ｍＬ）に溶解させた。溶液を冷却して０℃とし、固体ＫＯＨ（５０ｇ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルで抽出した（２００ｍＬで６回）。濃縮後、残留物についてシリカゲル（ＥｔＯＡｃ）でのクロマトグラフィーを行い、生成物を油状物として得た（１．５ｇ）。油状物を１−メチル−２−ピロリジノン（２０ｍＬ）に溶解させ、２，４−ジクロロフェニルメチルクロライド（４ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（６０％、０．８ｇ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、トルエン（１００ｍＬ）で希釈した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し（５０ｍＬで３回）、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒留去した。残留物をメタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、ＨＣｌのジオキサン溶液（４Ｍ、２ｍＬ）を加えた。溶液を終夜撹拌し、溶媒留去した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／４）でのクロマトグラフィーを行って、所望の生成物を油状物（２．０１ｇ）として得た。
【０２３２】
段階Ｃ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２，４−ジ−Ｃ−メチル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース
段階Ｂからの生成物（２．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）およびデス−マーチンペルヨージナン（２．０ｇ）の塩化メチレン（３０ｍＬ）溶液を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物をエーテルエーテル（５０ｍＬ）で磨砕し、濾過した。濾液を、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（２．５ｇ）の飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）溶液で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去した。残留物を脱水Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に溶解させ、−７８℃でＭｅＭｇＢｒのＥｔ２Ｏ溶液（３Ｍ、１０ｍＬ）に滴下した。反応混合物を昇温させて−３０℃とし、−３０℃〜−１５℃で５時間撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）に投入した。２層を分離し、有機層を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／９）でのクロマトグラフィーを行って、標題化合物をシロップ（１．４０ｇ）として得た。
【０２３３】
段階Ｄ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２，４−ジ−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの化合物（０．７０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）に、ＨＢｒ（５．７Ｍ酢酸溶液、２ｍＬ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、減圧下に溶媒留去し、脱水トルエンと共留去した（１０ｍＬで３回）。４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）および粉砕ＫＯＨ（８５％、１５０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を１−メチル−２−ピロリジノン（５ｍＬ）中で３０分間撹拌し、混合物をトルエンと共留去した（１０ｍＬ）。得られた溶液を上記のブロモ糖残留物に投入し、混合物を終夜撹拌した。混合物をトルエン（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し（５０ｍＬで３回）、減圧下に濃縮した。残留物について、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１５／８５）を溶離液とするシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って、固体を得た（２７０ｍｇ）。
【０２３４】
段階Ｅ：４−アミノ−７−（２，４−Ｃ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ステンレス製オートクレーブ中にて、段階Ｄからの化合物（２７０ｍｇ）をジオキサン（２ｍＬ）に溶解させ、液体アンモニア（２０ｇ）を加えた。混合物を１００℃で１５加熱し、冷却し、溶媒留去した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ）でのクロマトグラフィーを行って固体を得た（２００ｍｇ）。その固体（１５０ｍｇ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、１５０ｍｇ）のメタノール（２０ｍＬ）中混合物をＨ２下（約０．２１ＭＰａ（３０ｐｓｉ））で３時間振盪し、濾過し、溶媒留去した。残留物について、シリカゲル（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２：１／９）でのクロマトグラフィーを行って、所望の生成物を固体として得た（３５ｍｇ）。
【０２３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６５（ｓ、３Ｈ）、１．１８（ｓ、３Ｈ）、３．４３（ｍ、２Ｈ）、４．０６（ｄ、１Ｈ、Ｊ６．３Ｈｚ）、４．８７（ｓ、１Ｈ）、５．２６（ｂｒ、１Ｈ）、５．０８（ｄ、１Ｈ、Ｊ６．３Ｈｚ）、５．２５（ｔ、１Ｈ、Ｊ３．０Ｈｚ）、６．１７（ｓ、１Ｈ）、６．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ３．５Ｈｚ）、６．９７（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）、７．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ３．４Ｈｚ）、８．０２（ｓ、１Ｈ）。
【０２３６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１８．１９、２１．３２、６５．３８、７３．００、７９．３３、８４．８０、９０．６６、９９．０９、１０２．４１、１２１．９０、１４９．５８、１５１．４８、１５７．３８。
【０２３７】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２９５．１（Ｍ＋Ｈ＋）；Ｃ１３Ｈ１８Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２９５．１。
【０２３８】
（実施例２９）
４−アミノ−７−（３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２３９】
【化３５】
2004520367.tif 000038
【０２４０】
段階Ａ：３−デオキシ−３−フルオロ−１−Ｏ−メチル−５−Ｏ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノース
１，２−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−キシロフラノース（９．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルオイルクロライド（７．０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）溶液を３０分間撹拌した。水（１０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下に濃縮した。残留物をトルエン（５００ｍＬ）に溶解させ、溶液を水（２００ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。２層を分離し、有機層を溶媒留去した。残留物をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、ＨＣｌのジオキサン溶液（４Ｍ、１０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に溶媒留去した。得られた油状物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／１）でのクロマトグラフィーを行って油状物を得た（１０．１ｇ）。油状物を塩化メチレン（１００ｍＬ）に溶解させ、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）（５．７ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に投入した。混合物をトルエンで抽出し（５０ｍＬで２回）、合わせた有機層を濃縮した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１５／８５）でのクロマトグラフィーを行って、標題化合物を油状物として得た（１．５０ｇ）。
【０２４１】
段階Ｂ：３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−１−Ｏ−メチル−５−Ｏ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノース
段階Ａからの生成物（１．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）およびデス−マーチンペルヨージナン（２．５ｇ）の塩化メチレン（２０ｍＬ）溶液を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物をジエチルエーテル（５０ｍＬ）で磨砕し、濾過した。濾液をＮａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１２．５ｇ）の飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）溶液で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去した。残留物を脱水ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解させた。ＴｉＣｌ４（３ｍＬ）およびメチルマグネシウムブロマイドのエチルエーテル溶液（３Ｍ、１０ｍＬ）を−７８℃で加え、混合物を−５０〜−３０℃で２時間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）に投入し、セライトで濾過した。濾液をトルエン（１００ｍＬ）で抽出し、溶媒留去した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１５／８５）でのクロマトグラフィーを行って、標題化合物を油状物として得た（１５０ｍｇ）。
【０２４２】
段階Ｃ：４−アミノ−７−（３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの生成物（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＨＢｒ（３０％）の酢酸溶液（２ｍＬ）に溶解させた。１時間後、混合物を減圧下に溶媒留去し、トルエン（１０ｍＬ）と共留去した。４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）および粉砕ＫＯＨ（８５％、１５０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中で３０分間撹拌し、混合物をトルエン（２ｍＬ）と共留去した。得られた溶液を上記のブロモ糖に投入し、混合物を終夜撹拌した。混合物をトルエン（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬで３回）で洗浄し、減圧下に濃縮した。残留物について、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１５／８５）でのクロマトグラフィーを行って、油状物を得た（６０ｍｇ）。ステンレス製オートクレーブ中にて、油状物をジオキサン（２ｍＬ）に溶解させ、液体アンモニア（２０ｇ）を加えた。混合物を８５℃で１８時間加熱し、冷却し、溶媒留去した。残留物について、シリカゲル（メタノール／塩化メチレン：１／９）でのクロマトグラフィーを行って、標題化合物を固体として得た（２９ｍｇ）。
【０２４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．８１（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｍ、２Ｈ）、４．１６（ｍ、１Ｈ）、５．０９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ５３．２，７．８Ｈｚ）、５．２６（ｂｒ、１Ｈ）、５．７７（ｓ、１Ｈ）、６．１５（ｄ、１Ｈ、Ｊ２．９Ｈｚ）、６．５９（ｄ、１Ｈ、Ｊ３．４Ｈｚ）、７．０２（ｓｂｒ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、１Ｈ、Ｊ３．４Ｈｚ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）。
【０２４４】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１９．４０、５９．５６、７７．２４、７９．２９、９０．１５、９１．９２、９９．８８、１０２．３９、１２１．１７、１４９．８０、１５１．７７、１５７．４７。
【０２４５】
１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１４．６６（ｍ）。
【０２４６】
ＥＳ−ＭＳ：実測値：２８３．１（Ｍ＋Ｈ＋）；Ｃ１２Ｈ１５ＦＮ４Ｏ３＋Ｈ＋の計算値：２８３．１。
【０２４７】
（実施例３０）
４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２４８】
【化３６】
2004520367.tif 000039
【０２４９】
段階Ａ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２段階Ｄからの化合物（６１８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）溶液を予め冷却し（０℃）、それにヨウ化メチル（７０９ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（鉱油中６０％品）（４４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）および塩化メチレン（５０ｍＬ）の撹拌混合物に投入した。有機層を水（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去した。得られた粗生成物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、所望の生成物を無色泡状物として得た（７３５ｍｇ）。
【０２５０】
段階Ｂ：４−アミノ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロフェニルメチル）−２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（７３５ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）に、メタノール性アンモニア（０℃で飽和）（２０ｍＬ）を加えた。混合物をステンレス製オートクレーブ中にて８０℃で終夜加熱し、冷却し、内容物を減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して所望の生成物を無色泡状物として得た（５０４ｍｇ）。
【０２５１】
段階Ｃ：４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの生成物（６４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）、Ｅｔ３Ｎ（０．２ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（６１ｍｇ）の混合物を、パールの水素化装置にて約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ）下に室温で終夜水素化した。混合物をセライト濾過し、減圧下に溶媒留去し、溶離液として２％メタノール／塩化メチレンを用いるシリカゲル層で濾過した。所望の生成物を回収し、減圧下に溶媒留去した。その化合物をメタノール（１０ｍＬ）に再度溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃ（６１ｍｇ）を加えた。混合物を、パールの水素化装置にて、約０．３８ＭＰａ（５５ｐｓｉ）下室温で２週間水素化した。混合物をセライト濾過し、減圧下に溶媒留去し、溶離液として１０％メタノール／塩化メチレンを用いるシリカゲルで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を無色泡状物として得た（１１０ｍｇ）。
【０２５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６８（ｓ、３Ｈ）、３．４０（ｓ、３Ｈ）、３．５２〜３．９９（重複ｍ、４Ｈ）、４．９２（ｄ、１Ｈ）、５．０７（ｔ、１Ｈ）、６．２６（ｓ、１Ｈ）、６．５５（ｄ、１Ｈ）、７．００（ｓｂｒ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、１Ｈ）、８．０５（ｓ、１Ｈ）。
【０２５３】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２９３．１（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１２Ｈ１６Ｎ４Ｏ４−Ｈ＋の計算値：２９３．１２。
【０２５４】
（実施例３１）
４−メチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２５５】
【化３７】
2004520367.tif 000040
【０２５６】
実施例２段階Ｅからの化合物（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を、メチルアミン（小型のステンレス製オートクレーブ中で凝縮させたもの５ｍＬ）に加え、８５℃で４８時間加熱し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてエタノールを用いるシリカゲルで精製して、標題化合物を得た。それをＭｅＣＮで処理することで非晶質固体として分離した。得られた非晶質固体を水に溶解させ、凍結乾燥して、無色粉末（１４４ｍｇ）を得た。
【０２５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．３２（ｓ、３Ｈ、ＮＣＨ３）、３．５８〜３．６７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７９〜３．３９（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、５．０３（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、５．０４〜５．１１（１Ｈ、３′−ＯＨ、１Ｈ、５′−ＯＨ）、６．１４（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．５８（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．６Ｈｚ、Ｈ−５）、７．４６（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、７．７０（ｂｒｓ、１Ｈ、ＮＨ）、８．１４（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０２５８】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２９５．１（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１３Ｈ１８Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２９４．３。
【０２５９】
（実施例３２）
４−ジメチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２６０】
【化３８】
2004520367.tif 000041
【０２６１】
実施例２段階Ｅからの化合物（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を、ジメチルアミン（小型のステンレス製オートクレーブ中で凝縮させたもの５ｍＬ）に加え、８５℃で４８時間加熱し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてエタノールを用いるシリカゲルで精製して、標題化合物を得た。それをＭｅＣＮで処理することで非晶質固体として分離した。得られた非晶質固体を水に溶解させ、凍結乾燥して、無色粉末（１６４ｍｇ）を得た。
【０２６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．２９（ｓ、３Ｈ、ＮＣＨ３）、３．３２（ｓ、３Ｈ、ＮＣＨ３）、３．６０〜３．６６（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７７〜３．９７（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、５．０４（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、５．０６〜５．１１（１Ｈ、３′−ＯＨ、１Ｈ、５′−ＯＨ）、６．２１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．６９（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．６Ｈｚ、Ｈ−５）、７．５５（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．１３（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０２６３】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：３０９．３（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１４Ｈ２０Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：３０８．３３。
【０２６４】
（実施例３３）
４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２６５】
【化３９】
2004520367.tif 000042
【０２６６】
実施例２段階Ｅからの化合物（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を、シクロプロピルアミン（小型のステンレス製オートクレーブ中で凝縮させたもの５ｍＬ）に加え、８５℃で４８時間加熱し、冷却し、減圧下に溶媒留去した。粗混合物を、溶離液としてエタノールを用いるシリカゲルで精製して、標題化合物を得た。それをＭｅＣＮで処理することで非晶質固体として分離した。得られた非晶質固体を水に溶解させ、凍結乾燥して、無色粉末（１４８ｍｇ）を得た。
【０２６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．５１〜０．５８（ｍ、２Ｈ）、０．６４（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、０．７４〜０．０７６（ｍ、２Ｈ）、３．６２〜３．６７（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．７９〜３．８２（ｍ、３Ｈ、Ｈ−５″）、３．９２〜３．９６（ｍ、Ｈ−４′、Ｈ−３′）、５．０３（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、５．０５〜５．１０（１Ｈ、３′−ＯＨ、１Ｈ、５′−ＯＨ）、６．１５（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、７．４８（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．６Ｈｚ、Ｈ−５）、７．５９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．１３（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。
【０２６８】
ＬＣ−ＭＳ：実測値：３２１．１（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１５Ｈ２０Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：３２０．３。
【０２６９】
（実施例３４）
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２７０】
【化４０】
2004520367.tif 000043
【０２７１】
段階Ａ：７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル）］−４−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび７−［３，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−４−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２６および２７の段階Ａからの化合物の混合物（０．３２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン（６ｍＬ）溶液に、モノメトキシトリチルクロライド（０．３０ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残留物を、溶離液として５％から１３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲルカラムで精製した。適切な分画を回収し、濃縮して、２′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−および３′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）保護ヌクレオシドを無色泡状物として得た（それぞれ、３４３ｍｇおよび８４ｍｇ）。
【０２７２】
段階Ｂ：７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−エリスロ−ペントフラノース−３−ウロシル］−４−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
三酸化クロム（９１ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）懸濁液を０℃で高撹拌しながら、それにピリジン（１４７μＬ、１．８２ｍｍｏｌ）および次に無水酢酸（８６μＬ、０．９１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で０．５時間撹拌した。次に、段階Ａからの２′，５′−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）保護ヌクレオシド（３４３ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２．５ｍＬ）溶液を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を氷冷ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に投入し、溶離液としてＥｔＯＡｃを用いる短いシリカゲルカラムで濾過した。濾液を溶媒留去し、残留物を溶離液としてヘキサンおよびヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７／１）を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を得た（１８０ｍｇ）。
【０２７３】
段階Ｃ：７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび７−［２，５−ビス−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−４−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
ＭｅＭｇＢｒ（３．０Ｍエーテル溶液０．１７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）の脱水ヘキサン（１．５ｍＬ）中混合物に室温で、段階Ｂからの化合物（７８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の脱水ヘキサン（０．５ｍＬ）溶液を滴下した。室温で２時間撹拌後、反応混合物を氷冷水（１０ｍＬ）に投入し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、セライト濾過し、セライトをＥｔＯＡｃで十分に洗浄した。層を分液し、有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残留物を、溶離液として８％から２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲルカラムで精製して、３−Ｃ−メチルキシロ−（６０ｍｇ）および３−Ｃ−メチルリボ−異性体（２０ｍｇ）を得た。
【０２７４】
段階Ｄ：４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｃからの３−Ｃ−メチル−キシロ異性体（６０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を氷冷し、それにＴＢＡＦ（１Ｍ  ＴＨＦ溶液０．３２ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し（１５ｍＬで３回）、脱水し、溶媒留去した。残留物をジオキサン（０．３ｍＬ）に溶解させ、８０％酢酸（３ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、溶媒留去した。残留物をジオキサンと共留去し、水（５０ｍＬ）に取り、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した（１０ｍＬで２回）。水層を濃縮し、凍結乾燥した。残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２０／１および１０／１）を用いるシリカゲルカラムで精製して、凍結乾燥後に標題化合物を白色綿毛状化合物として得た（１０ｍｇ）。
【０２７５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ１．２８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．５６（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．７８（ｍ、３Ｈ、Ｈ−４′、Ｈ−５′、Ｈ−５″）、４．１０（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、４．４４（ｄ、１Ｈ、Ｊ２′，１′＝３．９Ｈｚ、Ｈ−２′）、５．５８（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１′）、５．８５（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、６．１５（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、６．４８（ｄ、１Ｈ、Ｊ５，６＝３．７Ｈｚ、Ｈ−５）、７．２３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．１１（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。ＥＳ−ＭＳ：２８１［ＭＨ］＋。
【０２７６】
（実施例３５）
４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２７７】
【化４１】
2004520367.tif 000044
【０２７８】
実施例３２段階Ｃからのリボ−異性体（２０ｍｇ）を、実施例３２段階Ｄに記載の手順を用いて脱保護して、標題化合物を得た（４ｍｇ）。
【０２７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ１．４３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．２８（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、３．５８（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５′、Ｈ−５″）、３．９９（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４′）、４．１０（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、４．６２（ｄ、１Ｈ、Ｊ２′，１′＝８．１Ｈｚ、Ｈ−２′）、５．６９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１′）、５．８８（ｂｒｓ、３Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２）、６．４５（ｂｒｓ、１Ｈ、ＯＨ）、６．５１（ｄ、１Ｈ、Ｊ、６＝３．７Ｈｚ、Ｈ−５）、７．１９（ｄ、１Ｈ、Ｈ−６）、８．１２（ｓ、１Ｈ、Ｈ−２）。ＥＳ−ＭＳ：２８１［ＭＨ］＋。
【０２８０】
（実施例３６）
２，４−ジアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２８１】
【化４２】
2004520367.tif 000045
【０２８２】
実施例４段階Ｂからの生成物（２４ｍｇ）のアンモニア水（３０％、１０ｍＬ）中混合物を、ステンレス製オートクレーブ中にて１００℃で終夜加熱し、冷却し、溶媒留去した。残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０／１および５／１）を用いるシリカゲルカラムで精製して標題化合物を得た（１５ｍｇ）。
【０２８３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．４８〜３．５８（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５′）、３．６８〜３．７３（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５″、Ｈ−４′）、３．８４（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３′）、４．７２（ｓ、１Ｈ、２′−ＯＨ）、４．９７〜５．０３（ｍ、２Ｈ、３′−ＯＨ、５′−ＯＨ）、５．４５（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）、６．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ−１′）、６．２８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、Ｈ−５）、６．４４（ｂｒｓ、２Ｈ、ＮＨ２）６．９２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、Ｈ−６）。
【０２８４】
ＥＳＭＳ：２９４．１（Ｍ−Ｈ＋）。
【０２８５】
（実施例３７）
４−アミノ−２−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２８６】
【化４３】
2004520367.tif 000046
【０２８７】
ピリジン（１ｍＬ）で希釈したＨＦ／ピリジン溶液（７０％、２ｍＬ）に−３０℃で、実施例３６の化合物（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のピリジン（０．５ｍＬ）溶液を加え、次にｔｅｒｔ−ブチルニトリル（３６μＬ、０．３ｍｍｏｌ）を加える。撹拌を−２５℃で５分間続ける。次に、溶液を氷水（５ｍＬ）に投入し、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液で中和し、溶媒留去して乾固させる。残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（２０／１および１０／１）を用いるシリカゲルカラムで精製して、標題化合物を得る。
【０２８８】
（実施例３８）
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【０２８９】
【化４４】
2004520367.tif 000047
【０２９０】
段階Ａ：４−アセチルアミノ−７−（２，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
実施例２段階Ｆからの化合物（２８０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に、無水酢酸（６１３ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を室温で終夜撹拌し、減圧下に溶媒留去し、得られた粗混合物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲルで精製する。所望の生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、所望の生成物を得る。
【０２９１】
段階Ｂ：４−アセチルアミノ−５−ブロモ−７−（２，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａからの化合物（４６０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を予め冷却し（０℃）、それにＮ−ブロモコハク酸イミド（１７８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を加える。得られた溶液を０℃で３０分間撹拌し、室温でさらに３０分間撹拌する。メタノールを加えることで反応停止し、減圧下に溶媒留去する。得られた粗混合物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲルで精製する。所望の生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を得る。
【０２９２】
段階Ｃ：４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ｂからの化合物（５２９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を予め冷却し（−７８℃）、それにブチルリチウム（２Ｍヘキサン溶液）（０．５ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液を−７８℃で３０分間撹拌し、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド（３１５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液で反応停止する。得られた溶液を非常にゆっくり昇温させて室温とし、飽和塩化アンモニウム水溶液および塩化メチレンの撹拌混合液に投入する。有機相を減圧下に溶媒留去し、密閉容器中、５５℃にて水酸化アンモニウムで終夜処理する。得られた粗混合物を、溶離液として塩化メチレン／メタノールを用いるシリカゲルで精製する。所望の生成物を含む分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、所望の生成物を得る。
【０２９３】
生物アッセイ
ＨＣＶＮＳ５ＢポリメラーゼおよびＨＣＶ複製の阻害を測定するのに用いたアッセイについて、以下に説明する。
【０２９４】
本発明の化合物のＨＣＶＮＳ５ＢＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害薬としての有効性を、以下のアッセイで測定した。
【０２９５】
Ａ．ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害アッセイ
このアッセイを用いて、本発明のヌクレオシド誘導体がヘテロメリックＲＮＡ鋳型上のＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の酵素活性を阻害する能力を測定した。
【０２９６】
手順
アッセイ緩衝液条件：（５０μＬ−総量／反応）
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５
５０μＭ  ＥＤＴＡ
５ｍＭ  ＤＴＴ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
８０ｍＭ  ＫＣｌ
０．４Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｉｎ（Promega、原液は４０単位／μＬである）
０．７５μｇ  ｔ５００（Ｃ型肝炎ゲノムのＮＳ２／３領域からの配列によるＴ７流出（runoff）転写を用いて得た５００−ｎｔＲＮＡ）
１．６μｇ  精製Ｃ型肝炎ＮＳ５Ｂ（Ｃ−末端切断した２１アミノ酸で形成）
１μＭＡ、Ｃ、Ｕ、ＧＴＰ（ヌクレオシド三リン酸混合物）
［α−３２Ｐ］−ＧＴＰまたは［α−３３Ｐ］−ＧＴＰ。
【０２９７】
化合物については、最終濃度１００μＭまでの各種濃度で試験を行った。
【０２９８】
酵素および鋳型ｔ５００を含む適切な容量の反応緩衝液を調製した。本発明のヌクレオシド誘導体をピペットを用いて９６ウェルプレートのウェルに入れた。放射能標識したＧＴＰを含むヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）の混合物を調製し、ピペットで９６ウェルプレートに入れた。酵素−鋳型反応溶液を加えることで反応開始し、室温で１〜２時間反応を進行させた。
【０２９９】
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０  ２０μＬを加えることで反応を停止した。反応停止溶液をＮＴＰに加えてから反応緩衝液を加えるブランク反応を含めた。
【０３００】
反応停止した反応液５０μＬをＤＥ８１フィルター円板（ワットマン（Whatman））にスポット添加し、３０分間乾燥させた。フィルターを０．３Ｍギ酸アンモニウムｐＨ８で洗浄した（洗浄液１ｍＬ中のｃｐｍが１００未満となるまで１５０ｍＬ／洗浄で実施する。通常は６回の洗浄）。フィルターについて、シンチレーションカウンターにおいて５ｍＬシンチレーション液中でのカウンティングを行った。
【０３０１】
阻害パーセントを、阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って計算した。
【０３０２】
ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイで調べた代表的化合物は、１００μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０３０３】
Ｂ．ＨＣＶＲＮＡ複製阻害アッセイ
本発明の化合物について、サブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞におけるＣ型肝炎ウィルスＲＮＡの複製に影響する能力も評価した。このアッセイの詳細について、以下に説明する。このレプリコンアッセイは、ローマンらの報告に記載の方法の変法である（V. Lohmann, F. Korner, J-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, and R. Bartenschlager, ″Replication of a Sub-genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line″, Science 285: 110 (1999)）。
【０３０４】
プロトコール
このアッセイは、in situでのリボヌクレアーゼ保護、シンチレーション近似に基づくプレートアッセイ（ＳＰＡ）であった。細胞１００００〜４００００個を、９６ウェルのサイトスター（cytostar）プレート（Amersham）で、０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を含む培地１００〜２００μＬ中で平板培養した。０〜１８時間の時点で、１％ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度で化合物を細胞に加え、次に２４〜９６時間培養を行った。細胞を固定し（２０分、１０％ホルマリン）、浸透性とし（２０分、０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウィルスゲノムに含まれている（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（または他の遺伝子）に対して相補性である一本鎖３３ＰＲＮＡプローブでハイブリダーゼーションを行った（終夜、５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、加熱して６５℃とし、トップカウント（Top-Count）でカウンティングを行った。複製の阻害を、毎分カウント数（ｃｐｍ）における低下として読み取った。
【０３０５】
サブゲノムレプリコンを含むように選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞は、ＨＣＶ５′非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択可能マーカー、ＥＭＣＶＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）およびＨＣＶ非構造蛋白ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂからなる細胞質ＲＮＡとそれに続く３′ＮＴＲを有する。
【０３０６】
複製アッセイで調べた代表的な化合物は、１００μＭ未満のＥＣ５０値を示した。
【０３０７】
本発明のヌクレオシド誘導体について、以下に記載のカウンタースクリーニング（counterscreen）で、細胞傷害性および抗ウィルス特異性の評価も行った。
【０３０８】
Ｃ．カウンタースクリーニング
本発明のヌクレオシド誘導体がヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０３０９】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼαおよびβの阻害
反応条件
反応容量５０μＬ。
【０３１０】
反応緩衝液成分
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５
２００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  ｐ−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０３１１】
酵素および鋳型
０．０５ｍｇ／ｍＬギャップ（gapped）魚精子ＤＮＡ鋳型
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼαまたはβ。
【０３１２】
ギャップ魚精子ＤＮＡ鋳型の製造
活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ７００７６）５００μＬに、１Ｍ  ＭｇＣｌ２  ５μＬを加える。
【０３１３】
昇温させて３７℃とし、６５Ｕ／μＬのエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ギブコＢＲＬ（GibcoBRL）１８０１３−０１１）３０μＬを加える。
【０３１４】
３７℃で５分間インキュベートする。
【０３１５】
６５℃で１０分間加熱することで、反応を終了させる。
【０３１６】
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で平衡としたバイオ−スピン（Bio-spin）６クロマトグラフィーカラム（バイオ−ラッド（Bio-Rad）７３２６００２）に小分けサンプル５０〜１００μＬを負荷する。
【０３１７】
１０００×ｇで４分間遠心することで溶離を行う。
【０３１８】
溶出液を合わせ、２６０ｎｍでの吸光度を測定して、濃度を求める。
【０３１９】
ＤＮＡ鋳型を適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で希釈し、酵素を２ｍＭ  β−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ  ＫＣｌを含む適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで希釈した。鋳型および酵素をピペットで微量遠心管または９６ウェルプレートに入れた。酵素を含まないブランク反応液および被験化合物を含まない対照反応液も、それぞれ酵素希釈緩衝液および被験化合物溶媒を用いて調製した。上記のような成分を含む反応緩衝液によって、反応を開始した。反応液を３７℃で１時間インキュベートした。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを加えることで反応停止した。反応停止した反応液５０μＬをワットマンＤＥ８１フィルター円板にスポット添加し、風乾させた。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍとなるまで、フィルター円板を０．３Ｍギ酸アンモニウム１５０ｍＬで繰り返し洗浄した。円板を純粋エタノール１５０ｍＬで２回、脱水エーテル１５０ｍＬで１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション液５ｍＬ中でカウンティングした。
【０３２０】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０３２１】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８，２ｍＭメルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含む緩衝液中で０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰおよびＴＴＰ；２μＣｉ／反応［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰおよび０．４μｇ／μｇＬ活性化魚精子ＤＮＡ（US Biochemicalから購入）を含む反応で、ヒトＤＮＡポリメラーゼγ阻害の能力を測定した。反応を３７℃で１時間進行させ、最終濃度１４２ｍＭまで０．５Ｍ  ＥＤＴＡを加えることで停止した。アニオン交換フィルター結合およびシンチレーションカウンティングによって、生成物形成を定量した。化合物について、５０μＭまで試験を行った。
【０３２２】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０３２３】
本発明のヌクレオシド誘導体がＨＩＶ感染力およびＨＩＶ伝播を阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０３２４】
ｃ．ＨＩＶ感染力アッセイ
低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現に関して選択したＣＸＣＲ４およびＣＣＲ５の両方を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異株を用いてアッセイを行った。細胞を４８時間感染させ、組み込まれたＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を、化学発光基質（Galactolight Plus, Tropix, Bedfordm, MA）を用いて定量した。１００μＭから開始する２倍連続希釈で、阻害薬の力価測定を行った（２連で）。各濃度での阻害パーセントを、対照感染との関連で計算した。
【０３２５】
ｄ．ＨＩＶ伝播の阻害
本発明の化合物がヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の伝播を阻害する能力を、米国特許第５４１３９９９号（１９９５年５月９日）およびバッカらの報告（J. P. Vacca, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 4096-4100 (1994)）（これらは参照によって、その全内容が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって測定した。
【０３２６】
本発明のヌクレオシド誘導体については、下記のアッセイに記載の方法に従って、ＭＴＳ細胞に基づくアッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞傷害性のスクリーニングも行った。ＨｕＨ−７細胞系については、ナカバヤシらの報告（H. Nakabayashi, et al., Cancer Res., 42: 3858 (1982)）に記載されている。
【０３２７】
ｅ．細胞傷害性アッセイ
３日間のインキュベーションでの懸濁培養用には細胞約１．５×１０５個／ｍＬ、３日間のインキュベーションでの付着培養用には細胞５．０×１０４個／ｍＬの濃度で、細胞培養物を適切な培地中で製造した。細胞培養物９９μＬを９６ウェル組織培養液処理プレートのウェルに移し入れ、１００倍最終濃度の被験化合物のＤＭＳＯ溶液１μＬを加えた。プレートを、所定の期間にわたって３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベーション期間終了後、アッセイ試薬（CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay reagent）（ＭＴＳ）（Promega）２０μＬを各ウェルに加え、さらに３時間までの期間にわたって、プレートを３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。プレートを撹拌して十分に混和し、４９０ｎｍでの吸光度をプレート読取装置を用いて読み取った。懸濁培養細胞の標準曲線を、ＭＴＳ試薬添加直前の既知細胞数で作成した。代謝活性細胞は、ＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは、４９０ｎｍで吸収を示す。化合物存在下での４９０ｎｍでの吸光度を、化合物を添加しなかった細胞での吸光度と比較した。
【０３２８】
参考文献：Cory, A. H. et al., ″Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture″, Cancer Commun. 3: 207 (1991)。
【０３２９】
以下のアッセイを用いて、他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスに対する本発明の化合物の活性を測定した。
【０３３０】
ａ．ライノウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）
アッセイ条件は、シドウェルおよびハフマンによる論文（Sidwell and Huffman, ″Use of disposable microtissue culture plates for antiviral and interferon induction studies″, Appl. Microbiol. 22: 797-801 (1971)）に記載されている。
【０３３１】
ウィルス
シドウェルおよびハフマンの参考文献に記載の方法に従って、ライノウィルス２型（ＲＶ−２）ＨＧＰ株を、ＫＢ細胞および培地（０．１％ＮａＨＣＯ３、抗生物質なし）とともに用いた。ＡＴＣＣから入手したウィルスは、軽度の急性熱性上気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。
【０３３２】
ライノウィルス９型（ＲＶ−９）２１１株およびライノウィルス１４型（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株も、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection, Rockville, MD）から入手した。ＲＶ−９は、ヒト咽頭うがい液からのものであり、ＲＶ−１４は気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。これらのウィルスはいずれも、ヒト頸部類上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Dr. Fred Hayden, Univ. of VA）とともに用いた。５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および０．１％ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ（イーグル最小必須培地）を、増殖培地として用いた。
【０３３３】
これら３種類のウィルスについての抗ウィルス試験培地は、５％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３、５０μｇゲンタマイシン／ｍＬおよび１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＭＥＭとした。
【０３３４】
本発明の化合物のアッセイを行う上での最高濃度は、２０００μｇ／ｍＬとした。被験化合物から約５分後に、アッセイプレートにウィルスを加えた。適切な対照についても行った。アッセイプレートを、加湿空気および５％ＣＯ２で３７℃にてインキュベートした。形態変化に関して顕微鏡観察にて、対照細胞で細胞傷害性をモニタリングした。ウィルスＣＰＥデータおよび細胞傷害性対照データの回帰分析によって、ＥＤ５０（５０％有効用量）およびＣＣ５０（５０％細胞傷害性濃度）を得た。ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０という式によって、選択性指数（ＳＩ）を計算した。
【０３３５】
ｂ．デング熱ウィルス、バンジウィルスおよび黄熱病ウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。
【０３３６】
ウィルス
デング熱ウィルス２型ニューギニア株を、疾病対策センターから入手した。２系統のアフリカミドリザル腎臓細胞を用いて、ウィルスを培養し（ベロ）、抗ウィルス試験を行った（ＭＡ−１０４）。感染マウス脳から得た黄熱病ウィルス１７Ｄ株および南アフリカの発熱した少年の血清から単離したバンジウィルスＨ３３６株のいずれも、ＡＴＣＣから入手した。ベロ細胞を、これら両方のウィルスとともに用い、アッセイに供した。
【０３３７】
細胞および培地
ＭＡ−１０４細胞（BioWhittaker, Inc., Walkersville, MD）およびベロ細胞（ＡＴＣＣ）を、５％ＦＢＳおよび０．１％ＮａＨＣＯ３を含み、抗生物質を含まない培地１９９中で用いた。デング熱ウィルス、黄熱病ウィルスおよびバンジウィルス用のアッセイ培地は、ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、０．１８％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０３３８】
本発明の化合物の抗ウィルス試験を、シドウェルおよびハフマンの参考文献に従い、上記のライノウィルス抗ウィルス試験と同様にして行った。これら各ウィルスについて、５〜６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０３３９】
ｃ．西ナイルウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記で引用のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。カラス脳由来の西ナイルウィルスニューヨーク単離株を、疾病対策センターから入手した。上記の方法に従って、ベロ細胞を増殖させ、使用した。試験培地は、ＭＥＭ、１％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０３４０】
ライノウィルス活性についてのアッセイに用いたものと同様であるシドウェルおよびはハフマンの方法に従って、本発明の化合物の抗ウィルス試験を行った。５〜６日後に、十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０３４１】
ｄ．ライノウィルス、黄熱病ウィルス、デング熱ウィルス、バンジウィルスおよび西ナイルウィルスに対する化合物のin vitro抗ウィルス活性の測定（ニュートラルレッド取り込みアッセイ）
上記のＣＰＥ阻害アッセイを行った後、文献（″Microtiter Assay for Interferon: Microspectrophotometric Quantitation of Cytopathic Effect″, Appl. Environ. Microbiol. 31: 35-38 (1976)）に記載の別の細胞変性検出法を用いた。ＥＬ３０９型微量プレート読取装置（Bio-Ｔek Instruments Inc.）を用いて、アッセイプレートの読取を行った。ＥＤ５０およびＣＤ５０を上記の方法に従って計算した。
【０３４２】
医薬製剤の例
本発明の化合物の経口組成物の具体的な実施形態として、実施例１または実施例２の化合物５０ｍｇを、十分に微粉砕した乳糖とともに製剤して総量５８０〜５９０ｍｇを得て、サイズＯ硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０３４３】
以上、本発明の具体的な実施形態を参照しながら、本発明についての説明を行ったが、当業者には、本発明の精神および範囲を逸脱しない限りにおいて、各種の変更、修正および置き換えが可能であることは明らかであろう。例えば、ＨＣＶ感染の重度に関して治療対象のヒトの応答における変動の結果として、上記のような好ましい用量以外の有効用量が適用可能な場合がある。同様に、認められる薬理応答は、選択される特定の活性化合物または医薬担体の有無、ならびに製剤の種類および用いられる投与形態に応じて変動し得るものであり、結果におけるそのような予想される変動もしくは差異は、本発明の目的および実務に従って想到されるものである。従って、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定され、そのような特許請求の範囲は妥当な限り広く解釈すべきものである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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