(57)【要約】本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療または予防において使用するためのヌクレオシド誘導体に関するものである。具体的には、本発明は、公知の２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡ複製の阻害剤としてのその使用、およびそのような化合物の医薬組成物に関する。本発明の化合物は、ＨＣＶ感染の治療のための治療剤としての使用の可能性を有する。本発明は、Ｒ1が、水素またはホスフェートであり、Ｂが、式Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３で示される１−ピリミジニルまたは９−プリニル残基を表す、式Ｉで示される２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体および薬学的に許容し得るその塩の、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置またはそのような処置のための医薬の製造のための使用を記載している。
2004534769.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2004534769.tif 000014
（式中、
Ｒ1は、水素またはホスフェートであり、
Ｂは、式Ｂ１、Ｂ２またはＢ３：
【化２】
2004534769.tif 000015
で示される１−ピリミジニルまたは９−プリニル残基を示す）
で示される化合物および薬学的に許容し得るその塩の、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が媒介する疾患の処置のための、またはそのような処置のための医薬の製造のための使用。
【請求項２】
化合物が、β−Ｄまたはβ−Ｌリボフラノシドおよび薬学的に許容し得るその塩である、請求項１記載の化合物の使用。
【請求項３】
式Ｉ−ａ：
【化３】
2004534769.tif 000016
（式中、
Ｒ1およびＢは、請求項１に定義したとおりである）
で示される請求項１または２記載の化合物および薬学的に許容し得るその塩の使用。
【請求項４】
Ｒ1が、上記定義のとおりであり、Ｂが、１−ピリミジニルを示す、請求項１〜３のいずれか一項記載の、式ＩまたはＩ−ａの化合物、および薬学的に許容し得るその塩の使用。
【請求項５】
化合物が、
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジン、
９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、
２′−デオキシ−２′−フルオログアノシン、または
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジン５′−Ｏ−トリホスフェートモノリチウム塩である、請求項１〜３のいずれか一項記載の式ＩまたはＩ−ａの化合物の使用。
【請求項６】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が媒介する疾患の処置のための、またはそのような処置のための医薬の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物または薬学的に許容し得るその塩。
【請求項７】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が媒介する疾患の処置のための、またはそのような処置のための医薬の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項記載の、式ＩもしくはＩ−ａの化合物または薬学的に許容し得るその塩の薬学的に効果的な量に基づく、医薬組成物。
【請求項８】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が媒介する疾患の処置のための、請求項１〜５のいずれか一項記載の、式ＩもしくはＩ−ａの化合物または薬学的に許容し得るその塩の薬学的に効果的な量に基づく医薬組成物の使用。
【請求項９】
本明細書記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療または予防に使用するためのヌクレオシド誘導体に関する。具体的には、本発明は、公知の２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体、並びにＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡ複製の阻害剤およびそのような化合物の医薬組成物としての使用に関する。本発明の化合物は、ＨＣＶ感染の治療のための治療剤としての潜在的用途を有する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルスは、全世界において慢性肝疾患の第一原因となっている。ＨＣＶに感染した患者は、肝硬変およびそれに続く肝細胞癌を発症する危険にあり、したがって、ＨＣＶは、肝移植の主要な適応症である。２種の承認治療法のみが、現在、ＨＣＶ感染の処置に利用し得る（R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999, 19, 35）。これらは、インターフェロン−α単独療法、およびさらに最近では、ヌクレオシドアナログであるリバビリン（Virazole）とインタフェーロン−αの併用療法である。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルスは、フラビリダ属（Flaviridae）に属する。それは、ＲＮＡウイルスであり、その大きなポリタンパク質をコードしているＲＮＡゲノムは、プロセシングの後、必要な複製メカニズムを産生し、子孫ＲＮＡの合成を確実に行う。ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムによりコードされる非構造タンパク質のほとんどが、ＲＮＡ複製に関与すると考えられている。Lohmann et al. [V. Lohmann et al., Science, 1999, 285, 110-113]は、サブゲノムＨＣＶ  ＲＮＡ分子を導入し、高い効率で複製することが明らかにされている、ヒト肝細胞癌（Ｈｕｈ７）細胞株の構築を記載している。これらの細胞株におけるＲＮＡ複製のメカニズムは、感染した肝細胞における完全長ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムの複製と同一であると考えられている。これらの細胞株の単離に使用されるサブゲノムＨＣＶ  ｃＤＮＡクローンは、ＨＣＶ複製のヌクレオシドアナログ阻害剤を同定する細胞ベースのアッセイの開発の基礎を形成している。
【０００４】
WO99/43691には、２′−フルオロヌクレオシドアナログが、Ｂ型肝炎感染、Ｃ型肝炎感染、ＨＩＶ、ならびに腫瘍および癌などの異常細胞増殖の処置に有用なことが記載されている。２′−デオキシ−２′−フルオロリボヌクレオシド誘導体は、具体的には記載されていない。
【０００５】
本発明は、式Ｉ：
【０００６】
【化４】
2004534769.tif 000003
【０００７】
（式中、
Ｒ1は、水素またはホスフェートであり、
Ｂは、式Ｂ１、Ｂ２またはＢ３：
【０００８】
【化５】
2004534769.tif 000004
【０００９】
で示される１−ピリミジニルまたは９−プリニル残基を示す）
で示される２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体および薬学的に許容し得るそれらの塩の、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置のための、またはそのような処置のための医薬の製造のための使用を記載している。
【００１０】
本明細書でＲ1について使用する用語「ホスフェート」は、式−［Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ］nＨ（式中、ｎは、１、２および３から選択される整数である）で示されるモノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェート基を示す。Ｒ1中のホスフェートは、好ましくはモノホスフェート基である。用語「ホスフェート」は、安定化させたモノホスフェートプロドラッグ、またはin vivo投与された場合に、Ｒ1がモノホスフェートである化合物を与え得る、薬学的に許容し得る他の脱離基をさらに含む。これらの「プロヌクレオチド」は、親ヌクレオチドの活性、バイオアベイラビリティまたは安定性などの性質を改良し得る。
【００１１】
モノホスフェート部分の水素の１つ以上を置き換え得る置換基の例は、C. R. Wagner et al Medicinal Research Reviews, 2000, 20 (6), 417またはR. Jones and N. Bischofberger, Antiviral Research 1995, 27, 1に記載されている。このようなプロヌクレオチドとして、アルキルおよびアリールホスホジエステル、ステロイドホスホジエステル、アルキルおよびアリールホスホトリエステル、環状アルキルホスホトリエステル、シクロサリゲニル（CycloSal）ホスホトリエステル、Ｓ−アシル−２−チオエチル（ＳＡＴＥ）誘導体、ジチオエチル（ＤＴＥ）誘導体、ピバロイルオキシメチルホスホエステル、パラ−アシルオキシベンジル（ＰＡＯＢ）ホスホエステル、グリセロリピドホスホジエステル、グリコシルリピドホスホトリエステル、ジヌクレオシジルホスホジエステル、ジヌクレオシドホスホトリエステル、ホスホロジアミデート環状ホスホルアミデート、ホスホルアミデートモノエステルおよびホスホルアミデートジエステルがあげられる。
【００１２】
本発明は、in vivoで、Ｒ1が水素である式Ｉの化合物に変換される親ヌクレオシドのプロドラッグもしくは生物前駆体または生理学的に許容し得るそれらの塩も含む。好ましいプロドラッグ誘導体は、エステル基の非カルボニル部分が、直鎖または分岐アルキル（例えば、メチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチルまたはtert−ブチル）、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えば、ベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）、アリール（例えば、場合によりハロゲン、Ｃ1-4アルキルもしくはＣ1-4アルコキシまたはアミノで置換されたフェニル）；アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル（例えば、メタンスルホニル）などのスルホネートエステル；アミノ酸エステル（例えば、Ｌ−バリルまたはＬ−イソロイシル）から選択される、３′−または５′−ヒドロキシル基のカルボン酸エステル誘導体、または薬学的に許容し得るそれらの塩を含む。その調製は、例えば、J. March (1992), "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure", 4th ed. John Wiley & Sonsなどの有機化学の教科書から公知にされている方法など、当分野において公知の方法により、実施される。
【００１３】
本明細書中に記載の化合物を図で示す際、太字の先細り線
【００１４】
【化６】
2004534769.tif 000005
【００１５】
は、環の平面の上方にある置換基を示し、点線
【００１６】
【化７】
2004534769.tif 000006
【００１７】
は、環の平面の下方にある置換基を示す。
【００１８】
本発明の化合物は、立体異性性を示し、したがって、炭素原子が、Ｓ、ＲまたはＲ，Ｓ配置を有する化合物を含む。本発明の化合物は、式Ｉの化合物のあらゆる異性体、またはそれらの異性体の混合物であり得る。１個以上の不斉炭素原子を有する本発明の化合物および中間体は、所望の立体配置を有する所与の立体異性体または純粋なエナンチオマーを得るために公知の立体特異的方法によって、本発明の方法の適当な工程において、分割することができる立体異性体の混合物として得てもよい。あるいは、所望の異性体を、当分野で公知の方法により直接合成してもよい。
【００１９】
本発明の好ましい実施態様においては、リボフラノシドは、α−Ｄ、β−Ｄ、α−Ｌまたはβ−Ｌリボフラノシル環、より好ましくはβ−Ｄまたはβ−Ｌリボフラノシル環、そして最も好ましくはβ−Ｄリボフラノシル環である。
【００２０】
本発明の化合物の好ましい相対的配置は、式Ｉ−ａ：
【００２１】
【化８】
2004534769.tif 000007
【００２２】
（式中、
Ｒ1およびＢは、上記定義のとおりである）
のもの、および薬学的に許容し得るそれらの塩である。
【００２３】
式Ｉの化合物は、互変異性を示し（J. March (1992), "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure", 4th ed. John Wiley & Sonsなどの有機化学の教科書から公知）、これは、本発明の化合物が、容易な相互変換可能な２つ以上の化学化合物として存在し得ることを意味する。多くの場合、それは単に、いずれとも共有結合を形成する、２つの他の原子間の１つの水素原子の交換を意味する。互変異性化合物は、互いに動的に平衡して存在するため、個別の物質として調製しようとすると、通常、成分の構造に基づいて予測される化学的および物理的性質のすべてを示す、混合物を形成することになる。
【００２４】
互変異性の最も一般的なタイプは、カルボニルもしくはケト化合物、および不飽和ヒドロキシ化合物、またはエノールに関するものである。構造の変化は、炭素原子と酸素原子との間の水素原子の移動であって、結合の再配列を伴う。
【００２５】
例えば、アセトアルデヒドなどの、多くの脂肪族アルデヒドおよびケトンにおいて、ケト型が優勢な型であり、フェノールでは、エノール型が主要成分である。中間的状況は、例えば、エチルアセトアセテートに代表される。これは、室温において、約９２．４％ケトおよび７．６％エノールを含有し、−７８℃では、二形態の相互変換が、個々の物質を単離できるほどゆっくりになる。
【００２６】
本発明の範囲内において、式Ｉの化合物が、様々な互変異性形態で存在し、それらが本発明に包含されることは、理解されるであろう。
好ましい互変異性形態を以下に図示する：
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジン：
【００２７】
【化９】
2004534769.tif 000008
【００２８】
２−アミノ−２′−デオキシ−２′−フルオロアデノシン：
【００２９】
【化１０】
2004534769.tif 000009
【００３０】
２′−デオキシ−２′−フルオログアノシン：
【００３１】
【化１１】
2004534769.tif 000010
【００３２】
好ましくは、上記化合物は、最初に図示された形態で存在する。
【００３３】
塩基性の式Ｉの化合物は、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸、および臭化水素酸）、硫酸、硝酸およびリン酸などの無機酸、および有機酸（例えば、酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸など）と薬学的に許容し得る塩を形成することができる。そのような塩の形成および単離は、当分野に公知の方法で行うことができる。酸性の式Ｉの化合物は、アルカリ金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウム）、アンモニウムまたはＮＸ4+（Ｘは、Ｃ1-4アルキル、好ましくはメチルまたはエチル、より好ましくはメチル）などの適切な塩基から誘導される、薬学的に許容し得る塩基塩を形成することができる。
【００３４】
本発明の好ましい実施態様は、Ｒ1が、上記定義のとおりであり、Ｂが、１−ピリミジニルを示す、上記定義通りの式Ｉまたは式Ｉ−ａで示される化合物、および薬学的に許容し得るそれらの塩の使用である。
【００３５】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置における使用のための、またはそのような処置のための医薬を製造するための使用のための、式Ｉで示される化合物のより好ましい実施態様を、表１に示す（以下参照）：
【００３６】
【表１】
2004534769.tif 000011
【００３７】
アッセイ方法
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンの活性を、Lohmann et al [V. Lohmann et al., Science, 1999, 285, 110-113]により報告された方法の応用を用いて測定した。
【００３８】
ＨＣＶレプリコンアッセイ
ＨＣＶレプリコンを含む細胞株を用いて、２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンが、細胞中のＨＣＶ  レプリコンＲＮＡの複製を阻害する能力を示した。レプリコンＲＮＡの複製は、感染肝細胞中のＨＣＶ  ＲＮＡの複製を模倣するので、上記性質を有するそれらの小分子は、抗ＨＣＶ薬としてさらに開発するのに興味深いと考えられる。
【００３９】
ＨＣＶレプリコンＲＮＡの複製の阻害は、細胞中のレプリコンＲＮＡの減少につながり、それは、このＲＮＡを特異的に定量する方法を用いて測定することができる。
【００４０】
このアッセイは、レポーターを細胞内ＨＣＶレプリコンＲＮＡレベルの単純な読み出しとして用いるという考えに基づいている。この目的で、ウミシイタケ（Renilla）ルシフェラーゼ遺伝子を、レプリコン構築物ＮＫ５．１の第一のオープンリーディングフレーム内、配列内リボゾーム侵入部位（internal ribosome entry site: IRES）配列のすぐ後ろに導入し（Krieger et al., J. Virol. 75: 4614）、口蹄疫ウイルスからの自己切断ペプチド２Ａを介して、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子に融合させた（Ryan & Drew, EMBO Vol 13: 928-933）。In vitro転写の後、ＲＮＡをヒト肝細胞Ｈｕｈ７細胞に電気穿孔法により導入し、Ｇ４１８耐性コロニーを単離し、増殖させた。安定に選択された細胞株２２０９−２３が、複製可能なＨＣＶサブゲノムＲＮＡを含有することが明らかにされ、レプリコンにより発現されたウミシイタケルシフェラーゼの活性は、細胞内のＲＮＡレベルを反映した。
【００４１】
アッセイ手順では、５％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）（Gibco BRL カタログ番号10106-169）を含むダルベッコＭＥＭ（Gibco BRL カタログ番号31966-021）中で培養したウミシイタケルシフェラーゼＨＣＶレプリコン細胞（２２０９−２３）を、９６ウエルプレート上にウエル当たり５０００細胞で播種し、一晩インキュベートした。２４時間後、化合物の増殖培地中への各種希釈物を細胞に添加し、その後さらに３７℃で３日間インキュベートした。化合物の活性および細胞毒性を並行して測定し、観察された活性が細胞増殖の低下によるものではないことを確認するために、アッセイは、１枚は白濁し、１枚が透明な２枚のプレートで繰り返して実施した。
【００４２】
インキュベーション時間の終了時に、白色プレート中の細胞を集め、デュアル−ルシフェラーゼレポーターアッセイ系（Promegaカタログ番号E1960）を用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。以下のパラグラフに記載するすべての試薬は、製造者のキットに含まれており、製造者の説明書に従って、試薬を調製した。簡潔に述べると、細胞を、１ウエル当たりＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩液；ｐＨ７．０）２００μＬで２回洗浄し、１×受動溶解緩衝液（passive lysis buffer）２５μＬで溶解させ、室温で２０分間インキュベートした。ＬＡＲＩＩ試薬１００μＬを、各ウエルに加えた。その後プレートをＬＢ９６Ｖマイクロプレートルミノメーター（MicroLumatPlus, Berthold）に挿入し、Stop & Glo試薬１００μＬを機械により各ウエルに注入し、２秒の待機、１０秒の測定というプログラムを使用して信号を測定した。未処置細胞対照値との関係において、レプリコンのレベルを５０％低下させるのに要する薬物の濃度であるＩＣ50は、ルシフェラーゼ活性の低下パーセンテージ対薬物濃度のプロットから算出することができる。
【００４３】
細胞毒性アッセイには、Roche Diagnostic（カタログ番号1644807）から得られるＷＳＴ−１試薬を用いた。ＷＳＴ−１試薬１０μＬを、ブランクとして培地のみを含むウエルを含む各ウエルに添加した。その後、細胞を３７℃で１〜１．５時間インキュベートし、ＯＤ値を、９６ウエルプレートリーダーにより４５０nm（６５０nmの対照フィルター）で測定した。未処理細胞対照値との関係において、細胞増殖を５０％低下させるのに要する薬物の濃度であるＣＣ50は、ＷＳＴ−１値の低下パーセンテージ対薬物濃度のプロットから算出することができる。
【００４４】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイ（Ｃ型肝炎ウイルス非構造タンパク質５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼアッセイ）：
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンの作用メカニズムを確立するために、５′−Ｏ−トリホスフェートの活性を、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ酵素に対して測定した。この方法のために、Ｃ末端６−ヒスチジンタグを有する全長ＮＳ５Ｂポリメラーゼを使用した（V Lohmann, U Herian and R Bartenschlager J Virol, 1997, 71(11), 8416）。
【００４５】
３５μＬ中、最終濃度で４０mM  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）ｐＨ８．０、４mMジチオトレイトール（ＤＴＴ）、４mM酢酸マグネシウム、ポリ（ｒＩ）：オリゴ（ｄＣ）16テンプレート（０．１mg：０．０１mg；０．１mg/mlポリ（ｒＩ）５mlおよび１０mg/mlオリゴ（ｄＣ）16の混合物を９５℃で５分間加熱し、その後２０分間にわたり３０℃に冷却することによりアニールさせた）、および５００ｎＭ［3Ｈ］シチジン５′−トリホスフェート（［3Ｈ］−ＣＴＰ；比活性７４０GBq/mmol）（Amersham Pahrmacia Biotech）を含む反応混合物をヌクレオチドトリホスフェート水溶液の５μLとともにインキュベートし、室温で５分間放置した。通常、各ＩＣ50の測定につき、化合物の１０段階の希釈物を用いた。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの５μg/ml溶液１０μLを加え、混合物を３０℃で２時間インキュベートした。化合物を含有しない陽性対照および酵素を含有しない陰性対照を、各アッセイに含めた。
【００４６】
２０％（ｖ／ｖ）トリクロロ酢酸５０μLを加え、４℃で３０分間インキュベートして、反応を終了させた。濾過し、１０％（ｖ／ｖ）トリクロロ酢酸２００μLずつで３回洗浄し、７０％（ｖ／ｖ）エタノール２００μLずつで３回洗浄して乾燥させた後、反応生成物をシンチレーションカクテル（National Diagnosticsから購入のEcoscint A）２５μLを加え、シンチレータで計測することにより定量した。
【００４７】
化合物を含有しない対照に比して［3Ｈ］−ＣＴＰの取込みを５０％低下するのに要する化合物の濃度（ＩＣ50）を、放射活性応答対ヌクレオシドトリホスフェート濃度のプロットから算出した。
【００４８】
ＨＣＶレプリコンアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、ＩＣ50から、活性は約０．０１〜１００μＭの範囲にあり、好ましい化合物は、約０．０１〜約５０μＭの活性範囲を有し、さらに好ましくは、約０．０１〜３０μＭであり、最も好ましくは０．０１〜１５μＭである。
【００４９】
ＨＣＶレプリコンアッセイ
【００５０】
【表２】
2004534769.tif 000012
【００５１】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲｄＲポリメラーゼアッセイ：
【００５２】
【表３】
2004534769.tif 000013
【００５３】
上記データは、式Ｉの２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体が、肝細胞株においてサブゲノムＣ型肝炎ウイルスの複製を阻害していることを示す。精製されたＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼおよび２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンの５′−Ｏ−トリホスフェート誘導体を用いたin vitro阻害実験から、作用様式が確認されている。したがって、式Ｉの化合物が、ヒトにおいてＨＣＶ感染の処置のための抗ウイルス薬として有効である可能性を有するか、そのような活性を示す化合物に代謝される。
【００５４】
本発明の別の実施態様では、活性化合物またはその誘導体若しくは塩を、式Ｉのものも含む、抗肝炎薬などの、別の抗ウイルス薬と組合わせてまたは交互に投与することができる。活性化合物またはその誘導体若しくは塩を、別の抗ウイル薬と組合わせてまたは交互に投与すると、その活性が増大することもある。
【００５５】
特定の医薬剤形においては、本発明の化合物のアシル化（特にアセチル化）誘導体、ピリジンエステルおよび種々の塩形態などの、化合物のプロドラッグ形態が好ましい。当業者ならば、本発明の化合物をプロドラッグ形態に修飾して、宿主生物または患者内の標的部位への活性化合物の送達を促進することがいかに容易であるかを理解するであろう。また、当業者は、適用可能な場合には、プロドラッグ形態の好ましい薬物動態学的パラメーターを利用して、宿主生物または患者内の標的部位への本発明の化合物の送達において、化合物の意図する効果を最大にするであろう。
【００５６】
レシピエントに投与した際に、直接または間接的に、親化合物を与えることができるあらゆる誘導体として、活性化合物を投与することができる。さらに、修飾は、化合物の生物学的活性に影響を与えることが可能で、場合により、親化合物に比して活性が増大することもある。これは、本明細書に記載の方法に従って誘導体を製造し、その抗ＨＣＶ活性を試験することにより、容易にアッセイすることができる。
【００５７】
本発明により提供される２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体またはその医薬を、単剤療法に用いても良いし、併用療法に用いても良い。即ち、処置は、一つ以上の更なる治療的に活性な物質、例えば、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子またはコロニー刺激因子などの免疫系調節剤、抗ウイルス剤または抗炎症剤などの投与と連係してもよい。処置が併用療法であるときは、そのような投与は、本発明の２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体の投与と同時または逐次的であってもよい。したがって、本明細書中の同時投与は、作用物質の同一の時間または異なる時間の投与を含む。
【００５８】
本発明により提供される活性化合物（２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体）および薬学的に使用可能なその塩の投与は、例えば経口、局所、例えば、注射用溶液の形態などの非経口（または、胸骨内注射若しくは注入技術）、例えば、鼻腔用スプレー、または吸入用スプレーの形態などの経鼻的なもの、局所的なものなど、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透増強剤を含んでもよい）、経頬および座剤投与などの、あらゆる医薬処方物の形態で医薬として使用することができ、連続的静脈内点滴から１日当たり数回（例えば、１日４回）の経口投与までに及んでもよい。さらに、医薬処方物を、例えば、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬および軟ゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、シロップまたは懸濁剤などの形態で経口的に、または例えば座剤の形態で経直腸的に、経腸的に投与することができる。
【００５９】
医薬製剤の製造のために、２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体および薬学的に許容し得るその塩を、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬ゼラチンカプセルおよび軟ゼラチンカプセル、液剤、エマルジョンまたは懸濁剤のための、治療上不活性な無機または有機賦形剤とともに処方することができる。
【００６０】
例として、本発明による化合物を、薬学的に許容し得る担体と混合して処方することができる。例えば、本発明の化合物を、薬学的に許容し得る塩として経口投与することができる。本発明の化合物は、一般には水溶性であるため、生理食塩溶液（例えば約ｐＨ７．２〜７．５に緩衝化）で静脈内投与することができる。リン酸、重炭酸またはクエン酸などの従来の緩衝液を、この目的のために用いることができる。無論、当業者は、本明細書の教示の範囲内で、処方物を改変し、本発明の組成物を不安定にしたり、治療活性を損ねたりすることなく、特定の投与ルートのための多数の処方物を提供してもよい。特に、本発明の化合物の水中または他のビヒクルへの溶解性を高めることを目的としたその修飾は、例えば、十分に当分野の通常の技術範囲内である若干の修飾（塩形成、エステル化など）により容易に達成し得る。また、患者における最大の有利な効果のために本発明の化合物の薬物動態を管理するために、具体的な化合物の投与ルートおよび投薬計画を変更することも、十分に当分野の通常の技術範囲である。
【００６１】
非経口処方物では、担体は、通常、滅菌水または塩化ナトリウム水溶液を含むが、分散を助けるものを含む他の成分を含んでもよい。無論、滅菌水を使用し、滅菌状態を維持すべき場合、組成物および担体も滅菌しなければならない。注射可能な懸濁液も調製し得るが、この場合、適切な液体の担体、懸濁化剤などを使用してもよい。
【００６２】
錠剤、被覆錠剤、糖衣錠および硬ゼラチンカプセルに適した賦形剤は、例えば、乳糖、コーンスターチおよびその誘導体、タルクならびにステアリン酸またはその塩である。
【００６３】
所望ならば、錠剤またはカプセルを、標準的手法により、腸溶コーティングしてもよいし、徐放性にしてもよい。
【００６４】
軟ゼラチンカプセルに適した賦形剤は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固形および液体多価アルコールである。
【００６５】
注射用溶液に適した賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、アルコール、多価アルコール、グリセリンまたは植物油である。
【００６６】
座剤に適した賦形剤は、例えば、天然および硬化油、ワックス、脂肪、半液体または液体多価アルコールである。
【００６７】
経腸的使用のための液剤およびシロップに適した賦形剤は、例えば、水、多価アルコール、ショ糖、転化糖およびグルコースである。
【００６８】
本発明の医薬製剤を、徐放処方物または他の適切な処方物として提供してもよい。
【００６９】
医薬製剤は、保存剤、溶解剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧調整のための塩、緩衝液、マスキング剤または抗酸化剤を含むこともできる。
【００７０】
医薬製剤は、当分野で公知の治療的に活性な他の作用物質を含有してもよい。
【００７１】
本発明により提供される２′−デオキシ−２′−フルオロヌクレオシド誘導体は、免疫が介する状態および疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、寄生虫疾患、炎症性疾患、過増殖性血管性疾患（hyperproliferative vascular disease）、同種移植片拒絶、腫瘍および癌の治療に有用である。
【００７２】
投薬量は、広い範囲で変えることができ、無論、個別具体的場合において、個々の必要により調整される。経口投与では、１日当たり約０．０１〜約１０００mg/kg体重の１日投薬量が、単剤療法および／または併用療法において適切である。好ましい１日投薬量は、約０．１〜約５００mg/kg体重であり、より好ましくは、１日当たり０．１〜約１００mg/kg体重であり、最も好ましくは、１日当たり１．０〜約１００mg/kg体重である。典型的な調剤は、約５〜約９５％（ｗ／ｗ）の活性化合物を含有する。１日投薬量は、一回投薬量として、または分割投薬量として、典型的には、１日当たり１〜５回投与することができる。
【００７３】
本明細書中で処置に言及するときは、現在存在する状態の治療とともに予防も含み、動物の処置は、ヒトおよび他の哺乳動物の処置を含むことを理解するであろう。さらに、本明細書中の「Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の処置」は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に関連する、またはＨＣＶが媒介する疾患もしくは状態、またはその臨床症状の治療または予防を含む。
【００７４】
本明細書中の「含む（comprise）」は、「含む、または、からなる（include or consist of）」を意味し、「含んでいる（comprising）」は、「含んでいる、または、からなっている（including or consisting of）」を意味する。
【００７５】
それぞれに特異的な形式で、もしくは開示された機能を実施するための手段で表された、先の記載中または特許請求の範囲、または添付の図面に開示された特徴、または開示された結果を得るための方法や工程は、別々に、またはこうした特徴のあらゆる組合わせでも、適宜、発明を様々な形態で実施するために利用してもよい。
【００７６】
本発明の化合物は、当業界において公知であり、特に以下に記載するような、公知の方法で製造することができる。
【００７７】
実施例１
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンは、Sigma-Aldrich Company Ltd.,カタログ番号F8883から購入するか、例えば２，２′−Ｏ−アンヒドロシチジンから、R Mengel and W Guschlbauer Angew Chemie Intl Ed 1978, 17, 525に記載のような当業界に公知の方法により製造することができる。
【００７８】
実施例２
９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリンは、H. J. Thomas et al., Nucleosides and Nucleotides, 1994, 13, 309の方法により製造することができる。
【００７９】
実施例３
２′−デオキシ−２′−フルオログアノシンは、B. S. Ross et al., Nucleosides and Nucleotides, 1997, 16, 1645の方法により製造することができる。
【００８０】
実施例４
２′−デオキシ−２′−フルオロシチジンの５′−Ｏ−トリホスフェート誘導体は、Trilink BioTechnologies Inc., カタログ番号N-1008-1から購入することもできるし、または例えばK Burgess and D Cook Chemical Reviews 2000, 100, 2047により記載されている、当分野で公知の方法により製造することもできる。
【００８１】
ヌクレオシドを含む有機化合物のモノリン酸化の方法は、L A Slotin, Synthesis, 1977, 737に概説されている。さらに近年、他のヌクレオシドリン酸化法が、記載されている：M Uchiyama et al., J. Org. Chem., 1993, 58, 373; R Caputo et al., Synlett., 1997, 739およびM Taktakishvili and V Nair Tet. Lett. 2000, 41, 7173。ヌクレオシドに有用であり得る他のモノリン酸化法が、C E McKenna and J Schmidhauser, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1979, 739およびJ K Stowell and T S Widlanski Tet. Lett., 1995, 1825により記載されている。ジホスフェート誘導体およびトリホスフェート誘導体の合成は、K H Scheit, Nucleotide Analogues, 1980, Wiley InterscienceおよびK Burgess and D Cook Chemical Reviews, 2000, 100, 2047に概説されている。
【００８２】
式Ｉで示される化合物は、類似の２′−フルオロヌクレオシド誘導体の製造について当分野で公知のあらゆる方法で製造され得る。例えば、P Herdewijn et al Nucleosides and Nucleotides, 1989, 8, 65、またはH Hayakawa et al Chem Pharm Bull, 1990, 38, 1136および、特に、R Mengel and W Guschlbauer Angew Chemie Intl Ed 1978, 17, 525またはH J Thomas et al., Nucleotides and Nucleotides 1994, 13, 309またはB S Ross et al, Nucleosides and Nucleotides, 1997, 16, 1645を参照のこと。
【００８３】
これらの方法は、式Ｉ、例えばＬ−ヌクレオシドなどにより表されるもう片方の立体異性体の合成に適合させ得る。Ｌ−ヌクレオシドの一般的合成が記載されている（P Wang et al, Antiviral Research, 1998, 40, 19; E Moyroud and P Strazewski Tetrahedron, 1999, 55, 1277）。２′−フルオロ置換基の導入は、上記参考文献において対応するＤ−ヌクレオシドアナログについて記載された方法を用いて、行うことができる。
【００８４】
式Ｉの化合物の合成に、H J Thomas et al Nucleosides and Nucleotides, 1994, 13, 309に記載されたような、プリンまたはピリミジン塩基と適切に保護された２−フルオロ−フラノース誘導体との縮合反応を用いると、しばしばアノマー性ヌクレオシド誘導体の混合物を得る結果となる。α−およびβ−ヌクレオシドは、再結晶、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは超臨界流体クロマトグラフィーなどの当業者に公知の標準的技術により分離することができる。
【００８５】
式ＩまたはＩ−ａの化合物の製造についての更なる情報は、以下の参考文献から推定することができる：WO99/43691、WO98/16184、C. R. Wagner et al., Medicinal Research Reviews, 2000, 20 (6), 417またはR. Jones and N. Bischofberger, Antiviral Research 1995, 27, 1。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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