(57)【要約】【解決する課題】発明は、糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択された少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む多価ワクチンを提供する。【課題を解決する手段】ワクチンは３用量につき週間隔で投与される。これに続き、４週間休み、次いで、第４のワクチン接種を行う。次いで、８週間休み、次いで、第５のワクチン接種を行い、続いて、（患者が実験に留まる限り）合計２４ヶ月の間、１２週間ごとにさらなる免疫化を行なう。【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択された少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む多価ワクチン。
【請求項２】
上記糖脂質がグロボ（Ｇｌｏｂｏ）Ｅ、ルイス（Ｌｅｗｉｓ）抗原またはガングリオシドである請求項１記載のワクチン。
【請求項３】
上記ルイス抗原がＬｅyまたはシアリルＬｅaである請求項１記載のワクチン。
【請求項４】
上記ガングリオシドがフコシル化ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ２またはＧＤ３である請求項２記載のワクチン。
【請求項５】
上記ムチンがＭＵＣペプチドである請求項１記載のワクチン。
【請求項６】
上記ＭＵＣペプチドがＭＵＣ‐１、ＭＵＣ‐２またはＭＵＣ‐１６である請求項５記載のワクチン。
【請求項７】
上記多糖抗原がＴｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）、ＴＦ（ｃ）またはポリシアル酸である請求項１記載のワクチン。
【請求項８】
請求項１記載の二価ワクチン。
【請求項９】
請求項１記載の三価ワクチン。
【請求項１０】
請求項１記載の四価ワクチン。
【請求項１１】
請求項１記載の五価ワクチン。
【請求項１２】
請求項１記載の六価ワクチン。
【請求項１３】
グリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）を含む請求項１２記載の六価ワクチン。
【請求項１４】
ＭＵＣ‐１‐３２量体の範囲が約０．１ないし３０ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項１５】
グロボＨの範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項１６】
ＧＭ２の範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項１７】
Ｌｅyの範囲が約０．１ないし６０ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項１８】
Ｔｎ（ｃ）の範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項１９】
ＴＦ（ｃ）の範囲が約０．１ないし３０ｕｇである請求項１３記載のワクチン。
【請求項２０】
上記アジュバントがＱＳ２１である請求項１３記載のワクチン。
【請求項２１】
上記アジュバントの範囲が約２５ないし約２００ｕｇである請求項２０記載のワクチン。
【請求項２２】
上記アジュバントが約１００ｕｇである請求項２１記載のワクチン。
【請求項２３】
上記アジュバントがＧＰＩ‐０１００である請求項１３記載のワクチン。
【請求項２４】
上記アジュバントの範囲が約１ないし２５ｍｇである請求項２３記載のワクチン。
【請求項２５】
上記アジュバントが約１０ｍｇである請求項２４記載のワクチン。
【請求項２６】
請求項１記載の七価ワクチン。
【請求項２７】
グリコシル化ＭＵＣ‐１‐Ｇ５、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）、およびＴＦ（ｃ）を含む請求項２６記載の七価ワクチン。
【請求項２８】
ＭＵＣ‐１‐Ｇ５の範囲が約０．１ないし３０ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項２９】
グロボＨの範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３０】
ＧＭ２の範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３１】
Ｌｅyの範囲が約０．１ないし６０ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３２】
Ｔｎ（ｃ）の範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３３】
ｓＴｎ（ｃ）の範囲が約０．１ないし１００ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３４】
ＴＦ（ｃ）の範囲が約０．１ないし３０ｕｇである請求項２７記載のワクチン。
【請求項３５】
上記アジュバントがＱＳ２１である請求項２７記載のワクチン。
【請求項３６】
上記アジュバントの範囲が約２５ないし約２００ｕｇである請求項３５記載のワクチン。
【請求項３７】
上記アジュバントがＧＰＩ‐０１００である請求項２７記載のワクチン。
【請求項３８】
上記アジュバントの範囲が約１ないし２５ｍｇである請求項３７記載のワクチン。
【請求項３９】
上記アジュバントが約１０ｍｇである請求項３８記載のワクチン。
【請求項４０】
上記抗原がキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲートした請求項１記載のワクチン。
【請求項４１】
癌用の請求項１記載のワクチン。
【請求項４２】
上記癌が前立腺癌、乳癌、または卵巣癌である請求項４１記載のワクチン。
【請求項４３】
有効量の請求項１ないし４２記載のワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において免疫反応を誘導する方法。
【請求項４４】
適当な量の請求項１ないし４２記載のワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において癌を治療する方法。
【請求項４５】
請求項１ないし４２記載のワクチンおよび担体を含む組成物。
【請求項４６】
請求項１ないし４２記載のワクチンおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４７】
グロボＨ、フコシル化ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、シアリルＬｅaおよびポリシアル酸を含む群から選択される少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む小細胞肺癌用のワクチン。
【請求項４８】
有効量の請求項４７記載のワクチンを対象に投与することを特徴とする小細胞肺癌を担う対象において免疫反応を誘導する方法。
【請求項４９】
有効量の請求項４７記載のワクチンを対象に投与することを特徴とする小細胞肺癌を担う対象を治療する方法。
【請求項５０】
さらに、ＣＡ１２５、その部分、ＫＳＡペプチドまたは蛋白質、およびＰＳＭＡ、またはその部分を含む群から選択される抗原を含む請求項１記載のワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ここに出典明示してその内容を本出願に一体化させる２００１年７月６日に出願された米国シリアル番号６０／３０３，４９４および２００２年１月１０日に出願された米国シリアル番号６０／３４７，２３１の優先権を主張する。
【０００２】
本明細書中で開示する発明は、合衆国Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  ＳｅｒｖｉｃｅｓからのＮＩＨ補助金番号ＣＡ３３０４９およびＣＡ５２４７７下で合衆国政府の支援でなされた。従って、合衆国政府は本出願においてある種の権利を有する。
【０００３】
本出願を通じて、種々の文献を引用する。本発明が属する技術水準をより充分に記載するために、これらの刊行物のその全部の開示を、ここに、出展明示して本出願に一体化させる。
【背景技術】
【０００４】
腫瘍‐特異的抗原がワクチン用の標的として同定され、追求されている。本発明者らの以前の仕事は、ＫＬＨにコンジュゲートした腫瘍抗原グロボＨ、ルイスy、ＧＭ２、グリコシル化ＭＵＣ‐１、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）またはＴＦ（ｃ）を利用する一価ワクチンが、最小の全身毒性を除き、局所的紅斑および浮腫で安全であることを示した。これらの一価ワクチンでの接種の結果、ほとんどの患者は、各抗原‐ＫＬＨコンジュゲートに対する特異的な高力価のＩｇＭまたはＩｇＧ抗体を生じた。本発明は、一価ワクチンの成分が組み合わされ、癌の治療としてアジュバントと共に投与される多価ワクチンに関わる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本明細書中に開示する発明は、糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択された少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む多価ワクチンを提供する。また、本発明は、グリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）を含む多価ワクチンを提供する。このワクチンは、グリコシル化ＭＵＣ‐１‐Ｇ５、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴＮ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）を含むことができる。本発明は、該アジュバントがサポニン‐ベースのアジュバントである前記ワクチンを提供する。
【０００６】
また、本発明は、有効量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において免疫反応を誘導する方法を提供する。最後に、本発明は、適当な量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において癌を治療する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書中に開示する発明は、糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択された少なくとも２つのコンジュゲート抗原を含む多価ワクチンを提供する。
【０００８】
該糖脂質は、限定されるものではないが、グロボＨ、ルイス抗原およびガングリオシドを含む。該ルイス抗原は、限定されるものではないが、ＬｅyおよびシアリルＬｅaを含む。該ガングリオシドはフコシル化ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ２またはＧＤ３を含む。もう１つの具体例において、該ムチンはＭＵＣペプチドである。さらなる具体例において、該ＭＵＣペプチドはＭＵＣ‐１、ＭＵＣ‐２またはＭＵＣ‐１６である。該多糖抗原は、限定されるものではないが、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）、ＴＦ（ｃ）およびポリシアル酸を含む。
【０００９】
本発明は二価、三価、四価、五価、六価および七価ワクチンを提供する。該ワクチンは、糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択された少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む。
【００１０】
ある具体例において、六価ワクチンはグリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）を含む。更なる具体例において、ＭＵＣ‐１‐３２量体の範囲は約０．１ないし３０ｕｇである。更にもう１つの具体例において、グロボＨの範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。なお更なる具体例において、ＧＭ２の範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。更なる具体例において、Ｌｅyの範囲は約０．１ないし６０ｕｇである。さらなる具体例において、Ｔｎ（ｃ）の範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。さらなる具体例において、ＴＦ（ｃ）の範囲は約０．１ないし３０ｕｇである。
【００１１】
別の具体例において、アジュバントはサポニンベースである。該アジュバントはＱＳ２１およびＧＰＩ‐０１００を含む。ある具体例において、ＱＳ２１の範囲は約２５ないし約２００ｕｇである。もう１つの具体例において、ＱＳ２１は約１００ｕｇである。別の具体例において、アジュバントは約１ないし２５ｍｇの範囲のＧＰＩ‐０１００である。ある具体例において、ＧＰＩ‐０１００は約１０ｍｇである。
【００１２】
本発明は、糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、およびグリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択される少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む七価ワクチンを提供する。ある具体例において、該ワクチンはグリコシル化ＭＵＣ‐１‐Ｇ５、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴＮ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）を含む。もう１つの具体例において、ＭＵＣ‐１‐Ｇ５の範囲は約０．１ないし３０ｕｇである。さらなる具体例において、グロボＨの範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。もう１つの具体例において、ＧＭ２の範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。さらにもう１つの具体例において、Ｌｅyの範囲は約０．１ないし６０ｕｇである。ある具体例において、Ｔｎ（ｃ）の範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。さらなる具体例において、ｓＴｎ（ｃ）の範囲は約０．１ないし１００ｕｇである。さらにもう１つの具体例において、ＴＦ（ｃ）の範囲は約０．１ないし３０ｕｇである。
【００１３】
本発明は、アジュバントがサポニン‐ベースのアジュバントである前記ワクチンを提供する。これらのサポニン‐ベースのアジュバントは、限定されるものではないが、ＱＳ２１およびＧＰＩ‐０１００を含む。
【００１４】
ある具体例において、ＱＳ２１の範囲は約２５ないし２００ｕｇである。もう１つの具体例において、ＱＳ２１は約１００ｕｇである。別の具体例において、アジュバントはＧＰＩ‐０１００であって、範囲は約１ないし２５ｍｇである。好ましい具体例において、ＧＰＩ‐０１００は約１０ｍｇである。
【００１５】
本発明は、コンジュゲーテッドグリコシル化抗原、コンジュゲーテッドガングリオシド抗原および適当なアジュバントを含み、ここに、該抗原が担体にコンジュゲートした多価ワクチンを提供する。ある具体例において、担体はキーホールリンペッドヘモシアニン（ＫＬＨ）である。
【００１６】
本発明は、癌用の糖脂質抗原、多糖抗原、ムチン抗原、およびグリコシル化ムチン抗原および適当なアジュバントを含む群から選択される少なくとも２つのコンジュゲーテッド抗原を含む前記多価ワクチンを提供する。ある具体例において、癌は前立腺癌、乳癌または卵巣癌である。
【００１７】
また、本発明は、有効量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において免疫反応を誘導する方法を提供する。
【００１８】
さらに、本発明は、適当な量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする対象において癌を治療する方法を提供する。
【００１９】
また、本発明は、前記ワクチンおよび担体を含む組成物を提供する。
【００２０】
また、本発明は、前記ワクチンおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
加えて、本発明は、グロボＨ、フコシル化ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、シアリルＬｅaおよびポリシアル酸を含む群から選択される少なくとも二つのコンジュゲーテッド抗原を含む小細胞肺癌用のワクチンを提供する。また、本発明は、有効量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする小細胞肺癌を担う対象において免疫反応を誘導する方法を提供する。本発明は、さらに、有効量の前記ワクチンを対象に投与することを特徴とする小細胞肺癌を担う患者を治療する方法を提供する。
【００２２】
加えて、本発明は、ＣＡ１２５、またはその部分、ＫＳＡペプチドまたは蛋白質、およびＰＳＭＡ、またはその部分を含む群から選択される抗原をさらに含む前記ワクチンを提供する。
【００２３】
本発明は、さらに、抗体および／または免疫反応を誘導することができる他の抗原を含む前記ワクチンを含む。明細書を通じて説明するごとく、用いる抗原はその免疫原性を増加させるように修飾することができる。該抗原は、限定されるものではないが、ＣＡ１２５、またはその部分、ＫＳＡペプチドまたは蛋白質、およびＰＳＭＡ、またはその部分を含む。当業者が容易に認識できるごとく、対象からの免疫反応の誘導には、抗原の一部のみが必要であり得る。
【００２４】
ここに述べるごとく、対象は免疫反応を有する生物である。該対象は、限定されるものではないが、ヒトを含む。該対象はイヌおよびネコのごとき家畜動物であり得る。
【００２５】
本発明は、さらに、前記組成物および医薬上許容される担体を提供し、それにより、医薬組成物を形成する。
また、本発明は、前記した組合せおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明の目的では、「医薬上許容される担体」は標準的な医薬担体のいずれも意味する。適当な担体の例は当該分野でよく知られており、限定されるものではないが、リン酸緩衝生理食塩水および種々の湿潤剤のごとき標準的な医薬担体のいずれも含むことができる。他の担体は錠剤、顆粒剤およびカプセル剤等で用いる添加剤を含むことができる。典型的には、そのような担体は澱粉、乳、糖、ある種のタイプのクレイ、ゼラチン、ステアリン酸またはその塩、ステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、タルク、植物油脂、ガム、グリコールまたは他の公知の賦形剤のような賦形剤を含む。そのような担体はフレーバーおよび着色添加剤または他の成分を含むこともできる。そのような担体を含む組成物はよく知られた慣用的な方法によって処方される。
【００２６】
以下の実験詳細を参照することによって本発明は良好に理解されるが、当業者であれば、具体的な詳細な実験は説明のためだけであり、本明細書中に記載される、後の請求の範囲によって規定される発明を限定することを意図しないのを理解するであろう。
【発明を実施する最良の手段】
【００２７】
実験の詳細
実験の第１のシリーズ
前立腺癌、乳癌、卵巣癌および小細胞肺癌のための多価（六価）コンジュゲートワクチン
腫瘍‐特異的抗原がワクチン用の標的として同定され、追求されてきた。本発明者らの以前の仕事は、ＫＬＨにコンジュゲートした腫瘍抗原、グロボＨ、ルイスy、ＧＭ２、グリコシル化ＭＵＣ‐１、Ｔｎ（ｃ）またはＴＦ（ｃ）を利用する一価ワクチンが、最小の全身毒性を除き、局所的紅斑および浮腫で安全であることを示した。これらの一価ワクチンでの接種の結果、ほとんどの患者は、各抗原‐ＫＬＨコンジュゲートに対して特異的な高力価のＩｇＭまたはＩｇＧ抗体を生じた。本発明は、一価ワクチンの成分を組み合わせ、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および小細胞肺癌の治療としてアジュバントと共に投与される六価ワクチンを提供する。
【００２８】
サポニン免疫学的アジュバントＱＳ‐２１またはＧＰＩ‐０１００と共に投与される６つの腫瘍抗原のユニークな組み合わせよりなるワクチン。該抗原はグリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）である。各場合、抗原はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲートされる。
【００２９】
抗原およびアジュバントの用量の好ましい範囲は以下の通りである：
グリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体：０．１ないし３０μｇ；
グロボＨ：０．１ないし１００μｇ；
ＧＭ２：０．１ないし１００μｇ；
Ｌｅy：０．１ないし６０μｇ；
Ｔｎ（ｃ）：０．１ないし１０μｇ；
ＴＦ（ｃ）：０．１ないし３０μｇ；
ＱＳ‐２１：１００μｇ；
ＧＰＩ‐０１００：１または２５ｍｇ。
生化学的に再発した前立腺癌を持つ患者のための第相Ｉ多価コンジュゲートワクチン試験
１．０  プロトコルの要約
２．０  目的
３．０  背景および原理的説明
４．０  患者の適格性
５．０  予備的処置の評価
６．０  ワクチンの調製
７．０  免疫化スケジュール
８．０  治療前および治療後の評価
９．０  毒性の情報
１０．０  データ管理
１１．０  ヒト対象の保護
１２．０  反応の基準
１３．０  研究からの除外の基準
１４．０  生物統計学的考慮
１５．０  インフォームド・コンセントの手順
１６．０  文献
１７．０  添付書類
Ａ．インフォームド・コンセント
Ｂ．適格性基準チェックリスト
Ｃ．患者の日記
Ｄ．経済的記録シート
Ｅ．免疫モニタリングスケジュール
１．０  プロトコルの要約
これは、多価コンジュゲートワクチンを用いて安全性を評価するために計画された第Ｉ相パイロット試験である。この試験は、ヒトにおいて一貫して免疫原性であることが示されてきた８用量を求める第Ｉ相一価糖蛋白質および炭水化物コンジュゲートワクチン試験の結果に基づく。また、これらの試験により、我々は、免疫化抗原に対する高力価の特異的抗体を生じるその能力につき候補抗原をスクリーニングすることができた。このワクチンは、生化学的に再発した前立腺癌を持つ患者で高力価のＩｇＭおよびＩｇＧ抗体を誘導することが示された最高用量の合成糖蛋白質および炭水化物抗原よりなる。本発明者らの以前の仕事は、一価ワクチンが最小の全身毒性を除き、局所的紅斑および浮腫で安全であることを示した。多価ワクチンに含まれるべき抗原には、炭水化物抗原グロボＨおよびＧＭ２ならびに糖蛋白質抗原グリコシル化ＭＵＣ‐１‐３２量体、ルイスy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）がある。標的とすべき患者集団は、前立腺切除または放射線照射のごとき一次的療法を奏功しなかったか、あるいは間欠的ホルモン療法を受け、かつＸ線撮影病の不存在下でホルモンに感受性なままである患者である。これらの集団は、病気進行の唯一の症状として上昇するＰＳＡを有しなければならない。前記した抗原に対する初期の一価ワクチン試験に参加した訳１６０人の男性からの本発明者らのデータは、治療前の値と比較したＰＳＡ対数勾配の減少の形態の治療効果が最小腫瘍負荷を持つ患者で見ることができるのを示した。２４０人の患者での第ＩＩＩ相二重盲検ランダム化試験は、この提案された第Ｉ相試験から獲得された安全性のデータに基づいて計画される。試験の主要エンドポイントは、ワクチンの安全性および多価コンジュゲートに対する液性反応を評価する能力であろう。副次エンドポイントは、ＰＳＡの治療後変化を評価することであろう。
【００３０】
２．０  目的：
２．  試験の主要エンドポイント：
２．１．１
外科的処置または放射線照射のごとき一次的療法に続き生化学的に再発した前立腺癌を持つ患者において、多価コンジュゲートワクチンの安全性を測定するものである。
【００３１】
２．１．２
ワクチンの個々の成分に対する抗体反応を測定し、該反応を引き続いての臨床コースに相関付ける。
【００３２】
２．２
副次エンドポイントは以下の通りである：
２．２．１
前立腺特異的抗原レベルおよび病気の他の対象となるパラメーター（放射性核種骨スキャンおよび／またはもし存在すれば測定可能な病気）の免疫化の後の変化を評価すること。
【００３３】
３．０  背景および原理的説明
３．１  前立腺癌：前立腺癌の１８０，０００を超える症例が２０００年には合衆国で診断されるであろう1。これらのうち、３０ないし３５％は該腺の境界を超えた腫瘍と供に存在し、他方、さらなる２５％は局所的療法にも拘わらず病気の間に転移を生じるであろう。これらの場合、上昇するＰＳＡは、１２ないし２４ヶ月のメジアンによる明白な転移の発生を早める。アンドロゲン除去は、療法後に異常なＰＳＡの正常化を示す症例の７０％まででの標準的処置である。治療を開始しようとすると、問題となる領域が依然として存在し、療法の延期は結果を悪くするという証拠はない。ほとんどの患者は１２ないし１８ヶ月のメジアン内に再発する2、およびほとんどの男性は性的不能、体重増加および体熱感を含めた去勢の副作用に耐えることができないという事実と組み合わせて、この観察は、代替療法の探求に導いた。１つのそのようなアプローチは、局所的病気を治療し、病気の進行を妨げる手段として身体自身の免疫系を増強することを含む。ＰＳＡモニタリングは、免疫刺激アプローチが、大きな腫瘍負荷を持つかなり予備処置された症候性の集団に対してより効果的であり得る、低‐容量の病気を持つ患者の同定を可能とする。ワクチン接種は、アジュバントとして、全身再発の危険がある男性における外科的処置または放射線照射療法に与えることができる最小毒性を伴う安全な介入を代表する。また、それらは、進行しつつあり、ホルモン療法または化学療法の毒性を受けたくない最小腫瘍負荷を持つ男性に提供することもできる。ホルモンの状態は抗原の発現および調節に影響し得るので、我々は、異なるホルモン感受性を持つ患者を含めることを提案する。これは、ホルモン療法を受けたことがないか、または間欠的ホルモン療法を受けている患者を含む。
３．２  臨床試験のためのエンドポイントとしてのＰＳＡ：血清ＰＳＡ測定の利用可能性は、新しい療法を迅速にテストするためのユニークな試験の設計を提供する。というのは、時経的なＰＳＡレベルの変化は臨床的な結果と良く相関するからである3。この関係はホルモン‐ナイーブおよびホルモン的に再発した病気の双方について適用される。一旦ＰＳＡにおける連続的な上昇が去勢テストホルモンレベルの設定で記録されれば、臨床症状は３ないし６ヶ月のメジアン中に発生する。この観察は、結果の尺度としてＰＳＡの療法後変化を用い、上昇するＰＳＡ値の設定における処置を正当化する。この計画でもって、規定された期間に複数測定で規定された程度のＰＳＡの減少が生じない治療的アプローチ（後記参照）はさらに評価しない2。
【００３４】
３．３  免疫学的アプローチ：癌に対する免疫反応の増加は、２つの基本的なアプローチによって試みることができる：癌免疫療法における過去および現在の多大な努力を構成する非特異的免疫増強、および癌の治療で全く評価されていないが、感染症の制御にかなり貢献した特異的免疫化。感染に対する成功した特異的免疫化の開発を可能としたのは微生物抗原の知識である。他方、よく規定されたヒト癌抗原の入手可能の欠如は癌の意味において特異的免疫化の開発を妨げてきた。というのは、それは、はっきりとした癌‐制限抗原性のワクチンを用い、癌患者におけるそれらの免疫原性を示して、開発されるべきだからである。
【００３５】
３．３．１  前立腺癌における炭水化物およびムチンの役割：炭水化物抗原は臨床的に重要であることが証明されており、（トキシンに対するワクチンとは別に）細菌病原体に対するワクチンで用いられる唯一の規定された細菌抗原である。また、炭水化物抗原での免疫化の結果、（4でレビューされている）ヒト腫瘍細胞に対する指向された抗体反応をもたらす。これは、恐らくは、これらの抗体が、腫瘍細胞の抗体‐依存性細胞‐媒介および補体媒介溶解、補体‐誘導炎症、および網膜‐内皮系によるファゴサイトーシスを媒介することが知られているからである。前立腺癌における本発明者らの以前の研究は、前立腺癌細胞の表面に発現された抗原を規定することに焦点を当てた。
【００３６】
３．３．２  糖蛋白質ペプチドおよび炭水化物抗原を用いる８つの一価第Ｉ相試験での結果。糖蛋白質および炭水化物抗原に対するよく規定されたモノクローナル抗体を用いる免疫組織化学は、一次および転移性前立腺癌腫検体がこれらの従前は知られていない抗原を発現すること、およびこれらの分子が免疫認識のための標的として働くことができることを示した。我々はＫＬＨにコンジュゲートした２つのムチンペプチド抗原ＭＵＣ−１およびＭＵＣ−２を研究し、免疫アジュバントと共に、１０、３０  １００および３μgでの用量上昇試験として第Ｉ相設定においてＱＳ２１を与えた。患者には、１、２、３、７および１９週間において２６週にわたって５つの皮下ワクチンを与えた。２０人の患者をＭＵＣ−１−ＫＬＨ−ＱＳ２１試験で処置し、１５人はＭＵＣ−２−ＫＬＨ−ＱＳ２１試験で処置した。全ての患者は、免疫化ペプチドに対して特異的な高力価のＩｇＭおよびＩｇＧ抗体を生じた。７週までは抗体力価は上昇し、１９週までは低下した（第５および最終ワクチンの時点）。予期せぬことに、患者のほぼ２/３における予備処置値と比較して、右下がりＰＳＡ対数勾配の形態でワクチン試験を完了した後に、治療効果が観察された。多くの患者において、勾配は、３８週までに減少を示し始め、引き続いて６０週まで減少した。初期の減少は、第１９週に受けた最後の免疫化に続く抗体の上昇に対応した。１９９６年にＭＵＣ−１−ＫＬＨコンジュゲートで処理した５人の患者は、病気のＸ線撮影証拠なくして安定なＰＳＡ対数勾配を継続して有する。ＭＵＣ−２−ＫＬＨコンジュゲートで処理した患者もまた同様な治療効果を示したが、該試験は今で成熟に達していない。ワクチンは、感染部位における紅斑、圧痛および浮腫で安全であることが判明した。自己免疫または全身毒性の証拠は観察されなかった。
【００３７】
３．３．３  糖脂質および炭水化物抗原での経験。１８人の患者が、グロボＨ、前立腺癌細胞で発現された糖脂質抗原の免疫化を受けた。これは、腫瘍細胞の補体溶解を媒介できる高力価の特異的抗体（メジアンピーク力価１：３２０、ＩｇＧメジアン力価１６０）を生じさせることができるヒトでの免疫化で用いられた最初の純粋に合成された複雑な炭水化物抗原である。幾人かの患者は、１：２０,４８０のIgM抗体力価を生じた。患者は２６週間にわたって１０、３０  １０００または３μgのグロボＨ−ＫＬＨ+ＱＳ２１で免疫化した。このワクチンで免疫化した患者の内、６人は依然として活力があり、安定なＰＳＡ対数勾配を持ち、最後の２年半にわたってＸ線による病気の証拠はなかった。このワクチンは安全であることが判明し、全身毒性の証拠はなかった。ガングリオシド抗原（一方の端部でシアル酸を、および他方の端部でセラミドを発現する酸性糖スフィンゴ脂質）も、より高い用量のＱＳ２１の免疫原生を比較する試験で調べた。３０μｇ（メラノーマ試験で以前確立された用量）においてＧＭ２−ＫＬＨを用い、１８人の患者を、ＧＭ２コンジュゲート+１００μｇの標準用量におけるＱＳ２１または２２５μｇにおけるＱＳ２１いずれかで免疫化した。全身毒性についてのその可能性のため、後者のワクチンは、１０μｇにおけるＧＭ２−ＫＬＨ+７５μｇにおけるＱＳ２１として３つの別々の部位に３つの別々の免疫として皮下投与した。抗体力価の差は患者の２つの群で観察されなかったが、より高い用量のＱＳ２１を与えられた群からの２人の患者はグレードＩＩの筋痛を経験した。また、幾人かの患者はＰＳＡ対数勾配の低下を呈したが、治療効果に関しては群間でいずれの差も出現しなかった。
【００３８】
４．０  患者の適格性：
ＭＳＫＣＣの病理学部門によって組織学的に確認された前立腺癌を持つ患者が考慮されるであろう。エントリーに先立ち、全ての患者は、Ｘ線撮影によらなくても生化学パラメーターに基づいて病気の進行を示している必要がある。
【００３９】
2004534088.tif 000002
【００４０】
４．２  （ネオ‐アジュバントアンドロゲン切除を伴うまたは伴わない）外科的処置または放射線照射を含む一次療法後に進行した患者、または非−去勢レベルのテストステロン（＞５０ｎｇ/ｍｌ）を有する間欠的ホルモン治療は無視できる。ホルモンの状態は、血清テストステロンレベルに基づいて記録される。処置に続いてのＰＳＡのこの検出は２年以内に発生するに違いない。
【００４１】
４．３  患者に対する実験へのエントリーに先立っての２週間以内はプレドニゾンまたはデキサメタゾンを含めたそのホルモン療法を変えては成らない（去勢レベルのテストステロンを維持するのに必要な療法は例外である）。
【００４２】
４．４ルノフスキー（Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ）進行状態＞６０％
４．５者は：
１．ＷＢＣ＞３５００/ｍｍ3、血小板カウント＞１０００，０００ｍｍ3
２．ビルビリン＜２．０ｍｇ/１００ｍｌまたはＳＧＯＴ＜３．０×正常の上限
３．クレアチニン＜２．０ｍｇ/１００ｍｌまたはクレアチニンクリアランス＞４０ｃｃ/分によって規定される適切な器官機能を有しなければならない。
【００４３】
４．６  患者はいずれの以前の療法の毒性からも回復していなければならず、かつ試験へのエントリーに先立って少なくとも４週間は化学療法または放射線照射療法を受けていてはならない。
【００４４】
４．７  非メラノーマ皮膚癌を除いて５年前までに活動的二次悪性疾患の履歴がないこと。その部位でのメラノーマの履歴を持つ患者は許容される。というのは、これらの病巣は複合母斑と同様に振舞うからである。
【００４５】
４．８  患者は１８歳以上の年齢でなければならない。
【００４６】
４．９  スラミンを以前に摂取した患者は、もし８週間以上の間この薬物から離れておよび/または５０μｇ/ｍｌ未満の記録された血漿濃度を有するならば、処置することができる。これらの患者では、ヒドロコルチゾンの置換投与が許される。
【００４７】
４．１０  患者はインフォームド・コンセントに署名しなければならない。
【００４８】
４．１１  ＩＲＢプロトコル９０−４０（ヒト前立腺癌における相関実験）に対する登録
４．１２  排除：
１．臨床的に重要な心臓病（New York Heart AssociationクラスＩＩＩ/ＩＶ）、または酷い消耗性肺疾患
２．転移性疾患のＸ線による的証拠
３．抗生物質治療を必要とする感染
４．麻薬依存性苦痛
５．余命推定６ヶ月未満
６．痔疾を除く陽性便グアヤクまたは記録された放射線照射で直腸炎を起こした履歴
７．海産物に対するアレルギー
８．ＭＳＣＫＫで行なった相Ｉ一価試験を除く外部機関における以前のワクチン療法
５．０  治療前評価：
５．１  臨床：
５．１．１  医師による第一次の完全な履歴および身体的調査
５．１．２  身長、体重およびカルモフスキー進行状態
５．１．３  兆候、苦痛、投薬、および生活の健康‐関連質のベースライン評価
５．２  （治療開始の２週間以内に）研究所で
５．２．１  血液細胞および血小板カウントを完了
５．２．２  包括的な代謝パネル、ＬＤＨおよび血清クレアチニン
５．２．３  プロトロンビン時間
５．２．４  ＰＳＡおよび酸性ホスファターゼ
５．２．５  テストステロン
５．２．６  Ｕ/ＡおよびＣ＆Ｓ
５．３  画像および診断試験：（治療開始の１ヶ月前以内）
５．３．１  胸部Ｘ線
５．３．２  放射性核種骨スキャン
５．３．３  測定可能な疾患についての画像化：適応があれば腹部骨盤ＣＴスキャンまたはＭＲＩ
５．４  病理学的相関：患者は、以前の診断／治療手法から組織ブロックを採取することが要求され、患者の腫瘍は免疫組織化学によって抗原の存在につき評価されるであろう。患者には、組織ブロックを得るためにＩＲＢプロトコル９０−４０（ヒト前立腺癌における相関実験）に登録することが要求されるであろう。パラフィン包埋腫瘍材料上の抗原の存在はエントリーについての基準ではない。さらに、生検手法はプロトコルエントリーについて特には用いられないであろう。
【００４９】
６．０  ワクチンの調製
グロボＨ、ルイスy、Ｔｎ（ｃ）、ＴＦ（ｃ）は、Ｓａｍｕｅｌ  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ博士がチーフであるバイオ‐有機化学の研究所で合成された。ＭＵＣ−１−３２量体は、Ｐａｕｌ  Ｔｅｍｐｓｔ博士の指導でＲｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのコアペプチド合成部門で合成される。それはコペンハーゲン大学、コペンハーゲン、デンマーク国のＨｅｎｒｉｋ  Ｃｌａｕｓｅｎ博士によってＴｎでグリコシル化される。ＧＭ２はＰｒｏｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋによってウサギ脳から抽出される。
【００５０】
６．１  グロボＨ、ＭＵＣ−１−３２量体、ＧＭ２、ルイスy、Ｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）−ＫＬＨのコンジュゲーション：前記抗原はＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎ博士の研究所においてＫＬＨに共有結合されるであろう。ＫＬＨ分子量を５×１０として１５０/１および８００/１の間の抗原―ＫＬＨ比率が許容範囲となろう。ゲル化を行い、将来のロットとの比較のために、ウエスタンブロット分析が抗原―ＫＬＨの各ロットで行なわれるであろう。臨床試験で用いるべき投与量/ｍ2の＞５０倍の量での各ロット+ＱＳ２１で滅菌性および安全性テストが行なわれるであろう。培養の増殖が無く、かつ（１０％以上の体重喪失を含めた）マウスまたはモルモットにおける有害反応がなければ許容される。２以上のマウスを１ないし２週間間隔で２ないし３の場合に各抗原‐ＫＬＨバッチで免疫化し、免疫化後血清をテストする。抗原に対する１/２００以上の抗体力価および抗原陽性細胞の＞２５％のＩＡまたはＦＡＣＳ染色による１/４０は、構築体が適当な免疫原性を有するという証拠として許容されるであろう。
【００５１】
６．２  抗原投与量：前立腺癌患者における以前のワクチン試験に基づき、以下の投与量が多価試験で確立された：グリコシル化ＭＵＣ−１−３２量体、３μｇ；グロボＨ、１０μｇ；ＧＭ２、１０μｇ；Ｌｅy、１０μｇ；Ｔｎ（ｃ）、３μｇ；およびＴＦ（ｃ）、３μｇ。免疫原性における有意な差が２２５μｇと同じ量でも観察されなかったので、ＱＳ２１は１００μｇで用いられるであろう。
【００５２】
６．３  安全性テスト：材料からの試料を滅菌性および安全性テストのために送る。個々のペプチド/炭水化物の免疫原性は以前にマウスにおいて確認されている
７．０  免疫化スケジュール：
７．１  患者の選択：生化学的再発の証拠を持つ全ての患者が考慮されるであろう。ホルモンの状態が、血清テストステロンレベルに基づいて以下のごとく記録されるであろう：非−去勢レベルのテストステロン（＞５０ｎｇ/ｍｌ）を有する（ネオ‐アジュバントアンドロゲン切除が済んでいなくても）一次外科的処理または放射線照射後に進行した患者は無視できるであろう。
【００５３】
７．２  間隔：我々が利用するであろう免疫化スケジュールは、メラノーマ、結腸および乳癌を持つ患者における他の糖蛋白質および炭水化物コンジュゲートでの発明者らの実験から導きだされた。
【００５４】
７．３  処置スケジュールおよび投与量：完了した初期の一価試験に基づいて以前に決定したように、１５人の患者に各炭水化物またはペプチド構成要素を定められた用量で処方する。ＱＳ２１は１００ｕｇの標準投与量で投与する。部位：ワクチンコンジュゲートは上腕および上部脚の任意の部位に皮下投与されるであろう。
【００５５】
７．４  投与量の改訂：もし患者がいずれかの時点でグレードＩＩＩまたはより大きな局所ないしグレードＩＩまたはより大きな全身毒性という事態になった時はいつでもその後のワクチン接種はすべての成分において５０％を減少しその患者に投与されるであろう。
【００５６】
８．０  治療前および治療後の評価：
８．１  結果：実験の評価は、ワクチンの安全性、抗腫瘍効果、ならびに免疫機能の評価を評価するためのパラメーターを含むであろう。間隔安全性評価は患者の日報を含むであろう。抗腫瘍評価総括が１３週間および２６週間の間に行なわれるであろう。もし患者が第１３週または２６週において病気の進行を示さなければ、彼はプロトコルを続けることになろう。試験の完了に際しては、彼は、次の２年間、または病気進行まで血液検査および画像実験で３ヶ月ごとにチェックされるであろう。
【００５７】
2004534088.tif 000003
ａ免疫化に先立つベースライン実験
ｂ最初の免疫化から７日以内
ｃ生化学的実験用の出発処置から１５日以内；画像実験についての３０日。全ビリルビン、ＳＧＯＴ、ＬＤＨ、アルカリ性ホスファターゼ、クレアチニン、ＢＵＮを含む。
ｄＣＭＰは全ビリルビン、ＳＧＯＴ、ＡＬＴ、ナトリウム、カリウム、塩化物、ＣＯ2、カルシウム、グルコース、全蛋白質、アブミン、アルカリ性ホスファターゼ、クレアチニン、ＢＵＮを含む。
ｅ患者には、以前の診断/試料手法で組織ブロックを採取することが要求され、患者の腫瘍が免疫組織化学によって抗原の存在につき評価されるであろう。パラフィン材料上のいずれかの抗原の存在はエントリーについての基準ではなく、記録のために生検手法が具体的に行なわれることはない。
ｆ腹部および骨盤ＣＴスキャン、場合によっては造影胸部Ｘ−線および病気を記録評価するのに必要と思われるその他のテストを伴う。
ｇ反応評価総括は、病気を評価するのに用いる異常画像および生化学実験の反復、および場合により、免疫機能を含む。
ｈ2年間、または病気の進行が記録されるまで、3ヶ月間隔で反復する。
ｌ患者にはＩＲＢの下で病理学的相関実験についての別の同意書に署名するよう求める［９０−４０：H.Scher博士, P.I．-ヒト前立腺癌における分子的相関］。
【００５８】
2004534088.tif 000004
【００５９】
以前の試験では、実験した抗原の皮膚内投与と最小の反応性しかないか、または反応性がなかったので、皮膚のテストは行なわない。
【００６０】
抗体の反応：各ワクチン接種直前の、ならびに９、１３および26週直前のワクチンに先立って、末梢血液（３０ｃｃ）を吸い出して、Ｂ−細胞機能を評価する。しかる後、（最初のワクチン接種から1年まで）3ヶ月間隔で、あるいは抗原に対する検出可能な免疫性が存在し続ける限り、採血する。抗体反応に依存して、増殖およびクローン化に関するさらなるテストを後日に行なうことができる。精製された抗原に対する抗体ならびにワクチンに含まれた抗原を発現する（または発現しない）種々の細胞系につき、患者の血清をＥＬＩＳＡ法によってテストする。
【００６１】
９．０  毒性情報：
毒性は、一般には以下に定義されるごとく、０ないし４+のスケールでグレード付けする：
０  毒性無し
１+  軽い毒性、通常は一過性であり、特殊な試料を必要とせず、一般には、通常の毎日の活動には影響しない。
【００６２】
２+  単純な治療的戦略によって軽減することができる中程度の毒性；通常の活動を損なう。
【００６３】
３+  治療的介入を必要とし、通常の活動を中断するひどい毒性。場合によっては入院が必要である。
【００６４】
４+  入院を必要とする生命を脅かす毒性。
薬物‐死亡を引き起こす毒性を４Ｆと呼ぶ。
通常のＮＣＩ毒性基準バージョン２についての詳細な定義は臨床試験局で入手できるであろう。ＮＣＩスケールが適用できない場合、ＭＳＫＣＣ毒性スケールが用いらる。
【００６５】
１０．０  データの管理
１０．１  この実験はＭＳＫＣＣにおいてのみ行なう。臨床データを収集し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ‘ｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈデータベース（ＣＲＤＢ）に入力する。治療の全ての毒性効果を含めた有害な事象は個々に表とし、実験投薬の投与量、および重傷度または毒性のグレードに従って身体系によってまとめる。実験室データを表とし、記述統計学によって、ならびにＭＳＫＣＣ規定の正常範囲に基づいてまとめる。
１０．２  治療反応の分析は、初期にＸ線では疾患が認められずＰＳＡは上昇している場合のプロトコルを有する全ての患者を含む。反応についての基準をセクション１２．０に概説する。
【００６６】
１１．０  ヒト対象の保護
有害な薬物反応（ＡＤＲ）は、添付のＧに記載した通常の毒性基準を用いてＮＣＩ  ＡＤＲ報告形態で、主任の調査者およびＩＲＢに報告しなければならない。生命を脅かす致死的な（グレード４または５）または未知の反応（すなわち、公知の毒性としてセクション３にリストされていないもの）は、２４時間以内に、Ｓｕｓａｎ  Ｓｌｏｖｉｎ，ＭＤ，ＰｈＤ，（２１２−６３９−６４１２）およびＨｏｗａｒｄ  Ｓｃｈｅｒ，  ＭＤ（２１２−６３９−７５８５）またはＰｈｉｌｉｐ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ博士（２１２−６３９−７４２５）に報告しなければならない。１０作業日以内に書面による報告を行なうべきである。ＡＤＲ報告形態のコピーを、臨床試験局、医療部門、Ｂｏｘ＃３４７に提出しなければならない。
【００６７】
１１．１  予測される毒性：このクラスにおけるワクチンの主な毒性は１２ないし２４時間の低グレードの発熱、および局所的な発疹、局所的な不快感に関係し得る注射が与えられた部位における皮膚の膨潤または掻痒である。下痢、腸の問題、インフルエンザ‐様兆候および蕁麻疹、喘ぎおよび寒気を含めた自己免疫またはアレルギー反応が理論的に可能である。
【００６８】
１１．２  利点：自己の癌に対してアンドロゲン切除療法を受けなかった患者については、治療は癌の進行を遅らせる可能性を提供し、かなり少ない副作用しか伴わない。ホルモン療法に伴う副作用は体熱感、虚弱、疲労、乳房の拡大、肝臓損傷、下痢、貧血および性的不能を含む。
【００６９】
１１．３  予測される/利点に関連する危険性：この試験に参加することに伴う危険は、病気のＸ線撮影で疾患が認められない生化学的再発前立腺癌を持つ患者に対する潜在的利点を供与すれば納得がいく。１７０人の患者からの以前のデータは、予備処理値と比較した処置後ＰＳＡ対数勾配の変調によって表わされるごとく、治療効果は起こり得ることを示唆する。全ての患者は、免疫化抗原に対する高力価特異的抗体の形態で抗腫瘍効果を得られることが示されている。
【００７０】
１１．４  プロトコルの修正：全てのプロトコル修正は、それが実施できる前に、Ｉｎｓｕｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ  およびＦＤＡによって直見され、認可される。
【００７１】
１１．５  別の治療：非−去勢レベルのテストステロンを持つ患者は、兆候を示す様になるか、または病気のＸ線撮影進行を示すならば、軽減のために医薬的または外科的精巣摘除を受けることができる。
【００７２】
１１．６  増強コスト：患者は、ワクチンの効果をモニターするのに必要な標準的な医療ケアのコストを支払う。ワクチンに対する請求はない。病気の程度を決定するのに用いるステージング手法は、進行しつつある癌についての一般的な評価の一部である。
【００７３】
１１．７  プライバシーの保護：調査者は、法律によって規定されるかまたは要求されるを除き、実験で得られた全てのデータを秘密に維持することを同意し、委員会によって秘密が維持されるという理解の下で、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｂｏａｒｄにその様な情報を開示する。実験における全ての患者の身元は秘密にされなければならない。
【００７４】
１１．８  インセンティブ：実験への参加に対して患者/対象にはインセンティブは与えられない。参加は任意である。
【００７５】
１２．０  反応の基準
１２．１  二次元的に測定可能な病気のない患者は、以下のごとく、ＰＳＡの治療後変化によって評価することができる。
【００７６】
１２．１．１  完全な反応（ＣＲ）：少なくとも２週間離して３回の連続的評価についてのＰＳＡ（４．１．１項で定義された＜１．０または２．０）を標準化。
【００７７】
１２．１．２  部分的反応（ＰＲ）：３回の連続的評価についての（標準化無しの）ベースラインを＞５０％だけ超えるＰＳＡ値の減少。
【００７８】
１２．１．３  安定化（ＳＴＡＢ）：少なくとも９０日間ＰＲまたはＰＲＯＧについての基準を満足しない患者は安定であると考えられる。
【００７９】
１２．１．４  進行（ＰＲＯＧ）：ベースラインを超えて＞５０％までの、ＰＳＡの３つの連続的増加。
【００８０】
１２．２  反応の持続：測定できない病気：ＰＳＡ最下点値からの５０％増加が３つの連続的測定で記録されるまでの、療法の開始からの時間。
【００８１】
１３．０  実験からの除去についての基準
結果の評価の間に実験に組入れした全ての患者に極力説明するべきである。しかしながら、以下の患者は意味がないと考えられる。
【００８２】
１３．１  初期死亡：薬物療法の開始から２週間以内の腫瘍進行または病気非関連事象の結果死亡した患者。
【００８３】
１３．２  追跡すべき喪失：情報を得るために努力を重ねたが、患者、関係する医者、または機関との接触が失われたため腫瘍反応を判断するための適切な情報がない患者。
【００８４】
１３．３  主なプロトコルの違反
１３．３．１  さらなる療法（測定可能な病巣のみの外科的処置または照射）を受けるか、あるいは他の腫瘍溶解剤を加えることによって、または特定の投与量およびスケジュールを実質的に修正することによって治療プログラムから外れた患者。
【００８５】
１３．３．２  試験の完了から最低４週間後には、免疫学的反応性および抗‐腫瘍反応を評価するために、適切に試験を終了しなければならないと考えられる患者。
【００８６】
１３．４  療法は、受けいれることができない副作用、またはいずれかの他の章に記載されていない生命を脅かす効果が発生した場合にはいずれの時点でも中断することができる。
【００８７】
１３．５  症例報告書には、療法を終了するための理由を明確に記載すべきである。全ての患者には、病状進行および生存の時間につき状況を知らせなければならない。
【００８８】
１４．０  生物統計学的検討
１４．１  これは、相ＩＩＩ臨床試験に対してとられる多価コンジュゲートワクチンの安全性を試験するための予備的実験である。根治的な前立腺切除または放射線照射療法後にＰＳＡ再発を経験した前立腺癌患者は除く。１５人の患者は全て同一の投与量を受ける。該用量は前立腺癌患者に対する前回のワクチン試験に基づいており、以下の用量が多価試験で確立されている：グリコシル化ＭＵＣ−１−３２量体、３μg;グロボＨ、１０μｇ；ＧＭ２、１０μｇ；Ｌｅy、１０μｇ；Ｔｎ（Ｃ）、３μｇ；およびＴＦ（Ｃ）、３μｇ。免疫原生においては２２５ＭＧという高い用量との間に有意差は見られないので、ＱＳ２１は１００μｇで用いる。患者は2年間、または転移性疾患の発生まで追跡する。骨スキャンおよびＣＴスキャン（または臨床的に適切な場合にはＭＲＩ）を、ほぼ１３、２６週において、およびその後、転移性疾患の発生するまでほぼ３ヶ月毎に行なう。加えて、ＰＳＡ測定は３、７、１３、２６週において、およびその後はほぼ３ヶ月毎に行い、発生する転移性疾患の確立に対するワクチンの効果、および時経的ＰＳＡ勾配に対するワクチンの効果をそれぞれ検証する24。
【００８９】
１４．２  実験対象から除かれるためには、患者は、根治的な前立腺切除または放射線照射療法後に上昇するＰＳＡを有しなければならない。治療後のＰＳＡのこの検出は２年以内に行なわなければならない。ＡＳＴＲＯ定義を用い、３つの連続的ＰＳＡ上昇は、根治的な前立腺切除または放射線照射療法後の生化学的失敗と考えられる。失敗の時点は、外科的処置後（または照射後）ＰＳＡの最低点および３回の連続的上昇の最初の間の中間点であるべきである25。加えて、患者は５ヶ月未満のＰＳＡ倍化時間（ＤＴ）を有しなければならない。ＰＳＡ倍化時間は治療前に測定され、ｌｎ（２）を、時経的なｌｏｇ  ＰＳＡの勾配から得られた最小二乗で割ったものである（ＰＳＡ対数勾配＞０．１５）26。ＰＳＡ  Ｄをが基礎とする時間間隔は、ランダム化に先立って１２ヶ月間隔の少なくとも３つのＰＳＡ測定点よりなる。この要件に合致する患者は、転移性疾患につきより高い危険性があると考えられこの試験では無視できる。
【００９０】
１４．３  この実験の主な目的は、特に、第３段階試験準備のため、多価ワクチンの安全性および液性反応を測定することにある。主な終点は、病気のＸ線撮影進行に対する時点である。第２の目的は、経時的なＰＳＡの変化の速度を調べることにある。
【００９１】
１５．０  ンフォームド・コンセントの手順：
患者には、連邦規則の法律（連邦登録，４６巻、１７号、１９８１年１月２７日、パート５０）およびこのセンターのＩＲＢの要件を満たすインフォームド・コンセントの宣言書にサインするよう求める。同意書の形式を添付する。
【００９２】
・ 全ての患者は、治療の開始に先立って、ＭＳＫＣＣ臨床試験局（ＣＴＯ）に登録されなければならない。
【００９３】
・ ＭＳＫＣＣ  ＣＴＯに患者は、（２１２）６３９−６０６１で電話にてプロトコルに登録される。
【００９４】
・ 署名されたインフォームド・コンセントの最後の頁はＣＴＯ宛てにファックスしなければならない（ＦＡＸ＃  ２１２−７１７−３０８５）。
【００９５】
・ ＣＴＯは、このプロトコルに対する適格性要件において例外をもたない。
【００９６】
・ 登録時間は、休日を除き、月曜から金曜日の午前８時から午後５時である。
【００９７】
１５．１  同意のプロセス：（表紙に示した）治療チームのメンバーは患者についての治療プログラムの説明原理をレビューする。考察は、ホルモン療法、適切であれば化学療法または裏付けケア、このプログラムにおける潜在的利点、その発生のリスクおよび確率、およびこれらのリスクを最小化するための手法を含めた利用可能である別法をレビューする。有害な事象がもし起これば、医療的介入を確認するために利用可能である項目もレビューする。秘酒義務を維持する努力も議論されるように、リスクは、実験への参加の結果として起こるであろう、または起こり得る予測できる利点、インセンティブ、コストに関連して合理的である。
【００９８】
１５．２  患者を登録するのに適格な医師：最終的なインフォームド・コンセントは、プロトコル表紙のリストにする医師調査者の１人が、または尿生殖器癌外来クリニックに譲渡された癌専門医師が受け取ることができる。同意を得るいずれの医師も、同意を得る権限が与えられたプロトコルの前の頁に指名された医師の１人が共に署名した同意書を有するべきである。登録の時点で、適格性のチェックリストがレビューされ、確認され、署名される。
【００９９】
１５．３  インフォームド・コンセントの記録：インフォームド・コンセントは、患者および３人の登録医師によって署名される。実験についての登録に際し、同意書書式の完成されたコピーはＭＳＫＣＣにおける臨床試験局（ＣＴＯ）にファックスされなければならない［ＦＡＸ番号：２１２  ７１７−３０８５］。同意書書式に署名されたオリジナルのコピーは患者に渡される。第２のオリジナルは医療記録に保管され、第３のオリジナルは臨床試験局のファイルに保持される。
【０１００】
文献
１．Ｗｉｎｇｏ，  ＰＡ，  Ｔｏｎｇ，  Ｔ，  Ｂｏｌｄｅｎ  Ｓ：  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，  １９９５．  Ｃａ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ，  ４５：８−３０，  １９９９．
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１５．  Ｒｅｇｕｇｐａｔｈｉ，  Ｇ．，  Ｓｌｏｖｉｎ  Ｓ．Ｆ．，  ａｎｄ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｐ．Ｏ．：Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｅｒａ  ｆｒｏｍ  ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＭＵＣ１−ＫＬＨ  ａｎｄ  ＭＵＣ−２−ＫＬＨ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ，Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ４０：３１２（Ａｂｓｔｒ＃２０７０），  １９９９
１６．Ｓｌｏｖｉｎ，  Ｓ．Ｆ．，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｐ．Ｏ．，  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，  Ｓ．，Ｍｈａｔｒｅ，  Ｓ．，Ｒｅｇｕｐａｔｈｉ，  Ｒ．，Ｄｅｐａｏｌｏ  Ｒ．，Ｓａｍａｓ，  Ｄ．，Ｔｅｒｒｙ  Ｋ．，Ｂａｕｓｏ，Ａ．，  Ｋｅｌｌｙ，    Ｗ．Ｋ．，  Ｆａｚｚａｒｉ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｒ  Ｈ．Ｉ．：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｓ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  （ＰＣ）：  Ｇｌｏｂｏ−Ｈ−ＫＬＨ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｐｌｕｓ  ＱＳ２１．  Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃ，  １７：４３３ａ（Ａｂｓｔｒ  １６６９），  １９９８．
１７．  Ｓｌｏｖｉｎ，  ＳＦ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，  Ｇ，  Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  Ｕｎｇｅｒｓ  Ｇ，  Ｔｅｒｒｙ  Ｋ．Ｋｉｍ  Ｓ，  Ｓｐａｓｓｏｖａ  Ｍ，  Ｂｏｒｎｍａｎｎ，  ＷＧ，  Ｆａｚｚａｒｉ，  Ｍ，  Ｄａｎｔｉｓ，  Ｌ，  Ｏｌｋｉｅｗｉｃｚ  Ｋ，  Ｌｌｏｙｄ  ＫＯ，  Ｌｉｖｉｎｇｓｏｎ  ＰＯ，  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ  ＳＪ，  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｒ  ＨＩ：  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｆｕｌｌｙ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｇｌｏｂｏ  ｈｅｘａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｉｎ  ｍａｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，  ＵＳＡ，  ９６：５７１０−５７１５，  １９９９．
１８．Ｓｌｏｖｉｎ，  Ｓ．，Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，  Ｇ．，Ｉｓｒａｅｌ，  Ｒ．，Ｔｅｒｒｙ，  Ｋ．，Ｂａｕｓｏ，  Ａ．，Ｆａｚｚａｒｉ，  Ｍ．，Ｋｅｌｌｙ，  Ｋ．，Ｒｅｙｅｓ，  Ｓ．，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｐ．，ａｎｄ  Ｓｃｈｅｒ，  Ｈ．  Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ（ＰＣ）：  Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ＧＭ２−ＫＬＨ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｐｌｕｓ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ａｄｊｕｖａｎｔ，  ＯＳ２１−Ａ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ＱＳ２１  ｄｏｓｅｓ，  Ｐｒｏｃ，  Ａｍｅｒ．  Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃ．，  １８：３１６Ａａ（Ａｂｓｔｒ＃１２１４），  １９９９．
１９．Ｌｉｖｉｎｇｓｏｎ  ＰＯ，  Ｎａｔｏｌｉ  ＥＪ．  Ｃａｌｖｅｓ  ＭＪ：  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ＧＭ２  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ｅｌｉｃｉｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｐｒｏｃ  ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ２７：５３７，  １９８７（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
２０．ＳＬｏｖｉｎ，  ＳＦ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｔｎ−ｃｌｕｓｔｅｒ  （Ｃ）−ＫＬＨ/ＰＡＭ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｙ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ（ＰＣ）：  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒａｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ．  Ｐｒｏｃ．  Ａｍｅｒ．  Ａｓｓｏｃ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ｉｎ  ｐｒｅｓｓ．
２１．Ｍａｃｌｅａｎ  ＧＤ，  Ｒｅｄｄｉｓｈ  Ｍ，  Ｋｏｇａｎｔｙ，  ＲＲ，  Ｗｏｎｇ  Ｔ，  Ｇａｎｄｈｉ  Ｓ，  Ｓｍｏｌｅｎｓｋｉ  Ｍ，  Ｓａｍｕｅｌ  Ｊ，  Ｎａｂｈｏｌｔｚ  ＪＭ，  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ  ＢＭ：Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｔｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｓｉａｌｙｌ−Ｔｎ  ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｐｌｕｓ  Ｄｅｔｏｘ  ａｄｊｕｖａｎｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ａｍｍｕｎｏl Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒｕｐ  ３６：２１５−２２２，  １９９３．
２２．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｗａｌｂｅｎｇ  ＬＡ，  Ｏｇａｔａ  Ｓ，  Ｉｔｚｋｏｗｉｔｚ  ＳＨ，  Ｋｏｇａｎｔｙ  ＲＲ，  Ｒｅｄｄｉｓｈ  Ｍ，  Ｇａｎｄｈｉ  ＳＳ，  Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ  ＢＭ，  Ｌｌｏｙｄ  ＫＯ  ａｎｄ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ：  Ｉｍｍｕｎｅ  ｓｅｒａ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｆｉｎｅ  ｔｗｏ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｓｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｉａｌｙｌ  Ｔｎ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｉｔｇｅｎ．  Ｃｎａｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５：３３６４−３３６８，  １９９５．
２３．ＭａｃＬｅａｎ  ＧＤ，  Ｂｏｗｅｎ−Ｙａｃｙｓｈｙｎ  ＭＢ，Ｓａｍｕｅｌ  Ｊ，  Ｍｅｉｋｌｅ  Ａ，  Ｓｔｕａｒｔ  Ｇ，  Ｎａｔｉｏｎ  Ｊ，  Ｐｏｐｐｅｍａ  Ｓ，  Ｊｅｒｒｙ  Ｍ，  Ｋｏｇａｎｔｙ  Ｒ，  Ｗｏｎｇ  Ｔ，  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｅｎｎｅｃｋｅｒ  ＢＭ：  Ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  （Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ）  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，  １１：２９２−３０５，  １９９２
２４．Ｓｃｈｅｒ，  Ｈ．Ｉ，  Ｓｌｏｖｉｎ，  Ｓ．Ｆ．，  Ｋｅｌｌｙ  Ｗ．Ｋ．，  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｐ．Ｏ．，Ｄａｎｉｓｈｅｒｆｓｋｙ，  Ｓ．，  Ｆａｚｚａｒｉ，  Ｍ．，Ｔｅｒｒｙ，  Ｋ．Ａｎｄ  Ｈｅｌｌｅｒ，  Ｇｌｅｎ：  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Pｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃ，  １７：３２４ａ  （Ａｂｓｔｒ  １２４７），１９９８．
２５．Ｐａｔｅｌ，  Ａ，  Ｄｏｒｅｙ，Ｆ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ，  Ｊ，  ａｎｄ  Ｄｅｋｅｒｎｉｏｎ，  ＪＢ：Ｒｅｃｕｒｒａｎｃｅ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｒａｄｉｃａｌ  ｒｅｔｒｏｐｕｂｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅｃｔｏｍｙ：  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｄｏｕｂｌｉｎｇ  ｔｉｍｅｓ  ａｎｄ  ｌｏｇ  ｓｌｏｐｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｆｉｃｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｊ  Ｕｒｏｌ，  １５８：１４４１−１４４５，  １９９７．
２６．Ｏ‘Ｂｒｉｅｎ，  ＰＣ，  Ｆｌｅｍｉｎｇ，  ＴＲ：  Ａ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．  Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  ３５：５４９−５５６，  １９７９．
臨床研究のための患者のインフォームド・コンセント
１．０  導入
あなたは、研究実験に参加することを尋ねられています。あなたの病気がどのようにして診断され、治療されているかについてより多くを知ることは我々にとって助けになることであると望んであります。あなたがこの実験の一部とに参加したいか否かについての通知判断を行なうためには、あなたは、そのリスクと有益性および選択肢を理解すべきです。このプロセスはインフォームド・コンセントとして知られています。
【０１０１】
本同意書書式は、あなたに、研究実験についての詳細な情報を与えるものです。一旦あなたが実験、そのリスク、有益性、および選択肢を理解し、あなたが参加しようと希望するならば、この書式に署名をすることが求められます。あなたには保管用のコピーが与えられます。
【０１０２】
あなたに提案されている研究実験は：
生化学的に再発した前立腺癌を持つ患者のための第Ｉ相多価コンジュゲートワクチン試験です。
【０１０３】
２．０  研究の目的
この研究の目的は、前立腺癌を持つ患者に対するワクチン治療を研究するように我々を助けることです。ワクチンは、身体が有害な感染および他の異物を破壊するように教える医薬です。あなたの免疫系は、あなたの身体中で感染および病気と闘う多くの異なるタイプの細胞よりなりたっています。ワクチンは、癌細胞を破壊させるため免疫系を刺激します。また、癌の成長を遅らせるよう助けます。ワクチンは皮膚中または皮膚下へ注射をして投与される液体です。それは、いくつかの部分よりなるものです。
・   この薬物で以前治療された患者において免疫反応を引き起こすことが示されているいくつかの糖および蛋白質分子。該糖分子は、多くの癌、特に前立腺癌上にあります。我々は、すでに、患者が治療された際、これらの分子のどの用量が、高い免疫反応を引き起こすことができるかを認知しています。
・   ＫＨＬまたはキーホールリンペットヘモシアニンと呼ばれる物質。ＫＬＨは、キーホールリンペットと呼ばれるヘビ−様の海生軟体動物から精製され、それは、長年、動物および人々において免疫反応を増強させるために用いられてきました。これらの分子をＫＬＨに付着させると、免疫系が全てのこれらの分子に反応するのを助けます。
・   樹木の皮からのＱＳ２１と呼ばれる物質。それは、免疫系がより多くの癌と戦う細胞を作成するのを助けます。
【０１０４】
あなたが受けるであろうと同様なワクチンは実験室動物に与えられ、これらの動物において免疫反応を生じることが示されています。この実験には１５人までの患者が登録されます。
【０１０５】
３．０  研究手法の記載
該実験は、進行しつつある前立腺癌を有する全ての患者に対して開かれています。あなたがこの実験に入る前に、あなたは、癌が広がったかを見るためにいくつかのテストを受けます。あなたの家の近くの施設で、またはＭｅｍｏｒｉａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌの外来患者部門でＸ線およびスキャンを行なうことができます。初期テストは：
・ 完全な履歴および身体の検査
・ 定期的な血液テスト
・ 尿の試料
・ 胸部Ｘ線
・ 骨スキャン
・ 腹部および骨盤のＣＡＴスキャン
よりなります。
【０１０６】
あなたは、研究の一部となりえない可能性があります。我々は、テスト結果を受け取った後にこれを知るのみです。もしあなたが研究に参加できないならば、我々はあなたに他の治療オプションを提供します。
【０１０７】
もしあなたが他の病院で生検を受けたか、または前立腺を摘出されているならば、我々はあなたに組織をブロック摘出することを要求します。我々は、該組織が糖分子のいずれかを有するかを見たいです。あなたには、これらの生検および組織ブロックの研究についての別の同意書書式に署名することが求められます。
【０１０８】
ワクチン接種の手法
・ あなたの予備治療評価の一部として、我々は、大さじ８杯分の血液を採取します。このほとんどが、定期的な研究のためです。
【０１０９】
・ あなたは９回のワクチン接種を受けます。血液テストがこの研究を通じて行なわれて、ワクチンが安全であることを確認し、それがあなたの免疫系に対してどのような効果を有しているかを知ります。大さじ４杯分の血液が、あなたがワクチンを受けるごとに、９週、１３週に採取されます。さらに大さじ４杯分の血液が研究の３週、９週、２１週および２６週に採取され得ます。この治療が終了した後、あなたの血液中の抗体のレベル、ならびにＰＳＡのようなマーカーを測定するため、あなたは規則的ベースで血液テストを受けます。Ｘ線は病気の程度を評価するためになされます。
治療の間、および最後のワクチン後に規則的なベースで、あなたは検査のために医者に会います。あなたは、通常の定期的な医者の訪問と比較して、この研究で約２回多い医者の訪問を受けます。処置についてのスケジュールは以下の通りです：
１週−検査、血液テスト、ワクチン
２週−血液テストおよびワクチン
３週−検査、血液テスト、ワクチン
７週−検査、血液テスト、ワクチン
９週−検査、血液テスト
１３週−検査、血液テスト、Ｘ線
１９週−検査、血液テスト、ワクチン
２６週−検査、血液テスト、Ｘ線
２６週の後、あなたには、検査および血液テストのために３ヶ月毎に戻るよう求められます。あなたが治療を開始する前に、あなたには、腹部および骨盤のＣＡＴスキャンを含めた定期的Ｘ線、および骨スキャンを受けるよう求められます。Ｘ線は、最後のワクチン注射から２ヶ月ないし４ヶ月後に繰り返されます。
【０１１０】
ワクチンを受けた後あなたが経験するかもしれない副作用の追跡をするため、各ワクチン後にあなたは「患者日記」を記録するでしょう。該日記は１頁であって、記入完了するのに５分ないし１０分を要します。いずれの不快な兆候も記録してください。あなたの医師は定期的なクリニック訪問の間にあなたが有するかもしれないいずれの兆候も綿密にモニターします。あなたの毎日の活動に影響するいずれの兆候も直ちに研究看護婦に報告してください。
【０１１１】
４．０  副作用／リスク／利点
癌細胞を殺すのに用いられる薬物および治療は、正常な細胞にも影響し、副作用を引き起こしかねません。この時点で、この治療の全ての副作用は知られていません。もしあなたが参加することを選択するならば、あなたが有するいずれの兆候も医師に知らせるのが非常に重要なことです。このワクチンに関連することが知られている副作用は以下のものです：
通常：
注射が投与された部位における皮膚の刺激は２日ないし４日間続きます；１ないし２日間続く軽い発熱およびかぜの様子の兆候；注射が投与された部位における皮膚の発疹、腫れまたは掻痒
稀：
蕁麻疹、喘ぎ、発熱、下痢、引きつりおよび寒気を含めたアレルギー反応
利点：
我々は、あなたの癌の成長を遅らせることによってこの実験があなたを助けることを希望しますが、それがあなたを直接的に助けるとは言えません。また、将来その他を助けることを我々は希望します。
【０１１２】
５．０  研究関連における損傷の場合の補償
もしあなたが本研究実験の結果として負傷されれば、病院はあなたが必要とするケアを提供します。病院はこのケアをカバーするのにあなたにいずれの金銭も支給しません。あなたのまたはあなたの保障キャリアもそれに対して請求されません。
【０１１３】
６．０  選択肢
あなたの癌に対しては他の治療があります。ＰＳＡが上昇した患者では、テストステロン（男性ホルモン）を低下させる治療を用いるのが普通です。これは、薬物を用いて、または睾丸を摘出することによってなされます。この治療は、癌の進行を約１ないし２年間遅らせることができますが、その時点の後、癌は進行し続けることもあり得ます。もし低レベルのテストステロン、またはテストステロンの不存在にもかかわらず、あなたの癌が継続的に進行すれば、化学療法単独でまたは他のホルモン療法と組み合わせた化学療法があなたの癌を制御するのを助けることができます。これらの治療は、短時間の間、４人の患者のうち約１名に有益があることが示されています。
【０１１４】
苦痛は放射線照射療法または痛み治療薬で制御することができますが、これは癌を治療しません。あなたはいずれかのさらなる治療を受けないよう決定することもできます。この場合、あなたはできる限りあなたを快適にする支持ケアを受けるでしょう。あなたは、あなたがこの実験に参加することについて決定を下す前にあなたの医師と選択肢を議論すべきです。
【０１１５】
７．０  経済的コスト
あなたまたはあなたの保険会社は以下のものに対して請求されます：
・   癌が広がったかを見るためになされる定期的的テスト
・   この研究のためだけになされたものを含めた全ての血液テスト
・   この研究のための必要とされた特別な訪問を含めた全ての医師の訪問
・   あなたの癌をモニターするためのＸ線
・   もしあなたがこの研究の結果として負傷した場合の入院または治療。
【０１１６】
あなたは以下のものに対しては請求されません：
あなたの免疫系の反応を測定するために用いたワクチンまたはテスト。
【０１１７】
８．０  秘酒義務／プライバシー
この研究のあなたの医療的および病院の記録はプライベートなものです。あなたの氏名またはあなたを特定するいずれの他の情報も、この実験の結果についての報告または公表で用いられません。食物および薬物管理局はあなたの記録を調査できます。
【０１１８】
９．０  拒絶または取り下げの権利／新しい知見
この実験に参加するか否かの選択はあなた自身のものです。我々があなたに説明したこと、およびあなたが実験およびケアの他の形式について読んだことをもとに選択してください。もしあなたが参加しないと決定されれば、侵害なく他のオプションをあなたは利用できます。我々はいずれの時点においても、実験についてのあなたの質問にお答えします。あなたが実験に参加している間、我々は、それを続けるあなたの意思に影響するかもしれないいずれの結果もあなたに報告します。あなたはいずれの時点においても取りやめる権利を有します；もしあなたがそうするならば、あなたにはあなたの必要性および条件に適合する他の利用可能なケアが与えられるでしょう。あなたは、あなたに権利がある利益を失いません。
【０１１９】
１０．０  終了
あなたの医師は、もし：
・   それがあなたの健康にいずれかの危害を与え、
・   あなたがいずれかの深刻なまたは生命を脅かす副作用を有する；
ならば、あなたの同意なくして治療を停止することができます。
【０１２０】
１１．０  結論
人を研究するいずれの病院もＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ  （ＩＲＢ）を有します。この会は、患者の権利を確認するために全ての新しい実験をレビューし、福祉は保護されます。Ｍｅｍｏｒｉａｌ  ＨｏｓｐｉｔａｌにおけるＩＲＢはこの実験をレビューしました。
【０１２１】
この実験を担当する医師はＳｕｓａｎ  Ｓｌｏｖｉｎ博士［電話番号：（２１２）６３９−６４１２］、Ｈｏｗａｒｄ  Ｓｃｈｅｒ博士［（２１２）６３９−７５８５］、およびＰｈｉｌｉｐ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ博士［（２１２）６３９−７４２５］です。もしあなたが参加をする前に、またはいずれかの他の時点で、この実験についての情報をもっと必要とするならば、あなたは彼らに連絡することができます。あなたが参加すると決定した場合に、もし研究実験で副作用があれば、彼らに電話すべきです。あなたが同意プロセス、研究患者の権利、または研究関連損傷についての情報について電話できる非−医師はＪａｎｉｃｅ  Ｌｅｖｙ氏です（電話番号：（２１２）６３９−５８０４）。
【０１２２】
方法
血清学的分析
１．ＥＬＩＳＡ法（酵素結合イムノソルベント検定法）：
ＥＬＩＳＡ検定法は後記するごとく行なった。エタノール中、または０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１１）中の抗原を、糖脂質については０．２μｇ／ウェルにて、およびペプチドについては０．１μｇ／ウェルにてＥＬＩＳＡプレートに被覆した。系列希釈した抗血清を各ウェルに添加し、アルカリ性ホスファターゼ−を結合されたヤギ抗−マウスＩｇＭまたは抗−マウスＩｇＧを１：２００の希釈にて添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）。ＫｉｅｒｋｅｇａａｒｄおよびＰｅｒｒｙ  Ｌａｂｓ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）から得たアルカリ性ホスファターゼで結合したしたヤギ抗−マウスＩｇＧおよびＩｇＭを第２の抗体として用いた。ＥＬＩＳＡ力価は、正常な対照マウス血清のそれの０．１またはそれ以上の吸光度を生じる最高希釈とに定義される。
２．ＴＡＣＳによって決定された細胞表面反応性：
免疫血清の細胞表面反応性をヒト細胞系でテストした。２×１０5細胞／試験管の単細胞懸濁液を、３％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）および０．０１Ｍ  ＮａＮ3を含むＰＢＳ中で洗浄し、２０μｌの１：２０希釈血清またはモノクローナル抗体ｍＡｂと共に氷上で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ中の３％ＦＣＳでの２回の洗浄の後、フルオレセイン−イソチオシアナートで標識した２０μｌの１：１５希釈ヤギ抗−マウスＩｇＭまたはＩｇＧ（ＦＩＴＣ，Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を添加し、混合物を３０分間インキュベートした。最後の洗浄の後、ＦＡＣＳｃａｎ、Ｂｅｃｔｏｍ  ＆  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡを用い、および平均蛍光強度の染色細胞を区別した。
【０１２３】
添付書類Ｂ
マウスにおける６価ワクチンの免疫原性試験
４匹の雌ＣＢ６Ｆ１マウスを６価ワクチンで３週間の間、毎週ワクチン接種した（マウス当たり多価−ＫＬＨコンジュゲート中の６価ワクチン＋２０μｇのＱＳ２１）。
【０１２４】
注射は９５μｌ／部位を用いる２部位での皮下であった。
［多価−ＫＬＨコンジュゲート中のＶｌＢｌ標識多価＋１００μｇ  ＱＳ２１／１．０ｍｌ、合計用量、１．０ｍｌ、ロット番号０８１１００］
プレーワクチン接種血清を各マウスから採取した。
第３ワクチン接種から１０日後に血清を再度採取した。
【０１２５】
ワクチン接種に先立って、およびワクチン接種後にマウスの体重を測った（２４時間後、４８時間後、１週間後および２週間後）。
対照については、以下のモノクローナル抗体を用いた：
【０１２６】
2004534088.tif 000005
【０１２７】
第２シリーズの実験
前立腺癌、乳癌、卵巣癌および小細胞肺癌のための多価（六価）結合ワクチン
腫瘍−特異的抗原が同定されており、ワクチンのための標的として追求されている。本発明者らの以前の仕事では、ＫＬＨに結合した腫瘍抗原グロボＨ、ルイスy、ＧＭ２、グリコシル化ＭＵＣ−１、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）またはＴＦ（ｃ）を利用する一価ワクチンが最小の全身特性を除き、局所的紅斑および浮腫で安全であることを示した。これらの一価ワクチンでのワクチン接種の結果、ほとんどの患者は、各抗原−ＫＬＨ結合に対して特異的な高力価のＩｇＭまたはＩｇＧ抗体を生じた。本発明は、一価ワクチンの成分を組み合わせ、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および小細胞肺癌のための治療としてアジュバントと共に投与される六価ワクチンを提供する。
【０１２８】
サポニン免疫学的アジュバントＱＳ−２１またはＧＰＩ−０１００と共に投与される７つの腫瘍抗原のユニークな組合せよりなるワクチン。該抗原はグリコシル化ＭＵＣ−１−Ｇ５、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）である。各場合、抗原はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合されている。
【０１２９】
抗原およびアジュバント用量の好ましい範囲は以下の通りである：
グリコシル化ＭＵＣ−１−Ｇ５：０．１ないし３０μｇ；
グロボＨ：０．１ないし１００μｇ；
ＧＭ２：０．１ないし１００μｇ；
Ｌｅy：０．１ないし６０μｇ；
Ｔｎ（ｃ）：０．１ないし１００μｇ；
ｓＴｎ（ｃ）：０．１ないし１００μｇ；
ＴＦ（ｃ）：０．１ないし３０μｇ；
ＱＳ−２１：２５ないし２００μｇ；
ＧＰＩ−０１００：１ないし２５ｍｇ。
【０１３０】
実施例１
六価ワクチンを用いる第Ｉ相臨床試験プロトコル
実施例２
マウスにおける六価ワクチン免疫原性試験
１．方法
２．結果
【０１３１】
多価ワクチン−ＫＬＨコンジュゲート＋ＱＳ−２１を用いる卵巣上皮、ファローピウス管、または腹腔癌を持つ患者におけるパイロット第Ｉ相試験
１．０  プロトコルの要約
２．０  目的
３．０  背景および原理
４．０  患者の適格性の基準
５．０  予備治療評価
６．０  ワクチンの調製
７．０  治療スケジュールおよび用量
８．０  実験の間の評価
９．０  毒性情報
１０．０  実験からの脱退の基準
１１．０  生物統計学的考慮（最終点）
１２．０  ヒト対象の募集および保護
１３．０  参照書目録
１４．０  添付書類
Ａ．インフォームド・コンセント
Ｂ．ＮＣＩ共通毒性スケール
１．０  プロトコルの要約およびプログラム計画
外科的細胞減少および白金／タキサン含有化学療法を受ける卵巣上皮、ファローピウス管、または腹腔癌を持つ患者は、完全な臨床緩解期に入るかなりの機会を有するが、残念なことに、ほぼ７０％が結局は再発する。臨床的緩解期にあるこれらの患者は残存する病気は最小であり、結果を改良する試みにおいて新規な強化戦略を評価する優れた候補である。このパイロット多価プロトコルは、種々のコンポーネント抗原の免疫原性を証明する、センターにおける一連の一価第Ｉ相ワクチン試験の最高点を表わす。それは、効果を評価するために設計されたより大きな試験の計画発展に至る、第２の緩解期における第Ｉ相一価試験プログラムの間の遷移を表わす。このワクチンのために選択された個々の抗原での免疫化は、患者の大部分において終始一貫して免疫原性であった。ワクチン投与に関して、確認された全身毒性は起こらなかった。免疫原性は不変であり、多価ワクチン投与では全身毒性は起こらないと予測される。このパイロット試験に適格な患者は、一次療法に続く、または再発およびさらなる化学療法での緩解期への再誘導に続く、完全な臨床的緩解期における段階ＩＩないしＩＶ疾患を最初に持つ患者である。この試験では、患者は、以下のガングリオシド成分：ａ）ＧＭ２、ｂ）グロボ−Ｈ；血液型関連抗原：ｃ）ＴＦ（ｃ）、ｄ）ｓ−Ｔｎ（ｃ）、ｅ）Ｔｎ（ｃ）、ｆ）ルイス−Ｙ；およびｇ）（グリコシル化された）蛋白質抗原ＭＵＣ−１−Ｇ５を含む抗原規定ワクチンを受ける。このパイロット試験の主要エンドポイントは安全性、および継続する免疫原性の確認である。副次エンドポイントは、抗体反応の性質および期間を特徴付けることである。
２．０  目的
２．１  このパイロット試験の主要エンドポイントは、多価ワクチン投与の安全性、および大きな無作為化実験を行なうに先立っての患者における継続した免疫原性を測定することである。
２．  ２．２  副次エンドポイントは、多価ワクチンによって生じた抗体反応の性質および期間をさらに特徴付けることである（ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ）。
３．０  背景および原理
３．１  病気の背景および治療についての適当性
１９９０年、卵巣癌の約２２，５００の新しい症例が診断され、１４，５００人の婦人が該疾患で死亡したと見積もられる。卵巣癌を持つ患者の７５パーセントは、診断時の卵巣を超えて広がるであろう。標準的な一次治療は、細胞減少外科処置、続いての、白金およびパクリタキセル含有化学療法レジメンよりなる1。多くの患者は、一次治療の最後に臨床的に測定可能な疾患を有しない。しかしながら、第２観察の開腹のレビューは、５０パーセント未満の患者が実際には疾患でないことを示す2。さらに、陰性第２観察手法での患者の約半分は、再発し、さらなる治療を要するように運命付けられている3、4。総じて、患者の約３０パーセントのみが、現在利用できる治療で病気のない状態である。一次療法の完了において最小の疾患負荷であること仮定すると、これらの患者は、免疫変調戦略を評価するのに理想的な候補である。
【０１３２】
３．２  抗体産生のために第１に設計された多価ワクチンについての原理
免疫指向療法の開発を指示するために、種々のデータが固体腫瘍で存在する。天然で獲得された５，６、または能動的に誘導された7、8、抗体は結果を改良することができることを示す実験がメラノーマを持つ患者で出現した。Ｒｅｉｔｈｍｕｌｌｅｒらによって報告された大きな臨床試験において、Ｄｕｋｅｓ  Ｃ結腸癌腫を切除した１８９人の患者が、ＫＳＡ抗原を認識するネズミ抗体ＣＯ１７−１Ａでの観察ｖｓと手術後治療を受けるように無作為化された。毒性効果は、頻繁でない体の症状に限定された。５年のメジアン追跡において、死亡率は処置分においては３６％だったのに対して、観察された群においては５１％であった。治療の利点は、他の公知の予後因子につき制御する場合の、一変量（ｐ＝０．０５１）および多変量（ｐ＝０．０４３）解析で示された9。
【０１３３】
抗体誘導のために一次的に設計された癌ワクチンのための基礎は、腫瘍再発を防止する受動的に投与されたまたは能動的に誘導された抗体の能力を示す多くの臨床前モデルであり10、受動的に投与されたモノクローナル抗体が臨床的効果、および天然で獲得された抗体または誘導されたワクチンと、いくつかの異なる臨床的設定における改良された予後の相関を示す臨床試験の数は増大している6。
【０１３４】
ＥＬ４リンパ腫は、天然では、モノクローナル抗体３Ｆ８によって認識されるＧＤ２ガングリオシドを発現する。ＫＬＨに共有結合によりコンジュゲートしたＧＤ２を含有し、かつ免疫学的アジュバントＧＳ２１と混合したワクチンは、ＧＤ２に対するワクチン接種への最適なアプローチである。静脈内腫瘍挑戦から２日または４日後に投与された比較的高レベルの抗体、または腫瘍挑戦後第２日または第４日まで存在したワクチンによって誘導された中程度の力価は、ほとんどのマウスにおいて疾患を壊滅させることができた。もし抗体投与が第７日または第１０日まで延びれば、利点はほとんどまたは全く示されなかった。もしＥＬ４挑戦における細胞の数が減少し、機会のより長いウインドウが与えられれば、ワクチン接種は腫瘍挑戦後に開始することができ、良好な保護が見られよう7。これらの結果は、標的が循環する腫瘍細胞およびミクロメタスターゼである場合、アジュバント設定において抗体を誘導するワクチンでの免疫化を開始する必要性と合致する。第１の緩解期にある卵巣癌を持つ患者はこれらの基準を満足し、残念なことに、高い「事象率」を有し（すなわち、８０％が再発する）、このアプローチの効率の迅速な評価を可能とする。
【０１３５】
多価ワクチンに対する本発明者らの強調についての基礎は、腫瘍細胞不均一性、ヒト免疫反応の不均一性、および腫瘍細胞に対する総じての抗体力価および補体媒介細胞傷害性（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のごときエフェクターメカニズムの間の相関である。例えば、一連の１４の腫瘍細胞系および３つのガングリオシドに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用い、ＭＳＫＣＣにおける研究者は、フローサイトメトリーおよびＣＤＣによって活発に分析された重要な細胞表面反応性は、３つのｍＡｂのうちの１つを用いる細胞系の２ないし８から、３つのｍＡｂをプールした場合の細胞系の１３ないし１４まで増加したことを示した。メジアンＣＤＣは、最良の単一のｍＡｂと比較してｍＡｂのプールで４倍増加した11。卵巣の癌は細胞表面抗原の豊富なアレイを発現し、それらを、多価ワクチンのための適当な標的とする。
【０１３６】
細胞表面抗原（特に、炭水化物細胞表面抗原）は、免疫認識およびヒト癌の攻撃のための予期せぬほど優れた標的であることが判明している。マウスのヒト腫瘍細胞での免疫化によって誘導されたより腫瘍が制限されたモノクローナル抗体の多くは、細胞表面で発現された炭水化物抗原に対して向けられることが判明している12。炭水化物抗原に対する免疫化は、一般的には、抗体反応をもたらし（切開ビューについての文献参照）、これは一義的にはＩｇＭである13-15。これらの抗体は、網内皮細胞系によって、ＣＤＣ、炎症、および腫瘍細胞のファゴサイトーシスを誘導することが知られている（オプソニ化）16。細胞表面蛋白質抗原に対する免疫化は、種々のＢおよびＴリンパ球反応を誘導することができる。Ｔリンパ球反応は、ワクチン接種試験の意味において定量するのが困難であり、この提案の焦点ではない。蛋白質抗原に対する抗体反応は、その双方が（サブクラスに依存するＩｇＧに関して（ＩｇＧ１およびＩｇＧ３が最適である））補体活性化を誘導することができるＩｇＭおよびＩｇＧを含む。これらのサブクラスのＩｇＧ抗体もＡＤＣＣを誘導することができる。
【０１３７】
抗体は、血流からの循環する病原体の活発な排除についての一義的なメカニズムである。それらは、理想的には、遊離腫瘍細胞および全身または腹腔内ミクロメタスターゼの根絶に適しており、それらは、これを、種々の臨床前マウス実験において前記したごとく達成した（文献でレビューされている）10、7。アジュバント免疫化試験において、一次標的は個々の腫瘍細胞、または全ての残存腫瘍の明らかな切除後に長期間存在し得る初期ミクロメタスターゼである17。外科的処置の後、化学療法の完了は、免疫介入のための、特に、ほとんど残っていない癌細胞を同定し、それを殺すよう免疫系を指示することを目的とした癌ワクチンの投与に理想的な時期である。もし充分な力価の抗体が腫瘍抗原に対して誘導されて、腫瘍細胞を血液およびリンパ系から排除できれば、外科的処置、放射性療法および病巣内治療を含めた攻撃的な局所療法の結果、転移性癌さえ長期制御がもたらされるであろう。
【０１３８】
３．３  抗原についての予備的実験
ＧＭ２ワクチン：センターの研究者（Ｐ．Ｏ．Ｌｉｖｉｎｓｇｔｏｎら）は、精製されたＧＭ２を含むワクチンがＧＭ２を発現する腫瘍細胞を含むワクチンよりも免疫原性であり得ることの最初の証明以来、１５年間、メラノーマ患者においてＧＭ２に対する抗体を誘導する能力を改良してきた18。最初に、患者の８５％におけるＩｇＭ抗体を含めた、ＢＣＧに接着するＧＭ２を最適なものとして選択した。これは、ＢＣＧでの免疫化と、ＡＪＣＣ段階３メラノーマを持つ１２２人の患者におけるＧＭ２／ＢＣＧでの免疫化とを比較する無作為化した試験の基礎であった8。ＩｇＭ抗体は１／１６０のメジアン力価を有し、短期間生存した（８ないし１２週）。ＩｇＧ抗体誘導は稀であった。抗体力価は、３ないし４ヶ月間隔での反復されたブースター免疫化の投与によって３年を超えて維持された。この試験において無作為化された患者と比較した場合、総じての、または病気のない生存に対する統計学的に有意な差は観察されなかった。治療結果を鈍らせかねないＧＭ２処理群におけるものとは反対に、予め存在するＧＭ２抗体が対照群で５人の患者で観察された。良好な結果およびＧＭ２抗体の存在の間の関係が見られた（８）。
【０１３９】
ＴＦ、ＴｎおよびｓＴｎワクチン：種々の上皮癌を持つ患者を、非クラスター化ＴＦ−ＫＬＨおよびｓＴｎ−ＫＬＨコンジュゲートワクチン＋種々のアジュバントで免疫化した19。ＴＦおよびｓＴｎ抗原に対する高力価ＩｇＭおよびＩｇＧ抗体が得られたが、我々は、免疫化マウスおよび患者からの血清で検出された反応性の大部分は、天然に発現されたムチンに存在しない合成構築体に存在する抗原性エピトープに対するものであることを見出した20。Ｔｎ抗原についての以前の研究に基づき21、クロサカおよびナカダらは、ｓＴｎに対するモノクローナル抗体であるＭＬＳ１０２はｓＴｎのクラスター（Ｃ）を優先的に認識すると仮定した。モノクローナル抗体Ｂ７２．３での、およびマウスにおける、および患者における、ＴＦ−ＫＬＨおよびｓＴｎ−ＫＬＨコンジュゲートワクチンに対して生起された血清での、ＭＳＫＣＣにおける研究の結果、同様の結論が得られた20、22。３つの連続したセリンまたはスレオニンに共有結合連結した３つのエピトープよりなる合成ＴＦ、ＴｎおよびｓＴｎクラスターの利用可能性は、ＭＳＫＣＣの研究者が、この仮説を証明することを可能とした。直接的テストおよび阻害アッセイ双方において、Ｂ７２．３はｓＴｎクラスターを専ら認識し、ｓＴｎ（Ｃ）−ＫＬＨで免疫化されたマウスからの血清は、天然ムチンおよびｓＴｎを発現する腫瘍細胞双方と強く反応した22。この背景に基づき、我々は、乳癌を持つ患者においてＴＦ（Ｃ）ＫＬＨ、Ｔｎ（Ｃ）−ＫＬＨおよびｓＴｎ（Ｃ）−ＫＬＨコンジュゲートワクチンで試験を開始した。ＯＳＭまたはＰＳＭおよびＴＦ、ＴｎまたはｓＴｎを発現する癌細胞に対するものを含めた、関連する高力価特異的な抗体は、本発明者らの経験で最初に誘導された。クラスター化エピトープの重要性を確認し、それらの関連免疫原性を規定するこれらの結果に基づき、我々は、卵巣癌に対する多価ワクチンにおけるこれらのクラスター化抗原を含めつつある。
【０１４０】
ＬｅyおよびグロボＨワクチン：
ＬｅyおよびグロボＨワクチンの開発は、以前は、ワクチン構築およびテストについての充分な量の抗原の欠如によって制限されていた。過去４年にわたり、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ博士は、双方の抗原の合成に成功した23、24。ＭＳＫＣＣの研究者は、グロボＨ−セラミドプラスまたはマイナスアジュバントＱＳ−２１およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａ突然変異体Ｒ５９５で、およびＫＬＨまたはＢＳＡに共有結合したグロボＨ＋免疫学的アジュバントＱＳ−２１でマウスの群を免疫化した。合成抗原およびグロボＨを発現するＭＣＦ７細胞双方に対する最高の抗体力価は、グロボＨ−ＫＬＨ＋ＱＳ−２１ワクチンによって誘導された23、24。合成グロボＨに対して誘導された抗体力価はＥＬＩＳＡによると１／１２０，０００であり、ＭＣＦ７に対して誘導された力価は１／３２０であり、優れた補体媒介細胞傷害性が同様に観察された。Ｌｅy−ＢＳＡおよびＬｅy−ＫＬＨワクチンもまたマウスでテストした。高力価抗体反応が、Ｌｅyの合成エピトープに対して、および免疫化されたマウスの大部分においてＬｅyを発現する腫瘍細胞に対して得られた25。これらの結果に基づき、グロボＨ−ＫＬＨ＋ＱＳ−２１およびＬｅy−ＫＬＨ＋ＱＳ２１での一価第Ｉ相臨床試験が、乳癌、前立腺癌または卵巣癌を持つ患者で開始された。精製された抗原に対する、およびこれらの抗原を発現する腫瘍細胞に対する抗体がほとんどの患者で誘導され、該原稿が最近後者につき公表された26、27。
【０１４１】
ＭＵＣ１およびＭＵＣ２ワクチン：ＭＳＫＣＣの研究者はＭＵＣ１−ＫＬＨおよびＭＵＣ２−ＫＬＨ＋ＱＳ−２１でマウスを免疫化し、ＭＵＣ１およびＭＵＣ２ならびにＭＵＣ１およびＭＵＣ２を発現するヒト細胞系に対する終始一貫した高力価のＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の誘導、ならびに遺伝子導入の結果としてのヒトＭＵＣ１を発現する同系マウス乳癌からの保護を観察した。３つの方法のうちの１つによってＫＬＨにコンジュゲートされた、またはされていない種々の長さのＭＵＣ１ペプチドを含み、かつＱＳ‐２１またはＢＣＧと混合したワクチンでもマウスを免疫化した。ＭＢＳに機能性リンカーと共にＫＬＨにコンジュゲートした３０以上のアミノ酸を含み、免疫学的アジュバントＱＳ‐２１と混合したＭＵＣ１は、最も高い力価の抗体を誘導した28。マウスにおけるこれらの実験に基づき、試験を開始し、全ての知られた疾患の切除後に検出可能な乳癌がない乳癌患者におけるＭＵＣ１−ＫＬＨ+ＱＳ−２１ワクチンでの試験を完了した。９人の患者を、ＫＬＨに対するコンジュゲーションのために一端にシステイン、および他端に免疫優性エピトープ−ＡＰＤＴＲＰＡを持つ３１アミノ酸のＭＵＣ１ペプチドで処置した29。免疫化に先立ち、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳによって検出可能なＭＵＣ１血清学的反応性を有する患者はいなかった。結果は後記表にまとめる。ＭＵＣ１およびＭＵＣ１を発現する腫瘍細胞に対する反応性はほとんどの患者で見られた。患者の別の群をＭＵＣ２−ＫＬＨ+ＱＳ２１で免疫化した。この試験の解析はまだ完了していないが、現在までの結果を後記表にまとめる。
【０１４２】
本発明者らは、ＭＵＣ１またはＭＵＣ２でのワクチン接種後に、Ｔ−リンパ球の増殖、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによるインターフェロンγおよびＩＬ４放出、ＣＴＬ活性または陽性ＤＴＨ反応を証明することができなかった。増殖アッセイは、特に、ＭＵＣ１試験において焦点が当てられた。患者はロイコフォレシスプレおよびポストワクチン接種を受け、実験のために充分なリンパ球を供した。定常的な２年の努力の後、種々の長さのＭＵＣ１ペプチドに対する増大した反応性の明らかな証拠、あるいはＨＬＡ  Ａ２に対する結合を増加させた単一のアミノ酸変化を持つ異常なＭＵＣ１ペプチドに対するＨＬＡ  Ａ２陽性患者における明瞭な証拠はなかった（個人的な通信、Ｐ．Ｏ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ）。ＭＵＣ１でワクチン接種受けた最初の６人の患者からのプレおよびポストワクチン接種ＰＢＬもまた、ＣＴＬ前駆体頻度分析のためにＯｌｉｖｅｒａ  Ｆｉｎｎ博士の研究所に送られた。頻度の増加は観察されなかった。総じて、３１ａａのＭＵＣ１−ＫＬＨ+ＱＳ−２１ワクチンでのＭＳＫＣＣからの結果、および１０４ａａのＭＵＣ１ペプチド+ＢＣＧワクチンでのＦｉｎｎ博士の結果の間の主な差は、前者が、腫瘍細胞と反応性である明瞭に証明可能な終始一貫した抗体反応を有したことである。阻害アッセイを行なって、この血清学的反応を良好に理解した30。ＩｇＭ反応の多く、およびＩｇＧ反応のほとんど全ては、末端位置におけるＲＰＡに対して優先的な免疫優性エピトープＡＰＤＴＲＰＡに対するものであった。
【０１４３】
ＫＳＡワクチン：ＫＳＡはＪｅｎｎｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  （Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，ＣＡ）によってバキュロウイルスシステムにおいて調製され、１０ｍｃｇ/患者がテストのために供給された。入手可能なＫＳＡが少量のため、マウスにおける関連免疫原性の証明の後に、我々は、ＫＳＡ+ＱＳ２１で、またはグルタルアルデヒドによってＫＬＨに共有結合連結したＫＳＡ+ＱＳ２１で９人の患者の群を処置した。いずれの場合にも、グルタルアルデヒドで処理しなかったＫＳＡに対する抗体、またはＫＳＡを発現する腫瘍細胞の有意な誘導はなかった。その結果，ＫＳＡは多価ワクチンに含めない。ＫＬＨコンジュゲートワクチンでのこのおよび他の試験の結果は後記表にまとめる（個人的なデータ、Ｐ．Ｏ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ）。
【０１４４】
2004534088.tif 000006
【０１４５】
さらなる変数：２つのさらなる変数が臨界的であることが判明した（コンジュゲーションの方法およびＫＬＨ分子当たりの抗原分子のエピトープ比率）。アプローチした最適なコンジュゲーションは抗原に従って変化した。ガングリオシドは、セラミド二重結合のオゾン開裂を用い、アルデヒド基を導入し、続いて、還元的アミノ化によってＫＬＨのアミノリシル基にカップリングさせることによって良好にコンジュゲートされた。このアプローチは、Ｍ２Ｃ２Ｈリンカーが最も効果的であることが判明している31ＫＬＨに対する、またはＭＢＳリンカー基が最適である28ＭＵＣ１またはＭＵＣ２についての、Ｔｎ、ｓＴｎおよびＴＦクラスターまたはグロボＨのコンジュゲーションについてほど効果的でなかった。
【０１４６】
メラノーマ患者におけるＧＭ２ワクチンに対する抗体反応に対するワクチン投与の用量およびスケジュールのインパクトもまた調べた。週間隔または２週間間隔での４回の免疫化、続いての、２ないし３ヶ月間隔での２回のブースター免疫化を、月間隔の６回の免疫化と比較した。週または２週間間隔の初期の免疫化の結果、匹敵する高い力価がもたらされた（高力価は週間隔ではわずかに早く起こる）が、顕著には、毎月の免疫化の結果、ワクチン接種した６人の患者においてはるかに弱い、または検出できない抗体反応がもたらされた32。ＭＳＫＣＣにおいて、およびＰｒｏｇｅｎｉｃｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌにおいて調製したＧＭ２−ＫＬＨ+ＱＳ−２１ワクチンは、各々、本出願で提案されたもののような用量発見実験でテストされた。双方の場合において、３ｕｇ以下のＧＭ２用量の結果、ほとんどの患者において、より低いＩｇＭ力価および検出できないＩｇＧ力価がもたらされた。１０、３０および１００ｕｇのＧＭ２用量は、匹敵するＩｇＭおよびＩｇＧ力価を与えた33。これらの実験に基づき、我々は、３ないし４回の免疫化の最初の週スケジュール、続いての、３ヵ月ごとのブースター免疫化、および無作為化された第ＩＩＩ相試験で用いる用量を選択した。
【０１４７】
３．４  ワクチン接種の潜在的毒性
ワクチンの予測される安全性は、個々の成分でのワクチン接種の安全性に基づく。臨床経験は、含まれた抗原の各々に対するワクチン誘導抗体反応での臨床試験で増えている。大多数が突き止められている、これらの試験における分泌境界における抗原発現は、一旦抗体が存在すれば、免疫学的許容性または兆候的自己免疫性を誘導せず、これは、それらが免疫系から隔離されていることを示唆する。それにもかかわらず、実験室での実験および身体検査の正規のスケジュールは、いずれかの異常を検出するように設計される。このパイロット試験は、この設定における多価ワクチン投与の安全性を確認するための最初の実験の内の１つを表わす。
【０１４８】
３．５  一般的な免疫アプローチ
種々の方法を用いて、特に、ＩｇＧ反応を誘導するために、抗原の免疫原性を増加させてきた。臨床前実験室での実験において、我々は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に対する抗原の共有結合が最も効果的であることを見出した34。ＫＬＨはよく許容され、従前には、ワクチン注射部位において軽い炎症を引き起こしたに過ぎなかった。ＫＬＨの付着は、種々の架橋方法によって達成することができる。ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）は最良の公知のヘテロ二機能性試薬であり；中性のｐＨでは、チオール基をアミノ基で架橋させる。該結合は２つの別々の反応を介して進み、かくして、同一分子の間の結合を制限する。免疫原性キャリア蛋白質に抗原を連結するに加え、誘導された抗体の力価は、適当な免疫学的アジュバントの使用でさらに増加させることができる。我々は、アジュバントを含まない、またはＤＥＴＯＸ、ＢＤＧまたはＱＳ−２１を用いるワクチンでメラノーマ患者の群を免疫化した。ＱＳ−２１は他のものよりも有意に効果的なアジュバントであり、有意により高い力価のＩｇＭおよびＩｇＧ抗体を産生する。それは、南米の樹木Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮から抽出されたサポニン誘導体である。一連のこれらのサポニンについての単糖組成、分子量、アジュパント効果および毒性が記載されている35-36。また、それは非毒性であって、ネコにおいてＦｅＬＶサブユニットワクチン37およびアカゲザルにおいてＨＩＶ−１組み換えワクチンの免疫原性を増加させることにおいて効果的であることも判明している。安全性を証明し、およびＧＭ２−ＫＬＨワクチンで処置した患者における１００ｕｇのＱＳ−２１用量の効果を示唆する第Ｉ相試験が報告されている。報告された唯一の有害な事象は最小かぜの様子兆候、および注射部位における軽い不快感であった38。かくして、ＫＬＨとのコンジュゲーション、およびＱＳ−２１の添加はＭＳＫＣＣにおけるワクチン構築のための標準的なアプローチとなり、マウスおよびヒトにおいて種々のガングリオシド、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＫＳＡ、Ｔｎ、ｓＴｎ、ＴＦ、ＬｅyおよびグロボＨに対する抗体誘導で最適であることが判明している。
【０１４９】
３．６  実験した抗原の分布：一般に、このワクチンに含まれる抗原は、高頻度で卵巣癌細胞で発現される。ＭＳＫＣＣにおける最近の実験は、免疫組織化学染色を用い、卵巣癌を含めた種々の腫瘍タイプにおけるこの分布を特徴付けた。種々の腫瘍検体を各腫瘍タイプで用い、抗原が存在すると考えるためには、５０％以上の細胞が陽性であることが必要とされた。卵巣癌でテストした腫瘍検体でのこれらの抗原の存在は：ＧＭ２（１００％）、ＧＬＯＢＯ−Ｈ（６０％）、ＭＵＣ１（１００％）、ｓＴｎ（６０％）、ＴＦ（１００％）、Ｌｅ  Ｙ（８０％）であった39-41。
【０１５０】
３．７  発明者らのアプローチについての原理：発明者らの仮定は、多価コンジュゲートワクチンでの卵巣癌細胞上のいくつかの細胞表面抗原に対する抗体反応の誘導の結果、遊離腫瘍抗原、循環する腫瘍細胞およびミクロメタスターゼが根絶されることである。ワクチンの多価性質および抗体反応は、抗原のいずれかの１つまたは２つを発現しない腫瘍細胞による逃避を排除し、および各細胞に対して反応する抗体の数を増加させるのに重要である。発明者らのワクチンは、前記した卵巣癌細胞表面抗原の５つまたは６つに対して終始一貫して免疫原性であることが判明し、およびそれは非毒性であることが判明すると期待される。緩解期設定における高リスク卵巣癌患者でのこの多価ワクチンでの免疫化の結果、延長された病気無しおよび総じての生存がもたさられるかは、このパイロット試験を追跡するための引き続いての実験の焦点である。
【０１５１】
４．０  患者の適格性および排除の基準
４．１  適格性の基準
４．１．１  患者は、診断における段階ＩＩ−ＩＶからの卵巣、ファローピウス管または腹膜で生起する組織学的に記載された上皮癌腫を有し、初期細胞低下外科的処置および少なくとも１つの白金ベースの化学療法レジメンでの化学療法を受けなければならず、完全に臨床的緩解期にあり、あるいは、少なくとも１つの白金含有レジメンでの一次処置に続いて再発したが、さらなる化学療法に続いて完全な緩解期に復帰した患者であっても良い。適格性のある患者は、完全な臨床的緩解期にあるものである。
【０１５２】
（完全な臨床的緩解期はＣＡ１２５＜３５単位、陰性の身体的調査、および腹部および骨盤の断層撮影法（ＣＴ）による病気の明確な証拠なしと定義される。リンパ節および/または柔軟組織異常≦１．０ｃｍは、しばしば、骨盤に存在し、病気の明確な証拠と考えることはできない）
４．１．２  患者が、適切な血液学的、腎臓および肝臓機能を有しなければならない。
【０１５３】
４．１．２．１  ＡＮＣ≧１，０００細胞/ｍｍ3；血小板≧１００，０００細胞/ｍｍ3
４．１．２．２  血清クレアチニン＜１．６ｍｇ/ｄｌ、および/またはクレアチニンクリアランス≧５０ｃｃ/分
４．１．２．３  ビリルビン、ＳＧＯＴ、Ａｌｋ  Ｐｈｏｓ＜２×正常超
４．１．２．４  Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ進行状態＞６０％
４．１．３  患者は、インフォームド・コンセントに署名しなければならない。
【０１５４】
４．２  排除の基準
４．２．１  いずれかの他の急性侵入性悪性疾患を同時に持つ患者
４．２．２  実験の期間につき追跡できない患者
４．２．３  海産物に対してアレルギーを有する患者
４．２．４  痔を排除する陽性便グアヤクを持つ患者。便グアヤクは、胃炎の検出を助けるためのスクリーニングツールとして実験を通じて反復される。
【０１５５】
４．２．５  子供の参加：癌を持つ子供の数は制限されているので、かつ国家的小児科癌研究ネットワークが既に大部分をアクセスしているので、このプロトコルは子供を含まない。さらに、子供における卵巣、ファローピウス管、または腹膜化癌の発生率は極端に頻繁ではない。
【０１５６】
５．０  予備処理評価
５．１  臨床：（処置の三週間以内）
５．１．１  病歴および身体検査
５．１．２  Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ進行状態
５．２  実験室：（処置の三週間以内）
５．２．１  示差でもっての完全な血液細胞カウント
５．２．２  肝機能プロフィールおよび血清クレアチニン
５．２．３  プロトロンビン時間
５．２．４  血清ＣＡ−１２５レベル
５．２．５  血清アミラーゼ
５．２．６  便グアヤク
５．２．７  尿分析
５．２．８  ＴＳＨ
５．３  画像化および診断実験：（処置の４週間以内）
５．３．１  腹部および骨盤の断層撮影法（ＣＴ）スキャン
６．０  ワクチンの調製
６．１  ＧＭ２はＰｒｏｇｅｎｉｃｓによって供給される。グロボ−Ｈ、ルイス−Ｙ、ＴＦ（Ｃ）、Ｔｎ（ｃ）およびｓＴｎ（ｃ）はセンターのＳａｍ  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ博士の研究室で合成される。ＭＵＣ−１はＭＳＫＣＣのコア施設で生産される。グリコシル化のために、該ＭＵＣ−１はコペンハーゲン大学、糖生物学グループに送られた。グリコシル化は、基質としてＵＤＰ−Ｎ−ＧａｌＮＡｃを用いてＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼによって行なった。逆相ＨＰＬＣによる精製の後、生成物はＭＳＫＣＣに送付されて戻された。
【０１５７】
６．２  ＱＳ−２１は、白色粉末として１００ｍｇバイアル中にてＡｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから得られ、摂氏−３０℃で保存される。これは標準生理食塩水にあまり溶解しないので、最初はＰＢＳに懸濁させ、次いで、標準生理食塩水中で最終希釈を行った。ＱＳ−２１を使用直前に０．２２マイクロメートルのフィルターを通す。
【０１５８】
６．３  ＫＬＨへのコンジュゲーションは、３つの異なるコンジュゲーション手法：ＧＭ２に対する直接的アミノ酸化（オゾン分解）、グロボＨおよびＬｅＹについてのＭ２Ｃ２Ｈ２機能性リンカー基、および４つのムチン抗原についてのＭＢＳ２機能性リンカー基で達成される。
６．４  コンジュゲートの滅菌性は０．２２マイクロメーターフィルターを通過させることによって確認され、それは、摂氏−３０ないし−８０℃にて凍結された標準生理食塩水中で貯蔵する。
【０１５９】
６．５  バイアルは、標準的なロット開放試験に続いて用いるために開放する（ほぼ５週間）。
【０１６０】
７．０  治療スケジュールおよび用量
７．１  ワクチンは：アジュバントＱＳ２１（１００ｍｃｇ）と共に［ＧＭ２（１０ｍｃｇ）/ＴＦ（ｃ）（３ｍｃｇ）/ｓＴｎ（ｃ）（３ｍｃｇ）/グロボ−Ｈ（１０ｍｃｇ）/ＭＵＣ１−１−Ｇ５（３ｍｃｇ）/Ｌｅy（１０ｍｃｇ）/Ｔｎ（ｃ）（３ｍｃｇ）］−ＫＬＨ（〜４００ｍｃｇ）を含有する。
【０１６１】
７．２  免疫化スケジュール
ワクチンは３用量につき週間隔で投与される。これに続き、４週間休み、次いで、第４のワクチン接種を行う。次いで、８週間休み、次いで、第５のワクチン接種を行い、続いて、（患者が実験に留まる限り）合計２４ヶ月の間、１２週間ごとにさらなる免疫化を行なう。
【０１６２】
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７．３  用量の投与および修飾
７．３．１  用量の上昇または用量の修飾は行なわない。全身毒性は以前のワクチン実験で観察されなかった。ワクチン接種に関連すると考えられる全身毒性＞グレードＩＩ（感染なしの発熱の例外）の結果、患者を実験から除き、プロトコル未解決調査を中断する。
【０１６３】
７．３．２  製剤は肩、尻または腿の部位に皮下投与した。これは１つのシリンジで投与され、約１ｃｃの合計用量で供給される。
【０１６４】
８．０  実験の間の評価
８．１  免疫機能（表８．３にまとめる）
８．１．１  抗体反応：その時点で５０ないし６０ｍｌを抗体テストのために収集する０、７および９週を例外として、表８．３のスケジュールに従って、末梢血液（２０ないし３０ｍｌ）を採取する。しかる後、患者がブースター免疫化のために戻った際に、血液を１２週間隔で採取する。種々の抗原に対する抗体をＥＬＩＳＡにより、且つ適切にはＰＡＣＳによってヒト腫瘍細胞系に対して実験する。
【０１６５】
８．２  臨床的および実験室的評価
８．２．１  臨床的および実験室的評価のスケジュール：臨床的および実験室的評価スケジュールはセクション８．３に概説され、ワクチンの安全性を評価するためのパラメーター、ならびに病気再発および進行の兆候についての計画を含む。異常の発見は標準医療プラクティスにより評価し、異常は処置、病気の進行、またはいずれも無しに関して分類される。
【０１６６】
８．２．３  病気の程度の評価：全ての患者は、プロトコルエントリーにおける病気の臨床的またはＸ線撮影的証拠なしの定義による。
【０１６７】
８．２．４  Ｘ線撮影画像化（ＣＴ腹部および骨盤）は、６ヶ月入手し、その間、実験では、またはもしいずれかの臨床症状/検査の知見がさらなる評価を警告すれば、またはもし血清ＣＡ−１２５が（治療失敗基準に対する時間当たり）・７０まで上昇すれば、反復値によって確認し；または調査者の裁量でいずれかの時点に得る。
【０１６８】
８．２．５  追跡の長さ：このパイロット試験における実験の主要エンドポイントは安全性である。患者は実験の期間追跡されるが、以前の試験に基づき、抗体は一般に第７週まで存在し、我々は、もし第９週の評価でいずれかの患者で全身毒性が観察されなければ、さらなる実験のための提案を進行させて、効果を評価する。患者が多価実験に募集し、パイロット試験の追跡に十分な時間を許容する前に、手続きにさらに８ないし１２週間必要であろう。治療の失敗の時点まで、または全てのワクチン接種が終了するまで（最大２４ヶ月）、患者を追跡する。
【０１６９】
８．３  評価のまとめ
【０１７０】
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ａ＝３週間以内の予備処置評価
ｂ＝便グアヤクはデジタル検査によって、患者によって収集されるカードによって得る事が出来る。
ｃ＝２７週後、訪問＋実験室実験＋３ヶ月における免疫化、実験中の６ヶ月におけるＣＴスキャン
ｄ＝免疫血液は、定期的には、３つの赤色頂部試験管に収集された２０ないし３０ｍｌよりなる。複数抗体につき評価するのに充分な血清を得るために、プレワクチン接種訪問における３つの代わりに６つの試験管を収集する；第７週および第９週のみである。
９．０  毒性情報
９．１  毒性は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  （ＮＣＩ）によって開発された普通毒性基準に従ってグレード分けされる。用量の修飾はセクション７．３．１に記載される。
９．２  有害な薬物反応（ＡＤＲ）は、主任または共同主任研究者へ、または添付書類に記載された普通毒性標準を用いるＮＣＩ  ＡＤＲ報告書式でＩＲＢに報告しなければならない。生命を脅かす致死的な(グレード４または５)および未知の反応は、２４時間以内に、Ｐａｕｌ  Ｓａｂｂａｔｉｎｉ、Ｍ．Ｄ．（２１２）６３９−６４２３、またはＣａｒｏｌ  Ｂｒｏｗｎ、Ｍ．Ｄ．（２１２）６３９−７６５９に報告しなければならない。１０仕事日内に書面による報告を提出すべきである。ＡＤＲ報告書式のコピーは臨床試験局、医療部門、Ｂｏｘ番号３４７に提出しなければならない。
【０１７１】
１０．０  実験からの除外についての基準
１０．１  もし患者がセクション１１．０に定義した治療失敗を有すれば、その患者は実験から除外される。
【０１７２】
１０．２  許容されない副作用、またはいずれの他のセクションにも記載されていない生命を脅かす効果により、治療はいずれの時点においても中断することができる。治療を終了するための理由は明瞭に記録すべきである。
【０１７３】
１１．０  生物統計学的考慮
終点：
このパイロット試験の主要なエンドポイントは多価設定における安全性および免疫原性の確認である。センターでは、一価ワクチンの投与で全身毒性は起こらなかった。毒性はこの製剤では予測されない。このパイロットに続き、エンドポイントとしての効果に関するさらなる実験が提案される。このパイロット試験は、いずれかの患者においてワクチンに関連すると考えられるいずれの全身毒性についても、未解決調査を中止される。免疫原性についての同一基準が、個々のパイロット試験のそれとして用いられる：患者はＩｇＭ力価≧１：８０、またはもしベースラインに存在すれば、支配的抗体力価の４倍増加を有しなければならない。９人の患者が生じ、９人の患者の内≧５は、さらなる実験でこの構築を進めるために、３以上の抗原についてのこれらの基準を満たさなければならない。以前の実験では、抗体は、一般に、第４のワクチン接種の完了（第７週）まで存在する。これらの患者における第９週の評価までに全身毒性が観察されなければ、我々は、効果エンドポイントを持つ第ＩＩ相実験のための提案を進める。
【０１７４】
このパイロットのエンドポイントではないが、後記定義の再発のため、患者は実験から除外される。処置失敗までの時間は、Ｒｕｓｔｉｎらからのデータに基づいて単純に定義される42。処置失敗は１）病気再発の身体検査証拠、病気再発のＸ線撮影の証拠（主任調査者の裁量で生検が行なわれるが、要求されるものではない）；または３）第２の試料によってやはり≧７０Ｕ/ｍｌであることが確認された、正常の上限の２倍までのＣＡ−１２５上昇（すなわち≧７０）によって特徴付けることができる。生化学的再発についての処置失敗までの時間は、最初の試料の≧７０Ｕ/ｍｌの日付として記録される。
【０１７５】
このパイロット試験の副次的エンドポイントは、免疫反応の性質および期間を特徴付けることである。末梢血液（２０ないし３０ｍｌ）を表に示したように採取する。個々の抗原に対する抗体はＥＬＩＳＡによって、および各抗原を発現するヒト腫瘍細胞系を用いて適当なヒト腫瘍抗原ＦＡＣＳに対して実験する。
【０１７６】
１２．０  ヒト対象の募集および保護
全ての実験参加者は、実験に登録される前に書面によるインフォームド・コンセントを提出しなければならない。適格性基準を満たすいずれの患者にも、実験に参加する機会が与えられる。適格性のある患者の間には、調査者によって選択性は調べられない。参加者には、参加に対してインセンティブまたは支払いは与えられない
参加に同意する適格性のある患者は、指名された研究実験アシスタントによって臨床試験局に登録される。
【０１７７】
インフォームド・コンセントプロセス：患者またはこの法的保護者は、療法の性質、治療プロトコルについての原理、利用可能な代替法処置、およびいずれかの知られた以前に観察された有害な事象、実験の調査すべき性質、および処置の潜在的リスクおよび利点を含めた提案された処置の包括的な説明を受ける。
【０１７８】
用いるインフォームド・コンセントは連邦規則の条項、およびこのセンターのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ委員会の要件を満たす。書式は添付する。インフォームド・コンセントは、星印によって示されたこのプロトコルのカバーシート上の医師の１人によって入手され得る。インフォームド・コンセントは、参加者および登録医師によって３部に署名される。１部の署名オリジナルは患者に渡され、１部は患者の医療記録の一部となり、残りのコピーは臨床試験局におけるファイルで保持される。
【０１７９】
プライバシーおよび秘密保持：この実験に関係する医療、病院および研究記録は秘密と考えられる。治療チームのメンバーおよび指名された研究実験アシスタントは、治療を投与し、プロトコルを満足するのに必要に応じて、記録に接近することができる。氏名または個人についての他の確認情報は本実験に関連する報告または公表で用いられない。患者の記録は、規制要件を満たすために監査局によって検査され得る。
【０１８０】
文献
１．ＭｃＧｕｉｒｅ  ＷＰ，  Ｈｏｓｋｉｎｓ  ＷＪ，  Ｂｒａｄｙ  ＭＦ，  ｅｔ  ａｌ：Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ａｎｄ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ａｎｄ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ｓｔａｇｅ  ＩＶ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３４：１−６，  １９９６
２．Ｂａｒｎｈｉｌｌ  Ｄｒ，  Ｈｏｓｋｉｎｓ  ＷＪ，  Ｈｅｌｌｅｒ  ＰＢ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  ｌｏｏｋ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｒｅａｓｓｅｓｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １９：１４８−，  １９８４
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５．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｌｌｏｙｄ  ＫＯ：  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｔｈａｔ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  ｐａｒｔ  Ｉ．  Ｒａｔｉｏｎａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ４５：１−９，  １９９７
６．Ｊｏｎｅｓ  ＰＣ，  Ｓｚｅ  ＬＬ，  Ｌｉｕ  ＰＹ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｏｒ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ＩｇＭ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｏｎｃｏｆｅｔａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅ  ６６：２４９−５４，  １９８１
７．Ｚｈａｎｇ  Ｈ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｃｈｅｕｎｇ  ＮＫ，  Ｅｔ  ａｌ：  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｃａｎ  ｅｒａｄｉｃａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２８４４−９９，  １９８８
８．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ，  Ｗｏｎｇ  ＧＹＣ，  Ａｌｄｕｒｉ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ＡＪＣＣ  ｓｔａｇｅ  ＩＩＩ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＧＭ２  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＧＭ２  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １２：１０３６−４４，  １９９４
９．Ｒｅｉｔｈｍｕｌｌｅｒ  Ｇ，  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ−Ｇａｄｉｃｋｅ  Ｅ，  Ｓｃｈｌｉｍｏｋ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｒｅｓｅｃｔｅｄ  Ｄｕｋｅｓ  Ｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｌａｎｃｅｔ  ３４３：１１７７−１１８３，  １９９４
１０．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ：  Ｔｈｅ  ｃａｓｅｓ  ｆｏｒ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｔｈａｔ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｉｎ  Ｋｉｒｋｗｏｏｄ  ＪＭ  （ｅｄ）：  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｅｌａｎｏｍａ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  １９９７
１１．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，Ｈｅｌｌｉｎｇ  Ｆ，Ｌｌｏｙｄ  ＫＯ，  ｅｔ  ａｌ：Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｍｉｘｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４０：８８−９４，  １９９５
１２．Ｆｅｉｚｉ  Ｔ：  Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ  ａｒｅ  ｏｎｃｏ−ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：５３−５７，  １９８５
１３．Ｆｕｎｇ  ＰＹＳ，  Ｍａｄｅｊ  Ｍ，  Ｋｏｇａｎｔｙ  ＲＲ，  ｅｔ  ａｌ：Ａｃｔｉｖｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍａｍｍａｒｙ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：４３０８−４３１４，  １９９０
１４．Ｓｉｎｇｈａｌ  Ａ，  Ｆｏｈｎ  Ｍ，  Ｈａｋｏｍｏｒｉ  ＳＩ：  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｏ−ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ（Ｔｎ）  ａｎｔｉｇｅｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  mｉｃｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  ５１：１４０６−１４１１，  １９９１
１５．Ｚｈａｏ  ＸＪ，  Ｃｈｅｕｎｇ  ＮＫ：  ＧＤ２  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８２：６７−７４，  １９９５
１６．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ：  Ａｕｇｍｅｎｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ，  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６：３５７−３６６，  １９９５
１７．Ｇｈｏｓｓｅｉｎ  Ｒ，  Ｓｃｈｅｒ  Ｈ，  Ｇｅｒａｌｄ  Ｗ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １３：１１９５−１２００，  １９９５
１８．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ，  Ｎａｔｏｌｉ  Ｊ．  Ｊｏｎｅｓ  Ｃａｌｖｅｓ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ＧＭ２  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ｅｌｉｃｉｔ  ＧＭ２  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８４：２９１１−２９１５，  １９８７
１９．ＭａｃＬｅａｎ  ＧＤ，  Ｂｏｗｅｎ−Ｙａｃｈｙｎ  ＭＢ，  Ｓａｍｕｅｌ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ：  Ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  （Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ）  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  １１：２９２−３０５，  １９９２
２０．Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  Ｈｅｌｌｉｎｇ  Ｆ，  Ｃａｌｖｅｓ  ＭＪ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ＴＦ  ａｎｄ  ｓＴｎ−ＫＬＨ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４１：１８５−１９２，  １９９５
２１．Ｎａｋａｄａ  Ｈ，  Ｉｎｏｕｅ  Ｍ，  Ｎｕｍａｔａ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ：Ｅｐｉｔｏｐｉｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｔｎ  ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ  Ａ  ｆｏｒ  ａｎ  ａｎｔｉ−Ｔｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  （ＭＬＳ  １２８）．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：２４９５−２４９９，  １９９３
２２．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｗａｌｂｅｒｇ  ＬＡ，  Ｏｇａｔａ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：Ｉｍｍｕｎｅ  ｓｅｒａ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｆｉｎｅ  ｔｗｏ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｉａｌｙｌ  Ｔｎ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３３６４−３３６８，  １９９５
２３．Ｂｉｌｏｄｅａｕ  ＭＴ，  Ｐａｒｋ  ＴＫ，  Ｈｕ  ＳT，Ｊ．Ｔ．／，ｅｔ  ａｌ：  Ｔｏｔａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １１７：７８４０−７８４１，  １９９５
２４．Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  Ｓｌｏｖｉｎ  Ｓ，  Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：  Ａ  ｆｕｌｌｙ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｇｌｏｂｏ−Ｈ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ｆｏｃｕｓｅｄ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：  ａ  ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  ｐｒｉｃｉｐｌｅ．  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  ３８：５６３−５６６，１９９９
２５．Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ  Ｖ，  Ｋｉｍ  ＨＭ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｏｆ  Ｌｅｗｉｓ−Ｙ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ：  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４５：２８１，  １９９８
２６．Ｓｌｏｖｉｎ  ＳＦ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ：  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｆｕｌｌｙ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｇｌｏｂｏ−Ｈ  ｈｅｘａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｉｎ  ｍａｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６：５７１０−５７１５，  １９９９
２７．Ｓａｂｂａｔｉｎｉ  Ｐ，  Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ  Ｖ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｌｅｗｉｓ−Ｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅ：  ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒｉａｌ．  Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８７（１）：７９−８５，  ２０００．
２８．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｗａｌｂｅｒｇ  ＬＡ，  Ｈｅｌｌｉｎｇ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ：  Ａｕｇｍｅｎｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ＭＵＣ−１  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３３６４−３３６８，  １９９６
２９．Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ，  Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｍｕｃｉｎ−１  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｐｌｕｓ  ＱＳ−２１．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  ６（５）：１６９３−７０１，２０００．
３０．Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  Ｇｉｌｅｗｓｋｉ  Ｔ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｅｒａ  ｆｒｏｍ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｕｃ−１−ＫＬＨ  ｐｌｕｓ  ＱＳ−２１．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ７９：１８０６−１８１２，  １９９９
３１．Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  Ｐａｒｋ  ＴＫ，Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ：Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｈｅｘａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｇｌｏｂｏ  Ｈ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎ  Ｅｎｇｌ：  １２５−１２８，  １９９７
３２．ＬＩｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ：  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ａｕｇｍｅｎｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ：  ｆｒｏｍ  ｗｈｏｌｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ−ＫＬＨ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １４５：１４７−１６６，  １９９５
３３．Ｃｈａｐｍａｎ  ＰＢ，  Ｍｏｒｉｓｓｅｙ  ＤＭ，  Ｐａｎｇｅａｓ  ＫＳ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＧＭ２  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ｂｙ  ｉｍｍ＋ｎｉｚｉｎｇ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ＧＭＳ−ＫＬＨ+ＱＳ２１  ｖａｃｃｉｎｅ：  ａ  ｄｏｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｔｕｄｙ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  ｉｎ  ｐｒｅｓｓ，  １９９９
３４．Ｈｅｌｌｉｎｇ  Ｆ，  Ｓｈａｎｇ  Ｙ，  Ｇａｌｖｅｓ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ＧＤ３  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ：  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎs  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＤ３−ＫＬＨ  ｆｏｒ  ｆｕｒｔｈｅｒ  ｔｅｓｔｉｎｇ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：  １９７−２０３，  １９９４
３５．Ｋｅｎｓｉｌ  ＣＲ，  Ｐａｔｅｌ  Ｕ，  Ｌｅｎｎｉｃｋ  Ｍ：  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓａｐｏｎｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｒｏｍ  Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎｉｎ  Ｍｏｌｉｎａ  ｃｏｒｔｅｘ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４６：４３１−４３６，  １９９１
３６．Ｋｉｍ  ＳＫ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  Ｍｕｓｓｅｌｉ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＭＵＣ１−ＫＬＨ  ａｎｄ  ＧＤ３−ＫＬＨ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  １８：５９７−６０３，  ２０００
３７．Ｍａｒｃｉａｎｉ  ＤＪ，  Ｋｅｎｓｉｌ  ＣＲ，  Ｂｅｌｔｚ  ＧＡ：  Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ＦｅＬＶ：  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｃａｔｓ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ９：８９−９６，  １９９１
３８．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  ＰＯ，  Ａｄｌｕｒｉ  Ｓ，  Ｈｅｌｌｉｎｇ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ＱＳ−２１  ｗｉｔｈ  ａ  ＧＭ２  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ−ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：１２７５−１２８０，  １９９４
３９．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｚｈａｎｇ  Ｈ，  Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ  Ｃ，  Ｒｅｕｔｅｒ  Ｖ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｔｔａｃｋ  ｕｓｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  ＩＩ．  Ｂｌｏｏｄ  Ｇｒｏｕｐ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７３：  ５０−５６，  １９９７．
４０．Ｚｈｅｎｇ  Ｓ，  Ｃｏｒｄｏ−Ｃａｒｄｏｎ  Ｃ，  Ｚｈａｎｇ  Ｈ，  Ｒｅｕｔｅｒ  Ｖ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｔｔａｃｋ  ｕｓｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；  Ｉ．  Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７３：  ４２−４９，  １９９７．
４１．Ｚｈｅｎｇ  Ｓ，  Ｚｈａｎｇ  ＨＨＨＳ，  Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ  Ｃ，  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｔｔａｃｋ  ｕｓｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４：  ２６６９−２６７６，  １９９８．
４２．Ｒｕｓｔｉｎ  ＧＪ，  Ｎｅｌｓｔｒｏｐ  ＡＥ，  Ｂｅｎｔｚｅｎ  ＳＭ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  １０：２１−７，  １９９９
【０１８１】
実施例２−マウスにおける七価ワクチン免疫原性試験
方法
血清学的分析
１．ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベント検定法）；
ＥＬＩＳＡ検定法は後記するごとく行った。エタノールまたは０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１１）中の抗原を、糖脂質では０．２μｇ/ウエルにて、およびペプチドでは０．１μｇ/ウエルにて、ＥＬＩＳＡプレート上にコートした。系列希釈された抗血清を各ウエルに添加し、アルカリ性ホスファターゼ−コンジュゲーテッドヤギ抗−マウスＩｇＭまたは抗−マウスＩｇＧを１：２００の希釈にて添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，  ＡＬ）。ＫｉｅｒｋｅｇａａｒｄおよびＰｅｒｒｙ  Ｌａｂｓ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）から得たアルカリ性ホスファターゼとコンジュゲートしたヤギ抗―マウスＩｇＧおよびＩｇＭを第２の抗体として用いた。ＥＬＩＳＡ力価は、正常対照マウス血清のそれの０．１以上の吸光度を生じる最高の希釈と定義される。
【０１８２】
２．ＦＡＣＳによって測定された細胞表面反応性：
免疫血清の細胞表面反応性をヒトＭＣＦ−７およびＬＳＣ細胞系でテストした。２×１０5細胞/試験管の単細胞懸濁液を、３％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）および０．０１ＭのＮａＮ3を含むＰＢＳ中で洗浄し、２０μｌの１：２０希釈血清またはモノクローナル抗体ｍＡｂと共に氷上で３０分間インキュベートした。ＰＢＳ中の３％ＦＣＳでの２回の洗浄の後に、２０μlの、フルオレセイン−イソチオシアネート（ＦＩＴＣ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，  ＡＬ）で標識した１：１５希釈のヤギ抗−マウスＩｇＭまたはＩｇＧを添加し、混合物を３０分間インキュベートした。最後の洗浄の後、ＦＡＣＳｃａｎ、Ｂｅｃｔｏｎ  ＆  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡを用い、陽性集団および染色された細胞の平均蛍光強度を微分した。
【０１８３】
2004534088.tif 000009
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【０１８４】
第三シリーズの実験
癌のための多価コンジュゲートワクチン
腫瘍−特異的抗原が同定され、ワクチンのための標的として追跡されている。発明者らの以前の仕事は、ＫＬＨにコンジュゲートした腫瘍抗原グロボＨ、ルイスｙ、ＧＭ２、グリコシル化ＭＵＣ−１、Ｔｎ（ｃ）、ｓＴｎ（ｃ）またはＴＦ（ｃ）を利用する一価ワクチンが、最小の全身毒性を除き、局所的紅斑および浮腫で安全であることを示した。これらの一価ワクチンでのワクチン接種の結果、ほとんどの患者は、各抗原−ＫＬＨコンジュゲートに対して特異的な高力価ＩｇＭまたはＩｇＧ抗体を生じた。本発明は、多価ワクチンを提供し、ここに、一価ワクチンの成分が組み合わされ、癌のための治療としてアジュバントと共に投与される。
【０１８５】
サポニン免疫学的アジュバントＱＳ−２１またはＧＰＩ−０１００と共に投与される腫瘍抗原の組合せよりなるワクチン。該抗原はグリコシル化ＭＵＣ−１−Ｇ５、グロボＨ、ＧＭ２、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、Ｓｔｎ（ｃ）およびＴＦ（ｃ）である。各場合、抗原をキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲートさせる。
【０１８６】
抗原およびアジュバント用量の好ましい範囲は以下の通りである：
グリコシル化ＭＵＣ−１−Ｇ５：０．１ないし３０ｇ；
グロボＨ：０．１ないし１００ｇ；
ＧＭ２：０．１ないし１００ｇ；
Ｌｅy：０．１ないし６０ｇ；
Ｔｎ（ｃ）：０．１ないし１００ｇ；
ｓＴｎ（ｃ）：０．１ないし１００ｇ；
ＴＦ（ｃ）：０．１ないし３０ｇ；
ＱＳ−２１：２５ないし２００ｇ；
ＧＰＩ−０１００：１ないし２５ｍｇ。
【０１８７】
実施例１−六価ワクチン
ａ）六価ワクチンを利用する臨床試験プロトコル
ｂ）前立腺癌に対する一価および六価−ＫＬＨコンジュゲートワクチンでの免疫化後の免疫応反応の比較
【０１８８】
実施例２−七価ワクチン
ａ）六価ワクチンを利用する臨床試験プロトコル
ｂ）上皮癌に対する七価ＫＬＨ−コンジュゲートワクチンの免疫原性を増加させるためのアプローチを比較する前臨床実験
【０１８９】
実施例１パートｂ）
前立腺癌に対する一価および六価−ＫＬＨコンジュゲートワクチンでの免疫化後の免疫反応の比較
各一価ワクチンで以前に免疫化された患者の免疫反応と、六価ワクチンを受ける５人の最初の患者の免疫反応を以下の５つの表で比較する。ＭＣＦ−７腫瘍細胞系を用いる、免疫化およびＦＡＣＳ検定法後のＩｇＭおよびＩｇＧについての平均ピークＥＬＩＳＡ力価の逆数（陽性細胞の％/平均強度）を示す。ＧＭ２−ＫＬＨについての比較は未解決である。一価および六価ワクチンによって誘導された反応を比較すると、現在までにテストした５つの抗原のいずれかに対する抗体反応において有意な差はなかった。単一ワクチンへの６つの個々のコンジュゲートの組合せは、個々の抗原に対する抗体反応を有意には変化させない。
【０１９０】
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【０１９１】
実施例２  ｂ）
上皮癌に対する七価ＫＬＨ‐コンジュゲートワクチンの免疫原性を増加させるためのアプローチを比較する前臨床実験
Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．，Ｋｏｉｄｅ；Ｆ．，Ｋａｇａｎ，Ｅ．；Ｂｏｒｎｍａｎｎ，  Ｗ．，  Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．，Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｌｉｖｉｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ-ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，  ＮＹ．
以前に、一連の一価ワクチンを用い、我々は、癌細胞‐表面抗原に対して抗体反応を誘導するための最適な方法は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）への抗原の共有結合コンジュゲーションおよびサポニンアジュバントの使用であることを証明した。クリニックにおいて多価（七価）‐ＫＬＨコンジュゲートワクチンをテストするための調製において、我々は、免疫原性を増加させるために、他者によって記載されたいくつかの変数の７つの抗原に対する抗体誘導に対するインパクトをテストした。我々は、ここに、免疫反応の抑制を減少させるためのアプローチ（低用量シクロホスファミドおよび抗‐ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ）、異なるサポニンアジュバント（ＱＳ‐２１およびＧＰＩ‐０１００）、および処方の異なる方法（凍結乾燥およびポリソルベート８０の使用）のインパクトを探索する。２組の実験の後、これらの結果は明らかである：
１）七価‐ＫＬＨコンジュゲートワクチンでの免疫化は、Ｔｎ（メジアンＥＬＩＳＡ力価ＩｇＭ／ＩｇＧ  ３２０／１０，２４０）、ｓＴｎ（６４０／２５６０）、ＴＦ（３２０／５１２０）、ＭＵＣ１（８０／２０，４８０）およびグロボＨ（１２８０／１０）に対する高力価の抗体、ルイス  Ｙ（１６０／８０）に対する低力価の抗体およびＧＭ２に対する場合によるのみの抗体を誘導する。
【０１９２】
２）これらの抗体は、ＥＬＩＳＡによる精製された合成抗原と、およびＦＡＣＳによる癌細胞表面の天然に発現された抗原と反応する。
【０１９３】
３）低用量のシクロホスファミドまたは抗‐ＣＴＬＡ４  ｍＡｂでの抑制の減少、または凍結乾燥、またはポリソルベート８０の使用による標準的処方の変化は、いずれも、抗体力価に対していずれのインパクトも有さなかった。
【０１９４】
４）２つのサポニンアジュバントは我々の標準的な用量（ＱＳ‐２１  １０ｕｇおよびＧＰＩ‐０１００  １００ｕｇ）において比較的優れていたが、より高い用量を比較する第３の実験は進行中である。
【０１９５】
この七価ワクチンに対する高力価の抗体、および抗体力価を更に増大させるためのこれらの更なるアプローチの無能力は、ＫＬＨへのコンジュゲーションおよびサポニンアジュバントの使用の組合せが、クリニックにおけるテストのために充分に最適化されることを確認する。
【０１９６】
導入
天然で獲得された、能動的に誘導された、および受動的に投与された抗体は、循環する腫瘍細胞およびミクロメタスターゼを排除することができることを示す広くかつ膨大に増えつつある前臨床および臨床実験がある（１）。腫瘍抗原に対する抗体の誘導は、ウイルスおよび細菌抗原に対する抗体の誘導よりも困難である。なぜならば、ほとんどの腫瘍抗原は正常なまたはわずかに修飾された自己抗原であるからであり、かつ活発に成長する腫瘍は、抗‐癌細胞免疫反応を抑制する運動メカニズムで設定できるからである。その結果、あるレベルの許容性のみならず、ある更なるレベルの活発な抑制を克服することが必要であり、免疫化アプローチを臨界的なものとする。我々は、以前、ガングリオシドならびに種々の他の炭水化物およびペプチド抗原に対する抗体の誘導についての最適なアプローチは、腫瘍抗原の免疫原性キャリア分子（キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）が最適であった（２，３））への共有結合と、優れた免疫学的アジュバントの使用であることを報告した。我々の以前の経験では、ＱＳ‐２１およびＧＰＩ‐０１００のごときサポニンアジュバントは最適なアジュバントであった（４，５）。
【０１９７】
七価ＫＬＨ‐コンジュゲートワクチンでの臨床試験のための調製において、我々は、ここに、１）ワクチン処方（凍結乾燥またはポリソルベート８０の使用）、２）抑制の減少（低用量のシクロホスファミドまたは抗‐ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ）、または、３）種々の用量の２つのサポニンアジュバントＱＳ‐２１およびＧＰＩ‐０１００を含めたいくつかの変数の、個々の抗原およびこれらの抗原を発現する腫瘍細胞に対する抗体力価のインパクトをテストする。
【０１９８】
材料および方法
６ないし１０週齢の病原体フリーの雌ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｂｖｏｒ，ＭＥ）から入手した。ＱＳ‐２１はＡｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ（現在のＡｎｔｉｇｅｎｉｃｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹＣ，ＮＹ））から入手し、ＧＰＩ‐０１００はＧａｌｅｎｉｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）から入手した。サイトキサン（２５ｍｇ／ｋｇ）は購入し、最初の免疫化に先立つ１日に腹腔内投与した。ネズミモノクローナル抗体ＣＴＬＡ‐４についてのハイブリドーマーはＪｉｍ  Ａｌｌｉｓｏｎ  （Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）から入手し、ｍＡｂはＰｏｌｌｙ  Ｇｒｅｇｏｒ博士（ＭＳＫＣＣ）が調製した。ｍＡｂとＣＴＬＡ‐４との反応性は確認した。ポリソルベート８０は購入した。
【０１９９】
マウスの免疫化：５匹のマウスの群を、ＫＬＨに共有結合によりコンジュゲートした７つの抗原の各々の３ｍｃｇを含み、かつ示したごとくＧＰＩ‐０１００またはＱＳ‐２１と混合した七価ワクチンで、１週間間隔で３回免疫化した。ワクチンは腹下部に皮下投与した。４回目のブースター免疫化は第８週に与えた。
【０２００】
血清学的アッセイ：ＥＬＡＳＡ検定法では、ＢＳＡにコンジュゲートしたグリコシル化ＭＵＣ１、グロボＨ、ルイスＹまたはＧＭ２、またはＴｎ、ｓＴｎまたはＴＦを、ウェル当たり０．１ないし０．２ｍｃｇの抗原用量にてＥＬＩＳＡプレートにコートした。
【０２０１】
ホスファターゼ‐コンジュゲーテッドヤギ抗マウスＩｇＧまたはＩｇＭを１；２００の希釈にて添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）。抗体力価は、０．１０以上の吸光度を生じる最高希釈であった。
【０２０２】
Ｆ  ＡＣＳ分析：特にルイスＹおよびＭＵＣ１およびｓＴｎを除いて全ての７つの抗原を発現するＭＣＦ‐７ヒト乳癌細胞、および特にルイスＹ、ｓＴｎおよびＴｎを発現するＬＳＣを用いた。５×１０7細胞／試験管の単細胞懸濁液を、３％胎児ウシ血清を含むＴＰＳ中で洗浄し、２０ｍｃｌの充分な強度の、または１／２００希釈の抗血清と共に、氷上で３０分間インキュベートした。ＦＩＴＣで標識した２０マイクロリットルの１／１５のヤギ抗‐マウスＩｇＧまたはＩｇＭを全て加え、Ｆ  ＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，ＣＡ）を用い、パーセント陽性細胞および染色された細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を分析した。ワクチン接種前および後血清を一緒に分析し、処理前パーセント陽性細胞を１０％に設定した。
【０２０３】
上皮癌に対する七価ＫＬＨ‐コンジュゲートワクチンの免疫原性を増加させるためのアプローチを比較する前臨床実験
Ｇｏｖｉｎｄａｓｗａｍｉ  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，  Ｆｕｓａｔａｋａ  Ｋｏｉｄｅ，  Ｅｌｌａ  Ｋａｇａｎ，  Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｂｏｍｍａｎｎ，  Ｍａｒｉａ  Ｓｐａｓｓｏｖａ，  Ｓａｍｕｅｌ  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，  Ｐｈｉｌｉｐ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ．
以前、一連の一価ワクチンを用い、我々は、癌細胞表面抗原に対する抗体反応を誘導するための最適な方法は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に対する抗原の共有結合付着およびサポニンアジュバントの使用であることを証明した。クリニックにおける多価（七価）‐‐ＫＬＨコンジュゲートワクチンをテストするための調製において、我々は、免疫原性を増大させるために、他者によって記載されたいくつかの変数の７つの抗原に対する抗体誘導に対するインパクトをテストした。我々は、ここに、免疫反応の抑制を減少させるためのアプローチ（低用量のシクロホスファミドおよび抗‐‐ＣＴＬＡ４ｍＡｂ）、異なるサポニンアジュバント（ＱＳ‐２１およびＧＰＩ‐０１００）、および処方の異なる方法（凍結乾燥およびポリソルベート８０の使用）のインパクトを探索する。２組の実験の後、これらの結果は明瞭である：１）七価‐ＫＬＨコンジュゲートワクチンでの免疫化は、Ｔｎ（メジアンＥＬＩＳＡ力価ＩｇＭ／ＩｇＧ  ３２０／１０，２４０）、ｓＴｎ（６４０／２５６０）、ＴＦ（３２０／５１２０）、ＭＵＣ１（８０／２０，４８０）およびグロボＨ（１２８０／１０）に対する高力価の抗体、ルイスｙ（１６０／８０）に対する低力価の抗体、ＧＭ２に対する場合によるのみの抗体を誘導する。２）これらの抗体は、ＥＬＩＳＡによると、精製された合成抗原と、ＦＡＣＳによると、癌細胞表面の天然に発現された抗原と反応した。３）シクロホスファミド（２５ｍｇ／Ｍ2）または抗‐ＣＴＬＡ４  ｍＡｂでの抑制の減少、または凍結乾燥またはポリソルベート８０の使用による標準処方の変化は、いずれも、抗体力価に対していずれのインパクトも有しなかった。４）２つのサポニンアジュバントは我々の標準用量（ＱＳ‐２１  １０μｇおよびＧＰＩ‐０１００  １００ｕｇ）において比較的優れていたが、より高い用量を比較する第３の実験は進行中である。この七価ワクチンに対する抗体の高力価および抗体力価を更に増加させるためのこれらの更なるアプローチの無能力は、ＫＬＨへのコンジュゲーションおよびサポニンアジュバントの使用の組合せは充分に最適化され、およびこのワクチンはクリニックでテストするのに準備ができていることを確認する。
【０２０４】
前立腺癌に対する一価および七価‐ＫＬＨコンジュゲートワクチンでの免疫化後の免疫反応の比較
Ｇｏｖｉｎｄ  Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，  Ｓｕｓａｎ  Ｆ  Ｓｌｏｖｉｎ，  Ｓｏｎａｌ  Ｂｈｕｔａ，  Ｃｈａｎｄｒａ  Ｈｏｏｄ，  Ｍａｒｉａ  Ｓｐａｓｓｏｖａ，  Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｇ  Ｂｏｒｍａｎｎ，  Ｈｏｗａｒｄ  Ｉ  Ｓｃｈｅｒ，  Ｓａｍｕｅｌ  Ｊ  Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，  Ｐｈｉｌｉｐ  Ｏ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ．
ＧＭ２、グロボＨ、ルイスｙ、Ｔｎ、ＴＦおよびムチン１（ＭＵＣ１）のごとき糖脂質および糖蛋白質分化抗原は、多くの腫瘍の細胞表面で過剰発現される。免疫化に対する多くのアプローチのうち、我々は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）へのこれらのごとき抗原の共有結合コンジュゲーション＋免疫学的アジュバントＱＳ‐２１の使用が、ＩｇＭおよびＩｇＧ抗体を誘導するための最適なアプローチであることをテストした。これらの抗原を含む一価ワクチンでの患者の免疫化は、これらのワクチンの終始一貫した免疫原性および安全性を示した。しかしながら、腫瘍の不均一な性質、および異なる個体における免疫反応の不均一な性質を克服するために、我々は、ＫＬＨに個々にコンジュゲートしたＧＭ２、グロボＨ、Ｌｅy、Ｔｎ（ｃ）、ＴＦ（ｃ）およびグリコシル化ＭＵＣ１を含み、かつ免疫学的アジュバントＱＳ‐２１と混合した六価‐ＫＬＥワクチンで患者の小さな群（ＰＳＡが上昇するが、検出可能な疾患はない前立腺癌）をワクチン接種した。このプレゼンテーションの主な目的は、六価ワクチンを受ける６人の最初の患者の免疫反応と、各一価ワクチンで以前に免疫化された患者の免疫反応とを比較することである。全ての患者を６回（１、２、３、７、１９および３１週）ワクチン接種し、処置前および第７週および第９週に血液を採取し、１度にテストした。免疫化ＩｇＭ／ＩｇＧ後の平均ピークＥＬＩＳＡ力価の逆数。
【０２０５】
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【０２０６】
Ｌｅyに対する低い反応のため、我々は、より免疫原性のＬｅyワクチンを作り出すことを目的として研究を続けている。一価および六価ワクチンによって誘導された反応を比較すると、現在までにテストした５つの抗原のいずれに対する抗体反応においても有意な差はなかった。６つの個々のコンジュゲートの単一ワクチンへの組合せは、個々の抗原に対する抗体反応を有意に変化させない。
【０２０７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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