(57)【要約】治療有効量の神経毒、例えばボツリヌス毒素Ａ型をヒト患者に頭蓋内投与することによって、内分泌障害を治療する方法および配偶子形成を抑制する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって内分泌障害の症状を治療することにより内分泌障害を治療するための薬剤の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項２】
ボツリヌス毒素が、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ型からなる群から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ボツリヌス毒素がボツリヌス毒素Ａ型である請求項１に記載の使用。
【請求項４】
ボツリヌス毒素を、約１０−２単位〜約５００単位の量で投与する請求項１に記載の使用。
【請求項５】
症状治療効果が約１ヶ月〜約５年間にわたって持続する請求項１に記載の使用。
【請求項６】
ボツリヌス毒素が視床下部に投与される請求項１に記載の使用。
【請求項７】
ボツリヌス毒素が視床下部の正中隆起領域に投与される請求項６に記載の使用。
【請求項８】
ボツリヌス毒素が下垂体に投与される請求項１に記載の使用。
【請求項９】
ボツリヌス毒素が下垂体前葉に投与される請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
神経毒が下垂体後葉に投与される請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
頭蓋内投与工程が、制御放出ボツリヌス毒素系を埋込む工程を含んでなる請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
治療有効量のボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって内分泌障害を治療することにより、先端巨大症、巨人症、クッシング病、性機能亢進症および甲状腺機能亢進症からなる群から選択される内分泌障害を治療するための薬剤の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１３】
ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって配偶子形成に必要とされるホルモンの頭蓋内分泌を減少させることにより避妊するための薬剤の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１４】
ボツリヌス毒素がボツリヌス毒素Ａ型である請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって排卵に影響を与えるホルモンの頭蓋内分泌を減少させることにより排卵を抑制するための薬剤の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１６】
ボツリヌス毒素がボツリヌス毒素Ａ型である請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって精子産生に影響を与えるホルモンの頭蓋内分泌を減少させることにより精子産生を抑制するための薬剤の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１８】
ボツリヌス毒素がボツリヌス毒素Ａ型である請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は内分泌障害の治療法に関する。特に、本発明は、神経毒の頭蓋内投与による内分泌障害の治療法に関する。
【０００２】
（背景技術）
下垂体（脳下垂体）は、約６００ｍｇの比較的小さい腺である。下垂体は、前葉（腺性下垂体）および後葉（神経下垂体）に分けることができる。下垂体の両方の葉の機能は、視床下部との血管および／神経連絡によって大きく影響される。下垂体前葉は、６つの主要ホルモンを産生し、２つの他のホルモンを貯蔵する。これらは、成長ホルモン（ＧＨ）：成長を調節し、中間代謝において重要な機能を有する；プロラクチン（ＰＲＬ）：乳汁分泌に必要であり、月経を抑制しうる；黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）：両方とも男性および女性の性腺活性に影響を与える；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）：甲状腺機能を調節する；および、アドレノコルチコトロピン［コルチコトロピン（ＡＣＴＨ）］：副腎皮質のグルココルチコイド機能を調節する；である。バソプレシン（ＡＶＰ；抗利尿ホルモン、ＡＤＨとも称される）およびオキシトシンは、視床下部のニューロンにおいて産生され、下垂体の後葉において貯蔵される。ＡＶＰは、腎臓による水保存を調節し、オキシトシンは、乳汁分泌の際の射乳に必要であり、分娩を補助しうる。
【０００３】
視床下部は約４ｇであり、間脳の腹側と内側の領域であり、第３脳室の腹側半分の壁を形成している。視床下部は、視床下溝（歯状回と海馬傍回の間の浅い溝）によって視床と区別され、内胞と視床腹側部の内側に位置し、前方では前交連中隔と、後方では中脳被蓋および中心灰白質と続いている。視床下部の腹側表面は、視床下部の腹側に沿って前方から後方に向かって、視神経交叉、視床漏斗茎を通って下垂体の後葉へ伸びる対をなさない視床漏斗、対をなす乳頭体によって識別される。視床下部ニューロンは、機能特性に基づいて種々の核に分類される。これらの視床下部核は、視索上室傍核、外側視索前核、外側視床下部核、隆起核、前視床下部核、腹内側核、背内側核、弓状核、視床下部後核、ならびに前乳頭核および乳頭体を包含する。
【０００４】
視床下部は、中脳、辺縁系、小脳との求心性神経線維結合、およびそれらと下垂体後葉との遠心性線維結合を有する。視床下部と下垂体前葉との機能的な結合は、視床下部下垂体の門脈系によって確立されている。視床下部は、自律神経系の機能、および下垂体前葉との血管連絡によって内分泌機構に深く関与している。視床下部は、情緒や動機付けの基礎である神経機構においても役割を有すると考えられる。内分泌性視床下部に関して、視床下部の弓状核が、ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）産生の主要部位であることが知られている。
【０００５】
１つの視床下部性調節因子、ＧｎＲＨは、男性および女性におけるＦＳＨおよびＬＨの両方の下垂体前葉からの合成および分泌を刺激する。ＦＳＨおよびＬＨは、集合的にゴナドトロピンと称される。他の視床下部性調節因子は、ＡＣＴＨ、ＴＳＨおよびＧＨの下垂体分泌を刺激するが、下垂体前葉からのＰＲＬの放出を抑制する。
【０００６】
視床下部と下垂体の血管連絡は、視床下部の神経分泌ニューロンが、調節（放出および抑制）因子を放出し、該因子が、視床下部の正中隆起領域に位置する毛細管叢の門脈循環によって腺性下垂体に到達する際に確立される。これらの神経血管視床下部性調節因子は、小ペプチド神経ホルモンであり、該神経ホルモンは、腺下垂体ホルモンの分泌に影響を及ぼすことによって、脳と腺下垂体との主要機能結合として作用する。視床下部そのものは、ドパミン、ノルエピネフィン（ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｉｎｅ）、セロトニンおよびアセチルコリンを包含する種々の神経伝達物質を使用して視床下部に作用するより高い脳領域によって影響を受ける。
【０００７】
視床下部フラグメントを使用して培養した下垂体前葉組織への、アセチルコリンの添加は、下垂体組織によるＬＨの放出を生じることができ、このＬＨ放出は、アトロピン［ムスカリン性アセチルコリン受容体（シナプス後）拮抗薬］によって遮断できる。プロスチグミン、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬も、この系においてＬＨ放出を刺激することができる。Ｆｉｏｒｉｎｄｏ Ｒ．Ｐ．ら、”Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ”，Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １８：３２２−３３２，１９７５。
【０００８】
さらに、予期されように、ＦＳＨレベルは、培養下垂体前葉組織への視床下部フラグメントの添加の際に増加するが、下垂体ＦＳＨ放出のさらなる増加がアセチルコリンによって生じる。この増加したＦＳＨ放出は、アトロピンによって拮抗される。Ｓｉｍｏｎｏｖｉｃ Ｉら、”Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｆｏｌｌｉｃｌｅ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ”，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ９５：１３７１，１９７４。
【０００９】
さらに、コリン作動薬は、視床下部からのゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の放出を刺激することができる。次に、ＧｎＲＨは下垂体前葉に作用して、ＬＨおよびＦＳＨの放出を促進する。Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ＳＢら、”Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ，ａｎｄ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｆｒｏｍ Ｒａｔ Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ”，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ａｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ． ７９（８）：２６８６−９，１９８２。非処置（ｉｎｔａｃｔ）ラットにおいて、側脳室へのアセチルコリンの注射は、ＬＨ放出を刺激する。これは、アトロピンによって遮断するか、またはプロスチグミンによって増加させることができる。
【００１０】
特に、雌のラットにおける半去勢（一方の卵巣の除去）は、残っている子宮のゴナドトロピン媒介肥大を一般に生じ、この作用は、前視床下部へのアトロピンインプラントによって妨げられる。Ｍｏｎｔｉ Ｊ．Ｍ．ら、”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｖａｒｉａｎ Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙ Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ ｂｙ Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ａｔｒｏｐｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ”，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ２６：１２６３−１２６４，１９７０。同様のインプラントは、雄のラットにおけるＬＨおよびＦＳＨの精巣摘除後増加も妨げる。Ｌｉｂｅｒｔｕｎ Ｃ．ら、”Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｏｓｔｏｒｃｈｉｄｅｃｔｏｍｙ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ ｂｙ Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ａｔｒｏｐｉｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ”，Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ １５２：１４３−１４６，１９７６。これらのデータは、視床下部におけるＧｎＲＨ放出を媒介するムスカリンコリン作用機構の存在と一致し、従って、視床下部活性における刺激性コリン作用の影響を明らかに示している。
【００１１】
他の研究は、視床下部へのアセチルコリンエステラーゼ阻害またはアセチルコリン投与の最終的作用は、ゴナドトロピン分泌を刺激することであることを示している。例えば、以下の文献を参照：Ｂｌａｋｅ Ｃ．Ａ．，”Ｐａｒａｌｌｅｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ａｎｄ Ｆｏｌｌｉｃｌｅ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ Ｎｉｃｏｔｉｎｅ−Ｔｒｅａｔｅｄ Ｒａｔｓ”，Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ １４５：７１６−７２０，１９７４；Ｋａｎｅｍａｔｓｕ Ｓ．ら、”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ−Ａｄｖａｎｃｅｄ ＬＨ Ｓｕｒｇｅ ａｔ Ｐｒｏｅｓｔｒｕｓ”，Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ １４３：１１８３−５，１９７３；Ｂｌａｋｅ Ｃ．Ａ．ら、”Ｎｉｃｏｔｉｎｅ Ｄｅｌａｙｓ ｔｈｅ Ｏｖｕｌａｔｏｒｙ Ｓｕｒｇｅ ｏｆ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｒａｔ”，Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ １４１：１０１４−１０１６，１９７２；Ｂｌａｋｅ Ｃ．Ａ．ら、”Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ Ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｏｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎ Ｒａｔｓ”，Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １６：２２−３５，１９７４；および、Ｂｌａｋｅ Ｃ．Ａ．ら、”Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ Ｄｅａｆｆｅｒｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｖａｒｉａｎ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ ｏｎ Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ＬＨ−ＲＨ ｉｎ Ｆｅｍａｌｅ Ｒａｔｓ”，ＧｕａｌおよびＲｏｓｅｍｂｅｒｇ編の”Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ Ｈｙｐｏｐｈｙｓｉｏｔｒｏｐｉｃ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ”中，Ｅｘｃｅｒｐｔａ Ｍｅｄｉｃａ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９７３，ｐ．３３−３８。
【００１２】
少しの例外（男性におけるテストステロン、男性および女性におけるプロゲステロン）を除いて、ホルモン過剰はほぼ例外なく病理作用を生じる。例えば、過剰の分泌が骨端閉鎖前に開始した場合、成長ホルホンまたはＧＨＲＨの過剰分泌は成人における先端肥大症、または青年における巨人症を生じる。プロラクチンに関して、高プロラクチンレベルは、正常な月経周期の停止を生じるので、病理学的過プロラクチン血症は、女性の不妊症の一般的な原因である。ゴナンドトロピンの主要な生理作用は、配偶子形成および／または性腺ステロイド産生の促進である。男性において、ＬＨはテストステロンの産生を刺激する。テストステロンは、精子産生、性欲の維持、および二次性徴に必要である。ＦＳＨは、正常な精子産生に必要である。女性において、ＦＳＨの総合的作用は、発育卵胞の成長を促進することであり、ＬＨの総合的作用は排卵を誘発することである。
【００１３】
内分泌性視床下部および下垂体障害の現在の治療は、顕著な短所および欠点を有する。下垂体過形成に原発する内分泌障害の治療は、内科（薬物）療法を包含する。例えば、プロラクチン分泌下垂体腺腫（プロラクチノーマ）は、全身投与ブロモクリプチンまたは他のドパミン作用薬を使用して治療されている。残念なことに、薬物を中止した際に腫瘍活性が一般に戻る。内科療法が成功しなかった場合、経蝶形骨手術による外科的切除が標準的処置である。下垂体は、経蝶形骨的（蝶形骨洞から下垂体窩への）、経篩骨的（内側眼窩壁の切開による）、経眼的および前頭的（開頭）経路によって、外科的に到達できる。例えば、Ｌｉｎｄｓａｙ Ｋ．Ｗ．ら、”Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ”，ｐ．３０３および３３２，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ、第３版（１９９７）を参照。外科的介入は、手術そのものによって誘発される機能障害、例えば、下垂体機能低下（尿崩症を包含する）および視機能障害ならびに死亡を誘発するリスクを有する。
【００１４】
定位放射線手術を包含する放射線手術は、下垂体新生物を包含する種々の過形成および肥大性下垂体障害の治療に使用されている。例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．ら、”Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｒａｄｉｏｓｕｒｇｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｕｓｈｉｎｇｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｐｒｏｌａｃｔｉｎｏｍａ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｄｉｏｓｕｒｇｅｒｙ Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．１，ｐ．２３−２９，１９９９を参照。放射線療法は、下垂体機能低下ならびに脳および光学装置（ｏｐｔｉｃ ａｐｐａｒａｔｕｓ）の放射線損傷のリスクを有する。
【００１５】
ヒト視床下部は、事実上、定位手術の出現までは外科的に到達できなかった対象であり、最初に報告されたヒト視床下部の定位手術は、ＳｐｅｉｇｅｌおよびＷｙｅｉｓにより１９４９年に行われた。定位神経手術は、過敏性運動過剰症、難治性疼痛、嗜癖（アルコールおよび薬物）および性的運動過剰症を包含する種々の適応症の治療において、視床下部の機能異常の効果的軽減のために、慢性的電気刺激または永久的切除損傷による治療的視床下部外科において実施されている。例えば、Ｓｈａｍａ，Ｒ．Ｒ．ら、”Ｍｉｎｉｍａｌｌｙ Ｉｎｖａｓｉｖｅ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ｕｓｉｎｇ ＣＲＷ−３ Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｙ”，Ａｎｎ Ｓａｕｄｉ Ｍｅｄ １９９４；１４（６）：５０７−５１０を参照。視床下部定位標的座標は、相互交連線（ｉｎｔｅｒｃｏｍｍｉｓｕｒａｌ ｌｉｎｅ）の中点の前方１ｍｍ〜中点の後方２ｍｍ、相互交連線の下方２〜４ｍｍ、および第３脳室の外側癖の側方２ｍｍを含む。特に、定位治療的損傷視床下部切除は、定位的に挿入した針でワックスを注射することによって行われている。Ｈｕｎｔｅｒ，Ｓ．，”Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｏｔｏｍｙ”、第１５３章、ｐ．１５０７−１５１７、”Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ”，Ｇｉｌｄｅｎｂｅｒｇ Ｐ．Ｌ．ら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９８）。薬剤の慢性的頭蓋内輸送に好適な装置は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７８８０（ＷＯ００／０７６５２）に開示されている。
【００１６】
定位法は、最初、所定の脳内標的部位におけるカニューレまたは電極の正確な配置を可能にする損傷形成のために開発された。種々の定位フレーム（ｆｒａｍｅ）が開発された（例えば、Ｌｅｋｓｅｌｌ，Ｔｏｄｄ−Ｗｅｌｌｓ，Ｇｕｉｏｔ）。放射線学的目標（一般に脳室造影法またはＣＴ／ＭＲＩの使用）と組み合わせたこれらの定位フレームは、約１ｍｍ以内の解剖学的限局化を可能にする。幾分かの機能的変動が各解剖学的部位において発生するので、限局化は、記録されたニューロン活性および電気的刺激の効果に基づくこともできる。定位手術は、所望の頭蓋内位置における、プローブ、電極、カテーテルまたは中空針のミリメートル単位の正確な配置を可能にする。放射性シード（例えばイットリウム９０）を定位的に埋め込んで、頭蓋咽頭腫のような深部脳腫瘍の壊死を生じさせることも既知であり、視床下部星状細胞腫を包含する種々の頭蓋内腫瘍の定位生検を行うことも既知である。さらに、視床切開術および／または視床腹部切開術またはカンポトミー（ｃａｍｐｏｔｏｍｙ）は、定位手術によってジストニーのような運動障害を治療する既知の神経外科法である。Ｔａｓｋｅｒ Ｒ．，”Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｙｓｔｏｎｉａｓ”、第１０５章、ｐ．１０１５−１０３２、Ｇｉｌｄｅｎｂｅｒｇ Ｐ．Ｌ．らの”Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ”中，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ （１９９８）。コンピュータ連動断層撮影および磁気共鳴画像法を包含する、プローブ配置の正確な誘導を可能にする種々の方法が存在する。特に、視床下部切除は、不可逆性の破壊的脳損傷を生じる。
【００１７】
深部脳電極刺激のような治療法は、ワイヤ腐蝕、導線摩擦、埋没性パルス発生器の感染、埋没性パルス発生器の機能不全、電気ショックおよび導線感染による問題を生じうる。電極刺激による他の合併症は、構語障害、平行異常、不全麻痺および歩行障害を包含する。例えば、Ｋｏｌｌｅｒ，Ｗ．Ｃ．ら、”Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ １６７；１−１０：１９９９、および、Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ Ｐ．Ｒ．ら、”Ａ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｔｈａｌａｍｉｃ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈａｌａｍｏｔｏｍｙ ｆｏｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｅ Ｔｒｅｍｏｒ”，ＮＥＪＭ ３４２（７）；４６１−４６８：２０００を参照。
【００１８】
外科的切除または刺激の他に、外部放射線治療（ガンマナイフ放射線手術）も、頭蓋内起源の多くの薬剤耐性疾患の治療に使用されている。この方法の欠点は、放射線手術から最大８ヶ月まで正の治療効果が生じず、長期間の利益ならびに放射部位作用が現在のところ不明である。
【００１９】
ボツリヌス毒素
細菌であるクロストリジウム属は、１２７を越える種を包含し、形態および機能によって分類される。嫌気性、グラム陽性細菌のボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）は、強力なポリペプチド神経毒、ボツリヌス毒素を産生し、該毒素は、ヒトおよび動物において、ボツリヌス中毒と称される神経麻痺性疾患の原因となる。ボツリヌス菌の胞子は、土壌中に見い出され、原産地の缶詰工場で適切に滅菌されずに密閉された食品容器において増殖して、多くのボツリヌス中毒の原因となる。通常、ボツリヌス中毒の作用は、ボツリヌス菌培養物または胞子に感染した食品を食べてから１８〜３６時間後に現れる。ボツリヌス毒素は、弱毒化せずに腸管を通過し、末梢運動神経を攻撃しうると考えられる。ボツリヌス毒素中毒の症状は、歩行困難、嚥下困難および会話困難から、呼吸筋の麻痺および死へ進みうる。
【００２０】
ボツリヌス毒素Ａ型は、最も致死性の高い既知の天然生物剤である。約５０ｐｇ（ピコグラム）の市販のボツリヌス毒素Ａ型（精製神経毒複合体）［Ａｌｌｅｒｇａｎ Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａからＢＯＴＯＸ（登録商標）の商品名で、１００単位バイアルで入手可能］が、マウスにおけるＬＤ５０である（即ち１単位）。１単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）は、約５０ピコグラム（約５６ａｔｔｏｍｏｌｅｓ）のボツリヌス毒素Ａ型複合体を含有する。興味深いことに、モルに基づいて、ボツリヌス毒素Ａ型は、ジフテリアより約１８億倍高い致死性であり、シアン化ナトリウムより約６億倍高い致死性であり、コブラ毒より約３０００万倍高い致死性であり、コレラより約１２００万倍高い致死性である。Ｓｉｎｇｈ，”Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｏｘｉｎｓ”，Ｂ．Ｒ．Ｓｉｎｇｈら編の”Ｎａｔｕｒａｌ Ｔｏｘｉｎｓ ＩＩ”の第６３−８４頁（第４章）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７６）［該文献におけるボツリヌス毒素Ａ型０．３ｎｇのＬＤ５０が１Ｕであるという記載は、ＢＯＴＯＸ（登録商標）約０．０５ｎｇが１単位であると校正される］。ボツリヌス毒素の１単位（Ｕ）は、それぞれ体重１８〜２０ｇの雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに腹腔内注射したときのＬＤ５０として定義される。
【００２１】
一般的に免疫学的に異なる７種類のボツリヌス神経毒が特性付けされている。これらは、ボツリヌス神経毒血清型Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧであり、そのそれぞれは型特異的抗体による中和によって識別される。ボツリヌス毒素の種々の血清型は、それらが作用する動物種において、およびそれらが誘発する麻痺の重度および期間において異なる。例えば、ボツリヌス毒素Ａ型は、ラットにおいて生じる麻痺の等級によって評価した場合に、ボツリヌス毒素Ｂ型より５００倍強力である。さらに、ボツリヌス毒素Ｂ型は、ボツリヌス毒素Ａ型の霊長類ＬＤ５０の約１２倍の４８０Ｕ／ｋｇの投与量において、霊長類に非毒性であることが測定されている。Ｍｏｙｅｒ Ｅら、”Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ｔｙｐｅ Ｂ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ”、Ｊａｎｋｏｖｉｃ，Ｊ．ら編（１９９４）の”Ｔｈｅｒａｐｙ Ｗｉｔｈ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ”の第７１−８５頁、第６章，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．。ボツリヌス毒素は、高親和力でコリン作動性運動ニューロンと結合すると考えられ、ニューロンに転位し、アセチルコリンの放出をブロックする。
【００２２】
血清型に関係なく、毒素中毒の分子メカニズムは類似し、少なくとも３つの工程または段階を含むと考えられる。過程の第１工程において、毒素は、ボツリヌス毒素の重鎖（またはＨ鎖）と神経細胞表面受容体との特異的相互作用によって、運動ニューロンのシナプス前膜に結合する。受容体は、ボツリヌス毒素の各型および破傷風毒素で異なると考えられる。Ｈ鎖のカルボキシル末端セグメント（ＨＣ）は、毒素を運動ニューロン表面に指向させるのに重要であると考えられる。
【００２３】
第２工程において、毒素は、運動ニューロンの形質膜を横切る。毒素は、初めに、受容体媒介エンドサイトーシスにより細胞によって包み込まれ、毒素を含有するエンドソームが形成される。次に、毒素は、エンドソームから出て、細胞形質に入る。この工程は、約５．５またはそれ以下のｐＨに反応して毒素のコンフォメーション変化を誘発するＨ鎖のアミノ末端セグメント（ＨＮ）によって媒介されると考えられる。エンドソームは、エンドソーム内ｐＨを低下させるプロトンポンプを有することが既知である。コンフォメーションのシフトは毒素の疎水性残基を露出させ、それにより、毒素をエンドソーム膜内に埋込むことが可能になる。次に、毒素（または、少なくともその軽鎖）が、エンドソーム膜を通って細胞形質に転位する。
【００２４】
ボツリヌス毒素活性のメカニズムの最終工程は、毒素の重鎖（Ｈ鎖）および軽鎖（Ｌ鎖）を結合するジスルフィド結合の減少を含むと考えられる。ボツリヌス毒素および破傷風毒素の毒素活性は、ホロトキシン（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）のＬ鎖に含まれる。Ｌ鎖は亜鉛（Ｚｎ＋＋）エンドペプチダーゼであり、これは、神経伝達物質を含有する小胞の認識および形質膜の細胞質表面とのドッキングならびに小胞と形質膜との融合に必須であるタンパク質を選択的に開裂する。破傷風神経毒、ボツリヌス毒素Ｂ、Ｄ、ＦおよびＧ型は、シナプトソーム膜タンパク質であるシナプトブレビン［小胞関連膜タンパク質（ＶＡＭＰ）とも称される］の分解を引き起こす。シナプス小胞の細胞質表面に存在する大部分のＶＡＭＰは、これらの開裂現象のいずれかの結果として除去される。ボツリヌス毒素の血清型ＡおよびＥは、ＳＮＡＰ−２５を開裂する。ボツリヌス毒素の血清型Ｃは、シンタキシンおよびＳＮＡＰ−２５を開裂する。同じ結合を開裂するボツリヌス毒素Ｂ型および破傷風毒素を除いて、各ボツリヌス毒素は異なる結合を特異的に開裂する。
【００２５】
ボツリヌス毒素は、過活動骨格筋を特徴とする神経筋障害の治療の臨床設定（ｓｅｔｔｉｎｇｓ）において使用されている。ボツリヌス毒素Ａ型複合体は、眼瞼痙攣、斜視および片側顔面痙攣の治療に関して、米国食品医薬局（Ｕ．Ｓ． Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されている。非Ａ型ボツリヌス毒素血清型は、ボツリヌス毒素Ａ型と比較して、より低い効力および／またはより短い活性期間を有すると考えられる。全てではないにしても、大部分のボツリヌス毒素は、筋肉注射した際に、例えばマウスＤｉｇｉｔ Ａｂｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ （ＤＡＳ）によって評価した場合に、注射から１日以内に有意の筋肉麻痺を生じる。Ａｏｋｉ Ｋ．Ｒ．，”Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ＢＯＴＯＸ （Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ｔｙｐｅ Ａ）−Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ Ｏｔｈｅｒ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ”，Ｅｕｒ Ｊ．Ｎｅｕｒ １９９９，６ （ｓｕｐｐｌ ４）：Ｓ３−Ｓ１０。最大臨床効果は、数日間は得られないであろう。ボツリヌス毒素Ａ型の１回の筋肉注射による症状軽減の一般的な期間は、平均で約３ヶ月である。明らかに、ボツリヌス毒素の基質は、種々の細胞型に見い出される。例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｊ １：３３９ （ｐｔ １）：１５９−６５：１９９９、および、Ｍｏｖ Ｄｉｓｏｒｄ，１０（３）：３７６：１９９５を参照（ランゲルハンス島Ｂ細胞は、少なくともＳＮＡＰ−２５およびシナプトブレビンを含有する）。
【００２６】
ボツリヌス毒素タンパク質分子の分子量は、７種類の全ての既知ボツリヌス毒素血清型について、約１５０ｋＤである。興味深いことに、ボツリヌス毒素は、１５０ｋＤのボツリヌス毒素タンパク質分子および関連の非毒素タンパク質を含んでなる複合体として、クロストリジウム属細菌によって放出される。即ち、ボツリヌス毒素Ａ型複合体は、９００ｋＤ、５００ｋＤおよび３００ｋＤの形態で、クロストリジウム属細菌によって産生される。ボツリヌス毒素ＢおよびＣ１型は、７００ｋＤまたは５００ｋＤ複合体としてのみ産生されるようである。ボツリヌス毒素Ｄ型は、３００ｋＤおよび５００ｋＤ複合体として産生される。最後に、ボツリヌス毒素ＥおよびＦ型は、約３００ｋＤ複合体としてのみ産生される。複合体（即ち、約１５０ｋＤより大きい分子量）は、非毒素の血球凝集素タンパク質および非毒素および非毒性の非血球凝集素タンパク質を含有すると考えられる。これらの２つの非毒素タンパク質（ボツリヌス毒素分子と共に、関連の神経毒複合体を構成する）は、変性に対する安定性をボツリヌス毒素分子に与え、毒素が摂取された際に消化酸（ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ａｃｉｄｓ）に対する保護を与えるように作用をしうる。さらに、大きい（約１５０ｋＤ分子量より大きい）ボツリヌス毒素複合体は、ボツリヌス毒素複合体の筋肉注射部位からの、ボツリヌス毒素の遅い拡散速度を与えうる。
【００２７】
生体外試験は、ボツリヌス毒素が、脳幹組織の一次細胞培養物からのアセチルコリンおよびノルエピネフリンの両方の、カリウム陽イオン誘発放出を阻害することを示す。さらに、ボツリヌス毒素が、脊髄ニューロンの一次培養物におけるグリシンおよびグルタメートの両方の誘発放出を阻害すること、ならびに、脳シナプトソーム調製物において、ボツリヌス毒素が、各神経伝達物質アセチルコリン、ドパミン、ノルエピネフリン（Ｈａｂｅｒｍａｎｎ Ｅ．ら、”Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｉｎ ａｎｄ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ａ ａｎｄ Ｃ Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｆｒｏｍ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ｂｒａｉｎ”，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ５１（２）；５２２−５２７：１９８８）、ＣＧＲＰ、サブスタンスＰおよびグルタメート（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｒｅｉｔｏ，Ｊ．ら、”Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ａ Ｂｌｏｃｋｓ Ｇｌｕｔａｍａｔｅ Ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ Ｆｒｏｍ Ｇｕｉｎｅａ Ｐｉｇ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ｓｙｎａｐｔｏｓｏｍｅｓ”，Ｅｕｒ Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ １６５；６７５−６８１：１８９７）の放出を阻害することも報告されている。このように、適切な濃度を使用した場合、大部分の神経伝達物質の刺激誘発放出がボツリヌス毒素によってブロックされる。例えば、Ｐｅａｒｃｅ，Ｌ．Ｂ．，”Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”，Ｔｏｘｉｃｏｎ ３５（９）， １３７３−１４１２，１３９３；Ｂｉｇａｌｋｅ Ｈ．ら、”Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ａ Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｎｏｎ−Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｓｙｎａｐｔｉｃ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｕｓｅ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ”，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３６０， ３１８−３２４， １９８５；Ｈａｂｅｍａｎｎ Ｅ．，”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｔｅｔａｎｕｓ ａｎｄ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ａ Ｔｏｘｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ［３Ｈ］Ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ ａｎｄ ［３Ｈ］ＧＡＢＡ Ｆｒｏｍ Ｒａｔ Ｂｒａｉｎ Ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ”，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ４４， ２２４−２２６， １９８８；Ｂｉｇａｌｋｅ Ｈ．ら、”Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｉｎ ａｎｄ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ａ Ｔｏｘｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ Ｕｐｔａｋｅ ｏｆ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ，ａｓ Ｓｔｕｄｉｅｄ ｗｉｔｈ Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ Ｆｒｏｍ Ｒａｔ Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ”，Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３１６， ２４４−２５１， １９８１；および、Ｊａｎｋｏｖｉｃ Ｊ．ら、”Ｔｈｅｒａｐｙ Ｗｉｔｈ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ”，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．（１９９４），ｐ．５を参照。
【００２８】
ボツリヌス毒素Ａ型は、既知の方法によって、発酵槽においてボツリヌス菌の培養菌を定着させ、増殖させ、次に、採取し、発酵混合物を精製することによって得られる。全てのボツリヌス毒素血清型は、初めに不活性な一本鎖タンパク質として合成され、これがプロテアーゼによって開裂されるかまたはニックが入って神経活性になる。ボツリヌス毒素の血清型ＡおよびＧを作る細菌株は内因性プロテアーゼを有し、従って、血清型ＡおよびＧは、主としてその活性形態で細菌培養物から回収できる。これに対して、ボツリヌス毒素の血清型Ｃ１、ＤおよびＥは、非タンパク質分解菌株によって合成され、従って、培養物から回収した際には通常は活性化されていない。血清型ＢおよびＦは、タンパク質分解菌株および非タンパク質分解菌株の両方によって産生され、従って、活性または不活性の形態で回収できる。しかし、例えばボツリヌス毒素の血清型Ｂを産生するタンパク質分解菌株であっても、該菌株は、産生された毒素の一部を開裂するにすぎない。ニック入り分子と非ニック入り分子の正確な比率は、培養時間、培養温度に依存する。従って、例えばボツリヌス毒素Ｂ型のいずれかの試料のある一定割合は不活性である可能性があり、これが、ボツリヌス毒素Ａ型と比較してボツリヌス毒素Ｂ型の既知の有意に低い効力を説明すると考えられる。臨床調製物における不活性ボツリヌス毒素分子の存在は、臨床効果に寄与せずに、調製物の全体的タンパク質負荷に寄与し、抗原性の増加につながる。さらに、ボツリヌス毒素Ｂ型は、筋肉注射した際に、同じ用量レベルのボツリヌス毒素Ａ型より短い活性期間を有し、低い有効性であることも既知である。
【００２９】
高品質の結晶性ボツリヌス毒素Ａ型は、≧３×１０７Ｕ／ｍｇ、０．６０未満のＡ２６０／Ａ２７８、およびゲル電気泳動での明瞭なバンドパターンを特徴とするボツリヌス菌のＨａｌｌ Ａ菌株から得ることができる。Ｓｈａｎｔｚ Ｅ．Ｊ．ら、”Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ． ５６， ８０−９９， １９９２に記載されているように、既知のＳｈａｎｔｚ法を使用して結晶性ボツリヌス毒素Ａ型を得ることができる。一般に、ボツリヌス毒素Ａ型複合体は、好適な培地においてボツリヌス菌Ａ型を培養することによって、嫌気性発酵から単離し精製することができる。非毒素タンパク質からの分離の際に、既知の方法を使用して、下記のような純粋なボツリヌス毒素を得ることもできる：分子量約１５０ｋＤおよび比効力（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｏｔｅｎｃｙ）１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上を有する精製ボツリヌス毒素Ａ型；分子量約１５６ｋＤおよび比効力１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上を有する精製ボツリヌス毒素Ｂ型；および、分子量約１５５ｋＤおよび比効力１〜２×１０７ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上を有する精製ボツリヌス毒素Ｆ型。
【００３０】
ボツリヌス毒素および／またはボツリヌス毒素複合体は、Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，カリフォルニア）；ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｃｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，英国）；和光（大阪，日本）；Ｍｅｔａｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ウイスコンシン）；および、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ミズーリ）から得られる。
【００３１】
純粋なボツリヌス毒素およびボツリヌス毒素複合体を使用して、医薬組成物を製造することができる。純粋なボツリヌス毒素およびボツリヌス毒素複合体（毒素Ａ型複合体など）の両方は、表面変性、熱およびアルカリ条件による変性を受けやすい。不活性化毒素は、免疫原性になりうるトキソイドタンパク質を形成する。生じた抗体は、毒素注射に対して患者を無反応性にしうる。
【００３２】
一般に酵素と同様に、ボツリヌス毒素（これは細胞内ペプチダーゼである）の生物学的活性は、その三次元コンフォメーションに少なくとも部分的に依存する。即ち、ボツリヌス毒素Ａ型は、熱、種々の化学物質表面伸張および表面乾燥によって無毒化される。さらに、既知の培養、発酵および精製によって得た毒素複合体を、医薬組成物に使用されるかなり低い毒素濃度まで希釈する際には、好適な安定剤が存在しなければ毒素の急速な無毒化を生じる。ミリグラム量からナノグラム／ミリリットル含有溶液への毒素の希釈は、そのような高希釈の際の比毒性の急速な減損のゆえに、重大な問題を生じる。毒素は、毒素含有の医薬組成物を配合して数ヶ月後または数年後に使用される場合があるので、アルブミンやゼラチンのような安定剤を使用して毒素を安定化しうる。
【００３３】
商業的に入手可能なボツリヌス毒素含有の医薬組成物は、ＢＯＴＯＸ（登録商標）（Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，カリフォルニアから入手可能）として市販されている。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、滅菌真空乾燥形態で充填された精製ボツリヌス毒素Ａ型複合体、アルブミンおよび塩化ナトリウムからなる。ボツリヌス毒素Ａ型は、Ｎ−Ｚアミンおよび酵母抽出物を含有する培地で増殖させたボツリヌス菌のＨａｌｌ菌株の培養物から調製される。ボツリヌス毒素Ａ型複合体は、培養液から、一連の酸析出によって、活性な高分子量毒素タンパク質および関連の血球凝集素タンパク質からなる結晶性複合体まで精製される。結晶性複合体を、食塩水およびアルブミンを含有する溶液に再溶解し、滅菌濾過し（０．２ミクロン）、真空乾燥する。真空乾燥した生成物は、−５℃またはそれ以下で冷凍庫中に貯蔵する。ＢＯＴＯＸ（登録商標）を、筋肉内注射の前に、滅菌した非貯蔵食塩水を使用して再構成することができる。ＢＯＴＯＸ（登録商標）の各バイアルは、防腐剤を含有しない滅菌真空乾燥形態において、約１００単位（Ｕ）のボツリヌス毒素Ａ型の精製神経毒複合体、ヒト血清アルブミン０．５ｍｇおよび塩化ナトリウム０．９ｍｇを含有する。
【００３４】
真空乾燥ＢＯＴＯＸ（登録商標）を再構成するために、適切なサイズの注射器で適切な量の希釈剤を吸引することによって、防腐剤を含有しない滅菌規定食塩水（０．９％塩化ナトリウム注射剤）を使用する。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、泡立ちまたは同様の激しい撹拌によって変性しうるので、希釈剤をバイアルにゆっくり注入する。滅菌上の理由により、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、バイアルを冷凍庫から取り出して再構成してから４時間以内に投与するのが好ましい。この４時間中は、再構成ＢＯＴＯＸ（登録商標）を、約２℃〜約８℃で冷蔵庫に貯蔵することができる。再構成され、冷蔵貯蔵されたＢＯＴＯＸ（登録商標）は、その効力を少なくとも約２週間にわたって維持することが報告されている（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４８， ２４９−５３， １９９７）。
【００３５】
ボツリヌス毒素Ａ型は、下記の臨床設定において使用されることが報告されている：
（１）頸部ジストニーの治療のために、筋肉内注射（複数筋肉）あたり、約７５〜１２５単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）；
（２）眉間線（前頭溝）の治療のために、筋肉内注射あたり、５〜１０単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）（５単位を鼻根筋に注射し、１０単位を各皺眉筋に注射する）；
（３）恥骨直腸筋の括約筋注射による便秘の治療のために、約３０〜８０単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）；
（４）上眼瞼の外側瞼板前部の眼輪筋および下眼瞼の外側瞼板前部の眼輪筋への注射による眼瞼痙攣の治療のために、筋肉あたり約１〜５単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）の筋肉内注射；
（５）斜視の治療のために、約１〜５単位のＢＯＴＯＸ（登録商標）を外眼筋に注射する：注射される量は、注射される筋肉の大きさおよび所望される筋肉麻痺の程度（即ち、所望されるジオプトリ矯正量）に依存して変化する；
（６）脳卒中後の上肢痙性の治療のために、下記の５種類の上肢屈筋にＢＯＴＯＸ（登録商標）を筋肉内注射する：
（ａ）深指屈筋：７．５〜３０Ｕ
（ｂ）浅指屈筋：７．５〜３０Ｕ
（ｃ）尺側手根屈筋：１０〜４０Ｕ
（ｄ）橈側手根屈筋：１５〜６０Ｕ
（ｅ）上腕二頭筋：５０〜２００Ｕ
上記の５種類の筋肉のそれぞれに同じ治療期間において注射し、それにより、各治療期間において９０〜３６０Ｕの上肢屈筋ＢＯＴＯＸ（登録商標）を患者に筋肉注射投与する；
（７）偏頭痛を治療するために、２５ＵのＢＯＴＯＸ（登録商標）を頭蓋周囲に注射する（眉間、前頭および側頭筋に対称的に注射する）：該注射は、偏頭痛頻度、最大重症度、付随嘔吐および急性薬剤使用の減少（２５Ｕ注射後の３ヶ月間にわたる）によって評価した場合に、ビヒクルと比較して、偏頭痛の予防療法として有意な利益を与える。
【００３６】
さらに、筋肉内ボツリヌス毒素は、パーキンソン病の患者の振せんの治療にも使用されているが、結果は顕著でないことが報告されている。Ｍａｒｊａｍａ−Ｊｙｏｎｓ，Ｊ．ら、”Ｔｒｅｍｏｒ−Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｄｒｕｇｓ ＆ Ａｇｉｎｇ １６（４）， ２７３−２７８， ２０００。
【００３７】
ボツリヌス毒素Ａ型は、最大１２ヶ月の有効性を有し（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６（Ｓｕｐｐ ４）， Ｓ１１１−Ｓ１１５０， １９９９）、ある場合には２７ヶ月間にもわたる有効性を有しうることが既知である（Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ １０９， １３４４−１３４６， １９９９）。しかし、ＢＯＴＯＸ（登録商標）筋肉注射の通常の持続期間は一般に約３〜４ヶ月間である。
【００３８】
種々の臨床疾患の治療におけるボツリヌス毒素Ａ型の成功は、他のボツリヌス毒素血清型への関心を高めている。商業的に入手可能な２つのボツリヌス毒素Ａ型調製物［ＢＯＴＯＸ（登録商標）およびＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）］、ならびに、ボツリヌス毒素Ｂ型およびＦ型の調製物（両方とも和光化学、日本から得られる）について試験を行って、局所筋肉虚弱化効力、安全性および抗原潜在性を評価した。ボツリヌス毒素調製物を右腓腹筋の上部に注射し（０．５〜２００．０単位／ｋｇ）、マウス指外転評価アッセイ（ＤＡＳ）を使用して筋肉虚弱を分析した。ＥＤ５０値を用量反応曲線から計算した。他のマウスに筋肉注射を行って、ＬＤ５０用量を求めた。治療指数を、ＬＤ５０／ＥＤ５０として計算した。マウスの別のグループに、ＢＯＴＯＸ（登録商標）（５．０〜１０．０単位／ｋｇ）またはボツリヌス毒素Ｂ型（５０．０〜４００．０単位／ｋｇ）を後脚に注射し、筋肉虚弱および増加した水消費について試験した（この後者は乾燥した口の推定モデルである）。１ヶ月に１回ウサギに筋肉注射することによって［１．５または６．５ｎｇ／ｋｇのボツリヌス毒素Ｂ型または０．１５ｎｇ／ｋｇのＢＯＴＯＸ（登録商標）］、抗原潜在性を評価した。ピーク筋肉虚弱および期間は、全ての血清型において用量に相関していた。ＤＡＳ ＥＤ５０値（単位／ｋｇ）は次の通りであった：ＢＯＴＯＸ（登録商標）：６．７、Ｄｙｓｐｏｒｔ（登録商標）：２４．７、ボツリヌス毒素Ｂ型：２７．０〜２４４．０、ボツリヌス毒素Ｆ型：４．３。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、ボツリヌス毒素Ｂ型またはボツリヌス毒素Ｆ型より長い作用期間を有していた。治療指数値は以下の通りであった：ＢＯＴＯＸ（登録商標）：１０．５、Ｄｙｓｐｏｒｔ（登録商標）：６．３、ボツリヌス毒素Ｂ型：３．２。水消費は、ボツリヌス毒素Ｂ型を注射したマウスは、ＢＯＴＯＸ（登録商標）を注射したマウスより多かったが、ボツリヌス毒素Ｂ型は、筋肉の虚弱化において低い有効性であった。注射から４ヶ月後、４匹中２匹のウサギ（１．５ｎｇ／ｋｇで処置）および４匹中４匹のウサギ（６．５ｎｇ／ｋｇで処置）は、ボツリヌス毒素Ｂ型に対して抗体を発生させた。別の試験において、ＢＯＴＯＸ（登録商標）で処理したウサギ９匹中０匹が、ボツリヌス毒素Ａ型に対して抗体を示した。ＤＡＳの結果は、ボツリヌス毒素Ａ型の相対ピーク効力は、ボツリヌス毒素Ｆ型に等しく、ボツリヌス毒素Ｆ型は、ボツリヌス毒素Ｂ型より高いことを示している。作用期間について、ボツリヌス毒素Ａ型はボツリヌス毒素Ｂ型より長く、ボツリヌス毒素Ｂ型の作用期間はボツリヌス毒素Ｆ型より長かった。治療指数値によって示されるように、ボツリヌス毒素Ａ型の２つの市販調製物［ＢＯＴＯＸ（登録商標）およびＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）］は異なっている。ボツリヌス毒素Ｂ型の後脚注射後に観察される増加した水消費挙動は、臨床的に有意な量のこの血清型がマウスの全身循環に入ったことを示している。また、結果は、ボツリヌス毒素Ａ型と同等の有効性を得るためには、試験した他の血清型の用量を増加させる必要があることをも示している。用量増加は、安全性を損なうことがある。さらに、ウサギにおいてＢ型はＢＯ��ＯＸ（登録商標）より高い抗原性であり、その理由は、ボツリヌス毒素Ｂ型の有効用量を得るために、より高いタンパク質負荷量が注射されたためと考えられる（Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ １９９９ Ｎｏｖ， ６（Ｓｕｐｐｌ ４）， Ｓ３−Ｓ１０）。
【００３９】
末梢部位における薬理作用を有する他に、ボツリヌス毒素は、中枢神経系における阻害作用も有しうる。Ｗｅｉｇａｎｄら［Ｎａｕｎｙ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １９７６， ２９２，１６１−１６５］、およびＨａｂｅｒｍａｎｎ［Ｎａｕｎｙ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １９７４， ２８１，４７−５６］の研究は、ボツリヌス毒素が逆行性輸送によって脊髄領域へ上行しうることを示している。従って、末梢部位（例えば筋肉内）に注射されたボツリヌス毒素は、脊髄に逆行輸送されうる。
【００４０】
米国特許第５９８９５４５号は、特定の標的化成分に化学的に結合させるかまたは組換え的に融合させた改質クロストリジウム属神経毒またはそのフラグメント、好ましくはボツリヌス毒素を使用して、脊髄に薬剤を投与することによって痛みを治療できることを開示している。
【００４１】
アセチルコリン
一般に、単一型の小分子神経伝達物質だけが、各型のニューロンによって、哺乳動物神経系に放出される。神経伝達物質アセチルコリンは、脳の多くの領域のニューロンによって分泌されるが、特に、運動皮質の大錐体細胞、脳幹神経節の数種類のニューロン、骨格筋を神経支配する運動ニューロン、自律神経系（交感神経および副交感神経の両方）の節前ニューロン、副交感神経系の節後ニューロン、および交感神経系のいくつかの節後ニューロンによって分泌される。本質的に、汗腺、立毛筋および少数の血管への節後交感神経線維だけがコリン作動性であり、交感神経系の大部分の節後ニューロンは、神経伝達物質ノルエピネフィン（ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｉｎｅ）を分泌する。ほとんどの場合、アセチルコリンは興奮作用を有する。しかし、アセチルコリンは、いくつかの末梢副交感神経終末において、迷走神経による心拍数の阻害のような阻害作用を有することが既知である。
【００４２】
自律神経系の遠心性信号は、交感神経系または副交感神経系によって身体に伝えられる。交感神経系の節前ニューロンは、脊髄の中間外側角に位置する節前交感神経ニューロン細胞体から伸びる。細胞体から伸びる節前交感神経線維は、脊椎傍交感神経節または脊椎前神経節に存在する節後ニューロンとシナプスを形成する。交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンは、コリン作動性であり、神経節へのアセチルコリンの適用は、交感神経および副交感神経節後ニューロンの両方を興奮させる。
【００４３】
アセチルコリンは、２種類の受容体、ムスカリン性およびニコチン性受容体を活性化させる。ムスカリン性受容体は、副交換神経系の節後ニューロンによって刺激される全ての効果細胞、ならびに、交感神経系の節後コリン作動性ニューロンによって刺激される効果細胞に見られる。ニコチン性受容体は、副腎随質、ならびに自律神経節内、即ち、交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンと節後ニューロンの間のシナプスにおける節後ニューロンの細胞表面に見られる。ニコチン性受容体は、多くの非自律神経終末、例えば、神経筋接合部における骨格筋繊維の膜にも見られる。
【００４４】
アセチルコリンは、小さい透明な細胞内小胞が、シナプス前ニューロン細胞膜と融合する際に、コリン作動性ニューロンから放出される。種々の非ニューロン分泌細胞、例えば、副腎随質（ならびにＰＣ１２セルライン）およびランゲルハンス島細胞は、それぞれカテコールアミンおよび副甲状腺ホルモンを、大きい濃染芯小胞（ｌａｒｇｅ ｄｅｎｓｅ−ｃｏｒｅ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）から放出する。ＰＣ１２セルラインは、交感神経副腎発生の研究用の組織培養モデルとして広く使用されているラット褐色細胞腫細胞のクローンである。ボツリヌス毒素は、生体外において、脱神経細胞に毒素を透過させるか（エレクトロポレーションによるなど）または直接注射によって、両方の種類の細胞からの両方の種類の化合物の放出を阻害する。ボツリヌス毒素は、皮質シナプトソーム細胞培養物からの神経伝達物質グルタメートの放出をブロックすることも既知である。
【００４５】
神経筋接合部は、筋肉細胞への軸索の近接によって、骨格筋において形成される。神経系を介して伝達される信号は、イオンチャンネルを活性化して末端軸索における活動電位を生じ、例えば神経筋接合部の運動終板において、ニューロン内シナプス小胞からの神経伝達物質アセチルコリンの放出を生じる。アセチルコリンは、細胞外空間を通って、筋肉終板の表面のアセチルコリン受容体タンパク質と結合する。一旦、充分な結合が生じると、筋肉細胞の活動電位は、特異性膜イオンチャンネル変化を生じ、筋肉細胞収縮を生じる。次に、アセチルコリンが筋肉細胞から放出され、細胞外空間においてコリンエステラーゼによって代謝される。代謝産物は、さらなるアセチルコリンに再処理するために末端軸索に再循環される。
【００４６】
コリン作動性の脳系
運動および視覚視床（ｖｉｓｕａｌ ｔｈａｌａｍｕｓ）の両方のコリン作動性の作用は、脳幹および基底前脳から生じる。例えば、Ｂｉｌｌｅｔ Ｓ．ら、”Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｖｉｓｕａｌ Ｔｈａｌａｍｕｓ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｃｏｌｌｉｃｕｌｕｓ”，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． ８４７， １２１−１２３， １９９９、および、Ｏａｋｍａｎ，Ｓ．Ａ．ら、”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ Ｐｏｎｔｏｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｎｅｕｒｏｎ’ｓ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｔｈａｌａｍｕｓ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｄｂｒａｉｎ Ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ Ｇｒｏｕｐｓ”，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ９４（２）， ５２９−５４７， １９９９を参照。このように、アセチルコリンエステラーゼ（ＡｃｈＥ）染色およびコリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）免疫化学による逆行性追跡を使用した組織化学研究に基づいて、視床ニューロンの脳幹による上行コリン作動性刺激が存在しうることが既知である［Ｓｔｅｒｉａｄｅ Ｍ．ら、Ｂｒａｉｎ Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｏｘｏｆｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ （１９９０）、第１章］。実際に、多くの視床核は、脳幹網様体からの濃厚な（ｄｅｎｓｅ）コリン作動性神経支配を受ける（同文献のｐ．１６７）。既知の脳幹コリン作動性細胞群は、次の位置に存在する：（１）Ｃｈ５位置と称される吻側橋、これは、結合腕のまわりの中心被蓋野内に存在し、橋脚被蓋核を形成する；（２）Ｃｈ６位置と称される中脳の尾部、外側背側被蓋核、これは中脳水道周囲および室周囲灰白質に埋込まれている。Ｃｈ５およびＣｈ６細胞群は、ほぼコリン作動性ニューロンだけから成り、一緒に橋コリン作動性の系を形成する。Ｃｈ５−Ｃｈ６コリン作動性の群は、直接上行投射を与え、これは、中脳、間脳および終脳における多くの標的構造物（上丘、腹側視蓋前野、後交連の間質大型細胞核、外側手綱核、視床、大型細胞視索前核、外側乳頭核、基底前脳、嗅球、内側前前頭皮質、および橋核を包含する）において終結する［Ｓｔｏｎｅ Ｔ．Ｗ．，”ＣＮＳ Ｎｕｅｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ：Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ”，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ （１９９５），ｐ．１６］。Ｓｃｈａｆｅｒ Ｍ．Ｋ．−Ｈ．ら、”Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｆｉｅｌｄｓ Ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ．Ｉ．Ｃｅｎｔｒａｌ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ”，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，８４（２）， ３３１−３５９， １９９８をも参照。Ｃｈ１〜８コリン作動性核の三次元局在は、ヒトにおいてマッピングされている。例えば、Ｔｒａｃｅｙ，Ｄ．Ｊ．ら、”Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ”，Ｐｌａｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ （１９９５），ｐ．１３６−１３９を参照。
【００４７】
さらに、基底前脳（前脳）は、視床背側核、ならびに、新皮質、海馬、扁桃および嗅球のコリン作動性神経支配を与える。例えば、Ｓｔｅｒｉｄａｅのｐ．１３６−１３６を参照。多くの割合のニューロンがコリン作動性である基底前脳野は、内側中隔核（Ｃｈ１）、ブロカ対角帯核の垂直枝（Ｃｈ２）、ブロカ対角帯核の水平枝（Ｃｈ３）、およびＣｈ３細胞群の側背に位置する大細胞基底核（Ｃｈ４）を包含する。Ｃｈ１およびＣｈ２は、海馬へのコリン作動性投射の主成分を与える。Ｃｈ３区域の細胞は、嗅球に投射する。
【００４８】
さらに、コリン作動性ニューロンは視床に存在する。Ｒｉｃｏ，Ｂ．ら、”Ａ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ Ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｓ Ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｃａｑｕｅ Ｍｏｎｋｅｙ Ｔｈａｌａｍｕｓ”，Ｅｕｒ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１０， ２３４６−２３５２， １９９８。
【００４９】
脳のコリン作動性の系における異常は、種々の神経精神医学的障害（アルツハイマー病、パーキンソン病およびレヴィー小体痴呆を包含する）において一貫して確認されている。このように、アルツハイマー病において、海馬および皮質へのコリン作動性投射の低活性が存在する。レヴィー小体痴呆の患者において、広範囲の新皮質コリン作動性欠損が存在すると考えられ、パーキンソン病においては、脚橋コリン作動性ニューロンの喪失が存在する。注目すべきことに、ヒト脳におけるコリン作動性活性の生体内画像化が報告されている［Ｐｅｒｒｙら、”Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｉｎ Ｍｉｎｄ：ａ Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｏｆ Ｃｏｎｓｃｉｏｕｓｎｅｓｓ？”，ＴＩＮＳ ２２（６）， ２７３−２８０， １９９９］。
【００５０】
従って、長期間の活性、投与された選択頭蓋内標的組織からの低拡散速度、および治療用量レベルにおける極僅かな全身作用を特徴とする薬剤を投与することによって、内分泌障害を効果的に治療する方法が必要とされている。
【００５１】
（発明の開示）
本発明は、上記の要求を満たし、長期間の活性、投与された頭蓋内部位からの低拡散速度、および治療用量レベルにおける極僅かな全身作用を特徴とする神経毒の頭蓋内投与によって、種々の内分泌障害を効果的に治療する方法を提供するものである。
【００５２】
本明細書において下記の定義を適用する。
「約」は、「およそ」または「ほぼ」を意味し、本明細書に開示されている数値または数値範囲に関して、開示されているかまたは特許請求の範囲に記載されている数値または数値範囲の±１０％を意味する。
【００５３】
「生物学的活性」は、神経毒に関して、アセチルコリンのような神経伝達物質または視床下部性調節因子のような神経内分泌の分泌物の、合成、エキソサイトーシス、受容体結合および／または摂取に影響を与える能力を意味する。
【００５４】
「ボツリヌス毒素」は、純粋なボツリヌス毒素（即ち、約１５０ｋＤの毒素分子）およびボツリヌス毒素複合体（即ち、血球凝集素のような非毒素分子と結合して最大で約９００ｋＤの複合体を形成した純粋なボツリヌス毒素分子）を包含する。
【００５５】
「局所投与」は、動物の体上または体内の、薬剤の生物学的作用を必要とする部位またはその付近における、薬剤の直接投与を意味する。局所投与は、静脈内または経口投与のような全身性投与経路を除外する。
【００５６】
「神経毒」は、神経細胞表面受容体に特異的親和性を有する生物学的に活性な分子を意味する。神経毒は、純粋毒素としての、および１つまたはそれ以上の非毒素、毒素関連タンパク質との複合体としての、クロストリジウム属毒素を包含する。
【００５７】
「頭蓋内」は、脊髄の背側末端またはその付近の頭蓋の内部を意味、髄質、脳幹、脳橋、小脳および大脳を包含する。下垂体および視床下部は両方とも頭蓋内と考えられる。
【００５８】
本発明の内分泌障害の治療法は、神経毒を患者に頭蓋内投与し、それによって内分泌障害の症状を軽減することを含んでなる。神経毒は、例えば、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、酪酸菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ベラッティ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｅｒａｔｔｉ）および破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）からなる群から選択される細菌によって作ることができるか、あるいは、ボツリヌス菌、酪酸菌、クロストリジウム・ベラッティまたは破傷風菌によって非組換え的に作れらた神経毒をコードする好適な宿主（即ち、組換え的に変性された大腸菌）によって発現させることができる。好ましくは、神経毒は、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ型のようなボツリヌス毒素である。より好ましくは、ボツリヌス毒素は、ボツリヌス毒素Ａ型である。これは、この毒素の高い効力、容易入手性、および種々の疾患の治療におけるボツリヌス毒素Ａ型の臨床使用の長い歴史のためである。
【００５９】
ボツリヌス毒素は、約１０−２単位〜約５００単位の量で局所投与することができ、本発明のボツリヌス毒素の局所投与による内分泌障害の症状軽減効果は、約１ヶ月〜約５年間にわたって持続しうる。
【００６０】
特に、神経毒は、視床下部に、例えば、視床下部の正中隆起領域および／または弓状核領域に投与することができる。さらに、神経毒は、下垂体（下垂体前葉または下垂体後葉を含む）に投与することもできる。頭蓋内投与工程は、制御放出ボツリヌス毒素インプラントの埋込み工程を含んでなることができる。
【００６１】
本発明の範囲内にある内分泌障害の治療法の詳細な態様は、治療有効量のボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって内分泌障害の症状を治療することを含んでなることができる。本発明の方法によって治療しうる内分泌障害は、過剰の任意の視床下部放出因子または任意の下垂体ホルモン（ＧｎＲＨ、ＧＨ、ＬＨおよび／またはＦＳＨを包含する）に起因する疾患を包含する。従って、内分泌障害、例えば、先端巨大症、巨人症、クッシング病、性機能亢進症および甲状腺機能亢進症を本発明の方法によって治療することができる。
【００６２】
本発明の範囲内にある内分泌障害の治療法のさらに詳しい態様は、下記の工程を含んでなることができる：視床下部放出ホルモンまたは下垂体ホルモン抑制活性を有する神経毒（例えば、ボツリヌス毒素）を選択し；内分泌障害に影響を与える視床下部または下垂体標的組織を選択し；治療有効量の選択神経毒を標的組織に頭蓋内投与し、それによって内分泌障害を治療する。
【００６３】
本発明の性機能亢進症の治療法は、治療有効量のボツリヌス毒素Ａ型を、ヒト患者のコリン作動的に影響を受ける視床下部組織に生体内局所投与し、それによって患者の性機能亢進症の症状を軽減する工程を含んでなることができる。
【００６４】
さらに、本発明の避妊法は、ボツリヌス毒素（例えば、ボツリヌス毒素Ａ型）を患者に頭蓋内投与し、それによって配偶子形成に必要とされるホルモンの頭蓋内分泌を減少させる工程を含んでなることができる。即ち、ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって排卵に影響を与えるホルモンの頭蓋内分泌を減少させることにより、排卵を抑制することができる。さらに、ボツリヌス毒素を患者に頭蓋内投与し、それによって精子産生に影響を与えるホルモンの頭蓋内分泌を減少させることにより、精子産生を抑制することもできる。
【００６５】
神経毒は、改質神経毒（即ち、天然神経毒と比較して、少なくとも１個のアミノ酸が、欠失、改質または置換されている神経毒）であることができ、また、改質神経毒は、組換えによって産生された神経毒またはその誘導体であることができる。
【００６６】
驚くべきことに、本発明者は、ボツリヌス毒素（例えば、ボツリヌス毒素Ａ型）を、約１０−２単位〜約５００単位の量で頭蓋内投与して、ヒト患者の内分泌障害を軽減しうることを見い出した。好ましくは、使用されるボツリヌス毒素は、約１０−１単位〜約５０単位の量で頭蓋内投与される。より好ましくは、ボツリヌス毒素は、約１０−１単位〜約５単位の量で投与される。最も好ましくは、約０．０１単位〜約１０単位のボツリヌス毒素Ａ型、および約０．１〜約１００単位のボツリヌス毒素Ｂ型を、本発明の方法に使用する。他のボツリヌス毒素血清型（ボツリヌス毒素ＥおよびＦ型）については、使用される単位用量は、上記のように約０．０１単位〜約５００単位である。重要なことは、本発明の方法の内分泌障害の軽減効果が、神経毒の水溶液を投与した場合に約２ヶ月〜約６ヶ月間持続し、制御放出インプラントとして投与した場合に最大で約５年間持続しうることである。
【００６７】
本発明の範囲内にある他の好ましい方法は、患者の機能を改善するための方法であり、該方法は、神経毒を患者に頭蓋内投与し、それによって、患者の機能（痛みの減少、ベッドで過ごす時間の減少、歩行の増加、より健康的な態度、およびより変化に富んだライフスタイルのうちの１つまたはそれ以上の因子における改善によって評価される）を改善する工程を含んでなる。
【００６８】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明は、生体内において、神経毒をヒト患者に頭蓋内局所投与することによって、１つまたはそれ以上の内分泌障害を効果的に治療しうるという発見に基づいている。一般に、ホルモン過剰は病理学的状態を生じ、本発明の１つの態様は、視床下部放出因子または下垂体ホルモンの過剰産生に起因するホルモン過剰を治療する方法に関する。本発明は、男性または女性のヒト患者に神経毒を、生体内で頭蓋内局所投与することによって、配偶子形成、従って妊娠を抑制しうるという発見にも基づいている。
【００６９】
このように、本発明は、種々の異なる内分泌障害の有意かつ長期間持続する緩和を、神経毒の頭蓋内投与によって達成できることを明らかにした。頭蓋内投与は、血液脳関門を回避することを可能にし、全身性投与経路より多量の毒素を脳に供給する。さらに、ボツリヌス毒素のような神経毒の全身投与は、ボツリヌス毒素が全身循環に入ることによって生じうる重度の合併症（即ちボツリヌス中毒）のゆえに禁忌である。さらに、ボツリヌス毒素は、血液脳関門をいかなる有意な程度にも通過しないので、ボツリヌス毒素の全身投与は、頭蓋内標的組織の治療に実際に適用できない。
【００７０】
本発明によれば、ボツリヌス毒素のような神経毒の生体内局所投与によって、高ゴナドトロピン性性機能亢進症のような視床下部−下垂体−性腺軸の阻害によって利益を得る種々の疾患を治療することができる。このように、本発明の方法を使用して、視床下部または下垂体分泌を減少させることによって高ゴナドトロピン性性機能亢進症を治療することができる。
【００７１】
さらに、本発明の方法を使用して、中枢性コリン作動性活性に影響を与える調製物を局所投与することによって、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の分泌に影響を与えることができる。簡単に言えば、本発明は、配偶子形成の防止（即ち、排卵または精子産生の抑制、従って避妊）のため、および高ゴナドトロピン性性機能亢進症の治療のために、視床下部−下垂体−性腺軸の阻害から利益を得る疾患の治療法を提供する。
【００７２】
理論に縛られるものではないが、本発明の方法が所望の結果を生じるメカニズムは、開示された神経毒局所投与によって、内分泌視床下部または下垂体組織におけるコリン作動性の影響力を阻害することによるものと推測される。視床下部コリン作動性影響力の阻害は、例えば、視床下部ＧｎＲＨの放出の減少、次に、ＬＨおよびＦＳＨの下垂体前葉放出の減少を生じる。循環ＬＨおよびＦＳＨの放出の減少は、妊娠の抑制および種々の性機能亢進状態の治療の有効な手段になりうる。このように、神経毒（例えばボツリヌス毒素）は、数種類の異なるＣＮＳ神経伝達物質（特にアセチルコリン）の神経エキソサイトーシスを阻害しうる。コリン作動性ニューロンは、視床下部および下垂体の両方に存在することが知られている。従って、本発明の範囲内にある方法の標的組織は、視床下部のような頭蓋内領域の神経毒誘発性の可逆性脱神経を包含しうる。例えば、コリン作動的に神経支配される視床下部核（視床弓状核など）への神経毒の注射または埋込みは、視床下部に投射するコリン作動性終末における毒素の作用によるＧＨＲＨ、従ってＧＨの分泌の抑制；および（２）コリン作動性および非コリン作動性の両方の視床下部体における毒素の作用による視床下部性調節ホルモン産生の減少；を生じ、それによって化学的および治療的視床下部切開を生じうる。
【００７３】
上記のように、本発明は、視床下部または下垂体への神経毒の直接的局所投与によって、視床下部−下垂体−性腺軸を調節する神経毒の使用に関する。特に、本発明は、視床下部からのゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の分泌を抑制することによって、視床下部−下垂体−性腺軸を調節する神経毒の局所中枢投与に関する。
【００７４】
本発明に使用するのに好適な神経毒は、他の非視床下部または非下垂体標的組織に有意な影響を与えずに、１つのまたは視床下部および／または下垂体の内分泌物を可逆的に抑制しうる非細胞毒性（即ち、有意なニューロンまたはその他の細胞の死／壊死を生じない）神経毒を包含する。この目的に好適な化合物は、ボツリヌス毒素である。
【００７５】
本発明は、選択した標的組織に神経毒を頭蓋内投与するためのあらゆる好適な方法を包含する（選択した標的部位における、神経毒の水溶液の注射、および、制御放出系、例えば神経毒を導入したポリマーインプラントの埋込みを包含する）。制御放出インプラントの使用は、反復注射の必要性を減少させる。頭蓋内インプラントは既知である。例えば、悪性神経膠腫の近接照射療法は、定位的に埋込まれた一時的なヨウ素−１２５間質カテーテルを包含する［Ｓｃｈａｒｆｅｎ．Ｃ．Ｏ．ら、”Ｈｉｇｈ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｏｄｉｎｅ−１２５ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｉｍｐｌａｎｔ Ｆｏｒ Ｇｌｉｏｍａｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ ２４（４）， ５８３−５９１， １９９２］。さらに、永久的頭蓋内低用量１２５Ｉ接種カテーテルインプラントを使用して、脳腫瘍の治療が行われている［Ｇａｓｐａｒら、”Ｐｅｒｍａｎｅｎｔ １２５Ｉ Ｉｍｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｇｌｉｏｍａｓ”，Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ ４３（５）， ９７７−９８２， １９９９］。Ｇｉｌｄｅｎｂｅｒｇ Ｐ．Ｌ．らの”Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ”，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ （１９９８）中の第６６章、第５７７−５８０頁、Ｂｅｌｌｅｚｚａ Ｄ．らの”Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｂｒａｃｈｙｔｈｅｒａｐｙ”をも参照。
【００７６】
さらに、外科的に埋込まれた生物分解性インプラントを使用する間質化学療法によって悪性神経膠腫を治療する抗ガン薬の局所投与も既知である。例えば、３−ビス（クロロ−エチル）−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）（カルムスチン）含有ポリ酸無水物ウエハー（ｗａｆｅｒ）の頭蓋内投与は、治療用途が見い出されている［Ｂｒｅｍ，Ｈら、”Ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ＢＣＮＵ−Ｌｏａｄｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｗｌｙ Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｇｌｉｏｍａｓ：Ｐｈａｓｅ Ｉ Ｔｒｉａｌ”，Ｊ Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２６， １１１−１２３， １９９５］。
【００７７】
ポリ酸無水物ポリマー、Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）（Ｓｔｏｌｌｅ Ｒ ＆ Ｄ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）、ポリ−カルボキシフェノキシプロパンとセバシン酸との２０：８０の比率のコポリマーを使用して、悪性神経膠腫の治療のために頭蓋内に埋込まれるインプラントが製造されている。ポリマーおよびＢＣＮＵを一緒に塩化メチレンに溶解し、噴霧乾燥して、微小球にすることができる。次に、微小球を、圧縮成形によって直径１．４ｃｍおよび厚さ１．０ｍｍの円板に圧縮し、窒素雰囲気下にアルミニウム箔ポーチ（ｐｏｕｃｈｅｓ）に充填し、２．２メガラドのガンマ線によって滅菌することができる。ポリマーは、２〜３週間にわたるカルムスチンの放出を可能にするが、ポリマーの大部分が分解するのに１年以上を要する［Ｂｒｅｍ，Ｈ．ら、”Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｔｒｉａｌ ｏｆ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂｙ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｌｉｏｍａｓ”，Ｌａｎｃｅｔ ３４５， １００８−１０１２， １９９５］。
【００７８】
インプラントは、必要量の安定化神経毒［例えば、再構成されていないＢＯＴＯＸ（登録商標）］を、室温において、塩化メチレンに溶解した好適なポリマーの溶液に混合することによって製造できる。次に、溶液をペトリ皿に移し、塩化メチレンを真空乾燥器で蒸発させる。所望のインプラントの大きさ、従って導入される神経毒の量に依存して、適量の乾燥神経毒導入インプラントを鋳型において約８０００ｐ．ｓ．ｉ．で５秒間または３０００ｐ．ｓ．ｉ．で１７秒間圧縮して、神経毒を封入したインプラント円板を形成する。例えば、Ｆｕｎｇ Ｌ．Ｋ．ら、”Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ ４−Ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｙｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ａｎｄ Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ Ｆｒｏｍ ａ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｉｍｐｌａｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｏｎｋｅｙ Ｂｒａｉｎ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８， ６７２−６８４， １９９８を参照。組織内におけるボツリヌス毒素の生物学的活性の拡散は、用量の関数であると考えられ、累進的にすることができる［Ｊａｎｋｏｖｉｃ Ｊ．ら、”Ｔｈｅｒａｐｙ Ｗｉｔｈ Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ”，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．（１９９４），ｐ．１５０］。
【００７９】
ボツリヌス毒素のような多くの神経毒は大きすぎて血液脳関門を通過することができないので、ボツリヌス毒素のような神経毒の局所頭蓋内供給は、毒素の高い局所治療レベルを与えることができ、あらゆる全身毒性の発生を有意に妨げることができる。頭蓋内部位への神経毒の長期局所供給が可能な制御放出ポリマーは、全身毒性および血液脳関門によって強いられる制限を回避することができ、頭蓋内標的組織への効果的な投与を可能にする。本発明に使用するのに好適な神経毒およびボツリヌス毒素インプラントは、同時係属中の米国特許出願第０９／５８７２５０号（発明の名称「Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ Ｉｍｐｌａｎｔ」）および第０９／６２４００３号（発明の名称「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ Ｔｏｘｉｎ Ｉｍｐｌａｎｔ」）に開示されている。そのようなインプラントは、制御放出ポリマーにより、脳標的組織への化学治療薬剤の直接導入を可能にする。使用されるインプラントポリマーは、好ましくは疎水性であり、毒素が標的組織環境に放出されるまで、ポリマーに導入された毒素を水誘発分解から保護することができる。
【００８０】
本発明による、例えばコリン作動性の視床下部への注射またはインプラントによるボツリヌス毒素の局所頭蓋内投与は、特に高ゴナドトロピン症の治療における視床下部切開の優れた代替法である。
【００８１】
本発明の範囲内の方法は、Ｒｉｅｃｈｅｒｔ−ＭｕｎｄｉｎｇｅｒユニットおよびＺＤ（Ｚａｍｏｒａｎｏ−Ｄｕｊｏｖｎｙ）多目的限局ユニットを使用する神経毒含有インプラントの定位的配置を包含する。１２０ｍｌのオムニペイク（ｏｍｎｉｐａｑｕｅ）、３５０ｍｇヨウ素／ｍｌを注入する、２ｍｍスライス厚みのコントラスト増強コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャンは、三次元多平面治療計画を可能にする（ＳＴＰ，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。この装置は、明確な標的確認のためにＣＴおよびＭＲＩ標的情報を組み合わせた磁気共鳴画像検査に基づく計画を可能にする。
【００８２】
ＧＥ ＣＴスキャナー（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）と一緒に使用するように改良されたＬｅｋｓｅｌｌ定位システム（Ｄｏｗｎｓ Ｓｕｒｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｃａｔｕｒ，ＧＡ）、ならびに、Ｂｒｏｗｎ−Ｒｏｂｅｒｔｓ−Ｗｅｌｌｓ （ＢＲＷ）定位システム（Ｒａｄｉｏｎｉｃｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）が、この目的に使用されている。即ち、インプラントを行う朝に、ＢＲＷ定位フレームの環状ベースリング（ｂａｓｅ ｒｉｎｇ）を、患者の頭蓋に取り付けることができる。ベースプレートに固定したグラファイトロッドの限局フレームにより、（標的組織）領域の３ｍｍ間隔の連続ＣＴ断面が得られる。コンピュータ化治療計画プログラムは、ＶＡＸ １１／７８０コンピューター（Ｄｉｇｉｔａｌ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｙｎａｒｄ，ＭＡ）において、ＣＴスペースとＢＲＷスペースの間をマッピングするグラファイトロッド画像のＣＴ座標を用いて行うことができる。
【００８３】
好ましくは、本発明の範囲内の方法に使用される神経毒は、ボツリヌス毒素、例えば、ボツリヌス毒素血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧの１つである。好ましくは、使用されるボツリヌス毒素は、ヒトにおける高い効力、容易入手性、および筋肉内注射によって局所投与されたときの骨格筋および平滑筋障害の治療における使用が既知であるゆえに、ボツリヌス毒素Ａ型である。ボツリヌス毒素Ｂ型は、Ａ型と比較して顕著に低い効力および有効性であり、容易に入手できず、ヒトにおける臨床使用の限られた歴史のゆえに、本発明の方法の実施に使用するには好ましさが低い。さらに、Ｂ型に関する比較的高いタンパク質負荷は、免疫原性反応の原因となり、Ｂ型神経毒に対する抗体の生成につながりうる。
【００８４】
本発明による標的組織への頭蓋内投与に選択される神経毒の量は、治療される内分泌障害、その重症度、関与するかまたは治療される脳組織の範囲、選択された神経毒の溶解特性、ならびに、患者の年齢、性別、体重および健康状態に依存して変化しうる。例えば、影響される脳組織領域の範囲は、注射される神経毒の容量に比例すると考えられ、一方、視床下部または下垂体分泌抑制作用の量は、ほとんどの用量範囲において、注射される神経毒の濃度に比例すると考えられる。適切な投与経路および用量は、主治医によってケースバイケースで決定されるのが普通である。そのような決定は、当業者にとって常法である（例えば、”Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ” （１９９８）、Ａｎｔｈｏｎｙ Ｆａｕｃｉら編、第１４版、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ出版を参照）。
【００８５】
本発明者は、ボツリヌス毒素のような神経毒を、約１０−２単位〜約５００単位の量で、本発明の方法によって頭蓋内投与しうることを見い出した。約１０−２単位の投与量は、小核に供給された場合に、ゴナドトロピン抑制作用を生じうる。約１０−２単位未満の頭蓋内投与は、有意なまたは持続的な治療効果を生じない。５００単位より多い神経毒、例えばボツリヌス毒素の頭蓋内投与量は、標的に近接するニューロンの感覚または望ましい運動機能の脱神経の大きなリスクを有する。
【００８６】
約１０−２Ｕ／ｋｇ未満は、比較的少ないがそれでもなお観察しうるゴナドトロピン抑制作用を生じうる。治療される患者においてゴナドトロピン抑制作用を得るためのボツリヌス毒素（ボツリヌス毒素Ａ型など）の頭蓋内投与のより好ましい範囲は、約１０−１Ｕ／ｋｇ〜約５０単位である。約１０−１Ｕ／ｋｇ未満は、最適かまたは最長の可能期間より短い所望の治療効果を生じうる。治療される患者において所望のゴナドトロピン抑制作用を得るためのボツリヌス毒素（ボツリヌス毒素Ａ型など）の頭蓋内投与の最も好ましい範囲は、約０．１単位〜約１０単位である。この好ましい範囲のボツリヌス毒素（ボツリヌス毒素Ａ型など）の頭蓋内投与は、劇的な治療効果を与えることができる。
【００８７】
本発明は、患者の頭蓋内に局所投与した場合に、長期間のゴナドトロピン抑制作用を有するあらゆる神経毒の使用を包含する。例えば、ボツリヌス菌、酪酸菌およびクロストリジウム・ベラッティなどの毒素産生クロストリジウム属細菌の種のいずれかによって産生される神経毒を使用するか、または本発明の方法における使用に適合させることができる。さらに、ボツリヌス血清型Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを本発明の実施に有利に使用しうるが、上記に説明したように、Ａ型が最も好ましく、Ｂ型は最も好ましくない血清型である。本発明の実施は、ヒトにおいて、１回の注射につき３ヶ月またはそれ以上のゴナドトロピン抑制作用を与えることができる。
【００８８】
重要なことは、本発明の方法が、患者の機能の改善を与えるうることである。「患者の機能の改善」とは、痛みの減少、ベッドで過ごす時間の減少、歩行の増加、より健康的な態度、より変化に富んだライフスタイルおよび／または正常な筋肉状態によって可能な治癒のような要因によって評価される改善と定義することができる。患者の機能の改善は、生活の質（ＱＯＬ）の改善と同義語である。ＱＯＬは、例えば既知のＳＦ−１２またはＳＦ−３６健康調査評価法を使用して評価することができる。ＳＦ−３６は、患者の身体的および精神的健康を、身体機能の８つの領域、身体的問題による役割制限、社会的機能、身体的痛み、一般的精神健康、情緒問題による役割制限、活力、および一般的健康知覚において評価する。得られた評点を、種々の一般および患者集団について入手しうる公表数値と比較することができる。
【００８９】
上記のように、本発明者は、患者に神経毒を頭蓋内投与することにより、驚くべき有効性かつ長期持続性の内分泌障害の治療を達成しうることを見い出した。最も好ましい態様において、本発明は、ボツリヌス毒素Ａ型の頭蓋内注射または埋込みによって実施される。
【００９０】
本発明は、その範囲内に下記のものを包含する：（ａ）神経毒、即ち、細菌培養、毒素抽出、濃縮、貯蔵、凍結乾燥および／または再構成によって得られたかまたは処理された神経毒；および（ｂ）改質または組換え神経毒、即ち、既知の化学的／生化学的アミノ酸改質法によるか、または既知の宿主細胞／組換えベクター組換え法によって、１つまたはそれ以上のアミノ酸またはアミノ酸配列が意図的に欠失、改質または置換された神経毒、ならびに、そのようにして製造された神経毒の誘導体またはフラグメント。
【００９１】
本発明に従って使用されるボツリヌス毒素は、真空圧下に容器中において凍結真空乾燥した形態でまたは安定な液体として貯蔵することができる。凍結乾燥の前に、ボツリヌス毒素を医薬的に許容される賦形剤、安定剤および／または担体（例えばアルブミン）と混合することができる。凍結乾燥物は、食塩水または水で再構成することができる。
【００９２】
（実施例）
下記の実施例は、内分泌障害を治療するかまたは妊娠を抑制する、本発明に包含される特定の方法を記載するものであり、本発明の範囲の限定を意図するものではない。
【００９３】
本発明に従う下垂体標的組織への神経毒の局所投与の好ましい方法は、経蝶形骨アプローチである。下垂体へのこの外科的アプローチは、ステロイド被覆を含む準備処置を患者に行った後に、上歯茎を切開することによって実施される。鼻粘膜を中隔から剥離し、蝶形骨洞を通って下垂体窩に到達する。
【００９４】
定位アプローチ（即ち、内分泌視床下部へのアプローチ）のために、好適な定位固定針（長さ２’’〜６’’、剛性、中空内腔、無コア（ｎｏｎ−ｃｏｒｉｎｇ）、１ｍｍ未満の外径；記録、刺激、およびボツリヌス毒素などの神経毒の投与用）を、Ｐｏｐｐｅｒ ＆ Ｓｏｎｓ （Ｎｅｗ Ｈｙｄｅ Ｐａｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）またはＳｕｒｇｉｃａｌ ９１１．ｃｏｍ （Ｏｌｄ Ｓａｙｂｒｏｏｋ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）から入手することができる。好ましい定位針は３２ゲージ（３２Ｇ、０．００９’’／０．２２９ｍｍ Ｏ．Ｄ．）（Ｐｏｐｐｅｒ ＆ Ｓｏｎｓ）である。定位固定を使用して気管内全身麻酔を行い、次に、冠状縫合において前頭バーホ−ル（ｂｕｒｒ ｈｏｌｅ）を形成する。気体または少量の造影剤を使用する脳室造影のために、微細なカテーテルを使用する。前交連および後交連を目標として使用し、ＣＲＷ装置を使用して、例えば弓状核に位置する標的部位に、直径０．８ｍｍの細い針を定位的に挿入する。Ａｘｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｐｏｓｉｔｉｏｎｅｒ （Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）をＬｅｋｓｅｌｌ−ＧまたはＲａｄｉｏｎｉｃｓ−ＣＲＷ定位固定フレームと一緒に使用して、所望の頭蓋内標的部位または該部位の５０ミクロン以内に針を配置することができる。脳波記録（ＥＥＧ）、皮質脳波記録（ＥＣＧ）および頸部筋肉の筋電図記録（ＥＭＧ）、血圧および呼吸を監視する。Ｘ線写真によって、標的部位への針の適切な配置を確認し、刺激検査を行った後、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型（例えばＢｏｔｏｘ）を注射するか、または、２〜５年の持続期間において３〜４ヶ月間にわたって約０．５単位のボツリヌス毒素を放出できるインプラントを標的組織部位に埋込む。所望処置領域は直径２〜３ｍｍである。標的へのパス（ｐａｓｓｅｓ）数は絶対最小限に制限される。
【００９５】
実施例１：頭蓋内標的組織の限局化および方法
定位法を、水溶液形態またはインプラントとしての神経毒の正確な頭蓋内投与に使用して、過形成内分泌視床下部または下垂体を下方調節することができる。即ち、内分泌治療のための神経毒の頭蓋内投与を下記のようにして行うことができる。
【００９６】
患者の予備的ＭＲＩスキャンを行って、前交連−後交連線の長さおよび外側骨目標に対するその配向を求めることができる。次に、フレームの底面を、前交連−後交連線の平面に整列させることができる。ＣＴ誘導を使用し、脳室造影法によって補助することができる。後交連を２ｍｍＣＴスライスで視覚化し、基準点として使用することができる。
【００９７】
標的組織の限局化の生理学的確認後に、使用される長い針の注射器に付随するかまたは組み込まれている電極により、高周波および低周波刺激を使用することができる。２ｍｍの露出先端を有する直径１．６ｍｍのサーミスタ電極を使用することができる（Ｒａｄｉｏｎｉｃｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）。電極高周波刺激（７５Ｈｚ）において、Ｒａｄｉｏｎｉｃｓ損傷発生器（Ｒａｄｉｏｎｉｃｓ Ｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙ Ｌｅｓｉｏｎ Ｇｅｎｅｒａｔｏｒ Ｍｏｄｅｌ ＲＦＧ３ＡＶ）を使用して、０．５〜１．０Ｖにおいて感覚異常反応を前腕および手に誘発することができる。低周波（５Ｈｚ）において、影響を受けた肢における振せんの活性化または抑制を２〜３Ｖで生じさせることができる。本発明の方法によれば、損傷の創製に電極を使用しない。標的組織限局化の確認後に、神経毒を注射し、それによって可逆性の化学的な視床下部切開を生じることができる。一般的な注射は、約０．０１ｍｌ〜約０．１ｍｌの水または食塩水中の所望の単位数（即ち、約０．１〜約５単位）のボツリヌス毒素Ａ型複合体である。低注射容量を使用して、標的からの毒素拡散を最小限にすることができる。一般に、視床下部放出因子または下垂体ホルモン放出抑制作用は、約２〜４ヶ月以内に消失すると考えられる。従って、代替の神経毒形態、即ちポリマーインプラントに導入された神経毒を使用して、長期間（即ち、約１年〜約６年）にわたって所望の位置において治療量の毒素の制御連続放出を与えることができ、それによって反復毒素注射を行う必要をなくすことができる。
【００９８】
先端巨大症の治療のための弓状核（ＡＮ）のような種々の頭蓋内標的に定位的に誘導される神経毒注射のために、いくつかの方法を使用することができる。例えば、電気生理学的記録およびＡＮ注射用の注射誘導と連結した、手術計画用の三次元（３Ｄ）Ｔ１強調画像およびＡＮの直接視覚化用の多平面Ｔ２強調画像に依存する定位磁気共鳴（ＭＲＩ）法を使用することができる。例えば、Ｂｅｊｊａｎｉ，Ｂ．Ｐ．ら、”Ｂｉｌａｔｅｒａｌ Ｓｕｂｔｈａｌａｍｉｃ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｔｈｒｅｅ−Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｇｕｉｄａｎｃｅ”，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ ９２（４）， ６１５−２５， ２０００を参照。ＡＮの中心の座標は、患者の前交連−後交連線および脳アトラス（ａｔｌａｓ）を参考にして決定することができる。
【００９９】
いくつかの平行トラック（ｔｒａｃｋｓ）による電気生理学的モニタリングを同時に行って、機能標的を正確に限定することができる。ＭＲＩ画像法を使用することによって所定の標的に向けられている中心トラックを、神経毒注射のために選択することができる。外科的合併症は予想されない。
【０１００】
コンピュータによって補助されたアトラスに基づく機能的神経外科法を使用して、正確かつ精密に所望の神経毒を注射するか、または神経毒制御放出インプラントを埋込むことができる。そのような方法は、視床下部構造の三次元表示およびリアルタイム操作を可能にする。従って、３つの全ての直交方向における相互予備登録多重脳アトラス（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｒａｉｎ ａｔｌａｓｅｓ）を使用する神経外科計画が可能であり、神経毒注射または埋込みのための標的限定の精度増加、路の数の減少による外科操作の時間短縮を可能にし、より高性能な軌道の計画を容易にする。例えば、Ｎｏｗｉｎｓｋｉ Ｗ．Ｌ．ら、”Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｉｄｅｄ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｂｒａｉｎ Ａｔｌａｓ Ｄａｔａｂａｓｅ”，ＩＥＥＥ Ｔｒａｎｓ Ｍｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ １９（１）， ６２−６９， ２０００を参照。
【０１０１】
実施例２：ボツリヌス毒素を使用する先端巨大症の治療
５５才の男性は、疲労、頭痛、発汗増加、熱不耐症および体重増加を示す。患者によって提供された過去１５年間に撮影された写真、および親族のコメントから、軟組織および骨の肥大があり、その結果、手、足、帽子サイズの増加、顎前突、舌の肥大、歯の間隔の広がり、および顔立の粗悪化が生じていると判断される。１００ｇのグルコースを投与して９０分後に測定したグルコース抑制ＧＨは１１μｇ／Ｌであり、先端巨大症と診断される。トルコ鞍のＭＲＩおよびコーンダウンＸ腺における下垂体腺腫の不存在、および異所性ＧＨＲＨ腫瘍の不存在によって、視床下部性ＧＨＲＨ過剰と結論される。
【０１０２】
実施例１に記載したＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ補助定位手術を使用して、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型［例えばＢＯＴＯＸ（登録商標）または約２単位のＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）］を、視床下部の弓状核に注射する。手術から１週間後に、グルコース抑制に反応したＧＨは、＜２μｇ／Ｌに減少し、過剰の軟組織は縮小し消失していた。長期の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ａ型を導入したポリマーインプラントを標的組織部位に配置することができる。インプラントは、生物分解性ポリマー微小球または生物分解性ペレットに導入された神経毒（ボツリヌス毒素Ａ型など）を含んでなることができ、どちらのインプラント形態も合計約１０単位（約０．５ｎｇ）の毒素Ａ型［即ちＢＯＴＯＸ（登録商標）］を含有し、インプラント放出部位および標的部位の両側の半径約２〜３ｍｍにおいて治療レベルの毒素を少なくとも約４年間にわたって連続放出するインプラント特性を有する。インプラントは、約０．５単位の毒素を本質的に即時に放出し、さらに約０．５単位の量をその後の２〜４ヶ月間にわたって累積的に放出することができる。この実施例で記載したのと同じプロトコールを使用して、青年における同じ原発性視床下部性病因を有する巨人症を治療することができる。
【０１０３】
ボツリヌス毒素Ａ型を使用する代わりに、約５〜約５０単位のボツリヌス毒素Ｂ型調製物、または約０．１単位〜約１００単位のボツリヌス毒素Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を同じように定位的に投与することもでき、この場合にも、長期間の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を導入した１つまたはそれ以上のポリマーインプラントを標的組織部位に配置することができる。
【０１０４】
コリン作動的に神経支配される下垂体腺腫に原発性の先端巨大症を、上記のように、経蝶形骨手術による治療有効量のボツリヌス毒素の局所投与または埋込みによって治療することができる。
【０１０５】
実施例３：ボツリヌス毒素を使用する甲状腺機能亢進症の治療
高遊離サイロキシンレベルおよび高放射能取り込みを有する広汎性甲状腺腫を有するが、グレーヴズ病に特徴的な眼または皮膚の変化を有さない２９才の女性は、下垂体過形成による甲状腺機能亢進症と診断される。治療は、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型［例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）または約２単位のＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）］を下垂体前葉へ注射する経蝶形骨手術によって行われる。手術から約１週間後に、循環サイロキシンレベルが正常に戻っていた。長期間の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ａ型を導入したポリマーインプラントを、標的組織部位に配置することができる。
【０１０６】
ボツリヌス毒素Ａ型を使用する代わりに、約５〜約５０単位のボツリヌス毒素Ｂ型調製物、または約０．１単位〜約１００単位のボツリヌス毒素Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を投与することもできる。長期間の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を導入した１つまたはそれ以上のポリマーインプラントを標的組織部位に配置することができる。
【０１０７】
実施例４：ボツリヌス毒素を使用するクッシング病の治療
４４才の男性患者は、脂肪組織の中枢分布、筋肉虚弱、紫がかった線条、高血圧、性欲減少および疲労を包含するコルチコル（ｃｏｒｔｉｃｏｌ）過剰の症状が認められ、ＡＣＴＨの下垂体過剰産生に原発性であると診断される。実施例１に記載したＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ補助定位脳手術を使用して、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型［例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）または約２単位のＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）］を、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）産生に関与する視床下部核に注射する。別法によれば、下垂体前葉にボツリヌス毒素を局所投与する経蝶形骨手術を行うこともできる。手術から数日以内に、血漿コルチコル濃度がほぼゼロに低下する。長期間の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ａ型を導入したポリマーインプラントを、標的組織部位に配置することができる。インプラントは、生物分解性ポリマー微小球または生物分解性ペレットに導入された神経毒（ボツリヌス毒素Ａ型など）を含んでなることができ、どちらのインプラント形態も合計約１０単位（約０．５ｎｇ）の毒素を含有し、インプラント放出部位および標的部位の両側の半径約２〜３ｍｍにおいて治療レベルの毒素を少なくとも約４年間にわたって連続放出するインプラント特性を有する。インプラントは、約０．５単位の毒素を本質的に即時に放出し、さらに約０．５単位の量をその後の２〜４ヶ月間にわたって累積的に放出することができる。この実施例で記載したのと同じプロトコールを使用して、青年における同じ病因の巨人症を治療することができる。
【０１０８】
ボツリヌス毒素Ａ型を使用する代わりに、約５〜約５０単位のボツリヌス毒素Ｂ型調製物、または約０．１単位〜約１００単位のボツリヌス毒素Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を定位的に投与することもでき、長期間の治療的軽減のために、適量のボツリヌス毒素Ｂ、Ｃ１、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ型を導入した１つまたはそれ以上のポリマーインプラントを標的組織部位に配置することができる。
【０１０９】
実施例５：ボツリヌス毒素Ａ型を使用する配偶子形成の抑制
女性における排卵または男性における精子産生を抑制するために、実施例１に記載したＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ補助定位脳手術を使用して、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型［例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）または約２単位のＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）または約１０単位のボツリヌス毒素Ｂ型］を、ＧｎＲＨ産生に関与する視床下部核に注射することができる。別法によれば、下垂体前葉にボツリヌス毒素を局所投与する経蝶形骨手術を行って、ＬＨおよびＦＳＨ産生を下方調節することもできる。適量のボツリヌス毒素Ａ型を導入したポリマーインプラントを、選択された標的組織部位に配置することもできる。インプラントは、生物分解性ポリマー微小球または生物分解性ペレットに導入された神経毒（ボツリヌス毒素Ａ型など）を含んでなることができ、どちらのインプラント形態も合計約１０単位（約０．５ｎｇ）の毒素を含有し、インプラント放出部位および標的部位の両側の半径約２〜３ｍｍにおいて治療レベルの毒素を少なくとも約４年間にわたって連続放出するインプラント特性を有する。インプラントは、約０．５単位の毒素を本質的に即時に放出し、さらに約０．５単位の量をその後の２〜４ヶ月間にわたって累積的に放出することができる。このプロトコールによって、成人男性および女性に使用される有効な避妊法が得られる。
【０１１０】
実施例６：ボツリヌス毒素を使用する月経の抑制
月経を抑制するために、実施例１に記載したＣＡＴスキャンまたはＭＲＩ補助定位脳手術を使用して、０．５単位のボツリヌス毒素Ａ型［例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）または約２単位のＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）または約１０単位のボツリヌス毒素Ｂ型］を、下垂体からのプロラクチン放出の抑制に関与する視床下部の領域に注射し、それによって過プロラクチン血漿を誘発する。その結果、無月経が生じる。別法によれば、実施例５に記載したように、適量のボツリヌス毒素を導入したポリマーインプラントを、選択された視床下部標的部位に配置することもできる。このプロトコールによって、ＧｎＲＨならびにＬＨおよびＦＳＨ分泌のどちらかまたは両方の直接抑制によって排卵が抑制される上記実施例５の避妊法の代替法として、女性に使用される有効な避妊法が得られる。
【０１１１】
本発明の方法による頭蓋内神経毒注射または制御放出神経毒インプラントの埋込みは、先端巨大症のような種々の内分泌障害を有する患者のための安全かつ有効な治療法を与えるか、または避妊を達成することができる。このように、本発明の方法を使用して、先端巨大症、クッシング病および甲状腺機能亢進症を包含する種々の内分泌障害を治療することができ、有効な避妊法をも与えることができる。
【０１１２】
本発明による内分泌障害の治療のための頭蓋内神経毒投与法は、下記のものを含む多くの利点および長所を有する：
１．内分泌障害の症状を劇的に軽減することができる；
２．内分泌障害の症状を、１回の神経毒注射につき約２〜約４ヶ月間、ならびに、制御放出神経毒インプラントの埋込み時には約１年〜約５年間にわたり、軽減することができる；
３．注射されたかまたは埋込まれた神経毒は、頭蓋内標的組織部位に特異的な視床下部放出因子および／または下垂体ホルモンの分泌抑制作用を発揮する；
４．注射されたかまたは埋込まれた神経毒は、頭蓋内注射または埋込み部位から拡散するかまたは輸送される傾向をほとんど示さないかまたは示さない；
５．本発明の神経毒の頭蓋内注射または埋込みによって、有意の望ましくない副作用がほとんど生じないかまたは生じない；
６．頭蓋内注射される神経毒の量は、他の投与経路（即ち、筋肉内、括約筋内、経口または非経口）に必要とされる同じ神経毒の量よりかなり少なくして、同等のゴナドトロピン抑制作用を得ることができる；
７．本発明の方法のゴナドトロピン抑制作用は、患者のより高い可動性、より積極的な態度、および生活の質の向上という望ましい副作用を生じうる；
８．全身毒性を示さずに、有効治療用量の神経毒を長期間にわたって頭蓋内標的組織に供給することができる。
【０１１３】
本発明を、特定の好ましい方法に関して詳しく説明したが、本発明の範囲内に含まれる他の態様、修正法および改変法も可能である。例えば、種々の神経毒を本発明の方法に効果的に使用することができる。さらに、本発明は、２つまたはそれ以上の神経毒（例えば、２つまたはそれ以上のボツリヌス毒素）を、同時にまたは連続的に投与する頭蓋内投与法を包含する。例えば、臨床反応の消失または中和抗体が現れるまで、ボツリヌス毒素Ａ型を投与し、次に、ボツリヌス毒素Ｂ型を投与することができる。別法によれば、ボツリヌス毒素血清型Ａ〜Ｇのいずれか２つまたはそれ以上の組み合わせを頭蓋内投与して、所望の治療効果の開始および期間を調節することができる。さらに、神経毒を投与する前に、それと同時に、またはその後に、非毒素化合物を頭蓋内投与して、神経毒（ボツリヌス毒素など）がその比較的長い持続抑制作用を発揮しはじめる前に、視床下部放出因子または下垂体ホルモンの分泌抑制の向上したかまたはより速い開始のような補助作用を与えることができる。
【０１１４】
本発明は、神経毒の頭蓋内投与によって内分泌障害を治療するための薬剤の製造における、神経毒（ボツリヌス毒素など）の使用をも包含する。
【０１１５】
上記した全ての文献、論文、特許、出願および公開は、その全体が本発明の開示の一部を構成するものとする。
従って、特許請求の範囲に記載した思想および範囲は、上記の好ましい態様の記載に限定すべきではない。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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