(57)【要約】本発明はチオ尿素化合物及びこれを含有する薬学的組成物に関し、特にバニロイド受容体（ＶＲ）に対する拮抗剤として新規なチオ尿素化合物及びこれを含有する薬学的組成物に関する。バニロイド受容体の活性と関連された疾患には疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、手術後疼痛、片頭痛、関節痛、神経障害、神経損傷、糖尿病性神経病、神経変性疾患、神経性皮膚疾患、脳卒中、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、喘息もしくは慢性閉塞性肺疾患等の呼吸器異常、皮膚、目、もしくは粘膜の刺激、発熱、胃−十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患、及び炎症性疾患等が含まれ得る。本発明はこれら疾患の予防、治療のための薬学的組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（Ｉ）で表れる化合物またはその薬学的に許容される塩：
【化１】
2004506714.tif 000063
式中、Ｘは硫黄または酸素原子であり；
Ｒ１はハロゲンで置換または非置換された炭素数１〜５の低級アルキルスルホニル基、炭素数１〜５のアリールスルホニル基または低級アルキルカルボニル基であり；
Ｒ２は水素原子、メトキシ基、またはハロゲンであり；
Ａが−ＮＨＣＨ２−である場合、Ｂは
【化２】
2004506714.tif 000064
（式中、ｎは０または１）であり、
または
Ａが−ＣＨ２−である場合、Ｂは４−ｔ−ブチルベンジル、３，４−ジメチルフェニルエチル、
【化３】
2004506714.tif 000065
、またはオレイル基であり；
Ｙは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２−であり；
Ｒ３は水素原子、または炭素数１〜５の低級アルキル基であり；
Ｒ４は炭素数１〜５の低級アルキル基またはフェニル基である。
【請求項２】
薬学的に許容される担体と共に活性成分として、請求項１に記載の化学式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含有する薬学的組成物。
【請求項３】
薬学的に許容される担体と共に活性成分として請求項１に記載の化学式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、手術後疼痛、片頭痛、関節痛、神経障害、神経損傷、糖尿病性神経病、神経変性疾患、神経性皮膚疾患、脳卒中、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、喘息もしくは慢性閉塞性肺疾患等の呼吸器異常、皮膚、目、もしくは粘膜の刺激、発熱、胃−十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患、または炎症性疾患の予防または治療に有効な量で含有する、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
化学式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される化合物を、治療上有効な量で投与することを含む、疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、手術後疼痛、片頭痛、関節痛、神経障害、神経損傷、糖尿病性神経病、神経変性疾患、神経性皮膚疾患、脳卒中、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、喘息もしくは慢性閉塞性肺疾患等の呼吸器異常、皮膚、目、もしくは粘膜の刺激、発熱、胃−十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患、または炎症性疾患の予防または治療のための方法。
【請求項５】
化学式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される化合物の、バニロイド受容体に対する拮抗剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明はチオ尿素化合物及びこれを含有する薬学的組成物に関し、特にバニロイド受容体（Ｖａｎｉｌｌｏｉｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＶＲ）に対する拮抗剤として優れた効果を持つチオ尿素化合物及びこれを含有する薬学的組成物に関する。
【０００２】
従来技術
バニロイド受容体の活性と関連した疾患には疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、手術後疼痛、片頭痛、関節痛、神経障害、神経損傷、糖尿病性神経病、神経変性疾患、神経性皮膚疾患、脳卒中、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、喘息と慢性閉塞性肺疾患等の呼吸器異常、皮膚、目、もしくは粘膜の刺激、発熱、胃−十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患、および炎症性疾患等が含まれ得る。本発明はこれら疾患の予防または治療のための薬学的組成物を提供する。
【０００３】
但し、上記の疾患は例示のためのものであるだけで、上記の例でバニロイド受容体拮抗剤の臨床適用範囲を限定するものではない。
【０００４】
カプサイシン（８−メチル−Ｎ−バニリル−６−ノネンアミド）は唐辛子の主なる辛味成分である。唐辛子は香辛料としてだけでなく伝統医薬として、胃腸疾患ならびに特に局所適用で疼痛および炎症の治療剤として長い間使用されてきた（ＳｚａｌｌａｓｉおよびＢｌｕｍｂｅｒｇ， １９９９， Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｖ． ５１， ｐｐ１５９−２１１）。カプサイシンは非常に多様な生物学的活性を示すが、心血管系および呼吸器系に効果を示すだけでなく、局所適用時に疼痛と刺激性を誘発する。しかし、カプサイシンはこのような疼痛誘発後に脱感作を誘導して、カプサイシンそのものだけでなく他の有害刺激に対しても疼痛を感じないようにする。このような特性に基づきカプサイシン、ならびにオルバニール（ｏｌｖａｎｉｌ）、ヌバニール（ｎｕｖａｎｉｌ）、ＤＡ−５０１８、ＳＤＺ−２４９４８２、レシニフェラトキシン（ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ）等の類似体が鎮痛剤、尿失禁治療剤または皮膚疾患治療剤として使用されているか開発中にある（ＷｒｉｇｇｌｅｗｏｒｔｈおよびＷａｌｐｏｌｅ， １９９８， Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ２３， ｐｐ５３１−５３８）。
【０００５】
機械的、熱的、および化学的有害刺激の伝達は主に細い無随神経（Ｃ−繊維）と薄い有髄神経（Ａ−繊維）の１次求心性神経繊維によるものであるが、カプサイシンおよびバニロイド（ｖａｎｉｌｌｏｉｄ）と通称されるその類似体の主なる作用部位もこれら有害刺激を伝達する神経繊維に存在する。カプサイシンはこれら神経に存在する受容体に作用して、カルシウムおよびナトリウム等の１価および２価のカチオンを強力に流入させることにより、強力な刺激を起こした後、神経機能を遮断することにより強力な鎮痛効果を発揮する（Ｗｏｏｄら、１９８８， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ８， ｐｐ３２０８−３２２０）。バニロイド受容体（ＶＲ−１）は最近になってクローニングされその存在が明確になった（Ｃａｔｅｒｉｎａら、１９９７， Ｎａｔｕｒｅ ３８９， ｐｐ８１６−８２４）。この受容体はカプサイシン類似体（バニロイド）だけでなく、プロトンおよび熱刺激等の多様な有害刺激も伝達することが明らかになった（Ｔｏｍｉｎａｇａら、１９９８， Ｎｅｕｒｏｎ ２１， ｐｐ５３１−５４３）。この事実からバニロイド受容体は多様な有害刺激に対する統合的調節者として機能し、疼痛及び有害刺激伝達において重要な機能を果たすと考えられる。近年、バニロイド受容体をコードする遺伝子が除去されたノックアウトマウスが製造された（Ｃａｔｅｒｉｎａら、２０００， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８８， ｐｐ３０６−３１３； Ｄａｖｉｓら、２０００， Ｎａｔｕｒｅ ４０５， ｐｐ１８３−１８７）。一般行動においては正常マウスと差異がなく、熱刺激および熱性疼痛に対してはその反応が顕著に減弱されたものとして示され、有害シグナル伝達におけるこの受容体の重要性が再確認された。ところが、カプサイシンのような外因性リガンドではない、実際バニロイド受容体で有害刺激伝達に関与する内因性リガンドとしては、プロトン以外には知られていない。１２−ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（１２−ＨＰＥＴＥ）で代表されるロイコトリエン代謝体（Ｈｗａｎｇら、２０００， ＰＮＡＳ １１， ｐｐ６１５５−６１６０）と、アナンダマイド（ａｎａｎｄａｍｉｄｅ）等のアラキドン酸誘導体（Ｚｙｇｍｕｎｔら、２０００， Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｓｃｉ． ２１， ｐｐ４３−４４）が、この受容体に対する最も有望な内因性リガンドとして作用し、プロトンは直接的なリガンドであると言うよりは、受容体刺激伝達活性を持った補助因子として作用すると考えられ。
【０００６】
このようにカプサイシン感受性感覚神経細胞及びその細胞に存在するバニロイド受容体は、全身に分布して痛覚と有害刺激の伝達において基本的な機能を果たすだけでなく、神経性炎症の発現にもやはり重要因子として作用して、神経障害、神経損傷、脳卒中、喘息、慢性閉塞性肺疾患、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、発熱、皮膚疾患、及び炎症性疾患の病因と密接な関連性を持つ。最近では神経障害性疾患との相関性も提示されている（ＷＯ９９／００１２５）。最近には胃腸管損傷でカプサイシンに反応性を示す求心性感覚神経の役割が特に注目されているが、求心性神経はＣＧＲＰ（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）等の末梢神経ペプチドを遊離して胃腸微細血流を改善し、胃の損傷に対する防御作用を示すと共に、交感神経系を刺激して胃腸損傷を誘発する二重的性格を発揮する可能性も提示された（Ｒｅｎら、２０００， Ｄｉｇ． Ｄｉｓ． Ｓｃｉ． ４５， ｐｐ８３０−８３６）。バニロイド受容体拮抗剤はこのように多様な機能を遂行するバニロイド受容体を遮断することにより、上記の多様な疾患に対して予防または治療の目的で使用され得る可能性が非常に高いと判断される。
【０００７】
理論上、この受容体に対する拮抗剤は疼痛及び神経性炎症に対して相当な抑制能を発揮することが予想できるが、今までほとんど唯一に知られたこの受容体に対する競合的拮抗剤であるカプサゼピン（ｃａｐｓａｚｅｐｉｎｅ）の場合、有意な鎮痛効果および消炎効果を発揮できないことが知られている（ＰｅｒｋｉｎｓおよびＣａｍｐｂｅｌｌ， １９９２， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １０７， ｐｐ３２９−３３３）。したがって、これに対する研究は足踏み状態にあった。しかし、最近カプサゼピンの鎮痛作用に対する動物実験結果で有意な結果が報告され（Ｋｗａｋら、１９９８， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ８６， ｐｐ６１９−６２６； Ｓａｎｔｏｓおよびｃａｌｉｘｔｏ， １９９７， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｌｅｔｔ． ２３５， ｐｐ７３−７６）、特に本発明者等は実験室での実験を通じて明らかになったバニロイド受容体の強力な拮抗剤に対する動物実験を通じて、その鎮痛及び消炎作用を明確にし、この事実によりバニロイド受容体拮抗剤の鎮痛および消炎剤としての開発可能性が有力に示唆された。但し、本研究で導出されたバニロイド受容体の拮抗剤は主にそれ自体の拮抗活性に基づいて作用すると考えられるが、体内に吸収された後代謝過程を経て作用剤に変換され、その薬理活性を示す可能性も排除されない。
【０００８】
上述した問題点を解決するために、本発明は、バニロイド受容体に対して選択的に拮抗することができ、刺激性を全然示さない一方、鎮痛および消炎効果を示す新規化合物及びこれを含有する薬学的組成物を提供することをその課題とする。
【０００９】
発明の開示
上記目的を達成するために、本発明は次の化学式（Ｉ）の新規化合物を提供する：
【化４】
2004506714.tif 000002
式中、Ｘは硫黄または酸素原子であり；
Ｒ１はハロゲンで置換または非置換された炭素数１〜５の低級アルキルスルホニル基、炭素数１〜５のアリールスルホニル基または低級アルキルカルボニル基であり；
Ｒ２は水素原子、メトキシ基、またはハロゲンであり；
Ａが−ＮＨＣＨ２−である場合、Ｂは
【化５】
2004506714.tif 000003
（式中、ｎは０または１）であり、
または
Ａが−ＣＨ２−である場合、Ｂは４−ｔ−ブチルベンジル、３，４−ジメチルフェニルエチル、
【化６】
2004506714.tif 000004
、またはオレイル基であり；
Ｙは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２−であり；
Ｒ３は水素原子、または炭素数１〜５の低級アルキル基であり；
Ｒ４は炭素数１〜５の低級アルキル基またはフェニル基である。
【００１０】
本発明はまた、上記化学式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を有効成分として含む、薬学的組成物を提供する。
【００１１】
本発明に係る化合物は、下記の反応式により化学的に合成され得る。しかし、これらは本発明を単に例示するためのものであって、本発明がこれらに限定されるものではない。
2004506714.tif 000005
【００１２】
上記反応式１で示されるように、４−アミノベンジルアミンを選択的にＢｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）基で保護することにより化合物１−１を合成した。化合物１−１のアミンを様々な種類のスルホニルクロライドまたはアシルクロライド試薬と反応させて化合物１−２を合成し、化合物１−２からＢｏｃ基を酸性条件下で除去した後、様々な種類のイソチオシアネート系化合物と反応させて化合物１−４ａ〜１−４ｈを製造した。
2004506714.tif 000006
【００１３】
上記反応式２で示されるように、３−メトキシ−４−ニトロベンジルクロライドにアジド基を導入してからアジド基を還元させた後、Ｂｏｃ基で保護して化合物２−３を合成した。化合物２−３のニトロ基を還元してアミン化合物２−４を製造した後、メタンスルホニルアミノ基（メシル基）を導入して化合物２−５を合成し、Ｂｏｃ基を除去してアミン化合物２−７を合成した。アミン化合物２−７を１，１−チオ−１Ｈ−カルボニル−ジ−２−ピリドンで処理して、主要中間体であるイソチオシアネート化合物２−９を合成した。化合物２−９と既に製造されたアジド化合物を反応させて、化合物２−１３〜２−１６を製造した。
【００１４】
上記式でＲＢ＝Ｈである場合、出発物質として４−ニトロベンジルクロライドを使用した点を除いては、上記の工程に従って化合物２−８を合成し、これをアジド化合物と反応させて、化合物２−１０〜２−１２、２−１７、および２−１８を製造した。
2004506714.tif 000007
【００１５】
上記反応式３で示されるように、化合物３−１を出発物質として常法によりアミン塩３−６を合成し、次いでこれをイソチオシアネート化合物２−８と反応させて、化合物３−７および３−８を製造した。
2004506714.tif 000008
【００１６】
４−メタンスルホニルアミノフェニル酢酸のペンタフルオロフェニルエステルと公知のアミンとを縮合して、化合物４−１〜４−４を製造した。
【００１７】
本発明に係る化学式（Ｉ）の化合物は薬学的に許容される担体、アジュバント、または希釈剤を含有する薬学的組成物として提供することができる。例えば、本発明の化合物は注射液の製造に通常使用されるオイル、プロピレングリコール、または他の溶媒に溶解させることができる。適当な担体としては特に限定されないが、例えば、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物性オイル、及びミリスチン酸イソプロピル等が挙げられる。局所適用のためには本発明の化合物を軟膏やクリームに剤形化することができる。
【００１８】
本発明の化合物を活性成分として含有する薬学的組成物は、急性、慢性、炎症性、もしくは神経障害性疼痛の治療、膀胱過敏症もしくは過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）の治療、喘息の治療、神経変性性疾患の予防もしくは治療、または神経性皮膚疾患、皮膚、目、粘膜の刺激に対する予防もしくは治療のために使用され得る。
【００１９】
以下、剤形方法及び賦形剤を説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００２０】
本発明に係る化合物は、薬学的に許容される塩の形態でも使用することができ、単独でまたは他の薬学的活性化合物と結合もしくは混合して使用され得る。
【００２１】
本発明の化合物は生理食塩水および５％デキストロースのような水溶性溶媒、または植物性オイル、合成脂肪酸グリセライド、高級脂肪酸エステル、およびプロピレングリコールのような非水溶性溶媒に化合物を溶解、懸濁、または乳化させることにより注射剤に剤形化され得る。本発明の剤形には溶解剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、及び防腐剤のような従来の添加剤が含まれる。
【００２２】
本発明に係る化合物の好ましい投与量は患者の状態及び体重、特定疾患の程度、薬物形態、投与経路及び期間を含む様々な要因により異なるが、当業者により適切に選択され得る。好ましくは本発明の化合物を１日０．００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇで、より好ましくは０．０１〜３０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量で投与する。投与は１日に１回行なうことができ、数回にわけて投与することも可能である。薬学的組成物中の本発明の化合物は組成物の総重量に対して０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜１重量％の量で存在すべきである。
【００２３】
本発明の薬学的組成物はラット、マウス、家畜、人間等の哺乳動物被験者に多様な経路で投与され得る。容易に予想される投与方法としては、例えば、経口投与、直腸投与、ならびに静脈内、筋肉内、皮下、子宮内、硬膜、および脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射が含まれる。
【００２４】
発明の実施の最良の形態
以下、実施例を通じて本発明をさらに具体的に説明するが、いかなる様式においても本発明がこれら実施例に限定されるものではないことを理解すべきである。
【００２５】
実施例１〜実施例８
実施例１〜実施例８は３つの段階（第１、２、３段階）に分けられ、各化合物の一般的な合成法は以下の通りである。
【００２６】
第１段階：化合物１−２の一般的な合成法
化合物１−１（５．３ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）に溶かした後０℃に冷却し、ここにアシルクロライド（６．３４ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応混合物を１モルの塩酸溶液で中和した後、水で希釈してジクロロメタンで数回抽出した。抽出した有機層を集めて水および飽和塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝１／１）で精製して、化合物１−２を得た。
【化７】
2004506714.tif 000009
2004506714.tif 000010
【００２７】
第２段階：化合物１−３の一般的な合成法
化合物１−２（４．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶かした後０℃に冷却し、ここにトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を徐々に加えた。得られた混合物を０℃で１時間３０分間攪拌した後、溶媒を減圧濃縮して朱黄色残渣を得た。残渣をエチルエーテルで洗浄し濾過して、化合物１−３を得た。
【化８】
2004506714.tif 000011
2004506714.tif 000012
【００２８】
第３段階：化合物１−４の一般的な合成法
化合物１−３（０．３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（０．３８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で窒素下にて１時間攪拌した。ここに２，２−ジメチル−プロピオン酸３−（３，４−ジメチルフェニル）−２−イソチオシアネートメチルプロピルエステル（０．３８ｍｍｏｌ）を加えた後、得られた混合物を２４時間攪拌した。反応混合物を水で希釈してエチルアセテートで数回抽出して得た有機層を、水と飽和塩化ナトリウム水溶液で連続して洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝３／２）で精製して、化合物１−４を得た。
【化９】
2004506714.tif 000013
2004506714.tif 000014
2004506714.tif 000015
【化１０】
2004506714.tif 000016
【化１１】
2004506714.tif 000017
【化１２】
2004506714.tif 000018
【化１３】
2004506714.tif 000019
【化１４】
2004506714.tif 000020
【化１５】
2004506714.tif 000021
【化１６】
2004506714.tif 000022
【化１７】
2004506714.tif 000023
【００２９】
実施例９〜実施例１７
第１段階：４−クロロメチル−２−メトキシ−１−ニトロベンゼン（２−１）の合成
（３−メトキシ−４−ニトロフェニル）メタノール（４．４３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（１３．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却した後、メタンスルホニルクロライド（６．６４ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。得られた混合物を室温で窒素下にて２４時間攪拌した。混合物に塩化アンモニウム溶液を加えて反応を終結させ、水で希釈した後ジクロロメタンで数回抽出した。採集した有機層を水と塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝４／１）で精製して、黄色の固体として化合物２−１（収率：９３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８６（ｄ， １Ｈ）， ７．０５（ｓ， １Ｈ）， ６．９８（ｄ， １Ｈ）， ４．５６（ｓ， ２Ｈ）， ３．９９（ｓ， ３Ｈ）
【００３０】
第２段階：４−アジドメチル−２−メトキシ−１−ニトロ−ベンゼン（２−２）の合成
化合物２−１（４．１２ｍｍｏｌ）とアジ化ナトリウム（１６．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶かした後、反応混合物を室温で窒素下にて１時間攪拌した。反応混合物を水で希釈してからエチルアセテートで数回抽出した後、有機層を集めて水と飽和塩化ナトリウム水溶液で連続して洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝３／１）で精製して、黄色の固体として化合物２−２（収率：９５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８７（ｄ， １Ｈ）， ７．０５（ｓ， １Ｈ）， ６．９９（ｄ， １Ｈ）， ４．４５（ｓ， ２Ｈ）， ３．９９（ｓ， ３Ｈ）
【００３１】
第３段階：（３−メトキシ−４−ニトロ−ベンジル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２−３）の合成
化合物２−２（３．９１ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（７．８３ｍｍｏｌ）、および水（７．８３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶かした後、室温で２４時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮して得た残渣をエタノール（２０ｍＬ）に溶かした後、Ｂｏｃ２Ｏ（１．７１ｇ）を加えて得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮した後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝２／１）で精製して、黄色の液体として化合物２−３（収率：８６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８３（ｄ， １Ｈ）， ７．０２（ｓ， １Ｈ）， ６．９３（ｄ， １Ｈ）， ５．０１（ｂｒｓ， １Ｈ）， ４．３５（ｄ， ２Ｈ）， ３．９５（ｓ， ３Ｈ）， １．４７（ｓ， ９Ｈ）
【００３２】
第４段階：（４−アミノ−３−メトキシベンジル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２−４）の合成
化合物２−３（３．１３ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶かした後、１０％パラジウム／炭素触媒（８５ｍｇ）を加えて、得られた混合物を室温で水素置換下に１時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮して褐色の液体として化合物２−４（収率：９０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．６−６．７（ｍ， ３Ｈ）， ４．１９（ｄ， ２Ｈ）， ３．８８（ｓ， ３Ｈ）， １．４６（ｓ， ９Ｈ）
【００３３】
第５段階：（４−メタンスルホニルアミノ−３−メトキシベンジル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２−５）の合成
化合物２−４（３．１３ｍｍｏｌ）を出発物質として用いた点を除いては、化合物１−２ａの合成方法と同一の手順に従い、ピンク色の固体として化合物２−５（収率：６７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４７（ｄ， １Ｈ）， ６．８６（ｍ， ２Ｈ）， ６．７４（ｓ， １Ｈ）， ４．８８（ｂｓ， １Ｈ）， ３．８８（ｓ， ３Ｈ）， ２．９４（ｓ， ３Ｈ）， １．４７（ｓ， ９Ｈ）
【００３４】
第６段階：４−メタンスルホニルアミノ−３−メトキシベンジルアンモニウムトリフルオロアセテート（２−７）の合成
化合物２−５（２．１ｍｍｏｌ）を出発物質として用いた点を除いては、化合物１−３ａの合成方法と同一の手順に従い、緑色の固体として化合物２−７（収率：８７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ８．１６（ｂｓ， ３Ｈ）， ７．２９（ｄ， １Ｈ）， ７．２０（ｓ， １Ｈ）， ６．９９（ｄ， １Ｈ）， ４．００（ｓ， ２Ｈ）， ３．８２（ｓ， ３Ｈ）， ２．９５（ｓ， ３Ｈ）
【００３５】
第７段階：化合物（２−８および２−９）の一般的な合成法
化合物２−６または２−７（１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（１２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で窒素下にて１時間攪拌した。ここに１，１−チオ−１Ｈ−２−カルボニル−ジ−２−ピリドン（１２ｍｍｏｌ）を加えた後、２４時間攪拌した。反応混合物を水で希釈しエチルアセテートで数回抽出して得た有機層を、水と飽和塩化ナトリウム水溶液で連続して洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧濃縮した。このようにして得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝３／２）で精製して、化合物２−８と２−９を得た。
【化１８】
2004506714.tif 000024
2004506714.tif 000025
【００３６】
第８段階：化合物（２−１０〜２−１８）の一般的な合成法
周知の方法に従いアジド化合物（０．５ｍｍｏｌ）、リンドラー触媒（Ｌｉｎｄｌｅｒｓ ｃａｔａｌｙｓｔ）（５０ｍｍｏｌ）、及び化合物２−８をエタノール（５ｍＬ）に溶かした後、水素雰囲気下で２時間水素反応させた。反応混合物を濾過して濾液を減圧濃縮し、濃縮液をカラムクロマトグラフィ（溶出液：エチルアセテート／ヘキサン＝１／１）で精製して、化合物２−１０〜２−１８を得た。
【化１９】
2004506714.tif 000026
2004506714.tif 000027
2004506714.tif 000028
【化２０】
2004506714.tif 000029
【化２１】
2004506714.tif 000030
【化２２】
2004506714.tif 000031
【化２３】
2004506714.tif 000032
【化２４】
2004506714.tif 000033
【化２５】
2004506714.tif 000034
【化２６】
2004506714.tif 000035
【化２７】
2004506714.tif 000036
【化２８】
2004506714.tif 000037
【００３７】
実施例１８〜実施例１９
第１段階：化合物（３−１）の一般的な合成法
Ｎ−（ジフェニルメチレングリシン）エチルエステル（１．８３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かした後、５０％水酸化ナトリウム溶液（３．６６ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムブロマイド（１．８３ｍｍｏｌ）、及びハロゲン化アルキル（２．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した後、６Ｎ塩酸溶液で中和して水で希釈した後、ジクロロメタンで数回抽出した。得られた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥および濾過し、濾液を減圧濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝１０／１）で精製して、化合物３−１を得た。
【化２９】
2004506714.tif 000038
2004506714.tif 000039
【００３８】
第２段階：化合物（３−２）の一般的な合成法
化合物３−１（１．１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした後、１Ｎ塩酸溶液でｐＨ４になるよう調節して混合物を室温で３０分間攪拌した。ここにエチルアセテート（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）を加えた後、形成された水層を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ９になるように中和してエチルアセテートで数回抽出した。このようにして得られた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濾過した後に濾液を減圧濃縮し、濃縮液をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝２／１）で精製して、化合物３−２を得た。
【化３０】
2004506714.tif 000040
2004506714.tif 000041
【００３９】
第３段階：化合物（３−３）の一般的な合成法
化合物３−２（０．６８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶かした後、０℃に冷却して（Ｂｏｃ）２Ｏ（０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した後、減圧濃縮して得た残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝４／１）で精製して、化合物３−３を得た。
【化３１】
2004506714.tif 000042
2004506714.tif 000043
【００４０】
第４段階：化合物（３−４）の一般的な合成法
水素化リチウムアルミニウム（１．７９ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（５ｍＬ）に懸濁させて０℃に冷却し、ここに化合物３−３（０．４８ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（５ｍＬ）に溶かした溶液を滴加した。室温で５時間攪拌した後に反応混合物を再び０℃に冷却し、水（７００μｌ）、ＮａＯＨ（１．４ｍＬ）、および水（２．１ｍＬ）を順に加え継続して攪拌した。この反応混合物をエチルアセテートで洗浄、濾過して濾液を減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：エチルアセテート／ヘキサン＝４／１）で精製して、化合物３−４を得た。
【化３２】
2004506714.tif 000044
2004506714.tif 000045
【００４１】
第５段階：化合物（３−５）の一般的な合成法
化合物３−４（０．７１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．８ｍｍｏｌ）、及び触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）をジクロロメタン（７ｍＬ）に溶かして０℃に冷却した後、トリメチルアセチルクロライド（２．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した後、反応混合物をジクロロメタンで希釈して１Ｎ ＨＣｌ、水、飽和塩化ナトリウム水溶液でそれぞれ１回ずつ順に洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し濾過した。濾液を減圧濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：エチルアセテート／ヘキサン＝１／４）で精製して、化合物３−５を得た。
【化３３】
2004506714.tif 000046
2004506714.tif 000047
【００４２】
第６段階：化合物（３−６）の一般的な合成法
化合物３−５（０．７１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶かした後、０℃に冷却してトリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を徐々に加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した後、減圧濃縮して精製されていないアミン塩３−６を得た。
【化３４】
2004506714.tif 000048
2004506714.tif 000049
【００４３】
第７段階：化合物（３−７および３−８）の合成法
化合物３−６（０．４６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶かした溶液にトリエチルアミン（０．４６ｍｍｏｌ）を加えて室温で窒素下にて３０分間攪拌した。ここに化合物２−８（０．４６ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２４時間攪拌した。反応混合物を水で希釈した後エチルアセテートで数回抽出して、得られた有機層を水と塩水で洗浄してから無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。このようにして得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝１／１）で精製して、化合物３−７または３−８を得た。
【化３５】
2004506714.tif 000050
2004506714.tif 000051
【化３６】
2004506714.tif 000052
【化３７】
2004506714.tif 000053
【００４４】
実施例２０〜実施例２３
化合物（４−１〜４−４）の一般的な合成法
アミン化合物（０．５ｍｍｏｌ）と（４−メタンスルホニルアミノフェニル）酢酸ペンタフルオロフェニルエステル（０．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶かした溶液を室温で２４時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮して得た残渣をカラムクロマトグラフィ（溶出液：ヘキサン／エチルアセテート＝１／２）で精製して化合物４−１〜４−４を得た。
【化３８】
2004506714.tif 000054
2004506714.tif 000055
【化３９】
2004506714.tif 000056
【化４０】
2004506714.tif 000057
【化４１】
2004506714.tif 000058
【化４２】
2004506714.tif 000059
【００４５】
以下で、本発明の化合物がバニロイド受容体の拮抗剤であることをカルシウム導入（Ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎｆｌｕｘ）試験で確認し、また鎮痛効果試験においても、これらが作用剤で示される刺激性を全く示さずに強い鎮痛効果を示すことが確認される。
【００４６】
実験例　生物学的効能の試験
（１）　４５Ｃａ導入実験
１） 新生ラットの脊髄後根神経節（ＤＲＧ）の分離及び１次培養
生後２日以内のＳＤ新生ラットを５分間氷中に置いて低温麻酔した後、７０％エタノールで消毒した。脊髄の全部位のＤＲＧを切り出し（Ｗｏｏｄら、１９８８， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ８， ｐｐ３２０８−３２２０）、１．２ｇ／ｌの重炭酸ナトリウム、５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンの添加されたＤＭＥ／Ｆ１２培地中に集めた。２００Ｕ／ｍｌコラゲナーゼおよび２．５ｍｇ／ｍＬのトリプシン中で別々に、ＤＲＧを３７℃でそれぞれ３０分ずつ連続してインキュベートした。１０％馬血清を含有するＤＭＥ／Ｆ１２培地で神経節を２回洗浄して、熱処理したパスツールピペットで破砕させた後、ニテックス４０メンブレン（Ｎｉｔｅｘ ４０ ｍｅｍｂｒａｎｅ）で濾過して単一細胞懸濁液を得た。これを遠心分離した後、細胞培養用培地に細胞濃度が一定水準になるように調節して再懸濁した。細胞培養用培地としては、１０％馬血清を含むＤＭＥ／Ｆ１２培地を、Ｃ６−神経膠腫細胞で馴化（コンフルエント単層培養で２日間）した同一の培地で１：１希釈したものを使用し、ＮＧＦ（神経成長因子）は最終濃度が２００ｎｇ／ｍｌがなるように添加した。分裂可能な非神経細胞を殺すためにシトシンアラビノシド （Ａｒａ−Ｃ、１００μＭ）が添加された培地で２日間細胞を増殖させた後、Ａｒａ−Ｃ非含有培地に交換した。再懸濁した細胞はポリ−Ｄ−オルニチンを１０μｇ／ｍｌ濃度で予めコートしたテラサキプレート（Ｔｅｒａｓａｋｉ ｐｌａｔｅ）に１５００〜１７００ニューロン／ウェルの密度になるように播種した。
【００４７】
２） ４５Ｃａ導入実験
２〜３日間１次培養したＤＲＧ神経細胞をＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ、ｐＨ７．４）で緩衝化されたＣａ２＋、Ｍｇ２＋非含有のＨＢＳＳ（Ｈ−ＨＢＳＳ）で４回洗浄して、平衡になるようにした。各ウェルの溶液を除去し、Ｈ−ＨＢＳＳを溶媒として試験化合物とカプサイシン（最終濃度０．５μＭ）および４５Ｃａ（最終濃度１０μＣｉ／ｍｌ）とを含有する培養液を各ウェルに加えて、室温で１０分間インキュベートした。テラサキプレートをＨ−ＨＢＳＳで６回洗浄後、オーブンで乾燥させた。各ウェルに１０μｌの０．３％ＳＤＳを加えて４５Ｃａを溶出させ、２ｍｌのシンチレーションカクテル（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｃｏｃｋｔａｉｌ）を各ウェルに加えて放射能を測定することにより、神経細胞に導入された４５Ｃａを定量した。試験化合物のバニロイド受容体に対する拮抗活性は０．５μＭ濃度におけるカプサイシンの反応性を最大反応として百分率で計算し、結果はＩＣ５０で表示した（表１）。
【００４８】
（２）　チャンネル活性アッセイ法
バニロイド受容体と連結されたカチオンチャンネルの電気的変化に基づき試験化合物の拮抗剤としての活性を解析し、実験方法は参考文献に従って実施した（Ｏｈら、１９９６， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １６， ｐｐ１６５９−１６６７）（表１）。
【表１】カルシウム導入及びパッチクランプ試験の結果
2004506714.tif 000060
ＮＲ： 無応答
＋：カプサゼピンと等しい拮抗活性
＋＋：カプサゼピンより１０倍高い拮抗活性
【００４９】
（３）鎮痛活性試験：フェニル−ｐ−キノン誘導性マウスライジング（捻じれ）試験
平均体重２５ｇの雄性ＩＣＲマウスを、１２時間明暗周期で調節された環境で飼育して実験に使用した。化学的刺激剤であるフェニル−ｐ−キノン（４．５ｍｇ／ｋｇの投与容量になるように、５％エタノールを含有する生理食塩水に溶解）０．３ｍＬを動物に腹腔内注射し、６分後から６分間腹部収縮の回数を測定した。１群に１０匹の動物を使用し、エタノール／Ｔｗｅｅｎ−８０／生理食塩水（１０／１０／８０）の溶媒に溶解した０．２ｍｌの試験化合物を、フェニル−ｐ−キノンの注射３０分前に腹腔内投与した。生理食塩水だけを投与した対照群での動物の捻じれ反応と比較して、試験薬物化合物投与群での捻じれ回数の減少を鎮痛効果の指標とした。鎮痛効果は％阻害率の式（％阻害率＝（Ｃ−Ｔ）／Ｃ×１００）により計算したが、ＣとＴはそれぞれ対照群と薬物処理群での捻じれ回数を示す（表２）。
【００５０】
実験結果から、本実験に使用した化合物の鎮痛効果が強力であることが示され、特にバニロイド受容体拮抗剤がこのように強力な鎮痛効果を示すことが明らかにされた事は大きな意義があり、この結果からバニロイド受容体拮抗剤の鎮痛剤としての可能性が示唆される。
【表２】フェニル−ｐ−キノンによるライジング（捻じれ）に対する鎮痛活性の試験結果
2004506714.tif 000061
【００５１】
（４） 消炎活性試験：ＴＰＡ（１２−０−テトラデカノイルフォルボル１３−アセテート）誘導マウスの耳浮腫試験
実験群当たり１０匹の雄性ＩＣＲマウス（体重２５〜３０ｇ）の右側耳にアセトンに溶かした２．５μｇのＴＰＡ３０μｌを局所的に処理し、１５分後アセトン自体またはアセトンに溶解した試験化合物溶液３０μｌを局所適用した。６時間後、同一の処理を再び適用した。ＴＰＡ処理後２４時間目に動物を屠殺し、６ｍｍ直径のパンチを用いて耳組織を切り出した。電子天秤で０．１ｍｇ単位まで耳組織の重量を測定し、対照群と比較した組織重量の増加を炎症の指標とした。％阻害率は以下の式により定義される：
％阻害率＝（Ｃ−Ｔ）／Ｃ×１００
式中、ＣとＴはそれぞれＴＰＡ処理群、ＴＰＡ＋薬物処理群での耳重量の増加を示す。
【００５２】
上記の実験から、バニロイド受容体拮抗剤は有意な消炎効果を発揮することが示される。この現象はバニロイド受容体の神経性炎症での作用と関連して理解され得るが、様々な炎症性疾患、特に神経性炎症疾患におけるバニロイド受容体拮抗剤の適用可能性を示唆している。
【表３】ＴＰＡ誘導マウスの耳浮腫試験
2004506714.tif 000062
【００５３】
産業上の利用可能性
本発明に係る化合物は、疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、手術後疼痛、片頭痛、関節痛、神経障害、神経損傷、糖尿病性神経病、神経変性疾患、神経性皮膚疾患、脳卒中、膀胱過敏症、過敏性腸症候群、喘息と慢性閉塞性肺疾患等の呼吸器異常、皮膚、目、もしくは粘膜の刺激、胃−十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患、ならびに炎症性疾患等の予防または治療に有用である。
【国際公開パンフレット】
2004506714.tif 000066
2004506714.tif 000067
2004506714.tif 000068
2004506714.tif 000069
2004506714.tif 000070
2004506714.tif 000071
2004506714.tif 000072
2004506714.tif 000073
2004506714.tif 000074
2004506714.tif 000075
2004506714.tif 000076
2004506714.tif 000077
2004506714.tif 000078
2004506714.tif 000079
2004506714.tif 000080
2004506714.tif 000081
2004506714.tif 000082
2004506714.tif 000083
2004506714.tif 000084
2004506714.tif 000085
2004506714.tif 000086
2004506714.tif 000087
2004506714.tif 000088
2004506714.tif 000089
2004506714.tif 000090
2004506714.tif 000091
2004506714.tif 000092
2004506714.tif 000093
2004506714.tif 000094
2004506714.tif 000095
2004506714.tif 000096
2004506714.tif 000097
2004506714.tif 000098
2004506714.tif 000099
2004506714.tif 000100
2004506714.tif 000101
2004506714.tif 000102
2004506714.tif 000103
2004506714.tif 000104
2004506714.tif 000105
2004506714.tif 000106
2004506714.tif 000107
2004506714.tif 000108
2004506714.tif 000109
2004506714.tif 000110
2004506714.tif 000111
2004506714.tif 000112
2004506714.tif 000113
2004506714.tif 000114
2004506714.tif 000115
2004506714.tif 000116
2004506714.tif 000117
2004506714.tif 000118
【国際調査報告】
2004506714.tif 000119
2004506714.tif 000120