(57)【要約】キマーゼ阻害剤として、又は活性化合物の合成中間体として有用な下記一般式（Ｉ）で表される新規なピロリジン誘導体；【化１】2004507539.tif 000061［式中、Ｒ１はシクロアルキル、置換又は非置換フェニル又はナフチル、インダニル、チエニル、フリル、置換又は非置換インドリル、ベンゾフリル、置換又は非置換ベンゾチエニル等；Ｒ２はＨ、アルキル、フェニル低級アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル低級アルキル；Ｒ３は（ｉ）置換又は非置換の単環性複素環基、（ｉｉ）置換又は非置換の、ベンゼン又はピリジンと縮合した複素環基、又は（ｉｉｉ） （ａ）の基であり、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立してＨまたはＯＨであるが、Ｒ４及びＲ５は同時にＨではなく、又は両者が結合してオキソを形成してもよく、ｎは０、１、２又は３である）又はその塩。
2004507539.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2004507539.tif 000054
［式中、Ｒ１はシクロアルキル基、置換又は非置換フェニル基、置換又は非置換ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、インダニル基、チエニル基、フリル基、置換又は非置換インドリル基、置換又は非置換ジヒドロインドリル基、ベンゾフリル基、ジヒドロベンゾフリル基、置換又は非置換ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノもしくはジオキシド、又はジヒドロベンゾチエニル基であり、該置換フェニル、ナフチル及びベンゾチエニル基はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、水酸基及び１〜３個のハロゲン原子を有してもいてもよい低級アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有し、および該置換インドリル及びジヒドロインドリル基は、その１位の窒素原子上に低級アルキル基及び低級アルキルカルボニル基から選ばれる置換基を有し；
Ｒ２は、水素原子、アルキル基、フェニル低級アルキル基、シクロアルキル基又はシクロアルキル低級アルキル基であり；
Ｒ３は、（ｉ）置換又は非置換不飽和単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゼン環又はピリジン環と縮合した置換又は非置換の、飽和又は不飽和の単環性複素環基であり、（ｉ）及び（ｉｉ）における該置換複素環基はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキルカルボニル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基から選ばれる１〜３個の置換基を有し、該フェニル及びフェノキシ置換基は更に、ハロゲン原子、低級アルキル基及びハロゲノ低級アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよい；又は（ｉｉｉ）式（ａ）：
【化２】
2004507539.tif 000055
（式中、Ａは低級アルキレン基、Ｄ１及びＤ２は同時にメチレン基であるか又はＤ１及びＤ２の一方がメチレン基で、他方がビニレン基であり、各メチレン基はオキソ基又は低級アルキル基で置換されていてもよく、および該ビニレン基は低級アルキル基で置換されていてもよく、Ｒ６はカルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基又はフェニル基で置換された低級アルキル基である）
の基であり；
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立して水素原子又は水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し；
ｎは０、１、２又は３である］、
で示される化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｒ１がＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基；フェニル基；ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びハロゲノ−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基；ナフチル基；テトラヒドロナフチル基；インダニル基；チエニル基；フリル基；インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキルカルボニル）インドリル基；ジヒドロインドリル基；ベンゾフリル基；ジヒドロベンゾフリル基；ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノもしくはジオキシド；又はジヒドロベンゾチエニル基、
Ｒ２が水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキル−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、
Ｒ３が、（ｉ）フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、及びピリジルから選ばれる不飽和単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾフラザニル又はそのＮ−オキシド、キノリル、ベンゾジオキソリル、及びイソキサゾロ［４，３−ｂ］ピリジニルから選ばれる、ベンゼン又はピリジンと縮合した飽和又は不飽和単環性複素環基で、（ｉ）及び（ｉｉ）における該複素環基はそれぞれ独立して、フッ素原子又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルカルボニル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく、該フェニルならびにフェノキシ置換基は更に、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びハロゲノ−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよい；又は（ｉｉｉ）式（ａ−１）から（ａ−４）：
【化３】
2004507539.tif 000056
（式中、ＡはＣ１〜Ｃ４アルキレン基、Ｒ６はカルボキシル基、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシカルボニル基又はフェニル基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル基）
のいずれかひとつの基、
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素原子又は水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し、
ｎが１又は２である、
請求項１記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
Ｒ１がＣ５〜Ｃ７シクロアルキル基；フェニル基；フッ素、塩素又は臭素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基；ナフチル基；テトラヒドロナフチル基；インダニル基；チエニル基；フリル基；インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）インドリル基；Ｎ−アセチルインドリル基；ジヒドロインドリル基；ベンゾフリル基；ジヒドロベンゾフリル基；ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノ又はジオキシド；或いはジヒドロベンゾチエニル基、
Ｒ２が水素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、フェニル−Ｃ１〜Ｃ２アルキル基、Ｃ５〜Ｃ７シクロアルキル基又はＣ５〜Ｃ７シクロアルキル−Ｃ１〜Ｃ２アルキル基、
Ｒ３が、（ｉ）フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル及びピリジルから選ばれる不飽和の単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾフラザニル又はそのＮ−オキシド、キノリル、ベンゾジオキソリル及びイソキサゾロ［４，３−ｂ］ピリジニルから選ばれる、ベンゼン又はピリジンと縮合している飽和又は不飽和の単環性複素環基であり、（ｉ）及び（ｉｉ）における該複素環基はそれぞれ独立して、フッ素又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ基、アセチル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基から選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく、当該フェニルおよびフェノキシ置換基は更に、フッ素又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基及びトリフルオロメチル基から選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく；又は（ｉｉｉ）式（ａ−１）から（ａ−４）：
【化４】
2004507539.tif 000057
（式中、ＡはＣ１〜Ｃ２アルキレン基、およびＲ６はカルボキシル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基又はフェニル基で置換されたＣ１〜Ｃ２アルキル基）
のいずれかひとつの基であり、
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素原子もしくは水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し、
ｎが１又は２である、
請求項２記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
一般式（Ｉ−Ａ）：
【化５】
2004507539.tif 000058
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｎは請求項１における定義と同じ）
で示される化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｎが請求項２における定義と同じである、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｎが請求項３における定義と同じである、請求項４記載の化合物。
【請求項７】
一般式（Ｉ−Ａ’）：
【化６】
2004507539.tif 000059
（式中、Ｒ３ａ及びＲ３ｂはそれぞれ独立して水素原子、低級アルキル基、低級アルキルカルボニル基であるか、又はハロゲン原子又はハロゲノ−低級アルキル基で置換されていてもよいフェニル基、Ｘは炭素原子又は硫黄原子、Ｙは酸素原子又は窒素原子、及び記号：
【化７】
2004507539.tif 000060
は単結合又は二重結合を意味し、およびＲ１、Ｒ２及びｎは請求項１における定義と同じ）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｘが炭素原子で、Ｙが酸素原子である、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが硫黄原子で、Ｙが窒素原子である、請求項７記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が置換又は非置換フェニル基、置換又は非置換のナフチル基又はベンゾチエニル基であり、該置換フェニル基及び置換ナフチル基がそれぞれ独立して、ハロゲン原子、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメチル基及び水酸基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有する、請求項７、８又は９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がイソプロピルである、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
以下の化合物から独立して選ばれる化合物：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（２−ナフチルメチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−エチル−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［１−（（１Ｒ）−１−メチルプロピル）（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル］−１−メチル−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；及び
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（４−メチル（１，２，３−チオジアゾール−５−イル））カルボキサミド。
【請求項１３】
活性成分として請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物を活性成分として含有することを特徴とする、キマーゼ阻害剤。
【請求項１５】
化合物が請求項１２に記載の化合物のいずれかひとつである、請求項１４記載の阻害剤。
【請求項１６】
活性成分として請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物を含有することを特徴とする、炎症性疾患に対する血管透過性阻害剤。
【請求項１７】
化合物が請求項１２に記載の化合物のいずれかひとつである請求項１６記載の阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、キマーゼ阻害剤として有用なピロリジン誘導体及びその合成中間体に関する。
【０００２】
背景技術
キモトリプシン様セリンプロテアーゼとして１９７５年に発見されたキマーゼは、肥満細胞の脱顆粒により放出される。キマーゼは、細胞外マトリックスおよび他の生物学的活性物質を切断出来ることが知られているが、アンギオテンシン変換酵素とは無関係にアンギオテンシンＩを血管収縮因子アンギオテンシンＩＩに変換する能力に多くの注目が寄せられている。これまでの研究によれば、ヒト心臓内でのアンギオテンシンＩＩの形成は、アンギオテンシン変換酵素よりもむしろキマーゼによって主として制御されていることが示唆されている［Ｃｉｒｃ． Ｒｅｓ． ６６， ８８３−８９０ （１９９０）］。従って、キマーゼは心臓肥大、心筋梗塞、血管肥厚及び血管形成術後の再狭窄の如き心血管学疾患の進行に重要な役割を果たすとみられる。
【０００３】
さらに、キマーゼは肥満細胞からのヒスタミン遊離を促進し、ヒスタミンとは無関係に微小血管透過性の持続的な亢進を誘発することが示されている［Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３５２， ９１−９８ （１９９８）］。よって、キマーゼが肥満細胞に関与していると知られているアレルギー性炎症反応の即時型においてだけでなく遅延型においても重要な役割をしている可能性は高い。
【０００４】
キマーゼおよびトリプターゼを含有する肥満細胞は主に結合組織に分布し、一方キマーゼを含まずトリプターゼを含有する肥満細胞は主に粘膜組織に存在する。加えて、腹腔内癒着形成を含む組織線維化の進行に伴い、キマーゼ活性が有意に増加することが報告されている［ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４０６， ３０１−３０４ （１９９７）， Ｊ． Ｓｕｒｇ． Ｒｅｓ． ９２， ４０−４４ （２０００）］。これらの知見は、キマーゼが組織線維化に関与していることを示唆している。
【０００５】
一連の疾病および合併症への関与の可能性に加えて、キマーゼが、例えば、マトリックス分解に関与する他の活性プロテアーゼの形成、炎症性サイトカインＩＬ−１βの前駆体の活性化、線維化における活性ＴＧＦ−βの形成、アテローム発生における泡沫細胞の形成と維持の促進、及びビッグエンドセリンから収縮活性のある３１アミノ酸長のエンドセリンへの変換などの種々の他の生理学的活性を有することが知られている。よって、キマーゼが血流調節、アレルギー、炎症、及び組織リモデリングにおいて重要な役割を果たしていることが示唆される。上記の情報を合わせると、キマーゼ阻害剤は抗アレルギー、抗炎症、抗再狭窄、又は抗動脈硬化剤として作用し、広範な疾病及び合併症に対する新規な治療を提供するものと期待される。
【０００６】
従来の研究は優れたキマーゼ阻害剤の発見に向けられており、様々な種類のキマーゼ阻害剤が報告されている。例えば、ＷＯ−Ａ−９３／２５５７４公報は、広範な化合物がキマーゼ阻害活性を有していることを開示しているが、具体的な活性データは開示していない。ＷＯ−Ａ−９３／２５５７４公報はかなり広範な請求項を含み、２８個の実施例を開示しているが、その中で、実施例２１の化合物は次の式（Ａ）を有している。
【化８】
2004507539.tif 000003
本発明化合物の下記式（Ｉ）は上記化合物（Ａ）を含んでいない。すなわち、下記式（Ｉ）のＲ３は不飽和単環性複素環基を意味するが、飽和単環性複素環基を意味しない。加えて、以下の実験例に示されるように、化合物（Ａ）のキマーゼ阻害活性は本発明化合物のそれに比べてはるかに弱いものである。
【０００７】
発明の開示
本発明の目的は、キマーゼ阻害活性を有する新規ピロリジン誘導体を提供することにある。本発明の他の目的は、活性成分として該新規ピロリジン誘導体と、薬学的に許容される担体又は希釈剤を含有することを特徴とする医薬組成物を提供することにある。本発明の更なる目的は、キマーゼ阻害剤を提供することである。
【０００８】
本発明のピロリジン誘導体は、下記式（Ｉ）：
【化９】
2004507539.tif 000004
［式中、Ｒ１はシクロアルキル基、置換又は非置換フェニル基、置換又は非置換ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、インダニル基、チエニル基、フリル基、置換又は非置換インドリル基、置換又は非置換ジヒドロインドリル基、ベンゾフリル基、ジヒドロベンゾフリル基、置換又は非置換ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノもしくはジオキシド、又はジヒドロベンゾチエニル基であり、該置換フェニル、ナフチル及びベンゾチエニル基はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、水酸基及び１〜３個のハロゲン原子を有してもいてもよい低級アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有し、および該置換インドリル及びジヒドロインドリル基は、その１位の窒素原子上に低級アルキル基及び低級アルキルカルボニル基から選ばれる置換基を有し；
Ｒ２は、水素原子、アルキル基、フェニル低級アルキル基、シクロアルキル基又はシクロアルキル低級アルキル基であり；
Ｒ３は、（ｉ）置換又は非置換不飽和単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゼン環又はピリジン環と縮合した置換又は非置換の、飽和又は不飽和の単環性複素環基であり、（ｉ）及び（ｉｉ）における該置換複素環基はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級アルキルカルボニル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基から選ばれる１〜３個の置換基を有し、該フェニル及びフェノキシ置換基は更に、ハロゲン原子、低級アルキル基及びハロゲノ低級アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよい；又は（ｉｉｉ）式（ａ）：
【化１０】
2004507539.tif 000005
（式中、Ａは低級アルキレン基であり、Ｄ１及びＤ２は同時にメチレン基（−ＣＨ２−）であるか又はＤ１及びＤ２の一方がメチレン基（−ＣＨ２−）で、他方がビニレン基（−ＣＨ＝ＣＨ−）であり、各メチレン基はオキソ基又は低級アルキル基で置換されていてもよく、および該ビニレン基は低級アルキル基で置換されていてもよく、およびＲ６はカルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基又はフェニル基で置換された低級アルキル基である）
の基であり；
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立して水素原子又は水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し；
ｎは０、１、２又は３である］、
で示される化合物またはその塩である。
【０００９】
本明細書及び請求の範囲中、「低級アルキル基」又は「低級アルキル」部なる用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖アルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル及びヘキシルが挙げられる。
【００１０】
「低級アルコキシ基」なる用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルコキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロピルオキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ及びヘキシルオキシが挙げられる。
【００１１】
「シクロアルキル基」は、３〜８個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。
【００１２】
「低級アルキレン基」なる用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキレン基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、イソブチレン、ペンチレン及びヘキシレンが挙げられる。
【００１３】
「低級アルキルカルボニル基」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキルで置換されたカルボニル基を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ペンタノイル及びヘキサノイルが挙げられる。
【００１４】
「ハロゲン原子」は、フッ素原子、臭素原子、塩素原子又はヨウ素原子を意味する。
【００１５】
Ｒ３における「不飽和単環性複素環基」は、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１から３個のヘテロ原子を含む、不飽和の５員〜７員、好ましくは５員又は６員の単環性複素環基を意味し、例えば、フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル及びピリジルが挙げられる。
【００１６】
Ｒ３における「ベンゼン環又はピリジン環と縮合した飽和又は不飽和単環性複素環基」は、ベンゼン環又はピリジン環と縮合した、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１〜３個のヘテロ原子を含む飽和又は不飽和の５員〜７員、好ましくは５員又は６員の単環性複素環基を意味し、例えば、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾフラザニル又はそのＮ−オキシド、キノリル、ベンゾジオキソリル及びイソキサゾロ［４，３−ｂ］ピリジニルが挙げられる。
【００１７】
Ｒ３における式（ａ）の基としては、例えば下記式：
【化１１】
2004507539.tif 000006
［式中、Ａ及びＲ６は前記と同じ］
で示される基が挙げられる。
【００１８】
本発明の好ましい化合物は、式（Ｉ）において、Ｒ１がＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基；フェニル基；ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びハロゲノ−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基；ナフチル基；テトラヒドロナフチル基；インダニル基；チエニル基；フリル基；インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキルカルボニル）インドリル基；ジヒドロインドリル基；ベンゾフリル基；ジヒドロベンゾフリル基；ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノもしくはジオキシド；又はジヒドロベンゾチエニル基、
Ｒ２が水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、フェニル−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキル−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、
Ｒ３が、（ｉ）フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、及びピリジルから選ばれる不飽和単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾフラザニル又はそのＮ−オキシド、キノリル、ベンゾジオキソリル、及びイソキサゾロ［４，３−ｂ］ピリジニルから選ばれる、ベンゼン又はピリジンと縮合した飽和又は不飽和単環性複素環基で、（ｉ）及び（ｉｉ）における該複素環基はそれぞれ独立して、フッ素原子又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルキルカルボニル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく、また該フェニルおよびフェノキシ置換基は更に、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びハロゲノ−Ｃ１〜Ｃ４アルキル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよい；又は（ｉｉｉ）式（ａ−１）から（ａ−４）：
【化１２】
2004507539.tif 000007
（式中、ＡはＣ１〜Ｃ４アルキレン基、Ｒ６はカルボキシル基、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシカルボニル基又はフェニル基で置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル基）
のいずれかひとつの基、
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素原子又は水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し、
ｎが１又は２である、
化合物またはその塩である。
【００１９】
本発明の更に好ましい化合物は、式（Ｉ）において、Ｒ１がＣ５〜Ｃ７シクロアルキル基；フェニル基；フッ素、塩素又は臭素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されたフェニル基；ナフチル基；テトラヒドロナフチル基；インダニル基；チエニル基；フリル基；インドリル基；Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）インドリル基；Ｎ−アセチルインドリル基；ジヒドロインドリル基；ベンゾフリル基；ジヒドロベンゾフリル基；ベンゾチエニル基又はそのＳ−モノ又はジオキシド；或いはジヒドロベンゾチエニル基、
Ｒ２が水素原子、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基、フェニル−Ｃ１〜Ｃ２アルキル基、Ｃ５〜Ｃ７シクロアルキル基又はＣ５〜Ｃ７シクロアルキル−Ｃ１〜Ｃ２アルキル基、
Ｒ３が、（ｉ）フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル及びピリジルから選ばれる不飽和の単環性複素環基；（ｉｉ）ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾフラザニル又はそのＮ−オキシド、キノリル、ベンゾジオキソリル及びイソキサゾロ［４，３−ｂ］ピリジニルから選ばれるベンゼン又はピリジンと縮合した飽和又は不飽和の単環性複素環基であり、（ｉ）及び（ｉｉ）における該複素環基はそれぞれ独立して、フッ素又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ基、アセチル基、シアノ基、カルボキサミド基、フェニル基及びフェノキシ基からなる群から選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく、当該フェニルおよびフェノキシ置換基は更に、フッ素又は塩素原子、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基及びトリフルオロメチル基から選ばれる１〜３個の置換基を有していてもよく；又は（ｉｉｉ）式（ａ−１）から（ａ−４）：
【化１３】
2004507539.tif 000008
（式中、ＡはＣ１〜Ｃ２アルキレン基、およびＲ６はカルボキシル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基又はフェニル基で置換されたＣ１〜Ｃ２アルキル基）
のいずれかひとつの基であり、
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立して水素原子または水酸基であるが、Ｒ４及びＲ５は同時に水素原子ではなく、又は両者が結合してオキソ基を形成し、
ｎが１又は２である、
化合物またはその塩である。
【００２０】
本発明の化合物（Ｉ）は、Ｒ４及びＲ５基の種類によって二つのグループに分類される。すなわち、Ｒ４及びＲ５基が結合してオキソ基を形成しているときは、該化合物は下記の式（Ｉ−Ａ）により示される。またＲ４及びＲ５基の一方が水素原子であり他方が水酸基であるときは、該化合物は下記の式（Ｉ−Ｂ）により示される。
【００２１】
【化１４】
2004507539.tif 000009
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｎは前記と同じ］
【００２２】
式（Ｉ−Ａ）の化合物は、式（Ｉ）における対応するＲ４及びＲ５のケト基が水分子の付加によって二つの水酸基に変換された構造を有していてもよい。
【００２３】
式（Ｉ−Ａ）の化合物は優れたキマーゼ阻害活性を有し、従って医薬として有用である。式（Ｉ−Ｂ）の化合物は、それらを酸化することによって式（Ｉ−Ａ）の化合物に変換することが出来、よって活性のある化合物（Ｉ−Ａ）を製造するための中間体として有用である。
【００２４】
式（Ｉ−Ａ）の化合物は経口投与で高い血中レベルを有し、優れたキマーゼ阻害活性を示す。化合物（Ｉ−Ａ）の特性は、Ｒ３の置換基の種類、特にＲ１や他の置換基などとＲ３の組み合わせに依るものである。
【００２５】
優れたキマーゼ阻害活性の観点において、特に好ましい化合物は、式（Ｉ−Ａ’）：
【化１５】
2004507539.tif 000010
（式中、Ｒ３ａ及びＲ３ｂはそれぞれ独立して水素原子、低級アルキル基、低級アルキルカルボニル基、又はハロゲン原子又はハロゲノ低級アルキル基で置換されていてもよいフェニル基、Ｘは炭素原子又は硫黄原子、Ｙは酸素原子又は窒素原子、及び記号：
【化１６】
2004507539.tif 000011
は単結合又は二重結合を意味し、およびＲ１、Ｒ２及びｎは前記と同じ）
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００２６】
好ましい化合物（Ｉ−Ａ’）の中で、特に好ましい化合物は、式（Ｉ−Ａ’）においてＸが炭素原子でＹが酸素原子であるか、又はＸが硫黄原子でＹが窒素原子であり、他の記号は前記と同じである、化合物又はその薬学的に許容される塩である。式（Ｉ−Ａ’）の特に好ましい化合物は、Ｒ１が置換又は非置換フェニル基、置換又は非置換ナフチル基又はベンゾチエニル基であり、該置換フェニル基及び置換ナフチル基はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメチル基及び水酸基から独立して選ばれる１〜３個の置換基を有している化合物である。
【００２７】
発明を実施するための最良の形態
好適な式（Ｉ−Ａ’）の化合物を以下に例示する。
化合物１−Ａ−１：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイゾキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
化合物１−Ａ−２：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（２−ナフチルメチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
化合物１−Ａ−３：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−エチル−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
化合物１−Ａ−４：
Ｎ−［１−（（１Ｒ）−１−メチルプロピル）（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］−チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
化合物１−Ａ−５：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−メチル−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド；
化合物１−Ａ−２０：
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（４−メチル（１，２，３−チアジアゾール−５−イル））カルボキサミド；
【００２８】
本発明化合物（Ｉ）は複数の不斉炭素を有し、エナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物を包含する。これらの異性体及びその混合物もまた本発明に包含される。更に、化合物（Ｉ）は水和物及び／又は塩を形成していてもよく、それらもまた本発明に含まれる。式（Ｉ）の化合物の塩としては、特に限定されることはないが、薬学的に許容される塩が好ましく、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンなどの有機塩基との塩；ナトリウムやカリウムなどの無機金属との塩が挙げられる。また、式（Ｉ）の化合物の内のいくつかは、酒石酸、フマル酸、酢酸、乳酸、コハク酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、マロン酸、グルコン酸、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸）などの有機酸との酸付加塩あるいは塩酸、リン酸などの無機酸との酸付加塩を形成する。
【００２９】
化合物（Ｉ）の製造工程
本発明の化合物（Ｉ）は、以下に記載した製法により製造される。
ひとつの好ましい製法を下記反応式−１に示す。
反応式−１
【化１７】
2004507539.tif 000012
［式中、Ｒはアミノ基の保護基、Ｗは脱離基、およびＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びｎは前記と同じ］
【００３０】
Ｒによって定義されるアミノ基の保護基は、通常のアミノ保護基、例えば、酸又は塩基での加水分解によって除去することができるアルコキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、「Ｂｏｃ」として略される）、又は水素化分解によって除去することが出来る置換又は非置換ベンジルオキシカルボニル基（記号“Ｚ”によって通常示されている）が挙げられる。
【００３１】
上記反応において「Ｗ」によって定義されている脱離基は、水酸基、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキルチオ基、低級アルキルスルフィニル基又は低級アルキルスルホニル基が挙げられる。
【００３２】
上記反応式−１の工程１において、公知化合物（１）をパラホルムアルデヒドと反応させて、化合物（２）を得る。工程２では、フッ化セシウムの存在下、化合物（２）をトリ（低級アルキル）（トリフルオロメチル）シラン化合物（例えば、トリメチル（トリフルオロメチル）シラン）と反応させ、反応生成物をメタノールで処理し、生じた生成物を還元して開環させ、ついで脱ヒドロキシメチル化を行うことによって化合物（３）に変換する。開環するための還元は、通常水素化ホウ素ナトリウムで行い、脱ヒドロキシメチル化は、炭酸カリウムのような塩基と処理することによって行う。工程３では、化合物（３）のアミノ保護基「Ｒ」を、上記の常法によって除去し、化合物（４）を得る。これら工程１、２及び３における反応は、１工程ごとに、又はワンポット（ｏｎｅ−ｐｏｔ）反応で実施してもよい。
【００３３】
工程４では、上記で得た化合物（４）を公知化合物（５）と反応させる。この工程における反応は、通常、ペプチド合成に用いられる常法のアミド化反応で実施する。例えば、化合物（４）を化合物（５）と、溶媒（例えば、塩化メチレン、ジメチルホルムアミド）中又は無溶媒で混合し、室温下又は加温下、塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下又は非存在下で混合物を攪拌する。化合物（５）の記号「Ｗ」が水酸基であるときは、工程４における反応は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１，１’−カルボニルジイミダゾール、又はＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートの如き縮合剤の存在下で有利に実施できる。記号「Ｗ」が水酸基であるとき、工程４における反応はまた、まずトリエチルアミン又は好ましくはＮ−メチルモルホリンの如き３級アミンの存在下、化合物（５）とクロロギ酸エチルを反応させ、引き続いて反応物を化合物（４）と反応させることによって実施してもよい。
【００３４】
工程５において、化合物（６）のアミノ保護基「Ｒ」を、常法によって除去する。例えば、アミノ保護基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであるときは、化合物（６）をトリフルオロ酢酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、又は酢酸の如き酸と接触することによって除去する。この反応は塩化メチレン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、又はそれらの混合物などの溶媒中で実施する。化合物（６）におけるアミノ保護基「Ｒ」がベンジルオキシカルボニル基であるときは、６０℃未満の温度で、通常室温下において、触媒（例えば、プラチナ、パラジウム、ラネーニッケル）の存在下、溶媒（例えば、酢酸エチル、エタノール）中において化合物（６）を水素ガスで処理することによって有利に除くことが出来る。
【００３５】
このようにして調製した化合物（７）を、次に工程６において化合物（８）と反応させる。この反応は工程４と同様にして行うことによって化合物（Ｉ−Ｂ）を得る。化合物（８）は、記号「Ｒ３」が式（ａ）の基であるときは新規であり、この化合物は後述する参考例又はそれと同様の方法により製造することができる。記号「Ｒ３」が式（ａ）以外の基であるときは、化合物（８）は公知であり、その中でも下記式（ＩＩ）の化合物が特に重要である。
【００３６】
【化１８】
2004507539.tif 000013
（式中、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、Ｘ、Ｙ、Ｗ及び記号：
【化１９】
2004507539.tif 000014
は前記と同じ）
上記式（ＩＩ）の化合物は公知であるが、それらが本発明の式（Ｉ−Ａ）の化合物の製造には用いられたことはない。
【００３７】
上記工程６において製造される式（Ｉ−Ｂ）の化合物は新規であり、優れたキマーゼ阻害活性を有する本発明の所望化合物（Ｉ−Ａ）の合成中間体として有用である。
すなわち、工程７において化合物（Ｉ−Ｂ）（ＯＨ−化合物）はそのＯＨ基の酸化によって化合物（Ｉ−Ａ）（ケトン化合物）に変換される。工程７における酸化反応は、溶媒（例えば、塩化メチレン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエン）中で化合物（Ｉ−Ｂ）を酸化剤で処理することによって実施することができる。酸化剤としては、例えば、ヨードベンゼン誘導体であるデス−マーチン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ）試薬が挙げられる。酸化はジメチルスルホキシド存在下五塩化リンによる酸化、ジメチルスルホキシド存在下１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド−ジクロロ酢酸による酸化、又はジメチルスルホキシド存在下オキサリルクロリドとトリエチルアミンの組み合わせによる酸化（いわゆるスワン（Ｓｗｅｒｎ）酸化）で実施することができる。
【００３８】
反応式−１における上記工程において、遊離のカルボキシル基を有する化合物は、通常の保護基（例えば、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル）によって任意に保護されていてもよく、その保護基は、反応後常法によって除去することができる。さらに、各工程で製造された化合物が異性体を含むとき、これらの異性体は常法によって分割し得る。
【００３９】
実施例
本発明を下記の実施例、参考例及び実験例により説明するが、これらに限定されるものではない。
これらの例においては、下記の略語を使用する。
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｐｈ：フェニル
Ｍｅ：メチル
Ｅｔ：エチル
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル又は（フェニルメトキシ）カルボニル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＬＳＩＭＳ：液体二次イオンマススペクトル
１Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴分光分析
ＡＰＣＩＭＳ：大気圧化学イオン化分析
ＩＲ：赤外線吸収分光分析
【００４０】
参考例１
反応式−１における原料化合物（８）の製造：
２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２−オキソイミダゾリジニル）酢酸（８ａ）：
【化２０】
2004507539.tif 000015
（１）２−オキソイミダゾリジン（０．３ｇ）とｔｅｒｔ−ブチル ブロモアセテート（１．５０ｇ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、リチウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６ｇ）を０℃で加えた。同温度で３０分間攪拌後、反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、沈殿物を集め、水洗し、乾燥した。沈殿物を酢酸エチルで再結晶し、濾取して、白色固体のｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２−オキソイミダゾリジニル）アセテート（０．８６ｇ）を得た。
ｍ．ｐ． １００−１０２℃
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ３１５ ［（Ｍ＋Ｈ）＋］
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １．４６ （１８Ｈ， ｓ）， ３．５４ （４Ｈ， ｓ）， ３．８９ （４Ｈ， ｓ）．
【００４１】
（２）ｔｅｒｔ−ブチル ２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２−オキソイミダゾリジニル）アセテート（１．１４ｇ）のエタノール（１０ｍｌ）及び水（１０ｍｌ）の溶液に水酸化カリウム（０．２２ｇ）を加え、反応混合物を７０℃で５時間攪拌した。エタノールを減圧除去後、得られた残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで洗浄し、１０％塩酸で酸性にした後、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。沈殿物を酢酸エチルで再結晶した後、濾取することによって無色固体の２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２−オキソイミダゾリジニル）酢酸（０．３０ｇ）を得た。
ｍ．ｐ． １１２−１１３℃
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ２５９ ［（Ｍ＋Ｈ）＋］
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １．４６ （９Ｈ， ｓ）， ３．５３ （４Ｈ， ｓ）， ３．８９ （２Ｈ， ｓ） ４．０１ （２Ｈ， ｓ）， ７．１１ （１Ｈ， ｂｒ ｓ）．
【００４２】
参考例２
反応式−１における原料化合物（８）の製造：
２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）酢酸（８ｂ）：
【化２１】
2004507539.tif 000016
（１）２，４−ジオキソピリミジン（１．０ｇ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液にベンジルブロモアセテート（２．５ｇ）および炭酸カリウム（２．５ｇ）を加えた。室温下、１５時間攪拌後、反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過後、減圧留去した。沈殿物をジエチルエーテルで洗浄して、無色固体のフェニルメチル ２−（２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）アセテ−ト（１．４ｇ）を得た。
ｍ．ｐ． １９２−１９４℃
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ２６１ ［（Ｍ＋Ｈ）＋］
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ４．５９ （２Ｈ， ｓ）， ５．２０ （２Ｈ， ｓ）， ５．６２ （１Ｈ， ｄ）， ７．３７ （５Ｈ， ｍ）， ７．６５ （１Ｈ， ｄ）， １１．４ （１Ｈ， ｓ）．
【００４３】
（２）フェニルメチル ２−（２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）アセテ−ト（１．０ｇ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（０．１８ｇ）を滴下した。反応混合物を氷浴にて冷却しながら１５分間攪拌後、ｔｅｒｔ−ブチル ブロモアセテート（０．９ｇ）を加えた。室温で混合物を１時間攪拌後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、無色油状のフェニルメチル ２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）アセテート（１．２ｇ）を得た。
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ３７５［（Ｍ＋Ｈ）＋］
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １．４６ （９Ｈ， ｓ）， ４．５１ （２Ｈ， ｓ）， ４．５８ （２Ｈ， ｓ） ５．２１ （２Ｈ， ｓ）， ５．８１ （１Ｈ， ｄ） ７．１０ （１Ｈ， ｄ） ７．３６ （５Ｈ， ｍ）．
【００４４】
（３）フェニルメチル ２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）アセテート（１．２ｇ）の酢酸エチル（２０ｍｌ）溶液に２０ｗｔ．％水酸化パラジウム（５０ｍｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下室温で１時間攪拌後、触媒を濾別した。濾液を減圧留去して、白色粉末の２−（３−｛［（ｔｅｒｔ−ブチル）オキシカルボニル］メチル｝−２，４−ジオキソ−１，３−ジヒドロピリミジニル）酢酸を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １．４６ （９Ｈ， ｓ）， ４．５１ （２Ｈ， ｓ）， ４．５９ （２Ｈ， ｓ）， ５．８６ （１Ｈ， ｄ）， ７．１７ （１Ｈ， ｄ）．
【００４５】
参考例３
反応式−１における原料化合物（８）の製造：
２−（２−オキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）酢酸（８ｃ）：
【化２２】
2004507539.tif 000017
（１）Ｎ−ベンジルエチレンジアミン（６．０ｇ、４０ミリモル）のトルエン（５０ｍｌ）溶液に、０℃で１，１’−カルボニルビス−１Ｈ−イミダゾール（７．８ｇ、４８ミリモル）を加えた。混合物を室温で終夜攪拌後、反応混合物を水、５％クエン酸水溶液及び食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濾過し、減圧留去した。残渣を加温した酢酸エチルで再結晶し、濾取して、１−ベンジルイミダゾリジン−２−オン（３．４７ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ７．２２−７．３７ （５Ｈ， ｍ）， ６．４１ （１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ４．２３ （２Ｈ， ｓ）， ３．１４−３．２６ （４Ｈ， ｍ）．
ＡＰＣＩＭＳ： １７７ （ＭＨ＋）
ｍｐ． １３１−１３１．５℃
【００４６】
（２）１−ベンジルイミダゾリジン−２−オン（３．５ｇ、１９．９ミリモル）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液に、０℃でリチウム ｔｅｒｔ−ブトキシド（１．９ｇ、２３．８ミリモル）とｔｅｒｔ−ブチル ブロモアセテート（３．２ｍｌ、２１．８ミリモル）を加えた。混合物を室温下で終夜攪拌後、反応混合物を水（１００ｍｌ）に注ぎ、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。結晶性残渣をｎ−ヘキサンで洗浄し、乾燥してｔｅｒｔ−ブチル ２−（２−オキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）アセテート（５．０８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．２４−７．３６ （５Ｈ， ｍ）， ４．４０ （２Ｈ， ｓ）， ３．９０ （２Ｈ， ｓ）， ３．４０−３．４６ （２Ｈ， ｍ）， ３．２６−３．２０ （２Ｈ， ｍ）．
【００４７】
（３）ｔｅｒｔ−ブチル ２−（２−オキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）アセテート（２．５１ｇ、８．６４ミリモル）のジクロロメタン（１５ｍｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を加えた。混合物を室温下で１時間攪拌後、溶媒を減圧除去した。油状の残渣を酢酸エチルで処理して結晶化し、濾取して２−（２−オキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）酢酸（１．５６ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ７．６５ （１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ７．２６−７．３６ （５Ｈ， ｍ）， ４．４１ （２Ｈ， ｓ）， ４．０４ （２Ｈ， ｓ）， ３．４５−３．５０ （２Ｈ， ｍ）， ３．２５−３．３０ （２Ｈ， ｍ）．
ＡＰＣＩＭＳ： ２３５ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ． １３２−１３３℃
【００４８】
参考例４
反応式−１における原料化合物（８）の製造：
２−（２，５−ジオキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）酢酸（８ｄ）：
【化２３】
2004507539.tif 000018
（１）ヒダントイン（１０．０ｇ、０．１０モル）のＤＭＦ（１００ｍｌ）溶液に６０℃で炭酸カリウム（２０．７ｇ、０．１５モル）とベンジル ブロモアセテート（１８．９ｍｌ、０．１２モル）を加えた。混合物を６０℃で終夜攪拌後、反応混合物を水（２５０ｍｌ）に注ぎ、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を５％クエン酸水溶液と食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。結晶性の残渣をジエチルエーテルで洗浄後、乾燥してフェニルメチル ２−（２，５−ジオキソイミダゾリジニル）アセテート（１４．９ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．２４ （１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ７．３２−７．４２ （５Ｈ， ｍ）， ５．１７ （２Ｈ， ｓ）， ４．２３ （２Ｈ， ｓ）， ４．０３ （２Ｈ， ｓ）．
ＡＰＣＩＭＳ： ２４９ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ． １４２−１４４℃
【００４９】
（２）フェニルメチル ２−（２，５−ジオキソイミダゾリジニル）アセテート（４．０ｇ、１６．１ミリモル）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液に０℃でリチウム ｔｅｒｔ−ブトキシド（１．６ｇ、１９．３ミリモル）とベンジルブロミド（２．１ｍｌ、１７．７ミリモル）を加えた。混合物を室温下で終夜攪拌後、反応混合物を水（１００ｍｌ）に注ぎ、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製して、フェニルメチル ２−（２，５−ジオキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）アセテート（３．４２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．２２−７．４１ （１０Ｈ， ｍ）， ５．２０ （２Ｈ， ｓ）， ４．５９ （２Ｈ， ｓ）， ４．３４ （２Ｈ， ｓ）， ３．８１ （２Ｈ， ｓ）．
【００５０】
（３）フェニルメチル ２−（２，５−ジオキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）アセテート（３．４２ｇ、１０．０ミリモル）のＴＨＦ−水（３：１、４０ｍｌ）溶液に水酸化リチウム一水和物（０．８５ｇ、２０．０ミリモル）を加えた。この混合物を５０℃で６時間攪拌後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし酢酸エチルで洗浄した。水層を希塩酸で酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣を酢酸エチルで再結晶化し、濾取することによって２−（２，５−ジオキソ−３−ベンジルイミダゾリジニル）酢酸（１．２８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．２４−７．３８ （１０Ｈ， ｍ）， ４．５７ （２Ｈ， ｓ）， ３．９９ （２Ｈ， ｓ）， ３．９６ （２Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ５．０Ｈｚ）．
ＡＰＣＩＭＳ： ２４９ （ＭＨ＋）
ｍｐ． １２５−１２７℃
【００５１】
参考例５
反応式−１における原料化合物（８）の製造：
２−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３−ベンジル−１，３−ジヒドロピリミジニル）酢酸（８ｅ）：
【化２４】
2004507539.tif 000019
化合物８ｅを参考例４と同様にして製造した。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．４２ （１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ７．２３−７．４４ （５Ｈ， ｍ）， ６．９１ （１Ｈ， ｓ）， ５．１３ （２Ｈ， ｓ）， ４．４５ （２Ｈ， ｓ）， １．９４ （３Ｈ， ｓ）．
ＡＰＣＩＭＳ： ２７５ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ． １３０−１３１℃
【００５２】
参考例６
反応式−１における原料化合物（４）の製造：
（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−１，１，１−トリフルオロブタン−２−オール塩酸塩（化合物４−１）
【化２５】
2004507539.tif 000020
（１）化合物１：（２Ｓ）−３−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニルアミノ］プロピオン酸（２０．０ｇ、６２．２ミリモル）のトルエン（２２０ｍｌ）懸濁液にパラホルムアルデヒド（６．２ｇ）とｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３７５ｍｇ）を加えた。この混合物を９０℃で３時間攪拌後、反応混合物を氷浴で冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製して、化合物２：ｔｅｒｔ−ブチル （４Ｓ）−４−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−メチル）−５−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート（１７．４ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．７９−７．８６ （２Ｈ， ｍ）， ７．３２−７．３７ （２Ｈ， ｍ）， ７．２５ （１Ｈ， ｓ）， ５．１１−５．４１ （１Ｈ， ｍ）， ４．６０ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ４．１６−４．４８ （１Ｈ， ｍ）， ３．３７−３．７４ （２Ｈ， ｍ）， １．４４ （９Ｈ， ｓ）
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ３３４ ［（Ｍ＋Ｈ）＋］
【００５３】
（２）化合物２（２５．３ｇ、７５．９ミリモル）及びトリメチル（トリフルオロメチル）シラン（１３．５ｇ、９４．９ミリモル）のＴＨＦ（７５ｍｌ）溶液に、室温下フッ化セシウム（２．３ｇ、１５．２ミリモル）を加えた。混合物を１時間攪拌した。反応混合物にメタノール（２５ｍｌ）を加えた後、混合物を室温下で１５分間攪拌した。溶媒を減圧除去後、残渣を酢酸エチルで抽出し、水及び食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。
残渣をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液に０℃で水素化ホウ素ナトリウム（２．９ｇ、７５．９ミリモル）を加えた。混合物を１時間攪拌後、反応混合物を１０％クエン酸水溶液を加えて酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、減圧留去した。
残渣をＤＭＦ（１００ｍｌ）と水（７５ｍｌ）中に溶解させ、この溶液に室温下で炭酸カリウム（１２．６ｇ、９１．１ミリモル）を加えた。混合物を１時間攪拌後、反応混合物を１０％クエン酸水溶液で酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製して、化合物３：Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル］（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（２２．４ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．８０−７．８９ （２Ｈ， ｍ）， ７．３５−７．４４ （２Ｈ， ｍ）， ７．２５ （１Ｈ， ｓ）， ５．０５ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ４．８１−４．８３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝７．５ Ｈｚ）， ３．９９−４．０２ （２Ｈ， ｍ）， ３．２３−３．４０ （２Ｈ， ｍ）， １．４４ （９Ｈ， ｓ）
ＬＳＩＭＳ （ｍ／ｚ）： ３７６ ［（Ｍ＋Ｈ）＋］
ｍ．ｐ．： １１８−１２０℃
【００５４】
（３）化合物３（３．７５ｇ、１０ミリモル）に４モル／１０００ｍｌの塩化水素含有の１，４−ジオキサン溶液（２５ｍｌ）を加えた。混合物を室温下で３０分間攪拌後、溶媒を減圧除去した。残渣をジエチルエ−テルで処理して結晶化させ、濾取して、化合物４−１：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−１，１，１−トリフルオロブタン−２−オール塩酸塩（３．１ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．０２−８．０５ （１Ｈ， ｍ）， ７．９１−７．９４ （１Ｈ， ｍ）， ７．７１ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ７．４０−７．５０ （２Ｈ， ｍ）， ４．１２−４．１５ （１Ｈ， ｍ）， ３．７０ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ３．２８−３．３２ （２Ｈ， ｍ）
ＡＰＣＩＭＳ： ２７６ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ．： １２３−１２５℃
【００５５】
参考例７
反応式−１における原料化合物（４）の製造：
（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−１，１，１−トリフルオロ−４−（２−ナフチル）ブタン−２−オール（化合物４−２）：
【化２６】
2004507539.tif 000021
（１）化合物１：（２Ｓ）−３−（２−ナフチル）−２−［（フェニルメトキシ）カルボニルアミノ］プロピオン酸（１４．３ｇ、４０．９ミリモル）のトルエン（１４０ｍｌ）懸濁液にパラホルムアルデヒド（２．０ｇ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（６００ｍｇ）を加えた。混合物を３０分間還流後、反応混合物を氷浴で冷却し、ついで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、減圧留去した。残渣をイソプロピルエ−テルで処理して結晶化し、化合物２：フェニルメチル （４Ｓ）−４−（２−ナフチルメチル）−５−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート（１１．８ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．６８−７．８１ （３Ｈ， ｍ）， ７．４０−７．６０ （８Ｈ， ｍ）， ７．１８ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ５．２１−５．２９ （３Ｈ， ｍ）， ４．６４ （１Ｈ， ｓ）， ４．２３ （１Ｈ， ｓ）， ３．３６ （１Ｈ， ｓ）
ＡＰＣＩＭＳ： ３６２ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ．： ８８−８９℃
【００５６】
（２）氷浴で冷却下、化合物２（１１．８ｇ、３２．７ミリモル）とトリメチル（トリフルオロメチル）シラン（５．８ｇ、４０．８ミリモル）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液にフッ化セシウム（１．０ｇ、６．５３ミリモル）を加えた。混合物を３０分間室温下で攪拌し、溶媒を減圧除去した。メタノール（６０ｍｌ）を残渣に加えた後、混合物を１５分間室温で攪拌した。
この溶液を氷浴で０℃に冷却し、それに水素化ホウ素ナトリウム（１．２ｇ、３２．７ミリモル）を加えた。混合物を３０分間攪拌後、溶液に水（４５ｍｌ）及び炭酸カリウム（５．４ｇ、３９．２ミリモル）を加えた。溶液を３０分間室温で攪拌後、メタノールを減圧除去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層を１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製して、化合物３：Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−（２−ナフチルメチル）プロピル］（フェニルメトキシ）カルボキサミド（８．４ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．７４−７．８４ （３Ｈ， ｍ）， ７．６５ （１Ｈ， ｂｒｓ）， ７．４６−７．５１ （２Ｈ， ｍ）， ７．３３ （６Ｈ， ｍ）， ５．２２−５．２５ （１Ｈ， ｍ）， ５．１２ （２Ｈ， ｓ）， ４．１０−４．１２ （２Ｈ， ｍ）， ３．９８ （１Ｈ， ｍ）， ３．２８ （１Ｈ， ｍ） ３．１７−３．１９ （１Ｈ， ｍ）
ＡＰＣＩＭＳ： ４０４ （ＭＨ＋）
ｍ．ｐ．： １７２−１７４℃
【００５７】
（３）化合物３（８．４ｇ、２０．８ミリモル）の酢酸エチル（１００ｍｌ）溶液に２０ｗｔ．％水酸化パラジウム（１．５ｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下室温で３時間攪拌後、触媒を濾過して除いた。濾液を減圧留去し、白色固体状の残渣をｎ−ヘキサンで洗浄して、化合物４−２：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−１，１，１−トリフルオロ−４−（２−ナフチル）ブタン−２−オール（５．３ｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．７９−７．８５ （３Ｈ， ｍ）， ７．６６（１Ｈ， ｓ）， ７．４５−７．５３ （２Ｈ， ｍ）， ７．３３−７．３６ （１Ｈ， ｍ）， ３．７１−３．７８ （１Ｈ， ｍ）， ３．６２−３．６８ （１Ｈ， ｍ）， ３．０２−３．０９ （１Ｈ， ｍ）， ２．７８−２．９０ （１Ｈ， ｍ）
ＡＰＣＩＭＳ： ２７０ （ＭＨ＋）
ｐ．： １２２−１２５℃
【００５８】
参考例８
反応式−１における原料化合物（４）の製造：
表１に示す化合物を、参考例６又は７と同様にして得た。
【表１】
2004507539.tif 000022
【００５９】
【表２】
2004507539.tif 000023
【００６０】
実施例１
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｉ−Ａ−１）の製造：
【化２７】
2004507539.tif 000024
【００６１】
（１）（工程４）化合物４：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−４−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−１，１，１−トリフルオロブタン−２−オール塩酸塩（１４．１ｇ、４５．２ミリモル）のピリジン（１３５ｍｌ）溶液に、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン（反応式−１の化合物５）（１４．２ｇ、４５．２ミリモル）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（９．１ｇ、４７．５ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で１５時間攪拌し、ついで溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、５％硫酸水素カリウム水溶液、水および食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、化合物６：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボキサミド（１９．８ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ５７２ （ＭＨ＋）
【００６２】
（２）（工程５）化合物６（１９．８ｇ、３４．６ミリモル）に４モル／１０００ｍｌの塩化水素含有１，４−ジオキサン溶液（９０ｍｌ）を加えた。室温で３０分間攪拌後、溶媒を減圧除去した。白色粉末状の残渣をｎ−ヘキサンで洗浄して、化合物７：［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）ピロリジン−２−イル］−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル］カルボキサミド塩酸塩（１７．６ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ４７２ （ＭＨ＋）
【００６３】
（３）（工程６）化合物７（１０．２ｇ、２０．１ミリモル）のピリジン（１００ｍｌ）溶液に３，５−ジメチルイソキサゾール−４−カルボン酸（反応式−１の化合物８）（２．８ｇ、２０．１ミリモル）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（４．０ｇ、２１．１ミリモル）を加えた。反応混合物を室温下で１５時間攪拌し、ついで溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、５％硫酸水素カリウム水溶液、水および食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐ（三菱化学株式会社）のカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル３０％〜７０％の濃度勾配で溶出して、化合物Ｉ−Ｂ−１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（８．２ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ５９５ （ＭＨ＋）
【００６４】
（４）（工程７）化合物Ｉ−Ｂ−１（８．２ｇ、１３．８ミリモル）のジクロロメタン （１６０ｍｌ）溶液にｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１．４ｍｌ、１３．８ミリモル）とデス−マーチンペルヨージナン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（１１．７ｇ、２７．６ミリモル）を加えた。反応混合物を１５時間室温下で攪拌し、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、ついで飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル３０％〜７０％の濃度勾配で溶出して、化合物Ｉ−Ａ−１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（５．９ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ：５７２（ＭＨ＋）
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ０．９３ （３Ｈ， ｄ）， ０．９５ （３Ｈ， ｄ） １．６９−２．１３ （４Ｈ， ｍ）， ２．２５ （３Ｈ， ｓ）， ２．４７ （３Ｈ， ｓ）， ２．８９ （１Ｈ， ｄｄ）， ３．２８−３．４５ （３Ｈ， ｍ）， ３．５２−３．５９ （１Ｈ， ｍ）， ３．７３−３．８０ （１Ｈ， ｍ）， ４．３７−４．４６ （２Ｈ， ｍ）， ７．２６−７．４８ （４Ｈ， ｍ）， ７．７８ （１Ｈ， ｄ）， ７．９３−８．１１ （２Ｈ， ｍ）．
元素分析　Ｃ２８Ｈ３１Ｆ３Ｎ４Ｏ５Ｓ・０．２５ Ｈ２Ｏとして：
理論値： Ｃ ５６．３２， Ｈ ５．３２， Ｆ ９．５４， Ｎ ９．３８， Ｓ ５．３７
測定値： Ｃ ５６．０４， Ｈ ５．５１， Ｆ ９．３４， Ｎ ９．１１， Ｓ ５．１３
【００６５】
実施例２
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（２−ナフチルメチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｉ−Ａ−２）の製造：
【化２８】
2004507539.tif 000025
【００６６】
（１）（工程４）化合物４：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−１，１，１−トリフルオロ−４−（２−ナフチル）ブタン−２−オール（０．９３ｇ、３．４４ミリモル）のジクロロメタン１５ｍｌ溶液にＮ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン（反応式−１の化合物５）（１．２０ｇ、３．４４ミリモル）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６９ｇ、３．６２ミリモル）を加えた。反応混合物を１５時間室温下で攪拌し、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出後、１０％塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル２０％〜７０％の濃度勾配で溶出して、化合物６：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−（２−ナフチルメチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（フェニルメトキシ）カルボキサミド（１．６ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ６００ （ＭＨ＋）
【００６７】
（２）（工程５）化合物６（１．６ｇ、２．６７ミリモル）の酢酸エチル（２０ｍｌ）溶液に、２０ｗｔ．％水酸化パラジウム（０．３ｇ）を加えた。水素雰囲気下、室温で３時間攪拌後、触媒を濾過して除去した。濾液を減圧留去して、化合物７：［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）ピロリジン−２−イル］−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−（２−ナフチルメチル）プロピル］カルボキサミド（１．２４ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ４６６ （ＭＨ＋）
【００６８】
（３）（工程６）化合物７（１．２４ｇ、２．６７ミリモル）のジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液に、３，５−ジメチルイソキサゾール−４−カルボン酸（反応式１における化合物８）（０．３８ｇ、２．６７ミリモル）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．５４ｇ、２．８０ミリモル）を加えた。反応混合物を１５時間室温下で攪拌し、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出後、１０％塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル２０％〜７０％の濃度勾配で溶出して、化合物Ｉ−Ｂ−２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−（２−ナフチルメチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（１．２ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ５８９（ＭＨ＋）
【００６９】
（４）（工程７）化合物Ｉ−Ｂ−２（１．２ｇ、２．０４ミリモル）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液にｔｅｒｔ−ブチルアルコール（０．２０ｍｌ、２．０４ミリモル）とデス−マーチンペルヨージナン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（１．７ｇ、４．０８ミリモル）を加えた。反応混合物を１５時間室温下で攪拌後、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、ついで飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリルの２０％〜７０％の濃度勾配で溶出して、化合物Ｉ−Ａ−２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（２−ナフチルメチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］（３，５−ジメチルイソキサゾール−４−イル）カルボキサミド（０．６０ｇ）を得た。
ＡＰＣＩＭＳ： ５８７ （ＭＨ＋）
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ８．０５ （１Ｈ， ｄ）， ７．７１−７．９４ （４Ｈ， ｍ）， ７．４０−７．４５ （２Ｈ， ｍ）， ７．１６−７．２２ （２Ｈ， ｍ）， ４．２８−４．４２ （３Ｈ， ｍ）， ３．７０ （１Ｈ， ｍ）， ３．５０ （１Ｈ， ｍ）， ３．３０−３．３４ （３Ｈ， ｍ）， ２．８８ （１Ｈ， ｄｄ）， ２．４０ （３Ｈ， ｓ）， ２．３０ （３Ｈ， ｓ）， １．９９−２．０７ （１Ｈ， ｍ）， １．５８−１．９１ （２Ｈ， ｍ）， ０．８７ （３Ｈ， ｄ）， ０．８５ （３Ｈ， ｄ）
元素分析 Ｃ３０Ｈ３３Ｆ３Ｎ４Ｏ５・０．７５ Ｈ２Ｏとして：
理論値：　Ｃ ６０．０４， Ｈ ５．７９， Ｆ ９．５０， Ｎ ９．３４
測定値：　Ｃ ６０．０６， Ｈ ５．８５， Ｆ ９．５３， Ｎ ９．１６
【００７０】
実施例３
化合物Ｉ−Ａの製造：
以下の表２〜表１２に記載の化合物は、実施例１又は２と同様にして得た。これらの表において、質量分析は、特に指定してなければ、ＡＰＣＩＭＳである。
【００７１】
【表３】
2004507539.tif 000026
【００７２】
【表４】
2004507539.tif 000027
【００７３】
【表５】
2004507539.tif 000028
【００７４】
【表６】
2004507539.tif 000029
【００７５】
【表７】
2004507539.tif 000030
【００７６】
【表８】
2004507539.tif 000031
【００７７】
【表９】
2004507539.tif 000032
【００７８】
【表１０】
2004507539.tif 000033
【００７９】
【表１１】
2004507539.tif 000034
【００８０】
【表１２】
2004507539.tif 000035
【００８１】
【表１３】
2004507539.tif 000036
【００８２】
【表１４】
2004507539.tif 000037
【００８３】
【表１５】
2004507539.tif 000038
【００８４】
【表１６】
2004507539.tif 000039
【００８５】
【表１７】
2004507539.tif 000040
【００８６】
【表１８】
2004507539.tif 000041
【００８７】
【表１９】
2004507539.tif 000042
【００８８】
参考例９
ＷＯ−Ａ−９３／２５５７４公報に記載の参照化合物（Ａ）の製造：
【化２９】
2004507539.tif 000043
【００８９】
Ａ．｛（２Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−Ｎ−メチルカルボニルアミノ］ピペリジル｝カルボニルアミノ）−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル｝−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド：
［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）ピロリジン−２−イル］−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド塩酸塩（２．７ｇ、６．０３ミリモル）とトリエチルアミン（０．６７ｇ、６．６３ミリモル）のジクロロメタン（１５ｍｌ）溶液を、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中のカルボニルジイミダゾール（１．１ｇ、６．６３ミリモル）及びイミダゾール（０．８２ｇ、１２．１ミリモル）のスラリーに０〜５℃で攪拌しながら加え、得られた混合物を３０分間２５℃で攪拌した。これに４−［Ｎ−［（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル］メチルアミノ］ピペリジン（１．３ｇ、６．０３ミリモル）のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を加え、混合物を２日間２５℃で攪拌した。得られた溶液を５％硫酸水素カリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル２０％〜７０％の濃度勾配で溶出し、標記化合物（１．０ｇ、収率：２５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ０．９６−０．９８ （３Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．８ Ｈｚ）， １．００−１．０２ （３Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．６ Ｈｚ）， １．４６ （９Ｈ， ｓ）， １．５７−１．７７ （７Ｈ， ｍ）， １．８４−１．９０ （１Ｈ， ｍ）， ２．３６−２．４２ （１Ｈ， ｍ）， ２．７２ （３Ｈ， ｓ）， ２．９０−３．０６ （４Ｈ， ｍ）， ３．１３−３．２０ （１Ｈ， ｍ）， ３．４３−３．５３ （１Ｈ， ｍ）， ３．８４−４．０５ （５Ｈ， ｍ）， ４．３５−４．３８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝７．３ Ｈｚ）， ４．８５−４．９０ （２Ｈ， ｍ）， ６．０８−６．１２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１１．７Ｈｚ）， ７．１９−７．３０ （５Ｈ， ｍ）， ７．７８−７．８１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝９．９ Ｈｚ）
ＡＰＣＩ−ＭＳ： ６５６ （ＭＨ＋）
【００９０】
Ｂ．｛（２Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−Ｎ−メチルカルボニルアミノ］ピペリジル｝カルボニルアミノ）−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル｝−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド：
｛（２Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−Ｎ−メチルカルボニルアミノ］ピペリジル｝カルボニルアミノ）−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド（１．０ｇ、１．５２ミリモル）のジクロロメタン溶液（１０ｍｌ）にｔｅｒｔ−ブチルアルコール（０．１５ｍｌ、１．５２ミリモル）とデス−マーチンペルヨージナン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ） （１．３ｇ、３．０５ミリモル）を加えた。反応混合物を１時間室温下で攪拌後、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧留去した。残渣をＣＨＰ２０Ｐのカラムクロマトグラフィーに付し、中圧下、水に対してアセトニトリル３０〜７０％の濃度勾配で溶出して、標記化合物（０．８ｇ、収率；８１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ０．９４−０．９６ （３Ｈ， ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ）， ０．９９−１．０１ （３Ｈ， ｄ， Ｊ＝６．６ Ｈｚ）， １．４７ （９Ｈ， ｓ）， １．５６−１．８６ （７Ｈ， ｍ）， ２．１１−２．１７ （１Ｈ， ｍ）， ２．７３ （３Ｈ， ｓ）， ２．７６−３．０５ （４Ｈ， ｍ）， ３．２８−３．３６ （１Ｈ， ｍ）， ３．８５−４．１３ （４Ｈ， ｍ）， ４．３６−４．３９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝８．１ Ｈｚ）， ４．６５ （１Ｈ， ｍ）， ４．８２−４．８５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝７．９Ｈｚ）， ５．７６ （１Ｈ， ｓ）， ６．１６ （１Ｈ， ｓ）， ７．１４−７．３１ （５Ｈ， ｍ）， ７．３７−７．４０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝９．０Ｈｚ）
ＡＰＣＩ−ＭＳ： ６５４ （ＭＨ＋）
【００９１】
Ｃ．［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［４−（メチルアミノ）ピペリジル］カルボニルアミノ｝ブタノイル）ピロリジン−２−イル］−Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド塩酸塩：
｛（２Ｓ）−１−［（２Ｓ）−２−（｛４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−Ｎ−メチルカルボニルアミノ］ピペリジル｝カルボニルアミノ）−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２−オキソ−１−ベンジルプロピル］カルボキサミド（０．５ｇ、０．７７ミリモル）に４Ｎ塩化水素含有の１，４−ジオキサン溶液（１０ｍｌ）を加えた。１時間０〜５℃で攪拌後、溶媒を減圧除去した。残渣をイソプロピルアルコールで処理し、減圧留去して標記化合物（０．３５ｇ、収率：７８％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ ０．８７−０．８９ （３Ｈ， ｄ）， ０．８９−０．９３ （３Ｈ， ｄ）， １．３２−１．３９ （３Ｈ， ｍ）， １．６３−１．７６ （２Ｈ， ｍ）， １．９３−１．９６ （３Ｈ， ｍ）， ２．５２ （３Ｈ， ｓ）， ２．６１−２．７３ （２Ｈ， ｍ）， ３．１１−３．１５ （２Ｈ， ｍ）， ３．３７−３．３９ （１Ｈ， ｍ）， ３．８６ （４Ｈ， ｍ）， ４．０４−４．３７ （４Ｈ， ｍ）， ６．４８−６．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝８．１Ｈｚ）， ７．１２−７．２４ （５Ｈ， ｍ）， ７．７９−７．８２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝９．３Ｈｚ）， ８．９３ （１Ｈ， ｍ）
ＡＰＣＩ−ＭＳ： ５５４ （ＭＨ＋）
元素分析：　Ｃ２７Ｈ３８Ｆ３Ｎ５Ｏ４・１．２５ ＨＣｌ・１．５０ Ｈ２Ｏ・０．５０ ジオキサン
理論値：　Ｃ ５１．９７， Ｈ ６．９６， Ｆ ８．５０， Ｎ １０．４５， Ｃｌ ６．６１
測定値：　Ｃ ５１．９９， Ｈ ７．２３， Ｆ ８．２３， Ｎ １０．２３， Ｃｌ ６．６６
【００９２】
薬理学的特性
本発明化合物（Ｉ−Ａ）の薬理学的特性を以下に説明する。
本発明化合物（Ｉ−Ａ）は、実験例１に示すように優れたキマーゼ阻害活性を有し、肥満細胞が主たる役割を果たすアレルギー症状を含む様々な疾患の治療に使用できる。これらのアレルギー症状において、肥満細胞の脱顆粒に続く血管透過性の亢進は、炎症性細胞の浸潤および免疫複合体の血管壁への沈着を惹起して炎症反応を引き起こす。
【００９３】
実験例２に示すように、本発明化合物（Ｉ−Ａ）は、キマーゼによって惹起される血管透過性の亢進を抑制し、その結果皮膚炎症を抑制する。この知見は、本発明化合物（Ｉ−Ａ）が皮膚の抗炎症剤として有用であることを示唆している。
上記に述べた特性に加えて、本発明化合物（Ｉ−Ａ）は経口投与であっても、血漿中で高い濃度を維持し、低毒性（実験例３及び４）を示す。上記の薬理学的特性を合わせると、本発明化合物（Ｉ−Ａ）は医薬として有用であると考えられる。
【００９４】
薬理試験
実験例１：キマーゼ阻害活性（ＩＣ５０）
サルキマーゼ及びヒトキマーゼに対する化合物の阻害活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。供試化合物は、表１３及び表１４に化合物番号として示している。
【００９５】
サルキマーゼの調製
キマーゼを、サルの頬嚢及び胃から次の方法により精製した。
要約すれば、キマーゼを、２モル／１０００ｍｌ ＫＣｌ及び０．１％ ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０（アムレスコ社（Ａｍｒｅｓｃｏ Ｉｎｃ．）製）を含有するｐＨ７．４の０．０１モル／１０００ｍｌリン酸ナトリウム緩衝液で、ホモジナイズしたサルの頬嚢及び胃から抽出した。キマーゼを含有する溶液をヘパリンアクチゲルカラムに付し、キマーゼ−リッチの画分を集めた。
【００９６】
ヒトキマーゼの調製
ヒトキマーゼを、組換えＤＮＡ技術を用いて哺乳動物細胞で調製した。
ヒトプロキマーゼ発現プラスミドの構築は次の方法で実施した。要約すれば、一本鎖のｃＤＮＡをヒト心臓ｍＲＮＡ（クローンテック・ラボラトリーズ社（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．）製）から合成した。そのｃＤＮＡを鋳型とし、適切なプライマーの組み合わせを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応増幅を行った。プライマーの配列は、ヒトプレプロキマーゼに基づいて決定した。増幅された生成物を、プラスミドｐＵＣ１８にクローン化し、プラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＫＳ（＋）（ストラタジーン社（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）製）に再クローン化した。最後に、ヒトプレプロキマーゼの完全な蛋白をコードする配列を有するＤＮＡフラグメントを、常法により一過性発現ベクターに挿入し、ヒトプロキマーゼ発現プラスミドを得た。
【００９７】
ヒトプロキマーゼ発現プラスミドのＣＯＳ７細胞へのトランスフェクションは、ＦｕＧｅｎｅＴＭ ６ トランスフェクション試薬（ベーリンガーマイハイム社製）を用いて行った。ＤＮＡに約７時間曝した後、培地を血清を含まないものに交換した。培養上清は、２日間培養後に採取した。
ヒトプロキマーゼは、サルキマーゼの調製において上述した方法に従い、ヘパリンアクチゲルカラムを用いて、培養上清から精製した。
活性のあるキマーゼを調製するために、ヒトプロキマーゼをジペプチジルペプチダーゼＩ（シグマ社）とインキュベートした。生じた活性ヒトキマーゼを上述したヘパリンアクチゲルカラムを用いて精製した。活性ヒトキマーゼは、２モル／１０００ｍｌ ＮａＣｌを含有する０．０１モル／１０００ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）で溶出した。
【００９８】
キマーゼ阻害活性の測定（ｉｎ ｖｉｔｒｏ アッセイ）
本発明化合物Ｉ−Ａのキマーゼ阻害活性は、次の方法により測定した。要約すれば、精製したサルもしくはヒトキマーゼを２モル／１０００ｍｌ ＫＣｌ及び０．１％ ノニデットＰ−４０を含有する０．０１モル／１０００ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）で適当な濃度に希釈し、酵素溶液として用いた。アンギオテンシンＩ（ペプチド研究所（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．）製）を水で希釈して５ｍｇ／ｍｌの濃度とし、これを基質溶液として用いた。供試化合物を、１０％ＤＭＳＯで段階的に希釈した。酵素溶液１０μｌ及び希釈した供試化合物１０μｌを、０．１モル／１０００ｍｌリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）６０μｌと混和し、室温に保持した。混合物を３７℃でプレインキュベーションした後、基質溶液２０μｌを酵素−供試化合物の混合物に加え、新しい混合物を３７℃でインキュベーションした。最後に３０％トリクロロ酢酸溶液５０μｌを加え、酵素反応を停止させた。
【００９９】
Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｌｅｕの量を、酵素反応によって生成したアンギオテンシンＩＩとして測定した。要約すれば、反応混合物１０μｌ及び１％オルトフタルアルデヒド−メタノール溶液１０μｌを２モル／１０００ｍｌ ＮａＯＨ １００μｌと混和し室温で保持した。その後、６モル／１０００ｍｌ ＨＣｌ １０μｌを加えて反応を停止させた。最後に、反応により誘起された蛍光を光度計を用いて３５５ｎｍの励起波長及び４６０ｎｍの発光波長により測定した。供試化合物のキマーゼ阻害活性を５０％阻害濃度（ＩＣ５０）で表した。
【０１００】
結果
本発明化合物のキマーゼ阻害活性については、サルキマーゼ阻害活性を表１３に、またヒトキマーゼ阻害活性を表１４に示す。
【表２０】
2004507539.tif 000044
【０１０１】
【表２１】
2004507539.tif 000045
【０１０２】
【表２２】
2004507539.tif 000046
【０１０３】
【表２３】
2004507539.tif 000047
【０１０４】
表１３および表１４に示したように、本発明化合物は、サルキマーゼ及びヒトキマーゼの双方に優れた阻害活性を示した。一方、ＷＯ−Ａ−９３／２５５７４公報の実施例２８に記載の参照化合物（Ａ）は、極めて低いキマーゼ阻害活性であった。
【０１０５】
実験例２：血管透過性阻害
実験例２は、キマーゼにより誘発される血管透過性の亢進が本発明化合物の投与によって阻害されることを立証するため、マーカーとして色素を用いて行なった。
皮膚透過性試験
皮膚透過性試験は次の方法に従って行った。要約すれば、雄性ハートレーモルモット（３５０−４６０ｇ、静岡実験動物センター（Ｓｈｉｚｕｏｋａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）、日本）を、ネンブタールＴＭ（３０ｍｇ／ｋｇ；大日本製薬株式会社、日本）の腹腔内注射により麻酔した。モルモットの背中を剃毛した後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１．８単位／５５μｇ タンパク／ｍｌ（キマーゼ１単位は、ｐＨ７．８、２５℃において１分間にＮ−ベンゾイル−Ｌ−チロシン−エチルエステル（ＢＴＥＥ）１．０μモルを加水分解するのに要するキマーゼの量を示す）の濃度になるように希釈した精製ヒトキマーゼ（エラスチン・プロダクツ社（Ｅｌａｓｔｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．）、米国）５０μｌを、各動物の背部三ヶ所の皮内に注入した。溶媒（ＰＢＳで希釈した、０．０５モル／１０００ｍｌ 酢酸ナトリウム及び１モル／１０００ｍｌ塩化ナトリウムの混合物）を同じ動物の背部の他の三ヶ所に同様に注入した。最後の注射後、１％（ｗ／ｖ）エバンスブルー色素を含む生理食塩水（体重１００ｇ当り０．４ｍｌ）を伏在静脈に静脈内注射した。３０分後、麻酔下放血によって動物を殺し、その背面の皮膚を剥いだ。背面の皮膚に漏出した色素量を次の方法に従って測定した。
【０１０６】
要約すれば、各注射個所の周辺部位（径１６ｍｍ）を皮膚の内部から打ち抜き、打ち抜いた皮膚を終夜５５℃で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、３ｍｌ）中でインキュベーションすることによって漏出した色素を抽出した。ついで色素抽出物の吸収度を分光光度計を用いて６２０ｎｍの波長で測定した。背面の皮膚に漏出した色素量を測定するために、エバンスブルー色素の外部標準から検量線を以下のとおり得た：ＤＭＦ（３ｍｌ）中の対照皮膚にエバンスブルー色素（３．７５３０μｇ）を加えた。対照皮膚を上記の打ち抜いた皮膚と同様の方法で処理し、その色素抽出物を外部標準として使用した。各動物におけるキマーゼ誘発色素漏出量（ＡＣＤＬ）及び溶媒誘発色素漏出量（ＡＳＤＬ）を、各々の場合において三箇所の処理背部からの色素漏出の平均値として算出した。
【０１０７】
供試化合物による処理
ヒトキマーゼの皮内注射の１時間前に、動物に０．５％トラガント又は０．５％トラガントに懸濁させた供試化合物（１００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。供試化合物によるキマーゼ誘発色素漏出の阻害率を次の計算式を用いて算出した。
色素漏出阻害率（％）＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
Ａ：トラガント投与群のＡＣＤＬ
Ｂ：トラガント投与群のＡＳＤＬ
Ｃ：供試化合物投与群のＡＣＤＬ
Ｄ：供試化合物投与群のＡＳＤＬ
【０１０８】
結果
供試化合物（Ｉ−Ａ−１）及び（Ｉ−Ａ−２０）は、色素漏出をそれぞれ３４％及び５９％有意に阻害した。
【０１０９】
実験例３：血漿レベル
供試化合物の血漿レベルを次の方法で測定した。
要約すれば、供試化合物を１００ｍｇ／ｍｌとなるようにＤＭＳＯに溶解し、１ｍｇ／ｍｌとなるように０．５％トラガント溶液で懸濁した。体重約３０ｇの雄性ｄｄｙマウスに供試化合物溶液を経口投与した。１時間後、ネンブタール（大日本製薬株式会社）麻酔下、心臓から血液を採取し、遠心分離して血漿を得た。採取した血漿（１２５μｌ）を１０％ＤＭＳＯ（１２０μｌ）と酢酸エチル（７２０μｌ）と混和した。遠心分離後、酢酸エチル層を採取し、乾固した。残渣を１０％ＤＭＳＯで溶解し、段階的に希釈して供試サンプルとした。供試サンプルのキマーゼ阻害活性を、実験例１と同様にして測定した。この供試サンプルのキマーゼ阻害アッセイにおいて、０．１モル／１０００ｍｌリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）は、５ミリモル／１０００ｍｌエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）２ナトリウム塩、０．７７ミリモル／１０００ｍｌジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＰ）および８ミリモル／１０００ｍｌジピリジルを含有している。供試化合物の血漿中濃度は検量線から算出した。
【０１１０】
検量線は下記の方法により得た。供試化合物（０．０６−６０ｎｇ）を対照血漿に加えた。対照血漿を供試サンプルの場合と同様の方法で処理した。最後に、１０％ＤＭＳＯに溶解した残渣のキマーゼ阻害活性を測定し、供試化合物の量に対してプロットした。
【０１１１】
結果
結果を表１５に示す。
【表２４】
2004507539.tif 000048
表１５に示すように、本発明化合物は、経口投与であっても高い血中濃度を示した。
【０１１２】
実験例４：毒性試験
５週令の雄性ｄｄｙマウスに、３０及び３００ｍｇ／ｋｇ／日の投与レベルで化合物Ｉ−Ａ−１を一日一回２週間経口投与した。これらのマウスにおいて、体重、摂飼量、心臓重量、肝臓重量、腎臓重量、剖検所見、血液学及び血液化学を含むいかなるパラメーターにおいても処置に関連する事項は観察されなかった。
【０１１３】
上述の実験結果から明らかなように、本発明化合物は優れたキマーゼ阻害剤であり、キマーゼが関与する様々な疾患の治療に対して有用である。
本発明化合物は、経口で、非経口で、皮膚で／経皮で、経眼等で投与することができ、好ましくは経口経路である。化合物の投与量は投与経路、疾患の重篤度ならびに患者の体重及び年齢などにより変動し得る。例えば、本発明化合物を経口投与する場合、その投与量は通常１日につき体重６０ｋｇあたり約０．５から約５０００ｍｇの範囲内であり、好ましくは１日につき体重６０ｋｇあたり約５から約２０００ｍｇの範囲内であり、最も好ましくは１日につき体重６０ｋｇあたり１５から３００ｍｇの範囲内にある。本発明化合物を点眼剤の形で投与する場合、その投与量は通常１日につき体重６０ｋｇあたり０．０６から３０ｍｇの範囲内であり、好ましくは０．３から６ｍｇの範囲内にある。
【０１１４】
本発明化合物は、通常の医薬製剤の形で使用される。そのような医薬製剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤、軟膏等が挙げられる。これらの医薬製剤は、通常の薬学的に許容しうる成分を用いて通常の手法において調製される。いかなる成分も、本発明の化合物（Ｉ−Ａ）と反応しない限り使用することができる。
【０１１５】
固形製剤における成分の具体的な例としては、トウモロコシデンプン（すなわち、コーンスターチ）、マンニトール、ラクトース、低置換度ＨＰＣ（すなわち、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）、ＨＰＣ（すなわち、ヒドロキシプロピルセルロース）、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸等が挙げられる。液体製剤における成分の例としては、注射用水、大豆油、ソルビタンモノオレート、ポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８８及びポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の如き界面活性剤等が挙げられる。軟膏製剤における成分例としては白色ワセリンが挙げられる。
【０１１６】
本発明の医薬製剤を製剤例により説明する。以下の製剤例において、活性成分たる本発明化合物は、５μｍもしくはそれ未満の大きさに微紛化した後に使用する。
製剤例Ａ、Ｂ及びＣ：錠剤
表１６に記載の顆粒成分を常法により顆粒化し、それに外部賦形剤を加え、混合物を打錠して１２０ｍｇ〜３００ｍｇの重さの錠剤を得た。
【表２５】
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【０１１７】
製剤例Ｄ、Ｅ及びＦ：顆粒剤
表１７に記載の顆粒成分を常法により顆粒化し、それに外部賦形剤を加えて顆粒剤を得た。
【表２６】
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【０１１８】
製剤例Ｇ及びＨ：水性液剤
表１８に記載の成分を常法により均一に混合し、点眼剤又は注射剤として使用できる水性液剤を得た。
【表２７】
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【０１１９】
製剤例Ｊ、Ｋ及びＬ：油性液剤
表１９に記載の成分を常法により均一に混合し、油性液剤を得た。これらの製剤は注射剤として使用でき、又は軟カプセルに充填して経口製剤として使用することができる。
【表２８】
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【０１２０】
製剤例Ｍ、Ｎ及びＰ：軟膏剤
表２０に記載の成分を常法により均一に混合し、皮膚投与製剤として使用できる軟膏剤を得た。
【表２９】
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【０１２１】
産業上の利用可能性
本発明化合物（Ｉ−Ａ）は優れたキマーゼ阻害活性を有し、キマーゼが関与する様々な疾患の予防または治療にキマーゼ阻害剤として、例えば、抗アレルギー剤及び抗炎症剤、抗再狭窄剤もしくは抗動脈硬化剤として有用である。化合物（Ｉ−Ｂ）は、該活性化合物（Ｉ−Ａ）の合成中間体として有用である。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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