(57)【要約】本発明は、肥満の治療に有用なメラノコルチン−４受容体（ＭＣ４−Ｒ）作動薬活性を有する、ジスルフィドまたはラクタム橋により環化されたペプチドに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式：
【化１】
2004507558.tif 000283
（式中、
Ｒ１およびＲ１２は、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成し、ＸはＣであり、ＹはＣであるか、あるいは、
Ｒ１は、水素、
【化２】
2004507558.tif 000284
であり；そして
Ｒ１２は、水素であり、ＸおよびＹは、それぞれＣであり、ＸとＹとの間の結合は二重結合であるか、またはＸおよびＹは、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合は一重結合であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；
Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｎは、０または１であり；そして
Ｑは、
【化３】
2004507558.tif 000285
であり（式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、ハロ、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ヒロドキシ、または１〜４個の炭素原子を有するアルコキシであり、ここで、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ３およびＲ５はいずれも水素であり；そしてＲ６は、水素、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ、フェノキシまたはハロであり；Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立して水素、３または４個の炭素原子を有するアルキル、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであるか、あるいはＲ１１およびＲ１３は、いずれもフェニルである）；
Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ８は、水素またはメチルであり；
Ｒ９は、
【化４】
2004507558.tif 000286
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ｐは、０または１であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
Ｚは、
【化５】
2004507558.tif 000287
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキルである）
の化合物、ならびに薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
下記式：
【化６】
2004507558.tif 000288
（式中、
Ｒ１およびＲ１２は、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成し、ＸはＣであり、ＹはＣであるか、あるいは、
Ｒ１は、水素、
【化７】
2004507558.tif 000289
であり；そして
Ｒ１２は、水素であり、ＸおよびＹは、それぞれＣであり、ＸとＹとの間の結合は二重結合であるか、またはＸおよびＹは、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合は一重結合であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；
Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、ハロ、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ヒロドキシまたは１〜４個の炭素原子を有するアルコキシであり、ここで、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ３およびＲ５はいずれも水素であり；
Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ８は、水素またはメチルであり；
Ｒ９は、
【化８】
2004507558.tif 000290
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ｐは、０または１であり；
ｍは、０、１、２または３であり；
Ｚは、
【化９】
2004507558.tif 000291
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキルである）
の化合物、ならびに、薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；Ｚが、
【化１０】
2004507558.tif 000292
であり；
Ｒ７が、Ｏであり；
Ｒ１が、
【化１１】
2004507558.tif 000293
であり；
Ｒ２が、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；そして
Ｒ１０およびＲ１２が、いずれも水素である、
請求項２記載の化合物。
【請求項４】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが、
【化１２】
2004507558.tif 000294
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；
Ｒ１が、水素、
【化１３】
2004507558.tif 000295
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；そして
Ｒ１０およびＲ１２が、いずれも水素であり；かつ
ｎおよびＲ１４が、請求項２に定義されたとおりである、
請求項２記載の化合物。
【請求項６】
ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；ｎが０であり；そしてＲ９が、
【化１４】
2004507558.tif 000296
である、
請求項５記載の化合物。
【請求項７】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｎ−メチル（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
Ｚが、
【化１５】
2004507558.tif 000297
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、
【化１６】
2004507558.tif 000298
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；Ｒ１０およびＲ１２が、いずれも水素であり；Ｒ９が、
【化１７】
2004507558.tif 000299
であり；そして
Ｒ７が、請求項２に定義されたとおりである、
請求項５記載の化合物。
【請求項９】
ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうち１個が水素、ハロまたはアルキルであり、残りが水素である、請求項５記載の化合物。
【請求項１０】
【表１】
2004507558.tif 000300
である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；Ｒ１が、
【化１８】
2004507558.tif 000301
であり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうち１個がアルコキシであり、残りが水素であり；ｎが、０である、請求項８記載の化合物。
【請求項１２】
【表２】
2004507558.tif 000302
である、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；
Ｒ９が、
【化１９】
2004507558.tif 000303
であり；
ｐが、０であり；そしてＲ１７が、請求項２に定義されたとおりである、
請求項８記載の化合物。
【請求項１４】
【表３】
2004507558.tif 000304
である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１およびＲ１２が、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成する、請求項２記載の化合物。
【請求項１６】
シクロ（フタル酸−Ｌｙｓ）−フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２もしくはシクロ（フタル酸−Ｄｐｒ）フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２、またはＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２である、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
下記式：
【化２０】
2004507558.tif 000305
（式中、
Ｒ１は、水素、
【化２１】
2004507558.tif 000306
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；
Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ６は、水素、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ、フェノキシまたはハロであり；
Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ８は、水素またはメチルであり；
Ｒ９は、
【化２２】
2004507558.tif 000307
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ｐは、０または１であり；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
Ｚは、
【化２３】
2004507558.tif 000308
であり；かつ
Ｒ１７は、水素または低級アルキルである）
の化合物、ならびに、薬学的に許容されるその塩。
【請求項１８】
Ｚが、
【化２４】
2004507558.tif 000309
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；
Ｒ１が、
【化２５】
2004507558.tif 000310
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；
Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；そして
Ｒ９が、
【化２６】
2004507558.tif 000311
であり；かつ
Ｒ１７が、請求項２に定義されたとおりである、
請求項１９記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ６が、水素またはアルキルである、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
【表４】
2004507558.tif 000312
である、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ６が、ハロである、請求項１９記載の化合物。
【請求項２２】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＣｌＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項２３記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ６が、アルコキシまたはフェノキシである、請求項２０記載の化合物。
【請求項２４】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＰｈＯＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−３−ＭｅＯ−Ａｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項２４記載の化合物。
【請求項２５】
下記式：
【化２７】
2004507558.tif 000313
（式中、
Ｒ１は、水素、
【化２８】
2004507558.tif 000314
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；
Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立して水素、３個もしくは４個の炭素原子を有するアルキル、または５個もしくは６個の炭素原子を有するシクロアルキルであるか、あるいはＲ１１およびＲ１３は、いずれもフェニルであり；
Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ８は、水素またはメチルであり；
Ｒ９は、
【化２９】
2004507558.tif 000315
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ｐは、０または１であり；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
Ｚは、
【化３０】
2004507558.tif 000316
であり；かつ
Ｒ１７は、水素または低級アルキルである）
の化合物、ならびに、薬学的に許容されるその塩。
【請求項２６】
Ｚが、
【化３１】
2004507558.tif 000317
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；
Ｒ１が、
【化３２】
2004507558.tif 000318
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；
Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；そして
Ｒ９が、
【化３３】
2004507558.tif 000319
であり；かつ
Ｒ１７が、水素または低級アルキルである、
請求項２５記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１１およびＲ１３のうち１個が、アルキルまたはシクロアルキルであり、他が水素である、請求項２６記載の化合物。
【請求項２８】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｃｈｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｂｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項２７記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ１１およびＲ１３が、フェニルであり、他が水素またはフェニルである、請求項２６記載の化合物。
【請求項３０】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−Ａｄｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項２９記載の化合物。
【請求項３１】
下記式：
【化３４】
2004507558.tif 000320
（式中、
Ｒ１は、水素、
【化３５】
2004507558.tif 000321
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；
Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち１個が、水素、ハロ、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、または１〜３個の炭素原子を有するアルコキシであり、残りが、水素であり；
Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ８は、水素またはメチルであり；
Ｒ９は、
【化３６】
2004507558.tif 000322
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ｐは、０または１であり；
ｍは、０、１、２または３であり；そして
Ｚは、
【化３７】
2004507558.tif 000323
であり；かつ
Ｒ１７は、水素または低級アルキルである）
の化合物、ならびに、薬学的に許容されるその塩。
【請求項３２】
Ｚが、
【化３８】
2004507558.tif 000324
であり；
Ｒ１が、
【化３９】
2004507558.tif 000325
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；
Ｒ６が、水素、ハロ、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、または１〜３個の炭素原子を有するアルコキシであり；そして
Ｒ９が、
【化４０】
2004507558.tif 000326
であり；かつ
Ｒ１７が、請求項３１に定義されたとおりである、
請求項３１記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ７が、ＮＨである、請求項３２記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ６が、水素またはアルキルである、請求項３２記載の化合物。
【請求項３５】
【表５】
2004507558.tif 000327
である、請求項３４記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ６が、ハロである、請求項３１〜３３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３７】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項３６記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ６が、アルコキシである、請求項３１〜３３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３９】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＭｅＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＥｔＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ｉＰｒＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項３８記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ７が、Ｏであり、Ｒ６が、ハロである、請求項３１または３２記載の化合物。
【請求項４１】
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２またはペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４２】
Ｚが、−Ｓ−Ｓ−であり；
Ｒ１が、
【化４１】
2004507558.tif 000328
であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、水素であり；
Ｒ６が、水素またはハロであり；
Ｒ７が、ＮＨであり；そして
Ｒ９が、
【化４２】
2004507558.tif 000329
であり；ここでＲ１７は、前述のとおりである、
請求項３１記載の化合物。
【請求項４３】
【表６】
2004507558.tif 000330
である、請求項４２記載の化合物。
【請求項４４】
前駆体線状ペプチドのＺ位において、ラクタム結合またはジスルフィド結合を形成することにより、式：
【化４３】
2004507558.tif 000331
（式中、Ｒ１〜Ｒ１２、ｍ、ｐ、Ｑ、Ｘ、ＹおよびＺは、請求項１〜４３に定義されたとおりである）
の化合物を製造する方法。
【請求項４５】
請求項１〜４３のいずれか１項記載の化合物、および治療に不活性な担体を含む薬学的組成物。
【請求項４６】
メラノコルチン−４−受容体活性に関連する疾患の治療および／または予防用の薬剤を調製するための、請求項１〜４３のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項４７】
メラノコルチン−４−受容体活性に関連する疾患の治療および／または予防の方法であって、請求項１〜４３のいずれか１項記載の化合物をヒトまたは動物に投与することを含む方法。
【請求項４８】
疾患が肥満である、請求項４６または４７記載の使用または方法。
【請求項４９】
請求項４４記載の方法により製造される、請求項１〜４３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５０】
治療活性物質として、特に、メラノコルチン−４−受容体に関連する疾患の治療および／または予防用の治療活性物質として用いるための、請求項１〜４３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５１】
実質的に以上に記載した、新規化合物、新規薬学的組成物および方法、ならびにそのような化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
肥満は、先進国の重大な健康問題として広く認識されており、米国において流行の状態に達している。米国人口の５０％を越えた者が体重過剰と見なされ、２５％を越えた者が臨床的肥満と診断され、心臓病、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、高血圧および特定の癌に対するかなりの危険性がある。この流行病は、米国だけでも毎年７００億ドルを越える突出した肥満治療費用が予想されているので、ヘルスケアシステムにかなりの負担を与えている。肥満治療方法は、食物摂取量の減少、またはエネルギー消費量の増加を含む。
【０００２】
メラノコルチン−４−受容体（ＭＣ４−Ｒ）作動薬活性を有するα−メラノサイト刺激ホルモン（αＭＳＨ）の環状ヘプタペプチド類似体が、脳の第３脳室内にまたは腹膜内に注射されると、マウスの食物摂取の長期にわたる抑制をもたらすことが、実証されている。この効果は、ＭＣ４−Ｒ拮抗薬と一緒に投与すると逆になる（Ｆａｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９７年）第３８５巻：１６５〜１６８頁）。したがって、ＭＣ４−Ｒ活性の作動薬は、肥満の治療または予防において有用である。
【０００３】
同類の構成員間で３５〜６０％の類似性に及ぶ配列類似性に基づいて、５種類のメラノコルチン受容体が知られているが（Ｃｏｎｅら、Ｒｅｃ．Ｐｒｏｇ．Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅｓ．（１９９６年）第５１巻：２８７〜３１８頁）、これらの受容体は、機能が異なる。例えば、ＭＣ１−Ｒは、ＭＣ１−Ｒの有効な作動薬であるαＭＳＨに反応して、色素沈着を制御する、Ｇ−蛋白が結合した受容体である（Ｃｏｎｅら、前掲書）。ＭＣ１−Ｒ受容体の作動により、メラノサイトが刺激され、それがユーメラニンを発生させ、皮膚癌の危険性を高める。ＭＣ１−Ｒの作動は、神経作用も有し得る。ＭＣ２−Ｒ活性の刺激により、副腎組織の癌が発生し得る。ＭＣ３−ＲおよびＭＣ５−Ｒの作動の効果は、まだ知られていない。すべてのメラノコルチン受容体が、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）のペプチドホルモンクラスに反応する。これらのペプチドは、メラノコルチン類（α、βおよびγ）、アドレノコルチコトロピンホルモン（ＡＣＴＨ）および種々のエンドルフィン類（例えば、リポトロピン）の３種のクラスのホルモンに加工される、１３１のアミノ酸からなるプロホルモンであるプロ−オピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）から誘導される（Ｃｏｎｅら、前掲書）。それらの異なる機能のゆえに、複数のメラノコルチン受容体の活性が同時に作動することは、望まれない副作用を引き起こす可能性がある。したがって、ＭＣ４−Ｒの作動薬は、１種以上の他のメラノコルチン受容体に対するよりも、ＭＣ４−Ｒに対してより選択的であることが望ましい。
【０００４】
Ｈａｓｋｅｌｌ−Ｌｕｅｖａｎｏら（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（１９９６年）第１７（６）巻、９９５〜１００２頁）は、トリペプチド（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐを含むと共にカエル（Ｒａｎａ　ｐｉｐｉｅｎｓ）皮膚の生物学的検定においてメラノトロピック（皮膚暗色化）活性を示すペプチドを開示している。Ｈａｓｋｅｌｌ−Ｌｕｅｖａｎｏら（前掲書）は、以下に記載の式ＩまたはＩＩで示される、いかなる化合物も開示していない。
【０００５】
Ｂｅｄｎａｒｅｋら（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（１９９９年）第２０巻：４０１〜４０９頁）およびＢｅｄｎａｒｅｋら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．（１９９９年）第２６１巻：２０９〜２１３頁）は、環状ペピチドＭＴ−ＩＩの類似体を開示している。これらは、以下に記載の式ＩまたはＩＩで示されるいかなる化合物も開示していない。
【０００６】
本発明は、下記式で示される化合物、および薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０００７】
【化４４】
2004507558.tif 000002
【０００８】
式Ｉで示される化合物中、Ｒ１およびＲ１２は、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成し、Ｘは、Ｃであり、そしてＹは、Ｃであるか、あるいは
Ｒ１は水素、
【０００９】
【化４５】
2004507558.tif 000003
【００１０】
であり；そして
Ｒ１２は、水素であり、ＸおよびＹは、それぞれＣであり、ＸとＹとの間の結合は二重結合であるか、またはＸおよびＹは、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合は一重結合であり；Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；ｎは、０または１であり；そしてＱは、
【００１１】
【化４６】
2004507558.tif 000004
【００１２】
であり（式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、ハロ、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ヒロドキシ、または１〜４個の炭素原子を有するアルコキシであり、ここで、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ３およびＲ５はいずれも水素であり；そしてＲ６は、水素、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ、フェノキシまたはハロであり；Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立して水素、３または４個の炭素原子を有するアルキル、５または６個の炭素原子を有するシクロアルキルであるか、あるいはＲ１１およびＲ１３は、いずれもフェニルである）；Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；Ｒ８は、水素またはメチルであり；Ｒ９は、
【００１３】
【化４７】
2004507558.tif 000005
【００１４】
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；ｐは０または１であり；ｍは、０、１、２または３であり；Ｚは、
【００１５】
【化４８】
2004507558.tif 000006
【００１６】
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【００１７】
式Ｉで示される化合物中の点線で示す結合は、ＸおよびＹがそれぞれＣＨ−である場合、水素化される。一方、点線で示す結合が存在する場合、ＹおよびＸが、Ｒ１およびＲ１２と一緒になってフェニル環を形成することはなく、ＸおよびＹはいずれも４価炭素原子である。
【００１８】
本発明は、また、下記式で示される化合物、および薬学的に許容されるその塩も提供する。
【００１９】
【化４９】
2004507558.tif 000007
【００２０】
式ＩＩで示される化合物中、Ｒ１は、水素、
【００２１】
【化５０】
2004507558.tif 000008
【００２２】
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；ｎは０または１であり；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうち１個は、水素、ハロ、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、または１〜３個の炭素原子を有するアルコキシであり、残りは、水素である。Ｒ７はＯまたはＮＨである。Ｒ８は、水素またはメチルである。Ｒ９は、
【００２３】
【化５１】
2004507558.tif 000009
【００２４】
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；ｐは、０または１であり；ｍは、０、１、２または３であり；Ｚは、
【００２５】
【化５２】
2004507558.tif 000010
【００２６】
である。
Ｒ１７は、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【００２７】
式ＩおよびＩＩで示される化合物ならびにペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２は、ＭＣ４−Ｒの作動薬である。ＭＣ４−Ｒ活性の作動薬が、ヒト肥満のマウスモデルにおいて、食物摂取量の低下を引き起こすことが知られている。したがって、こららの化合物は、肥満の治療または予防において有用である。
【００２８】
以下に例示する式ＩおよびＩＩで示されるすべての化合物ならびにペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２を、生物学的活性試験Ａにおける以下のインビトロ検定において、ＭＣ４−Ｒ作動活性およびＭＣ１−Ｒ作動活性について試験した。試験したすべての化合物が、ＭＣ４−Ｒ作動薬活性についてのＥＣ５０が、５００ｍＭ未満であり、すべて、ＭＣ１−Ｒ作動薬活性よりも、少なくとも１０倍大きなＭＣ４−Ｒ作動薬活性を示した。これに対して、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２は、ほぼ同じＭＣ１−Ｒ作動薬活性とＭＣ４−Ｒ作動薬活性を示した。
【００２９】
命名法および略称
「アルキル」という用語は、直鎖または分岐鎖アルキル基を意味し、「低級アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。「アルケニル」という用語は、直鎖または分岐鎖アルケニル基を意味する。「アルキニル」という用語は、直鎖または分岐鎖アルキニル基を意味する。
【００３０】
「アルコキシ」という用語は、アルキルが前述に定義されたとおりである式：アルキル−Ｏ−で示される基を意味する。「フェノキシ」という用語は、フェニル−Ｏ−で示される基を意味する。特記されない限り、「フェニル」は、非置換フェニル環を意味し、「フェノキシ」は、非置換フェノキシ基を意味する。
【００３１】
「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードから選択される基を意味する。
【００３２】
「薬学的に許容される塩」という用語は、遊離塩基または遊離酸の、生物学的効果および特性を維持する塩であって、生物学的にまたは他の点で望ましくないことが存在しないものを意味する。これらの塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等のような無機酸とで；および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ−アセチルシステイン等のような有機酸とで形成される。さらに、これらの塩は、遊離酸に無機塩基または有機塩基を添加することにより調製することができる。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム等の塩があるが、限定されるものではない。有機塩基から誘導される塩には、第一級、第二級および第三級アミン、天然に由来する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂等の塩があるが、限定されるものではない。
【００３３】
以下のような式ＩＡで示される化合物、および薬学的に許容されるその塩がある。
【００３４】
【化５３】
2004507558.tif 000011
【００３５】
（式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｐは、前述のとおりである）
【００３６】
式ＩＡで示される化合物において、Ｒ１およびＲ１２は、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成し、または
Ｒ１は水素、
【００３７】
【化５４】
2004507558.tif 000012
【００３８】
であり；そして
Ｒ１２は、水素であり、ＸおよびＹは、それぞれＣであって、ＸとＹとの間の結合は二重結合である、またはＸおよびＹは、それぞれＣＨであって、ＸとＹとの間の結合は一重結合であり；Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルであり；Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；そしてｎは、０または１である。Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、ハロ、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、ヒロドキシまたは１〜４個の炭素原子を有するアルコキシであり、ここで、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ３およびＲ５は、いずれも水素である。Ｒ７は、ＯまたはＮＨである。Ｒ８は、水素またはメチルである。Ｒ９は、
【００３９】
【化５５】
2004507558.tif 000013
【００４０】
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；ｐは、０または１であり；ｍは、０、１、２または３であり；Ｚは、
【００４１】
【化５６】
2004507558.tif 000014
【００４２】
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【００４３】
式ＩＡ中の点線で示される結合は、水素化することができる。点線で示される結合が水素化された場合、ＸおよびＹは、いずれも−ＣＨ−である。一方、点線で示される結合が存在する場合、ＹおよびＸがＲ１およびＲ１２と一緒になってフェニル環を形成することはなく、ＸおよびＹは、いずれも４価炭素原子である。
【００４４】
式ＩＡで示される化合物の一つの実施態様において、ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が、水素化された一重結合であり；Ｚが、
【００４５】
【化５７】
2004507558.tif 000015
【００４６】
であり；
Ｒ７が、Ｏであり；Ｒ１が、
【００４７】
【化５８】
2004507558.tif 000016
【００４８】
であり；
Ｒ２が、１〜５個の炭素原子を有するアルキルであり；そしてＲ１０およびＲ１２が、いずれも水素である。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【００４９】
式ＩＡで示される化合物のもう一つの好ましい実施態様においては、Ｚが、
【００５０】
【化５９】
2004507558.tif 000017
【００５１】
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、水素、
【００５２】
【化６０】
2004507558.tif 000018
【００５３】
であり、
Ｒ２が、アルキルであり；そしてＲ１０およびＲ１２が、いずれも水素である。
【００５４】
式ＩＡで示される化合物の他の実施態様においては、Ｚが、
【００５５】
【化６１】
2004507558.tif 000019
【００５６】
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、
【００５７】
【化６２】
2004507558.tif 000020
【００５８】
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；そしてＲ１０およびＲ１２が、いずれも水素である。
【００５９】
より具体的な実施態様において、ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が水素化された一重結合であり；ｎが、０であり；そしてＲ９が、
【００６０】
【化６３】
2004507558.tif 000021
【００６１】
である。
【００６２】
そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｎ−メチル（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【００６３】
式ＩＡで示される化合物のもう一つのより具体的な実施態様において、Ｚが、
【００６４】
【化６４】
2004507558.tif 000022
【００６５】
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、
【００６６】
【化６５】
2004507558.tif 000023
【００６７】
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；Ｒ１０およびＲ１２が、いずれも水素であり；Ｒ９が、
【００６８】
【化６６】
2004507558.tif 000024
【００６９】
であり；そして
Ｒ１７が、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【００７０】
そのような化合物には、ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうち一つが水素、ハロまたはアルキルであり、残りが水素である化合物があり、例えば、
【００７１】
【表７】
2004507558.tif 000025
【００７２】
がある。
【００７３】
式ＩＡで示される化合物のもう一つの具体的な実施態様は、ＸおよびＹが、それぞれＣＨであり、ＸとＹとの間の結合が一重結合であり；Ｒ１が、
【００７４】
【化６７】
2004507558.tif 000026
【００７５】
であり；Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうち一つがアルコキシであり、残りが水素であり；ｎが、０である化合物であり、例えば、
【００７６】
【表８】
2004507558.tif 000027
【００７７】
である。
【００７８】
式ＩＡで示される化合物の実施態様は、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、水素であり；Ｒ７がＮＨであり；Ｒ９が、
【００７９】
【化６８】
2004507558.tif 000028
【００８０】
であり；
Ｒ１７が、水素または低級アルキル、好ましくはメチルであり；そしてｐが０である化合物を含み、例えばシクロ（コハク酸−Ｌｙｓ）−コハク酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、シクロ（マレイン酸−Ｌｙｓ）−マレイン酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、シクロ（コハク酸−Ｄｐｒ）−コハク酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２およびシクロ（マレイン酸−Ｄｐｒ）−マレイン酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２である。
【００８１】
式ＩＡで示される化合物の他の実施態様において、Ｒ１およびＲ１２が、ＸおよびＹと一緒になってフェニル環を形成する。そのような化合物に例には、シクロ（フタル酸−Ｌｙｓ）−フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、シクロ（フタル酸−Ｄｐｒ）フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２およびＡｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２がある。
【００８２】
式ＩＢの化合物は、以下のように示され、そして薬学的に許容されるその塩である。
【００８３】
【化６９】
2004507558.tif 000029
【００８４】
式ＩＢで示される化合物において、Ｒ１は、水素、
【００８５】
【化７０】
2004507558.tif 000030
【００８６】
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルである。Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルである。ｎは、０または１である。Ｒ６は、水素、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ、フェノキシまたはハロであり；Ｒ７は、ＯまたはＮＨである。Ｒ８は水素またはメチルである。Ｒ９は、
【００８７】
【化７１】
2004507558.tif 000031
【００８８】
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；ｐは、０または１であり；ｍは、０、１、２または３であり；Ｚは、
【００８９】
【化７２】
2004507558.tif 000032
【００９０】
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【００９１】
式ＩＢで示される化合物の一つの実施態様において、すなわち、式ＩＢ１で示される化合物において、Ｚが、
【００９２】
【化７３】
2004507558.tif 000033
【００９３】
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、
【００９４】
【化７４】
2004507558.tif 000034
【００９５】
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；Ｒ９が、
【００９６】
【化７５】
2004507558.tif 000035
【００９７】
であり、Ｒ１７が、前述のとおりである。
【００９８】
式ＩＢ１で示されるそのような化合物のより具体的な実施態様においては、Ｒ６が、水素またはアルキルである。そのような化合物の例には、
【００９９】
【表９】
2004507558.tif 000036
【０１００】
がある。
【０１０１】
式ＩＢ１で示されるそのような化合物のもう一つのより具体的な実施態様においては、Ｒ６がハロである。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＣｌＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１０２】
式ＩＢ１で示されるそのような化合物のもう一つのより具体的な実施態様においては、Ｒ６がアルコキシまたはフェノキシである。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＰｈＯＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−３−ＭｅＯ−Ａｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１０３】
式ＩＣの化合物は、以下のように示されるもの、および薬学的に許容されるその塩である。
【０１０４】
【化７６】
2004507558.tif 000037
【０１０５】
式ＩＣで示される化合物において、
Ｒ１は、水素、または
【０１０６】
【化７７】
2004507558.tif 000038
【０１０７】
であり；
Ｒ２は、１〜５個の炭素原子を有するアルキル、２〜５個の炭素原子を有するアルケニル、または２〜５個の炭素原子を有するアルキニルである。Ｒ１４は、１〜５個の炭素原子を有するアルキルである。ｎは、０または１であり；Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立して水素、３もしくは４個の炭素原子を有するアルキル、または５もしくは６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり、あるいは、Ｒ１１およびＲ１３は、いずれもフェニルであり；Ｒ７は、ＯまたはＮＨであり；Ｒ８は、水素またはメチルであり；Ｒ９は、
【０１０８】
【化７８】
2004507558.tif 000039
【０１０９】
であり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；ｐは０または１であり；ｍは、０、１、２または３であり；Ｚは、
【０１１０】
【化７９】
2004507558.tif 000040
【０１１１】
であり；そして
Ｒ１７は、水素または低級アルキル、好ましくはメチルである。
【０１１２】
式ＩＣで示される化合物の一つの実施態様において、すなわち式ＩＣ１で示される化合物において、Ｚが、
【０１１３】
【化８０】
2004507558.tif 000041
【０１１４】
であり；
Ｒ７が、ＮＨであり；Ｒ１が、
【０１１５】
【化８１】
2004507558.tif 000042
【０１１６】
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；Ｒ９が、
【０１１７】
【化８２】
2004507558.tif 000043
【０１１８】
である。
【０１１９】
式ＩＣ１で示されるそのような化合物の、一つのより具体的な実施態様においては、Ｒ１１およびＲ１３のうち１個がアルキルまたはシクロアルキルであり、他が水素である。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｃｈｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｂｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１２０】
式ＩＣ１で示されるそのような化合物のもう一つのより具体的な実施態様においては、Ｒ１１およびＲ１３のうち１個がフェニルであり、他が水素またはフェニルである。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−Ａｄｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１２１】
式ＩＩで示される化合物の一つの実施態様において、すなわち式ＩＩＡで示される化合物において、Ｚが、
【０１２２】
【化８３】
2004507558.tif 000044
【０１２３】
であり；
Ｒ１が、
【０１２４】
【化８４】
2004507558.tif 000045
【０１２５】
であり；
Ｒ２が、アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、それぞれ水素であり；
Ｒ６が、水素、ハロ、１〜３個の炭素原子を有するアルキル、または１〜３個の炭素原子を有するアルコキシであり；
Ｒ９が、
【０１２６】
【化８５】
2004507558.tif 000046
【０１２７】
であり；そして
Ｒ１７が、前述のとおりである。
【０１２８】
式ＩＩ−Ａで示される化合物の一つの実施態様においては、先の段落において記載したように、Ｒ７がＮＨである。より具体的な実施態様においては、Ｒ７がＮＨであり、Ｒ６が、水素またはアルキルである。そのような化合物の例には、ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−（Ｄ，Ｌ）−Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−Ｍｅ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−Ｅｔ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ｉＰｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１２９】
式ＩＩＡで示される化合物のもう一つの具体的な実施態様においては、Ｒ７がＮＨであり、Ｒ６がハロである。そのような化合物の例には、ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１３０】
式ＩＩ−Ａで示される化合物の他の具体的な実施態様においては、Ｒ７がＮＨであり、Ｒ６がアルコキシである。ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＭｅＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２、ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＥｔＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ｉＰｒＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２。
【０１３１】
式ＩＩで示される化合物の他の実施態様は、Ｚ、Ｒ１〜Ｒ５およびＲ８〜Ｒ１０が前述のとおりであり、Ｒ７がＯであり、Ｒ６がハロである、式ＩＩで示される化合物である。そのような化合物の例には、ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１３２】
式ＩＩで示される化合物の他の実施態様において、すなわち式ＩＩＢで示される化合物は、Ｚが、−Ｓ−Ｓ−であり；
Ｒ１が、
【０１３３】
【化８６】
2004507558.tif 000047
【０１３４】
であり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０が、水素であり；Ｒ６が、水素またはハロであり；Ｒ７が、ＮＨであり；そしてＲ９が、
【０１３５】
【化８７】
2004507558.tif 000048
【０１３６】
であり、ここでＲ１７は、前述のとおりである。
【０１３７】
式ＩＩＢで示されるそのような化合物の例には、Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−５−Ｂｒ（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２がある。
【０１３８】
本発明は、次の化合物をも提供する：ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２。
【０１３９】
ペプチドを定義するために用いる命名法は、当技術分野において典型的に用いられるものであり、Ｎ末端においてアミノ基が左側に現れ、カルボキシル基がＣ末端において右側に現われる。天然アミノ酸とは、蛋白中に見出される天然産のアミノ酸；すなわち、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、ＴｒｐおよびＨｉｓの一つを意味する。アミノ酸が異性体形状を有する場合、それは、特記しない限り、表されるアミノ酸のＬ型である。
【０１４０】
以下の略号またはシンボルは、アミノ酸、保護基、溶媒、試薬等を表すのに用いられる。
符号　　　　　　　　　意味
β−Ａｌａ　　　　　　ベータ−アラニン
（２）−Ｎａｌ　　　　（２）−ナフチルアラニン
Ａｔｃ　　　　　　　　２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＢｒＡｔｃ　　　　５−ブロモ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＣｌＡｔｃ　　　　５−クロロ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＭｅＯＡｔｃ　　　５−メトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＥｔＯＡｔｃ　　　５−エトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ｉＰｒＯＡｔｃ　　５−イソプロポキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＭｅＡｔｃ　　　　５−メチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＥｔＡｔｃ　　　　５−エチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ｉＰｒＡｔｃ　　　５−イソプロピル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
５−ＤｍａＡｔｃ　　　５−ジメチルアミノ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸
ＤＢｒ　　　　　　　　Ｄ−２，４−ジアミノブタン酸
ＤＰｒ　　　　　　　　Ｄ−２，３−ジアミノプロピオン酸
Ｓａｒ　　　　　　　　サルコシン（Ｎ−メチルグリシン）
Ｃｉｔ　　　　　　　　シトルリン
Ａｐｃ　　　　　　　　１−アミノ−４−フェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ＨＯＡｐｃ　　　　１−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ＭｅＯＡｐｃ　　　１−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
３−ＭｅＯＡｐｃ　　　１−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ＥｔＯＡｐｃ　　　１−アミノ−４−（４−エトキシフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ｉＰｒＯＡｐｃ　　１−アミノ−４−（４−イソプロポキシフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ＭｅＡｐｃ　　　　１−アミノ−４−（４−メチルフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
４−ＣｌＡｐｃ　　　　１−アミノ−４−（４−クロロフェニル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸
Ａｐｐｃ　　　　　　　４−アミノ−１−フェニルピペリジン−４−カルボン酸
２−ＭｅＡｐｐｃ　　　４−アミノ−１−（２−メチルフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
２−ｉＰｒｏＡｐｐｃ　４−アミノ−１−（２−イソプロポキシフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
３−ＭｅＡｐｐｃ　　　４−アミノ−１−（３−メチルフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
３−ＭｅＯＡｐｐｃ　　４−アミノ−１−（３−メトキシフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
４−ＭｅＡｐｐｃ　　　４−アミノ−１−（４−メチルフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
４−ＣＩＡｐｐｃ　　　４−アミノ−１−（４−クロロフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
４−ＰｈＯＡｐｐｃ　　４−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）−ピペリジン−４−カルボン酸
Ａｃｈｃ　　　　　　　１−アミノ−４−シクロヘキシルシクロヘキサン−１−カルボン酸
Ａｄｐｃ　　　　　　　１−アミノ−４−ジフェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸
Ａｂｃ　　　　　　　　１−アミノ−４−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサン−１−カルボン酸
３−Ａｍｂ　　　　　　３−アミノメチル安息香酸
４−Ａｍｂ　　　　　　４−アミノメチル安息香酸
２−Ａｂａ　　　　　　２−アミノ安息香酸
Ｂｕ　　　　　　　　　ブチル
Ｐｅｎｔａ　　　　　　ペンタノイル
Ｆｍｏｃ　　　　　　　９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｐｍｃ　　　　　　　　２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
Ｔｒｔ　　　　　　　　トリチル（トリフェニルメチル）
ＣＨ２Ｃｌ２　　　　　　 塩化メチレン
ＣＨ３ＣＮ　　　　　　 アセトニトリル
ＤＭＦ　　　　　　　　ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ　　　　　　Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＴＦＡ　　　　　　　　トリフルオロ酢酸
ＨＯＢＴ　　　　　　　Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＣ　　　　　　　　Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミド
ＢＯＰ　　　　　　　　ベンゾトリアール−１−イルオキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート
ＰｙＢｒｏＰ　　　　　ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＢＴＵ　　　　　　　２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＦＡＢ−ＭＳ　　　　　高速原子衝撃質量分析法
ＥＳ−ＭＳ　　　　　　エレクトロスプレー質量分析法
【０１４１】
前記括弧内の置換アミノ酸は、ペプチド配列の類似体を示す。Ｎ−末端アミノ基の誘導を、ハイフンで分離されたＮ−末端置換の左に示す。すなわち、例えば、Ａｃ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＮＨ２は、Ｎ−末端の水素をアセチル基が置換したアミノ酸配列を有するペプチドを示す。ハイフンまたは括弧に続く末尾「−ＯＨ」および「−ＮＨ２」は、それぞれ、ポリペプチドの遊離酸およびアミド型を示す。
【０１４２】
これら代表的化合物用の前駆体として用いられる線状ペプチドは、アミノ酸の間のペプチド結合の形成のための、任意の既知の従来の手順により、容易に合成することができる。そのような従来の手順には、例えば、アミノ酸、または保護されたカルボキシル基もしくは他の反応性基を有する残基の遊離αアミノ基と、もう一つのアミノ酸、または保護されたアミノ基もしくは他の反応性基を有する残基の遊離第一級カルボキシル基との間に、縮合を生じさせる溶液相による手順がある。
【０１４３】
線状ペプチドを合成するためのプロセスは、所望の配列中の各アミノ酸をもう一つのアミノ酸またはその残基に引き続き添加する手順により、または所望のアミノ酸配列を有するペプチドフラグメントを、最初に従来法により合成し、次に縮合して所望のペプチドを提供する手順により、行うことができる。
【０１４４】
前駆体の線状ペプチドを合成するためのそのような従来の手順には、例えば、任意の固相ペプチド合成法がある。そのような方法において、新規化合物の合成は、所望のアミノ酸残基を、固相の一般的原理に従って、成長下のペプチド鎖に逐次組み込むことにより行うことができる〔Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３年、第８５巻、２１４９〜２１５４頁；Ｂａｒａｎｙら、Ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２巻、Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．およびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ １〜２８４頁（１９８０年）〕。
【０１４５】
ペプチドの化学的合成で一般的なのは、種々のアミノ酸部分の反応性側鎖基を、保護基が完全に除去されるまで化学反応がその部位で生じるのを防止する、適切な保護基で保護することである。通常、アミノ酸またはフラグメントのαアミノ基を保護すると同時に、カルボキシル基を反応させ、続いて、αアミノ保護基を選択的に除去し、その部位において続いて反応を起させることも一般的である。特定の保護基を固相合成法について開示したが、溶液相合成におけるそれぞれのアミノ酸について従来用いられていた保護基により、各アミノ酸を保護することができることに注目すべきである。
【０１４６】
αアミノ基は、芳香族ウレタン型保護基、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および置換ベンジルオキシカルボニル、例えば、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロポキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）；脂肪族ウレタン型保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルおよびアリルオキシカルボニルから選択される適切な保護基で、保護することができる。ここで、αアミノ保護のためには、Ｆｍｏｃが最も好ましい。
【０１４７】
グアノジノ基は、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、Ｚ、ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、アダマンチルオキシカルボニルおよびＢｏｃから選択される適切な保護基により、保護することができる。アルギニン（Ａｒｇ）用には、Ｐｍｃが最も好ましい。
【０１４８】
イソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）、塩化メチレン（ＣＨ２Ｃｌ２）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）のすべての溶媒は、Ｆｉｓｈｅｒ社またはＢｕｒｄｉｃｋ　＆　Ｊａｃｋｓｏｎ社から購入し、さらに蒸留することなく用いた。トリフルオロ酢酸は、Ｈａｌｏｃａｒｂｏｎ社またはＦｌｕｋａ社から購入し、さらに精製することなく用いた。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）は、Ｆｌｕｋａ社またはＡｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく用いた。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）および１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）は、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．から購入し、さらに精製することなく用いた。保護アミノ酸は、概してＬ型であり、Ｂａｃｈｅｍ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈ社またはＮｅｏｓｙｓｔｅｍ社から購入した。これらの試薬の純度は、使用前に、薄層クロマトグラフィー、ＮＭＲおよび融点により確かめた。ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）は、Ｂａｃｈｅｍ社またはＡｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ社から得られるスチレン−１％ジビニルベンゼン（１００〜２００メッシュまたは２００〜４００メッシュ）のコポリマーである。これらの樹脂の合計窒素含量は、通常、０．３〜１．２ミリ当量／ｇであった。
【０１４９】
Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ　ＩおよびＩＩＩポンプ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ　Ｍａｓｔｅｒ溶媒プログラマーおよびミキサー、およびＳｐｅｃｔｒｏｍｏｎｉｔｏｒ　ＩＩＩ可変波長ＵＶ検出器からなるＬＤＣ装置において、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８カラム（０．４×３０ｃｍ）を用いて、逆相方式で分析的ＨＰＬＣを行った。Ｖｙｄａｃカラム（２×２５ｃｍ）において、分取ＨＰＬＣ分離を行った。
【０１５０】
線状ペプチドは、好ましくは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより一般的に記載されている方法〔Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６３年、第８５巻、２１４９頁〕により固相合成を用いて調製したが、前述のように、当技術分野において知られている他の同等の化学合成を用いることができる。固相合成は、保護されたαアミノ酸を、適切な樹脂に結合させることにより、ペプチドのＣ末端から始める。そのような出発物質は、αアミノ保護アミノ酸をエステル結合によってｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Ｗａｎｇ）樹脂に結合させることにより、またはｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−α−〔１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシホルムアミド〕−２，４−ジメチルオキシベンジル〕フェノキシ酢酸（リンクリンカー）のようなＦｍｏｃ−リンカーと、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂との間のアミド結合により調製することができる。ヒドロキシメチル樹脂の調製は、当技術分野においてよく知られている。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持材は市販されており、合成される所望のペプチドが、Ｃ末端に非置換アミドを有する場合に、一般的に用いられる。
【０１５１】
本発明の化合物は、ラクタムまたはジスルフィド結合の形成により調製される環状ペプチドなので、前駆体の線状ペプチドは、分子内アミド結合またはジスルフィド結合の形成がなされるように、最終的に誘発され得る線状ペプチド中の位置に、適切な側鎖残基を有する適切なアミノ酸または擬似体を配するように集められる。ラクタムは、Ｃ末端アミノ酸残基の側鎖アミノ官能性を、遠位カルボン酸残基と結合させることにより形成され、一方、ジスルフィド結合は、前駆体の線状ペプチドのＣ末端およびＮ末端において、またはその近くに略導入された２個のシステイン残基の酸化的結合により形成される。例えば、ラクタムペプチドの調製においては、前駆体の線状ペプチド内で、Ｎ−キャップをカルボキシル残基、例えば構造Ｘを組み込むためのテンプレートとして用いることができ、またヘキサペプチドの場合、ペプチドは、適切に保護された側鎖カルボン酸基を含むアミノ酸、例えば、アスパラギン酸やグルタミン酸のうちの１種から選択されるように設計される。線状ヘプタペプチドにおいて、アスパラギン酸またはグルタミン酸が、Ｎ末端から二番目の残基として組み込まれる。すべての前駆体線状ペプチド、すなわち、ヘプタ−、ヘキサ−およびペンタペプチドにおいて、Ｃ末端残基は、脱保護されたときにアミド結合を形成することができる、適切に保護された塩基性側鎖残基を有する、天然または非天然アミノ酸、例えば、リシン、オルニチン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノブタン酸から選択される。ジスルフィド結合を含む環状ペプチドを形成するためには、前駆体が線状ヘキサペプチドの場合、ペプチドは、適切にＳ保護されたシステイン残基が、Ｃ末端残基とＮ末端残基の両方として組み込まれるように設計され、前駆体が線状ヘプタペプチドの場合、適切にＳ保護されたシステイン残基が、例えばＸにおけるように、Ｃ末端残基および最後から二番目のＮ末端残基の両方として組み込まれる。
【０１５２】
一般に、線状ペプチドを形成するために、２〜５当量相当のアミノ酸または擬似体のＦｍｏｃ保護型および適切なカップリング剤を用いて、アミノ酸または擬似体をＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂にカップリングする。カップリング後、樹脂を洗浄して、減圧下に乾燥してもよい。樹脂へのアミノ酸の担持は、少量のＦｍｏｃアミノ酸樹脂のアミノ酸分析により、または、ＵＶ分析によりＦｍｏｃ基の決定により決められる。あらゆる未反応のアミノ基は、樹脂を塩化メチレン中の無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンと反応させることにより、キャップすることができる。
【０１５３】
樹脂は、複数の繰り返しサイクルを経てアミノ酸を順次増やしてゆく。αアミノＦｍｏｃ保護基は、塩基性条件下に除去される。ＤＭＦ中のピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン（２０〜４０％ｖ／ｖ）を、この目的で用いることができる。好ましくは、ＤＭＦ中の４０％ピペリジンを使用する。
【０１５４】
αアミノ保護基の除去の後に、続いて、保護されたアミノ酸が所望の順序で段階的に結合されて、中間体である保護されたペプチド樹脂が得られる。ペプチドの固相合成において、アミノ酸をカップリングするのに用いられる活性化剤は、当該技術分野においてよく知られている。例えば、そのような合成用の適切な試薬には、べンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｒｏＰ）、２−（１Ｈ−べンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）がある。ここで好ましいのは、ＨＢＴＵおよびＤＩＣである。ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより記載されている他の活性化剤〔Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、第２巻、Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９７９年、１〜２８４頁〕を利用することができる。１−ヒドロキシべンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）および３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢＴ）のような種々の試薬を、カップリング混合物に添加して、合成サイクルを最適化することができる。ここで好ましいのはＨＯＢＴである。
【０１５５】
典型的合成サイクル用のプロトコールは、以下のとおりである。
プロトコール１
工程　　　試薬　　　　　　　　　　　　　　　　　時間
１　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０分
２　　４０％ピペリジン／ＤＭＦ　　　　　　１分
３　　４０％ピペリジン／ＤＭＦ　　　　　　１５分
４　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０分
５　　ｉＰｒＯＨ　　　　　　　　　　　　　２×３０分
６　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　３×３０分
７　　カップリング　　　　　　　　　　　　６０分〜１８時間
８　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
９　　ｉＰｒＯＨ　　　　　　　　　　　　　１×３０秒
１０　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　１×３０秒
１１　ＣＨ２Ｃｌ２　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
【０１５６】
すべての洗浄および結合用の溶媒の体積を測定すると、樹脂１ｇ当たり１０〜２０ｍｌであった。合成中のカップリング反応を、カイゼルニンヒドリンテストによりモニターして完了の程度を決めた〔Ｋａｉｓｅｒら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７０年、第３４巻、５９５〜５９８頁〕。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）について、および立体障害された酸による第二級アミンへのカップリングについて、遅い反応速度が観察された。あらゆる不完全なカップリング反応が、新しく調製された活性化アミノ酸と再び組み合わされ、または前述のように無水酢酸でペプチド樹脂を処理することによりキャップされた。充分に組み立てられたペプチド樹脂を、減圧下に数時間乾燥した。
【０１５７】
各化合物について、ブロッキング基を除去し、以下の手順により線状ペプチドを分解した。ペプチド樹脂を、室温で、樹脂１ｇに対してエタンジチオール１００μＬ、ジメチルスルフィド１００μＬ、アニソール３００μＬおよびトリフルオロ酢酸９．５ｍＬを用いて１２０分間処理する。樹脂を濾去し、濾液を冷たいエチルエーテルで沈殿させる。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションする。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離する。所望であれば、粗線状ペプチドを分取ＨＰＬＣで精製する。ペプチドを最少体積のＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏまたは０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中の最小の容量でカラムに適用する。傾斜溶離は、通常、８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、１０％Ｂ緩衝液から出発し、９０分間でＢを１０〜６０％にする（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）。２８０ｎｍでＵＶ検出を行う。画分を１．０〜２．５分の間隔で収集し、分析的ＨＰＬＣで検査する。高純度と判断された画分を溜めて、凍結乾燥する。
【０１５８】
ラクタムを調製するために、適切な非精製線状ペプチドを適切な不活性溶媒、例えば、Ｎ−メチルピロリドンまたはＤＭＦ、好ましくはＤＭＦ中に溶解し、第三級アミン塩基、例えば、Ｎ−メチルモルホリンの添加により、見掛けのｐＨ８．０に調節し、次に、アミド結合形成試薬、好ましくはＢＯＰで処理する。反応は、４０〜０℃、好ましくはほぼ室温で行うのが好都合である。粗環状ペプチドの精製を、分取ＨＰＬＣにより行う。傾斜溶離は、通常、８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、２０％Ｂ緩衝液から出発し、９０分間でＢを２０〜６０％にする（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）。２８０ｎｍでＵＶ検出を行う。画分を集め、分析的ＨＰＬＣでモニターする。高純度と判断された画分を溜めて、凍結乾燥する。
【０１５９】
環状ジスルフィドペプチドを調製するために、２個の適切に位置付けられたシステイン残基を含む、精製されたＨＰＬＣ精製線状ペプチドを、かなり高い希釈水準で、適切な不活性溶媒混合物、例えば、ＤＭＳＯ水溶液に溶解し、溶液を、水酸化アンモニウムを注意深く添加することにより、ｐＨ８．０に調節する。次に、酸素を撹拌下の溶液に吹き込む。反応は、４０〜０℃、好ましくはほぼ室温で行うのが好都合で、環化の進行を分析的ＨＰＬＣでモニターする。反応が完了したと判断された後、溶液を凍結乾燥し、粗環状ペプチドを、分取ＨＰＬＣで精製する。傾斜溶離は、通常、８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、２０％Ｂ緩衝液から出発し、９０分間でＢを２０〜６０％にする（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）。２８０ｎｍでＵＶ検出を行う。画分を集め、分析的ＨＰＬＣでモニターする。高純度と判断された画分を溜めて、凍結乾燥する。
【０１６０】
粗ペプチドの精製を分取ＨＰＬＣで行う。ペプチドを最少の容量のＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏまたは０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中でカラムに適用する。傾斜溶離は、通常、８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、１０％Ｂ緩衝液から出発し、９０分間でＢを１０〜６０％にする（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）。２８０ｎｍでＵＶ検出を行う。画分を１．０〜２．５分の間隔で収集し、分析的ＨＰＬＣで検査する。高純度と判断された画分を溜めて、凍結乾燥する。
【０１６１】
最終生成物の純度を、前述のような逆相カラム上の分析的ＨＰＬＣによって調べる。すべての生成物の純度は、約９５〜９９％であると判断される。すべての最終生成物を、高速原子衝突質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）またはエレクトロスプレー質量分析（ＥＳ−ＭＳ）にも付した。すべての生成物は、許容限度内に予想された親Ｍ＋Ｈイオンを産生した。
【０１６２】
代表的化合物の合成のための製造法は、所望の配列中の各アミノ酸をもう１個のアミノ酸またはその残基に引き続き添加する手順により、または所望のアミノ酸配列を有するペプチドフラグメントを最初に従来法により合成し、次に縮合して所望のペプチドを提供する手順により行うことができる。
【０１６３】
本発明の新規化合物を合成するためのそのような従来の手順には、例えば、任意の固相ペプチド合成法がある。そのような方法において、新規化合物の合成は、所望のアミノ酸残基を、固相法の一般的原理に従って、成長下のペプチド鎖に逐次組み込むことにより行うことができる〔Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３年、第８５巻、２１４９〜２１５４頁；Ｂａｒａｎｙら、Ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２巻、Ｇｒｏｓｓ、Ｅ．およびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ １〜２８４頁（１９８０年）〕。
【０１６４】
ペプチドの化学的合成で一般的なのは、種々のアミノ酸部分の反応性側鎖基を、保護基が完全に除去されるまで化学反応がその部位で生じるのを防止する、適切な保護基で保護することである。通常、アミノ酸またはフラグメントのαアミノ基を保護すると同時にカルボキシル基において反応させ、続いて、αアミノ保護基を選択的に除去し、その部位において続いて反応を起させることも一般的である。特定の保護基を固相合成法について開示したが、溶液相合成におけるそれぞれのアミノ酸について従来用いられていた保護基により、各アミノ酸を保護することができることに注目すべきである。
【０１６５】
αアミノ基は、芳香族ウレタン型保護基、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および置換ベンジルオキシカルボニル、例えば、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロポキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）；脂肪族ウレタン型保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルおよびアリルオキシカルボニルから選択される適切な保護基で保護することができる。ここで、αアミノ保護のためにＦｍｏｃが最も好ましい。
【０１６６】
グアノジノ基は、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、Ｚ、ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、アダマンチルオキシカルボニルおよびＢｏｃから選択される適切な保護基により保護することができる。アルギニン（Ａｒｇ）用には、Ｐｍｃが最も好ましい。
【０１６７】
イソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）、塩化メチレン（ＣＨ２Ｃｌ２）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）のすべての溶媒は、Ｆｉｓｈｅｒ社またはＢｕｒｄｉｃｋ　＆　Ｊａｃｋｓｏｎ社から購入し、さらに蒸留することなく用いた。トリフルオロ酢酸は、Ｈａｌｏｃａｒｂｏｎ社またはＦｌｕｋａ社から購入し、さらに精製することなく用いた。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）は、Ｆｌｕｋａ社またはＡｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく用いた。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）および１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）は、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．から購入し、さらに精製することなく用いた。保護アミノ酸は、概してＬ型であり、Ｂａｃｈｅｍ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈ社またはＮｅｏｓｙｓｔｅｍ社から購入した。これらの試薬の純度は、使用前に、薄層クロマトグラフィー、ＮＭＲおよび融点により確かめた。ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）は、Ｂａｃｈｅｍ社またはＡｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ社から得られるスチレン−１％ジビニルベンゼン（１００〜２００メッシュまたは２００〜４００メッシュ）のコポリマーである。これらの樹脂の合計窒素含量は、通常、０．３〜１．２ミリ当量／ｇであった。
【０１６８】
Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ　ＩおよびＩＩＩポンプ、Ｇｒａｄｉｅｎｔ　Ｍａｓｔｅｒ溶媒プログラマーおよびミキサー、およびＳｐｅｃｔｒｏｍｏｎｉｔｏｒ　ＩＩＩ可変波長ＵＶ検出器からなるＬＤＣ装置において、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８カラム（０．４×３０ｃｍ）を用いて逆相方式で分析的ＨＰＬＣを行った。Ｖｙｄａｃカラム（２×２５ｃｍ）において分取ＨＰＬＣ分離を行った。
【０１６９】
ペプチドは、好ましくは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより一般的に記載されている方法〔Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６３年、第８５巻、２１４９頁〕により固相合成を用いて調製したが、前述のように、当技術分野において知られている他の同等の化学合成を用いることができる。固相合成は、保護されたαアミノ酸を適切な樹脂に結合させることにより、ペプチドのＣ末端から始める。そのような出発物質は、αアミノ保護アミノ酸をエステル結合によりｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Ｗａｎｇ）樹脂に結合させることにより、またはｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−α−〔１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド〕−２，４−ジメチルオキシベンジル〕フェノキシ酢酸（リンクリンカー）のようなＦｍｏｃ−リンカーと、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂との間のアミド結合により調製することができる。ヒドロキシメチル樹脂の調製は、当技術分野においてよく知られている。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持材は市販されており、合成される所望のペプチドが、Ｃ末端に非置換アミドを有する場合に、一般的に用いられる。
【０１７０】
一般に、２〜５当量相当のアミノ酸または擬似体のＦｍｏｃ保護型および適切なカップリング剤を用いて、アミノ酸または擬似体がＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂にカップリングされる。カップリング後、樹脂を洗浄して、減圧下に乾燥してもよい。樹脂へのアミノ酸の担持は、少量のＦｍｏｃアミノ酸樹脂のアミノ酸分析により、または、ＵＶ分析によりＦｍｏｃ基の決定により決められる。未反応アミノ基は、樹脂を塩化メチレン中の無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンと反応させることにより、キャップすることができる。
【０１７１】
樹脂は、複数の繰り返しサイクルを経てアミノ酸を順次増やしてゆく。αアミノＦｍｏｃ保護基は、塩基性条件下に除去される。ＤＭＦ中のピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン（２０〜４０％ｖ／ｖ）を、この目的で用いることができる。好ましくは、ＤＭＦ中の４０％ピペリジンを使用する。
【０１７２】
αアミノ保護基の除去の後に、続いて、保護されたアミノ酸が所望の順序で段階的に結合されて、中間体である保護されたペプチド樹脂が得られる。ペプチドの固相合成において、アミノ酸をカップリングするのに用いられる活性化剤は、当該技術分野においてよく知られている。例えば、そのような合成用の適切な試薬には、べンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｒｏＰ）、２−（１Ｈ−べンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）がある。ここで好ましいのは、ＨＢＴＵおよびＤＩＣである。ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより記載されている他の活性化剤〔Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第２巻、Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９７９年、１〜２８４頁〕を利用することができる。１−ヒドロキシべンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）および３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢＴ）のような種々の試薬を、カップリング混合物に添加して、合成サイクルを最適化することができる。ここで好ましいのはＨＯＢＴである。
【０１７３】
典型的合成サイクル用のプロトコールは以下のとおりである。
プロトコール１
工程　　　試薬　　　　　　　　　　　　　　　　　時間
１　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
２　　４０％ピペリジン／ＤＭＦ　　　　　　１分
３　　４０％ピペリジン／ＤＭＦ　　　　　　１５分
４　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
５　　ｉＰｒＯＨ　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
６　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　３×３０秒
７　　カップリング　　　　　　　　　　　　６０分〜１８時間
８　　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
９　　ｉＰｒＯＨ　　　　　　　　　　　　　１×３０秒
１０　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　１×３０秒
１１　ＣＨ２Ｃｌ２　　　　　　　　　　　　　２×３０秒
【０１７４】
すべての洗浄および結合用の溶媒の体積を測定すると、樹脂１ｇ当たり１０〜２０ｍｌであった。合成中のカップリング反応を、カイゼルニンヒドリンテストによりモニターして完了の程度を決めた〔Ｋａｉｓｅｒら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７０年、第３４巻、５９５〜５９８頁〕。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）について、および立体障害された酸による第二級アミンへのカップリングについて遅い反応速度が観察された。あらゆる不完全なカップリング反応が、新しく調製された活性化アミノ酸と再び組み合わされ、または前述のように無水酢酸でペプチド樹脂を処理することによりキャップされた。充分に組み立てられたペプチド樹脂を、減圧下に数時間乾燥した。
【０１７５】
各化合物について、ブロッキング基を除去し、以下の手順によりペプチドを分解した。ペプチド樹脂を、室温で、樹脂１ｇに対してエタンジチオール１００μＬ、ジメチルスルフィド１００μＬ、アニソール３００μＬおよびトリフルオロ酢酸９．５ｍＬを用いて１２０分間処理する。樹脂を濾去し、濾液を冷たいエチルエーテルで沈殿させる。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションする。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離する。粗生成物を減圧下に乾燥する。
【０１７６】
粗ペプチド製剤の精製
粗ペプチドの精製を、分取ＨＰＬＣで行った。ペプチドを最少の容積のＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏまたは０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中でカラムに適用した。傾斜溶離は、通常、８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、１０％Ｂ緩衝液から出発し、９０分間でＢを１０〜６０％にした（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）。２８０ｎｍでＵＶ検出を行った。画分を１．０〜２．５分の間隔で収集し、分析的ＨＰＬＣで検査する。高純度と判断された画分を溜めて、凍結乾燥する。
【０１７７】
最終生成物の純度を、前述のような逆相カラム上の分析的ＨＰＬＣによって調べた。すべての生成物の純度は、約９５〜９９％であると判断された。すべての最終生成物を、高速原子衝突質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）またはエレクトロスプレー質量分析（ＥＳ−ＭＳ）にも付した。すべての生成物は、許容限度内に予想された親Ｍ＋Ｈイオンを産生した。
【０１７８】
前述の技術を利用して、以下の反応スキームに従って、本発明の化合物を合成することができる。
【０１７９】
【化８８】
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【０１８０】
本発明の環状ペプチド（構造１）の合成における、最後から二番目の中間体としてここで用いられる線状ペプチドは、先の部分において説明した従来の固相ペプチド合成法により調製される。各サイクルは、次の２個の手順からなる；樹脂結合鎖における末端窒素からのＦｍｏｃ保護基の分解、およびその後のＦｍｏｃ保護アミノ酸によるアミン官能基のアシル化である。サイクルは、通常、プロトコール１に概説する段階的手順に従って行われる。脱保護は、適切な不活性溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中において、有機塩基、例えば、ピペラジン、モルホリンまたはピペリジン、好ましくはピペリジンを用いて達成される。カップリング反応は、アミド結合形成のために開発された多くの条件の一つ、例えば、不活性溶媒、例えばＤＭＦ中における有機塩基、例えばジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下におけるＯ−ベンゾチアゾール−１−イルＮ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）により行うことができる。または、本例において、ＤＭＦのような適切な不活性溶媒中において、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）のような活性化剤と共にカルボジイミド、例えばジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を用いて、アミド基を形成することができる。
【０１８１】
反応スキームＡにおいて、ＺがＮＨＣＯである構造１の環状ペプチド用の線状ポリペプチド前駆体の調製の第一のサイクルいおいて、構造２で表されるＦｍｏｒ−リンカー−ＢＨＡ樹脂を脱保護し、構造３のＦｍｏｃ−アミノ酸と縮合させて樹脂結合化合物４を得る。環状ペプチドのこの合成において、Ｆｍｏｃ−アミノ酸３が、脱保護されたときに分子内アミド結合の形成に参加し得る適切に保護された塩基性側鎖である、重要な構造的要件を含むことが必要である。成長下のペプチド鎖を延長するために、第二のサイクルは、Ｆｍｏｃ−アミノ酸５を取り入れて構造６の化合物を与える。第三のサクルにおいて、樹脂結合ペプチド６を処理すると、Ｒ８が水素である構造７ａの中間体が得られる。Ｒ８がメチルである構造７ｂの中間体は、スキームＣに示すように合成される。
【０１８２】
構造７ｂの中間体は、スキームＣに記載されるように構造７ａの化合物から調製する。この手順において、プロトコール１の工程１〜５に記載されるように、構造６の化合物を処理することによって調製された構造７ａの化合物を、アリールスルホニルクロリド、好ましくは、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド２３と反応させて、構造２４の化合物を製造する。この反応は、適切な不活性溶媒、好ましくはＤＭＦ中で、プロトン受容体、例えば、ピリジン、トリエチルアミン（ＴＥＡ）またはＤＩＰＥＡ、好ましくはＤＩＰＥＡの存在下に行われる。洗浄された構造２４の樹脂結合化合物中に形成されたスルホンアミド結合のＮ−メチル化が、ミツノブ条件下に達成されて、構造２５の化合物が製造される。この反応の実施において、構造２４のスルホンアミドが、溶媒としてメタノールを用いて、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）およびトリフェニルホスフィンの存在下にメタノールと反応する。反応完了後、構造２５の樹脂結合Ｎ−メチルスルホンアミドを洗浄して、残留試薬および副生物が含まれないようにする。
【０１８３】
反応スキームＡに示す次の工程において、適切な溶媒、好ましくはＤＭＦ中において、２５を２−メルカプトエタノールおよび有機強塩基の１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）と反応させることにより、２−ニトロベンゼンスルホニル残基を構造２５から除去して、構造７ｂの樹脂結合中間体を得る。反応スキームＡの第三サイクルを、構造７ａまたは７ｂの化合物をＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（８）またはＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（９）と反応させて、構造１０の樹脂結合化合物を得ることにより完了させる。
【０１８４】
反応スキームＢに示す次の２個のサイクルは、まず、構造１０のペプチドをアミノ酸であるＦｍｏｃ−（Ｄ）−Ｐｈｅ−ＯＨと反応させて、構造１１の化合物を生成し、次にこの構造１１の化合物を、構造１２または１３のアミノ酸擬似体の一つと反応させて、これらのアミノ酸を樹脂結合ペプチドに組み込んで、どのアミノ酸擬似体を用いたかに依存して、構造１４または１５の樹脂結合ペンタペプチドを得ることにより実施する。本発明の環状ペプチドの形成に最終的に参加するのに適している線状ペンタペプチドに、カルボン酸側鎖を含むさらなるアミノ酸を組み込むことは、２つの方法により達成される。
【０１８５】
ａ．反応スキームＢに見られるように、適切に保護された酸側鎖を有するＦｍｏｃアミノ酸を、樹脂結合ペンタペプチド１４および１５に組み込む。このように、サイクル６（反応スキームＢ）において、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１６）またはＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１７）が、成長しているペプチド鎖中に組み込まれて、構造１８および１９を有する樹脂結合ヘキサペプチドが、それぞれまたは選択的に得られる。
【０１８６】
ｂ．樹脂結合ペンタペプチド１４および１５が、構造２８′（反応スキームＦ）の環状無水物、例えば、無水マレイン酸または無水フタル酸でＮ−キャッピングされて、構造２９および３０の化合物が、それぞれまたは選択的に得られる。
【０１８７】
ｃ．反応スキームＢに見られるように、樹脂結合ヘキサペプチド１８および１９は、さらに、さらなるアミノ酸と反応して、ヘプタペプチドを形成することができ、その後Ｎ−キャッピングされる。これは、通常の方法で、アミノ酸残基、好ましくはＦｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨを組み込むことにより達成され、２１および２２が得られる。
【０１８８】
ヘプタペプチドまたはヘキサペプチドをＮ−キャッピングすると、化合物１の末端アミド官能基が形成される。このようにして、置換基Ｘ、Ｙ、Ｒ１２およびＲ１が作られる。樹脂結合ヘキサペプチド（１８，１９）またはヘプタペプチド（２１，２２）をＮ−キャッピングするために、ポリペプチドをまず、ＤＭＦ中のピペリジンで処理してＦｍｏｃ保護基を除去し、次にアシル化剤と反応させる。構造１の化合物を製造してから、ＸおよびＹがＣＨで、Ｒ１が
【０１８９】
【化８９】
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【０１９０】
であるＺを形成するための反応スキームＤに示すように、構造１８の樹脂結合ポリペプチドを脱保護しおよびＮ−アシル化して構造２７の樹脂結合アミドを得る、または脱保護後に、イソシアネートと反応させて構造２８の尿素を形成する。Ｎ−アシル化は、当業者に周知の種々の方法により実施される。これらの方法には、以下のものがある。
【０１９１】
（ｉ）ＤＭＦのような適切な溶媒中、ＨＢＴＵおよび有機塩基、好ましくはＤＩＰＥＡの存在下に、末端アミノ官能基を、カルボン酸Ｒ２−ＣＯ２Ｈと反応させる。
（ｉｉ）ジクロロメタンのような適切な溶媒中、ピリジン、ＴＥＡおよびＤＩＰＥＡのような有機塩基、好ましくはＤＩＰＥＡの存在下に、末端アミノ官能基を、カルボン酸クロリドＲ２−ＣＯＣｌと反応させる。または、
（ｉｉｉ）反応スキームＦに示すように、末端アミノ官能基を、構造２８′のカルボン酸無水物と反応させる。この反応は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような適切な溶媒中、有機塩基、好ましくはＤＩＰＥＡの存在下に行われる。
【０１９２】
構造１８の化合物が構造２８の尿素に転換される、反応スキームＤにおけるＮ−キャッピング反応は、構造２８の化合物中の末端アミノ基を、イソシアネートＲ２−ＮＣＯと反応させることにより行われる。この反応は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような適切な溶媒中、有機塩基、好ましくはＤＩＰＥＡの存在下に行われる。アシル化および尿素形成反応が完了すると、樹脂結合生成物２７および２８を洗浄して、残留試薬および副生物を含まないようにする。同様の条件を用いて、構造３３、３５および３７のＮ−アシル化化合物ならびに構造３４、３６および３８の尿素の形成（反応スキームＥ）により、構造１９、２１および２２の樹脂結合ペプチドのＮ−キャッピングを行う。しかしながら、構造２１および２２の化合物を製造する反応スキームＢ中の、構造２０の化合物以外の既知のアミノ酸を利用することにより、Ｎｌｅから誘導されるものとは異なる基Ｒ１４を提供するように、反応スキームＥを修正することができる。
【０１９３】
反応スキームＧおよびＨは、Ｎ−キャップしたポリペプチド２９、３０、３３〜３８における残りの保護基の分解、および同時に起こる固体支持体からのペプチドの分解を示している。この反応は、場合により、ジクロロメタンのような不活性溶媒および微量（１％）の水の存在下で、場合により１種または２種以上のカルボカチオンスカベンジャー、例えば、エタンジチオール、ジメチルスルフィド、トリエチルシランおよびアニソールの存在下に、有機強酸、好ましくはトリフルオロ酢酸を用いることによって行われる。ポリペプチド分解溶液を濾過して、固体支持体を含まないようにし、次に適切な溶媒、好ましくはジエチルエーテルで希釈し、形成された固形物を濾過により収集する。反応スキームＨで製造された構造３９〜４４の固体ポリペプチドを、分取Ｃ１８カラムを用いることにより、逆相クロマトグラフィーで精製することができる。
【０１９４】
このように分子内アミド結合を形成するのに現在利用できる適切な官能基で、Ｎ−キャップされた線状ポリペプチドを、当技術分野において周知のアミド形成反応条件に付す。したがって、線状ポリペプチド３１、３２（反応スキームＧ）および３９〜４４（反応スキームＩ）のそれぞれが、不活性溶媒、例えば、ＤＭＳＯに溶解され、第三級アミン塩基、例えば、Ｎ−メチルモルホリンを添加することにより、溶液の見掛けのｐＨが８に調節され、その後、アミド形成試薬、例えば、ＢＯＰが添加される。反応は、０〜４０℃、好ましくはほぼ室温で行うことが好都合である。反応は、完了したと判断されるまで続けられる。平均的技術を有する人が反応の進行をモニターするために用いる一般的方法は、例えば、ＴＬＣまたは分析的ＨＰＬＣである。反応溶媒を減圧下に除去した後、反応スキームＩに示すように、ＺがＮＨＣＯである構造Ｉの粗環状ペプチドを、分取Ｃ１８カラムを用いて逆相クロマトグラフィーにより精製することができる。このようにして、ＺがＮＨＣＯ橋である構造１の化合物が製造される。
【０１９５】
ＺがＳ−Ｓである構造１の環状ジスルフィドペプチドは、ＺがＮＨＣＯである構造１のラクタムの調製のための上述の反応スキームＡ〜Ｈに類似した反応スキームにおいて概説される方法論により調製される。最後から二番目の線状ポリペプチドは、保護されたチオール側鎖残基、例えばＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを含むアミノ酸が、成長している樹脂結合ポリペプチドの適切な位置、好ましくはサイクル１および６において組み込まれること以外は同様にして、組み立てられる。樹脂結合線状ポリペプチドのこの調製を、反応スキームＪおよびＫに示す。先に説明し、スキームＬに示すように、樹脂結合線状ポリペプチド５２は、Ｆｍｏｃ保護基を除去した後、５６を与えるアシル化により、または尿素５７を形成するイソシアネートとの反応により、Ｎ−キャッピングすることができる。同様にして、樹脂結合ヘキサペプチド５３、ならびに樹脂結合ヘプタペプチド５４および５５が、対応するＮ−アシル化誘導体５８、６０および６２、ならびに尿素誘導体５９、６１および６３（反応スキームＭ）に転換される。
【０１９６】
反応スキームＮにおいて、Ｎ−キャップされた樹脂結合線状ヘキサペプチド５６を、場合によりジクロロメタンのような不活性溶媒の存在下で、場合により１種以上のカルボカチオンスカベンジャー、例えば、エタンジチオール、ジメチルスルフィド、トリエチルシタンおよびアニソールの存在下に、強酸、好ましくはトリフルオロ酢酸で処理する。これにより、すべての側鎖保護基の分解、および固体支持体からの線状ペプチドの分解が引き起こされる。反応は、０〜３５℃、好ましくは室温で行われるのが好都合である。ポリペプチド分解溶液を、濾過された固体支持体を含まないようにし、次に適切な溶媒、好ましくはジエチルエーテルで希釈し、形成された固体を濾過により収集する。このように製造された構造６４の固体ポリペプチドは、場合により、分取Ｃ１８カラムを用いて逆相クロマトグラフィーにより精製することができる。線状ヘキサペプチド６４は、次に、当業者に周知の、チオールにジスルフィド結合を形成させることができる、酸化的条件下に処理される。したがって、６４の希釈水溶液は、穏やかで弱い無機塩基、好ましくは水酸化アンモニウムを用いてｐＨ８．０に調節され、次に、環化が完了したと判断されるまで、標準的方法、例えばＴＬＣまたはＨＰＬＣを用いて酸素を容器に吹き込む。凍結乾燥により反応溶媒を除去した後、このように調製され、単離された粗環状ペプチド（Ｉ；Ｚ＝Ｓ−Ｓ）を、分取Ｃ１８カラムを用いて、逆相クロマトグラフィーにより精製することができる。
【０１９７】
反応スキームＨおよびＩに関して前述したのと同様の条件下に、反応スキームＯおよびＰに示すような樹脂結合線状ポリペプチド５８〜６３を脱保護し、固体支持体から解離して線状ペプチド６５〜７０を与え（反応スキームＯ）、次にこれを前述のように酸化的に環化して、対応する構造１の化合物を得る（反応スキームＰ）。
【０１９８】
前述のペプチドの調製において用いられるＦｍｏｃ−アミノ酸ならびにポリペプチドをＮ−キャッピングするのに用いられるアシル化剤およびイソシアネートは、市販されている既知の化合物である。反応スキームＢで用いられる、その種である構造１３の化合物を含むＦｍｏｃ−アミノ酸１２は、有機化学の当業者に周知の方法によって、ここに記載されたように調製される。スキームＱには、環状ケトンから構造１２の化合物のＦｍｏｃ−アミノ酸種の調製が概説されている。構造１２ならびに構造１３、７９および８０のこれらの種は、スキームＱの手順に概説されているように、構造７５の種と同様に調製される。構造７１の４−フェニルシクロヘキサノン類を、炭酸アンモニウムおよびシアン化カリウムによる処理で、構造７２のヒダントインに転換される。反応は、水性エタノール混合物中で５０〜９０℃、好ましくは８０〜９０℃の温度で行われる。ヒダントインから構造７３のアミノ酸への直接加水分解には、還流温度で、強塩基、例えば、６Ｎ水酸化ナトリウム溶液または水酸化バリウムで長期間処理することが必要である。または、構造７２の化合物を、構造７４のビス−Ｂｏｃ誘導体に転換することができる。反応は、不活性溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、有機アミン塩基、好ましくはＴＥＡおよび触媒の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下、０℃〜室温、好ましくは室温で重炭酸ｔｅｒｔ−ブチル〔（Ｂｏｃ）２Ｏ〕を用いて行われる。構造７４のビス−Ｂｏｃヒダントインは、構造７３のアミノ酸に容易に転換される。反応は、不活性溶媒、好ましくはジメトキシエタン（ＤＭＥ）中、０〜５０℃、好ましくはほぼ室温で１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて達成される。構造７３の化合物中のＦｍｏｃ基によるアミノ官能基の保護は、構造１２の化合物のＦｍｏｃ−アミノ酸種である構造７５の化合物を与える種々の反応条件下に行われる。反応は、好都合には、ＴＨＦまたはジオキサン、好ましくはジオキサンと炭酸ナトリウム水溶液との混合物中にアミノ酸７３を含む溶液を、０℃〜室温、好ましくは室温で、９−フルオレニルメトキシクロロホルマート（ＦｍｏｃＣｌ）で処理することにより行われる。あるいは、Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニロキシ）スクシンイミド（ＦｍｏｃＯＳｕ）を、有機第三級アミン塩基、好ましくはＴＥＡを含むアセトニトリル水溶液にアミノ酸７３を含む溶液に添加する。反応は、０℃〜室温、好ましくは室温で行う。もう一つの異なる手順において、７４から７３への転換において、加水分解混合物からＤＭＥを蒸発させ、反応生成物をｐＨ１１に調節する。７３のナトリウム塩の得られる溶液を、次に、その場で、ジオキサン中のＦｍｏｃＯＳｕまたはＦｍｏｃＣｌにより、０℃〜室温、好ましくは室温で処理する。反応スキームＱと同様の方法で、テトラロン７６、Ｎ−アリール−４−ケトピペリジン７７およびシクロヘキサノン誘導体７８を、対応する構造１３、７９および８０のＦｍｏｃ−アミノ酸に転換することができ、これらはすべて、７３と一緒に、反応スキームＢで利用される構造１２の亜属を形成する。
【０１９９】
反応スキームＱにおいて、亜属構造８２においてＲ４が線状または分岐低級アルコキシを表し、Ｒ２およびＲ３の両方が水素である構造７３の化合物を、反応スキームＲに示すように、構造８１の化合物のＯ−アルキル化により調製することができる。Ｒ１６が非分岐状低級アルキル部分を表す場合、アルキル化は、アルカリ金属炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムの存在下に、構造Ｒ１６ハライドの第一アルキルハライドを用いることにより行われる。アルキルハライドは、クロロ、ブロモまたはヨード誘導体、好ましくはアルキルヨージドであり得る。反応は、ＳＮ２置換反応を促進する不活性溶媒、例えば、アセトン、２−ブタノンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、好ましくはアセトン中で、室温から溶液の還流温度の間の温度、好ましくは還流温度で、好都合に行うことができる。Ｒ１６が分岐状低級アルキル基、例えば２−プロピルを表す場合、構造８２の化合物を製造するための構造８１の化合物のアルキル化は、アルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カリウムの存在下に、構造Ｒ１６ハライドの第二級アルキルハライドを用いて行われる。第二級アルキルハライドは、好ましくは第二級アルキルヨージド、例えば２−ヨードプロパンである。反応は、不活性溶媒、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、室温から溶媒の還流温度の間、好ましくは約１００℃で好都合に行うことができる。
【０２００】
反応スキームＱにおける出発物質である構造７１の４−アリールシクロヘキサノンは、有機化学の当業者に周知の方法により調製することができる。スキームＳに概説するように、Ｘ１がブロモまたはヨードを表す構造８３のアリールハライドを、アルキル金属試薬、好ましくはｔ−ブチルリチウムで処理すると、金属交換反応を生じて、対応する構造８４のアリールリチウムが得られる。反応は、ジエチルエーテルまたはテトラヒドロフランのような不活性無水溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン中に構造８３の化合物を含む溶液に、アルキルリチウムの溶液を添加することにより、−７８℃で好都合に行われる。このように製造される構造８４のアリールリチウムは、次に、その場で、シクロヘキサン−１，４−ジオール（８５）のモノケタールの、適切な不活性溶媒の溶液、例えばテトラヒドロフラン溶液で処理し、反応温度を−６０℃より低い温度、好ましくは約−７８℃に維持して、構造８６のカルビノールを得る。構造８７の化合物は、構造８６のカルビノールの脱水により得られる。反応は、不活性溶媒、例えばベンゼンまたはトルエン、好ましくはベンゼン中の有機強酸触媒、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸を用いて、溶媒の還流温度で好都合に行われる。形成された水は、反応を完了可能にするために、ディーンシュタルク装置により反応混合物から除去される。構造８８の化合物は、構造８７のオレフィンの水素化により製造される。反応は、不活性溶媒、例えばエタノールまたは酢酸エチル中、水素雰囲気下に、貴金属触媒、例えば炭素担持パラジウムを用いて好都合に行われる。水素化は、通常、室温および４０ｐｓｉの水素下に行われるが、構造８７中のアリール環が水素化分解し易い基を含む場合、例えば、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５がクロロを表す場合、反応圧力は約５ｐｓｉに維持される。構造８８の化合物は、ヒドロキシル基の還元的除去により構造８６のカルビノールから直接得ることもできる。この反応において、不活性溶媒、例えば、ジクロロメタン中に構造８６の化合物（Ｒ３＝Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＯＭｅ）を含む溶液を、三フッ化ホウ素エーテラートのようなルイス酸、および還元剤、例えば、トリエチルシランにより、０℃〜室温で処理する。構造８８の化合物中のケタール保護基の除去により、式７１で示されるケトンが得られ、これは、構造１２の化合物の構造７５のＦｍｏｃ−アミノ酸種を調製するための反応スキームＱのための出発物質である。反応は、アセトンまたは２−ブタノン、好ましくはアセトン中で、酸触媒、例えば、４Ｎ塩酸またはｐ−トルエンスルホン酸の存在下に、室温〜反応混合物の還流温度、好ましくは還流温度で好都合に行われる。
【０２０１】
構造１３の化合物を調製するための出発物質である、反応スキームＱに示される構造７６の５−置換−β−テトラロンは、既知の化合物である、あるいは、知られていない場合、有機化学の当業者に周知の方法により、調製することができる。本例の場合、構造７６の化合物は、基本的に、反応スキームＴおよびＵに概説する２つの方法により調製される。スキームＴに示すように、構造９０の２−置換ヒドロケイ皮酸は、構造９１の対応するカルボン酸クロリドに転換される。この転換は、いくつかの方法により、例えば、ベンゼンまたはジクロロメタンのような不活性溶媒、好ましくはジクロロメタン中、場合によっては触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの存在下に、ヒドロケイ皮酸を塩化オキサリルで処理することにより行うことができる。反応は、０℃〜室温、好ましくは室温で好都合に行うことができる。あるいは、構造９０の化合物を、不活性溶媒、例えばベンゼンまたはトルエン、好ましくはトルエン中、室温ないし溶液の還流温度、好ましくは還流温度で、塩化スルフリルのようなアシルクロリド形成試薬と反応させる。構造９２のジアゾケトンを、不活性溶媒、例えばジクロロメタン中、このように形成された構造９１のアシルハライドを、過剰量の新しく調製したジアゾメタンのエーテル溶液で処理することにより調製する。試薬の組合せは、氷浴温度で行うのが好都合であり、反応は、次に、０℃〜室温、好ましくは室温で行われる。反応スキームＴに示すように、構造７６のテトラロンを得るための構造９２のジアゾケトンの環化は、不活性溶媒、例えば、ジクロロメタン中の酢酸ロジウム（ＩＩ）により促進される。反応は、通常、室温〜溶液の還流温度、好ましくは還流温度で行われる。
【０２０２】
Ｒ６が線状または分岐状の低級アルコキシ基を表す、反応スキームＱ中の出発物質である構造７６の化合物は、構造９３の化合物から反応スキームＵに示すように調製することができる。反応スキームＵにおいて、Ｒ１５′が非分岐状低級アルキル部分を表す構造９４の化合物は、アルカリ金属炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムのような塩基の存在下に、第一級アルキルヨージドまたはブロミド、好ましくはヨージドを用いて、構造９３のナフタレンジオールの全部のＯ位置をアルキル化することにより調製される。反応は、不活性溶媒、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、室温〜１００℃、好ましくは３５℃で行うことができる。Ｒ１５′が分岐状低級アルキルを表す構造９７の化合物は、構造９４の２−テトラロンから２段階で調製される。構造９５のテトラロンは、ｐ−シメンのような適切な高沸点溶媒中における、パラジウム金属（炭素担持、１０％）のような貴金属触媒の存在下の脱水素に付され、構造９６の芳香族化された化合物が得られる。次に、構造９６のナフトールは、アルカリ金属炭酸塩、好ましくは炭酸セシウムのような塩基の存在下に、第二級アルキルヨージドを用いてＯアルキル化されて、構造９７の化合物が得られる。反応は、不活性溶媒、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、室温〜１００℃、好ましくは約４０℃で行うのが好都合である。
【０２０３】
構造７６のテトラロンは、構造９４および９７の化合物を、溶解性金属条件下に還元し、続いて中間体のエノールエーテルを酸触媒による加水分解によって製造される。変換は、低級アルコール、好ましくはエタノール中に基質を含む、沸騰している溶液に、出発物質が消費されるまで、大過剰のナトリウムまたはカリウムのようなアルカリ金属、好ましくはナトリウムを少量ずつ添加することにより好都合に行われる。構造７６のテトラロンは、単離された中間体エノールエーテルの溶液を、強酸触媒、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸で処理することによって得られる。加水分解は、低級アルコール、好ましくはエタノールと水との混合物中、室温〜溶液の還流温度、好ましくは還流温度で好都合に行われる。
【０２０４】
構造１２の化合物のＦｍｏｃ−アミノ酸種である、式７９で示される化合物の製造における出発物質として反応スキームＱで利用される、構造７７の化合物の調製において、構造９８の化合物が、出発物質として用いられる。これを、反応スキームＶに示す。反応スキームＶにおいて、構造１００の化合物は、それ自体知られている反応により調製することができる。例えば、これらは、構造９８の第二級アミンを、アリールブロミドまたはヨージド、好ましくは構造９９のアリールヨージド（反応スキームＶ）にカップリングすることにより調製することができる。カップリング反応は、キレート化ホスフィン配位子、好ましくはトリ−ｏ−トリルホスフィン、およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのようなヒンダードアルコキシドの存在下に、貴金属触媒、好ましくはトリ（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムの触媒作用を受ける。反応は、不活性雰囲気中、ジオキサンまたはトルエンのような無水溶媒、好ましくはジオキサンを用いて、６０℃〜還流温度、好ましくは９０℃で行うのが好都合である。化合物１００中のカルボニル保護基を除去して、構造７７の化合物を得ることは、有機化学の分野で周知の種々の方法により行うことができる。例えば脱保護は、アセトンまたは２−ブタノンのような低沸点ケトン中に化合物１００を含む溶液を、鉱酸水溶液、例えば６Ｎ塩酸により、室温〜混合物の還流温度、好ましくは還流温度で処理することにより、達成することができる。構造１００の化合物は、このように鉱酸水形態で処理すると、反応スキームＶにおいて、構造７７の化合物を形成する。反応スキームＱの説明で示したように、構造７７の化合物は、Ｑが、
【０２０５】
【化９０】
2004507558.tif 000068
【０２０６】
である構造１２の酸の種である、構造７９の化合物用の中間体である。
【０２０７】
反応スキームＡにおいて、構造５のアミノ酸は、Ｒ９が、
【０２０８】
【化９１】
2004507558.tif 000069
【０２０９】
である既知の化合物である。
【０２１０】
一方、Ｒ９中のＲ１７が低級アルキルである、すなわちＲ９が、
【０２１１】
【化９２】
2004507558.tif 000070
【０２１２】
である構造５のアミノ酸は、式１０１で示される化合物から、以下の反応スキームＶを介して調製される。
【０２１３】
【化９３】
2004507558.tif 000071
【０２１４】
反応スキームＷに示すように、Ｂｏｔｅｊｕ，Ｌ．Ｗ．、Ｗｅｎｇｅｒ　Ｋ．およびＨｒｕｂｙ，Ｖ．Ｊ．、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．、第３３巻、７４９１頁（１９９２年）によって先に記載された方法により、β−メチル（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）トリプトファン１０９を調製した。第一工程において、トランス−インドール−３−アクリル酸１０１中の窒素が、対応するメシチレンスルホンアミド１０２への転換により保護される。反応は、不活性溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン中にアルキルまたはアリールリチウム試薬、例えば、フェニルリチウムまたはｎ−ブチルリチウム、好ましくはｎ−ブチルリチウムを含む過剰（＞２当量）の溶液で、インドール酸１０１を−４０℃〜約−１００℃、最も都合よくは、−７８℃で処理することにより行われる。反応は約−７８℃に維持されるが、形成された、ジリチウム化された種は、次に、塩化メシチレンスルホニルで処理されて、メシチレンスルホンアミド１０２が得られる。Ｎ−保護されたインドールアクリル酸１０２は、次に、キラルな助剤（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン（調製には、Ｎｉｃｏｌａｓら、Ｊ．Ｏｒｇ　Ｃｈｅｍ．１９９３年、第５８巻、７６６〜７７０頁を参照）のＮ−リチウム化種１０４とカップリングして、キラルなアクリルアミド１０５を得る。カップリングは、１０２から形成された混成酸無水物を介して行う。混成酸無水物１０３を形成するために、Ｎ−保護されたインドールアクリル酸１０２を、第三級アミン塩基、例えばトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン、好ましくはトリエチルアミンの存在下に、適切なアシルクロリド、例えば、クロロギ酸ｔ−ブチル、２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリドまたは塩化ピバロイル、好ましくは塩化ピバロイルと反応させた。酸無水物１０３を形成するための適切なアシルクロリドの選択を可能にする基準は、充分に達成されており、有機化学の当業者により知られている。酸無水物の形成を、不活性溶媒、例えば、テトラヒドロフラン中、−１００〜０℃、好ましくは約−７８℃の初期温度で行う。反応は、−７８〜０℃、好ましくは約０℃の温度で完了させられる。このように形成された混成酸無水物１０３を、次に、（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノンを不活性溶媒、例えばテトラヒドロフラン中に含む溶液を、アルキルまたはアリールリチウム試薬、例えばフェニルリチウムまたはｎ−ブチルリチウム、好ましくはｎ−ブチルリチウムを不活性溶媒、例えばヘキサン中に含む等モル量の溶液により、−１００〜０℃、好ましくは約−７８℃で処理することにより、先に調製したＮ−リチウム化（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン１０４の溶液と、インサイチューで反応させる。キラルなアクリルアミド１０５を産出するカップリング反応は、−１００〜０℃、好ましくは約−７８℃の初期温度で行われ、すべての試薬が組み合わされた後、反応を−７８℃〜室温、好ましくはほぼ室温で進行させる。
【０２１５】
キラルなアクリルアミド１０５から１０６への変換の重要点は、１０６における２個の新しい隣接したキラルセンターの、制御された発生である。反応は、臭化第一銅−ジメチルスルフィド複合体および臭化メチルマグネシウムからその場で形成されるメチル銅酸エステル（ｍｅｔｈｙｌ ｃｕｐｒａｔｅ）を、１０５中に存在するマイケル受容体であるα，β−不飽和カルボニル系に立体選択的に１，４−共役付加（マイケル付加）することを含む。得られる金属キレート化エノラートを、次に、ハロゲン化剤、好ましくはＮ−ブロモスクシンアミドで直接ハロゲン化して１０６を得る。ここでも、マイケル付加の場合と同様に、臭素原子の混入は、α，β−不飽和アシルオキサゾリジノン系および中間体の金属キレート化エノラートの両方のｓｉ面を、侵入してくる試薬の攻撃から効果的に遮蔽するキラルな助剤上のかさ高いフェニル基により、立体選択的に制御される。メチル銅酸エステルの調製のために、臭化メチルマグネシウムをジエチルエーテル中に含む溶液を、不活性溶媒、例えば、硫化ジメチルまたはテトラヒドロフラン、好ましくはそれらの混合物中に臭化第一銅−ジメチルスルフィド（１：１）複合体を含む溶液に添加する。反応は、−７８℃〜室温、好ましくは−４℃で行う。臭化メチルマグネシウムの代わりに、任意の低級アルキルブロミドを添加して、メチル以外の低級アルキル基であるＲ１７を形成することができる。この形成されたメチル銅酸エステル溶液に、その場でα，β−不飽和アシロキサゾリジノン１０５を、不活性溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン中に含む溶液に添加する。メチル銅酸エステルの添加は、最初は−３０℃〜室温、好ましくは−４℃で行い、次に、室温で行う。反応が完了したと判断（例えば、ＴＬＣまたはＨＰＬＣによる分析）されると、次に−１００〜−４０℃、好ましくは約−７８℃に冷却し、その時点で、ハロゲン化剤、好ましくはＮ−ブロモスクシンイミドの不活性溶媒溶液、例えばテトラヒドロフラン溶液を添加する。反応を、次に、０℃〜室温、好ましくはほぼ室温で進めて、単離した後、臭化物１０６を得る。該臭化物を、アジドイオンで置換し、それに付随して構造は逆転される。この変換は、不活性溶媒、例えばアセトニトリル中で、臭化物１０６をテトラブチルアンモニウムアジドと反応させることにより達成されて、アジド１０７が得られる。反応は、８０℃〜室温、好ましくはほぼ室温で好都合に行われる。１０７およびアルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化リチウム、好ましくは水酸化リチウムを、過酸化水素の存在下に処理すると、キラルな助剤が加水分解されて、アジド酸１０８が得られる。加水分解反応は、不活性溶媒、好ましくは水中で、０℃〜室温、好ましくは約０℃で行われる。α−アジド酸１０８を水素化すると、β−メチル（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）トリプトファンが得られ、これは、ただちに対応するＮ（α）−Ｆｍｏｃ−β−メチル（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）トリプトファン１０９に転換される。１０８の水素化は、貴金属触媒、好ましくは１０％Ｐｄ／Ｃを用いて、不活性溶媒、例えば低級アルカノール、好ましくはメタノール中、低圧（＜２気圧）と室温で行う。濾過により触媒を除去した後、揮発成分を除去し、生成物を不活性溶媒、例えばテトラヒドロフランまたは水、好ましくはこれらの混合物中に溶解し、穏やかな無機塩基、例えばアルカリ金属重炭酸塩、好ましくは重炭酸ナトリウム、およびＦｍｏｃ　Ｎ−保護基形成試薬、例えば、９−フルオレニルメチルクロロホルメート（Ｆｍｏｃ−Ｃｌ）または９−フルオレニルメチル−Ｎ−スクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−Ｏｓｕ）、好ましくはＦｍｏｃ−Ｏｓｕで処理して１０９を得る。反応は、０℃〜室温、好ましくはほぼ室温で行うのが好都合である。式１０９で示される化合物は、反応スキームＡにおける構造５のアミノ酸の種である。
【０２１６】
本発明は、前駆体線状ペプチドのＺ位にラクラム結合またはジスルフィド結合を形成することにより、下記式で示される化合物を調製するプロセスにも関する。
【０２１７】
【化９４】
2004507558.tif 000072
【０２１８】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１２，ｍ，ｐ，Ｑ，Ｘ，ＹおよびＺは、前述に定義されたとおりである）。
【０２１９】
薬学的組成物
本発明は、先に定義した化合物、および治療に不活性なキャリアを含んでなる薬学的組成物にも関する。
【０２２０】
式ＩおよびＩＩで示される化合物、ならびに本発明により調製されたペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２およびペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２は、当技術分野において知られている方法により、適切なキャリアまたはビヒクルと一緒に投与し、または吸入させるのに適した薬学的組成物中で調製することができる。
【０２２１】
前述の化合物は、例えば非経口投与用の薬剤として、例えば薬学的製剤の状態で用いることができる。これらは、例えば非経口的に、例えば注射溶液または輸液溶液として投与することができる。
【０２２２】
薬学的製剤の製造は、当業者に周知の方法において、前述の化合物を、場合により他の治療価値のある物質と組み合わせて、適切な非毒性の不活性な治療適合性固体または液体キャリア材料、および所望であれば薬学的アジュバントと一緒に投与する形にして、実施することができる。
【０２２３】
適切なキャリア材料は、無機キャリア材料のみならず、有機キャリア物質もある。
【０２２４】
通常の安定化剤、防腐剤、湿潤および乳化剤、稠度向上剤、風味向上剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝物質、可溶化剤、着色剤およびマスキング剤ならびに酸化防止剤が、薬学的アジュバントとして考えられる。
【０２２５】
前述の化合物の投与量は、制御すべき疾患、患者の年齢および個々の症状、ならびに投与方法に依存して、広い限定内で変化させることができ、もちろん、それぞれの特定の場合の個々の要求に合わせられる。成人患者には、約１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ、特に約１０ｍｇ〜約５００ｍｇの日用量が考えられる。投与量に依存して、日用量を複数の投与単位に分けて投与することが好都合である。
【０２２６】
薬学的製剤は、前述の化合物を、約１〜５００ｍｇ、好ましくは５〜２００ｍｇ含むことが好都合である。
【０２２７】
肥満の処置
本発明により調製される化合物は、インビトロで選択的にＭＣ−４受容体作動活性を示す。ＭＣ４−Ｒ活性の作動薬は、ヒト肥満のマウスモデルにおいて食物摂取の低下を引き起こすことが知られている。したがって、これらの化合物を投与すると、体重の制御に重要なＭＣ４−Ｒ活性を作動する。本発明の化合物を含む薬学的組成物は、望ましくない程上昇した体重を有するヒトまたは動物患者に、種々の方法で、単独で、またはＩＩ型糖尿病のような、望ましくない医学的症状もしくは疾患の一部として投与するのに効果的な強さで調製することができる。種々の投与技術を用いることができる。活性化合物の平均量は変化することができ、特に、権威のある医者または獣医の薦めおよび処方に基づくべきである。
【０２２８】
したがって、本発明は、メラノコルチン−４−受容体活性に関連する疾患の治療および／または予防のための薬剤の調製のための、前述の化合物の使用にも関する。さらに、本発明は、メラノコルチン−４−受容体活性に関連する疾患の治療および／または予防のための方法であって、前述の化合物をヒトまたは動物に投与することを含んでなる方法に関する。本化合物は、特に肥満の治療および／または予防のために有用である。本発明は、また、前述のようなプロセスにより製造されたときの、前記化合物にも関する。さらに、本発明は、治療活性物質としての、特に、メラノコルチン−４−受容体に関わる疾患、例えば、肥満の治療および／または予防用の治療用活性物質としての前述の化合物の使用に関する。
【０２２９】
実施例
本発明は、以下の実施例により、より良く理解される。ここで記載する実施例は、本発明を説明するが、制限するものではない。実施例セクションで現される特定の化合物の構造において、水素は通常、便宜上省略する。
【０２３０】
実施例１
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−フェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ）の調製
【０２３１】
工程１：
【０２３２】
【化９５】
2004507558.tif 000073
【０２３３】
ガラス耐圧瓶中の、４−フェニルシクロヘキサノン（１０．０ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）のエタノール（１００ｍＬ）と水（３３ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（３３ｇ、３４４ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（５．６ｇ、８６．２ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を、８０〜９０℃で２４時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（４００ｍｌ）に加え、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を、吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＡを白色固体として得た（１４．０ｇ、収率１００％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．６３（ｓ，１Ｈ），７．２３〜７．３６（ｍ，４），７．１５（ｍ，１），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．１０（ｍ，１Ｈ），１．８５（ｄ，１Ｈ）および１．５５〜１．８０（ｍ，６Ｈ）。
【０２３４】
工程２：
【０２３５】
【化９６】
2004507558.tif 000074
【０２３６】
ヒダントインＡ（１０．０ｇ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、３５０ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で２〜３日加熱した。加水分解が完了したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られたスラリーを、濾過し、水洗し、乾燥して、１−アミノ−４−フェニルシクロヘキサンカルボン酸（ＡＰＣ）を白色固体として得て（２５ｇ、収率＞１００％、無機塩が混入）、それを次の工程に直接用いた。少量の粗生成物を、ＨＰＬＣで精製した。
【０２３７】
【表１０】
2004507558.tif 000075
【０２３８】
工程３：
【０２３９】
【化９７】
2004507558.tif 000076
【０２４０】
直前の工程からの粗１−アミノ−４−フェニルシクロヘキサンカルボン酸（ＡＰＣ）（２５ｇ）をジオキサン（３００ｍＬ）および１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１５０ｍｌ）中に懸濁し、一夜激しく撹拌した。反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して僅かに酸性（ｐＨ５〜６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して粗生成物を得、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−シス−ＡＰＣ（１８．２ｇ、２工程についての合計収率７２％）およびＦｍｏｃ−トランス−ＡＰＣ（２．１ｇ、８％）を得た。
【０２４１】
【表１１】
2004507558.tif 000077
【０２４２】
実施例２
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＯＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０２４３】
工程１：
【０２４４】
【化９８】
2004507558.tif 000078
【０２４５】
４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサノン（５．０ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）のアセトン（１００ｍＬ）溶液を、Ｋ２ＣＯ３（１４．５ｇ、１０５ｍｍｏｌ、４当量）およびヨードエタン（４．９ｍＬ、１１．２ｇ、７８．６ｍｍｏｌ、３当量）で処理した。反応液を６５℃で一夜加熱した。溶媒を除去した後、残渣をＨ２Ｏで処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して分光分析的に純粋な４−（４−メトキシフェニル）シクロヘキサノン（５．３４ｇ、１００％）を得た。
【０２４６】
【表１２】
2004507558.tif 000079
【０２４７】
工程２：
【０２４８】
【化９９】
2004507558.tif 000080
【０２４９】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−メトキシフェニル）シクロヘキサン（３．８６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（１４．５ｇ、１５１ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（２．０ｇ、３０．７ｍｍｏｌ、１．６当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で２４時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（３００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥してヒダントインＢを白色固体として得た（４．７５ｇ、収率９１％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２７３（Ｍ−Ｈ）、Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｏ３についての計算値：２７４。
【０２５０】
工程３：
【０２５１】
【化１００】
2004507558.tif 000081
【０２５２】
ヒダントインＢ（１８．７ｇ、６８．２５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４５０ｍＬ）中の懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３７．２ｇ、１７０．５ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（１０．５ｍＬ、７．５９ｇ、７５．０ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（４６０ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固体を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＣを白色固体として得た（２７．６ｇ、８７％）。
【０２５３】
【表１３】
2004507558.tif 000082
【０２５４】
工程４：
【０２５５】
【化１０１】
2004507558.tif 000083
【０２５６】
ビス−ＢｏｃヒダントインＣ（１５．０８ｇ、３１．７８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（５００ｍｌ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に、１Ｎ　ＮａＯＨ（２９０ｍｌ、２９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、僅かに曇った混合物を得た。ＨＰＬＣは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＭｅＯＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えてｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約３００ｍＬ）に、ＤＭＥ（３００ｍＬ）、およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（１６．７ｇ、４９．４２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２００ｍＬ）溶液を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９８／２→９０／１０）で精製して、粗生成物Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＯＡＰＣを白色固体として得た（１２．４ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＣからの収率８３％）。
【０２５７】
【表１４】
2004507558.tif 000084
【０２５８】
実施例３
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−エトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＥｔＯＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０２５９】
工程１
【０２６０】
【化１０２】
2004507558.tif 000085
【０２６１】
４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサノン（５．０ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）のアセトン（１００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１４．５ｇ、１０５ｍｍｏｌ、４当量）およびヨードエタン（１０．５ｍＬ、２０．５ｇ、１３１ｍｍｏｌ、５当量）を添加した。反応液を６５℃で一夜加熱した。溶媒を除去後、残渣をＨ２Ｏで処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、分光分析的に純粋な４−（４−エトキシフェニル）シクロヘキサノン（５．７４ｇ、１００％）を得た。
【０２６２】
【表１５】
2004507558.tif 000086
【０２６３】
工程２：
【０２６４】
【化１０３】
2004507558.tif 000087
【０２６５】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−エトキシフェニル）シクロヘキサノン（４．１５ｇ、１９．０１ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（１４．５ｇ、１５１ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（２．０５ｇ、３１．４２ｍｍｏｌ、１．６当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１９時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（３００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＤを白色固体として得た（５．１７ｇ、収率９４％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２８７（Ｍ−Ｈ）、Ｃ１６Ｈ２０Ｎ２Ｏ３についての計算値：２８８。
【０２６６】
工程３：
【０２６７】
【化１０４】
2004507558.tif 000088
【０２６８】
ヒダントインＤ（４．２２ｇ、１４．６５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７．９８ｇ、３６．６０ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（２．３ｍＬ、１．６３ｇ、１６．１１ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（８９．４ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固体を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×２０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×２０ｍＬ）およびブライン（２×２０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＥを白色固体として得た（７．０１ｇ、９８％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２７（ｄｔ，２Ｈ），６．８７（ｄｔ，２Ｈ），４．０２（ｑ，２Ｈ），１．５９，（ｓ，９Ｈ）１．４３（ｔ，３Ｈ）および１．３８（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　９９９（２Ｍ＋Ｎａ）＋、Ｃ２６Ｈ３６Ｎ２Ｏ７についての計算値：４８８。
【０２６９】
工程４：
【０２７０】
【化１０５】
2004507558.tif 000089
【０２７１】
ビス−ＢｏｃヒダントインＥ（６．５８ｇ、１３．４６ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２００ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に、１Ｎ　ＮａＯＨ（１２１ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、僅かに曇った混合物を得た。ＨＰＬＣは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＥｔＯＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えて、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約１３０ｍＬ）に、ＤＭＥ（１００ｍＬ）、およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（６．８３ｇ、２０．２４ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（３０ｍＬ）溶液を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９８／２→９０／１０）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−４−ＥｔＯＡＰＣを白色固体として得た（５．５６ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＥからの収率８５％）。
【０２７２】
【表１６】
2004507558.tif 000090
【０２７３】
実施例４
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＨＯＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０２７４】
工程１：
【０２７５】
【化１０６】
2004507558.tif 000091
【０２７６】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−エトキシフェニル）シクロヘキサノン（２．００ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（６．１７ｇ、６４．２ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（１．０７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で一夜加熱した。冷却した反応混合物を氷水（２００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＦを白色固体として得た（２．５６ｇ、収率９４％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２６１（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｃ１４Ｈ１６Ｎ２Ｏ３についての計算値：２６０。
【０２７７】
工程２：
【０２７８】
【化１０７】
2004507558.tif 000092
【０２７９】
ヒダントインＦ（２．１０ｇ、８．０６ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、１００ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で２〜３日加熱した。加水分解が完了したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られたスラリーを濾過し、水洗し、乾燥して１−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＨＯＡＰＣ）を白色固体として得た（３．１ｇ、収率＞１００％、無機塩が混入）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２３６（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ３についての計算値：２３５。
【０２８０】
工程３：
【０２８１】
【化１０８】
2004507558.tif 000093
【０２８２】
直前の工程からの粗１−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＨＯＡＰＣ）（３．１ｇ）を、ジオキサン（１００ｍＬ）と１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）中に懸濁し、一夜激しく撹拌した。反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ５〜６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して粗生成物を得て、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−４−ＨｏＡＰＣ（２．７６ｇ、２工程についての合計収率：７５％）を得た。
【０２８３】
【表１７】
2004507558.tif 000094
【０２８４】
実施例５
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−イソプロポキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ｉＰｒＯＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０２８５】
工程１：
【０２８６】
【化１０９】
2004507558.tif 000095
【０２８７】
４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサノン（６．０ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２１ｇ、１５８ｍｍｏｌ、５当量）および２−ヨードプロパン（１５ｍＬ、２６．８ｇ、１５８ｍｍｏｌ、５当量）を添加した。反応液を１００℃で一夜加熱した。溶媒を除去した後、残渣にＨ２Ｏを加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、分光分析的に純粋な４−（４−イソプロポキシフェニル）シクロヘキサノン（７．０２ｇ、９５％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．１４（ｄｔ，２Ｈ），６．８４（ｄｔ，２Ｈ），４．３（七重線，１Ｈ），２．９７（ｔｔ，１Ｈ），２．４６〜２．５２（ｍ，４Ｈ），２．１６〜２．２４（ｍ，２Ｈ），１．８３〜１．９８（ｍ，２Ｈ）および１．３３（ｄ，６Ｈ）。
【０２８８】
工程２：
【０２８９】
【化１１０】
2004507558.tif 000096
【０２９０】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−イソプロポキシフェニル）シクロヘキサノン（５．１ｇ、２１．９８ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（１２．６ｇ、１３１ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（２．１４ｇ、３２．９ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で２４時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（４００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＧを白色固体として得た（６．６０ｇ、収率９９％）。
【０２９１】
【表１８】
2004507558.tif 000097
【０２９２】
工程３：
【０２９３】
【化１１１】
2004507558.tif 000098
【０２９４】
ヒダントインＧ（５．８ｇ、１９．２０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１８０ｍＬ）中の懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０．４６ｇ、４８．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（２．９ｍＬ、２．１３ｇ、２１．１２ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（１４０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×４０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×４０ｍＬ）およびブライン（２×４０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。粗淡黄色生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→８０／２０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＨを白色固体として得た（９．４ｇ、９８％）。
【０２９５】
【表１９】
2004507558.tif 000099
【０２９６】
工程４：
【０２９７】
【化１１２】
2004507558.tif 000100
【０２９８】
ビス−ＢｏｃヒダントインＨ（４．３４ｇ、８．６４ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（１００ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に１Ｎ　ＮａＯＨ（７８ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、かなり透明な混合物を得た。ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（４−イソプロポキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ｉＰｒＯＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えて、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約９ｍＬ）に、ＤＭＥ（１２０ｍＬ）、およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（３．４９ｇ、１０．３４ｍｍｏｌ、１．２当量）のＤＭＥ（２０ｍＬ）溶液を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して、粗生成物Ｆｍｏｃ−４−ｉＰｒＯＡＰＣを白色固体として得た（３．２３ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＨからの収率７５％）。
【０２９９】
【表２０】
2004507558.tif 000101
【０３００】
実施例６
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−メチルフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０３０１】
工程１：
【０３０２】
【化１１３】
2004507558.tif 000102
【０３０３】
４−ヨードトルエン（１０．９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１８０ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、３１．０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）のヘキサン溶液を、−７８℃で２０分間かけて添加した。反応液をさらに２０分間撹拌してから、１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（６．０ｇ、３８．４６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を滴下した。−７８℃で２時間撹拌後、反応液をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して分光分析的に純粋な生成物Ｉを白色固体として得た（９．３４ｇ、収率９８％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．４１（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｄ，２Ｈ），３．９８（ｍ，４Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２４８（Ｍ＋），Ｃ１５Ｈ２０Ｏ３についての計算値：２４８。
【０３０４】
工程２：
【０３０５】
【化１１４】
2004507558.tif 000103
【０３０６】
ディーンシュタルクトラップを設けたフラスコ中の、アルコールＩ（９．１０ｇ、３６．６５ｍｍｏｌ）の乾燥ベンゼン（２００ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（６５０ｍｇ）を添加し、反応液を１００℃で３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）およびブライン（３×５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、分光分析的に純粋な生成物Ｊ（８．３６ｇ、収率１００％）を得て、これを精製することなく次の工程に用いた。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２３０（Ｍ＋）、１９０（Ｍ−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ１５Ｈ１８Ｏ２についての計算値：２３０。
【０３０７】
工程３：
【０３０８】
【化１１５】
2004507558.tif 000104
【０３０９】
オレフィンＪ（７．４９ｇ）のＥｔＯＡｃ（１８０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（炭素上５重量％、８００ｍｇ）を添加し、反応を４０ｐｓｉの水素雰囲気下に室温で３時間行った。触媒を濾去し、濾液を濃縮して、分光分析的に純粋な生成物Ｋを無色油状物として得た（７．４０ｇ、収率１００％）。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２３２（Ｍ＋）、１８８（Ｍ−ＯＣＨ２ＣＨ２）、Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２についての計算値：２３２。
【０３１０】
工程４：
【０３１１】
【化１１６】
2004507558.tif 000105
【０３１２】
ケタールＫ（６．９０ｇ）のアセトン（１４０ｍＬ）溶液に、４Ｎ　ＨＣｌ（６０ｍＬ）を添加し、６５℃で４時間加熱した。溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、４Ｎ　ＨＣｌで中和した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、乾燥し、濃縮した。得られた粗４−（４−メチルフェニル）シクロヘキサンを、精製することなく次の工程に用いた（５．５７ｇ、定量的収率）。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　１８８（Ｍ＋）、Ｃ１３Ｈ１６Ｏについての計算値：１８８。
【０３１３】
工程５：
【０３１４】
【化１１７】
2004507558.tif 000106
【０３１５】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−メチルフェニル）シクロヘキサノン（５．３２ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（１６．３ｇ、１６９．８ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（３．６８ｇ、５６．５ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で一夜加熱した。冷却した反応混合物を氷水（４００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＬを白色固体として得た（６．３ｇ、収率８６％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　５１７（２Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１５Ｈ１８ＣｌＮ２Ｏ２についての計算値：２５８。
【０３１６】
工程６：
【０３１７】
【化１１８】
2004507558.tif 000107
【０３１８】
ヒダントインＬ（５．８２ｇ、２２．５５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１２．３ｇ、５６．４ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（３．５ｍＬ、２．５ｇ、２４．７ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（２７５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＭを白色固体として得た（１０．０３ｇ、収率１００％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２６（ｄ，２Ｈ），６．８７（ｄ，２Ｈ），３．００（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｓ，９Ｈ）および１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【０３１９】
工程７：
【０３２０】
【化１１９】
2004507558.tif 000108
【０３２１】
ビス−ＢｏｃヒダントインＭ（６．４０ｇ、１３．９７ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２００ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に、１Ｎ　ＮａＯＨ（１２０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、僅かに曇った混合物を得た。ＨＰＬＣは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（４−メチルフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＭｅＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えて、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約１４０ｍＬ）に、ＤＭＥ（２４０ｍＬ）、およびＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（５．１０ｇ、１５．１３ｍｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＥ（４０ｍＬ）溶液を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９８／２→９０／１０）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡＰＣを白色固体として得た（４．３５ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＭからの収率６９％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８８（ｄ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），７．２４〜７．４３（ｍ，４Ｈ），７．０２〜７．１４（ｍ，４Ｈ），４．２５（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ）。
【０３２２】
実施例７
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（４−クロロフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０３２３】
【化１２０】
2004507558.tif 000109
【０３２４】
工程１：
【０３２５】
４−クロロフェニルブロミド（７．５ｇ、３９．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１８０ｍＬ）溶液を−７８℃に冷却し、ｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、２５ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）のヘキサン溶液を、２０分間かけて滴下した。反応液をさらに３０分間撹拌してから、１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（６．０ｇ、３８．４６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を滴下した。−７８℃で１時間撹拌し、反応液をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、分光分析的に純粋な生成物Ｎを白色固体として得た（９．４０ｇ、収率９１％）。
【０３２６】
【表２１】
2004507558.tif 000110
【０３２７】
工程２：
【０３２８】
【化１２１】
2004507558.tif 000111
【０３２９】
ディーンシュタルクトラップを設けたフラスコ中の、アルコールＮ（６．７８ｇ、２５．３０ｍｍｏｌ）の乾燥ベンゼン（１２０ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（９６０ｍｇ）を添加し、反応液を還流下に３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）およびブライン（３×５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して分光分析的に純粋な生成物Ｏ（６．３０ｇ、収率１００％）を得て、これを精製することなく次の工程に用いた。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２５０（Ｍ＋）、１９０（Ｍ−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ１４Ｈ１５ＣｌＯ２についての計算値：２５０。
【０３３０】
工程３：
【０３３１】
【化１２２】
2004507558.tif 000112
【０３３２】
オレフィンＯ（６．１１ｇ）のＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（炭素上５重量％、６００ｍｇ）を添加し、反応を５ｐｓｉの水素雰囲気下に室温で３時間行った。触媒を濾去し、濾液を濃縮して、分光分析的に純粋な生成物Ｐを無色油状物（６．１０ｇ、収率１００％）として得た。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２５２（Ｍ＋）、Ｃ１４Ｈ１７ＣｌＯ２についての計算値：２５２。
【０３３３】
工程４：
【０３３４】
【化１２３】
2004507558.tif 000113
【０３３５】
ケタールＰ（５．８１ｇ、２３．０６ｍｍｏｌ）のアセトン（２００ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８７６ｍｇ）を添加し、６０℃で一夜加熱した。溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃに取り込み、Ｎａ２ＣＯ３水溶液およびブラインで洗い、乾燥し、濃縮して、粗生成物を黄色油状物（５．３８ｇ、収率＞１００％）として得た。フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８０／２０→６０／４０）により精製して、４−（４−クロロフェニル）シクロヘキサノンを淡黄色油状物（４．５４ｇ、収率９５％）として得た。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２０８（Ｍ＋）、Ｃ１２Ｈ１３ＣｌＯ２についての計算値：２０８。
【０３３６】
工程５：
【０３３７】
【化１２４】
2004507558.tif 000114
【０３３８】
ガラス耐圧瓶中の、４−（４−クロロフェニル）シクロヘキサノン（４．２６ｇ、２０．４８ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（１３．８ｇ、１４４ｍｍｏｌ、７当量）およびシアン化カリウム（３．５６ｇ、５４．７７ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で一夜加熱した。冷却した反応混合物を氷水（４００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＱを白色固体として得た（５．５８ｇ、収率９８％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２７７（Ｍ−Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１５ＣｌＮ２Ｏ２についての計算値：２７８
【０３３９】
工程６：
【０３４０】
【化１２５】
2004507558.tif 000115
【０３４１】
ヒダントインＱ（５．１５ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０．１ｇ、４６．３ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（２．８ｍＬ、２．０７ｇ、２０．４５ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（２２６ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＲを白色固体として得た（８．０５ｇ、収率９１％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　５４２（Ｍ＋Ｍａ＋ＭｅＣＮ）、Ｃ２４Ｈ３１ＣｌＮ２Ｏ６についての計算値：４７８。
【０３４２】
工程７：
【０３４３】
【化１２６】
2004507558.tif 000116
【０３４４】
ビス−ＢｏｃヒダントインＲ（６．４１ｇ、１３．９７ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２００ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に、１Ｎ　ＮａＯＨ（１２０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、僅かに曇った混合物を得た。ＨＰＬＣは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（４−クロロフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（４−ＣｌＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えて、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約１８０ｍＬ）に、ＤＭＥ（２４０ｍＬ）、およびＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（５．３１ｇ、１５．７４ｍｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＥ（３０ｍＬ）溶液を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９８／２→９０／１０）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡＰＣを白色固体として得た（５．０４ｇ、ビス−Ｂｏｃヒダントインからの収率７６％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８８（ｄ，２Ｈ），７．７４（ｄ，２Ｈ），７．１９〜７．４２（ｍ，８Ｈ），４．２０〜４．３１（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　４７４（Ｍ−Ｈ）、Ｃ２８Ｈ２６ＣｌＮＯ４についての計算値：４７５。
【０３４５】
実施例８
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−（３−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡｐｃ−ＯＨ）の調製
【０３４６】
工程１：
【０３４７】
【化１２７】
2004507558.tif 000117
【０３４８】
３−ヨードアニソール（１１．７ｇ、５０．０ｍｍｏｌ、１．３当量）の無水ＴＨＦ（１８０ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍ、３１．０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ、１．３当量）のヘキサン溶液を、−７８℃で２５分間かけて添加した。反応液をさらに３０分間撹拌してから、１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（６．０ｇ、３８．４６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を滴下した。−７８℃で２時間撹拌後、反応液をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、分光分析的に純粋な生成物Ｓを白色固体として得た（９．３４ｇ、収率９８％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２６（ｄｄ，１Ｈ），７．０６〜７．１１（ｍ，２Ｈ），６．７９（ｄｄ，１Ｈ），３．９８（ｍ，４Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。
【０３４９】
工程２：
【０３５０】
【化１２８】
2004507558.tif 000118
【０３５１】
窒素雰囲気下の、アルコールＳ（５．６ｇ、２１．２１ｍｍｏｌ）の撹拌しつつある無水ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）溶液に、塩−氷浴温度で、トリエチルシラン（１０．２ｍＬ、７．４ｇ、６３．６３ｍｍｏｌ、３当量）および三フッ化ホウ素エーテラート（２１．５ｍＬ、２４．１ｇ、１６９．７ｍｍｏｌ、８当量）を順次添加した。次に反応混合物を室温まで暖め、３時間撹拌してから、１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液およびＨ２Ｏで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮して、脱酸素化合物を油状物（４．９１ｇ）として得た。これは直接用いるのに充分な純度であった。この粗中間体をアセトン（１３０ｍＬ）に溶解し、４Ｎ　ＨＣｌ（６０ｍＬ）を添加し、６５℃で４時間加熱した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、４Ｎ　ＮａＯＨ溶液で中和した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、乾燥し、濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（８０／２０→６０／４０）で精製して、４−（３−メトキシフェニル）シクロヘキサノン（３．６７ｇ、全収率８５％）を黄色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２５（ｄｔ，１Ｈ），６．７５〜６．８６（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．００（ｔｔ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ　２０４（Ｍ＋）、Ｃ１３Ｈ１６Ｏ２についての計算値：２０４。
【０３５２】
工程３：
【０３５３】
【化１２９】
2004507558.tif 000119
【０３５４】
ガラス耐圧瓶中の、４−（３−メトキシフェニル）シクロヘキサノン（３．１０ｇ、１５．２０ｍｍｏｌ）のエタノール（６０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（８．７５ｇ、９１．２０ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（１．９８ｇ、３０．４０ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で一夜加熱した。冷却した反応混合物を氷水（３００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で充分に洗い、乾燥して、ヒダントインＴを白色固体として得た（４．０８ｇ、収率９８％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．１１（ｄ，１Ｈ），６．７０〜６．９４（ｍ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　３１６（Ｍ＋ＭｅＣＮ＋Ｈ）、Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｏ３についての計算値：２７４。
【０３５５】
工程４：
【０３５６】
【化１３０】
2004507558.tif 000120
【０３５７】
ヒダントインＴ（５．２９ｇ、１９．３０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）懸濁液に、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０．５ｇ、４８．１６ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（３．０ｍＬ、２．１７ｇ、２１．５２ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（２３５ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応液は、透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８０／２０→６０／４０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＵを白色固体として得た（８．７０ｇ、収率９５％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　５３８（Ｍ＋ＭｅＣＮ＋Ｎａ）、Ｃ２５Ｈ３４Ｎ２Ｏ７についての計算値：４７４。
【０３５８】
工程５：
【０３５９】
【化１３１】
2004507558.tif 000121
【０３６０】
ビス−ＢｏｃヒダントインＵ（２．３０ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（８０ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に、１Ｎ　ＮａＯＨ（４４ｍｌ、４４ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、僅かに曇った混合物を得た。ＨＰＬＣは反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた１−アミノ−４−（３−メトキシフェニル）シクロヘキサンカルボン酸（３−ＭｅＯＡＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを加えてｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約４０ｍＬ）に、ジオキサン（８０ｍＬ）およびＦｍｏｃ−Ｃｌ（１．７３ｇ、６．７６ｍｍｏｌ、１．４当量）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、３Ｎ　ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９８／２→９０／１０）で精製して、Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡＰＣを白色固体として得た（１．９８ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＵからの収率８７％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８８（ｄ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），７．４０（ｔｄ，２Ｈ），７．３０（ｔｄ，２Ｈ），７．２１（ｍ，１Ｈ），６．７１〜６．８０（ｍ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　４９４（Ｍ＋Ｎａ）、Ｃ２９Ｈ２９ＮＯ５についての計算値：４７１。
【０３６１】
実施例２８
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−ブロモ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−Ｂｒ−Ａｔｃ−ＯＨ）の調製
【０３６２】
工程１：
【０３６３】
【化１３２】
2004507558.tif 000122
【０３６４】
３−（２−ブロモフェニル）プロピオン酸（２−ブロモベンジルブロミドから２工程で調製、２．０ｇ、８．７３ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（１．１４ｍｌ、１３．１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（２０ｍｌ）の混合物を氷浴中で冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３４μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で３時間撹拌した。減圧下に濃縮して、３−（２−ブロモフェニル）プロパノイルクロリドを得て、これを塩化メチレンに取り込み、粗生成物のままで次の工程に用いた。
【０３６５】
工程２：
【０３６６】
【化１３３】
2004507558.tif 000123
【０３６７】
前記酸クロリド（粗生成物、８．７３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液を、氷浴中で冷却したジアゾメタン（１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン５．７０ｇから得られた）のエーテル（４０ｍｌ）溶液に、ゆっくり添加した。次に、混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１０→２０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、１−ジアゾ−４−（２−ブロモフェニル）ブタン−２−オン（１．８８ｇ、２工程で８５％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．５０（１Ｈ，ｄ，フェニル），７．２４（２Ｈ，ｍ，フェニル），７．０６（１Ｈ，ｍ，フェニル），５．２１（１Ｈ，ブロードｓ，ジアゾ），３．０５（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．６２（２Ｈ，ｍ）。
【０３６８】
工程３：
【０３６９】
【化１３４】
2004507558.tif 000124
【０３７０】
塩化メチレン（１２０ｍｌ）中の酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体（１５ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）の還流下の混合物に、１−ジアゾ−４−（２−ブロモフェニル）ブタン−２−オン（１．７４ｇ、６．８５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３０ｍｌ）溶液を添加した。添加完了後、混合物をさらに２０分間還流した。混合物を室温まで冷却し、トリフルオロ酢酸（１．５ｍｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。層を分離し、塩化メチレン層を、飽和重炭酸ナトリウム溶液でもう一度洗った。合わせた水層を、塩化メチレンで逆抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、褐色油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（１０→１５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して５−ブロモ−β−テトラロン（１．１８ｇ、収率７７％）を無色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．４６（１Ｈ，ｔ，フェニル），７．０５〜７．０９（２Ｈ，ｍ，フェニル），３．５８（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．２２（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５４（２Ｈ，ｔ）。
【０３７１】
工程４：
【０３７２】
【化１３５】
2004507558.tif 000125
【０３７３】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−ブロモ−β−テトラロン（１．１８ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（５１２ｍｇ、７．８６ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（３．０ｇ、３１．２２ｍｍｏｌ）、エタノール（２５ｍｌ）および水（５ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で４日間加熱した。室温まで冷却後、白色スラリーを氷水中に注ぎ、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、その後、風乾してヒダントインＶ（１．３１ｇ、８５％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．７１（１Ｈ，ブロード，ＮＨ），８．２８（１Ｈ，ブロードｓ，ＮＨ），７．０〜７．５（３Ｈ，ｍ，フェニル）。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１２Ｈ１１ＢｒＮ２Ｏ２についての計算値：２９４；実測値：２９３（Ｍ−Ｈ）、２９５（Ｍ−Ｈ）
【０３７４】
工程５：
【０３７５】
【化１３６】
2004507558.tif 000126
【０３７６】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＶ（１．２８７ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）とＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（４．２０ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の、水（２５ｍｌ）中に含む混合物を、１２５℃の油浴中で４日間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に、４Ｎ硫酸を用いて、ｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で１時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約２０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥してラセミ５−ブロモ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（８９３ｍｇ、収率７６％）を得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１１Ｈ１２ＢｒＮＯ２についての計算値：２６９；実測値：２７０（Ｍ＋Ｈ）、２７２（Ｍ＋Ｈ）、２６８（Ｍ−Ｈ）、２７０（Ｍ−Ｈ）。
【０３７７】
工程６：
【０３７８】
【化１３７】
2004507558.tif 000127
【０３７９】
ラセミ５−ブロモ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（８８２ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．６０ｍｌ、４．３０ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、１．３２ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）の、アセトニトリル（３０ｍｌ）および水（３０ｍｌ）中の混合物を、室温で一夜撹拌した。翌日、反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（０．２５ｇ）、トリエチルアミン（０．６ｍｌ）およびアセトニトリル（５ｍｌ）を添加し、混合物を室温でさらに１日撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで２回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（２→５→１０％メタノール／塩化メチレンで溶離）によって精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−ブロモ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．０９ｇ、収率６８％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２６Ｈ２２ＢｒＮＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ）についての計算値：５１４．０６３０；実測値：５１４．０６４３。
【０３８０】
実施例１０
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−クロロ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ＣｌＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０３８１】
工程１：
【０３８２】
【化１３８】
2004507558.tif 000128
【０３８３】
３−（２−クロロフェニル）プロピオン酸（５．０ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１０．９ｍｌ、１４９ｍｍｏｌ）およびトルエン（７５ｍｌ）の混合物を、２時間還流した。減圧下に濃縮して３−（２−クロロフェニル）プロパノイルクロリドを得、これを塩化メチレンに取り込み、さらに精製することなく次の工程に用いた。
【０３８４】
工程２：
【０３８５】
【化１３９】
2004507558.tif 000129
【０３８６】
前記酸クロリド（粗生成物、２７．１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液を、氷浴中で冷却された、ジアゾメタン（１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン１７．８ｇから得られた）のエーテル（１２０ｍｌ）溶液にゆっくり添加した。次に混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮して、１−ジアゾ−４−（２−クロロフェニル）ブタン−２−オン（５．８７ｇ、２工程で＞１００％）を淡黄色油状物として得た。化合物をさらに精製することなく次の工程に用いた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．０５〜７．３２（４Ｈ，ｍ，フェニル），５．１３（１Ｈ，ブロードｓ，ジアゾ），３．００（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５７（２Ｈ，ｍ）。
【０３８７】
工程３：
【０３８８】
【化１４０】
2004507558.tif 000130
【０３８９】
酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の還流下の塩化メチレン（４００ｍｌ）中の混合物に、粗１−ジアゾ−４−（２−ブロモフェニル）ブタン−２−オン（５．８７ｇ、理論値２７．１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液をゆっくり添加した。添加完了後、混合物をさらに２０分間還流した。混合物を室温まで冷却し、トリフルオロ酢酸（６．０ｍｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。層を分離し、塩化メチレン層を飽和重炭酸ナトリウム溶液でもう一度洗った。合わせた水層を塩化メチレンで逆抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、褐色油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（１０→１５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、５−ブロモ−β−テトラロン（３．３２ｇ、工程１〜３についての収率６８％）を淡褐色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．３０（１Ｈ，ｍ，フェニル），７．１５（１Ｈ，ｔ，フェニル），７．０５（１Ｈ，ｄ，フェニル），３．６０（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．２２（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５６（２Ｈ，ｔ）。
【０３９０】
工程４：
【０３９１】
【化１４１】
2004507558.tif 000131
【０３９２】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−クロロ−β−テトラロン（８８０ｍｇ、４．８７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（５００ｍｇ、７．６７ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（２．８５ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）、エタノール（２５ｍｌ）および水（５ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で６６時間加熱した。室温まで冷却後、スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾して、ヒダントインＷ（０．９２ｇ、７５％）を淡ベージュ色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．７０（１Ｈ，ブロード，ＮＨ），８．２５（１Ｈ，ブロードｓ，ＮＨ），７．０〜７．３（３Ｈ，ｍ，フェニル）。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１２Ｈ１１ＣｌＮ２Ｏ２についての計算値：２５０；実測値：２４９（Ｍ−Ｈ），２５１（Ｍ−Ｈ）。
【０３９３】
工程５：
【０３９４】
【化１４２】
2004507558.tif 000132
【０３９５】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＷ（８８０ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ）とＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（３．４０ｇ、１８ｍｍｏｌ）を水（５０ｍｌ、希釈用）中に含む混合物を、１２５℃の油浴中で２日間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で２時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約５０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥して、ラセミ５−クロロ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（７８８ｍｇ、収率９９％）を得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮＯ２についての計算値：２２５；実測値：２２６（Ｍ＋Ｈ）、２２８（Ｍ＋Ｈ）、２２４（Ｍ−Ｈ）、２２６（Ｍ−Ｈ）。
【０３９６】
工程６：
【０３９７】
【化１４３】
2004507558.tif 000133
【０３９８】
ラセミ５−クロロ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（４０２ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３８ｍｌ、２．７３ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、９０４ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２０ｍｌ）と水（２０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２日間撹拌した。２日後、反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（０．１２ｇ）およびトリエチルアミン（０．１ｍｌ）を添加し、混合物を室温でさらに１日撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（３→６→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−クロロ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（５４０ｍｇ、収率６８％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＩ）：Ｃ２６Ｈ２２ＣｌＮＯ４（Ｍ）についての計算値：４４７．１２３７；実測値：４４７．１２３４。
【０３９９】
実施例１１
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−メトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ＭｅＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４００】
工程１：
【０４０１】
【化１４４】
2004507558.tif 000134
【０４０２】
ラセミ５−メトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｏｂｒｅｃｈｔ，Ｄ．ら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ．１９９２年、第７５巻、１６６６頁に従って調製）（８０２ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．６２ｍｌ、４．４５ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、１．４７ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２５ｍｌ）と水（２５ｍｌ）中に含む混合物を、室温で３０分間撹拌した。反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−炭酸フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（３７９ｍｇ）およびトリエチルアミン（０．６ｍｌ）を添加し、混合物を室温でさらに２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（１→３→５→１０％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−メトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．１４ｇ、収率７１％）を、灰色がかった白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２７Ｈ２６ＮＯ５（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４４７．１８１２；実測値：４４４．１８１４。
【０４０３】
実施例１２
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−エトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ＥｔＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４０４】
工程１：
【０４０５】
【化１４５】
2004507558.tif 000135
【０４０６】
１，６−ジヒドロキシナフタレン（５．０２ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（５２．０ｇ、３７６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）およびヨードエタン（１５ｍｌ、１８８ｍｍｏｌ）の混合物を、３５℃の油浴中で２４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、固体残渣をエチルエーテルで完全に濯いだ。濾液と洗浄液を合わせ、減圧下に濃縮して溶媒の大部分を除去した。褐色残渣を水とエーテルとで分配し、層を分離した。エーテル層を水で洗った。合わせた水層をエーテルで逆抽出した。エーテル抽出物を合わせ、ブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して、未精製の褐色固体（６．７４ｇ、収率９９％）を得た。熱いメタノールから粗生成物を再結晶して、１，６−ジヒドロキシナフタレン（４．３６ｇ、収率６４％、第一の生成物）を淡褐色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．２０（１Ｈ，ｄ，フェニル），７．０６〜７．３６（４Ｈ，ｍ，フェニル），６．６６（１Ｈ，ｄｄ，フェニル），４．１０〜４．２３（４Ｈ，２組のｑ、２ＣＨ２），１．４５〜１．５６（６Ｈ，２組のｔ、２ＣＨ３）。
【０４０７】
工程２：
【０４０８】
【化１４６】
2004507558.tif 000136
【０４０９】
１，６−ジエトキシナフタレン（４．１５ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）の還流下の無水エタノール（１００ｍｌ）溶液に、ナトリウム金属の小片（６．８ｇ、２９６ｍｍｏｌ）を６０分間かけて注意深く添加した。混合物をさらに９０分間還流した。ＴＬＣは、未反応の出発物質の存在を示した。さらなるナトリウム金属（１．０ｇ、４３．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をさらに６０分間還流した。反応液を室温まで冷却し、水でクエンチし、濃塩酸で酸性にした。混合物を減圧下に濃縮してエタノールの大部分を除去した。水性混合物をエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を、水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して褐色固体を得て、これを１：１エタノール／水（２００ｍｌ）に溶解し、次に、ｐ−トルエンスルホン酸（４００ｍｇ）を添加した。混合物を２１０分間還流した。さらなるｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）を添加し、混合物をさらに６０分間還流した。室温まで冷却後、エタノールの大部分を減圧下に除去した。水性混合物をエーテルで３回抽出し、合わせた有機層を、水および飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して褐色油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（７％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、５−エトキシ−β−テトラロン（２．４３ｇ、収率６７％）を淡黄色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．１５（１Ｈ，ｔ，フェニル），６．７６（１Ｈ，ｄ，フェニル），６．７２（１Ｈ，ｄ，フェニル），４．０５（２Ｈ，ｑ，ＣＨ２），３．５６（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．１０（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５３（２Ｈ，ｔ），１．４４（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）。
【０４１０】
工程３：
【０４１１】
【化１４７】
2004507558.tif 000137
【０４１２】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−エトキシ−β−テトラロン（２．２３ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１．２０ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（６．７５ｇ、７０．２ｍｍｏｌ）、エタノール（８０ｍｌ）および水（２０ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で３日間加熱した。室温まで冷却後、スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾してヒダントインＸ（２．６９ｇ、８８％）をベージュ色固体として得た。
【０４１３】
【表２２】
2004507558.tif 000138
【０４１４】
工程４：
【０４１５】
【化１４８】
2004507558.tif 000139
【０４１６】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＸ（２．５７ｇ、９．８７ｍｍｏｌ）とＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（９．４０ｇ、４９．６ｍｍｏｌ）を水（２００ｍｌ、希釈兼用）中に含む混合物を、１０５℃の油浴中で３９時間加熱した。さらなるＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（９．４０ｇ、４９．６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１２５℃の油浴中でさらに２１時間過熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で１時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を減圧下に約７５ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、風乾して、ラセミ５−エトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（２．３４ｇ、定量的収率）を淡ベージュ色固体として得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ３についての計算値：２３５；実測値：２３６（Ｍ＋Ｈ）、２３４（Ｍ−Ｈ）。
【０４１７】
工程５：
【０４１８】
【化１４９】
2004507558.tif 000140
【０４１９】
ラセミ５−エトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（２．２２ｇ、９．４４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．００ｍｌ、１４．３ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、４．８１ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（７５ｍｌ）と水（７５ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２日間撹拌した。反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（６４５ｍｇ）およびトリエチルアミン（１．０ｍｌ）を添加し、混合物を室温でさらに１日撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（３→５→１０％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−エトキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（４．６６ｇ、＞定量的収量）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２８Ｈ２８ＮＯ５（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４５８．１９６７；実測値：４５８．１９８５。
【０４２０】
実施例１３
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−イソプロポキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ｉＰｒＯＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４２１】
工程１：
【０４２２】
【化１５０】
2004507558.tif 000141
【０４２３】
６−メトキシ−１−テトラロン（５．０７ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（３．５３ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を乾燥ｐ−シメン（２５０ｍｌ）中に含む混合物を、アルゴン雰囲気下に３８時間加熱還流した。反応混合物を室温まで冷却し、セライトで濾過し、残渣をｐ−シメンで完全に濯いだ。濾液と洗浄液を合わせ、１Ｎ塩化ナトリウム溶液（２×７０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた水性抽出物を、６Ｎ塩酸でｐＨ約３まで酸性にし、エーテルで３回抽出した。合わせた有機層を水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮することにより、粗５−ヒドロキシ−６−メトキシナフタレン（２．３１ｇ、収率４６％）が淡褐色固体として得られ、これをさらに精製することなく次の工程に用いた。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１１Ｈ１０Ｏ２についての計算値：１７４；実測値：１７３（Ｍ−Ｈ）。
【０４２４】
工程２：
【０４２５】
【化１５１】
2004507558.tif 000142
【０４２６】
５−ヒドロキシ−６−メトキシナフタレン（２．１０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１９．７ｇ、６０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍｌ）および２−ブロモプロパン（３．５０ｍｌ、３６．９ｍｍｏｌ）の混合物を、４０℃の油浴中で一夜撹拌した。反応混合物を濾過し、固体残渣をエチルエーテルで完全に濯いだ。濾液と洗浄液を合わせ、減圧下に濃縮して溶媒の大部分を除去した。褐色の残渣を水とエーテルとに分配し、層を分離した。エーテル層を水で洗った。合わせた水層をエーテルで逆抽出した。エーテル抽出物を合わせ、ブラインで洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（２．５→５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１−イソプロポキシ−６−メトキシナフタレン（２．２３ｇ、収率８６％）を淡褐色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．１７（１Ｈ，ｄ，フェニル），７．０５〜７．３８（４Ｈ，ｍ，フェニル），６．７２（１Ｈ，ｄｄ，フェニル），４．７３（１Ｈ，ｍ，ｉＰｒのＣＨ），３．９２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３），１．４２（６Ｈ，ｄ，ｉＰｒの２ＣＨ３）。
【０４２７】
工程３：
【０４２８】
【化１５２】
2004507558.tif 000143
【０４２９】
１−イソプロポキシ−６−メトキシナフタレン（２．２３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の還流下の無水エタノール（５０ｍｌ）溶液に、ナトリウム金属の小片（３．６ｇ、１５７ｍｍｏｌ）を４５分間かけて注意深く添加した。混合物をさらに１２０分間還流した。反応液を室温まで冷却し、水でクエンチし、濃塩酸で酸性にした。混合物を減圧下に濃縮してエタノールの大部分を除去した。水性混合物をエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を、水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して赤色がかった油状物を得て、これを１：１エタノール／水（９０ｍｌ）に溶解し、次に、ｐ−トルエンスルホン酸（２００ｍｇ）を添加した。混合物を６０分間還流した。室温まで冷却後、エタノールの大部分を減圧下に除去した。水性混合物をエーテルで２回抽出し、合わせた有機層を、水および飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して赤色がかった油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（８→１５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、５−イソプロポキシ−β−テトラロン（１．３７ｇ、収率６５％）を無色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．１６（１Ｈ，ｔ，フェニル），６．７８（１Ｈ，ｄ，フェニル），６．７１（１Ｈ，ｄ，フェニル），４．５３（１Ｈ，ｍ，ｉＰｒのＣＨ），３．５６（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．０８（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５０（２Ｈ，ｔ），１．３７（６Ｈ，ｄ，ｉＰｒの２ＣＨ３）。
【０４３０】
工程４：
【０４３１】
【化１５３】
2004507558.tif 000144
【０４３２】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−イソプロポキシ−β−テトラロン（１．３７ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（６６０ｍｇ、１０．１ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（３．８７ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、エタノール（４４ｍｌ）および水（９ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で４２時間加熱した。室温まで冷却後、スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾して、ヒダントインＹ（１．６４ｇ、８９％）を得た。
【０４３３】
工程５：
【０４３４】
【化１５４】
2004507558.tif 000145
【０４３５】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＹ（１．６４ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）とＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（５．６６ｇ、２９．９ｍｍｏｌ）を水（２５ｍｌ）中に含む混合物を、１００℃の油浴中で７０時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約７に中和した。懸濁液を沸騰している水浴中で１時間撹拌し、室温まで冷却した。１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で塩基性にし、白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約７５ｍｌまで濃縮した。濃塩酸溶液で中和して、白色沈殿を得、これを濾過し、水で洗い、風乾してラセミ５−イソプロポキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（３．４８ｇ、湿っていて無機塩を含む、＞定量的収率）を得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ３についての計算値：２４９；実測値：２４８（Ｍ−Ｈ）。
【０４３６】
工程６：
【０４３７】
【化１５５】
2004507558.tif 000146
【０４３８】
ラセミ５−イソプロポキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（３．４８ｇ、理論値５．９８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．１０ｍｌ、７．８９ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、２．６２ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で１日間撹拌した。反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（５００ｍｇ）を添加し、混合物を室温でさらに１日撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（１→２→５→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−イソプロポキシ−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（０．５０ｇ、２工程での収率１８％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２９Ｈ３０ＮＯ５（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４７２．２１２４；実測値：４７２．２１１７。
【０４３９】
実施例１４
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−メチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ＭｅＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４４０】
工程１：
【０４４１】
【化１５６】
2004507558.tif 000147
【０４４２】
２−メチルヒドロケイ皮酸（３．０ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（３．１９ｍｌ、３６．６ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（３０ｍｌ）の混合物を氷浴中で冷却し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１４ｍｌ、１．８１ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で一夜撹拌した。減圧下に濃縮して、３−（２−メチルフェニル）プロパノイルクロリドを得て、これを塩化メチレン中に取り込み、粗生成物として次の工程で用いた。
【０４４３】
工程２：
【０４４４】
【化１５７】
2004507558.tif 000148
【０４４５】
前記酸クロリド（粗生成物、１８．３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液を、ジアゾメタン（１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン１１．９ｇから得られた）の、氷浴中で冷却されたエーテル（８０ｍｌ）溶液にゆっくり添加した。次に混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１０→２０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１−ジアゾ−４−（２−メチルフェニル）ブタン−２−オン（２．０８ｇ、２工程で６０％）を、淡黄色油状物として得た。
【０４４６】
工程３：
【０４４７】
【化１５８】
2004507558.tif 000149
【０４４８】
酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体（２４ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２００ｍｌ）中に含む還流下の混合物に、１−ジアゾ−４−（２−メチルフェニル）ブタン−２−オン（２．０８ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液に、１８０分間かけてゆっくり添加した。添加完了後、混合物をさらに２０分間還流した。混合物を室温まで冷却し、トリフルオロ酢酸（２．４０ｍｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。層を分離し、塩化メチレン層を飽和重炭酸ナトリウム溶液でもう一度洗った。合わせた水層を塩化メチレンで逆抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して褐色の粗油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（１５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、５−メチル−β−テトラロン（１．４８ｇ、収率８４％）を淡褐色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ６．９０〜７．２０（３Ｈ，ｍ，フェニル），３．５８（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．０３（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５５（２Ｈ，ｔ），２．３４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）。
【０４４９】
工程４：
【０４５０】
【化１５９】
2004507558.tif 000150
【０４５１】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−メチル−β−テトラロン（１．４８ｇ、９．２４ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（９０２ｍｇ、１３．９ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（５．３３ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）、エタノール（４５ｍｌ）および水（９ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で３日間加熱した。室温まで冷却後、スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾して、ヒダントインＺ（１．８１ｇ、収率８５％）をベージュ色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．６６（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），８．２２（１Ｈ，ブロードｓ，ＮＨ），６．８５〜７．０５（３Ｈ，ｍ，フェニル），２．１７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）。
【０４５２】
工程５：
【０４５３】
【化１６０】
2004507558.tif 000151
【０４５４】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＺ（１．８０ｇ、７．８２ｍｍｏｌ）およびＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（７．４０ｇ、３９．１ｍｍｏｌ）を水（２８ｍｌ）中に含む混合物を、１２５℃の油浴中で８８時間加熱した。反応混合物を、室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を沸騰している水浴中で１時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約５０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得、これを濾過し、水で洗い、風乾して、ラセミ５−メチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．０５ｇ、収率６５％）をベージュ色固体として得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ２についての計算値：２０５；実測値：２０６（Ｍ＋Ｈ）。
【０４５５】
工程６：
【０４５６】
【化１６１】
2004507558.tif 000152
【０４５７】
ラセミ５−メチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．０５ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．９３ｍｌ、６．６７ｍｍｏｌ）および９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、２．２４ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２日間撹拌した。反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（５２０ｍｇ）を添加し、混合物を室温でさらに２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで２回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して、粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（２→５→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−メチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．６２ｇ、収率７４％）を、淡褐色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２７Ｈ２６ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４２８．１８６２；実測値：４２８．１８４４。
【０４５８】
実施例１５
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−エチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ＥｔＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４５９】
工程１：
【０４６０】
【化１６２】
2004507558.tif 000153
【０４６１】
３−（２−エチルフェニル）プロピオン酸（１−エチル−２−ヨードベンゼンから３工程で調製、４．２４ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（９．５０ｍｌ、１３０ｍｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍｌ）の混合物を、２時間還流した。減圧下に濃縮して、３−（２−エチルフェニル）プロパノイルクロリドを得、これを塩化メチレン中に取り込み、粗生成物として次の工程で用いた。
【０４６２】
工程２：
【０４６３】
【化１６３】
2004507558.tif 000154
【０４６４】
３−（２−エチルフェニル）プロパノイルクロリド（粗生成物、２３．８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン中に含む溶液を、ジアゾメタン（１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン１５．６ｇから得られた）の氷浴中で冷却されたエーテル（１００ｍｌ）溶液に、ゆっくり添加した。次に混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１０→２０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、１−ジアゾ−４−（２−エチルフェニル）ブタン−２−オン（３．４７ｇ、２工程で７２％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．１〜７．２５（４Ｈ，ｍ，フェニル），５．２１（１Ｈ，ブロードｓ，ジアゾ），２．９７（２Ｈ，ｍ，エチルのＣＨ２），１．２０（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）。
【０４６５】
工程３：
【０４６６】
【化１６４】
2004507558.tif 000155
【０４６７】
酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体（３８ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３００ｍｌ）中に含む還流下の混合物に、１−ジアゾ−４−（２−エチルフェニル）ブタン−２−オン（３．４７ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液を、９０分間かけてゆっくり添加した。添加完了後、混合物をさらに２０分間還流した。混合物を室温まで冷却し、トリフルオロ酢酸（３．７５ｍｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。層を分離し、塩化メチレン層を飽和重炭酸ナトリウム溶液でもう一度洗った。合わせた水層を塩化メチレンで逆抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、粗５−エチル−β−テトラロン（３．０９ｇ、＞定量的収量）を、赤褐色油状物として得た。化合物をさらに精製することなく、次の工程に用いた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ６．９〜７．２（３Ｈ，ｍ，フェニル），３．５８（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．０８（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），２．７０（２Ｈ，ｑ，エチルのＣＨ２），２．５２（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），１．２０（３Ｈ，ｔ，エチルのＣＨ３）。
【０４６８】
工程４：
【０４６９】
【化１６５】
2004507558.tif 000156
【０４７０】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−エチル−β−テトラロン（３．０９ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１．７３ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（１０．２ｇ、１０６ｍｍｏｌ）、エタノール（８０ｍｌ）および水（１６ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で４８時間加熱した。室温まで冷却後、白色スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾してヒダントインＡＡ（３．８５ｇ、２工程で収率９２％）を淡ベージュ色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．６７（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），８．２６（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），６．８〜７．１（３Ｈ，ｍ，フェニル），１．１３（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１４Ｈ１６Ｎ２Ｏ２についての計算値：２４４；実測値：２４３（Ｍ−Ｈ）
【０４７１】
工程５：
【０４７２】
【化１６６】
2004507558.tif 000157
【０４７３】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＡＡ（１．００ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）およびＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（４．００ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）を水（２０ｍｌ）中に含む混合物を、１２５℃の油浴中で４８時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で２時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約５０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥して、ラセミ５−エチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（７９６ｍｇ、収率８９％）を得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ２についての計算値：２１９；実測値：２２０（Ｍ＋Ｈ）。
【０４７４】
工程６：
【０４７５】
【化１６７】
2004507558.tif 000158
【０４７６】
ラセミ５−エチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（７６５ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．０ｍｌ、７．１７ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、１．７９ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２日間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで２回、酢酸エチルで２回抽出した。塩化メチレン抽出物を水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチル抽出物を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（２→５→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−エチル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（３３０ｍｇ、収率２１％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２８Ｈ２８ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４４２．２０１８；実測値：４４２．２０１０
【０４７７】
実施例１６
Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−５−イソプロピル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）５−ｉＰｒＡｔｃ−ＯＨ）の調製
【０４７８】
工程１：
【０４７９】
【化１６８】
2004507558.tif 000159
【０４８０】
３−（２−イソプロピルフェニル）プロピオン酸（１−イソプロピル−２−ヨードベンゼンから３工程で調製，２．０１ｇ，１０．５ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（４．３０ｍｌ，５９．０ｍｍｏｌ）およびトルエン（４０ｍｌ）の混合物を、２時間還流した。減圧下に濃縮して３−（２−イソプロピルフェニル）プロパノイルクロリドを得て、これを塩化メチレンに取り込み、粗生成物として次の工程に用いた。
【０４８１】
工程２：
【０４８２】
【化１６９】
2004507558.tif 000160
【０４８３】
３−（２−イソプロピルフェニル）プロパノイルクロリド（粗生成物、１０．５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液を、ジアゾメタン（１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン６．９５ｇから得た）の氷浴中で冷却されたエーテル（５０ｍｌ）溶液にゆっくり添加した。次に、混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、１−ジアゾ−４−（２−イソプロピルフェニル）ブタン−２−オン（１．８７ｇ、２段階で８２％）を淡黄色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．１０〜７．３０（４Ｈ，ｍ，フェニル），５．２１（１Ｈ，ブロードｓ，ジアゾ），３．１５（１Ｈ，ｍ，ｉＰｒのＣＨ），３．００（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５７（２Ｈ，ｍ），１．２４（６Ｈ，ｄ，ｉＰｒの２ＣＨ３）。
【０４８４】
工程３：
【０４８５】
【化１７０】
2004507558.tif 000161
【０４８６】
酢酸ロジウム（ＩＩ）二量体（２０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１６０ｍｌ）中に含む還流下の混合物に、１−ジアゾ−４−（２−ブロモフェニル）ブタン−２−オン（１．８７ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２５ｍｌ）溶液を６０分間かけてゆっくり添加した。添加完了後、混合物をさらに１５分間還流した。混合物を室温まで冷却し、トリフルオロ酢酸（１．９０ｍｌ）を添加し、混合物を室温で４５分間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。層を分離し、塩化メチレン層を飽和重炭酸ナトリウム溶液でもう一度洗った。合わせた水層を塩化メチレンで逆抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、褐色の粗油状物を得た。カラムクロマトグラフィー（５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、５−イソプロピル−β−テトラロン（１．５７ｇ、収率９６％）を淡黄色油状物として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．９３〜７．２２（３Ｈ，ｍ，フェニル），３．５９（２Ｈ，ｓ，ベンジル性），３．２４（１Ｈ，ｍ，ｉＰｒのＣＨ），３．１２（２Ｈ，ｔ，ベンジル性），２．５２（２Ｈ，ｔ），１．２７（６Ｈ，ｄ，ｉＰｒの２ＣＨ３）。
【０４８７】
工程４：
【０４８８】
【化１７１】
2004507558.tif 000162
【０４８９】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、５−イソプロピル−β−テトラロン（１．５７ｇ、８．３４ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（０．８２ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（４．８１ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）、エタノール（４０ｍｌ）および水（１０ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で４８時間加熱した。室温まで冷却後、褐色スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２時間撹拌した。濾過し、続いて風乾して、粗ヒダントインＢＢをベージュ色固体として得て、これをさらに精製することなく次の工程に用いた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６９（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），８．３０（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），６．８５〜７．３２（３Ｈ，ｍ，フェニル），１．１５（６Ｈ，ｔ，ＣＨ３）。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｏ２についての計算値：２５８；実測値：５３９（２Ｍ＋Ｎａ）。
【０４９０】
工程５：
【０４９１】
【化１７２】
2004507558.tif 000163
【０４９２】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＢＢ（粗生成物、理論値８．３４ｍｍｏｌ）とＢａ（ＯＨ）２・Ｈ２Ｏ（７．９０ｇ、４１．７ｍｍｏｌ）を水（４０ｍｌ）中に含む混合物を、１２５℃の油浴中で３８時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で２時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約５０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥して、ラセミ５−イソプロピル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（１．２３ｇ、２工程の収率６３％）をベージュ色固体として得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ２についての計算値：２３３；実測値：２３２（Ｍ−Ｈ）。
【０４９３】
工程６：
【０４９４】
【化１７３】
2004507558.tif 000164
【０４９５】
ラセミ５−イソプロピル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（２５０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２ｍｌ、８．６１ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、２．７０ｇ、８．００ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３０ｍｌ）と水（３０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２日間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを酢酸エチルで抽出した。有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得、これをカラムクロマトグラフィー（２→５→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、ラセミＦｍｏｃ−５−イソプロピル−２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（２０８ｍｇ、収率４３％）を灰色がかった白色泡状物として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２９Ｈ３０ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４５６．２１７５；実測値：４５６．２１８４。
【０４９６】
実施例１７
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−Ａｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０４９７】
工程１：
【０４９８】
【化１７４】
2004507558.tif 000165
【０４９９】
ヨードベンゼン（６．３７ｇ、３．５ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（１０．３２ｇ、９．３ｍＬ、７２．２ｍｍｏｌ、２．３当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８．０ｇ、８３．３ｍｍｏｌ、２．７当量）の無水ジオキサン（１２０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（９１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（１８０ｍｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＣＣを微黄色固体（６．０８ｇ、８９％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．２５（ｄｄｔ，２Ｈ），６．９５（ｄｄ，２Ｈ），６．８４（ｔ，１Ｈ），４．００（ｓ，４Ｈ），３．３２（ｔ，４Ｈ）および１．８４（ｔ，４Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２２０（Ｍ＋Ｈ），Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ２についての計算値：２１９。
【０５００】
工程２：
【０５０１】
【化１７５】
2004507558.tif 000166
【０５０２】
ケタールＣＣ（３．２２ｇ、１５．１６ｍｍｏｌ）のアセトン（１００ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（１５０ｍＬ）を添加し、反応液を還流下に一夜加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃに取り込み、６ＮのＮａＯＨ水溶液で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８０／２０→６０／４０）により精製して、生成物ＤＤを黄色油状物（２．５８ｇ、９７％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　１７６（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１１Ｈ１３ＮＯについての計算値：１７５。
【０５０３】
工程３：
【０５０４】
【化１７６】
2004507558.tif 000167
【０５０５】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＤＤ（２．５３ｇ、１４．４６ｍｍｏｌ）をエタノール（７５ｍＬ）と水（２５ｍＬ）に含む溶液に、炭酸アンモニウム（１２．９ｇ、１３４．３ｍｍｏｌ、９当量）およびシアン化カリウム（２．１１ｇ、３２．５ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出（４回）した。合わせた有機抽出物を水で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して分光分析的に純粋なヒダントインＥＥを白色固体（３．３６ｇ、収率９５％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２４６（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１３Ｈ１５Ｎ３Ｏ２についての計算値：２４５。
【０５０６】
工程４：
【０５０７】
【化１７７】
2004507558.tif 000168
【０５０８】
ヒダントインＥＥ（３．３６ｇ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、１００ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で２〜３日加熱した。加水分解が完了（ＨＰＬＣによる）したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られるスラリーを濾過し、水で洗い、乾燥して４−アミノ−１−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（ＡＰＰＣ）を白色固体として得て（５．２６ｇ、収率＞１００％、湿っていて無機塩を含む）、これはＨＰＬＣでシングルピークを示し、次の工程に直接用いた。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／　ｅ２２１（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１６Ｎ２Ｏ２についての計算値：２２０。
【０５０９】
工程５：
【０５１０】
【化１７８】
2004507558.tif 000169
【０５１１】
直前の工程からの４−アミノ−１−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（ＡＰＰＣ）を、ジオキサン（８０ｍＬ）と１０％Ｎａ２ＣＯ３（４０ｍｌ）中に懸濁し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（５．３ｇ、２０．５７ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、一夜激しく撹拌した。次に、反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して僅かに酸性（ｐＨ６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して粗生成物を得、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−ＡＰＰＣ（４．９１ｇ、２工程からの全収率：８１％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）７．８８（ｄ，２Ｈ），７．７４（ｄ，２Ｈ），７．１９〜７．４２（ｍ，８Ｈ），４．２０〜４．３１（ｍ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ　ｍ／ｚ　４６５．１７８８、Ｃ２７Ｈ２６Ｎ２Ｏ４Ｎａについての計算値：４６５．１７９１。
【０５１２】
実施例１８
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（４−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５１３】
工程１：
【０５１４】
【化１７９】
2004507558.tif 000170
【０５１５】
４−ヨードトルエン（２．１２ｇ、９．７ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（２．８ｍＬ、２１．８２ｍｍｏｌ、２．２当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．６ｇ、２７．０８ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（４０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４４．４ｍｇ、０．０４８５ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（５９．０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られる反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＦＦを微黄色固体（１．９３７ｇ、８５％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．０６（ｄ，２Ｈ），６．８７（ｄ，２Ｈ），３．９９（ｓ，４Ｈ），３．２６（ｔ，４Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ）および１．８５（ｔ，４Ｈ）。
【０５１６】
工程２：
【０５１７】
【化１８０】
2004507558.tif 000171
【０５１８】
ケタールＦＦ（１．５８ｇ、６．７９ｍｍｏｌ）のアセトン（５０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（２５ｍＬ）を添加し、反応液を還流下に一夜加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃに取り込み、６ＮのＮａＯＨ水溶液で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）により精製して、生成物ＧＧを黄色油状物（１．２７ｇ、９８％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　１９０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１５ＮＯについての計算値：１８９。
【０５１９】
工程３：
【０５２０】
【化１８１】
2004507558.tif 000172
【０５２１】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＧＧ（１．１７ｇ、６．１８ｍｍｏｌ）のエタノール（６０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（４．７４ｇ、４９．４４ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（１．０１ｇ、１５．５４ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を９０℃で２２時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出（４回）した。合わせた有機抽出物を水で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して分光分析的に純粋なヒダントインＨＨを、白色固体（１．５５４ｇ、収率９７％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２６０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１７Ｎ３Ｏ２についての計算値：２５９。
【０５２２】
工程４：
【０５２３】
【化１８２】
2004507558.tif 000173
【０５２４】
ヒダントインＨＨ（１．５０２ｇ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、４０ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で４日間加熱した。加水分解が完了（ＨＰＬＣによる）したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られたスラリーを濾過し、水で洗い、乾燥して、４−アミノ−１−（４−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＭｅＡＰＰＣ）を白色固体として得て（２．１０ｇ、収率＞１００％、湿っていて無機塩を含む）、これはＨＰＬＣでシングルピークを示し、次の工程に直接用いた。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２３５（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１３Ｈ１８Ｎ２Ｏ２についての計算値：２３４。
【０５２５】
工程５：
【０５２６】
【化１８３】
2004507558.tif 000174
【０５２７】
直前の工程からの粗４−アミノ−１−（４−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＭｅＡＰＰＣ）を、ジオキサン（８０ｍＬ）と１０％Ｎａ２ＣＯ３（４０ｍｌ）の水溶液中に懸濁し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２．２ｇ、８．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、一夜激しく撹拌した。次に、反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して僅かに酸性（ｐＨ６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して、粗生成物を得て、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡＰＰＣ（２．１６ｇ、２工程からの全収率：８２％）を得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．８８（ｄ，２Ｈ），７．７２（ｄ，２Ｈ），７．３９（ｔ，２Ｈ），７．３０（ｔｄ，２Ｈ），６．９９（ｄ，２Ｈ），６．８２（ｄ，２Ｈ），２．１８（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　４５７（Ｍ＋Ｈ），Ｃ２８Ｈ２８Ｎ２Ｏ４についての計算値：４５６。
【０５２８】
実施例１９
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（４−クロロフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５２９】
工程１：
【０５３０】
【化１８４】
2004507558.tif 000175
【０５３１】
１−クロロ−４−ヨードベンゼン（２．３８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（３．１ｍＬ、３．４４ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、２．４当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．６８ｇ、２８．０ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（４０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４５．５ｍｇ、０．０４９７ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（６１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で９時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＩＩを微黄色固体（２．１７ｇ、８６％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．１８（ｄｔ，２Ｈ），６．８５（ｄｔ，２Ｈ），３．９８（ｓ，４Ｈ），３．２８（ｔ，４Ｈ）および１．８２（ｔ，４Ｈ）。
【０５３２】
工程２：
【０５３３】
【化１８５】
2004507558.tif 000176
【０５３４】
ケタールＩＩ（２．１２３ｇ、８．３９ｍｍｏｌ）のアセトン（７５ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（３０ｍＬ）を添加し、反応液を還流下に一夜加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃに取り込み、６ＮのＮａＯＨ水溶液で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７０／３０）で精製して、生成物ＪＪを黄色油状物（１．５１５ｇ、８６％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２１０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１１Ｈ１２ＣｌＮＯについての計算値：２０９。
【０５３５】
工程３：
【０５３６】
【化１８６】
2004507558.tif 000177
【０５３７】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＪＪ（１．４６５ｇ、６．９８６ｍｍｏｌ）のエタノール（７５ｍＬ）と水（２５ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（５．３６ｇ、５５．８８ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（１．１３５ｇ、１７．４６ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出（４回）した。合わせた有機抽出物を水で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、分光分析的に純粋なヒダントインＫＫを白色固体（１．８１７ｇ、収率９３％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２８０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１３Ｈ１４ＣｌＮ３Ｏ２についての計算値：２７９。
【０５３８】
工程４：
【０５３９】
【化１８７】
2004507558.tif 000178
【０５４０】
ヒダントインＫＫ（１．７６８ｇ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、５０ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で４日間加熱した。加水分解が完了（ＨＰＬＣによる）したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られたスラリーを濾過し、水で洗い、乾燥して、４−アミノ−１−（４−クロロフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＣｌＡＰＰＣ）を白色固体として得て（２．０５ｇ、収率＞１００％、湿っていて無機塩を含む）、これはＨＰＬＣでシングルピークを示し、次の工程に直接用いた。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２５３（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１５ＣｌＮ２Ｏ２についての計算値：２５４。
【０５４１】
工程５：
【０５４２】
【化１８８】
2004507558.tif 000179
【０５４３】
直前の工程からの４−アミノ−１−（４−クロロフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＣｌＡＰＰＣ）を、ジオキサン（１００ｍＬ）と１０％Ｎａ２ＣＯ３（５０ｍｌ）の水溶液中に懸濁し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２．０ｇ、７．７５ｍｍｏｌ、１．２当量）で処理し、一夜激しく撹拌した。次に、反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して僅かに酸性（ｐＨ６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して粗生成物を得て、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡＰＰＣ（１．１８ｇ、２工程の全収率：８１％）を得た。
【０５４４】
【表２３】
2004507558.tif 000180
【０５４５】
実施例２０
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−４−ＰｈＯＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５４６】
工程１：
【０５４７】
【化１８９】
2004507558.tif 000181
【０５４８】
１−ヨード−４−フェノキシベンゼン（３．１５ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（３．３ｍＬ、３．６６ｇ、２５．６ｍｍｏｌ、２．４当量）とナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．８５ｇ、２９．７ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（４０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４８．５ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（６４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で９時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→８０／２０）により精製して、純生成物ＬＬを微黄色固体（２．８０５ｇ、８５％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．２６〜７．３２（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｔ，１Ｈ），６．９２〜６．９７（ｍ，６Ｈ），４．００（ｓ，４Ｈ），３．２６（ｔ，４Ｈ），１．８６（ｔ，４Ｈ）。
【０５４９】
工程２：
【０５５０】
【化１９０】
2004507558.tif 000182
【０５５１】
ケタールＬＬ（２．７５５ｇ、８．８６ｍｍｏｌ）のアセトン（９０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（４５ｍＬ）を添加し、反応液を還流下に一夜加熱した。得られる反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、６ＮのＮａＯＨ水溶液で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）で精製して、生成物ＭＭを黄色油状物（２．２１ｇ、９３％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２６８（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１７Ｈ１７ＣｌＮＯ２についての計算値：２６７。
【０５５２】
工程３：
【０５５３】
【化１９１】
2004507558.tif 000183
【０５５４】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＭＭ（２．０１ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）のエタノール（８０ｍＬ）と水（２５ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（５．７８ｇ、６０．０ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（１．２２ｇ、１８．８０ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出（４回）した。合わせた有機抽出物を、水で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、分光分析的に純粋なヒダントインＮＮを、白色固体（２．３４ｇ、収率９５％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　３３８（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１９Ｈ１９Ｎ３Ｏ３についての計算値：３３７。
【０５５５】
工程４：
【０５５６】
【化１９２】
2004507558.tif 000184
【０５５７】
ヒダントインＮＮ（２．２８ｇ、６．７６ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ、６０ｍＬ）中に懸濁させ、１３０℃で４日間加熱した。加水分解が完了（ＨＰＬＣによる）したとき、反応混合物を濃ＨＣｌで中和して、僅かに酸性（ｐＨ約６）にした。得られたスラリーを濾過し、水で洗い、乾燥して、４−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＰｈＯＡＰＰＣ）を白色固体として得（２．５３ｇ、収率＞１００％、湿っていて無機塩を含む）、これはＨＰＬＣでシングルピークを示し、次の工程に直接用いた。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　３１３（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１８Ｈ２０Ｎ２Ｏ３についての計算値：３１２。
【０５５８】
工程５：
【０５５９】
【化１９３】
2004507558.tif 000185
【０５６０】
直前の工程からの粗４−アミノ−１−（４−フェノキシフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（４−ＰｈＯＡＰＰＣ）を、ジオキサン（５０Ｌ）と１０％Ｎａ２ＣＯ３（５０ｍｌ）の水溶液中に懸濁し、一夜激しく撹拌した。反応混合物を濃縮してジオキサンを除去し、６Ｎ　ＨＣｌで中和して僅かに酸性（ｐＨ６）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去して粗生成物を得て、これを次にフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）により精製して、純Ｆｍｏｃ−４−ＰｈＯＡＰＰＣ（２．１８ｇ、２工程の全収率：６０％）を得た。
【０５６１】
【表２４】
2004507558.tif 000186
【０５６２】
実施例２１
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（２−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−２−ＭｅＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５６３】
工程１：
【０５６４】
【化１９４】
2004507558.tif 000187
【０５６５】
２−ヨードトルエン（４．３６ｇ、２．５ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（６．８８ｇ、６．２ｍＬ、４８．１ｍｍｏｌ、２．４当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５．３ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（８０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（９１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（１２２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＯＯを微黄色固体（２．６６ｇ、５７％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．１２〜７．１８（ｍ，２Ｈ），６．９４〜７．０６（ｍ，２Ｈ），４．０１（ｓ，４Ｈ），２．９８（ｔ，４Ｈ）および１．８８（ｔ，４Ｈ）。
【０５６６】
工程２：
【０５６７】
【化１９５】
2004507558.tif 000188
【０５６８】
ケタールＯＯ（２．６６ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のアセトン（７０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（３５ｍＬ）を添加し、反応液を一夜８５℃で加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＯＨ水溶液（６Ｎ）で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）で精製して、生成物ＰＰを黄色油状物（２．０４ｇ、９５％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　１９０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１５ＮＯについての計算値：１８９。
【０５６９】
工程３：
【０５７０】
【化１９６】
2004507558.tif 000189
【０５７１】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＰＰ（１．５４ｇ、８．１５ｍｍｏｌ）のエタノール（６０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（４．６９ｇ、４８．９ｍｍｏｌ、６当量）およびシアン化カリウム（８００ｇ、１２．２ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（３００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で完全に洗い、乾燥して、ヒダントインＱＱを白色固体（２．０１ｇ、収率９５％）として得た。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　２６０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１７Ｎ３Ｏ２についての計算値：２５９。
【０５７２】
工程４：
【０５７３】
【化１９７】
2004507558.tif 000190
【０５７４】
ヒダントインＱＱ（１．０７ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中に含む懸濁液に、ピロ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．２５ｇ、１０．３２ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（０．６３ｍＬ、４６０ｍｇ、４．５４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（３６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得、これを次にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り込み、１Ｎ　ＨＣｌ（３×３０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×３０ｍＬ）およびブライン（２×３０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→８０／２０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＲＲを白色固体として得た（１．７１ｇ、９０％）。ＭＳ（エレクトロスプレー）ｍ／ｅ　４６０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ２４Ｈ３３Ｎ３Ｏ６についての計算値：４５９。
【０５７５】
工程５：
【０５７６】
【化１９８】
2004507558.tif 000191
【０５７７】
ビス−ＢｏｃヒダントインＲＲ（１．７１ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２３ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に１Ｎ　ＮａＯＨ（３３ｍＬ、３３ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、かなり透明な混合物を得た。ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。反応混合物を、減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた４−アミノ−１−（２−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（２−ＭｅＡＰＰＣ）を含む水層を、６Ｎ　ＨＣｌで処理して、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（３０ｍＬ）を１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（１．２８ｇ、４．９６ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加し、室温で一夜撹拌した。反応混合物を、減圧下に濃縮してジオキサンを除去し、１Ｎ　ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して、粗生成物Ｆｍｏｃ−２−ＭｅＡＰＰＣを白色固体として得た（１．０９ｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＲＲからの収率６４％）。
【０５７８】
【表２５】
2004507558.tif 000192
【０５７９】
実施例２２
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（２−イソプロピルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−２−ｉＰｒＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５８０】
工程１：
【０５８１】
【化１９９】
2004507558.tif 000193
【０５８２】
１−ヨード−２−イソプロピルベンゼン（１０．０ｇ、４０．７ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（１２．０ｍＬ、１３．３ｇ、９３．０ｍｍｏｌ、２．３当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０．０ｇ、１０４．２ｍｍｏｌ、２．６当量）の無水ジオキサン（１６０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１８０ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（２４４ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去し、水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＳＳを微黄色固体（３．６１ｇ、収率３５％）を得た。ＭＳ　ｍ／ｚ　２６２（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ２についての計算値：２６１。
【０５８３】
工程２：
【０５８４】
【化２００】
2004507558.tif 000194
【０５８５】
ケタールＳＳ（３．２４ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）のアセトン（９０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（４５ｍＬ）を添加し、反応液を一夜還流下に加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＯＨ水溶液（６Ｎ）で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）で精製して、生成物ＴＴを黄色油状物（２．４２ｇ、８９％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２７（ｍ，１Ｈ），７．０４〜７．１９（ｍ，３Ｈ），３．５８（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｔ，４Ｈ），２．６０（ｔ，４Ｈ）および１．２５（ｄ，６Ｈ）；ＭＳ　ｍ／ｚ　２１８（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１９ＮＯについての計算値：２１７
【０５８６】
工程３：
【０５８７】
【化２０１】
2004507558.tif 000195
【０５８８】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＴＴ（２．３０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（８．１ｇ、８４．３ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（１．７２ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（４００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で完全に洗い、乾燥して、ヒダントインＵＵを白色固体（２．７８ｇ、収率９１％）として得た。ＭＳ　ｍ／ｚ　２８８（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１６Ｈ２１Ｎ３Ｏ２についての計算値：２８７。
【０５８９】
工程４：
【０５９０】
【化２０２】
2004507558.tif 000196
【０５９１】
ヒダントインＵＵ（２．７４ｇ、９．５４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中に含む懸濁液に、ピロ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５．２ｇ、２４．２４ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（１．５ｍＬ、１．０７ｇ、１０．５ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（４６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り込み、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→８０／２０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＶＶを白色固体として得た（４．３９ｇ、収率９４％）。ＭＳ　ｍ／ｚ　４８８（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ２６Ｈ３７Ｎ３Ｏ６についての計算値：４８７。
【０５９２】
工程５：
【０５９３】
【化２０３】
2004507558.tif 000197
【０５９４】
ビス−ＢｏｃヒダントインＶＶ（２．３４ｇ、４．８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（３０ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に１Ｎ　ＮａＯＨ（４５ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、かなり透明な混合物を得た。ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた４−アミノ−１−（２−イソプロピルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（２−ｉＰｒＡＰＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを添加して、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（約４５ｍＬ）を１，４−ジオキサン（４５ｍＬ）で希釈し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（１．７８ｇ、６．８９ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してジオキサンを除去し、１Ｎ　ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−２−ｉＰｒＡＰＰＣを白色固体として得た（１．４６ｇ、ビス−Ｂｏｃヒダントインからの収率６３％）。ＨＲＭＳ　ｍ／ｚ　５０７．２２６３、Ｃ３０Ｈ３２Ｎ２Ｏ４Ｎａについての計算値：５０７．２２６０。
【０５９５】
実施例２３
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（３−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０５９６】
工程１：
【０５９７】
【化２０４】
2004507558.tif 000198
【０５９８】
３−ヨードトルエン（４．３６ｇ、２．６ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（６．８８ｇ、６．２ｍＬ、４８．１ｍｍｏｌ、２．４当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５．３ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（８０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（９１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（１２２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＷＷを微黄色固体（３．２１ｇ、収率６９％）として得た。
【０５９９】
工程２：
【０６００】
【化２０５】
2004507558.tif 000199
【０６０１】
ケタールＷＷ（１．２５ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（１０ｍＬ）を添加し、反応液を一夜還流下に加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＯＨ水溶液（６Ｎ）で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）で精製して、生成物ＸＸを黄色油状物（８４３ｍｇ、収率８３％）として得た。ＭＳ　ｍ／ｚ　１９０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１２Ｈ１５ＮＯについての計算値：１８９。
【０６０２】
工程３：
【０６０３】
【化２０６】
2004507558.tif 000200
【０６０４】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＸＸ（７６３ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）のエタノール（４５ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（３．０９ｇ、３２．２１ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（６７５ｍｇ、１０．３８ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（２００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で完全に洗い、乾燥して、ヒダントインＹＹを白色固体（９３０ｍｇ、収率８９％）として得た。ＭＳ　ｍ／ｚ　２６０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１７Ｎ３Ｏ２についての計算値：２５９。
【０６０５】
工程４：
【０６０６】
【化２０７】
2004507558.tif 000201
【０６０７】
ヒダントインＹＹ（７８０ｍｇ、３．０１２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２２ｍＬ）中に含む懸濁液に、ピロ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．６４ｇ、７．５２ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（０．４２ｍＬ、３０５ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＭＡＰ（２０ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り込み、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→８０／２０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＺＺを白色固体として得た（１．３７ｇ、定量的）。ＨＲＭＳ　ｍ／ｚ　４８２．２２６１（Ｍ＋Ｎａ）、Ｃ２４Ｈ３３Ｎ３Ｏ６Ｎａについての計算値：４８２．２２６７。
【０６０８】
工程５：
【０６０９】
【化２０８】
2004507558.tif 000202
【０６１０】
ビス−ＢｏｃヒダントインＺＺ（１．２９ｇ、２．８１８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２０ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に１Ｎ　ＮａＯＨ（２５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、かなり透明な混合物を得た。ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた４−アミノ−１−（３−メチルフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（３−ＭｅＡＰＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを添加して、ｐＨを１１〜１２に調節した。次にこの溶液（約３０ｍＬ）を１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（１．４６ｇ、５．６５ｍｍｏｌ、２．０当量）で処理し、室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してジオキサンを除去し、１Ｎ　ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＡＰＰＣを白色固体として得た（１．００２ｇ、ビス−Ｂｏｃヒダントインからの収率７８％）。ＨＲＭＳ　ｍ／ｚ　４７９．１９４０（Ｍ＋Ｎａ）、Ｃ２８Ｈ２８Ｎ２Ｏ４Ｎａについての計算値：４７９．１９４７。
【０６１１】
実施例２４
Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−（３−メトキシフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡｐｐｃ−ＯＨ）の調製
【０６１２】
工程１：
【０６１３】
【化２０９】
2004507558.tif 000203
【０６１４】
３−ヨードアニソール（４．６８ｇ、２．４ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ〔４．５〕デカン（６．２ｍＬ、６．８８ｇ、４８．１ｍｍｏｌ、２．４当量）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５．３ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、２．８当量）の無水ジオキサン（８０ｍＬ）溶液に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（９１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリルホスフィン（１２２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で２６時間加熱した。得られた反応混合物を濃縮して溶媒を除去し、残渣を水で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を一緒にし、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して褐色油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９５／５→７５／２５）により精製して、純生成物ＡＡＡを微黄色固体（３．１０ｇ、収率６２％）として得た。ＭＳ　ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）、２５０（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ３についての計算値：２４９。
【０６１５】
工程２：
【０６１６】
【化２１０】
2004507558.tif 000204
【０６１７】
ケタールＡＡＡ（３．１０ｇ、１２．４５ｍｍｏｌ）のアセトン（９０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸（４５ｍＬ）を添加し、反応液を一夜還流下に加熱した。得られた反応溶液を濃縮して溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＯＨ水溶液（６Ｎ）で中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→７０／３０）で精製して、生成物ＢＢＢを黄色油状物（２．５３ｇ、収率９９％）として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．２０（ｍ，１Ｈ），６．５８（ｄ，１Ｈ），６．３９〜６．５６（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｍ，４Ｈ）および２．５８（ｍ，４Ｈ）。
【０６１８】
工程３：
【０６１９】
【化２１１】
2004507558.tif 000205
【０６２０】
ガラス耐圧瓶中の、ケトンＢＢＢ（１．８１ｇ、８．８２ｍｍｏｌ）をエタノール（６０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中の溶液に、炭酸アンモニウム（６．７７ｇ、７０．５２ｍｍｏｌ、８当量）およびシアン化カリウム（１．１４ｇ、１７．６ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。混合物を８０〜９０℃で１８時間加熱した。冷却した反応混合物を氷水（２００ｍｌ）に添加し、３０分間激しく撹拌した。得られた沈殿を吸引濾過し、水で完全に洗い、乾燥して、ヒダントインＣＣＣを白色固体（２．２３ｇ、収率９２％）として得た。ＭＳ　ｍ／ｚ　２７６（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ１４Ｈ１７Ｎ３Ｏ３についての計算値：２７５。
【０６２１】
工程４：
【０６２２】
【化２１２】
2004507558.tif 000206
【０６２３】
ヒダントインＣＣＣ（１．１０ｇ、４．００ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に含む懸濁液に、ピロ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．１８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、トリエチルアミン（０．６２ｍＬ、４４５ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＭＡＰ（２０ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）を順次添加した。添加から約１５分後、反応液は透明な黄色溶液に変化し、これを室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮して固形物を得て、これを次にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り込み、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下に濃縮した。淡黄色の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０→８０／２０）により精製して、純ビス−ＢｏｃヒダントインＤＤＤを白色固体として得た（１．９０ｇ、定量的）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．１６（ｔ，１Ｈ），６．５７（ｄ，１Ｈ），６．２４（ｓ，１Ｈ），６．１９（ｄ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ　ｍ／ｚ　４７６（Ｍ＋Ｈ）、Ｃ２４Ｈ３３Ｎ３Ｏ７についての計算値：４７５。
【０６２４】
工程５：
【０６２５】
【化２１３】
2004507558.tif 000207
【０６２６】
ビス−ＢｏｃヒダントインＤＤＤ（１．０６ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２０ｍＬ）に溶解して、透明溶液を得た。この溶液に１Ｎ　ＮａＯＨ（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一夜撹拌して、かなり透明な混合物を得た。ＨＰＬＣは、反応の完了を示した。反応混合物を減圧下に濃縮してＤＭＥを除去し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。精製することなく、得られた４−アミノ−１−（３−メトキシフェニル）ピペリジン−４−カルボン酸（３−ＭｅＯＡＰＰＣ）を含む水層に、６Ｎ　ＨＣｌを添加して、ｐＨを１１〜１２に調節した。この溶液（３５ｍＬ）を１，４−ジオキサン（３５ｍＬ）で希釈し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（７５５ｍｇ、２．９３ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加し、室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してジオキサンを除去し、１Ｎ　ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して、純生成物Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡＰＰＣを白色固体として得た（６６８ｍｇ、ビス−ＢｏｃヒダントインＤＤＤからの収率６３％）。
【０６２７】
【表２６】
2004507558.tif 000208
【０６２８】
実施例２５
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−シクロヘキシルシクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−Ａｃｈｃ−ＯＨ）の調製
【０６２９】
工程１：
【０６３０】
【化２１４】
2004507558.tif 000209
【０６３１】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、４−シクロヘキシルシクロヘキサノン（３．００ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１．６３ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（９．５９ｇ、９９．８ｍｍｏｌ）、エタノール（７５ｍｌ）および水（１５ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で１５時間加熱した。室温まで冷却後、白色スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、続いて風乾して、ヒダントインＥＥＥ（６．１０ｇ、湿ったまま、収率＞１００％）を白色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．５２（１Ｈ，ブロード，ＮＨ），８．４３（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），０．８０〜１．８０（２０Ｈ，ｍ）．ＬＲＭＳ（ＡＰＣＩ）：Ｃ１４Ｈ２２Ｎ２Ｏ２についての計算値：２５０；実測値：２４９（Ｍ−Ｈ）、２５１（Ｍ＋Ｈ）。
【０６３２】
工程２：
【０６３３】
【化２１５】
2004507558.tif 000210
【０６３４】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＥＥＥ（１．３９ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）および６Ｎ水酸化ナトリウム溶液（５０ｍｌ）の混合物を、１３０℃の油浴中で２日間加熱した。反応混合物を氷浴中で冷却し、濃塩酸を用いてｐＨ約７に中和した。白色スラリーを濾過し、沈殿を水で濯いで、粗１−アミノ−４−シクロヘキシルシクロヘキサン−１−カルボン酸（４８．３ｇ、湿っていて無機塩を含む、収率＞１００％）を得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ１３Ｈ２３ＮＯ２についての計算値：２２５；実測値：２２６（Ｍ＋Ｈ）
【０６３５】
工程３：
【０６３６】
【化２１６】
2004507558.tif 000211
【０６３７】
粗１−アミノ−４−シクロヘキシルシクロヘキサン−１−カルボン酸（４８．３ｇ、理論値５．５５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．０ｍｌ、７．１７ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、２．４３ｇ、７．２０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（７５ｍｌ）と水（７５ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（１→５→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−トランス−シクロヘキシルシクロヘキサン−１−カルボン酸（２５０ｍｇ、２工程の収率１０％）を得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２８Ｈ３４ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４４８．２４８８；実測値：４４８．２４９７。
【０６３８】
実施例２６
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４，４−ジフェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−Ａｄｐｃ−ＯＨ）の調製
【０６３９】
工程１：
【０６４０】
【化２１７】
2004507558.tif 000212
【０６４１】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、４，４−ジフェニルシクロヘキサン（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｐ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９年、第５４巻、７８２〜７８９頁の手順に従って、４，４−ジフェニルシクロヘキサンの水素化により調製）（１．５５ｇ、６．１９ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（０．６５ｇ、９．９７ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（３．６０ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）、エタノール（４８ｍｌ）および水（１２ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で２４時間加熱した。室温まで冷却後、白色スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過し、風乾して、ヒダントインＦＦＦ（１．８９ｇ、収率９５％）を白色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．５７（１Ｈ，ブロード，ＮＨ），８．５９（１Ｈ，ブロードｓ，ＮＨ），７．００〜７．５０（１０Ｈ，ｍ，フェニル）。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）：Ｃ２０Ｈ２０Ｎ２Ｏ２についての計算値：３２０；実測値：３１９（Ｍ−Ｈ）。
【０６４２】
工程２：
【０６４３】
【化２１８】
2004507558.tif 000213
【０６４４】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＦＦＦ（１．８８ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）、水酸化バリウム一水和物（５．６０ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）および水（１００ｍｌ、希釈用）の混合物を、１０５℃の油浴中で２日間加熱した。さらなる水酸化バリウム一水和物（５．６０ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０５℃の油浴中でさらに２４時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で２時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約３０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥して、粗１−アミノ−４，４−ジフェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸（０．５２ｇ、収率３０％）を白色固体として得た。ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー）Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ２についての計算値：２９５；実測値：２９４（Ｍ−Ｈ）、２９６（Ｍ＋Ｈ）。
【０６４５】
工程３：
【０６４６】
【化２１９】
2004507558.tif 000214
【０６４７】
１−アミノ−４，４−ジフェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸（５１０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３７ｍｌ、２．６５ｍｍｏｌ）、９−フルオレニルメチルスクシニルイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、８８０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２５ｍｌ）および水（２５ｍｌ）中に含む混合物を、室温で一夜撹拌した。反応液をＴＬＣ分析すると、出発物質のアミノ酸の存在が示された。９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（２００ｍｇ）およびアセトニトリル（５ｍｌ）を添加し、混合物を室温でさらに２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してアセトニトリルの大部分を除去し、１０％クエン酸水溶液でｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（１→４→８％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４，４−ジフェニルシクロヘキサン−１−カルボン酸（３５０ｍｇ、収率３９％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ３４Ｈ３２ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：５１８．２３３１；実測値：５１８．２３１。
【０６４８】
実施例２７
Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−トランス−ｔ−ブチルシクロヘキサン−１−カルボン酸（Ｆｍｏｃ−Ａｂｃ−ＯＨ）の調製
【０６４９】
工程１：
【０６５０】
【化２２０】
2004507558.tif 000215
【０６５１】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、４−ｔ−ブチルシクロヘキサン（２．００ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１．２７ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（７．４８ｇ、７７．８ｍｍｏｌ）、エタノール（６０ｍｌ）および水（１２ｍｌ）の混合物を、８０℃の油浴中で１５時間加熱した。室温まで冷却後、白色スラリーを氷水中に注ぎ込み、室温で２〜３時間撹拌した。濾過して、ヒダントインＧＧＧ（２．７８ｇ、収率９６％）を白色固体として得て、これを粗生成物として、次の工程で用いた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．５２（１Ｈ，ブロード，ＮＨ），８．５０（１Ｈ，ブロード　ｓ，ＮＨ），０．８１（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ）。
【０６５２】
工程２：
【０６５３】
【化２２１】
2004507558.tif 000216
【０６５４】
密封した厚壁耐圧フラスコ中の、ヒダントインＧＧＧ（２．７８ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）、水酸化バリウム一水和物（１１．７４ｇ、６２．０ｍｍｏｌ）および水（５０ｍｌ）の混合物を、１２０℃の油浴中で２日間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、激しい撹拌下に４Ｎ硫酸を用いてｐＨ約３まで酸性にした。懸濁液を、沸騰している水浴中で１時間撹拌し、室温まで冷却した。白色懸濁液を濾過し、沈殿を水で濯いだ。合わせた濾液と洗浄液を、減圧下に約３０ｍｌまで濃縮した。濃水酸化アンモニウム溶液で中和して、白色沈殿を得て、これを濾過し、水で洗い、減圧下に一夜乾燥して、１−アミノ−４−トランス−ｔ−ブチルシクロヘキサン−１−カルボン酸（２．１０ｇ、収率８５％）を白色固体として得た。
【０６５５】
工程３：
【０６５６】
【化２２２】
2004507558.tif 000217
【０６５７】
粗１−アミノ−４−トランス−ｔ−ブチルシクロヘキシル−１−カルボン酸（２．１０ｇ、１０．５４ｍｍｏｌ）と９−フルオレニルメチルスクシニルイミジルカーボネート（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ、６．３３ｇ、７．２０ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（１５０ｍｌ）と１０％炭酸ナトリウム溶液（１２０ｍｌ）中に含む混合物を、室温で２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮してジオキサンの大部分を除去し、３Ｎ　ＨＣｌでｐＨ約３まで酸性にし、白色エマルションを塩化メチレンで２回抽出した。合わせた有機層を、水およびブラインで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィー（１→４→５％メタノール／塩化メチレンで溶離）により精製して、Ｆｍｏｃ−１−アミノ−４−トランス−ｔ−ブチルシクロヘキサン−１−カルボン酸（１．４２ｇ、収率３２％）を得た。ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：Ｃ２６Ｈ３２ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ）についての計算値：４２２．２３３１；実測値：４２２．２３。
【０６５８】
実施例２８
３Ｓ，２Ｓ−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−βメチル（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）トリプトファン、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−β−Ｍｅ（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）Ｔｒｐ−ＯＨの調製
【０６５９】
工程１：
【０６６０】
【化２２３】
2004507558.tif 000218
【０６６１】
トランス−３−インドールアリール酸（１５．０ｇ、０．０８ｍｏｌｅ）の無水ＴＨＦ（３５０ｍＬ）溶液に、１．６Ｍ　ｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液１２５ｍＬを、−７８℃でゆっくり添加した。得られた懸濁液を−７８℃で１時間撹拌した。次に、２−メシチレンスルホニルクロリド（２１．９ｇ、０．１ｍｏｌｅ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に含む溶液を、ゆっくり添加した。混合物を室温まで暖め、一夜撹拌した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注いだ。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除去すると、粗生成物ＨＨＨ　１４．１ｇが得られ、これをさらに精製することなく次の工程に用いた。１Ｈ　ＮＭＲ分析は、２−メシチレンスルホン酸を含有していることを示した。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ７．５７（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，１Ｈ），７．１５〜７．３０（ｍ，３Ｈ），７．０２（ｓ，２Ｈ），６．５４（ｄ，１Ｈ），６．３６（ｄ，１Ｈ），２．５２（ｓ，９Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ）。
【０６６２】
工程２：
【０６６３】
【化２２４】
2004507558.tif 000219
【０６６４】
Ｎ−２−メシチレンスルホニル−トランス−３−インドールアリール酸（３．２６ｇ、８．８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１４０ｍＬ）溶液に、−７８℃でトリエチルアミン３．７ｍＬ（３当量）およびＭｅ３ＣＣＯＣｌ　２．１７ｍＬ（２当量）を添加した。得られた混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、０℃で１．５時間撹拌した。混合物を−７８℃まで冷却し、ここに１．６Ｍ　ｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液５．５ｍＬを添加し、次に、（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノンおよびｎ−ＢｕＬｉをＴＨＦ中に含む混合物（（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン（２．８７ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ　７０ｍＬ中に含む溶液に、１．６Ｍ　ｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液１１ｍＬを−７８℃で添加することにより調製）を、カニューレを介して添加した。得られた混合物を−７８℃で２時間撹拌し、室温で一夜撹拌した。反応液をＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）でクエンチした。有機溶媒を減圧下に除去した後、水性残渣をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を硫化ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４）で精製して、生成物ＩＩＩを淡褐色ガム状物として得た（収率６３％（２．８６ｇ））。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ２９Ｈ２６Ｎ２Ｏ５Ｓについての計算値：５１４、実測値：ｍ／ｚ　５１５（Ｍ＋Ｈ）。
【０６６５】
工程３：
【０６６６】
【化２２５】
2004507558.tif 000220
【０６６７】
ＣｕＢｒ・Ｍｅ２Ｓ（０．８４ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）および硫化ジメチル（５ｍＬ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液に、３Ｍ　ＣＨ３ＭｇＢｒエーテル溶液（１．３６ｍＬ）を−４℃で添加した。１０分間撹拌した後、無水ＴＨＦ（８ｍＬ）中の前記生成物（１．４ｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、−４℃で１時間撹拌し、室温で６時間撹拌した。−７８℃に冷却後、Ｎ−ブロモスクシンイミド１．４５ｇ（８．１６ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中に含む混合物を添加した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、室温で一夜撹拌した。混合物をブライン１００ｍＬ中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を硫化ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４）で精製して、生成物ＪＪＪを淡褐色ガム状物として得た（収率４６％（０．７７ｇ））。
【０６６８】
【表２７】
2004507558.tif 000221
【０６６９】
工程４：
【０６７０】
【化２２６】
2004507558.tif 000222
【０６７１】
前記ブロミドＪＪＪ（０．７２ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル１０ｍＬ中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムアジド（１．６８ｇ、５．９ｍｍｏｌ）およびナトリウムアジド（７７ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）と混合し、室温で６時間撹拌した。混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液１００ｍＬに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を硫化ナトリウムで乾燥した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン、１：２：５）で精製して、生成物ＫＫＫを淡褐色ガム状物として得た（収率８２％（０．５５ｇ））。
【０６７２】
【表２８】
2004507558.tif 000223
【０６７３】
工程５：
【０６７４】
【化２２７】
2004507558.tif 000224
【０６７５】
前述のアジドＫＫＫ（０．５５ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、水（４ｍＬ）およびＴＨＦ（１２ｍＬ）の混合物に、３０％Ｈ２Ｏ２　０．６５ｍＬを０℃で添加し、次に、水１ｍＬ中のＬｉＯＨ　４８ｍｇ（２当量）を添加した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌した。反応液を水６ｍＬ中のＮａ２ＳＯ３（１ｇ）でクエンチした。混合物を室温でさらに３０分間撹拌した。有機溶媒を除去した後、水溶液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液１０ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１：１０：１００）により精製して、生成物ＬＬＬを灰色がかった白色固体として得た（収率８３％（０．３４ｇ））。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ２１Ｈ２２Ｎ４Ｏ４Ｓについての計算値：４２６、実測値：ｍ／ｚ　４２５（Ｍ−Ｈ）。
【０６７６】
工程６：
【０６７７】
【化２２８】
2004507558.tif 000225
【０６７８】
前記アジド酸ＬＬＬ（０．３４ｇ、０．８ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍＬに溶解した。溶液に、炭素担持１０％Ｐｄ　１７０ｍｇを添加した。得られた混合物をＨ２（バルーン）雰囲気下に、室温で３時間撹拌した。濾過および濃縮後、粗生成物をＴＨＦ（１２ｍＬ）と水（４ｍＬ）の混合溶媒に溶解した。混合物にＮａＨＣＯ３（２５４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（５４０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、室温で１８時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液３０ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。濾過し、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１：１０：１００）により精製して、生成物３Ｓ，２Ｓ−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−βメチル（Ｎｉｎ−Ｍｅｓ）トリプトファンを、灰色がかった白色固体として得た（収率５０％（０．２５ｇ））。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ３６Ｈ３４Ｎ２Ｏ６Ｓについての計算値：６２２、実測値：ｍ／ｚ　６２１（Ｍ−Ｈ）。
【０６７９】
実施例２９
Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂の調製
ベンズヒドリルアミンコポリスチレン−１％ジビニルベンゼン架橋樹脂（１０．０ｇ、９．３当量、１００〜２００ＡＳＴＭメッシュ、Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈ製）を、ＣＨ２Ｃｌ２　１００ｍＬ中で膨潤させ、濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（２回）およびＣＨ２Ｃｌ２（２回）のそれぞれ１００ｍＬで順次洗った。樹脂を、２５％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２　１００ｍＬ中のｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−α−〔１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシホルムアミド〕−２，４−ジメトキシベンジル〕フェノキシ酢酸（Ｆｍｏｃ−リンカー）（７．０１ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．１６ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルカルボジイミド（２．０４ｍｌ、１３．０ｍｍｏｌ）により、室温で２４時間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール（２回）、ＤＭＦおよびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ１００ｍｌで順次洗った。カイゼルニンヒドリン分析は、ネガティブであった。樹脂を減圧下に乾燥して、Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂１６．１２ｇを得た。この樹脂の一部（３．５ｍｇ）をＦｍｏｃ脱保護に付し、定量的ＵＶ分析は、０．５６ｍｍｏｌ／ｇの負荷を示した。
【０６８０】
実施例２９
Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０６８１】
【化２２９】
2004507558.tif 000226
【０６８２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載されたプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。７回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ（４３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の無水酢酸１ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂１．２ｇを得た。Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０６８３】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ２５０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン６００μＬを添加して、見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　３００ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られる反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０６８４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６０ｍｇ（１５％）を得た。この化合物は、ＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５０Ｈ６９Ｎ１５Ｏ９計算値：１０２４、実測値：ｍ／ｚ（１０２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０６８５】
実施例３１
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０６８６】
【化２３０】
2004507558.tif 000227
【０６８７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載されたプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０６８８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで、１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られる反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０６８９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５３ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７２Ｎ１２Ｏ８計算値：１０１７、実測値：ｍ／ｚ（１０１８　Ｍ＋Ｈ）。
【０６９０】
実施例３２
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０６９１】
【化２３１】
2004507558.tif 000228
【０６９２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載されたプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ（２）Ｎａｌ（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０６９３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０６９４】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られる反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０６９５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７３Ｎ１１Ｏ８計算値：１０２８、実測値：ｍ／ｚ（１０２９　Ｍ＋Ｈ）。
【０６９６】
実施例３３
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｎ−メチル（２）Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０６９７】
【化２３２】
2004507558.tif 000229
【０６９８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。２回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ（２）Ｎａｌ（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。
【０６９９】
２−Ｎａｌ残基からＦｍｏｃを除去した後、得られるアミンを、ＤＭＦ中の塩基としての２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（５当量、４２６ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５当量）を用いて、その２−ニトロベンゼンスルホニル誘導体に転換した。ＤＭＦ（６×３０ｍｌ）、続いてＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍｌ）を用いて洗浄を行い、樹脂を減圧下に乾燥した。得られたスルホンアミドを、ＴＨＦ中のトリフェニルホスフィン（５当量、５０５ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジエチルアゾジカルボキシレート（５当量、３０３μＬ、１．９３ｍｍｏｌ）およびメタノール（１０当量、１５６μＬ、３．８５ｍｍｏｌ）を用いてメチル化に付した。ＴＨＦ（６×３０ｍｌ）、続いてＣＨ２Ｃｌ２（５×３０ｍｌ）を用いて洗浄を行い、樹脂を減圧下に乾燥した。次に、２−ニトロベンゼンスルホニル基を、ＤＭＦ中の１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデカ−７−エン（３当量，１７３μＬ、１．１６ｍｍｏｌ）、２−メルカプトエタノール（５当量、１３５μＬ、１．９３ｍｍｏｌ）を用いて除去した。ＤＭＦ（３×３０ｍｌ）、イソプロパノール（３×３０ｍｌ）、続いてエチルエーテル（３×３０ｍｌ）を用いて洗浄を行ない、樹脂を減圧下に乾燥した。得られたＮ−Ｍｅ−２−Ｎａｌ樹脂を、４回のカップリングサイクルに付し、各１回のサイクルは、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０７００】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで、１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７０１】
粗線状ペプチド２３５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られる反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７０２】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４３ｍｇ（１０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５７Ｈ７５Ｎ１１Ｏ８計算値：１０４２、実測値：ｍ／ｚ（１０４３　Ｍ＋Ｈ）。
【０７０３】
実施例３４
シクロ（コハク酸−Ｌｙｓ）−コハク酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７０４】
【化２３３】
2004507558.tif 000230
【０７０５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水コハク酸（６００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ　１．１ｍｌを用いた。
【０７０６】
樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７０７】
粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７０８】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４０ｍｇ（１１％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４９Ｈ６３Ｎ１１Ｏ７計算値：９１８、実測値：ｍ／ｚ（９１９　Ｍ＋Ｈ）。
【０７０９】
実施例３５
シクロ（マレイン酸−Ｌｙｓ）−マレイン酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７１０】
【化２３４】
2004507558.tif 000231
【０７１１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水マレイン酸（６００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）にＨＯＢＴ（８００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を加え、ＤＩＰＥＡは加えず用いた。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７１２】
粗線状ペプチド２３０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られる反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７１３】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して：白色無定形粉末３８ｍｇ（１１％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４９Ｈ６１Ｎ１１Ｏ７計算値：９１６、実測値：ｍ／ｚ（９１７　Ｍ＋Ｈ）。
【０７１４】
実施例３６
シクロ（フタル酸−Ｌｙｓ）−フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７１５】
【化２３５】
2004507558.tif 000232
【０７１６】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水フタル酸（６６０ｍｇ、６ｍｍｏｌ）にＤＩＰＥＡ　１．１ｍｌを加えて用いた。
【０７１７】
樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７１８】
粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７１９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末３５ｍｇ（１０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ６３Ｎ１１Ｏ７計算値：９６６、実測値：ｍ／ｚ（９６７　Ｍ＋Ｈ）。
【０７２０】
実施例３７
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＯＨＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７２１】
【化２３６】
2004507558.tif 000233
【０７２２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＯＨＡｐｃ（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０７２３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７２４】
粗線状ペプチド２２５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７２５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７２Ｎ１２Ｏ９計算値：１０３３、実測値：ｍ／ｚ（１０３４　Ｍ＋Ｈ）。
【０７２６】
実施例３８
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＭｅＯＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７２７】
【化２３７】
2004507558.tif 000234
【０７２８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＯＡｐｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０７２９】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７３０】
粗線状ペプチド２３５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７３１】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４９ｍｇ（１２％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ９計算値：１０４７、実測値：ｍ／ｚ（１０４８　Ｍ＋Ｈ）。
【０７３２】
実施例３９
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＥｔＯＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７３３】
【化２３８】
2004507558.tif 000235
【０７３４】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＥｔＯＡｐｃ（６４０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０７３５】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７３６】
粗線状ペプチド２３５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７３７】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６０ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５６Ｈ７６Ｎ１２Ｏ９計算値：１０６１、実測値：ｍ／ｚ（１０６２　Ｍ＋Ｈ）。
【０７３８】
実施例４０
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ｉＰｒＯＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７３９】
【化２３９】
2004507558.tif 000236
【０７４０】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ｉＰｒＯＡｐｃ（６６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０７４１】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２６０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７４２】
粗線状ペプチド２６０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７４３】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６３ｍｇ（１５％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５７Ｈ７８Ｎ１２Ｏ９計算値：１０７５、実測値：ｍ／ｚ（１０７６　Ｍ＋Ｈ）。
【０７４４】
実施例４１
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−３−ＭｅＯＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７４５】
【化２４０】
2004507558.tif 000237
【０７４６】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡｐｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０７４７】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７４８】
粗線状ペプチド２３５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７４９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４９ｍｇ（１２％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ９計算値：１０４７、実測値：ｍ／ｚ（１０４８　Ｍ＋Ｈ）。
【０７５０】
実施例４２
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＣｌＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７５１】
【化２４１】
2004507558.tif 000238
【０７５２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡｐｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０７５３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７５４】
粗線状ペプチド２３０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７５５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４９ｍｇ（１２％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７１Ｎ１２Ｏ８計算値：１０５１、実測値：ｍ／ｚ（１０５２　Ｍ＋Ｈ）。
【０７５６】
実施例４３
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＭｅＡｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７５７】
【化２４２】
2004507558.tif 000239
【０７５８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡｐｃ（５９０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０７５９】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７６０】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７６１】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ８計算値：１０３１、実測値：ｍ／ｚ（１０３２　Ｍ＋Ｈ）。
【０７６２】
実施例４４
ペンタ−シクロ（Ｇｌｕ−Ｌｙｓ）−Ｇｌｕ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０７６３】
【化２４３】
2004507558.tif 000240
【０７６４】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）（５１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０７６５】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５５ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７６６】
粗線状ペプチド２５５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７６７】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６０ｍｇ（１５％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ８計算値：１０３１、実測値：ｍ／ｚ（１０３２　Ｍ＋Ｈ）。
【０７６８】
実施例４５
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｏｒｎ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｏｒｎ−ＮＨ２の調製
【０７６９】
【化２４４】
2004507558.tif 000241
【０７７０】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１５ｇを得た。
【０７７１】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７７２】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７７３】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５３ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７０Ｎ１２Ｏ８計算値：１００３、実測値：ｍ／ｚ（１００４　Ｍ＋Ｈ）。
【０７７４】
実施例４６
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｄｂｒ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｂｒ−ＮＨ２の調製
【０７７５】
【化２４５】
2004507558.tif 000242
【０７７６】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｂｒ（Ｂｏｃ）（５４０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１０ｇを得た。
【０７７７】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７７８】
粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７７９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末３５ｍｇ（９％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６８Ｎ１２Ｏ８計算値：９８９実測値：ｍ／ｚ（９９０　Ｍ＋Ｈ）。
【０７８０】
実施例４７
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｄｐｒ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２の調製
【０７８１】
【化２４６】
2004507558.tif 000243
【０７８２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０７８３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２００ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７８４】
粗線状ペプチド２００ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７８５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末３０ｍｇ（８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５１Ｈ６６Ｎ１２Ｏ８計算値：９７５、実測値：ｍ／ｚ（９７６　Ｍ＋Ｈ）。
【０７８６】
実施例４８
Ａｃ−シクロ（Ａｓｐ−Ｄｐｒ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２の調製
【０７８７】
【化２４７】
2004507558.tif 000244
【０７８８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、アセチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０７８９】
アセチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２００ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７９０】
粗線状ペプチド２１０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７９１】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２８ｍｇ（８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４８Ｈ６０Ｎ１２Ｏ８計算値：９３３、実測値：ｍ／ｚ（９３４　Ｍ＋Ｈ）。
【０７９２】
実施例４９
シクロ（フタル酸−Ｄｐｒ）−フタル酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２の調製
【０７９３】
【化２４８】
2004507558.tif 000245
【０７９４】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水フタル酸（６６０ｍｇ、６ｍｍｏｌ）にＤＩＰＥＡ　１．１ｍｌを加えて用いた。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０７９５】
ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０７９６】
粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０７９７】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末３０ｍｇ（８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５０Ｈ５７Ｎ１１Ｏ７計算値：９２４、実測値：ｍ／ｚ（９２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０７９８】
実施例５０
シクロ（コハク酸−Ｄｐｒ）−コハク酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２の調製
【０７９９】
【化２４９】
2004507558.tif 000246
【０８００】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水コハク酸（６００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）にＤＩＰＥＡ　１．１ｍｌを加えて用いた。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０８０１】
ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２２０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０８０２】
粗線状ペプチド２２０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８０３】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末３１ｍｇ（８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４６Ｈ５７Ｎ１１Ｏ７計算値：８７６、実測値：ｍ／ｚ（８７７　Ｍ＋Ｈ）。
【０８０４】
実施例５１
シクロ（マレイン酸−Ｄｐｒ）−マレイン酸−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｄｐｒ−ＮＨ２の調製
【０８０５】
【化２５０】
2004507558.tif 000247
【０８０６】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ中の無水マレイン酸（６００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）にＨＯＢＴ（８００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）を加えＤＩＰＥＡは加えないで用いた。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンタペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０８０７】
ペンタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２３０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０８０８】
粗線状ペプチド２３０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８０９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２８ｍｇ（８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４６Ｈ５５Ｎ１１Ｏ７計算値：８７４、実測値：ｍ／ｚ（８７５　Ｍ＋Ｈ）。
【０８１０】
実施例５２
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８１１】
【化２５１】
2004507558.tif 000248
【０８１２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．３ｇを得た。
【０８１３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体３００ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０８１４】
粗線状ペプチド３００ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８１５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末８０ｍｇ（２０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７１Ｎ１１Ｏ９計算値：１０１８、実測値：ｍ／ｚ（１０１９　Ｍ＋Ｈ）。
【０８１６】
実施例５３
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８１７】
【化２５２】
2004507558.tif 000249
【０８１８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ（３８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．４ｇを得た。
【０８１９】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体３３０ｍｇを得た。粗ペプチドを、精製することなく環化に付した。
【０８２０】
粗線状ペプチド３３０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８２１】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末８７ｍｇ（２０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５１Ｈ６５Ｎ９Ｏ８計算値：９３２、実測値：ｍ／ｚ（９３３　Ｍ＋Ｈ）。
【０８２２】
実施例５４
Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８２３】
【化２５３】
2004507558.tif 000250
【０８２４】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。７回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ（４３０、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物１ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８２５】
Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。
【０８２６】
この粗線状ペプチドを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された線状ペプチド４５ｍｇを得た。
【０８２７】
精製された線状ペプチドをＤＭＳＯ　２ｍｌに溶解し、水５００ｍｌで希釈し、ＮＨ４ＯＨでｐＨを８．０に調節した。Ｏ２を溶液に吹き込み、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は２４〜４８時間で完了した。溶液を凍結乾燥し、材料をＣＨ３ＣＯＯＨに溶解し、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣに付し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された環状ペプチド２０ｍｇ（４．７％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７０Ｎ１２Ｏ８Ｓ２計算値：１０６７、実測値：ｍ／ｚ（１０６８　Ｍ＋Ｈ）。
【０８２８】
実施例５５
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−（Ｄ，Ｌ）−Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８２９】
【化２５４】
2004507558.tif 000251
【０８３０】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−Ａｔｃ（５１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１５ｇを得た。
【０８３１】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８３２】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８３３】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６８Ｎ１２Ｏ８計算値：９８９、実測値：ｍ／ｚ（９９０　Ｍ＋Ｈ）。
【０８３４】
実施例５６
ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク１）
【０８３５】
【化２５５】
2004507558.tif 000252
【０８３６】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｂｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０８３７】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２４０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８３８】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８３９】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第１の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２６ｍｇ（６％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６７Ｎ１２Ｏ８Ｂｒ計算値：１０６８、実測値：ｍ／ｚ（１０６９　Ｍ＋Ｈ）。
【０８４０】
実施例５７
ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク２）
【０８４１】
【化２５６】
2004507558.tif 000253
【０８４２】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｂｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０８４３】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８４４】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８４５】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第２の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２０ｍｇ（５％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６７Ｎ１２Ｏ８Ｂｒ計算値：１０６８、実測値：ｍ／ｚ（１０６９　Ｍ＋Ｈ）。
【０８４６】
実施例５８
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク１）
【０８４７】
【化２５７】
2004507558.tif 000254
【０８４８】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｃｌ（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８４９】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８５０】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８５１】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第１の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２４ｍｇ（６％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６７Ｎ１２Ｏ８Ｃｌ計算値：１０２４、実測値：ｍ／ｚ（１０２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０８５２】
実施例５９
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク２）
【０８５３】
【化２５８】
2004507558.tif 000255
【０８５４】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｃｌ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８５５】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８５６】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第２の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２０ｍｇ（４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６７Ｎ１２Ｏ８Ｃｌ計算値：１０２４、実測値：ｍ／ｚ（１０２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０８５７】
実施例６０
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＭｅＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８５８】
【化２５９】
2004507558.tif 000256
【０８５９】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−ＭｅＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８６０】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８６１】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８６２】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７０Ｎ１２Ｏ９計算値：１０１９、実測値：ｍ／ｚ（１０２０　Ｍ＋Ｈ）。
【０８６３】
実施例６１
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＥｔＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８６４】
【化２６０】
2004507558.tif 000257
【０８６５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−ＥｔＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．３ｇを得た。
【０８６６】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２６０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８６７】
粗線状ペプチド２６０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８６８】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７２Ｎ１２Ｏ９計算値：１０３３、実測値：ｍ／ｚ（１０３４　Ｍ＋Ｈ）。
【０８６９】
実施例６２
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ｉＰｒＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８７０】
【化２６１】
2004507558.tif 000258
【０８７１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−ｉＰｒＯ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８７２】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８７３】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８７４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５８ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ９計算値：１０４７、実測値：ｍ／ｚ（１０４８　Ｍ＋Ｈ）。
【０８７５】
実施例６３
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−Ｍｅ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８７６】
【化２６２】
2004507558.tif 000259
【０８７７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｍｅ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５９０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８７８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２６０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８７９】
粗線状ペプチド２６０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８８０】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６２ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７０Ｎ１２Ｏ８計算値：１００３、実測値：ｍ／ｚ（１００４　Ｍ＋Ｈ）。
【０８８１】
実施例６４
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−Ｅｔ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８８２】
【化２６３】
2004507558.tif 000260
【０８８３】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｅｔ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．３ｇを得た。
【０８８４】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８８５】
粗線状ペプチド２４５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８８６】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１２％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７２Ｎ１２Ｏ８計算値：１０１７、実測値：ｍ／ｚ（１０１８　Ｍ＋Ｈ）。
【０８８７】
実施例６５
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ｉＰｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０８８８】
【化２６４】
2004507558.tif 000261
【０８８９】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−ｉＰｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８９０】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８９１】
粗線状ペプチド２４５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８９２】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５４ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ８計算値：１０３１、実測値：ｍ／ｚ（１０３２　Ｍ＋Ｈ）。
【０８９３】
実施例６６
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク１）
【０８９４】
【化２６５】
2004507558.tif 000262
【０８９５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｂｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０８９６】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２６０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０８９７】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０８９８】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第１の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２４ｍｇ（５．６％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６６Ｎ１１Ｏ９Ｂｒ計算値：１０６９、実測値：ｍ／ｚ（１０７０　Ｍ＋Ｈ）。
【０８９９】
実施例６７
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＢｒＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク２）
【０９００】
【化２６６】
2004507558.tif 000263
【０９０１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｂｒ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０９０２】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２４０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９０３】
粗線状ペプチド２４０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９０４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第２の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２２ｍｇ（４．８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６６Ｎ１１Ｏ９Ｂｒ計算値：１０６９、実測値：ｍ／ｚ（１０７０　Ｍ＋Ｈ）。
【０９０５】
実施例６８
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク１）
【０９０６】
【化２６７】
2004507558.tif 000264
【０９０７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｃｌ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９０８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９０９】
粗線状ペプチド２４５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９１０】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第２の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２２ｍｇ（５．８％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６６Ｎ１１Ｏ９Ｃｌ計算値：１０２４、実測値：ｍ／ｚ（１０２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０９１１】
実施例６９
ペンタ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−５−ＣｌＡｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製（ピーク２）
【０９１２】
【化２６８】
2004507558.tif 000265
【０９１３】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−Ｃｌ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９１４】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９１５】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９１６】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。第２の主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末２０ｍｇ（５．４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ６６Ｎ１１Ｏ９Ｃｌ計算値：１０２４、実測値：ｍ／ｚ（１０２５　Ｍ＋Ｈ）。
【０９１７】
実施例７０
Ａｃ−Ｎｌｅ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９１８】
【化２６９】
2004507558.tif 000266
【０９１９】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。７回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ（４３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物１ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０９２０】
アセチル−ヘプタペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。
【０９２１】
この粗線状ペプチドを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された線状ペプチド５５ｍｇを得た。
【０９２２】
精製された線状ペプチドをＤＭＳＯ　２ｍｌに溶解し、水５００ｍｌで希釈し、ＮＨ４ＯＨでｐＨを８．０に調節した。Ｏ２を溶液に吹き込み、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は２４〜４８時間で完了した。溶液を凍結乾燥し、材料をＣＨ３ＣＯＯＨに溶解し、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣに付し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された環状ペプチド２０ｍｇ（５．０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５１Ｈ６６Ｎ１２Ｏ８Ｓ２計算値：１０３９、実測値：ｍ／ｚ（１０４０　Ｍ＋Ｈ）。
【０９２３】
実施例７１
ペンタ−シクロ（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）−Ｃｙｓ−５−Ｂｒ（Ｄ，Ｌ）Ａｔｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９２４】
【化２７０】
2004507558.tif 000267
【０９２５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。７回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−５−ＢｒＡｔｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）（７１０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物１ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、Ａｃ−ヘプタペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０９２６】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４０ｍｇを得た。
【０９２７】
この粗線状ペプチドを、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された線状ペプチド５０ｍｇを得た。
【０９２８】
精製された線状ペプチドをＤＭＳＯ　２ｍｌに溶解し、水５００ｍｌで希釈し、ＮＨ４ＯＨでｐＨを８．０に調節した。Ｏ２を溶液に吹き込み、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は２４〜４８時間で完了した。溶液を凍結乾燥し、材料をＣＨ３ＣＯＯＨに溶解し、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣに付し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、精製された環状ペプチド２２ｍｇ（５．２％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ４８Ｈ６０Ｎ１１Ｏ７Ｓ２計算値：１０４７、実測値：ｍ／ｚ（１０４８　Ｍ＋Ｈ）。
【０９２９】
実施例７２
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９３０】
【化２７１】
2004507558.tif 000268
【０９３１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９３２】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９３３】
粗線状ペプチド２４５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９３４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５７ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７１Ｎ１３Ｏ８計算値：１０１８、実測値：ｍ／ｚ（１０１９　Ｍ＋Ｈ）。
【０９３５】
実施例７３
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−２−ＭｅＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９３６】
【化２７２】
2004507558.tif 000269
【０９３７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−２−ＭｅＡｐｐｃ（５７０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９３８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９３９】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９４０】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末６１ｍｇ（１５％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７３Ｎ１３Ｏ８計算値：１０３２、実測値：ｍ／ｚ（１０３３　Ｍ＋Ｈ）。
【０９４１】
実施例７４
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−２−ｉＰｒＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９４２】
【化２７３】
2004507558.tif 000270
【０９４３】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−２−ｉＰｒＡｐｐｃ（６００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９４４】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９４５】
粗線状ペプチド２４５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９４６】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５２ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５６Ｈ７７Ｎ１３Ｏ８計算値：１０６０、実測値：ｍ／ｚ（１０６１　Ｍ＋Ｈ）。
【０９４７】
実施例７５
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−３−ＭｅＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９４８】
【化２７４】
2004507558.tif 000271
【０９４９】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＡｐｐｃ（５７０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９５０】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４８ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９５１】
粗線状ペプチド２４８ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９５２】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７３Ｎ１３Ｏ８計算値：１０３２、実測値：ｍ／ｚ（１０３３　Ｍ＋Ｈ）。
【０９５３】
実施例６
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＭｅＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９５４】
【化２７５】
2004507558.tif 000272
【０９５５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＭｅＡｐｐｃ（５７０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９５６】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５４ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９５７】
粗線状ペプチド２５４ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９５８】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５７ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７３Ｎ１３Ｏ８計算値：１０３２、実測値：ｍ／ｚ（１０３３　Ｍ＋Ｈ）。
【０９５９】
実施例７７
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＣｌＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９６０】
【化２７６】
2004507558.tif 000273
【０９６１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＣｌＡｐｐｃ（５８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９６２】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９６３】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９６４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５５ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５３Ｈ７０Ｎ１３Ｏ８Ｃｌ計算値：１０３２、実測値：ｍ／ｚ（１０３３　Ｍ＋Ｈ）。
【０９６５】
実施例７８
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−ＰｈＡｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９６６】
【化２７７】
2004507558.tif 000274
【０９６７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−４−ＰｈＡｐｐｃ（６５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９６８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２７０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９６９】
粗線状ペプチド２７０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９７０】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５８ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５９Ｈ７５Ｎ１３Ｏ９計算値：１１１０、実測値：ｍ／ｚ（１１１１　Ｍ＋Ｈ）。
【０９７１】
実施例７９
ペンタ−（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−３−ＭｅＯ−Ａｐｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９７２】
【化２７８】
2004507558.tif 000275
【０９７３】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−３−ＭｅＯＡｐｐｃ（５８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．２ｇを得た。
【０９７４】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９７５】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９７６】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５４ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７３Ｎ１３Ｏ９計算値：１０４８、実測値：ｍ／ｚ（１０４９　Ｍ＋Ｈ）。
【０９７７】
実施例８０
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−４−Ａｄｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９７８】
【化２７９】
2004507558.tif 000276
【０９７９】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｄｐｃ（６２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０９８０】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２４２ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９８１】
粗線状ペプチド２４２ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９８２】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４８ｍｇ（１１％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ６０Ｈ７６Ｎ１２Ｏ８計算値：１０９３、実測値：ｍ／ｚ（１０９４　Ｍ＋Ｈ）。
【０９８３】
実施例８１
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｃｈｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９８４】
【化２８０】
2004507558.tif 000277
【０９８５】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｃｈｃ（５６０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．１ｇを得た。
【０９８６】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９８７】
粗線状ペプチド２５０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９８８】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５２ｍｇ（１３％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５４Ｈ７８Ｎ１２Ｏ８計算値：１０２３、実測値：ｍ／ｚ（１０２４　Ｍ＋Ｈ）。
【０９８９】
実施例８２
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｂｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９９０】
【化２８１】
2004507558.tif 000278
【０９９１】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（５２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｂｃ（５３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１３ｇを得た。
【０９９２】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、室温で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびトリフルオロ酢酸１０ｍＬで１８０分間処理した。樹脂を濾去し、ＴＦＡ約２ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体２５５ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９９３】
粗線状ペプチド２５５ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０９９４】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末５８ｍｇ（１４％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５２Ｈ７６Ｎ１２Ｏ８計算値：９９７、実測値：ｍ／ｚ（９９８　Ｍ＋Ｈ）。
【０９９５】
実施例８３
ペンタ−シクロ（Ａｓｐ−Ｌｙｓ）−Ａｓｐ−Ａｐｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の調製
【０９９６】
【化２８２】
2004507558.tif 000279
【０９９７】
実施例２９からのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（７２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、先に記載のプロトコール１を用いて固相合成に付した。すべてのカップリングは、カップリング剤としてのＤＭＦ中のＨＢＴＵおよび塩基としてのＤＩＰＥＡ（３当量）を用いて行った。６回のカップリングサイクルを行い、その各１サイクルは、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（５６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（２Ｓ，３Ｓ）βメチル（ｎＭｅｓ）Ｔｒｐ（６１６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（８００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｐｈｅ（４８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｐｃ（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４５２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を用いた。ペプチド樹脂をプロトコール１の工程１〜５に付し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗い（３回）、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２中の吉草酸無水物２ｍＬで３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（２回）、イソプロパノール、およびＣＨ２Ｃｌ２（３回）のそれぞれ５０ｍｌで順次洗った。樹脂を減圧下に乾燥して、ペンチルヘキサペプチド樹脂１．０ｇを得た。
【０９９８】
ペンチルヘキサペプチド樹脂を、０℃で、エタンジチオール１００μＬ、硫化ジメチル１００μＬ、アニソール２５０μＬおよびＨＦ１０ｍＬで６０分間処理した。ＨＦを蒸発させて、樹脂を酢酸エチルで洗い、濾過し、ＴＦＡ約５ｍｌで洗い、濾液を冷たいエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、エーテル層をデカンテーションした。残渣を２倍または３倍体積のＥｔ２Ｏで洗い、再び遠心分離し、粗線状生成物を減圧下に乾燥して、灰色がかった白色固体１８０ｍｇを得た。粗ペプチドを精製することなく環化に付した。
【０９９９】
粗線状ペプチド１８０ｍｇをＤＭＦ　２２０ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン５００μＬを添加して見掛けのｐＨを８．０とした。ＢＯＰ　２８０ｍｇを添加し、ＨＰＬＣで環化をモニターした。典型的には、環化は１８〜２４時間で完了した。水１０ｍｌを添加して反応を停止し、ＤＭＦを減圧下に蒸発させ、得られた反応混合物をＨＰＬＣで精製した。
【１０００】
この粗環状材料を、Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８−カラム（２．５×２０ｃｍ）上の分取ＨＰＬＣで精製し、２０〜６０％Ｂ（緩衡液Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、緩衡液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ）の線形勾配で９０分間溶離し、流速を８ｍｌ／ｍｉｎとし、検出を２８０ｎｍで行った。主なピークは、集めた画分の分析的ＨＰＬＣ分析によりカットし、貯留し、凍結乾燥して、白色無定形粉末４０ｍｇ（１０％）を得た。この化合物はＨＰＬＣによると均質であった。ＬＲ−エレクトロスプレー：Ｃ５５Ｈ７４Ｎ１２Ｏ８計算値：１０３１、実測値：ｍ／ｚ（１０３２　Ｍ＋Ｈ）。
【１００１】
生物学的活性実施例
実施例Ａ：作動薬アッセイ
方法
説明：ＭＣ−４受容体またはＭＣ−１受容体をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、９６ウエルプレートで成長させた。細胞を、１００ｎＭのＮＤＰ−αＭＳＨまたはスクリーニング化合物で刺激した。細胞から環状ＡＭＰを抽出し、濃度を、Ｂｉｏｔｒａｋ−ｃＡＭＰアッセイを用いて測定した。作動薬は、ｃＡＭＰの増加を引き起こす化合物と認識した。
【１００２】
細胞培養：ＭＣ−４受容体またはＭＣ−１受容体をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、１０％ＦＣＳおよびＧ４１８　５００μｇ／ｍｌを補ったＤ−ＭＥＭ中、７５ｃｍフラスコで培養した。細胞をトリプシン処理し、９６ウエル平底組織培養処理プレートに１：３に分割した。コンフルエンスで細胞を刺激した（２〜４日）。
【１００３】
ｃＡＭＰ反応：１００％ＤＭＳＯ中に連続的に希釈した化合物を、さらに１０％ＦＢＳおよび０．１ｍＭ　ＩＢＭＸを含むＤ−ＭＥＭ中で、１：２００に希釈した（希釈化合物２．５μｌ＋培地５００μｌ）。非刺激細胞については、ＤＭＳＯ　２．５μｌを培地５００μｌに添加した。ＮＤＰ−αＭＳＨ刺激細胞については、１００％ＤＭＳＯ中の２０μＭ　ＮＤＰ−αＭＳＨ　２．５μｌを培地５００μｌに添加した（最終濃度：１００ｎＭ）。ＤＭＳＯの最終濃度はすべてのウエルにおいて０．５％であった。
【１００４】
注意：各サンプルは、別のプレートで２回実施した。
【１００５】
培養培地を、コンフルエントの９６ウエルから除去し、前記希釈材料２００μｌと共に適切なウエル内に置き換えた。プレートを室温で１時間インキュベートした。培地を除去し、プレートを、ＰＢＳ　２００μｌで１回洗った。ＣＡＭＰを、７０％エタノール６０μｌを添加して抽出した（冷蔵庫内に貯蔵）。３０分の抽出時間後、エタノール抽出物１０μｌを、ｃＡＭＰアッセイプレートに移し、またはサンプルをｃＡＭＰアッセイが行われるまで−２０℃で貯蔵した。
【１００６】
ｃＡＭＰアッセイ：抽出されたサンプルおよびキットに含まれるすべての試薬を、室温に調整した。９６ウエル光学プレートに、エタノール抽出物１０μｌ、アッセイ緩衝液４０μｌ、〔１２５Ｉ〕ｃＡＭＰ　５０μｌ、抗血清５０μｌおよびＳＰＡビード５０μｌを添加した。添加後の合計ウエル体積は２００μｌであった。プレートを密封し、室温で１５〜２０時間インキュベートした。ＳＰＡビードにカップリングしている〔１２５Ｉ〕ｃＡＭＰを、各プレートをＰａｃｋａｒｄ　ＴｏｐＣｏｕｎｔ（商標）上で２分間数えることにより測定した。
【１００７】
注意：各プレートは、非刺激細胞用の対照サンプル、および刺激細胞用のＮＤＰ−αＭＳＨを含んでいた。
【１００８】
結果を以下の表Ｉに示す。
【１００９】
【表２９】
2004507558.tif 000280
2004507558.tif 000281
2004507558.tif 000282
【１０１０】
実施例Ｂ：注射溶液は、以下の組成をとり得る。
式Ｉで示される化合物　　　　　　３．０ｍｇ
ゼラチン　　　　　　　　　　１５０．０ｍｇ
フェノール　　　　　　　　　　　４．７ｍｇ
注射溶液用の水　　　　　　　　　１．０ｍｌにする量
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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