(57)【要約】本発明は、最適栄養組成のアミノ酸を含む高タンパク栄養食品の改善された製造方法を提供する。この方法の新規性は、所望の最適栄養組成のアミノ酸および良質タンパク質を有する最終製品を得るために、連続的かつ特異的な酵素反応を用いてタンパク質を加水分解することによって、異なる脂肪種子粉末から最適に混合された粉末を製造するステップにある。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）粉末の形のタンパク質原料を選択することと、
ｂ）粉末状の脂肪種子を混合することと、
ｃ）ステップ（ｂ）から得られた選択された混合粉末を、制御された温度およびアルカリ性ｐＨで１〜２時間水性溶媒中に分散させることと、
ｄ）スラリー（ｃ）の温度を４０〜５０℃まで上げることと、
ｅ）ステップ（ｄ）で得られたスラリーを、制御された温度で２〜３時間、真菌酵素を用いて加水分解することと、
ｆ）スラリー（ｅ）の温度を５０〜６０℃まで上げることと、
ｇ）培養されたスラリー（ｆ）を、５０〜６０℃の制御された温度と、１〜２時間の制御された時間とで、植物酵素を用いて加水分解することと、
ｈ）スラリーを水浴上９０〜１００℃で１０〜１５分間保持して残余の酵素を不活性化させることと、
ｉ）遠心分離によって加水分解ステップ（ｈ）のタンパク質画分から低分子量のタンパク質加水分解物を回収することと、
既知の方法によってサンプル中のタンパク質含有量とアミノ酸含有量とを決定することとを含む方法であることを特徴とする高タンパク加水分解物の製造方法。
【請求項２】
タンパク質原料が、大豆、ゴマおよびピーナッツなどの植物源から選択される脱脂した脂肪種子粉末の混合物を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
大豆、ゴマおよびピーナッツの粉末は、それぞれ１〜１．５：１．５〜２：０．５〜１の比で混合されることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
分散溶媒のアルカリ性ｐＨは、７から８までの範囲に維持されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
スラリー中の固体含有量は、８〜１５ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
タンパク質分解酵素は、真菌源のアルカリ性プロテアーゼおよび植物プロテアーゼのパパインから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
用いられるアルカリ性プロテアーゼは混合粉末の０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲であり、用いられる植物プロテアーゼは混合粉末の０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項８】
タンパク質加水分解物は、２５００±１０００乃至１００００±１５００の範囲の分子量を備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
タンパク質ろ過液は、６０００ｒｐｍで最大３０分間の遠心分離にかけられた後、その上方浮遊物(supernatant)を凍結乾燥させることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
混合した脂肪種子粉末中のタンパク質加水分解物の含有量は６５〜７２％の範囲であり、気泡容積(foam capacity)が１００〜１２２％であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
タンパク質加水分解物は、リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％およびチロシン３．５％の含有量で不可欠アミノ酸を含有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高タンパク加水分解物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪種子タンパク質は、世界中で、人間の食事タンパク質にとって潜在的に重要な供給源となっている。水への溶解性が乏しく、反栄養因子が存在し、消化性が乏しい等のために、脂肪種子タンパク質そのものの使用法は限られている。油を除去すると、脱脂したケーキ中に存在するタンパク質は熱変性するので、直接抽出できない。したがって、タンパク質加水分解は、ケーキからタンパク質を可溶な形で回収する魅力的な手法であり、様々な食品のタンパク質強化に適した高タンパク製品を提供する。また酵素加水分解も、その栄養価を損なわずに食品タンパク質のより優れた機能特性を得る魅力的な方法である。
【０００３】
ピーナッツ、ゴマ、大豆などの脂肪種子は、大量の高品質タンパク質を含み、植物原料タンパク質の優れた供給源として利用されている。タンパク質からの分離物は栄養補助食品として有用である。
【０００４】
過去１０年間にわたり、主に栄養および経済的理由で、特に大豆およびピーナッツ由来の植物性タンパク質の利用が非常に増加した。
【０００５】
グリシニン含有量が少ない大豆タンパク加水分解物の製造方法が開示されている（特許文献１参照）。上記参考文献では、タンパク質加水分解物を得るために、約１．０から約２．８までのｐＨ範囲と２０〜５０℃の温度範囲とで、分離物の重量の約０．００１％乃至約０．５％の濃度のペプシンで、大豆分離物の水性懸濁液が加水分解されている。この方法で用いられているタンパク質分解酵素（ペプシン）は、大豆タンパク質中のグリシニンを選択的に分解する。この加水分解は酸性ｐＨで行われる。このような加水分解の欠点は、酸性加水分解物の中和反応中に塩も形成されるので、酸性飲料に加えた場合に塩味および沈殿物が付随することである。
【０００６】
類似の手法を用いているが、その方法は主に原料がただ１種の供給源、すなわち大豆に限られているものがある（特許文献２，３参照）。
【０００７】
酵素加水分解によるタンパク質加水分解物の製造方法および限外ろ過による低分子量タンパク質原料の回収が開示されている（特許文献４参照）。上記の参考文献では、分離した大豆タンパクを、２５〜６０℃の温度、ｐＨ７．０〜９．０でアルカリプロテアーゼ（プロナーゼ）を用いて加水分解している。引き続きタンパク質原料加水分解物を、選択された連続した中空糸膜中に通してろ過し、平均分子量がより高いタンパク質加水分解物画分と平均分子量がより低いタンパク質加水分解物画分とに分離する。このような加水分解の欠点は、反応進行度を慎重に制御しないと、異臭または苦味が生じることである。
【０００８】
モノクロロジヒドロキシプロパノールを検出可能なレベルで全く含まない、香味を高めた植物タンパク質加水分解物のための方法が開示されている（特許文献５参照）。上記の参考文献では、小麦グルテンを、４０〜５０℃の温度、ｐＨ６．５〜７．０、基質の酵素濃度０．１〜２．０％で４時間、プロザイム６（真菌プロテアーゼ）を用いて加水分解している。タンパク質加水分解物をガス状ＨＣｌで処理してアミド分解した後、酸を加えて酵素を不活性化させる。このような加水分解の欠点は、アミノ酸のラセミ化をもたらす可能性が高いことと、酸の添加が生成物の塩含有量を増加させる可能性が高いこととである。
【０００９】
水中で真菌プロテアーゼを用いて大豆粉、大豆粕または大豆粗粒などの大豆原料から製造した低ナトリウム、低グルタミン酸モノナトリウムの大豆加水分解物が記載されている（特許文献６参照）。加水分解を酸または塩基なしに９０℃で２時間実施する。酵素を不活性化させ混合物を脱水した後、得られた加水分解物は、平均分子量が６７００００±５００００の大豆原料タンパク質酵素加水分解物を４５重量％と５５重量％との間で含む。使用されている真菌プロテアーゼは、本発明で用いる酵素と異なる。このような単一酵素系は苦いペプチドをもたらし、またこの方法は高温（９０℃）を使用するのでエネルギーを大量消費する。
【００１０】
大豆タンパク由来のプロテアーゼを用いた２種の加水分解生成物の製造について開示されている（特許文献７参照）。大豆タンパクをアルコールで沈殿させた後、パパインまたはペプシンで加水分解する。この方法の欠点は、加水分解生成物の混合物の分離を伴うことである。パパインまたはペプシンを用いて加水分解を実施する。酸性化を実施して、ｐＨを２．５〜５．０に下げて２種類の加水分解物を分離し、それによって塩含有量が増加する可能性がある。
【００１１】
１０４℃で数秒間ジェットクッキングまたは動的加熱し、その後真空チャンバー内で冷却してからブロメラインを用いて加水分解した後、タンパク質分離物からタンパク質加水分解物を製造することに関するものが開示されている（特許文献８参照）。原料の水性抽出物からタンパク質をその等電点で沈殿させてから加水分解を行う。この方法の欠点は、出発原料のタンパク質分離物がより高価なことである。この方法は、多段階製造方法であり、エネルギーを大量消費する。この方法はさらに、ジェットクッカーや真空チャンバーのような機械を必要とする。
【００１２】
乳酸連鎖球菌(Streptococcus lactus)由来のエンドペプチダーゼとそれに続くアミノペプチダーゼを用いた段階的な加水分解によって、肉およびチーズ風味のタンパク質加水分解物をタンパク様供給原料（例えば大豆、グルテン、乳清、カゼイン、ヘモグロビン、酵母、穀物または微生物タンパクを含有する）から分離することについて開示されている（特許文献９参照）。この方法の欠点は、他段階製造方法を要することである。
【００１３】
麹菌(Aspergillus)およびパンクレアチン由来の真菌プロテアーゼ（トリプシン、キモトリプシンＡ、ＢおよびＣ、エラスターゼならびにカルボキシペプチダーゼＡおよびＢ）を用いた大豆、小麦グルテンおよび綿実を加水分解する方法が開示されている（特許文献１０参照）。活性炭を用いて加水分解物を処理し、それを栄養改善に使用する。この方法の欠点は、多数の段階を含むことである。
【００１４】
微生物レンネット（ムコールミーハイ(Mucor miehei)）を用いた、卵白代替物として用いるための、加水分解度（ＤＨ）が０．２５乃至２．５％の大豆タンパク加水分解物の製造方法が開示されている（特許文献１１参照）。この方法で使用されている酵素は異なり、大豆タンパクの加水分解度は低い。
【００１５】
タンパク質分解酵素を用いた加水分解によって、部分脱脂大豆原料から大豆タンパク加水分解物を製造する方法が開示されている（特許文献１２参照）。この方法の欠点は、大豆粉を部分脱脂するために残余の油がタンパク相と接触し、それによって異臭が生じる可能性があることである。
【００１６】
タンパク質分解酵素を用いた加水分解によって、部分脱脂大豆原料から大豆タンパク加水分解物および油を製造する方法が開示されている（特許文献１３参照）。大豆粉をｐＨ３．５〜４．５で水洗することにより部分脱脂した後、水と、ｐＨを上げるための塩基とを用いて加水分解する。加水分解度（ＤＨ）は８〜１２％の範囲である。油を洗浄水から回収する。使用されている酵素はアルカラーゼである。この方法の欠点は、多段階製造方法であること、および大豆粉を部分脱脂するために残余の油がタンパク相と接触し、それによって異臭が生じる可能性があることである。酸の添加によって酵素が不活性化され、それによって生成物中の塩含有量が増加する可能性が高い。
【００１７】
大豆タンパク加水分解物を製造するための酵素加水分解法が開示されている（特許文献１４参照）。大豆種子を粉砕し、９０〜１４０℃で加熱する。２５〜７５℃でプロテアーゼ（真菌および細菌）を加える。繊維を分離し、スラリーは油相および水相の２相を有する。水相をｐＨ４．５にしてタンパク質を沈殿させ、次いでそれを濃縮する。出発原料は脱脂されておらず、したがって残余の油は水相と接触することができ、それによって異臭が生じる可能性がある。
【００１８】
大豆タンパク加水分解物をペプシンで改変して生成物を得ている（特許文献１５参照）。水および砂糖ホイップが速い速度で存在すると、低密度の気泡生成物が生成される。
【００１９】
ｐＨ１．５〜２．５でグリシニンを選択的に分解するために用いたプロテアーゼによる大豆タンパク加水分解物の製造方法が開示されている（特許文献１６参照）。低グリシニン含有量を実現するために、この方法で用いたｐＨは非常に低い。
【００２０】
ｐＨ４．５で洗浄し、続いてアルカラーゼを用いて加水分解することによって大豆フレークから大豆タンパク加水分解物を製造する方法が開示されている（非特許文献１参照）。基質の溶解性は酸性ｐＨで低く、そのため収率が低くなる可能性が高い。使用されている酵素は本発明で使用する酵素と異なる。
【特許文献１】米国特許第６０２２７０２号明細書
【特許文献２】インド国特許出願第１３３５／Ｄｅｌ／９９号明細書
【特許文献３】インド国特許出願第１３４７／Ｄｅｌ／２０００号明細書
【特許文献４】米国特許第４４４３５４０号明細書
【特許文献５】米国特許第５１８０５９７号明細書
【特許文献６】米国特許第５０７７０６２号明細書
【特許文献７】米国特許第４７５７００７号明細書
【特許文献８】欧州特許第０１４８６００号明細書
【特許文献９】欧州特許出願公開第０２２３５６０号明細書
【特許文献１０】欧州特許第００８７２４６号明細書
【特許文献１１】欧州特許出願公開第０１８７０４８号明細書
【特許文献１２】英国特許出願公開第２０５３２２８号明細書
【特許文献１３】米国特許第４３２４８０５号明細書
【特許文献１４】米国特許第３６４０７２５号明細書
【特許文献１５】カナダ国特許第９０５７４２号明細書
【特許文献１６】欧州特許出願公開第０７９７９２８号明細書
【非特許文献１】"Industrial production and application of soluble enzymatic hydrolysate of soy protein", Olsen, H. S., Adler Nissen, J. (1979), Process Biochemistry, 14(7), 6, 8, 10-11
【非特許文献２】Adler-Nissen, J. (1979) J. Agr. Food Chem. 27, 6, 1256-1262
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明の主要な目的は、上記のような欠点を回避する、最適組成のアミノ酸を含むタンパク質加水分解物の改善された製造方法を提供することである。
【００２２】
別の目的は、タンパク質分解酵素を使用する２種酵素加水分解を用いてタンパク質加水分解物を得ることである。
【００２３】
本発明のさらに別の目的は、選択された原料から指定した加水分解度でタンパク質加水分解物を高収率で得ることである。
【００２４】
この方法の新規性は、最適組成の不可欠アミノ酸およびアミノ酸組成の点で良質のタンパク質を有する最終製品を得るために、連続的かつ特異的な酵素反応を用いて、異なる脂肪種子粉末から最適に混合された粉末中のタンパク質を変換するステップにある。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
したがって、本発明は、
ａ）粉末の形のタンパク質原料を選択することと、
ｂ）粉末状の脂肪種子を１〜１．５：１．５〜２：０．５〜１の比で混合することと、
ｃ）ステップ（ｂ）から得られた選択された混合粉末を、制御された温度およびアルカリ性ｐＨで１〜２時間水性溶媒中に分散させることと、
ｄ）スラリー（ｃ）の温度を４０〜５０℃まで上げることと、
ｅ）ステップ（ｄ）で得られたスラリーを、制御された温度で２〜３時間、真菌酵素を用いて加水分解することと、
ｆ）スラリー（ｅ）の温度を５０〜６０℃まで上げることと、
ｇ）培養されたスラリー（ｆ）を、５０〜６０℃の制御された温度と、１〜２時間の制御された時間とで、植物酵素を用いて加水分解することと、
ｈ）スラリーを水浴上９０〜１００℃で１０〜１５分間保持して残余の酵素を不活性化させることと、
ｉ）遠心分離によって加水分解ステップ（ｈ）のタンパク質画分から低分子量のタンパク質加水分解物を回収することと、
ｊ）サンプル中のタンパク質含有量とアミノ酸含有量とを決定することとを含む高タンパク加水分解物の製造方法を提供する。
【００２６】
本発明の一実施形態では、選択されたタンパク質原料は、大豆、ゴマおよびピーナッツからなる群から選択される植物源由来の脱脂した脂肪種子粉末の混合物を含む。
【００２７】
本発明の他の実施形態では、大豆、ゴマおよびピーナッツから得られた脱脂した脂肪種子粉末は、それぞれ１〜１．５：１．５〜２：０．５〜１の比で混合される。
【００２８】
本発明のさらに他の実施形態では、分散溶媒のアルカリ性ｐＨは７乃至８の範囲に維持される。
【００２９】
本発明の一実施形態では、スラリー中の固体含有量は８〜１５ｗ／ｖ％の範囲である。
【００３０】
本発明のさらに他の実施形態では、タンパク質分解酵素は真菌プロテアーゼおよび植物プロテアーゼから選択される。
【００３１】
本発明の他の実施形態では、用いられる真菌プロテアーゼは、混合粉末の０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲であり、用いられる植物プロテアーゼは混合粉末の０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲である。
【００３２】
本発明の実施形態では、タンパク質加水分解物は、２５００±１０００乃至１００００±１５００の範囲の分子量を備える。
【００３３】
本発明の実施形態では、タンパク質ろ過液は、６０００ｒｐｍで最大３０分間遠心分離にかけられた後、その上方浮遊物(supernatant)を凍結乾燥させる。
【００３４】
本発明の実施形態では、混合した脂肪種子粉末中のタンパク質加水分解物含有量は６５〜７２％であり、気泡容積(foam capacity)が１００〜１２２％である。
【００３５】
本発明の他の実施形態では、タンパク質加水分解物は、次の含有量で不可欠アミノ酸を含有する。リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％およびチロシン３．５％。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
本発明は、以下に実施例を参照して説明するが、実施例は例示に過ぎず、いかなる形でも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
（ａ）脱脂粉末の調製
大豆、ゴマおよびピーナッツの種子を予め洗浄する。洗浄した種子を粗砕プロセスに通し、その種子断片を吸引システムによって篩で選別する。洗浄し粗砕した種子を調理器(conditioner cooker)に通し、フレークにする。このフレークを溶媒抽出プロセスにかける。抽出されたフレークを脱溶媒し、１００メッシュに粉砕する。３種の粉末の詳細は、（ａ）水分が質量％で最大９．２７％、（ｂ）タンパク質が乾物基準の質量％で、大豆、ゴマおよびピーナッツでそれぞれ最小４９％、５８％および５５％、（ｃ）脂肪が乾物基準の質量％で最大１％、（ｄ）全灰分が乾物基準の質量％で最大７．４％、（ｅ）残余の溶媒が１７０ｐｐｍで構成される。
（ｂ）混合粉末の調製
３種（大豆、ゴマおよびピーナッツ）の全タンパク質のアミノ酸組成を決定し、バランスの取れたアミノ酸の組成(profile)を備える混合粉末を得るために、大豆、ゴマおよびピーナッツの粉末をそれぞれ１〜１．５：１．５〜２：０．５〜１の割合で混合する。混合粉末の詳細は、（ａ）水分が質量％で最大９．２％、（ｂ）タンパク質が乾物基準の質量％で最小４９％（ただし４９〜５８％の範囲）、（ｃ）脂肪が乾物基準の質量％で最大１％、（ｄ）全灰分が乾物基準の質量％で最大７．４％、（ｅ）残余溶媒が１７０ｐｐｍである。
真菌酵素
天野製薬株式会社、日本、４６０、名古屋市中区錦１丁目２−７から市販されている食品用酵素プロテアーゼＰ「Ａｍａｎｏ」６であり、６００００Ｕ／ｇ以上のタンパク質分解活性を備える。
パパイン
植物チオールプロテアーゼのパパインについての詳細は、タンパク質分解活性２０，０００チロシン単位（ＴＵ）／ｍｇ以上のタンパク質分解活性を備える市販の食品用酵素を得ることである。
【００３７】
加水分解度（ＤＨ）の測定
トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）法は、食品タンパク加水分解物の加水分解度を決定するために正確で再現性のある、一般に適用可能な方法である。タンパク質加水分解物を１％熱ドデシル硫酸ナトリウム中に溶解／分散させて、濃度を０．２５〜２．５×１０−３アミノ当量／Ｌにする。サンプル溶液（０．２５ｍｌ）を０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ８．２）２ｍｌおよび０．１％ＴＮＢＳ２ｍｌと混合した後、５０℃で６０分間、暗所で培養する。０．１Ｎ塩酸（ＨＣｌ）４ｍｌを加えることにより、反応物を急冷し、３４０ｎｍにおける吸光度を読み取る。標準液として１．５ｍＭのＬ−ロイシン溶液を使用する。それぞれ個々のタンパク質基質の検量曲線(standard curve)を用いて、測定したロイシンアミノ当量を加水分解度に変換する（非特許文献２参照）。
【００３８】
脱脂した混合粉末を適切な溶媒対溶質比で水中に分散させ、６Ｎ水酸化ナトリウムまたは６Ｎ塩酸を用いて分散液のｐＨを調整する。これを機械的攪拌機(mechanical stirrer)で数分間攪拌し続け、次いで温度を４０〜４５℃に上げる。この段階で、混合粉末基準で０．３〜１％の真菌酵素を加え、２時間攪拌を続ける。規定の時間が経過した後、スラリーの温度を５０〜６０℃に上げる。これに、混合粉末基準で０．３〜１ｗ／ｗ％のパパインを加え、１〜２時間攪拌を続ける。前述の時間が経過した後、スラリーの温度を１０〜１５分間で９０〜９５℃に上げる。このスラリーを室温に冷却し、遠心分離によって不溶性炭水化物に富む画分を除去する。タンパク質加水分解物を得るために、清澄化したタンパク質加水分解物を噴霧乾燥する。
【００３９】
以下の実施例は、本発明の例示として挙げられており、したがって本発明の範囲を限定するように解釈されるべきものではない。
【実施例１】
【００４０】
脱脂した混合粉末２５グラムを水２５０ｍｌ中に分散させ、６Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてこの分散液のｐＨを７．２に調整した。これを機械的攪拌機で２０分間攪拌し続け、加熱によって温度を４０℃に上げた。この段階で、真菌プロテアーゼ１２５ｍｇを加え、２時間攪拌を続けた。２時間経過後、加熱によって温度を５０℃に上げ、第２の酵素、パパイン（１２５ｍｇ）を加え、１時間攪拌を続けた。加水分解後、得られた溶液を１０分間煮沸して酵素を不活性化させた。バスケット形遠心分離機を用いてこのスラリーを遠心分離した。この清澄溶液を凍結乾燥した。収率は、タンパク質基準で６５％であり、ＴＮＢＳ法による加水分解度は４３％であることが判明した。タンパク質加水分解物のアミノ酸組成をＨＰＬＣによって決定した。不可欠アミノ酸含有量は以下の通りである。リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％、チロシン３．５％。
【実施例２】
【００４１】
混合粉末５０グラムを水５００ｍｌ中に分散させ、この分散液のｐＨを７．３に調整した。これを機械的攪拌機で２０分間攪拌し続け、温度を４３℃に上げた。この段階で、真菌プロテアーゼ２５０ｍｇを加え、１．５時間攪拌を続けた。２時間経過後、温度を５３℃に上げ、第２の酵素パパイン（２５０ｍｇ）を加え、１時間攪拌を続けた。加水分解後、加水分解物を１５分間煮沸して酵素を不活性化させ、遠心分離した。この清澄溶液を凍結乾燥した。収率は、タンパク質基準で６８．０％であり、ＴＮＢＳ法による加水分解度は３９％であった。タンパク質加水分解物のアミノ酸組成をＨＰＬＣによって決定した。不可欠アミノ酸含有量は以下の通りである。リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％、チロシン３．５％。
【実施例３】
【００４２】
脱脂した混合粉末１００グラムを水１Ｌ中に分散させ、この分散液のｐＨを７．６に調整した。これを機械的攪拌機で２０分間攪拌し続け、次いで温度を４５℃に上げた。この段階で真菌プロテアーゼ５００ｍｇを加え、２時間攪拌を続けた。２時間経過後、温度を５５℃に上げ、第２の酵素パパイン５００ｍｇを加え、１．５時間攪拌し続けた。加水分解後、加水分解物を１０分間煮沸して酵素を不活性化させ、遠心分離した。この清澄溶液を噴霧乾燥した。収率は、タンパク質基準で７０％であり、ＴＮＢＳ法による加水分解度は３８％であった。タンパク質加水分解物のアミノ酸組成をＨＰＬＣによって決定した。不可欠アミノ酸含有量は以下の通りである。リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．４％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％、チロシン３．５％である。
【実施例４】
【００４３】
混合粉末１ｋｇを水１０Ｌ中に分散させ、この分散液のｐＨを７．６に調整した。これを機械的攪拌機で１５分間攪拌し続け、次いで温度を４５℃に上げた。この段階で、真菌プロテアーゼ５ｇを加え、攪拌を２時間続けた。２時間経過後、スラリーの温度を５５℃に上げ、第２の酵素パパイン（５ｇ）を加え、１．５時間攪拌を続けた。加水分解後、加水分解物を１５分間煮沸して酵素を不活性化させ、バスケット形遠心分離機中で遠心分離した。この清澄溶液を噴霧乾燥した。加水分解度は３８％であることが判明し、収率はタンパク質基準で７０％であった。タンパク質加水分解物のアミノ酸組成をＨＰＬＣによって決定した。不可欠アミノ酸含有率は以下の通りである。リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％、チロシン３．５％。
【００４４】
〔本発明の主な利点〕
１．本方法を用いることによって、製品は、最終製品に望ましくないどんな異臭も付与されることなく、優れた添加剤に必要な特性を獲得する。
２．この方法は、ｐＨに依存しない溶解度を備え、酸性ｐＨまたはアルカリ性ｐＨのどちらにも適した添加剤になる良質の加水分解物を産出する。
３．混合粉末からの窒素回収率は、これは現在のどの商業生産方法と比べても高い８０〜９０％である。
４．タンパク質加水分解物の収率は６５〜７２％である。
５．加水分解時間が短く、投入される原価と、投入されるエネルギーとの両方で有利である。
６．用いられる酵素は市販の食品用酵素である。
７．出発原料の栄養価は、不可欠アミノ酸の最小限の損失により維持される。
８．本方法によって得られるタンパク質加水分解物に含まれる不可欠アミノ酸は、不可欠アミノ酸に対する食料農業機構(FAO)の要求に匹敵する。
【国際公開パンフレット】
2004520064.tif 000002
2004520064.tif 000003
2004520064.tif 000004
2004520064.tif 000005
2004520064.tif 000006
2004520064.tif 000007
2004520064.tif 000008
2004520064.tif 000009
2004520064.tif 000010
2004520064.tif 000011
2004520064.tif 000012
2004520064.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成15年12月1日(2003.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）脱脂した脂肪種子粉末の形の２種以上のタンパク質原料を選択することと、
ｂ）脱脂した脂肪種子粉末を混合することと、
ｃ）スラリーを形成するために、ステップ（ｂ）から得られた混合粉末を、制御された温度およびアルカリ性ｐＨで１〜２時間水性溶媒中に分散させることと、
ｄ）スラリーの温度を４０〜５０℃まで上げることと、
ｅ）ステップ（ｄ）で得られたスラリーを、真菌酵素を用い、制御された温度で２〜３時間加水分解することと、
ｆ）ステップ（ｅ）からのスラリーの温度を５０〜６０℃まで上げることと、
ｇ）ステップ（ｆ）のスラリーを、植物酵素を用い、５０〜６０℃の温度で１〜２時間加水分解することと、
ｈ）スラリーを水浴上９０〜１００℃で１０〜１５分間保持して、残余の酵素を不活性化させることと、
ｉ）遠心分離によって加水分解ステップ（ｈ）のタンパク質画分から低分子量のタンパク質加水分解物を回収することと、加水分解物とを含む方法であることを特徴とする高タンパク加水分解物の製造方法。
【請求項２】
タンパク質原料は、大豆、ゴマおよびピーナッツから選択される植物源から選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
大豆、ゴマおよびピーナッツの粉末は、それぞれ１〜１．５：１．５〜２：０．５〜１の比で混合されることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
アルカリ性ｐＨは、７から８までの範囲に維持されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
スラリー中の固体の量は、８〜１５ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
真菌酵素は、アルカリ性プロテアーゼであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
用いられるアルカリ性プロテアーゼの量は、０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項８】
タンパク質加水分解物は、２５００±１０００乃至１００００±１５００の範囲の分子量を備えることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
タンパク質画分は、６０００ｒｐｍで最大３０分間遠心分離にかけられ、次いで、その上方浮遊物(supernatant)を凍結乾燥させることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
混合した脂肪種子粉末中のタンパク質加水分解物含有量は６５〜７２％の範囲であり、気泡容積(form capacity)が１００〜１２２％であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
タンパク質加水分解物は、リシン３．５％、トレオニン２．１％、バリン３．８％、メチオニン１．５％、イソロイシン２．９％、ロイシン５．５％、フェニルアラニン３．６％およびチロシン３．５％の含有量で不可欠アミノ酸を含有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１２】
植物酵素は、植物プロテアーゼであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
植物酵素は、パパインであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
植物プロテアーゼの量は、混合粉末の０．３〜１ｗ／ｗ％の範囲であることを特徴とする請求項１２記載の方法。
【国際調査報告】
2004520064.tif 000014
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