(57)【要約】本発明は、非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析における使用のための溶血剤に関連し、該溶血剤は、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨをもたらすようなものであり、そして、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈中の第四アンモニウム化合物の総濃度が１．５ないし４．５グラム毎リットルであるような濃度で、少なくとも１種の第四アンモニウム化合物を含有し；そして場合により１種またはそれ以上のそれ自体既知の溶血剤用成分をさらに含有する水性溶液を含む。本発明は、また、非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析で使用するための希釈剤に関連し、該希釈剤は、２９０ないし４００の浸透圧を有し；６．０ないし８．０のｐＨを有し；場合により、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸から選択される少なくとも１種の凝血剤；またはそれらの組合せを含み、場合により１種またはそれ以上のそれ自体既知の希釈剤用成分をさらに含有する水性溶液を含む。本発明の溶血剤および希釈剤は、例えば細孔インピーダンス技法を使用する非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析に、そして特にネコ、イヌまたはウマの血液または血液試料の分析に適する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析における使用のための溶血剤であって、該溶血剤は、
−最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨをもたらすようなものであり、そして
−最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈中の第四アンモニウム化合物の総濃度が１．５ないし４．５グラム毎リットルであるような濃度で、少なくとも１種の第四アンモニウム化合物を含有し；
そして場合により１種またはそれ以上のそれ自体既知の溶血剤用成分をさらに含有する、水性溶液を含むものである、溶血剤。
【請求項２】
本質的にシアン化物不含である、請求項１に記載の溶血剤。
【請求項３】
最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈１リットルをベースに、次の濃度で以下の成分：
−１種またはそれ以上の無機硫酸塩：６−１０ｇ
−第三アンモニウム化合物：５−９ｇ
第四アンモニウム化合物：１．５−４．５ｇ
の１種またはそれ以上のアンモニウム化合物：６．５−１３．５ｇ
−１種またはそれ以上の有機または無機酸：０．２−１．０ｍｌ
−１種またはそれ以上のグリコール：６−１０ｍｌ
−１種またはそれ以上のポリ−オキシ−アルキレン−フェニル−アルキル−エーテル：＜１．０ｍｌ
をもたらすようなものである、請求項１および／または請求項２に記載の溶血剤。
【請求項４】
非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析、および非ヒト哺乳動物の血液試料（中に存在する赤血球）の溶血および／または非ヒト哺乳動物の血液試料（中に存在する白血球）の「ストリッピング」における、即ち、該血液試料分析の一部としての、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶血剤の使用。
【請求項５】
請求項６ないし請求項９のいずれかに記載の希釈剤で希釈された非ヒト哺乳動物の血液試料の溶血および／またはストリッピングにおける、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析で使用するための希釈剤であって、該希釈剤は、
−２９０ないし４００の浸透圧を有し；
−６．０ないし８．０のｐＨを有し；
−場合により、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸から選択される少なくとも１種の凝血剤；またはそれらの組合せを含み、
そして場合により１種またはそれ以上のそれ自体既知の希釈剤用成分をさらに含有する、水性溶液を含むものである、希釈剤。
【請求項７】
ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸以外の少なくとも１種のさらなる凝血剤を含む、請求項６に記載の希釈剤。
【請求項８】
３４０ないし４００ｍオスモル／ｋｇの浸透圧と、６．０ないし７．０のｐＨを有する、請求項６または請求項７に記載の希釈剤。
【請求項９】
３６５ないし３７５ｍオスモル／ｋｇの浸透圧と、６．４ないし６．６のｐＨを有する、請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の希釈剤。
【請求項１０】
水１リットルにつき以下の成分：
−緩衝剤として作用するための無機塩：２−８ｇ
無機硫酸塩：９−１０ｇ
無機塩化物塩：２−３ｇ
の少なくとも１種の無機塩：１３−２１ｇ
−１種またはそれ以上の尿素化合物：１−３ｇ
−１種またはそれ以上のアミノ化合物０．０５−０．１５ｇ
−抗凝血剤：＜３．０ｇ
−防腐剤：＜１．０ｇ
を含む、請求項６ないし請求項９のいずれかに記載の希釈剤。
【請求項１１】
非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析、および特に該血液試料の分析の一部としての非ヒト哺乳動物の血液試料の希釈における、請求項６ないし請求項１０のいずれかに記載の希釈剤の使用。
【請求項１２】
非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析方法であって、該方法は、
ａ）該非ヒト哺乳動物の血液試料を提供すること；
ｂ）該血液試料を請求項６ないし請求項１０のいずれかに記載の希釈剤で希釈すること；
ｃ）段階ｂ）の希釈血液試料を、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶血剤で溶血／ストリッピングすること；
ｄ）場合により、段階ｃ）で得られた溶血／ストリッピングした血液試料中の白血球またはその少なくとも１つの亜集団を計数すること、および／または段階ｃ）で得られた溶血／ストリッピングした血液試料中のヘモグロビン含量を測定すること、
の段階を含むものである、方法。
【請求項１３】
段階ｄ）で白血球および／またはヘモグロビン含量が計数／測定される試料が、
−該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨを有し；そして
−総濃度１．５ないし４．５グラム毎リットルの少なくとも１種の第四アンモニウム化合物を含有する、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
段階ｄ）において、リンパ球、「混合細胞集団」および／または顆粒球を含む白血球亜集団の少なくとも２つ、好ましくは３つ全部が別々に計数される、請求項１２および／または請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
段階ｂ）で得られた希釈血液試料の一部をさらに希釈し、そのうえで、該さらに希釈された血液試料において、赤血球計数、血小板計数および／または平均赤血球容積が測定される、請求項１２ないし請求項１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
非ヒト哺乳動物が、ネコ、イヌおよびウマを含むが、これらに限定されるものではない哺乳動物の愛玩動物；および／または、ヒツジ、ウシ／畜牛、ヤギ、仔羊、および／またはブタを含むが、これらに限定されるものではない農業経済学的に重要な哺乳動物から選択される、請求項４または請求項５に記載の使用、請求項１１に記載の使用、および／または請求項１２ないし請求項１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
非ヒト哺乳動物が、ネコ、イヌおよび／またはウマから選択される、請求項４または請求項５に記載の使用、請求項１１に記載の使用、および／または請求項１２ないし請求項１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
血液試料の分析が細孔インピーダンス技法によるものである、請求項４または請求項５に記載の使用、請求項１１に記載の使用、請求項１６または請求項１７に記載の使用、および／または請求項１２ないし請求項１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
請求項１２ないし請求項１８のいずれかに記載の方法における、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶血剤の使用。
【請求項２０】
請求項１２ないし請求項１８のいずれかに記載の方法における、請求項６ないし請求項１０のいずれかに記載の希釈剤の使用。
【請求項２１】
場合によりラベルされ、かつ／または使用説明書と共に提供される、ビン、フラスコ、アンプル、ブリキ容器またはドラム缶などの適する容器中の、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶血剤。
【請求項２２】
場合によりラベルされ、かつ／または使用説明書と共に提供される、ビン、フラスコ、アンプル、ブリキ容器またはドラム缶などの適する容器中の、請求項６ないし請求項１０のいずれかに記載の希釈剤。
【請求項２３】
少なくとも請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶血剤および請求項６ないし請求項１０のいずれかに記載の希釈剤を含み、場合により使用説明書も含む、パーツのキット。
【請求項２４】
非ヒト哺乳動物由来血液または血液試料の分析における使用説明書を含む、請求項２１に記載の溶血剤、請求項２２に記載の希釈剤、および／または請求項２３に記載のパーツのキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は血液試料の分析方法、およびそのような方法で使用するための試薬に関するものである。
【０００２】
特に、本発明は、例えば愛玩動物および／または他の非ヒト哺乳動物の血液分析などの獣医学用応用を意図した血液試料の分析方法、およびそのような方法で使用するための試薬に関するものである。
【０００３】
ある特に好ましい実施態様では、本発明はネコ、イヌおよび／またはウマから得られた血液試料の分析方法、およびそのような方法で使用するための試薬に関するものである。
【０００４】
ヒト血液試料の分析方法は、当分野で周知である。通常、これらの既知方法では、血液試料中の赤血球（赤血球または「ＲＢＣ」）、血小板（血小板または「ＰＬＴ」）および／または白血球（白血球または「ＷＢＣ」）の量が測定される。そうする際に、白血球は通常３つの亜集団、例えばリンパ球、主に単球からなるいわゆる「混合細胞集団」、および顆粒球にさらに区別され、最後のものはさらに好中球、好酸球、好塩基球に区別され得る。１つまたはそれ以上のこれらのタイプの血液細胞の相対または絶対量における異常は、ある種の疾患状態および／または異常の診断の助けになり得、あるいはそれらを示すものでさえあり得る。
【０００５】
一般に、これらの既知方法では、特定の各細胞タイプの量は、試料中に存在する当該タイプの細胞の数を計数することにより測定される。このことは、通常、「細胞ソーター」または「細胞カウンター」とも呼ばれる自動細胞計測設備を使用して実行される。これは、細胞サイズの差異に基づき試料中に存在する細胞を区別でき、従って計数できる。
【０００６】
このような細胞ソーターは当分野で十分に確立されているので、本明細書で詳細に議論する必要はない。しかしながら、今回の開示のためには、細胞ソーターは一般に、細胞が細胞ソーターを通過する際に個々の細胞を測定／検出するのに使用される特定の技法によって、細孔インピーダンス装置と光散乱装置に分類され得ることに留意すべきである。両タイプの装置は上記のあらゆる細胞タイプを本質的に同時に測定／検出するのに使用できるが、細孔インピーダンスをベースとして作動する細胞ソーターは、一般にあまり高価でないという利点を有する。また、本明細書で開示する発明は、特に細孔インピーダンス装置（その最も広い意味においてであるが、それに制限されるものではない）での使用を意図している。
【０００７】
しかしながら、どちらのタイプの細胞ソーターを用いても、試料中の様々なタイプの血液細胞を直接、即ち、血液試料中でそのまま、計数することはできない。これは、試料中に存在する様々な細胞タイプは、一般にほぼ同じ大きさであり、従ってこれらは各々個々のタイプの計数を妨害するからである。例えば、非溶血赤血球は、白血球の計数を妨害し得る；また、白血球の様々な亜集団は、特定の亜集団の計数を妨害し得る。
【０００８】
ゆえに、あらゆる既知のヒト血液試料の分析方法では、測定／細胞計数の間に様々な細胞タイプ間を区別できるように、血液試料の前処理が必要である。
【０００９】
一般に、このことは２段階の手順で実行され、第１段階は、等張希釈剤を使用して血液試料を希釈することを含む。その後、第２段階では、溶血剤を希釈試料に添加する。この溶血剤は、白血球から細胞質を除去する（「ストリッピング」とも呼ばれる）。このことは異なる白血球亜集団間にサイズの差異をもたらし、次いで、これらは各々細胞ソーター中で別々に検出／計数できる。溶血剤はまた、赤血球を溶血（例えば、間質溶解）させ、そこからヘモグロビンを放出させ、その後それは、シアン化物ベースまたはシアン化物不含の溶血剤のいずれを使用したかによって、シアンメトヘモグロビン錯体（シアン化物ベース）として、またはヘマチン様錯体（シアン化物不含）として測定し得る。
【００１０】
溶血段階に加えて、第１の希釈段階後に得られた血液試料の一部をさらに希釈してもよく、その後、赤血球の量、血小板の量を測定するため、および／または、平均赤血球容積（ＭＣＶ）を測定するために、別の段階で使用し得る。
【００１１】
現在入手可能な細胞ソーターでは、上記希釈および溶血段階も自動的に実行される。従って、操作者は、細胞カウンターに血液試料を入れ、次いで検出／細胞計数の結果を含む出力を集めるだけでよい。
【００１２】
異なる細胞タイプ間の適正な区別を可能にするために、希釈剤と溶血剤の組成を慎重に選択すべきである。実際には、希釈剤と溶血剤は、特に相互に共に使用するために、また特定のタイプの細胞ソーターで使用するために、意図／製剤されたものが最も多く使用される。そのような希釈剤および溶血剤はまた、市販の調製物／製剤として、例えば出願人から、販売されている。
【００１３】
上記のヒト血液試料の分析方法およびそのような方法で使用する希釈剤と溶血剤をさらに説明するために、ＵＳ−Ａ−４４８５１７５、ＵＳ−Ａ−４３４６０１８などの先行技術およびこれらで言及されているさらなる先行技術などの参照文献が作成されている。
【００１４】
上記の技法および試薬は、現在ヒト血液試料の分析に日常的に使用されるが、当分野では獣医学的応用のため、例えば動物の血液分析のための、類似の技法を説明していない。従って、そのような方法を提供すること、特にネコ、イヌおよび他の愛玩動物、並びにウマおよび他の関心のある哺乳動物の血液分析のための、そのような方法を提供することが本発明の第１の目的である。
【００１５】
特に、ヒト血液試料の分析のためにそれ自体既知の細胞ソーターを使用して、特にそれ自体既知の細孔インピーダンス設備を使用して、実行できるような方法を提供することが、本発明の目的である。このことは、そのような方法が、いずれも既に（商業的に）入手可能な装置を使用して実行でき、ゆえに特別に設計された設備を必要としないという利点を有し得る。
【００１６】
この目的を達成するために、本発明に至る研究において、発明者たちは、ヒト血液の分析用に既知の希釈剤と溶血剤を動物の血液分析に適用することを最初に試みた。しかしながら、そうする間に、発明者たちはこれらの既知希釈剤と溶血剤は実際に動物の血液分析に適さないことを見出した。
【００１７】
特に、ヒト血液と動物血液（即ち、非ヒト哺乳動物の血液）との間の差異のために、ヒト血液の分析用に既知の希釈剤と溶血剤は、動物血液の分析に使用すると、白血球の様々な亜集団を十分に区別させられず、不適切なＭＣＶおよび血小板測定を導き得ることが判明した。動物血液の細胞、特に白血球は、しばしばヒト血液の細胞よりも脆弱／敏感であること、そしてこのことが、ヒト血液分析用の希釈および／または溶血剤を使用する場合に、細胞の検出／計数中の細胞安定性の問題を導くことも判明した。
【００１８】
動物血液の分析方法の開発において、そしてそのような方法で使用するための希釈剤と溶血剤の開発において生じるさらなる問題は、所定の動物（哺乳動物）の血液は、ヒトの血液と異なるだけでなく、他の種の動物（哺乳動物）の血液とも異なることである。例えば、ネコ、イヌおよびウマの血液は、異なって酸化し得る、異なるヘモグロビン構造を含有する。
【００１９】
従って、ある動物種由来の血液の分析に適する希釈剤と溶血剤は、必ずしも別の動物種由来の血液の分析に（等しく）適するわけではない。しかしながら、各動物種に異なる希釈剤および／または異なる溶血剤を提供することは、実用的にも経済的にも実行可能ではない。
【００２０】
従って、本発明の特別な目的は、様々な動物種の血液分析に、特に様々な非ヒト哺乳動物種の血液分析に、等しく適する希釈剤と溶血剤を提供することである。さらにより特別な本発明の目的は、ネコ、イヌおよび／またはウマの血液分析に等しく使用できる方法を提供すること、並びにそのような方法で使用する希釈剤と溶血剤を提供することである。
【００２１】
従って、発明者たちは、動物、特に非ヒト哺乳動物の血液分析に適する新規希釈剤および溶血剤を開発した。これらを本明細書で以下に詳述する。出願人によって本発明の一部として開発された溶血剤は、ヒト血液分析で既知のシアン化物ベースの溶血剤よりも、使用に安全で、環境問題をあまり提起せず、さらに安定であるように、シアン化物不含であるという利点も有する。また、本発明のシアン化物不含溶血剤の使用により、動物種ごとに生じ得る様々なヘモグロビン構造を、等しく適する様式で測定し得ることも判明した。
【００２２】
従って、本発明は、該希釈剤と溶血剤の使用により、非ヒト哺乳動物の様々な種、特にネコ、イヌおよびウマの血液分析に等しく適する非ヒト哺乳動物血液分析用の方法および試薬を有利に提供する。これらは、サイズの差異に基づいて少なくとも２つ、そして好ましくは３つの異なる亜集団への白血球の区別を可能にし、そしていかなるシアン化物含有試薬の使用も必要とせずに、ヘモグロビンの測定を可能にする。
【００２３】
従って、本発明は、ヘモグロビン種を分析するのにもはやシアン化物が必要とされないことを意味する、シアン化物不含溶血剤を提供する。また、該溶血剤の使用は、２または３要素の分別分析を有利に提供する。この特徴の組合せ（即ち、シアン化物不含溶血剤および２または３要素の分析）は、当分野でまだ達成されていない：現在販売されている２または３要素の分別分析を提供する能力のある溶血剤はもっぱら、常にシアン化物を含有している。
【００２４】
本発明の方法と溶血剤は、既知の方法と溶血剤（即ち、ヒト血液分析用）とは、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈（以下参照）中の第四アンモニウム化合物の濃度（再度以下参照）において（さらに）異なる。それは、本発明に従うと低い（即ち、ヒト血液分析用の４．５ないし７．５ｇ／ｌと比較して、本発明では１．５ないし４．５ｇ／ｌ）。
【００２５】
加えて、例えば以下に概説するようなさらなる成分の使用により、溶血剤の性能がさらに改善され得る。
【００２６】
さらに、本発明はまた、本発明の方法において上記の溶血剤と共に使用するのに特に適する（本質的に等張な）希釈剤を提供する。
【００２７】
従って、第１の態様では、本発明は、非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析における使用のための溶血剤に関するものであり、該溶血剤は、
−最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈（即ち、ＷＢＣおよびＨｂが測定／計数される溶液）に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨをもたらすようなものであり、そして
−最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に希釈すると、該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈中の第四アンモニウム化合物の総濃度が１．５ないし４．５グラム毎リットルであるような濃度で、少なくとも１種の第四アンモニウム化合物を含有し；
そして場合により以下に言及するような１種またはそれ以上のそれ自体既知の溶血剤用成分をさらに含有する、
水性溶液を含む。
【００２８】
ｐＨ、アンモニウム化合物（類）の濃度および「最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈」に関し、使用する特定の器具（即ち、細胞カウンター／細胞ソーターのタイプ）によって、添加する溶血剤および／または溶血容量は変化し得ることに留意すべきである。例えば、ある血液分析機は０．７ｍｌの溶血添加を使用し、一方２．０ｍｌの添加を使用するタイプもある。
【００２９】
従って、本発明の上記溶血剤中の第四アンモニウム化合物（類）の濃度も変化し得る、即ち、使用する特定の器具による。最も好ましくは、第四アンモニウム化合物の濃度は、特定の器具での使用に適合される。即ち、使用する器具によってもたらされる最終ＷＢＣ／Ｈｂ溶液（即ち、ＷＢＣおよびＨｂが測定／計数される希釈液であり、本質的に現在使用されるあらゆる器具で同一である）中で、第四アンモニウムの総濃度が１．５ないし４．５ｇ／ｌであるようにする。このことのために、通常、開始溶血剤中の第四アンモニウム化合物（類）濃度は、使用する器具によって、一般に２．０ないし３０．０ｇ／ｄＬである。
【００３０】
例として、溶血中の第四アンモニウム化合物（類）濃度に関する器具製造者のリストが与えられている：
−Ｍｅｄｏｎｉｃ （モデル ＣＡ５３０）：３．０−６．０ｇ／Ｌ（最終ＷＢＣ希釈１：４００）
−Ｄｉａｔｒｏｎ （モデル Ａｂａｃｕｓ）：２６．０−２９．０ｇ／Ｌ （最終ＷＢＣ希釈１：１８６）
−ＡＢＸ （モデル ＡＢＣ ＶＥＴ Ｍｉｃｒｏｓ）：１７．０−２０．０ｇ／Ｌ （最終ＷＢＣ希釈１：３００）
【００３１】
従って、一般的に、当業者は、溶血剤、即ち、ｐＨ／酸（類）の量、アンモニウム化合物（類）の濃度、および任意のさらなる成分の濃度、を適切に選択／適合できる。即ち、本明細書の開示および使用する特定の装置に関して入手可能な情報（例えば、装置に付属のマニュアルから）に基づく。
【００３２】
本発明はまた、非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析における溶血剤の使用に関連する。特に、本発明は、非ヒト哺乳動物の血液試料（中に存在する赤血球）の溶血および／または非ヒト哺乳動物の血液試料（中に存在する白血球）の「ストリッピング」における、即ち、該血液試料分析の一部としての、そのような溶血剤の使用に関連する。ことさらに、本発明は、上記の希釈剤で希釈されたような血液試料の溶血および／またはストリッピングにおける、即ち、該血液試料分析の一部としての、そのような溶血剤の使用に関連する。
【００３３】
第２の態様では、本発明は、非ヒト哺乳動物の血液および／または血液試料の分析で使用するための希釈剤に関連し、該希釈剤は、
−２９０ないし４００の浸透圧を有し；
−６．０ないし８．０のｐＨを有し；
−場合により、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸から選択される少なくとも１種の凝血剤；またはそれらの組合せを含み、
場合により以下に言及するような１種またはそれ以上のそれ自体既知の希釈剤用成分をさらに含有する、
水性溶液を含む。
【００３４】
本発明の希釈剤中にＥＤＴＡが存在する場合、それは血球計算の目的に適する任意の形態で使用し得、その２−および３カリウム塩および／またはその２−、３−および４ナトリウム塩、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【００３５】
本発明の希釈剤中にクエン酸塩が、場合によりクエン酸と組合せて、存在する場合、クエン酸塩は、細胞検血（ｃｙｔｏｈｅｍｏｍｅｔｒｙ）の目的に適するいかなる（塩）形態でもよく、クエン酸３ナトリウムを含むが、これらに限定されるわけではない。
【００３６】
本発明の希釈剤中にサリチル酸が存在する場合、細胞検血の目的に適する任意の形態（等価の形態を含むが、これらに限定されるわけではない）で使用し得、スルホサリチル酸および／またはサリチル酸ナトリウムなどの適する塩形態を含むが、これらに限定されるわけではない。
【００３７】
好ましくは、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸（またはそれらの組合せ）から選択される少なくとも１種の凝血剤に加え、本発明の希釈剤は、少なくとも１種のさらなる抗凝血剤（即ち、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸および／またはサリチル酸またはそれらの組合せ、と異なる／に加えて）を含む。この「さらなる凝血剤」は、血球計算の目的に適するそれ自体既知のいかなる凝血剤（またはそのような凝血剤の２種またはそれ以上の任意の適する組合せ）でもよく、特に希釈剤が溶血剤との使用に（さらに）良好に適する（即ち、希釈剤をさらによく凝血剤に適合させる）ように選択し得る。例えば、該「さらなる凝血剤」は：
−シュウ酸塩、例えばシュウ酸カリウムなどの細胞検血の目的に適する塩の形態で；
−フッ化物、例えばフッ化ナトリウムなどの細胞検血の目的に適する塩の形態で；
またはそれらの適する組合せ、
から選択され得る。
【００３８】
しかしながら、好ましくは、血球計算の目的にあまり適さないので、ヘパリンの使用は避けるべきである。
【００３９】
本発明はまた、非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析におけるそのような希釈剤の使用に関連する。特に、本発明は、非ヒト哺乳動物の血液試料の希釈における、即ち該血液試料分析の一部としての、そのような希釈剤の使用に関連する。
【００４０】
本発明では、上記の希釈剤および溶血剤は、好ましくは互いと共に使用するために特別に意図／製剤されてもよく、そして好ましい。従って、さらなる態様では、本発明は、少なくとも上記の希釈剤および溶血剤を含むパーツのキットに関連し、そこでは希釈剤および溶血剤は適する容器中に各々提供され得る。本発明の希釈剤および／または溶血剤は、特定のタイプまたは造りの細胞ソーターで使用するために特別に意図／製剤されてもよいことも認識される。
【００４１】
さらなる態様では、本発明は非ヒト哺乳動物の血液または血液試料の分析方法に関連し、該方法は、
ａ）該非ヒト哺乳動物の血液試料を提供すること；
ｂ）該血液試料を上記の希釈剤で希釈すること；
ｃ）段階ｂ）の希釈血液試料を上記の溶血剤で溶血／ストリッピングすること；
ｄ）場合により、段階ｃ）で得られた溶血／ストリッピングした血液試料中の白血球またはその少なくとも１つの亜集団を計数すること、および／または段階ｃ）で得られた溶血／ストリッピングした血液試料中のヘモグロビン含量を（例えば、後述するヘマチン錯体として）測定すること、
の段階を含む。
【００４２】
この方法では、段階ｄ）で白血球および／またはヘモグロビン含量が計数／測定される試料は、好ましくは：
−該最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨを有し；そして
−総濃度１．５ないし４．５グラム毎リットルの少なくとも１種の第四アンモニウム化合物を含有する。
【００４３】
本発明を、この方法の段階ａ）ないしｄ）を参照して、ここで以下により詳細に議論する。しかしながら、これらの段階は、使用される細胞ソーターによって通常自動的に実行されることに留意すべきである。
【００４４】
段階ａ）で使用される血液または血液試料は、任意の動物から、特に任意の非ヒト哺乳動物から、ことさらに哺乳動物の愛玩動物（ネコ、イヌおよびウマを含むが、これらに限定されるものではない）および／または農業経済学的に重要な哺乳動物（ヒツジ、ウシ／畜牛、ヤギ、仔羊、ブタなどを含むが、これらに限定されるものではない）から得たものであり得る。
【００４５】
本発明は、ネコ、イヌまたはウマの血液または血液試料の分析に特に適する。
【００４６】
好ましくは、該動物血液試料の浸透圧は、約２９０ないし３２５ｍオスモル／ｋｇである。特に、血液または血液試料は、ネコ（浸透圧３１０−３２０ｍオスモル／ｋｇ）、イヌ（浸透圧２９５−３２０ｍオスモル／ｋｇ）またはウマ（浸透圧約３２０ｍオスモル／ｋｇ）から得られたものであり得る。
【００４７】
比較すると、ヒト血液の浸透圧は約２７５−３００ｍオスモル／ｋｇである。本発明はいかなる特定のメカニズムまたは説明に制限されるものではないが、ヒト血液と動物血液との間の浸透圧におけるこの差異（例えば、このことは動物血液中の赤血球はヒト血液中の赤血球よりも小さいことを意味する）が、ヒト血液の分析用に知られている希釈剤が動物血液の分析にあまり適さない理由の１つであり得る。
【００４８】
血液試料は、静脈血によるなど、それ自体既知のいかなる適する方法で得てもよい。ネコやイヌからの血液は、例えば、首または足の静脈から抜いてもよい。ウマからは、ほとんど常に、血液を抜くのに首の静脈が使用される。血液試料は、ＥＤＴＡまたは他の適する抗凝血剤を含有する試料として、例えばそのような抗凝血剤を含有する収集チューブを使用して、得られてもよい。
【００４９】
好ましくは、血液試料は、収集から２４時間以内に、好ましくは収集後約２０−３０分で分析される。通常、分析される試料は、抗凝血剤の濃度および使用する細胞ソーターによって、０．５ｍｌないし５ｍｌの容量を有する。
【００５０】
段階ｂ）では、血液試料は、本発明の希釈剤で希釈される。この希釈剤は、一般に浸透圧２９０ないし４００ｍオスモル／ｋｇ、好ましくは３４０ないし４００ｍオスモル／ｋｇ、特に３５０ないし３９０ｍオスモル／ｋｇ、ことさらに３６５および３７５ｍオスモル／ｋｇの、水性溶液を含む。比較すると、ヒト血液分析用の希釈剤は、通常２４０ないし３５０の浸透圧を有する。
【００５１】
本発明の希釈剤の浸透圧は、特に非ヒト哺乳動物血液の分析に、ことさらにネコ、イヌおよび／またはウマの血液の分析に適合している。より一般的には、浸透圧は本発明の希釈剤を使用して本明細書に記載の技法で測定されるヘマトクリット値（例えば、総血液容量に対する細胞の率）が、微小遠心分離（参照技法）による同一の試料（例えば、同一の動物または同一の動物種からのもの）と２％以上違わないように選択され得る。
【００５２】
本発明で使用される希釈剤はまた、好ましくは６．０ないし８．０、好ましくは６．０ないし７．０、そして特に６．４ないし６．６のｐＨを有し、わずかに酸性である。比較すると、ヒト血液分析用の希釈剤は、通常６．５ないし７．５のｐＨを有する。
【００５３】
例えば、上記を考慮すると、特に好ましい本発明の希釈剤は、３６５ないし３７５ｍオスモル／ｋｇの浸透圧と、６．４ないし６．６のｐＨを有し得る。
【００５４】
本発明で使用される希釈剤は、少なくとも１種の（付加的な）抗凝血剤の存在をさらにもたらす。（即ち、例えばＥＤＴＡ抗凝血剤入りの血液試料を使用する場合に、希釈剤中に存在し得るか、または収集された血液試料に既に存在するＥＤＴＡに加えて。）
【００５５】
該「付加的な」抗凝血剤の存在は、例えば血液試料収集時に動物が負い得る緊張のために、血液試料中に上昇したレベルのアドレナリンが存在することに伴い得るか、またはそれによって引き起こされ得る、血栓凝集の形成を減少／防止するのを補助し得る。そのような試料中の上昇したレベルのアドレナリンは、今度は因子ＶＩＩＩなどの凝固因子の活性化を導き得、これが血液凝固カスケードを引き起こし得るか、または開始させ得、かくして血小板凝集の形成を導き得る。そのような凝集は分離するのが困難なので、血液血小板計数の測定に誤りをもたらし得る。また、それらは白血球の区別／計数、特にリンパ球の区別／計数を妨害し得る。ネコなどの容易に緊張する動物から得られた血液試料を使用する場合に、前記のことは特に問題である。
【００５６】
適する抗凝血剤には、ＥＤＴＡ、クエン酸塩／クエン酸およびサリチル酸またはそれらの組合せが含まれる。これらはそれ自体既知の従来の量、例えば
−ＥＤＴＡ：０．００１ないし０．４％、特に約０．０４％；
−クエン酸塩／クエン酸：０．０１ないし１％、特に約０．２５％；
−サリチル酸：０．０００１ないし０．１％、特に０．０１％以下；
で使用される。
【００５７】
希釈剤は、それ自体既知の希釈剤について、再度それ自体既知の量で存在し得る１種またはそれ以上のさらなる成分をさらに含有し得る。これには、次の成分が含まれるが、これらに限定されるわけではない：
−ｐＨの緩衝剤として作用するために使用される、リン酸（Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４またはＫＨ２ＰＯ４）、ホウ酸塩（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどの無機塩；
−ジメチロール尿素などの尿素化合物；
−プロカイン塩酸塩などのアミノ化合物；
−Ｎａ２ＳＯ４などの無機硫酸塩；
−ＮａＣｌなどの無機塩化物；
−アジ化ナトリウム、モノフェニルグリコール、安息香酸ナトリウム、チメロサールまたはナトリウム−１−ヒドロキシピリジン−２−チオンなどの防腐剤、
またはそれらの任意の適する組合わせ。
【００５８】
特に好ましい本発明の希釈剤は、３４０ないし４００、特に約３７０ｍオスモル／ｍｌの浸透圧；および６．０ないし７．０、特に約６．５のｐＨの水性溶液であって、水１リットルにつき以下の成分（例えば、本明細書で開示される特定の化合物から選択されたもの）を含有するものである：
−緩衝剤として作用するために使用される無機塩：２−８ｇ
無機硫酸塩：９−１０ｇ
無機塩化物塩：２−３ｇ
の少なくとも１種の無機塩：１３−２１ｇ
−１種またはそれ以上の尿素化合物：１−３ｇ
−１種またはそれ以上のアミノ化合物：０．０５−０．１５ｇ
−抗凝血剤（計）：＜３．０ｇ
−防腐剤（計）：＜１．０ｇ
【００５９】
例えば、本発明の希釈剤は、水１リットルにつき：
Ｎａ２ＨＰＯ４：３−４ｇ
ＮａＨ２ＰＯ４・１Ｈ２Ｏ：２−３ｇ
ジメチロール尿素：１−３ｇ
プロカイン塩酸塩：０．０５−０．１５ｇ
Ｎａ２ＳＯ４：９−１０ｇ
ＮａＣｌ：２−３ｇ
クエン酸：０．５−１．０ｇ
クエン酸ナトリウム：１−２ｇ
スルホサリチル酸：０．００４−０．００８ｇ
ナトリウムＥＤＴＡ：０．３−０．４ｇ
防腐剤：０．０５−０．１０ｇ
を含み得る。
【００６０】
該希釈剤を使用して、血液試料を１：１００ないし１：２００の希釈度に希釈する。その上で、段階ｃ）では、以下にさらに記載するように、本発明の溶血剤を使用して、段階ｂ）の希釈血液試料を溶血／ストリッピングする。
【００６１】
該溶血段階ｃ）に加えて、段階ｂ）の希釈血液試料の一部を収集し、とりわけ、赤血球細胞計数、血液血小板計数および／または平均赤血球容量（ＭＣＶ）を測定するために、別の段階で使用してもよい。通常、このために、段階ｂ）の希釈血液試料の一部を、例えば１：１０．０００ないし１：６０．０００の最終希釈度で、例えば（好ましくは）段階ｂ）で使用したものと同じ希釈剤または他の適する希釈剤を使用して、さらに希釈する。その上で、１つまたはそれ以上の上記の血液試料のパラメーターを、例えばヒト血液の分析用にそれ自体既知の方法で、測定し得る。例えば、赤血球細胞計数および血小板計数は、細孔インピーダンス技法を使用して、例えば６０ないし１００μｍ（マイクロメートル）の細孔サイズで、測定し得る。
【００６２】
本発明で使用される溶血剤は、一般に、溶血剤の添加後に、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈中の第四アンモニウム化合物の総濃度が１．５ないし４．５グラム毎リットルであるように、少なくとも１種の（好ましくは水溶性の）第四アンモニウム化合物を含有する水性溶液である。
【００６３】
第四アンモニウム化合物は、ドデシルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、テトラデシルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムハロゲン化物および／またはエチルヘキサデシルジメチルアンモニウムハロゲン化物（但し、用語「ハロゲン化物」は、対イオンとしての、フッ化物、塩化物、臭化物またはヨウ化物などのハロゲン陰イオンの存在を表す）および／またはＵＳ−Ａ−４３４６０１８および／またはＵＳ−Ａ−４４８５１７５で言及された第四アンモニウム化合物、またはそれらの任意の組合せなどの、溶血剤についてそれ自体既知の任意の第四アンモニウム化合物または第四アンモニウム化合物の組合せであり得る。
【００６４】
特に好ましいのは、一般式：
［（Ｒ１）３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎＣＨ３］Ｘ−
式中：
−各々の基Ｒ１は、独立してＣ１−Ｃ３アルキル基、好ましくはメチルまたはエチル基、そして最も好ましくはメチル基であり；
−ｎは５ないし２１の整数、好ましくは７ないし１５、より好ましくは９ないし１３、そして特に１１であり；そして
−Ｘ−は、塩化物、臭化物またはフッ化物などの適する陰イオンである；
の第四アンモニウム化合物であり、その特に好ましい例は、ドデシルトリメチルアンモニウム臭化物およびドデシルトリメチルアンモニウム塩化物である。
【００６５】
第四アンモニウム化合物は、場合により１種またはそれ以上の下記の溶血剤の他の成分と共に、赤血球の溶血（間質溶解）および白血球のストリッピングをもたらし、白血球亜集団の区別を可能にする。従って、より一般に、本発明の溶血剤中の第四アンモニウム化合物（類）の濃度は、赤血球の溶血および白血球のストリッピングを、より好ましくは上記白血球亜集団の少なくとも任意の２つ、好ましくは３つ全部の白血球の区別を、可能にするようなものであるべきである。
【００６６】
この態様では、本発明の溶血剤中の第四アンモニウム化合物の濃度は、一般にヒト血液試料の分析用の溶血剤中のそのような第四アンモニウム化合物の濃度よりも低いことに留意すべきである。通常、そのような第四アンモニウム化合物の濃度は、上記の最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈において、４．５ないし７．５グラム毎リットルの第四アンモニウム化合物濃度をもたらすようなものである。比較すると、ヒト血液試料分析の最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈では、該第四アンモニウム化合物の濃度は、通常４．５ないし７．５ｇ／ｌである。
【００６７】
本発明の溶血剤はまた、通常６．０ないし８．０（そして、２または３要素の分別分析用の、最も伝統的な溶血剤におけるシアン化物の存在のために、特に＞７．０）のｐＨを有するヒト血液分析用の溶血剤の通常のｐＨよりも低い、４．０ないし７．５、好ましくは５．０ないし７．０のｐＨの最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈をもたらす。本発明の溶血剤中のそのような（より）低いｐＨの使用は、（さらに）血小板凝集の形成を減少／防止し、赤血球の間質溶解を促進する。また、本発明の溶血剤中のより低いｐＨは、白血球の安定化を補助する。
【００６８】
本発明で使用される溶血剤は、好ましくは本質的にシアン化物不含であり、ヘモグロビン分析用のシアン化物含有塩または他の成分（例えば、シアン化物含有錯体）は添加されない。むしろ、本発明の溶血剤を使用して、ヘモグロビンは、塩化物および／または臭化物イオンなどの溶血剤中の適切な（陰）イオンの存在により、好ましくはシアン化物不含ヘマチン錯体に変換される。このシアン化物不含ヘマチン錯体は、さらに後述するように、次いで（分光）光度計で測定され得る。
【００６９】
本発明の溶血剤は、溶血剤についてそれ自体既知の１種またはそれ以上の成分をさらに含有し得る。これには以下のような成分が含まれ得る：
−適する有機または無機酸、例えば、蟻酸、酢酸、酪酸、クエン酸、サリチル酸、フタル酸または塩酸、またはこれらの任意の適する組合せ。これらの酸の存在は、赤血球の間質溶解に（さらに）寄与し得る；
−硫酸ナトリウム、硫酸カリウムおよび／または硫酸アンモニウムなどの水溶性硫酸塩、またはこれらの任意の適する組合せ。これらの硫酸塩は、白血球の安定化および／または白血球亜集団の区別の改善を補助する；
−モノエチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコールおよび／またはグリセロールなどのグリコール、またはこれらの適する組合せ。これらも、白血球の安定化および／または白血球亜集団の区別の改善を補助し得る；
−メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、フェノキシエタノールおよび／または２−ブトキシエタノールなどのアルコールまたはアルコキシアルコール、またはこれらの任意の適する組合せ；
【００７０】
−第三アンモニウム化合物、特にＮ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシドなどの第三アンモニウム酸化物、これらは赤血球の間質溶解に（さらに）寄与し得、かつ／または、白血球および／またはヘマチン錯体の安定化を補助し得る。
そのような化合物は、例えば、式
【化１】
2004506899.tif 000002
式中、各Ｒ１基は、独立してＣ１−Ｃ３アルキル基、好ましくはメチルまたはエチル基、そして最も好ましくはメチル基であり；式中、ｎは５ないし２１、好ましくは７ないし１５、より好ましくは９ないし１３、そして特に１１の整数である、
を有し得る；
【００７１】
−Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｎｏｄｉｄｅｔ Ｐ−４０ または Ｔｅｒｇｉｔｏｌ などのポリ−オキシ−エチレン−アルキル−フェニル−エーテル、これらは赤血球の間質溶解に（さらに）寄与し得、かつ／または、白血球および／またはヘマチン錯体の安定化を補助し得る。例えば、そのような化合物は、少なくとも１つの（そして好ましくは１つのみの）、１，１，３，３テトラメチルブチル残基などの、２ないし１６、好ましくは４ないし１２、より好ましくは６ないし１０炭素原子、特に８炭素原子の直鎖状または（好ましくは）分枝アルキル基で、（好ましくはパラ配置で）（少なくとも）置換されている芳香環；および少なくとも１（そして好ましくは１のみ）置換されているか、または（好ましくは）非置換の、式−Ｏ−（ＣＨ２−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ）ｑ−Ｈのポリエーテル残基、式中、ｐは０または１ないし３（そして好ましくは１）の整数であり、ｑは２ないし１４ （そして好ましくは９）の整数である、を含む：
またはこれらの成分の２種またはそれ以上の、任意の適する組合せ。
【００７２】
特に好ましい本発明の溶血剤は、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に４．０ないし７．５のｐＨをもたらす水性溶液である。
【００７３】
ことさらに、溶血剤は、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈１リットルをベースに、次の濃度で以下の成分（例えば、本明細書で言及される特定の化合物から選択されたもの）をもたらすようなものであり得る：
−１種またはそれ以上の無機硫酸塩：６−１０ｇ
−第三アンモニウム化合物：５−９ｇ
第四アンモニウム化合物：１．５−４．５ｇ
の１種またはそれ以上のアンモニウム化合物：６．５−１３．５ｇ
−１種またはそれ以上の有機または無機酸：０．２−１．０ｍｌ
−１種またはそれ以上のグリコール：６−１０ｍｌ
−１種またはそれ以上のポリ−オキシ−アルキレン−フェニル−アルキル−エーテル：＜１．０ｍｌ
【００７４】
例えば、溶血剤は、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈に、最終ＷＢＣ／Ｈｂ希釈１リットルをベースに、次の濃度で以下の化合物をもたらすようなものであり得る：
−Ｎａ２ＳＯ４：６−１０ｇ
−Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシド：５−９ｇ
−ドデシルトリメチルアンモニウム臭化物：１．５−４．５ｇ
−蟻酸：０．２−１．０ｍｌ
−エチレングリコール：６−１０ｍｌ
あるいは、
−Ｎａ２ＳＯ４：６−１０ｇ
−ドデシルトリメチルアンモニウム臭化物：１．５−４．５ｇ
−エチルジメチルヘキサデシルアンモニウム臭化物：＜０．５ｇ
−Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００：＜０．５ｇ
【００７５】
溶血剤は、好ましくは、段階ｂ）の希釈血液試料に、段階ｂ）で得られた希釈血液試料の容量をベースに０．２５ないし２．５０ｍｌの割合で添加する。一般に、これは、初めの血液試料と比較して、１：２００ないし１：５００の最終希釈をもたらす。
【００７６】
溶血剤を加えた後、溶血／ストリッピングを適切な時間、例えば２ないし１５秒、適温で、例えば１８および３０℃で、進行させる。
【００７７】
溶血段階ｃ）の後、白血球または少なくともその１亜集団を、細胞選別／細胞計数技法を使用して、好ましくはヒト血液試料分析用にそれ自体既知の細胞ソーターまたは細胞カウンターを使用して、計数する。
【００７８】
上述のように、本発明は、Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ａｂｂｏｔｔ、Ｓｙｓｍｅｘ、Ｎｉｈｏｎ Ｋｏｈｄｅｎ、Ｅｒｍａ、ＡＢＸ、Ｍｅｄｏｎｉｃ、Ｓｗｅｌａｂ、ＢｉｏＣｈｅｍ ＩｍｍｕｎｏＳｙｓｔｅｍｓ、Ｄａｎａｍ、Ｄｉａｔｒｏｎ、Ｍｅｌｅｔ、Ｍｅｄｏｎｉｃ および Ｈｙｃｅｌ により販売されている細孔インピーダンスベースの細胞ソーターなどの、細孔インピーダンス原理に従って作動する細胞ソーターまたは細胞カウンターでの使用を特に意図している。しかしながら、本発明は、その最も広い意味で、その作動原理に関わらずいかなるタイプの細胞ソーターまたは細胞カウンターの使用も包含し、従って（例えば）光散乱原理に従って作動する細胞ソーターの使用も包含することに留意すべきである。
【００７９】
使用する細胞ソーターの特定の設定は、使用する細胞ソーターのタイプ、使用する本発明の特定の希釈剤および溶血剤、および分析する血液試料によって異なる。適切な設定は、場合により、いくつかの簡単な初期実験および／または限度のある試行錯誤の後で、当業者に容易に決定され得る。本発明の希釈剤、溶血剤および／またはキットは、所定の細胞ソーターおよび所定の動物種に適する設定に言及したマニュアルと共に販売され得ることも認識される。
【００８０】
好ましくは、段階ｄ）では、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、最も好ましくは３つ全部の白血球亜集団、即ち、リンパ球、「混合細胞集団」、および顆粒球、が別々に測定／判定される。従って、本発明で使用される希釈剤および溶血剤は、最も好ましくは、該白血球亜集団の少なくとも任意の２つ、好ましくは３つ全部の区別を可能にするようなものである。細胞カウンターの適する細孔サイズは、７０ないし１２０μｍであり得る。
【００８１】
白血球または白血球亜集団の測定に加えて、段階ｄ）では、試料中のヘモグロビン含量も測定され得る。このために、溶血段階中に溶血赤血球から放出されたヘモグロビンは、好ましくは、溶血剤中の塩化物および／または臭化物イオンにより、シアン化物不含のヘマチン様錯体に変換され、それは５００ｎｍないし６００ｎｍ、好ましくは約５３５−５４５ｎｍの波長で、分光光度計で測定／検出できる。 このことは、ヒト血液試料用にそれ自体既知の方法でさらに実行できる。
【００８２】
さらなる態様では、本発明は、商業製品または製剤の形態の本発明の希釈剤および／または本発明の溶血剤に関連する。一般に、そのような商業製品／製剤は、場合によりラベルされ、かつ／または使用説明書と共に提供される、ビン、フラスコ、アンプル、ブリキ容器またはドラム缶などの適する容器中に、本発明の希釈剤／溶血剤を含む。上記のように、そのような商業製品は、本発明の希釈剤と溶血剤の両者を含むパーツのキットの形態であってもよい。
【００８３】
ここで、以下の非限定的実験の部並びに図面によって、本発明を例示説明する。但し、
−図１Ａおよび１Ｂは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するネコの血液分析の結果を示す印刷物である。図１Ａ：既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）；図１Ｂ：本発明の試薬を使用して得られた結果。
−図２Ａおよび２Ｂは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するイヌの血液分析の結果を示す印刷物である。図２Ａ：既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）；図２Ｂ：本発明の試薬を使用して得られた結果。
−図３Ａおよび３Ｂは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するウマ血液分析の結果を示す印刷物である。図３Ａ：既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）；図３Ｂ：本発明の試薬を使用して得られた結果。
【００８４】
実験の部
以下の実施例では、ヒト血液の分析用にそれ自体既知の等張希釈剤および溶血剤（まとめて「ヒト試薬」）と、本発明の等張希釈剤および溶血剤（まとめて「獣医学用試薬」）を使用した。これらは、以下の組成を有した：
【００８５】
「ヒト試薬」の組成
ａ．等張希釈剤
【表１】
2004506899.tif 000003
【００８６】
ｂ．溶血剤
【表２】
2004506899.tif 000004
【００８７】
「獣医学用試薬」の組成
ａ．等張希釈剤
【表３】
2004506899.tif 000005
【００８８】
ｂ．溶血剤
【表４】
2004506899.tif 000006
【００８９】
実施例Ｉ：ネコ血液の分析
ネコからの２つの同一血液試料を Ｍｅｄｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機で分析した。
試料の一方を後述の本発明の「獣医学用試薬」で分析した；比較として他方を上述の「ヒト試薬」で分析した。
【００９０】
結果を図１Ａ（「ヒト試薬」比較）および図１Ｂ（「獣医学用試薬」本発明）にそれぞれ示す。
これらの結果から分かるように、本発明の獣医学用試薬を使用して得られた結果は、顕著に情報を与えるものであり、なかでもＷＢＣ計数中の３つの異なる亜集団（３つの別々のピークとして見られる）の区別を可能にしている。
【００９１】
実施例ＩＩ：イヌ血液の分析
イヌからの２つの同一血液試料を Ｍｅｄｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機で分析した。
試料の一方を後述の本発明の「獣医学用試薬」で分析した；比較として他方を上述の「ヒト試薬」で分析した。
【００９２】
結果を図２Ａ（「ヒト試薬」比較）および図２Ｂ（「獣医学用試薬」本発明）にそれぞれ示す。
これらの結果から分かるように、本発明の獣医学用試薬を使用して得られた結果は、顕著に情報を与えるものであり、なかでもＷＢＣ計数中の３つの異なる亜集団（３つの別々のピークとして見られる）の区別を可能にしている。
【００９３】
実施例ＩＩＩ：ウマ血液の分析
ウマからの２つの同一血液試料を Ｍｅｄｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機で分析した。
試料の一方を後述の本発明の「獣医学用試薬」で分析した；比較として他方を上述の「ヒト試薬」で分析した。
【００９４】
結果を図３Ａ（「ヒト試薬」比較）および図３Ｂ（「獣医学用試薬」本発明）にそれぞれ示す。
これらの結果から分かるように、本発明の獣医学用試薬を使用して得られた結果は、顕著に情報を与えるものであり、なかでもＷＢＣ計数中の異なる亜集団の区別を可能にしている。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するネコの血液分析の結果を示す。既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）である。
【図１Ｂ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するネコの血液分析の結果を示す。本発明の試薬を使用して得られた結果である。
【図２Ａ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するイヌの血液分析の結果を示す。既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）である。
【図２Ｂ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するイヌの血液分析の結果を示す。本発明の試薬を使用して得られた結果である。
【図３Ａ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するウマの血液分析の結果を示す。既知のヒト血液分析用試薬を使用して得られた結果（比較用）である。
【図３Ｂ】Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ＣＡ ５３０ 分析機を使用するウマの血液分析の結果を示す。本発明の試薬を使用して得られた結果である。
【図１Ａ】
2004506899.tif 000007
【図１Ｂ】
2004506899.tif 000008
【図２Ａ】
2004506899.tif 000009
【図２Ｂ】
2004506899.tif 000010
【図３Ａ】
2004506899.tif 000011
【図３Ｂ】
2004506899.tif 000012
【国際公開パンフレット】
2004506899.tif 000013
2004506899.tif 000014
2004506899.tif 000015
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2004506899.tif 000043
2004506899.tif 000044
2004506899.tif 000045
【国際調査報告】
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2004506899.tif 000047
2004506899.tif 000048
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