(57)【要約】本発明は、免疫促進活性を示す式Ｉの多糖類化合物、それを調製する方法、免疫抑制性の病気の治療におけるその使用及びそれを含む薬学的組成物に関する。【化１】2004521969.tif 000008（式中、ｎは７乃至８である。）【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの多糖類化合物。
【化１】
2004521969.tif 000007
（式中、ｎは７乃至８である。）
【請求項２】
１）カレンドゥラ・オフィシナリスの花を分離し、２）それに以下の抽出方法：
ａ）花の汚染除去、
ｂ） 花の粉砕、
ｃ） 粉砕した花のレーザー光線による処理、
ｄ） 工程ｃ）で得られた混合物の水中への懸濁、
ｅ） 工程ｄ）で得られた懸濁液の離解、
ｆ） 得られた液体の分離、
を実施し、かつ３）工程ｆ）で得られた液体に、生物学的検定により誘導されるエタノールを用いた沈殿、遠心分離及びクロマトグラフィー分離を含む単離方法を実施することを含む請求項１記載の化合物を得る方法。
【請求項３】
前記工程３）が、
ｇ） 工程ｆ）で得られた液体の凍結乾燥、
ｈ） 工程ｇ）で得られた凍結乾燥した物質のメタノールを用いた沈殿、
ｉ） 固体相と液体相の分離、
ｊ） 工程ｉ）で得られた固体相のメタノールを用いた最終濃度２５％、５０％及び６７％への沈殿、
ｋ） 工程ｊ）で得られた沈殿物の５０％及び６７％での水中への溶解、遠心分離及び母液のクロマトグラフィー分離の実施、
ｌ） 活性フラクションの生物学的検定による識別、
ｍ） 活性フラクションの第二のクロマトグラフィー分離の実施、
ｎ） 活性フラクションの生物学的検定による識別、
ｏ） 溶離液の除去、
を含む請求項２記載の方法。
【請求項４】
１５０乃至８１０ｎｍの波長、１乃至６０ワットの仕事率及び直径１乃至６ｍｍのスポットの高調波発生能力を有する赤色線形レーザーダイオードを使用してレーザー光による処理を実施する請求項２または３記載の方法。
【請求項５】
前記波長が２００乃至４００ｎｍ、好ましくは２５０ｎｍで、仕事率が２０ワット、及びスポットの直径が４ｍｍである請求項４記載の方法。
【請求項６】
粉砕した物質１ｋｇ当たり３乃至１０分間、好ましくは５分間レーザー光線で処理する請求項２乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
治療剤として使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項８】
免疫抑制性の病気の治療に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項９】
癌、結核、インフルエンザ、風邪、アレルギー、紅斑性狼瘡、乾癬及びエイズのような免疫抑制性の病気の治療に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
肝臓癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌または前立腺腺癌、星状細胞腫及びグリア芽腫のような脳腫瘍、子宮癌及びブレード・キャンサーの治療に使用するための請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
医薬の製造のための請求項１記載の化合物の使用。
【請求項１２】
免疫抑制性の病気の治療用医薬を製造するための請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
癌、結核、インフルエンザ、風邪、アレルギー、紅斑性狼瘡、乾癬及びエイズの治療用医薬を製造するための請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
肝臓癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌または前立腺腺癌、星状細胞腫及びグリア芽腫のような脳腫瘍、子宮癌及びブレード・キャンサーの治療用医薬を製造するための請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
請求項１記載の化合物を含む医薬品。
【請求項１６】
薬学的に許容しうる賦形剤を更に含む請求項１５記載の医薬品。
【請求項１７】
１種以上のその他の薬学的に活性な化合物を更に含む請求項１５または１６記載の医薬品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、免疫促進活性を示す式Ｉの多糖類化合物、それを得る方法、免疫抑制性の（ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）病気の治療におけるその使用及びそれを含む薬学的組成物に関する。
【０００２】
発明の背景
免疫系は、その複雑な相互作用が、一般的には個体を外部の侵入物及びそれ自身の変化した細胞の両方から保護しうる創発的なシステムを形成する分子、細胞及び器官の収集と定義しうる。
免疫系は、２つの機能的に異なる部分、即ち、生得の要素及び獲得した要素に分離しうる。生得の免疫は、非特異性及び非適応性である免疫要素を言及する。それらは外来の組織／器官を区別しうるが、特定の侵入物を認識することはできない。それらは、バリヤー（皮膚及び粘膜）、非特異性化学物質（粘膜中に存在する酵素、キニン及びヒスタミン）及び非特異性効果器細胞（マクロファージ）にもっとも多く分配されている。獲得免疫は、特異性及び適応性である要素を言及する。それらは、それ自身と外来の細胞を区別しうるし、一抗原と別の抗原を区別しうる。獲得免疫は記憶を有する。これは免疫性を与えること及び同一の微生物の再感染に対する抵抗性を可能にする。獲得免疫を担う細胞は、２つの下位分類、Ｂ及びＴ−細胞があるリンパ球である。
獲得免疫は、自然感染またはワクチン摂取（能動的な方法）により、または免疫細胞の投薬（受動的な方法）のいずれかにより獲得しうる。第一の方法は効果が長く持続し、永久的な場合もありうるが、後者は長く持続しない。
【０００３】
免疫抑制性の病気を呈する患者は、免疫系を活性化するために免疫促進剤で治療する。第ＵＳ ４８０１５７８号、第ＵＳ ５４１７９７９号及び第ＷＯ ９８５１３１９号から種々の免疫促進剤が公知である。多糖類免疫促進剤は、第ＤＥ １９８１７１７７号及び第ＥＰ ０ ２２５ ４９６号から公知である。これらの特許には、免疫促進活性を有する多糖類及び植物細胞ｃｕｌｔｉｖｅｓからのその獲得が開示されている。植物としては、エチナセア・プルプレア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、エチナセア・アングスティフォリア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）及びカレンドゥラ・オフィシナリス（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）のような植物が使用される。
しかしながら、これらの免疫促進化合物はいずれも免疫抑制性の病気に満足な活性を示さない。従って、改良された幅広い活性を示す、それらに代わる免疫促進剤が当業者には必要である。
【０００４】
発明の要約
本発明は、免疫促進活性を示す式Ｉの多糖類化合物、それを得る方法、免疫抑制性の病気の治療におけるその使用及びそれを含む薬学的組成物を提供する。
本発明の一面は、式Ｉの多糖類化合物に関する。
【０００５】
【化２】
2004521969.tif 000002
（式中、ｎは７乃至８である。）
【０００６】
本発明の第二の面は、式Ｉの多糖類化合物を得る方法に関する。この方法は、第一に、本出願人の同時係属出願に開示されている方法に従ってカレンドゥラ・オフィシナリスから水性抽出物を得ること及び、第二に、生物学的検定により誘導される分離技術の組合せにより多糖類を分離することを含む。
本発明の更なる面は、癌、結核、インフルエンザ、風邪、アレルギー、紅斑性狼瘡、乾癬及びエイズのような免疫抑制性の病気の治療における治療剤としての本発明の式Ｉの多糖類化合物の使用に関する。
本発明の更なる面は、式Ｉの多糖類化合物を含む薬学的組成物に関する。
【０００７】
発明の詳細な説明
前述のように、本発明の第一の面は、式Ｉの多糖類化合物に関する。
【０００８】
【化３】
2004521969.tif 000003
（式中、ｎは７乃至８である。）
【０００９】
式Ｉの化合物の立体配置構造は以下のとおりである。
【００１０】
【化４】
2004521969.tif 000004
（式中、ｎは７乃至８である。）
【００１１】
多糖類化合物の平均分子量は約１０，０００である。
本発明の第二の面は、式Ｉの多糖類化合物を得る方法に関する。この方法は、第一に、本出願人の“植物の水性抽出物を調製する方法及びそのようにして得られた抽出物”と題する、出願番号第      号の本出願と同時に出願された同時係属出願に開示されている方法に従ってカレンドゥラ・オフィシナリスから水性抽出物を得ること及び、第二に、生物学的検定により誘導される分離技術の組合せにより多糖類を分離することを含む。
カレンドゥラ・オフィシナリスの水性抽出物は、この植物の花に以下の工程：
ａ）花の汚染除去、
ｂ） 花の粉砕、
ｃ） 粉砕した花のレーザー光線による処理、
ｄ） 工程ｃ）で得られた混合物の水中への懸濁、
ｅ） 工程ｄ）で得られた懸濁液の離解、
ｆ） 得られた液体の分離、
を実施することにより得られる。
【００１２】
汚染除去（工程ａ）は、カレンドゥラ・オフィシナリスを水で洗浄することにより実施する。この工程で使用する水の量は決定されているわけではなく、植物の汚染状態に依存して変化しうる。水の温度は、それより高くても低くてもいけないというわけではないが、１０乃至４０℃であり、好ましくは２０乃至３５℃であり、もっとも好ましくは２８℃である。この工程を容易にするためには、洗浄トンネルを使用しうる。洗浄トンネル中の水の量及び植物の滞留時間は決定されているわけではなく、植物の汚染状態に依存して変化しうる。洗浄工程は、乾燥工程を挟み数回実施しうる。この乾燥工程は、好ましくは植物を日の当たるところに置くことにより実施する。
十分に花の汚染を除去したら、粉砕機または手のような従来の方法により粉砕する（工程ｂ）。花を粉砕する温度は、それより高くても低くてもいけないというわけではないが、１０乃至４０℃である。
【００１３】
次いで、粉砕した花をレーザー光線により処理する（工程ｃ）。レーザー光源としては、好ましくは１５０乃至８１０ｎｍの波長の高調波発生（ｈａｒｍｏｎｉｃ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）能力を有する赤色線形レーザーダイオードを使用する。レーザー光線の波長は、更に好ましくは２００乃至４００ｎｍであり、もっとも好ましくは２５０ｎｍである。レーザー光線の仕事率は、好ましくは１乃至６０ワットであり、更に好ましくは１０乃至３０ワットであり、もっとも好ましくは２０ワットである。スポットは、好ましくは直径１乃至６ｍｍであり、更に好ましくは２乃至５ｍｍであり、もっとも好ましくは４ｍｍである。混合物全体または大部分が照射されるように、粉砕した植物をレーザー光線に暴露させる。これは、レーザー発生器を粉砕した植物上に手で移動させるか、または搬送ベルト上の粉砕した物質をレーザー発生器セット中に通過させることによりなしうる。好ましくは、粉砕した物質１ｋｇ当たり３乃至１０分間、更に好ましくは５分間レーザー光線で処理する。粉砕した植物をレーザー光線で処理する温度は、それより高くても低くてもいけないというわけではないが、１０乃至４０℃である。
次いで、レーザー処理した物質を水中に懸濁させる（工程ｄ）。この工程においては、いずれの市販の鉱水も使用しうる。懸濁は、水１リットル当たり５０乃至３００ｇ、好ましくは１００乃至２５０ｇのレーザー処理した物質が存在するように実施する。粉砕した植物を水に懸濁させる温度は、それより高くても低くてもいけないというわけではないが、１０乃至４０℃である。
【００１４】
次いで、懸濁液を、混合物の離解が起こるように２乃至１０℃、好ましくは４乃至８℃の温度に５乃至２０日間、好ましくは７乃至１５日間保持する（工程ｅ）。
離解工程後、最後に、液体相と固体相との分離を実施する（工程ｆ）。分離しやすいように、固体は加圧しうる。分離は、デカンテーションのみ、または、好ましくはデカンテーション後に濾過することによりなしうる。濾過は、好ましくは加圧下で実施する。もっとも好ましくは、５μｍ、１μｍ及び０．２２μｍの濾紙を用い、３回の連続加圧濾過で実施する。分離を実施する温度は、それより高くても低くてもいけないというわけではないが、１０乃至４０℃である。
最終的には黄土色の水性抽出物が得られる。
次に、このようにして得られた抽出物に、生物学的検定により誘導されるメタノールを用いた沈殿、遠心分離及びクロマトグラフィー分離を含む単離方法を実施する。使用する生物学的検定は、参考文献（Ｍａｘ， Ｗ． ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ｖｏｌ． ５４， ｎｏ． ６， ｐｐ． １５３１−１５４２ （１９９１））に従って、マウスから単離したリンパ球に試料を添加することによりインビトロで実施した。ＤＮＡの複製を意味するチミジンの取込を追跡した。この取込は、リンパ球の数の増大及びリンパ球活性の増大の両方を示す。使用するこれらの分離技術には、エタノールを用いた繰り返し沈殿、遠心分離、透析及び／またはカラムクロマトグラフィーが含まれる。
【００１５】
従って、すでに得られた１１２リットルの水性抽出物を凍結乾燥させると、８００ｇの黄褐色の粉末（“ＰＦ２”）が得られた。この粉末を、ＭｅＯＨ−可溶部及び、リンパ球転換活性を示すＭｅＯＨ−不溶性残留物（ＰＦ２Ｒ，３５０ｇ）に分別した。この物質８０ｇを、ＭｅＯＨ沈殿、遠心分離、透析及び／またはＳｅｐｈａｄｅｘ ＤＥＡＥ上でのカラムクロマトグラフィーにより分離すると、種々の結晶物質が単離され、それらは不活性無機塩であると決定された（図１）。
２７０ｇのＰＦ２ＲをＭｅＯＨで沈殿させ、最終濃度を２５、５０及び６７％とすると活性沈殿物が得られた。もっとも活性な物質は、５０％ＭｅＯＨ溶液から得られる沈殿物であった（ＰＦ２ＲＳ８ ５１．２ｇ，ＬＴ＝＋１０５９％）。５ｇのＰＦ２ＲＳ８を水中で溶解させ、次いで遠心分離して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５上で上澄みをクロマトグラフィー分離すると、ＰＦ２ＲＳ８Ａ（０．１３ｇ，ＬＴ＝＋１０７４％）として示される、活性な多糖類に富むフラクションが得られた。次いで、ＰＦ２ＲＳ８Ａ′として示される理想的なフラクション（０．３ｇ）が５０％ＭｅＯＨ沈殿物の第二の部分（６ｇ）から得られた。図２に示されるように、種々のその他のフラクション及び結晶物質が単離されたが、いずれもＰＦ２ＲＳ８ＡのＬＴ活性度は示さなかった。
【００１６】
ＰＦ２ＲＳ８Ａは、分光学（１Ｈ−，１３Ｃ−ＮＭＲ、及び ＤＥＰＴスペクトル）及び化学分析（ＴＦＡを用いた加水分解及びシリカゲルＴＬＣに基づく分析）により特性決定した。図３、４及び５を参照されたい。
更なる活性多糖類混合物ＰＦ２ＲＳ８Ａ（１．４ｇ）を残存する５０％ＭｅＯＨ沈殿物（ＰＦ２ＲＳ８）から単離した。同時に、２．０ｇの６７％ＭｅＯＨ不溶性フラクション（ＰＦ２ＲＳ９；ＬＴ＝＋７３５％）から、多糖類混合物（ＰＦ２ＲＳ９Ａ，０．３ｇ）が単離され、それは１Ｈ−ＮＭＲ分析によりＰＦ２ＲＳ８Ａと同一であることが示された。従って、ＰＦ２ＲＳ９Ａ（０．２ｇ）をＰＦ２ＲＳ８Ａ（１．４ｇ）と一緒にして、“ＰＦ２Ｓ８Ｂ”として示される混合物を、図６に示されるようにＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０（２０〜８０μｍ）で更に分離した。水で溶離すると、６つのフラクション（ＰＦ２ＲＳ８Ｂ１、２、３、４、５及び６）が得られ、それらは、蒸発光散乱及びＵＶ検出を用いたＨＰＬＣ分析に基づくと、主要な単離物ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のみが均質であることが示された（図７及び８）。１Ｈ−及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル分析（図９及び１０）により、この単離物のスペクトルは、ＰＦ２ＲＳ８Ａについて得られたそれ（図３及び４）と非常に類似していることが示され、混合物中の主要な多糖類であることが示された。従って、フラクションＰＦ２ＲＳ８Ｂ２は、式Ｉの多糖類及び水からなる。後者は当業者に公知の方法により除去しうる。
【００１７】
均質単離物ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２及びその親混合物ＰＦ２ＲＳ８Ａの同一検定法における生物学的検定により、リンパ球転換（ＬＴ）活性は、それぞれ６２０３％及び３５３２％であることが示された（表１）。単離物により示される活性度が比較的高いことは、この多糖類が本発明の抽出物の生物学的効果の主要な活性成分であることを示した。
【００１８】
【表１】
2004521969.tif 000005
【００１９】
活性多糖類ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２（式Ｉの多糖類）は、分光学（１Ｈ−，１３Ｃ−ＮＭＲ、ＨＭＱＣ及び２Ｄ １Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトル）及び化学分析（ＴＦＡを用いた加水分解及びシリカゲルＴＬＣに基づく分析）により明らかにされた。δ５．３及び３．２ｐｐｍにおける１Ｈ−ＮＭＲシグナル（図９）は多糖類を示す。δ１１１．９（ｄ）及び１１０．１（ｄ）ｐｐｍにおける１３Ｃ−ＮＭＲシグナル（図１０〜１２）は、１→３結合α−Ｌ−アラビノフラノース及び末端α−Ｌ−アラビノフラノース（それぞれＡｒａｆ及びＡｒａｆ′と表される）のアノマー炭素に帰属された。δ１０６．１（ｄ）及び１０５．９（ｄ）ｐｐｍにおけるシグナルは、１→６結合β−Ｄ−ガラクトピラノース及び１→３、１→６結合β−Ｄ−ガラクトピラノース（それぞれＧａｌｐ′及びＧａｌｐと表される）のアノマー炭素に帰属され、１００．２（ｄ）ｐｐｍにおけるシグナルは、α−Ｌ−ラムノピラノース（Ｒｈａｐと表される）のアノマー炭素に帰属された。アノマープロトンシグナル（Ｈ−１）も、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおける対応する低磁場のシフトにより容易に認められた。ＨＭＱＣスペクトル（図１３）において観察されるプロトン及び炭素−１３シグナル間の直接的相間により、δ５．０８（ｂｒｓ）、５．２３（ｂｒｓ）、４．４７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）、４．５３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）及び５．１（ｂｒｓ）ｐｐｍの１Ｈ−ＮＭＲシグナルが、α−Ｌ−アラビノフラノース（Ａｒａｆ′）、α−Ｌ−アラビノフラノース（Ａｒａｆ）、β−Ｄ−ガラクトピラノース（Ｇａｌｐ′）、β−Ｄ−ガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）及びα−Ｌ−ラムノピラノース（Ｒｈａｐ）のアノマープロトンであることが決定された。これらのシグナルを対照として用い、２Ｄ １Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトル（図１４、１５）を分析することによりその他のプロトンシグナルを追跡しうる。同様にして、ＨＭＱＣスペクトルにより対応する炭素シグナルを決定した（図１３、１６及び表２）。糖単位のシークエンスは以下のようにして決定した。Ａｒａｆ（δ７９．４）及びＧａｌｐ（δ８２．８）のＣ−３におけるシグナル、及びＧａｌｐ及びＧａｌｐ′（δ６９．２）のＣ−６におけるシグナルの下方磁場へのシフトは、これらの炭素がその他の糖単位に結合していることを示唆した。ＨＭＢＣスペクトル（図１７）におけるＡｒａｆのＣ−１及びＧａｌｐ及びＧａｌｐ′のＣ−６間の長範囲相関を観察すると、１→６結合β−Ｄ−ガラクトピラノース主鎖が示唆された。Ａｒａｆは、ＡｒａｆのＣ−１及びＧａｌｐのＣ−３間の長範囲相関の観察（図１８）によりＧａｌｐへ１→３結合されていた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（図９）から、糖の比は、アノマープロトンのピークの積分値に従って計算するとＡｒａｆ：Ａｒａｆ′：Ｇａｌｐ：Ｇａｌｐ′：Ｒｈａｐが３：１：２：２：１であった。従って、ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２は式Ｉに示されるような一次構造を有する大きな分枝鎖状連鎖の多糖類と解明された（スキームＩ）。スキームＩＩは、個々の糖の立体化学的配置を示す同一構造の描写である。
【００２０】
【表２】
2004521969.tif 000006
【００２１】
成分の糖の化学式を確認するために、ＴＦＡ（０．５Ｍ，１００〜１２０℃）を用いてＰＦ２ＲＳ８Ｂ２を加水分解した後、ＴＬＣ分析を実施した（図１９）。主要な糖のα−Ｌ−アラビノフラノース及びβ−Ｄ−ガラクトピラノースの存在は容易に識別されたが、少量の糖であるα−Ｌ−ラムノピラノースの存在の検出は、たぶんＴＬＣプレートに適用される加水分解物の量のために一層困難であった。
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２の分子量は、ゲル透過（サイズ排除）クロマトグラフィーにより推定した。このようにして推定したＰＦ２ＲＳ８Ｂ２の平均分子量は１０，０００である（図２０を参照されたい）。
式Ｉの多糖類化合物は、以下の実施例において示されるように、予期せぬことに免疫促進剤としての非常に高い活性を示す。従って、本発明の第三の面は、癌、結核、インフルエンザ、風邪、アレルギー、紅斑性狼瘡、乾癬及びエイズのような免疫抑制性の病気の治療における治療剤としての式Ｉの多糖類化合物の使用に関する。癌の非限定例は、肝臓癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌または前立腺腺癌、星状細胞腫及びグリア芽腫のような脳腫瘍、子宮癌及びブレード・キャンサー（ｂｌａｄｅ ｃａｎｃｅｒ）である。
【００２２】
本発明の第四の面は、式Ｉの多糖類化合物を含む薬学的組成物に関する。
本発明の化合物は、好ましくは組合せで投薬されるけれども、本発明による多糖類は、純粋な物質としてまたは医薬品の形で投薬しうる。薬剤の組合せは好ましくは配合物の形であり、それは（１）本発明による多糖類を単独で含む、（２）１種以上の適するバインダー、キャリヤー及び／または更なる補助物質を含む、及び（３）更に追加の治療上活性な物質を含みうる。
キャリヤー物質、バインダー及び／または補助物質は、配合物または製剤のその他の成分と組み合わせることが可能で、治療される生物に悪影響を及ぼさないように、薬学的及び薬理学的に許容されなければならない。
最良の投薬経路は患者の状態に依存するけれども、配合物には経口的または（皮下、皮内、筋肉内及び静脈内を含む）非経口的投与に適するものが含まれる。
配合物は単一の投与量の形でもよい。配合物は、薬理学の分野において公知の方法に従って調製される。投与に適する活性物質の適量は、個々の領域の治療の関数として変化しうる。一般的には、１回の投与量の配合物中の活性物質濃度は配合物全体の５乃至９５％である。
【００２３】
本出願により提供される発明を以下に示す実施例により説明する。
実施例１：本発明の方法によるカレンドゥラ・オフィシナリスの花の水性抽出物の調製
５００ｇのカレンドゥラ・オフィシナリスの花を洗浄トンネルに置き、約２８℃において水を用い十分洗浄する。次に花を粉砕機により粉砕する。得られた５００ｇの粉砕した物質を、２５０ｎｍの波長、２０ワットの仕事率及び直径４ｍｍのスポットの高調波発生能力を有する赤色線形レーザーダイオードを使用して処理する。混合物全体または大部分が照射されるように、レーザー発生器を粉砕した物質上に２．５分間手で移動させることにより処理を実施する。次に、レーザーで処理した物質を、約２０℃の温度において２リットルの水に懸濁させる。次いで、懸濁液を４℃の温度に１２日間保持する。最後に、まず液体をデカンテーションし（分離を容易にするために固体を加圧する）、次いで約２０℃の温度において５μｍ、１μｍ及び０．２２μｍの濾紙を用い３回連続加圧濾過することにより、液体及び固体相の分離を実施する。この方法で約１．７リットルの黄土色の溶液（水性抽出物）が得られる。
【００２４】
実施例２：式Ｉの多糖類の単離を、第７〜８頁の記載に開示されているように実施した。
実施例３：リンパ球転換活性（ＬＴＡ）を定量することにより免疫促進剤としての活性を確立するために、式Ｉの多糖類について試験した。リンパ球転換活性とは、リンパ球が休眠状態から活性状態に変換されることことを意味し、それは免疫学的機構により病気と闘うのに、または別の因子により弱められているかもしれない免疫系を復活させるのに必要不可欠である。試験は、参考文献（Ｍａｘ， Ｗ． ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ｖｏｌ． ５４， ｎｏ． ６， ｐｐ． １５３１−１５４２ （１９９１））に従って、マウスから単離したリンパ球に本発明の多糖類の溶液をインビトロで添加することにより実施した。ＤＮＡの複製を意味するチミジンの取込を追跡した。この取込は、リンパ球の数の増大及びリンパ球活性の増大の両方を示す。
式Ｉの多糖類は、促進されていないリンパ球に対して＋６２０３％のＬＴＡを示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】
ＰＦ２の単離のスキームである。
【図２】
ＰＦ２Ｒの単離のスキームである。
【図３】
ＰＦ２ＲＳ８Ａの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図４】
ＰＦ２ＲＳ８Ａの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図５】
ＴＦＡを用いたＰＦ２ＲＳ８Ａの加水分解生成物及びその他の単糖類のＴＬＣである。
【図６】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２、即ち式Ｉの多糖類の単離のスキームである。
【図７】
蒸発光散乱検出器に基づくＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＰＬＣプロフィールである。
【図８】
光ダイオードＵＶ検出器に基づくＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＰＬＣプロフィールである。
【図９】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１０】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２、即ち式Ｉの多糖類の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１１】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＤＥＰＴ−１３５スペクトルである。
【図１２】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＤＥＰＴ−９０スペクトルである。
【図１３】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＭＱＣスペクトルである。
【図１４】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２の１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルである。
【図１５】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２の１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルである。
【図１６】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＭＱＣスペクトルである。
【図１７】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＭＢＣスペクトルである。
【図１８】
ＰＦ２ＲＳ８Ｂ２のＨＭＢＣスペクトルである。
【図１９】
ＴＦＡを用いたＰＦ２ＲＳ８Ａの加水分解生成物及びその他の単糖類のＴＬＣである。
【図２０】
分子量測定図である。
【図１】
2004521969.tif 000009
【図２】
2004521969.tif 000010
【図３】
2004521969.tif 000011
【図４】
2004521969.tif 000012
【図５】
2004521969.tif 000013
【図６】
2004521969.tif 000014
【図７】
2004521969.tif 000015
【図８】
2004521969.tif 000016
【図９】
2004521969.tif 000017
【図１０】
2004521969.tif 000018
【図１１】
2004521969.tif 000019
【図１２】
2004521969.tif 000020
【図１３】
2004521969.tif 000021
【図１４】
2004521969.tif 000022
【図１５】
2004521969.tif 000023
【図１６】
2004521969.tif 000024
【図１７】
2004521969.tif 000025
【図１８】
2004521969.tif 000026
【図１９】
2004521969.tif 000027
【図２０】
2004521969.tif 000028
【国際公開パンフレット】
2004521969.tif 000029
2004521969.tif 000030
2004521969.tif 000031
2004521969.tif 000032
2004521969.tif 000033
2004521969.tif 000034
2004521969.tif 000035
2004521969.tif 000036
2004521969.tif 000037
2004521969.tif 000038
2004521969.tif 000039
2004521969.tif 000040
2004521969.tif 000041
2004521969.tif 000042
2004521969.tif 000043
2004521969.tif 000044
2004521969.tif 000045
2004521969.tif 000046
2004521969.tif 000047
2004521969.tif 000048
2004521969.tif 000049
2004521969.tif 000050
2004521969.tif 000051
2004521969.tif 000052
2004521969.tif 000053
2004521969.tif 000054
2004521969.tif 000055
2004521969.tif 000056
2004521969.tif 000057
2004521969.tif 000058
2004521969.tif 000059
2004521969.tif 000060
2004521969.tif 000061
2004521969.tif 000062
2004521969.tif 000063
2004521969.tif 000064
2004521969.tif 000065
【国際調査報告】
2004521969.tif 000066
2004521969.tif 000067
2004521969.tif 000068