(57)【要約】Ｇタンパク質結合レセプター関連ポリペプチドをコードする核酸配列が、本明細書中で開示される。これらの核酸配列によってコードされるポリペプチド、およびこのポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、ならびにこれらのポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体のフラグメントの誘導体、改変体、変異体もまた、開示される。本発明はさらに、これらの新規なヒト核酸およびタンパク質のいずれか１つに関与する障害を診断、処置、および予防するための、治療方法、診断方法、および研究方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列；ならびに
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において異なる、改変体；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の天然に存在する対立遺伝子改変体のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項３】
請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、前記対立遺伝子改変体が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる核酸配列の翻訳であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項４】
前記改変体のアミノ酸配列が、保存的アミノ酸置換含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
単離された核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群から選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において異なる、改変体；
（ｅ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは該ポリペプチドの改変体の、少なくとも一部をコードする核酸フラグメントであって、ここで、該改変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において異なる、核酸フラグメント；ならびに
（ｆ）　（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の相補体を含む、核酸分子、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、核酸分子。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が天然に存在する対立遺伝子核酸改変体のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、天然に存在するポリペプチド改変体のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項８】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる、核酸分子。
【請求項９】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が以下：
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８からなる群より選択されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８からなる群より選択されるヌクレオチド配列と１つ以上のヌクレオチドで異なる、ヌクレオチド配列であって、ただし、そのヌクレオチドの２０％以下が、該ヌクレオチド配列と異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）の核酸フラグメント；ならびに
（ｄ）（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１０】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８からなる群より選択されるヌクレオチド配列または該ヌクレオチド配列の相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸分子。
【請求項１１】
請求項５に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下：
（ａ）第１ヌクレオチド配列であって、前記アミノ酸配列をコードするコード配列と１以上のヌクレオチド配列で異なるコード配列を含み、ただし、該第１ヌクレオチド配列中のコード配列におけるヌクレオチドの２０％以下が、該コード配列と異なる、第１ヌクレオチド配列；
（ｂ）該第１ポリヌクレオチドの相補体である、単離された第２ポリヌクレオチド；ならびに
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１２】
請求項１１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１３】
前記核酸分子に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する、抗体。
【請求項１６】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１８】
サンプル中の請求項１に記載のポリペプチドの存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と接触させる工程；および
（ｃ）該ポリペプチドに結合した抗体の存在または量を決定して、それによって該サンプル中のポリペプチドの存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１９】
サンプル中の請求項５に記載の核酸分子の存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該核酸分子に結合するプローブと接触させる工程；および
（ｃ）該核酸分子に結合した該プローブの存在または量を決定して、それによって該サンプル中の該核酸分子の存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、前記核酸分子の存在または量が、細胞型または組織型についてのマーカーとして使用される、方法。
【請求項２１】
前記細胞型または組織型が癌性である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１に記載のポリペプチドに結合する因子を同定する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを該因子と接触させる工程；および
（ｂ）該因子が該ポリペプチドに結合するか否かを決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記因子が、細胞レセプターまたは下流エフェクターである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１のポリペプチドの発現または活性を調節する因子を同定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを発現する細胞を提供する工程；
（ｂ）該因子と該細胞を接触させる工程；および
（ｃ）該因子が、該ポリペプチドの発現または活性を調節するか否かを決定する工程、
を包含し、それによって、該ペプチドの発現または活性における変化が、該ポリペプチドの発現または活性を調節する因子を示す、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載のポリペプチドの活性を調節するための方法であって、該方法は、請求項１に記載のポリペプチドを発現する細胞サンプルを、該ポリペプチドの活性を調節するのに十分な量で、該ポリペプチドに結合する化合物とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２６】
ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２７】
前記障害が、心筋症およびアテローム硬化症からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路の調節に関連する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体がヒトである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項５に記載の核酸を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３１】
前記障害が、心筋症およびアテローム硬化症からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路の調節に関連する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体がヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＧＰＣＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１５に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記障害が糖尿病である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路の調節に関連する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記被験体がヒトである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１に記載のポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３９】
請求項５に記載の核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項４０】
請求項１５に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項４１】
請求項３８に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項４２】
請求項３９に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項４３】
請求項４０に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項４４】
第１の哺乳動物被験体における請求項１に記載のポリペプチドの変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該ポリペプチドの発現レベルを測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該ポリペプチドの量を、該疾患を有さないことが既知であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該ポリペプチドの量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体における該ポリペプチドの発現レベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項４５】
前記素因が癌に対するものである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
第１の哺乳動物被験体における請求項５に記載の核酸分子の変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該核酸の量を測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該核酸の量を、該疾患を有さないことが既知であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該核酸の量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体における該核酸のレベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項４７】
前記素因が癌に対するものである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、該病理状態を緩和するに十分な量でポリペプチドを該哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはそれらの生物学的に活性なフラグメントと、少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドである、方法。
【請求項４９】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、該病理学的状態を緩和するに十分な量で請求項１５に記載の抗体を該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項５０】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群から選択される嗅覚レセプターポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体と相互作用する候補物質をスクリーニングするための方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３の配列からなる群から選択されるポリペプチド、あるいはそのペプチドフラグメントまたは改変体を提供する工程；
ｂ）候補物質を得る工程；
ｃ）該ポリペプチドを、該候補物質と接触させる工程；ならびに
ｄ）該ポリペプチドと該候補物質との間で形成した複合体を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項５１】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群から選択される嗅覚レセプターポリペプチドと相互作用するリガンド分子をスクリーニングするための方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のアミノ酸配列を含むポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする核酸を含む組換え真核生物宿主細胞を提供する工程；
ｂ）該組換え真核生物宿主細胞の膜抽出物を調製する工程；
ｃ）工程ｂ）で調製した膜抽出物を、選択したリガンド分子と接触させる工程；ならびに
ｄ）セカンドメッセンジャー代謝産物の産生レベルを検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項５２】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３からなる群から選択される嗅覚レセプターポリペプチドと相互作用するリガンド分子をスクリーニングするための方法であって、該方法は、以下：
ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のアミノ酸配列を含むポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする核酸を含むアデノウイルスを提供する工程；
ｂ）嗅覚上皮に該アデノウイルスを感染させる工程；
ｃ）工程ｂ）の嗅覚上皮を、選択したリガンド分子と接触させる工程；ならびに
ｄ）該リガンド分子に対する応答の増加を検出する工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
本発明は、一般に、核酸およびポリペプチドに関する。より詳細には、本発明は、新規なＧタンパク質結合レセプター（ＧＰＣＲ）ポリペプチドをコードする核酸、ならびにこれらの核酸およびポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体および組換え方法に関する。
【０００２】
（発明の要旨）
本発明は、新規ポリペプチドをコードする核酸配列の発見に一部基づく。これらの新規核酸およびポリペプチドは、本明細書中でＧＰＣＲＸ、あるいはＧＰＣＲ１、ＧＰＣＲ２、ＧＰＣＲ３、ＧＰＣＲ４、ＧＰＣＲ５、ＧＰＣＲ６、ＧＰＣＲ７、ＧＰＣＲ８、ＧＰＣＲ９およびＧＰＣＲ１０核酸およびポリペプチドと呼ばれる。これらの核酸およびポリペプチド、ならびにそれらの誘導体、ホモログ、アナログおよびフラグメントは、本明細書中以降、まとめて、「ＧＰＣＲＸ」核酸またはポリペプチド配列と称する。
【０００３】
１つの局面において、本発明は、ＧＰＣＲＸポリペプチドをコードする単離されたＧＰＣＲＸ核酸分子を提供し、これは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６および３８に開示される核酸に対して同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、このＧＰＣＲＸ核酸分子は、ＧＰＣＲＸ核酸配列のタンパク質コード配列を含む核酸分子に相補的な核酸配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。本発明はまた、ＧＰＣＲＸポリペプチド、あるいはそのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体をコードする、単離された核酸を包含する。例えば、この核酸は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７および８３のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードし得る。この核酸は、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６および３８のいずれかの核酸配列を含む、ゲノムＤＮＡフラグメントまたはｃＤＮＡ分子であり得る。
【０００４】
オリゴヌクレオチド（例えば、ＧＰＣＲＸ核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６および３８）の少なくとも６個連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドまたはそのオリゴヌクレオチドの相補体）もまた、本発明に含まれる。
【０００５】
実質的に精製されたＧＰＣＲＸポリペプチド（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７および８３）もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において、このＧＰＣＲＸポリペプチドは、ヒトＧＰＣＲＸポリペプチドのアミノ酸配列に実質的に同一であるアミノ酸配列を含む。
【０００６】
本発明はまた、ＧＰＣＲＸポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体に免疫選択的に結合する抗体を特徴とする。
【０００７】
別の局面において、本発明は、治療有効量または予防有効量の治療剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を包含する。この治療剤は、例えば、ＧＰＣＲＸ核酸、ＧＰＣＲＸポリペプチド、またはＧＰＣＲＸポリペプチドに特異的な抗体であり得る。さらなる局面において、本発明は、１以上の容器に、この薬学的組成物の治療有効量または予防有効量を含む。
【０００８】
さらなる局面において、本発明は、ポリペプチドを産生する方法を包含し、この方法は、ＧＰＣＲＸ核酸を含む細胞を、このＤＮＡによってコードされるＧＰＣＲＸポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養することによる。所望の場合、次いで、このＧＰＣＲＸポリペプチドを回収し得る。
【０００９】
別の局面において、本発明は、サンプル中のＧＰＣＲＸポリペプチドの存在を検出する方法を包含する。この方法において、サンプルを、このポリペプチドに選択的に結合する化合物と、このポリペプチドとこの化合物との間での複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。この複合体は、存在するならば、検出され、それによって、このサンプル中のＧＰＣＲＸポリペプチドを同定する。
【００１０】
本発明はまた、ＧＰＣＲＸの発現に基づいて特定の細胞型または組織型を同定するための方法を包含する。
【００１１】
サンプル中のＧＰＣＲＸ核酸分子の存在を検出する方法もまた本発明に包含され、この方法は、このサンプルに、ＧＰＣＲＸ核酸プローブまたはプライマーを接触させ、そしてこの核酸プローブまたはプライマーが、このサンプル中のＧＰＣＲＸ核酸分子に結合したか否かを検出するによる。
【００１２】
さらなる局面において、本発明は、ＧＰＣＲＸポリペプチドの活性を調節するための方法を提供し、この方法は、このＧＰＣＲＸポリペプチドを含む細胞サンプルに、このＧＰＣＲＸポリペプチドに結合する化合物を、このポリペプチドの活性を調節するに十分な量で接触させることによる。この化合物は、例えば、本明細書中にさらに記載されるような、小分子（例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、糖質、脂質または他の有機分子（炭素含有）または無機分子）であり得る。
【００１３】
例えば、以下を含む障害または症候群を処置または予防するための医薬の製造における治療剤の使用もまた、本発明の範囲内にある：糖尿病、肥満に関連する代謝障害、代謝症候群Ｘ、食欲不振、るいそう障害（慢性疾患、代謝障害、糖尿病、肥満、感染性疾患、食欲不振、癌関連悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害および造血障害に関連する）、または細胞シグナル伝達プロセシングおよび代謝経路調節に関連する他の障害。治療剤は、例えば、ＧＰＣＲＸ核酸、ＧＰＣＲＸポリペプチド、またはＧＰＣＲＸ特異的抗体、あるいはそれらの生物学的に活性な誘導体またはフラグメントであり得る。
【００１４】
例えば、本発明の組成物は、以下に罹患している患者の処置に対する効力を有する：発生疾患、ＭＨＣＩＩおよびＩＩＩ疾患（免疫疾患）、味覚および嗅覚の検出能の障害、バーキットリンパ腫、皮質神経性（ｃｏｒｔｉｃｏｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ）疾患、シグナル伝達経路障害、網膜疾患（光受容性に関連する疾患を含む）、細胞増殖速度障害；細胞形状障害、摂食障害；摂食の制御；過食に起因する潜在的肥満；飢餓（食欲の損失）に起因する潜在的障害、非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ１）、細菌、真菌、原生生物およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、ぜん息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、残尿、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症；オールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、ぜん息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神学的および神経学的障害（不安、精神分裂病、躁鬱、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、低リン酸血症性くる病、常染色体優性（２）先端脳梁（Ａｃｒｏｃａｌｌｏｓａｌ）症候群およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む）ならびに／または他の病態および障害など。
【００１５】
ポリペプチドは、本発明に特異的な抗体を産生するための免疫原として、およびワクチンとして使用され得る。これらはまた、潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングするために使用され得る。例えば、ＧＰＣＲＸをコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＧＰＣＲＸは、それを必要とする被験体に投与された場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、以下に罹患している患者の処置に対する効力を有する：細菌、真菌、原生生物およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含むが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、ぜん息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、残尿、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症；オールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、ぜん息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神学的および神経学的障害（不安、精神分裂病、躁鬱、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群））、ならびに／または他の病態および障害。
【００１６】
本発明はさらに、例えば、以下を含む障害または症候群のモジュレーターについてスクリーニングするための方法を包含する：糖尿病、肥満に関連する代謝障害、代謝症候群Ｘ、食欲不振、るいそう障害（慢性疾患、代謝障害、糖尿病、肥満、感染性疾患、食欲不振、癌関連悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害および造血障害に関連する）、細胞シグナル伝達プロセシングおよび代謝経路調節に関連する他の障害。この方法は、試験化合物にＧＰＣＲＸポリペプチドを接触させる工程、およびこの試験化合物がこのＧＰＣＲＸポリペプチドに結合するか否かを決定する工程を包含する。ＧＰＣＲＸポリペプチドへの試験化合物の結合は、この試験化合物が、前述の障害または症候群に対する活性あるいは前述の障害または症候群に対する潜在性または素因のモジュレーターであることを示す。
【００１７】
また、本発明の範囲には、以下を含む障害もしくは症候群の活性のモジュレーター、または以下を含む障害もしくは症候群の潜伏もしくは素因のモジュレーターについてスクリーニングする方法が含まれる：例えば、糖尿病、肥満に関連する代謝障害、代謝異常症候群Ｘ（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　Ｘ）、食欲不振、慢性病に関連する消耗障害、代謝障害、糖尿病、肥満、感染性疾患、食欲不振、癌に関連した悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン障害、免疫障害、および造血障害、または、細胞のシグナルプロセシングおよび代謝経路調節に関連した他の障害。このスクリーニング方法は、上述の障害または症候群についての危険性の増大した試験動物に対して、試験化合物を投与することによる。試験動物は、ＧＰＣＲＸ核酸によってコードされる組換えポリペプチドを発現する。次いで、ＧＰＣＲＸポリペプチドの発現または活性を、この試験動物において測定し、同様に、コントロール動物（これは、ＧＰＣＲＸポリペプチドを組換え的に発現し、かつ上記の障害についての危険性も上記の症候群についても危険性も増大していない）におけるこのタンパク質の発現または活性を測定する。次いで、試験動物およびコントロール動物の両方におけるＧＰＣＲＸポリペプチドの発現を比較する。コントロール動物と比較した、試験動物におけるＧＰＣＲＸポリペプチドの活性の変化は、この試験化合物が、上記の障害または症候群の潜伏のモジュレーターであることを示す。
【００１８】
なお別の局面では、本発明は、被験体（例えば、ヒト被験体）におけるＧＰＣＲＸポリペプチド、ＧＰＣＲＸ核酸またはその両方のレベルの改変に関連した疾患の存在または素因を決定する方法を含む。この方法は、この被験体由来の試験サンプル中におけるＧＰＣＲＸポリペプチドの量を測定する工程、およびコントロールサンプル中において存在するＧＰＣＲＸポリペプチドの量に対して、この試験サンプル中におけるこのポリペプチドの量を比較する工程、を包含する。コントロールサンプルと比較した場合の試験サンプルにおけるＧＰＣＲＸポリペプチドレベルの変化は、この被験体における疾患の存在または素因を示す。好ましくは、この素因としては、以下の素因が挙げられる：例えば、糖尿病、肥満に関連する代謝障害、代謝異常症候群Ｘ、食欲不振、慢性病に関連する消耗障害、代謝障害、糖尿病、肥満、感染性疾患、食欲不振、癌に関連した悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン障害、免疫障害、および造血障害。また、本発明の新規なポリペプチドの発現レベルは、種々の癌についてスクリーニングするための方法および癌の病期を決定するための方法において使用され得る。
【００１９】
さらなる局面では、本発明は、病理学的状態を緩和または予防するに十分な量において、被験体（例えば、ヒト被験体）にＧＰＣＲＸポリペプチド、ＧＰＣＲＸ核酸、またはＧＰＣＲＸ特異的抗体を投与することによって、哺乳動物における障害に関連した病理学的状態を処置または予防する方法を包含する。好ましい実施形態では、この障害としては、以下が挙げられる：例えば、糖尿病、肥満に関連する代謝障害、代謝異常症候群Ｘ、食欲不振、慢性病に関連する消耗障害、代謝障害、糖尿病、肥満、感染性疾患、食欲不振、癌に関連した悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン障害、免疫障害、および造血障害。
【００２０】
なお別の局面では、本発明は、当該分野において一般的に使用される多数の技術のうちのいずれか１つによって、本発明の細胞性レセプターおよび下流エフェクターを同定する方法において使用され得る。これらの技術としては、ツーハイブリッド系、アフィニティ精製、抗体または他の特異的な相互作用分子を用いる共沈が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
他に規定されない限り、本明細書中において使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載された方法および物質と類似または等価な方法および物質が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および物質を以下に記載する。本明細書中で引用されたすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献が、それらの全体において、本明細書中において参考として援用される。矛盾する場合には、定義を含む本明細書中が制御する。さらに、物質、方法および例は、例示のみであり、限定されることを意図されない。
【００２２】
本発明の他の特徴および利点が、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【００２３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、一部、新規なポリペプチドをコードする新規な核酸配列の発見に基づく。この新規な核酸およびそれによりコードされるポリペプチドを、個々に、ＧＰＣＲ１、ＧＰＣＲ２、ＧＰＣＲ３、ＧＰＣＲ４、ＧＰＣＲ５、ＧＰＣＲ６、ＧＰＣＲ７、ＧＰＣＲ８、ＧＰＣＲ９およびＧＰＣＲ１０という。これらの核酸およびこれらによってコードされるポリペプチドを、本明細書中では集合的に、「ＧＰＣＲＸ」と称する。
【００２４】
本発明の新規なＧＰＣＲＸ核酸は、表１Ａ、１Ｄ、１Ｇ、２Ａ、３Ａ、４Ａ、４Ｃ、４Ｇ、５Ａ、５Ｃ、５Ｇ、６Ａ、７Ａ、８Ａ、９Ａ、１０Ａ、１０Ｃ、および１０Ｆまでのすべてを含んだ中（「表１Ａ〜１０Ｆ」）から配列が提供される核酸、それらのフラグメント、誘導体、アナログまたはホモログを含む。本発明の新規なＧＰＣＲＸタンパク質は、表１Ｂ、１Ｅ、１Ｈ、２Ｂ、３Ｂ、４Ｂ、４Ｈ、５Ｂ、５Ｄ、５Ｈ、６Ｂ、７Ｂ、８Ｂ、９Ｂ、１０Ｂ、１０Ｄ、および１０Ｇまでのすべてを含んだ中（「表１Ｂ〜１０Ｇ」）から配列が提供されるタンパク質フラグメントを含む。個々のＧＰＣＲＸ核酸およびタンパク質を、以下に記載する。細胞のシグナル伝達または代謝経路調節に関連した障害の処置または予防において、これらの核酸およびペプチドを使用する方法は、本発明の範囲内である。
【００２５】
Ｇタンパク質共役型レセプタータンパク質（ＧＰＣＲ）は、多数の種における、Ｇタンパク質共役型レセプターの大きなファミリーとして同定された。これらのレセプターは、多くの神経伝達物質レセプターおよびホルモンレセプターと、７回膜貫通ドメイン構造を共有し、そして種々のシグナルの認識およびＧタンパク質媒介性変換の根底をなすようである。ヒトＧＰＣＲは、一般的に、イントロンを含まず、そして高い配列可変性を示す４つの異なる遺伝子サブファミリーに属する。これらの遺伝子は、優先的に、嗅覚上皮において発現される。例えば、Ｂｅｎ−Ａｒｉｅら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１９９４　３：２２９−２３５；およびＯｎｌｉｎｅ　Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ　Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍａｎ（ＯＭＩＭ）エントリー番号１６４３４２（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｄｉｓｐｏｍｉｍ．ｃｇｉ？）を参照のこと。
嗅覚レセプター（ＯＲ）遺伝子ファミリーは、最大のＧＰＣＲ多重遺伝子ファミリーの１つを構成し、そしてヒトゲノムにおける多くの染色体部位の中に分散されている。Ｒｏｕｑｕｉｅｒら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．７（９）：１３３７−４５（１９９８）；Ｍａｌｎｉｃら、Ｃｅｌｌ　９６：７１３−２３（１９９９）を参照のこと。嗅覚レセプターは、Ｇタンパク質共役型レセプターの中でも最大のファミリーを構成し、推定上１０００までものメンバーを有する。Ｖａｎｄｅｒｈａｅｇｈｅｎら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ　３９（３）：２３９−４６（１９９７）；Ｘｉｅら、Ｍａｍｍ．Ｇｅｎｏｍｅ　１１（１２）：１０７０−７８（２０００）；Ｉｓｓｅｌ−Ｔａｒｖｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９３（２０）：１０８９７−９０２（１９９６）を参照のこと。嗅覚レセプターによる臭気物質の認識は、臭気の識別における最初の段階である。Ｋｒａｕｔｗｕｒｓｔら、Ｃｅｌｌ　９５（７）：９１７−２６（１９９８）；Ｂｕｃｋら、Ｃｅｌｌ　６５（１）：１７５−８７（１９９１）を参照のこと。多くのＯＲは、いくつかの特徴的な配列モチーフを共有し、そして推定リガンド結合部位に対応する中心可変領域を有する。Ｉｓｓｅｌ−Ｔａｒｖｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９３：１０８９７−９０２（１９９６）を参照のこと。
【００２６】
ＧＰＣＲに関連した７回膜を貫通するタンパク質の他の例は、化学受容体である。Ｔｈｏｍａｓら、Ｇｅｎｅ　１７８（１−２）：１−５（１９９６）を参照のこと。化学受容体は、味覚組織、嗅覚組織、および雄性生殖組織において同定された。同上；Ｗａｌｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１６）：９３７８−８７（１９９８）；Ｐａｒｍｅｎｔｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ　３５５（６３５９）：４５３−５５（１９９２）；Ａｓａｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２２１（２）：２４０−４７（１９９６）を参照のこと。
【００２７】
（ＧＰＣＲ１）
ＧＰＣＲ１は、以下に開示される、３つの新規なＧタンパク質共役型レセプター（ＧＰＣＲ）タンパク質のファミリーを含む。開示されたタンパク質には、ＧＰＣＲ１ａ、ＧＰＣＲ１ｂおよびＧＰＣＲ１ｃと命名した。これらのタンパク質は、嗅覚レセプターに関連する。
【００２８】
（ＧＰＣＲ１ａ）
１０１９ヌクレオチドの開示されたＧＰＣＲ１ａ核酸を、表１Ａに示す。開示されたＧＰＣＲ１ａのオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）は、表１Ａにおいてボールドで示された、ヌクレオチド２７〜２９のＡＴＧ開始コドンで始まる。コードされるポリペプチドは、本明細書中では、ＧＰＣＲ１ａまたはｂａ１１３ａ１０＿Ｂとして代替的に言及される。開示されたＧＰＣＲ１ａのＯＲＦは、ヌクレオチド９８４〜９８６のＴＡＧコドンで終結する。表１Ａに示されるように、開始コドンに対して５’側および停止コドンに対して３’側の推定非翻訳領域に下線を付す。そして開始コドンおよび停止コドンはボールド字体である。
【００２９】
【表１】
2004500098.tif 000002
開示された、コードされるＧＰＣＲ１ａタンパク質は、３１９アミノ酸残基を有し、ＧＰＣＲ１ａタンパク質と呼ばれる。ＧＰＣＲ１ａタンパク質を、シグナルペプチドの予測および細胞の局在化について分析した。ＳｉｇｎａｌＰの結果では、ＧＰＣＲ１ａが、配列番号２の４４位と５５位との間（すなわち、アミノ酸配列ＧＮＧ−ＶＬにおけるスラッシュ）において切断されると予測している。ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールはまた、ＧＰＣＲ１が、シグナルペプチドを含み、かつ形質膜に局在化される可能性がある（信頼度０．６０００）ことを予測している。開示されたＧＰＣＲ１ポリペプチド配列は、一文字アミノ酸コードを使用して、表１Ｂに示される。
【００３０】
【表２】
2004500098.tif 000003
ＧＰＣＲ１ａを、ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能にされたＧｅｎｏｍｉｃ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅｓに対して実行したＧタンパク質結合レセプタープローブまたは相同体についての専有配列ファイルのＴｂｌａｓｔＮ分析によって、染色体９上に初めに同定した。専有ソフトウエアプログラム（ＧｅｎＳｃａｎＴＭ）を使用して、核酸配列およびエキソンの選択をさらに予測した。得られる配列を、ＢＬＡＳＴ検索を用いて類似性によってさらに改変した。次いでこの配列を、見かけの不一致について手動で補正し、それによって全長タンパク質をコードする配列を得た。
【００３１】
ＧＰＣＲ１ａ核酸配列の領域は、３．６ｅ−１６０のＥ値を有する、部分的Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ嗅覚レセプターｍＲＮＡ（１７３１ｂｐ）（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号：Ａｊ１３３４２７）をコードする配列に対して同一な１０１６塩基のうち８７３塩基（８５％）を有する。本明細書中における全てのＢＬＡＳＴアラインメントにおいて、「Ｅ値」または「期待値」の値は、確率の数値表示であり、整列された配列は、検索されたデータベース内で、単なる偶然にＢＬＡＳＴ照会配列に対してそれらの類似性を達し得る。例えば、ＧＰＣＲ１ａ　ＢＬＡＳＴ分析から検索された対象（「Ｓｂｊｃｔ」）（例えば、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ嗅覚レセプター）が、Ｑｕｅｒｙ　ＧＰＣＲ１ａ配列と偶然に純粋に一致する確率は、３．６×１０−１６０である。
【００３２】
ＢＬＡＳＴＸ検索を、公共のタンパク質データベースに対して行った。本発明のタンパク質の全長アミノ配列は、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３１９アミノ酸嗅覚レセプタータンパク質（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＣＡＢ５５５９２、Ｅ＝１．８ｅ−１４２）に対して同一な３１６アミノ酸残基のうち２７４残基（８６％）、およびこの３１９アミノ酸嗅覚レセプタータンパク質に対して陽性な３１６残基のうち２９５残基（９３％）を有することを見出した。開示されたＧＰＣＲ１ａタンパク質（配列番号２）は、嗅覚レセプタータンパク質の数と良好な同一性を有する。例えば、ＧＰＣＲ１ａは、３１９アミノ酸Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ嗅覚レセプター３７ａタンパク質に対して同一な２５６／３１６（８１％）アミノ酸、およびＭｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の嗅覚レセプター３７ａに対して同一な３７６／３１６（８７％）アミノ酸を有する（期待値＝ｅ−１２８、ｇｉ｜１１２７６０７５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６２３４６．１｜）。開示されたタンパク質はまた、表１Ｃに開示した嗅覚タンパク質と類似している。
【００３３】
【表３】
2004500098.tif 000004
（ＧＰＣＲ１ｂ）
開示された１０１５ヌクレオチドのＧＰＣＲ１ｂ（ｂａ３２７１３＿Ａとも呼ばれる）核酸を表１Ｄに示す。オープンリーディングフレームを、ヌクレオチド１７〜１９のＡＴＧ開始コドンで開始し、そしてヌクレオチド９７１〜９７３のＴＡＧコドンで終止して同定した。表１Ｄにおいて、開始コドンからの推定非翻訳領域の上流および停止コドンからの下流に下線を付し、そして開始コドンおよび停止コドンは太字である。
【００３４】
【表４】
2004500098.tif 000005
配列データベースの検索において、例えば、核酸配列が、１７３１ｂｐ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ　ＯＲ　３７ｄ偽遺伝子（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号：ＭＭＵ１３３４２７｜ａｃｃ：ＡＪ１３３４２７、Ｅ＝５．５ｅ−１６１）に対して同一な１０１５塩基のうち８６９塩基（８５％）を有することを見出した。核酸が、嗅覚レセプタータンパク質（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号：ＨＳＯＬＦＭＦ｜ａｃｃ：Ｙ１４４４２、Ｅ＝９．５ｅ−４９）について、部分的ヒトｍＲＮＡに対して同一な７９１塩基のうち５０５塩基（６３％）を有することもまた見出した。
【００３５】
３１８アミノ酸残基を有するコードされたタンパク質を、表１Ｅにおいて一文字コードを用いて示す。本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列を、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３１９アミノ残基嗅覚レセプタータンパク質（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＣＡＢ５５５９２、Ｅ＝６．３ｅ−１４４）に対して同一な３１５アミノ酸残基のうち２７４残基（８６％）、およびこの３１９アミノ酸嗅覚レセプタータンパク質に対して陽性な３１５残基のうち２９６残基（９３％）を有することを見出した。
【００３６】
開示されたＧＰＣＲ１ｂタンパク質は、２つの位置においてのみ、開示されたＧＰＣＲ１ａタンパク質と異なる。１４５および１４６の位置において、ＧＰＣＲ１ａはＨＫを有し、一方ＧＰＣＲ１ｂは欠失（Δ）およびＩを有する。
【００３７】
【表５】
2004500098.tif 000006
ＰＳＯＲＴ分析は、ｂａ３２７１３＿Ａタンパク質（ＧＰＣＲ１ｂ）が、０．６０００の確実性を有するか、またはミトコンドリアの内膜、ミトコンドリアの内膜空間もしくはＧｏｌｇｉ体においてより低い確実性を有する、原形質膜に局在下されると予測する。このタンパク質が、残基４４と４５（表１Ｅにおいて斜線で示したＧＮＧ−ＶＬ）との間の大部分の切断部位を有する単一ペプチドを有することもまた予測される。
【００３８】
ＢＬＡＳＴＸ検索を、公共のタンパク質データベースに対して行った。本発明のタンパク質の全長アミノ配列は、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３１９アミノ酸嗅覚レセプタータンパク質（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＣＡＢ５５５９２、Ｅ＝６．３ｅ−１４４）に対して同一な３１５アミノ酸残基のうち２７４残基（８６％）、およびこの３１９アミノ酸嗅覚レセプタータンパク質に対して陽性な３１５残基のうち２９６残基（９３％）を有することを見出した。開示されたＧＰＣＲ１ｂタンパク質（配列番号４）は、表１Ｆに示すように、嗅覚レセプタータンパク質の数と良好な同一性を有する。
【００３９】
【表６】
2004500098.tif 000007
（ＧＰＣＲ１ｃ）
開示された１００３ヌクレオチドのＧＰＣＲ１ｃ（ｂａ１１３ａ１０＿Ｃとも呼ばれる）核酸を、表１Ｇに示す。オープンリーディングフレームを、ヌクレオチド２６〜２８のＡＴＧ開始コドンで開始し、そしてヌクレオチド９７４〜９７６のＴＧＡコドンで終止して同定した。開始コドンに対する５’および停止コドンに対する３’の推定非翻訳領域は、表１Ｇにおいて下線を付し、そして開始コドンおよび停止コドンは太字である。
【００４０】
配列データベースの検索において、例えば、核酸配列が、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ　ＧＰＣＲ　ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号：ＡＪ１３３４２８、Ｅ＝１．９ｅ−１２０）に対して同一な８９９塩基のうち７１９塩基（７９％）を有することを見出した。
【００４１】
【表７】
2004500098.tif 000008
３１６のアミノ酸残基を有する、開示されたＧＰＣＲ１ｃタンパク質を、表１Ｈにおいて一文字コードを用いて示す。ＰＳＯＲＴプログラムを使用する分析は、ｂａ１１３ａ１０＿Ｃタンパク質が、０．６４００の確実性を有する原形質膜中に局在化すると予測する；それはまた、中程度の確実性を有するＧｏｌｇｉ体中にも局在化される。このタンパク質は、大部分の切断部位が、残基４４と４５（表１Ｈにおいて斜線で示したＧＮＧ−ＶＬ）との間にある単一ペプチドを有することもまた予測される。
【００４２】
【表８】
2004500098.tif 000009
ＢＬＡＳＴＸ検索を、公共のタンパク質データベースに対して行った。本発明のタンパク質の全長アミノ配列は、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３１９アミノ酸残基ＯＲ（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＣＡＢ５５５９６、Ｅ＝５．２ｅ−１３８）に対して同一な３１７アミノ酸残基のうち２７０残基（８５％）、およびこの３１９アミノ酸残基ＯＲに対して陽性な３１７残基のうち２８７残基（９０％）を有することを見出した。開示されたＧＰＣＲ１ｂタンパク質（配列番号６）は、表１Ｉに示すように、嗅覚レセプタータンパク質の数と良好な同一性を有する。
【００４３】
【表９】
2004500098.tif 000010
３つのＧＰＣＲ１タンパク質間のアミノ酸相違を、表１Ｊに示す。欠失を、デルタ（Δ）によって標識する。この３つのタンパク質間の相違は、少しの異なる領域に局在化されるためと考えられる。従って、これらのタンパク質は、類似の機能性（例えば、嗅覚またはケモカインレセプター（以下を参照のこと）としての役目を果たす）を有し得る。
【００４４】
【表１０】
2004500098.tif 000011
本発明の開示されたタンパク質と関連したＯＲタンパク質配列とを比較するＣｌｕｓｔａ１Ｗ分析を、表１Ｋで与え、この表で、ＧＰＣＲ１ａは１行目に示し、そしてＧＰＣＲ１ｃは２行目に示す。
【００４５】
ＧＰＣＲ１ａタンパク質のＣｌｕｓｔａ１Ｗアラインメント、および本明細書中のＣｌｕｓｔａ１Ｗ分析において、黒で輪郭をとられているアミノ酸残基は、保存配列領域（つまり、構造的特性または機能的特性を保存するように要求され得る領域）を示す。それに対して、強調されていないアミノ酸残基は、ほとんど保存されず、そしてタンパク質の構造または機能を変えることなしに、非常に広範な範囲まで潜在的に変異され得る。ＧＰＣＲ１ａ、ＧＰＣＲ１ｂまたはＧＰＣＲ１ｃとして特にアドレスを取らない限り、ＧＰＣＲ１に対する任意の参考は、全ての変異体を含むと推定される。本明細書中における任意のＧＰＣＲＸ変異体配列間の残基相違は、「ａ」変異体における残基および「ａ」変異体についての残基位置を示すために描かれる。個々のＧＰＣＲ変異体の間で異なる、全ての以下の配列アラインメントにおけるＧＰＣＲ残基を、本明細書中の全てのアラインメントにおける変異体残基上で、囲みで強調しており、そして（ｏ）記号で標識する。例えば、表１Ｋの１行目に示すタンパク質は、ＧＰＣＲ１ａに対する配列を示し、そしてＧＰＣＲ１ｂが異なる位置を、（ｏ）記号で標識し、そして囲みで強調している。全てのＧＰＣＲ１タンパク質は、嗅覚レセプター（ＯＲ）タンパク質（Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３７ａ、３７ｂ、３７ｅおよび３７ｃ）に対して有意な相同性を有し、そしてファミリー２、サブファミリーＳ由来のヒトＯＲタンパク質メンバー２（表１Ｃ、１Ｆおよび１Ｉもまた参照のこと）に対して有意な相同性を有する。
【００４６】
【表１１】
2004500098.tif 000012
このＧＰＣＲ１タンパク質はまた、表１Ｌ（配列番号４４）のライン３に示されるように、３２１アミノ酸ヒト膜貫通レセプター（ｇｉ│６６９１９３７│ｅｍｂ│ＣＡＢ６５７９７．１│ｂＡ１５０Ａ６．２、新規な７膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）、嗅覚レセプター様タンパク質（ｈｓ６Ｍ１−２１））と、同一性の領域を有する。
【００４７】
【表１２】
2004500098.tif 000013
ＧＰＣＲ１、ならびに全ての他のＧＰＣＲＸタンパク質における同定可能なドメインの存在を、ソフトウェアアルゴリズム（例えば、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＤＯＭＡＩＮ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、およびＰｒｉｎｔｓ）を使用する検索によって決定し、次いでＩｎｔｅｒｐｒｏ番号をＩｎｔｅｒｐｒｏウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／　ｉｎｔｅｒｐｒｏ）を使用するドメイン適合（または数）に横線を引くことによって決定した。例えば、表１Ｍに開示されるようなＧＰＣＲ１ａについてのＤＯＭＡＩＮの結果は、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴ分析を用して、Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴ分析ソフトウェアサンプルは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍ収集において見出されたドメインをサンプリングする。表１Ｍおよび全ての連続したＤＯＭＡＩＮ配列整列において、完全に保存された単一の残基が、黒い影によって示され、そして「強い」半保存残基が灰色の影によって示される。この保存されたアミノ酸残基の「強い」群は、アミノ酸の以下の群のいずれか１つであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ。
【００４８】
表１Ｍは、ＧＰＣＲ１ａに対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメイン記述を列挙する。アミノ酸残基５３〜２３９（配列番号２）の領域は、最もおそらく（Ｅ＝２ｅ−１９）、「７膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）フラグメント」ドメインを含み、これは、本明細書中でＰｆａｍデータベースの７ｔｍ＿１　ｅｎｔｒｙ（ＴＭ７、配列番号４５、完全な配列については、表１Ｎを参照のこと）の残基１２〜１８０と整列されている。このことは、ＧＰＣＲ１配列が、このドメインを含むことが知られている他のタンパク質の特性、ならびに３７７個のアミノ酸の７ｔｍドメイン自体の特性に類似する特性を有することを示す。ＧＰＣＥ１ａはまた、ＴＭ７タンパク質の別の領域に対する同一性を有する。アミノ酸残基２２６〜２９８（配列番号２の）の領域が、ＴＭ７のアミノ酸残基３１０〜３７７と整列する（Ｅ＝３ｅ−４）。ＧＰＣＲ１ｂおよびＧＰＣＲ１ｃはまた、このドメインと整列し；ＧＰＣＲ１ｂの残基５３〜２３８は、ＴＭ７の残基１２〜１８０と整列し（Ｅ＝６ｅ−１９）、そしてＧＰＣＲ１ｂの残基２２５〜２９７は、ＴＭ７の残基３１０〜３７７と整列し（Ｅ＝３ｅ−４）；ＧＰＣＲ１ｃの残基５５〜２３５は、ＴＭ７の残基１４〜１８０と整列し（Ｅ＝２ｅ−１２）、そしてＧＰＣＲ１ｃの残基２２２〜２９４は、ＴＭ７の残基３１０〜３７７と整列する（Ｅ＝２ｅ−４）。
【００４９】
【表１３】
2004500098.tif 000014
この７膜貫通レセプタードメインファミリーの代表的なメンバーは、Ｂｏｓ　ｔａｕｒｕｓ（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ：　ｌｏｃｕｓ　Ｄ２ＤＲ＿ＢＯＶＩＮ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｐ２０２８８；ｇｅｎｅ　ｉｎｄｅｘ　１１８２０５）由来のＤ２ドーパミンである。このＤ２レセプターは、一体化膜タンパク質であり、そしてＧタンパク質結合レセプターのＦａｍｉｌｙ　１に属する。このＤ２レセプターの活性は、アデニルイルシクラーゼを阻害するＧタンパク質によって媒介される。Ｃｈｉｏら、Ｎａｔｕｒｅ　３４３：２５５−２６９（１９９０）。ここの４４４個のアミノ酸タンパク質の残基５１〜４２７は、表１Ｎに示される、代表的なＴＭ７ドメインであると考えられる。
【００５０】
【表１４】
2004500098.tif 000015
この７膜貫通レセプターファミリーは、多くの異なるタンパク質（例えば、セロトニンレセプター、ドーパミンレセプター、ヒスタミンレセプター、アドレナリン作動性レセプター、カンナビノイドレセプター、アンギオテンシンＩＩレセプター、ケモカインレセプター、オピオイドレセプター、Ｇタンパク質結合レセプター（ＧＰＣＲ）タンパク質、嗅覚レセプター（ＯＲ）などを含む）を含む。いくつかのタンパク質およびＰｒｏｔｅｉｎ　Ｄａｔａ　Ｂａｓｅ　Ｉｄｓ／ｇｅｎｅ　ｉｎｄｅｘｅｓは、例えば、以下を含む：ロドプシン（１２９２０９）；５−ヒドロキシトリプタミンレセプター；（１１２８２１、８４８８９６０、１１２８０５、２３１４５４、１１６８２２１、３９８９７１、１１２８０６）；Ｇタンパク質結合レセプター（１１９１３０、５４３８２３、１７３０１４３、１３２２０６、１３７１５９、６１３６１５３、４１６９２６、１１６９８８１、１３６８８２、１３４０７９）；味覚レセプター（５４４４６３、４６２２０８）；ｃ−ｘ−ｃケモカインレセプター（４１６７１８、１２８９９９、４１６８０２、５４８７０３、１３５２３３５）；オプシン（１２９１９３、１２９１９７、１２９２０３）；および聴覚レセプター様タンパク質（１２９０９１、１１７１８９３、４００６７２、５４８４１７）。
【００５１】
ＧＰＣＲＸ　ＲＮＡについての発現情報は、組織供給源（実施例に記載されるような、商品名データベース供給源、公的なＥＳＴ供給源、文献供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源があげられるがこれらに限定されない）を使用して、誘導された。
【００５２】
ＧＰＣＲ１の核酸およびタンパク質は、種々のＧＰＣＲまたは嗅覚レセプター（ＯＲ）関連の症状および／または障害に関係した潜在的な治療適用において有用である。例えば、Ｇタンパク質結合レセプター様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＧタンパク質結合レセプター様タンパク質は、その必要性において被験体に投与される場合、有用であり得る。ＧＰＣＲ１タンパク質、またそのフラグメントをコードする新規な核酸は、診断適用においてさらに有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。これらの物質は、治療方法または診断方法における使用のための、本発明の新規な物質に免疫特異的に結合する抗体の産生においてさらに有用である。このＧＰＣＲ１核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害および／または他の症状に関係する潜在的な診断適用および治療適用において有用である。例えば、本発明の組成物は、以下を患う患者の処置のための効力を有する：心筋症、アテローム性動脈硬化症、高血圧、先天性心疾患、大動脈狭窄症、心房中隔欠損症（ＡＳＤ）、房室（Ａ−Ｖ）管欠陥、動脈管、肺動脈弁狭窄症、大動脈弁下部狭窄症、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、弁疾患、結節硬化症、強皮症、肥満症、移植、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、受胎能、血友病、凝固亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫不全、対宿主性移植片病、気管支ぜん息、ならびに類似の他の疾患、障害、および状態。非限定的な例によって、本発明の組成物は、以下を患う患者の処置のための効力を有する：新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮癌、免疫応答、ＡＩＤＳ、喘息、クローン病、多発性硬化症、およびオールブライト遺伝性骨形成異常症。さらなるＧＰＣＲ関連疾患および障害は、本明細書を通して言及される。
【００５３】
さらに、ＧＰＣＲ１に対するタンパク質類似性情報、発現パターン、およびマップ配置は、ＧＰＣＲ１がＧＰＣＲファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断適用および治療適用において有用であり、そして検索ツールとして有用である。これらは、特定のまたは選択的核酸またはタンパク質診断および／または予防マーカーとして機能すること（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）、ならびに以下のような潜在的な治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、ならびに（ｖ）インビボおよびインビトロで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御武器。
【００５４】
これらの物質は、さらに治療方法または診断方法における使用のための新規なＧＰＣＲ１物質の免疫特異的に結合する抗体の生成において、さらに有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲ抗体」の節に記載されるような、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野で公知の方法に従って、産生され得る。
【００５５】
（ＧＰＣＲ２）
本発明のさらなるＧＰＣＲ様タンパク質（本明細書中でＧＰＣＲ２と称される）は、嗅覚レセプター（「ＯＲ」）様タンパク質である。１２５４ヌクレオチドの新規な核酸（１１６１２５３１＿１、配列番号７）（これは、新規なＧタンパク質結合レセプター様タンパク質をコードする）が、図２Ａに示される。ＧＰＣＲ２についてのＳｅｑＣａｌｌｉｎｇフラグメントは、胎盤由来であり、このことは、それが雌の健康について重要な組織において発現され得ることを示す。
【００５６】
【表１５】
2004500098.tif 000016
ＧＰＣＲ２についてのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が、ヌクレオチド１０５〜１０５８に同定された。配列番号７によってコードされる開示されたＧＰＣＲ２ポリペプチド（配列番号８）は、３１８アミノ酸残基であり、そして表２Ｂに一文字表記を使用して提供される。ＧＰＣＲ２タンパク質は、シグナルペプチド予測および細胞局在化について分析された。ＳｉｇｎａｌＰｅｐの結果は、ＧＰＣＲ２が配列番号８の位置４２と位置４３との間で（すなわち、アミノ酸配列ＩＴＡ−ＮＬにおけるスラッシュにおいて）切断されることを予測する。ＰｓｏｒおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールはまた、ＧＰＣＲ２が、シグナルペプチドを含み、そして原形質膜に局在化するようであることを予測する（０．６４００の確実度）。
【００５７】
【表１６】
2004500098.tif 000017
本発明のタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ由来の２１６アミノ酸残基の嗅覚レセプター（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｏ４３８６９）（Ｅ＝２．２ｅ−６１）に、２１６アミノ酸残基のうち１５１残基が同一（６９％）であり、２１６残基のうち１７７残基が陽性（８１％）であることが見出された。ＧＰＣＲ２（配列番号７）によってコードされるこのタンパク質は、嗅覚、臭気物質、および味覚の化学レセプターに有意な相同性を有し、そしてＧタンパク質結合レセプター（ＧＰＣＲ）のファミリーに属する。この遺伝子ファミリーは、小分子薬物の標的として使用され、そしてＧＰＣＲは、原形質膜に発現され、そしてまた、タンパク質薬様の治療抗体、細胞傷害性抗体、および診断抗体に対する適切な標的である。
【００５８】
表２Ｃに示されるように、ＢＬＡＳＴ分析によって、ＧＰＣＲ２が多数の嗅覚レセプターと有意な相同性を有することが示される。
【００５９】
【表１７】
2004500098.tif 000018
ＣｌｕｓｔａｌＷ分析に使用した配列を含む他のＢＬＡＳＴ結果を、表２Ｄに示す。
【００６０】
【表１８】
2004500098.tif 000019
この情報は、ＧＰＣＲ２を関連タンパク質配列と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析のように、表２Ｅに提供する複数配列整列にグラフで表す（ＧＰＣＲ２を１行目に示す）。
【００６１】
（表２Ｅ．ＣｌｕｓｔａｌＷタンパク質に関する情報）
１）新規ＧＰＣＲ２（配列番号８）
２）ｇｉ｜３９８３３８２｜ｇｂ｜ＡＡＤ１３３１９．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｅ３　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号４６）
３）ｇｉ｜２９２１６２８｜ｇｂ｜ＡＡＣ３９６１１．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号４７）
４）ｇｉ｜１２００７４２３｜ｇｂ｜ＡＡＧ４５１９６．１｜Ｔ２　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号４８）
５）ｇｉ｜１２００７４２４｜ｇｂ｜ＡＡＧ４５１９７．１｜Ｔ３　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号４９）
６）ｇｉ｜１２００７４２５｜ｇｂ｜ＡＡＧ４５１９８．１｜Ｔ４　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号５０）
７）ｇｉ｜１２００７４２２｜ｇｂ｜ＡＡＧ４５１９５．１｜Ｔ１　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号５１）
【００６２】
【表１９】
2004500098.tif 000020
ＧＰＣＲ２に関するＤＯＭＡＩＮの結果は、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いてＣｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、Ｓｍａｒｔ　ａｎｄ　Ｐｆａｍコレクションから見出された。７ｔｍ＿１（７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー））は、ＧＰＣＲ２に対する相同性を有する２つのセグメント有することが示された。アミノ酸残基４３〜２３８の領域は、「７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）フラグメント」ドメイン（配列番号４５、Ｅ＝２ｅ−２２）のアミノ酸２〜１８１と整列し、そしてＧＰＣＲ２のアミノ酸２２６〜２８９は、Ｐｆａｍデータベースの７ｔｍ＿１エントリー（配列番号４５、Ｅ＝０．０８）の残基３１３〜３１７と整列した。これは、ＧＰＣＲ２配列が、このドメインならびに７ｔｍ＿１ドメイン自体を含むことが公知の他のタンパク質に類似した特性を有することを示す。
【００６３】
開示されたＧＰＣＲ２は、雌性の生殖健康に重要な組織において発現され、故に、ＧＰＣＲ２は、例えば、早期分娩、子宮内膜症、およびインビトロ受精の薬物標的としてはたらき得る。嗅覚レセプターに対する相同性は、内因性小分子リガンドがこの遺伝子を調節し、故に内因性リガンドに構造的に類似する薬物がアゴニストおよびアンタゴニストとしてはたらいて、ＧＰＣＲ２の生物学的な効果を調節し得ることを示唆する。
【００６４】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下にさらに記載されるように、ＧＰＣＲ関連病理学的障害および／またはＯＲ関連病理学的障害に関与する潜在的な治療適用に有用である。例えば、嗅覚関連様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そして嗅覚レセプター様タンパク質は、それを必要とする被験体に投与される場合、有用であり得る。非限定の例として、本発明の組成物は、新生物、腺癌、リンパ腫、子宮癌、免疫応答、ＡＩＤＳ、喘息、クローン病、多発性硬化症、およびＡｌｂｒｉｇｈｔ遺伝性骨ジストロフィーを患う被験体の処置に有効性を有する。他のＧＰＣＲ関連疾患および障害が、意図される。
【００６５】
本発明のＧＰＣＲ様タンパク質をコードする新規核酸、またはそのフラグメントは、診断適用にさらに有用であり得、ここで、この核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。これらの材料は、治療方法または診断方法における使用のための本発明の新規物質に免疫特異的に結合する抗体の産生においてさらに有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の節に記載されるように、疎水性チャートからの推測によって、当該分野で公知の方法に従って作製され得る。１つの実施形態において、意図されるＧＰＣＲ３エピトープは、約アミノ酸１０５〜１４０である。これらの新規タンパク質は、種々のヒトの障害の機能分析のためのアッセイ系に使用され得、これは、疾患の病理学の理解および種々の障害のための新規薬物標的の開発を補助する。
【００６６】
（ＧＰＣＲ３）
本発明のさらなるＧＰＣＲ様タンパク質（本明細書においてＧＰＣＲ３と称される）は、嗅覚レセプター（「ＯＲ」）様タンパク質である。この新規核酸は、ＧＰＣＲプローブもしくはホモログに関するＣｕｒａＧｅｎ社配列ファイルを用いたＴｂｌａｓｔＮによって、ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能なＧｅｎｏｍｉｃ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅに対して実行され、第６染色体上に同定された。この核酸はさらに、プログラムＧｅｎＳｃａｎＴＭによって推測された（エキソンの選択を含む）。これらはさらに、ＢＬＡＳＴ検索を用いて類似性によって改変された。次いでこの配列は、明らかな不一致が手動で訂正され、それによって、全長タンパク質をコードする配列を得た。新規嗅覚レセプター様タンパク質をコードする９５７ヌクレオチドの新規核酸（ｂａｌ４５１２２＿Ｂ、配列番号９）を、表３Ａに示す。ヌクレオチド１０〜１２のＡＴＧ開始コドンで開始し、ヌクレオチド９５５〜９５７のＴＧＡコドンで終わるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を同定した。開始コドンの上流および終止コドンの下流である推定非翻訳領域は、表３Ａの下線であり、そして開始コドンおよび終止コドンは太字である。
【００６７】
【表２０】
2004500098.tif 000021
推定スプライス部位は、配列番号９のヌクレオチド１５と１６との間に位置する。１つの実施形態において、ヌクレオチド１〜１５はエキソン１からであり、ヌクレオチド１６〜９５７はエキソン２からである。
【００６８】
開示されたｂａｌ４５１２２＿Ｂ核酸配列は、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ由来のＧＰＣＲ　ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＵＭＯＲＬＭＨＣ｜ａｃｃ：Ｌ３５４７５）に対して９３４塩基のうちの５９２塩基が同一性（６３％）を有する（Ｅ＝２．４ｅ−５１）。
【００６９】
配列番号９によってコードされる開示されたＧＰＣＲ３ポリペプチド（配列番号１０）は、３１５アミノ酸残基であり、表３Ｂに一文字コードを用いて表示される。開示されたＧＰＣＲ３タンパク質の最初の７０アミノ酸を、シグナルペプチド推測および細胞局在に関して分析した。ＳｉｇｎａｌＰ結果は、ＧＰＣＲ３が配列番号１０の４６位と４７位との間（すなわち、アミノ酸配列ＮＳＡ−ＬＶ中のスラッシュ）で切断されることを推測する。ＰｓｏｒｔおよびＨｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールはまた、ＧＰＣＲ３がシグナルペプチドを含み、おそらく原形質膜に局在することを（０．６０００の確実性）推測する。
【００７０】
【表２１】
2004500098.tif 000022
ＢＬＡＳＴＸ検索を、公共のタンパク質データベースに対して実行した。本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列は、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３０９アミノ酸残基のＭＭ１７Ｍ−６、７回膜貫通レセプター（ＯＲ様タンパク質）（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＷＶ０９、配列番号５２）（Ｅ＝１．５ｅ−１２８）に、３０８アミノ酸残基のうち２５３残基が同一（８２％）であり、３０８残基のうち２６４残基が陽性（８５％）であることが見出された。これらのタンパク質の整列を、表３Ｃに示す。
【００７１】
【表２２】
2004500098.tif 000023
開示されたＧＰＣＲ３タンパク質（配列番号１０）は、表３Ｄに示されるように多数の嗅覚レセプタータンパク質と良好な同一性を有する。
【００７２】
【表２３】
2004500098.tif 000024
この情報は、ＧＰＣＲ３を関連タンパク質配列と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析のように、表３Ｅに提供する複数配列整列にグラフで表す（ＧＰＣＲ３を１行目に示す）。
【００７３】
（表３Ｅ．ＣｌｕｓｔａｌＷタンパク質に関する情報）
１）新規ＧＰＣＲ３（配列番号１０）
２）ｇｉ｜５０５１４０４｜ｅｍｂ｜ＣＡＢ４５０１２．１｜５７３Ｋ１．１５（ｍｍ１７Ｍ１−６（新規７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）（嗅覚レセプター様）タンパク質））Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ（配列番号５３）
３）ｇｉ｜１２０５４３５９｜ｅｍｂ｜ＣＡＣ２０４８７．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号５４）
４）ｇｉ｜１２０５４３５５｜ｅｍｂ｜ＣＡＣ２０４８５．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号５５）
５）ｇｉ｜１２２３１０２９｜ｓｐ｜Ｑ１５０６２｜Ｏ２Ｈ３＿ＨＵＭＡＮ　ＯＬＦＡＣＴＯＲＹ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　２Ｈ３（ＯＬＦＡＣＴＯＲＹ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ−ＬＩＫＥ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＦＡＴ１１（配列番号５６）
６）ｇｉ｜９７９８９２０｜ｇｂ｜ＡＡＦ９８７５２．１｜ＡＦ２１１９４０＿１　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号５７）
【００７４】
【表２４】
2004500098.tif 000025
【００７５】
【表２５】
2004500098.tif 000026
ＧＰＣＲ３に関するＤＯＭＡＩＮの結果は、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いてＣｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、Ｓｍａｒｔ　ａｎｄ　Ｐｆａｍコレクションから見出された。７ｔｍ＿１（７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー））は、ＧＰＣＲ３に対する有意な相同性を有する２つのセグメントを有することが示された。アミノ酸残基４０〜２２６の領域は、「７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）フラグメント」ドメイン（配列番号４５、Ｅ＝１ｅ−１５）のアミノ酸１〜１６７と整列し、そしてＧＰＣＲ３のアミノ酸２１９〜２９０は、Ｐｆａｍデータベースの７ｔｍ＿１エントリーの残基３０５〜３７７と整列した（Ｅ＝．００４）。これは、ＧＰＣＲ３配列が、このドメインならびに７ｔｍ＿１ドメイン自体を含むことが公知の他のタンパク質に類似した特性を有することを示す。
【００７６】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下でさらに記載されるように、様々なＧＰＣＲ関連の病理学的障害および／またはＯＲ関連の病理学的障害に関する潜在的な治療的適用において有用である。例えば、嗅覚受容体様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてこの嗅覚受容体様タンパク質は、これを必要とする被験体に投与される場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮癌、免疫応答、ＡＩＤＳ、喘息、クローン病、多発性硬化症、およびオールブライト遺伝性骨形成異常症に罹患している患者の処置のための効力を有する。他のＧＰＣＲ関連疾患および障害が企図される。
【００７７】
本発明のＧＰＣＲ様タンパク質をコードする新規の核酸、またはそのフラグメントは、診断用途においてさらに有用であり得、ここで、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価されるべきである。これらの材料は、治療方法または診断方法において使用するための本発明の新規の物質に免疫特異的に結合する抗体の作製において、さらに有用である。これらの抗体は、当該分野で公知の方法に従って、疎水性チャートによる予測を使用して、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の章に記載されるようにして作製され得る。これらの新規のタンパク質は、様々なヒト障害の機能分析のためのアッセイシステムにおいて使用され得、このタンパク質は、疾患の病理学の理解および様々な障害のための新規の薬物標的の開発の際に役立つ。
【００７８】
（ＧＰＣＲ４）
ＧＰＣＲ４は、以下に開示される３つの核酸のファミリーを含む。この開示される核酸は、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードする。
【００７９】
（ＧＰＣＲ４ａ）
開示されるＧＰＣＲ４ａは、３つの異なる核酸、ＧＰＣＲ４ａ１（ｄｊ４０８ｂ２０＿Ｃ）、ＧＰＣＲ４ａ２（ｄｊ４０８ｂ２０＿Ｃ＿ｄａｌ）、およびＧＰＣＲ４ａ３（ＣＧ５５３５８−０３）によりコードされる。第１の核酸であるｄｊ４０８ｂ２０＿Ｃ（ＧＰＣＲ４ａ１）は、９４７ヌクレオチド長（配列番号１１）である。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド３〜５においてＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド９３９〜９４１においてＴＧＡコドンで終結することが同定された。開始コドンから上流であり、かつ終止コドンから下流の推定非翻訳領域は、表４において下線を引かれており、そして開始コドンおよび終止コドンは、太字である。３１２アミノ酸残基を有するコードされたタンパク質は、表４Ｂにおいて一文字のコードを使用して表される（配列番号１２）。
【００８０】
【表２６】
2004500098.tif 000027
開示される核酸ＧＰＣＲ４ａ１配列は、９３９ｂｐのＨＯＭＯ　ｓａｐｉｅｎｓ嗅覚受容体様タンパク質（ＯＲ２Ｃ１）遺伝子（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号：ＡＦ０９８６６４）（Ｅ＝３．８ｅ−７２）に対して６２４／９３１（６７％）同一の（６２４／９３１の陽性、６７％）塩基を有する。配列データベースの検索において、部分的な一致点がまた同定され、例えば、ヌクレオチド７１９〜９４７のマイナス鎖は、１３２０ｂｐの合成ＧＰＣＲ　ｍＲＮＡ（患者番号：Ｔ７２０５０）（染色体６ｐ２．１のＨＨ領域におけるマーカー２Ｂ８の周辺の配列）に対して２２９／２２９（１００％）同一な塩基を有し、そして同じ領域のＧＰＣＲ４ａ１は、合成ＧＰＣＲ　ｍＲＮＡ（患者番号：Ｔ７２０５０）（これもまた染色体６ｐ２．１のＨＨ領域中のマーカー２Ｂ８の周辺の配列）に対して２２９／２２９（１００％）同一な塩基を有した（両方の場合のＥ値は、９．６ｅ−４７である）。
【００８１】
配列番号１１によってコードされるＧＰＣＲ４Ａポリペプチド（配列番号１２）は、表４Ｂにおいて、一文字のアミノ酸コードを使用して表される。ＧＰＣＲ４ＡのＰｓｏｒｔプロフィールは、この配列がシグナルペプチドを有し、そして０．６０００の確実度を有する形質膜に位置するようであることを示す。ＧＰＣＲ４ａペプチドの最も可能な切断部位は、シグナルＰ結果に基づいて、アミノ酸４１と４２との間、すなわち、アミノ酸配列ＬＬＧ−ＮＭにおけるスラッシュである。
【００８２】
【表２７】
2004500098.tif 000028
上記の推定ＧＰＣＲ４ａ１配列を、この配列を確認するためにエキソン結合プロセスに供した。ＰＣＲプライマーは、順方向プライマーについて使用可能な最も上流の配列、および逆方向プライマーについて利用可能な最も下流の配列において開始することによって設計された。各場合において、独特であるかまたは高度に選択性であるかのいずれかの適切な配列に遭遇するまで、または逆方向プライマーの場合、終止コドンに到達するまで、それぞれの末端からコード配列まで内向きに走査して、この配列を試験した。次いで、このような適切な配列を、広範なｃＤＮＡライブラリに基づいて、ＰＣＲ増幅において順方向プライマーおよび逆方向プライマーとして使用した。得られた単位複製配列を、実施例に記載されるように、ゲル精製し、クローン化し、そして高重複性になるまで配列決定した。
【００８３】
クローン化した配列は、本明細書中でＧＰＣＲ４ａ２と称され、そして表４Ｃで報告される、ＧＰＣＲ４ａ２（配列番号１３）の代替の実施形態として開示される。あるいは、この９４５ヌクレオチド配列（ＧＰＣＲ４ａ２）は、本明細書中でｄｊ４０８ｂ２０＿Ｃ＿ｄａｌと称される。この核酸は、５’ＵＴＲにおいて、ＧＰＣＲ４ａ１より短い２個のヌクレオチドである。しかし、ＣＰＣＲ４ａ２は、同じ３１２アミノ酸タンパク質（ＧＰＣＲ４ａ、配列番号１２）をコードする。
【００８４】
【表２８】
2004500098.tif 000029
開示されるＧＰＣＲ４ａポリペプチドの全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓの新規の７膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー、嗅覚受容体様タンパク質ＨＳ６Ｍ１−１５、ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｙ３Ｎ９　ＤＪ８８Ｊ８．１、Ｅ＝５．０ｅ−１０８）由来の３２０アミノ酸残基に対して１９７／３０５（６４％）同一なアミノ酸残基、およびこれに対して２４２／３０５（７９％）陽性の残基を有する。
【００８５】
ＧＰＣＲ４ａとの整列の最良のヒットのＢＬＡＳＴＰ（非重複複合データベース）分析を表４Ｄに示す。
【００８６】
【表２９】
2004500098.tif 000030
ＢＬＡＳＴＸをまた行って、ＧＰＣＲ４ａと有意な同一性を有するタンパク質を決定した。ＢＬＡＳＴＸの結果を表４Ｅに示す。
【００８７】
【表３０】
2004500098.tif 000031
ＧＰＣＲ４ａ２について見出された可能なＳＮＰを表４Ｆに列挙する。
【００８８】
【表３１】
2004500098.tif 000032
（ＧＰＣＲ４ｂ）
ｄｊ４０８ｂ２０＿Ｃ（ＧＰＣＲ４ａ１）として同定された標的配列を、再び、エキソン結合プロセスに供して、配列を確認した。順方向プライマーについて、利用可能な最も上流の配列、および逆方向プライマーについて利用可能な最も下流の配列で開始することによって、ＰＣＲプライマーを設計した。この配列をコードするｃＤＮＡを、以下のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってクローン化した：
以下を含むヒトｃＤＮＡのプール１上のＡＴＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＴＣＧＡＡＧＧＣＴＴＣＡＴＣＣ（配列番号１４）および
ＣＣＣＴＴＡＣＴＡＴＡＴＴＴＣＴＧＣＡＣＴＣＣＣＣＴＴ（配列番号１５）：
副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全脳、胎児脳、胎児腎臓、胎児肝臓、胎児肺、心臓、腎臓、リンパ腫−ラージ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮。
【００８９】
プライマーを、本発明のＤＮＡ／タンパク質配列の全長またはその一部（１つ以上のエキソン）のインシリコ（ｉｎ　ｓｉｌｉｃｏ）予測に基づいて、または密接に関連したヒト配列または他の種の配列に対する推定エキソンの翻訳相同性によって、設計した。通常、複数のクローンを配列決定してこの配列を駆動し、次いでこれを、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇプロセスと同様に構築した。さらに、配列トレースを、手で評価し、そして適切な場合、補正について編集した。エキソン結合によって駆動されたＰＣＲ産物を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のｐＣＲ２．１ベクターにクローン化した。細菌性クローン１１５８４３：：ＤＪ４０８Ｂ２０＿Ｃ．６９８３２２．Ｄ１０は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のＰＣＲ２．１へクローン化されたオープンリーディングフレーム全体を網羅する挿入物を有する。
【００９０】
各場合において、独特であるかまたは高度に選択性であるかのいずれかの適切な配列に遭遇するまで、または逆方向プライマーの場合、終止コドンに到達するまで、それぞれの末端からコード配列まで内向きに走査して、この配列を試験した。このようなプライマーは、本発明のＤＮＡ／タンパク質配列の全長またはその一部（１つ以上のエキソン）のインシリコ予測に基づいて、または密接に関連したヒト配列または他の種の配列に対する推定エキソンの翻訳相同性によって、設計した。代表的には、実施例に記載されるように、得られた単位複製配列をゲル精製し、クローン化し、そして高重複性になるまで配列決定した。全てのクローンから得られる配列を、それ自体を用い、ＬｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのデータベースの他のフラグメントおよび公開されたＥＳＴを用いて構築した。アセンブリの別の成分とのそれらの同一性の程度が、５０ｂｐにわたって少なくとも９５％である場合、フラグメントおよびＥＳＴは、このアセンブリの成分として含まれた。さらに、この配列トレースを、手で評価し、そして適切な場合は、補正のために編集した。
【００９１】
これらの手順は、ＧＰＣＲ４タンパク質をコードする第３の核酸を提供する。この核酸は、ＧＰＣＲ４ａ３またはＣＧ５５３５８−０３といわれる。この核酸は、９３２ヌクレオチド長（配列番号１６、表４Ｇ）であり、そして、ＧＰＣＲ２ａ１よりも、５’ＵＴＲにおいて、１６ヌクレオチド短い。ヌクレオチド３〜５におけるアミノ酸トレオニンについてコードするＡＣＡコドンで始まり、そして、ヌクレオチド９２４〜９２６におけるＴＡＧコドンで終わる成熟タンパク質のオープンリーディングフレームが、同定された。存在する場合、推定の非翻訳領域は、開始コドンから上流に、そして終結コドンから下流に見出される。１つの沈黙塩基置換が存在する：Ｃ７６７は、ＧＰＣＲ４ａ３中のＴ７５２である。ＧＰＣＲ４ｂ（ＧＰＣＲ４ａ３によってコードされるタンパク質）は、表４Ｈ（配列番号１７）において示されるように、Ｎ末端の５アミノ酸欠失を除いて、ＧＰＣＲ４ａと同一である。
【００９２】
本明細書中に開示されるＧＰＣＲ嗅覚レセプターは、少なくとも以下の組織において発現される：網膜色素上皮の先端の微絨毛、動脈（大動脈）、基底前脳、脳、バーキットリンパ腫細胞株、脳梁、心（房および室）、尾状核、ＣＮＳおよび末梢組織、小脳、大脳皮質、結腸、皮質神経細胞、内皮（冠状動脈および臍静脈）細胞、口蓋上皮、眼、新生児眼、前頭皮質、胎児造血細胞、心臓、海馬、視床下部、白血球、肝臓、胎児肝臓、肺、肺リンパ腫細胞株、胎児リンパ様組織、成人リンパ様組織、ＭＨＣＩＩおよびＩＩＩを発現する組織、神経組織、髄質、視床下核、卵巣、膵臓、下垂体、胎盤、橋、前立腺、被殻、血清、骨格筋、小腸、平滑筋（大動脈中の冠状動脈）、脊髄、脾臓、胃、舌の味覚レセプター細胞、精巣、視床、および胸腺組織。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、公のＥＳＴ供給源、文献供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源を含むがこれらに限定されない、本発明に含まれる配列の組織供給源を決定することによって、引き出される。
【００９３】
配列データベースの研究において、例えば、開示されたＧＰＣＲ４ａ３核酸配列は、ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０９８６６４｜ａｃｃ：ＡＦ０９８６６４．１　ｍＲＮＡ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＯＲ２Ｃ１）ｇｅｎｅ，ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｃｄｓ，Ｅ＝２．１ｅ−７１）に対して、９１３塩基のうち６１４（６７％）が同一である。
【００９４】
【表３２】
2004500098.tif 000033
開示されたＧＰＣＲ４ｂ嗅覚レセプター様タンパク質についての、シグナルＰ、Ｐ種類および／またはヒドロパシープロフィールは、この配列が、この配列がシグナルペプチドを有し、そして、０．６０００の確実性で、原形質膜に局在し得るようであるということを推定する。シグナルＰは、表４ＨにおいてＬＬＧ／ＮＭの間のスラッシュによって示されるように、シグナル配列が、アミノ酸３６と３７との間で、切断部位を有する最初の３６アミノ酸中にコードされることを示す。
【００９５】
【表３３】
2004500098.tif 000034
本発明の開示されたＧＰＣＲ４ｂタンパク質の全長アミノ酸配列は、３２０アミノ酸残基ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ由来のＱ９Ｙ３Ｎ９タンパク質（ＤＪ８８Ｊ８．１、ＮＯＶＥＬ　７　ＴＲＡＮＳＭＥＭＢＲＡＮＥ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ（ＲＨＯＤＯＰＳＩＮ　ＦＡＭＩＬＹ）（ＯＬＦＡＣＴＯＲＹ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　ＬＩＫＥ）ＰＲＯＴＥＩＮ）（ＨＳ６Ｍ１−１５），Ｅ＝１．６ｅ−１０７）に２９９アミノ酸残基の１９５（６５％）が同一であることが見出され、そして２９９アミノ酸残基のうち２３９（７９％）が類似していることが見出された。
【００９６】
以下の位置において、ＧＰＣＲ４ａ３ヌクレオチド配列の１つ以上のコンセンサス位置（Ｃｏｎｓ．Ｐｏｓ．）が、ＳＮＰとして同定されている。「深さ」は、ＳＮＰの領域をカバーするクローンの数を示す。推定対立遺伝子頻度（Ｐｕｔａｔｉｖｅ　Ａｌｌｅｌｅ　Ｆｒｅｑ．）は、ＳＮＰを含む全てのクローンの画分である。示される場合、ダッシュ（「−」）は、塩基が存在しないことを意味する。記号「＞」は、「に変更される」を意味する：Ｃｏｎｓ．Ｐｏｓ．：４２２　深さ：１８　変化：Ｔ＞Ｃ、Ｐｕｔａｔｉｖｅ　Ａｌｌｅｌｅ　Ｆｒｅｑ．：０．３３３：Ｃｏｎｓ．Ｐｏｓ．：５４６　深さ：１５　変化：Ｔ＞Ｃ、Ｐｕｔａｔｉｖｅ　Ａｌｌｅｌｅ　Ｆｒｅｑ．：０．１３３；Ｃｏｎｓ．Ｐｏｓ．：７５３　深さ：８　変化：Ｃ＞Ｔ、Ｐｕｔａｔｉｖｅ　Ａｌｌｅｌｅ　Ｆｒｅｑ．：０．２５０。
【００９７】
ＧＰＣＲ４ａまたはＧＰＣＲ４ｂとして特定にいわれない限り、ＧＰＣＲ４に対する任意の参照は、全ての改変体を含むことが推定される。本明細書中の任意のＧＰＣＲＸ改変体配列の間の残基の差異は、「１つの」改変体における残基および「１つの」改変体に関する残基の位置を示すために記載される。全ての以下の配列において、ＧＰＣＲ４ａタンパク質配列が使用される。
【００９８】
開示されたＧＰＣＲ４タンパク質（配列番号１２）はまた、多数の嗅覚レセプタータンパク質と良好な同一性を有する。ＣｌｕｓｔａｌＷ分析のために使用される同一性情報を表４に示す。
【００９９】
【表３４】
2004500098.tif 000035
この情報は、ＧＰＣＲ４と関連するＯＲ配列とを比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として、表４（ＧＰＣＲ４は、１行目に示される）において与えられる多重配列整列においてグラフによって示される。
【０１００】
【表３５】
2004500098.tif 000036
ＧＰＣＲ４についてのＤＯＭＡＩＮ結果を、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いてＣｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から回収した。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、Ｓｍａｒｔ　ａｎｄ　Ｐｆａｍ回収物において見出された。ＧＰＣＲ４の２つの領域は、上記のように、３７７アミノ酸の７ＴＭに対して同一性を有する。７ｔｍ＿１（上の７つの膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）（配列番号４５））は、ＧＲＣＲ４に相同性を有することが示された。ＧＰＣＲ４の残基４１〜１５９と整列した７ＴＭの残基１−１２０（Ｅ＝７ｅ−２２、表２Ｋにおいて示される）およびＧＰＣＲ４の残基２２４〜２９０は、７ＴＭの残基３１０〜３７７（Ｅ＝２ｅ−０４）と同一性を有する。
【０１０１】
【表３６】
2004500098.tif 000037
ＧＰＣＲ４の核酸およびタンパク質は、以下に記載される、種々のＧＰＣＲ関連病理学的障害および／またはＯＲ関連病理学的障害に関連する潜在的な治療適用において有用である。例えば、嗅覚レセプター様タンパク質をコードする、ｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そして嗅覚レセプター様タンパク質は、それを必要とする被験体に投与される場合に、有用であり得る。本明細書において開示されるタンパク質類似性情報、発現パターン、および嗅覚レセプター様タンパク質および核酸は、嗅覚レセプターファミリーの重要な構造および／または病理学的機能特性を有し得る。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断および治療適用において、ならびにリサーチツールとして有用である。これらは、特異的もしくは選択的な、核酸もしくはタンパク質診断および／または予後標識として役立ち、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価され、そして以下のような潜在的な治療適用に役立つ：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）小分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療学的抗体、診断的抗体、薬物標識／細胞障害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療に有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）、（ｖ）インビトロおよびインビボにおいて組織再生を促進する組成物、ならびに（ｖｉ）生物学的防御剤。
【０１０２】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または症状に関連している。例えば、本発明の組成物は、以下を患った患者の処置に対して有効性を有する：発育障害、ＭＨＣ　ＩＩおよびＭＨＣ　ＩＩＩ疾患（免役疾患）、味覚および嗅覚検知障害、バーキットリンパ腫、コルチコ神経性疾患（ｃｏｒｔｉｃｏｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ　ｄｉｓｅａｓｅ）、シグナル伝達経路障害、光受容体に関連する疾患を含む網膜疾患、細胞増殖速度障害；細胞形状障害、栄養補給障害；栄養補給の制御；過食に起因する潜在的な肥満；飢餓（食欲の欠如）に起因する潜在的な障害、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ１）、細菌感染、真菌感染、原性動物感染、ウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって発生する特定の感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫、前立腺癌；子宮癌が挙げられるが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心疾患、低血圧症、高血圧症、尿停滞、骨粗しょう症、クローン病；多発性漿膜炎；およびオールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性障害および神経性障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）低ホスファターゼ血症くる病、常染色体優性（２）末端脳梁および運動異常（例えば、ハンティングトン病もしくはＧｉｌｌｅｓ　ｄｅ　ｌａ　Ｔｏｕｒｅｔｔｅ症候群）、ならびに／あるいは他の症状および障害など。このポリペプチドは、免役原として使用され得、本発明に特異的な抗体を、ワクチンとして産生し得る。これらをまた使用して、強力なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物をスクリーニングし得る。例えば、ＯＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＯＲ様タンパク質は、それを必要とする被験体に対して投与される場合に有用であり得る。実施例を限定するのではなく、本発明の組成物は、以下を患った患者の治療に効果を有する：細菌感染、真菌感染、原性動物感染、ウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって発生する特定の感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫、前立腺癌；子宮癌が挙げられるが、これらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心疾患、低血圧症、高血圧症、尿停滞、骨粗しょう症、クローン病；多発性漿膜炎；およびオールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性障害および神経性障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞、ならびに運動異常（例えば、ハンティングトン病もしくはＧｉｌｌｅｓ　ｄｅ　ｌａ　Ｔｏｕｒｅｔｔｅ症候群）。他のＧＰＣＲ−４疾患および障害が意図される。
【０１０３】
ＯＲ様タンパク質をコードする新規な核酸、および本発明のＯＲ様タンパク質、またはそれらのフラグメントは、診断適用において、さらに有用であり、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。これらの材料は、治療方法または診断方法、および他の疾患、障害および症状などにおける使用のために、本発明の新規な物質に対して免役特異的に結合する抗体の産生において、さらに有用であり得る。これらの材料は、治療または診断方法での使用のために、本発明の新規な物質に免役特異的に結合する抗体の産生においてさらに有用である。これらの抗体は、以下の節の「抗−ＧＰＣＲＸ抗体」において記載されるように、疎水性チャートからの予測値を使用して、当該分野で公知の方法に従って産生され得る。１実施形態において、意図されるＧＰＣＲ４エピトープは、約６５から８５のアミノ酸由来である。別の局面において、ＧＰＣＲ４エピトープは、約１１５から１３０のアミノ酸由来である。さらなる実施形態において、ＧＰＣＲ４は、１５５から１７５、２１５から２４０、２５０〜２７５および２８０から３１０のアミノ酸由来である。これらの新規なタンパク質をまた使用して、機能分析に関するアッセイシステムを開発し得る。
【０１０４】
（ＧＰＣＲ５）
ＧＰＣＲ５は、以下に記載されるような、３種の類似の核酸および３種の類似のタンパク質のファミリーを含む。開示された核酸は、ＧＰＣＲ、ＯＲ様タンパク質をコードする。
【０１０５】
（ＧＰＣＲ５ａ）
開示された新規の、１００３ヌクレオチドのＧＰＣＲ５ａ核酸（これはまた、１１５−ａ−１２−Ａとも呼ばれる）は、表５Ａに示される。ＯＲＦは、ヌクレオチド６〜８のＡＴＧ開始コドンで開始し、そしてヌクレオチド９９９〜１００１のＴＡＡコドンで終了する。推定非翻訳領域の、開始コドンの上流および末端コドンの下流を、表５Ａにおいて下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンは、太字である。
【０１０６】
【表３７】
2004500098.tif 000038
配列番号１８によってコードされたＧＰＣＲ５ａタンパク質は、３３１個のアミノ酸残基を有し、そして表５Ｂに１文字のコードを使用して示されている。ＧＰＣＲ５ａのＰｓｏｒｔプロフィールにより、この配列が単一のペプチドを有し、そして０．０６００の確実度で原形質膜において局在化され、これはまた、Ｇｏｌｉｇｉ体に局在化されると推定する。最も起こりそうなペプチドの切断部位は、アミノ酸の５４と５５との間、すなわち、ＳｉｇｎａｌＰ結果に基づくアミノ酸配列ＶＲＡＤＴ（表５Ｂにおいてスラッシュで示してある）である。
【０１０７】
【表３８】
2004500098.tif 000039
ＧＰＣＲ５の開示された核酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ　ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ嗅覚レセプタータンパク質ｍＲＮＡ（９３６ｂｐ）（遺伝子バンク：ＲＡＴＯＬＦＰＲＯＤ｜ａｃｃ：Ｍ６４３７８）（Ｅ＝１．１ｅ−４５）と同一な９３４塩基のうち６０４（６４％）を有し、そしてそれに陽性な９３４塩基のうち６０４（６４％）を有する。
【０１０８】
完全ＧＰＣＲ５アミノ酸配列は、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の３１３アミノ酸残基嗅覚レセプター（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｚ１Ｖ０）（Ｅ＝２．６ｅ−７４）と同一な３０４アミノ酸残基のうち１４９（４９％）を有し、そしてそれに陽性な３０４残基のうち２０１（６６％）を有する。
【０１０９】
（ＧＰＣＲ５ｂ）
ＧＰＣＲ５ａ（１１５−ａ−１２−Ａ）を、エキソン連結プロセスに供し、おの配列を確認する。ＰＣＲプライマーを、前方向プライマーに対して最も上流の利用可能な配列、および逆方向プライマーに対して最も下流の配列で開始することによって設計した。各末端からコード配列の方へ内向きに、独特である適切な配列または高度に選択された適切な配列のいずれかが遭遇するまで、または逆方向プライマーの場合において、終止コドンが到達するまで、各場合において配列を試験した。次いで、このような適切な配列を、広範なｃＤＮＡライブラリーに基づくＰＣＲ増幅において、前方向プライマーおよび逆方向プライマーとして使用した。得られたアンプリコンを、ゲル精製し、クローン化し、そして高度な重複性まで配列決定し、ＧＰＣＲ５ｂを提供し、これをまた、１１５−ａ−１２−Ｂと言及する。
【０１１０】
ＧＰＣＲ５ｂのヌクレオチド配列（１００４ｂｐ、配列番号２０）は、表５Ｃに存在する。このヌクレオチド配列は、Ａ５とＡ６との間にＴを付加すること、および６個のヌクレオチド（ＧＰＣＲ５ａに対して番号付けされている）（Ｃ１３１＞Ｔ；Ｔ１８６＞Ｃ；Ｇ４７２＞Ａ；Ｔ５７９＞Ａ；Ａ６８７＞Ｔ；Ｃ７９９＞Ｔ）の変化により、ＧＰＣＲ５ａとは異なる。
【０１１１】
【表３９】
2004500098.tif 000040
このコードされたＧＰＣＲ５ｂタンパク質を、表５Ｄに示す。この開示したタンパク質は、３３１アミノ酸長であり、そして配列番号２１と命名する。ＧＰＣＲ５ｂは、３個のアミノ酸残基（Ｔ４２＞Ｉ；Ｖ１５１＞Ｉ；Ｐ２６５＞Ｓ）でＧＰＣＲ５ａとは異なる。ＧＰＣＲ５ａと同様に、ＧＰＣＲ５ｂのＰｓｏｒｔプロフィールにより、この配列が単一のペプチドを有し、そして０．６００の確実度で原形質膜において局在化されるようであることを予測する。ペプチドの最も起こりそうな切断部位は、アミノ酸５４と５５との間、すなわちＳｉｇｎａｌＰ結果に基づくアミノ酸配列ＶＲＡ−ＤＴ（表５Ｄにおいてスラッシュで示してある）である。
【０１１２】
【表４０】
2004500098.tif 000041
ＧＰＣＲ５ｂを有するアライメントについての最高のヒットのＢＬＡＳＴＰ（非冗長複合体データベース）分析は、表５Ｅに列挙される。
【０１１３】
【表４１】
2004500098.tif 000042
ＧＰＣＲ４ａと有意な同一性を有するタンパク質を決定するためにＢＬＡＳＴＸも行った。
【０１１４】
【表４２】
2004500098.tif 000043
（ＧＰＣＲ５ｃ）
別のヌクレオチド配列は、ＧＰＣＲ５ａ（１１５−ａ−１２Ａ）がこの配列を確認するためにエキソン連結プロセスに供される場合、生じた。ＰＣＲプライマーを、順方向プライマーについて利用可能な最も上流の配列で、そして逆方向プライマーについて利用可能な最も下流の配列で開始することによって設計した。それぞれの場合において、独特であるかまたは高く選択的であるかのいずれかである適切な配列に遭遇したか、逆方向プライマーの場合において、停止コドンに達するまで、それぞれの末端からコード配列に向かって内側に、ウォーキングしてこの配列を試験した。次いで、このような適切な配列を、幅広いｃＤＮＡライブラリーに基づいて、ＰＣＲ増幅における順方向プライマーおよび逆方向プライマーとして使用した。得られたアンプリコンをゲル精製し、クローンし、そして高い冗長性に対して配列決定して、以下に報告された配列（登録番号１１５＿Ａ＿１２＿Ａ＿ｄａ１、またはＧＰＣＲ５ｃとして示される）を提供した。
【０１１５】
クローンのＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ　Ｆｒａｇｍｅｎｔを提供するヒト組織は、Ｐｏｏｌ　Ｏｎｅ：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児脳、胎児腎臓、胎児肝臓、胎児肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮を含む。クローンの組織源は、ＲＡＣＥ（ａｓｍ：１２６６０３３８４）である。
【０１１６】
ＧＰＣＲ５ｃ（１００５ｂｐ、配列番号２２）についてのヌクレオチド配列は、表５Ｇに提示される。ＧＰＣＲ５ｃヌクレオチド配列は、５’末端においてエキストラＴ、３’末端においてＡ、６ヌクレオチドの変化（（ＧＰＣＲ５ａに関する数）Ｔ１２３＞Ｃ；Ｃ１３１＞Ｔ；Ｔ１８６＞Ｃ；Ｇ４７２＞Ａ；Ｔ５７９＞Ａ；Ａ６８７＞Ｔ）を有することによってＧＰＣＲ５ａと異なる。
【０１１７】
【表４３】
2004500098.tif 000044
ＧＰＣＲ５ｃのコード領域は、ヌクレオチド７〜１０００であり、表５Ｈに提示されるようなコードされたＧＰＣＲ５ｃタンパク質を与える。開示されたタンパク質は、３３１個のアミノ酸の長さであり、配列番号２３によって示される。ＧＰＣＲ５ｃは、３アミノ酸残基（Ｌ３９＞Ｐ；Ｔ４２＞Ｉ；およびＶ１５１＞Ｉ）、ＧＰＣＲ５ａと異なる。ＧＰＣＲ５ａのように、ＧＰＣＲ５ｃについてのＰｓｏｒｔプロフィールは、この配列が、シグナルペプチドを有し、そして０．６０００の確実度を有して原形質膜に局在化するようであること示す。ペプチドについての最も可能性のある切断部位は、アミノ酸５４と５５との間（すなわち、ＳｉｇｎａｌＰの結果の基づくアミノ酸配列ＶＲＡ−ＤＴにおけるスラッシュ（表５Ｈにおいてスラッシュで示される））である。
【０１１８】
【表４４】
2004500098.tif 000045
開示されたＧＰＣＲ５タンパク質（配列番号１９）は、多数の嗅覚レセプタータンパク質と良好な同一性を有する。ＣｌｕｓｔａｌＷ分析について使用される同一性の情報は、表５Ｉに提示される。ＧＰＣＲ５ａ、ＧＰＣＲ５ｂまたはＧＰＣＲ５ｃとして具体的には取り組まないが、ＧＰＣＲ５に対する任意の言及は、全ての改変体を含むとみなされる。本明細書中において任意のＧＰＣＲ５Ｘ改変体配列間の残基の差異は、「ａ」改変体における残基および「ａ」改変体に関する残基位置を示すために書かれる。個々のＧＰＣＲ改変体間で異なる全ての以下の配列のアライメントにおけるＧＰＣＲ残基は、囲み内で強調表示され、そして本明細書中において改変体残基の上に（ｏ）シンボルでマークされる。例えば、表５Ｊのライン１に示されるタンパク質は、ＧＰＣＲ５ａについての配列を示し、そしてＧＰＣＲ５ｂまたはＧＰＣＲ５ｃが異なる位置は、（ｏ）シンボルでマークされ、そして囲みとともに強調表示される。全てのＧＰＣＲ５タンパク質が、嗅覚レセプター（ＯＲ）タンパク質に対して有意な相同性を有する。
【０１１９】
【表４５】
2004500098.tif 000046
この情報は、ＧＰＣＲ５を関連のタンパク質配列と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として表５Ｊに与えられる複数配列アライメントにおいてグラフィカルに提示される（ＧＰＣＲ５がライン１に示される）。
【０１２０】
（表５Ｊ　ＣｌｕｓｔａｌＷタンパク質のついての情報）
【０１２１】
【表４６】
2004500098.tif 000047
ＧＰＣＲ５についてのＤＯＭＡＩＮの結果は、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いてＣｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から集めた。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍコレクションにおいて見出された。この結果は、統計およびドメイン記載とともに表５Ｋに列挙される。
【０１２２】
７ｔｍ＿１（配列番号４５）の残基１〜１１５は、表５ＫにおいてＧＰＣＲ５　４３−１５６（Ｅ＝１ｅ−２０）とともに整列される。７ｔｍ＿１の残基３１４〜３７７はまた、ＧＰＣＲ５の残基２３１〜２９３（Ｅ＝２ｅ−０５）と同一性を有する。
【０１２３】
【表４７】
2004500098.tif 000048
ＧＰＣＲ５の核酸およびタンパク質は、さらに以下に記載されるような、種々のＧＰＣＲ関連病理学的障害および／またはＯＲ関連病理学的障害に関連する潜在的な治療適用において有用である。例えば、タンパク質のようなＧＰＣＲ（または嗅覚レセプター）をコードするｃＤＮＡは、遺伝子療法において有用であり得、そしてレセプター様タンパク質は、必要な患者に投与される場合、有用であり得る。本発明の核酸およびタンパク質はまた、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染のような感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（限定しないが、新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含む）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症の処置；ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性および神経学的障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、痴呆、重症精神遅滞および運動障害（例えば、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む）ならびに／あるいは他の病理学および障害の処置に使用されるおける潜在的治療的適用において有用である。他のＧＰＣＲ関連疾患および障害が意図される。
【０１２４】
このポリペプチドは、本発明に特異的な抗体を産生するための免疫源として、およびワクチンとして使用され得る。これらはまた、潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングするために使用され得る。例えば、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子療法において有用であり得、そしてＧＰＣＲ様タンパク質は、必要な被験体に投与される場合、有用であり得る。非制限的な例として、本発明の組成物は、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染のような感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（限定しないが、新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌を含む）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症を罹患する患者の処置；ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性および神経学的障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、痴呆、重症精神遅滞および運動障害（例えば、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）を含む）ならびに／あるいは他の病理学および障害の処置について効力を有する。本発明のＧＰＣＲタンパク質、およびＧＰＣＲ様タンパク質をコードする新規な核酸またはそのフラグメントは、さらに診断的適用において有用であり得、ここで、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。これらの物質はさらに、治療的方法および診断的方法における使用のために本発明の新規な物質に免疫特異的に結合する抗体の生成において有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」のセクションに記載されるように、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野において公知の方法に従って生成され得る。この新規なタンパク質はまた、種々のヒトの障害の機能的分析について強力なアッセイ系の開発（この疾患の病理の理解に役立つ）において、および種々の障害についての新規な薬物標的の開発において有用性を有する。
【０１２５】
（ＧＰＣＲ６）
９４８ヌクレオチドの開示された新規なＧＰＣＲ６核酸（６−Ｌ−１９−Ｃと呼ばれる）は、表６Ａに示される。オープンリーディングは、ヌクレオチド７〜９においてＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド９４０〜９４１においてＴＡＧで終わる。開始コドンから上流および停止コドンから下流の推定の非翻訳領域は、表６Ａにおいて下線を引かれ、そして開始コドンおよび停止コドンは、太字である。
【０１２６】
【表４８】
2004500098.tif 000049
開示された核酸配列は、Ｇ．ｇａｌｌｕｓ　ｃｏｒ４嗅覚レセプター４ＤＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＧＧＣＯＲ４ＧＥＮ｜ａｃｃ：Ｘ９４７４４）に対する同一性９１５塩基のうち６１７（６７％）を有する（Ｅ値＝８．７ｅ−６５）。
【０１２７】
配列番号２４によってコードされるＧＰＣＲ６タンパク質は、３１８アミノ酸残基を有し、そして表６（配列番号２５）において１文字コードを使用して提示される。ＧＰＣＲ６についてのＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールは、ＧＰＣＲ６がシグナルペプチドを有し、そして０．６０００の確実度で、原形質膜に局在化するようである。ＳｉｇｎａｌＰは、シグナル配列が最初の４１アミノ酸でコードされる（すなわち、アミノ酸４０と４１との間で配列ＴＬＬ−ＡＮにおけるスラッシュで切断部位を有する）これは、このタイプの膜タンパク質で代表的である。
【０１２８】
【表４９】
2004500098.tif 000050
本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列は、３１４アミノ酸残基ヒト嗅覚レセプター様タンパク質ＯＬＦ１（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｑ１３６０６）（Ｅ値＝５．８ｅ−８６）に対して、３０７アミノ酸残基のうち同一な１６６アミノ酸残基（５４％）、および３０７アミノ酸残基のうち陽性の２１７アミノ酸残基（７０％）を有することが見出された。
【０１２９】
以前に同定されたＧＰＣＲ６標的配列（６＿Ｌ＿１９＿Ｃ）を、この配列を確認するためにエキソン連結プロセスに供した。ＰＣＲプライマーを、順方向プライマーについて利用可能な最も上流の配列で、そして逆方向プライマーについて利用可能な最も下流の配列で開始することによって設計した。それぞれの場合において、独特であるかまたは高く選択的であるかのいずれかである適切な配列に遭遇したか、逆方向プライマーの場合において、停止コドンに達するまで、それぞれの末端からコード配列に向かって内側に、ウォーキングしてこの配列を試験した。
【０１３０】
この配列をコードするｃＤＮＡを、以下のプライマー：ＣＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＧＴＴＣＡＴＴＣＴＣＣＴＴ（配列番号２６）およびＴＣＴＴＣＣＣＴＡＧＧＡＧＴＧＡＡＴＴＴＴＧＧＡＧＣ（該列番号２７）を使用して、以下のヒトｃＤＮＡのプール（副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児脳、胎児腎臓、胎児肝臓、胎児肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮）でポリメラーゼ連鎖反応によってクローン化した。プライマーを、本発明のＤＮＡ／タンパク質配列の全長または部分（１つ以上のエキソン）についてのシリコ（ｓｉｌｉｃｏ）予測に基づいて、あるいは密接に関連するヒト配列または他の種由来の配列に対する推定されるエキソンの翻訳された相同性によって設計した。通常、複数のクローンは、この配列を誘導するために配列決定され、次いで、この配列は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇプロセスと同様に組み立てられ得た。さらに、配列のトレースを、手動で評価し、そして適切であれば訂正のために編集した。
【０１３１】
エキソン結合によって誘導されたＰＣＲ産物を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのｐＣＲ２．１ベクターにクローニングした。細菌クローン５５４４６：：６＿Ｌ＿１９＿Ｃ．６９８０１８．Ｍ１は、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのｐＣＲ２．１ベクターにクローニングしたオープンリーディングフレーム全体をカバーするインサートを有する。
【０１３２】
通常、得られたアンプリコンをゲル精製し、クローニングし、そして高い重複性まで配列決定した。全てのクローンから得られた配列を、互いに、ＣｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのデータベースにおける他のフラグメントと、および公共のＥＳＴと構成した。構築のための別の成分とのフラグメントおよびＥＳＴの同一性の程度が５０ｂｐにわたって少なくとも９５％である場合には、これらのフラグメントおよびＥＳＴを、構築のための成分として含めた。さらに、配列の残りを手動で評価し、そして適切である場合には、補正のために編集した。これらの手順は、以下に報告する配列を提供し、これは、登録番号ＣＧ５０３８３＿０１と指定され、これは、アミノ酸もヌクレオチド配列も、ＧＰＣＲ６（６＿Ｌ＿１９＿Ｃ）と異ならない。
【０１３３】
開示されるＧＰＣＲ６−Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ様タンパク質は、少なくとも以下の組織において発現される：網膜色素上皮の尖微小柔毛、動脈（大動脈）、基底前脳、脳、バーキットリンパ腫細胞株、脳染、心臓（房および室）、尾状核、ＣＮＳおよび末梢組織、小脳、小脳皮質、結腸、皮質性神経原性細胞、内皮（冠状動脈および臍静脈）細胞、血小板上皮、眼、新生児の眼、前頭皮質、胎児造血細胞、心臓、海馬、視床下部、白血球、肝臓、胎児肝臓、肺、肺リンパ腫細胞株、胎児リンパ組織、成人リンパ組織、ＭＨＣ　ＩＩおよびＩＩＩを発現する組織、神経組織、髄質、視床下核、卵巣、膵臓、垂下体、胎盤、橋、前立腺、被殻、血清、骨格筋、小腸、平滑筋（大動脈における冠状動脈）脊髄、脾臓、胃、舌の味覚受容細胞、精巣、視床、および胸腺組織。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ　ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない）を決定することによって誘導された。
【０１３４】
開示されるＧＰＣＲ６タンパク質（配列番号２５）は、多数の嗅覚受容タンパク質との良好な同一性を有する。ＣｌｕｓｔａｌＷ分析のために使用した同一性情報を、表６Ｃに与える。ＧＰＣＲ６タンパク質は、嗅覚受容（ＯＲ）タンパク質に対して有意な同一性を有する：
【０１３５】
【表５０】
2004500098.tif 000051
この情報を、関連するタンパク質配列とＧＰＣＲ６とを比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として、表６Ｄに与えられる複数配列アライメントとして、図式的に提供する（ＧＰＣＲ６が１行目に示されている）。
【０１３６】
【表５１】
2004500098.tif 000052
ＧＰＣＲ６における同定可能なドメインの存在を、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓのようなアルゴリズムを使用する検索によって決定し、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を使用してドメインのマッチ（または数）を交差させることによって、Ｉｎｔｅｒｐｒｏ数を決定した。
【０１３７】
ＧＰＣＲ６についてのＤＯＭＡＩＮ結果を、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴでのＣｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍ収集において見出されたドメインをサンプリングする。これらの結果を、統計およびドメインの説明とともに表６Ｅに列挙する。これらの結果は、このタンパク質が７ｔｍ＿１（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義されるような）を、残基４２〜２０３（これは、７ＴＭドメインの残基２〜１５８と整列する）において含むことを示す。このことは、ＧＰＣＲ６の配列がこの／これらのドメインを含むことが既知である他のタンパク質と類似の特性、およびこれらのドメインの特性と類似の特性を有することを示す。
【０１３８】
【表５２】
2004500098.tif 000053
本明細書中に開示されるＧＰＣＲ６タンパク質と核酸とに関する類似性情報は、ＧＰＣＲ６が聴覚レセプターファミリーおよびＧＰＣＲファミリーに特徴的な重要な構造的および／または生理的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断用途および治療用途において、ならびに研究ツールとして、有用である。これらとしては、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される、特異的または選択的な核酸またはタンパク質の診断マーカーおよび／または予後マーカーとして働くこと、ならびに以下のような潜在的な治療用途が挙げられる：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療的、診断的、薬物標的化／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療において有用な核酸（遺伝子送達／遺伝子切除）および（ｖ）インビトロおよびインビボでの組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御兵器。ＧＰＣＲ６をコードする新規核酸、および本発明のＧＰＣＲ６タンパク質またはそのフラグメントは、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価される診断用途において、さらに有用であり得る。
【０１３９】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下に記載する種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関連する潜在的な診断および治療の用途において、有用である。例えば、本発明の組成物は、以下を罹患する患者の処置：発生疾患、ＭＨＣＩＩおよびＩＩＩ疾患（免疫疾患）、味覚および芳香の検出能の障害、バーキットリンパ腫、コルチコ神経原性疾患、シグナル伝達経路障害、網膜疾患（光受容、細胞増殖速度障害を伴うものを含む）；細胞形状障害、栄養補給障害；栄養補給の制御；過食に起因する潜在的肥満；飢餓に起因する潜在的障害（欲求の欠乏）、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ１）、細菌感染、真菌感染、原虫感染、およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿停留、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症；ならびに以下の処置：オールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性および神経学的な障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞を含む）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、低リン酸塩性佝僂病、常染色体優性（２）四肢脳梁（ａｃｒｏｃａｌｌｏｓａｌ）症候群およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）ならびに／または他の病理および障害を含む）などのために効力を有する。
【０１４０】
ポリペプチドを免疫原として使用して、本発明に特異的な抗体を産生し得る。そしてワクチンとして使用し得る。これらはまた、潜在的なアゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングするために、使用され得る。例えば、ＯＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＯＲ様タンパク質は、投与の必要がある被験体に投与される場合に、有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、細菌感染、真菌感染、原虫感染、およびウイルス感染（特に、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿停留、骨粗しょう症、クローン病；多発性硬化症；ならびに以下の処置：オールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性および神経学的な障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重篤な精神遅滞を含む）、およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）ならびに／または他の病理および障害を罹患する患者の処置のために、効力を有する。
【０１４１】
ＯＲ様タンパク質をコードする新規核酸、および本発明のＯＲ様タンパク質またはそのフラグメントは、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価される診断用途において、さらに有用であり得る。
【０１４２】
これらの物質は、治療方法または診断方法において使用するための新規なＧＰＣＲ６基質に免疫特異的に結合する抗体の生成において、さらに有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の節において記載されるような、疎水性チャートからの予測を使用して、当該分野において公知の方法によって生成し得る。１つの実施形態において、意図されるＧＰＣＲ６エピトープは、約２２５〜２４０アミノ酸である。別の実施形態において、ＧＰＣＲ６エピトープは、約２５５〜２７５アミノ酸である。さらなる実施形態において、ＧＰＣＲ６エピトープは、２８０〜３１０アミノ酸である。
【０１４３】
（ＧＰＣＲ７）
新規ＧＰＣＲ核酸が、ＴｂｌａｓｔＮによって、ＧＰＣＲプローブおよびホモログに関するＣｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの配列ファイルを使用し、そしてＧｅｎＢａｎｋによって利用可能にされるＧｅｎｏｍｉｃ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅｓに対して実行されて、同定された。この核酸をさらに、エキソンの選択を含むプログラムＧｅｎＳｃａｎＴＭによってさらに予測した。これらを、ＢＬＡＳＴ検索を使用する類似性によって、さらに改変した。次いで、これらの配列を、明らかな不一致に関して手動で補正し、これによって、全長タンパク質をコードする配列を得た。開示される１０１３ヌクレオチドの新規ＧＰＣＲ７核酸（ｄｊ３１３ｉ６＿Ｄともまた称される）を、表７Ａに示す。オープンリーディングフレームは、ＡＴＧ開始コドンでヌクレオチド５〜７において開始し、そしてＴＡＧコドンでヌクレオチド９９７〜９９９において終結する。開始コドンの上流および終止コドンの下流の推定の未翻訳領域は、表７Ａにおいて下線を引かれており、そして開始コドンおよび終止コドンは、太字である。
【０１４４】
【表５３】
2004500098.tif 000054
開示された核酸配列は、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ嗅覚レセプター様タンパク質（ＯＲ２Ｃ１）遺伝子（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０９８６６４）と９３９塩基のうち６１５塩基（６５％）同一である（Ｅ値＝１．７ｅ−６７）。
【０１４５】
配列番号２８にコードされるＧＰＣＲ７タンパク質は、３２７アミノ酸残基を有し、そして表７Ｂにおいて１文字コードを用いて示される（配列番号１９）。ＧＰＣＲ７についてのこのＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標プロフィールによって、ＧＰＣＲ７がシグナルペプチドを有すること、そして０．６０００の確実性で原形質膜に局在するらしいことが予期される。このＳｉｇｎａｌＰは、シグナル配列が、最初の４４アミノ酸（アミノ酸４３と４４との間）に、すなわち、配列ＧＮＧ−ＴＩにおけるスラッシュで切断部位とともに、コードされていることを示す。これは、このタイプの膜タンパク質の代表である。
【０１４６】
【表５４】
2004500098.tif 000055
本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ　ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ６３３９４）由来の３１３アミノ酸残基のＯＬ１レセプタータンパク質に対して、３０４アミノ酸残基のうち１８３（６０％）同一であり、そして３０４残基のうち２２９残基（７５％）陽性であることが見出された（Ｅ値＝２．６ｅ−９７）。さらなるＢＬＡＳＴ分析によって、表７Ｃに列挙される重要な結果を得た。開示されたＧＰＣＲ７タンパク質（配列番号２９）は、嗅覚レセプタータンパク質の数と良好な同一性を有する。
【０１４７】
【表５５】
2004500098.tif 000056
この情報は、関連タンパク質配列とＧＰＣＲ７を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として、表７Ｄ（ＧＰＣＲ７は１行目に示されている）において与えられた複数の配列アラインメントにおいて図示されている。
【０１４８】
表７Ｄ．ＣｌｕｓｔａｌＷタンパク質についての情報：
１）ＧＰＣＲ７（配列番号２９）
２）ｇｉ｜１１１７７９０６｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８６３２．１｜Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｒａｔｔｕｓ　ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（配列番号７３）
３）ｇｉ｜１０９４４５１６｜ｅｍｂ｜ＣＡＣ１４１５８．１｜ｄＪ４０８Ｂ２０．２（ｎｏｖｅｌ　７ＴＭ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｆａｍｉｌｙ）（ｈＳ６Ｍ１−３２）Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ（配列番号７４）
４）ｇｉ｜１２０５４４１１｜ｅｍｂ｜ＣＡＣ２０５１３．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号７５）
５）ｇｉ｜１２０５４３９３｜ｅｍｂ｜ＣＡＣ２０５０４．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号７６）
６）ｇｉ｜３０８０４６７｜ｅｍｂ｜ＣＡＢ１１４２７．１｜ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ（配列番号７７）
【０１４９】
【表５６】
2004500098.tif 000057
ＧＰＣＲ７における同定可能なドメインの存在は、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓのようなアルゴリズムを用いて検索すること、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏウエブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を用いてドメイン適合（または数）を掛け合わせることによってＩｎｔｅｒｐｒｏ数を決定することによって決定される。
【０１５０】
ＧＰＣＲ７のＤＯＭＡＩＮ結果を、Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いたＣｏｎｖｅｒｓｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍコレクション中で見出した。この結果を、統計およびドメインの詳細とともに、表７Ｅに列挙する。この結果は、このタンパク質が示された位置で以下のタンパク質ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって規定されるような）を含むことを示す：ドメイン名７ｔｍ＿１（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）７膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）。７ｔｍ＿１（配列番号４５）の残基６１〜１４２は、表７ＥにおいてＧＰＣＲ７　４１−１８０と整列されている（Ｅ＝５ｅ−１８）。７ｔｍ＿１の残基３０７〜３７７はまた、ＧＰＣＲ７の残基２２２〜２９１と同一性を有する（Ｅ＝０．００１）。このことは、ＧＰＣＲ７の配列が、このドメイン／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の配列と類似で、かつこれらのドメインの特性と類似の特性を有することを示す。
【０１５１】
【表５７】
2004500098.tif 000058
本明細書に開示されるＧＰＣＲ７タンパク質および核酸の類似の情報は、ＧＰＣＲ７が、Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（嗅覚レセプター）ファミリーおよびＧＰＣＲファミリーの重要な構造的および／または生理学的機能の特徴を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、可能性のある診断および治療適用において、そして検索ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な、核酸またはタンパク質の、診断および／または予測マーカーとしての働き（ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価されるべきである）、ならびに以下のような可能性のある治療適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療抗体、診断抗体、薬物標的／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子除去）において有用な核酸、および（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物、（ｖｉ）生物学的防御手段。ＧＰＣＲ７をコードする新規な核酸、および本発明のＧＰＣＲ７タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに診断適用（ここで核酸またはタンパク質の存在または量が評価される）において有用であり得る。
【０１５２】
本発明の核酸およびタンパク質は、感染（例えば、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって生じた感染））、疼痛、癌（新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮ガンが挙げられるがこれらに限定されない）、拒食症、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿閉、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症の処置、ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、および精神障害および神経障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞およびジスキネジア（ハンチントン舞踏病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群など）を含む）および／または他の病理および障害の処置において用いられた考えられた潜在的な治療適用において有用である。
【０１５３】
開示されたＧＰＣＲ７ポリペプチドは、本発明に特異的な抗体を生成するための免疫原として、およびワクチンとして有用であり得る。それらはまた、潜在的アゴニストおよびアンタゴニストの化合物をスクリーニングするために用いられ得る。例えば、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＧＰＣＲ様タンパク質は、その必要な被験体に投与される場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって生じた感染）、疼痛、癌（新生物、腺癌、リンパ腫、前立腺癌、子宮ガンが挙げられるがこれらに限定されない）、拒食症、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿閉、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症に罹患した患者の処置、ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、および精神障害および神経障害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞およびジスキネジア（ハンチントン舞踏病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群など）を含む）および／または他の病理および障害の処置に有効性を有する。ＧＰＣＲ様タンパク質をコードする新規な核酸および本発明のＧＰＣＲ様タンパク質、またはそのフラグメントは、診断適用（ここで核酸またはタンパク質の存在または量が評価されるべきである）においてさらに有用であり得る。これらの物質はさらに、治療または診断方法における使用のために、本発明の新規な物質に免疫特異的に結合する抗体を生成するのに有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の節において記載されるように、疎水性親水性指標チャートからの予想を用いて、当該分野で公知の方法に従って生成され得る。
【０１５４】
（ＧＰＣＲ８）
ＧＰＣＲプローブまたはホモログについてＣｕｒａＧｅｎ社の配列プロフィールを用いてＴｂｌａｓｔＮによって第６染色体上で新規な核酸を同定し、そしてＧｅｎＢａｎｋによって利用可能になされたＧｅｎｏｍｉｃ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅｓに対して実施した。核酸をさらに、エクソンの選択を含む、ＧｅｎＳｃａｎＴＭプログラムによって予想した。これらは、さらにＢＬＡＳＴ検索を用いる類似の手段によって改変された。次いで、この配列を明白な不一致について手動で補正し、これによって全長タンパク質をコードする配列を得た。開示された、９５８ヌクレオチドの新規なＧＰＣＲ８核酸（またはｄｊ４０８ｂ２０とも呼ばれる）は、表８Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４〜６でＡＴＧ開始コドンで開始し、そしてヌクレオチド９５５〜９５７でＴＧＡコドンで終わる。開始コドン上流および終止コドン下流の推定の非翻訳領域は、表８Ａで下線を付しており、そして開始コドンおよび停止コドンは太文字である。
【０１５５】
【表５８】
2004500098.tif 000059
開示された核酸配列は、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ＯＲ様（第６ｐ２１．３１−２１．３３染色体上のクローン８８Ｊ８由来のｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＳ８８Ｊ８｜ａｃｃ：ＡＬ０３５４０２　Ｈｕｍａｎ　ＤＮＡ配列）．これは、新規な７膜貫通ウイルスレセプター（ロドプシンファミリー）（嗅覚レセプター様）タンパク質の遺伝子、嗅覚レセプター遺伝子類似の偽遺伝子、およびＧＴＰ結合タンパク質ＳＡＲＡ（マウス）偽遺伝子を含み．これはＥＳＴ、ＳＴＳおよびＧＳＳ、完全な配列−Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ、４２１６塩基を含む）と１１４８塩基のうち７６８塩基（６６％）同一である（Ｅ値＝１．３ｅ−８１）。
【０１５６】
配列番号３０にコードされるＧＰＣＲ８タンパク質は、３１７アミノ酸残基を有し、そして表８Ｂにおいて１文字コードを用いて示される（配列番号３１）。ＧＰＣＲ８についてのこのＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標プロフィールによって、ＧＰＣＲ８がシグナルペプチドを有すること、そして０．６８５０の確実性で原形質膜に局在するらしいことが予期される。このＳｉｇｎａｌＰは、シグナル配列が、最初の４２アミノ酸（アミノ酸４１と４２との間）にすなわち、配列ＶＬＧ−ＮＳにおけるスラッシュで切断部位とともに、コードされていることを示す。これは、このタイプの膜タンパク質の代表である。
【０１５７】
【表５９】
2004500098.tif 000060
本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列が、ヒト由来の３２０アミノ酸残基の新規の膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー、ＯＲ様、ＨＳ６Ｍ１−１５）タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｙ３Ｎ９）と、３０５アミノ酸残基のうち１８７アミノ酸残基が同一（６１％）であり、また３０５個のアミノ酸残基のうち２３９の残基が陽性（７８％）であることが見出された（Ｅ値＝２．４×ｅ−１０１）。さらに、ＢＬＡＳＴ解析が、表８Ｃに示されるような有意な結果を生成した。開示されたＧＰＣＲ８タンパク質（配列番号３１）は、多数の嗅覚レセプタータンパク質と十分な同一性を有している。
【０１５８】
【表６０】
2004500098.tif 000061
この情報は、ＧＰＣＲ８を関連するタンパク質と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ解析として表８Ｄ（第１行目にＧＰＣＲ８が示されている）で与えられたマルチプルアライメントで図式的に表現される。
【０１５９】
【表６１】
2004500098.tif 000062
ＧＰＣＲ８において同一視可能なドメインの存在が、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓのようなアルゴリズムを用いたサーチによって決定され、ついでＩｎｔｅｒｐｒｏウェブ（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｐｒｏ／）を使用してドメインマッチを組合せてＩｎｔｅｒｐｒｏ番号を決定する。
【０１６０】
ＧＰＣＲ８に対するＤＯＭＡＩＮの結果を、Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）からＲｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴを用いて収集した。このＢＬＡＳＴは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍのコレクション中に見出されるドメインをサンプルリングする。この結果は、表８Ｅに統計値およびドメインの説明と共に列挙される。この結果は、アミノ酸残基位置４１〜１７０で、ＧＰＣＲ８が７ｔｍ＿１（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）ドメイン（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって定義される）を含むことを示している。これは、ＧＰＣＲ８の配列が、これまたこれらのドメインを含む既知の他のタンパク質の配列と類似の特徴を有しており、そしてこれらのドメインと類似の特徴を有していることを示している。
【０１６１】
【表６２】
2004500098.tif 000063
本明細書中で開示されたＧＰＣＲ８タンパク質および核酸についてのこの類似性情報が、ＧＰＣＲ８の嗅覚レセプターファミリーおよびＧＰＣＲファミリーの重要な構造的特徴および／または生理学的機能の特徴を有していることを示唆している。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断および治療の適用において有用であり、そしてリサーチツールとして有用である。これらは、特定または選択的な核酸またはタンパク質の診断マーカーおよび／または予後マーカーとして役割を含み（ここでこの核酸またはこのタンパク質の存在または量が評価され）ならびに、例えば以下のような潜在的な治療的適用を含む：（ｉ）タンパク質治療剤（ｉｉ）低分子薬物標的（ｉｉｉ）抗体標的（治療学薬物標的化／細胞傷害性抗体、診断的薬物標的化／細胞傷害性抗体）および（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子アブレーション（ａｂｌａｔｉｏｎ））において有用な核酸（ｖ）インビトロおよびインビボにおける組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的防衛手段。本発明のＧＰＣＲ８をコードする新規の核酸、および本発明のＧＰＣＲ８タンパク質、またはこれらのフラグメントは、さらに診断的適用において有用であり、ここでこの核酸またはこのタンパク質の量は、見積もられ得る。
【０１６２】
開示されたＧＰＣＲ８核酸および本発明のタンパク質は、以下に関連する潜在的な治療学的応用において有用である：新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌；免疫応答；ＡＩＤＳ；喘息；クローン病；多発性硬化症；ならびにオールブライト遺伝性骨形成異常ならびに／または他の病理および障害の処置。例えば、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり、そしてＧＰＣＲ様タンパク質は、これらを必要としている被験体に投与する場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、以下に苦しむ患者の処置について効力を有する：新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌；免疫応答；ＡＩＤＳ；喘息；クローン病；多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨形成異常の処置。ＧＰＣＲ様タンパク質、および本発明のＧＰＣＲタンパク質またはこれらのフラグメントをコードする新規の核酸が、さらに診断的応用において有用であり、ここでこの核酸またはこのタンパク質の量は、評価される。これらの物質は、治療的方法または診断的方法において、免疫特異的に新規のＧＰＣＲ８基質に結合する抗体産生においてさらに有用である。これらの抗体は、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の節に記載のように、疎水性チャートから予測を用いて、当該分野に公知の方法に従って生成され得る。
【０１６３】
（ＧＰＣＲ９）
新規の核酸を、ＧＰＣＲプローブまたはＧＰＣＲホモログに対するＣｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの配列ファイル使用して、Ｇｅｎｂａｎｋにより提供されたＧｅｎｏｍｅ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅｓに対して実行したＴｂｌａｓｔＮにより、第１１染色体上に同定した。この核酸は、エキソン選択を含むプログラムＧｅｎＳｃａｎＴＭによってさらに予測された。これらのは、さらにＢＬＡＳＴサーチを使用する相同性の手段によって改変される。この配列は、次いで手動で明らかな不一致に対して修正し、これによって全長タンパクをコードする配列を得た。この開示された９４６ヌクレオチドからなる新規のＧＰＣＲ９核酸（６−Ｌ−１９−Ｂとして称される）は、表９Ａ中に示される。読み枠は、ヌクレオチド５〜７におけるＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド９３２〜９３４のＴＡＡコドンで終止する。開始コドンより上流にある推定非翻訳領域および終止コドンより下流の推定非翻訳領域は、表９Ａで下線により示し、開始コドンおよび終止コドンは太字で示した。
【０１６４】
配列データベースのサーチにおいて、例えば、この核酸配列が、９０２塩基中に、嗅覚レセプターＡ１６（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０３０８９６｜ａｃｃ：ＡＢ０３０８９６）ついてのＭｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ遺伝子に対して同一（Ｅ＝８．５ｅ−４７）な５６３塩基（６２％）を有する。配列データベースのサーチにおいて、部分的な一致（３７３塩基中３５３塩基、つまり９４％同一）がまた、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ＧＰＣＲ　ＥＳＴ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＷ１８２６７８｜ａｃｃＡＷ１８２６７８；ｘｊ４５ｄ１１．ｘ１　Ｓｏａｒｅｓ＿ＮＦＬ＿Ｔ＿ＧＢＣ＿Ｓ１　Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅ　ＩＭＡＧＥ：２６６０１８１３’ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ＴＲ：Ｑ９Ｚ１Ｖ０Ｑ９Ｚ１Ｖ０　ＯＬＦＡＣＴＯＲＹ　ＲＥＣＥＰＴＯＲ　Ｃ６）の３０６〜６７８ヌクレオチドと同一なＧＰＣＲ９の１〜３７２ヌクレオチドと同定された。公開された配列の領域と本発明（遺伝子）の領域の間のこの９４％の一致（Ｅ＝１．１ｅ−６９）は、本発明（遺伝子）が公開されたＧＰＣＲ　ＥＳＴ（部分的ｍＲＮＡ）のスプライス改変体で有り得ることを示唆している。これはまた、ＧＰＣＲとしてのＧＰＣＲ９の同定を支持している。配列データベースのサーチにおいて、Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ＧＰＣＲ　ＥＳＴ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＡ２０６６８０｜ａｃｃ：ＡＡ２０６６８０：ｚｑ５１ｃ１１．ｒ１　Ｓｔｒａｇｅｎｅ　ｎｅｕｒｏｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ（＃９３７２３１）Ｈｏｍｏ　ｓａｐｉｅｎｓ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅ　ＩＭＡＧＥ：６４５１４０　５’　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｃｏｎａｔａｉｎｓ　Ｌ１．ｂ２　Ｌ１　ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ）の２５１〜３４８のヌクレオチドとのＧＰＣＲ９の８９３〜７９４ヌクレオチドの部分が一致している（１００塩基中９４塩基、９４％同一）。公開された配列のヌクレオチドとＧＰＣＲ９配列のヌクレオチドとのこの９４％の一致は、ＧＰＣＲ９がＧＰＣＲ　ＥＳＴ（ｍＲＮＡの部分）のスプライス改変体であり得ることを示唆している。
【０１６５】
【表６３】
2004500098.tif 000064
配列番号３２にコードされているＧＰＣＲ９タンパク質は、３０９アミノ酸残基を有しており、そして表９Ｂ（配列番号３３）中に１文字コードを用いて表現されている。ＧＰＣＲ９についてのＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性プロファイルは、ＧＰＣＲ９がシグナルペプチドを有しており、小胞体膜に局在する傾向（０．６８５０の確実性を有する）があることを予測している（これに対し、原形質膜に対しては０．６８５０の確実性を有して局在する）。ＳｉｇｎａｌＰは、表９Ｂ中のスラッシュが示すようなアミノ酸３８およびアミノ酸３９の間、ＩＷＭ−ＥＮ配列に切断部位を予測した。
【０１６６】
【表６４】
2004500098.tif 000065
本発明のタンパク質の全長アミノ酸配列が、Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の嗅覚レセプターＡ１６の３０２アミノ酸（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＢＡＡ８６１２７）と、３００アミノ酸残基のうちの１４０残基が同一（４６％）であり、３００残基中１９３残基（６４％）が陽性であることが見出された（Ｅ値＝１．０ｅ−７２）。さらなるＢＬＡＳＴ解析が、表９Ｃに列挙される有意な結果を生み出した。開示されたＧＰＣＲ８タンパク質（配列番号３３）は、多くの嗅覚レセプタータンパク質と十分な同一性を有している。
【０１６７】
【表６５】
2004500098.tif 000066
この情報は、関連タンパク質配列とＧＰＣＲ９を比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として表９Ｄ（ライン１に示されるＧＰＣＲ９と共に）に示される複数の配列整列において図として示される。
【０１６８】
【表６６】
2004500098.tif 000067
ＧＰＣＲ９において同定可能なドメインの存在は、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓといったアルゴリズムを使用する検索、次いで、Ｉｍｔｅｒｐｒｏウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を使用するドメインマッチ（またはナンバー）を交差することによってＩｎｔｅｒｐｒｏナンバーを決定することによって決定された。
【０１６９】
ＧＰＣＲ９に関するＤＯＭＡＩＮ結果は、反位特異的ＢＬＡＳＴを有する保存ドメインデータベース（ＣＤＤ）から収集された。このＢＬＡＳＴサンプルドメインは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍコレクションにおいて見出した。この結果は、統計およびドメインの詳細と共に表９Ｅに列挙される。この結果は、ＧＰＣＲ９が、アミノ酸残基の５６位〜２３４位において７ｍ＿１（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）７膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）ドメイン（ＩｎｔｅｒＰｒｏによって規定される）を含む。これは、ＧＰＣＲ９の配列が、これ／これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の配列と類似の性質およびこれらのドメインの性質と類似を有することを示す。
【０１７０】
【表６７】
2004500098.tif 000068
本明細書中に開示されるＧＰＣＲタンパク質および核酸に関する類似性の情報は、ＧＰＣＲ９が、嗅覚レセプターファミリーおよびＧＰＣＲファミリーの特徴である、重要な構造的および／または生理学的な機能を有することを示唆する。従って、本発明に関する核酸およびタンパク質は、診断適用および治療適用ならびに探索ツールとして有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質診断および／または予測マーカーとして役立つことを含み、ここで核酸またはタンパク質の存在または量は、例えば、以下の潜在的な適用と同様に評価される：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬剤標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療学的、診断、薬物標的／細胞傷害抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子切断）に有用な核酸あるいは（ｖ）インビボおよびインビトロにおいて組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的防御兵器。ＧＰＣＲ９をコードする新規の核酸、本発明のＧＰＣＲ９タンパク質またはそれらのフラグメントは、診断的適用においてさらに有用であり、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量は、評価される。
【０１７１】
本発明の核酸およびタンパク質は、以下の治療に使用に関連する潜在的な治療学的適用において有用である：細菌、真菌、原性動物およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって起きる感染）、痛み、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、ぜん息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大および精神病性かつ神経学的障害（不安、精神分裂病、大うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群および／または他の病理学および傷害））。
【０１７２】
ポリペプチドは、本発明に特異的な抗体を産生するために免疫原としておよびワクチンとして使用され得る。これらはまた、潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングに使用される。例えば、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そしてＧＰＣＲ様タンパク質が、それらの必要性において被験者に投与される場合、有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、細菌、真菌、原性動物およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって起きる感染）、痛み、癌（新生物；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌が挙げられるがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、ぜん息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿貯留、骨粗しょう症、クローン病、多発性硬化症；およびオールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大および精神病性かつ神経学的障害（不安、精神分裂病、大うつ病、せん妄、痴呆、重症精神遅滞およびジスキネジー（例えば、ハンティングトン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群および／または他の病理学および傷害））を患う患者の処置に効果を有する。ＧＰＣＲ様タンパク質をコードする新規の核酸、本発明のＧＰＣＲ様タンパク質またはそれらのフラグメントは、診断的適用においてさらに有用であり、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量は、評価される。
【０１７３】
これらの材料は、治療方法または診断方法における使用のための新規のＧＲＣＲ９基質に免疫特異的に結合する抗体の産生においてさらに有用である。これらの抗体は、以下のセクションの「抗ＧＰＣＲＸ抗体」に記載されるように、疎水性チャートからの推定を使用して、当該分野において公知の方法に従って産生され得る。
【０１７４】
（ＧＲＣＲ１０）
ＧＲＣＲ１０は、以下に開示される３つの類似の核酸および３つの類似のタンパク質のファミリーを含む。開示される核酸は、ＧＰＣＲ、ＯＲ様タンパク質をコードする。
【０１７５】
（ＧＰＣＲ１０ａ）
開示される新規の核酸は、ＧＰＣＲプローブまたは相同体に関するＣｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｏｒａｔｉｏｎの配列ファイル（ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能なったＧｅｎｏｍｉｃ　Ｄａｉｌｙ　Ｆｉｌｅに対して駆動する）を使用するＴｂｌａｓｔＮによって染色体１１にあることが同定された。この核酸は、プログラムＧｅｎＳｃａｎＴＭ（エキソンの選択を含む）によってさらに推定される。これらは、ＢＬＡＳＴ検索を使用して類似度によってさらに改変された。次いで、この配列は、明白な不一致に関して手動で回収され、それによって全長をコードする配列を得た。ＧＰＣＲ１０ａは、表１０Ａに示されるように（または６−Ｌ−１９−Ａと称される）９４８ｂｐ長の核酸である（配列番号３４）。ＯＲＦは、ヌクレオチド７〜９においてＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド９３４〜９３６におけるＴＡＡコドンで終わる。開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定非転写領域を表１０Ａにおいて下線を引いて示し、そして開始コドンおよび終止コドンを、太文字で示す。
【０１７６】
【表６８】
2004500098.tif 000069
配列番号３４によってコードされるＧＰＣＲ１０ａタンパク質が、３０９アミノ酸残基を有し、そしてこれを、表１０Ｂにおいて１文字コドンを使用して表す（配列番号３５）。ＧＰＣＲ１０ａに関するＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性プロフィールは、ＧＰＣＲ１０ａが、シグナルペプチドを有し、そして０．６０００の確実度で形質膜に局在するようだと推定する。ＳｉｇｎａｌＰは、表１０Ｂにおいて斜線によって示される、配列ＶＬＥ−ＮＬ（アミノ酸３９とアミノ酸４０との間）における切断部位を推定する。
【０１７７】
配列データベースの検索において、例えば、核酸配列が、臭気物質レセプターＡ１６ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０３０８９６）に関する９０９ｂｐ　Ｍｕｓ　ｍｕｓｃｕｌｕｓ遺伝子と９０８塩基のうち６２５の同一性（６８％）を有する（Ｅ＝３．０ｅ−７５）ことを見出す。
【０１７８】
【表６９】
2004500098.tif 000070
本発明のタンパク質の全アミノ酸は、Ｒａｔｔｕｓ　ｓｐ．（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷＡＣＣ：Ｇ２６４６１８）由来の３０７アミノ酸残基ＯＲ１８臭気物質レセプタータンパク質に対して３０２アミノ酸残基のうち１８３の同一性（６０％）、そして３０２残基のうち２３２の陽性（７６％）を有することを見出した。
【０１７９】
（ＧＰＣＲ１０ｂ）
ＧＰＣＲ１０ａ（６−Ｌ−１９−Ａ）を、配列を確認するためにエキソン連結プロセスに供した。ＰＣＲプライマーを、前向きのプライマーについては利用可能な最も上流の配列で開始し、そして逆向きのプライマーについては利用可能な最も下流の配列で開始することによって設計した。各場合に、この配列を、唯一であるかまたは高度に選択的であるかのいずれかである適切な配列に遭遇するまで、各末端からコード配列に内部に向かってウォーキングして試験するかあるいは、逆向きのプライマーの場合、終止コドンに達するまでウォーキングして試験した。次いで、このような適切な配列を、広範なｃＤＮＡライブラリーに基づいたＰＣＲ増幅において前向きおよび逆向きのプライマーとして使用した。生じたアンプリコンを、ゲル精製し、クローニングし、そしてＧＰＣＲ１０ｂ（６−Ｌ−１９−Ａ１とまたいわれる）を提供する高度な重複に配列決定した。
【０１８０】
ＧＰＣＲ１０ｂ（９４８ｂｐ、配列番号３６）についてのヌクレオチド配列を、表１０Ｃに示す。このヌクレオチド配列は、ＧＰＣＲ１０ａとは、１ヌクレオチド変化（（ＧＰＣＲ１０ａに対して番号を付し）Ｔ４０４＞Ｃ）によって異なる。
【０１８１】
【表７０】
2004500098.tif 000071
コードされたＧＰＣＲ１０ｂタンパク質を、表１０Ｄに示す。この開示されたタンパク質は、３０９アミノ酸の長さであり、配列番号３７によって示される。ＧＰＣＲ１０ｂは、ＧＰＣＲ１０ａとは、１アミノ酸残基（Ｉ１３３＞Ｔ）によって異なる。ＧＰＣＲ１０ａのように、ＧＰＣＲ１０ｂについてのＰ分類（Ｐｓｏｒｔ）プロフィールは、この配列が単一のペプチドであり、０．６０００の確実性でおそらく細胞膜に位置することを予知する。ペプチドについて最もありえる分裂部位は、ＳｉｇｎａｌＰの結果に基づいて、アミノ酸３９および４０の間、すなわち、アミノ酸配列ＶＬＥ−ＮＬにおけるスラッシュの位置である（表１０Ｄ中にスラッシュとして示される）。
【０１８２】
【表７１】
2004500098.tif 000072
表１０Ｅは、ＧＰＣＲ１０ｂについてのＢＬＡＳＴＰ結果を示す。
【０１８３】
【表７２】
2004500098.tif 000073
（ＧＰＣＲ１０ｃ）
ＧＰＣＲ１０ａ（６−Ｌ−１９−Ａ）を配列を確認するためにエキソン連結プロセスに供した場合、別のヌクレオチド配列が生じた。ＰＣＲプライマーを、前向きのプライマーについては利用可能な最も上流の配列で開始し、逆向きのプライマーについては利用可能な最も下流の配列で開始することによって設計した。各場合に、この配列を、唯一であるかまたは高度に選択的であるかのいずれかである適切な配列に遭遇するまで、各末端からコード配列に内部に向かってウォーキングして試験するかあるいは、逆向きのプライマーの場合、終止コドンに達するまでウォーキングして試験した。次いで、このような適切な配列を、広範なｃＤＮＡライブラリーに基づいたＰＣＲ増幅において前向きおよび逆向きのプライマーとして使用した。
【０１８４】
次いで、これらのプライマーを、以下のヒトｃＤＮＡプールに基づいたＰＣＲ増幅において使用した：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児脳、胎児腎臓、胎児肝臓、胎児肺、心臓、腎臓、リンパ腫−ラージ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮。通常、生じるアンプリコンをゲル精製し、クローニングし、高い重複性に配列決定した。全てのクローンから生じる配列を、それら自身で、ＣｕｒａＧｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのデータベース中の他のフラグメントと、そして公開ＥＳＴとアセンブルさせた。フラグメントおよびＥＳＴを、アセンブリの別の成分とのこれらの同一性の程度が５０ｂｐを越えて少なくとも９５％である場合、アセンブリのための成分としてインキュベートした。さらに、配列の痕跡を、手動で評価し、適切な場合、補正のために編集した。生じるアンプリコンをゲル精製し、クローニングし、以下に報告する配列を提供する高い重複性に配列決定した。これは、登録番号６−Ｌ−１９−Ａ−ｄａｌまたはＧＰＣＲ１０ｃと名付けられる。
【０１８５】
ＧＰＣＲ１０ｃ（９４３ｂｐ、配列番号３８）についてのヌクレオチド配列を、表１０Ｆに示す。ＧＰＣＲ１０ｃヌクレオチド配列は、ＧＰＣＲ１０ａとは、５’末端で６少ないヌクレオチドならびに２ヌクレオチドの変化（（ＧＰＣＲ１０ａについて番号を付し）Ｇ４６６＞ＡおよびＣ８３４＞Ｔ）を有することによって異なる。
【０１８６】
【表７３】
2004500098.tif 000074
ＧＰＣＲ１０ｃのコード領域は、１〜９２８ヌクレオチドであり、コードされたＧＰＣＲ１０ｃタンパク質を与え、表１０Ｇに示される。この開示されたタンパク質は、３０９アミノ酸の長さであり、配列番号８３に示される。ＧＰＣＲ１０ｃは、ＧＰＣＲ１０ａとは１アミノ酸残基（Ａ１５４＞Ｔ）によって異なる。ＧＰＣＲ１０ａのように、ＧＰＣＲ５ｃについてのＰ分類プロフィールは、この配列が単一のペプチドであり、０．６０００の確実性でおそらく細胞膜に位置することを予知する。ペプチドについて最もありえる分裂部位は、ＳｉｇｎａｌＰの結果に基づいて、アミノ酸３９および４０の間、すなわち、アミノ酸配列ＶＬＥ−ＮＬにおけるスラッシュの位置である（表１０Ｇ中にスラッシュとして示される）。
【０１８７】
【表７４】
2004500098.tif 000075
ＧＰＣＲ１０について見出される可能なＳＮＰを、表１０Ｈに記載した。
【０１８８】
【表７５】
2004500098.tif 000076
この開示されたＧＰＣＲ１０タンパク質（配列番号３５）は、多くの嗅覚レセプタータンパク質に良好な同一性を有する。ＣｌｕｓｔａｌＷ分析について使用されるこの同一性情報を、表１０Ｉに示す。ＧＰＣＲ１０ａ、ＧＰＣＲ１０ｂまたはＧＰＣＲ１０ｃとして具体的にいわない場合、ＧＰＣＲ１０に対する任意の言及は、全ての改変体を含むとみなす。本明細書中の任意のＧＰＣＲＸ改変体配列の間で異なる残基を、「ａ」改変体中の残基および「ａ」改変体に対する残基位置を示すために書く。個々のＧＰＣＲ改変体の間で異なる、以下の全ての配列アラインメント中のＧＰＣＲ残基を、四角で強調し、そして本明細書中の全てのアラインメントの改変体の残基の上に（ｏ）記号でマークする。例えば、表１０Ｊの１行目に示されるタンパク質は、ＧＰＣＲ１０ａについての配列を示し、そしてＧＰＣＲ１０ｂまたはＧＰＣＲ１０ｃが異なる位置を（ｏ）記号でマークし、そして四角で強調した。全てのＧＰＣＲ１０タンパク質は、嗅覚レセプター（ＯＲ）タンパク質に有意な相同性を有する：
【０１８９】
【表７６】
2004500098.tif 000077
この情報を、ＧＰＣＲ１０を関連するタンパク質配列と比較するＣｌｕｓｔａｌＷ分析として、表１０Ｊに与えられる複数の配列アラインメントに図式的に示す（ＧＰＣＲ１０を１行目に示して）。
【０１９０】
【表７７】
2004500098.tif 000078
ＧＰＣＲ１０における同定可能なドメインの存在を、ＰＲＯＳＩＴＥ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、Ｐｒｉｎｔｓのようなアルゴリズムを使用した研究によって決定し、次いで、Ｉｎｔｅｒｐｒｏのウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ／）を使用してドメインの一致（または数）を交差させることによってＩｎｔｅｒｐｒｏ数を決定する。
【０１９１】
ＧＰＣＲ１０についてのＤＯＭＡＩＮの結果を、Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　Ｄｏｍａｉｎ　Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）からＲｅｖｅｒｓｅ　Ｐｏｓｉｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＢＬＡＳＴによって収集した。このＢＬＡＳＴは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍ収集に見出されるドメインをサンプリングする。この結果を、統計およびドメインの説明と共に表１０Ｋに記載する。これらの結果は、このタンパク質が以下のタンパク質ドメイン（アミノ酸位置３９〜２１３でドメイン名７ｔｍ＿１（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）７回膜貫通レセプター（ロドプシンファミリー）（Ｉｎｔｅｒｐｒｏによって規定されるように）を示された位置で含むことを示す。これは、ＧＰＣＲ１０の配列がこのドメインを含む公知の他のタンパク質の特性に類似の特性およびこのドメインの特性に類似の特性を有することを示す。
【０１９２】
【表７８】
2004500098.tif 000079
本明細書中に開示されるＧＰＣＲ１０タンパク質および核酸についての類似性情報は、ＧＰＣＲ１０が、嗅覚レセプターファミリーおよびＧＰＣＲファミリーに特徴的な重要な構造的および／または生理学的機能を有し得ることを示唆する。従って、本発明の核酸およびタンパク質は、潜在的な診断的適用および治療的適用においてならびに研究道具として有用である。これらは、特異的または選択的な核酸またはタンパク質の診断的および／または治療的マーカーとして働く工程を包含し、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量、ならびに以下のような潜在的な治療的適用が評価される：（ｉ）タンパク質治療、（ｉｉ）低分子薬物標的、（ｉｉｉ）抗体標的（治療、診断、薬物標的化／細胞傷害性抗体）、（ｉｖ）遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子除去）において有用な核酸、および（ｖ）インビトロおよびインビボで組織再生を促進する組成物（ｖｉ）生物学的な防御武器。本発明のＧＰＣＲ１０をコードする新規核酸およびＧＰＣＲ１０タンパク質またはこれらのフラグメントは、さらに治療的適用において有用であり得、ここで、この核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。
【０１９３】
本発明の核酸およびタンパク質は、感染（例えば、細菌、真菌、原生動物、およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染））、痛み、癌（新生物；線癌；リンパ種；前立腺癌；子宮癌を含むがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿停滞、骨粗鬆症、クローン病、多発性硬化症の処置において、そしてオールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性傷害および神経学的傷害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、深刻な精神遅滞を含む）そして運動障害（例えば、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）ならびに／または他の病理学および傷害の処置における使用において関連する、潜在的な治療的適用において有用である。これらのポリペプチドを、本発明について特異的な抗体の、ワクチンとしての産生ための免疫原として使用し得る。これらをまた、潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてスクリーニングするために使用し得る。例えば、ＧＰＣＲ様タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてＧＰＣＲ様タンパク質は、それを必要とする被験体に投与される場合に有用であり得る。非限定的な実施例のために、本発明の組成物は、細菌、真菌、原生動物、およびウイルス感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、痛み、癌（新生物；線癌；リンパ種；前立腺癌；子宮癌を含むがこれらに限定されない）、食欲不振、過食症、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血圧、尿停滞、骨粗鬆症、クローン病、多発性硬化症を被っている患者の処置について、そしてオールブライト遺伝性骨形成異常症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、喘息、アレルギー、良性前立腺肥大、ならびに精神病性傷害および神経学的傷害（不安、精神分裂病、躁うつ病、せん妄、痴呆、深刻な精神遅滞を含む）ならびに運動障害（ハンチントン病またはジル・ド・ラ・ツレット症候群）ならびに／または他の病理学および傷害の処置について効力を有する。これらの材料はさらに、治療または診断的方法における使用のための新規ＧＰＣＲ１０物質に免疫特異的に結合する抗体の産生において有用である。これらの抗体を、以下の「抗ＧＰＣＲＸ抗体」の節で記載するように、疎水性チャートからの予知を使用して当該分野で公知の方法に従って産生し得る。
【０１９４】
本発明のＧＰＣＲＸ核酸およびタンパク質のまとめを、表１１に示す。
【０１９５】
【表７９】
2004500098.tif 000080
（ＧＰＣＲＸ核酸およびポリペプチド）
本発明の１つの局面は、ＧＰＣＲＸポリペプチドまたはその生物学的に活性なタンパク質をコードする、単離された核酸分子に関する。また、ＧＰＣＲＸをコードする核酸（例えば、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとしての使用について十分な核酸フラグメント、およびＧＰＣＲＸ核酸分子の増幅および／または変異のためのＰＣＲプライマーとしての使用のためのフラグメントもまた、本発明に含まれる。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを使用して作成されるＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ、ならびにそれらの誘導体、フラグメントおよびホモログを含むことを意図する。核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【０１９６】
ＧＰＣＲＸ核酸は、成熟ＧＰＣＲＸポリペプチドをコードし得る。本明細書中で使用される場合、本発明において開示されるポリペプチドの「成熟」形態またはタンパク質は、天然に存在するポリペプチドまたは前駆体形態またはプロプロテイン（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）の生成をいう。天然に存在するポリペプチドまたは前駆体形態またはプロプロテインとしては、非限定的な例の目的のみとして、対応する遺伝子によりコードされる全長遺伝子産物が挙げられる。あるいは、これらは、本明細書中に開示されるオープンリーディングフレームによりコードされるポリペプチド、前駆体またはプロプロテインとして規定され得る。生成物「成熟」形態は、また非限定的な例の目的として、１以上の天然に存在するプロセシング工程（これらがこの遺伝子産物が生じる細胞または宿主細胞内で起こる場合）の結果として生じる。ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態に至るこのようなプロセシング工程の例としては、オープンリーディングフレームの開始コドンによりコードされるＮ末端メチオニン残基の切断、またはシグナルペプチドまたはリーダー配列のタンパク質分解切断が挙げられる。従って、残基１〜Ｎ（残基１がＮ末端メチオニンである場合）を有する前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、Ｎ末端メチオニンの除去後に残基２〜Ｎを有する。あるいは、残基１〜Ｎ（ここで、Ｎ末端シグナル配列（残基１〜Ｍ）が切断される）を有する前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、残りの残基Ｍ＋１〜残基Ｎを有する。さらに、本明細書中で使用される場合、ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、タンパク質分解事象ではなく、翻訳後修飾の工程から生じ得る。このようなさらなるプロセスとしては、非限定的な例として、グリコシル化、ミリストイル化またはリン酸化が挙げられる。一般に、成熟ポリペプチドまたはタンパク質は、これらのプロセスの１つのみまたはこれらの任意の組み合わせの操作から生じ得る。
【０１９７】
用語「プローブ」とは、本明細書中で使用される場合、種々の長さの核酸配列をいい、好ましくは、特定の用途に依存して、少なくとも約１０ヌクレオチド（ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、約６，０００ｎｔほどの大きさの間である。プローブは、同一、類似または相補的な核酸配列の検出において使用される。より長いプローブは、通常、天然供給源または組換え供給源から入手され、非常に特異的であり、そしてより長さの短いオリゴマープローブよりもはるかに遅くハイブリダイズする。プローブは、一本鎖または二本鎖であり得、そしてＰＣＲ、膜ベースのハイブリダイゼーション技術、またはＥＬＩＳＡ様の技術において特異性を有するように設計される。
【０１９８】
用語「単離された」核酸分子は、本明細書中で使用される場合、この核酸の天然の供給源中に存在する他の核酸分子から分離された核酸分子である。好ましくは、「単離された」核酸は、この核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中でこの核酸に天然に隣接する配列（すなわち、この核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）を含まない。例えば、種々の実施形態において、単離されたＧＰＣＲＸ核酸分子は、この核酸が由来する細胞／組織（例えば、脳、心臓、肝臓、脾臓など）のゲノムＤＮＡ中でこの核酸に天然で隣接する、約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂ、または０．１ｋｂ未満のヌクレオチド配列を含み得る。さらに、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え技術により産生される場合、その他の細胞物質または培養培地を実質的に含まないか、または化学的に合成される場合、化学物質前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まないものであり得る。
【０１９９】
本発明の核酸分子、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヌクレオチド配列を有する核酸分子、または上記のヌクレオチド配列の相補体は、標準的な分子生物学的技法および本明細書で提供される配列情報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の核酸の全部または一部を使用して、ＧＰＣＲＸ分子は、標準的なハイブリダイゼーションおよびクローニング技術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＹ　ＭＡＮＵＡＬ第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（編）、ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３に記載されるように）を用いて単離され得る。
【０２００】
本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技法に従って、テンプレートとしてｃＤＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡ、および適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクター中にクローン化され、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられ得る。さらに、ＧＰＣＲＸヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技術、例えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いることにより調製され得る。
【０２０１】
本明細書で用いられる場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結されたヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応で用いられるに十分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲノム配列もしくはｃＤＮＡ配列に基づき得るか、またはそれから設計され得、そして特定の細胞もしくは組織において、同一、類似もしくは相補的ＤＮＡまたはＲＮＡを増幅し、確認し、もしくはその存在を示すために用いられる。オリゴヌクレオチドは、約１０ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔの長さ、好ましくは約１５ｎｔ〜３０ｎｔの長さを有する核酸配列の部分を含む。本発明の１つの実施形態では、１００ｎｔより少ない長さの核酸分子を含むオリゴヌクレオチドは、さらに、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の少なくとも６個連続するヌクレオチド、またはその相補体を含む。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとして用いられ得る。
【０２０２】
別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列またはこのヌクレオチド配列の一部分（例えば、プローブまたはプライマーとして使用され得るフラグメント、あるいはＧＰＣＲＸポリペプチドの生物学的に活性な部分をコードするフラグメント）の相補体である核酸分子を含む。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列に十分相補的である核酸分子であり、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列に対しミスマッチがほとんどまたは全くなく水素結合し得、それによって安定な二本鎖を形成する核酸分子である。
【０２０３】
本明細書で用いる場合、用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間のＷａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成をいい、そして用語「結合」は、２つのポリペプチドまたは化合物または関連ポリペプチドまたは化合物またはその組合せ間の物理的または化学的相互作用を意味する。結合は、イオン性、非イオン性、ファンデルワールス性、疎水性相互作用などを含む。物理的相互作用は直接的であるかまたは間接的であり得る。間接的相互作用は、別のポリペプチドまたは化合物を介するか、またはその効果に起因し得る。直接的結合は、別のポリペプチドもしくは化合物を介して、またはその効果に起因して生じない、その他の実質的な化学的中間体がない相互作用をいう。
【０２０４】
本明細書中に提供されるフラグメントは、少なくとも６個の（連続する）核酸配列または少なくとも４個の（連続する）アミノ酸配列（それぞれ、核酸の場合には、特異的なハイブリダイゼーションを可能にし、またはアミノ酸の場合には、エピトープの特異的な認識を可能にするに十分な長さ）として規定され、そして全長配列未満のせいぜいいくらかの部分である。フラグメントは、選択された核酸配列またはアミノ酸配列の任意の連続する部分に由来し得る。誘導体は、直接的にかまたは改変もしくは部分的置換によってかのいずれかでネイティブな化合物から形成される核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、ネイティブな化合物に類似する構造を有する（しかし、同一ではない）が、特定の成分または側鎖に関してそれとは異なる核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、合成物であり得るか、または進化的に異なる起源に由来し得、そして野生型と比較して、類似の代謝活性または反対の代謝活性を有し得る。ホモログは、異なる種由来の特定の遺伝子の核酸配列またはアミノ酸配列である。
【０２０５】
誘導体およびアナログは、以下に記載のように、誘導体またはアナログが、修飾された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長、または全長以外のものであり得る。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログは、種々の実施形態において、本発明の核酸もしくはタンパク質に、同一の大きさの核酸またはアミノ酸配列にわたって、または整列した配列に比較した場合（この整列は、当該分野で公知であるコンピューター相同性プログラムによって実施される）、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、または９５％の同一性（好ましい同一性は、８０〜９５％）で実質的に相同であるか、あるいはそのコードする核酸がストリンジェントの、中程度にストリンジェントの、または低いストリンジェントの条件下で上記のタンパク質をコードする配列の相補体にハイブリダイズし得る、領域を含む分子を包含するが、これらに限定されない。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３、および以下を参照のこと。
【０２０６】
「相同な核酸配列」もしくは「相同なアミノ酸配列」、またはその改変体とは、上記で考察したように、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルにおける相同性によって特徴付けられる配列をいう。相同なヌクレオチド配列は、ＧＰＣＲＸポリペプチドのアイソフォームをコードする配列をコードする。アイソフォームは、例えば、ＲＮＡの選択的スプライシングの結果として、同一の生物の異なる組織において発現され得る。あるいは、アイソフォームは、異なる遺伝子によってコードされ得る。本発明において、相同なヌクレオチド配列は、ヒト以外の種（脊椎動物が挙げられるが、これに限定されず、従って、例えば、カエル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマおよび他の生物が挙げられ得る）のＧＰＣＲＸポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相同なヌクレオチド配列はまた、天然に生じる対立遺伝子改変体および本明細書に記載されるヌクレオチド配列の変異体が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、相同的ヌクレオチド配列は、ヒトＧＰＣＲＸタンパク質をコードする正確なヌクレオチド配列を含まない。相同核酸配列は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３の保存的アミノ酸置換（以下を参照のこと）、およびＧＰＣＲＸ生物学的活性を保有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。ＧＰＣＲＸタンパク質の種々の生物学的活性は以下に記載されている。
【０２０７】
ＧＰＣＲＸポリペプチドは、ＧＰＣＲＸ核酸のオープンリーディングフレームによりコードされる。ＯＲＦは、ポリペプチドに潜在的に翻訳され得るヌクレオチド配列に対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止コドンによって途切れない。全タンパク質についてのコード配列を表すＯＲＦは、ＡＴＧ「開始」コドンで始まり、そして３つの「終止」コドン（すなわち、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）のうちの１つで終結する。本発明の目的で、ＯＲＦは、開始コドン、終止コドンまたはその両方を有するかまたは有さない、コード配列の任意の部分であり得る。ｂｏｎａ　ｆｉｄｅ細胞タンパク質のコードのための良好な候補としてみなされるＯＲＦについて、最小サイズの要求がしばしば、例えば、５０アミノ酸以上のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチを設定する。
【０２０８】
ヒトＧＰＣＲＸ遺伝子のクローニングから決定されたヌクレオチド配列は、他の細胞型（例えば、他の組織由来）におけるＧＰＣＲＸホモログ、ならびに他の脊椎動物由来のＧＰＣＲＸホモログを同定および／またはクローニングする際の使用のために設計されるプローブおよびプライマーの作製を可能にする。このプローブ／プライマーは、代表的には、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。このオリゴヌクレオチドは、代表的には、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の少なくとも約１２個、約２５個、約５０個、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個または約４００個の連続するセンス鎖ヌクレオチド配列；または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の天然に存在する変異体の少なくとも約１２個、約２５個、約５０個、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個または約４００個の連続するセンス鎖ヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。
【０２０９】
ヒトＧＰＣＲＸヌクレオチド配列に基づくプローブは、同じまたは相同なタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出するために使用され得る。種々の実施形態において、このプローブはさらに、プローブに付着した標識基を含み、例えば、この標識基は放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る。このようなプローブは、ＧＰＣＲＸタンパク質を誤って発現する細胞または組織を同定するための診断試験キットの一部として、例えば、被験体由来の細胞のサンプル中のＧＰＣＲＸをコードする核酸のレベルを測定すること（例えば、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡレベルを検出すること、またはゲノムＧＰＣＲＸ遺伝子が変異しているかまたは欠失しているか否かを決定すること）によって使用され得る。
【０２１０】
「ＧＰＣＲＸポリペプチドの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」は、本発明のポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチドをいい、用量依存性の有無に関わらず、特定の生物学的アッセイにおいて測定されるような成熟形態を含む。「ＧＰＣＲＸの生物学的に活性な部分」をコードする核酸フラグメントは、ＧＰＣＲＸの生物学的活性（ＧＰＣＲＸタンパク質の生物学的活性は、以下に記載される）を有するポリペプチドをコードする、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の一部を単離し、ＧＰＣＲＸタンパク質のコードされた部分を発現させ（例えば、インビトロでの組換え発現によって）、そしてＧＰＣＲＸのコードされた部分の活性を評価することによって調製され得る。
【０２１１】
（ＧＰＣＲＸ核酸およびポリペプチドの改変体）
本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列とは異なる核酸分子を包含し、従って、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じＧＰＣＲＸタンパク質をコードする。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０２１２】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるＧＰＣＲＸヌクレオチド配列に加えて、このＧＰＣＲＸポリペプチドのアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型は、集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが、当業者によって理解される。ＧＰＣＲＸ遺伝子中のこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子のバリエーションに起因して、集団内の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＧＰＣＲＸタンパク質、好ましくは脊椎動物のＧＰＣＲＸタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む核酸分子をいう。このような天然の対立遺伝子のバリエーションは、代表的には、ＧＰＣＲＸ遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の変動性を生じ得る。天然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、そしてこのＧＰＣＲＸポリペプチドの機能的活性を変化させない、ＧＰＣＲＸポリペプチド内の任意および全てのこのようなヌクレオチドのバリエーションならびに得られるアミノ酸多型は、本発明の範囲内であると意図される。
【０２１３】
さらに、他の種由来のＧＰＣＲＸタンパク質をコードし、従って、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヒト配列とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子は、本発明の範囲内にあることが意図される。本発明のＧＰＣＲＸのｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるヒトＧＰＣＲＸ核酸に対するその相同性に基づいて、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、標準的なハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイゼーションプローブとしてヒトｃＤＮＡまたはその一部を用いて単離され得る。
【０２１４】
従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも６ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形態では、この核酸は、少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、または２０００以上のヌクレオチド長である。なお別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、コード領域にハイブリダイズする。本明細書中で用いられる場合、用語「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関して、互いに少なくとも６０％相同なヌクレオチド配列が代表的には互いにハイブリダイズしたままである条件を記載することを意図する。
【０２１５】
ホモログ（すなわち、ヒト以外の種由来のＧＰＣＲＸタンパク質をコードする核酸）または他の関連配列（例えば、パラログ（ｐａｒａｌｏｇｓ））は、特定のヒト配列の全てまたは一部をプローブとし、核酸ハイブリダイゼーションおよびクローニングに関して当該分野で周知の方法を使用して、低い、中程度の、または高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって入手され得る。
【０２１６】
本明細書で用いられる場合、語句「ストリンジェントハイブリダイゼーション条件」は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、その標的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない条件をいう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で異なる。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズする。一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで、特定の配列の熱融解点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。このＴｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイズする（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下）温度である。標的配列は一般に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有されている。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩濃度が約１．０Ｍナトリウムイオンより少なく、代表的には約０．０１〜１．０Ｍナトリウムイオン（またはその他の塩）、そして温度が短いプローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）について少なくとも約３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチドについて少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドのような、脱安定化剤の添加で達成され得る。
【０２１７】
ストリンジェント条件は、当業者に公知であり、そしてＡｕｓｕｂｅｌら（編），ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％または約９９％相同な配列が、代表的には互いにハイブリダイズしたままであるような条件である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．０２％　ＰＶＰ、０．０２％　Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％　ＢＳＡ、および５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む高塩緩衝液中での６５℃でのハイブリダイゼーションであり、続いて、０．２×ＳＳＣ、０．０１％　ＢＳＡ中での５０℃での１回以上の洗浄を行う。ストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の配列にハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【０２１８】
第２の実施形態では、配列番号１、４、６、またはそれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸配列が提供される。中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、５５℃での６×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％　ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中でのハイブリダイゼーション、続いて１×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳ中での３７℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ　ＴＲＡＮＳＦＥＲ　ＡＮＤ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【０２１９】
第３の実施形態では、配列番号１、４、６、またはそれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．０２％　ＰＶＰ、０．０２％　Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％　ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）デキストラン硫酸中での４０℃でのハイブリダイゼーション、続いて２×ＳＳＣ、２５ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ　ＥＤＴＡおよび０．１％　ＳＤＳ中での５０℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る低ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である（例えば、種交差ハイブリダイゼーションについて用いられるように）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，ＮＹならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ　ＴＲＡＮＳＦＥＲ　ＡＮＤ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　７８：６７８９−６７９２を参照のこと。
【０２２０】
（保存的変異）
集団中に存在し得る、ＧＰＣＲＸ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加えて、当業者は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヌクレオチド配列への変異によって変化が導入され得、それによって、このＧＰＣＲＸタンパク質の機能的能力を変更することなく、コードされるＧＰＣＲＸタンパク質のアミノ酸配列に変化がもたらされることをさらに理解する。例えば、「非必須」アミノ酸残基にてアミノ酸置換をもたらすヌクレオチド置換は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３の配列において行われ得る。「非必須」アミノ酸残基は、生物学的活性を有意に変更することなく、このＧＰＣＲＸタンパク質のの野生型配列から、変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、このような生物学的活性に必要とされる。例えば、本発明のＧＰＣＲＸタンパク質の間で保存されているアミノ酸残基は、特に変更を受け入れ難いと予測される。保存的置換がなされ得るアミノ酸は、当該分野で周知である。
【０２２１】
本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化を含む、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードする核酸分子に関する。このようなＧＰＣＲＸタンパク質は、アミノ酸配列が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３とは異なるが、生物学的活性をなお保持する。１つの実施形態では、単離された核酸分子は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、このタンパク質は、それぞれ、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のアミノ酸配列に少なくとも約４５％の相同性であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子によってコードされるタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に対して少なくとも約６０％相同であり；よりましくは配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に対して少なくとも約７０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に対してして少なくとも約８０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に対して少なくとも約９０％相同であり；そして最も好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に対して少なくとも約９５％相同である。
【０２２２】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のタンパク質に相同なＧＰＣＲＸタンパク質をコードする単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヌクレオチド配列に１以上のヌクレオチドの置換、付加または欠失を導入することにより作製され得、その結果、１以上のアミノ酸の置換，付加または欠失が、コードされるタンパク質に導入される。
【０２２３】
変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）によって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必須アミノ酸残基にて作製される。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、アミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、以下が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アルパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。従って、ＧＰＣＲＸタンパク質中の推定された非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。あるいは、別の実施形態では、変異は、ＧＰＣＲＸコード配列の全てまたは一部に沿って（例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）によって）ランダムに導入され得、そして得られる変異体は、ＧＰＣＲＸの生物学的活性についてスクリーニングされて、活性を維持する変異体を同定し得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の変異誘発に続いて、コードされるタンパク質は、当該分野で公知の任意の組換え技術によって発現され得、そしてこのタンパク質の活性が決定され得る。
【０２２４】
アミノ酸ファミリーの関連性はまた、側鎖に基づいて決定され得る。置換されたアミノ酸は、完全に保存された「強い」残基または完全に保存された「弱い」残基であり得る。保存されたアミノ酸残基の「強い」群は、以下の群のいずれかであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ（ここで、単一の文字のアミノ酸コードは、互いに置換され得るこれらのアミノ酸残基によりグループ化される）。同様に、保存された残基の「弱い」群は、以下のいずれかで有り得る：ＣＳＡ、ＡＴＶ、ＳＡＧ、ＳＴＮＫ、ＳＴＰＡ、ＳＧＮＤ、ＳＮＤＥＱＫ、ＮＤＥＱＨＫ、ＮＥＱＨＲＫ、ＶＬＩＭ、ＨＦＹ（ここで、各群内の文字は、一文字アミノ酸コードを表する）。
【０２２５】
１つの実施形態では、変異ＧＰＣＲＸタンパク質は、以下についてアッセイされ得る：（ｉ）他のＧＰＣＲＸタンパク質、他の細胞表面タンパク質、または生物学的に活性なそれらの部分と、タンパク質：タンパク質相互作用を形成する能力、（ｉｉ）変異ＧＰＣＲＸタンパク質と、ＧＰＣＲＸのリガンドとの間の複合体形成；（ｉｉｉ）変異ＧＰＣＲＸタンパク質が細胞内標的タンパク質またはその生物学的に活性な部分に結合する能力；（例えば、アビジンタンパク質）。
【０２２６】
なお別の実施形態において、変異体ＧＰＣＲＸタンパク質は、特定の生物学的機能を調節する能力（例えば、インスリン放出の能力）についてアッセイされ得る。
【０２２７】
（アンチセンス核酸）
本発明の別の局面は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８またはそのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズし得るかまたは相補的である、単離されたアンチセンス核酸分子に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。特定の局面では、少なくとも約１０、約２５、約５０、約１００、約２５０もしくは約５００ヌクレオチドまたは全体のＧＰＣＲＸコード鎖、またはそれらの一部のみに相補的な配列を含む、アンチセンス核酸分子が提供される。配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のＧＰＣＲＸタンパク質のフラグメント、ホモログ、誘導体およびアナログをコードする核酸分子、または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のＧＰＣＲＸ核酸配列に相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。
【０２２８】
１つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対してアンチセンスである。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含む、ヌクレオチド配列の領域をいう。別の実施形態では、このアンチセンス核酸分子は、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対してアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接する、アミノ酸に翻訳されない、５’配列および３’配列をいう（すなわち、５’非翻訳領域および３’非翻訳領域ともいわれる）。
【０２２９】
本明細書中に開示されるＧＰＣＲＸタンパク質をコードするコード鎖配列を考慮すれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対合の規則に従って設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好ましくは、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部にのみアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、長さが約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５または約５０ヌクレオチドであり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いて、化学的合成または酵素連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはこの分子の生物学的安定性を増大させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増大させるように設計された種々に改変されたヌクレオチドを用いて化学的に合成され得る（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが用いられ得る）。
【０２３０】
アンチセンス核酸を作製するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例としては以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、シュードウラシル、クエオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、このアンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、以下の小節にさらに記載される、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）。
【０２３１】
本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には被験体に投与されるか、またはインサイチュで生成され、その結果それらは、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードする細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか、またはそれに結合し、それによってこのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって）。ハイブリダイゼーションは、安定な二重鎖を形成する従来のヌクレオチド相補性によってか、または例えばＤＮＡ二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんのメジャーグルーブ（ｍａｊｏｒ　ｇｒｏｏｖｅ）における特異的相互作用を介してであり得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組織部位での直接的注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的化するように改変され得、次いで全身に投与される。例えば、全身投与のために、アンチセンス分子は、それらが選択された細胞表面上に発現されたレセプターまたは抗原に特異的に結合するように改変され得る（例えば、そのアンチセンス核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することによって）。このアンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載されるベクターを用いて細胞に送達され得る。十分な核酸分子を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ　ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ　ＩＩＩプロモーターの制御下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
【０２３２】
なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子である。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで、通常のα−ユニットとは対照的に、鎖は、互いに平行に走行する（例えば、Ｇａｕｌｔｉｅｒら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１を参照のこと）。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１５：６１３１〜６１４８を参照のこと）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．２１５：３２７〜３３０を参照のこと）を含み得る。
【０２３３】
（リボザイムおよびＰＮＡ部分）
核酸の改変としては、非制限的な例として、改変塩基、および糖リン酸バックボーンが改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、少なくとも一部は、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実施され、その結果、それらは、例えば、被験体での治療的適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。
【０２３４】
１つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リボザイムは、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子であり、これらは、その一本鎖核酸に対して相補領域を有する。従って、リボザイム（例えば、ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ　１９８８．Ｎａｔｕｒｅ　３３４：５８５−５９１に記載されるハンマーヘッド型リボザイム）を使用して、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それによってＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＧＰＣＲＸをコードする核酸に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示されるＧＰＣＲＸ　ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８）に基づいて設計され得る。例えば、活性部位のヌクレオチド配列が、ＧＰＣＲＸをコードするｍＲＮＡ内で切断されるヌクレオチド配列に相補的である、テトラヒメナＬ−１９　ＩＶＳ　ＲＮＡの誘導体が構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈらの米国特許第４，９８７，０７１号およびＣｅｃｈらの米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡをまた使用して、ＲＮＡ分子のプールから、特異的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６１：１４１１〜１４１８を参照のこと。
【０２３５】
あるいは、ＧＰＣＲＸ遺伝子発現は、ＧＰＣＲＸ核酸の調節領域（例えば、ＧＰＣＲＸのプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化し、標的細胞中でＧＰＣＲＸ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を形成することによって阻害され得る。例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓ．６：５６９〜８４；Ｈｅｌｅｎｅら．１９９２．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；Ｍａｈｅｒ，１９９２．Ｂｉｏａｓｓａｙｓ　１４：８０７−１５を参照のこと。
【０２３６】
種々の実施形態において、ＧＰＣＲＸ核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格で改変され、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは可溶性を改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変して、ペプチド核酸を生成し得る（例えば、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　４：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格が偽ペプチド骨格によって置換され、そして４つの天然の核塩基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９３：１４６７０−１４６７５において記載されるような標準的固相ペプチド合成プロトコルを用いて行われ得る。
【０２３７】
ＧＰＣＲＸのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば転写または翻訳の停止を誘導することまたは複製を阻害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗遺伝子剤として使用され得る。ＧＰＣＲＸのＰＮＡはまた、例えばＰＮＡ指向性ＰＣＲクランピングによる遺伝子における一塩基対変異の分析において；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐ　Ｂ．ら，１９９６．前出を参照のこと）；またはＤＮＡ配列およびハイブリダイゼーションのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６，前出を参照のこと）、使用され得る。
【０２３８】
別の実施形態において、ＧＰＣＲＸのＰＮＡは、例えば、それらの安定性または細胞性取り込みを増強するために、ＰＮＡに脂溶性基または他のヘルパー基を結合することによって、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によって、またはリポソームもしくは当該分野において公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変され得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組合せ得る、ＧＰＣＲＸのＰＮＡ−ＤＮＡキメラが生成され得る。ＰＮＡ部分が高い結合親和性および特異性を提供する一方で、そのようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮａｓｅ　ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用するのを可能にする。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基のスタッキング、核塩基間の結合数および方向を考慮して選択される適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出を参照のこと）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出およびＦｉｎｎら，１９９６，Ｎｕｃｌ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ　２４：３３５７−３３６３において記載されるように行われ得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホラミダイトカップリング化学を用いて固体支持体上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホルアミダイト）が、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に使用され得る（Ｍａｇら，１９８９，Ｎｕｃｌ　Ａｃｉｄ　Ｒｅｓ　１７：５９７３〜５９８８を参照のこと）。次いで、ＰＮＡモノマーが段階様式でカップリングされ、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎら，１９９６，前出を参照のこと）。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いて、キメラ分子が合成され得る。例えば、Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，１９７５，）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９〜１１１２４を参照のこと。
【０２３９】
他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のような他の付属の基を含み得る：ペプチド（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するため）、または細胞膜を横切る輸送を容易にする因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　６：９５８〜９７６を参照のこと）、またはインターカレーター剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）で改変され得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤など）に結合され得る。
【０２４０】
（ＧＰＣＲＸポリペプチド）
本発明に従うポリペプチドは、配列が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に提供されるＧＰＣＲＸタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明はまた、なおそのＧＰＣＲＸ活性および生理学的機能を維持するタンパク質、またはその機能的フラグメントをコードするが、その任意の残基が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に示される対応する残基から変化し得る、変異体または改変体タンパク質を含む。
【０２４１】
一般に、ＧＰＣＲＸ様機能を保持するＧＰＣＲＸ改変体は、配列中の特定位置の残基が他のアミノ酸により置換され、そしてさらに、親タンパク質の２つの残基間にさらなる残基を挿入する可能性、および親配列から１つ以上の残基を欠失する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入または欠失が、本発明に包含される。好適な状況では、この置換は、上記で規定されるような保存的置換である。
【０２４２】
本発明の１つの局面は、単離されたＧＰＣＲＸタンパク質、およびその生物学的に活性な部分、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに関する。抗ＧＰＣＲＸ抗体を惹起するための免疫原としての使用のために適切なポリペプチドフラグメントもまた提供される。１つの実施形態において、ネイティブなＧＰＣＲＸタンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を用いる適切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生される。組換え発現に代わるものとして、ＧＰＣＲＸタンパク質またはポリペプチドは、標準的なペプチド合成技術を用いて化学合成され得る。
【０２４３】
「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはタンパク質あるいはその生物学的に活性な部分は、ＧＰＣＲＸタンパク質の由来する細胞または組織供給源由来の細胞性物質または他の夾雑タンパク質を実質的に含まないか、あるいは化学合成される場合に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、ＧＰＣＲＸタンパク質の調製物を含み、この調製物において、ＧＰＣＲＸタンパク質が単離または組換え産生される細胞の細胞性成分から、ＧＰＣＲＸタンパク質は分離されている。１つの実施形態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、非ＧＰＣＲＸタンパク質（本明細書中において「夾雑タンパク質」とも呼ばれる）を約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは非ＧＰＣＲＸタンパク質を約２０％未満、なおより好ましくは非ＧＰＣＲＸタンパク質を約１０％未満、そして最も好ましくは非ＧＰＣＲＸタンパク質を約５％未満有する、ＧＰＣＲＸタンパク質の調製物を含む。ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え産生される場合、好ましくは、調製物はまた培養培地を実質的に含まない。すなわち、培養培地は、そのタンパク質調製物の容量の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、そして最も好ましくは約５％未満を示す。
【０２４４】
用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパク質が、そのタンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離されているＧＰＣＲＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、化学前駆体または非ＧＰＣＲＸの化学物質を約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは化学前駆体または非ＧＰＣＲＸ化学物質を約２０％未満、なおより好ましくは化学前駆体または非ＧＰＣＲＸ化学物質を約１０％未満、そして最も好ましくは化学前駆体または非ＧＰＣＲＸ化学物質を約５％未満有する、ＧＰＣＲＸタンパク質の調製物を含む。
【０２４５】
ＧＰＣＲＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、全長ＧＰＣＲＸタンパク質より少ないアミノ酸を含み、そしてＧＰＣＲＸタンパク質の少なくとも１つの活性を示す、ＧＰＣＲＸタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に示されるアミノ酸配列）に十分に相同なアミノ酸配列、またはＧＰＣＲＸタンパク質のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な部分は、ＧＰＣＲＸタンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含む。ＧＰＣＲＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、長さが１０、２５、５０、１００またはそれより多いアミノ酸残基であるポリペプチドであり得る。
【０２４６】
さらに、タンパク質の他の領域が欠失している他の生物学的に活性な部分は、組換え技術によって調製され得、そしてネイティブなＧＰＣＲＸタンパク質の機能的活性のうちの１つ以上について評価され得る。
【０２４７】
１つの実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に示されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３に実質的に相同であり、そして以下に詳細に議論されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘発に起因してアミノ酸配列が異なるが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のタンパク質の機能的活性を保持する。従って、別の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同なアミノ酸配列を含み、そして、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のＧＰＣＲＸタンパク質の機能的活性を保持するタンパク質である。
【０２４８】
（２つ以上の配列間の相同性の決定）
２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性の百分率を決定するために、配列は、至適な比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、第２のアミノ酸または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸または核酸配列に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子はその位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。
【０２４９】
核酸配列の相同性は、２つの配列間の同一性の程度として決定され得る。相同性は、当該分野において公知のコンピュータープログラム（例えば、ＧＣＧプログラムパッケージにおいて提供されるＧＡＰソフトウェア）を用いて決定され得る。ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，１９７０　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　４８：４４３〜４５３を参照のこと。核酸配列比較のための以下の設定（ＧＡＰ作製ペナルティー、５．０、およびＧＡＰ伸長ペナルティー、０．３）を用いてＧＣＧ　ＧＡＰソフトウェアを使用すると、上記で言及される類似の核酸配列のコード領域は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８に示されるＤＮＡ配列のＣＤＳ（コード）部分と、好ましくは少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性の程度を示す。
【０２５０】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列が、特定の比較領域にわたって、残基毎を基準として同一である程度をいう。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、以下により算出される：この比較領域にわたって最適に整列された２つの配列を比較すること、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、核酸の場合にはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）が存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を導くこと、この一致した位置の数を、比較領域の内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算すること、およびその結果を１００で乗算して、配列同一性のパーセンテージを導くこと。用語「実質的な同一性」は、本明細書中で使用される場合、ポリヌクレオチド配列の特徴を示し、ここでこのポリヌクレオチドは、比較領域にわたり参照配列と比較して、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、そして頻繁には９０〜９５％の配列同一性、より通常には少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【０２５１】
（キメラタンパク質および融合タンパク質）
本発明はまた、ＧＰＣＲＸキメラタンパク質または融合タンパク質を提供する。本明細書中で使用される場合、ＧＰＣＲＸ「キメラタンパク質」またはＧＰＣＲＸ「融合タンパク質」は、非ＧＰＣＲＸポリペプチドに作動可能に連結された、ＧＰＣＲＸポリペプチドを含む。「ＧＰＣＲＸポリペプチド」は、ＧＰＣＲＸタンパク質（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非ＧＰＣＲＸポリペプチド」は、ＧＰＣＲＸタンパク質に対して実質的に相同ではないタンパク質（例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質とは異なり、かつ同一でかまたは異なる生物体に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。ＧＰＣＲＸ融合タンパク質において、このＧＰＣＲＸポリペプチドは、ＧＰＣＲＸタンパク質のすべてまたは一部分に対応し得る。１つの実施形態では、ＧＰＣＲＸ融合タンパク質は、ＧＰＣＲＸタンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の実施形態では、ＧＰＣＲＸ融合タンパク質は、ＧＰＣＲＸタンパク質の少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む。なお別の実施形態においてＧＰＣＲＸ融合タンパク質は、少なくとも３つの生物学的に活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結された」は、ＧＰＣＲＸポリペプチドおよび非ＧＰＣＲＸポリペプチドが、インフレームで互いに融合されていることを示すことが意図される。非ＧＰＣＲＸポリペプチドは、ＧＰＣＲＸポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０２５２】
１つの実施形態においては、この融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＧＰＣＲＸ融合タンパク質であり、ここではＧＰＣＲＸ配列が、ＧＳＴ（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。このような融合タンパク質は、組換えＧＰＣＲＸポリペプチドの精製を容易にし得る。
【０２５３】
別の実施形態において、この融合タンパク質は、Ｎ末端に異種シグナル配列を含むＧＰＣＲＸタンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ＧＰＣＲＸの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用を介して増加され得る。
【０２５４】
なお別の実施形態において、この融合タンパク質は、ＧＰＣＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質であり、ここで、ＧＰＣＲＸ配列が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。本発明のこのＧＰＣＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込まれ、そして被験体に投与されて、細胞の表面上でＧＰＣＲＸリガントとＧＰＣＲＸタンパク質との間の相互作用を阻害し、それによってインビボのＧＰＣＲＸ媒介信号伝達を抑制し得る。このＧＰＣＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質を用い、ＧＰＣＲＸ同族リガンドの生体利用性に影響を与え得る。ＧＰＣＲＸリガンド／ＧＰＣＲＸ相互作用の阻害は、増殖障害および分化障害の両方の処置、および細胞生存を調節（例えば、促進または阻害）することに、治療的に有用であり得る。さらに、本発明のこのＧＰＣＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗ＧＰＣＲＸ抗体を産生するための免疫原として用いられ得、ＧＰＣＲＸリガンドを精製し、そしてＧＰＣＲＸリガンドとのＧＰＣＲＸの相互作用を阻害する分子を同定するスクリーニングアッセイで用いられ得る。
【０２５５】
本発明のＧＰＣＲＸキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技法により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントを、従来の技法に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着（ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端のフィルイン、所望しない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を採用することにより、インフレームで一緒に連結する。別の実施形態では、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来技法により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得る、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープライマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ　ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ　ＩＮ　ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合成分（例えば、ＧＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている。ＧＰＣＲＸをコードする核酸は、この融合成分がＧＰＣＲＸタンパク質にインフレーム連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。
【０２５６】
（ＧＰＣＲＸアゴニストおよびアンタゴニスト）
本発明はまた、ＧＰＣＲＸアゴニスト（模倣物）として、またはＧＰＣＲＸアンタゴニストとして機能するＧＰＣＲＸタンパク質の改変体に関する。ＧＰＣＲＸタンパク質の改変体（例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質の離散した点変異または短縮型）が、変異誘発により生成され得る。ＧＰＣＲＸタンパク質のアゴニストは、天然に存在する形態のＧＰＣＲＸタンパク質と実質的に同じ生物学的活性、またはその生物学的活性のサブセットを保持し得る。ＧＰＣＲＸタンパク質のアンタゴニストは、天然に存在する形態のＧＰＣＲＸタンパク質の１つ以上の活性を、例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質を含む細胞シグナル伝達カスケードの下流または上流メンバーに競合的に結合することにより阻害し得る。従って、特異的生物学的効果が、限られた機能の改変体を用いた処理により惹起され得る。１つの実施形態では、このタンパク質の天然に存在する形態の生物学活性のサブセットを有する改変体を用いた被験体の処置は、ＧＰＣＲＸタンパク質の天然に存在する形態を用いた処置に対して被験体におけるより少ない副作用を有する。
【０２５７】
ＧＰＣＲＸアゴニスト（模倣物）として、またはＧＰＣＲＸアンタゴニストのいずれかとして機能するＧＰＣＲＸタンパク質の改変体は、ＧＰＣＲＸタンパク質アゴニストまたはアンタゴニスト活性のためのＧＰＣＲＸタンパク質の変異体（例えば短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより同定され得る。１つの実施形態では、ＧＰＣＲＸ改変体の多彩なライブラリーは、核酸レベルのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＧＰＣＲＸ改変体の多彩なライブラリーは、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、潜在的なＧＰＣＲＸ配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＧＰＣＲＸ配列のセットを含む（例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合タンパク質のセットとして発現可能であるように、遺伝子配列に酵素的に連結することにより産生され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的なＧＰＣＲＸ改変体のライブラリーを産生するために用いられ得る種々の方法がある。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結される。遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＧＰＣＲＸ配列の所望のセットをコードする配列のすべての供給を可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当該分野で周知である。例えば、Ｎａｒａｎｇ，１９８３．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９８：１０５６；Ｉｋｅら，１９８３．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと。
【０２５８】
（ポリペプチドライブラリー）
さらに、ＧＰＣＲＸタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用いて、ＧＰＣＲＸタンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のためのＧＰＣＲＸフラグメントの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態では、コード配列フラグメントのライブラリーは、ＧＰＣＲＸコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、１分子あたり約１つのみのニックが生じる条件下、ヌクレアーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からのセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにこのＤＮＡを再生すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二本鎖から一本鎖部分を除去すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結することにより生成し得る。この方法により、ＧＰＣＲＸタンパク質の種々のサイズのＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが派生し得る。
【０２５９】
点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための種々の技術が当該分野で公知である。このような技法を、ＧＰＣＲＸタンパク質のコンビナトリアル変異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に適した最も広く用いられる技法は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細胞を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大する新規技法であるリクルーシブエンセブル変異誘発（ＲＥＭ）を、スクリーニングアッセイと組み合わせて用い、ＧＰＣＲＸ改変体を同定し得る。例えば、ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ，１９９２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら，１９９３．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　６：３２７−３３１を参照のこと。
【０２６０】
（抗ＧＰＣＲＸ抗体）
本発明は、本発明の任意のＧＰＣＲＸポリペプチドに免疫特異的に結合する、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような抗体または抗体フラグメントを包含する。
【０２６１】
単離されたＧＰＣＲＸタンパク質、またはその部分もしくはフラグメントは、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体調製のための標準的な技術を用いて、ＧＰＣＲＸポリペプチドに結合する抗体を産生するための免疫原として用いられ得る。完全長のＧＰＣＲＸタンパク質が用いられ得るが、あるいは、本発明は、免疫原としての使用のためのＧＰＣＲＸタンパク質の抗原性ペプチドフラグメントを提供する。ＧＰＣＲＸの抗原性ペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３で示されるアミノ酸配列の少なくとも４アミノ酸残基を含み、そしてこのペプチドに対して惹起された抗体がＧＰＣＲＸと特異的な免疫複合体を形成するように、ＧＰＣＲＸのエピトープを含む。好ましくは、この抗原性ペプチドは、少なくとも６、８、１０、１５、２０、または３０個のアミノ酸残基を含む。より長い抗原性ペプチドが、用途に依存して、そして当業者に周知の方法に従い、より短い抗原性ペプチドよりもしばしば好適である。
【０２６２】
本発明の特定の実施形態では、抗原性ペプチドに含まれる少なくとも１つのエピトープは、タンパク質の表面上に位置するＧＰＣＲＸの領域、例えば、親水性領域である。抗体産生を標的にする手段として、親水性および疎水性の領域を示すヒドロパシープロットを、例えば、フーリエ変換を伴うかまたは伴わない、Ｋｙｔｅ　ＤｏｏｌｉｔｔｌｅまたはＨｏｐｐ　Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で周知の任意の方法により生成し得る。例えば、それらの全体が本明細書に参考として援用される、例えば、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７８：３８２４−３８２８；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ　１９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１４２を参照のこと。この各々が、それらの全体において、本明細書中で参考として援用される。
【０２６３】
本明細書で開示されるように、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のＧＰＣＲＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログを、これらのタンパク質成分に免疫特異的に結合する抗体の産生における免疫原として利用し得る。本明細書で用いる用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、ＧＰＣＲＸのような抗原に特異的に結合（免疫反応）する抗原結合部位を含む分子をいう。このような抗体は、制限されずに、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦａｂ発現ライブラリーを含む。特定の実施形態では、ヒトＧＰＣＲＸタンパク質に対する抗体が開示される。当該分野で公知の種々の手順が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、および８３のＧＰＣＲＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対するポリクローナルまたはモノクローナル抗体の産生のために用いられ得る。これらのタンパク質のいくつかを以下で論議する。
【０２６４】
ポリクローナル抗体の産生のために、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ、ヤギ、マウスまたはその他の哺乳動物）が、ネイティプタンパク質、またはその合成改変体、または前述の誘導体での注射により免疫され得る。適切な免疫原性調製物は、例えば、組換えにより発現されたＧＰＣＲＸタンパク質または化学的に合成されたＧＰＣＲＸポリペプチドを含有し得る。この調製物は、アジュバントをさらに含み得る。免疫学的応答を増大するために用いられる種々のアジュバントは、制限されずに、フロイントの完全および不完全アジュバント、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、ジニトロフェノールなど）、Ｂａｃｉｌｌｅ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ−ＧｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐａｒｖｕｍのようなヒトアジュバント、または類似の免疫刺激剤を含む。所望であれば、ＧＰＣＲＸに対して惹起された抗体分子は、哺乳動物（例えば、血液）から単離され、そしてさらに、ＩｇＧ画分を得るために、プロテインＡクロマトグラフィーのような、周知の技術により精製され得る。
【０２６５】
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、ＧＰＣＲＸの特定のエピトープと免疫反応し得る、１種類の抗原結合部位のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、代表的には、モノクローナル抗体組成物は、それと免疫反応する特定のＧＰＣＲＸタンパク質に対し、単一の結合親和性を示す。特定のＧＰＣＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対して惹起されたモノクローナル抗体の調製には、継続的な細胞株培養による抗体分子の産生を提供する任意の技術が利用され得る。このような技術は、制限されずに、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５　Ｎａｔｕｒｅ　２５６：４９５−４９７を参照のこと）；トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ　４：７２）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（例えば、Ｃｏｌｅら、１９８５　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ　ＡＮＤ　ＣＡＮＣＥＲ　ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ　Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．７７−９６頁を参照のこと）を含む。ヒトモノクローナル抗体を、本発明の実施において利用し得、そしてヒトハイブリドーマを用いることによるか（例えば、Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタイン−バーウイルスで形質転換することにより（例えば、Ｃｏｔｅら、１９８５　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ　ＡＮＤ　ＣＡＮＣＥＲ　ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ　Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．７７−９６頁を参照のこと）産生し得る。上記の引用の各々は、それらの全体が参考として本明細書に援用される。
【０２６６】
本発明によれば、技術は、ＧＰＣＲＸタンパク質に特異的な単鎖抗体の産生のために適合され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。さらに、方法は、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のために適合されて（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９　Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４６：１２７５−１２８１を参照のこと）、ＧＰＣＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ有効な同定を可能にし得る。非ヒト抗体は、当該分野で周知の技術により「ヒト化」され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。ＧＰＣＲＸタンパク質に対するイディオタイプを含む抗体フラグメントを、当該分野で公知の技術により産生し得、これには、制限されないで：（ｉ）抗体分子のペプシン消化により産生されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより産生されるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）抗体分子のパパインおよび還元剤での処理により産生されるＦａｂフラグメント；ならびに（ｉｖ）Ｆｖフラグメントが含まれる。
【０２６７】
さらに、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含むキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体のような、組換え抗ＧＰＣＲＸ抗体（これらは、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る）は、本発明の範囲内である。このようなキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術により産生され得る。この技術は例えば、以下に記載の方法を用いる：国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；欧州特許出願番号１８４，１８７号；欧州特許出願番号１７１，４９６；欧州特許出願番号１７３，４９４；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ　８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許出願番号１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８４：３４３９〜３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８４：２１４〜２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　４７：９９９〜１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ　３１４：４４６〜４４９；Ｓｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．８０：１５５３〜１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：１２０２〜１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　４：２１４；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ　３２１：５５２〜５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４；ならびにＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３〜４０６０。上記引用の各々は、それらの全体において参考として本明細書中に援用される。
【０２６８】
１つの実施形態において、所望の特異性を保有する抗体のスクリーニングのための方法は、当該分野内で公知の酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）および他の免疫学的に媒介された技術を含むが、これに限定されない。特定の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質の特定のドメインに対して特異的である抗体の選抜は、このようなドメインを所有しているＧＰＣＲＸタンパク質のフラグメントに結合するハイブリドーマの生成により容易にされる。従って、ＧＰＣＲＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログ内の所望のドメインについて特異的である抗体がまた、本明細書において提供される。
【０２６９】
抗ＧＰＣＲＸ抗体は、ＧＰＣＲＸタンパク質の局在化および／または定量化に関する当該分野で公知の方法において用いられ得る（例えば、適切な生理学的なサンプル中のＧＰＣＲＸタンパク質のレベルを測定する使用のために、診断的方法における使用のために、タンパク質の画像化における使用のために、など）。所定の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログについての抗体（抗体由来の結合ドメインを含む）は、薬理学的に活性な化合物（本明細書中、以降において「治療剤」）として利用される。
【０２７０】
抗ＧＰＣＲＸ抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的技術（例えばアフィニティークロマトグラフィまたは免疫沈降）によって、ＧＰＣＲＸポリペプチドを単離するために用いられ得る。抗ＧＰＣＲＸ抗体は、細胞からの天然のＧＰＣＲＸポリペプチド、そして宿主細胞において発現される組換え的に産生されたＧＰＣＲＸポリペプチドの精製を容易にし得る。さらに、抗ＧＰＣＲＸ抗体が、（例えば、細胞の溶解産物または細胞上清における）ＧＰＣＲＸタンパク質を検出するために用いられて、ＧＰＣＲＸタンパク質の発現のアバンダンスおよびパターンを評価し得る。抗ＧＰＣＲＸ抗体は、例えば、所定の治療レジメンの有効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として、組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物質に結合する（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易にされ得る。検出可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられる；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；そして、適切な放射性物質の例としては１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０２７１】
（ＧＰＣＲＸ組換え発現ベクターおよび宿主細胞）
本発明の別の局面は、ＧＰＣＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログをコードする核酸を含む、ベクター、好ましくは、発現ベクターに関する。本明細書において使用する場合、用語「ベクター」は、連結された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。１つの型のベクターは、「プラスミド」である。これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。他の型のベクターは、ウイルス性ベクターであり、ここでは、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムに連結され得る。特定のベクターは、ベクターが導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば、細菌性の複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そして、これにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指示し得る。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に用いられる形態のベクターであるので、交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価の機能を果たす、ウイルス性ベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）のような、このような他の形態の発現ベクターを含むことを意図する。
【０２７２】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態の本発明の核酸を含む。これは、組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結されている、発現に用いられる宿主細胞に基づいて選択された１つ以上の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作動可能に連結する」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロの転写／翻訳系において、またはベクターが宿主細胞に導入される場合は、宿主細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で調節配列に連結されることを意味することを意図する。
【０２７３】
用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ　１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指示する配列、および特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を指示する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計が形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどのような因子に依存し得ることは当業者には明白である。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され得、それにより、本明細書に記載される核酸によってコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質またはペプチドを含む）（例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質、ＧＰＣＲＸタンパク質の変異形態、融合タンパク質など）を産生し得る。
【０２７４】
本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、ＧＰＣＲＸタンパク質発現のために設計され得る。例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ　１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）にさらに考察されている。あるいは、組換え型発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて、インビトロで転写および翻訳され得る。
【０２７５】
原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現を指示する、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターを有するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉにおいて実施される。融合ベクターは、そこにコードされるタンパク質に、通常、組換えタンパク質のアミノ末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、以下の３つの目的のために役立つ：（ｉ）組換えタンパク質の発現を増加させるため；（ｉｉ）組換えタンパク質の可溶性を増加させるため；および（ｉｉｉ）アフィニティー精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の精製の際に補助するため。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解の切断部位が、融合部分と組換えタンパク質との結合部に導入されて、融合タンパク質の精製の後に融合部分から組換えタンパク質を分離することを可能とする。このような酵素、およびその同族（ｃｏｇｎａｔｅ）の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとしては、それぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを標的の組換えタンパク質に融合する、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ　Ｉｎｃ．；ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ　６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０２７６】
適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ　６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ　１１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ　１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げられる。
【０２７７】
Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラテジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力を欠損した宿主細菌中でタンパク質を発現させることである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ　ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ　１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラテジーは、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるコドンであるように発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２０：２１１１−２１１８を参照のこと）。本発明の核酸配列のこのような変更は、標準的なＤＮＡ合成技術によって実行され得る。
【０２７８】
別の実施形態において、ＧＰＣＲＸ発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ　Ｊ．６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌｌ　３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ　５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ　Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
【０２７９】
あるいは、ＧＰＣＲＸは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞中で発現され得る。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２１５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１７０：３１−３９）が挙げられる。
【０２８０】
なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ　３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ　Ｊ．６：１８７−１９５）が挙げられる。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のために適切な他の発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照のこと。
【０２８１】
別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型（例えば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）中で優先的に核酸の発現を指示し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切な組織特異的なプロモーターの非限定的な例には、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ　Ｄｅｖ．１：２６８−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、Ｔ細胞レセプターの特定のプロモーターにおいて（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ　Ｊ．８：７２９−７３３）および免疫グロブリンの特定のプロモーターにおいて（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ　３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ　３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、神経フィラメントプロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３０：９１２−９１６）、ならびに乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発達的に調節されるプロモーターもまた含まれる（例えば、マウスｈｏｘプロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：３７４−３７９）およびａ−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ　Ｄｅｖ．３：５３７−５４６）。
【０２８２】
本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分子は、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（ＤＮＡ分子の転写によって）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される。種々の細胞型においてアンチセンスＲＮＡ分子の持続的な発現を指示する、アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結された調節配列（例えば、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー）が選択され得るか、または、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞特異的発現を指示する調節配列が、選択され得る。アンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用する遺伝子発現の調節の考察については、例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ　ａｓ　ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０２８３】
本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能に使用される。このような用語は、特定の被験細胞をいうのみでなく、そのような細胞の子孫または潜在的な子孫をもいうことが理解される。変異または環境の影響のいずれかに起因して、特定の改変は次の世代において生じ得るので、このような子孫は、実際には、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中で使用される場合のこの用語の範囲内に含まれる。
【０２８４】
宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）において発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０２８５】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術を介して原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するために当該分野で容認されている種々の技術をいうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され得る。
【０２８６】
安定な哺乳動物細胞のトランスフェクションのために、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来ＤＮＡをそのゲノムに組み込み得ることが知られている。これらの要素を同定および選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。種々の選択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレキサート）に対する耐性を付与するものが含まれる。選択マーカーをコードする核酸は、ＧＰＣＲＸをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入され得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入された核酸で安定にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生存するが、他の細胞は死滅する）。
【０２８７】
本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物宿主細胞および真核生物宿主細胞）は、ＧＰＣＲＸタンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、ＧＰＣＲＸタンパク質を産生するための方法を提供する。１つの実施形態において、本発明の方法は、ＧＰＣＲＸタンパク質が産生されるような適切な培地中で、本発明の宿主細胞（ここに、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を培養する工程を包含する。別の実施形態において、本発明はさらに、培地または宿主細胞からＧＰＣＲＸタンパク質を単離する工程を包含する。
【０２８８】
（トランスジェニックＧＰＣＲＸ動物）
本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使用され得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、ＧＰＣＲＸタンパク質コード配列が導入された、受精卵母細胞または胚性幹細胞である。次いで、このような宿主細胞は、外因性のＧＰＣＲＸ配列がゲノムに導入された非ヒトトランスジェニック動物、または内因性のＧＰＣＲＸ配列が変更された相同組換え動物を作製するために使用され得る。このような動物は、ＧＰＣＲＸタンパク質の機能および／または活性を研究するため、ならびにＧＰＣＲＸタンパク質活性のモジュレーターを同定および／または評価するために有用である。本明細書中で使用される場合、「トランスジェニック動物」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは、ラットまたはマウスのような齧歯類であり、ここでは、その動物の１つ以上の細胞が、導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物の他の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などが挙げられる。導入遺伝子は、細胞（この細胞からトランスジェニック動物を発生させた）のゲノムに組み込まれかつ成熟動物のゲノムに残存し、それによって、トランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指示する、外因性のＤＮＡである。本明細書中で使用される場合、「相同（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）組換え動物」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはマウスであり、ここでは内因性のＧＰＣＲＸ遺伝子は、内因性の遺伝子と、その動物の発生の前にその動物の細胞（例えば、その動物の胚細胞）に導入された外因性のＤＮＡ分子との間の相同組換えによって変更されている。
【０２８９】
本発明のトランスジェニック動物は、ＧＰＣＲＸをコードする核酸を、例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって、受精卵母細胞の雄性前核に導入すること、およびその卵母細胞を偽妊娠雌性養育動物（ｆｏｓｔｅｒ　ａｎｉｍａｌ）中で発達させることを可能にすることによって作製され得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヒトのＧＰＣＲＸ　ｃＤＮＡ配列は、非ヒト動物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトのＧＰＣＲＸ遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスのＧＰＣＲＸ遺伝子）は、ヒトのＧＰＣＲＸ　ｃＤＮＡに対するハイブリダイゼーションに基づいて単離され得（上記にさらに記載された）、そして導入遺伝子として使用され得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた導入遺伝子中に含まれ得、その導入遺伝子の発現の効率を増大させ得る。組織特異的調節配列（単数または複数）は、特定の細胞に対して、ＧＰＣＲＸタンパク質の発現を指示するように、ＧＰＣＲＸ導入遺伝子に作動可能に連結され得る。胚の操作およびマイクロインジェクションを介するトランスジェニック動物（特に、マウスのような動物）を作製するための方法は、当該分野で慣習的になっており、そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；同第４，８７０，００９号；および同第４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａｎ　１９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩＮＧ　ＴＨＥ　ＭＯＵＳＥ　ＥＭＢＲＹＯ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。同様の方法が、他のトランスジェニック動物の作製のために使用される。トランスジェニック創始（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は、そのゲノムにおけるＧＰＣＲＸ導入遺伝子の存在および／またはその動物の組織もしくは細胞中のＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡの発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック創始動物は、導入遺伝子を有するさらなる動物を育種するために使用され得る。さらに、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は、さらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物に交雑され得る。
【０２９０】
相同組換え動物を作製するために、ＧＰＣＲＸ遺伝子の少なくとも一部を含むベクターを調製する。ここで、この遺伝子は、欠失、付加、または置換が導入され、それによってそのＧＰＣＲＸ遺伝子が変更されている（例えば、機能的に破壊されている）。ＧＰＣＲＸ遺伝子はヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のｃＤＮＡ）であり得るが、より好ましくは、ヒトのＧＰＣＲＸ遺伝子の非ヒトホモログである。例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８のヒトのＧＰＣＲＸ遺伝子のマウスホモログは、マウスゲノムにおける内因性のＧＰＣＲＸ遺伝子を変更するのに適切な相同組換えベクターを構築するために使用され得る。１つの実施形態において、そのベクターは、相同組換えに際して、その内因性のＧＰＣＲＸ遺伝子が、機能的に破壊されるように設計される（すなわち、機能的タンパク質をもはやコードしない；「ノックアウト」ベクターともいわれる）。
【０２９１】
あるいは、このベクターは、相同組換えに際して、内因性ＧＰＣＲＸ遺伝子が変異されるか、あるいはさもなければ、変更されるが、なお機能性タンパク質をコードするように、設計され得る（例えば、上流の調節領域が変更され、それによって内因性ＧＰＣＲＸタンパク質の発現を変更し得る）。相同組換えベクターにおいて、ＧＰＣＲＸ遺伝子の変更された部分は、ＧＰＣＲＸ遺伝子のさらなる核酸によって、その５’末端および３’末端で隣接されることにより、相同組換えが、ベクターによって保有される外因性ＧＰＣＲＸ遺伝子と胚幹細胞中の内因性ＧＰＣＲＸ遺伝子との間で起こることを可能にする。さらなる隣接するＧＰＣＲＸ核酸は、内因性遺伝子との首尾よい相同組換えのために十分な長さである。典型的に、数キロベースの隣接ＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方における）が、ベクターに含まれる。例えば、相同組換えベクターの説明についてＴｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ　５１：５０３を参照のこと。次いで、このベクターは、（例えば、エレクトロポレーションによって）胚性幹細胞株に導入され、そして導入されたＧＰＣＲＸ遺伝子が内因性ＧＰＣＲＸ遺伝子と相同組換えした細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２）Ｃｅｌｌ　６９：９１５を参照のこと）。
【０２９２】
次いで、選択された細胞が、動物（例えば、マウス）の未分化胚芽細胞へ注入され、凝集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９８７）のＴｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ　ａｎｄ　Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ、１１３頁〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚が、適切な偽妊娠雌性養育動物に移植され得、そしてその胚は分娩に到る。その生殖細胞中に相同組換えされたＤＮＡを保有する子孫が、動物を育種するために使用され得、ここでこの動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって、相同組換えされたＤＮＡを含む。相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築するための方法が、さらに以下に記載される；Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開番号：ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；およびＷＯ／９３／０４１６９。
【０２９３】
別の実施形態において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含む非ヒトトランスジェニック動物が産生され得る。このような系の１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の説明については、例えば、Ｌａｋｓｏら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５１：１３５１−１３５５を参照のこと・）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発現を調節するために使用される場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が必要となる。このような動物は、例えば、２つのトランスジェニック動物（一方は選択されたタンパク質をコードした導入遺伝子を含み、他方はリコンビナーゼをコードした導入遺伝子を含む）を交配することによる「二重の」トランスジェニック動物の構築によって提供され得る。
【０２９４】
本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンがまた、Ｗｉｌｍｕｔら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ　３８５：８１０−８１３に記載される方法に従って、産生され得る。簡単には、トランスジェニック動物からの細胞（例えば、体細胞）が単離され得、そして増殖サイクル（ｇｒｏｗｔｈ　ｃｙｃｌｅ）から出て、Ｇ０期に入るように誘導され得る。次いで、静止性細胞が、例えば、電気パルスの使用により、その静止性細胞が単離されたのと同種の動物から摘出された卵母細胞へ融合され得る。次いで、この再構築された卵母細胞は培養され、これにより、これは桑実胚または未分化胚芽細胞に発達し、次いで、偽妊娠雌性養育動物に移される。この雌性養育動物から産まれた子孫は、その細胞（例えば、その体細胞）が単離された動物のクローンである。
【０２９５】
（薬学的組成物）
本発明のＧＰＣＲＸ核酸分子、ＧＰＣＲＸタンパク質、および抗ＧＰＣＲＸ抗体（これはまた、本明細書中で、「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにそれらの誘導体、フラグメント、アナログ、およびホモログが、投与に適した薬学的組成物に組み込まれ得る。このような組成物は、典型的に、核酸分子、タンパク質または抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に適合可能な、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤（ｄｅｌａｙｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。適切なキャリアは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（当該分野の標準的参考文献であって、本明細書中に参考として援用される）の最新版に記載される。このようなキャリアまたは希釈剤の好ましい例としては、水、生理食塩水、フィンガー（ｆｉｎｇｅｒ）溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）もまた、使用され得る。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物におけるその使用が意図される。補助的な活性化合物もまた、組成物へ組み込まれ得る。
【０２９６】
本発明の薬学的組成物は、その意図される投与経路と適合可能であるように処方される。投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内、皮内、皮下）投与、経口（例えば、吸入）投与、経皮（すなわち、局所的）投与、経粘膜（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓａｌ）投与、および直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような、滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような、抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような、抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような、キレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような、緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような、張度の調整のための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基で調整され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または多用量のバイアル中に入れられ得る。
【０２９７】
注入用途に適した薬学的組成物は、滅菌水溶液（ここでは、水溶解性）または分散媒（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）、および滅菌注入可能溶液または分散媒の即座の調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与において、適切なキャリアには、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ　ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。これは、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌のような微生物の汚染行為に対して保護されなければならない。このキャリアは、例えば、以下を含む溶媒または分散媒であり得る：水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物。適切な流動性が、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散媒の場合には、要求される粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、砂糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトール）、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注入可能組成物の吸収期間の延長は、組成物に吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含ませることによってもたらされ得る。
【０２９８】
滅菌注射可能溶液は、必要量のこの活性化合物（例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質または抗ＧＰＣＲＸ抗体））を、適切な溶媒中で、上記で列挙される成分の１つまたは組み合わせと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散媒は、活性化合物を、基本（ｂａｓｉｃ）の分散媒と上記で列挙される成分から必要とされる他の成分とを含む滅菌ビヒクル中へ組み込むことによって調製される。滅菌注射可能液剤の調製のための滅菌粉末の場合において、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、予め滅菌濾過されたその溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る。
【０２９９】
経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へと圧縮され得る。経口治療投与の目的のために、この活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、そして錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、うがい薬としての使用のために流体キャリアを使用して調製され得、ここで、この流体キャリア中のこの化合物は、経口的に適用され、そして音を立てられ（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント物質が、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、任意の以下の成分または同様の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムトラガントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンスターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ））；潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０３００】
吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エアロゾル噴霧の形態で送達される。
【０３０１】
全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または経皮投与について、浸透される障壁に適切な浸透剤が、処方物において使用される。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻噴霧または坐剤の使用によって達成され得る。経皮投与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０３０２】
この化合物はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤基剤と共に）または貯留（ｒｅｎｔｅｎｔｉｏｎ）浣腸の形態で調製され得る。
【０３０３】
１つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な排出に対してこの化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者には明らかである。これらの物質はまた、Ａｌｚａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＧＰＣＲＸａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手され得る。リポソーム懸濁剤（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を感染させた細胞へ標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０３０４】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物または非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される投薬単位形態は、処置される被験体に対する単位投薬量として適切な物理的に個々の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して所望の治療的効果を生じるように計算された、所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態についての詳細は、この活性化合物の固有の特徴、および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合する分野に固有の制限によって決定されるか、あるいはこれらに直接依存する。
【０３０５】
本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとして使用され得る。遺伝子治療ベクターは、被験体へ、例えば静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）によって、または定位注射（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９１：３０５４−３０５７を参照のこと）によって送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物には、受容可能な希釈剤中の遺伝子治療ベクターが挙げられ得るか、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれる除放性マトリックスが挙げられ得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターが組換え細胞からインタクトで産生され得（例えば、レトロウイルスベクター）、薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１以上の細胞を含み得る。
【０３０６】
薬学的組成物は、投与のための使用説明書と共に、容器、包装、またはディスペンサーに含まれ得る。
【０３０７】
（スクリーニングおよび検出の方法）
本発明の単離された核酸分子は、以下にさらに説明されるように、ＧＰＣＲＸタンパク質（例えば、遺伝子治療適用における宿主細胞中の組換え発現ベクターを介する）を発現するため、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡ（例えば、生物学的サンプルにおいて）またはＧＰＣＲＸ遺伝子における遺伝子損傷を検出するため、ならびにＧＰＣＲＸ活性を調節するために使用され得る。さらに、ＧＰＣＲＸタンパク質は、ＧＰＣＲＸタンパク質の活性または発現を調節する薬物または化合物をスクリーニングするために、ならびにＧＰＣＲＸタンパク質の不十分もしくは過剰な産生によって、あるいはＧＰＣＲＸ野生型タンパク質と比較して減少した活性もしくは異常な活性を有するＧＰＣＲＸタンパク質形態の産生によって特徴付けられる障害を処置するために使用され得る。さらに、本発明の抗ＧＰＣＲＸ抗体が、ＧＰＣＲＸタンパク質を検出および単離するため、ならびにＧＰＣＲＸ活性を調節するために使用され得る。
【０３０８】
本発明は、さらに、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される新規の薬剤、および上記で本明細書中で記載されるような処置のためのそれらの使用に関する。
【０３０９】
（スクリーニングアッセイ）
本発明は、調節因子、すなわち、ＧＰＣＲＸタンパク質に結合するか、あるいは例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質の発現またはＧＰＣＲＸタンパク質の活性に対して刺激効果または阻害効果を有する、候補または試験化合物または薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他の薬物）を同定するための方法（本明細書中において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。本発明はまた、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイにおいて同定された化合物を含む。
【０３１０】
１実施形態において、本発明は、ＧＰＣＲＸタンパク質またはポリペプチド、あるいはその生物学的に活性な部分の膜結合形態に結合するか、またはその膜結合形態の活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチのいずれかを使用して得られ得、これには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的に位置付け可能な並行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーもしくは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である（例えば、Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　１２：１４５を参照のこと）。
【０３１１】
本明細書中で使用される場合、「低分子」とは、約５ｋＤ未満の分子量、最も好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物をいうように意味される。低分子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、炭水化物、脂質または他の有機分子もしくは無機分子であり得る。化学的および／または生物学的混合物（例えば、真菌、細菌または藻類抽出物）のライブラリーは、当該分野で公知であり、そして本発明のアッセイのいずれかを用いてスクリーニングされ得る。
【０３１２】
分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０３１３】
化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１３：４１２〜４２１）、あるいはビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ　３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ　３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ　米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ　米国特許第５，２３３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：６３７８〜６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０；Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２３３，４０９号）において提示され得る。
【０３１４】
１つの実施形態において、アッセイは細胞ベースのアッセイであり、ここで、膜結合形態のＧＰＣＲＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上に発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物が、ＧＰＣＲＸタンパク質に結合する能力が、決定される。例えば、細胞は、哺乳動物起源または酵母細胞であり得る。この試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質に結合する能力の決定は、例えば、その試験化合物を放射性同位体または酵素標識とカップリングさせて、その結果、この試験化合物のＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分に対する結合が、複合体におけるその標識化合物を検出することによって決定され得ることによって達成され得る。例えば、試験化合物は、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈで直接的または間接的のいずれかで標識され得、そしてその放射性同位体が、放射線放射の直接の計数により、またはシンチレーション計数により、検出され得る。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識され得、そしてこの酵素的標識が、適切な基質の生成物への転換を決定することにより、検出され得る。１つの実施形態において、このアッセイは、膜結合形態のＧＰＣＲＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分をその細胞表面上に発現する細胞を、ＧＰＣＲＸと結合する既知の化合物と接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物に試験化合物を接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程によって、この試験化合物が、既知の化合物と比較して、ＧＰＣＲＸまたはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。
【０３１５】
別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、膜結合形態のＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上で発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物が、ＧＰＣＲＸまたはその生物学的に活性な部分の活性を調節する能力の決定は、例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質が、ＧＰＣＲＸ標的分子に結合またはこれら標的分子と相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。本明細書中において使用する場合には、「標的分子」とは、ＧＰＣＲＸタンパク質が天然に結合または相互作用する分子であり、例えば、ＧＰＣＲＸ相互作用タンパク質を発現する細胞表面上の分子、第二の細胞表面上の分子、細胞外環境中の分子、細胞膜の内面と会合する分子、または細胞質分子である。ＧＰＣＲＸ標的分子は、非ＧＰＣＲＸ分子あるいは本発明のＧＰＣＲＸタンパク質またはポリペプチドであり得る。１つの実施形態において、ＧＰＣＲＸ標的分子は、シグナル伝達経路の構成要素であり、これは、細胞膜を通って細胞内への細胞外シグナル（例えば、化合物が膜結合ＧＰＣＲＸ分子に結合することにより発生するシグナル）の伝達を促進する。その標的は、例えば、触媒活性を有する第二の細胞内タンパク質、または下流シグナル伝達分子のＧＰＣＲＸとの会合を容易にするタンパク質であり得る。
【０３１６】
ＧＰＣＲＸタンパク質がＧＰＣＲＸ標的分子に結合するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は、直接的結合を決定するための上記方法の１つにより、達成され得る。１つの実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質がＧＰＣＲＸ標的分子に結合するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は、その標的分子の活性を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その標的の細胞性セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３など）の誘導を検出すること、適切な基質への標的の触媒活性／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に連結されたＧＰＣＲＸ応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または細胞応答（例えば、細胞生存度、細胞分化、または細胞増殖）を検出することにより、決定され得る。
【０３１７】
なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞（ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ）アッセイであり、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分と結合する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物の、ＧＰＣＲＸタンパク質への結合は、上記のように、直接的または間接的にのいずれかで決定され得る。１つのこのような実施形態において、このアッセイは、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＧＰＣＲＸを結合する既知の化合物に接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、この試験化合物が、既知の化合物と比較して、ＧＰＣＲＸ、またはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。
【０３１８】
なお別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工程、ならびにその試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＧＰＣＲＸの活性を調節する能力の決定は、例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質が、ＧＰＣＲＸ標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のための上記方法の１つによって決定することにより、達成され得る。代替の実施形態において、この試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質の活性を調節する能力の決定は、ＧＰＣＲＸタンパク質が、ＧＰＣＲＸ標的分子をさらに調節する能力を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の適切な基質に対する触媒活性／酵素活性は、上記のように決定され得る。
【０３１９】
さらに別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＧＰＣＲＸタンパク質を結合する既知の化合物に接触させてアッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＧＰＣＲＸタンパク質と相互作用する能力の決定は、ＧＰＣＲＸタンパク質が、ＧＰＣＲＸ標的分子と優先的に結合するか、またはその標的分子の活性を優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。
【０３２０】
本発明の無細胞アッセイは、ＧＰＣＲＸタンパク質の、可溶性の形態または膜結合形態の両方の使用に受け入れられる。膜結合形態のＧＰＣＲＸタンパク質を含む無細胞アッセイの場合には、ＧＰＣＲＸタンパク質の膜結合形態が溶液中に維持されるように、可溶化剤を利用することが所望され得る。このような可溶化剤の例には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、例えば、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ（Ｉｓｏｔｒｉｄｅｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｌ　ｅｔｈｅｒ）ｎ、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−１−ｐｒｏｐａｎｅ　ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅ　ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）である。
【０３２１】
本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の非複合形態からの複合形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化に適合させることが、所望され得る。試験化合物の、ＧＰＣＲＸタンパク質への結合、または候補化合物の存在下および非存在下での、ＧＰＣＲＸタンパク質の標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するために適切な任意の容器内で、達成され得る。このような容器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管が挙げられる。１実施形態において、そのタンパク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質が、提供され得る。例えば、ＧＳＴ−ＧＰＣＲＸ融合タンパク質またはＧＳＴ標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでこれらは、試験化合物と合わせられるか、あるいは試験化合物および未吸着標的タンパク質またはＧＰＣＲＸタンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合体形成を誘導する条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーション後、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックスを固定し、例えば上記のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、そしてＧＰＣＲＸタンパク質の結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用して決定し得る。
【０３２２】
タンパク質をマトリックスに固定するための他の技術もまた、本発明のスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、ＧＰＣＲＸタンパク質、またはその標的分子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合を利用して、固定され得る。ビオチン化ＧＰＣＲＸタンパク質、または標的分子は、当該分野において周知の技術を使用して、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）、そしてストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルのプレート（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定され得る。あるいは、ＧＰＣＲＸタンパク質、または標的分子と反応性であるがＧＰＣＲＸタンパク質のその標的分子への結合を妨害しない抗体が、そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはＧＰＣＲＸタンパク質が、抗体の結合によってウェル内に捕捉され得る。このような複合体を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記で述べた方法に加えて、ＧＰＣＲＸタンパク質または標的分子と反応性の抗体を使用する、複合体の免疫検出、ならびにＧＰＣＲＸタンパク質、または標的分子に関する酵素活性の検出に依存する酵素結合アッセイが挙げられる。
【０３２３】
別の実施形態において、ＧＰＣＲＸタンパク質発現のモジュレーターは、細胞を候補化合物と接触させ、そして細胞中のＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を決定する方法において同定される。候補化合物の存在下でのＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、候補化合物の非存在下でのＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルと比較される。次いで、候補化合物は、この比較に基づいて、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質発現のモジュレーターとして同定され得る。例えば、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下より、その存在下における方が大きい（すなわち、統計的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の刺激物質として同定される。あるいは、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下よりその存在下の方が少ない（統計的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中のＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡまたはタンパク質を検出するために本明細書中に記載の方法によって決定され得る。
【０３２４】
本発明のなお別の局面において、ＧＰＣＲＸタンパク質は、ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「餌（ｂａｉｔ）タンパク質」として使用されて（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ　７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら、１９９３　Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら、１９９３　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１４：９２０−９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３　Ｏｎｃｏｇｅｎｅ　８：１６９３−１６９６；およびＢｒｅｎｔ　ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）、ＧＰＣＲＸ（「ＧＰＣＲＸ結合タンパク質」または「ＧＰＣＲＸ−ｂｐ」）に結合するか、またはこれと相互作用し、そしてＧＰＣＲＸ活性を調節する他のタンパク質を同定し得る。このようなＧＰＣＲＸ結合タンパク質はまた、例えば、ＧＰＣＲＸ経路の上流または下流エレメントとしてＧＰＣＲＸタンパク質によるシグナル伝達に関与する可能性がある。
【０３２５】
ツーハイブリッドシステムは、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる、大部分の転写因子のモジュール的性質に基づく。簡潔には、このアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。一方の構築物においては、ＧＰＣＲＸをコードする遺伝子が既知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物においては、ＤＮＡ配列のライブラリー由来の、未同定タンパク質（「餌食（ｐｒｅｙ）」または「サンプル」）をコードするＤＮＡ配列が、既知の転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「餌」および「餌食」タンパク質がインビボで相互作用して、ＧＰＣＲＸ依存性複合体を形成し得る場合、この転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、非常に近くにある。近位にあることにより、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子（例えば、ＬａｃＺ）の転写が可能となる。レポーター遺伝子の発現が検出され得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーが、単離され得、そしてＧＰＣＲＸと相互作用するタンパク質をコードするクローニングされた遺伝子を得るために使用され得る。
【０３２６】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤および本明細書中に記載されるような処置のためのこの薬剤の使用に関する。
【０３２７】
（検出アッセイ）
本明細書中で同定されるｃＤＮＡ配列の一部またはフラグメント（および対応する完全な遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で使用され得る。例えば、これらの配列を使用して、（ｉ）染色体上にそれぞれの遺伝子をマッピングし得；従って遺伝病と関連する遺伝子領域を位置決定し得る；（ｉｉ）微量の生物学的サンプルから個体を同定し得る（組織型決定）；および（ｉｉｉ）生物学的サンプルの法医学的識別を助け得るが、これに限定されない。これらの適用は、以下の節において記載される。
【０３２８】
（染色体マッピング）
一旦遺伝子の配列（または配列の一部分）が単離されると、この配列を用いて染色体上に遺伝子の位置をマッピングし得る。このプロセスは、染色体マッピングとよばれる。従って、本明細書中に記載のＧＰＣＲＸ配列の一部またはフラグメント、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８、またはそのフラグメントもしくは誘導体を用いて、それぞれ、ＧＰＣＲＸ遺伝子の位置を染色体上にマッピングし得る。ＧＰＣＲＸ配列を染色体にマッピングすることは、これらの配列と、疾患と関連する遺伝子とを相関付ける際の重要な第一歩である。
【０３２９】
簡潔には、ＧＰＣＲＸ遺伝子は、ＧＰＣＲＸ配列からＰＣＲプライマー（好ましくは、１５〜２５ｂｐの長さ）を調製することにより染色体にマッピングし得る。ＧＰＣＲＸ配列のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡにおける１つを超えるエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し得、従って、増幅プロセスを複雑にし得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用され得る。ＧＰＣＲＸ配列に対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが増幅されたフラグメントを生じる。
【０３３０】
体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒトおよびマウス細胞）を融合することにより調製される。ヒトおよびマウスのハイブリッドが増殖および分裂するにつれ、それらは、無作為な順序で徐々にヒト染色体を失うが、マウス染色体を維持する。マウス細胞は増殖できないが、ヒト細胞は増殖できる培地を使用することにより、それらは特定の酵素を失うので、必要な酵素をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が維持される。種々の培地を使用することによって、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルにおける各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体いずれかおよびマウス染色体の完全なセットを含み、これにより、個々の遺伝子を特定のヒト染色体にマッピングすることが容易に可能になる（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２０：９１９−９２４を参照のこと）。ヒト染色体のフラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を伴うヒト染色体を使用することにより生成され得る。
【０３３１】
体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体に特定の配列を割り当てるためには迅速な手順である。１つのサーマルサイクラーを用いて一日に３つ以上の配列が割り当てられ得る。ＧＰＣＲＸ配列を使用して、オリゴヌクレオチドプライマーを設計すると、下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて達成され得る。
【０３３２】
中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）をさらに使用して、一工程で正確な染色体位置を提供し得る。染色体スプレッドは、コルセミド（染色体紡錘体を破壊する）のような化学物質により分裂が中期においてブロックされた細胞を使用して行われ得る。この染色体は、トリプシンで短時間処理され得、次いで、ギムザ染色され得る。薄いバンドおよび濃いバンドのパターンが各染色体で発生し、その結果、この染色体は、個々に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基ほどの短さのＤＮＡ配列と共に使用され得る。しかし、１，０００塩基より大きなクローンは、簡単な検出に十分なシグナル強度で、独特の染色体位置に結合する可能性がより高い。好ましくは、１，０００塩基、そしてより好ましくは、２，０００塩基が妥当な時間量で良好な結果を得るために十分である。この技術の総説については、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ　ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ　ＭＡＮＵＡＬ　ＯＦ　ＢＡＳＩＣ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９８８）を参照のこと。
【０３３３】
染色体マッピングの試薬は、単一の染色体またはその染色体上の単一部位を印付けするために個々に使用され得るか、または試薬のパネルは複数部位および／または複数染色体を印付けするために使用され得る。遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、実際に、マッピング目的のために好ましい。コード配列は、遺伝子ファミリー内に保存されており、従って、染色体マッピングの間に交叉ハイブリダイゼーションの機会が増大する可能性が高い。
【０３３４】
一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、その配列の染色体上の物理的位置は、遺伝子マップデータと相関し得る。このようなデータは、例えば、ＭｃＫｕｓｉｃｋ，ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ　ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ　ＩＮ　ＭＡＮ（Ｊｏｈｎｓ　Ｈｏｐｋｉｎｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｗｅｌｃｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで入手可能）において見いだされる。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる遺伝子と疾患との間の関係は、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ，３２５：７８３−７８７に記載される連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によって同定され得る。
【０３３５】
さらに、ＧＰＣＲＸ遺伝子と関連する疾患に罹患した個体と、この疾患に罹患していない個体との間のＤＮＡ配列における差異が決定され得る。罹患した個体のいくらかまたは全てにおいて変異が認められるが、非罹患個体のいずれにおいても認められない場合、この変異は特定の疾患の候補薬剤である可能性が高い。罹患個体と非罹患個体の比較は、一般に、染色体における構造的変化（例えば、染色体スプレッドから可視であるか、またはそのＤＮＡ配列に基づいたＰＣＲを用いて検出可能な欠失または転座）を最初に探すことを包含する。最終的に、いくらかの個体に由来する遺伝子の完全な配列決定を行って、変異の存在を確認し、かつ多型に由来する変異を区別する。
【０３３６】
（組織型決定（ｔｉｓｓｕｅ　ｔｙｐｉｎｇ））
本発明のＧＰＣＲＸ配列はまた、わずかな生物学的サンプルから個体を識別するために使用され得る。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の制限酵素で消化され、そして同定のために独特のバンドを生成するためにサザンブロット上でプローブされる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号に記載の「制限フラグメント長多型」）のためのさらなるＤＮＡマーカーとして有用である。
【０３３７】
さらに、本発明の配列を用いて、個体のゲノムの選択された部分について実際の塩基ごとにＤＮＡ配列を決定する代替的技術を提供し得る。従って、本明細書中に記載のＧＰＣＲＸ配列を用いて、配列の５’末端および３’末端から２つのＰＣＲプライマーを調製し得る。次いで、これらのプライマーを使用して、個体のＤＮＡを増幅し得、引き続いて、配列決定し得る。
【０３３８】
このように調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が、対立遺伝子差異に起因するこのようなＤＮＡ配列の独特のセットを有するので、唯一の個体識別を提供し得る。本発明の配列は、個体由来および組織由来の配列のこのような識別を得るために使用され得る。本発明のＧＰＣＲＸ配列は、ヒトゲノムの部分を独特に表す。対立遺伝子変異は、これらの配列のコード領域においてある程度生じ、そして非コード領域においてより大きな程度に生じる。個々のヒト間での対立遺伝子変異は、各５００塩基につき約１回の頻度で生じると見積もられる。対立遺伝子変異の多さは、制限フラグメント長多型（ＲＦＬＰ）を含む単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に起因する。
【０３３９】
本明細書中で記載の配列の各々は、ある程度、標準物質（これに対して個体からのＤＮＡが識別の目的で比較され得る）として使用され得る。より多くの多型が非コード領域で生じるので、個体を区別するために、それほど多くの配列が必要であるわけではない。非コード配列は、おそらく１０〜１，０００プライマーのパネルを用いてポジティブな個体識別を不自由なく提供し得る。これらのプライマーは、各々が１００塩基の増幅された非コード配列を生じる。推定コード配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８における配列）が使用される場合、ポジティブな個体識別に関するプライマーのより適切な数は、５００〜２，０００である。
【０３４０】
（予測医療）
本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）の目的に使用され、これによって個体を予防的に処置する、予測医療の分野に関する。従って、本発明の１つの局面は、ＧＰＣＲＸタンパク質および／または核酸の発現、ならびにＧＰＣＲＸの活性を、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）の関連で決定するための診断アッセイに関し、これによって、異常なＧＰＣＲＸの発現または活性に関連して、個体が疾患または障害に罹患するかどうか、あるいは障害を発症するリスクがあるかどうかを決定する。本発明はまた、個体が、ＧＰＣＲＸのタンパク質、核酸の発現または活性と関連した障害を発症するリスクがあるかどうかを決定するための予後的（または予測的）アッセイを提供する。例えば、ＧＰＣＲＸの遺伝子における変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイは、予後的または予測的な目的に使用され得、これによってＧＰＣＲＸのタンパク質、核酸の発現または生物学的活性によって特徴付けられるかまたは関連した障害の発病の前に個体を予防的に処置する。
【０３４１】
本発明の別の局面は、個体におけるＧＰＣＲＸのタンパク質、核酸の発現あるいは活性を決定するための方法を提供し、これによって、その個体についての適切な治療的または予防的試薬（本明細書において「薬物ゲノム」とよばれる）を選択する。薬物ゲノムは、個体の遺伝型（例えば、特定の試薬に対して応答する個体の能力を決定するために試験された個体の遺伝型）に基づいて個体の治療的または予防的処置のための試薬（例えば、薬物）の選択を可能にする。
【０３４２】
本発明のなお別の局面は、臨床試験におけるＧＰＣＲＸの発現または活性に対する試薬（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。
【０３４３】
これらおよび他の試薬は、以下の節でさらに詳細に記載される。
【０３４４】
（診断アッセイ）
生物学的サンプルにおけるＧＰＣＲＸの存在または非存在を検出するための例示的な方法は、試験被験体から生物学的サンプルを得る工程、およびその生物学的サンプルをＧＰＣＲＸのタンパク質またはＧＰＣＲＸタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物もしくは薬剤とを接触させ、その結果、ＧＰＣＲＸの存在が、その生物学的サンプルにおいて検出される、工程を包含する。ＧＰＣＲＸのｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出するための薬剤は、ＧＰＣＲＸ　ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る、標識された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、全長のＧＰＣＲＸの核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１６、１８、２０、２２、２４、２８、３０、３２、３４、３６、および３８の核酸またはそれらの一部）（例えば、少なくとも、１５、３０、５０、１００、２５０もしくは５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであり、ストリンジェントな条件下でＧＰＣＲＸのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと特異的にハイブリダイズするに十分である核酸）であり得る。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは本明細書において記載されている。
【０３４５】
ＧＰＣＲＸのタンパク質を検出するための薬剤は、ＧＰＣＲＸのタンパク質に結合し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナルであり得るか、またはより好ましくはモノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が使用され得る。用語「標識（された）」とは、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をそのプローブもしくは抗体にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結する）ことによってそのプローブまたは抗体を直接標識すること、ならびに、直接標識された別の試薬との反応性によってそのプローブもしくは抗体の間接的な標識をすることを包含することが意図される。間接的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにＤＮＡプローブのビオチンを用いた末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、被験体から単離された、組織、細胞および生物学的流体ならびに被験体に存在する組織、細胞および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を用いて、ＧＰＣＲＸのｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡを、生物学的サンプル中で、インビトロおよびインビボで検出し得る。例えば、ＧＰＣＲＸのｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＧＰＣＲＸのタンパク質の検出のためのインビトロ技術としては、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。ＧＰＣＲＸのゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。さらに、ＧＰＣＲＸのタンパク質の検出のためのインビボ技術としては、標識された抗ＧＰＣＲＸ抗体を被験体に導入することが挙げられる。例えば、その抗体は、放射性マーカーを用いて標識され得る。被験体における放射性マーカーの存在および位置は、標準的な画像化技術によって検出され得る。
【０３４６】
１つの実施形態において、この生物学的サンプルは、その試験被験体からのタンパク質分子を含む。あるいは、その生物学的サンプルは、その試験被験体からのｍＲＮＡ分子またはその試験被験体からのゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された末梢血白血球サンプルである。
【０３４７】
別の実施形態において、本発明の方法はさらに、コントロール被験体からコントロール生物学的サンプルを得る工程、そのコントロールサンプルを、ＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物もしくは薬剤と接触させ、その結果、ＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的サンプルにおいて検出される、工程、およびそのコントロールサンプルにおけるＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在と、その試験サンプルにおけるＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在とを比較する工程を包含する。
【０３４８】
本発明はまた、生物学的サンプルにおけるＧＰＣＲＸの存在を検出するためのキットを包含する。例えば、このキットは、以下を備え得る：生物学的サンプルにおいてＧＰＣＲＸのタンパク質またはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合物もしくは薬剤；そのサンプルにおいてＧＰＣＲＸの量を決定するための手段；およびそのサンプルにおいて、標準と、ＧＰＣＲＸの量とを比較するための手段。この化合物または薬剤は、適切な容器内に包装され得る。このキットは、さらに、ＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸を検出するためにキットを用いるための指示書を備え得る。
【０３４９】
（予後アッセイ）
本明細書において記載された診断方法をさらに利用して、ＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連した疾患もしくは障害を有するか、またはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例えば、上述の診断アッセイまたは下記のアッセイ）を利用して、ＧＰＣＲＸのタンパク質、核酸の発現または活性に関連する障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。あるいは、この予後アッセイを利用して、疾患または障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。従って、本発明は、ＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連する疾患もしくは障害を同定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルは、被験体から得られ、そしてＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）が検出され、ここで、ＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸の存在は、ＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体についての診断指標である。本明細書において使用される場合「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学的サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サンプル、または組織であり得る。
【０３５０】
さらに、本明細書に記載される予後アッセイを使用して、被験体に薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補）を投与してＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を処置し得るか否かを、決定し得る。例えば、このような方法を使用して、被験体が障害のための薬剤で有効に処置され得るか否かを決定し得る。従って、本発明は、ＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連する障害についての薬剤を用いて、被験体が有効に処置され得るか否かを決定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルが得られ、そしてＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸が検出される（例えば、ここで、ＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸の存在は、この薬剤が投与されてＧＰＣＲＸの異常発現または異常活性に関連する障害が処置され得る被験体についての、診断指標である）。
【０３５１】
本発明の方法はまた、ＧＰＣＲＸ遺伝子における遺伝的損傷を検出し、それによって、その損傷遺伝子を有する被験体が異常な細胞増殖および／または分化によって特徴付けられる障害についての危険性を有するか否かを決定するためにも使用され得る。種々の実施形態において、この方法は、その被験体からの細胞のサンプルにおいて、ＧＰＣＲＸタンパク質をコードする遺伝子の統合性に影響を与える少なくとも１つの変更によって特徴付けられる遺伝的損傷の存在または非存在、あるいはＧＰＣＲＸ遺伝子の誤発現を検出する工程を包含する。例えば、そのような遺伝的損傷は、以下の少なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：（ｉ）ＧＰＣＲＸ遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；（ｉｉ）ＧＰＣＲＸ遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；（ｉｉｉ）ＧＰＣＲＸ遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、（ｉｖ）ＧＰＣＲＸ遺伝子の染色体再配置；（ｖ）ＧＰＣＲＸ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変更、（ｖｉ）ＧＰＣＲＸ遺伝子の異常改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターンの異常改変）、（ｖｉｉ）ＧＰＣＲＸ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、（ｖｉｉｉ）ＧＰＣＲＸタンパク質の非野生型レベル、（ｉｘ）ＧＰＣＲＸ遺伝子の対立遺伝子の欠失、ならびに（ｘ）ＧＰＣＲＸタンパク質の不適切な翻訳後修飾。本明細書において記載されるように、当該分野において、ＧＰＣＲＸ遺伝子における損傷を検出するために使用され得る、多数の公知のアッセイ技術が存在する。好ましい生物学的サンプルは、従来手段によって被験体から単離された末梢血白血球サンプルである。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプルが使用され得、これには、例えば、頬粘膜細胞が挙げられる。
【０３５２】
特定の実施形態において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ　ＰＣＲ）、あるいは、連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ　９１：３６０−３６４を参照のこと）におけるプローブ／プライマーの使用を包含する。後者は、ＧＰＣＲＸ遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る）（Ａｂｒａｖａｙａら，１９９５　Ｎｕｃｌ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ　２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、患者から細胞のサンプルを収集する工程、核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはその両方）をそのサンプルの細胞から単離する工程、ＧＰＣＲＸの遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーとその核酸サンプルとを、ＧＰＣＲＸ遺伝子（存在する場合）のハイブリダイゼーションおよび増幅が生じるような条件下で接触させる工程、ならびに増幅産物の存在もしくは非存在を検出する工程、またはその増幅産物のサイズを検出する工程およびその長さをコントロールサンプルと比較する工程を包含し得る。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲは、本明細書中に記載される変異を検出するために使用される技術のいずれかとともに予備的増幅工程として使用されることが望ましくあり得ることが予想される。
【０３５３】
代替的な増幅方法としては、以下が挙げられる：当業者に周知な技術を用いた、その増幅された分子の検出の前の、自己維持配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：１８７４−１８７８を参照のこと）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６：１１７３−１１７７を参照のこと）、Ｑレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　６：１１９７を参照のこと）、または他の任意の核酸増幅方法。これらの検出スキームは、核酸分子が非常に極少数で存在する場合に、そのような核酸分子の検出のために特に有用である。
【０３５４】
代替の実施形態において、サンプル細胞からのＧＰＣＲＸ遺伝子における変異は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅され（必要に応じて）、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長の大きさがゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコントロールＤＮＡとの間のフラグメント長の大きさにおける差異は、そのサンプルＤＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイムの使用（例えば、米国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位の発生または喪失によって特異的な変異の存在についてスコア付けし得る。
【０３５５】
他の実施形態において、ＧＰＣＲＸにおける遺伝子変異は、サンプル核酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイに対してハイブリダイズさせることによって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）Ｈｕｍａｎ　Ｍｕｔａｔｉｏｎ　７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７５３−７５９を参照のこと）。例えば、ＧＰＣＲＸにおける遺伝子変異は、Ｃｒｏｎｉｎら（前出）に記載されるように光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同定され得る。手短には、プローブの第一ハイブリダイゼーションアレイを用いて、サンプルおよびコントロールにおける長いストレッチのＤＮＡにわたって走査し、連続的に重複するプローブの線形アレイを作成することによって、その配列間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程に第二のハイブリダイゼーションアレイが続き、これは、検出される全ての改変体または変異体に相補的な、より小さな特化されたプローブアレイを用いることによる特定の変異の特徴付けを可能にする。各変異アレイは、一方が野生型遺伝子に対して相補的であり、そして他方が変異遺伝子に対して相補である並行プローブセットから構成される。
【０３５６】
なお別の実施形態において、当該分野で公知の種々の配列決定反応のいずれかを使用して、ＧＰＣＲＸ遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルＧＰＣＲＸ配列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって、変異を検出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ　７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ　７４：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。診断アッセイを実施する場合、種々の自動化配列決定手順のいずれかを利用し得ることもまた意図される（例えば、Ｎａｅｖｅら（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１９：４４８を参照のこと）。これらには、質量分析法による配列決定法（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ　９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　３８．：１４７−１５９を参照のこと）が含まれる。
【０３５７】
ＧＰＣＲＸ遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断剤からの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡもしくはＲＮＡ／ＤＮＡのヘテロ二重鎖に基づくミスマッチ塩基を検出する方法が挙げられる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３０：１２４２を参照のこと）。一般に、「ミスマッチ切断」の当該分野の技術は、野生型のＧＰＣＲＸ配列を含む（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡを、組織サンプルから得られた潜在的な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供する工程によって始まる。この二本鎖の二重鎖を、二重鎖の一本鎖領域（例えば、そのコントロールとサンプルの鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するもの）を切断する薬剤を用いて処理する。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖を、ＲＮａｓｅを用いて処理し得、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドを、そのミスマッチ領域を酵素的に消化することに対して、Ｓ１ヌクレアーゼを用いて処理し得る。他の実施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかの二重鎖を、ミスマッチ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウム、およびピペリジンを用いて処理し得る。そのミスマッチ領域の消化後、次いで、得られた物質を変性ポリアクリルアミドゲル上で、大きさにより分離して、変異の部位を決定する。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ　２１７：２８６−２９５を参照のこと。１つの実施形態において、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０３５８】
なお別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、二本鎖ＤＮＡにおけるミスマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）を、細胞のサンプルから得られたＧＰＣＲＸ　ｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマッピングするために規定された系において使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅＬａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する（Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　１５：１６５７〜１６６２）。例示的な実施形態に従って、ＧＰＣＲＸ配列（例えば、野生型ＧＰＣＲＸ配列）に基づくプローブは、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハイブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素を用いて処理され、そしてその切断産物（もしあれば）は、電気泳動プロトコルなどから検出され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０３５９】
他の実施形態において、電気泳動の移動度における変化は、ＧＰＣＲＸ遺伝子における変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖コンホメーション多型（ＳＳＣＰ）は、変異体と野生型核酸との間の電気泳動の移動度における差異を検出するために使用され得る（Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ：８６：２７６６、またＣｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ　Ｒｅｓ　２８５：１２５〜１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ　Ａｎａｌ　Ｔｅｃｈ　Ａｐｐｌ　９：７３〜７９を参照のこと）。サンプルおよびコントロールＧＰＣＲＸ核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは、変性され、そして再生される。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気泳動の移動度において得られる変化は、１つの塩基変化の検出さえも可能にする。ＤＮＡフラグメントは、標識され得るか、または標識されたプローブを用いて検出され得る。アッセイの感度は、ＤＮＡよりもむしろ、二次構造が配列中の変化に対してより感受的であるＲＮＡを使用することによって増強され得る。１つの実施形態において、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動の移動度における変化に基づいて二本鎖のヘテロ二重鎖分子を分離する。例えば、Ｋｅｅｎら（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ　Ｇｅｎｅｔ　７：５を参照のこと。
【０３６０】
なお別の実施形態において、一定勾配の変性剤を含有するポリアクリルアミドゲルにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる。例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ　３１３：４９５を参照のこと。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、ＤＮＡは、例えば、ＰＣＲにより約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加することによって、完全には変性されないことを確実するように改変される。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールおよびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定するために、変性剤勾配の代わりに使用される。例えば、ＲｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｃｈｅｍ　２６５：１２７５３を参照のこと。
【０３６１】
点変異を検出するための他の技術の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、既知の変異が中心的に配置されるように調製され得、次いで、完全なマッチが見出される場合にのみハイブリダイゼーションを許容する条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされる。例えば、Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ　３２４：１６３）；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８６：６２３０を参照のこと。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチドがハイブリダイズ膜に付着され、そして標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多くの異なる変異にハイブリダイズされる。
【０３６２】
あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明と合わせて使用され得る。特異的増幅についてのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心において（その結果、増幅は、差次的ハイブリダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ　１７：２４３７〜２４４８）か、あるいは適切な条件下でミスマッチが妨げられ得るかまたはポリメラーゼ伸長を減少し得る、１つのプライマーの３’の最末端で、目的の変異を保有し得る（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ　１１：２３８）。さらに、切断に基づく検出を行うために、変異領域に新規な制限部位を導入することは、切断に基づく検出を行うために望ましくあり得る。例えば、Ｇａｓｐａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｐｒｏｂｅｓ　６：１を参照のこと。特定の実施形態において、増幅はまた、増幅用Ｔａｑリガーゼを使用して実施され得ることが予測される。例えば、Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８８：１８９を参照のこと。このような場合において、連結は、５’配列の３’末端に完全なマッチが存在する場合にのみ生じ、増幅の存在または非存在を探索することによって、特定の部位における既知の変異の存在を検出することを可能にする。
【０３６３】
本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載れる少なくとも１つのプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キットを利用することによって実施され得、これは、例えば、ＧＰＣＲＸ遺伝子を含む疾患または疾病の症状または家族病歴を示す患者を診断するための臨床的設定において簡便に使用され得る。
【０３６４】
さらに、ＧＰＣＲＸが発現される任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢血白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて利用され得る。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が、使用され得る。
【０３６５】
（薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ））
ＧＰＣＲＸ活性（例えば、ＧＰＣＲＸ遺伝子発現）に対する刺激性または阻害性の影響を有する因子、すなわちモジュレーターは、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定されるように、障害（例えば、癌、異常ＧＰＣＲＸ活性に関連する免疫障害）を（予防的または治療的に）処置するために個体に投与され得る。このような処置と合わせて、個体の薬理ゲノム学（すなわち、個体の遺伝子型と外来化合物または薬物に対するその個体の応答との間の関係についての研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬理学的に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関係を変更することによって、重篤な毒性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理ゲノム学は、個体の遺伝子型の考慮に基づく予防的または治療的処置のために有効な薬剤（例えば、薬物）の選択を許容する。このような薬理ゲノム学は、さらに、適切な投薬量および治療剤レジメンを決定するために使用され得る。従って、ＧＰＣＲＸタンパク質の活性、ＧＰＣＲＸ核酸の発現、あるいは個体におけるＧＰＣＲＸ遺伝子の変異含量が決定されて、それによって個体の治療的または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。
【０３６６】
薬理ゲノム学は、罹患した人おける変更された薬物の性質および異常な作用に起因して、薬物に応答する臨床的に有意な遺伝性変更を扱う。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ、１９９６、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，２３：９８３〜９８５およびＬｉｎｄｅｒ、１９９７、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，４３：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学状態が、区別され得る。薬物が身体に作用する方法を変更する１つの因子として伝達される遺伝的状態（変更された薬物作用）、または身体が薬物に作用する方法を変更する１つの因子として伝達される遺伝的状態（変更された薬物代謝）。これらの薬理ゲノム学状態は、稀な欠損としてか、または多型としてのいずれかで生じ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損は、一般的な遺伝性酵素病であり、この主な臨床的合併症は、酸化剤薬物（抗マラリア剤、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの摂食後の溶血である。
【０３６７】
例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および持続期間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、幾人かの患者が予期される薬物効果を得ないか、または標準的かつ安全な用量の薬物を摂取した後に過大な薬物応答および深刻な毒性を示すことに関しての説明を提供した。これらの多型は、集団において２つの表現型（高い代謝能を持つ人（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＥＭ）および低い代謝能を持つ人（ｐｏｏｒ　ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＰＭ））で表現される。ＰＭの有病率は、異なる集団の間で異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型であり、そしていくらかの変異がＰＭにおいて同定されており、この全ては機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在に至る。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低い代謝能を持つ人は、彼らが標準的な用量を受ける場合に、かなり頻繁に過大な薬物応答および副作用を経験する。代謝産物が活性な治療的部分である場合、そのＣＹＰ２Ｄ６形成代謝産物であるモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるように、ＰＭは治療的応答を示さない。他の極端なものは、標準的な用量に応答しない、いわゆる超迅速な代謝能を持つ人である。最近、超迅速な代謝の基準となる分子は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因していることが同定されている。
【０３６８】
従って、ＧＰＣＲＸのタンパク質の活性、ＧＰＣＲＸの核酸の発現、あるいは個体におけるＧＰＣＲＸの遺伝子の変異内容を決定して、それによって、その個体の治療的または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。さらに、薬理ゲノム学の研究を使用して、個体の薬物応答性の表現型の同定に対して薬物代謝酵素をコードする多型対立遺伝子の遺伝子型を適用し得る。この知見は、用量または薬物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、従って、被験体をＧＰＣＲＸの調節因子（例えば、本明細書中に記載される例示的なスクリーニングアッセイの１つによって同定される調節因子）を用いて処置する場合に治療的または予防的効率を増強し得る。
【０３６９】
（臨床試験中の効果のモニタリング）
ＧＰＣＲＸの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を調節する能力）に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることは、基本的な薬物スクリーニングおよび臨床試験に適用され得る。例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイによって決定される、ＧＰＣＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを増加するため、またはＧＰＣＲＸ活性をアップレギュレートする薬剤の効力は、減少したＧＰＣＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはダウンレギュレートしたＧＰＣＲＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。あるいは、スクリーニングアッセイによって決定される、ＧＰＣＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを減少、またはＧＰＣＲＸの活性をダウンレギュレートする薬剤の効力は、増加したＧＰＣＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはアップレギュレートしたＧＰＣＲＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。このような臨床試験において、ＧＰＣＲＸの発現または活性、および好ましくは、例えば、細胞増殖または免疫障害に関与するような他の遺伝子が、「リードアウト（読み出し）（ｒｅａｄ　ｏｕｔ）」、すなわち、特定の細胞の免疫応答性のマーカーとして使用され得る。
【０３７０】
例えば、ＧＰＣＲＸを含む遺伝子（これは、ＧＰＣＲＸ活性（例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同定される）を調節する薬剤（例えば、化合物、薬物または低分子）を用いる処置によって、細胞内で調節される）が同定され得るが、これらに限定されない。従って、細胞性増殖障害に対する薬剤の効果を研究するために、例えば、臨床試験において、細胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＧＰＣＲＸおよびこの障害に関与する他の遺伝子の発現のレベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるように、ノーザンブロット分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによるか、あるいは産生されるタンパク質の量を測定することによるか、本明細書中に記載されるような方法の１つによるか、あるいはＧＰＣＲＸまたは他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、定量され得る。この様式で、この遺伝子発現パターンは、この薬剤に対する細胞の生理学的応答の指標であるマーカーとして作用し得る。従って、この応答状態は、この薬剤を用いる個体の処置の前、および処置の間の種々の時点で、決定され得る。
【０３７１】
１つの実施形態において、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、タンパク質、ペプチド、核酸、ペプチド模倣物、低分子、または本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補物）を用いる、被験体の処置の効力をモニタリングするための方法を提供し、これは、以下の工程を包含する：（ｉ）薬剤の投与の前に、被験体から投与前サンプルを得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおいて、ＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）この被験体から１つ以上の投与後サンプルを得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルにおいて、ＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、この投与後サンプルにおけるＧＰＣＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルと比較する工程；ならびに（ｖｉ）従って、この被験体に対する薬剤の投与を変更する工程。例えば、この薬剤の増加した投与は、検出されるよりも高いレベルにＧＰＣＲＸの発現または活性を増加することが（すなわち、この薬剤の効力を増加すること）望ましくあり得る。あるいは、この薬剤の減少した投与は、検出されるよりも低いレベルにＧＰＣＲＸの発現または活性を減少することが（すなわち、この薬剤の効力を減少すること）望ましくあり得る。
【０３７２】
（処置方法）
本発明は、異常なＧＰＣＲＸの発現または活性に関連する障害の危険性のある（または感受性）か、またはこの障害を有する被験体を処置する予防的および治療的の両方の方法を提供する。このように関連する疾患または障害としては、例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、先天性心欠損症、大動脈狭窄症、心房中隔欠損症（ＡＳＤ）、房室（Ａ−Ｖ）管欠損症、動脈管、肺動脈弁狭窄症、大動脈弁下部狭窄症、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、弁疾患、結節硬化症、強皮症、肥満症、移植、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、前立腺癌、新形成；腺癌、リンパ腫、子宮癌、受胎能、血友病、凝固能亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫不全症、対宿主性移植片病、ＡＩＤＳ、気管支炎ぜん息、クーロン病；多発性硬化症、オールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、ならびに他の疾患、障害および状態など。
【０３７３】
これらの処置方法は、以下により詳細に記載される。
【０３７４】
（疾患および障害）
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）増加したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を拮抗する（すなわち、低減または阻害する）治療剤を用いて処置され得る。活性を拮抗する治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上記ペプチドに対する抗体；（ｉｉｉ）上記ペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）相同組換えによって上記ペプチドの内因性機能を「ノックアウトする」ために利用される、アンチセンス核酸および「機能不全性」である（すなわち、上記ペプチドに対するコード配列のコード配列内の異種挿入に起因する）核酸の投与、（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）；または（ｖ）上記ペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用を変化させる、調節因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに対して特異的な抗体を含む））。
【０３７５】
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）減少したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を増加させる（すなわち、活性に対するアゴニストである）治療剤を用いて処置され得る。活性をアップレギュレートする治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。
【０３７６】
増加したレベルまたは減少したレベルは、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定量することによって、容易に検出され得る。この定量は、患者の組織サンプルを（例えば、生検組織から）入手し、そしてそのサンプルを、その発現したペプチド（または上記ペプチドのｍＲＮＡ）のＲＮＡレベルまたはペプチドレベル、構造および／または活性をインビトロでアッセイすることによる。当該分野において周知の方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イムノアッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動が後に続く免疫沈降、免疫細胞化学などによる）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）。
【０３７７】
（予防的方法）
１つの局面において、本発明は、被験体において異常なＧＰＣＲＸの発現または活性と関連する疾患または状態を、ＧＰＣＲＸの発現または少なくとも１つのＧＰＣＲＸ活性を調節する薬剤をこの被験体に投与することによって予防するための方法を提供する。異常なＧＰＣＲＸの発現または活性によって引き起こされるかまたはこれらに起因する、疾患にかかる危険がある被験体は、例えば、本明細書中に記載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって、同定され得る。予防薬剤の投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいはその進行を遅らせられるように、このＧＰＣＲＸ異常の特徴である症状の発現の前に行い得る。このＧＰＣＲＸ異常の型に依存して、例えば、ＧＰＣＲＸアゴニスト薬剤またはＧＰＣＲＸアンタゴニスト薬剤が、その被験体を処置するために使用され得る。その適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。本発明の予防方法は、以下の小節において、さらに議論される。
【０３７８】
（治療方法）
本発明の別の局面は、治療目的のためにＧＰＣＲＸの発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、細胞を、その細胞に関するＧＰＣＲＸタンパク質活性の活性のうちの１つ以上を調節する薬剤と接触させる工程を包含する。ＧＰＣＲＸタンパク質活性を調節する薬剤は、核酸またはタンパク質、ＧＰＣＲＸタンパク質の天然に存在する同族リガンド、ペプチド、ＧＰＣＲＸペプチド模倣物、または他の低分子のような、本明細書中に記載されるような薬剤であり得る。１つの実施形態において、この薬剤は、ＧＰＣＲＸタンパク質活性のうちの１つ以上を刺激する。このような刺激薬剤の例としては、活性なＧＰＣＲＸタンパク質、およびその細胞に導入されたＧＰＣＲＸをコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、この薬剤は、ＧＰＣＲＸタンパク質活性のうちの１つ以上を阻害する。このような阻害薬剤の例としては、アンチセンスＧＰＣＲＸ核酸分子、および抗ＧＰＣＲＸ抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、その薬剤とともにその細胞を培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、被験体にその薬剤を投与することによって）実施され得る。このように、本発明は、ＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸分子の、異常な発現または異常な活性によって特徴付けられる、疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＧＰＣＲＸの発現または活性を調節する（例えば、アップレギュレートまたはダウンレギュレートする）薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）あるいはそのような薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態において、この方法は、ＧＰＣＲＸのタンパク質または核酸分子を、低減したかまたは異常な、ＧＰＣＲＸの発現または活性を補償するための治療として、投与する工程を包含する。
【０３７９】
ＧＰＣＲＸ活性の刺激は、ＧＰＣＲＸが異常にダウンレギュレートされている状況、および／またはＧＰＣＲＸ活性の増加が有益な効果を有するようである状況において、望ましい。このような状況の１つの例は、被験体が、異常な細胞増殖および／または細胞分化によって特徴付けられる障害（例えば、癌または免疫関連）を有する場合である。このような状況の別の例は、被験体が妊娠性疾患（例えば、プレクランプシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ））を有する場合である。
【０３８０】
（治療剤の生物学的効果の決定）
本発明の種々の実施形態において、適切なインビトロまたはインビボアッセイを行って、特定の治療剤の効果およびその投与が罹患組織の処置を示すか否かを決定する。
【０３８１】
種々の特定の実施形態において、インビトロアッセイが患者の障害に関与する代表的な細胞型で行われ、所定の治療剤がこの細胞型に対して所望の効果を発揮するか否かを決定し得る。治療において使用する化合物は、ヒト被験体において試験する前に適切な動物モデル系において試験され得る。これらの動物モデル系としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなど。同様に、インビボ試験については、当該分野で公知の任意の動物モデル系が、ヒト被験体に対する投与の前に使用され得る。
【０３８２】
（本発明の組成物の予防的用途および治療的用途）
本発明のＧＰＣＲＸ核酸およびタンパク質は、以下を含むが、これらに限定されない種々の障害に関連する強力な予防的適用および治療的適用に有用である：代謝障害、糖尿病、肥満症、感染症、食欲不振、癌関連癌、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、造血障害、および種々の異常脂肪性浮腫（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ）、肥満に関連する代謝障害、Ｘ代謝症候群（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　Ｘ）、および慢性疾患と関連する消耗疾患、および種々の癌。
【０３８３】
例のように、本発明のＧＰＣＲＸタンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり、そしてこのタンパク質は、遺伝子治療を必要とする被験体に投与される場合、有用であり得る。非制限的例示として、本発明の組成物は、上記の障害に罹患した患者の処置についての効力を有する。
【０３８４】
本発明のＧＰＣＲＸタンパク質をコードする新規の核酸、およびＧＰＣＲＸタンパク質の両方、またはそれらのフラグメントは、診断適用に有用で有り得る。ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。さらなる用途は、抗菌分子（すなわち、いくつかのペプチドは、抗菌特性を有することが見出されている）としての用途である。これらの材料は、治療的または診断的な方法における用途に関する本発明の新規の物質に免疫特異的に結合する抗体の生成においてさらに有用である。
【０３８５】
（等価物）
特定の実施形態は、詳細に本明細書中に開示されているが、これは、例証の目的のための例として開示され、そして前記の添付される特許請求の範囲に関して、制限することを意図しない。特に、種々の置換、変更、および改変が、特許請求の範囲により規定されるような発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明に対してなされ得ることが、本発明により意図される。核酸出発物質、目的のクローン、ライブラリーの型の選択は、本明細書中に記載される実施形態の知見を用いると当業者に慣用的な内容であると考えられる。他の局面、利点、および改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内であると考えられる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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