(57)【要約】本発明は、ホスホネート化合物、それを含有する組成物、それらを得る方法、ならびに骨粗鬆症および他の骨代謝の障害、癌、ウイルス感染症などの様々な医学的障害の治療におけるそれらの用途に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造を有するホスホネート化合物：
【化１】
2004500352.tif 000036
式中、
Ｒ１およびＲ１’は、独立して、−Ｈ、選択的に置換された−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アルケニル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アシル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アルケニル、または−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アシルであり、ただし少なくとも１個のＲ１およびＲ１’はＨではなく、かつ該アルケニルまたはアシルは選択的に１〜約６個の二重結合を有し；
Ｒ２およびＲ２’は、独立して、−Ｈ、選択的に置換された−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アルケニル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル））２、オキソ、ハロゲン、−ＮＨ２、−ＯＨ、または−ＳＨであり；
Ｒ３は、選択的にリンカーＬ上の官能基またはＣα上の利用可能な酸素原子に連結された、薬学的に活性を有する化合物のホスホネート誘導体であり；
Ｘは、存在する場合には、
【化２】
2004500352.tif 000037
であり；
Ｌは、原子価結合または式−Ｊ−（ＣＲ２）ｔ−Ｇ−の二官能連結分子であり（式中、ｔは１〜２４の整数であり、ＪおよびＧは、独立して、−０−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＨ−であり、かつＲは、−Ｈ、置換もしくは非置換のアルキル、またはアルケニルである）；
ｍは０〜６の整数であり；ならびに
ｎは０または１である。
【請求項２】
Ｒ３がビスホスホネートである、請求項１記載のホスホネート化合物。
【請求項３】
ビスホスホネートが、アレンドロネート、エチドロネート、チルドロネート、イバンドロネート、ＥＢ−１０５３、パミドロネート、オルパドロネート、アミノ−オルパドロネート、クロドロネート、またはリセドロネートである、請求項２記載のホスホネート化合物。
【請求項４】
Ｒ３が、抗ウイルス性ヌクレオシドのホスホネート誘導体である、請求項１記載のホスホネート化合物。
【請求項５】
ホスホネート誘導体が、アデフォビル、シドフォビル、環式シドフォビル、またはテノフォビルである、請求項４記載のホスホネート化合物。
【請求項６】
ホスホネート誘導体が、アジドチミジン（ＡＺＴ）の誘導体である、請求項４記載のホスホネート化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、抗新生物性ヌクレオシドのホスホネート誘導体である、請求項１記載のホスホネート化合物。
【請求項８】
ホスホネートが、シトシンアラビノシド、ゲムシタビン、５−フルオロデオキシウリジンリボシド、５−フルオロデオキシウリジンデオキシリボシド、２−クロロデオキシアデノシン、フルダラビン、または１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−グアニンの誘導体である、請求項７記載のホスホネート化合物。
【請求項９】
請求項１記載のホスホネート化合物およびそれらの薬学的に許容される担体を含有する、薬学的組成物。
【請求項１０】
哺乳類における骨粗鬆症の治療法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【請求項１１】
骨塩密度を増加させる方法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【請求項１２】
哺乳類において骨芽細胞および骨細胞のアポトーシスを防止する方法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【請求項１３】
哺乳類においてウイルス感染症を治療する方法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【請求項１４】
哺乳類において新生物の増殖を治療する方法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【請求項１５】
細胞増殖を調節する方法であって、請求項１記載の有効量のホスホネート化合物を必要とする被験者に投与する段階を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、新規ホスホネート化合物、それらを含有する組成物、それらの製造法、ならびに例えば骨粗鬆症およびその他の骨代謝障害、癌、ウイルス感染症などのような、様々な医学的障害の治療のためのそれらの用途に関する。
【０００２】
発明の背景
ホスホネート化合物は、様々な治療的恩典を提供することが以前より知られている。治療上の恩典を有するホスホネート化合物の特定の種類は、ビスホスホネート、すなわちピロリン酸結合の中心酸素原子が炭素により置換されているピロホスホネート類似体である。様々な置換基を、この中心炭素原子に結合し、異なる程度の薬効を有するビスホスホネート化合物誘導体を生成することができる。これらの誘導体は、下記の一般構造を有する：
【化３】
2004500352.tif 000002
式中、ＲａおよびＲｂは、独立して、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、ハロゲン、または様々なアルキルもしくはアリール基、またはこのような基の組合せより選択することができ、これらはさらに置換することができる。例としては、エチドロネート（式中、ＲａはＣＨ３であり、およびＲｂはＯＨである）；クロドロネート、ジクロロメチレンビスホスホン酸（Ｃｌ２ＭＤＰ）（式中、ＲａおよびＲｂはＣｌである）；パミドロネート、３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸（式中、Ｒａはエチルアミノであり、かつＲｂはヒドロキシルである）；アレンドロネート、４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデンビスホスホン酸（式中、Ｒａはプロピルアミノであり、およびＲｂはヒドロキシルである）；オルパドロネート（Ｏｌｐａｄｒｏｎａｔｅ）、３−ジメチルアミノ−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸（式中、ＲａはジメチルアミノエチルでありおよびＲｂはヒドロキシルである）；ならびに、アミノ−オルパドロネート（ＩＧ−９４０２）、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−１−アミノプロピリデンビスホスホネート（式中、ＲａはＮ，Ｎ−ジメチルアミノエチルであり、およびＲｂはＮＨ２である）を含む。
【０００３】
ビスホスホネートおよびそれらの置換された誘導体は、インビボにおける骨吸収を阻害するという固有の特性を有する。ビスホスホネートはさらに、造骨細胞においてアポトーシス（プログラムされた細胞死）を阻害することにより作用する。従ってそれらの用途についての適応症は、骨粗鬆症の治療および予防、ページェット病、転移性骨癌、副甲状腺機能亢進症、リウマチ様関節炎、疼痛性ジストロフィー、胸骨−肋骨鎖骨骨過形成（ｓｔｅｒｎｏ−ｃｏｓｔｏｃｌａｖｉｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｏｓｔｏｓｉｓ）、ゴーシェ病、エンゲルマン病、およびある種の骨格筋以外の障害の治療を含む（Ｐａｐａｐｏｕｌｏｓ， Ｓ． Ｅ．、Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ、Ｒ． Ｍａｒｃｕｓ、Ｄ． ＦｅｌｄｍａｎおよびＪ． Ｋｅｌｓｅｙ編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９６年、１２１０頁、表１）。
【０００４】
ビスホスホネートは治療的恩典を有する特性があるにもかかわらず、経口投与される物質としては薬学的欠点がある。ひとつの欠点は経口利用能が低いことであり：消化管から吸収されるのは経口投与用量の０．７％〜５％のような少量である。経口吸収は、食物と同時摂取された場合はさらに低下する。さらにいくつかの現在入手可能なビスホスホネート、例えばＦＯＳＡＭＡＸ（商標）（Ｍｅｒｃｋ社；アレンドロネートナトリウム）、ＳＫＥＬＩＤ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ社、チルドロネート）およびＡＣＴＯＮＥ（商標）（Ｐｒｏｃｔｅｒ ａｎｄ Ｇａｍｂｌｅ社、リセドロネート）は、局所毒性を有し、食道過敏および潰瘍を生じることが知られている。アミノ−オルパドロネートのようなその他のビスホスホネートは、抗吸収作用（ａｎｔｉ−ｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ）は持たないが（Ｖａｎ Ｂｅｅｋ， Ｅ．ら、Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ．、１１（１０）：１４９２−１４９７（１９９６））、骨細胞アポトーシスを阻害し、かつ正味の骨形成（ｎｅｔ ｂｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を刺激することができる（Ｐｌｏｔｋｉｎ， Ｌ．ら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、１０４（１０）：１３６３−１３７４（１９９９）および米国特許第５，８８５，９７３号）。従って、親化合物の薬学的に活性を維持または増強する一方で、それらの望ましくない副作用を除去または軽減するような、化学的に修飾されたビスホスホネート誘導体を開発することは有用であると思われる。
【０００５】
ビスホスホネートに加えて、モノホスホネートも、治療的恩典を提供することが知られている。治療的恩典を有するモノホスホネートのひとつのクラスは、例えばシドフォビル、環状シドフォビル、アデフォビル、テノフォビルなどの、抗ウイルス性ヌクレオチドホスホネートに加え、アジドチミジン、ガンシクロビル、アシクロビルなどの５’−ホスホネートおよびメチレンホスホネートである。この種の化合物において、糖部分の５’−ヒドロキシル、または完全な糖部分を含まない非環式ヌクレオシド（ガンシクロビル、ペンシクロビル、アシクロビル）におけるそれらの同等物は、リン−炭素結合で置換される。メチレンホスホネートの場合、メチレン基は、５’−ヒドロキシルまたはその同等物で置換され、かつその炭素原子は次にホスホネートと共有結合する。本発明の実施における使用のために考案された化合物を含む、様々なＡＺＴ構造を以下に示す。ＡＺＴそれ自身は左側に示している。化合物Ａは、ＡＺＴ−モノホスホネートであり、これは糖とリン酸の間に通常のホスホジエステル結合を有している。対照的に、化合物Ｂ（ＡＬＴ ５’−ホスホネート）および化合物Ｃ（ＡＺＴ ５’−メチレンホスホネート）においては、３’−アジド２’，３’−ジデオキシリボースの５’−ヒドロキシルが存在せず、かつリン−炭素結合（ＡＺＴホスホネート）またはリン−炭素結合により連結されたメチレン（ＡＺＴメチレンホスホネート）のいずれかにより置換されている。化合物Ｂおよび化合物Ｃは、本発明の実施において有用な化合物の例である。
【化４】
2004500352.tif 000003
【化５】
2004500352.tif 000004
【化６】
2004500352.tif 000005
【化７】
2004500352.tif 000006
【０００６】
この種の化合物は、抗増殖性または抗ウイルス性のヌクレオチドとして活性を有する可能性がある。細胞代謝において、２個の追加のリン酸化が生じ、ヌクレオシド三リン酸の同等物を示しているヌクレオチドホスホネート二リン酸を形成する。抗ウイルス性ヌクレオチドホスホネート二リン酸は、ウイルスＲＮＡもしくはＤＮＡポリメラーゼまたは逆転写酵素の選択的阻害剤である。すなわちウイルスポリメラーゼに対するそれらの阻害作用は、哺乳類細胞のＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγまたは哺乳類ＲＮＡポリメラーゼのそれらの阻害の程度よりも遙かに大きい。逆に、抗増殖性ヌクレオチドホスホネート二リン酸は、癌細胞のＤＮＡおよびＲＮＡポリメラーゼを阻害し、かつ正常細胞のＤＮＡおよびＲＮＡポリメラーゼに対する非常に低い選択性を示し得る。ヌクレオチドホスホネートは、消化管からの吸収が悪いので、これらは頻繁な非経口投与が必要とされる（例えばシドフォビル）。さらに、負に帯電したホスホネート部分は、細胞侵入を妨げ、低下された抗ウイルスまたは抗増殖活性をもたらす。驚くべきことに、本発明の化合物は、この種の物質の欠点を克服している。
【０００７】
抗ウイルス性ホスホネートの薬学的に活性を有する物質が公知である；下記の米国特許に、ヌクレオチドホスホネート類似体に関する研究が開示されている：第５，６７２，６９７号（ヌクレオシド−５’−メチレンホスホネート）、第５，９２２，６９５号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第５，９７７，０８９号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第６，０４３，２３０号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第６，０６９，２４９号。これまでに、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシルまたはスルフヒドリル官能基を有するホスホネート非含有薬物に共有結合したアルキルグリセロールリン酸の調製および使用が、明らかにされている。これらのプロドラッグは、選択的に該薬物とアルキルグリセロールリン酸の間にリンカー基または１個もしくは２個の追加のリン酸エステルを含む（米国特許第５，４１１，９４７号および米国特許出願第０８／４８７，０８１号）。クロロメタンジホスホン酸の不完全なエステル（ｐａｒｔｉａｌ ｅｓｔｅｒ）が公知であり（米国特許第５，３７６，６４９号）およびクロドロネートの二無水物が報告されている（Ａｈｌｍａｒｋら、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、４２：１４７３−１４７６（１９９９））。しかし、これらの不完全なエステルは、化学的または生化学的転換により活性ビスホスホネートを放出しないことが知られている（Ｎｉｅｍｉ， Ｒ．ら、Ｊ． Ｃｈｒｏｍ． Ｂ．、７０１：９７−１０２（１９９７））。抗ウイルス性ヌクレオシドに結合されているアルキルグリセロールリン酸残基を含有するプロドラッグ（米国特許第５，２２３，２６３号）、またはホスホノカルボキシレートを含有するプロドラッグ（米国特許第５，４６３，０９２号）も開示されている。
【０００８】
従って、ウイルス感染症および不適切な細胞増殖により惹起されたもの（例えば癌）のような、様々な疾患を治療するための、より毒性が低く、より効果的な薬剤が依然として必要とされている。従って本発明の目的は、例えば抗ウイルス性および抗新生物性薬剤のような、薬学的に活性を有する物質の化学的に修飾されたホスホネート誘導体を開発することである。これらの修飾された誘導体は、親化合物の効力を増強する一方で、それを必要とする被験者に投与した場合の有害な副作用を最小化する。
【０００９】
発明の簡単な説明
本発明は、ホスホネート化合物の類似体を提供する。本発明に従い使用するために考案されたホスホネート化合物は、骨吸収を低下させるか、または骨芽細胞もしくは骨細胞のアポトーシスを阻害するようなものに加え、癌、様々なウイルス感染症などの治療に有用であるようなヌクレオチドホスホネート類似体の生体活性、選択性、または生物学的利用能を改良するものを含む。本発明の化合物は、置換または非置換のアルキルグリセロール、アルキルプロパンジオール、アルキルエタンジオール、または関連した部分に共有結合した（直接的またはリンカー分子を介して間接的）ホスホネートを含んでいる。本発明の別の局面において、本明細書に記載されたホスホネート化合物の類似体を含有する薬学的製剤が提供される。
【００１０】
本発明の別の局面において、様々な治療法、例えば哺乳類において骨吸収を治療または予防するための方法、骨芽細胞および骨細胞のアポトーシスを妨げることにより骨形成を増加させる方法、骨量および強度を増加させる方法、ウイルス感染症を治療する方法、例えば癌のような不適切な細胞増殖により引き起された障害を治療する方法などが提供される。
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明のホスホネート化合物は下記の構造を有する：
【化８】
2004500352.tif 000007
式中、
Ｒ１およびＲ１’は、独立して、−Ｈ、選択的に置換された−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アルケニル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ２４）アシル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アルケニル、または−Ｓ（Ｃ１−Ｃ２４）アシルであり、ただし少なくとも１個のＲ１およびＲ１’はＨではなく、かつ該アルケニルまたはアシル部分は選択的に１〜６個の二重結合を有し；
Ｒ２およびＲ２’は、独立して、−Ｈ、選択的に置換された−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アルケニル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ７）アシル、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ７）アルキル））２、オキソ、ハロゲン、−ＮＨ２、−ＯＨ、または−ＳＨであり；
Ｒ３は、選択的にリンカーＬ上の官能基またはＣα上の利用可能な酸素原子に連結された、薬学的に活性を有するホスホネート、ビスホスホネートまたは薬学的に活性を有する化合物のホスホネート誘導体であり；
Ｘは、存在する場合には、
【化９】
2004500352.tif 000008
であり；
Ｌは、原子価結合または式−Ｊ−（ＣＲ２）ｔ−Ｇ−の二官能連結分子であり（式中、ｔは１〜２４の整数であり、ＪおよびＧは、独立して、−０−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＨ−であり、かつＲは、−Ｈ、置換もしくは非置換のアルキル、またはアルケニルである）；
ｍは０〜６の整数であり；および
ｎは０または１である。
【００１２】
好ましい態様において、ｍ＝０、１または２である。これらの好ましい態様において、Ｒ２およびＲ２’は、好ましくは−Ｈであり、その結果プロドラッグは、治療用ホスホネートのエタンジオール、プロパンジオールまたはブタンジオール誘導体である。好ましいエタンジオールホスホネート種は下記の式を有する：
【化１０】
2004500352.tif 000009
式中、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ３、Ｌおよびｎは先に定義したものである。
【００１３】
好ましいプロパンジオール種は下記の式を有する ：
【化１１】
2004500352.tif 000010
式中、ｍ＝１であり、およびＲ１、Ｒ１’、Ｒ３、Ｌおよびｎは先の一般式において定義したものである。
【００１４】
好ましいグリセロール種は下記の式を有する：
【化１２】
2004500352.tif 000011
式中、ｍ＝１、Ｒ２＝Ｈ， Ｒ２’＝ＯＨ、ならびにＣα上のＲ２およびＲ２’は両方とも−Ｈである。グリセロールは光学活性分子である。グリセロールの立体特異性番号順転換（ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）を用いると、ｓｎ−３位は、グリセロールキナーゼによりリン酸化される位置である。グリセロール残基を有する本発明の化合物において、−（Ｌ）ｎ−Ｒ３部分は、グリセロールのｓｎ−３またはｓｎ−１位のいずれかに結合することができる。
【００１５】
本発明の薬学的に活性を有する物質の全ての種において、Ｒ１は好ましくは、式−Ｏ−（ＣＨ２）ｔ−ＣＨ３を有するアルコキシ基である（式中、ｔは０〜２４である）。より好ましくは、ｔは１１〜１９である。最も好ましくは、ｔは１５または１７である。
【００１６】
好ましいＲ３基は、臨床的に有用であることが知られているビスホスホネートを含み、例えば下記の化合物を含む：
エチドロネート：１−ヒドロキシエチリデンビスホスホン酸（ＥＤＨＰ）；
クロドロネート：ジクロロメチレンビスホスホン酸（Ｃｌ２ＭＤＰ）；
チルドロネート：クロロ−４−フェニルチオメチレンビスホスホン酸；
パミドロネート：３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸（ＡＤＰ）；
アレンドロネート：４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデンビスホスホン酸；
オルパドロネート：３−ジメチルアミノ−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸（ジメチル−ＡＰＤ）；
イバンドロネート：３−メチルペンチルアミノ−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸（ＢＭ２１．０９５５）；
ＥＢ−１０５３：３−（１−ピロリジニル）−１−ヒドロキシプロピリデンビスホスホン酸；
リセドロネート：２−（３−ピリジニル）−１−ヒドロキシ−エチリデンビスホスホン酸；
アミノ−オルパドロネート：３−（Ｎ，Ｎ−ジイメチルアミノ−１−アミノプロピリデン）ビスホスホネート（ＩＧ９４０２）など。
【００１７】
Ｒ３も同様に、様々なホスホネート含有ヌクレオチド（または、それらの対応するホスホネートに誘導され得るヌクレオシド）より選択することができ、これも本明細書において使用することが考案されている。好ましいヌクレオシドは、不適切な細胞増殖により惹起された障害の治療に有用なもの、例えば２−クロロ−デオキシアデノシン、１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シチジン（シタラビン、ａｒａ−Ｃ）、フルオロウリジン、フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）、ゲムシチビン、クラドリビン、フルダラビン、ペントスタチン（２’−デオキシコフォルマイシン）、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、および置換または非置換の１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−グアニン（ａｒａ−Ｇ）、１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−アデノシン（ａｒａ−Ａ）、１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−ウリジン（ａｒａ−Ｕ）などを含む。
【００１８】
ウイルス感染症の治療に有用なヌクレオシドも、Ｒ３基として使用するためにそれらの対応する５’−ホスホネートに転換され得る。このようなホスホネート類似体は、典型的には抗ウイルス性ヌクレオシドの５’−ヒドロキシルが置換されたホスホン酸基（−Ｐ０３Ｈ２）またはメチレンホスホン酸基（−ＣＨ２Ｐ０３Ｈ２）のいずれかを含む。５’−ヒドロキシルの−Ｐ０３Ｈ２置換により誘導された抗ウイルス性ホスホネートの例のいくつかを以下に示す：
【化１３】
2004500352.tif 000012
【化１４】
2004500352.tif 000013
【化１５】
2004500352.tif 000014
【化１６】
2004500352.tif 000015
【００１９】
５’−ヒドロキシルの−ＣＨ２−Ｐ０３Ｈ２置換により誘導された抗ウイルス性ホスホネートの例のいくつかを以下に示す：
【化１７】
2004500352.tif 000016
【化１８】
2004500352.tif 000017
【化１９】
2004500352.tif 000018
【化２０】
2004500352.tif 000019
本発明の実施において使用するために考案された他の好ましい抗ウイルス性ヌクレオチドホスホネートは、同様に、ｄｄＡ、ｄｄＩ、ｄｄＧ、Ｌ−ＦＭＡＵ、ＤＸＧ、ＤＡＰＤ、Ｌ−ｄＡ、Ｌ−ｄＩ、Ｌ−（ｄ）Ｔ、Ｌ−ｄＣ、Ｌ−ｄＧ、ＦＴＣ、ペンシクロビルなどを含む抗ウイルス性ヌクレオシドに由来している。
【００２０】
加えて、シドフォビル、環式シドフォビル、アデフォビル、テノフォビルなどの抗ウイルス性ホスホネートは、本発明のＲ３基として使用することができる。
【００２１】
本発明の特定の化合物は、例えば糖部分内のように、１個またはそれ以上のキラル中心を有し、従って光学活性体で存在することができる。同様に、これらの化合物がアルケニル基または不飽和のアルキルもしくはアシル部分を含むならば、該化合物のｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−異性体で存在する可能性がある。追加の不斉炭素原子は、アルキル基のように置換基中に存在することができる。ラセミ混合物に加え、ｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−異性体混合物を含む、Ｒ異性体、Ｓ異性体、およびそれらの混合物が本発明により考察されている。このような異性体およびそれらの混合物は全て本発明に含まれることが意図される。特定の立体異性体が望ましい場合、不斉中心を含み、かつ既に分割されているような出発材料の立体特異性反応を使用することによる、当技術分野において公知の方法により、または代替的には、立体異性体の混合物および公知の方法による分割につながる方法により調製することができる。
【００２２】
薬学的に活性を改変するかまたは経口吸収を増大させるために、本発明に従って誘導することができる多くのホスホネート化合物、例えば下記の特許に開示された化合物などが存在し、これらは各々その全体が本明細書に参照として組み入れられる：米国特許第３，４６８，９３５号（エチドロネート）、第４，３２７，０３９号（パルミドロネート）、第４，７０５，６５１号（アレンドロネート）、第４，８７０，０６３号（ビスホスホン酸誘導体）、第４，９２７，８１４号（ジホスホネート）、第５，０４３，４３７号（アジドジデオキシヌクレオシドのホスホネート）、第５，０４７，５３３号（非環式プリンホスホネートヌクレオチド類似体）、第５，１４２，０５１号（ピリミジンおよびプリン塩基のＮ−ホスホニルメトキシアルキル誘導体）、第５，１８３，８１５号（骨活性化物質）、第５，１９６，４０９号（ビスホスホネート）、第５，２４７，０８５号（抗ウイルス性プリン化合物）、第５，３００，６７１号（Ｇｅｍ−ジホスホン酸）、第５，３００，６８７号（トリフルオロメチルベンジルホスホネート）、第５，３１２，９５４号（ビス−およびテトラキス−ホスホネート）、第５，３９５，８２６号（グアニジンアルキル−１，１−ビスホスホネート誘導体）、第５，４２８，１８１号（ビスホスホネート誘導体）、第５，４４２，１０１号（メチレンビスホスホン酸誘導体）、第５，５３２，２２６号（トリフルオロメチルベンジルホスホネート）、第５，６５６，７４５号（ヌクレオチド類似体）、第５，６７２，６９７号（ヌクレオシド−５’−メチレンホスホネート）、第５，７１７，０９５号（ヌクレオチド類似体）、第５，７６０，０１３号（チミジレート類似体）、第５，７９８，３４０号（ヌクレオチド類似体）、第５，８４０，７１６号（ホスホネートヌクレオチド化合物）、第５，８５６，３１４号（チオ−置換された窒素を含有するヘテロ環式ホスホネート化合物）、第５，８８５，９７３号（オルパドロネート）、第５，８８６，１７９号（ヌクレオチド類似体）、第５，８７７，１６６号（鏡像異性体的に純粋な２−アミノプリンホスホネートヌクレオチド類似体）、第５，９２２，６９５号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第５，９２２，６９６号（プリンのエチレン性およびアレン性ホスホネート誘導体）、第５，９７７，０８９号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第６，０４３，２３０号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）、第６，０６９，２４９号（抗ウイルス性ホスホノメトキシヌクレオチド類似体）；ベルギー特許第６７２２０５号（クロドロネート）；欧州特許第７５３５２３号（アミノ−置換されたビスホスホン酸）；欧州特許出願第１８６４０５号（ゲミナルジホスホネート）；など。
【００２３】
ある種のビスホスホネート化合物は、ヒトを含む哺乳類においてスクアレンシンターゼを阻害する能力および血清コレステロールレベルを低下させる能力を有する。これらのビスホスホネートの例は、例えば、Ｐａｕｌｓらの米国特許第５，４４１，９４６号および第５，５６３，１２８号「親油性アミンのホスホネート誘導体（Ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ａｍｉｎｅｓ）」に開示されており、これらは両方ともその全体が本明細書に参照として組み入れられる。本発明に係るこれらのスクアレンシンターゼ阻害化合物の類似体、およびヒトにおける脂質障害の治療におけるそれらの使用は、本発明の範囲内である。本発明のビスホスホネートを経口的または局所的に使用し、歯周病を予防または治療することができることが、米国特許第５，２７０，３６５号に開示されており、これはその全体が本明細書に参照として組み入れられる。
【００２４】
本明細書において使用される「アルキル」という用語は、１〜２４個の炭素原子の一価の直鎖もしくは分枝鎖または環式ラジカルであって、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどを含むものを意味する。
【００２５】
本明細書において使用される「置換されたアルキル」という用語は、さらにヒドロキシ、アルコキシ（低級アルキル基の）、メルカプト（低級アルキル基の）、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、ヘテロ環式、置換されたヘテロ環式、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、アリールオキシ、置換されたアリールオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、ニトロン、アミノ、アミド、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシル、カルバメート、スルホニル、スルホンアミド、スルフリルなどより選択される１個または複数の置換基を持つアルキル基を意味する。
【００２６】
本明細書において使用される「アルケニル」という用語は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を有し、かつ約２〜最大２４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のヒドロカルビル基を意味し、かつ「置換されたアルケニル」とは、前述の１個または複数の置換基をさらに有するアルケニル基を意味する。
【００２７】
本明細書において使用される「アリール」という用語は、６個から最大１４個の範囲の炭素原子を有する芳香族基を意味し、かつ「置換されたアリール」とは、前述の１個または複数の置換基をさらに有するアリール基を意味する。
【００２８】
本明細書において使用される「ヘテロアリール」という用語は、環構造の一部として１個または複数のヘテロ原子（例えば、Ｎ、０、Ｓなど）を含み、かつ３個から最大１４個の範囲の炭素原子を有する芳香族基を意味し、かつ「置換されたヘテロアリール」とは、前述の１個または複数の置換基をさらに有するヘテロアリール基を意味する。
【００２９】
本明細書において使用される「結合」または「原子価結合」という用語は、電子対からなる原子間の連結を意味する。
【００３０】
本明細書において使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、酸および塩基の付加塩を意味する。
【００３１】
本明細書において使用される「プロドラッグ」という用語は、化学的または代謝的に切断可能な基を有し、かつ加溶媒分解によりもしくはインビボの生理的条件下において薬学的に活性を有する化合物となる、薬学的に活性を有する化合物の誘導体を意味する。
【００３２】
ホスホネート類似体は、ヒドロキシル基により、１−Ｏ−アルキルグリセロール、３−Ｏ−アルキルグリセロール、１−Ｓ−アルキルチオグリセロール、またはアルコキシ−アルカノールに共有結合された、治療的に有効なホスホネート（または治療的に有効な化合物のホスホネート誘導体）を含み、消化管において、親化合物よりもより効率的に吸収され得る。この類似体の経口投与用量は、哺乳類の消化管からそのまま取込まれ、かつこの活性薬物は、内在性酵素の作用により、インビボ放出される。本発明のホスホネート類似体は、対応する誘導されていない化合物よりもより高度な生物活性を有し得る。
【００３３】
本発明の化合物は、ホスホネート含有部分がアルキル−グリセロールまたはアルコキシ−アルカノール部分に直接連結するため、およびホスホン酸結合の存在が酵素による遊離薬物への転換を妨害するために、先行技術において説明されたアルキルグリセロールリン酸プロドラッグよりも改良されている。これらの基の間のその他のリンカーは、改良された類似体において存在することができる。例えば、式−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を有する二官能リンカー（式中、ｎは１〜２４である）は、ホスホネートをアルコキシ−アルカノールまたはアルキルグリセロール部分のヒドロキシル基に結合することができる。
【００３４】
前述のことにより、本発明のホスホネートはより高度に経口吸収されうる。さらに血漿または消化管酵素ではなく、細胞の酵素が、この複合体を遊離ホスホネートへ転換すると考えられる。アルコキシ−アルカノールホスホネートの更なる利点は、同時投与される食物がホスホネート吸収を低下または除去する傾向が、非常に低下または除去され、その結果、より高度の血漿レベルおよびより良い患者の服薬遵守をもたらすことである。
【００３５】
本発明の化合物は、錠剤、カプセル剤、液剤、乳剤もしくは懸濁剤、吸入される液剤もしくは固形粒子、スプレーのようなマイクロカプセル化した粒子、経皮貼付剤のような塗布による皮膚を介して、または経直腸的、例えば坐薬の形状で投与することができる。本発明の親油性プロドラッグ誘導体は、経皮吸収投与および送達系に特に良く適しており、かつ同じく練り歯磨きとして使用してもよい。投与はさらに、注射可能な液剤の形状で非経口的に投与することもできる。
【００３６】
組成物は、例えばカプセル剤、錠剤、エアゾール、液剤、懸濁剤のような通常の形状で、または局所塗布用担体と共に調製することができる。本発明の化合物を含有する薬学製剤は、例えば「レミントンの薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）」（１９８５年）に記載されたような常法に従い調製することができる。
【００３７】
使用された薬学的担体または希釈剤は、通常の固形担体または液体担体であることができる。固形担体の例には、乳糖、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはセルロースの低級アルキルエーテルがある。液体担体の例は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレン、または水である。担体または希釈剤は、グリセリルモノステアレートまたはジステアレートのような、当技術分野において公知の持効性物質のいずれかを、単独でまたはワックスと混合して含むことができる。
【００３８】
固形担体が経口投与のために使用される場合には、この調製物は、打錠されるか、または硬質ゼラチンカプセル内に粉末またはペレットの形状で入れることができる。固形担体の用量は広範に変動するが、通常約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体が使用される場合、その調製物は、シロップ剤、乳剤、軟質ゼラチンカプセル剤、または水性もしくは非水性の液体懸濁液または溶液であるような無菌の注射可能な溶液であることができる。
【００３９】
錠剤は、活性成分（すなわち、１種または複数の本発明の化合物）と、薬学的に不活性の無機もしくは有機の担体、希釈剤、および／または賦形剤との混合により調製される。錠剤のために使用することができるこのような賦形剤の例は、乳糖、コーンスターチまたはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸、またはそれらの塩である。ゼラチンカプセル剤に適した賦形剤の例は、植物油、ワックス、脂肪、半固形、および液体ポリオールである。これらのビスホスホネートプロドラッグも、マイクロカプセル化した形状で製造することができる。
【００４０】
点鼻投与については、調製物は、エアゾール適用のための液体担体、特に水性担体中に溶解または懸濁化された本発明の化合物を含有することができる。この担体は、プロピレングリコールのような可溶化剤、界面活性剤、レシチンまたはシクロデキストリンのような吸収増強剤、または保存剤を含んでもよい。
【００４１】
非経口注射用の本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される滅菌された水性もしくは非水性の液体、分散体、懸濁液、または乳液に加え、使用直前に滅菌した注射用溶液または分散液中で再構成するための無菌散剤を含有することができる。
【００４２】
溶液およびシロップ剤の調製に適当な賦形剤は、水、ポリオール、ショ糖、転化糖、ブドウ糖などである。注射用溶液の調製に適当な賦形剤には、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などがある。
【００４３】
医薬品には、さらに例えば保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、緩衝剤、コーティング剤、酸化防止剤、希釈剤などのような、様々な添加成分を含有することができる。
【００４４】
選択的には、本発明の薬学的組成物は、例えば抗生物質または他の薬学的に活性を有する物質のような、様々な活性を示す１種または複数の化合物と組合せられた一般的処方に従って化合物を含有してもよい。このような組合せも本発明の範囲内である。
【００４５】
本発明は、骨代謝、ウイルス感染症、不適切な細胞増殖などに関連した哺乳類の疾患を治療する方法を提供する。これらの方法は特に、治療的有効量の本発明のプロドラッグを、それらを必要とするヒトまたは他の哺乳類へ投与する段階を含む。このような治療に適した適応症は、老人性骨粗鬆症、閉経後またはステロイド誘導性の骨粗鬆症、ページェット病、転移性骨癌、副甲状腺機能亢進症、リウマチ様関節炎、疼痛性ジストロフィー、胸骨−肋骨鎖骨骨過形成、ゴーシェ病、エンゲルマン病、ある種の骨格筋以外の障害および歯周病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、水痘帯状疱疹ヘルペスウイルス、リンパ腫、白血病のような血液学的疾患などを含む。
【００４６】
本発明のある局面において、哺乳類、特にヒトにおける骨量減少の予防または治療の方法が提供され、本方法は、治療的有効量の本発明の化合物をヒトまたは哺乳類に投与する段階を含む。本発明の骨吸収を阻害するビスホスホネートプロドラッグは、ビスホスホネートからプロドラッグが調製され、これが有効であることが知られている状態において、破骨細胞が媒介した骨吸収または骨量減少に対抗するため、治療において有用である。このような治療に適した適応症は、骨粗鬆症、特に閉経後の女性における骨粗鬆症、長期の糖質コルチコイド療法に随伴する骨粗鬆症、および骨ページェット病を含む。同じくビスホスホネート化合物クロドロネート（Ｏｓｔａｃ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ社、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、遠位部転移のリスクの高い乳癌患者において、内臓に加え骨への転移を低下させることが知られている（Ｄｉｅｌ， Ｉ．Ｊ．ら、 Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．、３３９（６０ ３５７−３６３）（１９９８））。本発明のビスホスホネートプロドラッグの効能は、親化合物に関するものと同じ方法に従い評価することができる。これらは、腰椎、大腿骨頚部、転子、前腕および全身の骨塩密度の比較測定；椎骨骨折、骨粗鬆症における脊椎変形および身長の測定、転移性疾患における骨病巣の骨スキャニングまたはｘ線写真による確定などとの組合せを含む。
【００４７】
本発明の別の局面において、骨芽細胞および骨細胞のアポトーシスを阻害し、より多い正味の骨形成率をもたらす一方で、実質的に破骨細胞の機能を変更しない本発明の骨同化作用促進性化合物を投与する段階により、哺乳類、特にヒトにおいて、骨量および強度を増す方法が提供される（Ｐｌｏｔｋｉｎら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、１０４：１３６３−１３７４（１９９９）およびＶａｎ Ｂｅｅｋら、Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ． Ｒｅｓ．、１１：１４９２（１９９６））。
【００４８】
さらに別の本発明の局面において、ウイルス感染症により引き起された疾患を治療する方法が提供される。このような治療に適した適応症は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、水痘帯状疱疹ヘルペスウイルス、およびオルトポックスウイルスにより惹起された疾患（例えば、大痘瘡および小痘瘡、ワクシニア、天然痘、牛痘、ラクダ痘疹、サル痘など）、エボラウイルス、パピローマウイルスなどのような易感染性ウイルスを含む。
【００４９】
本発明のさらに別の局面において、例えば黒色種、肺癌、膵癌、胃癌、結腸癌および直腸癌、前立腺癌および乳癌、白血病およびリンパ腫などの癌のような、不適切な細胞増殖により惹起された疾患を治療する方法が提供される。本発明の化合物としての使用に関してそれらのヌクレオチドホスホネートに転換することができる抗癌剤には、シタラビン（ａｒａ−Ｃ）、フルオロウリジン、フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）、ゲムシチビン、クラドリビン、フルダラビン、ペントスタチン（２’−デオキシコフォルマイシン）、６−メルカプトプリンおよび６−チオグアニン、ならびに置換または非置換のアラ−アデノシン（ａｒａ−Ａ）、アラ−グアノシン（ａｒａ−Ｇ）、およびアラウリジン（ａｒａ−Ｕ）が含まれるが、これらに限定されることはない。本発明の抗癌化合物は、単独で、または他の代謝拮抗物質もしくはアルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗腫瘍性抗生物質などのような他の種類の抗癌剤と組合わせて使用することができる。
【００５０】
本発明のプロドラッグは、望ましい場合には、経口、非経口、局所的、経直腸的、および他の経路を介して、適当な単位用量で投与することができる。
【００５１】
本明細書において使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、もしくは硝子体内の注射、または点滴法を意味する。
【００５２】
「局所的」という用語は、経直腸的および吸入スプレーによる投与、さらにはより一般的である口および鼻の皮膚および粘膜の経路、ならびに練り歯磨き中を包含している。
【００５３】
「有効量」という用語は、本発明のホスホネートプロドラッグにおいて使用される場合、前述の疾患を予防または逆行させる用量である。特に骨代謝に関連した疾患に関しての有効量は、異常もしくは過剰な骨吸収、もしくは加齢、特に閉経後の女性において生じるような骨吸収を予防、減弱、または逆行させる用量、または乳癌において骨への転移および内臓への転移を予防もしくは対抗する用量である。
【００５４】
ウイルス感染症または不適切な細胞増殖（例えば癌）に関連した疾患に関しての「有効量」とは、抗ウイルス性または抗癌性親化合物の推奨量を参照し決定される。選択された用量は、選択された化合物の活性、投与経路、治療される病態の重症度、ならびに治療される患者の状態および病歴に応じて変動すると思われる。しかし、所望の治療的効果を達成するのに必要とされる用量よりも低いレベルの化合物の用量で開始し、かつ所望の効果が達成されるまで用量を漸増することは当技術分野の範囲内である。望ましい場合には、一日の有効用量を、投与を目的とした多回用量、例えば１日２〜４回の用量に分割することができる。しかし、任意の特定の患者についての具体的服用量レベルは、体重、全身の健康状態、食事、時間、投与経路、併用薬、ならびに治療される疾患の重症度を含む、様々な要因により決定されることは理解されると思われる。
【００５５】
一般に、本発明の化合物は、活性成分を１％〜１００％含有する単位剤形に調剤される。治療用量の範囲は、患者、例えばヒトに薬物として投与される場合は、約０．０１〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは約０．１０ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者について所望の治療的反応を達成するのに有効である活性化合物の用量を投与のために変動させることができる。
【００５６】
多くの動物実験により、関連する臨床疾患を模倣するように設計された実験条件下で、骨量減少の防止においてビスホスホネートの効能が示されている。これらの試験を基に、ビスホスホネートの作用を評価するためのいくつかの小動物モデル系を利用することができる。これらの試験はさらに、本発明のビスホスホネートプロドラッグの比較のための効能の測定において有用である。ビスホスホネート治療の評価は、典型的には、処理動物群と非処理動物群の間での、大腿部の灰分質量および、例えば骨梁容積として測定されたような骨量の測定を必要とする。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ， Ｄ．ら、Ｊ． Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ．、５（３）：２７９−２８６（１９９０）は、アミノヒドロキシブタンビスホスホネートで処理した固定したラットにおける骨量減少の阻害を評価するためのこのような方法の利用を明らかにしている。Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｍ．ら、Ｃａｌｃｉｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．、５３：２７８−２８２（１９９３）は、ラットにおいて甲状腺機能亢進症を引き起し、ヒトの甲状腺機能亢進におけるものと類似した骨の変化を生じ、従ってビスホスホネート処理群と非処理群を、オステオカルシン測定値を基に生化学的に、ならびに海綿質の骨容積の差を含む組織形態学的分析、および骨切片における類骨、破骨細胞および骨芽細胞表面の組織学的比較により比較した。Ｓｅｅｄｏｒ， Ｊ．Ｇ．ら、Ｊ． Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ．、６（４）：３３９−３４６（１９９１）は、大腿部の灰分質量および脛骨の骨梁容積の組織形態学的分析による、卵巣摘出ラットにおける骨量減少に対抗するアレンドロネートの作用の試験を記載している。成長期ラットの骨端の組織学的試験を含むＳｃｈｅｎｋアッセイ法も、スクリーニングアッセイ法として使用することができる。様々な戦略により骨減少症とされた実験ラットにおける本発明の化合物の骨吸収対抗作用を評価するためのスクリーニング試験の例は、実施例１４に示されている。
【００５７】
本発明の化合物は、一般にはスキームＩ〜ＶＩに示されたような、様々な方法で調製することができる。以下に説明された一般的ホスホンネートエステル化法は例証のみを目的と提供され、これらはいかなる意味においても本発明を制限するものとして構成されてはいない。実際、ホスホン酸のアルコールによる直接縮合に関していくつかの方法が開発されている（例えば、Ｒ． Ｃ． Ｌａｒｏｃｋ、「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」、ＶＣＨ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９年、９６６頁およびその中の参考文献を参照のこと）。これらの例において説明された化合物および中間体の単離および精製は、望ましい場合には、例えば濾過、抽出、結晶化、フラッシュカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、蒸留またはこれらの手法の組合せのような、任意の適当な分離法または精製法により行うことができる。適当な分離法および単離法の詳細な説明は下記の実施例に示す。当然ながら、他の同等の分離法および単離法も使用することができる。
【００５８】
スキームＩは、パミドロネートまたはアレンドロネートのような、１級アミノ基を含むビスホスホネートプロドラッグの合成を概説している。実施例１は、１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロピル−アレンドロネート（ＨＤＰ−アレンドロネート）または１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロピル−パミドロネート（ＨＤＰ−パミドロネート）の合成の条件を提供する。本方法において、ピリジン溶液中のジメチル４−フタルイミドブタノイルホスホネート（１ｂ、米国特許第５，０３９，８１９号に開示されたように調製）およびヘキサデシルオキシプロピルメチルホスファイト（２）の混合物を、トリエチルアミンにより処理し、ビスホスホネートテトラエステル３ｂを得て、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。中間体２は、Ｋｅｒｓ， Ａ．、Ｋｅｒｓ， Ｊ．、Ｓｔａｗｉｎｓｋｉ， Ｉ．、Ｓｏｂｋｏｗｓｋｉ， Ｍ．、Ｋｒａｓｚｅｗｓｋｉ， Ａ．、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９５年４月、４２７−４３０頁に記載された、亜リン酸ジフェニルのエステル転移により得る。従って、ピリジン溶液中の亜リン酸ジフェニルを、最初にヘキサデシルオキシプロパン−１−オールで処理し、次にメタノールで処理し、化合物２が提供される。
【００５９】
スキームＩ
【化２１】
2004500352.tif 000020
【００６０】
この方法の重要な局面は、他の長鎖のアルコールを、ヘキサデシルプロパン−１−オールの代わりに使用し、様々な本発明の化合物を生成することができることである。中間体３ｂのアセトニトリルを溶媒とするブロモトリメチルシランによる処理によって、メチルエステルが選択的に切断され、モノエステル４ｂが生じる。化合物４ｂの混合溶媒系（２０％メタノール／８０％１，４−ジオキサン）中のヒドラジンによる処理によって、示されるようにフタルイミド保護基の除去が行われる。所望のアレンドロネートプロドラッグを濾過により収集し、メタノール性アンモニア（ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃ ａｍｍｏｎｉａ）による処理によりトリアンモニウム塩へと転換する。
【００６１】
スキームＩＩは、１級アミノ基を欠いているビスホスホネート類似体の合成を示す。この場合、処理工程は、フタルイミド基による保護と、それに続くヒドラジン分解による脱保護が不要であること以外は、スキームＩと同様である。
【００６２】
スキームＩＩ
【化２２】
2004500352.tif 000021
【００６３】
アミノ−オルパドロネートのような１−アミノ基を有するビスホスホネートは、わずかに変更されたスキームＩＩＩに示された方法を用いて、本発明のプロドラッグの類似体に転換することができる。
【００６４】
スキームＩＩＩ
【化２３】
2004500352.tif 000022
【００６５】
化合物２および３−（ジメチルアミノ）プロピオニトリルの混合物を、無水ＨＣｌにより処理し、続いて亜リン酸ジメチルを添加することによって、テトラエステル３を得る。ブロモトリメチルシランによる脱メチル化の後、ヘキサデシルオキシプロピル−アミノオルパドロネートが生じる。
【００６６】
スキームＩＶは、脂質基が、ホスホネートエステルではなく、むしろ親化合物の１級アミノ基に結合されているビスホスホネート類似体の合成を例示する。
【００６７】
スキームＩＶ
【化２４】
2004500352.tif 000023
【００６８】
スキームＶは、シドフォビル、環式シドフォビル、および他のホスホネートエステルのアルキルグリセロールまたはアルキルプロパンジオール類似体の一般的合成を例示する。２，３−イソプロピリデングリセロール１をジメチルホルムアミド中のＮａＨにより処理し、続いてメタンスルホン酸アルキルとの反応によって、アルキルエーテル２が生じる。酢酸処理によるイソプロピリデン基の除去、それに続くピリジン中でのトリチルクロライドとの反応により、中間体３が生成する。中間体３とハロゲン化アルキルとのアルキル化により、化合物４が生じる。８０％酢酸水溶液によるトリチル基の除去によって、Ｏ，Ｏ−ジアルキルグリセロール５が得られる。化合物５の臭素化、それに続く環式シドフォビルまたは他のホスホネート含有ヌクレオチドのナトリウム塩との反応によって、所望のホスホネート付加物７が生成する。環式付加物の開環は、水酸化ナトリウム水溶液との反応により達成される。好ましいプロパンジオール種は、スキームＶの化合物５について１−Ｏ−アルキルプロパン−３−オールの置換により合成することができる。テノフォビルおよびアデフォビルの類似体は、スキームＶの反応（ｆ）において、ｃＣＤＶをこれらのヌクレオチドホスホネートへ置換することにより合成することができる。同様に、本発明の他のヌクレオチドホスホネートもこの方法で生成することができる。
【００６９】
スキームＶ
【化２５】
2004500352.tif 000024
試薬：ａ）ＮａＨ、Ｒ１ＯＳＯ２Ｍｅ、ＤＭＦ；ｂ）８０％酢酸水溶液；ｃ）トリチルクロライド、ピリジン；ｄ）ＮａＨ、Ｒ２−Ｂｒ、ＤＭＦ；ｅ）ＣＢｒ４、トリフェニルホスフィン、ＴＨＦ；ｆ）環式シドフォビル（ＤＣＭＣ塩）、ＤＭＦ；ｇ）０．５Ｎ ＮａＯＨ
【００７０】
スキームＶＩは、例として１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロピル−アデフォビルを用いる、本発明のヌクレオチドホスホネートの合成の一般的方法を例示する。ヌクレオチドホスホネート（５ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン中に懸濁し、アルコキシアルコールまたはアルキルグリセロール誘導体（６ｍｍｏｌ）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１０ｍｍｏｌ）を添加する。薄層クロマトグラフィーでモニタリングして縮合反応が完了するまで、この混合物を加熱還流し、激しく攪拌する。その後混合物を冷却し、濾過する。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲル上に吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（約９：１のジクロロメタン／メタノールによる溶離）により精製し、対応するホスホネートモノエステルを得る。
【００７１】
スキームＶＩ
【化２６】
2004500352.tif 000025
【００７２】
本発明を実施例を参照してより詳細に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
【００７３】
実施例１
１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−アレンドロネートの合成
Ａ．　ヘキサデシルオキシプロピルメチルホスファイト（ｂ）
ヘキサデシルオキシプロピルメチルホスファイトを、Ｋｅｒｓ， Ａ．、Ｋｅｒｓ， Ｉ．、Ｓｔａｗｉｎｓｋｉ， Ｊ．、Ｓｏｂｋｏｗｓｋｉ， Ｍ．、Ｋｒａｓｚｅｗｓｋｉ， Ａ．、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９５年４月、４２７−４３０頁に記述された方法を用いて調製した。０℃に保った亜リン酸ジフェニル（１４ｇ、６０ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）溶液に、ヘキサデシルオキシプロパン−１−オール（６．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）のピリジン（２５ｍＬ）溶液をゆっくり加えた。混合物を１時間撹拌した後、無水メタノール（１０ｍＬ）を加えた。さらに１時間撹拌した後、残渣をシリカゲルに吸着して、勾配溶出法（ヘキサンから２０％酢酸エチル／８０％ヘキサン）を使用してクロマトグラフィーを行い、溶媒を蒸発させて、純粋な化合物２を蝋状の低融点の固体（４．５ｇ、収率６０％）として得た。
2004500352.tif 000026
【００７４】
Ｂ．　ヘキサデシルオキシプロピルトリメチル４−フタルイミドブタノイルホスホネート（３ｂ）
ジメチル４−フタルイミドブタノイルホスホネート（１ｂ、３．０ｇ、７．９ｍｍｏｌ、米国特許第５，０３９，８１９号の記述により調製した）およびヘキサデシルオキシプロピルメチルホスファイト（２、２．９ｇ、９ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．２ｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌した後、減圧下で溶媒を取り除いた。残渣をシリカゲルに吸着し、クロマトグラフィー（酢酸エチル）を行い、化合物３ｂ（３．５ｇ、６３％）を粘性のあるオイルとして得た。
2004500352.tif 000027
【００７５】
Ｃ．　ヘキサデシルオキシプロピル４−フタルイミドブタノイルホスホネート（４ｂ）
上記で得た化合物３ｂ（３．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を乾燥したアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解して０℃に冷却した。ブロモトリメチルシラン（３．９ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）溶液をゆっくり加え、さらに２時間撹拌した。混合物を割った氷の中にゆっくり注いだ。生じた沈殿物を減圧濾過により回収し、減圧乾燥して、１．２ｇの４ｂ（４２％収率）を得た。
2004500352.tif 000028
【００７６】
Ｄ．　１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−アレンドロネート（５ｂ）
化合物４ｂ（３００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）の混合物に溶解した。無水ヒドラジンを加えて、室温で４時間撹拌した。分離した沈殿物を減圧濾過により回収し、１，４−ジオキサンで洗浄した。固体をエタノールに懸濁して、メタノールアンモニア（３ｍＬ）を加えた。１０分間撹拌した後、生じた固体を濾過により回収し、エタノールで洗浄し、減圧乾燥して、２２０ｍｇ ＨＤＰ−アレンドロネート（５ｂ）をトリアンモニウム塩として得た。ＦＴ−ＩＲによる解析は、フタルイミド保護基が除去したことを示した。
エレクトロスプレーＭＳ ｍ／ｅ ５３２（ＭＨ＋）、５３０（ＭＨ−）
【００７７】
実施例２
１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−パミドロネート（５ａ）の合成
１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−パミドロネートは、３−フタルイミドプロパン酸を用いてジメチル３−フタルイミドプロパノイルホスホネート（１ａ）を調製する点を除いて、（スキーム１について）類似の方法によって調製される。化合物１ａを化合物２で濃縮して、トリメチルビスホスホネート３ａを得る。上記の段階Ｃおよび段階Ｄで脱保護して、示したようにＨＤＰ−パミドロネートを得る。
【００７８】
実施例３
１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチルｓｎ−グリセロ−３−アレンドロネートの合成
ヘキサデシルオキシプロピル以外の親油性基を持つプロドラックは、実施例１の段階Ａでヘキサデシルオキシプロパン−１−オールを様々な長鎖アルコールに置き換えて調製される。例えば、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロールと亜リン酸ジフェニルをピリジン中で反応させた後、メタノール処理によって１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセリルメチルホスファイトを得る。このジアルキルホスファイトとホスホネート１ｂを濃縮した後、段階Ｃおよび段階Ｄで脱保護して、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ−３−アレンドロネートを得る。スキーム２は、他のビスホスホネート複合体で側鎖に１級アミノ基を持たないものの合成を表している。この場合には、フタルイミド基での保護とヒドラジン分解は不要である。
【００７９】
実施例４
ＨＤＰ−アミノ−オルパドロネートの合成
スキーム３は、１−アミノビスホスホネート複合体の合成を示している。実施例１の化合物２、１−（ジメチルアミノ）プロピオニトリル、およびＯｒｌｏｖｓｋｉｉ、Ｖ． Ｖ．； Ｖｏｖｓｉ、Ｂ． Ａ．、Ｊ． Ｇｅｎ Ｃｈｅｍ． ＵＳＳＲ（Ｅｎｇｌ． Ｔｒａｎｓｌ．）１９７６、４６：２９４−２９６に記述された手順を用いてビスホスホネートトリメチルエステル３を調製する。実施例１の段階Ｃに記述されるように、ブロモトリメチルシランで脱メチル化し、ＨＤＰ−アミノ−オルパドロネートを得る。
【００８０】
実施例５
１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−スクシニル−アレンドロネートの合成
スキーム４は、親化合物の脂質基が１級アミノ基に結合しているビスホスホネート複合体の合成を示す。テトラメチル−（４−フタルイミド−１−ヒドロブチリデン）ビスホスホネート（２．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を０．２Ｍメタノールヒドラジン（１００ｍＬ）に溶解して、室温で３日間撹拌した。混合物を半分量に濃縮したら、固体が分離し始めた。その固体を濾過して除き、濾液を濃縮乾燥した。プロトンＮＭＲは、この化合物がテトラメチル−（４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン）ビスホスホネートであることを示した。これを５０℃で一晩、５酸化リンで乾燥させた。化合物１．２ｇをピリジン（２５ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）の混合物に懸濁して、３−スクシニル−１−ヘキサデシルプロパン（１．７６ｇ、４．４ｍｍｏｌ ）を加えた。ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．５２ｇ、１２．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２日間撹拌した。混合物を濾過して、濾液をシリカゲルに吸着し、ジクロロメタン（０％〜２０％）によりメタノールの増加する勾配でフラッシュクロマトグラフィーをして、スクシニル化化合物を得た。これを、アセトニトリルに入れたトリメチルシリルブロマイドで脱保護することにより、メタノールから結晶化することにより精製した表題の化合物を得た。
【００８１】
実施例６
アデフォビルヘキサデシルオキシプロピルエステル、および１−Ｏ−オクタデシル−ｓｎ−グリセリルエステルの合成
アデフォビル（１．３６ｇ、５ｍｍｏｌ）および３−ヘキサデシルオキシ−１−プロパノール（１．８ｇ、６ｍｍｏｌ） を乾燥したピリジン中に混合して、ＤＣＣ（２．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱還流して１８時間攪拌した後、冷却して濾過した。濾液は、減圧下で濃縮して、残渣をシリカゲルのショートカラムに注いだ。９：１ジクロロメタン／メタノールでカラムの溶出を行い、ヘキサデシルオキシプロピル−アデフォビル（ＨＤＰ−ＡＤＶ）を白い粉末として得た。
【００８２】
アデフォビル（１．３６ｇ、５ｍｍｏｌ）および１−Ｏ−オクタデシル−ｓｎ−グリセロール（２．０８ｇ、６ｍｍｏｌ）を乾燥したピリジン（３０ｍＬ）中に混合して、ＤＣＣ（２．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱還流して１８時間撹拌した後、冷却して濾過した。濾液は、減圧下で濃縮して、残渣をシリカゲルのカラムに注いだ。９：１ジクロロメタン／メタノールでカラムの溶出を行い、１−Ｏ−オクタデシル−ｓｎ−グリセリル−３−アデフォビルを得た。
【００８３】
実施例７
ＡＺＴ−ホスホネートヘキサデシルオキシプロピルエステルの合成
ＡＺＴ （３’−アジド−３’−５’−ジデオキシチミジン−５’−ホスホン酸） のホスホネート類似体は、公表された手順（Ｈａｋｉｍｅｌａｈｉ， Ｇ． Ｈ．； Ｍｏｏｓａｖｉ−Ｍｏｖａｈｅｄｉ， Ａ． Ａ．； Ｓａｄｅｇｈｉ， Ｍ． Ｍ．； Ｔｓａｙ， Ｓ−Ｃ．； Ｈｗｕ， Ｊ． Ｒ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９５ ３８、４６４８−４６５９）を用いて合成した。
【００８４】
ＡＺＴホスホネート（１．６５ｇ、５ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン（３０ｍＬ）に懸濁した後、３−ヘキサデシルオキシ−１−プロパノール（１．８ｇ、６ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を加熱還流して６時間撹拌した後、冷却して濾過した。その濾液を減圧下で濃縮して、残渣をシリカゲルカラムに注いだ。９：１ジクロロメタン／メタノールでカラムの溶出を行い、３’−アジド−３’−５’−ジデオキシチミジン−５’−ホスホン酸、ヘキサデシルオキシプロピルエステルを得た。
【００８５】
実施例８
環式シドフォビルにおける、ヘキサデシルオキシプロピル、オクタデシルオキシプロピル、オクタデシルオキシエチル、およびヘキサデシルエステルの合成
シドフォビル（１．０ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）を撹拌したＮ，Ｎ−ＤＭＦ（２５ｍＬ）懸濁液に、 Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシル−４−モルフォリンカルボキシアミジン（ＤＣＭＣ、１．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩攪拌してシドフォビルを溶解した。この澄んだ溶液を他の漏斗に満たして、１，３−ジクロヘキシルカルボジイミド（１．６４ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を撹拌した熱いピリミジン溶液（２５ｍＬ、６０℃）に、ゆっくり（３０分で）加えた。この反応混合液を１００℃で１６時間攪拌して室温に冷却して、減圧下で溶媒を取り除いた。残渣をシリカゲルに吸着して、勾配溶出法（ＣＨ２Ｃｌ２＋ＭｅＯＨ）を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。そのＵＶ活性産物を、最終的に５：５：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏで溶出して、溶媒を蒸発させ、８６０ｍｇの白い固体を得た。１Ｈおよび３１Ｐ ＮＭＲスペクトルをとると、これが環式シドフォビルのＤＣＭＣ塩（収率＝４４％）であることが示された。
【００８６】
環式シドフォビル（ＤＣＭＣ塩）（０．５ｇ、０．８ｍｍｏｌ） の乾燥ＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液に１−ブロモ−３−ヘキサデシルオキシプロパン（１．４５ｇ、４ｍｍｏｌ）を加えて、混合液を８０℃で６時間加熱して撹拌した。溶液を減圧中で濃縮して、残渣をシリカゲルに吸着し、勾配溶出法（ＣＨ２Ｃｌ２＋ＥｔＯＨ）を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。アルキル化産物を９０：１０ ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨで溶出した。精製産物を含む画分を蒸発させて、２６０ｍｇのＨＤＰ−環式シドフォビル（収率５５％）を得た。
【００８７】
環式シドフォビル（ＤＣＭＣ塩）（１．０ｇ、３．７ｍｍｏｌ） の乾燥ＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液に１−ブロモ−３−オクタデシルオキシプロパン（２．８２ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を８５℃で５時間加熱して撹拌した。溶液を減圧中で濃縮して、残渣をシリカゲルに吸着して、勾配溶出法（ＣＨ２Ｃｌ２＋ＭｅＯＨ）を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。アルキル化産物を９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨで溶出した。精製産物を含む画分を蒸発させて、４５０ｍｇのＯＤＰ−環式シドフォビルを得た。
【００８８】
ｃＣＤＶ（ＤＣＭＣ塩）（１．０ｇ、３．７ｍｍｏｌ） の乾燥ＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液に１−ブロモ−３−オクタデシルオキシエタン（３．０ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を加えて、その混合物を８０℃で４時間加熱して撹拌した。溶液を減圧中で濃縮して、残渣をシリカゲルに吸着して、勾配溶出法（ＣＨ２Ｃｌ２＋ＭｅＯＨ）を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。アルキル化産物を９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨで溶出した。精製産物を含む画分を蒸発させて、３２０ｍｇのオクタデシルオキシエチル−ｃＣＤＶを得た。
【００８９】
環式シドフォビル（ＤＣＭＣ塩）（０．５ｇ、０．８ｍｍｏｌ） の乾燥ＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液に１−ブロモヘキサデカン （１．２ｇ、４ｍｍｏｌ）を加えて、混合液を８０℃で６時間加熱して撹拌した。溶液を減圧中で濃縮して、残渣をシリカゲルに吸着して、勾配溶出法（ＣＨ２Ｃｌ２＋ＭｅＯＨ）を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。アルキル化産物を９：１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨで溶出した。精製産物を含む画分を蒸発させて、１６０ｍｇのヘキサデシル−ｃＣＤＶを得た。
【００９０】
実施例９
シドフォビルにおける、ヘキサデシルオキシプロピル、オクタデシルオキシプロピル、オクタデシルオキシエチル、およびヘキサデシルエステルの合成
上記のヘキサデシルオキシプロピル−環式ＣＤＶを０．５Ｍ ＮａＯＨに溶解して室温で１．５時間撹拌した。５０％酢酸水を滴下してｐＨを約９に調整した。沈殿したＨＤＰ−ＣＤＶを濾過により単離した後、水で洗浄し乾燥して、（３：１ ｐ−ジオキサン／水）で再結晶化してＨＤＰ−ＣＤＶを得た。
【００９１】
同様に、オクタデシルオキシプロピル−、オクタデシルオキシエチル−、およびヘキサデシル−ｃＣＤＶエステルを０．５Ｍ ＮａＯＨを用いて加水分解して精製し、対応するシドフォビルジエステルを得た。
【００９２】
実施例１０
環式−ガンシクロビルホスホネートヘキサデシルオキシプロピルエステルの合成　ガンシクロビルの環式ホスホネート類似体を公表された手順（Ｒｅｉｓｔ， Ｅ．Ｊ．； Ｓｔｕｒｍ， Ｐ．Ａ．； Ｐｏｎｇ， Ｒ．Ｙ．； Ｔａｎｇａ， Ｍ． Ｊ．およびＳｉｄｗｅｌｌ， Ｒ．Ｗ．、「抗ウイルス剤の評価のためのアシクロヌクレオシドホスホネートの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ　ａｃｙｃｌｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｓ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｇｅｎｔｓ）」、１７〜３４頁、Ｊ， Ｃ． Ｍａｒｔｉｎ（編）、抗ウイルス剤としてのヌクレオチド類似体（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ａｇｅｎｔｓ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．）を用いて調製した。ｃＧＣＶホスホネートをＤＭＦ中でＤＣＭＣ塩に変換後、１−ブロモ−３−ヘキサデシルオキシプロパンで処理して、混合物を８０℃で６時間加熱した。アルキル化産物をフラッシュクロマトグラフィーにより単離して、ＨＤＰ−環式−ＧＣＶホスホネートを得た。
【００９３】
実施例１１
ガンシクロビルホスホネートヘキサデシルオキシプロピルエステルの合成
上記で得たＨＤＰ−環式−ＧＣＶホスホネートを０．５Ｍ ＮａＯＨに溶解して、室温で撹拌して非環式ジエステルに変換した。溶液を５０％酢酸水で中和して、３：１ ｐ−ジオキサン／水で再結晶化した産物を沈殿させた。
【００９４】
実施例１２
１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネートはＭＬＯ−Ｙ４骨細胞のデキサメタソン誘導性のアポトーシスを阻害する
ＭＬＯ−Ｙ４骨細胞を指示された濃度の１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネート（ＨＤＰ−アレンドロネート）により、１時間、前処理して、次にデキサメタソン（終濃度１０−４Ｍ）存在下および非存在下で、６時間細胞をインキュベートした。死細胞率をトリパンブルーの取り込み（Ｐｌｏｔｋｉｎら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０４：１３６３−１３７４、１９９９）により決定した。その結果を図１に示す。線分は３回の独立した測定の平均±ＳＤを表す。データを、一元配置分散分析（スチューデント−クルーズ−ニューマン（Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｋｅｕｌｓ−Ｎｅｗｍａｎ）試験）により解析した。＊ｐ＜０．０５。ＨＤＰ−アレンドロネートはデキサメタソン誘導性のアポトーシスを１０−８から１０−５Ｍで阻害する。
【００９５】
実施例１３
１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネートは頭蓋冠細胞のデキサメタソン誘導性のアポトーシスを阻害する
頭蓋冠細胞を新生児Ｃ５７ ＢＬ／６Ｊマウスから取り、組織培養へ移した。細胞を指示された濃度のＨＤＰ−アレンドロネートにより前処理を行い、次に１０−４Ｍデキサメタソン存在下および非存在下で、６時間細胞をインキュベートした。死細胞率をトリパンブルーの取り込み（Ｐｌｏｔｋｉｎら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０４：１３６３−１３７４、１９９９）により決定した。その結果を図２に示す。線分は、３回の独立した測定の平均±ＳＤを表す。データを一元配置分散分析（スチューデント−クルーズ−ニューマン試験）で解析した。＊ｐ＜０．０５。ＨＤＰ−アレンドロネートは１０−８Ｍまたはそれより高濃度で、デキサメタソン誘導性の死細胞率の増加を阻害した（ｐ＝＜０．０５）。０．０５μＭのＤＥＶＤ（アポトーシスのペプチド阻害剤）に細胞を曝して死細胞率の増加が示されなかったため、ＤＥＶＤはデキサメタソン誘導性のアポトーシスを阻害することが示された。
【００９６】
実施例１４
１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネートによる卵巣摘出ラットの骨吸収の阻害
両卵巣の摘出手術をしたＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雌ラット（２５０ｇｍ〜２８０ｇｍ）群に４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン−１，１−ビスホスホン酸ジナトリウム塩又は１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−アレンドロネートを４〜１２週間、 ０ ｍｇ／ｋｇ／日から８ ｍｇ／ｋｇ／日の用量で皮下注射する。１２週目に、対照群に含まれるラットを屠殺し、それぞれ動物において大腿骨の灰分を回収する。または、投薬の方法は経口であってもよい。個体それぞれの大腿骨の灰分質量が測定され、各群の値が骨量の指標と比較されて、処理プロトコール中の骨の減少の相対的な阻害が測定される。１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンアレンドロネートで処理された動物は対照の卵巣摘出動物に比べて骨量の減少が阻害されていることを表す。
【００９７】
実施例１５
１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アレンドロネートによるヒト骨粗鬆症における骨吸収の阻害
閉経後の女性の２つの群を、それぞれ偽薬または１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アレンドロネートで、０．１ ｍｇ／ｋｇ／日から１００ ｍｇ／ｋｇ／日の経口用量で２〜３年にわたり処理する。処理群のそれぞれは、処理期間にわたり連続して、骨塩密度、脊椎骨折発生率、ｘ線写真撮影試験による脊椎変形の進行、および身長の減少について観察される。様々な処理群において測定値を比較し、処理群間のアレンドロネート治療の形態における有効性を判定する。１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピルアレンドロネートで処理された群は、偽薬群に比べて、骨折が減少し、骨密度の減少率が少ないと思われる。
【００９８】
実施例１６
１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アミノ−オルパドロネートによるステロイド誘導性のヒト骨粗鬆症における骨形成の刺激
ステロイド誘導性の骨粗鬆症に罹患した患者群を、１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アミノ−オルパドロネートまたは偽薬で、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の経口用量で、１ヶ月から１年間の期間処理する。処理群のそれぞれは、この処理期間にわたって連続して、骨塩密度、脊椎骨折発生率、ｘ線写真撮影試験による脊椎変形の進行、および身長の減少について観察される。様々な処理群において測定値を比較し、処理群間の１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アミノ−オルパドロネート治療の有効性を判定する。偽薬処理と比較したところ、１−Ｏ−オクタデシルオキシプロピル−アミノ−オルパドロネートで処理された患者では、骨密度が増大し、かつ骨折が減少している。
【００９９】
実施例１７
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に対するホスホネートヌクレオチド類似体の抗ウイルス活性および選択性
ＨＣＭＶ抗ウイルスアッセイ法：ＨＣＭＶ ＤＮＡに関する抗ウイルスアッセイ法は、Ｄａｎｋｎｅｒ， Ｗ．Ｍ．、Ｓｃｈｏｌｌ， Ｄ．、Ｓｔａｎａｔ， Ｓ．Ｃ．、Ｍａｒｔｉｎ， Ｍ．、Ｓｏｕｋｅ， Ｒ．Ｌ．およびＳｐｅｃｔｏｒ， Ｓ．Ａ．、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１：２９３−２９８（１９９０）に記載されているように行った。簡単に述べると、２４−ウェル培養皿中の亜集密なＭＲＣ−５細胞を、２％ＦＢＳおよび抗生物質を含有するイーグル（Ｅａｇｌｅ）最小必須培地（Ｅ−ＭＥＭ）中の様々な濃度の薬物により、２４時間、前処理した。この培地を除去し、ＨＣＭＶ株を、薬物非含有ウェルにおいて５日内に、３−４＋細胞変性効果（ＣＰＥ）を生じるような希釈で添加した。このウイルスを、３７℃で１時間吸着させ、吸引し、かつ薬物希釈物を交換した。５日間インキュベーションした後、ＨＣＭＶ ＤＮＡを、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｈｙｂｒｉｄｓ社（Ａｔｈｅｎｓ、ＯＨ）のＣＭＶ抗ウイルス感受性試験キット（ＣＭＶ Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔ Ｋｉｔ）を用いる核酸ハイブリダイゼーションにより、３つ組で定量した。培地を除去し、かつ製造業者の指示に従い細胞を溶解した。Ｈｙｂｒｉｗｉｘ（商標）フィルターに溶解液を吸着した後、６０℃で一晩ハイブリダイズした。Ｈｙｂｒｉｗｉｘ（商標）は、７３℃で３０分間洗浄し、かつガンマカウンターで計測した。結果を、ＥＣ５０（５０％阻害濃度）として示す。
【０１００】
予備実験を、シドフォビルおよびアデフォビルの１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール（ＨＤＰ）誘導体について行い、表１に示す。
【０１０１】
【表１】
2004500352.tif 000029
【０１０２】
表１の結果として、１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−環式ＣＤＶ（ＨＤＰｃＣＤＶ）は、ＣＤＶまたは環式ＣＤＶの＞９００倍以上の活性であることが示された。より細胞傷害性であるが、迅速に分裂している細胞におけるＨＣＭＶに対する選択性指標は、誘導されないＣＤＶが１，９００〜＞２，１００であるのに対し、＞５９，０００であった。これらの有望な予備的結果を基に、追加実験を、追加の本発明の化合物を用いて行った。これらの追加実験を以下に示す。
【０１０３】
インビトロにおける被験化合物の細胞傷害性：２４−ウェルプレート中の亜集密のヒト肺繊維芽細胞（ＭＲＣ−５、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌ、ＭＤ）を、２％ウシ胎仔血清および抗生物質を添加したＥ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）中に希釈した薬物で処理した。３７℃で５日間インキュベーションした後、細胞単層を、顕微鏡下で肉眼で検査し、細胞数の５０％減少を生じた薬物濃度を推定した。
【０１０４】
これらの実験から得たデータを表２に示す。
【０１０５】
【表２】ＤＮＡ減少によりアッセイされたＭＲＣ−５ヒト肺繊維芽細胞におけるヒトＣＭＶ複製の阻害
2004500352.tif 000030
ＥＣ５０−５０％有効濃度；ＣＣ５０ − ５０％細胞傷害性濃度；選択性指標−ＣＣ５０／ＥＣ５０。ＥＣ５０の結果は、ＡＤＶが２個組で１回反復し行われる以外は、３〜６回の測定の平均である。
【０１０６】
表２に示された結果のように、本発明の化合物は、誘導されていないシドフォビル、環式シドフォビルおよびアデフォビルよりも、一様により活性がありかつ選択性がある。
【０１０７】
実施例１８
ポックスウイルス複製に対するＨＤＰ−ｃＣＤＶのインビトロ作用
シドフォビル（ＣＤＶ）、環式シドフォビル（ｃＣＤＶ）、および１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−ｃＣＤＶ（ＨＤＰ−ｃＣＤＶ）の活性を、ワクシニアウイルスまたは牛痘ウイルスに感染したヒト包皮繊維芽細胞における抗ウイルス活性について、細胞変性効果（ＣＰＥ）の用量依存型の低下を測定することにより試験した。予備的ワクシニアおよび牛痘のＥＣ５０値を、ヒト包皮繊維芽細胞（ＨＦＦ）のＣＰＥ減少アッセイ法において決定した。こうして得られたデータを表３に示す。
【０１０８】
【表３】
2004500352.tif 000031
【０１０９】
表３に示したように、ＨＤＰ−ｃＣＤＶは、ワクシニアウイルスに対して高度に活性があり、ＩＣ５０値は０．１１μＭであるのに対して、ｃＣＤＶおよびＣＤＶのそれは、各々、０．９７および１．８μＭであった。牛痘感染細胞において、ＨＤＰ−ｃＣＤＶは非常に効果的であり、ＩＣ５０値は＜０．０３μＭであるのに対して、ｃＣＤＶおよびＣＤＶのそれは、各々、０．７２および２．１であった。これらの有望な予備的結果を基に、本発明のシドフォビル類似体における他のオルトポックスウイルスに対する作用を調べた。
【０１１０】
ポックスウイルスの抗ウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ法：各薬物濃度につき、Ｖｅｒｏ細胞を含有する３個のウェルを、オルトポックスウイルス１０００ｐｆｕ／ウェルで感染し、かつ別の３個は未感染のままとし、毒性を決定した。プレートを、ウイルス感染後に試験し、染色して、非処理の細胞は４＋ＣＰＥを示した。ニュートラルレッドをこれらの培地に添加し、ＣＰＥを、５４０ｎｍでのニュートラルレッドの取り込みについてアッセイした。５０％阻害（ＥＣ５０）および細胞傷害濃度（ＣＣ５０）を、用量反応のプロットから決定した。結果を表４に示す。
【０１１１】
【表４】
2004500352.tif 000032
ＥＣ５０−５０％有効濃度；ＣＣ５０ − Ｖｅｒｏ細胞における５０％細胞傷害性濃度；選択性指標−ＣＣ５０／ＥＣ５０。表２と同じ略号。結果は３回の測定の平均である。
【０１１２】
表４に示したように、本発明の化合物は、ワクシニア、牛痘、および様々な小痘瘡株に対して、誘導していないＣＤＶまたはｃＣＤＶよりも、実質的により活性があった。
【０１１３】
実施例１９
１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−アデフォビル（ＨＤＰ−ＡＤＶ）のＨＩＶ−１複製に対するインビボ作用
本発明の化合物によるＨＩＶ−１複製の阻害における予備的実験は、下記のように行った。薬物アッセイ法は、Ｌａｒｄｅｒら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ＆ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３４：４３６−４４１（１９９０）に既述のように行った。ＨＩＶ−１ＬＡＩ感染したＨＴ４−６Ｃ細胞を、指示された薬物に曝露し、かつ３７℃で３日間インキュベーションした。これらの細胞を、クリスタルバイオレットで固定し、プラークを可視化した。抗ウイルス活性は、薬物で処理した試料において測定した対照プラーク（薬物なし）に対する割合（％）として評価した。ＥＣ５０は、プラーク数を５０％減少するようなμＭ濃度である。ＨＩＶ−１感染したＨＴ４−６Ｃ細胞において、アデフォビルの活性を、ＡＺＴ（シドブジン）および１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−アデフォビル（ＨＤＰＡＤＶ）と比較した。結果を表５に示す。
【０１１４】
【表５】
2004500352.tif 000033
【０１１５】
アデフォビルは、ＥＣ５０が１６μＭと、中程度の活性であった。ＡＺＴは、予想されたように高い活性であった（ＥＣ５０は０．００７μＭ）が、ＨＤＰ−ＡＤＶはこれら３種の化合物の中で最も高い活性であり、ＥＣ５０は０．０００１μＭであり、これはアデフォビルそれ自身よりも５ ｌｏｇ倍より活性が高かった。これらの有望な予備的結果を基に、追加実験を以下のように行った。
【０１１６】
ＨＩＶ−１抗ウイルスアッセイ法：ＣＤ４発現しているＨｅＬａ ＨＴ４−６Ｃ細胞におけるＨＩＶ複製に対する抗ウイルス化合物の作用を、プラーク減少アッセイ法により測定した（Ｌａｒｄｅｒ， Ｂ．Ａ．、Ｃｈｅｓｅｂｒｏ， Ｂ．およびＲｉｃｈｍａｎ， Ｄ．Ｄ．、Ａｎｔｉｍｉｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、３４：４３６−４４１（１９９０））。簡単に述べると、ＨＴ４−６Ｃ細胞の単層を、２４−ウェルマイクロ希釈プレート上で、１ウェル当り１００〜３００プラーク形成単位（ＰＦＵ）のウイルスで感染した。前述のように、様々な濃度の薬物を、５％ＦＢＳおよび抗生物質を含有するダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）改変イーグル培地である培養培地に添加した。３７℃で３日後、単層を、リン酸−緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を溶媒とする１０％ホルムアルデヒド溶液で固定し、０．２５％クリスタルバイオレットで染色して、ウイルスプラークを目視できるようにした。抗ウイルス活性を、薬物で処理した試料において測定した対照プラークに対する割合（％）として評価した。細胞傷害性は、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒらの方法（Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３１：５９−６７（１９９６））によりアッセイした。結果を表６に示す。
【０１１７】
【表６】プラーク減少におけるＨＴ４−６Ｃ細胞のＨＩＶ複製の阻害
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ＥＣ５０−５０％有効濃度；ＣＣ５０ − Ｖｅｒｏ細胞における５０％細胞傷害性濃度；選択性指標−ＣＣ５０／ＥＣ５０。ＥＣ５０値は、４回の実験の平均である。
【０１１８】
表６の結果により容易に示されるように、本発明の化合物１−Ｏ−ヘキサデシルプロパンジオール−３−ＡＤＶは、アデフォビルよりも、より活性および選択性を有する。
【０１１９】
実施例２１
ヘルペスウイルス複製に対するシドフォビル類似体の作用
ＨＳＶ−１抗ウイルスアッセイ法：２４−ウェル培養皿中の亜集密なＭＲＣ−５細胞を、培地を除去し、ＨＳＶ−１ウイルスを薬物添加していないウェルにおいて２０〜２４時間で３−４＋ ＣＰＥの結果をもたらすように希釈して添加することにより接種した。これは、３７℃で１時間吸収させ、吸引し、かつ２％ＦＢＳおよび抗生物質を含有するＥ−ＭＥＭ中の様々な濃度の薬物と交換した。およそ２４時間インキュベーションした後、ＨＳＶ ＤＮＡを、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｈｙｂｒｉｄｓ社（Ａｔｈｅｎｓ、ＯＨ）のＨＳＶ抗ウイルス感受性試験キット（ＨＳＶ Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔ Ｋｉｔ）を用いて、核酸ハイブリダイゼーションにより３つ組で定量した。培地を除去し、細胞を製造業者の指示に従い溶解した。Ｈｙｂｒｉｗｉｘ（商標）フィルターに溶解物を吸着した後、一晩６０℃でハイブリダイズした。Ｈｙｂｒｉｗｉｘを、７３℃で３０分間洗浄し、ガンマカウンターで計測した。細胞傷害性は、実施例１７に記したように評価した。こうして得られたＥＣ５０およびＣＣ５０を表７に示す。
【０１２０】
【表７】ＤＮＡ減少によりアッセイされたＭＲＣ−５ヒト肺繊維芽細胞におけるヒトＨＳＶ複製の阻害
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表２と同じ略号：ＥＣ５０−５０％有効濃度；ＣＣ５０ − ５０％細胞傷害性濃度；選択性指標−ＣＣ５０／ＥＣ５０。ＥＣ５０値は、２つ組で１回測定したＨＤＰ−ＣＤＶを除いて、２回の実験の平均である。
【０１２１】
表７に示したように、全ての本発明の化合物は、ＨＳＶ−１に対して、誘導していないヌクレオチドホスホネート、シドフォビル、または環式シドフォビルよりも、より活性を有する。
【０１２２】
前述の発明は、明確化および理解のために例証および実施例を用いて詳細に説明されているが、当業者には、本発明の内容に鑑みて、特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱しない限りは、ある種の変更および修飾を行うことができることは明らかであると思われる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る化合物１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネートにおける、ＭＬＯ−Ｙ４骨細胞のデキサメタゾン誘導性のアポトーシスに対する作用を要約する。線分は、３回の個別の測定値の平均±ＳＤを表している。白抜きの棒はデキサメタゾンが存在しないことを表し、黒棒は１０−４Ｍのデキサメタゾンが存在することを示す。
【図２】本発明に係る化合物１−Ｏ−ヘキサデシルオキシプロパンアレンドロネートにおける、頭蓋冠細胞のデキサメタゾン誘導性のアポトーシスに対する作用を要約する。線分は、３回の個別の測定値の平均±ＳＤを表している。灰色の棒はデキサメタゾンが存在しないことを表し、黒棒は１０−４Ｍのデキサメタゾンが存在することを示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004500352.tif 000089
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