(57)【要約】１以上のメラノコルチン受容体に特異的であり、かつアゴニスト、アンタゴニストまたは混合アゴニスト・アンタゴニスト活性を発揮する線状および環状ペプチドが提供されている。一実施態様で、次の一般式の線状ペプチドが提供されている。
2004534851.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列S1-S2-S3-S4-S5を含むペプチドであって、
S1は、該ペプチドの残りの部分が本来有する活性を増強する官能基であり、例えば、受容体への補助的または二次的な接触を果たし、ただしこれに限定はされない；またS1は多様なアミノ酸および非ペプチド基、例えば中性または荷電L-またはD-立体配置アミノ酸残基1〜約4個のアミノ酸鎖のいずれかを含有し、S1が非ペプチド基である場合には線状または分枝状のアルキル、アリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖を含有し;
S2は、これを規定するとすれば、スペーサーとして機能する残基、好ましくは1以上の天然または合成の脂肪族アミノ酸、例えばL-またはD-立体配置のGly、Ala、Val、LeuまたはNleであり;
S3は、L-またはD-Phe、Phe(4-Cl)、Phe(2,4-diCl)、Phe(3,4-diCl)、Phe(4-NO2)、Phe(4-Me)、Phe(4-Phenyl)、Hphe、Pgl、Trp、Nal 1、Nal 2、Bip、Dip、Bpa、Ser(Bzl)、Lys(Z)、Lys(Z-2’Br)、Lys(Bz)、Thr(Bzl)、Cys(Bzl)、Tyr(BzlCl2)または芳香族側鎖基団を持つ天然または合成L-またはD-アミノ酸であり、この場合、芳香環は、任意にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化され、
S4は、L-またはD-Lys、Arg、Orn、Dpr、Dbu、p-アミノ-Pheまたは陽電荷側鎖を持つ任意の天然または合成アミノ酸、好ましくは、L-立体配置陽イオンアミノ酸であり;
S5は、芳香族側鎖を持つL-またはD-アミノ酸であり、任意に1個以上の追加アミノ酸を含み、さらに任意に末端基、例えばPhe、Phe(4-Cl)、Phe(2,4-diCl)、Phe(3,4-diCl)、Phe(4-NO2)、Phe(4-Me)、Phe(4-Phenyl)、Hphe、Pgl、Trp、Nal 1、Nal 2、Bip、Dip、Bpa、Ser(Bzl)、Lys(Z)、Lys(Z-2’Br)、Lys(Bz)、Thr(Bzl)、Cys(Bzl)、Tyr(BzlCl2)、前述のもののいずれかのN-アルキル化またはアリール化誘導体、あるいは、前述のもののいずれかに対応するデスカルボキシルアミノ酸、この場合にはS5基はS4残基の置換アミド官能基となる、を特徴とするペプチド。
【請求項２】
配列S1-S2-D-Phe(4-Cl)-S4-S5を含むペプチドであって、
S1は、ヘプタノイル、2’-ナフチルアセチル、7’-アミノ-ハプタノイル、2’-クロロフェニルアセチル、3’-クロロフェニルアセチル、4’-クロロフェニルアセチル、4’-フェニルブチルアミノカルボニル、3’-フェニルブチルアミノカルボニル、4’-ブロモフェニル-アセチル、3-4-ジクロロフェニル-アセチル、2,4-ジクロロフェニル-アセチル、4-ビフェニル-アセチル、2-ナフトイル、Ph-(CH2)2NH、3’-フェニルプロパンカルボニル、2’-ナフトイル-Pip、2’-ナフチルアセチル、2’-ブロモフェニル-アセチル、4’-CF3フェニル-アセチル、3’- CF3フェニル-アセチル、2’-CF3フェニル-アセチル、3’,5’-CF3フェニルアセチル、2’,5’-CF3フェニルアセチル、4’-Meフェニル-アセチル、3’-Meフェニル-アセチル、2’-Meフェニル-アセチル、7’-アミノヘプトノイル、β-Ala、4-アミノビチル、5-アミノバレリル、6-アミノカプロイル、アミノトラネキサミル、Cmpiまたは3’4’-Cl2フェニルアセチルであり;
S2は、存在しないか、Ser(Bzl)、Ala、D-Ala、β-Ala、Val、Leu、Chg、Alb、Tle、1-アミノ-1シクロヘキサンカルボニル、lnp、CO(CH2)2NH、CO(CH2)2CO、Pip、MeThe(Bzl)、Thr(Bzl)またはD-Thr(Bzl)であり;
S4は、Arg、D-Arg、(Nlys)Gly、Trp、Lys、ホモLys、Dpr(β-Ala)、α-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Gly、(4’-グアニジノ)Gly、（4’-グアニジノ）Phe、D-(4’-グアニジノ)Phe、β-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Alaまたはホモ-Ala-4’-pip(N-アミジノ)であり、かつ
S5は、Trp、Trp-OH、Trp-NH2、Trp-Cys-NH2、D-Trp、D-Trp-NH2、Trp-Val-NH2、3’-Pya-NH2、Phe-NH2、MeTrp-NH2、β-Ala-Trp-NH2、アミノブチルアミド、Nal 1-NH2、D-Nal 1-NH2、Nal 2-NH2、D-Nal 2-NH2、Tic-NH2、D-Tic-NH2、1’-アミノインダン、1’-アミノインダン-1-カルボキシル-NH2、Aic-NH2、Atc-NH2、Disc-NH2、Tpi-NH2、D-Tpi-NH2、Tiq-NH2、D-Tiq-NH2、トリプタミド、NMe-トリプタミド、α-Me-トリプタミド、2’-(4”-メチルフェニル)エチルアミド、3’,4’-Cl2)フェニルメチルアミド、3’-フェニルプロピルアミド、2’,4’-ジクロロベンジルアミド、3’-(1H-イミダゾール)プロピルアミド、4-フェニル-ピペリジン-4-カルボンアミド、3-フェニル-1-プロピルアミド、2,4-ジクロロフェンエチルアミド、S-(-)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミド、2’-メチルベンジルアミド、4’-メチルベンジルアミド、2’2’-ジフェニルエチルアミド、1-(2-ピリジル)ピペラジン、N-ベンジルメチルアミド、ヒスタミド、R-(+)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、Trp-Asp-NH2、Trp-Asp-Phe-NH2、Asp-Trp-NH2、Ala-Trp-NH2、Trp-Ala-NH2、フェネチルアミスまたはTrp-Asp-OHであることを特徴とするペプチド。
【請求項３】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trpを含む請求項２記載のペプチド。
【請求項４】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2から成る請求項３記載のペプチド。
【請求項５】
配列7’-アミノ-ハプタノイ-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Ala-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項６】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Asp -Phe-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項７】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Asp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項８】
配列ハプタノイル-Thr(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項９】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp -NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１０】
配列ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１１】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-トリプタミドを含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１２】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-NMe-トリプタミドを含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１３】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-α-Me-トリプタミドを含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１４】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-S-(-)  -1-(1-ナフチル)エチルアミドを含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１５】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 1-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１６】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-D-Nal 2-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１７】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 2-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１８】
配列2’-ナフチルアセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項１９】
配列4’-フェニルブチリル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項２０】
配列3’,4’-ジクロロフェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg -Trp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項２１】
配列3’-CF3フェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項２２】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-S2-D-Phe(4-Cl)-S4-S5を含むペプチドであって、
S2は、存在しないか、Ser(Bzl)、Ala、D-Ala、β-Ala、Val、Leu、Chg、Alb、Tle、1-アミノ-1シクロヘキサンカルボニル、lnp、CO(CH2)2NH、CO(CH2)2CO、Pip、MeThe(Bzl)、Thr(Bzl)またはD-Thr(Bzl)であり;
S4は、Arg、D-Arg、(Nlys)Gly、Trp、Lys、ホモLys、Dpr(β-Ala)、α-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Gly、（4’-グアニジノ）Gly、(4’-グアニジノ)Phe、D-(4’-グアニジノ)Phe、β-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Alaまたはホモ-Ala-4’-pip(N-アミジノ)であり;かつ
S5が、Trp、Trp-OH、Trp-NH2、Trp-Cys-NH2、D-Trp、D-Trp-NH2、Trp-Val-NH2、3’-Pya-NH2、Phe-NH2、MeTrp-NH2、β-Ala-Trp-NH2、アミノブチルアミド、Nal 1-NH2、D-Nal 1-NH2、Nal 2-NH2、D-Nal 2-NH2、Tic-NH2、D-Tic-NH2、1’-アミノインダン、1’-アミノインダン-1-カルボキシ-NH2、Aic-NH2、Atc-NH2、Disc-NH2、Tpi-NH2、D-Tpi-NH2、Tiq-NH2、D-Tiq-NH2、トリプタミド、NMe-トリプタミド、α-Me-トリプタミド、2’-(4”-メチルフェニル)エチルアミド、3’,4’-Cl2)フェニルメチルアミド、3’-フェニルプロピルアミド、2’,4’-ジクロロベンジルアミド、3’-(1H-イミダゾール)プロピルアミド、4-フェニル-ピペリジン-4-カルボンアミド、3-フェニル-1-プロピルアミド、2,4-ジクロロフェンエチルアミド、S-(-)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミド、2’-メチルベンジルアミド、4’-メチルベンジルアミド、2’2’-ジフェニルエチルアミド、1-(2-ピリジル)ピペラジン、N-ベンジルメチルアミド、ヒスタミド、R-(+)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、Trp-Asp-NH2、Trp-Asp-Phe-NH2、Asp-Trp-NH2、Ala-Trp-NH2、Trp-Ala-NH2、フェネチルアミスまたはTrp-Asp-OHであることを特徴とするペプチド。
【請求項２３】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Ala-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２４】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Asp-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２５】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Asp-Phe-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２６】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp- -NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２７】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-トリプタミドを含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２８】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-NMe-トリプタミドを含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項２９】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-α-Me-トリプタミドを含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項３０】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg -S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミドを含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項３１】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 1-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項３２】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-D-Nal 2-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項３３】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 2-NH2を含む請求項２２記載のペプチド。
【請求項３４】
配列S1-S2-S3-S4-S5を含むペプチドであって、
S1は、ヘプタノイル、2’-ナフチルアセチル、7’-アミノ-ハプタノイル、2’-クロロフェニルアセチル、3’-クロロフェニルアセチル、4’-クロロフェニルアセチル、4’-フェニルブチルアミノカルボニル、3’-フェニルブチルアミノカルボニル、4’-ブロモフェニル-アセチル、3-4-ジクロロフェニル-アセチル、2,4-ジクロロフェニル-アセチル、4-ビフェニル-アセチル、2-ナフトイル、Ph-(CH2)2NH、3’-フェニルプロパンカルボニル、2’-ナフトイル-Pip、2’-ナフチルアセチル、2’-ブロモフェニル-アセチル、4’-CF3フェニル-アセチル、3’-CF3フェニル-アセチル、2’-CF3フェニル-アセチル、3’,5’-CF3フェニルアセチル、2’,5’-CF3フェニルアセチル、4’-Meフェニル-アセチル、3’-Meフェニル-アセチル、2’-Meフェニル-アセチル、7’-アミノヘプトノイル、β-Ala、4-アミノビチル、5-アミノバレリル、6-アミノカプロイル、アミノトラネキサミル、Cmpiまたは3’4’-Cl2フェニルアセチルであり;
S2は、存在しないか、Ser(Bzl)、Ala、D-Ala、β-Ala、Val、Leu、Chg、Alb、Tle、1-アミノ-1シクロヘキサンカルボニル、lnp、CO(CH2)2NH、CO(CH2)2CO、Pip、MeThe(Bzl)、Thr(Bzl)またはD-Thr(Bzl)であり;
S3は、Phe、D-Phe、Phe(4-Cl)、D-Phe(4-Cl)、Phe(3-Cl)、D-Phe(3-Cl)、Phe(2-Cl)、D-Phe(2-Cl)、D-Phe(3,4-diCl)、MePhe、D-MePhe、D-Tpi、D-Nal 2、Arg、D-Phe(3,4-F2)、D-Tiq、D-Me(ホモ)PheまたはD-EtPheであり;
S4は、Arg、D-Arg、(Nlys)Gly、Trp、Lys、homoLys、Dpr(β-Ala)、α-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Gly、(4’-グアニジノ)Gly、（4’-グアニジノ）Phe、D-(4’-グアニジノ)Phe、β-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Alaまたはホモ-Ala-4’-pip(N-アミジノ)であり;かつ
S5は、Trp、Trp-OH、Trp-NH2、Trp-Cys-NH2、D-Trp、D-Trp-NH2、Trp-Val-NH2、3’-Pya-NH2、Phe-NH2、MeTrp-NH2、β-Ala-Trp-NH2、アミノブチルアミド、Nal 1-NH2、D-Nal 1-NH2、Nal 2-NH2、D-Nal 2-NH2、Tic-NH2、D-Tic-NH2、1’-アミノインダン、1’-アミノインダン-1-カルボキシ-NH2、Aic-NH2、Atc-NH2、Disc-NH2、Tpi-NH2、D-Tpi-NH2、Tiq-NH2、D-Tiq-NH2、トリプタミド、NMe-トリプタミド、α-Me-トリプタミド、2’-(4”-メチルフェニル)エチルアミド、3’,4’-Cl2)フェニルメチルアミド、3’-フェニルプロピルアミド、2’,4’-ジクロロベンジルアミド、3’-(1H-イミダゾール)プロピルアミド、4-フェニル-ピペリジン-4-カルボンアミド、3-フェニル-1-プロピルアミド、2,4-ジクロロフェンエチルアミド、S-(-)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミド、2’-メチルベンジルアミド、4’-メチルベンジルアミド、2’2’-ジフェニルエチルアミド、1-(2-ピリジル)ピペラジン、N-ベンジルメチルアミド、ヒスタミド、R-(+)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、Trp-Asp-NH2、Trp-Asp-Phe-NH2、Asp-Trp-NH2、Ala-Trp-NH2、Trp-Ala-NH2、フェネチルアミスまたはTrp-Asp-OHであることを特徴とするペプチド。
【請求項３５】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項３６】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- NH2から成る請求項３５記載のペプチド。
【請求項３７】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Ala-NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項３８】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Asp-Phe-NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項３９】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp- Asp-NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４０】
配列ヘプタノイル-Thr(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg- Trp-NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４１】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Nal 2- Arg-Trp- NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４２】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ala-D-Nal 2- Arg-Trp- NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４３】
配列Ser(Bzl)-D-Nal 2- Arg-Trp- NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４４】
配列Ser(Bzl)-D-Nal 2- Arg-D-Trp- NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４５】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４６】
配列ヘプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４７】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-トリプタミドを含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４８】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-NMe-トリプタミドを含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項４９】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-α-Me-トリプタミドを含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５０】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-S- (-)-1-(1-ナフチル)エチルアミドを含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５１】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 1- NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５２】
配列7’-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-D-Nal 2 - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５３】
配列2’-ナフチルアセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５４】
配列4’-フェニルブチリル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５５】
配列3’,4’-ジクロロフェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp - NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５６】
配列3’-CF3フェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を含む請求項３４記載のペプチド。
【請求項５７】
次式のメラノコルチン受容体特異的線状ペプチド:
【化１】
2004534851.tif 000032
式中、
R1は、脂肪族L-またはD-アミノ酸、N-アセチル化L-またはD-脂肪族アミノ酸またはR8であり；
R8は、線状または分枝状（C1〜C17）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖から成る群であって、以下：
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基、
C1〜C17線状または分枝状の脂肪族から誘導されるアシル化基、;
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基のωアミノおよびカルボキシル誘導体、および
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族から誘導するアシル化基のためのωアミノ誘導体、
から選択されるものから独立に選択される；
R2およびR3は、それぞれ、H、CH3、天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であってそれぞれは少なくとも1個の芳香族成分を含有し、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくは以下：
【化２】
2004534851.tif 000033
の側鎖から選択される；
R4は、天然または合成アミノ酸のための陽電荷脂肪族または芳香族側鎖であり、その場合、当該側鎖は少なくとも1個の窒素含有基、例えばアミド、イミド、アミンおよびニトリルを含有し、またその場合、側基は好ましくは以下：
【化３】
2004534851.tif 000034
の側基から選択され、:
あるいは、水素供与体および/または受容体を有する中性脂肪族側鎖、例えば以下：
【化４】
2004534851.tif 000035
であり、ただしこれらに限定されない；
R5は、H、CH3、少なくとも1個の芳香族成分を含有する天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくはR2およびR3について規定した側鎖または天然または合成L-またはD-アミノ酸の置換アルキルまたは水素結合極性の側鎖から選択し、その場合、当該側鎖は水素供与体または受容体の成分を有する；
R6は、水酸化物、NH2またはNH-R8で、その場合、R8は、好ましくは短い脂肪族C1〜C17鎖、例えばアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニルまたはアラルキルであり；
R7は、H、メチル、エチル、プロピル、ブチル、または類似の高級線状または分枝状鎖状同族体、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジルまたは類似アラルキル基であり；
R9は、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピルまたは類似の高級線状または分枝状鎖の同族体、から選択するアミノ酸側鎖基、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジル、または類似アラルキル基であり；
ｍは通常は1であるが、ただしｍは0であってもよく、その場合には該当する官能基は存在せず、N-末端基はアミンとなる；
ｎは通常は1であるが、ただしnは０であってもよく、その場合には該当するアミノ酸は存在しない；
pは通常は1であるが、ただしpが0の場合には鎖の末端はR5とT5の組み合わせとなり、qとR6は存在しない；および
qは通常は1であるが、ただしqが0でありpが1である場合には末端基はR6となる；および
T2、T3、T4、T5およびT9は、それぞれ、H、CH3、C2H5またはベンジル基であり、
ただし、R2とT2、または、R3とT3、または、R4とT4、または、R5とT5、または、R9とT9の部分ペアの1個以上は更なるC-C結合で共に結合して環状構造、好ましくは5員環、6員環または7員環構造を形成してもよい、
さらに、R2、R4、R5またはR9の1個以上はこれらR2、R4、R5またはR9の直前にあるR7基に結合して環状構造、好ましくは5員環、6員環または7員環構造を形成してもよく、それによって、これらR2、R4、R5またはR9は直前にある窒素原子に固定される。
【請求項５８】
次式のメラノコルチン受容体特異的環状ペプチド:
【化５】
2004534851.tif 000036
式中、
R1は、脂肪族L-またはD-アミノ酸、N-アセチル化L-またはD-脂肪族アミノ酸またはR8であり；
R8は、線状または分枝状（C1〜C17）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖から成る群であって、以下：
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基、
C1〜C17線状または分枝状の脂肪族から誘導されるアシル化基、
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基のωアミノおよびカルボキシル誘導体、および
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族から誘導するアシル化基のためのωアミノ誘導体、
から選択されるものから独立に選択される；
R2およびR3は、それぞれ、H、CH3、天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、それぞれは少なくとも1個の芳香族成分を含有し、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくは以下：
【化６】
2004534851.tif 000037
の側鎖から選択される；
R4は、天然または合成アミノ酸のための陽電荷脂肪族または芳香族側鎖であり、その場合、当該側鎖は少なくとも1個の窒素含有基、例えばアミド、イミド、アミンおよびニトリルを含有し、またその場合、側基は好ましくは以下：
【化７】
2004534851.tif 000038
の側基から選択され、
あるいは、水素供与体および/または受容体を有する中性脂肪族側鎖、例えば以下：
【化８】
2004534851.tif 000039
であり、ただしこれらに限定されない；
R5は、H、CH3、少なくとも1個の芳香族成分を含有する天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくはR2およびR3について規定した側鎖または天然または合成L-またはD-アミノ酸の置換アルキルまたは水素結合極性の側鎖から選択し、その場合、当該側鎖は水素供与体または受容体の成分を有する；
R6は、水酸化物、NH2またはNH-R8で、その場合、R8は、好ましくは短い脂肪族C1〜C17鎖、例えばアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニルまたはアラルキルであり;
R7は、水素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、または類似の高級線状または分枝状鎖状同族体、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジルまたは類似アラルキル基であり;
ｍは1または２であり
ｎは通常は1であるが、ただしnは0であってもよく、その場合には該当するアミノ酸は存在しない；および
ｐは１〜５である
【請求項５９】
哺乳類の性応答を刺激する方法であって、請求項１、２、２２、３４、５７または５８に記載のメラノコルチン受容体3および/または4選択性アゴニストペプチドの医薬的に十分な量を投与することを特徴とする方法。
【請求項６０】
静脈内、皮下、筋肉内、経管、鼻内、経口、皮内、吸入、口腔粘膜、肺内、眼内、舌下および膣内の各投与から成る群から選択する投与法を含む請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
哺乳類の食物摂取を減少する方法であって、請求項１、２、２２、３４、５７または５８に記載のメラノコルチン受容体４および/または５選択性アゴニストペプチドの医薬的に十分な量を投与することを特徴とする方法。
【請求項６２】
静脈内、皮下、筋肉内、経管、鼻内、経口、皮内、吸入、口腔粘膜、肺内、眼内、舌下および膣内の各投与から成る群から選択する投与法を含む請求項６１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１以上のメラノコルチン受容体に特異的であり、広範囲の疾患の治療に使用してもよい線状および環状のペプチドを提供する。
関連出願
本出願は、米国仮特許出願番号60/304,836、名称「メラノコルチン受容体に特異的な線状および環状ペプチド」、出願日2001年7月11日に基づく優先権の利益を主張し、その出願書類を本明細書に引用する。
【背景技術】
【０００２】
メラノコルチン受容体
メラノコルチン受容体のタイプおよびサブタイプに属する一団は既に同定されており、例えば、健常なヒトメラニン細胞および黒色腫細胞に発現されるメラノコルチン-１受容体(MC1-R)、ACTH（アドレノコルチコトロピン）のために副腎細胞に発現されるメラノコルチン-2受容体(MC2-R)、視床下部、中脳および脳幹の細胞に主に発現されるメラノコルチン-3受容体(MC3-R)およびメラノコルチン-4受容体(MC４-R)および広範に分布する末梢組織に発現するメラノコルチン-5受容体(MC5-R)が挙げられる。
【０００３】
メラノコルチン受容体に特異的なペプチドには広範な生物学的活性があると報告されており、例えば、色素沈着およびステロイド生成に及ぼす効果が挙げられ、これらにはMSH(メラニン細胞刺激ホルモン)受容体およびACTH受容体が介在することが判っている。ヒトの初期の黒色腫細胞にはメラノトロピン受容体が存在することを立証している研究もいくつかある(Tatro JB, Atkins M, Mier JWら、ヒト黒色腫細胞にin situで立証されたメラノトロピン受容体、J.Clin.Invest, 85:1825-1832,1990)。メラノトロピン受容体はメラニン性およびメラニン欠乏性黒色腫のマーカーとして報告されている(Sharma SD, Granberry ME, Jiang Jら、多価メラニン細胞刺激ペプチドおよび蛍光高分子複合体、メラノトロピン受容体の特性分析のための新しい試薬、Bioconjug Chem 5;591-601,1994；Sharma SD, Jiang J, HadleyMEら、黒色腫メラノトロピン受容体の顕微鏡目視化と特性分析のためのメラニン細胞刺激ペプチド結合ビーズ、Proc Natl Acad Sci USA 93(24):13715-13720、1996)。特に、MC1-Rの存在はMC1-Rに対する抗体によりヒト黒色腫細胞で証明されている（Xia Y, Skoog V, Muceniece Rら、ヒトメラノコルチンMC-1R受容体に対するポリクロナール抗体：悪性黒色腫細胞に対するメラノコルチンMC1-R受容体の局在を免疫組織化学的に予め決定する、    European J Pharmacol 288;277-283, 1995）。MC1-Rは、Gタンパク質に結合した7-膜貫通受容体であり、皮膚のメラニン細胞で発現され、関連受容体であるMC2-R、 MC3-R、 MC4-Rおよび MC5-Rとある程度の相似性を共有している。これら受容体の各々は、メラニン細胞刺激の共通の伝達体、すなわちαメラニン細胞刺激ホルモン(α-MSH)の6〜9番配列に記載されるHis-Phe-Arg-Trp、を含有する各種ペプチド類似体と結合することができる。
【０００４】
MC受容体を分子的に特性分析するに当たりα-MSH同族体が放射性同位元素インジウム-111で標識され、黒色腫の映像研究に使用された（Wraight EP, Bard DR, Maughan TS, ら 悪性黒色腫の臨床映像のためにαメラニン細胞刺激ホルモンのキレート誘導体の使用、Brit J Radiology 65: 112-118, 1992；Bard DR, Knight CG およびPage-Thomas DP. 強力な悪性腫瘍映像化剤としてのαメラニン細胞刺激ホルモンのキレート誘導体、Brit J Cancer 62:919-922, 1990； Bard DR, Knight CG, Page-Thomas DP.αメラニン細胞刺激ホルモンの短鎖同族体のキレート誘導体をクラウドマンS91黒色腫に向け送達、Biochem Soc Trans 18:882-883, 1990）。黒色腫映像用にジスルフィド含有線状または環状ペプチドが同定され、使用されているが、MC受容体間に対する選択性はないようである（Chen J および Quinn TP. αメラニン細胞刺激ホルモン同族体Tc-99m/Re-188の標識および悪性黒色腫マウスにおけるそれらの薬物速度論、 J Nucl Med 39: 222p, 1998； Giblin MF, Wang N, Hoffman TJ, ら、レニウムおよびテクネチウム金属配位体を介して環化したαメラノトロピンペプチド同族体のデザインと特性分析、Proc Natl Acad Sci U S A 95(22):12814-12818, 1998）。後者の研究ではGiblinと共同研究者が報告した環状ペプチドも脳に局在することが判った（Wang NN, Giblin MF, Hoffman TJ, ら、Tc-99m および Re-188で標識した環状メラノトロピンペプチド同族体のマウス黒色腫モデルにおけるIn vivo 特性分析、J Nucl Med 39: 77p, 1998 および 第45回Nuclear Medicine Meeting, Toronto, June 1998でのポスター提示）。MC1-Rを経由するcAMP経路がα-MSHにより活性化すると、ヒトメラニン細胞の紫外線照射に対する応答が高まるという報告が最近されている（Im S, Moro O, Peng F, ら、 αメラノトロピンによってAMP回路が活性化されると、ヒトメラニン細胞の紫外線B照射に対する応答が高まる、Cancer Res 58: 47-54, 1998）。
【０００５】
MC4-RもGタンパク質に結合した7-膜貫通受容体であるが、主に脳で発現されると考えられている。遺伝子を標的にしてこの受容体を不活性化すると、マウスは過食症、高インスリン血症、高血糖症に伴う成熟肥満症状を呈する（Huszar D, Lynch CA, Fairchild-Huntress V, ら、メラノコルチン４受容体が攻撃を受けて混乱すると、マウスは肥満化する、Cell 88:131-141, 1997）。MC4-Rはエネルギーバランスに治療的に介入するための分子標的である。
【０００６】
α-MSHは、全ての主要な炎症において強力な抗炎症剤であると記載されている（Star RA, Rajora N, Huang J, Stock RC, Catania A, および Lipton JM、αメラニン細胞刺激ホルモンによるマクロファージ一酸化窒素シンターゼの自己調節の証明、Proc Natl Acad Sci U S A 92:8016-8020, 1995； Getting SJ, および Perretti M、抗炎症治療のための新たな標的としてのMC3-R 、Drug News and Perspectives 13:19-27, 2000）。抗炎症の過程ではMC1-RとMC3-Rの両方が関連することが強調されている。特にメラノコルチン受容体アゴニストによってこれらMC受容体を活性化すると一酸化窒素シンターゼの発現ならびにそれに続く一酸化窒素の産生が阻害されると報告されている。
【０００７】
メラノコルチン受容体の構造、例えばこの受容体をコードする核酸配列およびこの受容体を構成するアミノ酸配列を決定する重要な研究が行われている。例えば、国際特許出願番号PCT/US98/12098 および PCT/US99/16862 および 米国特許番号 5,994,087参照。メラノコルチン受容体に特異的なリガンド、すなわちアゴニニストおよびアンタゴニストの両方が多数開発されている。例えば、本出願および共同発明者の共有する国際特許出願番号PCT/US00/16396, (MC受容体特異的金属ペプチド); PCT/US98/03298 (メラノコルチン受容体に特異的なヨード基含有線状ペプチド); PCT/GB99/01388 (MC1-Rに特異的な線状ペプチド); PCT/GB99/01195 (MC3-R, MC4-RおよびMC5-Rに特異的な環状ペプチド); PCT/US99/04111 (黒色腫治療用MC1-R特異的ペプチド性アンタゴニスト); PCT/US99/09216 (メラノコルチン受容体リガンドとしてのイソキノリン化合物); PCT/US99/13252 (メラノコルチン受容体アゴニストとしてのアウピロピペリジン誘導体);および米国特許番号6,054,556 (MC1-R, MC3-R, MC4-Rおよび MC5-R アンタゴニストとしての環状ラクタムペプチド)を参照。更に、メラノコルチン受容体に特異的な化合物をスクリーニングし決定する方法が多数の特許により教示されている。例えば、国際特許出願番号PCT/US97/15565, PCT/US98/12098 および PCT/US99/16862 および米国特許番号5,932,779 および 5,994,087のごとくである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
一般にMC1-Rに特異的な化合物は、黒色腫の治療用として、例えば放射線治療剤または薬物運搬剤としておよび診断用放射線核種で標識する際の診断用映像剤として有用であると考えられている。MC3-R、MC4-RまたはMC5-Rに特異的な化合物は、エネルギーバランスの制御において、例えば食物摂取と体重増加の抑制剤としての使用、食欲減退症治療の際の体重増加補助剤としての使用、肥満症治療および食物摂取と代謝に関連する他の目的の処置用としての使用に有用であると考えられている。メラノコルチン受容体の中でもMC3-RおよびMC4-Rに特異的な化合物は性的機能不全、例えば男性の勃起不全の治療剤として使用することができる。メラノコルチン受容体の中でもMC3-RおよびMC4-Rに特異的な化合物は血圧、心拍および他の神経生理学的パラメータの制御に使用することができる。他のメラノコルチン受容体ペプチド、例えばMC1-Rアゴニストペプチドはメラニン産生を増加する日焼け剤として使用することができる。MC1-RおよびMC3-Rに特異的な化合物は炎症性プロセスの制御に有用と思われる。
【０００９】
特定のメラノコルチン受容体に高い特異性を持ったリガンドならびに特定のメラノコルチン受容体のアゴニストまたはアンタゴニストとなるリガンドまたは化合物に対する需要は依然として大きい。メラノコルチン受容体に高親和性のペプチドリガンドは、メラノコルチン受容体に関連する各種の生理学的応答を促進する目的でアゴニストまたはアンタゴニストとして使用することができる。更にメラノコルチン受容体には各種サイトカインの活性に及ぼす効果があるので、メラノコルチン受容体に高親和性のペプチドリガンドはサイトカイン活性の制御に利用することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一実施態様として、本発明は、配列S1-S2-S3-S4-S5を含むペプチドであって、
S1は、該ペプチドの残りの部分が本来有する活性を増強する官能基であり、例えば、受容体への補助的または二次的な接触を果たし、ただしこれに限定はされない；またS1は多様なアミノ酸および非ペプチド基、例えば中性または荷電L-またはD-立体配置アミノ酸残基1〜約4個のアミノ酸鎖のいずれかを含有し、S1が非ペプチド基である場合には線状または分枝状のアルキル、アリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖を含有し；
S2は、これを規定するとすれば、スペーサーとして機能する残基、好ましくは1以上の天然または合成の脂肪族アミノ酸、例えばL-またはD-立体配置のGly、Ala、Val、LeuまたはNleであり;
S3は、L-またはD-Phe、Phe(4-Cl)、Phe(2,4-diCl)、Phe(3,4-diCl)、Phe(4-NO2)、Phe(4-Me)、Phe(4-Phenyl)、Hphe、Pgl、Trp、Nal 1、Nal 2、Bip、Dip、Bpa、Ser(Bzl)、Lys(Z)、Lys(Z-2’Br)、Lys(Bz)、Thr(Bzl)、Cys(Bzl)、Tyr(BzlCl2)または芳香族側鎖基団を持つ天然または合成L-またはD-アミノ酸であり、この場合、芳香環は、任意にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化され、
S4は、L-またはD-Lys、Arg、Orn、Dpr、Dbu、p-アミノ-Pheまたは陽電荷側鎖を持つ任意の天然または合成アミノ酸、好ましくは、L-立体配置陽イオンアミノ酸であり;
S5は、芳香族側鎖を持つL-またはD-アミノ酸であり、任意に1個以上の追加アミノ酸を含み、さらに任意に末端基、例えばPhe、Phe(4-Cl)、Phe(2,4-diCl)、Phe(3,4-diCl)、Phe(4-NO2)、Phe(4-Me)、Phe(4-Phenyl)、Hphe、Pgl、Trp、Nal 1、Nal 2、Bip、Dip、Bpa、Ser(Bzl)、Lys(Z)、Lys(Z-2’Br)、Lys(Bz)、Thr(Bzl)、Cys(Bzl)、Tyr(BzlCl2)、前述のもののいずれかのN-アルキル化またはアリール化誘導体、あるいは、前述のもののいずれかに対応するデスカルボキシルアミノ酸、この場合にはS5基はS4残基の置換アミド官能基である、を特徴とするペプチドを提供する。
【００１１】
また、別の実施態様として、本発明は、配列S1-S2-D-Phe(4-Cl)-S4-S5を含むペプチドであって、
S1は、ヘプタノイル、2’-ナフチルアセチル、7’-アミノ-ハプタノイル、2’-クロロフェニルアセチル、3’-クロロフェニルアセチル、4’-クロロフェニルアセチル、4’-フェニルブチルアミノカルボニル、3’-フェニルブチルアミノカルボニル、4’-ブロモフェニル-アセチル、3-4-ジクロロフェニル-アセチル、2,4-ジクロロフェニル-アセチル、4-ビフェニル-アセチル、2-ナフトイル、Ph-(CH2)2NH、3’-フェニルプロパンカルボニル、2’-ナフトイル-Pip、2’-ナフチルアセチル、2’-ブロモフェニル-アセチル、4’-CF3フェニル-アセチル、3’- CF3フェニル-アセチル、2’-CF3フェニル-アセチル、3’,5’-CF3フェニルアセチル、2’,5’-CF3フェニルアセチル、4’-Meフェニル-アセチル、3’-Meフェニル-アセチル、2’-Meフェニル-アセチル、7’-アミノヘプトノイル、β-Ala、4-アミノビチル、5-アミノバレリル、6-アミノカプロイル、アミノトラネキサミル、Cmpiまたは3’4’-Cl2フェニルアセチルであり;
S2は、存在しないか、Ser(Bzl)、Ala、D-Ala、β-Ala、Val、Leu、Chg、Alb、Tle、1-アミノ-1シクロヘキサンカルボニル、lnp、CO(CH2)2NH、CO(CH2)2CO、Pip、MeThe(Bzl)、Thr(Bzl)またはD-Thr(Bzl)であり;
S4は、Arg、D-Arg、(Nlys)Gly、Trp、Lys、homoLys、Dpr(β-Ala)、α-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Gly、(4’-グアニジノ)Gly、（4’-グアニジノ）Phe、D-(4’-グアニジノ)Phe、β-(N-アミジノ-4’-ピペリジン)Alaまたはホモ-Ala-4’-pip(N-アミジノ)であり、かつ
S5は、Trp、Trp-OH、Trp-NH2、Trp-Cys-NH2、D-Trp、D-Trp-NH2、Trp-Val-NH2、3’-Pya-NH2、Phe-NH2、MeTrp-NH2、β-Ala-Trp-NH2、アミノブチルアミド、Nal 1-NH2、D-Nal 1-NH2、Nal 2-NH2、D-Nal 2-NH2、Tic-NH2、D-Tic-NH2、1’-アミノインダン、1’-アミノインダン-1-カルボキシル-NH2、Aic-NH2、Atc-NH2、Disc-NH2、Tpi-NH2、D-Tpi-NH2、Tiq-NH2、D-Tiq-NH2、トリプタミド、NMe-トリプタミド、α-Me-トリプタミド、2’-(4”-メチルフェニル)エチルアミド、3’,4’-Cl2)フェニルメチルアミド、3’-フェニルプロピルアミド、2’,4’-ジクロロベンジルアミド、3’-(1H-イミダゾール)プロピルアミド、4-フェニル-ピペリジン-4-カルボンアミド、3-フェニル-1-プロピルアミド、2,4-ジクロロフェンエチルアミド、S-(-)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミド、2’-メチルベンジルアミド、4’-メチルベンジルアミド、2’2’-ジフェニルエチルアミド、1-(2-ピリジル)ピペラジン、N-ベンジルメチルアミド、ヒスタミド、R-(+)-1-(2-ナフチル)エチルアミド、Trp-Asp-NH2、Trp-Asp-Phe-NH2、Asp-Trp-NH2、Ala-Trp-NH2、Trp-Ala-NH2、フェネチルアミスまたはTrp-Asp-OHであることを特徴とするペプチドを提供する。
式S1 - S2 - D-Phe(4-Cl) - S4 - S5の代表的なペプチドには、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Ala-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Asp-Phe-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Asp-NH2、
ヘプタノイル-Thr(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp-NH2、
ヘプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-MeTrp-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-トリプタミド、
7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-NMe-トリプタミド、
7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-alpha-Me-トリプタミド、
7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-S-(-)-1-(1-ナフチル)エチルアミド、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 1-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-D-Nal 2-NH2、
7'-アミノ-ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Nal 2-NH2、
2'-ナフチルアセチル -Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2、
4'-フェニルブチリル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2、
3',4'-ジクロロフェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2、
および3'-CF3フェニル-アセチル-Ala-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2
がある。
【００１２】
さらに別の実施態様では、本発明は、配列7'-アミノ-ハプタノイル S2 - D-Phe(4-Cl) - S4 - S5のペプチドであって、S2, S4 およびS5は、上記の通りであることを特徴とするペプチドを提供する。式7'-アミノ-ハプタノイル- S2 - D-Phe(4-Cl) - S4 -S5のペプチドには、前記の代表的ペプチドの中で最初の残基が7’-アミノ-ハプタノイルのものが挙げられる。
【００１３】
また別の実施態様では、本発明は、配列S1 - S2 - S3 - S4 - S5を含むペプチドであって、S1, S2, S4 およびS5が上記の通りであって、S3がPhe、 D-Phe、 Phe(4-Cl)、 D-Phe(4-Cl)、 Phe(3-Cl)、 D-Phe(3-Cl)、 Phe(2-Cl)、 D-Phe(2-Cl)、D-Phe(3,4-diCl)、 MePhe、 D-MePhe、 D-Tic、 D-Tpi、 D-Nal 2、 Arg、 D-Phe(3,4-F2)、 D-Tiq、 D-Me(ホモ)Phe または D-EtPheであることを特徴とするペプチドを提供する。代表的な式S1 - S2 - S3 - S4 - S5のペプチドには、前述のペプチド、並びに7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Nal 2-Arg-Trp-NH2、 7'-アミノ-ハプタノイル-Ala-D-Nal 2-Arg-Trp-NH2、 Ser(Bzl)-D-Nal 2-Arg-Trp-NH2、 およびSer(Bzl)-D-Nal 2-Arg-D-Trp-NH2がある。
【００１４】
本発明は、さらに、哺乳類の性応答を刺激する方法を包含し、それはペプチドまたはその医薬的に受容可能な塩を含有する組成物の医薬的に十分な量を投与することを含む。この方法では、哺乳類は、雌雄いずれでもよい。更に組成物は医薬的に受容可能な担体を含有してよい。本方法では、投与には、注射による投与、粘膜からの投与、口腔粘膜投与、経口投与、皮内投与、吸入投与、鼻内投与、経管投与、肺内投与、眼内投与、舌下投与、膣内投与などの投与法投与が挙げられる。鼻内投与の場合、緩衝水溶液を含む一定量の配合品の鼻内投与でよい。
【００１５】
本発明は、さらに、哺乳類の食物摂取を阻害する方法を包含し、それはペプチドまたはその医薬的に受容可能な塩、特にMC3/4-Rに選択的なアンタゴニストを含有する組成物の医薬的に十分な量を投与することを含む。本方法では、投与には、注射による投与、粘膜からの投与、口腔粘膜投与、経口投与、皮内投与、吸入投与、鼻内投与、経管投与、肺内投与、眼内投与、舌下投与などの投与法投与が挙げられる。鼻内投与の場合、緩衝水溶液を含む一定量の配合品の鼻内投与でよい。
【００１６】
本発明は、さらに、哺乳類の体重を増加する方法を包含し、それはペプチドまたはその医薬的に受容可能な塩、特にMC4/5-Rに選択的なアンタゴニストを含有する組成物の医薬的に十分な量を投与することを含む。更に組成物は医薬的に受容可能な担体を含有してよい。本方法では、投与には、注射による投与、粘膜からの投与、口腔粘膜投与、経口投与、皮内投与、吸入投与、鼻内投与、経管投与、肺内投与、眼内投与、舌下投与などの投与法投与が挙げられる。鼻内投与の場合、緩衝水溶液を含む一定量の配合品の鼻内投与でよい。
【００１７】
本発明の第1の目的は、性機能障害の治療に使用するためのメラノコルチン受容体特異的製剤である。
【００１８】
第2の目的は、勃起機能障害を含めた男性の性機能障害の治療に使用するためのメラノコルチン受容体特異的製剤を提供することである。
【００１９】
別の目的は、女性の性機能障害の治療に使用するためのメラノコルチン受容体特異的製剤を提供することである。
【００２０】
別の目的は、摂食障害の治療に使用するためのメラノコルチン受容体特異的製剤を提供することである。
【００２１】
別の目的は、鼻内投与で有効な治療に使用するためのメラノコルチン受容体特異的製剤を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、メラノコルチン受容体MC3-Rおよび/またはMC4-Rおよび/またはMC5-Rに特異的で、アゴニストかアンタゴニストである化合物を提供することである。
【００２３】
本発明の他の目的、長所および新規の特徴、並びに、更に広範な適用は、一部は、添付した図面と合わせて後記の詳細な説明に記述されており、また一部は、後記の試験に基づき当業者に明らかになるか、あるいは、本発明の実施によって理解される。本発明の目的および長所は、特に添付する特許請求の範囲で指摘する手段との組み合わせによって実現され達成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
定義
本明細書および特許請求の範囲の全体で使用している用語は以下のように定義される。
本明細書および特許請求の範囲の全体で使用している「結合する」、「結合」、「複合する」および「複合」の語は一般的に物理的および化学的な結合、反応、複合、誘引、錯結合その他全てのタイプに及ぶものとする。
【００２５】
本発明の「ペプチド」は、(a)天然に生起、(b)化学合成による製造、(c)組替えDNA技術による製造、(d)大きな分子の生化学的または酵素的開裂、(e)以上のaからｄの方法を組み合わせた方法による製造、あるいは(f)他のペプチド製造手段による製造、が可能である。好ましい製造手段として化学合成を採用した場合には、鎖に沿って天然には生起しない各種アミノ酸を導入し、N末端またはC末端を修飾する等が可能になるので、安定性および製剤化の改良、プロテアーゼ分解に対する耐性その他が得られる。
【００２６】
本明細書および特許請求の範囲の全体で使用している「ペプチド」の語は、２以上のアミノ酸の任意の構造、例えばアミノ酸の化学的な修飾体および誘導体を包含するものである。本発明ペプチドの大部分が含有するアミノ酸は100個未満、好ましくは60個未満、最も好ましくは２から20個の範囲である。ペプチドの全部または一部を形成するアミノ酸は天然起源のアミノ酸、そのアミノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質性のアミノ酸、翻訳後に改変されたアミノ酸、酵素によって改変されたアミノ酸、アミノ酸を模擬するようにデザインされた構築構造体、その他であってよく、したがって「ペプチド」の語には擬制ペプチドおよびペプチド模倣体、例えば非ペプチド骨格を有する構造体も包含される。また「ペプチド」の語にはペプチドの二量体あるいは多量体も包含される。「製造された」ペプチドには、化学合成、組替えDNA技術、大きな分子の生化学的または酵素的な開裂、以上の組み合わせ、あるいはその他の方法によって生産されたペプチドが包含される。
【００２７】
本発明で使用している「アミノ酸」、および本明細書および特許請求の範囲の全体で使用しているこの語には、既知の天然由来タンパク質性アミノ酸が含まれており、これらは通常の三文字表記および一文字表記で指称される。一般的にはSynthetic Peptides: A User's Guide, GA Grant, editor, W.H. Freeman & Co., New York, 1992を参照。これの内容、例えば11頁から24頁に記載のテキストおよび表は本明細書に引用される。上記のごとく、「アミノ酸」の語には、天然起源タンパク質のアミノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質性アミノ酸、翻訳後に改変されたアミノ酸、酵素によって合成されたアミノ酸、誘導体アミノ酸、アミノ酸を模擬するようにデザインされた構築構造体、その他が包含される。修飾されたおよび特殊なアミノ酸は、一般に上で引用したSynthetic Peptides: A User's Guide,； Hruby VJ, Al-obeidi Fおよび Kazmierski W: Biochem J 268:249-262, 1990； および Toniolo C: Int J Peptide Protein Res 35:287-300, 1990に記載されており、これら全ての内容は本明細書に引用される。更に次の表記は以下の意味を示す。
2004534851.tif 000003
2004534851.tif 000004
2004534851.tif 000005
本発明化合物のリストでは、従来のアミノ酸残基が持つ意味はそのまま従来通りであって、the Manual of Patent Examining Procedure, 第７編の Chapter 2400に提示されているごとくである。したがって、「Nle」はノルロイシン、「Asp」はアスパラギン酸、「His」はヒスチジン、「D-Phe」はD-フェニルアラニン、「Arg」はアルギニン、「Trp」トリプトファン、「Lys」はリジン、「Gly」はグリシン、「Pro」はプロリン、「Tyr」はチロシン、[Ser]はセリン、等である。
【００２８】
単一のアミノ酸、例えば天然起源タンパク質のアミノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質性アミノ酸、翻訳後に改変されたアミノ酸、酵素によって合成されたアミノ酸、誘導体アミノ酸、アミノ酸を模擬するようにデザインされた構築構造体、その他上記の全部を含めて本明細書では時折「残基」と呼称する。
【００２９】
本明細書に開示のペプチドは医療用途にも動物の農業的または獣医学的用途にも使用することができる。製品は通常はヒトに使用するが、他の哺乳類にも使用してもよい。「患者」の語は哺乳動物の個体を指し、本明細書および特許請求の範囲の全体でそのように使用される。本発明の主要な用途はヒト患者であるが、本発明は研究動物、農場動物、動物園動物、野生動物、ペット、変異種その他の動物に適用してもよい。
【００３０】
一般に、本発明ペプチドは固相合成法により合成し、当分野に既知の方法で精製してよい。各種の樹脂と試薬を使用し多数の中の任意の既知操作を適用して本発明化合物を製造してよい。
【００３１】
本発明ペプチドは医薬的に受容可能な塩の形態でもよい。本発明化合物の酸付加塩は、適当な溶媒中でペプチドと過剰の酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、あるいはメタンスルフォン酸から製造する。酢酸塩は特に有用である。本発明化合物が酸部分を含有する場合には、適当な医薬的に受容可能な塩はアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩、あるいはアルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩またはマグネシウム塩を含有していてもよい。
【００３２】
本発明は、本発明ペプチドおよび医薬的に受容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。担体は液状剤でよく、緩衝化された等張水溶液が好ましい。医薬的に受容可能な担体は以後に記述するように賦形剤、例えば希釈剤、担体等、および添加剤、例えば安定化剤、保存剤、溶解剤、緩衝剤等を含有してよい。
投与ルート
注射により投与される場合には静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内あるいは他の当分野に公知の手段でよい。本発明ペプチドは当分野に公知のどのような公知手段によって製剤化してもよく、例えば錠剤、カプセル剤、カプレット、サスペンジョン、粉末、凍結乾燥製品、座剤、点眼液、皮膚パッチ、経口溶解製剤、スプレー、エアロゾル等が挙げられるが、これらに限定されない、また緩衝剤、結合剤、賦形剤、安定化剤、抗酸化剤、等当分野に公知の薬剤と混合して製剤化してもよい。一般に本発明ペプチドが細胞の表皮層を抜けて導入される投与ルートであれば採用してよい。投与手段には、例えば粘膜通過投与、バッカル投与、経口投与、皮膚投与、吸入投与、経鼻投与その他が挙げられる。治療に当たっては、上記手段または他の公知手段のいずれかによって、所望の治療効果を達成するのに十分な量を投与する。
【００３３】
本発明ペプチドは医薬組成物中に製剤化または処方化されてよく、この組成物には少なくとも１の本発明ペプチドが1以上の医薬的に受容可能な担体、例えば希釈剤、担体等の賦形剤および添加剤、例えば安定化剤、保存剤、溶解剤、緩衝剤等と共に所望により含有される。製剤用賦形剤には、例えばポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニット、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムがあってよい。注射または他の液体投与製剤には、少なくとも１以上の緩衝用成分を含有する水が好ましく、安定化剤、保存剤、溶解剤も使用してよい。固体投与製剤には各種の増粘、充填、増量、担持の添加剤、例えばでんぷん、砂糖、脂肪酸等が使用されてよい。局所投与製剤には、各種のクリーム、軟膏、ゲル、ローション等を使用してよい。大部分の医薬組成物では、その調製物の重量または容積の大きな部分が不活性な成分によって構成されている。医薬製剤には、各種の定常放出、遅延放出、時間放出のための製剤物および添加物の採用が考えられており、したがって本発明ペプチドの長時間運搬を有効にする薬用量が処方されている。
【００３４】
一般に、患者に投与される本発明ペプチドの実際の量は、投与モード、採用製剤、および所望の応答に応じてかなり広い範囲の間を変動する。
本発明ペプチドの構造
本発明は次の一般式の線状ペプチドを提供する。
【００３５】
【化１】
2004534851.tif 000006
式中、
R1は、脂肪族L-またはD-アミノ酸、N-アセチル化L-またはD-脂肪族アミノ酸またはR8であり；
R8は、線状または分枝状（C1〜C17）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖から成る群であって、以下：
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基;
C1〜C17線状または分枝状の脂肪族から誘導されるアシル化基;
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基のωアミノおよびカルボキシル誘導体;および
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族から誘導するアシル化基のためのωアミノ誘導体;
から選択されるものから独立に選択される；
R2およびR3は、それぞれ、H、CH3、天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、それぞれが少なくとも1個の芳香族成分を含有し、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくは以下：
【００３６】
【化２】
2004534851.tif 000007
の側鎖から選択される；
R4は、天然または合成アミノ酸のための陽電荷脂肪族または芳香族側鎖であり、その場合、当該側鎖は少なくとも1個の窒素含有基、例えばアミド、イミド、アミンおよびニトリルを含有し、またその場合、側基は好ましくは以下：
【００３７】
【化３】
2004534851.tif 000008
の側基から選択され、:
あるいは、水素供与体および/または受容体を有する中性脂肪族側鎖、例えば以下：
【００３８】
【化４】
2004534851.tif 000009
であり、ただしこれらに限定されない；
R5は、H、CH3、少なくとも1個の芳香族成分を含有する天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくはR2およびR3について規定した側鎖または天然または合成L-またはD-アミノ酸の置換アルキルまたは水素結合極性の側鎖から選択し、その場合、当該側鎖は水素供与体または受容体の成分を有する；
R6は、水酸化物、NH2またはNH-R8で、その場合、R8は、好ましくは短い脂肪族C1〜C17鎖、例えばアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニルまたはアラルキルであり；
R7は、H、メチル、エチル、プロピル、ブチル、または類似の高級線状または分枝状鎖状同族体、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジルまたは類似アラルキル基であり；
R9は、好ましくはH、メチル、エチル、プロピルまたは類似の高級線状または分枝状鎖の同族体、から選択するアミノ酸側鎖基、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジル、または類似アラルキル基であり；
ｍは通常は1であるが、ただしｍは0であってもよく、その場合には該当する官能基は存在せず、N-末端基はアミンとなる;
ｎは通常は1であるが、ただしnは0であってもよく、その場合には該当するアミノ酸は存在しない;
pは通常は1であるが、ただしpが0の場合には鎖の末端はR5とT5の組み合わせとなり、qとR6は存在しない；および
qは通常は1であるが、ただしqが0でありpが1である場合には末端基はR6となる；および
T2、T3、T4、T5およびT9は、それぞれ、H、CH3、C2H5またはベンジル基であり、
ただし、R2とT2、または、R3とT3、または、R4とT4、または、R5とT5、または、R9とT9の部分ペアの1個以上は更なるC-C結合で共に結合して環状構造、好ましくは5員環、6員環または7員環構造を形成してもよい；
さらに、R2、R4、R5またはR9の1個以上はこれらR2、R4、R5またはR9の直前にあるR7基に結合して環状構造、好ましくは5員環、6員環または7員環構造を形成してもよく、それによって、これらR2、R4、R5またはR9は直前にある窒素原子に固定される。
他の実施態様として、本発明は次の一般式の環状状ペプチドを提供する。
【００３９】
【化５】
2004534851.tif 000010
式中、
R1は、脂肪族L-またはD-アミノ酸、N-アセチル化L-またはD-脂肪族アミノ酸またはR8であり；
R8は、線状または分枝状（C1〜C17）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケン、アルケニルまたはアラルキル鎖から成る群であって、以下：
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基;
C1〜C17線状または分枝状の脂肪族から誘導されるアシル化基;
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族基のωアミノおよびカルボキシル誘導体;および
C1〜C17線状鎖または分枝状鎖脂肪族から誘導するアシル化基のためのωアミノ誘導体;
から選択されるものから独立に選択される；
R2およびR3は、それぞれ、H、CH3、天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、それぞれが少なくとも1個の芳香族成分を含有し、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくは以下：
【００４０】
【化６】
2004534851.tif 000011
の側鎖から選択される；
R4は、天然または合成アミノ酸のための陽電荷脂肪族または芳香族側鎖であり、その場合、当該側鎖は少なくとも1個の窒素含有基、例えばアミド、イミド、アミンおよびニトリルを含有し、またその場合、側基は好ましくは以下：
【００４１】
【化７】
2004534851.tif 000012
の側基から選択され、:
あるいは、水素供与体および/または受容体を有する中性脂肪族側鎖、例えば以下：
【００４２】
【化８】
2004534851.tif 000013
であり、ただしこれらに限定されない；
R5は、H、CH3、少なくとも1個の芳香族成分を含有する天然または合成L-またはD-アミノ酸の芳香族置換アリールまたはヘテロアリール側鎖であって、その場合、その環は追加的にハロゲン、アルキルまたはアリール基で官能基化してもよく、また芳香族側鎖は好ましくはR2およびR3について規定した側鎖または天然または合成L-またはD-アミノ酸の置換アルキルまたは水素結合極性の側鎖から選択し、その場合、当該側鎖は水素供与体または受容体の成分を有する；
R6は、水酸化物、NH2またはNH-R8で、その場合、R8は、好ましくは短い脂肪族C1〜C17鎖、例えばアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニルまたはアラルキルであり;
R7は、水素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、または類似の高級線状または分枝状鎖状同族体、またはアミノ基を末端とする類似鎖、ベンジルまたは類似アラルキル基であり;
ｍは1または２であり
ｎは通常は1であるが、ただしnは0であってもよく、その場合には該当するアミノ酸は存在しない;および
ｐは１〜５である。
本発明ペプチド
本発明ペプチドを従来の合成法により製造し、選択したペプチドを結合測定法によりテストした。表1および２は本発明線状ペプチドとその競合阻害結合測定の結果を示し、表３および４は本発明環状ペプチドとその競合阻害結合測定の結果を示す。
【００４３】
競合阻害結合測定を、hMC3-R, hMC4-R, hMC5-R, および B-16 マウス黒色腫細胞 (MC1-R含有) から調製した膜によって行い、1 mM MgCl2、2 mM CaCl2および 5 mM KClを含有する 50 mM HEPES pH7.2緩衝液中の0.4 nM 125I-NDP-α-MSH (New England Nuclear, Boston, MA, USA) を使用した。指示のごとくにレニウム金属イオンに錯結合させた本発明テストペプチドを選択濃度にて測定用チューブに入れ、受容体への125I-NDP-α-MSHの結合を阻害する効力を測定した。1μMのα-MSHの存在により125I-NDP-α-MSHの結合を完全に阻害することにより、非特異的な結合を測定した。インキュベーションを室温で90分間行い、その後測定混合物をろ過し、膜を氷冷緩衝液で３回洗浄した。フィルターを乾燥し、膜に結合した残存放射活性をガンマカウンターで計測した。1μMα-MSHの不存在下と存在下における細胞膜結合放射活性(cpm)の差を100%特異結合率と定義した。テスト化合物の存在下で得たcpmを100％特異結合率に関して標準化し、125I-NDP-α-MSH結合の阻害率を決定した。各測定を3回行った。実際の平均値が表1、2、3および4に記載されている。
表１
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表２
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表３
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表４
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【実施例】
【００４４】
以下の非限定実施例によって、本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
MC4-Rに対してアゴニスト/アンタゴニストの状態にある特定のペプチドについてKi（nM）を決定した。MC4-Rを発現するHEK-293細胞中に蓄積する細胞内cAMPを測定することによって、MC4-Rでのペプチドの機能を評価した。アンタゴニスト活性を決定するに当たり、α-MSH-誘発cAMPレベルの阻害度を当該化合物に曝露後に測定した。10mM HEPES、pH7.5、5ｍM MgCl2、1mMグルタミン、0.1%アルブミンおよびフォスフォジエステラーゼ阻害物質である3-イソブチル-1-メチル-キサンチン0.6ｍM、を含有するアールの平衡塩溶液に細胞を浮遊させ、96穴プレートに細胞0.5 x 105個/穴の密度にて流し込んだ。細胞をα-MSHの存在下および不在下で被験ペプチドと共に37℃で1時間培養した。cAMPレベルを細胞溶解物中でEIA（Amersham）によって測定した。Prism Graph-Padソフトウェアによる非直線回帰分析を使って、データ分析およびEC50値を決定した。
表5
2004534851.tif 000031
図1は、MC1-R, MC3-R, MC4-R およびMC5-R に結合したI125-NDP-α-MSHを各種濃度の7'-amino-haptanoyl-Ser(Bzl)-D-Phe(4’-Cl)-Arg-Trp-NH2によって置換したグラフであり、結合親和性曲線が示されている。
実施例2
雄ラットにおける化合物の陰茎勃起（PE）誘発能を選択したペプチドで評価した。体重200〜250gの雄Sprague-Dawley ラットを12時間の消灯/点灯周期 で餌と水を自由に与えながら飼育した。午前10時から午後5時の間における全行動の観察を行った。1群4~8匹の各ラット群に各種用量のペプチドを静脈内（IV）、皮下（SC）、脳脊髄内（ICV）、腹腔内（IP）注入で投与し、あるいは、マイクロピペッターを使って、一方の外鼻孔に溶液25μlを送達する鼻内（IN）投与を行なった。投与直後、行動観察のためラットを個別のポリスチレンケージ（長さ27cm、幅16cm、高さ25cm）に収容した。ラットを30分間観察し、あくび、毛づくろい行動およびPEの各回数を10分間単位で3回記録した。図2に示すように、7'- アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4’-Cl)-Arg-Trp-NH2を含め選択したペプチドは、雄ラットに勃起を誘発した。
実施例3
選択したペプチドについて摂食量および体重の変化を評価した。実験開始時に体重が〜300gである雄 Sprague-Dawley ラットを12時間の消灯/点灯周期 で飼育した。消灯期間の開始直前に投与ができるように、消灯を午後12時に調整した。ラット（1群12匹）に粉末飼料と水を自由に与えながら飼育した。投与前1週間、24時間の摂食量および体重の変化を記録し、群毎の基底値を粉末飼料と水のみ投与中に算定した。0日目に、ラットにICV, IV, SC または IP 投与し、1週間の間毎日摂食量と体重を測定した。投与は、1週間に1回、6週間まで行った。摂食量と1日の体重が基礎値との対比において変動した。図3、4および5に、ペプチド別、用量別、投与経路別の結果が図示してある。
実施例4
選択したペプチドを使ってラットの味覚条件による忌避を評価した。体重が〜300gの雄 Sprague-Dawley ラットを12時間の消灯/点灯周期 で飼育した。消灯を午後12時に調整し、餌を自由に与えた。ラットを訓練し、1日当たり30分間の水分摂取を習慣付けた。実験1日目、化合物をICV、IVまたはIP投与する直前に0.15%サッカリンを含有する水を30分間摂取させた。実験2日目、指定時間に水のみを与えた。実験3日目、サッカリン含有水を再度与えた。実験1日目と3日目にこれらラットが消費した液量を比較した。3日目に摂水量が減少すれば、それは1日目の薬物投与が誘発した疾病が原因で味覚条件による忌避が生じたことを示している。陽性対照として、LiCl 投与 (127mg/kg; IP) を使用した。図6の結果から、7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4’-Cl)-Arg-Trp-NH2を1500 μg/kgでIP投与しても味覚の条件付け嫌悪応答が誘発されなかったことが判かり、また7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4’-Cl)-Arg-Trp-NH2への嫌悪作用が原因で図4および5の摂食量減少が生じたのではないことが判る。
【００４５】
前述の各実施例は単なる説明に過ぎず、他の同等の実施例が考案可能である。
【００４６】
これらの好ましい実施例を参照にして本発明を説明したが、他の実施例でも同じ結果を達成することができる。本発明の変形例および修正例は当業者に明白であり、本発明はこれら修正例および均等例を特許請求の範囲の中に包含することを意図している。上に引用した全ての出願、特許および出版物の全開示内容を本明細書は参考として編入する。
【００４７】
前記の実施例で使用した反応物質および／または本発明操作条件を一般的または特殊的に記述されているものに置き換えて前記の実施例を繰り返した場合に同様の成果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
明細書に編入し、明細書の一部を形成する添付図面は、本発明のいくつかの実施態様を図示しており、また詳細な説明と一体となって、本発明の原理の説明に寄与する。本図面は、本発明の好ましい実施態様を図示する目的に止まり、本発明の制限を意図するものではない。図面は、以下の通りでる:
【図１】図１は、MC1-R, MC3-R, MC4-R および MC5-Rに結合しているI125-NDP-α-MSHを7'-アミノ−ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2の各種濃度によって置換するグラフである。ｘ軸はI125-NDP-α-MSH結合%で、ｙ軸は濃度である。
【図２】図２は、各種量の7'- アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2をiv投与したラットの勃起能を示すグラフである。
【図３】図３は、食塩水または被験化合物を脳脊髄内（ICV）投与した雄Sprague-Dawleyラットにおける摂食量の図である。食塩水は、12匹に、化合物A（7'-アミノ -ハプタノイル -Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-Asp-Phe-NH2）は11匹に、化合物B（ヘプタノイル-Thr(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2）は9匹に与えた。24時間時点での、食塩水投与と化合物A投与を対比した摂食量の差は、p 値が＜.01で有意であった。
【図４】図４は、食塩水または7'-アミノ−ハプタノイ-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2の各種用量をICV投与した雄Sprague-Dawleyラットの摂食量を各群のラット数と共に示すグラフである。食塩水投与と比較すると、24時間時点での摂食量の差は、1.0 nmolの場合、p＜.01で有意、0.5 nmolの場合、p＜.05 で有意、であった。食塩水を受けたラットは、4gの平均1日体重増加を示し、0.1 nmolを受けたラットは3g増加し、0.5 nmolを受けたラットは1g減量し、1.0nmolを受けたラットは3g減量した。これらのラットは、投与後48時間までには基底値に戻った。
【図５】図5は、食塩水または7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2の各種用量を腹腔内（IP）投与した雄Sprague-Dawleyラットの摂食量のグラフである。4群中、各群12匹であった（食塩水, 750 μg/kg, 1500 μg/kg および 3000 μg/kg）。24時間時点での1500 μg/kg と3000 μg/kgの摂食量の差はp 値＜ .01で有意であった。 食塩水を受けたラットは4gの平均1日体重増加を示し、750 μg/kg を受けたラットは4g増量し、1500 μg/kg を受けたラットは4g増量し、1500 μg/kg を受けたラットは2g増量し、3000 μg/kg を受けたラットは1g減量した。
【図６】図6は、7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2に対し味覚条件による忌避応答がなかったことを示すグラフであり、観察される体重減少の原因は誘発された疾病や同様の副作用ではないことがこの図から明らかとなった。食塩水（陰性対照）、LiCl（陽性対照）および1500 μg/kgの被験品7'-アミノ-ハプタノイル-Ser(Bzl)-D-Phe(4-Cl)-Arg-Trp-NH2を各IP投与し、投与前後のサッカリン添加水の消費量を測定した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004534851.tif 000101
2004534851.tif 000102
【国際調査報告】
2004534851.tif 000103
2004534851.tif 000104