(57)【要約】本開示は、特異的α１Ａアドレナリン受容体プロフィールを有する化合物による失禁の治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
α１Ａアドレナリン受容体アゴニストでありα１Ｂアンタゴニストである化合物を投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法
【請求項２】
該化合物がα１Ｄアンタゴニストである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
該α１Ｂ拮抗作用が競合的である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
該α１Ｂ拮抗作用が非競合的である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
該化合物が５以上のＩＵＰ（５ｍｍＨｇ）／ＭＡＰ（２０ｍｍＨｇ）選択性比率を有する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
該化合物が１０以上のＩＵＰ（５ｍｍＨｇ）／ＭＡＰ（２０ｍｍＨｇ）選択性比率を有する、請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、腹圧性尿失禁の治療における新規アプローチを開示する。より詳しくは、本発明は、α１Ｂおよびα１Ｄサブタイプにおける拮抗特性を有する選択的α１Ａアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる尿失禁の治療方法を提供する。
【０００２】
（発明の背景）
尿失禁は、尿の不随意的漏出と定義される状態であり、最近、世界保健機関により疾患として分類された。尿の不随意的漏出は、膀胱内の圧力が尿道括約筋の保持圧力（尿道内圧）を超えた場合に生じる。該疾患は、種々の病理学的、解剖学的および神経学的要因から生じうる。症状、徴候および状態に基づいて、腹圧性失禁、切迫尿失禁および混合失禁の３つの主要タイプの尿失禁が定義づけられている。
【０００３】
腹圧性尿失禁（ＳＵＩ）は、膀胱の収縮の不存在下で腹腔内圧を増加させる咳、くしゃみ、笑い又は他の身体的活動中の尿の不随意的漏出である。ＳＵＩは、２５〜５０歳の女性に最も一般的であり、通常に運動する女性の４７％までが何らかの程度のＳＵＩを有する。
【０００４】
女性におけるＳＵＩの最も一般的な原因は、尿道の過可動性および内因性尿道括約筋不全である。尿道の過可動性は、骨盤底支持の衰弱により特徴づけられる。この衰弱のため、腹圧の増加中に膀胱頚および近位尿道の回転下降が生じる。尿道が随伴的に開くと、ＳＵＩが生じうる。内因性尿道括約筋不全は、尿道平滑筋および横紋筋支持系の機能不全を意味する。これは先天的なものであったり、あるいは手術、外傷または仙骨髄（ｓａｃｒａｌ　ｃｏｒｄ）損傷後に後天的に生じうる。女性においては、内因性尿路括約筋不全は、一般には、複数の失禁外科的処置、および低エストロゲン血症、老化またはそれらの両方に関連している。この状態においては、尿道平滑筋および括約筋は、特にストレス操作（ｓｔｒｅｓｓ　ｍａｎｅｕｖｅｒ）中には、膀胱内の尿を保持するのに十分な抵抗性を生み出すことができない。多数の患者が尿道運動過剰および内因性尿道括約筋不全の両方に罹患していると考えられる。
【０００５】
ＳＵＩを治療するための現在の方法は理学療法および手術を含む。医薬物質での治療は、フェニルプロパノールアミンおよびミドドリンのような非選択的アドレナリン作動性アゴニストの使用に限定される。ＳＵＩの治療のためのアドレナリン作動性アゴニストの使用の原理は、尿道の平滑筋への豊富なノルアドレナリン作動性入力を示す生理学的データに基づく。ラット、ネコおよびイヌにおける研究は、尿道への交感神経アドレナリン作動性入力が、尿貯蔵を促進するよう膀胱充満中に持続的に活性であること、および交感神経経路の外科的または薬理学的遮断が尿道抵抗性を減少させうることを示している。
【０００６】
α１Ａアドレナリン受容体は尿道の緊張に対するノルエピネフリンの作用の媒介をもたらすことが、かなりの前臨床生理学的、薬理学的および分子的証拠から示唆されている。受容体結合およびオートラジオグラフィー研究は、ヒト、ウサギおよびイヌの尿道におけるα１アドレナリン受容体の存在を示しており（Ｃｈａｐｐｌｅ　Ｃ，Ａｕｂｒｙ　Ｍ，Ｊａｍｅｓ　Ｓ，Ｇｒｅｅｎｇｒａｓｓ　Ｐ，Ｂｕｒｎｓｔｏｃｋ　Ｇ，Ｔｕｒｎｅｒ−Ｗａｒｗｉｃｋ　Ｒ，Ｍｉｌｒｏｙ　ＥおよびＤａｖｅｙ　Ｍ（１９８９）．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ　ｕｓｉｎｇ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　６３：４８７−４９６；Ｔｅｓｔａ　Ｒ，Ｇｕａｒｎｉｅｒｉ　Ｌ，Ｉｂｂａ　Ｍ，Ｓｔｒａｄａ　Ｇ，Ｐｏｇｅｓｓｉ　Ｅ，Ｔａｄｄｅｉ　Ｃ，Ｓｉｍｏｎａｚｚｉ　ＩおよびＬｅｏｎａｒｄｉ　Ａ（１９９３）．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ−１　ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｔｙｐｅｓ　ｉｎ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｕｒｅｔｈｒａ　ｏｆ　ｒａｔ，ｒａｂｂｉｔ　ｄｏｇ　ａｎｄ　ｍａｎ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　２４９：３０７−３１５；Ｎｉｓｈｉ　Ｋ，Ｌａｔｉｆｐｏｕｒ　Ｊ，Ｓａｉｔｏ　Ｍ，Ｆｏｓｔｅｒ　Ｈ，Ｙｏｓｈｉｄａ　ＭおよびＷｅｉｓｓ　Ｒ（１９９８）．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　α１　ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｔｙｐｅ　ｉｎ　ｍａｌｅ　ｒａｂｂｉｔ　ｕｒｅｔｈｒａ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　１６０：１９６−２０５）、インビトロ研究は、いくつかの動物種からの単離された尿道細片をフェニレフリンが収縮させうることから、α１受容体が尿道の緊張を調節することを示している（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ　Ｍ，ＭａｃＮｅｉｌ　ＨおよびＢｒａｄｉｎｇ　Ａ（１９９３）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｎｅ　ｉｎ　ｐｉｇ　ｕｒｅｔｈｒａｌ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　１５０：２２３−２２８；Ｃｈｅｓｓ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ　Ｒ，Ａｓｔｏｎ　ＮおよびＣｏｕｌｄｗｅｌｌ　Ｃ（１９９４）．α１Ａ−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｔｙｐｅ　ｍｅｄｉａｔｅｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｕｒｅｔｈｒａ．Ｊｏｕｒｎａｌ　Ａｕｔｏｎｏｍｉｃ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　１４：３７５−３８１）。また、ヒト尿道筋の単離細片は、α１アドレナリン受容体アゴニストに応答して収縮し、これは、プラゾシンのようなα１アンタゴニストにより遮断される応答である（Ｂｒａｄｉｎｇ　Ａ，Ｆｒｙ　Ｃ，Ｍａｇｇｉ　Ｃ，Ｔａｋｅｄａ　Ｍ，Ｗａｍｍａｃｋ　Ｒ，Ｗｉｃｋｌｕｎｄ　Ｎ，Ｕｖｅｌｉｕｓ　ＢおよびＧａｂｅｌｌａ　Ｇ（１９９８）．Ｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅ：Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｉｎ：Ｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅ（Ａｂｒａｍｓ���Ｐ，Ｋｈｏｕｒｙ　ＳおよびＷｅｉｎ　Ａ編），ｐｐ．５９−１０４，Ｍｏｎａｃｏ；Ｃｈａｐｐｌｅ　１９８９）。同様に、エピネフリンの全身注射は、麻酔されたイヌにおいて尿道内圧を増加させ、これもまた、プラゾシンにより遮断される作用である（Ｓｏｍｍｅｒｓ　Ｗ，Ｆｅｌｓｅｎ　Ｄ，Ｃｈｏｕ　Ｔ，Ｍａｒｉｏｎ　Ｄ，Ｃｈｅｒｎｅｓｋｙ　ＣおよびＤａｒｒａｃｏｔｔ−Ｖａｕｇｈａｎ　Ｅ（１９８９）．Ａｎ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ　ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　ｃａｎｉｎｅ　ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　１４１：１２３０−１２３３）。
【０００７】
アドレナリン受容体は、生理学的アゴニストであるノルエピネフリンおよびエピネフリンに応答する７重らせん（ｈｅｐｔａｈｅｌｉｃａｌ）Ｇタンパク質ファミリーの受容体（ＧＰＣＲ）に属する細胞膜受容体である（Ｈａｎｃｏｃｋ　Ａ（１９９６）．α１　ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｔｙｐｅｓ：Ａ　ｓｙｎｏｐｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　３９：５４−１０７）。それらは、α１、α２およびβの３つのファミリーに分類される。αアドレナリン受容体は最初は「α１シナプス後」および「α２シナプス前」に下位分類されたが、この純粋に解剖学的な分類は後に放棄され、該クローン化受容体の薬理学および分子生物学に基づいて定義された（Ｌａｎｇｅｒ　Ｓ（１９９９）．Ｈｉｓｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　ｏｆ　α１−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　３６：２−６）。この分類を裏付けるよう、以下の６個の遺伝子が同定され配列決定されている：α１ａ、α１ｂ、α１ｄ、α２ａ、α２ｂおよびα２ｃ（ＩＵＰＨＡＲにより推奨されているとおり、下付き小文字はクローン化サブタイプを示し、下付き大文字は、薬理学的に定められたサブタイプを示す）。アドレナリン受容体の分子的多様性の解明は、初期の薬理学的研究に対する分子的相関性を示している。サブタイプ特異的プローブの使用は、ヒト、イヌおよびウサギの尿道がα１Ａアドレナリン受容体のｍＲＮＡに富むことを示しており、ＲＮアーゼプロテクションアッセイは、α１ａサブタイプがヒト尿道における主要サブタイプであることを示した。
【０００８】
非選択的αアドレナリン受容体アゴニストＰＰＡおよびミドドリンでの臨床研究は、限られた臨床的有効性を示している。ＰＰＡの使用は、より高い用量で該化合物を評価する能力を損なう用量制限的副作用、特に高血圧に関する懸念により限定されている。ＰＰＡは、組織浴（ｔｉｓｓｕｅ　ｂａｔｈ）研究においてα１アドレナリン受容体に対する選択性を欠く非選択的アドレナリン作動性アゴニストである。ＥＰ　８８７，３４６、ＥＰ５３８，４６９および米国特許第５，６１０，１７４号のような幾つかの特許は、選択的α１Ａアドレナリン受容体アゴニストとして特許請求された化合物を開示している。
【０００９】
血圧を調節する血管床内のアドレナリン受容体は、主にα１Ｂサブタイプのものであると考えられている。アドレナリン作動性アンタゴニスト（例えばプラゾシンおよびテラゾシン）は、自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）において、α１ａ受容体ではなくα１ｂ受容体への結合を置換するそれらの効力と相関する効力順位で、血圧を低下させ（Ｈａｎｃｏｃｋ　１９９６）、α１ｂノックアウトマウスにおいて、フェニペフリン（ｐｈｅｎｙｐｅｐｈｒｉｎｅ）に対する高血圧応答の減弱が観察されている（Ｃａｖａｌｌｉ　Ａ，Ｌａｔｔｉｏｎ　Ａ，Ｈｕｍｍｌｅｒ　Ｅ，Ｎｏｎｎｉｇｅｒ　Ｍ，Ｐｅｄｒａｚｚｉｎｉ　Ｔ，Ａｕｂｅｒｔ　Ｊ，Ｍｉｃｈｅｌ　Ｍ，Ｙａｎｇ　Ｍ，Ｌｅｍｂｏ　Ｇ，Ｖｅｃｃｈｉｏｎｅ　Ｃ，Ｍｏｓｔａｒｄｉｎｉ　Ｍ，Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ａ，Ｂｅｅｒｍａｎ　ＦおよびＣｏｔｅｃｃｈｉａ　Ｓ（１９９７）．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　α１ｂ−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ＵＳＡ　９４：１１５８９−１１５９４）。しかし、α１Ａ受容体は脈管系内のシナプス外にも存在する可能性があり、そのような受容体は血圧の通常の調節には関与していないかもしれないが、それらが外因性α１Ａアゴニストに応答しうることを最近のデータが示唆している。これらのデータに基づけば、α１Ｂアンタゴニストの特性は、α１Ａアドレナリン作動性アゴニストの高血圧の欠点を減少させうる。
【００１０】
膀胱内のα１受容体は、主にα１Ｄサブタイプである。プラゾシンのようなアドレナリン作動性アンタゴニストは膀胱反射亢進を低下させ、膀胱容量を増加させる（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ　Ｋ　（１９９９）．α１−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｂｌａｄｄｅｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｕｒｏｌｏｇｙ　３６：９６−１０２）。これらの臨床的知見を考慮すると、α１Ｄ拮抗作用は、混合失禁を有する患者に追加的な利点をもたらしうる。
【００１１】
失禁の治療に有用な医薬が依然として必要とされている。所望のα１Ａアゴニスト、ならびにα１Ｂ、および好ましくはα１Ｄアンタゴニストプロフィールを有する化合物は、失禁の治療に有用でありうる。
【００１２】
（発明の概要）
本発明は、α１Ａアドレナリン受容体作動（アゴニスト）特性ならびにα１Ｂ、および好ましくはα１Ｄアドレナリン受容体における拮抗（アンタゴニスト）特性を有する化合物を対象に投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。
【００１３】
（図面の簡単な記載）
図１：フェニルプロパノールアミンのｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【００１４】
図２：Ａ−６１６０３のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−６１６０３の効果を示す。
【００１５】
図３：Ａ−２８６５６９のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−２８６５６９の効果を示す。
【００１６】
図４：Ａ−２８６５６９のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−２８６５６９の効果を示す。
【００１７】
（発明の詳細な記載）
本明細書中に引用されている全ての文献を、参照により本明細書に組み入れることとする。
【００１８】
本発明は、α１Ｂ、および好ましくはα１Ｄ拮抗特性を有する選択的α１Ａアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。本発明は、α１Ａアドレナリン受容体アゴニストである化合物を投与する効果を介して尿道および膀胱頚の収縮を誘導する方法を提供し、また、血管組織内に存在するα１Ｂアドレナリン受容体を遮断する、そして好ましくは膀胱内のα１Ｄアドレナリン受容体を遮断する方法を提供する。本発明の目的の１つは、尿道内圧と平均動脈圧とにおける、より良好な分離を得ることにより失禁を治療するための化合物を開発するための手段を提供することにある。好ましくは、化合物は、５以上のＩＵＰ（５ｍｍＨｇ）／ＭＡＰ（２０ｍｍＨｇ）選択性比率を有する。より好ましくは、化合物は、１０以上のＩＵＰ（５ｍｍＨｇ）／ＭＡＰ（２０ｍｍＨｇ）選択性比率を有する。
【００１９】
腹圧性尿失禁の薬理学的治療は、現在では、非選択的αアゴニストの使用または選択的α１Ａアドレナリン受容体アゴニストの使用に焦点が絞られている。これらのタイプの化合物は、現在の薬物の治療的用途を制限する平均動脈圧の増加を誘発しうる。α１Ｂ拮抗特性と共にα１Ａアドレナリン受容体作動活性を有する化合物の使用は、優れた尿道−血管選択性をもたらしうる。該α１Ｂ拮抗作用は、潜在的な高血圧副作用を軽減しうる。α１Ｂ拮抗作用を示す化合物の投与は、非選択的αアゴニストの使用に典型的には関連した血管組織の収縮を改善することにより追加的な利点をもたらしうる。所望のプロフィールを有する化合物は経口、静脈内、皮下および筋肉内手段により投与されうると理解されるべきである。
【００２０】
アゴニストおよびアンタゴニストの作用の定量的分析は、受容体の分類およびドラッグデザインの基礎である。「アゴニスト」が適合性受容体に結合すると、それはアゴニスト−受容体複合体を形成し、二次メッセンジャー事象を開始させて、受容体のタイプおよび／または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩をもたらす。受容体とのアゴニストの相互作用は、２つの量、すなわちアフィニティーおよび有効性により特徴づけられうる。これらの量は、２つの濃度反応曲線を作成し該データを４パラメーター曲線平滑化の常套手段にあてはめることにより評価されうる。該第１曲線は、後に十分なリンスに付される参照標準であり、第２曲線は、試験物質を使用して作成される。このデータから、ＥＣ５０（半最大応答）として表されるアフィニティー（効力）を求めることができる。アゴニスト効力（ｐＤ２）は、該ＥＣ５０の負のｌｏｇ１０として表されうる。該有効性は、該試験物質の最大値を該参照物質の最大値と比較することにより求められ、最大応答に対する割合（％）として表される。本開示の目的においては、フェニレフリンと比較して２５％未満の作動性を示すアゴニストはアゴニストとはみなされない。
【００２１】
一方、「アンタゴニスト」は、アゴニストが受容体に結合するのをブロックし、したがって、受容体のタイプおよび／または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩を招く細胞内応答を妨げる。受容体とのアンタゴニストの相互作用は、アフィニティー定数ｐＡ２により特徴づけられうる。該アフィニティー単位ｐＡ２は、該参照アゴニストの効果を５０％減少させるアンタゴニスト薬のモル濃度の底１０の負の対数として定義されうる。競合的アンタゴニストが有する３つの分析基準が満たされるべきである。該アンタゴニストの効果に打ち勝つのに要するアゴニスト濃度の僅かな増加は、該アゴニスト濃度には無関係であるべきである。第２に、該アンタゴニストのアフィニティーは濃度に無関係であるべきであり、したがって、シルドプロットは傾き１を有するべきである。第３に、該アンタゴニストのアフィニティーは、使用するアゴニストには無関係であるべきである。シルドプロットにおいて傾き１を示す物質は、その特定の受容体サブタイプの競合的アンタゴニストとみなされ、一方、傾き１とは異なる傾きを示す物質は非競合的アンタゴニストとみなされる（Ｓｃｈｉｌｄ，Ｈ．Ｏ．（１９４７）．ｐＡ，Ａ　ｎｅｗ　ｓｃａｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２，１８９−２０６）。本開示の目的においては、アンタゴニストは、それがフェニレフリン作動作用の２５％未満の遮断を示す場合には、アンタゴニストとはみなされない。
【００２２】
生物学的アッセイ
ウサギ尿道α１Ａサブタイプ：
雌ニュージーランドホワイトウサギ（１．７５〜３．５ｋｇ）をペントバルビタール溶液（０．５ｍｌ／ｋｇ）Ｓｏｍｌｅｔｈａｌ（登録商標）（Ｊ．Ａ．Ｗｅｂｓｔｅｒ　Ｉｎｃ．，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ　ＭＡ）のＩ．Ｐ．注射により屠殺した。該尿道を膀胱と共に摘出し、直ちに、１２０　ＮａＣｌ、１８．０　ＮａＨＣＯ３、１１．０　デキストロース，４．７　ＫＣｌ、２．５　ＣａＣｌ２、１．５　ＭｇＳＯ４、１．２　ＫＨ２ＰＯ４のｍＭ濃度のクレブス・リンガー（Ｋｒｅｂｓ　Ｒｉｎｇｅｒ）炭酸水素塩溶液中に配置し、５％　ＣＯ２：９５％　Ｏ２で平衡化した。ＮａＨＣＯ３の飽和溶液で滴定することにより、該ｐＨを２５℃で７．２に調節した。該ｐＨは３７℃で７．４に増加した。βアドレナリン受容体を遮断するためのアッセイの全てには、プロプラノロール（０．００４ｍＭ）を含めた。該尿道を膀胱から分離し、幅約３〜４ｍｍの４つの組織輪に切断した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方の末端を１．０ｇの張力の基礎前負荷でＧｒａｓｓ　ＦＴ０３変換器に固定した。組織を１０分ごとに合計４５〜６０分間にわたりリンスした。該尿道を８０ｍＭ　ＫＣｌで刺激し、基礎張力にまでリンスし、再び１０μＭ　フェニレフリン（ＰＥ）で刺激した。更に６０分間の平衡化時間の後、ＰＥを参照アゴニストとして使用して、各組織に関して参照濃度応答曲線を作成した。累積濃度プロトコールを用いた。ついで、７５分間の洗浄時間の後、試験物質を使用して、第２の応答曲線を同様に作成した。５０％の応答を引き起こすのに必要な物質の量（ＥＤ５０）を、「Ａｌｌｆｉｔ」（ＤｅＬｅａｎ，Ａ．，Ｍｕｎｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．，Ｒｏｄｂａｒｄ，Ｄ．（１９８０）．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆａｍｉｌｉｅｓ　ｏｆ　ｓｉｇｍｏｉｄａｌ　ｃｕｒｖｅｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｂｉｏａｓｓａｙ，ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ　ａｓｓａｙ，ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｃｕｒｖｅｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３５，Ｅ９７−１０２）と同様の４パラメーター曲線あてはめプログラムである「ＡＧＡＮＴＧ」（Ｚｉｅｌｉｎｓｋｉ，Ｐ．Ｊ．，Ｂｕｃｋｎｅｒ，Ｓ．Ａ．（１９９８）．ＡＧＡＮＴＧ：Ａ　Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ　Ｅｘｃｅｌ　５．０−ｖｉｓｕａｌ　ｂａｓｉｃ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｄａｔａ．Ａｎａｌｙｓｔ．１２３，１６６１−１６６８）を使用して計算した。アゴニスト効力をＰＥに対して指標化（ｉｎｄｅｘｅｄ）し、負の対数（ｐＤ２）として表した。各組織を、ただ１つの試験アゴニストに関して使用した。アンタゴニストについては、第２のＰＥ曲線にとりかかる前に、該試験物質を３０分間の暴露時間に付した。ｐＡ２として表される効力を、Ａｒｕｎｌａｋｓｈａｎａ，Ｏ．，Ｓｃｈｉｌｄ，Ｈ．Ｏ．（１９５９）（Ｓｏｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｕｓｅｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４，４８−５８）の方法に従い計算した。個々の組織を、だた１つの濃度の該試験アンタゴニストにさらした。最小二乗回帰（Ｓｎｅｄｅｃ��ｒ，Ｇ．Ｗ．，Ｃｏｃｈｒａｎ，Ｗ．Ｇ．，（１９８０）．Ｉｎ　Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ，第７版，Ｉｏｗａ　Ｓｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ａｍｅｓ，Ｉｏｗａ）を用いて、シルドプロットの回帰直線を分析した。
【００２３】
ラット脾臓α１Ｂサブタイプ
雄Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙラット（１５０〜２００ｇ）をＣＯ２で鎮静化し、断頭した。全脾臓を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該脾臓を縦方向にラット１匹当たり２つの調製物に分割した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を１．０ｇの基礎前負荷でＧｒａｓｓ　ＦＴ０３変換器に固定した（Ａｂｏｕｄ　Ｒ，Ｓｈａｆｌｉ　ＭおよびＤｏｃｈｅｒｔｙ　ＪＲ（１９９３）．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａ−１−ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ａｏｒｔａ，ｖａｓ　ｄｅｆｅｒｅｎｓ，ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ．Ｂｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　１０９：８０−８７）。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【００２４】
ラット大動脈α１Ｄサブタイプ
雄Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙラット（３５０〜４５０ｇ）をＣＯ２で鎮静化し、断頭した。全胸大動脈を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該大動脈から外組織を除去し、内腔に長さ１００ｍｍのＰＥ−１６０管を通すことにより内皮を除去した。大動脈を３〜４ｍｍの輪に切断し、３７℃で１０ｍｌの単離組織浴中にマウントした。各ラットからの大動脈は８個の組織輪を与えることが可能であった。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を１．０ｇの基礎前負荷でＧｒａｓｓ　ＦＴ０３変換器に固定した。該ＰＥ刺激工程の終わりに行ったアセチルコリン誘発性（１０μＭ）弛緩の喪失により、機能的内皮の不存在を確認した。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【００２５】
【化１】
2004507447.tif 000002
【００２６】
放射性リガンド結合Ｋｉ（ｎＭ）
Ｋｎｅｐｐｅｒら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ（１９９５），２７４，９７−１０３に記載されているとおりに放射性リガンドとして［３Ｈ］プラゾシンを使用するα１Ａ（ラット顎下腺）、α１ｂ（マウス繊維芽細胞内で発現されたハムスター受容体）およびα１ｄ（マウス繊維芽細胞内で発現されたラット受容体）に特異的な放射性リガンドアッセイにおいて、化合物（ＰＰＡ，Ａ−６１６０３，Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９）を評価した。結果を表１に示す。ＰＰＡが弱いアドレナリン作動性リガンドであり、一方、残りの化合物はα１Ａサブタイプへの強力な結合を示し、いくつかはα１ｂおよびα１ｄサブタイプへの強力な結合を示すことが、放射性リガンド結合研究から示されている。
【００２７】
【表１】
2004507447.tif 000003
【００２８】
アゴニストとしてのアドレナリン作動性化合物の評価
アドレナリン作動性アゴニストとしての該リガンドの機能的活性を、α１Ａ、α１Ｂおよびα１Ｄサブタイプを示す３つの組織浴調製物（表２）において評価した。ＰＰＡは全てのアドレナリン作動性サブタイプにおける弱いアゴニストである。Ａ−６１６０３はそれらの３つのサブタイプにおけるアゴニストであり、それはα１Ａサブタイプにおける強力なアゴニストであり（ｐＤ２＝８．０）、α１Ｂおよびα１Ｄサブタイプに対して選択性を示す（３０倍以上）。Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９はα１Ａサブタイプにおけるアゴニストであるが（それぞれｐＤ２＝６．２および５．６）、それらはα１Ｂおよびα１Ｄサブタイプにおいては不活性である（１５％未満の活性を示す）。該化合物の有効性を、フェニレフリン（１００％）収縮に対する割合（％）として比較する。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
アンタゴニストとしてのＡ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９の評価
これらの化合物の幾つかはα１Ｂおよびα１Ｄサブタイプにおける結合を示しているが、該結合は機能的拮抗としては反映されなかった。したがって、これらの組織調製物に関して、Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９をアンタゴニストとして試験した（表３）。研究は、α１Ｂおよびα１Ｄアドレナリン作動性受容体サブタイプに対する有効性を測定する組織浴アッセイにおいて行った。もう一度、収縮曲線を作成するためにフェニレフリンを使用し、収縮が試験化合物で遮断されるか否かを調べるためにそれを該試験化合物と比較した。傾き及び回帰分析に基づき、Ａ−２８６６６６はα１Ｂおよびα１Ｄサブタイプにおける競合的アンタゴニストであることが確認された（ｐＡ２＝それぞれ５．８および６．５）。Ａ−２８６５６９はα１Ｂ受容体およびα１Ｄ受容体サブタイプにおいて非競合的アンタゴニストとして挙動することが、シルドプロット分析により示される（回帰相関性に乏しいため）。
【００３１】
【表３】
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【００３２】
ＩＵＰ／ＭＡＰの評価
イヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ−ＭＡＰ試験）：
２歳を超える体重１２〜１５ｋｇの雌Ｂｅａｇｌｅイヌ（Ｍａｒｃｈａｌｌ　Ｆａｒｍｓ，Ｎｏｒｔｈ　Ｒｏｓｅ，ＮＹ）をこれらの研究で使用した。いずれかのアゴニストを投与する少なくとも２週間前に、遠隔計測変換器／送信機（ＴＡ１１ＰＡ−Ｃ４０，Ｄａｔａ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）をイヌの頚動脈内に移植することにより、動脈圧の長時間測定のための測定器具をイヌに取り付けた。
【００３３】
試験当日に、前日の午後から絶食させたイヌをチオペンタールナトリウム　１５ｇ／ｋｇ　ｉ．ｖ．（Ｐｅｎｔｏｔｈａｌ（商標），Ａｂｂｏｔｔ）で予め麻酔し、挿管した。該イヌを、Ｎａｒｋｏｍｅｄ　Ｓｔａｎｄａｒｄ麻酔系（Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄｒａｇｅｒ，Ｔｅｌｆｏｒｄ，ＰＡ）により送達されるイソフルラン（２．５〜３容量％）と酸素との混合物で自発呼吸させることにより、麻酔を維持した。アゴニストの投与のために、Ａｂｂｏｃａｔｈ−Ｔ（商標）ｉ．ｖ．カテーテル（１８−Ｇ，Ａｂｂｏｔｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ　Ｐａｒｋ，ＩＩ）を橈側皮静脈内に挿入した。遠隔計測受信機（ＲＡ１３１０，ＤａｔａＳｃｉｅｎｃｅｓ）を各イヌの頭部下に配置し、平均動脈血圧値（ＭＡＰ）を測定するために電子的にフィルター化された動脈血圧の連続的校正記録を可能にするコンピューター化データ収集システム（Ｍｏｄｕｌａｒ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　Ｉｎｃ．（ＭＩ２），Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）にインターフェースさせた。
【００３４】
既に記載されているバルーンカテーテル技術（Ｂｒｕｎｅら，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　３４：２６７−２７５，１９９５）を用いて、尿道内圧をモニターした。簡単に説明すると、７　Ｆｒカテーテルバルーンカテーテル（４１２２４−０１，Ａｂｂｏｔｔ）を尿道口内に挿入し、その先端が十分に膀胱内に入るまで約１５ｃｍ進入させた。ついで該バルーンを１ｍｌの室内空気で膨張させ、該カテーテルを、抵抗性（膀胱頚に対応する）が明らかとなるまでゆっくり引き出した。ついで該バルーンをしぼませ、該カテーテルを更に２ｃｍ引き出した。ついで該バルーンを再膨張させ、そのカテーテル口を、尿道内圧（ＩＵＰ）の測定のために、コンピューター化データ収集システム（Ｍｏｄｕｌａｒ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）にインターフェースされたＧｏｕｌｄ　Ｓｔａｔｈａｍ　Ｐ２３Ｄｄ圧力変換器に接続した。試験アゴニストのｉｖ用量の増加に対するＭＡＰおよびＩＵＰ昇圧応答が同時に得られた。次の用量を投与する前に、各用量の昇圧効果をベースラインに戻した。ＰＰＡに関しては、８匹のイヌ（ｎ＝８）を使用し、Ａ−６１６０３、Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９に関しては、４匹のイヌを各アゴニストに関して使用した（ｎ＝４）。
【００３５】
血圧の生理学的に有意な増加（２０ｍｍｇＨｇ）を惹起するのに要する用量に対する、ＩＵＰの有意かつ臨床的に意義のある変化（５ｍｍＨｇ）を惹起するのに要する用量を算出する。臨床研究は、尿道圧の５ｍｍｇＨｇの増加後のＳＵＩ患者の失禁エピソードにおける有意な減少を示している（Ｃｏｌｌｓｔｅ　ＬおよびＬｉｎｄｓｋｏｇ　Ｍ（１９８７）．Ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｌａｍｉｎｅ　ｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｆｅｍａｌｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅ．Ｕｒｏｌｏｇｙ　３０：３９８−４０３；Ｗｅｉｎ　Ａ（１９９５）．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅ．Ｕｒｏｌｏｇｉｃ　Ｃｌｉｎｉｃｓ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａ　２２：５５７−５７７）。
【００３６】
インビボにおけるアドレナリン作動性物質の評価
ＰＰＡおよびＡ−６１６０３に対して改善されたインビボ尿道選択性を有する化合物の具体例として、Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９が挙げられる。各アゴニスト用量のＩＵＰおよびＭＡＰ昇圧効果を、投与前のベースラインレベルを超える各昇圧における最大正味変化として表した。ついで、ＩＵＰの５ｍｍＨｇの増加を得るのに要する有効用量（ＩＵＰ　ＥＤ５ｍｍＨｇ）およびＭＡＰの２０ｍｍＨｇの増加を得るのに要する有効用量（ＭＡＰ　ＥＤ２０ｍｍＨｇ）を、各イヌに関する用量応答データから推定した。各イヌにおける各アゴニストの尿道対血管の相対選択性を、これらのそれぞれの効力指数の比率（ＭＡＰ　ＥＤ２０ｍｍＨｇ／ＩＵＰ　ＥＤ５ｍｍＨｇ）を用いて推定した。
【００３７】
ＰＰＡ、Ａ−６１６０３、Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９は、尿道内圧および平均動脈圧の両方における用量依存的増加を引き起こした（図１〜４）。しかし、これらの４つの化合物の尿道選択性においては、顕著な相違が認められた。ＰＰＡおよびＡ−６１６０３は、血管床に対する尿道選択性を何ら示さなかった（それぞれ０．４および１．７）。Ａ−２８６６６６およびＡ−２８６５６９は、３倍以上の選択性比率を示したため、該インビボモデルにおいて最も選択的な化合物であった（表４）。該選択性比率は各イヌに関して計算し、ついで平均した。これは、尿道平滑筋収縮を増加させる一方で血管組織収縮により引き起こされる高血圧を避けるためにはα１Ａアドレナリン受容体アゴニストおよびα１Ｂアンタゴニスト作用が体内に必要であることを示した。また、α１Ｄアンタゴニストは膀胱内で拮抗作用をもたらしうる。
【００３８】
データは平均（±Ｓ．Ｅ．Ｍ）で表されており、すべての用量はｎｍｏｌ／ｋｇ，ｉ．ｖ．単位である。
【００３９】
【表４】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
フェニルプロパノールアミンのｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【図２】
Ａ−６１６０３のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−６１６０３の効果を示す。
【図３】
Ａ−２８６５６９のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−２８６５６９の効果を示す。
【図４】
Ａ−２８６５６９のｉ．ｖ．投与後のイヌにおける尿道内圧（ＩＵＰ）および平均動脈圧（ＭＡＰ）に対するＡ−２８６５６９の効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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