(57)【要約】式Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ、または式Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ｛式中、Ａは固相および液相有機化学で適用される標準的な物質に由来する、固相支持体の残基であり、Ｂは式ＩＩの化合物または式ＩＩＩの化合物を開裂させてそれぞれＤ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ、またはＤ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ断片を遊離する基を有するリンカー残基であり、ＤおよびＤ’は互いに独立に結合またはスペーサー残基であり、Ｅはコンビナトリアル・ケミストリーによって生成された検討分子の残基であり、かつ、Ｘは蛍光色素の残基である。｝の化合物であって、少なくとも１つのタグ残基によってタグ付けされることを特徴とする、式Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ、または式Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘの化合物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ　　　　　　　　　　　　　　 ＩＩ
の化合物、または式
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　 ＩＩＩ
の化合物
｛式中、
Ａは固相および液相有機化学で適用される標準的な物質に由来する、固相支持体の残基であり、
Ｂは式ＩＩの化合物または式ＩＩＩの化合物を開裂させてそれぞれＤ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ、またはＤ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ断片を遊離する基を有するリンカー残基であり、
ＤおよびＤ’は互いに独立に結合またはスペーサー残基であり、
Ｅはコンビナトリアル・ケミストリーによって生成された検討分子の残基であり、かつ、　Ｘは蛍光色素の残基である。｝
であって、少なくとも１つのタグ残基によってタグ付けされることを特徴とする、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物。
【請求項２】
式
Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＩＶ、または
Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖ、または
Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＶＩ
｛式中、ＥおよびＸは請求項１に記載の通りであり、ＤおよびＤ’は互いに独立にスペーサーの残基であるか、または結合であるか、または存在しない。｝
の化合物であって、少なくとも１つのタグ残基によってタグ付けされることを特徴とする、式ＩＶまたは式Ｖまたは式ＶＩの化合物。
【請求項３】
式Ｉ
｛式中、
Ｒ１およびＲ２の一方、ならびにＲ３およびＲ４の一方が水素であり、もう一方のＲ１またはＲ２、およびＲ３またはＲ４が互いに独立に
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、−ＣＦ３、非置換アルコキシおよび
アリール、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａＨ
により置換されたアルコキシ、非置換アルキルまたは
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ
により置換されたアルキルであり；
Ｒ５およびＲ６が水素であるか、あるいはＲ５およびＲ６の一方が水素であって、他方が水素、ハロゲン、非置換アルコキシまたは
−アリール、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２
により置換されたアルコキシ、非置換アルキルまたは
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ
により置換されたアルキルであり；
ｎ＝２〜８であり、
Ｒ７がカルボキシル保護基またはカルボキシル活性化基であり、
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子とともにヘテロシクリルを形成し（ただし、ピペラジンは除く）；
Ｒ１０およびＲ１１が互いに独立に水素またはＲｔａｇであり；
Ｒ１２がアルキル、アリール、アラルキル、非保護もしくは保護アミノまたはハロゲンであり；
Ｒｔａｇが水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキルであり（ただし、非置換メチルおよび非置換シクロプロピルメチルは除く）；
ただし、式Ｉの化合物では、
少なくとも１つのＲｔａｇが存在し、
少なくとも１つのＲｔａｇが水素以外のものであり、かつ、
１つまたは２つのさらなる反応物と共有結合する能力を有する、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の意味において少なくとも１つの官能基が存在する。｝
で示される化合物。
【請求項４】
スクリーニングプロセスの解読ステップにおける、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項５】
通常用いられる光開裂性リンカー上で包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）を合成する方法であって、蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップが部分的にコード化され、少なくとも１つのタグ残基と結合した化合物セット（なおこの化合物セットは、タグ残基が種々の分子量を有する請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物からなる）を提供することを含む、方法。
【請求項６】
通常用いられる酸開裂性リンカー上で包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）を合成する方法であって、蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップが部分的にコード化され、少なくとも１つのタグ残基と共有結合した本発明の化合物セット（なおこの化合物セットは、タグ残基が種々の分子量を有する請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物からなる）を提供することを含む、方法。
【請求項７】
包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の構成ブロックを解読する方法であって、ＭＳ−スペクトログラフィーを用いて請求項１から３のいずれか１項に記載の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物におけるタグ残基を読み取ることを含む、方法。
【請求項８】
包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の１を超えるコンビナトリアルステップによって得られた構成ブロックを解読する方法であって、１を超えるコンビナトリアルステップで包括的蛍光（ＡＩＤＡ）標識化合物ライブラリーの分割−混合−分配生産を行い、ＭＳ−スペクトログラフィーを用いて請求項１から３のいずれか１項に記載の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物におけるタグ残基、例えばＲｔａｇを読み取ることを含む、方法。
【請求項９】
包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の構成ブロックを解読する方法であって、
ａ）　第一のコンビナトリアルステップをタグ残基でタグ付けし、得られると予測される各構成ブロックに対して異なるバイアル中で第一のコンビナトリアルステップを行い、
ｂ）　第一のコンビナトリアルステップで得られ異なる構成ブロックを含有するバイアルの内容物を混合し、
ｃ）　個々のバイアルの各構成ブロックについて、第二のコンビナトリアルステップの後に得られた構成ブロックがｂ）で得られる混合物中に種々の分子量を有するように第二のコンビナトリアルステップを行い、さらに所望により
ｄ）　ステップｃ）で得られたバイアルの内容物を混合し、個々のバイアルの各構成ブロックについて、第三のコンビナトリアルステップを行い、さらに所望により
ｅ）　ステップｄ）で得られた少なくとも１つのバイアル中の各構成ブロックについて第四のコンビナトリアルステップを行い、さらに
ｆ）　ＭＳ−スペクトログラフィーを用いて請求項１から３のいずれか１項に記載の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物におけるタグ残基を読み取ることを含む、方法。
【請求項１０】
包括的蛍光標識コンジュゲートリガンドの物理化学特性の改変における、請求項１から３のいずれか１項に記載のタグ残基を含む化合物の使用。
【請求項１１】
包括的蛍光標識コンジュゲートリガンドの溶解度の向上における、請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、例えば固相支持体上および均質液相での、蛍光に基づく、コード化されたコンビナトリアル化合物ライブラリーの超ハイスループットスクリーニングに有用な、また、それに続き、スクリーニングプロセスで用いる化合物のコードライブラリーに含まれる化学構造の解読に有用なタグ付け化合物およびその方法に関する。
【０００２】
コンビナトリアル・ケミストリーは現代の創薬プロセスに適用される標準的な実験技術となるまでに進展を遂げている。コンビナトリアル・ケミストリーの有力かつ公知の方法論としては以下のステップが含まれる。
（ａ） 固相支持体ビーズ上での分割−混合合成（１ビーズ １化合物）
（ｂ）コンビナトリアル化合物ライブラリーのビーズ上スクリーニングとその後の溶液中、固相支持体上で得られた結合結果の確認（ＡＩＤＡ技術として知られる）、および
（ｃ） 標的分子への結合を起こす独自の化学構造の解読。
【０００３】
コンビナトリアル・ケミストリーは病態治療用途を検討する分子を合成するための有用な手段となる。
【０００４】
包括的標識技術による固相支持体および均質液相での超ハイスループットスクリーニングプロセスを行う適当な方法は、例えばＷＯ ００／３７４８８に記載されている。この標識技術は、固相支持体への結合およびその後の化合物ライブラリーのコンビナトリアル合成の開始のための反応性化学官能価を有する、化学的に安定な蛍光団に基づくものである。ＷＯ ００／３７４８８によれば、少なくとも二官能基型の１，３−ジフェニル−１Ｈ−インダゾール蛍光団（総じてＡＩＤＡ−色素と呼ぶ）を開裂可能なリンカーを介して固相支持体へ結合させる。この蛍光団の第二の官能基はその後のライブラリー合成の開始に利用される。このように内部標識化合物ライブラリーは固相支持体または均質液相でのスクリーニングに使用できる。包括的蛍光標識ライブラリーの最も顕著な化学的特徴は、その化合物ライブラリーを構成する総ての構造が可変のスペーサーを介して蛍光色素に共有結合されるということである。これらのコンジュゲートは開裂可能なリンカーを介して固相支持体へ共有結合される。固定化コンジュゲートは固相支持体上での直接スクリーニングに使用することができる（ビーズ上スクリーニング）。これらの蛍光コンジュゲートはリンカーが開裂した後、液相に遊離する。その後、マイクロタイタープレートで用いるアッセイ量で従来の一連の平均蛍光分光光度技術を適用すれば、液相中の標的分子に対する蛍光コンジュゲートの親和性が測定できる。さらにまた、いわゆるナノキャリヤーにてマイクロタイター量で行う一回の分子分光光度技術も使用できる。このスクリーニング技術において最終的な鍵となるステップは、蛍光団色素とコンジュゲートした活性リガンドの化学構造を同定する（解読する）ことである。
【０００５】
特にＷＯ ００／３７４８８によれば、式
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ　　ＩＩ
および
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　ＩＩＩ
｛式中、
Ａは固相支持体であり、
Ｂは式ＩＩまたはＩＩＩの蛍光コンジュゲートを開裂させてそれぞれＤ−Ｘ−Ｄ’−ＥまたはＤ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ断片を遊離するリンカー残基であり、
Ｘは例えば式Ｉの化合物に由来する蛍光色素残基であり、
ＤおよびＤ’は互いに独立に結合またはスペーサー残基であり、かつ、
Ｅは検討分子、例えばコンビナトリアル・ケミストリーによってコンジュゲート内に形成される分子の残基である。｝
のコンジュゲートが提供される。
【０００６】
発明者らは今般、驚くことに、検討する、例えばまたリガンドとして設計する分子であって、例えば標的との結合が起こった後にかかるコンジュゲートの一部となる分子の解読を向上させる方法を見出した。本発明の方法は式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物を含み、この化合物はタグ付けされ、例えばタグ残基と化学的に反応し、例えばタグ残基はその化学基と結合している所定の低分子量の化学化合物に由来するものであり、このタグ残基は例えば解読にＭＳ−スペクトログラフィーを用いる場合には解読中に分割可能であって、タグ残基を断片として見出すことができる。好ましくは本発明の方法は蛍光色素、例えば、タグ残基でタグ付けされた、例えばタグ残基と反応した式Ｉの化合物を含み、例えばこのタグ残基としては、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキルなど窒素と共有結合しうることが知られている基が窒素と共有結合したものが挙げられる。従って式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩのタグ付けされた化合物は、式ＩＩまたはＩＩＩの蛍光コンジュゲートのＥに由来する分子、すなわち検討分子の解読に使用することができる。
【０００７】
本発明の１つの態様において、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物が少なくとも１つのタグ残基によってタグ付けされることを特徴とする、式
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ　　　　　　　　　　　　　　 ＩＩ
の化合物、または式
Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　 ＩＩＩ
｛式中、
Ａは固相および液相有機化学で適用される標準的な物質に由来する、固相支持体の残基であり、
Ｂは式ＩＩの化合物または式ＩＩＩの化合物を開裂させてそれぞれＤ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ、またはＤ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ断片を遊離する基を有するリンカー残基であり、
ＤおよびＤ’は互いに独立に結合またはスペーサー残基であり、
Ｅはコンビナトリアル・ケミストリーによって、例えば製造プロセスのいずれかの段階で生成された検討分子の残基であり、そして
Ｘは蛍光色素の残基である。｝
化合物であって、
例えば、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物では、Ｘは第三級アミンによってタグ付けされ、例えば式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物では、Ｘは第三級アミンと結合し、さらにタグ残基、例えばアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、およびＤ’（またはＤ’が結合であればＥ）あるいはＤ（またはＤが結合であればＥ）と結合していることを特徴とする、
化合物が提供される。
【０００８】
式ＩＩの化合物および式ＩＩＩの化合物では好ましくは、
Ａは固相支持体の残基、例えば官能基化ポリスチレン系樹脂、ポリアクリルアミド系ポリマー、ポリスチレン／ポリジメチルアクリルアミドコンポジット、ＰＥＧＡ樹脂、ポリスチレン−ポリオキシエチレン系支持体、テンタゲル、ＰＥＧ−ポリスチレングラフト重合支持体、ガラス面、官能基化面、官能基化面とグラフトした材料、ポリエチレングリコールをはじめ、Ｂと共有結合する能力を有し、例えばコンビナトリアル、ペプチドおよびオリゴヌクレオチド化学で固相支持体として有用であることが知られている固相支持体に由来するものである。
Ｂはリンカー残基、例えば酸に不安定、塩基に不安定、光に不安定、酸化還元に不安定でマスキングされたリンカー、例えばベンジル、ベンズヒドリル、ベンズヒドリリデン、トリチル、キサンテニル、ベンゾイン、珪素、またはアリル系リンカーをはじめ、ＤがスペーサーならばＡとＤ、あるいはＤが結合ならばＡとＸまたはＥと共有結合する能力を含み、コンビナトリアル、ペプチドおよびオリゴヌクレオチド化学でリンカーとして有用であることが知られている基に由来するものである。
ＤおよびＤ’は互いに独立に結合、またはコンビナトリアル、ペプチドおよびオリゴヌクレオチド化学でスペーサーとして有用であることが知られており、それぞれＢとＸまたはＥ、あるいはＥとＸと共有結合する能力を有する基に由来するスペーサーの残基であり、例えば
少なくとも１以上、例えば２個のアミノ基により、または少なくとも１個のアミノ基と少なくとも１個の水酸基により置換された、置換アルカン、シクロアルカンおよびシクロアルケン；
少なくとも１以上、例えば２個のアミノ基により、または少なくとも１個のアミノ基と少なくとも１個の水酸基により置換された、置換シクロアルキルアルカン；
少なくとも１以上、例えば２個のアミノ基により、または少なくとも１個のアミノ基と少なくとも１個の水酸基によりアルキル部分で置換された、置換アリールアルカン；
少なくとも１以上、例えば２個のアミノ基により、または少なくとも１個のアミノ基と少なくとも１個の水酸基によりアルキル部分で置換された、置換アルキル芳香族化合物；
５から６員と、所望により別の環構造とアネレート（ａｎｅｌｌａｔｅ）していてもよいＮ、またはアミノ酸から選択される少なくとも２個のヘテロ原子とを有する脂肪族複素環、
例えば、ジアミノアルカン、例えばα，ω−ジアミノアルカン；ジアミノシクロアルキル、例えばジアミノシクロヘキシル；ビス−（アミノアルキル）置換アリール、例えばビス−（アミノメチル）置換フェニル；アミノおよびヒドロキシにより置換されたアルカン、例えばα−アミノ−ω−ヒドロキシ−アルカン；アルキルアミン；環状アルキルジアミンまたはアミノ酸、例えば側鎖にさらなる官能価を含んでいないものまたは含んでいるものが挙げられ、該スペーサー残基は官能基、例えば水酸基、アミノ基を介して、Ｄ’がスペーサーである場合にはＸとＥ、また、Ｄがスペーサーである場合にはＢとＸまたはＢとＥと結合する。
Ｅは検討する、コンビナトリアル・ケミストリーによって、例えば製造プロセスのいずれかの段階で形成された分子の残基、例えば低分子量化合物に由来し、Ｄ’が結合である場合にはＤ’またはＸと、あるいはＤが結合である場合にはＤまたはＢと、また、Ｄ’が結合である場合にはＤ’またはＸと共有結合する能力を有するものであり、例えば、脂肪族、芳香族および／または複素環式化合物などの官能基を有する、例えばあらゆる種の化学官能価を有する炭水化物が含まれる。
Ｘは式
【化１】
2004513120.tif 000002
｛式中、
Ｒ１およびＲ２の一方、ならびにＲ３およびＲ４の一方が水素であり、もう一方のＲ１またはＲ２、およびＲ３またはＲ４が互いに独立に
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、−ＣＦ３、アルコキシ（例えば非置換アルコキシおよび置換アルコキシ、例えばそのアルキル部分においてアリール、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ
により置換されたものを含む）、非置換または置換アルキル、例えば好ましくは末端の炭素原子において
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ
により置換されたアルキルであり；
Ｒ５およびＲ６が水素であるか、あるいはＲ５およびＲ６の一方が水素であって、他方が水素、ハロゲン、非置換アルコキシ、置換アルコキシ、例えば
−アリール、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２
により置換されたもの、非置換アルキルまたは置換アルキル、例えば好ましくは末端の炭素原子において
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ
により置換されたものであり；
ｎ＝２〜８であり、
Ｒ７がカルボキシル保護基またはカルボキシル活性化基であり、
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子とともにヘテロシクリルを形成し（ただし、ピペラジンは除く）；
Ｒ１０およびＲ１１が互いに独立に水素またはＲｔａｇであり；
Ｒ１２がアルキル、アリール、アラルキル、非保護もしくは保護アミノまたはハロゲンであり；
Ｒｔａｇが水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキルであり（ただし、非置換メチルおよび非置換シクロプロピルメチルは除く）；
ただし、式Ｉの化合物では、
少なくとも１つのＲｔａｇが存在し、
少なくとも１つのＲｔａｇが水素以外のものであり、かつ、
１つまたは２つのさらなる反応物と共有結合する能力を有する、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の意味において少なくとも１つ、好ましくは２つの官能基が存在する。｝
で示される化合物の残基である。
【０００９】
本明細書で用いる「共有結合する能力」とは、１つまたは２ついずれかの反応相手、例えば式ＩＩおよび式ＩＩＩの化合物の残基Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｄ’およびＸが由来する反応相手などと化学反応が（容易に）可能な少なくとも１つ、好ましくは２つの官能基が存在することを意味する。
【００１０】
本明細書において特に断りのない限り、アルキルまたはアルカンは、（Ｃ１−２２）アルキルまたはアルカン、例えば（Ｃ１−８）アルキルまたはアルカン、例えば（Ｃ１−４）アルキルまたはアルカンを含む。シクロアルキル、シクロアルカンまたはシクロアルケンは、（Ｃ３−７）シクロアルキル、シクロアルカンまたはシクロアルケン、例えば（Ｃ５−６）シクロアルキル、シクロアルカンまたはシクロアルケン、例えば別の環（構造）とアネレートしたものを含む。アルコキシとしては、（Ｃ１−１８）アルコキシ（（Ｃ１−８）アルコキシなど、例えば（Ｃ１−４）アルコキシ）が挙げられる。アリールまたは芳香族化合物としては、（Ｃ５−１８）アリールまたは芳香族化合物、例えばフェニルまたはベンゼン、例えば別の環（構造）とアネレートしたものが挙げられる。カルボキシル保護基またはカルボキシル活性化基としては、適当な保護または活性化基、例えばそれぞれ分割が（容易に）可能な基、またはさらなる反応が（容易に）可能な基など、有機化学で通常の基が挙げられる。ヘテロシクリルとしては、５〜７員、好ましくは５〜６員と、例えばＮ、Ｏ、Ｓから選択される１〜４個のヘテロ原子を有し、例えば別の環（構造）とアネレートした環（構造）が挙げられる。本明細書で述べた基はいずれも置換されていなくても置換されていてもよく、例えば有機化学で通常の基、好ましくは本明細書で特に断りのない限り、化学的に不活性な基で置換されていてもよい。アミノ保護基としては、適当なアミノ保護基、例えば有機化学で通常の保護基、例えばｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、９−フルオレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、フタルイミド、トリフルオロメチルカルボニル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルなどが挙げられる。
【００１１】
式ＩＩおよび式ＩＩＩの好ましい化合物としては式ＩＩおよび式ＩＩＩ｛式中、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｄ’およびＥは上記定義の通りであり、Ｘは式Ｉ（式中、Ｒ１およびＲ２の一方は水素であって、他方は−ＣＯＮＲｔａｇ基であり、Ｒ３およびＲ４基の一方は水素であって、他方は−ＣＯＮＲｔａｇ基であり、Ｒ５およびＲ６は水素であり、かつ、Ｒｔａｇは上記定義の通りである）の化合物の残基である。｝の化合物が挙げられる。
【００１２】
もう１つの態様では本発明は、少なくとも１つのタグ残基によってタグ付けされることを特徴とする、式
Ｄ−Ｘ−Ｄ’−Ｅ　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＩＶ、または
Ｄ−Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖ、または
Ｅ−Ｄ’−Ｘ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＶＩ
｛式中、ＥおよびＸは上記定義の通りであり、ＤおよびＤ’は互いに独立にスペーサーの残基であるか、または結合であるか、または存在せず、例えばＸは式Ｉの化合物の残基である。｝
の化合物を提供する。
【００１３】
好ましくは式ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物では、残基Ｘは式Ｉ｛式中、
少なくとも１つのＲｔａｇが存在し、
少なくとも１つのＲｔａｇが水素以外のものであり、かつ、
残基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがＤ、Ｄ’またはＥのいずれかに結合している。｝
の化合物の残基である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つが−Ｎ−Ｒｔａｇ基を含む式Ｉの化合物が新規なものである。
【００１４】
もう１つの態様では本発明は、Ｒ１およびＲ２の一方、ならびにＲ３およびＲ４の一方が水素であり、もう一方のＲ１またはＲ２、およびＲ３またはＲ４が互いに独立に
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、−ＣＦ３、アルコキシ（例えば非置換アルコキシおよび置換アルコキシ、例えばそのアルキル部分においてアリール、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａＨ
により置換されたものを含む）、非置換または置換アルキル、例えば好ましくは末端の炭素原子において
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲｔａｇＨ
により置換されたアルキルであり；
Ｒ５およびＲ６が水素であるか、あるいはＲ５およびＲ６の一方が水素であって、他方が水素、ハロゲン、非置換アルコキシ、置換アルコキシ、例えば
−アリール、−ＮＯ２、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲｔａｇＣＯＲ１２
により置換されたもの、非置換アルキルまたは置換アルキル、例えば好ましくは末端の炭素原子において
−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ７、−ＣＯＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨＲｔａｇ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ、−ＣＯＮＲｔａｇ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨＲｔａｇ
により置換されたものであり；
ｎ＝２〜８であり、
Ｒ７がカルボキシル保護基またはカルボキシル活性化基であり、
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子とともにヘテロシクリルを形成し（ただし、ピペラジンは除く）；
Ｒ１０およびＲ１１が互いに独立に水素またはＲｔａｇであり；
Ｒ１２がアルキル、アリール、アラルキル、非保護もしくは保護アミノまたはハロゲンであり；
Ｒｔａｇが水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキルであり（ただし、非置換メチルおよび非置換シクロプロピルメチルは除く）；
ただし、式Ｉの化合物では、
少なくとも１つのＲｔａｇが存在し、
少なくとも１つのＲｔａｇが水素以外のものであり、かつ、
１つまたは２つのさらなる反応物と共有結合する能力を有する、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の意味において少なくとも１つ、好ましくは２つの官能基が存在する、式Ｉの化合物を提供する。
【００１５】
好ましくはＲｔａｇとしては、非置換アルキル（ただしメチルは除く）、例えば（Ｃ２−２２）アルキル（（Ｃ２−６）アルキルなど、例えば３，３−ジメチルブチル）、および
シクロアルキル、例えば（Ｃ３−７）シクロアルキル（シクロヘキシルメチルなど、ただし２−シクロプロピルエチルは除く）、
アリール、例えばフェニル（４−メチルフェニルメチルフェニル、４−クロロフェニルメチル、４−ブロモフェニルメチル、４−トリフルオロメチルフェニルメチル、４−メトキシフェニルメチル、２−（２−クロロフェニル）エチル、２−（３，４−ジメトキシフェニル）メチル、３−フルオロフェニルメチル、２−（４−メトキシフェニル）エチル、３−フェニルプロピルなど）を含む、
アルコキシ、例えば（Ｃ１−４）アルコキシ（２−メトキシエチル、２−エトキシエチル、２−プロポキシエチル、２−イソプロポキシエチル、３−メトキシプロピル、３−エトキシプロピル、３−プロポキシプロピル、３−イソプロポキシプロピル、３−ブトキシプロピル、３−イソブトキシプロピル、３−（２−エチル−ヘキソキシ）プロピル、３−ヘキソキシプロピル、４−ヘキソキシブチルなど）を含む、
アルコキシアルコキシ（２−［２−（メトキシ）エトキシ］エチル、２−［２−（ドデシルオキシ）エトキシ］エチル、３−［２−（メトキシ）エトキシ］プロピル、３−［２−（エトキシ）エトキシ］プロピルなど）、
アルコキシアルコキシアルコキシ（ヘキソキシエトキシエトキシエチルなど）、
ヒドロキシアルコキシ（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチルなど）、
アミノアルコキシ、アミノアルコキシアルコキシ、アミノアルコキシアルコキシアルコキシ、例えばそのアミン基が保護されていないもの、または保護されているもの、（２−アミノエトキシメチル、２−（２−アミノエトキシ）エチル、３−（２−アミノエトキシ）プロピル、２−（２−Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノエトキシ）エチル、３−（２−ジメチルアミノエトキシ）プロピル、２−（２−アミノエトキシ）エトキシエチル、３−（３−アミノプロポキシブトキシプロピル、３−（３−アミノプロポキシ）エトキシ−エトキシプロピルなど）、
アリールアルコキシ、例えばベンジルオキシ、
アリールオキシ、例えばフェニルオキシ（４−メトキシフェニルオキシメチル、３，４−ジメトキシフェニルオキシメチル、３，４，５−トリメトキシフェニルオキシメチル、２−フェニルオキシエチル、２−（４−メトキシフェニルオキシ）エチル、２−（３，４−ジメトキシフェニルオキシ）エチル、２−（２−メトキシフェニルオキシ）エチル、２−（４−メトキシフェニルオキシ）エチル、２−クロロフェニルオキシメチル、２−（３，４，５−トリメトキシフェニルオキシ）エチル、２−（２−クロロフェニルオキシ）エチル、２−（３−トリフルオロフェニルオキシ）エチル、２−（４−トリフルオロフェニルオキシ）エチル、３−（４−アセトキシアミノフェニルオキシ）プロピル、４−フェニルブチルなど）を含む、
ヘテロシクリルオキシ、例えば（４−アミノ−フラザン−５−イル）オキシを含む、
ヘテロシクリル、例えば４−ピリジルメチル、２−（２−チエニル）エチル、２−モルホリノエチル、３−（２−オキソピロリジン−１−イル）−プロピルを含む、
アミノ、例えば非保護アミノおよび保護アミノ（２−アミノエチル、３−アミノプロピル、２−Ｎ−アセトキシカルボニル−アミノエチル、２−（４−メトキシフェニル）カルボニルアミノエチル、３−Ｎ−アセトキシカルボニル−アミノプロピルなど）、
シクロアルキル、例えば（Ｃ３−７）シクロアルキル（シクロペンチルなど）
により置換されたアルキルが挙げられる。
【００１６】
例えば式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩの化合物を含む、本発明によって提供される化合物を以後、本発明の化合物と呼ぶ。本発明の化合物は化学コンビナトリアルスクリーニング法における解読ステップに有用である。本発明のこの解読ステップはＲｔａｇ基により置換されている、すなわち部分的にコード化されている本発明の化合物中に窒素原子が存在することにより容易となる。
【００１７】
もう１つの態様では本発明は、スクリーニングプロセスの解読ステップでの本発明の化合物の使用を提供する。
【００１８】
本発明の化合物は適宜、例えば常法に従い、あるいは本明細書に記載のようにして製造することができる。
【００１９】
もう１つの態様では本発明は、通常用いられる光開裂性リンカー上で包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）を合成する方法であって、蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップが部分的にコード化され、少なくとも１つのタグ残基、例えばＲｔａｇと結合した化合物セットを提供し、例えばさらにスキーム１に従って反応させることを含み、その化合物セットが本発明の化合物からなり、そのタグ残基、例えばＲｔａｇが種々の分子量を有する方法を提供する。
【００２０】
光開裂性リンカーはまたフォトリンカーとしても知られる。本発明のこの方法は例えば以下の反応スキーム１に従って行うことができる。
【化２】
2004513120.tif 000003
【００２１】
固相支持体Ａ（例えば樹脂ビーズ）に固定された光に不安定な４−ブロモメチル−３−ニトロ−安息香酸リンカー上での蛍光標識ＡＩＤＡ−ライブラリーの合成は、例えば、式ＨＮＲｔａｇの第一級アミンによる臭化ベンジルの求核置換（ステップａ））によって始め、その後、例えばＷＯ ００／３７４８８から公知の、例えばＦｍｏｃ保護ＡＩＤＡ−色素とのカップリング（ステップｂ））、さらには検討化合物とのリガンド反応（ステップｃ））および光による開裂（ステップｄ））を行えばよい。蛍光団とコンジュゲートしたライブラリー化合物はアミドとして液相に遊離する。ＡＩＤＡ分子の１−フェニル置換基の４位のアミド官能基は、蛍光団（ＡＩＤＡ）自体についてもそうではないが、合成されたライブラリー化合物の一体部分としては見られない。アミド官能基とリガンドの結合点との距離は＞２０オングストロームである。その結果、ＡＩＤＡ−コンジュゲートの末端アミド官能基は合成されたライブラリー化合物がとるコンホメーションにほとんど影響を及ぼさない可変エレメントである。
【００２２】
ステップａ）〜ｄ）は適宜な方法、例えば常法に従って行うことができる。蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップが用いた特定のＲｔａｇによってコードされた化合物セットが得られる。
【００２３】
もう１つの態様では本発明は、通常用いられる酸開裂性リンカー上で包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）を合成する方法であって、蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップが部分的にコード化され、少なくとも１つのタグ残基、例えばＲｔａｇと共有結合した本発明の化合物セットを提供することを含み、その化合物セットが請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物からなり、そのタグ残基、例えばＲｔａｇが種々の分子量を有する方法を提供する。
【００２４】
通常用いられる強酸開裂性リンカーは例えばＲｉｎｋリンカーとして知られている。本発明のこの方法は例えば常法に従い、または例えば以下のようにして行うことができる。
【００２５】
酸不安定Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ （ＲＡＭ）リンカー上の蛍光標識ライブラリーの第一のコンビナトリアルステップの（部分）コード化は対応するフォトリンカープロセスとは異なるプロセスに従う。ＲＡＭ−リンカーの第一級アミンの、タグ付き第二級アミンへの直接的変換には例えば式Ｒｔａｇ−ＣＨＯのタグ付きアルデヒドのセット（なお、このセットでは蛍光団の結合前の異なるアルデヒドの分子量が異なる）での還元的アルキル化ステップが要される（例えば、Ｂｒｏｗｎ， Ｅ．， Ｇ． ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ （１９９７）， ３８（４９）， ｐ． ８４５７−８４６０参照）（ステップ ａ））。用いうる種々のステップは脱保護したＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂をブロモ酢酸と反応させた後、式Ｒｔａｇ−ＮＨ２のタグ付き第一級アミンのセット（なお、このセットでは異なるアミンの分子量が異なる）での求核置換を行うことを含む（ステップａ１）およびステップａ２））。ここで得られた第二級アミンを蛍光団試薬Ｆｍｏｃ−ＡＩＤＡ−ＯＨと結合させる（ステップｂ）。第一のコンビナトリアルステップ（リガンド反応−ステップｄ））はＦｍｏｃ−ＡＩＤＡの脱保護の後に始める（ステップｃ）。酸、例えばトリフルオロ酢酸などの強酸によるリンカーの酸開裂（ステップｅ））によって、以下のスキーム２に示されるように蛍光団コンジュゲートリガンドのアミドまたはＮ−（カルバモイルメチル）置換アミドを生じる。
【００２６】
ステップａ）、ａ１）、ａ２）、ｂ）、ｃ）およびｄ）に記載の反応はそれ自体公知であり、例えば常法に従って行えばよい。
【化３】
2004513120.tif 000004
【００２７】
もう１つの態様では本発明は、ＭＳ−スペクトログラフィーの使用により、本発明の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物においてタグ残基、例えばＲｔａｇを読み取ることを含んでなる、包括的標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の構成ブロックの解読方法を提供する。
【００２８】
包括的標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の第一のコンビナトリアルステップの解読のためのタグの読み取りは例えば以下のスキーム３（リガンドは式ＩＶ、ＶまたはＶＩのＥ）に示されているものなどの、例えば開裂した蛍光団コンジュゲートリガンド分子のＬＣ／ＭＳを用いて行うことができる。この質量スペクトルにはかかるコンジュゲートの分子量に関する情報が含まれる（ＭＳはＥＳＩ＋： ［ＭＨ］＋で示す）。蛍光団コンジュゲートリガンドの分子量に関する知見は、小分子ライブラリーでは化合物のいくつかが同時に同じ公称質量を有することがあるので、構造の解読に十分でない場合が多い。このような場合、蛍光団の構造に関する必要な情報は用いたＲｔａｇの分子量を示す質量分析計のフラグメント化された分子イオン（［ＭＨ］＋）から得られる。これらのコンジュゲートはイオン化後のフラグメンテーションの好ましい開始点であるアミド結合を含む。かかる一組のフラグメントイオンはＡＩＤＡ−蛍光団上のタグに関する十分な情報を持つ。望まれる情報はタグ付き蛍光団コンジュゲートの質量スペクトルでは数倍分かりやすくなり、例えばＡＩＤＡ−蛍光団のフラグメント例が以下のスキーム３に示されている。ＭＳ／ＭＳ（ＣＤＩ：衝突誘起解離）を、例えばスキーム３に示されているように、それらの分子イオン［ＭＨ］＋によりフラグメントイオンの確認に用いる。
【化４】
2004513120.tif 000005
【化５】
2004513120.tif 000006
【００２９】
もう１つの態様では本発明は、包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の１を超えるコンビナトリアルステップによって得られた構成ブロックを解読する方法であって、１を超える、例えば４までのコンビナトリアルステップで包括的蛍光（ＡＩＤＡ）標識化合物ライブラリーの分割−混合−分配生産を行い、ＭＳ−スペクトログラフィーを用いて本発明に記載の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物におけるタグ残基、例えばＲｔａｇを読み取ることを含む方法を提供する。
【００３０】
１回めのコンビナトリアルステップの部分的コード化は小さなＡＩＤＡ標識ライブラリーの作製に有用であるだけではない。本発明のタグ残基による蛍光団によるタグ付けは、例えばコンビナトリアル・ケミストリーの公知のデコンヴォルーション戦略と組み合わせると、より大きなライブラリーの解読の有効な手段ともなる。この態様は以下のスキーム４に例示されているように、４段階のコンビナトリアルステップで合成されたライブラリー（例えば、ビーズ上）の分割・混合・分配で概略が示される。３回の連続したコンビナトリアルステップ（Ｒ１ｘＲ２ｘＲ３）はマザーライブラリーを実際に作り出し、これは４回目のコンビナトリアルステップで作り出されるドーターライブラリー（Ｒ１ｘＲ２ｘＲ３ｘＲ４）のソースとなる。また、例えば多様性の付加を目的とした官能基の変換を達成するために非コンビナトリアルステップも行える。
【００３１】
２回目のコンビナトリアルステップ（Ｒ２）で得られる構成ブロックは、種々の分子量を有する反応物を用いることで、得られる構成ブロックが種々の分子量を有するように選択される。得られた３回目のコンビナトリアルステップ（Ｒ３）のタグ付きＡＩＤＡコンジュゲート構成ブロックは個別のバイアル（混合していない）で維持されることから、Ｒ３は解読する必要がない。３回目のコンビナトリアルステップで用いる構成ブロックの数は全ライブラリーのサブライブラリーの数を規定しうる。３回目のコンビナトリアルステップで得られたライブラリーはアリコートセットに分配するが、このアリコート数は４回目のコンビナトリアルステップ（Ｒ４）（ライブラリー由来のライブラリーステップ）で用いようとする構成ブロックの数により規定されうる。Ｒ４は個別に維持されるマザーライブラリーに対して等しい構造のドーターライブラリーを作り出すことから、Ｒ４は解読する必要がない。マザーライブラリーとそれから得られる全てのドーターライブラリーは同数のサブライブラリーを含み、各サブライブラリーは同数の化合物を含むと考えられる。最初の反応ステップをタグ付けし、Ｒ２で同重体がなく、Ｒ３でサブライブラリーを個別に維持し、続いてＲ４で分配すると、最後のコンビナトリアルステップの後に得られるライブラリーに含まれる全ての構造が、例えば単一のビーズから開裂された物質から得られた質量スペクトルデータに存在する分子イオン（［ＭＨ］＋）およびタグ情報（［ＭＨ］＋から導き出されたフラグメントイオンとして、例えば上記スキーム３参照）によって同時に同じ分子量を有する場合であっても、その構造の解読が可能となる。
【００３２】
もう１つの態様では本発明は、包括的蛍光標識ライブラリー（ＡＩＤＡ−ライブラリー）の構成ブロックを解読する方法であって、
ａ）　第一のコンビナトリアルステップをタグ残基、例えばＲｔａｇ、例えばビーズ上でタグ付けし、得られると予測される各構成ブロックに対して異なるバイアル中で第一のコンビナトリアルステップを行い、
ｂ）　第一のコンビナトリアルステップで得られ、異なる構成ブロックを含有するバイアルの内容物を混合し、
ｃ）　個々のバイアルの各構成ブロックについて、例えば種々の分子量を有する反応物を選択して使用することで、第二のコンビナトリアルステップの後に得られた構成ブロックがｂ）で得られる混合物中に種々の分子量を有するように第二のコンビナトリアルステップを行い、さらに所望により
ｄ）　ステップｃ）で得られたバイアルの内容物を混合し、個々のバイアルの各構成ブロックについて、第三のコンビナトリアルステップを行い、さらに所望により
ｅ）　ステップｄ）で得られた少なくとも１つ、好ましくは各々のバイアル中の各構成ブロックについて第四のコンビナトリアルステップを行い、さらに
ｆ）　ＭＳ−スペクトログラフィー、例えばＭＳ／ＭＳ（生得誘起解離＝ＣＩＤ）を用いて本発明の式Ｉ、ＩＶ、ＶまたはＶＩの化合物におけるタグ残基、例えばＲｔａｇを読み取ることを含む方法を提供する。
【００３３】
例えばコンビナトリアルステップが２回しか望まれない場合には、ステップｃ）およびｄ）は行う必要はなく、ステップｃ）およびｄ）は省かれる。
【化６】
2004513120.tif 000007
【００３４】
本発明のタグ付けは例えば上記のように解読に有用なだけでなく、さらにまた、それ以外では同じ非タグ付き化合物に対して、包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド（例えば本発明の化合物）の物理化学的特性に影響を及ぼし、例えば包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド（例えば本発明の化合物）の物理化学的特性を変化させるようなタグ残基を選択することで、包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド、例えば式ＩＶ、ＶおよびＶＩなどのＡＩＤＡコンジュゲートリガンドの物理化学的特性を改質するためにも使用できる。
【００３５】
もう１つの態様では本発明は、包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド、例えばＡＩＤＡコンジュゲートリガンドの物理化学特性の改変における、本発明のタグ残基を含む化合物の使用を提供する。
【００３６】
このような使用の重要な適用としては、例えば包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド、例えばＡＩＤＡコンジュゲートリガンドの溶解度の向上が挙げられる。すでに記載したように、次に、樹脂ビーズ上のＡＩＤＡコンジュゲートリガンドに対する標的のビーズ上結合の陽性結果は単離したビーズからのコンジュゲートの開裂後に液相で確認（同定）することができる（例えば、ＡＩＤＡ技術に相当）。このように用いる溶媒系、例えば水性バッファー系における包括的蛍光標識コンジュゲートリガンドの溶解度の向上はしばしば有利である。特にＡＩＤＡ蛍光団の１，３−ジフェニル−１Ｈ−インダゾール核は芳香環の含量が高いがゆえの疎水性部分であり、これによりＡＩＤＡコンジュゲートリガンドは非コンジュゲート型のものに比べて水への溶解度が低くなる。本発明によれば、例えば Ｒｔａｇ−アミン、Ｒｔａｇ−アルデヒドをはじめとするタグ残基セットは、それ以外では同じ非タグ付き化合物に比べて本発明のタグ付き化合物の溶解度を向上させるようなＲｔａｇ残基を選択することで作り出される。
【００３７】
もう１つの態様では本発明は、例えば非水性および水性溶媒（系）を含む溶媒系において包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド、例えばＡＩＤＡコンジュゲートリガンドの溶解度を向上させる上での、本発明のタグ残基を含む化合物の使用を提供する。
【００３８】
発明者らは包括的蛍光標識コンジュゲートリガンド、例えばＡＩＤＡコンジュゲートリガンドの溶解度の特性として１−オクタノール／水の分配係数の対数計算値（ｃｌｏｇＰ値）を用いた（例えば、Ｇｈｏｓｅ， Ａ． Ｋ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｐｈｙｓ． Ｃｈｅｍ． Ａ． （１９９８）， １０２（２１）， ｐ． ３７６２−３７７２， ｏ Ｃｈｏｕ， Ｊ． Ｔ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｆ． Ｃｏｍｐｕｔ． Ｓｃｉ． （１９７９）， １９（３）， ｐ． １７２−１７８参照）。下記表１では、種々のタグ残基によるＡＩＤＡ色素コンジュゲート（リガンドとしてジペプチドを有する）の水への溶解度の向上を示す。ｃｌｏｇＰが低いほど水に対する溶解度が高いことを意味する。
【表１】
2004513120.tif 000008
【００３９】
コンビナトリアル・ケミストリーは病態の治療用途を目的とした検討分子の合成のための有用な手段である。式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は例えばタンパク質、例えば哺乳類において病態に影響を及ぼすことが分かっているタンパク質のビーズ上スクリーニングに使用できる。このようなタンパク質と結合することが見出された式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は有用な医薬である。
【００４０】
以下の実施例では、温度は全てセ氏度である。
また、以下の略号を用いる。
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＣＩＤ：衝突誘起解離
【００４１】
実験
以下の表２に記載の化合物１〜２６は以下に示すような式Ｅ１の化合物であり、実施例２７〜３０の化合物は以下に示すような式Ｅ２の化合物であり、化合物１〜３、５、８、９、１５、２４、２６、２７および２９では、ＲＥはＡＬＡ（β−アラニノイル）であり、化合物４、６、７、１０〜１４、１６〜２３、２５、２８および３０では、ＲＥはＬＡＬＡ（Ｌ−アラニノイル）である。表２の化合物は、本明細書に記載のようにさらにＲｔａｇを導入すること以外はＷＯ ００／３７４８８に記載のものと同様にして製造することがきる。
【化７】
2004513120.tif 000009
【表２】
2004513120.tif 000010
【表３】
2004513120.tif 000011
【表４】
2004513120.tif 000012
【００４２】
分析方法
用いたＴｅｎｔａＧｅｌ樹脂（ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ ＮＨ２； ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ ＲＡＭ； ビーズサイズ： ９０μｍ；添加量：０．２３〜０．２６ｍｍｏｌ／ｇ樹脂）は公知のものであり、例えばＲａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ， Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ， ＤＥから入手できる。粗生成物の質量スペクトルはＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ Ｓｅｒｉｅｓ １１００ ＨＰＬＣシステムに接続したＦｉｎｎｉｇａｎ Ｔｈｅｒｍｏ Ｑｕｅｓｔ Ｎａｖｉｇａｔｏｒ ＬＣ／ＭＳで測定すればよい。この質量分析計は（ＥＳＩ＋／ＥＳＩ−）モードまたは（ＡＰＣＩ＋／ＡＰＣＩ−）モードで行うオープンアクセスＭＳとして作動させればよい。サンプルのインジェクションはフローインジェクション分析モードで行えばよい。溶媒供給系はメタノール／アセトニトリル５０／５０（％ｖ／ｖ）であってもよい。ＨＰＬＣ分析は逆相Ｗａｔｅｒｓ ＮｏｖａＰａｃｋ ＲＰ１８（５μｍ）カラム（３．９ｍｍ ｘ １５０ｍｍ）、２５４ｎｍ検出を用い、勾配は３０分間で１０〜１００％ Ｂ（Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ ＴＦＡ； Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ ＴＦＡ）、流速は１ｍＬ／分とし、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄにて行ってよい。これらの生成物はＧｅｎｅＶａｃエバポレーターシステムを用いて２ミリバールで真空乾燥させればよい。
【００４３】
μＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
サンプルを溶媒、すなわち５０％ＭｅＯＨ／５０％Ｈ２Ｏ／０．０５％ＴＦＡに再懸濁させる。これらのサンプルをＦＡＭＯＳμ−サンプリングワークステーション（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ， ＮＬ）に入れ、そこからカラム、すなわちＣ１８、２ｘ０．８ｍｍμ−ガードカラム（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ）に接続したＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３、Ｃ１８、５μｍ、５０ｘ０．８ｍｍカラムへロードする。クロマトグラフィーは ＨＰ１１００ ＨＰＬＣシステム（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ， Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を用い、１００μｌ／分で作動させて行う。ＨＰＬＣポンプとＦＡＭＯＳワークステーションのインジェクターの間にＡｃｕｒａｔｅμ−フロープロセッサー（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ）をインストールすることで流れを分割し、この逆相カラムに２５μｌ／分の流れを作り出す。ＨＰＬＣ溶媒は、
Ａ： ０．０５％ ＴＦＡ／水
Ｂ： ９６％アセトニトリル／０．０５％ ＴＦＡ／水
である。１２分間で１０％〜８０％ Ｂの直線勾配をかけ、勾配の終わりに９５％、３分の無勾配ステップを入れる。７分間の再平衡化ステップの後に次のサンプルをインジェクションする。カラム排出液を２１４ｎｍに設定した検出器を備えたＵ−Ｚ ｖｉｅｗ ３０ｎｌ ｆｌｏｗ ｃｅｌｌ（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ）に通し、次にそこからフューズドシリカキャピラリー（外径３４０μｍｘ内径５０μｍ）を経て、エレクトロスプレーソースのＬＣＱイオントラップ質量分析計（Ｆｉｎｎｉｇａｎ Ｃｏｒｐ．， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ， ＵＳＡ）へ送り、３段階のスキャン内容からなる２０分の一シリーズを行う（１：スキャンレンジを１５０〜２０００ａｍｕに設定して質量測定を行うＭＳモード； ２： 最小要求シグナル１００’０００カウントの従属ズームスキャンモード； ３：衝突エネルギーを３２％に設定し、単離幅を７ａｍｕに設定、選択イオン（最高イオンは約１００’０００カウント以上）のフラグメンテーションを行う従属ＭＳ／ＭＳスキャンモード）。電源は４．５ｋＶととし、加熱キャピラリーを２２０℃に、シース窒素ガスの流速を８０に設定した。ＭＳモードではイオン時間を５００ｍｓに、目標イオン数を５ｘ１０７に設定し、ＣＩＤモードではイオン時間を５００ｍｓに、目標イオン数を２ｘ１０７に設定した。両モードとも、マイクロスキャン／スペクトルを３回行う。電子増倍管は−１０００Ｖに設定し、スペクトルは全て陽イオンモードでとる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１４の化合物のＨＰＬＣ−ｓｐｕｒ（ＵＶ）を示す（保持時間：１１．３８分）
【図２】実施例１４の化合物の全ＭＳを示す（保持時間範囲：０．０５〜１９．９６分）。
【図３】実施例１４の化合物の全ＭＳを示す（保持時間範囲：１１．２１〜１１．６１分）。
【図４】実施例１４の化合物の分子イオン（［ＭＨ＋］＝５４３）のＭＳ／ＭＳを示す（保持時間：１１．６１分）。
【図５】実施例１５の化合物のＨＰＬＣ−ｓｐｕｒ（ＵＶ）を示す（保持時間：１１．７６分；保持時間１３．９０分の化合物はＴＦＡ存在下の光化学開裂の際に形成された実施例１５の化合物のトリフルオロアセチル化同族体である）。
【図６】実施例１５の化合物の全ＭＳを示す（保持時間範囲：０．０１〜１９．９３分）。
【図７】実施例１５の化合物の全ＭＳを示す（保持時間範囲：１１．５３〜１２．１５分）。
【図８】実施例１５の化合物の分子イオン（［ＭＨ＋］＝５５７）のＭＳ／ＭＳを示す（保持時間：１１．９７分）。
【図９】ＡＩＤＡ技術を加えたビーズ上スクリーニングの原理を示す。第一のコンビナトリアルステップでタグ付けされたコンビナトリアル化合物ライブラリーの樹脂ビーズ（Ｒｔａｇ；１ビーズ１化合物）を蛍光色素で標識した標的（例えばタンパク質）に曝す。ビーズ検査中には標的上の色素の励起波長はＡＩＤＡ蛍光団（サイレントＡＩＤＡ）に対し直交させる。標識された標的に結合したビーズを回収する（単一ビーズ採取）。ＡＩＤＡ−Ｒｔａｇ−コンジュゲートライブラリー化合物（リガンド）をその単一ビーズから開裂させる。次にビーズ上結合の結果を、蛍光分光光度法で非標識標的とＲ−ｔａｇ−ＡＩＤＡコンジュゲート化合物との相互作用を調べることにより液相中で確認および定量する。確認された活性については、活性リガンドの構造の解読（ＭＷとＲｔａｇ読み取り）のために単一ビーズＬＣ／ＭＳを行う。
【図１】
2004513120.tif 000013
【図２】
2004513120.tif 000014
【図３】
2004513120.tif 000015
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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