(57)【要約】下記の式（Ｉ）で表されるＦＲ９０１４５９物質またはその塩を医薬として許容される担体または賦形剤と共に含有する、細胞障害を抑制するための組成物。【化１】2004517818.tif 000004
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩を医薬として許容される担体または賦形剤と共に含有する、細胞障害を抑制するための医薬組成物。
【請求項２】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩の、細胞障害抑制剤の製造への使用。
【請求項３】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩をヒトまたは動物に投与することを特徴とする、細胞障害を抑制する方法。
【請求項４】
細胞障害が神経細胞障害である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
細胞障害が神経変性疾患である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
細胞障害が虚血性神経障害である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ＦＲ９０１４５９物質の医薬として許容される組成物およびそれに関連する文書から構成される販売用包装製品であって、その文書には、細胞障害を抑制するために前記の医薬として許容される組成物を用いることができるまたは用いるべきであることが明記されている。
【請求項８】
包装材料と前記包装材料内に含まれるＦＲ９０１４５９物質とからなる製品であって、ＦＲ９０１４５９物質は細胞障害を抑制することに有効であり、前記包装材料は、細胞障害を抑制するためにＦＲ９０１４５９物質を用いることができるまたは用いるべきであることを表示するラベルまたは文書から構成される。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は細胞障害を抑制する医薬組成物に関する。より詳しくは、本発明は細胞障害抑制剤としてのＦＲ９０１４５９物質に関する。
【従来の技術】
細胞に細胞死を誘導した場合、細胞の種類および／または細胞死誘導の方法に関わらず、多くの事例において、細胞死に先立ってミトコンドリア内膜の膜電位が低下することが観察される。すなわち、細胞死刺激により生じるカルシウムホメオスタシスおよびエネルギー代謝の障害が引き金になって、透過移行孔（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｐｏｒｅ）として知られる内膜上の経路が開口し、それによってミトコンドリアの膜電位の低下だけでなく、ミトコンドリアの膨化（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）を起こし、細胞死に至る種々の反応を強く誘発すると考えられる。そのため、ミトコンドリア透過移行（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を抑制する薬剤は、種々の病状における組織内の細胞死を抑制する治療薬として使用できると予測される。すでに、ｉｎ ｖｉｔｒｏでカルシウム誘発によるミトコンドリアの膜電位の低下及び膨化（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）をシクロスポリンＡが抑制し、さらに虚血脳モデルにおいて良好な神経細胞死抑制作用を示すことが報告されている（たとえばＷＯ９６／２２１０４）。
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、免疫抑制剤であるシクロスポリンＡが細胞障害の治療のために投与される場合、その免疫抑制作用は望ましくない副作用となる。そのため、免疫抑制および他の副作用に対する危険性が低く、さらに優れた神経障害抑制作用または神経保護作用を有する薬剤が求められていた。
【０００２】
【課題を解決するための手段】
本発明の発明者は、ＦＲ９０１４５９物質（日本公開特許Ｈ５−２７１２６７号公報）が、シクロスポリンＡよりも強力にミトコンドリアの透過移行を抑制し、さらにＦＲ９０１４５９物質が、シクロスポリンＡよりも低い免疫抑制作用を持つばかりでなく、それのラットへの経口投与の場合に起こる毒性も、シクロスポリンＡを用いる場合よりも強くないということを最初に明らかにした。したがって、本発明で説明されるＦＲ９０１４５９物質の活性は、多くの細胞障害性疾患、たとえば脳虚血、脳障害、心筋梗塞および肝疾患に対して、シクロスポリンＡと比較して、副作用が少なく、より高い治療効果を示す薬剤を提供するために有用である。
【０００３】
ＦＲ９０１４５９物質は、真菌スタキボトリス・チャータウムＮｏ．１９３９２（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔａｕｍ Ｎｏ． １９３９２）に属する菌株の発酵によって製造することができる。この菌株は、特許生物寄託センター（日本国 ３０５−５４６６ 茨城県つくば市東１丁目１−１ 中央第６）に、ＦＥＲＭ  ＢＰ−３３６４（寄託日：１９９１年４月１６日）として寄託されている。ＦＲ９０１４５９物質は、シクロスポリンＡとは異なる下記の式で表すことができる。
【０００４】
【化１】
2004517818.tif 000002
【０００５】
その化学式はＣ６２Ｈ１１１Ｎ１１Ｏ１３であり、その分子量は１，２１７である。
【０００６】
ＦＲ９０１４５９物質は、上記の日本公開特許Ｈ５−２７１２６７に記載されている方法にしたがって製造することができる。
【０００７】
種々の要因（たとえば、虚血、低酸素血症、脳血管発作、代謝性要因、毒性要因、外傷、外科手術要因、圧迫、出血、発熱要因、化学的要因、放射線照射、血管痙攣、神経変性疾患、神経変性過程、感染症、癲癇および上記の要因から二次的に生じる種々の要因）から生じる多くの様態（たとえば細胞組織への障害、細胞組織の死、脳障害、全体的または局所的脳破壊から生じる疾患、活動不全および死亡等）において、細胞障害が明らかにされている。細胞障害は多くの後遺症を伴うものである。
【０００８】
本発明では、「細胞障害の抑制」は「細胞障害の抑制または軽減に至る効果」と定義され、細胞障害を受けた細胞組織に対する保護、蘇生または再生効果を意味する。
【０００９】
本発明の目的のため、「細胞障害抑制剤」は、細胞障害を抑制または軽減するための有効用量を含む「治療または予防用薬剤またはそれを含有する医薬組成物」と定義されている。
【００１０】
本発明は、下記の細胞障害誘発症状、状況または疾患の治療のために、または治療および細胞保護のために使用される治療または予防用薬剤を提供するために、ＦＲ９０１４５９物質またはその塩を使用することを開示し、；たとえば、ＦＲ９０１４５９物質またはその塩は、外傷（刺傷、閉鎖脳障害、頭蓋内腫瘤亢進および頭蓋内圧亢進、外科的障害）、生理的異常（電解質、ブドウ糖、ビタミン、代謝性、恒常性）、中毒（代謝毒、毒素、神経毒）、放射線被爆（急性および遅延作用）、血管痙攣などにおいて治療または細胞保護に用いられる治療または予防用薬剤の製造のために、さらに上記の症状から二次的にまたは遅れて発現する種々の疾患、たとえば視覚、聴覚、前庭機能、嗅覚などに関わる特定の器官の神経障害を伴う疾患；脳幹を含む脳および脊髄細胞組織または末梢神経系の疾患およびある種の特異疾患（脊髄炎、脊髄障害）など；神経変性疾患（アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳ、ハンチントン病など）；感染症（ヘルペスウィルス感染、細胞後遺症を伴うエイズ、エイズ脊髄障害など；老化；脳血栓、脳塞栓または脳出血を伴う虚血性神経障害；呼吸器系全身性低酸素症（麻酔における低酸素性脳症等）；貧血；赤血球およびヘモグロビンの機能不全；高血圧；虚血性肝臓疾患（肝硬変など）；ＢまたはＣ型肝炎；腎臓血流障害；癲癇または痙攣を伴う神経障害；および心筋肥大の治療のために、または肝臓再生プロモータ；肝臓移植の保護または細胞死を伴う組織疾患の予防のための組織保護剤；臓器移植体の保存のための添加剤；発毛剤；神経伝達物質の抑制剤；記憶調節作用剤などとして用いることができる。
【００１１】
さらに、ＦＲ９０１４５９物質またはその塩は、細胞障害の発生前、発生中または発生後に細胞組織および細胞機能に対する保護効果を確保するために投与することもできる。
【００１２】
本発明において、ＦＲ９０１４５９物質またはその塩を有効成分として含有する細胞障害抑制剤は、種々の経路による投与、たとえば経口；舌下；頬内、経鼻；吸入；非経口（皮内、臓器内、皮下、皮内、筋肉内、関節内、中心静脈内、肝静脈内、末梢静脈内、リンパ液内、心臓内、動脈内、選択的または高度選択的脳動脈内、または脳実質組織内、またはカテーテルを通した脳静脈系から脳室への逆行性灌流）；脳または脊髄組織への投与；脳脊髄液腔を通してまたは脳脊髄液腔への直接または加圧下での暴露、脳槽穿開または腰椎穿刺によるクモ膜下、脳槽、硬膜下または硬膜外腔への注入；眼内注入または眼周辺注射を含む眼周辺注入；眼球内、眼球構造または眼球層への点滴；耳管、乳頭状空気室、外および内耳道を含む聴覚管、鼓膜、中耳、蝸牛らせん状神経節、迷路などを含む内耳への注入；または腸管、直腸、膣、尿管または膀胱への投与に適するように有機または無機の担体または賦形剤と共に製剤される種々の固体、半固体または液体の医薬製剤の形態で投与できる。子宮内および周産期の適応症においても、母親の血管内、または子宮、子宮頚部および膣を含む器官、胎芽、胎児、新生児、連合組織と羊膜、へその緒と静脈、胎盤などの空間部へ投与することができる。非経口投与が好ましいが、前記経路を患者の症状に応じて変わるものである。
【００１３】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩は、治療薬剤として単独に投与することができるが、製剤の一部として用いてもよい。本発明の「細胞障害抑制剤」は、少なくとも一つまたはいくつかの適当な有機または無機の担体または賦形剤と共に、または他の薬理学的に有効な物質と混合して有効成分を含有する固体、半固体または液体の医薬製剤の形態で使用することができる。たとえば前記有効成分は製薬上、常用される無毒の担体と混合することができ、顆粒、錠剤、ペレット剤、トローチ、カプセル剤、坐剤、クリーム、軟膏、エーロゾル、吸入用粉末；注射可能な液剤、乳剤または懸濁剤などの液体剤形態；経口摂取用の製剤；点眼剤；および投与に適する他の投与形態として提供することもできる。必要ならば、安定化剤、増粘剤、湿潤剤、硬化剤、着色剤などの添加剤；芳香剤および緩衝剤；および他の常用添加剤を上記製剤に配合することができる。
【００１４】
本発明の「細胞障害抑制剤」において、疾患の経過または症状に応じて予測される細胞障害抑制効果を確実にするために、十分な量のＦＲ９０１４５９物質またはその塩が製剤される。
【００１５】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩の治療有効用量は、患者の年令および症状により変化し、製剤形態、投与方法、疾患の時期および投与間隔にも依存するが、治療薬剤は、通常、組成物の全重量に基づいて０．１〜９０％の割合で製剤される。細胞障害の抑制のためには、体重１ｋｇにつき１日当たり０．０００１〜５０ｍｇ、好ましくは０．００１〜２５ｍｇの範囲の量を非経口投与することができ、または体重１ｋｇにつき１日当たり０．００１〜１００ｍｇ、好ましくは０．０１〜６０ｍｇの範囲の量を経腸投与することができる。しかしながら、予測される治療効果を得るためには上記の上限を超えることが必要になる場合がある。
【００１６】
ＦＲ９０１４５９物質の好適な塩は、医薬として許容される慣用の無毒の塩であり、たとえば、塩基との塩または酸付加塩、たとえば無機塩基との塩（たとえばアルカリ金属塩、たとえばナトリウム塩、カリウム塩など；アルカリ土類金属塩、たとえばカルシウム塩、マグネシウム塩など；アンモニウム塩）、有機塩基との塩（たとえば有機アミン塩、たとえばトリエチルアミン塩、ジイソプロピルエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）、無機酸付加塩（たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩など）、有機カルボン酸またはスルホン酸付加塩（たとえば蟻酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩など）、塩基性または酸性アミノ酸（たとえばアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）との塩を挙げることができる。
【００１７】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩は溶媒和化合物（たとえば水和物、エタノレートなど）を含む。
【００１８】
ＦＲ９０１４５９物質またはその塩は結晶形および非結晶形を含む。
【００１９】
本発明は、本明細書中で述べられた条件下で、本発明の治療薬剤の使用に関する。したがって、本発明は、とりわけ、すべての関連広告、ラベル、包装、データシート、折り込み広告、製品仕様、広告物、キャラクター、パンフレット、雑誌、書籍；種々の媒体、たとえばファックス、電話、写真、ラジオ、ビデオ、テレビ、映画、インターネット、電子メールなどを用いる会話および通信；情報のコンピュータ支援プレゼンテーション、臨床試験に関する提案、細胞障害抑制に関して本発明の治療薬剤を用いる臨床試験のためのプロトコール等も包含する。
【００２０】
本書で言及された特許明細書および公報は、引用によって本書に組み込まれる。
【００２１】
【実施例】
下記の実施例は、本発明をさらに詳しく説明するためのものであって、本発明の範囲を限定すると解釈されるものではない。
【００２２】
実施例１
脳から分離されたミトコンドリアのカルシウム誘発腫張（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）に対するＦＲ９０１４５９物質とシクロスポリンＡの効果
生体組織を構成する細胞に細胞毒性ストレス（酸素欠乏、栄養因子欠乏など）が加えられると、細胞質内のカルシウムが増加し、これがミトコンドリアの浸透移行孔（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｐｏｒｅ）の開口を誘発し、その結果、ミトコンドリア内外の無機イオン、水および、生体分子が、ミトコンドリア内に入り込み、ミトコンドリアの膜電位の降下およびミトコンドリアの腫張（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）を生じ、細胞死に至る。この反応は、ミトコンドリアを生体組織から分離し、ミトコンドリア浮遊液中のカルシウム濃度を上げることによって再現できる。散乱光（５４０ｎｍ）（５４０ｎｍの光が９０°の角度で散乱される）（パーキン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）ＬＳ−５０Ｂ蛍光分光計）の強度を測定することによってミトコンドリアの腫張を監視した。ＣａＣｌ２の添加前の状態（分散光の強度：約１．３）およびアラメチシン（４０μｇ／ｍｇミトコンドリアタンパク質）の添加による強制腫張後の状態（分散光の強度：約０．４）を基準として、シクロスポリンＡとＦＲ９０１４５９物質の各濃度において、ミトコンドリアの腫張抑制率を測定した。
【００２３】
その結果、シクロスポリンＡは約２５０ｎＭで約５０％の抑制率をもたらしたのに対し、ＦＲ９０１４５９物質は約２５ｎＭで５０％の抑制率をもたらした。このことは、ＦＲ９０１４５９物質がシクロスポリンＡの約１０倍の活性があることを示している。
【００２４】
シクロスポリンＡまたはＦＲ９０１４５９物質が細胞障害の治療のために投与される場合、各薬剤の免疫抑制作用は望ましくない副作用となる。ＦＲ９０１４５９物質は、免疫抑制作用がより低く、治療薬剤としてシクロスポリンＡよりも好ましい性質を有していることを実施例２に示す。
【００２５】
実施例２
マウスにおけるＭＬＲ反応に対するＦＲ９０１４５９物質およびシクロスポリンＡの効果
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４６巻、（１９６０〜１９６５）（１９８６）に、和泉らによって報告されている方法にしたがって、脾臓細胞を雌Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ−２ｄ）マウスおよび雌Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）マウスからそれぞれ採取し、細胞懸濁液を調製した。平底微量定量プレ−トに、Ｂａｌｂ／ｃから誘導した５×１０５個の応答細胞及びＣ５７ＢＬ／６から採取した細胞をＸ戦処理した２．５×１０５個の刺激細胞を含むＲＰＭＩ培地（１０％のウシ胎仔血清、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを加えたもの）の１００μｌずつ分注した。細胞を、５％ＣＯ２、９５％空気の加湿（飽和水蒸気）雰囲気中、３７℃で７２時間増殖させた。最後の４時間には、１８．５ｋＢｑの３Ｈ標識チミジン（ニューイングランドニュークリア（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ）、ボストン、マサチューセッツ）を培地に加えた。次に、細胞をマイクロハーベスタのグラスファイバー細片で回収し、細胞増殖の程度を放射能から判断した。その結果を表１に示す。
表１
ラットにおけるＭＬＲに対するＦＲ９０１４５９物質とシクロスポリンＡの抑制効果
【００２６】
【表１】
2004517818.tif 000003
＊：ｐ＜０．０５、対照と比較（ダネット（Ｄｕｎｎｅｔ）の多重比較）
＊＊：ｐ＜０．０１、対照と比較（ダネット（Ｄｕｎｎｅｔ）の多重比較）
【００２７】
表１に示されたように、ＦＲ９０１４５９物質は、１０ｎｇ／ｍｌ以上の濃度において統計的に著しいＭＬＲ抑制活性を示すのに対し、シクロスポリンＡは、３．２ｎｇ／ｍｌ以上の濃度において著しい抑制活性を示した。
【００２８】
実施例１および２から、ＦＲ９０１４５９物質の、細胞死の誘導によって生じるミトコンドリア障害（浸透移行）を阻害する効果は、シクロスポリンＡの約１０倍でありながら、その免疫抑制作用は、シクロスポリンＡの約１／３であることが示された。
【００２９】
【発明の効果】
したがって、ＦＲ９０１４５９物質は、細胞障害、特に神経障害に対して抑制効果を示す、優れた細胞障害抑制剤として有用である。さらに、ＦＲ９０１４５９物質は、細胞死を伴うあらゆる組織疾患、たとえば肝臓および心臓における虚血再灌流障害、腎臓における血流障害などにおいて、有効な組織保護剤として適用されると考えられる。
【００３０】
本書で引用された特許、特許出願および公報は、引用によって本書に組み込まれる。
【国際公開パンフレット】
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2004517818.tif 000017
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004517818.tif 000018
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004517818.tif 000019
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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2004517818.tif 000031
2004517818.tif 000032
【国際調査報告】
2004517818.tif 000033
2004517818.tif 000034
2004517818.tif 000035
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