(57)【要約】体液中または表面上の微生物を不活性化する方法および装置が提供される。好ましくは、体液は血液または血液製剤を含み、そして生物活性蛋白質を含む。好ましい微生物の不活性化法は、有効な無毒性量の内因性光増感剤およびクエンチ剤を体液に加え、そしてその内因性光増感剤を活性化するに足る十分な光輻射線に上記体液を曝露し、それによって微生物を不活性化する工程を含む。クエンチ剤は、光増感剤、および所望とされる生物学的成分を損傷させ得る光が発生させる副反応を減少させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
病原体を含んでいる可能性がある血液成分に対する照射用の、内因性光増感剤およびクエンチ剤を含む添加剤溶液。
【請求項２】
クエンチ剤が１２ｍＭ未満の量で存在する、請求項１記載の添加剤溶液。
【請求項３】
クエンチ剤が４ｍＭ超の量で存在する、請求項１記載の添加剤溶液。
【請求項４】
内因性光増感剤が内因性アロキサジン類より成る群から選ばれる、請求項１記載の添加剤溶液。
【請求項５】
内因性光増感剤が７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンである、請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項６】
血液成分が赤血球である、請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項７】
血液成分が血小板である、請求項４記載の添加成分。
【請求項８】
クエンチ剤がグルタチオンである、請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項９】
クエンチ剤が酸化防止剤である請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項１０】
酸化防止剤がビタミンＥ、トロロークスおよびＴＰＧＳより成る群から選ばれる、請求項９記載の添加剤溶液。
【請求項１１】
酸化防止剤がチオール基を含んでいる、請求項９記載の添加剤溶液。
【請求項１２】
酸化防止剤がＮ−アセチル−システイン、システインおよびグルタチオンより成る群から選ばれる、請求項１１記載の添加剤溶液。
【請求項１３】
クエンチ剤がアミノ酸である請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項１４】
アミノ酸がトリプトファン、チロシン、ヒスチジン、アデニンおよびメチオニンより成る群から選ばれる、請求項１３記載の添加剤溶液。
【請求項１５】
クエンチ剤がＮ−アセチルシステインである、請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項１６】
Ｎ−アセチルシステインが約８ｍＭの量で存在する、請求項１５記載の添加剤溶液。
【請求項１７】
Ｎ−アセチルシステインが約１２ｍＭの量で存在する、請求項１５記載の添加剤溶液。
【請求項１８】
内因性光増感剤が７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンであって、約５００μＭの量で添加される、請求項１記載の添加剤溶液。
【請求項１９】
グルタチオンが約４ｍＭのグルタチオン量で添加される、請求項８記載の添加剤溶液。
【請求項２０】
０．９％の塩化ナトリウムをさらに含む、請求項４記載の添加剤溶液。
【請求項２１】
病原体を含んでいる可能性がある血液成分に対する照射用の添加剤溶液であって、内因性光増感剤、クエンチ剤、および血液成分の貯蔵に有用な溶液を含む添加剤溶液。
【請求項２２】
照射された１つまたは２つ以上の血液成分を貯蔵するための、血液成分およびクエンチ剤の貯蔵に有用な溶液を含む貯蔵用溶液。
【請求項２３】
クエンチ剤がグルタチオンである、請求項２２記載の貯蔵用溶液。
【請求項２４】
クエンチ剤がＮ−アセチルシステインである、請求項２２記載の貯蔵用溶液。
【請求項２５】
血液成分の貯蔵に有用な溶液がＡＳ３であり、そしてクエンチ剤がグルタチオンである、請求項２２記載の貯蔵用溶液。
【請求項２６】
クエンチ剤がビタミンＥ、ＴＰＧＳおよびトロロークスより成る群から選ばれる、請求項２２記載の貯蔵用溶液。
【請求項２７】
クエンチ剤および内因性アロキサジン光増感剤を含む、溶媒と混合できるようにされている乾燥組成物。
【請求項２８】
クエン酸三ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、グルコン酸ナトリウムおよびリン酸ナトリウムから選ばれる群の一員をさらに含む、請求項２７記載の乾燥組成物。
【請求項２９】
血液または血液成分を受容できるようにされている血液バッグであって、請求項２７記載の乾燥媒体を含んでいる上記の血液バッグ。
【請求項３０】
乾燥組成物が錠剤、ピルまたはカプセルの形態をしている、請求項２８記載の乾燥組成物。
【請求項３１】
病原体を含んでいる可能性がある血液成分中の病原体を不活性化する方法であって、
光増感剤および第一クエンチ剤を含んでいる添加剤溶液を血液成分に添加し；
上記の血液成分および添加剤溶液に、その中に含まれるいかなる病原体も不活性化するに足る十分な時間光照射する
ことを含む上記の方法。
【請求項３２】
血液成分が赤血球であり、そしてクエンチ剤がビタミンＥである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
血液成分の貯蔵に有用な、第二クエンチ剤を含んでいることができる溶液中に血液成分を貯蔵することをさらに含む、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
病原体を含んでいる可能性がある赤血球中の病原体を不活性化する方法であって、
ある一定単位の全血から血漿を圧出して、血漿が減少した赤血球含有製品を作り；
上記血漿減少赤血球含有製品にリボフラビンおよび第一クエンチ剤を含んでいる添加剤溶液を加え；
上記の血漿減少赤血球含有製品および添加剤溶液に、その中に含まれるいかなる病原体も不活性化するに足る十分な時間光照射し；
上記照射赤血球を、第二クエンチ剤を含んでいることができる血液成分の貯蔵に有用な溶液中に貯蔵する
ことを含む上記の方法。
【請求項３５】
血液または血液成分並びに病原体を含んでいる生物体液中における病原体不活性化用化合物の副反応をクエンチさせる方法であって、
生物体液をリボフラビンから成る病原体不活性化用化合物で処理し；
上記の生物体液およびリボフラビンに、クエンチ剤を、リボフラビンによる病原体の不活性化を妨害することなく副反応のレベルを低下させるに足る十分な量で加え；そして
上記の生物体液とリボフラビンとクエンチ剤を、その生物体液中に含まれるいかなる病原体も不活性化するに足る十分な波長を持つ光に曝露する
工程を含む上記の方法。
【請求項３６】
クエンチ剤が酸化防止剤である、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
酸化防止剤がビタミンＥ、トロロークスおよびＴＰＧＳより成る群から選ばれる、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
酸化防止剤がチオール基を含んでいる、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
酸化防止剤がｎ−アセチル−システイン、システインおよびグルタチオンより成る群から選ばれる、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
クエンチ剤がアミノ酸である、請求項３５記載の方法。
【請求項４１】
アミノ酸がトリプトファン、チロシン、ヒスチジン、アデニンおよびメチオニンより成る群から選ばれる、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
クエンチ剤がビタミンＣである、請求項３５記載の方法。
【請求項４３】
クエンチ剤がＮ−アセチルシステインまたはアミノ酸である、請求項１記載の添加剤溶液。
【請求項４４】
リボフラビンが約５００μＭの量で加えられる、請求項３５記載の方法。
【請求項４５】
クエンチ剤が４ｍＭ超の量で存在する、請求項３５記載の方法。
【請求項４６】
クエンチ剤が２０ｍＭ未満の量で存在する、請求項３５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
この出願は、１９９８年７月２１日に出願された米国特許出願第０９／１１９，６６６号の一部継続出願であるところの、２０００年６月２日に出願された出願中の米国特許出願第０９／５８６，１４７号の一部継続出願であり、そしてそれは１９９９年７月２０日に出願された米国特許出願第０９／３５７，１８８号の一部継続出願である。この出願は、２００１年５月３０日に出願された米国仮特許出願第６０／２９４，８６６号；２００２年４月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／３７３，４６５号；および２００２年２月１日に出願された米国仮特許出願第６０／３５３，３２１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
（背景）
ＨＩＶウイルス、肝炎ウイルスおよび他のウイルス、並びに細菌のような感染性微生物による給血の汚染は、全血の輸血、または血小板、赤血球、血漿、第ＶＩＩＩ因子、プラスミノゲン、フィブロネクチン、抗トロンビンＩＩＩ、寒冷型沈降物、ヒト血漿蛋白質画分、アルブミン、免疫血清グロブリン、プロトロンビン錯体血漿成長ホルモン、および血液から分離された他の成分のような色々な血液成分の投与を受けなければならない人々に、重大な健康被害を与える。現在利用できる血液スクリーニング法は汚染物を見逃すことがある。従って、全ての感染性ウイルスおよび他の微生物を効果的に中和するが、細胞性血液成分を損傷せず、蛋白質の所望生物活性を落とさず、そして好ましくは血液製剤の患者に対する投与前に取り除く必要がない滅菌法の必要が存在する。
【０００３】
ある規定の波長を持つ光を吸収し、その吸収されたエネルギーをエネルギー受容体に移す化合物である光増感剤の使用が、血液および血液成分の汚染に対する１つの解決法として提案されている。各種の光増感剤が、血液または血液成分の病原体不活性化用血液添加剤としての使用に提案された。ソラレン類を含めてある種の光増感剤、および血液製剤の除染用光増感剤を選ぶ際に重要な問題の一部が、Ｇｏｏｄｒｉｃｈ， Ｒ． Ｐ．等（１９９７年）のＤｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ、２２：１５９−１７１・「血液製剤を滅菌するための、選択性の光活性化薬物の設計および開発（Ｔｈｅ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ， Ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）」において概観されている。
【０００４】
血液成分の光照射に対する使用に提案されたある種の光増感剤には望ましくない性質がある。例えば、１９８６年１０月８日公開の欧州特許出願第１９６，５１５号明細書は、ポルフィリン類、ソラレン類、アクリジン、トルイジン類、フラビン（アクリフラビン塩酸塩）、フェノチアジン誘導体、および色素、例えばニュートラルレッドおよびメチレンブルーのような非内因性光増感剤の血液添加剤としての使用を示唆している。他の分子、即ちクロルプロマジンが光増感剤として使用された；しかし、その有用性は、それには鎮静作用があるので、その分子は患者に投与されるいかなる体液からも除染手順後に除去されなければならないということによって制限される。体内で自然に生ずるプロトポルフィリンは代謝されて光増感剤を形成することができる；しかし、その有用性はプロトポルフィリンが蛋白質の所望生物活性を落とす点で限られている。
【０００５】
リボフラビンおよび関連光増感剤化合物を使用する病原体の死滅は、一重項酸素による損傷を含めて酸化的損傷による、または病原体の核酸に対する光増感剤の結合による光不活性化で起こり、それによって病原体の機能および繁殖する能力、またはその両者を同時に行う能力が壊される。光分解の副反応は、血液製剤を損傷させて、それらの輸血適合性を損なう可能性がある。
【０００６】
副反応をクエンチさせるための添加剤の使用を論じている特許は数件しかない。Ｂｅｎ−Ｈｕｒ等の米国特許第６，０７７，６５９号明細書（２０００年６月２０日）は、ウイルスを不活性化するためのビタミンＥおよびフタロシアニンポルフィリン様光増感剤の使用を論じている。Ｃｏｏｋ等の米国特許第６，２７０，９５２号明細書（２００１年８月７日）は、病原体を不活性化するためのグルタチオンとキナクリン化合物との使用を論じている。
【０００７】
この技術分野には、光増感剤および光で処理される血液成分に対して付随する損傷を低下させる方法の必要が存在する。本発明は、病原体が不活性化された血液および血液成分に対して付随する損傷を防止または低下させるものである。
【０００８】
本明細書で参照される全刊行物は、それらを参照することにより、本発明と矛盾しない程度で本明細書に含まれる。
【０００９】
（概要）
本発明は、光増感剤および光によって発生せしめられる副反応をクエンチさせる方法に関する。この副反応は所望の生物学的成分に好ましくない損傷をもたらすことがある。
【００１０】
本発明は、さらに具体的には、病原体を含んでいる可能性がある血液成分中の病原体を不活性化する方法であって、光増感剤およびクエンチ剤を血液成分に加え、そして上記の血液成分、光増感剤およびクエンチ剤に、その中に含まれるいかなる病原体も不活性化するに足る十分な時間、光を照射することを含む上記の方法に関する。クエンチ剤は血液成分および光増感剤の光照射後に加えることもできる。クエンチ剤は、また、照射後の血液また血液成分を貯蔵するのに用いられる貯蔵用溶液に加えることができる。もう１つの態様では、クエンチ剤および光増感剤を含む、溶媒と混合できるようにされている乾燥組成物が提供される。本発明は、さらに、血液または血液成分および光増感剤を含んでいる溶液中に光エネルギーの適用によって発生せしめられる副反応をクエンチさせるための少なくとも１種のクエンチ剤を含む添加剤溶液に向けられる。本発明は、また、生物活性蛋白質、血液または血液構成成分と不活性化された微生物、内因性光増感剤またはその光生成物、並びに１種または２種以上のクエンチ剤を含む体液（ｆｌｕｉｄ）も提供する。
【００１１】
また、生物活性蛋白質、血液および血液構成成分より成る群から選ばれる成分も含んでいる体液中の微生物を不活性化する方法であって、上記体液に有効量の内因性光増感剤を加え、その体液を上記の光増感剤を活性化するに足る十分な光輻射線（ｐｈｏｔｏｒａｄｉａｔｉｏｎ）に曝露し；この活性化された内因性光増感剤をして上記体液中の微生物を不活性化させることを含む上記の方法も提供される。この発明は、上記の体液に、細胞膜および蛋白質に対する上記光増感剤および／または光輻射線による損傷を、その光増感剤の微生物を不活性化する有効性を実質的に減ずることなく相殺するのに有効な量のクエンチ剤を加えることを含む改善を提供する。
【００１２】
１つの好ましい特定の態様において、本発明は、赤血球およびリボフラビンを含んでいる組成物に可視光を照射するときに起こる副反応に由来する細胞に対する損傷を、リボフラビンによる病原体の不活性化を妨害することなく低下させることに向けられる。
【００１３】
本発明で使用される用語「阻害剤（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」または「クエンチング剤（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」または「クエンチ剤（ｑｕｅｎｃｈｅｒ）」は、病原体の不活性化に使用される化合物および／または条件によって引き起こされる生物学的成分に対する損傷を減少させる化合物を意味する。血液および血液成分の細胞膜を損傷させ得るある種の副反応に、光増感剤を含んでいる溶液に対する可視光の適用による反応性酸素種の形成反応がある。これらの副反応はこの技術分野の当業者には公知である。クエンチ剤の特定の使用は、ウイルスおよび他の病原体が主として住む溶液中で酸素に基づく化学反応を進行させながら、細胞膜を酸化損傷から選択的に保護することができる。このようにして、酸化化学の正の作用は、細胞および蛋白質損傷の負の副作用を取り除きながら、病原体の死滅に利用することができる。
【００１４】
クエンチング剤の１つの部類は、グルタチオン、ｎ−アセチル−システインおよびシステインを含めてチオール含有化合物である。クエンチング剤のもう１つの部類は、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、アデニンおよびメチオニンのようなアミノ酸である。クエンチング剤の他の部類は、ビタミンＥ、ＴＰＧＳ、トロロークス（ｔｒｏｌｏｘ）およびビタミンＣ並びにそれらの誘導体を含めて酸化防止剤である。
【００１５】
異なるクエンチ剤は異なる機構で作用するだろう。酸化防止剤並びにチオール含有化合物は、照射プロセス中の副反応による血液中の蛋白質の変性を防止するのを促進し得る。アミノ酸は、照射プロセスで起こる副反応の疑似標的として作用し得、かくして血液蛋白質を保護する。
【００１６】
クエンチ剤は、上記プロセスをより効率的かつ選択性にするために体液に加えることもできる。このようなクエンチ剤に、酸化防止剤、或いは所望体液成分に対する損傷を防止するか、または微生物の不活性化の速度を改善する他の薬剤があり、そしてアデニン、ヒスチジン、システイン、チロシン、トリプトファン、アスコルベート、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、没食子酸プロピル、グルタチオン、メルカプトプロピオニルグリシン、ジチオスレオトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｏｔｏｌ）、ニコチンアミド、ＢＨＴ、ＢＨＡ、リシン、セリン、メチオニン、グルコース、マンニトール、トロロークス、グリセロール、ビタミンＥおよびそれらの混合物が例として挙げられる。
【００１７】
クエンチ剤はいかなる有効な量でも使用することができる。この開示には全ての特定の濃度量および中間範囲が含まれる。１つの好ましい範囲は０．０５〜約１００ミリモル濃度、さらに好ましくは０．１〜２０ミリモル濃度である。チオール含有化合物は、それらがクエンチ剤として用いられるとき、好ましくは０．５〜５０ｍＭ、最も好ましくは約０．１〜２０ｍＭの量で加えられる。ビタミンＥは、それがクエンチ剤として用いられるとき、好ましくは約０．１〜約２００ＩＵ／ｍＬ、さらに好ましくは約０．１〜約１ＩＵ／ｍＬの量で加えられる。ビタミンＣは、それがクエンチ剤として用いられるとき、好ましくは約０．１〜１００ミリモル濃度、好ましくは約５〜約１５ミリモル濃度、さらに好ましくは約１０ミリモル濃度の量で加えられる。他のクエンチ剤の好ましい濃度は、この技術分野の当業者であれば、本明細書に教示され、またこの技術分野の当業者に知られているように、所望とされる微生物の不活性化レベル、所望とされる光増感剤および他のパラメーターを分析することにより、過度の実験をすることなく決定することができる。
【００１８】
本明細書で説明され、またこの技術分野の当業者に知られているように、クエンチング剤は本発明の方法において多種多様な異なる仕方で使用することができる。クエンチ剤は、この方法のプロセスのいかなる段階においても血液成分に加えることができる。例えば、クエンチ剤は光増感剤の添加前および光に対する曝露前に加えてもよいし、或いは血液成分の光に対する曝露後に加えてもよい。クエンチング剤は、血液または血液成分を貯蔵するのに用いられる溶液に加えることができる。クエンチング剤は血液または血液成分に所望光増感剤と共に加えることができる。クエンチング剤を含んでいる組成物は乾燥形態または液状形態で使用することができる。ある好ましい使用が以下に与えられる。本発明のクエンチ剤は、血小板および赤血球添加剤溶液、およびこの技術分野で公知の他の血液成分添加剤溶液と共に使用することができる。
【００１９】
クエンチ剤は病原体不活性化用化合物と反応して、病原体不活性化用化合物による病原体の不活性化を妨害することなく、副反応をクエンチすることが好ましい。これは、例えば、病原体膜を実質的に通り抜けず、従って病原体膜外の副反応をクエンチするクエンチ剤の使用によって起こる。もう１つの態様では、クエンチ剤は病原体不活性化用化合物またはそれより形成される反応性中間体と速度論的に非常にゆっくり反応することができ、そのためクエンチ剤は病原体の不活性化を実質的に妨害しない。クエンチ剤は、病原体が不活性化されるべき血液または血液成分と負の相互作用をしないことも好ましい。クエンチ剤の１つの有効量は、微生物を不活性化する光増感剤の有効性を所望レベル以下に低下させることなく、その光増感剤の光照射によって発生せしめられる不所望の副反応を減少させる量である。
【００２０】
本発明の方法は、特に、病原体不活性化手法で処理される血液または血液成分の質を改善し、より厳しい病原体不活性化プロセスを、治療成分の完全性を損なうことなく利用できるようにする。光照射による体液の所望成分に対する損傷を相殺するためにクエンチ剤を用いるときは、従来公知の微生物の不活性化法で用いられたよりも多い光増感剤の量を用いることができる。
【００２１】
クエンチ剤、内因性光増感剤および内因性に基づく（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｌｙ−ｂａｓｅｄ）光増感剤誘導体を用いる本発明の除染法は、微生物以外の体液成分の生物活性を実質的に消失させない。これら成分の可能な限り大きい生物活性が保持されるが、但し、ある種特定の例では、この方法が最適化されると、体液の効果的な除染に対して釣り合いを取るために生物活性を一部失わなければならない、例えば蛋白質成分の変性が起こらなければならない。体液成分が十分な生物活性を保持し、それらの意図されたまたは自然な目的に有用である限りは、それらの生物活性は「実質的に消失された」とはみなされない。
【００２２】
本発明に開示されるクエンチ剤、内因性光増感剤および内因性に基づく誘導体光増感剤は、本明細書に開示される除染系においてのみならず、本発明以前に存在する血液成分除染系においても使用することができる。例えば、本発明の内因性光増感剤および内因性に基づく誘導体光増感剤は、米国特許第５，２９０，２２１号、同第５，５３６，２３８号、同第５，２９０，２２１号および同第５，５３６，２３８号明細書に記載される除染系で使用することができる。
【００２３】
（詳細な説明）
「光増感剤」は、１つまたは２つ以上の規定波長を有する輻射線を吸収し、続いてその吸収されたエネルギーを利用して化学プロセスを実行する任意の化合物と定義される。本発明で使用される光増感剤として、核酸に優先的に吸着され、かくしてそれらの光力学的効果を微生物およびウイルスに対して集中させ、その際付随細胞または蛋白質にはほとんどまたは全く影響を及ぼさない化合物を挙げることができる。タイプＩ（ラジカル）および／またはタイプＩＩ（一重項酸素）依存性機構を利用するもののような他の光増感剤も本発明で有用である。
【００２４】
内因性光増感剤が最も好ましい。用語「内因性」は、ヒトまたは哺乳動物の体の中に、体による合成の結果としてか、或いは必須栄養分（例えば、ビタミン）として消化され、または生体内で代謝産物および／または副生成物が形成されるためのいずれかで自然に見いだされることを意味する。このような内因性光増感剤の例は、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジン（リボフラビン）、７，８，１０−トリメチルイソアロキサジン（ルミフラビン）、７，８−ジメチルアロキサジン（ルミクローム）、イソアロキサジン−アデニンジヌクレオチド（フラビン・アデニンジヌクレオチド［ＦＡＤ］）、アロキサジンモノヌクレオチド（フラビンモノヌクレオチド［ＦＭＮ］およびリボフラビン−５−ホスフェートとしても知られる）のようなアロキサジン類、ビタミンＫ類、ビタミンＬ、それらの代謝産物および前駆体、並びにナフトキノン類、ナフタレン類、ナフトール類およびそれらの平面分子配座を有する誘導体である。用語「アロキサジン」はイソアロキサジン類を包含する。内因性に基づく誘導体光増感剤には、内因性光増感剤が誘導され、かつそれらの機能および実質的な無毒性を保存しているそれら光増感剤の低級（１−５）アルキルまたはハロゲン置換基を有していてもよいし、或いはそれら基を欠いていてもよいそれら内因性光増感剤の合成的に誘導された類似体および同族体がある。内因性光増感剤が用いられるとき、特にこのような光増感剤が本質的に有毒でないか、または光放射後に有毒な光生成物を生成しないとき、除染後に除去または精製工程は必要とされず、そして処理生成物は患者の体に直接戻すことができるか、またはその治療効果を必要としている患者に投与することができる。
【００２５】
好ましい内因性光増感剤は次のとおりである：
2004520448.tif 000002
2004520448.tif 000003
2004520448.tif 000004
2004520448.tif 000005
【００２６】
病原体の不活性化は、光増感剤を除染されるべき材料と混合することを必要とする。混合は、光増感剤または光増感剤を含んでいる溶液を除染されるべき体液に単に加えることによって行うことができる。１つの系では、光増感剤が加えられている除染されるべき材料が光輻射線源を通り過ぎて流されるが、その材料の流れは、一般に、光増感剤を除染されるべき体液全体に分布させるのに十分な乱れを与える。もう１つの系では、体液および光増感剤が光透過性容器の中に置かれ、そして、好ましくはその容器を攪拌してその光増感剤を完全に分布させ、かつ全体液を輻射線に曝露させながらバッチ式で照射される。本明細書で説明されるように、この系には、照射前に光増感剤と混合することを含むプロセスの任意の所望とされる段階にクエンチ剤を加えることができる。
【００２７】
体液と混合されるべき光増感剤の量は、体液中の微生物を十分に不活性化するに足るが、有毒（ヒトまたは他の哺乳動物に対して）または不溶な量よりは少ない量である。公開された特許出願であって、ここで参照することによって本発明と矛盾しない範囲まで全体が本明細書に含まれるＷＯ第００／０４９３０号明細書に教示されるように、所望光増感剤の最適濃度は、この技術分野の当業者であれば過度の実験をすることなく容易に決めることができる。好ましくは、光増感剤は少なくとも約１μＭから体液中における光増感剤の溶解度までの濃度、好ましくは約１０μＭの濃度で使用される。７，８−ジメチル−リビチルイソアロキサジンの場合、約１〜約５００μＭの範囲の濃度が好ましく、血小板および血漿では好ましくは約５０μＭ、赤血球では好ましくは約４５０μＭである。
【００２８】
処理されるべき体液は、光増感剤を活性化するために、適切な波長の光輻射線に、上記の光増感剤を活性化するに足る十分な量であるが、生物学的成分に非特異性損傷をもたらすか、またはその体液中に存在する他の蛋白質の生物活性を実質的に妨げる量よりは少ない量を用いて曝露される。使用される波長は、この技術分野で知られているか、または次のものの教示に従って過度の実験なしに容易に決め得るように、選択される光増感剤に依存する。
【００２９】
本発明の開示と矛盾しない程度に参照することによって本明細書に含まれる米国特許第６，２５８，５７７号およびその一部継続出願特許の第６，２７７，３３７号明細書は、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジン（リボフラビン）を含めて内因性光増感剤を使用する、生物汚染物質の病原体不活性化の方法と装置について記載している。本発明の開示と矛盾しない程度に参照することによって本明細書に含まれる米国特許第６，２６８，１２０号明細書も、イソアロキサジン誘導体を使用する生物汚染物質の病原体不活性化について記載している。内因性光増感剤を使用する不活性化法は、全てが本発明の開示と矛盾しない程度に参照することによって本明細書に含まれる、２０００年６月１日出願の米国特許出願第０９／５９６，４２９号および２００１年２月５日出願の米国特許出願第０９／７７７，７２７号明細書にも記載されている。微生物を光不活性化する他の方法はこの技術分野の当業者に知られている。クエンチ剤の使用を含む本発明の方法は、このような不活性化法全てに関して有用である。
【００３０】
本明細書で使用される用語「微生物の不活性化」は、微生物を殺すか、さもなければその繁殖能を妨害するかのいずれかによって微生物が複製するのを完全にまたは部分的に妨げることを意味する。
【００３１】
微生物として、ウイルス（細胞外および細胞内の両ウイルス）、細菌、バクテリオファージ、菌類、血液透過寄生虫および原生動物が挙げられる。典型的なウイルスを挙げると、後天性免疫不全症（ＨＩＶ）ウイルス、Ａ型、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス、シンビスウイルス（ｓｉｎｂｉｓ ｖｉｒｕｓ）、サイトメガロウイルス、水疱性口内炎ウイルス、単純疱疹ウイルス、例えばＩ型およびＩＩ型ウイルス、ヒトＴリンパ球好性レトロウイルス、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、リンパ節症ウイルスＬＡＶ／ＩＤＡＶ、パルボウイルス、輸血透過（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ−ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ：ＴＴ）ウイルス、エプスタイン−バーウイルスおよびこの技術分野の当業者に知られている他のウイルスがある。バクテリオファージにはΦ Ｘ１７４、Φ６、λ、Ｒ１７、Ｔ４およびＴ２がある。典型的な細菌を挙げると、緑膿菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、Ｌ．モノサイトゲン（Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、大腸菌、肺炎杆菌および霊菌がある。
【００３２】
白血球の不活性化は、免疫の抑制または自己免疫反応が望まれるときに、例えば、ドナー白血球が存在するかもしれないとき赤血球、血小板または血漿の輸注を含むプロセスにおいて望ましい。
【００３３】
本発明の方法で処理することができる材料として、ウイルスの不活性化を達成するのに十分な光を与える十分に光輻射線透過性であるか、またはそのような光輻射線透過性を有する体液中に懸濁または溶解させ得る任意の材料がある。このような物質の例は、全血、および血液または血液構成成分に由来する生物活性蛋白質を含んでいる水性組成物である。赤血球、血小板および血漿（新鮮血漿または新鮮凍結血漿）の濃厚液パックがこのような血液構成成分の例である。加えて、医学的疾患の治療で有用な生物活性蛋白質、例えば第ＶＩＩＩ因子、フォン−ウィルブランド因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、ハーゲマン因子、プロトロンビン、抗トロンビンＩＩＩ、フィブロネクチン、プラスミノゲン、血漿蛋白質画分、免疫血清グロブリン、修飾免疫グロブリン、アルブミン、血漿成長ホルモン、ソマトメジン、プラスミノゲン・ストレプトキナーゼ錯体、セルロプラスミン、トランスフェリン、ハプトグロビン、抗トリプシンおよびプレカリクレインを含んでいる体液のような、血液由来蛋白質を含む治療用蛋白質組成物が本発明の除染法で処理することができる。本発明の処理から利益を得ることができるだろう他の体液は、接続中に汚染され、腹膜感染をもたらすときがある腹膜透析に用いられる腹膜透析液である。処理されるべき材料は、血液構成成分、例えば全血、血小板、血漿、白血球または赤血球を含む体液であるが好ましい。体液は分離された血液製剤であってもよい。この方法は血小板の処理に特に有用である。ビタミンＥのクエンチ剤としての使用は血小板の処理に好ましい。赤血球が処理されるとき、グルタチオンのようなチオール含有化合物をクエンチ剤として使用するのが好ましい。
【００３４】
用語「生物活性（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）」は、生きている生物またはその成分に変化をもたらし得る能力を意味する。本明細書で参照される「生物活性蛋白質」に関しての「生物活性」は、不活性化される微生物の一部である蛋白質を意味しない。同様に、光増感剤に関しての「無毒性」は、ヒトおよび他の哺乳動物に対して毒性が低いかまたは毒性がないことを意味し、不活性化される微生物に対して無毒性であることを意味しない。生物活性の「実質的な破壊」とは、ヒトおよび哺乳動物の生物活性蛋白質および細胞に対して損傷作用を有することが知られているポルフィリン並びにポルフィリンの誘導体、代謝産物および前駆体によって引き起こされるほどの、少なくともそのような大きな破壊を意味する。同様に、「実質的に無毒性」とは、血液の滅菌に知られているポルフィリン、ポルフィリンの誘導体、代謝産物および前駆体よりは毒性が低いことを意味する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「血液製剤」には、血液構成成分、および上記定義の血液由来蛋白質を含んでいる治療用蛋白質組成物がある。血液に由来するもの以外の生物活性蛋白質を含んでいる体液も、本発明の方法で処理することができる。
【００３６】
「血液成分を貯蔵するのに有用な溶液」は、血液成分を貯蔵するのに有用であることがこの技術分野で知られている多数の溶液のどれかである。例は本明細書に与えられている。照射には、この技術分野で知られているように、任意、適当な容器および装置が用い得る。流通式かまたはバッチ式のいずれの処理を用いてもよい。バッチ式処理を含む態様では、処理されるべき体液は、攪拌され、そして微生物を実質的に不活性化するに足る十分な時間光輻射線に曝露される光透過性容器中に入れられる。光透過性容器は、透明または半透明のプラスチック製血液バッグであるのが好ましく、そして攪拌手段はシェーカー台であるのが好ましい。光増感剤およびクエンチ剤は、その容器に、粉末、錠剤、カプセルまたはピルとしての乾燥形態で、または液状形態で加えることができ、そして容器はその光増感剤およびクエンチ剤を体液と混合し、かつ微生物の不活性化を確実にするようその体液全部を光輻射線に十分に曝露するために攪拌される。
【００３７】
クエンチ剤および／または光増感剤は、光透過性容器に処理される体液とは別に加えまたは流入させることもできるし、或いは体液にその体液を容器に入れる前に加えることもできる。１つの態様では、光増感剤およびクエンチ剤は凝固防止剤に加えられ、そしてその光増感剤とクエンチ剤と凝固防止剤との混合物が体液に加えられる。光増感剤およびクエンチ剤は、光透過性容器にこのような容器の滅菌前に加えてもよいし、或いは滅菌後に加えてもよい。クエンチ剤はいかなる有効量で加えることができる。好ましい範囲は０．０５〜１００ミリモル濃度であり、さらに好ましくは０．１〜２０ミリモル濃度である。
【００３８】
本発明の除染系では、光輻射線源は、光源と体液用容器との間における光の散乱を防ぐ、さらに重要なことには容器内での体液の実質的な加熱を防ぐ光チャンネルまたはファイバーオプチック管のような導光器を使って体液用の光透過性容器に接続することができる。光源に対する直接曝露は、特に光に曝露される体液の量が少ないときに、血液成分の変性を引き起こし得る１０〜１５℃もの温度上昇をもたらす可能性がある。導光器の使用はいかなる加熱も約２℃未満に保つ。本発明の方法は、また、温度を体液中の所望蛋白質が損傷を受ける温度より低く保つことが必要な場合に、温度センサーおよび冷却機構の使用を含むことができる。温度は、好ましくは約０〜約４５℃の間に、さらに好ましくは約４〜約３７℃の間に、最も好ましくは約２２℃に保たれる。
【００３９】
光輻射線源は、可視光源若しくは紫外線源またはその両光源であることができる。光輻射線源は単純なランプであってもよいし、或いは色々な波長で放射する多重ランプより成っていてもよい。光輻射線源は、約１Ｊ／ｃｍ２から少なくとも約１２０Ｊ／ｃｍ２まで送ることができるべきである。
【００４０】
光増感剤およびクエンチ剤を除染されるべき体液に加え、この体液をこの技術分野の当業者に公知の光透過性容器に入れるための任意の手段が使用でき、このような手段には、典型的には、流れ導管、出入口、貯蔵器、弁等がある。この装置系はポンプ、またはクエンチ剤および光増感剤の除染されるべき体液への流れを、その濃度を前記の有効レベルに調節できるように制御するための調整弁のような手段を含むのが好ましい。１つの態様において、光増感剤およびクエンチ剤は血液アフェレシス装置系への凝固防止剤供給原料と混合される。内因性光増感剤および糖部分を有する誘導体では、その溶液のｐＨは、この技術分野の当業者に知られているように、糖部分の脱離を防ぐために十分に低く保たれるのが好ましい。光増感剤および／またはクエンチ剤は、前もって混合された水溶液、例えば水または貯蔵緩衝液中で除染されるべき体液に加えることができる。光増感剤およびクエンチ剤は、除染されるべき体液に、粉末、ピル、錠剤またはカプセルの形態をした乾燥媒体として加えるのが好ましい。
【００４１】
もう１つの態様では、体液は、例えば米国特許第５，６５３，８８７号明細書に記載されるアフェレシス装置系と共に使用される血液バッグのような光透過性容器に入れられ、そして光輻射線に曝露しながら攪拌される。適したバッグに、ここで説明される採集バッグがある。コロラド州（Ｃｏｌｏｒａｄｏ）、レークウッド市（Ｌａｋｅｗｏｏｄ）のＧａｍｂｒｏ ＢＣＴ社のＳｐｅｃｔｒａＴＭ装置系またはＴｒｉｍａＴＭアフェレシス装置系で使用される採集バッグが特に適している。シェーカー台は、例えば米国特許第４，８８０，７８８号明細書に記載されるとおり、この技術分野の当業者には公知である。バッグは、そのバッグに体液を加えるための少なくとも１つの口を備えている。１つの態様において、光増感剤、好ましくは７，８−ジメチル−１０−リビチル−イソアロキサジンおよびクエンチ剤は、体液を満たしたバッグに、粉末、ピル、錠剤またはカプセルとしての乾燥形態で加えられる。バッグは、次に、シェーカー台の上に置かれ、そして光輻射線の下で実質的に全体液が光輻射線に曝露されてしまうまで攪拌される。別法として、バッグはその中に含められる粉末化された光増感剤およびクエンチ剤と予備パッケージ化されていてもよい。除染されるべき体液は、次に、適切な口を通して加えることができる。
【００４２】
上記の除染装置系は独立型装置として設計することもできるし、或いは患者から抜き取られる、または患者に投与される血液を分離または処理するための、この技術分野の当業者に知られている現存装置に容易に組み込むこともできる。例えば、このような血液処理装置として、コロラド州、レークウッド市のＧａｍｂｒｏ ＢＣＴ社のＳｐｅｃｔｒａＴＭ装置系またはコロラド州、レークウッド市のＧａｍｂｒｏ ＢＣＴ社から入手できるＴＲＩＭＡＴＭアフェレシス装置系、或いはコロラド州、レークウッド市のＧａｍｂｒｏ ＢＣＴ社の米国特許第５，６５３，８８７号および１９９７年９月５日出願の米国特許出願第０８／９２４，５１９号（ＰＣＴ公開ＷＯ第９９／１１３０５号）明細書に記載される装置、並びに他のメーカーのアフェレシス装置系が挙げられる。この除染装置系は、血液を患者またはドナーから引き抜く点の直ぐ下流に挿入することもできるし、血液製剤の患者への挿入直前に挿入することもできるし、或いは血液構成成分の分離前または分離後の任意の時点に挿入することもできる。光増感剤およびクエンチ剤は、好ましい態様では、血液成分に凝固防止剤と共に加えられ、そして別々の照射源およびキュベットが血小板用、血漿用および赤血球用の採集点から下流に配置される。アフェレシス装置系の血液分離容器の上流に単一の血液除染装置系を配置することに比較すれば、３つの独立した血液除染装置系を使用する方が、別々の成分ラインでのより遅い流速がより一層容易に照射できるようにするので好ましい。
【００４３】
処理される体液中に赤血球が存在するときは、この技術分野の当業者であれば了解されるだろうように、それら赤血球による光の吸収を補うために、その体液を薄くし、より高エネルギーの輻射線に対してより長期間曝露し、より長期間攪拌し、または他の血液成分に関して使用するのに必要なよりも狭い容器または導管中で光輻射線に向けることができる。
【００４４】
本明細書では、内因性光増感剤および内因性に基づく誘導体光増感剤を用いるこの発明の除染法は、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを光増感剤として用いて例証されるが、しかし光輻射線によって活性化されて微生物を不活性化させ得るいかなる光増感剤も使用できる。
【００４５】
免疫血液学の研究によって、膜に作用する光活性化剤で処理された血液成分の細胞は、ＩｇＧおよびその細胞膜に関連した他の血漿蛋白質を有することが観察されている。ＩｇＧは、存在すると光活性化プロセス中に細胞と結合する原因となる免疫グロブリン血漿蛋白質である。
【００４６】
ＩｇＧの存在およびＩｇＧが赤血球の膜に結合されるに至る可能性は、光増感剤を使用して赤血球中の病原体を不活性化する際に潜在的な懸念と困難を増す。生理的問題に、輸血患者の細網内皮系組織および補体活性化による処理赤血球の即時クリアランスがある。
【００４７】
おそらくは重要なことであるが、たとえＩｇＧの存在が細胞の生残または製品の安全性に影響を及ぼさないとしても、ＩｇＧが結合することに対する懸念は、診断に関しては密接な関係がある。処理後は、処理細胞に結合したＩｇＧは、細胞を洗浄することによっては、多数回にわたる洗浄が行われるにしても、細胞膜から取り除くことはできない。ＩｇＧの細胞に対する結合の故に、それら細胞は、直接抗グロブリン試験（ＤＡＴまたはクームス試験）が用いられるとき、正の試験結果を示すことがある。
【００４８】
クームス試験は赤血球上の抗体を検出するために用いられる。この試験は免疫グロブリンに対してウサギ抗血清を使用する。ＩｇＧで被覆された細胞がウサギ抗血清と混合すると凝集反応が起こる。ＩｇＧ被覆赤血球が患者に輸注されると、このような製剤を受ける患者は正のクームス試験結果を示すだろうから、医師は患者の血液学的変化を理解するに当たっての彼の重要な診断試験法の１つを失うことになる。
【００４９】
クエンチ剤の使用は、赤血球に対するＩｇＧの結合およびその結果として生ずる全ての正のＤＡＴ結果を妨げるのを助ける。これらのクエンチ剤は、前記の病原体不活性化用化合物の添加前に、その添加と同時に、またはその添加後に処理されるべき血液または血液成分に加えることができる。クエンチ剤は、病原体不活性化用化合物の添加前またはその添加と同時に加えられるのが好ましい。クエンチ剤は、単独かまたは他のクエンチ剤と組み合わせるかのいずれかで光不活性化されるべき生物材料に加えられてもよい。
【００５０】
本発明での使用には、血液成分を実質的に損傷せず、特に、処理後に赤血球の機能を損なわないか、または赤血球を変性しないクエンチ剤が好ましい。また、病原体不活性化用化合物を実質的に妨害しないクエンチ剤も好ましい。赤血球の機能を実質的に損なわせる作用を欠くことは、赤血球の機能を試験するこの技術分野で公知の方法によって測定することができる。例えば、細胞内ＡＴＰ（アデノシン ５’−トリホスフェート）、細胞内２，３−ＤＰＧ（２，３−ジホスホグリセロール）または細胞外カリウムのようなインジケーターのレベルを測定し、無処理対照と比較することができる。さらに、溶血性、ｐＨ、ヘマトクリット値、ヘモグロビン値、浸透圧脆弱性、グルコース消費量およびラクテート産生量も測定することができる。
【００５１】
病原体不活性化用化合物およびクエンチング剤の濃度は前に与えられているけれども、クエンチング剤の濃度は所望されない副反応の望ましい低下をもたらし、同時に赤血球機能のような材料の性質を依然として保護し、そしてまた病原体の望ましいｌｏｇ死滅率を達成するために処理される血液製剤で必要とされるとおり調整することができる。これらの調整は、この技術分野の当業者には公知である。
【００５２】
グルタチオンのようなある種のクエンチ剤は酸化するか、さもなければ経時的に分解または反応することがある。例えば、クエンチ剤がチオール含有化合物であるとき、そのクエンチ剤は酸化してジスルフィド二量体を形成する。このクエンチ剤は、それが実質的に分解してしまうか、さもなければその場で反応してしまう前に病原体不活性化用化合物をクエンチすることができるような時点および濃度で材料に加えられるのが好ましい。病原体不活性化用化合物の添加時点に近い時間におけるグルタチオンの血液または血液成分に対する添加が、例えば酸化またはペプチド分解―これは、例えば血漿のようなある種の生物材料中で起こり得る―によって、起こる可能性のあるグルタチオン濃度の低下を最小限に抑えるのに有利である。
【００５３】
ウイルスに関連して説明したけれども、本発明の方法は、一般に、貯蔵されている血液または血液製剤中に見いだされる、細菌および血液透過寄生虫を含めていかなる生物汚染物を不活性化するのにも有用である。また、特定のウイルス抗原（コート蛋白質かエンベロープ蛋白質のいずれか）に対して向けられるモノクローナルまたはポリクローナル抗体が、光増感剤化合物と共有結合でカップリングすることができる。本発明が用途を見いだし得るだろう他の適用分野として、非感染性ウイルスワクチンの製造、光泳動法による免疫系疾患の治療、核酸結合性光増感剤の細胞毒性による白血球のような生有核細胞の除去、およびある種特定の接近可能癌および腫瘍に対する可能な治療がある。
【００５４】
本発明の１つの方法では、血液および血液成分の照射に有用な光照射用溶液が提供される。本発明の方法で使用される、赤血球用の好ましい光照射用溶液は、５００μＭのリボフラビン、０．９％の塩化ナトリウムおよび４ｍＭのグルタチオンを含んでいる。使用に際して、血液または血液成分は、本発明で説明されるように、またはこの技術分野で知られているように調製される。この血液または血液成分は、本発明で説明されるように光照射用溶液と組み合わされ、そして照射される。照射手順後に、その照射された赤血球は、一般的に使用される貯蔵用溶液、例えば公開ＰＣＴ出願ＷＯ第０１／９４３４９号明細書（これを参照することによって、本発明と矛盾しない範囲までその全体が含められる）に記載される、追加のクエンチ剤、好ましくはグルタチオンが加えられていてもよいＡＳ３中に貯蔵することができる。
【００５５】
グルタチオンにはそれをクエンチ剤として特に有用にする多くの性質がある。それは普通あらゆる種類の細胞に存在する。それは、細菌または脂質外被で覆われたウイルスの膜、例えば細胞膜または脂質コートを実質的に無抵抗に通過できるとは考えられない。グルタチオンはｐＨ７において帯電し、そして能動輸送の非存在下では脂質二重層をいかなる有意な程度にも透過しない。
【００５６】
バッチ系では、除染されるべき体液を、光増感剤およびクエンチ剤と共に、光透過性であるか、または光増感剤を活性化させるために十分な輻射線を内容物に到達させるべく少なくとも十分に光透過性であるバッグの中に入れるのが好ましい。各バッグには、不活性化できるようにするに足る、好ましくは少なくとも約１０μＭの光増感剤濃度を与えるに足る十分な光増感剤が加えられ、そしてそのバッグは、その体液を実質的に全部輻射線に確実に暴露させるように照射、好ましくは約１〜約１２０Ｊ／ｃｍ２で約６〜約３６分の間の期間照射しながら攪拌される。可視光を使用するのが好ましい。光増感剤およびクエンチ剤は粉末としての、或いはピル、錠剤またはカプセルとしての乾燥形態で加えることができる。除染されるべき体液は添加剤または凝固防止剤溶液を含んでいることができ、そして血液製剤または血液成分はそのような溶液の中に貯蔵することができる。本明細書で説明されるように、クエンチ剤はいかなる点においても系に加えることができる。
【００５７】
本発明の方法は、核酸の複製を妨害することによって機能する内因性光増感剤を含めて内因性光増感剤を使用するのが好ましい。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンが、本発明における使用に好ましい光増感剤である。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンと核酸との間に起こると考えられる化学は、一重項酸素依存性プロセス（即ち、ＩＩ型機構）で進行するのではなく、むしろ直接増感剤−基質相互作用（Ｉ型機構）で進行する。Ｃａｄｅｔ等（１９８３年）のＪ． Ｃｈｅｍ．、２３：４２０−４２９は、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの効果はグルタチオン残基の非一重項酸素酸化反応には因らないことを明白に証明している。加えて、アデノシン塩基は、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンとＵＶ線との作用に感受性であると思われる。アデノシン残基は一重項酸素依存性プロセスには比較的不感受性であるから、上記のことは重要である。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンはＵＶ線に暴露したときに大量の一重項酸素を生成させず、その作用を、むしろ、励起状態の増感剤種との電子移動反応による基質（例えば核酸）との直接相互作用によって及ぼすと思われる。細胞および蛋白質に対する無差別損傷は主として一重項酸素源から生ずるから、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの作用についてのこの機械論的経路は、その作用に、有意のＩＩ型化学を有するソラレンのような化合物による場合よりも大きな選択性を許す。
【００５８】
図１５は、除染されるべき体液が入口としての口２８２を備える血液バッグ２８４の中に入れられ、その入口を通して粉末形態の光増感剤２８４がフラスコ２８６から注水孔２８８経由で加えられる本発明の１つの態様を描くものである。クエンチ剤３００も加えられる。光増感剤２９０を溶解し、同時に光輻射線源２６０を賦勢してバッグ２８４中の体液および光増感剤に照射するために、シェーカー台２８０が賦勢されてバッグ２８４を攪拌する。別法として、バッグは、光増感剤およびクエンチ剤を含むように予備パッケージ化して与えることができ、その後バッグに体液が加えられる。
【００５９】
図１６および１７は、血液バッグ、または血液成分を採集および貯蔵する際に使用される他の光透過性容器が乾燥形態か水性形態のいずれかの光増感剤およびクエンチ剤を含むように予備パッケージ化されている本発明の１つの態様を描くものである。血液バッグには、血液成分の貯蔵に必要な添加剤溶液が、別々にか、または分離された血液成分と一緒かのいずれかで加えられる。別法として、添加剤溶液は、同じ容器または接続された容器中において、乾燥形態または水性形態で、単独または所望クエンチ剤およびウイルスの不活性化に必要な光増感剤と一緒のいずれかで予備パッケージ化することができる。バッグ内に予備パッケージ化される光増感剤、クエンチ剤および血液成分添加剤は、乾燥粉末形態、ピル、カプセル、錠剤の形態、液状形態またはそれらの色々な組み合わせ形態をしていることができる。本発明を述べるに当たって、乾燥固体または乾燥形態という用語は、ばらばらの粉末状態、或いはピル、カプセル、錠剤またはそれらのこの技術分野の当業者に知られている任意の同等なもののような固体状態で存在している成分を想定している。
【００６０】
図１６に示されるとおり、第一血液貯蔵バッグ１および第二血液貯蔵バッグ２は、可撓性の管３により互いに接続されている。第一および第二バッグ１および２は、図１７に示されるように、２つの血液バッグ間に可撓性管３を介して配置されている小さい容器４を有することもできる。容器４は、もう１つのバッグ、フラスコ、貯蔵器、小さいシリンダーまたはこの技術分野で知られている任意の同様の容器であることができる。図１７の小容器４または図１６の管３自体は、ある特定の形態の予備パッケージ化成分を２つの血液バッグ１および２と同様の様式で含むことができる。
【００６１】
１つの態様において、光増感剤、クエンチ剤、および血液添加剤成分かまたは生理食塩水のいずれかが、第一バッグ１において予備パッケージ化される。グルコースまたは他の栄養分も、場合によっては、バッグ１において予備パッケージ化できる。血液添加剤成分、クエンチ剤および光増感剤は乾燥固体形態をしていてもよいし、或いは液状形態をしていてもよい。乾燥形態が用いられるならば、バッグには口を通して溶液、または、好ましくは食塩水を加えることができる。分離された血液成分を第一バッグ１に口を通して加え終わると、その結果得られる、血液成分、光増感剤、クエンチ剤、グルコースおよび添加剤溶液を含む媒体は、可撓性管３を経由して、場合によって予備パッケージ化ホスフェートまたは他のエンハンサーを乾燥固体形態か液状形態のいずれかで含んでいる第二バッグ２へと移動する。次に、第二バッグ２は第一バッグ１から分離され、混合され、そして照射される。しかし、照射が光増感剤の添加後に行われる限り、第一バッグまたは第二バッグがどちらでも照射を受けることができることに留意されるべきである。
【００６２】
図１７に示されるもう１つの態様において、第一バッグ１は、固体形態か液状形態のいずれかの予備パッケージ化添加剤溶液を含む。血液成分の添加が終わると、その結果得られる血液成分または成分類を含む媒体は、管３または小容器４を通って第二バッグ２へと流れる。この態様では、固体形態か液状形態のいずれかのホスフェートが管３または小容器４の内部に配置されている。上記混合物が管３または容器４を通って流れるとき、上記ホスフェートは接触するとその混合物中に溶けていく。第二バッグ２に到達すると、その媒体と溶解ホスフェートとの混合物は、バッグ２中の、固体形態かまたは液状形態のいずれかの、予備パッケージ化されたグルコース、クエンチ剤および光増感剤と接触する。次に、第二バッグ２は第一バッグ１から分離され、混合され、そして照射される。
【００６３】
本発明が企図するもう１つ別の態様においては、第一バッグ１は、添加剤溶液を有しまたは有しない、またグルコースを有しまたは有しないクエンチ剤および光増感剤を含んでいることができ、そして管３または小容器４はホスフェートを含んでいることができる。もう１つの態様では、第一バッグ１は添加剤溶液を含み、光増感剤およびクエンチ剤は管３または容器４の中に存在し、そしてホスフェートおよび／またはグルコースは第二バッグ２の中に存在する。光増感剤およびクエンチ剤が第一バッグ１の中で予備パッケージ化され、そしてホスフェートおよび／またはグルコースが管３または容器４の中に存在することも考えられる。第一バッグ１と容器４との間における折れやすい接続（図示されず）の使用が本発明による使用にさらに考えられている。この折れやすい接合具は、体液または媒体が、所望とされるときに管３または容器４の中の構成成分に到達するのを可能にするために手で折られることになろう。
【００６４】
本発明には数多くの変更が可能であることが分かる。添加剤溶液および他の構成成分は、小容器４内のみならずバッグ中でも水性形態か乾燥固体のいずれかで予備パッケージ化することができる。血液内の汚染物を光不活性化するこの系においては、添加剤ホスフェートおよびグルコースを含まない既知の添加剤溶液に追加のホスフェートおよび栄養分、例えばグルコースを加えるのが好ましい。また、ホスフェートを光増感剤およびクエンチ剤から分離しておくことが望ましく、またホスフェートをバッグ系の滅菌中にグルコースから分離しておくことも好ましい。添加剤溶液がホスフェートおよび／またはグルコースを含んでいるならば、追加量のそのような構成成分を加えることは不要であると考えられる。上記のことは数例に過ぎず、それらは限定することを意味しない。構成成分の他の組み合わせも考えられることが分かる。
【００６５】
実施例１
濃厚血小板を血小板添加剤溶液であるＩｓｏｌｙｔｅ Ｓと１０：９０の濃厚血小板：Ｉｓｏｌｙｔｅ Ｓ比で混合した。濃厚血小板と血小板添加剤溶液との混合物は、本発明では「媒体」と称される。添加剤溶液なしの濃厚血小板は、本発明では「血漿」と称される。
【００６６】
濃厚血小板に、および７０：３０の媒体に、１０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。この濃厚血小板および媒体に黄色ブドウ球菌または表皮ブドウ球菌をスパイクし（ｓｐｉｋｅｄ）、そして８０Ｊ／ｃｍ２および３０Ｊ／ｃｍ２で照射し、次いで不活性化を前記のように測定した。結果は表１に示される。
【００６７】
実施例２
標準の血液バッグ中に含まれる実施例１で説明した濃厚血漿に、粉末形態をした２５μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。このバッグに表１に示される細菌をスパイクし、攪拌し、そして１２０Ｊ／ｃｍ２の輻射線に曝露した。不活性化の結果は表１に記載される。
【００６８】
2004520448.tif 000006
【００６９】
実施例３
実施例１で説明した濃厚血小板に、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジン、アロキサジンモノヌクレオチドまたは７，８−ジメチルアロキサジンを加え、続いて黄色ブドウ球菌または表皮ブドウ球菌をスパイクし、そして８０Ｊ／ｃｍ２で照射した。不活性化の結果は表２に示される。
【００７０】
2004520448.tif 000007
【００７１】
実施例４
実施例１の濃厚血小板に、１０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。アリコートは添加剤を含まないか、「クエンチ剤」または酸化防止剤として１０ｍＭのアスコルベートを含むか、または１０ｍＭのＫＩを含んでいた。これらの溶液にＨＳＶ−２、Ｘ１７４、表皮ブドウ球菌または黄色ブドウ球菌をスパイクし、そして８０Ｊ／ｃｍ２で照射した。結果は図２に示される。
【００７２】
実施例５
実施例１の濃厚血小板に、色々な濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。これらの溶液に、２本鎖ＤＮＡエンベロープウイルスである単純疱疹ウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）をスパイクした。照射を８０Ｊ／ｃｍ２で行った。実験を３回繰り返した。３回の試験全てにおいて不活性化が達成された。結果は図３に示される。
【００７３】
実施例６
実施例５のプロトコルに従って、ＨＳＶ ＩＩに代えて表皮ブドウ球菌を用い、４０、８０および１２０Ｊ／ｃｍ２の照射エネルギーにおいて実施した。不活性化の結果は図４に示される。
【００７４】
実施例７
実施例５のプロトコルに従って、１本鎖ＤＮＡバクテリオファージであるΦ Ｘ１７４を用い、色々な濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび照射エネルギーにおいて実施した。不活性化の結果は図５に示される。
【００７５】
実施例８
実施例１の濃厚血小板に、１０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。これらに黄色ブドウ球菌またはΦ Ｘ１７４をスパイクし、そして可視光と紫外線との５０：５０混合光で色々な照射エネルギーにおいて照射した。不活性化の結果は図６に示される。
【００７６】
実施例９
実施例８のプロトコルに従い、微生物として表皮ブドウ球菌およびＨＳＶ−ＩＩを用いて実施した。ＤＹＭＡＸ光源で紫外線と可視光との５０：５０混合光を供給した。不活性化の結果は図７に示される。
【００７７】
実施例１０
実施例１の濃厚血小板に、１０μＭの粉末形態をした７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。試験を添加アスコルベートありおよびなしで行った。１５０ｍＬの試験溶液をＳｐｅｃｔｒａＴＭ血液バッグに入れ、そして振とうし、次いで５０：５０可視光：紫外線を用いて色々な照射エネルギーに曝露した。４０Ｊ／ｃｍ２を受けた後、各バッグの内容物を、そのバッグのスパイク口に残っているかもしれない微生物に因る誤差を避けるために、新しいバッグに移した。不活性化の結果は図８に示される。下向きの矢印は、検出可能であったレベル（２．５ｌｏｇ力価）までの不活性化を示す。
【００７８】
実施例１１
実施例１の濃厚血小板、および３０：７０濃厚血小板：Ｉｓｏｌｙｔｅ ＳのＩｓｏｌｙｔｅ Ｓ中濃厚血小板に、２０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。これら濃厚血小板に２本鎖ＤＮＡエンベロープウイルスである牛痘ウイルスをスパイクし、そして６０Ｊ／ｃｍ２の可視光またはＤＹＭＡＸ ２０００ ＵＶ光源を用いる混合（５０：５０）可視光−紫外線に３０分間曝露した。検出限界は１．５ｌｏｇであった。不活性化の結果は図９に示される。光増感剤なし、Ｉｓｏｌｙｔｅ Ｓ媒体単独中光増感剤、Ｉｓｏｌｙｔｅ Ｓ中血小板媒体、７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンに代えて８−メトキシソラレンを用いているＩｓｏｌｙｔｅ Ｓ媒体中血小板、およびＩｓｏｌｙｔｅ Ｓ媒体中濃厚血小板（３０：７０）を用いて比較を行った。
【００７９】
実施例１２
Ｉｓｏｌｙｔｅ Ｓ媒体中濃厚血小板３０：７０の、１０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを有するおよび有しない試料に牛痘ウイルスをスパイクし、そして５０：５０可視光：ＵＶ線を６０Ｊ／ｃｍ２において色々な時間照射し、そして不活性化の結果を図１０に示されるように比較した。
【００８０】
実施例１３
実施例１で説明した濃厚血小板の試料に、５μＭまたは５０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。試料にＨＩＶ １をスパイクした。図１に示されるキュベットフローセルを用いて、試料にＥＦＯＳ光システムを使用して５０：５０可視光：ＵＶ線を色々なエネルギーにおいて照射した。不活性化の結果は図１１に示される。
【００８１】
実施例１４
ＨＩＶ感染ＡＣＨ−２細胞を実施例１で説明した濃厚血小板の試料に加えた。これらの試料に５μＭまたは５０μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。実施例１３のプロトコルに従って実施した。不活性化の結果は図１２に示される。ＨＩＶの存在を試験細胞に対する細胞変性作用によって検定した。
【００８２】
実施例１５
実施例１４のプロトコルに従って実施し、そしてＨＩＶの存在をＰ２４抗原産生のレベルを定量することによって検定した。不活性化の結果は、図１３に示される。
【００８３】
実施例１６
実施例１で説明した濃厚血小板、並びに３０％の濃厚血小板および７０％のＰＡＳ ＩＩＩ媒体を含んでいる媒体の試料に、６ｍＭのアスコルベートおよび１４μＭの７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを加えた。試料にＨＳＶ−ＩＩをスパイクした。不活性化の結果は図１４および表３に示される。
【００８４】
2004520448.tif 000008
【００８５】
実施例１７
この実施例は、全血から分離された血小板に添加するための新規な血液成分添加剤溶液を比較するものである。６種の商業的に入手できる溶液、即ちＰＡＳ ＩＩ、ＰＭＳ Ｉ−ｐＨ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、ＳｅｔｏＳｏｌ、ＰＡＳ ＩＩＩおよびＰＡＳ（表４にＰＳＳ１〜６とそれぞれ示される）が使用された。公知の各溶液に、有効量の内因性光増感剤である７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を加えた。光増感剤はそれら各種溶液に約１μＭから光増感剤の体液または乾燥媒体中における溶解度までの任意の所望濃度、好ましくは約１０μＭで存在することができる。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの場合、約１〜約１６０μＭの間の濃度範囲、好ましくは約１０μＭが好ましい。各溶液の組成が以下の表４に示され、それは存在する血液成分添加剤の量が変わっている。血液添加剤成分は、錠剤、ピルまたはカプセル形態を含めて、溶媒と混合できるようにされている乾燥媒体のみならず、生理的溶液中に存在することもできる。
【００８６】
2004520448.tif 000009
【００８７】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ １は生理食塩水、およそ約１０ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【００８８】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ ２は生理食塩水、およそ約５ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ約２３ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約２５ｍＭの濃度のリン酸一ナトリウムとリン酸二ナトリウムとの混合物および約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジン、そして有効量のクエンチ剤を含む。
【００８９】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ ３は生理食塩水、およそ約５ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ約３ｍＭの濃度の塩化マグネシウム、およそ約２３ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約２７ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、およそ約２３ｍＭの濃度のグルコン酸ナトリウム、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【００９０】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ ４は生理食塩水、およそ約５ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ約３ｍＭの濃度の塩化マグネシウム、およそ約１７ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約２５ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、およそ約２３ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、およそ約２３．５ｍＭの濃度のグルコース、およそ約２８．８ｍＭの濃度のマルトース、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【００９１】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ ５は生理食塩水、およそ約５．１ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ約１．７ｍＭの濃度の塩化カルシウム、およそ約０．８ｍＭの濃度の硫酸マグネシウム、およそ約１５．２ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約２．７ｍＭの濃度のクエン酸、およそ約３５ｍＭの濃度の重炭酸ナトリウム、およそ約２．１ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、およそ約３８．５ｍＭの濃度のグルコース、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【００９２】
実施例１７において、血小板貯蔵用溶液ＰＰＳ ６は生理食塩水、およそ約１２．３ｍＭの濃度のクエン酸三ナトリウム、およそ約２８ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、およそ約４２ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【００９３】
この好ましい態様の１つの面においては、生理食塩水は水および有効量の塩化ナトリウムを含む溶媒で置き換えてもよい。
【００９４】
この好ましい態様において、血液添加剤溶液は、商業的に入手できる製品、例えばＰＡＳ ＩＩまたはＴ−Ｓｏｌ（ＰＡＳ ＩＩと同じ成分を有する）、並びに有効量のグルコースのような栄養分、リン酸塩のようなエンハンサー、ピルまたは乾燥媒体の形態をした７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含むだろう。
【００９５】
また、血液添加剤溶液は液状形態、有効量のピルまたは乾燥媒体の形態をした７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンを含む他の添加剤溶液から成ることができるだろう。ＰＳＳ ７、ＰＳＳ ８およびＰＳＳ ９が、以下の表５に記載されるそのような血液添加剤溶液の例である。
【００９６】
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【００９７】
表５に記載されるように、ＰＳＳ ７はＲＯＤＩ水中で調製され、そしておよそ１１５ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、およそ１０．０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ６．２ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ１９．８ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（二塩基性）、およそ３０．０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、およそ１４．０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。この溶液はｐＨ７．２を有する。
【００９８】
ＰＳＳ ８はＲＯＤＩ水中で調製され、そしておよそ７８．３ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、およそ５．７ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ１．７ｍＭの濃度の塩化マグネシウム、およそ５．４ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ２４．６ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（二塩基性）、およそ３４．３ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、可変濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。この溶液はｐＨ７．４および２９７ミリモル／ｋｇの容量オスモル濃度を有する。
【００９９】
ＰＳＳ ９はＲＯＤＩ水中で調製され、そしておよそ６８．５ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、およそ５．０ｍＭの濃度の塩化カリウム、およそ１．５ｍＭの濃度の塩化マグネシウム、およそ８．５ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ２１．５ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（二塩基性）、およそ３０．０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウム、およそ１４．０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。この溶液はｐＨ７．２および３０５ミリモル／ｋｇの容量オスモル濃度を有する。
【０１００】
ＰＳＳ ７、ＰＳＳ ８およびＰＳＳ ９において、ＲＯＤＩ水および塩化ナトリウムは食塩水で置き換え得ることが分かる。
【０１０１】
実施例１８
この実施例は、全血から分離された赤血球に添加するための血液成分添加剤溶液を比較するものである。５種の商業的に入手できる赤血球添加剤溶液は、ＡＳ−１、ＡＳ−３、ＡＳ−５、ＳＡＧＭおよびＭＡＰ（表６にＡＳ１、ＡＳ２、ＡＳ３、ＡＳ４およびＡＳ５とそれぞれ示される）であると考えられた。公知の各溶液に、有効量の内因性光増感剤である７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を加えた。光増感剤はそれら各種溶液に約１μＭから光増感剤の体液または乾燥媒体中における溶解度までの任意の所望濃度で、好ましくは約１０μＭで存在することができる。クエンチ剤は０．０５ｍＭから約１００ｍＭの濃度までの範囲で存在することができる。好ましい範囲は約０．１〜約２０ｍＭの間である。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの場合、約１〜約１６０μＭの間の濃度範囲、好ましくは約１０μＭが好ましい。各添加剤溶液の組成が以下の表６に示され、それは存在する血液成分添加剤の量が変わっている。赤血球添加剤溶液成分は、生理的溶液中に、また前記の錠剤、ピルまたはカプセル形態を含めて、溶媒と混合できるようにされている乾燥媒体中に存在することができる。
【０１０２】
実施例１８において、赤血球添加剤溶液ＡＳ１は、生理食塩水、およそ約１２２．０９ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約４１．１６ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１０３】
2004520448.tif 000011
【０１０４】
実施例１８において、赤血球添加剤溶液ＡＳ２は生理食塩水、およそ約６１．０４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２．２２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２３ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ１９．９９ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、約２．１９ｍＭの濃度のクエン酸、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１０５】
赤血球添加剤溶液ＡＳ３は生理食塩水、およそ約４９．９４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２．２２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２８．８１ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１０６】
赤血球添加剤溶液ＡＳ４は生理食塩水、およそ約４９．９４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約１．２５ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２８．８１ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１０７】
赤血球添加剤溶液ＡＳ５は生理食塩水、およそ約０．１０ｍＭの濃度のアデニン、およそ約７．８０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ約７９．９１ｍＭの濃度のマンニトール、およそ約６ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約３９．９６ｍＭの濃度のグルコース、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１０８】
加えて、本発明は、さらに、赤血球凝固防止剤系溶液の分離赤血球に対する添加も企図する。５種の商業的に入手できる凝固防止剤系溶液、即ちＣＰＤ、ＣＰ２Ｄ、ＣＰＤＡ−１、ＡＣＤ−ＡおよびＡＣＤ−Ｂ（表７にＡＢＳ １、ＡＢＳ ２、ＡＢＳ ３、ＡＢＳ ４およびＡＢＳ ５とそれぞれ示される）が考えられた。各溶液に、有効量の内因性光増感剤である７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を加えた。光増感剤はそれら各種溶液に約１μＭから光増感剤の体液または乾燥媒体中における溶解度までの任意の所望濃度で、好ましくは約１０μＭで存在することができる。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの場合、約１〜約１６０μＭの間の濃度範囲、好ましくは約１０μＭが好ましい。各溶液の組成が以下の表６に示され、それは存在する血液成分添加剤の量が変わっている。血液添加剤成分は、生理的溶液中に、溶媒と混合できるようにされている乾燥媒体中に、または前記の錠剤、ピル若しくはカプセルの形態で存在することができる。
【０１０９】
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【０１１０】
実施例１８において、赤血球凝固防止剤系溶液ＡＢＳ １は生理食塩水、およそ約８９．５９ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約１５．５３ｍＭの濃度のクエン酸、およそ約１４１．８２ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約１８．５２ｍＭの濃度の一塩基性リン酸ナトリウム、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１１１】
赤血球凝固防止剤系溶液ＡＢＳ ２は生理食塩水、およそ約８９．５９ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約１５．５３ｍＭの濃度のクエン酸、およそ約２８３．６４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約１８．５２ｍＭの濃度の一塩基性リン酸ナトリウム、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１１２】
赤血球凝固防止剤系溶液ＡＢＳ ３は生理食塩水、およそ約８９．５９ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約１５．５３ｍＭの濃度のクエン酸、およそ約１７７．０５ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約１８．５２ｍＭの濃度の一塩基性リン酸ナトリウム、およそ約２．０３ｍＭの濃度のアデニン、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１１３】
赤血球凝固防止剤系溶液ＡＢＳ ４は生理食塩水、およそ約１３５．９６ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約７４．８０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約４１．６４ｍＭの濃度のクエン酸、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１１４】
赤血球凝固防止剤系溶液ＡＢＳ ５は生理食塩水、およそ約８１．５８ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約４４．８８ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約２４．９９ｍＭの濃度のクエン酸、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を含む。
【０１１５】
実施例１９
この実施例は、全血から分離された赤血球に添加するための血液成分添加剤溶液を比較するものである。５種の商業的に入手できる赤血球添加剤溶液、即ちＡＳ−１、ＡＳ−３、ＡＳ−５、ＳＡＧＭおよびＭＡＰが考えられた。これらの溶液は表８に（１−５）として記載されている。公知の各溶液に、有効量の内因性光増感剤である７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび有効量のクエンチ剤を加えた。光増感剤はそれら各種溶液に約１μＭから光増感剤の体液または乾燥媒体中における溶解度までの任意の所望濃度で、好ましくは約１０μＭで存在することができる。７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンの場合、約１〜約１６０μＭの間の濃度範囲、好ましくは約１０μＭが好ましい。各添加剤溶液の組成が以下の表８に示され、それは存在する血液成分添加剤の量が変わっている。赤血球添加剤溶液成分は、生理的溶液中に、また前記の錠剤、ピルまたはカプセル形態を含めて、溶媒と混合できるようにされている乾燥媒体中に存在することができる。
【０１１６】
実施例１９において、赤血球添加剤溶液１（市販溶液ＡＳ−１）は生理食塩水、およそ約１２２．０９ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約４１．１６ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび可変量の少なくとも１種のクエンチ剤を含む。
【０１１７】
2004520448.tif 000013
【０１１８】
実施例１９において、赤血球添加剤溶液２（市販溶液ＡＳ−３）は生理食塩水、およそ約６１．０４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２．２２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２３ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ１９．９９ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、約２．１９ｍＭの濃度のクエン酸、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび可変濃度の少なくとも１種のクエンチ剤を含む。
【０１１９】
赤血球添加剤溶液３（市販溶液ＡＳ−５）は生理食塩水、およそ約４９．９４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約２．２２ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２８．８１ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび可変濃度の少なくとも１種のクエンチ剤を含む。
【０１２０】
赤血球添加剤溶液４（市販溶液ＳＡＧＭ）は生理食塩水、およそ約４９．９４ｍＭの濃度のデキストロース、およそ約１．２５ｍＭの濃度のアデニン、およそ約２８．８１ｍＭの濃度のマンニトール、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび可変濃度の少なくとも１種のクエンチ剤を含む。
【０１２１】
赤血球添加剤溶液５（市販溶液ＭＡＰ）は生理食塩水、およそ約０．１０ｍＭの濃度のアデニン、およそ約７．８０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム（一塩基性）、およそ約７９．９１ｍＭの濃度のマンニトール、およそ約６ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、およそ約３９．９６ｍＭの濃度のグルコース、約１０μＭの濃度の７，８−ジメチル−１０−リビチルイソアロキサジンおよび可変濃度の少なくとも１種のクエンチ剤を含む。
【０１２２】
光増感剤およびクエンチ剤は、他の添加剤なしの無菌食塩水または緩衝剤溶液中で不活性化される病原体である細胞に加えることもできる。
【０１２３】
実施例２０
実施例２０において、赤血球の各単位をその血漿から分離し、そして３０％のヘマトクリット値まで希釈した。５００μＭのリボフラビン、０．９％の食塩および４ｍＭのクエンチ剤を含む溶液を加えた。添加クエンチ剤はグルタチオンであった。緩やかであるが完全に混合した後、それら単位に４４７ｎＭにおいて５０分間光照射した。これら単位を分析して赤血球のパーセントヘマトクリット値を求め、そしてＤＴＡ試験により赤血球膜の変化を検出した。負のＤＴＡ結果は、膜の変化は起こらなかったことの証拠である。表９は、ＤＴＡ試験（＋または−のいずれかとして）の結果を示す。表９は、また、全血、リボフラビンおよびクエンチ剤による血漿の圧出および希釈後だけの赤血球（後希釈と示される）、および光照射５０分後の赤血球の溶血百分率も比較している。
【０１２４】
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【０１２５】
実施例２１
図１８は、異なる処理条件を用いる赤血球中のＢＶＤＶ死滅の時間経過に対するグラフである。図において、「ＧＳＨ」は還元型グルタチオンを意味し、また「Ｎ−ＡＣ」はＮ−アセチルシステインを意味する。条件「＋ＧＳＨ」、「＋ＧＳＨ＋マンニトール」および「＋Ｎ−ＡＣ」の赤血球は、血漿圧出と、それに続く５００μＭのリボフラビンおよび４ｍＭのクエンチ剤による希釈によって調製された。「１−洗浄」と標識される条件の赤血球は、血漿の圧出、正常食塩溶液中再懸濁、再遠心分離および洗浄溶液の除去、次いで５００μＭのリボフラビンおよび４ｍＭのＧＳＨによる希釈によって調製された。「２９９１洗浄」と標識される条件の赤血球は、３回の手による洗浄の同等物である２９９１洗浄により洗浄され、次いで光照射のために５００μＭのリボフラビンで希釈された（クエンチ剤は加えられなかった）。２９９１洗浄とは、Ｇａｍｂｒｏ ＢＣＴ社（Ｌａｋｅｗｏｏｄ市、ＣＯ州、米国）から入手できる２９９１細胞加工処理機を用いて赤血球を洗浄することを意味する。２９９１洗浄は、赤血球を０．９％ＮａＣｌ ７００ｍＬおよび０．９％ＮａＣｌ中５００μＭのリボフラビン３００ｍＬで洗浄する。この洗浄工程の生成物は、およそ３７０μＭのリボフラビン濃度を有する、ヘマトクリット値６０〜７０％の濃縮ＲＢＣ類の懸濁液である。ある計算容量の洗浄赤血球を、ＥＬＰバッグ中で０．９％ＮａＣｌ中５００μＭのリボフラビンと混合してヘマトクリット値５０％および容量２７６ｍＬの懸濁液を得る。２９９１洗浄はその赤血球懸濁液から細胞外蛋白質を除去した。赤血球が光照射前に完全に洗浄されると、光照射後の赤血球のＤＡＴ結果は負になる。この洗浄の上記赤血球プロセスに対する追加の利益は、ウイルスの死滅速度が高まることである。この洗浄工程は、また、ウイルスをある程度除去できるようにする。
【０１２６】
各時点に対応するエネルギーは次のとおりである：２０分〜４５Ｊ／ｃｍ２；３０分〜６８Ｊ／ｃｍ２；４０分〜９０Ｊ／ｃｍ２；５０分〜１１２Ｊ／ｃｍ２。誤差バーは平均の両側における１つの標準偏差である。細胞は全てヘマトクリット値３０％まで希釈された。最終容量として２６６ｍＬが存在していた。光照射には４４７ｎｍの光が用いられた。１−ＬＥＬＰバッグが１４０ｃｐｍ混合で用いられた。
【０１２７】
図１８に見ることができるように、４ｌｏｇ ＢＶＤＶウイルス死滅は、４ｍＭのグルタチオンおよび５００Ｍのリボフラビンを含む照射用溶液の添加前に採集赤血球から血漿を圧出することによって、２５〜３０分の光曝露において得ることができる。
【０１２８】
実施例２２
図１９は、非洗浄赤血球に比較しての洗浄済み赤血球におけるＢＶＤＶのｌｏｇ低下を比較しているグラフである。図から分かるように、非洗浄赤血球から得られる結果には、非洗浄赤血球中における血漿蛋白質の存在に起因してより大きな変動がある。図１９で用いられている略号および他の条件は、図１８におけるものと同じである。マンニトールも加えられた。
【０１２９】
実施例２３
図２０は、血小板中におけるビタミンＥの存在下および非存在下でのＢＶＤＶウイルスの不活性化速度論を示しているグラフである。図２０はｌｏｇウイルス力価を示す。４１９ｎｍの光が、３０μＭのリボフラビンと共に１２０ｃｐｍの線混合で用いられた。
【０１３０】
図２１は、ビタミンＥを有するおよび有しない血小板試料間に観察される不活性化レベルを示しているグラフである。図２０〜２１に示される比較できる条件下での最終結果は、ビタミンＥの存在下ではウイルスの死滅レベルに実質的な低下はないことを示している。
【０１３１】
図２２は、色々な処理条件下における、放射能標識された霊長類の血小板（酸化防止剤を有するおよび有しない、並びに無処理対照）の生残率の結果を示しているグラフである。この結果は、ビタミンＥおよびビタミンＣの添加により観察される細胞の回収率に実質的な改善（無処理対照のレベルに戻ること）が存在することを示している。
【０１３２】
実施例２４
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【０１３３】
表１０は、クエンチ剤およびリボフラビンと共にインキュベートされ、そして１９０Ｊ／ｃｍ２において光照射された赤血球のＤＡＴ結果を示す。赤血球はクエンチ剤およびリボフラビンの添加前に洗浄されなかった。赤血球は、１５０ｍＬのＥＬＰバッグ中において容量７７ｍＬ溶液および３８ｍＬの空気中で光照射された。赤血球はヘマトクリット値３０％まで希釈された。各単位に、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（ＮＡＣ）かまたはグルタチオン（ＧＳＨ）のいずれかのクエンチ剤が、色々な５００μＭリボフラビンおよび０．９％食塩水中濃度で加えられた。クエンチ剤を含まない対照単位は、０．９％食塩水中に５００μＭのリボフラビンを含んでいた。
【０１３４】
表から分かるように、より高い濃度のクエンチ剤を含んでいる単位は、より低いクエンチ剤濃度を有するかまたはクエンチ剤を全く含まない単位よりも低い百分率の溶血を受けた。光照射用溶液に対するクエンチ剤の添加は正のＤＡＴ結果を防いだ。
【０１３５】
上記の全ての溶液に関し、濃度は全ておおよその値であり、それらはこの技術分野の当業者であれば直ちに理解されるように変えることができる。また、光増感剤または添加剤構成成分が乾燥形態で加えられるべきならば、それらのグラム重量は上記に与えられる濃度から容易に求めることができる。
【０１３６】
以上の説明は例示説明のみの目的のためであったこと、および本発明の範囲から逸脱しない限り多数の変更がなされ得ることはこの技術分野の当業者であれば容易に理解されるだろう。例えば、名を挙げたもの以外の他の光増感剤、好ましくは核酸に結合し、それによって核酸が複製されないようにする光増感剤、さらに好ましくは毒性がなく、かつ有毒な破壊生成物を有しない光増感剤を用いることができる。さらに、光増感剤を用いて体液を除染する流通装置系を組み立てるための、本明細書に記載されるものと同等な構造物は、この技術分野の当業者であれば、過度の実験を行うことなく、本発明の教示に従って容易に案出することができる。加えて、具体的に例示されるもの以外のクエンチ剤も使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】
９０％の血漿中血小板および１０％の血小板添加剤溶液（９０：１０）、並びに３０％の血小板と７０％の添加剤溶液（３０：７０）を用いる、血小板製剤および照射エネルギーの関数としての細菌の不活性化を描いている。
【図２】
ウイルス、バクテリオファージおよび細菌の不活性化に対する、酸化防止剤の濃厚血小板に添加することの効果を示す。
【図３】
半紫外線（ｈａｌｆ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｌｉｇｈｔ）および半可視光（ｈａｌｆ ｖｉｓｉｂｌｅ ｌｉｇｈｔ）を用いての２０Ｊ／ｃｍ２の照射エネルギーにおける、単純疱疹ＩＩ型ウイルスの、光増感剤の濃度の関数としての不活性化曲線を示す。
【図４】
色々な濃度の光増感剤および色々な照射エネルギーにおける表皮ブドウ球菌の不活性化を示す。
【図５】
色々な濃度の光増感剤および色々な照射エネルギーにおけるΦ Ｘ１７４の不活性化を示す。
【図６】
紫外線と可視光との５０：５０混合光を使用しての、色々な照射エネルギーにおける黄色ブドウ球菌およびΦ Ｘ１７４の不活性化を示す。
【図７】
可視光と紫外線との５０：５０混合光を使用しての、色々な照射エネルギーにおける表皮ブドウ球菌およびＨＳＶ−ＩＩの不活性化を示す。
【図８】
攪拌され、そして色々なエネルギーレベルにおいて照射された血液バッグ中のＨＳＶ２ウイルスの不活性化を示す。
【図９】
紫外線単独または５０：５０の可視光と紫外線を用いての、色々な体液における牛痘ウイルスの不活性化の結果を比較している。
【図１０】
増感剤を使用するおよび使用しない、色々な照射時間における牛痘ウイルスの不活性化の結果を比較している。
【図１１】
５および５０μＭの光増感剤および色々な照射エネルギーにおける細胞外ＨＩＶ−１の不活性化を比較している。
【図１２】
５および５０μＭの光増感剤および色々な照射エネルギーにおける細胞内ＨＩＶ−１の不活性化を比較している。
【図１３】
５および５０μＭの光増感剤および色々な照射エネルギーにおける、ｐ２４抗原レベルを使用しての細胞内ＨＩＶ−１の不活性化を比較している。
【図１４】
濃厚血小板、および血小板添加剤溶液をアスコルベートと共に含んでいる媒体中の濃厚血小板を使用しての、色々な照射レベルにおけるＨＳＶ−ＩＩの不活性化を示す。
【図１５】
処理される体液および光増感剤を含ませるための血液バッグ、および体液を光源からの光輻射線に曝露しながら攪拌するためのシェーカー台を使用する本発明の態様を示す。
【図１６】
血液または他の体液中の汚染物を不活性化するのに必要な光増感剤を含むように予備パッケージ化されている血液バッグを使用する本発明の態様を示す。
【図１７】
血液バッグ間の管ライン中に容器を有する、図１６における血液バッグを使用する本発明の態様を示す。
【図１８】
異なる処理条件を使用しての赤血球中における時間経過に対するＢＶＤＶの死滅を示す。
【図１９】
洗浄済み赤血球中におけるＢＶＤＶのｌｏｇ低下を、クエンチ剤を有するおよび有しない非洗浄赤血球と比較して示す。
【図２０】
血小板中におけるビタミンＥの存在下および非存在下でのＢＶＤＶの不活性化速度論（ｌｏｇウイルス力価）を示す。
【図２１】
血小板中にビタミンＥを有するおよび有しない試料間の観察不活性化レベルを示す。
【図２２】
色々な処理条件下における霊長類の放射能標識血小板（酸化防止剤を有するおよび有しない、並びに無処理対照）の生残率を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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