(57)【要約】本発明は、少なくとも２つの官能性部に結合し得る所定の標的についてのリガンドのダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成のための方法に関する。この方法は、以下の工程を包含する：（ｉ）上記標的に結合し得る官能性部を有するｎ分子のセットを選択する工程であって、上記分子は部分の形成下で互いに可逆的に結合し得、ここでｎは、１以上の整数である、工程；（ｉｉ）上記ｎ分子のセットを一緒に混合する工程；（ｉｉｉ）上記混合物を、官能性部の異なる組み合わせを有する部分の形成下で、平衡に達するまで、可逆的な結合形成および開裂をさせ得る条件に供する工程；（ｉｖ）必要に応じて上記部分をリガンドに変換する工程；（ｖ）工程（ｉ）から（ｉｖ）をｎ回繰り返す工程であって、各回、ｎ分子の上記セットの１つの異なる分子が排除される工程；（ｖｉ）得られた上記混合物の各々の、所定の標的に結合する能力を評価する工程。
2004508344.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの官能性部と結合し得る、所定の標的に対するリガンドのダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成のための方法であって、前記方法は、以下の工程を包含する：
（ｉ）前記標的に結合し得る官能性部を有するｎ分子のセットを選択する工程であって、前記分子は部分の形成下で互いに可逆的に結合し得、ここでｎは、１以上の整数である、工程；
（ｉｉ）前記ｎ分子のセットを一緒に混合する工程；
（ｉｉｉ）前記混合物を、官能性部の異なる組み合わせを有する部分の形成下で、平衡に達するまで、可逆的な結合形成および開裂をさせ得る条件に供する工程；
（ｉｖ）必要に応じて前記部分をリガンドに変換する工程；
（ｖ）工程（ｉ）から（ｉｖ）をｎ回繰り返す工程であって、各回、ｎ分子の前記セットの１つの異なる分子が排除される工程；
（ｖｉ）得られた前記混合物の各々の、所定の標的に結合する能力を評価する工程。
【請求項２】
少なくとも２つの官能性部と結合し得る、所定の標的に対するリガンドのダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成のための方法であって、前記方法は、以下の工程を包含する：
（ｉ）前記標的に結合し得る官能性部を有するｎ分子のセットを選択する工程であって、ｎは１以上の整数であり、そして前記官能性部をスペーサー基により連結し、それにより前記官能性部の異なる組み合わせを有する部分のセットを作製する工程；
（ｉｉ）前記部分のセットを一緒に混合する工程；
（ｉｉｉ）前記混合物を、スペーサー基の、またはスペーサー基での可逆的な結合形成および開裂を可能にする条件に供し、それにより新たな部分の形成下で前記官能基をかき混ぜる工程；
（ｉｖ）生成された前記部分を必要に応じてリガンドに変換する工程；
（ｖ）工程（ｉ）から（ｉｖ）を数回繰り返す工程であって、各回、前記ｎ個の官能性部の１つの異なる官能性部が排除される工程；
（ｖｉ）上記（ｉ）〜（ｖ）の工程を行った後に、得られた前記混合物の各々の、所定の標的に結合する能力を評価する工程。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法であって、工程（ｉｉｉ）の後に得られた前記混合物が、工程（ｖ）が前記分子または官能基を用いて行われる前に、結合形成および開裂のプロセスを終止する条件に供される、方法。
【請求項４】
請求項１または３のいずれかに記載の方法であって、工程（ｖ）において、ｎ分子またはｎ官能性部の前記セットの１つ以上の分子または官能基が、工程（ｉ）から（ｉｖ）が繰り返される度に排除される、方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の方法であって、工程（ｉ）〜（ｉｖ）が反復され、各回、最も活性な分子または官能性部と、少なくとも１つの更なる分子または官能性部とが排除される、さらなる工程（ｖｉｉ）を含む、方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の方法であって、それぞれの工程において得られる混合物が分析され、そしてその結果が比較される、方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の方法であって、前記官能性部が、アミノ基およびイミノ基およびそれらの誘導体、ヒドロキシ基メルカプト基およびそれらの誘導体、オキソおよびチオキソ基、ホルミルおよびチオホルミル基、アリール基、置換アリール基、フェニル基、置換フェニル基、ピリジル基およびそれらの誘導体、カルボキシル基およびカルボキシラート基およびそれらの誘導体、アルキルオキシカルボニル基、（ジ）チオカルボキシル基およびそれらの誘導体、（ジ）チオカルボキシラート基、カルバモイル基およびそれらの誘導体、スルホ、スルフィノおよびスルフェノ基およびそれらの誘導体、アルキルオキシスルホニル、アルキルオキシスルフィニルおよびアルキルオキシスルフェニル基、スルファモイル、スルフィナモイルおよびスルフェナモイル基およびそれらの誘導体、シアノおよび（イソ）（チオ）シアナート基、ヒドロペルオキシ基、ニトロソ基、ヒドロキシアミノ基、ヒドラジノ基、−ＮＲ１Ｒ２、−＋ＮＨＲ１Ｒ２、および−＋ＮＲ１Ｒ２Ｒ３基（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、同一であるかまたは異なり、そして１〜４０Ｃ原子を有するアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、アルキルアリールを表す）、−＋ＯＲ１Ｒ２基（Ｒ１およびＲ２は同一であるかまたは異なり、そして１〜４０Ｃ原子を有するアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、アルキルアリールを表す）、ヒドラジド基、環にＮ、Ｏ、およびＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を有するヘテロ環状基、アミノ酸およびオリゴペプチドおよびポリペプチド、糖、糖誘導体、ならびにそれらのオリゴマーおよびポリマー、ならびに核酸およびその誘導体からなる群から選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記官能性部が糖であり、前記糖が好ましくはヘキソースおよびペントースからなる群から選択される、方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の方法であって、前記官能性部を有する前記分子が、それ自体、アミノ基、アルデヒド基、ケト基、チオール基、オレフィン基、アルコール基、カルボニル基、ヒドラジン基、ヒドロキシルアミン基、およびホウ酸塩基から選択される官能基を有する、方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の方法であって、前記少なくとも２つの官能性部が、アミン、アセタール、オキシム、エステル、アルケン、イミン、アシルヒドラゾン、およびジスルフィドからなる群から選択される基によって連結されている、方法。
【請求項１１】
前記可逆的結合形成および開裂が、前記溶液のｐＨを調整することによって終止および開始される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記標的がタンパク質、酵素、生物学的レセプター、または抗体である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記標的が、炭水化物結合タンパク質、好ましくはレクチン、特にコンカナバリンＡである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的がカルボニックアンヒドラーゼまたはアセチルコリンエステラーゼである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記リガンドが、基質、特に前記標的のアクチベーターおよびインヒビターから選択され、前記標的が酵素またはそのアナログである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記リガンドが、レセプターのアゴニストおよびアンタゴニストからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記リガンドが抗原であり、前記標的が抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって得られ得るリガンドのダイナミックコンビナトリアルライブラリー。
【請求項１９】
前記リガンドがインヒビターである、請求項１８に記載のライブラリー。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれかに記載の方法によって得られ得る分子。
【発明の詳細な説明】
本発明は、コンビナトリアルライブラリー（ＣＬ）を生成、および１つの所定の官能性部または少なくとも２つの官能性部の組み合わせの相対活性の評価のための方法に関する。相対活性の評価は、いわゆるダイナミックデコンボリューションによって行われる。
生物学的に活性な化合物および医薬は、伝統的に、いわゆるリード化合物を変化させることによって従来の化学的または生物学的方法によって生成された。これらの化合物改変体の生成には時間がかかるため、これらの化合物の相対的に小さなプール（小さいライブラリー）のみが生物学的試験のために利用され得る。
これらの問題は、コンビナトリアルケミストリー（ＣＣ）によって克服され得る。そこでは、種々の基本的成分からなるセットを使用して、特定の化学反応を連続的かつ反復的に適用することによって、種々の新たな化合物を生成する。成分間の非可逆的な共有結合は、個々に並行してか、または同じ区画においていっせいに行われる。それゆえ、構成要素の広範な集団の巨大なコンビナトリアルライブラリー（ＣＬ）が短時間のうちに利用可能となる。ＣＣは、それゆえ、分子の幾何学的および相互作用的空間を、分子多様性生成を介して探索するための非常に強力な方法であり、したがって、別々の部分として存在する異なる分子の大きな集団に基づいている。
これとは対照的に、いわゆるダイナミックコンビナトリアルケミストリー（ＤＣＣ）は、可逆的なアセンブリプロセスを必要とする概念的に異なるアプローチであり、そしてその構成要素は、分子または超分子のいずれかである。
したがって、ＤＣＣは、基本的な成分のセットの間の可逆的な反応または相互作用に依存して、可能性のある部分の仮想のコンビナトリアルライブラリー（ＶＣＬ）に対するアクセスを提供し、ライブラリーの活性成分の標的により駆動される生成および増幅を可能にする。したがって、それは、所望の最適種が選好的に発現され、そしてＶＣＬから回収されるセルフスクリーニングプロセスを表す。ＤＣＣは、静的なコンビナトリアルケミストリー（ＳＣＣ）を超えて、適合性／進化的な化学システムに向かって拡大する。酵素、レセプター、または抗体のような標的に結合するリガンドのサーチのために特に有用である。検出された適切なリガンドは、医薬として使用され得る。
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　１９９７，９４，２１０６−２１１０において、Ｉ，ＨｕｃおよびＪ．−Ｍ．Ｌｅｈｎは、１セットのアルデヒドおよび１セットのアミンから、イミンのダイナミックコンビナトリアルライブラリーを生成するための方法を開示する。この方法は、認識が関与するアセンブリによる酵素カルボニックアンヒドラーゼのインヒビターの合成に関する。上記のイミンの合成は、上記酵素の存在下（いわゆる適合的コンビナトリアルライブラリー）で行われるか、または上記酵素は、平衡後に添加される（いわゆる予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリーまたはポストダイナミックコンビナトリアルライブラリー、ｐＤＣＬ）かのいずれかである。
本出願人の出願番号ＰＣＴ／ＥＰ０１／０２３１０を有するまだ公開されていないＰＣＴ出願は、コンカナバリンＡに対するダイナミックコンビナトリアル炭化水素ライブラリーのインサイチュ生成およびスクリーニングを開示する。植物レクチンコンカナバリンＡは、炭化水素結合タンパク質の広範なクラスに属する。それは、ライブラリー生成の間に存在するか、または平衡後に添加されるかのいずれかである。
いずれの場合においても、ライブラリーの生成において形成された化合物は、それらが参照物質との比較かまたは公知の分析方法によって分析される前に、単離および分離されなければならない。これはしばしば時間がかかることであるか、または不可能でさえあり得る。同じことが、しばしば静的コンビナトリアルライブラリーを介して生成されたインヒビターについても言える。
これらの欠点を回避するために、ＶＣＬまたはＳＣＬ（静的コンビナトリアルライブラリー）の簡単で効率のよいスクリーニングおよび活性化合物／構成要素の迅速な同定についての強い必要性が存在する。この問題は、本発明の方法によって解決される。この方法は、種々のプロセスのための、基質、インヒビター、レセプター、触媒およびキャリアの生成および簡単な同定を、仮想的コンビナトリアルライブラリーにより可能にする。
本発明は、リガンドのダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成およびスクリーニングのための方法に関する。１つの方法は、以下の工程を包含する：
（ｉ）上記標的に結合し得る官能性部を有するｎ分子のセットを選択する工程であって、上記分子は部分の形成下で互いに可逆的に結合し得、ここでｎは、１以上の整数である、工程；
（ｉｉ）上記ｎ分子のセットを一緒に混合する工程；
（ｉｉｉ）上記混合物を、官能性部の異なる組み合わせを有する部分の形成下で、平衡に達するまで、可逆的な結合形成および開裂をさせ得る条件に供する工程；
（ｉｖ）必要に応じて上記部分をリガンドに変換する工程；
（ｖ）工程（ｉ）から（ｉｖ）をｎ回繰り返す工程であって、各回、ｎ分子の上記セットの１つの異なる分子が排除される工程；
（ｖｉ）得られた上記混合物の各々の、所定の標的に結合する能力を評価する工程。
別の方法は、以下の工程を包含する：
（ｉ）上記標的に結合し得る官能性部を有するｎ分子のセットを選択する工程であって、ｎは１以上の整数であり、そして上記官能性部をスペーサー基により連結し、それにより上記官能性部の異なる組み合わせを有する部分のセットを作製する工程；
（ｉｉ）部分の上記セットを一緒に混合する工程；
（ｉｉｉ）上記混合物を、スペーサー基の、またはスペーサー基での可逆的な結合形成および開裂を可能にする条件に供し、それにより新たな部分の形成下で上記官能基をかき混ぜる工程；
（ｉｖ）生成された上記部分を必要に応じてリガンドに変換する工程；
（ｖ）工程（ｉ）から（ｉｖ）を数回繰り返す工程であって、各回、上記ｎ個の官能性部の１つの異なる官能性部が排除される工程；
（ｖｉ）上記（ｉ）〜（ｖ）の工程を行った後に、得られた上記混合物の各々の、所定の標的に結合する能力を評価する工程。
本発明によれば、本明細書において使用される用語は、以下の意味を有する：
本発明の方法はまた、標的のダイナミックコンビナトリアルライブラリーを生成するために使用され得る。ついで、この方法は、上記のリガンドの発見におけるのと同じ工程を包含するが、しかし、ここで標的は、リガンドの代わりに使用されるか、またはその逆である。
「官能性部」とは、任意の極性、非極性、親水性または親油性、または帯電したユニットまたはサブユニットまたは電子ドナーまたは電子アクセプター基を意味する。一方で「官能性部」には、アミノ基およびイミノ基およびそれらの誘導体のような簡単な官能性部、ヒドロキシおよびメルカプト基およびそれらの誘導体、オキソおよびチオキソ基、ホルミルおよびチオホルミル基、アリール基、置換アリール基、フェニル基、置換フェニル基、ピリジル基およびそれらの誘導体、カルボキシル基およびカルボキシラート基およびそれらの誘導体、アルキルカルボニル基、（ジ）チオカルボキシル基、およびそれらの誘導体、（ジ）チオカルボキシラート基、カルバモイル基およびそれらの誘導体、スルホ基、スルフィノ基およびフルフェノ基およびそれらの誘導体、アルキルオキシスルホニル基、アルキルオキシスルフィニル基およびアルキルオキシスルフェニル基、スルファモイル基、スルフィナモイル基、およびスルフェナモイル基およびそれらの誘導体、シアノおよび（イソ）（チオ）シアナート基、ヒドロペルオキシ基、ニトロソ基、ヒドロキシアミノ基、ヒドラジノ基、−ＮＲ１Ｒ２、−＋ＮＨＲ１Ｒ２および−＋ＮＲ１Ｒ２Ｒ３基（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、同一であるかまたは異なり、そして１〜４０Ｃ原子を有するアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、アルキルアリールを表す）、−＋ＯＲ１Ｒ２基（Ｒ１およびＲ２は同一であるかまたは異なり、そして１〜４０Ｃ原子を有するアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、アルキルアリールを表す）、ヒドラジド基、ならびに当業者に公知の任意の他の適切な基が含まれる。
他方、「官能性部」にはまた、より複雑な成分が含まれ、そして非限定的な例として、環にＮ、Ｏ、およびＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を有するヘテロ環状基、アミノ酸およびオリゴペプチドおよびポリペプチド、糖（好ましくはヘキソースおよびペントース）、糖誘導体（例えば、過アセチル化糖）、ならびにそれらのオリゴマーおよびポリマー、ならびに核酸およびその誘導体が含まれる。
したがって、その官能性部は、分子に結合され得、すなわち、官能性部（単数または複数）を有する分子が形成される。その官能性部はまた、それ自体、分子であり得る（したがって、官能性部を有する分子を形成する）。その１つの例は、糖分子である。
これらの分子、すなわち、官能性部を有する分子、またはそれぞれ、官能性部自体である分子は、別の分子上に存在する官能基と可逆的結合形成を可能にするために、さらに、１つ以上の官能基を有し得る（以下を参照のこと）。
ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの成分が互いに組み合わされると、「部分（ｅｎｔｉｔｙ）」が形成される。これらの部分は、すでに、少なくとも２つの官能性部を有する「リガンド」を提示して標的に結合する。それらはまた、リガンドの前駆体を提示するのみであり得る。これは、別の反応が起こって、その部分をリガンドに変換しなければならないこと（例えば、生成されたイミンのアミンへの還元）を意味する。その部分はまた、「標的」を表し得る。
「リガンド」は、代表的には１５００を超えない分子量、好ましくは１０００を超えない分子量、有利には５００を超えない分子量を有する分子を意味し、標的に対する親和性を有する（すなわち、水素結合、疎水性相互作用、電荷−電荷相互作用、ファンデルワールス相互作用、ドナーアクセプター相互作用、電荷移動相互作用、金属イオン結合などのような１つまたは複数の弱結合を形成することによって標的と相互作用し得る）。リガンドは、一般に、「標的」と相互作用し得る少なくとも２つの官能性部を有する。
「標的」は、代表的には５０００より大きい分子量を有する生物学的高分子または合成高分子を意味する。生物学的高分子は、リポタンパク質、糖タンパク質、タンパク質のアナログを含むタンパク質であり得、ここで、そのペプチド結合−ＣＯ−ＮＨ−は、類似の結合（おそらく、イミン、エステル、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、ホスフェート、ホスホネート、ホスホンアミド、グアニジン、ウレア、チオウレア、またはイミド結合のような可逆的結合）によって置換されるか、または、そのアミノ酸は、その合成誘導体によって置換される。天然のタンパク質は、異なる官能性を有し得、それらは、すなわち、酵素、レセプター、または抗体として作用し得る。レセプターは、膜レセプター、ホルモンレセプター、またはシグナルトラスデューサーであり得る。
標的が酵素である場合、得られるために探索されるリガンドは、その酵素の基質、インヒビター、またはアクチベーターとして作用し得る。
標的がレセプターである場合、得ようと探索されるリガンドは、そのレセプターの天然または合成のリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストとして作用し得る。
標的が抗体である場合、得られるために探索されるリガンドは、その抗体の抗原として作用し得る。
標的が抗原である場合、得られるために探索されるリガンドは、その標的の抗体として作用し得る。
本発明の範囲は、生物学的標的に限定されていない。任意の天然または合成の有機および無機標的が使用され得る。一般に、活性アッセイが存在する任意の種類の標的が適切である。その活性は、例えば、蛍光、粘度、伝導率、またはＩＲもしくはＵＶ吸収を測定することによって、決定され得る。したがって、適切な標的は、上記に引用されたものに加えて、ゼオライト、包接化合物、オリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴサッカライド、センサー、クラスター、ＲＮＡアプタマー、有機触媒または無機触媒、イオノフォア、任意の種類の環状高分子（ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ）（例えば、金属環状高分子（ｍｅｔａｌｌｏｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ）、環状高分子ラクタム、環状高分子エステル、２環状高分子クリプタンド、および高分子環状オリゴコレート）、任意の種類の合成ポリマー（例えば、ポリアミノ酸、ポリアミド、ポリエステル、ポリアルコール、およびそれらの混合物など）であり得る。リガンドは、上記の任意の種類の官能基を有し得る。カチオンまたはアニオンのような簡単な「分子」でも、リガンドとして作用し得る。一般に、すべての種類の分子（そのうちの１つはリガンドとして作用し得、そして他の１つは標的として作用し得る）は、本発明にしたがう方法において使用されるのに適している。
「可逆的」とは、動的平衡（ｄｙｎａｍｉｃ　ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ）における、結合形成および開裂のことをいう。可逆的結合は、可逆的共有結合反応を含むのみならず、非共有結合相互作用（例えば、金属イオン座標、πスタッキング、水素結合、または電荷−電荷相互作用）を含む可逆的結合プロセスをも含む。
可逆的共有結合反応が特に適している。なぜなら、結合形成および開裂は、特定の条件において生じ得、かつ他の条件においては阻害され得るからである。可逆的反応／結合は、生理学的条件においてまたはその近くで起こるべきである。一般に、熱力学的に最も安定な（超分子）種の量が、最も大きい量である。可逆的結合形成下で他の官能基と反応し得、そしてその官能基が官能性部を有する分子中に存在する官能基の例には、アミノ基、アルデヒド基、ケト基、チオール基、オレフィン基、アルコール基、カルボニル基、ヒドラジン基、ヒドロキシルアミン基、およびホウ酸塩基が挙げられる。上記の基が関与する可逆的共有結合反応の例には、カルボニル基がイミン、アシルヒドラゾン、アミド、アセタール、およびエステルの形成下で反応するものである。特に、アミノ基がカルボニル基と反応してイミン、オキシム、またはヒドラゾンとなる反応は、有用である。ジスルフィドにおけるチオール交換またはホウ酸エステルにおけるアルコール交換のような反応は、さらなる例であり、可逆的Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒおよび他の熱誘導もしくは光誘導再配置（例えば、シグマトロピー転位および電子環状転位）、ならびに水に可溶性であり得る触媒を使用するＭｉｃｈａｅｌ反応またはアルケン複分解もまたそうである。光誘導相互変換は、光力学的コンビナトリアルプロセスに導く別の可能性を表す。
ダイナミックライブラリーはまた、コンホメーション的性質またはコンフィギュレーション的性質のものであり得る：例えば、シス−トランス異性体化（ここでは、コンフィギュレーションの差異が選択において使用され得る）。コンホメーションの力学的プロセスは、例えば、内部回転または環および部位変換である。他の適切なライブラリー成分、可逆的プロセス、および生物学的標的は、当業者に公知である。
本発明の方法は、好ましくは、予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリー（ｐＤＣＬ）を利用する：このライブラリーの構成要素は、標的の非存在下で可逆的相互変換および平衡によって生成される。平衡に達した後に、ダイナミックプロセスは止められる。これは、例えば、反応条件を変えることによって達成され得る。適切であれば、その標的は、ライブラリーの生成の経過において存在し得るが、これは、好ましい実施形態ではない。
可逆性が止められた後で、標的が添加される。公知の方法では、この工程は、適切なリガンドを「探り出」し、そしてこれらを標的からの放出後に分析するために行われた。これとは対照的に、本発明による方法においては、リガンドの混合物の、この標的に結合する能力を評価するためにこの標的は添加され、好ましくは平衡に達した後に添加される。
リガンドがインヒビターであり、そして標的が酵素である場合、リガンドの、標的に結合する能力を評価することは、単に、その酵素をその混合物に添加し、そしてその酵素活性を測定することによって達成され得る。この方法は、反応を触媒する（すなわち酵素として作用する）すべてのタンパク質について有効であり、その結果、酵素活性の測定が可能である。一般に、本発明の方法は、その活性アッセイが公知である任意のタンパク質について使用され得る。一般に、本発明の方法は、ライブラリーの量と比較して少量の標的および公知の方法におけるようにより少量（適合的または予備平衡化ＤＣＬ）を必要とする。この能力は、当業者に公知の任意の適切な方法によって評価され得る。例として、酵素活性の測定は、Ｅｌｌｍａｎ試験によって行われ得る。ライブラリーによる酵素活性の阻害は、所定の平衡化混合物における１つまたは数個の活性リガンドの存在を示す。
次いで、所定の官能性部の、標的に結合する相対的能力を、ダイナミックデコンボリューションによって評価する。この原理において、ダイナミックライブラリーは、第一のライブラリーの生成において使用されるものと同一の条件下で再び生成される；しかし、この第２のライブラリー生成において、以前に使用した成分の１つは、排除される（すなわち、平衡条件下でのライブラリー生成の途中には存在しない）。その可逆性は、次いで、再び止められ、そしてこのようにして得た混合物の、標的と相互作用する能力を、公知の方法によって測定する。この手順は、次いで、数回繰り返され、その度に、最初のライブラリー生成に存在した１つの成分が排除される。各々新たに生成されたライブラリーの、標的と相互作用する能力が測定される。
したがって、最初のライブラリーが、ｎ個の出発分子から生成されるとき（ｎは、１より大きい整数）、この手順は、ｎ回繰り返され、ｎ−１が出発分子であり、このようにして、ｎ個の新たなライブラリーおよび１つのオリジナルライブラリーを生成する。次いで、この得られた混合物の、標的に結合する能力が（可逆性が止められた後に）、比較される。
新たに生成されたライブラリーの１つの結合能が大きい場合、これは、このライブラリーの生成において排除された成分中に存在する官能性部が、阻害効果に関して存在する官能性部に対して有意に寄与しないことを示す。結合能の減少は、その除去された成分が、ダイナミック混合物における活性成分の生成において重要な要素であることを示す。排除されると結合能の最も大きな減少をもたらす成分が、最良のインヒビターに属する。
この手順は、「ダイナミックデコンボリューション」であり、ライブラリーの動的な特徴を利用している。なぜなら、所定の成分の除去により、残りの成分が再分配され、そしてこの成分を含むすべての構成要素が、自動的に平衡ライブラリーから削除される。このような手順は、ＤＣＬの活性成分に収束する効率的な方法を提供する。より多くのライブラリーメンバーを有するより複雑な場合におけるのみならず、インヒビターの順位付けを得るために、この手順は、連続的な工程（単一の成分が除去される実験、
続いて、２つ以上の成分の除去を含む試験）を経ることにより、手順の収束性を得ることができる。
ダイナミックデコンボリューションの原理は、出発化合物の成分に存在する官能性部の順位付けリストを確立するためにさえ使用され得る。異なる官能性部の、標的に結合する能力をさらに評価するために、最も良く結合する官能性部を排除し、そして、がｎ−２分子を一緒に混合することによって手順を繰り返し、その度に、上記最も良く結合する官能性部プラスさらなる分子を排除する。このさらなる分子は、この手順が繰り返される度に異なる。生成されたライブラリーの結合効果を比較し、二番目に良い官能性部が同定され得る。このように、同時の除去は、活性に貢献し得るが最適のものほどではない成分の同定を可能にする。
異なる分子の２つのセットｎｘおよびｍｙ（ここで、ｎｘ＝ｎ１，ｎ２，ｎ３，．．．ｎｘであり、ｍｙはｍ１，ｍ２，．．．ｍｙであり；ｘおよびｙは、１以上の整数である。）が部分のＤＣＬの生成のために一緒に混合された場合、ｎｘ×ｍｙ部分のマトリックスが生成され、ここで各部分は、セットｎｘの分子ｎおよびセットｍｙの分子ｍからなる。１つの例は、６アミン（アミンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）を有する１２アルデヒド（アルデヒド１、２、・・・１２）の混合物であり得、その結果、６×１２＝７２イミンが生成され得る。次いで、ＤＣＬの生成が、上記のように繰り返される：各繰り返し工程において、別のｎｘ分子またはｍｙ分子が、各セットのうち少なくとも１つの分子がその混合物中に存在しなければならないという制限を伴って排除される。（反応は、アミンまたはアルデヒドがその混合物中に存在しない場合には起こりえない。）例えば、上記のような最良のインヒビターをスクリーニングした後に、その部分を形成する２つの成分（１つはアルデヒドであり１つはアミン）の１つまたは両方が排除され得、ｎｘ−１およびｍｙ−２またはｎｘ−２およびｍｙ−１またはｎｘ−２およびｍｙ−２分子を一緒に混合することによって手順が繰り返される。また、そのインヒビターの順位付けが得られる。
また、１つ以上の分子を１つの工程において排除し得る。実施例１および図１を参照して、例えば、アルデヒド１、２、および３を第一の繰り返し工程において、アルデヒド４、５、および６を第２の工程において排除するというように、各回、９個のアルデヒドおよび６個のアミンが一緒に混合されるようにする。これは、ＤＣＬ生成がｎ／ｚ回（１２／３回＝４回）繰り返されることを意味する。
アルデヒド１、２、および３を第一の繰り返し工程において、アルデヒド１、２、および４を第二の繰り返し工程において排除するなどして、その結果、毎回、３つのアルデヒドの新たな組み合わせを排除することも可能である。同じことがアミンでなされ得、これは、プロセスをさらに加速する。したがって、大量の改変、順列および組み合わせが可能であり、そして当業者により選択され得る。
本発明の方法は、好ましくは、ダイナミックコンビナトリアルライブラリーが生成される場合に使用される。これらのライブラリーもまた、本発明の目的である。しかし、この方法はまた、静的コンビナトリアルライブラリーが生成される場合に使用され得る。
ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの場合、生成された分子は、一般に、少なくとも２つの官能性部を含まなければならない。これらの官能性部は、出発分子中に存在し、これらの官能性部を可逆的に結合することによってライブラリーが形成される。その官能性部は、簡単な化学結合によって結合され得るか、または分子中に存在する官能基によって形成される基（これは可逆的に切断および形成され得る）によって、結合され得る。後者の場合、出発分子は、少なくとも２つの官能性部（標的に結合するための１つの官能性部、その標的に結合する官能性部を連結する（スペーサー）基の生成のための官能基である他の官能性部）を含まなければならない。
ライブラリーを作成するためのｎ個の出発化合物が選択される場合、異なる官能性部を有する１０より多くの、好ましくは１００より多くの、最も好ましくは１０００より多くの分子が選択され得る。例えば、少なくとも２つの官能性部を有する１０成分のセット（１つの官能性部は固定され、そして他の官能性部は変化する）が選択され得る。固定された１つは、別の成分に結合するように作用し、他方は、標的に結合するためである。１つの例は、分子ごとに異なる炭水化物のヘッド基およびメルカプト基を含む分子のセットである。これらのメルカプト基は、ジスルフィド結合を形成することによって互いに反応し得、その結果、標的に結合し得る２つの炭水化物ヘッド基を有する部分ができる。
さらなる例は、スペーサー基によって分離されている２つ以上の標的結合官能性部を含有する分子であり、官能性部の交換を可能にする。このタイプの分子は、ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成のための出発材料として使用され得る。例には、２つの炭化水素ヘッド基およびこれらの間に適切なスペーサー基（例えば、ジスルフィド結合を有するスペーサー基、または実施例２を参照して、その官能性部を有する分子上に存在する官能基（例えば、アルデヒド基）と反応し得る２つ以上のヒドラジド官能基を有するスペーサー基）を有する分子が含まれる。
一般に、結合の可逆的形成および切断を可能にする官能性部の間の原子または官能基を含むすべての分子が、出発物質として使用され得る。
本発明の別の実施形態において、少なくとも２つの官能性部を有する異なる分子ｎおよびｍ（ｎおよびｍは１以上の整数である）の２つのセットが選択される。その選択は、これらの分子が競合における偏りおよび極性、非極性、および荷電サブユニットの異なる組み合わせを包含する構造的変化性を避けるために、同等な反応性を有するようになされる。ｍ分子のセットの各メンバーは、ｎ分子のセットの各メンバーと化合（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）／反応／結合し得る。この化合／結合は、真の共有結合または任意の種類の相互作用であり得る。その分子中の官能性部の１つは、他のセットの分子（すなわち、この場合におけるこの「官能基」は、「官能基」として以前に規定されているものの機能を有する、すなわち別のこのような分子に官能性部を有する分子を結合するように作用する基である）との反応／結合のために使用され、そして他の官能性部は、標的に結合するために使用される。
このような２つのセットの例は、スルホ基、スルホナート基、カルボキシ基、またはスルファモイル基のような第二の官能基を有するアルデヒド、およびアミン（これらはまたカルボキシまたはアミノ基のような第二の官能基を有する）である。アルデヒドは、アミンと縮合して、標的に結合し得る「部分」を提示するイミンになる。
別の２つのセットの例は、第二の官能基を有するアルデヒドおよび第二の官能基を有するヒドラジンである。これらは、「アシルヒドラゾン」に縮合し得る。これらの第二の官能基は、例えば、−ＮＭｅ２および−＋ＮＭｅ３基、ヒドロキシ基、ピリジル基およびフェニル基、およびそれらの誘導体から選択される。
分子の１つのセットとして、２官能性または多官能性分子が使用され得、これは、リンカーとして作用して、分子の他のセットの２つ以上の分子を連結する。好ましくは、これらの分子は、対称性であり、そしてそれらは互いに同一かまたは異なる官能基を有し得る（同一の官能基が好ましい）。２官能性の分子についての例には、例えば、ジアルデヒド、ジアミン、ジカルボン酸、ジスルホンアミド、ジスルホン酸、ジオール、ジチオール、が含まれ、好ましくは２つの同一の官能基を有する。
標的の結合部位がすでに知られている場合、標的に結合するために必要な官能性部を含む分子が好ましくは選択される。標的のための１つのリガンドがすでに知られている場合、好ましくは、このリガンドが模倣されるように分子は選択される。
本発明の１つの好ましい実施形態において、予備平衡化されたダイナミックコンビナトリアルライブラリーのアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）のインヒビターを、ダイナミックデコンボリューションによって同定するためにＤＣＣ／ＶＣＬ概念が、実行される（実施例１を参照のこと）。
これは、以下の意味を有する図１〜３に示される（図面の簡単な説明を参照）。
ＡＣｈＥは、中枢神経系および末梢神経系におけるその機能が、コリン作用性シナプスで、カチオン性神経伝達因子アセチルコリン（ＡＣｈ）を加水分解することによって伝達を終止することである酵素である。したがって、そのインヒビターは、アルツハイマー病の処置のために興味深いものであり得る。
ダイナミックコンビナトリアルライブラリー（ＤＣＬ）は、ヒドラジンとモノアルデヒドまたはジアルデヒド成分前駆体との間の、可逆的「アシルヒドラゾン」結合（酸性水性媒体において）を介して生成され得る（図１）。その形成および成分交換プロセスは、酸性水性条件では迅速であり、そして中性および塩基性条件ではやや遅いため、その反応は、ｐＨを調整することによって容易に制御され得る。
成分のプール内の平衡は、例えば、酢酸緩衝液中（そこでは、形成および相互交換が迅速であり、より高いｐＨでは、そのライブラリー構成要素の内部変換が遮断される）で行われ得る。
活性成分を同定するために、そのプールライブラリー中の成分の１つを、連続的に排除した。
結果を図２に示す：完全なプールライブラリーが、予備平衡化された条件下で（酢酸緩衝液ｐＨ４．０）、すべての成分を添加することによって生成される（１〜４、Ａ〜Ｉ、図１の構造を参照のこと）。サブライブラリーは、特定のＸまたはＹ成分を除いて、すべての成分を同じ条件下で混合することによって形成される。
完全なプールライブラリーは、全ての可能な縮合産物の相対的熱力学的安定性に比例して、全ての可能な縮合産物から構成される。かき混ぜ（ｓｃｒａｍｂｌｉｎｇ）が終了した後、ライブラリーによるＡＣｈＥ活性の阻害を測定した。「緩衝液」は、任意のインヒビターの非存在下でのＡＣｈＥ活性を表す。図２におけるデータは、４またはＩがプールから除去されたときに、最も大きい効果が観察されることを示す。結果として、最も活性な成分は、フラグメント４およびＩのアセンブリから生じなければならず、これは、個々の成分の別の調査から得られた結果と一致する。
図３は、Ｉ（上部）または４（下部）またはＨもしくはＩ（中央）のいずれかを含有しないプールからの成分ＸまたはＹの連続的な除去の結果を例示する。Ｇ、Ｈ、２、および３（相対的な活性の順はＧ＜Ｈ＜Ｉおよび２〜３＜４）はまた、活性フラグメントを表すことが明らかである。また、結合／化合（Ｉ４３）が、実質的な活性を有するはずであることを推量し得る。さらに、Ｉ４２がＨ４２よりも活性であるが、データは、４の非存在下で、ＩよりもＨが、２または３とのより活性な結合／化合を生じることを明らかにする。
さらに好ましい実施形態において、本発明の方法は、標的に結合し得る官能性部を有するアミンとアルデヒドとの間の反応から形成されるＤＣＬに適用される。したがって、標的結合官能性部を含む可逆的に生成されたイミンが存在する。１つの例は、カルボニックアンヒドラーゼに結合し得る官能性部を含むアミンおよびアルデヒドに関連する上記のＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　１９９７，９４，２１０６−２１１０に開示される。上記の参考文献に開示されるＤＣＬおよび出発化合物を作製する方法は、本発明の構成部分であり、本明細書において参考として援用される。
なお更なる好ましい実施形態において、本発明の方法は、スペーサー基の周りの標的に結合し得る炭水化物のかき混ぜから形成されるＤＣＬに適用される。したがって、２つ以上の標的結合官能性部を含む可逆的に生成された分子が存在する。１つの例は、レクチン特にコンカナバリンＡにジスルフィド結合を含むスペーサー基で結合し得る官能性部を含有するペントースおよびヘキソースに関連する本出願人の上記の出願ＰＣＴ／ＥＰ０１／０２３１０に開示される。上記の出願において開示されるＤＣＬおよび出発化合物を作製する方法は、本発明の構成部分であり、本明細書中に参考として援用される。本発明の実施例２において、ＤＣＣ／ＶＣＬの概念が実行されて、ダイナミックデコンボリューションにより予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリーのレクチンコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）に対するリガンドを同定する。ここで、スペーサー基は、ヒドラジド官能性部を含有する。
これは、以下の意味を有する図４〜６に例示される（図面の簡単な説明を参照）。
図５に結果が示される。完全なプールライブラリーは、予備平衡化条件下（ギ酸アンモニウム緩衝液ｐＨ４．０）で、全ての成分を添加することによって生成される（２：１〜６、２：Ａ〜Ｉ、図４の構造を参照のこと）。サブライブラリーは、同じ条件下で、特定の成分を除いて、全ての成分を混合することによって形成される。
完全なライブラリー（ＣＬ）は、全ての可能な縮合産物の相対的熱力学的安定性に比例して、全ての可能な縮合産物から構成される。スクランブリングを終止した後、ライブラリーによるＣｏｎＡに対する結合を測定した。「Ｂｌｋ」は、任意のリガンドの非存在下での最大シグナルを表す（ブランク）。データは、６またはＧのいずれかがプールから除去されたときに最大効果が観察されることを示す。結果として、最も活性な成分がフラグメント６およびＧのアセンブリから生じる（図７）。
（実施例）
（実施例１）
（全体手順）
アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ；Ｔｏｒｐｅｄｏ　Ｍａｒｍｏｒａｔａより入手）を、記載されるように精製した。ヨウ化アセチルチオコリンを、Ｓｉｇｍａから購入した。ＤＴＮＰ［５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、Ｅｌｌｍａｎ試薬］を、Ａｃｒｏｓから入手した．塩化ホルミルテトラメチルアンモニウム（塩化ベタインアルデヒド）を、ジメチルアミノアセタールアルデヒドジエチルアセタールから合成した。他の試薬を、業者から購入し、そしてさらなる精製をせずに使用した。酵素アッセイをＶａｒｉａｎ　Ｃａｒｙ３　ＵＶ−Ｖ可視分光器を使用して行った。
（塩化ホルミルテトラメチルアンモニウムの合成）
ヨウ化メチル（０．９３ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのＭｅＯＨ中のジメチルアミノアセトアルデヒドジエチルアセタール（２．２７ｍＬ、１２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、滴下して添加した。その混合物を、５時間還流し、次いでその溶媒を除去した。その残渣を２０ｍＬの水中に溶解し、次いで、ヨウ化銀（２ｇ）を添加して、ヨウ化アンモニウム塩を、塩化アンモニウム塩に変化させた。その懸濁液をろ過し、そしてその溶媒を減圧下で濾液から除去した。その産物をエタノールおよびジエチルエーテルから再結晶化して、白色の固体を生成した。前の反応からのその白色固体を、１０％の水性ＨＣｌ（２０ｍＬ）中に溶解した。その混合物を、６０℃で一晩加熱した。その溶媒を除去し、その産物をギ酸およびホルムアルデヒドから再結晶化した。
（Ｘ’ＹおよびＸ’’Ｙ２結合の形成）
Ｘ（５０ｍＭのモノアルデヒドＸ’または２５ｍＭのジアルデヒドＸ’’）の溶液２０μＬおよびＹ（５０ｍＭのモノヒドラジド）の溶液２０μＬを、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中に添加した（４６０μＬの１００ｍＭ溶液）。その混合物を、周囲温度で１週間平衡化し、完全に反応することを確実にした。しかし、場合によっては、約１５分〜２日までのより短い時間が必要とされ得る。その溶液のアリコートを取り出して、ＡＣｈＥに対する阻害活性を、Ｅｌｌｍａｎ法により試験した。（注）Ｘ’Ｙの濃度は、Ｘ’’Ｙ２の濃度の２倍である。
Ａ、Ｂ（５０ｍＭ）およびＥ、Ｆ（２５ｍＭ）の溶液を、１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で調製した。Ｃ、Ｄ（５０ｍＭ）
およびＧ、Ｉ（２５ｍＭ）の溶液を、１２．５％ＣＨ３ＣＨ／１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で調製した。Ｈ（２５ｍＭ）の溶液を、１６．７％のＣＨ３ＣＮ／１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で調製した。
１〜４（５０ｍＭ）の溶液を、１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐｈ４．０）中で調製した．
（デコンボリューション実験のための、予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの生成）（図２）
全ライブラリー（全て）：各成分（１〜４およびＡ〜Ｉ、単官能性化合物について　ｍＭ、および２官能性化合物について２．５ｍＭ）の２０μＬの溶液を、２４０μＬの１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）に添加した。最終容量は、５００μＬであった。その平衡混合物を、周囲温度で攪拌した。
部分ライブラリー（ＸまたはＹ）：ＸまたはＹ化合物が排除されたことを除いて、各成分（１〜４およびＡ〜Ｉ、単官能性化合物について５ｍＭ、および２官能性化合物について２．５ｍＭ）の溶液の２０μＬを、２６０μＬの１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）に添加して、最終容量５００μＬとした。その平衡溶液を、周囲温度で攪拌した。
両方の場合において、平衡化を１週間行った。しかし、成分により、反応時間はもっと短くてもよい（約１５分から２日）。
Ａ、Ｂ、１〜４（５ｍＭ）、およびＥ、Ｆ（２．５ｍＭ）の溶液を、１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中にて調製した。Ｃ、Ｄ（５ｍＭ）およびＧ、Ｉ（２．５ｍＭ）の溶液を、１．２５％のＣＨ３ＣＮ／１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中にて調製した。Ｈ（２．５ｍＭ）の溶液を、１．６７％のＣＨ３ＣＮ／１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で調製した。
（酵素アッセイ）
平衡化混合物の阻害活性を、Ｅｌｌｍａｎ法を使用して決定した。５０ｍＭのヨウ化アセチルチオコリンの水溶液１０μＬおよび上記のように調製した１０μＭの平衡化混合物の溶液、またはブランクのｐＨ４．０溶液を、５０ｍＭリン酸ナトリウム、リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中の９８０μＬの１ｍｇ／ｍＬ　ＤＴＮＰの溶液に添加した。ＡＣｈＥの活性を、４１２ｎｍでの吸光度（Ｖ＝ΔＡ／分）の変化を３０秒間２５℃で追跡することによってモニターした。阻害は、以下の等式によって与えられる：
％阻害＝（Ｖ０−Ｖｉ）／Ｖ０×１００
ここで、Ｖ０はブランク溶液（１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．９）、インヒビターなし。）の酵素活性であり、そしてＶｉは、インヒビターの存在下でのその溶液の酵素活性である。
（実施例２）
（全体手順）
コンカナバリンＡおよび全ての試薬は、商業的供給源（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，Ｆｌｕｋａ，Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｂａｃｈｅｍ，Ｓｉｇｍａ）から入手した。ジクロロメタンを、使用前に、塩化カルシウムから蒸留した。平衡化した混合物の結合効果を、酵素標識コンカナバリンＡの競合阻害を使用して決定し、そしてＶｉｃｔｏｒマイクロピペッタープレートリーダーを使用して行った。
（ヒドラジド２Ａ〜２Ｉの合成）
ヒドラジド（２Ａ〜２Ｉ）を、対応するカルボン酸メチルエステルから調製し、後者を、カルボン酸を酸性条件下でメタノールで処理することによって合成した。代表的な例では：シクロヘキサン　シス−、シス−、１，３，５−トリカルボン酸（２．０ｇ、９．３ｍｍｏｌ）を、メタノール（１００ｍＬ）中に溶解し、硫酸（２ｍＬ）を添加し、そして反応を周囲温度で終夜進行させた。その溶液を濃縮し、ジクロロメタンで希釈し、そして水性重炭酸塩、水、およびブラインで洗浄した。乾燥した後、粗メチルエステルをメタノール（１５０ｍＬ）中に溶解し、ヒドラジン水和物（３ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）を添加して、その反応を周囲温度にて終夜放置した。得られた沈殿をろ過し、メタノールで洗浄し、そして減圧下で乾燥した（８０％）。
（炭水化物アルデヒド（２：１〜６）の合成）
炭水化物アルデヒド２：１〜５を、公開されている手順に従って、対応する過アセチル化種から合成した。
（炭水化物アルデヒド２：６）
１，２，３，４，６−Ｏ−ペンタアセチル−Ｄ−マンノシド（２．５ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を、ＨＢｒ／ＨＯＡｃ（１２５ｍＬ、ＨＯＡｃ中３３％ｖ／ｖ）中に溶解し、そしてその反応を周囲温度で４時間進行させた。得られる溶液を、氷上に注ぎ、ジクロロメタンで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、そして減圧下で乾燥した。その産物を乾燥ジクロロメタン（１００ｍＬ）中に再溶解し、それに硫酸カルシウム（３．０ｇ）、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．６ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）、および銀トリフレート（３．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で（３時間）反応が完了した後、その産物混合物を、セライトを介してろ過し、１Ｍ　ＮａＨＳＯ４（３０ｍＬ）で中和し、水およびブラインで洗浄し、乾燥し、そして濃縮した。有機相を１Ｍ　ＮａＯＨ、水、ブラインで洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４上で乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；ヘキサン／酢酸エチル　１：１ｖ／ｖ）、濃縮および乾燥により、白色の泡（２５％）を生じ、これは標準的Ｚｅｍｐｌｅｎ条件下（ＭｅＯＨ中にＮａＯＭｅ）で脱保護すると、灰色がかった白色の泡を生じた（定量分析）。
（アシルヒドラゾンライブラリーの生成）
完全なライブラリー（ＣＬ）を、各最終種が約１２μＭの濃度でほぼ等量含むように設計した。その最終溶液は、各２．５ｍＭの炭化水素アルデヒド（２：１〜６）および種々の量のヒドラジド：２：Ａ　７０μＭ；２：Ｂ〜Ｅ、０．２４ｍＭ；２：Ｆ、０．２４ｍＭ；２：Ｇ、０．６５ｍＭ；２：Ｈ、０．８８ｍＭ；２：Ｉ、２．５ｍＭ。この混合物をギ酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で作製し、そして周囲温度で１週間平衡化して反応が完了することを確実にした。
異なるサブライブラリー（ＳＬ１〜ＳＬＩ）を同一の条件下で調製し、ここで、１つの成分（２：１〜６、２：Ａ〜Ｉ）を各回その混合物から除去した。その溶液のアリコートを引き続き取り出して、コンカナバリンＡに対して阻害活性を試験した。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＡＣｈＥインヒビターの予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの構成要素を調製するための成分として選択された成分Ｘ’、Ｘ’’，およびＹ。
【図２】すべてのＸおよびＹ成分のプールにおいて形成された全（ｆｕｌｌ）ダイナミックコンビナトリアルライブラリーのダイナミックデコンボリューション；各バーは、全ライブラリーからの所定の成分１〜４またはＡ〜Ｉの除去に対応する。Ｅｌｌｍａｎの試験における各成分の最終濃度は、単官能性（１〜４およびＡ〜Ｄ）について２×１０−６Ｍおよび２官能性（Ｅ〜Ｉ）成分について１×１０−６Ｍである。
【図３】ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの連続的ダイナミックデコンボリューション。１〜４およびＡ〜Ｉ（図２）を含む最初の全ライブラリーのダイナミックデコンボリューション：（上部）１〜４およびＡ〜Ｈを含むライブラリー；（中央）１〜４およびＡ〜Ｇを含むライブラリー；（下部）１〜３およびＡ〜Ｉを含むライブラリー。
【図４】ＣｏｎＡリガンドの予備平衡化ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの構成要素を調製するための成分として選択された成分２：１〜６、２：Ａ〜Ｉ。
【図５】全ての成分のプール中に形成された全ダイナミックコンビナトリアルライブラリーのダイナミックデコンボリューション；各バーは、全ライブラリーからの所定の成分２：１〜６または２：Ａ〜Ｉの除去に対応する。
【図６】炭水化物ライブラリーのダイナミックデコンボリューション。完全なライブラリー（ＣＬ）は、全ての可能な縮合産物の相対的熱力学的安定性に比例して、全ての可能な縮合産物から構成される。スクランブリングを終止した後、ライブラリーによるＣｏｎＡに対する結合を測定した。「Ｂｌｋ」は、任意のリガンドの非存在下での最大シグナルを表す（ブランク）。データは、６またはＧのいずれかがプールから除去されたときに最大効果が観察されることを示す。
【図７】ダイナミックデコンボリューション手順から生じる産物としてのＣｏｎＡリガンドの構造。最も活性な成分がフラグメント６およびＧのアセンブリから生じることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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