(57)【要約】本発明は、インスリン様増殖因子−１レセプターの阻害剤としての、新規の化合物およびその使用ならびにラクトン環のトランス立体配置を有する公知のシクロリグナン類の使用に関する。該化合物は、ＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患（特に、癌）の処置のために使用され得る。特に、デオキシポドフィロトキシンは、ヒトにおける白血病の処置のために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2004534078.tif 000017
［式中、メチレン基の炭素原子とメトキシ基の炭素原子との距離は、０．８５〜１．０５ｎｍであり；
Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、あるいは必要に応じて二重結合を有し、必要に応じて１〜３の酸素官能基を有し、そして必要に応じてベンゼン環Ａにおける炭素原子と結合を形成する、Ｃ1-5直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖であり；
Ｒ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
を有する化合物の、インスリン様増殖因子−１レセプターのチロシンリン酸化の阻害剤としての使用。
【請求項２】
式Ｉ
【化２】
2004534078.tif 000018
［式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りである］
を有する化合物の、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
式II
【化３】
2004534078.tif 000019
［式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りである］
を有する化合物の、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
式III
【化４】
2004534078.tif 000020
［式中、Ｒ2、Ｒ5、Ｒ6は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、ＯＯＣＨ3、ＯＯＣＨ2ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＯＣ2Ｈ5であり、あるいはＲ5およびＲ6は一緒になってエーテルまたはラクトンであり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りであり、但し、Ｒ2がＯＨである場合この置換基はアルファ位に有り得ない］
を有する化合物の、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
エピポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、およびアセチルポドフィロトキシンからなる群から選択される化合物の、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
式Ｉを有する化合物：
【化５】
2004534078.tif 000021
式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りであり、但し、Ｒ1がＯＣＨ3でありそしてｎが２である場合、ＲはＯＨではない。
【請求項７】
式IIを有する化合物：
【化６】
2004534078.tif 000022
式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りである。
【請求項８】
医薬としての使用のための式Ｉ、IIまたはIIIを有する化合物。
【請求項９】
ＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患（例えば、癌、動脈硬化症（artheriosclerosis）、乾癬および先端巨大症）の処置のための式Ｉ、IIまたはIIIを有する化合物の使用。
【請求項１０】
癌処置用の医薬の製造のための、請求項６または７に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
式III
【化７】
2004534078.tif 000023
［式中、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、ＯＯＣＨ3、ＯＯＣＨ2ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＯＣ2Ｈ5であり、あるいはＲ5およびＲ6は一緒になってエーテルまたはラクトンであり；そしてＲ1およびｎは請求項１に定義される通りであり、但し、Ｒ2がＯＨである場合この置換基はアルファ位に有り得ない］
を有する化合物の、癌の予防または処置用の医薬製造のための使用。
【請求項１２】
白血病の予防または処置のための、エピポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、およびアセチルポドフィロトキシンからなる群から選択される化合物の、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
生理学的に許容される担体と組み合わせて、式Ｉ、IIまたはIIIを有する化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
腫瘍に罹患する患者への持続注入によって、生理学的に許容される担体と組み合わせて式Ｉ、IIまたはIIIを有する化合物を含有する薬学的組成物を投与する工程、該化合物の血漿レベルをモニタリングする工程、および該腫瘍を遅延させるかまたは消滅させるに十分である時間の間、０．０５〜５．０μＭの濃度に血漿レベルを維持するように注射の速度を調節する工程を包含する、哺乳動物における癌の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患（特に、癌）の処置のための、インスリン様増殖因子−１レセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）を阻害する、新規の化合物ならびに新規および公知の化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
インスリン様増殖因子−１レセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）は、悪性細胞の形質転換とアポトーシスに対する保護、増殖において重要な役割を果たしている。ＩＧＦ−１Ｒはまた、腫瘍細胞の悪性表現型を維持するために重要であり、そして抗癌剤の作用に対する耐性を発達させる腫瘍細胞に関連している。対照的に、ＩＧＦ−１Ｒは、正常細胞増殖について絶対条件ではないようである。
【０００３】
ＩＧＦ−１Ｒは、リガンド結合を担う２つの同一の細胞外アルファ−サブユニットと、貫膜ドメイン（transmembrane domain）および細胞内チロシンキナーゼドメイン（intracellular tyrosine kinase domain）を有する２つの同一のベータサブユニットとからなる。リガンド−レセプター相互作用は、β−サブユニットのアミノ酸９７３から１２２９に及ぶチロシンキナーゼドメインにおけるチロシン残基のリン酸化を生じさせる。リン酸化についての主要な部位は、１１３１、１１３５および１１３６位のクラスター化されたチロシン（clustered tyrosines）である（LeRoith, D., et al., Endocr Rev 1995 April; 16(2), 143-63）。自己リン酸化（autophosphorylation）後、レセプターキナーゼは、インスリンレセプター基質−１およびＳｈｃのような、細胞内タンパク質をリン酸化させ、これらは、それぞれ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼおよびマイトジェン活性化タンパク質キナーゼシグナル伝達経路を活性化させる。
【０００４】
悪性細胞におけるＩＧＦ−１Ｒの極めて重要な役割に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒは癌治療についての標的であることがますます明白となっている（Baserga, R., et al., Endocrine vol. 7, no. 1, 99-102, August 1997）。ＩＧＦ−１Ｒ活性を遮断するための１つの戦略は、ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの選択的阻害を誘発することである。しかし、現在、利用可能なＩＧＦ−１Ｒの選択的阻害剤は存在しない。
【０００５】
シクロリグナンポドフィロトキシン（cyclolignan podophyllotoxin）を含有する薬物が何世紀も使用されており、そしてその抗癌特性は特別な興味を引き付けた。しかし、ポドフィロトキシンの望ましくない副作用は、抗癌剤としてのその使用を妨げている。ポドフィロトキシンの細胞傷害性についての機構は、微小管集合（microtubule assembly）および有糸分裂停止（mitotic arrest）の阻害へと至る、ベータ−チューブリンへのその結合に起因していると考えられる。微小管に対するポドフィロトキシンの効果は、無細胞系においてμＭ濃度を必要とした。ポドフィロトキシンのラクトン環におけるトランス立体配置は、ベータ−チューブリンへの結合のために必要とされることが示された。これと一致して、ラクトン環においてシス立体配置を有するその立体異性体ピクロポドフィリン（picropodophyllin）は、ラットにおいて、微小管について５０倍低い親和性および３５倍高いＬＤ５０を有する。ピクロポドフィロトキシン（picropodophyllotoxin）の微小管についての低い親和性のために、この化合物は、ほとんど興味を引き付けなかった。この十年間の間、ポドフィロトキシン誘導体についての大きな興味は、４’−デメチル−エピポドフィロトキシンのエチリデングルコシド誘導体である、エトポシドに関連した。微小管に対して効果を有さないエトポシドは、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤であり、そして現在、癌治療においてそのまま使用されている。このようなシクロリグナン類の４’−メトキシ基の代わりの４’−ヒドロキシが、それらがトポイソメラーゼＩＩを阻害するための絶対条件である。
【０００６】
先行技術
チルホスチン（tyrphostins）と呼ばれる多数の合成チロシンキナーゼ阻害剤が、Parrizas, M., et al., Endocrinology 1997, Vol. 138, No. 4, 1427-1433によって研究されてきた。ＩＧＦ−１Ｒは、チロシンキナーゼレセプターファミリーのメンバーであり、該ファミリーはまた、インスリン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）のレセプターを含む。ＩＧＦ−１Ｒに対して活性な全てのチルホスチンは（チルホスチンのうち２つは、ＩＧＦ−１Ｒについて中程度の選好を示したが）、インスリンレセプターと交差反応し、何故ならばそれらが非常に相同であるためである。これら２つのレセプターを識別し得る小さな分子を設計および合成することが可能であり得ることが、示唆された。
【０００７】
ＩＧＦ−１レセプターキナーゼの基質競合的阻害剤が、Biochemistry 2000, 39, 15705-15712においてBlum, G.らによって議論されている。単離されたＩＧＦ−１Ｒキナーゼの阻害剤のための多数のリード化合物が、報告されている。これらの化合物についてのサーチは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼドメインと８４％相同であるインスリンレセプターキナーゼドメインの三次元構造の知見によって補助された。見出された最も強力な阻害剤は、４００ｎＭのＩＣ５０を有する、チルホスチンＡＧ  ５３８であった。しかし、該阻害剤もまた、インスリンレセプターキナーゼを遮断した。
【０００８】
Kanter-Lewensohn, L., et al., Molecular and Cellular Endocrinology 165 (2000), 131-137は、メラノーマ細胞に対するタモキシフェン（ＴＡＭ）の細胞傷害性効果がインスリン様増殖因子−１レセプターの発現または機能への干渉に依存し得るかどうかを研究した。ＴＡＭはＩＧＦ−１結合および細胞表面でのＩＧＦ−１Ｒの発現に対して強力な効果を有さないが、１５マイクロＭで、ＴＡＭはＩＧＦ−１Ｒベータ−サブユニットのチロシンリン酸化を効果的に遮断することが、見出された。
【０００９】
ＩＧＦ−１Ｒとポドフィロトキシン誘導体との関連は、以前に全くなされていなかった。J. L. Hartwell et al., Fortschritte der Chemie organischer Naturstoffe 15, 1958, 83-166によるポドフィルムの化学は、ポドフィロトキシンおよびその種々の誘導体［２種類の植物、Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｐｅｌｔａｔｕｍおよびＰｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｅｍｏｄｉから商業的に誘導される］の概要を提供している。述べたように、ポドフィロトキシンの観察された細胞傷害性効果は、有糸分裂ブロックを生じる、微小管へのその結合に起因するとされる。細胞に対する同一の効果は、デオキシポドフィロトキシンについても記載されており、そしてこれは、これら２つの化合物およびそれらの対応の４’−デメチルアナログが乾癬の処置のために使用され得る理由であると示唆された（WO 86/04062）。しかしながら、ラットにおけるポドフィロトキシンのＬＤ５０は比較的低い（１４ｍｇ／ｋｇ）のに対して、デオキシ誘導体のＬＤ５０は、不思議なことに＞１５倍高い。ラットにおけるＬＤ５０が高かった他のポドフィロトキシン誘導体、例えばアセチルポドフィロトキシン（１８５ｍｇ／ｋｇ）およびエピポドフィロトキシン（＞２００ｍｇ／ｋｇ）は、生物学的活性を本質的に欠いていると考えられている（Seidlova-Masinova V., et al. J Nat Cancer Inst, 18, 359-371, 1957）。
【００１０】
ポドフィロトキシンに対する構造類似性を有する、ベンジル−ベンゾジオキソールの多数のモルホリノ誘導体の構造−活性評価が、Batra, J., et al., Biochemical Pharmacology, Vol. 35, No. 22, 4013-4018, 1986によって行われた。チューブリン重合を阻害する化合物の能力が試験されたが、ポドフィロトキシンと最も類似するモルホリノ化合物が、一連において最小の活性であった。
【００１１】
２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールおよび１，３−ベンゾジオキソールのベンジルおよびシンナミル誘導体は、Jurd, L., et al., J. Agric. Food Chem. Vol. 27, No. 5, 1007-1016, 1979から、昆虫化学不妊剤として知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
発明の主題
本発明の目的は、インスリン様増殖因子−１レセプターの阻害による、ＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患（特に、癌）の処置のための新規化合物および新規方法を見出すことである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の説明
１１３１、１１３５および１１３６位のチロシン残基を含む、ＩＧＦ−１Ｒチロシンドメインのアミノ酸配列を有する短いペプチドの三次元構造を、該チロシン残基を模倣しそしてそれらのリン酸化を妨害する能力を有する化合物を見出すために、コンピュータプログラムを使用して分析した。そして、１２−アミノ酸ペプチドを使用した場合、活性化のためにＩＧＦ−１Ｒにおいて自己リン酸化（autophosphorylated）されなければならない３つの鍵となるチロシンのうち２つ（即ち、１１３５および１１３６）が互いに０．９５ｎｍ（９．５Å）程度接近して配置され得ること、ならびにこれらの基の間の見かけの角（apparent angle）が約６０°であることが発見された。該配列の立体配置は、図１に示されている。このような短い距離は、インスリンレセプターにおける対応のチロシンについては観察されていない。図１はまた、ポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンの空間構造を示している。
【００１４】
分子モデリング（molecular modelling）は、阻害分子が、たった１つの炭素原子によって隔てられている２つのベンゼン環からなり得ることを示した。２炭素架橋（two-carbon bridge）を試みた場合、該ベンゼン環の置換基間の距離は、非常に長くなり、約１．３ｎｍ（１３Å）であった。
【００１５】
該チロシンにおけるヒドロキシ基に対応する阻害剤の置換基は、メトキシまたはメチレンジオキシであるように選択され、何故ならば、それらは化学的に比較的安定であるため、即ちそれらは酸化またはリン酸化されないためである。これらの置換基間の距離は、約０．９５±０．１０ｎｍ（９．５±１．０Å）であるべきである。
【００１６】
次いで、驚くべきことに、いくつかのシクロリグナン類（ポドフィロトキシンを含む）の２つの角を成すベンゼン環が、２つのチロシン１１３５および１１３６をほぼ正確に模倣することが見出され、ポドフィロトキシンおよび誘導体は、これらチロシン残基の自己リン酸化を妨害し得ることを示している。
【００１７】
該レセプターに侵入するために、阻害分子は小さくなければならない。例えばポドフィロトキシンが、グルコシド誘導体と複合体化した場合［ポドフィロトキシン−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］、ＩＧＦ−１Ｒに対する効果は完全に消滅した。更に、ジオール構造へのラクトン環の還元に続いて、分子サイズは、該分子から突き出ている該還元された置換基に起因して増大し、該化合物の活性は劇的に減少した。ポドフィロトキシンジオールのメチレンジオキシ誘導体またはアセトニドを形成させることによって該サイズを増大させることは、ほとんど或いは全く活性を有しない化合物を生じさせた。
【００１８】
阻害剤分子はまた、それが細胞膜およびＩＧＦ−１レセプターに自由に侵入し得るが水に合理的に可溶であるに十分に極性であり得るように、比較的に無極性でなければならない。分子の極性は、酸素官能基の数および性質によって決定される。極性は、水溶性が、デオキシポドフィロトキシンのそれ（即ち、約０．０１ｍＭ）とポドフィロトキシンのそれ（約０．１〜０．２ｍＭ）との間である場合、最適であるようである。帯電しているかまたは高度に極性である基は、該分子上に存在するべきではない。
【００１９】
本発明は、式
【００２０】
【化１】
2004534078.tif 000002
【００２１】
［式中、メチレン基の炭素原子とメトキシ基の炭素原子との距離は、０．８５〜１．０５ｎｍであり；
Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、あるいは必要に応じて１〜３の酸素官能基を有し、そして必要に応じて上のベンゼン環における炭素（番号５）と結合を形成する、Ｃ1-5直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖であり；
Ｒ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
からなる化合物の、インスリン様増殖因子−１レセプターのチロシンリン酸化の阻害剤としての使用に関する。
【００２２】
この文脈における酸素官能基は、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、メトキシ、メチレンジオキシ、ラクトン、エーテルおよび／またはエステル基をいう。
【００２３】
本発明に従って使用され得る化合物の１つのグループは、式Ｉｂ
【００２４】
【化２】
2004534078.tif 000003
【００２５】
［式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1およびｎは上記に定義される通りである］
を有する。このグループの化合物の置換基Ｒは、下のベンゼン環に対してＲまたはＳ位にあり得る。
【００２６】
式Ｉの化合物は、以下の代表的な合成によって製造され得る：
【００２７】
【化３】
2004534078.tif 000004
【００２８】
この様式で製造され得る化合物の例としては、以下が挙げられ得る：
６−（３，４，５−トリメトキシ−アルファ−ヒドロキシ−ベンジル）−１，３−ベンゾジオキソール（Ｉａ）
６−（３，４，５−トリメトキシ−アルファ−メトキシ−ベンジル）−１，３−ベンゾジオキソール（Ｉｂ）
６−（３，４，５−トリメトキシ−アルファ−メチル−ベンジル）−１，３−ベンゾジオキソール（Ｉｃ）。
【００２９】
本発明に従って使用され得る化合物の別のグループは、式II
【００３０】
【化４】
2004534078.tif 000005
【００３１】
［式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1およびｎは上記に定義される通りである］
を有する。置換基Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、オキソ基を示さない場合、アルファ位またはベータ位のいずれかであり得る。下のベンゼン環は、好ましくはアルファ位にあるべきである。
【００３２】
式IIの化合物は、以下の代表的な合成によって製造され得る：
【００３３】
【化５】
2004534078.tif 000006
【００３４】
該スケジュールにおいて、ＮＢＳはＮ−ブロモスクシンイミドであり、ＰＰＡはポリリン酸であり、ＴＴＮは硝酸タリウム三水和物であり、ｐ−ＴＳＡはｐ−トルエンスルホン酸であり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、そしてＬＤＡはリチウムジアルキルアミドである。
【００３５】
この様式で製造され得る化合物の例としては、以下が挙げられ得る：
１−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIａ）
３−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｂ）
１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｇ）
３−ヒドロキシ−１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｈ）。
【００３６】
式IIの化合物はまた、以下の合成によっても製造され得る：
【００３７】
【化６】
2004534078.tif 000007
【００３８】
この様式で製造され得る化合物の例としては、以下が挙げられ得る：
２−ヒドロキシ−１−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｃ）
１−（４−メトキシ−フェニル）−２−オキソ−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｄ）
２−ヒドロキシ−１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｉ）
１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−２−オキソ−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｊ）。
【００３９】
式IIの化合物はまた、以下のように製造され得る：
【００４０】
【化７】
2004534078.tif 000008
【００４１】
この様式で製造され得る化合物の例としては、以下が挙げられ得る：
２，３−ジヒドロキシ−１−（４−メトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｅ）
１−（４−メトキシ−フェニル）−２，３−メチレンジオキシ−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｆ）
２，３−ジヒドロキシ−１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｋ）
１−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−２，３−メチレンジオキシ−６，７−メチレンジオキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（IIｌ）。
【００４２】
上記合成における反応条件の詳細は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｅｒｒｙ  Ｍａｒｃｈ（編）、第４版、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９２に記載されている。
【００４３】
本発明に従って使用され得る化合物のなお別のグループは、式III
【００４４】
【化８】
2004534078.tif 000009
【００４５】
［式中、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、ＯＯＣＨ3、ＯＯＣＨ2ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＯＣ2Ｈ5であり、あるいはＲ5およびＲ6は一緒になってエーテルまたはラクトンであり；そしてＲ1およびｎは上記に定義される通りである］
の化合物である。置換基Ｒ2は、遊離のヒドロキシ基である場合、ポドフィロトキシンにおけるような、アルファ位にあり得ない。他のＲ2置換基は、オキソ基を除いて、アルファ位またはベータ位にあり得る。特に、下のベンゼン環がアルファ位にあり、そして８と９に番号付けされた炭素間にベータ結合が存在し、そして８’と９’に番号付けされた炭素間にアルファ結合が存在し、従ってそれらは、例えばデオキシポドフィロトキシンおよびポドフィロトキシンにおけるように、トランス立体配置を形成する。
【００４６】
本発明は、特に、インスリン増殖因子−１レセプターのチロシン自己リン酸化の阻害剤としての、比較的に無毒性のシクロリグナン類（例えば、エピポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、およびアセチルポドフィロトキシン）のいずれかの使用に関し、より細胞傷害性でありそして組織刺激性の化合物（例えば、ポドフィロトキシンおよび４’−デメチル−ポドフィロトキシン）の使用は避けられるべきである。
【００４７】
式IIIのいくつかの化合物、例えばデオキシポドフィロトキシンおよびポドフィロトキシンは、植物において天然に生じる。純粋形態での該物質の調製のために、例えばＰｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｅｍｏｄｉまたはＰｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｐｅｌｔａｔｕｍの乾燥されそして細かくすりつぶされた根茎が、有機溶媒を用いて抽出される。次いで、抽出物は、シリカゲルにおいて濾過および濃縮される。該物質を含有するフラクションを回収し、そして後者を、酸アルミナおよびシリカゲルなどにおけるクロマトグラフィーによって更に精製し、そして最終的に再結晶させる。ポドフィロトキシンは、そのより毒性の少ない誘導体の合成のための出発物質として使用され得る。
【００４８】
エピポドフィロトキシンは、ポドフィロトキシンから容易に製造される。５ｍｇの後者を、２．５ｍＬのアセトンに溶解する。該溶液へ０．５ｍＬの濃ＨＣｌを添加し、そして混合物を２時間煮沸させる。次いで、該溶液をＮａＨＣＯ3水溶液（５ｍＬ中約０．５ｇ）で中和し、そして続いてアセトンを蒸発させ、生成物エピポドフィロトキシンを酢酸エチルで抽出する。
【００４９】
アセチルポドフィロトキシン（ポドフィロトキシンのアセテート誘導体）は、０．１ｍｇの後者を１ｍＬの酢酸無水物および１ｍＬのピリジンと共に５０℃で１６時間インキュベートすることによって、ポドフィロトキシンから製造され得る。次いで、試薬を部分的に蒸発させ、１０ｍＬの水および１０ｍＬの酢酸エチルを添加し、そして次いで生成物を水相から抽出する。
【００５０】
アセトニドおよびメチレンジオキシ誘導体は、標準手順に従って天然リグナン類のラクトン環を還元することによって得られるジオールから出発して製造され得る。
【００５１】
式IIIの化合物の更なる例としては以下が挙げられる：ポドフィロトキソン（podophyllotoxone）、および４’−デメチル−デオキシポドフィロトキシン。
【００５２】
本発明はまた、式Ｉ
【００５３】
【化９】
2004534078.tif 000010
【００５４】
［式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1およびｎは上記に定義される通りであり、但し、Ｒ1がＯＣＨ3でありそしてｎが２である場合、ＲはＯＨではなく、ＲがＣＨ3またはＣ2Ｈ5である場合、Ｒ1はＯＨでありそしてｎは１または２であり、ＲがＣ2Ｈ5である場合、Ｒ1はＯＨではない］
の新規の化合物に関する。
【００５５】
本発明の分子は、２つの置換基間の距離を所定範囲（即ち、０．９５±０．１０ｎｍ（９．５±１．０Å））内に維持するために、比較的堅く（rigid）あるべきである。炭化水素鎖の環構造を形成することは、ベンゼン環の回転または運動を防止し、そして従ってラクトンを形成する。
【００５６】
本発明はまた、式
【００５７】
【化１０】
2004534078.tif 000011
【００５８】
［式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1およびｎは上記に定義される通りである］
の新規化合物に関する。
【００５９】
治療目的についてＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの阻害剤を設計するために、該阻害剤がインスリンレセプターキナーゼ（これは、ＩＧＦ−１Ｒと非常に相同である）と交差反応しないことが、非常に重要である。インスリンレセプターの共阻害（co-inhibition）は、インビボでの糖尿病性応答（diabetogenic response）に導くであろう。この応答は、該レセプターキナーゼが遮断されているためにインスリン処置によって克服することができない、非常に深刻な副作用を含む。本発明者らは、チロホスチンベース化合物（tyrophostin-based compounds）より遥かに強力なＩＧＦ−１Ｒ阻害剤である、ポドフィロトキシンおよび誘導体が、インスリンレセプターチロシンキナーゼを全く干渉しないことを実証した。それらは、上皮増殖因子、血小板由来増殖因子または繊維芽細胞増殖因子のレセプターのチロシンリン酸化を妨害しない。
【００６０】
ポドフィロトキシンは、長い間、癌治療に関与していたが、それが患者へ投与される様式において、それは受入れられない副作用を生じさせた。抗癌効果、ならびに該副作用は、微小管集合（microtubule assembly）の抑制および有糸分裂ブロック（mitotic block）に起因しすると考えられた。ポドフィロトキシンおよびその毒性のより低いアナログのいくつかが、インスリン様増殖因子−１レセプター［これは、癌細胞における生存因子として極めて重要な役割を果たす］のチロシンリン酸化の非常に強力かつ特異的な阻害剤であることが、ここで実証された。ポドフィロトキシンの抗−微小管効果（anti-microtubule effect）と比較して、１００倍低い濃度が、ＩＧＦ−１Ｒを不活性化するに十分であった。ポドフィロトキシンおよびアナログが、ＩＧＦ−１Ｒと非常に相同であるインスリンレセプターを阻害しないことが、最大限に重要である。更に、それらは、他の主要な増殖因子レセプターキナーゼも阻害しない。
【００６１】
式Ｉの比較的に無毒性である化合物は、癌、動脈硬化症（脈管手術後の冠状動脈の再狭窄の予防を含む）、乾癬および先端巨大症のような、ＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患の処置のために使用され得る。
【００６２】
生理学的に許容される担体および任意の添加剤と組み合わせて式Ｉの化合物を含む薬学的組成物は、任意の好適な経路によって、例えば非経口的に（好ましくは、静脈内注射によって）、または局所的に（例えば、パッチによって）、患者へ投与され得る。
【００６３】
本発明は、医薬として使用のための、そして特に癌処置用の医薬の製造のための、式ＩまたはIIの新規化合物に関する。
【００６４】
生物学的実験の結果は、サブマイクロモル濃度（submicromolar concentrations）の、ポドフィロトキシン、または毒性のより少ないアナログ（例えば、デオキシポドフィロトキシンまたはエピポドフィロトキシン）が、腫瘍細胞を死滅させるに十分であり得ることを示唆する。しかし、長期間に渡って該阻害剤の一定血漿濃度を維持して、それらが全てのＩＧＦ−１Ｒを連続して飽和することを可能にし、そしてこの様式で可能な限り多くの悪性細胞を最終的に死滅させることが、重要であると考えられる。従って、血漿濃度をモニタリングすることと関連しての、ポドフィロトキシン誘導体の持続注入は、反復的な（例えば、毎日の）注射［これは、治療間のＩＧＦ−１Ｒの繰り返される再活性化へ導き得る］の代わりの処置戦略であり得る。
【００６５】
従って、本発明はまた、腫瘍に罹患する患者への持続注入によって、生理学的に許容される担体と組み合わせて式Ｉを有する化合物を含有する薬学的組成物を投与する工程、該化合物の血漿レベルをコントロールする工程、および該腫瘍を遅延させるかまたは消滅させるに十分である時間の間、０．０５〜５．０μＭ（化合物（copound）の一般的毒性に依存する）の血漿レベルを維持するように注入速度を調節する工程を包含する、哺乳動物における癌の処置方法に関する。
【００６６】
腫瘍がＩＧＦ−１Ｒに完全には依存していない場合、本発明の化合物は、腫瘍細胞を他の抗癌薬の効果に対して敏感にさせるために、有用であり得る。
【実施例】
【００６７】
実験
材料
化学物質
細胞培養試薬、即ち、培地、ウシ胎仔血清および抗生物質を、Ｇｉｂｃｏ，Ｓｗｅｄｅｎから購入した。全ての他の化学物質は、特に述べない限り、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．Ｍｏ，ＵＳＡ）から得た。ホスホチロシンに対するマウスモノクローナル抗体（ＰＹ９９）およびＩＧＦ−１Ｒのα−サブユニットに対するポリクローナル抗体（Ｎ２０）を、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ）から得た。ＩＧＦ−１Ｒのα−サブユニットに対するモノクローナル抗体（ＩＲ−３）を、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）から購入した。デオキシポドフィロトキシンおよびポドフィロトキシン（９９．９７％純度）、ならびにアセチルポドフィロトキシン、ポドフィロトキソン（podophyllotoxone）および４’−デメチルポドフィロトキシン（＞９５％純度）を、Ａｎａｌｙｔｅｃｏｎ  ＳＡ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから贈り物として得た。
【００６８】
細胞培養物
ヒト悪性メラノーマ細胞系ＳＫ−ＭＥＬ−２、ＳＫ−ＭＥＬ−５およびＳＫ−ＭＥＬ−２８、前立腺癌細胞系ＰＣ−３、ならびに乳癌細胞系ＭＣＦ−７を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＡから得た。悪性メラノーマ細胞系ＢＥ、およびＦＭ５５を、Ｒ  Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ教授、ＣＣＫ、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎから得た。Ｒ−およびＰ６細胞系は、Ｒ．Ｂａｓｅｒｇａ教授，Ｔｈｏｍａｓ  Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，ＵＳＡからの贈り物であった。全ての細胞系を、１０％ウシ胎仔血清、グルタミン、１％ベンジルペニシリンおよびストレプトマイシンを含有する、最小必須培地（Minimal Essential Medium）中で培養した。細胞を、湿らせたインキュベータ中、３７℃、９５％空気／５％ＣＯ2雰囲気で維持された組織培養フラスコにおいて、単層で増殖させた。実験のために、細胞を、３５−ｍｍまたは６０−ｍｍプラスチックディッシュあるいは９６−ウェルプラスチックプレートのいずれかにおいて培養させた。実験を、サブコンフルエント増殖条件（subconfluent growth conditions）下で開始した。
【００６９】
ヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２／ＳおよびＫ５６２／Ｖｃｒ３０系および急性骨髄性白血病細胞系ＨＬ６０／０およびＨＬ６０／Ｎｏｖを、ＡＴＣＣから得た。Ｋ５６２／ＳおよびＨＬ６０／０は野生型（非耐性）細胞であり、一方Ｋ５６２／Ｖｃｒ３０およびＨＬ６０／Ｎｏｖは細胞増殖抑制性−耐性亜系（cytostatic-resistant sublines）である。全ての白血病細胞系を、１０％ウシ胎仔血清ならびに２ｍＭグルタミン、１％ベンジル−ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ  １６４０培地において培養した。細胞を、湿らせたインキュベータ中、３７℃、９５％空気／５％ＣＯ2雰囲気で維持させた組織培養フラスコにおいて増殖させた。実験のために、２５，０００細胞を、６０−ｍｍプラスチックディッシュまたは９６−ウェルプラスチックプレートにおいて培養した。白血病細胞についての実験を、Ｓｉｇｕｒｄ  Ｖｉｔｏｌｓ助教授，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）と協力して行った。
【００７０】
方法
細胞増殖および生存の評価
細胞増殖キットＩＩ（Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．）は、生存細胞の呼吸鎖による、オレンジホルマザン色素におけるイエローテトラゾリウム塩ＸＴＴの比色変化に基づく（Roehm,NW,et al.,J Immunol Methods 142:257-265,1991）。９６−ウェルプレートにおいて１００μｌ培地中、５０００／ウェルの濃度で接種した細胞を、所定濃度の種々の薬物で処理した。２４または４８時間後、ＸＴＴラベリング混合物と共に、製造業者のプロトコルに従って、細胞をインキュベートした。４時間後、ホルマザン色素を、４９５ｎｍフィルターを備えるスキャンニングマルチウェル分光光度計を使用して定量する。吸光度は、生存細胞数と直接相互に相関する。標準吸光度曲線（standard absorbance curve）を、１０００細胞／ウェルの増加率で１０００〜１００００細胞／ウェルの濃度で接種した未処理細胞によって描いた。全ての標準（standards）および実験を３重で行った。
【００７１】
タンパク質内容物の免疫沈降および測定
単離された細胞を、プロテアーゼ阻害剤を含有する１０ｍｌ氷冷ＰＢＳＴＤＳ中で溶解させた（Carlberg, M., et al., J Biol Chem 271:17453-17462, 1996）。５０μｌプロテインＡまたはＧアガロースを、１ｍｌサンプルに添加し、そしてオービタルシェイカー（orbital shaker）において４℃で１５分間インキュベートした。４℃で１０，０００ｒ／分での１０分間の遠心分離後、上清みを採取した。タンパク質内容物を、Ｂｉｏ−Ｒａｄから購入した試薬を用いての色素−結合アッセイ（dye-binding assay）によって測定した。ウシ血清アルブミンを標準として使用した。１５μｌプロテインＧプラスアガロースおよび５μｌ抗−ＩＧＦ−１Ｒを添加した。オービタルシェイカーにおける４℃での３時間インキュベーション後、沈降物を、１０秒間１４，０００ｘｇでのマイクロ遠心分離機（micro centrifuge）におけるパルス遠心分離（pulse centrifugation）によって回収した。上清みを捨て、そしてペレットをＰＢＳＴＤＳで３回洗浄した。
【００７２】
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
タンパク質サンプルを、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液および０．５％メタノールを含有する２ｘ−サンプル緩衝液に溶解させ、そして９６℃で５分間煮沸させた。サンプルを、４％スタッキングゲル（stacking gel）および７．５％分離ゲルを用いてのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。分子量マーカー（Ｂｉｏ  Ｒａｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）を全ての実験において同時に実行した。
【００７３】
ウェスタンブロッティング
ＳＤＳ−ＰＡＧＥに続いて、タンパク質を、ニトロ−セルロース膜（Ｈｙｂｏｎｄ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＵＫ）へ一晩移し、そして次いで、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中４％スキムミルク粉末および０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０の溶液中、室温で１時間ブロックした。一次抗体と共のインキュベーションを室温で１時間行い、続いてＴｗｅｅｎを含むＰＢＳで３回洗浄し、そして二次抗体と共のインキュベーションを室温で１時間行った。更に３回の洗浄後、膜を、３０分間、ストレプトアビジン−標識化されたホースラディシュペルオキシダーゼと共にインキュベートし、そして次いで、Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＥＣＬシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＵＫ）を使用して検出した。フィルムをＦｌｕｏｒ−Ｓ（ＢｉｏＲａｄ）によってスキャンした。
【００７４】
インビトロでのＩＧＦ−１Ｒ自己リン酸化のアッセイ
ＩＧＦ−１Ｒチロシン自己リン酸化を、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによって分析した。手短に言えば、９６−ウェルプレート（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｎ，Ｎｕｎｃ）を、４℃で一晩、１μｇ／ウェルの、ＩＧＦ−１Ｒベータサブユニットに対するモノクローナル抗体Ａｂ−５（ＬａｂＶｉｓｉｏｎ）でコーティングした。プレートを、１時間、ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ中１％ＢＳＡでブロックし、次いでＰ６細胞系からの全タンパク質溶解物（８０ｇ／ウェル）を添加した。ネガティブコントロールとして、Ｒ−細胞系からの全タンパク質溶解物を使用した。該研究した化合物を、３０分間室温で、ＡＴＰを含まないチロシンキナーゼ緩衝液中に添加し、その後、ＡＴＰを用いてキナーゼ活性化を行った。キナーゼアッセイを、Ｓｉｇｍａキットを使用して行った。分光測定後、阻害剤のＩＣ５０値を、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａプログラムの回帰関数を使用して決定した。
【００７５】
実験１．培養されたメラノーマ細胞におけるＩＧＦ−１Ｒのリン酸化に対する、ポドフィロトキシンおよび他の生物学的に活性なフェノール性化合物の効果
メラノーマ細胞（系ＦＭ５５）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を補充した最小必須培地中１０，０００細胞／ｃｍ2の濃度で、６−ｃｍディッシュ中に接種した。細胞が６５，０００細胞／ｃｍ2の濃度に達したとき、それらを、１時間、培養培地中０、１、１５または６０μＭの最終濃度まで、ゲニステイン（genistein）、タモキシフェン、ケルセチンおよびポドフィロトキシンで処理した。０μＭでの処理は、未処理コントロールを示す。次いで、細胞を単離し、そしてＩＧＦ−１Ｒの免疫沈降反応に供した。精製ＩＧＦ−１Ｒを含有する免疫沈降物（immunoprecipitates）を、ゲル電気泳動によって分画した。ＩＧＦ−１Ｒのリン酸化を、ウェスタンブロッティングを使用して、抗−ホスホチロシン抗体によって検出した。得られたシグナルは、リン酸化されたＩＧＦ−１Ｒを示し、そしてシグナルの強度は、リン酸化されたＩＧＦ−１Ｒの量を示す。使用した方法の詳細は上述に記載されている。強度は、シグナルの光学密度（ＯＤ）を測定するスキャナーによって定量される。コントロール細胞について、ＯＤは１００％に設定される。ブランク（ＯＤ  ０％）はバックグラウンドを示す。以下の表１に示される結果は、３実験の平均値である。
【００７６】
【表１】
2004534078.tif 000012
【００７７】
結果は、ゲニステインは６０μＭで部分的阻害効果を有するだけでありそしてケルセチンは全く効果を有さないのに対して、ポドフィロトキシンは３つ全ての濃度でＩＧＦ−１Ｒリン酸化をほぼ完全にブロックすることを示している。
【００７８】
実験２．培養されたメラノーマ細胞におけるＩＧＦ−１Ｒの自己リン酸化に対する、ポドフィロトキシン誘導体の効果
ＦＭ５５メラノーマ細胞を、実験１に記載されるのと同一の様式で培養した。ディッシュ中６５，０００細胞／ｃｍ2の密度に達したとき、それらを、０．０５μＭの、ポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、アセチルポドフィロトキシン、エピポドフィロトキシン、４’−デメチル−ポドフィロトキシンおよびポドフィロトキソンで１時間処理した。次いで、細胞を、上述のように、ＩＧＦ−１Ｒ自己リン酸化のアッセイおよび定量のために収獲した。表２に示される値は３実験の平均を示す。
【００７９】
【表２】
2004534078.tif 000013
【００８０】
結果は、アセチルポドフィロトキシン、ポドフィロトキシン、およびデオキポドフィロトキシンは、ＩＧＦ−１Ｒリン酸化の強力な阻害剤であることを示す。
【００８１】
実験３．固形腫瘍細胞の生存率に対する、ポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンの用量応答効果
５つの異なるタイプの細胞系を、ウシ胎仔血清が補充された最小必須培地中１０，０００細胞／ｃｍ2の濃度で、９６−ウェルプレート（１ウェル中の培地容積は、１００μｌであった）中に接種した。細胞が６５，０００細胞／ｃｍ2の濃度に達すると、それらを、異なる用量のポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンで４８時間処理した。次いで、細胞生存率（cell viability）をアッセイした（上記を参照のこと）。細胞生存が５０％減少する濃度として計算される、各阻害剤と細胞系についてのＩＣ５０値を、以下に示す。結果は４つの異なる実験に基づく。
【００８２】
【表３】
2004534078.tif 000014
【００８３】
これは、ポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンが、両方とも、腫瘍細胞生存率の非常に強力な阻害剤であることを示す。
【００８４】
実験４．種々のポドフィロトキシンアナログの用量応答効果
ＦＭ５５メラノーマ細胞を、実験３で記載したのと同一の様式で培養し、そして実験３で記載したように種々の用量のポドフィロトキシンアナログで処理した。結果（ＩＣ５０値）を以下の表４に提供する。
【００８５】
【表４】
2004534078.tif 000015
【００８６】
結果は、試験したアナログは全て効力があったことを示す。
【００８７】
実験５．白血病細胞の生存率に対するポドフィロトキシンアナログの用量応答効果
白血病細胞系Ｋ５６２／Ｓ、Ｋ５６２／Ｖｃｒ  ３０、ＨＬ６０／０およびＨＬ６０／Ｎｏｖは、ＩＧＦ−１Ｒを発現することが判った。これを、「方法」ならびに実験１および２に記載されるように、ウェスタンブロッティング分析によってアッセイした。これら４白血病細胞系を、ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ４０培地中、９６−ウェルプレート（１ウェル中の培地容積は、１００μｌであった）へ接種した。２４時間後、ポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシンおよび他の誘導体を、７２時間、異なる濃度で添加した。次いで、細胞生存率をアッセイした（上記を参照のこと）。各阻害剤と細胞系についてのＩＣ５０値を、以下に示す（表５）。結果は、３つの異なる実験に基づく。
【００８８】
【表５】
2004534078.tif 000016
【００８９】
結果は、デオキシポドフィロトキシンが、ヒト白血病細胞に対して予想外かつ非常に強力な細胞傷害性効果を有することを実証する。このような効果は、ＩＧＦ−１Ｒに対するその作用によってのみ説明され得ない。アセチルポドフィロトキシンおよびエピポドフィロトキシンの効果は、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤について予想される通りである。
【００９０】
結論
ポドフィロトキシンおよびいくつかのアナログ（デオキシポドフィロトキシン）のような特定のシクロリグナン類（cyklolignans）は、インタクトな細胞においてアッセイされたように、ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの非常に特異的かつ効力のある阻害剤であることが、実証された。インタクトな細胞に投与される場合、ＥＣ５０値は、０．０２〜０．０６μＭ程度に低かった。
【００９１】
インスリン様増殖因子−１レセプターのポドフィロトキシン誘発不活性化は、悪性細胞において広範囲な細胞死を生じさせ、これに対して、インスリン様増殖因子−１レセプターを有していない細胞は耐性であった。無毒性誘導体ピクロポドフィリン（picropodophyllin）は、インスリン様増殖因子−１レセプター活性を阻害してそして細胞死を誘発することにおいて、ポドフィロトキシンと等しい効力（equipontent）を有した。ポドフィロトキシンおよび誘導体のこの新規の機構は、癌および他のＩＧＦ−１Ｒ依存性疾患の治療に有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は、ＩＧＦ−１レセプターのチロシン１１３１、１１３５および１１３６を含む１２アミノ酸ペプチドのコンピュータモデルを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、化合物ポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシンの構造式を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、エピポドフィロトキシンおよびアセチルポドフィロトキシンの構造式を示す。
【図１】
2004534078.tif 000024
【図２Ａ】
2004534078.tif 000025
【図２Ｂ】
2004534078.tif 000026
【国際公開パンフレット】
2004534078.tif 000027
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2004534078.tif 000062
2004534078.tif 000063
【手続補正書】
【提出日】平成15年7月28日(2003.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
本発明は、特に、インスリン様増殖因子−１レセプターのチロシン自己リン酸化の阻害剤としての、比較的に無毒性のシクロリグナン類（例えば、エピポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、およびアセチルポドフィロトキシン）の使用に関し、より細胞傷害性でありそして細胞を刺激する化合物（例えば、ポドフィロトキシンおよび４’−デメチル−ポドフィロトキシン）の使用は避けられるべきである。


【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２Ｂ】
2004534078.tif 000064
【手続補正書】
【提出日】平成15年9月15日(2003.9.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2004534078.tif 000065
［式中、メチレン基の炭素原子とメトキシ基の炭素原子との距離は、０．８５〜１．０５ｎｍであり；
Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、あるいは必要に応じて二重結合を有し、必要に応じて１〜３の酸素官能基を有し、そして必要に応じてベンゼン環Ａにおける炭素原子と結合を形成する、Ｃ1-5直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖であり；
Ｒ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
を有する化合物の、インスリンレセプターではなくインスリン様増殖因子−１レセプターのチロシンリン酸化を阻害する医薬の製造のための使用。
【請求項２】
式Ｉ
【化２】
2004534078.tif 000066
［式中、メチレン基の炭素原子とメトキシ基の炭素原子との距離は、０．８５〜１．０５ｎｍであり；
Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、あるいは必要に応じて二重結合を有し、必要に応じて１〜３の酸素官能基を有し、そして必要に応じてベンゼン環Ａにおける炭素原子と結合を形成する、Ｃ1-5直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖であり；
Ｒ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
を有し、インスリンレセプターではなくインスリン様増殖因子−１レセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）を阻害する化合物の、ＩＧＦ−１Ｒ依存性士官の予防または処置用の医薬の製造のための使用。
【請求項３】
式Ｉ
【化３】
2004534078.tif 000067
［式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
を有する化合物の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
式II
【化４】
2004534078.tif 000068
［式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である］
を有する化合物の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
式III
【化５】
2004534078.tif 000069
［式中、Ｒ2はＨ、ＯＨ、ＯＣＨ3、またはＯＣ2Ｈ5であり、そしてＲ5およびＲ6は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、ＯＯＣＨ3、ＯＯＣＨ2ＣＨ3、ＯＣＨ3、またはＯＣ2Ｈ5であり、あるいはＲ5およびＲ6は一緒になってエーテルまたはラクトンであり；そしてＲ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２であり；但し、Ｒ2がＯＨである場合この置換基はアルファ位に有り得ない］
を有する化合物の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項６】
エピポドフィロトキシンおよびデオキシポドフィロトキシンからなる群から選択される化合物の、請求項１、２または５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
化合物アセチルポドフィロトキシンの請求項１または２に記載の使用。
【請求項８】
医薬としての使用のための、式Ｉを有する化合物：
【化６】
2004534078.tif 000070
式中、Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＯＣ2Ｈ5、ＣＨ3、Ｃ2Ｈ5、またはＣ2Ｈ4ＯＨであり；そしてＲ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である。
【請求項９】
式IIを有する化合物：
【化７】
2004534078.tif 000071
式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、同一または異なり得、Ｈ、ＯＨ、Ｏ、ＯＣＨ3であり、またはＲ2およびＲ3は一緒になってメチレンジオキシ基であり、またはＲ3およびＲ4は一緒になってアセトニド、カーボネートまたはメチレンジオキシ基であり；そしてＲ1は、同一または異なり得、ＯＨまたはＯＣＨ3であり、そしてｎは０〜２である。
【請求項１０】
生理学的に許容される担体と組み合わせて、請求項８または９に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
癌処置用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１２】
白血病の予防または処置のための、エピポドフィロトキシン、デオキシポドフィロトキシン、およびアセチルポドフィロトキシンからなる群から選択される化合物の、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
動脈硬化症の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
乾癬の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１５】
先端巨大症の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
０．０５〜５．０μＭの濃度にその血漿レベルを維持するに有効な量の前記化合物を含む癌の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
腫瘍に罹患する患者への一定注射によって、生理学的に許容される担体と組み合わせて式Ｉ、IIまたはIIIを有する化合物を含有する薬学的組成物を投与する工程、該化合物の血漿レベルをモニタリングする工程、および該腫瘍を遅延させるかまたは消滅させるに十分である時間の間、０．０５〜５．０μＭの濃度に血漿レベルを維持するように注射の速度を調節する工程を包含する、哺乳動物における癌の処置方法。
【国際調査報告】
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