(57)【要約】本発明は以下の構造を有する化合物および薬学的組成物に関する。（Ｉ）Ｒ２はＦおよび（ＩＩ）からなる群から選択され、ｍは１、２または３である。これらの化合物はプロドラッグおよびアポトーシス特性を有する試薬および薬学的組成物であり、関節炎、ＡＬＳ，ＭＳ等の疾患に対する種々の治療に役立つ。
2004521078.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式［化１］で表される化合物：
【化１】
2004521078.tif 000045
（式中、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から選択され、この−Ｎ−ＣＨ−（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−基は天然アミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じ、かつＲ１に隣接した炭素はＤまたはＬ配置であり；
Ｒ２は−Ｆおよび
【化２】
2004521078.tif 000046
からなる群から選択され、式中、Ｒ３およびＲ４は、水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ５およびＲ５’は、水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、一緒に環状構造またはヘテロ環状構造を形成可能であり；
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化３】
2004521078.tif 000047
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数である。）
【化４】
2004521078.tif 000048
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数である。）、または
【化５】
2004521078.tif 000049
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールからなる群から選択される。）から選択される。）。
【請求項２】
下記の（ａ）および（ｂ）を含んで構成されるプロテアーゼ阻害剤として利用するための薬学的組成物：
（ａ）  一般式［化６］を有する化合物；
【化６】
2004521078.tif 000050
（式中、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から選択され、この−Ｎ−ＣＨ−（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−基は天然アミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じ、かつＲ１に隣接した炭素はＤまたはＬ配置であり、
Ｒ２は−Ｆおよび
【化７】
2004521078.tif 000051
からなる群から選択され、式中、Ｒ３およびＲ４は、水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ５およびＲ５’は、水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、一緒に環状構造またはヘテロ環状構造を形成可能であり、
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化８】
2004521078.tif 000052
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数である。）
【化９】
2004521078.tif 000053
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数である。）、または
【化１０】
2004521078.tif 000054
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールまたはこれらの薬学的に許容可能な酸性または塩基性塩からなる群から選択される。）
から選択される。）
および
（ｂ）薬学的に許容される賦形剤。
【請求項３】
Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、Ｒ２がＦであり、Ｒ５が水素である、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、Ｒ２が
【化１１】
2004521078.tif 000055
（Ｒ３およびＲ４がそれぞれフルオロであり、Ｒ５が水素である。）である請求項２記載の組成物。
【請求項５】
Ｒ３およびＲ４がフェニル環の２および６位にある請求項４記載の組成物。
【請求項６】
Ｒ２が
【化１２】
2004521078.tif 000056
である請求項５記載の組成物。
【請求項７】
Ｒ２が
【化１３】
2004521078.tif 000057
である請求項５記載の組成物。
【請求項８】
Ｒ２が
【化１４】
2004521078.tif 000058
である請求項５記載の組成物。
【請求項９】
一般式［化１５］（ａ）を含んで構成されるプロテアーゼ阻害剤として使用するための薬学的組成物。
【化１５】
2004521078.tif 000059
（式中、Ｒ１はメチル、エチル、イソプロピル、およびイソブチルからなる群から選択され、
Ｒ２が−Ｆまたは
【化１６】
2004521078.tif 000060
からなる群から選択され、
（式中、Ｒ３およびＲ４が水素、炭素数１〜１０のアルキル、フルオロ、クロロ、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択される）
Ｒ５およびＲ５’は水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシル、フルオロ、およびクロロ
【化１７】
2004521078.tif 000061
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数である）
【化１８】
2004521078.tif 000062
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数である）
【化１９】
2004521078.tif 000063
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールからなる群から選択される）
から選択される）
【請求項１０】
Ｒ２が
【化２０】
2004521078.tif 000064
である請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
Ｒ２が
【化２１】
2004521078.tif 000065
である請求項９記載の組成物。
【請求項１２】
Ｒ２が
【化２２】
2004521078.tif 000066
である請求項９記載の組成物。
【請求項１３】
Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、
Ｒ２が−Ｆであり、
Ｒ５が水素である、
請求項９記載の組成物。
【請求項１４】
Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、
Ｒ２が
【化２３】
2004521078.tif 000067
であり（式中、Ｒ３およびＲ４がそれぞれフルオロである）、
Ｒ５が水素である、
請求項９記載の組成物。
【請求項１５】
Ｒ３およびＲ４がフェニル環の２および６位にある、請求項９記載の組成物。
【請求項１６】
以下の（ａ）および（ｂ）を含んで構成されるカスパーゼまたはカスパーゼ様酵素に対する阻害剤として使用するための薬学的組成物：
（ａ）以下の［化２４］からなる群から選択される化合物；
【化２４】
2004521078.tif 000068
2004521078.tif 000069
2004521078.tif 000070
（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤。
【請求項１７】
［化２５］の一般式で表される化合物：
【化２５】
2004521078.tif 000071
（式中、ＢおよびＪは天然のアミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造からなる群からそれぞれ選択され、前記アミノ酸はＤまたはＬ配置をなし、
Ｒ２は−Ｆおよび
【化２６】
2004521078.tif 000072
からなる群から選択され（式中、Ｒ３およびＲ４は水素アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ選択される）、
Ｒ５は水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニルおよびアミノから選択される。）。
【請求項１８】
ＢおよびＪが共にグリシンであり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ５が水素である、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
一般式［化２７］で表される化合物：
【化２７】
2004521078.tif 000073
（式中、ｍは１、２または３であり、１，２、または３のアミノ結合を作り、ｍが１でありＲＡがＲ１であるとき、ｍが２であり、ＲＡが別々のアミノ酸でＲ１およびＲ１Ｂであるとき、ｍが３であり、ＲＡが同じかまたは異なるアミノ酸である別々のアミノ酸でＲ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃであるとき（Ｒ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃはアルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から独立に選択され、前記基−Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−；Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）；またはＮＣＨ（Ｒ１）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨＣＨ（Ｒ１Ｃ）（Ｃ＝Ｏ）−は天然のアミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じる）、１、２または３のアミノ酸結合を生じ、
Ｒ１に隣接する炭素がＤまたはＬ構造であり、
Ｒ２が−Ｆおよび
【化２８】
2004521078.tif 000074
からなる群から選択され（式中、Ｒ３およびＲ４は水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群から独立に選択される）、
Ｒ５およびＲ５’が水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノから独立に選択され、一緒に環構造またはヘテロ環構造を形成する
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化２９】
2004521078.tif 000075
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である。）
【化３０】
2004521078.tif 000076
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である。）、または
【化３１】
2004521078.tif 000077
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールまたはこれらの薬学的に許容可能な酸性または塩基性の塩からなる群から選択される。）から選択される。）
【請求項２０】
ｍが２であり、Ｒ１およびＲ１Ｂがメチル、エチル、イソプロピルおよびｔ−ブチルからなる群からそれぞれ独立に選択される、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
ｍが３であり、Ｒ１、Ｒ１ＢおよびＲ１Ｃがメチル、エチル、イソプロピルおよびｔ−ブチルからそれぞれ独立に選択される、請求項１９記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２がＦまたは２，６−ジフルオロフェノキシ、Ｒ５およびＲ５’がそれぞれ水素であり、Ｒ６がメチルである、請求項２０記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２がＦまたは２，６−ジフルオロフェノキシ、Ｒ５およびＲ５’がそれぞれ水素であり、Ｒ６がメチルである、請求項２１記載の化合物。
【請求項２４】
一般式［化３２］で表される化合物：
【化３２】
2004521078.tif 000078
（式中、ｍは１、２または３であり、ｍが１でありＲＡがＲ１であるとき、ｍが２であり、ＲＡが別々のアミノ酸でＲ１およびＲ１Ｂであるとき、ｍが３であり、ＲＡが同じかまたは異なるアミノ酸である別々のアミノ酸でＲ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃであるとき（Ｒ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃはアルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から独立に選択され、前記基−Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−；Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）；またはＮＣＨ（Ｒ１）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨＣＨ（Ｒ１Ｃ）（Ｃ＝Ｏ）−は天然のアミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じる）、１、２または３のアミノ酸結合を生じ、
Ｒ１に隣接する炭素がＤまたはＬ構造であり、
Ｒ２が−Ｆおよび
【化３３】
2004521078.tif 000079
からなる群から選択され（式中、Ｒ３およびＲ４は水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群から独立に選択される）、
Ｒ５およびＲ５’が水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノから独立に選択され、一緒に環構造またはヘテロ環構造を形成する
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化３４】
2004521078.tif 000080
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である。）
【化３５】
2004521078.tif 000081
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である。）、または
【化３６】
2004521078.tif 000082
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールまたはこれらの薬学的に許容可能な酸性または塩基性の塩からなる群から選択される。）から選択される。）
および薬学的に許容可能な賦形剤を有する、プロテアーゼ阻害剤として使用するための薬学的組成物。
【請求項２５】
ｍが２であり、Ｒ１およびＲ１Ｂがメチル、エチル、イソプロピル、およびｔ−ブチルからなる群からそれぞれ独立して選択される、請求項２４記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
ｍが３であり、Ｒ１、Ｒ１ＢおよびＲ１Ｃがメチル、エチル、イソプロピル、およびｔ−ブチルからなる群からそれぞれ独立して選択される、請求項２４記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
Ｒ２がＦまたは２，６−ジフルオロフェノキシであり、Ｒ５およびＲ６がそれぞれ水素であり、Ｒ６がメチルである、請求項２５記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
Ｒ２がＦまたは２，６−ジフルオロフェノキシであり、Ｒ５およびＲ５’がそれぞれ水素であり、Ｒ６がメチルである、請求項２６記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項２記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３０】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項９記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３１】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項１５記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３２】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項１６記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３３】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項１７記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３４】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項２４記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３５】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項２５記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【請求項３６】
関節炎、転移、感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷、外傷性脳損傷、脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患を患っているとして診断されたヒトの治療法であって、その方法が
Ａ．治療的に有効な量の、請求項２６記載の薬学的組成物を投与すること含んで構成される方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願）
本出願は２０００年８月３０日出願の米国特許出願６０／２２９，２５７号のＣＩＰ出願であり、この全てを参照して本発明に取り込む。
【０００２】
（発明の属する技術分野）
本発明は置換キノリン−（複数アミノ酸）−脱離基構造（例えば、置換フェノールまたはフルオロメチルケトン）（およびキノリン型構造）およびその組成物に関する。２つ、３つまたは４つのアミノ酸結合基を説明する。これらの構造は種々の治療的薬学的用途を有しており、プロドラッグおよびプロテアーゼ阻害剤特にカスパーゼ酵素に対する阻害剤としての使用を含む。
【０００３】
（従来技術の説明）
プロテアーゼ阻害剤の使用に対する研究が公開された文献および特許文献において報告されている。
２００１年３月１３日に発行された、Ｌ．Ｃ．Ｆｒｉｔｓ氏等の米国特許第６，２００，９６９号明細書には、移植用器官の生存を延ばすための造血細胞集団の生存を高めるための、およびインターロイキン−１β−転化酵素（ＩＣＥ）／ＣＥＤ−３ファミリー阻害剤を使用してバイオプロダクションを高める方法および構造が開示されている。この特許は本発明を開示も示唆もしていない。
【０００４】
Ｄ．Ｈ．Ｒａｓｎｉｃｋの米国特許第４，５１８，５２８号明細書は新規なα−アミノフルオロケトン、これらの合成法、およびプロテアーゼを不可逆的に阻害する方法を開示している。キノリン小僧は開示、示唆されていない。
【０００５】
Ｍ．Ｐ．Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ氏等の米国特許第５，７１４，４８４号明細粗は、所望のシステインプロテアーゼを標的としかつプロテアーゼの活性部位のチオレートアニオン部分付近の阻害剤を位置づけるシステインプロテアーゼ阻害剤を開示している。第２部分はシステインプロテアーゼに共有結合し、カルボニルまたはカルボニル等価物をもたらすことよりそのプロテアーゼ不可逆的に失活させる。この構造はシステインプロテアーゼの活性部位のチオナートアニオンにより攻撃され、続いてβ−カルボニルエノールエーテル脱離基を解裂する。あるフルオロメチルケトンは長引く治療にあっては毒性であることを示され、薬剤として役立つ可能性はない。フェノキシエーテル化合物は抗カスパーゼ阻害剤として報告された結果に比べてあまり有効ではないことが報告されている。
【０００６】
リファレンス：
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【０００７】
カスパーゼはアポトーシスまたはプログラム細胞死（ＰＣＤ）に伴われるシステインプロテアーゼである。これらはアミノ酸すなわちアスパラギン酸を解裂します。フルオロメチルケトン、アルデヒド、およびクロロメチルケトン等のこれらの酵素に対して幾つかの型の阻害剤が使用された。システインプロテアーゼのこのファミリーについて知られる最も良好な阻害剤の一つはＺ−ＶＡＤ−ＦＭＫ（参照：１Ａ―１７Ａ）であり、これはカリフォルニア州リバーモアにあるＥｎｚｙｍｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社に所有される。本発明は治療分野に用途を拡張するこれらの阻害剤の新規な生成について説明する。
【０００８】
蛋白質分解は腫瘍が進行する間癌細胞によるホスト組織への侵入における重要な多段階工程である（リファレンス：１〜９）。（リファレンスは上記リストによる。）組織病理学的研究および転移性培養癌細胞のインビトロでの研究によりマトリックスメタロプロテイナーゼ（リファレンス：７）（リファレンス１０）プァスミノーゲンアクチベータ（リファレンス７、１２、１３、１４）およびカテプシン（リファレンス１１および１５〜２４）が含まれることが明らかになった。
【０００９】
Ｓｌｏａｎｅおよび共同研究者は、癌細胞の原形質膜か癌細胞周りの細胞間スペースにおけるカテプシンＢの存在が転移に重要であることを早期に提案した（リファレンス１１、１５、１６、１７および２５）。カテプシンＢはシステインプロテイナーゼサブクラスの最も有名なサブクラスであり（リファレンス２６）、ファゴサイトーシスまたは自食作用の後の蛋白質分解に伴われるリソソームに普通に存在する。カテプシンＢをブロックすると、リソソーム蛋白質分解は非常に抑止される（リファレンス２７、２８）。ある条件下で、カテプシンＢはリソソームに分類されず、例えば慢性炎症（リファレンス３２）の間にマクロファージによりおよび関節炎の急性期に軟骨細胞により分泌される（リファレンス２９、３０、３１）。カテプシンＢの分泌と原形質膜との結合は転移性癌細胞中で見いだされるが転移性を欠いている癌細胞にはない（リファレンス３０、３５、３６）。これは機能的に完全な微小管ネットワーク（リファレンス３０、３１）に依存しており、細胞外のミクロ環境の酸性化により誘導される（リファレンス３０）。カスパーセはアポトーシスまたはプログラム細胞死（ＰＣＤ）に含まれるシステインプロテアーゼである。
【００１０】
アミノ酸部分の合成およびペプチドの合成に関する米国特許は第３，５３１，２５８；４，３１８，９０５；５，５２７，８８２；およびｂ５，８４７，６９５号明細書に見いだされる。これらを参照して本発明に取り込む。
他の米国特許としては、第４，５１８，５２８；４，７７１，１２３；５，４１６，０１３；５，７５６，４６５；および５，８６９，５１９号明細書があり、参照により本発明に取り込む。
【００１１】
プロドラッグは患者（ヒト）に投与される通常は非活性の化合物であり、インビボで転化または解裂して薬理的および治療的特性を有する構造を生じる。
本出願に引用された全ての論文、特許、特許出願、基準、プロトコル等は参照して全体を本発明に取り込む。
【００１２】
現存する技術の上記説明からわかるように、有効なプロドラッグおよびプロテアーゼ阻害剤、特にカスパーゼ酵素に対する阻害剤に対する必要性がある。本発明はプロドラッグおよびプロテアーゼ阻害剤として役立つ新規な構造および薬学的組成物および治療剤を提供する。これらの構造および組成物を使用する治療法もクレームする。
【００１３】
本発明はキノリン−（２−カルボニル）−（複数のアミノ酸）−脱離基構造（およびキノリン−タイプ構造）を有するとして一般に記載される特定の化合物に関する。この化合物はプロドラッグとして、およびプロテアーゼ阻害剤として特に広範な疾患条件に対するカスパーゼ治療において役に立つ。通常、２、３または４のアミノ酸結合基が存在する。
【００１４】
別の観点から、本発明は一般式［化３７］で表される化合物に関する。
【化３７】
2004521078.tif 000011
式中、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から選択され、この−Ｎ−ＣＨ−（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−基は天然アミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じ、かつＲ１に隣接した炭素はＤまたはＬ配置であり；
Ｒ２は−Ｆおよび
【化３８】
2004521078.tif 000012
からなる群から選択され、式中、Ｒ３およびＲ４は、水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ５およびＲ５’は、水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、一緒に環状構造またはヘテロ環状構造を形成可能であり；
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化３９】
2004521078.tif 000013
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり、好ましくは２である。）
【化４０】
2004521078.tif 000014
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり、好ましくは２である。）、または
【化４１】
2004521078.tif 000015
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールからなる群から選択される。）から選択される。
【００１５】別の観点から、本発明は下記のプロテアーゼ阻害剤として利用するための薬学的組成物に関する。
すなわち、一般式［化４２］を有する化合物；
【化４２】
2004521078.tif 000016
（式中、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から選択され、この−Ｎ−ＣＨ−（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−基は天然アミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じ、かつＲ１に隣接した炭素はＤまたはＬ配置であり、
Ｒ２は−Ｆおよび
【化４３】
2004521078.tif 000017
からなる群から選択され、式中、Ｒ３およびＲ４は、水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ５およびＲ５’は、水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノからなる群からそれぞれ独立に選択され、一緒に環状構造またはヘテロ環状構造を形成可能であり、
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化４４】
2004521078.tif 000018
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり、好ましくは２である。）
【化４５】
2004521078.tif 000019
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり、好ましくは２である。）、または
【化４６】
2004521078.tif 000020
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールまたはこれらの薬学的に許容可能な酸性または塩基性塩からなる群から選択される。）
から選択される。）
および
薬学的に許容される賦形剤を含んで構成される。
【００１６】前記薬学的組成物の特定の態様では、前記構造において、Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、Ｒ２がＦであり、Ｒ５が水素である。
【００１７】前記薬学的組成物の特定の態様では、前記構造において、Ｒ１がイソプロピルまたはイソブチルから選択され、Ｒ２が
【化４７】
2004521078.tif 000021
（Ｒ３およびＲ４がそれぞれフルオロであり、Ｒ５が水素である。）である。好ましくはＲ３およびＲ４がフェニル環の２および６位にあるフルオロである。
【００１８】
特定の態様では、Ｒ２が
【化４８】
2004521078.tif 000022
【化４９】
2004521078.tif 000023
または
【化５０】
2004521078.tif 000024
から独立に選択される。
【００１９】
別の態様では、本発明は一般式［化５１］を含んで構成されるプロテアーゼ阻害剤として使用するための薬学的組成物に関する。
【化５１】
2004521078.tif 000025
式中、Ｒ１はメチル、エチル、イソプロピル、およびイソブチルからなる群から選択され、
Ｒ２が−Ｆまたは
【化５２】
2004521078.tif 000026
からなる群から選択され、
（式中、Ｒ３およびＲ４が水素、炭素数１〜１０のアルキル、カルボキシル、フルオロ、クロロ、およびアミノからなる群からそれぞれ独立に選択される）
Ｒ５およびＲ５’は水素、炭素数１〜１０のアルキル、炭素数１〜１０のアルコキシル、フルオロ、およびクロロ
【化５３】
2004521078.tif 000027
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり、好ましくは２である）
【化５４】
2004521078.tif 000028
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である）
【化５５】
2004521078.tif 000029
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールからなる群から選択される）
から選択される。
【００２０】
さらに、別の観点から、本発明は以下の群から選択される構造を有するカスパーゼまたはカスパーゼ様酵素に対する阻害剤として使用するための薬学的組成物に関する。
【化５６】
2004521078.tif 000030
2004521078.tif 000031
【００２１】
さらに、別の態様では、本発明は［化５７］の一般式で表される化合物を含む薬学的組成物に関する。
【化５７】
2004521078.tif 000032
（式中、ＢおよびＪは天然のアミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造をなす群からそれぞれ選択され、前記アミノ酸はＤまたはＬ配置をなし、
Ｒ２は−Ｆおよび
【化５８】
2004521078.tif 000033
からなる群から選択され（式中、Ｒ３およびＲ４は水素アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群からそれぞれ選択される）、
Ｒ５およびＲ５’は水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニルおよびアミノから独立に選択される。）
【００２２】さらに別の観点から、本発明は下記の構造を有する、カスパーゼ阻害剤として役に立つ試薬（化合物）およびプロテアーゼ阻害剤として役に立つ薬学的組成物に関する。
前記構造は一般式［化５９］で表される。
【化５９】
2004521078.tif 000034
（式中、ｍは１、２または３であり、ｍが１でありＲＡがＲ１であるとき、ｍが２であり、ＲＡが別々のアミノ酸でＲ１およびＲ１Ｂであるとき、ｍが３であり、ＲＡが同じかまたは異なるアミノ酸である別々のアミノ酸でＲ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃであるとき（Ｒ１、Ｒ１Ｂ、およびＲ１Ｃはアルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールからなる群から独立に選択され、前記基−Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−；Ｎ−ＣＨ（Ｒ１）−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）−（Ｃ＝Ｏ）；またはＮＣＨ（Ｒ１）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１Ｂ）（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨＣＨ（Ｒ１Ｃ）（Ｃ＝Ｏ）−は天然のアミノ酸構造または非天然のアミノ酸構造を生じる）、１、２または３のアミノ酸結合を生じ、
Ｒ１に隣接する炭素がＤまたはＬ構造であり、
Ｒ２が−Ｆおよび
【化６０】
2004521078.tif 000035
からなる群から選択され（式中、Ｒ３およびＲ４は水素、アルキル、フルオロ、クロロ、カルボキシル、アルコキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびアミノからなる群から独立に選択される）、
Ｒ５およびＲ５’が水素、アルキル、アルコキシ、フルオロ、クロロ、カルボキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アミノから独立に選択され、一緒に環構造またはヘテロ環構造を形成する
Ｒ６は１〜１０の炭素原子を有するアルキル、アリール、または置換アリール、
【化６１】
2004521078.tif 000036
（式中、Ａは共有結合したアミン保護基であり、ｎは１〜４の整数であり好まし  くは２である。）
【化６２】
2004521078.tif 000037
（式中、Ｘは薬学的に許容可能な塩であり、ｎは１〜４の整数であり好ましくは２である。）、または
【化６３】
2004521078.tif 000038
（式中、Ｒ７は炭素数１〜１０のアルキル、アリール、およびアルキルアリールまたはこれらの薬学的に許容可能な酸性または塩基性の塩からなる群から選択される。）から選択される。）
さらに薬学的に許容可能な賦形剤に関する。
【００２３】
特定の態様では、ｍが２であり、Ｒ１およびＲ１Ｂがメチル、エチル、イソプロピルおよびｔ−ブチルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
特定の態様では、ｍが３であり、Ｒ１、Ｒ１ＢおよびＲ１Ｃがメチル、エチル、イソプロピルおよびｔ−ブチルからそれぞれ独立に選択される。
【００２４】
（発明の実施の態様）
定義
「アルキル」は約１〜２０の炭素数、好ましくは約１〜１０の炭素数を有するアルキル基をいう。アルキル基の全配置が「アルキル」の用語に含まれる。メチルおよぼエチルがより好ましい。
「アルコキシ」または「アルコキシル」は約１〜２０の炭素数、好ましくは約１〜１０の炭素数を有する普通のアルキル−ｏ−部分をいう。これらのアルキル基の全配置が「アルコキシ」または「アルコキシル」の用語に含まれる。メチルおよびエチルがより好ましい。
【００２５】
「アミノ酸」とは、天然のアミノ酸および合成（非天然の）アミノ酸を含む有機化合物をいう。天然のアミノ酸は生命系の基本であり、種々の置換基を含む炭素に結合したアミノ基およびカルボニル基を有する。天然のアミノ酸は全てＬ配置であり、表１に示す。Ｄ配置のアミノ酸は知られているが、代謝工程には加わらない。合成アミノ酸は表１および図２７に記載の天然のアミノ酸以外のアミノ酸である。
【００２６】
【表１】
2004521078.tif 000039
【００２７】
「天然のアミノ酸および非天然のアミノ酸」とは、天然に産生するアミノ酸と、これ以外の、Ｄ型とＬ型を含む、天然に産生するペプチドの合成類似物を調製する際にペプチド合成の分野の当業者が普通に使用する非蛋白質生成性αアミノ酸とをいう。天然産生アミノ酸はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、ｙ−カルボキシルグルタミン酸、アルギニン、オルニチン、およびリジンである。非天然のα−アミノ酸の例としては、ヒドロキシレジン、シトルリン、キヌレニン、（４−アミノフェニル）アラニン、３−（２’−ナフチル）アラニン、３−（１’−ナフチル）アラニン、メチオニンスルフォン、（ｔ−ブチル）アラニン、（ｔ−ブチル）グリシン、４−ヒドロキシフェニル−グリシン、アミノアラニン、フェニルグリシン、ビニルアラニン、プロパルギル−グリシン、アミノアラニン、フェニルグリシン、ビニルアラニン、プロパルギル−グリシン、１，２，４−トリアゾーロ−３−アラニンチロシン、６−ヒドロキシトリプトファン、５−ヒドロキシトリプトファン、３−ヒドロキシ−キヌレニン、３−アミノトリプシン、トリフルオロメチルアラニン、２−チエニルアラニン、（２−（４−ピリジル）エチル）システイン、３，４−ジメトキシ−フェニルアラニン、３−（２’−チアゾリル）アラニン、イボテン酸、１−アミノ−１−シクロペンタン−カルボン酸、１−アミノ−１−シクロへキサンカルボン酸、キスカル酸、３−（トリフルオロメチルフェニル）アラニン、（シクロヘキシル）グリシン、チオヒスチジン、３−メトキシチロシン、ノルロイシン、ノルバリン、アロイソロイシン、ホモアルギニン、チオプロリン、デヒドロ−プロリン、ヒドロキシプロリン、ホモプロリン、インドリン−２−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、１，２，３，４−トトラヒドロキノリン−２−カルボン酸、α−アミノ−ｎ−酪酸、シクロヘキシルアミン、２−アミノ−３−フェニル酪酸、フェニル部位のオルト、メタまたはメタ位を１つまたは２つの以下の置換基で置換されたフェニルアラニン：すなわち、炭素数１〜４のアルキル、炭素数１〜４のアルコキシ、ハロゲンまたはニトロ基、またはメチレンジオキシ基での置換物；β−２−および３−チエニルアラニン；β−２−および３−フラニルアラニン；Ｐ−２−、３−および４−ピリジルアラニン；β−（ベンゾチエニル−２−および３−イル）アラニン；β−（１−および２−ナフチル）アラニン；セリン、トレオニンまたはチロシンのＯ−アルキル化誘導体；Ｓ−アルキル化システイン、Ｓ−カルキル化ホモシステイン、チロシンのＯ−サルフェート、Ｏ−ホスフェート、およびＯ−カルボキシレートエステル；３−（スルホ）チロシン、３−（カルボキシ）チロシン、３−（ホスホ）チロシン、チロシンの４−メタンホスホン酸エステル、３，５−ジヨードチロシン、３−ニトロチロシン、ｅ−アルキルリジン、およびデルタ−アルキルオルニチンである。これらのα−アミノ酸はα位をメチル基で置換され、αア���ノ側鎖の芳香族残基の何れかの位置をハロゲンで置換され、または前記側鎖残基のＯ、ＮまたはＳ原子位置を適当な保護基で置換される。適当な保護基とは上記のとおりである。
【００２８】
「アミノ保護基」は、分子の他の官能基を反応させる間、アミノ官能性をブロックまたは保護するために普通に使用されるアミノ基の置換基をいう。「保護された（一置換の）アミノ」は、一置換されたアミノ窒素原子上にアミノ保護基があることを意味する。このようなアミノ保護基の例としては、ホルミル（「Ｆｏｒ」）基、トリチル基、フタルイミド基、トリクロロアセチル基、トリフロロアセチル基、クロロアセチル、ブロモアセチル、およびヨードアセチル基、ｔ−ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）等のウレタン型保護基、２−（４−ビフェニルイル）プロピル−２−オキシカルボニル（「Ｂｐｏｃ」）、２−フェニルプロピル−２−オキシカルボニル（「ｐｏｃ」）、２−（４−キセニル）イソプロポキシカルボニル、１，１−ジフェニルエチル−１−オキシカルボニル、１，１−ジフェニルプロピル−１−オキシカルボニル，２−（３，５−ジメトキシフェニル）プロピル−２−オキシカルボニル（「Ｄｄ」）、２−Ｈ−トルイル）プロピル−２−オキシカルボニル、シクロペンタニルオキシカルボニル、１−メチルチクロペンタニルオキシカルボニル、シクロヘキサニルオキシカルボニル、１−メチル−シクロヘキサニルオキシカルボニル−カルボニル、１−メチル−シクロヘキサニルオキシカルボニル、２−メチルシクロヘキサニルオキシカルボニル、２−（４−トルイスルフォニル）エトキシカルボニル、２−（メチルスルフォニル）エトキシカルボニル、２−（トリフェニルホスピノ）エトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（「Ｆｍｏｃ」）、２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、１−（トリメチルシリルメチル）プロピル−１−エニルオキシカルボニル、５−ベンゾイソオキサリメトキシカルボニル、４−アセトキシベンジル−オキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−エチニル−２−プロポキシカルボニル、シクロプロピルメトキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、１−ピペリジルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル（「Ｃｂｚ」）、４−フェニルベンジルオキシカルボニル、２−メチルベンジルオキシカルボニル、α−２，４，５−テトラメチルベンジル−オキシカルボニル（「Ｔｍｚ」）、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、４−フルオロベンジルオキシカルボニル、４−フルオロベンジルオキシカルボニル、４−クロロベンジルオキシカルボニル、３−クロロベンジルオキシカルボニル、２−クロロベンジルオキシカルボニル、２，４−ジクロロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベンジルオキシカルボニル、３−ブロモベンジルオキシカルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−シアノベンジルオキシカルボニル、４−（デシロキシ）ベンジルオキシカルボニル等；ベンゾイルメチルスルフォニル基、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基（ＰＭＣ）、ジチアスクシノイル基（Ｄｓｔ）、２−（ニトロ）フェニルスルホニル基（Ｎｐｓ）、ジフェニルホスフィンオキシド基、等のアミノ保護基を含む。使用されるアミノ保護基の種類は、誘導体化されるアミノ基が続く反応の条件に対して安定であり、反応分子の残りの部分が分解���ることなく適当な点で除去可能である限りは重要ではない。好ましいアミノ保護基はＢｏｃ、Ｃｂｚ、およびＦｍｏｃである。
【００２９】
「脱離基」とは、当業界における従来からの脱離基をいう。好ましい脱離基はフルオロメチルケトン、２，６−ジフルオロフェノキシ、２−カルボキシフェノキシ、２−カルボキシ−４−アミノ−フェノキシル、テトラン酸等を含む。
「キノリン」とは標準１−アザ−ナフタレン構造をいう。「キノリン」は２−または３−位が例えばキナ酸からのカルボニル部分を有する「キノリン型」構造を含む。
「キノリン型」とは２−または３−位がカルボニル部分を有する標準インドール型およびインドール構造をいう。キノリン型はメラトニンおよび置換メラトニン構造をいう。
「置換されたアルキル基」はプロトンがクロロまたはフルオロまたは天然のまたは非天然のアミノ酸に見られる基で置換された、（本発明で定義した）アルキルをいう。
【００３０】
「アリール」とは、フェニル、ナフタリル、等をいう。
「置換アリール」とは、当業界で見られる一または二置換のフェニルまたはナフチルをいう。置換基としては（本発明で定義した）アルキル、（本発明で定義した）アルコキシル、フルオロ、クロロ、カルボキシル（アルキルまたはアリールは本発明で定義した）、アルキルカルボニル（アルキルは本発明で定義した）、アリールカルボニル（アリールは本発明で定義した）、またはアミノを含む。
【００３１】
一般的なおよび特定の構造に対する「構造標記」（参照：表２（参照Ａ１〜Ｊ１）は、Ｑ−Ｖ−Ｄ（ＯＣＨ３）−ＣＨ２−ＦＭＫをいい、これはキノリン−（Ｃ＝Ｏ）−バリニルアスパラギン酸であり、バニリルはアミンを介してキナ酸におよびカルボニル基を介してアスパラギン酸アミンに結合する。ある構造においてＶａｌはＬｅｕにより置換され、アルパラギン酸の１つのカルボン酸はメチルエステルとして保護され、他のカルボキシル基は変えられた。−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨのヒドロキシル基はメチレン基に転化された（参照：実施例）。ある態様では、メチレン基はフッ素（−Ｆ）により末端化され、末端フルオロメチルケトン部分（ＦＭＫ）を生じる。別の態様では、置換フェノキシ基（−Ｏ−）に対する非置換により末端化される（例えば２，６−ジフルオロ）。他の脱離基はフェノキシ基の代りに使用される。
【００３２】
【表２】
2004521078.tif 000040
【００３３】
議論−システインプロテアーゼは生物系において、重要な酵素である。名前が示すように、これらの酵素の活性部位にアミノ酸システインを含み、ある疾病状態において自らを明確に示す組織破壊酵素であるとして知られている。カテプシンはこのファミリーに含まれる約２０の個々の酵素を有するシステインプロテアーゼに属する。カテプシンを含むある疾病は関節炎、転移および多発性硬化症である。付加的な疾病として、例えば感染症、髄膜炎、卵管炎、敗血性ショック、呼吸器疾患、炎症条件、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、肝炎、膵炎、再潅流障害、虚血性疾患、心筋梗塞、脳梗塞、虚血性腎臓疾患、免疫に基づく疾患、過敏症、自己免疫疾患、多発性硬化症、骨疾患、および神経変性疾患を含む。カスパーゼは別の型のシステインプロテアーゼ酵素である。アポトーシスすなわちプログラム細胞死（ＰＣＤ）の主な原因であるとして知られている主なカスケードに含まれる。
【００３４】
本発明は新規なペプチドカスパーゼ阻害剤の独特なグループを提示する。これらの組成物および予備活性は潜在的な薬剤として大きな展望を示す。
これらの構造は共有結合した部分として表される。
Ａ’−Ｂ’−Ｃ’
これらの成分は以下のように定義される。
Ａ’は非置換または置換のキノリンまたはキノリン型構造である。
Ｂ’は２、３、または４つの天然のＤ−またはＬ−アミノ酸または非天然のアミノ酸を含み、例えば、Ｌ配置を有してもよい。より好ましくは、これらのアミノ酸はグルタミン酸、バリン、アルパラギン酸、またはモノアルキル（例えばメチル）保護アスパラギン酸から選択される。最も好ましくは構造ＩＩにおけるアミノ酸はバリン−アスパラギン酸（Ｏ―Ｍｅ）である。
Ｃ’は脱離基である。これらの脱離基は概して本発明において規定される。好ましい脱離基としては、非制限的にフルオロメチルケトン；２，６−ジフルオロフェノキシ；４−アミノ−２−カルボキシフェノキシ；２−カルボキシフェノキシ；Ｌ−ドーパミン−トリフルオロ酢酸（ＤＯＰＡ・ＴＦＡ）；Ｌ−ドーパミン−ｔ−ブトキシカルボニル（ＤＰＯＡ−ＢＯＣ）；テトロン酸；メラトニン等を含む。さらに、Ｃ１基は体内においてインビボで放出される場合それ自体が有益な薬剤活性を有する。
【００３５】
文献は、カスパーゼ阻害剤がアルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンキントン病、パーキンソン病、髄膜炎、脊髄損傷および肝臓損傷等の幾つかの疾病状態における有益な治療法であるとして必要とされると示している。アポトーシスのコントロールは疾病の治療において有益である（参照：Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｒｅｆ．５Ａ）。特に、ＩＣＥ／ＣＥＤ−３ファミリーの阻害剤は治療効果を有する。例えば、ＩＣＥの阻害剤は炎症性疾患の治療に役立つことが示唆された（ｄｏｌｌｅ氏等、「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．」３７：５６３、１９９４； Ｔｈｏｍｂｅｒｒｙ氏等、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」３３：３９４、１９９４）。ＩＣＥ／ＣＥＤ−３ファミリーメンバーの阻害剤は神経変性疾患等の変性疾患（例えば、アルツハイマー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、ハンキントン病）、心臓の虚血性疾患または中枢神経系（すなわち心筋梗塞、脳梗塞）および外傷性脳障害、並びに脱毛症、ＡＩＤＳおよび毒素誘導肝臓疾患（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ， 「Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」１４：２９７，１９９６）治療する際に役立つことが知られている。また、これらは細胞および組織保存において非常に重要な役割を表す。
アポトーシスは徹底的に研究されている分野であり、最後の潜在的治療法は展望できない。これらの阻害剤は種々の疾患に対して非常に重要な新規な治療試薬として提示する。
【００３６】
有益性および投与
本発明の化合物は種々のインビトロの動物調製および組織培養におけるプログラム化された細胞死の減少に有効であり、生理学的減少に影響を与えることが示された。これらの化合物は動物モデルに有効であることが示され、したがって哺乳類、特に人類の治療に有効である。
これらの化合物は免疫抑制剤として有益であり、特に関節炎等の自己免疫症の治療において有益である。
【００３７】
本発明において記載の活性化合物および塩の投与は、アポトーシスおよび他の外傷性早期細胞死により生じた状態に影響を与える治療薬の受け入可能なモードの投与による。これらの方法としては、経口、非経口、経皮的、皮下その他の方法を含む。自力で薬剤を取り込むことができない場合を除いて、好ましい投与方法は経口である。前記経口不可能な場合は、非経口的に組成物を投与することが必要である。
【００３８】
意図するモードに応じて、組成物は固体、半固体、または液体の投与形態をとる。例えばタブレット、座薬、ピル、カプセル、粉末、液体、懸濁液、皮膚パッチ等であり、好ましくは正確な投与量の単一投与に適した単位投与形態である。組成物は、従来の薬学的賦形剤および式Ｉの活性化合物およびこれの薬学的に許容できる塩を含み、さらに、他の治療薬、薬剤、担体、補助剤、希釈剤等を含んでもよい。
【００３９】
投与される活性化合物の量は、無論、治療される患者、苦痛の深刻さ、投与方法、処方者の判断に依存する。しかし、有効投与量は０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇ／日である。平均７０ｋｇのヒトにたいして、この量は１日あたり７〜７０００ｍｇ、好ましくは３５〜３５０ｍｇ／日となる。あるいは、Ｌ．Ｃ．Ｆｒｉｔｚ氏等の米国特許第６，２００，９６９号明細書により記載された化合物の投与に従う。この開示から当業者は有効な薬学的処方が可能である。
化合物の効果は（生体系のアポトーシスに影響を与える）同じ中央のメカニズムを介して達成されるので、投与量（および投与形態）はこれらの全利用性に対して同じ一般的で好ましい範囲内にある。
【００４０】
固体組成物について、従来の非毒性固体としては、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、当業者を使用できる。上記活性化合物は例えば担体としてプロピレングリコール等のポリアルキレングリコール等を使用する座薬として配合してもよい。液体薬学的投与可能組成物は例えば上記の活性化合物および例えば水、塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール等の賦形剤中の任意の薬学的補助剤を溶解、分散等することにより調製可能であり、これにより溶液および懸濁液を形成する。所望の場合は、投与されるべき薬学的組成物は少量の非毒性補助物質を含むことができる。例えば湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤等であり、具体的には例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、トリエタノールアミンオレアート等である。このような投与形態を調製する実際的な方法は、知られており、また当業者には明らかであり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」１７刷、１９８５年、ペンシルベキア州イーストン、Ｍａｃｋ出版社、が参照される。投与される組成物または処方は所定量の活性化合物を、治療に有効な量で、すなわち治療される患者の症状を緩和するために有効な量で含む。
【００４１】
経口投与について、薬学的許容可能な非毒性組成物は、例えば薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石粉、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等の通常使用される賦形剤のいずれかと組み合わせて作られる。このような組成物は溶液、懸濁液、タブレット、ピル、カプセル、粉末、徐放性処方等の形態を採用する。このような組成物は１０％〜９５％の活性成分、好ましくは１〜７０％の活性成分を含む。
【００４２】
非経口投与は一般に、皮下注射、筋肉注射、または静脈注射により特徴付けられる。注射可能物は、液体溶液または懸濁液として調製され、注射の前に液体中で溶液または懸濁液にするのに適した固体形態あるいはエマルジョンとして従来の形態で調製可能である。適当な賦形剤は例えば水、塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等である。さらに、所望の場合は、投与される薬学的組成物は湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤等の少量の非毒性の補助物質を含むことができる。具体的には、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート等である。
【００４３】
最近では、非経口投与法は、一定レベルの投与量を維持する遅速放出または徐放性系のために、移植、皮膚パッチを使用する。参照：例えば米国特許第３７１０７９５号明細書。参照によりこれを本発明に取り込む。
【００４４】
実験
本発明で記載した出発材料化合物、溶媒、試薬等は市販されており、あるいは当業者が文献を参照することにより容易に調製可能である。参照：フロリダ、ボーカラトーンにあるＤｉｒｅｃｔｏｒｉｅｓ出版社により毎年出版される「Ｃｈｅｍ Ｓｏｕｒｃｅｓ ＵＳＡ」およびウィスコンシン、ミルウォーキー「Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ」。出発材料は特記しない限りは入手したものとして使用する。
【００４５】
（実施例）
実施例１
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＣＨＮ２の合成
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＯＨ（５．０ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフランＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解した。−１５℃に冷却後（氷−塩浴）、４−メチルモルホリン（２．８ｍｌ、２６．３ｍｍｏｌ）を添加し、イソブチルクロロホルメート（２．８ｍｌ、２２．３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を１５分間攪拌した。沈殿物を濾過した。１０ｇのＤＩＡＺＡＬＤから新たに作ったジアゾメタンを−１０℃で添加し、１時間攪拌した。溶液を室温に温め、４時間攪拌した。溶媒を除去した。残りのジアゾメタンをシリカゲルカラムクロマトグラフ（ヘキサン中１０％から３０％のＥｔＯＡｃを用いて溶出した）により精製した。収率：５．２ｇ（９４．９％）。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）５．６７（ブロード１Ｈ）、４．５２（ブロード、１Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、３．０３（ｍ、１Ｈ）、２．７０（Ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ、９Ｈ）。
【００４６】
実施例２
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）の合成
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＣＨＮ２（１．１２ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：エーテル（１：１  ３０ｍｌ）に溶解し、−１５℃に冷却した。エーテル：ＴＨＦ（１：１、８ｍｌ）中のＨＢｒ／酢酸（３０％、０．９８ｍｌ、４．９６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下により添加し、１５分間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は完全な反応を示した。ブライン（５０ｍｌ）を添加した。水層をＴＨＦ：エーテル（１：１、５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この溶媒を除去し、ポンプ乾燥した。収率：１．２ｇ（９０％）。この臭化物（１．２ｇ、３．７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミドＤＭＦ（７ｍｌ）に溶解した。２，６−ジフルオロフェノール（５２９ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ）を添加し、その後ＫＦ（５３７ｍｇ、９．２５ｍｍｏｌ）を添加し，一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。
ＥｔＯＡｃ溶液を、水（５０ｍｌ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）、および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この溶媒を除去した。残りをシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：ヘキサン中１０％から３０％のＥｔＯＡｃ）。収率：１．１ｇ（８０％）。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）６．９５（ｍ、３Ｈ）、５．０４（ｓ、２４）、４．７３（ブロード，１Ｈ）、３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．８５（Ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｓ、９Ｈ）。
【００４７】
実施例３
キノリン−（２−カルボニル）−バリン−ＯＨの合成
キナ酸（キノリン−２−カルボン酸）（２．０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ），Ｖａｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ，ＨＣｌ（２．４２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１．５６ｇ、１１．５ｍｍｏｌ），およびＨＢＴＵ（４．３８ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍｌ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（６ｍｌ、３４．６ｍｍｏｌ）をシリンジを使用して添加し、１時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃ溶液を水（１００ｍｌ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍｌ）、および飽和ＮａＣｌ（１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この溶媒を除去した。残りをシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン中５０％のＥｔＯＡｃで溶出した）。収率：３．５ｇ（９２．３％）。ｔ−ブチルエステル（３．５ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を９５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（３５ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌した。この溶液を除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。収率：２．８ｇ（９６％）。ＭＳ（Ｅｌ）：Ｍ＋＝２７３。
【００４８】
実施例４
キノリン−２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―α―（２―オキシ―２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトンの合成
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）ＣＨ２−２−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトン（１５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（３ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌した。この溶液を真空下で除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。Ｑ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−ＯＨ（１１０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（５５ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ），ＨＢＴＵ（１５３ｍｇ，０．０４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍｌ）中の得られた残渣添加した。ＤＩＥＡ（０．２１ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）をシリンジを使用して添加し、１時間攪拌した。
ＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）を添加し、ＥｔＯＡｃ溶液をＨ２Ｏ（５０ｍｌ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。この溶媒を除去した。この残渣を２つの分離用ＴＬＣ（２０×２０）プレートで精製した（ヘキサン中５０％のＥｔＯＡｃで展開した。収率：９０ｍｇ（４３％））。δＨ（３００ＭＨｚ）８．７５（ｔ、１Ｈ）、８．３２（ｍ、１Ｈ）、８．２９（ｍ，１Ｈ０）、８．２５（ｄ、１Ｈ）、７．８８（ｄ，１Ｈ）、７．７９（ｔ、１Ｈ）、７．６４（ｔ、１Ｈ）、７．３７（ｔ、１Ｈ）、６．８７（ｔ，１Ｈ）、６．７５（ｔ、１Ｈ）、５．０８（Ｍ，２Ｈ）、４．５９（ｍ、１Ｈ）、３．６１（ｓ、３Ｈ）、３．１４（ｍ、１Ｈ）、３．０９（ｍ，１Ｈ）、２．４１（ｍ、１Ｈ）、１．０９（ｍ，１Ｈ）、ＭＳ（Ｅ．１），ＭＨ＋＝５２８。
【００４９】
実施例５
キノリンβＡ−Ｄ（ＯＭｅ）−α−フルオロメチルケトンの合成
２−キノリン（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＯＨの合成
キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−ＯＨ（１．１７ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＯＢｚ、ＨＣｌ（１．１７５ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（５８０ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１．６３ｇ，４．２９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７ｍｌ）に溶解した。ＤＩＥＡ（２．２ｍｌ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加し、１時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃと水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍｌ）およびＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。ＥｔＯＡｃを除去した。この残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン中５０％のＥｔＯＡｃで溶出した）。収率：０．７ｇ（６７％））。
ベンジルエステル（１．４ｇ）をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に溶解した。炭素担持１０％のパラジウム（１４０ｍｇ）を添加し、溶液を１９０ｐｓｉで一晩水素化した。この溶液をセライト（ＣＥＬＩＴＥ）で濾過した。この溶媒を除去し酸を生じた。収率：１．０ｇ（８７％）。質量分析＆ＮＭＲ：ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝４０２。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）８．８９（ｄ、１Ｈ）、８．３１（ｄ、１Ｈ）、８．２７（ｄ，１Ｈ）、８．１７（ｄ、１Ｈ）、７．８７（ｄ，１Ｈ）、７．７８（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｔ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、（ｍ，１Ｈ）、４．６８（ｍ、１Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．３４（ｍ、１Ｈ）、１．０８（ｍ、６Ｈ）。
Ｂｏｃ−Ｄ−（ＯＭｅ）−ＦＭＫ（５２７ｍｇ、０．００２ｍｏｌ）に９５％トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を添加した。反応混合物を３０分間周囲条件下で攪拌し、蒸発させ、乾燥し（減圧下で）、トリフルオロ酢酸塩を生じた。この塩にジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）を添加し、キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−β−Ａ−ＯＨ（５００ｍｇ、０．００２ｍｏｌ），ＨＯＢＴ（２７６ｍｇ、０．００２ｍｏｌ），ＨＢＴＵ（７７５ｍｇ、０．００２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．１ｍｌ、０．００６３ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を３０分間攪拌し、ＥｔＯＡｃで抽出し、１０％塩酸、水、飽和ＮａＨＣＯ３、および水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、（減圧下で）蒸発させた。粗生成物をシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製し（９５：５／酢酸エチル：メタノールで溶出）、１１０ｍｇの精製物を与えた（収率１４％）。この構造を商業的な分析ラボラトリーによるサンプルの質量分析および核磁気共鳴分光法により確認した。
【００５０】
実施例６
２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−Ａ−Ｄ（ＯＭｅ）−α−フルオロメチルケトンの合成
２−キノリン（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＣＨ２Ｂｒの合成
キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＯＨ（２．０６ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）に溶解し、−１５℃に冷却した。ＮＭＭ（０．７３ｍｌ、６．６８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＩＢＣＦ（０．７３ｍｌ、５．６５ｍｍｏｌ）を添加し、０．５時間攪拌した。沈殿物を濾過により除去した。５．０ｇのジアザルド（ｄｉａｚａｌｄ）から得たジアゾメタンを−１０℃で添加し、１時間攪拌した。溶液を周囲温度に温めてさらに４時間攪拌した。溶媒を除去した。ジアゾケトンをジリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン中５０％のＥｔＯＡｃで溶出した）。収率：１．５ｇ（６９％）。
【００５１】
ジアゾケトンを（４１５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：エーテル（１：１、３０ｍｌ）に溶解し、−１５℃に冷却した。ＴＨＦ：エーテル（１：１、６ｍｌ）中のＨＢｒ／酢酸（３０％、０．２４ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）ＴＨＦを滴下した。ＴＬＣは、約２０分で完全な反応を示した。ブライン（ＮａＣｌ）を添加した。水層をＴＨＦ：エーテル（１：１、５０ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃおよび水性層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、乾燥濃縮した（ポンプ乾燥）。収率：４５０ｍｇ（９６％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝４７９。
Ｂｏｃ−アスパラギン酸（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトン（１．６ｇ、０．００６ｍｏｌ）に９５％トリフルオロ酢酸（２５ｍｌ）を添加した。反応混合物を３０分間周囲条件下で攪拌し、蒸発させ、乾燥し（減圧下で）、トリフルオロ酢酸塩をえた。このＴＦＡ塩にジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）を添加した溶液に、キノリンアラニン（１．４８ｇ、０．００６ｍｏｌ），ＨＯＢＴ（８４０ｍｇ、０．００６２ｍｏｌ），ＨＢＴＵ（２．４ｍｇ、０．００６ｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３．２ｍｌ、０．１８ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１時間周囲温度で攪拌し、酢酸エチル（３×１００ｍｏｌ）で抽出した。酢酸エチル抽出物を１０％塩酸（１×１００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１×１００ｍｌ）、水（１×１００ｍｌ）、で洗浄し、この抽出物を減圧下で蒸発させ、得られた粗生成物をシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製した。７０：３０／酢酸エチル：ヘキサンで溶出し、純粋な分画を複数得、この分画を一緒にして減圧下で蒸発させ、所望の生成物を得た。収率：８５０ｍｇ（３６％）。この構造を商業的な分析ラボラトリーによるサンプルの質量分析および核磁気共鳴分光法により確認した。
【００５２】
実施例７
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ−（ＯＭｅ）−α−ＣＨ２Ｆ（フルオロメチルケトン）の合成
Ｂｏｃ−Ｄ−ＣＨ２−Ｉ（ＯＭｅ）（４２６ｍｇ、０．００１６ｍｏｌ）に９５％トリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）を添加した。反応混合物を３０分間周囲条件下で攪拌し、蒸発させ、乾燥し（減圧下で）、トリフルオロ酢酸塩をえた。このＴＦＡ塩にジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）を添加した溶液に、キノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−ＯＨ（４５０ｍｇ、０．００１６ｍｏｌ），ＨＯＢＴ（２３０ｍｇ、０．００１７ｍｏｌ），ＨＢＴＵ（６５０ｍｇ、０．００１７ｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（８５０マイクロリットル、０．００４８ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を３０分間周囲条件で攪拌し、酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル抽出物を１０％塩酸（１×１００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×１００ｍｌ）、水（１×１００ｍｌ）、で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。この抽出物分離し、減圧下で蒸発させ、得られた粗生成物をシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製した。使用した溶出液は８０：２０／酢酸エチル：ヘキサンであり、純粋な生成物を得た。収率：１２５ｍｇ（１８．５％）。この構造を商業的な分析ラボラトリーによるサンプルの質量分析および核磁気共鳴分光法により確認した。
【００５３】
実施例８
キノリン−（２−カルボニル）―Ｌ―Ｄ−（ＯＭｅ）−α−ＣＨ２Ｆ（フルオロメチルケトン）ＴＨＦの合成
Ｂｏｃ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２Ｆ（フルオロメチルケトン）（３４０ｍｇ、０．００１３ｍｏｌ）に９５％トリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）を添加した。反応混合物を３０分間周囲条件下で攪拌し、蒸発させ、乾燥し（減圧下で）、ＴＦＡ塩をえた。このＴＦＡ塩にジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）を添加した溶液に、キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−ＯＨ（３８５ｍｇ、０．００１３ｍｏｌ），ＨＯＢＴ（１９０ｍｇ、０．００１４ｍｏｌ），ＨＢＴＵ（５３５ｍｇ、０．００１４ｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７００マイクロリットル）を添加した。この反応混合物を３０分間周囲条件で攪拌し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を１０％塩酸、飽和ＮａＨＣＯ３、水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗生成物をシリカゲル（メッシュサイズ２３０−４００）のカラムクロマトグラフィーで精製した。使用した溶出液は６０：４０／ＥｔＯＡｃ：ヘキサンであり、純粋な生成物を得た。収率：２００ｍｇ（３５％）。この構造を商業的な分析ラボラトリーによるサンプルの質量分析および核磁気共鳴分光法により確認した。
【００５４】
実施例９
本発明で記載したように、実施例１〜８で記載した段階を追うことにより当業者は類似の化合物および組成物を生成することが可能である。
記載した段階におけるアミノ酸（または保護されたアミノ酸）を置き換えることにより、種々のキノリン−（２−カルボニル）−アミノ酸−アミノ酸−ＣＨ２Ｆ（フルオロメチルケトン）またはキノリン−（２−カルボニル）−アミノ酸−アミノ酸−フェノキシ部分を得られる。
【００５５】
実施例１０
カスパーゼ阻害剤のための実験プロトコル（ＴＵＮＥＬ分析）
このアッセイでは、細胞はカスパーゼ阻害剤で前処理されマクチノマイシンＤにさらすことによりアポトーシス誘導を受ける。ＴＵＮＥＬアッセイは、アポトーシスカスケードの誘導から得られたＤＮＡ断片化を示す。フローサイトメトリーでアポトーシスを受ける細胞集団の割合を測定する。阻害剤の効果はアポトーシスを受ける細胞手段の割合が減少することにより確認される。
細胞型：ＷＥＨＩ２３１細胞、ネズミ未成熟Ｂ細胞（懸濁）
プレート細胞、培地１０ｍｌ中２×１０５／ｍｌ（合計２×１０６細胞）
カスケード阻害剤のインキュベート前（式Ｉ）アポトーシス誘導前１時間
カスケード阻害剤ストック溶液：１００％ＤＭＳＯ中２０ｍＭ
アクチノマイシンＤ（ＡｃｔＤ）ストック：１μｇ／μｌ添加１０μｌ／１０ｍｌ−処理４時間
ＴＵＮＥＬ分析の方法（参照：下記の表２）
【００５６】
【表３】
2004521078.tif 000041
【００５７】
ＴＵＮＥＬ分析およびフローサイトメトリー用の細胞処理
３００×ｇ、５分間で細胞を遠心分離および上清吸引。
５．０ｍｌの冷１×ＰＢＳ中に細胞再懸濁、３００×ｇ、５分間スピン。
上清吸引。冷１×ＰＢＳ中１％パラホルムアルデヒドの５ｍｌ添加。１５分氷上インキュベート。３００×ｇ、５分間スピン。上清吸引。冷１×ＰＢＳの５．０ｍｌで細胞洗浄。３００×ｇ、５分間スピン。
上清吸引。冷１×ＰＢＳ５．０ｍｌで細胞洗浄。
３００×ｇ、５分間スピン。上清吸引。
３００μｌの冷１×ＰＢＳへ細胞再懸濁、
１．５ｍｌ試験管へ移動。７００μｌの冷無水アルコールの培地の渦下で滴下。
−２０℃で少なくとも１８時間貯蔵後ＴＵＮＥＬラベル化。
固定細胞は少なくとも３０日間安定である。
ファーミンジェン（カリフォルニア州サンディエゴ）のＡｐｏ−ＢＲＤＵキットを使用し製造者の指示にしたがってＴＵＮＥＬ用の固定細胞を処理し、フローサイトメトリーにより分析した。
【００５８】
【表４】
2004521078.tif 000042
【００５９】
下記の表５はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびアッセイで使用した濃度における阻害剤の毒性の欠如を示す。
【００６０】
【表５】
2004521078.tif 000043
【００６１】
実施例１０Ａ
ｔ−ブチル５−Ｎ−ＢＯＣ−サリチラートの合成
５−アミノ−サリチル酸（２．５ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）をジオキサン（２５ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、および１５ｍｌの水中のＮａＯＨ（６５３ｍｇ、１６．３ｍｍｏｌ）の混合物に溶解した。この溶液を攪拌し、氷水浴で冷却した。（Ｂｏｃ）２Ｏ（３．９２ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を１時間周囲温度で継続した。この溶液を減圧下約１５ｍｌに濃縮し、氷水浴で冷却し、酢酸エチル（５０ｍｌ）の層でカバーし、ＫＨＳＯ４の希釈溶液でｐＨ２〜３に酸性化した。この水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を水（２×５０ｍｌ）、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、ｎ−Ｂｏｃサリチル酸を得た。収率：３．９ｇ（９５％）。ＮＭＲ：δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）１３．８（ブロード、１Ｈ）、９．２６（ｓ、１Ｈ）、７．４９（ｄｄ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、１Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）。
【００６２】
０℃に冷却したＤＭＦ（２０ｍｌ）中ｎ−Ｂｏｃサリチル酸（１．８５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）溶液を１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．４２ｇ、８．８ｍｍｏｌ）で処理した。周囲温度に１時間置いた後、ｔ−ブチルアルコール（１．４ｍｌ、１４．６ｍｍｏｌ）および（ＤＢＵ）（１．３１ｍｌ、８．８ｍｍｏｌ）を添加し、２時間攪拌し、冷水（５０ｍｌ）に注いだ。この水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画をＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した。残りをシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中６０％ＥｔＯＡｃで溶出）で精製した。収率：１．７９ｇ（７９％）。これをＮＭＲで分析した。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．４９（ブロード、１Ｈ）、７．２６（ｓ、１Ｈ）、６．９０（ｄ、１Ｈ）、１．６０（ｓ、９Ｈ）、１．５４（ｓ、９Ｈ）。
【００６３】
実施例１１Ａ
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−ＯＨ（１．１７ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＯＢｚ．ＨＣｌ（１．１７５ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（５８０ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（４．６３ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７ｍｌ）に溶解した。ＤＩＥＡ（２．２ｍｌ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加し、１時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｏｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃ分画を分離し、水、ＮａＨＣＯ３，およびＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃで溶出）で精製した。収率：０．７ｇ（６７％）。ベンジルエステル（１．４ｇ）をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に溶解した。炭素（１４０ｍｇ）担持１０％パラジウムを添加した。この溶液を１９０ｐｓｉで一晩水素化し（〜２０時間）、ＣＥＬＩＴＥで濾過した。溶媒を除去して、酸を得た。収率：１．０ｇ（８７％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝４０２。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）８．８９（ｄ、１Ｈ）、８．３１（ｄ、１Ｈ）、８．２７（ｄ、１Ｈ）、８．１７（ｄ、１Ｈ）、７．７８（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｔ、１Ｈ）、７．４４（ｄ，１Ｈ）、（ｍ、１Ｈ）、４．６８（ｍ、１Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｍ、１Ｈ）、１．０８（ｍ、６Ｈ）。
【００６４】
実施例１１Ｂ
キノリン−（２−カルボニル）−ＶＡＬ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ＣＨ２Ｂｒの合成
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＯＨ（２．０６ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）に溶解した。−１５℃に冷却した。ＮＭＭ（０．７３ｍｌ、６．６８ｍｍｏｌ）を添加し、ＩＢＣＦ（０．７３ｍｌ、５．６５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を０．５時間攪拌し、沈殿を濾過して除去した。５．０ｇのＤＩＡＺＡＬＤから得たジアゾメタンを−１０℃で添加し、１時間攪拌し、室温に温め、さらに４時間攪拌した。溶媒を除去した。ｔジアゾケトンをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：ヘキサン中５０％のＥｔＯＡｃ）。収率：１．５ｇ（６９％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）＝０．３５。ジアゾケトン（４１５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：エーテル（１：１、３０ｍｌ）に溶解し、−１５℃に冷却した。ＴＨＦ（１：１、５０ｍｌ）中ＨＢｒ／酢酸（３０％、０．２４ｍｌ、１．１７ｍｍｏｌ）を添加し、抽出した。有機分画を分離し、水、ＮａＨＣＯ３，ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。生成物を濃縮して乾燥し、ポンプ乾燥した。収率：４５０ｍｇ（９８％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）＝０．４５。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝４７９。
【００６５】
実施例１１Ｃ
キノリン−（２−カルボニル）−ＶＡＬ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−アミノサリチル酸）の合成
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＣＨ２Ｂｒ（２５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。ｔ−ブチルｎ−Ｂｏｃサリチラート（１０２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加し、ＫＦ（７６ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。残渣を分離用ＴＬＣプレートで精製した（溶出：ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。収率：１９０ｍｇ（６２％）。ブチルエステル（４５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（２ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×３ｍｌ）を添加した。ポンプ乾燥後、収率は３５ｍｍｇ（８６％）であった。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５５１。
【００６６】
実施例１２
ｔ−ブチルサリチラートの合成
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍｌ）中のサリチル酸（１．５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、１，１’−カルボニルジイミダゾール（２．１１ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）で処理した。周囲温度で１時間置いた後、ｔ−ブチルアルコール（２．１ｍｌ、２１．８ｍｍｏｌ）および（ＤＢＵ）（１．９５ｍｌ、１３．０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を２時間攪拌し、冷水（５０ｍｌ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）。収率：１．５ｇ（７１％）。これをＮＭＲで分析した。δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）、７．７７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４０（ｍ、１Ｈ）、６．９５（ｄｄ、１Ｈ）、６．８４（ｍ、１Ｈ）、１．５６（ｓ、９Ｈ）。
【００６７】
実施例１３
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−サリチル酸の合成
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＣＨ２Ｂｒ（２５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。ｔ−ブチルｎサリチラート（１０２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加し、ＫＦ（７６ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した（約２時間）。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。残渣を分離用ＴＬＣプレートで精製した（溶出：ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。収率：１９０ｍｇ（６２％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５９２。ブチルエステル（４５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（１ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×３ｍｌ）を添加し、その後、ポンプ乾燥した。収率は３５ｍｍｇ（８６％）であった。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５３６。
【００６８】
実施例１４
Ｎ−ＢＯＣドーパミンンの合成
ドーパミン（２．５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）をジオキサン（２５ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、および水１５ｍｌ中ＮａＯＨ（５２７ｍｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の混合物に溶解し、その後、攪拌して氷水浴で冷却した。（Ｂｏｃ）２Ｏ（３．１７ｍｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を添加し、１時間周囲温度で攪拌を継続した。この溶液を約１５ｍｌに濃縮し、氷水浴で冷却し、酢酸エチル（５０ｍｌ）の層でカバーし、ＫＨＳＯ４の希釈溶液でｐＨ２〜３に酸性化した。この水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水（２×５０ｍｌ）、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。収率：２．６ｇ（７８％）。ＮＭＲ：δＨ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）６．７０（ｓ、１Ｈ）、６．５９（ｄ、１Ｈ）、４．６０（ブロード、１Ｈ）、３．３１（ｔ、２Ｈ）、２．６６（ｔ、２Ｈ）、１．４４９ｓ、９Ｈ）。
【００６９】
実施例１５
キノリン−（２−カルボニル）−ＶＡｌ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−α−（３−オキシ−ドーパミン）の合成
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＣＨ２Ｂｒ（２５０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。Ｎ−Ｂｏｃ−ドーパミン（１３２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加し、ＫＦ（７６ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。残渣を分離用ＴＬＣプレートで精製した（溶出：ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。収率：２００ｍｇ（６０％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝６５１。ブチルエステル（１５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を９５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×３ｍｌ）を添加し、その後、ポンプ乾燥した。収率は１５０ｍｇ（９８％）であった。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５７４。
【００７０】
実施例１６
テトロン酸の前躯体の合成
テトロン酸の調製：一般的な方法
ヘキサン中ｎ−ＢｕＬｉ（１当量）の溶液をＴＨＦ（約１ｍｍｏｌ／ｍｌ）中ジイソプロピルアミン（１．０５当量）の溶液を添加することにより、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の溶液を−７８℃で窒素下で調製した。この溶液を−７８℃に２５分保持した後、ＴＨＦ中適当なエステル（１当量）を添加することによりエステルのリチウムエノラートを精製した。このエノラートを−７８℃に２５分保持し、その後、ＴＨＦ中の所望のジオキソラノンを添加した。この反応混合物を徐々に周囲温度にし（一晩（約２０時間）攪拌下）、その後、溶媒を蒸発し、エーテルと水の間で残渣を分割した。エーテル層を水で洗浄した。一緒にした水層を濃ＨＣｌで約ｐＨ１に酸性化し、濾過または抽出により単離しテトロン酸を得た
【００７１】
実施例１７Ａ
２−（４−メトキシフェニル）テトロン酸
一般的な方法により、ジオキソラノン（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をメチル４−メトキシフェニルアセタートのリチウムエノラート（２．５４ｍｌ。１６．０ｍｍｏｌ）で処理した。酸性化により粗生成物を得、これを濾過、乾燥、再結晶化（エチルアセタートおよびヘキサン）して精製酸を得た。収率：６４０ｍｇ（４８．５％）。ＮＭＲによる分析：δＨ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）７．８４（ｍ、２Ｈ）、６．９５（ｍ、２Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）。
【００７２】
実施例１７Ｂ
２−（４−フルオロメチルフェニル）−テトロン酸
一般的な方法により、ジオキソラン（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をメチル４−フルオロフェニルアセタートのリチウムエノラート（２．６９ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）で処理した。酸性化により粗生成物が得られ、これは濾過され、乾燥され、再結晶化（酢酸エチルおよびヘキサン）されて精製酸を得る。収率：６９０ｍｇ（５６．９％）。ＮＭＲによる分析：δＨ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）７．９６（ｍ、２Ｈ）、７．２３（ｍ、２Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）。
【００７３】
実施例１７Ｃ
２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−テトロン酸
一般的な方法により、ジオキソラン（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をメチル４−トリフルオロ−ｐ−トリルアセタートのリチウムエノラート（３．４９ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）で処理した。酸性化により粗生成物が得られ、これは濾過され、乾燥され、再結晶化（酢酸エチルおよびヘキサン）されて精製酸を得る。収率：６８０ｍｇ（４３．５％）。ＮＭＲによる分析：δＨ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１７（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｄ、２Ｈ）、４．８１（ｓ、２Ｈ）。
【００７４】
実施例１８
キノリン−（２−カルボニル）−ＶＡＬ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−２−フェニルテロトン酸の合成
キノリン−（２−カルボニル）−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）―ＣＨ２Ｂｒ（２１０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。２−フェニルテトロン酸（７８ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、ＫＦ（６４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水層を分離し、ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。残渣を分離用ＴＬＣプレートで精製した（溶出：ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ）。収率：１２５ｍｇ（５０％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５７４。
【００７５】
実施例１９
５−メトキシトリプトアミン−カルボニル−Ｖａｌ−ＯＨの合成
０℃に冷却した乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）中５−メトキシトリプトアミン（５００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）溶液を１，１’−カルボニルジイミダゾール（４２６ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）で処理した。周囲温度に１時間置いた後、Ｖａｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ．ＨＣｌ（５５１ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ），ＤＢＵ（０．３９ｍｌ、２．６３ｍｍｏｌ），トリエチルアミン（０．３６６ｍｌ、２．６３ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃ（８０ｍｌ）を添加した。酢酸エチル層を分離し、１ＮのＨＣｌ，水、ＮａＨＣＯ３，ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃで溶出）で精製した。収率：０．７ｇ（６８％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）＝０．４０。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝３９０。
ｔ−ブチルエステル（６４０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（７ｍｌ）に溶解した。これを１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。収率：５４０ｍｇ（９８％）、ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝３３４。
【００７６】
実施例２０
５−メトキシトリプトアミン−カルボニル−Ｖａｌ―Ａｓｐ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６―ジフルオロフェニル）メチルケトンの合成
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトン（３４５ｍｇ、０．９３ｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（４ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌して、除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。ＤＭＦ（７ｍｌ）中のこの溶液に、５−メトキシトリプトアミン−カルボニル−Ｖａｌ―ＯＨ（３０８ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ），ＨＯＢＴ（１２５ｍｇ、０．９３ｍｏｌ），ＨＢＴＵ（３５１ｍｇ、０．９３ｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（０．４８ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を１時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水、ＮａＨＣＯ３、ＮａＣｌで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン中７５％のＥｔＯＡｃで溶出）。収率：０．７ｇ（４４％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）＝０．１５。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５８９。
【００７７】
実施例２１
カスパーゼ１、カスパーゼ３、カスパーゼ８およびカスパーゼ９に関するＩＣ５０における新規な化合物の評価
ＩＣ５０／μｍの評価をＧａｒｙ Ｊｏｈｎｓｏｎ， ９４０１ Ｊａｍｅｓ Ａｖｅｎｕｅ， Ｓｕｉｔｅ Ｎｏ． １５５， Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ， ＭＮ ５５４３１にしたがって実施した。
カスパーゼ阻害剤：――カスパーゼをカスパーゼ緩衝液、すなわち０．１ＭのＨＥＰＥＳ，１０％のスクロース、０．１％のＣＨＡＰＳおよび１０ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ７．５、で希釈する。９６ウェルの蛍光定量プレートに、カスパーゼ１、３および８を１４４Ｕ／ウェルの濃度で使用し、カスパーゼ９を４．８Ｕ／ウェルで使用する。
【００７８】
阻害剤を先ずＤＭＳＯに１０ｍｇ／ｍｌで溶解し、カスパーゼ緩衝液でさらに希釈可能である。阻害剤は５０ｕＭ〜０．００５ｕＭの範囲の濃度で一般的に試験される。これらは通常２倍または２．５倍に減少して希釈して調製される。１２０ｕｌカスパーゼ緩衝液における酵素約１４４Ｕを、阻害剤について適当な濃度を含有する３８０ｕｌカスパーゼ緩衝液に添加し、１５分氷上でインキュベートする。その後、反応体２００ｕｌを黒色蛍光定量プレートに添加し、３７℃で３０分間蛍光分光計でインキュベートした。
【００７９】
インキュベートの間、適当なクマリン基質をＤＭＳＯおよびカスパーゼ緩衝液の希釈で調製し、０．４１７ｍＭの作業ストックを得た。ＡｃＹＶＡＤ−ＡＦＣをカスパーゼ１に対して使用し、ＡｃＤＥＶＤ−ＡＦＣをカスパーゼ３に対して使用する。また、ＡｃＩＥＴＤ−ＡＦＣをカスパーゼ８に、Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＡＦＣをカスパーゼ９に使用した。２５マイクロリットルのストック溶液を２００ｕｌのカスパーゼおよび阻害剤試験溶液に添加し、０．０４６ｍＭの最終基質濃度を得た。
蛍光分光計を４００ｎｍの励起および５０５ｎｍの発光に設定する。酵素阻害剤基質をさらに２０分インキュベートし、応答を蛍光単位対阻害剤濃度として読んだ。応答を最大応答（阻害剤がない場合の応答）の％として、阻害剤の各濃度に対してプロットする。各阻害剤の阻害活性を最大応答の５０％阻害（ＩＣ５０）を生じる阻害剤濃度として記載する。
幾つかの結果を表６に纏める。
【００８０】
【表６】
2004521078.tif 000044
【００８１】
この表から、これらの化合物が特定のプロテアーゼ阻害剤であることがわかる。
図８から２８は、種々のカスパーゼについての新規な化合物の阻害剤効果を示す。各化合物に対する活性を、最大応答を５０％（ＩＣ５０）だけ減じる濃度として記載する。
図８はカスパーゼ９に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノ−サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。０．７３５の真数は５．４４である。ＩＣ５０は約５．４４μＭである。
図９はカスパーゼ８に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノ−サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。ＩＣ５０は約５．８２μＭである。
図１０はカスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノ−サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。０．１６３６の真数は１．４６である。ＩＣ５０は約１．４６μＭである。
図１１はカスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノ−サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。０．０８８の真数は１．２３である。ＩＣ５０は約１．２３μＭである。
図１２はカスパーゼ１に対するインドール−（２−カルボニル）−３−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．３３の真数は０．４６である。ＩＣ５０は約０．４６μＭである。
図１３はカスパーゼ１に対するメラトニン−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．８５７の真数は０．１３９である。ＩＣ５０は約０．１３９μＭである。
【００８２】
図１４はカスパーゼ１に対するＢｚｌ−メラトニン−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．７６９２の真数は０．１７である。ＩＣ５０は約０．１７μＭである。
図１５はカスパーゼ１に対するヒドロキシＴｒｐ−ＴＴＰ−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．９３９の真数は０．１１５である。ＩＣ５０は約０．１１５μＭである。
図１６はカスパーゼ１に対するＴＦＡ  Ｔｒｐ−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈ  ＴＦＡの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．２０５の真数は０．６２４である。ＩＣ５０は約０．６２４μＭであり、これがカスパーゼ１活性を５０％阻害する。
【００８３】
図１７Ａおよび１７Ｂはカスパーゼ９に対する非エステラーゼ処理（１７Ａ）およびエステラーゼ処理（１７Ｂ）のキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＦＭＫの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−１．１４６の真数は０．０６５である。−１．１４６の真数は０．０７である。図１７Ａの化合物はＩＣ５０が約０．０６５μＭである。図１７Ｂの化合物はＩＣ５０が約０．０７μＭである。したがって、この結果から、エステラーゼおよび非エステラーゼ処理阻害剤は略同じ阻害特性を有することがわかる。
図１８Ａおよび１８Ｂはカスパーゼ９に対する非エステラーゼ処理（１８Ａ）およびエステラーゼ処理（１８Ｂ）のキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＦＭＫの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。図１８Ａについて、−１．５３の真数は０．０２９である。図１８Ａの化合物はＩＣ５０が約０．０２９μＭである。−１．６２の真数は０．０２５である。図１８Ｂから、エステラーゼ処理阻害剤Ｑ−（Ｃ＝Ｏ）−ＶＤ（ＯＭｅ）−ＦＭＫはカスパーゼ９酵素に対して、非処理阻害剤よりも良好に結合することが明らかである。これが第１の観察結果である。
【００８４】
図１９はカスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。０．１５３８の真数は−１．４３である。ＩＣ５０は約１．４３μＭである。
図２０はカスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−（４−アミノ）サリチル酸の阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．０５の真数は０．９８である。ＩＣ５０は約０．９８μＭである。
図２１はカスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＣＨ３）−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−０．２５の真数は０．９４である。ＩＣ５０は約０．９４μＭである。
【００８５】
図２２はカスパーゼ１に対するヒドロキシキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ−ＯＰｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。１．４２３の真数は０．０３８である。ＩＣ５０は約０．０３８μＭである。
図２３はカスパーゼ１に対するエステラーゼ処理キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＦＭＫの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−１．４の真数は０．０３９８である。ＩＣ５０は約０．０３９８μＭである。
【００８６】
図２４はカスパーゼ１に対するエステラーゼ処理キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＦＭＫの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−１．１６８の真数は０．０６８である。ＩＣ５０は約０．０６８μＭである。
図２５Ａおよび２５Ｂはカスパーゼ３に対する非エステラーゼ処理（２５Ａ）およびエステラーゼ処理（２５Ｂ）のキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＦＭＫの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。図２５Ａについて、−１．３４６の真数は０．０４５である。０．０４５μＭの濃度のこの化合物はカスパーゼ３活性の５０％を阻害する。図２５Ｂで、−１．５０８の真数は０．０３１である。ＩＣ５０は約０．０３１μＭである。したがって、エステラーゼ処理は効果が少ない。
【００８７】
図２６はカスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。真数は約０．５４８である。ＩＣ５０は約０．５４８μＭである。
図２７はカスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。真数は約０．０５である。ＩＣ５０は約０．０５μＭである。
図２８はカスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果を示すグラフであり、μＭでの濃度の対数対阻害％を示す。−１．２５５の真数は約０．０５６である。ＩＣ５０は約０．０５μＭである。
【００８８】
結論
ＴＵＮＥＬ法によるブラインドテストにおいて１０の異なる配列を試験することにより、以下を結論を得た。
ａ）最も有効な配列は：Ｑ−ＡＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＦＭＫ，Ｑ−ＶＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＯＰｈおよびＱ−ＬＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＯＰｈである。
ｂ）有効順（μｍ  最大〜最小）は：Ｑ−ＶＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＯＰｈ．Ｑ−ＬＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＯＰｈ＞Ｑ−ＡＤ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−ＦＭＫである。
ＺＶＡＤ−ＦＭＫは２０μＭで有効である。
Ａ１（構造）阻害剤は４０μＭで有効である。
Ｂ１阻害剤はで有効ではない。
Ｃ１阻害剤は１００μＭで有効である。
Ｄ１阻害剤は２０μＭで有効である。
Ｅ１阻害剤は２０μＭで有効である。
Ｆ１阻害剤は有効ではない。
Ｇ１阻害剤は１００μＭで有効である。
Ｈ１阻害剤は有効ではない。
Ｉ１阻害剤は＜１０μＭで有効である。
Ｊ１阻害剤は１０μＭで有効である。
【００８９】
実施例２２
キノリン−（Ｃ＝Ｏ）ＶＡＬ−ＡＬＡ−ＡＳＰ（ＯＭＥ）−フルオロメチルケトン（キノリン−ＶＡＤ（ＯＭｅ）−ＦＭＫ）
ａ）Ｚ−ＶＡＤ（ＯＭｅ）−ＦＭＫ（７５ｍｇ、０．０００１６ｍｍｏｌ）に３０％ＨＢｒ／ＡｃＯＨを添加した。この反応混合物を３０分攪拌して蒸発して乾燥させ、Ｈｂｒ塩を得た。ＤＭＦ（３ｍｌ）中のＨＢｒ塩の溶液に２−キナルジン酸（２８ｍｇ、０．０００１６ｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．０００１７ｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（６４ｍｇ、０．０００１７ｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（１１１μｌ、０．０００６ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を３時間攪拌し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルおよび水性分画を分離した。ＥｔＯＡｃ分画を１０％ＨＣＬ、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて粗生成物を得た。生成物をカラムクロマトグラフィーで精製し、蒸発により乾燥して、生成物を得た。収率：２６ｍｇ（３３％）。ＭＳ（ＥＩ）：Ｍ＋１４８９．２。
ＱＶＡＤ（ＯＭｅ）ＦＭＫについての濃度対＞９０％の生存細胞は、１００μＭである。
（ｂ）Ｚ−ＶＡＤ（ＯＭｅ）ＦＭＫを化学量論的に等価な量のＺ−ＶＬＤ（ＯＭｅ）ＦＭＫで置き換えたことを除いて実施例２２を同様に繰り返した。所望の生成物の対応する収率が得られた。
（ｃ）Ｚ−ＶＡＤ（ＯＭｅ）ＦＭＫをＺ−ＶＡＤ（ＯＭｅ）ＣＨ２−２−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトンで置き換えたことを除いて実施例２２（ａ）を同様に繰り返した。所望の生成物の対応する収率が得られた。
【００９０】
実施例２３
２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ＶＡＬ−ＡＬＡ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトンの合成
Ｂｏｃ−ａｓｐ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトン（３４５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（４ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、減圧下に除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。ＤＭＦ（７ｍｌ）のこの溶液に２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ｖａｌ−ａｌａ−ＯＨ（３２０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１２５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３５１ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（０．４８ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水性分画を分離した。ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：ヘキサン中７５％のＥｔＯＡｃ）。収率：０．３１ｇ（５６％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（１００％酢酸エチル）＝０．５２。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝６００。
【００９１】
実施例２４
２−キノリン−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ＧＬＵ（ＯＭｅ）−ＶＡＬ−ＯＨの合成
ＤＭＦ（１０ｍｏｌ）中のＨ−ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ｖａｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（５２５ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＯＨ（５００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（２２４ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（６３０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（０．８６ｍｇ、４．９８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水性分画を分離した。ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：１００％ＥｔＯＡｃ）。収率：０．７４ｇ（７４％）。ｔ−ブチルエステル（７００ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（２ｍｏｌ）に溶解し、１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。収率：０．６ｇ（９４％）。た。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝５４５。
【００９２】
実施例２５
２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ＧＬＵ（ＯＭｅ）−ＶＡＬ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトンの合成
Ｂｏｃ−ａｓｐ（ＯＭｅ）−α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトン（３４５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（４ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、ポンプ乾燥した。ＤＭＦ（７ｍｌ）のこの溶液に２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ａｓｐ（ＯＭｅ）−ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ｖａｌ−ＯＨ（５０５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１２５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３５１ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（０．４８ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水性分画を分離した。ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：１００％ＥｔＯＡｃ）。収率：０．２０ｇ（２７％）。ＴＬＣ：Ｒｆ（１００％酢酸エチル）＝０．４２。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝８００。
【００９３】
実施例２６
２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ＧＬＵ（ＯＭｅ）−ＶＡＬ−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−フルオロメチルケトンの合成
（ａ）Ｂｏｃ−ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＦＭＫ（２４５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を９５％ＴＦＡ（３ｍｌ）に溶解し、１時間攪拌し、真空下に除去し、ヘキサン（３×５ｍｌ）を添加し、真空下でポンプ乾燥した。ＤＭＦ（７ｍｌ）のこの溶液に２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ＡＳＰ（ＯＭｅ）−ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ｖａｌ−ＯＨ（５０５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（０．４８ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加した。ＥｔＯＡｃおよび水性分画を分離した。ＥｔＯＡｃ分画を水、ＮａＨＣＯ３溶液、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出：１００％ＥｔＯＡｃ）。収率：０．３４ｇ（５５％）。ＭＳ（ＥＩ）：ＭＨ＋＝６９０。
（ｂ）Ｂｏｃ−ａｓｐ（ＯＭｅ）−ＦＭＫを化学量論的に等価な量のＢｏｃ−ａｓｐ（ＯＭｅ）α−（２−オキシ−２，６−ジフルオロフェニル）メチルケトンで置き換えたことを除いて実施例２６（ａ）を同様に繰り返した。所望の化合物の対応する収率が得られた。
（ｃ）２−キノリン−（Ｃ＝Ｏ）−ａｓｐ（ＯＭｅ）−ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ｖａｌ−ＯＨを化学量論的に等価な量の２−キノリン（Ｃ＝Ｏ）ａｓｐ（ＯＭｅ）−ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ｌｅｕ−ＯＨで置き換えたことを除いて実施例２６（ａ）を同様に繰り返した。所望の生成物の対応する収率が得られた。
【００９４】
本発明においては少しの態様を示したに過ぎないが、当業者には、プロドラッグとしてのおよびプロテアーゼ阻害剤としてのキノリン−（２−カルボニル）−（複数アミノ酸−アミノ酸脱離基構造およびキノリン型構造において種々の改変が可能であることは明らかである。これら合成およびこれらの多くの薬学的使用は本発明の範囲に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】２つのアミノ酸およびフルオロメチルケトン部分を有する本発明の特定の構造を示す。
【図１Ａ】３つのアミノ酸およびフルオロメチルケトン部分を有する本発明の特定の構造を示す。
【図２】ジフルオロフェノキシ部分を有する特定の構造を示す。
【図２Ａ】３つのアミノ酸およびジフルオロフェノキシ部分を有する本発明の特性の構造を示す。
【図３】４−アミノ−２−カルボン酸部分を有する特定の構造を示す。
【図４】２−カルボン酸部分を有する特定の構造を示す。
【図５】トリフルオロ酢酸塩としてドーパミン構造を有する特定の構造を示す。
【図６】ｔ−ブトキシ保護基を有するドーパミン構造を有する特定の構造を示す。
【図７】テトロン酸部分を有する特定の構造を示す。
図８〜２９は種々のカウパーゼについて新規な化合物の阻害効果を示す。各化合物の活性は最大応答を５０％減少させる濃度（ＩＣ５０）として記載する。
【図８】カスパーゼ９に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノサリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図９】カスパーゼ８に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノサリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１０】カスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノサリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１１】カスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−４−アミノサリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１２】カスパーゼ１に対するインドール−３−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１３】カスパーゼ１に対するメラトニン−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１４】カスパーゼ１に対するメラトニン−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１５】カスパーゼ１に対するヒドロキシＴｒｐ−ＴＴＰ−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−Ｐｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１６】カスパーゼ１に対するＴＦＡ−Ｔｒｐ−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｏ−ＰｈＴＦＡの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂはカスパーゼ９に対する非エステラーゼ処理（１７Ａ）およびエステラーゼ処理（１７Ｂ）キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｆ（ＦＭＫ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１８】図１８Ａおよび１８Ｂはカスパーゼ９に対する非エステラーゼ処理（１８Ａ）およびエステラーゼ処理（１８Ｂ）キノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｆ（ＦＭＫ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図１９】カスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−サリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２０】カスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−（４−アミノサリチル酸の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２１】カスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−（−ＯＰｈ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２２】カスパーゼ１に対するヒドロキシキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）（−ＣＨ２−ＯＰｈ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２３】カスパーゼ１に対するエステラーゼ処理キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｆ（ＦＭＫ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２４】カスパーゼ１に対するエステラーゼ処理キノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｆ（ＦＭＫ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２５】図２５Ａおよび２５Ｂはカスパーゼ３に対する非エステラーゼ処理（２５Ａ）およびエステラーゼ処理（２５Ｂ）キノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ（ＯＭｅ）−ＣＨ２−Ｆ（ＦＭＫ）の阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２６】カスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２７】カスパーゼ１に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｖ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２８】カスパーゼ３に対するキノリン−（２−カルボニル）−Ｌ−Ｄ−ＣＨ２−ＯＰｈの阻害効果をμＭの濃度の対数対阻害％でグラフにて示す。
【図２９Ａ】幾つかの天然のアミノ酸の構造を示す。
【図２９Ｂ】幾つかの天然のアミノ酸の構造を示す。
【図２９Ｃ】幾つかの天然のアミノ酸の構造を示す。
【図１】
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【図１Ａ】
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【図２】
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【図２Ａ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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