(57)【要約】本発明は、受容体分子に対する親和性が増大した、シグレック阻害剤に関する。本発明により提供されるシグレック阻害剤は、好ましくは所与のシグレック分子に対し選択性を有する。本発明はさらに、シグレック阻害剤の作製方法、および所与のシグレック分子に対する結合選択性を増大させるための方法に関する。本発明はまた、シグレック阻害剤を含む薬学的組成物、およびシグレック阻害剤に対する医療適応に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式のシグレック阻害剤
2004534085.tif 000009
(式中、
Xはカルボキシル基、リン酸基もしくは硫酸基などの負に荷電された基またはそれらの誘導体を示し；
YはH原子、アルキル基もしくはアリール基、水酸基、グリカン、ポリマー担体分子またはそれらの誘導体を示し；
ZはO、N、CおよびSから選択され；
R1はH原子、水酸基またはそれらの誘導体を示し；
R2は水酸基もしくはアミノ基またはそれらの誘導体を示し；
R3は水酸基またはその誘導体を示し；
R4は水酸基またはその誘導体を示し；
R5は置換型または未置換型のアミノ基を示し、ここで置換基は、
置換型または未置換型のホルミル基、アルカノイル基、シクロアルカノイル基、アリール-カルボニル基、ヘテロアリール-カルボニル基、アルキル基、アリール基、シクロアルキル基またはヘテロアリール基から選択され、ここでこれら残基はまた、1つまたは複数の不飽和結合を含むこともでき、ここで、R4はH受容体として機能し、かつR5はH供与体として機能し；
R6はH原子もしくはアルキル基、荷電基またはそれらの誘導体を示し；
R6'はH原子もしくはアルキル基、荷電基またはそれらの誘導体を示し、ここで少なくとも1つの置換基がR6から選択され、R6'は疎水性基、好ましくはH原子またはメチル基であり；かつ
R7はH原子または任意の基、好ましくはシグレック阻害剤の薬理学的特性を改善するための基を示す)。
【請求項２】
アルカノイル基が、エタノイル基、プロパノイル基、ブタノイル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル基、ノナノイル基およびデカノイル基から選択され、好ましくはヘキサノイルである、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項３】
シクロアルカノイル基が、C3〜C6シクロアルカノイル基から選択され、好ましくはシクロヘキサノイルである、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項４】
アリール-カルボニル基が、C4〜C15アリール-カルボニル基から選択され、好ましくはベンゾイル基、ナフトイル基またはアントラセン-カルボニル基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項５】
ヘテロアリール-カルボニル基が、ピリジル-カルボニル基、キナルジン-カルボニル基およびチオフェニル-カルボニル基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項６】
アルキル基が、C1〜C20アルキル基から、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基およびヘキシル基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項７】
シクロアルキル基が、C3〜C6シクロアルキル基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項８】
アリール基が、フェニル基、ナフチル基、およびアントラセン基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項９】
ヘテロアリール基が、ピリジル基およびチオフェニル基から選択される、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項１０】
Xがアキシアル位に存在すべきカルボキシル基を示し；
YがH原子、O-メチル基、O-ベンジル基、または水酸基誘導体を示し；
ZがO原子を示し；
R1が水酸基を示し；
R2がアミノ-アセチル基を示し；
R3が水酸基を示し；
R4が水酸基を示し；
R6がH原子を示し；
R6'がH原子を示し；かつ
R7がH原子を示す、請求項1記載のシグレック阻害剤。
【請求項１１】
ノイラミン酸またはその誘導体のR5位に、請求項1〜10のいずれか一項記載のR5に対する残基から選択された置換基を導入する段階を含む、シグレック阻害剤の結合選択性を増大させる方法。
【請求項１２】
シグレック分子に対する親和性が増大したシグレック阻害剤の製造方法であり、以下の段階を含む方法：
a)ノイラミン酸またはその誘導体のR5位に、請求項1〜10のいずれか一項記載のR5に対する残基から選択された置換基を導入する段階；
b)段階a)による産物の、シグレック分子に対する親和性を決定する段階；
c)親和性の増大した産物を選択する段階；
d)該当する場合には、R5とは異なる位置で、好ましくはR2位で、c)により選択された産物をさらに置換する段階。
【請求項１３】
請求項1〜10のいずれか一項記載のシグレック阻害剤および薬理学的に適合する担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
シグレックにより媒介される疾患の治療における、請求項1〜10のいずれか一項記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項１５】
B細胞依存性免疫応答の調節における、請求項1〜10のいずれか一項記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項１６】
アレルギー、自己免疫疾患、および慢性炎症の治療における、請求項15記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項１７】
損傷神経の再生能力の改善における、請求項1〜10のいずれか一項記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項１８】
対麻痺および多発性硬化症の治療における、請求項17記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項１９】
NK細胞の細胞傷害活性の調節における、請求項1〜10のいずれか一項記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項２０】
癌疾患の治療における、請求項19記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項２１】
ウイルス疾患の治療における、請求項19記載のシグレック阻害剤の適用。
【請求項２２】
特に免疫不全患者において、B細胞応答を増大させるための、請求項15記載の適用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はシグレック(Siglec)阻害剤およびそれらを含む薬学的組成物に関する。さらに、本発明はシグレック阻害剤の結合選択性を増大させる方法および提供したシグレック阻害剤の医療適応の特定に関する。
【背景技術】
【０００２】
シグレック(シアル酸結合Ig様レクチン)は、シアル酸結合を媒介するN末端V-セットドメインにより特徴づけられるIg型レクチンである。Igドメインの後ろに、様々な数のC2セットのIgドメインが存在する。元々、レクチンファミリーは、マクロファージレクチン様接着分子であるシアロアドヘシン(シグレック-1 CD 169)、および、Igスーパーファミリー(IgSF)のB細胞制限メンバーであるCD22(シグレック-2)(B細胞活性化の調節において重要な役割を果たす)の別個の研究に基づいて見出された。また、どちらの分子もシアル酸化複合糖質の検出によりインビトロ細胞間相互作用を媒介することが見出された。シアロアドヘシンのクローニングによりCD22との高い配列類似性が示され、この点に関係する2つのさらなるIgSFタンパク質であるミエリン付随糖タンパク質(MAG/シグレック-4)、およびCD33(シグレック-3)（シアル酸への結合は今まで知られていなかった）もまたシグレックファミリーのメンバーであるという結論が導かれた。6つの他のヒトシグレック分子(シグレック5〜シグレック10)が同定され、特徴づけられている。以前は知られていなかったこれらの分子は、細胞外ドメインおよび細胞内ドメインにおいてCD33との配列類似性が高く、ひとまとめにして「CD33関連シグレック」と呼ばれる(1:要約文)。参考文献(7)はヒト樹状細胞から発現されるシグレック-11のクローニングおよび特徴付けについて記述している。
【０００３】
表1は既知のシグレックの発生および可能な機能の概要を示したものである。
【０００４】
（表1）既知のシグレックの発生および可能な機能
2004534085.tif 000002
【０００５】
表からわかるように、シグレックはまた、免疫応答の抑制、神経系におけるミエリン構成の維持および血球新生にも関与する。
【０００６】
シグレックにより媒介される相互作用は2種類ある。第1に、対応するシグレックを発現する細胞中のシグナルを、シグレック分子の結合により産生することができ(例えば、B細胞依存性免疫応答の制動、ITIMモチーフのホスホリル化によるナチュラルキラー細胞(NK細胞)の細胞傷害活性の阻害)、またはシグナルを、シグレックが結合した細胞において産生することができる(例えば、シグレック-4a、[MAG](1,2)のニューロンの神経突起成長の調節)。
【０００７】
ここで、シグレックの結合パートナーの効果はここでは2通り生じ得る(3)。第1に、一価の物質はシグレック分子同士の生物学的関連架橋を損傷しうり、または他の分子と共に損傷しうる。これによりシグナルが減少する。第2に、多価物質は誘発されたシグナルを強化することができる。その結果、両方向での調節が可能である。これらの段階に適した特異的物質が必要である。
【０００８】
シアル酸は9炭素原子糖の大きなファミリーに対する一般用語であり、ノイラミン酸(Neu)またはケト-デゾキシ-ノヌルソン酸(keto-desoxy-nonulsonic acid)(KDN)の全誘導体を表す。典型的には、これらは多数のタンパク質および脂質に結合されたオリゴ糖鎖の曝露された非還元末端上で見出されている。
【０００９】
シグレックのシアル酸結合部位はN末端ドメインに存在するが、このドメインはV-セットドメインでありかつシグレックに特有の構造的特徴を含む。結合部位の位置、および結合に関与するアミノ酸はシグレック-1(シアロアドヘシン)および2,3-シアリルラクトースの共晶のX線構造解析により見出された。結合に対するシアル酸官能基の寄与は、合成シアル酸誘導体を用いたハプテン(Hapten)阻害実験により決定された(5、6)。要約すると、これらの研究により、他の局面の中で、シアル酸のC-9上のヒドロキシル基が、結合のための水素架橋における水素供与体として実質的に寄与すること、およびアミノ基により置換されうることが示されている(5)。
【００１０】
シグレックにより媒介される生物学的機能を調節するためには、高い親和性により結合部位を占有する結合パートナーが必要である。
【発明の開示】
【００１１】
したがって、本発明の目的は、親和性の高いシグレック阻害剤を提供することである。好ましい目的とは、可能な限り特異的にシグレック受容体のみに結合する、親和性の増大したシグレック阻害剤を提供することである。
【００１２】
本発明の目的は、下記式を有するシグレック阻害剤を提供することにより解決される
2004534085.tif 000003
(式中、
Xはカルボキシル基、リン酸基もしくは硫酸基などの負に荷電された基またはそれらの誘導体を示し；
YはH原子、アルキル基もしくはアリール基、水酸基、グリカン、ポリマー担体分子またはそれらの誘導体を示し；
ZはO、N、CおよびSから選択され；
R1はH原子、水酸基またはそれらの誘導体を示し；
R2はヒドロキシもしくはアミノ基またはそれらの誘導体を示し；
R3は水酸基またはその誘導体を示し；
R4は水酸基またはその誘導体を示し；
R5は置換型または未置換型のアミノ基を示し、ここで置換基は、
置換型または未置換型のホルミル基、アルカノイル基、シクロアルカノイル基、アリール-カルボニル基、ヘテロアリール-カルボニル基、アルキル基、アリール基、シクロアルキル基またはヘテロアリール基から選択され、ここでこれら残基はまた、1つまたは複数の不飽和結合を含むこともでき、
ここで、R4はH受容体として機能し、かつR5はH供与体として機能し；
R6はH原子もしくはアルキル基、荷電基またはそれらの誘導体を示し；
R6'はH原子もしくはアルキル基、荷電基またはそれらの誘導体を示し、ここで少なくとも1つの置換基がR6から選択され、R6'は疎水性基、好ましくはH原子またはメチル基であり；かつ
R7はH原子または任意の基、好ましくはシグレック阻害剤の薬理学的特性を改善するための基を示す)。
【００１３】
以下、本出願に関連して使用される場合の幾つかの用語を規定する。
【００１４】
「シグレック」という用語はすべてのシグレック分子を含む。シグレック分子の規定については(8)を参照されたい。シグレック分子であるシグレック-1〜シグレック-10のアミノ酸配列は、例えば(1、表1)に列挙した参考文献から得ることができる。シグレック-11のアミノ酸配列は(7)から得ることができる。シグレック分子のアミノ酸配列はまた、公的にアクセス可能なデータベース、Entrez(インターネットアドレス：www.ncbi.nlm.gov./entrez)から得ることができる。この点において、シグレック分子は天然の細胞についての天然の環境または人工的環境において存在することができる。
【００１５】
「シグレック阻害剤」という用語は一般に、シグレックタンパク質へのシアル酸分子、特に天然リガンドの結合を阻害する化合物の能力を示す。本発明によるシグレック阻害剤は所与のシグレックタンパク質をその構造に依存して活性化または不活性化する。好ましくは、シアル酸の参照化合物はメチル-α-5'-N-アセチル-ノイラミン酸である。好ましくは、阻害をハプテン阻害試験により測定することができる。本明細書においてハプテン阻害試験は、シグレックのN末端ドメインおよびヒトIgGのFc部分からなるFc-キメラに基づくものであり、これを放射性標識した抗Fc抗体と複合体形成させ、様々な濃度の、可能な被験阻害剤と共にインキュベートし、その後適切な標的細胞、好ましくはヒト赤血球を添加する。4℃で一晩インキュベートした後、細胞を洗浄することにより未結合複合体を除去し、結合放射能を決定する。このようにして得たデータから、結合の50％阻害を生じる濃度(IC50値)を見出す(5、6)。ハプテン阻害試験においては、同じ体積の被験物質の溶液(3倍濃縮)と混合されて4℃で1時間インキュベートされた、103 Bq125I活性を有する複合体溶液10μlが特に好ましかった。その後、10μlの標的細胞懸濁液、好ましくは0.25％〜0.5％のヒト赤血球を添加し、4℃で一晩インキュベートした。200μlの洗浄緩衝液、好ましくは0.1％(W/V)ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水を用いて、細胞を5回洗浄することにより未結合放射能を除去し、γ-カウンタを用いて細胞結合活性を決定する。対照として、好ましくはシアリダーゼ処理した細胞のおよび未処理細胞の結合を、被験物質の非存在下で測定する。阻害剤非存在下での値を0％と設定しかつシアリダーゼ処理した細胞をほぼ100％と設定した条件下で、阻害を決定する。
【００１６】
「誘導体」という用語は一般に、残基X、Y、R1〜R4との関連を含め、ノイラミン酸において生じる基が、本質的に同じ生物活性を示す生物学的に等価な基により置換されることを示す。生物学的等価性の概念は当業者には周知である。
【００１７】
「置換型のホルミル基、アルカノイル基、シクロアルカノイル基、アリール-カルボニル基、ヘテロアリール-カルボニル基、アルキル基、シクロアルキル基またはヘテロアリール基」という表現は、関連する基が、生物学的特性が本質的には修飾されていないままの置換基を示すことを意味する。これには、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基およびブチル基などの低級アルキル置換基が含まれる。
【００１８】
本発明によれば、Xは負に荷電された基を示す。この負に荷電された基は、おそらくシグレック受容体のアルギニン残基と塩橋を形成すると考えられる。天然の置換基はカルボキシル基である。適切なその誘導体は、例えば、リン酸基または硫酸基である。さらに、ホスホン酸基およびスルホン酸基もまた考慮される。他の適切な誘導体はカルボキシメチレン基またはカルボキシエチレン基である。
【００１９】
本発明によれば、YはH原子、アルキル基もしくはアリール基、水酸基、グリカン、ポリマー担体分子、またはそれらの誘導体を示す。天然の置換基は水酸基である。この点において、水酸基の適切な誘導体は、アミノ基またはチオ基である。この点において、適切なグリカンは、六炭糖、ヘキソサミンおよび/もしくは五炭糖、またはその誘導体であり、好ましくはグルコースもしくはガラクトースまたはそれらの誘導体である。さらに、適切なグリカンはオリゴ糖および多糖であり、ここでオリゴ糖および多糖は単一のモノマーまたは様々なモノマー(混合糖)から形成されうる。この点において、ポリマー担体分子としては、例えば保持時間の延長など薬理学的特性を改善する担体分子が適している。多くの結合シグレック阻害剤リガンドを有するポリマー担体分子は架橋を可能にし、その結果シグレック受容体分子の活性化が可能となる。そのため、そのようなポリマー担体分子の適用により微調節が可能となる。
【００２０】
担体分子は好ましくは、コアおよび、適切なスペーサを介してコアに結合した本発明による様々な量の物質を含む。望ましい薬理学的効果を、コアおよび本発明による物質を含むポリマー組成物により制御することができる。好ましくは、ポリマー(コア)はデンドリマー、ポリアクリルアミドまたはポリラクチドである。本発明による物質は例えば、化学的にまたは酵素的にポリマーに結合できる。
【００２１】
本発明によればZは、O、N、CまたはSから選択される原子を示す。
【００２２】
本発明によれば、R1はH原子、水酸基またはそれらの誘導体である。この点において、水酸基の適切な誘導体は、適切に置換できるアミノ基またはチオ基である。
【００２３】
本発明によれば、R2は水酸基もしくはアミン基またはそれらの誘導体を示す。天然の置換基はアミノ-アセチル基である。適切な誘導体は、例えば、アミノ基がアセチル基、プロピオニル基、ブチル基またはペンチル基により置換されたものである。アルカノイル基は、この点においてさらに、1つまたは複数のハロゲン原子により置換することができる。他の適切な誘導体は(参考文献5；化合物4〜12)から得られる。R2位での修飾は、所与のシグレック分子に対するシグレック阻害剤の特異性の増大に寄与しうる。
【００２４】
本発明によれば、R3は水酸基またはその誘導体を示す。この点において、適切な誘導体は、例えばアミノ基またはチオ基であり、これらは該当する場合置換することができる。
【００２５】
本発明によれば、R4は水酸基またはその誘導体を示す。この点において、適切な誘導体はH受容体として作用する官能基である。この点において、誘導体の例はアミノ基またはチオ基であり、これらは該当する場合置換することができるが、H受容体特性は保持される。
【００２６】
本発明によれば、R6およびR6'は互いに独立して、H原子もしくはアルキル基、荷電基またはそれらの誘導体を示し、ここで少なくとも1つの置換基がR6から選択され、R6'は疎水性基、好ましくはH原子またはメチル基である。適切な誘導体はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基などの低級アルキル置換基である。適切な荷電基は、例えばカルボキシル基、硫酸基またはリン酸基である。
【００２７】
本発明によれば、R7はH原子または任意の基、好ましくはシグレック阻害剤の薬理学的特性を改善するための基である。薬理学的特性を改善するための基は、ポリマー担体分子であってよい。完全シグレック阻害剤は好ましくは、親水相および疎水相における阻害剤の均一分布をもたらす親水性などを示す。
【００２８】
さらに、天然の複合多糖および糖タンパク質に対して、本発明によるシグレック阻害剤の共有結合または非共有結合が考慮される。
【００２９】
驚くべきことに、9-アミノ-9-デゾキシ-シアル酸、特にノイラミン酸のアミノ基上に疎水性置換基を導入することにより、参照化合物5'-アセチル-ノイラミン酸と比べて親和性が増大したシグレック阻害剤が得られた。好ましい態様によれば、所与のシグレックタンパク質に特異的に結合してそれらを阻害する、シグレック阻害剤が提供される。
【００３０】
好ましい態様によれば、アルカノイル基はエタノイル基、プロパノイル基、ブタノイル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル基、ノナノイル基およびデカノイル基から選択され、好ましくはヘキサノイルである。本発明によれば、分枝アルカノイル基もまた考慮される。
【００３１】
さらに好ましい態様では、シクロアルカノイル基はC3〜C6シクロアルカノイル基から選択され、好ましくはシクロヘキサノイルである。
【００３２】
他の好ましい態様では、アリール-カルボニル基は、C4〜C15アリール-カルボニル基から選択され、好ましくはベンゾイル基、ナフトイル基、アントラセン-カルボニル基から選択され、ここで、この残基が主に選択性に関与する。選択性は、このように適切な選択により制御することができる。
【００３３】
他の好ましい態様では、ヘテロアリール-カルボニル基はピリジル-カルボニル基、キナルジン-カルボニル基およびチオフェニル-カルボニル基から選択される。
【００３４】
他の態様では、アルキル基はC1〜C20アルキル基から選択され、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基およびヘキシル基から選択される。
【００３５】
本発明によれば、分枝アルキル基もまた考慮される。
【００３６】
他の好ましい態様では、シクロアルキル基はC3〜C6アルキル基から選択される。
【００３７】
さらに好ましい態様では、アリール基はフェニル基、ナフチル基、ビフェニル基およびアントラセン基から選択される。本発明によれば、アリール基は縮合アリール基および非縮合アリール基の両方から選択できる。
【００３８】
ピリジル基、キナルジン基およびチオフェニル基から選択されるヘテロアリール基もまた好ましい。
【００３９】
本発明によれば、ヘテロアリール基は、当業者に周知の縮合ヘテロ芳香族系および非縮合ヘテロ芳香族系の両方を含む。
【００４０】
特に好ましい化合物はメチル-α-9-N-(ナフチル-2-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-Neu5Acである。このシアル酸誘導体は、参照化合物2-α-メチル-5-N-アセチル-ノイラミン酸に比べて、シグレック-1に約12倍強く、かつさらにシグレック4aに(約236倍)強く結合する。
【００４１】
メチル-α-9-N-(ビフェニル-4-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-Neu5Acもまた特に好ましい。この化合物は、参照化合物2-α-メチル-5-N-アセチル-ノイラミン酸に比べ約150倍強く、シグレック-2に結合する。
【００４２】
さらに、メチル-α-9-N-ベンゾイル-アミノ-9-デゾキシ-Neu5Acは特に好ましい。この化合物は、参照化合物2-α-メチル-5-N-アセチル-ノイラミン酸に比べ約704倍強く、シグレック-4a(MAG)に結合する。
【００４３】
本発明の好ましい態様によれば、
Xがアキシアル位に存在すべきカルボキシル基を示し；
YがH原子、O-メチル基、O-ベンジル基、または水酸基誘導体を示し；
ZがO原子を示し；
R1が水酸基を示し；
R2がアミノ-アセチル基を示し；
R3が水酸基を示し；
R4が水酸基を示し；
R6がH原子を示し；
R6'がH原子を示し；かつ
R7がH原子を示す、シグレック阻害剤が提供される。
【００４４】
Yを除き、この点において引用した置換基はシアル酸の天然置換基に一致する。
【００４５】
本発明はまた、以下の段階を含む、シグレック分子に対する親和性が増大したシグレック阻害剤の製造方法を提供する：
a)ノイラミン酸またはその誘導体のR5位に、本発明による残基から選択された置換基を導入する段階；
b)段階a)による産物の、シグレック分子に対する親和性を決定する段階；
c)親和性の増大した産物を選択する段階；
d)該当する場合には、R5とは異なる位置で、好ましくはR2位で、c)により選択された産物をさらに置換する段階。
【００４６】
本発明によれば、シグレック分子に対する親和性が増大したシグレック阻害剤を、ノイラミン酸またはその誘導体のR5位に疎水性置換基を導入することにより得られることが見出された。所与のシグレック分子に対する産物の親和性の決定は、この点において、結合アッセイ法またはハプテン阻害試験により実施することができる。この点において、ハプテン阻害アッセイ法に関する条件は、上述した通りであり、好ましくは(5、6)で特定する通りである。所与のシグレック分子に対する選択した産物の親和性は、R5位とは異なる位置に、好ましくはR2位に置換基を導入することによりさらに増大させることができる。R2に対する適切な置換基はこの点において、R5に対し記述した置換基である。
【００４７】
本発明はまた、請求項1〜10のいずれか一項記載のR5に対する残基から選択された置換基を、ノイラミン酸またはその誘導体のR5位に導入する段階を含む、シグレック阻害剤の結合選択性を増大させるための方法を提供する。
【００４８】
本発明による化合物の合成は、原則的には、一般的な専門知識を有する当業者にとって可能である。5-N-アセチル-ノイラミン酸が、開始産物として好ましく、ここから、第1の適切なアルキル、アリール、アルキル-α-O-またはα-S-グリコシドが、いくつかの段階を含む連続反応において生成される。
【００４９】
次の段階は、5-N-アセチル-ノイラミン酸の適当なO-またはS-グリコシドのC9(本発明によるR5)上の水酸基をアミノ基により置換する段階からなる。この変換は、適当な9-O-トシル化合物を介して実施することができる。好ましくは、この反応は、改変Mitsunobu反応を用いて実施することができる。このように得られた9-アミノ-9-デゾキシ-5-N-アセチル-ノイラミン酸のアルキル、アリール、アラルキル-α-O-またはα-S-グリコシドは最終的に、5-N-アセチル-9-(ビフェニル-4-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸の適当なアルキル、アリール、アルキル-α-O-またはα-S-グリコシド、およびC-9(本発明によるR5)の一定アミノ基上に様々なアシル残基を有する同様の物質を供給する。酸官能基とアミノ基とのこの結合は、様々な様式で、例えば個々の酸塩化物もしくは無水物を用いて、または、カルボジイミド方法を利用して、または、例えばニトロフェノル、ペンタフルオロフェノールなどにより活性化された個々の酸官能基法により、完成することができる。
【００５０】
本発明はまた、本発明による少なくとも1つのシグレック阻害剤および薬学的に適合可能な担体を含む、薬学的組成物を提供する。好ましい態様によれば、治療上適用可能なシグレック阻害剤は、可能な限りシグレック分子に対し選択的である。薬学的に適合可能な担体は当業者には周知である。適切な希釈剤も含まれる。一般に、任意の投与形態、例えば静脈内、腹腔内、経皮、皮内、経口または局所投与が適しており、経口投与がこの点において好ましい。
【００５１】
投与すべき薬剤の量は、医者により日常的に決定することができる。
【００５２】
さらに、本発明はシグレックにより媒介される疾患、好ましくは免疫系の疾患の治療用の、本発明によるシグレック阻害剤の適用を提供する。シグレック-2はB細胞依存性の免疫応答の調節に関与する。したがって、本発明は、B細胞依存性の免疫応答の調節に対するシグレック阻害剤の適用を示す。この点において、本発明によれば、アレルギー、自己免疫疾患、および慢性炎症が、シグレック阻害剤治療用の対象として引用される。
【００５３】
シグレック-4aは、神経突起成長阻害効果を示す。そのため、本発明によるシグレック阻害剤は、シグレック-4aの神経突起成長阻害効果を中和するのに適しており、したがって例えば対麻痺の治療において、損傷神経の再生能力を改善することができる。たとえばシグレック-7は、NK細胞の細胞傷害活性の調節に関与する。そのため、本発明によるシアル酸誘導体はこれらの細胞の細胞傷害活性の調節に適している。例えば、この点に関して治療可能な疾患は、癌疾患およびウイルス疾患、特にAIDSである。
【００５４】
免疫系の制御には他のシグレック類が関与していることが示されている。表1を参照のこと。そのため、本発明によるシグレック阻害剤はまた免疫系の制御にも適している。
【００５５】
本発明による好ましいシグレック阻害剤により、B細胞に依存する免疫応答が増大するが、これは特にCa2+分泌の増大により証明することができる。このCa2+分泌の増大は、本発明による好ましいシグレック阻害剤を適用することにより起こり、これは例えば、マウス由来のDaudi細胞またはB細胞を用いた試験により証明することができる。このように、本発明の好ましいシグレック阻害剤の適用により誘発される、B細胞依存的な免疫応答の増大は、免疫欠陥に関連する疾患の治療用の薬剤の製造のための多くの前途有望な可能性を開く。これに関して好ましい化合物は、メチル-α-9-N-(ビフェニル-4-カルボノイル)-アミノ-9-デゾキシ-Neu5Ac(実施例で説明される)である。この化合物はまた、特にhCD22に対し非常に優れた選択的親和性を示す。好ましい阻害剤が特別な可能性を示すような医療適応は、B細胞活性化の範囲内の免疫応答が妨害される疾患である。この例とは、分類不能型免疫不全(CVID)およびIgA欠乏症である。CVID患者はB細胞を持っているが、この細胞は効果的な免疫応答を開始することができず、低ガンマグロブリン血症により特徴づけられる。CVID患者は重篤な感染症を患っており、現在のところ免疫グロブリン治療のみが可能であるが、この治療はリスクが著しくかつ適用範囲が限られている点で問題のある治療である。IgA欠乏患者もまた、免疫グロブリンにより治療することができるが、上記リスクにより、および、患者の症状がごくわずかであることが多いため、この治療を受けられないことが多い。
【００５６】
以下、実施例について記述するが、これらの実施例は本発明を説明するものであり、制限すべきものではない。本発明を利用する場合、当業者にはその他の適用が可能であるが、これらもまた本発明に含まれる。
【００５７】
材料および方法
シグレック阻害剤の合成
メチル-α-5-N-アセチル-9-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸のアミノ基上でアシル化された上記の引用物質の生成の例として、ここではメチル-α-5-N-アセチル-9-N-(ビフェニル-4-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸(3)の合成について記述する。
【００５８】
メチル-α-5-N-アセチル-9-アジド-9-デゾキシ-ノイラミン酸(1)
a)メチル-α-5-N-アセチル-9-O-トシル-ノイラミン酸メチルエステルから、文献から周知の方法に従い、適切な9-アジドおよびエステル基の鹸化を介して行う
b)Mitsunobu反応に基づく化学反応を介して周知のメチル-α-N-アセチル-ノイラミン酸から直接行う
無水ピリジン(0.4ml)およびN,N-ジメチル-ホルムアミド(DMF)(1ml)に溶解したメチル-α-5-N-アセチル-ノイラミン酸(0.1g)のトリエチル-アンモニウム塩の溶液を真空下で濃縮し、その後無水DMFで1回〜2回蒸発させる（fumed）(A)。テトラメチルグアニジン(0.19g)を無水ピリジン(0.25ml)およびDMF(1ml)の混合物に溶解し、その溶液を真空下で濃縮し、その後無水DMFで1回〜2回蒸発させる（fumed）(B)。AをDMF(0.8ml)に溶解し、その溶液をBに添加し、その後98％〜100％のギ酸(0.13ml)を添加する。A+Bの溶液を、トリフェニルホスフィン(0.17g)とジイソプロピルアゾジカルボキシレート(0.125ml)の混合物を含む無水テトラヒドロフラン(1.2ml)溶液に添加し、まず0℃で約15分間インキュベートした。0℃→20℃で約24時間後、反応を停止させ、その後約0.5mlのメタノールを添加する。溶液を真空下で濃縮し、酢酸エチル/H2Oまたは塩化メチレン/H2Oを用いて取り出し（shake out）、シリカゲル上でクロマトグラフィーに供した(フラッシュ法)。
溶出：メタノール/酢酸エチル/酢酸（20％）で最初は1/6/1、その後1/4/1
収率：理論値の70％〜80％
【００５９】
メチル-α-5-N-アセチル-9-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸(2)
9-アジド化合物(1)を、標準圧力下で酸化パラジウム水溶液を用いて水素化する。
収率：95％
【００６０】
メチル-α-5-N-アセチル-9-N(ビフェニル-4-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸(3)
ビフェニル-4-カルボン酸(0.4g)を、室温、N,N'-ジシクロヘキシル-カルボジイミド(0.416g)の存在下で、4-ニトロフェノール(0.28g)の酢酸エチル溶液と化学反応させると、それぞれビフェニル(4)-カルボン酸4-ニトロフェニルエステルが得られる。これは酢酸エチル/ジエチルエステル/ヘキサンから結晶化する。
【００６１】
無水DMF(0.6ml)に溶解したメチル-α-5-N-アセチル-9-アミノ-9-デゾキシ-ノイラミン酸(2)(30mg)はトリエチルアミン(12.9ml)の存在下、室温で上記ニトロフェニルエステル(39mg)と完全に反応する。シリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製する(フラッシュ法)。
溶出：メタノール/酢酸エチル/酢酸（20％）で最初は1/6/1、次に1/5/1、最後に1/4/1
(3)の収率：93％
【００６２】
高分解能NMR分光法およびFAB-MSにより、合成産物の構造を示す。
【００６３】
ハプテン阻害アッセイ法
ハプテン阻害アッセイ法を、(5、6)で引用された条件下で実施する。
【００６４】
（表２）結果
2004534085.tif 000004
2004534085.tif 000005
2004534085.tif 000006
gly=グリシン
【００６５】
IC50値は、ハプテン阻害アッセイ法の結合における50％阻害をもたらすシグレック阻害剤濃度である。各シアル酸誘導体のrIP値は、比較化合物である5-N-アセチル-ノイラミン酸のIC50値と被験化合物のIC50値の比を求めることにより決定された。rIP値が＞1.0であるシアル酸誘導体は、参照化合物よりも強く結合し、rIP値が＜1である化合物は、受容体への結合が参照化合物よりも弱い。n.d.とは、測定が行われなかったことを示す。
【００６６】
化合物BPC-Neu5Ac(以下に示す)を用いて、周知の方法に従い、選択性および活性検討のための一連の試験を行った。BPC-Neu5Acの存在下で、抗IgMによりDaudi細胞を刺激すると、Ca2+濃度が増大した。また、この化合物を適用すると、抗IgMで刺激したヒト血液由来の一次Bリンパ球中のCa2+濃度が明らかに増大した。このデータから、CD22のリガンド結合ドメインの特異的阻害により、処理細胞のCa2+シグナル増大が引き起こされることが示される。リガンドの結合に関するこの障害は、CD22の細胞内阻害ドメインの不完全な活性化をもたらす。
2004534085.tif 000007
メチル-α-9-N-(ビフェニル-4-カルボニル)-アミノ-9-デゾキシ-Neu5Ac(BPC-Neu5Ac)
【００６７】
参考文献
2004534085.tif 000008
【国際公開パンフレット】
2004534085.tif 000010
2004534085.tif 000011
2004534085.tif 000012
2004534085.tif 000013
2004534085.tif 000014
2004534085.tif 000015
2004534085.tif 000016
2004534085.tif 000017
2004534085.tif 000018
2004534085.tif 000019
2004534085.tif 000020
2004534085.tif 000021
2004534085.tif 000022
2004534085.tif 000023
2004534085.tif 000024
2004534085.tif 000025
2004534085.tif 000026
2004534085.tif 000027
2004534085.tif 000028
2004534085.tif 000029
2004534085.tif 000030
2004534085.tif 000031
2004534085.tif 000032
2004534085.tif 000033
2004534085.tif 000034
2004534085.tif 000035
2004534085.tif 000036
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004534085.tif 000037
2004534085.tif 000038
2004534085.tif 000039
2004534085.tif 000040
2004534085.tif 000041
2004534085.tif 000042
2004534085.tif 000043
2004534085.tif 000044
2004534085.tif 000045
2004534085.tif 000046
2004534085.tif 000047
2004534085.tif 000048
2004534085.tif 000049
2004534085.tif 000050
2004534085.tif 000051
2004534085.tif 000052
2004534085.tif 000053
2004534085.tif 000054
2004534085.tif 000055
2004534085.tif 000056
2004534085.tif 000057
2004534085.tif 000058
2004534085.tif 000059
2004534085.tif 000060
2004534085.tif 000061
2004534085.tif 000062
2004534085.tif 000063
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004534085.tif 000064
【国際調査報告】
2004534085.tif 000065
2004534085.tif 000066
2004534085.tif 000067
2004534085.tif 000068
2004534085.tif 000069
2004534085.tif 000070
2004534085.tif 000071
2004534085.tif 000072
2004534085.tif 000073
2004534085.tif 000074
2004534085.tif 000075
2004534085.tif 000076