(57)【要約】動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける、選択部位での神経機能または非神経細胞活性を調節するまたは制御するための破傷風毒素の使用方法が提供される。動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける選択部位での動物の神経機能または非神経細胞活性を調節する薬剤配合物がまた提供される。動物、特に哺乳動物及びより特にヒトの臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用がまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経毒が標的ニューロンの活性を可逆的に調節するように、治療上有効な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンの影響を受ける選択部位に投与することを有する、選択部位での動物の神経機能の調節方法。
【請求項２】
治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位での神経活性の減少または神経活性の可逆的な阻害応答を引き起こすのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位での神経活性の増加または神経活性の興奮応答を引き起こすのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
標的ニューロンの神経支配除去を引き起こすのに十分な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンに影響を及ぼす選択部位に投与することを有し、該神経支配除去により標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の可逆的な阻害応答が起こるものである、動物の神経機能の活性の抑制方法。
【請求項５】
標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮応答を引き起こすのに十分な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンに影響を及ぼす選択部位に投与することを有する動物の神経機能の活性の向上方法。
【請求項６】
神経活性の抑制または向上が約１時間から約１年の期間で起こる、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項７】
神経活性の抑制または向上が約１週間から約４ヶ月の期間で起こる、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および
（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置する
ことをさらに有する請求項１〜５に記載の方法。
【請求項９】
（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および
（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置する
ことをさらに有する請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および
（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置する
ことをさらに有する請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
該免疫処置は受動的または能動的に行なわれる、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
該免疫処置は受動的または能動的に行なわれる、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
該免疫処置は受動的または能動的に行なわれる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルが抗体価によって測定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルが抗体価によって測定される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルが抗体価によって測定される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
治療上有効な量の破傷風毒素が注射、局所適用、エアロゾル、または管若しくは体の開口部への点滴注入によって選択部位にデリバリーされる、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項１８】
治療上有効な量の破傷風毒素が注射、局所適用、エアロゾル、または管若しくは体の開口部への点滴注入によって選択部位にデリバリーされる、請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
治療上有効な量の破傷風毒素が注射、局所適用、エアロゾル、または管若しくは体の開口部への点滴注入によって選択部位にデリバリーされる、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
治療上有効な量の破傷風毒素がリポソームまたは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて標的ニューロン中にデリバリーされる、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項２１】
治療上有効な量の破傷風毒素がリポソームまたは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて標的ニューロン中にデリバリーされる、請求項８に記載の方法。
【請求項２２】
治療上有効な量の破傷風毒素がリポソームまたは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて標的ニューロン中にデリバリーされる、請求項９に記載の方法。
【請求項２３】
治療上有効な量の破傷風毒素が製薬上許容できる担体中に懸濁される、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項２４】
治療上有効な量の破傷風毒素が製薬上許容できる担体中に懸濁される、請求項８に記載の方法。
【請求項２５】
治療上有効な量の破傷風毒素が製薬上許容できる担体中に懸濁される、請求項９に記載の方法。
【請求項２６】
破傷風毒素は凍結乾燥粉末の形態を有する、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項２７】
破傷風毒素は凍結乾燥粉末の形態を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項２８】
破傷風毒素は凍結乾燥粉末の形態を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項２９】
標的ニューロンは運動ニューロン、自律性ニューロン、及び感覚ニューロンからなる群より選択される、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項３０】
標的ニューロンは運動ニューロン、自律性ニューロン、及び感覚ニューロンからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項３１】
標的ニューロンは運動ニューロン、自律性ニューロン、感覚ニューロンまたは中枢神経系のニューロンからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項３２】
標的ニューロンの活性は神経伝達物質または神経ペプチドの放出を直接的にまたは間接的に阻害することによって影響を受ける、請求項１〜５に記載の方法。
【請求項３３】
標的ニューロンの活性は神経伝達物質または神経ペプチドの放出を直接的にまたは間接的に阻害することによって影響を受ける、請求項８に記載の方法。
【請求項３４】
標的ニューロンの活性は神経伝達物質または神経ペプチドの放出を直接的にまたは間接的に阻害することによって影響を受ける、請求項９に記載の方法。
【請求項３５】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項３６】
治療上有効な量は、選択部位に対して約５００単位〜約５０００単位である、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項３７】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１０００単位〜約２０００単位である、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項３８】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項３９】
治療上有効な量は、選択部位に対して約５００単位〜約５０００単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項４０】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１０００単位〜約２０００単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項４１】
治療上有効な量は、選択部位に対して約０．００１単位〜約２０００単位である、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４２】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約１０単位である、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４３】
治療上有効な量は、選択部位に対して約２単位〜約４単位である、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４４】
治療上有効な量は、選択部位に対して約０．００１単位〜約２０００単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項４５】
治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約１０単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項４６】
治療上有効な量は、選択部位に対して約２単位〜約４単位である、請求項８に記載の方法。
【請求項４７】
選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、若しくは重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、または顔面筋の緊張の減少に冒された組織または器官を有する、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４８】
選択部位は、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官を有する、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４９】
選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、若しくは重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、または顔面筋の緊張の減少に冒された組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項５０】
選択部位は、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項５１】
選択部位は、唾液の生産に影響を与える組織または器官を有し、該唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を含む、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項５２】
選択部位は、唾液の生産に影響を与える組織または器官を有し、該唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項５３】
選択部位は、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織器官を有する、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項５４】
選択部位は、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項５５】
選択部位は、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）若しくは歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉内の神経の再生または片頭痛に冒された組織または器官を有する、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項５６】
選択部位は、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）または歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉若しくは片頭痛における神経の再生に冒された組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項５７】
選択部位は、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣または裂肛に冒された組織または器官を有する、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項５８】
選択部位は、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣または裂肛に冒された組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項５９】
選択部位は、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応に冒された組織または器官を有する、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項６０】
選択部位は、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応に冒された組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項６１】
選択部位は、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官を有する、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項６２】
選択部位は、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項６３】
選択部位は、毛嚢、前立腺、弛緩した（ｌａｘ）結合組織、老化した皮膚、炎症線維、増殖性またはアレルギー疾患における皮膚、皮脂腺、循環系の交感神経、胸腺の免疫応答を制御するニューロン、リンパ節、または神経免疫相互作用を有する組織、皮膚、消化管、扁桃腺、前眼房、胃粘膜、鼻粘膜または翼口蓋神経節を有する、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項６４】
治療上有効な量の破傷風毒素が標的ニューロンの影響を受ける選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１００単位〜約１０，０００単位である、標的ニューロンの影響を受ける選択部位での動物の神経機能を調節することを目的とする薬剤配合物。
【請求項６５】
治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である、選択部位での動物の神経機能の活性を抑制することを目的とする薬剤配合物。
【請求項６６】
選択部位は、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉内の神経の再生、片頭痛、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣、裂肛、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官を有する、請求項６５に記載の薬剤配合物。
【請求項６７】
治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約２０００単位である、選択部位での動物の神経機能の活性を向上することを目的とする薬剤配合物。
【請求項６８】
選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、顔面筋の緊張の減少、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織または器官を有する、請求項６７に記載の薬剤配合物。
【請求項６９】
選択部位は、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官を有する、請求項６７に記載の薬剤配合物。
【請求項７０】
選択部位は、唾液の生産または鼻粘膜に影響を与える組織または器官を有し、該唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を含む、請求項６７に記載の薬剤配合物。
【請求項７１】
治療上有効な量の破傷風毒素を動物の臨床的障害または症状に関連する標的ニューロンの影響を受ける選択部位に投与することを有し、この際、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１００単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項７２】
動物の臨床的障害または症状に関連する動物の神経機能の活性を抑制するために動物の選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、この際、破傷風毒素は標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮または可逆的な阻害応答を引き起こし、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１００単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項７３】
選択部位は、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉内の神経の再生、片頭痛、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣、裂肛、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官を有する、請求項７２に記載の使用。
【請求項７４】
動物の臨床的障害または症状に関連する動物の神経機能の活性を向上するために動物の選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、この際、破傷風毒素は標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮または可逆的な阻害応答を引き起こし、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約２０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項７５】
選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、顔面筋の緊張の減少、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織または器官を有する、請求項７４に記載の使用。
【請求項７６】
選択部位は、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官を有する、請求項７４に記載の使用
【請求項７７】
選択部位は、唾液の生産または鼻粘膜に影響を与える組織または器官を有し、該唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を含む、請求項７４に記載の使用
【請求項７８】
細胞活性がホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含む、選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有する、選択部位での動物の細胞活性の調節方法。
【請求項７９】
細胞活性は、マクロファージ、単球、内分泌細胞または腎細胞を含む細胞中で起こる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
細胞活性は、約１時間から約１年の期間で調節される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および
（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置する
ことをさらに有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
該免疫処置は受動的または能動的に行なわれる、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルが抗体価によって測定される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
治療上有効な量の破傷風毒素が注射、局所適用、エアロゾル、管若しくは体の開口部への点滴注入によって、リポソーム若しくは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて、選択部位にデリバリーされる、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項８５】
治療上有効な量の破傷風毒素が製薬上許容できる担体中に懸濁される、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項８６】
破傷風毒素は凍結乾燥粉末の形態を有する、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項８７】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約０．００１単位〜約１０，０００単位である、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項８８】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約５０００単位である、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項８９】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位である、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項９０】
選択部位は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する、請求項７８または８１に記載の方法。
【請求項９１】
治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約１０，０００単位である、動物の細胞の細胞活性を調節することを目的とする薬剤配合物。
【請求項９２】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約５０００単位である、請求項９０に記載の薬剤配合物。
【請求項９３】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位である、請求項９０に記載の薬剤配合物。
【請求項９４】
選択部位は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する、請求項９０に記載の薬剤配合物。
【請求項９５】
選択部位での動物の細胞活性を調節するために治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、該細胞活性はホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含み、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状を効果的に処置する方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項９６】
選択部位での動物の細胞活性を調節するために治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、該細胞活性はホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含み、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１単位〜約５，０００単位である、動物の臨床的障害または症状を効果的に処置する方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項９７】
破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位である、請求項９５に記載の使用。
【請求項９８】
選択部位は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する、請求項９５に記載の使用。
【請求項９９】
動物の選択部位に製薬上許容できる担体中に懸濁された破傷風毒素を投与することを有し、該破傷風毒素は痛みに関連する炎症性神経伝達物質若しくは神経ペプチドの放出を抑制する若しくは可逆的に阻害するのにまたは選択部位から中枢神経系への痛みの感覚の伝達を防止するのに十分な治療上有効な量である、動物によって経験される痛みの軽減方法。
【請求項１００】
動物の選択部位を制御する炎症性神経伝達物質若しくは神経ペプチドの放出に影響を与える感覚ニューロンを神経支配除去する（ｄｅｎｅｒｖａｔｅ）のにまたは選択部位から中枢神経系への痛みの感覚の伝達を防止するのに十分な治療上有効な量の破傷風毒素を動物の選択部位に投与することを有する、動物によって経験される痛みの軽減方法。
【請求項１０１】
選択された筋肉の神経活性の増加または興奮応答を引き起こすのに十分な薬学上有効な量の破傷風毒素を筋肉の選択部位に投与することを有する、動物の筋肉量の増加方法。
【請求項１０２】
選択された筋肉は、骨格または平滑筋である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
実施例を参照しながら本明細書中で実質的に記載されるものである、動物の臨床的障害または症状を効果的に処置する方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用。
【請求項１０４】
実施例を参照しながら本明細書中で実質的に記載されるものである、動物の神経機能または非神経性細胞活性の調節方法。
【請求項１０５】
実施例を参照しながら本明細書中で実質的に記載されるものである、動物の神経機能または非神経性細胞活性の調節を目的とする薬剤配合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、概括的には、選択部位での、哺乳動物などの、動物の神経機能の調節方法に関するものである。本発明はまた、概括的には、選択部位での動物の他の非神経性細胞活性の調節方法に関するものである。本発明はまた、選択部位での動物の神経機能または非神経機能の調節を目的とする薬剤配合物を包含する。本発明はまた、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。
【０００２】
発明の背景
クロストリジウムの神経毒は、人で知られている最も強力な毒素である。クロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）菌を経口で摂取すると、ボツリヌス毒素（ＢＴ）を産生する。ＢＴは、胃腸管から吸収されて、体中の筋肉に循環系によって輸送される。ＢＴは、運動ニューロンに結合して運動ニューロンからの神経筋伝達を遮断し、ボツリヌス中毒として知られる致命的な麻痺を引き起こす。
【０００３】
ＢＴの異常な性状の一としては、その作用は数ヶ月間継続するが患者は完全に回復することがある。このような独特な性状の結果、ＢＴは多くの臨床用途を有する。現在、少ない投与量のＢＴの局所注射を用いて、広範な様々な臨床的な運動不全における筋肉の活性を抑制または遮断する。より近年では、ＢＴの使用は、神経筋伝達に使用される同じ神経伝達物質、すなわち、アセチルコリンを用いる自律神経の遮断にまで拡張されてきた。
【０００４】
クロストリジウム細菌の他のクラスには、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ ｔｅｔａｎｉ）がある。これらの細菌は、傷に感染して、破傷風毒素を産生する。破傷風毒素（ＴＴ）は、感染部位から放出されて、体中の運動ニューロンにまで循環系によって運ばれる。運動ニューロンに直接作用せずに、破傷風毒素は、一般的に運動ニューロン活性を阻害するニューロンを遮断する中枢神経系に運ばれる。この結果、罹患筋肉で徐々に緊張が増し、ついに体中の筋肉の広範な痙攣が起こる。このような痙性麻痺は、しばしば致命的であり、呼吸抑制または循環虚脱から死に至る。
【０００５】
破傷風は古来より疾患として認識されており、これは依然として世界中で共通である。多くの国では、抗原性を維持しつつ生物学的活性を除去するためにホルムアルデヒドに暴露する弱毒化形態の毒素である、破傷風毒素を子供に定常的にワクチン接種している。破傷風毒素は、製薬工業において最大の生物学的製剤である。
【０００６】
破傷風毒素の作用は数週間から数ヶ月まで継続する。ＴＴがいったんニューロンシナプスに入り、これからの神経伝達を遮断した後は、このプロセスは可逆的である。機能の回復には、運動ニューロンに最終的に再度連結して、阻害活性を正常なレベルにまで回復する、ニューロンからの新たなプロセスの成長が必要である。この回復に必要な時間は数週間から５ヶ月までの範囲である（Ｓｔｒｕｐｐｌｅｒ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏｌ， ８， １６２−１７８２， （１９６３））。
【０００７】
ＴＴ作用の非常に広い範囲によって、一回の注射によって長期間神経系のいずれかの部分を実際興奮または阻害できる。神経系はほとんどすべての器官及び生理学的機能を厳密にモニターし、制御するので、予想されなかったことに、ＴＴは広範な様々な臨床的障害の処置または軽減に対して非常に有益な用途を有しうることが分かった。
【０００８】
破傷風は骨格筋の進行性痙性収縮及びしばしば致命的である自律神経系の過活動という特徴のある破傷風毒素による全身性の中毒である。
【０００９】
全身性の疾患以外に、３種のより知られていない変異体または破傷風が知られている。これらは、新生児、頭部及び局所破傷風である。新生児破傷風は、全身性の弛緩麻痺として現れる新生児の致命的な中毒である。頭部破傷風は、顔面で起こり、周辺領域が筋痙攣すると共に、局所的な麻痺、最もしばしば顔面神経の麻痺を合併する（Ｄａｓｔｕｒ， Ｆ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ， Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ４０（８）， ７８２−６ （１９７７））。局所性破傷風は、全身性破傷風に進行するまたは数週間から数ヶ月で消散するかもしれない筋肉群または四肢の隔離された痙攣である（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ， １４９（２） ８４−８， （１９８１）； Ｊａｉｎ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ， ２２８（４）， ２８９−９３， （１９８２））。
【００１０】
破傷風毒素は、すべての生物学的毒素のうち恐らく最も研究されたある独特な特性を有する。例えば、破傷風毒素は、すべての型のニューロンに結合する。その主な親和性は運動ニューロンに結合するものであるが、ＴＴは自律神経系のニューロン及び感覚ニューロンにも結合する（Ｓｔｏｃｋｅｌ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ９９， １−１６ （１９７５））。これに対して、ボツリヌス毒素は主に運動ニューロンに結合する。
【００１１】
破傷風毒素は、ニューロンでその効果を起こすのに多数の特定の段階を必要とする。これらの段階としては、（ｉ）末梢結合（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｉｎｄｉｎｇ）；（ｉｉ）インターナリゼーション；（ｉｉｉ）逆行性輸送；（ｉｖ）中枢結合（ｃｅｎｔｒａｌ ｂｉｎｄｉｎｇ）；及び（ｖ）膜内外インターナリゼーションが挙げられる。
【００１２】
末梢結合では、毒素は細胞の表面に結合する。ＴＴは、ほとんどすべてのニューロンのシナプス前膜に結合する。加えて、これは、ニューロン軸索の膜にも結合する。ＴＴが結合する受容体はガングリオシドとして知られている分子のクラスである。ＢＴもガングリオシドに結合するが、ＢＴはコリン作動性ニューロンのシナプス前膜上のものに主に結合すると考えられるが、ＴＴはすべてではないとしてもほとんどのニューロンのシナプス前膜に結合する。
【００１３】
インターナリゼーション段階では、毒素は細胞中に運ばれる。ＴＴはベシクルを形成するプロセスによってニューロン中に運ばれる。ＴＴは、物理的にはニューロン内であるが、ベシクル内に維持されながら、毒素は膜によってニューロンの細胞質から分離される。これに対して、ＢＴでは、インターナリゼーションされる前にシナプス前膜上の第二の分子がこれに結合する必要があると考えられる。ＢＴが第二の分子に結合した後は、細胞膜を介して細胞質中を直接通り、これが末梢シナプス前膜で効果を発揮する理由である。
【００１４】
逆行性輸送中、ＴＴを含むベシクルは中枢神経系において細胞体に輸送される。次に、ベシクルは、細胞体またはその樹状突起の細胞膜と融合することにより、ＴＴを運動ニューロンに接合する（ｓｙｎａｐｓｉｎｇ）他のニューロンのプロセスで運動ニューロン間の細胞外空間中に蓄積する（Ｈｉｌｂｉｇ， Ｇ．， Ｋ．Ｏ． Ｒａｋｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈｉｖｅｓ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ３０７（３）， ２８７−９０， １９７９）。
【００１５】
中枢結合段階では、ＴＴはすべてのニューロンに結合できる。しかしながら、ＴＴは、抑制性ニューロンに対して非常により大きな親和性を有する。低濃度では、破傷風は、抑制性神経伝達物質であるＧＡＢＡ及びグリシンを使用するニューロンに対してより大きな親和性を有する（Ｍｏｎｔｅｃｕｃｃｏ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， Ｑ Ｒｅｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ， ２８（４）， ４２３−７２， （１９９５））。より高い濃度では、これはすべての神経伝達物質を遮断する。最終的に、破傷風毒素は、活動電位の伝達の局所的な遮断を引き起こす軸索への局所的な効果を有する。これのメカニズムは不明であるが、結果が局所麻酔薬の作用と同様である。
【００１６】
膜内外インターナリゼーション中は、毒素が第二のニューロンに結合したら、インターナリゼーションが起こり、その毒性効果が生じる。
【００１７】
ＴＴの作用の一次メカニズムは、細胞からのベシクルの放出を遮断することである。ニューロンでは、これらのベシクルは、神経伝達物質を含む。細胞の内膜へのベシクルの結合に係わるタンパク質は、ＳＮＡＲＥ（シナプトソーム関連タンパク質受容体（ｓｙｎａｐｔｏｓｏｍｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））群のタンパク質である。これらのタンパク質は、細胞内ベシクルが細胞膜にドッキングしてその内容物を放出するメカニズムの一部である。詳細には、破傷風毒素がＶＡＭＰ（ベシクル関連膜タンパク質（ｖｅｓｉｃｌｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）を切断する。ボツリヌス毒素Ａ及びＥはＳＮＡＰ−２５を切断する；さらに、ボツリヌス毒素ＣはＳＮＡＰ−２５及びシンタキシン（ｓｙｎｔａｘｉｎ）を切断する；破傷風毒素及びボツリヌス神経毒タイプＢ、Ｄ、Ｆ及びＧはＶＡＭＰ、シナプスベシクルを含む神経伝達物質の内在性タンパク質（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）を切断する。
【００１８】
ベシクル放出のメカニズムは、酵母由来のすべての細胞からヒトの細胞まで共通である。ＴＴ分子は、特定の結合及び輸送特性に応答できる重鎖、ならびにＶＡＭＰタンパク質への触媒作用を実際行なう軽鎖から構成される。ＴＴがその作用を開始、実施できる非ニューロン細胞は数種であり、これらは実施例で討論されるであろう。
【００１９】
多数の実験から、ＴＴがある型の細胞中に結合、進入できない場合であっても、様々なメカニズムによって挿入できることが示された。細胞内に一旦入ると、ＴＴはＶＡＭＰを切断して、ベシクルの放出をできなくする。異なる細胞は、ホルモン、神経ペプチド、リゾチームタンパク質、及び他の物質を分泌するメカニズムを使用する。特定の物質が細胞によって分泌される場合には、これは、分泌がＶＡＭＰタンパク質の使用を必要とする際にはＴＴによって遮断されるであろう。
【００２０】
細胞は、細胞膜の外表面にガングリオシドを配置することによってＴＴに対して感受性になりうる。細胞中へのＴＴの他の挿入方法としては、ＴＴ、または最小限ではその軽鎖を、細胞に結合できる第２の分子と化学的に結合することによるものがある。加えて、ＴＴは、ミクロピペットを用いた微量注入、加圧注入によって、リソソーム中への取り込みによって、または一時的に細胞膜をＴＴに浸透できるようにすることによって挿入できる。
【００２１】
運動ニューロンはＴＴ毒性の一次ターゲットである。運動ニューロンは、骨格筋の大きな錘外筋線維を神経支配する（ｉｎｎｅｒｖａｔｅ）コリン作動性ニューロンを意味する。骨格筋内にはより小さな錘内筋線維があり、これらはガンマニューロンと呼ばれるより小さなコリン作動性運動ニューロンによって神経支配される（ｉｎｎｅｒｖａｔｅｄ）。これらはまた、ＴＴによって中毒にかかる（ｉｎｔｏｘｉｃａｔｅｄ）。最後に、平滑筋もまたコリン作動性ニューロンによって神経支配される。非常に多数のこれらのニューロンがコリン作動性であり、自律神経系の一部であると形式的に考えられるものの、特定の生物学的に同様の性質を有するため、討論では他の運動ニューロンと一緒にグループ分けされることもある。ＴＴは、横紋筋線維に対するのと同様にして平滑筋の運動ニューロンに結合し、これを中毒にかける（ｉｎｔｏｘｉｃａｔｅ）ことが示された。
【００２２】
高い投与量では、ＴＴは、興奮性及び抑制性軸索双方からのすべての求心性インプットを遮断することによって神経筋接合部で、末梢において、及び中枢作用的に（ｃｅｎｔｒａｌｌｙ）双方で運動ニューロン活性を遮断することによって弛緩麻痺を引き起こすことができる。これらの２領域のうちどちらが中毒の所望の場合において優勢であるかは、ＴＴ感染がどこにあるかおよびどのようにして進行するかに依存する。
【００２３】
頭部破傷風では、ＴＴの３種の作用すべてが一緒に起こりうる。感染の部位では、筋肉が、ＴＴレベルが高くなるにつれて、弛緩麻痺を示し、神経筋シナプスが直接遮断される。加えて、高レベルの毒素が脳幹に運ばれて、中枢神経系のインプットを遮断する。しかしながら、感染の部位周辺の様々な距離では、ＴＴの濃度が筋肉が痙攣している領域が見られるまで低下する（Ｄａｓｔｕｒ， Ｆ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ， Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ４０（８）， ７８２−６ （１９７７））。
【００２４】
破傷風毒素は、重量によって、またはより一般的には、生物学的アッセイによって、測定できる。破傷風の有効投与量は、単位、皮下注射された際に５０％のマウスが死ぬ破傷風毒素の量で測定される。破傷風毒素の一単位は、１ｋｇのマウスの体重当たり０．１〜１００ｎｇの毒素の範囲でありうる。マウスの半横隔膜アッセイ（ｍｏｕｓｅ ｈｅｍｉ ｄｉａｐｈｒａｇｍ ａｓｓａｙ）では、５００倍高い量の破傷風毒素が弛緩麻痺を引き起こすのに必要である（Ｂｉｇａｌｋｅ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１２（３）， ２５５−６３， （１９８０））。したがって、等重量では、ボツリヌス毒素は弛緩麻痺を起こすが、破傷風毒素は痙性麻痺を起こすと予想される。
【００２５】
破傷風毒素は、運動ニューロンでのと同じ効果を自律性ニューロンで有する（Ａｂｂｏｕｄ， Ｆ．Ｍ．， Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ４ （３ Ｐｔ ２）， ２０８−２５， （１９８２））。全身性の破傷風では、自律神経系の興奮が顕著であり、高血圧（Ｔｏｒｉｙａ， Ｙ．， Ｉ． ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｄｏｎｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｄｅｎｔａｌ Ｔｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ， １３ （１）， ６−１２， （１９９７））、血圧の不規則な変化、高熱、及び大量の発汗などの症状で現われる。したがって、低濃度では、自律性の緊張が増し、生理学的な変化によりすべての器官が罹患する。
【００２６】
自律神経系は、神経伝達物質としてアセチルコリンを使用する副交感神経系及び神経伝達物質としてエピネフリンを使用する交感神経系に分かれる。副交感神経及び交感神経系双方において、ニューロンは、中枢神経系から末梢器官までの全距離に到達しない。その代わりに、距離は、末梢でのどこかのシナプスを有する２個のニューロンを必要とする。交感神経系では、これらは、脊柱付近に位置する限られた数の大きな神経節中に一緒に集まる。副交感神経器官では、シナプスは、一般的に、標的器官付近のより小さな神経節中に位置する。双方の系において、神経節シナプス中で使用される神経伝達物質は、常に、アセチルコリンである。
【００２７】
交感神経系の末梢ニューロンはすべて神経伝達物質としてノルエピネフリンを使用してもよいが、標的器官細胞の応答は受容体の型に依存する。アドレナリン受容体には３種の型がある：アルファ（平滑筋の収縮）、ベータ１（心臓の一過性頻脈及び脂肪酸の可動化（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ））及びベータ２（平滑筋の弛緩）。ノルエピネフリンの正確な効果は、表面で見出される受容体の型に基づいて異なる筋肉では完全に相対することに留意する。この情報の多くは、臨床的に関連のあるほとんどの器官で知られている。
【００２８】
神経節及び多数の神経伝達物質の存在は、運動系に対する自律神経系の複雑さを増加する。器官は、一般的に、副交感及び交感ニューロンによって神経支配され、これらは、一般的に、標的で反対の作用を有する。したがって、標的器官の解剖学及び生理学の理解は、所望の効果を達成しようとするために、ＴＴ注射の位置を計画するのに重要である。
【００２９】
感覚ニューロンは破傷風毒素によっても遮断されうる。感覚ニューロパシーは、臨床的な破傷風の症候群の一部である。クロストリジウムによる破傷風感染の一つの態様としては、感染部位での痛み及び炎症がこのような重篤な感染症で予想されるのよりかなりより低いことがある。したがって、ＴＴは感覚ニューロンを遮断すると考えられる。
【００３０】
シナプス連結を介して他のニューロンと直接連絡するのに一般的に使用される、神経伝達物質に加えて、ニューロンは、運動、感覚及び自律神経から神経ペプチドを放出する（ＳＰ、物質Ｐ；ＮＫＡ、ニューロキニンＡ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ Ａ）；ＣＧＲＰ、カルシトニン遺伝子関連ペプチド；ＮＰＹ、神経ペプチド；Ｙ、インターロイキン及び成長因子）。これらの神経ペプチドは多くの異なる効果を有するが、最も重要なものの一つとして血管拡張及び炎症がある（Ｂｉｇａｌｋｅ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１２（３）， ２５５−６３， （１９８０））。これらの神経ペプチドは神経伝達物質と同様のベシクルメカニズムによって放出されるため、ＴＴによって遮断されうる。
【００３１】
ＳＮＡＲＥタンパク質及びベシクル放出メカニズムは、神経伝達物質の放出以外の目的で細胞に使用される。事実、ほとんどすべての細胞分泌物の放出はこのメカニズムに依存する。これらとしては、ホルモン、酵素、及び炎症調節剤、呼吸、消化または尿腺からの粘液分泌物、ならびに神経及び白血球由来の炎症調節剤などが挙げられる（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ， Ｅ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２７３ （６ Ｐｔ ２）， Ｆ１０５４−７ （１９９７））。破傷風毒素を内在化することが知られる細胞としては、マクロファージ、内分泌細胞、及び腎細胞が挙げられる（Ｈｕｅｔ ｄｅ ｌａ Ｔｏｕｒ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ４０（２−３）， １２３−３１， （１９７９））。
【００３２】
ＳＮＡＲＥタンパク質へのこれらの効果に加えて、クロストリジウムの毒素は他の細胞活性を妨げることが示された。例えば、これはアクチン分子がフィラメントを形成するのを防止する。アクチンは、細胞の形状及び移動に関わる主要な細胞骨格タンパク質である。この作用は、筋細胞の収縮を遮断でき、さらに白血球及び恐らく悪性細胞の移動を止めることができる。この毒素はまた、細胞のシグナル伝達（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）をも妨げる。詳しくは、細胞表面上の受容体は、２次タンパク質のカスケードを促進することによって特定の分子に応答し、さらに、これにより分泌物の形態の変化から様々な細胞の機能が生じる。
【００３３】
”Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ”， １６ （２）， １０１−１３， （２０００）において、Ｆｅｚｚａ Ｊ．Ｐ． ｅｔ ａｌ．は、免疫処置されたウサギで全身性のテタニーを生じずに極在化した眼輪筋を生じるのに破傷風毒素を使用することを開示する。眼瞼痙攣及び片側顔面痙攣の処置における破傷風毒素の潜在的な用途は投与量に関する詳細な情報またはこれらの状態を処置するのに破傷風毒素を使用しようと探索する当業者に有用である他の記載なく、示唆される。
【００３４】
Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，９８９，５４５号には、痛みの処置を目的とする薬剤としてクロストリジウムの神経毒自体または他の成分に結合したクロストリジウムの神経毒の軽鎖の使用が記載される。Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．は、破傷風毒素の完全な分子の使用を開示していない。
【００３５】
Ｂｉｎｄｅｒの米国特許第５，７１４，４６８号には、片頭痛の痛みの軽減に破傷風毒素の断片を使用することが記載される。Ｂｉｎｄｅｒ米国特許第５，６７０，４８４号には、ボツリヌスＡ及び破傷風毒素による細胞増殖性の皮膚疾患（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｅｌｌ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の処置方法が開示される。双方の特許では、Ｂｉｎｄｅｒは、ＢＴで使用するのと同様のＴＴ投与量を使用する。さらに、彼は、ＴＴが彼の特許で開示される投与量では毒性が強すぎることを見出したため、有益な目的でのＴＴの使用に反対している。
【００３６】
Ｓａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，７６６，６０５には、治療上有効な量のボツリヌス毒素を哺乳動物に投与することによる哺乳動物の自律神経機能の制御が記載される。破傷風毒素の開示はない。
【００３７】
運動、自律及び感覚ニューロンへの神経毒の明らかな効果にもかかわらず、ヒトを含む、動物におけるこのような毒素、特に破傷風毒素の使用は制限されており、臨床用途には使用されてはいなかった。ゆえに、患者の選択部位での神経活性を向上または抑制しうる破傷風毒素による患者の処置方法に対する医療分野における必要性は依然としてある。同様にして、炎症状態等の、不適切な細胞活性によって引き起こされる臨床疾患の処置への破傷風毒素の使用方法に対する医療分野における必要性もまた依然としてある。さらに、依存性、耐薬性、及びより公知の薬剤と関連する副作用を排除しまたは最小限にしつつ、臨床上有益な結果を達成するまたは特定の機能不全を処置するために患者にデリバリーされうる薬剤配合物に対する必要性が依然としてある。
【００３８】
発明の目的
本発明の目的は、動物において、特に哺乳動物において及びより特にヒトにおいて有益な効果を達成するための破傷風毒素の使用方法を提供することである。
【００３９】
本発明の目的は、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける神経筋の機能不全の処置を提供することである。
【００４０】
本発明の目的は、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける自律神経の機能不全の処置を提供することである。
【００４１】
本発明の他の目的は、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける感覚機能を制御することである。
【００４２】
本発明の目的は、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける神経の機能を調節または制御することである。
【００４３】
本発明の他の目的は、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける非神経細胞活性を調節するのに破傷風毒素を使用することである。
【００４４】
発明の要約
上記目的及び他の点で、本発明は、部分的に、破傷風毒素が標的ニューロンの活性を可逆的に調節するように、治療上有効な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンの影響を受ける選択部位に投与することを有する、選択部位での動物の神経機能の調節方法に関するものである。
【００４５】
本発明の一態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、選択部位での神経活性の減少または神経活性の可逆的な阻害応答を引き起こすのに十分である。
【００４６】
本発明の他の態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、選択部位での標的ニューロン活性の増加または神経活性の興奮応答を引き起こすのに十分である。
【００４７】
他の実施態様においては、本発明はさらに、標的ニューロンの神経支配除去を引き起こすのに十分な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンが影響を及ぼす選択部位に投与することを有し、該神経支配除去により標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の可逆的な阻害応答が起こるものである、動物の神経機能の活性の抑制方法に関するものである。
【００４８】
さらに他の実施態様においては、本発明は、標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮応答を引き起こすのに十分な量の破傷風毒素を動物の標的ニューロンが影響を及ぼす選択部位に投与することを有する動物の神経機能の活性の向上方法に関するものである。
【００４９】
他の態様においては、本発明は、神経機能を制御するために治療上有効な量の破傷風毒素を選択部位に投与することを有する、動物における、特に哺乳動物における及びより特にヒトにおける神経機能の制御方法に関するものである。
【００５０】
前記方法のそれぞれを含む本発明の特定の実施態様においては、神経活性の抑制または向上は、約１時間から約１年の期間で起こる。特定の好ましい実施態様においては、神経活性の抑制または向上は、約１週間から約４ヶ月の期間で起こる。
【００５１】
前記方法のそれぞれの特定の実施態様においては、前記方法のそれぞれは、（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置することをさらに有する。免疫処置段階は、受動的または能動的に行なわれる。血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルは、抗体価または当該分野において既知の他の適切な方法によって測定される。
【００５２】
前記方法の各実施態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、注射、局所適用、エアロゾル、または管若しくは体の開口部への点滴注入によって選択部位にデリバリーされる。前記方法の特定の好ましい実施態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、リポソームまたは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて標的ニューロン中にデリバリーされる。
【００５３】
前記方法のそれぞれの特定の好ましい実施態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、製薬上許容できる担体中に懸濁される。
【００５４】
前記方法のそれぞれの他の好ましい実施態様においては、破傷風毒素は、凍結乾燥粉末の形態を有する。
【００５５】
前記方法のそれぞれの各前記実施態様においては、標的ニューロンは、運動ニューロン、自律性ニューロン、及び感覚ニューロンまたは中枢神経性のニューロンを包含する。
【００５６】
前記方法のそれぞれの特定の実施態様においては、標的ニューロンの活性は、神経伝達物質または神経ペプチドの放出を直接的にまたは間接的に阻害することによって影響を受ける。
【００５７】
標的ニューロンの神経活性が可逆的に阻害されるまたは標的ニューロンが神経支配除去される本発明の特定の好ましい実施態様においては、ＴＴの治療上有効な量は、選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である。
【００５８】
標的ニューロンの神経活性が破傷風毒素の投与によって可逆的に阻害されるまたは標的ニューロンが神経支配除去される他のより好ましい実施態様においては、ＴＴの治療上有効な量は、選択部位に対して約５００単位〜約５０００単位である。
【００５９】
標的ニューロンの神経活性を可逆的に阻害するまたは標的ニューロンを神経支配除去する前記方法のそれぞれの他の最も好ましい実施態様においては、ＴＴの治療上有効な量は、選択部位に対して約１０００単位〜約２０００単位である。
【００６０】
破傷風毒素の投与によって標的ニューロンの神経活性が向上するまたは標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮応答が起こる、前記方法のそれぞれの特定の他の好ましい実施態様においては、ＴＴの治療上有効な量は、選択部位に対して約０．０１単位〜約２０００単位である。前記方法のそれぞれの特定のより好ましい実施態様においては、治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約１０単位である。前記方法の特定の最も好ましい実施態様においては、治療上有効な量は、選択部位に対して約２単位〜約４単位である。
【００６１】
前記方法のそれぞれの特定の他の実施態様においては、破傷風毒素が選択部位に投与されると、骨格筋の組織または器官と関連する標的ニューロンでの興奮応答が誘発される。これらの前記した実施態様では、適用可能な臨床疾患としては、以下に制限されないが、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、若しくは重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、または顔面筋の緊張の減少が挙げられる。
【００６２】
前記方法のそれぞれの他の実施態様においては、ＴＴが投与されると、以下に制限されないが、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官などの平滑筋での神経活性の興奮応答が誘発される。
【００６３】
本発明の方法が自律副交感神経系の標的ニューロンの興奮応答を誘発するＴＴの投与を含む、本発明の他の実施態様においては、選択部位としては、唾液の生産に影響を与える組織または器官があり、当該唾液の生産に影響を与える器官としては、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺が挙げられる。
【００６４】
本発明の方法が自律交感神経系の標的ニューロンの興奮応答を誘発するＴＴの投与を含む、本発明のさらなる他の実施態様においては、選択部位は、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織器官を有する。
【００６５】
前記方法の特定の他の実施態様においては、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）若しくは歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉内の神経の再生または片頭痛に冒された組織または器官などの選択部位での可逆的な阻害応答を誘発するために、破傷風毒素が骨格筋に投与される。適用可能な骨格筋としては、声帯ひだ、顔面筋、咬筋、胸鎖乳突筋、僧帽筋、前腕筋、四肢の筋肉、側頭筋及び他の不特定の筋肉が挙げられる。
【００６６】
ＴＴの投与が可逆的な阻害応答を誘発するものである、前記方法の他の実施態様においては、破傷風毒素は、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣または裂肛に冒された平滑筋の組織または器官などの他の選択部位に投与される。筋肉としては、肺の平滑筋、輪状咽頭筋（ｃｒｉｃｏｐｈａｒｙｎｇｅｕｓ ｍｕｓｃｌｅ）、食道、下部食道括約筋、胃壁筋、結腸壁の筋肉及び括約筋が挙げられる。
【００６７】
前記方法のさらなる他の実施態様においては、破傷風毒素は、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応に冒された組織または器官などの選択部位で投与されることによって可逆的な阻害応答を誘発する。前記実施態様において、適用できる標的ニューロンは、自律副交感神経系の一部であり、これとしては、胃神経の供給、前立腺、鼻腔内粘膜、肺粘膜、顎下腺、皮膚及び胸腺が挙げられる。前記方法の特定の他の実施態様においては、ＴＴの適用の他の選択部位として、骨粗鬆症または骨、冠状動脈及び心筋等のアンギナに冒された組織または器官が挙げられる。
【００６８】
前記方法のそれぞれの特定の他の実施態様においては、ＴＴは、１：２００，０００〜約１：１００，０００の量で選択部位の標的ニューロンに血管収縮薬と共に投与されうる。血管収縮薬は、破傷風毒素の投与の前に、これと同時にまたはこの直後に投与されてもよい。本発明に使用できる血管収縮薬としては、以下に制限されないが、エピネフリン、ノルエピネフリン、またはエピネフリルボレート（ｅｐｉｎｅｐｈｒｙｌ ｂｏｒａｔｅ）が挙げられる。
【００６９】
他の態様においては、本発明は、治療上有効な量の破傷風毒素が標的ニューロンの影響を受ける選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である、標的ニューロンの影響を受ける選択部位での動物の神経機能を調節することを目的とする薬剤配合物に関するものである。
【００７０】
他の態様においては、本発明は、治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１００単位〜約１０，０００単位である、選択部位での動物の神経機能の活性を抑制することを目的とする薬剤配合物に関するものである。前記実施態様において、選択部位としては、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、片頭痛、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣、裂肛、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官が挙げられる。
【００７１】
さらに他の態様においては、本発明は、治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約２０００単位である、選択部位での動物の神経機能の活性を向上することを目的とする薬剤配合物に関するものである。この実施態様の薬剤配合物に関する選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、顔面筋の緊張の減少、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織または器官を有する。この実施態様の薬剤配合物に関する他の選択部位としては、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官が挙げられる。この実施態様の薬剤配合物に関する他の選択部位としては、唾液の生産または鼻粘膜に影響を与える組織または器官が挙げられ、上記唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を含む。
【００７２】
本発明はさらに、治療上有効な量の破傷風毒素を動物の臨床的障害または症状に関連する標的ニューロンの影響を受ける選択部位に投与することを有し、この際、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１００単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。
【００７３】
本発明の他の態様は、動物の臨床的障害または症状に関連する動物の神経機能の活性を抑制するために動物の選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、この際、破傷風毒素は標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮または可逆的な阻害応答を引き起こし、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１００単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。本発明のこの態様において、選択部位は、痙攣性発声障害、片側顔面痙攣及び眼瞼痙攣、下顎関節症候群（ｔｅｍｐｏｒａｌ ｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、歯ぎしり、斜頚、頚痛、書痙、四肢筋拘縮（ｌｉｍｂ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、筋肉内の神経の再生、片頭痛、気管支痙攣、輪状咽頭痙攣、食道痙攣、アカラシア、肥満、直腸痙攣、裂肛、胃酸、前立腺肥大、鼻漏、唾液分泌、肺粘膜の刺激、乾癬、免疫寛容または免疫反応、骨粗鬆症またはアンギナに冒された組織または器官を有する。
【００７４】
さらなる他の態様においては、本発明は、動物の臨床的障害または症状に関連する動物の神経機能の活性を向上するために動物の選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、この際、破傷風毒素は標的ニューロンによって神経支配される選択部位での神経機能の興奮または可逆的な阻害応答を引き起こし、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約０．００１単位〜約２０００単位である、動物の臨床的障害または症状の処置方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。本発明のこの実施態様において、選択部位は、睡眠無呼吸及びいびき、側彎、斜視、筋萎縮、筋ジストロフィー、ＡＬＳ、重症筋無力症等の神経に損傷を受けた筋肉、筋肉量の減少、顔面筋の緊張の減少、鼻充血、インポテンス、脱毛または低血圧に冒された組織または器官を有する。前記実施態様に関する他の選択部位としては、下部食道括約筋、肛門括約筋、膀胱、膀胱括約筋、膣括約筋、幽門括約筋、上部食道括約筋、結腸壁の筋肉などの組織または器官が挙げられる。前記実施態様に関する他の選択部位は、唾液の生産または鼻粘膜に影響を与える組織または器官を有し、該唾液の生産に影響を与える器官は、顎下腺、耳下腺、舌下腺、または口腔粘膜の小唾液腺を有する。
【００７５】
本発明のさらなる他の態様は、細胞活性がホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含む、選択部位に治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有する、選択部位での動物の細胞非神経（ｎｏｎ−ｎｅｕｒａｌ）活性の調節方法に関するものである。
【００７６】
前記実施態様において、細胞活性は、マクロファージ、単球、内分泌細胞または腎細胞を含む細胞中で起こる。この実施態様において、細胞活性は、約１時間から約１年の期間で調節される。好ましい実施態様においては、細胞活性は、１週間から４ヶ月の期間、制御または調節されうる。
【００７７】
細胞活性の調節に関する前記方法のそれぞれの特定の実施態様においては、前記各方法のそれぞれはさらに、（ｉ）破傷風毒素の投与前に動物の血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルを測定し；および（ｉｉ）破傷風毒素のレベルが０．１ＩＵ／ｍｌ未満である際には動物を免疫処置することを有する。免疫処置は受動的または能動的に行なわれる。血漿中に存在する破傷風毒素の抗体のレベルは、抗体価によって測定される。
【００７８】
前記方法のそれぞれの特定の実施態様においては、治療上有効な量の破傷風毒素は、注射、局所適用、エアロゾル、管若しくは体の開口部への点滴注入によって、リポソーム若しくは脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入されて選択部位にデリバリーされる。前記実施態様において、治療上有効な量の破傷風毒素は製薬上許容できる担体中に懸濁される。加えて、破傷風毒素は、凍結乾燥粉末の形態を有してもよい。
【００７９】
細胞活性の調節に関する前記方法の実施態様において、破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約０．００１単位〜約１０，０００単位である。
【００８０】
前記方法の他のより好ましい実施態様においては、破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１単位〜約５０００単位である。
【００８１】
前記方法の他の最も好ましい実施態様においては、破傷風毒素の治療上有効な量は、選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位である。
【００８２】
前記方法のそれぞれの特定の実施態様において、選択部位は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する。
【００８３】
さらなる他の態様においては、本発明は、治療上有効な量の破傷風毒素が選択部位へのデリバリーを目的とする製薬上許容できる担体中に懸濁されてなり、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約０．００１単位〜約１０，０００単位である、動物の細胞の細胞活性を調節することを目的とする薬剤配合物に関するものである。
【００８４】
他のより好ましい実施態様においては、本発明は、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１単位〜約５０００単位である、前記方法の薬剤組成物に関するものである。
【００８５】
さらなる他の最も好ましい実施態様においては、本発明は、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位である、前記方法の薬剤組成物に関するものである。
【００８６】
本発明の特定の実施態様においては、薬剤組成物は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する選択部位で投与される。
【００８７】
本発明の他の態様は、選択部位での動物の細胞活性を調節するために治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、該細胞活性はホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含み、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約０．００１単位〜約１０，０００単位である、動物の臨床的障害または症状を効果的に処置する方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。
【００８８】
好ましい実施態様において、本発明は、選択部位での動物の細胞活性を調節するために治療上有効な量の破傷風毒素を投与することを有し、該細胞活性はホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物を含む細胞成分の放出を含み、破傷風毒素の治療上有効な量が選択部位の約１単位〜約５，０００単位である、動物の臨床的障害または症状を効果的に処置する方法を目的とする薬剤の調製における破傷風毒素の使用に関するものである。最も好ましい実施態様においては、破傷風毒素の使用は、選択部位に対して約１０単位〜約１０００単位の治療上有効な量でである。破傷風毒素の前記使用において、選択部位は、悪性癌腫または炎症状態によって冒された組織または器官を有する。
【００８９】
本発明はまた、動物の選択部位に製薬上許容できる担体中に懸濁された破傷風毒素を投与することを有し、該破傷風毒素は痛みに関連する炎症性神経伝達物質若しくは神経ペプチドの放出を抑制するまたは可逆的に阻害するのに十分な治療上有効な量である、動物によって経験される痛みの軽減方法に関するものである。
【００９０】
他の態様においては、本発明は、動物の選択部位を制御する炎症性神経伝達物質または神経ペプチドの放出に影響を与える感覚ニューロンを神経支配除去する（ｄｅｎｅｒｖａｔｅ）のに十分な治療上有効な量の破傷風毒素を動物の選択部位に投与することを有する、動物によって経験される痛みの軽減または遮断方法に関するものである。
【００９１】
さらなる他の態様においては、本発明は、選択された筋肉の神経活性の増加または興奮応答を引き起こすのに十分な薬学上有効な量の破傷風毒素を筋肉の選択部位に投与することを有する、動物の筋肉量（ｍｕｓｃｌｅ ｍａｓｓ）の増加方法に関するものである。
【００９２】
本発明のこれら及び他の利点は、本明細書に記載される詳細な説明及び実施例から認識されるであろう。詳細な説明及び実施例は、本発明の理解を促進するものであるが、本発明の概念を制限するものではない。
【００９３】
本発明の詳細な説明
動物への有効な量の破傷風毒素の投与による動物の神経機能の調節を目的とする方法及び薬剤組成物が提供される。これらの方法及び組成物は、多くの臨床的障害または疾患の管理または処置に使用できる。
【００９４】
神経機能の調節または制御の文脈において、本明細書に使用される際の、「選択部位」は、標的ニューロンによって直接または間接的に影響を受ける（ａｆｆｅｃｔｅｄ）組織または器官を包含するものと規定される。非神経、細胞活性の調節の文脈において、「選択部位」は、ホルモン、神経若しくは血球由来の炎症性モジュレーター、コリン作動性分泌物（ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｃａｕｓｅｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ）、酸分泌物、呼吸（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｇｌａｎｄ）、消化若しくは尿腺（ｕｒｉｎａｒｙ ｇｌａｎｄ）からの粘液分泌物等の細胞成分の放出を含むことによって非神経細胞によって直接または間接的に影響を受ける組織または器官を意味する。
【００９５】
本明細書に使用される際の、「調節」ということばは、「制御」ということばで置き換えて使用され、必要条件まで調節する（ａｄｊｕｓｔ）または規制する（ｒｅｇｕｌａｔｅ）ことを意味する。
【００９６】
本明細書に使用される際の、「標的ニューロン」ということばは、選択部位での生理学的変化を引き起こすのに十分な治療上有効な量の破傷風毒素の存在によって直接または間接的に影響を受けるニューロンを意味する。標的ニューロンとしては、以下に制限されないが、特に神経伝達物質または神経ペプチドの取り込み、輸送または阻害に関連する感覚ニューロン、運動ニューロン、介在ニューロン、自律及び中枢神経性ニューロンとして機能的に明らかにされるニューロンが挙げられる。
【００９７】
「治療上有効な量」ということばは、破傷風毒素が標的とされる症状の出現率や重篤度を減少させるのに十分な無毒な量で投与されることを意味する。毒素がニューロンの緊張を増加するのに使用される際には、好ましい量は、反対の効果（神経支配除去）を引き起こすボツリヌス毒素の量と等しくてもよい。破傷風毒素が標的ニューロンの神経支配除去を引き起こすのに使用される際には、その量は、同等の効果を達成するのに必要なボツリヌス毒素の同量より約５００倍高くてもよい。
【００９８】
本明細書に使用される際の、「患者」ということばは、本明細書中に開示される組成物でおよび方法によって処置されるいずれかの動物を広範に意味する。特に、開示される方法及び組成物は、神経機能の調節が簡便であるまたは望ましい場合には、獣医の診療及び動物の例えば、鳥や哺乳動物の飼畜に用途があるであろう。「動物」ということばは、哺乳動物及び特にヒトを含む、動物界のすべてのものを包含する。
【００９９】
本発明の目的のために、破傷風毒素は、例えば、「Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｏｉｄ Ｐｕｒｏｇｅｎａｔｅｄ」の商品名でＷａｙｎｅ， Ｎ． Ｊ．所在のＬｅｄｅｒｌｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓで市販される。本発明の方法は、好ましくは、重及び軽鎖双方を含む完全な破傷風毒素の製薬上安全な形態、さらにはＡＢ断片等の、これの断片の使用を包含するであろう。タンパク質ならびに破傷風毒素の重または軽鎖部分のハイブリッドなどの他のタンパク質などの他の部分との組み合わせもまた本発明に包含される。
【０１００】
より詳細には、本発明の目的のために、破傷風毒素、およびこれの断片の使用が包含される。加えて、破傷風毒素の結合タンパク質部分を分離して、他のタンパク質を細胞中に入れられるように他のタンパク質と組み合わせて使用することが有益であるかもしれない。また、そうしなければ入ることができない細胞に毒素タンパク質を入れるために破傷風毒素の毒素タンパク質部分を他のタンパク質に結合させることも有益であるかもしれない。
【０１０１】
当業者は、どのようにして製薬上安全な形態の、好ましくは非催奇形性である形態の破傷風毒素を得るかを知っているであろう、または容易に確認できる。本発明の神経毒のほとんどでは、製薬上の安全性は線量依存性であるので、比較的低い投与量の毒素は発症させるのに十分であることが知られている投与量に比べて「安全」であろう。
【０１０２】
好ましくは、本発明の破傷風毒素は、製薬上許容できる担体における組成物として投与されるであろう。その目的のためには、シナプス前神経毒組成物が、望ましい純度の毒素を生理学上許容できる滅菌担体と混合することによって投与用に調製される。このような担体は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに無毒であろう。通常、このような組成物の調製は、神経毒を緩衝液、アスコルビン酸等の抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコースまたはデキストリン等の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート化剤、グルタチオンならびに他の安定化剤及び賦形剤と合わせることを必要とする。このような組成物はまた、凍結乾燥されてもよく、製薬上許容できる、即ち、適切に調製されて、所望の用途に使用されるのに容認されるであろう。
【０１０３】
他の薬剤と異なり、同重量の神経毒の生物学的活性は、一般的に、毒を生産する様々な実験間で異なる。この理由としては、すべての調製物から完全に他のタンパク質を除去できないまたは毒素の単離中に分子によってはその生物学的活性を失いやすいことがある。
【０１０４】
バイオアッセイによる測定が、破傷風毒素の標準的な調製物を得るのに一般的に使用される。破傷風毒素の毒性を測定するのに使用される一般的なバイオアッセイは、皮下注射された際に５０％のマウスを殺すのに必要な平均投与量である。この毒素量は、マウスのＬＤ５０、若しくはｍＭＬＤ（マウスの最小致死量）と、または単に破傷風毒素の単位と称される。
【０１０５】
神経毒の実験研究に一般的に使用される他のバイオアッセイとしては、マウスの半横隔膜調製（ｍｏｕｓｅ ｈｅｍｉ ｄｉａｐｈｒａｇｍ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）（Ｂｕｌｂｒｉｎｇ， Ｅ．， Ｊ Ｐｈｙｓ （Ｌｏｎｄｏｎ）， １， ３８−６１， （１９４６））がある。これは、マウスの横隔膜の半分及びこれを神経支配する神経から構成されるインビトロアッセイである。神経は電気的に刺激されて横隔膜を収縮させ、神経筋の伝達物質を遮断する際の様々な毒素製剤の効果を正確に測定できる。この特定のアッセイの利点としては、研究者さらには臨床医に一般的に興味のある神経の連結である、神経筋接合部での毒素の効果を正確に測定することである。
【０１０６】
ワクチン製剤以外では、破傷風毒素は商業的に使用されない；単位を構成する一般的な標準物質がない。代わりに、単位は、０．３ｎｇ／ｋｇから２５ｎｇ／ｋｇまで変化することがＨａｂｅｒｍａｎ， ｅｔ ａｌ．によって報告された（Ｈａｂｅｒｍａｎｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１１（１）， ３３−４０， （１９８０））。局所的な効果に必要である破傷風毒素の量は、所望の興奮性または阻害性作用、神経組織の特定の型（Ｍｏｎｔｅｃｕｃｃｏ， Ｃ． ａｎｄ Ｇ． Ｓｃｈｉａｖｏ， Ｑ Ｒｅｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ， ２８（４）， ４２３−７２ （１９９５））、効果が望ましい組織または器官の大きさ、注射される物質、神経の活性、温度（Ｈａｂｅｒｍａｎｎ， Ｅ．， Ｆ． Ｄｒｅｙｅｒ， ａｎｄ Ｈ． Ｂｉｇａｌｋｅ， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１１（１）， ３３−４０， （１９８０））および他の因子によって変化するであろう。
【０１０７】
破傷風毒素の単位を構成する絶対的な標準重量は存在せず、破傷風毒素は臨床用途では使用されていなかったため、標準物質を採用する強制的な理由がなかった。破傷風毒素の将来的な臨床用途では、供給メーカー（ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｖｅｎｄｏｒ）が単位服用量形態の破傷風毒素の標準化されかつ安定した製剤を製造、配布する必要があるかもしれない。現在では、標準物質はなく、様々な会社または実験室で一般的に使用される単位を構成する破傷風毒素の重量は約０．１ｎｇ〜１００ｎｇの範囲であり、ほとんどは約１ｎｇである。この理由により、本発明で使用される際には、破傷風毒素の１単位は、０．０２ｎｇの破傷風毒素を意味する。
【０１０８】
ＢＴとは逆に、ＴＴは、臨床用途で使用されていなかった。ＴＴがＢＴに比べて潜在的にかなりより臨床的に有用となる様々な特別な性質を有するので、これは驚くべきことである。まず、これは、すべてのクラスのニューロン：運動、自律、及び感覚ニューロンに結合する。これに対して、ボツリヌス毒素は、運動ニューロンに結合する。第二に、ＴＴは、中枢神経系に運ばれる。毒素は末梢神経、ほとんど運動ニューロンに結合するものの、これは末梢ニューロンを中毒にすることによって一次効果を引き起こさない。代わりに、この毒素は、運動ニューロンの軸索内で脊柱や脳幹中に位置するその細胞体に運ばれる。ここで、運動ニューロンは毒素を放出して、シナプスを通過して、中枢神経系のニューロン中に結合して入る。第三に、これは、すべてではないが、ほとんどの神経伝達物質：アセチルコリン、ノルエピネフリン、エピネフリン、ドーパミン、グルタミン酸塩、ＧＡＢＡ、グリシン、セロトニン、さらには神経ペプチドＣＧＲＰ、神経ペプチドＹ、Ｐ物質など；ならびに神経内分泌ホルモンオキシトシン、バソプレシンの放出を遮断する。中枢神経系では、毒素は主に神経伝達物質ＧＡＢＡ及びグリシンを使用するニューロンに結合する。結合後は、毒素はこれらのニューロンに入り、これらの神経伝達物質の放出を遮断する。ＧＡＢＡ及びグリシンを含むニューロンは、中枢神経系の阻害性ニューロンである。一般的に、運動ニューロンは多くの阻害性及び興奮性ニューロンからのインプットを受け取り、これらの対立する影響は相互に打ち消しあう。しかしながら、阻害性ニューロンが遮断された後は、興奮性ニューロンが対立しない運動ニューロンを刺激できるため、運動ニューロン活性が上がってこれらの中毒にかかった運動ニューロンによって神経支配された筋肉内の活性が向上する。臨床上では、これは最終段階で絶え間ない痙攣に達する筋肉の緊張の増加として見られる。第四に、ＴＴは、末梢及び中枢神経の活性の増加ならびに使用される投与量によってはこれらの同じ神経の遮断を引き起こすことができる。
【０１０９】
破傷風毒素の作用メカニズムとしては、この使用によって誘発される興奮作用が間接的であることがある。破傷風毒素は、筋肉を神経支配する運動ニューロン等の末梢ニューロンに吸収され、脊柱内の運動ニューロンの細胞体に運び戻される。次に、これはシナプス前空間に放出される。運動ニューロンは興奮性または阻害性のいずれかの多くの他のニューロンに連結する。正常な状態では、これらのインプットは運動ニューロンが適当な筋肉の運動を行なうのに十分なくらい興奮されるように均衡がとれている。阻害性ニューロンは神経伝達物質であるグリシンまたはＧＡＢＡを使用し、破傷風毒素はこれらのニューロンに結合した後、遮断する（Ｂｉｇａｌｋｅ， Ｈ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１６（２）， １４３−８， （１９８１））。阻害性ニューロンが遮断されると、興奮性インプットのみが残り、筋肉の活性が向上する。
【０１１０】
各筋肉は興奮及び阻害の様々な混合を有する。例えば、咬筋はかなりの興奮性インプットを有する筋肉である。破傷風毒素が咬筋を供給する運動ニューロンへのすべての阻害性インプットを遮断すると、非常に強力でかつ長期間の痙攣になる。咬筋のこの痙攣は顎の閉めを固く結び、全身性疾患を意味する「破傷風（ｌｏｃｋｊａｗ）」ということばの由来となる。
【０１１１】
ほとんどの筋肉用途では、破傷風毒素を注射して、長期間の痙攣を得ることは望ましくない。代わりに、一般的に必要なのは、筋肉の緊張の増加をやわらげる温和（ｍｉｌｄ）である。したがって、非常に低い投与量が局所的な興奮用途で使用される。例えば、ネコの後脚に後肢の下腿３頭筋中に１．５ｎｇを注射した場合には、破傷風毒素は約１週間後に肢の不完全な伸展を発症させた（Ｔａｋａｎｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｎ ２７（４）， ４３１−８， （１９８９））。７．５ｎｇ以上を注射したところ、ネコの肢は動物が解消できないようなこわばった連続的な痙攣で伸展したままであった。
【０１１２】
同様にして、ヒトの筋肉または他の標的組織での興奮用途は、筋肉の大きさならびに興奮性及び阻害性インプットの根本的な神経混合によって０．００１〜１０ｎｇの範囲の投与量を必要とする。所望の適用を達成するために、当業者は、前記範囲の下限での量を使用することで始め、待って効果を観察することが有用であることを理解する。適当なレベルが達成されるまで破傷風毒素の量を次々増やしていってもよい。
【０１１３】
破傷風毒素はまた、神経筋接合部で直接末梢神経の伝達を遮断して、弛緩性麻痺を引き起こす。実験から、この直接的な神経の遮断効果は、興奮を引き起こすのに使用されるのに比べて約５００倍多くの破傷風毒素必要とすることが示される（Ｈａｂｅｒｍａｎｎ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ３１１（１）， ３３−４０， （１９８０））。興奮または阻害の異なる効果を生じるこの投与量の大きな不一致の理由は不明である。
【０１１４】
局所的な麻痺はその効果を達成するために０．５〜５０ｎｇの破傷風毒素またはそれ以上を必要とするので、これらの量は免疫処置されないヒトの致死量に近いまたはこの量を超える。免疫処置されないヒトの致死量は、約２．５ｎｇ／ｋｇまたは７０ｋｇのヒトで１７５ｎｇである。したがって、神経の遮断のための破傷風毒素の使用は少量の毒素を必要とするより小さな標的に限定されてもよい。したがって、破傷風毒素を投与する前に知られているヒトの免疫状態を確認することは重要である。全員の免疫処置がアメリカ合衆国及びほとんどの工業国で行なわれている。免疫状態は破傷風抗体の国際単位で測定される。０．１ＩＵ／ｍｌを超える血漿中の抗体含量は、全身性破傷風に対して保護的であると考えられる。免疫状態のレベルは免疫処置後は高く、次の数年間で徐々に下がる。研究から、ワクチン接種された成人ヒトの半分が０．１ＩＵ／ｍｌ未満であることが示された。このようなヒトは恐らく免疫レベルを上げるために追加のワクチン接種が必要であろう。
【０１１５】
破傷風毒素は、局所麻酔と同様、神経の軸索での活動電位をも遮断できる。その結果、破傷風毒素はその経過に沿って神経に注射して遮断するのに使用できるため、臨床上の有用性が増す。ボツリヌス毒素とは異なり、破傷風毒素はニューロン軸索の膜に結合する（Ｈｅｒｒｅｒｏｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ９（１２）， ２６７７−８６， （１９９７））。局所的な破傷風の動物実験モデルから、注射された筋肉から軸索の外の脊柱に戻る神経の経過に沿った多量の毒素が示される（Ｅｒｄｍａｎｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ， Ａｒｃｈｉｖｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ２９０（４）， ３５７−３７３， （１９７５））。局所的な破傷風を有する患者の生理学的な研究から、神経の伝導は抑制または遮断され、これはシナプスでの遮断とは別の効果であることが示唆される（Ｄａｓｔｕｒ， Ｆ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ， Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ Ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ４０（８）， ７８２−６ （１９７７））。
【０１１６】
また、多くの報告された注射は、筋肉内の適切な極在化のために筋電図の使用を必要とするかもしれない。これは、針の先端を用いて筋肉活性を検出し、多くのボツリヌス毒素注射で定常的である。
【０１１７】
予想されなかったことに、破傷風毒素の大量の注射は全身性または局所的な拡散を伴わずに筋肉内になされる。部分的には、これは、神経膜に対して破傷風毒素が有する非常に高い親和性により、これによりニューロンと迅速に結合するためである （Ｃｒｉｔｃｈｌｅｙ， Ｄ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ， １００（５）， １４９９−５０７ （１９８５））。さらなるメカニズムが副作用の危険性を減らすのに使用できる。一例としては、アドレナリン１：１００，０００倍希釈液、フェニレフリン１／２％または他の血管収縮剤の注射液への添加がある。これらは、一時的な局所的な血管収縮及び血流量の減少を引き起こすため、破傷風毒素が体循環に入る機会を減少するであろう。
【０１１８】
本発明で使用できる他の血管収縮剤としては、以下に制限されないが、エピネフリン、ノルエピネフリン、またはエピネフリルボレート（ｅｐｉｎｅｐｈｒｙｌ ｂｏｒａｔｅ）が挙げられる。
【０１１９】
他のさらなる用法注意としては、大量が局所的に注射される際の破傷風毒素の全身性拡散を防止するようにすることがある。例えば、破傷風抗毒素を、ある時間遅らせてであるが破傷風毒素の注射部位と同じ部位にまたは異なる部位のいずれかに、注射してもよい（Ｆｅｚｚａ， Ｊ．Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， Ｏｐｔｈａｌｍｉｃ Ｐｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ， １６（２）， １０１−１１３， （２０００））。ウサギでは、一般的な２ｋｇのウサギでの破傷風毒素の致死量は約１〜１０ｎｇまたは０．５〜５ｎｇ／ｋｇである。しかしながら、２５ｎｇ、致死量の２，５００〜２５，０００倍の注射液が、口輪筋中に安全に注射された。この実験では、２５０ＩＵの破傷風抗毒素を、後脚の筋肉中に同時に筋肉内注射して、全身への拡散を遮断した。５日目に、これらの動物は毒性の局所的または全身の拡散なく注射された眼瞼の不全麻痺を示した。明らかに、これは投与量の最大限でであり、破傷風毒素の量を１２５ＩＵにまで減少する、または破傷風毒素の注射量を３７．５ｎｇにまで増加するのいずれかのスペクトルにより、毒性の局所的または全身の兆候がでた（Ｆｅｚｚａ， Ｊ．Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， Ｏｐｔｈａｌｍｉｃ Ｐｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ， １６（２）， １０１−１１３， （２０００））。
【０１２０】
特定の好ましい実施態様においては、破傷風毒素は、運動ニューロン機能を制御するのに使用される。例えば、毒素を、標的領域での運動ニューロンの神経活性を向上するのに十分な量体内（例えば、特定の筋肉）の特定の標的部位に局所的に投与する。次に、これにより当該ニューロンによって神経支配される筋肉細胞の神経刺激が上がる。これにより、筋肉の緊張が増し、神経が短い長さで固定化される場合には、迅速に短い長さに適応するであろう（Ａｂｅ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｃｔａ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ （Ｓｔｏｃｋｈ）， １１２ （４）， ７０３−９， （１９９２））。または、破傷風毒素の量を調節することによって、反対の効果、例えば、ニューロンの神経支配除去を得てもよい。臨床上有益な効果のためには、治療上有効な量の破傷風毒素が投与される。
【０１２１】
好ましい実施態様においては、緊張を増すために低濃度の破傷風毒素が、オトガイ舌筋、オトガイ舌骨及び口蓋帆筋（例えば、睡眠無呼吸の処置を目的として）；嚥下困難を有する患者の嚥下を補助するために、咽頭筋；副棘筋（ｐａｒａｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｌｅ）（例えば、側彎の処置を目的として）；外眼筋（例えば、斜視の処置を目的として）；固定化肢の筋肉（例えば、長期のギプス包帯固定中の萎縮を防止するため）；筋肉の緊張を回復するためにＡＬＳ等の麻痺性の神経疾患の異なる筋肉に；下部食道括約筋（例えば、食道の逆流を制御するため）；胃の筋肉（例えば、胃の拘縮及び食欲減退のため）；顔面筋（例えば、緊張の増加及び若々しい外見のため）；運動の代わりとして筋肉量を増加するための標的筋肉に投与される。
【０１２２】
他の好ましい実施態様においては、緊張を減少するために高濃度の破傷風毒素が、顔面筋または眼瞼の痙攣を抑制するために顔面筋に；筋筋膜疼痛及び頭痛を処置するために側頭筋に；斜頚及び子宮頚部のジストニーを処置するために、子宮頚部の筋肉に；筋ジストロフィ、ＡＬＳ、重症筋無力症のための様々な標的筋肉；肢の筋肉（例えば、脳卒中後に見られるような、上位運動ニューロンの病変から生じる痙攣または拘縮を処置するために）；歯軋りを抑制するために顎筋に；痙性発声障害及び外傷性状態を処置するために喉頭筋に；書痙を処置するために前腕筋に；夜間の攣り（ｎｉｇｈｔ ｃｒａｍｐ）を処置するために脚の筋肉に；運動神経の分枝形成の促進が外傷性の神経の損傷後の神経の再生中などで有用であるいずれかの筋肉に投与される。
【０１２３】
特定の実施態様においては、破傷風毒素は、自律神経系の特定部分（例えば、標的組織または器官）に局所的に投与されて、この領域でのニューロンの活性を制御し、さらに当該ニューロンによって神経支配される標的自律神経系に影響を与えてもよい。
【０１２４】
特定の実施態様においては、破傷風毒素は、その領域でのニューロンの活性を向上するのに十分な治療上有益な低い量を、標的自律神経系（例えば、組織または腺）に局所的に投与する。これにより、当該ニューロンによって神経支配される細胞（例えば、組織または腺）の刺激が増加する。破傷風毒素は、口内乾燥、乾性眼及び萎縮性膣炎を処置するために唾液、涙及び膣腺に；ミルクの生産を増加するために乳腺に；鼻充血及びアレルギー性症候を処置するために鼻粘膜に；勃起を持続させ、インポテンスを処置するために脈管系組織に；ホルモンの生産を増すために膵臓及び他の内分泌腺に；運動性を向上させて便秘を処置するために結腸及び他の胃腸器官に；喘息及び慢性の閉塞性疾患における平滑筋を弛緩するために肺の交感神経に；胃の収縮を引き起こし及び満腹感を出して食欲を減退させ体重を減少させるために胃の平滑筋に；漿液粘液の生産（ｓｅｒｏｕｓ ｍｕｃｏｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）及び線毛の輸送を増加して嚢胞性線維症を処置するために肺の粘液腺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｕｃｕｓ ｇｌａｎｄ）に； 脂肪分解及び脂肪細胞の収縮を起こすために脂肪組織に投与されてもよい。
【０１２５】
特定の実施態様においては、より高い量を自律神経活性を抑制するために使用してもよい。臨床で使用する際には、破傷風毒素は、脱毛症を処置するために毛嚢に；増大した前立腺を収縮させるために前立腺に；代謝を改善して老齢者の弛緩した皮膚を処置するために結合組織に；痛覚及び炎症を抑制するために傷んだ線維（ｐａｉｎ ｆｉｂｅｒ）に；乾癬やアトピー性皮膚炎等の増殖性またはアレルギー性疾患の皮膚に；アクネを処置するために皮膚の皮脂腺に；耳垢を減らすために耳管の皮膚（ｅａｒ ｃａｎａｌ ｓｋｉｎ）の皮脂腺に；血圧を下げるために循環系の交感神経に；胸腺及び脾臓、リンパ節、または神経免疫相互作用が存在する組織における免疫応答を神経修飾するために；外来抗原の認識を防止して寛容を生じるために皮膚、消化管または粘膜に；その大きさを減少するために扁桃腺に；体液の生産を減らして高眼圧を処置するために前眼房に；逆流性食道炎における酸の生産を減少するために胃の粘膜に；鼻漏を減少するため、及び肥満細胞のヒスタミンの放出への神経の影響を抑制してアレルギー性の症状を抑制するために鼻粘膜に；血管拡張ニューロンを遮断して真性片頭痛を防止するために翼口蓋神経節に、治療上有効な量、投与される。
【０１２６】
特定の好ましい実施態様においては、破傷風毒素は、鼻充血鼻漏及びアレルギー症状を処置する（Ａｄｏ， Ａ．Ｄ．， Ｅｋｓｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｎａｉａ Ｉ Ｋｌｉｎｉｃｈｅｓｋａｉａ Ｆａｒｍａｋｏｌｏｇｉｉａ， ５８ （３）， ４３−５ （１９９５）； Ａｌｂｅｇｇｅｒ， Ｋ．， Ｈｎｏ， ３６ （１０）， ３８９−９８ （１９８８）； Ａｇｒｏ， Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ５ （３）， ３１１−９， （１９９５））、免疫応答を調節する（Ａｄｏ， Ａ．Ｄ．， Ｖｅｓｔｎｉｋ Ｒｏｓｓｉｉｓｋｏｉ Ａｋａｄｅｍｉｉ Ｍｅｄｉｔｓｉｎｓｋｉｋｈ Ｎａｕｋ， （７）， ４８−５１ （１９９３）； Ａｌｂａｎｅｓｅ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｖ Ｄｉｓｏｒｄ， １２（５）， ７６４−６， （１９９７））、便秘時の肛門括約筋を弛緩する（Ｓａｂｂａｄｉｎｉ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ， ２ （４）， １８４−２０２， （１９９５））、ペニス勃起に影響を与える、様々な器官における炎症及び痛みを抑制する、乾癬等の病気における皮膚の増殖を抑制する、抗原の寛容（ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を誘発する、血圧を下げる、片頭痛を抑制する、唾液の分泌を向上する若しくは抑制する、発汗を抑制する、前立腺の大きさを減少する、結合組織を増加する、ならびに脱毛を制御するために、治療上有効な量を標的自律神経系に投与される。
【０１２７】
特定の実施態様においては、破傷風毒素は、可逆的な感覚の遮断を行なうために感覚ニューロンに投与される。このような使用の一用途としては、例えば、痛みを遮断または抑制するのに有効な量を局所的に投与することによって、身体のある部分から痛みを遮断することがある。他の実施態様としては、例えば、リウマチ様関節炎で治療上有益な量を関節に局所的に投与することによって、感覚ニューロンによって放出される炎症メディエーターを遮断することがある。
【０１２８】
特定の他の実施態様においては、破傷風毒素は、直接または末梢神経からの逆行性輸送の結果としてのいずれかで、中枢神経系の部分に適用される。
【０１２９】
特定の他の実施態様においては、破傷風毒素は、有益な効果のために非神経細胞に投与される。これらとしては、炎症を抑制するためにマクロファージ及び他の白血球、ホルモンの分泌を抑えるために内分泌細胞、酸の生産を減少するために胃壁細胞、緑内障での眼内圧を減少するために眼の体液産生細胞、運動性及び転移を減らすために悪性細胞が挙げられる。
【０１３０】
本発明はまた、例えば、標的家畜動物の筋肉量を増加するための、破傷風毒素の家畜への使用に関するものである。これとしては、ミルク及び肉の生産が挙げられる。
【０１３１】
本発明によると、破傷風毒素は、様々な投与形式によって投与されてもよい。局所的に投与される場合には、投与形式としては、以下に制限されないが、注射（加圧ジェット注射を含む）、エアロゾル（鼻、上気道または肺への投与を目的とする）、局所適用（皮膚及び粘膜上ならびに内体表面上（外科手術中または外傷の処置中など）開放創、ならびに管（唾液、乳腺、涙管）または体の開口部（尿道、肛門、経口）への点滴注入によるものが挙げられる。
【０１３２】
特定の標的部位に局所的に投与される場合には、破傷風毒素は、好ましくは全身効果を有さずに、その領域のニューロンの活性に影響を与える。破傷風毒素は軸索によって吸収されるので、神経によって神経支配される異なる器官または組織によって受けられる神経活性を遮断または向上するために、神経の経路に沿って投与されてよい。好ましい実施態様においては、破傷風毒素は、体内の標的部位に局所的に投与される。しかしながら、場合によっては、局所的な適用によって、毒素の広範な分布を故意に生じうる場合がある。例えば、局所的な適用は、中枢神経系の大部分に分布するように、髄液に対して；または動脈に灌流する体部分に分布するように動脈中にであってもよい。特定の実施態様においては、破傷風毒素の適用は、例えば、身体中に分布するように体循環中への、全身性であってもよい。
【０１３３】
薬理学的なレベルでの破傷風毒素の局所的な適用によって、局所的な神経末端によるその吸収および中枢神経系（ＣＮＳ）へのその逆行性輸送が起こる。局所的な適用は、以下に制限されないが、注射、例えば、加圧ジェット注射、及び塗布（ｔｏｐｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）などの、すべてのデリバリー手段を含む。ＣＮＳでは、破傷風毒素はシナプスを介して（ｔｒａｎｓｙｎａｐｔｉｃａｌｌｙ）運ばれ、阻害性ニューロンに結合する。その結果、末梢ニューロンの脱抑制が起こり、その活性が上昇する。増加の正確な量及びそのパターンはその特定のニューロンの生物学に関連する。家畜用途等のＣＮＳに広範に分布させるためには、毒素を髄液中に直接注射してもよい。
【０１３４】
毒素を必要な膜レセプターのない細胞に投与する場合には、毒素をリポソーム、脂質二分子膜を有する人工ベシクル中に封入してもよい。ベシクルは注射の領域で細胞と同化し（ｍｅｒｇｅ）、内部に毒素をデリバリーする。特異性を向上するために、リポソームの表面を標的細胞にリポソームを特異的にドッキングできる抗体や糖タンパク質等の特定のタンパク質で被覆してもよい。
【０１３５】
実施例
本発明をさらに下記実施例において説明する。実施例は、本発明の概念に含まれる生成物のあるものおよびこれの作製方法を詳細に説明するものである。いうまでもなく、これらは本発明の概念を限定するものと解されるものではない。多数の変更及び修飾が本発明に関してなされる。下記実施例で使用される材料は容易に市販される。
【０１３６】
破傷風毒素の興奮性筋肉内用途を実施例１〜１８で詳細に述べる。破傷風毒素の適用によって誘発される阻害応答を実施例１９〜３７で詳細に述べる。自律神経系の神経での緊張の増加は多くの場合望ましい。この作用メカニズムは筋肉内で観察されるものと同様である。注射部位からの逆行性輸送は阻害性輸入インプット（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｐｕｔ）を引き起こす。実施例３０、３３及び３８では、ホロクリン分泌である内分泌細胞及びマクロファージの細胞活性を調節または制御するための破傷風毒素の使用が詳細に述べられている。
【０１３７】
実施例１
睡眠無呼吸及びいびき
本実施例では、いびき及び閉塞性の睡眠無呼吸を有する６０歳齢の男性に、口腔底の粘膜を介して針を通すことによって破傷風毒素を注射する。１単位の破傷風毒素を双方のオトガイ舌筋に注射した。オトガイ舌骨筋に入るまで針をさらに進め、各筋肉にさらに１単位注射した。針を除いて、硬口蓋の端２ｃｍ以内の軟口蓋の口腔粘膜に再挿入した。１単位の破傷風毒素を各挙筋に注射する。１週間以内に、睡眠中のいびき及び閉塞の発生率は減少する。
【０１３８】
睡眠無呼吸及びいびきは、オトガイ舌筋および／またはオトガイ舌骨筋、張筋及び口蓋帆挙筋に作用する臨床的状態である。睡眠無呼吸は、上気道（舌及び軟口蓋）の軟組織が吸気中の空気の流れを妨げることにより空気流及びその領域の軟組織の振動が一部閉塞する（いびき）または空気流が完全に閉塞する一般的な疾患である。閉塞の結果としては、睡眠パターンの障害、いびき、昼間の傾眠、集中しにくさがあり、気分の低下、高血圧、及び心臓病の原因となる。閉塞性睡眠無呼吸の病態生理としては、オトガイ舌筋及び他の上気道筋肉の活性の減少がある。オトガイ舌筋が舌根に挿入して、相動性活性（ｐｈａｓｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を、舌を前に動かして気道を拡張する吸気と同調させる。オトガイ舌骨筋は舌骨に入り、同様の吸気活性を有する。張筋及び口蓋帆挙筋もまた、軟口蓋をかなり移動する吸気活性を有する。本実施態様では、オトガイ舌筋および／またはオトガイ舌骨筋、張筋及び口蓋帆挙筋への１単位の破傷風毒素の投与（例えば、注射）により、相動性運動（ｐｈａｓｉｃ ｍｏｔｉｏｎ）の幅が増加し、及び気道の閉塞が抑制されうる。
【０１３９】
実施例２
側彎−副棘筋（ｐａｒａｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｌｅ）
側彎、脊椎の彎曲に罹っている１０歳の女性患者を、副棘筋中に１００単位の破傷風毒素を注射することによって処置する。１〜３日で、患者は筋肉の緊張の増加を示し、脊椎がまっすぐになる。
【０１４０】
側彎で起こる脊椎の発達上の調整不良（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｍｉｓａｌｉｇｎｍｅｎｔ）は、脊椎をまっすぐにするであろう適当な筋肉中への破傷風毒素の投与（例えば、注射）で修正できた。筋肉活性の長期間の増加による骨のこのリモデリングには数多くの他の用途がある。他の例としては、顔の骨を再配置するために頭蓋顔面筋からの興奮応答を得ることがある。
【０１４１】
実施例３
斜視
斜視を患っている、または眼の配置が不適切である、５歳の男性患者を、位置不良の眼（ｍｉｓａｌｉｇｎｅｄ ｅｙｅ）の内側直筋への０．１単位の破傷風毒素の注射によって処置する。１〜３日で、眼は一直線に移動する。本実施例は、再配置が筋肉の軟組織で起こる以外は実施例２に記載されるのと同様の概念を説明するものである。外直筋または他の適当な筋肉中への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、緊張活性を増加し、眼球の配列をまっすぐにする。
【０１４２】
実施例４
筋肉の萎縮の防止
２５歳の男性患者は、大腿骨が骨折しており、６週間、脚をギブス包帯される予定である。１０単位の破傷風毒素を大腿の各筋肉に注射する。１〜３日後に、固定された筋肉の緊張が増加する。６週間後に、ギブス包帯を除いたところ、筋肉は予想より萎縮を示さない。
【０１４３】
重篤な骨折または靭帯断裂後に、ギブス包帯及び固定により、固定された肢の筋肉が萎縮してしまう。この望ましくない副作用は、その緊張を増し、萎縮を防止するためにギブス包帯前に筋肉に破傷風毒素を投与（例えば、注射により）することによって防止される。
【０１４４】
実施例５
食道の逆流（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ）−下部食道括約筋
下部食道括約筋では、逆流性食道炎に冒されている５０歳齢の男性に、１単位の破傷風毒素を注射する。３日で、逆流性酸度の症状は抑制される。
【０１４５】
下部食道括約筋の弛緩によって、酸分が食道上部に逆流する。この一般的な医療上の問題は、下部食道括約筋への破傷風毒素の投与（例えば、注射）によって防止されうる。この実施例から、緊張の増加は食道の逆流の発生を防止することが示される。
【０１４６】
実施例６
膀胱または便（ｂｏｗｅｌ）失禁−括約筋
尿失禁のある５０歳齢の女性の外（陰部神経）及び内（下腸間膜動脈神経節の交感神経軸索）尿道括約筋に、１単位の破傷風毒素を注射する。３日で、これらの括約筋における筋肉の緊張の増加が尿失禁を緩和する。
【０１４７】
関連する実施例では、尿失禁のある５０歳齢の男性の尿道括約筋に、膀胱鏡を用いて直接見ながら１単位の破傷風毒素を注射する。１〜３日で、尿失禁の症状は改善する。
【０１４８】
多くの医学的な状態は、失禁、尿または便の内容物を含んでおくことができないことをもたらす。括約筋の緊張の減少が問題である場合には、括約筋への破傷風毒素の投与（例えば、注射）が緊張を増加しうる。注射されうる別の括約筋としては、膣口、幽門括約筋、及び上部食道括約筋がある。
【０１４９】
実施例７
胃の拘縮および食欲の減退
肥満の４０歳齢の女性の胃壁の平滑筋および／または幽門括約筋に、内視鏡を用いて直接見ながら１００単位の破傷風毒素を注射する。１〜３日後に、彼女は、十分な満足感を感じ、食欲が減退する。
【０１５０】
満足感は少なくとも部分的に胃の膨満によることは知られている。外科的な方法が、胃の大きさを外科的に減少することによって効果の利点を得るように設計されてきた。代わりに、破傷風毒素の投与（例えば、注射）が胃壁になされてもよい。平滑筋の神経支配で誘導される緊張の増加は、経時的に、その大きさを減らすであろう。この効果としては、より少量の食物の摂取後の満足感がある。
【０１５１】
実施例８
筋ジストロフィー、ＡＬＳ、重症筋無力症
多くの神経疾患及び老齢化は、筋肉への輸出活性の減少と関連する。最小限の数の運動軸索が存在している限り、この活性は破傷風毒素の投与（例えば、注射）で増加しうる。特定の筋肉は、病気の状態に依存するが、すべての骨格筋を包含する。
【０１５２】
実施例９
筋拘縮
脳血管発作後に右腕の痙攣性収縮に見舞われた６０歳齢の女性の右腕の３頭筋に、１０単位の破傷風毒素を注射した。１〜３日後に、拘縮の症状が抑制され、腕はより伸長する状態になる。
【０１５３】
拘縮、発作及び他の上位運動ニューロンの損傷によって、肢の筋肉ならびに特に上肢の屈筋及び下肢の伸筋の脱抑制が起こる。破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、拘縮とは反対の筋肉の緊張を増加でき、これにより、肢がよりニュートラル位置になる。
【０１５４】
実施例１０
顔面筋の緊張
７０歳齢の女性患者の各口輪筋に、全部で１単位の破傷風毒素を分けて注射する。３日で、筋肉の緊張が改善され、眼周辺の組織の弛緩が抑制される。
【０１５５】
本実施例から、顔面筋への破傷風毒素の投与により、緊張が増加して患者の外見が若々しくなることが示される。若々しい外見は顔面筋の良好な緊張によるものである。老齢者では、この緊張が顔面筋への投与（例えば、直接注射による）によって改善できた。使用されるこの処置に有効であろうと最も考えられる筋肉は、笑う筋肉である笑筋及び方形筋ならびに眼窩周囲筋（ｐｅｒｉｏｒｂｉｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ）である。これらの筋肉の緊張の増加は、老齢者で見られる皮膚の余分なしわを平らにし、眼瞼形成術の代わりとして非常に使用される。
【０１５６】
実施例１１
運動の代わりとしての筋肉量の増加
２５歳齢の重量挙げの選手の両方の２頭筋に、１０単位の破傷風毒素を注射する。１〜３日で、２頭筋の緊張が増す。１〜６週間で、筋肉の量及び強さが増加する。
【０１５７】
筋肉の緊張および／または量の増加は、通常、美容面の、競争面の、予防面のまたはリハビリ面の理由により望ましい。運動の効果を望むものは、もっぱら緊張を増し、肥大を生じることを目的として２頭筋等の有益な筋肉に注射を受けるであろう。競技の選手では、同じ方法が機能的な効果のために使用できる。一例としては、一般的な運動では修正できず、破傷風毒素の注射受けることによって有益でありうる（ｂｅｎｉｔｅ）特定の腕の筋肉の相対的な弱さを有する重量挙げの選手がある。場合によっては、筋肉の緊張の増加は、美容上および医学上双方で望ましい。一例としては、腹壁の筋肉がある。腹壁の筋肉の弱さは、腹をたるませ、また、患者の背に障害をおわせやすくする。腹筋への破傷風毒素の注射は腹壁の緊張を増して平らにし、脊柱の配列を補助する。
【０１５８】
実施例１２
嚥下困難による咽頭の病的興奮
脳血管発作後に嚥下困難になった６０歳齢の女性の下及び中咽頭収縮筋に、１単位の破傷風毒素を注射する。１〜３日後に、嚥下困難の症状が改善する。
【０１５９】
実施例１３
鼻充血抑制−鼻粘膜
本実施例では、長期間続くアレルギー性鼻炎により鼻充血のある２０歳齢の男性の各鼻甲介を覆う粘膜に、１単位の破傷風毒素を注射する。１週間後、充血はかなり抑制する。
【０１６０】
鼻充血は、アレルギー性及び感染性鼻炎の主要な症状であり、すべての医療の中で最も一般的な苦情である。鼻腔内の鼻甲介を覆っている粘膜は、一部血流の変化の結果厚みを変えることができる。充血抑制（ｄｅｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ）のメカニズムは、交換神経系の活性の増加に関わる。詳しくは、鼻粘膜への交感神経の緊張の増加は、細動脈及び細静脈の平滑筋を収縮させて、粘膜を縮ませる。
【０１６１】
本実施例から、鼻粘膜への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は鼻充血抑制を生じることが示される。
【０１６２】
実施例１４
ペニス勃起および射精
糖尿病性ネフロパシーによりインポテンスである４０歳齢の男性のペニスの基部に、１単位の破傷風毒素を注射して、自律神経さらには坐骨海綿体及び球海綿体筋への外陰の運動神経の神経活性を増加を起こす。１週間で、患者は興奮時に勃起を維持できる。
【０１６３】
ペニス機能の制御は、副交感及び交感神経支配双方の複合して混合したものである。仙骨神経叢からのコリン作動性交感神経は、勃起を可能にする血管拡張を引き起こす。アドレナリン作動性交感ニューロンは、精管及び精嚢の平滑筋を活性化する。射精は、交感神経応答である。尿道球腺及び前立腺の分泌物は、副交感神経の制御下にある。様々な医学的な理由による自律神経の機能不全はインポテンスを引き起こしうる。
【０１６４】
適当な自律交感神経の活性を制御するための破傷風毒素の適用により所望の結果が得られることが、本実施例から明らかである。
【０１６５】
実施例１５
結合組織の増加
７０歳齢の女性の顔の皮膚の様々な四半分に、４つの別の注射液でデリバリーされた全１単位の破傷風毒素を注射する。神経活性の増加により、皮膚の皮層が厚くなり、外見がより若々しくなる。
【０１６６】
結合組織は、線維芽細胞または筋線維芽細胞によって形成される。皮膚領域への運動及び神経の供給の神経支配除去は皮膚の厚みをかなり減少することは知られている。皮膚への神経の供給の活性は、明らかに結合組織の生産を刺激する。
【０１６７】
本実施例から、破傷風毒素が結合組織を増加し、これによりより若々しい外見にするために皮膚の皮層に適用（例えば、注射）できることが示される。
【０１６８】
実施例１６
脱毛
壮年性脱毛症である５０歳齢の男性の頭皮のはげている領域に、０．２５単位の破傷風毒素を含む注射液で複数回注射する。１ヶ月で、患者は、この領域に初期の再発毛に気づく。
【０１６９】
脱毛は、毛嚢への自律神経支配の活性の減少に一部よるものと考えられる。ラットでの実験から、発育相（発毛）が毛嚢周辺の神経内の自律神経活性の増加と関連することが示される。脱毛領域の皮膚への破傷風毒素の投与（例えば、注射）が自律神経活性を増加して、脱毛を遅延するまたは逆転することが見出される。
【０１７０】
実施例１７
破傷風毒素の家畜への使用
ウシ、ヤギ、ヒツジ、コヒツジ、ブタ、家禽、魚、無脊椎動物及び他の動物はすべて、肉のために育てられ、収穫される。ほとんどの場合、これらの動物から収穫される重要な肉は、筋肉である。筋肉の大きさを増加することは肉生産量の増加になる。本実施態様では、破傷風毒素を動物に投与（例えば、注射）して、筋肉肥大を引き起こす。
【０１７１】
一例としては、シチメンチョウの胸筋を、シチメンチョウの各胸筋に１単位の破傷風毒素を注射することによって増加する。２日後に、筋肉の緊張は筋肉内で増し、筋肉量は増加するであろう。
【０１７２】
ウシに、腰椎穿刺し、１単位の破傷風毒素を脳脊髄中に点滴注入する。翌日、動物はすべての筋肉の緊張の緩やかな増加を示す。次の２ヵ月で、筋肉量は最低１０％増加する。
【０１７３】
実施例１８
ミルクの生産の増加
ミルクは、動物から収穫される他の製品である。ミルクの生産は、かなりホルモンによるものであるが、神経系がミルクの分泌に大きな役割を果たし、生産に役割を果たす証拠がある。
【０１７４】
乳腺への直接投与（例えば、注射）またはその管を介した逆行性投与（例えば、注射）によって、神経活性が増加し、このような増加はミルクの生産の増加になる。
【０１７５】
乳牛に、それぞれ、１単位の破傷風毒素を注射した。２日で、乳頭内の平滑筋の緊張が増し、ミルクの生産量が増加する。
【０１７６】
実施例１９
発汗−皮膚
ハイパーヒドロシス（ｈｙｐｅｒｈｙｄｒｏｓｉｓ）とも呼ばれる、発汗は、交感神経系の制御を受けるが、神経節後ニューロンによって使用される神経伝達物質はアセチルコリンである。臨床的に重要な発汗の位置としては、腋窩；足（湿気が運動選手の足の真菌感染を引き起こす）；生殖領域（またのかゆみ）；手のひら及び額が挙げられる。
【０１７７】
一実施例では、わきの下から過剰に発汗する４０歳齢の男性のこの領域に、１０００単位の破傷風毒素を注射する。３日以内に発汗の減少に気づく。
【０１７８】
本実施例から、破傷風毒素等の抗コリン作動性薬剤投与は汗の生産を遮断できることが示される。
【０１７９】
実施例２０
鼻漏（鼻漏後（ｐｏｓｔ ｎａｓａｌ ｄｒｉｐ））−鼻粘膜
鼻漏は、鼻からの過剰な分泌物の生産であり、アレルギー性、感染性及び血管運動神経性鼻炎の主要な症状である。抗コリン作動性薬剤投与は、短期間に鼻漏を遮断するのに有効であるまたはヒトの鼻腔内の鼻甲介に注射される。鼻分泌腺を供給する神経節後細胞体を含む副交感神経節は翼口蓋神経節中にある。
【０１８０】
一実施例では、７０歳齢の女性は、一日中大量の水様の鼻漏を訴えている。双方の下鼻甲介に５００単位の破傷風毒素を注射したところ、３日で鼻漏が抑制される。
【０１８１】
他の実施例では、５０歳齢の男性は、通年性のアレルギー性及び大量の鼻粘液の鼻漏を訴えている。翼口蓋管を介しておよび翼口蓋空間に硬口蓋の口側から針を通し、５００単位の破傷風毒素をそれぞれの側から注射する。鼻漏の症状が破傷風毒素で処置してから３日以内に改善する。
【０１８２】
ゆえに、破傷風毒素を使用することによる翼口蓋神経節でのコリン作動性神経伝達の遮断はまた鼻漏を抑制するのにも有効である。
【０１８３】
実施例２１
前立腺肥大−前立腺
前立腺肥大により排尿が困難である６０歳齢の男性の前立腺に、５００単位の破傷風毒素を注射する。破傷風毒素を注射してから１ヶ月で、患者は彼の症状が徐々に減退するのに気付く。
【０１８４】
前立腺肥大は、５０歳齢の男性では一般的であり、排尿を開始するのが困難である。腺の自律神経支配の神経支配除去により大きさが小さくなることは長い間知られていた。
【０１８５】
本実施例から、前立腺への破傷風毒素の注射により前立腺が縮小することが示される。
【０１８６】
実施例２２
喘息、ＣＯＰＤ−肺粘液分泌
気管支炎を有する６０歳齢の男性は、過剰な肺粘液の症状を有する。５０００単位の破傷風毒素を１０ｃｃの生理食塩液と混合し、３０分間、患者にエアロゾル投与し、吸入させた。２日で、患者は粘液の生産の減少に気付く。
【０１８７】
多くの肺疾患の主な症状は、過剰量の粘液の生産である。これらの疾患としては、喘息、慢性の閉塞性疾患、気管支炎、気管支拡張症及び嚢胞性線維症がある。肺の粘液は、気管支を覆っている呼吸粘膜内の小腺（ｓｍａｌｌ ｇｌａｎｄ）によって生産される。
【０１８８】
本実施例から、粘液の生産は破傷風毒素を適用して肺粘膜の副交感神経活性を阻害することによって制御されることが示される。
【０１８９】
実施例２３
喘息、ＣＯＰＤ−気管支の平滑筋
多くの肺疾患が慢性または急性の気道閉塞の症状を有する。細気管支の管腔は、副交感神経の制御下にある平滑筋の収縮によってかなり制御される。
【０１９０】
喘息もちの１３歳齢の女の子に軽い麻酔をかけ、気管支鏡を口から気管中に挿入する。薄いゲージ経気管支針（ｔｈｉｎ ｇａｕｇｅ ｔｒａｎｓｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｎｅｅｄｌｅ）を用いて、１００単位の破傷風毒素を２０回粘膜を介して注射する。これから数週間で、気管支痙攣の症状が改善する。本実施例から、粘膜を介した破傷風毒素の経粘膜（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓａｌ）吸収または注射が副交感神経活性を遮断し、気管支痙攣を予防することが示される。
【０１９１】
実施例２４
唾液分泌−耳下、顎下及び舌下腺
多くの神経に損傷を受けた患者は唾液が肺に入ることを防止しにくい。細菌を含んだ唾液が肺に混入すると、致命的な肺炎が生じうる。
【０１９２】
筋萎縮性側索硬化症を有する６０歳齢の女性は、唾液を吸引していた。この患者の３つの主な唾液腺のそれぞれに１００単位の破傷風毒素を６００単位の全投与量となるように左右に注射した。２日で、唾液分泌はかなり抑制され、唾液を吸引しなくなった。ゆえに、唾液分泌は、副交感神経の制御下にあり、唾液分泌量は、動物及びヒト双方に破傷風毒素を注射すると、減少することが示された。
【０１９３】
実施例２５
括約筋−裂肛および便秘
便秘を引き起こす肛門括約筋の緊張の増加は、出口閉塞（ｏｕｔｌｅｔ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）と呼ばれ、パーキンソン病及び他の神経状態で起こる。
【０１９４】
パーキンソン病を有しかついきみ（ｓｔｒａｉｎｉｎｇ）時に恥骨直腸筋の逆の活性化（ｐａｒａｄｏｘｉｃａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を伴う６５歳齢の男性患者を、恥骨直腸筋の２箇所に全１０００単位の破傷風毒素を注射して処置する。３日以内に、患者は、排便中に腹圧の減少を経験する。
【０１９５】
慢性の裂肛は、内肛門括約筋の収縮によって維持される。括約筋の外科手術による切出しは患者の８５〜９５％で成功するが、括約筋を永久的に脆弱化し、肛門の変形及び失禁を生じさせるかもしれない。
【０１９６】
他の実施例においては、慢性の裂肛を有する３５歳齢の女性の肛門括約筋の２箇所に、全１０００単位を注射する。１〜３日で、肛門括約筋の緊張が減少し、裂溝が２ヶ月後に治癒する。
【０１９７】
これらの実施例から、ボツリヌス毒素の注射は肛門括約筋を弛緩させ、治癒するのに良好に使用されることが明らかである。
【０１９８】
実施例２６
アカラシア−下部食道括約筋
下部食道括約筋のコリン作動性神経支配の収縮緊張の増加は嚥下を妨げる。
【０１９９】
４０歳齢の男性は、食道のアカラシアを有し、嚥下が非常に困難である。可撓性の内視鏡を食道に通し、３００単位の破傷風毒素を下部食道括約筋に経粘膜的に（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓｓａｌｌｙ）注入する。３日で、患者は嚥下の改善に気付く。
【０２００】
この症状は、破傷風毒素の経粘膜による注射によって良好に処置できることが示される。
【０２０１】
実施例２７
肥満−胃壁筋
３０歳齢の女性の食道を介して及び胃中に内視鏡を通した。胃の洞壁筋（ａｎｔｒａｌ ｗａｌｌ ｍｕｓｃｌｅ）に、１０００単位の破傷風毒素を注入する。１週間後、患者の食物の消費が減り、体重が減少し始める。
【０２０２】
空腹及び飽満感は、胃壁の収縮の状態に部分的に関連する。胃洞の麻痺は、胃を空にして、初期の飽満感を引き起こす。したがって、病的肥満の患者は胃壁への破傷風毒素の内視鏡による注射によって利益を得ることができることが示される。
【０２０３】
実施例２７
免疫寛容
皮膚（または粘膜）のある領域に対する副交感神経の遮断後のこの領域への抗原に注射は抗原に対する免疫寛容（ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を誘発することは示されている。破傷風毒素さらには抗原の投与（例えば、注射）は抗原に対する寛容を誘導できる。この効果は、自己免疫疾患を処置するまたは改善するのに使用できる。
【０２０４】
挿入句的に記載される推定の抗原性タンパク質を有する自己免疫疾患としては、以下に制限されないが：実験的自己免疫性脳脊髄炎（ミエリン塩基性タンパク質）；喘息（タイプＩＩコラーゲン）；ブドウ膜炎（Ｓ抗原、インターフォトレセプター結合タンパク質（ｉｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ））；糖尿病（インスリン、グルタミンデカルボキシラーゼ）；重症筋無力症（アセチルコリンレセプター）；甲状腺炎（サイログロブリン）；および多発性硬化症（ミエリン）が挙げられる。
【０２０５】
多発性硬化症を有する４０歳齢の女性の左前腕の皮膚に、１０００単位の破傷風毒素を注射する。１週間後、ミエリンを同じ部位に注射する。１ヶ月以内に、患者は症状の抑制を示す。
【０２０６】
免疫寛容が好ましい他の領域としては、器官の移植がある。ヒトは、一般的に、移植器官中の細胞の表面上に存在する、外来タンパク質、特に主要組織適合タンパク質に対する免疫反応を発揮する。
【０２０７】
器官の移植に関する他の例では、腎臓の移植を必要とする４０歳齢の女性の左腕の皮膚に、１０００単位の破傷風毒素を注射する。１週間後に、潜在的なドナー由来の細胞表面抗原を同じ領域に注射する。１ヶ月後、患者について、右前腕の皮膚に同じ細胞表面抗原を注射することによって寛容を試験する。顕著な反応がなかったことから、寛容が達成され、移植が行なわれたことが示される。
【０２０８】
ゆえに、領域への破傷風毒素の投与（例えば、注射）により、抗原の提示が次に起こり、その抗原に対する寛容が誘発される。この効果は、自己免疫疾患を有する患者または同種移植若しくは異種移植の潜在的なレシピエントによって有益でありうる。
【０２０９】
実施例２９
胃酸
胃酸の生産は、副交感神経の制御を受ける。しかしながら、酸の生産を遮断する他の方法が、酸を生産する壁細胞にある。これらの細胞は、ベシクルの放出によってＨ＋を分泌し、直接遮断されうる（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２７３ （６ Ｐｔ． ２）， Ｆ １０５４−７， （１９９７））。第三の方法としては、酸の生産を増加するホルモン、セクレチン及びガストリンを遮断することがある。別の有益な効果としては、酵素トリプシンの生産を遮断することがある。
【０２１０】
実施例３０
ホロクリン分泌
ホロクリン腺は、脂質分泌物を生産する皮膚の分泌腺の一つのクラスであり、部分的に神経の制御を受ける。ホロクリン腺としては、皮脂及び毛嚢腺、耳垢腺（ｃｅｒｕｍｅｎ ｇｌａｎｄ）及び乳酸が挙げられる。破傷風毒素の投与（例えば、注射）によるこれらの腺への神経インプットの遮断は、様々な医学的な状態で有用であり、例としては、分泌物の過剰な生産が炎症及び感染の原因であるアクネがある。
【０２１１】
また、耳垢の過剰な生産は、耳鼻咽喉科医を訪れる最も一般的な理由の一つである。耳管の皮膚への投与（例えば、注射）は、耳垢の生産を遮断し、耳管への耳垢（ｅａｒ ｗａｘ）の蓄積を防止するであろう。
【０２１２】
加えて、破傷風毒素は、皮脂腺の活性を遮断するため、皮膚状態アクネの有益な効果を提供するのに使用される。
【０２１３】
実施例３１
皮膚疾患
乾癬、アトピー性皮膚炎（じんま疹）、白斑はすべて、副交感神経活性に関連する。皮膚のある領域の神経支配除去が神経支配除去領域でのこれらの皮膚疾患を消散することは長い間知られてきた。罹患領域への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、活性を遮断し、症状の改善または消散（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）を起こしうる。破傷風毒素の皮膚への注射は、選択部位での副交感神経活性を減少することによって、上記で列挙した皮膚疾患を抑制できる。
【０２１４】
実施例３２
片頭痛
翼口蓋神経節への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、頚動脈への翼口蓋神経を遮断し、これにより片頭痛の原因であるこれらの神経によって引き起こされる動脈の痙攣を遮断するであろう。緊張性頭痛等の片頭痛は側頭筋への注射によって処置されうる。
【０２１５】
実施例３３
脂肪組織
脂肪組織によるグルコースの取込みは脂質の生産に必要である。リポソームによってデリバリーされる破傷風毒素は脂肪細胞による脂質グルコースの取込みを遮断し、その大きさを小さくする。他の内分泌細胞の細胞活性は、破傷風毒素の投与（注射による）によって阻害されうる。破傷風毒素による処置によって影響を受ける内分泌細胞としては、甲状腺、膵臓及び腫瘍細胞が挙げられる。
【０２１６】
実施例３４
鋤鼻器官
鋤鼻器官は、フェロモンを知覚し、生殖挙動及び他の自律神経系の欲求に役割を果たす。この器官への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、これらの欲求を遮断、または向上できる。
【０２１７】
実施例３５
免疫系Ｔ細胞の成熟および放出
副交感神経活性は、胸腺及び脾臓由来のＴ細胞の成熟及び放出に関連する。Ｔ細胞は、抗原認識の細胞メディエーターである。副交感神経活性が増加すると、Ｔ細胞の成熟及び放出が向上する；これらの器官が急性的に神経支配除去されると、反対のことが起こる。様々な投与量での胸腺および／または脾臓への破傷風毒素の投与（例えば、注射）は、Ｔ細胞の放出を向上または抑制できる。
【０２１８】
ＨＩＶ及び低いＴ細胞数を有する２５歳齢の患者の胸腺に、１００単位の破傷風毒素を注射する。１週間後、血中のＴ細胞レベルは増加する。
【０２１９】
多発性硬化症を有する５０歳齢の女性は病気が急激に悪化し、彼女の胸腺に１００単位を注射する。注射してから１週間で、症状が改善する。
【０２２０】
実施例３６
破傷風毒素の感覚用途
ボツリヌスとは異なり、破傷風毒素は、感覚神経と結合して入り、逆行性輸送され、知覚消失を引き起こすことが示された。これらの考察は、実験動物でさらには臨床的な破傷風でなされた。求心性神経活性の減少に加えて、破傷風毒素は、これらの神経ペプチドが破傷風毒素によって不活性化されるタンパク質ＶＡＭＰを用いたＳＮＡＲＥメカニズムによるので、感覚神経（物質ｐ、神経ペプチドＹ、ＣＧＲＰ）からの炎症性メディエーターの放出を遮断するであろう。この効果の最も重要な用途としては、体のある部分から痛みを遮断することがありうる。例えば、慢性の関節痛は、関節の滑液包中への破傷風毒素の投与（例えば、注射）によって遮断されうる。
【０２２１】
慢性の痛みのある右股関節の変形性関節を有する７５歳齢の女性の関節に、１０００単位の破傷風毒素を注射する。１週間以内に、患者の痛みが減少した。上記実施例から、投与の特定の標的は特定の臨床的な状態によって変化しうるが、これとしては、骨、軟骨、靭帯、筋肉、筋膜、粘膜、皮膚、側膜、神経上膜、滑膜、神経腫、及び平滑筋が挙げられる。
【０２２２】
感覚遮断の他の用途としては、炎症の原因となっている軸索−軸索反射がある。感覚軸索は、神経によって神経支配されるいずれかの領域での反射性血管拡張（膨疹−嗅覚反応（ｗｈｅａｌ ａｎｄ ｆｌａｉｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ）とも称する）を誘発することによって侵害刺激に反応する。破傷風毒素は、この反射を誘発する神経ペプチドの放出を遮断できる。
【０２２３】
慢性の気管支炎ならびに過剰な粘液の生産及びパラオキシスマルな（ｐａｒａｏｘｙｓｍａｌ）咳の症状を有する６５歳齢の男性に、３０分間、１０００単位の破傷風毒素を含むエアロゾル投与用溶液を吸入させる。２日後、咳が抑制される。
【０２２４】
上記実施例から、感覚遮断の他の用途が、慢性の咳、粘液の生産及び肺内の感覚レセプター（ｉｎｔｒａ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｅｎｓｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）によって発症する気管支痙攣にありうることが示される。本実施態様においては、破傷風毒素は吸入エアロゾルによって良好にデリバリーされる。
【０２２５】
実施例３７
心臓血管系
心臓血管系、心臓、動脈、及び静脈は、広範な自律神経支配を有する。心臓では、交感神経活性が心拍数及び収縮力を増加する。副交感神経の刺激は、心臓を遅くし、収縮力を減少する。心房から心室への収縮の伝達は房室結節（ａｔｒｉａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｎｏｄｅ）（ＡＶ）節によって制御されるものの、心臓の収縮速度は洞房結節、心臓の右房の小神経節によって制御される。
【０２２６】
破傷風毒素薬剤配合物によって処置されうる心臓疾患としては、心不整脈：頻脈、徐脈、及び心室細動がある。さらなる疾患としては、アンギナおよび／または心筋梗塞を生じる冠状動脈痙攣がある。冠状動脈のカテーテル挿入（ｃａｔｈｅｒｉｚａｔｉｏｎ）によって、心室を灌流する血液中に破傷風毒素を放出させ、特定の環状動脈を使用することによって最も冒されている心臓の領域に破傷風毒素を局所的に分布させることもできる。これらの場合には、阻害量の破傷風毒素が、交感神経の刺激を阻害することによっておよび心筋細胞に直接作用することによって心臓の興奮を抑制できる。より高い阻害量での冠状動脈への破傷風毒素の注入によって、平滑筋の交感神経の活性化を抑制し、冠状動脈痙攣の強さを減少してアンギナを改善する。興奮レベルでの洞房結節（ＳＡ）への破傷風毒素の注入は、副交感神経活性を増加し、心拍数を遅らせて不整脈および／またはアンギナの可能性を減少できる。心臓の上述した領域に達するカテーテル技術の使用は、当業者には既知であり、過度の実験を必要としない。
【０２２７】
実施例３８
白血球
単球及びマクロファージは、破傷風毒素の取込み及びインターナリゼーションを可能にするレセプターを有する。内在化すると、毒素は細胞の移動性さらにはベシクルの分泌の根底をなす分子メカニズムを破壊する。多くの炎症プロセスは、マクロファージのまたはその領域への移動と関連する。炎症の領域に入ると、これらの細胞は、炎症を促進するまたは組織の破壊を引き起こす他のサイトカインを放出する。破傷風毒素の投与は、マクロファージの移動を遅延できるまたは停止でき、さらに、その領域での細胞からの炎症性メディエーターの放出を防止できる。破傷風毒素はまた、好中球の凝集及び分泌を遮断できるが、細胞のインターナリゼーションのためにはリポソームのようなベクターを必要とする。リウマチ様関節炎は、滑液包に直接投与する、この治療が有益でありうる疾患の一例である。これは、マクロファージ等の特定の標的細胞の細胞活性を制御するのに破傷風毒素を使用する一例である。
【０２２８】
このように、本発明の好ましい実施態様であると現在考えられるものを説明してきたが、当業者は、他の及びさらなる修飾および変更が本発明の真の精神を逸脱することなくなされうることを認識するであろうし、また、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の概念に含まれるすべてのさらなる及び他のこのような修飾及び変更を包含するものである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
2004521067.tif 000058
2004521067.tif 000059
2004521067.tif 000060