(57)【要約】本発明は、生体被験者の真皮に新しい毛髪の生育を促進することにより男性型禿頭症及び毛髪の喪失を伴う他の状態を治療するのに用いられる方法及び装置に関する。本方法は、真皮と表皮との間の界面に毛嚢前駆細胞を非外傷性に注入する段階と、細胞を成長させて新しい毛嚢にする段階とを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
真皮及び表皮層を含む被験者の皮膚に新しい毛嚢を生成する方法であって、
前記被験者の皮膚の真皮及び表皮により境界を定められる小胞内に培養毛嚢前駆細胞の部分標本を非外傷性的に注入する段階と、
前記細胞を成長させて新しい毛嚢を生成させる段階と、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
被験者に新しい毛嚢を生成する方法であって、
ａ）生検毛嚢由来の毛嚢前駆細胞を調達する段階と、
ｂ）その数を増加させることにより前記前駆細胞を培養する段階と、
ｃ）前記培養細胞を細胞クラスタに形成する段階と、
ｄ）１つ又はそれ以上の新しい毛嚢を望む部位の皮膚の真皮と表皮との界面に水疱を生成する段階と、
ｅ）前記細胞クラスタの部分標本を前記水疱内に注入する段階と
ｆ）前記細胞を成長させて新しい毛嚢を生成する段階と、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３】
前記段階ａ）で調達される前記前駆細胞が、前記段階（ｅ）で注入される被験者から取得されることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
被験者の皮膚内に注入される前記毛嚢前駆細胞の培養液が、少なくとも１つの付加的な種類の細胞を更に含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記付加的な種類の細胞が、前記表皮から取得されることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記毛嚢前駆細胞の培養液が、被験者の皮膚内に注入される前に、少なくとも１つの構造形成賦形剤と組み合わされることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記構造形成賦形剤が、コラーゲン、熱可逆性ヒドロゲル、化学的に架橋可能なポリマー、現場で架橋可能なヒドロゲル、フィブリノーゲン、トロンビン、デキストリン、アミロース、ヒアルロン酸、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、多糖類、ムコ多糖類、タンパク類、糖タンパク類、及びこれらの任意の誘導体、コポリマー、又は他の修飾物、及び他の薬学的に許容可能な賦形剤から成る群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記構造形成賦形剤が、ヒアルロン酸及びゼラチンの架橋混合物であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記水疱が、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、及び、他の多糖類、ムコ多糖類、タンパク類、糖タンパク類、及び同様のポリマー、天然物質、及び合成物質から成る群から選択される溶質を用いて調製された粘稠溶液の皮内注入により形成されることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記水疱が、ヒアルロン酸ナトリウム溶液の皮内注入により形成されることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記注入段階（ｅ）が、非外傷性的に行われることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
皮内針と、皮内針の先端の管腔内に収容された培養毛嚢前駆細胞のプラグと、前記針を皮膚内に注入した後に前記細胞のプラグを排出するための手段とを含むことを特徴とする培養毛嚢前駆細胞を注入するための装置。
【請求項１３】
前記培養毛嚢前駆細胞のプラグが、細胞及び構造形成賦形剤の混合物であることを特徴とする請求項１１に記載の装置。
【請求項１４】
前記細胞が、培養真皮乳頭細胞であり、前記構造形成賦形剤が、ヒアルロン酸及びゼラチンの架橋混合物であることを特徴とする請求項１２に記載の装置。
【請求項１５】
被験者に新しい毛嚢を生成する方法であって、
ａ）生検毛嚢由来の毛嚢前駆細胞を調達する段階と、
ｂ）その数を増加させることにより前記前駆細胞を培養する段階と、
ｃ）前記培養細胞を細胞クラスタに形成する段階と、
ｄ）前記細胞クラスタを構造形成賦形剤と組み合わせる段階と、
ｅ）１つ又はそれ以上の新しい毛嚢を望む部位に隣接する皮膚の真皮と表皮との界面に非外傷性的に水疱を生成する段階と、
ｆ）前記細胞クラスタの部分標本を前記水疱内に注入する段階と、
ｇ）前記細胞を成長させて新しい毛嚢を生成する段階と、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
前記段階（ａ）で調達される前記前駆細胞が、前記段階（ｆ）で注入される被験者から取得されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験者の皮膚内に注入される前記毛嚢前駆細胞の培養液が、少なくとも１つの付加的な種類の細胞を更に含むことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記付加的な種類の細胞が、前記表皮から取得されることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記構造形成賦形剤が、ヒアルロン酸及びゼラチンの架橋混合物を含むことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記段階ｅ）及び前記段階ｆ）が、同時に行われることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の説明）
本出願は、２００１年１月２９日出願の米国仮特許出願番号６０／２６４，８０６の優先権を享受するものである。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、一般に、生体被験者の真皮に新しい毛髪が成長するように促進することにより、男性型禿頭症及び毛髪の喪失を含む他の状態を治療する方法に関する。詳細には、本発明は、被験者の皮膚内に注入した毛嚢前駆細胞の培養液から新しい毛髪を生育させる方法に関する。
【０００３】
（背景技術）
男性型禿頭症は、よく見られる状態であり、毛髪移植手術により治療されることが多い。この処置では、禿髪パターンに含まれない頭皮の部分の毛嚢を切除して再移植し、頭髪が豊かになったように見せるものである。実際には、この処置では新しい毛髪は生成せず、この処置は再分配するために採取することができる毛嚢の数により制限される。
【０００４】
毛嚢内の特定の下部組織内に見られる特定の種類の細胞が、完全かつ正常に機能する毛嚢の形成を促す能力を有することは公知である。このような細胞は、毛嚢幹細胞又は毛嚢前駆細胞として知られている。以下の文献を参照されたい。これらの教示事項は、種々の生物の生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）及び真皮組織内で毛髪が新しく形成される際の種々の種類の毛嚢幹細胞又は前駆細胞の機能を示すための実験作業を例示するために本明細書に組み込まれている。Ｒ．Ｍ．Ｌａｖｋｅｒ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１０１（１）補遺１９９３年７月、１６Ｓ−２６Ｓ。Ｗ．Ｃ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１００（３）１９９３年３月、２２９−２３５。Ｊ．Ｋａｍｉｍｕｒａ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１０９（４）１９９７年１０月、５３４−５４０。Ｌｉｃｈｔｉ，Ａ．Ｂ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１０４（５）補遺１９９５年５月、４３Ｓ−４４Ｓ。Ｓ．Ｈ．Ｙｕｓｐａ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１０１（１）補遺１９９３年７月、２７Ｓ−３２Ｓ。Ｃ．Ａ．Ｂ．Ｊａｈｏｄａ他の「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１０１（１）補遺１９９３年７月、３３Ｓ−３８Ｓ。
【０００５】
例えば、教示事項が本明細書に組み込まれている国際特許公開番号ＷＯ９９／０１０３４に開示されているように、培養真皮乳頭細胞をヒトの皮膚に注入又は移植することによりこの知見を利用しようとする従来の試みは、一般に成功していない。従って、その代わりに、皮膚又は毛髪の移植のような痛みを伴う処置を用いない、頭皮等のヒトの皮膚に新しい毛嚢を生成させる方法に対するニーズが依然としてある。
【０００６】
（発明の開示）
１つの態様において、本発明は、表皮及び真皮層を含む生体被験者の皮膚に新しい毛髪を生成する方法である。この方法は、毛嚢前駆細胞を皮膚内に注入する段階と、この細胞を成長させ、新しい毛嚢にする段階とを含む。毛嚢前駆細胞は、細胞のクラスタの形で皮膚内に送達されることが好ましい。また、細胞クラスタは、非外傷性に皮膚に、好ましくは真皮と表皮との間の界面に送達されることが好ましい。外科的切開又は吸引水疱法のような細胞移植の外傷性的な方法は、移植細胞の生存及び／又は適切な機能を妨げ、その結果、典型的には、毛嚢が誘発されず、毛髪も成長しないことがわかっている。
【０００７】
別の態様において、本発明は、毛嚢前駆細胞を単離する段階と、細胞を培養する段階と、細胞のクラスタを生成する段階と、細胞のクラスタを皮膚内に注入する段階とを含む、被験者の皮膚に新しい毛髪を生成する方法である。前述のように、細胞クラスタは、好ましくは皮膚の表皮／真皮界面に、好ましくは非外傷性的に送達される。
【０００８】
更に別の態様において、本発明は、真皮から表皮を一時的に分離することにより生じる空間に、細胞、特に、培養した毛嚢前駆細胞のクラスタを非外傷性的に移植する方法であって、真皮又は表皮をいずれも傷つけることなく表皮と真皮との間の界面又はポケットに流体を注入し、これによって、隆起性水疱を生じさせ、前記細胞のクラスタをこの流体を満たした空間に注入する方法である。当業者であれば、細胞又は細胞クラスタは、水疱の形成と同時に皮膚内に移植することができることを理解できる筈である。また、前駆細胞／細胞クラスタは、水疱真皮／表皮界面を形成した後に水疱に送達することができる。
【０００９】
本発明の方法により、患者から採取した各々の毛嚢から、又は他人といった別の毛嚢源から多数の新しい毛嚢を生成することが可能になる。詳細には、本発明の方法は、男性型禿頭症及び毛髪の喪失を含む別の状態を治療する手段を提供する。
【００１０】
別の態様において、本発明は、前記細胞を培養して十分に大きな凝集塊にするための好都合な容器になるとともに、前記細胞凝集塊を皮膚内に注入するための道具としての目的に適う装置に関する。
他の利点及び本発明の特質は、添付の図面及び特許請求の範囲と併せて以下の好適な実施形態の詳細な説明を検討すれば完全に理解できる筈である。
【００１１】
定義
「注入」という用語は、本明細書で用いる場合、破壊、切開、壁の破壊、穿孔又は他の方法で被験者の皮膚の表面を開口させて物質を皮内又は皮下に堆積させる何らかの装置を用いる処置であると定義される。前記皮膚を破壊する段階及び前記物質を堆積させる段階は、同じ装置又は異なる装置で行うことができ、同時に、短い間隔で連続して、又は２つの段階の間に所定の時間間隔をあけて行うことができる。
「細胞」又は「細胞の注入」又は「細胞の部分標本」という用語は、本明細書で用いる場合、以下のいずれかを意味する。
１）構造形成賦形剤（任意量）を付加するか又は付加せずに、個々の細胞を互いに付着することにより実質的に形成された１つ又はそれ以上の種類の細胞の１つ又はそれ以上のクラスタ又は凝集塊。
２）実質的に球又はビーズ様の形状の細胞のクラスタ又は凝集塊。
３）各々のクラスタ内に２つ又はそれ以上の異なる種類の細胞を組織化して２つ又はそれ以上の部分がある構造をもたらし、各々の部分が主に一種類の細胞から成る細胞のクラスタ。
【００１２】
「前駆細胞」という用語は、本明細書で用いる場合、高度に分化した細胞に変化する能力及び／又は周囲の細胞を用いて分化組織に変化させる能力がある任意の種類の細胞であると定義される。従って、真皮乳頭の細胞は、適切な条件下では、今まで毛嚢が存在していなかったところに毛嚢の形成を促すので、前駆細胞であると考えられる。
「毛嚢新生」又は「嚢新生」という用語は、本明細書で用いる場合、今まで機能的な毛嚢が存在していなかった皮膚に、新しい機能的な毛嚢を生成することであると定義される。
【００１３】
「構造形成賦形剤」という用語は、本明細書で用いる場合、任意の無毒性で、組織と相性がよく、薬理学的に許容可能な生体吸収可能な物質であって、生細胞と混合又はそれに加える前には実質的に液体であり、生細胞に加えるか、それと混合した後にはゼリー状、繊維状、又は実質的に非液体になるものであると定義される。また、構造形成賦形剤は、生細胞に加える前に固体、ゼリー状、繊維状、又は実質的に非液体であり、その後、液化するか又は生体吸収可能になる何らかの物質も意味する。構造形成賦形剤の機能は、一般に、担持、封入、固定化、又は別の方法で凝集や前記細胞を凝集又はクラスタ化することになる増殖を引き起こすか又は促進することにより、細胞のクラスタ又は凝集塊の形成を容易にすることである。
「水疱」という用語は、本明細書で用いる場合、無毒性の身体適合性のある流体を注入することにより生成された、皮膚の表皮と真皮との間の流体で満たされた空間、ポケット、空洞、小室、又は小胞と定義される。本明細書が意図する水疱の生成は、上側の表皮又は下側の真皮に実質的に永久的な損傷を引き起こさない良性の一時的な状態、即ち、非外傷性である。
【００１４】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明は、新しい毛髪の生育が望まれる部位の皮膚の水疱内に毛嚢前駆細胞を注入することにより、正常で美容上有用な毛髪を生育させる新しい毛嚢の発生を誘発する方法を含む。この毛嚢誘発能力を有する細胞は、構造形成賦形剤と組み合わされた細胞の懸濁液として、又は構造形成賦形剤を含まない予形成された細胞の凝集塊又は集団として、又は生体外で細胞を培養する間の時間に実質的に溶解又は分解される構造形成賦形剤と組み合わされた状態で、皮膚の水疱内に皮下針等で簡単に注入することができる。
【００１５】
好適な実施形態において、本発明は、
ａ）生検毛嚢から毛嚢前駆細胞を調達する段階と、
ｂ）前駆細胞を培養して、その数を増加させる段階と、
ｃ）培養細胞を細胞クラスタに形成する段階と、
ｄ）１つ又はそれ以上の新しい毛嚢が望まれる部位の皮膚の真皮と表皮との界面に水疱を生成する段階と、
ｅ）細胞クラスタの部分標本を水疱内に注入する段階と、
を含む毛嚢新生方法を含む。
【００１６】
前記段階（ａ）で調達する毛嚢前駆細胞は、生体被験者の生検毛嚢から取得されることが好ましい。毛嚢の生検組織を提供する患者は、段階（ｅ）で細胞の注入を受ける患者と同一患者であることが好ましい。しかし、毛嚢は、死亡又は生存に関わらず、臓器提供者又は他の個人から取得することもできる。これは、毛嚢前駆細胞が「免疫特権」であることが知られており、通常、異物性組織として拒絶されないため実行可能であると考えられる。患者に残っている毛嚢に生検に適するものがない特定の毛髪喪失状態であるか、患者が毛髪の質又は色を複製することに関心がない場合には、臓器提供者の毛嚢の利用が特に望ましいであろう。
【００１７】
本発明の方法に用いるのに適する前駆細胞は、真皮乳頭、真皮鞘、及びバルジ部のような毛嚢組織内に置かれる。一般に前駆細胞と考えられていない他の細胞も生検標本から回収して培養し、前駆細胞の培養液とともに被験者に注入することができる。例えば、毛嚢新生が素早く誘発されるようにするために表皮幹細胞を含むと有用な場合もある。本発明で有用な前駆細胞を培養する方法が改善されることが見込まれる。また、成長因子、条件培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  ｍｅｄｉａ）、遺伝子組み換え細胞、及び種々の補助剤及び活性剤の添加剤を用いると毛嚢新生を促す細胞の能力を改善することができる。
【００１８】
前記段階（ｂ）に関しては、一般に、毛嚢前駆細胞を繰り返し培養すると、毛嚢誘発能力が失われる可能性があると考えられている。従って、個々の毛嚢の各々を解体した組織の培養から取得できる細胞の数には限界がある場合がある。しかしながら、重度の禿頭症の例では、本発明の方法により再生した毛髪から毛嚢の生検組織を後で取得し、所望の結果が得られるまで毛髪回復処置を継続することが可能であろう。従って、段階（ｂ）及び（ａ）には、それ自身が前駆細胞であった前駆細胞を用いることができる。更に、細胞の度重なる継代の間に、例えば特別に開発した条件培地を用いることにより、培養細胞の毛嚢誘発能力の限界を取り除く技術を開発できることも予想される。本発明は、このような改善も意図している。
【００１９】
段階（ｃ）は、多数の方法で実現できる。例えば、細胞クラスタは、（１）封入すること、（２）細胞に構造形成賦形剤を添加すること、（３）細胞が互いに付着し、賦形剤が実質的に溶解して細胞により生成される細胞外マトリクスと置き換わるように、生体外で構造形成賦形剤の存在下で一定期間培養することにより、個々の細胞懸濁液から作ることができる。
【００２０】
段階（ｄ）に関しては、細胞注入の前に水疱を生成するための好適な手段は、最初に、温湿布で皮膚を温めて表皮と真皮との間の可逆的結合を弱め、次に、１％（重量／容量）のヒアルロン酸ナトリウム塩等の燐酸緩衝食塩溶液を細いゲージの針を経由して、針の先端が皮膚を最低限しか貫通しないようにして皮膚内に注入する。ヒアルロン酸の利点は、粘度があるので表皮の繊細な下側表面がその後の機械的外傷から保護されること、及び高分子量なので流体再吸収過程が遅くなることである。ヒアルロン酸の代わりに、ポリエチレングリコール、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、及び、別の多糖類、ムコ多糖類、タンパク類、糖タンパク類、及び同様のポリマー、天然物質、及び合成物質といった他の高粘度材料を用いることもできる。
【００２１】
前記段階（ｅ）に関しては、最適な結果を得るために、注入する細胞凝集塊又は細胞クラスタの数、各々のクラスタの大きさ、及び注入流体の容量及び組成の最適化を必要とする場合もある。段階（ｅ）で注入する細胞の部分標本は、構造形成賦形剤を含む流体と組み合わすことができ、結果的に流体が注入部位で固体に変化する。これは、移植した細胞の大部分を外傷後炎症により引き起こされる損傷から保護するように機能する。細胞が一時的に人工マトリクスにより取り囲まれると、炎症は、移植の表面に制限されることになる。つまり、中心部寄りに配置された細胞は、この一過性の破壊的組織反応から保護されることになる。構造形成賦形剤は、薬学的に許容可能な担体であることが好ましい。また、構造形成賦形剤は、固体形で生体吸収可能であり、移植を受ける患者に注入されると、注入部位に形成されている組織が時間の経過とともに吸収されることが好ましい。
【００２２】
このような構造形成賦形剤の例の１つは、注入可能なコラーゲン（Ｚｙｄｅｒｍ（商標）Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｅｓｔｈｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）である。この製品は、培養ヒト繊維芽細胞と組み合わされて胸腺欠損マウスに注入され、生存能力のある空間充填移植片の形成をうまく誘発する。培養繊維芽細胞は、単独でも皮下注入後に生存し、初期生着が認められたが、コラーゲン賦形剤と組み合わせない場合には、中央部分が壊死を起こした。コラーゲンマトリクスは、生体内の細胞機能及び生存につながる間質をもたらす場合がある。これらの結果は、「Ａｒｃｈ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ」１９８９年７月、１１５：８３７−４４のＲｅｍｍｌｅｒ  Ｄ、Ｔｈｏｍａｓ  ＪＲ、Ｍａｚｏｕｊｉａｎ  Ｇ、Ｐｅｎｔｌａｎｄ  Ａ、Ｓｃｈｅｃｈｔｍａｎ  Ｋ、Ｆａｖｏｒｓ  Ｓ、Ｂａｕｅｒ  Ｅによる文献「注入可能な培養ヒト繊維芽細胞の経皮的組織移植への利用。実験的研究」に発表されている。なお、この教示事項は本明細書に組み込まれている。
【００２３】
他の構造形成賦形剤としては、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）界面活性剤を挙げることができる。この賦形剤は、体温に一致する臨界温度になるように作ることができる、ポリ（エチレンオキシド−コ−プロピレンオキシド）水溶性ポリマーである。つまり、細胞凝集塊は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃの低温溶液に懸濁した後に注入することができる。その後、注入された液体は、暖められてヒドロゲルになり、結果的に細胞凝集塊をマトリクスに安定させて、移植の初期外傷後も生存するようにする。
Ｎ−ジメチルイソプロピルアクリルアミドに基づくような他の熱可逆的ヒドロゲルも公知である。このようなポリマーは、化学的に修飾して、適切な分解速度での生体吸収性を有するようにすることができる。
【００２４】
生体内注入後に現場で構造を形成できる他の賦形剤としては、種々の架橋可能な二成分液体系を挙げることができる。この場合、注入装置は、二重注射外筒の皮下針に繋がれた２つのシリンジを必要とする。細胞凝集塊は、一方の成分Ａ（例えば、架橋可能で生体吸収可能なポリマーを含む）に懸濁され、他方の成分Ｂは、架橋剤を含むことができる。ポリマー及び架橋剤は、生体適合可能で生体吸収可能である種々の材料から選択することができる。例えば、成分Ａをフィブリノーゲンとし、成分Ｂをトロンビンとすることができる。本発明の本実施形態で有用であると考えられる他の成分対は、ヒト血清アルブミン及びポリ（エチレングリコール）−ジスクシンイミジルスクシネートである。
【００２５】
構造形成賦形剤の利用に関する更に別の選択肢は、最初に生体外で細胞を培養する際に、決められた大きさ及び形状の細胞凝集塊を生成することである。この場合、固体で高度に多孔性の賦形剤を用い、細胞が付着するための表面積を広くすることが望ましい。細胞が成長して増殖し、天然の細胞外マトリクスを生成することにより互いに付着するにつれ、構造化された賦形剤は、実質的に生体吸収され、細胞外マトリクス材料で置換される。
以上の理由から、本発明の方法に用いる任意の賦形剤は、コラーゲン、熱可逆性ヒドロゲル、化学的に架橋された生体吸収性ポリマー、現場で架橋可能なヒドロゲル、フィブリノーゲン、トロンビン、デキストリン、アミロース、ヒアルロン酸、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、多糖類、ムコ多糖類、タンパク類、糖タンパク類、及びこれらの任意の誘導体、コポリマー、又は他の修飾物から成る群から選択されることが好ましい。
【００２６】
注入細胞と共に移植される材料に関する別の選択肢は、毛幹が皮膚から生える角度を制御するための方法に関する。毛髪の角度は、頭皮の異なる領域で様々であるが、この角度を統一して、その変動量を制御することが頭全体の毛髪の美容上の外観に重要であることは公知である。従って、本発明では、毛嚢新生により皮膚から新しい毛幹が出現する方向及び角度の制御を容易にする細胞移植方法の改善を見越している。
実施例２に示す１つの方法は、細いステンレス鋼のワイヤを皮膚内に数日間放置し、表皮を下向きに成長させることである。この成長により、表皮細胞が移植毛嚢前駆細胞と確実に相互作用するのみならず、毛嚢の方向及び毛幹角度の制御のためのガイドとして機能する皮膚表面への経路がもたらされる。また、この点に関して、合成又は天然の生体吸収可能なポリマーで作られた他のこのような保持繊維は、除去する必要がないので特に有用なことが予想される。
本発明は、以下の実施例で更に説明されるが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【００２７】
実施例１：注入装置の準備
男性型禿頭症の患者の後頭部の毛髪を有する頭皮から直径４ｍｍの全層皮膚穿孔生検試料を採取する。毛嚢から毛嚢球を切り取り、真皮乳頭を切除する。真皮乳頭細胞（ＤＰ細胞）は、Ａ．Ｇ．Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒによる「Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」１１０、６８５−６８９（１９８４）に記載されている方法により培養して増殖させる。この文献の教示事項は、本明細書に参照により組み込まれている。
【００２８】
図４に示す本発明の装置は、以下のように準備する。１００ミリグラムのヒアルロン酸ナトリウム及び１００ミリグラムのブタ皮膚のゼラチンを蒸留水に溶解し、１０ミリリットルの溶液を作る（ＨＡ−ゼラチン溶液）。低分子量のポリ（ｄ、ｌ−ラクチド−コ−５０％グリコリド）粒子を粉砕し、篩いにかけて粒子の大きさを１００〜２００ミクロンにし、ＨＡ−ゼラチン溶液と混合して粘稠なペーストを形成する。このペーストを直径０．００３５インチのステンレス鋼ワイヤの結び目付きフィラメントを収容した、先端部が３０度である１８ゲージの皮下針の先端に詰め、完全に乾かす。ＰＬＧＡ粒子をジクロロメタンで溶出し、残ったＨＡ−ゼラチン賦形剤は、アセトン及び水の９０：１０（ｖ／ｖ）混合物における１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の０．１％（ｗ／ｖ）溶液に浸漬することにより架橋する。次に、この装置は、アセトンですすぎ、７０％イソプロパノール／水に浸漬して消毒し、蒸留水ですすぐ。針上に露出したＨＡ−ゼラチン賦形剤を用いて、培養皿から細胞の層を掻き落とすことにより、培養したＤＰ細胞を装置に付加する。次に、細胞を植え付けた針は、培養培地のフラスコに入れ、装置内に移した細胞を一週間培養して増殖させるが、この間に、ＨＡ−ゼラチン賦形剤が実質的に分解して溶解するにつれ、細胞は互いに付着するようになる。
【００２９】
実施例２：培養細胞の注入
最初に、禿頭の頭皮部分を温水で柔らかくし、Ｅｍｌａ（商標）リドカインクリーム（マサチューセッツ州ウエストバラ０１５８１のＡｓｔｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．）を塗布し、Ｔｅｇａｄｅｒｍ（商標）包帯（ミネソタ州セントポールの３Ｍ）で約３０分間覆うことにより麻酔する。次に、頭皮を拭いてきれいにした後、７０％イソプロパノールを塗布する。最初に温湿布で皮膚を暖めた後に、毛髪の生育を望む部分の皮膚内にヒアルロン酸ナトリウム溶液（Ｈｅａｌｏｎ（商標）  ミシガン州カラマズー４９００１のＰｈａｒｍａｃｉａ−Ｕｐｊｏｈｎ）を注入する。次に、得られた水疱は、実施例１で説明したＤＰ細胞凝集塊含有針で穿孔する。細いワイヤを保持した状態で針を引き抜き、注入した細胞塊が針と一緒に引き抜かれないようにする。次に、結び目が穿孔傷の外側になるまで細いワイヤを引き抜く。ワイヤを引き抜いて処置を終えることもできるが、随意的に、Ｔｅｇａｄｅｒｍ（商標）包帯で皮膚に止めることにより傷内に放置し、５日後に取り除き、表皮を移植細胞の方へ成長させることもできる。頭皮上に複数の水疱を生成することができ、複数回の細胞注入を各々の水疱内に行い、新しい毛髪を所望の密度にすることができる。
【００３０】
注入後約８週間で、毛嚢の新生が完了し、患者は、完全に正常で供給部位の毛髪と同一の新しい組織処理毛髪の成長を経験し始めることができる。
本発明は、ある程度詳細に説明され例示されているが、当業者であれば、記載内容の変形、付加、及び省略を含む種々の変更を行い得ることが理解できる筈である。従って、このような変更形態も本発明に包含され、本発明の範囲は、法律的に特許請求の範囲に一致する最も広義の解釈によってのみ制限されることに留意されたい。
【図面の簡単な説明】
【図１】
表皮（１）及び真皮（２）の断面略図である。図Ａでは、皮下注射器（４）で例えばヒアルロン酸ナトリウム溶液を注入することにより表皮（１）と真皮（２）との間に水疱（３）を生成する。図Ｂでは、鋭利な器具（５）、例えば外科用メスで水疱を穿刺し、切開口（８）を通してワイヤ（７）の端部に取り付けた細胞凝集塊（６）を水疱内に注入する。ワイヤ（７）には、細胞凝集塊（６）を水疱（３）内に堆積するのを助ける結び目（９）がある。図Ｃでは、ワイヤ（７）を切開部（８）から部分的に引き抜き、ワイヤの結び目（９）が切開部（８）の外側になるようにする。ワイヤは、随意的に、表皮が注入細胞に向かって成長するのを案内する手段として創傷内に数日間放置することもできる。
【図２】
直径０．００３５インチの３１６ステンレス鋼ワイヤ（１１）の端部に取り付けたヒアルロン酸及びゼラチンの架橋混合物で作られた構造形成賦形剤（１０）の被写試料倍率１４Ｘの顕微鏡写真である。
【図３】
直径０．００３５インチのワイヤ（１１）の端部に取り付けた構造形成賦形剤（１２）の被写試料倍率１４Ｘの顕微鏡写真であり、ここでは、培養したヒト真皮乳頭細胞を賦形剤の上に播種して１０日間培養し、細胞及び部分的に分解された賦形剤（１２）の混合物である凝集塊を生成している。
【図４】
細胞凝集塊注入のための装置の概略図であり、ここでは、細胞凝集塊／賦形剤の組合せ体（１２）をワイヤ（１１）の端部に取り付け、皮下注射器（１３）の端部内に詰め込んでいる。この針は、短くて、真皮内斜端（１４）に特に鋭利な点（１５）を有するものである。この装置で水疱を穿刺した後、ワイヤを押しながら針（１３）を引き抜く。ワイヤ（１１）の結び目（１６）は、細胞凝集塊がワイヤ上に戻らないようにするとともに、細胞凝集塊が水疱内に確実に堆積するようにする。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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