(57)【要約】無傷光化学系を有する細胞または細胞部分を提供し、平面層に前記細胞または細胞部分を挿入し、試験物質を平面層上に、または平面層内に置き、励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させ、検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定し、検出器信号を光合成阻害の程度と関連付けることによる、物質の光合成阻害を検出する方法、システムおよびテストストリップ。【特許請求の範囲】
【請求項１】
無傷の光化学系を有する細胞または細胞部分を提供するステップと、
平面層に細胞または細胞部分を導入するステップと、
試験物質を平面層に、または平面層内に加えるステップと、
励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させるステップと、
検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定するステップと、
検出器信号を光合成阻害の程度と関連付けるステップと
を含む、物質の光合成阻害活性の検出方法。
【請求項２】
前記細胞が、藻類、微細藻類、シアノバクテリア、光合成系を有する他の細菌、植物細胞培養物または植物ホモジネート、選択した変異体または遺伝的に改変した生物のうちから選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞が、光合成系ＩＩが無傷のままの元気な細胞であることを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記平面層の基質が、好ましくはアガロースまたはアクリル酸または他のゲル化剤または他の粘性培地からなることを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記平面層の厚さが、０．１ｍｍ〜１０ｍｍの範囲であることを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記細胞または細胞部分が、緑藻類をアガロース中に包埋することによって平面層内に導入されることを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記試験物質を、ピンツール、注射器システムまたは適当な圧力技術によってスポットの形で平面層、または平面層内に加えることを特徴とする請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記発光が、蛍光および／または燐光の形態をとることを特徴とする請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記励起光源が、白色光源、あるいは狭スペクトル分布（例えば発光ダイオード）の光源であり、連続励起および／またはパルス変調技術に使用されることを特徴とする請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記励起光源が昼光であることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出器がまた、６８０ｎｍ超の波長範囲において感度がよく、イメージング特性を有することを特徴とする請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
使用する前記検出器が、例えば、ビジコンシステム、ＣＣＤカメラ、スキャナ、燐光イメージャまたは写真フィルムであることを特徴とする請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
時間分解光測定が、適切な場合、パルス励起ならびに励起と測定の相関付けと共に実施されることを特徴とする請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
励起照明とは独立に、光合成活性を制御するために補助照明または暗期を用いることを特徴とする請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
無傷の光化学系を有する細胞または細胞部分を提供するステップと、
物質ゾーンをその上に被着させた、薄層クロマトグラフィープレートまたは電気泳動層または別の支持体を提供するステップと、
平面層に細胞または細胞部分を導入するステップと、
細胞または細胞部分を伴う平面層を、用意した薄層クロマトグラフィープレートまたは電気泳動層またはその他の支持体に付着させるステップと、
励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させるステップと、
検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定するステップと、
検出器信号を光合成阻害の程度と関連付けるステップと
を含む、物質の光合成阻害活性の検出方法。
【請求項１６】
物質ゾーンが、クロマトグラフ分離または電気泳動分離によって生成されたことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
無傷光化学系を有する細胞または細胞部分を含む平面層と、
試験物質を平面層に、または平面層内に加える手段と、
平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させる励起光源と、
平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定する検出器と、
検出器信号を光合成阻害の程度と関連付ける評価手段と
を含む、物質の光合成阻害活性を検出するシステム。
【請求項１８】
試験物質を平面層に、または平面層内に、または平面層の支持体に加える手段が、注射器システム、ピンツールまたは適当な圧力スタンプあるいは噴射システムであってよいことを特徴とする請求項１７に記載のシステム。
【請求項１９】
使用する前記検出器が、例えば、ビジコンシステム、ＣＣＤカメラ、スキャナ、燐光イメージャまたは写真フィルムであることを特徴とする請求項１７または１８に記載のシステム。
【請求項２０】
前記評価が、イメージングによってまたは視覚的に実施されることを特徴とする請求項１７から１９のいずれかに記載のシステム。
【請求項２１】
平面層の前記支持体が、物質ゾーンをその上に被着させた薄層クロマトグラフフィープレートまたは電気泳動層であることを特徴とする請求項１７から２０のいずれかに記載のシステム。
【請求項２２】
試験物質をテストストリップまたはセンサーチップに加えた後、またそれに続いて励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させた後、また検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定した後、検出器信号に基づいて試験物質の光合成阻害の程度を決定することができる、無傷光化学系の細胞または細胞部分を伴う平面層を含む、物質の光合成阻害活性を検出するためのテストストリップまたはセンサーチップ。
【請求項２３】
前記テストストリップまたはセンサーチップの平面層が、アガロースまたはアクリル酸ゲルまたは他のゲル基質または粘性溶液中における緑藻類からなることを特徴とする請求項２２に記載のテストストリップまたはセンサーチップ。
【請求項２４】
前記細胞が、光合成系ＩＩが無傷のままの元気な細胞であることを特徴とする請求項２２または２３に記載のテストストリップまたはセンサーチップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、従来技術と比べて、小型化および著しく高い試料スループットを可能にする、光合成阻害物質を検出する装置および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
除草活性物質によって植物の光合成を阻害することは、物質の生態毒性評価にとって、また作物保護研究における除草活性物質の調査にとっても重要なパラメータである。したがって、光合成阻害活性を迅速に測定する強力な技法は、物質の生態毒性評価において、また新規な作物保護剤を探すスクリーニング法として非常に重要である。
【０００３】
高等植物と微細藻類の両方に対する様々な試験が、光合成阻害活性の検定法として知られている。知られている測定原理は、特に、クロロフィル蛍光または光合成酸素発生の測定に基づいている（Ｂ．Ｈｏｃｋ、Ｃ．Ｆｅｄｔｋｅ、Ｒ．Ｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ［Ｈｅｒｂｉｚｉｄｅ］、Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ、１９９５、５４および１１２〜１１４；Ｄ．Ｍｅｒｚ、Ｍ．Ｇｅｙｅｒ、Ｄ．Ａ．Ｍｏｓｓ、Ｈ．−Ｊ．Ａｃｈｅ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｊ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ、１９９６、３５４：２９９〜３０５）。従来技術を表すこれらすべての方法には、高スループット測定が可能でないという制限がある。というのは、これらの方法は、活性成分のスクリーニング、小型化、例えば高度の並列化を行うときに、または物質混合物の活性を検出する分析分離技術と直接組み合わせて実施するからである。
【０００４】
クロロフィル蛍光の測定は、光合成プロセスを研究するための確立された標準法である。それに使用される方法では、それらの方法論がプローブまたはキュベットを用いた測定に基づいているため、逐次測定のみを可能とする蛍光光度計を利用し、したがって高スループット用途には適していない。さらに、このような方法はまた、小型化するのが非常に難しい。この技法のための一般的な測定器は、特に、以下に記載したメーカーから入手可能である：ＡＤＣ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ．、Ｈａｎｓａｔｅｃｈ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｈｅｉｎｚ  Ｗａｌｚ  ＧｍＢＨ、Ｑｕｂｉｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．。
【０００５】
ＤＦ藻類試験［ＤＦ−Ａｌｇｅｎｔｅｓｔ］では、水の試料を緑藻類で処理し、続いて測光測定する（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ［Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅｎ  Ｗａｓｓｅｒｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇ］、第２巻：Ｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ  Ｇｅｗａｓｓｅｒｕｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇ、Ｇ．Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、１９９９、３８６〜３８８頁）。この試験では、第１のステップは、光合成色素錯体の遅延発光に関する非活性化速度を決定することである。対応する未処理の標準試料の非活性化速度と比べることによって、光合成阻害物質の有無に関する結論が引き出される。この方法は、連続して試料を処理することだけが可能であり、したがって、高スループット測定に適していない。
【０００６】
さらなる制限は、装置の寸法により、ＤＦ藻類試験の試料量がミリリットル程度であることに関する。この方法では小型化が可能にならない。さらに、実際の試料に特徴的な物質混合物は、この方法によりその全体しか評価することができない。試料成分間の相互作用の可能性があるため、偽陽性のリスクがある。
【０００７】
高等植物に関する試験も知られている（例えば、Ｗ．Ｂｉｌｇｅｒ、Ｕ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｍ．Ｂｏｃｋ、Ｏｅｃｏｌｏｇｉａ  １０２、１９９５、４２５〜４３２頁を参照のこと）。これらの試験では、蛍光を測定する方法によって光合成阻害に関する結果が得られる。この場合も、試験装置の形状により、高度の並列化および小型化が妨げられる。この場合も、物質混合物を全体としてしか評価することができない。
【０００８】
欧州特許第５８８  １３９  Ａ１では、物質混合物の試験が記載されている。物質混合物中の諸物質の生物学的作用は、クロマトグラフゾーンで試験すべき物質への物質混合物のクロマトグラフィーによる分離と、それに続く分離された個々の画分の生物検定（毒性）の組合せによって試験される。生物検定では、個々の画分を発光微生物と接触させ、それらの生物発光が個々の画分で局所的に変化することでこの画分の生物学的作用が示される。
【０００９】
活性検定の並列化および小型化の可能性は、欧州特許第１  ０４３  ５８２  Ａ２に記載されている。欧州特許第１  ０４３  ５８２  Ａ２に開示されている方法によれば、活性センサーをその中に懸濁させた拡散律速基質からなるセンサー層が使用されている。試験物質の生物活性は、このセンサー層が試料と接触したときの光学信号によって示される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、従来技術と比べて、小型化および著しく高い試料スループットを可能にする、光合成阻害物質を検出する装置および方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の目的は、以下のステップを含む、物質の光合成阻害活性の検出方法によって達成される。
−  無傷の光化学系を有する細胞または細胞部分を提供するステップ
−  平面層内に細胞または細胞部分を導入するステップ
−  試験物質を平面層に、または平面層内に加えるステップ
−  励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させるステップ
−  検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定するステップ、および
−  検出器信号を光合成阻害の程度と関連付けるステップ。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
細胞は、藻類、微細藻類、光合成系を有する細菌、特にシアノバクテリア、植物細胞培養物または植物ホモジネートに由来するものであってよい。この方法はまた、無傷の光学系ＩＩ（ＰＳＩＩ）が存在する限り、生命力が損なわれている細胞でも動作する。
【００１３】
この細胞はまた、選択した変異体または遺伝的に改変した生物に由来するものであってもよい。
【００１４】
平面層はゲル層であることが好ましい。この平面層の厚さは、０．１ｍｍ〜１０ｍｍの範囲であることが好ましい。細胞または細胞部分は、例えば緑藻類をアガロースまたはアクリル酸ゲルまたは他のゲル化剤または粘性培地中に包埋することによって、平面層内に導入することができる。
【００１５】
平面層、または平面層内への試験物質の添加は、例えば注射器技術またはピンツールまたは適当な圧力技術（噴射システムなど）によって好ましくはスポットの形で行う。
【００１６】
発光は、蛍光および／または燐光（遅延発光）である。燐光の測定は、励起と発光を区別する必要がないので、蛍光の測定に比べて有利である。一方、蛍光を用いた測定は、その感度がより高いために有利である。
【００１７】
適当な励起光源には、白色光源、例えばハロゲン光または蛍光灯だけでなく、狭スペクトル域内で発光する光源、例えば発光ダイオードもある。昼光も、励起光源として作用することができる。励起は、連続でもパルスモード（パルス変調技術）でもよい。
【００１８】
検出は、６８０ｎｍ超の波長範囲で放射された発光のイメージングが充分な感度で可能な測定器を用いて行う（例えばビジコンシステム、ＣＣＤカメラ、スキャナ、燐光イメージャ、写真フィルム）。
【００１９】
時間分解光測定は、適切な場合、パルス励起ならびに励起と測定の相関付けと共に実施することもできる。
【００２０】
励起露光に関係なく、光合成活性を制御するために、補助照明または暗期（ｄａｒｋ  ｐｈａｓｅ）を用いることができる。
【００２１】
平面層に、または平面層上に加えた本発明による光合成阻害試験物質は、光合成色素錯体の発光挙動に影響を与える。平面層に加えたアトラジンなどの光合成阻害剤のスポットは簡単に検出でき、多数のスポットがある場合は、それらの活性によって、例えば遅延発光（燐光）をかなり減衰させることによって、ビデオイメージング法を用いて同時に検出することができる。別の方法として、光化学系ＩＩが阻害されたときの光色素の蛍光の増大を用いて、ＰＳＩＩ−活性物質スポットをイメージングすることもできる。
【００２２】
本発明はさらに、本発明による方法を用いて物質の光合成阻害活性を検出するシステムに関する。このシステムは、以下のものを含む。
−  無傷の光化学系を有する細胞または細胞部分を含む平面層
−  試験物質を平面層に、または平面層内に加える手段
−  平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させる励起光源
−  平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定する検出器
−  検出器信号を光合成阻害の程度と関連付ける評価手段。
【００２３】
試験物質を平面層に、または平面層内に加える手段は、例えば注射器システム、鉄鋼針（ピンツール）または適当な圧力スタンプ、また噴射システムであってもよい。
【００２４】
この評価は、視覚的に、または適当なイメージング技術を用いて行うことができる。
【００２５】
本発明はさらに、試験物質を平面層に、または平面層内に加えた後、またそれに続いて励起光源によって平面層内の細胞または細胞部分の発光を励起させた後、また検出器を用いて平面層内の細胞または細胞部分の発光を測定した後、検出器信号に基づいて光合成阻害の程度を決定することができる、本発明による方法を用いて物質の光合成阻害活性を検出するための、無傷の光化学系を有する細胞または細胞部分を含む平面層を含むテストストリップまたはセンサーチップに関する。
【００２６】
テストストリップまたはセンサーチップの平面層は、アガロースまたはアクリル酸ゲル中における緑藻類からなることが好ましい。この方法の場合、長期間にわたって貯蔵したときでさえ光合成阻害活性の試験系としてのその機能が保持される、安定な検出層を調製することができる。
【００２７】
本発明による方法の利点は、光合成阻害物質の検出方法の高度の小型化および並列化である。並列化により、試料の高スループットを達成することができる。小型化により、かなり少ない材料で間に合わせることができる。
【００２８】
本発明による方法により、数千個の物質スポットを９ｃｍ＊１２ｃｍの範囲に適用することが可能になり、したがって並列化だけでなく、試験容積５００ｎｌ未満において試験物質１０ｎｇ未満の小型化の程度を達成することが可能になる。
【００２９】
空間分解分析では、まず物質混合物を、薄層クロマトグラフィープレートまたは電気泳動層上でクロマトグラフィー分離または電気泳動分離にかけ、続いて請求項１５に記載の本発明による方法を用いて、その画分の光合成阻害活性を分析することによって、面倒なく薄層クロマトグラムまたは電気泳動図中の物質混合物の成分である光合成阻害物質の同定が可能になる。
【００３０】
空間分解分析ではまた、支持体の異なる位置への光合成阻害物質の適用、および本発明による方法を用いたこれらのスポットの光合成阻害活性の分析が可能になる。
【００３１】
本発明による方法は、光合成阻害剤を最適化するための活性成分調査に使用することができる。さらなる適用分野は、例えば、汚染物質に帰せられる可能性のある排水および環境試料中の除草活性の特殊測定である。
【実施例１】
【００３２】
実施例１は、本発明による層システムで誘起蛍光を用いた、光合成阻害物質の本発明による方法を用いた具体的な検出を示す。
【００３３】
緑藻類（イカダモ（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ  ｓｕｂｓｐｉｃａｔｕｓ））をその中に懸濁させたアガロース薄層（層厚さ約４ｍｍ）を使用して、光合成阻害作用を検出した。
【００３４】
緑藻類を以下の通りに増殖させた。
イカダモ貯蔵物由来の藻類を使用して、無菌の１００ｍｌ三角フラスコに増殖培地５０ｍｌを播種する。続いて、この溶液を２３℃で７日間、蛍光灯を備えた制御された環境のキャビネット中で露光した状態で１２５ｒｐｍで培養する。
【００３５】
増殖培地には、
炭酸ナトリウム  ５８ｍｇ／ｌ
硝酸ナトリウム  ４９６ｍｇ／ｌ
リン酸水素カリウム  ３９ｍｇ／ｌ
硫酸マグネシウム七水和物  ７５ｍｇ／ｌ
塩化カルシウム二水和物  ３６ｍｇ／ｌ
Ｔｉｔｒｉｐｌｅｘ  ＩＩＩ  １０ｍｇ／ｌ
クエン酸  ３ｍｇ／ｌ
が含まれ、１Ｎ  ＨＣｌおよび／または１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨ７．５±０．２にする。この培地を１２１℃で２０分間加圧滅菌してから使用する。
【００３６】
藻類層の調製：
藻類懸濁液（光学濃度約２ｍＡＵ）２５ｍｌを１％強度アガロースＭＰ溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  ＧｍｂＨ  Ａｒｔ．Ｎｏ．１３８８９８３）１５ｍｌと、４０℃以下の温度で均質になるまで混合する。この懸濁液を冷却する前に１穴プレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ、Ｏｍｎｉ  Ｔｒａｙ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｗｅｌｌ  ８６×１２８ｍｍ）中に入れ、そこで冷却後に均一に懸濁した藻類を含むゲル層が形成される。この検出層を即座に、あるいは数週間貯蔵した後に使用して、光合成阻害作用を測定することができる。
【００３７】
検出層への物質の転移およびインキュベート：
本発明による並列活性試験を実施するために、９６本ピンツール（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  ９６Ｐｉｎ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｏｒ）を用いて、藻類層にマイクロタイタープレートからの試験物質を型押しする（ｓｔａｍｐ）。したがって、マイクロタイタープレート上の試料被着物（表１参照）も、当該の物質の位置を藻類層上に移す。試験物質は、マイクロタイタープレート中でＤＭＳＯ溶液（１穴当り１００μｌ中物質１００μｍｏｌ）の形で存在した。ピンツールを用いて、それぞれの場合に、１ピン当り試料溶液約０．５μｌを検出層に移した。型押しした検出層を室温で１５分インキュベートした後、蛍光測定を行った。
【００３８】
【表１】
2004533853.tif 000002
2004533853.tif 000003
2004533853.tif 000004
【００３９】
蛍光イメージングによる活性の並列検出：
ビデオイメージングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｇｈｔ  Ｉｍａｇｅｒ  ＮｉｇｈｔＯＷＬ）を使用して、蛍光イメージを記録した。測定を実施するために、１穴プレートをライトテーブル上に置いた。この白色光源は、フィルター（Ｏｍｅｇａ  ４７５  ＲＤＦ  ４０）によって波長を４７５ｎｍ未満に制限した。蛍光を選択的に検出するために、カメラのレンズに６８０ｎｍ超の光を通過させるフィルター（Ａｎｄｏｖｅｒ  Ｐ／Ｎ：６８０ＦＳ１０−５０）を装備した。蛍光励起およびカメラによる記録を、１秒間にわたって同時に行った。ビデオイメージングシステムのスクリーン上で、蛍光イメージを視覚的に評価した。文書化するために、ＴＩＦＦファイルを適当なグラフィックプログラムでフォーマットし、ラベル表示した（Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ５．０、ＭＳ  Ｐｏｗｅｒｐｏｉｎｔ  ９７）。
【００４０】
結果：
蛍光イメージから、２２個の光点（ｌｉｇｈｔ  ｓｐｏｔ）が現れた（図１参照）。これらのスポットに被着した物質は、光化学系と相互作用するので蛍光を増大させる。知られている光合成阻害剤であるメタミトロンを、対照物質としてＦ１２、Ｇ１２およびＨ１２の位置に５０ｎｇ、１２５ｎｇおよび２５０ｎｇの量で加えた。この並列検定で示したすべての物質および表１中でＸ印を付けた物質は、知られている光化学系ＩＩ阻害剤である。
【実施例２】
【００４１】
実施例２は、本発明による層システムで燐光を用いた、光合成阻害物質の本発明による方法を用いた具体的な検出を示す。
【００４２】
藻類層を実施例１と同様にして調製した。
【００４３】
実施例と同様の試験物質を藻類層の同一の位置に加えた。インキュベーションも同様に１５分間行った。
【００４４】
燐光イメージングによる活性の並列検出：
ビデオイメージングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｇｈｔ  Ｉｍａｇｅｒ  ＮｉｇｈｔＯＷＬ）を使用して、燐光メージを記録した。測定のために、ＮＵＮＣプレートを、白色光源を備えたライトテーブル上に置いた。燐光を記録するために、カメラレンズの前にフィルターを挿入しなかった。藻類層を９０秒間露光して、燐光を励起させた。１５秒後に、このイメージをカメラで露光時間３０秒で撮影した。ビデオイメージングシステムのスクリーン上で、燐光イメージを視覚的に評価した。文書化するために、ＴＩＦＦファイルを適当なグラフィックプログラムでフォーマットし、ラベル表示した（Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ５．０、ＭＳ  Ｐｏｗｅｒｐｏｉｎｔ  ９７）。
【００４５】
結果：
燐光イメージから、２２個の灰色点（ｄａｒｋ  ｓｐｏｔ）が現れた（図２参照）。これらのスポットに被着した物質は、光化学系と相互作用するので燐光をより急速に不活性化させる。知られている光合成阻害剤であるメタミトロンを、対照物質としてＦ１２、Ｇ１２およびＨ１２の位置に５０ｎｇ、１２５ｎｇおよび２５０ｎｇの量で加えた。この結果は、蛍光イメージングの結果とよく一致している（実施例１も参照のこと）。この並列検定で示したすべての物質は、知られている光化学系ＩＩ阻害剤である。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】蛍光イメージから、２２個の光点（ｌｉｇｈｔ  ｓｐｏｔ）が現れた。
【図２】燐光イメージから、２２個の灰色点（ｄａｒｋ  ｓｐｏｔ）が現れた。
【図１】
2004533853.tif 000005
【図２】
2004533853.tif 000006
【国際公開パンフレット】
2004533853.tif 000007
2004533853.tif 000008
2004533853.tif 000009
2004533853.tif 000010
2004533853.tif 000011
2004533853.tif 000012
2004533853.tif 000013
2004533853.tif 000014
2004533853.tif 000015
2004533853.tif 000016
2004533853.tif 000017
2004533853.tif 000018
2004533853.tif 000019
2004533853.tif 000020
2004533853.tif 000021
2004533853.tif 000022
2004533853.tif 000023
2004533853.tif 000024
2004533853.tif 000025
2004533853.tif 000026
2004533853.tif 000027
2004533853.tif 000028
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004533853.tif 000029
【国際調査報告】
2004533853.tif 000030
2004533853.tif 000031
2004533853.tif 000032
2004533853.tif 000033
2004533853.tif 000034
2004533853.tif 000035