(57)【要約】本発明は、ＨＩＶに対する効果的な予防用及び治療ワクチンを得るために、細胞毒性Ｔ−細胞活性を拮抗しないで、ＨＩＶ−１特異的免疫応答を誘発できる新規及び修飾されたペプチドを含んで成る。前記ペプチドは、ＨＩＶ ｇａｇ ｐ１７及びｐ２４タンパク質の保存された領域に基づかれている。前記ペプチドの少なくとも１つを含んで成る遊離−又はキャリヤー−結合された形での抗原、前記抗原の少なくとも１つを含むワクチン組成物、そのような抗原を用いてＨＩＶ又はＨＩＶ特異的ペプチドにより誘発される検体を検出するためのイムノアッセイキット及び方法が記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記アミノ酸配列群：
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ （配列番号１）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
ペプチド誘導体の位置１のＸａａは、Ｈｉｓ， Ｌｙｓ又はＡｒｇであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置４のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置５のＸａａは、Ａｌａ又はＬｅｕであり、
位置６のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ， Ａｒｇ又はＡｓｎであり、
位置７のＸａａは、Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１１のＸａａは、Ａｒｇ， Ｌｙｓ， Ｇｌｙ又はＡｓｎであり、
位置１２のＸａａは、Ｐｈｅ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
位置１３のＸａａは、Ａｌａ， Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＣｙｓであり、
位置１５のＸａａは、Ａｓｎ， Ａｓｐ又はＳｅｒであり、
位置１６のＸａａは、Ｐｒｏ， Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｇｌｙ， Ｓｅｒ， Ａｌａ， Ａｓｐ又はＡｓｎであり、
位置１８のＸａａは、Ｌｅｕ又はＰｈｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置２０のＸａａは、Ｇｌｕ， Ｇｌｙ， Ａｓｐ又はＩｌｅであり、
位置２１のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
前記ペプチドは、配列番号１の配列の少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成る］；
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｙ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｖａｌ−Ｚ−Ｔｙｒ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ Ａｌａ Ｘａａ２３ Ｘａａ２４ Ｘａａ２５ Ｘａａ２６ （配列番号４）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
位置１のＸａａは、Ｐｒｏ， Ｔｒｙ又はＰｈｅであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＬｅｕであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｍｅｔ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＶａｌであり、
位置５のＸａａは、Ａｎｓ， Ａｓｐ又はＴｈｒであり、
位置６のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置７のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｌｙｓ又はＧｌｙであり、
位置９のＸａａは、Ｇｌｎ又はＩｌｅであり
位置１３のＸａａは、削除され、
位置１４のＸａａは、Ａｌａ， Ｓｅｒ， Ａｓｎ， Ｖａｌ又はＰｒｏであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｍｅｔ又はＶａｌであり、
位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｐｒｏ又はＡｌａであり、
位置１８のＸａａは、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｌｅｕ又はＳｅｒであり、
位置２１のＸａａは、Ａｎｓ， Ｐｈｅ又はＶａｌであり、
位置２３のＸａａは、Ｔｒｐ， Ｔｙｒ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２５のＸａａは、Ｌｙｓ， Ａｒｇ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２６のＸａａは、Ｖａｌ， Ａｌａ， Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号４の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成り、そして−Ｚ−は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は ［Ｇｌｙ］ｎ（ここで、ｎは１，２又は３である）の意味を有する］；
Ｘａａ１ Ａｌａ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ａｌａ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ ‐Ｚ‐Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｘａａ１９ Ａｌａ Ｘａａ２１ Ｘａａ２２ （配列番号９）
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｙｒ， Ｔｒｐ， Ｐｈｅ又はＧｌｙであり、
位置３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｉｌｅ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｐｒｏ又はＳｅｒであり、
位置５のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙ， Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
位置７のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置８のＸａａは、Ａｓｎ又はＴｙｒであり、
位置９のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＡｌａであり、
位置１２のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
位置１３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＡｌａであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ又はＩｌｅであり、
位置１５のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１９のＸａａは、Ａｌａ又はＧｌｙであり、
位置２０のＸａａは、Ａｌａであり、
位置２１のＸａａは、Ｍｅｔ， Ｌｅｕ， Ｃｙｓであるか又は存在せず、
位置２２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号９の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸から成り、そしてリンカー‐Ｚ‐は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は［Ｇｌｙ］ｎ（ここでｎは１，２又は３である）の意味を有する］；
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１（配列番号１５）：
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置２のＸａａは、Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
位置７のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ又はＳｅｒであり、
位置８のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置９のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１１のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｐｒｏ， Ｖａｌ又はＧｌｎであり、
位置１２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ａｌａ又はＨｉｓであり、
位置１３のＸａａは、Ｇｌｕ又はＧｌｙであり、
位置１４のＸａａは、Ｇｌｎ又はＨｉｓであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙ， Ａｌａ， Ｇｌｎ， Ｔｈｒ， Ａｓｎ， Ａｒｇ， Ｈｉｓ又はＩｌｅであり、
位置１７のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置１８のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＩｌｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２１のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号１５の配列が少なくとも６個の連続したアミノ酸から成る］
から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列を含んで成り、
前記配列の末端は、遊離カルボキシル−又はアミノ基、アミド、アシル、アセチル又はそれらの塩であり得、
複数のＣｙｓ残基は、鎖間ジスルフィド結合の一部、−Ｓ−（ＣＨ２）ｐ−Ｓ−又は−（ＣＨ２）ｐ−架橋（ここでｐは１〜８である）を形成し、任意には、１又は複数のヘテロ原子、例えばＯ， Ｎ及びＳにより介在され、そして／又は前記ペプチド配列は、固体支持体に固定されていることを特徴とするペプチド。
【請求項２】
前記配列番号１のアミノ酸配列が、配列番号２及び３の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項３】
前記配列番号４のアミノ酸配列が、配列番号５，６及び８の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項４】
前記配列番号９のアミノ酸配列が、配列番号１１及び１２の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項５】
前記配列番号１５のアミノ酸配列が、配列番号１４であることを特徴とする請求項１記載のペプチド。
【請求項６】
少なくとも請求項１記載のペプチドを含んで成ることを特徴とする抗原。
【請求項７】
配列番号１，４，９及び１５の群の少なくとも１つから選択された少なくとも１つのペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項６記載の抗原。
【請求項８】
請求項６記載の抗原、医薬的に許容できる稀釈剤及び任意にはアジュバント、キャリヤー及び／又はビークル、並びに任意には追加の免疫刺激化合物を含んで成ることを特徴とするワクチン組成物。
【請求項９】
配列番号１，４，９及び１５の群から選択された少なくとも１つのペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項８記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
配列番号３，６，１１及び１４のペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項８記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、無菌水溶液に溶解され、そして前記任意の免疫刺激化合物が顆粒球マクロファージコロニー刺激因子であることを特徴とする請求項８〜１０のいずれか１項記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
モノホスホリン脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、完全な不完全フロイントアジュバント、又はアルミニウムヒドロキシドの群から選択されたアジュバントを含んで成ることを特徴とする請求項８〜１１のいずれか１項記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
請求項６記載の抗原が、リポペプチド及び／又はリポソーム配合物として配合されていることを特徴とするワクチン組成物。
【請求項１４】
体液サンプルにおけるＨＩＶ又はＨＩＶ−特異的ペプチド又はタンパク質により誘発される抗体の検出方法であって、抗原が請求項１，２，３，４及び５記載のペプチドから選択されるイムノアッセイに、前記サンプルをゆだねることを特徴とする方法。
【請求項１５】
体液のサンプルにおけるＨＩＶ又はＨＩＶ−特異的ペプチド又はタンパク質により誘発される抗体の検出のためのイムノアッセイキットであって、診断用抗原が請求項１〜５のいずれか１項記載のペプチドであることを特徴とするキット。
【請求項１６】
請求項６及び７記載の抗原と選択的に反応することができることを特徴とする抗体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＨＩＶ ｇａｇ ｐ１７及びｐ２４の保存された領域に基づく新規ペプチド、少なくとも１つの前記ペプチドを含んで成る遊離の又はキャリヤー−結合形の抗原、少なくとも１つの前記抗原を含むワクチン組成物、そのような抗原を用いて、ヒト免疫欠損ウィルス（ＨＩＶ）又はＨＩＶ‐特異的ペプチドにより誘発される抗体を検出するイムノアッセイキット及び方法に関する。
【０００２】
背景：
ＨＩＶ感染の世界的流行を制御する切迫した必要性であり、そしてＨＩＶに対するワクチンの開発がＡＩＤＳ研究における主要目的の１つである。一般的に、ワクチンは、抗原提供細胞を活性化し、Ｔ−細胞応答における遺伝的制限を克服し、そしてＴ−及びＢ−記憶細胞を生成すべきである。ウィルス集団の変動性は、効果的なＨＩＶワクチンの獲得においてはさらなる困難性を提供する。ＡＩＤＳに対するワクチンを開発する前進性試みを通しての可能性はまだ報告されていない。抗原−特異的体液性及び細胞−介在性免疫性の誘発は、効果的な予防用及び治療用ワクチンの開発のために決定的である。中和抗体を包含する免疫系のすべての３種のアーム、すなわちＣＤ８＋ＣＴＬ及びＴ−ヘルパー１（ＴＨ１）細胞が、ＨＩＶに対する保護免疫性のために必要とされる。
【０００３】
ＣＴＬは他のウィルス感染を取り除き（Ａｄａ， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．， ７２： ４４７−４５４， １９９４）、そしてＣＴＬは、Ａｄａなど．， 前記によれば、ウィルス子孫が生成され、そして細胞溶液により放出される前、感染の初期、感染された標的物を溶解することができることが知られている。この焦点は、抗原の選択、及び異なったアジュバントの企画及び評価に対してであった。異なったインビトロ及びインビボ研究に使用される抗原は、すべて、粗タンパク質〜いくつかのＨＩＶタンパク質からの種々の合成ペプチドであった。莫大な数の研究がｇｐ１２０のＶ３ループに対して行われて来た。Ｂ‐及びＴ‐細胞応答の誘発は観察されていないが、しかしながら、ｇｐ４１の保存された領域からのペプチドが感染の増強を示していることが、インビトロ研究からの報告されている（Ｂｅｌｌ Ｓ．Ｊ．， など．， Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ８７ （１）： ３７−４５ （Ｊａｎｕａｒ． １９９２）。
【０００４】
ワクチン候補体における天然に存在するＨＩＶ配列は、感染された細胞の細胞表面上に提供されるエピトープの外観を変えることによって隠れるウィルス固有の能力のために、安定した免疫応答を刺激することはできない。免疫系は、特定のアミノ酸配列が、実際、その重要なアミノ酸が隠されている場合、適切であるとは思わない。
【０００５】
ｇａｇ ｐ２４タンパク質に対する抗体の力価の最近の研究は、ＡＩＤＳの開発に対する遅い進行が高い力価に関連し、そしてＡＩＤＳの開発に対する早い進行が低い力価に関連することを示している。低いｐ２４抗体力価を有する個人は、高いｐ２４抗体力価を有する個人よりも、有意に早くＡＩＤＳを進行することが示されており（Ｚｗａｒｔ Ｇ．， など．， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１， ｐ． ２８５−９３， Ｊｕｎｅ １９９４）、このことは、ｇａｇ及びｐ２４が特に、ＡＩＤＳの進行を制御するキー役割を演じ得ることを示す。
新規ＨＩＶ ｐ２４ペプチドは、ＷＯ９１／１３３６０号に記載されており、ここでペプチドは、誤った及び真実の診断されたＨＩＶ−陽性血清サンプルを区別する方法に使用される。
【０００６】
Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｒ． Ｐ．， など．， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １４７， ｐ．１５１２−１５２１， Ｎｏ．５， Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １ （１９９１） は、３人のＨＩＶ−１血清陽性個人におけるｇａｇ−特異的ＣＴＬ−応答の特異性の分析を記載し、ｇａｇ−特異的ＣＴＬ−応答がＨＬＡクラスＩ制限されるＣＤ３＋ＣＤ８＋リンパ球により介在されることが見出された。Ｇｏｕｌｄｅｒ Ｐ．Ｊ．Ｒ． など．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． ７４． ｐ．５６７９−５６９０， Ｎｏ． １２， Ｊｕｎｅ （２０００） は、異なった集団におけるＨＩＶのｐ１７及びｐ２４の異なった部分からのＣＴＬ応答を研究している。前記発見は、一定の免疫優性領域が存在するが、しかしながら、アミノ酸組成におけるマイナーな差異が応答における大きな差異を引き起こすことができる。
【０００７】
ＥＰ−Ａ−０３５６００７号は、抗原決定因子を開示し、特にそれは、ＨＩＶ−１に存在するタンパク質に関連し、そしてＡＩＤＳに対する可能性あるワクチンのための基材として使用され得る合成ポリペプチド配列に関する。
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｅ．Ｓ． など．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｖｏｌ． ２７８， ２１ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９９７， ｐ．１４４７−１４５０は、ウィルス特異的ＣＤ４＋ Ｔヘルパーリンパ球が、多くの慢性ウィルス感染における効果的な免疫性の維持に関して決定的であるが、しかし慢性ヒト免疫欠損ウィルス−タイプ１（ＨＩＶ−１）感染においては特徴的に検出できないことを記載している。ｐ２４に対するＨＩＶ−１−特異的増殖応答は、ウィルス負荷に対して反比例した。彼らは、ＨＩＶ−特異的ヘルパー細胞がたぶん、免疫治療介在及びワクチン開発において重要であることを結論づける。
【０００８】
ＥＰ０２３０２２２号、ＥＰ０２７０１１４号、ＤＥ３７１１０１６号及びＧＢ２１８８６８９号（すべて、Ｆ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ ＆ Ｃｏ． Ａｋｉｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔの名称の特許である）は、ＨＴＬ ＶＩＩ Ｇａｇ／Ｅｎｖ遺伝子タンパク質又は融合タインパク質の組換え発現及び精製に関係している。生来の配列から成るタンパク質は、均質性に精製され、そしてＡＩＤＳに関連するウィルスに対する抗体の検出のための診断試験のための基礎として使用され得る。ｇａｇ／ｅｎｖタンパク質はまた、予防用免疫化を通してＡＩＤＳに対する保護のためのワクチンとしての使用のために配合され得る。
【０００９】
診断及び治療の観点から、アッセイ又は治療の部分としてｐ２４を用いることに関する主要問題は、可能性ある突然変異誘発された配列に基づく反復された追加免疫化を通して、自己抗体を創造することができる、不良な特異性を有する多数の抗体の生成を刺激する、ｐ２４上の多数のエピトープと関連している（Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ａｌｆａ／ｂｅｔａ Ｔ−ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ； ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｎｉｃｒｙ， Ｌａｋｅ Ｄ．Ｆ．， など．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， （２３）： １０８４９−５３， Ｎｏｖ． ８， １９９４）。さらに、ｐ２４抗体力価は、エンベロープタンパク質（ｇｐ１２０及びｇｐ４１）に関するのと同じ高さのレベルに達しないことが報告されている。
【００１０】
通常、ｐ２４に対する抗体は感染の非常に初期相で進行するが、しかしその力価は、初期感染期間の後、かなりすばやく安定化される。後に、ｐ２４の力価は、徐々に低下するが、ところがｇｐ１６０に関しては逆のことが生じる。それらの発見はまた、細胞毒性Ｔ−細胞活性が天然に存在するＨＩＶ−１ｇａｇ変異体により拮抗される最近の報告に関して見出され得る（Ｋｌｅｎｅｒｍａｎ Ｐ．， など．， Ｎａｔｕｒｅ ２： ３６９ （ｂ４７９）， ｐ．３５５， ２ Ｊｏｎｅ １９９４）。これは、ｐ２４力価の急速な安定化が見られ、そしてそれが、後に、低下し始める理由の１つであり得る。
【００１１】
上記背景のデータに基づいて、本発明者は、効果的な予防及び治療用ワクチンのための必要性を満たすために、細胞毒性Ｔ−細胞活性を拮抗しないで、ｐ１７及びｐ２４エピトープを模倣することができる新規合成ペプチドを企画する可能性を調べることを決定した。
ＣＴＬ及び抗体応答を誘発できるペプチドの開発のための可能性ある鋳型として固定されるｐ１７の配列は、Ｋｏｒｂｅｒ Ｂ．， など．， Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ＡＩＤＳ １９９９ Ｅｄｓ． Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ Ｇｒｏｕｐ， Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ， ＮＭにより公開されている。その同定されたアミノ酸配列は、アミノ酸３３と５３との間に位置する；下記表１を参照のこと：
【００１２】
【表１】
2004508381.tif 000002
【００１３】
本明細書を通して与えられる配列におけるアミノ酸を定義する１文字及び３文字コードは、国際標準に従い、そしてテキストブック、例えばＬｅｈｎｉｎｇｅｒ Ａ．Ｌ， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８２に与えられている。第２欄の右側に与えられるアミノ酸は、配列の天然の変動性を表す。アミノ酸の修飾によるエピトープの全体的な電荷の変化は、免疫原性の有意な改良性を包含する。修飾は、元のヘリカルから、エピトープを免疫系に、異なった態様で及び予測とおりに高い程度に暴露するシート構造への可能なコンホメーション変化を包含する。
【００１４】
Ｔ−細胞エピトープの数をさらに高めるために、及びｇａｇタンパク質内のエスケープ変異体の進行のための確率を低めるためには、ｐ２４からの３個の追加のペプチド配列は、それぞれＨｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ＡＩＤＳ １９９９； Ａ Ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ， Ｅｄｓ． Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ Ｇｒｏｕｐ， Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓに公開される、残基１３３−１５８、１７８−１９９及び２３２−２５１からの次の３種の配列に基づかれ；下記表２〜４を参照のこと。
【００１５】
【表２】
2004508381.tif 000003
【００１６】
【表３】
2004508381.tif 000004
【００１７】
【表４】
2004508381.tif 000005
【００１８】
いくつかの修飾されたペプチドが、ＨＩＶ−１に対して特異的であり、且つ敏感であるユニークな配列を決定するために合成された。
【００１９】
発明の記載：
本発明のペプチドは、ＨＩＶ−１エピトープのユニーク性を維持する性質を有する、上記に記載されるＨＩＶ−１ｇａｇタンパク質ｐ１７及びｐ２４の４種の異なった保存された領域に起因する。さらに、本発明の新規ペプチドは、認識される細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）拮抗効果を有さず、そして少なくとも１つの可能性あるＣＴＬエピトープを有するであろう。
【００２０】
上記基準を満たす本発明のペプチドは、次の群：
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ （配列番号１）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
ペプチド誘導体の位置１のＸａａは、Ｈｉｓ， Ｌｙｓ又はＡｒｇであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置４のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置５のＸａａは、Ａｌａ又はＬｅｕであり、
位置６のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ， Ａｒｇ又はＡｓｎであり、
位置７のＸａａは、Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１１のＸａａは、Ａｒｇ， Ｌｙｓ， Ｇｌｙ又はＡｓｎであり、
位置１２のＸａａは、Ｐｈｅ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
【００２１】
位置１３のＸａａは、Ａｌａ， Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＣｙｓであり、
位置１５のＸａａは、Ａｓｎ， Ａｓｐ又はＳｅｒであり、
位置１６のＸａａは、Ｐｒｏ， Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｇｌｙ， Ｓｅｒ， Ａｌａ， Ａｓｐ又はＡｓｎであり、
位置１８のＸａａは、Ｌｅｕ又はＰｈｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置２０のＸａａは、Ｇｌｕ， Ｇｌｙ， Ａｓｐ又はＩｌｅであり、
位置２１のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
前記ペプチドは、配列番号１の配列の少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成る］；
【００２２】
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｙ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｖａｌ−Ｚ−Ｔｙｒ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ Ａｌａ Ｘａａ２３ Ｘａａ２４ Ｘａａ２５ Ｘａａ２６ （配列番号４）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
位置１のＸａａは、Ｐｒｏ， Ｔｒｙ又はＰｈｅであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＬｅｕであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｍｅｔ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＶａｌであり、
位置５のＸａａは、Ａｎｓ， Ａｓｐ又はＴｈｒであり、
位置６のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置７のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｌｙｓ又はＧｌｙであり、
位置９のＸａａは、Ｇｌｎ又はＩｌｅであり
位置１３のＸａａは、削除され、
【００２３】
位置１４のＸａａは、Ａｌａ， Ｓｅｒ， Ａｓｎ， Ｖａｌ又はＰｒｏであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｍｅｔ又はＶａｌであり、
位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｐｒｏ又はＡｌａであり、
位置１８のＸａａは、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｌｅｕ又はＳｅｒであり、
位置２１のＸａａは、Ａｎｓ， Ｐｈｅ又はＶａｌであり、
位置２３のＸａａは、Ｔｒｐ， Ｔｙｒ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２５のＸａａは、Ｌｙｓ， Ａｒｇ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２６のＸａａは、Ｖａｌ， Ａｌａ， Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号４の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成り、そして−Ｚ−は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は ［Ｇｌｙ］ｎ（ここで、ｎは１，２又は３である）を有する］；
【００２４】
Ｘａａ１ Ａｌａ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ａｌａ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ ‐Ｚ‐Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｘａａ１９ Ａｌａ Ｘａａ２１ Ｘａａ２２ （配列番号９）
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｙｒ， Ｔｒｐ， Ｐｈｅ又はＧｌｙであり、
位置３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｉｌｅ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｐｒｏ又はＳｅｒであり、
位置５のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙ， Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
位置７のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置８のＸａａは、Ａｓｎ又はＴｙｒであり、
位置９のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＡｌａであり、
位置１２のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
【００２５】
位置１３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＡｌａであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ又はＩｌｅであり、
位置１５のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１９のＸａａは、Ａｌａ又はＧｌｙであり、
位置２０のＸａａは、Ａｌａであり、
位置２１のＸａａは、Ｍｅｔ， Ｌｅｕ， Ｃｙｓであるか又は存在せず、
位置２２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号９の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸から成り、そしてリンカー‐Ｚ‐は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は［Ｇｌｙ］ｎ（ここでｎは１，２又は３である）を有する］；
【００２６】
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１（配列番号１５）：
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置２のＸａａは、Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
位置７のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ又はＳｅｒであり、
位置８のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置９のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１１のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｐｒｏ， Ｖａｌ又はＧｌｎであり、
【００２７】
位置１２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ａｌａ又はＨｉｓであり、
位置１３のＸａａは、Ｇｌｕ又はＧｌｙであり、
位置１４のＸａａは、Ｇｌｎ又はＨｉｓであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙ， Ａｌａ， Ｇｌｎ， Ｔｈｒ， Ａｓｎ， Ａｒｇ， Ｈｉｓ又はＩｌｅであり、
位置１７のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置１８のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＩｌｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２１のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号１５の配列が少なくとも６個の連続したアミノ酸から成る］
【００２８】
から選択され；
前記配列の末端は、遊離カルボキシル−又はアミノ基、アミド、アシル、アセチル又はそれらの塩であり得、
複数のＣｙｓ残基は、鎖間ジスルフィド結合の一部、−Ｓ−（ＣＨ２）ｐ−Ｓ−又は−（ＣＨ２）ｐ−架橋（ここでｐは１〜８である）を形成し、任意には、１又は複数のヘテロ原子、例えばＯ， Ｎ及びＳにより介在され、そして／又は前記ペプチド配列は、固体支持体に固定されていることを特徴とする。
【００２９】
新規ペプチド配列は、配列番号１，４，９又は１５の配列群から選択された少なくとも１つのペプチドを含んで成る良好な抗原として作用する可能性を有する。抗原性は、例えば固相への二量体化又は多量体化、及び／又は固定化により、種々のペプチドの割合又は濃度、又はペプチドのサイズを調節することにより適合され得る。前記抗原は、Ｏ， Ｓ又はＮのような１又は複数のヘテロ原子により、たぶん介在されるＣ１−Ｃ８アルキレンのような鎖又は架橋のＣｙｓ残基間での架橋又はジスルフィド架橋により連結されるか、又は好ましくは、連結されていない、本発明の複数のポリペプチド配列を含んで成る。前記鎖は、モノマー、ダイマー又はオリゴマー形で固相に固定され得る。さらに、アミノ酸は、固定化を促進するための“アーム（ａｒｍ）”を達成するために、その末端に付加され得る。
【００３０】
ＰＥＧはポリエチレングリコール（ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＨ）であり、そしてリンカー−Ｚの一部であり得、任意にはＰＥＧは、ジカルボン酸（ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＯ（ＣＨ２）ｏＣＯＯＨ）又は末端カルボキシル基（ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−１ＣＨ２ＣＯＯＨ）（ここで、ｍは１〜１０であり、そしてＯは２〜６である）により、連結の前、修飾される。
リンカー−Ｚ−は、ＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ又はそれらの組合せ、及び／又は１又は複数の組合されたＧｌｙ残基から成ることができる。他方では、リンカー−Ｚ−は、Ｇｌｙ−架橋 ［Ｇｌｙ］ｎ（ここで、ｎは１，２または３である）から成る。
【００３１】
本発明のペプチドにおけるすべてのアミノ酸は、Ｄ−又はＬ−形の両者で存在することができるが、但し天然に存在するＬ−形が好ましい。
ペプチド配列のＣ−及びＮ−末端は、末端ＮＨ２−基及び／又はＣＯＯＨ−基の修飾により天然の配列と異なり、すなわちそれらは例えば、キャリヤー又はもう１つの分子のための結合部位を供給するために、アシル化され、アセチル化され、アミド化されるか又は修飾され得る。
本発明のペプチドは、少なくとも６個のアミノ酸、好ましくは１０〜３０個のアミノ酸から成る。それらは、同定される位置におけるアミノ酸のすべての天然の変動性を包含する。
【００３２】
本発明のポリペプチド抗原は、遊離形又はキャリヤー結合された形で存在する。ペプチドが任意には結合されるキャリヤー又は固相は、広範囲の種類の既知キャリヤーから選択され得る。それは、診断用抗原として、又はワクチンにおける免疫化成分として、固定されたポリペプチドの意図された使用に関して、選択されるべきである。
【００３３】
例えば、診断目的のために使用され得るキャリヤーの例は、磁気ビーズ、又はコポリマー、例えばスチレン−ジビニルベンゼン、ヒドロキシル化されたスチレン−ジビニルベンゼン、ポリスチレン、カルボキシル化されたポリスチレンのラテックス、カーボンブラックのビーズ、活性化されていないか又はポリスチレン又はポリ塩化ビニル活性化ガラス、エポキシ−活性化された多孔性磁気ガラス、ゼラチン又は多糖粒子又は他のタンパク質粒子、赤血球細胞、モノクローナル又はポリクローナル抗体又はそのような抗体のＦａｂフラグメントである。
【００３４】
本発明のさらなる態様によれば、抗原は、キャリヤー、アジュバント、又は他の免疫刺激要素、例えばｅｎｖ遺伝子を担持するカナリアポックスウィルスと共にたぶん組合されるワクチンの一部を形成することができる。ワクチン目的のためのキャリヤー及び／又はアジュバントの例は、他のタンパク質、例えばヒト又はウシ血清アルブミン及びキーホールリンペットヘモシアニン及び脂肪酸である。免疫刺激材料は、次の３種のグループに分けられ得る：アジュバント、抗原のためのキャリヤー及びビークル。
【００３５】
アジュバントの例は、アルミニウムヒドロキシド、アルミニウム塩、サポニン、ムラミルジ及びトリペプチド、モノホスホリル脂質Ａ、パルミチン酸、Ｂ．ペルツシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、及びＴｈ１サイトカインＩＬ−１２及びＩＬ−１を含む種々のサイトカインを包含する。多数のタンパク質のトキシンが、ＣＴＬワクチンの開発において有用である、シトソール中に細胞膜を通してパッセンジャータンパク質を運ぶために使用され得る。キャリヤーは、細菌トキソイド、例えば不活性化された破傷風菌及びコレラトキシン、遺伝子的に解毒された細菌トキシン、例えばＥ．コリからの熱不安定性エンテロトキシン、脂肪酸、生存ベクター、例えばポリオキメラ、及び粒質物を形成するためにハイブリッドタンパク質、例えば酵母レトロランスポゾンハイブリッドＴＹ粒子及びＨＢｃＡｇ粒子を包含する。
【００３６】
近代的なワクチンにおいて時折存在する成分であるビークルは、鉱油エマルジョン、完全及び不完全フロイントアジュバント、植物油エマルジョン、非イオン性ブロックポリマー界面活性剤、スクアレン又はスクアラン、リポペプチド、リポソーム及び生分解性微小球から成る。新規ワクチンの開発のために有意な可能性を有する２種の最近のアジュバントは、水中油マイクロエマルジョン（ＭＦ５９）及びポリマー微小球を包含する。抗原の免疫原性を増強することができるいずれかの物質が使用され得、そしていくつかの追加の異なったキャリヤー又はアジュバントがアメリカ又はヨーロッパ薬局により提供されている。
【００３７】
免疫刺激使用のための抗原の適切な配合物はまた、インターフェロン、例えばＩＮＦ−γ、鉱ウィルスケモカイン又は造血成長因子、例えば顆粒球マクロファージ成長（コロニー刺激）因子を含んで成ることができる。
例えば小腸における刺激及び吸収を増強するためのもう１つのアプローチは、小さなペプチド、例えばジ、トリ又はテトラペプチドと共に、本発明のペプチドを投与することである。それらのペプチドは、本発明のペプチド以外に又はそれと組合して投与され得る。好ましくは、ペプチドは、Ｄ−又はＬ−形、好ましくはＤ−形でのアミノ酸から成るトリペプチドＹＧＧと共に投与される。
【００３８】
例えば粘膜を通してワクチンの非経口投与するための最近のアプローチは、粘膜アジュバントの非毒性誘導体を創造するための遺伝子融合技法、必須遺伝子に欠失を有する遺伝子的に不活性化された抗原、抗原、及び粘膜免疫応答の調節及び制御において重要である特定のサイトカインの同時発現、及びＤＮＡ又はＲＮＡ摂取及び宿主細胞におけるその内因性発現を可能にする遺伝子材料自体を包含する。
細胞介在性免疫性が必要とされる耐久性のある応答を開発する１つのアプローチは、１又は複数の特異的抗原をコードするプラスミドＤＮＡによりワクチン接種することである。
【００３９】
ＨＩＶ感染に対して保護するためには、ワクチンは、粘膜性及び全身性免疫応答を誘発すべきであり、そしていずれかの便利な経路により、例えば非経口的に、例えば皮下的に、皮膚下的に、静脈内に、筋肉内的に、経口的に、粘膜的に又は鼻腔内的に投与され得た。
本発明のワクチンの好ましい態様においては、それは、配列番号１，４，９及び１５の群から選択された少なくとも１つのペプチドを含む抗原を含んで成り、より好ましい異なったペプチドは等量で存在する。
【００４０】
さらなる好ましい態様においては、ワクチン組成物は、下記抗原を含む：
ＲＬＩＹＡＴＲＱＬＱＲＦＡＶＮＰＧＬＬＩＴ−ＮＨ２（配列番号３）；
ＦＩＬＱＮＩＥＧＱＬＶＧＧＧＹＡＩＳＰＲＴＬＶＡＧＧＧＧ（配列番号６）；
ＹＡＩＰＱＡＬＮＴＬＬＮＴＶＧＧＨＱＡＡ−ＮＨ２（配列番号１１）；及び
ＷＳＡＬＡＧＴＴＳＬＬＱＧＱＬＧＷＩＴ−ＮＨ２（配列番号１４）。
【００４１】
前記配列は、ＣＴＬ−エピトープと共に寄与し、そして細胞免疫系を活性化することができる。ＣＴＬ−エピトープの骨格内に包含されるアミノ酸変化が、増強された結合を達成するために企画される。他のアミノ酸変化は、ペプチドの合成を促進し、そして／又はペプチドの溶解能力を高めるために行われて来た。
本発明の抗原を用いて、体液のサンプルにおける、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−１特異的ペプチド又はタンパク質により誘発される抗体を検出するための方法は、本発明の追加の態様である。この検出のために企画されるイムノアッセイキット、及び前記抗原と選択的に反応することができる抗体がまた、本発明により包含される。
【００４２】
ペプチドの調製の記載：
本発明のペプチドは、線状アミノ酸配列を生成するいずれかの既知の方法、例えば組換えＤＮＡ技法により生成され得る。本発明のペプチド又は前記ペプチドのマルチマーをコードする核酸配列は、発現ベクター中に導入される。適切な発現ベクターは例えば、複製及び発現のための必要な制御領域を含んで成る、プラスミド、コスミド、ウィルス又はＹＡＣ（酵母人工染色体）である。発現ベクターは、宿主細胞における発現のために刺激され得る。適切な宿主細胞は例えば、細菌、酵母細胞及び哺乳類細胞である。
【００４３】
そのような技法は、当業界において良く知られており、そして例えばＳａｍｂｒｏｏｋなど．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， １９８９により記載されている。他の良く知られている技法は、例えば、いわゆるＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ合成により、液相において又は好ましくは固相（樹脂）上で１つのアミノ酸残基を次のアミノ酸残基にカップリングすることによる分解又は合成である。例えば、Ｂａｒａｎｇ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ２， Ｅ． Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ， Ｅｄ． （Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓｓ， Ｎ． Ｙ．， １９８０）， Ｋｎｅｉｂ−Ｃｏｒｏｎｉｅｒ ａｎｄ Ｍｕｌｌｅｎ Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．， ３０， ｐ． ７０５−７３９ （１９８７）， 及びＦｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｎｏｂｌｅ Ｉｎｔ． Ｊ． ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．， ３５， ｐ． １６１−２１４ （１９９０） を参照のこと。
【００４４】
結合された又は環状のペプチドが所望される場合、アミノ酸配列は、適切な線状アミノ酸配列が合成される場合、２種のペプチド配列間で２個のシステイン残基を環化するか又は連結するために化学的酸化段階にゆだねられる。Ｋａｊａなど．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒ， ３３， ８， ｐ．１０７３−１０７６， １９９２を参照のこと。
【００４５】
合成の一般的な記載：
下記例において調製されるすべてのペプチド誘導体は、標準のプログラムを用いて、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ ９０５０ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で合成された。使用される樹脂は、０．２０ｍ当量／ｇの理論負荷用量を有するＴｅｎｔａ Ｇｅｌ Ｐ ＲＡＭ （ＲＡＰＰ ＰＯｌＹＭＥＲＥ ＧｍｂＨ， Ｔｕｂｉｎｇｅｎ） であった。合成の最終生成物は、真空下で一晩、乾燥された。次に、ペプチドは、スキャベンジャーとしてエタンジチオール（５％）及び水（５％）の存在下での９０％トリフルオロ酢酸による処理により樹脂から分離された（ＲＴで１．５時間）。
【００４６】
次に、樹脂が濾過され、そして追加のトリフルオロ酢酸（１００％）（２×２０ｍｌ）によりフィルター上を洗浄された。組合された濾液が真空下で蒸発され（ＲＴで水浴）、そして樹脂がエチルエーテル（２００ｍｌ）と共に粉砕され、そして沈殿された生成物が濾過された。フィルター上の固形物が氷酢酸（１００ｍｌ）によりすばやく溶解され、そしてメタノール中、２０％酢酸１．５Ｌに添加され、そして淡褐色が残るまで、メタノール中、ヨウ素の０．１Ｍ溶液により処理された。次に、酢酸塩形でのＤｏｗｅｘ×１×８イオン交換体（１５ｇ）（Ｂｉｏ−Ｒｅｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ， ＣＡ）が添加され、そしてその混合物が濾過された。
【００４７】
濾液が蒸発され、そして残留物が酢酸から凍結乾燥された。次に、生成物が、０．１％トリフルオロ酢酸中、アセトニトリル水溶液を含む適切なシステム中、Ｋｒｏｍａｓｉｌ（商標） １００−５ Ｃ８ （ＥＫＡ Ｎｏｂｅｌ， Ｓｕｒｔｅ， Ｓｗｅｄｅｎ） により充填されたカラム上での逆相液体クロマトグラフィーにより分析された。順類な物質を含む画分がプールされ、溶液が蒸発され、そして生成物が酢酸から凍結乾燥された。最終ＨＰＬＣ分析が最終生成物に対して行われ、そしてペプチドの構造アミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめられた。
【００４８】
合成の間に使用されるすべてのアミノ酸はＬ−アミノ酸であり、そしてそれらは、α−アミノ官能基でフルオレニルメトキシ−カルボニル基により保護された。側鎖は次の通りに保護された：
Ｃｙｓ （Ｔｒｔ）， Ｇｌｎ （Ｔｒｔ）， Ｇｌｕ （ＯｔＢｕ）， Ｔｈｒ （ｔＢｕ）；
前記括弧内の略語は次の通りである：
Ｔｒｔ＝トリフェニルメチル；ｔＢｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル；ＯｔＢｕ＝ブチルエステル。
アミノ酸誘導体は、Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄにより供給された。
【００４９】
実施例
例１．ＨＬＩＹＬＴＲＱＬＱＲＦＡＬＮＰＧＬＬＩＴ−ＮＨ２（配列番号２）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
【００５０】
例２．ＲＬＩＹＡＴＲＱＬＱＲＦＡＶＮＰＧＬＬＩＴ−ＮＨ２（配列番号３）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９７％以上（１％以下の単一の不純物）；
分子量（遊離塩基）：２４４２．９。
【００５１】
例３．ＹＩＬＱＮＩＥＧＱＬＶＧＧＧＹＡＩＳＰＲＴＬＶＡＹＬＲＧ−ＮＨ２（配列番号５）
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
【００５２】
例４．ＦＩＬＱＮＩＥＧＱＬＶＧＧＧＹＡＩＳＰＲＴＬＶＡＧＧＧＧ（配列番号６）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９４％以上。
分子量（遊離塩基）：２７４５。
分子式：Ｃ１２３Ｈ１９８Ｏ３７Ｎ３４。
【００５３】
例５．参照例：ｎａｔｉｖ ｐ２４配列ＰＩＶＱＮＩＥＧＱＭＶＨＱＡＩＳＰＲＴＬＮＡＷＶＫＶ（配列番号７）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：８５％。
分子量（遊離塩基）：２９２９。
分子式：Ｃ１３１Ｈ２１４Ｏ３６Ｓ。
【００５４】
例６．ＦＩＬＱＮＩＱＧＱＬＶＧＧＧＹＡＩＳＰＲＴＬＶＡＧ−ＮＨ２（配列番号８）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９７％以上（１％以下の単一の不純物）；
分子量（遊離塩基）：２５７２．０。
【００５５】
例７．参照例：ｎａｔｉｖ ｐ２４配列ＧＡＴＰＱＤＬＮＴＭＬＮＴＶＧＧＨＱＡＡ−ＮＨ２（配列番号１０）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９８％。
分子量（遊離塩基）：１９９５．２。
分子式：Ｃ８２Ｈ１３５Ｏ２９Ｎ２７Ｓ。
【００５６】
例８．ＹＡＩＰＱＡＬＮＴＬＬＮＴＶＧＧＨＱＡＡ−ＮＨ２（配列番号１１）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９８％。
分子量（遊離塩基）：２０５１．４。
分子式：Ｃ９１Ｈ１４７Ｏ２７Ｎ２７。
【００５７】
例９．ＦＡＩＰＱＡＬＮＴＬＬＮＴＶＧＧＧＧＨＱＡＡＣＧ−ＮＨ２（配列番号１２）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
【００５８】
例１０．参照例：ｎａｔｉｖ ｐ２４配列ＧＳＤＩＡＧＴＴＳＴＬＱＥＱＩＧＷＭＴ−ＮＨ２（配列番号１３）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９０％。
分子量（遊離塩基）：１９９５．２。
分子式：Ｃ８４Ｈ１３５Ｏ３１Ｎ２３Ｓ。
【００５９】
例１１．ＷＳＡＬＡＧＴＴＳＬＬＱＧＱＬＧＷＩＴ−ＮＨ２（配列番号１４）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９７％以上（１％以下の単一の不純物）；
分子量（遊離塩基）：２００７．３。
【００６０】
例１２．参照例：ｎａｔｉｖ ｐ２４配列ＨＩＶＷＡＳＲＥＬＥＲＦＡＶＮＰＧＬＬＥＶＴ−ＮＨ２（配列番号１６）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９５％以上。
分子量（遊離塩基）：３４３６．８。
【００６１】
例１３．参照例：ｎａｔｉｖ ｐ２４配列ＰＩＶＱＮＩＱＧＱＭＶＨＱＡＩＳＰＲＴＬＮＡＷ−ＮＨ２（配列番号１７）の調製
前記ペプチドを、合成の一般的記載に従って、対応する出発材料から、アミド形で合成する。純度をＨＰＬＣ分析により決定し、そして構造をアミノ酸分析及び質量分析法（ＬＤＩ−ＭＳ）により確かめる。
純度（ＨＰＬＣ）：９３％以上。
分子量（遊離塩基）：２６０１．０。
【００６２】
例１４．ジスルフィド架橋を通しての二量体化
ペプチド配列を酸化段階を通して連結し、システイン残基がジスルフィド架橋を形成しているジペプチドを形成する。前記架橋は、次の通りに、Ｉ２による酸化により形成され得る：
等量のペプチドを、酢酸／メタノール（１：４）に溶解し、そしてメタノール中、０．１ＭのＩ２を添加し、ダイマーの混合物を生成する。
【００６３】
例１５．
配列番号３，６，１１及び１４のペプチドを含んで成るワクチンを調製する。凍結乾燥されたペプチドを、無菌水に溶解し、４ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。溶液の最終塩濃度は、生理学的に適合できる。顆粒球−マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の調製をまた、製造業者の使用説明書に従って調製し、０．３ｍｇ／ｍｌの最終濃度の調製物を得る。前記２種の溶液を、皮下注射する。典型的な注射用量は１００μｌである。
【００６４】
例１６．
抗原溶液又は懸濁液を、等部のＢｅｈｒｉｎｇの完全又は不完全フロイントアジュバントと共に混合し、そして次に、注射器又はホモジナイザーにより吸い上げたり、出したりすることにより、細かく乳化し、そして強く圧縮する。そのエマルジョンは、少なくとも３０分間、安定して持続すべきである。抗原−アジュバントエマルジョンを、補充物として最良に皮下注射する。
【００６５】
例１７．ＨＩＶ−１により誘発された抗体の検出のためのイムノアッセイ
磁気粒子試薬は、製造業者により推薦されるプロトコールに従って調製されるべきである。Ｄｙｎａｌ ＡＳは、使用されるＤｙｎａｂｅａｄｓの製造業者である。リガンドにより被覆された磁気粒子は、試薬１と呼ばれる。本発明のペプチドを、磁気粒子の予備活性化された表面に共有結合する。磁気粒子の表面にペプチドを物理的に吸収することもまた可能である。試薬１における粒子の濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜１５ｍｇ／ｍｌの範囲内である。粒度は０．２μｍ〜１５μｍである。ペプチドの濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｇ粒子〜１ｍｇ／ｍｇ粒子の範囲内である。
【００６６】
抗ヒトＩｇアルカリホスファターゼ（ＡＰ）接合の抗体試薬を、Ｄａｋｏ ＡＳの推薦されるプロトコールに従って調製する。このプロトコールはこの分野においては標準の方法である。この試薬は試薬２と呼ばれる。
基質溶液フェノールフタレイン−一リン酸は、Ｆｌｕｋａ ＡＧの推薦されるプロトコールに従って調製されるべきである。このプロトコールは、この分野においては標準の方法である。この基質溶液は試薬３と呼ばれる。
使用される洗浄及びインキュベーション緩衝液は、次の追加の化合物を含む標準の０．０５Ｍのトリス−基材の緩衝液である：Ｔｗｅｅｎ２０（０．０１％〜０．１％）、グルセロール（０．１％〜１０％）、及び塩化ナトリウム（０．２％〜０．１％）。
【００６７】
アッセイ方法は、１滴の試薬１を、個々のウェルにおいて、２滴の洗浄緩衝液と共に混合するインキュベーション段階を包含する。混合の後、３０μｌのサンプルを添加し、そしてその溶液を５分間、インキュベートする。磁気粒子を磁石により取り、そして磁石を分離する前、液体を除く。次に、ウェルを、４滴の洗浄溶液により２度、洗浄し、次に、試薬２と共にインキュベートする。１滴の試薬２を、２滴の洗浄緩衝液と共に添加し、そしてその溶液を５分間インキュベートする。磁気粒子を磁石により取り、そして液体を除去し、その後、磁石を分離する。次に、洗浄段階を反復し、その後、試薬３と共にインキュベートする。
【００６８】
２滴の試薬３を個々のウェルに添加し、そしてその溶液を３分間インキュベートする。結果は、白色バックグラウンドに対して読み取られ得る。正の結果が読み取られ（３＋＝強い赤色）、そして負の結果は、負の対照において得られるように、明らかに淡黄／褐色溶液である。
イムノアッセイキットは、ＨＩＶウィルス又はＨＩＶ−特異的ペプチド又はタンパク質、例えば本発明のペプチドにより誘発される抗体の検出に使用され得る。
【００６９】
例１８．治療用又は予防用ワクチン
配列番号１，４，９及び１５の配列群から選択された本発明のポリペプチドの少なくとも１つが、抗原を形成するために使用され、そしてそれは、ヒト免疫欠損ウィルス型１（ＨＩＶ−１）に対する保護を提供するよう意図された予防用又は治療用ワクチンの活性素因である。ワクチンは、宿主免疫系（ヒト又は脊椎動物）の保護又は刺激において有益な効果を有する化合物、例えばインターロイキン、インターフェロン、顆粒マクロファージ成長因子、造血成長因子又は同様のものを含むことができる。好ましくは、ワクチン組成物はさらに、アジュバント又はビークルを含み、より好ましくは前記アジュバント又はビークルは、たぶんみょうばんを含むモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、フロイトアジュバント（完全又は不完全）又はアルミニウムヒドロキシである。アジュバント／ビークルの最適な量は、選択されるその型に依存するであろう。
【００７０】
本発明のペプチドは、リポペプチドワクチンを形成するために、単一の脂肪酸、例えば単一のパルミトイル鎖のＣ−末端付加により修飾され得る。さらに、リポペプチドが、凍結−融解方法によりリポソーム膜中に導入され、それらの表面上にペプチドリガンドを担持するポリソームがもたらされる。
【００７１】
ペプチド又はワクチン配合物は、貯蔵の前、凍結乾燥され得る。凍結乾燥されたペプチドを、無菌水に溶解し、０．１〜１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ワクチンは好ましくは、すぐに使用するために、１又は複数の用量単位を含むアンプルにおいて、低温で貯蔵され得る。本発明のペプチドの典型的な用量単位は、次の濃度範囲内である：０．０５μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１５μｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ体重。当業者は、適切な用量が患者の体重、疾病のタイプ、病状の重症度、投与路及びいくつかの他の要因に依存するであろうことを理解するであろう。治療用ワクチンとして使用される場合、ワクチンは典型的には、まず、注射により約１２度、投与されるであろう。
【００７２】
さらなる追加免疫が追随し、そして極端な場合、患者の一生を通して投与される。注射溶液の調製においては、ペプチドは、１ｍｇ／ｍｌペプチドの最終濃度になるよう、無菌水に溶解される。典型的には、注射液の体積は１００μｌ〜２００μｌ（２×１００μｌ）である。ペプチドは好ましくは、適切なアジュバント及び／又は顆粒球−マクロファージ成長因子、例えば０．１〜１ｍｇ／ｍｌの濃度範囲内に、製造業者に推薦に従って製造されたＬｅｕｃｏｍａｘ（商標）（Ｓｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）と共に同時−投与される。
【００７３】
本発明のペプチドが、２０００年３月２日に出願された国際特許出願公開番号ＰＣＴ／ＮＯ００／００７５号及び／又は同時継続出願のノルウェイ特許出願番号第２０００４４１２号に記載されるペプチドと共に投与される組み合わせ治療が特に好ましい。ペプチドは、連続的に又は同時に投与され得る。適切な投与は、皮膚内、皮膚下、静脈内、経口、筋肉内、鼻腔内、粘膜又は他のいずれかの適切な経路であり得る。追加の免疫投与は、保護を維持するために必要とされ得る。当業者は、本発明のワクチン組成物が感染においてのみならず、感染の処理において有用であることを理解するであろう。
【００７４】
本発明のペプチドの非毒性効果は、１００μｇ／体重の用量でマウスに注射される場合に観察される。
上記例は、本発明を単に例示している。当業者は、本明細書に記載されるペプチド、抗原及びワクチンを、本発明の範囲内で修飾され得ることを理解すべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年11月21日(2002.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生来の配列に比較して、修飾を含み、そして下記アミノ酸配列群：
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ （配列番号１）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
ペプチド誘導体の位置１のＸａａは、Ｈｉｓ， Ｌｙｓ又はＡｒｇであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置４のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置５のＸａａは、Ａｌａ又はＬｅｕであり、
位置６のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ， Ａｒｇ又はＡｓｎであり、
位置７のＸａａは、Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１１のＸａａは、Ａｒｇ， Ｌｙｓ， Ｇｌｙ又はＡｓｎであり、
位置１２のＸａａは、Ｐｈｅ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
位置１３のＸａａは、Ａｌａ， Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＣｙｓであり、
位置１５のＸａａは、Ａｓｎ， Ａｓｐ又はＳｅｒであり、
位置１６のＸａａは、Ｐｒｏ， Ａｒｇ又はＳｅｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｇｌｙ， Ｓｅｒ， Ａｌａ， Ａｓｐ又はＡｓｎであり、
位置１８のＸａａは、Ｌｅｕ又はＰｈｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置２０のＸａａは、Ｇｌｕ， Ｇｌｙ， Ａｓｐ又はＩｌｅであり、
位置２１のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
前記ペプチドは、配列番号１の配列の少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成る］；
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ｘａａ６ Ｘａａ７ Ｇｌｙ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｖａｌ−Ｚ−Ｔｙｒ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１ Ａｌａ Ｘａａ２３ Ｘａａ２４ Ｘａａ２５ Ｘａａ２６ （配列番号４）
［ここで前記鎖のアミノ酸は次の意味を有し：
位置１のＸａａは、Ｐｒｏ， Ｔｒｙ又はＰｈｅであり、
位置２のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＬｅｕであり、
位置３のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｍｅｔ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＶａｌであり、
位置５のＸａａは、Ａｎｓ， Ａｓｐ又はＴｈｒであり、
位置６のＸａａは、Ｉｌｅ， Ａｌａ， Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、
位置７のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｌｙｓ又はＧｌｙであり、
位置９のＸａａは、Ｇｌｎ又はＩｌｅであり
位置１３のＸａａは、削除され、
位置１４のＸａａは、Ａｌａ， Ｓｅｒ， Ａｓｎ， Ｖａｌ又はＰｒｏであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｍｅｔ又はＶａｌであり、
位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１７のＸａａは、Ｐｒｏ又はＡｌａであり、
位置１８のＸａａは、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｌｅｕ又はＳｅｒであり、
位置２１のＸａａは、Ａｎｓ， Ｐｈｅ又はＶａｌであり、
位置２３のＸａａは、Ｔｒｐ， Ｔｙｒ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２４のＸａａは、Ｖａｌ， Ｌｅｕ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２５のＸａａは、Ｌｙｓ， Ａｒｇ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２６のＸａａは、Ｖａｌ， Ａｌａ， Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号４の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含んで成り、そして−Ｚ−は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は ［Ｇｌｙ］ｎ（ここで、ｎは１，２又は３である）の意味を有する］；
Ｘａａ１ Ａｌａ Ｘａａ３ Ｘａａ４ Ｘａａ５ Ａｌａ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ ‐Ｚ‐Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｘａａ１９ Ａｌａ Ｘａａ２１ Ｘａａ２２ （配列番号９）
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｙｒ， Ｔｒｐ， Ｐｈｅ又はＧｌｙであり、
位置３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ， Ｖａｌ， Ｉｌｅ又はＬｅｕであり、
位置４のＸａａは、Ｐｒｏ又はＳｅｒであり、
位置５のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙ， Ｔｈｒ， Ｓｅｒ又はＴｙｒであり、
位置７のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｉｌｅ又はＶａｌであり、
位置８のＸａａは、Ａｓｎ又はＴｙｒであり、
位置９のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＡｌａであり、
位置１２のＸａａは、Ｓｅｒ， Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
位置１３のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｉｌｅ， Ｖａｌ又はＡｌａであり、
位置１４のＸａａは、Ｖａｌ又はＩｌｅであり、
位置１５のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置１９のＸａａは、Ａｌａ又はＧｌｙであり、
位置２０のＸａａは、Ａｌａであり、
位置２１のＸａａは、Ｍｅｔ， Ｌｅｕ， Ｃｙｓであるか又は存在せず、
位置２２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ｇｌｕ， Ｈｉｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号９の配列は、少なくとも６個の連続したアミノ酸から成り、そしてリンカー‐Ｚ‐は任意であり、そしてＰＥＧ、修飾されたＰＥＧ及び／又は［Ｇｌｙ］ｎ（ここでｎは１，２又は３である）の意味を有する］；
Ｘａａ１ Ｘａａ２ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｘａａ７ Ｘａａ８ Ｘａａ９ Ｌｅｕ Ｘａａ１１ Ｘａａ１２ Ｘａａ１３ Ｘａａ１４ Ｘａａ１５ Ｘａａ１６ Ｘａａ１７ Ｘａａ１８ Ｘａａ１９ Ｘａａ２０ Ｘａａ２１（配列番号１５）：
［ここで位置１のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置２のＸａａは、Ｓｅｒ又はＡｌａであり、
位置７のＸａａは、Ｔｈｒ， Ａｌａ又はＳｅｒであり、
位置８のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置９のＸａａは、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、
位置１１のＸａａは、Ｌｅｕ， Ｐｒｏ， Ｖａｌ又はＧｌｎであり、
位置１２のＸａａは、Ｇｌｎ， Ａｌａ又はＨｉｓであり、
位置１３のＸａａは、Ｇｌｕ又はＧｌｙであり、
位置１４のＸａａは、Ｇｌｎ又はＨｉｓであり、
位置１５のＸａａは、Ｉｌｅ， Ｌｅｕ， Ｖａｌ又はＭｅｔであり、
位置１６のＸａａは、Ｇｌｙ， Ａｌａ， Ｇｌｎ， Ｔｈｒ， Ａｓｎ， Ａｒｇ， Ｈｉｓ又はＩｌｅであり、
位置１７のＸａａは、Ｔｒｐ又はＴｙｒであり、
位置１８のＸａａは、Ｔｈｒ， Ｍｅｔ， Ｌｅｕ又はＩｌｅであり、
位置１９のＸａａは、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり、
位置２０のＸａａは、Ｃｙｓ， Ｇｌｙであるか又は存在せず、
位置２１のＸａａは、Ｇｌｙであるか又は存在せず、
ここで配列番号１５の配列が少なくとも６個の連続したアミノ酸から成る］
から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列を含んで成り、
前記配列の末端は、遊離カルボキシル−又はアミノ基、アミド、アシル、アセチル又はそれらの塩であり得、
複数のＣｙｓ残基は、鎖間ジスルフィド結合の一部、−Ｓ−（ＣＨ２）ｐ−Ｓ−又は−（ＣＨ２）ｐ−架橋（ここでｐは１〜８である）を形成し、任意には、１又は複数のヘテロ原子、例えばＯ， Ｎ及びＳにより介在され、そして／又は前記ペプチド配列は、固体支持体に固定されていることを特徴とする、ＨＩＶ−１ ｇａｇ ｐ１７及びｐ２４タンパク質由来のペプチド。
【請求項２】
前記配列番号１のアミノ酸配列が、配列番号２及び３の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項３】
前記配列番号４のアミノ酸配列が、配列番号５，６及び８の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項４】
前記配列番号９のアミノ酸配列が、配列番号１１及び１２の群から選択されることを特徴とするペプチド。
【請求項５】
前記配列番号１５のアミノ酸配列が、配列番号１４であることを特徴とする請求項１記載のペプチド。
【請求項６】
少なくとも請求項１記載のペプチドを含んで成ることを特徴とする抗原。
【請求項７】
配列番号１，４，９及び１５の群の少なくとも１つから選択された少なくとも１つのペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項６記載の抗原。
【請求項８】
請求項６記載の抗原、医薬的に許容できる稀釈剤及び任意にはアジュバント、キャリヤー及び／又はビークル、並びに任意には追加の免疫刺激化合物を含んで成ることを特徴とするワクチン組成物。
【請求項９】
配列番号１，４，９及び１５の群から選択された少なくとも１つのペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項８記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
配列番号３，６，１１及び１４のペプチドを含んで成ることを特徴とする請求項８記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、無菌水溶液に溶解され、そして前記任意の免疫刺激化合物が顆粒球マクロファージコロニー刺激因子であることを特徴とする請求項８〜１０のいずれか１項記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
モノホスホリン脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、完全な不完全フロイントアジュバント、又はアルミニウムヒドロキシドの群から選択されたアジュバントを含んで成ることを特徴とする請求項８〜１１のいずれか１項記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
請求項６記載の抗原が、リポペプチド及び／又はリポソーム配合物として配合されていることを特徴とするワクチン組成物。
【請求項１４】
体液サンプルにおけるＨＩＶ又はＨＩＶ−特異的ペプチド又はタンパク質により誘発される抗体の検出方法であって、抗原が請求項１，２，３，４及び５記載のペプチドから選択されるイムノアッセイに、前記サンプルをゆだねることを特徴とする方法。
【請求項１５】
体液のサンプルにおけるＨＩＶ又はＨＩＶ−特異的ペプチド又はタンパク質により誘発される抗体の検出のためのイムノアッセイキットであって、診断用抗原が請求項１〜５のいずれか１項記載のペプチドであることを特徴とするキット。
【請求項１６】
請求項６及び７記載の抗原と選択的に反応することができることを特徴とする抗体。
【国際調査報告】
2004508381.tif 000048
2004508381.tif 000049
2004508381.tif 000050
2004508381.tif 000051
2004508381.tif 000052
2004508381.tif 000053
2004508381.tif 000054