(57)【要約】少なくとも４種の成分を用いる、経皮免疫のための接着剤中タンパク質パッチが記載されている：（ｉ）裏当て層；（ｉｉ）裏当て層に付着している感圧接着層；（ｉｉｉ）少なくとも１種のタンパク質が、接着剤と接触するように、裏当て層とは反対側で感圧接着層に施与されるか、かつ／又は感圧接着層に導入される、免疫原性処方物の少なくとも１種の免疫的に活性なタンパク質；及び（ｉｖ）周囲条件下に、少なくとも１種のタンパク質の免疫活性を維持する安定剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
経皮免疫用パッチであって、少なくとも４種の成分：
（ａ）裏当て層、
（ｂ）裏当て層に付着している感圧接着層並びに感圧接着層に施与及び／又は導入されている、次の（ｃ）及び（ｄ）を含有する免疫原性処方物、
（ｃ）該当する少なくとも１種のタンパク質が免疫活性である、感圧接着層の接着剤に接触している少なくとも１種のタンパク質、及び
（ｄ）接着剤の存在下に少なくとも１種のタンパク質の免疫活性を維持する安定剤、
を含み、
パッチは、皮膚に付着する感圧接着層及び皮膚に対して遠位の裏当て層と共に皮膚表面から対象の皮膚に貼られ、その結果、有効量の少なくとも１種のタンパク質が、経皮免疫により患者内で抗原特異的免疫応答をもたらす、
上記経皮免疫用パッチ。
【請求項２】
裏当て層が閉鎖性である請求項１記載のパッチ。
【請求項３】
接着剤が水性接着剤である請求項１記載のパッチ。
【請求項４】
接着剤がアクリレート接着剤である請求項１記載のパッチ。
【請求項５】
少なくとも１種のタンパク質がアジュバント活性を有する請求項１記載のパッチ。
【請求項６】
少なくとも１種のタンパク質が、ＡＤＰリボシル化外毒素、その断片又はその突然変異体である請求項１記載のパッチ。
【請求項７】
少なくとも１種のタンパク質が、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性外毒素、その断片又はその突然変異体である請求項１記載のパッチ。
【請求項８】
少なくとも１種のタンパク質が、抗原特異的免疫応答がそれに対して誘発される抗原である請求項１記載のパッチ。
【請求項９】
少なくとも１種のタンパク質が１μｇから１００μｇ存在する請求項１記載のパッチ。
【請求項１０】
安定剤が非還元糖である請求項１記載のパッチ。
【請求項１１】
安定剤がスクロース又はトレハロースである請求項１記載のパッチ。
【請求項１２】
第５の成分（ｅ）である剥離性ライナーをさらに備え、剥離性ライナーを剥がすと、感圧接着層が露出し、パッチを、皮膚表面から対象の皮膚に、皮膚に対して遠位の裏当て層と共に貼ることができるように、感圧接着層が裏当て層と剥離性ライナーとの間に位置する請求項１記載のパッチ。
【請求項１３】
少なくとも１種のタンパク質が、経皮免疫により少なくとも２年間、対象に抗原特異的免疫応答を誘発するに有効であるように、単一のパッチが包装されている請求項１記載のパッチ。
【請求項１４】
感圧接着層がさらに、少なくとも１種の可塑剤及び少なくとも１種の粘着性付与剤を含む請求項１記載のパッチ。
【請求項１５】
可塑剤がクエン酸トリアルキルである請求項１４記載のパッチ。
【請求項１６】
粘着性付与剤が１種又は複数のグリコール及び／又はコハク酸である請求項１４記載のパッチ。
【請求項１７】
免疫原性処方物がさらに増粘剤を含有する請求項１記載のパッチ。
【請求項１８】
増粘剤がヒドロキシアルキルセルロース又はデンプンである請求項１７記載のパッチ。
【請求項１９】
抗原特異的免疫応答を誘発するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のパッチの使用。
【請求項２０】
疾患に伴う１つ又は複数の症状を治療及び／又は予防するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のパッチの使用。
【請求項２１】
パッチを貼る前に、皮膚を水和することをさらに含む請求項１９又は２０に記載の使用。
【請求項２２】
パッチを貼る前に、皮膚の真皮を穿孔することなく、角質層を破壊するための化学的及び／又は物理的エネルギーにより、皮膚の浸透を高めることをさらに含む請求項１９又は２０に記載の使用。
【請求項２３】
経皮免疫を目的とする請求項１〜１８のいずれか一項に記載のパッチを製造する方法において、（ａ）少なくとも１種の免疫活性なタンパク質を含む免疫原、及び（ｂ）感圧接着剤との懸濁液又は溶液中で、少なくとも１種の該タンパク質の免疫活性を維持する安定剤を含有する免疫原性処方物を、感圧接着層に施与及び／又は導入し、かつ感圧接着層は裏当て層に付着していることを特徴とする方法。
【請求項２４】
（ａ）感圧接着剤、（ｂ）少なくとも１種の免疫活性なタンパク質を含有する免疫原、及び（ｃ）感圧接着剤との懸濁液又は溶液中で、少なくとも１種の該タンパク質の免疫活性を維持する安定剤を含有する処方物。
【請求項２５】
裏当て層に処方物を付着させることにより、経皮免疫用パッチを製造するための、請求項２４記載の処方物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００１年３月１９日に提出された米国仮出願第６０／２７６４９７号による利益を主張する。
【０００２】
本発明は、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）免疫のための接着剤中タンパク質パッチ（ｐｒｏｔｅｉｎ−ｉｎ−ａｄｈｅｓｉｖｅ  ｐａｔｃｈ）、疾患を治療するためのその使用及びその製造に関する。
【背景技術】
【０００３】
様々な抗原が、抗原特異的免疫応答を誘発するために経皮免疫（ＴＣＩ）により有効に投与されている。ＷＯ第９８／２０７３４号、ＷＯ第９９／４３３５０号及びＷＯ第００／６１１８４号；米国特許第５９１０３０６号及び同第５９８０８９８号；及び米国特許出願第０９／２５７１８８号、同第０９／３０９８８１号、同第０９／３１１７２０号、同第０９／３１６０６９号、同第０９／３３７７４６号及び同第０９／５４５４１７号参照。免疫応答は、アジュバント（例えば、ＡＤＰリボシル化外毒素）の使用を必要とすることもある。腸内、粘膜、経皮又は他の非経口経路（例えば、皮下、筋内、腹腔内、動脈内、静脈内）により投与される場合の数種のアジュバントの使用に伴う欠点に比べて、皮膚表面から（ｅｐｉｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）投与されると、ワクチンは安全で有効である。皮膚抗原提示細胞は活性化され、抗原は、望ましくない免疫反応（例えば、アトピー、皮膚炎、湿疹、乾癬及び他のアレルギー性又は過敏性反応）を誘発することなく処理することができる。ここで、我々は、タンパク質抗原が、免疫されるべきヒト又は動物の皮膚と接触する接着成分に導入されている、経皮免疫用パッチを記載する。
【０００４】
接着剤中薬物パッチは記載されているが、その多くは、全身循環に導入される小さい分子量の薬物（例えば、アンドロゲン、ニコチン、ニトログリセリン）の経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）投与に限られている。しかし、前記の薬物よりもはるかに大きく、化学的及び物理的構造がより不安定なタンパク質の経皮免疫用パッチの粘着部分内への導入は、記載されていない。タンパク質アジュバント及び抗原は、変性及び劣化される。ここで、我々は、本発明によるパッチとその免疫原性タンパク質の両方がそれぞれ機械的及び化学的に安定であることを示す。さらに、室温での長期貯蔵の後でも、免疫原性タンパク質の生物活性は維持され、微生物汚染は回避される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
経皮免疫のために使用される接着剤中タンパク質パッチ、さらにこれを製造及び使用するためのプロセスをここでは、開示する。特に、この処方物中でのタンパク質の安定性及びＴＣＩでのパッチの使用を証明する。１種又は複数の安定剤の使用により、タンパク質の凝集、劣化、変性又はこれらの組合せを回避することができる。本発明の他の利点は下記で検討するか、ここでの開示から明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
経皮免疫のための接着剤中タンパク質パッチは、少なくとも４種の成分（ｉ）裏当て層、（ｉｉ）裏当て層に付着している感圧接着層、（ｉｉｉ）少なくとも１種のタンパク質が接着剤と接触しているように、裏当て層とは反対側で感圧接着層に施与されているか、かつ／又は感圧接着層に導入されている免疫原性処方物の少なくとも１種の免疫活性タンパク質及び（ｉｖ）周囲条件下に、少なくとも１種のタンパク質の免疫活性を維持する安定剤からなる。
【０００７】
裏当て層は、閉鎖性又は半閉鎖性（例えば、包帯）であってよい。付加的な剥離性ライナーが含まれてもよい。周囲条件下での貯蔵に十分なパッケージング材料中にパッチを封入することにより、単一のユニットを製造することができる。
【０００８】
感圧接着層は、少なくとも１種の水性接着剤（例えば、アクリレート又はシリコーン）を含有してよい。安定剤は、タンパク質を保護するための糖又はポリマーであってよい；例えば、非還元二糖、スクロース又はトレハロースを使用することができる。可塑剤、粘着性付与剤、増粘剤などの他の賦形剤を、接着剤、アジュバント又は抗原を含有する処方物に含ませることができる。可塑剤は、短鎖クエン酸トリアルキルであってよい。粘着性付与剤は、グリコール及び／又はコハク酸であってよい。増粘剤は、短鎖ヒドロキシアルキルセルロース又はデンプンであってよい。
【０００９】
タンパク質は、アジュバント活性、抗原活性又はこれら両方を有してよい。タンパク質は、免疫応答がこれに対して誘発される抗原であってよいか、これは、非対応抗原により誘発される免疫応答を刺激するアジュバントとして作用してよい。ＡＤＰリボシル化外毒素（例えば、コレラ毒素、ジフテリア毒素、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｏｍｎａｓ）外毒素Ａ、百日咳毒素）、ケモカイン、サイトカイン、他の知られているアジュバント又はこれらの誘導体が、該タンパク質であってよい。誘導体の例は、アジュバント活性を有する断片（化学的に複合しているか、野生型アジュバントの一部分と遺伝的に融合しているものを含む）又は突然変異体（自然に生じる変異体又はアミノ酸配列中の他の変化、挿入又は欠失を含む）である。
【００１０】
有効量のタンパク質を、パッチに供給する。例えば、パッチは、１μｇから１ｍｇ、５μｇから５００μｇ、１０μｇから１００μｇあるいはこの中間範囲のタンパク質の量を含んでよい。タンパク質の免疫活性に応じて、特定のタンパク質の有効量は変動しうる。
【００１１】
抗原特異的免疫応答、存在する疾患の治療又は患者がリスクを示している疾患の予防のために、経皮免疫は使用することができる。パッチを使用する部位の皮膚を水和又は浸透させると、抗原特異的免疫応答を高めるか、望ましくない免疫応答を防ぐことができる。抗原の活性化及び／又は提示のための可能なターゲットは、皮膚の下に位置する樹状細胞である。
【００１２】
接着剤及び安定化タンパク質を含有する湿潤ブレンドを処方することができ、次いでこれを、パッチを製造するために使用することができる。タンパク質は、接着層の表面に施与するか、懸濁液としての、又は溶液の形の接着剤に導入するか、あるいは接着剤及びタンパク質含有処方物を別々に製造し、次いで、一緒に混合又は積層させることができる。注型、コーティング、押出し、積層及びプリントを使用して、タンパク質を接着剤と接触させることができる。
【００１３】
１つ又は複数の臨床又は実験室基準、健康に関する代理マーカー又は罹患率又は死亡率基準により、有効性を評価することができる。本発明のさらなる態様は、以下の詳細な説明及び請求項及びこれを一般化することにより、当技術分野の専門家には明らかであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
経皮免疫で使用される１種又は複数の活性な免疫原性タンパク質は、非変性条件下に安定剤を用いてタンパク質を分散又は可溶化することにより、パッチの接着部分又は接着処方物自体に付与及び／又は導入することができる。シロップ又は他の粘着性の溶液とは対照的に、接着剤は、感圧性である。タンパク質含有免疫原性処方物は、劣化並びにアジュバント及び／又は抗原活性の損失に対して安定化される。水性接着剤中に可溶性でなくとも、安定化されたタンパク質又は安定化されたタンパク質を含有する粒子を、スラリー又は懸濁液として加えることができる。我々は、これを、「接着剤中タンパク質」（ＰＩＡ；Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｉｎ−ａｄｈｅｓｉｖｅ）パッチと称する。
【００１５】
接着剤中薬剤（ＤＩＡ）製品で通常使用される処方物は、タンパク質のためには許容することができない。それというのも、ＤＩＡ中の接着剤の可溶化は通常、保護されていないタンパク質には適さないと考えられている有機溶剤中で行われるためである。接着剤のベースを水性接着剤処方物に変え、タンパク質を水性接着剤処方物に導入すると、経皮免疫のための活性成分を、パッチの接着部分又は接着処方物自体に導入することができる。
【００１６】
ＤＩＡのコンセプトは、経皮薬物送達で使用されてきたが、これは、いくつかの特徴により経皮免疫とは異なる（Ｇｌｅｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ、８：７９７−８０５、１９９９）。したがって、経皮免疫のためにＰＩＡ処方物及びパッチを使用することは、新規の、自明ではない発明を示している。
【００１７】
接着剤は、１つ又は複数の次の目的のために使用することができる。即ち、対象の定位置にパッチを維持するために、付加的な皮膚浸透増強化学薬品又は非活性成分などの処方物の他の成分を導入するために、処方物の不安定な成分を安定化するために、さらに、当業者に知られている他の目的のために使用することができる。経皮免疫の目的での接着パッチの使用により、ワクチンを投与するための簡便で実用的な方法がもたらされる。
【００１８】
皮膚構造及び免疫生物学
最も広範なヒトの器官である皮膚は、感染因子による侵入及び有害物質との接触に対する防御において重要な役割を果たしている。しかし、皮膚のこのバリア機能こそが、経皮免疫により、ワクチンを投与するための腸内、粘膜及び他の非経口経路に対する有効な代替案が得られると当技術分野が認めることを阻んでいたようである。最近、ワクチンの皮膚表面への投与は、特殊抗原提示細胞をターゲットとし、強い免疫応答をもたらすことが示されている。
【００１９】
解剖学的に、皮膚は３つの層からなる：表皮、真皮及び皮下脂肪。表皮は、基底層、有棘層、顆粒層及び角化層からなる；角質層は、角化層及び脂質からなる。皮膚の主な抗原提示細胞であるランゲルハンス細胞は、ヒトでは表皮の中部から上部有棘層にあると報告されている。真皮は主に、結合組織を含有する。血管及びリンパ管は、真皮及び皮下脂肪に限られている。
【００２０】
死んでいる皮膚細胞及び脂質の層である角質層は慣例的に、角質層下の生細胞から微生物及び有害物質を排除する、危険性のある外界に対するバリアと見なされてきた。さらに角質層は、皮膚からの水分の損失に対するバリアとして役立つ；比較的乾いた角質層は、５％から１５％の含水率を有し、より深部の表皮及び真皮層は、８５％から９０％の含有率で比較的良好に水和されていると報告されている。皮膚のバリア機能は、角質細胞（ｃｏｒｎｅｏｃｙｔｅ）間の広範な架橋により強化されている。最近になって初めて、抗原提示細胞（例えば、ランゲルハンス細胞）によりもたらされる二次的保護が認められた。さらに、皮膚活性アジュバントを使用する、浸透強化を伴う、又は伴わない皮膚を介しての免疫（即ち、経皮免疫）の可能性も、最近になって初めて記載された。アトピー及び皮膚炎などの望ましくない皮膚反応は、当技術分野で知られているが、経皮免疫の治療的利点の認識は、これまで認められていなかった。それというのも、皮膚は、約５００ダルトンよりも大きい分子の通過に対するバリアになっていると考えられていたためである（Ｂｏｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、９：１６５−１６９、２０００）。
【００２１】
表皮は、主に角化細胞からなるが、生角化細胞に分布しているランゲルハンス細胞（ＬＣ）と称される免疫監視細胞の重要な占有率（約１％から３％）を有する。ＬＣは比較的、皮膚中で細胞の低い占有率ではあるが、これらは、ヒトの全皮膚表面積の２５％を占めている。ランゲルハンス細胞は、ワクチン送達のための牽引ターゲットを作る免疫細胞の広範で表面的なネットワークバリアを示している。これらは、骨髄由来樹状細胞であり、これは、上皮表面へと移動して、そこで、免疫監視を行う。正常な環境下では、皮膚から排出性（ｄｒａｉｎｉｎｇ）リンパ節へＬＣの基準量が送達されている。感染性微生物などの刺激に直面すると、皮膚外へと移動するＬＣの数が著しく増大して、抗原提示細胞の免疫監視機能を果たす。微生物、異物又はアジュバントとの相互作用により生じた危険信号に刺激されたランゲルハンス細胞は、その抗原提示機能により生じた非常に特異的で増幅された応答を介して、リンパ節中でエフェクター免疫応答を組織化する。
【００２２】
ヒト又は動物で免疫応答（例えば、抗原に特異的な液性及び／又は細胞性エフェクター）を誘発する経皮免疫（ＴＣＩ）のためのシステムが得られる。この送達システムは、少なくとも１種のアジュバント及び１種又は複数の抗原からなる処方物のヒト又は動物対象の皮膚への簡単な経皮投与をもたらす（Ｇｌｅｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６１：３２１１−３２１４、１９９８ａ；Ｇｌｅｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、３９１：８５１、１９９８ｂ；Ｇｌｅｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．、６：１４０３−１４０６、２０００；Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、４３：４５−５５、２０００；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、６８：５３０６−５３１３、２０００）。したがって、皮膚が、真皮層を介して貫通していない限りは、抗原特異的免疫応答は、化学的及び／又は物理的浸透増強を伴って、又は伴わずに誘発される。さらにこの送達系は、腸内、粘膜又は他の非経口免疫技術と組み合わせて使用することができる。したがって、ここに記載のパッチ技術は、例えば、免疫療法及び免疫保護などのヒト及び動物の治療で使用することができるであろう：治療的には、存在する疾患を治療するために、保護的には、疾患を予防するために、疾患の重度及び／又は期間を低減するために、疾患の１つ又は複数の症状を緩和するために、又はこれらの組合せで。
【００２３】
角質層を通過するために抗原が利用する送達経路は、現在のところ知られていない。角質層（ＳＣ）は、皮膚を通しての薬物及び抗原の送達に対する主なバリアである。極性薬物の経皮薬物送達は幅広く、角化細胞の間に生じる水性細胞間チャネルを介して生じ続ける（Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｅｄｓ．Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ：Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９９７）。ＳＣは、浸透のための制限的なバリアであるが、これは、毛包及び汗管によって破られている。抗原がＳＣに直接的に浸透するか、表皮付属器を介して浸透するかは、多数の要因に依存している。これらの付属物は、経皮薬物送達では目立たない役割しかはたしていないと考えられている（Ｂａｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．、６：８５−９７、１９８７）。ＤＮＡを使用する経皮免疫は、皮膚浸透のための経路として毛包を使用することができるというマウスでのいくつかの証拠にも関わらず（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１７：８７０−８７２、１９９９）、強い免疫応答は、より多くの皮膚表面積を使用するようである。ＳＣバリアの破壊は、皮膚の簡単な水和によって達成することができるので（Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｋｉｎ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ、Ｅｄｓ．Ｗａｌｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、１９９３）、これは、経皮免疫のために使用することができる。
【００２４】
１種又は複数のアジュバント、抗原及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化は、免疫応答の誘発を促進する。ＡＰＣは、抗原を処理し、次いで、リンパ球に対して１種又は複数のエピトープを提示する。活性化は、処方物とＡＰＣ（例えば、ランゲルハンス細胞、他の樹状細胞、マクロファージ、Ｂリンパ球）との間の接触、ＡＰＣによる処方物の接種、ＡＰＣによる抗原の処理及び／又はエピトープの提示、ＡＰＣの移動及び／又は分化、ＡＰＣとリンパ球との間の相互作用あるいはこれらの組合せを促進することができる。アジュバント自体も、ＡＰＣを活性化しうる。例えば、ケモカインは、抗原提示細胞を１つの部位に集め、かつ／又は活性化させることができる。特に、抗原提示細胞は、皮膚からリンパ節へと移動し、次いで、抗原をリンパ球に提示して、抗原特異的応答を誘発する。さらに、処方物は、抗原を認識して、抗原特異的免疫応答を誘発するリンパ球と直接的に接触することができる。
【００２５】
抗体及び細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）を含む抗原特異的Ｂ細胞及び／又はＴ細胞集団の活性化及び／又は拡大をもたらす免疫反応を引き出すことに加えて、本発明は、抗原特異性ヘルパー（Ｔｈ１及び／又はＴｈ２）又は遅延型過敏症Ｔ細胞サブセット（ＴDTH）に影響を及ぼす経皮免疫を使用することにより、免疫系の１つ又は複数の成分をプラスに、かつ／又はマイナスに調整することもできる。誘発される望ましい免疫応答は好ましくは、全身的又は局所的（例えば、粘膜）であるが、これは、通常望ましくない免疫応答（例えば、アトピー、皮膚炎、湿疹、乾癬及び他のアレルギー性又は過敏性反応）ではない。ここで分かるように、誘発される免疫応答は、疾患を治療するために有効な治療的又は予防的免疫応答をもたらす量及び質のものである。
【００２６】
処方物を経皮投与する前、その間、又はその直後に無損傷又は貫通された皮膚を水和することが好ましく、いくつかの場合又は多くの場合に必要である。例えば、水和により、皮膚（例えば、角質層又は浸透増強技術により露出された表面表皮層）の最上層の含水率が２５％、５０％又は７５％以上に高まる。皮膚は、グリセロール１０％、イソプロピルアルコール７０％及び水２０％からなる水溶液で水和させることができる。閉鎖性包帯の付加又は半液体処方物（例えば、クリーム、エマルション、ゲル、ローション、ペースト）の使用により、皮膚の水和を高めることもできる。例えば、脂質ベシクル又は糖を処方物に加えて、溶液又は懸濁液を増粘することもできる。真皮が穿孔されない限り、水和は、可能ならば、表皮の一部を伴う処方物の適用部位のところの角質層の全て又は少なくとも一部の破壊を伴って、又は伴わずに生じる。この意図は、処方物の一部は遠位でも作用しうるが、処方物の免疫活性な成分を全身循環に導入する代わりに、処方物を、皮膚の抗原提示細胞に作用させることである。
【００２７】
皮膚を、水和又は化学的浸透剤を含有する塗布具（例えば、パッド又はスティック状の吸着材）で拭くか、これらを直接、皮膚に塗布する。例えば、水溶液（例えば、水、生理食塩水、他の緩衝液）、アセトン、アルコール（例えば、イソプロピルアルコール）、界面活性剤（例えば、硫酸ドデシルナトリウム）、脱毛剤又は角質溶解剤（ｋｅｒａｔｉｎｏｌｙｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、水酸化カルシウム、サリチル酸、尿素）、湿潤剤（例えば、グリセロール、他のグリコール）、ポリマー（例えば、ポリエチレン又はプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン）又これらの組合せを、処方物中で使用するか、又は処方物に導入することができる。同様に、皮膚の擦過（例えば、エメリーボード（ｅｍｅｒｙ  ｂｏａｒｄ）又はエメリー紙、紙やすり、線維パッド、軽石などの研磨材）、皮膚の表皮層の除去（例えば、粘着テープでのピーリング又はストリッピング）、エネルギー源（例えば、熱、光、音波、電気、磁気）又はバリア破壊装置（例えば、ブレード、ニードル、発射体、スプレー、尖叉）を使用する皮膚の微細孔処理（ｍｉｃｒｏｐｏｒａｔｉｎｇ）あるいはこれらの組合せは、物理的浸透増強法として作用しうる。ミクロブレード又はミクロニードル、癌又はスプレーインジェクタに関し、さらに経皮免疫に適するであろう皮膚の微細孔処理及び技術に関する、ＷＯ第９８／２９１３４号、ＷＯ第０１／３４１８５号及びＷＯ第０２／０７８１３号；米国特許第５４４５６１１号、同第６０９０７９０号、同第６１４２９３９号、同第６１６８５８７号、同第６３１２６１２号、同第６３２２８０８号及び同第６３３４８５６号参照。ＴＣＩに関連する化学的又は物理的浸透増強の目的は、少なくとも角質層又は表皮又は深部表皮層を、真皮層を越えて皮膚を穿孔することなしに除去することである。このことは好ましくは、ヒト又は動物対象に対して多くても、僅かな不快だけで、部位の出血を伴うことなく達成する。例えば、無損傷皮膚への処方物の投与は、角質層又は表皮以下までの皮膚層を穿孔するための熱的、光学的、音波的又は電磁エネルギーを必要とするか、必要としないでよい。
【００２８】
ＷＯ第９８／２０７３４号及び同第９９／４３３５０号で行われている経皮免疫の間の差は、角質層の全てか、又は少なくとも一部が破壊されているかどうかである。ここで使用する場合の「浸透増強剤」との用語は、処方物中に、適用の前、適用の間又は適用の後に施与されると、このような破壊をもたらす化学薬品のことである。数種の化学薬品（例えば、アルコール）は、どの程度強く、これらが適用されるか（例えば、十分な圧力で拭くか、こする）に応じて、角質層を破壊することができるか、破壊しない。例えば、処方物中にアルコール、Ｏ／Ｗ又はＷ／Ｏエマルジョン、脂質ミセル又脂質ベシクルが含まれると、角質層の検出可能な破壊を伴うことなしに、無損傷皮膚にわたって同じ処方物の１種又は複数の免疫活性成分の浸透を強めることができる。
【００２９】
ワクチン接種で有用な処方物も、これを製造する方法と同様に提供される。処方物は、液体又は半液体の形であってよい。例えば、処方物は、液体；クリーム、エマルション、ゲル、ローション、軟膏、ペースト、溶液、懸濁液又他の液体の形として提供することができる。処方物は、風乾させるか、高温で乾燥させるか、凍結乾燥又は噴霧乾燥させるか、固体物質の上に塗布又は噴霧し、次いで乾燥させるか、固体物質上に散布し、迅速に凍結させ、次いで、真空下に徐々に乾燥させるか、これらを組み合わせて、低い含水率にすることができる。開始剤、加速剤又は減速剤（ｄｅｃｅｌｅｒａｔｏｒ）及び停止剤を適切に選択することにより、接着処方物を所望量の架橋まで硬化させることができる。
【００３０】
「パッチ」とは、固体基材（例えば、閉鎖性又非閉鎖性包帯）、さらに少なくとも１種の活性成分を含有する製品のことである。液体又は半液体処方物を、パッチに導入することもできる。この場合、パッチは、裏当て層、感圧接着層及び免疫原性処方物を含む。固体基材は、少なくとも裏当て層であるが、適切に乾燥し、硬化するならば、接着剤及び免疫原性処方物が、固体基材の一部を形成していてもよい。免疫原性処方物の１種又は複数の活性成分は、粘着層上に施与されるか、粘着層中に導入されるか、これらの組合せであってよい。複数の層を形成して、相互に付着又は積層させることもできる。
【００３１】
接着層の含水率は、０．５％より多く、１％より多く、２％より多く、１０％未満、５％未満、２％未満であってよく、これらの中間範囲であってよい。パッチは、約１ｃｍ2から約１００ｃｍ2の柔軟で平面の基材であってよい。タンパク質の有効量が、単一のパッチにより供給される。例えば、パッチは、１μｇから１ｍｇ、５μｇから５００μｇ、１０μｇから１００μｇ又はこの中間範囲のタンパク質の量を含有してよい。タンパク質の免疫活性に応じて、有効量の特定タンパク質は変動しうる。パッチは、防湿包装（例えば、ブリスターパック、フォイルパウチ）中で、室温（例えば、２０℃から３０℃）で少なくとも１年又は２年間、パッチの当初活性の８５％から１１５％の免疫活性で貯蔵することができる。
【００３２】
液体又は半液体の形の処方物を、１種又は複数のアジュバント及び／又は抗原と共に、同じ又は別々の部分で、又は同時に、又は頻繁な繰り返し適用で投与することができる。パッチは、制御放出用貯留部又は速度制御マトリックスを含んでよいか、アジュバント及び／又は抗原の段階的放出を可能にする膜を使用することができる。これは、アジュバント及び／又は抗原を有する単一の貯留部を、又は別々の個々の抗原及びアジュバントのための複数の貯留部を含む。パッチの施与が、複数の抗原に対する免疫応答を誘発するように、パッチは、付加的な抗原を含んでもよい。このような場合には、抗原は、同じ源から由来してもよいか、由来しなくてもよく、これらは、異なる化学的構造を有して、様々な抗原に特異的な免疫応答を誘発する。複数のパッチを同時に施与することもできる；単一のパッチが、複数の貯留部を含んでもよい。有効な治療のために、複数のパッチを、間隔をおいて、又は継続的に、一定期間にわたって施与することもできる；これらは、異なる時間に、重複する期間、又は同時に施与することもできる。
【００３３】
固体（例えば、ナノメートル又はマイクロメートル寸法の粒子）を、処方物中に導入することもできる。固体形（例えば、ナノ粒子又はマイクロ粒子）により、活性成分の分散又は可溶化を促進し、皮膚の表在層を通して処方物を運ぶのを助け；アジュバント、抗原又はその両方のための付着ポイントを基材にもたらし、これは、抗原提示細胞又はその組合せによりオプソニン処理されうる。水性溶液に不溶性であるか、可溶性の乏しい成分は、エマルション、脂質ベシクル又はミセルの形で処方することができる。
【００３４】
処方物は、生物学的製剤及びワクチンに関する適切な規制官庁（例えば、米国食品薬品局）に許容されうる条件下に製造することができる。場合によって、結合剤、緩衝剤、着色剤、乾燥剤、希釈剤、湿潤剤、防腐剤、安定剤、他の賦形剤、接着剤、可塑剤、粘着性付与剤、増粘剤、パッチ材料又はこれらの組合せなどの成分を、これらが免疫的に不活性であっても、処方物中に含有させることができる。しかしながら、これらは、処方物の有効性を改善する他の望ましい特性又は特徴を有することもできる。
【００３５】
投与に適した処方物の単一又は単位用量を提供する。単位用量中のアジュバント又は抗原の量は大体、約０．００１μｇから約１０ｍｇの広い範囲内である。この範囲は、約０．１μｇから約１ｍｇであってもよく、より狭い範囲は、約５μｇから約５００μｇである。他の適切な範囲は、約１μｇから約１０μｇ、約１０μｇから約５０μｇ、約５０μｇから約２００μｇ、約１ｍｇから約５ｍｇである。毒素での好ましい用量は、約５０μｇ又は１００μｇ又はそれ未満である（例えば、約１μｇから約５０μｇ又は１００μｇ）。抗原とアジュバントとの比は、約１：１であってよいが（例えば、抗原とアジュバントの両方である場合、ＡＤＰリボシル化外毒素）、乏しい抗原では、より高い比が適しており（例えば、約１：１０又はそれ未満）、あるいは、アジュバントに対してより低い比の抗原を使用することもできる（例えば、約１０：１以上）。
【００３６】
アジュバント及び抗原又はポリヌクレオチドを含有する処方物は、ヒト又は動物対象の皮膚に施与することができ、抗原を免疫細胞に提示し、抗原特異的免疫応答を誘発させる。これは、病原体による感染の前、その間、又その後に行うことができる。処方物の免疫原性が、アジュバント活性が必要でないほど十分である場合には、抗原又は抗原をコードするポリヌクレオチドのみが必要で、付加的なアジュバントは必要でなくてもよい。処方物は、処方物の施与が複数抗原（即ち、多価）に対する免疫応答を誘発するように、付加的な抗原を含有してもよい。このような場合、抗原は、同じ源から由来してよいか、由来しなくてもよいが、抗原は、異なる抗原に対して特異的な免疫応答を誘発するように様々な化学的構造を有する。抗原特異性リンパ球は、免疫応答に関与し、Ｂリンパ球の関与の場合には、抗原特異性抗体は、免疫応答の一部をなしている。前記の処方物は、結合剤、緩衝剤、着色剤、乾燥剤、希釈剤、湿潤剤、防腐剤、安定剤、他の賦形剤、接着剤、可塑剤、粘着性付与剤、増粘剤及び当技術分野で知られているパッチ材料を含んでもよい。
【００３７】
本発明を使用して、対象（例えば、疾患の予防、感染の効果からの保護、現存する疾患又は症状の治療又はこれらの組合せなどの処置を必要とするヒト又は動物）を治療する。感染以外の疾患には、癌、アレルギー及び自己免疫が含まれる。抗原が病原体に由来する場合には、治療は、病原体による感染に対してか、毒素分泌により誘発されるもののようなその病原効果に対して対象をワクチン接種することができる。本発明は、治療的には現存する疾患を治療するために、予防的には疾患を予防するために、疾患の重度及び／又は期間を低減するために、疾患の症状を軽減するために、又はこれらの組合せのために使用することができる。
【００３８】
適用部位を、起こりうる局所皮膚反応を低減するか、免疫応答のタイプを変更するためのヒドロコルチゾン、トリアムシノロン及びモメタゾン（ｍｏｍｅｔａｚｏｎｅ）又は非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症性コルチコステロイドで保護することができる。同様に、抗炎症性ステロイド又はＮＳＡＩＤが、パッチ材料又は液体又は固体処方物中に含まれていてよく；コルチコステロイド又はＮＳＡＩＤは、免疫の後に適用することもできる。ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、他の免疫調節剤を、抗炎症剤の代わりに使用することもできる。さらに、処方物を、単一又は複数の適用を使用して、１つよりも多い排出性リンパ節の上に位置する皮膚に適用することもできる。適用が複数抗原に対する免疫応答を誘発するように、処方物は、付加的な抗原を含有してもよい。このような場合には、抗原は、同じ源から由来してもよいか、由来しなくてもよいが、これらは、様々な抗原に特異的な免疫応答を誘発するように、異なる化学的構造を有することになろう。それぞれの室が、異なる抗原提示細胞を包含するので、多室パッチにより、多価ワクチンのより有効な送達が可能である。こうすると、抗原提示細胞は、１種のみの抗原（アジュバントを伴うか、伴わずに）に直面し、したがって、抗原競合が排除され、したがって、多価ワクチン中の個々の抗原に対する応答が増強される。
【００３９】
浸透技術を用いて、又は用いずに、免疫応答を開始させるか、増加させるために、処方物を皮膚表面から皮膚に、又は免疫の他の経路に適用することができる。単一又は複数の適用を用いる経皮免疫（ＴＣＩ）による開始の後に、同じ又は別の抗原での免疫を増大させるための腸内、粘膜、経皮及び／又は他の非経口技術を続けることもできる。単一又は複数の適用を用いる腸内、粘膜、経皮及び／又は他の非経口経路による開始の後に、同じ又は別の抗原での免疫を増大させるための経皮技術を続けることもできる。ＴＣＩは、粘膜又は経皮免疫などの慣用の局所技術とは異なることを特記する。それというのも、前者は、皮膚中には存在しない粘膜（例えば、肺、口腔、鼻、直腸）を必要とするが、後者は、真皮を通しての皮膚の穿孔を必要とするためである。皮膚への適用が、複数の抗原に対する免疫応答を誘発するように、処方物は、付加的な抗原を含有してもよい。
【００４０】
抗原及びアジュバントに加えて、処方物は賦形剤を含有してもよい。例えば、処方物は、ＡＱＵＡＰＨＯＲ、Ｆｒｅｕｎｄ、Ｒｉｂｉ又はＳｙｎｔｅｘエマルション；油中水型エマルション（例えば、水性クリーム、ＩＳＡ−７２０）、水中油型エマルション（例えば、油性クリーム、ＩＳＡ−５１、ＭＦ５９）、マイクロエマルション、乾燥脂質及び水中油型エマルション、他のタイプのエマルション；ゲル、脂肪、ワックス、オイル、シリコーン及び湿潤剤（例えば、グリセロール）を含有してもよい。
【００４１】
抗原は、ヒト又は動物対象に感染する病原体（例えば、細菌、ウイルス、カビ又は原生動物）、アレルゲン及び自己抗原から由来してよい。抗原の化学構造は、１種又は複数の炭水化物、脂肪酸及びタンパク質（例えば、糖脂質、糖タンパク質、リポタンパク質）として記載することができる。タンパク様抗原が好ましい。抗原の分子量は、５００ダルトン、８００ダルトン、１０００ダルトン、１０キロダルトン、１００キロダルトン又は１０００キロダルトンよりも大きくてよい（これらの中間範囲も含まれる）。化学的又は物理的浸透増強が、細胞、ウイルス粒子及び１メガダルトンよりも大きな分子などの高分子構造には好ましいが、水和及び溶剤を用いる消毒などの技術が、皮膚に免疫を誘発するために十分である。抗原は、組換え技術、化学合成又は、天然源からの少なくとも部分的な精製により得ることができる。これは、化学的又は組み合え複合体であってもよい；例えば、化学的に反応性の基の間の結合又はタンパク質融合。抗原は、生細胞又はウイルス、弱毒化生細胞又はウイルス、死細胞又は不活化ウイルスとして提供することができる。もしくは、抗原を、細胞不含な形に、少なくとも部分的に精製することができる（例えば、細胞又はウイルス溶解産物、膜又は他の細胞内画分）。多くのアジュバントが、免疫原活性を有し、抗原と見なされるので、アジュバントも、抗原の前記の特性及び特徴を有すると予測される。例えば、アジュバント及び抗原を、同じ技術を使用して調製することができる（前記参照）。
【００４２】
アジュバントを選択することにより、免疫応答の強化又は調節することができる。さらに、適切なアジュバントを選択することにより、液性又は細胞性免疫応答、特異的抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及び／又はＩｇＧ４）及び／又は特異的Ｔ細胞サブセット（例えば、ＣＴＬｌ、Ｔｈ１、Ｔｈ２及び／又はＴDTH）の優先的な誘発をもたらすことができる。アジュバントは好ましくは、化学的に活性か（例えば、タンパク分解的に消化されている）、遺伝的に活性な（例えば、融合、欠失又はポイント突然変異体）ＡＤＰリボシル化外毒素又はそのＢサブユニットである。
【００４３】
「抗原」は、免疫又はワクチン接種の後にヒト又は動物対象の免疫系により特異的に認識される処方物の活性成分である。抗原は、Ｂ細胞受容体（即ち、分泌されるか、膜結合されている抗体）又はＴ細胞受容体により認識される単一又は複数免疫原性エピトープを含む。Ｔ細胞受容体により認識されるタンパク質様エピトープは、特有の長さを有し、主な組織適合性複合体（ＭＨＣ）Ｉ群又はＩＩ群分子によって抗原提示細胞上に結合されているかどうかに応じて、保存されたアミノ酸基を有する。対照的に、抗体により認識されるタンパク質様エピトープは、短鎖で延在したオリゴペプチド及びもっと長い折り畳まれたポリペプチドを含む様々な長さからなってよい。エピトープ間の単一アミノ酸の差は、明らかである。抗原は、病原体、アレルゲン物質又は哺乳類ホスト（例えば、自己抗原、癌抗原、免疫系の分子）の分子に対して免疫応答を誘発しうる。免疫調整のために、分子は、アレルゲン、自己抗原、その内部イメージ又は免疫系の他の成分であってよい（例えば、Ｂ又はＴ細胞受容体、補助受容体又そのリガンド、可溶性メディエータ又はその受容体）。したがって、抗原は通常、同一であるか、少なくとも、分子の化学的構造に由来するが、このような化学構造に僅かにしか類似していない模擬物質（ｍｉｍｅｔｉｃｓ）も、有利に使用することができる。
【００４４】
「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答の誘発を補助するための処方物の活性成分である。アジュバント活性とは、アジュバント自体を処方物中に含有させることにより、又は処方物の他の成分又は特別な免疫技術と組み合わせて、非対応抗原（即ち、アジュバントとは別の化学構造である抗原）に対する免疫応答を増大させる能力である。前記のように、分子は、抗原とアジュバントとの化学的な複合により、あるいは抗原及びアジュバントのコード領域の遺伝的な融合により、抗原及びアジュバント活性の両方を含有しうる；したがって、処方物は、１種のみの材料又は成分を含有するだけでもよい。ＣＴ及びＬＴなどのいくつかの天然タンパク質は、アジュバント及び抗原特性の両方を有する；いくつかの組換えタンパク質は、同様の特性（ＬｅＩＦ）を有すると知られている；いくつかの非タンパク質アジュバントも、ＬＰＳ又は脂質Ａなどのそれ自体に対する抗体を誘発しうる。アジュバントと抗原特色の組合せを使用して、防御免疫応答を誘発させることができる。例えば、ＬＴ抗体は、ＥＴＥＣに対して防御的であり、ＬｅＩＦ免疫応答は、リーシュマニア症の形質発現で有効であり、ＬＰＳ抗体は、グラム陰性生物体により誘発される疾患に対する保護において防御的でありうる。
【００４５】
「有効量」との用語は、抗原特異的免疫応答を誘発するアジュバント又は抗原の量を記載していることを意味している。「サブユニット」免疫原又はワクチンは、組換え技術、化学合成又は天然源からの少なくとも部分的な精製により、病原体の他の細胞又はウイルス成分（例えば、内毒素などの膜又は多糖類成分）から単離された活性成分（例えば、アジュバント、抗原）からなる処方物である。
【００４６】
免疫応答の誘発により、例えば、免疫保護、脱感作、免疫抑制、自己免疫疾患の調節、癌免疫監視の強化、疾患を予防するための予防的ワクチン接種及び生じた疾患を軽減するための治療的ワクチン接種などの、対象の治療がもたらされる。その存在又は不在が、免疫応答の規模及び／又は動態に統計的に重要な変化をもたらす場合、生成物又は方法は、免疫系の誘発された要素の変化（例えば、液性ｖｓ．細胞性、Ｔｈ１  ｖｓ．Ｔｈ２）；疾患症状の数及び／又は重度に対する効果；対象の健康及び快適さに対する効果（即ち、罹患率及び死亡率）；又はこれらの組合せをもたらす。
【００４７】
本発明で使用する場合の「排出性リンパ節領域」との用語は、一組の定義されたリンパ節（例えば、頚部、腋窩、鼠径部、上腕骨の内側上顆、膝窩、腹部及び胸部のもの）を介して、集められたリンパ液が濾過される解剖学的領域を意味している。したがって、免疫の部位及び時間が、処方物の異なる成分を一緒に送達するために適切に間を空けられている場合には（例えば、単独では有効ではない場合には、アジュバント又は抗原を有する２つのパッチを同時に、近くに位置させるのが有効である）、抗原提示細胞がリンパ節に移動するために必要とされる数日間は、同じ排出性リンパ節界が、免疫のターゲットとなりうる（例えば、腸内、粘膜、経皮、経皮、他の非経口）。例えば、経皮技術によりアジュバントを送達するパッチを、慣用のワクチンを注射された同じ腕に貼って、高齢、小児又他の免疫学的に易感染性人口でのその有効性を強化することができる。対照的に、他方の肢にパッチを適用することで、アジュバント含有パッチが、抗原のみを含有するパッチの有効性を強化するのを防ぐことができる。
【００４８】
本発明の実施に関して特定の理論と結びつけることはせずに、我々の観察に関する説明を提供するためにのみ、我々は、この経皮送達系は抗原を、免疫応答が誘発される免疫系の細胞に運ぶと仮定する。抗原は、皮膚の通常は存在する保護外側層（即ち、角質層）を通過して、直接に、あるいはリンパ球に処理抗原を提示する表皮中の抗原提示細胞集団（例えば、マクロファージ、組織マクロファージ、ランゲルハンス細胞、他の樹状細胞、Ｂリンパ球又はクッパー細胞）を介して免疫応答を誘発する。したがって、透過増強技術を用いて、又は用いずに、皮下注射又は経皮技術でのように、ＴＣＩでは、真皮を穿孔しない。場合によって、抗原は、毛包又は皮膚器官（例えば、汗腺、油腺）を介して角質層を通過しうる。
【００４９】
実施例のような細菌性ＡＤＰリボシル化外毒素（ｂＡＲＥ）での経皮免疫は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）のうちで最も有効であると知られている表皮ランゲルハンス細胞をターゲットとしうる。ＡＰＣの成熟は、形態学及び表現型によって判断することができる（例えば、ＭＨＣ  ＩＩ群分子、ＣＤ８３又は同時刺激性（ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ）分子の発現）。我々は、ｂＡＲＥは、無損傷皮膚に表皮的に適用されると、ランゲルハンス細胞を活性化するようであることを発見した。トリプシン分割されたｂＡＲＥなどのアジュバントは、ランゲルハンス細胞活性を増強させる。リンパ球に抗原を提示するＡＰＣとして作用して、強力な抗体応答を誘発する場合、ランゲルハンス細胞は、抗原の食細胞活動を介して特異的免疫応答及びリンパ節への移動を指示とする。皮膚は通常、病原体に対するバリアと考えられているが、このバリアの不完全さは、皮膚を介して侵入する微生物に対する免疫応答を統合するように設計されている表皮に分布している数多くのランゲルハンス細胞によって証明されている。Ｕｄｅｙによると（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０７：ｓ６−ｓ８、１９９７）：
「ランゲルハンス細胞は、骨髄由来細胞であり、これは、全ての哺乳動物の重層扁平上皮に存在している。これは、補助細胞活性の全てを含み、これは、非炎症性表皮に存在し、最近のパラダイムでは、外皮的に適用される抗原を対象とする免疫応答の開始及び伝播に必須である。ランゲルハンス細胞は、強力な補助細胞（「樹状細胞」）ファミリーの一員であり、これは、稀にしか現れないが、表皮及び固体器官、さらにリンパ組織に広く分布している。
現在は、ランゲルハンス細胞（及び、おそらく他の樹状細胞）は、少なくとも２つの異なる段階を伴うライフサイクルを有する。表皮に位置するランゲルハンス細胞は、抗原捕捉性「歩哨（ｓｅｎｔｉｎｅｌ）」細胞の規則的なネットワークを構成している。表皮ランゲルハンス細胞は、微生物を含む粒子状物質を摂取することができ、複合抗原の有効なプロセッサである。しかしながら、これらは、僅かなレベルのみのＭＨＣ  Ｉ及びＩＩ群抗原及び同時刺激分子（ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−１及びＢ７−２）を発現し、抗原刺激を受けていないＴ細胞の僅かな刺激物質である。抗原と接触した後に、いくつかのランゲルハンス細胞は活性化されて、表皮を出て、局所リンパ節のＴ細胞依存領域へと移動し、ここで、成熟樹状細胞として局在化する。表皮を出て、リンパ節に移動する過程で、抗原を有する表皮ランゲルハンス細胞（ここでは、「メッセンジャー」）は、形態、表面表現型及び機能に関して劇的な変化を示す。表皮ランゲルハンス細胞とは異なり、リンパ球樹状細胞は主に、非貪食性で、タンパク質抗原は不十分にしか処理しないが、高レベルのＭＨＣ  Ｉ群及びＩＩ群抗原及び様々な共同刺激分子を発現し、同定されている未刺激Ｔ細胞の最も強力な刺激物質である」。
【００５０】
ランゲルハンス細胞の強力な抗原提示能は、経皮送達される免疫原及びワクチンのために利用することができる。皮膚免疫系を使用する免疫応答は、処方物を角質層（即ち、角化細胞及び脂質からなる皮膚の最上層）中のランゲルハンス細胞のみに送達し、次いで、ランゲルハンス細胞を活性化させて、抗原を摂取させ、Ｂ細胞小胞及び／又はＴ細胞依存領域に移動させ、Ｂ及び／又はＴリンパ球に抗原を提示させる。ｂＡＲＥ以外の抗原（例えば、毒素、コロニー形成又は病原性因子）が、ランゲルハンス細胞によって貪食される場合には、これらの抗原も、Ｔリンパ球に提示するためのリンパ節に移動し、次いで、その抗原に対して特異的な免疫応答を誘発するであろう。したがって、ＴＣＩの形態は、おそらくｂＡＲＥ又はその誘導体、ケモカイン、サイトカイン、ＰＡＭＰ又は、接触感作物質及びアジュバントを含む他のランゲルハンス細胞活性化物質によるランゲルハンス細胞の活性化である。ランゲルハンス細胞の皮膚占有率のサイズ又はその活性化状態を高めることにより、免疫応答の増強も期待される（例えば、アセトン前処理）。老齢対象又はランゲルハンス細胞欠損皮膚（即ち、ＵＶダメージにより）では、ランゲルハンス細胞の占有率を補充することも可能である（例えば、トレチノイン前処理）。
【００５１】
ｂＡＲＥなどのアジュバントは、全身的に注射又は投与すると、毒性が高いことが知られている。真皮内注射も、ＬＴがアジュバントとして含まれている場合には、持続的な結節をもたらすことが判明している（Ｇｕｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｖａｃｃｉｎｅ、１７：１１３０−１１３５、１９９９）。しかし、無損傷皮膚の表面に（即ち、皮膚表面に）置かれると、これらは、全身的な毒性を誘発しないようである。したがって、経皮経路によって、全身的な毒性を伴うことなく、アジュバントの利点が可能となる。皮膚が、角質下まで（即ち、表皮付近又は表皮）しか侵入を受けず、真皮を貫通されない場合に、同様に毒性が発現しないと予想される。したがって、皮膚を介して免疫系の活性化を誘発できることにより、全身毒性を伴わずに強い免疫応答が誘発される。
【００５２】
親和性成熟及び、主にＩｇＧ抗体にスイッチするイソタイプによって誘発される抗体応答の強さは通常、Ｔ細胞の助けによって達成され、Ｔｈ１及びＴｈ２経路の両方の活性化は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａの産生により触発される。もしくは、広い抗体応答は、胸腺非依存性抗原１型（Ｔｉ−１）によって誘発されることもあり、これは直接に、Ｂリンパ球を活性化させるか、ＭＨＣ  ＩＩ群、ＣＤ２５、ＣＤ４０、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６及びＩＣＡＭ−１分子のアップレギュレーションなどのＢリンパ球に対する同様の活性化効果を有しうる。
【００５３】
一般に知られている皮膚免疫応答のスペクトルは、アトピー及び接触皮膚炎に代表される。ランゲルハンス細胞活性化の病原性発現である接触皮膚炎は、ランゲルハンス細胞により支配され、これは、抗原を貪食し、リンパ節に移動させ、抗原に提示し、皮膚に移動するＴリンパ球を感作し、侵された皮膚部位の所で生じる激しい破壊性細胞応答を誘発する。このような応答は通常、抗原特異性ＩｇＧ抗体と関連しているとは知られていない。アトピー性皮膚炎も同様に、ランゲルハンス細胞を利用しうるが、Ｔｈ２細胞と同定されており、通常、高レベルのＩｇＥ抗体と関連している。
【００５４】
他方で、ｂＡＲＥでの経皮免疫は、有効かつ望ましい免疫応答をもたらす。普通、誘発される高レベルのＩｇＧにより生じるアトピー又は接触皮膚炎に典型的な所見は存在しない。皮膚表面に適用された毒素又はＥ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシンは、免疫の２４、４８及び１２０時間後に、リンパ球浸潤の不在下に免疫を達成することができる。臨床前及び臨床試験で見られた僅かな皮膚反応性は、簡単に治療することができた。このことは、経皮免疫がランゲルハンス細胞を用いることを示している。それというのも、これらは、「非炎症表皮に存在する補助細胞活性の全てを含み、最近のパラダイムでは、経皮的に適用された抗原を対象とする免疫応答の開始及び伝播に必須である」（Ｕｄｅｙ、１９９７）ためである。この場合、経皮免疫応答の独自性は、高レベルの抗原特異性ＩｇＧ抗体並びに産生される抗体のタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３及びＩｇＡ）及び通常は抗原特異性ＩｇＥ抗体の不在の両方によっても示される。アトピー又接触皮膚炎と同時に存在して、抗原提示細胞及びＴリンパ球の十分な活性化が経皮応答で生じた場合には、経皮免疫は、皮膚炎症と協力して生じると考えることができる。
【００５５】
ランゲルハンス細胞の経皮ターゲッティングは、その抗原提示機能の全て又は一部を不活性化する抗原と協力して使用して、免疫を調節するか、感作を予防することもできる。ランゲルハンス活性化又は他の皮膚免疫細胞を調節するための技術には例えば、抗炎症ステロイド又は非ステロイド薬（ＮＳＡＩＤ）；シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、シクロホスファミド、グルココルチコイド又は他の免疫抑制剤；インターロイキン−１０；インターロイキン−１モノクローナル抗体（ｍＡＢ）又は可溶性受容体アンタゴニスト（ＲＡ）；インターロイキン変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤；又はスーパー抗原を介して、例えば表皮ランゲルハンス細胞枯渇により誘発されるブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）を介しての枯渇が含まれる。同様の化合物を、ランゲルハンス細胞の自然免疫応答を調節し、異なるＴヘルパー応答（Ｔｈ１又はＴｈ２）を誘発するために使用することができるか、免疫の強い副作用を低減するために皮膚炎症応答を調節することができる。同様に、免疫抑制剤を別に投与することにより、又は処方物と共に免疫抑制剤を同時投与することにより、免疫の前、その間又はその後に、リンパ球を免疫抑制することができる。例えば、ＩＣＥの抑制剤を加えることで、不利な皮膚反応を軽減することができるが、アレルギー性又は刺激性接触過敏性を通常はもたらす薬剤で、有効な全身保護免疫応答を誘発することができる。
【００５６】
抗原
経皮免疫系は、免疫応答をもたらす特殊な細胞（例えば、抗原提示細胞、リンパ球）に対する作用物質を送達する。群としてこれらの作用物質は、抗原と称される。抗原は、例えば、炭水化物、糖脂質、糖タンパク質、脂質、リポタンパク質、リン脂質、ポリペプチド、これらの複合体又は、免疫応答を誘発すると知られている他の物質などの化学的構造からなってよい。抗原は、キャリヤと複合していてもよい。抗原は、例えば、細菌又はビリオンなどの全生物体として提示されてもよく；抗原は、全細胞又は膜のみからの抽出物又は溶解産物から得ることもできるか；抗原は、組換え技術により化学的に合成又は生産することもできる。抗原は、可溶化又は分散により、処方物に導入することができる。
【００５７】
本発明の抗原は、好ましくは親和性タグ又はエピトープタグとの融合体として、組換え技術により発現することができる。遊離の、又はキャリヤタンパク質に複合したオリゴペプチドの化学合成を、本発明の抗原を得るために使用することもできる。糖ペプチドは、ポリペプチドの１タイプと考えられる。６基から２０基からなるオリゴペプチド長さが好ましい。ポリペプチドも、分枝鎖構造として合成することができる。抗原性ポリペプチドには例えば、合成又は組換えＢ細胞及びＴ細胞エピトープ、普遍的（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）Ｔ細胞エピトープ及び１種の生体又は疾患からの混合Ｔ細胞エピトープ及び別の生体又は疾患からのＢ細胞エピトープが含まれる。組換え技術又はペプチド合成を介して得られる抗原、さらに天然源又は抽出物から得られた抗原を、抗原の物理的及び化学的特性により、好ましくは分割又はクロマトグラフィにより精製することができる。組換え体は、抗原断片と組み合わせるか、それと融合させて、キメラにすることができる。多価抗原処方物を使用して、同時に、１個より多い抗原に対する免疫応答を誘発させることができる。複合体を使用して、複数抗原に対する免疫応答を誘発させるか、免疫応答を強化するか、その両方を行うことができる。経皮免疫を使用して、経口、鼻又は他の非経口経路などによる他の免疫系路により初めは誘発された応答を強化することができる。このような経口／経皮又は経皮／経口免疫は、粘膜免疫が防御と関連している疾患で粘膜免疫を強化するために特に重要である。
【００５８】
抗原を、緩衝液又は水又はアルコール又はＤＭＳＯなどの有機溶剤中に可溶化するか、ゲル、エマルション、脂質ミセル又はベシクル及びクリームに導入することができる。適切な緩衝液には、これらに限らないが、Ｃａ++／Ｍｇ++不含のリン酸緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水、正常食塩水（水中に１５０ｍＭのＮａＣｌ）及びＨｅｐｅｓ又はトリス緩衝液が含まれる。中性緩衝液に可溶性ではない抗原は、１０ｍＭの酢酸中で可溶化して、ＰＢＳなどの中性緩衝液で所望の容量に希釈することができる。酸性ｐＨでのみ可溶性な抗原の場合には、酸性ｐＨのＰＢＳ酢酸塩を、希酢酸中で可溶化した後に、希釈剤として使用することができる。ジメチルスルホキシド及びグリセロールが、本発明で使用するために適した非水性緩衝液である。
【００５９】
疎水性抗原は、洗浄剤又は界面活性剤、例えば、膜貫通（ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｓｐａｎｎｉｎｇ）ドメインを含有するポリペプチド中で可溶化することができる。さらに、リポソームを含有する処方物では、洗浄剤溶液中の抗原（例えば、細胞膜抽出物）を、脂質と混合し、次いで希釈、透析又はカラムクロマトグラフィにより界面活性剤を除去することにより、リポソームを生じさせることができる。一定の抗原（例えば、膜タンパク質）は、それ自体可溶性である必要はないが、脂質膜（例えば、ヴィロソーム）、ビリオン単独の懸濁液、あるいは抗原提示細胞を活性化することにより取り込むことができる熱不活化細菌又は微小球の懸濁液（例えば、オプソニン作用）中に直接挿入することができる。抗原を、ＷＯ第９９／４３３５０号に記載されている浸透増強剤と混合することもできる。
【００６０】
ヒト又は動物対象のワクチン接種に使用することができ、特定の病原体に対して特異的な免疫応答を誘発する多くの抗原、さらに、抗原を調製し、抗原の適切な容量を決定し、免疫応答を誘発するためにアッセイし、病原体（例えば、細菌、ウイルス、カビ又は原生動物）による感染を治療する方法は、当技術分野で知られている。環境及び食品アレルゲン、さらに、哺乳類ホスト（例えば、ヒト、動物）の自己抗原が、病原体に由来しない抗原の例である。経皮免疫のための処方物及びワクチンを製造するために使用される抗原は、天然製品そのもの、その遺伝的に改変又は化学的に合成された形、その断片、融合体又は複合体であってよい。免疫応答は通常、抗原の一部のみを認識する（例えば、１個又は複数の免疫原性エピトープ）。
【００６１】
Ｐｌｏｔｋｉｎ及びＭｏｒｔｉｍｅｒ（Ｖａｃｃｉｎｅ、２ｎｄ  Ｅｄ．、Ｐｈｉｌａｄｅｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ、１９９４）は、特定の病原体に特異的な免疫応答を誘発するためにヒト又は動物にワクチン接種するために使用することができる抗原、さらに、抗原を調製し、抗原の適切な用量を決定し、免疫応答の誘発をアッセイし、病原体による感染を治療するための方法を提供する。
【００６２】
細菌には例えば、炭疽（ａｎｔｈｒａｘ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ）、クロストリジウムディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）を含むクロストリジウム属、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、腸管出血性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）、毒素原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）、ジアルジア（Ｇｉａｒｄｉａ）、淋菌（ｇｏｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ヘモフィルスインフルエンザＢ（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｂ）、型別不能ヘモフィルスインフルエンザ（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｎｏｎｔｙｐｅａｂｌｅ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）、結核、ヒト型結核をもたらす微生物を含むミコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）、百日咳、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）、サルモネラ（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、Ａ群β溶血ストレプトコッカス（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｂｅｔａ−ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカスＢ（ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＢ）、テタヌス（ｔｅｔａｎｕｓ）、ボレリアブルクドルフィ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｉ）及びエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）が含まれる。これらの産物を抗原として使用することもできる。抗原には例えば、毒素、トキソイド、そのサブユニット又はこれらの組合せ；ビルレンス又は定着因子；及び産物が含まれる。
【００６３】
ウイルスには例えば、アデノウイルス、デングセロタイプ１から４、エボラ、エンテロウイルス、ハンタウイルス、肝炎セロタイプＡからＥ、単純ヘルペスウイルス１又は２、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、麻疹、ノーウォーク、日本ウマ脳炎、パピローマウイルス、パルボウイルスＢ１９、ポリオ、狂犬病、ＲＳウイルス、ロタウイルス、風疹、はしか、セントルイス脳炎、ワクシニア、マラリア抗原などの他の抗原をコードする遺伝子を含有するウイルス発現ベクター、水痘及び黄熱が含まれる。これらのウイルス産物又は誘導体を、抗原のための源として使用することができる。
【００６４】
カビには、体部白癬、爪白癬、スポロトリクム症、アスペルギルス症、カンジダをもたらす実体及び他の病原性カビが含まれる。そのカビ産物又は誘導体を、抗原のための源として使用することができる。
【００６５】
原生動物には例えば、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）及び蠕虫（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｅｓ）；住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｅｓ）；及びこれらの産物が含まれる。その原生動物産物又は誘導体を、抗原のための源として使用することができる。
【００６６】
粘膜表面上で、又はそれを介して侵入する病原体、例えば、細菌のアクチノマイセス属の病原体種、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、キャプノサイトファガ（Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ）、クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エイケネラ（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ）、エリジペロスリックス（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ）、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘモフイルス（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、マイコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セレノモナス（Ｓｅｌｅｎｏｍｏｎａｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）及びヴェルシニア（Ｖｅｒｓｉｎｉａ）；アデノウイルス群からの病原性ウイルス株、コロナウイルス（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ヘルペスウイルス、オルソミクソウイルス（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｕｓ）、ピコルノウイルス（Ｐｉｃｏｒｎｏｖｉｒｕｓ）、ポックスウイルス（Ｐｏｘｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ）、レトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ロタウイルス、アスペルギルス属からの病原性カビ、ブラストミセス、カンジダ、コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ヒストプラスマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）及びフィコマイス（ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｓ）及びアイメリア、エントアメーバ、ギアリダ及びトリコモナス属の病原性原生生物が、特に重要である。
【００６７】
癌、アレルギー及び自己免疫疾患の治療として、ワクチン接種を使用することもできる。例えば、腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２、前立腺特異的抗原）のワクチン接種は、抗体、ＣＴＬ及びリンパ球増殖の形の免疫応答を誘発し、これにより、腫瘍細胞を認識し、撲滅する体の免疫系が可能となる。ワクチン接種のために使用することができる腫瘍抗原が、白血病、リンパ腫及び黒色腫に関して記載されている。動物（例えば、トリ、ネコ、イヌ、げっ歯類）、ゴキブリ、ノミ、ダニ及び植物花粉（例えば、草、樹木）が、アレルゲンとして知られている。Ｔ細胞受容体又は自己抗原（例えば、すい島抗原）のワクチン接種は、自己免疫疾患の進行を停止させる免疫応答を誘発しうる。
【００６８】
アジュバント
処方物は、アジュバントを含有するが、単一の分子が、アジュバントと抗原特性の両方を有してもよい（例えば、ＡＤＰリボシル化外毒素）。大抵のアジュバントは、免疫原活性を有し、抗原と見なされるので、アジュバントも、抗原の前記の特性及び特徴を有すると予測される。例えば、アジュバント及び抗原を、同じ技術を使用して調製することができる（前記参照）。
【００６９】
アジュバントは、おそらく抗原提示細胞（例えば、皮膚の様々な層中の樹状細胞、特に、ランゲルハンス細胞）の活性化を介して、特異的に、又は非特異的に抗原特異的免疫応答を強化するために使用することができる物質である。Ｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．も参照（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９４）。活性化は当初、表皮又は真皮中で生じうるが、効果は、リンパ系及び循環を介しての樹状細胞移動として持続しうる。アジュバントを処方し、抗原と共に、又はこれを伴わずに適用するが、通常、アジュバントによる抗原提示細胞の活性化は、抗原の提示前に生じる。もしくは、これらは、短い時間間隔内で別々に提示されるが、同じ解剖学的領域をターゲットとしてよい（例えば、同じ排出性リンパ節界）。
【００７０】
アジュバントには例えば、ケモカイン（例えば、デフェンシン、ＨＣＣ−１、ＨＣＣ−４、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１δ、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−２、ＲＡＮＴＥＳ）；ケモカイン受容体の他のリガンド（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ−２、ＣＣＲ−５、ＣＣＲ−６、ＣＸＣＲ−１）；サイトカイン（例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２；ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α；ＧＭ−ＣＳＦ）；これらのサイトカインのための受容体の他のタンパク質リガンド、熱ショックタンパク質及びその誘導体；ｅｌＦ４ａのリーシュマニア同族体及びその誘導体；細菌ＡＤＰリボシル化外毒素及びその誘導体（例えば、遺伝突然変異体、Ａ及び／又はＢサブユニット含有断片、化学的にトキソイド化した変異型）；細菌ＡＤＰリボシル化外毒素又はその誘導体を含有する化学的複合体又遺伝的組換え体；Ｃ３ｄタンデム配列；及びスーパー抗原が含まれる。他の有効なアジュバントに関しては、Ｎｏｈｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ、７：２６１−２６９、１９９４）及びＲｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９９５）も参照。
【００７１】
抗体又は細胞性エフェクター、特異的抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、分泌性ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及び／又はＩｇＧ４）又は特異的Ｔ細胞サブセット（例えば、ＣＴＬ、Ｔｈ１、Ｔｈ２及び／又はＴDTH）が優先的に誘発されるように、アジュバントを選択することができる。例えば、抗原提示細胞は、クラスＩＩ制限的抗原を前駆体ＣＤ４＋Ｔ細胞を提示し、Ｔｈ１又はＴｈ２経路に侵入しうる。活発にサイトカインを分泌するＴヘルパー細胞が主な、エフェクター細胞であり；これは、静止している場合には、免疫記憶細胞である。免疫記憶細胞の再活性化により、免疫記憶エフェクター細胞が産生される。Ｔｈ１は特徴的にＩＦＮ−γを分泌し（ＴＮＦ−β及びＩＬ−２も分泌されうる）、細胞性免疫の「ヘルプ」に関連し、Ｔｈ２は特徴的にＩＬ−４を分泌し（ＩＬ−５及びＩＬ−１３も分泌されうる）、液性免疫の「ヘルプ」に関連している。疾患病理に依存して、Ｔｈ２応答（例えば、抗原特異性抗体）に対してＴｈ１応答（例えば、抗原特異性細胞溶解細胞）を選ぶように、アジュバントを選択することができる。
【００７２】
大抵のＡＤＰリボシル化外毒素（ｂＡＲＥ）は、Ａ：Ｂへテロ二量体として構成されており、この際、Ｂサブユニットは、受容体結合活性を有し、Ａサブユニットは、ＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ活性を有する。代表的なｂＡＲＥには、コレラ毒素（ＣＴ）、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素Ａ（ＥＴＡ）、百日咳毒素（ＰＴ）、Ｃ．ボツリヌス毒素Ｃ２、Ｃ．ボツリヌス毒素Ｃ３、Ｃ．リモスム外酵素、Ｂ．セレウス外酵素、シュードモナス外毒素Ｓ、Ｓ．オーレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＥＤＩＮ及びＢ．スファエリクス（Ｂ．ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）毒素が含まれる。例えば、トリプシン分割部位の突然変異を含む突然変異ｂＡＲＥ（例えば、Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ、６３：１６１７−１６２３、１９９５）又はＡＤＰリボシル化に影響を及ぼす突然変異（例えば、Ｄｏｕｃｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ、６５：２８２２１−２８２２１８、１９９７）を使用することができる。
【００７３】
ＴＣＩは、ＣＴ、ＬＴ又そのサブユニット（例えば、ＣＴＢ又はＬＴＢ）のガングリオシドＧＭ1結合活性を介して達成することができる。ガングリオシドＧＭ1は、全ての哺乳動物細胞中に存在する汎存性（ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）細胞膜糖脂質である。ペンタマーＣＴＢサブユニットは、細胞表面に結合し、親水性細孔が生じて、これにより、Ａサブユニットが、脂質二重層へと挿入しうる。ＡＰＣ上の他の結合ターゲットを使用することもできる（例えば、ＥＴＡは、α2−マクログロブリン受容体−低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質と結合する）。ＬＴＢサブユニットは、ガングリオシドＧＭ1、加えて、他のガングリオシドに結合し、その結合活性によって、ＬＴが、皮膚上で極めて免疫原性であるという事実が説明される。
【００７４】
ｂＡＲＥ又はＢサブユニット含有断片又その複合体を伴うＴＣＩは、そのガングリオシドＧＭ1結合活性を必要とする。マウスをＣＴ、ＣＴＡ及びＣＴＢで経皮的に免疫化する場合、免疫応答を誘発するためにＣＴ及びＣＴＢを必要とした。ＣＴＡは、ＡＤＰリボシル化外毒素活性を有するが、結合活性を有するＣＴ及びＣＴＢだけが、免疫応答を誘発することができ、このことは、Ｂサブユニットが、皮膚を介しての免疫には必要かつ十分であることを示している。ＣＴＢがその細胞表面に結合することにより、ランゲルハンス細胞又は他のＡＰＣは活性化されて、経皮免疫応答が生ずると、我々は結論付ける。
【００７５】
異なる細胞結合部位を有するにも関わらず、ＣＴ、ＬＴ、ＥＴＡ及びＰＴは、ＩｇＧ抗体を誘発するが、ＩｇＥ抗体は誘発しない経皮免疫のための強力なアジュバントである。ＣＴを伴わないＣＴＢも、ＩｇＧ抗体を誘発しうる。したがって、ｂＡＲＥ及びその誘導体の両方が、皮膚に経皮的に適用されると有効に免疫しうる。しかしながら、アジュバント及び抗原としての天然ＬＴは明らかに、天然ＣＴほど強力ではない。しかし活性化ｂＡＲＥは、経皮免疫系での弱い免疫原性抗原のためのアジュバントとして作用しうる。したがって、１種又は複数の抗原を用いての治療的免疫を、予防的又は治療的免疫応答を誘発する抗原提示細胞の免疫刺激と別々に、又はそれと一緒に使用することができる。
【００７６】
通常、毒素を、化学的に不活化して、免疫原性のままではあるが毒性は低いトキソイドを生じさせることができる。毒素ベースの免疫原及びアジュバントを使用する経皮免疫系により、これらの疾患に対する保護に適した抗毒素レベルが達成されると、我々は考えている。抗毒素抗体を、毒素又はその遺伝的に解毒されたトキソイドを用いる、あるいはトキソイド及びアジュバントを用いる免疫を介して誘発することができる。変更されたＡＤＰリボシル化外毒素活性又はトリプシン分割部位を有するが、結合活性は有しない遺伝的にトキソイド化された毒素は、経皮免疫で使用される抗原提示細胞の非毒性活性化物質として特に有効であり、毒素使用に対する懸念を低減しうると考えられる。
【００７７】
ｂＡＲＥは、経皮免疫を介して抗原特異性ＣＴＬを誘発するためのアジュバントとしても作用しうる。ｂＡＲＥアジュバントを、例えば、炭水化物、ポリペプチド、糖脂質及び糖タンパク質抗原を含む他の抗原と化学的に複合させることができる。毒素、そのサブユニット又はトキソイドとこれらの抗原との化学的複合は、経皮的に適用された場合のこれらの抗原に対する免疫応答を増強すると予測される。毒素の毒性に関する問題を克服し（例えば、ジフテリア毒素は、１分子が細胞を殺しうるほどの毒性を有することが知られている）、破傷風のような強力な毒素を用いて作業するという問題を克服するために、数人の従事者が、遺伝的に製造されたトキソイドに対する組換え手法に取り組んできた。これは、遺伝的欠失によりＡＤＰリボシルトランスフェラーゼの触媒活性を不活化することに基づく。これらの毒素は、そのままの毒素の結合能は保持しているが、毒性は欠いている。このような遺伝的にトキソイド化された外毒素は、経皮免疫応答を誘発し、アジュバントとして作用すると予測される。これらは、経皮免疫系の利点はもたらしうるが、その際、安全性に関する懸念は生じない。それというのも、トキソイドは、毒性を有するとは考えられないためである。しかしながら、トリプシン分割などの技術を介しての活性化により、トリプシン様酵素を欠いている皮膚を介してのＬＴのアジュバント品質が増強されると予測される。加えて、毒素を化学的に変性するためのいくつかの技術が存在し、これらは、同じ問題に取り組んでいる。これらの技術は、特定の適用、特に小児適用で重要であり、この際、摂取された毒素は、不利な反応をもたらしうる。
【００７８】
アジュバントを、天然源から生化学的に精製するか（例えば、ｐＣＴ又ｐＬＴ）、組換えにより製造することができる（例えば、ｒＣＴ又はｒＬＴ）。ＡＤＰリボシル化外毒素を、タンパク質分解（即ち、活性化）の前又は後に精製することができる。ＡＤＰリボシル化外毒素のＢサブユニットを使用することもでき；タンパク質分解の後に天然酵素から精製するか、酵素の全体コード領域の断片から製造することができる。ＡＤＰリボシル化外毒素のサブユニットは、別々に（例えば、ＣＴＢ又はＬＴＢ）、又は一緒に（例えば、ＣＴＡ−ＬＴＢ、ＬＴＡ−ＣＴＢ）、化学的複合又遺伝的融合により使用することができる。その細胞膜受容体に結合する能力を保持しているＡＤＰリボシル化外毒素の断片を生化学的に精製又は組換えにより生産し、次いで、Ｂサブユニットの代わりに使用することもできる。
【００７９】
点突然変異（例えば、１回、２回又は３回アミノ酸置換）、欠失（例えば、プロテアーゼ認識部位）及びＡＤＰリボシル化外毒素の単離された機能領域を、アジュバントとして使用することもできる。毒性が低いか、そのＡＤＰリボシル化活性を失っているが、そのアジュバント活性を保持している誘導体は、記載されている。Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシンの特異的突然変異体には、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、ＬＴ（Ｈ４４Ａ）、ＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）、ＬＴ（Ｒ１９２Ｇ／Ｌ２１１Ａ）及びＬＴ（Δ１９２〜１９４）が含まれる。毒性は、Ｙ−１副腎皮質細胞アッセイでアッセイすることができる（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、２４：７６０−７６９、１９７９）。ＡＤＰリボシル化は、ＮＡＤアグマチンＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼアッセイでアッセイすることができる（Ｍｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：６３８３−６３８７、１９９３）。特殊なＡＤＰリボシル化外毒素、その誘導体及びその製造プロセス及び特徴は、米国特許第４６６６８３７号、同第４９３５３６４号、同第５３０８８３５号、同第５７８５９７１号、同第６０１９９８２号、同第６０３３６７３号及び同第６１４９９１９号に記載されている。
【００８０】
ランゲルハンス細胞の活性化物質を、アジュバントとして使用することもできる。このような活性化物質の例には、ケモカイン、サイトカイン、分化因子及び成長因子（例えば、ＴＧＦβスーパーファミリーの一員）が含まれる。
【００８１】
抗原及びアジュバントの両方であるＬＴの場合のように、免疫化抗原が、十分なランゲルハンス細胞活性化能を有する場合には、別のアジュバントは必要とされない。もしくは、このような抗原は、アジュバントを必要とするとは考えられない。それというのも、これらは、十分に免疫原性であるためである。皮膚病変を誘発することなく、免疫応答を誘発するために、低濃度のランゲルハンス細胞活性化物質を使用することもできる。
【００８２】
ＡＤＰリボシル化因子によりＡＤＰリボシル化外毒素のアジュバント活性を増強するために、処方物に界面活性剤及び／又はリン脂質を加えるなどの、アジュバントの活性を増強するための他の技術も有効でありうる。１種又は複数のＡＤＰリボシル化因子（ＡＲＦ）を、ｂＡＲＥのアジュバント活性を増強するために使用することができる（例えば、ＡＲＦ１、ＡＲＦ２、ＡＲＦ３、ＡＲＦ４、ＡＲＦ５、ＡＲＦ６、ＡＲＤ１）。同様に、１種又は複数のＡＲＦを、そのアジュバント活性を増強するためにＡＤＰリボシル化外毒素と共に使用することもできる。
【００８３】
望ましくない特性又は有害な副作用（例えば、アレルギー性又は過敏性反応；アトピー、接触皮膚炎又は湿疹；全身毒性）を、経皮免疫でのその有効性を破壊することなく、修飾により低減することができる。修飾は、例えば、可逆的化学修飾（例えば、タンパク質分解）の除去又は、処方物の１種又は複数の成分を免疫系から可逆的に隔離するコーティング中へのカプセル封入を伴う。脂質ベシクル中へのカプセル封入は、経皮免疫のためには必要なく、マイナスの効果を有すると明らかになっているが、例えば、処方物の１種又は複数の成分を、送達のために粒子中にカプセル封入することができる（例えば、マイクロスフェア、ナノ粒子）。粒子の食細胞活動は単独で、ＭＨＣ  Ｉ群及び／又はＩＩ群分子及び／又は共同刺激分子（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０及びＣＤ８６などのＢ７ファミリー員）の発現をアップレギュレーションすることにより、抗原提示細胞の活性化を増強することができる。抗原提示細胞を活性化することによりこのような分子をアップレギュレーションする別の方法も知られている（前記参照）。
【００８４】
処方
薬剤処方物を製造するためのプロセスはよく知られている。処方物の成分を、薬剤学的に許容されるキャリヤ又は溶剤と、さらに、場合による添加物（例えば、少なくとも１種の結合剤、緩衝剤、着色剤、乾燥剤、希釈剤、湿潤剤、防腐剤、安定剤、他の賦形剤又これらの組合せ）の組合せと組み合わせることができる。一般に、Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６thＥｄ．（ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９８）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２２nd（Ｇｅｎｎａｒｏ、１９９０、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、２ndＥｄ．（ｖａｒｉｏｕｓ  ｅｄｉｔｏｒｓ、１９８９−１９９８、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ）；及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、１９９４、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）参照。
【００８５】
良好な製造実施が、薬剤工業では知られており、官庁により規制されている（例えば、米国食品薬品局）。処方物の所定の成分を十分な量の適切な溶剤に溶解させることにより、液体処方物を調製することができる。通常、処方物の様々な成分を、分散媒体を含有する賦形剤に導入することにより、分散液を調製する。液体処方物から固体形を製造するために、溶剤を室温又はオーブン中で蒸発させることができる。表面上に窒素又は空気流を吹き付けることにより、乾燥を促進する；もしくは、真空乾燥又は凍結乾燥を使用することができる。
【００８６】
様々な剤形を製造し、パッチを生産するために適した手順は知られている。各用量サイズ及び対象への投与間隔を利用して、容器、区画又はチャンバーの適切なサイズ及び形を決定することができる。ヒト又は動物に投与するために適した薬剤学的に許容される組成物を提供することができるようなキャリヤ又は適切な量の溶剤と共に、有効量の活性成分（例えば、少なくとも１種のアジュバント及び／又は１種又は複数の抗原）を処方物は含有する。賦形剤を含有する処方物は、クリーム、エマルション、ゲル、ローション、軟膏、ペースト、溶液、懸濁液又は当技術分野で知られている他の液体形であってよく、特に、皮膚水和を増強するものである。パッチでは、処方物の連続的なコーティングを、基材に適用することができるか、いくつかの処方物を含有する層を、積層して、活性成分のためのその能力を高めることができる。
【００８７】
用量及び投与スケジュール内での活性成分の相対量を、対象（例えば、動物又はヒト）への有効な投与のために適切に調整することができる。この調整は、対象の特定の疾患又は状態に、さらに治療又は予防が意図されているかどうかに依存してよい。対象への処方物の投与を簡単にするために、各単位用量は、免疫の１回ラウンドのために予め決定された量で、活性成分を含有する。
【００８８】
タンパク質不安定性、加水分解及び変性を含む劣化には、数多くの原因が存在する。変性の場合には、タンパク質の立体配座が妨害され、タンパク質が、通常の球状構造から開いてしまう。その本来の立体配座に再び戻るよりもむしろ、疎水性相互作用によって、分子同士が集中（即ち、凝集）するか、又は不自然な立体配座に再び戻る。これらの結果のいずれかは、抗原又はアジュバント活性の減損又は損失を伴いうる。安定剤を加えて、このような問題を少なくするか、防止することができる。
【００８９】
処方物又はその製造の際の中間体を、保護剤（即ち、凍結保護物質及び乾燥安定剤）で予め処理し、次いで、氷晶形成を最低化するような冷却速度及び最終温度にする。凍結保護因子を適切に選択し、予め選択された乾燥パラメーターを使用することにより多くの場合に、処方物を、適切な所望の最終用途のために乾燥させることができる。
【００９０】
次の検討では、結合剤、緩衝液、着色剤、乾燥剤、希釈剤、湿潤剤、防腐剤及び安定剤などの付加的な添加剤を、その機能によって記載することを理解されたい。したがって、特定の化学薬品が、前記のいくつかの組合せとして作用することもある。このような化学薬品は、免疫学的に不活性とみなされる。それというのも、これらは、免疫応答を直接的には誘発せずに、抗原又はアジュバントの免疫活性を増強することにより、例えば、抗原又はアジュバントの変質あるいは乾燥及び水和サイクルの間の変性を低減することにより、応答を高めるからである。
【００９１】
安定剤には、デキストラン及びデキストリンが含まれ；グリコール、アルキレングリコール、ポリアルカングリコール及びポリアルキレングリコール、糖及びデンプン、及びこれらの誘導体が適している。好ましい添加剤は、非還元糖及びポリオールである。特に、トレハロース、ヒドロキシメチル又ヒドロキシエチルセルロース、エチレン又はプロピレングリコール、トリメチルグリコール、ビニルピロリドン及びこれらのポリマーを加えることができる。アルカリ金属塩、硫酸アンモニウム、塩化マグネシウム及び界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）は、タンパク質様アジュバント又は抗原を安定化し；場合によって、キャリヤ（例えば、寒天、アルブミン、ゼラチン、グリコーゲン、ヘパリン）を加え、凍結乾燥すると、さらに安定性を増強することができる。例えば、単糖類、二糖類、糖アルコール及びこれらの混合物（例えば、アラビノース、フルクトース、ガラクトース、グルコース、ラクトース、マルトース、マンニトール、マンノース、ソルビトール、スクロース、キシリトール）などの糖と接触させることにより、ポリペプチドを安定化することもできる。ポリオールは、ポリペプチドを安定化することができ、水混和性又は水溶性である。アミノ酸、脂肪酸及びリン脂質、金属、還元剤及び金属キレート化剤を含む様々な他の賦形剤も、ポリペプチドを安定化しうる。安定剤は、接着処方物に対して、０．１％（ｗ／ｖ）から１０％（ｗ／ｖ）又は１％（ｗ／ｖ）から５％（ｗ／ｖ）であってよい。
【００９２】
安定剤又は他の賦形剤を適切に選択することにより、単一用量処方物を、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）及びポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）マイクロスフェア中で安定化することができる。添加剤としてトレハロースを使用するのが有利である。それというのも、これは、非還元糖であり、したがって、タンパク質などのアミノ基を有する物質とアミノカルボニル反応を起こさないためである。高濃度の糖などの安定剤は、細菌及びカビなどの微生物の成長を撲滅するが、防腐剤は、微生物の成長を活発に除去するか（例えば、殺菌）、微生物の成長を低減する（例えば、静菌）する典型的な抗菌物質である。酸化防止剤を、処方物の活性成分の酸化を防止するために使用することもできる。
【００９３】
乾燥した非液体（即ち、固体）の形で対象に投与することができる処方物又はパッチは、コールドチェーンを必要としない状態での貯蔵を可能にすると考えられる。抗原を、異種アジュバントと混合し、包帯の上に置いてパッチを生じさせ、完全に乾燥させることができる。次いで、この乾燥パッチを、一定期間、皮膚に直接接触させて、包帯と共に皮膚の上に置き、閉鎖性裏当て層（例えば、プラスチック又はワックスフィルム）でカバーして一定の場所に保持することができる。
【００９４】
パッチ材料は、不織布又は織布であってよい（例えば、ガーゼ包帯）。層は、処理の間に積層することもできる。これは、非閉鎖性又は閉鎖性であってよいが、後者は、裏当て層には好ましい。付加的な放出ライナーは、可能ならばシリコーン又はフルオロカーボンでフィルムを処理することによって、著しい量の処方物を吸収しないのが好ましい。パッチを好ましくは、貯蔵のために、気密封止する（例えば、ホイル包装）。パッチを皮膚の上に保持して、パッチの成分を、様々な接着剤を使用して一緒に保持することができる。アジュバント及び／又は抗原の１種又は複数を、パッチの接着部分に適用及び／又は導入することができる。通常、パッチは、平坦かつ柔軟で、均一な形で製造することができる。付加的な添加剤は、パッチの柔軟性を維持するための可塑剤、パッチと皮膚との付着を補助するための粘着性付与剤及び少なくとも処理の間、処方物の粘度を増加させるための増粘剤である。
【００９５】
金属ホイル、セルロース、布（例えば、アセテート、木綿、レーヨン）、アクリルポリマー、エチレン酢酸ビニルコポリマー、ポリアミド（例えば、ナイロン）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンナフタレート、テレフタル酸エチレン）、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン）、ポリウレタン、塩化ポリビニリデン（ＳＡＲＡＮ）、天然又は合成ゴム、シリコーンエラストマー及びこれらの組合せが、パッチ材料（例えば、包帯、裏当て層、放出ライナー）の例である。
【００９６】
接着剤は、水性接着剤（例えば、アクリレート又はシリコーン）であってよい。アクリル接着剤は、複数の商業的源から入手することができる。アクリルポリマーは、Ｃ４〜Ｃ１８脂肪族アルコールとメタクリル酸アルキルエステルとのコポリマーあるいはＣ４〜Ｃ１８アルキルを有するメタクリル酸アルキルエステル、メタクリル酸及び又他の官能性モノマーからなるコポリマーであってよい。メタクリル酸アルキルエステルの例には、アクリル酸ブチル、アクリル酸イソブチル、アクリル酸ヘキシル、アクリル酸オクチル、アクリル酸２−エチルヘキシル、アクリル酸イソオクチル、アクリル酸デシル、アクリル酸イソデシル、アクリル酸ラウリル、アクリル酸ステアリル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸ブチル、メタクリル酸イソブチル、メタクリル酸２−エチルヘキシル、メタクリル酸イソオクチル、メタクリル酸デシルなどが含まれる。
【００９７】
官能性モノマーの例には、ヒドロキシル基を含有するモノマー、カルボキシル基を含有するモノマー、アミド基を含有するモノマー、アミノ基を含有するモノマーが含まれる。ヒドロキシル基を含有するモノマーには、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル、メタクリル酸ヒドロキシプロピルなどのメタクリル酸ヒドロキシアルキルが含まれる。カルボキシル基を含有するモノマーには、アクリル酸、メタクリル酸など；リンゴ酸ブチルなどのマレイン酸モノアルキルエステル；マレイン酸；フマル酸；クロトン酸など；及び乾燥マレイン酸などのα−β不飽和カルボン酸が含まれる。アミド基を含有するモノマーの例は、アクリルアミド、ジメチルアクリルアミド、ジエチルアクリルアミドなどのアルキルメタクリルアミド；ブトキシメチルアクリルアミド、エトキシメチルアクリルアミドなどのアルキルエチルメチロールメタクリルアミド；ジアセトンアクリルアミド；ビニルピロリドン；ジメチルアミノアクリレートが含まれる。共重合のための前記のモノマーに加えて、酢酸ビニル、スチレン、α−メチルスチレン、塩化ビニル、アクリロニトリル、エチレン、プロピレン、ブタジエンなどを使用することもできる。
【００９８】
市販のアクリル接着剤は、商品名ＡＲＯＳＥＴ、ＤＵＲＯＴＡＫ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ、ＧＥＬＶＡ及びＮＥＯＣＲＹＬで販売されている。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、ポリマーの多様なファミリーを生じさせ、その一般的な形態は、胃腸管と相容性のポリアクリル酸又はポリメタクリル酸バックボーンであり、これは、薬剤調製で、特に錠剤のためのコーティングとして幅広く使用されているが、他の薬物装置のためのコーティングとしても使用されている。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、（１）遊離カルボキシル基とエステル基との比がほぼ１：１である、メタクリル酸とメタクリル酸メチルをベースとするアニオンコポリマー、（２）遊離カルボキシル基とエステル基との比がほぼ１：２である、メタクリル酸とメタクリル酸メチルをベースとするアニオンコポリマー、（３）アンモニウム基と残りの中性メタクリル酸エステルとのモル比が１：２０である、低含有率の４級アンモニウム基を有するアクリル酸エステル及びメタクリル酸エステルをベースとするコポリマー及び（４）アンモニウム基と残りの中性メタクリル酸エステルとのモル比が１：４０である、低含有率の４級アンモニウム基を有するアクリル酸エステル及びメタクリル酸エステルをベースとするコポリマーとして特徴付けられる。これらのコポリマーは、商品名ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ及びＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳで販売されている。ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｅは、ジエチルアミノエチルメタクリレート及び中性メタクリル酸エステルをベースとするカチオンコポリマーであり；ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥは、ポリメタクリレートの中性コポリマーである。メタクリレート又はアクリレートポリマーでは、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ及びＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥが存在し；ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ−９０、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥ−３０、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｅ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ−１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ−３０Ｄ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｅ−１００Ｒ及びＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＴＭを入手することができる。
【００９９】
さらに、接着層の水分吸収能を高めるか、低下させる目的のために、アクリルポリマーを、親水性モノマー、カルボキシル基を含有するモノマー、アミド基を含有するモノマー、アミノ基を含有するモノマーなどと共重合させることができる。ゴム状又はシリコーン樹脂を、接着樹脂として使用することもでき；これらを、粘着付与剤又は他の添加剤を有する接着層に導入することもできる。
【０１００】
もしくは、接着層の水分吸収能を、その中に高吸水性ポリマー、ポリオール及び吸水性無機物質を導入することにより調節することもできる。高吸水性樹脂の例には、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などのムコ多糖類；キチン、キチン誘導体、デンプン及びカルボキシメチルセルロースなどの分子中に多数の親水基を有するポリマー；及びポリアクリル酸、ポリオキシエチレン、ポリビニルアルコール及びポリアクリロニトリルなどの高吸水性ポリマーが含まれる。吸水能を調節するために接着層に導入することができる吸水性無機物質の例は、粉末シリカ、ゼオライト、粉末セラミックなどが含まれる。
【０１０１】
可塑剤は、例えば、アセチルクエン酸トリブチル（ＡＴＢＣ）、アセチルクエン酸トリエチル（ＡＴＥＣ）及びクエン酸トリエチル（ＴＥＣ）などのクエン酸トリアルキルであってよい。可塑剤は、接着処方物の０．００１％（ｗ／ｖ）から５％（ｗ／ｖ）であってよい。接着層の柔軟性を選択し、脆性を回避することにより、適切な濃度を経験的に決定することができる。
【０１０２】
代表的な粘着性付与剤はグリコールであり（例えば、グリセロール、１，３ブタンジオール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）；２００、３００、４００、８００、３０００などの平均分子量を、ポリアルキレングリコールでは利用することができる。コハク酸は、別の粘着性付与剤である。粘着性付与剤は、接着処方物の０．１％（ｗ／ｖ）から１０％（ｗ／ｖ）であってよい。接着層の脆性を回避すること及びその柔軟性により、適切な濃度を経験的に決定することができる。
【０１０３】
接着剤又免疫原性処方物の粘度を高めるために、増粘剤を加えることができる。増粘剤は、ヒドロキシアルキルセルロース又はデンプン、あるいは水溶性ポリマー；例えば、ポロキサマー、ポリエチレンオキシド及びその誘導体、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールエステルであってよい。しかし、溶液の粘度を高めるために役立つ分子であれば、パッチを製造している間の処方物の取り扱いを改善するために適している。例えば、ヒドロキシエチル又はヒドロキシプロピルセルロースは、接着剤又は免疫原性処方物の１％（ｗ／ｖ）から１０％（ｗ／ｖ）であってよい。層としての処方物は、フィルムキャスティング又は押出しすることができ、次いで、層を、パッチを製造する間に被覆又は積層することができる。複数の薄い接着層を一緒に連続して塗布又は積層することにより、タンパク質の容積を高めることができる。もしくは、アジュバント又は抗原などの免疫的に活性な成分の損失を最小にしつつ、粘性処方物を基材（例えば、裏当て層又は粘着層）の上に広げることができる。増粘剤は、ＮＡＴＲＯＳＯＬヒドロキシエチルセルロース及びＫＬＵＣＥＬヒドロキシプロピルセルロースとして販売されている。
【０１０４】
ゲル及びエマルション系を、パッチ送達系に導入するか、パッチとは別に製造するか、ヒト又は動物対象に適用する前にパッチに施与することができる。ゲル又はエマルションは、最小限の損失で容易に取り扱うことができる粘性の処方物をもたらすことにより、製造を簡単にする同じ目的のために役立つ。「ゲル」との用語は、共有結合しているか、非架橋ヒドロゲルマトリックスのことである。ヒドロゲルは、ＰＩＡパッチのための免疫活性を有する少なくとも１種のタンパク質と共に処方することができる。付加的な賦形剤を、ゲル系に加えることができ、これにより、抗原／アジュバント送達、皮膚水和及びタンパク質安定性を増強することができる。「エマルション」との用語は、油中水型クリーム、水中油型クリーム、軟膏及びローションなどの処方物に関する。エマルション系は、ミセルベース、脂質ベシクルベースあるいはミセル及び脂質ベシクルの両方のベースであってよい。エマルション系は、タンパク質接着剤系として少なくとも１種のアジュバント及び／又は抗原と共に処方することができる。付加的な賦形剤をエマルション系に加えることができ、これにより、抗原／アジュバント送達、皮膚水和及びタンパク質安定性を増強することができる。
【０１０５】
処方物をパッチと共に、対象の皮膚と接触させて適用することができる。これは、非閉鎖性又は閉鎖性裏当て層で覆うことができ、後者は、適用部位での水分の蒸発を防ぎ、閉じ込める。このような処方物を、１箇所又は複数の箇所に、１本又は複数本の肢に、又は大きな表面積の皮膚に適用することができる。使用することができる他の基材は、アクリル、ポリイソブチレン及びシリコーンなどの感圧接着剤である。処方物を、多孔性パッド（例えば、コットンガーゼ）又は胆汁性（ｂｉｌｉｏｕｓ）細片（例えば、セルロース紙）に吸着させる代わりに、場合によって接着剤自体を伴うこのような基材に直接導入することができる。
【０１０６】
接着剤及び免疫原性処方物を少なくとも部分的に混合するか、十分にブレンドし、次いで、裏当て層に付着させることができる。免疫活性な成分を処方物中に分散又は溶解させることができる。もしくは、Ｍｅｙｅｒロッドを使用して接着剤の上にコーティング又は展開するか、層をキャスティングし、次いでローラーを使用して接着剤と緊密に並置させて積層するか、グラビア印刷などを使用して接着剤を印刷することにより、免疫原性処方物を接着層の表面に施与することができる。接着剤を、剥離性ライナーと接触させることができる。装置を処方物でコーティングするか、それに浸漬させて、乾燥させるか、あるいは、装置に処方物を噴霧することにより、接着剤及び免疫原性処方物を、顕微ブレード（ｍｉｃｒｏｂｌａｄｅ）又は顕微針アレイ又は顕微針の歯先と接触させることもできる。
【０１０７】
処方物に加えられたポリマーは、活性成分の安定剤又は他の賦形剤として作用し、活性成分の少なくとも部分的に乾燥された形（即ち、乾燥又は半流動体）を水和するために使用されている溶液を飽和させて、活性成分の濃度を低下させることができる。ポリマーは、溶剤中の「空の」スペースを満たすことにより、有効自由体積を減らすので、このような低減が起こる。こうすると、アジュバント／抗原の量を、飽和溶液の量を低減することなく節約することができる。重要な熱力学的な問題点は、飽和溶液中の活性成分が、低濃度の領域で「駆動」することである（例えば、皮膚を介して）。少なくとも１種のアジュバント及び／又は１種又は複数の抗原を分散又は溶解させるために、ポリマーで、処方物のこれらの成分のアジュバント／抗原活性を安定化することができる。このようなポリマーには、エチレン又はプロピレングリコール、ビニルピロリドン及びβ−シクロデキストリンポリマー及びコポリマーが含まれる。
【０１０８】
経皮送達
処方物の経皮送達は、ランゲルハンス細胞をターゲットとし、したがって、有効かつ有能な免疫を達成することができる。細胞は、皮膚に大量に存在し、Ｔ細胞記憶及び強力な免疫応答をもたらしうる有能な抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。皮膚中に大量のランゲルハンス細胞が存在するので、経皮送達の有効性は、抗原及びアジュバントにさらされる表面積に関連している。実際に、経皮免疫がこのように有効である理由は、これが、筋肉内免疫よりも大量のこれら有効な抗原提示細胞をターゲットとしていることである。
【０１０９】
化学的又は物理的浸透を伴う、又は伴わない無損傷皮膚への、場合によって閉鎖性包帯で覆われている抗原及びアジュバントからなる簡単な処方物の皮膚表面への適用を使用して、又は他のパッチ技術を使用することにより、免疫を達成することができる。本発明による経皮免疫は、抗原及びアジュバントを免疫系、特に皮膚の下に位置する特殊な抗原提示細胞（例えば、ランゲルハンス細胞などの樹状細胞）に送達することができる方法をもたらす。パッチを、一時的に、３０秒；１分から５分；１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間又は４８時間未満装着することができる。薬物を送達する経皮パッチとは異なり、本発明のパッチの放出特性は、一定又は長時間である必要はない。免疫活性タンパク質を、迅速かつ定量的に放出するのが好ましい。
【０１１０】
さらに、経皮免疫は、皮下注射針を使用する免疫よりも優れている。それというのも、皮膚の大きな表面積をターゲットとする複数位置を使用することにより、より多い免疫細胞をターゲットとすることができるであろう為である。免疫応答を誘発するために十分な抗原の治療的に有効な量を、単一の皮膚位置で、又は排出性リンパ節界（例えば、頚部、腋窩、鼠径部、上腕骨の内側上顆、膝窩、腹部及び胸部のもの）を覆っている皮膚面上で経皮的に送達することができる。体全体位置する数多くの異なるリンパ節に近接しているこのような位置は、少量の抗原を、真皮内、皮下又は筋肉内注射により単一の位置に注射するよりも、免疫系に広範な刺激をもたらす。
【０１１１】
皮膚への、又は皮膚を介して通過した抗原は、抗原を処理する抗原提示細胞と遭遇し、一部では、免疫応答を誘発する。複数の免疫部位は、より大量の抗原提示細胞を集め、集められた抗原提示細胞のより高い集団が、免疫応答のより高い誘発をもたらす。皮膚の使用は、抗原を、例えば樹状細胞、ランゲルハンス細胞、マクロファージ及び他の皮膚抗原提示細胞などの皮膚の食細胞へと送達することができ、抗原は、血流又はリンパ球を介して抗原提示細胞として役立つと考えられている肝臓、脾臓及び骨髄の食細胞へと送達される。
【０１１２】
そのアシアログリコプロテイン受容体、マンノース受容体、Ｆｃｙ受容体ＣＤ６４、ＩｇＥの高親和性受容体又は他の高発現膜タンパク質を使用して、ランゲルハンス細胞、他の樹状細胞、マクロファージ又はこれらの組合せを特異的にターゲットとすることができる。これらの受容体のいずれかに特異的なリガンド又は抗体は、アジュバント、抗原又はその両方と複合させるか、タンパク質融合体として組換えにより製造することができる。さらに、アジュバント、抗原又はその両方を、Ｂリンパ球の表面免疫グロブリンをターゲットとするために、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇと複合させるか、タンパク質融合体として組換えにより製造することができる。想定される結果は、達成されたとしても、現行の免疫実施では稀な、抗原提示細胞への抗原の幅広い分布である。
【０１１３】
特異的免疫応答は、液性（即ち、抗原特異的抗体）及び／又は細胞性（即ち、Ｂリンパ球、ＣＤ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、ＣＴＬ、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞及び／又はＴDTH細胞などの抗原特異的リンパ球）エフェクターアームを含む。さらに、免疫応答は、ＮＫ細胞及び、抗体依存性細胞仲介細胞毒性（ＡＤＣＣ）を仲介する他の白血球を含む。
【０１１４】
本発明の処方物により誘発された免疫応答には、抗原特異的抗体及び／又はリンパ球の誘発が含まれる。抗体は、イムノアッセイ技術により検出することができる。様々な抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、分泌ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）の検出は、全身又は部分免疫応答を示す。免疫応答は、中和アッセイにより検出することもできる。抗体は、Ｂリンパ球により産生される保護タンパク質である。これらは、高次に特異的で、通常、抗原の１つのエピトープをターゲットとする。免疫は、アレルゲン、細胞侵入（ｃｅｌｌ−ｅｎｔｒｙ）受容体、成長因子受容体又は毒素の生物活性を中和する抗体を誘発することができる。例えば、抗体の誘発は、病原体又は癌に由来する抗原（例えば、コレラ毒、ＨＥＲ２、インフルエンザヘマグルチニン）と特異的に反応することにより、疾患を治療することができる。病原体による感染又は毒素の投与を使用するホストでの攻撃研究、免疫された集団と対照集団との罹患率又は死亡率の比較、あるいは他の臨床判定基準（例えば、高い抗体力価又は粘膜中でのＩｇＡ抗体分泌細胞の産生を、代理マーカーとして使用することができる）の測定により、疾患に対する保護又は存在する疾患の治療を証明することができる。
【０１１５】
ＣＴＬは、病原体による感染に対して保護するために産生される免疫細胞である。これらも、高次に特異的である。免疫は、自己−主要組織適合複合体抗原に関連して、抗原に特異的なＣＴＬを誘発しうる。経皮送達系で免疫により誘発されるＣＴＬは、病原体感染細胞又は癌を撲滅しうる。抗体及びＣＴＬでの応答の強化、抗原に刺激されたリンパ球培養の増殖及び抗原単独の真皮内皮膚攻撃に対する遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答により示されるように、免疫は、記憶応答をもたらしうる。
【０１１６】
次いで、本発明を詳述するが、次の実施例によって、本発明の実施は、なんらの制限又は制約を受けることはない。
【実施例】
【０１１７】
接着剤中リゾチーム処方物の安定性
多くのタンパク質及び大きな生体分子が、ｐＨファクター又は様々な化合物との非相容性により、熱不安定性、さらに化学的不安定性を示す。多くの接着系が、薬物安定性に対して有害な溶剤中で溶媒和化される。これらの接着ポリマーの多くが、多くの反応性分子と非相容性の官能基を有する。加えて、慣用の技術は往々にして、乾燥、押出し又は接着ブレンドの設定のために、高温を必要とする。したがって、これらの化合物で、接着剤中薬物系を処方及び加工することは、非常に困難である。ここに記載の処方物及びプロセスにより、これらの不安定な分子の熱的又は化学的変化を伴うことなく、接着剤中タンパク質（ＰＩＡ）系を製造することができる。水にさらされると生体分子の放出を可能にする接着ポリマーの水溶性特性により、この処方は、大きな分子量の生体分子に特に適している。
【０１１８】
リゾチームを、ＰＩＡ処方物のためのモデルタンパク質として使用した。タンパク質は、熱又は様々な溶剤又は反応性化学的部位を受けると、凝集、劣化又は変性する化学的に不安定な化合物である。リゾチーム及びその酵素的活性のアッセイにより、これは、安定化に必要なタンパク質の良好なモデルとなる。
【０１１９】
リゾチームを、２種の水性接着剤を用いて製造されたパッチに適用し；リゾチームを、パッチ上のシリコーン接着剤又はアクリル接着剤に適用した。タンパク質を、水２０ｍＬ中の接着剤から１時間抽出した。室温で貯蔵されたか、４０℃で一晩貯蔵されたシリコーン接着剤パッチ、さらに室温で貯蔵されたアクリル接着剤パッチからの、リゾチーム回収率は、約８５％から９０％であった。ベースのリゾチームを、約９５％の回収率及び約１０７％の活性を有する陽性対照としてアッセイした（生体活性を、ＵＶ分光法及びミクロコッカスリゾデイクティクス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ）でのリゾチームの反応動態の走査監視によりアッセイした）。パッチの接着剤から抽出されたリゾチームでの活性は、もともとの約１００％から１１０％であった。
【０１２０】
メタクリレート接着剤−ＫＬＵＣＥＬ増粘剤エマルションを、液体可塑剤及び乳化剤を用い、一次溶剤として水を使用して室温で調製した。湿潤ブレンド中でのリゾチームの安定性を、７日間にわたって証明した。湿潤なブレンドを、調製の後に直ぐに覆い、次いで、接着剤表面のすぐ近くで発泡させた室温の空気又は窒素を使用して乾燥させた。生じた部分的に乾燥した接着剤中タンパク質は、リゾチーム生体活性により示されるように、室温で３０日間にわたる安定性を証明した。これは、許容可能な接着及び着用特性を有した。
【０１２１】
接着剤中Ｅ．ｃｏｌｉ熱安定性エンテロトキシン（ＬＴ）処方物
ＬＴは、Ｔｕｌａｎｅ大学のＪｏｈｎ  Ｃｌｅｍｅｎｔｓ博士から得た（ＬＴｃ）。この物質は、ＮａＣｌ２００ｍＭを含有するＴＲＩＳ緩衝液から凍結乾燥された乾燥粉末として得られた。このＬＴは、ラクトースに曝されることはなかった。特に記載のない限り、これが、この実施例を通して使用されたＬＴ源である。ＬＴは、ＳＳＶＩ−Ｂｅｒｎｅ（ＬＴｓ）から得た。この物質は、ラクトース５％を含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）処方物から凍結乾燥された乾燥粉末として得た。ＬＴR192G又はＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）突然変異タンパク質は、ＬＴの単一アミノ酸基突然変異である：１９２位のアルギニンが、グルタミンに突然変異している。ＰＢＳx、ｐＨ７．４は、ｐＨ７．４を有する１０ｍＭのリン酸緩衝食塩水であり；下付き文字ｘは、ＮａＣｌの濃度を示している（例えば、ＰＢＳ200、ｐＨ７．４は、２００ｍＭのＮａＣｌを有する）。
【０１２２】
ＫＬＵＣＥＬ  ＥＦ増粘剤は、Ｈｅｒｃｕｌｅｓにより製造された粘度増強剤であるヒドロキシプロピルセルロースであり、水中に２０％（ｗ／ｗ）ストックとして調製した。ＮＡＴＲＯＳＯＬ  ２５０Ｌ  ＮＦは、Ｈｅｒｃｕｌｅｓにより製造された粘度増強剤であるヒドロキシエチルセルロースであり、水中に１２％（ｗ／ｗ）ストックとして調製した。
【０１２３】
接着剤処方物は、非揮発性成分（ＮＶＣ）３７．４％を含有する水中のＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯポリマー（Ｒｏｈｍ）の懸濁液である。改質接着剤処方物は、グリセロール６％（ｗ／ｗ）及び１，３−ブタンジオール４％（ｗ／ｗ）を加えられた標準接着剤処方物である。最終懸濁液は、ＮＶＣ４３．７％を含有する。ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤の硬化膜の可塑性及び粘着性を増加させるために、これらの添加剤を加える。
【０１２４】
接着剤処方物は、その中で、ＬＴが良好な安定性及び回収性を示すと同定されている。湿潤なブレンドは、ＬＴ約５００μｇ／ｇｍ、二糖類（例えば、スクロース、トレハロース）５％及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤３％を含有する。ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤とｐＨ７．４に緩衝されているタンパク質溶液（非還元糖としての二糖類及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤）とを約１：１の質量比で混合することにより、このブレンドを調製する。５℃での優れた安定性及び室温での良好な安定性（回収されたタンパク質の若干の損失が存在する）が、６から７週間にわたって観察された。
【０１２５】
タンパク質溶液（二糖類含有）を約１：１の質量比で標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤と組み合わせることにより、パッチを製造した。これらの湿潤なブレンドを次いで、０．０２５４ｍｍ（８ミル）ナイフを使用して１０１２プラスチック製裏当て上に薄膜としてキャスティングした。塗膜を放置して、室温で空気乾燥させ、次いで、剥離性ライナーで覆った。約１ｃｍ2の面積を有するパッチを、１．１１１２５ｃｍ（７／１６インチ）直径の多用途パンチで打ち抜いた。パッチを、５ｍｌガラス凍結乾燥バイアル（口径２０ｍｍ）に入れ、窒素下に密閉した。密閉されたバイアルを、インキュベーションし、間隔をおいてサンプリングした。
【０１２６】
パッチを、ｄｄＨ2Ｏで再水和し、サンプルを調製し、次の手順に従って分析した。ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤は、酸性条件下に可溶性である。この手順を、ｄｄＨ2Ｏ、ＰＢＳ20、ｐＨ７．４又は再水和緩衝液としてＳＥ−ＨＰＬＣ緩衝液（リン酸Ｎａ２００ｍＭ、ｐＨ７．２）を使用することができる。剥離性ライナーを有さない２つのパッチを、１．７ｍｌＥＰＰＥＮＤＯＲＦ遠心分離管に入れた。再水和緩衝液約０．５ｍＬを加え、パッチを、時折手動で攪拌（ほぼ３０分毎）しながら数時間、室温で緩衝液中で再水和することができた。ＥＰＰＥＮＤＯＲＦ管を、１４０００ｇ、４℃で５分間遠心分離した。上澄みを回収し、ＨＰＬＣ分析のために使用した。
【０１２７】
逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して、ＬＴ及びＬＴR192Gなどのタンパク質の劣化を検出した。緩衝液ＡではｄｄＨ2Ｏ中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０．１％（ｗ／ｖ）、緩衝液Ｂではアセトニトリル９５％（ｖ／ｖ）中のＴＦＡ０．１％（ｗ／ｖ）からなる勾配を使用して、０．３ｍｌ／分の速度で、Ｖｙｄａｃカラム（ＩＤ２．１ｍｍ×２５ｃｍを有するＰｒｏｔｅｉｎ  ＆  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃ４）から、タンパク質サブユニットを溶離した。劣化プロテイン及び凝集タンパク質のピークに伴って、ＬＴのサブユニットＡ及びＢの両方が分解された。
【０１２８】
変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）は、１４％分離ゲルと５％スタッキングゲルからなった。β−メルカプトエタノールを含有する緩衝液中で５分間サンプルを沸騰させることにより、タンパク質サンプルを減らした。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いるＡ及びＢサブユニットの分離を使用して、ＲＰ−ＨＰＬＣ結果を確認した。
【０１２９】
一連の１Ａパッチを、ＳＳＶＩ  ＢｅｒｎｅからのＬＴを使用して調製した。凍結乾燥させたサンプルを、ｄｄＨ2Ｏの推奨容量の半分で再構成して、公称でＬＴ２ｍｇ／ｍｌ及びＰＢＳ中のラクトース１０％を有する溶液を得た。トレハロースをこの溶液に溶かし、最終濃度５％（ｗ／ｖ）にした。
【０１３０】
一連の２Ａパッチを、Ｔｕｌａｎｅ大学のＣｌｅｍｅｎｔｓ研究室からのＬＴｃを使用して調製した。ＬＴｃをｄｄＨ2Ｏを使用して再構成し、次いで、ＰＢＳ150、ｐＨ７．４中で透析した。３００００ＭＷ  カットオフＣＥＮＴＲＩＣＯＮユニットを使用して、透析されたＬＴｃを濃縮した。トレハロースを濃縮ＬＴｃ中に溶かして、ＰＢＳ150、ｐＨ７．４中にＬＴｃ１．２ｍｇ／ｍｌ及びトレハロース５％（ｗ／ｖ）を有する最終溶液を得た。
【０１３１】
一連の１Ａパッチを、４０℃で１カ月間インキュベーションした。一連の２Ａパッチを、４０℃で２カ月間インキュベーションした。ＬＴｃは、より良好に二糖類により安定化され；トレハロース５％（ｗ／ｖ）は、ラクトース１０％（ｗ／ｖ）よりもこのタンパク質ではより良好な安定剤であった。クロマトグラムのピーク高さは、より低く、Ａ及びＢサブユニット生成物でのピーク面積の間の比は、ラクトースではより多い劣化が存在することを示していた。
【０１３２】
標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を、他の成分（ＬＴを伴い、トレハロースを伴うか、伴わず、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を伴うか、伴わないＰＢＳ緩衝液）と、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を伴うブレンドでは質量比約１：１．２、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を伴わないブレンドでは質量比約１：１でブレンドした。湿潤ブレンド中の最終濃度は、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤３％（ｗ／ｗ）、二糖類（存在する場合）５％（ｗ／ｖ）及びＬＴ４１０μｇ／ｇｍから４６０μｇ／ｇｍであった。
【０１３３】
トレハロースを含有する処方物と、トレハロースを含有しない処方物との比較により、トレハロースが存在すると、６０℃のような高温でもＬＴの安定性が劇的に高まることが明らかに示されている。トレハロースが存在しなくても、標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を使用して調製されたパッチは、改質ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を使用して調製されたものよりも高いＬＴ安定性を示した。ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を改質する目的は、部分的に乾燥された膜の粘着性及び展性を高めることである。トレハロースを含有する標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤の膜は、パッチ裏当て基材を崩壊させ、剥げさせる傾向を有した。しかしながら、この剥がれやすさは、高温でインキュベーションした後に劇的に低減した（又は、完全に消失した）。ＫＬＵＣＥＬ増粘剤が存在すると、一貫した膜をキャスティングすることができる。ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を伴わないブレンド処方物からの膜は、一貫性を伴ってキャスティングされない。
【０１３４】
２種のブレンドされた接着剤及び免疫活性なタンパク質組成物を研究した；スクロース又はトレハロースを有するＫＬＵＣＥＬ。改質ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を、他の成分（ＬＴ、二糖類及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤を有するＰＢＳ緩衝液）と質量比約１：１．３でブレンドした。ＫＬＵＣＥＬ増粘剤及び二糖類の湿潤ブレンド中での最終濃度は、それぞれ２．６％及び５％及びＬＴ約４５０μｇ／ｇｍであった。各ブレンド組成物からのパッチを５℃、室温、４０℃又は６０℃でインキュベーションした。
【０１３５】
各サンプル（即ち、４種の異なる温度でインキュベーションされたスクロース又はトレハロースを有するＫＬＵＣＥＬ増粘剤−感圧接着剤処方物）から抽出されたタンパク質でのＲＰ−ＨＰＬＣからの溶離プロファイルのクロマトグラムを分析した。インキュベーション時間に伴う、ピーク面積比及び標準ピーク面積の変化をプロットした。二糖類５％（ｗ／ｖ）を加えると、少量の二糖類が存在するか、二糖類が存在しない条件に比較すると、４０℃でも、ＬＴの安定性が高まった。トレハロースは、これらの条件下では、スクロースよりも良好な安定剤である。５℃では、試験されたインキュベーション時間にわたって、両方の二糖類で、タンパク質は安定化された。しかし、ＬＴは、６０℃では安定化されず；この温度での１週間後には、ＬＴは回収されなかった。
【０１３６】
５種のブレンド組成物を、改質ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を用いて研究した；ＫＬＵＣＥＬ増粘剤及び二糖類なし、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤及びスクロース、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤及びトレハロース、ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤及びスクロース並びにＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤及びトレハロース。ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を含有するパッチでは、改質ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を、他の成分（ＬＴを有し、二糖類及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤を有するか、有さないＰＢＳ緩衝液）と１：１の質量比でブレンドした。ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤を含有するパッチでは、これを、約１：１．４の質量比でブレンドした。増粘剤及び二糖類（存在する場合）からなる湿潤ブレンド中の最終濃度は、ＫＬＵＣＥＬパッチではそれぞれ３％及び０．４％、ＮＡＴＲＯＳＯＬパッチではそれぞれ３．５％及び０．３％であった。湿潤ブレンド中のＬＴの最終濃度は、約５００μｇ／ｇｍであった。５種のブレンドそれぞれからのパッチを、室温、４０℃又は６０℃でインキュベーションした。
【０１３７】
各サンプル（即ち、３種の異なる温度でインキュベーションされたＫＬＵＣＥＬ増粘剤又はＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤−感圧接着剤処方物）から抽出されたタンパク質でのＲＰ−ＨＰＬＣからの溶離プロファイルのクロマトグラムを分析した。インキュベーション時間に伴うピーク面積比及び標準ピーク面積の変化をプロットした。二糖類５％（ｗ／ｖ）が含まれていると、二糖類が少量存在するか、存在しない条件に比較して、ＬＴの安定性が、かなり増強された。処方物成分の粘度を高めて、これを均一な膜としてキャスティングすることができるように、増粘剤を使用する。これらの条件下では、ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤よりも、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤が好ましい。それというのも、ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤が存在するよりも、ＫＬＵＣＥＬ増粘剤が存在する場合に、ＬＴがより安定性であるようであるためである。低い濃度の二糖類では（即ち、０．３％から０．４％）、１週間インキュベーションした後に、付加的な安定性がＬＴに与えられることはないようである。したがって、より高い二糖類濃度が好ましい。
【０１３８】
増粘剤（例えば、ＫＬＵＣＥＬヒドロキシプロピルセルロース）約３％（ｗ／ｖ）及び非還元糖（例えば、トレハロース）約５％（ｗ／ｖ）をさらに含有する接着剤−タンパク質処方物が好ましい。高温（４０℃から６０℃）での硬化の時間を使用して、少なくとも部分的に乾燥されたフィルムが砕け、剥離する問題に対処する。タンパク質を不安定にしない程度に低い（例えば、最終湿潤ブレンド中でグリセロール及び／又は１，３−ブタンジオール１％以下を、出発点として、約５％、１０％又は１５％までを使用することができる）が、部分的に乾燥された感圧接着層に展性及び粘着をもたらすには十分な濃度のグリコールを含有することもできる。二糖類３％（ｗ／ｖ）から５％（ｗ／ｖ）を含有する標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤及び緩衝液からなる湿潤ブレンドをキャスティングし、乾燥させることにより調製された薄膜は、パッチに使用される裏当て層から剥離する傾向を有し、それほどの粘着特性は有しない。展性及び付着力を改善するために、グリセロール（約６％まで）及び１，３−ブタンジオール（約４％まで）を加えて、標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤を改質することができる。これらの可塑剤を加えることにより、展性及び付着力において所望の硬化を達成することができるが、これらは、ＬＴ安定性には有害である。
【０１３９】
二糖類を含有する緩衝液中の標準ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤及びタンパク質からなるブレンドからキャスティングされたパッチは、パッチからパッチへの非常に均一な塗布量をもたらした。最終湿潤ブレンド中にＫＬＵＣＥＬ又はＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤約３％（ｗ／ｗ）が含まれると、均一な被膜をキャスティングする能力が著しく高まることが判明した。
【０１４０】
ＬＴがその中では良好な安定性及び回収性を示すと、パッチ組成物は同定された。湿潤なブレンドされた処方物は、ＬＴ約５００μｇ／ｇｍ、二糖類（例えば、スクロース、トレハロース）５％（ｗ／ｖ）及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤３％（ｗ／ｖ）を含有する。ＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤及び緩衝タンパク質溶液（ｐＨ７．４；二糖類及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤を含有する）を質量比約１：１で混合することにより、ブレンドを調製した。５℃で優れた安定性が存在した。６から７週間にわたって観察されたように、室温で良好な安定性が存在した。
【０１４１】
５％（ｗ／ｖ）の高濃度で、二糖類（例えば、スクロース、トレハロース）である安定剤を加えることによって、凝集、劣化及び変性に対して保護することができる。この構造的安定性は、生物活性の維持と関連している。トレハロースは、スクロースよりもやや高い安定性をもたらすようだが、ラクトースは、パッチ中でのＬＴ安定性には有害である。グリセロール及び１，３−ブタンジオールなどの賦形剤も、少なくとも部分的に乾燥されたパッチ中でのＬＴ安定性に多少、有害でありうる。
【０１４２】
市場供給者からのＬＴ及びＬＴR192G処方物中のラクトースの存在は、可溶性に対して有害な効果を有する。ラクトース（ＳＳＶＩから得られるもののような）中に処方されたＬＴは、ラクトース不含溶液中に非常に僅かしか可溶性を有さない。加えて、ラクトース不含ＬＴ接着剤処方物に比較して、ラクトース処方されたＬＴから生じた断片中に１４原子質量単位の差を示す質量分析法の結果に示されるように、ラクトースは、タンパク質を化学的に改質しうる。
【０１４３】
ＫＬＵＣＥＬ増粘剤を加えると、ナイフを使用して一貫して均一な塗膜をキャスティングすることができる。二糖類及びＫＬＵＣＥＬ増粘剤の濃度を増やすと徐々に、塗膜は、砕けやすいか、剥離しやすく、粘着特性を失う。グリセロール及び１，３−ブタンジオールなどの賦形剤（最終湿潤ブレンド中に、それぞれ約３％及び２％の濃度で）を含有することによるＥＵＤＲＡＧＩＴ粘着剤の改質は、塗膜の展性及び粘着性の大部分を復活させる。しかしながら、これらの添加は、タンパク質安定性に対しては有害である。約１週間の高温（４０℃）でのインキュベーションは、展性及び塗膜粘着性の回復を示した。このことは、高温（４０℃から５０℃）で数時間未満の短期間、塗膜を「硬化」させることは、タンパク質安定性に有害な賦形剤を加えることを必要とせずに、膜展性及び結合性を回復する実行可能な手段となりうる。新たに調製されたＥＵＤＲＡＧＩＴ接着剤は、ポリマー間の過剰な架橋を回避するために使用するべきである。
【０１４４】
経皮面形のための接着剤中ＬＴ処方物
次の水性接着剤を、感圧接着層のために使用した。アクリレート接着剤を、可塑剤としてのアセチルクエン酸トリブチル（ＡＴＢＣ）及び粘着性付与剤としてのコハク酸とブレンドする。
【０１４５】
【表１】
2004525921.tif 000002
【０１４６】
乾燥重量％は、そのそれぞれのＮＶＣ％を掛けた全ての成分の全重量で割った、ＮＶＣ％を掛けた成分の全重量である。この接着剤処方物を、タンパク質含有エマルションを製造するために使用する。
【０１４７】
【表２】
2004525921.tif 000003
【０１４８】
５種のブレンドを、接着剤中アジュバント処方物を使用して製造した：
ブレンド１は、表２に示したようなものである。
ブレンド２は、グリセロールを含有した（乾燥重量５．４％）。
ブレンド３は、１，３ブタンジオールを含有した（乾燥重量５．４％）。
ブレンド４は、ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤の代わりにＫＬＵＣＥＬ増粘剤を使用した。
ブレンド５及び６は、グラビア印刷により塗布され、感圧アクリレート又はシリコーン接着層に積層されたブレンド１であった。
【０１４９】
【表３】
2004525921.tif 000004
【０１５０】
２種のブレンドを、接着剤中アジュバント処方物を使用して製造した：
ブレンド７は、表３に示したようなものである。
ブレンド８は、グラビア印刷により塗布され、ＬＴのみのドローダウンに積層されているＣＳ６  ２６．６ｍｇ／ｍｌ及びブレンド３の１：１混合物であった。
【０１５１】
次の処方物を製造した：
Ａ  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯ接着剤／ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤３．２％／Ｔｗｅｅｎ０．５％中に処方されたＬＴ、
Ｂ  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯ接着剤／ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤３．０％／グリセロール５％／Ｔｗｅｅｎ０．４％中に処方されたＬＴ、
Ｃ  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯ接着剤／ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤３．２％／１，３ブタンジオール５％／Ｔｗｅｅｎ０．４％中に処方されたＬＴ、
Ｄ  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯ接着剤／ＫＬＵＣＥＬ増粘剤３．２％／Ｔｗｅｅｎ０．５％中に処方されたＬＴ、
Ｅ  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＥＰＯ接着剤／ＮＡＴＲＯＳＯＬ増粘剤３．２％／Ｔｗｅｅｎ０．４％中に処方されたＬＴ及びＣＳ６。
【０１５２】
処方物ＡからＥの化学的安定性を、逆相ＨＰＬＣにより決定し、物理的安定性を、ゲルろ過ＨＰＬＣにより決定した。逆相クロマトグラフィにより、結合親和性に基づきタンパク質を分離し、タンパク質劣化をもたらす断片を検出することができる。ゲルろ過クロマトグラフィにより、細孔の通過に基づきタンパク質を分離し、凝集、解離サブユニット、沈殿物及び開いたポリペプチド鎖を検出することができた。サンプルを、１５℃、２５℃又は４０℃で１週間貯蔵した。ＬＴ−ＡサブユニットからのＬＴ−Ｂサブユニット（ペンタマー）の解離が、処方物Ｂでのみ検出された。
【０１５３】
マウスを、以前に書かれたように経皮免疫した（Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、６８：５３０６−５３１３、２０００）。簡単には、動物を背の所で、皮膚に目に見える刺激又は変化を残さないＮｏ．４０クリッパで剃毛し、４８時間休ませた。自己グルーミングを防止するために、免疫手順の間、ケタミン／キシラジン（ｘｙｌａｚｉｎｅ）混合物を用いて、大腿の後ろの筋肉内（ＩＭ）で、又は腹腔内（ＩＰ）でマウスに麻酔をかけた。露出している皮膚表面を、グリセロール１０％、イソプロピルアルコール７０％及び水２０％からなる水溶液で水和し；角質層を、少なくとも部分的に、サンドペーパーで破壊した。パッチを動物の上に肯定するためにパッチの上に置かれた粘着テープを用いて、タンパク質１０μｇ／ｃｍ2を有するパッチ１ｃｍ2を２４時間皮膚表面に適用した。パッチを剥がした後に、水道の流水で約３０秒間、動物を広汎に尾の先まで洗い、叩いて乾かし、再び洗った。
【０１５４】
抗原特異的免疫応答の誘発を、ＬＴ又はＣＳ６に対する抗体のＥＬＩＳＡによりアッセイした。ＩＭＭＵＬＯＮ−２ポリスチレンプレート（Ｄｙｎｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を抗原０．１μｇ／ウェルで被覆し、室温で一晩インキュベーションし、ＰＢＳ中の０．５％カゼイン緩衝液でブロックし、洗浄し、試験体の系列希釈を適用し、プレートを、室温で２時間インキュベーションした。ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体を、ＨＲＰ−結合ヒツジ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して１時間検出した。２，２’−アジノ−ジ（３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸）基質（ＡＢＴＳ；Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ）を使用して、結合した抗体を明らかにし、３０分後に、１％ＳＤＳ溶液を使用して、反応を停止させた。プレートを、４０５ｎｍで読み取った。抗体価の結果を、ＯＤ（４０５ｎｍ）又はＥＬＩＳＡユニットで報告するが、これらは、１．０の光学密度（ＯＤ）をもたらす血清の逆希釈として定義される。
【０１５５】
【表４】
2004525921.tif 000005
【０１５６】
ＬＴ含有溶液を１ｃｍ2Ｎｕ−ガーゼ裏当て層に加えることにより、ガーゼパッチを製造した。基材を、１片の粘着テープと共にマウスの一定の位置に保持する。
【０１５７】
経皮免疫のための接着剤中タンパク質処方物
これらの接着剤中タンパク質処方物は、接着処方物に１種又は複数のＥＴＥＣサブユニット抗原を導入することにより、毒素原性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＴＥＣ）を治療することを目している。この処方物は、ＬＴアジュバントを用いて、又は用いずに、死ＥＴＥＣ全細胞（１用量当たり〜１０4から１０8死細胞）を導入するためにも適している。次いでブレンドを、薄膜としての閉鎖性（又は半閉鎖性）裏当てシートの上にキャスティングする。塗膜が少なくとも部分的に乾燥するまで（含水率は、０．５％から５％で変動してよい；約１％又は２％未満が、本発明によるパッチには好ましい）、処方物を放置して、硬化させる（室温又は４０℃から６０℃）。キャスト膜を、ダイカストから切り離して、所望のサイズ及び形にすることができる。次いで、パッチを遮光性の防水性プラスチック又は金属フォイルパウチに密閉することができる。こうして製造されたパッチを、冷蔵で、又は室温（例えば、２０℃から３０℃）で貯蔵することができる。接着剤中タンパク質は柔軟で、この際、１種又は多種の抗原及びアジュバントの様々な量及び比を導入するために多価ワクチンブレンドを変動させることができる。加えて、パッチサイズを、用量に合わせて変動させることができる。個々人の年齢に応じて、パッチサイズ（用量）を、子供及び老人で使用するために変動させることもできる。
【０１５８】
接着剤中タンパク質処方物は柔軟で、これによって独自に、複数のワクチンを層状に被覆することができる。各ワクチン成分が別々に、パッチ裏当て上で層になるように、これらのパッチを製造する。接着処方物が裏当て層に接着していて、第１の免疫原性処方物が、接着処方物の上に施与されていて、第２の免疫原性処方物が、第１の免疫原性かつ粘着性の処方物の上に施与されていて、剥離性ライナーが、裏当て層に対して最も遠位の層であるような多層膜を製造することが、この目的である。この手法の利点は、これが、処方物に柔軟性を与えることである（即ち、抗原を含有する第１の免疫原性処方物とアジュバントを含有する第２の免疫原性処方物の様々な比を使用して、同じプロセスからパッチを製造することができるか、１種又は２種の活性成分のみを含有するように、パッチを製造する）。多層パッチは、各抗原及びアジュバントの放出速度を制御する利点も有する。場合によって、他の抗原の放出前に、皮膚樹状細胞（例えば、ランゲルハンス細胞）に予め初回抗原刺激を与えるために、直ちに放出されるＬＴアジュバントを有することが望ましい。次いで、ＬＴ初回抗原刺激を受けたランゲルハンス細胞は、毒素及び定着因子抗原をより有効に補足及び処理することができる。制御送達は、アジュバント及び抗原のより効率的な使用であり、これにより、用量をさらに減らすことができる。
【０１５９】
接着剤と接触している、少なくともアジュバント及び／又は抗原活性を有するタンパク質を安定化するために適している処方物を記載する。以下は、このような処方物の例であって、処方物を限定することを意図したものではない。
【０１６０】
ＥＴＥＣサブユニットワクチン（ＣＳ３、ＣＳ６、ＣＦＡ／Ｉ、ＳＴ及びＬＴ）及び死ＥＴＥＣ全細胞を送達するためのゲル処方物
ゲルは、十分に水和されているか、湿潤なバッチの例である。これらの処方物は、ゲルマトリックス内に閉じ込められた１種又は複数のＥＴＥＣサブユニット抗原を導入することを意図している。この処方物は、ＬＴを伴う、又は伴わない死ＥＴＥＣ全細胞（用量当たり〜１０4から１０8死細菌）の経皮送達にも適している。抗原を含有する溶液を、所望の量及び比で、カルボマー、プルロニック又はこれら２種のゲル成分の混合物とブレンドすることにより、ワクチンを処方する（下記参照）。次いで、ゲル含有免疫原性処方物を、こぼすことなくその位置にゲルを保持する細片（ｓｔｒｉｐ）上に塗布する。材料が、処方物中のタンパク質に関して低い結合能を有することが重要である。細片は、前記のようなパッチ材料を含んでよい。細片は、単一層又は１つよりも多い層からなる積層であってよい。通常、細片は、実質的に水不透過性であり、皮膚を水和条件に留めるために役立つ。材料は、必要な柔軟性及びタンパク質に関して低い結合能を満たすいずれのタイプのポリマーであってもよい。好ましいポリマーには、これらに限らないが、ポリエチレン、ビニル酢酸エチル、エチルビニルアルコール、ポリエステル又はテフロン（登録商標）が含まれる。ゲルを保持する材料からなる細片は、１ｍｍ厚未満、好ましくは０．０５ｍｍ厚未満、さらに好ましくは０．００１から０．０３ｍｍ厚である。
【０１６１】
ゲル負荷細片は、様々なサイズ及び形であってよい。適用を容易にするために、角が丸いことが好ましい。細片の長さは変動してよく、所定の使用者に応じる（即ち、子供又は成人）。これは、約２ｃｍから約１２ｃｍであってよく、好ましくは、約４ｃｍから約９ｃｍである。細片の幅は、変動してよいが、約０．５ｃｍから約４ｃｍであってよい。細片は、ゲルのための貯留部として、浅いポケット又は窪みを有してもよい。一定の位置に保持するために、ゲル含有処方物を、細片の上に塗布する場合には、ゲルを、貯留部に充填すべきである。浅いポケットは、幅約０．４ｍｍ及び深さ約０．１ｍｍであってよい。ゲル負荷パッチは、約１ｍｍ厚であり、好ましい厚さは、約０．５ｍｍ未満である。感圧接着剤層に付着させることにより、ゲル負荷細片を一定の位置に保持し、その際、ゲル表面は、接着剤とは反対を向いている。裏当て材料は、閉鎖性又は半閉鎖性であってよい（例えば、ＴＥＧＡＤＥＲＭ包帯）。
【０１６２】
ゲルと皮膚との間に最大接触が維持されるべきなので、曲げ剛性は重要である。細片は、パッチが適用される解剖学的位置（例えば、三角筋、手掌の前腕（ｖｏｌａｒ  ｆｏｒｅａｍ）、首、耳の後ろ又は他の位置の上の皮膚）の輪郭に一致するべきである。曲げ剛性は、Ｈａｎｄｌｅ−Ｏ−Ｍｅｔｅｒ（Ｔｈｗｉｎｇ  Ａｌｂｅｒｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて測定することができる。曲げ剛性は、５ｇｍ／ｃｍ未満、さらに好ましくは３ｇｍ／ｃｍ未満であるべきである。比較的低い剛性により、材料からなる細片で、輪郭を示した表面の上をほとんど力を掛けずに覆うことができる。裏当て層を、パッチを一定の位置に保持するように設計して、皮膚とゲルとの間に最大接触を維持し、着用している間にゲルが脱水するのを防ぐ。
【０１６３】
貯蔵及び取り扱いの間に湿潤なパッチが脱水することを防ぐために、かなり硬い不活性なプラスチック細片の上にこれを置くこともできる。ゲル表面は、プラスチック細片と直接接触していて、ゲル／プラスチック界面は、低い剥離力を有し、これによって、プラスチック細片からのゲル細片の分離が容易になる。プラスチック細片は、ポリエチレン又は同様の材料からなってよい。ゲル含有パッチを、遮光性及び水密性プラスチック又はフォイルパウチ内に包装することができる。パウチを、室温で、又は冷蔵庫内で貯蔵することができる。
【０１６４】
次は、水和ゲル処方物の例を意図しており、これを制限することは意図していない：カルボマー１３４２  １％；カルボマー９４０  １．５％；カルボマー９３４  １．５％；カルボマー９４０  １．５％、スクロース２％、イソプロピルアルコール１０％、グリセロール１０％；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ８７  ５０％及びＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１０８  ３０％。
【０１６５】
カルボマーポリマーは、高分子量のアクリル酸ベースのポリマーであり、これは、アリルスクロース又はアリルペンタエリトリトールと架橋することができるか、かつ／又はアクリル酸Ｃ１０〜Ｃ３０アルキルで改質することができる。これらは、パッチ中に導入してよいか、しなくてもよいか、当技術分野で知られている他の手段により皮膚中に送達することができる。
【０１６６】
処方物は、様々な平均分子量のカルボマーを含有してよい。例えば、ポリマーは、カルボマー１３４２（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー１３４２  １％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）；カルボマー９３４（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー９３４  １．５％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）；又はカルボマー９４０（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー９４０  １．５％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）であってよい。各処方物を、リン酸緩衝生理食塩水中で調製し、これは、ＬＴを約０．６ｍｇ／ｍｌ又はそれ未満で含有するが、抗原及びアジュバントは、約０．００１ｍｇ／ｍｌから約０．６ｍｇ／ｍｌ又は約０．６ｍｇ／ｍｌから約６ｍｇ／ｍｌから処方することもできる。加えて、メチルパラベン及びプロピルパラベンなどの抗菌物質を含んでもよい。
【０１６７】
カルボマー９４０及びＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ８７からなる組合せ（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー９４０  １．５％、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ８７  ０．５％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）を使用することもできる。Ｐｌｕｒｏｎｉｃは、別の群のヒドロゲルであり、これは、酸化エチレン−酸化プロピレン−酸化エチレンの繰り返しセグメントを含有する。処方物中のＬＴ及び抗菌物質の量は、同一である。
【０１６８】
他の処方物は、浸透増強剤及びカルボマーを使用して、送達を増強することができる。例えば、ゲルは、Ｐｈａｒｍａｓｏｌｖｅと共にカルボマー９４０を含んでよく（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー９４０  １．５％、Ｐｈａｒｍａｓｏｌｖｅ１０％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）、最終ゲルは、カルボマー９４０、グリセロール及びイソプロパノールを含有してよい（例えば、１×ＰＢＳ中、カルボマー９４０  １．５％、グリセロール１０％、イソプロパノール１０％、ＬＴ０．６ｍｇ／ｍｌ、メチルパラベン０．３％、プロピルパラベン０．１％、ラクトース２．５％）。ＬＴ及び抗菌物質の濃度は、前記の処方と同一なままであってよいか、他の特別な範囲であってよい。
【０１６９】
前記の参考文献の全て（例えば、論文、書籍、特許及び特許出願）は、当技術分野の専門家のレベルを示しており、参照して援用することができる。
【０１７０】
請求項の意図及びその法的同等物の範囲内での変更及び置き換えは全て、その範囲内に包含されるべきである。接続句（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）「含む」を使用する請求項は、請求項の範囲内である他の要素の包含を許容する；本発明は、接続フレーズ「主に〜からなる」（即ち、本発明の実施に実質的に影響を及ぼさない場合に、請求項の範囲内である他の要素の包含を許容する）及び「含む」との用語の代わりに、接続句「〜からなる」（即ち、本発明に通常関連する不純物又は多少の活量以外は、請求項に挙げられた要素のみを許容する）を使用するような請求項によっても記載されている。請求項中に明らかに関連が記載されていない限り、請求項間で、又は請求項内に特別な関連は意図されていない（例えば、物質請求項中での成分の配置、又は方法請求項中でのステップの順序は、そのように特に記載されていない限り、請求項の制限ではない）。したがって、ここに開示されている個々の要素の全ての可能な組合せ又は並べ替えは、本発明の考慮される部分である。
【０１７１】
前記から、本発明は、その意図又は基本的な特徴から逸脱することなく、他の特殊な形態で実施することができることは、当技術分野の専門家には明らかであろう。本発明に与えられる法的保護の範囲は、この明細書によってではなく添付の請求項によって示されているので、前記の実施形態は、例示としてのみ考慮されるべきで、制限的なものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１７２】
【図１】接着剤中タンパク質（ＰＩＡ）パッチ１０の部分断面図を示す図である。裏当て層１２及び感圧接着層１４が相互に付着している。パッチ１０の皮膚側は場合によって、使用前には剥離性ライナー１８で被われている。感圧接着層１４の皮膚側に施与されていることにより、免疫原性処方物１６は、パッチ１０の露出側に位置する。これは必ずしも、一定の比率に縮小されて示されてはいない。
【図２】接着剤中タンパク質（ＰＩＡ）パッチ２０の部分断面図を示す図である。裏当て層２２及び感圧接着層２４が相互に付着している。パッチ２０の皮膚側は場合によって、使用前には剥離性ライナー２８で被われている。感圧接着層２４中に導入されていることにより、免疫原性処方物２６は、パッチ２０の露出側に位置する。これは必ずしも、一定の比率に縮小されて示されてはいない。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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