(57)【要約】本発明は、免疫調節性抗体、例えば抗Ｂ７．１又は抗Ｂ７．２又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体、及びＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、又はＣＤ３７などの少なくとも１つのＢ細胞抗体の組合せによる自己免疫疾患の治療に関し、そのような抗体は、長期にわたり、別々に又は組み合わせて、並びにいずれかの順で投与してもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において自己免疫疾患を治療する方法であって、抗ＣＤ４０Ｌ、抗Ｂ７．１（ＣＤ８０）、抗Ｂ７．２（ＣＤ８６）、ＣＤ４０抗体及び抗ＣＤ４抗体からなる群から選択される治療上有効な量の免疫調節性抗体、並びに治療上有効な量のＢ細胞枯渇活性を有する抗体の組合せを哺乳動物に投与することを含み、前記免疫調節性抗体及び前記Ｂ細胞枯渇抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれの順序で投与してもよい方法。
【請求項２】
Ｂ細胞枯渇抗体が、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５及びＣＤ８６（Ｂ７．２）からなる群から選択される抗原と結合する抗体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
免疫調節性抗体が抗ＣＤ４０Ｌ抗体又は抗Ｂ７抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
組合せが、ＣＤ４０Ｌと結合する抗体及びＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２３又はＣＤ３７と結合する抗体を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
組合せが、Ｂ７．１又はＢ７．２と結合する抗体及びＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、又はＣＤ３７と結合する抗体を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
免疫調節性抗体をＢ細胞枯渇抗体の前に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ｂ細胞枯渇抗体を免疫調節性抗体の前に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｂ細胞枯渇抗体及び免疫調節性抗体を組み合わせて投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
自己免疫疾患が、乾癬；皮膚炎；全身性強皮症及び硬化症；炎症性腸疾患に伴う反応；クローン病；潰瘍性大腸炎；呼吸窮迫症候群；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；糸球体腎炎；アレルギー状態；湿疹；喘息；Ｔ細胞の浸潤及び慢性炎症反応を含む状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全；慢性関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年性糖尿病；サイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅延型過敏症に伴う免疫応答；結核；サルコイドーシス；多発性筋炎；肉芽腫症；血管炎；悪性貧血（アジソン病）；白血球血管外遊出に関わる疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレイヴス病；ランバート・イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害；ライター病；スティフマン症候群；ベーチェット病；巨細胞性動脈炎；免疫複合体性腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発神経障害；特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）及び自己免疫性血小板減少症、及び卵巣炎からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
どちらの抗体にも細胞毒性剤が複合していない、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
抗体の組合せがヒト化もしくはヒト抗ヒトＣＤ４０ＬもしくはＢ７．１抗体、及びキメラ、ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ２０抗体を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
Ｂ細胞枯渇抗体が細胞毒性剤と複合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
細胞毒性剤が放射性核種である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
抗体がＹ２Ｂ８又は１３１Ｉ−Ｂ１（ＢＥＸＸＡＲ（商標））を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗体を静脈内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
抗体を注入により投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
抗体の実質的に３７５ｍｇ／ｍ２未満の投与量を哺乳動物に投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
投与量が、約２０ｍｇ／ｍ２から約２５０ｍｇ／ｍ２までの範囲である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
投与量が、約５０ｍｇ／ｍ２から約２００ｍｇ／ｍ２までの範囲である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
初回量の抗体と、その後の続行量を投与することを含み、続行量における抗体のｍｇ／ｍ２量が初回量における抗体のｍｇ／ｍ２量を上回る、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
自己免疫疾患が免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項２３】
自己免疫疾患が慢性関節リウマチである、請求項６に記載の方法。
【請求項２４】
自己免疫疾患が溶血性貧血である、請求項６に記載の方法。
【請求項２５】
溶血性貧血がクリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
自己免疫疾患が血管炎である、請求項６に記載の方法。
【請求項２７】
本質的に抗Ｂ７．１抗体及びＢ細胞枯渇抗ＣＤ２０抗体を投与することからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
容器並びにその中に含まれる１つ又はいくつかの組成物を含み、少なくとも１つの組成物はＢ細胞枯渇抗体を含み、少なくとももう１つの組成物は抗ＣＤ４０Ｌ又は抗Ｂ７．１又は抗Ｂ７．２抗体を含み、さらに組成物のユーザーに自己免疫疾患を有する又は自己免疫疾患に罹患しやすい患者を治療するように指示する添付文書を含む製品。
【請求項２９】
自己免疫疾患が、乾癬；皮膚炎；全身性強皮症及び硬化症；炎症性腸疾患に伴う反応；クローン病；潰瘍性大腸炎；呼吸窮迫症候群；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；糸球体腎炎；アレルギー状態；湿疹；喘息；Ｔ細胞の浸潤及び慢性炎症反応を含む状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全；慢性関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年性糖尿病；サイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅延型過敏症に伴う免疫応答；結核；サルコイドーシス；多発性筋炎；肉芽腫症；血管炎；悪性貧血（アジソン病）；白血球血管外遊出に関わる疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレイヴス病；ランバート・イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害；ライター病；スティフマン症候群；ベーチェット病；巨細胞性動脈炎；免疫複合体性腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発神経障害；特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）及び自己免疫性血小板減少症、及び卵巣炎からなる群から選択される、請求項２５に記載の製品。
【請求項３０】
多発性硬化症を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びどちらかの順序で投与する方法。
【請求項３１】
ＩＴＰを治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３２】
狼蒼を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３３】
糖尿病を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３４】
慢性関節リウマチを治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３５】
乾癬を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３６】
甲状腺炎を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３７】
皮膚炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｕｓ）を治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３８】
ＩＢＤを治療する方法であって、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＣＤ４０Ｌに対する抗体及び実質的なＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含み、前記抗体を、別々又は組み合わせて、及びいずれかの順序で投与する方法。
【請求項３９】
合成免疫抑制剤の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫抑制剤がシクロスポリン又はＦＫ５０６である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
自己抗体を標的とする抗体の投与をさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、Ｎａｂｉｌ　Ｈａｎｎａの名において「ＣＤ４０Ｌアンタゴニスト及びＢ７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＣＤ２３に対する抗体を含む自己免疫疾患を治療するための併用療法（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｆｏｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ　ＣＤ４０Ｌ　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　Ｂ７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２　ｏｒ　ＣＤ２３）」という表題で２０００年９月１８日に出願された米国仮出願番号６０／２３３，６０７；及びＮａｂｉｌ　Ｈａｎｎａの名において「Ｂ細胞枯渇抗体／免疫調節性抗体の組合せを用いる自己免疫疾患を治療するための併用療法（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｆｏｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　Ｕｓｉｎｇ　Ｂ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ／Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という表題で２０００年１２月２２日に出願された米国仮出願番号６０／２５７，１４７に関連し、かつそれらに基づく優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、自己免疫疾患を治療するための新規な併用療法を提供する。特に、本発明は、免疫調節性抗体、好ましくはＴ細胞及び／又はＢ細胞の分化、増殖及び／又は機能を変調する抗体、並びにＢ細胞枯渇抗体を自己免疫疾患治療のために併用する方法に関する。これらの抗体は、別々に又は組み合わせて、及びいずれの順序でも投与することができる。
【０００３】
（発明の背景）
最近、癌、特に非ホジキン・リンパ腫、白血病、ウイルス性疾患、及び自己免疫疾患を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法が広く受け入れられている。特に、癌、例えば非ホジキンリンパ腫及び関連するＢ細胞リンパ腫を治療するために細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０又は抗ＣＤ２２抗体を使用する方法が報告されている。また、ＣＤ１９及びＣＤ３７に対して特異的なＢ細胞枯渇抗体を使用する方法も報告されている。
【０００４】
さらに、様々な免疫調節性抗体、すなわち特定の免疫経路を変調、すなわち亢進又は阻害することにより治療上の恩恵をもたらす抗体の使用法が報告されている。例えば、このような抗体は、Ｔ細胞もしくはＢ細胞、又は免疫の調節に関与する他の細胞の分化、増殖、活性化、及び／又は機能を変調させる。このような免疫調節性抗体は、免疫細胞、通常は体液性又は細胞性免疫の調節に関与しているＢ細胞又はＴ細胞抗原上のリガンド又は受容体と結合する。このようなリガンドの例は、Ｂ７．１、Ｂ７．２などの免疫シグナル伝達分子、ＣＤ４０−Ｌ、ＣＤ４０、及びＣＤ４などのＴ細胞調節性分子である。これらの抗原の一部についての機能の考察及びそれらに特異的な抗体を治療のために使用するこれまでの方法を以下で手短に論じる。
【０００５】
ＣＤ４０Ｌは、ヘルパー細胞の活性化の表面上で発現する受容体であり、Ｂリンパ球並びに他の抗原提示細胞の表面上で発現するリガンドであるＣＤ４０のカウンター受容体（ｃｏｕｎｔｅｒｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。活性化Ｔ細胞上のＣＤ４０ＬとＢ細胞及び他の抗原提示細胞上で発現するＣＤ４０との接触依存性相互作用は「Ｔ細胞ヘルパー機能」と呼ばれ、Ｂリンパ球の活性化及び分化をもたらし、体液性免疫応答の調節に役立つ。この調節は、抗体分子の特異性、分泌及びアイソタイプにコードされた（ｉｓｏｔｙｐｅ−ｅｎｃｏｄｅｄ）機能を含んでいる。Ｂ細胞が分化するのをＴ細胞が助けるプロセスは、２つの異なる相、誘導相（ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｈａｓｅ）及び作動相（ｅｆｆｅｃｔｏｒ　ｐｈａｓｅ）に分けられている（Ｖｉｔｅｔｔａ他、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：１（１９８９）；Ｎｏｅｌｌｅ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１１、３６１（１９９０））。
【０００６】
ＣＤ４０とそのリガンドｇｐ３９（別名ではＣＤ４０ＬとＣＤ１５４）の相互作用による体液性免疫におけるＴ細胞ヘルプの分子的機序は今や十分に理解されている。基本的には、活性化Ｔヘルパー細胞はリンホカイン遺伝子及び同系の抗原提示Ｂ細胞の相互活性化に不可欠な膜タンパク質であるＣＤ４０Ｌを発現することが知られている。ＣＤ４０ＬとそのＢ細胞上の受容体ＣＤ４０との相互作用は、Ｂ細胞参加を促進し、リンホカインの成長及び分化作用に対するＢ細胞の応答性を誘導する。
【０００７】
さらに、Ｔ細胞の免疫プロセスにおいてＣＤ４０Ｌがさらに大きくさらに一般的な役割、すなわちＴ細胞ヘルプ及び体液性免疫の調節における役割とは別の役割を果たしていることが知られている。ＣＤ４０Ｌのこの役割は十分に理解されていない。例えば、一例として多発性硬化症を含むＴ細胞媒介性自己免疫疾患、１型糖尿病、炎症性腸症候群、卵巣炎、及び甲状腺炎の病理には、疾患の病理における役割、おそらくエフェクターＴ細胞の役割に優先することにより役割を果たすサプレッサーＴ細胞集団を発現する特定のＣＤ４０リガンドの存在が関わっていることが理論上想定されている。また、耐性に対する末梢性及び中枢性のＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌの役割及び自己免疫疾患における寄与についても報告されている（Ｄｕｒｉｅ他、Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ１４５（３）：２００〜２０５（１９９４））。
【０００８】
Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患とＴ細胞媒介性自己免疫疾患の双方を治療するためにＣＤ４０Ｌのアンタゴニストを使用する方法が報告されている。例えば、ＥＰ５５５，８８０、米国特許５，４７４，７７１、及びＷＯ９３／０９２１２は、体液性自己免疫疾患を治療するためにＣＤ４０Ｌアンタゴニストを使用する方法を開示している。Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患を治療するためにＣＤ４０Ｌアンタゴニストを使用する方法は、米国特許５８３３９８７、及びそのＰＣＴ対応特許のＰＣＴ／ＵＳ９６／０９Ｂ７に開示されている。
【０００９】
前述のように、Ｂリンパ球上の標的抗原と特異的に結合し、治療剤としてＢ細胞を枯渇させる分子の使用法も報告されている。非ホジキン・リンパ腫の治療のためにＣＤ２０抗原を対象とするキメラ・モノクローナル抗体であるリツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）（登録商標）がＦＤＡに承認されたことを考えると、最も受け入れやすいＢ細胞の治療目標はおそらくＣＤ２０抗原であろう。
【００１０】
ＣＤ２０抗原（またの名をヒトＢリンパ球限定分化抗原、−ｐ−３３という）は、プレＢリンパ球及び成熟型Ｂリンパ球上に位置する分子量約３５ｋＤの疎水性膜貫通型タンパク質である（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９）：１１２８２〜１１２８７（１９８９）；及びＥｉｎｆｅｌｄ他、ＥＭＢＯ　Ｊ．７（３）：７１１〜７１７（１９８８））。また、この抗原は９０％を超えるＢ細胞の非ホジキン・リンパ腫ＨＬで発現するが（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｂｌｏｏｄ　６３（６）：１４２４〜１４３３（１９８４））、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞又は他の正常組織上には見いだされない（Ｔｅｄｄｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５（２）：９７３〜９７９（１９８５））。ＣＤ２０は、細胞周期の開始及び分化に関する活性化プロセスにおける初期のステップを調節し（Ｔｅｄｄｅｒ他、同上）、カルシウム・イオン・チャンネルとして機能している可能性がある（Ｔｅｄｄｅｒ他、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４Ｄ：１９５（１９９０））。
【００１１】
Ｂ細胞リンパ腫におけるＣＤ２０の発現を考えると、この抗原は、このようなリンパ腫の「ターゲティング」の候補としての役割を果たすことができる。基本的に、このようなターゲティングを以下のように一般化することができる。Ｂ細胞のＣＤ２０表面抗原に対して特異的な抗体を患者に投与する。これらの抗ＣＤ２０抗体は、（表面上は）正常細胞と悪性Ｂ細胞の双方のＣＤ２０抗原と特異的に結合する。ＣＤ２０表面抗原と結合した抗体は、新生物のＢ細胞の破壊及び枯渇をもたらす。さらに、腫瘍を破壊する能力を有する化学薬品又は放射性標識を抗ＣＤ２０抗体と複合させ、薬剤を新生物のＢ細胞へ特異的に「送達する」ことができる。手法に関係なく、主要目的は腫瘍を破壊することであり、具体的な手法は利用される特定の抗ＣＤ２０抗体によって決定されるため、ＣＤ２０抗原を標的とするために使用可能な手法はかなり異なることがある。
【００１２】
ＣＤ１９は、Ｂ細胞系譜の細胞の表面上で発現する別の抗原である。ＣＤ２０と同様に、ＣＤ１９は、幹細胞段階から形質細胞への最終分化直前まで、この細胞系譜の分化の初めから終わりまで細胞上に見いだされる（Ｎａｄｌｅｒ、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　ＩＩ２：３〜３７及びＡｐｐｅｎｄｉｘ、Ｒｅｎｌｉｎｇ他編（１９８６）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇによる）。ＣＤ２０とは異なり、ＣＤ１９と結合する抗体はＣＤ１９抗原の内部移行を引き起こす。ＣＤ１９抗原は、例えばＨＤ２３７−ＣＤ１９抗体（「Ｂ４」抗体とも呼ばれる）によって識別される（Ｋｉｅｓｅｌ他、Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ＩＩ、１２：１１１９（１９８７））。ＣＤ１９抗原は、４〜８％の末梢血単核細胞上に存在し、末梢血、脾臓、リンパ節又は扁桃から単離される９０％を超えるＢ細胞上に存在する。ＣＤ１９は、末梢血Ｔ細胞、単球又は顆粒球では検出されない。事実上すべての非Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及びＢ細胞リンパ腫は、抗体Ｂ４によって検出可能なＣＤ１９を発現する（Ｎａｄｌｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：２４４（１９８３）；及びＮａｄｌｅｒ他、ｉｎ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ．ＸＩＩ　ｐｐ．１８７〜２０６．Ｂｒｏｗｎ、Ｅ．編（１９８１）Ｂｒｕｎｅ　＆　Ｓｔｒａｔｔｏｎ、Ｉｎｃ．による）。
【００１３】
ＣＤ２２は、Ｂ細胞系譜の細胞の表面上で発現する別の抗原である。この抗原は、「ＢＬ−ＣＡＭ」及び「ＬｙＢ８」という名前でも呼ばれる。この抗原は、約１４０，０００の分子量を有する膜型免疫グロブリン関連タンパク質であり、膜型Ｉｇが連結した場合にチロシンがリン酸化される（Ｅｎｇｅｌ他、Ｊ．Ｒ　＆　ＰＭｅｄ　１８１（４）：１５２１〜１５２６　９１９９５）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ及びＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１５７３）。この抗原は、Ｂ細胞受容体シグナル伝達の負のレギュレーターであり（Ｎｉｔｓｃｈｋｅ他、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７：１３３（１９９７））；単球赤血球アシズム（ａｔｈｉｓｍ）を促進する（Ｓｔｅｍｅｎｋｏｕｌ他、Ｎａｔｕｒｅ３４５：７４（１９９０））ことが報告されている。現在、Ｌｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（商標）と呼ばれるＣＤ２２に対して特異的な裸の抗体は、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、Ｉｎｃ．によって無痛性非ホジキンリンパ腫の治療に関して臨床試験中である。また、無痛性及び悪性非ホジキンリンパ腫を治療するために、これと同じ抗体のイットリウム９０標識体の使用法も臨床試験中である。
【００１４】
ＣＤ２３は、Ｂ細胞上で発現するさらに別の抗原であり、ＦｃＥＲＩＩの別名でも知られるＩｇＥにとっての低親和性受容体である。炎症性、自己免疫及びアレルギー性障害を治療するためにＣＤ２３と結合する抗体を使用する方法が患者及び非患者の文献で提案されている。
【００１５】
Ｂ７．１及びＢ７．２は、特異的に結合するリガンドの使用法に対するＢ細胞抗原の他の例を含み、免疫調節薬（ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒ）としての役割を果たし、治療上の有用性があると報告されている。特に、抗Ｂ７、特にＢ細胞の表面上に発現するＢ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、又はＢ７．３膜貫通型糖タンパク質は、免疫抑制剤としての潜在的用途、及び様々な疾患を治療するための潜在的用途を有している。例えば、１９９９年２月９日にＤｅＢｏｅｒ他に発行され、Ｃｈｉｒｏｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された米国特許５，８６９，０４０は、移植拒絶反応、移植片対宿主疾患及び慢性関節リウマチを治療するために別の免疫抑制剤と組み合わせた抗Ｂ７．１抗体の使用法を開示している。また、１９９９年３月２３日にＬｉｎｓｌｅｙ他に発行された米国特許５，８８５，５７９は、Ｂ７抗原、例えばＢ７．１（ＣＤ８０）又はＢ７．２（ＣＤ８６）に対して特異的なリガンドを投与することにより、Ｂ７陽性細胞とＴ細胞の相互作用が関わる免疫疾患の治療を開示している。
【００１６】
さらに、Ａｎｄｅｒｓｏｎ他への米国特許６，１１３，１９８は、以前の抗Ｂ７抗体とは対照的に、Ｂ７．１／ＣＴＬＡ−４相互作用を阻害せず、自己免疫疾患を含む疾患の治療に有用であるＢ７−１抗原に対して特異的な抗体の使用法を開示している。しかしながら、これらの抗体とＣＤ４０Ｌに対して特異的な抗体との併用法は開示されておらず、Ｂ細胞枯渇抗体と合わせた抗体の使用法も報告されていない。
【００１７】
特に、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）（登録商標））抗体は、ＣＤ２０抗原を対象とする遺伝子組み換えキメラ・マウス／ヒト・モノクローナル抗体である。リツキサン（登録商標）は、再燃型又は難治性の軽度悪性型又は濾胞性、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキン・リンパ腫患者の治療に適応される（１９９８年４月７日にＡｎｄｅｒｓｏｎ他に発行された米国特許番号５，７３６，Ｂ７）。Ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける作用機序の研究から、リツキサン（登録商標）はヒト補体と結合し、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）によりリンパ性Ｂ細胞を溶解することが立証された（Ｒｅｆｆ他、Ｂｌｏｏｄ　８３（２）：４３５　４４５（１９９４））。さらに、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいてリツキサン（登録商標）は顕著な活性を有する。つい最近、リツキサン（登録商標）は、トリチウム化チミジン取り込みアッセイにおいて抗増殖作用を有し、直接アポトーシスを誘導するが、他の抗ＣＤ１９及びＣＤ２０抗体はアポトーシスを誘導しないことが分かった（Ｍａｌｏｎｅｙ他、Ｂｌｏｏｄ　８８（１０）：６３７ａ（１９９６））。リツキサン（登録商標）と化学療法及び毒素との相乗作用も実験的に観察されている。特に、リツキサン（登録商標）は、薬剤耐性のヒトＢ細胞リンパ腫細胞系をドキソルビシン、ＣＤＤＰ、ＶＰ−１６、ジフテリア毒素及びリシンに対して感受性にする（Ｄｅｍｉｄｅｍ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　＆　Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　１２（３）：１７７〜１８６（１９９７））。Ｉｎ　ｖｉｖｏにおいてリツキサン（登録商標）は、カニクイザルの末梢血、リンパ節、及び骨髄からＢ細胞を極めて効果的に枯渇させるが、これは補体媒介性及び細胞媒介性プロセスによると思われる（Ｒｅｆｆ他、Ｂｌｏｏｄ　８３（２）：４３５〜４４５（１９９４））。
【００１８】
Ｐｅｒｒｏｔｔａ及びＡｂｕｅｌ（Ｂｌｏｏｄ：９２　ＡＳＨ　４０ｔｈ　Ａｎｎｕａｌ　ＭｅｅｔｉｎｇからのＡｂｓｔｒａｃｔ＃３３６０（１１月、１９９８））は、リツキサン（登録商標）に反応を示す特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を有する５０歳の女性に関する事例報告を提供している。
【００１９】
（発明の概要）
本発明は、少なくとも１種類の免疫調節性抗体及び少なくとも１種類のＢ細胞枯渇抗体、例えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２３、又はＣＤ３７を標的とする抗体の組合せを用いる、自己免疫疾患、好ましくはＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を対象とする。これらのタイプの抗体を別々又は組み合わせて投与すると、自己免疫疾患を治療するために用いた場合には相乗的利益をもたらす。そのような結果が得られるのは、Ｂ細胞枯渇抗体がＢ細胞数を枯渇させる働きをすることにより、自己免疫の病理に関与する循環しているＩｇＥ及び他の抗体を減少させるためである。しかしながら、Ｂ細胞枯渇抗体、例えばリツキサン（登録商標）は、活性化Ｂ細胞を優先的に枯渇させる傾向がある。対照的に、免疫調節性抗体、例えば抗Ｂ７及び抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、免疫調節性作用、すなわち非活性化Ｂ細胞、すなわち非活性化抗原提示Ｂ細胞に対する免疫抑制をもたらす。したがって、これら２種類の機能的に異なるタイプの抗体を使用すると、循環からの活性化Ｂ細胞と非活性化Ｂ細胞双方の除去を容易にするという点で相乗的利益をもたらすことが仮定できる。それによって自己免疫抗体の循環レベルが著しく低下するのは、抗体産生Ｂ細胞のレベルが劇的に減少するためである。これによって、治療上の利益、特にＢ細胞、より具体的には自己抗体が疾患の病理に積極的に関与している自己免疫疾患では顕著な治療上の利益が得られるはずである。
【００２０】
後述するように、好ましい免疫調節性抗体には、抗Ｂ７．１又は抗Ｂ７．２、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＣＤ４抗体が含まれる。Ｂ細胞枯渇抗体の好ましい例には、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ３７及びＣＤ２２に対して特異的な抗体が含まれる。
【００２１】
最も幅広い態様では、本発明は、（ｉ）免疫調節性抗体、好ましくは非活性化Ｂ細胞を阻害する抗体、及び（ｉｉ）Ｂ細胞枯渇抗体の併用により、自己免疫疾患、例えば慢性関節リウマチ、ＳＬＥ、ＩＴＰを治療するための併用療法であって、そのような抗体を別々に又は組み合わせて、及びいずれの順序でも投与することができる併用療法を提供する。
【００２２】
より具体的な態様では、本発明は、（ｉ）Ｂ７．１又はＢ７．２に対する抗体及び／又は抗ＣＤ４０Ｌ、及び（ｉｉ）抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２及び抗ＣＤ３７から選択されるＢ細胞枯渇抗体の併用による自己免疫疾患の治療を含む。
【００２３】
さらに、本発明は、容器並びにその中に含まれ、有効量の免疫調節性抗体、例えば抗ＣＤ４０Ｌ又は抗Ｂ７．１又は抗Ｂ７．２抗体（免疫調節性抗体）及びＢ細胞枯渇抗体又はそのフラグメント、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２又は抗ＣＤ３７（Ｂ細胞枯渇抗体）を含む１種類又は複数の組成物を含む自己免疫疾患を治療するための製品に関する。
【００２４】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
Ｉ．定義
本明細書の「Ｂ細胞枯渇抗体」は、投与により明白なＢ細胞枯渇をもたらし、Ｂ細胞マーカーと結合する抗体又はフラグメントである。このような抗体は、投与後、通常は約数日以内に約５０％以上のＢ細胞数の枯渇をもたらすことが好ましい。好ましい実施形態では、Ｂ細胞枯渇抗体は、リツキサン（登録商標）（キメラ抗ＣＤ２０抗体）又は実質的にそれと同一もしくはそれを超える細胞枯渇活性を有する抗体である。この抗体は、有効量を投与して２４時間以内に実質的に９０％のＢ細胞枯渇をもたらすことが立証されている。
【００２５】
「免疫調節性抗体」は、活性化Ｂ細胞の枯渇とは異なる機序により免疫系に対する作用をもたらす抗体を指す。その例には、Ｔ細胞免疫、Ｂ細胞免疫を、例えば、耐性（抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ４０）を誘導することにより阻害する抗体、又は他の免疫抑制抗体（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、又は抗ＣＤ４）が含まれる。場合によっては、免疫細胞の免疫調節性抗体もアポトーシスを増強する能力を有することがある。
【００２６】
本明細書の「Ｂ細胞表面マーカー」は、抗原と結合するアンタゴニストが標的とすることができるＢ細胞の表面上に発現する抗原である。典型的なＢ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５及びＣＤ８６（Ｂ７．２）白血球表面マーカーが含まれる。特に興味深いＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織に比べて優先的にＢ細胞上で発現し、Ｂ前駆細胞と成熟Ｂ細胞上の双方で発現することができる。一実施形態では、このマーカーは、ＣＤ２０又はＣＤ１９と同様に、幹細胞段階から形質細胞への最終分化直前まで、その細胞系譜の分化の初めから終わりまでＢ細胞上に見いだされるマーカーである。本明細書で好ましいＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ８０及びＣＤ８６である。
【００２７】
「ＣＤ２０」抗原は、末梢血又はリンパ器官の９０％を超えるＢ細胞の表面上に見いだされる約３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は初期のプレＢ細胞発生中に発現し、形質細胞分化まで残存する。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞並びに悪性Ｂ細胞上の双方に存在する。文献におけるＣＤ２０の別名には、「Ｂリンパ球限定抗原」及び「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原はＣｌａｒｋ他、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：１７６６（１９８５）に記載されている。
【００２８】
「ＣＤ１９」抗原は、例えばＨＤ２３７−ＣＤ１９又はＢ４抗体によって識別される約９０ｋＤａの抗原を指す（Ｋｉｅｓｅｌ他、Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ＩＩ、１２：１１１９（１９８７））。ＣＤ２０と同様に、ＣＤ１９は、幹細胞段階から形質細胞への最終分化直前まで、この細胞系譜の分化の初めから終わりまで細胞上に見いだされる。ＣＤ１９に対するアンタゴニストの結合はＣＤ１９抗原の内部移行を引き起こすことがある。
【００２９】
「ＣＤ２２」抗原は、Ｂ細胞上で発現する抗原を指し、「ＢＬ−ＣＡＭ」及び「ＬｙｂＢ」の別名でも知られ、Ｂ細胞シグナル伝達及び接着に関与する（Ｎｉｔｓｃｈｋｅ他、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７：１３３（１９９７）；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４５：７４（１９９０）を参照）。この抗原は、膜型Ｉｇが連結した場合にチロシンがリン酸化される膜型免疫グロブリン関連抗原である（Ｅｎｇｅｌ他、Ｊ．Ｅｔｙｐ．Ｍｅｄ．１８１（４）：１５２１、１５８６（１９９５））。この抗原をコードする遺伝子がクローニングされ、そのＩｇドメインの特徴が明らかにされている。
【００３０】
Ｂ７抗原には、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、又はＢ７．３抗原が含まれ、これらはＢ細胞上で発現する膜貫通型抗原である。ヒトＢ７．１及びＢ７．２抗原を含むＢ７抗原と特異的に結合する抗体が当技術分野で知られている。好ましいＢ７抗体は、ＩＤＥＣ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された米国特許番号６，１１３，１９８でＡｎｄｅｒｓｏｎ他によって開示されている霊長類化（登録商標）Ｂ７抗体、並びにヒト及びヒト化Ｂ７抗体を含む。
【００３１】
ＣＤ２３は、Ｂ細胞及び他の細胞によって発現されるＩｇＥの低親和性受容体を指す。本発明では、ＣＤ２３はヒトＣＤ２３抗原であることが好ましい。当技術分野ではＣＤ２３抗体も知られている。本発明では、ＣＤ２３抗体は、ヒトＩｇＧＩ又はＩｇＧ３定常ドメインを含むヒト又はキメラ抗ヒトＣＤ２３抗体であることが好ましく、米国特許番号６，０１１，１３８に開示されている枯渇抗ＣＤ２３抗体であることが最も好ましい。
【００３２】
「自己免疫疾患」は、各自の組織から生じ、各自の組織が対象となる非悪性疾患又は障害である。本明細書の非悪性自己免疫疾患は、悪性又は癌性疾患又は状態を除外し、特にＢ細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）ヘアリー（Ｈａｉｒｙ）細胞白血病及び慢性骨髄芽球性白血病を除外する。このような疾患又は障害の例には、乾癬及び皮膚炎（例えばアトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患；全身性強皮症及び硬化症；炎症性腸疾患に伴う反応（クローン病及び潰瘍性大腸炎など）；呼吸窮迫症候群（成人呼吸窮迫症候群；ＡＲＤＳを含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；糸球体腎炎；湿疹及び喘息などのアレルギー状態並びにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症反応を含む他の状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全；慢性関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、１型糖尿病すなわちインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群（Ｒｅｙｎａｕｄ’ｓ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年性糖尿病；並びに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎に通常見いだされるサイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅延型過敏症に伴う免疫応答；悪性貧血（アジソン病）；白血球血管外遊出に関わる疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｉｎｅｍｉａ）を含む）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレイヴス病；ランバート・イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害；ライター症候群；スティフマン症候群；ベーチェット病；巨細胞性動脈炎；免疫複合体性腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発神経障害；特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性血小板減少症及び卵巣炎が含まれる。
【００３３】
Ｂ細胞「アンタゴニスト」は、Ｂ細胞表面マーカーと結合して哺乳動物のＢ細胞を破壊もしくは枯渇させ、かつ／又は１種又は複数のＢ細胞機能を、例えばＢ細胞によりもたらされる体液性反応を低下又は妨げることにより妨害する分子である。対照的に、Ｂ細胞枯渇抗体は、それで治療される哺乳動物においてＢ細胞を枯渇させる（すなわち循環するＢ細胞レベルを低下させる）。このような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘発（例えばアポトーシスを介する）などの様々な機序を介して達成することができる。本発明の範囲内にあるアンタゴニストには、抗体、合成又は天然配列のペプチド及びＢ細胞マーカーと結合する、場合によっては細胞毒性剤と複合又は融合した小さな分子アンタゴニストが含まれる。
【００３４】
ＣＤ４０Ｌアンタゴニストは、ＣＤ４０Ｌと特異的に結合し、ＣＤ４０ＬとＣＤ４０の相互作用に拮抗することが好ましい分子である。その例には、ＣＤ４０Ｌと特異的に結合する抗体及び抗体フラグメント、可溶性ＣＤ４０、可溶性ＣＤ４０融合タンパク質、並びにＣＤ４０Ｌと結合する小さな分子が含まれる。本発明による好ましいアンタゴニストは、ＣＤ４０に対して特異的な抗体又は抗体フラグメントである。
【００３５】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介するための一次細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ　９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページにある表３に要約されている。当該分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許番号５，５００，３６２又は５，８２１，３３７に記載されているようなｉｎ　ｖｉｔｒｏのＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、当該分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、例えばＣｌｙｎｅｓ他、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に記載されているような動物モデルで評価することができる。
【００３６】
「ヒト・エフェクター細胞」は、１種又は複数のＦｃＲを発現しエフェクター機能を行う白血球である。これらの細胞は少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を行うことが好ましい。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が含まれ、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然源から、例えば、本明細書に記載するように血液又はＰＢＭＣから単離することができる。
【００３７】
用語「Ｆｃ受容体」すなわち「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を記載するために用いられる。好ましいＦｃＲは天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合する受容体（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩサブクラスの受容体が含まれ、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＵＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは類似したアミノ酸配列を有し、主にそれらの細胞質ドメインが異なっている。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンをベースとする活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンをベースとする阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｍ．Ｄａｅｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）中の総説を参照）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ他、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ　４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ　Ｈａａｓ他、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。また、この用語には、母性ＩｇＧの胎児への移動を担う新生児受容体ＦｃＲｎも含まれる（Ｇｕｙｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍほか、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【００３８】
「補体依存性細胞傷害作用」すなわち「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力を指す。補体活性化経路は、同系抗原と複合体を形成した分子（例えば抗体）と補体系の第一の成分（Ｃｌｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０２：１６３（１９９６）に記載されているＣＤＣアッセイを行うことができる。
【００３９】
「成長阻害性」アンタゴニストは、アンタゴニストが結合する抗原を発現する細胞の増殖を妨げるか減少させるアンタゴニストである。例えば、アンタゴニストは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ　ｖｉｖｏにおいてＢ細胞の増殖を妨げるか減少させることができる。
【００４０】
「アポトーシスを誘発する」アンタゴニストは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の膨張、細胞断片化、及び／又は膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成によって判断されるプログラム細胞死、例えばＢ細胞の死を誘発するアンタゴニストである。
【００４１】
本明細書の用語「抗体」は最も幅広い意味で使用され、具体的には原型のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２種類の原型抗体から生成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物活性を示す限りは抗体フラグメントを網羅する。
【００４２】
「抗体フラグメント」は、原型抗体の一部を含み、その抗原結合領域又は可変領域を含むことが好ましい。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；リニア（ｌｉｎｅａｒ）抗体；単鎖抗体分子；及び抗体フラグメントから生成した多重特異性抗体が含まれる。
【００４３】
「天然抗体」は、通常約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２本の同一軽（Ｌ）鎖及び２本の同一重（Ｈ）鎖からなる。各軽鎖は１個の共有ジスルフィド結合によって重鎖と連結するが、ジスルフィド連鎖数は、異なる免疫グロブリン・アイソタイプの重鎖間で異なる。また、各重鎖及び軽鎖は、規則正しい間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）と、続いて多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を、他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメインと並び、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成していると考えられている。
【００４４】
用語「可変」は、可変ドメインの特定部分は、抗体間で配列が大きく異なり、特定の各抗体の特定のその抗原に対する結合及び特異性に用いられるということを指す。しかしながら、その可変性は、抗体の可変ドメイン全体に一様には分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメイン双方の超可変領域と呼ばれる３個のセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。自然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々４個のＦＲを含み、主に１３シート構成（１３−ｓｈｅｅｔ　ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ））を取り、３個の超可変領域によって連結され、ループ接続を形成し、場合によってはＢシート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって極めて接近してまとめられ、他の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（１９９１））。定常ドメインは、抗体が抗原と結合する際に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。
【００４５】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれ、各々が単一の抗原結合部位を有する２種類の同一の抗原結合フラグメント、及び容易に結晶化する能力を表す名前である残りの「Ｆｃ」フラグメントを生成する。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られる。
【００４６】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインが堅固であるが非共有結合で会合した二量体からなる。この配置で、各可変ドメインの３個の超可変領域が相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。まとめると、６個の超可変領域が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（すなわち抗原に特異的な３個の超可変領域のみを含む半分のＦｖ）であっても、全体の結合部位に比べて親和性は低いが、抗原を認識し結合する能力を有している。
【００４７】
また、Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨＩ）を含む。Ｆａｂ’フラグメントはＦａｂフラグメントと異なり、抗体ヒンジ領域からの１個又は複数のシステインを含む数個の残基が重鎖ＣＨＩドメインに付加されている。本明細書では、Ｆａｂ’―ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１個の遊離チオール基を有するＦａｂ’という意味である。Ｆ（ａｂ’）Ｚ抗体フラグメントは、間にヒンジ・システインを有するＦａｂ’フラグメントの対として生成した。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【００４８】
いかなる脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００４９】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、様々な種類に抗体を割り当てることができる。原型の抗体には５つの主な種類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧＩ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２に分類することができる。異なる種類の抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと呼ばれる。重鎖定常ドメインがガンマ−１、ガンマ−２、ガンマ−３及びガンマ−４定常領域をすべて揃えていることが好ましい。また、これらの定常ドメインは、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，０１１，１３８号に開示されているＰ及びＥ修飾などの、抗体安定性を増強するための修飾を含むことが好ましい。様々な種類の免疫グロブリンについてのサブユニット構造及び三次元立体配置はよく知られている。
【００５０】
「単鎖Ｆｖ」すなわち「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖として存在する。Ｆｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチド・リンカーを含むことが好ましい。ｓｃＦｖの総説については、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００５１】
用語「ダイアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗原フラグメントを指し、そのフラグメントは、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の２個のドメイン間では対になることができない長さのリンカーを用いることにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと一組にし、２個の抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ　４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳しく記載されている。
【００５２】
本明細書で用いる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の母集団から得られる抗体、すなわち母集団を含む個々の抗体が、少量存在する可能性のある天然に存在する突然変異を除いては同一であることを指す。モノクローナル抗体は極めて特異的であり、単一の抗原部位を対象とする。さらに、通常は様々な決定基（エピトープ）を対象とする様々な抗体が含まれる従来の（ポリクローナル）抗体調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基を対象とする。それらの特異性に加え、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されない点で有利である。修飾語の「モノクローナル」は、実質的に同種の抗体母集団から得られる抗体の性質を示し、特定の方法により抗体の製造が必要であるとは見なされない。例えば、本発明に従って用いられるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ　２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ法によって製造でき、又は組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって製造することができる。また、「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９７）に記載の技法を用い、ファージ抗体ライブラリーから単離することができる。
【００５３】
本明細書のモノクローナル抗体には、具体的に、重鎖及び／又は軽鎖の一部は、特定の種に由来するか特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体中の対応する配列と一致するか相同であるが、所望の生物活性を示す限り、鎖の残部は、別の種に由来するか別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体、並びにそのような抗体のフラグメント中の対応する配列と一致するか相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）が含まれる（米国特許番号４，８１６，５６７；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１〜６８５５（１９８４））。本明細書で関心のあるキメラ抗体には、ヒト以外の霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体が含まれる。
【００５４】
「ヒト化」形のヒト以外（例えばマウス）の抗体は、ヒト以外の免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体の大部分は、レシピエントの超可変領域からの残基が、マウス、ラット、ウサギ又はヒト以外の霊長類などのヒト以外の種の超可変領域からの残基（ドナー抗体）により置き換えられ、所望の特異性、親和性、及び能力を有するヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応するヒト以外の残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中及びドナー抗体中に見いだされない残基を含むことがある。これらの修飾を行うと抗体能力がさらに改善される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべて又は実質的にすべてはヒト以外の免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてはヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。また、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常はヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を場合によって含む。詳細についてはＪｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ　３２　１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３〜３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６（１９９２）を参照されたい。
【００５５】
本明細書で用いる用語「超可変領域」は、抗体の抗原結合を担うアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）、並びに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）及び９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、（１９９１））からのアミノ酸配列、及び／又は「超可変ループ」（軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）及び９１〜９６（Ｌ３）、並びに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５６】
当該抗原、例えばＢ細胞表面マーカーと「結合する」アンタゴニストは、十分な親和性でその抗原と結合することができるアンタゴニストであり、そのようなアンタゴニストは、抗原を発現する細胞、すなわちＢ細胞を標的とする治療剤として有用である。
【００５７】
本明細書の「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０、好ましくはヒトＣＤ２０と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有し、リツキサン（登録商標）と同一の量及び条件で投与された場合に、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有する抗体である。
【００５８】
本明細書の「抗ＣＤ２２抗体」は、ＣＤ２２、好ましくはヒトＣＤ２２と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有し、リツキサン（登録商標）と同同一の量及び条件で投与された場合に、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有する抗体である。
【００５９】
本明細書の「抗ＣＤ１９抗体」は、ＣＤ１９抗原、好ましくはヒトＣＤ１９と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有し、リツキサン（登録商標）と同一の量及び条件で投与された場合に、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許番号５，７３６，１３７を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有する抗体である。
【００６０】
本明細書の「抗ＣＤ２３抗体」は、ＣＤ２３抗原、好ましくはヒトＣＤ２３と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有し、リツキサン（登録商標）と同一の量及び条件で投与された場合に、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許番号５，７３６，１３７を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有する抗体である。
【００６１】
本明細書の「抗ＣＤ３７抗体」は、ＣＤ３７抗原、好ましくはヒトＣＤ３７と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有し、リツキサン（登録商標）と同一の量及び条件で投与された場合に、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許番号５，７３６，１３７を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有する抗体である。
【００６２】
本明細書の「抗Ｂ７抗体」は、Ｂ７．１、Ｂ７．２又はＢ７．３、最も好ましくはヒトＢ７．１と特異的に結合する抗体である。この抗体は、Ｂ７／ＣＤ２８相互作用を特異的に阻害することが好ましく、Ｂ７．１／ＣＤ２８相互作用を阻害することがより好ましく、Ｂ７／ＣＴＬＡ−４相互作用を実質的に阻害しないものとする。抗Ｂ７．１抗体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許６，１１３，８９８に記載されている特異的抗体の１つであることがより好ましい。
【００６３】
「抗ＣＤ４０Ｌ抗体」は、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＴＢＡＭの別名でも知られる）と特異的に結合する抗体、好ましくはアゴニスト活性を有する抗体である。好ましい抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許番号６，０１１，３５８（ＩＤＥＣ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡）に開示されているヒト化抗体の特異性を有する抗体である。
【００６４】
「抗ＣＤ４抗体」は、ＣＤ４、好ましくはヒトＣＤ４、より好ましくは霊長類化又はヒト化抗ＣＤ４抗体と特異的に結合する抗体、好ましくはヒトガンマ４抗ヒトＣＤ４抗体である。
【００６５】
「抗ＣＤ４０抗体」は、ＣＤ４０、好ましくはヒトＣＤ４０と特異的に結合し、それらのすべてを参照により本明細書に組み込む米国特許５，８７４，０８５、５，８７４，０８２、５，８０１，２２７、５，６７４，４４２、及び５，６６７，１６５開示されている抗体などである。
【００６６】
Ｂ細胞枯渇抗体と免疫調節性抗体は共に、ヒト定常ドメインを含むことが好ましい。好適な抗体には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４アイソタイプが含まれる。
【００６７】
ＣＤ２０抗原と結合する抗体の具体的な例には、「リツキシマブ」（「リツキサン（登録商標）」）（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号）；イットリウム−［９０］標識２Ｂ８マウス抗体「Ｙ２Ｂ８」（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号）；マウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」場合によって１３１Ｉで標識されている１３１Ｉ抗体（ＢＥＸＸＡＲＴＭ（商標））（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，５９５，７２１号）；マウス・モノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓ他　Ｂｌｏｏｄ　６９（２）：５８４−５９１（１９８７）；及び「キメラ２Ｈ７」抗体（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，６７７，１８０号）が含まれる。
【００６８】
ＣＤ２２と結合する抗体の具体的な例には、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって報告され、現在非ホジキンリンパ腫の臨床試験中であるＬｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（商標）が含まれる。Ｂ７抗原と結合する抗体の例には、Ｌｉｎｓｌｅｙ他に発行された米国特許番号５，８８５，５７７に報告されているＢ７抗体、ＤｅＢｏｅｒ他に発行され、Ｃｈｉｒｏｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された米国特許番号５，８６９，０５０に報告されている抗Ｂ７抗体、及びＡｎｄｅｒｓｏｎ他への米国特許番号６，１１３，１９８に開示されている霊長類化（登録商標）抗Ｂ７．１（ＣＤ８０）抗体が含まれ、それらの特許のすべてを参照により本明細書に組み込む。
【００６９】
ＣＤ２３と結合する抗体の好ましい例には、１９９９年７月４日に発行され、ＩＤＥＣ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｃｏｒｐ．及び日本のＳｅｉｋａｋａｇｕ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに同時譲渡された米国特許６，０１１，１３８でＲｅｆｆ他により報告されているヒトＣＤ２３に対して特異的な霊長類化（登録商標）抗体が含まれる。他の抗ＣＤ２３抗体及び抗体フラグメントには、Ｂｏｎｎｅｆｏｙ他、Ｎｏ．９６１２７４１；Ｒｅｃｔｏｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：４８１〜４８８（１９８５）；Ｆｌｏｒｅｓ−Ｒｕｍｅｏ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４１：１０３８〜１０４６（１９９３）；Ｓｈｅｒｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：４８１〜４８９（１９８９）；及びＰｅｎｅ他、ＰＮＡＳ、ＵＳＡ８５：６８２０〜６８２４（１９８８）により報告されている抗体及び抗体フラグメントが含まれる。報告によれば、このような抗体はアレルギー、自己免疫疾患、及び炎症性疾患の治療に有用である。
【００７０】
本明細書の用語「リツキシマブ」すなわち「リツキサン（登録商標）」は、遺伝学的に設計され、ＣＤ２０抗原を対象とするキメラ・マウス／ヒト・モノクローナル抗体を指し、参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，Ｂ７号では「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれている。この抗体は、マウス軽鎖及び重鎖可変領域配列及びヒト定常領域配列を含むＩｇＧＩカッパ免疫グロブリンである。リツキシマブは、ＣＤ２０抗原に対し約８．０ｎＭの結合親和性を有する。
【００７１】
「単離された」アンタゴニストは、特定され、その自然環境の成分から分離かつ／又は回収されたアンタゴニストである。その自然環境の混入物成分は、アンタゴニストを診断又は治療上で使用するのを妨害すると思われる材料であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質が含まれる。好ましい実施形態では、アンタゴニストは、（１）Ｌｏｗｒｙ法による測定で９５重量％を超え、最も好ましくは９９重量％を超えるまで、（２）スピニング・カップ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ　ｃｕｐ）配列決定装置を使用することによりＮ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）クーマシー・ブルー又は、好ましくは銀染色を用いる還元又は非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離されたアンタゴニストに組換え細胞中のｉｎ　ｓｉｔｕのアンタゴニストが含まれるのは、アンタゴニストの自然環境のうち少なくとも１成分が存在しないからである。しかしながら、通常は単離されたアンタゴニストは少なくとも１つの精製ステップにより調製する。
【００７２】
治療を目的とする「哺乳動物」は、哺乳動物として分類されるいかなる動物も指し、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎｉｍａｌ）及び家畜（ｆａｒｍ　ａｎｉｍａｌ）、並びにイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの動物園、スポーツ又はペットの動物が含まれる。哺乳動物はヒトであることが好ましい。
【００７３】
「治療」は、治療上の処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置を共に指す。治療を必要とするヒトには、すでに疾患又は障害を有するヒト並びに疾患又は障害が予防されなければならないヒトが含まれる。したがって、哺乳動物は、疾患もしくは障害があると診断されていても、疾患に罹患しやすいもしくは感受性が強くてもよい。
【００７４】
表現「治療上有効な量」は、当該自己免疫疾患の予防、寛解又は治療に有効なアンタゴニストの量を指す。
【００７５】
補助療法として本明細書で用いる用語「免疫抑制剤」は、本明細書で治療される哺乳動物の免疫系を抑制又はマスクする働きをする物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制し、自己抗原をダウンレギュレート又は抑制し、又はＭＨＣ抗原をマスクする物質が含まれる。このような薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（その開示を参照により本明細書に組み込む米国特許第４，６６５，０７７号を参照）、アザチオプリン；シクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載のようにＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣフラグメントの抗イディオタイプの抗体；シクロスポリンＡ；グルココルチコステロイドなどのステロイド、例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；抗インターフェロンα、β又はδ抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン２抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体を含むサイトカイン又はサイトカイン受容体アンタゴニスト；抗ＣＤ１　１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；汎Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３又は抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（７／２６／９０公開のＷＯ９０／０８１８７）、ストレプトラナーゼ（ｓｔｒｅｐｔｏｌａｎａｓｅ）；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡ又はＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎ他、米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；Ｌａｎｅｗａｙ、Ｎａｔｕｒｅ　３４１：４８２（１９８９）；及びＷＯ９１／０１１３３）；及びＴ１０Ｂ９などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が含まれる。
【００７６】
本明細書で用いる用語「細胞毒性剤」は、細胞の機能を阻害又は妨げかつ／又は細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１　１１３１　１１２５　Ｙ９ｏ　Ｒｅ　１８６　Ｒｅ　ｌｇ８　ｓＭ１５３　Ｂｉ２１２　ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物もしくは動物起源の小分子の毒素もしくは酵素的に活性な毒素、又はその断片が含まれる。
【００７７】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポサルファンなどのアルキル・スルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）及びトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）キロラムブシル（ｃｈｉｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン・オキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシル・マスタードなどのナイトロジェン・マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソ尿素；アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチェアミシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニベクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類縁体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミヂン類縁体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの副腎皮質抑制剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン（ｆｒｏｌｉｎｉｃ）酸などの葉酸補充物；アセグラトン；アルドホスファミド・グリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクォン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトガゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ）酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトル；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）及びドキセタキセル（タキソテール、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ　Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＧＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；及び上記のいずれかの薬剤として許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。また、この定義には、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼを阻害する４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、及びトレミフェンを含む抗エストロゲン；フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；及び上記のいずれかの薬剤として許容される塩、酸又は誘導体も含まれる。
【００７８】
用語「サイトカイン」は、一細胞母集団によって放出され、細胞間メディエータとして他の細胞に作用するタンパク質の総称である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び従来のポリペプチド・ホルモンである。サイトカインには、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニル・ヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子α及びβ；ミューラー阻害物質；マウス・ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−１３などの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、β、及びγなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−ｇ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−α又はＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；及びＬＩＦ及びキット・リガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で用いる用語サイトカインには、自然源由来又は組換え細胞培養液由来のタンパク質及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価体が含まれる。
【００７９】
本出願で用いる用語「プロドラッグ」は、もとの薬物に比べて腫瘍細胞に対する細胞傷害性が低く、酵素的に活性化されるか、より活性なもとの形態に変換されることが可能である、薬剤として活性な物質の前駆体又は誘導体を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、１４、ｐｐ．３７５−３８２、６１５ｔｈ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）及びＳｔｅｌｌａ他、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ他、（編）、ｐｐ．２４７−２６７、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。本発明のプロドラッグには、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、１３−ラクタム含有プロドラッグ；場合によって置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ又は場合によって置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン及びより活性な細胞傷害性遊離薬物に変換することができる他の５フルオロウリジン・プロドラッグが含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いるためにプロドラッグ体に誘導体化することができる細胞傷害性薬物の例には、前述の化学療法剤が含まれるが、それらに限定されるものではない。
【００８０】
「リポソーム」は、薬物（本明細書に開示されたアンタゴニスト及び、場合によっては化学療法剤）を哺乳動物に送達するのに有用な、様々なタイプの脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤からなる小胞である。リポソームの成分は、一般に生体膜の脂質配列と同様に二重層を形成するように配置する。
【００８１】
用語「添付文書」は、習慣的に治療薬の商業包装に含められる指示書を指すために用いられ、このような治療薬の使用法に関する適応、用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告についての情報を含む。
【００８２】
ＩＩ．抗体の製造
本発明の方法及び製品は、免疫調節活性を有する抗体、例えば抗Ｂ７、抗ＣＤ４０Ｌ又は抗ＣＤ４０、及びＢ枯渇活性を有し、Ｂ細胞表面マーカーと結合する抗体を使用、又は組み入れる。したがって、そのような抗体を作成する方法を本明細書に記載する。
【００８３】
抗原の製造又は抗原のスクリーニングに用いられる分子は、所望のエピトープを含む可溶性形態の抗原又はその一部であってもよい。あるいは、又はさらに、それらの細胞表面において抗原を発現する細胞を用い、アンタゴニストを作成したり、アンタゴニストをスクリーニングすることができる。アンタゴニストを作成するのに有用な他の形態のＢ細胞表面マーカーは当業者にとって明らかであろう。本発明による抗体を製造するためのＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３７及びＢ７（Ｂ７．１又はＢ７．２）に適している抗原供給源はよく知られている。
【００８４】
ＣＤ４０Ｌ抗体又は抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、１９９９年６月１４日に発行され、ＩＤＥＣ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された米国特許６，００１，３５８に開示されているヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体であることが好ましい。
【００８５】
好ましいＣＤ４０Ｌアンタゴニストは抗体であるが、抗体以外のアンタゴニストも本明細書に企図されている。例えば、アンタゴニストは、可溶性ＣＤ４０、ＣＤ４０融合タンパク質又は場合により細胞毒性剤（本明細書に記載した細胞毒性剤など）と複合又は融合した小さな分子のアンタゴニストを含むことができる。小さな分子のライブラリーを本明細書で関心のあるＢ細胞表面マーカーに対してスクリーニングすると、抗原と結合する小さな分子を特定することができる。さらに、小さな分子をそのアンタゴニスト特性についてスクリーニングしかつ／又は細胞毒性剤と複合させることができる。
【００８６】
また、アンタゴニストは、合理的な設計又はファージ・ディスプレイ（１９９８年８月１３日に公開されたＷ０９８／３５０３６）によって作成されたペプチドであってもよい。一実施形態では、最適な分子は、「ＣＤＲ模倣体（ｍｉｍｉｃ）」又は例えば抗体のＣＤＲに基づいて設計された抗体類似体であってもよい。ペプチドは単独でアンタゴニストであってもよいが、細胞毒性剤と、又は免疫グロブリンＦｃ領域と場合により融合させて（例えば、ペプチドにＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ活性を付与することが）できる。
【００８７】
本発明により用いられる抗体を製造するための例示的技法に関する説明を次に述べる。
【００８８】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、複数回の関連抗原及びアジュバントの皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射により動物で作製することが好ましい。免疫すべき動物種において免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシ・サイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターに、二官能性又は誘導化剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基による結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基により）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（Ｒ及びＲ１は異なるアルキル基）を用いて関連抗原を結合させることが有用である。
【００８９】
例えば、タンパク質又は複合体１００μｇ又は５μｇ（それぞれ、ウサギ又はマウスの場合）を３倍量のフロイント完全アジュバントと混合し、複数の部位に溶液を皮内注射することにより、動物を抗原、免疫原性複合体、又は誘導体に対して免疫にする。１ヶ月後、フロイント完全アジュバントに溶かした当初の１／５から１／１０量のペプチド又は複合体で、複数部位に皮下注射して、動物を追加免疫する。７から１４日後、動物から採血し、抗体力価について血清をアッセイする。力価が頭打ちになるまで動物を追加免疫する。同一抗原の複合体であるが、異なるタンパク質及び／又は異なる架橋剤によって結合した複合体で動物を追加免疫することが好ましい。複合体はまた、タンパク質融合として組換え細胞培養で製造することができる。また、ミョウバンなどの凝集剤を適当に用い、免疫反応を亢進させる。
【００９０】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の母集団から得られ、すなわち母集団を含む個々の抗体は、少量存在する可能性のある天然に存在する突然変異を除いては同一である。したがって、修飾語の「モノクローナル」は、抗体の性質が個々の抗体の混合物ではないことを示す。
【００９１】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ法によって製造でき、又は組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって製造することができる。
【００９２】
ハイブリドーマ法では、マウス又はハムスターなどの他の適当な宿主動物を前述のように免疫化し、免疫化に用いられるタンパク質と特異的に結合する抗体を産生するか、産生することができるリンパ球を誘導する。あるいは、リンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏで免疫化してもよい。次いで、ポリエチレングリコールなどの適当な融合剤を用い、リンパ球を骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を生成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８６））。
【００９３】
このようにして得られたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞の成長又は生存を阻害する１種又は複数の物質を含むことが好ましい適当な培地中に播種し、培養する。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いている場合には、ハイブリドーマ用の培地は通常、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。
【００９４】
好ましい骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルな抗体の産生を支え、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である細胞である。これらの細胞のうち、好ましい骨髄腫細胞株は、Ｓａｌｋ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｃｅｌｌ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍、並びにＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞に由来するようなマウス骨髄腫系である。ヒト・モノクローナル抗体の産生については、ヒト骨髄腫及びマウス−ヒト・ヘテロ骨髄腫も記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００　１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９８７））。
【００９５】
抗原を対象とするモノクローナル抗体の産生について、ハイブリドーマ細胞が培養されている培地をアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける結合アッセイによって測定する。
【００９６】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ他、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０（１９８０）の３０回のスキャッチャード解析によって測定することができる。
【００９７】
所望の特異性、親和性及び／又は反応性の抗体を産生するハイブリドーマを特定した後、クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準法によって培養することができる（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８６）。この目的に適した培地には、例えばＤ−ＭＥＭ又はＲＰＭＬ−１６４０培地が含まれる。さらに、動物における腹水腫瘍として、ハイブリドーマ細胞をｉｎ　ｖｉｖｏで増殖させることができる。
【００９８】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシアパタイト・クロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティ・クロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン精製手順により、培地、腹水、又は血清から適当に分離する。
【００９９】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは容易に単離され、従来の手順を用いて配列決定される（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合することができるオリゴヌクレオチド・プローブを用いることにより）。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましいソースとして働く。単離したら、発現ベクター中にＤＮＡをセットし、次いで大腸菌細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などの、別な方法では免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成させる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総論には、Ｓｋｅｒｒａ他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６−２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。
【０１００】
他の実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技法を用いて作製した抗体ファージライブラリーから抗体又は抗体フラグメントを単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれファージライブラリーを用いるマウス及びヒト抗体の単離について記載している。次の公表文献は、チェーン・シャッフリング（ｃｈａｉｎ　ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｍａｒｋｓ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２））、並びに極めて大きなファージライブラリーを構築するための戦略としての組合せ感染及びｉｎ　ｖｉｖｏにおける組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ他、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２１：２２６５−２２６６（１９９３））による高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生について記載している。したがって、これらの技法は、モノクローナル抗体を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技法の実行可能な代替法である。
【０１０１】
また、例えば、相同的なマウス配列をヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ．ＳｃＬ　ＵＳＡ　８１：６８５１（１９８４））、又は免疫グロブリン・コード配列すべてもしくは非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の一部に共有結合させることによりＤＮＡを修飾することができる。
【０１０２】
通常、このような非免疫グロブリンポリペプチドで抗体の定常ドメインを置換するか、抗体の一抗原結合部位の可変ドメインを置換し、抗原に対して特異性を有する１種の抗原結合部位及び異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。
【０１０３】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
ヒト以外の抗体をヒト化する方法は、当技術分野で記載されてきた。ヒト化抗体は、ヒト以外であるソースからヒト化抗体に導入された１種又は複数のアミノ酸残基を有することが好ましい。これらのヒト以外のアミノ酸残基は、しばしば「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれ、通常は「輸入」可変ドメインから選ばれる。ヒト化は、基本的にＷｉｎｔｅｒ及び共同研究者（Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ　３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従い、超可変領域配列で対応するヒト抗体の配列を置き換えることによって行うことができる。したがって、このような「ヒト化抗体」はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、実質的に原型とは言えないヒト可変ドメインは、対応するヒト以外の種に由来する配列によって置換されている。実際、ヒト化抗体は、通常一部の超可変領域配列及びおそらく一部のＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似の部位に由来する残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１０４】
ヒト化抗体を作製するのに用いられる軽鎖及び重鎖のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減らすのに極めて重要である。いわゆる「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従い、齧歯類抗体の可変領域の配列を、知られているヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーについてスクリーニングする。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体用のヒト・フレームワーク領域（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｕｎｓ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を用いる。いくつかの異なるヒト化抗体に対して同一のフレームワークを用いることができる（Ｃａｒｔｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））。
【０１０５】
さらに重要なのは、抗原に対する高い親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持しつつ抗体をヒト化することである。この目標を達成するためには、好ましい方法に従い、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列及び様々な概念的ヒト化生成物の解析プロセスにより、ヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用でき、当業者にはよく知られている。選択された免疫グロブリン配列候補の予想される三次元コンホメーション構造を図示及び表示するコンピュータ・プログラムが利用できる。これらの表示を検討することにより、免疫グロブリン配列候補が機能する際に考え得る残基の役割の解析、特に免疫グロブリン候補がその抗原と結合する能力に影響を及ぼす残基の解析が可能になる。このようにして、標的抗原に対する親和性の増加などの望ましい抗体特性が達成されるように、レシピエント及び輸入配列からＦＲ残基を選択及び組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基が、抗原結合に影響を及ぼすことに直接かつ最も実質的に関与する。
【０１０６】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化の代替法として、ヒト抗体を作製することできる。例えば、免疫化により、内因性の免疫グロブリン産生がない状態でヒト抗体のすべてのレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を生み出すことが今や可能である。例えば、キメラ及び構造遺伝子変異マウスにおける抗体重鎖結合領域ＰＨ）遺伝子の同型接合的な欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような構造遺伝子変異マウスにおけるヒト生殖細胞免疫グロブリン遺伝子配列の移動は、抗原チャレンジによるヒト抗体の産生をもたらすはずである。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ他、Ｐｒｏｃ．Ｍａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：２５５　１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ他、Ｎａｔｕｒｅ　３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ他、Ｙｅａｒ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏ．７：３３（１９９３）；並びに米国特許第５，５９１，６６９号、第５，５８９，３６９号及び第５，５４５，８０７号を参照されたい。
【０１０７】
あるいは、ファージ・ディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５４（１９９０））を用い、非免疫化ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでヒト抗体及び抗体フラグメントを製造することができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３又はｆｄなどの糸状バクテリオファージの主要又は副次コート・タンパク質遺伝子中にフレーム単位でクローニングし、ファージ粒子の表面上の機能性抗体フラグメントとして発現させる。糸状粒子はファージ・ゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能性に基づく選択は、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択にもつながる。すなわち、ファージは、Ｂ細胞の特性の一部を模倣する。ファージ・ディスプレイは、様々なフォーマットで行うことができる。それらの総説に関しては、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｋｅｖｉｎ　Ｓ．及びＣｈｉｓｗｅｌｌ、Ｄａｖｉｄ　Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　３：５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。ファージ・ディスプレイにはいくつかのＶ遺伝子セグメント源を用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダム組合せライブラリーから様々な抗オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒト・ドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築し、様々な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を、基本的にＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、又はＧｒｉｆｆｉｔｈ他、ＥＭＢＯ　Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載された技法に従って単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び第５，５７３，９０５号も参照されたい。
【０１０８】
また、ヒト抗体は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏの活性化Ｂ細胞によって作製することができる（米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号を参照）。
【０１０９】
（ｖ）抗体フラグメント
抗体フラグメントの製造には様々な技法が開発されている。伝統的に、これらのフラグメントは、原型抗体のタンパク質分解性消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ他、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２４：１０７−１１７（１９９２）及びＢｒｅｎｎａｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：８１（１９８５）を参照）。しかしながら、現在これらのフラグメントは組換え宿主細胞により直接製造することができる。例えば、前述の抗体ファージ・ファイブラリーから抗体フラグメントを単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングさせてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成することができる（Ｃａｒｔｅｒ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　１０：１６３−１６７（１９９２））。別の手法に従い、組換え宿主細胞培養液からＦ（ａｂ’）２フラグメントを直接単離することができる。抗体フラグメントを製造するための他の技法は当業者に明らかである。他の実施形態では、最適な抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。また、抗体フラグメントは、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載の「リニア（ｌｉｎｅａｒ）抗体」であってもよい。このようなリニア抗体フラグメントは単一特異性又は二重特異性であってもよい。
【０１１０】
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種類の異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。典型的な二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２種類の異なるエピトープと結合することができる。他のこのような抗体は、第一のＢ細胞マーカーと結合し、さらに第二のＢ細胞表面マーカーと結合することができる。あるいは、Ｂ細胞に対する細胞性防御機構に集中するように、抗Ｂ細胞マーカー結合アームを、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２又はＣＤ３）、又はＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃｙＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃｙＲ）などの、白血球上のトリガ分子と結合するアームと組み合わせることができる。二重特異性抗体を用い、Ｂ細胞に細胞毒性剤を局在化させることもできる。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカー結合アーム及び細胞毒性剤（例えば、サポニン、抗インターフェロンα、ビンカ・アルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン）と結合するアームを有している。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体フラグメントとして調製することができる（例えば、Ｆ（ａｂ）２二重特異性抗体）。
【０１１１】
二重特異性抗体を製造する方法は当技術分野で知られている。従来の完全長二重特異性抗体の製造は、２本の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、この場合、２本の鎖は異なる特異性を有している（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな組合せのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種類の異なる抗体分子の混合物を産生し、このうち１種類のみが正しい二重特異性構造を有している。正しい分子の精製は通常アフィニティ・クロマトグラフィ・ステップによって行われるが、どちらかと言えば面倒で、生成物収量も低い。同様の手順は、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ他、ＥＭＢＯ　Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１１２】
異なる手法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合する。この融合は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインによることが好ましい。少なくとも１種類の融合物中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含む最初の重鎖定常領域（ＣＨＩ）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物及び望ましい場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、別の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物体中に同時形質移入する。このことは、構築に用いる３種類のポリペプチド鎖の比が一様でないことが最適収量をもたらす実施形態において３種類のポリペプチド・フラグメントの相互の割合を調整する際に大きな柔軟性を提供する。しかしながら、少なくとも２種類のポリペプチド鎖が等しい比で発現すると高収量が得られるか比が特別の意味を持たない場合には、２種類又は３種類すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１種類の発現ベクター中に挿入することが可能である。
【０１１３】
この手法の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームにある第一の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他方のアームにあるハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第二の結合特異性を提供する）からなる。この非対称の構造が望ましくない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にするのは、二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリン軽鎖が存在することが容易な分離様式を提供するためであることが分かった。この手法はＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体を作製するための詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ他、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【０１１４】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別の手法によれば、一対の抗体分子間の境界面を設計して、組換え細胞培養液から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にすることができる。好ましい境界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第一の抗体分子の境界面からの１種又は複数の小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換える。大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニン又はスレオニン）で置き換えることにより、大きな側鎖と同一又は類似したサイズの代償的「空洞」を第二の抗体分子上に作製する。このことは、ホモ二量体などの他の望ましくない最終生成物上回ってヘテロ二量体の収量を増加するための機序を提供する。
【０１１５】
二重特異性抗体には、架橋又は「ヘテロ複合体」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ複合体における一方の抗体はアビジンと連結させ、他方はビオチンと連結させることができる。例えば、このような抗体は、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的とし（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染の治療用（ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３、及びＥＰ０３０８９）に提案されている。ヘテロ複合体抗体は、便利などのような架橋法を用いても製造することができる。適当な架橋剤は当技術分野ではよく知られており、多くの架橋技法と共に米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０１１６】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製する技法も文献中に記載されている。例えば、化学結合を用いて二重特異性抗体を調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：８１（１９８５）は、原型抗体をタンパク質分解的に切断してＦ（ａｂ’）２フラグメントを作製する手順について記載している。これらのフラグメントは、隣接ジチオールを安定化し分子間ジスルフィド形成を防ぐためのジチオール錯化剤砒酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで、生成したＦａｂ’フラグメントをチオニトロベンゼン（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一方をメルカプトエチルアミンで還元することによりＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混ぜて二重特異性抗体を生成する。製造した二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化用薬剤として使用することができる。
【０１１７】
最近の進歩は、大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接回収を容易にし、これを化学的にカップリングして二重特異性抗体を生成することができる。Ｓｈａｌａｂｙ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の製造について記載している。各Ｆａｂ’フラグメントは大腸菌から別々に分泌され、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける有向化学カップリングを受けて二重特異性抗体を生成した。このように生成した二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過発現する細胞及び正常なヒトＴ細胞と結合するばかりでなく、ヒト乳癌標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０１１８】
組換え細胞培養液から直接二重特異性抗体を製造及び単離する様々な技法も記載されている。例えば、ロイシン・ジッパーを用いて二重特異性抗体が製造されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。ヒンジ領域で抗体ホモ二量体を還元して単量体を生成させ、次いで再酸化して抗体ヘテロ二量体を生成させた。この方法は抗体ホモ二量体の製造にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを製造するためのもう１つの機序を提供した。これらのフラグメントは、同一の鎖上の２個のドメイン間で対になることができない長さのリンカーを用いることにより軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方のフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、他方のフラグメントの相補的ＶＨ及びＶＬドメインと対にならざるを得ないことにより、２種類の抗原結合部位が形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いることによる二重特異性抗体を製造する別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【０１１９】
３個以上の結合価を有する抗体も企図されている。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０１２０】
ＩＩＩ．アンタゴニストの複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）及び他の修飾
本明細書の方法で用いられる、又は本明細書の製品に含まれるアンタゴニストは、細胞毒性剤と場合により複合される。
【０１２１】
このようなアンタゴニスト−化学療法剤複合体の作製に有用な化学療法剤は上記に記載した。
【０１２２】
アンタゴニスト並びにカリチェアミシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、及びＣＣ１０６５などの１種又は複数の小さな分子毒素の複合体も本明細書では企図されている。本発明の好ましい一実施形態では、アンタゴニストを１個又は複数のメイタンシン分子と結合させる（例えば、アンタゴニスト分子１個当たり約１から約１０個のメイタンシン分子）。例えば、メイタンシンをＭａｙＳＳ−Ｍｅに変換し、それを還元してＭａｙ−ＳＨ３とし、修飾アンタゴニストと反応させて（Ｃｈａｒｍ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））メイタンシノイド−アンタゴニスト複合体を生成することができる。
【０１２３】
あるいは、アンタゴニストを１個又は複数のカリチェアミシン分子と結合させることができる。カリチェアミシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡの切断を引き起こすことができる。用いることができるカリチェアミシンの構造類縁体には、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチルγ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びＯ１Ｉが含まれるが、これらに限定されるものではない（Ｈｉｎｍａｎ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５３：３３３６−３３４２（１９９３）及びＬｏｄｅ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５８：２９２５−２９２８（１９９８））。
【０１２４】
用いることができる酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ・サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ　ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ゴーヤー（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテシンが含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。
【０１２５】
さらに、本発明は核酸分解（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ又はデオキシリボヌクレアーゼなどのＤＮＡエンドヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）と結合したアンタゴニストを企図している。
【０１２６】
放射性結合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）アンタゴニストの製造には、様々な放射性同位体が利用できる。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、ＲＥ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体が含まれる。
【０１２７】
アンタゴニストと細胞毒性剤の複合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリイルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルなどの二官能性誘導体（ジメチル・アジピミデート（ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）ＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミヂルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて製造することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３８：１０９８（１９８７）に記載のように調製することができる。炭素−１４−標識１イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレン・トリアミン５酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種とアンタゴニストを結合させる典型的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内の細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチル・リンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｍ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））を使用することができる。
【０１２８】
あるいは、アンタゴニスト及び細胞毒性剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え体技法又はペプチド合成によって製造することができる。
【０１２９】
さらに別の実施形態では、アンタゴニスト−受容体複合体を患者に投与し、続いて除去剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）を用いて未結合の複合体を循環から除去し、次いで細胞毒性剤（例えば、放射性ヌクレオチド）と結合した「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する腫瘍のプレターゲティング（ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）に利用するために、抗体を「受容体」（ストレプトアビジン）と結合させることができる。
【０１３０】
また、本発明のアンタゴニストは、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照）を活性な抗癌剤に変換するプロドラッグ活性化酵素と結合させることができる。例えば、ＷＯ８８／０７３７８及び米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。
【０１３１】
このような複合体の酵素成分には、プロドラッグをより活性な細胞傷害性の形態に変換するような方法でプロドラッグに作用することができるいずれの酵素も含まれる。
【０１３２】
本発明の方法で有用な酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリ・ホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性の５−フルオロシトシンを抗癌剤フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用である、セラチア・プロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、１３−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；１３−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用な１３−ラクタマーゼ；並びにペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼなどの、それぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基によりアミン窒素で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリン・アミダーゼが含まれるが、これらに限定されるものではない。あるいは、当技術分野では「アブザイム（ａｂｚｙｍｅｓ）」という別名でも知られる酵素活性を有する抗体を用い、本発明のプロドラッグを遊離の活性薬物に変換することができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ、Ｎａｔｕｒｅ　３２８：４５７−４５８（１９８７））。アブザイムを腫瘍細胞母集団へ送達するために、本明細書に記載のようにしてアンタゴニスト−アブザイム複合体を調製することができる。
【０１３３】
酵素は、前述のヘテロ二官能性架橋剤の使用などの当技術分野でよく知られている技法により、アンタゴニストと共有結合させることができる。あるいは、当技術分野でよく知られている組換えＤＮＡ技法を用い、少なくとも本発明の酵素の機能的に活性な部分と連結した、少なくとも本発明のアンタゴニストの抗原結合領域を含む融合タンパク質を構築することができる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照）。
【０１３４】
アンタゴニストの他の修飾も本明細書では企図されている。例えば、アンタゴニストを、様々な非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーの１つの連結させることができる。
【０１３５】
また、本明細書に開示された抗体をリポソームとして製剤化することができる。アンタゴニストを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号；並びに１９９７年１０月２３日公開のＷＯ９７／３８７３１に記載のような当技術分野で知られている方法によって調製される。循環時間が増加したリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１３６】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用い、逆相気化法によって作製することができる。規定の孔径のフィルターによりリポソームを押し出すと、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントを、ジスルフィド交換反応により、Ｍａｒｔｉｎ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載のようにリポソームと結合させることができる。場合により、化学療法剤がリポソーム中に入れられる。Ｇａｂｉｚｏｎ他、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）を参照されたい。
【０１３７】
本明細書に記載のタンパク質又はペプチドアンタゴニストのアミノ酸配列修飾が企図されている。例えば、アンタゴニストの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改良することが望ましい。アンタゴニストのアミノ酸配列変異体は、アンタゴニスト核酸に適当なヌクレオチド変化を導入することにより、又はペプチド合成によって調製される。このような修飾には、例えば、アンタゴニストのアミノ酸配列内の残基からの削除、及び／又は残基への挿入及び／又は残基の置換が含まれる。最終構築物に達するには削除、挿入、及び置換のいかなる組合せも行われるが、ただし最終構築物は所望の特性を有する。また、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置を変化することなどのアンタゴニストの翻訳後プロセスを変化させることがある。
【０１３８】
変異誘発に好ましい位置であるアンタゴニストの特定の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４４：１０８１−１０８５（１９８９）によって記載されたように「アラニン・スキャニング変異誘発」と呼ばれている。ここで、残基又は標的残基の群は特定されており（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）、中性又は負に荷電したアミノ酸（アラニン又はポリアラニンが最も好ましい）によって置き換えてアミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼす。次いで、置換部位に、又は置換部位用にさらに又は他の変異体を導入することにより、置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置を精製する。したがって、アミノ酸配列変化を導入する場所は予め決まられていても、変異自体の性質が予め決められる必要はない。例えば、所与の部位における変異の能力を分析するためには、標的コドン又は領域でａｌａスキャニング又はランダム変異誘発を行い、発現したアンタゴニスト変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０１３９】
アミノ酸配列挿入には、長さが１個の残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまで及ぶアミノ及び／又はカルボキシ末端融合物、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ−末端メチオニル残基を有するアンタゴニスト又は細胞傷害性ポリペプチドに融合したアンタゴニストが含まれる。アンタゴニスト分子の他の挿入変異体には、酵素のアンタゴニストのＮもしくはＣ末端、又はアンタゴニストの血清中半減期を増加するポリペプチドとの融合物が含まれる。
【０１４０】
別のタイプの変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、アンタゴニスト分子中に異なる残基によって置き換えられた少なくとも１個のアミノ酸残基を有する。抗体アンタゴニストの置換変異誘発にとって最も興味のある部位には超可変領域が含まれるが、ＦＲ変化も企図されている。表１には、「好ましい置換」という見出しの下に保存的置換を示す。このような置換が生物活性の変化をもたらす場合には、表１において「典型的置換」と呼ばれる、又はアミノ酸の種類に関して後述するようなより実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングすることができる。
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【０１４１】
アンタゴニストの生物学的特性における実質的な変化は、（ａ）置換の領域におけるポリペプチド主鎖の構造、例えばシートもしくはラセン立体配座、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の大きさを維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することによって行われる。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいていくつかの群に分けられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性ハイドロフィウイック（ｈｙｄｒｏｐｈｉｕｉｃ）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０１４２】
非保存的置換には、これらの種類のうち１つを別の種類で交換することが必要である。
【０１４３】
アンタゴニストの適切な立体配置を維持することに関与しないシステイン残基を、一般的にはセリンで置換し、分子の酸化的安定性を改善し異常な架橋を防ぐことができる。逆に、アンタゴニストにシステイン残基を付加し、アンタゴニストの安定性（特に、アンタゴニストがＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）を改善することができる。
【０１４４】
特に好ましいタイプの置換型変異体は、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１個又は複数の超可変領域を置換するものである。一般的に、さらなる開発のために選択される得られた変異体は、それらが作製された親抗体に比べて改善された生物学的特性を有する。このような置換型変異体を作製するための便利な方法は、ファージ・ディスプレイを用いる親和性変異である。手短に言えば、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させ、各部位にすべての可能なアミノ置換を作製する。このようにして作製された抗体変異体は、糸状ファージ粒子から一価の様式で、各粒子内に詰め込まれたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合物として呈示される。次いで、ファージ・ディスプレイされた変異体を、本明細書に開示する生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。修飾のための超可変領域部位候補を特定するために、アラニン・スキャニング変異誘発を行い、抗体結合に大きく寄与する超可変領域残基を特定することができる。あるいは、又はさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析し、抗体と抗原の接点を特定することが有益であることがある。このような接触残基及び隣接残基は、本明細書に記載の技法による置換の候補である。このような変異体が作製されたら変異体の一団を本明細書に記載のようにスクリーニングし、１種又は複数の関連アッセイで優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０１４５】
抗体の別のタイプのアミノ酸変異体は、アンタゴニストの原グリコシル化パターンを変更する。変更とは、アンタゴニスト中に見いだされる１個又は複数の炭水化物成分を除去すること、及び／又はアンタゴニスト中に存在しない１個又は複数のグリコシル化部位を付加することを意味する。
【０１４６】
ポリペプチドのグリコシル化は、通常Ｎ−結合型あるいはＯ−結合型である。Ｎ−結合型は、炭水化物成分のアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリンを除くすべてのアミノ酸である）は、炭水化物成分のアスパラギン側鎖との酵素的結合にとっての認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのいずれかのトリペプチド配列の存在は、潜在的なグリコシル化部位を生み出す。Ｏ−結合型グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースのうち１つと、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセイン（ｓｅｉｎｅ）又はスレオニンとの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも使用することができる。
【０１４７】
アンタゴニストへのグリコシル化部位の付加は、１個又は複数の前述のトリペプチド配列（Ｎ−結合型グリコシル化部位のための）を含むようにアミノ酸配列を変更することによって都合よく行われる。また、この変更は、原アンタゴニストの配列に１個又は複数のセイン又はスレオニン残基を付加することにより、又は１個又は複数のセイン又はスレオニン残基によって置換することにより行うことができる（Ｎ−結合型グリコシル化部位のための）。
【０１４８】
アンタゴニストのアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当技術分野で知られている様々な方法によって調製される。これらの方法には、天然ソースからの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、又はオリゴヌクレオチド媒介性（又は部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及び前に調製した変異体又はアンタゴニストの非変異体バージョンのカセット式変異誘発が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１４９】
本発明で用いる抗体を修飾してエフェクター機能を改善する、例えば、アンタゴニストの抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強することが望ましいことがある。これは、抗体アゴニストのＦｃ領域に１個又は複数のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。あるいは、又はさらに、１個又は複数のシステイン残基をＦｃ領域に導入することにより、この領域中で鎖間のジスルフィド結合形成を可能にすることができる。このようにして作製されたホモ二量体抗体は、改良された内在化能力、及び／又は増加した補体媒介性細胞死滅及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有することがある。Ｃａｒｏｎ他、Ｊ．Ｅｘｐ　Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）及びＳｈｏｐｅｓ、Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい。また、Ｗｏｌｆｆ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載のヘテロ二官能性架橋剤を用い、抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体を調製することができる。あるいは、二重のＦｃ領域を有し、それによって増強された補体溶解能及びＡＤＣＣ能力を有する可能性がある抗体を設計することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ他、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　３：２１９−２３０（１９８９）。
【０１５０】
アンタゴニストの血清中半減期を増加させるために、米国特許第５，７３９，２７７号に記載のように、アンタゴニスト（特に抗体フラグメント）中にサルベージ受容体結合エピトープを組み入れることができる。本明細書で用いる用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ　ｖｉｖｏにおける血清中半減期の増加を引き起こすＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧＩ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０１５１】
ＩＶ．薬剤製剤
本発明に従って使用されるアンタゴニストを含む治療用製剤は、所望の純度を有するアンタゴニストを、任意の薬剤として許容される坦体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編（１９８０））と混ぜることにより、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で保存のために調製される。許容される坦体、賦形剤、又は安定剤は、用いる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム・クロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジル・アルコール；メチル又はプロピル・パラベンなどのアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が含まれる。
【０１５２】
免疫調節性抗体又は抗体フラグメント及びＢ細胞枯渇抗体アンタゴニストは、同一製剤中又は異なる製剤中のどちらにあってもよい。投与は、同時又は連続して行うことができ、どちらの順序でも有効である。両抗体の連続投与によりこのような投与を長期間行うことができる。
【０１５３】
典型的な抗ＣＤ２０抗体の製剤は、参照により本明細書に組み込むＷＯ９８／５６４１８に記載されている。この刊行物は、ｐＨ５．０にて４０ｍｇ／ｍＬ　リツキシマブ、２５ｍＭアセテート、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジル・アルコール、０．０２％ポリソルベート２０を含み、２〜８℃で最少２年の保存期間を有する液体多用量（ｍｕｌｔｉｄｏｓｅ）製剤について記載している。別の抗ＣＤ２０製剤は、９．０ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムに溶かした１０ｍｇ／ｍＬ　リツキシマブ、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム２水和物、０．７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、及びｐＨ６．５の注射用滅菌水を含む。
【０１５４】
皮下投与に適した凍結乾燥製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、適当な希釈剤で再構成して高いタンパク質濃度とし、再構成された製剤を本明細書で治療すべき哺乳動物に皮下投与することができる。
【０１５５】
また、本明細書の製剤は、治療される特定の適応症に必要な２種類以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的活性を有する化合物を含むことができる。例えば、化学療法剤、サイトカイン又は免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリンなどのＴ細胞に作用する薬物、又はＴ細胞と結合する抗体、例えば、ＬＦＡ−１と結合する抗体）をさらに提供することが望ましいことがある。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するアンタゴニストの量、疾患又は障害又は治療のタイプ、及び前述の他の要素によって異なる。これらの薬剤は前に使用したのと同一の用量及び投与経路で用いるか、あるいは使用した用量の約１〜９９％が用いられる。
【０１５６】
また、活性成分は、例えば、３０コアセルベーション（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ、コロイド脱混合現象）技法、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン・ミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）、又はマイクロエマルジョン中に取り込むことができる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編（１９８０）に開示されている。
【０１５７】
徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の好適な例には、アンタゴニストを含む固形の疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、マトリックスは成形加工した部材、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、ノアール（ｎｏｉｒ）分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ　ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用マイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。ｉｎ　ｖｉｖｏの投与に用いられる製剤は無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通す濾過によって容易に行われる。
【０１５８】
Ｖ．Ｂ細胞枯渇抗体及び免疫調節性抗体による治療
Ｂ細胞枯渇抗体及び／又は免疫調節性抗体を含む１個又は複数の組成物を製剤化し、適量に分け、優良投薬規範（ｇｏｏｄ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｐｒａｃｔｉｃｅ）に合致する方法で投与する。これに関連して考慮する要素には、治療される特定の自己免疫疾患又は障害、治療される特定の哺乳動物、各患者の臨床症状、疾患もしくは障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与の計画、及び医者に知られている他の要素が含まれる。投与されるアンタゴニストの治療上有効な量は、このような考慮によって左右される。
【０１５９】
前述のように、Ｂ細胞枯渇抗体及び免疫調節性抗体は、同一製剤中又は異なる製剤中のどちらにあってもよい。これらの抗体は、別々に又は同時に、及びいずれの順序でも投与することができる。Ｂ細胞抗原標的、例えばＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２３又はＣＤ３７に対して特異的なＢ細胞枯渇抗体は、免疫調節性抗体、例えば抗ＣＤ４０Ｌ抗体又は抗ＣＤ４０、抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２抗体とは別々に投与することが好ましい。ＣＤ４０Ｌ抗体は、米国特許番号６，００１，３５８に開示されているヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体であることが好ましい。この抗体は、Ｔ細胞とＢ細胞の自己免疫疾患、例えば多発性硬化症とＩＴＰの両者を治療する際に有効性を有することが分かっている。また、Ｂｉｏｇｅｎにより報告されている別のヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体（５ｃ８）とは異なり、この抗体は有害な血液学的事象を引き起こさないことが知られている。
【０１６０】
一般的事柄として、投与１回につき非経口投与される抗体の治療上有効な量は、通常１日に患者の体重１ｋｇ当たり約０．１〜５００ｍｇの範囲であり、用いられるアンタゴニストの典型的初期範囲は約２〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０１６１】
好ましいＢ細胞枯渇抗体はリツキサン（登録商標）である。このような抗体に適した用量は、例えば、約２０ｍｇ／ｍ２から１０００ｍｇ／ｍ２までの範囲である。抗体の用量は、現在非ホジキンリンパ腫の治療に推奨されているリツキサン（登録商標）と同一又は異なっていてもよい。例えば、実質的に３７５ｍｇ／ｍ２未満の抗体、例えば投与量が約２０ｍｇ／ｍ２から約２５０ｍｇ／ｍ２まで、例えば約５０ｍｇ／ｍ２から約２００ｍｇ／ｍ２までの範囲で１回又は複数回患者に投与することができる。
【０１６２】
さらに、抗体の１回又は複数回の初期投与と、続く１回又は複数回のその後の投与を、その後の投与における抗体のｍｇ／ｍ２投与量が初期投与における抗体のｍｇ／ｍ２投与量を上回って投与することができる。例えば、初期投与が約２０ｍｇ／ｍ２から約２５０ｍｇ／ｍ２まで（例えば、約５０ｍｇ／ｍ２から約２００ｍｇ／ｍ２まで）の範囲であり、その後の投与が約２５０ｍｇ／ｍ２から約１０００ｍｇ／ｍ２までの範囲であってもよい。
【０１６３】
しかしながら、前述のように免疫調節性抗体の推奨量は共に、多くの治療的裁量を受けやすい。前述のように、適切な投与量及び計画を選択する際の重要な要素は得られる結果である。例えば、進行中及び急性の疾患を治療するには比較的高用量が初期には必要なことがある。最も有効な結果を得るため、自己免疫疾患もしくは障害に応じ、疾患もしくは障害の最初の徴候、診断、外観もしくは出現とできる限り近く、又は疾患もしくは障害の寛解中にアンタゴニストを投与する。
【０１６４】
抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内を含む任意の好適な手段、並びに局所免疫抑制治療が望ましい場合には病変内投与によって投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。さらに、パルス注入により、例えば抗体の投与量を減らしながら抗体を好適に投与することができる。投与は注射によるのが好ましく、静脈内又は皮下注射が最も好ましく、投与が短時間であるか長時間にわたるかに一部左右される。
【０１６５】
さらに、化学療法剤、免疫抑制剤及び／又はサイトカインを本明細書の抗体と一緒に投与することができる。併用投与には、別々の製剤又は単一の薬剤製剤を用いる同時投与、及びいずれかの順序による連続投与が含まれ、この場合、両者（又はすべての）活性薬剤がそれらの生物活性を同時に発揮する時期のあることが好ましい。
【０１６６】
抗体を患者に投与する他に、本出願は、遺伝子療法による抗体の投与を企図している。抗体をコードする核酸のこのような投与は、表現「治療上有効な量のアンタゴニストを投与すること」に包含される。例えば、細胞内抗体を生成するための遺伝子療法の使用法に関する１９９６年３月１４日公開のＷＯ９６／０７３２１を参照されたい。
【０１６７】
患者の細胞内に核酸（場合によりベクター中に含まれる）を入れるにはｉｎ　ｖｉｖｏ及びｅｘ　ｖｉｖｏという２種類の主要な手法がある。ｉｎ　ｖｉｖｏ送達の場合には、通常はアンタゴニストが必要な部位で核酸を直接患者に注射する。ｅｘ　ｖｉｖｏ治療の場合には、患者の細胞を取り出し、こられの単離細胞中に核酸を導入し、修飾細胞を直接、又は例えば、患者に埋め込まれた多孔質膜内に封入して投与する（例えば、米国特許第４，８９２，５３８号及び第５，２８３，１８７号を参照されたい）。核酸を生細胞中に導入するために利用できる様々な技法がある。これらの技法は、核酸がｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養細胞中に運ばれるか、ｉｎ　ｖｉｖｏで対象宿主の細胞中に運ばれるかによって異なる。ｉｎ　ｖｉｔｒｏで哺乳動物細胞中に核酸を運ぶのに適した技法には、リポソームの使用、電気穿孔法、微量注入法、細胞融合、ＤＥＡＦ−デキストラン、リン酸カルシウム沈降法などが含まれる。遺伝子のｅｘ　ｖｉｖｏ送達で一般的に使用されるベクターはレトロウイルスである。
【０１６８】
現在のところ好ましいｉｎ　ｖｉｖｏの核酸運搬技法には、ウイルス・ベクター（アデノウイルス、Ｉ型単純疱疹ウイルス、又はアデノ随伴ウイルス）によるトランスフェクション及び脂質をベースとする系（遺伝子の脂質媒介性運搬に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ及びＤＣ−Ｃｈｏｌである）が含まれる。ある状況では、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上の受容体のリガンドなどの、標的細胞を標的とする薬剤と共に核酸源を提供することが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスに関係する細胞表面膜タンパク質と結合するタンパク質、例えば、特定の細胞タイプ、循環中に内在化を受けるタンパク質、及び細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を増加させるタンパク質の抗体を刺激するカプシドタンパク質又はそのフラグメントを、標的化及び／又は取り込みを容易にするのに使用することができる。受容体媒介性エンドサイトーシスの技法は、例えば、Ｗｕ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ　２６２：４４２９−４４３２（１９８７）；及びＷａｇｎｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：３４１０−３４１４（１９９０）により記載されている。現在のところ知られている遺伝子マーキング及び遺伝子療法のプロトコルについての総説は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５６：８０８−８１３（１９９２）を参照されたい。ＷＯ９３／２５６７３も参照されたい。これらの参考文献を本明細書に引用する。
【０１６９】
ＶＩ．製品
本発明の別の実施形態では、前述の疾患又は障害の治療に有用な材料を含む製品を提供する。
【０１７０】
製品は、容器及び容器上又は容器に付属するラベル又は添付文書を含む。好適な容器には、例えば、瓶、バイアル、注射器などが含まれる。これらの容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から作製することができる。これらの容器は、疾患及び障害を治療するのに有効な組成物を保持又は含み、無菌の出入り口を有することができる（例えば、容器は、静脈注射用溶液袋又は皮下注射針によって穴を開けることができる栓を有するバイアルであってもよい）。全体としては、１つ又はいくつかの組成物であってもよい。これらの組成物のうち１つにおける少なくとも１種の活性薬剤は、Ｂ細胞枯渇活性を有する抗体であり、少なくとも１種の抗体は、抗ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ４、抗Ｂ７などの免疫調節性抗体である。ラベル又は添付文書は、この組成物が、前に列挙したような自己免疫疾患を有するか、それらにかかりやすい患者を治療するために用いられることを示す。さらに、製品は、静菌性の注射用の水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）及びデキストロース溶液などの薬剤として許容される緩衝液を含む第二の容器を含むことができる。さらに、製品は、商業的立場及び使用者の立場から所望され、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、及び注射器を含む他の材料を含むことができる。
【０１７１】
本発明の詳細を、以下の非限定的な実施例によりさらに説明する。明細書におけるすべての引用の開示を参照により本明細書に組み込む。
【０１７２】
実施例１
慢性関節リウマチ（ＲＡ）の臨床診断を受けた患者をまずリツキシマブ（リツキサン（登録商標））抗体で治療する。また、この患者は、Ｂ細胞枯渇抗体、すなわち悪性疾患を有しているかどうか分からない。さらに、この患者を場合により、サリチル酸塩（ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）；インドメタシン、フェニルブタゾン、フェニル酢酸誘導体（例えば、イブプロフェン及びフェノプロフェン）、ナフタレン酢酸誘導体（ナプロキセン）、ピロール・アルカン酸（トメチン（ｔｏｍｅｔｉｎ））、インドール酢酸（スリンダク）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフェナム酸ナトリウム）、ピロキシカム、ゾメピラック及びジフルニサルなどの非ステロイド抗炎症薬；クロロキンなどの抗マラリア薬；金塩；ペニシラミン；又はメトトレキセートもしくはコルチコステロイドなどの免疫抑制剤などのＲＡを治療するのに用いられる１個又は複数の薬剤により、このような薬物について知られている用量、又は少ない用量で治療する。しかしながら、この患者をリツキサン（登録商標）のみで治療することが好ましい。
【０１７３】
リツキサン（登録商標）は、以下の投与スケジュールのいずれかにより患者に静脈内（ＩＶ）投与する。
2004508420.tif 000003
【０１７４】
その後は、同一の投与計画により静脈内投与される米国特許番号６，００１，３５８に開示されているヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体で患者を治療する。
【０１７５】
一次応答は、Ｐａｕｌｕｓ指数（Ｐａｕｌｕｓ他Ａｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ．３３：４７７〜４８４（１９９０））、すなわち朝のこわばりの改善、有痛性及び炎症性関節数、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、並びに患者及び医師により評価される５ポイント・スケールの疾患重症度に関する少なくとも２ポイントの改善により判定した。リツキサン（登録商標）及び抗ＣＤ４０Ｌ抗体の投与は、前述のように治療した患者においてＲＡの１つ又は複数の症状を軽減するはずである。
【０１７６】
実施例２
自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、例えばクリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血と診断された患者をリツキサン（登録商標）抗体で治療する。ＡＩＨＡは、患者の赤血球と反応する自己抗体による後天性溶血性貧血である。治療を受ける患者が、場合によりＢ細胞悪性疾患にもかかっている恐れがある。患者をまず、ヒト化抗ヒトＣＤ４０Ｌ抗体を含有し、ＩＶにより５００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される組成物で治療する。この用量を合計４週間、週に２回投与する。
【０１７７】
その後は、以下の投与スケジュールのいずれかによりリツキサン（登録商標）を患者に静脈内（ＩＶ）投与する。
2004508420.tif 000004
【０１７８】
別の補助療法（糖質コルチコイド、プレドニゾン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ビンカ含有（ｖｉｎｃａ−ｌａｄｅｎ）血小板又はダナゾールなど）を抗ＣＤ４０Ｌ抗体及びリツキサン（登録商標）療法と組み合わせてもよい。治療の初めから終わりまで、リツキサン（登録商標）及び唯一の他剤として上記実施例と同一の抗ＣＤ４０Ｌ抗体により患者を治療することが好ましい。
【０１７９】
総合有効率（ｏｖｅｒａｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｒａｔｅ）は、血球カウント数の改善、輸血の必要性低下、ヘモグロビン濃度の改善及び／又は標準的化学パラメータによって判定される溶血の証拠の減少に基づいて判定される。抗ＣＤ４０Ｌ抗体及びリツキサン（登録商標）の投与は、前述のように治療した患者において溶血性貧血のいずれか１つ又は複数の症状を軽減するはずである。
【０１８０】
実施例３
成人性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）は、最も多く見られる免疫性血球減少を構成する比較的まれな血液障害である。この疾患は通常、骨髄における正常から増加した巨核球の存在下に急性出血に伴うことがある重篤な血小板減少症を示す。大部分のＩＴＰ患者は、血小板膜の外面上の標的抗原を対象とし、脾臓における血小板減少（ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）及び血小板の細網内皮性破壊の加速をもたらすＩｇＧ抗体を有している（Ｂｕｓｓｅｌｌ、Ｊ．Ｂ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ　Ａｍ．（４）：１７９（１９９０））。ＩＴＰの治療では、多くの治療的介入が有効であることが分かっている。一般的にはステロイド剤が第一選択療法と考えられており、その後は、大部分の患者が静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、脾臓摘出、又はビンクリスチンもしくは免疫抑制剤／細胞毒性剤を含む他の薬物療法の候補者である。初めは、ＩＴＰ患者の８０％までは一連のステロイド剤に反応するが、完全かつ永続的に寛解する患者はかなり少ない。ステロイド剤が無効な場合には標準的第二選択療法として脾臓摘出が推奨されており、持続性の寛解につながるが、症例のほぼ６０％では、感染に対する免疫低下につながることがある。脾臓摘出は主要な外科的措置であるが、実質的罹患率（１５％）と死亡率（２％）を伴うことがある。ＩＶＩＧも第二選択の薬物療法として用いられているが、寛解に達するのは成人ＩＴＰ患者のほんの一部に過ぎない。
【０１８１】
コルチコステロイド及び／又は脾臓摘出に伴って生じる罹患なしに活性化Ｂ細胞による自己抗体の産生を妨害する治療の選択肢は、ある割合のＩＴＰ患者にとって重要な治療手法を提供するであろう。
【０１８２】
臨床的にＩＴＰ（例えば、血小板数７５，０００／μＬ未満）と診断された患者を、リツキマブ（リツキサン（登録商標））抗体で、場合によりステロイド療法と組み合わせて治療する。治療する患者はＢ細胞悪性疾患を有していない。
【０１８３】
以下の投与スケジュールのいずれかによりリツキサン（登録商標）をＩＴＰ患者に静脈内（ＩＶ）投与する。
2004508420.tif 000005
【０１８４】
リツキサン（登録商標）投与と同時に、参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許番号６，１１３，８９８に開示されている霊長類化抗Ｂ７．１抗体の１つで患者を治療する。抗Ｂ７．１抗体は、３週間、週に２回、５００ｍｇ／ｍ２の用量で別々の製剤として静脈内投与する。
【０１８５】
リツキサン（登録商標）及び抗Ｂ７．１抗体組成物の注入に先立ち、静脈内でジフェンヒドラミン２５〜５０ｍｇを、経口でアセトアミノフェン６５０ｍｇを各々１回患者に前投薬する。殺菌した注射器及び２１ゲージ以上の針を用い、滅菌した発熱物質を含まない０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ（食塩溶液）が入ったＩＶバッグ中に必要量のリツキサン（登録商標）及び抗Ｂ７．１抗体をバイアルから移す。リツキサン（登録商標）及びＢ７．１抗体の最終濃度は約１ｍｇ／ｍＬである。最初の３０分間は２５ｍｇ／時間で初回量の注入速度を開始し、次いで３０分の間隔で５０ｍｇ／時間ずつ最大速度２００ｍｇ／時間まで増加させる。リツキサン（登録商標）及びＢ７．１抗体の最初のコースで忍容性が良好である場合には、次のコースの注入速度は５０ｍｇ／時間で開始し、３０分の間隔で１００ｍｇ／時間ずつ３００ｍｇ／時間を超えない最大速度まで増加させる。バイタル・サイン（血圧、脈拍、呼吸、体温）が安定するまで１５分ごとに４回、次いで注入が完了するまで１時間毎にモニターする。
【０１８６】
総合有効率は、リツキサン（登録商標）の４回にわたる毎週の治療及びＢ７抗体組成物の３週間の投与が終了して２週間後に連続して２回測定する血小板数に基づいて判定する。抗Ｂ７．１抗体及びリツキサン（登録商標）で治療した患者は、プラセボで治療した患者に比べて血小板数の改善を示すはずである。
【０１８７】
実施例及び好ましい実施形態の点から本発明について説明してきたが、上記の説明から当技術分野で示された変更形態に加えて、本発明の様々な変更形態が本発明の範囲に含まれる。そのような変更形態は、以下の特許請求の範囲に含まれることを意図している。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004508420.tif 000065
【国際調査報告】
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