(57)【要約】カーボン表面を有し、そして造影剤を含む微小粒子を用いて、組織をマーキングする方法を記載する。好ましい微小粒子は、不変的に放射線不透過性の基材及び熱分解カーボン表面を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出可能な微小粒子を組織部位に送達し、そして当該微小粒子を検出すること、を含んで成る組織マーキングのための方法。
【請求項２】
微小粒子が１又は複数の放射線不透過性材料を含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
放射線不透過性材料がチタニウム、酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム、又はそれらの混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
微小粒子が基材及び放射線不透過性コーティングを含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
微小粒子が放射線不透過性基材及びコーティングを含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
微小粒子の横断面の平均寸法が１００〜１０００ミクロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
微小粒子の横断面の平均寸法が２５１〜３００ミクロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
微小粒子が、当該微小粒子を運び、そして送達するために、生体適合性担体において運ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
皮下注射針を用いて微小粒子を注射することを含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
Ｘ線撮影又は蛍光透視を用いて微小粒子を検出することを含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
生検部位をマーキングする方法であって、
生検を行い、そして
皮下注射針を介して注射した検出可能な微小粒子を用いて、生検部位をマーキングすること、
を含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
背景
組織マーキングは、体内の部位又は位置をマーキングする方法であって、後になって病気の進行又は発生及び処置について調べるために前記位置の再訪を可能にし、あるいは同一部位の再処置を可能にする方法である。組織マーキングは、生検又は他の組織摘出過程の間、所望により、処置する者が後になって同一の部位に戻ることを可能にする目的で、組織の摘出部位又は生検を正確にマーキングするために使用され得る。
【０００２】
その様な組織マーキングは、結腸又は直腸生検又は組織の摘出、前立腺生検、又は乳房生検に関連する過程に有用である。具体的には、乳房生検に関して、それは現代の乳房生検において、生検の間に摘出され得る病変の全ての証拠にとって珍しいことではない。組織の痕跡を全て摘出することは、当該部位に由来する特徴を同定することも取り除き、そして後になって当該部位を再検査するために同じ場所に戻ることを困難にする。コア生検の間の潜在的に悪性の乳房の塊又は微小石灰化の塊の除去によって作り出されるこのジレンマは、生検直後にＸ線写真で見えるマーカーを据えることによって改善され得る。当該マーカーは、最初の病変と関連する乳房Ｘ線撮影による発見を完全に除いたとしても悪性が決定される場合に、生検部位の場所を特定するのを助けるのに使用され得る。
【０００３】
１つの局在化又はマーキング方法として、生検装置の１１〜１４ゲージプローブを介して金属性クリップ（例えば、Ｂｉｏｐｓｙｓ　Ｍｅｄｉｃａｌの、商品名Ｍｉｃｒｏｍａｒｋ（商標）のもとで販売されているクリップ）を据え、そして生検の場所をマーキングするために、生検の部位にクリップを取り付けることが挙げられる。これらのクリップは直径約３ｍｍであり、そして不変であり、かつ放射線不透過性である。マーキングクリップの使用は、Ｂｕｒｂａｎｋ ｅｔ． ａｌ．，“Ｔｉｓｓｕｅ Ｍａｒｋｉｎｇ Ｃｌｉｐ ｆｏｒ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｂｒｅａｓｔ Ｂｉｏｐｓｙ ： Ｉｎｉｔｉａｌ Ｐｌａｃｅｍｅｎｔ Ａｃｃｕｒａｃｙ， Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ， ａｎｄ Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ａｓ ａ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｗｉｒｅ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ，”Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９７； ２０５ ： ４０７−４１５； ａｎｄ Ｌｉｂｅｒｍａｎ ｅｔ． ａｌ．，“Ｃｌｉｐ Ｐｌａｃｅｍｅｎｔ Ａｆｔｅｒ Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ Ｖａｃｕｕｍ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｂｉｏｐｓｙ，”Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ， １９９７； ２０５ ： ４１７−４２２に記載されている。
【０００４】
組織マーキングについての別の応用例は前立腺生検である。前立腺における最初の生検は、完全に決定力のあるものではないことが認識されている。Ｊｏｎａｔｈａｎ Ｉ．，“Ａｒｅ Ｙｏｕ Ｇｅｔｔｉｎｇ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｙｏｕｒ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｎｅｅｄｌｅ Ｂｉｏｐｓｙ？”Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ Ｕｒｏｌｏｇｙ， １０６， Ａｐｒｉｌ １９９９を参照のこと。組織マーキングは、決定力のない最初の生検の組織が進行性疾患についてモニタリングされ、そして必要により、追跡生検が最初の生検の部位で行われ得ることを保証し得る。
【０００５】
組織マーキング又は局在化の他の方法は、Ｆａｊａｒｄｏ ｅｔ． ａｌ．，“Ｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ Ｍｉｃｒｏｃｏｉｌｓ ｔｏ Ｌｏｃａｌｉｚｅ ｔｈｅ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｂｒｅａｓｔ Ｌｅｓｉｏｎｓ Ｒｅｍｏｖａｌ ａｔ Ｓｔｅｒｏｔａｃｔｉｃ Ｃｏｒｅ Ｂｉｏｐｓｙ，”Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ， １９９８， ２０６ ： ２７５−２７８， Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ｅｔ． ａｌ．，“Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎ−Ｐａｌｐａｂｌｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｌｅｓｉｏｎｓ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｗｉｒｅ Ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄ Ｍａｍｍｏｇｒａｐｈｉｃ Ｇｒｉｄ，”Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １４６ ： ８３３−８３５， Ｍａｒｃｈ １９８３ 並びに米国特許第４，３４１，２２０号及び第５，６６５，０９２号に記載されている。
【０００６】
本発明の要約
本発明は組織マーキングの方法を提供する。当該方法は、後の検出のために組織の部位に運ばれる、検出可能な、好ましくは放射線不透過性の粒子の使用を含む。当該粒子は、好ましくは皮下注射針及び注射器、又は別の類似の器具を用いる注射によって所望の部位に、あるいは生検プローブを用いて経皮的に体内に送達され得る。微小粒子は、横断面の寸法が、好ましくは約１００〜１０００ミクロン、更に好ましくは約２００〜５００ミクロン、そして最も好ましくは約２５１〜約３００ミクロンの範囲の平均サイズのものであってもよい。当該微小粒子は、好ましくは不変的に放射線不透過性であることもあり、そして任意にカーボンコーティングを含んで成ることもある。
【０００７】
任意なカーボン表面は、薄いコーティング又はフィルムとして粒子基材上にコーティングされ、その結果として高度に生体適合性のカーボン表面を有する粒子が作り出され得る。要求されない場合、熱分解カーボンが好ましいと思われる。
【０００８】
当該粒子基材は、必要ではないが、生体適合性であることがあり、そして温度の上昇を含むことがある、当該基材上にカーボン表面をコーティングするための方法の条件に耐えることができなければならない。特に好ましい態様において、粒子基材は放射線不透過性であり、最も好ましくは不変的に放射線不透過性であると思われる。例示的な放射線不透過性材料は、金属及び酸化金属、例えば酸化ジルコニウム及び酸化アルミニウム、金、チタニウム、銀、ステンレス鋼、それらの酸化物及び合金を含み得る。
【０００９】
前記微小粒子は、所望の組織部位に微小粒子を送達することができる、生物学的に適合性のある任意な材料、例えば生物学的に適合性のある懸濁液、溶液、又は他の液体若しくはゲルの形態であってもよい液体担体を用いて送達され得る。生物学的に適合性のある担体において有用な材料の例は、塩溶液、デキストラン、グリセロール、ポリエチレングリコール、コーン油又はベニバナ油、他の多糖又は生体適合性ポリマー、メチルセルロース、グルカン、アガロースを、単独で又は組み合わせて含む。
【００１０】
好ましくは皮下注射針及び注射器又は類似の器具を介して注射することによる、組織マーキング方法における微小粒子の使用は、他の組織マーキング方法以上の利点を有している。例えば、注射針及び注射器を用いる微小粒子の送達は、所望の組織部位に対する微小粒子マーカーの非常に正確な送達を可能にする；このことは、生検を行うのに使用する生検プローブが、最初に生検シースを動かすことなく、組織マーキングのための微小粒子の送達を補助するために使用される場合には正しい。更に、微小粒子は、他のタイプの組織マーカーが使用されない、又は使用され得ない組織の場所において使用され得る。例えば、複数の組織の場所、例えば結腸又は直腸には、マーキングクリップを使用することができないが、有効なマーキングのために、これらの場所に微小粒子を送達することは可能である。更に、微小粒子の好ましい態様は不変的に放射線不透過性であり得る。不変的に放射線不透過性の粒子の場所は、当該放射線不透過性微小粒子が体内に留まる限り、既知の方法によってモニタリングされ得る。
【００１１】
本開示の目的のために、以下の用語は以下の意味を与えられるべきである。
【００１２】
用語「生体適合性」は、適用される量で、患者において内部で使用される場合に非毒性であり、かつ実質的に非免疫原性であり、そして血液中で実質的に不溶性である材料を言及する。適当な生体適合性材料は、セラミック、金属及び酸化金属、例えばチタニウム、金、銀、ステンレス鋼、それらの酸化物、酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム又はカーボン、例えば熱分解性の、低温又は超低温の等方性カーボンを含む。
【００１３】
用語「検出可能」は、材料をモニタリングし、そして検出するのに一般的に使用される方法、例えば磁気共鳴、Ｘ線、超音波、マグネットトモグラフィー、電気インピーダンスイメージング、ライトイメージング（例えば共焦点顕微鏡及び蛍光イメージング）及び放射性イメージング（例えばシンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ及びＰＥＴ）によって患者に注射する間又は注射した後に検出することができる材料を言及する。例として、コントラスト促進剤、例えば放射線不透過性材料が挙げられる。コントラスト促進剤は、水溶性又は非水溶性のいずれであってもよい。水溶性放射線不透過性材料の例は、メトリザミド、イオパミドール、ヨータラム酸ナトリウム、ヨードミド（ｉｏｄｏｍｉｄｅ）ナトリウム、及びメグルミンを含む。非水溶性放射線不透過性材料の例は、金属及び酸化金属を含む。
【００１４】
詳細な説明
本発明は、何らかの理由で組織をマーキングする方法であって、例えば組織の摘出（結腸又は直腸由来のポリープの摘出）の部位をマーキングするための、生検（乳房生検、前立腺生検、結腸生検、又は直腸生検）の部位をマーキングするための、又は任意な他の医療処置の部位をマーキングするための方法を提供する。組織は、病状又は処置の進行をモニタリングし、又はその後に同一部位で生検を行うためにマーキングされ得る。更に、検出可能な微小粒子は、放射線ビームが正確に方向づけられ得る部位又は付近で標的として働くために、組織部位に送達され得る。
【００１５】
本発明は、好ましくは生体適合性でもある、検出可能な微小粒子を用いて組織部位をマーキングすることに関する。当該微小粒子は、微小粒子をトラッキングさせ、モニタリングさせ、又はさもなければ既知の方法、例えばＸ線撮影又は蛍光透視によって検出させる複数の検出可能な成分（いくつかの周知の検出可能成分は「コントラスト促進剤」と称されている）を含む。当該検出可能な成分は、所望のイメージング療法（例えば磁気共鳴、Ｘ線、超音波、マグネットトモグラフィー、電子インピーダンスイメージング、ライトイメージング（例えば共焦点顕微鏡及び蛍光イメージング）及び放射性イメージング（例えばシンチグラフィー、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ））においてコントラストを促進することができる任意な材料であってもよい。コントラスト促進剤は医療の業界で周知であり、多くのその様なコントラスト促進剤のいずれかが本発明の方法に従う使用に適している。
【００１６】
検出可能な成分は、好ましくは微小粒子内に事実上固定化することができ、そして様々な方法のうちのいずれかでの組織マーキングにおける使用のための微小粒子内に、例えば粒子基材の一部に、表面コーティングに、表面コーティング、例えばカーボンコーティングに対する添加物に、又は他のどこかに組み込まれ得る。検出可能な成分は、放射線不透過性ではない材料に加えられ得る。当該検出可能な成分は、既知な方法によって微小粒子の任意な場所又は部分において提供され得る。
【００１７】
本発明の態様に従い、微小粒子は、組織部位への送達後に体内で検出され得る不変的に放射線不透過性の材料を含んで成る。不変的な放射線不透過性は、数日ないし数週間、例えば７〜１４日間で生物分解し、又は他の方法でそれらの有効性（検出可能性又は放射線不透過性）を失うコントラスト促進剤又は放射線不透過性材料と異なる。不変的な放射線不透過性材料の利点は、それらが体内に留まる限り検出され得ることであり、一方、不変的ではない放射線不透過性材料又は他の型のコントラスト促進剤は、限定された時間のみ検出可能である。Ｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ と題され、そして２０００年６月２３日に出願された同時係属出願である、米国特許出願番号第０９／６０２，３２３号を参照のこと。
【００１８】
放射線不透過性材料のいくつかの例として、常磁性材料（例えば、不変のフリーラジカル）並びに常磁性金属（例えば遷移金属又はランタニドイオン）の化合物、塩及び錯体；重原子化合物（すなわち３７又はそれ以上の原子番号）の塩、又は錯体（例えば重金属化合物、ヨウ化化合物等）；放射性核種含有化合物、塩、又は錯体（例えば放射性金属同位体の塩、化合物又は錯体あるいは放射性ヨウ化有機化合物）；並びに超常磁性金属（例えば酸化金属又は混合型酸化物粒子、特に酸化鉄）が挙げられる。常磁性金属にはＧｄ（ＩＩＩ），Ｄｙ（ＩＩＩ），Ｆｅ（ＩＩ），Ｆｅ（ＩＩＩ），Ｍｎ（ＩＩＩ）及びＨｏ（ＩＩＩ）、並びに常磁性Ｈｉ，Ｃｏ及びＥｕがある。重金属にはＰｂ，Ｂａ，Ａｇ，Ａｕ，Ｗ，Ｃｕ，Ｂｉ及びランタニド、例えばＧｄがある。
【００１９】
組織マーキングに使用される微小粒子内に含まれる検出可能な材料の量は、所望な様に微小粒子の検出を可能にするのに十分なものであるべきである。任意な特定の適用又は微小粒子に使用される量は、種々の要因、例えば当該微小粒子のサイズ、送達される微小粒子の合計量、コントラスト促進剤の型等に依存することがある。本発明のいくつかの態様に従い、微小粒子は１００％の放射線不透過性材料から成ることがある。あるいは、カーボン表面でコーティングされる放射線不透過性粒子の場合、微小粒子は、当該微小粒子を検出可能な組織マーカーとして使用させ得るカーボンコーティングに対して任意な相対量を有していてもよく、例えば、粒子基材及びカーボンコーティングの合計重量に基づいた、放射線不透過性粒子基材の重量当たり約５０〜１００％であってもよい。任意に、特定の組織マーキング過程において使用される多少の、すなわちわずかに一部、しかし全てではない微小粒子（下文に記載の様な、組織マーキング組成物）は、検出可能な成分を含み得る。
【００２０】
本発明の１つの態様において、微小粒子は、生物学的に適合性があり、そしてそれ自体組織に直接送達される形態の、不変的に放射線不透過性な材料から完全に構成される。
【００２１】
別の態様において、本発明に従う組織マーキングのための微小粒子は、カーボンを含んで成る粒子を有していてもよい。カーボン含有粒子表面は、任意な型のカーボン、例えば熱分解カーボン、例えば低温等方性（ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｓｔｒｏｐｉｃ， ＬＴＩ）カーボン、別の型の等方性カーボン、又はガラス質カーボンの、カーボン含有コーティング又はカーボン含有フィルムの形態、好ましくは生体適合性のある形態であってもよい。様々なカーボンの形態は、Ｂｅａｖｅｎ，“Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｙｒｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｃａｒｂｏｎ”， Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９９０ に記載されている。カーボンコーティング型粒子の例は、米国特許第５，７９２，４７８号に記載されている。
【００２２】
熱分解カーボン及びガラス性カーボン、この両方の原子構造は、カーボンの一般的な形態であるグラファイトと類似しているが、原子の六角形の面の間の配列はグラファイトのものほど十分に整っていない。熱分解カーボンは、原子を失い、ひずんだ六角形の面を有する更に無秩序な原子構造、及び一般的に更にターボスタティック（ｔｕｒｂｏｓｔａｔｉｃ）な外観を特徴とする。これは、層の面の間の良好な結合をもたらす。
【００２３】
カーボンコーティング型微小粒子は、カーボン表面を有する粒子基材として構築され得る。当該基材は、それがカーボンを含んで成る生体適合性のある層でコーティングされるので生体適合性である必要はないが、好ましくは粒子基材も生体適合性であることがある。
【００２４】
その様なカーボンコーティング型の微小粒子は、カーボンを粒子基材上に堆積させるための様々なコーティング過程のうちのいずれかを用いて調製され得る。粒子基材は、当該コーティング過程との適合性で選択されることもあり、すなわち、それはカーボンを粒子基材上にコーティングするための所定の過程において使用される温度に耐えることができるべきである。コーティング過程の高温条件に耐え得る比較的硬い金属又はセラミック材料は、粒子基材にとって一般的に好ましい材料である。金属、酸化金属、及び合金、例えば限定しないが医療用ステンレス鋼、銀、金、チタニウム及びチタニウム合金、並びにステンレス鋼又はチタニウム又はチタニウム合金の酸化誘導体も、特に適している酸化アルミニウム及び酸化ジルコニウムと共に、粒子基材に関して許容される材料である。種々の形態のいずれかにあるカーボン自体、例えば熱分解カーボン、非熱分解カーボン、等方性カーボン、グラファイト、又はガラス質カーボン、粒子基材材料として有用なことがある。従って、当該微小粒子はカーボン粒子基材上に堆積されたカーボンコーティングを含むことがあり、そして実質的に又は全体的にカーボンから構成される。本発明の１つの態様において、粒子基材及びカーボンコーティングは共に熱分解カーボンを含んで成ることもある。
【００２５】
カーボンコーティングすることが意図される粒子基材は、それらがどの様な組成であっても、本明細書に記載のサイズ、質、及び性質のカーボンコーティング型粒子を生成するためにカーボンでコーティングされ得るのに十分な直径、形状、及び均一性のものであるべきである。好ましくは、当該粒子基材は、コーティングの前に選択され、そしてミル粉砕され、押し出され、移され、きれいにされ、濾過され、又は他の方法で整形され、その結果粒子サイズ、形状、及び質の所望な組み合わせを提供し、所望なサイズ、形状、及び質のコーティングされた粒子をもたらし得る。
【００２６】
熱分解カーボンは、既知の方法によって製造され、そして基材表面上にコーティングされ得る。一般に、ハイドロカーボン及び合金化ガスは分解されて粒子基材上に熱分解カーボンコーティングを調製せしめる。当該粒子基材は、基材表面上に熱分解されたカーボンを堆積せしめるのに十分な温度、典型的に約１２００〜１５００°で、流動床又はフローティングベッド内にハイドロカーボン及び合金化ガスと一緒に含まれる。不活性ガス流が、任意に不活性混合媒体を含む、粒子基材のベッドをフローティングさせるために使用される。ハイドロカーボンの熱分解は、粒子基材上に固体材料として堆積される、高カーボン、低水素含有カーボンをもたらす。
【００２７】
あるいは、カーボンコーティング（場合によっては「超低温等方性カーボン」として言及される）はカーボンを堆積させるための他の様々なコーティング過程のいずれか１つ、例えば真空蒸着過程を用いて、粒子基材に適用され得る。その様な方法は、様々な既知の過程のいずれか、例えばＣＯ２ の解離（ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、グロー放電の結果としての真空における炭化水素の解離（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、固体のグラファイト源の凝華、又はグラファイト源の陰極スパッタリングから生じたイオンビームを使用する。金は、真空蒸着型カーボンに特に適した基材材料であることが明らかになっている。他の基材、例えば限定しないが、ニッケル、銀、ステンレス鋼、又はチタニウムも、基材材料としてこの型のコーティング過程について極めて条件を満たしている。
【００２８】
カーボン表面の、高い強度、破壊又は腐食に対する耐性、及び耐久性は、組織マーキング適用において、微小粒子が有効に長期間機能することを保証する。カーボン、例えば熱分解カーボン及びガラス質カーボンの確立された生体適合性は、上述の粒子を、組織マーキング適用に特に適したものにする。当該微小粒子基材は、カーボン表面によって完全に覆われると考えられる。この結果は、当該粒子表面上に基材をさらすことなしに、滑らかなコーティングされた粒子を生む。好ましいカーボンコーティングは、平均数千分の一インチの範囲で、例えば約１／２０００インチ（０．０００５インチ）の、粒子基材の表面を覆うものであり得る。
【００２９】
コーティングされているか否かに関わらず、微小粒子は好ましくは一般的に滑らかな表面を有する丸い粒子である。滑らかな表面は、皮下注射針を通り抜ける微小粒子の通過を促進する。微小粒子は、好ましくは汚染物質を除去し、そして所望のサイズ範囲未満又は範囲超の粒子を分離するクリーニング及びふるいの過程にかけられる。当該粒子は、横断面の寸法が平均１００ミクロン〜１，０００ミクロンのサイズ、好ましくは約２００〜５００ミクロンの範囲に及ぶことがあり、そして組織マーキング適用における使用にとって特に好ましいサイズ範囲は約２５１〜約３００ミクロンであると思われる。この最も好ましい当該サイズ範囲を達成するために、微小粒子は、例えば最小の微小粒子の寸法が、Ｕ．Ｓ．Ｎｏ．５０　Ｓｃｒｅｅｎ　Ｍｅｓｈ（３００ミクロンのグリッドサイズの開き）を通過するが、Ｕ．Ｓ．Ｎｏ．６０　Ｓｃｒｅｅｎ　Ｍｅｓｈ（２５０ミクロンのグリッドサイズ）を通過しない様なふるい過程を用いて、選択したサイズ範囲に分離され得る。その最小の寸法は、長楕円形又は長円形の粒子に対する横断面の寸法であり、この結果、広く球面の粒子に対する粒子の直径と一致する寸法であろう。
【００３０】
微小粒子は、好ましくは担体に含まれ、その中で懸濁されたかなりの量の微小粒子を、皮膚、粘膜を介して、又は皮膚の切開を介して、所望の組織部位に注射するために使用され得る任意な器具又は用具を用いて組織部位に送達され得る。好ましい器具は、皮下注射針又は他の類似の針様用具、例えば任意な小口径の器具、カニューレなどの器具を含む（これらの型の器具の全てが、本明細書において集合的に、便宜上、用語「皮下注射針」又は「注射針」を用いて言及される）。送達に使用される特定の器具は重要ではないが、その構成要素は組織マーキング組成物と適合するものである。
【００３１】
組織マーキングのための微小粒子を送達する方法の一例に従い、微小粒子は、皮下注射針を所望の組織部位に挿入し、続けて微小粒子を組織部位に送達することによって、皮下注射針及び注射器を用いて送達され得る。
【００３２】
任意に、様々な外科的又は非侵略的又は最低限侵略的な外科用器具のいずれかが、送達の補助に使用されることもある。例えば、既知の外科的方法によって結腸又は直腸からポリープを摘出した後、皮下注射針が、微小粒子を送達するために、粘膜を介してポリープの部位に挿入され得る。別の例として、皮膚における小さな切開を介して挿入されるマンモトーン（ｍａｍｍｏｔｏｎｅ）は作用する位置で維持され、そして注射針は、生検部位に微小粒子を正確に送達するために、そのシースを介して挿入され得る。
【００３３】
一度注射針が据えられると、微小粒子は、注射針を介して所望の組織部位にゆっくり挿入され得る。当該微小粒子は、皮下注射針又は類似の器具を介して効果的に堆積され、そして送達された組織部位に実質的に留まるものである。当該粒子が小さ過ぎる場合、それらは身体の白血球（貧食細胞）によって飲み込まれ、そして離れた器官まで運ばれ、あるいは微小血管系に運び去られ、そしてそれらが更なる移動を防ぐのに十分なほど収縮した部位に到達するまで移動するだろう。他方では、粒子は、それらが皮下注射針又は類似のものを用いて有効に送達され得るほど大きいべきではない。本発明の方法にとって、特に好ましい平均微小粒子のサイズが約１００〜１０００ミクロン、あるいは約２００〜５００ミクロン、又は約２５１〜３００ミクロンであり得るのは、その様なサイズが小口径の器具を介する注射を可能にし、そして注射部位からの微小粒子の移動を避けるのに十分なほど小さいためである。
【００３４】
組織マーキング法における、好ましくは注射針及び注射器又は類似の器具の使用によって注射される微小粒子の使用は、他の組織マーキング法の使用以上に有利である。例えば、注射針及び注射器を用いる微小粒子の送達は、所望の組織部位に対する微小粒子の非常に正確な送達を可能にする。このことは、生検を行うのに使用される生検プローブが、最初に生検シースを動かすことなしに、微小粒子を送達するのに使用される場合に特に正しい。他の利点は、他の型の組織マーカーが使用され得ない、又は使用されない場所で微小粒子が使用され得ることである。具体的には、組織マーキングクリップは結腸又は直腸において使用されないが、微小粒子はこれらの組織に注射され得る。あるいは、組織マーキングクリップは時々、クリップを移動させ、そしてクリップの移動をもたらし得る組織、例えば靱帯に対して不都合に付着することがある。微小粒子の注射は、この様な問題を回避する。
【００３５】
組織マーキング法で導入される微小粒子の量は、後に検出されるべき場所をマーキングするのに十分な任意の量であってもよい。送達される量は、微小粒子のサイズ、患者に関係する微小粒子の因子における検出可能な成分の量等、の様な因子に依存して変化し得る。その様な因子は、医療業界又は組織マーキング界の当業者の技術範囲にあり、そしてその様な当業者は身体の組織部位への送達にとって有用な量の微小粒子がどの程度かを理解するだろう。
【００３６】
本発明に従い、微小粒子は、生体適合性担体における注射可能な粒子の組み合わせを含んで成る組織マーキング組成物の送達のために含まれ、そして使用され得る。前記担体は、所望の組織部位に対して微小粒子を送達することができる任意な生体適合性の液体であり得る。担体は、生物学的に適合性のある懸濁液、溶液、又は液体若しくはゲルの他の形態を含み得る。生物学的に適合性のある担体において有用な材料の例は、塩溶液、デキストラン、グリセロール、ポリエチレングリコール、コーン油又はベニバナ油、他の多糖又は生体適合性ポリマー、メチルセルロース、グルカン、アガロースを、単独又は組み合わせのいずれかで含む。
【００３７】
前記担体は、好ましくは水性懸濁液又は溶液、他の液体、又は一般的にβ−グルカンと言及される、Ｂ−Ｄグルコースのポリマー鎖のゲルであってもよい。グルコース単位は、１−３，１−４、又は１−６位で互いに連結され、そして重量当たり数千ダルトンに及ぶポリマー鎖を形成する。
【００３８】
β−グルカンは、植物、酵母、細菌、及び哺乳類系を含む、本質的に全ての生物系における細胞壁の天然成分である。生物系でのその効果及び変調作用は、Ａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｓｙｔｅ Ｂ−ｓｌｕｃａｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｇｌｕｃａｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ−α ａｎｄ １Ｌ−Ｂ，”Ｉｎｔ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １４ （８） ： １３６３−１３７３， １９９２ に報告されている。β−グルカンは、実験的な研究で投与された場合、最初の意図によって治癒を促進し、それによって宿主系の修復過程を刺激するのに必要な段階を含む、宿主の防御機構を誘発し、そして増強する。β−グルカンは、マクロファージのファゴサイトーシスを介して、又は漿液の酵素による酵素破壊によって組織部位から除去される。β−グルカンの破壊又は除去、並びにその利用可能な粘度及びぬるぬるした性質は、それを、組織マーキング適用における微小粒子にとって有用な担体にする。
【００３９】
β−グルカンの水溶液、懸濁液、液体、又はゲルは、組織マーキング適用における微小粒子のために、担体として好ましい物理的特性を有する様に生成され得る。粘度は、薄い液体から、固い、自立しているゲルにまで変化し得る。粘度に関係なく、β−グルカンは優れた潤滑性を有し、その結果小口径の注射針を介して、あらかじめ決定された身体の部位に送達されることによって容易に投与される粒子−担体組成物を創り出す。有用なβ−グルカン組成物は、４−Ｏ−結合型−β−Ｄ−グリコピラノシル単位及び３−Ｏ−結合型−β−Ｄ−グリコピラノシル単位を含むβ−Ｄ−グルカンである。当該担体は、注射の手順を遂行するのに十分な期間、微小粒子がその中で懸濁された状態のまま留まることを保証するのに十分な粘度のものであると思われる。
【００４０】
担体材料の別の例は、メチルセルロース又は別の直鎖状非分枝多糖である。適当な担体材料の更なる例は、アガロース、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン又はそのヒドロゲル誘導体、デキストラン又はそのヒドロゲル誘導体、グリセロール、ポリエチレングリコール、スクシニル化コラーゲン、液体コラーゲン、又はベニバナの様な、油を基にした乳濁液、あるいは他の多糖又は生体適合性有機ポリマーを、単独であるいは１又は複数の上文で言及した溶液と組み合わせて含む。
【００４１】
組織マーキング組成物中の担体に対する微小粒子の量は、流動性があり、かつ注射可能な組織マーキング組成物を提供し、そして所望な量の微小粒子を組織部位に送達せしめ得る任意な量であり得る。組織マーキング組成物中の微小粒子の量は、体積当たり約２０〜６０％、又は体積当たり約２５〜４０％の範囲内でもよい。
【００４２】
使用において、組織マーキング組成物は、典型的にスラリー、懸濁液、又は乳濁液として、注射針を介して身体の組織部位に注射され得る。身体の組織内に堆積したとき、当該担体は身体の中に運び去られ、そして分散し、あるいは破壊される。少なくともいくつかの微小粒子、好ましくは微小粒子のほとんど又は実質的に全てが、マーキングのための組織部位に対する送達によって実質的に不動であることが必要である。本発明に従う組織マーキングに使用される微小粒子は、組織マーキングのために使用されるのに十分不動性である。微小粒子が、組織部位への送達後に少しでも移動する傾向がある場合、微小粒子は、一般的にそれらを注射するのに使用する注射針の通路によってのみ移動し得る。
【００４３】
次の記述の一部は、具体的に乳房生検適用における組織マーキングと関連する言葉を含むが、全ての型の組織マーキング適用が、本発明の意図の範囲内にあるとみなされる。例えば、他の型の生検適用、例えば結腸、直腸、又は前立腺生検、及び生検以外の適用、例えば他の型の医療処置のための組織マーキングが挙げられる。当該組織はまた、放射線ビームが正確に方向づけられ得る標的を提供するためにマーキングされ得る。医療又は生検業界の当業者は、検出可能な微小粒子がこれらの及び他の組織マーキング又は生検過程でどの様に使用され得るかを理解し、そして評価するだろう。
【００４４】
特定の組織マーキング適用に対して、当該過程を適用する際に考えられ、制御され、又は調節され得る因子は、微小粒子の組成；身体の部位に送達されるべき微小粒子の量；送達に使用される特定の道具（注射針又は生検プローブ）を含む、送達の方法に関連する因子、並びに所望の身体の部位で送達装置の分注末端を据えるのに使用される方法及び経路、の考慮を含み得る。これらの因子の全てが、組織マーキング又は医療業界の当業者によって評価され、そして広範な組織マーキング法に記載した方法を適用するために容易に取り扱かわれ得る。
【００４５】
生検は、組織を健康又は病気として診断するために、組織試料が身体の部位から摘出される方法である。生検は、多くの異なる身体の器官の組織、例えば前立腺及び乳房の組織で行われる。生検を行うのに使用される手段は、生検方法において一般に知られ、又は有用な、任意の道具及び技術を含むことがある。
【００４６】
乳房生検は、定位固定の、真空補助型（ｖａｃｕｕｍ−ａｓｓｉｓｔｅｄ）乳房生検技術及びその道具を用いて実施され得る。その様な技術及び装置は、最低限侵略的な器具及び技術、例えば自動外科的生検装置の使用を含む。これらの方法及び装置は、注目の組織の塊に接近し、そして後の試験及び解析のための組織試料を得るために、乳房における非常に小さな切開を介して、注射針様器具を含む経皮的手順に関する。米国特許第６，０８６，５４４号を参照のこと。現代の乳房生検において、当該生検の間に摘出されるべき病変の全ての証拠のために、商品名ＢＩＯＰＳＹＳのもと、Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｅｎｄｏ−Ｓｕｒｇｅｙ， Ｉｎｃ． から販売されているマンモトーン乳房生検システムを用いることは一般的なことである。
【００４７】
検出可能な微小粒子は、乳房生検の部位をマーキングするために使用され得る。当該微小粒子は、悪性腫瘍が決定される場合に生検部位を示し、それによって、最初の病変と関連するマンモグラフィーの発見が完全に取り除かれたとしても当該部位に戻り、そして次に外科的処置を施すことを可能にするために使用され得る。
【００４８】
検出可能な微小粒子は、任意な種類の注射針送達系を用いて、乳房生検部位に送達され得る。本発明の好ましい方法に従い、微小粒子は、生検された部位の非常に正確なマーキングを達成できる様に、当該生検を実施するために使用するのと同一の生検道具を用いて送達され得る。
【００４９】
例
放射線不透過性熱分解カーボンでコーティングした酸化ジルコニウムビーズへの適用を評価するために、ウサギでの研究が行われた。ウサギを選択したのは、耳への注射が材料の持続性を定量するためにしばしば使用され、耳の軟骨が、当該材料を挿入し、そして後に測定することができる基材を提供するためである。挿入部位から近位への移動は直ちに観察することができ、そしてより小さな動物における目標物の相対的な安定性は、検死での解剖のために、骨性の目標物を許容する。
【００５０】
カーボンコーティングしたビーズは、耳の皮下組織、及び胃／食道の粘膜下組織においてウサギに注射された。合計５匹のウサギが両耳において注射され（０．５〜１．０ｍｌ）、そして２匹のウサギが腸／胃の位置において注射された（各０．２５ｍｌ）。
【００５１】
放射線不透過性カーボンでコーティングしたビーズは、皮膚と耳の凸面上の耳介軟骨との間から皮下注射され、そしてウサギの胃のより大きな曲面に沿って奬膜下から注射された。一週間に一回の試験は、注射領域に対する最小の炎症反応を示した。術後５週目（耳）及び８週目（胃／食道）に、放射線不透過性ビーズは、所定の位置において安定している様であった。
【００５２】
位置の持続性は、Ｘ線撮影及び検死によって測定された。フラットフィルムのＸ線像は、持続性及び非移動性を証明するために、術前及び術後に撮られた。Ｘ線像は、非移動性を証明するために、屠殺時に撮られた。
【００５３】
耳の手術
０．５〜１．０ｍｌのビーズの体積が５匹のウサギの両耳に注射された。当該ビーズは、使い捨ての１６ゲージの注射針を用いて、耳の凸面上の皮膚と耳介軟骨との間に皮下注射された。全ての耳が注射後に試験され、そして耳のＸ線が記録目的で撮られた。
【００５４】
術後１週目
注射部位又は注射と関連する腫脹、炎症又は浮腫の証拠は存在しなかった。
【００５５】
術後２週目
それぞれの注射されたバルク周辺に、わずかな赤味及び腫脹が観察された。
【００５６】
術後３週目
全ての注射部位が、赤味又は腫脹のわずかな証拠により容易に視認された。
【００５７】
術後５週目
術後５週目にウサギ＃１及び＃２が検死された。
【００５８】
耳及び臓器は肉眼で見て試験された。頭蓋上の耳介周辺組織並びに耳の基部の前方及び後方の解剖によって、ビーズは当該組織において観察されなかった。
【００５９】
耳は、注射部位からのビーズの移動について試験された。当該試験は、明るい光で組織を照らすことによって達成された。粒子は、病変の境界を越えて観察されることはなかった。
【００６０】
胃／食道の手術
胃のモデルを用いて、複数の奬膜下からの注射が、胃のより大きな曲面に沿って行われた。約０．２５ｍｌの材料を一方のウサギの４ヶ所それぞれに、そして他方のウサギの３ヶ所に注射した。注射は、材料の１ｍｌ注射器及び１６ゲージの注射針を用いて行った。
【００６１】
術後２週目
観察結果は、耳のデータのものと一致していた。
【００６２】
術後８週目
術後８週目に、Ｘ線撮影に従い、両方のウサギが検死された。
【００６３】
ビーズの消失又は注射部位からのビーズの移動は、はっきりとは見られなかった。胃の表面又は腹部組織の表面上での粒子の全体的な移動が無かったことが注目された。当該注射部位は、注射部位又はその付近で注目された紅斑又は腫脹の証拠が無かったことから、良好に治癒したと思われる。腹部組織の全体的な試験は、全体的な異常を全く示さなかった。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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