(57)【要約】本明細書中に記載される発明により、非ヒト動物において産生された、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのリポ多糖（ＬＰＳ）に特異的に結合するヒト抗体が提供される。本発明はさらに、非ヒト動物における抗体の作製方法、およびハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む細胞株における抗体の発現方法を提供する。抗体を含むキットおよび薬学的組成物、ならびに本明細書中に記載される薬学的組成物を患者に投与することにより、シュードモナス感染を処置または予防する方法もまた、提供される。
2004514423.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト動物で発現され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記ヒト抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
前記抗体またはその一部が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞についてオプソニン作用性である、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
前記抗体またはその一部が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の食作用を促進する、請求項３に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記抗体またはその一部が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対する免疫応答を強化する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
前記抗体またはその一部が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の死滅を促進する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の死滅の促進が、該Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞に対して致死性である試薬の送達を含む、請求項６に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の死滅の促進が、該Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対する免疫応答の強化を含む、請求項６に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を阻害する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対して、５×１０−７Ｍから１×１０−７ＭのＫｄで結合する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対して、１×１０−７Ｍから５×１０−８ＭのＫｄで結合する、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対して、５×１０−８Ｍから１×１０−８ＭのＫｄで結合する、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳが、０６ａｄ、０１１、Ｈａｂｓ１６、１７０００３、およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙからなる群より選択されるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株由来である、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、１時間から３０日の間のインビボでの半減期を有する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、１６日から３０日の間のインビボでの半減期を有する、請求項１４に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、１時間から１５日の間のインビボでの半減期を有する、請求項１４に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１７】
前記抗体が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤからなる群より選択される重鎖イソ型を有する免疫グロブリン分子であるかまたは該免疫グロブリン分子に由来する、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群より選択されるサブタイプである、請求項１７に記載の単離されたヒト抗体。
【請求項１９】
前記抗体またはその一部が標識されている、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２０】
前記標識が、放射標識、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁気因子、２次抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項１９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２１】
κ軽鎖およびそのフレームワーク配列を含む、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２２】
前記κ軽鎖の前記フレームワーク配列が、ヒトＶｋ２／Ａ２遺伝子によってコードされる、請求項２１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２３】
前記κ軽鎖が、生殖細胞系Ｖｋ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖からの、７個から１５個の間のアミノ酸変化を含む、請求項２１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２４】
前記κ軽鎖が、生殖細胞系Ｖｋ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖からの、６個未満のアミノ酸変化を含む、請求項２１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２５】
前記κ軽鎖が、生殖細胞系Ｖｋ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖からの、３個未満のアミノ酸変化を含む、請求項２４に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２６】
前記κ軽鎖が配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２７】
前記軽鎖が配列番号３の核酸配列によってコードされる、請求項２１に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２８】
λ軽鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２９】
可変領域（Ｖ）、多様性領域（Ｄ）、および結合領域（Ｊ）から構成され、そしてそのフレームワーク配列から構成される重鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３０】
前記重鎖の前記可変領域がヒトＶＨ３／Ｖ３−３３遺伝子によってコードされる、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３１】
前記重鎖の前記多様性領域がヒトＤ２−８遺伝子によってコードされる、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３２】
前記重鎖の前記連結領域がヒトＪＨ４ｂ遺伝子によってコードされる、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３３】
前記可変領域が、生殖細胞系ＶＨ３／Ｖ３−３３遺伝子によってコードされる可変領域からの、７個から１５個の間アミノ酸変化を含む、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３４】
前記重鎖が、生殖細胞系ＶＨ３／Ｖ３−３３遺伝子によってコードされる可変領域からの、６個未満のアミノ酸変化を含む、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３５】
前記重鎖が、生殖細胞系ＶＨ３／Ｖ３−３３遺伝子によってコードされる可変領域からの、３個未満のアミノ酸変化を含む、請求項２９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３６】
前記重鎖が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３７】
前記重鎖が配列番号１の核酸配列によってコードされる、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３８】
Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメントからなる群より選択される抗原結合ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３９】
前記抗体が単鎖抗体である、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４０】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４１】
異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域を含む、請求項４０に記載のキメラ抗体。
【請求項４２】
前記キメラ抗体が二重特異的である、請求項４０に記載のキメラ抗体。
【請求項４３】
前記キメラ抗体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳおよび以下からなる群より選択される標識について二重特異的である、請求項４２に記載のキメラ抗体：放射標識分子、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁気因子、２次抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質、およびサイトカイン。
【請求項４４】
前記抗体またはその一部が誘導体化されている、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４５】
前記抗体またはその一部が、ポリエチレングリコール、少なくとも１つのメチル基もしくはエチル基、または少なくとも１つの炭水化物部分で誘導体化されている、請求項４４に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４６】
請求項１または請求項２に記載の抗体またはその抗原結合部分、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項４７】
請求項１または請求項２に記載の抗体またはその抗原結合部分、薬学的に受容可能なキャリア、および容器を備える、キット。
【請求項４８】
使用のための説明書をさらに備える、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
請求項１に記載の単離されたヒト抗体を、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の危険があるかまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに現在感染している患者に投与する工程を包含する、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を処置または予防するための方法。
【請求項５０】
前記ヒト抗体がモノクローナル抗体である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記投与が、注射手段、経粘膜手段、経口手段、吸入手段、眼内手段、直腸手段、長期作用性移植手段、リポソーム手段、乳濁剤手段、クリーム剤手段、局所的手段、または徐放手段によって実施される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が第２のタンパク質との融合体である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体が、放射標識、毒素、補体タンパク質、サイトカイン、または抗生物質で標識されている、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記第２のタンパク質が、毒性ペプチド部分、補体タンパク質、放射標識タンパク質、サイトカイン、または抗生物質タンパク質からなる群より選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記患者が、熱傷患者、手術患者、プロテーゼレシピエント、呼吸患者、癌患者、嚢胞性繊維症患者、または免疫無防備状態の患者である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
前記薬学的組成物がさらに、毒素、補体タンパク質、放射標識タンパク質、サイトカイン、抗生物質、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
請求項１または請求項２に記載の抗体を産生する、単離された細胞株。
【請求項５８】
前記細胞株がハイブリドーマである、請求項５７に記載の細胞株。
【請求項５９】
以下の工程を包含する、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を産生する、方法：
ａ）該抗体が産生される条件下で該抗体を産生することができる非ヒト細胞を培養する工程：
ｂ）該細胞培養物から該抗体を単離する工程。
【請求項６０】
前記細胞がハイブリドーマである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記細胞が、前記ヒト抗体またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子で形質転換され、そして該細胞が、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、両生類細胞、および哺乳動物細胞からなる群より選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞、ウシ細胞、およびハムスター細胞からなる群より選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記哺乳動物細胞が、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ　３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＣＶ−１細胞、ＮＳ／０細胞、およびＣＯＳ細胞からなる群より選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
以下の工程を包含する、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を作製するための、方法：
ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子座が組み込まれた非ヒト動物を、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの抗原性組成物で免疫する工程；
ｂ）該非ヒト動物の、該抗原性組成物に対する体液性応答を増大させる工程；および
ｃ）該非ヒト動物から該ヒト抗体を単離する工程。
【請求項６５】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする、非ヒト動物から単離された核酸分子。
【請求項６６】
前記核酸分子が前記ヒト抗体を産生するハイブリドーマから単離される、請求項６５に記載の単離された核酸分子。
【請求項６７】
配列番号　　のヌクレオチド配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子またはそのフラグメント。
【請求項６８】
前記フラグメントが、前記ヒト抗体の１個から３個のＣＤＲ領域をコードする配列を含む、請求項６７に記載の単離された核酸分子。
【請求項６９】
請求項６５〜６８のいずれか１項に記載の核酸分子またはそのフラグメントを含有する、ベクター。
【請求項７０】
前記ベクターがさらに、前記核酸に作動可能に連結された発現制御配列を含む、請求項６９に記載のベクター。
【請求項７１】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする、非ヒト動物から単離された核酸分子。
【請求項７２】
前記核酸分子が、前記ヒト抗体を産生するハイブリドーマから単離される、請求項７１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７３】
配列番号３のヌクレオチド配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子またはそのフラグメント。
【請求項７４】
前記フラグメントが、前記ヒト抗体の１個から３個のＣＤＲ領域をコードする配列を含む、請求項７１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７５】
請求項７１〜７４のいずれか１項に記載の核酸分子を含有する、ベクター。
【請求項７６】
前記ベクターがさらに、前記核酸に作動可能に連結された発現制御配列を含む、請求項７５に記載のベクター。
【請求項７７】
以下を含有する、単離された宿主細胞：
ａ）非ヒト動物から単離され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する、ヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする、核酸分子；あるいは
ｂ）該核酸分子を含有する、ベクター。
【請求項７８】
以下を含有する、単離された宿主細胞：
ａ）非ヒト動物から単離され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする、核酸分子；あるいは
ｂ）該核酸分子を含有する、ベクター。
【請求項７９】
以下を含有する、単離された宿主細胞：
ａ）非ヒト動物から単離されそして重鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子；あるいは
ｂ）該核酸分子を含有する、単数または複数のベクター。
【請求項８０】
前記細胞が、ハイブリドーマ細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、両生類細胞、および哺乳動物細胞からなる群より選択される、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の単離された宿主細胞。
【請求項８１】
前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞、ウシ細胞、およびハムスター細胞からなる群より選択される、請求項８０に記載の宿主細胞。
【請求項８２】
前記哺乳動物細胞が、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ　３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＣＶ−１細胞、ＮＳ／０細胞、およびＣＯＳ細胞からなる群より選択される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
請求項７７〜８１のいずれか１項に記載の宿主細胞を、前記核酸分子が発現される条件下で培養する工程を包含する、非ヒト動物から同定されそしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の、重鎖またはその抗原結合部分、軽鎖またはその抗原結合部分、あるいは軽鎖および重鎖の両方またはそれらの抗原結合部分を組換え産生する、方法。
【請求項８４】
請求項６７に記載の核酸分子によってコードされるか、または請求項７８に記載の宿主細胞から単離される、請求項１または請求項２に記載の抗体から得られた、単離された重鎖またはその抗原結合部分。
【請求項８５】
請求項７３に記載の核酸分子によってコードされるか、または請求項７７に記載の宿主細胞から単離される、請求項１または請求項２に記載の抗体から得られた、単離された軽鎖またはその抗原結合部分。
【請求項８６】
請求項６７に記載の核酸分子を含有する非ヒトトランスジェニック動物であって、該非ヒトトランスジェニック動物が前記核酸分子を発現する、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項８７】
請求項７３に記載の核酸分子を含有する非ヒトトランスジェニック動物であって、前記非ヒトトランスジェニック動物が前記核酸分子を発現する、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項８８】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子、および該ヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子を含有する非ヒトトランスジェニック動物であって、ここで、該動物が該核酸分子を発現する、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項８９】
前記動物が、マウス、ラット、ハムスター、ウシ、ヒツジ、霊長類、ウマ、およびブタからなる群より選択される、請求項８６〜８８のいずれか１項に記載の、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項９０】
前記単離された核酸分子またはその一部の発現によって生じたヒト抗体が、前記動物のＢリンパ球細胞またはその後代由来の細胞の表面上で発現される、請求項８６〜８８のいずれか１項に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項９１】
前記単離された核酸分子またはその一部の発現によって生じたヒト抗体が、前記動物のリンパ液、血液、乳汁、唾液、または腹水中に分泌される、請求項８６〜８８のいずれか１項に記載の非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項９２】
請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分、および第２のポリペプチド配列を含有する、融合タンパク質。
【請求項９３】
前記第２のポリペプチド配列が、エピトープタグ、親和性タグ、毒性ポリペプチド、抗生物質、酵素、２次抗体配列、補体タンパク質、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項９２に記載の融合タンパク質。
【請求項９４】
前記抗体の前記重鎖イソ型が、μ、γ、δ、ε、またはαである、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９５】
前記抗体の血清半減期を増大させる１個から１０個の間のアミノ酸置換を含有する、請求項８４に記載の単離された重鎖またはその抗原結合部分。
【請求項９６】
前記抗体の血清半減期を増大させる１個から１０個の間のアミノ酸置換を含有する、請求項８５に記載の単離された軽鎖またはその抗原結合部分。
【請求項９７】
以下の工程を包含するプロセスによって産生される、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分：
ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有する非ヒト動物を、単離されたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ調製物、雄性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物、弱毒化Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物、および死滅させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物からなる群より選択される抗原で免疫する工程；
ｂ）該非ヒト動物の、該抗原に対する免疫応答を増大させる工程；および
ｃ）該非ヒト動物から該抗体を単離する工程。
【請求項９８】
ヒトの生体材料が混入していない動物または細胞から単離される、請求項１または請求項２に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９９】
前記生体材料が、ウイルス、酵素、ホルモン、サイトカイン、レセプター、レセプターリガンド、免疫グロブリン、補体、核タンパク質、および細胞質シグナル伝達タンパク質からなる群より選択される、請求項９９に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１００】
前記ウイルスが、エプスタインバーウイルスまたはレトロウイルスである、請求項１００に記載の単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０１】
アメリカンタイプカルチャーコレクション登録番号　　を有する、Ｓ２０　ｍＡｂを産生するハイブリドーマ細胞株。
【請求項１０２】
請求項１０１に記載のハイブリドーマ細胞株によって産生される、モノクローナル抗体。
【請求項１０３】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳのＯ特異的側鎖に特異的に結合する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０４】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株が、０６ａｄ、０１１、Ｈａｂｓ１６、１７００３、およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙからなる群より選択される、請求項１０３に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０５】
モノクローナルである、請求項１０３または１０４に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０６】
約１．０の相対的な結合力を有する、請求項１０３〜１０５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０７】
１つの株のＬＰＳのＯ特異的側鎖に結合し、そして他の４個の株のＬＰＳのＯ特異的側鎖には結合しない、請求項１０４に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０８】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１株のＬＰＳのＯ特異的側鎖に特異的に結合する、ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０９】
ＩｇＭ抗体である、請求項１０８に記載のヒトモノクローナル抗体または抗原結合部分。
【請求項１１０】
ＡＴＣＣ登録番号＃　　またはＡＴＣＣ登録番号＃　　を有するハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１０８に記載のヒトモノクローナル抗体または抗原結合部分。
【請求項１１１】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１７０００３株のＬＰＳのＯ特異的側鎖に特異的に結合する、ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１２】
ＩｇＭ抗体である、請求項１１１に記載のヒトモノクローナル抗体または抗原結合部分。
【請求項１１３】
ＡＴＣＣ登録番号＃　　を有するハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１１１に記載のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１４】
請求項１０８〜１１３のいずれか１項に記載の抗体の結合を阻害する、ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１５】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳのＯ特異的側鎖に特異的に結合し、図９に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の１つ以上を含有する重鎖を含む、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１６】
前記重鎖が、図９に示されるＣＤＲ３を含む、請求項１１５に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１７】
配列番号２に示されるアミノ酸配列を含有する、請求項１１５に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１８】
図１０に示されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の１つ以上を含有する軽鎖を含む、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳのＯ特異的側鎖に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１９】
前記重鎖が、図１０に示されるＣＤＲ３を含む、請求項１１８に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１２０】
配列番号４に示されるアミノ酸配列を含有する、請求項１１８に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１２１】
請求項１、請求項１０２、請求項１０３、および請求項１１５〜１２０に記載の抗体または一部からなる群より選択される、１つ以上のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含有し、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の予防または阻害のための、受動性ワクチン。
【請求項１２２】
２つ以上のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含有しており、ここで、該ヒトモノクローナル抗体または一部が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの異なる株に特異的に結合する、請求項１２１に記載の受動性ワクチン。
【請求項１２３】
生物学的サンプル中のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの存在を検出するための方法であって、該サンプルを、請求項１、請求項１０２、請求項１０３、または請求項１１５〜１２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分と接触させる工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染およびこのような感染によって引き起こされる状態の処置または予防についての組成物および方法に関する。特に、本発明は、ヒト抗体に関し、この抗体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａリポ多糖類（ＬＰＳ）に特異的に結合し、そしてその核酸分子をコードする。本発明は、非ヒト動物におけるこの抗体の作製についての方法、および細胞株（ハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む）におけるこの抗体の発現についての方法にさらに関する。本発明はまた、この抗体を含むキットおよび薬学的組成物に関する。本発明は、患者に、本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することによって、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染を処置または予防する方法にさらに関する。
【０００２】
（発明の背景）
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染）
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、グラム陰性の鞭毛桿体菌（ｆｌａｇｅｌｌａｔｅｄ　ｒｏｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ）であり、これは、手術、プロテーゼ移植および気道処置から生じる院内感染において、有意な病原体であり続ける。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａはまた、癌、嚢胞性線維症、糖尿病、心臓疾患、外耳炎（ｏｔｉｔｉｓ　ｅｘｔｅｒｎａ）（外耳炎（ｓｗｉｍｍｅｒ’ｓ　ｅａｒ））、骨髄炎、角膜潰瘍、毛包炎、乳腺炎、肺炎、髄膜炎、尿路感染症、心内膜炎、腹膜炎および老年患者または免疫無防備状態の患者において見出される他の疾患の病因における日和見病原体である。
【０００３】
手術患者は、しばしば、その病気（例えば、外傷、熱傷、吸息損傷および癌）または処置（例えば、切開または経皮カテーテル法、気管内挿管、心臓手術および胸郭手術、神経手術ならびに胃腸手術による天然の上皮関門の崩壊）によって、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の危険性の増大にある。抗生物質処置または予防、固形器官移植レシピエントの治療的免疫抑制、あるいはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａへの環境曝露による天然の腸微生物叢の崩壊は、患者を危険性の増大に置き得る。さらに、多剤耐性株は、入院患者単位ならびにナーシングホームにおける有意な感染を引き起こし得る。
【０００４】
手術患者は、院内肺炎によって冒され、これは、しばしば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって引き起こされる。発症は、入院の最初の７２時間後に生じ、そして熱、化膿性痰、白血球増加、および胸部Ｘ線撮影によって明らかになる新規または変化した肺浸潤によって特徴付けられる。口腔咽頭部は、急速にコロニー形成され、これは、下気道に蔓延し得る。手術患者全体における院内感染の発生率は、約５％〜８％であり、そしてあらゆる危篤患者においては、おそらくより高い。外科集中治療室（ＩＣＵ）から報告される肺炎の発生率は、１５％〜２０％であり、そして時折より高い。Ｂａｒｉｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇｅｒｙ　１７９：２Ｓ〜７Ｓ（２０００）を参照のこと。
【０００５】
嚢胞性線維症（ＣＦ）患者は、慢性コロニー形成（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）を患い、狭いが進化性のスペクトルの細菌病原体、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、主要なＣＦ病原体のままであり、ＣＦ成人において、８０％〜９０％までの世界的罹患率である。このような感染は、衰弱性の炎症悪化、および進行性の肺損傷の断続的エピソードを導く。顕現性病原体はまた、複数の抗生物質レジメンに耐性である傾向があり、従って、感染制御は、ＣＦ患者の生活の質および平均余命における決定的役割を果たす。
【０００６】
慢性コロニー形成の発症は、努力呼気量（ＦＥＶ）の促進に関連する。本来のコロニー形成株は、ムコイドコロニー形態に形質転換し、これは、アルギネートとして公知の非常に粘着性のエキソ多糖類（ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）の豊富な産生に起因する。コロニー形成株は、有意により親ムチン性（ｍｕｃｉｎｏｐｈｉｌｉｃ）および走化性となり、そして粘膜せん毛クリアランス障害に関連する。Ｇｏｖａｎ　Ｊ．Ｒｏｙａｌ　Ｓｏｃ．Ｍｅｄ．９３補遺、３８：４０〜４５（２０００）を参照のこと。さらに、ＣＦ患者の肺から単離されるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、ＬＰＳ脂肪酸アシル化パターンにおける変化、およびいくつかの陽イオン抗菌ペプチド（ＣＡＭＰ）の殺菌活性に対する耐性の増強の変化を示す。
【０００７】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのＬＰＳリピドＡにおける変更は、ＣＦ隔離集団において見出され、これは、抗菌ペプチドに対する細菌耐性およびＬＰＳが炎症性メディエータを誘導する能力の両方を増大した。ＣＦ患者は、血清および痰の両方において、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対する非常に高い抗体力価を有し、これは、インビボでのその生物学的活性（例えば、炎症前メディエータ放出）を中和し得る。Ｐｉｅｒ　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｍｉｃｒｉｏｂｉｏｌ．８：２４７〜２５１（２０００）を参照のこと。
【０００８】
重篤な熱傷創傷患者における罹病率および死亡率の主要な原因は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの感染である。Ｌｅｅら、Ｖａｃｃｉｎｅ　１８：１９５２〜１９６１（２０００）を参照のこと。熱傷創傷は、非常に滲出性であり、細菌コロニー形成について、湿性の栄養豊かな環境を作製する。熱傷創傷は、重篤な組織損傷に起因して、患者の免疫応答および脈管由来の抗生物質に主として到達しがたい。さらに、熱傷創傷は、宿主を免疫無防備状態のままにし、免疫グロブリンγ（ＩｇＧ）のレベルは、内因性に減少する。処置を受けないと、熱傷創傷感染は、蔓延し得、そして敗血症に発達し得、炎症性サイトカイン（インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む）の関連した産生が生じる。熱傷創傷感染はまた、治癒の遅延、瘢痕の増大、部分的な肥厚欠陥から全体の肥厚欠陥への転換、および栄養要求の増大をもたらし得る。
【０００９】
静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）は、益々使用されて、細菌感染およびウイルス感染、ならびに原発性免疫不全障害および二次性免疫不全障害の両方を処置している。ＩＶＩＧは、正常ドナー由来のプールされるヒトポリクローナル抗体から構成され、これは、原発性および二次性の抗体欠損症についての補充療法として使用され、そして免疫媒介性疾患（自己免疫炎症状態および全身性炎症状態を含む）を処置するために使用される。免疫グロブリンは、細菌のオプソニン作用および食作用、細菌毒素の中和、微生物付着の阻害、ならびに細菌の補体誘導性溶解を促進する。Ｆｅｌｔｓら、Ｂｕｒｎｓ　２５：４１５〜４２３（１９９９）を参照のこと。
【００１０】
防御性免疫グロブリンの創傷部位および熱傷部位への直接送達および局所送達は、熱傷創傷の血管新生、ならびにバイオフィルム障壁の欠如を克服するための合理的手段を表す。予防的および感染後の両方のＩｇＧの局所送達は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染性の熱傷創傷のマウスモデルにおいて、生存率を改善したことが実証された。Ｆｅｌｔｓら、Ｂｕｒｎｓ　２５：４１５〜４２３（１９９９）を参照のこと。
【００１１】
プロテーゼデバイスの生体工学における進歩は、無数の患者の寿命を改善した。しかし、この進歩は、移植関連感染によって抑制されており、これは、しばしば、抗生物質処置に耐える。感染性生物（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む）は、合成の移植材料を選択的に標的化し、重篤かつ犠牲の大きな感染を誘導し、これは、頻繁に、コロニー形成デバイスの除去を必要とする。
【００１２】
最初の微生物接着は、生体材料のコロニー形成の主要な決定要素である。なぜなら、最初の接着生物は、しばしば、生体材料表面に接着する成熟したバイオフィルムに進行するからである。プロテーゼ上のバイオフィルム形成の減少を目指す研究の焦点は、移植材料の表面の修飾またはコーティングに指向されている。しかし、表面化学および抗生物質放出コーティングを利用するアプローチは、完全に首尾良くはない。
【００１３】
手術部位は、しばしば、免疫無防備状態であるので、見込みのあるアプローチは、局所創傷部位の免疫刺激を伴う。研究は、プールされるポリクローナルヒト抗体が、感染性細菌にオプソニンを作用させ、そしてプールされる抗体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの接着速度および表面増殖動力学を阻害し得、従って、バイオフィルム形成を減少することを示した。Ｐｏｅｌｓｔｒａら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ．５１：２２４〜２３２（２０００）を参照のこと。
【００１４】
腹膜炎は、しばしば、潰瘍、虫垂炎、憩室炎、イレウス、射創または刺創、腹手術中の障害、および連続携行式腹膜灌流（ＣＡＰＤ）によって引き起こされる。外因性の病原性細菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む）によって引き起こされる院内腹膜炎は、免疫無防備状態集団および老年集団についての特に重大な問題である。
【００１５】
腹膜炎についての現在の処置レジメンは、抗生物質に集中するが、しかし抗生物質耐性が、有意な速度で生じ、そして頻繁に、臨床不全に関連する。ＩＶＩＧは、腹膜炎において、有望だが、一貫しない結果を示したが、しかし、熱傷創傷に関して、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対するプールされるポリクローナル免疫グロブリンの局所（腹膜）送達は、マウスモデルにおいて、感染を有意に減少することが示された。Ｂａｒｅｋｚｉら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ．４３：１６０９〜１６１５（１９９９）を参照のこと。
【００１６】
抗生物質レジメンを用いたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の処置は、益々困難になっている。なぜなら、とりわけ、抗生物質耐性株が現れたからである。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の予防および処置についての受動抗体治療の出現は、有望ではあるが、非ヒト動物抗体のない精製ヒト抗体（これは、臨床量で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに特異的に結合する）の有用性によって抑制されている。
【００１７】
非ヒト抗体調製物（マウスモノクローナル抗体を含む）は、その免疫原性のために、一般的に、ヒト治療について許容されない。ヒトポリクローナル抗体調製物は、ヒト治療に適切ではあるが、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについての可変力価の防御性抗体を有し、そして複数のドナー由来の抗体の精製の高いコストを有する。
【００１８】
モノクローナル抗体は、理論上、低いコストで、そして所望の特異性で、無制限の量で作製され得る。しかし、有効なヒトモノクローナル抗体は、作製が困難であり、そしてエプスタイン−バーウイルスを用いて形質転換されるべき適切な抗体を発現するヒトＢ細胞を必要とする。この得られるモノクローナル抗体調製物は、ヒトの治療用途に適切ではないようである。さらに、今まで試験されたヒトモノクローナル抗体の大半は、ＩｇＭであり、これは、肺組織に十分に浸透せず、そして免疫複合体形成および炎症の増強に関連し得る。
【００１９】
従って、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに特異的に結合する精製ヒトＩｇＧ抗体、その調製および使用についての方法、ならびにその薬学的組成物およびキットについての必要性が存在する。
【００２０】
（発明の要旨）
本発明は、単離ヒト抗体を提供し、この抗体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａリポ多糖類（ＬＰＳ）に特異的に結合する。本発明は、非ヒト動物におけるこの抗体の作製についての方法、細胞株（ハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む）におけるこの抗体の発現についての方法をさらに提供する。本発明はまた、この抗体を含むキットおよび薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、患者に、本明細書中に記載される薬学的組成物を投与することによって、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染を処置または予防する方法を提供する。
【００２１】
（発明の詳細な説明）
本発明に従って、完全なヒト単離抗体またはその抗原結合部分が提供され、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この完全なヒト単離抗体は、モノクローナルである。他の好ましい実施形態は、抗体の重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列、ならびに抗体の重鎖および軽鎖を含むアミノ酸配列、ならびに特に、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３の連続した重鎖配列および軽鎖配列に対応する特定の配列を含む。さらに、本明細書中に開示される抗体と類似の結合性質を有する抗体、および本明細書中に開示される抗体と類似の機能性を有する抗体（または他のアンタゴニスト）が提供される。このような免疫グロブリン分子およびモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマがまた提供される。
【００２２】
本明細書中の用語は、一般的に、当業者によって理解されるようなその通常の意味を有する。以下の用語は、本明細書中で使用される場合、以下の一般的な意味を有することが意図される：
「Ｂリンパ球性細胞またはその後代」は、Ｂリンパ球性系統由来の任意の細胞またはＢリンパ球性系統に運命付けられる任意の細胞をいう。例は、最初期Ｂリンパ球幹細胞から記憶Ｂ細胞に開始するＢ細胞発生経路におけるすべてのＢリンパ球、形質細胞およびインビトロで作製される任意のハイブリドーマを含むがこれらに限定されない。
【００２３】
「二重特異性抗体」は、２つの別々の抗原についての親和性を有する１つの抗体である。例えば、二重特異性抗体は、重鎖および軽鎖の１つの組み合わせを用いて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳを認識し得、そして第一の組み合わせに付着した重鎖および軽鎖の第二の組み合わせを用いて、白血球細胞の表面マーカーを認識し得る。ＭｃＣｏｒｍｉｃｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：３４７４〜３４８２（１９９７）を参照のこと。
【００２４】
「キメラ抗体」は、その本来の形態から変更されて、別のタンパク質由来のアミノ酸配列を含む抗体である。キメラ抗体は、本来の抗体アミノ酸配列の少なくとも一部分、代表的には、抗原結合領域（Ｆａｂ）を含む部分を保持する。キメラ抗体の例としては、二重特異性抗体、および他の非免疫グロブリンタンパク質配列との融合が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２５】
「サイトカイン」は、一般的に、免疫系のシグナリング分子をいう。サイトカインとしては、インターロイキン（ＩＬ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、リンホトキシン（ＬＴ）、インターフェロン、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージ　ＣＳＦ、顆粒球　ＣＳＦおよび遊走阻害因子が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２６】
「誘導体化する」は、非免疫グロブリン因子の免疫グロブリン分子への接着のプロセスをいう。誘導体化因子の例としては、毒素、補体、抗生物質、ペプチド、多糖類、脂質、有機ポリマー、放射能標識および無機化合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】
「発現制御配列」は、特定の条件下、または特定の細胞において、遺伝子配列の誘導性発現または構成発現を可能にする配列をいう。発現制御配列を調節する細胞プロセスの例としては、遺伝子転写、タンパク質翻訳、メッセンジャーＲＮＡスプライシング、免疫グロブリンアイソタイプスイッチ、タンパク質グリコシル化、タンパク質開裂、タンパク質分泌、細胞内タンパク質局在および細胞外タンパク質ホーミングが挙げられるがこれらに限定されない。
「融合タンパク質」は、２つ以上の異なるタンパク質のアミノ酸配列を含むキメラタンパク質をいう。代表的には、融合タンパク質は、当該分野で周知のインビトロ組換え技術から得られる。しかし、融合タンパク質は、インビボ交差、または他の組換え事象から得られ得る。
【００２８】
「ヒト免疫グロブリン分子」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列によってコードされる免疫グロブリンタンパク質をいう。この免疫グロブリン遺伝子配列は、任意の非ヒト動物において発現され得る。
【００２９】
「ヒトモノクローナル抗体」は、同一の特異性を有するヒト抗体の集団のメンバーである抗体をいう。このヒト抗体の集団は、ハイブリドーマまたは他の不死化細胞株において、ならびに外因性ヒト抗体遺伝子配列を発現する組換え細胞株において産生され得る。
【００３０】
「免疫無防備状態の患者」は、外来抗原または因子に対する免疫応答が、他の状態（例えば、器官移植患者）についての処置に関連して、疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、侵襲性手術または薬物治療のいずれかによって損なわれる患者をいう。
【００３１】
「標識」は、本発明の免疫グロブリンに、普通にはこの免疫グロブリンに関連しない機能的特性を付着する任意の分子をいう。標識は、免疫グロブリンの化学修飾を介して、二重特異性免疫グロブリンの２つのＦａｂ領域のうちの１つによるこの標識の認識を介して、第三の因子についての親和性（例えば、アビジン／ビオチン（ｂｉｏｇｅｎ）相互作用）を介して、放射能標識を介して、または組換え発現される融合タンパク質として付着され得る。標識は、臨床目的または研究目的についての分子タグまたは放射性タグとして、あるいはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染との闘争についての因子（例えば、毒素または補体タンパク質）として機能し得る。標識の他の例としては、酵素、蛍光分子、磁気標識、エピトープタグ（例えば、Ｈ．インフルエンザ赤血球凝集素（ｈｅｍａｇｌｕｔｉｎｉｎ）、抗生物質、補体タンパク質およびサイトカインが挙げられ得る。
【００３２】
「呼吸患者」は、いくつかの他の医療処置に関連して、呼吸器系の疾患について処置されているか、または呼吸ケア（例えば、挿管または換気）を受けているかのいずれかの任意の患者をいう。
【００３３】
「手術患者」は、侵襲性手術手順（代表的には、真皮の穿刺または切開を伴う）に供される任意の患者をいう。
【００３４】
「毒素」は、細胞の殺傷の目的について、抗体に付着され得るタンパク質または非タンパク質化合物をいい、この細胞に、抗体が付着している。毒素の例としては、補体、抗生物質、ペプチド、多糖類、脂質、有機ポリマー、放射能標識および無機化合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３５】
「ベクター」は、目的のＤＮＡ配列のクローニング、増殖、組換え、変異またはそのネイティブ細胞の外側への発現を可能にするＤＮＡ分子をいう。しばしば、ベクターは、発現制御配列を有し、これは、特定の条件下、または特定の細胞において、遺伝子配列の誘導性発現または構成発現を可能にする。ベクターの例としては、プラスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ウイルス、バクテリオファージおよびファージミドが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３６】
「ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）」は、相同に標的される内因性の免疫グロブリ遺伝子座を保有するマウスをいい、内因性のマウス免疫グロブリンの発現を不可能にするが、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の実質的部分を保有するようにする。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統のマウスは、ヒト免疫グロブリン遺伝子の体細胞再配列、ヒト可変遺伝子の超変異（ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）および免疫グロブリンアイソタイプスイッチを可能にする。従って、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統のマウスは、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を利用して、抗原性チャレンジに対する有効な体液性応答の開始を可能にする。この得られる抗体は、完全にヒトであり、そしてその動物自身から、この動物から抽出される培養細胞から、そしてＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）Ｂリンパ球性系統またはその後代から作製されるハイブリドーマから単離され得る。さらに、特定の抗原性チャレンジに対して惹起される免疫グロブリンをコードする、再配列されるヒト遺伝子配列は、当該分野で周知の組換え手段によって単離され得る。
【００３７】
（抗体構造）
基本的な抗体構造単位は、テトラマーを含むことが知られている。各々のテトラマーは、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各々の対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各々の鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う、およそ１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各々の鎖のカルボキシ末端部分は、主に、エフェクター機能を担う定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして分類され、そしてそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖の内部において、可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖はまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））（すべての目的について、その全体において参考として援用される）を参照のこと。各々の軽／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。
【００３８】
従って、インタクトなＩｇＧ抗体は、２つの結合部位を有する。二重特異性抗体（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）または二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）においてを除いて、この２つの結合部位は、同じである。
【００３９】
この鎖はすべて、３つの超可変領域（また、相補性決定領域またはＣＤＲと呼ばれる）によって結合される、同じ一般的構造の比較的保存される枠組み構造領域（ＦＲ）を示す。この各々の対の２つの鎖由来のＣＤＲは、枠組み構造領域によって整列され、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖および重鎖の両方は、ＦＲ１ドメイン、ＣＤＲ１ドメイン、ＦＲ２ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン、ＦＲ３ドメイン、ＣＤＲ３ドメインおよびＦＲ４ドメインを含む。各々のドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ（１９８７および１９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ　Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ　３４２：８７８〜８８３（１９８９）の定義に従う。
【００４０】
二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）または二重特異性抗体（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、２つの異なる重／軽鎖対、および２つの異なる結合部位を有する人工のハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、種々の方法（ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの結合を含む）によって産生され得る。例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉおよびＬａｃｈｍａｎｎ　Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５〜３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３（１９９２）を参照のこと。さらに、二重特異性抗体は、「ｄｉａｂｏｄｉｅｓ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、「Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ」：ｓｍａｌｌ　ｂｉｖａｌｅｎｔ　ａｎｄ　ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」ＰＮＡＳ　ＵＳＡ　９０：６４４４〜６４４８（１９９３））または「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、「Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｈａｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（Ｊａｎｕｓｉｎｓ）ｔａｒｇｅｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｏｎ　ＨＩＶ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｃｅｌｌｓ」ＥＭＢＯ　Ｊ　１０：３６５５〜３６５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、「Ｊａｎｕｓｉｎ：ｎｅｗ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｓｉｇｎ　ｆｏｒ　ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅａｇｅｎｔｓ」Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｕｐｐｌ　７：５１〜５２（１９９２））として形成され得る。二重特性抗体の産生は、従来の抗体の産生と比較して、比較的労働集約的なプロセスであり得、そして精製の収率および程度は、二重特異性抗体について、一般的により低い。二重特異性抗体は、１つの結合部位を有するフラグメントの形態（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦｖ）には存在しない。
【００４１】
（非ヒト動物由来のヒト抗体）
ヒト抗体は、マウスまたはラットの可変領域および／または定常領域を有する抗体に関連する問題のいくらかを回避する。このようなマウスまたはラット由来のタンパク質の存在は、抗体の迅速な除去を導き得るか、または患者による抗体に対する免疫応答の作製を導き得る。マウスまたはラット由来の抗体の利用を回避するために、ヒト化抗体を開発し得るか、または齧歯類へのヒト抗体機能の導入を通じて、完全なヒト抗体を作製し、その結果、この齧歯類が、完全なヒト抗体を産生することが要求されている。
【００４２】
ＹＡＣにおいて、メガベースサイズのヒト遺伝子座をクローニングおよび再構築する能力、ならびにその遺伝子座をマウス生殖系列に導入する能力は、極めて大きいか、または不十分にマッピングされる遺伝子座の機能的成分の解明、ならびにヒト疾患の有用なモデルの作製に対する強力なアプローチを提供する。さらに、マウス遺伝子座のそのヒト等価物での置換についてのこのようなテクノロジーの利用は、発生の間のヒト遺伝子産物の発現および制御、他の系とのその伝達、ならびに疾患誘導および進行におけるその関与への独特の洞察を提供し得る。
【００４３】
このようなストラテジーの重要な実際的適用は、マウスの体液性免疫系の「ヒト化」である。ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座のマウス（このマウスにおいて、内因性のＩｇ遺伝子は、不活化されている）への導入は、プログラム発現および抗体のアセンブリ、ならびにＢ細胞発生におけるその役割の基礎をなす機構を研究する機会を提供する。さらに、このようなストラテジーは、完全なヒトモノクローナル抗体（Ｍａｂ）の産生（ヒト疾患における抗体治療の保証の履行に対する重要な画期的出来事）についての理想的供給源を提供し得る。完全なヒト抗体は、マウスまたはマウス由来のＭａｂに内因性の免疫原性応答およびアレルギー応答を最小化することが期待され、従って、投与される抗体の効能および安全性を増大することが期待される。完全なヒト抗体の使用は、慢性ヒト疾患および再発性ヒト疾患（例えば、炎症、自己免疫、癌および細菌感染）の処置において、実質的利点を提供することが期待され得、この疾患は、潜在的に、度重なる抗体投与を必要とする。
【００４４】
この目的に向けた１つのアプローチは、マウス抗体産生に欠陥のあるマウス系統を、ヒトＩｇ遺伝子座の大きなフラグメントを用いて操作することであり、これは、このようなマウスが、マウス抗体の非存在下において、ヒト抗体の大きなレパートリーを産生することを見越していた。大きなヒトＩｇフラグメントは、大きな可変性の遺伝子多様性、ならびに抗体産生および発現の適切な調節を保持する。抗体多様化および選択、ならびにヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如についてのマウス機構の利用によって、これらのマウス系統における再生ヒト抗体レパートリーは、目的の任意の抗原（ヒト抗原を含む）に対する高親和性抗体を生じるはずである。ハイブリドーマテクノロジーを用いて、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭａｂは、容易に産生および選択され得る。
【００４５】
この一般的なストラテジーは、１９９４年に公表されるように、第一のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統の作製と関連して実証された。Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　７：１３〜２１（１９９４）を参照のこと。このＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統は、酵母人工染色体（ＹＡＣ）（ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のそれぞれ２４５ｋｂおよび１９０ｋｂサイズの生殖系列配置フラグメントを含む）を用いて操作され、これは、中心的な可変領域配列および定常領域配列を含んだ。ヒトＩｇ含有ＹＡＣは、抗体の再配列および発現の両方について、このマウス系統に適合することが証明され、そして不活化マウスＩｇ遺伝子について置換し得た。これは、Ｂ細胞発生を誘導する能力、完全なヒト抗体の成熟様ヒトレパートリーを産生する能力、および抗原特異的ヒトＭａｂを作製する能力によって実証された。これらの結果はまた、より多数のＶ遺伝子、さらなる調節エレメントおよびヒトＩｇ定常領域を含むヒトＩｇ遺伝子座のより大きな部分の導入が、実質的に完全なレパートリーを要約し得ることを示唆し、これは、感染および免疫に対するヒト体液性応答の特徴である。Ｇｒｅｅｎらの研究は、それぞれヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列配置のＹＡＣフラグメントの導入を通じて、ヒト抗体レパートリーの約８０％を超える導入に最近拡張されて、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）マウスを産生した。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１５：１４６〜１５６（１９９７）、ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ　Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３〜４９５（１９９８）、ならびに１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願番号０８／７５９，６２０（この開示は、本明細書によって、参考として援用される）を参照のこと。
【００４６】
このようなアプローチは、さらに、１９９０年１月１２日に出願された米国特許出願番号０７／４６６，００８、１９９０年１１月８日に出願された同０７／６１０，５１５、１９９２年７月２４日に出願された同０７／９１９，２９７、１９９２年７月３０日に出願された同０７／９２２，６４９、１９９３年３月１５日に出願された同０８／０３１，８０１、１９９３年８月２７日に出願された同０８／１１２，８４８、１９９４年４月２８日に出願された同０８／２３４，１４５、１９９５年１月２０日に出願された同０８／３７６，２７９、１９９５年４月２７日に出願された同０８／４３０，９３８、１９９５年６月５日に出願された同０８／４６４，５８４、１９９５年６月５日に出願された同０８／４６４，５８２、１９９５年６月５日に出願された同０８／４６３，１９１、１９９５年６月５日に出願された同０８／４６２，８３７、１９９５年６月５日に出願された同０８／４８６，８５３、１９９５年６月５日に出願された同０８／４８６，８５７、１９９５年６月５日に出願された同０８／４８６，８５９、１９９５年６月５日に出願された同０８／４６２，５１３、１９９６年１０月２日に出願された同０８／７２４，７５２および１９９６年１２月３日に出願された同０８／７５９，６２０において議論および詳細に概説される。また、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１５：１４６〜１５６（１９９７）ならびにＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ　Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３〜４９５（１９９８）を参照のこと。また、１９９６年６月１２日に特許を取った後に公開された欧州特許第ＥＰ　０　４６３　１５１　Ｂ１号、１９９４年２月３日に公開された国際特許出願第ＷＯ　９４／０２６０２、１９９６年１０月３１日に公開された国際特許出願第ＷＯ　９６／３４０９６および１９９８年６月１１日に公開された同第ＷＯ　９８／２４８９３を参照のこと。上記で引用される特許、出願および参考文献の各々の開示は、本明細書によって、その全体において参考として援用される。
【００４７】
本発明に従った抗体は、好ましくは、トランスジェニックマウスの利用を通じて調製され、このマウスは、ヒト抗体を産生する挿入ゲノムの実質的部分を有するが、内因性のマウス抗体の産生においては不完全にする。次いで、このようなマウスは、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を産生し得、そしてマウス免疫グロブリン分子および抗体の産生は不完全である。同じことの達成について利用されるテクノロジーは、本明細書中に開示される特許、出願および参考文献に開示される。
【００４８】
このようなテクノロジーの使用を通じて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対する完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が産生された。本質的に、本発明者らは、マウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統を、熱殺傷したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを用いて免疫し、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ抗体を発現するマウスから脾臓細胞およびリンパ節細胞（例えば、Ｂ細胞）を回収し、このような回収される細胞を、非分泌性骨髄腫細胞に融合して、不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し、そしてハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして、目的の抗原に特異的な抗体を産生する細胞株を同定した。
【００４９】
認識されるように、本発明に従った抗体は、ハイブリドーマ細胞株ではない細胞株において発現され得る。特定の抗体をコードする配列は、適切な宿主細胞の形質転換について使用され得る。形質転換は、ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入（例えば、ポリヌクレオチドのウイルス（またはウイルスベクター）へのパッケージング、およびウイルス（またはベクター）を用いた宿主細胞の形質導入を含む）についての任意の公知の方法、あるいは米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号および同第４，９５９，４５５号（これらの特許は、本明細書によって、本明細書中において参考として援用される）によって例示されるような当該分野で公知のトランスフェクション手順によって行われ得る。使用されるこの形質転換手順は、形質転換されるべき宿主に依存する。異種ポリヌクレオチドの哺乳動物細胞への導入についての方法は、当該分野で周知であり、そしてデキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソームへのポリヌクレオチドのカプセル化、およびＤＮＡの核への直接マイクロインジェクションが挙げられる。
【００５０】
発現についての宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、そして以下を含むがこれらに限定されないＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む：チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ／Ｏ、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌腫細胞（例えば、Ｈｅｐ　Ｇ２）および多くの他の細胞株。特定の好みの細胞株が、どの細胞株が、高い発現レベルを有するか、そして構成的なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ結合性質を有する抗体を産生するかの決定を通じて選択される。
【００５１】
さらに、産生細胞株からの本発明の抗体（またはその抗体由来の他の部分）の発現は、多くの公知の技術を用いて増強され得る。例えば、発現の増強は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）またはグルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）を利用して、同時増幅発現系によって実現され得る。例えば、ＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ　Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１〜６２１（１９８２）；欧州特許第０　２１６　８４６号、同第０　２５６　０５５号および同第０　３２３　９９７号；ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４を参照のこと。
【００５２】
本発明の抗体はまた、哺乳動物または植物（これは、目的の免疫グロブリン重鎖配列および軽鎖配列についてトランスジェニックである）の作製、およびその動物または植物から回収可能な形態にある抗体の産生を通じて産生され得る。哺乳動物におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、ヤギ、ウシまたは他の哺乳動物の乳汁において産生され得、そしてこれらの乳汁から回収され得る。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号および同第５，７４１，９５７号を参照のこと。
【００５３】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、非ヒト動物において発現され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、モノクローナル抗体である。
【００５４】
本発明は、さらに、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞についてオプソニン作用性である。好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の食作用を促進する。
【００５５】
本発明はまた、この単離ヒト抗体またはその抗原結合部分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに対する免疫応答を増強することを意図する。好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の殺傷を促進する。より好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞に致死的な因子の送達によって、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞の殺傷を促進する。
【００５６】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、ここで、この抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を阻害する。
【００５７】
本発明はまた、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、ここで、この抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに、５×１０−７Ｍ以下、好ましくは、５×１０−７Ｍ〜１×１０−７Ｍの解離定数（Ｋｄ）で結合する。より好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに、１×１０−７Ｍ〜５×１０−８ＭのＫｄで結合する。より好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに、５×１０−８Ｍ〜１×１０−８ＭのＫｄで結合する。
【００５８】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして１時間以上のインビボ半減期を有する。好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、１時間と３０日との間のインビボ半減期を有する。より好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、１６日と３０日との間のインビボ半減期を有する。別のより好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、１時間と１５日との間のインビボ半減期を有する。
【００５９】
本発明のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するこの単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびＩｇＤであり得る。好ましい実施形態において、このＩｇＧは、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプまたはＩｇＧ４サブタイプであり得る。
【００６０】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして標識される。好ましい実施形態において、この標識は、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁気因子、二次抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質またはサイトカインである。
【００６１】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてκ軽鎖およびその枠組み構造配列を含む。好ましい実施形態において、このκ軽鎖の枠組み構造配列は、ヒトＶκ２／Ａ２遺伝子によってコードされる。好ましい実施形態において、このκ軽鎖は、生殖系列Ｖκ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖由来の７と１５との間の変化を含む。より好ましい実施形態において、このκ軽鎖は、生殖系列Ｖκ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖由来の６以下のアミノ酸変化を含む。より好ましい実施形態において、このκ軽鎖は、生殖系列Ｖκ２／Ａ２遺伝子によってコードされるκ軽鎖由来の３以下のアミノ酸変化を含む。
【００６２】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして配列番号４のアミノ酸配列を有するκ軽鎖を含む。本発明は、さらに、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして配列番号３の核酸配列によってコードされるκ軽鎖を含む。本発明はまた、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてλ軽鎖を含む。
【００６３】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、可変（Ｖ）領域、多様性（Ｄ）領域および結合（Ｊ）領域から構成され、そしてその枠組み構造配列から構成される重鎖を含む。好ましい実施形態において、この重鎖の可変領域は、ヒトＶＨ３／Ｖ３〜３３遺伝子によってコードされる。別の好ましい実施形態において、この重鎖の多様性領域は、ヒトＤ２〜８遺伝子によってコードされる。別の好ましい実施形態において、この重鎖の結合領域は、ヒトＪＨ４ｂ遺伝子によってコードされる。より好ましい実施形態において、この可変領域は、生殖系列ＶＨ３／Ｖ３〜３３遺伝子によってコードされる可変領域由来の７と１５との間のアミノ酸変化を含む。より好ましい実施形態において、この重鎖は、生殖系列ＶＨ３／Ｖ３〜３３遺伝子によってコードされる可変領域由来の６以下のアミノ酸変化を含む。より好ましい実施形態において、この重鎖は、生殖系列ＶＨ３／Ｖ３〜３３遺伝子によってコードされる可変領域由来の３以下のアミノ酸変化を含む。
【００６４】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そして配列番号１の核酸配列によってコードされる。
【００６５】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦｒフラグメントからなるリストから選択される抗原結合ドメインを含む。
【００６６】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてこの抗体は、単鎖抗体である。
【００６７】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてこの抗体は、キメラ抗体である。好ましい実施形態において、このキメラ抗体は、異なるヒト抗体由来の枠組み構造領域およびＣＤＲ領域を含む。より好ましい実施形態において、このキメラ抗体は、二重特異性である。より好ましい実施形態において、このキメラ抗体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ、および以下からなるリストから選択される標識について二重特異性である：放射性標識分子、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁気因子、二次抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質およびサイトカイン。
【００６８】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、そしてこの抗体またはその一部分は、誘導体化される。好ましい実施形態において、この抗体またはその一部分は、ポリエチレングリコール、少なくとも１つのメチル基またはエチル基、あるいは少なくとも１つの炭水化物部分を用いて誘導体化される。
【００６９】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を意図する。本発明は、その抗体またはその抗原結合部分、それについての薬学的に受容可能なキャリア、および容器を含むキットをさらに意図する。好ましい実施形態において、このキットは、使用についての指示書をさらに含む。
【００７０】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の処置または予防についての方法を意図し、この方法は、薬学的組成物を、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染されている危険性の患者またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに現在感染した患者に投与する工程を包含する。
【００７１】
好ましい実施形態において、このヒト抗体は、モノクローナル抗体である。別の好ましい実施形態において、この薬学的組成物は、注入、経粘膜（ｔｒａｓｍｕｃｏｓａｌ）、経口、吸入、目、直腸、持続性作用のある移植、リポソーム、乳剤、クリーム、局所放出手段または徐放性手段を介して投与される。別の好ましい実施形態において、この抗体は、第二のタンパク質との融合である。より好ましい実施形態において、この第二のタンパク質は、以下からなるリストから選択される：毒素ペプチド部分、補体タンパク質、放射性標識タンパク質、サイトカインまたは抗生物質タンパク質。別の好ましい実施形態において、この抗体は、放射性標識、毒素、補体タンパク質、サイトカインまたは抗生物質で標識される。別の好ましい実施形態において、この患者は、熱傷患者、手術患者、プロテーゼレシピエント、呼吸患者、癌患者、嚢胞性線維症患者または免疫無防備状態の患者である。別の好ましい実施形態において、この薬学的組成物は、毒素、補体タンパク質、放射性標識タンパク質、サイトカイン、抗生物質またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
【００７２】
本発明は、単離細胞株を意図し、これは、ヒト抗体またはその抗原結合部分を産生し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この細胞株は、ハイブリドーマである。
【００７３】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分の産生方法を意図し、この方法は、以下の工程：
ａ）抗体が産生される条件下で、抗体を産生し得る非ヒト細胞を培養する工程；
ｂ）この細胞培養物から抗体を単離する工程、
を包含する。
【００７４】
好ましい実施形態において、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分の産生方法は、ハイブリドーマを利用する。別の好ましい実施形態において、この方法は、ヒト抗体またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子を用いて形質転換される細胞を利用し、そしてこの細胞は、以下からなるリストから選択される：細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、両生動物細胞および哺乳動物細胞。より好ましい実施形態において、この哺乳動物細胞は、以下からなるリストから選択される：ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞、ウシ細胞およびハムスター細胞。より好ましい実施形態において、この哺乳動物細胞は、以下からなるリストから選択される：ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ　３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＣＶ−１細胞、ＮＳ／０細胞およびＣＯＳ細胞。
【００７５】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分の作製についての方法を意図し、この方法は、以下の工程：
ａ）非ヒト動物にヒト免疫グロブリン遺伝子座を組み込まれた非ヒト動物を、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗原性組成物を用いて免疫する工程；
ｂ）この非ヒト動物が、この抗原性組成物に対する体液性応答を開始することを可能にする工程；および
ｃ）この非ヒト動物からヒト抗体を単離する工程、
を包含する。
【００７６】
本発明は、非ヒト動物から単離される核酸分子を意図し、この核酸分子は、ヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分をコードし、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この核酸分子は、ヒト抗体を産生するハイブリドーマから単離される。
【００７７】
本発明は、ヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子またはそのフラグメントを意図し、これは、配列番号１のヌクレオチド配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この単離核酸分子は、ヒト抗体の１と３との間ＣＤＲ領域をコードする配列を含む。
【００７８】
本発明は、ヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子またはそのフラグメントを含むベクターを意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに特異的に結合する。好ましい実施形態において、このベクターは、この核酸に作動可能に結合される発現制御配列をさらに含む。
【００７９】
本発明は、非ヒト動物から単離される核酸分子を意図し、この核酸分子は、ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードし、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この核酸分子は、ヒト抗体を産生するハイブリドーマから単離される。
【００８０】
本発明は、ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子またはそのフラグメントを意図し、これは、配列番号３のヌクレオチド配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する。好ましい実施形態において、この単離核酸分子は、ヒト抗体の１と３との間ＣＤＲ領域をコードする配列を含む。
【００８１】
本発明は、ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子またはそのフラグメントを含むベクターを意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに特異的に結合する。好ましい実施形態において、このベクターは、この核酸に作動可能に結合される発現制御配列をさらに含む。
【００８２】
本発明は、単離宿主細胞を意図し、これは、以下：
ａ）非ヒト動物から単離され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子；あるいは
ｂ）この核酸分子を含むベクター、
を含む。
【００８３】
本発明は、単離宿主細胞を意図し、これは、以下：
ａ）非ヒト動物から単離され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子；あるいは
ｂ）この核酸分子を含むベクター、
を含む。
【００８４】
本発明は、単離宿主細胞を意図し、これは、以下：
ａ）非ヒト動物から単離され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子、およびそのヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子；あるいは
ｂ）この核酸分子を含むベクター、
を含む。
【００８５】
好ましい実施形態において、上記の単離宿主細胞は、以下からなるリストから選択される：ハイブリドーマ細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、両生動物細胞および哺乳動物細胞。より好ましい実施形態において、この哺乳動物細胞は、以下からなるリストから選択される：ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞、ウシ細胞およびハムスター細胞。より好ましい実施形態において、この哺乳動物細胞は、以下からなるリストから選択される：ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ　３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＣＶ−１細胞、ＮＳ／０細胞およびＣＯＳ細胞。
【００８６】
本発明は、非ヒト動物から同定され、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分、軽鎖またはその抗原結合部分、あるいは軽鎖および重鎖の両方またはそれらの抗原結合部分を組換え産生する方法を意図し、この方法は、この核酸分子が発現される条件下で、上記の宿主細胞を培養する工程を包含する。
【００８７】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分を意図し、これは、上記の重鎖をコードする核酸分子のいずれかによってコードされるか、または上記の宿主細胞のいずれかから単離される。好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体重鎖またはその抗原結合部位は、抗体の血清半減期を増大する１と１０との間のアミノ酸置換を含む。
【００８８】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分を意図し、これは、上記の重鎖をコードする核酸分子のいずれかによってコードされるか、または上記の宿主細胞のいずれかから単離される。好ましい実施形態において、この単離ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部位は、抗体の血清半減期を増大する１と１０との間のアミノ酸置換を含む。
【００８９】
本発明は、上記の核酸分子のいずれかを含む非ヒトトランスジェニック動物を意図する。好ましい実施形態において、この非ヒトトランスジェニック動物は、核酸分子を発現する。より好ましい実施形態において、この非ヒトトランスジェニック動物は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合するヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子、およびそのヒト抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離核酸分子を含み、そしてこの非ヒト動物は、両方の核酸分子を発現する。より好ましい実施形態において、この非ヒト動物は、以下からなるリストから選択される：マウス、ラット、ハムスター、ウシ、ヒツジ、霊長類、ウマおよびブタ。より好ましい実施形態において、この単離核酸分子またはその一部分の発現から生じるヒト抗体は、動物のＢリンパ球性細胞またはその後代由来の細胞の表面上に発現される。別の好ましい実施形態において、この単離核酸分子またはその一部分の発現から生じるヒト抗体は、動物のリンパ、血液、乳汁、唾液または腹水に分泌される。
【００９０】
本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分、および第二のポリペプチド配列を含む融合タンパク質を意図する。好ましい実施形態において、この第二のポリペプチド配列は、以下からなるリストから選択される：エピトープタグ、親和性タグ、毒素ポリペプチド、抗生物質、酵素、第二の抗体配列、補体タンパク質およびサイトカイン。
【００９１】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、ここで、この抗体の重鎖のアイソタイプは、μ、γ、δ、εまたはαである。
【００９２】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、ここで、この抗体またはその抗原結合部分は、以下の工程：
ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒト動物を、以下からなる群より選択される抗原を用いて免疫する工程：単離Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ調製物、雄性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物、弱毒化Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物、および死菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細胞調製物；
ｂ）この非ヒト動物が、この抗原に対する免疫応答を開始することを可能にする工程；ならびに
ｃ）この非ヒト動物からこの抗体を単離する工程、
を包含するプロセスによって産生される。
【００９３】
本発明は、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、これは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合し、ここで、このＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳは、以下からなるリストから選択されるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株に由来する：０６ａｄ、０１１、Ｈａｂｓ１６、１７０００３およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙ。
本発明は、汚染ヒト生体材料を含まない動物または細胞から単離される単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を意図する。好ましい実施形態において、この生体材料は、ウイルス、酵素、ホルモン、サイトカイン、レセプター、レセプターリガンド、免疫グロブリン、補体、核タンパク質および細胞質シグナリングタンパク質である。より好ましい実施形態において、このウイルスは、エプスタイン−バーウイルスまたはレトロウイルスである。
【００９４】
薬学的組成物は、以下の手段によって製造され得る：従来の混合工程、溶解工程、粒状化工程、糖剤作製工程、湿式粉砕工程、乳化工程、カプセル化工程、捕捉工程または凍結乾燥工程。
【００９５】
従って、本発明に従った使用についての薬学的組成物は、賦形剤および補助剤を含む１つ以上の生理学的に受容可能なキャリアを用いて、従来の様式で処方され得、この賦形剤および補助剤は、活性化合物の薬学的に使用され得る調製物へのプロセシングを容易にする。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。
【００９６】
注入について、本発明の因子は、水溶液、好ましくは、生理学的に適合性の緩衝液（例えば、ハンクス液、リンガー液または生理的食塩水緩衝液）に処方され得る。経粘膜投与について、浸透されるべき障壁に適切な浸透剤が、この処方において使用される。このような浸透剤は、一般的に当該分野で公知である。目投与について、適切な生理食塩水溶液における懸濁液は、当該分野で周知のように使用される。
【００９７】
経口投与について、この化合物は、この活性化合物を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって容易に処方され得る。このようなキャリアは、本発明の化合物を、処置されるべき患者による経口摂取について、錠剤、丸剤、糖剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方されることを可能にする。経口使用についての薬学的調製物は、固体賦形剤として獲得され得、これは、所望であれば、適切な補助剤の添加の前に、必要に応じて、得られる混合物を研磨し、そしてこの顆粒混合物をプロセシングして、錠剤または糖剤のコアを得る。適切な賦形剤としては、以下が挙げられる：フィラー（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のような）。所望であれば、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が添加され得る。
【００９８】
糖衣錠の中核は、適切なコーティングとともに提供される。この目的のためには、濃縮された糖溶液が使用され得る。これは、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル（ｃａｒｂｏｐｏｌ　ｇｅｌ）、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒、または溶媒混合物を含み得る。染料または色素が、活性な化合物の用量の異なる組合せを同定するかまたはそれを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠のコーティングに添加され得る。
【００９９】
経口によって使用され得る薬学的調製物には、ゼラチンから作られたプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）から作られた軟らかいシールされたカプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースのような増量剤、澱粉のような結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ならびに必要に応じて安定剤とともに、混合物中に有効成分を含み得る。軟らかいカプセル中では、活性な化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、液体パラフィン、または液体のポリエチレングリコール）中に溶解させられるかまたは懸濁され得る。さらに、安定剤が添加させられ得る。経口投与のための全ての処方物は、このような投与に適切な投与量であるべきである。
【０１００】
舌下投与のためには、組成物は、従来の様式で処方された錠剤またはトローチ剤の形態をとり得る。
【０１０１】
吸入による投与のためには、本発明に従って使用される化合物は、加圧されたパック、または噴霧器からのエアゾールスプレーの噴出の形態で、適切な発射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体）の使用とともに、便利に送達される。加圧されたエアゾールの場合には、投与量単位は、測定された量を送達する値を提供することによって、決定され得る。吸入器または通気器での使用のためには、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物の粉末混合物およびラクトースまたは澱粉のような適切な散剤基剤を含有して処方され得る。
【０１０２】
化合物は、注射による（例えば、ボーラス注射または持続的な注入による）非経口投与のために処方され得る。注射用の処方物は、添加された防腐剤とともに、例えば、アンプルまたは複数投薬容器中に単位投与量形態で提示され得る。組成物は、油性または水性のビヒクル中で懸濁物、溶液、または乳濁物のような形態をとり得、そして懸濁剤、安定剤、および／または分散剤のような処方剤を含み得る。
【０１０３】
全身的投与のための薬学的処方物は、水溶性の形態で活性な化合物の水溶液を含む。さらに、活性な化合物の懸濁物が、適切な油性の注射用懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルには、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドのような合成の脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘性を増大させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、懸濁物はまた、適切な安定剤、または高度に濃縮された溶液の調製を可能にする化合物の可溶性を増大させる試薬を含み得る。
【０１０４】
あるいは、有効成分は、適切なビヒクル（例えば、滅菌の発熱物質をふくまない水）との使用前の構成のために粉末形態であり得る。
【０１０５】
化合物はまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を含有する、坐剤または保持浣腸液のような直腸用組成物に処方され得る。
【０１０６】
上記に記載されている処方物に加えて、化合物はまた、貯蓄用調製物（ｄｅｐｏｔ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）として処方され得る。このような長期作用性処方物は、移植（例えば、皮下または筋肉内）によって、あるいは筋肉内注射によって投与され得る。従って、例えば、化合物は、適切なポリマー性もしくは疎水性材料（例えば、受容可能な油中の乳濁物として）またはイオン交換樹脂とともに処方されるか、あるいは可溶性の低い誘導体として（例えば、可溶性の低い塩として）処方される場合がある。
【０１０７】
本発明の疎水性化合物のための薬学的キャリアは、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水と混合することができる有機ポリマー、および水相を含有する共溶媒系である。共溶媒系はＶＰＤ共溶媒系であり得る。ＶＰＤは、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００の溶液であり得、無水エタノールで容量を増大させられる。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：５Ｗ）は、水溶液中で５％デキストロースと１：１稀釈されたＶＰＤから構成される。この共溶媒系は、疎水性化合物を十分に溶解させ、そしてそれ自体は全身投与の際に低い毒性しか生じない。天然においては、共溶媒系の特性は、その可溶性および毒性の特徴を破壊させることなく相当に変化し得る。さらに、補助溶媒成分の同定は変更され得る：例えば、他の毒性の低い非極性界面活性剤が、ポリソルベート８０の代わりに使用され得る；ポリエチレングリコールの画分の大きさが変更され得る；他の生体適合性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）によってポリエチレングリコールを置き換え得る；そして他の糖またはポリサッカライドによってデキストロースを置換し得る。
【０１０８】
あるいは、疎水性の薬学的化合物のための他の送達系が、使用される場合がある。リポソームおよび乳濁物が、疎水性薬物のための送達ビヒクルまたはキャリアの周知の例である。特定の有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド）もまた使用され得るが、通常は、より大きな毒性を伴う。
【０１０９】
さらに、化合物は、治療薬を含有する固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスのような、徐放系を使用して送達され得る。種々の徐放材料が確立されており、そして当業者に周知である。徐放カプセルは、それらの化学的な性質に依存して、数週間から１００日を越えて、化合物を放出し得る。
【０１１０】
治療薬の化学的性質および生物学的安定性に依存して、タンパク質の安定化のためのさらなるストラテジーが使用され得る。
【０１１１】
薬学的組成物はまた、適切な固相またはゲル相キャリアまたは賦形剤を含み得る。このようなキャリアまたは賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマーが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１２】
本発明のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分は、薬学的に適合性の反対イオンを有する塩として提供し得る。薬学的に適合性の塩は、多くの酸（塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、スクシン酸などを含むがこれらに限定されない）を用いて形成され得る。塩は、対応する遊離塩基の形態の、水性または他のプロトン性溶媒中でより可溶性となる傾向にある。
【０１１３】
本発明のキットの成分は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の予防または処置のために本発明の組成物を利用するための説明書を含む。出願人は、最初に、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を用いて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を予防または処置する方法を、本明細書中で開示する。キットに印刷された説明書によって、当業者は、本発明の方法を実施するためにキットを利用することが可能である。
【０１１４】
（実施例１）
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳに対する完全なヒト抗体を産生するマウスおよびハイブリドーマの作製）
Ａ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ血清型０６ａｄ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ血清型０６ａｄを、マウスの免疫化、マウスの保護アッセイ、および浸透圧アッセイに使用した。マウスチャレンジアッセイのための細菌を、ｐｓｅｕｄｏｓｅｌ寒天（ＢＢＬ、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋ，ＭＤ）上に新たにプレートし、次いで３７℃でインキュベートし、そして１ｃｆｕをＬＢ培地上に接種し、そして５×１０８ｃｆｕ／ｍｌの濃度にまで、水浴を振盪させながら３７℃でインキュベートした。細菌を、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁し、そして冷却したリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄した。免疫化のために細菌を上記のように増殖させ、そして６０℃で１時間熱によって死滅させ、そして使用するまで４℃で保存した。フローサイトメトリー浸透圧アッセイで使用した標識した細菌を上記のように増殖させ、そして熱によって死滅させた。しかし、これらの細菌を、１０９／ｍｌの濃度を生じるように、アルカリ結合緩衝液（ＡＣＢ：０．５ＭのＮａ２ＣＯ３および０．５ＭのＮａＨＣＯ３の１：３の溶液、ｐＨ９．５）中に再懸濁した。０．０６％のフルオレセインイソチオシアネートイソマーＩ（ＦＩＴＣ、Ａｍｒｅｓｃｏ、Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）を含む等量のＡＢＣを添加し、そして穏やかに振盪させながら室温で２０時間インキュベートした。細菌を、ベローナル緩衝化生理食塩水中で洗浄し、次いで１０９／ｍｌでＰＢＳ中に再懸濁し、そして−８０℃で保存した。
【０１１５】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの０６ａｄ、００１、Ｈａｂｓ１６、１７０００３、およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙ株のＬＰＳ由来のＬＰＳのＯ特異的側鎖の高分子量の多糖部分（高分子量のＰＳ）を、記載するように作成し、そして保存のために凍結乾燥させた。Ｈａｔａｎｏら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６２：３６０８−３６１６（１９９４）を参照のこと。これらの高分子量のＰＳを、以下に記載するように、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のための９６ウェルプレートをコーティングするために使用した。０６ａｄの高分子量のＰＳはまた、以下に記載するブロッキングおよび結合力アッセイにも使用した。
【０１１６】
ヒトの重鎖Ｉｇおよび軽鎖Ｉｇについてトランスジェニックであるマウスを交配させ、そしてＡｂｇｅｎｉｘ　Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡによって維持した。使用したＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）の株は、Ｘｍａ２ａ−３であった。これは、同時挿入されたヒトの重鎖および軽鎖導入遺伝子を含有するＹＡＣで再構築された、Ｉｇ不活化マウスである。マウスを、出荷後、病原体を含まない設備の中でマイクロアイソレータゲージに閉じ込め、そして食物および水は使用前にオートクレーブした。マウスを、１０７個の熱によって死滅させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＰＡで、１週間に２回、腹腔内（ｉｐ）で免疫化（ＰＢＳ中の１０７個の細菌）および／またはフットパットで免疫化（１０７個の細菌およびＲＩＢＩアジュバント、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）し、そしてそれらの血清を、以下に記載するようにＥＬＩＳＡによって抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＬＰＳ抗体についてスクリーニングした。
【０１１７】
ハイブリドーマを、以前に記載されたように、免疫化したセロポジティブなＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）動物由来の脾臓および／またはリンパ節細胞と、非分泌型ｓｐ２／０骨髄腫細胞株との融合によって作製した。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔ．Ｇｅｎ．１５：１４６−１５６（１９９７）；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８８−１９３（１９９１）を参照のこと。ハイブリドーマ由来の上清を、以下に記載するＥＬＩＳＡ手順を使用して、ヒト抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＬＰＳの産生についてスクリーニングし、次いでＩｇＧ抗ＬＰＳ抗体を分泌することを見出したハイブリドーマを、限界希釈によって３回クローン化した。１つのＩｇＧ２分泌型クローン（Ｓ２０）を、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＰＳへの結合強度の最初の測定に基づいて選択した。
【０１１８】
（Ｂ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ血清型ＰＡ０１および１７０００３）
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ血清型ＰＡ０１および１７０００３を、マウスの免疫化のために使用した。細菌をｐｓｅｕｄｏｓｅｌ寒天（ＢＢＬ、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋ，ＭＤ）上にプレートし、次いで３７℃でインキュベートし、そして１ｃｆｕをＬＢ培地上に接種し、そして５×１０８ｃｆｕ／ｍｌの濃度にまで、水浴を振盪させながら３７℃でインキュベートした。細菌を、１０，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、再懸濁し、そして冷却したリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄した。免疫化のために細菌を上記のように増殖させ、そして６０℃で１時間熱によって死滅させ、そして使用するまで４℃で保存した。
【０１１９】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの０６ａｄ、００１、Ｈａｂｓ１６、１７０００３、およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙ株のＬＰＳ由来のＬＰＳのＯ特異的側鎖の高分子量の多糖部分（高分子量のＰＳ）を、記載するように作製し、そして保存のために凍結乾燥させた。Ｈａｔａｎｏら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６２：３６０８−３６１６（１９９４）を参照のこと。これらの高分子量のＰＳを、以下に記載するように、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のための９６ウェルプレートをコーティングするために使用した。ＰＡ０１および１７０００３の高分子量のＰＳはまた、以下に記載するブロッキングアッセイにも使用した。
【０１２０】
ヒトの重鎖Ｉｇおよび軽鎖Ｉｇについてトランスジェニックであるマウスを交配させ、そしてＡｂｇｅｎｉｘ　Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡによって維持した。使用したＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）の株は、Ｘｍａ２ａ−３であった。これは、同時挿入されたヒトの重鎖および軽鎖導入遺伝子を含有するＹＡＣで再構築された、Ｉｇ不活化マウスである。マウスを、出荷後、病原体を含まない設備の中でマイクロアイソレータゲージに閉じ込め、そして食物および水は使用前にオートクレーブした。マウスを、１０７個の熱によって死滅させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１または１７０００３で、１週間に２回、腹腔内（ｉｐ）で免疫化（ＰＢＳ中の１０７個の細菌）および／またはフットパットで免疫化（１０７個の細菌およびＲＩＢＩアジュバント、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）し、そしてそれらの血清を、以下に記載するＥＬＩＳＡによって、抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１または１７０００３　ＬＰＳ抗体について、それぞれスクリーニングした。
【０１２１】
ハイブリドーマを、以前に記載されたように、免疫化したセロポジティブなＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）動物由来の脾臓および／またはリンパ節細胞と、非分泌型ｓｐ２／０骨髄腫細胞株との融合によって作製した。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔ．Ｇｅｎ．１５：１４６−１５６（１９９７）；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８８−１９３（１９９１）を参照のこと。ハイブリドーマ由来の上清を、以下に記載するＥＬＩＳＡ手順を使用して、ヒト抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳの産生についてスクリーニングし、次いで抗ＬＰＳ抗体を分泌することを見出したハイブリドーマを、限界希釈によって３回クローン化した。２つのＩｇＭ２分泌型クローン（Ｈ１２およびＣ３）を、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１　ＰＳへの結合強度の最初の測定に基づいて選択した。これらは、上記の脾臓細胞の融合によって誘導された。リンパ節細胞の融合によって誘導された１つのＩｇＭ分泌型クローン（ＬＭ１Ｈ１０）を、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１７０００３　ＰＳへの結合強度の最初の測定に基づいて選択した。
【０１２２】
（実施例２）
（トランスジェニックマウス由来の抗ＬＰＳ抗体からの可変領域遺伝子の特徴付けおよび用法）
ジデオキシＤＮＡ配列決定を、ヒトモノクローナル抗体の可変領域の配列の決定について以前に記載されているように行った（３０、３３）。全ＲＮＡを、ＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）を使用して９個の異なるクローン由来のハイブリドーマ細胞から単離し、そしてＰＣＲの鋳型としての使用のために、ランダムプライムしたｃＤＮＡに転換した。ヒト重鎖および軽鎖可変領域を、Ｈｕｍａｎ　Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ　Ｓｅｔ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）において提供される縮重リーダーペプチドプライマーおよび定常領域プライマーを使用して増幅した。ＰＣＲ産物を、Ｔｒｉｓ−酢酸−ＥＤＴＡアガロースゲル上で分析した。ポジティブなＰＣＲ反応産物を、クロロホルムイソアミルアルコール（２４：１）で抽出し、そしてｐＴ７Ｂｌｕｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）のＥｃｏＲＩ部位にクローン化した。クローンを、Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ　Ｖ２．０　ＤＮＡ配列決定キット（ＵＳＢ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）を用いたジデオキシ法に基づいて配列決定した。遺伝子用法分析を、Ｖｂａｓｅデータベース（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、ＭＲＣ　Ｃｅｎｔｒｅ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を使用して行った。
【０１２３】
ＰＡ免疫化トランスジェニックマウス由来の脾臓細胞と非分泌型ＳＰ２／０細胞株との融合によって得られたハイブリドーマ由来の可変領域遺伝子をクローン化し、そして可変領域遺伝子の用法を決定するために配列決定した（図１）。ヒトＩｇトランスジェニックマウスで行った防御型ＩｇＧ２抗ＬＰＳモノクローナル抗体を、さらなる研究のために選択し、ＶＨ３遺伝子ファミリー由来の遺伝子を利用して、限定されたＶＨ遺伝子用法との類似性を、種々の細菌の多糖でのヒトの免疫化後に見出した。ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓで免疫化したトランスジェニックマウス由来の脾臓細胞との融合によって作成された９個の他のＭａｂは、ＤＮＡ配列決定によって決定すると重鎖遺伝子エレメントのＶＨ３遺伝子ファミリーにも使用される抗体を生じた。より詳細には、ＤＮＡ配列分析は、ＶＨ３／Ｖ３−３３およびＪＨ４遺伝子が、防御型抗ＬＰＳ　Ｍａｂに使用されることを示した。同様に、使用した軽鎖遺伝子セグメントはＶｋ２／Ａ２およびＪｋ１であり、これはＰＳワクチン免疫法の後に一般的にヒトで使用される。まとめると、これらのトランスジェニックマウスでのＰＡ免疫化後の抗ＬＰＳ抗体の遺伝子用法は、ＰＳ免疫化後にヒトで観察されるものと大いに類似するようである。
【０１２４】
（実施例３）
（抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ抗体の検出）
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を、免疫化したマウスの血清中、および本発明者らが以前に記載した（３４）ようなハイブリドーマ上清中の、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＬＰＳに対する抗体を検出するために使用した。簡潔には、９６ウェルマイクロタイターポリスチレンプレート（ＮＵＮＣ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、２μｇ／ｍｌのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄの高分子量のＰＳで４℃にて一晩コーティングし、洗浄し、そしてＰＢＳ中の１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＴ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および０．０５％のＴｗｅｅｎ　２０（Ａｍｒｅｓｃｏ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）でブロックした（２００μｌ／ウェル）。プレートを洗浄し、そしてＰＢＳ中の１％のＢＳＡ中のＳ２０または血清の連続稀釈とともに一晩インキュベートした。プレートを洗浄し、そして結合した抗体を、イソ型特異的アルカリホスファターゼ結合マウス抗ヒトポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）の添加によって検出した。プレートを、ＤＥＡ緩衝液中の１００μｌ／ウェルのｐ−ニトロフェニルホスフェート（ＰＮＰＰ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）色素形成物質で発色させた。光学密度を、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて４１５ｎｍで測定した。Ｓ２０の特異性を決定するためのブロッキングアッセイを、可溶性のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄの高分子量のＰＳまたは種々の濃度のコントロールのＯＳを、ＰＳでコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートへの添加の前に、Ｓ２０に添加したことを除いて、上記と同じ様式で行った。Ｍａｂの相対的な結合力を、記載されているように計算した。Ｃｈｕｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６３：４２１９−４２３３（１９９５）；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ．１６７：２２１−２２６（１９９３）を参照のこと。抗体を、高分子量のＰＳでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートのウェルに添加し、続いて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄの高分子量のＰＳの連続稀釈物または等量のＰＢＳ（ネガティブコントロール）を添加した。Ｈ１２、Ｃ３、およびＬＮ１Ｈ１０モノクローナル抗体の結合特異性を決定するためのブロッキングアッセイを、可溶性のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１または１７０００３の高分子量のＰＳを使用して、上記に記載したように行った。最大吸収の５０％を阻害するために必要なＰＳの濃度を計算し（Ｉ５０）、そしてこの値の逆数を、相対的な結合力を示すために使用した。
【０１２５】
トランスジェニックマウス中で産生されたＳ２０は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ株のＯ側鎖に特異的であった。ブロッキングアッセイは、コントロールのＰＳ（精製型６Ｂ　ｐｎｅｙｍｏｃｏｃｃａｌ　ｃａｐｓｕｌａｒ　ＰＳ；図２）での１０％未満の阻害と比較して、同じＰＳとのＭａｂの予備インキュベーション後の、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＬＰＳの高分子量のＰＳへのＳ２０の結合の９０％以上の減少を明らかにした。しかし、Ｓ２０は、他のＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ血清型由来のＬＰＳとは交差反応しなかった。なぜなら、種々のｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ株（０１１、Ｈａｂｓ　１６、１７０００３、およびＰＡ０１　Ｈａｌｌｏｗａｙを含む）由来の固相ＬＰＳ　Ｏ側鎖の高分子量のＰＳへの結合は、示すことができなかったからである（図３）。
【０１２６】
高分子量のＰＳへのＳ２０の結合の最大吸収の５０％を阻害した高分子量のＰＳの濃度を決定し、この値の逆数（１／Ｉ５０）を、Ｓ２０の相対的な結合力を計算するために使用した。この値を、以前に開発した同じ高分子量のＰＳに対する防御型マウスのクローナル抗体と、そして同様の技術を使用して誘導した以前に公開された（２、３３）抗多糖の値と比較した。本発明者らは、ヒトのＭａｂの相対的な結合力が、マウスのＭａｂよりも高いことを見出した（１．０対０．０３６）。
【０１２７】
Ｈ１２およびＣ３でのブロッキングアッセイは、コントロールのＰＳ（精製型６Ｂ　ｐｎｅｙｍｏｃｏｃｃａｌ　ｃａｐｓｕｌａｒ　ＰＳ；図７）での２０％未満の阻害と比較して、同じＰＳとのｍＡｂの予備インキュベーション後に、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１のＬＰＳの高分子量のＰＳへの結合において、それぞれ９０％および８５％以上の減少を明らかにした。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１７０００３　ＬＰＳの高分子量のＰＳとのＬＮ１Ｈ１０の予備インキュベーションは、コントロールのＰＳでの４０％未満の阻害と比較して、８９％まで固相ＰＳへのｍＡｂの結合を減少させた（図８）。
【０１２８】
（実施例４）
（抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳ抗体のオプソニン作用は補体依存性の食作用を促進する）
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄにヒト多形核リンパ球（ＰＭＮ）による取り込みのためにオプソニン作用させるヒトモノクローナル抗体の能力を、以前に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定した。Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ　１６７：２２１−２２６（１９９３）を参照のこと。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄを増殖させ、熱によって死滅させ、そしてＦＩＴＣ標識した。オプソニン作用を、補体供給源として無ガンマグロブリン血症患者由来の１％のヒト血清とともにまたはそれを伴わずに、Ｓ２０で標識した細菌をインキュベートすることによって行った。細菌を、６％のデキストランおよび０．２％のグルコースを含有するＰＢＳ中で洗浄し、次いで０．１％のゼラチンを含有するＨＢＳＳ中に再懸濁した。多形核白血球（ＰＭＮ）を、健常な成体のボランティア由来のヒト末梢血から単離した。Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ　１６７：２２１−２２６（１９９３）；Ｔｏｓｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８６：３００−３０８（１９９０）を参照のこと。ＭＮを、１０７個の細胞／ｍｌの濃度を生じるように再懸濁し、そしてＦＭＬＰの細胞１ｍｌあたり１０−６稀釈の１０μｌとともに３０分間活性化した（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ　Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）。ＰＭＮを、オプソニン作用させた各細菌サンプルに添加し、３７℃でインキュベートし、次いで、種々の遠心分離によって遊離の細菌を分離し、そしてＰＢＳ中に再懸濁した。単色フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳｃａｎおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）を利用してＰＭＮについて行い、そして食作用を、それぞれのサンプルについて１０，０００個のＰＭＮの平均の蛍光の相対的な単位で示した。観察したオプソニン作用性食作用（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）が、細菌の死滅に関係するかどうかを決定するために、生存しているＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄの１０６　ＣＦＵを、細菌に吸収させた新鮮なヒト血清、Ｓ２０、および１０６個の新鮮なヒトＰＭＮと混合した、別のアッセイを使用した。サンプルを、９０分間の３７℃でのインキュベーションの開始時および終了時に採取し、細菌を希釈し、次いで細菌数を数え上げるためにプレートした。
【０１２９】
抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ　ＬＰＳ抗体の機能的活性を示すために、Ｓ２０が、補体依存性アッセイにおいて新鮮なヒトＰＭＮによる標識されたＰＡの取り込みについて高度にオプソニン作用性であることを示した。実際、ヒトＭａｂは、以前に記載された同じエピトープに対する防御型マウスＭａｂ（Ｄ８）よりもほぼ２倍、オプソニン作用性であった（２．５ｍｇのヒトＭａｂが、５ｍｇのマウスＭａｂの平均の蛍光の２倍を生じた；図４）。細菌を熱によって死滅させ、その後、ＦＩＴＣで標識したので、抗体に対する感受性の増大および補体媒介性のオプソニン作用が、細菌表面への損傷に起因して生じ得たことを観察することができたようである。従って、本発明者らはまた、１０６のＣＦＵの生存している細菌が抗体およびヒト補体とともにオプソニン作用され、次いでコロニー数が１０６個の新鮮なＰＭＮへの暴露後に決定される、死滅アッセイにおいて、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄのオプソニン作用および食作用を測定した。Ｓ２０　Ｍａｂはまた、５ｍｇ／ｍｌの抗体によってＰＡ　ｃｆｕの８０％の減少を生じたように、このアッセイでも有効である。
【０１３０】
（実施例５）
（好中球減少症のマウスの胎児のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ敗血症からの防御）
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの侵襲性感染に対するヒトＭａｂの防御効果を、以前に記載された好中球減少症マウスのモデルにおいて測定した。Ｐｉｅｒら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５７：１７４−１７９（１９８９）；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８８−１９３（１９９１）を参照のこと。雌性の６週齢のＢＡＬＢ／ｃ　ＢｙＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、病原体を含まない、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓを含まない環境下で維持した。水、敷き藁、および食物を、使用前にオートクレーブした。１、３、および５日目にそれぞれのマウスに３ｍｌのシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を腹腔内注射で投与することによって、好中球減少症を確立させた。５日目に、シクロホスファミドを、０時間で投与し、そして２時間後に、１０μｇのＳ２０またはＰＢＳコントロールを、ｉｐ投与し、続いて２時間後に、１０３ｃｆｕの生存しているＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄのＰＡを投与した。マウスを、その後毎日観察し、そして死亡率を測定結果とした。
【０１３１】
図５に示すように、ＰＢＳコントロールで処置した感染させたマウスは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の１日後に死亡し始めた。２日後、ＰＢＳで処置した感染させたマウスの１００％が死亡した。対照的に、Ｓ２０　ｍＡｂで処置したマウスの１００％が防御を示し、そしてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染の２日後に生存していた。このことは、患者のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる致死力を妨げる上でのＳ２０の防御能力を示している。
【０１３２】
上記の実施態様は、例示の目的のためのみであり；意図される本発明は、これらの特定の実施態様のいずれかによっても限定されず、そして実際、１つ以上の実施態様の組合せを含む場合がある。
【０１３３】
（微生物の寄託）
ハイブリドーマ細胞株Ｓ２０、Ｈ１２、Ｃ３、およびＬＮ１Ｈ１０を、ブダペスト条約の取り決めに従って、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎｎｓｓａｓ，ＶＡ　２０１１０−２２０９、ＵＳＡに寄託し、そして以下の登録番号を与えられた：
ハイブリドーマ　Ｓ２０　　　　ＨＢ
ハイブリドーマ　Ｈ１２　　　　ＨＢ
ハイブリドーマ　Ｃ３　　　　　ＨＢ
ハイブリドーマ　Ｌｎ１Ｈ１０　ＨＢ　　　　　。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、Ｓ２０モノクローナル抗Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗体を産生するハイブリドーマによって利用されるヒト免疫グロブリン可変（Ｖ）領域、多様性（Ｄ）領域および結合（Ｊ）領域を示す。
【図２】
図２は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳとの特異性を有するＳ２０ヒトモノクローナル抗体結合を示す結合阻害アッセイを示す。可溶性のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳは、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳへのＳ２０結合を阻害し得たが、可溶性のＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ　６Ｂコントロール多糖類は、これを阻害できなかった。
【図３】
図３は、Ｓ２０モノクローナル抗体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　０６ａｄ血清型ＬＰＳを特異的に結合するが、０１１、Ｈａｂｓ　１６、１７０００３およびＰＡＯＩ　Ｈａｌｌｏｗａｙ株由来の固相ＬＰＳを結合しないことを示す。
【図４】
図４は、Ｓ２０オプソニン作用が、補体依存性食作用を促進することを示す。末梢核単球（ＰＭＮ）のフローサイトメトリー分析は、ＰＭＮが、補体の存在下においてのみ、ＦＩＴＣ標識されるオプソニン作用性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを食作用したことを示した。
【図５】
図５は、Ｓ２０モノクローナル抗体が、致死的なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ敗血症から、好中球減少性マウスを保護したことを示す。
【図６】
図６は、ヒトモノクローナル抗体Ｓ２０（ＩｇＧ）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す。
【図７】
図７は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳとの特異性を有するＨ１２ヒトモノクローナル抗体結合およびＣ３ヒトモノクローナル抗体結合を示す結合阻害アッセイを示す。可溶性のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１　ＬＰＳは、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＰＡ０１　ＬＰＳへの結合を阻害し得たが、可溶性のＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ　６Ｂコントロール多糖類は、これを阻害できなかった。
【図８】
図８は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＬＰＳとの特異性を有するＬＮ１Ｈ１０ヒトモノクローナル抗体結合を示す結合阻害アッセイを示す。可溶性のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１７０００３　ＬＰＳは、固相Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１７０００３　ＬＰＳへの結合を阻害し得たが、可溶性のＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ　６Ｂコントロール多糖類は、これを阻害できなかった。
【図９】
図９は、Ｓ２０ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１〜３の位置を示す。
【図１０】
図１０は、Ｓ２０ヒトモノクローナル抗体のκ軽鎖可変領域のＣＤＲ１〜３の位置を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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