(57)【要約】本発明は、一般に、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶおよびＨＣＶによって引き起こされるウイルス疾患の予防および／または治療のための、インターフェロン−γ−誘導因子（ＩＧＩＦ）としても知られるＩＬ−１８を含む組成物および他の薬剤との組み合わせたＩＬ−１８の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の全長にわたり配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するポリペプチドを含む治療上有効量の組成物の投与を特徴とする、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項２】
配列番号２の全長にわたり配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一性を有するポリペプチドを含む治療上有効量の組成物の投与を特徴とする、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項３】
治療上有効量の請求項１記載のポリペプチドを含む組成物の投与を特徴とする、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶによって引き起こされる疾患の予防法。
【請求項４】
治療上有効量の請求項２記載のポリペプチドを含む組成物の投与を特徴とする、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶによって引き起こされる疾患の予防法。
【請求項５】
治療上有効量の請求項１または２記載のポリペプチドを含む組成物および抗ウイルス剤の投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項６】
治療上有効量の請求項１または２記載のポリペプチドを含む組成物および免疫調節性サイトカインの投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項７】
治療上有効量の請求項１または２記載のポリペプチドを含む組成物およびリバビリン、インターフェロンαまたはβ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ、ＣＳＦ、ＴＮＦ、ラミブジン、レベトロン（リバビリンおよびリバビリンα）、シドフォビル、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、ファムシクロビル、ガンシクロビルまたはバルガネシクロビルよりなる群から選択される薬剤の投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項８】
治療上有効量の請求項１または２に記載のポリペプチドを含む組成物およびウイルス蛋白質またはヌクレオチド配列から由来の免疫原の投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項９】
治療上有効量の請求項１または２に記載のポリペプチドを含む組成物およびウイルス性ワクチンの投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【請求項１０】
治療上有効量の請求項１または２に記載のポリペプチドを含む組成物ならびにＨａｖｒｉｘ、Ｅｎｇｅｒｉｘ ＢおよびＲｅｃｏｍｂｉｖａｘから選択されるワクチンの投与を特徴とする、ウイルスによって引き起こされる疾患の治療法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、一般に、ウイルス疾患の予防および／または治療において、インターフェロン−γ−誘導因子（ＩＧＩＦ）としても知られるＩＬ−１８およびＩＬ−１８と他の薬剤との組み合わせの使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
ＩＬ−１８は、近年に見出された新規なサイトカインである。活性なＩＬ−１８は１５７個のアミノ酸残基を含む。それは、Ｔ細胞および脾臓細胞によるインターフェロン−γ−産生、ＮＫ細胞の致死活性の増強および天然ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｈ１細胞への分化の促進を包含する強い生物学的活性を有する。さらに、ヒトＩＬ−１８は、ＧＭ−ＣＳＦの産生を増加し、ＩＬ−１０の産生を減少する。ＩＬ−１８は、ＩＬ−１２より大きいインターフェロン−γ−誘導能を有することが示されており、異なるレセプターを有し、別個のシグナル変換経路を利用するようである。
【０００３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、全ての免疫応答の中央調節エレメントである。それらは、２つのサブセット、Ｔｈ１およびＴｈ２に分かれる。各サブセットは、異なるサイトカインを分泌する能力によって定義付けられる。興味深いことに、分化の最も強力な誘導因子はサイトカイン自体である。天然前駆体からのＴｈ２細胞への発達は、ＩＬ−４によって誘導される。ＩＬ−１８の発見より以前は、ＩＬ−１２が主なＴｈ１誘導性サイトカインでると考えられていた。ＩＬ−１８もまたＴｈ１誘導性サイトカインであり、インターフェロン−γの産生の刺激においてＩＬ−１２より強力である。
【０００４】
Ｔｈ１細胞は、ＩＬ−２、インターフェロン−γおよびＴＮＦ−βを分泌する。インターフェロン−γ、典型的なＴｈ１サイトカインは、マクロファージに直接作用して、それらの殺微生物活性および食細胞活性を増強する。結果として、活性化されたマクロファージは、細胞内病原体および腫瘍細胞を効果的に破壊することができる。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を生産し、それらはＢ細胞を助けて抗体産生細胞に発達させることによって作用する。まとめると、Ｔｈ１細胞は主として細胞媒介性免疫の原因であり、一方、Ｔｈ２細胞は体液性免疫の原因である。
【０００５】
ＩＬ−１８、その精製蛋白質のコード化ヌクレオチド配列およびある種の物理化学的化学特性が知られている。
１９９６年１月１７日に公開されたＥＰ０ ６９２ ５３６に対応する株式会社林原生物化学研究所（「林原」）のＵＳ５，９１２，３２４は、免疫担当細胞によるＩＦＮ−ガンマ産生を誘導するマウス蛋白質、さらに、ある種の物理化学的特性を有するとして特徴付けられている該蛋白質および定義付けられた部分アミノ酸配列を開示する。また、１５７アミノ酸配列を有する蛋白質、その２つのフラグメント、該蛋白質をコードしているＤＮＡ（４７１ｂｐ）、ハイブリドーマ、蛋白質精製法および該蛋白質の検出方法が開示される。
【０００６】
１９９６年５月２２日に公開されたＥＰ ０ ７１２ ９３１に対応する林原のＵＳ６，２１４，５８４は、１５７アミノ酸ヒト蛋白質およびその相同物、該蛋白質をコードしているＤＮＡ、形質転換体、該蛋白質の調製法、該蛋白質に対するモノクローナル抗体、ハイブリドーマ、蛋白質精製法、該蛋白質の検出法、および悪性腫瘍、ウイルス疾患、細菌感染疾患および免疫疾患の治療および／または予防法を開示する。
【０００７】
１９９７年６月１０日に公開されたＩｎｃｙｔｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．のＷＯ９７／２４４４１は、ＩＬ−１８前駆体に対応する１９３アミノ酸蛋白質およびコード化ＤＮＡを開示する。
ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＶＢおよびＨＣＶなどのウイルス疾患は、現在、例えば、抗ウイルス剤、免疫療法およびワクチンを用いて治療および／または予防される。しかしながら、現行の治療は常に有効であるとは限らない。したがって、かかるウイルス疾患のためのより有効な治療が要望される。
【０００８】
（発明の開示）
発明の概要
一の態様において、本発明は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列と該配列の全長にわたり少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドのウイルス疾患阻害量を単独で、または抗ウイルス剤、例えば、限定するものではないが、フォスカルネット（ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）、アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）（ＡＣＶ）、ＡＣＶ−ホスホネート、ブリブジン（ｂｒｉｖｕｄｉｎｅ）（ブロモビニルデオキシウリジン、ＢＶＤＵ）、シドフォビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）（ＨＰＭＰＣ、ＧＳ５０４）、サイクリックＨＰＭＰＣ、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）（ＧＣＶ）、ＧＣＶ−ホスホネート、ロブカビル（ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）（ビスヒドロキシメチルシクロブチルグアニン、ＢＨＣＧ）、ペンシクロビル（ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、リバビリン（ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）、アデフォビル（ａｄｅｆｏｖｉｒ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）（３ＴＣ）、アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、ジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）、テノビル（ｔｅｎｏｖｉｒ）、他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮまたは免疫調節物質、例えば、限定するものではないが、リバビリン、チモシンアルファ、コルチコステロイド、サリドマイド、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、ならびにワクチン、例えば、限定するものではないが、ＨａｖｒｉｘＲ（登録商標）、ＥｎｇｅｒｉｘＲ（登録商標）と組み合わせて投与することを特徴とする、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶおよびＨＣＶなどのウイルス疾患を治療および／または予防する方法を提供する。
【０００９】
さらなる態様において、本発明は、単独の、または抗ウイルス剤、例えば、限定するものではないが、フォスカルネット、アシクロビル（ＡＣＶ）、ＡＣＶ−ホスホネート、ブリブジン（ブロモビニルデオキシウリジン、ＢＶＤＵ）、シドフォビル（ＨＰＭＰＣ、ＧＳ５０４）、サイクリックＨＰＭＰＣ、ファムシクロビル、ガンシクロビル（ＧＣＶ）、ＧＣＶ−ホスホネート、ロブカビル（ビスヒドロキシメチルシクロブチルグアニン、ＢＨＣＧ）、ペンシクロビル、リバビリン、アデフォビル、ラミブジン（３ＴＣ）、アバカビル、スタブジン、ジドブジン、テノビル、他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮまたは免疫調節物質、例えば、限定するものではないが、リバビリン、チモシンアルファ、コルチコステロイド、サリドマイド、イミキモド、ならびにワクチン、例えば、限定するものではないが、ＨａｖｒｉｘＲ、ＥｎｇｅｒｉｘＲと組み合わせた、ＩＬ−１８を含む組成物のウイルス疾患阻害量の投与を特徴とする、哺乳動物においてＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶおよびＨＣＶなどのウイルス疾患を治療および／または予防する方法を提供する。組成物は、また、医薬上許容される担体を含んでいてもよい。
【００１０】
発明の詳細な記載
本発明は、一般に、ウイルス疾患阻害量のＩＬ−１８を投与することを特徴とするＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶおよびＨＣＶなどのウイルス疾患の予防および／または治療法およびＩＬ−１８を含む組成物に関する。
【００１１】
下記の定義は、本明細書中でしばしば使用されるある特定の用語および略語の理解を容易にするために提供される。
【００１２】
当該分野で既知の「同一性」なる語は、配列を比較して決定される２以上のポリペプチド配列または２以上のポリヌクレオチド配列間の関係をいう。当該分野において、「同一性」なる語はまた、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間の配列相関の度合を意味し、場合により、かかる一連の配列間の合致によって決定される。「同一性」および「類似性」は、限定するものではないが、（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｌｅｓｋ， Ａ．Ｍ．編， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８８； Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ： Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， Ｓｍｉｔｈ， Ｄ．Ｗ．編， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３； Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ Ｉ， Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ．Ｍ．および Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ．Ｇ．編， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ， １９９４； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９８７； および Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． および Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．編， Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１； および Ｃａｒｉｌｌｏ， Ｈ．および Ｌｉｐｍａｎ， Ｄ．， ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．， ４８： １０７３ （１９８８））に記載される方法を包含する既知の方法によって容易に算出できる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間の最も大きい合致を与えるように設計される。同一性および類似性を決定するための方法は、公けに入手可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための好ましいコンピュータープログラム法は、限定するものではないが、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（１）： ３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ， Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ． Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３−４１０ （１９９０））を包含する。ＢＬＡＳＴ Ｘプログラムは、ＮＣＢＩおよび他の供給源から公けに入手可能である（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ， Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ．ら、ＮＣＢＩ ＮＬＭ ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ ２０８９４； Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓ．ら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３−４１０ （１９９０））。よく知られたスミス・ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用されうる。
【００１３】
「単離された」なる語は、「人の手によって」天然状態から変えられたことを意味する。「単離される」組成物または物質が天然物である場合、それは、その元々の環境から変化されたか、または取り出された、またはその両方である。例えば、該用語が本明細書中で使用される場合、生きている動物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていないが、その天然状態の共存材料から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されている。
【００１４】
「ポリペプチド」は、互いにペプチド結合または修飾型ペプチド結合によって結合された２以上のアミノ酸を含むいずれかのペプチドまたは蛋白質、すなわち、ペプチドイソスターをいう。「ポリペプチド」は、一般にペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと称される短鎖および一般に蛋白質と称される長鎖をいう。ポリペプチドは、２０個の遺伝子でコードされるアミノ酸以外のアミノ酸を含有していてもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセッシングのような自然な方法、または当該分野でよく知られた化学的修飾技術によって修飾されたアミノ酸配列を包含する。かかる修飾は、基本的なテキストおよびより詳細な研究論文ならびに大量の研究文献によく記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシ末端を包含するポリペプチドのどこにでも起こり得る。同じ型の修飾が所定のポリペプチドのいくつかの部位に同じまたは異なる度合まで存在しうることは明らかであろう。また、所定のポリペプチドは、多くの型の修飾を含有していてもよい。ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分岐していてもよく、それらは分岐を有するまたは分岐を有さない環状であってもよい。環状の分岐したおよび分岐した環状のポリペプチドは、翻訳後の天然の過程から生じてもよく、または合成法によって作成されてもよい。修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、電子対共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解性プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アミノ酸の蛋白質へのトランスファーＲＮＡ媒介性付加、例えば、アルギニル化、およびユビキチン化を包含する（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ − ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， ２ｎｄ Ｅｄ．， Ｔ． Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３； Ｗｏｌｄ， Ｆ．， Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ： Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ， ｐｇｓ．　１−１２ ｉｎ ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ． Ｃ． Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８３； Ｓｅｉｆｔｅｒら， ”Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａｃｔｏｒｓ”， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ （１９９０） １８２：６２６−６４６ および Ｒａｔｔａｎ ら， ”Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｇｉｎｇ”， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ （���９９２） ６６３：４８−６２を参照のこと）。
【００１５】
「変種」は、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。ポリヌクレオチドの典型的な変種は、別の参照ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列において異なる。変種のヌクレオチド配列における変化は、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変えても変えなくてもよい。ヌクレオチド変化は、下記に論じるように、参照配列によってコードされるポリペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断をもたらしてもよい。ポリペプチドの典型的な変種は、別の参照ポリペプチドとアミノ酸配列において異なる。一般に、差異は、参照ポリペプチドおよび変種の配列が全体に密接に類似し、多くの領域において同一であるように限定される。変種および参照ポリペプチドは、１以上の置換、付加、欠失のいずれかの組み合わせによってアミノ酸配列において異なっていてもよい。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされるものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は、対立遺伝子変種のような天然に生じるものであってもよく、または、天然に生じることが知られていない変種であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非天然変種は、突然変異誘発技術または直接合成によって作成されうる。
【００１６】
ポリペプチド配列比較に関する好ましいパラメーターは：
１）アルゴリズム：ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ， Ｊ． Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． ４８： ４４３−４５３ （１９７０）
比較マトリックス：Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８９：１０９１５−１０９１９ （１９９２）由来のＢＬＯＳＳＵＭ６２
ギャップペナルティー：１２
ギャップ長ペナルティー：４
を包含する。
【００１７】
これらのパラメーターを用いて有用なプログラムは、「ギャップ」プログラムとしてＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩから公に入手可能である。上記のパラメーターは、ペプチド比較のためのデフォルトパラメーター（エンドギャップのためのペナルティーを伴わない）である。
【００１８】
本発明のポリペプチド配列は、配列番号１または配列番号２の参照配列と同一、すなわち、１００％同一であってもよく、またはそれは、同一性％が１００％未満であるように参照配列と比較した場合、ある整数個までのアミノ酸改変を含んでいてもよい。かかる改変は、少なくとも１個のアミノ酸欠失、置換（保存的および非保存的置換を包含する）、または挿入よりなる群から選択され、ここに、該改変は、参照ポリペプチド配列のアミノまたはカルボキシ末端位置または参照配列中のアミノ酸の間で個々にまたは参照配列内の１以上の隣接する群において散在する該末端間のいずれの位置で起こってもよい。所定の％同一性に関するアミノ酸改変の数は、配列番号１または配列番号２におけるアミノ酸の総数に各パーセント同一性（１００で割る）のパーセント数を掛け、次いで、その積を、配列番号１または配列番号２のアミノ酸の総数から各々、引くことによって決定される。
【００１９】
ｎａ＜ｘａ−（ｘａ・ｙ）
式中、ｎａはアミノ酸改変の数であり、ｘａは配列番号１または配列番号２におけるアミノ酸の総数であり、ｙは、例えば、７０％なら０．７０、８０％なら０．８０、８５％なら０．８５であり、ここに、ｘａおよびｙのいずれかの整数でない積は、ｘａからそれを引く前に端数を切り捨てて最も近い整数にする。
【００２０】
「融合蛋白質」なる語は、２つの、しばしば関連しない、融合遺伝子またはそのフラグメントによってコードされる蛋白質をいう。１の例において、ＥＰ−Ａ−０ ４６４は、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を別のヒト蛋白質またはその一部と一緒に含む融合蛋白質を開示する。多くの場合、免疫グロブリンＦｃ領域を融合蛋白質の一部として用いることが、例えば、改善された薬物速度特性をもたらす治療および診断における使用に有益である（例えば、ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２を参照）。一方、いくつかの用途のために、融合蛋白質を発現させ、検出し、精製した後で、Ｆｃ部分を欠失できることが望ましい。
【００２１】
ＩＬ−１８ポリペプチド
ＩＬ−１８ポリペプチドはＥＰ０６９２５３６Ａ２、ＥＰ０７１２９３１Ａ２、ＥＰ０７６７１７８Ａ１およびＷＯ９７／２４４１に開示される。該ポリペプチドは、配列番号１（ヒトＩＬ−１８）および配列番号２（ネズミＩＬ−１８）のアミノ酸配列と各々、配列番号１および配列番号２の全長にわたり、少なくとも７０％同一性、好ましくは少なくとも８０％同一性、より好ましくは少なくとも９０％同一性、まだより好ましくは少なくとも９５％同一性、最も好ましくは少なくとも９７−９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを包含する。かかるポリペプチドは、各々、配列番号１および配列番号２のアミノ酸を含むものを包含する。
【００２２】
本発明のポリペプチドは、インターフェロン−γ−誘導性ポリペプチドである。それらは、Ｔ細胞および脾臓細胞によるインターフェロン−γ−産生の誘導、ＮＫ細胞の致死活性の増強および天然ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｈ１細胞への分化の促進を包含する細胞媒介性免疫の誘発における主要な役割を果たす。これらの特性は、本明細書で以後、「ＩＬ−１８活性」または「ＩＬ−１８ポリペプチド活性」または「ＩＬ−１８の生物学的活性」と称する。また、該ＩＬ−１８ポリペプチドの抗原性および免疫原性活性、特に、配列番号１および配列番号２のポリペプチドの抗原性および免疫原性活性もこれらの活性の中に包含される。好ましくは、本発明のポリペプチドは、ＩＬ−１８の少なくとも１つの生物学的活性を示す。
【００２３】
本発明のポリペプチドは、「成熟」蛋白質の形態であってもよく、または融合蛋白質のようなより大きな蛋白質の一部であってもよい。分泌またはリーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のように精製を助ける配列、または組換え型生産の間の安定性のための付加配列を含有する付加的なアミノ酸配列を包含することがしばしば、有益である。
【００２４】
本発明は、また、残基が同様の特性を有する別のものと置換する保存的アミノ酸置換によって参照から変化するポリペプチドである、上記のポリペプチドの変種を包含する。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間；ＳｅｒおよびＴｈｒ間；酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；および塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；または芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間である。特に好ましくは、数個、５−１０個、１−５個、１−３個、１−２個または１個のアミノ酸がいずれかの組み合わせにおいて置換、欠失または付加されている変種である。
【００２５】
本発明のポリペプチドは、いずれかの適当な方法で調製できる。かかるポリペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組換えにより生じたポリペプチド、合成により生じたポリペプチド、またはこれらの方法の組み合わせにより生じたポリペプチドを包含する。かかるポリペプチドを調製する方法は当該分野でよく理解されている。
【００２６】
本発明の組換え型ポリペプチドは、当該分野でよく知られた方法により、発現系を含む遺伝子操作した宿主細胞から調製してもよい。したがって、さらなる態様において、本発明は、本発明のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む発現系、かかる発現系を用いて遺伝子操作された宿主細胞および組換え技術による本発明のポリペプチドの生産に関する。無細胞翻訳系は、また、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いてかかる蛋白質を生産するために使用できる。
【００２７】
適当な宿主の代表例は、細菌細胞、例えば、連鎖球菌、ブドウ状球菌、イー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ストレプトミセス属およびバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞；真菌細胞、例えば、酵母細胞およびアスペルギルス属細胞；昆虫細胞、例えば、ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）Ｓ２およびスポドプテラ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞；動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞；および植物細胞を包含する。
【００２８】
例えば、染色体、エピソームおよびウイルス誘導系、例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、バキュロウイルス、パボーベウイルス、例えば、ＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、偽狂犬病ウイルスおよびレトロウイルスなどのウイルス由来のベクター、およびその組み合わせ由来のベクター、例えば、プラスミドおよびバクテリオファージ遺伝エレメント、例えば、コスミドおよびファージミド由来のベクターなどの非常に多くの種類の発現系を使用することができる。発現系は、発現を調節ならびに発生させる調節領域を含有していてもよい。一般に、宿主においてポリペプチドを生産するためにポリヌクレオチドを維持、伝搬または発現することのできるいずれの系またはベクターを用いてもよい。適当なヌクレオチド配列は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２ｎｄ Ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ （１９８９）に示される方法のような種々のよく知られた慣用的な技術のいずれかによって、発現系中に挿入してもよい。細胞質網状構造、細胞周辺腔または細胞外環境の管腔中への翻訳蛋白質の分泌を可能とするために、適当な分泌シグナルが所望のポリペプチド中に組み込まれてもよい。これらのシグナルはポリペプチドに対して内在性であってもよく、または異種シグナルであってもよい。
【００２９】
本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含するよく知られた方法によって組換え細胞培養体から回収および精製できる。最も好ましくは、アフィニティークロマトグラフィーを精製に用いる。単離および／または精製の間にポリペプチドが変性した場合、蛋白質のリホールディングのためのよく知られた技術を用いて、活性なコンホメーションを再生してもよい。
【００３０】
ある種のウイルス疾患の予防／治療におけるＩＬ−１８に関するの治療上の可能性が動物モデルにおいて評価され、保護効果が明らかにされた。正常、ヌードまたはＳＣＩＤマウスへのＩＬ−１８の投与は、ＨＳＶ−１感染における生存を改善した；保護は少なくとも一部、ＩＦＮγを介して媒介された（Ｆｕｊｉｏｋａら、１９９９ Ｊ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：２４０１）。さらに、近年のデータは、ＩＦＮγが、潜伏期からの再活性化後のＨＳＶの迅速な抑制に重要であることを示し（Ｃａｎｔｉｎら、１９９９ Ｊ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：５１９６； Ｃａｎｔｉｎら、１９９９ Ｊ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３： ３４１８）、それは、再活性化に起因する再発疾患の抑制のためのＩＬ−１８療法の可能性を示唆する。ワクシニアウイルス誘導性痘疹形成は、ＩＬ−１８処理に応答して減少し、結果はＩＦＮγレセプターノックアウトマウスにおけるワクシニアウイルスの複製の増加と一致した。ヘルペスおよびワクシニアウイルス感染モデルの両方において、ＩＬ−１８を予防的に、および／または感染後早期に投与した。
【００３１】
本発明のポリペプチドは、種々のウイルス疾患を治療または予防するために、単独で使用でき、または抗ウイルス剤、他のサイトカイン、ＩＦＮ、抗生物質または抗ウイルスワクチンと組み合わせることができる。
【００３２】
ＨＩＶ
ＨＩＶ感染の例において、本発明のポリペプチドを単独で使用することができ、またはプロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）、ヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）、ＨＩＶレセプターまたはコレセプター阻害剤、融合阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤、グルコシダーゼ阻害剤、他のサイトカイン、ＩＦＮ、抗生物質または免疫調節剤と組み合わせることができる。ＰＩの例は、限定するものではないが、アムプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、クリキシバン（ｃｒｉｘｉｖａｎ）、ＤＭＰ−３２３、ＤＭＰ−４５０、インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ）、ＫＮＩ−２７２、ラシナビル（ｌａｓｉｎａｖｉｒ）、ロピナビル（ｌｏｐｉｎａｖｉｒ）、ビラセプト（ｖｉｒａｃｅｐｔ）、ＰＤ１７８３９０、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、ＲＰＩ３１２、サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、ＳＣ−５２１５１、ＳＤＺ ＰＲＩ０５３、チプラナビル（ｔｉｐｒａｎａｖｉｒ）、Ｕ−１０３０１７、およびＡ−７７００３を包含する。ＮＲＴＩの例は、限定するものではないが、アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、アデフォビル、アロブジン（ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）、ＡＺｄＵ、ＣＳ−９２、ＤＡＰＤ、ジダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）、ｄＯＴＣ、コビラシル（ｃｏｖｉｒａｃｉｌ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ロブカビル（ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）、ヨーデノシン（ｉｏｄｅｎｏｓｉｎｅ）、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、テノフォビル、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、およびジドブジンを包含する。ＮＮＲＴＩの例は、限定するものではないが、アテビルジン（ａｔｅｖｉｒｄｉｎｅ）メシレート、カラノリド（ｃａｌａｎｏｌｉｄｅ）Ａ，カプラビリン（ｃａｐｒａｖｉｒｉｎｅ）、デラビルジン（ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ）、エファビレンツ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）、エミビリン（ｅｍｉｖｉｒｉｎｅ）、ＧＷ４２０ ８６７Ｘ、ＨＢＹ０９７、ロビリド（ｌｏｖｉｒｉｄｅ）、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）、ＰＥＴＴ−５、チビラピン（ｔｉｖｉｒａｐｉｎｅ）、およびトロビルジン（ｔｒｏｖｉｒｄｉｎｅ）を包含する。レセプター、コレセプターおよび融合阻害剤の例は、限定するものではないが、ＡＭＤ ３１００、ＴＡＫ ７７９、Ｔ−２０およびＴ−１２４９を包含する。これらおよびＨＩＶに対する作用の種々のメカニズムのさらなる抗ウイルス剤の例は、定期刊行物Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｎｅｗｓの要約に、例えば、２００年１月第８巻１号に見出すことができる。サイトカインおよび免疫調節剤の例は、限定するものではないが、ＩＬ−２、ステロイド、およびサリドマイドを包含する。また、自然免疫応答を増強させるために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００３３】
ＨＳＶ
単純ヘルペスウイルスは、典型的に粘膜表面または皮膚に感染するヘルペスウイルス科の一員である。潜伏は、知覚および自律神経節のニューロンにおいて確立される。ストレス、発熱、ＵＶ照射または免疫抑制のようなある特定の刺激下で、該ウイルスは再活性化でき、感染元の部位にて、または神経節によって刺激されるいずれかの部位にて出現することができる。現在、抗ウイルス剤が利用可能であり、アルファヘルペスウイルス複製を阻害するのに非常に有効である。しかしながら、それらは治癒時間の穏かな減少をもたらすが、ウイルス潜伏の確立に対する有益な効果は制限される。近年のデータは、ＩＦＮ−γが潜伏からの再活性化後のＨＳＶの迅速な抑制に重要であることを示し（Ｃａｎｔｉｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３： ３４１８−３４２３， ７３： ５１９６−５２００）、それは、再活性化に起因する再発疾患の抑制に対するＩＬ−１８療法の可能性を示唆する。
【００３４】
ヘルペス単純脳炎（ＨＳＥ）は、ウイルス脳炎ケースの１０−２０％を占める重篤な散発性疾患である。それは、多くの場合、重篤な神経学的後遺症をもたらす病巣の壊死病変を引き起こすヘルペス単純ウイルス（ＨＳＶ）感染の最も重篤な形態である（ＷｈｉｔｌｅｙおよびＲｏｉｚｍａｎ １９９８， Ｃｌｉｎ． Ｉｎｆ． Ｄｉｓ． ２６：５４１−５４７）。ＨＳＶ−１および２の両方が中枢神経系（ＣＮＳ）の感染と関連した。抗ウイルス剤処理は、ＨＳＥ−関連死亡率を約３０％に減少させうるが、今だ、重篤な神経学的欠陥を有する生存者を残しうる（Ｓｋｏｌｄｅｎｂｅｒｇ， １９９６ Ｓｃ． Ｊ． Ｉｎｆ． Ｄｉｓ． １００：８−１３； Ｋｉｍｂｅｒｌｉｎら、１９９８ Ｊ． Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ ４： ４７４−４８５）。
【００３５】
本発明のポリペプチドは、単独で使用でき、またはウイルス性ポリメラーゼ阻害剤（例えば、アシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、ファムシクロビル、ガンシクロビル、バンガンシクロビル、フォスカルネット、シドフォビル、および他のヌクレオシドおよびヌクレオチド）などの抗ウイルス剤と組み合わせて使用することができる。ポリペプチドはまた、ＩＦＮ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２などのサイトカインならびに他の免疫調節物質と組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００３６】
ＨＰＶ
ＨＰＶ感染の予防および／または治療に対する今だ応じられていない要望がある。現在まで、１００を越えるＨＰＶの型が同定されている。感染は無徴候性であり、いぼを生じることができ、または子宮頚癌を包含する種々の良性または悪性生殖器腫瘍形成をもたらしうる（Ｋｏｕｔｓｋｙ， Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． １０２：３−８， １９９７によって概説される）。正確な数字は入手できないが、目に見えるいぼが米国における性的に活性な大人の１％に存在し、少なくとも１５％はＨＰＶ感染の分子的証拠を有すると見積もられた。該結果は、年間の子宮頚および生殖器癌の約６５，０００ケースである。現在、利用可能な抗ウイルス薬はなく、ＨＰＶ疾患は、化学的または物理的除去、細胞毒性剤または免疫療法によって治療される（Ｍｉｌｌｅｒ， Ｒ．Ｌ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２１： １−１４， １９９９）。現在の療法のほとんどは、結局、大多数の患者においていぼを取り除くことができるが、それらはウイルス伝達または疾患進行に影響を与えない（ＢｅｕｔｎｅｒおよびＦｅｒｅｎｃｚｙ， Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． １０２： ２８−３７， １９９７）。耐久力のある免疫を誘導し、子宮頚癌の発症を予防する見込みのある治療のために、異常なパプ塗沫標本および高い危険性のあるＨＰＶ血清型を有する女性がおそらく同定された。
【００３７】
本発明のポリペプチドは、シドフォビル（ＨＰＭＰＣ、ＧＳ５０４）、ＢＶＤＵ、ＢＶＲＵおよび他のヌクレオシドおよびヌクレオチドのような抗ウイルス剤と組み合わせて使用できる。本発明は、また、インターフェロンまたはインターフェロン誘導剤（イミキモド、Ａｌｄａｒａ；ＩＬ−１２）のような他の免疫調節物質と組み合わせて使用できる。本発明は、また、現在開発中の組換え型ワクチン（予防的または治療的のいずれか）と組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００３８】
近年のデータは、ヘルペスウイルス関連腫瘍形成におけるＩＬ−１８に関する潜在的な保護的役割を示唆する。ＩＬ−１８ならびにインターフェロンガンマは、ＥＢＶ急性感染細胞においてアップレギュレートされ、ＥＢＶによって誘導された移植後リンパ組織増殖疾患においてダウンレギュレートされる（Ｓｅｔｓｕｄａら、１９９９， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １５５： ２５７−２６５）。これらのデータは、これらのメディエーターがＥＢＶの腫瘍形成特性に対する宿主防御に関連することを示唆する。本発明は、ＨＳＶに関して列挙されたような薬剤と組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００３９】
ＨＡＶ
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）はピコルナウイルス科に属する。Ａ型肝炎は、汚染された食物、食物を扱う人、汚染された水、汚染された水由来の貝の摂取による糞便−経口経路を介して、または他の直接的な人と人との接触によって、人から人への高い感染性を有する。ＨＡＶは、肝臓で複製し、胆汁中で排出される。感染は急性であって、一般に徴候的であり、徴候は、穏かで一過性から重篤で長期までの範囲にわたり、発熱、嘔吐、下痢、黄疸および肝腫を包含し得る。治療は、一般に、支持療法であり、肝臓移植は特に重篤なケースにおいて稀に行われる。予防は、不活性化されたウイルス（Ｈａｖｒｉｘ）を用いる事前の曝露による活性免疫化またはプールした免疫グロブリンを用いる曝露後の受動免疫化を介する。
【００４０】
本発明のポリペプチドは、免疫を増強するために、または治療的効果を達成するために（１回、患者はすでに感染している）、既存のワクチンと組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００４１】
ＨＢＶ
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ＤＮＡウイルスのヘパドナウイルス科の一員である。ＨＢＶは、血液または体液を介して、ＨＩＶの伝達と同様の経路で、人から人へ伝達する。ＨＢＶは、主に肝臓で複製し、ウイルスは血流中を流れ、次いで、精液および唾液を包含する身体分泌物中で見出される。曝露と臨床的徴候との間に６０−１８０日の潜伏期間があり、臨床的徴候は、無徴候性の感染から黄疸を伴う胆汁鬱帯肝炎までの範囲にわたり、時折、肝臓障害までの範囲にわたる。急性の進行の後、患者の大部分はウイルスを取り除き、免疫になる。幾人かの患者は、慢性肝臓疾患、繊維症および肝細胞性癌腫を導くことができる慢性感染を発症する。
【００４２】
複数の薬剤がＨＢＶの治療に利用できるが、ほとんどは慢性ＨＢＶ感染の一部においてただ有効なだけである。現在利用可能な認可された実験的薬剤は、抗ウイルス剤（ラミブジン［３ＴＣ］、ファムシクロビル、ロブカビル、アデフォビル、およびいくつかの他のヌクレオシドおよびヌクレオチド剤）；免疫調節物質（インターフェロンアルファ、ベータ、ガンマ、コルチコステロイド、レバミソール、チモシンアルファ、ＩＬ−２、リバビリン）および治療的ワクチンまたは高免疫グロブリンを包含する。
【００４３】
本発明のポリペプチドは、これらの現行の療法または他の同様の薬剤のいずれかと組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００４４】
ＨＣＶ
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、ヘパシウイルスまたはフラビウイルス科の一本鎖ＲＮＡウイルスメンバーである。ＨＣＶは、血液および身体分泌物中に存在するウイルスを用いて、ＨＩＶおよびＨＢＶとほぼ同じ方法で人から人へ伝達される。ＨＣＶは、主に肝臓で複製するが、ウイルスはリンパ球および樹状細胞のような他の細胞型において見出すことができる。急性感染は、しばしば、無徴候性であるか、またはより一般的なウイルス感染としばしば混同される穏かな進行によって特徴付けられる。稀なケースでは、急性感染が劇症肝炎および死を導くこともある。ほとんどの感染は、慢性の、しばしば無徴候性の感染をもたらし、それは、肝臓酵素の随時の上昇または穏かな硬変症だけを伴って、何十年も持続しうる。肝臓機能不全および肝細胞性癌腫を包含するより重篤な肝臓疾患へ進むケースもある。
【００４５】
ＨＣＶの治療は、一般的に、インターフェロン−アルファ、コンセンサスインターフェロン、またはリバビリンと組み合わせたインターフェロン−アルファを介する。現在、真の抗ウイルス化合物がちょうど初期の臨床試験中であり、ウイルス性ポリメラーゼ、アンチセンスポリヌクレオチド、またはリボザイムの阻害剤を包含する。
【００４６】
本発明は、これらの現行の療法のいずれかまたは他の同様の薬剤と組み合わせて使用できる。また、自然免疫応答を増強するために、本発明を単独療法として感染個体に施して、感染の制御またはクリアランスのいずれかを達成することができる。
【００４７】
慢性ＨＣＶ感染の間のＩＬ−１８の投与は、ＩＦＮγまたはＴＮＦαなどの非細胞融解性抗ウイルス性サイトカインの誘導によって、または増強および持続された保護免疫を導くウイルス抗原に対するＴ細胞応答の増強によって、ウイルスレベルを減少することが期待されると考えられる。
【００４８】
本発明は、また、上記のように、他の薬剤と組み合わせてもよい治療上有効量のＩＬ−１８を含む医薬組成物を提供する。医薬上許容される担体または賦形剤もまた、使用してもよい。使用される医薬担体は、例えば、固体または液体のいずれであってもよい。固体担体の例は、限定するものではないが、ラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などを包含する。液体担体の例は、限定するものではないが、セーライン、緩衝化セーライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノールシロップ、ピーナツ油、オリーブ油、およびその組み合わせを包含する。同様に、担体または希釈剤は、単独またはワックスエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルメタクリレートなどと一緒のモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの当該分野でよく知られた時間遅延性材料を包含しうる。
【００４９】
本発明はさらに、上記の本発明の組成物の１以上の材料を充填した１以上の容器よりなる医薬パックおよびキットに関する。ポリペプチドは、単独で、または治療化合物などの他の化合物と一緒に使用されうる。
【００５０】
組成物は、例えば、全身または経口経路などの投与経路に適応させる。全身投与の好ましい形態は、注射、典型的には静脈内注射を包含する。皮下、筋内、または腹腔内などの他の注射経路を使用できる。さらに、本発明が腸溶性またはカプセル処方において処方できる場合、経口投与が可能である。全身性投与のための別の手段は、胆汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤などの浸透剤を用いる経粘膜および経皮投与を包含する。これらの組み合わせの投与はまた、膏薬、ペースト、ゲルなどの形態において、局所的であってもよく、および／または局在化されていてもよい。
【００５１】
必要とされるＩＬ−１８の投与量範囲は、アジュバンド（もしあれば）の選択、投与経路、処方の性質、対象の状態の性質、および随伴する医師の判断に依存する。しかしながら、ＩＬ−１８のための組成物の適当な投与量は、１ミリグラム／キログラムの対象に対して１ナノグラム／キログラムの範囲にある。しかしながら、必要な投与量における幅広い変動は、利用可能な種々の化合物および種々の投与経路の異なる効率を考慮して予測されるべきである。例えば、経皮投与は、静脈内注射による投与よりも高い投与量を必要とすると予測されたであろう。これらの投与量レベルにおける変動は、当該分野でよく理解されているように、最適化のための標準的な経験的手順を用いて調整できる。
【００５２】
組成物の投与のためのスケジュールは、投与量、アジュバンドの選択、投与経路、処方の性質、対象の状態の性質、および随伴する医師の判断に依存する。適当な投与スケジュールは、毎日、毎週または毎月である。しかしながら、組成物の投与スケジュールにおける幅広い変動は、利用可能な種々の他の薬剤および種々の投与経路の異なる効率を考慮して予測されるべきである。例えば、経皮投与は、静脈内注射による投与よりも高い投与量を必要とすると予測されたであろう。組成物のこれらの投与スケジュールにおける変動は、当該分野でよく理解されているように、最適化のための標準的な経験的手順を用いて調整できる。
【００５３】
限定するものではないが、特許および特許出願を包含する本明細書に引用した全ての出版物は、個々の出版物が特別および個々に、あたかも完全に示されているかのように出典明示により本明細書の一部とされることが指示されているかのごとく、出典明示により本明細書の一部とされる。
【００５４】
当業者は、上記の記載を用いて、その完全な範囲まで本発明を利用できると確信する。したがって、本明細書の実施例は、単なる例示であって、いかなる方法においても、本発明の範囲を制限するものではないと解釈されるべきである。
【００５５】
実施例
実施例１：ネズミＩＬ−１８でのマウスの処理はＩＦＮγおよびＧＭ−ＣＳＦを誘導する。
ネズミＩＬ−１８の活性は、非感染マウスにおけるサイトカインメッセージおよび蛋白質誘導の速度論をプロファイリングすることによって評価された。雌性Ｂａｌｂ／Ｃマウスを１０または１００μｇのネズミＩＬ−１８を用いて腹腔内（ＩＰ）処理し、試料を処理後０、２．５、４または６時間にて収集した。プールした血清（ｎ＝３）および個々の脾臓ホモジネートを、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γおよびＧＭ−ＣＳＦについてＥＬＩＳＡによって評価した。ＩＬ−１８は、処理後２．５時間までに血清および脾臓（２ｎｇ／ｍｌ）中のＩＦＮレベルを誘導し、活性と一致した。ＴＮＦ−αの最小の誘導（１００ｐｇ／ｍｌ）およびＧＭ−ＣＳＦの誘導がないことが検出された。対照的に、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−ガンマおよびＴＮＦのｍＲＮＡ誘導が、定量的リアルタイムＰＣＲによって観察された。ＩＦＮγｍＲＮＡは、注射後２．５−６時間でビヒクルの２０倍まで誘導され（図３）、ＧＭ−ＣＳＦはビヒクル対照値と比較して約６−１０倍誘導された（示されない）。したがって、サイトカインを誘導する点でネズミＩＬ−１８の活性が確認された。
【００５６】
図３は、緩衝化セーライン中においてＩＰ投与される変化量のネズミＩＬ−１８を用いて処理されたマウスにおけるＩＦＮ−γ蛋白質の誘導を示す。蛋白質レベルは、ＥＬＩＳＡキットを用いて血清および脾臓ホモジネート中で、製造者（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の指示書により検出された。
【００５７】
図４は、緩衝化セーライン中においてＩＰ投与される変化量のネズミＩＬ−１８を用いて処理されたマウスにおけるＩＦＮ−γｍＲＮＡの誘導を示す。全ＲＮＡを脾臓から収集し、ｃＤＮＡ（Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ， Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを用いて調製された）を個々の試料において、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨおよびＩＦＮ−γについてリアルタイムＰＣＲを用いて分析した（Ｒ．Ｊ． Ｃｏｈｒｓら、Ｊ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２０００； ２４：１１４６４−１１４７１において記載される方法）。
【００５８】
実施例２：ネズミＩＬ−１８はマウスを致死ＨＳＶ−１攻撃から保護する。
いくつかの研究は、致死全身性ＨＳＶ感染モデルにおけるネズミＩＬ−１８の効果を評価した。ネズミＩＬ−１８は、ＨＳＶ−１（ＳＣ−１６）でのＩＰ感染の２時間前、２４時間後および４８時間後にＩＰ投与された。ビヒクル処理動物が生き残らないことと比べて、１０μｇ／マウスでのＩＬ−１８処理は、全ての研究において４０％までの生存率を導く（図５）。全ての研究において、ＩＬ−１８処理は、死までの時間の遅延を導く。１つの研究において、１００μｇ／マウスにてＩＬ−１８の１日に２回の投与が７０％の生存率を導く（示されない）。
【００５９】
図５は、対照と比較した、２時間前、１日目および２日目でのネズミＩＬ−１８のＩＰ投与後のＨＳＶ−１（ＳＣ−１６）の致死用量で攻撃されたマウスの改善された生存率を示す。
【００６０】
実施例３：ＩＬ−１８は、インフルエンザ誘導性病因を改善する。
ＩＬ−１８での処理は、ネズミインフルエンザ肺炎モデルにおける臨床疾患に対して有益な効果を有する。Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、マウス適合性インフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４のほとんど致死量に近い攻撃で鼻腔内接種した。実施例２に記載されるようなＩＬ−１８の投与は、インフルエンザに誘導される体重減少（図６）ならびにパルス酸素測定を用いて測定された肺機能（図７）および全身のプレスチモグラフィー（Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、示されない）における改善を導く。
【００６１】
実施例４：ＩＬ−１８投与はＨＢＶウイルス複製を減少する。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）トランスジェニックマウスのＩＬ−１８処理は、ウイルスＤＮＡのレベルの減少によって示されるように、ウイルス複製において用量依存的減少をもたらす（図８）。ＨＢＶトランスジェニックマウス（Ｇｕｉｄｏｔｔｉら、１９９５， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ ６９：６１５８−６１６９）を、組換え型ネズミＩＬ−１８の４つの異なる投与量（１００、１０、１および０．１マイクログラム）の皮下注射で１日に３回処理し、３日目にサザンブロットによってＨＢＶ ＤＮＡについて肝臓の分析を行った。ＩＬ−１８の全ての投与量は、最も低い投与量（０．１マイクログラム）で見られるある程度の減少およびより高い投与量でより大きな減少を伴う効果を有した。
【００６２】
実施例５：ＩＬ−１８は、チンパンジーおよびヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ産生の誘導に関し、ＩＬ−２と共に相乗的に作用する。
チンパンジーまたはヒトＰＢＭＣを単離し、対照培地、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１８、または３ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２と組み合わせたＩＬ−１８（１００ｎｇ／ｍｌ）のいずれかを用いて処理した。２４、４８、７２または９６時間インキュベーション後に上清を冷凍した。メディエーターレベルをＥＬＩＳＡによって分析した。図９および１０に示されるデータは、ヒトＩＬ−１８が、ヒトＰＢＭＣに対するその影響と類似の速度論を伴って、チンパンジーＰＢＭＣにおいてサイトカイン発現を誘導する点で活性であることを示す。さらに、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−８、ネオプテリン（Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ）およびＩＦＮ−ガンマの誘導においてＩＬ−２およびＩＬ−１８の間に相乗作用が存在する（図９および１０）。これらの観察は、複数のチンパンジーおよびヒトドナーにおいて確認された。
【００６３】
図９は、ヒトＩＬ−１８がＩＬ−８（１４倍）、ネオプテリン（７倍）、ＧＭ−ＣＳＦ（１００倍）およびＩＦＮ−ガンマ（８倍）を誘導したことを示す。最も高い蛋白質レベルは、２４時間で最大レベルに達したＩＦＮ−ガンマを除き、処理後９６時間で得られた試料において検出された。ヒトＩＬ−１８およびＩＬ−２の組み合わせ処理は、有意により高い誘導を導く。
【００６４】
図１０は、異なる動物における結果の再現性を示す。該研究において、ＩＬ−２単独処理を対照として用いた。ＩＦＮ−ガンマは、図１０（ａ）；ネオプテリンは図１０（ｂ）；ＩＬ−８は図１０（ｃ）に示される。
【００６５】
実施例６：ＨＢＶ複製のＩＬ−１８阻害は、ＩＬ−１２を用いて相加的または相乗的である。
実施例４および図８に記載のものと同様の研究において、ＩＬ−１２と組み合わせたＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）トランスジェニックマウスのＩＬ−１８処理は、ウイルス複製ならびにウイルスＤＮＡの転写の減少において、いずれかのサイトカイン単独処理よりも大きな効果を有する。該相加的または相乗的効果は、ＩＬ−１２（１マイクログラム）と共にＩＬ−１８（１０マイクログラム）を用いる０日目のＨＢＶトランスジェニックマウスの１回の皮下処理後に見られた。これらのマウスの肝臓を３日目に調べたとき、サザンブロットによるウイルスＤＮＡの検出から明らかなように（図１１）、ＨＢＶ複製は顕著に減少していた。また、これらの同じ肝臓試料のノーザンブロットから明らかなように（図１１）、ＩＬ−１８およびＩＬ−１２の組み合わせは、ＨＢＶ ＤＮＡ生産を減少させただけでなく、ウイルスＲＮＡの生産も劇的に減少させた。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ヒトＩＬ−１８のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【図２】図２は、ネズミＩＬ−１８のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図３】図３は、緩衝化セーライン中において腹腔内投与される変化量のネズミＩＬ−１８を用いて処理されたマウスにおけるＩＦＮ−γ蛋白質の誘導を示すグラフを示す。
【図４】図４は、緩衝化セーライン中において腹腔内投与される変化量のネズミＩＬ−１８を用いて処理されたマウスにおけるＩＦＮ−γｍＲＮＡの誘導を示すグラフを示す。
【図５】図５は、対照と比較した、２時間前、１日目および２日目でのネズミＩＬ−１８の腹腔内投与後の、ＨＳＶ−１（ＳＣ−１６）の致死用量を用いて攻撃されたマウスの改善された生存を示すグラフを示す。
【図６】図６は、ＩＬ−１８の投与がインフルエンザに誘導される体重減少における改善を導くことを示すグラフである。
【図７】図７は、ＩＬ−１８の投与がパルス酸素測定を用いて測定された肺機能における改善を導くことを示すグラフである。
【図８】図８は、ＨＢＶ複製に対するＩＬ−１８の影響を示す。
【図９】図９（ａ）−（ｄ）は、ＩＬ−１８がＩＬ−８を１４倍（図９（ａ））、ネオプテリンを７倍（図９（ｂ））、ＧＭ−ＣＳＦを１００倍（図９（ｃ））およびＩＦＮ−ガンマを８倍（図９（ｄ））誘導したことを示すグラフである。
【図１０】図１０（ａ）−（ｃ）は、ＩＬ−１８がＩＦＮ−ガンマ（図１０（ａ））、ネオプテリン（図１０（ｂ））およびＩＬ−８（図１０（ｃ））の産生を誘導したことを示すグラフである。該研究において、ＩＬ−２単独での処理を対照として用いた。
【図１１】図１１は、ＨＢＶ複製に対するＩＬ−１２およびＩＬ−１８の影響を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１０ｃ】
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【図１１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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