(57)【要約】特定のアリールホスフェートヌクレオシド誘導体は、望ましからざるレベルの細胞毒性を示すことなく、ＨＩＶに抗する活性を示す。特に、これらの誘導体は、強力なＨＩＶ逆転写酵素阻害剤である。アリールホスフェートヌクレオシド誘導体の例としては、アリールホスフェート基のリンが、メトキシアラニニル基などのようなエステル化または置換され得るアミノ酸残基に結合した、アリール基に１以上の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体が含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。
【化１】
2004513177.tif 000008
但し、Ｒ’は、メチル基またはエチル基であり、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、 ２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択される。
【請求項２】
Ｘが、３−Ｎ（ＣＨ３）２である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが、４−Ｂｒ、２−Ｃｌである請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが、２−Ｂｒである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、２，５−（Ｃｌ）２である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
５’−［３−ジメチルアミノフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジンまたはその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
５’−［２，６−ジメトキシフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジンまたはその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
５’−［４−ブロモ−２−クロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジンまたはその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
５’−［２−ブロモフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジンまたはその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
５’−［２，５−ジクロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジンまたはその薬学的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
下記式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩。
【化２】
2004513177.tif 000009
但し、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択され、Ｒは、アミノ酸残基である。
【請求項１３】
抗ウイルス作用に有効な量の前記化合物を、患者に投与することを含む、ウイルス性感染症を治療する薬剤調製のための請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１４】
阻害に有効な量（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｍｏｕｎｔ）の前記化合物を、感染した細胞に投与することを含む、ＨＩＶに感染した細胞においてＨＩＶ逆転写酵素を阻害する薬剤調製のための請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１５】
阻害に有効な量の前記化合物を投与することを含む、宿主細胞においてＨＩＶ複製を阻害する薬剤調製のための請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１６】
抗菌作用に有効な量の請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物と、１以上の薬学的に許容されるキャリヤーまたは希釈剤とを含む薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、例えば免疫欠乏ウイルス（ＨＩＶ）に対して、例えばＨＩＶ逆転写酵素阻害剤として、抗ウイルス活性を示す、アリールホスフェートヌクレオシド誘導体、特に２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン（以下、「ｄ４Ｔ」という。）のアリールホスフェート誘導体に関する。
【０００２】
［発明の背景］
エイズの蔓延と、原因であるウイルスを抑制するためになされている努力が、広く文献に記されている。ＨＩＶ阻害の一つの方法は、その逆転写酵素活性（ＲＴ）を阻害することである。そのため、有用な治療薬として、新規の強力且つ選択的なＨＩＶＲＴ阻害剤が求められている。既知の強力なＨＩＶ ＲＴ阻害剤は、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド（「ｄｄＮ」）同族体の５’−トリホスフェートを含む。これらの活性なＲＴ阻害剤は、ヌクレオシドキナーゼおよびヌクレオチドキナーゼの作用によって、細胞内で生成される。このように、ＡＺＴおよびｄ４ＴなどのｄｄＮ化合物は、抗ＨＩＶ剤の追求において非常に有望であると考えられている。
【０００３】
３’−アジド−３’−デオキシチミジン （ジドブジン；ＡＺＴ）の、生物活性な代謝物質であるＡＺＴ−トリホスフェートへの変換の律速段階は、モノホスフェート誘導体からジホスフェート誘導体への変換であると思われるが、生物活性なｄ４Ｔ代謝物質であるｄ４Ｔ−トリホスフェートの細胞内生成の律速段階は、ヌクレオシドのモノホスフェートへの変換であると報告されている（バルザリニ（Ｂａｌｚａｒｉｎｉ）等， １９８９年， Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４：６１２７；マクギガン（ＭｃＧｕｉｇａｎ）等， １９９６年， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３９：１７４８）。次のメカニズムが提案されている。
【０００４】
【化３】
2004513177.tif 000002
【０００５】
ｄｄＮの細胞内ヌクレオシドキナーゼ活性への依存を克服するための試みにおいて、マクギガン等は、ＡＺＴ（マクギガン等， １９９３年、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３６：１０４８；マクギガン等， １９９２年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ． １７：３１１） およびｄ４Ｔ（マクギガン等， １９９６年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１７４８； マクギガン等， １９９６年 Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ． ６：１１８３）のアリールメトキシアラニニルホスフェート誘導体を調製した。このような化合物は、細胞内で加水分解されてモノホスフェート誘導体を生成することが示されている。モノホスフェート誘導体は、チミジンキナーゼ（ＴＫ）に依存することなく、チミジル酸キナーゼによって更にリン酸化され、生物活性なトリホスフェート誘導体を与える。しかしながら、細胞毒性の増強を伴うことなく、アリール部分の様々な置換によってｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体の効力を更に改善するという、これまでの試みの全ては失敗している（マクギガン等， １９９６年 Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１７４８）。
【０００６】
この技術において、強力で選択的なＨＩＶＲＴ阻害剤である１以上の有用な治療薬が求められている。更に、この技術において、細胞毒性の増強を伴うことなく、改善された効力を有する１以上の有用な治療薬が求められている。
【０００７】
［発明の要約］
ヌクレオシドのアリールホスフェート誘導体において、アリール部分に特定の置換基を配置すると、置換基の特性により、加水分解されるｄ４Ｔヌクレオシド誘導体の能力が増強されることが見出された。本発明の置換フェニルホスフェートヌクレオシド誘導体は、既知の治療薬と比較して、改善された効力および特有の抗ウイルス活性を示す。
【０００８】
一つの側面において、本発明は、ウイルス性感染症を治療する方法に関し、抗ウイルス作用に有効な量の、抗ウイルス活性を有する本発明の化合物を投与することを含む。別の側面において、本発明は、抗ウイルス活性を示すアリールホスフェートヌクレオシド誘導体、特にｄ４Ｔのアリールホスフェート誘導体に関する。例えば、特定の化合物は、例えばＨＩＶ逆転写酵素阻害剤として、ＨＩＶに対して強力な活性を示す。アリール基に１以上の特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体は、望ましからざるレベルの細胞毒性を示すことなく、抗ＨＩＶ剤として著しく増大した効力を示す。特に、これらの誘導体は、強力なＨＩＶ逆転写酵素阻害剤である。
【０００９】
本発明は、更に、ＨＩＶに感染した細胞においてＨＩＶ逆転写酵素を阻害する方法に関し、この方法は、阻害に有効な量の、アリール基に特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体を、感染した細胞に投与することを含む。更に、本発明は、宿主細胞におけるＨＩＶ複製を阻害する方法に関し、阻害に有効な量の、アリール基に特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体に、宿主細胞を接触させることを含む。
【００１０】
これらの、およびその他の本発明の特徴および利点は、以下に開示される実施形態の詳細な説明および添付のクレームを検討した後に明らかになるであろう。
【００１１】
［発明の詳細な説明］
ヌクレオシドの特定の置換アリールホスフェート誘導体が、細胞毒性を低レベルに維持しながら、ＨＩＶに対して増大した活性を有することが、意外にも見出された。このように、これらの誘導体は、抗ウイルス性組成物、および、ＨＩＶ感染症などのウイルス性感染症の治療方法のための活性物質として、特に有用である。
【００１２】
本発明の化合物
本発明の化合物は、後述の実施例において更に十分に検討されるように、抗ウイルス活性を有する、ヌクレオシドのアリールホスフェート誘導体、特にｄ４Ｔの誘導体である。本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシド誘導体は、下記式のものである。
【００１３】
【化４】
2004513177.tif 000003
【００１４】
但し、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択され、Ｒは、例えば−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ３などの、エステル化または置換され得るアミノ酸残基から選択されるものか、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルである。
【００１５】
ここで用いられるように、「アミノ酸残基」という用語は、アミノ酸側鎖で形成される部分を含む。「アミノ酸側鎖」は、アミノ酸の可変的な基であり、例えば、グリシン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、ヒドロキシリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンなどの側鎖を含む。好ましくは、アミノ酸側鎖は、アラニンまたはトリプトファンの側鎖である。
【００１６】
本発明の一実施形態において、本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシドｄ４Ｔ誘導体は、下記式のものである。
【００１７】
【化５】
2004513177.tif 000004
【００１８】
但し、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択され、Ｒ’は、メチル、エチルまたはその薬学的に許容される塩である。
【００１９】
本発明の更なる実施形態において、本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシドｄ４Ｔ誘導体は、下記化合物、または下記化合物のいずれかの薬学的に許容される塩である。
５’−［３−ジメチルアミノフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２，６−ジメトキシフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［４−ブロモ−２−クロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２−ブロモフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２，５−ジクロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
【００２０】
ｄ４Ｔ誘導体の合成
本発明の化合物の合成を一般的に説明するため、ｄ４Ｔ誘導体の合成を以下に記述する。マクギガン等， Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．， １９９２年， １７：３１１に開示された手順により、適当に置換されたフェニルホスホロジクロリデートが調製され得る。その開示を、ここに参考として組み入れる。
【００２１】
本発明のｄ４Ｔ誘導体の一つの適当な生成方法を、下記スキーム１に示す。
【００２２】
【化６】
2004513177.tif 000005
【００２３】
スキーム１に示すように、置換フェノールがオキシ塩化リンと反応し、置換フェニルホスホロジクロリデートが得られる。置換フェニルホスホロジクロリデートは、更にＬ−アラニンメチルエステルと反応し、スキーム１において「Ａ」で示す、置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートを形成する。スキーム１に示される置換基「Ｘ」は、反応物質のフェニル基における１以上の置換基を表すことを言及しておく。
【００２４】
置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートは、上記スキーム１に示すように、ｄ４Ｔと反応する。置換フェニルメトキシアラニニルホスフェート（Ａ）とｄ４Ｔとは、ジクロロメタンおよびトリエチルアミン中で反応し、本発明の所望の生成物を形成する（上記スキーム１を参照されたい。）。
【００２５】
ｄ４Ｔ誘導体の投与
ｄ４Ｔ誘導体は、薬学的に許容されるキャリヤー、補助剤または希釈剤とともに、活性物質としてｄ４Ｔ誘導体を含む適当な組成物の形態で、患者に投与され得る。組成物は、経口的または非経口的に投与され得る。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、および非経口投与のためのバイアル瓶の溶液または分散液を含む。所望されるのであれば、持効性の投与形態を使用してもよい。組成物は、抗ウイルス活性を必要とする患者に、例えば、ＨＩＶ逆転写酵素を阻害する、および／または宿主細胞におけるＨＩＶ複製を阻害するのに十分な、適当な抗ウイルス量で投与される。投与量は、適当な用法・用量に従って管理される。
【００２６】
本発明の一実施形態において、ｄ４Ｔ誘導体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重１ｋｇ当りのｄ４Ｔのｍｇ）の投与量で投与される。好ましいｄ４Ｔ誘導体の投与方法は、経口または経静脈輸送を含む。投薬は、１年当り１〜約１２の間で変化するコース数で、１コース当り７〜３０日の期間実施することができる。
【００２７】
本発明は前述され、実施例として後に更に説明されるが、実施例は本発明の範囲を限定するものと解釈されるものではない。反対に、この記載が読まれた後、本発明の意図および／または添付されたクレームの範囲から外れることなく、手段には、様々なその他の実施形態、変形および同等のものがあることが、当業者により想到されることが明確に理解される。
【００２８】
（実施例１）
ｄ４Ｔ誘導体の合成および特性評価
上記スキーム１に示す反応機構を用いて、置換フェニルホスホロジクロリデートを生成した。選択した「Ｘ」置換基を使用し、５種の置換フェニルホスホロジクロリデートを生成した。スキーム１に示すように、置換フェニルホスホロジクロリデートをアラニンメチルエステルと反応させ、５種の置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートを形成した。そして、上記スキーム１に示すように、置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートをｄ４Ｔと反応させ、本発明のｄ４Ｔ誘導体を形成した。
【００２９】
上に概要を述べた一般的な手順を用いて、次の化合物を生成した。
化合物１：５’−［３−ジメチルアミノフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物２：５’−［２，６−ジメトキシフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物３：５’−［４−ブロモ−２−クロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物４：５’−［２−ブロモフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物５：５’−［２，５−ジクロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
【００３０】
融点を、フィッシャー−ジョーンズ溶融装置（Ｆｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓ ｍｅｌｔｉｎｇ ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて、補正することなく測定した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、ヴァリアンマーキュリー ３００ スペクトロメーター（Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて、ＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３中で記録した。化学シフトを、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を０ｐｐｍの内部標準として、百万分率（ｐｐｍ）で記録した。赤外スペクトルを、ニコレットプロテージ ４６０−ＩＲスペクトロメーター（Ｎｉｃｏｌｅｔ ＰＲＯＴＥＧＥ ４６０−ＩＲ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）で記録した。質量分光データを、ＨＰ５９７３質量選択検出器（ＨＰ ５９７３ Ｍａｓｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）を備えたフィンニガンマット９６、ＶＧ７０７０Ｅ−ＨＦ Ｇ．Ｃ．システム（ＦＩＮＮＩＧＡＮ ＭＡＴ ９５， ＶＧ ７０７０Ｅ−ＨＦ Ｇ．Ｃ． ｓｙｓｔｅｍ）で記録した。ＵＶスペクトルを、ベックマンＤＵ ７４００で、ＭｅＯＨを溶媒として用いて記録した。ＴＬＣを、プレコートシリカゲルプレート（シリカゲルＫＧＦ；ホイットマン社（Ｗｈｉｔｍａｎ Ｉｎｃ））上で実施した。全てのカラムクロマトグラフィー分離に、シリカゲル（２００〜４００メッシュ、ホイットマン社）を使用した。ＨＰＬＣを、７０：３０の水／アセトニトリルで流速１ｍＬ／分で溶出したＣ１８４×２５０ｍｍリクロスファーカラムを用いて実施した。ＨＰＬＣにより、下記化合物の純度は９６％を超えた。全ての化学種は試薬グレードであり、オルドリッチケミカルカンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）（ミルウォーキー、ウィスコンシン州）またはシグマケミカルカンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）（セントルイス、ミズーリ州）から購入した。
【００３１】
物理定数セクション：
化合物１：収率：０．８３ ｇ （１８％）；融点６１−６２ ℃；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）δ９．９３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２７ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ２０．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．０４ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９７ （ｍ， １ Ｈ）， ６．４４ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．２４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， ２２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９４ （ｍ， １ Ｈ）， ４．２４ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．０８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６４＊ （ｄ， Ｊ＝ １．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ２．８６ （ｓ， ６ Ｈ）， １．７７＊ （ｄ， Ｊ＝ ６．０ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．２８＊ （ｍ， ３ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．７＊， １６３．９＊， １５１．３＊， １５０．８ ＊， １３５．５＊， １３２．９＊， １２９．５＊， １２６．９＊， １１１．０＊ ， １０８．８＊， １０７．２＊， １０３．７＊， ８９．３＊， ８４．４＊， ６６．７＊， ６６．１＊， ５２．３＊， ４９．９＊， ４０．２， ２０．７ ＊， １２．２；３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ３．３２， ２．７０；ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４４８， ３０５０， ２９５２， １６９１， １５０６， １４５０， １２４７， １１４３， ９９９ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２０３， ２０６， ２１， ２５８ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５３１．１６１９ （Ｃ２２Ｈ２９Ｎ４Ｏ８Ｐ ＋ Ｎａ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ ３．３６ 分
【００３２】
化合物２：収率：０．６０ ｇ （１３％）；融点 ５１−５３ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．７８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３８ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ２１．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９５ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．４８ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ＝ ６．０， ２２．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．３６ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ， ６ Ｈ）， ３．６３＊ （ｄ， Ｊ＝ ４．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．７４＊ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．２９＊ （ｍ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．７＊， １６３．９＊， １５１．７＊， １５０．８＊， １３５．７＊， １３３．１＊， １２８．４， １２６．８＊， １２５．０＊， １１０．９＊， １０４．８＊， ８９．２， ８４．６＊， ６６．８＊， ５５．８＊， ５２．２＊ ，４９．７＊， ４９．４＊， ２１．０＊， １１．８＊； ３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ４．９７， ４．２８； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４３２， ３０７２， ２９５０， １６９１， １４８３， １２６１， １１１２， ９３１ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２１０， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５２６．１５７０ （Ｃ２２Ｈ２８Ｎ３Ｏ１０Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ６．５５ 分
【００３３】
化合物３：収率：０．８９ ｇ （１７％）；融点：５１−５２ ℃；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．５２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２２ （ｄｄ， Ｊ＝ １．２， １７．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， １４．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．００ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６７ （ｓ， １ Ｈ）， １．７９＊ （ｄ， Ｊ＝ １４．１ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３１＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．２， １０．５ Ｈｚ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．５＊， １６３．８＊， １５０．８， １４５．５＊， １３５．３＊， １３２．８＊， １３０．９， １２７．３＊， １２６．２＊， １２２．７＊， １１７．８＊， １１３．３＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．５＊， ６７．１＊， ５２．６， ５０．１， ２０．８＊， １２．３＊；３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ３．１１， ２．５４；ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４１５， ３２２２， ３０７２， ２９５２， １６９１， １４７５， １２４５， １０８５， １０３５， ９２９ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２１５， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５７８．０１０５ （Ｃ２０Ｈ２２ＢｒＣｌＮ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ１８．６３， ２０．６３ 分
【００３４】
化合物４：収率： ０．３６ ｇ （１９％）；融点：４５−４６ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４７ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２４ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， １６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．８８ （ｍ， １ Ｈ）， ５．００ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３ Ｈ）， １．８０＊ （ｄ， Ｊ＝ １３．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３０＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．６， １５．３ Ｈｚ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．６＊， １６３．８＊， １５０．８， １４７．３＊， １３５．４＊， １３３．０＊， １２８．５＊， １２７．２＊， １２６．１， １２１．３＊， １１４．４＊， １１１．３＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．２＊， ５２．５， ５０．１＊， ２９．６， ２０．８＊， １２．４；　３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ２．９８， ２．３７； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４３２， ３０７２， ２９５４， １６８５， １４７５， １２４５， １０８９， ９３３ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２０７， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５４４．０４６９ （Ｃ２０Ｈ２３ＢｒＮ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ ８．３７， ９．２３分
【００３５】
化合物５：収率：０．６８ ｇ （３０％）；融点： ４２−４４ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．０４ （ｄｄ， Ｊ＝ ２．４， ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ５．８８ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３２ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．００ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６７ （ｓ， ３ Ｈ）， １．７７＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．２， １９．８ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３３＊ （ｍ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １７３．５＊， １６３．８， １５０．８， １４６．４＊， １３５．３， １３２．７＊， １３０．７＊， １２７．４， １２５．８， １２３．７＊， １２１．７＊， １１１．２＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．１＊， ５２．６， ５０．１， ２９．６， ２０．７＊， １２．３＊； ３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）δ ３．２４， ２．６０； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４２３， ３２０５， ３０７２， ２９５４， １６９１， １４７５， １２４５， １０９３， ９４６ ｃｍ−１；ＵＶ λｍａｘ ２１１， ２１６， ２２０， ２６８ ｎｍ；ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５３４．０５８１ （Ｃ２０Ｈ２２Ｃｌ２Ｎ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ１３．１８ 分
＊ 異性体のために複数のピークが認められる。
【００３６】
（実施例２）
ＰＢＭＣ細胞における化合物１〜５の細胞内代謝
化合物およびＡＺＴについて、末梢血液単核細胞におけるＨＩＶ複製阻害能を、以前に開示された手順を用いて試験した（ザーリング（Ｚａｒｌｉｎｇ）等， １９９０年， Ｎａｔｕｒｅ ３４７：９２；　エリス（Ｅｒｉｃｅ）等， １９９３年， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ３７：８３５； ウックン（Ｕｃｋｕｎ）等， １９９８年， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ４２：３８３）。逆転写酵素活性アッセイに基づいて、５０％のウイルス複製阻害に必要な化合物濃度（ＩＣ５０）を測定することによって、ＡＺＴ感受性ＨＩＶ−１（系統：ＨＴＬＶＩＩＩＢ）に感染した末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）において、抗ＨＩＶ活性を評価した。ウイルス阻害百分率は、試験物質で処理した感染細胞からのＲＴ活性値を、未処理の感染細胞（すなわち、ウイルス対照）からのＲＴ値と比較することによって算出した。
【００３７】
また、 ザーリング、エリスおよびウックンの論文Ｓｕｐｒａに記載されているように、細胞増殖の微量培養テトラゾリウムアッセイ（ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ａｓｓａｙ：ＭＴＡ）化合物の細胞毒性を検査した。更に詳しくは、２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−［（フェニルアミノ）−カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロオキサイド（ＸＴＴ）を用いて、ＭＴＡによって、化合物の５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を測定した（ザーリング等、１９９０年；エリス等、１９９３年；ウックン等、１９９８年、Ｓｕｐｒａ）。
【００３８】
結果を、表１および２に示す。各表の結果は、異なるＰＢＭＣを用いた個別試験を示すものである。
【００３９】
【表１】
2004513177.tif 000006
【００４０】
【表２】
2004513177.tif 000007
【００４１】
本発明の詳細な説明を示したが、本発明はこれに限定されるものではない。当業者に明らかなように、ここに記載された本発明は、代替の実施形態を含むように変更することができる。クレームされたように、このような全ての代替物が、本発明の意図および範囲内で考慮されるべきである。
【国際公開パンフレット】
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2004513177.tif 000023
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【手続補正書】
【提出日】平成14年11月26日(2002.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の詳細な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、例えば免疫欠乏ウイルス（ＨＩＶ）に対して、例えばＨＩＶ逆転写酵素阻害剤として、抗ウイルス活性を示す、アリールホスフェートヌクレオシド誘導体、特に２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン（以下、「ｄ４Ｔ」という。）のアリールホスフェート誘導体に関する。
【０００２】
［発明の背景］
エイズの蔓延と、原因であるウイルスを抑制するためになされている努力が、広く文献に記されている。ＨＩＶ阻害の一つの方法は、その逆転写酵素活性（ＲＴ）を阻害することである。そのため、有用な治療薬として、新規の強力且つ選択的なＨＩＶＲＴ阻害剤が求められている。既知の強力なＨＩＶ ＲＴ阻害剤は、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド（「ｄｄＮ」）同族体の５’−トリホスフェートを含む。これらの活性ＲＴ阻害剤は、ヌクレオシドキナーゼおよびヌクレオチドキナーゼの作用によって、細胞内で生成される。このように、ＡＺＴおよびｄ４ＴなどのｄｄＮ化合物は、抗ＨＩＶ剤の追求において非常に有望であると考えられている。
【０００３】
３’−アジド−３’−デオキシチミジン （ジドブジン；ＡＺＴ）の、生物活性な代謝物質であるＡＺＴ−トリホスフェートへの変換の律速段階は、モノホスフェート誘導体からジホスフェート誘導体への変換であると思われるが、生物活性なｄ４Ｔ代謝物質であるｄ４Ｔ−トリホスフェートの細胞内生成の律速段階は、ヌクレオシドのモノホスフェートへの変換であると報告されている（バルザリニ（Ｂａｌｚａｒｉｎｉ）等， １９８９年， Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４：６１２７；マクギガン（ＭｃＧｕｉｇａｎ）等， １９９６年， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３９：１７４８）。次のメカニズムが提案されている。
【０００４】
【化３】
2004513177.tif 000025
【０００５】
ｄｄＮの細胞内ヌクレオシドキナーゼ活性への依存を克服するための試みにおいて、マクギガン等は、ＡＺＴ（マクギガン等， １９９３年、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３６：１０４８；マクギガン等， １９９２年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ． １７：３１１） およびｄ４Ｔ（マクギガン等， １９９６年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１７４８； マクギガン等， １９９６年 Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ． ６：１１８３）のアリールメトキシアラニニルホスフェート誘導体を調製した。同様に、シディック（Ｓｉｄｄｉｑｕｉ）等は、ＨＩＶに対して使用されるアミド亜リン酸エステルｄ４ｔ−ＭＰプロドラッグを調整した（シディック等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２（２０））。このような化合物は、細胞内で加水分解されてモノホスフェート誘導体を生成することが示されている。モノホスフェート誘導体は、チミジンキナーゼ（ＴＫ）に依存することなく、チミジル酸キナーゼによって更にリン酸化されて、生物活性なトリホスフェート誘導体を与える。しかしながら、細胞毒性の増強を伴うことなく、アリール部分の様々な置換によってｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体の効力を更に改善するという、これまでの試みの全ては失敗している（マクギガン等， １９９６年 Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１７４８）。
【０００６】
この技術において、強力で選択的なＨＩＶ ＲＴ阻害剤である１以上の有用な治療薬が求められている。更に、この技術において、細胞毒性の増強を伴うことなく、改善された効力を有する１以上の有用な治療薬が求められている。
【０００７】
［発明の要約］
ヌクレオシドのアリールホスフェート誘導体において、アリール部分に特定の置換基を配置すると、置換基の特性により、加水分解されるｄ４Ｔヌクレオシド誘導体の能力が増強されることが見出された。本発明の置換フェニルホスフェートヌクレオシド誘導体は、既知の治療薬と比較して、改善された効力および特有の抗ウイルス活性を示す。
【０００８】
一つの側面において、本発明は、ウイルス性感染症を治療する方法に関し、抗ウイルス作用に有効な量の、抗ウイルス活性を有する本発明の化合物を投与することを含む。別の側面において、本発明は、抗ウイルス活性を示すアリールホスフェートヌクレオシド誘導体、特にｄ４Ｔのアリールホスフェート誘導体に関する。例えば、特定の化合物は、例えばＨＩＶ逆転写酵素阻害剤として、ＨＩＶに対して強力な活性を示す。アリール基に１以上の特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体は、望ましからざるレベルの細胞毒性を示すことなく、抗ＨＩＶ剤として著しく増大した効力を示す。特に、これらの誘導体は、強力なＨＩＶ逆転写酵素阻害剤である。
【０００９】
本発明は、更に、ＨＩＶに感染した細胞においてＨＩＶ逆転写酵素を阻害する方法に関し、この方法は、阻害に有効な量の、アリール基に特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体を、感染した細胞に投与することを含む。更に、本発明は、宿主細胞におけるＨＩＶ複製を阻害する方法に関し、阻害に有効な量の、アリール基に特定の置換基を有するｄ４Ｔアリールホスフェート誘導体に、宿主細胞を接触させることを含む。
【００１０】
これらの、およびその他の本発明の特徴および利点は、以下に開示される実施形態の詳細な説明および添付のクレームを検討した後に明らかになるであろう。
【００１１】
［発明の詳細な説明］
ヌクレオシドの特定の置換アリールホスフェート誘導体が、細胞毒性を低レベルに維持しながら、ＨＩＶに対して増大した活性を有することが、意外にも見出された。このように、これらの誘導体は、抗ウイルス性組成物、および、ＨＩＶ感染症などのウイルス性感染症の治療方法のための活性物質として、特に有用である。
【００１２】
本発明の化合物
本発明の化合物は、後述の実施例において更に十分に検討されるように、抗ウイルス活性を有する、ヌクレオシドのアリールホスフェート誘導体、特にｄ４Ｔの誘導体である。本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシド誘導体は、下記式のものである。
【００１３】
【化４】
2004513177.tif 000026
【００１４】
但し、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択され、Ｒは、例えば−ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ３などの、エステル化または置換され得るアミノ酸残基から選択されるものか、またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルである。
【００１５】
ここで用いられるように、「アミノ酸残基」という用語は、アミノ酸側鎖で形成される部分を含む。「アミノ酸側鎖」は、アミノ酸の可変的な基であり、例えば、グリシン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、ヒドロキシリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンなどの側鎖を含む。好ましくは、アミノ酸側鎖は、アラニンまたはトリプトファンの側鎖である。
【００１６】
本発明の一実施形態において、本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシドｄ４Ｔ誘導体は、下記式のものである。
【００１７】
【化５】
2004513177.tif 000027
【００１８】
但し、Ｘは、３−Ｎ（ＣＨ３）２、２，６−（ＣＨ３Ｏ）２、４−Ｂｒ、２−Ｃｌ、２−Ｂｒおよび２，５−（Ｃｌ）２からなる群より選択され、Ｒ’は、メチル、エチルまたはその薬学的に許容される塩である。
【００１９】
本発明の更なる実施形態において、本発明の組成物および方法における使用に好適なヌクレオシドｄ４Ｔ誘導体は、下記化合物、または下記化合物のいずれかの薬学的に許容される塩である。
５’−［３−ジメチルアミノフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２，６−ジメトキシフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［４−ブロモ−２−クロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２−ブロモフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
５’−［２，５−ジクロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
【００２０】
ｄ４Ｔ誘導体の合成
本発明の化合物の合成を一般的に説明するため、ｄ４Ｔ誘導体の合成を以下に記述する。マクギガン等， Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．， １９９２年， １７：３１１に開示された手順により、適当に置換されたフェニルホスホロジクロリデートが調製され得る。
【００２１】
本発明のｄ４Ｔ誘導体の一つの適当な生成方法を、下記スキーム１に示す。
【００２２】
【化６】
2004513177.tif 000028
【００２３】
スキーム１に示すように、置換フェノールがオキシ塩化リンと反応し、置換フェニルホスホロジクロリデートが得られる。置換フェニルホスホロジクロリデートは、更にＬ−アラニンメチルエステルと反応し、スキーム１において「Ａ」で示す、置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートを形成する。スキーム１に示される置換基「Ｘ」は、反応物質のフェニル基における１以上の置換基を表すことを言及しておく。
【００２４】
置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートは、上記スキーム１に示すように、ｄ４Ｔと反応する。置換フェニルメトキシアラニニルホスフェート（Ａ）とｄ４Ｔとは、ジクロロメタンおよびトリエチルアミン中で反応し、本発明の所望の生成物を形成する（上記スキーム１を参照されたい。）。
【００２５】
ｄ４Ｔ誘導体の投与
ｄ４Ｔ誘導体は、薬学的に許容されるキャリヤー、補助剤または希釈剤とともに、活性物質としてｄ４Ｔ誘導体を含む適当な組成物の形態で、患者に投与され得る。組成物は、経口的または非経口的に投与され得る。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、および非経口投与のためのバイアル瓶の溶液または分散液を含む。所望されるのであれば、持効性の投与形態を使用してもよい。組成物は、抗ウイルス活性を必要とする患者に、例えば、ＨＩＶ逆転写酵素を阻害する、および／または宿主細胞におけるＨＩＶ複製を阻害するのに十分な、適当な抗ウイルス量で投与される。投与量は、適当な用法・用量に従って管理される。
【００２６】
本発明の一実施形態において、ｄ４Ｔ誘導体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重１ｋｇ当りのｄ４Ｔのｍｇ）の投与量で投与される。好ましいｄ４Ｔ誘導体の投与方法は、経口または経静脈輸送を含む。投薬は、１年当り１〜約１２の間で変化するコース数で、１コース当り７〜３０日の期間実施することができる。
【００２７】
本発明は前述され、実施例として後に更に説明されるが、実施例は本発明の範囲を限定するものと解釈されるものではない。反対に、この記載が読まれた後、本発明の意図および／または添付されたクレームの範囲から外れることなく、手段には、様々なその他の実施形態、変形および同等のものがあることが、当業者により想到されることが明確に理解される。
【００２８】
（実施例１）
ｄ４Ｔ誘導体の合成および特性評価
上記スキーム１に示す反応機構を用いて、置換フェニルホスホロジクロリデートを生成した。選択した「Ｘ」置換基を使用し、５種の置換フェニルホスホロジクロリデートを生成した。スキーム１に示すように、置換フェニルホスホロジクロリデートをアラニンメチルエステルと反応させ、５種の置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートを形成した。そして、上記スキーム１に示すように、置換フェニルメトキシアラニニルホスフェートをｄ４Ｔと反応させ、本発明のｄ４Ｔ誘導体を形成した。
【００２９】
上に概要を述べた一般的な手順を用いて、次の化合物を生成した。
化合物１：５’−［３−ジメチルアミノフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物２：５’−［２，６−ジメトキシフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物３：５’−［４−ブロモ−２−クロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物４：５’−［２−ブロモフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
化合物５：５’−［２，５−ジクロロフェニルメトキシアラニニルホスフェート］−２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン
【００３０】
融点を、フィッシャー−ジョーンズ溶融装置（Ｆｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓ ｍｅｌｔｉｎｇ ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて、補正することなく測定した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、ヴァリアンマーキュリー ３００ スペクトロメーター（Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて、ＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３中で記録した。化学シフトを、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を０ｐｐｍの内部標準として、百万分率（ｐｐｍ）で記録した。赤外スペクトルを、ニコレットプロテージ ４６０−ＩＲスペクトロメーター（Ｎｉｃｏｌｅｔ ＰＲＯＴＥＧＥ ４６０−ＩＲ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）で記録した。質量分光データを、ＨＰ５９７３質量選択検出器（ＨＰ ５９７３ Ｍａｓｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）を備えたフィンニガンマット９６、ＶＧ７０７０Ｅ−ＨＦ Ｇ．Ｃ．システム（ＦＩＮＮＩＧＡＮ ＭＡＴ ９５， ＶＧ ７０７０Ｅ−ＨＦ Ｇ．Ｃ． ｓｙｓｔｅｍ）で記録した。ＵＶスペクトルを、ベックマンＤＵ ７４００で、ＭｅＯＨを溶媒として用いて記録した。ＴＬＣを、プレコートシリカゲルプレート（シリカゲルＫＧＦ；ホイットマン社（Ｗｈｉｔｍａｎ Ｉｎｃ））上で実施した。全てのカラムクロマトグラフィー分離に、シリカゲル（２００〜４００メッシュ、ホイットマン社）を使用した。ＨＰＬＣを、７０：３０の水／アセトニトリルで流速１ｍＬ／分で溶出したＣ１８４×２５０ｍｍリクロスファーカラムを用いて実施した。ＨＰＬＣにより、下記化合物の純度は９６％を超えた。全ての化学種は試薬グレードであり、オルドリッチケミカルカンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）（ミルウォーキー、ウィスコンシン州）またはシグマケミカルカンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）（セントルイス、ミズーリ州）から購入した。
【００３１】
物理定数セクション：
化合物１：収率：０．８３ ｇ （１８％）；融点６１−６２ ℃；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）δ９．９３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２７ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ２０．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．０４ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９７ （ｍ， １ Ｈ）， ６．４４ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．２４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， ２２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．８１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９４ （ｍ， １ Ｈ）， ４．２４ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．０８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９２ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６４＊ （ｄ， Ｊ＝ １．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ２．８６ （ｓ， ６ Ｈ）， １．７７＊ （ｄ， Ｊ＝ ６．０ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．２８＊ （ｍ， ３ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．７＊， １６３．９＊， １５１．３＊， １５０．８ ＊， １３５．５＊， １３２．９＊， １２９．５＊， １２６．９＊， １１１．０＊ ， １０８．８＊， １０７．２＊， １０３．７＊， ８９．３＊， ８４．４＊， ６６．７＊， ６６．１＊， ５２．３＊， ４９．９＊， ４０．２， ２０．７ ＊， １２．２；３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ３．３２， ２．７０；ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４４８， ３０５０， ２９５２， １６９１， １５０６， １４５０， １２４７， １１４３， ９９９ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２０３， ２０６， ２１， ２５８ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５３１．１６１９ （Ｃ２２Ｈ２９Ｎ４Ｏ８Ｐ ＋ Ｎａ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ ３．３６ 分
【００３２】
化合物２：収率：０．６０ ｇ （１３％）；融点 ５１−５３ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．７８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３８ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ２１．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９５ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．４８ （ｍ， ３ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ＝ ６．０， ２２．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．３６ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ， ６ Ｈ）， ３．６３＊ （ｄ， Ｊ＝ ４．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．７４＊ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．２９＊ （ｍ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．７＊， １６３．９＊， １５１．７＊， １５０．８＊， １３５．７＊， １３３．１＊， １２８．４， １２６．８＊， １２５．０＊， １１０．９＊， １０４．８＊， ８９．２， ８４．６＊， ６６．８＊， ５５．８＊， ５２．２＊ ，４９．７＊， ４９．４＊， ２１．０＊， １１．８＊； ３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ４．９７， ４．２８； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４３２， ３０７２， ２９５０， １６９１， １４８３， １２６１， １１１２， ９３１ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２１０， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５２６．１５７０ （Ｃ２２Ｈ２８Ｎ３Ｏ１０Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ６．５５ 分
【００３３】
化合物３：収率：０．８９ ｇ （１７％）；融点：５１−５２ ℃；１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．５２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２２ （ｄｄ， Ｊ＝ １．２， １７．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， １４．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．００ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．１９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６７ （ｓ， １ Ｈ）， １．７９＊ （ｄ， Ｊ＝ １４．１ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３１＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．２， １０．５ Ｈｚ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．５＊， １６３．８＊， １５０．８， １４５．５＊， １３５．３＊， １３２．８＊， １３０．９， １２７．３＊， １２６．２＊， １２２．７＊， １１７．８＊， １１３．３＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．５＊， ６７．１＊， ５２．６， ５０．１， ２０．８＊， １２．３＊；３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ３．１１， ２．５４；ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４１５， ３２２２， ３０７２， ２９５２， １６９１， １４７５， １２４５， １０８５， １０３５， ９２９ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２１５， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５７８．０１０５ （Ｃ２０Ｈ２２ＢｒＣｌＮ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ１８．６３， ２０．６３ 分
【００３４】
化合物４：収率： ０．３６ ｇ （１９％）；融点：４５−４６ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．５５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４７ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２４ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， １６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．８８ （ｍ， １ Ｈ）， ５．００ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３ Ｈ）， １．８０＊ （ｄ， Ｊ＝ １３．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３０＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．６， １５．３ Ｈｚ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ１７３．６＊， １６３．８＊， １５０．８， １４７．３＊， １３５．４＊， １３３．０＊， １２８．５＊， １２７．２＊， １２６．１， １２１．３＊， １１４．４＊， １１１．３＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．２＊， ５２．５， ５０．１＊， ２９．６， ２０．８＊， １２．４；　３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ２．９８， ２．３７； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４３２， ３０７２， ２９５４， １６８５， １４７５， １２４５， １０８９， ９３３ ｃｍ−１； ＵＶ λｍａｘ ２０７， ２６７ ｎｍ； ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５４４．０４６９ （Ｃ２０Ｈ２３ＢｒＮ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ ８．３７， ９．２３分
【００３５】
化合物５：収率：０．６８ ｇ （３０％）；融点： ４２−４４ ℃； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ９．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．０４ （ｄｄ， Ｊ＝ ２．４， ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ６．３２ （ｍ， １ Ｈ）， ５．８８ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３２ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．００ （ｍ， １ Ｈ）， ３．６７ （ｓ， ３ Ｈ）， １．７７＊ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．２， １９．８ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．３３＊ （ｍ， ３ Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １７３．５＊， １６３．８， １５０．８， １４６．４＊， １３５．３， １３２．７＊， １３０．７＊， １２７．４， １２５．８， １２３．７＊， １２１．７＊， １１１．２＊， ８９．６＊， ８４．３＊， ６７．１＊， ５２．６， ５０．１， ２９．６， ２０．７＊， １２．３＊； ３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）δ ３．２４， ２．６０； ＩＲ （ＫＢｒ） ν３４２３， ３２０５， ３０７２， ２９５４， １６９１， １４７５， １２４５， １０９３， ９４６ ｃｍ−１；ＵＶ λｍａｘ ２１１， ２１６， ２２０， ２６８ ｎｍ；ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ　５３４．０５８１ （Ｃ２０Ｈ２２Ｃｌ２Ｎ３Ｏ８Ｐ ＋ Ｈ＋）； ＨＰＬＣ ｔＲ１３．１８ 分
＊ 異性体のために複数のピークが認められる。
【００３６】
（実施例２）
ＰＢＭＣ細胞における化合物１〜５の細胞内代謝
化合物およびＡＺＴについて、末梢血液単核細胞におけるＨＩＶ複製阻害能を、以前に開示された手順を用いて試験した（ザーリング（Ｚａｒｌｉｎｇ）等， １９９０年， Ｎａｔｕｒｅ ３４７：９２；　エリス（Ｅｒｉｃｅ）等， １９９３年， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ３７：８３５； ウックン（Ｕｃｋｕｎ）等， １９９８年， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ４２：３８３）。逆転写酵素活性アッセイに基づいて、５０％のウイルス複製阻害に必要な化合物濃度（ＩＣ５０）を測定することによって、ＡＺＴ感受性ＨＩＶ−１（系統：ＨＴＬＶＩＩＩＢ）に感染した末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）において、抗ＨＩＶ活性を評価した。ウイルス阻害百分率は、試験物質で処理した感染細胞からのＲＴ活性値を、未処理の感染細胞（すなわち、ウイルス対照）からのＲＴ値と比較することによって算出した。
【００３７】
また、 ザーリング、エリスおよびウックンの論文Ｓｕｐｒａに記載されているように、細胞増殖の微量培養テトラゾリウムアッセイ（ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ａｓｓａｙ：ＭＴＡ）化合物の細胞毒性を検査した。更に詳しくは、２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−［（フェニルアミノ）−カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロオキサイド（ＸＴＴ）を用いて、ＭＴＡによって、化合物の５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を測定した（ザーリング等、１９９０年；エリス等、１９９３年；ウックン等、１９９８年、Ｓｕｐｒａ）。
【００３８】
結果を、表１および２に示す。各表の結果は、異なるＰＢＭＣを用いた個別試験を示すものである。
【００３９】
【表１】
2004513177.tif 000029
【００４０】
【表２】
2004513177.tif 000030
【国際調査報告】
2004513177.tif 000031
2004513177.tif 000032
2004513177.tif 000033