(57)【要約】糖尿病の被験者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの島細胞新生を達成するために提供される組成物及び方法。該方法はガストリン／コレシストキニン受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを含む組成物を用いる短期間の治療を含む。このような短期間治療のための組成物はインスリン放出の増加、空腹時血糖値の低下及びグルコース耐性向上の期間の延長をもたらし、該効果の持続は治療停止の時間から考慮される期間である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）受容体リガンドの第一の投与量及び表皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体リガンドの第二の投与量を含む医薬組成物であって、第一及び第二の投与量は、島新生を必要とする被験者中に島新生を誘発させるために効果的な組成物の割合で存在する医薬組成物。
【請求項２】
ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドが合成ガストリン誘導体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＥＧＦ受容体リガンドが組換え体修飾ＥＧＦである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドが１５位置にロイシン置換を有する合成ガストリン誘導体であって、ＥＧＦ受容体リガンドが２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体修飾ＥＧＦである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
島新生を必要とする被験者が糖尿病患者である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
糖尿病がインスリン依存型糖尿病である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
糖尿病が成人発症糖尿病である、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
第一の投与量が少なくとも組成物中の第二の投与量の質量と等しい、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
第一の投与量が第二の投与量の質量よりも約２倍〜約１００倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
第一の投与量が第二の投与量の質量よりも約２倍〜約１０倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
第一の投与量が第二の投与量の質量よりも約１０倍〜約１００倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
第一の投与量が１日につき被験者の体重１ｋｇ当たり約０．１μｇ〜約１μｇである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
第一の投与量が１日につき被験者の体重１ｋｇ当たり約１μｇ〜約１０μｇである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
第一の投与量が１日につき被験者の体重１ｋｇ当たり約１０μｇ〜約１００μｇである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
第一の投与量が１日につき被験者の体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜約１０ｍｇである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
被験者が哺乳動物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
哺乳動物が齧歯動物または霊長類である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
被験者がヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
１日当たりの投与量が１日複数回の投与に分割されている、請求項１２〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
合成ガストリン誘導体及び組換え体修飾ＥＧＦを含有する医薬組成物であって、該ガストリン誘導体と該組換え体修飾ＥＧＦの比が約６０：１である医薬組成物。
【請求項２１】
１５位置にロイシン置換を有する合成ガストリン誘導体及び２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体修飾ＥＧＦを含有する医薬組成物であって、該ガストリン誘導体と該修飾ＥＧＦの比が約６０：１である医薬組成物。
【請求項２２】
少なくとも約１μｇ／体重ｋｇの修飾組換え体ＥＧＦ、及び少なくとも約３０μｇ／体重ｋｇの合成ガストリン誘導体の効果的な投与量を含有する島新生療法（Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標））のための医薬組成物。
【請求項２３】
少なくとも約１μｇ／体重ｋｇの２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体修飾ＥＧＦ、及び少なくとも約３０μｇ／体重ｋｇの１５位置にロイシン置換を有する合成ガストリン誘導体の効果的な投与量を含有するＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）のための医薬組成物。
【請求項２４】
以下を含有する糖尿病の被験者を治療する方法：第１の効果的なガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド投与量及び第２のＥＧＦ受容体リガンドの効果的な投与量を含む組成物を治療期間の間投与する工程であって、第１及び第２の効果的な投与量は島新生が必要な被験者に島新生を引き起こすために適切な量であって、少なくとも治療期間よりも約４倍以上の一時的な回復期間をもたらす量である。
【請求項２５】
組成物が一時的な回復期間の間、血中インスリンを増加させ、血糖を減少させるのに効果的である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
第１及び第２の効果的な投与量の組成物が、単一の注射として混合して投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
第１及び第２の効果的な投与量の組成物が、単一の皮下注射として混合して投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
インスリン依存型糖尿病患者の高血糖を防止するために必要な外因性インスリンの投与を減少させる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
被験者がヒトであり、治療期間がヒトの平均寿命の約０．３％よりも少ない、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
治療期間がヒトの平均寿命の約０．２％よりも少ない、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
治療期間がヒトの平均寿命の約０．１％よりも少ない、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
被験者がヒトであり、一時的な回復期間が少なくともヒトの平均寿命の約０．５％である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
一時的な回復期間が少なくともヒトの平均寿命の約１％である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
一時的な回復期間が少なくともヒトの平均寿命の約２％である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
一時的な回復期間がほぼ終わる時期に対応して同時に該組成物の投与を繰り返す工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
インスリン欠乏症糖尿病の被験者を治療する方法であって、以下を含む：被験者の種の平均寿命の約１％よりも短い期間である治療期間で合成ガストリン誘導体及び組換え体修飾ＥＧＦの各投与量を投与する工程であって、該治療により被験者が血中インスリンの増加及び血糖の低下を含む糖尿病の一時的な回復を生じ、；及び一時的な回復期間がほぼ終わる時期に対応して同時に該組成物の投与を繰り返す工程であって、その結果インスリン欠乏症糖尿病の被験者を治療する。
【請求項３７】
インスリン欠乏症糖尿病の被験者を治療する方法であって、以下を含む：被験者の種の平均寿命の約１％よりも短い期間である治療期間で１５位置にロイシン置換を有する合成ガストリン誘導体及び２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体修飾ＥＧＦの各投与量を投与する工程であって、該治療により被験者が血中インスリンの増加及び血糖の低下を含む糖尿病の一時的な回復を生じ、；及び一時的な回復期間がほぼ終わる時期に対応して同時に該組成物の投与を繰り返す工程であって、その結果インスリン欠乏症糖尿病の被験者を治療する。
【請求項３８】
島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法であって、以下を含む：第１の効果的な投与量のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及び第２の効果的な投与量のＥＧＦ受容体リガンドを含む組成物であって、該組成物を短期間の服薬スケジュールに従って患者に投与する工程；該組成物投与後に患者の血糖値を観測する工程；及び患者がさらに島新生が必要であることを示す増加した血糖値である場合に、島新生が必要な糖尿病患者が治療されるように該組成物の投与を患者に繰り返す工程。
【請求項３９】
組成物の投与により血中インスリンの増加及び血糖の低下をもたらす、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
服薬スケジュールの期間が約３ヶ月以下である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
服薬スケジュールの期間が約２ヶ月以下である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
服薬スケジュールの期間が約１ヶ月以下である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
血糖値の観測を１日約３回以下の頻度で行う、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
血糖値の観測を１日約１回以下の頻度で行う、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
血糖値の観測を１週間約１回以下の頻度で行う、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
血糖値の観測を患者による自己管理で行う、請求項３５に記載の方法。
【請求項４７】
組成物の繰り返し投与が６ヶ月当たり約１回以下の頻度である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４８】
組成物の繰り返し投与が１年当たり約１回以下の頻度である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
組成物の繰り返し投与が２年当たり約１回以下の頻度である、請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
組成物中のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの第１の効果的な投与量がＥＧＦ受容体リガンドの第２の効果的な投与量よりも少なくとも約１０倍の質量である、請求項３８に記載の方法。
【請求項５１】
島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法であって、以下を含む：合成ガストリン誘導体及び修飾組換え体ＥＧＦを含む組成物を、島新生が開始して血糖が実質的に低下するように、約２ヶ月以下の服薬スケジュールの期間に従って該組成物を患者に投与する工程；血糖値を１日当たり約１回以下の間隔で観測する工程；及び該組成物の患者への投与を６ヶ月に約１回以下の頻度で繰り返す工程。
【請求項５２】
島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法であって、以下を含む：１５位置にロイシン置換を有する合成ガストリン誘導体及び２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体修飾ＥＧＦを含む組成物を、島新生が開始して血糖が実質的に低下するように、約２ヶ月以下の服薬スケジュールの期間に従って該組成物を患者に投与する工程；血糖値を１日当たり約１回以下の間隔で観測する工程；及び該組成物の患者への投与を６ヶ月に約１回以下の頻度で繰り返す工程。
【請求項５３】
インスリン依存型糖尿病患者における外因性インスリンの使用を減らす方法であって、該方法は以下を含む：島新生を引き起こすために効果的な投与量のＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物を投与する工程；及び血糖が低下することによって、高血糖を防ぐために必要な外因性インスリンの投与を減らす工程。
【請求項５４】
組成物がガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
組成物がガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドをＥＧＦ受容体リガンドの質量よりも少なくとも約１０倍の質量で含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
組成物の投与を約３ヶ月以下の服薬スケジュール期間に従って行う、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
インスリン供与の減量を組成物投与停止後に開始する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
インスリン供与の減量を組成物投与のスケジュール期間内に開始する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
組成物投与後のインスリン供与を組成物投与前の糖尿病患者への使用と比較して約７０％以下に減少させる、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６０】
組成物投与後のインスリン供与を組成物投与前の糖尿病患者への使用と比較して約５０％以下に減少させる、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６１】
組成物投与後のインスリン供与を組成物投与前の糖尿病患者への使用と比較して約１０％以下に減少させる、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６２】
組成物投与後のインスリン供与を組成物投与前の糖尿病患者への使用と比較して約１％以下に減少させる、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６３】
インスリン依存型糖尿病患者のインスリン使用を減らす方法であって、該方法は以下を含む：少なくとも約１０：１の割合で効果的な投与量のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及び効果的な投与量のＥＧＦ受容体リガンドを投与する工程；及び患者の血糖低下の開始後にインスリン供与を減らす工程。
【請求項６４】
患者の島新生を増加させる方法であって、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを、島新生が増加するように短期間にわたって投与する工程を含む方法。
【請求項６５】
ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドをガストリンするキット。
【請求項６６】
ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドが単一の容器内に混合されている、請求項６５に記載のキット。
【請求項６７】
ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドが投与量単位で提供される、請求項６５または６６に記載のキット。
【請求項６８】
インスリンをさらに含有する、請求項６５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明の実施形態は、ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）受容体リガンド及び表皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体リガンドを用いて糖尿病患者を短期治療単位で全身治療するための組成物及び方法を目的とするものであり、このような治療は被験者に投与した場合膵臓ランゲルハンス島新生を開始し、治療の停止後長期間にわたって糖尿病の一時的な回復を与える。
【０００２】
背景
米国人口の約８０万の人々はインスリン欠乏症糖尿病（若年性糖尿病または１型糖尿病としても知られる）に苦しんでおり、毎年約３０，０００人の新しい患者が発生している。さらに、極めて多数かつ急速に患者数が増加しているのは２型糖尿病（成人発症型またはインスリン抵抗性糖尿病とも呼ばれる）であり、異常発生比率のレベルにおけるこの集団において、膵臓疲労及びインスリン不足を引き起こす。１型糖尿病は患者の糖自己管理によって測定される血糖レベルに応じて、インスリン注射を用いて一般的に治療する。例えば、遅効性や速効性、及び注射によるインスリンデリバリーに適したシステムやデバイス、例えばデリバリー・ペン（ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｐｅｎ）などの多様なインスリンの製剤が、増加する糖尿病人口に使用されている。
【０００３】
糖尿病の特徴である異常に高い血糖（高血糖）は、未治療のままでいると、様々な病的状態をもたらす。例えば治癒しない末梢血管障害、失明に至るレチナール損傷、及び腎不全である。患者によるインスリン投与の複数回にわたる1日の投薬は、１日あたりの糖自己管理の頻度に応じて、一生涯必要とされ、それに伴う出費と患者にとっての不自由さ、及び健康管理システムを伴う。さらに、糖尿病の病的影響は血糖レベルの制御、糖レベル管理やインスリン投与及び食事制限により達成される制御を厳密に行わないことに相関して増大し、従って従順に守っている患者だけがマイナスの結果を避けることになる。
【０００４】
例えば糖尿病患者に膵臓物質の移植を行うなどの、糖管理及びインスリン注射とは別の糖尿病治療法が追求されてきた。これらの可能性は通常の生理学的反応の潜在的な利点、すなわち、血糖濃度の増加に応じて素早いインスリンの放出を提供する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで区別するために取り込んでカプセル化した豚島細胞または島胆管細胞のような異質遺伝子型の移植または異種移植片膵臓物質は実験的なものに留まる。ヒト膵臓物質の移植は深刻な手に入る材料不足及び免疫拒絶反応により依然として制限されている。また、異質遺伝子型または異種移植片膵臓島組織の移植は移植免疫拒絶反応または動物ウイルスの感染の可能性のために依然として制限されている。
【０００５】
ＴＧＦα及びガストリン組換え体遺伝子の両方を発現するトランスジェニックマウスは増加した膵島の塊を有し、いずれかの物質のみを発現するマウス中には存在しない（１９９９年３月２３日に発行された米国特許第５，８８５，９５６号及び２００１年９月１１日に発行された第６，２８８，３０１号）。血糖をコントロールし、インスリン不足を修整するための治療用組成物及び方法、特に高い血糖に応じてインスリンの素早い放出をもたらすことができ、期間の延長に効果的な組成物及び方法は、依然として医療における重要な優先事項である。
【０００６】
概要
本発明は、調剤の短い服薬スケジュールに従ってガストリン受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドの両方を糖尿病の被験者に対して投薬することで被験者中のランゲルハンス島再生を引き起こし、糖尿病状態の驚くべき長い期間の一時的な回復という反応を生じる発見の一部に基づく。一時的な回復期間は血糖の低下及び血液インスリン中の増加により特徴付けられる。現在では商業的に利用可能な糖尿病患者のｉｎ  ｖｉｖｏ島再生に関する治療法はない。
【０００７】
１つの側面において、ここで本発明はガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）受容体リガンドの第１の投与量、及び上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体リガンドの第２の投与量を含む医薬組成物を提供する。第１及び第２の投与量は島新生の必要な被験者中に島新生を引き起こすための効果的な組成物中の割合である。ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドは、例えば、合成ガストリン誘導体であってもよい。ＥＧＦ受容体リガンドは組換え体修飾ＥＧＦであってもよい。例えば、１つの実施形態において、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドは、１５位置に置換されたロイシンを有する合成ガストリン誘導体であり、ＥＧＦ受容体リガンドは、２個のＣ末端アミノ酸の欠失を有し５１位置において置換された中性アミノ酸を有する組換え体修飾ＥＧＦである。島新生が必要な被験者は糖尿病患者であってもよい。糖尿病は、例えばインスリン依存型糖尿病、例えば成人発症型糖尿病であってもよい。
【０００８】
一般に、第１の投与量は少なくとも組成物中において第２の投与量とおおよそ等しい質量であってよい。例えば、第１の投与量は第２の投与より約２倍〜約１００倍質量が大きい。１つの実施形態において、第１の投与量は第２の投与量より約２倍〜約１０倍質量が大きい。さらに、第１の投与量は第２の投与量より約１０倍〜約１００倍質量が大きい。具体的には、第１の投与量は１日につき、被験者の体重１ｋｇ当たり約０．１μｇ〜約１．０μｇとすることができる。あるいは、第１の投与量は１日につき、被験者の体重１ｋｇ当たり約１．０μｇ〜約１０μｇとすることができ、第１の投与量は１日につき、被験者の体重１ｋｇ当たり約１０μｇ〜約１００μｇとすることができ、または第１の投与量は１日につき、被験者の体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜約３．０ｍｇとすることができる。いくつかの実施形態において、１日当たり（または２４時間周期）の投与量は１日につき複数回の投与に分けられる。
【０００９】
一般に、被験者は哺乳動物である。例えば、哺乳動物は齧歯動物または霊長類であり、例えば被験者はヒトである。
【００１０】
１つの実施形態において、本発明は合成ガストリン誘導体及び組換え体修飾ＥＧＦを含んだ医薬組成物を提供する。ガストリン誘導体と組換え体修飾ＥＧＦの比は約６０：１である。さらに他の実施形態は、１５位置に置換されたロイシンを有する合成ガストリン誘導体及び２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に置換された中性アミノ酸を有する組換え体修飾ＥＧＦを有する医薬組成物である。ここで、ガストリン誘導体と修飾ＥＧＦの比は約６０：１である。さらに別の実施形態は島新生療法（ｉｓｌｅｔ  ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｅｒａｐｙ）（Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標））のための医薬組成物であってもよく、効果的な投与量は修飾組換え体ＥＦＧは少なくとも約１μｇ／体重ｋｇ、合成ガストリン誘導体は少なくとも約３０μｇ／体重ｋｇである。さらに別の実施形態はＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）のための医薬組成物であって、効果的な投与量は２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に置換された中性アミノ酸を有する組換え体修飾ＥＦＧは少なくとも約１μｇ／体重ｋｇ、１５位置に置換されたロイシンを有する合成ガストリン誘導体は少なくとも約３０μｇ／体重ｋｇである。
【００１１】
他の側面において、本発明の実施形態は糖尿病を持つ被験者を治療する方法を提供し、以下を含む：ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの第１の効果的な投与量及びＥＧＦ受容体リガンドの第２の効果的な投与量を含む組成物を治療期間中投与し、第１及び第２の効果的な投与量は島新生が必要な被験者中に島新生を引き起こすために適した量であり、及び治療期間よりも少なくとも約４倍長い一時的な回復期間を与える。組成物は一時的な回復期間の間、血中インスリンの増加及び血糖の減少に効果的に働くことができる。例えば、被験者がヒトの場合、治療期間は約７０〜７５年のヒトの平均寿命の約０．１％より少なく、すなわち治療期間は約１ヶ月の治療よりも短い。あるいは、治療期間はヒトの平均寿命の約０．２％より少なく、または治療期間はヒトの平均寿命の約０．３％より少ない。さらに、一時的な回復期間は少なくともヒトの平均寿命の約０．５％であり、一時的な回復期間は少なくともヒトの平均寿命の約１％であり、または一時的な回復期間は少なくともヒトの平均寿命の約２％である。多様な実施形態における方法は、一時的な回復期間のおおよその終了時に対応して該組成物の投与を同時に繰り返すことを含む。
【００１２】
さらに本発明の他の実施形態は、インスリン依存型糖尿病を持つ被験者を治療する方法を提供し、以下を含む：合成ガストリン誘導体及び組換え体修飾ＥＧＦのそれぞれの投与量を対象となる種の平均寿命の約１％よりも短い期間である治療期間の間投与し、該治療によりインスリン生成の増加及び血糖値の低下をもたらし、及び一時的な回復期間のおおよその終了時に対応して同時に該組成物の投与を繰り返し、その結果インスリン欠乏性の糖尿病を持つ被験者を治療する。
【００１３】
さらに本発明の別の側面は、インスリン欠乏性の糖尿病を持つ被験者を治療する方法を提供し、以下を含む：１５位置に置換されたロイシンを有する合成ガストリン誘導体及び２つのＣ末端アミノ酸の欠失と５１位置に置換された中性アミノ酸を有する組換え修飾ＥＧＦのそれぞれの投与量を対象である種の平均寿命の約１％よりも短い期間である治療期間の間投与し、該治療によりインスリン生成の増加及び血糖値の低下をもたらし、及び一時的な回復期間のおおよその終了時に対応して同時に該組成物の投与を繰り返し、その結果インスリン欠乏性の糖尿病を持つ被験者を治療する。
【００１４】
さらに本発明の別の側面は、島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法を提供し、以下を含む：ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの第１の効果的な投与量及びＥＧＦ受容体リガンドの第２の効果的な投与量を含む組成物を患者に投与し、短期間の服薬スケジュールに従って該組成物を投与し、該組成物の投与後に患者の血糖値を観測し、及びサンプル中の血糖値の増加により患者がさらに島新生が必要であることが示されると該組成物の患者への投与を繰り返し、従って、島新生が必要な糖尿病患者は治療される。その結果、該組成物の投与は血中インスリンを増加させ、血糖値の減少をもたらす。服薬スケジュールの期間は約３ヶ月よりも短く；例えば、服薬スケジュールの期間は約２ヶ月よりも短く；例えば、服薬スケジュールの期間は約１ヶ月よりも短い。さらに、血糖値の観測は１日約１回よりも頻度が少なく；例えば、血糖値の観測は週約１回よりも頻度が少ない。血糖値の観測は患者による自己管理であってもよい。該組成物の投与の繰り返しは約６ヶ月に一度の頻度よりも少なくてよい。あるいは、該組成物の投与の繰り返しは約１年に一度の頻度よりも少なくてよく；または該組成物の投与の繰り返しは約２年に一度の頻度よりも少なくてよい。関連のある実施形態において、該組成物中のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの第１の効果的な投与量は少なくともＥＧＦ受容体リガンドの第２の効果的な投与量の質量よりも約１０倍大きい。
【００１５】
さらに他の側面において、本発明は島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法を提供し、以下を含む：合成ガストリン誘導体及び修飾組換えＥＧＦを有する組成物を患者に投与し、島新生が開始され、血糖が実質的に減少するように約２ヶ月の期間よりも少ない服薬スケジュールに従って該組成物を投与する；１日約１回よりも少ない間隔で血糖値を観測し；及び約６ヶ月に１回よりも少ない頻度で患者に該組成物の投与を繰り返す。
【００１６】
さらに別の側面において、本発明は島新生が必要な糖尿病患者を治療する方法を提供し、以下を含む：合成ガストリン誘導体（該ガストリン誘導体は１５位置にロイシンを有する）及び組換え修飾ＥＧＦ（該修飾ＥＧＦはＣ末端に２つのアミノ酸の欠失と５１位置に中性アミノ酸を有する）を含む組成物を患者に投与し、島新生が開始され、血糖が実質的に減少するように約２ヶ月の期間よりも少ない服薬スケジュールに従って該組成物を投与する；１日約１回よりも少ない間隔で採取した血液サンプル中の血糖値を観測し；及び約６ヶ月に１回よりも少ない頻度で患者に該組成物の投与を繰り返す。
【００１７】
さらに別の側面において、本発明はインスリン欠乏症糖尿病患者のインスリン使用を減少させる方法を提供し、該方法は以下を含む：島新生を引き起こすために効果的な投与量のＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物を投与し；及び島新生が引き起こされるので、その結果インスリン分泌の増加及び血糖の減少をもたらし、インスリン供与を減少させる。関連する実施形態において、該組成物はガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを含む。該組成物は組成物中のＥＧＦ受容体リガンドの量よりも質量が少なくとも約１０倍大きい量のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドを有することができる。該組成物の投与は約６ヶ月の期間よりも短いスケジュールに従って行う。さらに、インスリン供与の減量は該組成物の投与の停止後に開始できる。あるいは、外因性インスリン投与の減量は該組成物を投与するスケジュールの期間内に開始できる。従って、該組成物投与後のインスリン供与は該組成物投与前の糖尿病患者における使用と比較して約７０％よりも減少している。例えば、該組成物投与後のインスリン供与は該組成物投与前の糖尿病患者における使用と比較して約５０％よりも減少している；または該組成物投与後のインスリン供与は該組成物投与前の糖尿病患者における使用と比較して約１０％よりも減少している；または該組成物投与後のインスリン供与は該組成物投与前の糖尿病患者における使用と比較して約１％よりも減少している。
【００１８】
さらに本発明が提供する別の側面はインスリン依存型糖尿病患者におけるインスリン使用を減少させる方法であり、該方法は以下を含む：効果的な投与量のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及び効果的な投与量のＥＧＦ受容体リガンドを少なくとも約１０：１の割合で投与し；患者の血糖減少の発現後にインスリン供与を減少させる。
【００１９】
ここで本発明の実施形態は患者の島新生を増加させる方法を提供し、島新生が増加されるように短い継続期間の間にわたってガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを投与することを含む。
【００２０】
ここで本発明の実施形態はガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを含むキットを提供する。例えば、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドは単一の容器に混合される。該キットは取扱説明書または使用説明書のセットを含むことができる。さらに、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドは服用量単位で含めることができる。該キットはさらにインスリンを含むことができる。
【００２１】
本発明のその他の特徴及び有利な点は以下の好ましい実施形態の記載及び特許請求の範囲から明らかである。
【００２２】
実施形態の詳細な説明
ここで使用するように、“ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド”の語は同じまたは隣接する組織または同じ個体中のＥＧＦ受容体も刺激を受けたとき、インスリン産生膵島細胞の新生を誘発するようなガストリン／ＣＣＫ受容体を刺激する化合物を包含する。そのようなガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの例としては２００１年９月１１日に発行された米国特許第６，２８８，３０１号に与えられており、例えば、ガストリン３４（ビッグガストリン）、ガストリン１７（リトルガストリン）及びガストリン８（ミニガストリン）のような多様な形態のガストリン；ＣＣＫ５８、ＣＣＫ３３、ＣＣＫ２２、ＣＣＫ１２及びＣＣＫ８のような多様な形態のコレシストキニン；及びその他のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドで、ＥＧＦ受容体リガンドとの相乗効果が同じであり、ＥＧＦ受容体リガンドと相乗作用したときに成熟した膵臓の細胞分化を誘発して、インスリン分泌性の島細胞を形成することができるものを含む。
【００２３】
ガストリン１７のような小さい形態のガストリンはペプチド合成により経済的に調製し、合成ペプチドは市販されている。合成ヒトガストリン１７及び１５位置でメチオニンをロイシンで置換したヒトガストリン１７のような誘導体もＢａｃｈｅｍ  ＡＧ（ブーベンドルフ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ）、スイス）及びＲｅｓｅａｒｃｈｐｌｕｓから市販されている。
【００２４】
また、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドは活性類似体、断片及び上記リガンドのその他の修飾体も含む。このようなリガンドは、組織保存の部位由来の内因性ガストリン、コレシストキニンまたは同様の活性のあるペプチドの分泌を増加させる化合物も含まれている。これらの例としては、胃酸分泌を阻害するオメプラゾール、及びＣＣＫ剌激を増加する大豆トリプシン阻害因子がある。
【００２５】
ここで用いられるように、“ＥＧＦ受容体リガンド”の語は同じまたは隣接する組織または同じ個体中のガストリン／ＣＣＫ受容体も剌激したとき、インスリン産生膵臓島細胞の新生を誘発するように、ＥＧＦ受容体を刺激する化合物を包含する。そのようなＥＧＦ受容体リガンドの例はＥＧＦ１−５３である完全長ＥＧＦやさらにＥＧＦ１−４８、ＥＧＦ１−４９、ＥＧＦ１−５２及び断片やそれらの活性類似体などである。ＥＧＦ受容体リガンドのその他の例には、１−４８、１−４７、１−５１及びアンフィレギュリンやポックスウイルス成長因子などのＴＧＦαの形態、及びガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドとの相乗作用が同じであるＥＧＦ受容体リガンドである。これらには、上記物質の活性類自体や断片及び修飾体が含まれる。さらに背景を知るには、ＣａｒｐｅｎｔｅｒとＷａｈｌ共著、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓの第４章（Ｓｐｏｒｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、１９９０）を参照されたい。
【００２６】
ＥＧＦは細胞分裂活性を有する、すなわち、様々な細胞や組織の成長を刺激する（Ｋａｒｎｅｓ  ｓｕｐｒａ；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ、Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８８、２２７−２３７、１９７６；Ｇａｓｓｌａｎｄｅｒ、Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．２９、１４２−１４９、１９９７）。ＥＧＦは細胞保護効果（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ）を持つこともわかっており、ｉｎ  ｖｉｖｏの外傷に向かって、または培地内の細胞の単分子層中における誘発された隙間に向かっての細胞の移動を促し、外傷の回復を促す。これらの生物活性は、ＥＧＦ、ＴＧＦα、アンフィレギュリン及びヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子（Ｋａｒｎｅｓ、ｓｕｐｒａ）など構造上関連のある増殖因子のファミリーに特異的である。この増殖因子のファミリーの各々はアミノ酸配列の１１残基において同一のアミノ酸を有し、そのうち６個はジスルフィド結合を形成するシステイン残基である。
【００２７】
ＥＧＦ受容体リガンドである化合物のグループはさらに通常または野生型ＥＧＦの変異体である“修飾ＥＧＦ”を含む。修飾によりＥＧＦのクリアランス速度のような１つ以上の生物活性への影響が見られる。この語は実質的にヒトＥＧＦと同様のアミノ酸配列を持つペプチドを含み、例えば、様々な残基位置に１〜３程度のアミノ酸置換を有するものである。
【００２８】
組換えＥＧＦ体は構造及び活性において変性を有するように遺伝学的に設計され、例えば、２１位置においてメチオニンをロイシン残基で置換したＥＧＦが記載されている（米国特許第４，７６０，０２３号）。５１残基を有する、すなわちｈＥＧＦの５２及び５３位置の２つのＣ末端残基が欠落しており、５１位置に中性アミノ酸置換を有する組換え体ヒトＥＧＦは、微生物生成工程の間及び被験者に対する投与後、ＥＧＦ活性を保有し、プロテアーゼ分解に対してより耐性を有する。一連の核酸分子がＥＧＦ及びＴＧＦαと大きな類似性を有するタンパク質のファミリーをエンコードすることが記載されている（国際公開ＷＯ００／２９４３８号）。低ｐＨ値で活性持続を形成するような、１６位置に中性または酸性アミノ酸を置換したヒスチジンを有するＥＧＦムテイン（変異ＥＧＦ）が記載されている（国際公開ＷＯ９３／０３７５７号）。化学類似体及びＥＧＦやＴＧＦα断片はＥＧＦ受容体ファミリーの各々に結合する能力を保有する（米国特許第４，６８６，２８３号）。ＥＧＦまたはＴＧＦαの様々な修飾は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ安定性やｉｎ  ｖｉｖｏ活性における１つ以上の組換えタンパク質生成に影響する有利な性質を与える。ここで好ましい組換え体修飾ＥＧＦ受容体リガンドの実施形態は、実質的に完全なＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）活性を保有し、少なくとも通常または野生型ｈＥＧＦとおおそよ同じくらいまたはそれよりも大きいｉｎ  ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性を有する。
【００２９】
本発明の主要な側面は、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドを含む組成物を投与することが必要な個々の糖尿病を治療するための方法であり、各々は十分な量を含み、及びお互いの割合はこれらのリガンドの組合わせが成熟したインスリン分泌細胞へ膵島前駆細胞の分化を達成するような、島新生として知られる工程の割合である。分化する細胞は成熟した動物被験者の膵管中に存在する潜在的な島前駆細胞である。１９９９年３月２３日に発行された米国特許第５，８８５，９５６号を参照されたい。
【００３０】
ここで用いられる“成熟”の語は動物の胎児から成熟動物を区別するために、もっぱら出生後の動物をいう。成熟とは、その哺乳類の種の平均寿命の５％より長い生活年齢の哺乳類をいう。この語は被験者の発達段階または糖尿病の開始時期とは無関係である。１つの実施形態において、ここでの方法及び組成物は１型糖尿病（すなわちインスリンの欠如または不足などのインスリンに依存することが特徴の糖尿病の形態であって、“若年型”糖尿病とも呼ばれる）を有する患者を治療するために有用である。該方法及び組成物は２型インスリン依存型糖尿病または成人発症の糖尿病（例えば、膵臓疲労が原因で血糖値を維持するために不十分な量のインスリンしか生成できない）の患者の治療にも有用である。
【００３１】
本発明の方法の１つの実施形態は、個々に対してガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド（例えばガストリン）及びＥＧＦ受容体リガンド（ＥＧＦまたはＴＧＦα）の分化再生させる量の組成物を投与、好ましくは全身投与することを含む。ガストリンは合成物であって、例えば合成ヒトガストリン、例えばヒトガストリン１７、例えば１５残基にロイシンを持つガストリンである。ＥＧＦ受容体リガンドはｈＥＧＦであり、例えば組換え生成したＥＧＦ、例えば組換え体修飾ＥＧＦ、例えば５２及び５３位置に２つのＣ末端アミノ酸の欠失及び５１個のアミノ酸の長さを有するＥＧＦをエンコードするような修飾を運ぶ合成遺伝子由来の組換え生成されたＥＧＦである。さらにＥＧＦ修飾は、例えば荷電アミノ酸グルタミン酸のｈＥＧＦの５１位置の通常残基というよりも５１位置に中性アミノ酸の置換のような、１つ以上の様々な置換を含むことができる。ここで定義されるように中性アミノ酸は、その位置で通常見られる残基をセリン、アラニン及びグルタミンで置換することなどにより生理的ｐＨでは非荷電で、好ましくは親水性である。
【００３２】
他の実施形態においては、本発明は例えば哺乳類などの被験者の膵島前駆細胞の分化を達成するための方法に関するものであり、特定の服薬スケジュールに従って、例えばガストリン１７のようなガストリン、例えば１５位置にロイシンを運ぶ合成ガストリン１７及びＥＧＦ受容体リガンド、例えばＴＦＧαまたは組換え体修飾ＥＧＦのガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドの組合わせを用いてそのような細胞を刺激することにより行うものである。
【００３３】
ここで用いられるように、服薬スケジュールはＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物を投与するための手順をいい、１日当たりの供給される組成物の量及び該組成物が投与される間の期間または周期を含む。
【００３４】
大部分のインスリン依存型糖尿病患者は少なくとも毎日のようにインスリン注射を必要とする。１日当たり複数回のインスリン投与が特定の病気または食事状況下で糖尿病管理のために必要とされ、該インスリン投与は頻繁に糖を観測する結果により指示され、糖尿病の最適な管理のために、例えば１日に５回ほど他の活動を行うということも糖尿病患者には必要である。
【００３５】
その一方、本発明の組成物及び方法は短い期間の服薬スケジュールに使用し、例えば服薬期間は被験者の種の平均寿命の０．５％または０．２％または０．１％よりも少ない。
【００３６】
ここで該組成物の短期間の服薬スケジュールにわたる投与は効果期間の延長をもたらし、さらに糖尿病の症状の一時的な回復を達成する。ここで用いる寿命データは以下を含む：飼育されている齧歯動物の平均寿命は約２．５年（３０ヶ月）；飼育されているカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のようなサル科マカク属の霊長類の平均寿命は約３０年（３６０ヶ月）；飼育されているチンパンジー（パン・トログロディテス（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ））の霊長類の平均寿命は約４５年（５４０ヶ月）；及び霊長類であるヒトの平均寿命は約７０〜７５年（８４０〜９００ヶ月）である。種の平均寿命は食習慣及び／または遺伝のような文化的条件に伴って変化することが確認された。
【００３７】
ラットのような齧歯動物のための短期間服薬スケジュールはここでは、例えば約２８日以下、約１８日以下または約９日以下で算出された。霊長類のための服薬スケジュールの期間は、例えばカニクイザル、チンパンジーまたはヒトは齧歯動物のための期間よりも長く、例えば治療期間は約１年、約３ヶ月、約２ヶ月、またはさらに１ヶ月よりも少ない。
【００３８】
ヒト患者のための短期間服薬スケジュールはその寿命の非常に少ない割合に相当する。例えば、４週間の治療期間は７０年（３６４０週）の寿命の０．１１％であり、２週間の治療は寿命の０．０５％である。治療の効果は２６週間（０．７％）または５２週間（１．４％）または１０４週間（２．８６％）の期間まで延長される。
【００３９】
このような短期間の服薬スケジュールに従ってここで提供されるＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物を投与した結果、島新生の工程が開始する。被験者中の前駆細胞は分化するように誘発され、分化細胞はその後血糖値の変動に応じてインスリン分泌が可能な島細胞に成熟する。すなわち、糖尿病を持つ被験者は血糖惹起に対する通常の反応により特徴付けられる一時的な回復期間に入る。この投与の結果、糖尿病の一時的な回復が開始し、従って、例えば治療の間またはその後の患者の自己管理による観測により得られる血糖値により測定されるように、治療前の糖尿病患者に与えられる標準のインスリン投与量が減少する。島新生治療の成功による糖尿病からの一時的な回復は、空腹時血糖値の減少及び食事の糖消費に応じて惹起される血糖が上昇するレベル及び時間の減少により示される。島新生がうまく達成されると、インスリン投与は、血糖値観測から得たデータが示すように例えば１日当たり５回から２回の注射に；１日当たり２回から１回の注射に；及び１回からゼロ回に減少する。薬理学の当業者は、糖尿病患者を治療するとき、空腹後の、またはその他の生理的条件下での血糖値に対してインスリン投与を調節することは知っている。
【００４０】
被験者に投与されるＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物の投与量は吸収、分布、循環中の半減期速度、代謝、排出及び本発明の実施形態の受容体リガンドの毒性の、例えば各霊長類及び齧歯動物の種に関する基準を包含する標準データ内で種から種への公知の変動に関連して調節する。一般に、投与量は霊長類種に対する場合よりも齧歯動物種に対する場合のほうが約１００倍多くなるように調節する。例えば、ラットに対するＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物の投与量は、体重１ｋｇ当たりを基準として約３，０００μｇ／日のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及び約１００μｇのＥＧＦ受容体リガンドを例えば１日当たり３回（１日当たりの総量は、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドが約９，０００μｇ、ＥＧＦ受容体リガンドが約３００μｇ）注射投与するのが典型的な例である。カニクイザル、チンパンジーまたはヒトのような霊長類では、これに見合う投与量は、例えば体重１ｋｇ当たり約１〜約３μｇのＥＧＦ受容体リガンドまたは約３〜約１０μｇのＥＧＦ受容体リガンド、及び体重１ｋｇ当たり約３０〜約９０μｇまたは約９０μｇ〜約３００μｇのガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドであり、このような１日の投与量は１日当たり１回与えられる合計のボーラスとして、または１日当たり２回または複数の投与で少ない投与量に分割したものとして投与される。
【００４１】
受容体リガンドの投与の種類は限定されないが、皮下、経皮、筋内、腹腔内、静脈内、経鼻及び経口手段が挙げられる。該組成物はいかなる都合のよい手段により投与されてもよく、例えば輸液または静脈内ボーラス、ポンプ、上皮または粘膜皮膚の内面を通した吸収（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）により投与される。受容体リガンドはここでは１または複数の他の生物学的に活性な物質との組合わせで投与してもよい。投与は好ましくは全身性である。
【００４２】
また、本発明は医薬組成物も提供する。このような組成物は治療に効果的な量の治療剤及び薬学的に許容し得る無菌キャリアまたは賦形剤を含む。このようなキャリアは限定されないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、Ｄ−グルコース、水、グリセロール、エタノール及びそれらの組合わせが挙げられる。剤形は投与の種類に適応させる。
【００４３】
組成物には所望により、ＴｗｅｅｎまたはｐＨ緩衝剤のような湿潤剤または乳化剤を少量含めることもできる。該組成物は溶液、懸濁液、乳液、タブレット、錠剤、カプセル、徐放性製剤または粉末であってもよい。該組成物は従来の結合剤及びトリグリセリドのようなキャリアーを用いて座剤として処方できる。経口製剤はマンニトール、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの医薬品グレードのような標準キャリアーを含むことができる。
【００４４】
様々なデリバリーシステムは公知であり、本発明の治療剤を投与するために使用できる。例えば、リボソーム内のカプセル充填、微粒子、マイクロカプセル及びその類似物である。
【００４５】
好ましい実施形態において、該組成物はヒトへの静脈内投与のために医薬組成物が適合するように規定の手順に従って処方される。静脈内投与のための組成物は一般的には殺菌した生理緩衝溶液である。必要であれば、組成物には例えば可溶化剤のような添加化合物を含めてもよい。一般的に、材料は別々にまたは単一投与形状で前もって混合されて提供される。溶液の形態に加えて組成物は例えば、アンプルのような密封容器中、または活性剤の量を示すサケット（ｓａｃｈｅｔｔｅ）中の凍結乾燥粉末または非水性凝縮体として提供できる。注入により組成物を投与する場合、無菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含んだ注入ボトルを用いて投薬できる。注射により組成物を投与する場合、成分を投与前に混合できるように注射のための無菌水または生理食塩水のアンプルを提供できる。
【００４６】
本発明の組成物の治療剤の実施形態としては、中性または塩の形態として処方できる。薬学的に許容できる塩は塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等から得られるフリーアミノ基を有する形態、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から得られるフリーカルボキシル基を有する形態を含む。
【００４７】
本発明の組成物の各治療剤の量及び特定の病気及び状態の治療に効果的なお互いの相対量は病気または状態の性質に左右され、標準的な臨床検査技術によって決定できる。製剤に用いられる正確な投与量は投与手段及び所定の患者の病気または不調の範囲によっても左右され、熟練者の判断及び各患者の環境に従って決定するべきである。しかしながら、静脈内及び皮下投与の適切な投与量範囲は一般に体重１ｋｇ当たり約０．１μｇまたは１μｇ〜約１ｍｇまたは３ｍｇであり、例えば体重１ｋｇ当たり各活性化合物約２０〜約５００μｇである。経鼻投与の適切な投与量の範囲は一般に体重１ｋｇ当たり約０．０１ｐｇ〜約１ｍｇである。効果的な投与量はｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験システムから得られる用量反応曲線から推定できる。１日量は１回の服薬または１日の間に数回服薬する複数回の小さい分別投与量に分割したものとして投与する。
【００４８】
座剤は一般に約０．５質量％〜約１０質量％の範囲で活性成分を含む；経口製剤は好ましくは約１０質量％〜約９５質量％の活性成分を含む。
【００４９】
本発明の実施形態は、本発明の医薬組成物成分を１つ以上詰めた１つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットも提供する。例えば、ガストリン／ＣＣＫ受容体リガンド及びＥＧＦ受容体リガンドのいずれかまたは両方を投与量単位で含んだ容器である。このような容器に付随するものとしては、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関による所定の書類に告示されているものであって、その告示がヒト投与のための製造、使用または販売をしている製造機関による承認が示されているものであってよい。ある実施形態におけるパックまたはキットは、島新生の誘発及び糖尿病からの一時的な回復前の服薬スケジュールの期間に投与するためのインスリンを含む１つ以上の容器を含む。
【００５０】
実施例
実施例１：  糖尿病ラットにおけるＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物及び方法の効果の延長
５０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を静脈注射することにより糖尿病を誘発し、膵臓のインスリン含量を９５％に減少させた。１週間後、ＳＴＺ糖尿病ラット（体重２００〜２５０ｇ）に比較対照のため賦形剤のみ（図１でＣＯＮと表示）またはヒトガストリン１７（４μｇ／ｋｇ）とヒトＴＧＦα（４μｇ／ｋｇ）ペプチド（ＧＡＳ／ＴＧＦと表示）を組合わせたものを１日１回、腹腔注射で１２日間投与した。治療後１、２、４及び８週間目に腹腔グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）を行い、グルコースの試験量毎に両方の血糖値及び血漿インスリン値を測定した。
【００５１】
データは、膵管に隣接したインスリン染色細胞の小集団の数の著しい増加により形態学的に示されるように、ＧＡＳ／ＴＧＦ治療がβ島細胞新生を刺激したことを示す。さらに、ＧＡＳ／ＴＧＦ治療ラットはＣＯＮラットと比較すると著しく膵臓インスリン濃度が増加した。研究の間常にＩＰＧＴＴはＧＡＳ／ＴＧＦ治療ラットがＣＯＮラットよりも血糖値が著しく低いということを示した（図１参照）。さらに、血漿インスリン値のグルコース刺激による増加はＣＯＮラットと比べるとＧＡＳ／ＴＧＦ治療ラットが２〜３倍大きかった。
【００５２】
驚くべきことに、少なくとも治療停止後８週間持続するＧＡＳ／ＴＧＦラットのグルコース試験に応じた改善されたグルコース耐性を示す治療効果の延長が観測された（図３）。さらに治療停止８週間後、ＧＡＳ／ＴＧＦ治療ラットは、ＣＯＮラットに観測された糖尿病値（１２．０±２．２ｍＭ）と比較して正常な空腹時血糖値も示した（６．４±１．２ｍＭ）（図４参照）。Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）治療グループのラットの成長は正常であった（図５）。グルコース耐性の改善は治療期間後８週間の間のＧＡＳ／ＴＧＦグループの体重増加の改善に相関した。
【００５３】
さらに、追加データはＩ．Ｎ．Ｔ．治療の効果は少なくとも治療停止後１６週間続くことを示す（図６）。
【００５４】
実施例２：  結果として糖尿病ラットに膵臓β細胞質量、インスリン含量やインスリン分泌の増加及び血糖の低下をもたらす、２週間における糖尿病ラットのＥＧＦ及びガストリンの皮下投与による治療
糖尿病ＳＴＺラットは体重３００ｇ以上のラットを用いて上記の方法で用意した。これらを以下の通り、ＥＧＦ及びガストリンの皮下投与（皮下持続性注入）によって治療した。ラットは１日当たり２７０μｇ／ｋｇの合成ヒトガストリン１７（ｌｅｕ１５）と１日当たり２２７μｇ／ｋｇの組換えヒトＥＧＦ１−５１（ｇｌｎ５１）を用いて、または対照として賦形剤を用いて２週間治療した。各棒グラフは６個体に関して平均＋／−標準誤差を示し、＊印はｐ＜０．０５を意味する（ペアを組んでない研究者の試験）。膵臓インスリンは免疫学的検定によって決定し、β細胞質量は染色β細胞に対するインスリン抗体を用いた免疫組織化学染色後の膵臓組織学区分（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ）の形態計測分析の得点計算により決定した。抗体はインスリンＣペプチドに特異的である。
【００５５】
賦形剤しか与えていない対照ラットと比較したＥＧＦ／ガストリン治療ラットの血漿インスリンＣペプチド値の増加（図７Ａ、左パネル）及び空腹時血糖値の減少（図７Ａ、右パネル）が観測された。
【００５６】
さらに、ラットの膵臓インスリン含量及びインスリン分泌膵臓β細胞の数を検査した（図７、パネルＢ参照）。図７Ｂは、治療したインスリン依存型ＳＴＺ糖尿病ラット（ＩＮＴと表示）及び賦形剤対照（賦形剤と表示）から得た形態計測学的に測定した膵臓インスリン含量及びβ細胞質量を示す。治療ラットは対照ラットよりも約３倍多いインスリン含量、約２倍多いβ細胞質量を示した。
【００５７】
実施例３：  ＥＧＦ／ガストリンの組合わせにおいてガストリンの割合を増加させることにより改善された糖尿病の一時的な回復
Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）組成物及び治療方法を２８日間の服薬スケジュールを用い、ＳＴＺラットのグループを用いて実施し、組成物はＥＧＦより質量が３０倍大きいガストリンを含む。ラットに体重１ｋｇ当たり１００μｇ／注射のＥＧＦ受容体リガンド及び３ｍｇ／注射のガストリン／ＣＣＫ受容体リガンドを投与した。このような注射を１日当たり３回投与した。
【００５８】
図８は、組換え体修飾ＥＧＦ５１  Ｇｌｎ５１（１００μｇ／ｋｇ）と一緒に投与した３，０００μｇ／ｋｇ合成ガストリン１７  Ｌｅｕ１５を用いた糖尿病ラットの治療２８日後の空腹時血糖値を示す。該データはこの治療が、治療してない対照グループ（グループＶ）と比較して著しい数のラットに糖尿病の一時的な回復を与えたことを示す（空腹時血糖が１０ｍＭ以下に示されている）（グループＣ）。それに対して、同じ量のＥＧＦ（１００μｇ／ｋｇ）と３００μｇ／ｋｇのガストリンを用いた治療では著しい数の個体の一時的な回復を生じなかった（グループＡ）。
【００５９】
驚くべきことに、ガストリン／ＥＧＦの質量比が３０：１のＩ．Ｎ．Ｔ．組成物を用いた治療を停止して１４日以内の間、治療を受けた顕著な個体数における血糖値が非糖尿病値内まで落ちたことが観察された。１０倍低いガストリン投与量である３：１の比で治療した糖尿病ラットの対照グループは治療後１４日目には顕著な非糖尿病個体数を生じなかったので、３０：１のガストリン値は反応に重要であった。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１はガストリン及びＴＧＦαを用いた島新生療法（Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標））による治療後の改善されたＳＴＺ糖尿病ラットのグルコース耐性を時間毎に示すグラフである。ラットの分類は、非糖尿病対照（図中、非ＳＴＺ対照ｎ＝４と表示）；賦形剤のみを用いて治療した糖尿病ＳＴＺマウス（ＳＴＺ賦形剤ｎ＝１２と表示）；体重１ｋｇ当たりのガストリン及びＴＧＦαの投与量各４μｇの低Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）を用いて治療したラット（ＳＴＺ４ＴＧＦ／ガストリンｎ＝６と表示）；及び体重１ｋｇ当たりガストリン及びＴＧＦαの投与量各４０μｇの、ガストリン及びＴＧＦαの各投与量が１０倍高いＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）を用いて治療したラット（ＳＴＺ４０ＴＧＦ／ガストリンｎ＝８と表示）である。データは、Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）で治療したＳＴＺラットの両グループが治療されなかった対照グループ中の糖尿病ラットよりも試験後に低血糖値を達成したことを示している。
【図２】図２はグルコース試験から１５分後または３０分後のＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）治療されたラット中のインスリン放出の増加を示す棒グラフである。左側の３つの棒、それぞれ白、点描及び黒で塗りつぶされた棒は図１で示される３匹のＳＴＺ糖尿病ラットの各血漿インスリン値（ｎｇ／ｍｌ）を示す。非糖尿病ラットグループの試験１５分及び３０分後のインスリン値は右側の棒中に異なる尺度で示す。該データは図１の高い投与量のＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）でＩ．Ｎ．Ｔ．治療を施した糖尿病ラットは非治療ラットよりも試験１５分及び３０分後において３倍以上のインスリンを生成し、図１の低Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）投与量を受けたラットは治療されていない糖尿病ラットよりも３０分で４倍以上のインスリンを作ることを示す。
【図３】図３は、時間毎に分析した、治療２週間後（左パネル）及び治療８週間後（右パネル）に採取した血液試料中の、図１のラットグループの血糖値を示すグラフである。該データは、少なくとも治療後８週間におけるグルコース試験後の低Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）投与量で治療したラットの血糖が治療されていない対照よりも低く維持されていることを示している。
【図４】図４は、非糖尿病ラット（対照と表示）、糖尿病非治療ラット（賦形剤と表示）及び低Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）投与量で治療したラット（ＴＧＦ／ＧＡＳ４と表示）の治療後２、４及び８週間の時点における空腹時血糖濃度（ｍＭ）を示す棒グラフである。データはＩ．Ｎ．Ｔ．で治療したラットは治療後少なくとも８週間の間正常な空腹時血糖値を維持することができることを示す。
【図５】図５は非治療の対照糖尿病ラットと比較した、治療後少なくとも８週間の間のＩ．Ｎ．Ｔ．（商標）で治療した糖尿病ラットの成長の改善の持続を示すグラフである。
【図６】図６は糖尿病ラット（糖尿病対照と表示）、非糖尿病の治療されてないラット（非糖尿病対照と表示）及び低Ｉ．Ｎ．Ｔ．（商標）投与量で治療したラット（ＴＧＦ／ＧＡＳ４と表示）の空腹時血糖値を治療後の時間毎に示すグラフである（２、４、８及び１６週）。データはＩ．Ｎ．Ｔ．で治療したラットは治療しない糖尿病対照ラットと比べて少なくとも治療後１６週間の間、低い空腹時血糖値を維持することを示している。
【図７Ａ】図７Ａは空腹時血漿インスリンＣ−ペプチド濃度及び空腹時血糖濃度を示す棒グラフである。インスリン依存型ＳＴＺ糖尿病ラット（ＢＷ＞３００ｇ）を合成ヒトガストリン誘導体、ガストリン１７（Ｌｅｕ１５）、１日当たり２７０μ／ｋｇ及び組換え体ヒトＥＧＦ１−１５ｇｌｎ５１、１日当たり２２７μｇ／ｋｇまたは賦形剤の対照を用いて２週間の間、連続的に皮下注入することにより治療した。各棒グラフは６匹の各グループの平均値プラス標準誤差（ｍｅａｎ＋／−ＳＥ）を示す。＊印はｐ＜０．０５を意味する（ペアでない研究者による試験）。
【図７Ｂ】図７Ｂは膵臓インスリン含量及び形態計測学的に決定したβ細胞質量を示す棒グラフである。インスリン依存型ＳＴＺ糖尿病ラット（ＢＷ＞３００ｇ）を合成ヒトガストリン誘導体、ガストリン１７（Ｌｅｕ１５）、１日当たり２７０μ／ｋｇ及び組換え体ヒトＥＧＦ１−１５ｇｌｎ５１、１日当たり２２７μｇ／ｋｇまたは賦形剤の対照を用いて２週間の間、連続的に皮下注入することにより治療した。各棒グラフは６匹の各グループの平均値プラス標準誤差（ｍｅａｎ＋／−ＳＥ）を示す。＊印はｐ＜０．０５を意味する（ペアでない研究者による試験）。
【図８】図８は、ガストリン、３００μｇ／ｋｇ及びＥＧＦ、１００μｇ／ｋｇ（グループＡ）；３，０００μｇ／ｋｇガストリン及び１００μｇ／ｋｇＥＧＦ（グループＣ）；または対照賦形剤（グループＶ）を用いて２８日間１日３回皮下注入する治療完了後４、１１及び１４日目の各ＳＴＺインスリン依存型糖尿病ラットの空腹時血糖濃度のレベルを示す散布図である。ｐ＜０．０５の重要度（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）でカイ２乗検定により糖尿病の一時的な回復、治療後１４日目に１０ｍＭより低い血糖値を示すことで一時的な回復を示す個体の数をグループ間で比較した。該グラフは（ガストリン）３０００μｇ／ｋｇ及びＥＧＦ１００μｇ／ｋｇ（グループＣ）を用いて２８日間治療した後１４日目において、著しい数の個体（１０のうち４）が賦形剤グループ（９個体のいずれも一時的な回復を見せなかった）及び３００μｇ／ｋｇ及びＥＧＦ１００μｇ／ｋｇの異なる比を持つ実験グループ（１個体のみ完全な一時的な回復を示したグループＡ）の両方と比較して完全な糖尿病の一時的な回復を示したということを示す。この反応の特徴は治療完了後一時的な回復は１１〜１４日遅れたということである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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