(57)【要約】本発明は、エポチロン、デオキシエポチロン、およびその類似体を調製するための集中的な方法を提供する。さらに本発明は、ガンを治療するための新規な組成物および方法を提供し、多剤の表現型を進展させたガンを治療するための方法をさらに提供する。
2004500388.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
2004500388.tif 000249
［式中、ＭはＮＨまたはＯであり；
ＣＹはアリールまたはヘテロアリール部分であり；
ｑは１〜５であり；
Ｗは出現するごとに独立に、不在であるか；−ＮＨ−；Ｃ＝Ｏ；Ｃ＝Ｓ；−Ｏ−；−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２であり；
Ｖは出現するごとに独立に、水素；ハロゲン；−ＯＨ；−ＳＨ；アミノ；または置換または無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ｍは出現するごとに独立に、１〜５であり；
結合Ｗ−−−Ｒ１は単結合または二重結合を表し；
Ｒ１は出現するごとに独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識であり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；窒素保護基；炭素保護基；酸素保護基；イオウ保護基；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識であり；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、水素；置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；アシル；アロイル；ベンゾイル；またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素；置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、１つまたは複数のヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノによって任意に置換されており、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；
Ｒ６は独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ２；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；窒素保護基；炭素保護基；酸素保護基；イオウ保護基；直鎖状または分枝鎖状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識であり；
ＺはＯ、Ｎ（ＯＲＥ）またはＮ−ＮＲＦＲＧであり；ＲＥ、ＲＦ、およびＲＧはそれぞれ独立に置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式脂肪族部分であり；  ｎは０、１、２または３である］
を有する化合物。
【請求項２】
ＭがＯである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ６がＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化２】
2004500388.tif 000250
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝状または非分枝状の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ６がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化３】
2004500388.tif 000251
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
ＣＹが４−チアゾリルまたは４−オキサゾリルであり、Ｒ１がＯＲＡであり、ＲＡが水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式の脂肪族またはヘテロ脂肪族、または置換または無置換のアリールまたはヘテロアリールであり；Ｗが−ＣＨ２−であり、ｍが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ＣＹが４−チアゾリルまたは４−オキサゾリルであり、Ｗが（Ｃ＝Ｏ）であり、ｍが１であり、Ｒ１が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれ水素であり、Ｒ４がメチルであり、Ｒ５が水素であり、ＺがＯである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
以下の構造：
【化４】
2004500388.tif 000252
［式中、ＸがＯまたはＳであり、ＹがＮである］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
以下の構造：
【化５】
2004500388.tif 000253
［式中、ＸがＯまたはＳであり、ＹがＮである］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
以下の構造：
【化６】
2004500388.tif 000254
［式中、ＸがＯまたはＳであり、ＹがＮである］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
以下の構造：
【化７】
2004500388.tif 000255
［式中、ＸがＯまたはＳであり、ＹがＮである］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
以下の構造：
【化８】
2004500388.tif 000256
［式中、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識である］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ６がメチルであり、以下の構造：
【化９】
2004500388.tif 000257
を有する化合物である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
以下の構造：
【化１０】
2004500388.tif 000258
［式中、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識である］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
以下の構造：
【化１１】
2004500388.tif 000259
［式中、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；窒素保護基；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識である］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
以下の構造：
【化１２】
2004500388.tif 000260
［式中、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識であり；ＷおよびＵは、出現するごとに独立に不在であるか；−ＮＨ−；Ｃ＝Ｏ；Ｃ＝Ｓ；−Ｏ−；−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２がなく；Ｖが出現するごとに独立に、水素；ハロゲン；−ＯＨ；−ＳＨ；アミノ；または置換または無置換アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｂがポリマー、炭水化物、親和性標識、または放射性標識である］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
ポリマー主鎖、および
２つ以上の請求項１に記載の化合物を含む構成物であって、２つ以上の請求項１に記載の化合物が同じであるかあるいは異なっており、前記２つ以上の化合物がポリマー主鎖に直接的に、あるいはリンカーを介して結合しており、２つ以上の化合物が該化合物の１２−位、２０−位または２１−位で結合している構成物。
【請求項２１】
ポリマー主鎖がデンドリマー、ペプチド、または生分解性ポリマーである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
以下の構造：
【化１３】
2004500388.tif 000261
［式中、ＥＰＯが、１２−、２０−または２１−位に存在する官能基を介して結合している、請求項１に記載の化合物を含み；Ｘがメチレン、（Ｃ＝Ｏ）であるか、あるいは存在せず；Ｙが（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、ＮＨであるか、あるいは存在せず；Ｚが（Ｃ＝Ｏ）、ＮＨ、Ｏであるか、あるいは存在せず；ｎが０〜１０である］
を有する、二量体デオキシエポチロン。
【請求項２３】
ＥＰＯが以下の構造：
【化１４】
2004500388.tif 000262
［式中、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識である］
を有する、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ６が、２つ以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝状または非分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族部分である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｘがメチレンであり、ＹがＯであり、Ｚが（Ｃ＝Ｏ）である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｘがメチレンであり、ＹがＮＨであり、Ｚが不在である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｘが（Ｃ＝Ｏ）であり、ＹがＯまたはＮＨであり、Ｚが不在である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項１に記載の化合物、および
製薬品として適切な担体または希釈剤を含む、ガンを治療するための製薬組成物。
【請求項２９】
ガンに罹患した患者においてガンを治療する方法であって、治療的に有効量の請求項１に記載の化合物を患者に投与する工程を含む方法。
【請求項３０】
前記ガンが固形腫瘍である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ガンが乳ガンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
所定量の細胞毒性剤をさらに含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３３】
前記細胞毒性剤が抗ガン剤である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３４】
前記抗ガン剤がアドリアマイシン、ビンブラスチンまたはパクリタクセルである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記化合物の有効量が、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３６】
以下の構造：
【化１５】
2004500388.tif 000263
［式中、Ｐが酸素保護基であり；Ｈａｌがハロゲンであり；Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；窒素保護基；酸素保護基；イオウ保護基；または炭素保護基；ポリマー；炭水化物；光アフィニティー標識；または放射性標識である］
を有する化合物を調製する方法であって、
ａ）以下の構造：
【化１６】
2004500388.tif 000264
を有するハロケトンを提供する工程、
ｂ）前記ハロケトンにエノールエーテルを生成させるための条件を施し、その後以下の構造：
【化１７】
2004500388.tif 000265
を有するヒドロキシケトンを調製するのに適した条件下でヒドロキシル化する工程、および、
ｃ）以下の化合物：
【化１８】
2004500388.tif 000266
を形成するのに適した条件下でヒドロキシケトンを保護する工程を含む方法。
【請求項３７】
ヒドロキシル化の工程が、非対称触媒を使用してＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−αの存在下でハロケトンを反応させて、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造：
【化１９】
2004500388.tif 000267
を有する化合物を生成させることを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ヒドロキシル化の工程が、ＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−βの存在下でハロケトンを反応させて、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造：
【化２０】
2004500388.tif 000268
を有する化合物を生成させることを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
以下の構造：
【化２１】
2004500388.tif 000269
［式中、Ｐが酸素保護基であり；Ｈａｌがハロゲンであり；Ｒ６が、水素、ヒドロキシ、チオ、アミノまたはハロゲンであるか、あるいは置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、チオアルキル、アリールチオ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、環式アセタール、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドロキシイミノ、またはアルコキシアミノである］
を有する化合物を調製する方法であって、
ａ）以下の構造：
【化２２】
2004500388.tif 000270
を有するグリコールイミドを調製する工程、
ｂ）前記グリコールイミドを、Ｎ，Ｏ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキル、アリール）ヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｏ−ジ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８）アルキルヒドロキシルアミンおよびＮ，Ｏ−アリール，アリールヒドロキシルアミンからなる群から選択される置換ヒドロキシルアミンを用い、以下の構造：
【化２３】
2004500388.tif 000271
［式中、Ｒ’およびＲ”がそれぞれ独立に直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキルまたはアリールである］
を有するアミドを形成するのに適切な条件下で処理する工程、
ｃ）前記アミドを、当該化合物を形成するのに適切な条件下で、置換有機金属試薬と反応させる工程を含む方法。
【請求項４０】
置換有機金属試薬がグリニャール試薬である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
以下の構造：
【化２４】
2004500388.tif 000272
［式中、Ｒ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり；ＺＡがＯＰ、ＳＰ、またはＮＨＰであり；Ｐが酸素、窒素またはイオウ保護基であり；Ｈａｌがハロゲンであり；Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ２；ＮＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；窒素保護基；イオウ保護基；酸素保護基；炭素保護基；またはポリマーである］
を有する化合物を調製する方法であって、
ａ）以下の構造：
【化２５】
2004500388.tif 000273
［式中、Ｒ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシである］
を有するホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）前記ホスフィンオキシドを、以下の構造：
【化２６】
2004500388.tif 000274
を有するケトンと縮合させる工程、および
ｃ）前記化合物を任意に転化させるか、あるいは、生成したエステルを任意に当該化合物を形成するのに適切な条件下で還元する工程を含む方法。
【請求項４２】
Ｒ１が水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ１が置換または無置換４−チアゾリルである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
以下の構造：
【化２７】
2004500388.tif 000275
［式中、Ｒ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり；ＺＡがＮ３またはＮＨＰであり；Ｐが窒素保護基であり；Ｈａｌがハロゲンであり；Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ２；ＮＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである］
を有する化合物を調製する方法であって、
ａ）以下の構造：
【化２８】
2004500388.tif 000276
［式中、Ｒ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシである］
を有するホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）前記ホスフィンオキシドを、以下の構造：
【化２９】
2004500388.tif 000277
を有するケトンと縮合させる工程、
ｃ）工程ｂ）で形成された化合物を適切な条件下で転化させてアジドを生成させるか、あるいは任意に、さらにアジドを処理して保護型アミンを生成させる工程を含む方法。
【請求項４５】
Ｒ１が水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
Ｒ１が置換または無置換４−チアゾリルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
以下の構造：
【化３０】
2004500388.tif 000278
［式中、Ｐが窒素保護基であり；Ｈａｌがハロゲンであり；Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり；ＲＡは出現するごとに独立に、水素；直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである］
を有する化合物を調製する方法であって、
ａ）以下の構造：
【化３１】
2004500388.tif 000279
［式中、Ｒ０，Ｒ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシである］
を有するホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）前記ホスフィンオキシドを、以下の構造：
【化３２】
2004500388.tif 000280
を有するケトンと縮合させる工程、および
ｃ）工程ｂ）で形成されたエステルを、当該化合物を形成するのに適切な条件下で還元する工程を含む方法。
【請求項４８】
以下の構造：
【化３３】
2004500388.tif 000281
［式中、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ９が水素または酸素またはイオウ保護基であり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、またはベンゾイルであるか；またはＳｉ（ＲＢ）３（ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素、直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタールによって任意に置換されているもの、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルである］
を有する化合物を調製する方法であって、
以下の構造：
【化３４】
2004500388.tif 000282
を有するケトアルデヒドを保護して保護型アルデヒドを生成させ、その後前記保護型アルデヒドを、以下の構造：
【化３５】
2004500388.tif 000283
を有する化合物との縮合を行うために適切な条件下で反応させて、以下の構造：
【化３６】
2004500388.tif 000284
を有するアルドールを生成させ、前記の保護されたアセタール基を加水分解して、以下の構造：
【化３７】
2004500388.tif 000285
を有するケトアルデヒドを生成させ、前記ケトアルデヒドを第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で反応させ、任意にＣ３アルコールを保護して、以下の構造：
【化３８】
2004500388.tif 000286
［式中、ＺＢおよびＲ２〜Ｒ５は上述の定義を有する］
を有する化合物を生成させることを含む方法。
【請求項４９】
第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、前記ケトアルデヒドを化学量論的条件下でキラルエノラートチタンと反応させることを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、前記ケトアルデヒドを触媒試薬と反応させることを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
使用する触媒試薬がＣａｒｒｅｉｒａ触媒である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
使用する触媒試薬がＭｉｋａｍｉのキラル・アルドール触媒である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
以下の構造：
【化３９】
2004500388.tif 000287
［式中、Ｒ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であるか、あるいは−ＣＹ＝ＣＨＸ（式中、Ｘは水素である）であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、Ｙが水素、または直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル；またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立に、水素、直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタールによって任意に置換されているもの、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ６が独立に、水素；ＯＲＡ；ＳＲＡ；ＮＲＡＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ；Ｃ（Ｏ）ＲＡ；ＣＯＮＨＲＡ；Ｎ３；Ｎ２ＲＡ；ハロゲン；環式アセタール；置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり；ＲＡが出現するごとに独立に水素；または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族；アリールまたはヘテロアリール；窒素保護基；酸素保護基；イオウ保護基；炭素保護基；またはポリマーであり；ＭがＮＨまたはＯであり；ｎが０、１、２または３である］
を有する化合物を調製するための方法であって、
以下の構造：
【化４０】
2004500388.tif 000288
［式中、Ｒ１〜Ｒ６が上述の定義を有し；ＺＡがＯＲ７、ＮＨＲ８またはＮ３であり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、またはＲ１１が出現するごとに独立に水素、酸素保護基または窒素保護基である］
を有する前駆体を提供する工程を含み、前記前駆体を提供する工程が、
以下の構造：
【化４１】
2004500388.tif 000289
を有する第１の化合物を、適切な条件下で以下の構造：
【化４２】
2004500388.tif 000290
を有する第２の化合物と反応させてカップリングを起こさせ、前駆体を生成させること、及び、
前記前駆体に適切な条件を施して大環化を行い、任意に脱保護して所望の化合物を生成させることをさらに含む方法。
【請求項５４】
脱保護してＲ２およびＲ３が水素である化合物を生成させる工程を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
Ｒ１が−ＣＹ＝ＣＨＸまたは水素、置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルであり、Ｘが水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール基が、光活性化可能基で、または１つまたは複数のヒドロキシ、チオ、アミノ、置換アミノ、アルデヒド、カルボン酸、アルケニル、イミノ、またはジアゾでさらに置換されている、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
ＭがＯであり、Ｒ１が−ＣＹ＝ＣＨＸであり、Ｙがメチルであり、Ｘが−（Ｃ＝Ｏ）Ｈ、−（ＣＨ２）ｎＯＨ、または−（ＣＨ２）ＮＲＡＲＡによって２−位において置換されている４−チアゾリルであり、ｎが０〜５である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
Ｒ７〜Ｒ１１がそれぞれ独立に水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル、またはＳｉ（ＲＢ）３からなる群から選択され、ＲＢは出現するごとに独立に、分枝または非分枝、置換または無置換、脂肪族またはヘテロ脂肪族、または置換または無置換アリールまたはヘテロアリールである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
前記第１および第２のセクターに適切な条件を施す工程が、前記セクターにスズキカップリングを行うための条件を施すことを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
前駆体を提供する前記工程が、以下の構造：
【化４３】
2004500388.tif 000291
［Ｒ１、Ｒ６およびＺＡは上述の定義を有する］
を有する第１のセクターを提供すること、以下の構造：
【化４４】
2004500388.tif 000292
［Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は上述の定義を有し、ＺＢはＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９である］
を有する第２のセクターを提供することを含み、
第２のセクターを提供する工程が、以下の構造：
【化４５】
2004500388.tif 000293
を有するケトアルデヒドを保護して保護型アルデヒドを生成させ、その後前記保護型アルデヒドを以下の構造：
【化４６】
2004500388.tif 000294
を有する化合物と縮合を行うために適切な条件下で反応させて、以下の構造：
【化４７】
2004500388.tif 000295
を有するアルドールを生成させ、保護されたアセタール基を加水分解して、以下の構造：
【化４８】
2004500388.tif 000296
を有するケトアルデヒドを生成させ、前記ケトアルデヒドを第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で反応させ、任意にＣ３アルコールを保護して、以下の構造：
【化４９】
2004500388.tif 000297
［ＺＢおよびＲ２〜Ｒ５は上述の定義を有する］
を有する第２のセクターを生成させ、
前記第１および第２のセクターをカップリングを行うために適切な条件下で反応させて、当該前駆体を生成させることをさらに含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
Ｒ１がＣＹ＝ＣＨＸであり、Ｙが水素またはアルキルであり、Ｘが直鎖状または分枝状アルキルによって２位において置換されているか、あるいは−（ＣＨ２）ｎＯＨによって置換されている４−チアゾリルであり、ｎが０〜５であり、
Ｒ６が水素、ヒドロキシ、チオ、アミノまたはハロゲンであるか、あるいは置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、チオアルキル、アリールチオ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、環式アセタール、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドロキシイミノ、またはアルコキシアミノである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ＺＡがＮ３であり、適切な条件下でアジドを反応させて保護型アミンを生成させる工程を任意にさらに含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前駆体化合物を脱保護して、遊離ヒドロキシ酸前駆体、またはアミノ酸前駆体を生成させる工程を任意にさらに含む、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（優先権の情報）
【発明の属する技術分野】
本発明は、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で、参照によってその全容がここに組み込まれている「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ，Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ Ｔｈｅｒｅｔｏ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という表題で２０００年３月１日に出願された同時係属仮出願６０／１８５，９６８号、および「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ，Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ Ｔｈｅｒｅｔｏ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という表題で２０００年１１月３０日に出願された６０／２５０，４４７号に対する優先権を主張するものであり、参照によってその全容がここに組み込まれている、それぞれ１９９８年２月２５日、１９９８年７月９日、および１９９８年８月２４日に出願された米国仮特許出願第６０／０７５，９４７号、６０／０９２，３１９号、および６０／０９７，７３３号に基づき、１９９９年２月２４日に出願された米国特許第０９／２５７，０７２号の一部継続出願であり、参照によってその全容がここに組み込まれている、それぞれ１９９６年１２月３日、１９９７年１月１４日、１９９７年５月２２日、１９９７年５月２９日および１９９７年８月１３日に出願された米国仮特許出願第６０／０３２，２８２号、６０／０３３，７６７号、６０／０４７，５６６号、６０／０４７，９４１号および６０／０，５５，５３３号に基づき、１９９７年１２月３日に出願された米国特許第０８／９８６，０２５号の一部継続出願である。さらに本出願は、参照によってその全容がここに組み込まれている「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ，Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ Ｔｈｅｒｅｔｏ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という表題で２０００年３月１日に共に出願された米国特許出願に対する優先権を主張するものである。
【０００２】
（政府の支援）
本研究は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈからの補助金ＣＡ−２８８２４，２５８４８，ＣＡ−０８７４８，ＣＡ−３９８２１，ＣＡ−ＧＭ−７２２３１，ＧＭ−１８２４８，ＣＡ−６２９４８，Ｆ３２ＣＡ８１７０４、及びＡＩＯ−９３５５、並びにＮａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎからの補助金ＣＨＥ−９５０４８０５によって支援された。さらに本研究は、Ｃｈｕｌ Ｂｏｍ Ｌｅｅ（Ｕ．Ｓ．Ａｒｍｙ，Ｇｒａｎｔ ＤＡＭＤ １７−９８−１−８１５５）、Ｓｈａｗｎ Ｊ．Ｓｔａｃｈｅｌ（ＮＩＨ，Ｇｒａｎｔ Ｆ３２ＣＡ８１７０４）；およびＭａｒｋ Ｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ．（ＮＩＨ，Ｇｒａｎｔ，Ｆ３２ＧＭ１９９７２１）に対する博士号取得後補助金によって支援された。したがって米国政府は、本発明において確かな権利を有するものとする。
【０００３】
【従来の技術】
（発明の背景）
エポチロンは、マイコバクテリウム属Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍから単離した、天然に存在する細胞毒性マクロライドの１ファミリーである。タクソイドの構造とは大きく異なる構造を有するにもかかわらず、パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））と類似なエポチロンは、微小管アセンブリを安定化させることにより細胞分裂を阻害することを含み、ひいては細胞死をもたらす、類似のメカニズムによって機能するようである（Ｂｏｌｌａｇ他Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，２３２５）。現在パクリタクセルは、第一線の化学療法剤として使用されている。しかしながら、その治療指数、および水に不溶であるために製剤が困難であるこという懸念は障害である。
比較すると、エポチロンは、より高い治療プロフィールおよび増大した水溶性を享受しており、このため魅力的な治療剤である。具体的には、エポチロンには、多剤耐性腫瘍細胞に対して著しい効能があることが証明されている。さらに、パクリタクセルと比べて増大した水溶性は、エポチロンの製剤化能力にとって有用である。天然に存在する化合物、エポチロンＢ（以下のスキーム１中の１ｂ，ＥｐｏＢ）は、このファミリーの最も効力のあるメンバーであることが分かっているが、これは少なくとも異種移植マウスでは、厄介なほど限られた治療指数を残念ながら有する（Ｓｕ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９７，３６，１０９３；Ｈａｒｒｉｓ他Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６４，８４３４）。
【０００４】
【化５０】
2004500388.tif 000003
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
エポチロンＢの治療指数が限られているにもかかわらず、エポチロンの著しい臨床潜在力は、本発明者等による、エポチロンの細胞毒性および生体内での抗腫瘍効力を調べるためのいくつかの合成および治療研究の誘因となっている（Ｂａｌｏｇ他；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９６，３５，２８０１；Ｓｕ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９７，３６，７５７；Ｍｅｎｇ他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９７，１１９，１００７３を参照のこと）。これらおよび他の研究の行程中において、１２，１３−デオキシエポチロンＢ（２ｂ，ｄＥｐｏＢ）は、エポチロンＢ（１ｂ，ＥｐｏＢ）よりも有望な治療プロフィールを示すことが近年判明している。具体的にはｄＥｐｏＢが、毒性用量レベルの低下のために、エポチロンＢと比べてより広い治療範囲を示すことが分かっている（Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ他Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９８，９５，９６４２）。さまざまなマウス・モデルに基づく生体内での実験は、ｄＥｐｏＢが著しい治療効力を有し、異種移植片中のさまざまな感受性および耐性腫瘍に対して本質的に治癒力があることを一貫して証明している。その印象的な生体内でのプロフィールのために、ｄＥｐｏＢには、イヌにおける毒性評価を経て、抗ガン剤としてのその利用を想定した、ヒトでの試用の期待が高まっている。
【０００６】
エポチロンの治療効力に基づき、エポチロンの他の構造変異体の発見および単離に関する関心が依然として存在している。近年、エポチロンＥおよびＦが発酵から単離されており、これらは２１−ヒドロキシル基を有する（Ｎｉｃｏｌａｏｕ．他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９８，３７，８４；Ｈｏｆｌｅ Ｉｎ ＧＢＦ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔ；Ｗａｌｓｄｏｒｆｆ，Ｊ．−Ｈ，Ｅｄ．；ＧＢＦ：Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，１９９７，ｐ． ９１）。これらの化合物のＳＡＲ研究によって、Ｃ２１にヒドロキシル官能が存在することにより、生物学的活性が大幅に低下することはないことが示唆される（Ｈｏｆｌｅ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９９，３８，１９７１）。製剤に由来するパクリタクセル化学療法の相当なリスクを考慮すると、追加のヒドロキシによって水溶性が増大した化学療法剤が提供され、結果として製剤性能を大幅に改善しうる点で、この特徴は非常に有用である。さらに、２１−ヒドロキシル基は容易に入手できる第１アルコールを表すので、さらなる合成用の分子ハンドル（ｈａｎｄｌｅ）としてそれを使用することも可能であろう。
【０００７】
明らかに、Ｃ２１に官能性ハンドルを有するという潜在的な利点の点で、本発明人による１２，１３−デオキシエポチロンの優れた治療プロフィールの認識に基づいて、新規な合成法を開発してエポチロンの１２，１３デオキシ、２１−ヒドロキシル類似体への容易なアクセスを可能にすることが望ましいであろう。望ましい２１−ヒドロキシル類似体へのアクセスを可能にするだけでなく、他の有用な類似体、好ましくは２０−または２１−位において官能化された類似体を含めたデオキシエポチロンの類似体、またはアザ類似体、およびこれらの誘導体へのアクセスも可能にする、効率の良い方法を開発することも望ましいであろう。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
（発明の概要）
重要なことに、本発明は新規なエポチロンの類似体、およびそれを合成するための方法を提供する。一態様において本発明は、以下の構造を有する化合物を提供する。
【化５１】
2004500388.tif 000004
上式でＭはＮＨまたはＯであり、
ＣＹはアリールまたはヘテロアリール部分であり、
ｑは１〜５であり、
Ｗは出現するごとに独立に、不在であるか、−ＮＨ−、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２であり、
Ｖは出現するごとに独立に、水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ、または置換または無置換アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
ｍは出現するごとに独立に、１〜５であり、
結合Ｗ−−−Ｒ１は単結合または二重結合を表し、
Ｒ１は出現するごとに独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、窒素保護基、炭素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、１つまたは複数のヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノによって任意に置換されており、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、
Ｒ６は独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ２、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、窒素保護基、炭素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、
ＺはＯ、Ｎ（ＯＲＥ）またはＮ−ＮＲＦＲＧであり、ＲＥ、ＲＦ、およびＲＧはそれぞれ独立に置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式部分であり、
ｎは０、１、２または３である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、これまで及びここに記載されるそれぞれの化合物について、ＣＹがフェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである。他の実施形態では、ＣＹは、１つまたは２つのメチル基で置換された、４−チアゾリルまたは４−オキサゾリル部分であり、いくつかの実施形態では、メチル基が２−または５−位で置換されている。他の実施形態では、ＣＹが４−チアゾリルであり、ｍが１であり、ｎが３である。本発明の他の実施形態では、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ水素であり、Ｒ４がメチルであり、Ｒ５が水素であり、ＺがＯである。
【００１０】
上記および本明細書に記載するいくつかの化合物についてはＭがＯであり、他の実施形態では、ＭがＮＨであることことも理解されるであろう。本発明の他の実施形態では、Ｒ６が、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化５２】
2004500388.tif 000005
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である。
本発明の化合物のあるサブセットでは、Ｒ６がメチルまたはエチルである。本発明の化合物の他のサブセットでは、ＣＹが４−チアゾリルまたは４−オキサゾリルであり、Ｒ６がメチルまたはエチルである。他の実施形態では、Ｒ６がエチルである。
本発明の他の実施形態では、１２−位に置換基を有し、２つ以上の炭素原子を有する化合物が企図され、したがって、Ｒ６は２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。さらに、他のサブセットは、Ｒ６がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化５３】
2004500388.tif 000006
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である化合物を含む。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態では、前に記載したように、チアゾニリルおよびオキサゾリニル化合物が当該のものである。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、以下の一般式を有する化合物が提供される。
【化５４】
2004500388.tif 000007
【００１２】
さらに本発明は、考えられるすべての立体異性体および二重結合異性体を含む。たとえば、当該のいくつかの異性体は、これまで及びここに記載するように、以下の構造を有する化合物を含む。
【化５５】
2004500388.tif 000008
【化５６】
2004500388.tif 000009
【化５７】
2004500388.tif 000010
【００１３】
他の実施形態では、これまで及びここに記載する化合物のそれぞれについて、Ｒ１がＯＲＡであり、ＲＡが水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式脂肪族またはヘテロ脂肪族、または置換または無置換アリールまたはヘテロアリールであり、Ｗが−ＣＨ２−であり、ｍが１である。他の実施形態では、これまで及びここに記載する化合物のそれぞれについて、Ｒ１がＮＲＡＲＡであり、ＲＡが水素、窒素保護基、または低級アルキルであり、ｍが１であり、Ｗが−ＣＨ２−である。他の実施形態では、Ｗが（Ｃ＝Ｏ）であり、ｍが１であり、Ｒ１が水素である。
【００１４】
他の実施形態では、Ｒ１が光アフィニティー標識である。いくつかの実施形態では、光アフィニティー標識は光活性化可能基であり、１つまたは複数のハロゲン部分によって置換されたｏ−、ｍ−またはｐ−アジドベンゾイルである。いくつかの実施形態では、光活性化可能基は４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロフェニルアシルである。
【００１５】
本発明に懸かる化合物のサブセットは、以下の構造を有する化合物を含む。
【化５８】
2004500388.tif 000011
上式でＲ６は独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ２、ＮＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。このサブセットのいくつかの実施形態では、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。このサブセットの他の実施形態では、Ｒ６が、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化５９】
2004500388.tif 000012
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である。このサブセットの他の実施形態では、Ｒ６がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化６０】
2004500388.tif 000013
または（ＣＨ２）ｐ−ＯＨ（式中、ｐが１〜６である）である。
【００１６】
他の実施形態では、Ｒ６がメチルであり、化合物は以下の構造を有する。
【化６１】
2004500388.tif 000014
【００１７】
本発明の他の実施形態では、いくつかの化合物が提供され、本発明の化合物は、ここに記載するように、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識に結合している。いくつかの実施形態では、これらの本発明の化合物は、以下の一般構造を有する。
【化６２】
2004500388.tif 000015
上式でＲ６は独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、
ＷおよびＵはそれぞれ独立に、不在であるか、−ＮＨ−、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２であり、
Ｖは出現するごとに独立に、水素、ハロゲン、−ＯＨ，−ＳＨ，アミノ、または置換または無置換アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｂはペプチドまたは炭水化物である。いくつかの実施形態では、ペプチドが５〜約２５個のアミノ酸から成る。他の実施形態では、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。
【００１８】
本発明の他の態様では、いくつかの構成体が提供されるが、エポチロン化合物は、本明細書に詳細に記載するように、多数現れる。たとえば、本発明の構成体はポリマー主鎖を含むが、前記ポリマー主鎖は生体高分子または合成ポリマーであり、およびこれまで及びここに記載する２つ以上の化合物であり、この２つ以上の化合物は同じであるか異なっており、前記２つ以上の化合物はポリマー主鎖に、直接的あるいはリンカーを介して結合しており、ここで前記２つ以上の化合物は、その化合物の１２−位、２０−位または２１−位を介して結合している。いくつかの実施形態では、ポリマー主鎖はデンドリマー、ペプチド、または生分解性ポリマーである。
【００１９】
いくつかの実施形態では、以下の構造を有する二量体デオキシエポチロンが提供される。
【化６３】
2004500388.tif 000016
上式でＥＰＯは、１２−、２０−または２１−位に存在する官能基を介して結合している、これまで及びここに記載する本発明の化合物を含むが、ここではＸがメチレン、（Ｃ＝Ｏ）であるか、あるいは存在せず、Ｙが（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、ＮＨであるか、あるいは存在せず、Ｚが（Ｃ＝Ｏ）、ＮＨ、Ｏであるか、あるいは存在せず、ｎが０〜５である。いくつかの実施形態では、ＥＰＯが以下の構造式を有する。
【化６４】
2004500388.tif 000017
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。他の実施形態では、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。他の実施形態では、Ｘがメチレンであり、ＹがＯであり、Ｚが（Ｃ＝Ｏ）である。他の実施形態では、Ｘがメチレンであり、ＹがＮＨであり、Ｚが不在である。他の実施形態では、Ｘが（Ｃ＝Ｏ）であり、ＹがＯまたはＮＨであり、Ｚが不在である。
【００２０】
本発明の他の態様では、これまで及びここに記載する本発明の化合物の任意の１つ、および製薬品として許容される担体を含む、製薬組成物を提供する。
【００２１】
さらに本発明は、ガンに罹患した患者においてガンを治療するための方法であって、治療的に有効量のこれまで及びここに記載する化合物の任意の１つを患者に投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、ガンが固形腫瘍である場合にガンの治療に使用される。他の実施形態では、この方法は、ガンが乳ガンである場合にガンの治療に使用される。
【００２２】
さらに本発明は、多剤耐性細胞の成長を阻害するのに有効な、これまで及びここに記載する化合物の任意の１つを一定量含む、組成物を提供する。さらに本発明は、多剤耐性細胞の成長を阻害する方法を提供するが、この方法は多剤耐性細胞と、多剤耐性細胞の成長を阻害するのに有効な、これまで及びここに記載する化合物の任意の１つの一定量を接触させることを含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物が、製薬品として許容される担体または希釈剤をさらに含むことが理解されるであろう。他の実施形態では、本発明の組成物は、一定量の細胞毒性剤（抗ガン剤を含むがこれだけには限らない）をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ガン剤はアドリアマイシン、ビンブラスチンまたはパクリタクセル、またはこれらの任意の組み合わせである。他の実施形態では、化合物の有効量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ／〜約５０ｍｇである。他の実施形態では、化合物の有効量が約０．０１ｍｇ／体重１ｋｇ〜約２５ｍｇ／体重１ｋｇである。
【００２３】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化６５】
2004500388.tif 000018
または
【化６６】
2004500388.tif 000019
上式でＰが酸素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、窒素保護基、炭素保護基、イオウ保護基、または酸素保護基である。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するハロケトンを提供する工程、
【化６７】
2004500388.tif 000020
ｂ）前記ハロケトンにエノールエーテルを生成させるための条件を施し、その後以下の構造を有するヒドロキシケトンを調製するのに適した条件下でヒドロキシル化する工程、
【化６８】
2004500388.tif 000021
または
【化６９】
2004500388.tif 000022
および、ｃ）以下の化合物を形成するのに適した条件下でヒドロキシケトンを保護する工程。
【化７０】
2004500388.tif 000023
または
【化７１】
2004500388.tif 000024
【００２４】
いくつかの実施形態では、ヒドロキシル化の工程が、非対称触媒を使用してハロケトンを反応させて、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造を有する化合物を生成させることを含む。
【化７２】
2004500388.tif 000025
いくつかの実施形態では、ヒドロキシル化の工程をＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−αの存在下で行う。
【００２５】
他の実施形態では、ヒドロキシル化の工程が、非対称触媒を使用してハロケトンを反応させて、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造を有する化合物を生成させることを含み、
【化７３】
2004500388.tif 000026
いくつかの実施形態では、ヒドロキシル化の工程をＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−βの存在下で行う。
【００２６】
前に記載した方法について、いくつかの実施形態では、Ｐが−ＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。
【００２７】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化７４】
2004500388.tif 000027
上式でＰが酸素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、ＮＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するグリコールイミドを調製する工程、
【化７５】
2004500388.tif 000028
ｂ）前記グリコールイミドを、Ｎ，Ｏ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキル、アリール）ヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｏ−ジ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８）アルキルヒドロキシルアミンおよびＮ，Ｏ−アリール，アリールヒドロキシルアミンからなる群から選択される置換ヒドロキシルアミンを用いて、以下の構造を有するアミドを形成するのに適切な条件下で処理する工程、
【化７６】
2004500388.tif 000029
［上式でＲ’およびＲ”がそれぞれ独立に直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキルまたはアリールである］
ｃ）前記アミドと置換有機金属試薬を、当該化合物を形成するのに適切な条件下で反応させる工程を含む。いくつかの実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。他の実施形態では、置換有機金属試薬が、ＭｅＭｇＢｒまたはＭｅＭｇＣｌを含めた（これらだけには限られないが）グリニャール試薬である。
【００２８】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化７７】
2004500388.tif 000030
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、ＺＡがＯＰであり、Ｐが酸素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、窒素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、または炭素保護基である。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化７８】
2004500388.tif 000031
上式でＲ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）以下の構造：
【化７９】
2004500388.tif 000032
を有するケトンと前記ホスフィンオキシドを縮合させる工程、および
ｃ）任意に、当該化合物を形成するのに適切な条件下で工程ｂ）で形成されたエステルを還元する工程。
いくつかの実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。他の実施形態では、Ｒ１が水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルであることが理解されるであろう。他の実施形態では、Ｒ１が置換または無置換４−チアゾリルである。他の実施形態では４−チアゾリルが、−２または−５位において１つまたは２つのメチル基で置換されている。
【００２９】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化８０】
2004500388.tif 000033
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、ＺＡがＮ３またはＮＨＰであり、Ｐが窒素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化８１】
2004500388.tif 000034
上式でＲ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）以下の構造：
【化８２】
2004500388.tif 000035
を有するケトンと前記ホスフィンオキシドを縮合させる工程、
ｃ）工程ｂ）で形成された化合物を適切な条件下で転化させてアジドを生成させ、任意に、さらに前記アジドを処理して保護型アミンを生成させる工程。
いくつかの実施形態では、トンプソンの方法を使用して、本発明を実施する。他の実施形態では、シュタウディンガー還元によりアジドを還元して、保護型アミンを生成させる。他の実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。本発明の他の実施形態では、Ｒ１が水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである。本発明の他のサブセットでは、Ｒ１が置換または無置換４−チアゾリルである。
【００３０】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化８３】
2004500388.tif 000036
上式でＰが窒素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化８４】
2004500388.tif 000037
上式でＲ０，Ｒ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）以下の構造：
【化８５】
2004500388.tif 000038
を有するケトンと前記ホスフィンオキシドを縮合させる工程、および
ｃ）当該化合物を形成するのに適切な条件下で、工程ｂ）で形成されたエステルを還元する工程。
【００３１】
前に記載した方法についてのいくつかの実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。いくつかの実施形態では、Ｈａｌがヨードである。
【００３２】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化８６】
2004500388.tif 000039
上式でＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ９が水素または酸素またはイオウ保護基であり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素であるか、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルである。この方法は以下の工程を含む。
以下の構造：
【化８７】
2004500388.tif 000040
を有するケトアルデヒドを保護して保護型アルデヒドを生成させ、その後前記保護型アルデヒドを以下の構造：
【化８８】
2004500388.tif 000041
を有する化合物と縮合を行うために適切な条件下で反応させて、以下の構造：
【化８９】
2004500388.tif 000042
を有するアルドールを生成させ、前記保護されたアセタール基を加水分解して、以下の構造：
【化９０】
2004500388.tif 000043
を有するケトアルデヒドを生成させ、前記ケトアルデヒドを第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で反応させ、任意にＣ３アルコールを保護して、以下の構造：
【化９１】
2004500388.tif 000044
［式中、ＺＢおよびＲ２〜Ｒ５は上述の定義を有する］
を有する化合物を生成させる工程。
【００３３】
いくつかの実施形態では、第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、化学量論的条件下で前記ケトアルデヒドをキラルエノラートチタンと反応させることを含む。他の実施形態では、第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、前記ケトアルデヒドを触媒試薬と反応させることを含む。いくつかの実施形態では、使用する触媒試薬がＣａｒｒｅｉｒａ触媒である。他の実施形態では、使用する触媒試薬がＭｉｋａｍｉのキラル・アルドール触媒である。
【００３４】
他の態様では本発明は、以下の構造を有する化合物を調製する方法を提供する。
【化９２】
2004500388.tif 000045
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であるか、あるいはＸが水素である−ＣＹ＝ＣＨＸであるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、Ｙが水素、または直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立に、水素であるか、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ２、ＮＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＭがＮＨまたはＯであり、ｎが０、１、２または３である。
この方法は以下の工程を含む。
以下の構造を有する前駆体であって、
【化９３】
2004500388.tif 000046
上式でＲ１〜Ｒ６が前で定義するものであり、ＺＡがＯＲ７、ＮＨＲ８またはＮ３であり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、またはＲ１１が出現するごとに独立に水素、酸素保護基または窒素保護基である前駆体を提供する工程。前記前駆体を提供する工程は、更に以下の構造：
【化９４】
2004500388.tif 000047
を有する第１の化合物を、適切な条件下で以下の構造：
【化９５】
2004500388.tif 000048
を有する第２の化合物と反応させて、カップリングを行って前記前駆体を生成させ、
前記前駆体に適切な条件を施して大環化を行い、任意に脱保護して所望の化合物を生成させる工程をさらに含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、該方法は、脱保護してＲ２およびＲ３が水素である化合物を生成させる工程を方法が含む。他の実施形態では、Ｒ１が−ＣＹ＝ＣＨＸまたは水素、置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルであり、Ｘが水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである。他の実施形態では、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール基が光活性化可能基で、または１つまたは複数のヒドロキシ、チオ、アミノ、置換アミノ、アルデヒド、カルボン酸、アルケニル、イミノ、またはジアゾでさらに置換されている。他の実施形態では、ＭがＯであり、Ｒ１が−ＣＹ＝ＣＨＸであり、Ｙがメチルであり、Ｘが−（Ｃ＝Ｏ）Ｈ、メチル、または−（ＣＨ２）ｎＯＨ（式中、ｎが０〜５である）によって２位において置換されている４−チアゾリルである。他の実施形態では、Ｘが２−および５−位においてメチルによって置換されている、４−チアゾリルである。他の実施形態では、Ｒ７〜Ｒ１１がそれぞれ独立に水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル、またはＳｉ（ＲＡ）３からなる群から選択され、ＲＡは出現するごとに独立に、分枝または非分枝、置換または無置換、脂肪族またはヘテロ脂肪族、または置換または無置換アリールまたはヘテロアリールである。他の実施形態では、前記第１および第２のセクターに適切な条件を施す工程が、前記セクターにスズキカップリングを行うための条件を施すことを含む。他の実施形態では、ＭがＮＨまたはＯであり、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。
【００３６】
上述の方法についてのいくつかの実施形態では、本発明は、以下の構造を有する前駆体化合物の合成を提供する。
【化９６】
2004500388.tif 000049
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であるか、あるいはＸが水素である−ＣＹ＝ＣＨＸであるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、Ｙが水素、または直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立に、水素であるか、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ２、ＮＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、窒素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、または炭素保護基であり、ｎが０、１、２または３であり、ＺＡがＯＲ７、ＮＨＲ８またはＮ３であり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、またはＲ１１が出現するごとに独立に水素、酸素保護基または窒素保護基である。前記方法は、以下のことを含む。
以下の構造：
【化９７】
2004500388.tif 000050
［式中、Ｒ１、Ｒ６およびＺＡが上述の定義を有する］
を有する第１の化合物を提供する工程、以下の構造：
【化９８】
2004500388.tif 000051
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が上述の定義を有し、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９である］
を有する第２の化合物を提供する工程。
ここで、第２の化合物を提供する工程は、以下の構造：
【化９９】
2004500388.tif 000052
を有するケトアルデヒドを保護して保護型アルデヒドを生成させ、その後前記保護型アルデヒドを以下の構造：
【化１００】
2004500388.tif 000053
を有する化合物と縮合を行うために適切な条件下で反応させて、以下の構造：
【化１０１】
2004500388.tif 000054
を有するアルドールを生成させ、保護されたアセタール基を加水分解して、以下の構造：
【化１０２】
2004500388.tif 000055
を有するケトアルデヒドを生成させ、前記ケトアルデヒドを第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で反応させ、任意にＣ３アルコールを保護して、以下の構造：
【化１０３】
2004500388.tif 000056
［式中、ＺＢおよびＲ２〜Ｒ５が上記の定義を有する］
を有する第２のセクターを生成させ、前記第１および第２のセクターをカップリングを行うために適切な条件下で反応させて、当該前駆体を生成させることをさらに含む。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ１が−ＣＹ＝ＣＨＸであり、Ｙが水素またはアルキルであり、Ｘが直鎖状または分枝状アルキルによって２位において置換されているか、あるいは−（ＣＨ２）ｎＯＨ（式中、ｎが０〜５である）によって置換されている４−チアゾリルであり、Ｒ６が独立に水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである。本発明の他の実施形態では、ＭがＮＨまたはＯであり、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。いくつかの実施形態では、ＺＡがＮ３であり、本発明の方法は、適切な条件下でアジドを反応させて保護型アミンを生成させる工程を任意にさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、前駆体化合物を脱保護して、遊離ヒドロキシ酸前駆体、またはアミノ酸前駆体を生成させる工程をさらに含む。
【００３７】
【発明の実施の形態】
（定義）
上述したように、本発明が癌およびそれに関連する他の増殖性疾病の治療に有用な化合物の新規な種類を供給する。本発明の化合物は上述したものおよびここに述べられるものを含み、ここのどこかで開示する様々な綱、亜属および種によって部分的に例示される。
【００３８】
本発明の化合物に多くの不斉中心があることは当業者であれば理解するであろう。したがって、本発明の化合物およびその製薬組成物は鏡像異性体、ジアステレオマーまたは幾何異性体の形をとることが可能であり、あるいは立体異性体の混合体の形をとることも可能である。付け加えると、ここに述べたようなある好ましい実施形態で、本発明の方法はエポチロンおよびその類似体の効率的な合成のための改良された方法を提供する。
【００３９】
加えて、本発明は前述の化合物の製薬品として許容される誘導体およびこれらの化合物を使用する患者の治療方法、それらの製薬組成物、あるいはこれらいずれかを１つまたは複数の別の治療薬剤との組み合わせとして供給する。ここで使用する「製薬品として許容される誘導体」という語句は製薬品として許容される、そのような化合物のあらゆる塩、エステル、またはそのような化合物のエステルの塩、あるいは患者に投与する上でここに述べたのとは違う方法で（直接的ないし間接的に）化合物を供給できる何らかの付加化合物または誘導体、またはその代謝産物または残渣を意味する。したがって製薬品として許容される誘導体はとりわけプロドラッグを含む。プロドラッグは化合物の誘導体であって普通は非常に低い薬理活性をもち、生体内で除去され易く、その結果親分子を薬理活性種として生じる付加部分を含む。プロドラッグの範例は生体内で切断されて目的の化合物を生じるエステルである。様々な化合物のプロドラッグ、プロドラッグを作製するために親分子を誘導化する材料と方法が知られており、本発明に適合化することができる。ある範例的な医薬組成および製薬品として許容される誘導体をここで以下にさらに詳しく検討する。
【００４０】
本発明の所定の化合物および特定の官能基の定義もまた以下にさらに詳細に説明する。本発明の目的のために、化学元素はＣＡＳバージョンの、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈＥｄ．の表紙裏にある元素の周期律表に従って識別し、特定の官能基はそこに述べてあるように定義する。加えて、有機化学の一般的な原理、ならびに特定の官能部分と反応性は、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９の「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」に述べられており、その全内容はここで参考のために取り入れられている。さらに、ここで述べるような合成方法が様々な保護基を利用することは当業者であれば分かるであろう。ここで使用した「保護基」という用語で、特定の官能部分、例えばＯ、ＳまたはＮは一時的にブロックされ、多官能化合物中において、反応が別の反応部位で選択的に生じることができるようにることを意味する。好ましい実施形態では、指向する反応に対して安定な保護基質を与えるために保護基は優れた収率で選択的に反応する。この保護基は容易に入手可能で好ましくは他の官能基を侵さない無害な試薬によって優れた収率で選択的に除去されねばならない。この保護基は容易に分離可能な誘導体を形成する（さらに好ましくは新たな立体中心を生じない）。この保護基はさらなる反応部位を回避するために最少限の付加的官能性を有する。ここで列挙すると、酸素、イオウ、窒素および炭素の保護基を利用することができる。範例となる保護基をここで列挙するが、しかしながら、本発明がこれらの保護基に限定されることは意図されず、様々な同等の付加的保護基が上記の標準を使用して容易に識別可能であり、本発明の方法において利用可能であることは理解されるであろう。付け加えると、様々な保護基は「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９に述べられており、その全内容は参考のためにここに取り入れている。
【００４１】
ここで述べたような化合物が何らかの数の置換部分または官能部分で置換され得ることは理解されるであろう。概して、「任意に」という用語が前にあろうとなかろうと、「置換された」という用語および本発明の式に含まれる置換基は、所定の構造中の水素基の特定の置換基による置き換えを称する。何らかの所定の構造内で複数の位置が特定のグループから選択される複数の置換基で置換されるとき、その置換基はすべての位置で同じであっても異なっていてもよい。ここで使用する「置換された」という用語は有機化合物のすべての許容できる置換基を含むことを意図している。広い態様では、許容できる置換基には有機化合物の非環状型および環状型、分枝型および非分枝型、炭素環型および複素環型、芳香族および非芳香族置換基が含まれる。本発明の目的のために、窒素のようなヘテロ原子が水素置換基および／またはヘテロ原子の原子価を満たすここに述べた有機化合物のいずれかの許容できる置換基を有することがある。その上さらに、本発明は有機化合物の許容可能な置換基によって何らかの方式で制限されることを意図するものではない。本発明により想定される置換基および変形の組み合わせは癌の治療および／または癌細胞の増殖の阻害または死滅に有用な安定な化合物の生成という結果につながるものであることが好ましい。ここに使用する「安定」という用語は製造を許容するのに充分な安定性を有し、充分な期間にわたってここで詳細に述べる目的に有用な化合物の保全性を維持する化合物を称することが好ましい。
【００４２】
ここに使用する「脂肪族」という用語は飽和および不飽和の両方、直鎖状（すなわち非分枝型）、分枝型、環状、または多環式脂肪族炭化水素のいずれでも、場合によっては１つまたは複数の官能基で置換されたものを含む。当業者は理解するであろうが、「脂肪族」は、限定されるものではないが、ここではアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、およびシクロアルキニル部分を含むことを意図されている。こうして、ここで使用する「アルキル」という用語は直鎖状、分枝型および環状のいずれのアルキル基をも含む。同様の慣行を、「アルケニル」、「アルキニル」などの他の一般的な用語にも適用する。その上さらに、ここで使用する「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」などの用語は置換および無置換の基の両方を包含する。
【００４３】
特定しない限り、アルキルおよび他の脂肪族基は１〜６または１〜３の隣接する脂肪族炭素原子を含むことが好ましい。したがって例証となる脂肪族は、限定はされないが、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロプロピル、アリール、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、−ＣＨ２−シクロブチル、ｎ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、シクロペンチル、−ＣＨ２−シクロペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、シクロヘキシル、−ＣＨ２−シクロヘキシル部分などを含み、やはり１つまたは複数の置換基をもってもよい。アルケニル基は、限定はされないが、例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イルなどを含む。代表的なアルキニル基は、限定はされないが、エチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニルなどを含む。
【００４４】
ここに使用する「アルコキシ」または「チオアルキル」という用語は前に規定したように、酸素原子またはイオウ原子を介して親分子部分に結合したアルキル基を称する。アルコキシの範例は、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ネオペントキシおよびｎ−ヘキソキシを含む。チオアルキルの範例は、限定はされないが、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオなどを含む。
【００４５】
「アルキルアミノ」という用語は−ＮＨＲ’の構造を有する基を称し、その中でＲ’はここでアルキルと規定する。アルキルアミノの範例は、限定はされないが、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノなどを含む。ある実施形態ではＣ１−Ｃ３のアルキルアミノ基が本発明で使用される。
【００４６】
本発明の化合物の上述の脂肪族（および他の）部分の置換基のいくつかの例は、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２−アリール、ＣＯ２−ヘテロアリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、ＯＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＯＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ２−アリール、ＯＣＯ２−ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ２、ＯＣＯＮＨ−アルキル、ＯＣＯＮＨ−アリール、ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＮＨＣＯ２−アルキル、ＮＨＣＯ２−アリール、ＮＨＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨＣｌ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシ；メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアミノ、チオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、アルキルチオ、またはメチルチオメチルを含む。概して適用可能な置換基の付加的な例はここに説明する実施例に示された特定の実施形態によって例示される。
【００４７】
概して、ここに使用する「アリール」および「ヘテロアリール」という用語は、安定で好ましくは３から１４個の炭素原子を有する単環または多環式、複素環式、多環式、および複素多環式の不飽和の部分を称し、各々は置換されてもされなくてもよい。置換基は、限定はされないが、前述の置換基すなわちここに開示した脂肪族部分またはその他の部分で引用した置換基を含み、安定な化合物を形成する結果につながる。本発明のある実施形態では、「アリール」という用語は１つまたは２つの芳香環を有する単環または二環の炭素環系であって、限定はされないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニルなどを含む。本発明のある実施形態では、ここに使用する「ヘテロアリール」という用語は５個から１０個の環状の原子群を有する環式芳香族基を称し、その環状原子の１つはＳ、ＯおよびＮから選択され、環状原子のゼロ個、１個または２個は付加的なヘテロ原子であって独立してＳ、ＯおよびＮから選択され、環状原子の残りは炭素であり、この基は、例えばピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニルなどのような環状原子のいずれかを介して分子の残りに連結されている。
アリールまたはヘテロアリール基（二環式アリール基を含む）が置換されてもされなくてもよいことは理解されるであろうし、ここで置換は、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２−アリール、ＣＯ２−ヘテロアリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、ＯＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＯＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ２−アリール、ＯＣＯ２−ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ２、ＯＣＯＮＨ−アルキル、ＯＣＯＮＨ−アリール、ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＮＨＣＯ２−アルキル、ＮＨＣＯ２−アリール、ＮＨＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨＣｌ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアミノ、チオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、アルキルチオ、またはメチルチオメチルを含む何らかの１つまたは複数の部分による１つ、２つまたは３つの水素原子の独立した置き換えを含む。概して適用可能な置換基の付加的な例はここに説明する実施例に示された特定の実施形態によって例示される。
【００４８】
ここに使用する「シクロアルキル」という用語は特に、３個から７個、好ましくは３個から１０個の炭素原子を有する基を称する。適切なシクロアルキルは、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどを含み、他の脂肪族、ヘテロ脂肪族または複素環式部分の場合には任意に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２−アリール、ＣＯ２−ヘテロアリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、ＯＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＯＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ２−アリール、ＯＣＯ２−ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ２、ＯＣＯＮＨ−アルキル、ＯＣＯＮＨ−アリール、ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＮＨＣＯ２−アルキル、ＮＨＣＯ２−アリール、ＮＨＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨＣｌ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアミノ、チオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、アルキルチオ、またはメチルチオメチルで置換されることもある。概して適用可能な置換基の付加的な例はここに説明する実施例に示された特定の実施形態によって例示される。
【００４９】
ここに使用する「ヘテロ脂肪族」という用語は、例えば炭素原子に代わって１つまたは複数の酸素、イオウ、窒素、リンまたはケイ素原子を含む脂肪族部分を称する。ヘテロ脂肪族部分は分枝、非分枝または環状であってもよく、モルホリノ、ピロリジニルなどのような飽和および不飽和の複素環を含む。ある実施形態では、ヘテロ脂肪族部分は、以下に限定されないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２−アリール、ＣＯ２−ヘテロアリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、ＯＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＯＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ２−アリール、ＯＣＯ２−ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ２、ＯＣＯＮＨ−アルキル、ＯＣＯＮＨ−アリール、ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＮＨＣＯ２−アルキル、ＮＨＣＯ２−アリール、ＮＨＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨＣｌ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアミノ、チオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、アルキルチオ、またはメチルチオメチルを含む１つまたは複数の部分による１つまたは複数の水素原子の独立した置き換えによって置換される。概して適用可能な置換基の付加的な例はここに説明する実施例に示された特定の実施形態によって例示される。
【００５０】
ここに使用する「ハロ」および「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を称する。
「ハロアルキル」という用語は１つ、２つ、または３つのハロゲン原子を結合して有する上記に規定したアルキル基を意味し、クロロメチル、ブロモエチル、トリフルオロメチルなどのような基によって例示される。
【００５１】
ここに使用する「ヘテロシクロアルキル」または「複素環」という用語は非芳香族の５、６または７員環、または酸素、イオウおよび窒素から独立的に選択される１から３個のヘテロ原子を有する縮合６員環を含む二または三環性基を称し、そこでは（ｉ）各々の５員環が０から１個の二重結合を有し、各々の６員環が０から２個の二重結合を有し、（ｉｉ）ヘテロ原子の窒素およびイオウが場合によっては酸化され、（ｉｉｉ）ヘテロ原子の窒素が場合によっては第４級化され、（ｉｖ）上記の複素環のいずれかがベンゼン環に縮合されることがある。代表的な複素環は、限定はされないが、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、およびテトラヒドロフリルを含む。ある実施形態では、「置換型ヘテロシクロアルキルまたは複素環」基が使用され、ここでは１つ、２つまたは３つの水素原子を独立的に、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２−アリール、ＣＯ２−ヘテロアリール、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、ＯＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＯＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ２−アリール、ＯＣＯ２−ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ２、ＯＣＯＮＨ−アルキル、ＯＣＯＮＨ−アリール、ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、ＮＨＣＯ２−アルキル、ＮＨＣＯ２−アリール、ＮＨＣＯＮＨ−ヘテロアリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨＣｌ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＮＨ２、ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアミノ、チオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、アルキルチオ、またはメチルチオメチルで置き換えることにより置換された上記に規定したヘテロシクロアルキルまたは複素環基を称する。概して適用可能な置換基の付加的な例はここに説明する実施例に示された特定の実施形態によって例示される。
【００５２】
「標識化」：ここに使用する「標識化」という用語は、化合物に、その化合物の検出を可能にする、少なくとも１つの元素、同位元素または化合物が結合していることを意味するように意図される。概して、標識は３つの種類に分かれ、すなわちａ）限定はされないが６７Ｇａ、９９ｍＴｃ（Ｔｃ−９９ｍ）、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１６９Ｙｂおよび１８６Ｒｅを含む放射活性同位元素ないし重同位元素であってもよい同位元素標識、ｂ）抗体ないし抗原であってもよい免疫標識、ｃ）着色または蛍光染料である。生物学的活性または検出する化合物の特性を阻害しないあらゆる位置で標識が化合物に組み込まれてもよいことは理解されるであろう。本発明のある実施形態では、生物学的系の分子間の相互作用の直接的な解明のために（例えばチューブリン二量体のエポチロン結合部位を探査するために）光アフィニティー標識が利用される。ジアゾ化合物、アジド、またはジアジリンのニトレンないしカルベンへの光変換に最も依存して多様な既知の発光団が使用可能であり（Ｂａｒｌｅｙ，Ｈ．，Ｐｈｏｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８３），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ．を参照）、その全内容をここでは参考のために取り入れている。本発明のある実施形態では、使用する光アフィニティー標識は１つまたは複数のハロゲン部分で置換されたｏ−、ｍ−およびｐ−アジドベンゾイルであり、限定はされないが４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸を含む。
【００５３】
「ポリマー」：ここに使用する「ポリマー」という用語は、開いた状態、閉じた状態、直鎖状、分枝状または同じまたは異なる繰り返しユニット（モノマー）の架橋状であってもよい鎖を有する組成を称する。ある実施形態ではポリマーという用語が生体高分子を称し、ここで使用するそれは自然界で見出される物質かまたは自然界で見出されるそれらの物質を基本としたポリマー状の物質を称するように意図され、限定はされないが核酸、ペプチド、およびその擬似物質を含むことは理解されるであろう。ある他の実施形態では、ポリマーという用語は生分解ポリマーあるいはその他のポリマー状材料のような合成ポリマーを称する。ポリマー状の固体支持体もまた本発明のポリマーに包含されることは理解されるであろう。本発明の化合物はポリマー状の支持体に結合させることが可能であり、したがってある合成的な修飾を固相で行うことができる。ここで使用する「固体支持体」という用語は、限定はされないが、ペレット、ディスク、キャピラリー、中空ファイバ、ニードル、ピン、固体繊維、セルロース・ビーズ、ポアガラス・ビーズ、シリカゲル、場合によってはジビニルベンゼンと架橋したポリスチレン・ビーズ、グラフト共重合ビーズ、ポリアクリルアミド・ビーズ、ラテックス・ビーズ、場合によってはＮ−Ｎ’−ｂｉｓ−アクリロイルエチレンジアミンと架橋したジメチルアクリルアミド・ビーズ、および疎水性ポリマーでコーティングされたガラス粒子を含むよう意味される。当業者は特定の固体支持体の選択が使用する反応化学との支持体の適合性によって制限されることを実感するであろう。範例となる固体支持体は、１）ジビニルベンゼンと架橋したポリスチレン・ビーズ、２）ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）の複合物であるＴｅｎｔａｇｅｌアミノ樹脂である。Ｔｅｎｔａｇｅｌは、オン・ビーズまたはオフ・ビーズ分析に使用する万能支持体を提供し、かつトルエンから水まで広がる溶媒中で優れた膨潤をもするので、特に有用な固体支持体である。
【００５４】
（発明の詳細な説明）
上述したように、本発明は新規なエポチロン類似体、およびその合成の方法を供給する。ある実施形態では、本発明は２０−ないし２１−および１２−置換型のエポチロンおよびアザ類似体、医薬的組成、および癌の治療におけるエポチロン類似体の使用方法を供給する。予想外にも、あるエポチロンは生体外と生体内の両方で癌細胞の多剤耐性を逆行させるのに効果的であることが見出されたばかりでなく、正常細胞よりもＭＤＲ細胞に対して細胞毒性のある傍系の感受性薬剤として、ビンブラスチンのような他の細胞毒性薬剤との組み合わせで個別薬剤が単独に同じ濃度であるときよりも活性となる協力薬剤として活性を示すと判定された。注目すべきことに、本発明のデオキシエポチロンは生体内での腫瘍細胞毒性薬剤としての例外的な高い特異性を有し、タキソール（Ｔａｘｏｌ、登録商標）ビンブラスチン、アドリアマイシンおよびカンプトテシンを含む最新の主だった化学療法薬剤よりもさらに効果的で正常細胞に対する毒性が少ない。
【００５５】
前に開示したように、全体的に合成により導き出された薬剤を使用して、本発明者らは初めてエポチロンＢの生体内での作製を行った。ＥｐｏＢそれ自体がやっかいな毒性プロファイルを示すと判明したとき、１２，１３−デオキシ化合物が調べられた。予想外なことに、ＭＤＲ活性化に関して高度に細胞毒性で健全である一方で、ｄＥｐｏＢはさらに望ましい毒性プロファイルを示した。ｄＥｐｏＢが注目すべき治療能力を有し、異種移植片による様々な感受性および抵抗性の腫瘍に対して本質的に治療効果のあることを様々なマウスのモデルに基づく実験が矛盾無く有意に示した。その生体内での印象的なプロファイルのせいで、ｄＥｐｏＢは抗癌剤としての進展を予想するヒトでの試験を期待して、イヌで毒物学的評価を進められてきた。明らかに、１２，１３−デオキシ化合物の優れた治療プロファイルの本発明者らの独自の先駆的認識に期待すると、エポチロンの他の類似体の生体内での効力を評価することは興味深かった。しかしながら、生物学的評価のためにこれらの物質の有意の量を利用する能力は改善された合成の方法論を必要とした。ここに開示したように、様々なエポチロン・マクロライド、特に１２，１３−デオキシエポチロンの合成のための改善された合成方法が提供され、それがエポチロンの様々な合成類似体の利用を可能にする。
【００５６】
本発明のエポチロンおよびその類似体
重要なことに、前で論じたように、本発明は新規な化合物、およびエポチロンおよびその類似体の効率の良い合成を可能にするための方法を提供する。一態様において本発明は、以下の構造を有する新規な化合物であって、
【化１０４】
2004500388.tif 000057
上式でＭはＮＨまたはＯであり、
ＣＹはアリールまたはヘテロアリール部分であり、
ｑは１〜５であり、
Ｗは出現するごとに独立に、不在であるか、−ＮＨ−、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２であり、
Ｖは出現するごとに独立に、水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ、または置換または無置換アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
ｍは出現するごとに独立に、１〜５であり、
結合Ｗ−−−Ｒ１は単結合または二重結合を表し、
Ｒ１は出現するごとに独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、窒素保護基、炭素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、１つまたは複数のヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノによって任意に置換されており、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、
Ｒ６は独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ２、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、窒素保護基、炭素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、
ＺはＯ、Ｎ（ＯＲＥ）またはＮ−ＮＲＦＲＧであり、ＲＥ、ＲＦ、およびＲＧはそれぞれ独立に置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式部分であり、
ｎは０、１、２または３である化合物を提供する。
【００５７】
本発明が、前に記載した化合物のあらゆる立体異性体および二重結合異性体を、含むことが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、以下の構造を有する化合物を提供する。
【化１０５】
2004500388.tif 000058
いくつかの実施形態では、ＸがＳであり、ＹがＮであり、ｍが１であり、ｎが３である。他の実施形態では、Ｒ６がメチルまたはエチルである。他の実施形態では、ＭがＯである。他の実施形態では本発明は、Ｒ６がＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化１０６】
2004500388.tif 000059
またはｐが１〜６である（ＣＨ２）ｐ−ＯＨである化合物を含む。
Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である化合物を、本発明が含むことも理解されるであろう。他の実施形態では、Ｒ６がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化１０７】
2004500388.tif 000060
【００５８】
またはｐが１〜６である（ＣＨ２）ｐ−ＯＨである。これまで及びここに記載の化合物も本明細書において提供され、Ｒ１がＯＲＡであり、ＲＡが水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式脂肪族またはヘテロ脂肪族、または置換または無置換アリールまたはヘテロアリールであり、Ｗが−ＣＨ２−であり、ｍが１である。他の実施形態では、Ｗが（Ｃ＝Ｏ）であり、ｍが１であり、Ｒ１が水素である。他の実施形態では、ＷがＣＨ２−であり、Ｒ１がＮＲＡＲＡであり、ＲＡは出現するごとに独立に、窒素保護基、水素または低級アルキルである。他の実施形態では、Ｗが−ＣＨ２−であり、Ｒ１が１つまたは複数のヒドロキシル部分によって置換されているアルキルまたはアルキレン部分である。他の実施形態では、これまで及びここに記載する化合物のそれぞれについて、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ水素であり、Ｒ４がメチルであり、Ｒ５が水素であり、ＺがＯである。他の実施形態では、Ｒ１が光アフィニティー標識であり、いくつかの実施形態では、光アフィニティー標識は光活性化可能基であり、１つまたは複数のハロゲン部分によって置換されたｏ−、ｍ−またはｐ−アジドベンゾイルである。いくつかの実施形態では、光活性化可能基は４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロフェニルアシルである。
【００５９】
本発明が、以下の構造を有する化合物を含めた、エポチロンのいくつかの異性体を提供することが理解されるであろう。
【化１０８】
2004500388.tif 000061
【００６０】
他の実施形態では、以下の構造を有する異性体を提供する。
【化１０９】
2004500388.tif 000062
【００６１】
他の実施形態では、以下の構造を有する異性体を提供する。
【化１１０】
2004500388.tif 000063
【００６２】
本発明の他の実施形態では、２１−ヒドロキシル化化合物が提供され、この化合物は以下の構造を有する。
【化１１１】
2004500388.tif 000064
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。本発明のいくつかの実施形態では、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である、化合物を提供する。他の実施形態では、Ｒ６がＨ、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化１１２】
2004500388.tif 000065
またはｐが１〜６である（ＣＨ２）ｐ−ＯＨである、化合物を提供する。他の実施形態では、Ｒ６がエチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化１１３】
2004500388.tif 000066
またはｐが１〜６である（ＣＨ２）ｐ−ＯＨである、化合物を提供する。
【００６３】
本発明の他の実施形態では、Ｒ６がメチルであり、化合物は以下の構造を有する。
【化１１４】
2004500388.tif 000067
【００６４】
他の実施形態では、Ｒ６がエチルであり、本発明の化合物は以下の構造を有する。
【化１１５】
2004500388.tif 000068
【００６５】
他の実施形態では、本発明の化合物は以下の構造を有する。
【化１１６】
2004500388.tif 000069
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。
【００６６】
他の実施形態では本発明は、以下の一般構造を有する化合物を提供する。
【化１１７】
2004500388.tif 000070
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、窒素保護基、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。
【００６７】
多量の官能化化合物にアクセスする能力により、ポリマーおよび／または治療部分へのさらなる結合が可能になることが理解されるであろう。したがって他の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の化合物の、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識への結合を企図する。一実施形態では、以下の式を有する化合物を提供する。
【化１１８】
2004500388.tif 000071
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、ＷまたはＵは出現するごとに独立に、不在であるか、−ＮＨ−、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＣ（Ｖ）２であり、Ｖが出現するごとに独立に、水素、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ、または置換または無置換アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｂがポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。
【００６８】
他の態様では本発明は、多様に表される化合物を提供し、一実施形態では本発明は、ポリマー主鎖、および
２つまたは本発明の化合物であって、２つまたは本発明の化合物が同じであるかあるいは異なっていてもよく、前記２つ以上の化合物がポリマー主鎖に直接的に、あるいはリンカーを介して結合しており、２つ以上の化合物が化合物の１２−位、２０−位または２１−位を介して結合している化合物を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、ポリマー主鎖がデンドリマー、ペプチド、または生分解性ポリマーである。
【００６９】
他の実施形態では、以下の構造を有する二量体デオキシエポチロンを提供する。
【化１１９】
2004500388.tif 000072
上式でＥＰＯが、１２−、２０−または２１−位に存在する官能基を介して結合している、請求項１に記載の化合物を含み、Ｘがメチレン、（Ｃ＝Ｏ）であるか、あるいは存在せず、Ｙが（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、ＮＨであるか、あるいは存在せず、Ｚが（Ｃ＝Ｏ）、ＮＨ、Ｏであるか、あるいは存在せず、ｎが０〜５である。
【００７０】
他の実施形態では、ＥＰＯが以下の構造式を有する。
【化１２０】
2004500388.tif 000073
上式でＲ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識である。
【００７１】
他の実施形態では、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。
他の実施形態では、Ｘがメチレンであり、ＹがＯであり、Ｚが（Ｃ＝Ｏ）である。
他の実施形態では、Ｘがメチレンであり、ＹがＮＨであり、Ｚは存在である。
他の実施形態では、Ｘが（Ｃ＝Ｏ）であり、ＹがＯまたはＮＨであり、Ｚは存在である。
【００７２】
新規な合成法
前に記載したように本発明により、エポチロンおよび関連化合物の効率の良い合成を可能にし、さまざまな類似体へのアクセスを可能にする新規な方法も提供される。一般に本発明は、新規な方法を提供し、この方法によって大環化に必要なアシルおよびアルキル・セクター（ｓｅｃｔｏｒ）を多量に提供することができ、この方法が、参照によってその全容がここに組み込まれている、０８／９８６，０２５および０９／２５７，０７２中で開示される、以前に報告された合成法から改良された方法であることが示される。
【００７３】
図１に示すように（さらにｄＥｐｏＦおよびｄＥｐｏＢの代替合成に関する実施例２中に記載するように）、本発明は一態様において、エポチロンおよびその類似体に関する新規な合成を提供する。本明細書に記載するように、この手法はアルキル・セクターの使用を含み、アルキル・セクター中のＣ３は既に還元されており、アルキル・セクターとのカップリング用に態勢が整っている。さらに、アルキル・セクターに対する、より好都合で調整的な手法を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、Ｂ−アルキルスズキカップリング反応によって、２つの断片を結合させ、次いで大環化反応によってマクロラクトンまたはマクロラクトムに進展させることができる。いくつかの実施形態では、ｄＥｐｏＢの以前の合成用に使用した反応（係属中の特許出願０８／９８６，０２５および０９／２５７，０７２に記載される）およびｄＥｐｏＦ（実施例１に記載し、図２に示す）と同様に、Ｙａｍａｇｕｃｈｉの大環化を使用する。
【００７４】
したがって、本発明の一態様では、Ｏ−アルキル断片の中間体を調製するための効率の良い方法を提供し、その中間体化合物は以下の構造を有する。
【化１２１】
2004500388.tif 000074
または
【化１２２】
2004500388.tif 000075
上式でＰが酸素保護基であり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、ポリマー、窒素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、または炭素保護基、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールである。
【００７５】
一実施形態では、非対称触媒酸素化によって、これらの構造の合成を達成することができることが理解されるであろう（１つの異性体の合成に関する図３を参照のこと）。この方法では、非対称触媒酸素化法を使用して、Ｃ１５中心を取り付け、アルキンのヨード化を行って、（Ｚ）−アルケンの形状を与える。一般に本発明のこの方法は、以下のことを含む。
ａ）以下の構造を有するハロケトンを提供すること、
【化１２３】
2004500388.tif 000076
ｂ）前記ハロケトンにエノールエーテルを生成させるための条件を施し、その後以下の構造を有するヒドロキシケトンを調製するのに適した条件下でヒドロキシル化すること、
【化１２４】
2004500388.tif 000077
または
【化１２５】
2004500388.tif 000078
および、ｃ）以下の化合物を形成するのに適した条件下でヒドロキシケトンを保護すること。
【化１２６】
2004500388.tif 000079
または
【化１２７】
2004500388.tif 000080
【００７６】
非対称ヒドロキシル化反応において使用する試薬に応じて、前述のように、本発明のエポチロンおよびその類似体の調製において使用するための、いずれかの立体異性体を提供することができることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、ヒドロキシル化の工程が、非対称触媒を使用してハロケトンを反応させて、好ましくはＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−αの存在下で、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造を有する化合物を生成させることを含む。
【化１２８】
2004500388.tif 000081
【００７７】
他の実施形態では、ヒドロキシル化の工程が、非対称触媒を使用してハロケトンを反応させて、好ましくはＯｓＯ４およびＡＤ−ｍｉｘ−βの存在下で、非対称なジヒドロキシル化を行い、以下の構造を有する化合物を生成させることを含む。
【化１２９】
2004500388.tif 000082
【００７８】
この化合物は、本明細書に詳細に記載するように、ラクタム誘導体を合成するのに非常に有用である。本発明はさらに、シリルエノールエーテルを最初に提供する方法を企図することも理解されるであろう。
【００７９】
これまで及びここに記載した方法中で使用する化合物についての、いくつかの実施形態では、Ｐが−ＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。前に記載した方法中で使用する化合物についての他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。
【００８０】
本明細書の実施例中に記載するように、図３中に示すように、一実施形態ではこの手法は、プロピレン（１７）とＢ−ヨード−９−ＢＢＮを反応させ、結果として生じたビニルボラントをメチルビニルケトンに加えて、ケトン（１８）を供給することを含む。ＴＭＳＩ／ＨＭＤＳなどの試薬を用いて、この化合物を後に処理することにより、２つのシリルエーテルレジル異性体１９と２０が８８：１２である混合物が与えられた。ＡＤ−ｍｉｘ−α、生成したヒドロキシケトン２１を使用して、この混合物の非対称なジヒドロキシル化を行う。重要なことに、この手順を使用して、オスミウム仲介ジヒドロキシル化中に、潜在的に影響を受けやすいヨードアルケン官能基を維持することができる。最後に、２５を生成した１８のトリエチルシリル化を行い、わずか４工程のシークエンスを終了させる。
【００８１】
本発明の他の実施形態では、図４中の一実施形態において示すような、Ｃ１５の形状を確立させるための非対称アルキル化反応を使用して、ケトンを生成させることができることも理解されるであろう。
【００８２】
一般に、本発明の方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するグリコールイミドを調製する工程、
【化１３０】
2004500388.tif 000083
ｂ）Ｎ，Ｏ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキル、アリール）ヒドロキシルアミン、Ｎ，Ｏ−ジ−（直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８）ヒドロキシルアミンおよびＮ，Ｏ−アリール，ヒドロキシルアミンからなる群から選択される置換ヒドロキシルアミンを用いて、以下の構造を有するアミドであって、
【化１３１】
2004500388.tif 000084
上式でＲ’およびＲ”がそれぞれ独立に直鎖状または分枝鎖状Ｃ１−８アルキルまたはアリールであるアミドを形成するのに適切な条件下で、グリコールイミドを処理する工程、
ｃ）化合物を形成するのに適切な条件下で、アミドと置換有機金属試薬を反応させる工程。
【００８３】
いくつかの実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルである。これまで及びここに記載した方法中で使用する化合物についての、他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。本発明の他の実施形態では、置換有機金属試薬が、ＭｅＭｇＢｒまたはＭｅＭｇＣｌを含めた（これらだけには限られないが）グリニャール試薬である。
【００８４】
図４中に示すように、本発明の一実施形態では、非対称アルキル化を使用して１８ケトンを提供した。このアルキル化は、３工程で２３から得た知られているＰＭＢ誘導体２４ｂからの、シリル化グリコレートの合成で始まる。いくつかの実施形態では、混合型無水物のｉｎ ｓｉｔｕでの形成を含む１つのフラスコ手順によって、２３をマルチグラム・スケールの２４ａに転換することができる。二ヨウ化物を用いて−７８℃で、リチオ２４ａを後で処理することによって、１つの異性体として所望の２５ａを得る。ＴＥＳ基を除去した後、Ｗｅｉｎｒｅｂアミド２６ａの形成を、キラル補助体の同時脱離、およびその後の保護によって行い、グリニャールを加えて１１を得る。
【００８５】
上記のケトンのいずれかの立体異性体に多量にアクセスする能力によって、以下に示すハロゲン化ビニルを多量に合成することも可能である。
【化１３２】
2004500388.tif 000085
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、ＺＡがＯＰ，ＳＰ，Ｎ３またはＮＨＰであり、Ｐが酸素、イオウまたは窒素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、またはポリマーである。
【００８６】
いくつかの実施形態では、ＺＡがＯＰであり、本発明の方法は以下のことを含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化１３３】
2004500388.tif 000086
上式でＲ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製すること、
ｂ）以下の構造：
【化１３４】
2004500388.tif 000087
を有するケトンとホスフィンオキシドを縮合させること、および
ｃ）任意に、化合物を形成するのに適切な条件下において工程ｂ）で形成されたエステルを還元すること。
【００８７】
本発明の他の実施形態では、ＺＡがＮ３またはＮＨＰであり、本発明の方法は以下のことを含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化１３５】
2004500388.tif 000088
上式でＲ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製すること、
ｂ）以下の構造：
【化１３６】
2004500388.tif 000089
を有するケトンとホスフィンオキシドを縮合させること、
ｃ）工程ｂ）で形成された化合物を適切な条件下で転化させてアジドを生成させるか、あるいは任意に、さらにアジドを処理して保護型アミンを生成させること。
いくつかの実施形態では、トンプソンの方法を使用して、本発明を実施する。他の実施形態では、シュタウディンガー還元によりアジドを還元して、保護型アミンを生成させる。
これまで及びここに記載するように、前に記載した方法をさまざまなエポチロンの類似体に適用することができることも理解されるであろう。たとえば、いくつかの実施形態では、Ｒ１が水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、アルキル、ヘテロアルキル、フェニル、４−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、４−オキサゾリル、３−インドリルまたは６−インドリルである。本明細書に記載するように、それぞれのこれらの置換基は１つまたは複数の部分で置換することができ、本明細書の実施例中に詳細に記載するように、Ｒ１が置換または無置換４−チアゾリルであり、いくつかの実施形態ではＲ１が、２−または５−位の１つまたは両方において１つまたは２つのメチル官能基で置換されている、チアゾリル部分を含むことも理解されるであろう。
【００８８】
本発明の一実施形態では、実施例１および２に詳細に記載するように、前に記載した方法を使用して、以下の構造を有する２１−ヒドロキシ類似体を合成する。
【化１３７】
2004500388.tif 000090
上式でＰが窒素保護基であり、Ｈａｌがハロゲンであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、またはヘテロアリールであり、ＲＡは出現するごとに独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、またはポリマーである。この方法は以下の工程を含む。
ａ）以下の構造を有するホスフィンオキシドであって、
【化１３８】
2004500388.tif 000091
上式でＲ０，Ｒ’およびＲ”が独立にＣ１−８直鎖状または分枝鎖状アルキル、または置換または無置換フェニル、アルコキシまたはアリールオキシであるホスフィンオキシドを調製する工程、
ｂ）以下の構造：
【化１３９】
2004500388.tif 000092
を有するケトンとホスフィンオキシドを縮合させる工程、および
ｃ）化合物を形成するのに適切な条件下で、工程ｂ）で形成されたエステルを還元する工程。
【００８９】
前に記載したハロゲン化ビニルおよび中間体のそれぞれについて、いくつかの実施形態では、ＰがＳｉＲＨＲＪＲＫであり、ＲＨ、ＲＪ、およびＲＫはそれぞれエチルであることが理解されるであろう。他の実施形態では、Ｒ６が直鎖状または分枝状、環式または非環式、置換または無置換脂肪族またはヘテロ脂肪族である。他の実施形態では、Ｒ６がメチル、エチル、ｎ−またはイソプロピル、フェニルまたはベンジルである。他の実施形態では、Ｈａｌがヨードである。
【００９０】
前に論じたように、本発明の他の態様では、Ｏ−アシル断片への新規な経路を提供し、その断片は以下の構造を含む。
【化１４０】
2004500388.tif 000093
上式でＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ９が水素または酸素またはイオウ保護基であり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール；直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、水素、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルである。前記方法は以下のことを含む。
以下の構造：
【化１４１】
2004500388.tif 000094
を有するケトアルデヒドを保護して保護型アルデヒドを生成させ、その後前記保護型アルデヒドを以下の構造：
【化１４２】
2004500388.tif 000095
を有する化合物と縮合を行うために適切な条件下で反応させて、以下の構造：
【化１４３】
2004500388.tif 000096
を有するアルドールを生成させ、保護されたアセタール基を加水分解して、以下の構造：
【化１４４】
2004500388.tif 000097
を有するケトアルデヒドを生成させ、前記ケトアルデヒドを第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で反応させ、任意にＣ３アルコールを保護して、ＺＢおよびＲ２〜Ｒ５が前で定義するものであり、以下の構造：
【化１４５】
2004500388.tif 000098
を有する化合物を生成させること。
【００９１】
いくつかの実施形態では、第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、化学量論的条件下で前記ケトアルデヒドをキラルエノラートチタンと反応させること含む。他の実施形態では、第２のアルドール反応を行うために適切な条件下で前記ケトアルデヒドを反応させる工程が、前記ケトアルデヒドを触媒試薬と反応させること含む。Ｃａｒｒｅｉｒａ触媒およびＭｉｋａｍｉのキラル・アルドール触媒だけには限られないが、これらを含めたさまざまな触媒試薬を使用することができることが理解されるであろう。たとえば、右翼セクターを構築するために、非対称アルドール反応（Ｄｕｔｈａｌｅｒ，Ｒ．Ｏ．；Ｈｅｒｏｌｄ，Ｐ．；Ｌｏｔｔｅｎｂａｃｈ，Ｗ．；Ｏｒｅｔｌｅ，Ｋ．；Ｒｅｉｄｉｋｅｒ，Ｍ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９８９，２８，４９５）を使用することができる。この方法では、以下のアルドール反応のために化学量論的キラル添加剤を使用した。
【化１４６】
2004500388.tif 000099
【００９２】
しかしながら一例では、以下の第１のスキームは、Ｃａｒｒｅｉｒａ触媒（Ｃａｒｒｅｉｒａ，Ｅ．Ｍ．；Ｓｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ａ．；Ｌｅｅ，Ｗ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４，１１６，８８３７）を使用する、触媒的なＭｕｋａｉｙａｍａタイプのアルドール反応を表す。シリルケトンアセタールおよびわずかな触媒装入（２〜５ｍｏｌ％）を使用するこの方法に関しては、ＥＥが一般的に高い。この場合、メチルエステルが生成され、水性塩基を用いる後のスズキカップリング後に、これを加水分解することができる。
【化１４７】
2004500388.tif 000100
【００９３】
使用することができる他の方法は、Ｍｉｋａｍｉのキラル・アルドール触媒（Ｍｉｋａｍｉ，Ｋ．；Ｍａｔｓｕｋａｗａ，Ｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４，１１６，４０７７）に基づく。このシリーズの触媒は容易に調製され、反応は一般に０℃で行われ、高いエナンチオ選択性が提供される。この方法によってチオエステルが生成され、後のスズキカップリング後に、これを容易に加水分解することができる。
【化１４８】
2004500388.tif 000101
【００９４】
ｄＥｐｏＢおよびｄＥｐｏＦ、およびそれらのいくつかの類似体に関する新規な方法を本明細書に記載しているが、この新規な方法を、オキサゾリニル、ピリジル、およびフェニル類似体および置換されたこれらの誘導体を含めた（これらだけに限られないが）広範囲の他の類似体を合成するために、使用することもできることが理解されるであろう。ホスフィンオキシドも、ｄＥｐｏＢおよびｄＥｐｏＦ前駆体化合物について本明細書に記載するように、本明細書に記載の適切なオキサゾリニル、ピリジル、およびフェニル出発原料、または他の類似体用の物質を使用して、調製することができることが理解されるであろう。本明細書に記載するように、これらのホスフィンオキシドをケトンと反応させ、そのケトンを多様化させて１２個の改変型類似体を生成させることもできる。本明細書に記載するように、本発明は、ケトン部分およびアシル・セクターの効率の良い調整的な合成を提供し、したがって、大環化前駆体を合成するために（スズキカップリングを介する）、適切なホスフィンオキシドを使用して、これらを使用することができる。さらに、調整ケトンを容易に生成する能力によりさまざまなＣ１２類似体の合成が可能であり、したがってこの方法により、合成の工程中に、１２−位およびアリールまたはヘテロアリール・セクターを同時に改変することが可能である。
【００９５】
したがって他の態様では、本明細書に記載の新規な方法を使用して、以下の一般構造を有する化合物を合成することができる。
【化１４９】
2004500388.tif 000102
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であるか、あるいはＸが水素である−ＣＹ＝ＣＨＸであるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、Ｙが水素、または直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、窒素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、炭素保護基、ポリマー、炭水化物、光アフィニティー標識、または放射性標識であり、ＭがＮＨまたはＯであり、ｎが０、１、２または３である。
【００９６】
一般に本発明の化合物は、以下のことによって調製される。
以下の構造を有する前駆体であって
【化１５０】
2004500388.tif 000103
上式でＲ１〜Ｒ６が前で定義するものであり、ＺＡがＯＲ７、ＮＨＲ８またはＮ３であり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、またはＲ１１が出現するごとに独立に水素、酸素保護基または窒素保護基である前駆体を提供することであって、前駆体を提供する工程は以下の構造
【化１５１】
2004500388.tif 000104
を有する第１の化合物を適切な条件下で以下の構造
【化１５２】
2004500388.tif 000105
を有する第２の化合物と反応させて、カップリングを行って前駆体を生成させ、
前記前駆体に適切な条件を施して大環化を行い、任意に脱保護して所望の化合物を生成させることをさらに含む。
【００９７】
以下に示す構造を有する本発明の前駆体が、本発明の方法に従い、本明細書に記載の新規なアシルおよびアルキル・セクターを使用して、一般的に調製されることが理解されるであろう。たとえば、前駆体：
【化１５３】
2004500388.tif 000106
上式でＲ１が水素であるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であるか、あるいはＸが水素である−ＣＹ＝ＣＨＸであるか、あるいは置換または無置換、直鎖状または分枝状、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリール置換脂肪族、またはアリール置換ヘテロ脂肪族であり、Ｙが水素、または直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に、水素、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、直鎖状または分枝状、置換または無置換アシル、アロイル、ベンゾイル、またはＳｉ（ＲＢ）３であり、ＲＢは出現するごとに独立に、置換または無置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒドによって任意に置換されている直鎖状または分枝鎖状アルキル、直鎖状または分枝状アルキルまたは環式アセタール、フッ素、ＮＲＣＲＤ、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノであり、ＲＣおよびＲＤがそれぞれ独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ６が独立に、水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、窒素保護基、酸素保護基、イオウ保護基、炭素保護基、またはポリマーであり、ｎが０、１、２または３であり、ＺＡがＯＲ７、ＮＨＲ８またはＮ３であり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、またはＲ１１が出現するごとに独立に水素、酸素保護基または窒素保護基である前駆体を、一般に以下のことによって調製する。
【００９８】
Ｒ１、Ｒ６およびＺＡが前で定義するものであり、以下の構造
【化１５４】
2004500388.tif 000107
を有する第１のセクターを提供すること、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が前で定義するものであり、ＺＢがＣＯ２Ｒ９またはＣＯＳＲ９であり、以下の構造
【化１５５】
2004500388.tif 000108
を有する第２のセクターを提供すること、
前記第１および第２のセクターをカップリングを行うために適切な条件下で反応させて、前駆体を生成させること。
【００９９】
いくつかの実施形態では、これまで及びここに記載するように、Ｒ１がＣＹ＝ＣＨＸであり、Ｘが２−位、５−位あるいは２−および５−位の両方において、直鎖状または分枝状アルキルによって置換されているか、あるいはｎが０〜５である−（ＣＨ２）ｎＯＨよって置換されている４−チアゾリルであり、Ｒ６が独立に水素、ＯＲＡ、ＳＲＡ、ＮＲＡＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、Ｃ（Ｏ）ＲＡ、ＣＯＮＨＲＡ、Ｎ３、Ｎ２ＲＡ、ハロゲン、環式アセタール、置換または無置換、環式または非環式、直鎖状または分枝状の脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリールであり、ＲＡが出現するごとに独立に水素、または直鎖状または分枝状、置換または無置換、環式または非環式、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール、またはポリマーである。
【０１００】
他の実施形態では、ＭがＮＨであり、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。他の実施形態では、ＭがＯであり、Ｒ６が２個以上の炭素原子を有する、置換または無置換、環式または非環式、分枝または非分枝脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。
【０１０１】
前に記載したように、いくつかの実施形態では、新規な方法を使用してマクロラクタム誘導体を調製し、したがって本発明の方法は、ＺＡがＮ３であるとき、適切な条件下でアジドを反応させて保護型アミンを生成させる工程を任意に含む。さらに本発明の方法は、前駆体化合物を脱保護して、遊離ヒドロキシ酸前駆体、またはアミノ酸前駆体を生成させる工程を任意に含み、したがってこれらの前駆体は、本明細書に詳細に記載するように、マクロラクタム化またはマクロラクタン化反応用の態勢ができている。さらに本発明は、環化化合物に脱保護の工程を施すことを企図し、適切な条件下で環化化合物を反応させて、本明細書に詳細に記載する光アフィニティー標識、放射性標識、炭水化物結合またはポリマー結合化合物を生成させることをさらに任意に企図する。
【０１０２】
機能性エポチロン類似体の合成
ここに示したように、２１−ヒドロキシの機能性化合物（または他の反応性類似体）の大量利用能力は、概してここに述べて権利主張した各々の類似体のさらなる機能化と合成のための足場を提供する。ここにある実施形態であるヒドロキシ置換型チアゾリニル誘導体（ｄＥｐｏＢに基づく）が提示されるけれども、以下に示したおよび本書に述べた各々の方法論は他の新規な類似体（例えばヒドロキシル置換型オキザゾリニル、ピリジルなど）に適用することも可能であり、それらの合成は総じて上記および本書で説明される。
【０１０３】
本発明のある実施形態では、標識化化合物が供給され、ある実施形態では光アフィニティー標識または放射性標識された化合物が供給される。様々な光親和性放射活性試薬が利用可能であることは理解されるであろう。例えば、本発明の一実施形態では、チューブリン二量体の中のエポチロン結合部位を探査するのに使用可能な（図５に示したような）光アフィニティー標識されたｄＥｐｏＦ３を生じるために、ＤＣＣの作用下で保護されていないｄＥｐｏＦと４−アジド−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸との縮合が実施される。アジド酸に代わって蛍光芳香族酸（例えばローダミン）が使用されると、結合反応はフルオロフォアを含んだ新規なエポチロン４を供給する。エポチロンの細胞内分布のモニタおよび結合の調査にとって蛍光エポチロンは特に有用である。
【０１０４】
ある実施形態では放射活性標識が利用される。ｓｅｃ−ヒドロキシル基の保護を使用しないで２１−ヒドロキシル基を機能化する能力は有意にＣ２１で効率的な置換を供給する。ｐ−トルエンベンゼンスルホニルクロリド（ｐ−ＴｓＣｌ）によるｄＥｐｏＦの処理はＣ−２１トシラート５の生成に利用することができる。それに続いてヨウ素で置換すると２１−ヨード−ｄＥｐｏＢ６が生じ、それをシアノ水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化トリブチルスズで還元してｄＥｐｏＢ（２ｂ）にすることができる。したがって、この順序はｄＥｐｏＦの選択的脱酸素化を介したｄＥｐｏＢの調製を構成する。付け加えると、水素化源としてトリチウム還元剤（例えばＮａＢＴ３ＣＮまたはｎ−Ｂｕ３ＳｎＴ）を使用するならば、放射性標識エポチロン（７，Ｔ−ｄＥｐｏＢ）を容易に生じることができる。もっと重要なことには、トシラート５またはヨウ化物６を使用する単純な置換反応によって様々な求核剤をＣ２１の位置に導入することができる。特に、上述したケトン合成にもやはり使用されてきた２１−アジド−エポチロン（６でＲ＝Ｎ３）のシュタウディンガー還元は２１−アミノ−エポチロン（Ｒ＝ＮＨ２）の新しい種類の利用を可能にする。
【０１０５】
Ｃ２１での選択的機能化がアシル化またはスルホニル化に限定されないことは理解されるであろう。例えば、保護されていないｄＥｐｏＦ（２ｄ）をＭｎＯ２の介在する酸化条件に直接晒すと図６に示したような２１−オキソ−エポチロンＢ（８）の高収率の形成という結果につながり、これは図７に示したようなさらなる機能化にとって有用な類似体である。
こうして、別の実施形態で、図７に示すように２１−オキソ系からエポチロン誘導体を利用することができる。ＮａＢＴ４（またはＮａＢＣＮＴ３、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｔ）によるアルデヒド８の単純な還元は放射性同位元素を９のようにｄＥｐｏＦ内に配置する。ウィーティッヒ型のオレフィン化反応が２１−アルキリデン−エポチロン１０を生じ、その後、それが化学選択的に水素化またはジヒドロキシル化されてそれぞれ１１および１２を生じることができる。場合によっては、アリールインジウム試薬の作用によって１２ｂを供給するために、水溶性溶媒中で保護されていないアルデヒド８にアリールのユニットを加えることは容易に可能である。１０および１２ｂのようにいったんアルケン機能が装備されると、引き続く添加反応に関与するその能力はさらに精巧なエポチロン誘導体を作製するのに利用することができる。例えば、選択的な水素化は１１を供給し、それは自然に生じるエポチロンＢ１０の「デオキシ」類似体を構成する。水素ガスを使用する代わりにＴ２を使用することによってトリチウムで放射性標識することもやはり可能である。一方、１２ａ（またはジヒドロキシル化された１２ｂ）は調剤化に利点をもたらす水溶性の類似体である。カルボン酸部分を備えた新規なエポチロン１３は亜塩素酸ナトリウムによるアルデヒド８の酸化を介して生じる。
【０１０６】
さらに別の実施形態では、アルデヒド８はアミンと反応させられ、脱水を介して対応するシッフ塩基１４が容易に生成される。シッフ塩基１４は２１−イミノ−エポチロン類似体を表わし、その生物学的活性は報告されないままである。特に、オキシム誘導体（１４でＲがヒドロキシまたはアルコキシ）は容易に端衛さえて簡単に取り扱いされる。ヒドラジンとの反応から誘導されるヒドラゾン（１４でＲ＝ＮＲ２）は２１−イミノ−エポチロンの別の安定な形である。引き続いてＮａＢＨ３ＣＮで還元するとイミン１４が２１−アミノ−エポチロン１５へと容易に変換される。この工程でアミノ酢酸メチルがアミンとして使用されると、優れた収率でＮ−ｄＥｐｏＢ−Ｇｌｙメチルエステルが産物として形成される。同じプロトコルを辿って、還元性アミン化にαアミノ酸またはオリゴペプチドを使用すると多くの潜在性の利点を有する新規なエポチロン−ペプチド共役体が供給される。
【０１０７】
最後に、アルデヒドにヒドラジンを加え、得られるヒドラゾンを引き続いて酸化すると２１−ジアゾ−エポチロン１６が生じる。チューブリンへのエポチロンの結合に関する詳細な情報が欠けていることを考慮すると、２１−ジアゾ系は適切な生物学的研究にとって光親和性プローブとして有用となるかもしれない。
【０１０８】
水溶性で多様に存在するエポチニン類似体の合成
本発明は付加的に治療薬剤のさらに効果的な供給を可能にするために本発明の化合物の調剤化および／または機能化を意図する。タキソールによる化学療法の１つの大きな問題は疎水性から生じる。その限界水溶性は発色団（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ）のようなそれら自体の危険性と管理点を有する調剤媒体に頼ることを必要とする。Ｃ２１でヒドロキシ置換することによりエポチロンに付与される比較的高い水溶性および付加的な増加はある程度の期待を示した。しかしながら、水溶性の溶媒中でエポチロンの調剤化を可能にする程度までエポチロンの水溶性がさらに増進されるならばそれはもっと望ましいことであろう。Ｃ２１機能化系による生物学的活性の維持は溶解度促進剤の結合の可能性を招く。この補助の促進剤は細胞の酵素によって切断および代謝され、それに付随してエポチロンが放出されることが予測される。
【０１０９】
ある実施形態では、本発明は図８に示すようにｄＥｐｏＦをＮ，Ｎ−ジメチルグリシンと反応させ、続いて塩化水素塩形成させることによって調製される新規な化合物を供給する。別の手法には、やはり図８に示したように無水アスパラギン酸の使用、２１−アミノ基による開環および穏やかな脱保護（Ｒ１＝Ｔｒｏｃ、Ｚｎ／ＡｃＯＨ）によるαアミノ基の遊離が含まれ、水溶性の増進を供給する両性イオンが生じる。
【０１１０】
別の実施形態では、Ｃ２１の官能基は水溶性を高めるための親水性の側鎖を有する様々なαアミノ酸またはペプチドの導入にとってそれら自体を足場として提供する。図９を参照すると、２１−ヒドロキシ−（２ｂ）または２１−アミノ化合物（１５）を使用して、Ｎ保護されたオリゴペプチドをＣ末端結合を介してエポチロン・セクターに結合させることができる。場合によっては、還元性のアミノ化およびペプチド結合はカルボキシ保護されたペプチドのアルデヒド８および酸１３それぞれへのＮ末端結合を可能にする。水溶性の増進に加えて、ペプチド−エポチロン共役体は腫瘍細胞を目標化する付加的な利点を供給する可能性がある。腫瘍細胞はしばしばペプチド・リガンドに対するある受容体を過剰発現するので、エポチロンに結合したペプチドを認識素子として利用することができる。こうして、リガンド−受容体の相互作用はペプチド−エポチロンを腫瘍細胞に案内し、細胞内取り込みを容易にすることができる。例えば、ソマトスタチンの断片はエポチロンをいくつかの腫瘍のタイプで頻繁に見受けられるソマトスタチン受容体過剰発現細胞へと供給するのに使用することができる。
【０１１１】
ペプチドとの共役に加えて、新規なグリコシル化によって水溶性エポチロン類似体の別の興味深い種類が生じる。グルカルエポキシドを使用するグリコシル化法の利点を活用すると、ある実施形態で、図１０に示すようにグルコースまたはラクトースをもつ２１−機能化エポチロンを容易に共役させることができる。この共役手法が還元端部にグリコシル供与体ユニットを呈示する様々なオリゴ糖に適用可能であることに留意すべきである。さらに別の実施形態では、図１１に示したように、直接の炭素−炭素結合を有するエポチロン炭水化物共役体を図示したようにして調製することができる。一実施形態では、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙジエンが使用され、ヘテロ−ディールス−アルダー反応が有効化される。
【０１１２】
別のある実施形態では、本発明は多価アレーの形成を意図する。細胞外リガンドの低親和性結合は多くのリガンドを一緒に共有結合でつないで多価アレーを形成することによって有意に向上させることができる。エポチロンの抗癌活性作用の開始は微小管への非共有結合を含むので、二量体の形成はリガンド（エポチロン）のバイオポリマー（微小管）への結合を促進する可能性がある。細胞内背景での多価の有効性は疑問ではあるが、微小管によって呈示される多数の結合部位はそのような利点の可能性を提供する。
【０１１３】
図１２に示したように、エポチロン二量体の調製はエポチロンの２つの半片を共有結合で連結することによって容易に実施することができる。機能性ハンドルとしてのＣ２１官能基の利点を活用すると、変化した長さ（ｎ＝０、１、２、３など）をもつα，ω二酸、ジアミン、およびジオールのようなつながりは単純な結合反応を介してエポチロンを結合することができる。細胞毒性の能力増進に加えて、エポチロン二量体を使用するチューブリン結合分析はチューブリン二量体または微小管のタキソール（エポチロン）結合部位に関する価値ある情報を供給するかもしれない。
【０１１４】
本発明の別の実施形態では、低分子のリガンド（エポチロン）と細胞内受容体（微小管）という背景での多価の概念はデンドリマーないしポリマー骨格上のエポチロンの多数存在によってより良く試験することができる。微小管に位置する多数結合部位と多数存在エポチロンとの間の相互作用は好都合な多価の状況を発生し、それによって抗癌活性の完璧な促進につながることがあり得る。上述したのと同じ共役プロトコルを辿ると、多数存在エポチロンはデンドリマーないしポリマーの骨格上で利用可能な官能基を使用して容易に合成することができる。図１２の例証は市販入手可能なＰＡＭＡＭ（Ｓｔａｒｂｕｒｓｔ（登録商標））デンドリマー（Ｘ＝ＣＯ２またはＮＨ）およびオクタペプチド（例えばグルタミン酸、リシン）上にある８つのエポチロンの存在である。
【０１１５】
本発明が付加的にバイオポリマーや生体適合性の（合成または自然に生じる）ポリマーのようなポリマーを介したエポチロンの投薬を意図していることは理解されるであろう。生体適合性ポリマーは生分解性と非生分解性に分類することができる。生分解ポリマーは化学組成、製造方法、および移植構造の関数として生体内で分解する。合成および自然ポリマーが使用可能であるが、より均一で再現性のある分解およびその他の物理的性質のせいで合成ポリマーが好ましい。合成ポリマーの範例には無水物重合体、乳酸重合体やグリコール酸重合体およびその共重合体のようなヒドロキシ酸重合体、ポリエステル、ポリアミド、ポリオルトエステル、およびいくつかのポリホスファゼンが含まれる。自然に生じるポリマーにはコラーゲン、ヒアルロン酸、アルブミンおよびゼラチンのようなタンパク質および多糖類が含まれる。エポチロンがバイオポリマーあるいは人工的な機能性ポリマーを介して投薬されると、巨大分子治療の生物学的利点を活用することが可能である。理想的なポリマー・マトリックスは疎水性、安定性、有機的可溶性、低融点、および適切な分解プロファイルの組み合わせであろう。付け加えるとこのポリマーは、身体のような水成環境に置かれたときに適切な期間にわたってその保全性を維持し、かつ使用前に長期間にわたって貯蔵されるのに充分に安定であるように疎水性であることもやはり好ましい。理想的なポリマーはまた、使用の間で崩壊したりまたは砕けたりしないように強固でなおかつ柔軟性があるべきである。
【０１１６】
様々な生分解ポリマーが本発明に使用可能であり、中でも、Ｎ−（ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、グルタミン酸、およびラクチド−リシン共重合体のような流行の官能基を含むもの（図１４に示す）は効率的な媒介物として役立つことができる。荷電した側鎖をもつポリペプチドは本来水溶性であるが、非極性ポリマーのケースではポリマー骨格とエポチロン類似体との間に共有結合で、溶解度促進剤として設計されたペプチド・リンカーを組み入れてもよい。ある実施形態では、ここに述べた化合物は、参考資料としてここでその全内容を取り入れた米国特許第５，９７７，１６３号に述べられているように、水溶性のキレート剤、あるいはポリエチレングリコール、ポリ（ｌ−グルタミン酸）ないしポリ（ｌ−アスパラギン酸）のような水溶性ポリマーに適切な機能を介して共役されてもよい。
【０１１７】
別のある実施形態で、樹状の中心の球上に多数のエポチロンを存在させる手法が図１５に例示されている。ＰＡＭＡＭ（Ｓｔａｒｂｕｒｓｔ（登録商標））上で半分を形成することから開始し、３，４−２カ所保護したグルカルが末端カルボキシル基に結合される。デンドリマーの生成に応じて、末端基の数（４、８、１６、３２など）および性質（ＣＯ２Ｎａ、ＮＨ２）は変えることができる。グルカルエポキシドをグリコシル化するプロトコルを使用して、エポチロンの２１−官能基（Ｘ＝Ｏ、Ｓ、ＮＨなど）と末端グルコースとの間のグリコシド結合が確立される。最終的なＣ３’およびＣ４’の保護基の脱保護は水溶性、デンドリマー上のエポチロンの多数存在を提供する。追加的な親水性が必要であるときは、単糖ではなくてオリゴ糖のユニットをグリコシル供与体としてデンドリマーの末端に結合させてもよい。
【０１１８】
医薬組成
上述したように、本発明は抗癌および抗増殖活性を有する新規な化合物を供給し、したがって本発明の化合物は癌の治療にとって有用である。したがって、本発明の別の態様では医薬組成が供給され、そこではこれらの組成は本書で述べたような化合物のいずれか１つを含み、場合によっては製薬品として許容される基剤を含む。ある好ましい実施形態では、場合によってはこれらの組成は１種または複数種の追加の治療薬剤をさらに含む。別のある実施形態では、追加の治療薬剤はここでさらに詳細に述べるような抗癌剤である。
【０１１９】
本発明のある化合物が治療のための遊離の形、あるいは製薬品として許容されるその誘導体として適切に存在することが可能であることもやはり理解されるであろう。本発明によると、限定はされないが製薬品として許容される誘導体には、製薬品として許容される塩、エステル、そのようなエステルの塩、または必要としている患者への投薬でここに述べた以外またはその代謝産物ないし残渣、例えばプロドラッグとしての化合物を直接的ないし間接的に供給できる何らかの別の付加化合物ないし誘導体が含まれる。
【０１２０】
ここで使用する「製薬品として許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などをなくしてヒトおよび下等動物の組織に接触させて使用するのに適し、かつ適度な利点／危険度比率に見合った塩を称する。製薬品として許容される塩は当該技術ではよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ他が、ここで参考のために取り入れたＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）に製薬品として許容される塩を述べている。これらの塩は本発明の化合物の最終的な単離および精製の間でイン・サイチューで調製されるか、または遊離塩基機能を適切な有機酸と反応させることによって別に調製されてもよい。医薬的に受容可能であって無毒の酸添加塩の範例は塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸のような無機酸、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸のような有機酸とアミノ基との塩、またはイオン交換のような当該技術で使用される別の方法を使用することによる塩である。その他の製薬品として許容される塩にはアジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンホル酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオネート、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、バレリアン酸塩などが含まれる。代表的なアルカリないしアルカリ土類金属塩にはナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。さらなる製薬品として許容される塩には、適切なら、非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム、およびハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩といった対イオンを使用して形成されるアミンのカチオンが含まれる。
【０１２１】
付け加えると、ここで使用する「製薬品として許容されるエステル」という用語は生体内で加水分解するエステルを称し、ヒトの体内で容易に分解して親化合物またはその塩を残すものを含む。適切なエステルのグループには、例えば、製薬品として許容される脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸から誘導されたものを含み、各々のアルキルまたはアルケニル部分は６個を超えない炭素原子を有すると有利である。特定のエステルの範例にはギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリル酸エステルおよびエチルコハク酸エステルが含まれる。
【０１２２】
さらに、ここで使用する「製薬品として許容されるプロドラッグ」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などをなくしてヒトおよび下等動物の組織に接触させて使用するのに適し、かつ適度な利点／危険度比率に見合っており、できれば本発明の化合物の両性イオン型と同様に、意図されたそれらの用途に効果的な本発明の化合物のプロドラッグを称する。「プロドラッグ」という用語は生体内で、例えば血液中の加水分解によって迅速に変換されて上記の式の親化合物生じる化合物を称する。綿密な考察はＴ．ＨｉｇｕｃｈｉとＶ．ＳｔｅｌｌａによるＰｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、およびＥｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編のＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７に供給されており、それらの両方をここで参考資料として取り入れている。
【０１２３】
上述したように、本発明の医薬的組成は製薬品として許容される基剤を付加的に含み、ここで使用するそれは、所望の特定の投薬に合わせて溶剤、希釈剤、またはその他の液体媒体、分散ないし懸濁補助、表面活性剤、等張剤、濃化剤ないし乳化剤、保存料、固体結合剤、潤滑剤などのいずれかあるいはすべてを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９７５）には医薬組成の調剤に使用する様々な基剤およびその調製のために知られている技術が開示されている。何らかの従来の基剤媒体が、何らかの不本意な生物学的効果ないしさもなければ医薬組成の他の何らかの成分と有害な方式で相互作用することなどで本発明の抗癌性化合物と相容れない場合を例外として、その使用は本発明の範囲内にあると意図される。製薬品として許容される基剤として役立つことのできる材料のいくつかの範例には、限定はされないが、ラクトース、グルコースおよびスクロースのような糖、コーンスターチおよびポテトスターチのようなデンプン、セルロースおよびその誘導体のカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテートなど、粉末トラガカントゴム、モルト、ゼラチン、タルク、ココアバターおよび坐薬ワックスのような賦形剤、ピーナッツオイルおよび綿実油のようなオイル、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびダイズ油、グリコール、プロピレングリコール類、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル、寒天、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのようなバッファ剤、アルギン酸、脱ピロゲン水、等張塩、リンゲル液、エチルアルコール、リン酸バッファ溶液、ならびにラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのようなその他の非毒性の適合潤滑剤が含まれ、同様に着色剤、解離剤、コーティング剤、甘味料、調味料および芳香剤、保存料および抗酸化剤もまた調剤者の判断に従って組成の中にあってもよい。
【０１２４】
化合物および製薬組成物の用途
さらに別の態様では、本発明の治療方法によると、腫瘍細胞はここに述べたような本発明の化合物ないし組成と前記腫瘍細胞を接触させることによって殺されるかまたは増殖を阻害される。したがって、本発明のさらに別の態様では、治療に有効な量で本発明の化合物または本発明の化合物を含む医薬組成を、それを必要とする被験体に投薬する工程を含む癌の治療方法が供給され、所望の結果を達成するのに必要な量と時間で為される。本発明のある実施形態では、本発明の化合物または医薬組成の「治療に有効な量」は腫瘍細胞の殺害または増殖阻害に有効な量である。本発明の方法によると、この化合物および組成は腫瘍細胞の殺害ないし増殖阻害に効果的ないかなる量および径路を使用して投薬されてもよい。したがって、ここで使用する「腫瘍細胞の殺害ないし増殖阻害に効果的な量」という表現は腫瘍細胞を殺すかまたは増殖を阻害するのに充分な薬剤量を称する。正確な必要量は被験体によって変わるもので被験体の種、年齢、および総合的な状態、感染のひどさ、特定の抗癌剤、その投薬モードなどによって決まる。本発明の抗癌性化合物は投薬の簡易性および投与の均一性のために投与ユニットの形で調剤されることが好ましい。ここで使用する「投与ユニット形」という表現は治療を受ける患者にとって適切な物理的に別々のユニットの抗癌剤を称する。しかしながら、本発明の化合物および組成の毎日の合計使用量が正常な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることは理解されるであろう。いかなる特定の患者ないし有機体のためのいかなる特異的な治療有効化投与レベルも治療する疾病および疾病の重篤度、使用される特異的化合物の活性、使用される特異的組成、患者の年齢、体重、総合健康状態、性別および食事、投薬時間、投薬径路、使用する特異的化合物の排出速度、治療期間、使用する特異的化合物と組み合わせるか同時に使用する薬剤、および医学技術でよく知られている類似因子を含めた様々な因子によって決まるであろう。
【０１２５】
さらに、所望の投与量で適切な製薬品として許容される基剤で調剤した後、本発明の医薬組成は経口、直腸経由、非経口、槽内経由、膣内経由、腹膜内経由、局所適用（粉末、軟膏、または滴下剤として）、頬内、口腔ないし鼻腔スプレーなど、治療する病気の重篤度に応じてヒトおよび他の動物に投薬されてもよい。本発明のある実施形態では、ここに述べた化合物は、参考資料としてここでその全内容を取り入れた米国特許第５，９７７，１６３号に述べられているように、水溶性のキレート剤、あるいはポリエチレングリコール、ポリ（ｌ−グルタミン酸）ないしポリ（ｌ−アスパラギン酸）のような水溶性ポリマーに適切な機能を介して共役されて調剤される。ある実施形態では、本発明の化合物は所望の治療効果を得るために約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇの患者の体重当たりの１日当たりの投与レベルを、１日に１回ないし複数回で経口ないし非経口で投薬されてもよい。
【０１２６】
経口投薬のための液体の投与形には、限定はされないが、製薬品として許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、この液体投与形は、例えば水ないし他の溶剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジル安息香酸、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（特に綿実油、ピーナッツ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、カストール油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物といった可溶化剤および乳化剤のような当該技術で一般的に使用される不活性な希釈剤が含まれてもよい。不活性希釈剤の上にさらに、経口用の組成はまた、湿潤剤、乳化および懸濁化剤、甘味料、調味料、および芳香剤をも含むことがある。
【０１２７】
注射可能な調製物、例えば、殺菌済みで注射可能な水性ないし油性の懸濁液は適切な分散ないし湿潤剤および懸濁化剤を使用して知られている技術に従って調剤することが可能である。殺菌済みで注射可能な調製物はまた、非毒性で非経口で受容可能な希釈剤または溶剤中の殺菌済みの注射可能溶液、懸濁液または乳濁液、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としてあってもよい。受容可能な媒体および溶剤のうちで使用できるものは水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐおよび等張塩化ナトリウム溶液である。付け加えると、殺菌済みの固定油が溶剤あるいは懸濁化媒体として広く使用される。この目的で、合成のモノまたはジグリセリドを含めたいかなるブランドの固定油も使用することができる。付け加えると、オレイン酸のような脂肪酸が注射可能な調製物で使用される。
【０１２８】
注射可能な調剤は、例えば、バクテリア保留フィルタを通す濾過によるか、または滅菌水ないし他の殺菌済み媒体に溶解ないし分散可能な殺菌固体組成の形で殺菌剤を使用前に取り込むことによって殺菌することができる。
【０１２９】
薬剤の効果を引き延ばすために、皮下注射または筋肉注射から薬剤の吸収を遅くすることがときには望ましい。これは水溶性の低い結晶質または非晶質物質の懸濁液体を使用することによって達成される可能性がある。そのとき、薬剤の吸収速度はその溶解速度によって決まり、それは今度は逆に、結晶のサイズおよび結晶形状によって決まる可能性がある。場合によっては、非経口注射薬剤形の遅い吸収は薬剤を油性の媒体に溶解または懸濁することによって達成される。注射可能なデポー製剤形はポリラクチド−ポリグリコリドのような生分解ポリマー中に薬剤のマイクロカプセルのマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬剤の比率および使用する特定のポリマーの性質に応じて、薬剤の放出速度を制御することができる。他の生分解ポリマーの範例にはポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー剤の注射可能調剤はまた、薬剤を身体組織と適合するリポソームあるいはマイクロエマルジョン中に捕捉することによっても調製される。
【０１３０】
直腸ないし膣投薬のための組成は、本発明の化合物をココアバター、ポリエチレングリコールないし常温では固体であるが体温で液体となってそれにより直腸や膣腔内で溶けて活性化合物を放出する座剤ワックスのような適切な非刺激性の賦形剤ないし基剤と混合することによって調製可能な座剤であることが好ましい。
【０１３１】
経口投薬のための固体投与形にはカプセル、タブレット、丸薬、粉末、および顆粒が含まれる。そのような固体投与形では、活性化合物はクエン酸ナトリウムないしリン酸二カルシウムのような少なくとも１つの不活性で製薬品として許容される賦形剤ないし基剤、および／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マニトール、および珪酸のようなフィラーないし増量剤、ｂ）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシアのような結合剤、ｃ）グリセロールのような希釈剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ポテトないしタピオカスターチ、アルギン酸、ある種の珪酸塩、および炭酸ナトリウムのような分解剤、ｅ）パラフィンのような溶解遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物のような吸収加速剤、ｇ）例えばセチルアルコールおよびグリセリンモノステアラートのような湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物のような潤滑剤と混合される。カプセル、タブレットおよび丸薬のケースでは、投与形はまたバッファ剤を含むことがある。
【０１３２】
類似したタイプの固体組成はまた、ラクトースないし乳糖のような賦形剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用してソフトおよびハード充填ゼラチンカプセル内でフィラーとして使用されることもある。タブレット、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒の固体投与形は腸溶コーティングおよび薬剤調剤技術でよく知られている他のコーティングのようなコーティングおよび外殻で調製されることがある。場合によってはそれらは乳白化剤を含むことがあり、また、腸管の一定の部分でだけかまたはそこを優先して、場合によっては遅延方式で活性成分を放出する組成であってもよい。組成を埋め込む使用可能な範例にはポリマー物質およびワックスが含まれる。類似したタイプの固体組成はまた、ラクトースないし乳糖のような賦形剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用してソフトおよびハード充填ゼラチンカプセル内でフィラーとして使用されることもある。
【０１３３】
この活性化合物はまた、上述の１つまたは複数の賦形剤でマイクロカプセル形状にされることもある。タブレット、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒の固体投与形は腸溶コーティングおよび薬剤調剤技術でよく知られている他のコーティングのようなコーティングおよび外殻で調製されることがある。そのような固体投与形では活性化合物はスクロース、ラクトースまたはデンプンのような少なくとも１つの希釈剤を添加されることもある。そのような投与形はまた、普通の慣例として、不活性希釈剤以外の添加物質、例えばタブレット形成用の潤滑剤およびステアリン酸マグネシウムおよび微結晶セルロースのような他のタブレット形成補助剤を含むこともある。カプセル、タブレットおよび丸薬のケースでは、投与形はまたバッファ剤をも含むことがある。場合によってはそれらは乳白化剤を含むことがあり、また、腸管の一定の部分でだけかまたはそこを優先して、場合によっては遅延方式で活性成分を放出する組成であってもよい。組成を埋め込む使用可能な範例にはポリマー物質およびワックスが含まれる。
【０１３４】
本発明の化合物の局所適用または経皮投薬のための投与形には軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、粉末、溶液、スプレー、吸入薬または貼付剤が含まれる。この活性化合物は殺菌条件下で製薬品として許容される基剤および何らかの必要な保存料ないしバッファを必要かもしれなければ添加される。眼用調剤、耳用滴下剤、眼用滴下剤もまた本発明の範囲内にあることが意図される。付け加えると、本発明は身体に化合物を制御しながら供給する追加的な利点を有する経皮貼付剤の用途を意図するものである。そのような投与形は適当な媒体中に本化合物を溶解または調剤することによって為され得る。皮膚を通過する化合物の流れを増大させるためにやはり吸収促進剤を使用することもある。この速度は速度制御用の膜を供給することによってもまたは化合物をポリマー・マトリックスないしジェルに分散することによっても制御することができる。
【０１３５】
上述したように、本発明の化合物は抗癌剤として有用であり、したがって腫瘍細胞の細胞死を有効化するかまたは腫瘍細胞の増殖を阻害することによって癌の治療に有用となり得る。概して、本発明の抗癌剤は癌および他の、限定はされないが、一例を挙げれば乳癌、子宮頚部癌、結腸および直腸癌、白血病、肺癌、メラノーマ、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、および胃癌を含めた他の増殖性障害の治療に有用である。ある実施形態では、本発明の抗癌剤は白血病細胞およびメラノーマ細胞に対して活性であり、したがって白血病（例えば脊髄性、リンパ球、骨髄球およびリンパ芽球性白血病）および悪性メラノーマの治療に有用である。さらに別の実施形態では、本発明の抗癌剤は充実性腫瘍に対して活性であり、やはり多剤耐性細胞（ＭＤＲ細胞）を殺し、かつ／または増殖を阻害する。
【０１３６】
本発明の化合物および組成が複合治療で使用され得ること、すなわち本化合物および医薬組成が１つまたは複数の他の望ましい治療薬ないし医療処置と同時、またはそれに先行して、あるいはそれに引き続いて投薬され得ることもやはり理解されるであろう。複合療法で使用される特定の治療組み合わせ（治療薬と処置）は望ましい治療薬および／または処置と、達成されるべき望ましい治療効果を考慮するものであろう。使用される治療が同じ疾病に所望の効果を達成すること（例えば本発明の化合物は別の抗癌剤と同時に投薬されてもよい）、または異なる効果を達成する（例えば何らかの副作用の制御）ことがあり得ることもまた理解されるであろう。
【０１３７】
例えば、本発明の本発明の抗癌剤と組み合わせて使用されるかもしれない他の治療ないし抗癌剤には外科手術、放射線治療（少しだが例を挙げると、γ放射線、中性子ビーム放射線治療、電子ビーム放射線治療、プロトン治療、短距離放射線療法、系統的放射活性同位元素）、内分泌治療、生物学的応答緩和剤（ほんの一部であるが挙げるとインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍致死因子（ＴＮＦ））、高体温および寒冷療法、何らかの副作用緩和剤（例えば制吐作用）、および限定はされないがアルキル化薬剤（メクロレタミン、クロラムブチル、シクロホスファミド、メルファラン、イフォスファミド）、代謝拮抗物質（メトトレキセート）、プリン・アンタゴニストおよびピリミジン・アンタゴニスト（６−メルカプトプリン、５−フルオロウラシル、シタラビル、ジェムシタビン）、スピンドル毒（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンオレルビン、パクリタクセル）、ポドフィロトキシン（エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソ尿素（カルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（シスプラチン、カルボプラチン）、酵素（アスパラギナーゼ）、およびホルモン（タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、およびメゲストロール）を含めた他の認可化学療法薬剤が含まれる。最新の癌治療のさらに包括的な考察については、（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を参照し、ＦＤＡ認可腫瘍薬剤のリストは（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ｄｒｕｇｌｉｓｔｆｒａｍｅ．ｈｔｍ）、およびここで参考のために全内容を取り入れたＴｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｖｅｎｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ．１９９９を参照されたい。
【０１３８】
さらに別の態様では、本発明はまた、本発明の医薬的組成の成分のうちの１つまたは複数で満たした１つまたは複数の容器を有する医薬パックないしキットをも供給し、ある実施形態では複合療法として使用するために追加の認可治療薬剤を含む。場合によっては、そのような容器に付随するものは医薬製品の製造、使用ないし販売を統括する政府機関によって通達される通告である可能性があり、その通告はヒトに投与するための製造、使用ないし販売の機関による認可を反映する。
【０１３９】
同等物
引き続く代表的な実施例は本発明を例証する手助けとなることを意図するものであり、それらが本発明の範囲を限定することを意図していなければまたそう解釈されるべきでもない。全くのところ、本発明の様々な変形、およびここに示して説明したものに加わるそのさらなる実施形態は、ここに引用した科学的および特許の文献に追従して参照する判例を含めて、本文書の全内容から当業者にとって明らかになるであろう。さらに、それら引用文献の内容が当該技術の状態を具体的に説明する補助としてここに取り入れられていることも理解されるはずである。以下の実施例は重要な付加的情報、例証および手引きを含んでおり、それらは様々な実施形態およびその同等例で本発明の実施に適合することが可能である。
【０１４０】
【実施例】
実施例１：スズキカップリング、ノヨリ還元およびマクロラクトン化による２１−ＯＨ ｄＥｐｏＢ（ｄＥｐｏＦ）の合成（図２、および図１６〜１８を参照）
１つの典型的な実施形態において、新規なエポチロン類似体である１２，１３−デスオキシエポチロンＦ（ｄＥｐｏＦ、２１−ヒドロキシ−１２，１３−デスオキシエポチロンＢ；図２）を、１２，１３−デスオキシエポチロンＢ（ｄＥｐｏＢ）の実用的合成、この合成は図１６〜１８に記載したが、この合成にて以前に使用した集中的戦略を用いて合成した。本明細書に更に詳細に記述したように、水への溶解性がより高くなるため、および適切な生物学的研究のための官能基化が容易になるため、付加的なヒドロキシル基を含む新規な類似体が他のエポチロン類に対して優位性があると評価されるであろう。
【０１４１】
１つの実施例において、本明細書で示したようにｄＥｐｏＢを調製するために使用した方法と同様の方法を用いてｄＥｐｏＦを合成した。ここで、２種のほぼ同等に複雑なフラグメントを重要な構成要素としていた（図２）。本明細書に記載したように、チアゾール成分の新規な合成のための手法を開発し、ｄＥｐｏＢのこれまでの合成に用いた右翼を、ｄＥｐｏＦ合成用のポリプロピオン酸ドメインのために使用した。
【０１４２】
本明細書に例示したように、知られている２−置換チアゾール（Ｃｉｕｆｏｌｉｎｉ，Ｍ．Ａ．；Ｓｈｅｎ，Ｙ．Ｃ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，６２，３８０４）をＴｒｏｃ基で保護し、これを後段の合成でＣ７ヒドロキシ保護で同時に除去することから左翼の合成を開始した（図１６）。エチルエステルをＤｉｂａｌ−Ｈでアルデヒドに還元し、そしてこれをアルデヒドにホモロゲートした。ブラウンプロトコル（Ｒａｃｈｅｒｌａ，Ｕ．Ｓ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｈ．Ｃ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，５６，４０１）によりアリール単位の不斉付加を行い、高い鏡像体過剰率（＞９５％）でＣ１５に（Ｓ）−立体配置を導入した。末端オレフィンを選択的にジヒドロキシル化した後、得られたジオールを開裂させ、アルデヒドを生成した。続いてヨードエチレニル化し、所望のヨウ化ビニルを単一の幾何異性体として得た（Ｓｔｏｒｋ，Ｇ．；Ｚｈａｏ，Ｋ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９８９，３０，２１７３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．他Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９４，３５，２８２７）。そして粗生成物を水酸化リチウムで直接処理し、実用的な収率でアルコールを得た。
【０１４３】
２種の重要なフラグメントをＰｄ触媒スズキカップリング反応により結合し、ジケトンを得た（図１７）（Ｍｉｙａｕｒａ，Ｎ．；Ｓｕｚｕｋｉ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１９９５，９５，２４５７；Ｍｉｙａｕｒａ，Ｎ．他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８９，１１１，３１４；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃ．Ｒ．；Ｂｒａｕｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９３，１１５，１１０１４）。その代りに、遊離のアルコールをカップリングに用いてアルコールを得、そしてこれをジケトンに再度変換することができた。ＴＢＳ基を除去した後、ジケトンを修飾したノヨリ触媒を用いてルテニウム触媒不斉水素化条件下に置いた（Ｉｋａｒｉｙａ，Ｔ．他Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９８５，９２２；Ｔａｂｅｒ，Ｄ．Ｆ．；Ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇ，Ｌ．Ｊ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９１，３２，４２２７）。驚くべきことに、所望のジオールが単一のジアステレオマーとして生成したけれども、Ｃ１５メチルエーテルがほぼ１：１の比で生成した。市販されているノヨリ触媒であるＲｕＣｌ２（ＢＩＮＡＰ）（Ｎｏｙｏｒｉ，Ｒ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９４，５０，４２５９）を用いると、主成分がＣ１６−Ｃ１７還元生成物である複雑な混合物が形成されることとなった。多くの異なる条件下でも、メチルエーテルの形成は回避できなかった。メタノール性ＨＣｌがＣ１５ヒドロキシ基の加溶媒分解を引き起こすことが考えられるので、溶媒としてエタノールを使用すると加溶媒分解プロセスが最小化されると期待された。ジオールの収率がいくらか高められるように、充分に長い反応時間および低い転化率で反応を行った。基質をジケトンからＣ１５ ＴＢＳエーテルに変更すると、限界まで向上した。これらの結果は、加溶媒分解によるこの種の生成物が観察されないｄＥｐｏＢの合成と極めて対照的である。
【０１４４】
触媒としてＥｔ２ＮＨ２［｛（ＢＩＮＡＰ）ＲｕＣｌ２｝２Ｃｌ３］（Ｏｈｔａ，Ｔ．他Ｏｒｇｎｏｍｅｔａｌ，１９９６，１９，１５２１；Ｎｏｙｏｒｉ，Ｒ．他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９８７，１０９，５８５６）を用いる不斉ノヨリ還元は、反応に存在する酸の量に依存することが知られている（Ｋｉｎｇ他Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，５７，６６８９）。ｄＥｐｏＢ合成の場合、Ｃ３での還元および良好なジアステレオ選択性の両方のため、化学量論量のＨＣｌの存在が必要であった（Ｈａｒｒｉｓ，Ｃ．Ｒ．他Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９９，１２１，７０５０）。化学量論量の酸を添加すると、チアゾール成分が明らかにプロトン化され、これによってルテニウム触媒の不活性化が阻害される。その代りに、このチアゾールのプロトン化は、加溶媒分解に潜在的に弱いＣ１５アリルアルコールを効果的に保護することができた。化学量論量のＨＣｌを用いてＣ２１置換誘導体の還元を行うことができた。しかしながら、加溶媒分解は２０モル％のＨＣｌでさえも進行し、このことは２−ヒドロキシメチル置換チアゾールはＨＣｌを除去するのに効果的な塩基ではないことを示している。この大きな反応性の差異は大部分が立体配置的な原因であるけれども、チアゾールへの置換は、遠隔アルコールの反応性に大きく影響する。
【０１４５】
全ての必要な立体中心を確立するために、ＴＥＳＯＴｆによってＣ３およびＣ１５アルコールを同時に保護することにより、ｔ−ブチルエステルを外した（図１８）。メタノール性ＨＣｌを用いてＣ１５ ＴＥＳ基を選択的に脱シリル化すると、ヒドロキシ酸が得られ、これは容易にマクロラクトン化される。山口のプロトコルによるマクロラクトン化では、完全に保護されたマクロラクトンが６０〜７０％の収率で得られた（Ｉｎａｎａｇａ，Ｊ．他Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９７９，５２，１９８９；Ｍｕｌｚｅｒ，Ｊ．他Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９２，２１５）。２つのＴｒｏｃ保護基の除去は、ヨウ化サマリウム（ＩＩ）（Ｅｖａｎｓ，Ｄ．Ａ．他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９０，１１２，７００１）または亜鉛の作用により良好な収率で行われた。最後に、Ｃ３ ＴＥＳ基を標準のＨＦ−ピリジン脱保護化して、１２，１３−デスオキシエポチロンＦを得た。
【０１４６】
実施例１のための実験：（図１６〜１８参照）
エステル（３Ｇ）。知られている２−（ヒドロキシメチル）チアゾール−４−カルボン酸エチル（３８．４ｇ、０．２０５ｍｏｌ）およびピリジン（４１ｍＬ、０．０５３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液に、０℃でクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（３２ｍＬ、０．２３ｍｏｌ）をゆっくり添加した。０℃で３０分間攪拌した後、ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）をゆっくり添加して反応物をクエンチした。有機層を分離し、そして水層をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ×２）で２回抽出した。合わせた有機抽出物を２ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）および食塩水で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、減圧下に溶媒を除去した。残留物をエタノール（５０ｍＬ）で処理して、淡黄色固体（３５ｇ）を得た。母液を濃縮し、クロマトグラフして、更なる量（３５ｇ）の生成物を得た（９５％）。
【ＮＭＲ１】
2004500388.tif 000109
【０１４７】
アルデヒド（４Ｇ）。エステル（２３ｇ、０．０６３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）溶液に、−７８℃で０．５時間かけてＤｉｂａｌ−Ｈ溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、１２０ｍＬ）を添加した。添加後、得られた混合物を冷凍庫（−７８℃）に置いた。１０時間後、過剰のＤｉｂａｌ−Ｈを酢酸（５ｍＬ）でクエンチし、懸濁が消えて透明な２相溶液になるまで、飽和酒石酸カリウムおよびナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）とともに混合物を攪拌した。有機層をＮａＨＣＯ３、食塩水で洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。真空下に溶媒を除去し、そして残留物をシリカゲルカラムでクロマトグラフして、所望のアルデヒドを淡黄色で粘着性のあるオイルとして得た（１６ｇ、８０％）。
【ＮＭＲ２】
2004500388.tif 000110
【０１４８】
アルデヒド（５Ｇ）。アルデヒド（２１ｇ、０．０６６ｍｏｌ）のベンゼン（３００ｍＬ）溶液に、２−（トリフェニルホスホラアニリデニル）プロピオンアルデヒド（２０．６ｇ、０．０６６ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を加熱還流した。３時間後、混合物を室温に冷却し、減圧下に濃縮した。ＳｉＯ２によるフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４：１）により精製し、透明オイルとして所望のアルデヒドを得た（２１ｇ、８９％）。
【ＮＭＲ３】
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【０１４９】
アルコール：不斉アリール化（６Ｇ）。アルデヒド（９．２０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）溶液を無水エーテル（５０ｍＬ）に溶解し、エーテル−液体窒素浴により−１００℃に冷却した。知られている方法により調製した（＋）−ジイソピノカンフェイルアリールボランのペンタン溶液（１．５当量、１５０ｍＬ）を、激しく攪拌したアルデヒド溶液に滴下添加した。添加を終えた後、反応混合物を１．５時間攪拌し、そして−５０℃に加温した。そして、３０％のＨ２Ｏ２（２０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）を添加し、得られた濁りのある混合物を８時間攪拌した。有機層を分離し、水層をエーテル（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１００ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝１０：１）により精製し、透明オイルとしてアルコールを得た（７．６５ｇ、７４％）。アルコールの鏡像体過剰率は、対応するＭｏｓｈｅｒのエステルに誘導体化することにより９５％と決定した。
【ＮＭＲ４】
2004500388.tif 000112
【０１５０】
シリルエーテル（７Ｇ）。方法Ａ：アルコール７（７．６５ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（１０ｍＬ、８５．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）混合物に、−７８℃でＴＢＳＯＴｆ（１５ｍＬ、０．０６６ｍｏｌ）を滴下添加した。添加後、反応混合物を室温に加温し、５時間攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れ、エーテル（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を２ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサンそしてヘキサン／酢酸エチル＝９５：５）により、無色オイルとしてＴＢＳエーテル９．３９ｇを得た（９５％）。
方法Ｂ：アルコール（８．５０ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（３．４０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）混合物に、ＴＢＳＣｌ（４．７２ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）および４−ＤＭＡＰ（３０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で８時間攪拌した後、混合物をエーテル（２５０ｍＬ）で希釈し、２ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。ＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィにより、ＴＢＳエーテル１１．０ｇを得た（９７％）。
【ＮＭＲ５】
2004500388.tif 000113
【０１５１】
アルデヒド（８Ｇ）。ジヒドロキシル化。オレフィン（２０．６ｇ、０．０４０ｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（ＴＨＦ中５０％、１０ｍＬ、０．０４８ｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（２１ｍＬ）のｔ−ＢｕＯＨ（１５５ｍＬ）溶液に、０℃でＯｓＯ４溶液（ＴＨＦ中１重量％、２０．３ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を添加した。１２時間攪拌した後、Ｎａ２ＳＯ３（〜１０ｇ）および水（５ｍＬ）を添加し、得られた溶液を３０分間攪拌した。そして、混合物をエーテル（１００ｍＬ×３）で抽出し、そして食塩水で洗浄した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去し、そしてシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、無色粘稠性オイルとして１：１ジアステレオマーのジオール混合物１８．８ｇを得た（８５％）。
【ＮＭＲ６】
2004500388.tif 000114
【０１５２】
アルデヒド形成。方法Ａ：ジオール（１８ｇ、０．０３２ｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（８．６７ｇ、０．０８１ｍｏｌ）のベンゼン（５００ｍＬ）懸濁液に、０℃で５分間かけて四酢酸鉛（１９．１ｇ、０．０４３ｍｏｌ）を数度に分けて添加した。１５分間攪拌後、混合物を４：１ヘキサン−酢酸エチル混合物を用いてシリカゲルのショートパッドにより濾過した。減圧下に溶媒を除去して、所望のアルデヒド１４ｇを得た（８２％）。
【０１５３】
方法Ｂ：ジオール（１１．８ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１００ｍＬ）溶液に、０℃で四酢酸鉛（９５％、１２．５ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を数度に分けて添加した。得られた黄色懸濁液を１時間激しく攪拌し、その時点でのＴＬＣ分析は出発物質が完全に消費されたことを示していた。そして反応混合物を１：１エーテル／ヘキサン混合物を用いてシリカゲルのショートパッドにより濾過した。濾液を濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィにより精製して、淡黄色オイルとしてアルデヒド７．９５ｇを得た（７２％）。
【ＮＭＲ７】
2004500388.tif 000115
【０１５４】
ヨウ化ビニル（９Ｇ）。ヨウ化エチルトリフェニルホスホニウム（７．９０ｇ、１７．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）懸濁液に、周囲温度でｎ−ブチルリチウム（７．１７ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ、１７．９４ｍｍｏｌ）を添加した。固体成分がなくなった後、この赤色溶液を−７８℃で激しく攪拌しながらヨウ素（４．５４ｇ、１７．９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に添加した。得られた暗褐色懸濁液を５分間攪拌し、ゆっくり−３０℃に加温した。ヘキサメチルジシラジドナトリウム溶液（１７．３４ｍＬ、ＴＨＦ中１．０Ｍ、１７．３４ｍｍｏｌ）を懸濁液に滴下添加し、暗赤色溶液を得た。そして、アルデヒド８Ｇ（３．１０ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液をゆっくり添加し、−３０℃で３０分間攪拌し続けた。反応混合物をペンタン（１０００ｍＬ）で希釈し、セライトパッドにより濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝６：１）により精製し、シロップとしてヨウ化ビニル１．５０ｇを得た（３８％）。
【ＮＭＲ８】
2004500388.tif 000116
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【０１５５】
ヨウ化ビニル（９Ｇｂ）。ヨウ化（エチル）トリフェニルホスホニウム（５．０５ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）懸濁液に、周囲温度でヘキサメチルジシラジドナトリウム溶液（１２ｍＬ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を添加した。５分間攪拌後、暗赤色溶液を−７８℃に冷却し、−７８℃でヨウ素（３．０２ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に激しく攪拌しながらカニューレし、暗褐色懸濁液を得た。５分後、ヘキサメチルジシラジドナトリウム溶液（１１ｍＬ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を添加し、得られた赤色溶液を０．５時間攪拌した。アルデヒド（３．１２ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液をカニューレにより添加し、混合物を１時間かけて−２０℃に加温し、その時点でのＴＬＣ分析は出発アルデヒドが完全に消費されたことを示していた。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（０．５ｍＬ）およびヘキサン（５０ｍＬ）を添加して反応物をクエンチし、得られた沈殿物をシリカゲルのショートパッドで濾過した。濾液を減圧下に濃縮し、淡黄色オイル４．０５ｇを得た。
【０１５６】
上記のように得た粗製の混合物をＴＨＦ水溶液（１：１、１０ｍＬ）に溶解した。そして、水酸化リチウム１水和物（０．５１０ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、そして得られた混合物を攪拌した。４時間後、２相溶液を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル＝３：１）で精製し、淡黄色オイルとしてアルコール１．７８ｇを得た（６１％）。
【ＮＭＲ９】
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【０１５７】
１５−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−３−ケトン（微量の互変異性体＊）（１１Ｇ）。９−ＢＢＮダイマー（０．７７４ｇ、６．３４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、トリカルボニル（２．８０ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を添加した。２５℃で１時間攪拌した後、ＴＬＣ分析は出発オレフィンが完全に消費されたことを示していた。
【０１５８】
ヨウ化ビニル（３．２５ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）、（ｄｐｐｆ）ＰｄＣｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（０．３７０ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）、ＡｓＰｈ３（０．１３９ｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２．２１ｇ、６．７８ｍｍｏｌ）を含む分離フラスコに、脱ガスしたＤＭＦ（５ｍＬ）を添加した。得られた赤色懸濁液を２０分間アルゴンガス気流でパージした。水（２ｍＬ）を上記調製したボラン溶液に添加し、１０分間攪拌をし続けて過剰の９−ＢＢＮをクエンチした。そして、アルキルボラン溶液を、臭化ビニルを含む溶液に激しく攪拌しながら素早く添加した。２時間後、反応混合物をエーテル（５０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ×２）および食塩水で洗浄し、そして無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、粗生成物をヘキサン／酢酸エチル（１０：１）で溶出させるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製し、淡黄色で粘り気があるオイルとして生成物３．２６ｇを得た（６５％）。
【ＮＭＲ１０】
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【０１５９】
１５−ヒドロキシ−３−ケトン（鈴木生成物、微量の互変異性体＊）（１２Ｇ）。ＴＢＳエーテル（０．２６５ｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を、２５℃でＭｅＯＨ中０．５ＮのＨＣｌ（２５ｍＬ）に溶解した。反応物をＴＬＣによりモニターして反応の完結を見た。２時間後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２５ｍＬ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、そして無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。アルコールをヘキサン／酢酸エチル（２：１）で溶出させるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製し、無色粘稠性オイルとして純粋なアルコール（０．１９８ｇ、８４％）を得た。
【ＮＭＲ１１】
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【０１６０】
３，１５−ジオール（ノヨリ生成物）（１３Ｇ）。ジケトン（０．３０２ｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）を２５℃でＭｅＯＨ中０．１２ＮのＨＣｌ（３．５ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）に溶解した。そして、Ｅｔ２ＮＨ２［｛（Ｒ）−（ＢＩＮＡＰ）ＲｕＣｌ｝２Ｃｌ３］触媒（ＴＨＦ中０．０４８Ｍ、０．０３４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＰａｒｒ装置に移した。容器を１０分間Ｈ２でパージし、そして１，２００ｐｓｉ（約８．３ＭＰａ）に加圧した。２５℃で８時間後、反応物を大気圧に戻し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）に注ぎ入れた。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。生成物混合物をヘキサン／酢酸エチル（２：１）で溶出させるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィにより分離し、透明なオイルとしてより極性の低いメチルエーテル０．１５２ｇ（４９％）および緑色で粘り気があるオイルとしてより極性の高いヒドロキシエステル０．１２６ｇ（４２％）を得た。
【ＮＭＲ１２】
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【０１６１】
１５−ヒドロキシ酸（１４Ｇ）。ジオール（０．４９５ｇ、０．５３１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に、−７８℃で２，６−ルチジン（０．８７０ｍＬ、７．４７ｍｍｏｌ）およびＴＥＳＯＴｆ（０．８４０ｍＬ、３．７２ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を−７８℃で０．５時間攪拌し、そして３時間かけて室温に加温した。室温で８時間攪拌した後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）に注ぎ入れた。有機層を分離し、緩衝剤溶液（２０ｍＬ、ｐＨ＝７）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下に濃縮した後、粗生成物を次の反応条件に適用した。
【０１６２】
粗製のビス（トリエチルシリル）エーテルをＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、そして０℃に冷却した。反応をＴＬＣによりしっかりモニターしながら、ＭｅＯＨ中０．１ＮのＨＣｌ溶液（２．２ｍＬ）を添加した。メタノール性ＨＣｌは少しずつであり、完結するためにおよそ５ｍＬの０．１ＮのＨＣｌが必要であった。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で希釈し、緩衝剤（１０ｍＬ、ｐＨ＝７）で洗浄し、そして無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、粗生成物をシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）で精製し、無色の粘り気があるオイルとして酸０．３７０ｇを得た（７０％）。
【ＮＭＲ１３】
2004500388.tif 000123
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【０１６３】
７，２１−ビス（２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル）−３−トリエチルシリルオキシ−１２，１３−デスオキシエポチロンＦ（１５Ｇ）。トリエチルアミン（０．３６０ｍＬ、２．６０ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリクロロ安息香酸（０．５２８ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を、ヒドロキシ酸（０．４２６ｇ、０．４３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９．０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で１５分間攪拌し、そしてトルエン（４０ｍＬ）で希釈した。得られた溶液を注射器に取り出し、あらかじめ調製しておいたＤＭＡＰ（０．５２５ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）のトルエン（４００ｍＬ）溶液に３時間かけてシリンジポンプにより添加した。添加を終えた後、反応物を１時間攪拌し、そしてセライトのショートパッドで濾過した。濾液を真空下に濃縮し、そしてＳｉＯ２でのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２１：１）により、白色発泡体として所望のマクロラクトン０．１９６ｇを得た（６４％）。Ｍｐ７１．７〜７２．９℃。
【ＮＭＲ１４】
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【０１６４】
３−トリエチルシリルオキシ−１２，１３−デスオキシエポチロンＦ（１６Ｇ）。方法Ａ：サマリウム金属（１２６ｍｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）およびヨウ素（１７０ｍｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）混合物を、２時間還流下激しく攪拌した。この間、反応混合物は暗オレンジ色からオリーブグリーン色、そして深青色になった。深青色溶液を室温に冷却し、そして触媒量のヨウ化ニッケル（２．６ｍｇ、０．００８３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で５分間攪拌した後、混合物を−７８℃に冷却した。マクロラクトン（８１．５ｍｇ、０．０８３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液をＳｍＩ２／ＮｉＩ２溶液にカニューレし、そして１時間攪拌し続けた。−４０℃で２時間攪拌した後、反応混合物を１ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）水溶液および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空下に留去した後、シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィし（ヘキサン／酢酸エチル＝２：１）により、無色のオイルとしてジオール４５．３ｍｇを得た（８７％）。
【０１６５】
方法Ｂ：活性化亜鉛粉末（０．２６１ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）の酢酸（２ｍＬ）懸濁液に、室温でマクロラクトン（０．１９６ｇ、０．２０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０ｍＬ）溶液を添加した。１．５時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、コットンプラグで濾過して、過剰の亜鉛を除去した。そして濾液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、フラッシュカラムクロマトグラフィにより粗生成物を精製し、無色の粘り気があるオイルとしてジオール０．１０８ｇを得た（８６％）。
【ＮＭＲ１５】
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【０１６６】
１２，１３−デスオキシエポチロンＦ（ｄＥｐｏＦ）（２Ｇｄ）。トリエチルシリルエーテル（８２ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）をポリエチレン容器中ＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、氷浴中０℃に冷却した。得られた溶液を、ＴＬＣによりしっかりモニターしながらＨＦ−ピリジン（１．５ｍＬ）で処理した。０℃で１時間そして室温で０．５時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）に注ぎ入れた。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）と１ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）との水溶液および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。ヘキサン／酢酸エチル（１：２）混合物を用いるシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィにより、白色発泡体としてデスオキシエポチロンＦ６１ｍｇを得た（９１％）。
【ＮＭＲ１６】
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【０１６７】
２−エトキシカルボニル−４−クロロメチル（チアゾール）（３Ｈ）。アミノチオキソ酢酸エチル（０．１４５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）および１，３−ジクロロアセトン（０．１３８ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）のアセトン（２ｍＬ）中１：１混合物を２４時間加熱還流した。暗褐色溶液を室温に冷却し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、残留物をヘキサン−酢酸エチル（３：１）で溶出させるシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィにより精製し、淡黄色で粘り気があるオイルとしてチアゾール３Ｈ０．１８７ｇを得た（８３％）。
【ＮＭＲ１７】
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【０１６８】
２−エトキシカルボニル（チアゾール）−４−メチルジフェニルホスフィンオキシド（４Ｈ）。塩化物（２．６５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１３ｍＬ）溶液に、ジフェニルホスフィンオキシド（３．１３ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５．８８ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）および触媒量のヨウ化テトラブチルアンモニウム（９５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を室温で４８時間攪拌した。ＴＬＣ分析により出発クロリドが完全に消費されたことが示された後、反応混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５０ｍＬ）を含む分液漏斗に注ぎ入れ、塩化メチレン（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル−塩化メチレン＝１：１）により精製し、僅かに粘稠性のオイルとしてウィッティッヒ試薬３．２８ｇを得た（６８％）。
【ＮＭＲ１８】
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【０１６９】
ヨウ化ビニル６Ｈ。ウィッティッヒ試薬（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、−７８℃でヘキサメチルジシラジドリチウム（ＴＨＦ中１．０Ｍ、０．１５ｍＬ）を滴下添加した。初期の淡黄色溶液が直ちに深赤色溶液に変色した。１０分後、ケトンのＴＨＦ溶液をカニューレにより赤色溶液にゆっくり添加した。添加を終えた後、反応混合物を０．５時間かけて０℃に加温し、その時点でのＴＬＣ分析は反応が完結していることを示していた。混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５ｍＬ）に注ぎ入れ、エーテル（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（ヘキサン−酢酸エチル＝２０：１）により精製し、無色オイルとしてエチルエステル５２ｍｇを得た（８０％）。
【ＮＭＲ１９】
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【０１７０】
アルコール７Ｈ。水素化リチウムアルミニウム（４．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のエーテル（０．５ｍＬ）スラリーに、０℃でエチルエステル（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）溶液を滴下添加した。添加後、反応混合物を室温に加温し、２時間攪拌した。そして混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５ｍＬ）に注ぎ入れ、エーテル（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（ヘキサン−酢酸エチル＝５：１）により精製し、透明オイルとしてアルコール２４ｍｇを得た（５０％）。
【ＮＭＲ２０】
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【０１７１】
グリコールイミド１０Ｈａ。０℃に冷却したＰＭＢ−保護化イミド（９．２３ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（９０ｍＬ）溶液に、ＴｉＣｌ４（５．０５ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間攪拌し、その後ジイソプロピルエチルアミン（３．５３ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を滴下添加し、１時間攪拌し続けた。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチし、ジクロロメタン（３×６０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を食塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、透明オイルとしてグリコールイミド１０Ｈａ（５．５ｇ、８７％）を得た。
【０１７２】
グリコールイミド１１Ｈ。グリコールイミドＸ（４．７５ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（１．６５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）続いてＴＥＳＣｌ（３．３５ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１２時間攪拌した。そして溶液をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、透明オイルとしてＴＥＳ−保護化グリコールイミド１１Ｈ（５．９３ｇ、８４％）を得た。２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中Ｒｆ＝０．３３。
【ＮＭＲ２１】
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【０１７３】
アルキル化グリコールイミド（１２Ｈ）。ＴＥＳ−保護化グリコールイミド１１Ｈ（１．１１ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。ＬＨＭＤＳ（１．０ＭのＴＨＦ溶液、３．５０ｍｍｏｌ）を滴下添加し、−７８℃で３０分間攪拌した。１，３−ジヨード−３−ブテン（１．０８ｇ、３．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、冷却したエノレートにカニューレにより添加し、その後溶液を１２時間かけて室温にゆっくり加温した。溶液を飽和ＮａＣＯ３溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、淡黄色オイルとしてアルキル化グリコールイミド１２Ｈ（１．２７ｇ、８１％）を得た。２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中Ｒｆ＝０．４７。
【ＮＭＲ２２】
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【０１７４】
アルキル化ＴＥＳ−保護化Ｎ，Ｏ−ジメタミド（１２Ｈａ）。アルキル化ＴＥＳ−保護化グリコールイミド１２Ｈ（５．２９ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を、ＨＯＡｃ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３：１：１、１５０ｍＬ）に溶解し、室温で４時間攪拌した。そして溶媒を真空下に除去した。オイル状残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＣＯ３（２×５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。この物質を更には精製せずに引き続く反応に用いた。Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．８７ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に懸濁させ、０℃に冷却した。ＡｌＭｅ３のトルエン１．０Ｍ溶液（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を滴下添加した。添加を終えた後、氷浴を除去し、溶液を室温で２時間攪拌した。そしてこの溶液を０℃で粗製のアルキル化グリコールイミド（上記調製したもの）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液にカニューレした。添加を完結した後、氷浴を除去し、混合物を室温で６時間攪拌した。反応物を１Ｎの酒石酸溶液（１００ｍＬ）を添加してクエンチし、１時間攪拌した。有機層を除去し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（２０％アセトン／ヘキサン）により、透明オイルとしてＮ，Ｏ−ジメチルアミド１２Ｈａ（２．６７ｇ、２工程で９１％）を得た。４０％アセトン／ヘキサン中Ｒｆ＝０．４２。
【ＮＭＲ２３】
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【０１７５】
ＴＥＳ−保護化Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド（１３Ｈ）。Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド１２Ｈａ（２．５３ｇ、８．４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、イミダゾール（０．６９ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）続いてＴＥＳＣｌ（１．４０ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で５時間攪拌した。そして溶液をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１５％アセトン／ヘキサン）により、黄色オイルとしてＴＥＳ−保護化Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド１３Ｈ（３．３９ｇ、９７％）を得た。４０％アセトン／ヘキサン中Ｒｆ＝０．６６。
【ＮＭＲ２４】
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【０１７６】
ＴＥＳ−保護化メチルケトン（１４Ｈ）。０℃に冷却したＴＥＳ−保護化Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド１３Ｈ（３．２７ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍＬ）溶液に、メチルマグネシウムブロミド（ジエチルエーテル中３．０Ｍ、２３．７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で１５分間攪拌し、そして飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）でクエンチした。有機層を除去し、水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１５％アセトン／ヘキサン）により、黄色オイルとしてＴＥＳ−保護化メチルケトン１４Ｈ（２．７２ｇ、９３％）を得た。２０％アセトン／ヘキサン中Ｒｆ＝０．３５。
【ＮＭＲ２５】
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【０１７７】
ヒドロキシケトン（１７Ｈ）。ケトン１６Ｈ（３．１０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）溶液を−１７℃に冷却し、ＨＭＤＳ（１０．０ｍＬ、４７．４ｍｍｏｌ）そしてＴＭＳＩ（５．５ｍＬ、３８．６ｍｍｏｌ）で順次処理した。得られた黄色懸濁液を５分後室温に加温し、３時間磁気攪拌し、その後反応混合物をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、そして冷却した飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔ２Ｏ（２×５０ｍＬ）で逆抽出した。合わせたＥｔ２Ｏ抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。得られた黄色オイルを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０１７８】
ＡＤ−混合−α（１６．４９ｇ）およびＯｓＯ４（１．５５ｍＬ、０．１５２ｍｍｏｌ）の１：１ｔ−ＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（１２４ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、粗製のシリルエノールエーテルで処理した。２時間後、反応物を飽和Ｎａ２ＳＯ３（１００ｍＬ）でクエンチし、室温に加温し、そして１時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（５：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により、透明オイルとして１７Ｈ（１．６０ｇ、全４８％）を得た。
【ＮＭＲ２６】
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【０１７９】
ＴＥＳ−保護化ヒドロキシケトン（１４Ｈ）。ヒドロキシケトン１７Ｈ（１．３８３ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を、イミダゾール（０．８２２ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＳＣｌ（１．００ｍＬ、５．９５ｍｍｏｌ）で処理した。３時間後、反応物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ２Ｏ（１×２０ｍＬ）および食塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（２０：１（Ｒ）５：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により、透明オイルとして１４Ｈ（１．７２ｇ、８６％）を得た。
【０１８０】
実施例２：還元型にカップリングするためのアシル部位の導入および右翼および左翼を合成するための新規な方法によるデスオキシエポチロンＦの合成
他の実施形態において、図１に示すようにおよび本明細書に詳述したように、ｄＥｐｏＦの全合成を行った。特に、使用した合成技術の効果を改良する試みにおいて、有望な抗ガン剤であるｄＥｐｏＦの新規でかつ改良された全合成を、（スズキカップリングの後にノヨリ還元を行うよりは）既に還元されたＣ３とスズキカップリングさせるためのアシル部位を用いて開発した。この試みとの関連において、アシルおよびアルキル部位の両方に対する、より収束したおよびモジュラー経路を開発した。新規な合成は、それぞれの工程で強い立体選択性を持って収束したおよびモジュラー性質戦略を特徴としている。主要な中間体を合成することが簡便であるため、大量調製が容易であり、それぞれの合成セグメントにおいて構造上の変更が簡単である。
【０１８１】
より特異的には、ｄＥｐｏＦのＯ−アルキル翼の合成のために、ホーナー様縮合により、チアゾール成分と臨界のＣ１５立体化学および（Ｚ）−１２，１３−アルケン官能基を有するセグメントとを好都合に結合した。Ｏ−アシル翼への途中である立体選択的アルドール反応を詳細に調べた。図１９に描写するように、遷移状態に影響する要因を微妙に変化させると、立体化学情報を長期に伝達することに顕著な影響があることが示された。これらの研究において（Ｗｕ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２０００，３９，４５０５〜４５０８も参照のこと）、この全ての内容は参照により本明細書に取り込まれるが、アルドール縮合における成分の立体化学的整合性の関わり合いを動力学的レベルで調査した。共有結合形成における分子認識が重要性であるという顕著な例は、反応速度分割により示されてきた。図１９に描写するように、Ｏ−アシル翼１６の合成において、適切な順序でケトアルデヒド１９とアセテート２０およびアルデヒド１１とを立体選択的アルドール反応させると、関連するキラル中心での立体配置を制御しながら必要な炭素単位を組み立てることができると考えられた（図１８参照）。初期のアルドール生成物（ＡまたはＢ）の立体中心は、このシナリオにおいて、後期のアルドールプロセスによりＣ−Ｃ結合を形成する際のジアステレオ選択性に強く影響すると信じられていた。遷移状態に影響する要因を微妙に変化させると、立体化学情報を長期に伝達することに顕著な影響があることも示した。
【０１８２】
ポリプロピオン酸領域のＳＡＲマップにおいて高い程度の不耐性が見られ、多くの類似体が入手できるために広範な適応可能中間体として、新規なＯ−アシル翼フラグメントを用いることが出来る。より詳細に記載したように、ｄＥｐｏＦを生体外および生体内での両方で評価すると、本化合物は極めて有望な抗ガン剤活性を示した。
【０１８３】
上述のような一般的合成法に加えて、本発明は更に、２種の独立した方法によりメチルケトン１１を調製する新規な方法を提供する。最初の方法は、Ｃ１５中心を導入する触媒的不斉酸化方法、および（Ｚ）−アルケン幾何を導入するためのアルキンのヨードホウ素化を含む（図３）。図３に示したように、本発明の１つの実施形態において、プロピン（１７）をβ−ヨード−９−ＢＢＮと反応させ、得られたビニルボランをメチルビニルケトンに添加し、ケトン１８を得た。続いて本化合物をＴＭＳＩ／ＨＭＤＳと処理して、２種のシリルエーテルのレジオ異性体１９および２０の８８：１２混合物を得た。ＡＤ−混合−αを用いて混合物を不斉ジヒドロキシル化を行い、５５％収率および８７％鏡像体過剰率でヒドロキシケトン２１を得た。オスミウムで媒介されるジヒドロキシル化の間、潜在的に弱いヨウ化アルケン官能基が耐えうることができることは注目すべきである。最後に、２５のトリエチルシリル化により１８が得られ、たった４工程で手順が完結した。
【０１８４】
本発明の更に他の実施形態において、Ｃ１５立体配置を確立する不斉アルキル化反応を含む経路（図４）を検討した。炭素−炭素結合形成は、求核剤としてキラルなグリコレートエノレートを用いると効果的であり、必要であった（Ｚ）−２，４−ジヨード−２−ブテン（２２）は２−ブチン−４−オールから容易に調製できた。あらかじめ、アルキル化によるよりは「キラルなエノレート」（すなわち、補助のアシル基を有するもの）の酸化により、グリコレートの不斉合成を行った。一般的なタイプ２４のグリコレートのアルキル化を含む実施例は、強固なＯ−保護基を必要とする傾向にあった。よって、これらのアルキル化にシリル保護した２４を用いる可能性を調べた。シリル化されたグリコレートの合成は、３工程で２３から得られる、公知のＰＭＢ誘導体２４ｂを出発物として行った。他の実施形態において、系内での混合無水物の形成を含む１フラスコ方法により、２３を数グラムスケールで２４ａに変換できた。続いて、−７８℃でリチオ２４ａをジヨード２２で処理して、所望の２５ａを単一の異性体（９８％以上のジアステレオ選択性）として良好な収率で得た。ある実施形態において、ＴＥＳ官能基を保護化剤として優先的に使用し、２４ａの不斉アルキル化を数グラムスケールでごく普通に行い、光学的に純粋な２５ａを得ることができた。ＴＥＳ基を除去した後、ワインレブアミド２６ａの形成は、キラルな補助基が同時に解離し、続いて保護化およびグリニャール付加により影響を受け、１１が得られた。
【０１８５】
上記模範的な実施形態に記載したように、必要なケトン１１を調製した後、完全な左翼成分の調製を行った。特に、図２０に示すように、チオオキサミド酸エチル（３１）を１，３−ジクロロアセトン（３２）と縮合させて、優れた収率で２，４−二置換チアゾール３３を得た。そして、Ｐｈ２ＰＯＥｔを用いるアルブゾフ反応またはＨＯＰＰｈ３を用いる直接Ｐ−アルキル化によるある実施形態において、３５は効果がある。ＬＨＭＤＳで処理すると、チアゾール３４およびケトン１１は円滑に縮合し、単一の幾何異性体として３５が得られた。最後に、エステル３５をＤｉｂａｌ−Ｈで還元して、アルコール３６が得られ、これをＴｒｏｃ基で保護して、所望のＯ−アルキル部分８を得た。この新規な経路は、１０の一次変換を含む従来の手法より極めて短くかつより収束的である。
【０１８６】
Ｏ−アシルフラグメントへの新規な合成経路
定量的にＯ−アルキル構成要素８をうまく調製したので、Ｏ−アシルフラグメント９への経路の開発に興味を移した。前述のように、我々が以前の合成に使用したセグメントを用いると（実施例１参照）、ノヨリ還元の間Ｃ１５で加溶媒分解の問題が発生する。よって、スズキカップリングの前にＣ３カルビノール中心を確立することに、多くの改良点が集中した。１つの実施形態において、不斉レフォルマトスキー反応（式１、表１）を実現するという試みを検討した。キラルなアミノアルコール３９の存在下、臭化酢酸ｔ−ブチルの「亜鉛酸塩」をケトアルデヒド１３に付加反応させた（Ｓｏａｌ他Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．，１９９４，１２５７、Ｓｏａｌ他Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１９９２，９２，８３３）。本反応により優れた収率で期待するアルドール付加物が生成し、それゆえ、エナンチオ選択性は合成的に価値があるレベルに達していなかったが（エントリー１および２）、本反応は多くの他の２つの炭素求核剤に適応できると評価される。反応温度を下げるにつれ、エナンチオ選択性は大きく向上するので、反応は効果的ではない転化率に問題ある方法であった（エントリー３）。
【０１８７】
更に他の実施形態において、酢酸ｔ−ブチルから誘導したキラルなチタンエノレートの反応により、立体制御を行った。文献のプロトコル（Ｄｕｎｔｈａｌｅｒ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，１９８９，２８，４９５）に従い、β−ヒドロキシｔ−ブチルエステル３７の両方のエナンチオマーを高いエナンチオ選択性で良好な収率で調製した（エントリー４および５）。鏡像体過剰率および絶対立体選択性の感覚を、３７を対応するＭｏｓｈｅｒエステルに誘導体化することにより決定し、我々のプログラムでの現象により実証した（Ｄａｌｅ他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７３，９５，５１２参照）。
【化１５６】
2004500388.tif 000139
【０１８８】
【表１】
2004500388.tif 000140
【０１８９】
高いエナンチオ過剰率で３７を得る方法を見出したので、２重の立体区別アルドール反応を検討した（β−ヒドロキシケトン類のアルドール反応の例として、Ｌｕｋｅ他Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，６０，３０１３；Ｅｖａｎｓ他Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９３，３４，６８７１、ＭｃＣａｒｔｈｙ他Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９８７，５２，４６８１）。求核剤として保護化された３７を用いるために、両方のエナンチオマーのアルドール付加物を、対応するＴＥＳエーテル鏡像異性体３８に変換した。反応に関し、同じアルドール反応に３８のチタンエノラートを用いた（Ｅｖａｎｓ他Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９０，１１２，８２１５）。実際、（Ｓ）−３８および（Ｒ）−３８の両方がアルドール縮合し、ジアステレオマー混合物が適切な収率で得られた（図２２）。それぞれの反応で得られる主要なジアステレオマーの立体化学は、Ｃ８よりもＣ３の立体配置が、新たに形成されたＣ６およびＣ７中心の立体配置に大きな効果を有することを示していた。
【０１９０】
本明細書に記載した研究の過程において、立体化学情報を長期に伝達するための微妙な変化を検討するために、本明細書に記載したアルドール反応の過程において他の研究を行った。リチオアルコキシエノレートの場合、適合したシリーズを支持する大きな動力学的有利性が示されてきたことを確定した。これらの発見は、立体化学バイアスの長期間転移の他の例に適用できると認められるであろう。これらの結果を議論するために、Ｗｕ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２０００，３９，４５０５〜４５０８を参照のこと。この全体の内容は参照により本明細書に取り込まれる。
【０１９１】
それゆえ、ある他の実施形態において、引き続く「基質−方向性」および「試薬−制御性」アルドール反応により、Ｃ６、Ｃ７およびＣ３での必要な立体配置が得られるという、９への代りの方法を探索した（図２２）。
【０１９２】
この目標に向かって、ケトアルデヒド１３をジイソプロピルアセタールとして保護し、得られたケトン４９を１４とアルドール反応させた。４９をＬＤＡで脱プロトン化し、そして１４と反応させると、縮合が円滑に進行し、アルドール付加物５０と５１との４：１混合物が得られた。主要なジアステレオマー５０を、フラッシュクロマトグラフィにより極めて容易に分離し、Ｔｒｏｃ基として保護した。実際、Ｃ３がエノールエーテルに相当した初期の場合と異なり、アルドール縮合が完結するという、本ルートに重要な効果があった。さらに、これまでの合成では−１２０℃よりも−７８℃でカップリングが行われているので、反応条件は科学技術的により要求が少ない。
【０１９３】
図２２を参照するように、酸触媒下５０ｂのジイソプロピルアセタール基を加水分解すると、ケトアルデヒド５２が得られ、これは第２のアルドール反応のためになる。式１に示すようにグルコースより誘導された補助を用いる同じ「チタノ」ｔ−ブチルエステル法に従い、所望したＣ３（Ｓ）５３を高いジアステレオ選択性（ｄｒ＞２０：１）で得た。Ｃ３アルコールをシリル基で保護して、Ｏ−アシル翼９およびＴＢＳ誘導体５４が得られ、このスペクトルおよびクロマトグラフ性質は、これらの実験室での他のプログラムから以前に得られた物質と同一であった。
【０１９４】
そして、図２３に示したように、ｄＥｐｏＢの形式的な全合成に、新たに調製した９を利用した。ＥｐｏＢシリーズ５８においてＯ−アルキルセグメントとβ−アルキルスズキカップリングさせ、５９を得た。続いて、５９をＴＥＳＯＴｆで処理した後、選択的に脱シリル化し、ヒドロキシ酸６０を得た。これは我々の以前の合成にてｄＥｐｏＢ（２ｂ）およびＥｐｏＢ（１ｂ）に誘導した。したがって、これらの研究により明らかに、多くのアルドール反応の立体化学成果およびｄＥｐｏＢに代わりうる全合成の構成を確立した。アシル部位における「酢酸チタン」を基礎とするＣ３Ｓへの経路または以前に行った次期鈴木経路（Ｃ３ケト→Ｃ３Ｓヒドロキシ）は、経済性の問題およびスケールアップし易さに依存して利用できる。
【０１９５】
最終的に、これらの研究結果をｄＥｐｏＦの全合成に適用した。上記説明したように、本化合物の全合成をより改良することは、臨床評価を前進させるために重要である。
【０１９６】
図２４に示したように、フラグメント８および９をβ−アルキル鈴木プロトコルにより結合し、ｓｅｃｏエステル６２を得た。ｔ−ブチルエステル６２をＴＥＳエステルに変換した後、酸触媒による選択的脱シリル化を行い、６３が得られ、これをマクロラクトン化した。この点において、スペクトルの相関を詳細に取ると６３は以前に合成した中間体と一致することを確認した。我々の以前の合成で使用したのと同様の手順に従い、ヒドロキシ酸６３を環化して、全体が保護されたマクロラクトン６４を得た。最終的に、ＴｒｏｃおよびＴＥＳ基を連続的に除去して、１２，１３−デスオキシエポチロン（２ｄ、ｄＥｐｏＦ）を得、これは以前に合成したｄＥｐｏＦと全ての面で再び一致していることが分かった。
【０１９７】
ｄＥｐｏＦの合成を完結するとともに、１２，１３−アルケンでエポキシ化することによりエポチロンＦ自身（１ｄ、ＥｐｏＦ）の合成も確立した（図２５）。合成ｄＥｐｏＦを２，２−ジメチルジオキシラン（ＤＭＤＯ）で処理して、天然の立体化学を有する１２，１３−エポキシドが形成し、ＥｐｏＦを得た。分光学的データおよび観察された［α］Ｄ（ｃ、ＭｅＯＨ）は、天然のＥｐｏＦによく一致していた（Ｈｏｆｌｅ他Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，１９９９，３８，１９７１）、［α］Ｄ（ｃ、ＥｔＯＨ）。２１−ヒドロキシル基はｄＥｐｏＢの水溶性を２．５倍向上させることも分かった（Ｓｗｉｎｄｅｌｌ他Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，３４，１１７６）。加えて、更なる官能基化のための中間点として有用であることが分かった。ＤＣＣの作用のもと、非保護化ｄＥｐｏＦをアジド酸６５と縮合させて、光親和性で標識したｄＥｐｏＦ６６を得た。チューブリン−結合アッセイでは、ｄＥｐｏＦはｄＥｐｏＢの活性を９０％維持していることを示しているので、アロイル化誘導体６６はチューブリン重合を引き起こさず、それゆえ、チューブリン−結合に効果的なチアゾール領域の微妙な性質が強調された。
【０１９８】
その抗ガン能を評価するために、全合成ｄＥｐｏＦについてまずは多くの細胞タイプを試験した。表２に示すように、ｄＥｐｏＦは、広範囲の高感度および耐性ガン細胞株に対して高い細胞毒性活性を示した。特に、ｄＥｐｏＦは、ＭＤＲ細胞株に対して高い有効性と低い交差耐性を維持しており、パクリタキセル、ビンブラスチン、エトポシド、アクチノマイシン、およびアドリアマイシンなどの他の非エポチロン抗ガン剤より確実に優れていた。ｄＥｐｏＦのこれらの特性は、極めて有望な抗ガン剤であるｄＥｐｏＢの特性に非常に匹敵している。
【０１９９】
【表２】
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【０２００】
実施例２のための実験
概要。全ての市販されている物質は、他に断らない限り、更には精製せずに使用した。以下の溶媒を乾燥溶媒システムから得、更には乾燥せずに使用した：ＴＨＦ、ジエチルエーテル、塩化メチレン、トルエンおよびベンゼン。事前に精製した乾燥アルゴンガスの陽圧下に全ての反応を行った。１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、それぞれ３００または４００、および７５または１００ＭＨｚでＣＤＣｌ３溶液中記録した。Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０ Ｆ２５４プレートで分析的薄層クロマトグラフィを行い、Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０（４０〜６３μｍ）またはシグマＨ−型シリカゲル（１０〜４０μｍ）上で、示した溶媒を用いてフラッシュクロマトグラフィを行った。
【０２０１】
【化１５７】
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化合物２５。ケトン２２（３．１０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７０ｍＬ）溶液を−１７℃に冷却し、ＨＭＤＳ（１０．０ｍＬ、４７．４ｍｍｏｌ）そしてＴＭＳＩ（５．５ｍＬ、３８．６ｍｍｏｌ）で順次処理した。得られた黄色懸濁液を５分間かけて室温に加温し、３時間磁気攪拌し、その後反応混合物をエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、そして冷飽和１０％ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍＬ）で洗浄した。水層をエーテル（２×５０ｍＬ）で逆抽出した。合わせたエーテル性抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。得られた黄色オイルを更には精製せずに次の工程に用いた。
【０２０２】
ＡＤ−混合−α（１６．４９ｇ）およびＯｓＯ４（１．５５ｍＬ、０．１５２ｍｍｏｌ）の１：１ ｔ−ＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ（１２４ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、粗製のシリルエノールエーテル２３で処理した。２時間後、反応物を飽和Ｎａ２ＳＯ３（１００ｍＬ）でクエンチし、室温に加温し、そして１時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（５：１ヘキサン／酢酸エチル）により、透明オイルとして２５を得た（１．６０ｇ、全４８％）。
【ＮＭＲ２７】
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【０２０３】
【化１５８】
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化合物１８。ヒドロキシケトン２５（１．３８ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を、イミダゾール（０．８２２ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＳＣｌ（１．００ｍＬ、５．９５ｍｍｏｌ）で処理した。３時間後、反応物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ２Ｏ（１×２０ｍＬ）および食塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（２０：１から５：１＝ヘキサン／酢酸エチル）により、透明オイルとして１８を得た（１．７２ｇ、８６％）。
ＴＥＳ保護化Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド３０ｂ（３．２７ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したＴＨＦ（８０ｍＬ）溶液に、メチルマグネシウムブロミド（ジエチルエーテル中３．０Ｍ、２３．７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で１５分間攪拌し、そして飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）でクエンチした。有機層を除去し、そして水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１５％アセトン／ヘキサン）により、黄色オイルとしてＴＥＳ−保護化メチルケトン１８を得た（２．７２ｇ、９３％）。２０％アセトン／ヘキサン中Ｒｆ＝０．３５。；
【ＮＭＲ２８】
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【０２０４】
【化１５９】
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化合物２８ａ。方法Ａ。ＰＭＢ−保護化イミド２８ｂ（９．２３ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（９０ｍＬ）溶液に、ＴｉＣｌ４（５．０５ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で５分間攪拌し、その後ジイソプロピルエチルアミン（３．５３ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を滴下添加し、そして１時間攪拌し続けた。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチし、ジクロロメタン（３×６０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を食塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、透明オイルとして非保護化グリコールイミドを得た（５．５０ｇ、８７％）。得られた化合物（４．７５ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（１．６５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）続いてＴＥＳＣｌ（３．３５ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１２時間攪拌した。そして溶液をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、透明オイルとしてＴＥＳ−保護化グリコールイミド２８ａを得た（５．９３ｇ、８４％）。
【０２０５】
方法Ｂ。機械攪拌機および窒素注入口を装備した２Ｌの三つ口フラスコに、水素化ナトリウム（６０％分散液、８．０ｇ、０．２００ｍｏｌ）およびエーテル（４００ｍＬ）を添加した。この懸濁液に、０℃でグリコール酸（１５．２１ｇ、０．２００ｍｏｌ）を数回に分けて添加した。２０分後、トリエチルアミン（３０ｍＬ、０．２１５ｍｏｌ）およびＴＥＳＣｌ（３０．１５ｇ、０．２００ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した後、ピバロイルクロリド（２４．６ｍＬ、０．２００ｍｏｌ）を注射器によりゆっくり添加し、１時間攪拌し続けた。ＴＨＦ（４００ｍＬ）中２７（１７．７ｇ、０．１００ｍｏｌ）を含む分離フラスコに、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、４０ｍＬ、０．１００ｍｏｌ）をゆっくり添加した。０．５時間攪拌した後、混合物を上記調製した懸濁液に激しく攪拌しながらカニューレした。混合物を２時間かけて室温に加温し、１０％ＮａＨＳＯ４（５００ｍＬ）に注ぎ入れた。有機層を分離し、水層をエーテル（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＨＣＯ３および食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、そして濾過した。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１５：１）により精製し、透明オイルとして２８ａを得た（１２．８５ｇ、３８％）。２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中Ｒｆ＝０．３３。
【ＮＭＲ２９】
2004500388.tif 000147
【０２０６】
【化１６０】
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化合物２９ａ。ＴＥＳ−保護化グリコールイミド２８ａ（１．１１ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。ＬＨＭＤＳ（１．０ＭのＴＨＦ溶液、３．５０ｍｍｏｌ）を滴下添加し、−７８℃で３０分間攪拌した。１，３−ジヨード−３−ブテン（２６、１．０８ｇ、３．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、カニューレにより冷却したエノレートに添加し、その後溶液を１２時間かけて室温にゆっくり加温した。溶液を飽和ＮａＣＯ３溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、淡黄色オイルとしてアルキル化グリコールイミド２９ａを得た（１．２７ｇ、８１％）。２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中Ｒｆ＝０．４７。
【ＮＭＲ３０】
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【０２０７】
【化１６１】
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化合物３０ａ。アルキル化ＴＥＳ−保護化グリコールイミド２９ａ（５．２９ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）をＨＯＡｃ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３：１：１、１５０ｍＬ）に溶解し、室温で４時間攪拌した。そして溶媒を真空下に除去した。オイル状の残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＣＯ３（２×５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮して、２９ｂを得た。この物質は更には精製をせずに続く反応に使用した。
【０２０８】
Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．８７ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に懸濁し、０℃に冷却した。ＡｌＭｅ３のトルエン（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）１．０Ｍ溶液を滴下添加した。添加を終えた後、氷浴を除去し、溶液を室温で２時間攪拌した。そしてこの溶液を、０℃で粗製のアルキル化グリコールイミド２９ｂ（上記調製した）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液にカニューレした。添加を終えた後、氷浴を除去し、混合物を室温で６時間攪拌した。１Ｎの酒石酸溶液（１００ｍＬ）を添加することにより反応物をクエンチし、１時間攪拌した。有機層を除去し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（２０％アセトン／ヘキサン）により、透明オイルとしてＮ，Ｏ−ジメチルアミド３０ａを得た（２．６７ｇ、２工程で９１％）。
【ＮＭＲ３１】
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【０２０９】
【化１６２】
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化合物３０ｂ。Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド３０ａ（２．５３ｇ、８．４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、イミダゾール（０．６９ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）続いてＴＥＳＣｌ（１．４０ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で５時間攪拌した。そして溶液をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。そして溶液を濾過し、真空下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（１５％アセトン／ヘキサン）により、黄色オイルとしてＴＥＳ−保護化Ｎ，Ｏ−ジメチルアミド３０ｂ（３．３９ｇ、９７％）を得た。
【ＮＭＲ３２】
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【０２１０】
【化１６３】
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２−エトキシカルボニル−４−クロロメチル（チアゾール）、（３４）。アミノチオキソ酢酸エチル（１２．２ｇ、９１．６ｍｍｏｌ）および１，３−ジクロロアセトン（１３．４ｇ、１０５ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）混合物を２時間加熱還流した。褐色溶液を室温に冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（トルエン−酢酸エチル＝９：１）により精製し、淡黄色で粘り気があるオイルとしてチアゾール３４を得た（１８．１ｇ、９６％）。
【ＮＭＲ３３】
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【０２１１】
【化１６４】
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２−エトキシカルボニル（チアゾール）−４−メチルジフェニルホスフィンオキシド、（３５）。塩化物３４（８．４０ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（６０ｍＬ）溶液に、ジフェニルホスフィンオキシド（９．１０ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１６．３ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブ（４オングストローム、約０．５ｇ）および触媒量のヨウ化テトラブチルアンモニウム（１５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を室温で４８時間攪拌した。そして反応混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５０ｍＬ）を含む分液漏斗に注ぎ入れ、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル−塩化メチレン＝１：１）により精製し、僅かに粘稠性のシロップとしてホーナー試薬３５を得た（１２．４８ｇ、８２％）。
【ＮＭＲ３４】
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【０２１２】
【化１６５】
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化合物３６。ケトン１８（５．４５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）およびホスフィンオキシド３５（８．２０ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）混合物に、−７８℃でヘキサメチルジシラジドリチウム溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ、１８ｍＬ）を滴下添加した。初期の淡黄色溶液が徐々に深赤色に変色した。室温で１０時間攪拌した後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、エーテル（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（ヘキサン−酢酸エチル＝４０：１から１０：１）により精製し、無色オイルとしてエチルエステル３６を得た（４．０１ｇ、５２％）。
【ＮＭＲ３５】
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【０２１３】
【化１６６】
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化合物３７。エチルエステル３６（４．０１ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、０℃でＤｉｂａｌ−Ｈ溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ、１９ｍＬ）を添加した。添加後、反応混合物を室温に加温した。２時間攪拌した後、１．０Ｍロシェル溶液（１００ｍＬ）およびエーテル（５０ｍＬ）を反応混合物に添加し、得られた懸濁液を室温で２時間攪拌し、この時点で透明な相が分離してきた。有機相を分離し、水相を更なるエーテル（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空下に濃縮した。シリカゲルカラムでのカラムクロマトグラフィ（ヘキサン−酢酸エチル＝５：１）により精製し、透明オイルとしてアルコール３７を得た（３．６０ｇ、９８％）。
【ＮＭＲ３６】
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【０２１４】
【化１６７】
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化合物１５。アルコール３７（３．４０ｇ、７．０９ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．２ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に、０℃でクロロギ酸２，２，２−トリクロロエチル（１．８０ｇ、８．５０ｍｏｌ）をゆっくり添加した。３０分間攪拌した後、１０％ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）を添加して反応物をクエンチし、エーテル（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物を２ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。シリカゲルカラム（ヘキサン−酢酸エチル＝２０：１）により精製して、淡黄色オイルとしてＴｔｏｃエーテル１５を得た（３．９３ｇ、８５％）。
【ＮＭＲ３７】
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【０２１５】
【化１６８】
2004500388.tif 000165
１，１−ジイソプロピルオキシ−２，２−ジメチル−３−ペンタノン（５０）。ケトアルデヒド１９（６．４０ｇ、５０ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（１００ｍＬ）溶液に、オルトギ酸トリイソプロピル（１６．７ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）およびｐ−ＴｓＯＨ（９５１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３時間攪拌した後、食塩水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、エーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し、そして真空下に濃縮して、淡黄色液体として５０を得た（１０．１２ｇ、８８％）。：
【ＮＭＲ３８】
2004500388.tif 000166
2004500388.tif 000167
【０２１６】
【化１６９】
2004500388.tif 000168
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−１，１−ジイソプロピルオキシ−５−ヒドロキシ−２，２，４，６−テトラメチル−８−ノン−３−オン（５１ａ）。ＬＤＡ（１５．７０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、−７８℃でケトン５０（３．２９ｇ、１４．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を−７８℃で０．５時間攪拌し、そして−４０℃に加温した。−４０℃で０．５時間攪拌した後、−７８℃に再び冷却した。そして、アルデヒド１１の塩化メチレン溶液（２．２ｍＬ、７３％、１６．３６ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃で１時間攪拌した後、反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１２ｍＬ）でクエンチし、室温に加温した。水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（２％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製し、５１ａ（３．０６ｇ、６５％）および５２ａ（０．７４ｇ、１６％）を共に無色オイルとして得た。
【ＮＭＲ３９】
2004500388.tif 000169
【０２１７】
【化１７０】
2004500388.tif 000170
（４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−１，１−ジイソプロピルオキシ−５−ヒドロキシ−２，２，４，６−テトラメチル−８−ノン−３−オン（５２ａ）。分析値：
【ＮＭＲ４０】
2004500388.tif 000171
2004500388.tif 000172
【０２１８】
【化１７１】
2004500388.tif 000173
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−１，１−ジイソプロピルオキシ−５−ヒドロキシ−２，２，４，６−テトラメチル−５−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−８−ノン−３−オン（５１ｂ）。５１ａ（３．００ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に、０℃でＴｒｏｃＣｌ（２．５０ｍＬ、１８．２６ｍｍｏｌ、２．０当量）およびピリジン（２．９５ｍＬ、２６．５ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。混合物を５時間攪拌した。そして、食塩水（２０ｍＬ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（２％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製して、５１ｂ（４．５８ｇ、９９％）を得た。：
【ＮＭＲ４１】
2004500388.tif 000174
【０２１９】
【化１７２】
2004500388.tif 000175
（４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−１，１−ジイソプロピルオキシ−２，２，４，６−テトラメチル−５−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−８−ノン−３−オン（５２ｂ）。５１ｂのための方法に従って、Ｔｒｏｃエーテル５２ｂ（０．１９２ｇ、９０％）を、５２ａ（０．１４０ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）、ピリジン（１３８μＬ、１．７０ｍｍｏｌ、４．０当量）およびＴｒｏｃＣｌ（１１７μＬ、０．８５ｍｍｏｌ、２．０当量）から調製した。：
【ＮＭＲ４２】
2004500388.tif 000176
【０２２０】
【化１７３】
2004500388.tif 000177
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−オキソ−２，２，４，６−テトラメチル−５−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−８−ノネナール（５３）。５１ｂ（４．５８ｇ、９．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）および水（２３ｍＬ）溶液に、ｐ−ＴｓＯＨ（４５０ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７時間加熱還流し、そして飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。水層をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（３％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製し、５３（３．２２ｇ、８８％）を得た。：
【ＮＭＲ４３】
2004500388.tif 000178
【０２２１】
【化１７４】
2004500388.tif 000179
（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−オキソ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル，（５４）。ＬＤＡ（７．５２ｍｍｏｌ）のエーテル（３０ｍＬ）溶液に、−７８℃で酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８６５ｍｌ、６．４１ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃で１時間攪拌した。チタン錯体Ｌ−４１（８．３４ｍｏｌ）のエーテル（９０ｍｌ）溶液を４０分間かけて滴下添加した。−７８℃で０．５時間攪拌した後、反応混合物を−３０℃に加温し、４５分間攪拌し、そして−７８℃に再び冷却した。５３（２．５７ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）のエーテル（１５ｍＬ）溶液を１０分間かけて添加し、混合物を−７８℃で２時間攪拌した。５ＭのＴＨＦ水溶液（１４ｍＬ）でクエンチした後、室温で１時間攪拌し、混合物をセライトプラグにより濾過した。濾液を食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、水層をエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（７％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製し、透明オイルとして５４（２．９５ｇ、８９％）を得た。：
【ＮＭＲ４４】
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2004500388.tif 000181
【０２２２】
【化１７５】
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（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ）−５−オキソ−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル，（５４ｂ）。５４ａ（１２６ｍｇ、０．２４３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）溶液に、−２０℃で２，６−ルチジン（８５μＬ、０．７２９ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＴＢＳＯＴｆ（６２μＬ、０．２６９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、終夜で室温に加温した。食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、そして水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（２％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）を用いて精製し、５４ｂ（１１０ｍｇ、７２％）を得た。：
【ＮＭＲ４５】
2004500388.tif 000183
【０２２３】
【化１７６】
2004500388.tif 000184
化合物１６。アルコール５４（１．８０ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（０．４８ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）混合物に、ＴＥＳＣ１（０．６８ｇ、４．５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間攪拌し、水（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。エーテル（３０ｍＬ×３）で抽出し、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（トルエン−酢酸エチル＝２０：１）により精製して、無色オイルとしてＴＥＳエーテル１６を得た（２．１２ｇ、９６％）。：［α］Ｄ−６１．７（ｃ１．０５，ＣＨＣｌ３）
【ＮＭＲ４６】
2004500388.tif 000185
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【０２２４】
【化１７７】
2004500388.tif 000187
（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−オキソ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５６ａ）。５４ａのための方法に従って、５６ａ（２０．８ｍｇ、７４％）をＬＤＡ（０．０６４ｍｍｏｌ）、酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．４μＬ、０．０５５ｍｍｏｌ）、チタン錯体Ｄ−４１（０．０７１５ｍｍｏｌ）およびアルデヒド５５（２２ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）から調製した。：
【ＮＭＲ４７】
2004500388.tif 000188
【０２２５】
【化１７８】
2004500388.tif 000189
（３Ｒ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ）−５−オキソ−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５６ｂ）。５４ｂの方法に従って、ＴＢＳエーテル５６ｂ（１３ｍｇ、６５％）をアルコール５６ａ（１７ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（μＬ、０．１０３ｍｍｏｌ）、およびＴＢＳＯＴｆ（８．５μＬ、０．０３７ｍｍｏｌ）から調製した。１Ｈ ＮＭＲおよびＴＬＣの両方とも、他の経路で得られたサンプルと一致していた。
【０２２６】
【化１７９】
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（４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−オキソ−２，２，４，６−テトラメチル−５−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−８−ノネナール（５７）。５５の方法に従って、アルデヒド５７（０．１０３ｍｇ、８１％）を５２ｂ（０．１６ｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（３ｍＬ）、水（１ｍＬ）、ｐ−ＴｓＯＨ（２０ｍｇ）から調製した。：
【ＮＭＲ４８】
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【０２２７】
【化１８０】
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（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−オキソ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル、（５８ａ）。５４のための方法に従い、アルコール５８ａ（２４ｍｇ、８２％）をＬＤＡ（０．０６４ｍｍｏｌ）、酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．４μＬ、０．０５５ｍｍｏｌ）、チタン錯体Ｄ−４１（０．０７１５ｍｍｏｌ）およびアルデヒド５７（２２ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）から調製した。
【ＮＭＲ４９】
2004500388.tif 000193
【０２２８】
【化１８１】
2004500388.tif 000194
（３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｓ）−５−オキソ−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−４，４，６，８−テトラメチル−７−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）−１０−ウンデセン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５８ｂ）。５４ｂのための方法に従って、ＴＢＳエーテル５８ｂ（１７ｍｇ、６５％）を５８ａ（２１ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（１４μＬ）、およびＴＢＳＯＴｆ（１０．５μＬ）から調製した。１Ｈ ＮＭＲおよびＴＬＣの両方とも、他の経路から得られたサンプルと一致していた。
【０２２９】
【化１８２】
2004500388.tif 000195
（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１２Ｚ，１５Ｓ，１６Ｅ）−５−オキソ−３，１５−ビス（トリエチルシリルオキシ）−１７−（２−メチルチアゾル−４−イル）−４，４，６，８，１２，１６−ヘキサメチル−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）ペンタデカ−１２，１６−ジエン酸ｔｅｒｔ−ブチル、（６０）。９−ＢＢＮダイマー（４０ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０ｍＬ）溶液に、オレフィン１６（１００ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０ｍＬ）溶液を添加した。室温で２時間攪拌した後、ＴＬＣ分析は１６が完全に消費されたことを示しており、この時点でＨ２Ｏ（３０ｍＬ）を添加し、残留している９−ＢＢＮをクエンチした。ヨウ化ビニル５９（７３ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液を含む分離フラスコに、Ｃｓ２ＣＯ３（１０２ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）、ＡｓＰｈ３（１０ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（２６ｍｇ、０．０３１８ｍｍｏｌ）、およびＨ２Ｏ（０．１３ｍＬ）を順次激しく攪拌しながら添加した。そして、上記調製したアルキルボラン溶液を注射器により素早く添加した。４時間後、反応混合物をエーテル（２０ｍＬ）に注ぎ入れ、水（２×１０ｍＬ）および食塩水（８ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（５％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製し、淡黄色オイルとして６０（１１０．５ｍｇ、７２％）を得た。：
【ＮＭＲ５０】
2004500388.tif 000196
【０２３０】
【化１８３】
2004500388.tif 000197
（３Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１２Ｚ，１５Ｓ，１６Ｅ）−５−オキソ−１５−ヒドロキシ−３−トリエチルシリルオキシ−１７−（２−メチルチアゾル−４−イル）−４，４，６，８，１２，１６−ヘキサメチル−（２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル）ペンタデカ−１２，１６−ジエン酸ｔｅｒｔ−ブチル、（６１）。エステル６０（５０ｍｇ、０．０５１７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍＬ）溶液に、−７８℃で２，６−ルチジン（７２ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）およびＴＥＳＯＴｆ（７１ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を終夜攪拌し、そして室温に加温した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に注ぎ入れた。有機層を緩衝剤溶液（ｐＨ７．０）で洗浄し、濃縮した。残留物をＴＨＦ（０．５ｍＬ）に溶解し、そして０℃に冷却した。メタノール性ＨＣｌ（０．１２Ｍ、０．５ｍＬ）を少しずつ添加し、反応をＴＬＣによりしっかりモニターした。２０分後、反応物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し、濾過し、そして真空下に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）により精製し、淡黄色で粘り気のあるオイルとして６１（２８．２ｍｇ、６８％）を得た。
【０２３１】
【化１８４】
2004500388.tif 000198
化合物６３。９−ＢＢＮ−Ｈダイマー（０．４９０ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、オレフィン１６（２．１２ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を添加した。室温で１時間攪拌した後、ＴＬＣ分析は出発オレフィン１６が完全に消費されたことを示していた。水（０．２５ｍＬ）を上記調製したボラン溶液に添加し、１０分間攪拌をし続け、過剰の９−ＢＢＮ−Ｈをクエンチした。ヨウ化ビニル１５（２．００ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）、（ｄｐｐｆ）ＰｄＣｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（０．２５０ｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）、ＡｓＰｈ３（０．１８８ｇ、０．６１４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１．４９ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）を含む分離フラスコに、脱ガスしたＤＭＦ（２ｍＬ）を添加した。そしてアルキルボラン溶液を、０℃でヨウ化ビニル１５を含む溶液に激しく攪拌しながら素早く添加した。室温で１５時間攪拌した後、反応混合物を１０％ＮａＨＳＯ４（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＨＳＯ４（３０ｍＬ）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。ＳｉＯ２でのフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン−酢酸エチル＝１０：１）により精製し、淡黄色粘稠性オイルとして６３を得た（２．９７ｇ、８４％）。［α］Ｄ−３５．６（ｃ．２．１０、ＣＨＣｌ３）；
【ＮＭＲ５１】
2004500388.tif 000199
【０２３２】
【化１８５】
2004500388.tif 000200
化合物６４。ｔｅｒｔ−ブチルエステル６３（２．８６ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液に、０℃で２，６−ルチジン（０．８６ｍＬ、７．３７ｍｍｏｌ）およびＴＥＳＯＴｆ（０．９８ｇ、３．７１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で０．５時間攪拌し、そして室温に加温した。室温で１０時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）に注ぎ入れた。有機層を分離し、リン酸緩衝剤溶液（２０ｍＬ、ｐＨ＝７）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、そして濃縮した。そして、粗製のＴＥＳ誘導体をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、０℃で０．１ＮＨＣｌのＭｅＯＨ溶液（０．５ｍＬ）を用いて処理した。さらにメタノール性ＨＣｌを少しずつ添加し、完結させるためにおよそ１．５ｍＬの０．１ＮＨＣｌを必要とした。反応混合物をリン酸緩衝剤（１５ｍＬ、ｐＨ＝７）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、そして濃縮した。ＳｉＯ２カラム（ヘキサン−酢酸エチル＝１：１）により精製し、無色で粘着性のあるオイルとして酸６４を得た（１．７８ｇ、７３％）。クロマトグラフィのデータと分光学的データとを、あらかじめ合成した化合物でのデータと比較して、６４であることを確認した。
【０２３３】
【化１８６】
2004500388.tif 000201
エポチロンＦ（１ｄ、ＥｐｏＦ）。ｄＥｐｏＦ（２ｄ、７．１ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）溶液に、−７８℃で２，２−ジメチルジオキシラン溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中約０．０４Ｍ）を添加した。反応混合物を−４０℃に加温し、１時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、そして１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２ｍＬ）および食塩水で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）により精製して、薄膜としてＥｐｏＦ（１ｄ）を得た（４．４ｍｇ、６０％）。
【ＮＭＲ５２】
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【０２３４】
【化１８７】
2004500388.tif 000203
化合物６７。アジド酸６６（３．８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でＤＣＣ（３．３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）およびｄＥｐｏＦ（７．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）溶液を添加した。２時間攪拌した後、混合物をシリカゲルのショードパッドで濾過し、そして濃縮した。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝５：１）により精製して、透明な粘り気のあるオイルとして６７を得た（６．８ｍｇ、６３％）。：
【ＮＭＲ５３】
2004500388.tif 000204
【０２３５】
実施例３：アザ−エポチロン類の合成
本発明のある種の実施形態はマクロラクタム類似体を目的としており（例えば図２６参照）、以下の実施例はある種の発明であるアザ−類似体を記述していることが理解されるであろう。
Ｃ１５−Ｅｐｉ−アザ−ｄＥｐｏＢ（１Ｆ）。デスオキシエポチロンＢ（ｄＥｐｏＢ）の生体安定性を改良するために、対応するラクタム類似体を合成した。図２７。生体内でのエステラーゼ開裂に影響を受けないので、ラクタムの生体安定性が向上した。この合成は、Ｃ１５−Ｅｐｉ−アザ−ｄＥｐｏＢを全合成した初めての例である。本明細書に記載した方法は、必要なＣ１５−（Ｒ）−アザ−異性体の合成にも適応できる。
【０２３６】
図２７に参照するように、１Ｆの合成は、既に報告されている（Ｒ）−ヒドロキシヨウ化ビニル２Ｆを出発物としている。アジ化水素酸を用いるＣ１５（エポチロン付番方式）アルコールにおけるミツノブの発明により、アジド３Ｆが得られた。７Ｅから誘導したエノールエーテルとアジド２とのパラジウム−触媒スズキカップリングにより、アジドエステル４Ｆが得られた。アジドをトリフェニルホスフィンを用いてシュタウディンガー還元を行い、そして発生したアミンをｔ−ブトキシカルボニル誘導体として保護化すると、アジド４Ｆからの全収率５２％でエノールエーテル５Ｆが得られた。続いて、アセトン中化学量論量のｐ−トルエンスルホン酸を用いてメチルエノールエーテルを加水分解し、８２％という満足すべき収率でｂ−ケトエステル６Ｆを得た。Ｃ−３ケトンの立体選択的還元をノヨリ水素化条件下に行い、５６％の収率でβ−ヒドロキシエステル７Ｆを得た。酸性の水素化条件でも、アミノ−ｔ−ブトキシカルボニル基の早い脱保護（約２０％）が起こった。次に、ジクロロメタン中トリフルオロ酢酸を用いてｔ−Ｂｏｃ−アミンとｔ−ブチルエステルとを同時に脱保護し、アミノ酸８Ｆを得た。ジクロロメタン中ＨＡＴＵおよびコリジンを用いてｓｅｃｏ−アミノ酸を処理することにより、大環状閉環による環状ラクタムが５０％収率で得られた。最後に、亜鉛で媒介されたＣ７−Ｔｒｏｃ基の脱保護により、Ｃ１５−ｅｐｉ−アザ−デスエポキシエポチロンＢ（１Ｆ）が得られた。
【０２３７】
本発明の他の実施形態において、本明細書に記載し、そして以下により詳細に記載した方法を用いて、アザ−エポチロン類を調製した。アザ−ｄＥｐｏＢ（４ａ）の全合成に関する結果が最近報告された。本明細書には、アザ−ＥｐｏＢ（２）の全合成を報告し、そして我々自身の生体内比較を基本とする抗ガン剤として価値ある効能を提供する。
【０２３８】
アザ−ＥｐｏＢ（４ａ）の全合成が最近達成され、これは１２，１３−デスオキシエポチロンＢ（３、ｄＥｐｏＢ）の合成で我々が使用した戦略と同様の収束した戦略を基本としていた。これらに沿って、ほぼ同様に複雑なフラグメントを主要な構成要素として使用した（図２８）。新しい目標に対応するために、アルキル部位５の調製は新規な構成を必要としたが、ｄＥｐｏＢを我々が以前に合成した際に入手できたアシル部位６は、ポリプロピオン酸ドメインに使用できた。パラジウム触媒βアルキルスズキカップリングにより、２つの主要なフラグメント５および６を結合させた。ルテニウムにより媒介される不斉水素化により、Ｃ−３での所望する立体化学が高い選択性で得られた。そして脱保護した後マクロラクタム化して、アザ−ｄＥｐｏＢに直ぐに誘導された。考えられるように、これらのアイディアを実行することはラクタムシリーズについて簡単ではなかった。
【０２３９】
アルキルフラグメント５を含む必要なアミンは、ホーナー様オレフィン化により生産できたけれども、反応は非能率的であった。オレフィン化反応を回避するために、ｄＥｐｏＢ（３、図２９）の合成のために使用したアルキルフラグメントを基盤として、Ｃ−１５アミン（エポチロン付番方式）を導入するためのミツノブ基準方策を開発した。ｄＥｐｏＢの合成に使用したＴＥＳ−保護化ヨウ化ビニルアルキルフラグメント（１５）の反対のエナンチオマー（Ｓヒドロキシル立体配置の代わりにＲ）は、最近開発された方法により容易に入手できる。酢酸：ＴＨＦ：水を用いて、シリルエーテル（１５）の脱保護が簡便に達成できた。対応するＣ−１５ ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルは、より強い条件下でも脱保護および分解に極めて抵抗性があることは注目すべきである。この研究成果は、より丈夫なｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを頼りとする代わりに、ヒドロキシル基に対してトリエチルシリル保護を用いると更に有利であることを示した。トンプソンの方法を用いて、遊離のアルコール（１６）を対応するアジド（１７）に変換した。このプロトコルにより、完全な転化率および最小の脱離生成物でアジドを８５％収率で得た。対照的に、標準のミツノブ条件を用いて転移させ、アジドを６６％の収率で得た。この反応では、多量の脱離生成物が副生した。次に、トリフェニルホスフィンを媒介としてアジドをシュタウディンガー還元した後、発生したアミンをｔ−ブチルカーバメートとして保護し、引き続くβ−アルキルスズキカップリングに必要なパートナー（５）を得た。不幸にも、パラジウム触媒β−アルキル鈴木反応は１０％の収率であった。本反応が低い収率であったのは、パラジウムにカーバメートが酸化的に挿入した後に分子内でキレート化することにより誘導された安定な中間体が生成するためと考えられる。
【０２４０】
β−アルキル鈴木反応を円滑にするために、対応するアジド−アルキルフラグメント１７を用いてクロスカップリングを行った。満足すべきことに、パラジウム触媒クロスカップリングが円滑に進行し、アジド−エステル１９が６３％の収率で生成した（図３０）。しかしながら、続いてアジド１９をシュタウディンガー還元すると、失望することにアミノエステル２０が１８％の収率で得られ、これは、発生したアミンとβ−ケトエステルとで、分子間的にまたは分子内的にの何れかで、シッフ塩基が生成するためと考えられる。
【０２４１】
効率を上げるために、β−ケトエステルを一次的に対応するエノールエーテルとしてマスクできることが分かった（図３１）。アシルフラグメント６を合成するための最後から２番目の工程は、Ｃ２−Ｃ３メチルエノールエーテルの加水分解を含んでいるので、この回避策は現実に合成を短くした。意味深いことに、パラジウム触媒β−アルキル鈴木クロスカップリング反応は円滑に進行し、ｄＥｐｏＢの合成を更に改良するために引き続いて導入した結果である、対応するβ−ケトエステルとよりも高収率であった。期待されたように、β−ケトエステルを対応するエノールエーテルとしてマスクすることにより、続くトリフェニルホスフィンにより媒介されるアジド２２のシュタウディンガー還元において、９８％の収率が得られた。発生したアミンをそのｔ−ブチルカーバメート（２３）として保護した後、β−ケトエステル１８を転移加水分解により遊離することができた。
そして、β−ケトエステル１８を、修飾ノヨリ触媒を用いたメタノール中でのルテニウム媒介不斉水素化反応に供した（図３２）。実際、所望のジオール２４が７８％の収率で単一のジアステレオマーとして生成した。しかしながら、（チアゾール成分のプロトン化のために）水素化媒体中に酸が必要なため、少量の脱保護化したアミン生成物が得られた。この望ましくない加水分解は、再結晶した触媒を用いることにより、反応速度を向上させ、それゆえに酸性溶液への暴露時間が最小化し、回避した。ジクロロメタン中トリフルオロ酢酸の作用により、ｔ−ブチルカーバメートとｔ−ブチルエステルとを同時に脱保護して、アミノ酸２５を得、これを精製せずに次の環化反応に用いた。ジクロロメタン中ＨＡＴＵを媒介としてマクロラクタン化を行い、９０％の収率でＴｒｏｃ−保護化ラクタムを得た。マクロラクタン化に他の溶剤（すなわち、ＤＭＦ、ＴＨＦ）を用いると、マクロ環化も起こったことは注目すべきである。しかしながら、ＨＡＴＵのテトラメチルウロニウムフラグメントが環状付加物のＣ３ヒドロキシルに転移することが原因であった副生成物の程度が変わるので、所望の物質となることが制限された。ＨＡＴＵのテトラメチルウロニウムフラグメントが環状付加物のＣ３ヒドロキシルに転移することが副生成物の原因であることは、後に明白となった。尿素付加物を酸水溶液（酢酸：ＴＨＦ：水）で処理すると、環化生成物が遊離した。超音波の影響下に亜鉛粉末で脱保護を行うと、完全に脱保護された１２，１３，１５−デスオキシ−１５（Ｓ）−アザ−エポチロンＢ（４ａ）が８８％の収率で得られた。最後に、−５０℃で２，２−ジメチルジオキシランを用いて１２，１３−オレフィン性結合をエポキシ化すると、単一のジアステレオマーとして全合成したアザ−エポチロンＢ（２）が得られた。
【０２４２】
ラクタムシリーズの生物活性を更に深く調べるために、本明細書に記載したように、エピマー化したヨウ化ビニルフラグメントを生成するために、アルキル化用のエナンチオマーのキラル補助を用いることによりＣ１５−（Ｒ）鏡像異性体を合成した。そして、対応するラクトンシステムにおいて見られたように、Ｃ１５で反転する影響に関して、このジアステレオマーを評価した（Ｈａｒｒｉｓ他Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，６４，８４３４）。
【０２４３】
アザ−エポチロン類の生物学的評価
全合成したアザ−エポチロンＢ（２、アザ−ＥｐｏＢ）、１２，１３，１５−デスオキシ−１５（Ｓ）−アザ−エポチロンＢ（４ａ、アザ−ｄＥｐｏＢ）、およびエピマー化１２，１３，１５−デスオキシ−１５（Ｒ）−アザ−エポチロンＢ（４ｂ、１５−エピ−アザ−ｄＥｐｏＢ）を、これらの抗ガン能を評価するために、多くの細胞タイプについて評価してきた。表３に示すように、アザ−ＥｐｏＢをｄＥｐｏＢと直接比較すると、我々の基礎である白血病細胞株（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）において、それぞれ０．００２１および０．００９５μＭと、生体外で僅かに高い能力があることを示していた。しかしながら、アザ−ＥｐｏＢは、ｄＥｐｏＢと比較して、我々の多種薬剤耐性細胞株（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１００、ＣＣＲＭ−ＣＥＭ／ＶＭＩ、およびＣＣＲＦ−ＣＥＭ／タキソール）において、活性が大きく低下していた。加えて、エポチロンＢ（Ｃ１２，Ｃ１３エポキシドを含む）とｄＥｐｏＢ（エポキシドを含まない）とを比較して注目されるように、アザ−ｄＥｐｏＢは、アザ−ＥｐｏＢを含むエポキシドよりも約１０倍能力が低かった。また、１５−エピ−アザ−ｄＥｐｏＢは、試験した全ての細胞株において更に低い活性を示した。
【０２４４】
【表３】
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【０２４５】
そして、アザ−ＥｐｏＢ（２）の生体内評価に興味を移した。最初に、アザ−ＥｐｏＢの治療学的有効性を、ヒト乳房ＭＸ−１異種移植を有するヌードマウスについて調べた（図３３）。我々の以前の研究において開発したゆっくりしたＩＶ注入プロトコルに従い、動物実験を行った。６ｍｇ／ｋｇの用量により、ガン成長をいくらか阻害することが示されたが、ガンの塊の減少は見られず、処置を中止するとガンの成長能が回復した。高い用量レベル（９ｍｇ／ｋｇ）では、最大許容用量レベルに近づくにつれ、ガンの大きさが退化せずに、同様の妨害作用が見られた。
【０２４６】
次に、アザ−ＥｐｏＢの治療学を、ヒト白血病Ｋ５６２異種移植を有する胸腺欠損マウスについて評価した。
図３４に示したように、マウスをアザ−ＥｐｏＢ（６ｍｇ／ｋｇ）で処置すると、ガン成長が阻害されたが、ガンの大きさは減少しなかった。対照的に、同じマウスをｄＥｐｏＦより（３０ｍｇ／ｋｇ）で更に処置すると、免除の点でガンの大きさが容易に減少した。
そして、ＨＰＬＣを基本とする方法を用いてアザ−ＥｐｏＢの水溶性を試験した。驚くべきことに、ラクタムシリーズはｄＥｐｏＢよりもおよそ２５倍水溶性があると考えられた。この観察および我々のＭＤＲ細胞株に対する活性の明らかな欠乏を考慮して、いくつかの我々が事前に調製した類似体の活性を再調査した。類似体の極性およびその性能の間に、明らかな相関が見られ、Ｐ糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）基質として使用した。したがって、ラクトンと比べてラクタムシステムの極性が高いので、アザ−ｄＥｐｏＢは、Ｐ−ｇｐ受容体によりＭＤＲ細胞からより効率的に除去される。
【０２４７】
要約すれば、アザ−ｄＥｐｏＢを、β−アルキルスズキカップリングおよび続くマクロラクタム化による２つの主要なフラグメントを結合させることを基本とする戦略を用いて、全化学合成により生産した。生体外活性を検討するために、アザ−ｄＥｐｏＢもアザ−ＥｐｏＢにうまく酸化した。動物試験を容易にするために大量スケール生産に効率的でありおよび受け入れられやすい合成を検証した。従って、アザ−ｄＥｐｏＢはｄＥｐｏＢと同様の活性を示すことが示されたが、耐性細胞株に対しては効果がなかった。アザ−ＥｐｏＢは非耐性細胞株においてはｄＥｐｏＢよりも活性があったが、生体内モデルに拡張すると効果がなかった。
【０２４８】
実施例３  実験の部
一般手順。特記していない場合は、市販の材料は全て精製せずに使用した。以下の溶媒は乾燥溶媒系から得られ、更なる乾燥をせずに使用した。ＴＨＦ、ジエチルエーテル、塩化メチレン、トルエンおよびベンゼン。全ての反応は事前に精製した乾燥アルゴンガスによる陽圧下で行った。１Ｈおよび１３ＣのＮＭＲスペクトルは、それぞれ４００および１００ＭＨｚでＣＤＣ１３溶液中で記録した。分析用薄層クロマトグラフィはＥ．メルクシリカゲル６０Ｆ２５４プレートで行い、フラッシュクロマトグラフィは表示した溶媒を使用して、Ｅ．メルクシリカゲル６０（４０〜６３μｍ）またはシグマＨタイプシリカゲル（１０〜４０μｍ）で行った。
【０２４９】
【化１８８】
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１６の作製。ＴＥＳで保護されたアルコール１５（２．２８ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）をＨＯＡｃ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３：１：１、５０ｍｌ）に溶解し、室温で８時間攪拌した。その後、溶媒を真空で除去した。油状残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）に溶解し、余分な酸は飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍｌ）を添加して中和した。有機層を除去し、水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ×３）で抽出した。混合した有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍｌ×１）、食塩水（５０ｍｌ×１）で洗い、（ＭｇＳＯ４）上で乾燥した。溶液をろ過して真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で、黄色油状のアルコール１６（１．７１ｇ、９９％）が得られた。［α］Ｄ＋４．９（ｃ １．０，ＣＨＣｌ３）；Ｒｆ＝０．１９，４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン。
【ＮＭＲ５４】
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【０２５０】
【化１８９】
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１７の作製。アリルアルコール１６（１．７４ｇ、４．９９ｍｍｏｌ）をトルエン（３０ｍｌ）に溶解して０℃に冷却した。ジフェニルホスホリルアジド（１．６５ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）を添加し、その後ＤＢＵ（０．９１ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合液を０℃で２時間攪拌した。次に、溶液を２５℃に加温してエチルアセテート（１００ｍｌ）を添加した。有機層を、Ｈ２Ｏ（３０ｍｌ×１）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌ×１）、食塩水（５０ｍｌ×１）で洗った。次に、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。
シリカゲルによるクロマトグラフィ（７．５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、淡黄色油状のアジ化物１７（１．５８ｇ、８５％）が得られた。
【ＮＭＲ５５】
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【０２５１】
【化１９０】
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５の作製。ＴＨＦ（３ｍｌ）に溶解したアジ化物１７（０．０７４ｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）溶液に、トリフェニルホスフィン（０．０６２ｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で２４時間攪拌した。次に水（０．０１４ｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）を添加して６５℃で４時間反応させた。溶液を冷却し、１ＮＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（３０ｍｌ×３）で抽出した。次に、水溶液層を１ＮＮａＯＨで塩基性化して酢酸エチル（３０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後、真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（５％メタノール／クロロホルム）では、遊離アミン（０．０６９ｇ、１００％）が得られた。
アミンの性状；
【ＮＭＲ５６】
2004500388.tif 000211
【０２５２】
上記方法で作製した遊離アミン（０．０６９ｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍｌ）に溶解した溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（０．０６５ｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）を添加し、次にトリエチルアミン（０．０２４ｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２５℃で１．５時間攪拌した。溶媒を真空で除去した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、黄色油状の保護されたアミン５（０．０６５ｇ、７３％）が得られた。
【ＮＭＲ５７】
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【０２５３】
【化１９１】
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２２の作製。ＴＨＦ（２５ｍｌ）に溶解したエノールエーテル２１（５．８０ｇ、１１．２２ｍｍｏｌ）溶液に、９−ＢＢＮニ量体（２．１０ｇ、８．６３ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を２５℃で１時間攪拌した後のＴＬＣ分析では、出発物のオレフィン２１が完全に消費されていた。ヨウ化ビニル１７（３．２２ｇ、８．６３ｍｍｏｌ）、（ｄｐｐｆ）ＰｄＣｌ２ＣＨ２Ｃｌ２（０．７０５ｇ、０．８６２ｍｍｏｌ）、ＡｓＰｈ３（０．２６４ｇ、０．８６２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（４．２１ｇ、１２．９４ｍｍｏｌ）の入った別のフラスコに、脱気したＤＭＦ（３０ｍｌ）を添加した。水（５ｍｌ）をボラン溶液に加えて攪拌を１０分間連続し、余剰の９−ＢＢＮ−Ｈを失活させた。次に、激しく攪拌したヨウ化ビニルを含む溶液に、アルキルボラン溶液を速やかに添加した。２時間後、反応混合液を酢酸エチル（３００ｍｌ）で希釈し、水（２５０ｍｌ×１）、次いで食塩水（１００ｍｌ×１）で洗い、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、黄色油状の２２（４．５６ｇ、７０％）が得られた。
【ＮＭＲ５８】
2004500388.tif 000214
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【０２５４】
【化１９２】
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１８の作製。ＴＨＦ（１００ｍｌ）に溶解した鈴木産物２２（４．１０ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）溶液に、トリフェニルホスフィン（２．８１ｇ、１０．７１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を４０℃に１９時間加温した。水（２ｍｌ）を添加して６５℃に４時間加温した。シリカゲル（７０ｇ）を添加して溶媒を真空で除去した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（１．５％ＭｅＯＨ／０．５％トリエチルアミンを含有するクロロホルム）では、還元アミン（３．９ｇ、９８％）が得られた。［α］Ｄ−４．４（ｃ １．０，ＣＨＣｌ３）；Ｒｆ＝０．３０，１０％メタノール／クロロホルム（１％トリエチルアミンを含む）。
【ＮＭＲ５９】
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【０２５５】
上記方法で作製したアミン（３．３０ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍｌ）に溶解した溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１．３７ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）を添加し、次にトリエチルアミン（０．９１ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。次に、溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で希釈し、１ＮＨＣｌ（１００ｍｌ×１）、飽和Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｌ）次いで食塩水（１００ｍｌ×１）で洗い、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。
シリカゲルによるクロマトグラフィ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、白色泡状の２２（２．６６ｇ、７０％）が得られた。
【ＮＭＲ６０】
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【０２５６】
【化１９３】
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アセトン（９ｍｌ）に溶解したエノールエーテル２３（０．３０９ｇ、０．３６３ｍｍｏｌ）溶液に、ρ−トルエンスルホン酸（０．０８３ｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で２２時間攪拌した。反応物に飽和ＮａＨＣＯ３を加えて中和し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後、真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、白色泡状のβ−ケト−エステル１８（０．２５０ｇ、８２％）が得られた。［α］Ｄ−３６．８（ｃ １．０，ＣＨＣｌ３）；Ｒｆ＝０．２８，１０％ ＥｔＯＡｃ／トルエン。
【ＮＭＲ６１】
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【０２５７】
【化１９４】
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２３の作製。ジケトン１８（１．２３４ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を、２５℃の０．１２ＮＨＣｌのＭｅＯＨ（２４．６ｍｌ、２．９５ｍｍｏｌ）溶液に溶解した。次に、溶液をアルゴンガスで３０分間スパージした。次に、ルテニウム触媒（０．１５０ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を添加して混合液をＰａｒｒ器具に移した。容器をＨ２で１０分間パージし、その後圧力を１２００ｐｓｉに高めた。２５℃で１８時間経過後、反応物を大気圧に戻し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍｌ）に注いだ。ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ×３）で抽出後、混和した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では白色泡状のヒドロキシエステル２４（０．９５５ｇ、７８％）が得られた。
【ＮＭＲ６２】
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【０２５８】
【化１９５】
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２４の作製。ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）に溶解したビス−Ｂｏｃで保護されたアミノ酸（０．７３８ｇ、０．８８０ｍｍｏｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を添加した。溶液を室温で２時間攪拌した後真空で濃縮した。粗物質は精製せずに使用した。
【ＮＭＲ６３】
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【０２５９】
【化１９６】
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Ｔｒｏｃにより保護された４ａの作製。上で得られた粗混合物をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍｌ）で希釈した。次に、ＨＯＡｔ（０．３５９ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（１．０２ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）、最後にＨＡＴＵ（０．３５９ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合液を２５℃で１６時間攪拌した。次に、反応混合物を水（１００ｍｌ×１）で洗った。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。次に粗混合物をＨＯＡｃ、ＴＨＦおよび水の混合溶液（３：１：１、３０ｍｌ）に３０分間で溶解した。反応混合液を真空で濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ×３）で抽出した。混和した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（４５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、白色泡状のＴｒｏｃで保護されたアザ−ｄＥｐｏＢ（０．４７９ｇ、７９％）、および８８％非対称ジヒドロキシル化から、Ｔｒｏｃで保護されたＣ−１５−エピ−アザ−ｄＥｐｏＢ（０．０６５ｇ、１１％）が得られた。
【０２６０】
Ｔｒｏｃで保護されたアザ−ｄＥｐｏＢの性状。
【ＮＭＲ６４】
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【０２６１】
Ｔｒｏｃで保護されたＣ−１５−エピ−アザ−ｄＥｐｏＢの性状。
【ＮＭＲ６５】
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【０２６２】
【化１９７】
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４ａの作製。ＴＨＦとＨＯＡｃの混合溶液（１：３、６ｍｌ）に溶解したＴｒｏｃで保護されたアザ−ｄＥｐｏＢ（０．０３８ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）の溶液に、ナノサイズの活性亜鉛をスパチュラの先一杯分添加した。次に、反応混合液を２５℃で２時間音波処理した。溶液をろ過して金属亜鉛を除去後真空で濃縮した。次に、残留物をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）に溶解して飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍｌ）で中和した。水層をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×３）で抽出し多。混和した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過後真空で濃縮した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、白色泡状のアザ−ｄＥｐｏＢ（０．０２５ｇ、８８％）が得られた。
【０２６３】
アザ−ｄＥｐｏＢ（４ａ）の性状。
【ＮＭＲ６６】
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【０２６４】
１５（Ｒ）−アザ−ｄＥｐｏＢ（４ｂ）の性状。
【ＮＭＲ６７】
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【０２６５】
【化１９８】
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２の作製。アザ−ｄＥｐｏＢ（０．０２５ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に溶解し、−７８℃に冷却した。２，２−ジメチルジオキシラン（０．６Ｍ、０．１１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応混合物を−５０℃になるまで放置し、１時間攪拌した。ジメチルスルフィド（０．１ｍｌ）を−５０℃で添加して余剰のＤＭＤＯを失活させ、室温まで加温した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）では、白色泡状の完全合成アザ−ＥｐｏＢ（０．０１８ｇ、６９％）が得られた。
【ＮＭＲ６８】
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【０２６６】
実施例４。生物学的研究。
微小管アセンブリーを安定させる天然の分子の中では、パクリタキセル（タキソール（登録商標））が断然最もよく知られ、広く研究され、また最先端で広く使われる癌の化学療法剤で、特に固形癌の治療のために使用される（Ｌａｎｄｉｎｏ，Ｌ．Ｍ．＆ ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｔ．Ｌ．（１９９５）Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔａｘｏｌ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ｅｄ．Ｆａｖｉｎ，Ｖ．（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）Ｃｈａｐ．７．；Ｒｏｓｅ，Ｗ．Ｃ．（１９９２）Ａｎｔｉ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ３，３１１−３２１；Ｒｏｗｉｎｓｋｙ，Ｅ．Ｋ．，Ｅｉｓｅｎｈａｕｓｅｒ，Ｅ．Ａ．，Ｃｈａｕｄｈｒｙ，Ｖ．，Ａｒｂｕｃｋ，Ｓ．Ｇ．＆ Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ，Ｒ．Ｃ．（１９９３）Ｓｅｍｉｎ，Ｏｎｃｏｌ，２０，１−１５）。類似の作用機構を有しより近年になって発見された化合物としては、ｄｉｓｃｏｒｄｅｒｍｏｌｉｄｓ（４、５）、ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎｓ（６）、ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅｓ（７）およびエポチロン（８〜１４）がある。推測されるチューブリンアセンブリーとの結合部位が共通している（１５〜１８）にもかかわらず、これらの化学構造および／または薬理学上の特性は大きく異なる。
【０２６７】
関連する他のマイナーな構成要素と並んで、エポチロンＡおよびＢは粘液菌Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍから単離されたマクロライドで、南アフリカ共和国のザンビア川沖から採取された（８）。チューブリンからの微小管の形成に対するエポチロン誘導体の影響に関する最近の研究では、１６個のエポチロン（１０μＭ）の内１３個がＥｐｏＢと比較して８３〜９９％の微小管安定化効果を示した（１６）。細胞毒性と観察された微小管安定化効果は相関性があった（１０）。
【０２６８】
薬理学的評価では、一連のエポチロンの中では最も効力が高いＥｐｏＢが、高毒性または致死的な用量においても治療効果は低いことが指摘された（１９）。試験管内細胞毒性検定ではＥｐｏＢより低い評価のｄＥｐｏＢ（Ｚ−１２，１３−デスオキシエポチロンＢ）が、ＥｐｏＢより格段に高い治療効果を示した（１９、２０）。構造活性相関（ＳＡＲ）を調べた結果、ＥｐｏＢの１２，１３−エポキシ部は宿主に対する毒性と関連するが、抗腫瘍性治療効果にはほとんど貢献しないことが示唆された。
【０２６９】
本明細書では、先導化合物ｄＥｐｏＢ（１４）および２１−ヒドロキシ−ｄＥｐｏＢ（ｄＥｐｏＦ）（２１）と共に、現在臨床試験中の１５−アザ−ＥｐｏＢ（ＢＭＳ２４７５５０）（２２）の試験管内および生体内における薬理学的性質を提示する。ｄＥｐｏＢおよびｄＥｐｏＦは広い抗腫瘍性スペクトルを有し、ヒト白血病または乳腫瘍の異種移植片を移植されたヌードマウスにおいて治癒効果のあることが示されている。ｄＥｐｏＢの予備的毒性試験では、治療用量においては有害作用がほとんどなく、主に胃腸管において限定的な毒性が認められた。
【０２７０】
結果
ヒト結腸癌ＨＣＴ−１１６異種移植片に対する治療効果。
癌化学療法剤の治療効果は、用いた腫瘍モデル、用量および投与方法などの各種要素によって異なる。ヌードマウスにおけるヒト結腸癌ＨＣＴ−１１６異種移植片に対しては、ｄＥｐｏＢ、ｄＥｐｏＦ、パクリタキセルおよびＣＰＴ−１１は実質的に類似した治療効果を示した（図３５）。こうした結果は、本研究で使用される各薬剤の用量および投与経路が適切であることを示唆している。本研究では、体重減および／または死亡率の測定により最大耐用量近くでの治療効果の比較を意図した。
【０２７１】
ヒト白血病Ｋ５６２異種移植片に対する治療効果。
ａ．ｄＥｐｏＢ、パクリタキセル、アドリアマイシンおよびビンブラスチン間の比較。
図３６に示したように、ｄＥｐｏＢは特に、ヌードマウスに移植した、投薬経験のない非ＭＤＲ慢性ヒト骨髄性白血病のＫ５６２異種移植片に対して有効であった。ｄＥｐｏＢでは完全寛解が認められたが、アドリアマイシン、パクリタキセルおよびビンブラスチンは部分的治療効果または寛解効果を認めただけであった。これは、ｄＥｐｏＢが広い範囲の薬剤耐性腫瘍（例えば、ＶＢＬ、Ａｄｒまたはパクリタキセルに耐性の腫瘍）に対してパクリタキセルより優れた治療効果を示したが、非薬剤耐性腫瘍においてはパクリタキセルと同等の効果を示した初期の試験（１９、２７、２８）と対照的である。
【０２７２】
ｂ．パクリタキセルとｄＥｐｏＢによる逐次的治療。
ｄＥｐｏＢ（３０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ×３）による単剤投与治療では４週間のＫ５６２の消失が認められた。しかし、パクリタキセルによる同様の方法での投与では、部分的治療効果が認められたにすぎない（図３７）。後者の群のヌードマウスはその後ｄＥｐｏＢを３サイクル（３０ｍｇ／ｋｇ、（Ｑ２Ｄ×３）×３）投与され、その結果８８０ｍｍ３の大きさのＫ５６２腫瘍が２０ｍｍ３未満に縮小した。反復注射の結果尾静脈が傷害を受けたので、それ以後ｄＥｐｏＢによる治療は中止された。
【０２７３】
ｃ．アザＥｐｏＢとｄＥｐｏＦによる逐次的治療。
アザＥｐｏＢの最大耐用量（６ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ×６）によるＫ５６２異種移植片の治療では、腫瘍増殖が顕著に抑制されたが腫瘍の縮小は認められなかった。５００ｍｍ３近くの大きさの腫瘍を有する同群のヌードマウスは、その後ｄＥｐｏＦ（３０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ×６）による治療を受けた。腫瘍は治療期間中に縮小し、治療の終了後も縮小しつづけた。３週後には遂に腫瘍塊は消失した。
【０２７４】
ヒト乳腺癌のＭ−１異種移植片に対するｄＥｐｏＦの治療効果。
初期の試験で、ｄＥｐｏＢおよびパクリタキセルはＭ−１異種移植片に対して治療効果があることが示された（１９、２７および２８）。同様の試験をｄＥｐｏＦで行った。ＭＸ−１腫瘍を移植されたヌードマウスを、ｄＥｐｏＦの２種類の用量で治療した（図３９）。１５ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ×５、６時間静脈内点滴の用法では、腫瘍増殖は部分的に抑制された。ｄＥｐｏＦのより高い用量（３０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ２Ｄ×５、６時間静脈内点滴）では、ＭＸ−１腫瘍は徐々に縮小し、マウス５体中３体で消失した。
【０２７５】
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ異種移植片に対するｄＥｐｏＦおよび１５−アザＥｐｏＢの治療効果の比較。
図３７に示したように、定着状態の良好なＣＣＲＦ−ＣＥＭ腫瘍異種移植片（平均腫瘍サイズは約４００ｍｍ３）を有するヌードマウスを、ｄＥｐｏＢ３０ｍｇ／ｋｇまたは１５−アザＥｐｏＢ６ｍｇ／ｋｇにより６時間静脈内点滴、Ｑ２Ｄ×６の用法で治療した。１５−アザＥｐｏＢによる中等度の腫瘍抑制が認められた。しかし、ｄＥｐｏＦは腫瘍を徐々に縮小し、２８日目（６回目の投与）にはマウス３体の内１体で腫瘍が消失し、２体では腫瘍残留物が認められるだけであった（図３８）。この実験で、対照マウスは体重が増加し続けたが、ｄＥｐｏＦまたは１５−アザＥｐｏＢで治療されたマウスは、２８日目には体重が約１０％減少した（図３９）。
【０２７６】
ＭＸ−１異種移植片に対するｄＥｐｏＢおよび１５アザＥｐｏＢの治療効果の比較。
ＭＸ−１腫瘍の大きさが約１００ｍｍ３の時、アザＥｐｏＢ４ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｄ×６（１０〜２０日目）投与により腫瘍増殖が低下したが、縮小は認められなかった。更に、Ｑ２Ｄ×３（２６〜３０日目）による投与では、腫瘍の進行が継続してその負荷が大きくなったため、実験動物は屠殺された（図４１）。アザＥｐｏＢ４ｍｇ／ｋｇの用量では体重変化はほとんど認められなかったが、６ｍｇ／ｋｇの用量では１８日目に約３ｇの体重減がみられ、２２日目にはマウス５体中１体が毒性のため死亡した（図４２）。ＭＸ−１腫瘍の大きさが約１２０ｍｍ３の時、ｄＥｐｏＢ３０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｄ×６（１０〜２０日目）投与により当初腫瘍増殖が低下し、後に腫瘍は縮小した（図４１）。ｄＥｐｏＢのＱ２Ｄ×５（２６〜３４日目）による継続投与では、２２日目に腫瘍の５分の１が、３８日目に５分の２が、４０日目に５分の３が消失した。ｄＥｐｏＢの最終投与から６日目においても、腫瘍の縮小が継続していたことを認めた（図４１）。
【０２７７】
ｄＥｐｏＢ３０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｄ（１０〜２０日目）による投与から２２日目に体重は約３．５ｇ減少したが、２６日目には対照の体重近くまで回復した。Ｑ２Ｄ×５（２６〜３４日目）による第２サイクルの治療が開始したとき、体重は３６日目に約４．１ｇ減少し、その後腫瘍の消失がみられた３６〜４０日目には約２ｇの体重増が認められた（図４１および図４２）。
【０２７８】
各種ヒト腫瘍の異種移植片に対するｄＥｐｏＢおよびパクリタキセルの治療効果の比較。
ヒト腫瘍の異種移植片を移植されたヌードマウスにおいて、ｄＥｐｏＢおよびパクリタキセルの治療効果が比較された。合計すると、８個の固形癌（肺癌（Ａ５４９）、乳癌（ＭＸ−１）、結腸腺癌（ＨＴ−２９）、結腸癌（ＨＣＴ−１１６）、前立腺癌（ＰＣ−３）、卵巣腺癌（ＳＫ−ＯＶ−３）およびＵＬ３−Ｃ）および５個の白血病（Ｔ細胞急性リンパ芽球白血病（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）とそのパクリタキセル耐性亜系統（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／タキソール、５７倍の耐性）およびビンブラスチン耐性亜系統（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１００、７６１倍の耐性）、慢性骨髄芽球白血病（Ｋ５６２）ならびに前骨髄球白血病（ＨＬ−６０））を皮下移植のために使用した（表５）。ｄＥｐｏＢ３０〜４０ｍｇ／ｋｇおよびパクリタキセル（タキソール（登録商標））１５〜２４ｍｇ／ｋｇをＣｒｅｍｏｐｈｏｒとＥｔＯＨの混合溶液（１：１）に溶解して、表５に示した投薬スケジュールに従って６時間静脈内点滴として使用した。これらの投与により１０〜２０％の体重減が認められたが死には至らなかった。特記されていなければ、腫瘍の種類により、治療は１０日目から皮下腫瘍が３５〜２００ｍｍ３に達した２１日目の間に開始された。腫瘍の大きさと体重は１日おき（Ｑ２Ｄ）に記録し、また人道的理由から腫瘍が体重の１０％以上に達した時に実験動物は屠殺された。特記無き場合は、対照群を含め各群は３〜５匹の実験動物で構成された。治療期間中における投与群と対照群との比で最小の平均腫瘍サイズを表５に示した。投与群における腫瘍が消失したマウスの比率も表５に示した。試験した３種の薬剤耐性腫瘍（ＭＣＦ−７／Ａｄｒ、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／タキソールおよびＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１００）および白血病Ｋ５６２に対して、ｄＥｐｏＢはタキソールよりもかなり高い（＞＞）または格段に高い（＞＞＞）治療効果を示した。前立腺癌ＰＣ−３および卵巣癌ＳＫ−ＯＶ−３に対しては、タキソールはｄＥｐｏＢよりもかなり高い（＞＞）効果を示した。興味深いことに、他の卵巣腫瘍ＵＬ３−Ｃに対しては、ｄＥｐｏＢはタキソールと同等またはやや高い（≧）効果を示した。ｄＥｐｏＢがタキソールと同等またはやや高い（≧）効果を示した腫瘍は、肺癌Ａ５４９、乳癌ＭＸ−１、ＣＣＲＦ−ＣＥＭであり、タキソールがｄＥｐｏＢと同等またはやや高い効果を示した腫瘍は、結腸腺癌ＨＴ−２９、結腸癌ＨＣＴ−１１６、および白血病ＨＬ−６０であった。乳癌ＭＸ−１と白血病ＣＣＲＦ−ＣＥＭ腫瘍に対しては、ｄＥｐｏＢおよびタキソールはともに全てまたはほとんどの試験動物において腫瘍を完全に消失させた。白血病ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／タキソール、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１００およびＫ５６２に対しては、タキソールは腫瘍増殖を遅らせたが腫瘍の縮小および消失効果は認められなかったが、ｄＥｐｏＢの場合は全ての試験動物において完全な腫瘍の消失が認められた。
【０２７９】
動物モデルを使用したｄＥｐｏＢ、ｄＥｐｏＦ、ＥｐｏＢ、アザＥｐｏＢ間または数種常用抗癌剤との治療効果の比較。
ｄＥｐｏＢの治療効果の相対効力をパクリタキセル（タキソール（登録商標））、アドリアマイシン（ＡＤＲ）、ビンブラスチン（ＶＢＬ）、カンプトテシン、カンプトサー（ＣＰＴ−１１）、エトポシド（ＶＰ−１６）、ｄＥｐｏＦ、ＥｐｏＢまたは１５アザ−ＥｐｏＢと比較し、マウス腫瘍１個、ヒト固形癌８個およびヒト白血病５個を使い異なった投与経路（腹腔内、静脈内および静脈内点滴）、および異なった投与スケジュールで実施した２１試験の結果をまとめた（表６）。
【０２８０】
比較は最大耐用量近くの用量で行い、体重減は１０〜２０％であったが致死例はなかった。全般的に、治療効果の幅と効力はｄＥｐｏＢが最も優れ、次にタキソール、次に他の癌化学療法剤と続いた。ｄＥｐｏＦはｄＥｐｏＢと類似の治療効果を示すが、他の常用癌化学療法剤との直接比較はまだ行われていない。ＥｐｏＢおよびアザＥｐｏＢの抗腫瘍効果は中等度であったが、中等度の体重減で死亡例が見られたことから治療閾値幅は狭いようである（参考文献１９、表３および４、ならびに本明細書図３８および３９）。
【０２８１】
ｄＥｐｏＢとタキソールとの比較をより詳細に表５および図３７に示し、ＨＣＴ−１１６腫瘍に対するｄＥｐｏＢ、ｄＥｐｏＦ、タキソール、ＣＰＴ−１１間の比較を図３５に、Ｋ５６２白血病に対するｄＥｐｏＢ、タキソール、アドリアマイシン、ビンブラスチン間の比較を図３６に、Ｋ５６２白血病に対する１５−アザＥｐｏＢとｄＥｐｏＦとの比較を図３８および３９に、またＭＸ−１腫瘍に対する１５−アザＥｐｏＢとｄＥｐｏＢとの比較を図４１および４２に示した。
【０２８２】
薬剤耐性発達の経過。
致死下の濃度の抗腫瘍剤に対してヒト肺癌Ａ５４９細胞が繰り返し曝露すると、薬剤耐性が発達することがある。本研究では、ＶＢＬに対する１４．３カ月間の曝露で４８４８倍の同剤耐性が、パクリタキセルに対する２１．３カ月間の曝露で２８５８倍の同剤耐性が、アドリアマイシンに対する２１．３カ月間の曝露で１６．３倍のパクリタキセル耐性が、またｄＥｐｏＢに対する２１．４カ月間の曝露で２１倍のｄＥｐｏＢ耐性が発達した（図８）。従って、他の抗腫瘍剤と比較すると、ｄＥｐｏＢは薬剤耐性腫瘍細胞に対してより有効である（表４）だけでなく、同剤に対する長期曝露による耐性の発達がより起こりにくい。
【０２８３】
血漿中のｄＥｐｏＢの安定性。
ヌードマウスに移植された各種ヒト腫瘍の異種移植片に対してｄＥｐｏＢが著しい治療効果を示したにもかかわらず、試験管内におけるヌードマウス血漿中の半減期（ｔ１／２）は比較的短く、約２０分であった（図４４）。予想外にも、ＨＰＬＣの結果では、ｄＥｐｏＢは試験管内におけるヒト血漿中で３時間以上安定であった（図４４）。
【０２８４】
ビーグル犬におけるｄＥｐｏＢの毒性および薬理学。
ｄＥｐｏＢの２、６、１２および２０ｍｇ／ｋｇを、静脈内点滴で雄ビーグル犬（１１．２〜１４ｋｇ）に投与した。点滴の量は１０分間で１ｍｌ／ｋｇで、ハーバードＰＨＤ２０００ポンプ（ハーバード・アパレータス社）を使用した。ｄＥｐｏＢは、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ３％、エタノール３％、プロピレングリコール４０％、および５％グルコース５４％で調製した。実験動物は、すなわちＣｒｅｍｏｐｈｏｒによるアレルギー反応を最小限にするために、３０分前にＢｅｎａｄｒｙｌ５ｍｇ／ｋｇ、静注、シメチジン５ｍｇ／ｋｇ、筋注、およびデキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇで前処理された。
【０２８５】
ｄＥｐｏＢの２および６ｍｇ／ｋｇ（４０および１２０ｍｇ／ｍ２）では有意な毒性を認めなかった。１２ｍｇ／ｋｇ（２４０／ｍ２）では、３日目に中等度の下痢（無出血）と体重減（１．３ｋｇ）を認めた。体重は２〜３週間で徐々に回復した。白血球（ＷＢＣ）数はやや減少した（１３％）が９日間で回復した。血小板数およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）においては、有意な変化を認めなかった。心臓、肺、腎臓、脾臓、大小腸、肝臓、筋肉、骨髄、リンパ節など２８の臓器および組織においては、有意な病理組織上の病変を発見できなかった。ｄＥｐｏＢの用量を更に２０ｍｇ／ｋｇ（４００／ｍ２）の静脈内投与に高くした場合、２日目に重度の出血性下痢および脱水症を認め、体重減は２日目には０．９ｋｇ、３日目には３．６ｋｇであった。ＷＢＣは３日目に０．６ｋ／μｌに低下し、４日目にはＡＬＴおよびＡＳＴが３〜６倍に上昇した。実験動物は全身虚弱、食欲低下、活力低下が認められ、４日後には死亡した。十二指腸から回腸までの腸粘膜には、目視で異常（赤変化）が認められた。小腸には血液の滲んだムチン様粘性物が含まれていた。骨髄の病理組織学的検査では、細胞性の低下を認めた。この致死用量では、陰窩細胞を有する腸粘膜上皮の壊死が最も激しく影響した。
【０２８６】
ビーグル犬を使用した薬物動態学研究では、ｄＥｐｏＢの６ｍｇ／ｋｇ（１２０ｍｇ／ｍ２体表面）を１０分間の静脈点滴で投与した。５ｍｌのヘパリンを添加した試験管に、１５分前から２４時間後にかけて間欠的に血液標本を連続して採取した。方法の項で説明したように、ｄＥｐｏＢの血漿中濃度はＨＰＬＣで測定した。半減期（ｔ１／２）のα相は１．９時間で、β相は２１時間であった（図４５）。２４時間後の標本採取の終了時点で、ｄＥｐｏＢの血漿中濃度は０．０４５μｇ／ｍｌつまり０．０９２μＭであり、組織培養におけるＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞の増殖を阻止するｄＥｐｏＢのＩＣ５０値０．００９５μＭよりもかなり高かった。
【０２８７】
総括すると、微小管安定化作用が類似しているにもかかわらず、エポチロン類（例えば、ＥｐｏＡ、ＥｐｏＢおよびｄＥｐｏＢ）はタキサン類（例えば、パクリタキセル）とは自然界の供給源、化学構造、水溶性、Ｐｇｐ−ＭＤＲ特性、構造変化に対する耐性、全合成の難易度および抗癌スペクトルの点で異なる。これまで蓄積された結果によると、ｄＥｐｏＢは、試験管内および生体内において特に薬剤耐性細胞または腫瘍に対する効果の点でパクリタキセルよりも優れた薬理学上の特徴を有する（１９、２９、表４）。
【０２８８】
ＥｐｏＢはＥｐｏＡ、パクリタキセル、ｄＥｐｏＢよりも効果が高いが、ヌードマウスに対する毒性が高く、高毒性の用量においてすらヒト腫瘍の異種移植片を移植されたマウスにおける治療効果は、ｄＥｐｏＢまたはパクリタキセルに比べて低かった（１９）。しかし、パクリタキセルはＰｇｐ−ＭＤＲの格好の基質であり、ｄＥｐｏＢの治療効果が高い多剤耐性腫瘍に対しては効果がない（１９、２０、２８および図３５および３６）。
【０２８９】
ヌードマウスにおけるヒト腫瘍異種移植片に対するｄＥｐｏＢ（ＮＳＣ−７０３１４７）の治療効果に関する報告に加え、ＥｐｏＢ（３０、３１）および１５−アザ−ＥｐｏＢ（ＢＭＳ−２４７５５０）（３２）の生体内における効果が明らかとなった。従って、同じ設定で試験された、ｄＥｐｏＢと別の化合物（ｄＥｐｏＦ）ならびに１５−アザ−ＥｐｏＢ、およびタキソール（登録商標）とを比較する。この結果は、ｄＥｐｏＦとｄＥｐｏＢの治療効果は類似しており、ヌードマウスにおけるヒトＫ５６２腫瘍の異種移植片に対して治療効果があることを示している（図３６〜３９）。ｄＥｐｏＢとｄＥｐｏＦの治療効果はタキソール（登録商標）（図３６および３７）または１５−アザ−ＥｐｏＢ（図３８および３９と図４１および４２）、およびデキソンビジン、ビンブラスチンまたはＣＰＴ−１１などの現在広く使用されている癌治療剤の一部よりも優れていた（図３５）。広い範囲のヒト腫瘍異種移植片に対するｄＥｐｏＢの高い効果は、試験管内のヌードマウス血漿中におけるｄＥｐｏＢの半減期が短い（ｔ１／２＝１５〜２０分）事実にかかわらず明らかである（図４４）。ヌードマウスに対するｄＥｐｏＢの静脈内６時間点滴が短い半減期を補った可能性がある。ヒト血漿（図４４）およびビーグル犬（図４５）におけるｄＥｐｏＢの長い半減期は、ヒトおよび犬における静脈点滴の必要性を低くする可能性がある。
有用な癌治療剤に必須の特徴としては、癌に対する高い効果だけでなく、宿主特に重要な器官または機能に対して毒性が低いことが必要である（つまり、広い治療閾値または高い治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０））。毒性学的研究から、ｄＥｐｏＦとｄＥｐｏＢは治療期間中に致死的ではないが２３〜２９％の体重減を引き起こすが、ＥｐｏＢまたはアザＥｐｏＢによる１４〜２０％の体重減は致命的になるという１つの重要な知見がもたらされた。更に、ｄＥｐｏＢとｄＥｐｏＦは死亡をもたらさずに腫瘍を完全に消失させた（図３６〜４２）が、ＥｐｏＢ（１９）またはアザＥｐｏＢ（図４１〜４２）は最低限の治療効果が得られた時でも死亡例があった。
【０２９０】
材料および方法
化学物質。本試験で使用したｄＥｐｏＢ（ＮＳＣ−７０３１４７）（１０、１４）、ｄＥｐｏＦ（２１）およびアザＥｐｏＢ（ＢＭＳ ２４７５５０）（２２）は、前述したようにＢｉｏ−Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで全合成により得た。試験管内試験用には、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド（ＶＭ−２６）、カンプトテシン（ＣＰＴ）、アクチノマイシンＤ（ＡＤ）、および硫酸ビンブラスチン（ＶＢＬ）はシグマ社から購入した。上記物質（ＶＢＬは生理食塩水）の原液は全て、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶媒を使用して調製し、実験時に望みの濃度に希釈して使用した。組織培養におけるＤＭＳＯの最終濃度は、溶媒による細胞毒性を避けるために０．２５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）以下であった。生体内試験用には、ｄＥｐｏＢ、ｄＥｐｏＦおよび１５−アザ−ＥｐｏＢをＣｒｅｍｏｐｈｏｒとＥｔＯＨを混合（１：１）した賦形剤に溶解し、その後生理食塩水で希釈して６時間静脈点滴に使用した。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬはシグマ社から購入した。パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ／ＥｔＯＨ製剤は臨床用の市販品（ブリストル−マイヤーズ・スクイブ社）を使用した。パクリタキセル、ｄＥｐｏＢおよびｄＥｐｏＦの水溶性は、それぞれ約０．６ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌであった。硫酸ビンブラスチン（ＶＢＬ、ベルバン、イーライ・リリー社）、エトポシド（ＶＰ−１６、ベプシド、ブリストル−マイヤーズ・スクイブ社）、カンプトサー（イリノテカンまたはＣＰＴ−１１、ファルマシア＆アップジョン）、およびアドリアマイシン（ＤＸまたはＡｄｒ、ドキソルビシン−ＨＣｌ、アストラ・ファーマスーティカル社）は製造業社による製剤を使用し、生理食塩水で希釈した。
【０２９１】
腫瘍および細胞系統。
ＣＣＲＦ−ＣＥＭヒトＴ細胞急性リンパ芽球白血病細胞、そのテニポシド耐性亜系統（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＭ１）、およびビンブラスチン耐性亜系統（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１００）は、Ｗ．Ｔ．ベック（イリノイ大学、シカゴ、ＩＬ）から入手した。これらの亜系統を、次第に高くなる致死下の濃度（ＩＣ５０−ＩＣ９０）にビンブラスチンでは１６カ月間、パクリタキセルでは１２カ月間、テニポシドでは１２カ月間曝露させた（それぞれ、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ１０００、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／タキソール、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＭ２と命名された）。各薬剤を含有する新鮮培地を７〜１４日毎に補充した。耐性細胞系統は、試験開始時のＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞と比較して、ビンブラスチンに対して４３０８倍の耐性（ＩＣ５０：０．９７４３μＭ）、パクリタキセルに対しては２８２倍の耐性（ＩＣ５０：０．３３９μＭ）、ＶＰ−１６に対しては６９倍の耐性（ＩＣ５０：１９．８μＭ）を示した（表１を参照）。Ａ５４９ヒト肺癌細胞におけるＶＢＬ、タキソール、ＡｄｒおよびｄＥｐｏＢ耐性の発達の過程でも、同様の手順を用いた（図４３を参照）。各ケースで、細胞増殖阻止試験を行う前に、薬剤に曝露させた細胞は新鮮培地に最低４日間再び懸濁させた。卵巣腺癌ＵＬ３−Ｃ、ＵＬ３−Ｂ／タキソール、ハムスター肺繊維芽細胞とその亜系統ＤＣ−３Ｆ、ＤＣ−３Ｆ／ＡＤＩＩおよびＤＣ−３Ｆ／ＡＤＸは、本研究所の細胞銀行から入手した。
【０２９２】
以下のヒト癌細胞は、アメリカ基準菌株保存機構（ＡＴＣＣ、ロックビル、ＭＤ）から入手した。乳癌（ＭＸ−１）、乳腺癌（ＭＣＦ−７）、卵巣腺癌（ＳＫ−ＯＶ−３）、肺癌（Ａ５４９）、結腸腺癌（ＨＴ−２９）、結腸癌（ＨＣＴ−１１６）、前立腺癌（ＰＣ−３）、慢性骨髄芽球白血病（Ｋ５６２）および前骨髄細胞白血病（ＨＬ−６０）。
【０２９３】
実験動物
ｎｕ／ｎｕ遺伝子をもつ無胸腺ヌードマウスを全てのヒト腫瘍異種移植に使用した。異系交配させたＳｗｉｓｓ家系のマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。体重２２ｇ以上、８週齢以上の雄マウスをほとんどの試験で使用した。薬剤は尾静脈から６時間の点滴により投与した。各マウス個体は、薬剤投与のためにファルコンの有孔ポリプロピレンチューブ拘束器に閉じ込めた。腫瘍容積は、長さ、幅、高さ（または幅）をカリパスで測定して評価した。マルチトラック付きプログラム式ハーバードＰＨＤ２０００注射ポンプ（ハーバード・アパレータス）を静脈点滴に使用した。一般的には、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／ＥｔＯＨ（１：１）に溶解した各薬剤の点滴量は、６時間点滴の場合１００μｌ＋生理食塩水２．０ｍｌであった。動物実験は全て、国立衛生研究所の「実験動物の飼育および利用ガイド」の指針、およびメモリアル・スローン−ケタリング癌センター施設動物飼育および利用委員会の認定したプロトコールに従って行った。腫瘍移植動物の人道的扱いに関するこの委員会の方針通り、マウスは腫瘍が全体重の１０％以上になった時点で安楽死させられた。
【０２９４】
細胞毒性検定。
細胞は初期密度２〜５×１０４細胞／ｍｌで培養した。これらは、３７℃の５％ＣＯ２、加湿空気中で、ペニシリン（１００ユニット／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）、および５％熱不活化ウシ胎仔血清が含まれたＲＰＭＩ培地１６４０（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）で維持された。単層で増殖している固形腫瘍細胞（例えば、ＭＣＦ−７／Ａｄｒ）に関しては、薬剤の細胞毒性は、Ｓｋｅｈａｎ他（２３）が記載した細胞蛋白含量測定用のスルホローダミンＢ法により９６ウェル微量定量プレートを使用して測定した。懸濁液中で培養された細胞（例えば、ＣＣＲＦ−ＣＥＭおよびその亜系統）に関しては、細胞毒性の測定は９６ウェル微量定量プレートを使用して、２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−カルボキサニリド−２Ｈテラゾジウム水酸化物（ＸＴＴ）−ミクロ培養テトラゾニウム法（２４）を２回繰り返して行った。この両者の方法では、各ウェルの吸光をミクロ平板リーダー（ＥＬ−３４０、バイオテック社、バーリントン、ＶＴ）で測定した。１回の試験で、試験薬剤を６または７種の濃度で試験した。用量−効果関係データは、既に記載したコンピュータ・プログラムを使用して、５０％効果量プロット（２５）により解析した。
【０２９５】
ＨＰＬＣ分析
ｄＥｐｏＢ（０．０５〜２０μｇ／ｍｌ）を含むヒト血漿またはヌードマウス血漿（３００μｌ）に３０μｌのメタノールを加えて２分間混合し、その後３００μｌのメタノールを加えた。遠心分離による上清を高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）で使用した。ノバパックＣ１８カラム（１５ｃｍ）を使用し、０．８％トリエチルアミンおよび０．２％リン酸の入った５０％アセトニトリル／水を移動相とした。２５０ｎｍにおけるＵＶ吸光度を測定した。
【０２９６】
試験管内における薬剤耐性の発達。
ヒト肺癌Ａ５４９細胞を、１４．３〜２１．４カ月間、繰り返しＩＣ５０〜ＩＣ９０の濃度の抗癌剤（ｄＥｐｏＢ、パクリタキセル、ビンブラスチンまたはアドリアマイシン）に曝露させた。数週毎に細胞を採取して用量−効果関係を解析し、ＩＣ５０値を無処理の親細胞のＩＣ５０値と比較して耐性程度を測定（ＳＲＢ蛋白質染色検定を使用）した。細胞系譜の増殖には、トリプシン処理／洗浄細胞を使用した。薬剤含有新鮮培地に加える薬剤濃度（新規ＩＣ５０濃度の１〜２倍）は、細胞の曝露を継続するため毎週高くしていった。
【０２９７】
異種移植片試験。
ヒト腫瘍細胞（５×１０６）または腫瘍組織（３０〜５０ｍｇ）をｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ウィルミントン、ＭＡ）皮下に移植した。特に断らない限り、腫瘍が特定の大きさに成長した時点で、６時間静脈点滴を１日置きに５回の投与を開始した。腫瘍容積は、カリパスで寸法を３カ所（長さ、幅および高さまたは幅）測定して求めた。体重変化および致死性は１日置きに調査した。
【０２９８】
以下の参考文献が、実施例４において引用されている。
【参考文献】
2004500388.tif 000238
2004500388.tif 000239
2004500388.tif 000240
【０２９９】
【表４】
2004500388.tif 000241
2004500388.tif 000242
【０３００】
【表５】
2004500388.tif 000243
【０３０１】
【表６】
2004500388.tif 000244
【０３０２】
実施例５。追加の生物学的データおよび類似体の合成
動物血漿中のｄＥｐｏＦの安定性。ノバパックＣ１８、３．９×３００ｍｍカラムを使用し、移動相として０．０１％のトリエチルアミンを含む５０ｍＭリン酸ニ水素カリウムと混合した５０％アセトニトリルを使用し、流速０．８ｍｌ／分で行うＨＰＬＣ法が樹立されている。ｄＥｐｏＦは波長２６０ｎｍで測定され、約１０分間の保持時間を有する。血漿安定性試験はＰｅｌ−Ｆｒｅｅｚｅ社から購入したマウス血漿およびイヌ血漿、およびＭＳＫＣＣの血液センターから購入したヒト血漿で行う。少量のｄＥｐｏＦを５０％メタノール／水に溶解して５００μｇ／ｍｌとする。２０μｌ分を２ｍｌの血漿に加えて最終血漿濃度を５μｇ／ｍｌとする。血漿標本を３７℃に保った。その時点で２００μｌの血漿を取り出し、４００μｌのメタノールに添加して血漿蛋白質を沈殿させる。２０μｌの上清をそのままＨＰＬＣで分析した。市販の凍結マウス血漿単独ではｄＥｐｏＦの半減期は約１時間で急速に消失するが、イヌおよびヒト血漿中では安定である。
【０３０３】
以下の実験は図７に示した化合物に関する。
トシラート（５）。ＣＨ２Ｃｌ２（０．２ｍｌ）に溶解したｄＥｐｏＦ（４．２ｍｇ、０．００８３ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．１ｍｌ）溶液に、ρ−トルエンスルホニルクロリド（２．４ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この溶液を１時間攪拌したときのＴＬＣ分析では、反応は少々進行していた。更に、ρ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｍｇ）と４−ジメチルアミノピリジン（０．１ｍｇ）を添加し、攪拌を０．５時間継続した。次に、反応混合物をＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）で希釈し、１ＮＨＣｌ水溶液（２ｍｌ×２）、ＮａＨＣＯ３（２ｍｌ）、ＮａＣｌ（２ｍｌ）溶液の順で洗い、ＭｇＳＯ４上で乾燥後濃縮した。シリカゲルカラム（４０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）による精製で、粘着性油状の純粋トシラート５（４．１ｍｇ、７５％）が得られた。
【ＮＭＲ６９】
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【０３０４】
ヨウ化物（６）。２１−トシラート−ｄＥｐｏＢ（５、２．０ｍｇ）のアセトン（ＨＰＬＣ級試薬、０．４５ｇ）溶液にＮａＩ（５ｍｇ）を添加した。１５分間の攪拌後、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液２滴を添加して微量のＩ２を不活化し、攪拌を３分間継続した。トルエン（０．５ｍｌ）を添加した後窒素ガスでアセトンを蒸発させた後、残留物を直接シリカゲルカラム上に載せた。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（４：１）による溶出の結果、淡黄色油状の２１−ヨード−ｄＥｐｏＢ（６、１．５ｍｇ）が得られた。
【ＮＭＲ７０】
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【０３０５】
ｄＥｐｏＢ（２または７）。２１−ヨード−ｄＥｐｏＢ（６、約０．１５ｍｇ）のＨＭＰＡ（０．１５ｍｌ）溶液に、ＮａＢＨ３ＣＮ（５ｍｇ）を添加した。反応の進行を追跡するために、少量の反応混合液を水とエーテルに分画し、エーテル層をＴＬＣに使用した。ＴＬＣ分析によると、反応は３．５時間で終了した。水（３ｍｌ）で不活化した後、反応混合液をヘキサン−ＣＨ２Ｃｌ２（２：１、２ｍｌ）で３回、ヘキサン−トルエン（２：１、２ｍｌ）で１回抽出した。シリカゲルによるクロマトグラフィ（５０％エーテルのヘキサン溶液から純粋なエーテル）精製の結果、望みのｄＥｐｏＢ（２ｂ、約０．０５ｍｇ）が得られた。ｄＥｐｏＢの同定は、標本のクロマトグラフィおよび分光分析結果を既存のデータと比較して行った。
アルデヒド（８）。ｄＥｐｏＦ（１０．０ｍｇ、０．０１９７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）溶液に、二酸化マンガン（活性化済み、１４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２時間攪拌後、混合液を小さいシリカゲルカラムパッドでろ過した。ろ液を濃縮して、粘凋、無色油状のアルデヒド８（８．９ｍｇ、８９％）を得た。
【ＮＭＲ７１】
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【０３０６】
２１−オキソ−ｄＥｐｏＢの生物学的データ。
表４に示したように、２１−オキソ−ｄＥｐｏＢの相対効力を試験した。高度耐性（ビンブラスチンに２７６６倍耐性）のＭＤＳ細胞を使用した。表に示したように、ｄＥｐｏＦはｄＥｐｏＢよりわずかに効力が低く、２１−オキソ−ｄＥｐｏＢはｄＥｐｏＢよりも３．７倍効力が低くｄＥｐｏＢと同様の弱い薬剤耐性を示した。具体的には、ＭＤＲ ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ細胞において、ｄＥｐｏＦの効力はｄＥｐｏＢよりも４．５倍低く、２１−オキソ−ｄＥｐｏＢの効力はｄＥｐｏＢよりも５．１倍低い。（ＩＣ５０ ＣＣＲＦ−ＣＥＭ／ＶＢＬ）／（ＩＣ５０ ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）比を使用すると、ｄＥｐｏＢは８．６倍、２１−オキソ−ｄＥｐｏＢは１１．９倍、ｄＥｐｏＦは３３．６倍の耐性であった。
【０３０７】
【表７】
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【０３０８】
実施例６。新規合成法によるジオキサランの合成（図４６および４７）
Ｃ１２エチルジオキサランｄＥｐｏＢ（Ｃ１２−Ｄｉｏｘ−ｄＥｐｏＢ）の合成は、既知のＴＢＤＰＳで保護されたアルキン１から始まる。化合物１はＢ−ヨード−９−ＢＢＮによるヨード−ホウ酸処理を受ける。生じるビニルボランは、１位と４位にメチルビニルケトンを付加して７８％の収率でケトン２を産生する。シリル基はＨＦ−ピリジン処理で取り除かれ第１アルコール３を産生する。ＴＢＤＰＳエーテルは後者の段階の合成と適合性がないので、この過程が必要であることがわかった。この時点では、熱力学的エノールエーテルはＴＭＳＩおよびＨＭＤＳにより９５％の収率で約９：１の比率（熱：力学）で産生される。第１アルコールは反応の間ＴＭＳエーテルとして同時に保護される。水酸基の不斉導入は、第１シリル基の加水分解および生じるジオールのビスＴＥＳ誘導体としての保護の後、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓジヒドロキシル化法で化合物４を全収率５６％で産生することにより達成される。ホスフィン酸化物５およびケトン４による効率的なホルナーオレフィン化（８６％）により、ヨウ化ビニルセグメントに最終的な炭素−炭素結合が形成される。最後に、慎重に管理された条件下で、２％酢酸のメタノール溶液を使用して０℃で最初のＴＥＳが取り除かれ、生じるアルコールはＴｒｏｃカーボネートとして再び保護され化合物８を産生する。
【０３０９】
合成の重要な工程には、ヨウ化ビニル８とポリプロピオネート９の結合と完全に合成された炭素骨格の形成が含まれる。この過程は、鈴木交差共役を使用して化合物１０を７７％の収率で産生することで達成される。その後、ｔｅｒｔ−ブチルエステルはＴＥＳＯＴｆ処理により脱保護され、生じるシリルエステルとＣ１５シリルエーテルは希塩酸のメタノール溶液処理により同時に加水分解される。その結果生じるｓｅｃｏ−酸は、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ環化を受け、７１％の収率でマクロラクトン１２を産生する。Ｔｒｏｃカーボネートは両者とも金属亜鉛の酢酸溶液で取り除かれ、６８％の収率でジオール１３を産生する。第１アルコールの選択的酸化はＴＥＭＰＯ／ヨードベンゼンジアセテートで達成され、Ｃ７酸化の徴候は認めない。エチレングリコールアセタールは、ビス（トリメチルシリル）エチレングリコールと触媒性ＴＭＳＯＴｆを使用してノヨリの方法で合成した。最後に、粗産物はＨＦ−ピリジンで脱シリル化され最終産物１５を産生する。この方法でこれまでに５０ｍｇの最終産物が生産されて、高度な生体内生物学的試験を支えている。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、アシル・セクターの合成にアルドールカップリング反応を使用してエポチロンおよびその類似体を合成するためのモジュラープランを示す図である。
【図２】図２は、スズキカップリング、ノヨリ還元およびマクロラクトン化を経由したデオキシエポチロンＦの合成を示す図である。
【図３】図３は、試薬および条件が（ａ）ｉ）９−ＢＢＮ−Ｉ、ヘキサン、ｉｉ）メチルビニルケトン、ｉｉｉ）３Ｎ ＮａＯＨ、トルエン、１００℃、６５％、（ｂ）ＴＭＳＩ−ＨＭＤＳ、ＣＨ２Ｃｌ２、−２０℃から室温、（ｃ）１モル％ＯｓＯ４、ＡＤ−ｍｉｘ−α、ＭｅＳＯ２ＮＨ２、ｔ−ＢｕＯＨ−Ｈ２Ｏ（１：１）、２段階について５５％、（ｄ）ＴＥＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ、８５％である、ケトン１１への触媒による非対称径路を示す図である。
【図４】図４は、試薬および条件が（ａ）ｉ）ＴｉＣｌ４、ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＩＰＥＡ、８７％、ｉｉ）ＴＥＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ、８４％、（ｂ）ｉ）グリコール酸、ＴＥＳＣｌ、ＮａＨ−ＴＥＡ、エーテル、０℃、その後、ｔ−ＢｕＣＯＣｌ、−７８℃、ｉｉ）ｎ−ＢｕＬｉ、−７８℃から室温、３８〜４１％、（ｃ）ＬＨＭＤＳ、−７８℃、ＴＨＦ、８１％、（ｄ）ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ：ＴＨＦ（３：１：１）、８６％、（ｅ）ｉ）ＣＨ３ＯＮＨＣＨ３、ＡｌＭｅ３、ＣＨ２Ｃｌ２、ｉｉ）ＴＥＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ、８８％、（ｇ）ＭｅＭｇＢｒ、０℃、９３％でケトン１１への立体選択性のアルキル化径路を示す図である。
【図５】図５は、ある官能化エポチロン類似体の合成と利用を示す図である。
【図６】図６は、２１−ヒドロキシ−デオキシエポチロンＢから２１−オキソ−デオキシエポチロンＢへの変換を示す図である。
【図７】図７は、ある２１−官能化１２，１３−デオキシエポチロンＢ類似体の合成を示す図である。
【図８】図８は、増進した水溶性を提供するある両性イオンの合成を示す図である。
【図９】図９は、ある本発明の化合物のペプチドへの共役を示す図である。
【図１０】図１０は、ある炭水化物−エポチロン共役体の合成を示す図である。
【図１１】図１１は、直接Ｃ−Ｃ結合で接合したある炭水化物−エポチロン共役体の合成、およびその他のエポチロン類似体を示す図である。
【図１２】図１２は、あるエポチロン二量体の合成を示す図である。
【図１３】図１３は、デンドリマーおよびポリマー上に多数存在する本発明のエポチロンを示す図である。
【図１４】図１４は、生分解可能なポリマーに結合した本発明のあるエポチロンの合成を示す図である。
【図１５】図１５は、ある本発明の水溶性エポチロン誘導体の合成を示す図である。
【図１６】図１６は、チアゾリル部分７Ｇの合成を示す図である。
【図１７】図１７は、保護された環化前駆体１３Ｇｃの合成を示す図である。
【図１８】図１８は、ｄＥｐｏＦ（２Ｇｄ）の合成を示す図である。
【図１９】図１９は、連続的なアルドール反応によるＯ−Ａｃｙｌ Ｗｉｎｇの合成設計を示す図である。
【図２０】図２０は、試薬および条件が（ａ）トルエン、１１０℃、２時間、９６％、（ｂ）ＨＯＰＰｈ２、Ｃｓ２ＣＯ３、ｃａｔ．ＴＢＡＩ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、４８時間、８２％、（ｃ）ＬＨＭＤＳ、ＴＨＦ、−７８℃、５２％、（ｄ）２．５ ｅｑ Ｄｉｂａｌ−Ｈ、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、９８％、（ｅ）Ｃｌ３ＣＣＨ２ＯＣＯＣｌ、ピリジン、ＣＨ２Ｃｌ２、８６％で、ホーナー縮合を経るＯ−Ａｌｋｙｌ ｗｉｎｇの合成を示す図である。
【図２１】図２１は、ＴＥＳエーテル対掌体３８のアルドール縮合を示す図である。
【図２２】図２２は、試薬および条件が（ａ）ＣＨ（Ｏｉ−Ｐｒ）３、ｉＰｒＯＨ、ｃａｔ．ＴｓＯＨ、８８％、（ｂ）ＬＤＡ、−７８℃、８５％、４６：４７＝４：１、（ｃ）ＴｒｏｃＣｌ、ピリジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、９９％、（ｄ）Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ、ｃａｔ．ＴｓＯＨ、８８％、（ｅ）ＴＨＦ、８９％、ｄｒ＞２０：１、（ｆ）ＴＢＳＯＴｆ、２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、−７８℃、８１％、（ｇ）ＴＥＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ、９６％で、Ｏ−Ａｃｙｌ Ｗｉｎｇへの新規な合成径路を示す図である。
【図２３】図２３は、試薬および条件が（ａ）ｉ）９−ＢＢＮ−Ｈ、ＴＨＦ（ｉｉ）ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＡｓＰｈ３、ＤＭＦ−ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ、室温、２時間、７２％、（ｂ）ＴＥＳＯＴｆ、２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、−７８℃から室温、８時間、（ｉｉ）ＨＣｌ−ＣＨ３ＯＨ、ＴＨＦ、０℃、６９％で、ｄＥｐｏＢの全合成を示す図である。
【図２４】図２４は、試薬および条件が（ａ）ｉ）９−ＢＢＮ−Ｈ、ＴＨＦ（ｉｉ）ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＡｓＰｈ３、ＤＭＦ−ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ、室温、８時間、８９％、（ｂ）ＴＥＳＯＴｆ、２，６−ルチジン、ＣＨ２Ｃｌ２、−７８℃から室温、８時間、（ｉｉ）ＨＣｌ−ＣＨ３ＯＨ、０℃、７８％、（ｃ）２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド、（Ｃ２Ｈ５）３Ｎその後４−ＤＭＡＰ、トルエン、低速添加３時間、６０〜７０％、（ｄ）Ｚｎ、ＡｃＯＨ−ＴＨＦ、室温、１時間、９０％、（ｅ）ＨＦ−ピリジン、ＴＨＦ０℃から室温、９１％で、ｄＥｐｏＦの全合成の完結を示す図である。
【図２５】図２５は、ＥｐｏＦおよび光アフィニティー標識したｄＥｐｏＦの合成を示す図である。
【図２６】図２６は、あるアザ類似体を示す図である。
【図２７】図２７は、Ｃ１５−エピ−アザ−デオキシエポチロンＢを調製するための合成径路を示す図である。
【図２８】図２８は、スズキカップリング、ノヨリ水素化およびマクロラクトン化を介したアザ−ｄＥｐｏＢの合成を示す図である。
【図２９】図２９は、ヨウ化ビニル５とアシル・セクター６のスズキカップリングを示す図である。
【図３０】図３０は、アジド断片とのスズキカップリングを示す図である。
【図３１】図３１は、ヨウ化ビニルアジド１７とメチルエノールエーテル２１とのスズキカップリングを示す図である。
【図３２】図３２は、アザｄ−ＥｐｏＢの合成を示す図である。
【図３３】図３３は、Ｃ１５−アザ−ＥｐｏＢによる処理の後の、ＭＸ−１腫瘍をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図３４】図３４は、６ｍｇ／ｋｇのＣ−１５−アザ−ＥｐｏＢ、Ｑ２Ｄ×６および３０ｍｇ／ｋｇのｄＥｐｏＦ、Ｑ２Ｄ×６（静脈注射６時間）の後の、ヒト白血病Ｋ５２６腫瘍をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図３５】図３５は、ヒト結腸癌をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図３６】図３６は、ヒト白血病Ｋ５６２の異種移植片をもつヌードマウスのｄＥｐｏＢ、タキソール、アドリアマイシン、およびビンブラスチンによる治療効果を示す図である。
【図３７】図３７は、  ヒト白血病Ｋ５６２の異種移植片をもつヌードマウスのｄＥｐｏＢとタキソールによる治療効果を示す図である。
【図３８】図３８は、１５−アザ−ＥｐｏＢまたはｄＥｐｏＦ処理（静脈注射６時間）の後の、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ腫瘍をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図３９】図３９は、１５−アザ−ＥｐｏＢまたはｄＥｐｏＦ処理（静脈注射６時間）の後の、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ腫瘍をもつヌードマウスの体重を示す図である。
【図４０】図４０は、ｄＥｐｏＦ（静脈注射６時間（Ｑ２Ｄ×５））の後の、ＭＸ−１をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図４１】図４１は、Ｃ−１５−アザ−ＥｐｏＢまたはｄＥｐｏＦ処理の後の、ＭＸ−１腫瘍をもつヌードマウスの腫瘍サイズを示す図である。
【図４２】図４２は、Ｃ−１５−アザ−ＥｐｏＢまたはｄＥｐｏＦ処理の後の、ＭＸ−１腫瘍をもつヌードマウスの体重を示す図である。
【図４３】図４３は、ヒト肺癌Ａ５４９に対する抵抗性を示す図である。
【図４４】図４４は、血漿内での安定性（マウスｖｓヒト）を示す図である。
【図４５】図４５は、６ｍｇ／ｋｇの静脈注射（１０分間）の後の、イヌでのｄＥｐｏＢの薬物動態を示す図である。
【図４６】図４６は、Ｃ１２エチルジオキサレンヨウ化ビニルの合成を示す図である。
【図４７】図４７は、ここに述べた新規な方法論を使用するＣ１２環状アセタールの合成を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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