(57)【要約】本発明は、環境的に望ましい生物学的殺真菌剤として用いるための、微生物バチルス・リヘニホルミス菌株ＳＢ３０８６の単離された生物学的に純粋な培養物を開示する。本発明は、微生物剤の生物学的殺真菌活性を向上させるための方法も開示する。さらに、本発明は、微生物剤を含む栄養素組成物および、前記菌株を利用する植物真菌病およびアスペルギルス・ニガーの感染を制御する方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＴＣＣ菌株５５４０６の確認指標を有する微生物接種体バチルス・リヘニホルミス菌株ＳＢ３０８６を含む組成物を適用することを含んでなる、真菌生物を制御する方法。
【請求項２】
微生物接種体が濃縮胞子の状態である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
微生物接種体が活性植物細胞の状態である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記菌株が、約１×１０４〜約１×１０１２ＣＦＵ／ｍｌの範囲の濃縮液体胞子として存在する請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記菌株が、約１×１０５〜約１×１０１３ＣＦＵ／ｇの範囲の濃縮乾燥胞子として存在する請求項２に記載の方法。
【請求項６】
非毒性量の界面活性剤、防腐剤、植物養分および任意にバイオサプリメントをさらに含む前記組成物を適用する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
植物、種子または栄養繁殖体に適用するのに適した状態で前記組成物を適用する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記菌株が、真菌症による植物への損傷に対して効果的な量で存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物を微粒子、噴霧、顆粒、粉末または液体として適用する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物を苗条、葉、種子、栄養繁殖体または根に適用する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物を土壌処理剤として適用する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記菌株が、植物病原性真菌以外の真菌に対して効果的な量で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
植物病原性真菌以外の前記真菌がアスペルギルス・ニガーである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物を微粒子、噴霧、顆粒、粉末または液体として適用する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物を、アスペルギルス・ニガーによる表面汚染に対して効果的な量で適用する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
殺真菌剤を生成することができる微生物を、前記微生物の生物学的殺真菌活性を向上させる栄養組成物と一緒に適用することを含む、微生物剤の生物学的殺真菌活性を向上させる方法。
【請求項１７】
前記組成物が、非毒性量の界面活性剤、防腐剤、植物養分および任意にバイオサプリメントを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記栄養組成物がＳＢ３０８６を含まない７１０−１４０である、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的殺真菌剤に関する。特に、本発明は、真菌により引き起こされる植物病を含む真菌生物の成長を制御する微生物バチルス・リヘニホルミス菌株ＳＢ３０８６、およびその菌株ＳＢ３０８６を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
真菌種により引き起こされる病気は、植物界中において最も広がっていると共に損傷的であると考えられる。現在、植物真菌病の制御は、主として、特定の化学物質の用途に依存する。これらの化学物質の一部は、有害な環境およびヒトの健康の問題を有することが知られているが、それにも拘わらず、そのような化学物質は、主要な真菌病に対する強度の活性、および環境的に安全で効果的な代替手段の利用性故に、広く使用し続けられている。
【０００３】
通常、根領域（根食性）および葉領域（葉面）において一般的に植物を感染する病気の生物学的制御は、より伝統的な合成化学的制御法より好ましい。そのような生物学的制御剤は、通常、植物宿主または環境に損害をあまり与えないまたは全く与えず、一部のものは、正常な植物成長を促進さえし得る。しかしながら、大部分のそのような生物学的制御有機体は、典型的には、真菌病に対する効果の範囲が非常に限定される、または実際の野外の条件下および治療中に生き残る性能が非常に制限される。
【０００４】
特定の微生物を用いることにより植物真菌病を制御する試みが成されてきた。例えば、米国特許第５，５８９，３８１号（ＮｅｙｒａおよびＳａｄａｓｉｖａｎ、１９９６年）は、特定の植物病原を抑制するある程度の性能を有するバチルス・リヘニホルミス菌株ＰＲ１−３６ａを記載している。しかしながら、特定の生きている生物学的制御生物を適用する努力は、植物病原に対する効果の範囲が狭いことにより、またはこれらの生物の固有の不安定性により大きく制限された。多くの菌株は、数週間以内に、標準的貯蔵条件に屈服する、または数時間以内に、比較的高い温度、噴霧後の乾燥、および活発に成長している生物への太陽紫外光（ＵＶ）の有害効果を含む典型的野外条件に屈服することが多い。生物学的制御菌株が適用される位置において、そのような生物をその場で培養しようとする試みは、有用性がある。しかしながら、培養物汚染の過酷な問題、および温度およびＵＶ効果を避けるために夕方に適用する必要性によって、困難、厳しい労働、高い費用および非実用性が生じることが多い。従って、真菌病により引き起こされる植物への損傷を抑制する環境的に安全で効果的な生物学的制御手段は今まで達成されておらず、農業界において現在用いられている危険な化学物質より優れたものが長年求められている。
【特許文献１】
米国特許第5589381号
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
従って、本発明の目的は、広範囲の植物真菌病および他の真菌生物の制御のための環境的に好ましく効果的な生物学的試薬を提供することにある。
【０００６】
本発明のさらなる目的は、バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の独自の菌株を利用して植物真菌病を制御するための組成物および生物学的方法を提供することにある。この菌株ＳＢ３０８６の使用により、標準的生体異物の化学試薬への実用的天然産代替物が提供され、それにより、植物における真菌病の制御または除去を達成するための環境的に安全な手段が提供される。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、植物に適用するのに適している状態の前記ＳＢ３０８６菌株を含んでなる組成物を提供することにある。そのような組成物は、非毒性の界面活性剤、非毒性量の植物養分、防腐剤、バイオサプリメント等を含み、活性植物胞子、液体、流動性粉末、顆粒、噴霧乾燥材料の状態である、またはもう一つのキャリア材料を有してよい。
【０００８】
本発明のもう一つの目的は、本発明の生物学的殺真菌剤を利用して植物真菌病を制御する方法を提供することにある。この生物学的殺真菌剤は、苗条、根、種子、栄養繁殖体に適用するまたは、活性植物細胞を含む液体、噴霧、粉末、根浸液、顆粒、微粒子等のような任意の適当な状態の土壌または植物処理剤として適用することができる。
【０００９】
本発明のさらなる目的は、殺真菌剤を生成することができる微生物を、前記微生物の生物学的殺真菌活性を向上させる栄養組成物と一緒に適用することを含む、微生物剤の生物学的殺真菌活性を向上させる方法を提供することにある。
【００１０】
本発明の種々の他の目的および利点は、後述する図面の簡単な説明および本発明の詳細な説明から明らかとなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の前記および種々の他の目的および利点は、ＡＴＣＣ寄託番号５５４０６の確認指標を有するバチルス・リヘニホルミス菌株ＳＢ３０８６の生物学的に純粋な培養物、および微生物剤の生物学的殺真菌活性を向上させる組成物により達成される。
【００１２】
本発明の重要な局面は、病原性真菌の自然の拮抗または成長抑制により機能する生物学的有機体を用いて植物病原性真菌種を制御し、それにより、有害病の損傷および拡散を制限することである。本発明は、特に、予想外にも、広範囲の真菌病に対する性能抑制効果を提供する非常に強い性能のみならず、長期貯蔵および実用的野外適用手順または条件を生き抜く生来の性能も有する、新規バクテリア土壌単離物バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の発見に関する。
【００１３】
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６が、太陽からの紫外光（ＵＶ）による損傷に比較的高い抵抗性を示す高密度な胞子被覆を形成する、並外れの驚くべき特性を有することがわかった。これは、野外条件下にしばしば遭遇する乾燥および高温による生活力の損失に抵抗性があることもわかった。さらに、本発明は、約１０４〜約１０１２ＣＦＵ／ｍｌの範囲の高濃度液体状の優れた品質のＳＢ３０８６胞子の実用的な大規模な工業的成長を達成した。濃厚胞子は噴霧乾燥し、約１０５〜約１０１３ＣＦＵ／ｇの範囲の濃度の流動性粉末として、または他の適当な状態で用いることができる。
【００１４】
特記しない限り、ここで用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。ここに記載のものと類似または同等の任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において用いることができるが、ここに記載の方法および材料が好ましい。特記しない限り、ここで用いられるまたは考えられる技術は、当業者に良く知られた標準的方法である。これらの材料、方法および例は、単なる例示であり限定されるものではない。
【００１５】
ここで用いられる「生物学的制御」または「生物学的殺真菌剤」という用語は、合成化学試薬の使用と対照的に、バクテリアを用いるような生物学的手段により真菌活性を制御するまたは除去することを意味する。
【００１６】
ここで用いられる「生物学的殺真菌活性を向上させる」という用語は、微生物剤の生物学的殺真菌活性が、栄養組成物と一緒にまたは組み合わせて適用された場合に、栄養組成物を用いないで得られたものよりもかなりまたは実質的に大きいことを意味している。
【００１７】
ここで用いられる「生物学的サプリメント」という用語は、一般的に理解されている無機栄養素およびマイクロ栄養素以外の、植物の成長、耐性、収率または品質に直接または間接的に有益であると理解されている天然産材料と定義される。そのような生物学的サプリメントの例には、ｉ）海産植物抽出物、例えば、ノルウェーケルプ植物アスコフィラム・ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｏｓｕｍ）から得られるもの；ｉｉ）動物肥料および加工汚水スラッジ；ｉｉｉ）動物誘導生成物、例えば、骨、羽毛、毛髪および魚粉；ｉｖ）フミン酸およびフルビン酸材料、例えば、採掘されたレオナルダイト（ｌｅｏｒｎａｒｄｉｔｅ）、泥炭；ｖ）紙加工副産物（例えば、スルホン酸リグニン）；ｖｉ）微生物の代謝および植物および動物廃物の部分的分解により得られる堆肥材料；等がある。
【００１８】
ここで用いられる「栄養繁殖体」という用語は、全植物への再成長および／または所望の植物成分の繁殖を可能にする全ての本質的要素を含む植物の成分または区分を意味する。そのような栄養繁殖体の例にはｉ）種子；ｉｉ）目または「種子部品」、例えばジャガイモからのもの；ｉｉｉ）適当な成長条件下に置かれて新しい根を形成することができる茎切断物；ｉｖ）根または根茎部分；等がある。
【００１９】
天然土壌微生物バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６は、スクレロチニア・ホメオカルパ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ）（ダラースポット病：Ｄｏｌｌａｒ  Ｓｐｏｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）（リゾクトニア：ブライト：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｂｌｉｇｈｔ）、リゾクトニア・オリザエ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｏｒｙｚａｅ）（リゾクトニア・シース・スポット：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  Ｓｈｅａｔｈ  Ｓｐｏｔ）、ピリクラリア・グリセア（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｇｒｉｓｅａ）（グレイ・リーフ・スポット：Ｇｒａｙ  Ｌｅａｆ  Ｓｐｏｔ）、ミクロドチウム・ニバレ（Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ  ｎｉｖａｌｅ）（ピンク・スノー・モールド：Ｐｉｎｋ  Ｓｎｏｗ  Ｍｏｌｄ）およびバイポラリス・ソロキニアナ（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ  ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ）（ヘルミントスポリウム・ブライト：Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｂｌｉｇｈｔ）を含む広範囲の重要な植物病原性真菌に対して効果的であるとわかった。そのような示された広範囲の効果、およびこの独自の生物の比較的大規模な成長および配達の利用性故に、この産業の実務家は、真菌感染に対する生物学的制御方法を用いることができる。ＳＢ３０８６の独自の特徴には：標準的大規模発酵条件および培地下の有効かつ迅速な成長；最適成長のための広い温度範囲（１８℃〜５０℃）；既知の発酵手順下の成長力のあるバクテリア集団の高い割合の安定な胞子を形成する傾向；過度の温度および乾燥のような最適条件に及ばない条件下に長期間生き延びる胞子の性能；ＵＶ日光に対する胞子の固有の抵抗；土壌および根の環境において典型的に遭遇する低酸素条件下に成長する性能；植物の根および葉の表面にコロニーを作る性能；および標準的毒物学および病因論の研究に基づく動物および植物への種々の安全性がある。
【００２０】
バチルス・リヘニホルミスおよびバチルス・スブチリス種の標準的特徴と比べたバチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の分類学的特徴を表１に列挙する。
【００２１】
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６は、受け入れ番号ＡＴＣＣ５５４０６下にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．に寄託された。寄託物は、発行特許の全期間中、ＡＴＣＣにおいて生育可能な条件下に維持され、制限はされないが寄託物を支配する法律の規定に従って、任意のヒトおよび団体が非商業的用途で利用できるようにされる。
【００２２】
本発明の種々の態様を次に記載する。
【実施例１】
【００２３】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の単離）
健康な植物および芝生の根および隣接領域から、土壌サンプルおよび根の洗浄材料を集めた。胞子を形成することができるバクテリア菌株が選択されるように種々の固体成長培地上で希釈プレート分析を行うことにより個々の単離物を得た。特に、植物および芝生の根を無菌燐酸緩衝液中で洗い、次に、８０℃で１０分間加熱した。加熱洗浄物を、続いて、新鮮な緩衝液中に１０倍増で希釈し、標準法の寒天プレート上に広げ、３２℃で一晩インキュベートした。個々のコロニーを別々に培養し、特定の他の植物病原性真菌と同様に指示薬ゲオトリチャム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）真菌を抑制する性能についてスクリーニングした。この指示薬真菌を抑制し得るものを、さらなる植物病原性真菌種に対するさらなる比較試験のために選択した。指示薬プレート上の抗真菌活性を査定するために、市販のジャガイモデキストロース寒天を含む滅菌１５ｃｍペトリ皿の中心に、標的真菌（半固体培地上で成長している培養物から得られる）の小さな環状プラグ（４ｍｍ）を置いた。同時に、試験すべき候補バクテリア単離物の個々の一晩培養物（ＬＢブロス中で成長）の５μｌ体積を、真菌プラグから約３ｃｍ離れて別々に置いた。２３℃で３〜４日培養後、抑制の証拠を記録した。
【実施例２】
【００２４】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６と、他のバチルス・リヘニホルミス型菌株との性能比較）
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６は、公共の供給源（例えば、ＡＴＣＣ）から得られる他の既知のバチルス・リヘニホルミス菌株と共通する特徴を共有するが、これは、少なくとも、広範囲の植物病原性真菌の成長を抑制する予想外に強力な性能において、独自に異なっている。この驚くべき特性は、以下のようにして決めた。
【００２５】
実施例１に記載のように、植物真菌病原：スクレロチニア・ホメオカルパ（ダラースポット）、リゾクトニア・ソラニ（リゾクトニア・ブライト）、リゾクトニア・オリザエ（リゾクトニア・シース・スポット）、ピリクラリア・グリセア（グレイ・リーフ・スポット）、ミクロドチウム・ニバレ（ピンク・スノー・モールド）およびドレヒスレラ・ジクチオイデス（ヘルミントスポリウム・ブライト）の活発に成長している培養物から小さな環状プラグを得た。これらの環状プラグを、標準的成長培地（ジャガイモデキストロース寒天のようなもの）を含むペトリ皿の中心に置いた。四つの異なるバチルス・リヘニホルミス菌株によるこれらの真菌の成長の抑制を査定し、５＝強度抑制から０＝無抑制の階級尺度で評価（実施例１に示すように）した。結果を表２に示す。これらの結果は、広範囲の植物病型におけるバチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の優れた性能を明らかに示している。これは、特に、ダラースポット（スクレロチニア・ホメオカルパ）において真実であり、従来技術のバクテリア菌株バチルス・リヘニホルミス  ＰＲ１−３６ａ（ＮｅｙｒａおよびＳａｄａｓｉｖａｎの米国特許第５，５８９，３８１号）は、ＳＢ３０８６と比較して性能が非常に乏しかった。
【実施例３】
【００２６】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６と、種々の他の土壌微生物単離物との性能比較）
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６のような単独の土壌微生物が種々の標的真菌に対して強い抗真菌活性を示す性能は、表４に示す結果により示されるように、この土壌バクテリアの驚くべき並外れた特徴であり、複数の属および種からの種々の微生物による異なる抗真菌活性を、ＳＢ３０８６と比較した。具体的には、基準として、二つの異なる真菌抑制特性を試験した。最初の特性（Ａ）は、試験バクテリアコロニーの、成長している抗真菌剤との界面における病原真菌菌糸体の暗くなる変色である。この暗化は、真菌によるメラニンの生成増加に関わることが多く、真菌防御機構の一部であると考えられている。第二の特性（Ｂ）は、生物学的制御バクテリアが、真菌菌糸の成長および進行を抑制する性能を評価する。これは、成長しているバクテリアコロニーと、成長している真菌との間の明らかな抑制領域により示される。
【００２７】
一部の菌株は、ＳＢ３０８６と共通する特定の抗真菌特性を示すが、大部分の菌株は制限された活性を示し、ＳＢ３０８６と同様に強い活性を有するものは見られなかった。
【実施例４】
【００２８】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６が他の望ましくない真菌の成長を抑制する性能）
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６の抗真菌性能は、他の状況での制御が重要となり得る、他の望ましくない真菌生物にも及ぶ。例えば、ＳＢ３０８６は、浴室のタイルおよびしっくいの暗化および変色を引き起こす一般的真菌であるアスペルギルス・ニガーの成長を抑制することができる。表４に示すように、ＳＢ３０８６は、臭気減少および他の清掃用途で有用であることが知られている有機体と比べて、この菌株の成長の減少において優れている。
【実施例５】
【００２９】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６が真菌病を制御する野外性能）
実験室試験によりＳＢ３０８６の広い範囲の抗真菌効果を示し、実際の野外条件下における生物学的制御微生物の機能および耐性を示すための研究を行った。バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６について、天然産真菌病原による攻撃下の自生環境において成長している植物に対するこの野外性能を示した。
【００３０】
この研究のために、ゴルフコースおよびスポーツフィールドで広く用いられている経済的に重要な芝生であるペンクロス・ベントグラス（Ｐｅｎｎｃｒｏｓｓ  Ｂｅｎｔｇｒａｓｓ）を、代表的試験対象として選択した。真菌性病原であるスクレロチニア・ホメオカルパ（ダラースポット病）は、この芝生を激しく損傷し、ゴルフコースおよびスポーツフィールドを荒らす。この結果は、スクレロチニア・ホメオカルパの感染が、ＳＢ３０８６の胞子懸濁物の噴霧適用後に定着した芝生上で強度に抑制されることを示していた。約１．０×１０９ＣＦＵ／ｍｌのＳＢ３０８６を含む濃厚胞子組成物を、ダラースポット病で均一に感染された定着Ｐｅｎｎｃｒｏｓｓ  Ｂｅｎｔｇｒａｓｓに、葉スプレーとして１８オンス／１０００平方フィートの割合で適用した。処理を、同様の感染芝生スポット中にランダムに配された四つの２フィート×４フィートプロットに適用した。比較用の繰り返しプロットを、肥料（０．２ポンド窒素／１０００平方フィートでの、Ｐｅｔｅｒ’ｓ２０−２０−２０）、化学的制御剤クロロタロニル（８オンス／１０００平方フィートでの、Ｄａｃｏｎｉｌ  ＷＳ）または水（対照）で処理した。処理は以下のように行った：０および７日目にＳＢ３０８６；０、３、７および１０日目にＳＢ３０８６；０および７日目にＰｅｔｅｒ’ｓ（登録商標）肥料；および０日目にクロロタロニル（製造者の薦めによる）。個々のプロットの被覆％に基づく病気感染の評価を、０、７および１４日目に行った。
【００３１】
結果を図１に示す。このデータから、ＳＢ３０８６の胞子懸濁物の噴霧適用により、処理開始から２週間以内に植物表面上の病気兆候が大幅に低下したことが明らかである。特に、処理開始前に病気兆候がすでに非常に明らかであった。７０％を超える対照（非処理）プロットが１４日後に目に見える病気の崩壊を示し続けたが、バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６で処理した植物の１５％未満のプロット領域が、同じ期間中に、目に見える病気の兆候を示した。化学的病気制御剤クロロタロニルの適用のみが、ＳＢ３０８６の病気治療性能に近づくことができる。もちろん、クラスＩＩ発癌物質であるのみならず魚および水生生物に毒性でもあるクロロタロニルを用いる一般的に用いられる化学的制御法と比較して、ＳＢ３０８６の使用が、植物上の真菌病処理のための一層環境的に安全である手段を提供することに注目すべきである。
【実施例６】
【００３２】
（バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６によるリゾクトニア・ブライト病（ブラウン・パッチ：Ｂｒｏｗｎ  Ｐａｔｃｈ）の野外制御）
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６が植物病を制御する野外性能の幅をさらに示すために、自然に感染した植物上のＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｂｌｉｇｈｔ病に対して、ＳＢ３０８６を用いて、種々の野外および気候条件下に三つの異なる位置で野外試行を行った。典型的には、リゾクトニア・ブライトは、真菌リゾクトニア・ソラニにより引き起こされ、芝生、小麦、トウモロコシ、潅木、木、大部分の野菜および多年生観賞植物を含む多くの植物に共通の病気である。これらの試行のために、リゾクトニア・ブライトの著しい症候を示すフェスキュー（Ｆｅｓｃｕｅ）およびベントグラス（Ｂｅｎｔｇｒａｓｓ）種の定着芝生を、７日毎に葉スプレーとして１８オンス／１０００平方フィートで適用される、約１．０×１０９ＣＦＵ／ｍｌを含むＳＢ３０８６胞子懸濁物で、並列的（３）にランダムに３フィート×５フィーのプロットにおいて、処理した。試験領域における同様のプロットを、二つの化学的制御剤Ｄａｃｏｎｉｌ（登録商標）（クロロタロニル；Ｚｅｎｅｃａ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）またはＨｅｒｉｔａｇｅ（登録商標）（アゾキシストロビン；Ｚｅｎｅｃａ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の一方で、推薦される割合および間隔で処理する、または非処理対照プロットとして維持させた。非処理対照プロットに対する、各処理の病気減少％を表５に示す。
【００３３】
データは、リゾクトニア・ブライト（ブラウン・パッチ）に対するバチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６による著しい病気制御を示しているが、病気減少水準は、化学試薬を用いて観察される水準に達しなかった。しかしながら、これらの試行は、種々の場所および気候条件における複数の植物型への野外でのＳＢ３０８６の病気標的効果の幅を明らかに示している。
【００３４】
もちろん、生物学的殺真菌剤を、噴霧、粉末、顆粒、液体等のような任意の適当な状態で植物に適用することができる。本発明の生物学的殺真菌剤を含む組成物は、当業者に示差されるように、界面活性剤、非毒性量の植物栄養素（例えば、肥料およびマイクロ栄養素）等のような一般的成分も含んでよい。
【実施例７】
【００３５】
（組成物の組成）
本発明の組成物は、有機窒素、キレート化亜鉛、キレート化鉄のような、並びに例えば海産植物抽出物である天然有機成長向上剤のような植物栄養素およびマイクロ栄養素を非毒性量で含む濃厚液体組成物である。組成物中に活性成分バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６に加えてこれらの成分を含むことは、病気の攻撃中に遭遇する損傷およびストレスから植物が回復するのを補助することができる。本発明による好ましい組成物を表６に示す。もちろん、当業者に示差されるように、他の水準および型の栄養素、有機材料等を組成物中に置換または添加することができる。
【００３６】
濃厚物は、通常、約２〜３００体積の水中に希釈され、葉スプレーにより適用される。芝生上では、適用割合は、通常、適当な液体スプレー装置を用いて１０００平方フィートの芝生表面に噴霧される水２ガロン中に好ましい組成物が１８オンスの割合である。そのような装置は、標準的灌漑システムによる適用を含む。適用される好ましい組成物の量は、病気の圧力および植物の全体的健康に依存して、１０００平方フィート当たり約２乃至約３６オンスで変わり得る。また、本発明の乾燥組成物は、バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６胞子を流動性粉末として噴霧乾燥することにより調製することができる。これを、次に、乾燥栄養素、マイクロ栄養素および有機成長剤とブレンドする。適用のために、ＳＢ３０８６の噴霧乾燥胞子を含む乾燥組成物を、約８．０×１０７ＣＦＵ／ｍｌの好ましい胞子濃度になるように水中に懸濁させる。次に２ガロンのこの懸濁液を１０００平方フィートの植物表面上に前述のように適用する。単位面積当たり適用される懸濁胞子の濃度は、病気の圧力および型に依存して、約５×１０７ＣＦＵ／平方フィートから約１×１０１１ＣＦＵ／平方フィートで変わり得る。
【００３７】
（野外試行）
野外研究は、バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６菌株が真菌病を制御する重要な効果が、ここの表６に記載の好ましい有機栄養サプリメントと組み合わせて用いた場合に、最も良く達成されることを示した。濃厚状であってもこの微生物を単独で適用すること、またはＳＢ３０８６菌株を含まない栄養組成物（７１０−１４０栄養素ベースと表される）を適用することは、市場で望ましい水準の病気制御を提供するのには効果が著しく劣っていた。いかなる理論または作用機構等にも拘束されることなく、この現象は、胞子状のＳＢ３０８６の適用が、安定な市販生成物に標準的であるように、植物滲出材料がバクテリア胞子の発芽を誘発することを必要とするからである。もちろん、発芽して活動的に成長している成長力のある細胞になった後にのみ、バクテリア菌株（例えば、ＳＢ３０８６等）は、病気制御の原因となる抗真菌剤を生成することができる。組成物中の注意深く選択された栄養素が、植物に、重要なアミノ酸および糖のような物質を生成および排出させ、これが、バクテリア胞子発芽を誘発する。この発見は、何故、実験室条件下にある程度効果的な多くの生物学的殺真菌剤が、有効な栄養組成物を用いることなく適用された場合、野外条件下に顕著な病気制御を示すことができることが多いか説明している。
【００３８】
図２に示す結果により示されるように、本発明の組成物が平均数の病気障害を引き起こす性能は、標準的化学的殺真菌剤（クロロタロニル）を用いて得られる病気縮減の範囲にある。７１０−１４０栄養素ベース（ＳＢ３０８６菌株を含まない）またはＳＢ３０８６胞子のみで処理することは、野外条件下にこの病気を制御することに効果が著しく低い。この野外研究において、クロロタロニルを受けるプロット（１．８２オンスＤａｃｏｎｉｌ  Ｕｌｔｒｅｘ（登録商標）８２．５ＳＤＧ）を除いて、四つの４フィート×５フィートのランダムプロットを、標準的割合および頻度で適用される提示材料を用いる葉スプレーとして一週間に二回処理した。ＳＢ３０８６および７１０−１４０栄養素ベース（ＳＢ３０８６菌株を含まない）を含む好ましい７１０−１４０組成物を、１０００平方フィート当たり２０オンスの割合で適用した。ＳＢ３０８６単独（栄養素ベースを含まない）で処理すると、少なくとも、好ましい７１０−１４０組成物を適用した場合と同じ単位面積当たりの数の胞子を受け取った。
【００３９】
図２に示す結果は、明らかに、（ｉ）７１０−１４０中におけるような、好ましい栄養素組成物中におけるＳＢ３０８６菌株の著しい効果；および（ｉｉ）ＳＢ３０８６菌株を含まない栄養素組成物またはＳＢ３０８６菌株そのものの、好ましい栄養素組成物と離れて用いた場合の、有効性の少ない性能、を達成している。
【００４０】
本発明の目的および利点に従って、態様例を説明した。これらの例は単に説明するものであり発明を制限するものではないと考えられる。多くの変化および修飾が当業者に明らかであり、全てのそのような変化および修飾が、本発明の範囲に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】
バチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６を含むスクレロチニア・ホメオカルパ（ダラースポット）病を制御するための種々の試薬を比較する研究の結果を示す図である。
【図２】
好ましい７１０−１４０組成物中のバチルス・リヘニホルミス  ＳＢ３０８６菌株が、自然に感染した芝生上の野外試行においてダラースポット病（スクレロチニア・ホメオカルパ）を制御する性能を示す図である。
【表１】2004533468.tif 000002
【００４２】
１Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，Ｒ．Ｃ．Ｗ．，Ｌｏｇａｎ，Ｎ．Ａ．，Ｓｈｕｔｅ，Ｌ．Ａ．，およびＣａｐｅｙ，Ａ．Ｇ．１９８４年著，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ第１６巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ロンドン，２９１〜３０８頁。
【００４３】
２Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８６年（Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．，Ｍａｉｒ，Ｎ．，Ｓｈａｒｐｅ，Ｍ．Ｅ．，およびＨｏｌｔ，Ｊ．，編），Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，ボルチモア，１１２３〜１１３１頁。
【表２】2004533468.tif 000003
【表３】2004533468.tif 000004
【表４】2004533468.tif 000005
【表５】2004533468.tif 000006
【表６】2004533468.tif 000007
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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