(57)【要約】本発明は、スペーサーまたは架橋基に結合した３個以上のノイラミニダーゼ結合基を含んでなり、前記ノイラミニダーゼ結合基が、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性部位に結合し、かつ該ノイラミニダーゼによって切断されない化合物である、多量体化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体に関する。本発明はまた、上記多量体化合物の製造方法、それらを含有する医薬組成物、またはそれを利用するウイルス感染の治療および／または予防方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スペーサーまたは架橋基に結合した３個以上のノイラミニダーゼ結合基を含んでなり、ここで、前記ノイラミニダーゼ結合基が、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性部位に結合し、かつ該ノイラミニダーゼによって切断されない化合物である、多量体化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体。
【請求項２】
前記ノイラミニダーゼ結合基のＩＣ５０が約１０−６Ｍ以上である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
コアまたはコアおよびスペーサーの両者を含んでなる共通の主鎖基に共有結合した、ノイラミニダーゼ結合性の３個以上のノイラミン酸（シアル酸）誘導体またはシクロペンチルもしくはシクロヘキセニルカルボン酸誘導体を含んでなる、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ノイラミニダーゼ結合基である末端基を有するデンドリマーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記デンドリマーがポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーまたはポリリジンデンドリマーである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式（Ｉ）で示される化合物、または医薬上許容されるその誘導体および／もしくはその異性体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物：
【化１】
2004507564.tif 000058
｛式中、
ＸはＯまたはＣＨであり、
Ｒはアジド基、水酸基、所望により置換されていてもよいグアニジノ基、所望により置換されていてもよいアミノ基、所望により置換されていてもよいアミジン、または所望により置換されていてもよいイミデートであり、
Ｒ２はＣＯＣＲ３３またはＳＯ２ＣＲ３３であり、
Ｒ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＣ１−６アルキルから独立して選択され、
ｎは２〜１２８の整数であり、
Ｙは−Ｏ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）、−ＮＲ４、−ＮＲ４ＣＯ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４、−Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ４、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｏ）Ｏ、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｓ）Ｏ、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ４、−ＮＲ４ＳＯ、−ＮＲ４ＳＯ２、−ＮＲ４ＳＯＮＲ４、または−ＮＲ４ＳＯ２ＮＲ４（ここで、Ｒ４はＨまたはＣ１−６アルキルである）であり、
ＣＧは、所望により置換されていてもよい環状、直鎖状もしくは分枝鎖状の基またはこれらの組合せから選択されるコア基であって、その主鎖が１〜２００個の原子を有し、該主鎖原子がＣ、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるものである前記コア基であり、かつ、
Ｌは、０〜２０個の主鎖原子を有する架橋基であって、該主鎖原子および末端原子がＣ、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるものである前記架橋基である｝。
【請求項７】
ＸがＯであり、Ｒが所望により置換されていてもよいアミノ基またはグアニジノ基であり、Ｒ３がＨ、ＦまたはＣ１−６アルキルであり、ｎが２〜７の整数であり、Ｙが−Ｏまたは−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４（ここで、Ｒ４はＨであり、この基はＮ原子を介して架橋基Ｌと結合している）であり、かつＬが１〜１５個の主鎖原子を有する架橋基である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒが非置換のアミノ基またはグアニジノ基であり、ｎが２または３であり、Ｙが−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４（ここで、Ｒ４はＨであり、この基はＮ原子を介して架橋基Ｌと結合している）であり、かつＬが−ＨＮ（ＣＨ２）ｐ（ここで、ｐは２〜１０の整数である）である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
７−カルバメート誘導体である、請求項６〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒがグアニジンであり、Ｒ２がアセチルであり、ＸがＯであり、Ｙが−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨであり、かつｎが２〜７である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ＣＧが、Ｎ、ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素鎖、ペプチド、オリゴ糖、シクロデキストリン、ポリアミドアミン、ポリエチレンイミン、ポリアルキルおよびポリアリールエーテル、ポリアミドアルコール、カリキサレン、ポリアミノ酸、ポリエチレングリコール単位、アルキルアミドアルカン、オリゴラクテート、オリゴグリコレート、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基（ここで、ヘテロ原子はＮおよびＯから選択される）の１以上から選択される、請求項６〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
ＣＧが、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素基、ペプチド、ポリアミドアミン、ＥＤＴＡ、ポリエチレングリコール単位、カリキサレン、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基の１以上から選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＣＧが、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素基、ＥＤＴＡ、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基の１以上から選択される、請求項１１または１２に記載の化合物。
【請求項１４】
コア基ＣＧ、架橋基Ｌ、および／またはＹ基が、式（Ｉ）の化合物に長時間肺滞留性を付与するように選択される、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
ＣＧが式（ＩＩ）で表されるものである、請求項６に記載の化合物、またはその医薬上許容される誘導体および／もしくはその異性体：
【化２】
2004507564.tif 000059
｛式中、
ＷはＯＨ、Ｎ（Ｒ４）２または−Ｌ−Ｙ−Ｂ（ここで、Ｒ４は請求項６で定義されたとおり）から独立して選択され、
ｘは１〜１０の整数であり、
ｍは１〜４の整数であり、
Ｒ５はアリール、ヘテロアリール、環式Ｃ１−１０アルキルもしくは複素環式Ｃ１−１０アルキルから選択される環式基、または所望により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルケニルもしくはＣ３−１０アルキニル（ここで、この鎖の１以上のＣ原子はＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子またはその組合せにより所望により置換されていてもよい）であり、
Ｌは請求項６で定義されたとおりであり、
Ｙは請求項６で定義されたとおりであり、
ＢはＨまたは式（Ｂ）で表されるものであり：
【化３】
2004507564.tif 000060
（式中、Ｘ、ＲおよびＲ２は請求項６で定義されたとおり）、
ただし、
Ｙが−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｏまたは−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）Ｏである場合には、ＢはＨではなく、
Ｗは１個のみＯＨまたはＮ（Ｒ３）２であってよく、Ｂは１個のみＨであってよく、ＢがＨである場合には、ＷはＯＨ、Ｎ（Ｒ３）２であることはない｝。
【請求項１６】
式（ＩＩＩ）で表されるものである、請求項６に記載の化合物：
【化４】
2004507564.tif 000061
（式中、ＣＧ、Ｌ、Ｙ、Ｘ、ＲおよびＲ２は請求項６で定義したとおり）。
【請求項１７】
分子量が約１，０００〜約１００，０００である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
分子量が約１，０００〜約１０，０００である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
分子量が約１，０００〜約５，０００である、請求項１７または１８に記載の化合物。
【請求項２０】
請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法であって、
式（ＩＶ）の化合物：
【化５】
2004507564.tif 000062
｛式中、Ｙ＊はＣＯ２Ｈ、−ＣＯＬＧ、ＮＣＯ、−ハライド、−ＯＨ、−ＮＲ３ＣＯＬＧ、−ＯＣＯＬＧ、−ＯＣＳＬＧ、ＳＯ２ＬＧ、ＮＲ３ＳＯ２ＬＧ、ＮＲ３ＣＳＬＧ、エポキシドまたはマイケル受容体であり、かつ、ＬＧは脱離基またはその保護誘導体である｝と、
式（Ｖ）の化合物：
【化６】
2004507564.tif 000063
（式中、Ｙ＊＊はＮＨＲ３もしくはＯＨ、またはその活性化もしくは保護された誘導体である）と
をカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる、方法。
【請求項２１】
請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法であって、
式（ＶＩ）の化合物：
【化７】
2004507564.tif 000064
（式中、Ｌ＊はＬ−ＮＨＲ３、Ｌ−ＯＨ、Ｌ−ＣＯ２Ｈ、またはその保護誘導体である）を、
式（ＶＩＩ）の化合物：
【化８】
2004507564.tif 000065
｛式中、Ｙ＊＊＊はＤ−ＡＧまたはハロゲンであり、
ＤはＯまたはＮＲ３であり、
ＡＧはＣＯＬＧ、Ｈ、ＣＳＬＧまたはＳＯ２ＬＧであり、かつ
ＬＧは脱離基またはその保護誘導体である｝
と反応させることを含んでなる、方法。
【請求項２２】
請求項１５に記載の式（ＩＩ）の化合物を製造する方法であって、
一般式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
2004507564.tif 000066
の化合物またはその保護誘導体と、式Ｂ−Ｙ−Ｌ−Ｈまたはその保護誘導体（式中、Ｂ、ＹおよびＬは請求項１５で定義したとおりであり、Ｈに結合しているＬ中の原子はヘテロ原子である）とをカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる、方法。
【請求項２３】
請求項１５に記載の式（ＩＩ）の化合物を製造する方法であって、
請求項２０に記載の式（Ｖ）の化合物またはその保護誘導体と、
式（ＸＩ）の化合物：
【化１０】
2004507564.tif 000067
（式中、Ｙ＊およびＬは請求項２０で定義したとおり）と
をカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる、方法。
【請求項２４】
Ｌの末端原子が窒素である、請求項１５に記載の式（ＩＩ）の化合物を製造する方法であって、
式（ＸＩＩ）：
【化１１】
2004507564.tif 000068
の化合物またはその保護誘導体と、請求項２１に記載の式（ＶＩＩ）の化合物またはその保護誘導体とをカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる、方法。
【請求項２５】
Ｒ５が所望により置換されていてもよいアルキル基である請求項１５に記載の式（ＩＩ）の化合物を製造する方法であって、
式（ＸＩＩＩ）：
【化１２】
2004507564.tif 000069
（式中、Ｗは請求項１５で定義したとおり）の化合物またはその保護誘導体を、所望により置換されていてもよいハロゲン化アルキルと反応させ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる、方法。
【請求項２６】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体および所望により少なくとも１種の他の治療成分および／または予防成分とともに含んでなる、医薬組成物。
【請求項２７】
他の治療成分および／または予防成分が抗感染薬である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
抗感染薬が抗菌薬または抗ウイルス薬である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
抗ウイルス薬がシアル酸類似体、アマンタジン、リマンタジンおよび／またはリバビリンである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物の有効量をそれを必要とする被験体に投与する工程を含んでなる、ウイルス感染を治療および／または予防する方法。
【請求項３１】
ウイルス感染がオルソミクソウイルス感染またはパラミクソウイルス感染である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
感染がインフルエンザＡまたはＢによって引き起こされるものである、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
被験体が哺乳動物である、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
哺乳動物がヒトである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
投与される化合物の量が、約０．０００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲である、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
化合物が、吸入、通気もしくは鼻腔内投与またはその組合せにより気道に投与される、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
ウイルス感染の治療および／または予防において活性治療薬として用いるための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
ウイルス感染の治療および／または予防に用いるための薬剤の製造における、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３９】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物を、ウイルスを含有すると思われるサンプルと接触させる工程を含んでなる、ウイルス感染の検出方法。
【請求項４０】
ウイルス感染がオルソミクソウイルス感染またはパラミクソウイルス感染である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
感染がインフルエンザＡまたはＢによって引き起こされるものである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の組成物を含有する吸入器。
【請求項４３】
流動性粉末として経口投与するのに適合された、請求項４２に記載の吸入器。
【請求項４４】
定量エアロゾル吸入器である、請求項４２に記載の吸入器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は新規な化学化合物種およびそれらの薬剤における使用に関する。詳細には、本発明は新規な多価ノイラミニダーゼ阻害物質複合体、それらの製造方法、その医薬組成物および抗インフルエンザ薬としてのそれらの使用に関する。本発明はまた、インフルエンザＡおよびＢウイルスの全タイプの検出に使用できる新規な診断方法を提供する。
【０００２】
発明の背景
他の炭水化物から、シアル酸としても知られているＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）を切断する能力を持つ酵素は多くの微生物に存在している。これらとしては、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、 ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびアルトロバクター・シアロフィラス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｉａｌｏｐｈｉｌｕｓ）などの細菌、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルスおよびセンダイウイルスなどのウイルスが挙げられる。これらのウイルスの大部分はオルソミクソウイルスまたはパラミクソウイルス群のものであり、ウイルス粒子の表面にノイラミニダーゼ活性を有する。これらのノイラミニダーゼを有する生物の多くがヒトおよび／または動物の主要な病原体であり、インフルエンザウイルスやニューカッスル病ウイルスなどのいくつかのものは極めて重要な疾病を引き起こす。
【０００３】
インフルエンザＡおよびＢウイルスは急性呼吸器疾患の主な原因となり、米国だけでも年間推定３千万〜５千万の感染例をもたらしている。インフルエンザＡは何百万人かを死に至らせた１９１９年の「スペイン風邪」のような主たる伝染病の原因となっている。インフルエンザは依然として制御が困難で、相当な罹患率、そして大抵は年輩者や衰弱した患者における二次感染に起因する相当な死亡率をもたらす疾病である。ワクチンは抗原の変化や変動によって頻繁に無効化され、その結果、免疫化は感染を防ぐ上で約７０％の効果しかない。これまでにインフルエンザの治療に関して当局によって承認された薬剤はアマンタジンとリマンタジンだけであり、これらはインフルエンザＢに対して効果はなく、また、重大な副作用を持つことが知られている。また、これら両化合物に対する急速な抗ウイルス耐性がこれらの化合物にしばしば不随することが分かっている。
【０００４】
インフルエンザＡおよびＢは、２種の主要な表面糖タンパク質である、ヘマグルチニン（ＨＡ）と酵素ノイラミニダーゼ（ＮＡ）を含み、これらはいずれも感染性に不可欠なものである。ＨＡはウイルスが細胞に接着するのに必要であり、一方で、ＮＡは細胞表面からのウイルスの放出に必要であると考えられている。各ウイルス粒子の表面には、典型的には約６００の三量体ＨＡと約５０コピーのＮＡ四量体ユニットが存在する。従って、ＨＡおよびＮＡの両者は抗インフルエンザ薬を探索する上で可能性のある魅力的な標的である。
【０００５】
インフルエンザウイルスのヘマグルチニンは細胞表面受容体のシアル酸含有糖タンパク質および糖脂質と結合し、これによりウイルスの細胞への接着およびこれに続く感染のプロセスが始まる。細胞膜に対するウイルス粒子の結合の強度は、複数コピーのインフルエンザＨＡと細胞表面の複数のシアル酸基の相互作用によって異なる。
【０００６】
この多価相互作用の概念（Ｍａｍｍｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ．， １９９８ ３７： ２７５４−２７９４）を用い、数人の研究者がヘマグルチニン阻害物質として作用する２種以上のシアル酸誘導体を含有する高分子の合成について報告している。強力なＨＡ阻害物質もいくつか発見されているが、これらの多価高分子でｉｎ ｖｉｖｏにおいてインフルエンザ感染を防ぐことが示されているものはない。Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓその他の研究者による最近の報告（Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９９６ １１８ ３７８９−３８００； Ｊ． Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ．， １９９５ ３８ ４１７９−４１９０； Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９９９ １０： ２７１−２７８）では、インフルエンザヘマグルチニンの阻害物質の設計のためにこのアプローチを用いる様々な試みがまとめられている。
【０００７】
ノイラミニダーゼの阻害物質はノイラミニダーゼを有するウイルスによる感染を妨げるものと長い間考えられていた。既知のノイラミニダーゼ阻害物質の大部分は、２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＤＡＮＡ）およびその数種の誘導体などのノイラミン酸類似体である（Ｍｅｉｎｄｌ ｅｔ ａｌ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， １９７４ ５８ ４５７）。本発明者らによる国際公開第ＷＯ９１／１６３２０号には、ウイルスのノイラミニダーゼに対して活性を有するいくつかのＤＡＮＡ類似体が記載されており、さらに、特に４−グアニジノ−２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（化合物（Ａ）、コード番号：ＧＧ１６７）がインフルエンザＡおよびＢの治療に有用であることが示されている（Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， １９９７ ３３７ ８７４−８８０）。他の特許出願には、密接に関連する種々のシアル酸誘導体（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１８８００号、第ＷＯ９５／２０５８３号および第ＷＯ９８／０６７１２号）、およびＧＧ１６７の抗ウイルス高分子複合体も記載されている（国際特許出願第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１号、ＷＯ９８／２１２４３）。
【化１３】
2004507564.tif 000002
【０００８】
上記のシアル酸に基づく阻害物質の他、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼの極めて有効な他のタイプの阻害物質、特に５員および６員の炭素環構造に基づくものも報告されている（例えば、国際公開第ＷＯ９６／２６９３３号および第ＷＯ９７／４７１９４号）。包括的な研究活動にもかかわらず、これまでにＮＡ部位に作用する抗インフルエンザ薬としては「レレンザ（Ｒｅｌｅｎｚａ）」（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ ｐｌｃの商標）と「タミフル（Ｔａｍｉｆｌｕ）」（Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅ ＡＧの商標）の２種しか臨床用として認可されていない。他のノイラミニダーゼ阻害物質、特に、第ＩＩＩ相臨床試験下にある（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−［（ＩＲ）−１−（アセチルアミノ）−２−エチルブチル］−４−｛（アミノ（イミノ）メチル］アミノ］−２−ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸がＷＯ９９／３３７８１に開示されている。
【０００９】
最近では、国際公開第ＷＯ９７／０６１５７号、第ＷＯ９８／０６７１２号および欧州特許出願第０８２３４２８号には、通常のシアル酸７−ヒドロキシ基が種々の他の官能基で置換されている、インフルエンザウイルスの増殖を阻害する化合物（Ａ）の特定の誘導体が記載されている。
【００１０】
Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｌｔｄによる国際公開第ＷＯ９５／３４５９５号および第ＷＯ９８／０３５７２号にはそれぞれ、複数の末端基を有するデンドリマーおよび複数の側鎖基を有する直鎖ポリマーが開示されている。ＷＯ９５／３４５９５では、前記末端基はとりわけ陰イオン性であり、カルボン酸基を含むこともある。シアル酸および関連化合物は開示も示唆もされていない。ＷＯ９８／０３５７２では、側鎖基はシアル酸またはその誘導体であってよく、その時点での従来知見と相まって、かかる化合物の唯一の例は２位の硫黄原子を介するシアル酸部分の結合を用いるものである。側鎖基としての２，３−デヒドロシアル酸誘導体は開示も示唆もされていない。
【００１１】
本発明者らにより２０００年３月９日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＡＵ００／００１６５号では、２つのノイラミニダーゼ結合化合物が活性部位への結合に関与しない分子の領域を介して適宜結合している場合には、得られる二量体は高い抗ウイルス活性を示すことが示されている。特に、化合物（Ａ）の７位に結合した付加的な置換基は一般に抗インフルエンザ効力を若干引き下げるが、一方で、２つの前記化合物（Ａ）−７置換分子が両者とも一つの好適なスペーサー部分と結合している場合には抗インフルエンザ活性が著しく向上し得ることが見出されている。認められた効果に関して提案されるいずれの機構にも拘束または限定されるものではないが、この二量体化合物が別個の２つのノイラミニダーゼ分子と結合することができることから、それらが抗インフルエンザ活性を向上させ、それによってノイラミニダーゼ四量体および／またはインフルエンザビリオンの凝集を引き起こすと考えられ、あるいは、ノイラミニダーゼの活性部位と結合した１コピーのザナミビルと近接して他の１コピーを有することで、この結合動態は、１コピーが他の１コピーを解離してザナミビルの自由な分子よりも迅速に結合することができるという点でより効果的であると考えられる。本発明者らは、今般、デンドリマー型分子をも含む多価ノイラミニダーゼ阻害物質複合体がより長い作用時間を有することを示した。ここでもいずれかの理論に拘束するものではないが、長時間の肺滞留時間の基礎となるのは、呼吸器上皮にしっかり結合してしまって侵入しない高分子の大きさおよび分子量、ならびに細胞膜の通過があまり効果的に起こらなくなる高分子の極性によるものであると思われる。もう１つの理論としては、これらの化合物自体が呼吸器上皮の細胞膜またはその他の成分のリン脂質と相互作用し、肺滞留時間が長くなるというものである。
【００１２】
本明細書ではいくつかの先行技術刊行物を参照しているが、この参照は、これらの文書のいずれもがオーストラリアまたは他の国々でも当技術分野の共通の一般知識の一部をなすものであることを認めるものではないと、明らかに理解される。
【００１３】
発明の概要
第一の態様によれば、本発明は、スペーサーまたは架橋基に結合した３個以上のノイラミニダーゼ結合基を含んでなり、ここで、前記ノイラミニダーゼ結合基が、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性部位に結合し、かつ該ノイラミニダーゼによって切断されない化合物である、個々の多量体化合物を提供する。
【００１４】
ノイラミニダーゼ結合基はそれ自体高い結合親和性を有するのが有利であり、好ましくは、ＮＡ結合基のＫｄまたはＩＣ５０は１０−６Ｍよりも良好なものとされる。１つのノイラミニダーゼ阻害物質に対する架橋基の共有結合は、親分子（例えば、化合物Ａ）と比べて酵素に対する結合能をいくらか低下させるが、かかるいくつかのリガンドが共通の主鎖に結合している場合には、この多価性の効果により平均結合に上昇が見られることがある。
【００１５】
前記多価分子は、好ましくは、コア、またはコアおよびスペーサーの両者を含んでなる共通の主鎖基に共有結合した、ノイラミニダーゼ結合性の３個以上のノイラミン酸（シアル酸）誘導体またはシクロペンチルもしくはシクロヘキセニルカルボン酸誘導体を含んでなる。本発明による化合物は、その少なくとも８０％、好ましくは９０％までが、規定可能かつ測定可能な純度および特定の分子量（ＭＷ）を有する共通分子構造からなる個々の分子物質である。従って、本発明による化合物は、本発明者らの先の出願である第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１号の、様々な分子量と置換パターンを有するポリマー鎖の混合物からなる多分散系高分子複合体よりも医薬としての開発に適したものである。
【００１６】
本発明の好ましい実施態様によれば、式（Ｉ）で示される化合物、または医薬上許容されるその誘導体および／もしくはその異性体が提供される：
【化１４】
2004507564.tif 000003
｛式中、
ＸはＯまたはＣＨであり；
Ｒはアジド基、水酸基、所望により置換されていてもよいグアニジノ基、所望により置換されていてもよいアミノ基、所望により置換されていてもよいアミジン、または所望により置換されていてもよいイミデートであり；
Ｒ２はＣＯＣＲ３３またはＳＯ２ＣＲ３３であり；
Ｒ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＣ１−６アルキルから独立して選択され；
ｎは２〜１２８の整数であり；
Ｙは−Ｏ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）、−ＮＲ４、−ＮＲ４ＣＯ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４、−Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ４、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｏ）Ｏ、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｓ）Ｏ、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４、−ＮＲ４（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ４、−ＮＲ４ＳＯ、−ＮＲ４ＳＯ２、−ＮＲ４ＳＯＮＲ４、または−ＮＲ４ＳＯ２ＮＲ４（ここで、Ｒ４はＨまたはＣ１−６アルキルである）であり；
ＣＧは、所望により置換されていてもよい環状、直鎖状もしくは分枝鎖状の基またはこれらの組合せから選択されるコア基であって、その主鎖が１〜２００個の原子を有し、該主鎖原子がＣ、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるものである前記コア基であり；かつ、
Ｌは、０〜２０個の主鎖原子を有する架橋基であって、該主鎖原子および末端原子がＣ、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるものである前記架橋基である｝。
【００１７】
好ましくは、ＸはＯである。
【００１８】
好ましくは、Ｒは所望により置換されていてもよいアミノ基またはグアニジノ基であり、より好ましくは、非置換のアミノ基またはグアニジノ基である。
【００１９】
好ましくは、Ｒ３はＨ、ＦまたはＣ１−６アルキルである。
【００２０】
好ましくは、ｎは２〜７の整数であり、より好ましくは、ｎは２または３である。
【００２１】
好ましくは、Ｙは−Ｏまたは−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ４、より好ましくは−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ４である（ここで、Ｒ４はＨであって、この基はＮ原子を介して架橋基Ｌと結合している）。
【００２２】
好ましくは、架橋基Ｌは１〜１５個の主鎖原子を有する。
【００２３】
より好ましくは、架橋基Ｌは−ＨＮ（ＣＨ２）ｐ（ここで、ｐは２〜１０の整数であり、より好ましくはｐは６である）であり、ここで架橋基ＬはＮ原子を介してコア基（ＣＧ）に結合している。
【００２４】
架橋基ＬがＹに結合する原子は末端原子と呼ばれる。
【００２５】
ある実施態様によれば、本発明による化合物は、ノイラミニダーゼ結合基である末端基を有するデンドリマーである。好適なデンドリマー担体およびそれらの製法は、国際公開第ＷＯ９５／２４２２１号および第ＷＯ９５／３４５９５号ならびに米国特許第４，２８９，８７２号明細書、同第４，４１０，６８８号明細書、同第４，５０７，４６６号明細書、同第４，５５８，１２０号明細書、同第４，５６８，７３７号明細書および同第４，５８７，３２９号明細書に記載のように周知である。ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーが特に好ましく、８〜１２８個の末端基を有するＰＡＭＡＭデンドリマーが市販されている。アンモニア核またはエチレンジアミン核のいずれかに基づくＰＡＭＡＭデンドリマーが使用できる。あるいは、リジン分枝単位を有するベンズヒドリルアミン核に基づく非対称ポリリジンデンドリマーも使用できる。かかるデンドリマーは米国特許第４，２８９，８７２号明細書および同第４，４１０，６８８号明細書に記載されている。その他の好適なデンドリマー型のものも最近の化学文献に記載されている（例えば、Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍｉｅ， １９９９ ３８ ８８４； Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９９９ １０ １１１５）。当業者であれば、どのデンドリマー型のものが特定の目的に最も適切であるか容易に決定することができる。
【００２６】
本発明の特に好ましい実施態様によれば、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体または八量体である式（Ｉ）の化合物が提供される。これらの化合物は化合物Ａ（ＧＧ１６７）の７−カルバメート誘導体の複合体であるのが好ましく、すなわち、Ｒはグアニジンであり、Ｒ２はアセチルであり、Ｘは酸素であり、Ｙは−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨであり、かつ、ｎは２、３、４、５、６および７の整数の１つから選択される。
【００２７】
本発明による化合物の分子量は、一般に約１，０００〜約１００，０００、好ましくは約１，０００〜約１０，０００、さらに好ましくは約１，０００〜約５，０００の範囲である。当業者であれば、通常の実験によって架橋基の長さおよび構造を容易に最適化することができる。
【００２８】
本発明による化合物の生物活性は、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性部位に特異的に結合し得る主鎖上のリガンド、またはかかる化合物の官能化誘導体の使用に基づくものである。本明細書で用いる「ノイラミニダーゼ結合剤」とは、これらの化合物およびそれらの官能化誘導体をさす。好ましいノイラミニダーゼ結合基は式（Ａ）の化合物に基づくものである。本発明による方法および化合物は、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼと非特異的に結合する化合物の存在下または不在下のいずれかで機能し得る。ノイラミニダーゼ結合剤はインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性部位と結合するが、その酵素によって切断されないいずれの薬剤であってもよい。この結合は不可逆性である必要はないが、結合基は高い結合親和性を有し、好ましくはＫｄまたはＩＣ５０が１０−６Ｍまたは１０−６Ｍよりも良好であるべきである。
【００２９】
一般に式（Ｉ）でいずれかの変数が２回出てきた場合には、その変数は同じであっても異なっていてもよいものとする。
【００３０】
Ｒが置換されたアミノ基またはグアニジノ基であるとき、好適な置換基としては、限定されるものではないが、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、アリル、ニトリル、Ｃ１−６アルコキシカルボニルおよびＣ１−６アシルが挙げられる。
【００３１】
好適なコア基ＣＧとしては、限定されるものではないが、Ｎ、ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素鎖、ペプチド、オリゴ糖、シクロデキストリン、ポリアミドアミン、ポリエチレンイミン、ポリアルキルおよびポリアリールエーテル、ポリアミドアルコール、カリキサレン、ポリアミノ酸、ポリエチレングリコール単位、アルキルアミドアルカン、オリゴラクテート、オリゴグリコレート、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基（ここで、ヘテロ原子はＮおよびＯから選択される）が挙げられる。これらの基はいずれか１つを単独で用いてもよいし、他のものと複合化した形で、あるいは他のものと組み合わせて用いてもよい。デンドリマー化合物はコア基の一種である。コア基ＣＧはまた、その化合物の薬物特性または薬物動態特性を向上させるために、所望によりそれに付加的な官能基を結合させたものでもよい。かかる官能基としては、親油性炭化水素基、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、ペプチドおよびイオン性基が挙げられる。
【００３２】
好ましいコア基としては、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素基、ペプチド、ポリアミドアミン、ＥＤＴＡ、ポリエチレングリコール単位、カリキサレン、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基またはその組合せが挙げられる。
【００３３】
より好ましくは、コア基は以下の基：Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を所望により含んでもよく、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝炭化水素基、ＥＤＴＡ、アリール、シクロアルキル、複素環およびヘテロアリール基またはその組合せから選択される。
【００３４】
本発明の特に好ましい実施態様によれば、化合物のコア基、架橋基Ｌおよび／またはＹ基は、式（Ｉ）の化合物に長時間肺滞留性を付与するように選択される。これらの特性は、例えば、コア構造への付加的なイオン性基の包摂により、または最終の複合体へ増粘を付与する主鎖分子を用いることで改良し得る。
【００３５】
「炭化水素」とは、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基をさす。
【００３６】
「アリール」とは、一環（例えばフェニル）または複数の縮合環（例えばナフチルまたはアンスリル）を有する炭素原子６〜２０の不飽和芳香族炭素環式基をさす。好ましいアリール基はフェニルまたはナフチルである。
【００３７】
「ポリアミノ酸」とは、１を超えるアミノ酸を含んでなる基をさす。好適なアミノ酸は典型的にはαアミノ酸であり、すなわちあるアミノまたはイミノ窒素原子が１つの置換または非置換α炭素原子によってあるカルボキシル基の炭素原子から隔てられていることを特徴とする化合物である。
【００３８】
「アルキル」とは、特に断りのない限り、好ましくは１〜４０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子を有する分枝または非分枝飽和炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ドデシル、２−エチルドデシル、テトラデシルなどをさす。環式アルキル基の例としては、シクロヘキシルおよびシクロブチルが挙げられる。
【００３９】
「アルケニル」とは、好ましくは２〜４０個の炭素原子、好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子、および好ましくは１〜６個の二重結合を有する分枝または非分枝不飽和炭化水素をさす。この用語はさらにビニル、プロプ−２−エニル、ペント−３−エニル、ヘクス−５−エニル、５−エチルドデク−３，６−ジエニルなどのような基で例示される。
【００４０】
「アルキニル」とは、好ましくは２〜４０個の炭素原子、好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子、および好ましくは１〜６個の三重結合を有する不飽和炭化水素をさす。この用語はさらにアセチレニル、プロプ−２−イニル、ペント−３−イニル、ヘクス−５−イニル、５−エチルドデク−３，６−ジニルなどのような基で例示される。
【００４１】
「ヘテロアリール」とは、１〜１５個の炭素原子と、少なくとも１つの環（１を超える環が存在する場合）において酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子とからなる芳香基をさす。「複素環式」とは、１〜４０個の炭素原子と、少なくとも１つの環（１を超える環が存在する場合）における酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子とからなる環式アルキル、アルケニルまたはアルキニル基をさす。複素環式基の例としてはピペラジンおよびテトラヒドロフランが挙げられる。
【００４２】
コアまたは架橋基として用いられる基のあらゆるものに対して好適な置換基としては、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＣＦ３、ＮＨ２、ヒドロキシ、ＮＨアシルなどの置換アミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノ、カルボキシ、スルホン酸、スルホキシド、スルホンアミド、第四級アンモニウム基、およびメトキシなどのＣ１−６アルコキシ基が挙げられ、Ｆ、Ｃｌ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはカルボキシが好ましい。
【００４３】
ハライドはＣｌ、Ｆ、ＢｒまたはＩを意味するものとする。
【００４４】
本明細書では「異性体」は最も広義に用いられ、構造異性体、幾何学異性体および立体異性体を含む。式（Ｉ）の化合物は１以上のキラル中心を持ち得るので、鏡像異性体として存在する場合もある。
【００４５】
本明細書では「含んでなる」とは、「限定されるものではないが含む」ことを意味するものと明らかに解釈される。
【００４６】
当業者であれば、式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の化合物の官能基のいずれかにおいて修飾して、その医薬上許容される誘導体を得てもよいことが分かるであろう。かかる誘導体として特に注目されるものとして、カルボキシル基、水酸基またはグアニジノもしくはアミノ基で修飾した化合物がある。従って、注目される化合物としては、式（Ｉ）の化合物の、Ｃ１−６アルキルエステル（メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルエステルなど）、アリールエステル（フェニルなど）、ベンゾイルエステル、およびＣ１−６アセチルエステルが挙げられる。
【００４７】
さらに好ましい実施態様は、式（ＩＩ）の化合物、またはその医薬上許容される誘導体によって表される：
【化１５】
2004507564.tif 000004
｛式中、
Ｗは独立してＯＨ、Ｎ（Ｒ３）２または−Ｌ−Ｙ−Ｂ（ここで、Ｒ３はＨまたはＣ１−６アルキルである）であってよく；
ｘは１〜１０の整数であり；
ｍは１〜４の整数、好ましくは１または２の整数であり；
Ｒ５はアリール、ヘテロアリール、環式Ｃ１−１０アルキルもしくは複素環式Ｃ１−１０アルキル、または所望により置換されていてもよいＣ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルケニルもしくはＣ３−１０アルキニル（ここで、この鎖の１以上のＣ原子はＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子またはその組合せにより所望により置換されていてもよい）であり；
Ｌは式（Ｉ）の化合物の定義に同じであり；
Ｙは式（Ｉ）の化合物の定義に同じであり；
ＢはＨまたは式（Ｂ）：
【化１６】
2004507564.tif 000005
（式中、Ｘ、ＲおよびＲ２は式（Ｉ）の化合物の定義に同じ）、
ただし、
Ｙが−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｏまたは−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）Ｏである場合には、ＢはＨではなく；
Ｗは１個のみＯＨまたはＮ（Ｒ３）２であってよく、Ｂは１個のみＨであってよく、ＢがＨである場合には、ＷはＯＨ、Ｎ（Ｒ３）２であることはない｝。
【００４８】
本発明による四量体化合物は、下記一般式によって示されるものであってよい：
【化１７】
2004507564.tif 000006
｛式中、リガンドＺは、
【化１８】
2004507564.tif 000007
である｝。
【００４９】
好ましい四量体化合物は下記の化合物（３）である。
【化１９】
2004507564.tif 000008
【００５０】
３２−リガンド化合物は下記の構造を有する。
【化２０】
2004507564.tif 000009
【００５１】
さらに好ましい化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物である：
【化２１】
2004507564.tif 000010
（式中、ＣＧ、Ｌ、Ｙ、Ｘ、ＲおよびＲ２は式（Ｉ）の化合物の定義に同じ）。
【００５２】
本発明による化合物のその他の具体例は、下記表１に示す。
【００５３】
【表１】
2004507564.tif 000011
2004507564.tif 000012
2004507564.tif 000013
【００５４】
本発明による化合物は以下で概略を示す方法によって製造できる。ここで、ＣＧ、Ｌ、Ｙ、Ｘ、ＲおよびＲ２は式（Ｉ）の化合物の定義に同じであり、Ｗ、Ｒ５、Ｂおよびｘは式（ＩＩ）の化合物の定義に同じである。
【００５５】
一般式（Ｃ）の好適な単量体中間体化合物は国際公開第ＷＯ９７／０６１５７号および第ＷＯ９７／３２２１４号に記載の方法に従って製造することができる。従って、７位の基がアリールカーボネートであるとき（例えば、Ｒ４＝４−ニトロフェノキシ）、前記中間体を用いて種々のアミン（アルキル−ＮＨ２）と反応させることで、７−カルバメート誘導体（Ｒ４＝アルキル−ＮＨ）を製造することができる。
【化２２】
2004507564.tif 000014
【００５６】
例えば、下記の化合物（２）、ＧＧ１６７の（６−アミノヘキシル）−７−カルバメート誘導体は、本発明による特定の化合物の有用な前駆体である。
【化２３】
2004507564.tif 000015
【００５７】
当業者には明らかであるが、スペーサー基に単量体を結合させる過程でノイラミニダーゼ結合分子の１以上の官能基を保護するために保護基を用いる必要がある、または用いるのが望ましい場合がある。例えば、Ｔｈｅｏｄｏｒｅ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ． Ｗｕｔｓ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９９）による”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”を参照されたい。
【００５８】
通常のアミノ保護基としては、例えばアリールアルキル基（ベンジル、ジフェニルメチルまたはトリフェニルメチル基など）、およびアシル基（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニルなど）が挙げられる。
【００５９】
水酸基は例えばアリールアルキル基（ベンジル、ジフェニルメチルまたはトリフェニルメチル基）、アシル基（アセチルなど）、珪素保護基（トリメチルシリル基）、カーボネート基、アセタールにより、またはテトラヒドロピラン誘導体として保護すればよい。
【００６０】
カルボン酸基はメチルまたはジフェニルメチルエステルとして保護するとよい。
【００６１】
存在する保護基の除去は常法にて行うことができる。
【００６２】
本発明による化合物を塩、例えば酸付加塩として単離するのが望ましい場合には、好適な溶媒（例えば水性エタノール）中、一般式（Ｉ）の遊離塩基を適当な酸、好ましくは等量で反応させることでこれを行えばよい。
【００６３】
本発明による三量体および四量体化合物は容易に合成される。これらを構成ブロックとして用いてより大きな化合物を製造することができること、また、偶数の単量体単位が存在する化合物は、例えば２種類の奇数の多量体または２種類の偶数の多量体を結合させることで作製することができ、一方、奇数の単量体単位が存在する化合物は、例えば奇数の多量体と偶数の多量体を結合させることで作製することができることが分かるであろう。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物：
【化２４】
2004507564.tif 000016
｛式中、Ｙ＊はＣＯ２Ｈ、−ＣＯＬＧ、ＮＣＯ、−ハライド、−ＯＨ、−ＮＲ３ＣＯＬＧ、−ＯＣＯＬＧ、−ＯＣＳＬＧ、ＳＯ２ＬＧ、ＮＲ３ＳＯ２ＬＧ、ＮＲ３ＣＳＬＧ、エポキシドまたはマイケル受容体であり；
ＬＧはハライドまたはその他当業者に明らかなものなどの脱離基、またはその保護誘導体を表す｝と、
式（Ｖ）の化合物：
【化２５】
2004507564.tif 000017
（式中、Ｙ＊＊はＮＨＲ３もしくはＯＨ、またはその活性化もしくは保護された誘導体を表す）と
をカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することにより製造することができる。この方法は本明細書では方法αと呼ぶ。
【００６５】
好ましくは脱離基はハライドである。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物：
【化２６】
2004507564.tif 000018
（式中、Ｌ＊はＬ−ＮＨＲ３、Ｌ−ＯＨ、Ｌ−ＣＯ２Ｈ、またはその保護誘導体である）を、
式（ＶＩＩ）の化合物：
【化２７】
2004507564.tif 000019
｛式中、Ｙ＊＊＊はＤ−ＡＧまたはハロゲンを表し；
ＤはＯまたはＮＲ３を表し；
ＡＧはＣＯＬＧ、Ｈ、ＣＳＬＧまたはＳＯ２ＬＧを表し；かつ
ＬＧはハライドまたはその他当業者に明らかなものなどの脱離基、またはその保護誘導体である｝
と反応させることにより製造することができる。この方法は本明細書では方法βと呼ぶ。
【００６７】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）：
【化２８】
2004507564.tif 000020
の化合物またはその保護誘導体と、式Ｂ−Ｙ−Ｌ−Ｈまたはその保護誘導体（式中、Ｂ、ＹおよびＬは式（ＩＩ）の定義に同じであり、Ｈに結合しているＬ中の原子はヘテロ原子である）とをカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することにより製造することができる。
【００６８】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式Ｗ−Ｈ（式中、Ｗは式（ＩＩ）の定義に同じ）の化合物またはその保護誘導体と、式（ＩＸ）：
【化２９】
2004507564.tif 000021
の化合物を反応させることにより製造することができる。
【００６９】
式（ＩＸ）の化合物は式（Ｘ）の化合物の環化反応により製造することができる。
【００７０】
式（Ｘ）の化合物の多くは市販されている（例えばＥＤＴＡ）。
【００７１】
式（ＩＩ）の化合物の他の製造方法としては、式（Ｖ）の化合物またはその保護誘導体と、式（ＸＩ）：
【化３０】
2004507564.tif 000022
の化合物とを上記の方法αによりカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することである。
【００７２】
Ｌの末端原子が窒素である式（ＩＩ）の化合物の他の製造方法は、式（ＸＩＩ）：
【化３１】
2004507564.tif 000023
の化合物またはその保護誘導体と、式（ＶＩＩ）の化合物またはその保護誘導体とを上記の方法βによりカップリングさせ、必要であれば、その後に脱保護することである。
【００７３】
Ｒ５が置換または非置換アルキル基である式（ＩＩ）の化合物の他の製造方法は、式（ＸＩＩＩ）：
【化３２】
2004507564.tif 000024
（式中、Ｗは式（ＩＩ）の化合物に関する定義に同じ）の化合物またはその保護誘導体を、置換または非置換ハロゲン化アルキル、例えばＢｒＣＨ２ＣＨ２Ｂｒと反応させ、必要であれば、その後に脱保護することを含んでなる。
【００７４】
式（ＸＩ）および（ＸＩＩ）の化合物は、式Ｌ＊またはＬ−Ｙ＊の化合物を式（Ｘ）または式（ＩＸ）の化合物と反応させることにより製造することができる。
【化３３】
2004507564.tif 000025
式（ＸＩＩＩ）の化合物は、Ｗ（ただし、ＷはＯＨまたはＮ（Ｒ３）２ではない）と、式（ＸＩＶ）：
【化３４】
2004507564.tif 000026
の化合物とのペプチド／カーボネート／無水混合物でのカップリングを行なうことにより製造することができる。ここで、Ｗは式（ＩＩ）の化合物に関する定義に同じである。
【００７５】
式（ＸＩＶ）の化合物は市販されている。当業者であれば、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される誘導体が１を超える位置で誘導体化され得ることが分かるであろう。
【００７６】
「医薬上許容される誘導体」とは、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩、エステルもしくはそのようなエステルの塩、または受容者に投与した際に式（Ｉ）の化合物もしくはその抗ウイルス活性代謝物もしくは残基を提供し得る他のいずれかの化合物を意味する。誘導体として特に注目されるものとしては、シアル酸カルボキシまたはグリセロール水酸基で、あるいはアミノまたはグアニジノ基で修飾された化合物がある。
【００７７】
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩としては、医薬上許容される無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが挙げられる。好適な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。シュウ酸などのその他の酸はそれら自体医薬上許容されるものではないが、本発明による化合物およびそれらの医薬上許容される酸付加塩を得る上での中間体として有用な塩の製造に有用であり得る。
【００７８】
適当な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属（例えばナトリウム）、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）、アンモニウムおよびＮＲ４＋（ここでＲはＣ１−４アルキルである）塩が挙げられる。
【００７９】
式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、当技術分野で公知の反応、例えば保護基の加水分解または酸分解による水酸基またはカルボキシ基の露出、または保護されたアミンまたはグアニジンの脱保護を行なうことにより、それぞれ式（Ｉ）または（ＩＩ）の他の化合物へと変換することができる。またアミン基のグアニジノ基への変換も当技術分野で公知の方法によって行うことができる。
【００８０】
本発明による化合物は抗ウイルス活性を有する。特に、これらの化合物は、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスのウイルスノイラミニダーゼ、例えばインフルエンザＡおよびＢ、パラインフルエンザ、流行性耳下腺炎およびニューカッスル病のウイルスノイラミニダーゼの阻害物質である。
【００８１】
従って、本発明の第二の態様によれば、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルス感染の治療および／または予防において活性治療薬として用いるための式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体が提供される。
【００８２】
本発明の第三の態様によれば、本発明による化合物またはその医薬上許容される誘導体の有効量をかかる治療を必要とする被験体に投与する工程を含んでなる、被験体におけるウイルス感染、例えばオルソミクソウイルスまたはパラミクソウイルス感染を治療および／または予防する方法が提供される。
【００８３】
好ましくは被験体は哺乳動物などの動物であり、より好ましくはヒトである。
【００８４】
哺乳動物は、ヒトであっても、家畜またはペットであってもよい。本発明による化合物は、特に、ヒトの医学的治療に用いるのに好適であると考えられるが、イヌおよびネコなどのペット、ならびにウマ、ウシおよびヒツジなどの家畜、またはニワトリ、アヒルもしくはガチョウなどの鳥類、あるいはネコ科、イヌ科、ウシ科および有蹄類などの動物園の動物の治療をはじめとする獣医学的処置にも適用できる。
【００８５】
好ましい実施態様によれば、本発明のこの態様により、本発明による化合物またはその医薬上許容される誘導体の有効量をかかる治療を必要とする被験体に投与する工程を含んでなる、哺乳動物のインフルエンザＡおよびＢ感染を治療および／または予防する方法が提供される。好ましくは被験体はヒトである。
【００８６】
本発明の第四の態様によれば、ウイルス感染の治療および／または予防に用いるための薬剤の製造における、本発明による化合物またはその医薬上許容される誘導体の使用が提供される。
【００８７】
本発明による化合物はまた、診断法、特にインフルエンザウイルスを検出する方法にも使用できる。かかる方法で用いるためには、本発明による化合物は、放射性標識、蛍光標識または化学発光標識などの標識と結合させるのが有利である。当業者には、多様な好適な標識が知られている。本発明による化合物に適している診断方法は、例えば、本発明者らの先の出願である第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００１０９号および第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１号の明細書に記載されている。
【００８８】
本発明の第五の態様によれば、本発明による化合物を、ウイルスを含有すると思われるサンプルと接触させる工程を含んでなる、ウイルス感染の検出方法が提供される。
【００８９】
さらに、治療および／または予防における使用に必要とされる本発明による化合物の量は、選択した特定の化合物によって異なるだけでなく、投与経路、治療する症状の性質ならびに患者の年齢および状態によっても異なり、最終的には主治医または獣医の判断に委ねられる。しかし、一般には、好適な用量は約０．０００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲、好ましくは０．０００１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日、さらに好ましくは０．００２〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【００９０】
治療については、本化合物は感染後、例えば確立された症状が現れた後に与えれば有効である。予防については、本化合物は感染に曝される前、または曝された際に与えれば有効である。
【００９１】
治療は、用いる特定の化合物にもよるが、適切には２週間に１〜２回、一週間に１〜２回または毎日１〜４回とし、感染後３〜７日間、例えば５日間続ける。好ましくは、治療は一週間に１または２回である。さらに好ましくは、治療は一回投与量である。
【００９２】
望ましい用量は一週間に一回投与量で与えてもよいし、あるいは適当な間隔、例えば１日に２、３、４回またはそれ以上の部分量で分割量として投与してもよい。
【００９３】
好ましくは、感染治療としては、本化合物を一週間に１または２回、最も好ましくは感染診断後すぐに一回量で投与する。例えば、本発明者らの出願第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００１０９号および第ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７号の明細書に記載の診断方法を用いれば、診療所でインフルエンザ感染を診断してすぐに治療することができる。
【００９４】
本発明による化合物の長時間肺滞留性は、治療を一週間に１回施せばよいという利点をもたらす。
【００９５】
本発明のさらなる態様によれば、インフルエンザＡまたはＢを治療および／または予防する方法が提供され、該方法は、３個以上のノイラミニダーゼ結合基を含んでなる個々の多量体化合物の有効量を投与することを含んでなり、投与は一回である。好ましくは、個々の多量体化合物は式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体である。
【００９６】
予防目的では、本化合物は一週間に１もしくは２回、または二〜三週間に１回、好ましくは一週間に１回投与する。
【００９７】
本化合物は便宜には単位投与形で投与され、例えば単位投与形当たり有効成分０．０５〜５００ｍｇ、便宜には０．０１〜５０ｍｇ、最も便宜には０．１〜２０ｍｇを含有する。
【００９８】
治療または予防に用いる場合、本発明による化合物はそのままの化学物質として投与することもできるが、有効成分を医薬組成物として提供するのが望ましい。
【００９９】
従って、本発明の第六の態様によれば、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体および所望により１種以上の他の治療および／または予防成分とともに含んでなる医薬組成物が提供される。担体はその製剤の他の成分と適合し、かつ、その受容者に害がないという意味で「許容される」ものでなければならない。
【０１００】
本発明による化合物はまた、他の治療薬、例えば他の抗感染薬と組み合わせて用いてもよい。特に、本発明による化合物は他の抗ウイルス薬と併用してもよい。従って、本発明の第七の態様によれば、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を、別の治療上有効な薬剤、特に抗ウイルス薬とともに含んでなる組成物が提供される。
【０１０１】
上述の組合せは、医薬組成物の形で用いるのに便宜に提供され、従って上記のような組合せを医薬上許容される担体とともに含んでなる組成物は本発明のさらなる態様となる。
【０１０２】
かかる組合せに用いられる好適な治療薬としては、他の抗感染薬、特に呼吸器系の感染を治療するのに用いられるものなどの抗菌薬および抗ウイルス薬が挙げられる。例えば、上述のアマンタジン、リマンタジンおよびリバビリンならびにシアル酸類似体などの、インフルエンザウイルスに対して有効な他の化合物がかかる組合せに含まれる。
【０１０３】
かかる組合せの個々の化合物は、逐次または同時に、個々のまたは複合型の医薬製剤として投与することができる。
【０１０４】
本発明による化合物を同じウイルスに対して有効な第二の治療薬と併用する場合、各化合物の用量は各化合物を単独で用いる際に用いる量と同じである場合も異なる場合もあり得る。当業者であれば、適当な用量を容易に知ることができる。
【０１０５】
医薬製剤としては、経口投与、鼻腔内投与、局所投与（口内および舌下を含む）、または非経口投与（筋肉内、皮下および静脈内投与を含む）に適したもの、あるいは例えば吸入または通気による気道（鼻腔内を含む）投与に適した形態のものが挙げられる。これらの製剤は、適当であれば、個別の投与形で提供するのが便宜であり、製薬分野で周知のいずれの方法によって製造してもよい。これらの方法としては、活性化合物を液体担体または微粉砕した固体担体あるいはその双方と会合させ、必要であれば、その後にその生成物を所望の形態へ成形する工程を含む。
【０１０６】
経口投与に好適な医薬製剤はそれぞれ所定量の有効成分を含有するカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの個別単位として、粉末または顆粒として、溶液剤、懸濁剤またはエマルションとして便宜に提供できる。また、有効成分はボーラス剤、舐剤またはペースト剤として提供してもよい。経口投与用の錠剤およびカプセル剤は、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤または湿潤剤などの通常の賦形剤を含んでもよい。錠剤は当技術分野で周知の方法によってコーティングしてもよい。経口液体製剤としては、例えば、水性または油性懸濁剤、溶液剤、エマルション、シロップ、コロイド分散系またはエリキシルの形であってもよいし、あるいは使用前に水その他の好適なビヒクルで構成する乾燥粉末として提供してもよい。かかる液体製剤は沈殿防止剤、乳化剤、食用油を含む非水性ビヒクル、または保存剤などの通常の添加物を含んでもよい。
【０１０７】
また、本発明による化合物は、注射、例えばボーラス注射、または点滴による非経口投与用に製剤化してもよく、アンプル、プレフィルドシリンジ、少量注入の単位投与形、または保存剤を加えて多用量容器で提供してもよい。これらの組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、溶液剤、またはエマルションのような形態をとってもよく、沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤などの処方剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は使用前に好適なビヒクル、例えば発熱物質を含まない滅菌水で構成する、滅菌固体の無菌単離または溶液の凍結乾燥によって得られる粉末状であってもよい。
【０１０８】
口内の局所投与に好適な製剤としては、フレーバーベース、通常スクロースおよびアラビアガムまたはトラガカントガムに有効成分を含んでなるトローチ剤；ゼラチンまたはスクロースおよびアラビアガムなどの不活性基剤に有効成分を含んでなる香錠；好適な液体担体に有効成分を含んでなる口中洗浄剤が挙げられる。
【０１０９】
吸入、通気および鼻腔内投与による気道投与では、ノイラミニダーゼ阻害物質は、気道投与のために当技術分野で用いられる方法および製剤のいずれによって投与してもよい。
【０１１０】
このように、一般に気道投与では、本化合物は溶液剤または懸濁剤の形態で、あるいは乾燥粉末として投与できる。
【０１１１】
溶液剤および懸濁剤は、一般に、水性、例えば水単独（例えば発熱物質を含まない水）、または水および生理学上許容される補助溶剤（例えばエタノール、プロピレングリコールまたはＰＥＧ４００などのポリエチレングリコール）で形成されたものとされる。
【０１１２】
かかる溶液剤または懸濁剤はさらに他の賦形剤、例えば保存剤（塩化ベンズアルコニウム）、ポリソルベートなどの可溶化剤／界面活性剤（例えばｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０、塩化ベンズアルコニウム）、緩衝剤、浸透圧調整剤（例えば塩化ナトリウム）、吸収促進剤および増粘剤を含んでもよい。懸濁剤はさらに沈殿防止剤（例えば微晶質セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）を含んでもよい。
【０１１３】
溶液剤または懸濁剤は通常の手段、例えばスポイト、ピペットまたはスプレーを用いて鼻腔に直接適用する。これらの製剤は一回量または多用量型で提供できる。後者の場合、定量手段を提供するのが望ましい。スポイトまたはピペットの場合、これは患者が適当な所定の量の溶液剤または懸濁剤を投与することで達成できる。スプレーの場合では、これは例えば定量噴霧スプレーポンプの手段によって達成できる。
【０１１４】
気道投与はまた、化合物がクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタンまたはジクロロテトラフルオロメタン）、二酸化炭素またはその他の好適なガスなどの好適な噴射剤とともに予圧パックで提供されるエアロゾル製剤の手段によって達成できる。このようなエアロゾル剤はまた便宜にはレシチンなどの界面活性剤を含んでもよい。薬剤量は定量バルブを設けることで調節できる。
【０１１５】
あるいは本化合物は乾燥粉末または乾燥粉末混合物、例えばラクトース、デンプン、デンプン誘導体（ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のような好適な粉末中の本化合物の粉末混合物の形で提供してもよい。この粉末組成物は例えばゼラチンなどのカプセル剤もしくはカートリッジ、または粉末が吸入器の手段で投与されるブリスターパックにおいて単位投与形として提供してもよい。
【０１１６】
鼻腔内製剤をはじめとする気道投与を意図した製剤では、本化合物は一般に例えば５ミクロン未満のオーダーの小さな粒径（空気動力学的粒径；５０％粒子径）を有する。かかる粒径は当技術分野で公知の手段、例えば微粉化によって得られる。
【０１１７】
好ましくは、本発明による化合物は吸入、通気または鼻腔内投与、あるいはその組合せによって気道へ投与される。
【０１１８】
「レレンザ」は「Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ」（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ ｐｌｃの商標）から流動性粉末として経口吸入により投与される。同様の製剤が本発明に好適である。
【０１１９】
従って、本発明の他の態様によれば、上記のような組成物を含有する吸入器が提供される。
【０１２０】
また、吸入器は定量エアロゾル吸入器の形であってもよい。
【０１２１】
必要であれば、有効成分の持続放出を提供するようにした製剤を使用してもよい。
【０１２２】
発明の具体的説明
以下、本発明を以下の実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０１２３】
実施例１：５−アセトアミノ−７−（６−アミノヘキシルカルバモイルオキシ）−４−グアニジノ−２，３，４，５−テトラデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノン−２−エノピラノソン酸のエチレンジアミンテトラアセトアミド誘導体（３）［化合物（２）の四量体］の製造
【化３５】
2004507564.tif 000027
【０１２４】
７−カルバメート誘導体（２ａ）は本発明者らの初期の特許出願ＰＣＴ／ＡＵ９７／００１０９に記載のものと同様の手法に従って製造した。
化合物（２ａ）（４０ｍｇ，５．３９×１０−５モル）、無水エチレンジアミン四酢酸（７ｍｇ，２．６９×１０−５モル）およびピリジン（６．８μｌ，８．０７×１０−５モル）をジメチルホルムアミド（２００μｌ）中で５０℃にて３０分間攪拌した。反応混合物をトルエンと共蒸発させて化合物（５）を白色泡沫として得た（４４ｍｇ）。
【０１２５】
ＬＣ　Ｒｔ２．１分、ＭＳ６４３［Ｍ＋２Ｈ］２＋（方法Ａ）；
ＴＯＦ　６４３．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋、１２８５．５［Ｍ＋Ｈ］＋（方法Ｂ）
【０１２６】
ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）中の二量体（５）（２００ｍｇ，１．５５７×１０−４モル）の溶液にベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１６２ｍｇ，３．１２×１０−４モル）、化合物（２）（２３１ｍｇ，３．１２×１０−４モル）およびジイソプロピルエチルアミン（２４１μｌ、１．５５７×１０−３モル）を加えた。反応混合物を一晩室温で攪拌した後、蒸発乾固させた。
粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製して（方法Ｃ）、標題化合物の保護形態（２５０ｍｇ）をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＬＣ　Ｒｔ２．４分（方法Ａ）、ＭＳ　ＴＯＦ７５９．９［Ｍ＋３Ｈ］３＋、１１３９．３［Ｍ＋２Ｈ］２＋、２２７７．５［Ｍ＋Ｈ］＋（方法Ｂ）。水中のこの化合物（１００ｍｇ）およびトリエチルアミン（３ｍｌ）を室温にて１時間攪拌した後、蒸発乾固させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製して（方法Ｄ）、標題化合物（２０ｍｇ）をトリフルオロ酢酸塩として得た。
【０１２７】
ＬＣ　Ｒｔ５．４分、ＭＳ　ＴＯＦ５３０．２［Ｍ＋４Ｈ］４＋、７０６．６［Ｍ＋３Ｈ］３＋、１０５９．４［Ｍ＋２Ｈ］２＋（方法Ｂ）
【０１２８】
方法Ａ（ＬＣ／ＭＳ）
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＩＩ質量分析計（陽イオン電子スプレーモードで作動、質量範囲１００〜１０００ａｍｕ）
カラム：３．３ｃｍ×４．６ｍｍ　ＩＤ、３ｕｍ　ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ
流速：３ｍｌ／分
インジェクション量：５μｌ
溶媒Ａ：９５％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸＋１０ミリモル酢酸アンモニウム
グラジェント：０〜１００％　Ａ／５分、１００〜０％　Ｂ／５分
【０１２９】
方法Ｂ　ＴＯＦ（ＬＣ／ＭＳ）
ＴＯＦ装置はＭｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣＴ質量分析計（陽イオン電子スプレーモードで作動、質量範囲１００〜３０００ａｍｕ、連続データ取得モード）である。
【０１３０】
ＨＰＬＣグラジェント法としては
カラム：１５ｃｍ×２．１ｍｍ　ＩＤ、３．５ｕｍ　Ｘｔｅｒｒａ（Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．４ｍｌ／分
溶媒Ａ：１００％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸
グラジェント：１５％　Ａ／１０分、８５％　Ｂ／１０分、その後１５〜１００％　Ａ／１０分、８５〜０％　Ｂ／１０分
【０１３１】
方法Ｃ
使用したＰｒｅｐカラムはＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＡＢＺｐｌｕｓ（１０ｃｍ×２．５ｃｍ）であった。
【０１３２】
紫外線波長：２３０ｎｍ
流速：４ｍｌ／分
溶媒Ａ：アセトニトリル（＋０．０５％ＴＦＡ）
溶媒Ｂ：水（＋０．１％ＴＦＡ）
グラジェント：５〜５０％　Ａ／２０分、９５〜５０％　Ｂ／２０分、その後５０〜９５％　Ａ／１０分、５０〜５％　Ｂ／１０分
【０１３３】
方法Ｄ
使用したＰｒｅｐカラムはＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＡＢＺｐｌｕｓ（１０ｃｍ×２．５ｃｍ）であった。
【０１３４】
紫外線波長：２３０ｎｍ
流速：４ｍｌ／分
溶媒Ａ：アセトニトリル（＋０．０５％ＴＦＡ）
溶媒Ｂ：水（＋０．１％ＴＦＡ）
グラジェント：１５％　Ａ／２０分、８５％　Ｂ／２０分、その後１５〜９５％　Ａ／１０分、８５〜５％　Ｂ／１０分
【０１３５】
実施例２：１，３，５−ベンゼントリカルボン酸（トリメシン酸）および化合物（２ａ）からの三量体（４）の製造
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＩＩ質量分析計の電子スプレーイオン化および陽イオン検出にて行った。ＲＰ−ＨＰＬＣ精製はギルソンポンプ系、ギルソン２１５フラクションコレクターおよびヒューレットパッカード１１００フォトダイオードアレイデテクターを備えたギルソンＨＰＬＣシステムで行った。化合物４ａおよび４の精製収率はトリス−トリフルオロ酢酸複合体の分子量に基づいて算出した。
【０１３６】
合成
【化３６】
2004507564.tif 000028
【０１３７】
化合物２ａ（６２．０ｍｇ，８．３３×１０−５モル）、トリメシン酸（Ｉ）（５．０ｍｇ，２．３８×１０−５モル）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（３７．０ｍｇ，８．３３×１０−５モル）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、室温で攪拌した。次に上記の溶液にジイソプロピルエチルアミン（９０μｌ，５．１６×１０−５モル）を加え、室温で５時間攪拌した。次にこの粗溶液をそれ以上の後処理を行わずにＣ１８　ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製し、目的の生成物（４）（１７．９ｍｇ，８．７７×１０−６モル）を３７％の収率で得た。
【０１３８】
１Ｈ ｎ．ｍ．ｒ． （ＣＤ３ＯＤ）： δ １．４５ （ｂｒ， １２Ｈ）， １．５４−１．５８ （ｍ， ６Ｈ）， １．６９−１．７２ （ｂｒ， ６Ｈ）， １．９８ （ｓ， ９Ｈ）， ３．００−３．２５ （ｍ， ６Ｈ）， ３．４６ （ｔ， ６．９Ｈｚ， ６Ｈ）， ３．８４ （ｓ， ９Ｈ）， ４．１７ （ｔ， １０．０Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．４７ （ｄｄ， ９．３Ｈｚ， ２．２Ｈｚ， ６Ｈ）， ４．７０−４．８０ （ｍ， ６Ｈ）， ５．１８， （ｍ， ３Ｈ）， ５．６２ （ｔ， ２．４Ｈｚ， ３Ｈ）， ５．９３ （ｄ， ２．４Ｈｚ， ３Ｈ）， ８．４１ （ｓ， ３Ｈ）． ｍ／ｚ ５６８ （［Ｍ＋３Ｈ］３＋， ８５％）， ８５１ （［Ｍ＋２Ｈ］２＋， １００％）， ９０７ （［Ｍ＋ＣＦ３ＣＯ２Ｈ ＋ ２Ｈ］２＋， ３０％）．
【０１３９】
化合物４ａの精製
化合物４ａのＲＰ−ＨＰＬＣ精製はＷａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ−１８、５ミクロン、１９×１００ｍｍカラムを用い、二溶媒系（Ａ＝０．１％ＴＦＡを含む水、Ｂ＝０．０６％ＴＦＡを含むアセトニトリル）で行った。以下のグラジェントを用いた。
【０１４０】
【表２】
2004507564.tif 000029
【０１４１】
反応Ｂ：
【化３７】
2004507564.tif 000030
【０１４２】
化合物４ａ（ｌ４．４ｍｇ，７．０５×１０−６モル）を、メタノール、水およびトリエチルアミンをそれぞれ１０：１０：３の比率で含有する溶液６ｍｌに溶解した。この溶液を室温で３時間攪拌した。次に減圧下で溶媒を除去した。減圧下で水と共沸することで過剰なトリメチルアミンを除去した。次にこの粗材料をＣ１８　ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製し、目的の生成物４（８．１１ｍｇ，４．２２×１０−６モル）を６０％の収率で得た。
【０１４３】
１Ｈ ｎ．ｍ．ｒ． （ＣＤ３ＯＤ）： δ １．４７ （ｂｒ， １２Ｈ）， １．５４−１．５８ （ｍ， ６Ｈ）， １．７０−１．７５ （ｍ， ６Ｈ）， ２．００ （ｓ， ９Ｈ）， ３．００−３．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ３．４７ （ｔ， ７．１Ｈｚ， ６Ｈ）， ３．５０−３．５６， （ｍ， ３Ｈ）， ３．６９ （ｄｄ， １１．８Ｈｚ， ３．１Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．０−４．１ （ｍ， ３Ｈ）， ４．２４ （ｔ， ９．３Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．４１ （ｄｄ， ８．７Ｈｚ， ２．５Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．５９ （ｄｄ， ９．６Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， ３Ｈ）， ５．０３ （ｄｄ， ９．２Ｈｚ， ２．３Ｈｚ， ３Ｈ）， ５．９２， （ｄ， ２．６Ｈｚ， ３Ｈ）， ８．４２ （ｓ， ３Ｈ）． ｍ／ｚ ５２８ （［Ｍ＋３Ｈ］３＋， ３５％）， ７９０ （［Ｍ＋２Ｈ］２＋， １０５４ （［２Ｍ＋３Ｈ］３＋， ３５％）， １５７９ （［Ｍ＋Ｈ］１＋， ２０％）．
【０１４４】
化合物４の精製
化合物２ａのＲＰ−ＨＰＬＣ精製はＷａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ−１８、５ミクロン、１９×１００ｍｍカラムを用い、二溶媒系（Ａ＝０．１％ＴＦＡを含む水、Ｂ＝０．０６％ＴＦＡを含むアセトニトリル）で行った。以下のグラジェントを用いた。
【０１４５】
【表３】
2004507564.tif 000031
【０１４６】
実施例３：四量体（化合物（３））合成の別法
【化３８】
2004507564.tif 000032
【０１４７】
エチレンジアミン四酢酸二無水物（２．３６ｇ）、Ｎ−（６−アミノヘキシル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（４．００ｇ）、ピリジン（１．９ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）を室温で一晩攪拌した後、３時間５５℃まで温めた。次に真空下で溶媒を除去し、トルエン（３×２５ｍＬ）と共沸して化合物（６）（６．３ｇ）を得た。
【０１４８】
質量スペクトル　ＭＨ＋　６８９
【０１４９】
【化３９】
2004507564.tif 000033
【０１５０】
化合物（６）（５００ｍｇ，０．７３ミリモル）を無水ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（１．０ｍＬ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１９４ｍｇ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（７６０ｍｇ）を連続して加えた。反応物を窒素雰囲気下、室温で１５分間攪拌した。Ｎ−（６−アミノヘキシル）カルバミン酸ｔ−ブチルエステル塩酸塩（４０５ｍｇ）を加え、反応物を室温で一晩攪拌した。真空下で溶媒を除去し、残渣を１：１ｖ／ｖジエチルエーテル：酢酸エチル（３０ｍＬ）に再溶解した。この溶液を重炭酸ナトリウム飽和水溶液、次いでブライン（ともに３０ｍＬ）で洗浄した。真空下で溶媒を除去して黄色の粗オイルを得た。この粗生成物を２０ｇ固相抽出カートリッジを用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。化合物（７）を１００：８：１ｖ／ｖジクロロメタン：エタノール：ＮＨ３で溶出した。真空下で溶媒を除去し、化合物（７）を白色泡沫として得た（２８８ｍｇ）。ＴＬＣ　Ｓｉ０２（１００：８：１ジクロロメタン：エタノール：ＮＨ３）Ｒｆ０．１５。
【０１５１】
【化４０】
2004507564.tif 000034
【０１５２】
化合物（７）（０．２８ｇ）をトリフルオロ酢酸塩（５ｍＬ）とともに４５分間攪拌した後に真空濃縮して化合物（８）（０．４２３ｇ）を得た。
【０１５３】
１Ｈ−ＮＭＲ （ｄ６−ＤＭＳＯ）； δ １．２４ （ｍ， １６Ｈ）， １．３８ （ｍ， ８Ｈ）， １．４８ （ｍ， ８Ｈ）， ２．７４ （ｂｒｏａｄ ｓ， ８Ｈ）， ３．０７ （ｍ， １２Ｈ）， ３．９０−４．６０ （ｂｒｏａｄ ｓ）， ７．７８ （ｂｒｏａｄ ｓ， ８Ｈ）， ８．２６ （ｔ， ４Ｈ）．
【０１５４】
【化４１】
2004507564.tif 000035
【０１５５】
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−アミノ−２−［（１Ｒ，２Ｒ）］−１，２，３−トリヒドロキシプロピル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸三水和物（８５ｇ，０．２４７モル）をメタノール（７００ｍＬ）に懸濁した。ジクロロメタン中のジフェニルジアゾメタン溶液（２００ｍＬ、０．０９２モル）および２Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ）を加えた。この懸濁液を室温で１５時間攪拌した。さらに２Ｍ塩酸水溶液（１０ｍＬ）を加え、懸濁液を５時間攪拌した。さらにジクロロメタン中のジフェニルジアゾメタン溶液（３００ｍＬ、０．１５モル）を加え、懸濁液を１５時間攪拌した。固体を濾去し、濾液を真空蒸発させた。この物質を、アセトニトリル、アセトニトリル／メタノール／水２０：５：１、アセトニトリル／メタノール／水２０：５：２で溶出するシリカＳＰＥカートリッジを用いて精製した。真空下で溶媒を除去すると、化合物（９）が灰白色の固体として残った（２２ｇ）。
【０１５６】
ＭＨ＋測定値４５７
【０１５７】
【化４２】
2004507564.tif 000036
【０１５８】
化合物（９）（１３．６７ｇ，３０ミリモル）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ’−ビス−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−グアニルピラゾール（１０．２２ｇ，３２．９ミリモル）を加えた。反応物を室温で４８時間攪拌した。揮発物質を真空下で除去した。残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）とともに２０分間攪拌・振盪し、不溶性物質を濾去した。濾液を濃縮し、酢酸エチル／シクロヘキサン１：１、次いで酢酸エチルで溶出するシリカフラッシュカラムクロマトグラフィー用いて精製した。生成物を含有する画分を真空蒸発させると、化合物（１０）が白色固体として残った（８．２ｇ）。
【０１５９】
ＭＨ＋測定値６９９
【０１６０】
【化４３】
2004507564.tif 000037
【０１６１】
化合物（１０）（１．０ｇ，１．４ミリモル）を無水アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解した。カルボニルジイミダゾール（２８０ｍｇ）を加え、反応物を窒素下、室温で３．５時間攪拌した。真空下で溶媒を除去して透明で粘稠な残渣を得た。この粗生成物を２０ｇ固相抽出カートリッジを用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。化合物（１１）は１：１ｖ／ｖ酢酸エチル：シクロヘキサンで溶出させた。真空下で溶媒を除去し、化合物（１１）を白色結晶固体として得た（７４７ｍｇ）。
ＴＬＣ　ＳｉＯ２（酢酸エチル）　Ｒｆ０．７
【０１６２】
質量スペクトル：７２５ｍ／ｚ（ＭＨ＋）
【０１６３】
【化４４】
2004507564.tif 000038
【０１６４】
化合物（１１）（０．０６７ｇ）にアセトニトリル（０．５ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．０３４ｇ）、Ｎ，Ｎ’−スクシニニジルカーボネート（０．０３６ｇ）を加え、混合物を室温で３日間攪拌した。この混合物に化合物（８）（０．０８５ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍＬ）およびアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加え、混合物を室温で３日間攪拌し、化合物（１２）を含んだ混合物を得た。
質量スペクトル：Ｍ／３＝１２２９
次に保護基を常法により除去して遊離四量体の化合物（３）を得た。
【０１６５】
実施例４：ＥＤＴＡおよび化合物（２ａ）からの三量体（１４）の製造
中間体（１３）
化合物（５）（０．０７６６ｇ）、ベンゾトリアゾール−２−１−イルオキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（０．０３１ｇ）、化合物（２ａ）（０．０４４ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１０４ｍＬ）およびＤＭＦ（３ｍＬ）をともに１８時間攪拌した。トリフルオロ酢酸（０．１１５ｍＬ）を加えた後、真空下で溶媒を除去し、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ（２０分間で２０〜３０％のＭｅＣＮグラジェント、トリフルオロ酢酸で緩衝）により精製して中間体（１３）を得た（０．０７７ｇ）。
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　８９１．８；　Ｔｒｅｔ＝８．２３分
【０１６６】
中間体（１３）
【化４５】
2004507564.tif 000039
【０１６７】
（１Ｓ）−１−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ）−６−［（メチルオキシ）カルボニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝−１４，１７−ビス｛２−［（６−｛［（｛（ｓ）−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−［（メチルオキシ）カルボニル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル｝［（４Ｒ）−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル］メチル｝オキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキシル）アミノ］−２−オキソエチル｝−３，１２−ジオキソ−１−［（４Ｒ）−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル］−２−オキサ−４，１１，１４，１７−テトラアザノナデカン−１９−酸
【０１６８】
中間体（１３）（０．００５ｇ）、水（１ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）をともに２時間激しく攪拌した後、揮発性物質を窒素流で吹き飛ばした。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（２５分間で０〜５０％ＭｅＣｎ）によって精製して化合物（１４）を得た（０．００３１ｇ）。
【０１６９】
化合物（１４）
【化４６】
2004507564.tif 000040
【０１７０】
（１９Ｒ，２０Ｒ）−１９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３，６−ビス［２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）−２−オキソエチル］−２０，２１−ジヒドロキシ−８，１７−ジオキソ−１８−オキサ−３，６，９，１６−テトラアザヘニコサン−１−酸トリス（トルフルオロ酢酸塩）
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　８３１；　Ｔｒｅｔ＝７．４１分
【０１７１】
実施例５：化合物（１８）および（１９）
中間体（１５）
中間体（１５）
【化４７】
2004507564.tif 000041
【０１７２】
５−［（４−［［３，５−ビス（クロロカルボニル）フェニル］カルボニル）ピペラジン−１−イル）カルボニル］ベンゼン−１，３−ジカルボニルジクロリド
【０１７３】
５℃にて、３，５−ジエチルカルボキシ安息香酸（１．５５ｇ）にジクロロメタン（１００ｍＬ）、ジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）および塩化オキサリル（０．５ｍＬ）を加えた。室温で３時間後、真空下で揮発性物質を除去し、残渣をトルエンと共沸した。
【０１７４】
この残渣にジクロロメタン（１００ｍＬ）、ピペラジン（０．２５１ｇ）およびトリエチルアミン（０．８９ｍＬ）を加えた。室温で３時間攪拌した後、混合物を２Ｍ塩酸（２×１００ｍＬ）、２Ｎ炭酸ナトリウム（２×１５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄して乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。真空濃縮して白色固体を得た（０．８２ｇ）。
【０１７５】
この白色固体にメタノール（２０ｍＬ）、水（７ｍＬ）、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）および水酸化リチウム（０．１４５ｇ）を加えた。室温で２時間後、真空下で有機溶媒を除去し、残渣に２Ｍ塩酸を加えてｐＨ４とした。生じた白色沈殿を濾別し、水で洗浄して乾燥させ、白色固体を得た（０．６２６ｇ）。
【０１７６】
この白色固体の一部（０．２００ｇ）をトルエン（２×５０ｍＬ）と共沸した後、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に懸濁させた。次に、塩化オキサリル（０．１８５ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（２滴）を加えた。１時間後、さならる塩化オキサリル（０．１８５ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（１滴）を加えた。３０分後、真空下で溶媒を除去し、残渣をトルエン（２×２０ｍＬ）とともに共沸して中間体（１５）を薄いクリーム色の固体として得（０．２１４ｇ）、これをさらに精製および分析せずに用いた。
【０１７７】
中間体（１６）および（１７）
中間体（１６）
【化４８】
2004507564.tif 000042
【０１７８】
５−｛［４−（｛３，５−ビス［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノカルボニル］フェニル｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝−Ｎ，Ｎ’−ジ（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノカルボニル）ベンゼン−ｌ，３−ジカルボキシアミドテトラキス（トリフルオロ酢酸塩）
【０１７９】
中間体（１７）
３−｛［４−（｛３，５−ビス［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル］フェニル｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝−５−［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル）安息香酸トリス（トリフルオロ酢酸塩）
【０１８０】
【化４９】
2004507564.tif 000043
【０１８１】
化合物（２ａ）（０．１００ｇ）をトルエン（１５ｍＬ）とともに共沸した。次にトルエンをジクロロメタン（２ｍＬ）およびアセトニトリル（２ｍＬ）に懸濁させ、これにジイソプロピルエチルアミン（０．４７ｍＬ）および中間体（１５）（０．０１５ｇ）を加えた。３時間後、真空下で溶媒を除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣ（４５分間で２０〜３０％ＭｅＣｎ）で精製して中間体（１６）（０．０１２５ｇ）および中間体（１７）（０．００３９ｇ）を得た。
【０１８２】
中間体（１６）
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　１２２８；　Ｔｒｅｔ＝８．７９分
【０１８３】
中間体（１７）
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　９８０；　Ｔｒｅｔ＝９．０１分
【０１８４】
化合物（１８）
化合物１８
【化５０】
2004507564.tif 000044
【０１８５】
５−｛［４−（｛３，５−ビス［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル］フェニル｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）ベンゼン−ｌ，３−ジカルボキシアミドテトラキス（トリフルオロ酢酸塩）
【０１８６】
中間体（１６）（０．００７９ｇ）、メタノール（１ｍＬ）、水（１ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．２ｍＬ）を２時間混合した。揮発性物質を除去した後、水性残渣をトリフルオロ酢酸でｐＨ２まで酸性化した後、逆相ＨＰＬＣ（２０分間で２０〜４０％）で精製して化合物（１８）（０．００３５ｇ）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　１１４９；　Ｔｒｅｔ＝８．２４分
【０１８７】
化合物（１９）
化合物１９
【化５１】
2004507564.tif 000045
【０１８８】
３−｛［４−（｛３，５−ビス［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル］フェニル｝カルボニル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝−５−［（２−（｛６−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル）安息香酸トリス（トリフルオロ酢酸塩）
【０１８９】
中間体（１７）（０．００３３ｇ）、メタノール（１ｍＬ）、水（１ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．２ｍＬ）を２時間混合した。揮発性物質を除去した後、水性残渣をトリフルオロ酢酸でｐＨ２まで酸性化した後、逆相ＨＰＬＣ（２０分間で２０〜４０％）で精製して化合物（１９）（０．００１ｇ）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）　ＭＨ＋／２　９２０；　Ｔｒｅｔ＝８．２４分
【０１９０】
実施例６：　１，２，４，５−ベンゼンテトラカルボン酸および化合物（２ａ）のカップリングからの四量体（２０）および三量体（２１）の製造
化合物（２０）および（２１）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，２，４，５−ベンゼンテトラカルボン酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。これらの化合物をＨＰＬＣにより分離し、１Ｈ　ＭＮＲおよび質量分析によって同定した。
【０１９１】
化合物（２０）
１Ｈ ｎｍｒ （ＣＤ３ＯＤ）： δ １．３７ （ｂｒ， １６Ｈ）； １．４７ （ｂｒ， ８Ｈ）； １．５８ （ｂｒ， ８Ｈ）； １．９１ （ｓ， １２Ｈ）； ３．００ （ｍ， ８Ｈ）； ３．３１ （ｍ， ８Ｈ）； ３．４６ （ｄｄ， ４Ｈ）； ３．６２ （ｄｄ， ４Ｈ）； ３．９９ ｄｄ， ４Ｈ）； ４．１４ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．４８ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．６３ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．９３ （ｄｄ， ４Ｈ）； ５．８４ （ｄ， ４Ｈ）； ７．６５ （ｓ， ２Ｈ）．
ＭＳ （分子量 ２０８０．１６）： １０４１ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ６９４ （Ｍ＋３Ｈ）３＋， ５２１ （Ｍ＋４Ｈ）４＋
【０１９２】
化合物（２１）
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．３７ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．５１ （ｂｒ， ６Ｈ）； １．６３ （ｂｒ， ６Ｈ）； １．９３ （ｂｒ， ９Ｈ）； ３．０５ （ｍ， ６Ｈ）； ３．３２ （ｍ， ６Ｈ）； ３．５０ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．７５ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．９８ （ｍ， ３Ｈ）； ４．１８ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．３７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．５３ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．０１ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．８７ （ｄ， ３Ｈ）； ７．５２ （ｓ， １Ｈ）； ８．０８ （ｓ， １Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １６２３．６６）： １０８３ （２Ｍ＋３Ｈ）３＋， ８１３ （Ｍ＋３Ｈ）２＋， ５４２ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０１９３】
実施例７：　１，２，４−ベンゼントリカルボン酸および化合物（２ａ）のカップリングからの三量体（２２）の製造
化合物（２２）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，２，４−ベンゼントリカルボン酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
ＭＳ （分子量 １５７８）： １５７９ （Ｍ＋Ｈ）＋、 １０５３ （２Ｍ＋３Ｈ）３＋、 ７９０ （Ｍ＋２Ｈ）２＋
【０１９４】
実施例８：　４−ｔ−ブチルカリクス［４］アレン−Ｏ−四酢酸および化合物（２ａ）のカップリングからの四量体（２３）の製造
化合物（２３）の合成は、トリメシン酸の代わりに４−ｔ−ブチルカリクス［４］アレン−Ｏ−四酢酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （ＣＤ３ＯＤ）： δ （ｐｐｍ） μ １．１２ （ｓ， ２８Ｈ）； １．２１ （ｓ， ８Ｈ）； １．３０−１．６５ （ｂｒ， ３２Ｈ）； １．９５ （ｓ， １２Ｈ）； ３．０ （ｍ， ８Ｈ）； ３．２−３．４ （ｍ， １６Ｈ）； ３．５１ （ｄｄ， ４Ｈ）； ３．６３ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．００ （ｍ， ４Ｈ）； ４．２２ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．３７ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．５２ （ｓ， ８Ｈ）； ４．５４ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．９７ （ｄｄ， ４Ｈ）； ５．８５ （ｄ， ４Ｈ）； ６．９５ （ｂｒ， ６．２Ｈ）； ７．４１ （ｓ， １．８Ｈ）．ＭＳ （分子量 ２７０４）： １３５４ （Ｍ＋４Ｈ）２＋， ９０２ （Ｍ＋３Ｈ）３＋， ６７７ （Ｍ＋４Ｈ）４＋
【０１９５】
実施例９：　１，２，３−ベンゼン酸酢酸および化合物（２ａ）のカップリングからの三量体（２４）の製造
化合物（２４）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，２，３−ベンゼントリカルボン酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
ＭＳ （分子量 １５７８）： ７９０ （Ｍ＋３Ｈ）２＋、 ５２７ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０１９６】
実施例１０：　トリカルバリル酸および化合物（２ａ）のカップリングからの三量体（２５）の製造
化合物（２５）の合成は、トリメシン酸の代わりにトリカルバリル酸（１，２，３−プロパントリカルボン酸）を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．２８ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．４５ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．９６ （ｓ， ９Ｈ）； ２．４０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ２．９８−３．１８ （ｍ， １３Ｈ）； ３．５０ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．６５ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．０２ （ｄｄｄ， ３Ｈ）； ４．１６ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．４３ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．５７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．９３ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．９８ （ｄ， ３Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １５４４）： １５４６ （Ｍ＋２Ｈ）＋， ７７３ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ５１６ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０１９７】
実施例１１：　１，３，５−シクロヘキサントリカルボン酸（ｃｉｓ）および化合物（２ａ）のカップリングからの三量体（２６）の製造
化合物（２６）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，３，５−シクロヘキサントリカルボン酸（ｃｉｓ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．３２ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．４５−１．６０ （ｂｒ， １５Ｈ）； １．９３ （ｄ， ３Ｈ）； １．９９ （ｓ， ９Ｈ）； ２．４２ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．０８ （ｍ， ６Ｈ）； ３．１８ （ｍ， ６Ｈ）； ３．５３ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．６８ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．０５ （ｄｄｄ， ３Ｈ）； ４．１８ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．４７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．５９ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．９９ （ｄｄ， ３Ｈ）； ６．０７ （ｄ， ３Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １５８５）： １５８６ （Ｍ＋Ｈ）＋， １０５７ （２Ｍ＋３Ｈ）３＋， ７９３ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ５２９ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０１９８】
実施例１２：　１，２，３，４−テトラヒドロフラン−テトラカルボン酸および化合物（２ａ）のカップリングからの四量体（２７）の製造
化合物（２７）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，２，３，４−テトラヒドロフラン−テトラカルボン酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．２７ （ｂｒ， １６Ｈ）； １．４３ （ｂｒ， １６Ｈ）； １．９３ （ｓ， １２Ｈ）； ２．９２−３．４０ （ｍ， １８Ｈ）； ３．４５ （ｄｄ， ４Ｈ）； ３．６２ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．００ （ｍ， ４Ｈ）； ４．１１ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．４０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．５２ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．６２ （ｄ， ２Ｈ）； ４．７２ （ｄ， ２Ｈ）； ４．９０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ５．８９ （ｄ， ４Ｈ）．
ＭＳ （分子量 ２０７２）： １０３８ （Ｍ＋４Ｈ）２＋， ６９２ （Ｍ＋４Ｈ）３＋
【０１９９】
実施例１３：　１，２，３，４−シクロブタン−テトラカルボン酸および化合物（２ａ）のカップリングからの四量体（２８）の製造
化合物（２８）の合成は、トリメシン酸の代わりに１，２，３，４−シクロブタン−テトラカルボン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．２３ （ｂｒ， １６Ｈ）； １．４３ （ｂｒ， １６Ｈ）； １．９３ （ｓ， １２Ｈ）； ２．９５−３．２０ （ｍ， １６Ｈ）； ３．４７ （ｄｄ， ４Ｈ）； ３．５５−３．７０ （ｍ， ８Ｈ）； ４．０１ （ｍ， ４Ｈ）； ４．１０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．４０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．５０ （ｄｄ， ４Ｈ）； ４．８９ （ｄｄ， ４Ｈ）； ５．８５ （ｄ， ４Ｈ）．
ＭＳ （分子量 ２０５６）： １０３０ （Ｍ＋４Ｈ）４＋， ６８６ （Ｍ＋２Ｈ）３＋
【０２００】
実施例１４：　１，３，５−ベンゼントリカルボン酸および化合物（３０）のカップリングからの三量体（２９）の製造
化合物（２９）の合成は、化合物（２ａ）の代わりにリジン誘導体（３０）を用いたこと以外は実施例２の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
【０２０１】
【化５２】
2004507564.tif 000046
【０２０２】
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．４−１．６ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．８０−１．９８ （ｂｒ， １５Ｈ）； ３．０５ （ｍ， ６Ｈ）； ３．４４ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．６０ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．９８ （ｍ， ３Ｈ）； ４．０２ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．３７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．４６ （ｍ， ６Ｈ）； ４．８７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．６５ （ｄ， ３Ｈ）； ８．２８ （ｂｒ， ３Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １６６８）： ８３５ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ５５７ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０２０３】
実施例１５：　クエン酸および化合物（２ａ）のカップリングからの三量体（３１）の製造
化合物（３１）の合成は、トリメシン酸の代わりにクエン酸を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．２６ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．３８ （ｂｒ， １２Ｈ）； １．９３ （ｓ， ９Ｈ）； ２．５０ （ｄ， ２Ｈ）； ２．６９ （ｄｄ， ２Ｈ）； ２．９５−３．２０ （ｍ， １２Ｈ）； ３．４７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．６５ （ｄｄ， ３Ｈ）； ３．９９ （ｍ， ３Ｈ）； ４．１４ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．４２ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．５２ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．９１ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．９６ （ｄ， ３Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １５６０）： ７８１ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ５２１ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０２０４】
実施例１６：　１，３，５−ベンゼントリカルボン酸および化合物（３３）のカップリングからの三量体（３２）の製造
化合物（３２）の合成は、化合物（２ａ）の代わりに１，３−プロパンジアミン誘導体（３３）を用いたこと以外は実施例２に記載の化合物（４）に関するものと実質的に同じ方法に従って行った。
【０２０５】
【化５３】
2004507564.tif 000047
【０２０６】
１Ｈ ｎｍｒ （Ｄ２Ｏ）： δ １．８０ （ｔ， ６Ｈ）； １．９３ （ｓ， ９Ｈ）； ３．１９ （ｔ， ６Ｈ）； ３．４０−３．５０ （ｍ， ９Ｈ）； ３．６４ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．０ （ｍ， ３Ｈ）； ４．０９ （ｔ， ３Ｈ）； ４．３７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．４７ （ｄｄ， ３Ｈ）； ４．９４ （ｄｄ， ３Ｈ）； ５．８０ （ｄ， ３Ｈ）； ８．２４ （ｓ， ３Ｈ）．
ＭＳ （分子量 １４５２）： ７２７ （Ｍ＋２Ｈ）２＋， ４８５ （Ｍ＋３Ｈ）３＋
【０２０７】
実施例１７：　インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ（ＮＡ）に対する本発明の化合物の結合の同定
インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスを用いて、化合物がインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ全体と結合する能力を調べた。ノイラミニダーゼアッセイは実質的にＰｏｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １９７９ ９４， ２８７により記載された手法に従って行った。
【０２０８】
実施例１８：　インフルエンザプラークアッセイを用いた本発明の化合物の抗ウイルス活性の評価
プラークアッセイは実質的にＨａｙｄｅｎ ｅｔ ａｌ． （Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．， １９８０， １７， ８６５）に記載のように行う。ＭＤＣＫ細胞単層に約１００プラーク形成単位のインフルエンザウイルスを感染させる。ウイルスを吸収させた後、細胞に、例えば０．１μｇ／ｍｌから０．０００３μｇ／ｍｌまでの範囲の濃度を用い、試験化合物の１／２ｌｏｇ希釈を含有するアガロースを重層する。これらのプレートを４日間インキュベートした後、ホルマリンで一晩固定する。アガロース層を除去した後、プラークをニュートラルレッドで染色し、プラークを可視化する。プレートのプラーク数の阻害を評価し、各化合物についてＥＣ５０を求めた。
【０２０９】
【表４】
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【０２１０】
【表５】
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【０２１１】
実施例１９：　遺伝子ウイルスに対する化合物の活性
実質的に文献に記載されている標準的な方法に従い（例えば、Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９９４ ４８ ２５７参照）、実施例３の三量体化合物のインフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスの複製を阻害する能力を調べた。アッセイはＭＤＣＫ細胞ならびに異なる３種類のインフルエンザウイルス株、すなわちインフルエンザＡ２系統およびインフルエンザＢ１系統を用いて行い、結果は表１に示されている。結果は、１／２ｌｏｇ曲線の当てはめに関する回帰解析プログラムを用いて算出した、細胞病理作用を５０％まで阻害する最小化合物濃度［（μｇ／ｍｌ）］ＩＣ５０で示されている。これらの結果は、三量体化合物（４）は３種類全てのインフルエンザウイルス株に対して極めて有効な化合物ザナミビル（化合物（Ａ））よりも遙かに有効であったことを示す。これらの化合物の治療指数は、最小細胞傷害剤濃度（ＭＴＣ）をＩＤ５０で割ることにより算出できる。
【０２１２】
【表６】
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【０２１３】
上記と同じプロトコールによれば、本発明の化合物は下表にまとめられたＣＰＥ結果を示した。
【０２１４】
【表７】
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【０２１５】
実施例２０：　長時間作用の評価
齧歯類を麻酔し、目的の化合物を０．８ｍｌ／ｋｇの用量で頚部から投与する。その後、齧歯類が完全に回復するまで垂直位に保つ。様々な時点、例えば投与２、８、２４および４８時間後に、肺組織中の化合物のレベルを分析法にて評価する。この種の化合物の検出に適した分析法を用いればよい。化合物のレベルが確認された分析技術の感受性を下回る時間を、肺組織における化合物の滞留時間とする。
【０２１６】
本発明の多量体化合物番号３、４および２０は各化合物０．４ｍｇ／ｋｇの用量を用い、ザナミビル［化合物（Ａ）］と並行して試験し、４８時間および１６８時間後に肺組織中の化合物のレベルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて評価した。この分析により、化合物３、４および２０が単量体ザナミビル（Ａ）よりも遙かに高濃度で肺に保持されていたことを示した。
【０２１７】
実施例２１：　長時間作用および効力の評価の別法
マウスを感染させるプロトコールはこれまでに記載されている（１、２、３、４）。軽く麻酔したマウスの外鼻孔にインフルエンザウイルスを接種する。
【０２１８】
治療法および投与計画
一回量の化合物を感染前１０日までの所定の時点、好ましくは感染４〜７日前、あるいは感染後、好ましくは感染直後および感染４８時間後にに投与する。大部分の実験では、非致死株のインフルエンザを用い、効力は肺のウイルス力価の減少により評価する。感染前に化合物を与えたマウスについては、感染後１日、または感染後数日、好ましくは感染後１〜４日後に肺を摘出する。ホモジナイズした肺サンプルを確立された方法でウイルス評価し、ウイルス負荷の力価を評価して非処置マウスの肺のウイルス力価と比較する。
【０２１９】
インフルエンザのマウス適合致死系統を用いる実験では、効力は非処置マウスと比べ、生存率および／または生存数の増加により評価する。
【０２２０】
【表８】
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【０２２１】
【表９】
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【０２２２】
【表１０】
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【０２２３】
【表１１】
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【０２２４】
実施例１９〜２１に記載のアッセイ法は当業者に周知であり、一般にヒトにおける効力の推定値として受け入れられている。
【０２２５】
【表１２】
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【０２２６】
実施例２２：　粉末吸入製剤
有効成分　　　　　　　　　５ｍｇ
担体、例えばラクトース　２０ｍｇ
有効成分と担体を転倒混合機で混合する。
【０２２７】
本発明を明らかに理解させる目的でいくつか詳細に記載したが、当業者ならば本明細書に開示されている発明の概念の範囲から外れることなく、本明細書に記載の具体例および方法に対して種々の改変および変更をなし得ることが分かるであろう。
【０２２８】
本明細書およびクレームが一部をなす出願は後続のいずれの出願についても優先権の基礎として用いられる。かかる後続出願のクレームは本明細書に記載のいずれの特徴または特徴の組合せにも向けられる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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