(57)【要約】ヒトインターロイキン−１８（ｈＩＬ−１８）に結合する抗体が提供され、特に、ヒトＩＬ−１８のエピトープに結合する抗体が提供される。抗体は、例えば全体がヒト抗体、組換え抗体、またはモノクローナル抗体でよい。好ましい抗体は、ｈＩＬ−１８に対する親和性が高く、生体外および生体内でｈＩＬ−１８活性を中和する。本発明の抗体は、完全長抗体またはその抗原結合部分でよい。本発明の抗体を作製する方法および使用する方法も提供される。本発明の抗体または抗体部分は、ｈＩＬ−１８の検出に有用であり、例えば、ｈＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト対象のｈＩＬ−１８活性を阻害するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＬ−１８アミノ酸配列またはその一部に結合することができる化合物であって、前記アミノ酸が、配列番号６７および配列番号６８からなる群から選択された配列を含む化合物。
【請求項２】
前記化合物が、小分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、および抗体フラグメントからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記抗体または抗体フラグメントが完全にヒトのものである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ヒトＩＬ−１８に結合することができるヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数０．１ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−６Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−２ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−７Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−３ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−８Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項８】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−４ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−９Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項９】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−５ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−１０Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項１０】
抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−６ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−１１Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項４に記載の抗体。
【請求項１１】
配列番号３および配列番号３３を含む群から選択されたアミノ酸配列を含む、ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはその一部に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
抗体が中和抗体である、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３】
ヒト抗体である請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１４】
組換え抗体である請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１５】
モノクローナル抗体である請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１６】
ヒトＩＬ−１８のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数０．１ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−６Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１７】
表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−２ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−７Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−３ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−８Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１９】
表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−４ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−９Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２０】
表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−５ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−１０Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２１】
表面プラズモン共鳴により決定されるようにｋｏｆｆ速度定数１×１０−６ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−１１Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２２】
ヒトＩＬ−１８のエピトープに結合することができる少なくとも１つの可変部領域ＣＤＲを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、修飾されていない抗体またはその抗原結合部分に比べてＩＬ−１８結合を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換または挿入を含む、請求項２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、修飾されていない抗体またはその抗原結合部分に比べてＩＬ−１８の中和を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換または挿入を含む、請求項２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２５】
前記可変部領域が、
配列番号９のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号９から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
配列番号１０のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１０から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
配列番号１１のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１１から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２６】
前記可変部領域が、
位置Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、またはＨ３５で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号９から変更されたＨ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
位置Ｈ５２、Ｈ５２ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、またはＨ５８で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１０から変更されたＨ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
位置Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、またはＨ９８で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１１から変更されたＨ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項２５に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２７】
前記可変部領域が、
配列番号１２のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１２から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１３から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１４から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２８】
前記可変部領域が、
位置Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、またはＬ３４で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１２から変更されたＬ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
位置Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、またはＬ５５で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１３から変更されたＬ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
位置Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９５ａ、Ｌ９５ｂ、Ｌ９６、またはＬ９７で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号１４から変更されたＬ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項２７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２９】
配列番号１５、１６、および１７からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む可変部領域を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３０】
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３１】
配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３２】
前記可変部領域が、
配列番号２０のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２０から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
配列番号２１のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２１から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
配列番号２２のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２２から変更された配列を有するＨ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３３】
前記可変部領域が、
位置Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、またはＨ３５で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２０から変更されたＨ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
位置Ｈ５０、Ｈ５１、Ｈ５２、Ｈ５２ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、またはＨ５８で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２１から変更されたＨ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
位置Ｈ９６、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ９９、Ｈ１００、Ｈ１００ａ、Ｈ１０１、またはＨ１０２で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２２から変更されたＨ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３４】
前記可変部領域が、
配列番号２３のアミノ酸配列、または位置で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２３から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
配列番号２４のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２４から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
配列番号２５のアミノ酸配列、または少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２５から変更された配列を有するＬ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３５】
前記可変部領域が、
位置Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、またはＬ３４で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２３から変更されたＬ鎖ＣＤＲ１ドメインと、
位置Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、またはＬ５５で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２４から変更されたＬ鎖ＣＤＲ２ドメインと、
位置Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９５ａ、Ｌ９５ｂ、Ｌ９６、またはＬ９７で少なくとも１つのアミノ酸置換によって配列番号２５から変更されたＬ鎖ＣＤＲ３ドメインと
からなる群から選択されたＣＤＲドメインを含む、請求項３４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３６】
配列番号２６、２７、および２９からなる群から選択されたアミノ酸を含む可変部領域を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３７】
配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３８】
配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号２７のアミノ酸配列を有するＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３９】
請求項４から３８のいずれか一項に記載の抗体ＣＤＲアミノ酸配列をコードする、単離された核酸。
【請求項４０】
組換え発現ベクターにある請求項３９に記載の単離された核酸。
【請求項４１】
内部に請求項４０に記載の組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞。
【請求項４２】
ヒトＩＬ−１８に結合する抗体を合成する方法であって、ヒトＩＬ−１８に結合する抗体が細胞によって合成されるまで請求項４１に記載の宿主細胞を培地で培養することを含む方法。
【請求項４３】
前記抗体がヒトのものである請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項４から３８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合部分を含む医薬品組成物、および医薬品として許容される担体。
【請求項４５】
ＩＬ−１８活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の他の治療薬をさらに含む、請求項４４に記載の医薬品組成物。
【請求項４６】
前記他の薬剤が、ヒトＩＬ−１２に結合することができる抗体またはそのフラグメント、メトトレキサート抗ＴＮＦ、コルチコステロイド、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、および非ステロイド系抗炎症薬からなる群から選択される、請求項４５に記載の医薬品組成物。
【請求項４７】
ヒトインターロイキン１８（ＩＬ−１８）に結合する抗体を作製する方法であって、
ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはその一部を含む抗原に、抗体群を曝露すること、および
ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはその一部に結合する抗体を抗体群から選択することを含む方法。
【請求項４８】
抗体群が動物のｉｎ　ｖｉｖｏレパートリーであり、方法が、ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはその一部を含む抗原で動物を免疫化することを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記エピトープが、配列番号３および３３からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｉｎ　ｖｉｖｏレパートリーが、動物のゲノムに組み込まれた完全ヒト免疫グロブリンレパートリーである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
抗体群が組換え抗体ライブラリーであり、方法が、ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはその一部を含む抗原でライブラリーをスクリーニングすることを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
ライブラリーがヒト抗体ライブラリーである請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
ヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、ヒトＩＬ−１８と請求項１に記載の化合物を接触させることを含む、ヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法。
【請求項５４】
ヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、ヒトＩＬ−１８と、請求項４から３８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合部分を接触させることを含む、ヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法。
【請求項５５】
ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト対象のヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法であって、ヒト対象のヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、請求項１に記載の化合物をヒト対象に投与することを含む方法。
【請求項５６】
ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト対象のヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法であって、ヒト対象のヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、請求項４から３８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合部分をヒト対象に投与することを含む方法。
【請求項５７】
治療が達成されるように、請求項１に記載の化合物を投与することによって、ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト対象を治療するための方法。
【請求項５８】
治療が達成されるように、請求項４から３８のいずれか一項に記載の抗体を投与することによって、ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト対象を治療するための方法。
【請求項５９】
前記障害が、慢性関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、再活性化関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮性皮膚炎、対宿主性移植片病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、汎発性血管内凝固症候群、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、トキシックショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンティングトン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性疾患、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患、Ｉ型多分泌腺機能低下およびＩＩ型多分泌腺機能低下、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促進症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性丘関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルジニアおよびサルモネラに関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー、自己免疫性水泡性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クーン陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全に関連する疾病、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化肺胞炎、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間隙性肺炎、結合組織病に伴う間隙性肺疾患、混合結合組織病に伴う肺疾患、全身性硬化症に伴う間隙性肺疾患、慢性関節リウマチに伴う間隙性肺疾患、全身性エリテマトーデスに伴う肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に伴う肺疾患、シェーグレン病に伴う肺疾患、強直性脊椎炎に伴う肺疾患、脈管性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症に伴う肺疾患、薬物誘発性の間隙性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間隙性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介型低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、ジスコイドエリテマトーデス、特発性またはＮＯＳの男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患の二次的な肺高血症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状疾患、甲状腺機能亢進、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能亢進（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性脈管炎および白斑、急性肝臓疾患、慢性肝臓疾患、アレルギーおよび喘息、精神障害（例えばうつ病や精神分裂病）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介疾患を含む群から選択される、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＩＬ−１８が害となる疾患に罹患した患者を治療する方法であって、抗ＩＬ−１８抗体を、第２の薬剤の前に、第２の薬剤と同時に、または第２の薬剤の後に投与するステップを含み、第２の薬剤が、抗ＩＬ−１２抗体またはその抗原結合フラグメント、メトトレキサート、抗ＴＮＦ抗体またはその抗原結合フラグメント、コルチコステロイド、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、および非ステロイド系抗炎症薬からなる群から選択されるものである方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｈａｔ　Ｂｉｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１８　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｍａｋｉｎｇ　ａｎｄ　Ｕｓｉｎｇ」という名称の２０００年２月１０日に出願された米国仮出願第６０／１８１，６０８号の優先権を主張する、仮出願ではない通常の出願であり、その内容を参照により本明細書に組み込む。さらに、本出願全体を通して引用された、参考文献、発行された特許、および公表された特許出願を含めた全ての引用文献の内容を、参照により本明細書に特に組み込む。
【０００２】
発明の背景
１９８９年、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）は、当初、インターフェロン−γ誘導因子（ＩＧＩＦ）と言われていたが、現在では、インターフェロン−γを誘導する能力の他にも様々な機能を有するプロ炎症性サイトカインである。これらの生物学的性質には、ＮＦ−κｂの活性化、Ｆａｓリガンドの発現、ＣＣおよびＣＸＣケモカインの誘導、コンピテントヒト免疫不全ウイルスの産生増加が含まれる。
【０００３】
ＩＬ−１８は、Ｔ細胞およびマクロファージ内でインターフェロン−γ産生を誘導することができるので、Ｔｈ１タイプの免疫応答において重要な役割を果たし、先天性免疫および後天性免疫の両方に関与する。ＩＬ−１８は、構造および機能の両方の点でＩＬ−１ファミリーに関連する。ＩＬ−１８の構造、機能、および生物学的活性の概要については、例えば、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．他（１９９８）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６３：６５８〜６５４；Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）Ｍｅｔｈｏｄｓ　１９：１２１〜１３２；およびＤｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．（１９９９）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：１１〜２４を参照されたい。
【０００４】
様々なヒト免疫応答においてＩＬ−１８を調節して使用することが望ましい。詳細には、ＩＬ−１８に結合しＩＬ−１８を中和する抗体が特に望ましい。さらに、ネズミＩＬ−１８抗体は、例えば血清半減期が短く、ある特定のヒトエフェクター機能を発揮させることができず、人体内においてマウス抗体に対し望ましくない免疫応答（「ヒト抗マウス抗体」（ＨＡＭＡ）反応）を引き起こすなど、マウス抗体のヒトへの投与に関連した問題が生じるので、その生体内での使用が限られている。
【０００５】
一般に、完全なネズミ抗体の人体内での使用に関連した問題を克服する試みでは、抗体を遺伝子操作して、より「ヒトのように」することが行われてきた。例えば抗体鎖の可変部領域がネズミで誘導され、抗体鎖の不変部領域がヒトで誘導されたキメラ抗体が調製された（Ｊｕｎｇｈａｎｓ他（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．５０：１４９５〜１５０２；Ｂｒｏｗｎ他（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：２６６３〜２６６７；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ他（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３〜７８３）。しかし、これらのキメラおよびヒト化抗体は、一部が依然としてネズミ配列のままであるので、特に長期間にわたって投与する場合に望ましくない免疫反応、すなわちヒト抗キメラ抗体（ＨＡＭＡ）反応を、依然として引き起こす可能性がある。
【０００６】
ネズミ抗体またはその誘導体（例えばキメラまたはヒト化抗体）に好ましいＩＬ−１８阻害剤は、完全なヒト抗ＩＬ−１８抗体と考えられるが、それは、そのような薬剤が長期間にわたって使用される場合であってもＨＡＭＡ反応を引き起こすべきではないからである。しかし、そのような抗体について当技術分野では述べられておらず、したがって、そのような抗体が依然として必要とされている。
【０００７】
発明の概要
本発明は、ヒトＩＬ−１８に結合する抗体などの化合物、ならびにそのような化合物または抗体を形成し使用する方法に関する。
【０００８】
一態様では、本発明は、ヒトＩＬ−１８アミノ酸配列またはその一部に結合することができる化合物に関し、ただしそのアミノ酸は、配列番号７０または配列番号７１で与えられるようなヒトＩＬ−１８のＮ末端部分またはＣ末端部分を含むものである。一実施形態で、化合物は、完全なヒト抗体やフラグメントなどの、小さい分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体フラグメントである。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ヒトＩＬ−１８に結合することができるヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。他の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数０．１ｓ−１以下、１×１０−２ｓ−１以下、１×１０−３ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、１×１０−５ｓ−１以下、１×１０−６ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、あるいはＩＣ５０が１×１０−６以下、１×１０−７以下、１×１０−８以下、１×１０−９、１×１０−１０以下、または１×１０−１０以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）、ＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）、またはその一部を含んだヒトＩＬ−１８のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は、中和抗体であることが好ましい。抗体は、ヒト抗体であることが好ましい。様々な実施形態では、抗体は組換え抗体（例えば一本鎖抗体（ｓｃＦｖ））またはモノクローナル抗体である。
【００１１】
他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＩＬ−１８のエピトープまたはどちらか一方の一部に結合し、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数０．１ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０　１×１０−６Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−２ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０　１×１０−７Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−３ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０　１×１０−８Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−４ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０　１×１０−９Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−５ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０　１×１０−１０Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−６ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０　１×１０−１１Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。
【００１２】
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１８のエピトープに結合することができる少なくとも１つの可変部領域ＣＤＲドメインを含んだ、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分に関する。関連する実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、例えば表７〜８および１０〜１１に示されるＫａｂａｔ位のいずれかに、またはそこに隣接して１つまたは複数のアミノ酸置換またはアミノ酸挿入を行うことが可能な、表６または９に示されるＨおよび／またはＬ鎖ＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン、またはＣＤＲ３ドメインを含んだ可変部領域を有する。好ましい実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）および配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を含んでいる。別の好ましい実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬ鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＨ鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を含む。
【００１３】
本発明の別の態様は、本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む医薬品組成物と、医薬品として許容される担体に関する。一実施形態では、医薬品組成物は、ＩＬ−１８活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の他の治療薬をさらに含む。
【００１４】
本発明の別の態様は、ヒトインターロイキン１８（ＩＬ−１８）に結合する抗体を形成する方法に関する。本発明は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）、ＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）、またはどちらか一方の一部を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含む抗原に抗体群を曝露すること、および抗体群から、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）、ＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）、またはどちらか一方の一部を含むヒトＩＬ−１８のエピトープに結合する抗体を選択することを含む方法を提供する。
【００１５】
一実施形態では、抗体群は動物におけるｉｎ　ｖｉｖｏレパートリーであり、その方法は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）、ＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）、ヒトＩＬ−１８のＮ末端またはＣ末端部分（配列番号７０〜７１）、またはこれらのエピトープのいずれかの一部を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含んだ抗原で、動物を免疫化することを含む。別の実施形態では、抗体群は組換え抗体ライブラリーであり、その方法は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）、ＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）、配列番号３１〜３２および３４〜６０によって表されるペプチド、または前述のいずれかの一部を有するヒトＩＬ−１８のエピトープを含有する抗原で、そのライブラリーをスクリーニングすることを含む。ライブラリーは、ヒト抗体ライブラリーであることが好ましい。
【００１６】
別の態様では、本発明は、上記態様のいずれかの抗体、例えばＨおよび／またはＬ鎖可変部領域の抗体またはその一部をコードする、単離された核酸を提供する。関連する実施形態では、抗ＩＬ−１８抗体またはその一部をコードする単離された核酸は、例えば宿主細胞内で発現させるための組換え発現ベクターに在る。
【００１７】
このため別の態様では、本発明は、ヒトＩＬ−１８に結合する抗体を合成するために、ヒトＩＬ−１８に結合する抗体が宿主細胞によって合成されるまで宿主細胞を培地で培養することによって組換え発現ベクターが内部に導入された、前述の宿主細胞を使用する方法に関する。
【００１８】
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、本発明の抗体またはその抗原結合部分にヒトＩＬ−１８を接触させることを含む、ヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法に関する。
【００１９】
本発明のさらに別の態様は、ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患したヒト被験者のヒトＩＬ−１８活性を阻害するための方法であって、ヒト対象のヒトＩＬ−１８活性が阻害されるように、本発明の抗体およびその抗原結合部分をヒト対象に投与することを含む方法に関する。一実施形態では、抗ＩＬ−１８抗体は、例えば抗ＩＬ−１２抗体やその抗原結合フラグメント、メトトレキセート、抗ＴＮＦ抗体やその抗原結合フラグメント、コルチコステロイド、サイクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、非ステロイド系抗炎症薬などの、他の薬剤の前に、その薬剤と同時に、またはその薬剤の後に、投与することができる。
【００２０】
図面の簡単な説明
図１は、ＩＬ−１β（左）およびＩＬ１ＲＡ（右）と比較したＩＬ−１８（中央）の構造モデルを示す。
【００２１】
図２は、ＩＬ−１８受容体と複合体を形成するＩＬ−１８の構造モデルを示し、ＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むペプチドエピトープが濃い灰色で示されている。このペプチドエピトープは抗ＩＬ１８抗体２Ｅ１に結合している。
【００２２】
図３は、ＩＬ−１８受容体と複合体を形成するＩＬ−１８の構造モデルを示し、ＩＬ−１８のアミノ酸ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮ（配列番号３３）を含むペプチドが濃い灰色で示されている。このペプチドエピトープは抗ＩＬ１８抗体ＬＴ２８に結合している。
【００２３】
図４は、ＩＬ−１８受容体と複合体を形成する完全長ＩＬ−１８の構造モデルを示す。球状の薄い灰色および濃い灰色のエピトープは、ＩＬ−１８のＮおよびＣ末端接触エピトープを表す（それぞれ配列番号７０および７１）。
【００２４】
図５は、ＩＬ−１８の生物学的作用を中和する際の３種の異なる抗ＩＬ−１８抗体の効力を、ＫＧ１細胞内でのＩＦＮ−γ誘導の阻害の関数として示す。抗体１２５Ｈ（四角形）およびＩｇＧ抗体（円形）としてまたは一本鎖抗体（三角形）としての２Ｅ１抗体に関するＩＣ５０値は、それぞれ、２．１×１０−１０、９．０×１０−１０、および３．３×１０−９である。
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明は、ＩＬ−１８で媒介されるシグナル形質導入に対する中和抗体を生成することが可能なペプチドエピトープの選択、これらのエピトープに対する抗体の調製、およびそのような抗体の使用法であってＩＬ−１８に関係する障害を治療する用法も含めた使用法に関する。エピトープを選択する戦略として、ＩＬ−１８およびそれに対応する受容体のホモロジーモデルを構築することが必要である。次いで目視検査とコンピュータによる評価の組合せを使用して、合成および抗体生成のための代表的なペプチドセグメントを選択する。本明細書で示されるアミノ酸配列は、標準的な１文字省略コードを使用する。
【００２６】
ＩＬ−１８エピトープの選択
プログラムＭｏｄｅｌｅｒ（Ｓａｌｉ，Ａ他、Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｂｙ　ＭＯＤＥＬＬＥＲ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔ．，Ｆｕｎｃｔ．，Ｇｅｎｅｔ．（１９９５）、２３（３）、３１８〜２６頁、ＣＯＤＥＮ：ＰＳＦＧＥＹ；ＩＳＳＮ：０８８７−３５８５）を使用して、ＩＬ−１８とＩＬ−１８受容体の両方のホモロジーモデルを生成した。ＩＬ−１βのＸ線結晶構造（Ｐｒｉｅｓｔｌｅ，Ｊ．他、Ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１．ｂｅｔａ．ｒｅｆｉｎｅｄ　ｔｏ　２．０．ＡＮＧ．ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．（１９９０）、３４９（Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　Ｌｉｐｏｃｏｒｔｉｎｓ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　Ｄｉｆｆｅｒ．）、２９７〜３０７頁）およびＩＬ−１ＲＡの結晶構造（Ｓｃｈｒｅｕｄｅｒ，Ｈ．他、Ｒｅｆｉｎｅｄ　ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ：ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｌｉｎｋ　ａｎｄ　ａ　ｃｉｓ−ｐｒｏｌｉｎｅ．Ｅｕｒ．ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９５）、２２７（３）、８３８〜４７頁）を利用することができ、これらの結晶構造を、ＩＬ−１８のモデル構造の基準座標として使用した。ＩＬ−１８受容体をモデル化するためにＩＬ−１受容体構造（Ｖｉｇｅｒｓ，Ｇ．他、Ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｙｐｅ−１　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１．ｂｅｔａ．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）（１９９７）、３８６（６６２１）、１９０〜１９４頁）を使用した。
【００２７】
次に、ＩＬ−１８およびＩＬ−１８受容体のための構造モデル構築について、以下に述べる。
【００２８】
ＩＬ−１８モデル構築
これら２種のタンパク質（すなわちＩＬ−１βおよびＩＬ−１８）の全体的な配列ホモロジーは低いが、ＩＬ−１８がＩＬ−１ファミリーのメンバであり（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．ＩＬ−１８：ａ　ＴＨ１−ｉｎｄｕｃｉｎｇ，ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ａｎｄ　ｎｅｗ　ｍｅｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＬ−１　ｆａｍｉｌｙ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏ．（１９９９）、１０３（１、Ｐｔ．１）、１１〜２４頁参照）、全体的なタンパク質の折りたたみが非常に類似しているという有力な証拠がある。ＩＬ−１βと同様に、ＩＬ−１８は、初めに前駆体の状態で分泌される。プロＩＬ−１βとプロＩＬ−１８は、共にＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）によって活性化される（Ｆａｎｔｕｚｚｉ，Ｇ．およびＤｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１８　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β：ｔｗｏ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｆｏｒ　ＩＣＥ（ｃａｓｐａｓｅ−１）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）、１９（１）、１〜１１頁）。ＩＬ−１受容体とＩＬ−１８受容体は、類似していることも知られている（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．他、Ｏｖｅｒｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１８：ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ａｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ．Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｂｉｏｌ．（１９９８）、６３（６）、６５８〜６６４）。ＩＬ−１βはＩＬ−１８受容体に結合することができる。最後の論点として、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１ＲＡは、これら２種のタンパク質の全体的な配列ホモロジーがＩＬ−１８との配列ホモロジーと同等であるが、同一の折りたたみを示す。３種のタンパク質（すなわちＩＬ−１８、ＩＬ−１β、およびＩＬ１−ＲＡ）間の配列アライメントを、プログラムＩｎｓｉｇｈｔＩＩを用いて手作業で構成した。このアライメントを表１に見ることができる。
【００２９】
【表１】
2004500086.tif 000002
【００３０】
これらの配列間の配列ホモロジーを表２に列挙する。上方の三角形は、厳密な配列同一性のパーセントであり、下方の三角形は、保存配列ホモロジーのパーセントである。表１に報告された全配列の一部のみを表２に示したと考えられる。上述のように、全体的なホモロジーは低いが、そのファミリー全体にわたって一貫性がある。
【００３１】
【表２】
2004500086.tif 000003
【００３２】
得られたＩＬ−１８構造を、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１ＲＡと共に図１に示す。プログラムＷｈａｔ＿Ｃｈｅｃｋ（Ｈｏｏｆｔ，Ｒ．Ｗ．他、Ｅｒｒｏｒｓ　ｉｎ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ（１９９６）３８１、２７２頁）により評価された全体的な質は妥当なものであるが、少しだけ低い（下記の表３参照）。
【００３３】
【表３】
2004500086.tif 000004
【００３４】
しかし、Ｗｈａｔ＿Ｃｈｅｃｋによる基準構造の評価も低く、このタンパク質の折りたたみは基準構造のデータベースに十分に表されていないことが示唆される。しかし明らかに、本発明者等の全体的なタンパク質の折りたたみに対する確信にも関わらず、配列ホモロジーが低いことが、完全とはいえない最終構造の原因となっていた。しかし、抗体生成のためエピトープを選択するには、この構造で十分と考えられる。
【００３５】
ＩＬ−１８受容体モデル構築
ＩＬ−１８受容体の構造も、プログラムＭｏｄｅｌｅｒを使用して生成した。基準座標はＩＬ−１受容体からのものであった。これらの受容体に関連するサイトカインの場合と同様に、全体的な配列同一性は低いが、アライメントを生成するには十分である。配列ホモロジーの数値を上記表２に示す。アライメントはプログラムＩｎｓｉｇｈｔＩＩを使用して手作業で生成したが、それを表４に示す。
【００３６】
【表４】
2004500086.tif 000005
【００３７】
Ｍｏｄｅｌｅｒプログラムを使用して決定されたＩＬ−１８受容体の構造の全体的な品質は妥当なものであるが、やはりＷｈａｔ＿Ｃｈｅｃｋによればやや低い得点となっている（上記表３参照）。全体的な折りたたみに信頼を置くことができるのは、主に、ＩＬ−１βがＩＬ−１およびＩＬ−１８受容体の両方に結合するからである。配列ホモロジーが低いことは確かに最終構造の質の一因であるが、上記関連サイトカインの場合と同様に、この現行の構造で十分と考えられる。他の作業として、ＩＬ−１８受容体と複合体を形成する場合の、ＬＴ２８に結合したＩＬ−１８ペプチドエピトープ（配列番号３３）をモデル化した（図３）。最終の作業として、ＩＬ−１８／ＩＬ−１８受容の複合体モデルを、ＩＬ−１β／ＩＬ−１受容体構造に基づいて生成した（図４）。この構造は、サイトカイン構造と受容体構造を重ね合せることによって生成した。最終構造を最小限にする試みはなされなかった。
【００３８】
ペプチドエピトープの選択
構造モデルを生成する主な目的は、主として目に見える得点に基づいて適切なペプチドを選択できるようにすることであった。いずれも親水性で受容体／サイトカイン複合体に埋め込まれている、溶媒に曝されたタンパク質のセクションおよびタンパク質の一部が考えられた。考えられる最後の要素は選択性の基準に基づいていた。選択されたペプチドエピトープは、配列が、そのファミリーの他のメンバの同様の部分とは異なるべきである。この基準に基づいて、ＩＬ−１８からのペプチドを選択した。さらに、完全長ヒトＩＬ−１８（配列番号６１）を代表するペプチド（配列番号３１〜６０）の広範な重複パネルも作成したが、これらのＩＬ−１８関連ペプチドの全ての配列を、以下の表５に示す。
【００３９】
【表５】
2004500086.tif 000006
2004500086.tif 000007
【００４０】
配列番号２により表されるＩＬ−１８ペプチドのＮ末端システインは、天然のＩＬ−１８配列の一部ではないが、接合部位として加えた。したがって、天然ＩＬ−１８アミノ酸配列内では、選択されたエピトープに対応する領域が、アミノ酸配列ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を有するアミノ酸残基を含む。
【００４１】
ＩＬ−１８受容体と複合体を形成するＩＬ−１８ペプチド（配列番号１）の概略的なモデルを図２に示し、このペプチドエピトープを濃い灰色で示す。
【００４２】
後続の抗原性に関する計算を、ＩＬ−１８ペプチド配列について行い、その結果、このペプチドは特に高い得点を示した。このペプチドを合成しエピトープとして使用して、ウサギ宿主内に抗体を生成した。図２および３に示されるような、同族受容体、すなわちＩＬ−１８受容体と比べると、ＩＬ−１８ペプチドＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）またはＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮ（配列番号３１）を使用して得られた分子モデル化データにより、中和抗体または化合物がどの残基と相互に作用し合うかが示される。
【００４３】
ペプチドエピトープを選択するための代替の方法は、免疫選択を使用して代表的なペプチドのパネルをスクリーニングすることにより、どのような分子モデル化も行うこと無く、実現することができる。ある手法では、タンパク質配列全体を代表する重複ペプチドを使用することができる。より限定された手法では、ある特定のエピトープだけをペプチドのパネルに表す。組み合わされた手法では、重要である可能性が高いエピトープを識別するために、分子モデル化を使用することができる。次いで、識別されたエピトープ配列を使用して、識別されたエピトープを代表するペプチドのパネルを構築することができる（例えば重複ペプチド）。所望のペプチド配列を製造するための方法は、当技術分野で知られている標準的な技法を使用して実行することができる。
【００４４】
結合ペプチド（例えば重複ペプチドのパネル）が選択されたら、同族受容体に関して免疫スクリーンを行うことができる。あるいは、ある特定の結合親和性を有するペプチドを識別することができるように、免疫スクリーンを、選択された同族受容体で行うことができる。さらに研究を行うための候補結合分子として所望の受容体または所望のペプチドのいずれかを識別できるように、免疫スクリーンを任意の回数で行うことができる。このような、タンパク質とタンパク質の相互作用を分析し、候補結合分子を識別し、かつ／または結合親和性に得点を付けるための「おとり（ｂａｉｔ）」および「餌食（ｐｒｅｙ）」技法については当技術分野で述べられている。好ましい一技法は、本明細書で述べるファージディスプレイを利用する。
【００４５】
抗ＩＬ−１８抗体
本発明は、ＩＬ−１８に結合する抗体ならびにその抗体部分を提供する。抗体またはその部分は、単離された抗体であることが好ましい。抗体またはその部分は、中和抗体であることが好ましい。
【００４６】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子を指すものとする。各Ｈ鎖は、Ｈ鎖可変部領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略す）とＨ鎖不変部領域からなる。Ｈ鎖不変部領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。各Ｌ鎖は、Ｌ鎖可変部領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略す）とＬ鎖不変部領域からなる。Ｌ鎖不変部領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、より一定に保たれたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に、さらに細分することができる。ＶＨおよびＶＬのそれぞれは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、これらは以下の順序、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端まで配列される。
【００４７】
本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（または簡単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えばｈＩＬ−１８）に特異的に結合する能力を持つ１つまたは複数の抗体のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって発揮できることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例には、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、すなわちＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価のフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、すなわちヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ他、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ　３４１：５４４〜５４６）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子でコードされるが、これらは、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって１価の分子を形成する１本のタンパク質鎖（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ他（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４２：４２３〜４２６；およびＨｕｓｔｏｎ他（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８５：５８７９〜５８８３参照）として形成することが可能な合成リンカーによって、組換え方法を使用して接合させることができる。そのような１本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。二抗体など、１本鎖抗体のその他の形も包含される。二抗体は、２価の二重特異性抗体であり、ＶＨおよびＶＬドメインが１本のポリペプチド鎖上に発現するが、同じ鎖上の２つのドメイン同士を対にできるようにするには短すぎるリンカーを使用すると、それらのドメインは、必ず別の鎖の相補性ドメインと対になり、２つの結合部位が作り出される（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．他（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：６４４４〜６４４８；Ｐｏｌｉｊａｋ，Ｒ．Ｊ．他（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　２：１１２１〜１１２３参照）。
【００４８】
さらに、抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分と、１つまたは複数のその他のタンパク質またはペプチドとの共有または非共有会合によって形成された、より大きい免疫接着分子の一部にすることができる。そのような免疫接着分子の例には、四量体ｓｃＦｖ分子を形成するためにストレプトアビジンコア領域を使用すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．他（１９９５）Ｈｕｍａｎ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ　６：９３〜１０１）、および２価のビオチニル化したｓｃＦｖ分子を形成するためにシステイン残基、標識ペプチド、およびＣ末端ポリヒスチジンタグを使用すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．他（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７〜１０５８）が含まれる。ＦａｂフラグメントやＦ（ａｂ’）２フラグメントなどの抗体部分は、それぞれ抗体全体のパパイン消化またはペプシン消化などの従来の技法を使用して、抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分、および免疫接着分子は、本明細書に記載する標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して得ることができる。
【００４９】
本明細書で使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を持たないその他の抗体を、実質上含まない抗体を指すものとする（例えば、ｈＩＬ−１８に特異的に結合する単離された抗体は、ｈＩＬ−１８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質上含まない）。しかし、ｈＩＬ−１８に特異的に結合する単離された抗体は、他の種からのＩＬ−１８分子などその他の抗原に対して交差反応性を有する場合がある。さらに、単離された抗体は、その他の細胞材料および／または化学物質を実質上含まなくてもよい。さらに、単離された抗体、例えば単離されたヒト抗体は、キメラ抗体にすることができ、例えば、別の人間を元に得られた可変部領域、ＣＤＲドメイン、またはアイソタイプが、親であるヒト抗体に組み込まれる。
【００５０】
本明細書で使用される「化合物」は、抗体などの結合分子、例えばポリクローナル抗体やモノクローナル抗体、それらの結合フラグメント（例えばＦａｂフラグメント）、１本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ペプチドまたはペプチドミメティクス、ならびにリガンド結合活性を有する小分子などペプチドをベースとしない分子を指す。
【００５１】
本明細書で使用される「中和抗体」（または「ｈＩＬ−１８活性を中和した抗体」）は、ｈＩＬ−１８に結合することによってｈＩＬ−１８の生物学的活性を阻害する抗体を指すものとする。このｈＩＬ−１８の生物学的活性の阻害は、ｈＩＬ−１８の生物学的活性の１つまたは複数の指標を測定することによって評価することができる。ｈＩＬ−１８生物学的活性のこれらの指標は、当技術分野で知られているいくつかの標準的なｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉｎ　ｖｉｖｏアッセイの１つまたは複数によって、評価することができる。
【００５２】
本明細書で使用される「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えばＢＩＡコアシステムを使用して（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ　ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデンおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）バイオセンサーマトリックス内でのタンパク質濃度の変化を検出することにより、実時間での生物特異的な相互作用の分析を可能にする、光学的現象を指す。さらなる記述に関しては、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．他（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．他（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１１：６２０〜６２７；Ｊｈｏｎｓｓｏｎ，Ｂ．他（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５〜１３１；およびＪｈｏｎｎｓｏｎ，Ｂ．他（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７を参照されたい。
【００５３】
本明細書で使用される「Ｋｏｆｆ」という用語は、抗体／抗原複合体から抗体が解離するｏｆｆ速度定数を指すものとする。
【００５４】
本明細書で使用される「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体・抗原相互作用の解離定数を指すものとする。
【００５５】
一態様では、本発明は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）またはＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱ（配列番号３３）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープまたはこれらのエピトープのいずれかの一部に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。抗体は中和抗体であることが好ましい。抗体はヒト抗体であることが好ましい。様々な実施形態で、抗体は組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
【００５６】
その他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープに結合し、この抗体またはその抗原結合部分が、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数０．１ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離し、またはＩＣ５０が１×１０−６Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害する。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−２ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０が１×１０−７Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−３ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０が１×１０−８Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−４ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０が１×１０−９Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−５ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０が１×１０−１０Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定されるように、ｋｏｆｆ速度定数１×１０−６ｓ−１以下でヒトＩＬ−１８から解離することができ、またはＩＣ５０が１×１０−１１Ｍ以下でヒトＩＬ−１８活性を阻害することができる。
【００５７】
識別された抗ＩＬ−１８抗体の親和性成熟
本発明は、ＩＬ−１８エピトープに結合することが確認された抗体の、別の修飾も提供する。識別された抗ＩＬ−１８抗体の修飾は、結合および／または中和活性を改善することである。
【００５８】
治療組成物および投与方法
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む医薬品組成物と、医薬品として許容される担体も提供する。一実施形態では、医薬品組成物はさらに、ＩＬ−１８活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の他の治療薬を含む。
【００５９】
本発明の抗体および抗体部分は、被験対象への投与に適する医薬品組成物に組み込むことができる。典型的な場合、医薬品組成物は、本発明の抗体または抗体部分と、医薬品として許容される担体を含む。本明細書で使用される「医薬品として許容される担体」には、生理学的に適合可能な、任意の、または全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤または抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などが含まれる。医薬品として許容される担体の例には、水、塩類溶液、リン酸緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１種または複数、ならびにこれらの組合せが含まれる。多くの場合、等張剤、例えば糖や、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。医薬品として許容される担体には、さらに、湿潤剤や乳化剤、防腐剤、緩衝剤など、抗体または抗体部分の保存性または有効性を増大させる少量の補助物質を含めることができる。
【００６０】
本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適する医薬品組成物に組み込むことができる。抗体または抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射可能な溶液として調製することが好ましい。注射可能な溶液は、液体または凍結乾燥させた剤型を、フリントまたはアンバーバイアル、アンプル、または予備充填シリンジに入れたもので構成することができる。緩衝剤は、ｐＨ５．０〜７．０（最適な場合、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適な場合は５〜１０ｍＭのＬ−ヒスチジンにすることができる。その他の適切な緩衝剤には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、またはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。濃度０〜３００ｍＭの溶液（液体剤型に関しては、最適な場合、１５０ｍＭ）の毒性を変えるために、塩化ナトリウムを使用することができる。凍結乾燥させた剤型には、凍結保護物質、主に０〜１０％（最適な場合、０．５〜１．０％）のスクロースを含めることができる。その他の適切な凍結保護物質にはトレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥させた剤型には、増量剤、主に１〜１０％のマンニトール（最適な場合、２〜４％）を含めることができる。液体および凍結乾燥させた剤型の両方には、安定剤、主に１〜５０ｍＭＬ（最適な場合、５〜１０ｍＭ）のＬ−メチオニンを使用することができる。その他の適切な増量剤にはグリシン、アルギニンが含まれ、０〜０．０５％（最適な場合、０．００５〜０．０１％）のポリソルベート８０として含めることができる。他の界面活性剤には、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
本発明の組成物は、様々な剤型にすることができる。そのような組成物には、例えば、溶液（例えば注射可能であり輸液可能な溶液）や分散液、懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソーム、坐剤など、液体、半固体、固体の剤型が含まれる。好ましい形は、意図される投与形態および治療の適用例により異なる。一般に好ましい組成物は、他の抗体でヒトを受動免疫化するために使用されるものと同様の組成物など、注射可能または輸液可能な溶液の形にあるものである。好ましい投与形態は、非経口的なもの（例えば静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内から）である。好ましい実施形態では、抗体は、静脈輸液または静脈注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は筋肉内注射または皮下注射によって投与される。
【００６２】
治療組成物は、一般に、製造および貯蔵の条件下で無菌または安定でなければならない。この組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高い薬物濃度に適するその他のオーダーされた構造として、処方することができる。無菌の注射可能な溶液は、必要とされる量の活性化合物（すなわち抗体または抗体部分）を、必要な場合には上述の成分の１つまたは組合せと共に適切な溶媒に混ぜ、その後、濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、活性化合物を、基本的な分散媒および上記列挙したものから必要とされるその他の成分を含有する無菌ビヒクルに混ぜることによって、分散液を調製する。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および噴霧乾燥であり、それによって、活性成分の粉末に加え、前に述べたその滅菌濾過溶液からの任意の他の所望の成分が得られる。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、また、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することによって、また、界面活性剤を使用することによって、維持することができる。注射可能な組成物の長期にわたる吸収は、その組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩やゼラチンを含めることによって行うことができる。
【００６３】
本発明の抗体および抗体部分は、当技術分野で知られている様々な方法によって投与することができるが、多くの治療の適用例での好ましい投与経路／形態は皮下注射、静脈注射、または輸液である。当業者に理解されるように、投与経路／形態は、所望の結果に応じて異なる。ある実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤など、この化合物が急速に放出されないようにする担体と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニルやポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸など、生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法には特許が付与され、または当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９７８を参照されたい。
【００６４】
ある実施形態では、本発明の抗体または抗体部分を、例えば不活性な希釈剤または同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。化合物（および望むならその他の成分）は、硬質または軟質シェルのゼラチンカプセルに封入し、錠剤に圧縮し、または被験対象の食物に直接混ぜることもできる。経口治療投与の場合、化合物を賦形剤に混ぜることができ、経口摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形で使用することができる。非経口投与以外で本発明の化合物を投与するには、その化合物の不活性化を防止する材料でその化合物を被覆し、またはその化合物の不活性化を防止する材料と同時にその化合物を投与する必要があると考えられる。
【００６５】
組成物には、補助的な活性化合物も組み入れることができる。ある実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ＩＬ−１８が原因となる疾患を治療するのに有用な１種または複数の他の治療薬と一緒に処方し、またはそのような他治療薬と同時に投与する。例えば、本発明の抗ｈＩＬ−１８抗体または抗体部分は、他の標的に結合する１つまたは複数の他の抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体、または細胞表面分子に結合する抗体）と一緒に処方し、またはそのような他の抗体と同時に投与することができる。さらに、本発明の１つまたは複数の抗体は、前述の治療薬のうち２種またはそれ以上の種類を組み合せて使用することができる。そのような組合せによる療法は、投与された治療薬のより低い用量を有利に利用することができ、したがって、様々な単一療法に伴う可能性ある毒性または合併症が回避される。
【００６６】
治療上の用法
インターロイキン１８は、免疫および炎症性の因子に関わる様々な疾病に関連する病理学で、非常に重要な役割を果たす。これらの疾病には、慢性関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、再活性化関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、強皮性皮膚炎、対宿主性移植片病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム硬化症、汎発性血管内凝固症候群、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、トキシックショク症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンティングトン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性疾患、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患、Ｉ型多分泌腺機能低下およびＩＩ型多分泌腺機能低下、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促進症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性丘関節症、腸性滑膜炎、クラミジア、エルジニアおよびサルモネラに関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー、自己免疫性水泡性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クーン陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋肉痛脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明の自己免疫性肝炎、後天性免疫不全疾患症候群、後天性免疫不全に関連する疾病、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化肺胞炎、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間隙性肺炎、結合組織病に伴う間隙性肺疾患、混合結合組織病に伴う肺疾患、全身性硬化症に伴う間隙性肺疾患、慢性関節リウマチに伴う間隙性肺疾患、全身性エリテマトーデスに伴う肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に伴う肺疾患、シェーグレン病に伴う肺疾患、強直性脊椎炎に伴う肺疾患、脈管性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症に伴う肺疾患、薬物誘発性の間隙性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間隙性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介型低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、ジスコイドエリテマトーデス、特発性またはＮＯＳの男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患の二次的な肺高血症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状疾患、甲状腺機能亢進、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能亢進（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性脈管炎および白斑が含まれるが、これらに限定されない。ヒト抗体、および本発明の抗体部分は、自己免疫性疾患、特に炎症に伴う自己免疫性疾患であって、リウマチ様脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎、急性肝臓疾患、慢性肝臓疾患、アレルギーおよび喘息、精神障害（例えばうつ病や精神分裂病）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型媒介疾患を含めた疾患に苦しむ人を治療するのに使用することができる。
【００６７】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、真性糖尿病、および乾癬の治療に使用することが好ましい。
【００６８】
本発明の抗体または抗体部分は、自己免疫および炎症性疾患の治療に有用な１種または複数の他の治療薬と共に投与することもできる。
【００６９】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、そのような疾病を治療するため単独で、または組み合せて使用することができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、または他の薬剤、例えば治療薬と共に使用することができ、前記他の薬剤はその意図される目的のため当業者によって選択されるものであることを理解されたい。例えば、他の薬剤は、本発明の抗体により治療される病気または容態を治療するのに有用であることが当技術分野で理解されている治療薬でよい。他の薬剤は、治療組成物に有益な性質を与える薬剤、例えば組成物に粘性をもたらす薬剤でもよい。
【００７０】
本発明に含まれることになる組合せは、その意図される目的に有用な組合せのものであることを、さらに理解されたい。以下に述べる薬剤は例示を目的とするものであり、これらに限定するものではない。本発明の一部であるその組合せは、本発明の抗体と、下記のリストから選択された少なくとも１種の薬剤にすることができる。組合せは、複数の他の薬剤を含むこともでき、例えば、形成された組成物がその意図される機能を発揮できるような組合せである場合には２種または３種の他の薬剤を含むことができる。
【００７１】
好ましい組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含む、ＮＳＡＩＤＳとも呼ばれる非ステロイド系抗炎症薬である。その他の好ましい組合せは、プレドニソロンを含むコルチコステロイドであり、本発明の抗ＩＬ−１８抗体と組み合せて患者を治療する場合、必要とされるステロイドの用量を徐々に減少させることによって、ステロイド使用によるよく知られている副作用を低減することができ、または無くすことさえできる。慢性関節リウマチ用治療薬であって、本発明の抗体または抗体部分と組み合せることができるその治療薬の非限定的な例には、以下のものが含まれる。すなわち、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）と、他のヒトサイトカインまたは成長因子に対する抗体または拮抗薬であって、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、または、ＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。
【００７２】
治療薬の好ましい組合せは、自己免疫および後続の炎症カスケードの異なる点で干渉する可能性があり、好ましい例には、キメラ様のＴＮＦ拮抗薬、ヒト化したまたはヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｆ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、および可溶性ｐ５５またはｐ７５　ＴＮＦ受容体、その誘導体、（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）も含まれ、同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）を同様の理由で効果的に用いることができる。その他の好ましい組合せには、インターロイキン１１が含まれる。さらに別の好ましい組合せは、ＩＬ−１８の機能に並行して、依存して、または協働して作用することが可能な自己免疫応答のその他の主要な役割を果すものであり、特に好ましいものは、ＩＬ−１２抗体または可溶性ＩＬ−１２受容体を含むＩＬ−１２拮抗薬、またはＩＬ−１２結合タンパク質である。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は一部重複するところがあるが、明確に異なる機能および双方に対する拮抗薬の組合せを、最も効果的にすることができることが示されてきた。さらに別の好ましい組合せは、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに好ましい組合せには、抗体、可溶性受容体、または拮抗性リガンドを含む同時刺激性経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）の拮抗薬が含まれる。
【００７３】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペンシルアミン、金チオマレート（筋肉内および経口）、アザチオプリン、コチシン、コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）、β２アドレナリン作用性受容体作動薬（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラル）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、ｃｏｘ−２阻害剤、ｃｏｘ−２選択的阻害剤（例えばロフェコクシブ（ＶＩＯＸＸ（商標）；Ｍｅｒｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．））プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、プロ炎症性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５　ＴＮＦ受容体および誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤と組み合せることもできる。好ましい組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミドが含まれ、中程度または重度の慢性関節リウマチの場合にはシクロスポリンが含まれる。
【００７４】
炎症性腸疾患用治療薬であって、本発明の抗体または抗体部分を組み合せることができるその治療薬の非限定的な例には、以下のものがふくまれる。すなわち、ブデソニド；表皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチレート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジン；抗酸化薬；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗薬；抗ＩＬ−βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；その他のヒトサイトカインまたは成長因子に対する抗体または拮抗薬、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、マイコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、プロ炎症性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５　ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤と組み合せることもできる。
【００７５】
クローン病用治療薬であって、抗体または抗原結合部分を組み合せることができるその治療薬の好ましい例には、以下のものが含まれる。すなわち、ＴＮＦ拮抗薬、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｆ７（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構造体、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））阻害剤、およびＰＤＥ４阻害剤である。本発明の抗体または抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えばブデソニドやデキサメタゾンと組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、スルファサァジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジンなどの薬剤、ＩＬ−１などのプロ炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤、およびＩＬ−１ｒａの合成または作用を妨げる薬剤と組み合せることもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル阻害剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンと共に使用することもできる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合せることができる。
【００７６】
多発性硬化症用治療薬であって、本発明の抗体または抗体部分と組み合せることができるその治療薬の非限定的な例には、以下のものが含まれる。すなわち、コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロンβ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；コポリマー１（Ｃｏｐ−１；Ｃｏｐａｘｏｎｅ；Ｔｅｖａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；その他のヒトサイトカインまたは成長因子に対する抗体または拮抗薬、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０、またはこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合せることができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、マイコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動薬、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用性の薬剤、ＴＮＦαやＩＬ−１など、プロ炎症性サイトカインからのシグナルを妨げる薬剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体（例えば可溶性ｐ５５またはｐ７５　ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤と組み合せることもできる。
【００７７】
多発性硬化症用治療薬であって、抗体またはその抗原結合部分を組み合わせることができるその治療薬の好ましい例には、インターフェロンβ、例えばＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパクソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、およびＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【００７８】
本発明の医薬品組成物は、本発明の抗体または抗体部分を、「治療上有効な量」または「予防に有効な量」だけ含むことができる。「治療上有効な量」は、必要とされる投与量および時間で、所望の治療結果を実現するのに有効な量を指す。抗体または抗体の治療上有効な量は、個人の疾病の状態や年齢、性別、体重などのファクタと、抗体または抗体部分が個人の所望の反応を引き起こす能力によって、様々に変えることができる。また治療上有効な量とは、抗体または抗体部分の任意の毒作用または有害な影響よりも治療上有益な作用のほうが大きいものである。「予防に有効な量」は、必要とされる投与量および時間で、所望の予防結果を実現するのに有効な量を指す。一般に、疾病の早期段階の前または早期段階で予防的用量を被験対象に対し使用するので、予防に有効な量は、治療上有効な量よりも少なくなる。
【００７９】
投薬計画は、最適な所望の応答（例えば治療上または予防的な応答）が得られるように調整することができる。例えば、ひと塊の薬を投与することができ、用量を数回に分けて時間をかけて投与することができ、またはその用量を、治療状況に必要な条件に示されるように、比例的に減少させまたは増加させることができる。投与を容易にし投薬量を均一にするため、非経口組成物を単位剤型に処方することが、特に有利である。本明細書で使用される単位剤型は、治療が施される哺乳類の被験体に単一の投薬量を与えるのに適する、物理的に隔散した単位を指し、各単位は、必要とされる医薬品担体と共同して所望の治療効果を発揮するよう計算された、所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤型に関する仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特徴、および実現される特定の治療または予防効果と、（ｂ）個々の感受性を治療するためそのような活性化合物を配合する技術分野に固有の制限によって決定され、かつこれらに直接依存する。
【００８０】
本発明の抗体または抗体部分の治療上または予防に有効な量の、例示的な非限定的範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。投薬量の値は、緩和されるべき状態のタイプおよび重さに応じて変えることができることに留意されたい。任意の特定の被験対象に関しては、特定の個人のニーズ、および組成物の投与を管理し監督する担当者の専門的判断に従って、投薬計画を経時的に調整すべきであり、かつ、本明細書で述べる投薬量の範囲は単なる例示にすぎず、特許請求の範囲に記載される組成物の範囲または実施を制限するものではないことを、さらに理解されたい。
【００８１】
抗ＩＬ−１８抗体を形成する方法
本発明の抗ＩＬ−１８抗体は、抗体を調製する技術分野で知られている様々な技法のいずれか１つを使用して、また、サブセクションに記載されているＩＬ−１８ペプチドエピトープ、すなわちアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含む抗原を使用して、形成される。
【００８２】
一般に、ヒトインターロイキン１８（ＩＬ−１８）に結合する抗体を形成するための本発明の方法は、
抗体群を、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）またはその一部（例えば配列番号３または３３）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含む抗原に曝すこと、および
抗体群から、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）またはその一部（例えば配列番号３または３３）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープに結合する抗体を選択することを含む。
【００８３】
一実施形態では、抗体群は、動物におけるｉｎ　ｖｉｖｏレパートリーであり、方法は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含む抗原で動物を免疫化することを含む。別の実施形態では、抗体群は、組換え抗体ライブラリーであり、方法は、アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含む抗原で、ライブラリーをスクリーニングすることを含む。このライブラリーは、ヒト抗体ライブラリーであることが好ましい。
【００８４】
当技術分野では、抗原で動物を免疫化し、それによって抗原に対する特異抗体を作らせる方法がよく知られている。アミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むヒトＩＬ−１８のエピトープを含むＩＬ−１８抗原を動物に投与して、ポリクローナル抗体を導き出すことができ、エピトープに結合する特異抗体は、エピトープに結合するそのような抗体をポリクローナル抗体から選択することによって（例えば、ｈＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むペプチドを含んだカラムにポリクローナル抗血清を通すことによって）、単離することができる。ポリクローナル抗体を導き出すのに使用される抗原は、無傷（すなわち完全長）のｈＩＬ−１８でよく、または、問題のエピトープを含むｈＩＬ−１８の一部、例えば、ｈＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含む合成ペプチドの一部でよい。さらに、エピトープに対するモノクローナル抗体は、標準的なハイブリドーマ技術を使用し、問題のエピトープに特異的に結合する抗体を分泌するそのようなハイブリドーマを選択することによって、前述の動物から形成することができ、例えば、ｈＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むペプチドでハイブリドーマをスクリーニングし、ペプチドに特異的に結合する抗体を選択することによって、形成することができる。
【００８５】
本発明の抗体を形成するためにｉｎ　ｖｉｔｒｏ法を使用することもでき、この場合、抗体ライブラリーをスクリーニングして、所望の結合特異性を有する抗体を識別する。そのような組換え抗体ライブラリーのスクリーニング方法は当技術分野でよく知られており、例えば、Ｌａｄｎｅｒ他の米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ他のＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓ他（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　９：１３７０〜１３７２；Ｈａｙ他（１９９２）Ｈｕｍ　Ａｎｔｉｂｏｄ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ　３：８１〜８５；Ｈｕｓｅ他（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４６：１２７５〜１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２〜５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ他（１９９３）ＥＭＢＯ　Ｊ　１２：７２５〜７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ他（１９９２）Ｊ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　２２６：８８９〜８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ他（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ　３５２：６２４〜６２８；Ｇｒａｍ他（１９９２）ＰＮＡＳ　８９：３５７６〜３５８０；Ｇａｒｒａｄ他（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　９：１３７３〜１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ他（１９９１）Ｎｕｃ　Ａｃｉｄ　Ｒｅｓ　１９：４１３３〜４１３７；およびＢａｒｂａｓ他（１９９１）ＰＮＡＳ　８８：７９７８〜７９８２、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１に記載されている方法が含まれ、そのそれぞれの内容を参照により本明細書に組み込む。
【００８６】
組換え抗体ライブラリーは、ＩＬ−１８またはＩＬ−１８の一部であってアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）のエピトープを含むもので免疫化された被験対象からのものでよい。あるいは、組換え抗体ライブラリーは、まだ処置を施していない被験対象、すなわちＩＬ−１８で免疫化されていない被験対象からのものでよく、ヒトＩＬ−１８で免疫化されていないヒト対象からのヒト抗体ライブラリーなどがある。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）のエピトープで組換え抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより選択され、その結果、このエピトープを認識する抗体が選択される。このようなスクリーニングおよび選択を実行するための方法は、上記段落の引例に記載されているものなど当技術分野ではよく知られている。
【００８７】
ｈＩＬ−１８に対する特定の結合親和性を有する本発明の抗体を選択するには、当技術分野で知られている表面プラズモン共鳴方法を使用することができる。ｈＩＬ−１８に対する特定の中和活性を有する抗体を選択するには、ｈＩＬ−１８活性の阻害を評価するための当技術分野で知られている標準的な方法を使用することができる。さらに、マウスを免疫化するための方法であって、遺伝子導入によりこのマウスを変化させてヒト免疫グロブリンレパートリーをコードし、それによって生体が免疫原に応答して完全なヒト抗体を発現することができるようにされた、マウスを免疫化するための方法が、当技術分野で知られている（例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および第６，１５０，５８４号参照）。
【００８８】
抗ＩＬ−１８抗体の使用法
ｈＩＬ−１８に結合することができるので、酵素様免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）や放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、組織に関する免疫組織学などの従来の免疫アッセイを使用することにより、本発明の抗ｈＩＬ−１８抗体またはその一部を使用してｈＩＬ−１８（例えば、血清や血漿などの生体試料中）を検出することができる。本発明は、生体試料中のｈＩＬ−１８を検出するための方法であって、生体試料を本発明の抗体または抗体部分に接触させること、およびｈＩＬ−１８に結合された抗体（または抗体部分）または結合されていない抗体（または抗体部分）を検出することを含む方法を提供し、それによって、生体サンプル中のｈＩＬ−１８が検出される。抗体は、結合されまたは結合されていない抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な、検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子団、蛍光物質、ルミネッセント材料、およびが放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれ；適切な補欠分子団複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド、またはフェイコエリトリンが含まれ；ルミネッセント材料の例にはルミノールが含まれ；適切な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３２Ｐ、３３Ｐ、または３Ｈが含まれる。
【００８９】
抗体を標識する代わりに、検出可能な物質で標識されたｒｈＩＬ−１８標準および標識されていない抗ｈＩＬ−１８抗体を利用する競合免疫アッセイによって、生物学的流体中でｈＩＬ−１８をアッセイにかけることができる。このアッセイでは、生体試料、標識されたｒｈＩＬ−１８標準、および抗ｈＩＬ−１８抗体を組み合わせて、標識されていない抗体に結合された標識済みのｒｈＩＬ−１８標準の量を決定する。生体試料中のｈＩＬ−１８の量は、抗ｈＩＬ−１８抗体に結合された標識済みのｒｈＩＬ−１８の量に反比例する。
【００９０】
本発明の抗体および抗体部分は、生体外と生体内の両方で、ｈＩＬ−１８活性を中和することができることが好ましい。したがって、本発明の抗体および抗体部分を使用してｈＩＬ−１８活性を阻害することができ、これは例えば、ｈＩＬ−１８を含有する細胞培養物において、また、ヒト対象あるいはその他の哺乳類被験対象であってＩＬ−１８を有するものにおいて行われ、そこで本発明の抗体との交差反応が行われる。一実施形態では、本発明は、ＩＬ−１８活性を阻害するための方法であって、ＩＬ−１８活性が阻害されるように本発明の抗体または抗体部分とＩＬ−１８とを接触させることを含む方法を提供する。ＩＬ−１８はヒトＩＬ−１８であることが好ましい。例えば、ｈＩＬ−１８を含有しまたは含有すると考えられる細胞培養物では、本発明の抗体または抗体部分を培地に添加して培養物のｈＩＬ−１８活性を阻害することができる。
【００９１】
別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１８活性が害となる疾患に罹患した被験対象のＩＬ−１８活性を阻害するための方法を提供する。本発明は、そのような障害に苦しむ被験対象のＩＬ−１８活性を阻害するための方法であって、被験対象のＩＬ−１８活性が阻害されるように本発明の抗体または抗体部分をその被験対象に投与することを含む方法を提供する。ＩＬ−１８はヒトＩＬ−１８であり、被験対象はヒト対象であることが好ましい。あるいは、被験対象は、本発明の抗体と交差反応するＩＬ−１８を発現する哺乳類でよい。さらに、被験対象は、ｈＩＬ−１８が導入された（例えば、ｈＩＬ−１８の投与によって、またはｈＩＬ−１８導入遺伝子の発現によって）哺乳類でよい。本発明の抗体は、治療の目的でヒト対象に投与することができる。さらに、動物薬を目的としてまたはヒトの疾病の動物モデルとして、抗体と交差反応するＩＬ−１８を発現するヒト以外の哺乳類に本発明の抗体を投与することができる。後者に関し、そのような動物モデルは、本発明の抗体の治療効果を評価するうえで有用と考えられる（例えば、投薬量の試験や投与の時間的経過）。
【００９２】
特に、動物でのＩＬ−１８活性を調節するための１つの動物モデルでは、ヒト末梢血単核細胞が移植されたＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスが使用される。次いで、移植後２〜４週間経過後（血清中のヒトＩｇＧ力価により測定される）、マウスにＬＰＳ（リポ多糖類）を注射する。４〜６時間後、ＬＰＳが導入されたヒトインターフェロンγ血清力価を測定する。抗ＩＬ−１８抗体（例えばＩＬ−１８中和抗体）の効力（力価）は、ＬＰＳ試験の１日前に抗体を注射（ｉｐ）し、その後、試験動物を監視して、そのインターフェロンγ血清力価の減少（ＩＬ−１８ｉｎ　ｖｉｖｏ活性の関数）を対照と比較することによって決定される（例えば、Ｈｏｌｍｅｓ他、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：３６３３６７（２０００）参照）。
【００９３】
本明細書で使用される「ＩＬ−１８活性が害となる疾患」という用語は、その疾患にかかっている被験対象がＩＬ−１８を持っていることがその疾患の病態生理の原因でありまたはその疾患を悪化させる一因である、ということが示されまたはそうであると考えられる疾病およびその他の疾患を含むものとする。したがって、ＩＬ−１８活性が害となる疾患は、ＩＬ―１８活性の阻害によってその疾患の症状および／または進行が緩和されることが予測される疾患である。このような疾患は、例えば上述の抗ＩＬ−１８抗体を使用して検出することが可能な、その疾患にかかっている被験対象の生物学的流体中のＩＬ−１８の濃度を高める（例えば、被験対象の血清や血漿、滑液中のＩＬ−１８の濃度を高める）ことによって証明することができる。
【００９４】
本発明の抗体で治療することができる疾患の非限定的な例には、本発明の抗体の医薬品組成物に関する上記で論じた疾患が含まれる。
【００９５】
本発明のその他の特徴は、それに限定されると解釈するべきではない以下の実施例から明らかにされよう。
【００９６】
実例
一般に、本発明の実施に際して、他に特に示さない限り、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、ＰＣＲ技術、免疫学（特に、例えば抗体技術）、および任意の必要な細胞培養または畜産学的技法といった従来の技法であって当業者の範囲内にあり文献に十分に説明されている技法が使用される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．１および２、（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編　１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編　１９８４）；ＰＣＲ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｂｅａｕｃａｇｅ編　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９９）（編集者）；Ｏｘｆｏｒｄ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎｅｉｄｌｅ編、Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖ　Ｐｒｅｓｓ（１９９９）；ＰＣＲ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｉｎｎｉｓ他、Ａｃａｄｅｍｉｃ　ｐｒｅｓｓ（１９９０）；ＰＣＲ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｂｕｒｋｅ編、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎ　Ｌｔｄ（１９９６）；Ｔｈｅ　ＰＣＲ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ：ＲＴ−ＰＣＲ、Ｓｉｅｂｅｒｔ編、Ｅａｔｏｎ　Ｐｕｂ．Ｃｏ．（１９９８）；Ｑｕａｎｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｋｏｃｈａｎｏｗｓｋｉ他　編、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ（１９９９）；Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＰＣＲ、Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ（１９９８）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、５１０、Ｐａｕｌ，Ｓ．、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　Ｓｅｒｉｅｓ、１６９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ編、Ｉｒｌ　Ｐｒ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗ他、Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｌ．Ｐｒｅｓｓ　出版（１９９９）；Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、編集　Ａｕｓｕｂｅｌ他、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９２）；Ｌａｒｇｅ−Ｓｃａｌｅ　Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｌｕｂｉｎｉｅｃｋｉ，Ａ．編、Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ　出版（１９９０）；およびＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｍｏｕｓｅ　Ｅｍｂｒｙｏ、Ｈｏｇａｎ他、Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｌ．Ｐｒｅｓｓ　出版（１９９４）を参照されたい。
【００９７】
実施例の全体を通して、他に特に示さない限り、上記材料および方法を使用した。
【００９８】
実施例１
抗ＩＬ−１８抗体の単離
ヒトＢ細胞（例えば扁桃腺や脾臓）由来のｍＲＮＡからのヒトＶＬおよびＶＨ　ｃＤＮＡを使用して調製された、別個のｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって、ｈＩＬ−１８に対する抗体を単離した。このライブラリーの構造および選択方法は、Ｖａｕｇｈａｎ他（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９〜３１４に記載されている。
【００９９】
このライブラリーを、完全長ヒトＩＬ−１８（配列番号６１）、ＩＬ−１８のペプチドエピトープ（配列番号１〜３）、またはＩＬ−１８を表す重複１５アミノ酸ペプチドのパネル（そのエピトープ配列を表５の配列番号３１〜６０に示す）を使用して、ライブラリーをスクリーニングした。標準の手順を使用してイムノチューブに抗原をコーティングすることにより、ＩＬ−１８特異抗体を選択した（Ｍａｒｋｓ他（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７）。かなりの数のＩＬ−１８特異バインダーを発生させるため、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８のペプチドエピトープ、またはＩＬ−１８ペプチドパネルを使用して、ｓｃＦｖライブラリーをスクリーニングした。いくつかの異なるクロノタイプを選択し、制限酵素消化パターンによって決定し、ＤＮＡ配列決定によって確認した。
【０１００】
完全長ＩＬ−１８またはその代表的なペプチドに優先的に結合するＩＬ−１８抗体を識別するために、ＥＬＩＳＡにおいて、ビオチンに取り込まれたＩＬ−１８に、ｓｃＦｖを含有する上清を滴下して滴定を行い、結合特性を決定した。
【０１０１】
２つの抗ＩＬ−１８一本鎖抗体が得られ、その１つは２Ｅ１と呼ばれてペプチドエピトープおよびペプチドパネルを使用して独立に単離され、２つめの抗ＩＬ−１８抗体はＬＴ２８と呼ばれて完全長ＩＬ−１８を使用して単離された。これらの親抗ＩＬ−１８抗体を選択して、さらに研究を行い変更を加えた。
【０１０２】
実施例２
抗−１８抗体の親和性成熟
確認されたＩＬ−１８結合活性と表６に示されるＨ鎖およびＬ鎖配列を有する一本鎖Ｆｖタイプの抗体２Ｅ１をさらに修飾して、ＩＬ−１８活性の中和を改善した。
【０１０３】
【表６】
2004500086.tif 000008
2004500086.tif 000009
【０１０４】
ＩＬ−１８ペプチドと、ＩＬ−１８を表す順次重複ペプチドパネル（表６参照）を使用して、抗ＩＬ−１８抗体２Ｅ１を独立に選択した。
【０１０５】
突然変異誘発のために選択されたＨ鎖可変部領域の特定のアミノ酸残基を表７にまとめる。特に、Ｈ鎖領域に関しては、それぞれのアミノ酸置換について、ＣＤＲ１の位置Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、およびＨ３５で、ＣＤＲ２の位置Ｈ５２、Ｈ５２ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、およびＨ５８で、ＣＤＲ３のＨ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、およびＨ９８で試験をした。
【０１０６】
突然変異のために選択されたＬ鎖アミノ酸残基に関しては、それぞれのアミノ酸置換について、ＣＤＲ１の位置Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、およびＬ３４で、ＣＤＲ２の位置Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、およびＬ５５で、ＣＤＲ３の位置Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９５ａ、Ｌ９５ｂ、Ｌ９６、およびＬ９７で試験をした。
【０１０７】
【表７】
2004500086.tif 000010
【０１０８】
【表８】
2004500086.tif 000011
2004500086.tif 000012
【０１０９】
置換は、標準の技法を使用して導入した（例えば、Ｔａｙｌｏｒ他、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１３：８７６４〜８７５８（１９８５）；Ｎａｋａｍａｙｅ他、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１４：９６７９〜９６９８（１９８６）；およびＯｌｓｅｎ他、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２１７：１８９（１９９３）に記載されている）。簡単に言えば、突然変異が誘起される位置のそれぞれについて、所与のコドンに関して縮重しているオリゴヌクレオチドを合成した。一本鎖Ｆｖタイプの抗体２Ｅ１遺伝子を含む、もとのプラスミドから、一本鎖ＤＮＡ鋳型を調製した。親２Ｅ１抗体ＨおよびＬ鎖の核酸配列は、配列番号６２および６３で与えられる。次いで、突然変異オリゴヌクレオチドを使用して、相補的ＤＮＡ鎖、最終的には二本鎖プラスミドを生成し、したがって、抗体の所与のコドンに、縮重または種々の突然変異が取り込まれた。特に、製造業者の指示に従いＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ　Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して、２Ｅ１のＨおよびＬ鎖のＣＤＲ３領域に変更を加えた。
【０１１０】
次いで、各突然変異誘発反応から代表的な数のクローンの配列決定をし（すなわち７〜３６クローン）、親２Ｅ１一本鎖抗体配列からの変化を示すものを細菌中に発現させ、さらに以下に述べるｉｎ　ｖｉｔｒｏおよびｉｎ　ｖｉｖｏ試験を行うために精製した。
【０１１１】
完全長ＩＬ−１８リガンドを使用する別のスクリーンでは、第２の抗ＩＬ−１８抗体を識別し、選択して、親和性成熟を使用してさらに改善した。特に、上述の技法を使用して、表９に示されるＨ鎖およびＬ鎖配列（および配列番号６６および６８で与えられる核酸配列）を有するＬＴ２８抗体をさらに修飾した。
【０１１２】
【表９】
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【０１１３】
Ｈ鎖領域に関しては、アミノ酸置換を、ＣＤＲ１の位置Ｈ３１、Ｈ３２、Ｈ３３、およびＨ３５に、ＣＤＲ２の位置Ｈ５０、Ｈ５１、Ｈ５２、Ｈ５２ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、およびＨ５８に、ＣＤＲ３の位置Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ９９、Ｈ１００、Ｈ１００ａ、Ｈ１０１、およびＨ１０２に導入した。
【０１１４】
突然変異のために選択されたＬ鎖残基に関しては、アミノ酸置換を、ＣＤＲ１の位置Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４に、ＣＤＲ２の位置Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５に、また位置Ｌ８９、Ｌ９０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９５、Ｌ９５ａ、Ｌ９５ｂ、Ｌ９６、Ｌ９７に導入した。
【０１１５】
【表１０】
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【０１１６】
【表１１】
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【０１１７】
置換は上述のように導入した。次いで、各突然変異誘発反応から代表的な数のクローンの配列決定を行い、親ＬＴ２８一本鎖抗体配列からの変化を示すものを細菌中で発現させ、以下に述べる試験をさらに行うために精製した。
【０１１８】
実施例３
ＩＬ−１８に対するヒト抗体の結合活性
ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｓｅｎｓｅｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、リガンド（バイオセンサーマトリックスに固定化されたビオチニル化組換えヒトＩＬ−１８（ｒｈＩＬ−１８））と分析物（溶液中の抗体）との実時間結合相互作用を測定した。このシステムは、デキストランバイオセンサーマトリックス内でのタンパク質濃度の変化を検出するためにＳＰＲの光学的性質を利用する。タンパク質は、知られている濃度でデキストランマトリックスに共有結合している。このデキストランマトリックスを通して抗体を注入し、注入された抗体と固定化されたリガンドとの特異結合によって、マトリックスタンパク質濃度が増し、その結果、ＳＰＲシグナルに変化が生じる。これらのＳＰＲシグナルの変化を共鳴ユニット（ＲＵ）として記録し、センサーグラムのｙ軸に沿って、時間に対して表示する。
【０１１９】
バイオセンサーマトリックスへのビオチニル化ｒｈＩＬ−１８の固定化を容易にするために、遊離アミン基を介してストレプトアビジンとデキストランマトリックスとを共有結合させるが、これは、まず、マトリックス上のカルボキシル基を１００ｍＭのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）と４００ｍＭのＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を用いて活性化することにより行う。次に、この活性化したマトリックスを通してストレプトアビジンを注入する。ｐＨ４．５の酢酸ナトリウムに入れて希釈した３５マイクロリットルのストレプトアビジン（２５μｇ／ｍｌ）を、活性化したバイオセンサーを通して注入し、タンパク質上の遊離アミンをこの活性化したカルボキシル基に直接結合させる。１Ｍのエタノールアミンを注入することによって、未反応のマトリックスＥＤＣ−エステルを非活性化する。ストレプトアビジン結合バイオセンサーチップは市販もされている（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＢＲ−１０００−１６、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）。
【０１２０】
ビオチニル化ｒｈＩＬ−１８を調製したが、それには、まず、ビオチン（Ｄ−ビオチニル−ε−アミノカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　カタログＮｏ．１００８９６０）５．０ｍｇをジメチルスルホキシド５００μｌに溶解して１０ｍｇ／ｍｌ溶液を作製した。ｒｈＩＬ−１８　１ｍｌ当たり、ビオチン１０マイクロリットルを添加し（２．６５ｍｇ／ｍｌで）、ビオチンとｒｈＩＬ−１８のモル比を２：１にした。反応物を穏やかに混合し、暗闇の中で、室温で２時間インキュベートした。ＰＤ−１０カラム、Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２５Ｍ（Ｐａｈａｒｍａｃｉａ　カタログＮｏ．１７−０８５１−０１）を、低温のＰＢＳ　２５ｍｌで平衡状態にし、カラム１本当たり、ｒｈＩＬ−１８−ビオチン２ｍｌを充填した。このカラムについて、１ｍｌの低温のＰＢＳで１０回、溶離を行った。画分を収集し、ＯＤ２８０で読み取った（１．０ＯＤ＝１．２５ｍｇ／ｍｌ）。適切な画分をプールし、使用まで−８０℃で保存した。
【０１２１】
ストレプトアビジンを介してマトリックス上に固定化させるビオチニル化ｒｈＩＬ−１８を、０．０５％（ＢＩＡｃｏｒｅ）界面活性剤Ｐ２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＢＲ−１０００−５４、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）が補われたＰＢＳ流動緩衝液（Ｇｉｂｃｏ　カタログＮｏ．１４１９０−１４４、Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ　Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）に入れて希釈した。固定化されたｒｈＩＬ−１８にｒｈＩＬ−１８特異抗体が結合する能力を決定するため、結合アッセイを以下のように行った。ビオチニル化ｒｈＩＬ−１８のアリコート（２５ｎＭ；１０μｌアリコート）を、ストレプトアビジン結合デキストランマトリックスを通して５μｌ／分の流量で注入した。タンパク質の注入前、およびその直後に、各フローセルを通してＰＢＳ緩衝液のみを流した。基準線と、ビオチニル化したｒｈＩＬ−１８の注入が終了して３０秒経過したときのシグナルの正味の差を、結合値を表すものとして解釈した。固定化されたビオチニル化ｒｈＩＬ−１８へのｒｈＩＬ−１８特異抗体の直接的な結合を測定した。抗体（２０μｇ／ｍｌ）をＰＢＳ流動緩衝液に入れて希釈し、２５μｌのアリコートを、固定化されたタンパク質マトリックスを通して５μｌ／分の流量で注入した。抗体の注入前、およびその直後に、各フローセツを通してＰＢＳ緩衝液のみを流した。基準線のシグナルと、抗体注入が終了した後のシグナルとの正味の差を、特定のサンプルの結合値を表すものとして解釈した。次のサンプルを注入する前に、１００ｍＭのＨＣｌを使用して、バイオセンサーマトリックスを再度生成した。ｏｆｆ速度（Ｋｏｆｆ）、ｏｎ速度（Ｋｏｎ）、会合速度（Ｋａ）、および解離速度（Ｋｄ）定数を決定するために、ＢＩＡｃｏｒｅ反応速度評価ソフトウェア（バージョン２．１）を使用した。
【０１２２】
ビオチニル化したｒｈＩＬ−１８に結合する、改善された候補抗ＩＬ−１８抗体の代表的な結果を、親抗体２Ｅ１およびＬＴ２８（およびネズミ対照）と比較して、以下の表１２に示す。比較のために、細胞ベースの中和アッセイからのＩＣ５０値も含め、それらを実施例４に示す。全てのクローンは、Ｂｉａｃｏｒｅ分析および以下に述べる細胞ベースのアッセイを使用する試験用の一本鎖Ｆｖ抗体として調製した。列挙されたクローンが、突然変異していない親ＨおよびＬ鎖を含んでいるのに対し、一本鎖突然変異体は、１本の親鎖および１本の突然変異した鎖を含んでおり、この突然変異した鎖は重（Ｈ）鎖または軽（Ｌ）鎖であり、その後にＫａｂａｔ位が続いて、アミノ酸置換の性質を持つ。
【０１２３】
【表１２】
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【０１２４】
実施例４
抗ＩＬ−１８抗体の中和活性
本発明の抗ヒトＩＬ−１８抗体の中和活性を試験するために、ＩＬ−１８活性をモニタするための当技術分野で認められているアッセイを使用した。
【０１２５】
簡単に言うと、そのアッセイは、標準的な技法（例えば、ＲＰＭＩ　１６４０培地　Ｇｉｂｃｏ　＃２１８７０−０７６；（１０％ウシ胎児血清（Ｂｉｏ　Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ　＃１４−５０１Ｆ）が補われた）；２ｍＭ　Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ　＃２５０３０−０８１）；５０単位／ｍｌペニシリン、５０ｕｇ／ｍｌストレプトアビジン（Ｇｉｂｃｏ　＃１５０７０−０６３）；および０．０７５％重炭酸ナトリウムを使用する）により培養されたＫＧ１細胞（ＡＴＣＣ　＃ＣＣＬ−２４６、骨髄性白血病の骨髄細胞）を使用する。
【０１２６】
ＩＬ−１８中和の試験を行うため、２０ｎｇ／ｍｌのｈＴＮＦ−α（Ｌｏｔ＃１９１３０１３２）で刺激を与えた３×１０５個のＫＧ−１細胞を、５０ｕｌの抗ＩＬ−１８抗体（４倍濃度）と５０ｕｌのＩＬ−１８（４倍濃度＝８ｎｇ／ｍｌ）を用いてインキュベートし、３７℃で１時間または１６〜２０時間インキュベートした。誘導されたｈＩＦＮ−γ産生の関数として生じたＩＬ−１８中和の量を決定するために、製造業者の指示に従って、市販のＥｌｉｓａキット（Ｒ＆Ｄ　＃ＤＩＦ００／Ｅｎｄｏｇｅｎ　＃ＥＨ−ＩＦＮＧ）を使用してＥＬＩＳＡを行い、ｈＩＦＮ−γ産生を標準曲線から計算した（ｐｇ／ｍｌ）。
【０１２７】
全部で４つの突然変異体、すなわち２Ｅ１から誘導されたＬ３４Ｓ、Ｈ５３Ｒ、Ｈ５３Ｙ、およびＨ５８Ｑは、そのＩＬ−１８中和能力が、親２Ｅ１抗体よりも大きいことが示された（表１２参照）。ＫＧ−１アッセイを使用したＩＣ５０値の改善は、２〜５倍の範囲内であり、同様に改善された結合結果は、ＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用して決定された。
【０１２８】
様々な突然変異の組合せクローンも調製して試験を行ったが、そのデータを表１２にまとめる。最良の組合せのクローンＬ３４Ｓ−Ｈ５３Ｒは、ＫＧ−１細胞ベースのアッセイとＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用した場合の両方で、親抗体２Ｅ１よりも１０倍改善されたことを示した。得られた抗体は、２Ｅ１ＲＳという名称で示した。
【０１２９】
２Ｅ１のいくつかのその他の突然変異クローンは、ＫＧ−１アッセイを使用して決定されたように、その効力、すなわちＩＬ−１８中和が改善されたことを示した。突然変異体Ｌ９５Ｙは、そのＩＣ５０値が、親２Ｅ１抗体よりも５〜８倍良いことを示した。いくつかのその他の突然変異体は２〜３倍改善されたことを示し、それらは、２Ｅ１突然変異体Ｈ９６Ａ、Ｈ９６Ｑ、Ｈ９６Ｓ、Ｈ９８Ｓ、Ｌ９０Ｃ、Ｌ９０Ｗ、Ｌ９３Ｃ、Ｌ９４Ｐ、Ｌ９４Ｐ、Ｌ９４Ｑ、Ｌ９４Ｒ、Ｌ９４Ｗ、Ｌ９５Ｒ、Ｌ９５ａＡ、Ｌ９５ａＨ、Ｌ９５ａＰ、Ｌ９５ａＲ、Ｌ９５ａＷ、Ｌ９５ｂＥ、Ｌ９５ｂＷ、Ｌ９５ｂＹ、Ｌ９７Ｃ、およびＬ９７Ｅであった。
【０１３０】
ＳｃＦｖ抗体またはＩｇＧ抗体の形をした２Ｅ１の結合も比較した（表５参照）。
【０１３１】
さらに、ＬＴ２８親から誘導された２つの突然変異体は、そのＩＬ−１８中和活性が、親抗体に比べて改善されていた。
【０１３２】
これらの結果は、本発明の方法および組成物を使用して、完全なヒトＩＬ−１８中和抗体を得ることができることを実証している。
【０１３３】
均等物
当業者なら、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態の多くの均等物を理解し、または通常の実験しか使用しないで確認することができるであろう。そのような均等物は、上述の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１３４】
【図１】
ＩＬ−１β（左）およびＩＬ１ＲＡ（右）と比較したＩＬ−１８（中央）の構造モデルを示す図である。
【０１３５】
【図２】
ＩＬ−１８受容体と複合体を形成するＩＬ−１８の構造モデルを示し、ＩＬ−１８のアミノ酸ＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡ（配列番号１）を含むペプチドが濃い灰色で示されている図である。
【０１３６】
【図３】
ＩＬ−１８受容体と複合体を形成するＩＬ−１８の構造モデルを示し、ＩＬ−１８のアミノ酸ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮ（配列番号３３）を含むペプチドが濃い灰色で示されている図である。
【０１３７】
【図４】
ＩＬ−１８受容体と複合体を形成する完全長ＩＬ−１８の構造モデルを示す図である。
【０１３８】
【図５】
ＩＬ−１８の生物学的作用を中和する際の３種の異なる抗ＩＬ−１８抗体の効力を、ＫＧ１細胞内でのＩＦＮ−γ誘導の阻害の関数として示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500086.tif 000116
【国際調査報告】
2004500086.tif 000117
2004500086.tif 000118
2004500086.tif 000119
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