(57)【要約】個体の治療方法が示される。上記方法は上記個体に上記個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルを調節することのできる剤をデリバリーすることを含み；ここで、上記剤によるＩＫＣａチャネルの調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。上記剤は医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合されうる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
性機能障害（ＳＤ）の治療における使用のための（又は使用における）医薬組成物であって；個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルの活性を調節することができる剤を含み；ここで、上記剤は医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と場合により混合される、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記ＩＫＣａチャネル活性の調節が、海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる、請求項（１）に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＳＤが男性のＳＤ（ＭＳＤ）である、請求項１又は請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＳＤが、勃起機能障害（ＥＤ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ＳＤが、男性の勃起機能障害（ＭＥＤ）である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記組成物が医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＳＤの治療のための医薬の調製における剤の使用であって；ここで、上記剤は個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される、前記使用。
【請求項８】
前記ＩＫＣａチャネル活性の調節が、海綿体平滑筋弾力性における弛緩を仲介することができる、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記ＳＤが男性のＳＤ（ＭＳＤ）又は女性のＳＤ（ＦＳＤ）である、請求項７又は請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＳＤが、勃起機能障害（ＥＤ）である、請求項７〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ＳＤは男性の勃起機能障害（ＭＥＤ）である、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
ＳＤを有する個体の治療方法であって；上記個体に上記個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができる剤をデリバリーすることを含む方法であって；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される、前記治療方法。
【請求項１４】
前記ＩＫＣａチャネル活性の調節が海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＳＤを治療するためにＩＫＣａチャネル活性を調節することができる剤を同定するための分析方法であって；上記剤を上記ＩＫＣａチャネルと接触させること：上記ＩＫＣａチャネル活性を計測すること：を含み；ここで、上記ＩＫＣａチャネル活性における増大は上記剤がＳＤの治療において有用でありうることを指標する、前記分析方法。
【請求項１６】
前記ＳＤがＭＥＤである、請求項１５に記載の分析方法。
【請求項１７】
以下のステップ：
（ａ）請求項１５又は請求項１６に記載の分析を行うこと；
（ｂ）上記ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる１以上の剤を同定すること；及び
（ｃ）多量の１以上の同定された剤を調製すること：
を含む方法。
【請求項１８】
剤でＳＤを治療する方法であって；ここで、上記剤はｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析方法においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析方法は請求項１５又は請求項１６に定義される分析方法である、前記分析方法。
【請求項１９】
ＳＤの治療用医薬組成物の調製における剤の使用であって；ここで、上記剤は請求項１５又は請求項１６に記載の分析方法によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで分析されるときＩＫＣａチャネル活性を調節することができる、前記使用。
【請求項２０】
請求項１５又は請求項１６に記載の分析方法により同定される剤。
【請求項２１】
医薬における使用のための請求項２０に記載の剤。
【請求項２２】
ＳＤ（好ましくはＭＥＤ）の治療における使用ための請求項２０に記載の剤。
【請求項２３】
ＳＤ（好ましくはＭＥＤ）を治療するための経口投与用医薬であって；ここで、上記医薬は請求項２０に記載の剤を含む、前記医薬。
【請求項２４】
個体の生殖器からサンプルを単離すること；上記個体からのサンプルにおける発現及び／又はＩＫＣａチャネル活性が上記個体の生殖器における海綿体平滑筋弾力性の弛緩に効果を有するかどうかを決定すること：を含む、診断方法。
【請求項２５】
個体の生殖器から単離されたサンプルにおける実在を検出する方法を含む診断組成物又はキットであって；上記個体からのサンプルにおける上記ＩＫＣａチャネルの発現及び／又はＩＫＣａチャネル活性の値が上記個体の生殖器における海綿体平滑筋弾力性の弛緩に影響を有するかどうかを決定するために使用されうる、前記診断組成物又はキット。
【請求項２６】
前記動物の海綿体平滑筋細胞のＩＫＣａチャネル活性を計測する方法を含む麻酔された動物を含む、ＳＤ（特にＭＥＤ）を治療することのできる剤の同定において有用な動物モデル。
【請求項２７】
ＳＤ（好ましくはＭＥＤ）を治療するためにＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するための分析方法であって；請求項２６の動物モデルに剤を投与すること；及び前記動物の生殖器におけるＩＫＣａチャネル開放時間の可能性を計測すること：を含む前記分析方法。
【請求項２８】
医薬における使用のためのＩＫＣａチャネル。
【請求項２９】
ＳＤ、好ましくはＭＥＤを予防する及び／又は治療するための医薬の調製におけるＩＫＣａチャネルの使用。
【請求項３０】
ＳＤ、好ましくはＭＥＤを予防する及び／又は治療するための医薬の製造におけるＩＫＣａチャネルの使用。
【請求項３１】
海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することのできる剤を同定するための標的としてのＩＫＣａチャネルの使用。
【請求項３２】
前記ＩＫＣａチャネルはＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をスクリーニングするために使用される、請求項２９又は請求項３０又は請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
ＩＫＣａチャネルが請求項２８に記載のものである、ＩＫＣａアゴニスト。
【請求項３４】
ＩＫＣａチャネルが、請求項２８に記載のものである、ＩＫＣａチャネルアンタゴニスト。
【請求項３５】
前記ＩＫＣａチャネル活性の調節が、海綿体平滑筋弾力性の窒素性又は一酸化窒素仲介弛緩を高める、請求項３２に記載のＩＫＣａチャネルの使用。
【請求項３６】
実質的に本明細書中に示される及び添付の図面に関する、ＩＫＣａチャネル及び／又は剤。
【請求項３７】
海綿体平滑筋弾力性の窒素性又は一酸化窒素仲介弛緩を高めることにおける使用のための本明細書中に実質的に示される、ＩＫＣａチャネル及び／又は剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は性機能障害（ＳＤ）、特に男性勃起機能障害（ＭＥＤ）の予防及び／又は治療に有用である医薬に関する。
本発明はＳＤ、特にＭＥＤの予防及び／又は治療方法にも関する。
本発明はＳＤ、特にＭＥＤの治療において有用である化合物をスクリーニングする分析にも関する。
【０００２】
便利のために、以下の文において使用される略語のリストは請求項の節の前に示される。
【０００３】
発明の背景
性機能障害（ＳＤ）は男性及び女性の両方に影響しうる顕著な臨床的問題である。ＳＤの原因は器質性及び生理学的でありうる。ＳＤの器質性の局面は、高血圧又は真性糖尿病に関連するものの如き、基礎にある血管疾患により、処方医薬により及び／又は憂うつの如き精神的疾患により典型的に引き起こされる。生理学的因子は恐れ、行動不安及び対人関係の衝突を含む。ＳＤは性行為を損ない、自己尊重を減少させ、そして個人的関係を破壊する。臨床においては、ＳＤ障害は女性の性機能障害（ＦＳＤ）障害及び男性の性機能障害（ＭＳＤ）障害に分けられている。ＦＳＤは女性の性的表現において満足を見つけることの困難さ又は不能としてもっともよく定義される。ＦＳＤはいくつかのさまざまな女性の性障害についての集合的な用語である（Ｌｅｉｂｌｕｍ，  １９８８，  Ｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９９）。男性の性機能障害（ＭＳＤ）は一般的に、男性の勃起機能障害（ＭＥＤ）としても知られる、勃起機能障害と関連する。
【０００４】
男性の勃起機能障害（ＭＥＤ）は：
「満足な性行為のための陰茎の勃起を達成する及び／または維持することの不能」（ＮＩＨ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅ，  １９９３）
として定義される。
【０００５】
全ての程度（最小の、軽い及び完全な不能症）の勃起機能障害（ＥＤ）の有病率は４０〜７０歳の男性において５２％であり、７０歳以上ではより高い割合であると見積もられている（Ｍｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９９）。上記状態は上記患者及び彼らの相手の生活の質に顕著な負の影響を有し、しばしば憂うつ及び低い自己尊重を引き起こす、増大した不安及び緊張を生ずる。２０年前は、ＭＥＤは主に生理学的障害であると考えられていた（Ｂｅｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９４）が、患者の大部分に基礎にある器質性の原因があることが今般知られている。その結果として、多大な進展が通常の陰茎の勃起の機構を同定すること及びＭＥＤの病態生理においてなされた。
【０００６】
陰茎の勃起は海綿体平滑筋の収縮及び弛緩の均衡及び陰茎の細動脈に因る血流力学的事件である（Ｌｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ  １９９３）。海綿体平滑筋収縮はシナプス後部のα１アドレナリン作動性受容体の活性化を介する交感神経のノルアドレナリンの神経感応により調節される。海綿体平滑筋の弛緩は海綿体の柱空間内への増大した血流を引き起こし、それらを周囲の膜に対して伸長させる及び枯れる静脈を圧縮する。これは、勃起をもたらす血圧における莫大な上昇を起こす（Ｎａｙｌｏｒ，  １９９８）。
【０００７】
勃起のプロセスの間に起こる変化は複雑であり、抹消の及び中枢の神経系、及び内分泌系を含む高い程度の共配置された制御を必要とする（Ｎａｙｌｏｒ，  １９９８）。しかしながら、平滑筋弛緩のプロセスは主に非アドレナリン性、非コリン性（ＮＡＮＣ）神経伝達により仲介される。この弛緩の仲介を負う主要な弛緩因子は、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）によりＬ−アルギニンから合成される、一酸化窒素（ＮＯ）である（Ｔａｕｂ  ｅｔ  ａｌ  １９９３；  Ｃｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  １９９８）。勃起の間、ＮＯはニューロン及び内皮から放出され、そして平滑筋細胞及び内皮に局在する可溶性グアニレートシクラーゼ（ｓＧＣ）に結合し及び活性化し、細胞内ｃＧＭＰ値における上昇を引き起こす。ｃＧＭＰにおけるこの上昇は海綿体の弛緩を引き起こす。
【０００８】
ＭＥＤは主にＮＯの海綿体平滑筋を有効に弛緩することの不能から生ずる。それゆえ、細胞内ｃＧＭＰ値における上昇を引き起こすＮＯシグナル伝達を増強する又は促進することによりＭＥＤを治療することが可能である。この点において、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（商標）としても知られる）は最近ＭＥＤの初めの経口薬治療としてＰｆｉｚｅｒにより開発された。
【０００９】
シルデナフィルは選択的にフォスフォジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）を阻害し、それによりｃＧＭＰから５’ＧＭＰへの加水分解を妨げることにより海綿体におけるｃＧＭＰの分解を阻害することによりはたらく（Ｂｏｏｌｅｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９６；  Ｊｅｒｅｍｙ  ｅｔ  ａｌ  １９９７）。他の注入可能な血管活性薬は共通して高い有効性を示すが陰茎の痛み、線維症及び持続勃起症（すなわち、不適当な長すぎる期間の勃起）の如き副作用が共通であるので、シルデナフィルは最近市場における最も好ましい治療を代表する。最近、全ての他の入手可能な治療は侵襲性であり、そして吸引圧縮装置、血管活性薬注入及び陰茎補綴埋め込みを含む（Ｍｏｎｔａｇｕｅ  ｅｔ  ａｌ  １９９６）。
したがって、ＳＤを治療する新規方法を見つけることが望まれる。
【００１０】
局面の要約
本発明はＳＤが中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネル活性に関連しうるという新規発見に基づく。このことは海綿体平滑筋弾力性の制御におけるＩＫＣａチャネルの役割を証明する初の報告である。
より重要には、このことは海綿体平滑筋弾力性のＮＯ誘導弛緩の仲介におけるＩＫＣａチャネルの役割を証明する初の報告である。この発見はＭＥＤの治療のための重要な示唆を有する。
【００１１】
この点において、上記ＩＫＣａチャネルは海綿体平滑筋の直接の弛緩を仲介する又は海綿体平滑筋のＮＯ誘導弛緩を増強する治療的標的として使用されうる。個体の予防の及び／又は治療の処置は、例えば、ＩＫＣａチャネル開放が増大される及び／又はＩＫＣａチャネル開放の長さが増大される及び／又はＩＫＣａチャネル開放の可能性が増大される及び／又はＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性が増大されるように、ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を用いて達成されうる。上記剤は例えば、上記ＩＫＣａチャネルのカルシウム感受性を増大させることにより、チャネル開放を直接的に又は関節的に高めうる。直接のチャネル開放又はカルシウム感受性における増大のこの効果は上記ＩＫＣａチャネルを開放させ、海綿体における平滑筋弾力性の弛緩を促進する。上記ＩＫＣａチャネルのカルシウム感受性を増大させることに加えて、上記剤は上記ＩＫＣａチャネルの一酸化窒素（ＮＯ）への感受性をも増大させうる。ＮＯはその後ＰＫＧ／ｃＧＭＰ経路を介して直接的に又は間接的にカルシウム感受性を増大させうる。したがって、例えば、ＭＥＤに関連した、ＮＯシグナル伝達における不全は、海綿体平滑筋の窒素性弛緩を高めるＩＫＣａチャネル調節剤／活性化剤／開放剤を用いることにより克服されうる。
【００１２】
示されるように、本発明はＳＤが中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネル活性に関連しうるという初の報告である。このことはＳＤにおけるカリウムチャネルの可能性のある関連における重要な人工的技術に直接対比している。この点において、上記重要な技術は大伝導性カルシウム活性化カリウムチャネル（ＢＫチャネル）の開放に関する。例として、引用文献はＷＯ−Ａ−９９／３８８５３及びＷＯ−Ａ−９９／０９９８３にされうる。引用文献はＭｏｒｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  （２００１）（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｖｏｌ  ２９６（ｎｏ．  ２）ｐａｇｅｓ  ２２５−２３４）及びＭｏｒｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  （２０００）（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ＣＰＮＳ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ｖｏｌ２  （ｎｏ．  ３）ｐａｇｅｓ  ２８３−３０２）にもされることができ、彼はＢＫチャネルを標的にする剤の使用について報告する。ＵＳ−Ａ−５４３００４８はカリウムチャネルが標的にされることについてはふれていない。
【００１３】
したがって、海綿体平滑筋弾力性の制御におけるＩＫＣａチャネルの役割は非常に重要な発見を示す。
したがって、１の局面においては、本発明はＳＤの治療のためのＩＫＣａチャネル調節剤の使用を提供する。
他の局面においては、本発明は平滑筋弛緩剤としてのＩＫＣａチャネル調節剤の使用を提供する。
他の局面においては、本発明は泌尿生殖器系平滑筋弛緩剤としてのＩＫＣａチャネル調節剤の使用を提供する。
【００１４】
発明の詳細な局面
１の局面においては、本発明は性機能障害（ＳＤ）の治療における二次的な使用のための医薬組成物；個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルの活性を調節することのできる剤を含む医薬組成物に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される。
別に表現すると、本発明は性機能障害（ＳＤ）の治療における使用（又は使用されるとき）のための医薬組成物；個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルの活性を調節することのできる剤を含む医薬組成物に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される。
【００１５】
他の局面においては、本発明はＳＤの治療のための医薬の調製における剤の使用に関し；ここで、上記剤は個体の生殖器におけるＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される。
【００１６】
さらなる局面においては、本発明は個体を治療する方法；上記個体に上記個体の生殖器におけるＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をデリバリーすることを含む方法に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合される。
【００１７】
さらなる局面においては、本発明はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定する分析方法；上記剤を上記ＩＫＣａチャネルと接触させること；上記ＩＫＣａチャネル活性を計測すること：を含む分析方法に関し；ここで、上記ＩＫＣａチャネル活性における増大は上記剤はＳＤの予防及び／又は治療において有用でありうることを示唆する。
【００１８】
さらなる局面においては、本発明は：
（ａ）本発明にしたがう分析を行う；（ｂ）ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる１以上の剤を同定する；及び（ｃ）多数のそれらの１以上の同定された剤を調製する：段階を含むプロセスに関する。
【００１９】
さらなる局面においては、本発明は上記剤でＳＤを予防する及び／又は治療する方法に関し；ここで、上記剤はｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析方法においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析方法は本発明にしたがう分析方法である。
【００２０】
さらなる局面においては、本発明はＳＤの予防及び／又は治療のための医薬組成物の調製における剤の使用に関し；ここで、上記剤は本発明にしたがう分析方法によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで分析されるときＩＫＣａチャネル活性を調節することができる。
【００２１】
さらなる局面においては、本発明は診断方法に関し、ここで、上記方法は：個体の生殖器からサンプルを単離すること；上記個体からのサンプルにおける発現及び／又はＩＫＣａチャネル活性が上記個体の生殖器における海綿体平滑筋の弛緩に効果を有するかどうかを決定すること：を含む。
【００２２】
さらなる局面においては、本発明は個体の生殖器からの単離されたサンプルにおける実在を検出する手段を含む診断組成物又はキットに関し；ここで、上記手段は上記個体からのサンプルにおける上記ＩＫＣａチャネルの発現及び／又はＩＫＣａチャネル活性の値が上記個体の生殖器における海綿体平滑筋弾力性の弛緩に効果を有するかどうかを決定するのに使用されうる。
【００２３】
さらなる局面において、本発明はＳＤを予防する及び／又は治療することのできる剤の同定において有用な動物モデルに関し；前記モデルは麻酔された動物を含み；及び前記動物の海綿体平滑筋細胞におけるＩＫＣａチャネル活性を計測する方法を含む。
【００２４】
さらなる局面においては、本発明はＳＤを予防する及び／又は治療するためのＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定する分析方法；剤を本発明にしたがう上記動物モデルに投与すること及び前記動物の生殖器におけるＩＫＣａチャネルを通るイオン伝導性又は膜のポテンシャルを計測すること：を含む分析方法に関する。
【００２５】
さらなる局面においては、本発明は医薬における使用のためのＩＫＣａチャネルに関する。
【００２６】
さらなる局面においては、本発明はＳＤ（好ましくはＭＥＤ）を予防する及び／又は治療するための医薬の調製におけるＩＫＣａチャネルの使用に関する。ここで、上記ＩＫＣａチャネルは、例えば、本発明にしたがう剤の製造段階及び／又は同定予備段階及び／又は調節予備段階において使用されうる。
【００２７】
さらなる局面においては、本発明は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することのできる剤を同定するための標的としてのＩＫＣａチャネルに関する。
【００２８】
さらなる局面においては、本発明はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をスクリーニングするためのＩＫＣａチャネルに関する。
【００２９】
さらなる局面においては、本発明はＳＤ（好ましくはＭＥＤ）を予防する及び／又は治療するための医薬の製造におけるＩＫＣａチャネルの使用に関する。ここで、上記ＩＫＣａチャネルは医薬に調合される。
【００３０】
本発明の他の局面は付属の請求項において及び以下の説明及び図面において示される。これらの局面は別々の節の見出しの下に示される。しかしながら、それぞれの節の下の技術はその特定の節の見出しに必要的に限定されないことが理解されるべきである。
【００３１】
好ましい局面
好ましくは、上記剤はＳＤの治療用である。
上記ＳＤは男性のＳＤ又は女性のＳＤでありうる。
好ましくは、上記剤は、上記ＳＤが勃起機能障害（ＥＤ）である、ＳＤの治療用である。
【００３２】
好ましくは、上記剤はＭＥＤの如きＥＤの治療用である。
好ましくは、ＩＫＣａチャネル活性の調節はＩＫＣａチャネル開放を増大させる及び／又はＩＫＣａチャネル開放の長さを増大させる及び／又はＩＫＣａチャネル開放の可能性を増大させる及び／又は上記ＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性を増大させる。
【００３３】
好ましくは、ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
好ましくは、ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤は海綿体平滑筋弾力性の窒素性の又は一酸化窒素仲介弛緩を高める。
１の態様においては、好ましくは上記剤は経口投与用である。
他の態様においては、上記剤は局所投与又は海綿体内投与用でありうる。
【００３４】
本発明は性的覚醒／刺激の前及び／又は間の本発明に係る剤の投与をも含む。
それは体系的な選択性を提供するので、これは有用である。自然の段階は生殖器でのみ起こり、心臓等では起こらない、それゆえ、生殖器に対する選択的な効果を達成することが可能であろう。
【００３５】
したがって、本発明に係るいくつかの局面のために、性的覚醒／刺激段階があることが高く所望される。私たちはこの段階は体系的な選択性を提供しうることを見つけた。
【００３６】
ここで、「性的覚醒／刺激」は１以上の視覚的な覚醒／刺激、身体的な覚醒／刺激、聴覚的な覚醒／刺激又は考えの覚醒／刺激でありうる。
したがって、好ましくは、特にそれらの剤が経口デリバリー用であるとき、本発明に係る剤は性的覚醒／刺激の前又は間にデリバリーされる。
それゆえ、この好ましい局面のために、本発明はＳＤの治療用医薬の製造における剤の使用を提供し；ここで、上記剤は個体においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ、；そしてここで、前記個体は前記医薬の投与の前又は間に性的に覚醒される／刺激される。
【００３７】
好ましくは、前記医薬は前記個体に経口でデリバリーされる。
さらに、この好ましい局面のために、本発明は個体の治療方法；上記個体にＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をデリバリーすることを含む方法を提供し；ここで、上記剤はＳＤを治療する量であり；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され；及びここで前記個体は前記剤の投与の前又は間に性的に覚醒される／刺激される。
好ましくは、前記剤は前記個体に経口でデリバリーされる。
【００３８】
驚くべき及び予想しない発見
本発明は以下の驚くべき及び予想しなかった発見を示す：
（ａ）ＩＫＣａチャネルは（心臓、動脈の如き）血管平滑筋又は骨格筋において発現されないが、海綿体平滑筋において発現される。
【００３９】
（ｂ）海綿体平滑筋におけるＩＫＣａチャネル活性の調節は陰茎の勃起の如き、勃起応答を仲介することのできる平滑筋弾力性の弛緩を誘導する。
【００４０】
（ｃ）ＩＫＣａチャネル活性の調節は、例えば、筋肉の過分極及び／又は（電位作動性カルシウムチャネルの如き）カルシウムチャネル活性を阻害することにより又は平滑筋弾力性のＮＯ仲介弛緩を増強することにより、海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介しうる。
【００４１】
（ｄ）ＩＫＣａ活性の増大した開放により仲介される高められた弛緩剤効果は細胞内カルシウム濃度への増大した感受性により直接的に又は間接的に仲介されうる。
【００４２】
（ｅ）海綿体平滑筋弾力性のＮＯ仲介弛緩は、部分的には、ＩＫＣａチャネルの開放により仲介されうる。ＮＯは直接的に内因性の窒素性経路を介して又は間接的にＰＫＧ／ｃＧＭＰ仲介経路を介してＩＫＣａチャネル開放を増大させうる。
【００４３】
（ｆ）ＥＢＩＯ（１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン）の如き、ＩＫＣａチャネル開放因子は海綿体平滑筋弾力性のＮＯ誘導弛緩を高めることによりＩＫＣａチャネル活性の調節において役割を果たしうる。平滑筋弾力性の上記ＮＯ誘導弛緩は性的覚醒への応答においても観察されうる。
【００４４】
（ｇ）ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤は勃起応答を高めることにおいて有用であることができ、そしてＭＥＤの如き勃起機能障害を克服するのに役立ちうる。
【００４５】
（ｈ）ＩＫＣａチャネル開放は海綿体平滑筋弾力性のＮＯ仲介弛緩を高め、そしてそれゆえ、内因性の勃起プロセスを高める。
【００４６】
利点
本発明は以下のことから有用である：
（ｉ）ＩＫＣａチャネル活性の調節において役割を果たす剤は、海綿体平滑筋弾力性の弛緩を誘導することにより、ＭＥＤの如き、ＳＤにおいて、勃起応答の如き、正常な性的応答を予防する及び／又は治療する及び／又は回復させる方法を提供しうる。したがって、本発明は上記正常な勃起応答を回復させる又は真似る方法を提供する。
【００４７】
（ｉｉ）ＩＫＣａチャネル活性の調節を通しての海綿体平滑筋弾力性の弛緩は海綿体に特異的であるように、及びｉｎ  ｖｉｖｏで動脈の平滑筋又は血圧に影響を有しないように見える。動脈平滑筋における効果の欠落は心血管組織におけるＩＫＣａチャネルの不在に帰することができる。ＩＫＣａチャネルのこの選択的発現は、それは海面体内の平滑筋を特異的に標的にしうる（ＩＫＣａチャネル開放因子の如き）ＩＫＣａチャネル活性化剤が開発されうることを意味するので、有用である。この選択的標的化は勃起機能障害を治療するために最近使用される血管活性化薬のいくつかに関連する危険性及び（血圧における減少の如き）副作用を減少させる。
【００４８】
（ｉｉｉ）上記ＩＫＣａチャネルは、例えば、カルシウムチャネル活性を阻害する及び／又は海綿体平滑筋弾力性のＮＯ誘導弛緩を増強させることを通して、ＩＫＣａチャネル活性を調節すること及び海綿体平滑筋の弛緩を仲介することのできる剤を同定するために、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）において標的として使用されうる。
他の利点は以下の実例において議論される及び明らかにされる。
【００４９】
カルシウム活性化カリウムチャネル
本明細書中で使用されるとき、上記用語「カルシウム活性化カリウムチャネル」は（Ｍａｘｉ  Ｋ＋チャネルともいわれる）大伝導性カルシウム活性化（ＢＫＣａ）チャネル、少伝導性カルシウム活性化（ＳＫＣａ）チャネル及び、ときどきｈＳＫ４チャネル又はＩＫチャネル又はｈＩＫ１チャネルとも言われる、中伝導性カルシウム活性化（ＩＫＣａ）チャネルを含む。
【００５０】
今般、カルシウム活性化カリウムチャネルの３のサブタイプがある。これらは大伝導性カルシウム活性化（ＢＫＣａ）チャネル、中伝導性カルシウム活性化（ＩＫＣａ）チャネル及び小伝導性カルシウム活性化（ＳＫＣａ）チャネルである。これらのチャネルは単一の開放の間にチャネルの小孔を通過するイオン伝導性の程度により特徴付けられる（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９５）。区別のために：大伝導性（ＢＫ）チャネルは内部のカルシウムイオン及び膜ポテンシャルの協調した活動により開放され、そして１００〜２２０ピコジーメンス（ｐＳ）の単位伝導性を有する；その一方で、中伝導性（ＩＫ）及び小伝導性（ＳＫ）チャネルは内部のカルシウムイオンによってのみ開放される。さらなる区別のために、上記ＩＫＣａ及びＳＫＣａチャネルは、それぞれ、２０〜８５ｐＳ及び２〜２０ｐＳの単位伝導性を有し、ＢＫチャネルよりもカルシウムにより感受性である。それぞれの型のチャネルは明らかな薬理作用を示す（Ｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ  １９９７）。
【００５１】
全ての３の上記カルシウム活性化カリウムチャネル（ＢＫＣａ、ＩＫＣａ及びＳＫＣａ）は細胞内Ｃａ２＋における増大により活性化される。さらに、ＩＫＣａチャネルと対照的に、ＳＫＣａ及びＢＫＣａは膜ポテンシャルにおける変化によりさらに活性化される。このことはさらなる区別である。すなわち、ＳＫＣａ及びＢＫＣａチャネルの活性化は電位依存性である。カルシウム活性化カリウムチャネルの活性化−それは上記カルシウム活性化カリウムチャネルの開放をもたらす−は筋肉細胞からの正味のＫ＋流出を引き起こす。この正の電荷の損失は上記細胞内をより負にさせ、そして膜ポテンシャルにおける減少をもたらす細胞膜の過分極を引き起こす。この膜ポテンシャルにおける減少は、膜の過分極ではなく、脱分極により活性化される電位依存性カルシウムチャネル（ＶＯＣＣｓ）を阻害する（Ｑｕａｓｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９３）。したがって、カルシウム活性化カリウムチャネル開放の全体の効果はＶＯＣＣｓ（維持された収縮のためのＣａ２＋の源）を介するＣａ２＋流入における減少及びそれゆえ、平滑筋弾力性における減少である。Ｋ＋チャネル開放により誘導される過分極はイノシトール１，４，５−トリフォスフェート（ＩＰ３）のアゴニスト誘導蓄積（及びそれゆえ、細胞内貯蔵からのＣａ２＋移動）及び収縮装置のＣａ２＋感受性を減少させることが示されている（Ｃｈｒｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９３）。しかしながら、これらの観察の背景にある機構はいまだ完全に解明されていない。
【００５２】
これらのカルシウム活性化カリウムチャネルに関する初期の報告は心血管系及び／又は中枢神経系（ＣＮＳ）を通してのこれらのチャネルの発現の欠損を示す（Ｂｏ  Ｓｋａｎｎｉｎｇ  Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９８）。しかしながら、海綿体におけるこれらのチャネルの発現は、まだ不明である。例として、（Ｍａｘｉ  Ｋ＋ともいわれる）ＢＫＣａチャネルは海綿体弛緩のＮＯ／ｃＧＭＰ経路に関連すること及び平滑筋の休止膜ポテンシャルの維持において役割を果たすことが明らかにされた。対照的に、ＩＫＣａチャネルは、今のところ、海綿体に局在しておらず、そして海綿体におけるＩＫＣａチャネルの発現又は機能に関連する教示を伴う文献報告はない。最近、文献証拠はウマ陰茎動脈（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９８；Ｐｒｉｅｔｏ  ｅｔ  ａｌ  １９９８）における及びベルベリン（ベンゾジオゾロキノリジンアルカロイド）により誘導されたウサギ海綿体弛緩（Ｃｈｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ  １９９８）における「ＣｈＴＸ感受性Ｋ＋チャネル」の役割をも示唆した。これらの研究はカルシウム活性化カリウム伝導性を含むカリウムチャネルを過分極させるための可能性のある役割について予想するが、どの研究も海綿体弛緩を負うチャネルサブタイプを同定しない。すなわち、どの研究も大伝導性カルシウム活性化（ＢＫＣａ）チャネル、中伝導性カルシウム活性化（ＩＫＣａ）チャネル又は少伝導性カルシウム活性化（ＳＫＣａ）チャネルを区別しない。さらに、上記研究のどれもＭＥＤの如きＳＤ障害の治療におけるこれらのチャネルの可能性のある役割を示唆しない。
【００５３】
私たちは、今般、驚くべきことに、ＩＫＣａチャネルが海綿体平滑筋細胞において発現されることを見つけた。海綿体におけるＩＫＣａチャネル発現に関する文献報告はこれまでない。さらに、海綿体の平滑筋細胞における陰茎ＩＫＣａチャネルの如き、ＩＫＣａチャネルについての機能的証拠を開示する文献証拠はない。これらのチャネルに関連する文献報告は心血管系及び／又は中枢神経系（ＣＮＳ）を通しての発現の欠損を示す。これらの発見はＭＥＤの如き、ＳＤの治療に重要な示唆を有する。
【００５４】
中伝導性カルシウム活性化（ＩＫＣａ）チャネル
本明細書中で使用されるとき、上記用語「中伝導性カルシウム活性化（ＩＫＣａ）チャネル」は単一の開放の間に上記チャネルの小孔を通過するイオン伝導性の程度により特徴付けられるカルシウム活性化カリウムチャネルのサブタイプをいう（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９５）。内部のカルシウムイオン及び膜ポテンシャルの協調した活動により開放される及び１００〜２２０ピコジーメンス（ｐＳ）の単位伝導性を有する大伝導性（ＢＫ）チャネルに比較して、上記中伝導性（ＩＫ）チャネルは、２０〜８５ｐＳの単位伝導性で、内部のカルシウムイオンによってのみ開放され、そして上記ＢＫチャネルよりもカルシウムにより感受性である。
【００５５】
本明細書中で使用されるとき、上記用語「中伝導性カルシウム活性化カリウムチャネル」（ＩＫＣａ）は上記用語ｈＳＫ４又はその活性異形、ホモログ、誘導体、断片、部分又はサブユニットで交換可能に使用される。本明細書中に示される配列リスト中で、ｈＳＫ４を含むアミノ酸配列は配列ＩＤ番号１（取得番号００２２５０）として設定され、及びｈＳＫ４をコードするヌクレオチド配列は配列ＩＤ番号２（取得番号００２２５０）に設定される。本明細書中で使用されるとき、上記用語「ＩＫＣａチャネル」はその同じ又は異形、ホモログ、誘導体、断片、部分又はサブユニットをコードするアミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列はもちろん、上記ＩＫＣａチャネルそのものをいう。
【００５６】
背景情報として、Ｊｏｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）は、彼らがＳＫ４と呼ぶ、ＫＣＮＮ４をコードするｃＤＮＡをクローニングした。ＫＣＮＮ４の予想された４２７アミノ酸配列はラット及びヒトＳＫチャネルタンパク質ｒＳＫ１、ｒＳＫ２、ｒＳＫ３及びｈＳＫ１のそれと約４０％同一であった。配列分析は、ＳＫチャネルタンパク質のように、ＫＣＮＮ４は６の推定されている膜貫通ドメイン、保存された小孔領域、及びＣ末端に近いロイシンジッパー様モチーフを含むことを明らかにした。チャイニーズハムスターの卵巣細胞において発現されたとき、ＫＣＮＮ４は約１２ｐＳの伝導性を作出し、そしてカルシウムに対して非常に高いアフィニティーを有した。ノザン分析により、上記著者はＫＣＮＮ４が胎盤内でそしてより低い値で肺及び膵臓内で２．６ｋｂ及び３．８ｋｂの転写産物として発現されたことを見つけた。その発現パターン、生理学的特性、及び他のＳＫチャネルタンパク質への低いホモロジーに基づいて、Ｊｏｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）はＫＣＮＮ４がＳＫチャネルの新規サブファミリーに属することを提唱した。Ｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）も、彼らがＩＫ１と呼ぶ、ＫＣＮＮ４をコードするｃＤＮＡを同定した。
【００５７】
アフリカツメガエルの卵母細胞におけるその発現は、天然のＩＫチャネルの生物物理学的及び生理学的特長を示す、３９ｐＳの伝導性値を有するカリウムチャネルを作出したので、これらの著者はＫＣＮＮ４をＩＫチャネルとして分類した。
【００５８】
それとは独立に、Ｌｏｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）は、彼らがＫＣａ４と呼ぶ、ＫＣＮＮ４をコードするヒトリンパ節ｃＤＮＡを単離した。ノザン分析はＫＣＮＮ４がさまざまな組織内で、主に２．２ｋｂのｍＲＮＡとして発現され、いくつかの組織内でより少ない大きな転写産物があったことを明らかにした。Ｌｏｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）は上記２．２ｋｂのＫＣＮＮ４転写産物が、ＫＣａチャネル流速における増大と一致して、休止Ｔ細胞においてよりも活性化Ｔ細胞において１０倍豊富であることを見つけた。哺乳類細胞におけるＫＣＮＮ４の発現は、活性化されたＴリンパ球において負のＫＣａチャネルについて報告されたものと非常に似通った電気生理学的特長を有する、３３ｐＳの伝導性を有するチャネルを作出した。Ｌｏｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）は、ＫＣＮＮ４がＴリンパ球において主要なＫＣａチャネルをコードすることを示した。蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより、Ｇｈａｎｓｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）は上記ＫＣＮＮ４遺伝子を染色体１９ｑ１３．２に位置づけた。
【００５９】
調節
本明細書中で使用されるとき、上記用語「ＩＫＣａチャネル活性を調節する」は１以上の：ＩＫＣａチャネル活性を改善すること、増大すること、高めること、作用させること、脱分極させること又はアップレギュレートすること又は上記ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性が増大される−すなわち、ＩＫＣａチャネル活性／開放を誘発するのに必要とされるカルシウム濃度が低くされることを意味する。上記ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性における増大は上記ＩＫＣａチャネルの直接的な又は間接的な開放により増大され／高められうる。上記ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性におけるこの増大は、上記ＩＫＣａチャネルの開放が上記ＩＫＣａチャネルがより早く及び／又はより低い細胞内カルシウム濃度で及び／又はより長い時間及び／又は増大した開放時間の可能性で開放するような様式で、影響されるような、上記ＩＫＣａチャネルの特性の改変をもたらしうる。
【００６０】
上記用語「ＩＫＣａチャネル活性を調節する」は、例えば、ＩＫＣａチャネルの発現を増大させる剤による及び／又はそうでなければＩＫＣａチャネル活性及び／又は上記ＩＫＣａチャネルの発現の調節を損なう及び／又は拮抗するであろう物質に対する剤の活性によるような、海綿体平滑筋組織内でのＩＫＣａチャネルの発現のアップレギュレーションをも含む。
【００６１】
カルシウム感受性
本明細書中で使用されるとき、及びＩＫＣａチャネルに関して、上記用語「増大したＣａ２＋感受性」はＩＫＣａチャネル活性化／開放を誘発するのに必要とされるカルシウムイオン濃度が減少される／低くなることを意味する。ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性は（ｉ）例えば、上記ＩＫＣａチャネルについての生物物理学的研究から予想されるであろうよりも低い細胞内Ｃａ２＋濃度で起こるＩＫＣａチャネル活性化／開放により直接的に又は（ｉｉ）例えば、上記ＮＯ／ｃＧＭＰ経路の活性化から生ずる上記ＩＫＣａチャネルのＮＯに対する又はチャネルのリン酸化に対する感受性を増大させることにより間接的に、増大されうる。上記ＩＫＣａチャネルのカルシウム感受性を増大させることは筋肉の過分極、及びそれゆえ、カルシウムチャネル活性における減少を引き起こしうる。
【００６２】
カルシウムチャネル活性の阻害
本明細書中で使用されるとき、上記用語「Ｃａ２＋チャネル活性の阻害」は（ｉ）平滑筋細胞へのＣａ２＋流入における減少及び／又は（ｉｉ）細胞内貯蔵からのＣａ２＋の流動化の減少及び／又は（ｉｉｉ）収縮装置の減少したＣａ２＋感受性をもたらしうるチャネル活性の阻害を意味する。
例として、細胞内Ｃａ２＋における増大はＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネルの活性化を、及びそれゆえ、平滑筋細胞からのＫ＋イオンの正味の流出を引き起こしうる。このＫ＋正電荷の損失は上記細胞内部をより負にさせ、そしてそれは膜ポテンシャルにおける減少をもたらす、細胞膜の過分極をもたらす。膜ポテンシャルにおけるこの減少は脱分極に依存する電位依存性カルシウムチャネル（ＶＯＣＣ）活性を阻害する／減少させる。ＶＯＣＣｓを介するＣａ２＋流入における減少は維持された収縮に必要とされるＣａ２＋の源における減少（及び最終的な弛緩）をもたらす。このことは平滑筋弾力性における減少をもたらす。Ｋ＋チャネル開放により誘導される過分極は、イノシトールのアゴニスト誘導蓄積を減少させ、及びそれゆえ、細胞内貯蔵からのＣａ２＋の流動化を減少させうる。
【００６３】
ＩＫＣａチャネルのＮＯに対する感受性
本明細書中で使用されるとき、及び上記ＩＫＣａチャネルに関して、上記用語「増大したＮＯに対するＣａ２＋感受性」はＮＯが内因性の窒素性経路を介して直接的に又はＰＫＧ／ｃＧＭＰ仲介経路を介して間接的に、ＩＫＣａチャネルのカルシウム感受性を増大しうることを意味する。
【００６４】
ＰＫＧ／ｃＧＭＰ経路
本明細書中で使用されるとき、上記用語「ＰＫＧ／ｃＧＭＰ経路」の、ｃＧＭＰの如き環状ヌクレオチドは重要な細胞内セカンドメッセンジャーである。一酸化窒素は細胞内ｃＧＭＰにおける増大をもたらす、可溶性のグアニレートシクラーゼを活性化する。細胞内ｃＧＭＰは環状ヌクレオチドフォスフォジエステラーゼ−そうでなければ、ＰＤＥｓとして知られる−により分解され、筋肉の弛緩を促進する。上記ＰＤＥｓは環状ヌクレオチドの分解を触媒する酵素のファミリーであり、そして、そうすることで、環状ヌクレオチドの濃度を制御する細胞内成分の１である。ここ何年かにおいて、これらの酵素の多くのサブタイプに加えて、（ＰＤＥＩ−ＰＤＥＶＩＩの如き）少なくとも７のＰＤＥ酵素が基質アフィニティー及び共因子必要性に基づいて定義された（Ｂｅａｖｏ  ＪＡ  ａｎｄ  Ｒｅｉｆｓｎｙｄｅｒ  ＤＨ，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．  １１：１５０［１９９０］；Ｂｅａｖｏ  Ｊ，  Ｉｎ：Ｃｙｃｌｉｃ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ．，  Ｂｅａｖｏ  Ｊ  ａｎｄ  Ｈｏｕｓｌｅｙ  ＭＤ  （Ｅｄｓ．）Ｗｉｌｅｙ：Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ，  ｐｐ．３−１５［１９９０］）。環状ヌクレオチドフォスフォジエステラーゼについての教示はＵＳ−Ａ−５９３２４２３及びＵＳ−Ａ−５９３２４６５においても見られうる。
【００６５】
仲介
好ましい局面において、本発明に係る剤は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
本明細書中で使用されるとき、海綿体平滑筋弾力性の弛緩に関して、上記用語「仲介する」は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を直接的に又は間接的に促進する剤によるＩＫＣａチャネル活性化の調節をいう。上記用語「仲介する」はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤による、海綿体平滑筋のＮＯ誘導弛緩の増強をも含む。
【００６６】
増強
本明細書中で使用されるとき、海綿体平滑筋弾力性の弛緩に関して、上記用語「増強する」は１以上の：（ＮＯの如き）実在の有効性を増大させること、（ＮＯの如き）実在の値を増大させること、（ＮＯの如き）実在の活性を増大させること、（ＮＯの如き）実在の入手可能性を増大させること、（ＩＫＣａチャネルの如き）１の実在の（ＮＯの如き）他の実在に対する感受性を増大させることを含む。増大の効果は直接的な又は間接的な効果でありうる。例として、ＩＫＣａチャネルの一酸化窒素（ＮＯ）に対する感受性は直接的に又は上記ＰＫＧ／ｃＧＭＰ経路を介して間接的にカルシウム感受性を増大させることをとおして増強されうる。
【００６７】
海綿体
本明細書中で使用されるとき、上記用語「海綿体」はｉｎｔｅｒ  ａｌｉａで陰茎内に見られる組織の塊をいう。この点に関して、陰茎の体は組織の３の円筒形の塊からなり、それぞれは白膜と呼ばれる繊維質の組織により囲まれる。対になった背面の塊は陰茎海綿体と呼ばれる（ｃｏｒｐｏｒａ＝主要な体；ｃａｖｅｒｎｏｓａ＝洞）；より小さい中間腹面の塊、尿道海綿体は海綿状の尿道を含み、そして射精の間海綿状尿道を開いておくのに機能する。全ての３の塊は筋膜及び皮膚により囲まれ、そして血液洞により貫通された勃起性組織からなる。上記海綿体は平滑筋細胞を含む。上記用語「海綿体」は本明細書中で使用されるとき、クリトリスにおける相当する平滑筋細胞及び／又は組織をも含む。
【００６８】
勃起機能障害（ＥＤ）
本明細書中で使用されるとき、上記用語「勃起機能障害（ＥＤ）」は陰茎の勃起機能障害−成人男性の射精すること又は性交に十分な長さの勃起を得る又は維持することの一貫した不能により特徴付けられる−及び陰茎及びクリトリスの勃起性組織の間における実質的な相当がある範囲での、女性におけるクリトリスの機能障害を含む。
【００６９】
陰茎の勃起
本明細書中で使用されるとき、上記用語「陰茎の勃起」は視覚的、触覚的、聴覚的、嗅覚的又は想像からでありうる刺激に基づいて、陰茎に供給する動脈が膨張し、そして大量の血液が血液洞に入ることによる状況をいう。これらの空間の伸長は陰茎から排出する静脈を圧縮し、そのため血液の流出が遅くなる。副交感神経系の反射作用のための、これらの血管変化は勃起をもたらす。陰茎は、上記動脈が収縮し、そして上記静脈に対する圧が和らげられるとき、その弛緩した状態に戻る。本明細書中で使用されるとき、上記用語「陰茎の」及び「陰茎の勃起」は、陰茎の及びクリトリスの勃起性組織の間で実質的な相当がある範囲で、クリトリスに同等に適用されると解釈されうる。
【００７０】
クリトリス
本明細書中で使用されるとき、上記用語「クリトリス」は男性における陰茎に相同である女性の勃起性組織の塊をいう。男性の組織と同様に、上記クリトリスは触覚的な刺激について膨張することができ、そして女性における性的興奮において役割を果たす。女性の性的覚醒機能障害（ＤＳＡＤ）の如き、女性の性機能障害（ＦＳＤ）のある型においては、上記覚醒機能障害は生殖器の血流及びクリトリスの海綿体の弛緩における不十分さに関連しうる。
【００７１】
生殖器
本明細書中で使用されるとき、上記用語「生殖器」は陰茎及びクリトリスの如き、男性の及び女性の生殖器をいう。
【００７２】
平滑筋
本明細書中で使用されるとき、上記用語「平滑筋」は、洞の内部器官の壁内に局在し、そして自立運動神経により分布される、平滑筋線維（細胞）から成る収縮のために特別化された組織をいう。上記用語「平滑筋」は筋を欠き、それゆえ平滑な外観を有する筋肉を意味する。それは不随意の筋肉とも呼ばれる。平滑筋細胞質におけるＣａ２＋の濃度における増大は筋を有する筋肉においてと同様に、収縮を開始する。しかしながら、筋小胞体（筋を有する筋肉におけるＣａ２＋の貯蔵庫）は平滑筋においては貧弱である。カルシウムイオンは細胞外液及び筋小胞体から平滑筋細胞質へ流れるが、平滑筋線維において横の管はないので、Ｃａ２＋が上記線維の中心の微細線維に到達し、そして収縮プロセスを誘発するのに時間がかかる。このことは、部分的には、平滑筋の遅い開始及び延長された収縮の原因である。
【００７３】
収縮及び弛緩
いくつかの機構は平滑筋細胞の収縮及び弛緩を制御する。１において、カルモジュリンと呼ばれる制御タンパク質は細胞質においてＣａ２＋に結合する。カルシウムイオンは平滑筋線維にゆっくり入るのみでなく、それらは興奮が減退するとき筋肉線維からゆっくり出、そのことは弛緩を遅らせる。細胞質におけるＣａ２＋の延長された存在は平滑筋弾力性に継続した部分的な収縮の状態を提供する。平滑筋組織は、血管、肺への気道、胃、小腸胆嚢、膀胱、陰茎及びクリトリスの海綿体の如き、洞の内部器官の壁に局在する。
【００７４】
標的
本発明の１の局面において、ＩＫＣａチャネルはＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するためのスクリーニングにおいて標的として使用されうる。例として、ＩＫＣａチャネルは、例えば、上記ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性及び／又は上記ＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性を増大させるようにＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するためのスクリーニングにおいて標的として使用されうる。この点において、上記標的は、組換えの及び／又は合成の方法又は同一のものを含む実在の発現により調製される、配列ＩＤ番号１において設定されるアミノ酸配列又は同じ又はその異形、ホモログ、誘導体又は断片をコードするヌクレオチド配列を含みうる。
好ましくは、上記剤は上記ＩＫＣａチャネルのＣａ２＋感受性を増大させる及び／又はＩＫＣａチャネル開放を増大させる及び／又はＩＫＣａチャネル開放の長さを増大させる及び／又はＩＫＣａチャネル開放の可能性を増大させる及び／又は約３０ｎＭ〜２００ｎＭの範囲での上記ＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性を増大させる。
あるいは、ＩＫＣａチャネルはＩＫＣａチャネル活性の調節をとおして海綿体平滑筋の弛緩を仲介することのできる剤を同定するための標的として使用されうる。この点において、上記標的は海綿体平滑筋細胞又はその相当物を含む好適な組織抽出物でありうる。
上記標的は上記組織及び／又は組換え体標的の組み合わせでもありうる。
【００７５】
スクリーニング
ＩＫＣａ標的のチャネル活性を調節することのできる試験剤は本分野において周知の分析においてスクリーニングされうる。スクリーニングは、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、細胞培養で、及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏで行われうる。生物学的スクリーニング分析は、非限定的に、ＩＫＣａチャネル活性に基づいた応答モデル、（剤がＩＫＣａチャネル活性をどのくらいよく調節するか計測する）結合分析、及び（海綿体平滑筋細胞又は同一のものを含む組織抽出物の如き、平滑筋細胞における剤の生物学的効果を計測する）菌、酵母及び動物細胞系に基づきうる。上記分析は、大量の化合物が、所望されるＩＫＣａチャネル調節活性を有する化合物を同定するために試験されうる、高性能ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）のために自動化されうる（例えば、ＷＯ  ８４／０３５６４を参照のこと）。上記ＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤−上記ＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性を調節することによるように−が同定されると、さらなる段階は選択する及び／又は化合物を改変する及び／又は上記ＩＫＣａチャネル活性調節能力を改善するように、存在する化合物を改変するよう行われうる。
【００７６】
１の好ましい局面においては、ＩＫＣａ標的のチャネル活性を調節することのできる試験剤は、Ｂｏ  Ｓｋａｎｎｉｎｇ  Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｌｏｎｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ−ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  Ｃａ２＋−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌ  Ａｍ  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７５  Ｃ８４８−Ｃ８５６）により示される、上記分析を用いてスクリーニングされる。
【００７７】
剤
本明細書中で使用されるとき、上記用語「剤」はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる実在を含む。例として、本発明に係る剤は、非限定的に、ＩＫＣａチャネル開放剤又は上記ＩＫＣａチャネル活性を増大させるＩＫＣａチャネル活性化剤、アゴニスト、エンハンサー、又はアップレギュレーターを含みうる。上記剤はＩＫＣａチャネル活性を阻害する／損なうことのできる、他の実在（又は標的）に直接的に又は間接的に働くアンタゴニストでもありうる。
【００７８】
本明細書中で使用されるとき、上記用語「剤」は、非限定的に、天然であるか否かを問わず、好適な源から得られ又はより産出されうる化合物を含む。上記剤は、小有機分子及び特に新規リード化合物の如き他の化合物に加えて、ペプチドを含みうる化合物ライブラリーから設計され又は得られうる。例として、上記剤は菌、真菌又は動物（特に哺乳類）細胞又は組織の如き生物学的材料からの天然の物質、生物学的巨大分子又は抽出物、有機又は無機分子、合成剤、半合成剤、構造的又は機能的ミメティック、ペプチド、ペプチドミメティックス、誘導剤、全体のタンパク質から切り出されたペプチド又は（例として、ペプチド合成機を用いる又は組換え技術又はそれらの組み合わせによる、組換え剤、抗体、天然の又は非天然の剤、融合タンパク質又はそれらの相当物及びそれらの変異体、誘導体又は組み合わせの如き）合成的に合成されたペプチドでありうる。上記剤はＩＫＣａチャネル又は同一のものを含むアミノ酸配列又は同一の又はその異形、ホモログ又は誘導体をコードするヌクレオチド配列又は（ミメティックの如き）その機能的な相当物又は上記に挙げられた剤の組み合わせでもありうる。
【００７９】
本発明に係る剤は１以上の他の有用な機能的特性を示すことができうる。
【００８０】
好ましくは、上記剤は好適な標的を選択的に作用し及び／又は選択的にアップレギュレートし又は選択的に阻害しうる。
いくつかの適用のために、好ましくは上記剤は３００ｎＭ，２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ未満の、好ましくは約１００ｎＭ未満の、好ましくは約７５ｎＭ未満の、好ましくは５０ｎＭ未満の、好ましくは２５ｎＭ未満の、好ましくは約２０ｎＭ未満の、好ましくは約１５ｎＭ未満の、好ましくは約１０ｎＭ未満の、好ましくは約５ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する。
【００８１】
いくつかの適用のために、好ましくは上記剤は、所望の標的に対して少なくとも約２５、５０、７５、１００倍の選択性、好ましくは所望の標的に対して少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは所望の標的に対して少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは所望の標的に対して少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは所望の標的に対して少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは所望の標的に対して少なくとも約３５０倍の選択性を有する。
【００８２】
本明細書中で使用されるとき、上記用語「剤」は単一の実在でありうる、又はそれは剤の組み合わせでありうる。
上記剤はそのアミノ酸配列又は化学誘導体でありうる。上記物質は有機化合物又は他の化学物質でもありうる。上記剤はヌクレオチド配列でもありうる−それはセンス配列又はアンチセンス配列でありうる。上記剤は抗体でもありうる。
【００８３】
上記剤が有機化合物である場合、いくつかの適用のためには、その有機化合物は典型的に１以上のヒドロカルビル基を含むであろう。ここで、上記用語「ヒドロカルビル基」は少なくともＣ及びＨを含む基を意味し、そして場合により１以上の他の好適な置換基を含みうる。上記置換基の例はハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環状基等を含みうる。上記置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組み合わせが環状基を形成しうる。上記ヒドロカルビル基が１超のＣを含む場合、それらの炭素は必ずしも互いに結合する必要はない。例えば、少なくとも２の炭素が好適な元素又は基を介して結合しうる。したがって、上記ヒドロカルビル基はヘテロ原子を含みうる。好適なヘテロ原子は当業者に明らかであろう、そして、例えば、硫黄、窒素及び酸素を含む。
【００８４】
上記剤はハロ基を含みうる。ここで、「ハロ」はフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
上記剤は１以上のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキレン及びアルケニレン基を含みうる−それは有枝でない又は有枝の鎖でありうる。
【００８５】
１の好ましい態様において、上記剤は以下の式（Ｉ）：
【化１】
2004517046.tif 000002
｛式中、
Ｒ１はＨ又は場合により置換されうるアルキル基の如き、好適な置換基である；
Ｒ２はＨ又は好適な置換基、好ましくはＨである
Ｒ３は１以上の好適な場合による置換基を示す｝
の構造を有する。
【００８６】
他の好ましい態様においては、上記剤は以下の式（１）：
【化２】
2004517046.tif 000003
｛ここで、
ＸはＮＲ、Ｏ又はＳから選ばれる
ここで、ＲはＨ又はアルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）である
Ｒ１はアルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）である
Ｒ２はＨ、ハライド、アルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）、アルコキシ（好ましくはより低いアルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ）から選ばれる
Ｒ３はＨ、ハライド、アルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）、アルコキシ（好ましくはより低いアルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ）から選ばれる
Ｒ４はＨ、ハライド、アルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）、アルコキシ（好ましくはより低いアルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ）から選ばれる
Ｒ５はＨ、ハライド、アルキル（好ましくはより低いアルキル、より好ましくはＣ１−６アルキル）、アルコキシ（好ましくはより低いアルコキシ、より好ましくはＣ１−６アルコキシ）から選ばれる｝
の構造を有する。
【００８７】
式（１）の化合物−ここで、Ｘ＝Ｏ（式（１ａ））又はここでＸ＝Ｓ（式（１ｂ））−はそれぞれの対応する親ヘテロ環（２ａ）又は（２ｂ）の塩基性条件下でＮ−アルキル化により調製されることができ、これらは、今度は、それぞれの対応するアミノフェノール（３ａ）又はアミノチオフェノール（３ｂ）のフォスゲン又は他の好適なカルボニル化剤での処理により調製されうる。アミノフェノール及びアミノチオフェノールは通常、還元によりそれぞれの対応するニトロフェノール（４ａ）又はニトロチオフェノール（４ｂ）から調製される。多くの置換されたニトロフェノール（４ａ）及びニトロチオフェノール（４ｂ）は商業的に入手可能である。
【００８８】
【化３】
2004517046.tif 000004
Ｘ＝ＮＨ（式（１ｃ））である、式（１）の化合物は上記スキームへの改変により調製されうる。この点において、それぞれの対応するニトロアニリン（５ｃ）のアルキル化はニトロ基の還元の前に行われ、上記に示されるようにカルボニル化により１ｃに環状化されるフェニルジアミン（３ｃ、Ｘ＝ＮＨ）を提供する。
【００８９】
【化４】
2004517046.tif 000005
１の好ましい態様においては、上記剤はＥＢＩＯ（１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン）又はそのミメティック又はそれらの医薬として許容される塩である。ＥＢＩＯの構造は：
【化５】
2004517046.tif 000006
である。
【００９０】
医薬として許容される塩
上記剤は−酸添加塩又は塩基性塩の如き−医薬として許容される塩−又はそれらの水和物を含むそれらの溶媒和物−の形態でありうる−及び／又はとして投与されうる。好適な塩についての総覧には、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  １９９７，  ６６，  １−１９を参照のこと。
【００９１】
典型的に、医薬として許容される塩は、好適なように、所望の酸又は塩基を用いて、容易に調製されうる。上記塩は溶液から沈殿し、そしてろ過により回収されうる、又は上記溶媒の蒸発により回復されうる。
好適な酸添加塩は非毒性塩を形成する酸から形成され、そして例は塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨー化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、琥珀酸塩、糖酸塩、ベンゾエート塩、メタンスルフォン酸塩、エタンスルフォン酸塩、ベンゼンスルフォン酸塩、ｐ−トルエンスルフォン酸塩及びパモエート塩である。
【００９２】
好適な塩基性塩は非毒性塩を形成する塩基から形成され、例はナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩及びジエタノールアミン塩である。
【００９３】
同質異像形／不斉炭素
本発明に係る剤は同質異像形で存在しうる。
本発明に係る剤は１以上の不斉炭素原子を含むことができ、そしてそれゆえ、２以上の立体異性体形で存在する。剤がアルケニル又はアルケニレン基を含む場合、シス（Ｅ）及びトランス（Ｚ）異性が起こりうる。本発明は上記剤の個々の立体異性体、好適な場合には、その個々の互変異性体形、それらの混合物を含む。
【００９４】
ジアステレオアイソマー又はシス及びトランス異性体の分離は慣用技術により、例えば、上記剤又はその好適な塩又は誘導体の立体異性体混合物の分別結晶化、クロマトグラフィー又はＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．により達成されうる。上記剤の化合物の個々のエナンチオマーは対応する光学的に純粋な中間体から又は好適なキラル支持を用いる対応するラセミ体のＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．による又は好適な光学活性酸又は塩基での対応するラセミ体の反応により形成されるジアステレオアイソマー塩の分別結晶化よるような、分解によっても、好適に、調製されうる。
【００９５】
同位体異形
本発明は上記剤又はその医薬として許容される塩の全ての好適な同位体異形をも含む。本発明に係る剤又はその医薬として許容される塩の同位体異形は、少なくとも１の原子が、同じ原子数を有するが、通常天然に見られる原子量と異なる原子量を有する原子により置き換えられるものとして定義される。上記剤及びその医薬として許容される塩に導入されうる同位体の例は、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｃｌの如き、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素及び塩素の同位体を含む。上記剤及びその医薬として許容される塩のある同位体異形、例えば、３Ｈ又は１４Ｃの如き放射活性同位体が導入されるものは薬物及び／又は基質の組織分布研究において有用である。トリチウム化された、すなわち、３Ｈ、及び炭素−１４、すなわち、１４Ｃ、同位体はそれらの調製及び検出の容易さのために特に好ましい。さらに、重水素、すなわち、２Ｈの如き、同位体での置換はより大きな代謝安定性、例えば、増大したｉｎ  ｖｉｖｏの半減期又は減少した用量必要性から生ずる、ある治療的有用性を与えることができ、そしてそれゆえ、いくつかの状況では好まれうる。本発明に係る剤及び本発明に係るその医薬として許容される塩の同位体異形は一般的に好適な試薬の好適な同位体異形を用いて慣用の手順により調製されうる。
【００９６】
プロドラッグ
本発明に係る剤はプロドラッグから由来しうることが当業者により理解されるであろう。プロドラッグの例はある保護された基を有する実在を含み、及びそれは上記のような生理学的活性を有しないこともあるが、ある場合には、（経口で又は非経口でのように）投与され、そしてその後体内で代謝されて、生理学的に活性である本発明に係る剤を形成しうる。
【００９７】
プロ基
例えば、（その開示は本明細書中に援用される）Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  １９８５による「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」中に示されるような、「プロ基」として知られるある基が上記剤の好適な機能性に設置されうることがさらに理解されるであろう。上記プロドラッグも本発明の範囲内に含まれる。
【００９８】
アゴニスト
本発明の１の態様においては、好ましくは上記剤はＩＫＣａチャネルのアゴニスト、部分的アゴニスト及び競合的アゴニストから成る基から選ばれる。
【００９９】
本明細書中で使用されるとき、上記用語「アゴニスト」は活性型であるＩＫＣａの割合の開放の可能性を増大させ、増大した生物学的応答をもたらすことのできる剤を意味する。上記用語は部分的アゴニスト及び反アゴニストを含む。
【０１００】
アンタゴニスト
本明細書中で使用されるとき、上記用語「アンタゴニスト」はアゴニストの如き、他の剤の作用を減少させる剤を意味する。上記アンタゴニストは上記アゴニストと同じ標的に働きうる。上記拮抗作用は拮抗された物質（化学拮抗作用）又は異なる標的をとおす反対の効果の産出（機能的拮抗作用又は生理学的拮抗作用）の組み合わせから又は標的活性化を観察された効果につなげる中間体の結合部位に対する競合の結果（間接的拮抗作用）として生じうる。
【０１０１】
抗体
本発明に係る１の態様においては、本発明に係る剤は抗体でありうる。さらに、又はあるいは、本発明に係る標的は抗体でありうる。
抗体は、本発明に係る物質での免疫化による又はファージディスプレイライブラリーを用いることによるように、標準の技術により作出されうる。
【０１０２】
本発明の目的のために、上記用語「抗体」は、そうでないと特異化されない限り、非限定的に、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂ断片及びＦａｂ発現ライブラリーにより作出される断片を含む。上記断片は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、上記抗体の抗原結合部位を含む融合タンパク質及び他の合成タンパク質はもちろん、標的物質、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）及びＦ（ａｂ’）２断片に対するそれらの結合活性を保持する抗体全体の断片を含む。さらに、上記抗体及びその断片はヒト化された抗体でありうる。中和抗体、すなわち、上記物質ポリペプチドの生物学的活性を阻害するものは、診断及び治療に特に好ましい。
【０１０３】
ポリクローナル抗体が所望される場合、選択される哺乳類（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ等）は本発明に係る同定された剤及び／又は物質から得られうるエピトープを有する免疫原性ポリペプチドで免疫される。宿主種に因り、さまざまな補助剤が免疫学的応答を増大させるのに使用されうる。上記補助剤は、非限定的に、水酸化アルミニウムの如きＦｒｅｕｎｄ’ｓ鉱物ゲル、及びリゾレシチン、ｐｌｕｒｏｎｉｃ多価アルコール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、カサガイヘモシアニン、及びジニトロフェノールの如き、界面活性物質を含む。ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｉ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）及びＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍは、精製された上記物質ポリペプチドが体系的な防御を刺激する目的のために免疫学的にさらされた個体に投与される場合、使用されうる潜在的に有用なヒト補助剤である。
【０１０４】
上記免疫された動物からの血清は知られた手順にしたがって、回収される及び処理される。本発明に係る同定された剤及び／又は物質から得られうるエピトープに対するポリクローナル抗体を含む血清が他の抗原に対する抗体を含む場合、上記ポリクローナル抗体は免疫アフィニティークロマトグラフィーにより精製されうる。ポリクローナル抗血清を作出する及びプロセスする技術は本分野において知られる。上記抗体が作出されうるために、本発明は動物又はヒトにおける免疫原としての使用のための他のポリペプチドにハプテン化された本発明に係るポリペプチド又はその断片を提供する。
【０１０５】
本発明に係る同定された剤及び／又は物質から得られうるエピトープに対して方向付けられたモノクローナル抗体も当業者により容易に作出されうる。ハイブリドーマによりモノクローナル抗体を作成するための一般的な方法は周知である。不死の抗体産生細胞系は細胞融合により、及びＢリンパ球の腫瘍形成性ＤＮＡでの直接の形質転換又はＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスでのトランスフェクションの如き他の技術により作出されうる。軌道エピトープに対して作出されたモノクローナル抗体のパネルはさまざまな特性について、すなわち、アイソタイプ及びエピトープアフィニティーについてスクリーニングされうる。
【０１０６】
本発明に係る物質及び／又は同定された剤に対するモノクローナル抗体は培養中の連続した細胞系による抗体分子の産生を提供するいかなる技術を用いても調製されうる。これらは、非限定的に、もともとＫｏｅｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）により示されたハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ  （１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２；Ｃｏｔｅ  ｅｔ  ａｌ（１９８３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８０：２０２６−２０３０）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ  Ｉｎｃ．  ｐｐ  ７７−９６）を含む。さらに、「キメラ抗体」の作出のために開発された技術、好適な抗原特異性及び生物学的活性を有する分子を得るためのマウス抗体遺伝子のヒト抗体遺伝子へのスプライシングが使用されうる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９８４）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８１：６８５１−６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；  Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）。あるいは、単鎖抗体の産生について示された技術（米国特許第４，９４６，７７９号）は物質特異的単鎖抗体を産出するのに適合されうる。
【０１０７】
本発明に係る同定された剤及び／又は物質から得られうるエピトープに対して方向付けられる抗体、モノクローナル及びポリクローナルの両方は診断において特に有用であり、そして中和するものは受動免疫治療において有用である。モノクローナル抗体は特に、抗イディオタイプ抗体を作出するのに使用されうる。抗イディオタイプ抗体は、それに対する保護が所望される上記物質及び／又は剤の「内部のイメージ」を有する免疫グロブリンである。抗イディオタイプ抗体を作出する技術は本分野において知られる。これらの抗イディオタイプ抗体は治療においても有用でありうる。
【０１０８】
抗体はリンパ球集団内でｉｎ  ｖｉｖｏ産生を誘導することにより又はＯｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ（１９８９，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８６：３８３３−３８３７）、及びＷｉｎｔｅｒ  Ｇ  及びＭｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９９１；Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９）中に開示されるように、組換え免疫グロブリンライブラリー又は高い特異的結合試薬のパネルをスクリーニングすることによっても作出されうる。
【０１０９】
上記物質についての特異的結合部位を含む抗体断片も作出されうる。例えば、上記断片は、非限定的に、上記抗体分子のペプシン消化により産出されうるＦ（ａｂ’）２断片及び上記Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより作出されうるＦａｂ断片を含む。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーは所望される特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の速い及び簡単な同定を可能にするために構築されうる（Ｈｕｓｅ  ＷＤ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２７５−１２８１）。
【０１１０】
化学合成法
典型的に本発明に係る剤は化学合成技術により調製されるであろう。
本発明に係る剤又はその異形、ホモログ、誘導体、断片又はミメティックは上記剤を全体的に又は部分的に合成する化学方法を用いて産出されうる。例えば、ペプチドは固相技術により合成され、レジンから切断され、そして予備の高性能液体クロマトグラフィーにより精製されうる（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ  （１９８３）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，  ＷＨ  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ＮＹ）。合成ペプチドの組成物はアミノ酸分析又はシークエンシングにより確認されうる（例えば、ｔｈｅ  Ｅｄｍａｎ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ；  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  ｓｕｐｒａ）。
【０１１１】
上記剤又はその異形、ホモログ、誘導体、断片又はミメティックの直接の合成はさまざまな固相技術を用いて行われうる（Ｒｏｂｅｒｇｅ  ＪＹ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：２０２−２０４）及び、自動化された合成が、例えば、製造業者により提供される教示にしたがってＡＢＩ  ４３  １  Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて達成されうる。さらに、上記剤又はそのいずれかの部分を含むアミノ酸配列は、例えば、異形ＩＫＣａチャネルの如き異形剤を作出するために、直接合成の間に変換され及び／又は他のサブユニット又はそのいずれかの部分からの配列と化学方法を用いて混合されうる。
【０１１２】
本発明の代替の態様においては、上記剤又はその異形、ホモログ、誘導体、断片又はミメティックのコード配列は、本分野において周知の化学的方法を用いて、全体的に又は部分的に合成されうる（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ  ＭＨ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  Ｓｙｍｐ  Ｓｅｒ  ２１５−２３，  Ｈｏｒｍ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ（１９８０）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  Ｓｙｍｐ  Ｓｅｒ  ２２５−２３２を参照のこと）。
【０１１３】
ミメティック
本明細書中で使用されるとき、上記用語「ミメティック」は、非限定的に、ペプチド、ポリペプチド、抗体又は同じ定性的な活性又は機知の剤としての影響を有する他の有機化学物質を含むいずれかの化学物質に関連する。すなわち、ミメティックはＩＫＣａチャネルの開放時間の可能性を増大させることのできる（１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン（ＥＢＩＯ）の如き）機知の剤の機能的相当物でありうる、又はそれは海綿体平滑筋組織において見られるＩＫＣａチャネルの機能的相当物でありうる。
【０１１４】
誘導体
本明細書中で使用されるとき上記用語「誘導体」又は「誘導された」は剤の化学的改変を含む。上記化学的改変の実例は水素のハロ基、アルキル基、アシル基又はアミノ基による置換であろう。
【０１１５】
化学的改変
本発明の１の態様においては、上記剤は化学的に改変された剤でありうる。
本発明に係る剤の化学的改変は上記剤及び上記標的の間の水素結合相互作用、電荷相互作用、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用又は双極性相互作用を高め又は減少しうる。
１の局面においては、上記同定された剤は他の化合物の開発のためのモデル（例えば、鋳型）としてはたらきうる。
【０１１６】
組換え方法
典型的に、本発明に係る剤は組換えＤＮＡ技術により調製される。
１の態様においては、好ましくは上記剤はＩＫＣａチャネルである。
好ましくは、上記ＩＫＣａチャネルは組換えＤＮＡ技術により調製される。
好ましくは、本発明に係るＩＫＣａチャネルは配列ＩＤ番号１中に設定されるアミノ酸配列又はその異形、ホモログ、誘導体又は断片を含む。
【０１１７】
アミノ酸配列
本明細書中で使用されるとき、上記用語「アミノ酸配列」はペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質配列又はその部分をいう。
本明細書中で使用されるとき、上記用語「アミノ酸配列」は上記用語「ポリペプチド」及び／又は上記用語「タンパク質」と同義語である。いくつかの場合には、上記用語「アミノ酸配列」は上記用語「ペプチド」と同義語である。いくつかの場合には、上記用語「アミノ酸配列」は上記用語「タンパク質」と同義語である。
上記アミノ酸配列は好適な源から単離され調製されうる、又はそれは合成的に作出されうる又はそれは組換えＤＮＡ技術の使用により調製されうる。
【０１１８】
１の局面においては、本発明はＩＫＣａチャネル活性を調節するために上記アミノ酸配列に影響することのできる１以上の剤及び／又はその誘導体の同定のための分析において標的としてはたらくことのできるアミノ酸配列を提供する。
好ましくは、上記標的はＩＫＣａチャネルである。
【０１１９】
好ましくは、上記ＩＫＣａチャネルは単離されたＩＫＣａチャネル及び／又は精製された及び／又は非天然のＩＫＣａチャネルである。
本発明に係るＩＫＣａチャネルは実質的に単離された形態で存在しうる。上記ＩＫＣａチャネルは上記ＩＫＣａチャネルの意図された目的を妨害しないであろう担体又は希釈剤と混合され、そしてそれでもなお実質的に単離されたものとしてみなされうるということが理解されるであろう。
【０１２０】
本発明に係るＩＫＣａチャネルは実質的に精製された形態でも存在することができ、その場合には、それは一般的に、上記調製物における９０％超、例えば、９５％、９８％又は９９％のＩＫＣａチャネルが配列ＩＤ番号１又はその異形、ホモログ、誘導体又は断片を含むペプチドである、調製物における上記ＩＫＣａチャネルを含むであろう。
【０１２１】
アミノ酸配列の異形／ホモログ／誘導体
配列ＩＤ番号１中に設定される本発明に係る好ましいアミノ酸配列は、本発明に係るＩＫＣａチャネルから得られうる配列であるが、その異形又は誘導体はもちろん、いずれかの源及び、例えば、合成ペプチドから得られるホモログ配列をも含む。
したがって、本発明はそれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の異形、ホモログ又は誘導体に加えて、本明細書中に示されるアミノ酸配列の異形、ホモログ又は誘導体を包含する。
【０１２２】
本発明に係る内容において、ホモログ配列は、例えば、少なくとも本明細書中に列挙される配列の配列ＩＤ番号１中に設定されるアミノ酸配列にわたり、アミノ酸値で少なくとも７５、８５又は９０％同一、好ましくは少なくとも９５又は９８％同一であるアミノ酸配列を含むととられる。特に、ホモロジーは典型的に重要でない近隣の配列よりむしろＩＫＣａチャネル活性に重要であることが知られる配列のそれらの領域について考えられるべきである。ホモロジーは相似性（すなわち、相似の化学特性／機能を有するアミノ酸残基）の点でも考えられることができ、本発明の内容においては、配列同一性の点でホモロジーを表現することが好ましい。
【０１２３】
ホモロジー比較は肉眼により、又はより通常には容易に入手可能である配列比較プログラムの助けにより行われうる。これらの商業的に入手可能であるコンピュータープログラムは２以上の配列の間の％ホモロジーを計算しうる。
【０１２４】
％ホモロジーは連続した配列にわたり計算されうる、すなわち、１の配列が他の配列とともに並べられ、そして１の配列中のそれぞれのアミノ酸が一度に１残基、他の配列中の対応するアミノ酸と直接的に比較される。これは「隙間のない」並列と呼ばれる。典型的に上記隙間のない並列は比較的短い残基数にわたってのみ行われる。
【０１２５】
これは非常に単純な及び一貫した方法であるが、それは、例えば、全体の並列が行われるとき、そうでなければ同一の対の配列において１の挿入又は欠失が、続くアミノ酸残基を並列から除き、そのため％ホモロジーにおける大きな減少をもたらす可能性があるということを考慮にいれることができない。その結果として、ほとんどの配列比較方法は全体のホモロジースコアを不当に不利にすることなく、可能性のある挿入及び欠失を考慮に入れる最適化並列を作出するよう設計される。これは局所のホモロジーを最高化するようにする配列並列において「隙間」を挿入することにより達成される。
【０１２６】
しかしながら、これらのより複雑な方法は、同じ数の同一のアミノ酸について、できる限り少ない隙間を有する配列並列−２の比較される配列の間のより高い関連性を反映する−が多くの隙間で１以上のより高いスコアを達成するであろうように、上記並列において起こるそれぞれの隙間に「隙間ペナルティー」を割り当てる。隙間の存在について比較的高いコスト及び上記隙間におけるそれぞれの結果として起こる残基についてのより小さい点を課する「アフィン隙間コスト」が典型的に使用される。これは最も通常に使用される隙間加点システムである。高い隙間ペナルティーは、もちろん、より少ない隙間での最適化された並列を産出するであろう。ほとんどの並列プログラムは上記隙間ペナルティーを調節させることができる。しかしながら、配列比較に上記ソフトウェアを使用するときデフォルト値を使用することが好ましい。例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔ  ｐａｃｋａｇｅ  （以下を参照のこと）を使用するとき、アミノ酸配列についての上記デフォルト隙間ペナルティーは隙間について−１２及びそれぞれの延長について−４である。
【０１２７】
最高％ホモロジーの計算はそれゆえ、隙間ペナルティーを考慮した、最適な並列の作出をはじめに必要とする。上記並列を行うための好適なコンピュータープログラムは上記ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔ  ｐａｃｋａｇｅ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，  Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ  １９８４，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７）である。配列比較を行いうる他のソフトウェアの例は、非限定的に、ＢＬＡＳＴ  ｐａｃｋａｇｅ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  ｉｂｉｄ−Ｃｈａｐｔｅｒ  １８を参照のこと）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９０，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ４０３−４１０）及びＧＥＮＥＷＯＲＫＳの比較ツールセットを含む。ＢＬＡＳＴ及びＦＡＳＴＡの両方はオフライン及びオンライン検索で入手可能である（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  ｉｂｉｄ，  ｐａｇｅｓ  ７−５８〜７−６０を参照のこと）。しかしながら、上記ＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用することが好ましい。ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓと呼ばれる新しい道具もタンパク質及びヌクレオチド配列の比較のために入手可能である（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  １７４（２）：２４７−５０；ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  １７７（１）：１８７−８及びｔａｔｉａｎａ＠ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと）。
【０１２８】
最終的な％ホモロジーが同一性の点で計測されうるが、並列プロセスそのものは典型的に全か無かの対比較に基づいていない。そのかわりに、化学的相似性又は進化的距離に基づくそれぞれ対毎の比較にスコアを割り当てる、比べられた相似性スコアマトリックスが一般的に使用される。通常使用される上記マトリックスの例はＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス−上記ＢＬＡＳＴのプログラムセットについてのデフォルトマトリックス−である。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは一般的に公的なデフォルト値又は、供給される場合、慣習シンボル比較表のどちらかを用いる（詳細は使用者マニュアルを参照のこと）。上記ＧＣＧパッケージについて公的なデフォルト値、又は他のソフトウェアの場合には、ＢＬＯＳＵＭ６２の如きデフォルトマトリックスを使用することが好ましい。
【０１２９】
上記ソフトウェアが最適な並列を作出したら、％ホモロジー、好ましくは配列同一性を計算することが可能である。上記ソフトウェアは典型的に配列比較の部分としてこれを行い、そして多数の結果を産出する。
【０１３０】
本発明に係るアミノ酸配列に関連する上記用語「異形」又は「誘導体」は上記配列からの又はへの、１の（又はそれ以上の）アミノ酸の置換、変化、改変、置き換え、欠失又は追加を含み、そして生ずるアミノ酸配列がＩＫＣａチャネル活性を有する、好ましくは少なくとも本明細書中に示される配列列挙の配列ＩＤ番号１に設定されるアミノ酸配列と同じＩＫＣａチャネル活性を有することを提供する。
【０１３１】
本明細書中の配列列挙の配列ＩＤ番号１は本発明における使用のために改変されうる。典型的に、上記配列の結合特異性を維持する改変が行われる。アミノ酸置換は、例えば、上記改変された配列が必要とされるＩＫＣａチャネル活性を保持するように提供される１、２又は３〜１０又は２０置換行われうる。アミノ酸置換は非天然に起こるアナログの使用を含みうる。
【０１３２】
本発明に係るＩＫＣａチャネルは、サイレント変化を産出し、そして機能的に同等なＩＫＣａチャネルをもたらすアミノ酸残基の欠失、挿入又は置換をも有しうる。故意のアミノ酸置換は、上記ＩＫＣａチャネルの活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は両新媒性の性質における相似性の基礎に基づいて行われうる。例えば、負に荷電したアミノ酸はアスパラギン酸及びグルタミン酸を含む；正に荷電したアミノ酸はリジン及びアルギニンを含む；及び同様の親水性値を有する非荷電の極性頭基を伴うアミノ酸はロイシン、イソロイシン、ヴァリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン、及びチロシンを含む。
【０１３３】
保存された置換は、例えば、以下の表にしたがって行われうる。第二のカラム中の同じブロック内及び好ましくは第三のカラム中の同じ列内のアミノ酸は互いに置換されうる。
【０１３４】
【表１】
2004517046.tif 000007
【０１３５】
好ましくは、上記単離されたＩＫＣａチャネル及び／又は精製されたＩＫＣａチャネル及び／又は非天然のＩＫＣａチャネルは組換え技術の使用により調製される。
【０１３６】
ヌクレオチド配列
本明細書中で使用されるとき、上記用語「ヌクレオチド配列」は上記用語「ポリヌクレオチド」と同義語である。
上記ヌクレオチド配列はゲノムの若しくは合成の又は組換え起源のＤＮＡ又はＲＮＡでありうる。上記ヌクレオチド配列はセンス若しくはアンチセンス鎖又はそれらの組み合わせを示す二重鎖又は単鎖でありうる。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記ヌクレオチド配列はＤＮＡである。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記ヌクレオチド配列は組換えＤＮＡ技術（例えば、組換えＤＮＡ）の使用により調製される。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記ヌクレオチド配列はＤＮＡである。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記ヌクレオチド配列は天然に起こる形態と同じでありうる。
【０１３７】
１の局面においては、本発明はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる１以上の剤及び／又はその誘導体の同定のための、（酵母ツーハイブリッド分析の如き）分析において標的としてはたらくことのできる物質をコードするヌクレオチド配列を提供する。
本発明の１の局面においては、上記ヌクレオチド配列はＩＫＣａチャネルをコードする。
【０１３８】
多くの異なるヌクレオチド配列は遺伝的コードの縮重の結果として、本発明に係る同じＩＫＣａチャネルをコードしうるということが当業者により理解されるであろう。さらに、当業者は、日常の技術を用いて、本発明に係るＩＫＣａチャネルが発現されるべき特定の宿主有機体のコドン利用を反映するように、本発明に係るヌクレオチド配列によりコードされるＩＫＣａチャネルに影響を与えないヌクレオチド置換を作出しうるということが理解されるべきである。本発明に係る配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列に関連して、上記用語「異形」、「ホモログ」又は「誘導体」は、上記配列からの又はへの１（又はそれ以上の）核酸の置換、変化、改変、置き換え、欠失又は追加を含み、生ずるＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列はＩＫＣａチャネル活性を有する、好ましくは、少なくとも本発明に係る配列列挙の配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列によりコードされるのと同じＩＫＣａチャネル活性を有することを提供する。
【０１３９】
上記に示されるように、配列ホモロジーに関連して、本明細書中に列挙される配列中に見られる配列に、好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％のホモロジーがある。より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％のホモロジーがある。ヌクレオチドホモロジー比較は上記に示されるように行われうる。好ましい配列比較プログラムは上記に示されるＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムである。上記デフォルト加点マトリックスはそれぞれの同一のヌクレオチドに１０及びそれぞれのミスマッチに−９の適合値を有する。上記デフォルトの隙間作出ペナルティーは−５０であり、そして上記デフォルトの隙間伸長ペナルティーはそれぞれのヌクレオチドについて−３である。
【０１４０】
本発明は本明細書中に示される配列又はその異形、断片若しくは誘導体に、又は上記いずれかの相補鎖に選択的にハイブリダイズすることのできるヌクレオチド配列をも含む。ヌクレオチド配列は好ましくは少なくとも１５ヌクレオチドの長さ、より好ましくは少なくとも２０、３０、４０又は５０ヌクレオチドの長さである。
【０１４１】
ハイブリダイゼーション
本明細書中で使用される用語「ハイブリダイゼーション」は、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）技術中に行われる増幅のプロセスに加えて、「核酸の鎖が塩基対形成をとおして相補鎖と結合するプロセス」を含むべきである。
【０１４２】
本明細書中に示されるヌクレオチド配列に又はその相補鎖に、選択的にハイブリダイズすることのできる本発明に係るヌクレオチド配列は一般的に、少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５又は３０、例えば、少なくとも４０、６０又は１００以上の隣接するヌクレオチドの領域にわたる本明細書中に示される対応する相補的ヌクレオチド配列に少なくとも７５％、好ましくは８５％又は９０％及びより好ましくは少なくとも９５％又は９８％相似であろう。本発明に係る好ましいヌクレオチド配列は本発明に係る配列列挙の配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列に相似である、好ましくは本発明に係る配列列挙の配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列に少なくとも８０又は９０％及びより好ましくは少なくとも９５％相似である、領域を含むであろう。
【０１４３】
上記用語「選択的にハイブリダイズすることのできる」は、ヌクレオチド配列が、プローブとして使用されるとき、本発明に係る標的ヌクレオチド配列がバックグラウンドより顕著に高い値でプローブにハイブリダイズすることが見られる条件下で使用されることを意味する。上記バックグラウンドハイブリダイゼーションは、例えば、スクリーニングされるｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡライブラリー中に存在する他のヌクレオチド配列のために起こりうる。この事件においては、バックグラウンドは、標的ＤＮＡについて観察される特異的相互作用の強さの１０倍未満、好ましくは１００倍未満である、プローブ及び上記ライブラリーの非特異的ＤＮＡ構成員の間の相互作用により作出されるシグナルの値を示唆する。相互作用の強さは、例えば、例えば、３２Ｐで、上記プローブを放射性ラベル化することにより計測されうる。
【０１４４】
ハイブリダイゼーション条件は、Ｂｅｒｇｅｒ及びＫｉｍｍｅｌ（１９８７，  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ  １５２，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）中に教示されるように、核酸結合複合体の融解温度（Ｔｍ）に基づき、そして以下に説明される定義された「厳重さ」を付与する。
【０１４５】
最高の厳重さ（ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ）は典型的に約Ｔｍ−５℃（上記プローブのＴｍの５℃下）で；高い厳重さはＴｍの約５℃〜１０℃下で；中間の厳重さはＴｍの約１０℃〜２０℃下で；及び低い厳重さはＴｍの約２０℃〜２５℃下で起こる。当業者により理解されるであろうように、中間の（又は低い）厳重なハイブリダイゼーションは相似の又は関連したポリヌクレオチド配列を同定する又は検出するのに使用されうる一方で、最高の厳重なハイブリダイゼーションは同一のヌクレオチド配列を同定する又は検出するのに使用されうる。
【０１４６】
好ましい局面においては、本発明は厳重な条件下（例えば、６５℃及び０．１×ＳＳＣ｛１×ＳＳＣ＝０．１５Ｍ  ＮａＣｌ，  ０．０１５Ｍ  Ｎａ３  Ｃｉｔｒａｔｅ  ｐＨ７．０｝）で本発明に係るヌクレオチド配列にハイブリダイズすることのできるヌクレオチド配列を含む。本発明に係るヌクレオチド配列は二重鎖であるとき、二本鎖の両方の鎖は、個々に又は組み合わせで、本発明により含まれる。上記ヌクレオチド配列が単鎖であるとき、そのヌクレオチド配列の相補的配列も本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。
【０１４７】
本発明に係る配列に１００％相似でないが、本発明の範囲内に入るヌクレオチド配列はいくつかの方法で得られうる。本明細書中に示される配列の他の異形は、例えば、ある範囲の源から作出されるＤＮＡライブラリーをプローブすることにより得られうる。さらに、他のウイルスの／菌の又は細胞のホモログ、特に哺乳類細胞（例えば、ラット、マウス、ウシ及び霊長類の細胞）中に見られる細胞のホモログは得られることができ、そして一般的に上記ホモログ及びその断片は本明細書中に列挙される配列中に見られる配列に選択的にハイブリダイズすることができるであろう。上記配列は他の動物種から作出されるｃＤＮＡライブラリー又はゲノムＤＮＡライブラリーをプローブすること、及び中間〜高い厳重さの条件下で本発明に係る配列列挙の配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列の全部又は部分を含むプローブで上記ライブラリーをプローブすることにより得られうる。同様の考慮は本発明に係るアミノ酸及び／又はヌクレオチド配列の種のホモログ及び対立異形を得ることに適用する。
【０１４８】
異形及び鎖／種のホモログは、本発明に係る配列内の保存されたアミノ酸配列をコードする異形及びホモログ内の標的配列に設計されたプライマーを使用するであろう縮重ＰＣＲを用いても得られうる。保存された配列は、例えば、いくつかの異形／ホモログからのアミノ酸配列を並列することにより、予想されうる。配列並列は本分野で知られるコンピューターソフトウェアを用いて行われうる。例えば、上記ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＰｉｌｅＵｐプログラムは広く使用される。縮重ＰＣＲ中で使用されるプライマーは１以上の縮重位置を含むであろう、そして既知の配列に対する単一の配列プライマーでクローニング配列について使用されるものよりも低い厳重さの条件で使用されるであろう。
【０１４９】
あるいは、上記ヌクレオチド配列は、本発明に係る配列列挙の配列ＩＤ番号２中に設定されるヌクレオチド配列の如き、特徴化された配列の位置特異的突然変異により得られうる。このことは、例えば、サイレントコドン変化が、上記ヌクレオチド配列が発現される特定の宿主細胞のためにコドンの選択を最適化するために配列に必要とされるとき、有用でありうる。他の配列変化は制限酵素認識部位を導入するために、又は上記ヌクレオチド配列によりコードされるＩＫＣａチャネルのＩＫＣａチャネル活性を変化させるために所望されうる。
【０１５０】
本発明に係るヌクレオチド配列はプライマー、例えば、ＰＣＲプライマー、代替増幅反応のためのプライマー、例えば放射活性又は非放射活性値を用いる慣用の方法により露出させるラベルでラベルされた、プローブを作出するために使用されうる、又は上記ヌクレオチド配列はベクター内にクローニングされうる。上記プライマー、プローブ及び他の断片は少なくとも１５、好ましくは少なくとも２０、例えば、少なくとも２５、３０又は４０ヌクレオチドの長さであろう、そして本明細書中で使用される本発明に係る上記用語ヌクレオチド配列により含まれる。
【０１５１】
本発明にしたがうＤＮＡポリヌクレオチド及びプローブの如き、ヌクレオチド配列は組換えで、合成で又は当業者に入手可能ないずれかの方法により作出されうる。それらは標準の技術によりクローニングされうる。
【０１５２】
一般的に、プライマーは、一度に１のヌクレオチドの上記所望の核酸配列の段階的な製造を含む、合成方法により作出されるであろう。自動化された技術を用いるこれを達成するための技術は本分野において容易に入手可能である。
【０１５３】
より長いヌクレオチド配列は一般的に組換え方法を用いて、例えば、ＰＣＲ（ポリメラーゼ鎖反応）クローニング技術を用いて、作出されるであろう。これは、クローニングされることが所望される標的化配列の領域の側面に位置する一対のプライマー（例えば、約１５〜３０ヌクレオチドの）を作出し、上記プライマーを動物又はヒト細胞から得られたｍＲＮＡ又はｃＤＮＡと接触させ、上記所望の領域の増幅をもたらす条件下でポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）を行い、（例えば、アガロースゲル上の反応混合物を精製することにより）増幅された断片を単離する及び増幅されたＤＮＡを回復させることを含むであろう。上記プライマーは増幅されたＤＮＡが好適なクローニングベクター内へクローニングされうるように、好適な制限酵素認識部位を含むよう設計されうる。
【０１５４】
遺伝的コードの固有の縮重のために、実質的に同じ又は機能的に同等のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列は上記ＩＫＣａチャネルをクローニングする及び発現するのに使用されうる。当業者により理解されるであろうように、いくつかの発現系について、非天然に起こるコドンを有するヌクレオチド配列をコードする−上記ＩＫＣａチャネルを作出することが有用でありうる。特定の原核生物の又は真核生物の宿主（Ｍｕｒｒａｙ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ  （１９８９）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：４７７−５０８）により好まれるコドンは、例えば、上記ＩＫＣａチャネル発現の速度を増大させるために又は天然に起こる配列から作出される転写産物よりも長い半減期の如き、所望の特性を有する組換えＲＮＡ転写産物を作出させるために選択されうる。
【０１５５】
ベクター
本発明の１の態様においては、本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルは直接的に個体与されうる。
本発明の他の態様においては、本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列を含むベクターは個体に投与される。
好ましくは、上記組換えＩＫＣａチャネルは遺伝的ベクターを用いて標的部位に調製される及び／又はデリバリーされる。
【０１５６】
本分野において周知のように、ベクターは１の環境から他への実在の移動をさせる又は促進する道具である。本発明にしたがって、及び例として、組換えＤＮＡ技術において使用されるいくつかのベクターは、本発明に係るヌクレオチド配列を含むベクターを増幅させる及び／又は本発明に係るヌクレオチド配列によりコードされる本発明に係るタンパク質を発現する目的のために、（ヘテロ接合ｃＤＮＡ部分の如き、ヘテロ接合のＤＮＡ部分の如き）ＤＮＡの部分の如き、実在を宿主及び／又は標的細胞内へ移動させる。組換えＤＮＡ技術中で使用されるベクターの例は、非限定的に、プラスミド、染色体、人工染色体又はウイルスを含む。
【０１５７】
上記用語「ベクター」は発現ベクター及び／又は形質転換ベクターを含む。
上記用語「発現ベクター」はｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ発現のできる構築物を意味する。
上記用語「形質転換ベクター」は１の種から他へ移動されることのできる構築物を意味する。
【０１５８】
「裸のＤＮＡ」
ＭＥＤの如き、ＳＤの治療における使用のための本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列を含むベクターは、好ましくは宿主細胞ゲノムに相似の側面に位置する配列をさらに含む、「裸の核酸構築物」として直接的に投与されうる。
本明細書中に使用されるとき、上記用語「裸のＤＮＡ」は、その産生を制御するための短いプロモーター領域を伴う、本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列を含むプラスミドをいう。上記プラスミドはいかなるデリバリー媒体中でも運ばれないので、それは「裸の」ＤＮＡと呼ばれる。上記ＤＮＡプラスミドが真核細胞の如き、宿主細胞へ入るとき、（本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルの如き）それがコードするタンパク質は上記細胞内で転写される及び翻訳される。
【０１５９】
非ウイルスデリバリー
あるいは、本発明に係るヌクレオチド配列又は本発明に係る剤を含むベクターは、トランスフェクション、形質転換、エレクトロポーレーション及びｂｉｏｌｉｓｔｉｃ形質転換の如き、本分野において知られるさまざまな非ウイルス技術を用いて好適な宿主細胞内へ導入されうる。
本明細書中で使用されるとき、上記用語「トランスフェクション」は遺伝子を標的哺乳類細胞にデリバリーする非ウイルスベクターを用いるプロセスをいう。
【０１６０】
典型的なトランスフェクション方法はエレクトロポーレーション、ＤＮＡ  ｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓ、脂質仲介トランスフェクション、小型化ＤＮＡ仲介トランスフェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、陽イオン性剤仲介、陽イオン性界面両親媒性物質（ＣＦＡｓ）（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９６  １４；５５６）、スペルミン、陽イオン性脂質又はポリリジンの如き多価陽イオン、１，２，−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）−コレステロール複合体（Ｗｏｌｆｆ  ａｎｄ  Ｔｒｕｂｅｔｓｋｏｙ  １９９８  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １６：４２１）及びそれらの組み合わせを含む。
【０１６１】
哺乳類細胞による裸の核酸構築物の取り込みは、例えば、トランスフェクション剤の使用を含むもののような、いくつかの既知のトランスフェクション技術により高められる。これらの剤の例は陽イオン性剤（例えば、リン酸カルシウム及びＤＥＡＥ−デキストラン）及びリポフェクタント（例えば、リポフェクタム（商標）及びトランスフェクタム（商標））を含む。典型的に、核酸構築物は組成物を作出するようトランスフェクション剤と混合される。
【０１６２】
ウイルスベクター
あるいは、本発明に係る剤又は本発明に係るヌクレオチド配列を含むベクターは、例えば、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス及びアデノウイルスの如き、組換えウイルスベクターでの感染の如き、本分野において知られるさまざまなウイルス技術を用いて好適な宿主細胞内へ導入されうる。
好ましくは、上記ベクターは組換えウイルスベクターである。好適な組換えウイルスベクターは、非限定的に、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、水痘ウイルスベクター又はパルヴォウイルスベクターを含む（Ｋｅｓｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０（１０）：１６１９−３２を参照のこと）。ウイルスベクターの場合には、上記ＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列のデリバリーは標的細胞のウイルス感染により仲介される。
【０１６３】
標的化ベクター
上記用語「標的化ベクター」はその、細胞に感染する／トランスフェクトする／形質導入する又は宿主及び／又は標的細胞内で発現される能力が、上記宿主有機体内のいくつかの細胞型、通常共通の又は同様の表現型を有する細胞に制限されるベクターをいう。
【０１６４】
複製ベクター
本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列は組換え複製可能なベクター内に導入されうる。上記ベクターは適合性のある宿主細胞内のヌクレオチド配列を複製するのに使用されうる。したがって、本発明の１の態様においては、本発明は本発明に係るヌクレオチド配列を複製可能なベクターに導入し、上記ベクターを適合性のある宿主細胞内へ導入し、及び上記宿主細胞を上記ベクターの複製をもたらす条件下で生育させることによる、本発明に係る上記ＩＫＣａチャネルの作出方法を提供する。上記ベクターは上記宿主細胞から回復されうる。
【０１６５】
発現ベクター
好ましくは、ベクター内に挿入される本発明に係る剤又は本発明に係るヌクレオチド配列は上記宿主細胞による本発明に係るＩＫＣａチャネルのコード配列の如き、コード配列の発現を提供することができる制御配列に実施可能に結合される、すなわち、上記ベクターは発現ベクターである。本発明に係る剤又は宿主組換え細胞により作出されるＩＫＣａチャネルは上記配列及び／又は使用されるベクターに因り細胞内に分泌されうる又は含まれうる。当業者により理解されるであろうように、本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルコード配列を含む発現ベクターは、特定の原核の又は真核の細胞膜をとおして本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルコード配列の分泌を方向付けるシグナル配列で設計されうる。
【０１６６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの発現
本発明に係るベクターは本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルの発現を提供するために、以下に示されるように好適な宿主細胞及び又は標的細胞内に形質転換され又はトランスフェクションされうる。
このプロセスは発現ベクターで形質転換した宿主細胞及び／又は標的細胞を本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルをコードするコード配列のベクターによる発現を提供するような条件下で培養し、及び場合により本発明に係る発現された剤又はＩＫＣａチャネルを回復させることを含みうる。上記ベクターは、例えば、複製起源、場合により前記ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーター及び場合によりプロモーターのレギュレーターを伴うプラスミド又はウイルスベクターでありうる。上記ベクターは１以上の選択可能なマーカー遺伝子、例えば、菌のプラスミドの場合にはアンピシリン耐性遺伝子又は哺乳類のベクターにはネオマイシン耐性遺伝子を含みうる。本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルの発現は、それらが継続的に産出されるように構成的で、又は発現を開始する刺激を必要として、誘導可能でありうる。誘導可能な発現の場合には、本発明に係る剤又はＩＫＣａチャネルの産出は、例えば、培養培地への誘導剤物質、例えば、デキサメタゾン又はＩＰＴＧの添加により、必要とされるとき開始されうる。
【０１６７】
融合タンパク質
本発明に係るＩＫＣａチャネル又は剤は、本発明に係る剤又は上記ＩＫＣａチャネルの抽出及び精製及び／又は個体へのデリバリーにおいて役立てるために及び／又はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤のためのスクリーニングの発展を促進するために、融合タンパク質として発現されうる。融合タンパク質の相手の例はグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６×Ｈｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合及び／又は転写活性化ドメイン）及びβ−ガラクトシダーゼを含む。融合タンパク質配列の除去を許すために、上記融合タンパク質相手及び目的のタンパク質配列の間にタンパク質分解の切断部位を含むことも便利でありうる。好ましくは、上記融合タンパク質は上記標的の活性を妨げないであろう。
【０１６８】
上記融合タンパク質は本発明に係る物質に融合された抗原又は抗原決定因子を含みうる。この態様においては、上記融合タンパク質は免疫系の一般化された刺激を提供する意味で、補助剤としてはたらきうる物質を含む非天然に起こる融合タンパク質でありうる。上記抗原又は抗原決定因子は上記物質のアミノ又はカルボキシル末端のどちらかに結合されうる。
【０１６９】
本発明の他の態様において、上記アミノ酸配列は融合タンパク質をコードするヘテロ接合配列に結合されうる。例えば、上記物質の活性に影響することのできる剤のためのペプチドライブラリーのスクリーニングのためには、商業的に入手可能な抗体により認識されるヘテロ接合エピトープを発現するキメラ物質をコードすることが有用でありうる。
【０１７０】
宿主細胞
広くさまざまな宿主細胞が本発明に係る剤又は本発明に係るＩＫＣａチャネルの如き−上記剤をコードするヌクレオチド配列の発現に使用されうる。これらの細胞は原核の及び真核の宿主細胞でありうる。好適な宿主細胞はＥ．  ｃｏｌｉの如き菌、酵母、繊維状真菌、昆虫細胞、哺乳類細胞、典型的に不死の、例えば、マウス、ＣＨＯ、ヒト及びサル細胞系及びそれらの誘導体を含む。
【０１７１】
本発明の範囲内の好適な発現宿主の例は（ＥＰ−Ａ−０１８４４３８及びＥＰ−Ａ−０２８４６０３中に示されるものの如き）Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種及びＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種の如き真菌；（ＥＰ−Ａ−０１３４０４８及びＥＰ−Ａ−０２５３４５５中に示されるものの如き）Ｂａｃｉｌｌｕｓ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種の如き菌；及び（ＥＰ−Ａ−００９６４３０及びＥＰ−Ａ−０３０１６７０中に示されるものの如き）Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ種及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種の如き酵母である。例として、典型的な発現宿主はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．  ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．  ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから選ばれうる。
酵母、真菌及び植物宿主細胞の如き−好適な宿主細胞の使用は、本発明に係る組換え発現産物に対する最適な生物学的活性を確実にするために必要とされうるように、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、切除、ラピデーション及びチロシン、セリン又はスレオニンのリン酸化）を提供しうる。
【０１７２】
好ましい宿主細胞は発現産物をプロセスして好適な成熟ポリペプチドを作出することができる。プロセッシングの例は、非限定的に、グリコシル化、ユビキチン化、ジスルフィド結合形成及び一般的な翻訳後修飾を含む。
【０１７３】
医薬組成物
本発明は治療的に有効な量の本発明に係る剤及び医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤（それらの組み合わせを含む）を含む医薬組成物をも提供する。
【０１７４】
上記医薬組成物はヒト及び獣医学の医薬におけるヒト又は動物の使用のためであることができ、そして典型的に１以上の医薬として許容される希釈剤、担体又は賦形剤を含むであろう。治療的な使用のための許容される担体又は希釈剤は医薬分野において周知である、そして、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  （Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｉｔ．  １９８５）中に示される。医薬の担体、賦形剤又は希釈剤の選択は意図される投与経路及び標準の医薬の実施に関して選択されうる。上記医薬組成物は好適な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤として−又は担体、賦形剤又は希釈剤に加えて−含みうる。
【０１７５】
保存剤、安定化剤、色素及び香味剤でさえも上記医薬組成物中に提供されうる。保存剤の例はベンゾエートナトリウム、ソルビン酸及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルを含む。抗酸化剤及び懸濁剤も使用されうる。
【０１７６】
異なるデリバリー系に因り異なる組成物／調剤の必要性がありうる。例として、本発明に係る医薬組成物はミニポンプを用いて又は、例えば、吸入若しくは摂取可能な溶液のための鼻の噴霧又はエーロゾとして粘膜経路により又は上記組成物が注入可能な形態により調合される非経口で、デリバリーのために、例えば、静脈内の、筋内の又は皮下の経路により、デリバリーされるよう調合されうる。あるいは、上記調剤は両方の経路によりデリバリーされるよう設計されうる。
【０１７７】
上記剤が胃腸の粘膜をとおして粘膜的にデリバリーされる場合、胃腸腔をとおる移動の間安定のままであることができるべきである：例えば、それはタンパク質分解に耐性であり、酸性ｐＨに安定であり、そして胆汁の界面活性効果に耐性であるべきである。
【０１７８】
好適な場合には、上記医薬組成物は吸入により、坐剤又はペッサリーの形態で、ローション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で局所的に、皮膚パッチの使用により、デンプン又はラクトースの如き賦形剤を含む錠剤の形態で又は単一で若しくは賦形剤と混合してカプセル又は小卵中で、又は香味又は着色剤を含むエリキシル剤、溶液又は懸濁物の形態で経口で投与されることができる、又はそれらは非経口で、例えば、静脈内に、筋内に又は皮下に注入されうる。非経口投与のために、上記組成物は、上記溶液を血液に等張にするために他の物質、例えば、十分な塩又は単糖を含みうる滅菌水性溶液の形態でもっともよく使用されうる。頬の又は舌下の投与ために、上記組成物は慣用の様式で調合されうる錠剤又は舐剤の形態で投与されうる。
【０１７９】
いくつかの態様のために、本発明に係る剤はシクロデキストリンと共にも使用されうる。シクロデキストリンは薬物分子と封入体及び非封入体複合体を形成することが知られる。薬物−シクロデキストリン複合体の形成は薬物分子の溶解性、崩壊速度、バイオアベイラビリティー及び／又は安定性特性を改変しうる。薬物−シクロデキストリン複合体は一般的にほとんどの投与形態及び投与経路に有用である。上記薬物との直接の複合体形成の代わりに、上記シクロデキストリンは補助の添加物として、例えば、担体、希釈剤又は可溶化剤として、使用されうる。アルファ−、ベータ−及びガンマ−シクロデキストリンは最もよく使用され、そして好適な例はＷＯ−Ａ−９１／１１１７２、ＷＯ−Ａ−９４／０２５１８及びＷＯ−Ａ−９８／５５１４８中に示される。
【０１８０】
好ましい態様においては、本発明に係る剤は（経口で、頬で、舌下でのように）体系的に、より好ましくは経口でデリバリーされる。
したがって、好ましくは、上記剤は経口デリバリーに好適な形態である。
いくつかの態様のために、好ましくは上記剤は−使用におけるとき−中枢神経系にはたらかない。
いくつかの態様のために、好ましくは上記剤は−使用におけるとき−末梢神経系ではたらく。
【０１８１】
投与
上記用語「投与される」はウイルス又は非ウイルス技術によるデリバリーを含む。ウイルスデリバリー機構は、非限定的に、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、及びバキュロウイルスベクターを含む。非ウイルスデリバリー機構は脂質仲介トランスフェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、陽イオン性界面両親媒性物質（ＣＦＡｓ）及びそれらの組み合わせを含む。
【０１８２】
本発明に係る剤は単一で投与されうるが、一般的に−例えば、上記剤が意図される投与経路及び標準の医薬の実施に関連して選択される好適な医薬賦形剤、希釈剤又は担体と混合されるとき−医薬組成物として投与されるであろう。
例えば、上記剤は、即時の、遅延した、調節された、維持された、拍動性の、又は制御された放出適用のために、香味又は着色剤を含みうる錠剤、カプセル、小卵、エリキシル剤、溶液又は懸濁物の形態で投与（例えば、経口で又は局所的に）されうる。
上記錠剤は微晶質セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、カルシウムカーボネート、二塩基性リン酸カルシウム及びグリシンの如き賦形剤、デンプン（好ましくはトウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、デンプングリコレートナトリウム、クロスカルメルロースナトリウム及びいくつかの複合体シリカの如き崩壊剤、及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン及びアカシアの如き粒状化結合剤を含みうる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリルベヘネート及びタルクの如き潤滑剤が含まれうる。
【０１８３】
同様の型の固体組成物はゼラチンカプセル中の充填剤としても使用されうる。この点において好ましい賦形剤はラクトース、デンプン、セルロース、乳糖又は高分子量ポリエチレングリコールを含む。水性懸濁物及び／又はエリキシル剤について、上記剤はさまざまな甘味又は香味剤、着色料又は色素と、乳化及び／又は懸濁剤と、及び水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリンの如き希釈剤と、並びにそれらの組み合わせと混合されうる。
【０１８４】
上記投与（デリバリー）経路は、非限定的に、１以上の：
経口の（例えば、錠剤、カプセルとして又は摂取可能な溶液として）、局所の、粘膜の（例えば、吸入のための鼻の噴霧又はエーロゾルとして）、鼻の、非経口の（例えば、注入可能な形態により）、胃腸の、脊髄内の、腹腔内の、筋内の、静脈内の、卵巣内の、眼内の、皮内の、頭蓋内の、気管内の、膣内の、脳室内の、大脳内の、皮下の、眼の（硝子体内の又はカメラ内の、を含む）、経皮の、直腸の、頬の、陰茎を介して、膣の、硬膜外の、舌下の
を含む。
【０１８５】
上記剤の全てが同じ経路により投与されることを必要としないことが理解されるべきである。そのように、上記組成物が１以上の活性成分を含む場合、それらの成分は異なる経路により投与されうる。
本発明に係る剤が非経口で投与される場合、上記投与の例は１以上の：静脈内、動脈内、腹腔内、包膜内、室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋内又は皮下で上記剤を投与すること；及び／又は融合技術を使用することによることを含む。
【０１８６】
非経口投与のために、上記剤は他の物質、例えば、上記溶液を血液と等張にするために十分な塩又はグルコースを含みうる滅菌水性溶液の形態で最もよく使用される。上記水性溶液は、必要な場合は、（好ましくは３〜９のｐＨに）好適に緩衝されるべきである。滅菌条件下での好適な非経口調剤の調製は当業者に周知の標準の医薬技術により容易に達成される。
【０１８７】
示されるように、本発明に係る剤は鼻内に又は吸入により投与されることができ、そして、好適な駆出剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ（商標））又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ（商標））の如きヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素又は他の好適な気体の使用を伴って、加圧容器、ポンプ、スプレイ又は噴霧器からの乾燥粉末吸入剤又はエーロゾル噴霧提示の形態で便利にデリバリーされる。加圧されたエーロゾルの場合には、用量単位は計測された量をデリバリーする弁を提供することにより決定されうる。上記加圧容器、ポンプ、スプレイ又は噴霧器は、追加的に潤滑剤、例えば、トリオール酸ソルビタンを含みうる、例えば、溶媒としてエタノール及び駆出剤の混合物を用いて、上記活性化合物の溶液又は懸濁物を含みうる。吸入器又は注入器における使用のための（例えば、ゼラチンから作られる）カプセル及びカートリッジは上記剤及びラクトース又はデンプンの如き好適な粉末基礎の粉末混合物を含むよう調合されうる。
【０１８８】
あるいは、本発明に係る剤は坐剤又はペッサリーの形態で投与されうる、又はそれはジェル、ヒドロジェル、ローション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で局所的に適用されうる。本発明に係る剤は、例えば、皮膚パッチの使用により、皮膚に又は経皮にも投与されうる。それらは肺の又は直腸の経路によっても投与されうる。それらは眼の経路によっても投与されうる。眼の使用のために、上記化合物は、場合により、塩化ベンジルアルコニウムの如き保存剤と共に、等張の、ｐＨを調節された、滅菌塩水中の微粉にした懸濁物として又は好ましくは、等張の、ｐＨを調節された、滅菌塩水中の溶液として調合されうる。あるいは、それらはワセリンの如き軟膏中に調合されうる。
【０１８９】
皮膚への局所的適用のために、本発明に係る剤は、例えば、１以上の以下の：鉱物油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋及び水との混合物中に懸濁された又は溶解された、上記活性化合物を含む好適な軟膏として調合されうる。あるいは、それは、例えば、１以上の以下の：鉱物油、一ステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、液体パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステル蝋、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水の混合物中に懸濁された又は溶解された、好適なローション又はクリームとして調合されうる。
【０１９０】
本発明に係る組成物は直接の注入により投与されうる。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記剤は経口で投与される。
いくつかの適用のために、好ましくは、上記剤は局所的に投与される。
【０１９１】
用量値
典型的に、臨床医は個々の患者に最も好適であろう実際の用量を決定するであろう。特定の患者のための特定の用量値及び投与頻度はさまざまであることができ、そして使用される特定の化合物の活性、代謝安定性及びその化合物の活動の長さ、年齢、体重、一般的な健康、性別、食事、投与の様式及び時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重篤さ、及び個人の受けている治療を含むさまざまな因子に因るであろう。本発明に係る剤及び／又は医薬組成物は、１日当たり１回又は２回の如き、１日当たり１〜１０回の投与計画にしたがって投与されうる。
ヒト患者への経口及び非経口投与のために、上記剤の毎日の用量値は単一又は別々の用量でありうる。
【０１９２】
必要に応じて、上記剤は、０．１〜１０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／体重ｋｇの如き、０．０１〜３０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与されうる。普通、本明細書中に挙げた用量は平均の場合の例示である。もちろん、より高い又はより低い用量範囲が有効である個々の例がありうる。
【０１９３】
調合
本発明に係る剤は、本分野において知られる技術を用いることにより、１以上の好適な担体、希釈剤又は賦形剤と混合することによるように、医薬組成物に調合されうる。
以下はいくつかの調合の非限定的な例を示す。
【０１９４】
調合１：錠剤は以下の成分を用いて調製される：
【０１９５】
2004517046.tif 000008
【０１９６】
上記化合物は配合され、そしてそれぞれが６６５ｍｇの重さの錠剤を形成するように圧縮される。
【０１９７】
調合２：静脈内調剤は以下のように調製されうる：
【０１９８】
剤                            １００ｍｇ
等張塩水                      １，０００ｍｌ
【０１９９】
個体
本明細書中で使用されるとき、上記用語「個体」は脊椎動物、特に哺乳類の種の構成員をいう。上記用語は、非限定的に、家畜動物、娯楽動物、霊長類及びヒトを含む。
【０２００】
治療
治療に関する本明細書中の全ての引用文献は治療的、緩和的及び予防的処置を含むということが理解されるべきである。
【０２０１】
医薬の組み合わせ
一般的に、上記剤は１以上の他の医薬として活性な剤と共に使用されうる。上記他の剤はときどき補助剤であるといわれる。補助剤の例は（フォスフォジエステラーゼ５型阻害剤、例えば、Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ又は一酸化窒素供与体又は一酸化窒素前駆体、例えば、Ｌ−アルギニンの如き）細胞内ｃＧＭＰの増強剤及び／又は中枢で作用する医薬（例えば、アポモルフィン又はメラノタンＩＩの如き、ドパミン受容体又はメラノコルチン受容体アゴニスト）を含む。医薬としてのアポモルフィンの使用についての教示はＵＳ−Ａ−５９４５１１７中に見られうる。その特定の書類中では、アポモルフィンは舌下でデリバリーされる。さらに、又はあるいは、上記剤は１以上の：ＰＤＥ５阻害剤（例えば、シルデナフィル、ヴァルデナフィル（Ｂａｙｅｒ  ＢＡ  ３８−９４５６）及びＩＣ３５１（Ｃｉａｌｉｓ、Ｉｃｏｓ  Ｌｉｌｌｙ））、１以上の一酸化窒素供与体（例えば、ＮＭＩ−９２１）、１以上のドパミン受容体アゴニスト（例えば、アポモルフィン、Ｕｐｒｉｍａ、ｌｘｓｅｎｅ）、１以上のメラノコルチン受容体アゴニスト（例えば、Ｍｅｌａｎｏｔａｎ  ＩＩ又はＰＴ１４）、
【０２０２】
１以上のカリウムチャネル開放剤（例えば、ＫＡＴＰチャネル開放剤（例えば、ミノキシジル、ニコランジル）及び／又はカルシウム活性化カリウムチャネル開放剤（例えば、ＢＭＳ−２０４３５２））、１以上の１−アドレナリン作動性受容体アンタゴニスト（例えば、フェントラミン、Ｖａｓｏｆｅｍ、Ｖａｓｏｍａｘ）、１以上のＶＩＰ受容体アゴニスト又はＶＩＰアナログ（例えば、Ｒｏ−１２５−１５５３）又はＶＩＰ断片、１以上のＶＩＰの組み合わせを伴うα−アドレナリン作動性受容体アンタゴニスト（例えば、Ｉｎｖｉｃｏｒｐ、Ａｖｉｐｔａｄｉｌ）、１以上のα２−アドレナリン作動性受容体アンタゴニスト（例えば、ヨヒムビン）、１以上のエストロゲン、エストロゲン及びメドロキシプロゲステロン又は酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）又はエストロゲン及びメチルテストステロンホルモン置換療法剤（例えば、ＨＲＴ、特にＰｒｅｍａｒｉｎ、Ｃｅｎｅｓｔｉｎ、Ｏｅｓｔｒｏｆｅｍｉｎａｌ、Ｅｑｕｉｎ、Ｅｓｔｒａｃｅ、Ｅｓｔｒｏｆｅｍ、Ｅｌｌｅｓｔｅ  Ｓｏｌｏ、Ｅｓｔｒｉｎｇ、Ｅａｓｔｒａｄｅｒｍ、Ｅａｓｔｒａｄｅｒｍ  ＴＴＳ、Ｅａｓｔｒａｄｅｒｍ  Ｍａｔｒｉｘ、Ｄｅｒｍｅｓｔｒｉｌ、Ｐｒｅｍｐｈａｓｅ、Ｐｒｅｍｐｒｏ、Ｐｒｅｍｐａｋ、Ｐｒｅｍｉｑｕｅ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ  ＨＳ、Ｔｉｂｏｌｏｎｅ）、１以上のテストステロン置換剤（ＤＨＥＡ（デヒドロアンドロステンジオン）、テストステロン（Ｔｏｓｔｒｅｌｌｅ）又はテストステロン埋め込み（Ｏｒｇａｎｏｎ）を含む）、１以上のテストステロン／エストラジオール剤、１以上のエストロゲンアゴニスト、１以上のセロトニン受容体アゴニスト又はアンタゴニスト（例えば、５ＨＴ１Ａ、５ＨＴ２Ｃ、５ＨＴ２Ａ及び５ＨＴ３受容体アゴニスト及びアンタゴニスト；ＷＯ２０００／２８９９３中に示されるように）、１以上のプロスタノイド受容体アゴニスト（例えば、Ｍｕｓｅ、アルプロスタジル、ミソプロストール）、１以上のプリン作動性受容体アゴニスト、１以上の抗うつ剤（例えば、ブプロピオン（Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ）、ミンタザピン、ネファゾドン）と共に使用されうる。
【０２０３】
ＩＣ３５１の構造は：
【化６】
2004517046.tif 000009
である。
【０２０４】
より詳細には、本発明は、１以上の以下の補助の活性剤と共の、本明細書中に概略される男性の性機能障害（より特には、男性の勃起機能障害）の治療のための本発明に係る化合物の組み合わせをさらに含む。上記組み合わせは有機的、神経性及び／又は心因性の起源の勃起機能障害用治療を提供する。上記組み合わせは性的欲求活動低下障害、性的覚醒障害、無オルガズム及び性的疼痛障害の治療をする能力をも有しうる。
【０２０５】
したがって、本発明に係るさらなる局面は本発明に係る化合物及び１以上の以下の補助の活性剤を含む（同時の、別々の又は連続した投与のための）医薬の組み合わせを提供する：
【０２０６】
１）１以上の天然に起こる又は合成のプロスタグランジン又はそのエステル。本明細書中における使用のための好適なプロスタグランジンは、アルプロスタジル、プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ０、１３，１４−ジヒドロプロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ２、エプロスチノール、全て本明細書中に援用される、ＷＯ−０００３３８２５及び／又は２０００年３月１４日発行のＵＳ  ６，０３７，３４６中に示されるものを含む、天然の合成の及び半合成のプロスタグランジン及びその誘導体、ＰＧＥ０、ＰＧＥ１、ＰＧＡ１、ＰＧＢ１、ＰＧＦ１α、１９−ヒドロキシＰＧＡ１、１９−ヒドロキシ−ＰＧＢ１、ＰＧＥ２、ＰＧＢ２、１９−ヒドロキシ−ＰＧＡ２、１９−ヒドロキシ−ＰＧＢ２、ＰＧＥ３α、カルボプロストトロメタミンジノプロスト、トロメタミン、ジノプロストン、リポプロスト、ジェメプロスト、メテノプロスト、サルプロストゥン、チアプロスト及びモキシシレートの如き化合物を含む；
【０２０７】
２）１以上のα−アドレナリン作動性受容体又はα−受容体としても知られるα−アドレナリン作動性受容体アンタゴニスト化合物又はα−ブロッカー。本明細書中における使用のための好適な化合物は：１９９８年６月１４日公開のＰＣＴ出願ＷＯ  ９９／３０６９７中に示されるα−アドレナリン作動性受容体ブロッカーを含み、α−アドレナリン作動性受容体に関連するその開示は本明細書中に援用される、そして選択的α１−アドレナリン作動性受容体又はα２−アドレナリン作動性受容体ブロッカー及び非選択的アドレナリン作動性受容体ブロッカーを含み、好適なα１−アドレナリン作動性受容体ブロッカーは：フェントラミン、フェントラミンメシレート、トラゾドン、アルフゾシン、インドラミン、ナフトピジル、タムスロシン、ダピプラゾール、フェノキシベンザミン、イダゾキサン、エファラキサン、ヨヒムビン、ラウウォルファアルカロイド、Ｒｅｃｏｒｄａｔｉ  １５／２７３９、ＳＮＡＰ  １０６９、ＳＮＡＰ  ５０８９、ＲＳ１７０５３、ＳＬ８９．０５９１、ドキサゾシン、テラゾシン、アバノキル及びプラゾシンを含み；米国特許第６，０３７，３４６号［２０００年３月１４日］からのα２−ブロッカーブロッカー、ジベナルニン、トラゾリン、トリマゾシン及びジベナルニン；それぞれが本明細書中に援用される、米国特許第４，１８８，３９０号；第４，０２６，８９４号；第３，５１１，８３６号；第４，３１５，００７号；第３，５２７，７６１号；第３，９９７，６６６号；第２，５０３，０５９号；第４，７０３，０６３号；第３，３８１，００９号；第４，２５２，７２１号及び第２，５９９，０００号中に示されるα−アドレナリン作動性受容体；α２−アドレナリン作動性受容体ブロッカーは：クロニジン、パパベリン、塩酸パパベリンを含み、場合によりピルキサミンの如きｃａｒｉｏｔｏｎｉｃ剤の存在下で；
【０２０８】
３）１以上のＮＯ−供与体（ＮＯ−アゴニスト）化合物。本明細書中における使用のための好適なＮＯ−供与体化合物は一、二又は三硝酸塩の如き有機硝酸塩又は（ニトログリセリンとしても知られる）グリセリル三硝酸塩、イソソルビド５−一硝酸塩、イソソルビド二硝酸塩、ペンタエリスリトール四硝酸塩、エリスリチル四硝酸塩、ニトロプルッシドナトリウム（ＳＮＰ）、３−モルフォリノシドノニミンモルシドミン、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシルリアミン（ＳＮＡＰ）Ｓ−ニトロソ−Ｎ−グルタチオン（ＳＮＯ−ＧＬＵ）、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、アミル硝酸塩、リンシドミン、リンシドミンクロロヒドレート、（ＳＩＮ−１）Ｓ−ニトロソ−Ｎ−システイン、ジアゼニウムジオレート、（ＮＯＮＯエート）、１，５−ペンタン二硝酸塩、Ｌ−アルギニン、ジンセン、ジズフィフラクトゥス、モルシドミン、Ｒｅ−２０４７、公開ＰＣＴ出願ＷＯ  ００１２０７５中に示される、ＮＭＩ−６７８−１１及びＮＭＩ−９３７の如き、ニトロシル化マキシシリト誘導体を含む、有機硝酸塩エステルを含む；
【０２０９】
４）１以上のカリウムチャネル開放剤又は調節剤。本明細書中における使用のために好適なカリウムチャネル開放剤／調節剤はニコランジル、クロモカリム、レヴクロマカリム、レマカリム、ピナシジル、クリアゾキシド、ミノキシジル、チャリブドトキシン、グリブリド、４−アミニピリジン、ＢａＣｌ２を含む；
【０２１０】
５）１以上のドパミン作動性剤、好ましくはアポモルフィン又は（ＷＯ−００２３０５６中に請求される）プラミペキソール及びロピリノール、（ＷＯ−００４０２２６中に請求される）ＰＮＵ９５６６６の如き、選択的Ｄ２、Ｄ３又はＤ２／Ｄ３アゴニスト；
【０２１１】
６）１以上の血管拡張剤。本明細書中における使用のために好適な血管拡張剤はニモデピン、ピナシジル、シクランデレート、イソクススプリン、クロロプルマジン、ハロペリドール、Ｒｅｃ  １５／２７３９、トラゾドンを含む；
【０２１２】
７）１以上のトロンボキサンＡ２アゴニスト；
８）１以上のＣＮＳ活性剤；
９）１以上の麦角アルカロイド；好適な麦角アルカロイドは２０００年３月１４日発行の米国特許第６，０３７，３４６中に示され、そしてアセテルガミン、ブラゼルゴリン、ブロメルグリド、シアネルゴリン、デロルゴトリル、ジサレルジン、マレイン酸エルゴノヴィン、酒石酸エルゴタミン、エチサレルジン、レルゴトリル、リセルジド、メスレルジン、メテルゴリン、メテルゴタミン、ニセルゴリン、ペルゴリド、プロピセルジド、プロテルグルド及びテルグリドを含む；
【０２１３】
１０）阻害剤又は中性エンドペプチダーゼのごとき、ナトリウム利尿因子、特に（心房性ナトリウム利尿ペプチドとしても知られる）心房性ナトリウム利尿因子、Ｂ型及びＣ型ナトリウム利尿因子の活動を調節する１以上の化合物；
【０２１４】
１１）エナプリルの如き、アンギオテンシン変換酵素を阻害する１以上の化合物、及びオマパトリラートの如きアンギオテンシン変換酵素及び中性エンドペプチダーゼの混合された阻害剤；
【０２１５】
１２）ロサルタンの如き１以上のアンギオテンシン受容体アンタゴニスト；
１３）１以上の、Ｌ−アルギニンの如き、ＮＯ−合成酵素の基質；
１４）１以上の、アムロジピンの如き、カルシウムチャネルブロッカー；
１５）１以上の、エンドセリン受容体のアンタゴニスト及びエンドセリン変換酵素の阻害剤；
１６）１以上の、スタチン（例えば、アトルヴァスタチン／Ｌｉｐｉｔｏｒ−商標）及びフィブレートの如きコレステロール低下剤；
１７）１以上の抗血小板及び抗血栓剤、例えば、ｔＰＡ、ｕＰＡ，ワルファリン、ヒルジン及び他のトロンビン阻害剤、ヘパリン、トロンボプラスチン活性化因子阻害剤；
【０２１６】
１８）１以上の、レズリンの如き、インスリン増感剤及びグリピジドの如き、低血糖剤；
１９）Ｌ−ＤＯＰＡ又はカルビドーパ；
２０）１以上の、ドネジピルの如き、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
２１）１以上のステロイドの又は非ステロイドの抗炎症剤；
２２）１以上の、エストロゲン受容体調節剤及び／又はエストロゲンアゴニスト及び／又はエストロゲンアンタゴニスト、好ましくはラロキシフェン又はラソフォキシフェン、（−）−シス−６−フェニル−５−［４−（２−ピローリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール及びその医薬として許容される塩であって、その調製はＷＯ  ９６／２１６５６中に詳述される；
【０２１７】
２３）１以上のＰＤＥ阻害剤、より特にはＰＤＥ２、３、４、５、７又は８阻害剤、好ましくはＰＤＥ２又はＰＤＥ５阻害剤及び最も好ましくはＰＤＥ５阻害剤（本明細書中後を参照のこと）であって、前記阻害剤は好ましくは１００ｎＭ未満のそれぞれの酵素に対するＩＣ５０を有する；
【０２１８】
２４）１以上のＮＰＹ（神経ペプチドＹ）阻害剤、より特にはＮＰＹ１又はＮＰＹ５阻害剤、好ましくはＮＰＹ１阻害剤；好ましくは前記ＮＰＹ阻害剤（ＮＰＹ１及びＮＰＹ５を含む）は１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する；
【０２１９】
２５）好ましくは３００ｎＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満のＮＥＰについてのＩＣ５０を有する、１以上のＮＥＰ阻害剤；
【０２２０】
２６）１以上の血管作用性小腸タンパク質（ＶＩＰ）、ＶＩＰミメティック、ＶＩＰアナログ、より特には１以上のＶＩＰ受容体サブタイプＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ又はＰＡＣＡＰ（下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ペプチド）、１以上のＶＩＰ受容体アゴニスト又はＶＩＰアナログ（例えば、Ｒｏ−１２５−１５５３）又はＶＩＰ断片、ＶＩＰの組み合わせを伴う１以上のα−アドレナリン作動性受容体アンタゴニスト（例えば、Ｉｎｖｉｃｏｒｐ、Ａｖｉｐｔａｄｉｌ）により仲介される；
【０２２１】
２７）１以上の、メラノタンＩＩ、ＰＴ−１４、ＰＴ−１４１又はＷＯ−０９９６４００２、ＷＯ−０００７４６７９、ＷＯ−０９９５５６７９、ＷＯ−００１０５４０１、ＷＯ−０００５８３６１、ＷＯ−００１１４８７９、ＷＯ−００１１３１１２、ＷＯ−０９９５４３５８中に請求される化合物の如き、メラノコルチン受容体アゴニスト又は調節剤又はメラノコルチンエンハンサー；
【０２２２】
２８）１以上のセロトニン受容体アゴニスト、アンタゴニスト又は調節剤、より特にはＷＯ−０９９０２１５９、ＷＯ−００００２５５０及び／又はＷＯ−０００２８９９３中に示されるものを含む、５ＨＴ１Ａ（ＶＭＬ６７０を含む）、５ＨＴ２Ａ、５ＨＴ２Ｃ、５ＨＴ３及び／又は５ＨＴ６受容体のアゴニスト、アンタゴニスト又は調節剤；
【０２２３】
２９）１以上のテストステロン置換剤（デヒドロアンドロステンジオンを含む）、テストステルノン（Ｔｏｓｔｒｅｌｌｅ）、ジヒドロテストステロン又はテストステロン埋め込み；
【０２２４】
３０）１以上のエストロゲン、エストロゲン及びメドロキシプロゲステロン又は酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）（すなわち、組み合わせとして）又はエストロゲン及びメチルテストステロンホルモン置換療法剤（例えば、ＨＲＴ、特にＰｒｅｍａｒｉｎ、Ｃｅｎｅｓｔｉｎ、Ｏｅｓｔｒｏｆｅｍｉｎａｌ、Ｅｑｕｉｎ、Ｅｓｔｒａｃｅ、Ｅｓｔｒｏｆｅｍ、Ｅｌｌｅｓｔｅ  Ｓｏｌｏ、Ｅｓｔｒｉｎｇ、Ｅａｓｔｒａｄｅｒｍ  ＴＴＳ、Ｅａｓｔｒａｄｅｒｍ  Ｍａｔｒｉｘ、Ｄｅｒｍｅｓｔｒｉｌ、Ｐｒｅｍｐｈａｓｅ、Ｐｒｅｅｍｐｒｏ、Ｐｒｅｍｐａｋ、Ｐｒｅｍｉｑｕｅ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ、Ｅｓｔｒａｔｅｓｔ  ＨＳ、Ｔｉｂｏｌｏｎｅ）；
【０２２５】
３１）１以上の、ブプロピオン、ＧＷ−３２０６５９の如き、ノルアドレナリン、ドパミン及び／又はセロトニンの輸送体の調節剤；
３２）１以上のプリン作動性受容体アゴニスト及び／又は調節剤；
３３）１以上の、ＷＯ−０９９６４００８中に示されるものを含む、ニューロキニン（ＮＫ）受容体アンタゴニスト；
３４）１以上のオピオイド受容体アゴニスト、アンタゴニスト又は調節剤、好ましくはＯＲＬ−１受容体についてのアゴニスト；
３５）１以上の、オキシトシン／ヴァソプレッシン受容体についてのアゴニスト又は調節剤、好ましくは選択的オキシトシンアゴニスト又は調節剤；
３６）１以上の、カンナビノイド受容体の調節剤。
【０２２６】
本発明にしたがって使用されうる特許及び特許出願中に含まれる化合物についての本明細書中の相互的な引用文献により、私たちは請求項（特に請求項（１））及び特定の実施例（それらの全てを本明細書中に援用する）に定義される治療的に活性化な化合物を意味する。
活性剤の組み合わせが投与される場合、それらは同時に、別々に又は連続して投与されうる。
【０２２７】
補助剤−ＰＤＥ５阻害剤
特定のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の好適さは標準の医薬の実施にしたがってその毒性、吸収、代謝、薬物速度論等を評価することを伴う、文献方法を用いるその有効性及び選択性の評価により容易に決定されうる。
【０２２８】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤についてのＩＣ５０値はＰＤＥ５分析を用いて決定されうる（本明細書中下を参照のこと）。
【０２２９】
好ましくは、本発明にしたがう医薬の組み合わせにおいて使用されるｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は上記ＰＤＥ５酵素に選択的である。好ましくは、それらはＰＤＥ３よりも、より好ましくはＰＤＥ３及びＰＤＥ４よりも選択的である、好ましくは、本発明に係るｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤はＰＤＥ３よりも及びより好ましくはＰＤＥ３及びＰＤＥ４よりも１００超、より好ましくは３００超の選択率を有する。
【０２３０】
選択率は当業者により容易に決定されうる。ＰＤＥ３及びＰＤＥ４酵素についてのＩＣ５０値は確立された文献方法を用いて決定されうる、Ｓ  Ａ  Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，  １９９８，  ｖｏｌ．  １５９，ｐａｇｅｓ  ２１６４−２１７１を参照のこと及び本明細書中後に詳述される。
【０２３１】
本発明にしたがう使用のために好適なｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は：
ＥＰ−Ａ−０４６３７５６中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０５２６００４中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９３／０６１０４中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９３／０７１４９中に開示されるアイソマーピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
【０２３２】
公開国際特許出願ＷＯ  ９３／１２０９５中に開示されるキナゾリン−４−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９４／０５６６１中に開示されるピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９４／００４５３中に開示されるプリン−６−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９８／４９１６６中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ９９／５４３３３中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５１中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；公開国際特許出願ＷＯ  ００／２４７４５中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−０９９５７５０中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−４−オン；公開国際出願ＷＯ  ９５／１９９７８中に開示される化合物；公開国際出願ＷＯ  ９９／２４４３３中に開示される化合物及び公開国際出願ＷＯ  ９３／０７１２４中に開示される化合物を含む。公開国際出願ＷＯ  ０１／２７１１２中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；公開国際出願ＷＯ  ０１／２７１１３中に開示されるピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＥＰ−Ａ−１０９２７１８中に開示される化合物及びＥＰ−Ａ−１０９２７１９中に開示される化合物。
【０２３３】
本発明にしたがう使用のためにさらに好適なＰＤＥ５阻害剤は：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルフォニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルフォニル］−４−メチルピペラジンとしても知られる（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６を参照のこと）；５−（２−エトキシ−５−モルフォリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４を参照のこと）；
【０２３４】
３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ９８／４９１６６を参照のこと）；３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ９９／５４３３３を参照のこと）；（＋）−３−エチル−５−［５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル］−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、３−エチル−５−｛５−［４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル］−２−（［（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］オキシ）ピリジン−３−イル｝−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる（ＷＯ  ９９／５４３３３を参照のこと）；
【０２３５】
５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−［２−メトキシエチル］−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、１−｛６−エトキシ−５−［３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル］−３−ピリジルスルフォニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られる（ＷＯ  ０１／２７１１３、実施例（８）を参照のこと）；５−［２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ０１／２７１１３、実施例（１５）を参照のこと）；５−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルフォニル）ピリジン−３−イル］−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ０１／２７１１３、実施例（６６）を参照のこと）；
【０２３６】
５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ０１／２７１１２、実施例（１２４）を参照のこと）；５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（ＷＯ  ０１／２７１１２、実施例（１３２）を参照のこと）；（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１）、すなわち、公開国際出願ＷＯ  ９５／１９９７８の実施例（１）、（３）、（７）及び（８）の化合物に加えて、実施例（７８）及び（９５）の化合物；
【０２３７】
２−［２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルフォニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（ヴァルデナフィル）、１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］−アズ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルフォニル］−４−エチルピペラジンとしても知られる、すなわち、公開国際出願ＷＯ  ９９／２４４３３の実施例（２０）、（１９）、（３３７）及び（３３６）の化合物；及び公開国際出願ＷＯ  ９３／０７１２４（ＥＩＳＡＩ）の実施例（１１）の化合物；及びＲｏｔｅｌｌａ  Ｄ  Ｐ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１２５７からの化合物（３）及び（１４）を含む。
【０２３８】
さらに他の好適なＰＤＥ５阻害剤は：
４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミオノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジン−カルボン酸、一ナトリウム塩；（＋）−シス−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペント−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン；シス−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；
【０２３９】
３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５（５−モルフォリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アルニノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸、一ナトリウム塩；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ第４５１６号（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ第５０５１号（Ｂａｙｅｒ）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ第５０６４号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ；ＷＯ  ９６／２６９４０を参照のこと）；Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ第５０６９号（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）；ＧＦ−１９６９６０（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）；Ｅ−８０１０及びＥ−４０１０（Ｅｉｓａｉ）；Ｂａｙ−３８−３０４５＆３８−９４５６（Ｂａｙｅｒ）及びＳｃｈ−５１８６６を含む。
【０２４０】
環状グアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）及び環状アデノシン３’，５’−一リン酸（ｃＡＭＰ）フォスフォジエステラーゼに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏのＰＤＥ阻害活性はそれらのＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要とされる化合物濃度）の計測により決定された。
【０２４１】
上記必要とされるＰＤＥ酵素は、主にＷ．Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ及びＭ．Ｍ．Ａｐｐｌｅｍａｎ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １９７１，  １０，  ３１１）の方法により、ヒト海綿体、ヒト及びウサギ血小板、ヒトの心室、ヒト骨格筋及びヒト及びイヌの網膜を含む、さまざまな源から単離された。特に、上記ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ５）及び上記ｃＧＭＰ阻害されたｃＡＭＰ  ＰＤＥ（ＰＤＥ３）はヒト海綿体又はヒト血小板から得られた；上記ｃＧＭＰ刺激されたＰＤＥ（ＰＤＥ２）はヒト海綿体及びヒト血小板から得られた；上記カルシウム／カルモジュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ（ＰＤＥ１）はヒト心室から；上記ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＰＤＥ４）はヒト骨格筋及びＳＦ９細胞において発現されたヒト組換え体から；及び光受容体ＰＤＥ（ＰＤＥ６）はヒト又はイヌの網膜から。フォスフォジエステラーゼ７〜１１はＳＦ９細胞内にトランスフェクトされた全長ヒト組換え体クローンから作出された。
【０２４２】
分析はＷ．Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １９７９，  １８，  ５２２５）の「バッチ」法の改変を用いて又は製品コードＴＲＫＱ７０９０／７１００の下でＡｍｅｒｓｈａｍ  ｐｌｃにより示されるプロトコールの改変を用いてＡＭＰ／ＧＭＰの直接の検出のためのシンチレーション近接分析を用いて行われうる。要約すると、ＰＤＥ阻害剤の効果はさまざまな阻害剤濃度及びＩＣ５０≒Ｋｉのように、低い基質（〜１／３Ｋｍの濃度でラベル化されていないものと［３Ｈ］−ラベル化されたものが３：１の割合のｃＧＭＰ又はｃＡＭＰ）の存在下で固定された量の酵素を分析することにより調査された。上記最終分析容量は分析緩衝液［２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４，５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，  １ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン］で１００μｌまでに作成された。反応を酵素で開始し、＜３０％の基質ターンオーバーを与えるように３０℃で３０〜６０分間インキュベートし、そして５０μｌのイットリウムシリカＳＰＡビーズ（３ｍＭの、ＰＤＥ９及び１１についてのそれぞれのラベル化していない環状ヌクレオチドを含む）で停止した。プレートを再度密閉し、そして２０分間振騰し、その後上記ビーズを暗所で３０分間静置させ、そしてその後ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダー（ＣＴ、メリデンのＰａｃｋａｒｄ）でカウントした。放射活性単位を阻害されていないコントロール（１００％）の％活性に変換し、阻害剤濃度に対してプロットし、そして阻害剤ＩＣ５０値を「Ｆｉｔ  Ｃｕｒｖｅ」マイクロソフトエクセルエクステンション（又は自家の相当物）を用いて得た。これらの試験からの結果は本発明に係る化合物はｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ５の阻害剤であることを示す。
【０２４３】
機能的活性はＳ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  １９９６，  １１８（ｓｕｐｐｌ．），ａｂｓｔｒａｃｔ  １５３Ｐ）又はＳ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ，  １９９８，  １５９，  ２１６４−２１７１）により示されるものに基づいた方法を用いて、本発明に係る化合物の前収縮されたウサギ海綿体組織片のニトロプルッシドナトリウム又は電場刺激誘導弛緩を高める能力を決定することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価されうる。
【０２４４】
化合物は、Ｔｒｉｇｏ−Ｒｏｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎｅｕｒｏｕｒｏｌ．ａｎｄ  Ｕｒｏｄｙｎ．，  １９９４，  １３，  ７１）により示されるものに基づいた方法を用いて、ｉ．ｖ．投与後、ニトロプルッシドナトリウムの海綿体内注入により誘導される陰茎の海綿体における圧の上昇を高めるそれらの能力を決定するために、麻酔されたイヌにおいてｉｎ  ｖｉｖｏでスクリーニングされうる。
【０２４５】
補助剤−ＮＥＰ阻害剤（Ｉ：ＮＥＰ）
ＮＥＰ  ＥＣ３．４．２４．１１（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２２９（１），  ２０６−２１０（１９８８））、エンケファリナーゼ又はネプリリシンとしても知られる、は亜鉛依存性中性エンドペプチダーゼである。この酵素はいくつかの生理活性オリゴペプチドの分解、疎水性アミノ酸残基のアミノ側のペプチド結合の切断に関与する（Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７中に概略される）。ＮＥＰにより代謝される、鍵の神経的に放出される生理活性剤又は神経ペプチドは、脳のナトリウム利尿ペプチド及びＣ型ナトリウム利尿ペプチド、ボムベシン、ブラジキニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、エンドセリン、エンケファリン、ニューロテンシン、Ｐ物質及び血管作用性小腸ペプチドに加えて、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＭＰ）の如きナトリウム利尿ペプチドを含む。これらのペプチドのいくつかは有効な血管拡張性及び神経ホルモン機能、利尿及びナトリウム利尿活性を有する又は行為効果を仲介する。ＮＥＰについての背景となる教示はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ３．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｏｍｉｍ／ｓｅａｒｃｈｏｍｉｍ．ｈｔｍ上のＶｉｃｔｏｒ  Ａ．  ＭｃＫｕｓｉｃｋ  ｅｔ  ａｌにより示されている。
【０２４６】
特定のＩ：ＮＥＰの好適さは標準の医薬の実施にしたがうその毒性、吸収、代謝、薬物速度論等の評価を伴う、文献方法を用いるその有効性及び選択性の評価により容易に決定されうる。
好ましくは、上記Ｉ：ＮＥＰはＡＣＥよりも３００超の選択性を有する。
【０２４７】
ＡＣＥについてのＩＣ５０値及び選択率はＥＰ１０９７７１９Ａ１中に示される方法により決定されうる。
【０２４８】
ＮＥＰ阻害剤の例は以下の総覧文献中に開示される及び議論される：Ｐａｔｈｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ４６（３），１９９８，１９１；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓｉｇｎ，  ２（５），１９９６，４４３；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，２１（３），１９９３，６７８；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｅｘｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  １０４／１，  １９９３，５４７；ＴｉＰＳ，１１，１９９０，２４５；Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，  ４５（１），１９９３，８７；Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓ．  Ｄｒｕｇｓ，２（１１），１９９３，１１７５；Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  Ｄｒｕｇｓ，  （１９９７），  １１３；Ｃｈｅｍｔｒａｃｔｓ，（１９９７），１０（１１），８０４；Ｚｉｎｃ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｄｉｓ．（１９９６），１０５；Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．，（１９９６），１４（２），１６６；Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，（１９９６），２７（４），５８１；Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．，（１９９４），１２（４），２７１；Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，（１９９５），２２（１），６３；Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．，（１９９１），９（３），２８５；Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ（１９９６），６（１１），１１４７。
【０２４９】
ＮＥＰ阻害剤のさらなる例は以下の文献中に開示される：ＥＰ−５０９４４２Ａ；ＵＳ−１９２４３５；ＵＳ−４９２９６４１；ＥＰ−５９９４４４Ｂ；ＵＳ−８８４６６４；ＥＰ−５４４６２０Ａ；ＵＳ−７９８６８４；Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．１９９３，３８２１；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９３，８８（４），１；ＥＰ−１３６８８３；ＪＰ−８５１３６５５４；ＵＳ−４７２２８１０；Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓｉｇｎ，  １９９６，２，４４３；ＥＰ−６４０５９４；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  １９９３，３６（１），８７；ＥＰ−７３８７１１−Ａ；ＪＰ−２７０９５７；ＣＡＳ＃１１５４０６−２３−０；ＤＥ−１９５１０５６６；ＤＥ−１９６３８０２０；ＥＰ−８３０８６３；ＪＰ−９８１０１５６５；
【０２５０】
ＥＰ−７３３６４２；ＷＯ  ９６１４２９３；ＪＰ−０８２４５６０９；ＪＰ−９６２４５６０９；ＷＯ  ９４１５９０８；ＪＰ  ０５０９２９４８；ＷＯ−９３０９１０１；ＷＯ−９１０９８４０；ＥＰ−５１９７３８；ＥＰ−６９００７０；Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９３），３６，２４２０：ＪＰ−９５１５７４５９；Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｓ．，  １９９６，  ６（１），６５；ＥＰ−Ａ−０２７４２３４；ＪＰ−８８１６５３５３；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．，  １９８９，１６４，５８；ＥＰ−６２９６２７−Ａ；ＵＳ−７７９７８；Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９３），４５；ＥＰ−３５８３９８−Ｂ。
【０２５１】
さらに、ＮＥＰ阻害剤の例はＥＰ１０９７７１９−Ａ１、特に、その中の化合物（ＦＸＩＩ）〜（ＦＸＩＩＩ）に開示される。
好ましいＮＥＰ阻害剤はＥＰ１０９７７１９−Ａ１の化合物（ＦＶ）〜（ＦＸＩ）及び（Ｆ５７）〜（Ｆ６５）である。
【０２５２】
補助剤−ＮＰＹ阻害剤（Ｉ：ＮＰＹ）
特定のＩ：ＮＰＹの好適さは標準の医薬の実施にしたがう、その毒性、吸収、代謝、薬物速度論等の評価を伴う文献方法を用いるその有効性及び選択性の評価により容易に決定されうる。
ＮＰＹ阻害剤を同定するための分析はＷＯ−Ａ−９８／５２８９０中に示される（９６ページ、２〜２８行を参照のこと）。
【０２５３】
バイオアベイラビリティー
好ましくは、本発明に係る剤（及び組み合わせ）は経口で生物学的に利用可能である。経口バイオアベイラビリティーは体系の循環に到達する経口投与された薬物の割合をいう。薬物の経口バイオアベイラビリティーを決定する因子は溶解、膜透過性及び代謝安定性である。典型的に、はじめにｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びその後ｉｎ  ｖｉｖｏの技術のスクリーニングの段階が経口バイオアベイラビリティーを決定するのに使用される。
【０２５４】
溶解、胃腸腔（ＧＩＴ）の水性内容物による上記薬物の溶解は上記ＧＩＴを真似る好適なｐＨで行われるｉｎ  ｖｉｔｒｏの溶解性実験から予想されうる。好ましくは、本発明に係る化合物は５０ｍｃｇ／ｍｌの最小の溶解性を有する。溶解性はＡｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．２３，  ３−２５，１９９７中に示されるような本分野において知られる標準の手順により決定されうる。
【０２５５】
膜透過性は上記ＧＩＴの細胞をとおる化合物の通過をいう。脂肪親和性はこれを予想することにおける鍵の特性であり、そして有機溶媒及び緩衝液を用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＬｏｇ  Ｄ７．４の計測により決定される。好ましくは、本発明に係る化合物は−２〜＋４の、より好ましくは−１〜＋２のＬｏｇ  Ｄ７．４を有する。
【０２５６】
上記ｌｏｇＤはＪ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９０，  ４２：１４４中に示されるような本分野において知られる標準の手順により決定されうる。
ｃａｃｏ−２の如き細胞単層膜分析は、いわゆるｃａｃｏ−２流と呼ばれる、ｐ−糖タンパク質の如き流出輸送体の存在下で好ましい膜透過性の予想を実質的に付加する。好ましくは、本発明に係る化合物は２×１０−６ｃｍｓ−１超、より好ましくは５×１０−６ｃｍｓ−１超のｃａｃｏ−２流を有する。上記ｃａｃｏ流値はＪ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ，  １９９０，  ７９，  ５９５−６００中に示されるような本分野において知られる標準の手順により決定されうる。
【０２５７】
代謝安定性は上記ＧＩＴ又は肝臓の吸収プロセスの間の化合物を代謝する能力：初回通過効果を扱う。ミクロソーム、肝細胞等の如き分析系は代謝負担の予報である。好ましくは実施例の化合物は０．５未満の肝臓抽出物で釣り合った分析系における代謝安定性を示す。分析系及びデータ処理の例はＣｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．  Ｄｅｖｅｌ．，  ２０１，  ４，  ３６−４４，  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．  Ｄｉｓｐ．，  ２０００，  ２８，  １５１８−１５２３中に示される。
【０２５８】
上記プロセスの相互作用のために、薬物がヒトにおいて経口で生物学的に利用可能であるというさらなる支持が動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ実験により得られうる。絶対的なバイオアベイラビリティーは上記化合物を経口経路により別々に又は混合物中で投与することによりこれらの研究において決定される。絶対的な決定（％吸収された）のために、上記静脈内経路も使用される。動物における経口バイオアベイラビリティーの評価の例はＤｒｕｇ  Ｍｅｔ．  Ｄｉｓｐ．，  ２００１，  ２９，  ８２−８７；  Ｊ．  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，  １９９７，  ４０，  ８２７−８２９，  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．  Ｄｉｓｐ．，  １９９９，  ２７，  ２２１−２２６中に見られうる。
【０２５９】
診断キット
本発明は（ｉ）生物学的液体及び組織におけるＩＫＣａチャネル活性の検出及び計測；及び／又は（ｉｉ）勃起組織におけるＩＫＣａチャネル活性の局在；及び／又は（ｉｉｉ）ＭＥＤの如き、ＳＤへの素因の検出のための、診断化合物又は診断方法又はキットをも含む。この点において、上記組成物又はキットは試験サンプルにおけるＩＫＣａチャネル標的の如き、標的の１以上の存在を−又は１以上の不在でさえも−示すことのできる実在を含むであろう。好ましくは、上記試験サンプルは男性の生殖器又はそれの又はそれからの分泌物から得られる。
例として、上記診断組成物は本明細書中に挙げられるヌクレオチド配列のいずれか１又はその異形、ホモログ、断片若しくは誘導体、あるいは上記ヌクレオチド配列のいずれか１の全部又は部分にハイブリダイズすることのできる配列を含みうる。
【０２６０】
プローブ
本発明に係る診断組成物及び／又はキットは、ＩＫＣａチャネルコード領域又は対立遺伝子の如き密接に関係した分子の如き、標的コード領域をコードする、ゲノム配列を含む、ポリヌクレオチド配列を検出することのできる核酸ハイブリダイゼーションの如きプローブ又はＰＣＲプローブを含みうる。上記プローブの特異性、すなわち、高く保存された、保存された又は保存されていない領域又はドメインに由来するかどうか、及び上記ハイブリダイゼーション又は増幅の厳格さ（高い、中間の又は低い）は上記プローブが天然に起こる標的コード配列のみ又は関連した配列を同定するかどうかを決定するであろう。関連した核酸配列の検出のためのプローブは標的ファミリーの構成員の保存された又は高く保存されたヌクレオチド領域から選ばれ、そして上記プローブは変性したプローブの集まりにおいて使用されうる。同一の核酸配列の検出のため又は最高の特異性が所望される場合には、核酸プローブは上記標的ポリヌクレオチドの保存されていないヌクレオチド領域又は独特の領域から選ばれる。本明細書中で使用されるとき、上記用語「保存されていないヌクレオチド領域」は本明細書中に開示される標的コード配列に独特である、及び関連したファミリーの構成員においては起こらないヌクレオチド領域をいう。
【０２６１】
ＵＳ−Ａ−４６８３１９５、ＵＳ−Ａ−４８００１９５及びＵＳ−Ａ−４９６５１８８中に示されるＰＣＲは標的配列に基づいたオリゴヌクレオチドのための追加の使用を提供する。上記オリゴマーは一般的に化学的に合成されるが、それらは酵素的に作出され又は組換え体の源から作出されうる。オリゴマーは一般的に、特定の遺伝子又は状態の同定のために最適化された条件下で使用される、２のヌクレオチド配列、１はセンスの向き（５’→３’）及び１はアンチセンス（３’←５’）を含む。上記同じ２のオリゴマー、オリゴマーの入れ子状のセット又は変性したオリゴマーの集まりでさえも密接に関連したＤＮＡ又はＲＮＡ配列の検出及び／又は定量のために、より厳格でない条件下で使用されうる。
【０２６２】
標的のための核酸配列は、上記内因性のゲノム配列をマッピングするために、以前に示されるようにハイブリダイゼーションプローブを作出するためにも使用されうる。上記配列は、周知の技術を用いて特定の染色体に又は上記染色体の特定の領域にマッピングされうる。これらは染色体スプレッドへのｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｃｉｔｙ）、流動−選別染色体調製物又はＹＡＣｓの如き人工の染色体構築物、菌の人工染色体（ＢＡＣｓ）、菌のＰＩ構築物又は単一の染色体ｃＤＮＡライブラリーを含む。
【０２６３】
染色体調製物のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション及び確立された染色体マーカーを用いる結合分析の如き、物理的なマッピング技術は遺伝的マップを伸長することにおいて貴重である。遺伝的マップの例はＳｃｉｅｎｃｅ（１９９５；２７０：４１０ｆ及び１９９４；２６５：１９８１ｆ）中に見られうる。特定のヒト染色体の番号又は腕が未知の場合でさえも、しばしば、他の哺乳類種の染色体についての遺伝子の位置は関連したマーカーを明らかにしうる。新規配列は物理的マッピングにより染色体腕、又はその部分に割り当てられうる。このことは位置上のクローニング又は他の遺伝子発見技術を用いて疾患遺伝子を調査する調査員に価値のある情報を提供する。疾患又は症候群が特定の遺伝子領域への遺伝的関連付けにより粗く位置づけられたら、その領域にマッピングされるどの配列もさらなる調査のために関連した又は制御遺伝子を示しうる。本発明に係るヌクレオチド配列は通常の、担体又は影響された個体の間の移動、侵入等のために染色体位置において相違を検出するのに使用されうる。
【０２６４】
分析方法
上記診断組成物及び／又は方法及び／又はキットは、非限定的に；競合及び非競合分析、放射性免疫分析、バイオルミネセンス及びケミルミネセンス分析、蛍光計分析、サンドウィッチ分析、免疫放射性分析、ドットブロット、ＥＬＩＳＡを含む酵素結合分析、マイクロタイタープレート、尿又は血液の速いモニターのための抗体で覆われた片又は計深棒、免疫組織化学及び免疫細胞化学を含む技術において使用されうる。例として、免疫組織化学キットは勃起組織及び／又は海綿体平滑筋細胞における、ＩＫＣａチャネル活性の局在のためにも使用されうる。この免疫組織化学キットは光学及び電子顕微鏡の両方を用いて組織切片及び培養細胞におけるＩＫＣａチャネルの局在を許し、それは調査及び臨床目的のために使用されうる。上記情報はＭＥＤの如き、ＳＤの検出及び／又は予防及び／又は治療における、診断の及び潜在的に治療的目的のために有用でありうる。それぞれのキットのために、上記分析の範囲、感受性、正確さ、信頼性、特異性及び再現性が確立される。内部分析及び相互分析の変化は置換又は活性の標準曲線について２０％、５０％及び８０％点で確立される。
【０２６５】
診断試験
疾患の診断のための基礎を提供するために、標的からの通常の又は標準の値が確立されるべきである。これは、例えば、本分野において周知の複合体形成のために好適な条件下で、標的に対する抗体で、動物又はヒトの、正常な患者からとられる体液又は細胞抽出物を混合することにより達成されうる。標準の複合体形成の量は、それを、既知の量の抗体が既知の濃度の精製された標的に混合された正のコントロールの希釈系列と比較することにより定量されうる。その後、正常のサンプルから得られる標準の値は潜在的にＳＤにより影響される患者からのサンプルから得られる値と比較されうる。標準及び患者の値の間の偏差は疾患状態の存在を確立する。
【０２６６】
標的そのもの又はその部分は診断の及び／又は予防の及び／又は治療の化合物について基礎を提供しうる。診断の目的のために、標的ポリヌクレオチド配列はＳＤが示唆されうる状態、障害又は疾患における遺伝子発現を検出する及び定量するのに使用されうる。
【０２６７】
上記標的をコードするポリヌクレオチド配列は上記標的の発現から生ずるＳＤの診断のために使用されうる。例えば、標的をコードするポリヌクレオチド配列は、標的の発現における異常さを検出するために、生検又は解剖又は生物学的液体からの組織のハイブリダイゼーション又はＰＣＲ分析において使用されうる。上記定性的又は定量的方法の形態はサザン又はノザン分析、ドットブロット又は他の膜に基づいた技術；ＰＣＲ技術；計深棒、ピン又はチップ技術；及びＥＬＩＳＡ又は他の複数のサンプルの正式の技術を含みうる。これらの技術の全ては本分野において周知であり、そして実際に多くの商業的に入手可能な診断キットの基礎である。
【０２６８】
上記分析は特定の治療的処置計画の有効性を評価するのに仕立てられることができ、そして動物研究において、臨床試験において又は個々の患者の治療をモニターすることにおいて使用されうる。疾患の診断の基礎を提供するために、標的の発現についての通常の又は標準の性質は確立されるべきである。これは、ハイブリダイゼーション又は増幅に好適な条件下で、標的又はその部分で、動物又はヒトの、正常な患者からとられた体液又は細胞抽出物を混合することにより達成される。標準のハイブリダイゼーションは正常な患者について得られる値を、既知の量の精製標的が使用される、同じ実験において行われる正のコントロールの希釈系列と比較することにより定量されうる。正常なサンプルから得られる標準の値は潜在的に上記標的をコードする配列の発現に関連する障害又は疾患により影響される患者からのサンプルから得られる値と比較されうる。標準及び患者の値の間の偏差は上記疾患状態の存在を確立する。疾患が確立される場合、存在する治療用剤は投与され、そして治療の性質又は値が作出されうる。最後に、上記分析は上記値が正常の又は標準のパターンに向かって進行するか又は退行するかを評価するために規定の基礎について繰り返されうる。連続的な治療の性質は何日又は何ヶ月の期間にわたる治療の有効性を示すのに使用されうる。
したがって、１の局面においては、本発明は、例えば、ＳＤ状態における標的の値を検出する及び定量するために診断的に使用されうる抗標的抗体を作出するための、標的ポリペプチド又はその異形、ホモログ、断片又は誘導体の使用に関連する。
【０２６９】
本発明にはさらに、正のコントロールとして使用されうる精製標的、及び抗標的抗体を含む細胞及び組織における標的の検出のための診断分析及びキットを提供する。上記抗体は、標的タンパク質の発現又は欠失又はその異形、ホモログ、断片若しくは誘導体の発現に関連した、疾患状態又は条件を検出するために溶液に基づいた、膜に基づいた又は組織に基づいた技術において使用されうる。
【０２７０】
上記診断組成物及び／又はこれらの実在を含むキットは勃起組織抽出物におけるＩＫＣａチャネル活性の速い、信頼性のある、感受性の、及び特定の計測及び位置づけのために使用されうる。いくつかの状況では、上記キットはＭＥＤの如き、ＳＤの存在を示しうる。
【０２７１】
レポーター
広くさまざまなレポーターが、便利で検出可能な（例えば、分光学による）シグナルを提供する好ましいレポーターと共に、本発明に係る分析方法（スクリーニングはもちろん）において使用されうる。例として、レポーター遺伝子は光吸収特性を変換する反応を触媒する酵素をコードしうる。
【０２７２】
レポーター分子の例は、非限定的に、β−ガラクトシダーゼ、転化酵素、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、β−グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼ及びグルコアミラーゼを含む。あるいは、放射性標識した又は蛍光タグ標識したヌクレオチドは発生中の転写産物に導入されることができ、それはその後オリゴヌクレオチドプローブに結合されるとき同定される。
【０２７３】
１の好ましい態様においては、上記レポーター分子の産出はβ−ガラクトシダーゼの如き、上記レポーター遺伝子産物の酵素活性により計測される。
【０２７４】
上記タンパク質に特異的なポリクローナル又はモノクローナル抗体を用いることによるような、上記標的の発現を検出する及び計測するためのさまざまなプロトコールは、本分野において知られる。例は酵素結合した免疫吸着剤分析（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫分析（ＲＩＡ）及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含む。上記標的上の２の非妨害性のエピトープに反応するモノクローナル抗体を利用する２の部位のモノクローナルに基づいた免疫分析が好ましいが、競合結合分析が使用されうる。これらの及び他の分析は、他の場でも、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９０，  Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓｔ  Ｐａｕｌ  ＭＮ）及びＭａｄｄｏｘ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ（１９８３，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １５  ８：１２１  １）中に示される。
【０２７５】
広くさまざまな標識及び結合技術が当業者により知られ、そしてさまざまな核酸及びアミノ酸分析において使用されうる。上記標的ポリヌクレオチド配列を検出するための標識化されたハイブリダイゼーション又はＰＣＲプローブを作出する方法はオリゴ標識化、ニック翻訳、エンド標識化又は標識化されたヌクレオチドを用いるＰＣＲ増幅を含む。あるいは、上記標的コード配列又はその一部はｍＲＮＡプローブの産出のためにベクター内へクローニングされうる。上記ベクターは本分野において知られ、商業的に入手可能であり、そしてＴ７、Ｔ３又はＳＰ６の如き好適なＲＮＡポリメラーゼ及び標識化ヌクレオチドの添加によりｉｎ  ｖｉｔｒｏでＲＮＡプローブを合成するのに使用されうる。
【０２７６】
Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＮＪ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）、Ｐｒｏｍｅｇａ（ＷＩ、マディソン）、及びＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ（ＯＨ、クリーブランド）の如きいくつかの会社はこれらの手順のための商業的なキット及びプロトコールを供給する。好適なレポーター分子又は標識は、基質、共因子、阻害剤、磁気性粒子等はもちろん、それらの放射性核種、酵素、蛍光、化学ルミネセンス又は色素産生性剤を含む。上記標識の使用を教示する特許はＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９及びＵＳ−Ａ−４３６６２４１を含む。また、組換え免疫グロブリンはＵＳ−Ａ−４８１６５６７中に示されるように産出されうる。
【０２７７】
特定の分子の発現を定量する追加の方法は放射性標識（Ｍｅｌｂｙ  ＰＣ  ｅｔ  ａｌ  １９９３  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １５９：２３５−４４）又はビオチニル化（Ｄｕｐｌａａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ  １９９３  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２２９−３６）ヌクレオチド、コントロール核酸の共増幅、及び実験結果が補間される標準曲線を含む。複数のサンプルの定量は、目的のオリゴマーがさまざまな希釈物中に示され、そして分光光度計測の又は熱量測定の応答が速い定量を与えるＥＬＩＳＡ形式における分析を行うことにより能率を上げられうる。
【０２７８】
マーカー遺伝子発現の存在／不在は、目的の遺伝子も存在することを示すが、その存在及び発現が確認されるべきである。例えば、上記ヌクレオチド配列がマーカー遺伝子配列内に挿入される場合、同じものを含む組換え細胞はマーカー遺伝子機能の不在により同定されうる。あるいは、マーカー遺伝子は単一のプロモーターの制御の下で標的コード配列と並列に置かれうる。誘導又は選択に応答した上記マーカー遺伝子の発現は通常上記標的の発現をも示す。
【０２７９】
あるいは、上記標的のコード配列を含み、そして上記標的コード領域を発現する宿主細胞は当業者に知られるさまざまな手順により同定されうる。これらの手順は、非限定的に、上記核酸又はタンパク質の検出及び／又は定量のために膜に基づいた、溶液に基づいた又はチップに基づいた技術を含む、ＤＮＡ−ＤＮＡ又はＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーション及びタンパク質バイオアッセイ又は免疫分析技術を含む。
【０２８０】
スクリーニング
アミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列の如き−１以上の好適な標的はさまざまな薬物スクリーニング技術のいずれかにおいてＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するために使用されうる。上記試験において使用される標的は溶液中に遊離し、固体支持に付着し、細胞表面上に提示され、又は細胞内に局在しうる。標的活性の廃止又は上記標的及び試験される剤の間の結合複合体の形成が計測されうる。
【０２８１】
薬物スクリーニングの技術はＧｅｙｓｅｎ，１９８４年９月１３日公開の欧州特許出願８４／０３５６４中に示される方法に基づきうる。要約すると、多数の異なる小ペプチド試験化合物がプラスティックピン又はいくつかの他の表面の如き、固体基質上で合成される。上記ペプチド試験化合物は好適な標的又はその断片と反応し、そして洗浄される。結合した実在はその後−本分野において周知の好適に適合された方法によるように−検出される。精製標的は薬物スクリーニング技術における使用のために直接プレートにコーティングされうる。あるいは、非中和抗体は上記ペプチドを捕獲し、そして固体支持上にそれを固定するために使用されうる。
【０２８２】
本発明は、特異的に標的に結合することのできる中和抗体が標的に結合する試験化合物と競合する、競合薬物スクリーニング分析の使用をも含む。
【０２８３】
スクリーニングのための他の技術は基質への好適な結合アフィニティーを有する剤のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、そしてＷＯ  ８４／０３５６４中に詳述される方法に基づく。
本発明に係る分析方法は、定量分析はもちろん、試験化合物の小及び大スケールのスクリーニングに好適であろうことが予想される。
【０２８４】
したがって、本発明は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介する剤を同定する方法、好適な標的を上記剤と接触させ、そしてその後海綿体平滑筋弾力性の弛緩の弛緩程度を計測することを含む方法にも関連する。
本発明は選択的にＩＫＣａチャネル活性を調節する及び／又は個体の生殖器における海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介する剤を同定する方法、個体の生殖器からの好適な標的を接触させ、そしてその後ＩＫＣａチャネル活性及び／又は海綿体平滑筋弾力性の弛緩の弛緩程度を計測することを含む方法にも関する。
【０２８５】
本発明は上記ＩＫＣａチャネル活性を調節する剤を同定する方法、好適な標的を上記剤と接触させ、そしてその後上記活性及び／又はＩＫＣａチャネルの発現値を計測することを含む方法にも関する。
本発明は選択的に上記ＩＫＣａチャネル活性を調節する剤を同定する方法、好適な標的を上記剤と接触させ、そしてその後上記活性及び／又は上記ＩＫＣａチャネルの発現値を計測することを含む方法にも関する。
【０２８６】
動物モデル
ｉｎ  ｖｉｖｏのモデルはＭＥＤの如き、ＳＤを治療する治療又は治療用剤を調査する及び／又は設計するために使用されうる。上記モデルは上記性的覚醒応答を示すさまざまなパラメーターにおけるさまざまな道具／リード化合物の効果を調査するのに使用されうる。
【０２８７】
本発明は本発明に係るＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列、又はその異形、ホモログ、誘導体又は断片を発現することのできるトランスジェニック非ヒト動物及び／又は１以上の不活性化された本発明に係るＩＫＣａチャネルをコードするヌクレオチド配列又はその異形、ホモログ、誘導体又は断片を有するトランスジェニック非ヒト動物をさらに提供する。上記ヌクレオチド配列の発現は通常プロモーター及び場合によりエンハンサーに上記ヌクレオチド配列を機能できるように結合し、そして接合体内に上記構築物をマイクロ注入することにより達成される。Ｈｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを参照のこと。上記ヌクレオチド配列の不活性化はクローニングされたヌクレオチド配列が陽性選択マーカーの挿入により不活性化される導入遺伝子を形成することにより達成されうる。Ｃａｐｅｃｃｈｉ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４，  １２８８−１２９２（１９８９）を参照のこと。上記導入遺伝子はその後胚の幹細胞内に導入され、そこで、それは内因性のさまざまな遺伝子との相同的組換えを経験する。マウス及び他のげっ歯類は好ましい動物である。上記動物はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するためのスクリーング及び／又はスクリーニング系を提供する。
【０２８８】
実施例
本発明はここで単に例としてさらに示されるであろう、その例の中で、引用が続く図中になされる。
【０２８９】
実施例（１）
材料及び方法
組織の単離及び調製
オスニュージーランド白色ウサギ（２．０〜３．０Ｋｇ）を頸部脱臼により殺した。腹腔を開き、そして骨盤骨で器官の基礎が始まる陰茎を摘出した。海綿体を周囲の白膜から慎重に離した−２組織片、約１０ｍｍ×３ｍｍ×２ｍｍの大きさ、をそれぞれの陰茎から得た。上記解剖はＫｒｅｂｓ  Ｒｉｎｇｅｒ溶液中で行った。組織を回収の日に使用した。
【０２９０】
器官浴中の組織の据えつけ
海綿体片を５ｍｌ  Ｗｅｓｌｅｙ  ＆  Ｃｏ．器官浴中に外科的な縫合で据えつけ、そして３７℃に維持された及びｐＨ７．４を得るために５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２を含ませたＫｒｅｂ’ｓ溶液中に浸した。上記縫合を力置換変換器（Ｍａｙｗｏｏｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．）につなげ、そして等大の緊張における変化をＤＡＲＴ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏコンピューターパッケージ上に記録した。上記組織を１．５ｇの開始休止緊張の下に置き、そして１時間平衡化させた。平衡化の間、上記組織を５ｍｌ／分ですすいだ。平衡化の後のおよその組織緊張は１ｇであった。上記組織をその後フェニルエフリン（ＰＥ）（１０μＭ）及びＫＣｌ（１２０ｍＭ）で収縮に、及びニトロプルッシドナトリウム（ＳＮＰ）（１００μＭ）で弛緩に増感させた。
【０２９１】
ＥＢＩＯの直接の弛緩効果
組織をＰＥ（１０μＭ）（＝ＥＣ４０）又は１２０ｍＭ  Ｋ＋で収縮させ、そしてそれぞれの添加の間に約１０分間の間隔で、ＥＢＩＯ（１０ｎＭ〜１ｍＭ）の半ログ単位累積添加にかけた。
【０２９２】
ＥＢＩＯ及びバーベリン誘導弛緩の機構の調査
１．組織をＰＥ（１０μＭ）で収縮させ、そしてＮＧ−ニトロ−Ｉ−アルギニン（Ｌ−ＮＯＡＲＧ−ＮＯＳ阻害剤）（３００μＭ）で２５分間インキュベートした。上記組織をその後ＥＢＩＯ（１０ｎＭ〜１ｍＭ）の累積的な半ログ単位添加にかけた。
【０２９３】
２．ウサギ海綿体の裂孔の空間の内皮の裏打ちを機械的な破壊により取り除いた（親指及び人差し指の間でゆるやかに２０〜３０秒間こすった）。内皮の除去をＡｃｈ（１μＭ）への弛緩応答の程度により確認した−上記組織が弛緩しない又は十分に弛緩しない（＜１０％最高弛緩）場合、それらは内皮から機能的に剥脱されたと考えられた。内皮剥脱組織をＰＥ（１０μＭ）で収縮させ、そしてその後ＥＢＩＯ（１０ｎＭ〜１ｍＭ）用量応答曲線にかけた。
【０２９４】
ｃＧＭＰ仲介弛緩に対するＥＢＩＯの効果
ＰＥ（１０μＭ）収縮組織を対照用量応答曲線を得るために、ＳＮＰの半ログ単位累積添加（ｃＧＭＰ仲介弛緩）（１０ｎＭ〜３００μＭ）にかけた。徹底的な洗浄（＝５ｍｌ／分で２０分間）の後、ＰＥ（１０μＭ）収縮組織をＥＢＩＯ（５０μＭ及び１００μＭ）で１５分間インキュベートした。ＥＢＩＯの添加の後の弾力性における下落をＰＥのさらなる添加により事前処理の値に戻し、そしてその後上記組織をＳＮＰ（１０ｎＭ〜３００μＭ）用量応答曲線にかけた。
【０２９５】
電場刺激（ＥＦＳ）誘導弛緩に対するＥＢＩＯの効果
組織を、それぞれＮＡ放出及び受容体を防御するために、５μＭグアネシジン及び１μＭアトロピンを含む「普通の」Ｋｒｅｂ’ｓ中に浸した。ＥＦＳを、器官の室の上部及び下部に置いた２プラチナ電極につなげたＭＳ３刺激装置によりデリバリーした。ＥＦＳパラメーターは以下のとおりである：電位＝４５〜６５Ｖ、頻度＝２〜３２Ｈｚ、パルス幅＝０．２ｍｓ、連続期間＝１０秒。組織をＰＥ（１０μＭ）で収縮させ、そして８Ｈｚ及び１５Ｈｚで刺激し、全ての組織において同じ応答を得るように電位を変えることによりＥＦＳに増感させた。ＥＦＳ曲線は２Ｈｚ、４Ｈｚ、８Ｈｚ、１６Ｈｚ及び３２ＨｚでＰＥ収縮組織を刺激することに関与し、そして弛緩の程度を３０秒間にわたり得られた最高記録からの最低記録をとることにより計測した。対照ＥＦＳ応答曲線は毎回得られ、そしてその後さらなるＥＦＳ曲線をＥＢＩＯ（５０μＭ及び１００μＭ）若しくはチャリブドトキシン（１００ｎＭ；ＣｈＴＸ−ＩＫＣａチャネルの毒ブロッカー）又はＣｈＴＸ（１００ｎＭ）及びＥＢＩＯ（５０μＭ）の両方で１５分間インキュベート後行った。
【０２９６】
心血管組織にわたる海綿体に対するＥＢＩＯの選択性
ＰＥ（１μＭ）又は８０ｍＭ  Ｋ＋収縮ウサギ大動脈部分をそれぞれの添加の間に約１０分間の間隔でＥＢＩＯの半ログ単位累積添加（１０ｎＭ〜１ｍＭ）にかけた。
【０２９７】
薬物
使用された薬物は：塩酸フェニルエフリン（ＰＥ）、硫酸アトロピン、グアネシジン、塩化アセチルコリン（ＡＣｈ）、ニトロプルッシドナトリウム（ＳＮＰ）、ＮＧ−ニトロ−Ｉ−アルギニン（Ｌ−ＮＯＡＲＧ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、ＫＣｌ（Ｍｅｒｃｋ  Ｌｔｄ．）、チャリブドトキシン（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ）、１−エチル−２−ベンズイミダゾール−イノン（ＥＢＩＯ）（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．）であった。全ての薬物は、Ｋｒｅｂ’ｓ中に溶解されたＬ−ＮＯＡＲＧ、ＥｔＯＨ中に溶解されたＣｈＴＸ及びＥＢＩＯを除いては、ｄＨ２Ｏ中に溶解された。
【０２９８】
Ｋｒｅｂ’ｓ  Ｒｉｎｇｅｒ溶液（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）を使用した、組成物は以下のとおりである：ＮａＣｌ  １１８ｍＭ、ＮａＨＣＯ３  ２５ｍＭ、ＫＣｌ  ４．７ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １．２ｍＭ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  １．２ｍＭ、グルコース１１ｍＭ及びＣａＣｌ２  ２．５ｍＭ。試薬の沈殿を避けるために、上記緩衝溶液を上記ＣａＣｌ２溶液を添加する前に１０分間気体で満たした（９５％  Ｏ２／５％  ＣＯ２）。
【０２９９】
統計
それぞれの容量応答曲線のために、上記弛緩応答はＰＥ誘導収縮のパーセントとして表される。平均値±平均誤差はその後ｌｏｇ［薬物］濃度に対してプロットされる。シグモイド曲線はＯｒｉｇｉｎ曲線フィッティングコンピューターパッケージを用いて上記データにフィットされた。曲線フィッティングの目的のために、最小弛緩応答は０％に強いられ、そして最高弛緩応答は自由フィットさせられる。ＥＦＳ応答曲線のために、弛緩の程度はＰＥ誘導収縮のパーセントとして表された。これらの値はその後刺激頻度に対してプロットされた。
統計分析は変動の１方向分析の後にＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｐａｉｒｅｄ  ｔ−テストを用いて行われた。
【０３００】
結果
ＥＢＩＯでのＩＫＣａチャネルの開放は海綿体の直接の弛緩を引き起こす
ＥＢＩＯ、は基礎の弾力性を抑制し（≧１０μＭの濃度で）、そしてＰＥ収縮ウサギ海綿体の濃度依存的弛緩を誘導する（図（１））。しかしながら、高いＫ＋環境においては、ＥＢＩＯは収縮ウサギ海綿体に効果を有しない（図（１））。このことはＥＢＩＯの活動の機構はＩＫＣａチャネル開放を介しており、そして直接ＶＯＣＣｓを妨害することによらないことを示す。
【０３０１】
ＥＢＩＯ誘導弛緩は上記ＮＯ／ｃＧＭＰ経路を介して又は内皮依存性機構を介して仲介されない。
ＥＢＩＯ誘導弛緩はＬ−ＮＯＡＲＧ（１００μＭ）（ＮＯＳ阻害剤）の存在下でも観察され（図（２））、そしてＥＢＩＯ誘導弛緩は内皮の除去によっては影響されない（図（２））。
【０３０２】
ＩＫＣａチャネルの開放は窒素性弛緩機構を増強する
ＥＢＩＯ（５０μＭ〜ＩＣ２０）はウサギ海綿体の窒素性誘導弛緩の増強を引き起こす（図（３）及び（４））。ＥＢＩＯは真正の内因性窒素性弛緩（ＥＦＳ誘導）又は内因性のｃＧＭＰ仲介弛緩（ＳＮＰ誘導）の両方を高めた。
この高めは窒素性弛緩の頻度／用量範囲にわたり観察された（図（３）及び（４））。
ＩＫＣａチャネルは窒素性弛緩に関連するという証拠はＣｈＴＸ−ＩＫＣａチャネルの毒ブロッカー−を用いて決定された。ＣｈＴＸ（１００ｎＭ）は３０％まで海綿体の内因性のＮＯ仲介（ＥＦＳ誘導）弛緩を顕著に減ずる（図（５））。このことは、ＩＫＣａチャネルが窒素性弛緩を仲介することにおいて役割を果たすことを示す。
【０３０３】
内因性ＮＯ誘導弛緩のＥＢＩＯ誘導増強はＣｈＴＸ（１００ｎＭ）感受性である（図（６））。このことは、窒素性弛緩のＥＢＩＯ誘導増強はＩＫＣａチャネルの開放により仲介されることを示す。
【０３０４】
ＩＫＣａチャネル開放因子−心血管系にわたる海綿体選択性についての機会
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウサギ大動脈での試験は、ＥＢＩＯは、高い濃度（≧１００μＭ）を除いては、弛緩剤効果を有しないということを示した（図（７））。このことはＩＫＣａチャネル開放因子は心血管系に影響することなしに選択的に海綿体を弛緩しうることを示す。
【０３０５】
議論
この研究は、ＩＫＣａチャネルは海綿体平滑筋弾力性の制御において重要な機能的役割をはたすことを確認する。上記ＩＫＣａチャネル開放因子、ＥＢＩＯは単離したウサギ海綿体において濃度依存的弛緩活性を有し、そしてＮＯ／ｃＧＭＰ仲介弛緩を増強しうる。この弛緩剤効果は内皮剥脱海綿体においては影響されず、上記弛緩機構が内皮非依存性であり、そしてＩＫＣａチャネルは平滑筋にのみ存在することを示す。Ｌ−ＮＯＡＲＧ（ＮＯＳ阻害剤）がＥＢＩＯ誘導弛緩を減じないという事実も、ＥＢＩＯが上記ＮＯ／ｃＧＭＰ経路を介してその効果を発揮しないことを示し、そしてこのことは内皮非依存性機構とも一致する。
【０３０６】
ＥＢＩＯの弛緩活性は高いＫ＋環境において強く減少される。Ｋ＋での脱分極により得られた強壮性緊張における増大はカルシウムチャネルの開放のためであるから、海綿体を弛緩させることにおけるＥＢＩＯの減少した有効性は、上記薬物が直接電位依存性カルシウムチャネル（ＶＯＣＣｓ）を妨げないことを示す。この観察は、ＥＢＩＯが上記Ｋ＋チャネル機構を介してはたらいていることを確認する−高い細胞外Ｋ＋は細胞膜を介したＫ＋勾配を減じ、したがって、Ｋ＋チャネル活性化機構を無効にさせる。
【０３０７】
この研究はＥＢＩＯ（５０μＭ）がＮＯ誘導弛緩（ＳＮＰ誘導）及び内因性ＮＯ誘導弛緩（ＥＦＳ誘導）を増強することも示した。この研究はしたがって、ＩＫＣａチャネルはＮＯシグナルのエフェクターであるＮＯ又はＰＫＧにより仲介されうるという提案を強化する。チャリブドトキシン（ＣｈＴＸ−ＩＫＣａチャネルの毒ブロッカー）は内因性ＮＯ誘導弛緩を顕著に減じ、ＩＫＣａチャネルがこの組織の基礎の弾力性を設定することにおいて役割を有しうることを示す。内因性ＮＯ誘導弛緩のＥＢＩＯ誘導増強はＣｈＴＸ感受性でもある、したがって、ＥＢＩＯはＩＫＣａチャネルを介してはたらいていることを確定する。ＣｈＴＸはＩＫＣａチャネルに完全に選択的ではなく、そしてＢＫＣａチャネルをも妨害いしうる。したがって、これらの結果は、上記ＥＢＩＯ誘導効果はＩＫＣａチャネル調節に帰するということを確定しえない。このことに関わらず、これらの結果は、Ｋ＋チャネル開放因子が海綿体の弛緩を誘導すること及びＮＯ／ｃＧＭＰ誘導弛緩を増強すること、そしてそれゆえ、ＭＥＤの如きＳＤを治療する効果的なアプローチを示すことを明らかに示した。
【０３０８】
要約
本発明は、ＩＫＣａチャネルは海綿体平滑筋細胞において発現されることをはじめて示す。海綿体におけるＩＫＣａチャネル発現に関する文献報告は今までのところない。さらに、海綿体の平滑筋細胞における陰茎のＩＫＣａチャネルの如き、ＩＫＣａチャネルについての機能的証拠を開示する文献報告はない。これらのチャネルに関する文献報告は心血管系及び／又は中枢神経系（ＣＮＳ）をとおしての発現の欠落を示す。
【０３０９】
本発明は、ＩＫＣａチャネル開放を介する平滑筋弛緩は海綿体に特異的であるように見えることをはじめて示す。
【０３１０】
本発明は、ＥＢＩＯの如き、ＩＫＣａチャネル開放因子は海綿体平滑筋弾力性のＮＯ誘導弛緩を高めることができることをも示す。海綿体平滑筋弾力性のこの直接の弛緩は内皮依存性ではなく、そしてカルシウムチャネル活性の阻害又はＮＯ経路の直接の刺激に由来しない。この効果は性的覚醒への応答においても観察されうる。都合のよいことに、ＥＢＩＯは大動脈平滑筋弾力性には効果を有さず、そしてｉｎ  ｖｉｖｏで血圧には影響を及ぼさないように見える。
【０３１１】
ＩＫＣａチャネル活性の調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介するという示唆はＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤を同定するスクリーニングを開発するのに使用されうる。上記剤は勃起応答を妨げる及び／又は治療する及び／又は高める、そして男性勃起機能障害（ＭＥＤ）の如き、勃起機能障害を克服するのに使用されうる。
【０３１２】
１の局面においては、本発明は性機能障害（ＳＤ）の治療における二次的な使用のための医薬組成物；個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルの活性を調節することのできる剤を含む医薬組成物に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され、そしてここで、上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１３】
他の局面においては、本発明は性機能障害（ＳＤ）の治療における二次的な使用のための医薬組成物；個体の生殖器における中伝導性カルシウム活性化カリウム（ＩＫＣａ）チャネルの活性を調節することのできる剤を含む医薬組成物に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され、そして上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１４】
他の局面においては、本発明はＳＤの治療のための医薬の調製における剤の使用に関し；ここで、上記剤は個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され、；及びここで、上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１５】
他の局面においては、本発明はＳＤの治療のための医薬の調製における剤の使用に関し；ここで、上記剤は個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することができ；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され；及び上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は性的覚醒の応答における海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１６】
さらなる局面においては、本発明は個体を治療する方法；上記個体に上記個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をデリバリーすることを含む方法に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され；そしてここで、上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１７】
さらなる局面においては、本発明は個体を治療する方法；上記個体に上記個体の生殖器においてＩＫＣａチャネル活性を調節することのできる剤をデリバリーすることを含む方法に関し；ここで、上記剤は場合により医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合され；そしてここで、上記ＩＫＣａチャネル活性の調節は性的覚醒への応答において海綿体平滑筋弾力性の弛緩を仲介することができる。
【０３１８】
上記詳述において挙げられた全ての文献は本明細書中に援用する。本発明に係る示された方法及び系のさまざまな改変及び変化が本発明の範囲及び精神から離れることなしに当業者に明らかであろう。本発明は特定の好ましい態様に関連して示されたが、請求される発明は上記特定の態様に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。ほんとうに、分子生物学又は関連した分野における当業者に明らかである、本発明を行うための示された様式のさまざまな改変は本発明により含まれることが意図される。
【０３１９】
【化７】
2004517046.tif 000010
【０３２０】
【化８】
2004517046.tif 000011
【０３２１】
【化９】
2004517046.tif 000012
【０３２２】
略語
ＢＫＣａ：大伝導性カルシウム活性化カリウムチャネル（Ｍａｘｉ  Ｋ＋チャネルともいわれる）
［Ｃａ２］ｉ：細胞内Ｃａ２＋濃度
ｓＧＣ：可溶性グアニレートシクラーゼ
ｃＧＭＰ：環状グアノシン一リン酸
ＣｈＴＸ：チャリブドトキシン：ＩＫＣａチャネルの毒ブロッカー
ＥＢＩＯ：１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン（商業的に入手可能なチャネル開放因子）
ＥＦＳ：海綿体平滑筋弾力性の内因性窒素性仲介弛緩を誘導するのに使用されうる電場刺激
ＩＫＣａ：中伝導性カルシウム活性化カリウムチャネル（ＳＫ４チャネルともいわれる）
Ｌ−ＮＯＡＲＧ：ＮＯＳ阻害剤
ＮＡＮＣ：非アドレナリン性、非コリン性神経伝達
ＮＯ仲介（ＥＦＳ誘導）
ＮＯ：一酸化窒素：一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）によりＬ−アルギニンから合成される
ＮＯＳ：一酸化窒素合成酵素
ＰＤＥ５：フォスフォジエステラーゼ５
ＰＥ：フェニルエフリン：平滑筋の収縮を誘導する
ＰＫＧ：タンパク質キナーゼＧ
ＳＫＣａ：小伝導性カルシウム活性化カリウムチャネル
ＳＮＰ：ニトロプルッシドナトリウム：平滑筋弾力性の内因性ｃＧＭＰ仲介弛緩を誘導する
ＶＯＣＣ：電位依存性カルシウムチャネル：膜の脱分極により活性化される
【図面の簡単な説明】
【図１】
図（１）は、ＥＢＩＯ（１−エチル−２−ベンズイミダゾリノン、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍ  Ｃｏからの商業的に入手可能なチャネル開放因子）での、ＩＫＣａチャネルの開放は海綿体の直接の弛緩を誘導することを示す。ＥＢＩＯはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＰＥ収縮ウサギ海綿体の濃度依存的な弛緩を誘導するが、高いＫ＋環境においては効果を有しない。このことは、ＥＢＩＯはＩＫＣａチャネルの開放を介して組織を弛緩し、ＶＯＣＣｓを直接妨害することによってははたらかないことを示す。結果は平均±平均誤差として表される。
【図２】
図（２）は、海綿体のＥＢＩＯ誘導弛緩はＮＯ／ｃＧＭＰ経路の活性化を介さない又は内皮依存性機構を介さないことを示す。ＥＢＩＯ誘導弛緩はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＮＯＳ阻害剤（Ｌ−ＮＯＡＲＧ）の存在下及び内皮剥脱ウサギ海綿体でも観察される。結果は平均±平均誤差として表される。
【図３】
図（３）は、ＥＢＩＯでの、ＩＫＣａチャネルの開放はＰＥ収縮ウサギ海綿体のＳＮＰ誘導弛緩を増強することを示す。ＥＢＩＯ（５０μＭ〜ＩＣ２０）はｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウサギ海綿体のＳＮＰ（０．１ｎＭ〜０．３ｍＭ）誘導弛緩を増強する。結果は平均±平均誤差として表される。
【図４】
図（４）は、ＥＢＩＯでの、ＩＫＣａチャネルの開放はＰＥ収縮ウサギ海綿体の電場刺激（ＥＦＳ）誘導弛緩を増強することを示す。ＥＢＩＯ（５０μＭ）はｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウサギ海綿体のＥＦＳ誘導弛緩を大きく増強する。ＥＦＳ誘導弛緩は上記頻度範囲にわたって高められた。結果は平均±平均誤差として表される。
【図５】
図（５）は、チャリブドトキシン（ＣｈＴＸ−ＩＫＣａチャネルの毒ブロッカー）でのＩＫＣａチャネルの妨害は海綿体のＮＯ仲介（ＥＦＳ誘導）弛緩を減少させることを示す。ＣｈＴＸ（１００ｎＭ）はｉｎ  ｖｉｔｒｏで海綿体の３０％まで内因性ＮＯ誘導弛緩を顕著に弱める。ＥＦＳ誘導弛緩におけるこの顕著な減少は上記頻度範囲にわたり起こる。結果は平均±平均誤差として表される。
【図６】
図（６）は、ＩＫＣａチャネルの妨害は海綿体の窒素性弛緩のＥＢＩＯ誘導増強を妨害することを示す。図（４）において観察される、内因性ＮＯ仲介（ＥＦＳ誘導）弛緩のＥＢＩＯ誘導増強はＣｈＴＸ感受性である。１００ｎＭ  ＣｈＴＸはｉｎ  ｖｉｔｒｏでのウサギ海綿体の対照ＥＢＩＯ誘導弛緩における減少を引き起こした。結果は平均±平均誤差として表される。
【図７】
図（７）は、ＩＫＣａチャネルの開放は単離されたウサギ大動脈における平滑筋弾力性には影響を有しないことを示す。ＥＢＩＯは１００μＭまでの濃度でｉｎ  ｖｉｔｒｏでウサギ大動脈には弛緩効果を有しない。したがって、ＩＫＣａチャネルはいくつかの心血管組織には存在しえないことを示す。結果は平均±平均誤差として表される。
【図８】
図（８）は配列ＩＤ番号（１）−その詳細は以下のとおり−を示す：
位置番号  ＿００２２５０  ２２３８ｂｐ  ｍＲＮＡ  ＰＲＩ  １９−ＭＡＲ−１９９９
定義  ホモサピエンスカリウム中／小伝導性カルシウム活性化チャネル、サブファミリーＮ、メンバー４（ＫＣＮＮ４）ｍＲＮＡ、及び翻訳産物。
取得番号  ＿００２２５０
バージョン番号  ＿００２２５０．１  ＧＩ：４５０４８５８
源  ヒト。
生物  ホモ・サピエンス；真核生物上界；後生動物亜界；脊索動物門；有頭類；脊椎動物亜門；哺乳綱；真獣亜綱；霊長目；Ｃａｔａｒｒｈｉｎｉ；ヒト上科；ヒト属。
引用  １（塩基１〜２２３８）
著者  Ｌｏｇｓｄｏｎ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｋａｎｇ，  Ｊ．，  Ｔｏｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，  Ｅ．Ｐ．及びＡｉｙａｒ，  Ｊ．
表題  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｇｅｎｅ，  ｈＫＣａ４，  ｅｎｃｏｄｅｓ  ｔｈｅ  ｃａｌｃｉｕｍ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ
ジャーナル  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２（５２），  ３２７２３〜３２７２６（１９９７）
ＭＥＤＬＩＮＥ  ９８０７０４５９
引用  ２（塩基１〜２２３８）
著者  Ｌｏｇｓｄｏｎ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｋａｎｇ，  Ｊ．，  Ｔｏｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，  Ｅ．Ｐ．及びＡｉｙａｒ，  Ｊ．
表題  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ
ジャーナル  Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ（０４−ＳＥＰ−１９９７）Ｔａｒｇｅｔ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｚｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  １８００  Ｃｏｎｃｏｒｄ  Ｐｉｋｅ，  Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，  ＤＥ  １９８９７，  ＵＳＡ
ＣＯＭＭＥＮＴ  ＲＥＦＳＥＱ；この引用配列はＡＦ０２２７９７から由来した。
仮の引用配列：これはヒトのレビューにまだかけられていない仮の引用配列記録である。最終的に管理された引用配列記録はこれとはいくらか異なりうる。
特徴  位置／予選
源  １．．２２３８
／生物＝「ホモ・サピエンス」
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ｔａｘｏｎ：９６０６」
／組織＿型＝「リンパ節」
遺伝子  １．．２２３８
／遺伝子＝「ＫＣＮＮ４」
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ＬｏｃｕｓＩＤ：３７８３」
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ＭＩＭ：６０２７５４」
ＣＤＳ  ３９７．．１６８０
／遺伝子＝「ＫＣＮＮ４」
／コドン＿開始＝１
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ＬｏｃｕｓＩＤ：３７８３」
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ＭＩＭ：６０２７５４」
／産物＝「カリウム中／小伝導性カルシウム活性化チャネル、サブファミリーＮ、メンバー４」
／タンパク質＿ｉｄ＝「ＮＰ＿００２２４１．１」
／ｄｂ＿ｘｒｅｆ＝「ＧＩ：４５０４８５９」
【図９】
配列ＩＤ番号２−その詳細は以下のとおり−を示す図（９）：
ポリＡ＿シグナル  ２２１１．．２２２６
ベースカウント  ４２１ａ  ６６６ｃ  ７０７ｇ  ４４４ｔ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
2004517046.tif 000143
2004517046.tif 000144
2004517046.tif 000145
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