(57)【要約】ＨＩＶ抗原に対する抗体およびＣＴＬ応答を誘発する能力が改善された改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、またはＮｅｆ  ＤＮＡを、ＨＩＶ感染の治療または予防のための原型免疫原として同定した。
2004533208.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変グリコシル化もしくはΔＣＦＩ  ＨＩＶ  Ｅｎｖ、またはそれらの組合せをコードするか、表１から選ばれるプラスミド（またはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）をコードするか、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項２】
前記核酸分子が、プラスミド２１００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
前記核酸分子が、プラスミド２２００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４】
前記核酸分子が、プラスミド２３００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記核酸分子が、プラスミド２３０２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記核酸分子が、プラスミド２４００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記核酸分子が、プラスミド２７００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８】
前記核酸分子が、プラスミド２７０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９】
前記核酸分子が、プラスミド２７０２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０】
前記核酸分子が、プラスミド２７０６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１】
前記核酸分子が、プラスミド２７０７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２】
前記核酸分子が、プラスミド２８００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
前記核酸分子が、プラスミド２８０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４】
前記核酸分子が、プラスミド２８０４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５】
前記核酸分子が、プラスミド２８０５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１６】
前記核酸分子が、プラスミド２８１０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１７】
前記核酸分子が、プラスミド２８１１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１８】
前記核酸分子が、プラスミド２８１２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１９】
前記核酸分子が、プラスミド２８１３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２０】
前記核酸分子が、プラスミド２８１４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２１】
前記核酸分子が、プラスミド２８２０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２２】
前記核酸分子が、プラスミド２８２１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２３】
前記核酸分子が、プラスミド２８２２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２４】
前記核酸分子が、プラスミド２８２３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２５】
前記核酸分子が、プラスミド２８２４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２６】
前記核酸分子が、プラスミド２８２５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２７】
前記核酸分子が、プラスミド２８２６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２８】
前記核酸分子が、プラスミド２８２７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項２９】
前記核酸分子が、プラスミド２８２８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３０】
前記核酸分子が、プラスミド２８２９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３１】
前記核酸分子が、プラスミド２８３０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３２】
前記核酸分子が、プラスミド２８３１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３３】
前記核酸分子が、プラスミド２８３２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３４】
前記核酸分子が、プラスミド２８３３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３５】
前記核酸分子が、プラスミド２８３４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３６】
前記核酸分子が、プラスミド２８３５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３７】
前記核酸分子が、プラスミド２８３６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３８】
前記核酸分子が、プラスミド２８３７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３９】
前記核酸分子が、プラスミド２８３８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４０】
前記核酸分子が、プラスミド２８３９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４１】
前記核酸分子が、プラスミド２８４０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４２】
前記核酸分子が、プラスミド２８４１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４３】
前記核酸分子が、プラスミド２８４２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４４】
前記核酸分子が、プラスミド２８４３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４５】
前記核酸分子が、プラスミド２８４４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４６】
前記核酸分子が、プラスミド２８４５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４７】
前記核酸分子が、プラスミド２８４６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４８】
前記核酸分子が、プラスミド２８４７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４９】
前記核酸分子が、プラスミド２８４８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５０】
前記核酸分子が、プラスミド２８４９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５１】
前記核酸分子が、プラスミド２８５０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５２】
前記核酸分子が、プラスミド２８５１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５３】
前記核酸分子が、プラスミド２８５２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５４】
前記核酸分子が、プラスミド２８５３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５５】
前記核酸分子が、プラスミド２８５４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５６】
前記核酸分子が、プラスミド２８６０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５７】
前記核酸分子が、プラスミド２８６１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５８】
前記核酸分子が、プラスミド２８６２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５９】
前記核酸分子が、プラスミド２８６３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６０】
前記核酸分子が、プラスミド２８６４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６１】
前記核酸分子が、プラスミド２８６５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６２】
前記核酸分子が、プラスミド２８６６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６３】
前記核酸分子が、プラスミド２８６７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６４】
前記核酸分子が、プラスミド２８６８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６５】
前記核酸分子が、プラスミド２８６９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６６】
前記核酸分子が、プラスミド２８７０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６７】
前記核酸分子が、プラスミド２８７１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６８】
前記核酸分子が、プラスミド２８７２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６９】
前記核酸分子が、プラスミド２８７３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７０】
前記核酸分子が、プラスミド２８７４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７１】
前記核酸分子が、プラスミド２９００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７２】
前記核酸分子が、プラスミド３０００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７３】
前記核酸分子が、プラスミド３２００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７４】
前記核酸分子が、プラスミド３２０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７５】
前記核酸分子が、プラスミド３２０２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７６】
前記核酸分子が、プラスミド３２０３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７７】
前記核酸分子が、プラスミド３３００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７８】
前記核酸分子が、プラスミド３３０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７９】
前記核酸分子が、プラスミド３４００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８０】
前記核酸分子が、プラスミド３４０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８１】
前記核酸分子が、プラスミド３５００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８２】
前記核酸分子が、プラスミド３６００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８３】
前記核酸分子が、プラスミド３７００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８４】
前記核酸分子が、プラスミド３８００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８５】
前記核酸分子が、プラスミド５２００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８６】
前記核酸分子が、プラスミド５２０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８７】
前記核酸分子が、プラスミド５２０２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８８】
前記核酸分子が、プラスミド５２０３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項８９】
前記核酸分子が、プラスミド５３００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９０】
前記核酸分子が、プラスミド５３０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９１】
前記核酸分子が、プラスミド５３０３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９２】
前記核酸分子が、プラスミド５３０４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９３】
前記核酸分子が、プラスミド５３０５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９４】
前記核酸分子が、プラスミド５３０６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９５】
前記核酸分子が、プラスミド５３０７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９６】
前記核酸分子が、プラスミド５３０８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９７】
前記核酸分子が、プラスミド５３０９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９８】
前記核酸分子が、プラスミド５３５０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項９９】
前記核酸分子が、プラスミド５３５１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１００】
前記核酸分子が、プラスミド５３５２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０１】
前記核酸分子が、プラスミド５３５３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０２】
前記核酸分子が、プラスミド５３５４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０３】
前記核酸分子が、プラスミド５３５５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０４】
前記核酸分子が、プラスミド５３５６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０５】
前記核酸分子が、プラスミド５３５７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０６】
前記核酸分子が、プラスミド５３５８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０７】
前記核酸分子が、プラスミド５３５９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０８】
前記核酸分子が、プラスミド５３６０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０９】
前記核酸分子が、プラスミド５３６１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１０】
前記核酸分子が、プラスミド５３６２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１１】
前記核酸分子が、プラスミド５３６３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１２】
前記核酸分子が、プラスミド５３６４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１３】
前記核酸分子が、プラスミド５３６５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１４】
前記核酸分子が、プラスミド５３６６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１５】
前記核酸分子が、プラスミド５３６７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１６】
前記核酸分子が、プラスミド５３６８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１７】
前記核酸分子が、プラスミド５３６９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１８】
前記核酸分子が、プラスミド５３７０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１９】
前記核酸分子が、プラスミド５３７１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２０】
前記核酸分子が、プラスミド５３７２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２１】
前記核酸分子が、プラスミド５３７３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２２】
前記核酸分子が、プラスミド５３７４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２３】
前記核酸分子が、プラスミド５３７５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２４】
前記核酸分子が、プラスミド５３７６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２５】
前記核酸分子が、プラスミド５３７７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２６】
前記核酸分子が、プラスミド５３７８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２７】
前記核酸分子が、プラスミド５３７９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２８】
前記核酸分子が、プラスミド５５００（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２９】
前記核酸分子が、プラスミド５５０１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３０】
前記核酸分子が、プラスミド５５０２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３１】
前記核酸分子が、プラスミド５５０３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３２】
前記核酸分子が、プラスミド５５０４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３３】
前記核酸分子が、プラスミド５５０５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３４】
前記核酸分子が、プラスミド５５０６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３５】
前記核酸分子が、プラスミド５５０７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３６】
前記核酸分子が、プラスミド５５０８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３７】
前記核酸分子が、プラスミド５５０９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３８】
前記核酸分子が、プラスミド５５１０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３９】
前記核酸分子が、プラスミド５５１１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４０】
前記核酸分子が、プラスミド５５１２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４１】
前記核酸分子が、プラスミド５５１３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４２】
前記核酸分子が、プラスミド５５１４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４３】
前記核酸分子が、プラスミド５５１５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４４】
前記核酸分子が、プラスミド５５１６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４５】
前記核酸分子が、プラスミド５５１７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４６】
前記核酸分子が、プラスミド５５１８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４７】
前記核酸分子が、プラスミド５５１９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４８】
前記核酸分子が、プラスミド５５２０（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１４９】
前記核酸分子が、プラスミド５５２１（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５０】
前記核酸分子が、プラスミド５５２２（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５１】
前記核酸分子が、プラスミド５５２３（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５２】
前記核酸分子が、プラスミド５５２４（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５３】
前記核酸分子が、プラスミド５５２５（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５４】
前記核酸分子が、プラスミド５５２６（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５５】
前記核酸分子が、プラスミド５５２７（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５６】
前記核酸分子が、プラスミド５５２８（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５７】
前記核酸分子が、プラスミド５５２９（もしくはその改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物）、または前記プラスミドもしくは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１５８】
連続オープンリーディングフレーム中に、改変ＨＩＶ  Ｇａｇ−ＰｏｌもしくはＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｎｅｆ融合タンパク質をコードするか、表１から選ばれるプラスミド（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）をコードするか、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項１５９】
前記核酸分子が、プラスミド３９００（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６０】
前記核酸分子が、プラスミド３９０１（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６１】
前記核酸分子が、プラスミド４０００（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６２】
前記核酸分子が、プラスミド４００１（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６３】
前記核酸分子が、プラスミド４１００（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６４】
前記核酸分子が、プラスミド４１０１（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６５】
前記核酸分子が、プラスミド４２００（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６６】
前記核酸分子が、プラスミド４３００（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６７】
前記核酸分子が、プラスミド４３０１（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６８】
前記核酸分子が、プラスミド４３０２（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１６９】
前記核酸分子が、プラスミド４３０３（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７０】
前記核酸分子が、プラスミド４３０４（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７１】
前記核酸分子が、プラスミド４３０５（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７２】
前記核酸分子が、プラスミド４３０６（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７３】
前記核酸分子が、プラスミド４３０８（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７４】
前記核酸分子が、プラスミド４３０９（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７５】
前記核酸分子が、プラスミド４３１０（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７６】
前記核酸分子が、プラスミド４３１１（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７７】
前記核酸分子が、プラスミド４３１２（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７８】
前記核酸分子が、プラスミド４３１３（またはその改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物）、あるいは前記プラスミドまたは挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体である、請求項１５８に記載の核酸分子。
【請求項１７９】
請求項１ないし、１７８のいずれか一項に記載の核酸分子によりコードされる改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆ。
【請求項１８０】
バックボーンをさらに含む核酸分子であって、前記バックボーンが、プラスミドベクターである、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項１８１】
バックボーンをさらに含む核酸分子であって、前記バックボーンが、アデノウイルスベクターである、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項１８２】
改変グリコシル化、もしくはΔＣＦＩ  ＨＩＶ  Ｅｎｖ、またはそれらの組合せをコードするか、表１から選ばれるプラスミドから選ばれる改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ挿入物をコードするか、あるいは前記挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体をコードし、さらに、連続オープンリーディングフレーム中に改変ＨＩＶ  Ｇａｇ−ＰｏｌもしくはＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｎｅｆ融合タンパク質をコードするか、表１から選ばれるプラスミドから選ばれる改変ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆ挿入物をコードするか、あるいは前記挿入物に対して少なくとも９５％同一性を有する類似体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項１８３】
請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の少なくとも１個の核酸分子、および薬学的に許容可能な溶液を含む、治療上有効な用量の薬学的組成物。
【請求項１８４】
請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の少なくとも１個の核酸分子、および薬学的に許容可能な溶液を含む、予防上有効な用量のワクチン組成物。
【請求項１８５】
請求項１７９に記載の少なくとも１個の修飾ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆ、および薬学的に許容可能な溶液を含む、治療上有効な用量の薬学的組成物。
【請求項１８６】
請求項１７９に記載の少なくとも１個の修飾ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆ、および薬学的に許容可能な溶液を含む、予防上有効な用量のワクチン組成物。
【請求項１８７】
アジュバントをさらに含む、請求項１８３ないし１８６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８８】
前記アジュバントが、サイトカインである、請求項１８７に記載の組成物。
【請求項１８９】
前記組成物が、プラスミド４３０６（ｇａｇ−ｐｏｌ−ｎｅｆ）およびプラスミド２８２７（ｅｎｖ）を組み合わせている、請求項１８３または１８４に記載の組成物。
【請求項１９０】
前記組成物が、プラスミド４３０６（ｇａｇ−ｐｏｌ−ｎｅｆ  クレードＢ）、プラスミド２８２７（ｅｎｖ  クレードＢ）、プラスミド４３１１（ｇａｇ−ｐｏｌ−ｎｅｆ  クレードＣ）、およびプラスミド５５０９（ｅｎｖ  クレードＣ）を組み合わせている、請求項１８３または１８４に記載の組成物。
【請求項１９１】
遺伝的免疫化により、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子を宿主に投与する工程を含む、ＡＩＤＳまたはＨＩＶ感染の症状を回復させる方法。
【請求項１９２】
遺伝的免疫化により、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子を宿主に投与する工程を含む、自然ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆに対する抗体またはＣＴＬ応答を生成させる方法。
【請求項１９３】
タンパク質免疫化により、請求項１７９に記載の改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆを宿主に投与する工程を含む、ＡＩＤＳまたはＨＩＶ感染の症状を改善させる方法。
【請求項１９４】
タンパク質免疫化により、請求項１７９に記載の改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆを宿主に投与する工程を含む、自然ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆに対する抗体またはＣＴＬ応答を生成させる方法。
【請求項１９５】
前記工程が、一次免疫化である、請求項１９１ないし１９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９６】
前記工程が、ブーストである、請求項１９１ないし１９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９７】
前記工程が、プラスミドベクターによる一次免疫化である、請求項１９１または１９２に記載の方法。
【請求項１９８】
前記工程が、アデノウイルスベクターによるブーストである、請求項１９１または１９２に記載の方法。
【請求項１９９】
前記工程が、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩを発現するプラスミドベクターによる一次免疫化であり、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩを発現するアデノウイルスベクターによるブーストである工程をさらに含む、請求項１９１または１９２に記載の方法。
【請求項２００】
ＡＩＤＳまたはＨＩＶ感染の症状の改善における遺伝的免疫化による使用のための、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２０１】
自然ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆに対する抗体またはＣＴＬ応答の生成における遺伝的免疫化による使用のための、請求項１ないし１７８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２０２】
ＡＩＤＳまたはＨＩＶ感染の症状の改善におけるタンパク質免疫化による使用のための、請求項１７９に記載の改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆ。
【請求項２０３】
自然ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌもしくはＮｅｆに対する抗体またはＣＴＬ応答の生成におけるタンパク質免疫化による使用のための、請求項１７９に記載の改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌまたはＮｅｆ。
【請求項２０４】
任意のＨＩＶクレードまたは株に適用される、改変ΔＣＦＩ  ＨＩＶ  Ｅｎｖをコードするか、あるいは連続オープンリーディングフレーム中に改変ＨＩＶ  Ｇａｇ−ＰｏｌもしくはＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｎｅｆ融合タンパク質、またはそれらの組合せをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項２０５】
他のウイルスの関連タンパク質に適用される、改変ΔＣＦＩ  ＨＩＶ  Ｅｎｖをコードするか、あるいは連続オープンリーディングフレーム中に改変ＨＩＶ  Ｇａｇ−ＰｏｌもしくはＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｎｅｆ融合タンパク質、またはそれらの組合せをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項２０６】
最適抗原提示のためにコアタンパク質を露出させるのに十分なドメインの欠失を伴う改変ウイルス膜融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子であって、該ウイルス膜融合タンパク質が、中心三重鎖コイルドコイルと、続いて鎖方向を逆転させ、コアヘリックスに逆平行に収容されたαヘリックスに連結するジスルフィド結合ループとにより規定される核酸分子。
【請求項２０７】
連続オープンリーディングフレーム中に改変ウイルスタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子であって、該ウイルスタンパク質が、非等価比でシフトする翻訳フレームにより、または別個のオープンリーディングフレームを介して、自然型で転写される核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、分子生物学の分野に関する。本発明は、改変ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＮｅｆタンパク質、関連ヌクレオチド配列、および遺伝的免疫化のための使用を開示する。
【０００２】
［発明の背景］
ヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−１）に対する防御免疫は、複数のＨＩＶ抗原由来の直鎖状および配座エピトープの認識を必要とする可能性が高い。ビリオン様構造または融合ＣＴＬエピトープにより、これらの応答をより効率的に誘発することができるかどうかは知られていない。
【０００３】
長期未発症者（Ｃａｏ Ｙ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ３３２：２０１−８； Ｐａｎｔａｌｅｏ Ｇ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｍｅｄ， ３３２：２０９−１６）、およびＨＩＶに曝露した売春婦におけるＨＩＶ感染に対する免疫応答は、特異的なウイルス免疫性が、疾患の感染および症状を制限し得ることを示唆している。防御免疫と相関する唯一の特徴というものはいまだにないが、非ヒト霊長類での研究により、体液性免疫および細胞性免疫の両方がこの応答に必要とされることが示唆されている。慢性的に感染したマカク中の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の消耗は、ウイルス血症を高める（Ｊｉｎ Ｘ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ， １８９：９９１−８； Ｓｃｈｍｉｔｚ ＪＥ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２８３：８５７−６０）。ヒトでは、高ＣＴＬ応答は、低ウイルス負荷および臨床症状の安定化と相関している（Ｍｕｓｅｙ Ｌ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ３３７： １２６７−７４； Ｏｇｇ ＧＳ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７９： ２１０３−６）。動物モデルでは、中和抗体の受動転移もまた、ウイルス攻撃に対する防御に寄与することができる（Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ， Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ ＤＣ， １９９７， ＡＩＤＳ， １１ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ８７−Ｓ９８； Ｇａｕｄｕｉｎ ＭＣ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎａｔ Ｍｅｄ， ３：１３８９−９３； Ｍｏｏｒｅ ＪＰ， Ｈｏ ＤＤ．， １９９５， ＡＩＤＳ， ９ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ１１７−Ｓ１３６； Ｍｕｓｔｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ， ６８：４０３１−４； Ｍｕｓｔｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６７：６６４２−７； Ｐｏｉｇｎａｒｄ Ｐ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ， １７：２３９−４６； Ｓａｔｔｅｎｔａｕ ＱＪ， １９９６， Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ８：５４０−５； Ｓｈｉｂａｔａ Ｒ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｎａｔ Ｍｅｄ， ５：２０４−１０）。中和抗体応答はまた、ＨＩＶ感染した個体でも発生することができ（Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ， Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ ＤＣ．， １９９７， ＡＩＤＳ， １１ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ８７−Ｓ９８； Ｐｏｉｇｎａｒｄ Ｐ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ， １７：２３９−４６； Ｓａｔｔｅｎｔａｕ ＱＪ．， １９９６， Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ８：５４０−５）、長期非進行者における低ウイルス負荷に関連する（Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ ＤＣ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １７３：６０−７）。この中和抗体応答は、珍しいものであるが、それは、主としてウイルスのＥｎｖタンパク質に対して誘導される（Ｒｏｂｅｙ ＷＧ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８３：７０２３−７； Ｓｔｅｉｍｅｒ ＫＳ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２５４：１０５−８）。
【０００４】
初期のヒトワクチン試行では、ｇｐ１２０タンパク質免疫原は、期待に反する結果をもたらした。すなわち、ワクチン誘発性抗体は、広範に中和せず、時にはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの感染を高めた（Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ ＤＰ， Ｍａｔｔｈｅｗｓ ＴＪ， １９９８， Ｎａｔｕｒｅ， ３９１：６３８−９； Ｃｏｎｎｏｒ ＲＩ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７２： １５５２−７６； Ｈａｙｎｅｓ ＢＦ， １９９６， Ｌａｎｃｅｔ， ３４８：９３３−７； ＶａｎＣｏｔｔ ＴＣ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １５５：４１００−１０）。単量体ｇｐ１２０は、オリゴマー依存性エピトープを損失しており、ウイルス侵入中に曝露されるようになるｇｐ４１の外部ドメイン中の配列を含まない（Ｂｒｏｄｅｒ ＣＣ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ９１：１１６９９−７０３； Ｍｏｏｒｅ ＪＰ， １９９５， Ｎａｔｕｒｅ， ３７６：１１５； Ｍｕｓｔｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６７：６６４２−７）。広範な中和抗体は、可溶性ｇｐ１２０ではなく、ウイルスの表面上の自然ｇｐ１２０／ｇｐ４１複合体に結合すると仮定される（Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ，Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ ＤＣ，１９９７，ＡＩＤＳ，１１ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ８７−Ｓ９８）。
【０００５】
ウイルスに対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の発生は、多くの場合、感染の成り行きに決定的である。子孫ビリオンの産生前の感染細胞の溶解は、ウイルスのバーストサイズを制限し得て（Ｙａｎｇ， Ｏ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７０：５７９９−５８０６）、ＨＩＶ特異的ＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は、ウイルスクリアランスおよび初期ＨＩＶ−１伝播の制御において重要であることがわかった（Ｂｏｒｒｏｗ， Ｐ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ６８：６１０３−６１１０； Ｙａｎｇ， Ｏ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７０：５７９９−５８０６）。ＨＩＶに特異的なＣＴＬ応答はまた、急性および無症候性感染中のウイルス負荷の減少にも寄与し（Ｋｌｅｉｎ， ＭＲ， ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８１： １３６５−１３７２； Ｍｏｓｓ， ＰＡＨ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９２：５７７３−５７７７）、また持続性ＨＩＶ感染の確立に対する防御にも関与し得る（Ｒｏｗｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓ， ＳＬ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｌａｎｃｅｔ， ３４１： ８６０−８６１； Ｒｏｗｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓ， ＳＬ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．， １：５９−６４）。ＨＩＶ−１に対する高頻度のＣＴＬ応答は、慢性的に感染した個体における低ウイルス負荷およびゆっくりとした病気の進行と相関した（Ｍｕｓｅｙ， Ｌ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３３７：１２６７−１２７４； Ｏｇｇ， ＧＳ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７９：２１０３−２１０６）。ＣＤ８＋細胞の抗ウイルス効果のより有力な証拠は、モノクローナル抗体を用いて、ＣＤ８＋細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで消耗させるマカクでの比較試験で実証された。ＣＤ８＋細胞が、それぞれ消耗または再出現されるにつれ、これらの動物のウイルス負荷は、増加または減少した（Ｊｉｎ， Ｘ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １８９：９９１−９９８； Ｓｃｈｍｉｔｚ， ＪＥ， ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２８３：８５７−８６０）。したがって、これらのタンパク質に特異的なＣＴＬ応答の誘発は、ＨＩＶ−１ワクチンにおいて望ましい応答を表す。
【０００６】
ＨＩＶ−１の内部構造および酵素タンパク質は、それらの機能を保存する保存ドメインを有し、したがって、より効果的なＣＴＬ応答を誘発し得る抗原多様性をあまり示さない（Ｎｉｘｏｎ， ＤＦ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｎａｔｕｒｅ， ３３６：４８４−４８７）。効率的かつ永続性のＣＴＬ応答には、内因性抗原合成およびプロセシングが必要である。現在のワクチン送達技法には、生きた弱毒化ウイルスによる免疫化、不活性化組換えウイルス感染（Ｌｅｔｖｉｎ， ＮＬ， １９９８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２８０：１８７５−１８８０）、またはプラスミドＤＮＡ発現ベクターが包含される。ＨＩＶワクチンの開発中の裸のＤＮＡまたは組換えウイルスによるＣＴＬ応答誘発の主な障害は、ＨＩＶ−１の構造遺伝子および酵素遺伝子の発現が、ウイルス自体によってしっかりと調節されていることである。これらのタンパク質の発現は、組換えベクター中のＨＩＶ−１のＲｅｖ応答性エレメント（ＲＲＥ）の存在に非常に依存している（Ｃｕｌｌｅｎ， ＢＲ， １９９２， Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｒｅｖ．， ５６：３７５−３９４； Ｆｅｌｂｅｒ， ＢＫ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８６：１４９５−１４９９）。乏しい発現は、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子中のＡＴリッチな抑制ヌクレオチド配列（ＩＮＳ）の存在によって引き起こされ、それらは、スプライシングされていないＨＩＶ１、ｍＲＮＡの核外移行および効率的な発現を阻害する。マウスにおけるＨＩＶに対するＤＮＡワクチン接種の初期の研究では、それらの発現ベクター中にＲｅｖを含むことが必要であった（Ｌｕ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０９：１４７−１５４； Ｏｋｕｄａ， Ｋ ｅｔ ａｌ．， １９９５， ＡＩＤＳ Ｒｅｓ． Ｈｕｍ． Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ， １１：９３３−９４３； Ｗａｎｇ， Ｂ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０：４１５６−４１６０）が、ＩＮＳの修飾が、ＨＩＶ−１  ＧａｇのＲｅｖ非依存性発現の促進を示し（Ｑｉｕ， Ｊ−Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７３：９１４５−９１５２； ｚｕｒ Ｍｅｇｅｄｅ， Ｊ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７４：２６２８−２６３５）、このタンパク質に対する検出可能な体液性およびＣＴＬ応答が可能となった（Ｑｉｕ， Ｊ−Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７３：９１４５−９１５２）。これらの改変ＨＩＶ−１  Ｇａｇ遺伝子は、マウスでのＤＮＡ免疫化後に、期待される密度および形態を有するウイルス様粒子を産生し、ＨＩＶ−１  Ｇａｇに対する免疫応答を誘発した（ｚｕｒ Ｍｅｇｅｄｅ， Ｊ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７４：２６２８−２６３５）。
【０００７】
［発明の概要］
ヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−１）に対する防御免疫は、複数のＨＩＶ抗原の直鎖状および配座エピトープの認識を必要とする可能性が高く、これらの応答が、ビリオン様構造または融合ＣＴＬエピトープにより効率的に誘発され得るかどうかは、これまで知られていなかった。本明細書中では、最適抗原提示および認識のためのコアタンパク質を露出させるために、切断部位、膜融合（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ドメイン、ならびに７アミノ酸繰り返し（ｈｅｐｔａｄ ｒｅｐｅａｔ）１および２のスペーシングの欠失を伴う改変ＨＩＶ  Ｅｎｖを提供する。さらに、本発明者等は、エピトープ提示を最大限にするように設計したポリタンパク質であるＧａｇ−ＰｏｌまたはＧａｇ−ＰＯｌ−Ｎｅｆ融合タンパク質を提供する。本発明は、任意のＨＩＶクレードまたは株、および他のウイルスの関連タンパク質にまで、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、およびＮｅｆの突然変異を拡張する。１個の主題に基づいた種々の組合せ、種々の順序、および種々の変更が想定され、この主題は、広範なＣＴＬおよび抗体応答を発生するエピトープの提示を最適化することである。
【０００８】
より具体的には、本発明者等は、ＤＮＡワクチン接種後の体液性および細胞性免疫応答に対するヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）エンべロープ（Ｅｎｖ）中の特異的突然変異の効果について研究してきた。融合中間体を模倣するように意図した保存グリコシル化部位または種々のＣＯＯＨ末端突然変異の改変を伴うＨＩＶ  Ｅｎｖコードプラスミド発現ベクターをマウスに注射した。保存グルコシル化部位の消失は、体液性またはＣＴＬ免疫性を実質的に強化しなかった。対照的に、切断部位、膜融合ドメイン、ならびに７アミノ酸繰り返し１および２のスペーシングの欠失を伴う改変ｇｐ１４０は、ＣＴＬ応答の効果を減少することなく体液性免疫を強化した。細胞性免疫に影響を及ぼすことなく自然ｇｐ１６０に対する抗体応答を刺激するその能力のため、この改変ｇｐ１４０または関連誘導体は、ＡＩＤＳワクチンの有用な成分であると想定される。
【０００９】
さらに、本発明者等は、様々な形態のこれらのタンパク質をコードするＲＥｖ非依存性発現ベクターによるプラスミドＤＮＡ免疫化後の、ＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌに対する免疫応答を調べた。Ｇａｇ単独またはＧａｇ−Ｐｏｌ（ビリオン様粒子（ＶＬＰ）を形成しなかったＰｏｌ単独またはＧａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質と比較して、この両者ともに、ＶＬＰを生じた）を含む４個の発現ベクターによるワクチン接種後に、免疫応答を解析した。Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質は、ＤＮＡワクチン接種したマウス中のＧａｇおよびＰｏｌに対する最も広範でかつ強力なＣＴＬ応答を誘発し、この免疫原はまた、ＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌ決定基に対する抗体応答を容易に誘発した。広範なＣＴＬおよび抗体応答を誘発するその能力により、このＧａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質または関連誘導体は、ＡＩＤＳワクチンの有用な成分であると想定される。
【００１０】
【表１】
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【００１１】
［発明の詳細な説明］
本発明は、遺伝的免疫化のための免疫原性を強化するＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、およびＮｅｆの改変を提供する。ＨＩＶおよびＳＩＶの両方は、レトロウイルス科のレンチウイルス属の遺伝的に関連した成員である。ヒトからのレンチウイルス単離集団は、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２と称される２個のタイプの一方に分類される。類別体系により、ＨＩＶ−１の９個のサブタイプ（クレード）（Ａ〜Ｉ）、およびＨＩＶ−２の５個のサブタイプ（Ａ〜Ｅ）が認識されている。ＨＩＶおよびＳＩＶ配列情報の概論は、Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ， ＮＭ： Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにより作成されたデータベース中に見出される。
【００１２】
核酸分子
本明細書中に記載する場合、本発明の核酸分子は、クローニングにより得られるか、または合成的に生産される、ＲＮＡの形態あるいはＤＮＡの形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、センス鎖としても既知のコード鎖であってもよく、あるいは、それは、アンチセンス鎖とも呼ばれる非コード鎖であってもよい。
【００１３】
「単離」核酸分子（複数可）とは、その自然環境から取り出された核酸分子（すなわち、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を意図する。例えば、ベクター中に含入される組換えＤＮＡ分子は、本発明の目的で、単離されているとみなされる。単離ＤＮＡ分子の更なる例としては、異種宿主細胞中に維持される組換えＤＮＡ分子、または溶液中の精製（部分的にまたは実質的に）ＤＮＡ分子が挙げられる。単離ＲＮＡ分子としては、本発明のＤＮＡ分子のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏＲＮＡ転写物が挙げられる。本発明による単離核酸分子としてはさらに、合成的に生産されたかかる分子が挙げられる。
【００１４】
本発明の核酸分子としては、野生型ＨＩＶ遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子、および上述のものとは実質的に異なる配列を含むが、遺伝コードの縮重により、野生型ＨＩＶポリペプチドのＯＲＦを依然としてコードするＤＮＡ分子が挙げられる。当然のことながら、遺伝コードは、当該技術分野で既知である。ヒトコドン使用頻度に関して最適化した縮重変異体が好ましい。
【００１５】
別の態様では、本発明は、上述の本発明の核酸分子中のポリヌクレオチドの一部に、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。「ストリンジェントハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ  ＮａＣｌ、７５ｍＭ  クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％デキストラン硫酸、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断（ｓｈｅａｒｅｄ）サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で４２℃で一晩インキュベーションした後に、約６５℃で０．１×ＳＳＣ中でフィルターを洗浄することを意図する。
【００１６】
ポリヌクレオチドの「一部」にハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、参照ポリヌクレオチドの、少なくとも約１５個のヌクレオチド（ｎｔ）、より好ましくは少なくとも約２０個のｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０個のｎｔ、より一層好ましくは約３０〜７０個のｎｔにハイブリダイズするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）を意図する。
【００１７】
例えば「少なくとも２０個のｎｔ長」を有するポリヌクレオチドの一部とは、参照ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列由来の２０個またはそれ以上の連続ヌクレオチドを意図する。当然のことながら、Ｔ（またはＣ）残基の相補的範囲（ｓｔｒｅｔｃｈ）にのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、ポリＴ（またはＵ）範囲またはそれらの相補体を有する任意の核酸分子（例えば、事実上任意の二本鎖ＤＮＡクローン）にハイブリダイズするため、本発明の核酸分子の一部にハイブリダイズするのに使用される本発明のポリヌクオレチドに包含されないであろう。
【００１８】
本明細書に記載する場合、ＨＩＶポリペプチドをコードする本発明の核酸分子としては、単独で完全長ポリぺプチドのアミノ酸配列をコードするもの；完全長ポリペプチド、およびプレタンパク質もしくはプロタンパク質またはプレプロタンパク質配列のようなリーダー配列あるいは分泌配列をコードするもののようなさらなる配列のコード配列；転写、スプライシングを含むｍＲＮＡプロセシング、およびポリアデニル化シグナル（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）で役割を果たす転写された非翻訳配列のような、イントロンならびに非コード５’および３’配列が挙げられるが、これらに限定されないさらなる非コード配列とともに、上述のさらなるコード配列ありまたはなしの完全長ポリペプチドのコード配列；およびさらなる機能性を提供するもののようなさらなるアミノ酸をコードするさらなるコード配列である。
【００１９】
本発明はさらに、ＨＩＶタンパク質の一部、類縁体または誘導体をコードする、本発明の核酸分子の変異体に関する。変異体は、天然対立遺伝子変異体のように天然に存在してもよい。「対立遺伝子変異体」とは、生物ゲノム上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子の幾つかの代替的形態の１個を意図する（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ， Ｌｅｗｉｎ， Ｂ．， ｅｄ．， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。天然に存在しない変異体は、当該技術分野で既知の突然変異誘発技法を用いて産生されてもよい。
【００２０】
かかる変異体としては、ヌクレオチド置換、欠失または付加により産生されたものが挙げられ、それは、１個またはそれ以上のヌクレオチドを包含してもよい。変異体は、コード領域、非コード領域、またはその両方で変更されてもよい。コード領域での変更は、保存的または非保存的アミノ酸置換、欠失、あるいは付加をもたらし得る。これらのうちで特に好ましいのは、サイレント置換、付加および欠失であり、それは、ＨＩＶポリペプチドまたはその一部の特性および活性を変更させない。また、この点で特に好ましいのは、保存的置換である。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、野生型ＨＩＶポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、またはそれに相補的なヌクレオチド配列に、少なくとも９５％同一、より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む核酸分子を包含する。
【００２２】
ＨＩＶポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配列に対して、少なくとも、例えば９５％「同一の」ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチド配列がＨＩＶポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配列のそれぞれ１００個のヌクレオチド当たり５個以下の点突然変異を含み得る以外は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照配列と同一であることを意図する。換言すると、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中の５％以下のヌクレオチドが、欠失されてもよく、または別のヌクレオチドで置換されてもよく、あるいは参照配列中の全ヌクレオチドの５％以下のヌクレオチド数が参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこれらの突然変異は、参照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置で、あるいは参照配列中のヌクレオチド間で別個に、または参照配列内の１個またはそれ以上の連続群で点在した末端位置間のいずれかで生じ得る。
【００２３】
実際には、任意の特定核酸分子が、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ， ５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ． ５３７１１）のような既知のコンピュータプログラムを用いて、慣用的に決定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２： ４８２−４８９ （１９８１）の局所ホモロジーアルゴリズムを使用し、２つの配列間の相同性の最良セグメントを見つけ出す。特定配列が、例えば本発明による参照配列に９５％同一であるかどうかを決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラムを用いる場合、パラメータは、当然のことながら、同一性％が、参照ヌクレオチド配列の完全長にわたって算出され、かつ参照配列中でヌクレオチドの総数の５％以下の相同性におけるギャップが許容されるように設定される。
【００２４】
本出願は、ＨＩＶポリペプチド活性を有するポリペプチドをコードする本明細書中で配列表中に示した核酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸分子に関する。「ＨＩＶ活性を有するポリペプチド」とは、特定の生物学的アッセイでＨＩＶ活性を示すポリペプチドを意図する。例えば、Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌタンパク質活性は、適切な免疫学的アッセイにより、免疫学的性質の変化に関して測定することができる。
【００２５】
当然のことながら、遺伝コードの縮重に起因して、本明細書中で配列表に示した核酸配列に対して、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を有する多数の核酸分子が、「ＨＩＶポリペプチド活性を有する」ポリペプチドをコードすることを、当業者は直ちに認識するであろう。実際に、これらのヌクレオチド配列の縮重変異体すべてが同一のポリペプチドをコードするため、このことは、上に記載の比較アッセイを実施しなくても、当業者には明らかであろう。縮重変異体でないような核酸分子に関して、妥当な数がまた、ＨＩＶポリぺプチド活性を有するポリペプチドをコードすることは、当該技術分野でさらに認識されるであろう。これは、当業者が、タンパク質機能を有意に達成する可能性が低いか、または可能性がまったくないアミノ酸置換（例えば、ある脂肪族アミノ酸を第２の脂肪族アミノ酸で置き換えること）を完全に承知しているためである。
【００２６】
例えば、表現型的サイレントアミノ酸置換を作製する方法に関する手引きは、Ｂｏｗｉｅ， Ｊ． Ｕ． ｅｔ ａｌ．， 「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ： Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｕｔｉｏｎｓ」， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０ （１９９０）に提供され、ここで著者は、タンパク質は、驚くべきことにアミノ酸置換に寛容性であることを示している。
【００２７】
ポリペプチドおよび断片
本発明は、野生型ＨＩＶ遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）によりコードされるアミノ酸配列を有するＨＩＶポリペプチド、またはその一部（例えば、ｇｐ１２０）を含むペプチドもしくはポリペプチドをさらに提供する。
【００２８】
ＨＩＶポリペプチドの幾つかのアミノ酸配列は、タンパク質の構造または機能に著しく影響することなく変化させることができることが当該技術分野で認識されよう。配列のこのような差異を意図する場合、活性を決定するタンパク質上に臨界領域が存在することが念頭におかれるはずである。
【００２９】
したがって、本発明はさらに、実質的なＨＩＶポリペプチド活性を示すか、または以下で議論するタンパク質部分のようなＨＩＶタンパク質の領域を含むＨＩＶポリペプチドの変形を包含する。かかる突然変異体としては、欠失、挿入、反転、反復、および型置換が挙げられる。記載するように、アミノ酸変化が表現型的にサイレントである可能性が高いことに関連する手引きは、Ｂｏｗｉｅ， Ｊ．Ｕ．， ｅｔ ａｌ．， 「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ： Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｉｔｕｔｉｏｎｓ」， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０ （１９９０）に見出すことができる。
【００３０】
したがって、本発明のポリペプチドの断片、誘導体または類縁体は、（ｉ）アミノ酸残基の１個または複数が、保存または非保存アミノ酸残基（好ましくは、保存アミノ酸残基）で置換され、かつかかる置換アミノ酸残基は、遺伝コードによりコードされるものであってもそうでなくてもよいもの、または（ｉｉ）アミノ酸残基の１個または複数が、置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）ＩｇＧ  Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダーもしくは分泌配列、あるいは成熟ポリペプチドまたはプロタンパク質配列の精製のために使用される配列のようなさらなるアミノ酸が、成熟ポリペプチドに融合されるものであってもよい。かかる断片、誘導体および類縁体は、本明細書中の教示から、当業者の範囲内であると考えられる。
【００３１】
記載するように、変化は、タンパク質のフォールディングまたは活性に有意に影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換のような軽度のものが好ましい（表Ａ参照）。
【００３２】
【表Ａ】
2004533208.tif 000009
【００３３】
当然のことながら、当業者が行うアミノ酸置換の数は、上述のものを含む多くの要素に依存するであろう。概して、任意の所定のＨＩＶポリペプチドに関するアミノ酸置換の数は、５０、４０、３０、２０、１０、５または３以下であろう。
【００３４】
機能に必須である本発明のＨＩＶポリペプチド中のアミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニンスキャニング突然変異誘発のような当該技術分野で既知の方法により同定することができる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５ （１９８９））。後者の手法は、分子中のあらゆる残基に単一のアラニン突然変異を導入する。次に、生じた突然変異分子を、免疫学的性質の変化のような生物活性に関して試験する。
【００３５】
本発明のポリペプチドは、単離形態で利便性よく提供される。「単離ポリペプチド」とは、その自然環境から取り出したポリペプチドを意図する。したがって、組換え宿主細胞内で生産および／または含入されるポリペプチドは、本発明の目的で単離されているとみなされる。
【００３６】
また組換え宿主細胞または自然源から、部分的または実質的に精製されたポリペプチドも、「単離ポリペプチド」として意図される。例えば、ＨＩＶポリペプチドの組換え的に産生される型は、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０ （１９８８）に記載される一段階法により実質的に精製することができる。
【００３７】
本発明のポリペプチドには、本明細書中で配列表に示したポリペプチドを含むポリペプチド、ならびに上述のポリペプチドに対して、少なくとも９５％同一、より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、また少なくとも３０個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸を有するかかるポリペプチドの一部を含むポリペプチドが包含される。
【００３８】
ＨＩＶポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して、少なくとも例えば９５％「同一の」アミノ酸配列を有するポリペプチドとは、ポリヌクレオチド配列がＨＩＶポリペプチドの参照アミノ酸のそれぞれ１００個のアミノ酸当たり５個以下のアミノ酸変更を含み得る以外は、ポリペプチドのアミノ酸配列が、参照配列と同一であることを意図する。換言すると、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、参照配列中の５％以下のアミノ酸残基が、欠失されてもよく、または別のアミノ酸で置換されてもよく、あるいは参照配列中の全アミノ酸残基の５％以下のアミノ酸数が参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこれらの変更は、参照アミノ酸配列のアミノ末端またはカルボキシル末端位置で、あるいは参照配列中の残基間で別個に、または参照配列内の１個またそれ以上の連続群で点在した末端位置間のいずれかで生じ得る。
【００３９】
実際には、任意の特定ポリペプチドが、例えば本明細書中で配列表に示したアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ， ５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ． ５３７１１）のような既知のコンピュータプログラムを用いて、慣用的に決定することができる。特定配列が、例えば本発明による参照配列に９５％同一であるかどうかを決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラムを用いる場合、パラメータは、当然のことながら、同一性％が、参照アミノ酸配列の完全長にわたって算出され、かつ参照配列中でアミノ酸残基の総数の５％以下の相同性におけるギャップが許容されるように設定される。
【００４０】
本発明のポリペプチドは、任意の従来の手段により生産してもよいＨｏｕｇｈｔｅｎ， Ｒ．Ａ． （１９８５） Ｇｅｎｅｒａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ： ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｍｉｎｏ ａｄｉｄｓ）． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５。この「同時複数ペプチド合成（ＳＭＰＳ）」プロセスは、米国特許第４，６３１，２１１号（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， （１９８６））にさらに記載されている。
【００４１】
本発明はまた、本発明の核酸分子を含むベクター、組換えベクターで遺伝子操作した宿主細胞、および組換え技法によるＨＩＶポリペプチドまたはその断片の生産に関する。
【００４２】
ポリヌクレオチドを、宿主中に増殖用の選択マーカーを有するベクターに連結してもよい。一般に、プラスミドベクターを、リン酸カルシウム沈殿物のような沈殿物中で、または荷電脂質との複合体中で導入する。ベクターがウイルスである場合、適切なパッケージング細胞系を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏでパッケージングした後に、宿主細胞に形質導入してもよい。
【００４３】
ＤＮＡ挿入物は、例えば、いくつかを挙げると、ファージラムダ  ＰＬプロモーター、大腸菌ｌａｃ、ｔｒｐおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーターのような適切なプロモーターに作動的に連結すべきである。他の適切なプロモーターは、当業者に既知であろう。発現構築物は、転写開始、終結用の部位および、翻訳された領域で、翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに有するであろう。この構築物により発現される成熟転写物のコード部分は、好ましくは、開始コドンで開始する翻訳、および翻訳されるべきポリペプチドの末端に適切に位置する終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を包含するであろう。
【００４４】
記載するように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１個の選択マーカーを包含するであろう。かかるマーカーとしては、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸還元酵素またはネオマイシン耐性、ならびに大腸菌および他の細菌を培養するためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。適切な宿主の代表例としては、大腸菌、ストレプトミセス属およびネズミチフス菌細胞のような細菌細胞、酵母細胞のような真菌細胞、ショウジョウバエＳ２およびヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９のような昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳおよびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞のような動物細胞、ならびに植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。上述の宿主細胞用の適切な培養の培地および条件は当該技術分野で既知である。
【００４５】
細菌で使用するのに好ましいベクターとしては、Ｑｉａｇｅｎから入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、およびｐＱＥ−９、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ、ならびにＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５が挙げられる。好ましい真核ベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ、ならびにＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬである。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかであろう。
【００４６】
宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、陽イオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の方法により達成することができる。かかる方法は、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多くの標準的な実験室マニュアルに記載されている。
【００４７】
ＨＩＶポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィ、ホスホセルロースクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、およびレクチンクロマトグラフィを含む既知の方法により、組換え細胞培地から、回収および精製することができる。最も好ましくは、精製のために、高速液体クロマトグラフィ（「ＨＰＬＣ」）を使用する。本発明のポリペプチドは、天然で精製された生成物、化学合成手法の生成物、および原核または真核宿主（例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む）から組換え技法により生産した生成物を包含する。組換え生産手法で使用する宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グルコシル化されてもよく、あるいはグルコシル化されなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドはまた、場合によっては宿主媒介性プロセスの結果として、開始修飾メチオニン残基を含んでもよい。
【００４８】
薬学的配合物、投与量、および投与様式
本発明の化合物は、当業者に既知の技法を用いて投与してもよい。好ましくは、化合物を配合して、遺伝的免疫化により投与する。配合および投与に関する技法は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」， １８ｔｈ ｅｄ．， １９９０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡに見出し得る。適切な経路としては、幾つか例を挙げると、筋内、皮内、皮下、骨髄内注射、ならびに髄腔内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射のような非経口送達が挙げられ得る。注射に関して、本発明の化合物は、水溶液中で、好ましくはハンクス溶液、リンゲル溶液または生理食塩緩衝液のような生理学的に適合性の緩衝液中で配合してもよい。
【００４９】
本発明の化合物の細胞内投与が好ましい場合では、当業者に既知の技法を利用してもよい。例えば、かかる化合物をリポソーム内に被包した後、上に記載するように投与してもよい。リポソームは、水性内部を有する球状脂質二重層である。リポソーム形成時に水溶液中に存在する分子はすべて、水性内部に取り込まれる。リポソーム内容物は、外部微小環境から保護され、またリポソームが細胞膜と融合することから、細胞質に効果的に送達される。
【００５０】
細胞内投与されるべき本発明のヌクレオチド配列は、当業者に既知の技法を用いて、所定の細胞中で発現されてもよい。例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、もしくはシンドビスウイルス、または他のＲＮＡウイルスに由来する発現ベクター、あるいはプラスミドに由来する発現ベクターを、標的細胞集団へのかかるヌクレオチド配列の送達および発現のために使用してもよい。かかる発現ベクターの構築方法は既知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｏｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ、およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ＮＹを参照されたい。
【００５１】
本発明は、宿主の第一次免疫化（プライミング）のためのプラスミドの使用、および上記宿主を追加免疫するためのレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、もしくはシンドビスウイルス、または他のＲＮＡウイルスのような組換えウイルスの続く使用、またその逆にまで拡張する。例えば、宿主を、ＤＮＡ免疫化によりプラスミドで免疫化（プライミング）し、相当するウイルス構築物で追加免疫してもよい（その逆も可）。あるいは、宿主を、ＤＮＡ免疫化によりプラスミドで免疫化（プライミング）し、相当するウイルス構築物ではなく、異なるウイルス構築物で追加免疫してもよい（その逆も可）。
【００５２】
ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌに関して、本発明のタンパク質配列を、ＡＩＤＳすなわちＨＩＶ感染の治療の治療薬または予防薬（サブニットワクチンとして）として使用してもよい。治療上有効な用量とは、患者の症状を回復させるか、または患者の生存を延長させるのに十分な化合物量を指す。かかる化合物の毒性および治療効率は、例えば、ＬＤ５０（集団５０％の致死用量）、およびＥＤ５０（集団５０％に治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法により決定することができる。毒性の影響と治療の影響との間の用量比が治療指数であり、それは、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトで使用するための投与量範囲を処方するのに使用することができる。かかる化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にある。投与量は、使用する投薬形態および利用する投与経路に応じて、この範囲内で変化させてもよい。本発明の方法で使用する任意の化合物に関して、治療上有効な用量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。細胞培養で決定されるように、ＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲（例えば、試験化合物の非存在下で起こる量に対するウイルス感染の最大の半分の抑制を達成する試験化合物濃度）を達成する用量を、動物モデルで処方してもよい。かかる情報を使用して、ヒトでの有用な用量をより正確に決定することができる。例えば高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により、血漿中のレベルを測定してもよい。
【００５３】
本発明の化合物はさらに、予防用ワクチンの役割を果たし、その場合宿主は、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、ＧａｇおよびＰｏｌに対する抗体および／またはＣＴＬ応答を生じ、続いてこの応答は、好ましくは、例えばＨＩＶ感染をさらに抑制することで、ＨＩＶウイルスを中和するのに役立つ。したがって、予防用ワクチンとしての本発明の化合物の投与は、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌに対する抗体および／またはＣＴＬ応答を誘発し、そして／または例えば感染細胞に対するＨＩＶの能力を抑制することで、ＨＩＶを中和するのに十分な免疫応答を高めるのに有効な濃度の化合物を宿主に投与することを包含する。正確な濃度は、投与する特定の化合物に応じるが、当業者に既知の免疫応答の発生をアッセイするための標準的な技法により測定してもよい。
【００５４】
免疫学的応答を増強するために、化合物を適切なアジュバントとともに処方してもよい。かかるアジュバントとしては、水酸化アルミニウムのような鉱物ゲル、リソレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオンのような界面活性物質、他のペプチド、油エマルジョン、ならびにＢＣＧおよびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）のような潜在的に有用なヒトアジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
本発明による同時投与に適したアジュバントは、ＱＳ−２１、Ｄｅｔｏｘ−ＰＣ、ＭＰＬ−ＳＥ、ＭｏＧＭ−ＣＳＦ、ＴｉｔｅｒＭａｘ−Ｇ、ＣＲＬ−１００５、ＧＥＲＢＵ、ＴＥＲアミド、ＰＳＣ９７Ｂ、Ａｄｊｕｍｅｒ、ＰＧ−０２６、ＧＳＫ−１、ＧｃＭＡＦ、Ｂ−アレチン、ＭＰＣ−０２６、Ａｄｊｕｖａｘ、ＣｐＧ  ＯＤＮ、ベータフェクチン、Ａｌｕｍ、およびＭＦ５９を含めた、潜在的に安全であり、十分寛容性であり、ヒトに効果的であるものであるべきである（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｖａｃｃｉｎｅ， １８： ５９７、およびそこに含まれている参照文献を参照）。
【００５６】
投与してもよい他の意図されるアジュバントとしては、アルファ−インターフェロン、ガンマ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ｇＣＳＦ、ｇＭＣＳＦ、ＴＮＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１２のような、レクチン、成長因子、サイトカインおよびリンホカインが挙げられる。
【００５７】
上に記載するような治療すべてに関して、正確な処方、投与経路、および投与量は、患者の状態を考慮して、担当医師により選択され得る（例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．， １９７５， ｉｎ 「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」， Ｃｈ．１ ｐ．１を参照）。
【００５８】
毒性または臓器機能不全により、投与を終了、中断または調節する方法と時期を主治医が理解していることに留意すべきである。逆に、主治医はまた、臨床的応答が十分でない場合、治療をより高レベルに調節することについても認識している（毒性を排除する）。所定のウイルス感染の管理における投与用量の規模は、治療される状態の重篤性および投与経路により変化するであろう。用量、およびおそらくプライム−追加免疫レジメンもまた、個々の患者の年齢、体重、および応答に応じて変化するであろう。上記で議論したものに匹敵するプログラムを獣医学に使用してもよい。
【００５９】
本発明の薬理学的に活性な化合物は、患者（例えばヒトを含む哺乳動物）に投与するための医薬品を生産する製剤調製学の従来法に従って加工することができる。
【００６０】
本発明の化合物は、従来の賦形剤、すなわち、活性化合物と有害に反応しない、非経口、経腸（例えば、経口）もしくは局所用途に適した薬学的に許容可能な有機または無機キャリア物質と混合して使用することができる。適切な薬学的に許容可能なキャリアとしては、水、塩溶液、アルコール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロースまたはデンプンのような炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的調製物を滅菌することができ、望ましい場合には、活性化合物と有害に反応しない助剤、例えば、潤滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝液、着色剤、風味物質および／または芳香物質等と混合することができる。望ましい場合、それらを、他の活性作用物質、例えばビタミン類と組み合わせることもできる。
【００６１】
筋内、皮内、皮下、鼻腔内、嚢内、脊髄内、胸骨下、および静脈内注射を包含する非経口用途に関して、特に好適なのは、注射可能な滅菌溶液、好ましくは油性溶液または水溶液、ならびに懸濁液、エマルジョン、または坐剤を含む埋没片である。注射用配合物は、添加防腐剤とともに、アンプル中にまたは複数用量容器中に、単位投薬形態で提供してもよい。組成物は、油性または水性媒質中で、懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとってもよく、また沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤のような配合剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は、使用前に、適切な媒質、例えば滅菌の発熱物質を含まない水で構成するための粉末形態であってもよい。
【００６２】
経腸用途に関して、特に好適なのは、錠剤、糖衣錠、液体、ドロップ剤、坐剤、またはカプセル剤である。薬学的組成物は、結合剤（例えば、あらかじめゼラチン化したコーンスターチ、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ポテトスターチまたはナトリウムスターチグリコレート）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のような薬学的に許容可能な賦形剤を用いて、従来の手段により調製してもよい。錠剤は、当該技術分野で既知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与用の液体調製物は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとってもよく、あるいは使用前に水または適切な媒質で構成するための乾燥生成物として提供されてもよい。かかる液体調製物は、沈殿防止剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）、非水性媒質（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油）、および防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸）のような薬学的に許容可能な添加剤を用いて、従来の手段により調製してもよい。調製物はまた、必要に応じて、緩衝液、塩類、風味剤、着色剤および甘味剤を含んでもよい。甘味媒質が用いられるシロップ、エリキシル等を使用することができる。
【００６３】
持続または指向（ｄｉｒｅｃｔｅｄ）放出性組成物、例えばリポソーム、または活性化合物を、例えばマイクロカプセル化、複数コーティング等により、差次的に分解可能なコーティングで保護したものを配合することができる。新規化合物を凍結乾燥し、例えば注射用製品の調製のために、得られた凍結乾燥物を使用することも可能である。
【００６４】
吸入による投与に関して、本発明による使用のための化合物は、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガス）を用いて、加圧パックまたは噴霧器から、エーロゾルスプレー包装（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の形態で、利便性よく送達してもよい。加圧エーロゾルの場合には、投薬単位は、定量を送達するためのバルブを提供することで決定され得る。化合物とラクトースまたはデンプンのような適切な粉末基剤との粉末混合物を含む、吸入器または注入器で使用するための例えばゼラチンのカプセルあるいはカートリッジを配合してもよい。
【００６５】
局所用途に関しては、局所用途に適合するキャリアを含み、かつ好ましくは水を超える動的粘度を有する非噴霧可能形態、粘性から半固形または固形形態として使用される。適切な配合物としては、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏、粉末、リニメント、軟膏剤、エアロゾル等が挙げられるが、それらに限定されない。それらは望ましい場合には、滅菌され、あるいは助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝液または浸透圧に影響を及ぼす塩等と混合される。局所用途に関して、好ましくは固体または液体不活性キャリア物質と組み合わせた有効成分を、スクイーズボトル中に、あるいは加圧揮発性の通常は気体性の噴射剤（例えばフロン）と混合して包装される噴霧可能なエーロゾル調製物も好適である。
【００６６】
組成物は、望ましい場合、有効成分を含む１個または複数の単位投薬形態を含み得るパックまたはディスペンサー装置中に供給されてもよい。パックは、例えば、ブリスターパックのような金属またはプラスチック箔を含んでもよい。パックまたはディスペンサー装置に、投与に関する説明書を添えてもよい。
【００６７】
遺伝的免疫化
本発明による遺伝的免疫化は、感染性作用物質または感染性ベクターを用いることなく、効果的な免疫応答を誘発する。ＣＴＬ応答を通常生じるワクチン接種技法は、まさに感染性作用物質の使用により行うものである。完全な広範の免疫応答は、死菌ワクチン、不活性化ワクチンまたはサブユニットワクチンで免疫化した個体では一般に示されない。本発明は、感染性作用物質を使用するワクチン接種に関連した危険性および問題がなく、安全な様式で、完全量の免疫応答を達成する。
【００６８】
本発明によれば、標的タンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡを、それが発現される個体の細胞に導入し、こうして標的タンパク質を産生する。ＤＮＡまたはＲＮＡは、個体の細胞での発現に必要な調節エレメントに連結される。ＤＮＡ用の調節エレメントとしては、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルが挙げられる。さらに、Ｋｏｚａｋ領域のような他のエレメントもまた、遺伝子構築物に含まれてもよい。
【００６９】
遺伝子ワクチンの遺伝子構築物は、遺伝子発現に必要な調節エレメントに作動可能に連結された標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。したがって、生細胞にＤＮＡまたはＲＮＡ分子を組込むことにより、標的タンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡの発現をもたらし、こうして標的タンパク質の産生がもたらされる。
【００７０】
細胞により取り込まれる場合、調節エレメントに作動可能に連結された標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物は、機能している染色体外分子として細胞中に存在したままでよく、あるいはそれは、細胞の染色体ＤＮＡに組込まれてもよい。ＤＮＡは、細胞中に導入されてもよく、そこでそれは、プラスミドの形態で別個の遺伝子物質としてとどまる。あるいは、染色体に組込むことができる直鎖状ＤＮＡを、細胞に導入してもよい。ＤＮＡを細胞に導入する場合、染色体へのＤＮＡ組込みを促進する試薬を添加してもよい。また組込みを促進するのに有用なＤＮＡ配列が、ＤＮＡ分子中に含まれていてもよい。染色体ＤＮＡへの組込みは、必然的に染色体の操作を要するため、複製または非複製染色体外分子としてＤＮＡ構築物を維持することが好ましい。これにより、ワクチンの有効性に影響を及ぼすことなく、染色体へのスプライシングにより細胞に損害を与える危険性が減少する。あるいは、ＲＮＡを細胞に投与してもよい。セントロメア、テロメア、および複製起点を含む直鎖状ミニ染色体として、遺伝子構築物を提供することも意図される。
【００７１】
遺伝子ワクチンの遺伝子構築物の必須エレメントとしては、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列、およびワクチン接種した個体の細胞での当該配列の発現に必要な調節エレメントが挙げられる。調節エレメントは、発現を可能にするために、標的タンパク質をコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結される。
【００７２】
標的タンパク質をコードする分子は、タンパク質に翻訳されるタンパク質コード分子である。かかる分子としては、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡが挙げられる。これらの分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはそれらのハイブリッド、あるいはｍＲＮＡのようなＲＮＡ分子であってもよい。したがって、本明細書中で使用する場合、「ＤＮＡ構築物」、「遺伝子構築物」、および「ヌクレオチド配列」という用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子の両方を指すことを意図する。
【００７３】
ＤＮＡ分子の遺伝子発現に必要な調節エレメントとしては、プロモーター、開始コドン、終止コドン、およびポリアデニル化シグナルが挙げられる。さらに、エンハンサーは、多くの場合遺伝子発現に必要とされる。これらのエレメントは、ワクチン接種した個体中で作動可能であることが必要である。さらに、これらのエレメントは、ワクチン接種した個体の細胞でヌクレオチド配列を発現することができ、したがって標的タンパク質を生産することができるように、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されることが必要である。
【００７４】
開始コドンおよび終止コドンは一般に、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列の一部であるとみなされる。しかしながら、これらのエレメントは、ワクチン接種した個体で機能的であることが必要である。
【００７５】
同様に、使用するプロモーターおよびポリアデニル化シグナルは、ワクチン接種した個体の細胞内で機能的でなくてはならない。
【００７６】
特にヒト用の遺伝子ワクチンの生産で、本発明を実施するのに有用なプロモーターの例としては、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳腺癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ＨＩＶ末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターのようなヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、モロニ−ウイルス、ＡＬＶ、ＣＭＶ前初期プロモーターのようなサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、ならびにヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン、およびヒトメタロチオネインのようなヒト遺伝子由来のプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
特にヒト用の遺伝子ワクチンの生産で、本発明を実施するのに有用なポリアデニル化シグナルの例としては、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルおよびＬＴＲポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。特に、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと呼ばれるｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆ．）中のＳＶ４０ポリアデニル化シグナルを使用することができる。
【００７８】
ＤＮＡ発現に必要とされる調節エレメントの他に、他のエレメントもＤＮＡ分子中に含んでもよい。かかるさらなるエレメントとしては、エンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン、ならびにＣＭＶ、ＲＳＶおよびＥＢＶのようなウイルスエンハンサーを含むが、これらに限定されない群から選択され得る。
【００７９】
染色体外で構築物を維持して、細胞中に構築物の複数のコピーを産生するために、哺乳動物の複製起点を有する遺伝子構築物を提供することができる。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．）からのプラスミドｐＣＥＰ４およびｐＲＥＰ４は、組込みなしで高コピーエピソーム複製をもたらすエプスタインバーウイルスの複製起点および核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域を含む。
【００８０】
何らかの理由により遺伝子構築物を受け取った細胞を排除することが望ましい場合、細胞破壊のための標的として作用するさらなるエレメントを付加してもよい。発現可能な形態にあるヘルペスチミジンキナーゼ（ｔｋ）遺伝子を、遺伝子構築物中に包含することができる。構築物が細胞に導入されると、ｔｋが産生されるであろう。薬剤ガンシクロビルを個体に投与することができ、当該薬剤は、ｔｋを産生する任意の細胞を選択的に死滅させるであろう。したがって、ワクチン接種した細胞の選択的な破壊を可能にする系を提供することができる。
【００８１】
機能的遺伝子構築物であるためには、調節エレメントを、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結しなくてはならない。したがって、開始または終止コドンを、コード配列にインフレーム中に存在させることが必要である。
【００８２】
同一ベクターまたは異なるベクター上にある所定のタンパク質、および所定の別のタンパク質または他のタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を、細胞に導入してもよい。別個のプロモーターにより、または単一プロモーターにより、ベクター上のＯＲＦを制御してもよい。ポリシストロンメッセージを生じる後者の配置では、ＯＲＦは、翻訳停止および開始シグナルで分離されているであろう。これらのＯＲＦ間の内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の存在は、ビスシストロンまたはポリシストロンｍＲＮＡの翻訳の内部開始により、所定の第２または第３等のＯＲＦから生じる発現産物の産生を可能とする。
【００８３】
本発明によれば、遺伝子ワクチンは、免疫化すべき個体に直接投与してもよく、あるいは投与後に再移植する取り出した個体細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで投与してもよい。いずれかの経路により、遺伝子物質を、個体の身体に存在する細胞に導入する。投与経路としては、筋内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼内、および経口、ならびに経皮投与、あるいは吸入または坐剤による投与が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい投与経路としては、筋内、腹腔内、皮内および皮下注射が挙げられる。遺伝子構築物は、伝統的な注射器、無針注射装置、または微粒子遺伝子銃を含むが、これらに限定されない手段により投与してもよい。あるいは、遺伝子ワクチンは、個体から取り出した細胞に、様々な手段で導入してもよい。かかる手段としては、例えばｅｘ  ｖｉｖｏトランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、および微粒子銃が挙げられる。遺伝子構築物が細胞に取り込まれた後に、それらを個体に再移植する。あるいは、ワクチン接種した細胞が本来別の個体から採取したものであったとしても、内部に遺伝子構築物が組込まれた非免疫原性細胞を、個体に移植することができることが意図される。
【００８４】
本発明による遺伝子ワクチンは、約１ｎｇ〜約１０００μｇのＤＮＡを含む。幾つかの好ましい実施形態では、ワクチンは、約１０ｎｇ〜約８００μｇのＤＮＡを有する。幾つかの好ましい実施形態では、ワクチンは、約０．１〜約５００μｇのＤＮＡを有する。幾つかの好ましい実施形態では、ワクチンは約１〜約３５０μｇのＤＮＡを有する。幾つかの好ましい実施形態では、ワクチンは、約２５〜約２５０μｇのＤＮＡを有する。幾つかの好ましい実施形態では、ワクチンは、約１００μｇのＤＮＡを有する。
【００８５】
本発明による遺伝子ワクチンは、使用する投与様式に従って配合される。当業者は、遺伝子構築物を含む遺伝子ワクチンを容易に配合することができる。筋内注射が選択される投与様式である場合には、等張性配合物が好ましくは使用される。一般に、等張性のための添加物としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、およびラクトースを挙げることができる。場合によっては、リン酸緩衝生理食塩水のような等張溶液が好ましい。安定剤としては、ゼラチンおよびアルブミンが挙げられる。幾つかの実施形態では、血管収縮剤を配合物に添加する。滅菌かつ発熱物質を含まない、本発明による薬学的調製物が提供される。
【００８６】
遺伝的構築物は、任意に、トランスフェクションを強化する化合物（すなわち、トランスフェクト剤）、細胞分裂を刺激する化合物（すなわち、複製剤）、投与部位への免疫細胞遊走を刺激する化合物（すなわち、炎症剤）、免疫応答を強化する化合物（すなわち、アジュバント）、またはこれらの活性の２個またはそれ以上を有する化合物のような、１個または複数の応答増強剤とともに配合してもよい。
【００８７】
一実施形態では、遺伝子構築物の前に、それと同時に、またはその後に、既知で市販されている薬学的化合物のブピバカインを投与する。ブピバカインおよび遺伝子構築物は、同一組成物中で配合してもよい。ブピバカインは、組織に投与する場合に、その多くの特性および活性に関して細胞刺激剤として特に有用である。ブピバカインは、細胞による遺伝子物質の取り込みを促進および容易にする。したがって、ブピバカインは、トランスフェクト剤である。ブピバカインを併用した遺伝子構築物の投与は、遺伝子構築物に細胞が侵入するのを容易にする。ブピバカインは、細胞膜を破壊するか、そうでなければ細胞膜をより浸透性にさせると考えられる。細胞分裂および複製は、ブピバカインにより刺激される。したがって、ブピバカインは、複製剤として作用する。ブピバカインの投与はまた、組織に炎症を起こし、組織に損害を与える。したがって、ブピバカインは、投与部位への免疫細胞の遊走および走化性を誘発する炎症剤として作用する。投与部位に通常存在する細胞のほかに、炎症剤に応答してその部位に遊走する免疫系細胞が、投与した遺伝子物質およびブピバカインと接触することができる。トランスフェクション剤として作用するブピパカインは、同様に免疫系のような細胞による遺伝子物質の取り込みを促進するのにも利用可能である。
【００８８】
ブピバカインのほかに、メピバカイン、リドカイン、プロカイン、カルボカイン、メチルブピバカイン、および他の同様に作用する化合物を、応答増強剤として使用してもよい。かかる増強剤は、遺伝子構築物の細胞への取り込みを促進し、細胞複製を刺激し、投与部位での炎症性応答を開始する細胞刺激剤として作用する。
【００８９】
トランスフェクト剤および／または複製剤および／または炎症剤として機能し、投与してもよい他の意図される応答増強剤としては、アルファ−インターフェロン、ガンマ−インターフェロン、白血球由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ｇＣＳＦ、ｇＭＣＳＦ、ＴＮＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１２のようなレクチン、成長因子、サイトカインおよびリンホカインが挙げられ、コラゲナーゼ、線維芽細胞成長因子、エストロゲン、デキサメタゾン、サポニン、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）のような界面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を含むＬＰＳ類縁体、ムラミルペプチド、スクアレンおよびスクアランのようなキノン類縁体およびベシクル、ヒアルロン酸およびヒアルロニダーゼもまた、遺伝子構築物と併用して投与するのに使用してもよい。幾つかの実施形態では、これらの作用物質の組合せは、遺伝子構築物と併用して同時投与される。他の実施形態では、これらの作用物質をコードする遺伝子は、当該作用物質の同時投与のために、同一または異なる遺伝子構築物（複数可）に含まれる。
【００９０】
本発明のＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌヌクレオチド配列については、特に遺伝的免疫化により、ＡＩＤＳすなわちＨＩＶ感染の治療の治療薬または予防薬として使用してもよい。治療上有効な用量とは、患者の症状を回復させるか、または患者の生存を延長させるのに十分な化合物量を指す。かかる化合物の毒性および治療効率は、例えば、ＬＤ５０（集団５０％の致死用量）、およびＥＤ５０（集団５０％に治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法により決定することができる。毒性と治療の効果との間の用量比が治療指数であり、それは、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトで使用するための投与量範囲を処方するのに使用することができる。かかる化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にある。投与量は、使用する投薬形態および利用する投与経路に応じて、この範囲内で変化させてもよい。本発明の方法で使用する任意の化合物に関して、治療上有効な用量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。細胞培養で決定されるように、ＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲（例えば、試験化合物の非存在下での事象の量に対するウイルス感染の最大の半分の抑制を達成する試験化合物濃度）を達成する用量を、動物モデルで処方してもよい。かかる情報を使用して、ヒトでの有用な用量をより正確に決定することができる。例えば高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により、血漿中のレベルを測定してもよい。
【００９１】
本発明の（遺伝的免疫化用の）化合物はさらに、予防用ワクチンの役割を果たし、その場合宿主は、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌに対する抗体および／またはＣＴＬ応答を生じ、続いてこの応答は、好ましくは、例えばＨＩＶ感染をさらに抑制することで、ＨＩＶウイルスを中和するのに役立つ。したがって、予防用ワクチンとしての本発明の化合物の投与は、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、Ｇａｇ、およびＰｏｌに対する抗体および／またはＣＴＬ応答を誘発し、および／または例えば感染細胞に対するＨＩＶの能力を抑制することで、ＨＩＶを中和するのに十分な免疫応答を高めるのに有効な濃度の化合物を宿主に投与することを包含する。正確な濃度は、投与する特定の化合物に応じるが、当業者に既知の免疫応答の発生をアッセイするための標準的な技法を使用して測定してもよい。
【００９２】
Ｅｎｖ
自然ｇｐ１６０に対する免疫応答を改善するために、また最適な抗原提示および認識のためにコアタンパク質を露出するために、本発明者等は、改変形態のタンパク質に対する免疫応答について解析した。保存Ｎ結合グリコシル化部位の役割を研究し、融合中間体の類縁体を開発した。切断部位（Ｃ）、融合ペプチド（Ｆ）、および２つの７アミノ酸繰り返し間のインタースペース（Ｉ）を有する発現ベクターをΔＣＦＩと称した。プラスミドＤＮＡワクチン接種は、免疫原の開発および解析にとって有用な技術であった。このワクチン接種方法は、適切な翻訳後修飾、妥当な細胞内輸送、および抗原提示を可能にする。げっ歯類において筋内または皮内のいずれかにより裸のＤＮＡを直接注射することにより、免疫応答が誘発され、プラスミド発現ベクターを容易に改変して、種々の形態のＨＩＶエンベロープタンパク質を発現する能力により、ワクチン免疫原の迅速かつ全身的な試験が可能となる。この開示において、本発明者等は、遺伝子発現を改良するために、改変コドンを有するプラスミドで発現される改変Ｅｎｖ候補物に対する免疫応答を解析した。プラスミドＤＮＡを筋肉に注射した後に、抗体およびＣＴＬ応答の両方を解析した。ＨＩＶ  Ｅｎｖに対する抗体およびＣＴＬ応答を誘発する能力が改善された改変ｇｐ１４０ＤＮＡを、ＨＩＶに対して広範に中和する抗体応答を誘発することができる原型免疫原と想定する。
【００９３】
ウイルス膜融合タンパク質のコアタンパク質の露出
自然ｇｐ１６０に対する免疫応答を改善し、最適な抗原提示および認識のためにコアタンパク質を露出する改変ＨＩＶエンベロープタンパク質を本明細書中に記載する。Ｗｅｉｓｓｅｎｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ， ２， ６０５−６１６， １９９８は、ウイルス糖タンパク質の融合中間体のモデルとしてコアタンパク質を提唱しており、そこで糖タンパク質は、例えばエボラ・ザイール（Ｅｂｏｌａ Ｚａｉｒｅ）ＧＰ２、マウスモロニー白血病ウイルス（ＭｕＭｏＬｖ）のＴＭサブユニットの５５残基セグメント（Ｍｏ−５５）、低ｐＨ処理インフルエンザＨＡ２、ＨＩＶ  ｇｐ４１プロテアーゼ耐性コア、およびＳＩＶ  ｇｐ４１の場合のように、中心三重鎖コイルドコイルに続いて、鎖方向を逆にし、コアヘリックスに対して逆平行に収容されたαヘリックスに接続するジスルフィド結合ループを特徴とする（図Ａ）。したがって、ＨＩＶ  ｇｐ４１のプロテアーゼ耐性コアを露出することにより免疫応答を改善するためのストラテジーは、中心三重鎖コイルドコイルに続いて、鎖方向を逆にし、コアヘリックスに対して逆平行に収容されたαヘリックスに接続するジスルフィド結合ループを特徴とする他のウイルス膜融合タンパク質にまで拡張する。
【００９４】
このアプローチは、原型免疫原としての改変ｇｐ１４０に基づいて、ウイルス膜融合タンパク質Ｅｎｖのコアタンパク質を露出するために、すべてＣＯＯＨ末端切断を有するバックボーン上の切断部位（Ｃ）、融合ドメイン（Ｆ）、および２つの７アミノ酸繰り返し間のインタースペース（Ｉ）を置き換えるように設計した一連の内部突然変異を包含する。置き換えとは、アミノ酸残基の欠失、挿入、および／または置換を意味する。一実施形態では、欠失が意図される（すなわち、アミノ酸を欠失して、ΔＣＦＩ突然変異を創出する）。
【００９５】
この実施形態では、ΔＣ突然変異は、外部ドメインにエンベロープを共有結合するｇｐ１２０／ｇｐ４１切断部位を、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％、５６％、５５％、５４％、５３％、５２％、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％分欠失させることによりタンパク質分解性を排除することを意図する。
【００９６】
この実施形態では、ΔＦ突然変異は、融合ドメインを、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％、５６％、５５％、５４％、５３％、５２％、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％分欠失させることにより分子を可溶化することを意図する。
【００９７】
この実施形態では、ΔＩ突然変異は、２つの７アミノ酸繰り返し間のインタースペースを、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％、５６％、５５％、５４％、５３％、５２％、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％分欠失させることによりオリゴマー形成を安定化することを意図する。
【００９８】
この実施形態では、ＣＯＯＨ末端切断は、細胞質ドメインを、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％、５６％、５５％、５４％、５３％、５２％、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％分欠失させることにより毒性を低減することを意図する。
【００９９】
この実施形態では、任意に、ＣＯＯＨ末端切断は、膜貫通ドメインを、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、７０％、６９％、６８％、６７％、６６％、６５％、６４％、６３％、６２％、６１％、６０％、５９％、５８％、５７％、５６％、５５％、５４％、５３％、５２％、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％分欠失させることにより分子を可溶化するように拡張される。
【０１００】
アミノ酸置換は、保存的または非保存的性質を有するものを包含する。おそらく、ドメインの非保存的置換は、ドメインの欠失と同様に作用する。保存的アミノ酸置換は、類似した電荷、サイズおよび／または疎水性特性を有するアミノ酸と、１個またはそれ以上のアミノ酸を交換することに等しい。非保存的アミノ酸置換は、異なった電荷、サイズおよび／または疎水性特性を有するアミノ酸と、１個またはそれ以上のアミノ酸を交換することに等しい。アミノ酸ファミリーとしては、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）、および芳香族アミノ酸（フェニルアラミン、トリプトファン、およびチロシン）が挙げられる。外部ドメインにエンベロープを共有結合するｇｐ１２０／ｇｐ４１切断部位の欠失と同様に作用することでタンパク質分解を排除することを意図するΔＣ突然変異を、融合ドメインの欠失と同様に作用することで分子を可溶化することを意図するΔＦ突然変異を、２つの７アミノ酸繰り返し間のインタースペースの欠失同様に作用することでオリゴマー形成を安定化することを意図するΔＩ突然変異を、細胞質ドメインの欠失と同様に作用することで毒性を低減することを意図するＣＯＯＨ末端切断を、また任意に、膜貫通ドメインの欠失と同様に作用することで分子を可溶化するように拡張されるＣＯＯＨ末端切断を達成するために、１個または複数の置換を導入してもよい。
【０１０１】
アミノ酸挿入は、単一アミノ酸残基または残基の延長を構成し得る。挿入は、ドメインのカルボキシ末端またはアミノ末端で、ならびに当該ドメインの内部位置で行われてもよい。かかる挿入は一般に、２〜１５アミノ酸長の範囲であろう。外部ドメインにエンベロープを共有結合するｇｐ１２０／ｇｐ４１切断部位の欠失と同様に作用することでタンパク質分解を排除することを意図するΔＣ突然変異を、融合ドメインの欠失と同様に作用することで分子を可溶化することを意図するΔＦ突然変異を、２つの７アミノ酸繰り返し間のインタースペースの欠失同様に作用することでオリゴマー形成を安定化することを意図するΔＩ突然変異を、細胞質ドメインの欠失と同様に作用することで毒性を低減することを意図するＣＯＯＨ末端切断を、また任意に、膜貫通ドメインの欠失と同様に作用することで分子を可溶化するように拡張されるＣＯＯＨ末端切断を達成するために、１個または複数の挿入を導入してもよい。
【０１０２】
本発明の核酸は、任意に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｍＲＮＡである。最も典型的には、核酸は、ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡとして細胞中で発現されるＤＮＡを組換え的に作製することで提供される。本発明の核酸を作製するためのストラテジーを仮定して、当業者は、機能的に等価な核酸を有する様々なクローンを構築すすることができる。これらの目的を遂行するためのクローニング方法論、および核酸配列を確証するためのシーケンシング方法は当該技術分野で既知である。適切なクローニングおよびシーケンシング技法の例、ならびに多くのクローニング実習を当業者に誘導するのに十分な教示は、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ， Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｕｍｅ １５２， Ａｃａｄｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． （Ｂｅｒｇｅｒ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ−−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２ｎｄ ｅｄ．） Ｖｏｌ．１−３， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．， （Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， （１９９４ 増補）（Ａｕｓｕｂｅｌ）に見出される。生物学的試薬および実験機器の製造業者からの製品情報もまた、既知の生物学的方法で有用な情報を提供する。かかる製造業者としては、ＳＩＧＭＡ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐａｎｙ （Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ， Ｍｏ．）、Ｒ ＆ Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ （Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， Ｍｉｎｎ．）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， Ｎ．Ｊ）、ＣＬＯＮＴＥＣＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． （Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， Ｃａｌｉｆ．）、Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｓ Ｃｏｒｐ．、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ （Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ， Ｗｉｓ．）、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｉｎｃ．，ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． （Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｅｒｇ， Ｍｄ．）， Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ Ａｎａｌｙｔｉｋａ （Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧ， Ｂｕｃｈｓ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．、およびＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ （Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， Ｃａｌｉｆ．）、ならびに当業者に既知の多くの他の市販源が挙げられうる。
【０１０３】
本発明の核酸構築物は、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、または様々な組合せのハイブリッドのどれであろうと、生物学的供給源から単離されるか、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される。本発明の核酸は、形質転換またはトランスフェクト全細胞に、形質転換またはトランスフェクト細胞溶解産物に、または部分的に精製した形態もしくは実質的に純粋な形態で存在する。
【０１０４】
核酸を提供するために、あるいは続く解析、シーケンシングまたはサブクローニング用に、配列を増幅するのに適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅技法は、既知である。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、Ｑβ−レプリカーゼ増幅、および他のＲＮＡポリメラーゼ媒介性技法（例えば、ＮＡＳＢＡ）を含む、かかるｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅方法により当業者を誘導するのに十分な技法の例は、Ｂｅｒｇｅｒ， Ｓａｍｂｒｏｏｋ、およびＡｕｓｕｂｅｌ、ならびにＭｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， （１９８７） 米国特許第４，６８３，２０２号、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｉｎｎｉｓ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ． Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． （１９９０）（Ｉｎｎｉｓ）、Ａｒｎｈｅｉｍ ＆ Ｌｅｖｉｎｓｏｎ （Ｏｃｔ． １， １９９０） Ｃ＆ＥＮ ３６−４７、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ ＮＩＨ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （１９９１） ３：８１−９４、Ｋｗｏｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８６：１１７３ （１９８９）、Ｇｕａｔｅｌｌｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８７：１８７４ （１９９０）、Ｌｏｍｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ．， ３５：１８２６ （１９８９）、Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４１：１０７７−１０８０ （１９８８）、Ｖａｎ Ｂｒｕｎｔ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ８：２９１−２９４ （１９９０）、Ｗｕ ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ， Ｇｅｎｅ， ４：５６０ （１９８９）、Ｂａｒｒｉｎｇｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， ８９：１１７ （１９９０）、およびＳｏｏｋｎａｎａｎ ａｎｄ Ｍａｌｅｋ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １３：５６３−５６４ （１９９５）に見出される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増幅した核酸のクローニングの改良された方法は、Ｗａｌｌａｃｅ， ｅｔ ａｌ．，  米国特許第５，４２６，０３９号に記載されている。大きな核酸（最大４０ｋｂ）の増幅の改良された方法は、Ｃｈｅｎｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３６９：６８４−６８５ （１９９４）、およびそこに含まれている参照文献に要約されている。本質的に任意のＲＮＡは、逆転写酵素およびポリメラーゼを用いて、制限消化、ＰＣＲ増大およびシーケンシングに適した二重鎖ＤＮＡに変換することができることは、当業者に理解されよう。Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｉｎｎｉｓ、およびＢｅｒｇｅｒ（すべて上述）を参照されたい。
【０１０５】
当業者は、所定の核酸構築物中に変化を発生する多くの方法を理解するであろう。かかる既知の方法としては、部位特異的突然変異誘発、縮重オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ増幅、突然変異誘発剤または照射への核酸を有する細胞の曝露、所望のオリゴヌクレオチドの化学的合成（例えば、大きな核酸を生成するための連結反応および／またはクローニングと併せて）、および他の既知の技法が挙げられる。例えば、Ｇｉｌｉｍａｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ， Ｇｅｎｅ ８：８１−９７ （１９７９）， Ｒｏｂｅｒｔｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２８：７３１−７３４ （１９８７）、ならびにＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｉｎｎｉｓ、Ａｕｓｕｂｅｌ、ＢｅｒｇｅｒおよびＭｕｌｌｉｓ（すべて上述）を参照されたい。
【０１０６】
核酸に対する改変のほとんどが、所望の特性に適したアッセイで、日常的なスクリーニング技法により評価される。例えば、コードポリペプチドの免疫学的性質の変化は、適切な免疫学的アッセイにより検出することができる。例えば、ポリペプチドの細胞免疫学的性質の変化は、適切な抗体またはＣＴＬアッセイにより検出することができる。相補核酸に対する核酸ハイブリダイゼーション、コードタンパク質の酸化還元または熱的安定性、疎水性、タンパク質分解に対する感受性、または凝集傾向のような他の特性の改変はすべて、標準的な技法に従ってアッセイされる。
【０１０７】
ポリペプチド配列の検出にとって、多種多様の形式および標識が利用可能であり、適切である。これらには、分光測定、ラジオグラフィ、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、高度拡散（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィ等のような解析的生化学的方法、および液体またはゲル沈降素反応、免疫拡散（単一または二重）、免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロットアッセイ、免疫蛍光アッセイ等のような様々な免疫学的方法が包含される。Ｅｎｖドメインを含むレトロウイルス成分の検出のための幾つかの市販のＥＬＩＳＡアッセイが利用可能であり、当業者は生物試料中のＥｎｖを検出することが可能である。
【０１０８】
同様に、本発明の核酸の検出は、サザン解析、ノーザン解析、ゲル電気泳動、ＰＣＲ、放射標識およびシンチレーションカウンティング、ならびにアフィニティクロマトグラフィのような既知の方法により進められる。Ｔｉｊｓｓｅｎ （１９９３） Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ−−ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅｓ ｐａｒｔｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｃｈｏｏ （ｅｄ） （１９９４） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ３３−− Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに概説されるもの（また、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙシリーズの他の本も参照）を含む多くのアッセイフォーマットが適切である。特に、Ｃｈａｐｔｅｒ ２１ ｏｆ Ｃｈｏｏ （ｉｄ．） 「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｒｕｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｂｙ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」を参照されたい。最後に、ＰＣＲもまた、生物試料中の核酸を検出するのに日常的に使用される（ＰＣＲ技法の総説に関する上述のＩｎｎｉｓを参照）。
【０１０９】
好ましい一実施形態では、ポリペプチド配列を検出するのに抗体を使用する。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生方法は、当業者に既知であり、多くの抗ＨＩＶ抗体が利用可能である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ （１９９１） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ， ＮＹ、およびＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８９） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ、Ｓｔｉｔｅｓ， ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．） Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （４ｔｈ ｅｄ．）， Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ， Ｃａｌｉｆ．およびそこで引用される参照文献、Ｇｏｄｉｎｇ （１９８６） Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （２ｄ ｅｄ．）， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．、ならびにＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５−４９７ （１９７５）を参照されたい。抗体調製に関する他の適切な技法としては、ファージまたは類似したベクター中で組換え抗体のライブラリーを選択することが挙げられる。Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４６：１２７５−１２８１ （１９８９）、およびＷａｒｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４１：５４４−５４６ （１９８６）を参照されたい。特異的モノクローナルおよびポリクローナル抗体ならびに抗血清は一般に、少なくとも約０．１ｍＭ、より一般には少なくとも約１μＭ、好ましくは少なくとも約０．１μＭ以上、最も典型的でかつ好ましくは、０．０１μＭ以上のＫＤと結合するであろう。
【０１１０】
ＨＩＶ  Ｅｎｖベクターの開発
体液性および細胞免疫を効果的に誘発し得るＥｎｖ糖タンパク質変異体を開発するために、一連のプラスミド発現ベクターを作成した（図Ｉ）。ＨＩＶ  Ｅｎｖは、遺伝子発現を制限するＲＮＡ構造を有する核酸配列によりコードされる（Ａｎｄｒｅ Ｓ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７２：１４９７−５０３； Ｑｉｕ ＪＴ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７３：９１４５−５２； Ｒａｎａ ＴＭ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ， ３６５：１７５−８５； Ｒｏｅｂｕｃｋ ＫＡ， Ｓａｉｆｕｄｄｉｎ Ｍ， １９９９， Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ， ８：６７−８４； Ｒｏｍａｎｏ Ｇ， ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ７５：３５７−６８； Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｒ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７１：４８９２−９０３）。したがって、アミノ酸配列に影響を及ぼすことなくこれらの構造を排除することが可能なヒト遺伝子中に見られるコドンを用いて、これらのベクターを合成した。ウェスタンブロット解析により、完全長ＨＩＶ  Ｅｎｖ（ｇｐ１６０）は、ＨＩＶアクセサリータンパク質に非存在下で、トランスフェクト２９３細胞中のＲｅｖ依存性ウイルスｇｐ１６０よりも１０倍以上のレベルで高度に発現され（図ＩＩＡ）、関連突然変異タンパク質は、予測した見かけの分子量で検出された（図ＩＩＣ〜Ｄ）。予測され得るように、合成遺伝子から発現されるｇｐ１６０は、おそらくｇｐ１６０の過剰発現が切断を招く細胞プロテアーゼを飽和させるため、トランスフェクト２９３細胞では効率的にプロセシングされなかった（Ｂｉｎｌｅｙ ＪＭ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ， ７４：６２７−６４３）。合成ＨＩＶ  ｇｐ１６０は、４８時間以内に細胞の丸まりおよび剥離を伴って、トランスフェクト細胞中で毒性を誘発した（図ＩＩＩＡ対Ｂ）。この細胞毒性は、ＣＯＯＨ末端細胞質ドメインの排除により低減した。アミノ酸７５２で終結させたＥｎｖタンパク質（ｇｐ１５０）は、ｇｐ１６０よりも毒性が低い一方で、より短いタンパク質（ｇｐ１４５およびｇｐ１４０）は、影響をほとんどまたは全くもたらさなかった（それぞれ図ＩＩＣ、ＤおよびＥ）。
【０１１１】
Ｅｎｖ免疫原性を変化させるために、２つの異なるアプローチを調べた。まず、部位特異的突然変異誘発により保存Ｎ結合グリコシル化部位を排除した突然変異の解析により、細胞性および体液性免疫に対するグリコシル化の影響を評価した。２組の突然変異を、ｇｐ１６０およびｇｐ１５０の両方に導入した（図Ｉ）。第１組は、１１個の潜在的部位（Δｇｌｙ１１）を包含し、第２組は、下流にさらなる６個の部位（Δｇｌｙ１７）を包含していた。発現の研究により、グリコシル化突然変異体は効率的に発現され、グリコシル化突然変異タンパク質は、Ｎ結合グリコシル化の減少と一致して、野生型ｇｐ１６０およびｇｐ１５０と比較して適切にサイズが減少していることがわかった（図ＩＩＣ）。
【０１１２】
第２のアプローチは、ヘアピン中間体中の６個の成員からなる二重コイル構造を形成する前に伸長されたらせん構造中に存在し得るタンパク質の機能的ドメインを安定化および露出するように設計した一連の内部欠失を包含する（Ｃｈａｎ ＤＣ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｃｅｌｌ， ８９：２６３−７３； Ｗｅｉｓｓｅｎｈｏｒｎ Ｗ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎａｔｕｒｅ， ３８７：４２６−３０）。この推定上のプレヘアピン構造を生成するために、切断部位を除去して、エンベロープのタンパク質分解性プロセシングを阻止し、そこにｇｐ４１細胞外および／または膜貫通ドメインを共有結合することによりタンパク質を安定化した。毒性を低減し、安定性を高めるために、融合ペプチドドメインを欠失させた。エンベロープタンパク質中の７アミノ酸繰り返しは、エンベロープタンパク質が三量体を形成する能力に関与した重要な三次構造ドメインである（Ｌｕ Ｍ， Ｋｉｍ ＰＳ， １９９７， Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｔｒｕｃｔ Ｄｙｎ， １５：４６５−７１）。７アミノ酸繰り返し間の配列を除去して、三量体の形成を安定化し、ヘアピン中間体の形成を排除した。これらのΔＣＦＩ欠失を、完全長ｇｐ１６０およびＣＯＯＨ末端切断突然変異体に導入した。ｇｐ１４０ΔＣＦＩ、ｇｐ１５４ΔＣＦＩおよびｇｐ１６０をコードするベクターでトランスフェクトした細胞は、これらのタンパク質を容易に発現する（図ＩＩＤ）が、膜貫通ドメインを欠如するｇｐ１４０ΔＣＦＩのみが、上清中で容易に検出され（図ＩＶ）、可溶性抗原を生じることができることを示した。
【０１１３】
ＤＮＡワクチン接種後のＥｎｖ突然変異体の免疫原性
これらのＥｎｖタンパク質が免疫応答を誘発する能力を、これらのプラスミドＤＮＡ発現ベクターを注射することによりマウスで決定した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロッティングにより、注射したマウス由来の抗血清の、細胞溶解産物から野生型ｇｐ１６０を免疫沈降される能力で、抗体応答をモニターした（図Ｖ）。場合によっては、抗体反応性も、免疫蛍光により確認した。抗体応答を定量化するために、免疫化したマウス血清の種々の希釈物を用いた免疫沈降、続くウェスタンブロットを試験した。ｇｐ１６０バンド強度をデンシトメトリーにより決定し、実験間のデータを正規化するのに使用する陽性対照血清に対して標準化した。血清希釈物を用いた場合のｇｐ１６０強度のほぼ線形の用量応答により、マウス血清中の抗ｇｐ１６０抗体応答の定量化が可能となった。免疫化したマウスからのデータは、野生型Ｅｎｖタンパク質も、ｇｐ１６０、ｇｐ１５０、ｇｐ１４５およびｇｐ１４０ＣＯＯＨ末端切断も、安定して高い抗体応答を発生しないことを示した（図ＶＡ）。これらのタンパク質のうち、ｇｐ１４０は、抗体応答の発生においてｇｐ１６０よりも幾らか効果的であったが、依然として低く安定していなかった。グリコシル化を欠乏したエンベロープタンパク質を発現するように設計したベクターによる免疫化もまた、体液性応答を改善しなかった。対照的に、Ｅｎｖ切断ベクター中のΔＣＦＩ突然変異体は、抗ｇｐ１６０抗体応答を実質的に増加させた（図ＶＡ；ｇｐ１４５、ｇｐ１４０およびｇｐ１２８）。より長いΔＣＦＩ  Ｅｎｖタンパク質（ｇｐ１６０およびｇｐ１５０）は、この応答の匹敵する強化を示さなかった。ｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）は、ｇｐ１２８ΔＣＦＩよりも安定した、かつより多大に増加した抗体応答を提供した（図ＶＢ）。すべての場合において、ｇｐ１４０ΔＣＦＩをコードするが、野生型ｇｐ１４０をコードしないこれらのベクターは、自然ｇｐ１６０に対して反応性を有する抗体を誘発した（図ＶＣ）。
【０１１４】
Ｅｎｖのこれらの改変がＣＴＬ応答に不利に影響を及ぼすかどうかを決定するために、免疫化したマウス由来の脾細胞を、関連標的細胞を溶解させるそれらの能力に関して試験した。ＣＯＯＨ末端欠失突然変異（図ＶＩＡ）またはグリコシル化突然変異（図ＶＩＢ）を含む、コドンを変化させたＥｎｖベクターで免疫化したマウスすべてが、ＨＩＶ  Ｅｎｖペプチドを間欠的に投与した細胞系に対して強力なＣＴＬ応答を誘発した。これらの見解についてはまた、Ｅｎｖを発現する安定にトランスフェクトした細胞を用いて確認した。重要なことに、匹敵する野生型Ｅｎｖに対して増加した抗体応答を誘発するｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）は、他のΔＣＦＩ突然変異と同様に、自然Ｅｎｖに対するＣＴＬ応答を容易に誘発した（図ＶＩＣ）。抗ＣＤ８抗体の添加は、抗ＣＤ８抗体と結合させた磁気ビーズを用いた減少と同様に、細胞溶解活性を抑制し、遺伝的免疫化後にこれらの免疫原に対する細胞障害性Ｔ細胞応答を確認した（図ＶＩＤ）。この応答は、免疫化後少なくとも６ヶ月間検出可能であった。
【０１１５】
グリコシル化およびΔＣＦＩ  ＨＩＶ  Ｅｎｖ突然変異体
ＨＩＶ用のＤＮＡワクチン候補物を開発するために、本発明者等は、ヒト細胞でＨＩＶ  Ｅｎｖ突然変異体を発現するように設計した一連の合成遺伝子を開発した。ＨＩＶ調節タンパク質の非存在下で、これらのコドンを変化させたエンベロープタンパク質遺伝子は、ヒト細胞で十分に発現した。他のＤＮＡワクチンと同様に、これらのベクターによる免疫化は、マウスにおいて強力なＣＴＬ応答を誘発し、野生型Ｅｎｖ発現ベクターで免疫化したマウスでは抗体応答は、激しくなかった。高度に保存されたＮ結合グリコシル化部位での突然変異は、自然Ｅｎｖに対する体液性または細胞性免疫応答を有意に変化させなかった。対照的に、切断部位、融合ドメイン、および７アミノ酸繰り返し間の領域に欠失を有する突然変異Ｅｎｖは、より強力な体液性免疫応答を誘発し、Ｅｎｖ特異的ＣＴＬを刺激するその能力を保持した。
【０１１６】
最近の報告で、ｇｐ１６０がｉｎ  ｖｉｔｒｏで三量体を形成し、三量体形成に必要とされるドメインは、ｇｐ４１の外部ドメインに存在することが示唆された（Ｙａｎｇ Ｘ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７４：５７１６−２５）。かかるＨＩＶエンベロープタンパク質の三量体は、単量体ｇｐ１２０と比較して、種々のエピトープを免疫系に提示する可能性が高い。エンベロープにおける直鎖状エピトープの他に、この三量体構造は、関連抗体応答のＢ細胞誘発に重要な立体配座エピトープを露出する可能性が高い。これに関して、最大の抗体応答を誘発したｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）は、溶解形態で放出される（図ＩＶＢ）。対照的に、野生型Ｅｎｖは、高力価の抗体応答を誘発しなかった。哺乳動物細胞におけるＥｎｖの毒性が見られ、免疫原性に影響を及ぼすｉｎ  ｖｉｖｏでのエンベロープタンパク質の発現の量および期間の両方を制限することができる。エンベロープはまた、重度にグリコシル化されており、部分的または完全ｇｐ１２０グリコシル化部位の除去により、サルにおいて突然変異ＳＩＶに対するより高力価の株特異的中和抗体の応答を生じた（Ｂｉｎｌｅｙ ＪＭ ｅｔ ａｌ．， １９９８， ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ， １４： １９１−８ Ｒｅｉｔｔｅｒ ＪＮ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｎａｎ Ｍｅｄ， ４：６７９−８４）。脱グリコシル化が、そうでなければ自然タンパク質において覆われていたエピトープをさらけ出すことは、合理的であると思われたが、ｇｐ１６０およびｇｐ１５０の両方における、種々のグルコシル化部位突然変異体を用いたＤＮＡワクチン接種による免疫反応性の強化は、本発明者等には観察されなかった。これまでの研究とのこの差異は、ウイルス感染よりもＤＮＡワクチン接種が免疫化に利用されたという事実に起因する可能性が高い。グリコシル化突然変異体が、免疫化のこの先の方法とともに有用であることが判明しそうにもないが、本発明者等は、グリコシル化部位の改変が、他のベクターまたはアジュバントとともに効果的であると想定する。
【０１１７】
ＨＩＶ−１  Ｅｎｖは、細胞性コンバターゼにより、ｇｐ１２０およびｇｐ４１へタンパク質分解的に切断される（Ｅｃｋｅｒｔ ＤＭ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｃｅｌｌ， ９９：１０３−１５）。ｇｐ４１サブユニットは、細胞質セグメント、膜貫通セグメント、および外部ドメインセグメントから構成される。膜融合におけるエンベロープの外部ドメイン、特にその疎水性グリシンリッチな融合ペプチドの役割が十分に確立されている。ｇｐ４１の外部ドメイン中の７アミノ酸コイルドコイル繰り返しを有する２個の領域が、ウイルス融合に関与している（Ｅｃｋｅｒｔ ＤＭ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｃｅｌｌ， ９９：１０３−１５； Ｗｅｉｓｓｅｎｈｏｒｎ Ｗ ｅｔ ａｌ．， １９９６， ＥＭＢＯ Ｊ， １５：１５０７−１４）。融合時に、ジスルフィドで安定化されたループにより連結されたこれらの２個のアルファヘリックス（Ｇａｌｌａｈｅｒ ＷＲ ｅｔ ａｌ．， １９８９， ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ， ５：４３１−４０； Ｋｅｎｔ ＫＡ， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｊ， １９９６， ＡＩＤＳ， １０ Ｓｕｐｐｌ Ａ： Ｓ１０７−Ｓ１１４； Ｓａｔｔｅｎｔａｕ ＱＪ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０６：７１３−７）はおそらく、融合活性状態への一過性の立体配座変化を受ける。これらの変化により、ｇｐ４１のＮＨ２末端にある融合ペプチドをおそらく露出させる６個の成員からなるらせん状ヘアピン中間体構造の形成が可能となり、標的細胞膜に融合することができる（Ｂｉｎｌｅｙ Ｊ， Ｍｏｏｒｅ ＪＰ， ［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｅｒｒａｔｕｍ ａｐｐｅａｒｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ １９９７ Ｓｅｐ １１； ３８９ （６６４７）：１３１］， １９９７， Ｎａｔｕｒｅ， ３８７：３４６−８； ＬａＣａｓｓｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２８３： ３５７−６２）。ΔＣＦＩ突然変異は、ｇｐ１４０の切断を排除し、不安定な疎水性領域を除去し、かつオリゴマー形成を安定化することが意図された。詳述した構造データは、このタンパク質ではまだ利用可能ではないが、これらの突然変異は、体液性および細胞性免疫応答の両方を誘発する立体配座でＥｎｖを見かけ上安定化する。例えば、ｇｐ４１の外部ドメイン中の中和エピトープ（Ｍｕｓｔｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６８：４０３１−４）は、一連の欠失に存在し、エンベロープおよびｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）の切断は、このエピトープに結合する２Ｆ５中和モノクローナル抗体と反応する。重要なことに、これらの免疫原はまた、Ｅｎｖに対してＣＴＬ応答を誘発した。ｇｐ１２８（ΔＣＦＩ）は、わずかにより強力なＣＴＬ活性を誘発したが、ｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）は、ペプチドを間欠的に投与した細胞および安定に形質転換した標的細胞の両方に対するかかる応答を良好に誘発することができた。したがって、このワクチン候補物により導入され、強化した体液性免疫応答は、ＣＴＬ応答を減少させないようであった。まとめると、これらの結果により、ｇｐ１４０ΔＣＦＩは、ＣＴＬ応答を誘発するその能力を保存しながら、ＤＮＡワクチン接種によりエンベロープに対する抗体応答をより効果的に誘発することができる改良免疫原として作用することが示される���
【０１１８】
ＧａｇおよびＰｏｌ
この開示では、本発明者等は、ヒト（ｈ）コドン使用頻度に基づく合成ＨＩＶ−１  ＢクレードＧａｇおよびＰｏｌ発現ベクターを調製した。これらのベクターは、ｈＧａｇ−Ｐｏｌおよびその誘導体、ｈＧａｇ、ｈＰｏｌおよびｈＧａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質をコードする。合成Ｇａｇ−Ｐｏｌ遺伝子は、ＨＩＶ−１に対してあまりヌクレオチド相同性を示さないが、タンパク質配列は同一である。改変Ｇａｇ−Ｐｏｌ遺伝子を、発現およびＤＮＡ免疫化研究用の真核プラスミド発現ベクターにサブクローニングした。合成Ｇａｇ−Ｐｏｌ遺伝子は、ヒトおよびマウス細胞系において、ＨＩＶ−１  Ｇａｇ−Ｐｏｌ前駆タンパク質の高レベルのＲｅｖ依存性発現を可能とし、マウスにおいて有意な細胞性および体液性応答を誘発した。Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質は、ＧａｇおよびＰｏｌ決定基に対する最も広範な応答を誘発し、したがってそエピトープ提示を最大にする原型免疫原として想定される。
【０１１９】
ウイルスポリタンパク質を創出するのためのフレームシフト部位の排除
自然ＧａｇおよびＰｏｌに対する免疫応答を改善するための連続オープンリーディングフレームによりコードされるＨＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質を本明細書中に記載する。幾つかのウイルスでは、翻訳フレームシフトが、タンパク質合成中に利用される。ＲＮＡ中の特定配列は、フレームシフトに必要とされる。ウイルスＲＮＡ配列は、リボソームのずれ（ｓｌｉｐｐａｇｅ）を引き起こし、その結果、ウイルスタンパク質が、非等価比で生産される。例えば、ＨＩＶの翻訳中に、リボソームは、リーディングフレームをシフトして、Ｇａｇ前駆タンパク質およびｇａｇ−ｐｏｌ融合タンパク質を２０：１の比で合成する。ここでのストラテジーは、フレームシフト部位を排除することで、連続オープンリーディングフレームから免疫原を転写することによりエピトープ提示を最大にすることである。したがって、連続オープンリーディングフレームによりコードされるＨＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質を用いて免疫応答を改善するストラテジーは、翻訳フレームシフトにより非等価比で生産される他のウイルスタンパク質にまで拡張する。
【０１２０】
本発明は、フレームシフト部位の突然変異に起因した単一連続オープンリーディングフレームによりコードされるＨＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質を包含する。フレームシフト部位は、単一連続オープンリーティングフレームを創出するために、ヌクレオチドの欠失、挿入および／または置換により突然変異する。一実施形態では、欠失が意図される（すなわち、同一オープンリーディングフレームを創出するために、ヌクレオチドが欠失される）。
【０１２１】
フレームシフト部位は、単一連続オープンリーディングフレームを創出するための突然変異フレームシフトである。例えば、一組の類似レトロウイルスｇａｇ−ｐｏｌフレームシフト部位は任意に、例えば種々のｇａｇ−ｐｏｌフレームシフト領域を合成し、適切に配列をクローニングすることにより、あるいは所定のフレームシフトクローンの部位特異的突然変異誘発により、所定の融合タンパク質のために作製される。フレームシフト部位の効率は、融合タンパク質の産生を測定することで評価される。最高レベルの発現を示す配列が、評価した組に関して「最適」フレームシフト突然変異である。あるいは、特定レベルの発現が望ましい場合、所望の活性レベルに最も近い考え得るフレームシフト部位の特定組からのフレームシフト部位が、「最適」であるとみなされる。
【０１２２】
完全長Ｇａｇ配列は、本発明の融合タンパク質で使用するのに好ましいが、Ｇａｇは任意に、ポリエピトープ応答を無効とすることなく、部分配列を欠失させる。例えば、マトリクスタンパク質（ｐ１７）領域、キャプシドタンパク質（ｐ２４）領域、ｐ２領域、ヌクレオキャプシドタンパク質（ｐ７）領域、ｐ１領域、およびｐ６領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら欠失することができる。あるいは、マトリクスタンパク質（Ｐ１７）領域、キャプシドタンパク質（ｐ２４）領域、ｐ２領域、ヌクレオキャプシドタンパク質（ｐ７）領域、ｐ１領域、およびｐ６領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら置換することができる。あるいは、マトリクスタンパク質（Ｐ１７）領域、キャプシドタンパク質（ｐ２４）領域、ｐ２領域、ヌクレオキャプシドタンパク質（ｐ７）領域、ｐ１領域、およびｐ６領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら挿入により中断させるすることができる。任意に、マトリクスタンパク質（Ｐ１７）領域、キャプシドタンパク質（ｐ２４）領域、ｐ２領域、ヌクレオキャプシドタンパク質（ｐ７）領域、ｐ１領域、およびｐ６領域を突然変異させて、これらのタンパク質を不活性化することができる。
【０１２３】
同様に、完全長Ｐｏｌ配列は、本発明の融合タンパク質で使用するのに好ましく、Ｐｏｌは任意に、ポリエピトープ応答を無効とすることなく、部分配列を欠失させる。例えば、プロテアーゼタンパク質領域、逆転写酵素タンパク質領域、およびインテグラーゼタンパク質領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら欠失することができる。あるいは、プロテアーゼタンパク質領域、逆転写酵素タンパク質領域、およびインテグラーゼタンパク質領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら置換することができる。あるいは、プロテアーゼタンパク質領域、逆転写酵素タンパク質領域、およびインテグラーゼタンパク質領域を、ポリエピトープ応答を保存しながら挿入により中断させるすることができる。任意に、プロテアーゼタンパク質領域、逆転写酵素タンパク質領域、およびインテグラーゼタンパク質領域を突然変異させて、これらの酵素を不活性化することができる。
【０１２４】
他の実施形態では、Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質を、他のタンパク質とともに、好ましくは本明細書中に記載の改変ＨＩＶ  ＥｎｖΔＣＦＩタンパク質のようなＥｎｖ配列タンパク質とともに、融合タンパク質としてまたは別個に同時発現される。
【０１２５】
別の態様では、本発明は、キメラ核酸分子を包含する。本発明のキメラ核酸分子は典型的に、フレームシフト部位の突然変異に起因した同一オープンリーディングフレームにレトロウイルスｇａｇ核酸配列およびレトロウイルスｐｏｌ核酸配列を有する。連続オープンリーディングフレームは、上述するもののような融合タンパク質をコードする。
【０１２６】
本発明のキメラ核酸は任意に、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｍＲＮＡである。最も典型的には、キメラ核酸は、ＤＮＡを組換え的に作製することで供給され、ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡとして細胞中で発現される。本発明のキメラ核酸を作成するためのストラテジーを考えると、当業者は、機能的に等価な核酸を有する様々なクローンを構築することができる。これらの目的を達成するためのクローニング方法論、および核酸配列を確証するためのシーケンシング方法論は、当該技術分野で既知である。適切なクローニングおよびシーケンシング技法の例、および当業者に多くのクローニング実習を誘導するのに十分な教示は、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ， Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｕｍｅ １５２， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． （Ｂｅｒｇｅｒ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ −− Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２ｎｄ ｅｄ．） Ｖｏｌ．１−３， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．， （Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， （１９９４ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ） （Ａｕｓｕｂｅｌ）に見出されれる。生物学的試薬および実験装置の製造業者からの製品情報もまた、既知の生物学的方法において有用な情報を提供する。かかる製造業者としては、ＳＩＧＭＡ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐａｎｙ （Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ， Ｍｏ．）、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ （Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， Ｍｉｎｎ．）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， Ｎ．Ｊ．）、ＣＬＯＮＴＥＣＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． （Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， Ｃａｌｉｆ．）、Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｓ Ｃｏｒｐ．、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ （Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ， Ｗｉｓ．）、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｉｎｃ．、ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． （Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｅｒｇ， Ｍｄ．）、Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ Ａｎａｌｙｔｉｋａ （Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧ， Ｂｕｃｈｓ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．、およびＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ （Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， Ｃａｌｉｆ．）、ならびに当業者に既知の多くの他の市販源が挙げられる。
【０１２７】
本発明のキメラ核酸組成物は、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、または様々な組合せのハイブリッドのいずれであろうと、生物学的供給源から単離されるか、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される。本発明のキメラ核酸は、形質転換またはトランスフェクトした細胞全体に、形質転換またはトランスフェクトした細胞溶解産物に、あるいは部分的に精製したかまたは実質的に純粋な形態で存在する。
【０１２８】
核酸を提供するために、あるいは続く解析、シーケンシングまたはサブクローニング用に、配列を増幅するのに適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅技法は、既知である。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、Ｑβ−レプリカーゼ増幅、および他のＲＮＡポリメラーゼ媒介性技法（例えば、ＮＡＳＢＡ）を含む、かかるｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅方法により当業者を誘導するのに十分な技法の例は、Ｂｅｒｇｅｒ， Ｓａｍｂｒｏｏｋ、およびＡｕｓｕｂｅｌ、ならびにＭｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， （１９８７） 米国特許第４，６８３，２０２号、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｉｎｎｉｓ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ． ＳａｃＤｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． （１９９０）（Ｉｎｎｉｓ）、Ａｒｎｈｅｉｍ ＆ Ｌｅｖｉｎｓｏｎ （Ｏｃｔ． １， １９９０） Ｃ＆ＥＮ ３６−４７、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ ＮＩＨ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （１９９１） ３：８１−９４、Ｋｗｏｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８６：１１７３ （１９８９）、Ｇｕａｔｅｌｌｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８７：１８７４ （１９９０）、Ｌｏｍｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｅｍ．， ３５：１８２６ （１９８９）、Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４１：１０７７−１０８０ （１９８８）、Ｖａｎ Ｂｒｕｎｔ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ８：２９１−２９４ （１９９０）、Ｗｕ ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ， Ｇｅｎｅ， ４：５６０ （１９８９）、Ｂａｒｒｉｎｇｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， ８９：１１７ （１９９０）、およびＳｏｏｋｎａｎａｎ ａｎｄ Ｍａｌｅｋ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １３：５６３−５６４ （１９９５）に見出される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増幅した核酸のクローニングの改良された方法は、Ｗａｌｌａｃｅ， ｅｔ ａｌ．，  米国特許第５，４２６，０３９号に記載されている。大きな核酸（最大４０ｋｂ）の増幅の改良された方法は、Ｃｈｅｎｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３６９：６８４−６８５ （１９９４）、およびそこに含まれている参照文献に要約されている。本質的に任意のＲＮＡは、逆転写酵素およびポリメラーゼを用いて、制限消化、ＰＣＲ増大およびシーケンシングに適した二重鎖ＤＮＡに変換することができることは、当業者に理解されよう。Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｉｎｎｉｓ、およびＢｅｒｇｅｒ（すべて上述）を参照されたい。
【０１２９】
当業者は、所定の核酸構築物中に変化を発生する多くの方法を理解するであろう。かかる既知の方法としては、部位特異的突然変異誘発、縮重オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲ増幅、突然変異誘発剤または照射への核酸を有する細胞の曝露、所望のオリゴヌクレオチドの化学的合成（例えば、大きな核酸を生成するための連結反応および／またはクローニングと併せて）、および他の既知の技法が挙げられる。例えば、Ｇｉｌｉｍａｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ， Ｇｅｎｅ ８：８１−９７ （１９７９）， Ｒｏｂｅｒｔｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２８：７３１−７３４ （１９８７）、ならびにＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｉｎｎｉｓ、Ａｕｓｕｂｅｌ、ＢｅｒｇｅｒおよびＭｕｌｌｉｓ（すべて上述）を参照されたい。
【０１３０】
核酸に対する改変のほとんどが、所望の特性に適したアッセイで、日常的なスクリーニング技法により評価される。例えば、コードポリペプチドの免疫学的性質の変化は、適切な免疫学的アッセイにより検出することができる。例えば、ポリペプチドの細胞免疫学的性質の変化は、適切な抗体またはＣＴＬアッセイにより検出することができる。相補核酸に対する核酸ハイブリダイゼーション、コードタンパク質の酸化還元または熱的安定性、疎水性、タンパク質分解に対する感受性、または凝集傾向のような他の特性の改変はすべて、標準的な技法に従ってアッセイされる。
【０１３１】
融合タンパク配列の検出にとって、多種多様の形式および標識が利用可能であり、適切である。これらには、分光測定、ラジオグラフィ、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、高度拡散（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィ等のような解析的生化学的方法、および液体またはゲル沈降素反応、免疫拡散（単一または二重）、免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロットアッセイ、免疫蛍光アッセイ等のような様々な免疫学的方法が包含される。Ｅｎｖドメインを含むレトロウイルス成分の検出のための幾つかの市販のＥＬＩＳＡアッセイが利用可能であり、当業者は生物試料中のＥｎｖを検出することが可能である。
【０１３２】
同様に、本発明のキメラ核酸の検出は、サザン解析、ノーザン解析、ゲル電気泳動、ＰＣＲ、放射標識およびシンチレーションカウンティング、ならびにアフィニティクロマトグラフィのような既知の方法により次に進められる。Ｔｉｊｓｓｅｎ （１９９３） Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ−−ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅｓ ｐａｒｔｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｃｈｏｏ （ｅｄ） （１９９４） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ３３−− Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに概説されるもの（また、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙシリーズの他の本も参照）を含む多くのアッセイフォーマットが適切である。特に、Ｃｈａｐｔｅｒ ２１ ｏｆ Ｃｈｏｏ （ｉｄ．） 「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｒｕｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｂｙ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」を参照されたい。最後に、ＰＣＲもまた、生物試料中の核酸を検出するのに日常的に使用される（ＰＣＲ技法の総説に関する上述のＩｎｎｉｓを参照）。
【０１３３】
好ましい一実施形態では、ポリペプチド配列を検出するのに抗体を使用する。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生方法は、当業者に既知であり、多くの抗ＨＩＶ抗体が利用可能である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ （１９９１） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ， ＮＹ、およびＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８９） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ、Ｓｔｉｔｅｓ， ｅｔ ａｌ．， （ｅｄｓ．） Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （４ｔｈ ｅｄ．）， Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ， Ｃａｌｉｆ．およびそこで引用される参照文献、Ｇｏｄｉｎｇ （１９８６） Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （２ｄ ｅｄ．）， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．、ならびにＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５−４９７ （１９７５）を参照されたい。抗体調製に関する他の適切な技法としては、ファージまたは類似したベクター中で組換え抗体のライブラリーを選択することが挙げられる。Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４６：１２７５−１２８１ （１９８９）、およびＷａｒｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４１：５４４−５４６ （１９８６）を参照されたい。特異的モノクローナルおよびポリクローナル抗体ならびに抗血清は一般に、少なくとも約０．１ｍＭ、より一般には少なくとも約１μＭ、好ましくは少なくとも約０．１μＭ以上、最も典型的でかつ好ましくは、０．０１μＭ以上のＫＤと結合するであろう。
【０１３４】
合成ＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌ遺伝子の発現
４個の合成ＨＩＶ−１  Ｇａｇおよび／またはＰｏｌ発現ベクターであるｈＧａｇ−Ｐｏｌ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦｓΔＰｒ、ｈＰｏｌ、およびｈＧａｇ遺伝子を調製した（図ＶＩＩ）。発現を確認するために、合成またがウイルスＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子を、ヒト腎臓由来細胞系である２９３Ｔ細胞に一過的にトランスフェクトした。ヒト抗ＨＩＶ−１  ＩｇＧ（図ＶＩＩＩＡ）、モノクローナル抗ｐ２４（図ＶＩＩＩＢ）およびウサギ抗ＲＴ（図ＶＩＩＩＣ）による免疫ブロッティングにより細胞溶解産物を解析すると、Ｇａｇ  ｐ５５、Ｐｏｌ  ｐ１１０およびＧａｇ−Ｐｏｌ  ｐ１６０前駆タンパク質は、予想通り、ｈＧａｇ、ｈＰｏｌ、およびｈＧａｇ−Ｐｏｌ融合プラスミドでトランスフェクトした２９３Ｔ細胞中で検出された。成熟ビリオンタンパク質であるｐ２４およびＲＴｐ６６は、ｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子でトランスフェクトした細胞中で検出された（図ＶＩＩＩＡ、ＢおよびＣ）。これは、それ自体がＧａｇおよびＧａｇ−Ｐｏｌタンパク質の高レベル発現の結果であるプロテアーゼ内部細胞の活性化の結果であり得る（Ｋａｒａｃｏｓｔａｓ， Ｖ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， １９３：６６１−６７１）。コドンを変化させたベクターからのＧａｇ前駆タンパク質の発現は、定量的ホスホイメージング（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｉｎｇ）により決定した場合、ウイルスＧａｇ−Ｐｏｌより１０倍以上高かった（図ＶＩＩＩ）。Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質蓄積レベルは、ウイルスＧａｇ−Ｐｏｌと比較して、ｈＧａｇ−Ｐｏｌでトランスフェクトした細胞では１００倍高かった。ウイルス様粒子は、透過型電子顕微鏡で検出した場合に、ｈＧａｇ遺伝子でトランスフェクトした細胞から放出された（図ＩＸ）。かかる粒子は、ｈＧｇａ−Ｐｏｌの場合では、そのような粒子は低頻度で観察されたが、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦｓΔＰｒまたはｈＰｏｌベクターでトランスフェクトした細胞では粒子は見られなかった。マウスＣＴ２６およびＢＨ１０ＭＥ細胞でコドン最適化遺伝子からのＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌタンパク質の安定な発現もまた観察された（図ＶＩＩＩＤ）。
【０１３５】
ＤＮＡワクチン接種によるマウスにおけるＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌ  ＣＴＬ応答の誘発
ＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌタンパク質に対する細胞性免疫応答を評価するために、Ｂａｌｂ／Ｃ雌マウスに、コドン最適化遺伝子を有する真核発現ベクタープラスミドを筋内注射した。最終ワクチン接種の２週後に、免疫化したマウスから脾細胞を回収し、ＧａｇまたはＰｏｌペプチドのいずれかを間欠的に投与した未処置マウス脾細胞で感作した。一週後、５時間クロム放出アッセイを用いてＣＴＬ応答を解析した。
【０１３６】
まず、ＧａｇまたはＰｏｌペプチドを間欠的に投与したＢＣ１０ＭＥ細胞、またはＢ／Ｃ−Ｎ細胞に由来するマウス線維肉腫細胞系を用いて、ＨＩＶ−１  Ｇａｇおよび／またはＰｏｌに特異的なＣＴＬ応答を解析した（Ｃｏｌｌｉｎｓ， ＪＬ ｅｔ ａｌ．， １９８１， Ｊ Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １５３： ８９−１０６）。ｈＧａｇ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒまたはｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子による免疫化は、同等に強力な、Ｇａｇに特異的なＣＴＬ応答を誘発した（図ＸＡ）が、ｈＰｏｌ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒまたはｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子による免疫化後、融合タンパク質ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒのみ、およびより少ない程度でｈＰｏｌは、Ｐｏｌに対する顕著なＣＴＬ応答を誘発した（図ＸＢ）。ＣＴＬアッセイにおける特異的死滅が、ＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ球により誘発されることを確認するために、Ｄｙｎａｌビーズ（Ｄｙｎａｌ， Ｉｎｃ．， Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ， ＮＹ）により、感作脾細胞から、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋細胞を枯渇させた。ＣＤ８＋細胞の枯渇により、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒ遺伝子免疫化マウス中の特異的溶解が根絶された一方で、ＣＤ４＋の枯渇は、溶解に対してあまり影響を及ぼさず（図ＸＣ）、ＣＤ８＋リンパ球が特異的細胞毒性を招くことを示唆した。
【０１３７】
ｈＧａｇまたはｈＰｏｌ遺伝子形質導入同系ＣＴ２６およびＢＣ１０ＭＥ細胞系を用いて、応答をさらに解析および確認した。ＣＴＬアッセイにおいてペプチドを間欠的に投与した細胞を標的として使用した場合、ｈＧａｇ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒまたはｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子で免疫化したマウスにおけるＧａｇに対する応答は類似していた（図ＸＩＡ）。ｈＰｏｌ遺伝子で免疫化したマウスは、標的細胞として安定にＰｏｌを発現するＢＣ１０ＭＥ細胞系のＨＩＶ−１  Ｐｏｌに対して特異的な応答を発生した（図ＸＩＢ）。ＣＴ２６細胞系を用いた場合、同じ結果が観察された。したがって、これらの安定にトランスフェクトした細胞系は、Ｐｏｌ  ＣＴＬアッセイにおいて、ペプチドを間欠的に投与した細胞よりも標的細胞として感受性が高かった。
【０１３８】
免疫化したマウスにおける抗体応答
種々のプラスミドで免疫化したマウス由来の血清を、ｐ２４  ＥＬＩＳＡで解析した。ｈＧａｇ免疫化マウスは、最高のｐ２４抗体力価を示した（図ＸＩＩＡ）。意外にも、ｈＧａｇ−Ｐｏｌウイルス様粒子は、最低レベルのｐ２４抗体を誘発した。同様の結果が、プールした血清を用いたウェスタンブロッティングで観察された（図ＸＩＩＢ）。ＨＩＶ−１  Ｐｏｌ特異的抗体は、市販のウェスタンブロッティングキットにより検出されなかった（図ＸＩＩＢ）が、Ｐｏｌに対する抗体は、より高感度の方法であるＩＰ／ウェスタンブロッティングを用いて、ｈＰｏｌおよびｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒで免疫化したマウスで検出された（図ＸＩＩＣ）。おそらく、このアッセイは、より高感度であり、自然立体配座エピトープをより良好に検出することが可能である。かかる抗体は、このアッセイではＰｏｌおよびＧａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質で免疫化したマウス中で見られたが、最小応答は、ｈＧｇａ−Ｐｏｌで免疫化したマウスで検出された。したがって、両方の免疫原が同様のＧａｇ応答を誘発したが、Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質は、Ｐｏｌに対するＣＴＬおよび抗体応答の刺激でより効果的であった。
【０１３９】
ＨＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質
この開示では、ＨＩＶ−１  ＢクレードＧａｇおよびＰｏｌ遺伝子を、ＨＩＶ−１  Ｇａｇ−Ｐｏｌタンパク質のＲｅｖ非依存性発現を増加するように改変した。この改変により、ＲｅｖおよびＰＲＥエレメントの非存在下で、相当するＲｅｖ依存性ウイルス遺伝子よりも１０〜１００倍高いレベルで、ＨＩＶ  ＧａｇおよびＰｏｌ、ならびに融合タンパク質を合成することが可能となった。これらのウイルスタンパク質は、標準的なポリクローナルおよびモノクローナル抗体により認識され（図ＶＩＩＩ）、未熟ＶＬＰは、ｈＧａｇでトランスフェクトした２９３Ｔ細胞から産生および放出された（図ＩＸ）。
【０１４０】
Ｒｅｖ非依存性Ｇｇａ−Ｐｏｌにより誘発される免疫応答は、ＧａｇおよびＰｏｌ決定基に対して誘導された。ｈＧａｇ、ｈＧａｇ−Ｐｏｌ融合およびｈＧａｇ−Ｐｏｌはすべて、プラスミドＤＮＡで免疫化したマウスにおいてＧａｇに特異的な強力なＣＴＬ応答を誘発したが、有意なＰｏｌ応答は、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒまたはＰｏｌ単独で免疫化したマウスにおいてのみ誘発された。ｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子による免疫化は、ＨＩＶ−１  Ｐｏｌタンパク質に対して検出可能な細胞性または体液性応答を誘発することができなかったことから、これらの見解は、Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質が、より広範囲の応答を誘発し、単一連続オープンリーディングフレーム中の多数のエピトープを有する免疫原の送達を可能にすることを示す。ウイルス複製中に、ウイルスｇａｇ−ｐｏｌは、フレームシフトによりＧａｇ前駆タンパク質およびｇａｇ−ｐｏｌ融合タンパク質を２０：１の比で産生する（Ｗｉｌｓｏｎ， Ｗ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｃｅｌｌ， ５５：１１５９−１１６９）。ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒ中のフレームシフト部位の欠失は、Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質のみの産生をもたらす結果となる。ＨＩＶ−１ウイルス集合は、Ｇａｇ前駆タンパク質を要するため、ヒト細胞でのＧａｇ−Ｐｏｌタンパク質単独での発現は、放出可能なウイルス粒子を形成するのに適していない（Ｐａｒｋ， Ｊ ａｎｄ ＣＤ Ｍｏｒｒｏｗ， １９９２， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６６：６３０４−６３１３； Ｓｍｉｔｈ， ＡＪ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６７：２２６６−２２７５）。ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒの、マウスにおける強力なＧａｇおよびＰｏｌ特異的ＣＴＬ応答を誘発する能力は、Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質の高レベルの発現および細胞内部上でのその保持により説明され得て、標準的なウイルス複製中に存在しない新たな状態を創り出すことができ、また抗原提示に十分なタンパク質を提供することができる。さらにウイルスプロテアーゼ中の突然変異は、ウイルスタンパク質が細胞内活性化するのを防ぎ、細胞毒性を減少させた。このポリタンパク質の過剰発現もまた、その細胞内の局在化／輸送に影響を及ぼす可能性が高く、抗原提示を改善するものと想定される。
【０１４１】
ＨＩＶ−１のＰｏｌ遺伝子は、ウイルス複製に極めて重要なウイルスプロテアーゼ、逆転写酵素およびインテグラーゼの前駆タンパク質である（Ｋｏｈｌ， ＮＥ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８５：４６８６−４６９０）。放出後のプロテアーゼの自己活性化に起因するレトロウイルス細胞外成熟は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２およびＳＩＶ複製に関して、それぞれ逆転写および組込みにおいて重要な機能を有する成熟ＲＴおよびＩＮをもたらす。これらの酵素の触媒コアは、それらの機能を保存するために、比較的保存されたドメインを有し、したがって交差クレードＣＴＬ応答を誘発するものと想定される。１９８８年には、ＨＩＶ−１  ＲＴに特異的なＣＴＬは、ＨＩＶ−１に感染した個体由来の血液試料中に見出されていた（Ｈｏｓｍａｌｉｎ Ａ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８７：２３４４−２３４８； Ｗａｌｋｅｒ， ＢＤ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４０：６４−６６）。比較的強力なＧａｇ特異的ＣＴＬ応答は、ウイルスＧａｇ−Ｐｏｌ構築物を有するＤＮＡワクチンまたは生組換えベクターを用いた数多くの非ヒト霊長類およびヒト研究で示されてきた （Ｅｖａｎｓ， ＴＧ， １９９９， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ， １８０：２９０−２９８； Ｆｅｒｒａｒｉ， Ｇ， １９９７， Ｂｌｏｏｄ， ９０：２４０６−２４１６； Ｇｏｒｓｅ， ＧＪ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｖａｃｃｉｎｅ， １８：８３５−８４９； Ｓｅｔｈ， Ａ， １９９８， Ｐｒｏｃ， Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９５：１０１１２−１０１１６； Ｓｅｔｈ， Ａ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７４：２５０２−２５０９）が、報告されたＰｏｌ特異的ＣＴＬ応答は数少なかった。本発明者等の開示におけるＰｏｌに特異的な有意なＣＴＬ応答の検出は、安定なＰｏｌ発現細胞系の樹立にある程度起因し得て、その細胞系ではＰｏｌ遺伝子中のＦＳおよびＰＲのコドン変更および不活性化により、細胞毒性なく、Ｐｏｌタンパク質の高レベルの発現が可能である。ｈＧａｇ−Ｐｏｌ、またはｈＧａｇおよびｈＰｏｌの組合せが、適切なアジュバント、または種々のプライム−追加免疫レジメンと同様の効果を発揮し得るが、Ｒｅｖ非依存性Ｇａｇ−Ｐｏｌ融合タンパク質は、マウスにおいてＨＩＶ−１  ＧａｇおよびＰｏｌ特異的ＣＴＬ応答を刺激し、ＡＩＤＳワクチンにおいて有用であることを証明するものとして想定される。
【０１４２】
プラスミドの説明
Ｅｎｖプラスミド
ＶＲＣ２１００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１３９−Ｎｅｆ（ｄｅｌｔａ）ＭＨＣ（ｄｅｌｔａ）ＣＤ４／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７２）由来のエンベロープタンパク質遺伝子を、ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７８）由来の突然変異Ｎｅｆ遺伝子とインフレームで連結して、ｐＸ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを生産した。ｐＸ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈから発現されるエンベロープ−Ｎｅｆ融合タンパク質は、全突然変異Ｎｅｆタンパク質に融合したＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１３９）由来の最初の６６８個のアミノ酸を有する。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１３９）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域が欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩおよびＣＤ４発現の両方を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７５）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、Ｐ７８Ａ、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。Ｘ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２６７）ベクターバックボーンから発現させる。
【０１４３】
ＶＲＣ２２００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１５７−Ｎｅｆ（ｄｅｌｔａ）ＭＨＣ（ｄｅｌｔａ）ＣＤ４／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７２）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１５７−Ｎｅｆ／ｈから発現されるエンベロープ−Ｎｅｆ融合タンパク質は、全突然変異Ｎｅｆタンパク質に融合したＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１５７）由来の最初の８２０個のアミノ酸を有する。ｇｐ１５７に関する遺伝子を、ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７８）由来の完全長突然変異Ｎｅｆ遺伝子とインフレームで連結して、ｐＲ５ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを生産した。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩおよびＣＤ４発現の両方を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７５）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、Ｐ７８Ａ、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。Ｒ５ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２６７）ベクターバックボーンから発現させる。
【０１４４】
ＶＲＣ２３００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１３９−Ｎｅｆ  ｄｅｌｔａＭＨＣ  ｄｅｌｔａＣＤ４／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７２）由来のエンベロープタンパク質遺伝子を、ｐＮｅｆＤＭＨＣ／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７６）由来の突然変異Ｎｅｆ遺伝子とインフレームで連結して、ｐＸ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣ４／ｈを生産した。ｐＸ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣ／ｈから発現されるエンベロープ−Ｎｅｆ融合タンパク質は、全突然変異Ｎｅｆタンパク質に融合したＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１３９）由来の最初の６６８個のアミノ酸を有する。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１３９）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域が欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩ発現を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２７５）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、およびＰ７８Ａである。Ｘ４ｇｐ１３９−ＮｅｆＤＭＨＣ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（Ｎａｂｅｌ ｌａｂ ＃１２６７）ベクターバックボーンから発現させる。
【０１４５】
ＶＲＣ２３０２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１３０−Ｎｅｆ／ｈ
Ｘ４ｇｐ１３０／ｈ（ＶＲＣ２７０３）部分に関して、ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸６０２用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。このＸ４ｇｐ１３０／ｈ（ＶＲ２７０３）遺伝子をＮｅｆ遺伝子に融合した。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質を使用して、ウイルスＮｅｆ遺伝子（ｐＶＲ１０１２−Ｎｅｆ）（Ｎａｂｅｌ Ｌａｂ ＃１０９３）を創出した。ヌクレオチド配列は、ウイルス遺伝子に相同性であり、コードタンパク質は、同一のものである。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１４６】
ＶＲＣ２４００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈから発現されるエンベロープ−Ｎｅｆ融合タンパク質は、全突然変異Ｎｅｆタンパク質に融合したＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１５７）由来の最初の８２０個のアミノ酸を有する。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１５７）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。ｇｐ１５７に関する遺伝子を、ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ（ＶＲＣ３６００）由来の完全長突然変異Ｎｅｆ遺伝子とインフレームで連結して、ｐＸ４ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを生産した。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩおよびＣＤ４発現の両方を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（ＶＲＣ３５００）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、Ｐ７８Ａ、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。Ｘ４ｇｐ１６０−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０１４７】
ＶＲＣ２７００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１４８】
ＶＲＣ２７０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１４９】
ＶＲＣ２７０２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１２８（ｄｅｌＦ／ＣＬ）／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸５９２用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５０】
ＶＲＣ２７０６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４５／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５１】
ＶＲＣ２７０７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ  ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５２】
ＶＲＣ２８００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株由来の相当する領域（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５３】
ＶＲＣ２８０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ  ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５４】
ＶＲＣ２８０４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびオリゴマー形成に重要な領域を包含するＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５５】
ＶＲＣ２８０５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびオリゴマー形成に重要な領域を包含するＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１５６】
ＶＲＣ２８１０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣ１（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸３３〜１２７の定常ドメイン１を、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１５７】
ＶＲＣ２８１１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣ２（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸１９９〜２９３の定常ドメイン２を、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１５８】
ＶＲＣ２８１２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣ３（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸３３３〜３８０の定常ドメイン３を、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１５９】
ＶＲＣ２８１３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣ４（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸４１９〜４５８の定常ドメイン４を、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１６０】
ＶＲＣ２８１４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣ５（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸４７２〜４９８の定常ドメイン５を、ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１６１】
ＶＲＣ２８２０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１ループ（アミノ酸１２９〜１５４）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６２】
ＶＲＣ２８２１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２ループ（アミノ酸１６０〜１９３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６３】
ＶＲＣ２８２２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ３ループ（アミノ酸２２９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６４】
ＶＲＣ２８２３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ４ループ（アミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６５】
ＶＲＣ２８２４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸１６０〜１９３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６６】
ＶＲＣ２８２５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸２９９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６７】
ＶＲＣ２８２６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６８】
ＶＲＣ２８２７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸２９９〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１６９】
ＶＲＣ２８２８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７０】
ＶＲＣ２８２９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７１】
ＶＲＣ２８３０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸２９９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７２】
ＶＲＣ２８３１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７３】
ＶＲＣ２８３２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７４】
ＶＲＣ２８３３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７５】
ＶＲＣ２８３４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０のタンパク質配列）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１７６】
ＶＲＣ２８３５
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１ループ（アミノ酸１２９〜１５４）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１７７】
ＶＲＣ２８３６
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２ループ（アミノ酸１６０〜１９３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ＡｄＡｐｔである。
【０１７８】
ＶＲＣ２８３７
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ３ループ（アミノ酸２２９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１７９】
ＶＲＣ２８３８
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ４ループ（アミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８０】
ＶＲＣ２８３９
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸１６０〜１９３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８１】
ＶＲＣ２８４０
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸２９９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８２】
ＶＲＣ２８４１
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８３】
ＶＲＣ２８４２
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸２９９〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８４】
ＶＲＣ２８４３
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８５】
ＶＲＣ２８４４
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８６】
ＶＲＣ２８４５
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６６〜１９３、およびアミノ酸２９９〜３２７）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８７】
ＶＲＣ２８４６
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８８】
ＶＲＣ２８４７
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１８９】
ＶＲＣ２８４８
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１９０】
ＶＲＣ２８４９
ｐＡｄＡｐｔＲ５ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）／ｄＶ１２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインを含むが、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）および膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＡｄＡｐｔである。
【０１９１】
ＶＲＣ２８５０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣ１（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸３３〜１２７の定常ドメイン１を、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１９２】
ＶＲＣ２８５１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣ２（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸１９９〜２９３の定常ドメイン２を、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１９３】
ＶＲＣ２８５２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣ３（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸３３３〜３８０の定常ドメイン３を、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１９４】
ＶＲＣ２８５３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣ４（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸４１９〜４５８の定常ドメイン４を、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１９５】
ＶＲＣ２８５４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣ５（ｄｅｌＣＦＩ）／ｈ
アミノ酸４７２〜４９８の定常ドメイン５を、ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩから欠失させて、ＮｈｅＩ部位で置き換えた。
【０１９６】
ＶＲＣ２８６０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１ループ（アミノ酸１２９〜１５４）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１９７】
ＶＲＣ２８６１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ２ループ（アミノ酸１６０〜１９３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）とを欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１９８】
ＶＲＣ２８６２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ３ループ（アミノ酸２９９〜３２７）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０１９９】
ＶＲＣ２８６３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ４ループ（アミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２００】
ＶＲＣ２８６４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１２
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸１６０〜１９３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０１】
ＶＲＣ２８６５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸２９９〜３２７）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０２】
ＶＲＣ２８６６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０３】
ＶＲＣ２８６７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ２３
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸２９９〜３２７）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０４】
ＶＲＣ２８６８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０５】
ＶＲＣ２８６９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０６】
ＶＲＣ２８７０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０７】
ＶＲＣ２８７１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０８】
ＶＲＣ２８７２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄｖ１２３／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６６〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２０９】
ＶＲＣ２８７３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１２４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１０】
ＶＲＣ２８７４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）／ｈ／ｄＶ１２３４
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、およびＰ４７０Ｌを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメインおよびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１２９〜１５４、アミノ酸１６０〜１９３、アミノ酸２９９〜３２７、およびアミノ酸３８６〜４１３）と融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸５０３〜５３６）とを欠失させた。また、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５９３〜６２０）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１１】
ＶＲＣ２９００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１５０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７５２用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１５０）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１２】
ＶＲＣ３０００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１６０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１のＢａＬ株（ＧｅｎｅＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。全ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２１３】
ＶＲＣ３２００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７５２用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１５０）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１４】
ＶＲＣ３２０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７５２用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質（ｇｐ１５０）は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびオリゴマー形成に重要な領域を含むＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１５】
ＶＲＣ３２０２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５０Δｇｌｙ／ｈ
グリコシル化部位でＸ４向性突然変異させた、ＨＸＢ２由来のＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１５０を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクターＶＲＣ３２０２  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５０ＤΔｇｌｙ／ｈ。ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ＨＩＶ−１エンベロープタンパク質の潜在的グリコシル化部位を破壊するために、ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質に点突然変異を導入した。Ｘ４ｇｐ１６０Ｄｇｌｙ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｎ８８Ｄ、Ｎ１５６Ｄ、Ｎ１６０Ｄ、Ｎ１９７Ｅ、Ｎ２３０Ｄ、Ｎ２３４Ｄ、Ｎ２４１Ｄ、Ｎ２７６Ｄ、Ｌ２８８Ｖ、Ｎ２８９Ｄ、Ｓ２９１Ｔ、Ｎ２９５Ｄ、Ｎ３３２Ｄ、Ｎ３３９Ｄ、Ｎ３５６Ｄ、Ｎ３８６Ｄ、およびＮ４４８Ｄである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７５２用のコドン後に終結させた。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２１６】
ＶＲＣ３２０３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１５０ＡＢΔｇｌｙ／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ＡＢの称号は、１〜３０７のアミノ酸（ＸｂａＩ〜ＥｃｏＲＩ）を意味する。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ＨＩＶ−１エンベロープタンパク質の潜在的グリコシル化部位を破壊するために、ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子に点突然変異を導入した。Ｘ４ｇｐ１６０Ｄｇｌｙ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｎ８８Ｄ、Ｎ１５６Ｄ、Ｎ１６０Ｄ、Ｎ１９７Ｅ、Ｎ２３０Ｄ、Ｎ２３４Ｄ、Ｎ２４１Ｄ、Ｎ２７６Ｄ、Ｌ２８８Ｖ、Ｎ２８９Ｄ、Ｓ２９１Ｔ、およびＮ２９５Ｄである。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７５２用のコドン後に終結させた。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２１７】
ＶＲＣ３３００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１６０／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。全ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２１８】
ＶＲＣ３３０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１６０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質が発現される。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２１９】
ＶＲＣ３４００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１６０Δｇｌｙ／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ＨＩＶ−１エンベロープタンパク質の潜在的グリコシル化部位を破壊するために、ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子に点突然変異を導入した。Ｘ４ｇｐ１６０Ｄｇｌｙ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｎ８８Ｄ、Ｎ１５６Ｄ、Ｎ１６０Ｄ、Ｎ１９７Ｅ、Ｎ２３０Ｄ、Ｎ２３４Ｄ、Ｎ２４１Ｄ、Ｎ２７６Ｄ、Ｌ２８８Ｖ、Ｎ２８９Ｄ、Ｓ２９１Ｔ、Ｎ２９５Ｄ、Ｎ３３２Ｄ、Ｎ３３９Ｄ、Ｎ３５６Ｄ、Ｎ３８６Ｄ、およびＮ４４８Ｄである。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２０】
ＶＲＣ３４０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１６０ＡＢｍｕｔΔｇｌｙ／ｈ
ＨＸＢ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ＡＢの称号は、１〜３０７のアミノ酸（ＸｂａＩ〜ＥｃｏＲＩ）を意味する。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。ＨＩＶ−１エンベロープタンパク質の潜在的グリコシル化部位を破壊するために、ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質に点突然変異を導入した。Ｘ４ｇｐ１６０Ｄｇｌｙ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｎ８８Ｄ、Ｎ１５６Ｄ、Ｎ１６０Ｄ、Ｎ１９７Ｅ、Ｎ２３０Ｄ、Ｎ２３４Ｄ、Ｎ２４１Ｄ、Ｎ２７６Ｄ、Ｌ２８８Ｖ、Ｎ２８９Ｄ、Ｓ２９１Ｔ、およびＮ２９５Ｄである。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２１】
ＶＲＣ３５００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＮｅｆ／ｈ
ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｆ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｎｅｆ／ｈは、ウイルス遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。Ｎｅｆ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２２】
ＶＲＣ３６００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ
ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｆ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩおよびＣＤ４発現の両方を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（ＶＲＣ３５００）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、Ｐ７８Ａ、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２３】
ＶＲＣ３７００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＮｅｆＤＣＤ４／ｈ
ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｆ）を創出した。ＮｅｆのＣＤ４発現を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（ＶＲＣ３５００）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。ｐＮｅｆＤＣＤ４／ｈをｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。ＶＲＣ３７００ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＮｅｆＤＣＤ４／ｈ。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｆ）を創出した。ＮｅｆのＣＤ４発現を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（ＶＲＣ３５００）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。ｐＮｅｆＤＣＤ４／ｈをｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２４】
ＶＲＣ３８００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＮｅｆＤＭＨＣ／ｈ
ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｆ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩ発現を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ（ＶＲＣ３５００）由来のＮｅｆ遺伝子に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣ／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、およびＰ７８Ａである。ｐＮｅｆＤＭＨＣ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２５】
ＶＲＣ５２００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ８９．６Ｐｇｐ１２８（ｄｅｌＦ／ＣＬ）／ｈ
８９．６Ｐ（二重向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ｕ８９１３４／ＬＯＣＵＳ：ＳＩＵ８９１３４）由来のエンベロープポリタンパク質のタンパク質配列（ｇｐ１６０）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（８９．６Ｐｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列８９．６Ｐｇｐ１６０／ｈは、８９．６Ｐ遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。８９．６Ｐｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３０００）由来の完全長８９．６Ｐ二重向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸５９６用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。アミノ酸５０８〜５４１の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２２６】
ＶＲＣ５２０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ８９．６Ｐｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
８９．６Ｐ（二重向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ｕ８９１３４／ｌｏｃｕｓＳＩＵ８９１３４）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（二重向性ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列二重向性ｇｐ１６０／ｈは、８９．６Ｐ遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。完全長８９．６Ｐ二重向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸６８３用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０８〜５４１の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９７〜６２５の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２２７】
ＶＲＣ５２０２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ８９．６Ｐｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
８９．６Ｐ（二重向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ｕ８９１３４／ｌｏｃｕｓＳＩＵ８９１３４）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（二重向性ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列二重向性ｇｐ１６０／ｈは、８９．６Ｐ遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。完全長８９．６Ｐ二重向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０９用のコドン後に終結させた。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０８〜５４１の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９７〜６２５の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２２８】
ＶＲＣ５２０３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ８９．６Ｐｇｐ１６０／ｈ
８９．６Ｐ（二重向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ８９１３４／ＬＯＣＵＳ：ＳＩＵ８９１３４）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（二重向性ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列８９．６Ｐｇｐ１６０／ｈは、８９．６Ｐ遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。完全長ＳＵタンパク質およびＴＭタンパク質を、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０２２９】
ＶＲＣ５３００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＣ）ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９２ｂｒ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１６０／ｈは、９２ｂｒ０２５遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。完全長Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質を、ｋｏｎｇｅｎｅという名称のオペロンにより合成した。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢｇｌＩＩ（ＡＴＧから１３７６ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ＶＲＣ２７０１  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ  Ｘ４ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈバックボーンのＸｂａｌ〜ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。その結果、遺伝子は、ＢｇｌＩＩ部位（ＡＴＧから１３７６ｎｔ下流）までのＲ５（クレードＣ）ｇｐ１６０／ｈであり、ＢｇｌＩＩ部位後の遺伝子残部は、ＶＲＣ２７０１  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈである。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質を、アミノ酸６８０用のコドン後に終結させた。
【０２３０】
ＶＲＣ５３０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＣ）ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９２ｂｒ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１６０／ｈは、９２ｂｒ０２５遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。完全長Ｒ５向性型のエンべロープタンパク質を、ｋｏｎｇｅｎｅという名称のオペロンにより合成した。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢｇｌＩＩ（ＡＴＧから１３７６ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ＶＲＣ２７０１  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ  Ｘ４ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈバックボーンのＸｂａＩ〜ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。その結果、遺伝子は、ＢａｇｌＩＩ部位（ＡＴＧから１３７６ｎｔ下流）までのＲ５（クレードＣ）ｇｐ１６０／ｈであり、ＢａｌＩＩ部位後の遺伝子残部は、ＶＲＣ２７０１  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＸ４ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈである。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、および融合ドメインを含むが、膜貫通ドメインが欠如したＴＭタンパク質の一部を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸５０３〜５３６の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５９３〜６２０の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。ｐＸ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来の完全長Ｘ４向性型のエンベロープタンパク質遺伝子を、アミノ酸７０４用のコドン後に終結させた。
【０２３１】
ＶＲＣ５３０３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１４５クレード（ブラジル）ｄｅｌＣＦＩ／ｈ
ＣとＢとの間のハイブリッドである、５３０１とは異なる真正クレードＣ。
【０２３２】
ＶＲＣ５３０４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＡ）ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９２ｒｗ０２０（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５１２８３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ａ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、９２ｒｗ０２０遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１８３７ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４８６〜５１９の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５７６〜６０４の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３３】
ＶＲＣ５３０５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＡ）ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９２ｒｗ０２０（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５１２８３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ａ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、９２ｒｗ０２０遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１２ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４８６〜５１９の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５７６〜６０４の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３４】
ＶＲＣ５３０６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＥ）ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９３ｔｈ９６６．８（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ０８４５６）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９３ｔｈ９６６．８にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１８５６ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４９７〜５３０の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５８８〜６１３の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３５】
ＶＲＣ５３０７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＥ）ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９３ｔｈ９６６．８（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ０８４５６）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９３ｔｈ９６６．８にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９２８ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４９７〜５３０の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５８８〜６１３の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３６】
ＶＲＣ５３０８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＣ  南アフリカ）ｇｐ１４０（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１８３３ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４８７〜５２０の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５７７〜６０５の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３７】
ＶＲＣ５３０９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（クレードＣ  南アフリカ）ｇｐ１４５（ｄｅｌＦ／ＣＬ  ｄｅｌＨＩＳ）／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、全ＳＵタンパク質、ならびに融合ドメインおよび細胞質ドメインが欠如したＴＭタンパク質を有する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。アミノ酸４８７〜５２０の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメインを欠失させた。アミノ酸５７７〜６０５の７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）を欠失させた。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３８】
ＶＲＣ５３５０
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１ループ（アミノ酸１３３〜１４８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２３９】
ＶＲＣ５３５１
ｐＶＲ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１３３〜１９１）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４０】
ＶＲＣ５３５２
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１３０〜１９１、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４１】
ＶＲＣ５３５３
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３０〜１９１、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４２】
ＶＲＣ５３５４
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１３０〜１９１、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４３】
ＶＲＣ５３５５
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１３３〜１４８、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４４】
ＶＲＣ５３５６
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３０〜１４８、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４５】
ＶＲＣ５３５７
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１３０〜１４８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４６】
ＶＲＣ５３５８
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２ループ（アミノ酸１５４〜１９１）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４７】
ＶＲＣ５３５９
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４８】
ＶＲＣ５３６０
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２４９】
ＶＲＣ５３６１
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５０】
ＶＲＣ５３６２
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ３ループ（アミノ酸３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５１】
ＶＲＣ５３６３
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ３、Ｖ４ループ（アミノ酸３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５２】
ＶＲＣ５３６４
ｐＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４０（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ４ループ（アミノ酸３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５３】
ＶＲＣ５３６５
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１ループ（アミノ酸１３３〜１４８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５４】
ＶＲＣ５３６６
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１３３〜１９１）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５５】
ＶＲＣ５３６７
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１３３〜１９１、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５６】
ＶＲＣ５３６８
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３３〜１９１、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５７】
ＶＲＣ５３６９
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１２４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１３３〜１４８、１５４〜１９１、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５８】
ＶＲＣ５３７０
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１３３〜１４８、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２５９】
ＶＲＣ５３７１
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３３〜１４８、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６０】
ＶＲＣ５３７２
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ１４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１３３〜１４８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６１】
ＶＲＣ５３７３
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２ループ（アミノ酸１５４〜１９１）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６２】
ＶＲＣ５３７４
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６３】
ＶＲＣ５３７５
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６４】
ＶＲＣ５３７６
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ２４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１５４〜１９１、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６５】
ＶＲＣ５３７７
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ３
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ３ループ（アミノ酸３３０〜３５８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６６】
ＶＲＣ５３７８
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ３４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ３、Ｖ４ループ（アミノ酸３３０〜３５８、３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６７】
ＶＲＣ５３７９
ＰＶＲＣ１０１２（ｘ／ｓ）−ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）（ブラジルＣ）／ｄＶ４
９２ＢＲ０２５（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ブラジル−Ｃ  ｇｐ１４５（ｄｅｌＣＦＩ）のヌクレオチド配列は、遺伝子９２ＢＲ０２５にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１０ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、ＳＵタンパク質のＶ４ループ（アミノ酸３８４〜４０８）中に欠失を含む。切断エンベロープポリタンパク質はまた、ＴＭタンパク質中の融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４９６〜５２９）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５８６〜６１２）、および細胞質ドメインが欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６８】
ＶＲＣ５５００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１ループ（アミノ酸１３６〜１５０）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２６９】
ＶＲＣ５５０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１３６〜１９４）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７０】
ＶＲＣ５５０２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２３／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１３６〜１９４、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７１】
ＶＲＣ５５０３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１９４、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７２】
ＶＲＣ５５０４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１９４、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７３】
ＶＲＣ５５０５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１３／ｈ  ９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１３６〜１５０、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７４】
ＶＲＣ５５０６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１５０、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７５】
ＶＲＣ５５０７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ１４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１５０、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７６】
ＶＲＣ５５０８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ２／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２ループ（アミノ酸１５６〜１９４）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７７】
ＶＲＣ５５０９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ２３／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１５６〜１９４、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７８】
ＶＲＣ５５１０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ２３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１５６〜１９４、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２７９】
ＶＲＣ５５１１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ２４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１５６〜１９４、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８０】
ＶＲＣ５５１２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ３／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ３ループ（アミノ酸２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８１】
ＶＲＣ５５１３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８２】
ＶＲＣ５５１４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４０（ｄＣＦＩ）ｄＶ４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ４ループ（アミノ酸３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、膜貫通ドメイン、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８３】
ＶＲＣ５５１５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１ループ（アミノ酸１３６〜１５０）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８４】
ＶＲＣ５５１６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２ループ（アミノ酸１３６〜１９４）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８５】
ＶＲＣ５５１７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２３／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１３６〜１９４、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８６】
ＶＲＣ５５１８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１９４、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８７】
ＶＲＣ５５１９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ２／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２ループ（アミノ酸１５６〜１９４）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８８】
ＶＲＣ５５２０
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ２３／ｈ  ９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ３ループ（アミノ酸１５６〜１９４、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２８９】
ＶＲＣ５５２１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ２３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１５６〜１９４、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９０】
ＶＲＣ５５２２
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ２４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１５６〜１９４，３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９１】
ＶＲＣ５５２３
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ３／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ３ループ（アミノ酸２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９２】
ＶＲＣ５５２４
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ３４／ｈ  ９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９３】
ＶＲＣ５５２５
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ４ループ（アミノ酸３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９４】
ＶＲＣ５５２６
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１３／ｈ  ９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ３ループ（アミノ酸１３６〜１５０、２９７〜３２５）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９５】
ＶＲＣ５５２７
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１３４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ３、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１５０、２９７〜３２５、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９６】
ＶＲＣ５５２８
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１２４／ｈ
９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１５０、１５６〜１９４、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９７】
ＶＲＣ５５２９
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５（ＳＡ−Ｃ）ｇｐ１４５（ｄＣＦＩ）ｄＶ１４／ｈ  ９７ＺＡ０１２（Ｒ５向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ２８６２２７）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（クレード−Ｃ  ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｒ５ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩは、遺伝子９７ＺＡ０１２にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。５’末端にポリリンカーを有するＸｂａＩ（ＡＴＧから１８ｎｔ上流）〜ＢａｍＨ１（ＡＴＧから１９１４ｎｔ下流）断片、Ｋｏｚａｋ配列、およびＡＴＧを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーンのＸｂａＩ〜ＢａｍＨ１部位にクローニングした。切断エンベロープポリタンパク質は、Ｖ１、Ｖ４ループ（アミノ酸１３６〜１５０、３８５〜３９９）、融合および切断（Ｆ／ＣＬ）ドメイン（アミノ酸４８７〜５２０）、７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１と２との間のインタースペース（ＩＳ）（アミノ酸５７７〜６０５）、および細胞内領域が欠如する。オリゴマー形成に重要な領域は、部分的に機能的であってもよい。７アミノ酸繰り返し（Ｈ）１、７アミノ酸繰り返し２およびそれらのインタースペース（ＩＳ）は、オリゴマー形成に必要とされる。発現ベクターバックボーンは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）である。
【０２９８】
Ｇａｇ−Ｐｏｌプラスミド
ＶＲＣ３９００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＧａｇ／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結して、ｐＧａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈ（ＶＲＣ４２００）を生産した。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子を創出した。ｇａｇタンパク質すべてを発現する遺伝子を生産するために、Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈからｐｏｌアミノ酸７７〜１００３をコードする領域を欠失させて、Ｇａｇ／ｈを生産した。この構築物はまた、アミノ酸３〜７７をコードするプロテアーゼ（９８個のアミノ酸）遺伝子の大部分をコードする。Ｇａｇ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。
【０２９９】
ＶＲＣ３９０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＳＩＶ  Ｇａｇ／ｈ
ＳＩＶｍａｃ２３９（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ３３２６２）由来のｇａｇポリタンパク質（アミノ酸１〜５５０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＳＩＶＭａｃ２３９遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。
【０３００】
ＶＲＣ４０００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＧａｇ−Ｐｏｌ／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。Ｇａｇ−Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。
【０３０１】
ＶＲＣ４００１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＳＩＶ  Ｇａｇ−Ｐｏｌ／ｈ
ＳＩＶｍａｃ２３９のＧａｇ−ｐｏｌ遺伝子を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクター。ＳＩＶ  ｇａｇ（ＶＲＣ３９０１）のＳａｌＩ−ＸｂａＩ断片を、ＳＩＶ  Ｐｏｌ（ＶＲＣ４１０１）のＳａｌＩ−ＸＢａＩに挿入して、ＶＲＣ４００１を創出した。
【０３０２】
ＶＲＣ４１００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＰｏｌ／ｈ
ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質（アミノ酸３〜１００３）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子を創出した。Ｐｏｌの初期で翻訳を開始するために、メチオニンコドンを合成ポリメラーゼ遺伝子の５’末端に付加して、Ｐｏｌ／ｈ遺伝子を創出した。Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０３０３】
ＶＲＣ４１０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＳＩＶ  Ｐｏｌ／ｈ
ＳＩＶｍａｃ２３９（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質（アミノ酸３〜１０１７）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子を創出した。Ｐｏｌの初期で翻訳を開始するために、メチオニンコドンを合成ポリメラーゼ遺伝子の５’末端に付加して、Ｐｏｌ／ｈ遺伝子を創出した。プロテアーゼ（Ｐｒ）突然変異は、ｐｏｌアミノ酸１２３におけるものであり、ＡＡＧ→ＧＧＡすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、アミノ酸３５２におけるもの（ＧＡＣからＣＡＴへ（ＤからＨへ）−ＲＴ）であり、インテグラーゼ突然変異は、アミノ酸７８８におけるもの（ＧＡＣからＧＧＣへ（ＤからＡへ）−ＩＮ）である。Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０３０４】
ＶＲＣ４２００
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＧａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。
【０３０５】
ＶＲＣ４３００
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ−Ｐｏｌ（ｄ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）／ｈ  Ｇａｇ、ならびに逆転写酵素およびインテグラーゼ領域中に欠失を有するＨＩＶ  ＨＸＢ２サブタイプＢのフレームシフトＰｏｌ遺伝子を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクター。ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３０６】
ＶＲＣ４３０１
ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ−Ｇａｇ（ＦＳ）−Ｐｏｌ−ｄｅｌｔａＲＴ  ＩＮ−ＩＲＥＳ−Ｒ５  ｇｐ１５７−Ｎｅｆ
Ｇａｇ（ＦＳ）Ｐｏｌ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ／ｈ部分に関して、ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列のためにＶＲＣ４３０２  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＧａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａ／ｈ）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびＰ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。この遺伝子を、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）に融合させた後、ＶＲＣ２２００  ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓＲ５ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ由来のＲ５ｇｐ１５７−Ｎｅｆに融合させて、ここでＨＢＸ２（Ｘ４向性、ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のエンベロープポリタンパク質（ｇｐ１６０）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型の遺伝子（Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｘ４ｇｐ１６０／ｈは、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｋ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを伴う同一のものである。Ｒ５向性型のエンベロープタンパク質（Ｒ５ｇｐ１６０／ｈ）を生産するために、Ｘ４ｇｐ１６０／ｈ（ＶＲＣ３３００）由来のＨＩＶ−１エンベロープポリタンパク質アミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、ＨＩＶ−１の���ａＬ株（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３、ここでもまたヒトに好ましいコドンを使用する）由来の相当する領域で置き換えた。ｐＲ５ｇｐ１５７−Ｎｅｆ／ｈから発現されるエンベロープ−Ｎｅｆ融合タンパク質は、全突然変異Ｎｅｆタンパク質に融合したＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１５７）由来の最初の８２０個のアミノ酸を有する。ｇｐ１５７に関する遺伝子を、ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ（ＶＲＣ３６００）由来の完全長突然変異Ｎｅｆ遺伝子とインフレームで連結して、ｐＲ５ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを生産した。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ＮｅｆのＭＨＣクラスＩおよびＣＤ４発現の両方を制限する能力を妨害するために、ｐＮｅｆ／ｈ由来のＮｅｆ遺伝子（ＶＲＣ３５００）に点突然変異を導入した。ｐＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈ中に生じたアミノ酸置換は、Ｐ６９Ａ、Ｐ７２Ａ、Ｐ７５Ａ、Ｐ７８Ａ、Ｄ１７４Ａ、およびＤ１７５Ａである。ｐＲ５ｇｐ１５７−ＮｅｆＤＭＨＣＤＣＤ４／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓ（ＶＲＣ２０００）ベクターバックボーンから発現させる。
【０３０７】
ＶＲＣ４３０２
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質（アミノ酸３〜１００３）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルスでの置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３０８】
ＶＲＣ４３０３
ｐＶＲ１０１２ＳＩＶ  Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）／ｈ
Ｇａｇ、ならびにプロテアーゼ、逆転写酵素およびインテグラーゼ領域中に欠失を有するフレームシフト欠失Ｐｏｌ遺伝子ＳＩＶｍａｃ２３９を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクター。ＳＩＶ  ｇａｇ−ｐｏｌ（ＶＲＣ４００１）の３１８８〜３１９２の５個のＴを欠失させて、ＶＲＣ４３０３を創出した。
【０３０９】
ＶＲＣ４３０４
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ  ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ／ｈ
ＨＩＶ−１Ｃクレード（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＩＶ−１遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質（アミノ酸３〜１００３）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１０】
ＶＲＣ４３０５
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ−Ａ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）／ｈ
Ｇａｇ、ならびにプロテアーゼ、逆転写酵素およびインテグラーゼ領域中に欠失を有するＨＩＶ−１ＡクレードのフレームシフトＰｏｌ遺伝子を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクター。ＨＩＶ−１Ａクレード（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ００４８８５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＩＶ−１遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質（アミノ酸３〜１００３）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１１】
ｐＶＲＣ４３０６
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ  ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ／Ｎｅｆ／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のＧａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＧａｇ遺伝子を創出した。合成Ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成Ｇａｇ遺伝子は、Ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成Ｇａｇ遺伝子を、Ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のＰｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＰｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。Ｇａｇ−Ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、Ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とＰｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むＧａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、Ｇａｇ−Ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、Ｇａｇ−Ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、Ｇａｇ−Ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。Ｎｅｆ／ｈ遺伝子をＧａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）のＰｏｌ遺伝子の下流に融合させた。ＮｅｆとＰｏｌとの間での融合により、アミノ酸の損失または追加は創出されなかった。ＮｅｆのＡＴＧが保存された。ＨＩＶ−１  ＰＶ２２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０２０８３）由来のＮｅｆタンパク質のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のＮｅｆ遺伝子（Ｎｅｆ／ｈ）を創出した。ヌクレオチド配列Ｎｅｆ／ｈは、ウイルス遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１２】
ＶＲＣ４３０８
ＶＲＣ４３０２−ｍｙｒ
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ  ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ  ｄｅｌｔａＭｙｒ／ｈ
ｐＶＲＣ４３０２からミリストイル化部位を欠失させた。ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。ミルストイル化部位は欠失した。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１３】
ＶＲＣ４３０９
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ  ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ  ｄｅｌｔａＭｙｒ／Ｎｅｆ／ｈ
ｐＶＲＣ４３０６からミリストイル化部位を欠失させた。ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびＰ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。停止コドンＴＡＧを除去して、ＰＣＲにより、合成ＢクレードＮｅｆ（Ｇｅｎｂａｎｋ アクセッション番号）をｐｏｌの３’末端に融合させた。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１４】
ＶＲＣ４３１０
ｐＶＲ１０１２Ｎｅｆ  Ｇａｇ（ｄｅｌ  ｆｓ）（ｄｅｌ  Ｍｙｒ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）／ｈ
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。合成ＢクレードＮｅｆ（Ｇｅｎｂａｎｋ アクセッション番号）遺伝子の停止コドンＴＡＧを除去して、ＰＣＲにより遺伝子の５’末端に融合させた。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１５】
ＶＲＣ４３１１
ｐＶＲ１０１２Ｇａｇ−Ｃ（ｄｅｌＦＳ）Ｐｏｌ（ｄｅｌｔａＰＲ  ｄｅｌｔａＲＴ  ｄｅｌｔａＩＮ）Ｎｅｆ／ｈ
ＶＲＣ４３０４＋クレードＣ  Ｎｅｆ
ＨＩＶ−１Ｃクレード（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｕ５２９５３）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＩＶ−１遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。停止コドンＴＡＧを除去して、ＰＣＲにより、合成ＣクレードＮｅｆ（Ｇｅｎｂａｎｋ アクセッション番号：Ｕ５２９５３）をｐｏｌの３’末端に融合させた。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１６】
ＶＲＣ４３１２
Ｇａｇ（ｄｅｌ  ｆｓ）（ｄｅｌ  Ｍｙｒ）ＮｅｆＰｏｌΔＰＲΔＲＴΔＩＮ／ｈ
ＶＲＣ−Ｍｙｒ−ｇａｇ−Ｄｎｅｆ−Ｄｐｏｌ
（ＨＩＶサブタイプＢ（ｎｓ）のＧａｇ、切断Ｎｅｆ、および切断Ｐｏｌタンパク質を発現する、ヒト化コドンを有する真核ベクター）
この構築物は、ＶＲＣ４３０２から得られた。ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＸＢ２遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、５’から５１個のアミノ酸を欠失させた合成ｎｅｆ遺伝子をコードする配列とインフレームで連結させた。ｐｏｌポリタンパク質の５’から７７個のアミノ酸を欠失させ、ｔａｇ停止コドンが欠失したｎｅｆの３’と連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜７８〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、Ｇａｇ配列とＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１７】
ＶＲＣ４３１３
ｐＶＲ１０１２ＧａｇクレードＡ（ｄｅｌ  ｆｓ）Ｐｏｌ（ΔＰＲΔＲＴΔＩＮ）／ｈ
ＶＲＣ４３０５＋クレードＡ  Ｎｅｆ
ＨＩＶ−１Ａクレード（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号ＡＦ００４８８５）由来のｇａｇポリタンパク質（Ｐｒ５５、アミノ酸１〜４３２）のタンパク質配列を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｇａｇ遺伝子を創出した。合成ｇａｇ遺伝子のヌクレオチド配列は、ＨＩＶ−１遺伝子にあまり相同性を示さないが、コードタンパク質は、同一のものである。合成ｇａｇ遺伝子は、ｇａｇポリタンパク質のカルボキシ末端から通常切断される最後の２個であるｐ１およびｐ６（アミノ酸４３３〜５００）を除いて、成熟Ｇａｇタンパク質すべてを有する。合成ｇａｇ遺伝子を、ｐｏｌポリタンパク質をコードする配列とインフレームで連結させた。ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のｐｏｌポリタンパク質のタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を使用して、ヒト細胞での発現に関して最適化したコドンを用いて、合成型のｐｏｌ遺伝子（Ｐｏｌ／ｈ）を創出した。ｇａｇ−ｐｏｌポリタンパク質を発現するための手段として翻訳フレームシフトの可能性を創出するために、ｇａｇの残部中のＮＣタンパク質の最後の４個のアミノ酸とｐｏｌ由来のさらなる３個のアミノ酸用の合成コード領域を、ＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来の相当するウイルス配列（ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド２０７４〜２３０２）で置き換えた。合成配列のウイルス配列での置換により、フレームシフトに必要な部位を導入し、さらにｐ１およびｐ６を含むｇａｇタンパク質すべてを発現する能力を回復させる。欠失させたフレームシフト（ｄｅｌＦＳ）は、ＧａｇとＰｏｌ配列との間を欠失させた５個のＴヌクレオチドを有する。Ｇａｇ（ｆｓ）Ｐｏｌ／ｈを、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓベクターバックボーンから発現させる。プロテアーゼ（ＰＲ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸５５３におけるものであり、ＡＧＧ→ＧＧＣすなわちアミノ酸Ｒ→Ｇである。逆転写酵素（ＲＴ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸７７１におけるものであり、ＧＡＣ→ＣＡＣすなわちアミノ酸Ｄ→Ｈである。インテグラーゼ（ＩＮ）突然変異は、ｇａｇ−ｐｏｌアミノ酸１２０９におけるものであり、ＡＣＴ→ＣＡＴすなわちアミノ酸Ｄ→Ａである。停止コドンＴＡＧを除去して、ＰＣＲにより、合成ＡクレードＮｅｆ（Ｇｅｎｂａｎｋ アクセッション番号：ＡＦ０６９６７０）をｐｏｌの３’末端に融合させた。このベクターは、ｐＶＲ１０１２ｘ／ｓバックボーン中に存在しないことに留意されたい。
【０３１８】
［実施例］
Ｅｎｖ
免疫原
ＣＸＣＲ４向性ＨＩＶ−１  ＨＸＢ２  Ｅｎｖを発現するプラススミドを、ヒト細胞に典型的に見られるコドンを用いることでタンパク質発現を制限するウイルスＲＮＡ構造を妨害するように設計した配列を用いて、合成的に作製した。簡潔に述べると、ＰＣＲ増幅を用いて重複合成オリゴヌクレオチドを構築することにより、ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）の合成Ｅｎｖ遺伝子を３つの断片で生成した。ＣＣＲ５向性型のＨＩＶ−１エンベロープを生産するために、ＨＸＢ２（ＣＸＣＲ４向性）ｇｐ１６０のアミノ酸２７５〜３６１をコードする領域を、Ｖ３ループを含むＣＣＲ５向性ＨＩＶ−１  ＢａＬ配列（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ６８８９３）で置き換えた。グリコシル化突然変異体は、アミノ酸８８〜４４８間の１７個の保存グルコシル化部位でアスパラギンをグルタミン酸残基で置き換える部位特異的突然変異誘発により生成した。切断突然変異Ｅｎｖタンパク質を発現するために、位置７５２、７０４、６８０または５９２後に終止コドンを導入して、それぞれｇｐ１５０、ｇｐ１４５、ｇｐ１４０またはｇｐ１２８を生産した。アミノ酸５０３〜５３７、および５９３〜６１９を欠失させることで、Ｅｎｖタンパク質をさらに変化させて、切断部位配列、融合ドメイン、および２つの７アミノ酸繰り返し間のスペーサーの一部を除去した。合成ＨＩＶエンベロープ遺伝子の構造を示す（図Ｉ）。サイトメガロウイルス前初期エンハンサー、プロモーター、および第１のイントロンの制御下にある発現ベクターｐＮＧＶＬまたはｐＶＲ１０１２中にｃＤＮＡをクローニングした。タンパク質配列は、以下のアミノ酸置換：Ｆ５３Ｌ、Ｎ９４Ｄ、Ｎ１９２Ｓ、Ｉ２１５Ｎ、Ａ２２４Ｔ、Ａ３４６Ｄ、Ｐ４７０Ｌ、Ｔ７２３Ｉ、およびＳ７４５Ｔを除いて、ＨＸＢ２  Ｅｎｖと同一であった。
【０３１９】
トランスフェクト細胞中のエンベロープタンパク質の発現
２９３細胞（１０６個）を６０ｍｍ皿中で平板培養した。翌日、リン酸カルシウムを用いて、プラスミド２μｇで細胞をトランスフェクトした（Ｇｒａｈａｍ ＦＬ， ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ ＡＪ， １９７３， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ５２：４５６−６７）。トランスフェクションの４８時間後に細胞を回収して、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、２５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．５％ＮＰ４０を含む緩衝液中に溶解した。溶解産物中のタンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて決定した。溶解産物中のタンパク質（２５μｇ）を、７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離して、イモビロン−Ｐ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ， Ｂｅｄｆｏｒｄ， ＭＡ）に転写した。免疫沈降、続くｇｐ１６０に対するポリクローナル抗体（Ｉｎｔｒａｃｅｌ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）を用いたウェスタンブロッティングでＥｎｖを検出した。
【０３２０】
ＦＡＣＳ解析によるエンベロープの細胞表面発現
トランスフェクションの４８時間後に２９３細胞を回収して、１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、ＨＩＶ−１感染患者由来のポリクローナル免疫グロブリンとともに、氷上で３０分間インキュベートした。ＦＩＴＣと結合したヒトＩｇＧに対する二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を添加して、氷上で３０分間インキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄して、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ）で解析した。Ｃｅｌｌ  Ｑｕａｎｔソフトウェアを用いて、蛍光強度のメジアン値を得た。
【０３２１】
マウスにおけるＤＮＡ注射
６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、標準的な生理食塩水２００μｌに懸濁した精製プラスミドＤＮＡ１００μｇを筋内注射した。各プラスミドＤＮＡに関して、４匹のマウスからなる１群に、２週間隔で３回注射した。最後の注射の２週後に、マウスから採血し、血清を回収し、４℃で保管した。
【０３２２】
抗体応答の定量化
免疫沈降およびウェスタンブロッティングを用いて、自然エンベロープタンパク質に結合する抗体を検出した。免疫化マウス由来の血清を用いて、ｇｐ１６０でトランスフェクトした２９３細胞の細胞溶解産物から、ｇｐ１６０を免疫沈降させた。記載の希釈物を用いて、細胞溶解産物からｇｐ１６０を免疫沈降させた（４００μｇ）。７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより免疫複合体を分離して、ｇｐ１６０に対するポリクローナル抗体を用いた免疫ブロッティングにより解析した。
【０３２３】
ＣＴＬ応答の解析
脾臓を無菌状態で取り出し、単一細胞懸濁液へと穏やかに均質化して、洗浄して、最終濃度５×１０７個細胞／ｍｌに再懸濁した。ＩＬ−２（１０Ｕ／ｍｌ）および未処置マウス由来のペプチドを間欠的に投与した照射脾細胞または完全長ｇｐ１６０  ＢＣ−ｅｎｖ／ｒｅｖを発現する安定な照射細胞系のいずれかの存在下にて７日間細胞をインキュベートした（Ｉｒｗｉｎ ＭＪ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ６８：５０３６−４４）。３つのタイプの標的細胞を使用した：ペプチドを間欠的に投与したＰ８１５細胞（ＡＴＣＣ  ＴｌＢ６４）、ｇｐ１６０を安定に発現するＢＣ１０ＭＥ細胞、およびｇｐ１６０配列に由来するペプチドを間欠的に投与したＢＣ１０ＭＥ細胞（Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＬ， Ｐａｔｅｋ ＰＱ， Ｃｏｈｎ Ｍ． Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｌｙｓｉｓ ｂｙ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ， １９８１； １５３：８９−１０６）。標的細胞を５１Ｃｒで９０分間標識して、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、５×１０−５Ｍ  β−メルカプトエタノールおよびファンギゾン２５０ユニット／ｍｌを有するＲＰＭＩ−１６４０で３回洗浄して、この培地中に再懸濁させた。５時間５１Ｃｒ放出アッセイ（Ｏｈｎｏ Ｔ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ， ４：３６１−６）で、すべて異なる標的細胞希釈物を用いて、三重試料で細胞溶解活性を決定した。
【０３２４】
ＧａｇおよびＰｏｌ
合成ＨＩＶ−１  Ｇａｇ−Ｐｏｌ発現ベクターの開発
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のＧａｇのタンパク質配列（アミノ酸１〜４３２）、およびＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のＰｏｌ（アミノ酸３〜１００３）を、ヒト細胞に関して予測されるコドンを用いて、ＧＣＧパッケージ（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｉｎｃ．， Ｍａｄｉｏｎ， ＷＩ）により逆翻訳した。ＮＬ４−３由来の２つのリーディングフレームのフレームシフト部位と重複領域にまたがる２２６ｂｐ断片を保持して、同一構築物中でのＧａｇおよびＧａｇ−Ｐｏｌ前駆ポリタンパク質の発現を可能にした。５’ＳａｌＩおよび３’ＥｃｏＲＩ部位を有する４３２５個のＤＮＡ塩基対に及ぶ８６個のオリゴヌクレオチドを、ＧＩＢＣＯ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。オリゴヌクレオチドそれぞれは、２５ｎｔの重複を有する７５塩基対であった。コドン最適化Ｇａｇ−Ｐｏｌ遺伝子（ｈＧａｇ−Ｐｏｌ）を、Ｐｗｏ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）およびＴｕｒｂｏ  Ｐｆｕ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）高ファイデリティＤＮＡポリメラーゼを用いたＰＣＲにより構築した。ＰＣＲ条件は、グラジエントＲｏｂｏｃｙｃｌｅｒ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にて、ＰＣＲ最適化キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて最適化した。完全長合成Ｇａｇ−Ｐｏｌ遺伝子を、哺乳動物発現ベクターｐＮＧＶＬ−３のＳａｌＩおよび平滑末端化ＢｇｌＩＩ部位にクローニングし（Ｘｕ， Ｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ４：３７−４２）、ＤＮＡシーケンシングにより確認した。３つのさらなる構築物を、ｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子から得た。ｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子のフレームシフト部位（ＦＳ）中の５個のチミジン（Ｔｓ）を欠失させて（ΔＦＳ）、プロテアーゼ中のＡＧＧをＧＧＣに置き換える（Ｒ４２Ｇ）ことでプロテアーゼを不活性化させて、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒを創出した（Ｈｕｎｇ， Ｍ， １９９８， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ７２：４８１９−４８２４； Ｌｏｅｂ， ＤＤ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｎａｔｕｒｅ ３４０：３９７−４００）。ｈＧａｇ−Ｐｏｌ遺伝子のＮＨ２末端の４３２個のアミノ酸を欠失させて、ＡＴＧ開始コドンを付加して、ｈＰｏｌ遺伝子を創出した。ＣＯＯＨ末端ｈＧａｇ−Ｐｏｌの９２５個のアミノ酸を欠失させて、ｈＧａｇ遺伝子を創出した。ｈＧａｇＰｏｌΔＦＳΔＰｒ、ｈＰｏｌおよびｈＧａｇ遺伝子を、ｐＶＲ１０１２にポリリンカーを挿入することにより得られるｐＮＧＶＬ−３プラスミド中で発現させた。ウイルスＧａｇ−Ｐｏｌを発現するプラスミドであるｐＣＭＶΔ８．２は、ご好意による寄贈物であった（Ｎａｌｄｉｎｉ， Ｌ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７２：２６３−２６７）。
【０３２５】
一過性トランスフェクションおよび発現の解析
２９３Ｔ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）中で維持した。プラスミドＤＮＡを二重塩化セシウム沈降勾配で精製した。およそ３×１０６個の２９３Ｔ細胞を１０ｃｍ皿でトランスフェクション前日に平板培養した。。ｐＣＭＶｄＲ８．２プラスミド（ウイルスｇａｇ−ｐｏｌ遺伝子を有する）１０μｇ、またはｐＶＲ１０１２（コドン変更遺伝子を有する）５μｇを用いて、リン酸カルシウム法（Ｃｈｅｎ， Ｃ ａｎｄ Ｈ Ｏｋａｙａｍａ， １９８７， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ， ７：２７４５−２７５２）を使用して２９３Ｔ細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの３日後、細胞溶解物をＲＩＰＡ緩衝液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）を用いて調製して、４〜１５％グラジエントＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により分離した後、イモビロンＰ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に転写した。次に、膜を抗ＨＩＶ−１−ＩｇＧ（ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）、モノクローナル抗ｐ２４（ＩＣＮ）、またはウサギ抗ＲＴ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）とともにインキュベートした。ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）を用いて、製造業者が記載するようにバンドを可視化させた。ホスホイメージャーを用いて発現レベルを決定した。
【０３２６】
安定にトランスフェクトした細胞系の生成
ｈＧａｇおよびｈＰｏｌ遺伝子を、レトロウイルスベクターであるｐＰＧＳ−ＣＩＴＥ−ＮｅｏのＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩ部位に、別個にサブクローニングした。３つのプラスミド系を用いて、ｈＧａｇまたはｈＰｏｌ遺伝子を有する組換えレトロウイルスを生産した（Ｙａｎｇ， Ｚ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７９：１０３４−１０３７）。トランスフェクションの４８時間後、上清を回収して、Ｂａｌｂ／Ｃマウスと同系であるＣＴ２６およびＢＣ１０ＭＥを形質導入し（Ｃｏｌｌｉｎｓ， ＪＬ， １９８１， Ｊ Ｅｘｐ． Ｍｅｄ， １５３：８９−１０６）、注射の２日後に、Ｇ４１８  ０．８ｍｇ／ｍｌを選択した。陽性クローンをスクリーニングして、ウェスタンブロッティングにより確認し、０．５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を有する１０％ＦＣＳ補充ＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）中に維持した。
【０３２７】
マウスのＤＮＡワクチン接種
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウスを、免疫原性の研究に使用した。ＤＮＡワクチン接種のために、各後脚の大腿四頭筋にて、１００μｌ（０．５μｇ／ｍｌ  ＤＮＡ、０．９％  ＮａＣｌ）で、全４回の注射を隔週毎にしてマウスを免疫化した。
【０３２８】
ＣＴＬアッセイ
最後の免疫化後、動物を屠殺して、無菌技法を用いて、未処置マウスおよび免疫化マウスの両方から脾臓を取り出した。脾リンパ球を回収して、上述したようにクロム放出ＣＴＬアッセイを三重反復試験で実施した（Ｏｈｎｏ， Ｔ． ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ， ４：３６１−３６６）。細胞を感作するのに使用したペプチドは以下の通りである：Ｇａｇタンパク質Ｐ１７（８８〜１１５）およびｐ２４（６２〜７６）からの２つのペプチド混合物、Ｐｏｌタンパク質：１）Ｐ６６（１７５〜１８９）、２）Ｐ６６（１７９〜１９３）、３）Ｐ６６（１８３〜１９７）、４）Ｐ６６（１８７〜２０１）、５）Ｐ６６（２２３〜２３７）、６）Ｐ６６（２２７〜２４１）、７）Ｐ６６（３６７〜３８１）からの７個のペプチド混合物。
【０３２９】
抗体応答の測定
抗ｐ２４ＥＬＩＳＡアッセイ
抗ｐ２４ＥＬＩＳＡアッセイを、Ｉｍｍｕｎｌｏｎ９６ウェルプレート（Ｄｙｎｅｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ， ＶＡ）で行った。０．０５％アジ化ナトリウムを有するＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）（ＧＩＢＣＯ）中で２μｇ／ｍｌの濃度の精製組換えＨＩＶ−１ＩＩＩＢ  ｐ２４抗原（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）５０μｌで、プレートをコーティングした。３％ＢＳＡおよび０．０５％ツィーン２０を含むＰＢＳ（ブロッキング緩衝液）でプレートを３回洗浄し、２時間インキュベートした。マウス血清を、ブロッキング緩衝液で１：１００から１：１２，８００まで順次希釈し、ｐ２４でコーティングしたプレートに添加して、４℃で一晩インキュベートした。次に、ＰＢＳ（０．０５％ツィーン２０）で４回プレートを洗浄して、ヤギ抗マウスＩｇＧ（１：１０，０００希釈、Ｓｉｇｍａ）とともに室温で２時間インキュベートした。プレートを４回洗浄した後、ｐＮＰＰアルカリホスファターゼ基質（７５μｌ、Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）を各ウェルに添加した。１時間後、０．５Ｎ  ＮａＯＨ（２５μｌ）を添加して反応を停止させた。ＥＬＩＳＡリーダーにて４０５ｎｍでプレートを読取り、遮断光学密度０．４で力価を算出した。
【０３３０】
ＨＩＶ−１免疫ブロッティング
ＨＩＶ−１タンパク質（Ｉｍｍｕｎｅｃｔｉｃｓ Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ）を有する条片を、１：２５の希釈度のプールマウス血清とともにインキュベートした。精製ヒト抗ＨＩＶ  ＩｇＧ（ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）を陽性対照として使用した。ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）を用いて、バンドを可視化した。
【０３３１】
免疫沈降およびウェスタンブロッティング
トランスフェクションの３日後、ｈＰｏｌ遺伝子でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞溶解産物を、ＲＩＰＡ緩衝液を用いて調製した。プールマウス血清を、免疫沈降（ＩＰ）緩衝液（１００ｍＭ  ＫＣｌ、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．９、０．１％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、およびプロテアーゼ阻害剤）を用いて希釈した。ＨＩＶ−１  Ｐｏｌタンパク質を含む細胞溶解産物１０μｇを添加した後、反応物を回転子上で４℃で一晩インキュベートした。次に、プロテインＧおよびＡセファロースビーズ（ＩＰ緩衝液中に１０％Ｖ／Ｖ）２５０μｌを添加し、反応物を回転子上で４℃で２時間インキュベートした。ＩＰ緩衝液で４回ビーズを洗浄し、１×試料緩衝液３０μｌ中に再懸濁させて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥへと負荷した。イモビロンＰ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上へ転写した後、膜を、抗ＨＩＶ−１−ＩｇＧ（ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）とともにインキュベートした。ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて、バンドを可視化した。
【０３３２】
プライム／追加免疫ワクチン接種ストラテジー
モルモット群（４／群）を、２週間隔で３回、以下に列挙したベクターで免疫化（プライミング）した。３回目のＤＮＡ免疫化の２週後に、免疫解析用に血液を採取した。血液採取の２〜３日後、相当するアデノウイルス構築物であるＡｄＡｐｔ（Ｓｕｌｌｉｖａｎ， Ｎ． ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｎａｔｕｒｅ， ４０８：６０５−６０８）で動物を追加免疫した。アデノウイルス追加免疫の２週後に、血液を再び採取した。中和抗体、およびエンベロープに対する抗体の存在（ＥＬＩＳＡを用いて）について血液を試験した。群を以下に要約する。
【０３３３】
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【０３３４】
結果
アデノウイルス追加免疫後の血清中の抗体レベルは、ほとんど全ての場合で、ＤＮＡ単独を３回注射した後に存在する抗体レベルより８〜１０倍高かった。ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ  ＤＮＡまたはｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩ  ＤＮＡのいずれかでの免疫化に続いてＡｄｖｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩで免疫化した動物の血清中で、中和抗体が検出された。
【０３３５】
ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ  ＤＮＡでの免疫化に続いてＡｄｖｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩで免疫化した動物、ならびにアデノウイルスでプライミングおよび追加免疫の両方を行った動物でも中和が観察された。
【０３３６】
ｇｐ１４５ｄｅｌＣＦＩ  ＤＮＡ、続くクレードＢ（Ｒ５−Ｂａｌ株）および８９．６Ｐ（クレードＢ、二重向性株）の両方でｇｐ１４０ｄｅｌＣＦＩを発現するアデノウイルスで動物をプライミングした場合に、最適な中和が見られた。
【０３３７】
中和活性はすべて、相当する株のＶ３ペプチドで遮断することができた。
【０３３８】
明瞭性および理解の目的で、幾らか詳細に本発明を説明してきたが、本発明の真の範囲を逸脱することなく、形態および詳細の様々な変化がなされ得ることを当業者は理解するであろう。図、表、および付属物、ならびに上述に参照した特許、出願および刊行物はすべて、参照により本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【図Ａ】
ＧＰ２と、ウイルスおよび細胞膜融合タンパク質の構造との比較。
（Ａ）組換えエボラ・ザイール（Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅ）ＧＰ２、（Ｂ）ＭｏＭｕＬｖのＴＭサブユニット由来の組換えＭｏ−５５、（Ｃ）インフルエンザウイルス由来の低ｐＨ処理ＨＡ２、（Ｄ）ＨＩＶ−１  ｇｐ４１の組換えタンパク質分解耐性コア、（Ｅ）組換えＳＩＶ  ｇｐ４１、ＮＭＲ構造、（Ｆ）ＳＮＡＲＥＳシンタキシン１−Ａ、シナプトブレビン−ＩＩ、およびＳＮＡＰ−２５Ｂの組換えコアコイルドセグメント（Ｗｅｉｓｓｅｎｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ， ２， ６０５−６１６）。
【図Ｉ】
機能性ドメイン、およびＨＩＶ−１  Ｅｎｖ糖タンパク質における突然変異の概要図。
ＨＸＢ２のアミノ酸残基に基づく記載の特徴を有する完全長エンベロープポリタンパク質であるｇｐ１６０を示す（最上部）。機能性ドメインは、ｇｐ１２０／ｇｐ４１切断部位（残基５１０／５１１）、融合ドメイン（５１２〜５２７）、２つの７アミノ酸繰り返し（５４６〜５７９、および６２８〜６５５）、膜貫通ドメイン（６８４〜７０５）、および細胞質ドメイン（７０６〜８５６）を含む。エンベロープタンパク質の突然変異型を、ｇｐ１６０の構造の下に示す。位置７５２、７０４または６８０でエンベロープタンパク質を終結させるＣＯＯＨ欠失を導入して、それぞれｇｐ１５０、ｇｐ１４５、またはｇｐ１４５を生産した。切断部位、融合ドメイン、および２つの７アミノ酸繰り返し間領域を除去する２つの内部欠失を、ｇｐ１６０、ｇｐ１５０、ｇｐ１４５およびｇｐ１４０に導入した。位置５９２におけるＣＯＯＨ末端領域中のさらなる欠失により、第２の７アミノ酸繰り返し、膜貫通ドメイン、およびスペース間領域を除去して、ｇｐ１２８ΔＣＦＩを生産した。潜在的グリコシル化部位を破壊するために、ｇｐ１６０およびｇｐ１５０の両方で、１１個の位置（８８、１５６、１６０、１９７，２３０、２３４、２４１、２６２、２７６、２８９、および２９５）にあるアスパラギン（Ｎ）残基を、アスパラギン酸（Ｄ）残基で置換した。位置３３２、３３９、３５６、３８６、３９２、および４４８でのＮからＤへの６個のさらなる置換を含むことで、総計１７個の突然変異グリコシル化部位を有するｇｐ１６０およびｇｐ１５０の両方の型を創出した。
【図ＩＩ】
ＨＩＶ−１  ｇｐ１６０の発現と、コドン最適化ｇｐ１６０との比較。
Ａ．Ｒｅｖ依存性およびＲｅｖ非依存性のコドン改変ｇｐ１６０をコードするプラスミドの発現。上部パネル：トランスフェクト２９３細胞における、Ｒｅｖ依存性ウイルスｇｐ１６０（左）およびコドン改変ｇｐ１６０（右）の発現。下部パネル：これらのトランスフェクト細胞中のβ−アクチンの匹敵する発現。
Ｂ〜Ｄ：ＣＯＯＨ末端切断を有する突然変異ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ５向性ＨＩＶ  Ｅｎｖ糖タンパク質の発現（それぞれ、パネルＡおよびＢ）。突然変異グリコシル化部位および突然変異機能性ドメインを有するＣＸＣＲ−４向性エンベロープタンパク質を示す（それぞれ、パネルＣおよびＤ）。記載のタンパク質は、上述のように免疫ブロッティングで検出した。挿入物を有しないベクターでトランスフェクションすることで産生される細胞溶解産物を対照として使用した（各パネルの第１レーン）。
【図ＩＩＩ】
完全長ｇｐ１６０の細胞毒性は、ＣＯＯＨ末端細胞質ドメインの欠失により排除される。
細胞の丸まりおよび剥離は、完全長ｇｐ１６０（Ｂ）に対比して、対照のトランスフェクト２９３細胞（Ａ）では観察されず、またｇｐ１４５（Ｄ）またはｇｐ１４０（Ｅ）に対比して、ｇｐ１５０でトランスフェクトした細胞（Ｃ）ではより少ない程度で観察された。
【図ＩＶ】
可溶性ｇｐ１４０ΔＣＦＩ  ＨＩＶ−１エンベロープ変異体の発現。
記載のトランスフェクト細胞からの上清の免疫沈降およびウェスタンブロット解析。
【図Ｖ】
ＤＮＡ免疫化したマウスにおけるＨＩＶ−１エンベロープタンパク質に対する抗体応答。
Ａ．ｇｐ１４０（ΔＣＦＩ）または他のＥｎｖプラスミド発現ベクターで免疫化したマウスにおける抗体応答の比較。最後の免疫化の２週間後に血清を回収して、それを用いて、トランスフェクト２９３細胞の溶解産物からコドン改変ｇｐ１６０を免疫沈降した。免疫沈降したｇｐ１６０の定量化を図５Ｂに記載するように行った。正規化データの平均を実線図として表した。
Ｂ．種々の突然変異Ｅｎｖ発現ベクターで免疫化したマウスにおける抗体応答。免疫化したマウスからの抗血清をＩＰ緩衝液で希釈して、各希釈血清１μｌを用いて、図３Ａに記載するように、トランスフェクト２９３細胞の溶解産物からコドン改変ＨＩＶ−１  ｇｐ１６０を免疫沈降した。ゲルをスキャンして、プログラムＩｍａｇｅ  Ｑｕａｎｔを用いたデンシトメトリーによりｇｐ１６０バンドの強度を決定して、実験間のデータを正規化するのに使用される陽性対照血清（ウサギ抗ｇｐ１６０）で免疫沈降したｇｐ１６０の強度に比較して表した。グループ間の比較を容易にするために、これらのデータをグラフで示す。
Ｃ．ｇｐ１４０またはｇｐ１４０（ΔＣＦＴ）で免疫化したマウスにおける抗体応答を、免疫沈降およびウェスタンブロッティングで決定した。２回のブースター用量（１００μｇ）の同一プラスミドを、２週おきに動物に与えた。最後の免疫化の２週後に回収した血清（１μｌ）を用いて、総計タンパク質４００μｇを有するトランスフェクト２９３細胞の溶解産物からコドン最適化ＨＩＶ−１  ｇｐ１６０を免疫沈降した。各レーンは、対照ベクター（レーン１および２）、ＣＸＣＲ４向性ｇｐ１４０（レーン３〜６）、または記載の突然変異機能性ドメインを有するｇｐ１４０を発現するプラスミド（レーン７〜１０）のいずれかで免疫化した動物からの血清に相当する。ｇｐ１６０に対するマウスモノクローナル抗体（ＨＩＶ−１  Ｖ３モノクローナル（ＩＩＩＢ−Ｖ３−１３）、ＮＩＨ ＡＩＤＳ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）を陽性対照として使用した（レーン１１）。
【図ＶＩ】
ＤＮＡ免疫化マウスにおけるＨＩＶ−１エンベロープタンパク質に対するＣＴＬ応答。
ＣＸＣＲ４向性Ｅｎｖおよび記載の欠失突然変異体に対するＣＴＬ応答を示す（Ａ）。グルコシル化部位およびΔＣＦＩ突然変異を有するＣＸＣＲ４向性エンベロープのＣＴＬ応答を示す（それぞれ、ＢおよびＣ）。ＣＤ８細胞に対するＣＴＬ活性の依存性を、記載の代表的免疫原を用いた磁気ビーズ消耗で示した（Ｄ）。最後の免疫化の２週後に、免疫化マウスから脾細胞を単離して、ｇｐ１６０を発現する照射細胞によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激して、４日目にｈＩＬ２（５Ｕ／ｍｌ）を添加した。再刺激した脾細胞の細胞溶解活性を、７日後に、Ｖ３ペプチドを間欠的に投与したＢＣ１０ＭＥ細胞に対して試験した。完全長Ｅｎｖを安定に発現する標的細胞を用いた場合、同様の結果が得られた。
【図ＶＩＩ】
ＨＩＶ−１  Ｇａｇ−Ｐｏｌ発現構築物の概要図。
ＨＸＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｋ０３４５５）由来のＧａｇのタンパク質配列（アミノ酸１〜４３２）、およびＮＬ４−３（ＧｅｎＢａｎｋ アクセッション番号Ｍ１９９２１）由来のＰｏｌのタンパク質配列（アミノ酸３〜１００３）を用いて、ヒト細胞中に見出されるコドンを用いたｈＧａｇ−Ｐｏｌの合成型を創出した。ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒは、フレームシフト部位（ＦＳ）の改変およびプロテアーゼの不活性化により作製した。ｈＰｏｌに関して、ｈＧＡＧ−ＰｏｌのＮＨ２末端領域から４３２個のアミノ酸を欠失させ、ＡＴＧコドンを付加した。ｈＧａｇは、ｈＧａｇ−ＰｏｌのＣＯＯＨ末端領域由来の９２５個のアミノ酸欠失により作製した。ｈＧａｇ−Ｐｏｌ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒ、ｈＰｏｌおよびｈＧａｇを、ｐＮＧＶＬ−３ベクターバックボーンから発現させる。
【図ＶＩＩＩ】
トランスフェクト２９３Ｔ細胞、ならびに安定にトランスフェクトしたＣＴ２６およびＢＣ１０ＭＥ細胞におけるＨＩＶ−１  Ｇａｇ−Ｐｏｌ発現。
ウイルスＧａｇ−Ｐｏｌ（ｖＧａｇ−Ｐｏｌ）（Ｎａｌｄｉｎｉ， Ｌ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７２：２６３−２６７）、ｐＮＧＶＬ−ｈＧａｇ、ｈＰｏｌ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰｒ、およびｈＧａｇ−Ｐｏｌを有するｐＣＭＶ  ΔＲ８．２でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞からの細胞溶解産物を、４〜１５％勾配のＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離して、ニトロセルロースフィルターに転写して、（Ａ）ヒト抗ＨＩＶ−１−ＩｇＧ、（Ｂ）モノクローナル抗ｐ２４、および（Ｃ）ウサギ抗ＲＴによる免疫ブロッティングにより解析した。（Ｄ）ｈＧａｇまたはｈＰｏｌで安定に形質導入したＣＴ２６およびＢＣ１０ＭＥ細胞からの細胞溶解産物を、ヒト抗ＨＩＶ−１−ＩｇＧで解析した。
【図ＩＸ】
トランスフェクト２９３Ｔにより産生されるＨＩＶ−１未熟ウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡法。
細胞をｐＮＧＶＬ−ｈＧａｇでトランスフェクトし、４８時間後に、回収および固定した（倍率、２５，０００倍）。
【図Ｘ】
免疫化マウスにおけおるＣＤ８陽性細胞により媒介されるＧａｇまたはＰｏｌ特異的ＣＴＬ応答。
対照ベクター、ｈＧａｇ、ｈＰｏｌ、ｈＧａｇ−ＰｏｌΔＦＳΔＰＲ、およびｈＧａｇ−Ｐｏｌで、マウスを免疫化した２週間後に、脾細胞を回収し、ＧａｇまたはＰｏｌペプチドを間欠的に投与した未処理マウス脾細胞で感作した。１週間後、（Ａ）ＨＩＶ−１  Ｇａｇペプチド、または（Ｂ）ＨＩＶ−１  Ｐｏｌペプチドのいずれかを２時間、間欠的に投与した５１Ｃｒ標識ＢＣ１０ＭＥ標的細胞を用いた５−ｈ５１Ｃｒ放出アッセイで、細胞溶解活性に関して、エフェクター細胞を試験した。（Ｃ）製造業者の説明書に従って、抗マウスＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｄｙｎａｌビーズにより、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋リンパ球を、免疫化マウスの脾細胞から消耗させた。
【図ＸＩ】
標的細胞として安定な発現細胞系を用いた、免疫化マウスにおけるＣＤ８陽性細胞により媒介されるＧａｇまたはＰｏｌ特異的ＣＴＬ応答。
マウスの免疫化の２週間後に、脾細胞を回収して、ＧａｇまたはＰｏｌペプチドを間欠的に投与した未処理マウス脾細胞で感作した。１週間後、（Ａ）ＨＩＶ−１  Ｇａｇまたは（Ｂ）Ｐｏｌタンパク質のいずれかを発現する５１Ｃｒ標識ＢＣ１０ＭＥ標的細胞を用いた５−ｈ５１Ｃｒ放出アッセイで、細胞溶解活性に関して、エフェクター細胞を試験した。
【図ＸＩＩ】
ＨＩＶ−１  ｐ２４抗体ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＶ−１免疫ブロッティング、および免疫沈降ウェスタンブロッティング。
（Ａ）ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中の２μｇ／ｍｌの濃度の、精製組換えＨＩＶ−１ＩＩＩＢｐ２４抗原５０μｌで、９６ウェルプレートをコーティングすることで、ＨＩＶ−１  ｐ２４抗体ＥＬＩＳＡアッセイを行った。
（Ｂ）ＨＩＶ−１タンパク質を有する条片のＨＩＶ−１免疫ブロッティングを、１：２５の希釈度のプールマウス血清とともにインキュベートした。ＥＣＬウェスタンブロッティング検出試薬を用いて、バンドを可視化した。
（Ｃ）ＲＩＰＡ緩衝液でトランスフェクションした３日後のｈＰｏｌ遺伝子でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞溶解産物の免疫沈降およびウェスタンブロッティング。プールマウス血清をＩＰ緩衝液で希釈した。ＨＩＶ−１  Ｐｏｌタンパク質を有する細胞溶解産物１０μｇを添加した後、反応物を回転板上で、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プロテインＧおよびＡセファロースビーズ（ＩＰ緩衝液中１０％Ｖ／Ｖ）２５０μｌを添加し、反応物を回転板上で４０℃で２時間インキュベートした。反応物をＩＰ緩衝液で４回洗浄し、１×試料緩衝液３０μｌで再懸濁した後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上に負荷した。反応物をイモビロンＰ膜に転写した後、抗ＨＩＶ−１−ＩｇＧ抗体とともにインキュベートした。ＥＬＣウェスタンブロッティング検出試薬を用いて、バンドを可視化した。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図６０】
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【図７０】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９】
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【図１１０】
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【図１１１】
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【図１１６】
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【図１１７】
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【図１１８】
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【国際調査報告】
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