(57)【要約】コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）の新しいそしてより有効な合成は、主要な中間体としてアルデヒド５とホスホニウム８でメチル没食子酸とイソバニリンから出発して完成された（全般的収率８．４％）。コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）の選ばれたアニオンを含む一連の２リン酸塩プロドラッグ（１０ａ−１０ｌ）への変換が達成された。２リン酸ナトリウム（１０ａ）及びカリウム（１０ｃ）の両者は室温で２２０ｍｇ／ｍｌ以上の水可溶性と良好なガン細胞ライン抑制活性を発揮した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナトリウム、リチウム、カリウム、ルビジウム、カルシウム、亜鉛、マンガン及びマグネシウムから成る群から選ばれたアニオンと、キニン、キニジン、モルホリン及びニシチナミドから成る群から選ばれたアミンを含むコンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグの一般構造を有する化合物。
【請求項２】
コンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグは下記の構造式を有する塩１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄ、１０ｅ、１０ｆ、１０ｇ、１０ｈ、１０ｉ、１０ｊ、１０ｋ及び１０ｌの群から選ばれた請求項１による化合物。
【化１】
2004521939.tif 000012
１０ａ，Ｚ＝Ｎａ＋ Ｉ，Ｚ＝キニン
ｂ，Ｚ＝Ｌｉ＋ ｊ，Ｚ＝キニジン
ｃ，Ｚ＝Ｋ＋ ｋ，Ｚ＝モルホリン
ｄ，Ｚ＝Ｒｂ＋ ｌ，Ｚ＝ニコチンアミド
ｅ，Ｚ＝Ｃａ２＋
ｆ，Ｚ＝Ｚｎ２＋
ｇ，Ｚ＝Ｍｎ２＋
ｈ，Ｚ＝Ｍｇ２＋
【請求項３】
コンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグは下記の塩１０ａ、１０ｂ、１０ｃ、１０ｄ、１０ｅ、１０ｆ、１０ｇ、１０ｈ、１０ｉ、１０ｊ、１０ｋ及び１０ｌの群から選ばれた請求項１による化合物。
【表１】
2004521939.tif 000013
2004521939.tif 000014
表Ｉの中の精製方法において：Ａ）水−アセトンからの再結晶；Ｂ）アセトンーメタノールからの再結晶；Ｃ）エーテルでのトリトレイト。
【請求項４】
薬理学的に許容可能な担体において活性成分コンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグの有効量を投与することから成る新生物病に冒された細胞を処理する方法。
【請求項５】
コンブレタスタチンＡ−３をジベンジルホスファイトでリン酸化してホスフェイト２ｂを得；ホスフェイトエステル２ｂをブロモトリメチルシランを用いて脱ベンジル化し；ヨウ化物の代わりにシリルブロマイドを用いて（Ｅ）異性体への変換を減少し；そして得られたリン酸を相当する塩基と反応させてリン酸塩１０ａ〜ｌに導くことから成るコンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグを製造する方法。
【請求項６】
没食子酸メチルとイソヴァニリンとを用いる請求項５による方法。
【請求項７】
下記の化学式から成るコンブレタスタチンＡ−３ジホスフェイト  プロドラッグの製造方法。
【化２】
2004521939.tif 000015
１ａＲ＝ＨコンブレタスタチンＡ−４
１ｂＲ＝ＰＯ３Ｎａ２コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ
【化３】
2004521939.tif 000016
２ａ，Ｒ＝ＨコンブレタスタチンＡ−３
２ｂ，Ｒ＝ＰＯ（Ｏｂｎ）２
２ｃ，Ｒ＝ＰＯ３Ｈ２
【化４】
2004521939.tif 000017
試薬及び条件：（ａ）ＤＩＰＥＡ，ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ；（ｂ）ＮａＨ，ＣＨ３Ｉ，ＤＭＦ；（ｃ）ＬＡＨ，ＴＨＦ；（ｄ）ＰＣＣ，酢酸ナトリュウム，ＤＣＭ
【化５】
2004521939.tif 000018
試薬及び条件：（ａ）イミダゾール，ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ，ＤＭＦ；（ｂ）ＮａＢＨ４，エタノール；（ｃ）ＰＢｒ３，ＣＨ２Ｃｌ２；（ｄ）ＰＰｈ３，ＣＨ２Ｃｌ２
【化６】
2004521939.tif 000019
試薬及び条件：（ａ）ｎ−ＢｕＬｉ，ＴＨＦ，−７８℃；（ｂ）５，ｉｎ２０ｍｌ，ＴＨＦ；（ｃ）１Ｍ  ＴＢＡＦ；（ｄ）ＣＣｌ４，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＡＰ，ジベンジルホスファイト，−１０℃，ＣＡＮ；（ｅ）ＴＭＳＢｒ，ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）ＮａＯＣＨ
【化１】
2004521939.tif 000020
１０ａ，Ｚ＝Ｎａ＋ Ｉ，Ｚ＝キニン
ｂ，Ｚ＝Ｌｉ＋ ｊ，Ｚ＝キニジン
ｃ，Ｚ＝Ｋ＋ ｋ，Ｚ＝モルホリン
ｄ，Ｚ＝Ｒｂ＋ ｌ，Ｚ＝ニコチンアミド
ｅ，Ｚ＝Ｃａ２＋
ｆ，Ｚ＝Ｚｎ２＋
ｇ，Ｚ＝Ｍｎ２＋
ｈ，Ｚ＝Ｍｇ２＋
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本件は２００１年６月１５日に提出したＳｅｒｉａｌ  Ｎｏ．６０／２９８，６０６のＵＳ特許出願に基づく。
（序文）
本発明は、一般に抗新生物薬剤の分野、詳しく言えば、コンブレタスタチンＡ−３を合成し、その後コンブレタスタチンＡ−３を、ナトリウム、リチュウム、カリウム、ルビジウム、カルシウム、亜鉛、マンガン及びマグネシウムから成る群から選ばれたアニオンと、キニン、キニジン、モルホリン及びニシチナミドから成る群から選ばれたアミンとを含む一連のジホスフェイトプロドラッグに変換する新規な予期しない有利な方法に関する。
この研究は、一部Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＤＨＨＳによって授与されたＯｕｔｓｔａｎｄｉｎｇ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  Ｇｒａｎｔ  ＣＡ−４４３４４−０５−１２によっている。合衆国政府はこの発明に権利を有する。
【０００２】
（発明の背景）
強力なガン抗脈管形成（Ｐｌｕｄａ，１９９７，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２４，２０３）天然生成物コンブレタスタチンＡ−４（１ａ）とそのリン酸ナトリウムプロドラッグ（１ｂ）の病状発現前の（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，１０，２９９；１９９５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８，１６６６；１９９８，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  ｄｅｓｉｇｎ，１３，１８３；Ｇｒｏｓｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，８１，１３１８；Ｃｈａｐｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９，１８９；Ｄａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７，１８２９；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２６，２３６；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏ．Ｐｈｙｓ．，４２，８９９；Ｈｏｒｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．，４２，８９５；Ｒｏｂｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｍｙｃｏｌ．Ｒｅｓ．，１０２，３７８）及び臨床開発（現在Ｐｈａｓｅ１ヒトのガン臨床試験）、（Ｒｅｍｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ−ＮＣｌ−ＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．＃１６，ｐ．４；Ｒｕｓｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ−ＮＣｌ−ＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．＃１４，ｐ．４）は構造上の変化に向けられた多様の新しい研究努力を促した。（Ｚ）−及び（Ｅ）−コンブレタスタチンＡ−４（Ｌａｗｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，９  １６５６）の新しい合成、ベンゾフラン（Ｂａｎｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．５２，７６７）、ダイアリルインドール（Ｍｅｄａｒｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，９，２３０３）、ヘテロコンブレタスタチン（Ｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｌｅｔｔｅｒｓ，９，２７１１；Ｍｅｄａｒｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３，７１；Ｏｈｓｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１，３０２２）及びコンブレタダイオキソレーン（Ｓｈｉｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，８，１９９７）類縁物質の合成が例証されている。コンブレタスタチンＡ−４の最も進歩した（臨床前の開発）構造的変形の一つはＡＣ−７７００として知られたスチルベンのフェノール基に対するアミノ置換のＬ−セリンアミドである（Ｎｉｈｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９０，１０１６）。
【０００３】
本発明は、臨床前の開発に適切なリン酸塩プロドラッグへの合成的変換に焦点を当て、南アフリカのブッシュウイロウＣｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍ（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｒｈｏｄｅｓ，１９９８，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，１３，１８３）から前もって分離された最も活性な成分のＳＡＲ研究の連続的追及について叙述される。本研究は、コンブレタスタチンＡ−３に基づいた有用な２リン酸塩プロドラッグを得ることに向けられた（２ａ，Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ６５，２３９０）。これらの新しいリン酸塩プルドラッグを目標とする理論は、水溶性における予想された増加及び生体内での転移性腫瘍への移動、更にガン繊維におけるホスファターゼの著しく増加した水準によるリン酸塩エステル結合の急速な酵素的裂け目に基づく。このような例外的に有用な性質は、先にコンブレタスタチンＡ−４リン酸塩プロドラッグに観察された（Ｎａｂｂａ  ｅｔ  ａｌ．２０００，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，１１，３８５を参照）。
【０００４】
（本発明の簡単な概要）
コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）の新しいそしてより有効な合成は、主要な中間体としてアルデヒド５とホスホニウム８でメチル没食子酸とイソバニリンから出発して完成された（全般的収率８．４％）。コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）の選ばれたアニオンを含む一連の２リン酸塩プロドラッグ（１０ａ−１０ｌ）への変換が達成された。２リン酸ナトリウム（１０ａ）及びカリウム（１０ｃ）の両者は室温で２２０ｍｇ／ｍｌ以上の水可溶性と良好なガン細胞ライン抑制活性を発揮した。
【０００５】
従って、本発明の主要目的は、主要な中間体としてアルデヒドとリン塩でメチル没食子酸とイソバニリンを使用するコンブレタスタチンＡ−３の経済的に価値ある合成の開発と、その後コンブレタスタチンＡ−３を一連の２リン散塩プロドラッグに変換することである。
【０００６】
本発明の他の目的は、その主要な活性成分としてコンブレタスタチンＡ−３の選ばれた２リン酸塩プロドラッグを含む新しい改良された抗新生物薬の開発と利用である。
この目的及び後に記載される更なる目的は、以下に記載の詳細な説明から容易に分かるごとく、著しく予期されない態様において本発明によって容易に達成される。
【０００７】
（好ましい具体例の詳細な説明）
溶剤はすべて無水であり、その他の試薬は前記に要約した出所からであった（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。重力カラムクロマトグラフィはＶＷＲ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのシリカゲル（７０〜２３−メッシュ）をもちいて行われた。融点はすべて電気化学デジタル融点装置、モデルＩＡ９２００で測定し、修正はしなかった。ＮＭＲスペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ３００又はＶａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ４００の装置を用いて記録した。化学変化は国内標準としてテトラメチルシランからｐｐｍで報告した。高分解能ＦＡＢマススペクトルはＫｒａｔｏｓ  ＭＳ−５０単位で得られた（Ｍｉｄｗｅｓｔ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｏｒｏｍｅｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｂｒａｓｋａ−Ｌｉｎｃｏｌｎ）。元素分析はＧａｌｂｒａｉｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮから得られた。
【０００８】
略称  ＬＡＨ              水素化リチウムアルミニウム
ＰＣＣ              ピリジニウムクロロクロメイト
ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ    ｔ−ブチルクロロジメチルシラン
ＴＢＤＭＳ          ｔ−ブチルジメチルシラン
ＤＩＰＥＡ          ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ              Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
ＤＣＭ              ジクロロメタン
ＴＬＣ              薄層クロマトグラフ
【０００９】
メチル−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ−４，５−ジメトキシ−ベンゾエイト（３）
火炎乾燥した５ＬのＲＢフラスコにＤＭＦ（１Ｌ）、ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（７２ｇ，０．４７６ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（８０ｍｌ，０．４６ｍｏｌ）を加えた。この溶液を１０分間磁気的に攪拌し、没食子酸メチル（８０ｇ，０．４６ｍｏｌ）を加え、アルゴン下に攪拌を２時間続け、そしてＮａＨ（６０％，５６ｇ，１．４ｍｏｌ）を加えた（３０分間、その間溶液は緑色に変わった）。ヨードメタン（９０ｍｌ，１．４４ｍｏｌ）を加えた。溶液は４時間攪拌を続けその間赤色に変わった。反応は水（５００ｍｌ）の添加で終わりヘキサン（４ｘ１Ｌ）で抽出した。溶媒は真空で除き、残渣をカラムクロマトグラフ（溶離剤として５：９５エチルアセテートーヘキサン）によって精製し透明な油５４．７ｇ（２，３９％収率）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．１９（ｓ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），１．００（ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３，３．８３（ｓ，ＯＣＨ３），３．８８（ｓ，ＯＣＨ３），３．８９（ｓ，ＯＣＨ３），７．２０（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），７．２５（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ）；１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−４．８８，１８．０８，２５．４６，５１．８４，５５．８２，６０．１５，１０６．６０，１１５．６８，１２４．９５，１４４．４９，１４８．４９，１５３．２７，１６６．３７．ＩＲ２９５５，２８６０，１７１８，１５８５，１４９８，１４２１，１３５０ｃｍ−１．Ｃ１６Ｈ２６Ｏ５Ｓｉの分析：Ｃ５８．８７，Ｈ８．０３，Ｏ２４．５０；（Ｃ５８．９５；Ｈ８．１０）
【００１０】
３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ−４，５−ジメトキシ−ベンジルアルコール（４）
火炎乾燥した１Ｌ  ＲＢフラスコにＴＨＦ（２００ｍｌ）とＬＡＨ（３．６ｇ，９７ｍｏｌ）を加えた。溶液を（アルゴン下で）１０分間攪拌し、メチルエステル（２９ｇ，８９ｍｏｌ，２０ｍｌＴＨＦ中）を３０分間に滴下添加した。３時間後反応は水５ｍｌの添加、続いて塩水３００ｍｌの添加によって終わった。溶液はシリカゲルの５ｃｍの床を通してろ過しクロマトグラフ基質はエチルアセテイトで抽出した。溶媒は真空で除き透明な油２６ｇを得た（４，９８％収率ｃｆ  Ｐｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，１９８７，Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６５，２３９０）；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤｌ３）δ０．１８（ｓ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），１．０１（ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３，３．７８（ｓ，ＯＣＨ３），３．８６（ｓ，ＯＣＨ３），４．５８（ｓ，ＡｒＣＨ２），６．５０（ｓ，ＡｒＨ），６．５９（ｓＡｒＨ）。
【００１１】
４，５−ジメトキシ−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ−ベンズアルデヒド（５）
ＰＣＣ（３ｇ，１４ｍｍｏｌ）と酢酸ナトリウム（１．２ｇ，１４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にＤＣＭ（２０ｍｌ）中ベンジルアルコール４（３．８ｇ，１３ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を室温で１６時間攪拌し、５ｃｍのシリカゲルの層を通し、溶媒を真空で除去した。残渣を溶離剤として１：９エチルアセテートーヘキサンを用いてコラムクロマトグラフによって精製し収率９８％でアルデヒド５  ３．４ｇを無色の油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．２０（ｓ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），１．０２（ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３），３．８７（ｓ，ＯＣＨ３），３．９２（ｓ，ＯＣＨ３），７．０２（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），７．１１（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），９．８２（ｓ，Ｃ（Ｏ）Ｈ）。
【００１２】
３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリロキシ−４−メトキシ−ベンヅアルデヒド（６）
１Ｌの丸底フラスコにＤＭＦ（４００ｍｌ），イソヴァニリン（５０ｇ，３２９ｍｍｏｌ），ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（１００ｇ，３６５ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）及びイミダゾール（４５ｇ，６６１ｍｍｏｌ，２ｅｑ）を加えた。反応混合物をアルゴン下で１６時間攪拌した。反応は水（５００ｍｌ）の添加、続いてヘキサンでの抽出で終わった。溶媒は真空で除去し、コラムクロマトグラフ（溶離剤として９：１ヘキサン−酢酸エチル）によって精製し（ヘキサンから）ｍ．ｐ．９６〜９７℃の無色の固体として１１７ｇ（６，９２％収率）を得た。ＩＲ２８５８，１６８７，１５９５，１５１０，１４２９，１２８２，１１１６，９１０ｃｍ−１；１ＨＮＭＲ（３００  δＭＨｚ，ＣＤＣ１３）１．１２（ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３），３．３５（ｓ，ＯＣＨ３），６．７９（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２５（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），７．３９（ｍ，７ＡｒＢ），７．６８（ｍ，４ＡｒＨ），９．６６（ｓ，Ｃ（Ｏ）Ｈ）；１３ＣＮＭＲ１９．７６，２６．６０，５５．１０，１１１．１７，１２０．０８，１２５．５７，１２７．５１，１２９．７ｓ，１２９．８６，１３３．０５，１３５．２５，１４５．４２，１５５．９８，１９０．７３．ＨＲＭＳ（Ｍ＋）３９１．１７４０；Ｃ２４Ｈ２６Ｏ３Ｓに対して計算した分析：Ｃ，７３．８１；Ｈ，６．７１．ファウンド：Ｃ，７３．９４；Ｈ，６．７４．
【００１３】
３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリロキシ−４−メトキシ−ベンジルアルコール（７）
エタノール（７００ｍｌ）中アルデヒド６（１１１．５ｇ，２８５ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間攪拌し、この濁った混合物に３０分間にわたってＮａＢＨ４（１３ｇ，３４３ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）を加えた。３時間攪拌の後、固体のＮａＨＣＯ３を泡立ちが止むまで加えた。溶液相をろ過し、溶媒を真空で除去してｍｐ１１１−１１３℃の無色の固体として９９％の収率でアルコール７（１１２ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１１（ｓ，Ｃ（ＣＨ３）３），３．５１（ｓ，ＯＣＨ３），４．３９（ｓ，ＣＨ２），７．６１（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．１０（ｄ，ＡｒＨＪ＝１．５Ｈｚ），６．８２（ｄｄ，ＡｒＨＪ＝８．１，１．５Ｈｚ），７．３３（ｍ，６ＡｒＨ），７．６８（ｍ，４ＡｒＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ１９．７４，２６．６５，５５．２８，６４．８８，１１２．１８，１１９．４１，１２０．３１，１２７．４３，１２９．５３，１３３．３８，１３３．６２，１３４．７６，１３５．３３，１４５．０３，１５０．０６．ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｌｉ）＋３９９．１９５９；Ｃ２４Ｈ２８Ｏ３Ｓｉに対して計算した分析：Ｃ７３．４３；Ｈ７．１９．ファウンド：Ｃ，７３．２０；Ｈ，７．１３
【００１４】
３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリロキシ−４−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウム  ブロマイド（８）
ＤＣＭ（４００ｍｌ）中ベンジルアルコール７（８４ｇ，２１４ｍｍｏｌ）の溶液をＰＢｒ３（１０ｍｌ，１０６ｍｍｏｌ，０．５ｅｑ）に加えた。反応混合物を１６時間攪拌し、反応は１０％ＮａＨＣＯの添加によって終わり、ＤＣＭで抽出した。溶媒を真空で除去し、得られたトルエン（５００ｍｌ）に溶解したベンジルブロマイドにＰＰｈ３（６２ｇ２３６ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）を加えた。混合物を還流で１時間加熱し、次に１５時間攪拌した。沈殿を集めエーテルを加えて粉砕して８６％の収率でホスホニウムブロマイド８（１３２ｇ）を得た。メタノールからの再結晶でｍｐ１５０−１５１℃の無色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）１．００（ｓ，９Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊｐｃｈ２，７．４Ｈｚ），６．３４（ｄｔ，Ｊ＝２．４８．２Ｈｚ），６．５９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．６５（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ２０．４７，２７．０７，５５．６０，１０２．２０，１１３．１５，１１８．４８，１１９．６０，１２３．４３，１２６．５６，１２６．８５，１２８．１７，１２８．７４，１３１．０７，１３１．１２，１３１．２９，１３３．９１，１３５．１０，１３５．２３，１３６．１７，１３６．５５，１４６．５５，１５２．７６．Ｃ４２Ｈ４２ＢｒＯ２ＰＳｉ：Ｃ，７０．２８；Ｈ，５．９０．ファウンド：Ｃ，６９．８３；Ｈ，６．０５
【００１５】
３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシ−コンブレタスタチンＡ−３（９）
ＴＨＦ（１Ｌ３ネックフラスコ中２５０ｍｌ）とホスホニウムブロマイド８（３８ｇ，５３ｍｍｏｌ）から成る混合物を攪拌しー７８℃に冷却し、その時点で２．５Ｍｎ−ブチルリチウム（２１ｍｌ，５３ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌を２時間続け、ベンズアルデヒド５（１３ｇ，４４ｍｍｏｌ，ＴＨＦの５０ｍｌに溶解）を加えた（３０分間に滴下）。反応は室温まで暖め更に２時間攪拌した。反応は水（１００ｍｌ）の添加で終了し、酢酸エチルで抽出し、有機溶媒を（真空）除去した。コラムクロマトグラフ（溶離剤として３：９７酢酸エチル−ヘキサン）による残渣の分離は９（３．３ｇ，２９％）を与えた；；ｂ．ｐ．ｄｅｃ２９０℃（０．１ｍｍ）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ３），δ０．１１（ｓ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），０．９７（ｓ，Ｃ（Ｃｈ３）３），１．０７Ｃ（ＣＨ３）３），３．４３（ｓ，ＯＣＨ３），３．６３（ｓ，ＯＣＨ３），３．７６（ｓ，ＯＣＨ３），６．２７（ｓ，２ｖｉｎｙｌ  Ｈ），６．３８（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），６．４３（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），６．５６（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．７２（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），６．７７（ｄｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝２．１，８．４Ｈｚ），７．３３（ｍ，６ＡｒＨ），７．６５（ｍ，４ＡｒＨ）；１３Ｃ  ＮＭＲ−５．０９，１７．８７，１９．３７，２２．１６，２５．２７，２６．２７，２８．５８，５４．８６，５５．４６，５９．９６，１０２．６０，１１１．７１，１１２．０５，１１７．０９，１２０．０２，１２６．００，１２６．９１，１２７．０６，１２９．００，１２９．１４，１２９．７８，１３２．７１，１３３．３０，１３４．８０，１３４．９９，１３９．４９，１４４．７５，１４８．９６，１４９．８５，１５３．２６
【００１６】
コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）
ＴＨＦ（５０ｍｌ）、ジシリルエーテル９（３．３ｇ，５ｍｍｏｌ）及び１Ｍ  ＴＢＡＦ（１１ｍｌ，１１ｍｏｌ）から作った溶液を３時間攪拌した。反応の終結は６Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍｌ）の添加によって完了した。混合物の酢酸エチル抽出物は硫酸ナトリウムで乾燥し溶媒はｉｎ  ｖａｃｕｏで除いた。溶離剤として１：１ヘキサン−酢酸エチルを使用するコラムクロマトグラフによる分離で油としてコンブレタスタチンＡ−３（２ａ，１．５ｇ，９９％）が得られた（Ｌｉｔ．，ｏｉｌ，Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）；ｂ．ｐ．ｄｅｃ２４３℃（０．１ｍｍ）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ３），δ３．６８（ｓＯＣＨ３），３．８８（ｓ，ＯＣＨ３），３．９０（ｓ，ＯＣＨ３），５．５０（ｓ，ＡｒＯＨ），５．６６（ｓ，ＡｒＯＨ），６．３８（ｄ，ｖｉｎｙｌ  Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．４６（ｄ，ｖｉｎｙｌ  Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．４４（ｓ，ＡｒＨ），６．５４（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），６．７４（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８０（ｄｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ），６．９１（ｄ，ＡｒＨ，Ｊ＝１．８）
【００１７】
３，３’−Ｏ−ビス（ベンジル）ホスホリル−３，４，４’−トリメトキシ−（Ｚ）−スチルベン（２ｂ）
アセトニトリル（３０ｍｌ）、ビスフェノール２ａ（２．８ｇ，９．３ｍｍｏｌ）及びＣＣｌ４（９ｍｌ．９３ｍｍｏｌ）から（連続的に）製造した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（６．６ｍｌ，３８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（２２６ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）及びジベンジルホスファイト（６ｍｌ，２７ｍｍｏｌ）を加え（５分間にわたて滴下）、−１０℃に冷却し、そして１０分間攪拌した。反応混合物を−１０℃で３時間攪拌し、ＫＨ２ＰＯ４（５０ｍｌ，０．５ｍ）で処理し、１０分間攪拌し、次いで酢酸エチルで抽出した。溶剤の除去（真空）及びコラムクロマトグラフ（１：１ヘキサンー酢酸エチル溶離剤）による分離で無色の油として５．８ｇ（２ｂ，７６％収率）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨＺ，ＣＤＣｌ３）δ３．５９（ｓ，ＯＣＨ３），３．７２（ｓ，ＯＣＨ３），３．８０（ｓ，ＯＣＨ３），５．１０（ｓ，２ＣＨ２），５．１３（ｓ，２ＣＨ２），６．３３（ｄ，ｖｉｎｙｌ  Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．４０（ｄ，ｖｉｎｙｌ  Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．６３（ｓ，ＡｒＨ），６．７３（ｓ，ＡｒＨ），６．７６（ｓ，ＡｒＨ），７．０４（ｄＡｒＨ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．０９（ｓ，ＡｒＨ），６．７３（ｓ，ＡｒＨ），１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨＺ，ＣＤＣ１３）δ、１５３．１６，１４９．７６，１４９．７２，１４３．８６，１４３．８０，１３９．４５，１３９．４２，１３９．３９，１３９．３５，１３５．６３，１３５．５６，１３５．４８，１３２．４７，１２９．７４，１２９．７２，１２８．９９，１２８．５９，１２８．４３，１２８．４１，１２８．３７，１２７．８７，１２７．８６，１２７．７７，１２６．３４，１２６．３６，１２２．１７，１２２．１４，１１４．３９，１１４．３６，１１２．３１，１０９．４２，１１．２１，６１．１２，５５．９１，５５．９０；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨＺ，ＣＤＣｌ３）−７．８２，−８．０９；Ｃ４５Ｈ４４Ｏ１１Ｐ２に対する分析：Ｃ，６５．６９；Ｈ，５．３９，ファウンド：Ｃ，６５．７０；Ｈ，５．５６
【００１８】
コンブレタスタチンＡ−３リン酸塩プロドラッグの合成に対する一般的手法ナトリウムコンブレタスタチンＡ−３  ３，３’−Ｏ−リン酸塩（１０ａ）
ＤＣＭ（１０ｍｌ）中ビスホスフェイト２ｂ（０．９ｇ，１．１ｍｍｏｌ）の溶液にトリメチルブロモシラン（０．６ｍｌ，４．５ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴン下で３０分攪拌の後、メタノール（２０ｍｌ）の添加によって反応が完了した。溶剤の除去（真空）に次いで、得られた油（２ｃ）を水（１０ｍｌ）に溶かし、ヘキサン（１５ｍｌ）で洗浄した。水を真空で除去し、リン酸残渣をエタノール（１０ｍｌ）に溶かした。ナトリウムメトキシド（０．２５ｇ，１．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間攪拌した。溶媒を真空除去し、無色の固体を水−アセトンから再結晶して無色の固体としてビスーナトリウムホスフェイト１０ａ（１．６ｇ）を得た。抗菌薬感受性テスト。化合物は、規定されたデスク感受性テストプロトコールに依り、バクテリアＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎｏｎａｓ  ｍａｌｔｏ−ｐｈｉｌｉａ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏ−ｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ及び菌Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓとＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対して審査した（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｈｎｉｃｍｌ  Ｌａｂｏｒａｔｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄ１９９７．Ｐｅｒｆｏｒ−ｍａｎｃｅ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｄｉｓｋ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔｓ−ｓｉｘｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ：Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ２−Ａ６，ＮＣＣＬＳ，Ｗａｙｎｓ，ＰＡ．）。
【００１９】
（結果と検討）
コンブレタスタチンＡ−３の最初の合成（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，１０８７，Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ６５，２３９０）はＷｉｔｔｉｇのオレフィン合成において反応性官能基を入れ換えることによって最初に改良された。続いて、私たちは、メチル没食子酸をｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシランを選択的にシリル化し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中ヨウ化メチルでメチル化してジメチルエーテル３を得ることによって、さらに精製することが出来た。次に、テトラヒドロフラン中水素化リチウムアルミニウムを用いてベンゾエイト３を還元（３→４）し、生成物をジクロロメタン中ピリジウムクロロクロメイトでアルデヒド５に酸化した。Ｂリングユニットはｔｅｒｔ−ブチルクロロジフェニルシラン用いて先ずイソバニリンを保護することに依って合成した。得られたシリルエーテル−プロテクトされたイソワニリン（６）はエタノール中臭水素化ナトリウムを用いてベンジルアルコール７に還元した。アルコール７の三臭化リン、次いでトリフェニルホスフィンでの処理でホスホニウム塩８が得られた。アルデヒド５を使用するＷｉｔｔｉｇ反応と−７８℃のテトラヒドロフランにおけるホスホニウム塩８とｎ−ブチルリチウムの反応からの生成はスチルベン９を与えた。テトラブチルアンモニウムフルオライドを使用するデプロテクシヨンは好収率（８．４％）でコンブレタスタチンＡ−３を与えた。リングＡ及びＢに対する二つの異なったシリルエーテル保護基の選択は、Ｗｉｔｔｇ反応ステップを良好に存続することが発見されたリングＢ保護基を使用する必要から起こり、リングＡシリルエーテル基の選択的除去を許す将来の利点を与える。
【００２０】
コンブレタスタチンＡ−３の亜リン酸ジベンジルとのリン酸化反応はリン酸塩２ｂを与えた（ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，１９９６，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３７，７７１；Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｒｈｏｄｅ，１９９８，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，１３，９８１）。リン酸塩エステル２ｂの脱ベンジル化はブロモトリメチルシランを用いて用意に達成された（Ｌａｚａｒ  ａｎｄ  Ｇｕｉｌｌａｕｍｅｔ，１９９２；Ｐｅｔｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ヨウ化物の代わりに臭化シリルの使用（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｒｈｏｄｅｓ，１９９８）は（Ｅ）異性体への変換を減少することが発見された（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ，２０００）。得られたリン酸のそれぞれの塩基との反応はリン酸塩１０−ｌに導いた。
【００２１】
【化２】
2004521939.tif 000002
１ａＲ＝ＨコンブレタスタチンＡ−４
１ｂＲ＝ＰＯ３Ｎａ２コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ
【００２２】
【化３】
2004521939.tif 000003
２ａ，Ｒ＝ＨコンブレタスタチンＡ−３
２ｂ，Ｒ＝ＰＯ（Ｏｂｎ）２
２ｃ，Ｒ＝ＰＯ３Ｈ２
【００２３】
【化４】
2004521939.tif 000004
試薬及び条件：（ａ）ＤＩＰＥＡ，ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ；（ｂ）ＮａＨ，ＣＨ３Ｉ，ＤＭＦ；（ｃ）ＬＡＨ，ＴＨＦ；（ｄ）ＰＣＣ，酢酸ナトリュウム，ＤＣＭ
【００２４】
【化５】
2004521939.tif 000005
試薬及び条件：（ａ）イミダゾール，ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ，ＤＭＦ；（ｂ）ＮａＢＨ４，エタノール；（ｃ）ＰＢｒ３，ＣＨ２Ｃｌ２；（ｄ）ＰＰｈ３，ＣＨ２Ｃｌ２
【００２５】
【化６】
2004521939.tif 000006
試薬及び条件：（ａ）ｎ−ＢｕＬｉ，ＴＨＦ，−７８℃；（ｂ）５，ｉｎ２０ｍｌ，ＴＨＦ；（ｃ）１Ｍ  ＴＢＡＦ；（ｄ）ＣＣｌ４，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＡＰ，ジベンジルホスファイト，−１０℃，ＣＡＮ；（ｅ）ＴＭＳＢｒ，ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）ＮａＯＣＨ
【００２６】
【化１】
2004521939.tif 000007
１０ａ，Ｚ＝Ｎａ＋ Ｉ，Ｚ＝キニン
ｂ，Ｚ＝Ｌｉ＋ ｊ，Ｚ＝キニジン
ｃ，Ｚ＝Ｋ＋ ｋ，Ｚ＝モルホリン
ｄ，Ｚ＝Ｒｂ＋ ｌ，Ｚ＝ニコチンアミド
ｅ，Ｚ＝Ｃａ２＋
ｆ，Ｚ＝Ｚｎ２＋
ｇ，Ｚ＝Ｍｎ２＋
ｈ，Ｚ＝Ｍｇ２＋
【００２７】
【表Ｉ】
2004521939.tif 000008
2004521939.tif 000009
精製方法：Ａ）水−アセトンから再結晶；
Ｂ）アセトンーメタノールから再結晶；
Ｃ）エーテルでトリトレイト。
ノート：ＩＲデータはＨ  ＮＲＭが可溶性又は常磁性により可能でない時のみにとった。
精製方法：Ａ）水−アセトンからの再結晶；Ｂ）アセトンーメタノールからの再結晶；Ｃ）エーテルでのトリト；Ｃ）エーテルでのトリトレイ
ノート：ＩＲデータはＨ  ＮＭＲが可溶性又は常磁性により可能でない時に取った。
【００２８】
【表ＩＩ】
2004521939.tif 000010
【００２９】
【表ＩＩＩ】
2004521939.tif 000011
【００３０】
プロドラッグカンジデイト（１０ａ−１）の大部分は有効な腫瘍細胞成長・抑制活性を保持している（表ＩＩ）、しかしカンジデイト（１０ａ−ｄ）は１０ｅ−ｊより実質的に良好な水溶性を示した（表ＩＩＩ）。コンブレタスタチン  Ａ−３（２ａ）のＮＣｌ  ６０−セルスクリーン中リン酸ジナトリウムプロドラッグ（１０ａ）との同時発生的比較試験は、それぞれ  ６．５７，１．８４と  １０．３，１．８の平均パネル  Ｇ１５０値（Ｘ１０−８ＭＩＳＥ）を与えた。比較関連分析（Ｂｏｙｄ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｌ，１９９５）は２ａ及び  １０ａのミーン・グラフプロファイルが実質的に見分けがつかないことを確認した。
【００３１】
コンブレタスタチンは、どちらかというと抗菌薬である（Ｐｅｔｔｉｔ他，１９９５；Ｐｅｔｔｉｔ他，１９９８；ＰｅｔｔｉｔおよびＬｉｐｐｅｒｔ，２０００）。確かに、天然のコンブレタスタチンの大部分やその誘導体には抗菌効果があり；また一方、（Ｅ）−コンブレタスタチンＡ−１は抗菌及び抗真菌活性を持つ（Ｐｅｔｔｉｔ他，２０００）。ディスク拡散検定において、コンブレタスタチンＡ−３（２ａ）のために病原菌  クリプトコックス・ネオフォルマンス（ＭＩＣ＝５０−１００μｇ／ディスク）を選んだ。このコンブレタスタチンＡ−３（２ａ）のリン酸ナトリウムプロドラッグ（１０ａ）はこれらの検定で不活性であった。
【００３２】
投与について
投与される用量は、新生物疾患の個性、年齢や健康や体重を含む患者のタイプ、同時治療をもし行っていればその種類、処置頻度や治療比率、などに依存する。
【００３３】
具体的には、投与する活性成分の用量レベルは患者の体重あたりでは、静脈内投与では０．１約２００ｍｇ／ｋｇ、筋肉内投与では１から約５００ｍｇ／ｋｇ、経口投与５から約１０００ｍｇ／ｋｇ、経鼻投与では５から約１０００ｍｇ／ｋｇ、そしてエアゾールでは５から約１０００ｍｇ／ｋｇである。
【００３４】
濃度を用いて表すと、経皮、経鼻、経喉、経気管支、経膣、経直腸または経眼についての本発明組成物中に存在する活性成分は組成物の約０．０１から約５０％ｗ／ｗの濃度であり、好ましくは組成物の約１から約２０％ｗ／ｗの濃度であり；そして非経口投与のためには、組成物の約０．０５から約５０％ｗ／ｖであり、好ましくは組成物の約５から約２０％ｗ／ｖである。
【００３５】
好ましくは本発明の組成物はヒトや動物に対して、活性成分の適量を含む単位投与形態、たとえば錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒、坐薬、滅菌非経口溶液または懸濁液、滅菌非非経口溶液または懸濁液などとして投与するために提供される。
【００３６】
経口投与のためには、固体または液体の投与形態が製造される。
【００３７】
粉末は、活性成分を適当に細かい大きさに粉砕し、そして同じように粉砕した希釈剤と混合することによって極めて簡単に製造される。希釈剤は、たとえば乳糖やデンプンのような可食性の炭水化物材料であってよい。有利には、香料油と同様に甘味剤や砂糖が存在している。
【００３８】
カプセル剤は、上述のようにして粉末混合物を作り、そして形成されたゼラチンの鞘の中へ充填して製造される。有利には充填作業前に、補助剤として、たとえばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、などのような潤滑剤を粉末混合物に加える。
【００３９】
軟ゼラチンカプセル剤は、活性成分のスラリーを、許容可能な植物油、液体軽油またはその他の不活性油やトリグリセライドと共に機械的カプセル化により製造される。
【００４０】
錠剤は、粉末混合剤を作製し、顆粒またはスラグとし、潤滑剤を添加し、そして打錠して製造される。粉末混合物は、適当に粉砕した活性成分を、たとえばデンプン、乳糖、カオリン、リン酸ジカルシウムのような希釈剤や基剤と混合して製造される。粉末混合物は、たとえばコーンシロップ、ゼラチン溶液、メチルセルロース溶液またはアラビアゴム粘液のような結合剤で湿らせ、そしてスクリーンを強制通過させて顆粒化させる。顆粒化の別法として、粉末混合物をスラグ化、すなわち打錠機を通過させ、得られた不完全な形の錠剤を粉砕（スラグ）とする。このスラグにステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱物油を添加することによって製錠用の型への付着を防ぐため潤滑化することができる。ついで潤滑化した混合物を圧縮して錠剤とする。
【００４１】
有利には錠剤は、シェラックの密閉被膜または腸溶性被膜から成る保護被覆、砂糖とメチルセルロースの被覆、およびカルナウバ蝋の研磨被覆をすることができる。
【００４２】
シロップ、エリキシル及び懸濁液のような経口投与のための液体単位投与形態は、組成物の一匙分が投与のための活性成分の一定量を含むように製造することができる。この水溶液の形態のものは、砂糖、香料および保存剤と共に水性のビヒクルに溶解してシロップとすることができる。エリキシルは、香料と共に適当な甘味料を水性アルコールのビヒクルを使って製造する。懸濁剤は、アラビアゴム、トラガカント、メチルセルロースなどのような懸濁用剤を補助剤として適当なビヒクルと共に不溶性の形態として製造することができる。
【００４３】
非経口投与のために、液体単位投与形態は、活性成分と滅菌ビヒクル（水が好ましい）を用いて製造される。形態と使用濃度により、活性成分はビヒクルに懸濁または溶解することができる。溶液を製造するときは、水溶性の活性成分は注射用水に溶解し、そして適当なビヒクルまたはアンプルに充填して、密封する前に滅菌濾過する。有利には、たとえば局所麻酔剤、保存剤および緩衝剤のような補助剤をビヒクルに溶解することができる。活性成分をビヒクルに溶解せずに懸濁させ滅菌は濾過によって行わない、ということ以外は実質的に上記と同様にして非経口剤を製造する。滅菌ビヒクルに懸濁する前にエチレンオキサイドに曝露させることで、活性成分を滅菌することができる。有利には、界面活性剤または湿潤剤を組成物に包含させて、活性成分を均一に分布させる。
【００４４】
経口および非経口投与に加えて、直腸や膣の経由もまた用いられる。活性成分は坐薬という手段で投与することができる。おおむね体温での融点をもつビヒクルまたは容易に溶けるビヒクルを用いることができる。たとえば、カカオ脂や種々のポリエチレングリコール（カウナウバワックス）がビヒクルとして用いられる。
【００４５】
経鼻滴下のために、液体単位投与形態を、活性成分と適当な医薬用ビヒクル、好ましくはＰ．Ｆ．水を用いて製造する。吸入剤が好ましい投与であるときは乾燥粉末が処方される。
【００４６】
エアゾルとしての使用のために活性成分は、必要または所望に応じてたとえば供溶媒や湿潤剤のような通常の補助剤と共に、たとえばジクロロジフルロメタン、二酸化炭素、窒素、プロパンなどのような気体や液体の噴射剤と一緒に加圧エアゾル容器に詰めることができる。
【００４７】
本明細書や請求の範囲で用いる「単位用量形態」という用語は、ヒトや動物の対象のための単位用量として適当な物理的に分離された単位であって、各々の単位は、必要な医薬用希釈剤、担体またはビークルと共に所望の治療効果を生じるように計算した一定量の活性剤を含むものである。本発明の新規な単位投与形態の明細は記載されそして、（ａ）活性成分のユニークな特性および得られるべき特定の治療効果、そして（ｂ）本発明の特徴である本明細書に開示のヒトにおける治療的使用のためのそのような活性材料の配合技術に本質的な限定に直接に依存する。本発明における適当な単位投与形態の例は、錠剤、カプセル、トローチ、坐薬、粉末のパケット、ウエハース、カシェ剤、小さじ用剤、大さじ用剤、滴剤、アンプル、バイアル、上記の適当な組み合わせ、およびここに記載のその他の形態である。
【００４８】
抗新生物剤として用いられる活性成分は、それ自体が当該技術で入手可能であり確立された方法で製造可能な医薬材料を用いて容易に上記の単位用量形態にすることができる。次の製法は本発明の単位用量形態の製造説明であって限定するものではない。本発明の態様として種々の投与形態を製造した。それらは以下の例に示されており、「活性成分」という用語はフェンスタチン３ｂ及び／またはフェンスタチンプロドラッグ３ｄ、及び／またはベンゾフェノン４ａ−ｆまたはここに記載した他の組成物を意味する。
【００４９】
組成物  Ａ  硬ゼラチンカプセル剤
各々のカプセルが２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の経口用二部分型硬ゼラチンカプセル剤を、次のタイプと量の成分から製造した。
活性成分、微粉末化                ２００ｇ
コーンスターチ                      ２０ｇ
タルク                              ２０ｇ
ステアリン酸マグネシュウム            ２ｇ
【００５０】
空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別に微粉砕した成分に加え、完全に混合し、ついで常法によりカプセルに封入した。
【００５１】
上記のカプセル剤は、日に１ないし４回、１ないし２カプセルの経口投与により、新生物患者の治療に有用である。
【００５２】
上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を５０ｇ、２５０ｇおよび５００ｇに代えて５０、２５０および５００ｍｇの活性成分を含有するカプセル剤を同様にして製造する。
【００５３】
組成物  Ｂ  軟ゼラチンカプセル剤
まず、０．５ｍｌのトウモロコシ油に化合物を懸濁し材料をカプセル化可能とし次いで上記のようにしてカプセル充填して、空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を各２００ｍｇ含有する経口用の一体型軟ゼラチンカプセル剤を製造する。
【００５４】
上記のカプセル剤は日に１ないし４回、１ないし２カプセルの経口投与により、新生物疾患の治療に有用である。
【００５５】
組成物  Ｃ  錠剤
各々の錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の錠剤を、次のタイプと量の成分から製造した。
活性成分、微粉化                  ２００ｇ
乳糖                              ３００ｇ
コーンスターチ                      ５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム              ４ｇ
軽油                                  ５ｇ
【００５６】
空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別に微粉砕した成分に加え、ついで完全に混合しスラグとする。スラグを１６号スクリーンを通し力を加えて破砕する。得られた顆粒を打錠して、各錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有するようにする。
【００５７】
上記の錠剤は、日に１ないし４回、１ないし２錠の経口投与により、新生物疾患の治療に有用である。
【００５８】
上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を２５０ｇおよび１００ｇに代えて２５０ｍｇおよび１００ｍｇの活性成分を含有する錠剤を同様に製造する。
【００５９】
組成物  Ｄ  経口用懸濁剤
各小さじ（５ｍｌ）用量が５０ｍｇの活性成分を含有する経口用の水性懸濁剤１リットルを、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉末              １０ｇ
クエン酸                        ２ｇ
安息香酸                        １ｇ
しょ糖                      ７９０ｇ
トラガカントガム                ５ｇ
レモン油                        ２ｇ
脱イオン水、適量        １０００ｍｌ
【００６０】
クエン酸、安息香酸、しょ糖、トラガントガム、およびレモン油を充分な量の水に分散して８５０ｍｌの懸濁液とする。微粉末機で細かく粉砕した活性成分を、均一に分布したシロップ単位の中へ攪拌する。充分な量の水を加えて１０００ｍｌとする。
【００６１】
このようにして製造した組成物は、日に３回、小さじ１杯（１５ｍｌ）の用量で新生物疾患の治療に有用である。
【００６２】
組成物  Ｅ  非経口製品
新生物疾患治療のための１ｍｌあたり３０ｍｇの活性成分含有の非経口注射のための滅菌水性懸濁剤を、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                    ３０ｇ
ポリソルベート８０                    ５ｇ
メチルパラベン                    ２．５ｇ
プロピルパラベン                ０．１７ｇ
注射用水、適量                １０００ｍｌ
【００６３】
活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸濁液を滅菌バイアルに充填し、バイアルを密封する。
【００６４】
このようにして製造した組成物は、日に３回１ミリリットル（１ｍｌ）の用量で新生物疾患の治療に有用である。
【００６５】
組成物  Ｆ  坐薬、直腸および膣
新生物疾患治療のための、各々が２．５ｇの重量であり２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の坐薬を、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                              １５ｇ
プロピレングリコール                        １５０ｇ
ポリエチレングリコール＃４０００  適量    ２５００ｇ
【００６６】
活性成分を空気微粉砕機で細かく粉砕し、プロピレングリコールに添加し、混合物が均一に分散されるまでコロイドミルを通過させる。ポリエチレングリコールを溶融し、プロピレングリコール分散液を攪拌しながらゆっくりと添加する。この懸濁液を、非冷却の型へ４０℃で注ぐ。組成物を放冷固化させ、ついで型から外し、各々の座剤をホイルで包む。
【００６７】
上記の座剤を、新生物疾患の治療のために直腸または膣に挿入する。
【００６８】
組成物  Ｇ  経鼻用懸濁剤
１ｍｌあたり２０ｍｇの活性成分を含む経鼻滴下のための滅菌水性懸濁液１リットルを次のタイプの量と成分から製造する。
活性成分、微粉化                    １５ｇ
ポリソルベート８０                    ５ｇ
メチルパラベン                    ２．５ｇ
プロピルパラベン                ０．１７ｇ
脱イオン水  適量              １０００ｍｌ
【００６９】
活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸濁液を無菌的に滅菌容器に充填する。
【００７０】
このようにして製造した組成物は、日に１ないし４回、０．２から０．５ｍｌの経鼻滴下により新生物治療に有用である。
【００７１】
活性成分はまた、経皮、経鼻、経咽頭、経気管支または経口での局所的使用のために非希釈の純粋な形態でも与えることができる。
【００７２】
組成物  Ｈ  粉末
バルク形態の活性成分５ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕した粉末をシェイカー式の容器に入れる。
【００７３】
上記の組成物は日に１ないし４回、粉末を局所部位に適用することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００７４】
組成物  Ｉ  経口用粉末
バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕化した粉末を、２００ｍｇの各々の用量に分けて包装する。
【００７５】
上記の組成物は日に１ないし４回、コップ一杯の水で１ないし２包装を経口投与することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００７６】
組成物  Ｊ  吸入剤
バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。
【００７７】
上記の組成物は日に１ないし４回、３００ｍｇを吸入することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００７８】
上述したところから、それに基づく新規で有用な抗新生物薬剤および新規で有用な抗新生物製剤がここに記載され説明されており、それは上記の目的のすべてを極めて予期しない態様で満たしている。この開示に直面する当業者において容易に起こるその修整、変更および適用は、本発明の精神の範囲内にあると意図されることは当然理解される。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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