(57)【要約】５）注入用の水と、６）単糖、二糖、三糖、または多糖などから選ばれる少なくとも１つの糖質と、７）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、８）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分を含む血液が供給されない場合に細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液；当該溶液の製造方法；鼓動中の心臓又は鼓動していない心臓の提供者から器官（ｏｒｇａｎｓ）を含む臓器を移植中に、暖又は寒虚血（ｗａｒｍ ｏｒ ｃｏｌｄ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）、心臓麻痺又は開心手術（ｏｐｅｎ ｈｅａｒｔ ｓｕｒｇｅｒｙ）、手足全部又は全身を保存するいかなる状況をも含む外科手術中に、生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ）の実験中に、設計された細胞、組織、器官及びこれらの同等物を培養して保存する際における当該溶液の使用；細胞をフラッシュ、保存、又はフラッシュ保存する方法；当該溶液の成分を含む部品のキット。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分
を含む血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項２】
サッカライドが単糖、二糖、三糖、または多糖などから選ばれることを特徴とする請求項１記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３】
ｐＨ緩衝液はリン酸ナトリウムバッファとリン酸カリウムバッファから選ばれることを特徴とする請求項１又は２記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項４】
カルシウム輸送ブロッカー（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｂｌｏｃｋｅｒ）又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活性剤は、ニカルジピン、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、ベラバミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ニソルジビン（ｎｉｓｏｌｄｉｐｉｎｅ）、クロルプロマジン、およびトリフルオロペアジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）から選ばれることを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項５】
（５）主に細胞に浸透しない少なくとも１つの陰イオン、望ましくは陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）、
（６）トロンボキサン反応抑制剤、そして
（７）コロイド浸透性質を有する少なくとも１つの成分
から選択される１つまたはそれ以上の追加成分を含むことを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項６】
陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）はラクトビオン酸塩（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）又はラクトビオン酸を含むことを特徴とする請求項５載のフラッシュ保存溶液。
【請求項７】
トロンボキサン反応抑制剤はアスピリンを含むことを特徴とする請求項５又は６載のフラッシュ保存溶液。
【請求項８】
コロイド浸透物質（ｏｓｍｏｔｉｃ）はポリエチレングリコール（ｐｅｇ）、サクシニル化されたゼラチン、フィコール（多糖）またはデンプン製品などの多糖類を含むことを特徴とする請求項５載のフラッシュ保存溶液。
【請求項９】
（８）無機的または有機的な溶質、
（９）カルシウムキレート化特性を有する成分または成分群、および
（１０）鉄のキレート化特性を有する成分または成分群
から選択される１つまたはそれ以上の成分を追加的に含むことを特徴とする請求項５載から８のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１０】
無機溶質は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、ＯＨ−、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋から選択される陽イオン及び／又は陰イオンを含む電解質であることを特徴とする請求項９記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１１】
カルシウムキレート（ｃｈｅｌａｔｅｒ）はクエン酸塩（ｃｉｔｒａｔｅ）又はＥＧＴＡを含むことを特徴とする請求項９又は１０記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１２】
（１１）１つ又は１つ以上のアミノ酸、
（１２）酸素フリーラジカルに対して有効な少なくとも１つの成分又は酸素フリーラジカル生成物（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）、及び、
（１３）エネルギー供給システムの少なくとも１つの成分、又は、エネルギー供給システム若しくはケトン体に影響を及ぼす少なくとも１つの成分
を追加的に含むことを特徴とする請求項１から１１のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１３】
アミノ酸はグルタミン、グリシン又はノルマルアセチルシステインから選択されることを特徴とする請求項１から１２のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１４】
酸素フリーラジカル抑制物はアロプリノール、還元されたグルタチオン及びその組合せから選択されることを特徴とする請求項１２又は１３記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１５】
エネルギー供給システムの成分にはアデノシン又はベータヒドロキシブチル又はベータヒドロキシブチルを含むケトン体を含むことを特徴とする請求項１２ないし１４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１６】
（１４）筋肉中で架橋機能（ｃｒｏｓｓｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に逆に作用する、少なくとも１つの成分、望ましくはブタンジオンモノオキシム、
（１５）細胞膜の中外からの蛋白質の挿入と除去に影響を及ぼす少なくとも１つの成分、望ましくはタキソール、
（１６）少なくとも、細胞間信号形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）システム、又はこのシステムを修正する少なくとも１つの成分、望ましくはプロテインキナーゼ障害剤、又はカルモジュリン障害剤、
（１７）膜を安定させる作用を持つ少なくとも１つの成分、望ましくはラノラジーン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）
から選択される追加的な成分を含むことを特徴とする請求項１２ないし１７のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１７】
ｐＨの範囲が６．５〜７．８であることを特徴とする請求項１ないし１６のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１８】
浸透圧重量モル濃度が３００〜４５０ｍｏｓｍｏｌ／Ｌの範囲であることを特徴とする請求項１ないし１７のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１９】
成分（２）の量は５０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、各成分（３）、（５）、（８）の総量は１５〜７５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（１１）の量は１５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（１２）の総量は最大５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（７）の量は０．５〜３．０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（６）の量は０．３〜１．０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（４）の量は０．０００５〜０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、他の成分は最大１モルＬの範囲の少量で存在することを特徴とする請求項１ないし１８のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２０】
前記に定義した成分（１）〜（４）と前記に定義した成分（５）、（６）、（７）から選択される少なくとも１つの成分を含み、さらに望ましくは付加的に成分（８）、（１１）、（１２）、（１３）を含む、腎臓、肝臓、すい臓、腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、腸（ｂｏｗｅｌ）などを保存することを特徴とする請求項１ないし１９のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２１】
器官は前記に定義された成分（１）〜（４）と成分（８）から選択された成分を含み、さらに望ましくは付加的に前記に定義された少なくとも１つの成分（１４）を含む、心臓などの筋骨逞しい器官を保存するのに使用されることを特徴とする請求項１ないし２０のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２２】
以下の成分を含む肝臓、腎臓、すい臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　類　　　　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
５）　　　　ラクトビオン酸　　　　　　　　　　　　５０
８）　　　　ＫＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　１５
８）　　　　ＮａＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　３５
１２）　　　グルタチオン　　　　　　　　　　　　　３
３）　　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　　２６．４５
３）　　　　ＮａＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　１６．６６
１１）　　　グルタミン　　　　　　　　　　　　　　２０
２）　　　　サクロース　　　　　　　　　　　　　　１００
６）　　　　アスピリン　　　　　　　　　　　　　　０．５
１２）　　　アロプリノール　　　　　　　　　　　　０．４
４）　　　　ニカルジピン　　　　　　　　　　　　　０．００５
７）　　　　ペグ（ＰＥＧ）（２万ＭＷ）　　　　　　１
【請求項２３】
以下の成分を含む心臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　類　　　　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
３）　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　４２．３
３）　　　ＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　１０．６７
３）　　　ＫＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　　１６
２）　　　サクロース　　　　　　　　　　　　　　　１００
８）　　　ＭｇＣｌ２　　　　　　　　　　　　　　　　５
８）　　　ＣａＣｌ２　　　　　　　　　　　　　　　　０．６
８）　　　ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　　　　１２
４）　　　ジルチアゼム　　　　　　　　　　　　　　０．５
【請求項２４】
薬理（方）的に（ｐｈａｒｍｅｃｏｐｏｅｉａｌｌｙ）許容可能な条件の下で成分を追加した後、成分（７）ともしあれば不安定な成分を除いて、フラッシュ保存溶液の構成成分を水に添加し、次いで、もしあれば成分（７）を添加してほぼ目的の容量に近い溶液を作製し、最後にｐＨを整える容量まで増やし除菌と冷却することを含むことを特徴とする請求項１ないし２３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液の製造方法。
【請求項２５】
血液が供給されない場合に、細胞を保存するため、特に器官（ｏｒｇａｎｓ）、生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ）、および細胞への損傷を防ぐためのフラッシュ溶液、保存溶液、又はフラッシュ保存溶液であることを特徴とする請求項１ないし２４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液の使用。
【請求項２６】
鼓動中の心臓又は鼓動していない心臓の提供者から器官（ｏｒｇａｎｓ）を含む臓器を移植中に、暖又は寒虚血（ｗａｒｍ ｏｒ ｃｏｌｄ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）、心臓麻痺又は開心手術（ｏｐｅｎ ｈｅａｒｔ ｓｕｒｇｅｒｙ）、手足全部又は全身を保存するいかなる状況をも含む外科手術中に、生きた組織の実験中に、設計された細胞、組織、器官及びこれらの同等物を培養して保存する際における請求項２５記載の保護溶液の使用。
【請求項２７】
保護溶液が血管系を介して細胞、生きている組織、器官、手足又は全身に接触し、かつ、任意に、追加的にフラッシュされた細胞、組織、および器官を保存するための保護溶液として作用することを特徴とする請求項２５又は２６記載の保護溶液の使用。
【請求項２８】
前記に定義した第１番目の溶液は細胞、組織、器官、手足又は身体をフラッシュするのに使用され、第２番目の溶液はその保存に使用されるか、または部分的な保存に使用されることを特徴とする請求項２５ないし２７のいずれかに記載の保護溶液の使用。
【請求項２９】
細胞、特に、生きた細胞、組織、器官を請求項１ないし２３のいずれかに記載の簡易な低体温保存用溶液に接触させ、当該細胞、組織または器官を溶液で洗い流し、定位置から取り除き、望ましくは通常ゼロから４℃の間の温度範囲に冷やして保管することで、細胞をフラッシュ、保存またはフラッシュ保存する方法。
【請求項３０】
細胞、組織または器官をフラッシュし、低体温状態にして、侵入（ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ）または潅流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）により当該保存溶液と接触させることで、細胞、特に組織または器官を保護する方法であることを特徴とする請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ある細胞、組織または器官の機能を保護する方法、及び／又は一時的にある機能を停止させる方法において、細胞、組織、器官または患者に対して、それらの機能を維持させたり高めたりするために、有効な速度でまたは効果的な濃度で請求項１ないし２３のいずれかに記載の溶液を生物学的に効果的な量を付与することを含むことを特徴とする請求項２９及び３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
フラッシュ潅流が最大３００ｍｍＨｇの圧力で実施されることを特徴とする請求項２９ないし３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
特定目的のための１つ又は１つ以上のフラッシュ溶液の製造に使用し、普遍的なフラッシュ、保存、またはフラッシュ保存溶液として機能させるために、成分（５）〜（１７）の１つ又は１つ以上から選択される個々の成分と、成分（１）〜（４）を含むことを特徴とする請求項１ないし２３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液を構成要素とする部品のキットを提供すること。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は血液を供給しなくても細胞を生かし続けるフラッシュ保存溶液、それを使用して移植手術、外科手術、実験的に又は試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での細胞への損傷を防止すること、保存、フラッシュ、又はフラッシュ保存方法、治療方法、及び、その液体を構成要素とする部品のキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
腎臓、肝臓、心臓、肺、すい臓、及び腸の臓器移植が現在利用できる。修復時に（Ａ ｔ　ｒｅｔｒｉｅｖａｌ）、移植器官はその脈管構造を通して保存溶液で洗い流される（ｂｅ ｆｌｕｓｈｅｄ）。この溶液は器官の温度の整復（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）を容易にし、細胞の膨張を防ぎ、酸素遊離基を除去し、ｐＨを制御し、虚血性損傷（ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｄａｍａｇｅ）を減らし、安全な時間を拡大するようにデザインされているので、器官を体外に出したままで保存でき、器官の修復を再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）で促進することができる。
【０００３】
重要なフラッシュ液は、１９６７年にベルザー（Ｂｅｌｚｅｒ）、１９６９年にコリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）により導入され、その後ユーロ−コリンズ（Ｅｕｒｏ−Ｃｏｌｌｉｎｓ）（ＥＣ）、マーシャル（Ｍａｒｓｈａｌｌ）（１９７６）、ブレットシュナイダー（Ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒ）（１９９８年のイズマーら（Ｉｓｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ）を参照せよ）により改良された。 全ての溶液中、最も成功したウィスコンシン大学溶液（ＵＷ）はベルザーとその同僚たちにより１９８８年に導入された。しかし、改良されたフラッシュ保存の必要性は未だに残っている。最近の資料によれば、高品質の移植が直ちに機能を改善し、機能的移植寿命（ｇｒａｆｔ ｌｉｆｅｔｉｍｅ）をより長くすることが示されている。
【０００４】
当該文献の分野は、ベルザー（１９９３年）、ベルザーとザウザード（Ｓｏｕｔｈａｒｄ）（１９８８年）、ボンベントレ（Ｂｏｎｖｅｎｔｒｅ）とバインブルク（Ｗｅｉｎｂｕｒｇ）（１９９２年）、チャンガニら（Ｃｈａｎｇａｎｉ ｅｔ ａｌ）（１９９９年）、チャーチル（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ）とクネートマン（Ｋｎｅｔｅｍａｎ）（１９９８年）、コリンズ（１９９７年）、コリンズとビコウム（Ｗｉｃｏｍｂ）（１９９２年）、ダレザンドロ（Ｄ’Ａｌｌｅｓａｎｄｒｏ）ら（１９９４年）、ムールベーカーら（Ｍｕｈｌｂａｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ）（１９９９年）、サウザードとベルザー（１９９５年）によりレビューされた。
【０００５】
虚血性損傷から腎臓細管のモルフォロジー（Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）を保護するための、リン酸ナトリウムとサクロースだけを含む簡易なフラッシュ溶液が１９８２年にアンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）とコフィー（Ｃｏｆｆｅｙ）により、１９８３年にコフィーとアンドリュースにより提示された。我々は機能テスト（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｅｓｔ）を実施し、確立した保存溶液（ＥＣとコリンズＣ２液）と比較すると、極めて小さい潅流（ｍｉｃｒｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）（ピリエ（Ｐｉｒｉｅ）とポッツ（Ｐｏｔｔｓ）、１９８６年）によって判断されるように、近似溶液（ＰＢＳ１４０）が腎臓細管の保存に非常に有効であると分かった。ＰＢＳ１４０は他の溶液よりも優れたモルフォロジーの保存と近位尿細管（ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ）の機能を提供するのが分かった。また、ＰＢＳ１４０は１９８８年と１９８９年にフェルワナ（Ｆｅｒｗａｎａ）、ピリエ、ポッツにより腎臓の全機能に有効であることも分かった。試験的な移植で、ラム（Ｌａｍ）、マーバー（Ｍａｖｏｒ）、ポッツ、ギルズ（Ｇｉｌｅｓ）はＰＢＳ１４０が高浸透圧性クエン酸塩とＵＷ溶液（ロッジ（Ｌｏｄｇｅ）、ペリィ（Ｐｅｒｒｙ）、スキンナー（Ｓｋｉｎｎｅｒ）、ポッツ、ギルズ、１９９１年）と比較して好しいことに（ｆａｖｏｕｒａｂｌｙ）効果の高い保存を可能にすることが分かった（１９８９年）。ＰＢＳ１４０はリーズで臨床試験がなされ、人間の腎臓移植に非常によく作用することが分かった（アーマッド（Ａｈｍａｄ）、カシ（Ｋａｓｈｉ）、ヘルミー（Ｈｅｌｍｙ）、ハーディングハム（Ｈａｄｉｎｇｈａｍ）、ポッツ、ロッジ、１９９７年）。
【０００６】
【非特許文献１】
Ａｎｄｒｅｗｓ ＰＭ ａｎｄ Ｃｏｆｆｅｙ ＡＫ （１９８２）， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ４６， １００−１２０．
【０００７】
【非特許文献２】
Ｂｅｌｚｅｒ ＦＯ， Ａｓｈｂｙ ＢＳ ａｎｄ Ｄｕｎｐｈｙ ＪＥ （１９６７）， Ｌａｎｃｅｔ ２， ５３６−５３９．
【０００８】
【非特許文献３】
Ｂｅｌｚｅｒ ＦＯ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈａｒｄ ＪＨ （１９８８）， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４５， ６７３−６７６．
【０００９】
【非特許文献４】
Ｃｏｆｆｅｙ ＡＫ ａｎｄ Ａｎｄｒｅｗｓ ＰＭ （１９８３）， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ３５， １３６−１４３．
【００１０】
【非特許文献５】
Ｃｏｌｌｉｎｓ ＧＭ， Ｂｒａｖｏ−Ｓｈｕｇａｒｍａｎ Ｍ ａｎｄ　Ｔｅｒａｓａｋｉ ＰＩ （１９６９）， Ｌａｎｃｅｔ ２， １２１９−１２２２．
【００１１】
【非特許文献６】
Ｆｅｒｗａｎａ Ｏ， Ｐｉｒｉｅ ＳＣ ａｎｄ Ｐｏｔｔｓ ＤＪ （１９８８）， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ７４， ２６１−２６８．
【００１２】
【非特許文献７】
Ｆｅｒｗａｎａ Ｏ， Ｐｉｒｉｅ ＳＣ ａｎｄ Ｐｏｔｔｓ ＤＪ （１９８９）， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ７７， ７７−８４．
【００１３】
【非特許文献８】
Ｉｓｅｍｅｒ ＦＥ， Ｌｕｄｗｉｇ Ａ， Ｓｃｈｕｃｋ Ｏ， Ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ＨＪ ａｎｄ Ｐｅｉｐｅｒ ＨＪ （１９８８）， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ２０， ８８５−８８６．
【００１４】
【非特許文献９】
Ｌａｍ ＦＴ， Ｍａｖｏｒ Ａ， Ｐｏｔｔｓ ＤＪ ａｎｄ Ｇｉｌｅｓ Ｇ （１９８９）， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４７， ７６７−７７１．
【００１５】
【非特許文献１０】
Ｒｏｓｓ Ｈ， Ｍａｒｓｈａｌｌ ＶＣ ａｎｄ Ｅｓｃｏｔｔ ＭＯ （１９７６）， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２１， ４９８−５０１．
【００１６】
【非特許文献１１】
Ｐｉｒｉｅ ＳＣ ａｎｄ Ｐｏｔｔｓ ＤＪ （１９８６）， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ７０， ４４３−４５２．
【００１７】
【発明が解決しようとする課題】
向上した免疫抑制作用の出現で高性能の多器官フラッシュ溶液の必要性が生じた。
【００１８】
非常に多くの研究者たちが改良された溶液の開発、及び特に多数の添加物を含む比較的簡易な溶液の開発に従事した。いろいろな処方箋（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）で得られた結果を合理化することに努力が費やされた。それにもかかわらず、明らかに交換可能な付加的なタイプが予想されたものとは異なる効果を実際に生じさせる場合があるが、その機能は全体として処方箋に依存し、個々の成分だけに依存するものではないので、所定のタイプの添加剤と、所定の添加剤と共に存在する他の構成要素の両面から見ると非常に特異的な処方箋になることは明らかである。さらに、異なる器官には非常に広範な異なる条件があるので、単一の万能なフラッシュ溶液を得ることを目的とすることは誤っていることが明らかである。しかしながら、個々の研究者は特定の器官に適するフラッシュ溶液の基礎となる必須成分に集中することを試みた。
【００１９】
当該課題に関する多数の評論を参照する；特に、「腹腔内器官の保存評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｒａ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｏｒｇａｎｓ）、エフ　オー　ベルザー（Ｆ Ｏ Ｂｅｌｚｅｒ）、移植方法（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ）、第２５巻、第４号（８月）１９９３年、２５２７〜２５３０ページ、「器官保護（Ｏｒｇａｎ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）」ダレッサンドロら（Ｄ’Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ ｅｔ ａｌ）、臓器移植の展望（Ｈｏｒｉｚｏｎｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、第７４巻、第５号、１９９４年、１０８３〜１０９３ページ、「分離した潅流豚の模型を使用した肝臓を調達するためのフラッシング溶液の比較（Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｆｌｕｓｈｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｌｉｖｅｒ Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｐｅｒｆｕｓｅｄ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｍｏｄｅｌ）」、ベルら（Ｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ）、アウスト．エヌ．ゼット．ジェイ．スルク．（Ａｕｓｔ． Ｎ．Ｚ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．）（１９９４年）６４、５６５〜５６８、「新しい器官保存溶液（Ｎｅｗ Ｏｒｇａｎ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）」、コリンズら（Ｃｏｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ）、腎臓インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、第４２巻、増補３８（１９９２）ＰＳ１９７〜Ｓ２０２、「改良された器官蓄積用保存液（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎ Ｓｔｏｒａｇｅ）」、チャンガニら（Ｃｈａｎｇａｎｉ ｅｔ ａｌ）、移植、第６８巻、３４５〜３５５、第３号、１９９９年、「器官保存溶液の第１条件に関する研究（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｇａｎ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、チャーチルら（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ）、移植、第６５巻、５５１〜５５９、第４号、１９９８年。有益な部分もあるが、個々の研究や評論はとても多くの変数（ｖａｒｉａｂｌｅｓ）を提示するので、どんな重要な演繹もそういうものとして描くことができない。 保存の間に喪失したり破壊される不可欠な細胞成分の周りの処方箋を設計する設計概念、破壊を防いだり、ある機能を維持したり他の機能を阻む自然の細胞の機能・成分と相互に作用する成分の周りの処方箋などを設計する比較概念などが提案される。この結果によれば、有効なフラッシュ溶液は既存の作業から推論したり分析したりするよりも、むしろ勤勉な実験から引き出される可能性が高いといえる。
【００２０】
従って、移植中に、暖又は寒虚血（ｗａｒｍ ｏｒ ｃｏｌｄ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）、心臓麻痺、又は開心外科手術（ｏｐｅｎ ｈｅａｒｔ ｓｕｒｇｅｒｙ）、手足全部、全身のどんな状況をも含む外科手術中に、又は実験中において、改良された万能性、有効性、および再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）をもたらす、設計器官や組成を含む、特に器官や生きている組成（ｌｉｖｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ）の細胞を延長保存することを可能にする、商業的に実施可能で有効なフラッシュ溶液の必要性が残っている。
【００２１】
【課題を解決するための手段】
我々は肝臓移植に用いる改良溶液を開発するために実験を行った。サクロースリン酸緩衝溶液によって良好に基本的な保存ができることが明らかになった。多数の添加物を混入することにより、比較的多量の胆汁流量、胆汁酸抽出、減少した肝臓増体量と肝臓酵素の放出から判断される通り、ＵＷ溶液よりも優れた保存ができる溶液が生み出された。この手法により腎臓と肝臓に使用する新規なフラッシュ溶液が提供された。
【００２２】
心臓には異なる必要条件がある。腎臓と肝臓に使用するために開発された当該新規な溶液が心臓に適するのか分からなかった。しかしながら、若干変更を加えた塩基性のサクロースリン酸塩（ｂａｓｉｃ ｓｕｃｒｏｓｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）緩衝溶液が心臓組織の保存に有効であることが分かった。このような必要条件の相違が概ね心臓の筋肉組織と関係があるのは確実である。
【００２３】
従って、本発明の最も大きな観点では、
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの単糖類、二糖類、三糖類又は多糖類などの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は反カルシウム活動性を有する成分とを含む、
血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液を提供することである。
【００２４】
フラッシュ溶液はこれらの要素だけで構成してもよく、その場合普遍的な細胞の種類と機能の保存、特に簡単な細胞システムの保存に適するが、その代わりに所定の細胞の種類や機能の保存、特に器官や生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ）、より望ましいのは大小の動物、最も望ましいのはヒトの器官や生きた組織のような複雑な細胞システムの保存に特に適合させた１又は１以上の代替物（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔｓ）と共に提供されてもよい。
【００２５】
驚くべきことに、本発明を用いて高効率で普遍的な塩基性溶液を異なる応用毎に異なる多くの成分を用いて効果を等しくするために追加してもよいことが分かった。これは、そのような処方箋を商業的に実施可能とする利便性と費用性に密接に関連する、特に必要な処方箋を作製する処方箋キットを準備することに加えて、保存中の損害を少なくし保存期間を延長しながら、既存の溶液を改良することに関して多くの利点がある。
【００２６】
従来技術は普遍的な保存溶液の基礎的な知見を教えることを試みたが、教示は広く分岐し、サッカリドとｐＨ緩衝液の組合せの識別でさえ普遍的に認められない。実験に基づくが、基本的な保存メカニズムを合理化するのを試みることなく、本発明により先に定義したフラッシュ保存溶液が普遍的に応用可能であることが分かった。
【００２７】
本発明のフラッシュ保存溶液の全成分は応用可能な場所の清浄に関する国内又は国際薬局方（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａｌ）標準規格を満たす。注入用の水は殺菌前に通常は浄化されて、イオン化されない。
【００２８】
サッカリドはサクロース、ラフィノース、マンニトールから選択されるが、サクロースであることが望ましい。
【００２９】
ｐＨ緩衝溶液はリン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、および同様のものから選択されるが、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４およびこれらに類似のものが望ましい。
【００３０】
カルシウム転送ブロッカー（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｂｌｏｃｋｅｒ）又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活性剤は、ニカルジピン、ジルチアゼム、ベラパミル、ニソルジピン、クロルプロマジン、又はトリフルオロペラジンなどのいずれかの既知のカルシウム転送又はチャンネルブロッカーから選択されるが、ニカルジピンそして／又はジルチアゼムが望ましい。
【００３１】
この理論に限定されないで、一般的に認められた生理学的な活動に基づく機能（ｆｕｎｃｔｉｏｎ）による成分について以下言及する。しかしながら、疑問を回避するために、提示される成分は追加的又は異なる機能を帰属するものに与えうるが、これはその限定と考えられるべきではない。さらに、提示されたものと機能的に同等な物を当該発明の範囲に入れても良い。
【００３２】
フラッシュ保存溶液は、以下のものから選択される１つまたはそれ以上の追加成分を含むのが望ましい；
（５）　　　 主に細胞に浸透しない少なくとも１つの陰イオン、望ましくは陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）、
（６）　　　 トロンボキサン抑制物（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、及び
（７）　　　 コロイド浸透性を有する少なくとも１つの成分。
【００３３】
陰イオンを隔離するインパーミータはラクトビオン酸塩（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）又はラクトビオン酸を含むのが望ましい。
【００３４】
トロンボキサン抑制物は血液の凝固を防ぎ、アスピリンを含むのが望ましい。
【００３５】
コロイド浸透物質（ｏｓｍｏｔｉｃ）はポリエチレングリコール（ｐｅｇ）、サクシニル化されたゼラチン（ゲロフュージン（Ｇｅｌｏｆｕｓｉｎｅ）にあるように）、フィコール（多糖）またはデンプン製品を含むのが望ましい。
【００３６】
代わりに又は追加的に、本発明のフラッシュ保存溶液は、以下のものから選択される１つまたはそれ以上の成分を含んでも良い；
（８）　　　 無機的または有機的な溶質、
（９）　　　 カルシウムキレート化特性を有する成分または成分群、および
（１０）鉄のキレート化特性を有する成分または成分群。
【００３７】
無機的または有機的な溶質は無機溶質を含み、例えばＮａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、ＯＨ−、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、及びこれらに類似のものから選択される陽イオン及び／又は陰イオンを含む電解質であるのが望ましい。
【００３８】
カルシウムキレート（ｃｈｅｌａｔｅｒ）はクエン酸又はＥＧＴＡを含み、鉄キレート（ｃｈｅｌａｔｅｒ）はＥＤＴＡを含むのが望ましい。
【００３９】
代わりに又は追加的に、本発明のフラッシュ保存溶液は、以下のものから選択される１つまたはそれ以上の成分を含んでも良い；
（１１）１つ又は１つ以上のアミノ酸、
（１２）酸素フリーラジカルに対して有効な少なくとも１つの成分又は酸素フリーラジカル生成物（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）、及び、
（１３）エネルギー供給システムの少なくとも１つの成分、又は、エネルギー供給システム若しくはケトン体に影響を及ぼす少なくとも１つの成分。
【００４０】
アミノ酸はグルタミン、グリシン又はノルマルアセチルシステインであるのが望ましい。
【００４１】
酸素フリーラジカル抑制物はアロプリノール及び還元されたグルタチオンから選択されるのが望ましく、その組合せはより望ましい。
【００４２】
エネルギー供給システムの成分にはアデノシンを含むことが望ましい。ケトン体はベータヒドロキシ酪酸を含むのが望ましい。
【００４３】
代わりに又は追加的に、本発明のフラッシュ保存溶液は、以下のものから選択される特別な機能のための追加的な成分を含んでも良い；
（１４）筋肉中で架橋機能（ｃｒｏｓｓｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に逆に作用する、少なくとも１つの成分、望ましくはブタンジオンモノオキシム、
（１５）細胞膜の中外からの蛋白質の挿入と除去に影響を及ぼす少なくとも１つの成分、望ましくはタキソール、
（１６）少なくとも、細胞間信号形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）システム、又はこのシステムを修正する少なくとも１つの成分、望ましくはプロテインキナーゼ障害剤、又はカルモジュリン障害剤、
（１７）膜を安定させる作用を持つ少なくとも１つの成分、望ましくはラノラジーン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）、及び類似のもの。
本発明のフラッシュ保存溶液は、薬方的に（ｐｈａｒｍｅｃｏｐｏｅｉａｌｌｙ）許容可能で身体特性に必要な範囲に従うように定式化されるのが望ましい。当該溶液のｐＨ範囲は６．５〜７．８が望ましく、６．５〜７．０がより望ましく、６．８〜７．０が最も望ましい。
【００４４】
当該溶液の浸透圧重量モル濃度は３００〜４５０ｍｏｓｍｏｌ／Ｌの範囲が望ましく、３５０〜４００ｍｏｓｍｏｌ／Ｌがより望ましい。
【００４５】
本発明の第１の側面において、前に定義したフラッシュ保存溶液の製造手順が得られる。当該溶液は薬方的に許容可能な条件の下で簡単な混合により公知の方法で適当に製造される。成分は必要なモル濃度に定められ、取り入れられるのが望ましい。
【００４６】
変化分が当該溶液の効果に特に有効かどうかということと、流体の性能に影響しない変化分の量がこの発明の範囲の中で考慮されることが奨励される。通常の実験による検証を必要とする成分種の選択は当該発明の範囲の中で考慮される。成分（２）の量は５０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、約１００ｍｍｏｌ／Ｌ、各成分（３）、（５）、（８）の総量は１５〜７５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、約１５〜２０、又は４０〜７０ｍｍｏｌ／Ｌ、成分（１１）の量は１５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、約２０ｍｍｏｌ／Ｌ、成分（１２）の総量は最大５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、約３〜５ｍｍｏｌ／Ｌ、成分８（ケトン体成分）の量は最大４０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、約２５ｍｍｏｌ／Ｌ、成分（７）の量は０．５〜３．０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、例えば、０．７５〜１．３３ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、１．０ｍｍｏｌ／Ｌや２万ｍｗなど、成分（６）の量は０．３〜１．０ｍｍｏｌ／Ｌ、例えば、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、成分（４）の量は０．０００５〜０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、例えば、約０．０００５〜０．５ｍｍｏｌ／Ｌで存在するのが望ましい。
【００４７】
他の成分は例えば最大１ｍｍｏｌ／Ｌの範囲の少量で通常は存在している。
【００４８】
２つ以上のタイプとして存在しているある成分の場合では、相対量は臨界的であるかもしれないし、臨界的ではないかもしれない。成分（１２）は約３ｍｍｏｌ／Ｌの還元グルタチオンと０．３５〜０．４０、より好ましくは０．４０ｍｍｏｌ／Ｌのアロプリノールに対応するのが望ましい。
【００４９】
成分（８）は以下の電解質に対応するのが望ましい；
ナトリウムイオン（Ｎａ＋） 　　　５０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌ
カリウムイオン（Ｋ＋）　　 　　　０〜２５ｍｍｏｌ／Ｌ
塩化物イオン（Ｃｌ−）　　　　　　０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌ
水酸化物イオン（ＯＨ−）　　　　　０〜７５ｍｍｏｌ／Ｌ
カルシウムイオン（Ｃａ２＋）　　　　０〜２ｍｍｏｌ／Ｌ
マグネシウムイオン（Ｍｇ２＋）　　 ０〜１０ｍｍｏｌ／Ｌ
【００５０】
本発明による溶液は、紫外線光のない無酸素条件下で製造保存されるのが望ましい。成分（１）から（４）を含む既に定義した溶液は長期間保存でき、使用直前に他の成分を加えられるという特別の利点がある。
【００５１】
前記に定義した本発明のフラッシュ保存溶液は基礎成分（１）〜（４）と特定機能のための追加的な成分を含むのが望ましい。器官の保存に使用する溶液は簡単な細胞組織を保存するものよりも非常に複雑であるが、それにもかかわらず、我々はその溶液が比較的簡単であるかもしれないことが分かった。
【００５２】
腎臓、肝臓、すい臓、腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、腸（ｂｏｗｅｌ）及び同等物のような腹腔内器官のためのフラッシュ保存溶液は前記に定義した成分（１）〜（４）と前記に定義した成分（５）、（６）、（７）から選択される少なくとも１つの成分を含むのが望ましく、さらに成分（８）、（１１）、（１２）、（１３）を追加するとより望ましい。
【００５３】
心臓などの筋骨逞しい器官を保存するのに使用される器官は前記に定義された成分（１）〜（４）と成分（８）から選択された成分を含むのが望ましく、さらに前記に定義された少なくとも１つの成分（１４）を追加するとより望ましい。
【００５４】
肝臓、腎臓、すい臓を保存するためのフラッシュ保存溶液は、以下に与えられた成分類の組合せを含むのが望ましく、示された特定種の組合せを含むのがより望ましく、示された量を実質的に含むのが最も望ましい；
成分　　　　　　　種　類　　　　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
５）　　　　ラクトバイオニクス酸　　　　　　　　　５０
８）　　　　ＫＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　１５
８）　　　　ＮａＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　３５
１２）　　　グルタチオン　　　　　　　　　　　　　３
３）　　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　　２６．４５
３）　　　　ＮａＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　１６．６６
１１）　　　グルタミン　　　　　　　　　　　　　　２０
２）　　　　サクロース　　　　　　　　　　　　　　１００
６）　　　　アスピリン　　　　　　　　　　　　　　０．５
１２）　　　アロプリノール　　　　　　　　　　　　０．４
５）　　　　ニカルジピン　　　　　　　　　　　　　０．００５
７）　　　　ペグ（Ｐｅｇ）（２万ＭＷ）　　　　　　１
【００５５】
心臓を保存するためのフラッシュ保存溶液は、以下に与えられた成分類の組合せを含むのが望ましく、示された特定種の組合せを含むのがより望ましく、示された量を実質的に含むのが最も望ましい；
成分　　　　種　類　　　　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
３）　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　４２．３
３）　　　ＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　１０．６７
３）　　　ＫＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　１６
２）　　　サクロース　　　　　　　　　　　　１００
８）　　　　ＭｇＣｌ２　　　　　　　　　　　　　５
８）　　　　ＣａＣｌ２　　　　　　　　　　　　　０．６
８）　　　　ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　１２
４）　　　　ジルチアゼム　　　　　　　　　　　０．５
【００５６】
驚いたことに、本発明によるフラッシュ保存溶液の構成要素の有効性が他の成分の存在によって影響を受けることも分かった。この理論に限定されなければ、他の細胞機能を確実に維持する成分が存在しないとき、ある成分の効果が否定されるか、または単に目標とする部位に伝わらないようにも考えられる。例えば、陰イオンを隔離するインパーミータ（５）の存在とコロイド浸透圧剤（７）の存在は他の組合せよりも効果的であり、酸素フリーラジカルクエンチ（１２）としてのアロプリノールと還元型グルタチオンの両方の存在は個々の化合物よりも効果的であると考えられる。我々は、このことが特定の細胞、組織または器官種を保存するために特定の溶液を選択する際に特に役立ち、それによりある組合せはある種類に役立ち、別の種類に適する組合せによって置き換わるだけかもしれないことが分かった。先述したように、置換は通常作用している細胞中の置換基の存在に関係があるか、または何らかの方法で作用している細胞と相互に影響し合うのかもしれない。本発明の好ましい実施例において、コロイド浸透圧剤（７）と共に陰イオンを隔離するインパーミータ（５）は腹腔内器官の保存に適し、心臓などの筋肉器官の保存に使用する流体を仕立てる際に筋肉架橋作用剤（ａ ｍｕｓｃｌｅ ｃｒｏｓｓ ｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）（１４）と置換することが分かった。
【００５７】
従って、本発明により、ある置換基があらゆる細胞種に本質的な細胞機能の保存に不可欠であるということと、これらは前記に定義した成分（１）〜（４）と同一であることが分かった。この定式化は簡単な組織や細胞組織を保存する際に非常に有効、または十分適しているかもしれないが、珍しい又はより複雑な細胞機能を必要とする又は提供する器官や細胞組織を保存したいとき、それが筋肉的で電気的な特定の膜の活動、エネルギー供給、又は同様のものであるか否かに関係なく、必須の又は提供された機能を保存するように指示する特別の置換基を取り入れることが必要である。
【００５８】
本発明の別の観点では、成分（７）ともしあれば不安定な成分を除いて、フラッシュ保存溶液の構成成分を水に添加し、次いで、もしあれば成分（７）を添加してほぼ目的の容量に近い溶液を作製し、最後にｐＨを整える容量まで増やし除菌と冷却することを含むフラッシュ保存溶液の製造方法を提供する。使用直前にどんな不安定な成分を追加することが必要になっても、当該溶液は蓄積できる。
【００５９】
本発明の別の観点では、特に器官（ｏｒｇａｎｓ）、生きた組織、および細胞への損害を防ぐために、血液が供給されない場合に細胞を保存するためのフラッシュ溶液、保存溶液、又はフラッシュ保存溶液として前記に定義されたフラッシュ保存溶液を使用できる。当該溶液は大小の動物や哺乳動物、特にヒトの器官、生きた組織、及び細胞への使用に適している。
【００６０】
鼓動中の心臓又は鼓動していない心臓の提供者から器官（ｏｒｇａｎｓ）を含む臓器移植中に、暖又は寒虚血（ｗａｒｍ ｏｒ ｃｏｌｄ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）、心臓麻痺又は開心手術（ｏｐｅｎ ｈｅａｒｔ ｓｕｒｇｅｒｙ）、手足全部又は全身を保存するいかなる状況をも含む外科手術中に、生きた組織の実験中に、設計された細胞、組織、器官及びこれらの同等物を培養して保存する際に、当該溶液を使用してもよい。当該溶液は血管系を介して細胞、生きている組織、器官、手足又は全身に接触し、さらに、任意に、追加的にフラッシュされた細胞、組織、および器官を保存するための保存溶液として使用されるのが望ましい。本発明の実施例において、前記に定義した第１番目の溶液は細胞、組織、器官、手足又は身体をフラッシュするのに使用され、第２番目の溶液はその保存に使用されるか、または部分的な保存に使用されるのが望ましい。例えば、当該フラッシュ溶液は前記に定義した成分（１）〜（４）を含み、さらに当該保存溶液は機能を継続させるために、又は問題となっている細胞、組織または器官に対して特別なある一定の細胞または器官の機能にダメージを与えないようにするために追加的な成分を含んでも良い。
【００６１】
本発明の別の観点では、生きた細胞、組織、器官を前記定義した溶液に接触させることで、細胞、特に生きた細胞、組織、器官をフラッシュ、保存またはフラッシュ保存する方法を提供することである。当該方法は簡易な低体温保存（ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉｃ ｓｔｏｒａｇｅ）に適するので、当該細胞、組織または器官は溶液で洗い流され、定位置から取り除かれて、望ましくは通常ゼロから４℃の間の温度範囲に冷やされて、保管される。我々は、細胞、組織または器官を現在の実務期間を超えた長期間保管できるのを発見した。例えば、心臓は６〜１２時間の常態期間（ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ）、腎臓と肝臓は４８時間以上の常態期間保管できた。さらに、又はその代わりに、当該方法は細胞、特に組織または器官の保存に適するので、当該細胞、組織または器官をフラッシュし、低体温状態にされ、侵入（ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ）または潅流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）により当該保存溶液と接触する。
【００６２】
本発明の方法が、細胞、組織、器官または患者に対して、機能を維持したり高めたりするために、有効な速度でまたは効果的な濃度で当該発明の溶液を生物学的に効果的な量で付与することを含むのは望ましい。当該方法は、望ましくは、ある細胞、組織または器官の機能、例えば細胞代謝を保護する方法、及び／又は一時的にある機能を停止させる方法、例えば筋肉の活動、不可欠の細胞成分などの破損または排出、及び／または例えば胆汁や尿などとして排出する方法である。
【００６３】
虚血は器官を通る血液流動が停止することから生じる状態である。当該結果は酸素と栄養分が不足し、二酸化炭素と他の廃棄物が堆積したためである。移植器官は洗い流され、冷やされるので冷却状態にあるよりも体温で、より大きなダメージ受ける。臓器提供者は頻繁に外傷（ｔｒａｕｍａ）を受けたので、提供者の臓器は外傷（ｔｒａｕｍａ）の結果として暖虚血（ｗａｒｍ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）期間におかれていたかもしれない。実験的にフラッシュ前に暖虚血期間を追加すると当該状態を写し取れる。我々の溶液がこのような暖虚血から保護できるのは利点である。
【００６４】
フラッシュ潅流は最大３００ｍｍＨｇの圧力で実施されるのが望ましく、より望ましくは２００ｍｍＨｇまでの気圧範囲、より望ましくは最大１６０ｍｍＨｇまでの範囲、より望ましくは最大１００ｍｍＨｇまで、最も望ましくは最大５０ｍｍＨｇまでである。
【００６５】
本発明の別の観点では、特定目的のための１つ又は１つ以上のフラッシュ溶液の製造に使用し、普遍的なフラッシュ、保存、またはフラッシュ保存溶液として機能させるために、前記に定義した成分（５）〜（１７）の１つ又は１つ以上から選択される個々の成分と、前記に定義した成分（１）〜（４）を含むフラッシュ保存溶液を構成要素とする部品のキットを提供することである。
【００６６】
【発明の実施の形態】
ここで、本発明を限定しない方法で図を参照して説明する。
実施例１
本発明及び比較に使用されるフラッシュ保存溶液
この研究に関わる保存溶液は表１、２、３に示されており、量はｍｍｏｌ／Ｌで示される。ゾル（ＳＯＬＳ）はフラスコ半分に満たされた水から作られて、そこにラクトビオン酸塩（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）、水酸化カリウム、リン酸ナトリウム、グルタミン、サクロース、アスピリン、アロプリノール、及びニカルジピンのいずれか、またはすべてを順々に加えて溶解させた。
【００６７】
次にコロイド（ＰＥＧ）が加えられ、溶液がほぼ既定の体積に近づいた。水酸化ナトリウムがｐＨを調節するために加えられた。そして、溶液は既定の体積になった。全ての溶液が濾過により殺菌されて、ガラス瓶に４℃で保管されて、製造から３日間以内に使用された。還元グルタチオンは製造中または使用直前に加えられた。
【００６８】
比較例
ＵＷは標準のオリジナルの市販溶液である（ｖｉａＳｐａｎ／ＢＥＬＺＥＲ　ＵＷ、ＤＵＰＯＮＴ　ＰＨＡＲＭＡ）。ＰＢＳ１４０（図示せず）はリン酸とサクロース（１４０ｍｍｏｌ／Ｌ）を含む。
【００６９】
化学物質
ラクトバイオニック酸（シグマ、Ｌ−２３９８）、アロプリノール（シグマ、Ａ−８００３）、グルタミン（シグマ、Ｇ−７０２９）、還元グルタチオン（シグマ、Ｇ−４２５１）、アスピリン（シグマ、Ａ−５３７６）、ジルチアゼム（シグマ、Ｄ−２５２１）、タウロコール酸（シグマ、Ｔ−４００９）、ポリエチレングリコール（シグマ、Ｐ−２２６３）、ニカルジピン（シグマ、Ｎ−７５１０）、アデノシン（シグマ、Ａ−９２５１）、グリシン（シグマ、Ｇ０７１２６）、Ｎ−アセチル−システイン（ シグマ、Ａ−８１９９）、アルブミン、ボビン（Ｂｏｖｉｎｅ）（シグマ、Ａ−７９０６）、アラニン（シグマ、Ａ−５８２４）、グルコース（ＢＤＨ、１０１１７Ｙ）、ゲロフシン（Ｇｅｌｏｆｕｓｉｎｅ） （ビー．ブラウン医療株式会社）（Ｂ． Ｂｒａｕｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｔｄ．）ロット ：８２７４Ｄ１４　Ｆ）、ＫＯＨ（ＢＤＨ、１０２１０４Ｖ）、ＮａＯＨ（ＢＤＨ、１０２５２４Ｘ）、Ｎａ２ＨＰＯ４（ＢＤＨ、１０２４９４Ｃ）、ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ （ＢＤＨ、３１０３２４Ｑ）、サクロース（ＢＤＨ、１０２７４５Ｃ）、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（ＢＤＨ、１０１４９４Ｖ）。
【００７０】
【表１】
2004513955.tif 000002
【００７１】
【表２】
2004513955.tif 000003
【００７２】
【表３】
2004513955.tif 000004
【００７３】
ゾル４、ゾル５、ゾル６、ゾル７、ゾル８、ゾル１２、ゾル１３、ゾル１４、ゾル１５、ゾル１６、ゾル１７、ゾル１８、ゾル１９、ゾル２０はゾル４に全て基づくが、異なる添加物も含んでいた。個々の添加物の効果を研究したので、より重要なことに以下言及する。特定の結果をゾル２０に関して以下に示す。
【００７４】
グルタチオンがグリシンとノルマルアセチルシステインに置換されたとき、再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）中ゾル４グループより多く胆汁を生産する証拠として、冷えたネズミの肝臓を２４時間保存する際にある利点が見られた。ニカルジピンがゾル４の中のジルチアゼムに代えて加えられたとき、再潅流中にゾル４グループのためのそれより胆汁の生産が多く酵素の放出が少ないことが示すように、冷えたネズミの肝臓を２４時間保存する際にゾル４より効果的であるという新しい解決を見出した。再潅流の間、ＡＳＴとＬＤＨの放出が数字的により少ないことから証明されるように、異なるペグの比較では、２０Ｋペグは８Ｋペグよりもわずかに効果的であるように見える。ゾル１７における２０Ｋペグの濃度は、より多い胆汁の生産、より少ない酵素の放出、より高い胆汁酸の抽出に示されるように、冷えたネズミの肝臓を２４時間保存する際にゾル１７、ゾル４、及びＵＷ溶液よりも効果的であることが判明したゾル１８を得るために０．１３３ｍｍｏｌ／Ｌから１．３３ｍｍｏｌ／Ｌまで上げられた。より多い胆汁の生産、より少ない酵素の放出、より高い胆汁酸の抽出により証明されるように、冷えたネズミの肝臓を２４時間及び４８時間保存する際に最終的な溶液であるゾル２０はゾル４またはＵＷ溶液よりも効果的であった。ゾル２０は虚血性損傷からネズミの肝臓を保護するのに有利である。
【００７５】
肝臓の保存：材料と方法
１．分離したかん流ネズミの肝臓（ＩＳＯＬＡＴＥＤ ＰＥＲＦＵＳＥＤ ＲＡＴ ＬＩＶＥＲＳ）（ＩＰＲＬ）
ゴアズ（Ｇｏｒｅｓ）と同僚によって説明される、このモデルの方法（ゴアズ他、１９８６）は当該研究に採用され、修正された。２３０〜２８０グラムの重さの、生まれつき雄のウィスターネズミをリーズ大学のバイオメディカルサービスから入手した。
【００７６】
１．１　供与体の肝臓採取
予め食事を与えて、ネズミにペントバルビタール（６０ｍｇ／ｋｇ）を腹こう内投与して麻痺させた。腹は長い正中線の切り目から開けられた。肝臓には、腫瘍も炎症に関するいかなる証拠も見受けられなかった。共通の胆管（ｂｉｌｅ ｄｕｃｔ）はその前方壁に配置・切断され、絹のひもで適所に固定された直径１ｍｍのポリエチレンカテーテルでカニューレ挿入（ｃａｎｎｕｌａｔｅｄ）された後、末端で分割された。５００ユニットのヘパリンを含む０．５ｍｌの通常の塩水溶液が陰茎静脈を通して注入された。腹部の大動脈は直径２ｍｍのポリエチレンカテーテルで隔離された後、カニューレ挿入（ｃａｎｎｕｌａｔｅｄ）され、そこを通って肝臓が氷のように冷たい実験的な保存溶液の１つから３０ｍｌを用いて元の位置に洗い流された。その間に胸腔が開かれ、胸部大動脈は固定され、粗悪なバナ大静脈（Ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｖａｎａ ｃａｖａ）（ＩＶＣ）は潅流液を排出させるために切り開けられた。氷のように冷たい通常の塩水は、肝臓を冷やすためにその周りに置かれた。別の２ｍｍの直径ポリエチレンカテーテルは門静脈に挿入されて、絹のひもによって固定されて、同一の保存溶液１５ｍｌはこのカテーテルを通して肝臓から潅流された。それから、提供者の肝臓を取り除き、同一の保存溶液で、２４〜４８時間、４℃で保存された。フラッシュ前の暖虚血性グループではネズミの心臓が停止した後で、肝臓はＰＢ１４０またはＵＷ溶液と共に元の位置に洗い流された。予め再潅流する前の暖虚血性グループでは、再潅流直前に３７℃の室内において３０分の暖虚血が課された。
【００７７】
１．２　保全された肝臓の再潅流
本研究における分離した肝臓を再潅流するための塩基性水溶液は生理的食塩水であった（表４）。
【００７８】
【表４】
2004513955.tif 000005
【００７９】
洗浄されたウシの赤血球が酸素容量を増加させるために加えられた。ウシ血清アルブミン２％（フラクション５、シグマ）が膠質浸透圧を維持するために加えられた。潅流液の構成を表５で概説する。
【００８０】
【表５】
2004513955.tif 000006
【００８１】
新鮮なウシの血液は屠殺場から得られた。血液を１０分間に３０００ｒｐｍで遠心分離し、赤血球を切り離した。それから、通常の２倍の食塩水で洗い、最終的に潅流液へデカンテーションで注いだ。潅流液のヘマトクリット（ｈａｅｍａｔｏｃｒｉｔ）は約３０〜３５％である。ペーハーを測定し、８．４％の重炭酸ナトリウムを添加して７．４に滴定した。これは通常４．０ｍｌ必要である。
【００８２】
１．３　装置
潅流装置は一方を門静脈カニューレーションに、他方をガラスリザーバに通して、２個のファンヒーター、ロールポンプ（Ｗａｔｓｏｎ−Ｍａｒｌｏｗ　Ｃｏ．）、膜酸素加装置（ＣＯＢＥ＊）、２個のシリンジ・ポンプ、マグネティックスターラ、及び肝臓（パースペック容器の中の）を接続する潅流サーキットにより温度を３７℃に維持するパースペックキャビネット（ｐｅｒｓｐｅｘ ｃａｂｉｎｅｔ）から構成された。全成分がポンプを除いてキャビネット内にあった。ロールポンプは循環を起こさせ、２個のシリンジ・ポンプはタウロコール酸と重炭酸ナトリウムを別々に注入するためのものであった（図１ａ）。
【００８３】
１．４　再潅流
酸素ゲネータ（ｏｘｙｇｅｎａｔｏｒ）を含む潅流サーキットは、予め１００〜２００ｍｌ／分の流速で、酸素９５％に対して二酸化炭素５％が混合した酸素／二酸化炭素混合物で処理された潅流液で満たされた。冷却保存の後、肝臓は肝臓容器に移され、パースペックキャビネットに置かれ、門形カニューレ（ｐｏｒｔａｌ ｃａｎｎｕｌａ）は流入管に接続された。肝臓への塞栓症を避けるため僅かな空気泡をもカニューレに確実入れないように極端な注意が払われた。タウロコール酸用の循環ポンプとシリンジ・ポンプの両方が同時に開始された。タウロコール酸塩（ナトリウム塩、シグマ）は６０〜８０μｍｏｌ／時のレートで潅流溶液にポンプで送られた。血中ガス分析種（ＣＩＢＡ−ＣＯＲＮＩＮＧ）測定される約７．４±０．１の潅流液のペーハーを維持する必要に応じて８．４％の重炭酸ナトリウム溶液がリザーバの中に加えられた。再潅流流速は１５ｍｌ／分であった。胆汁量は１５分間連続して記録された。ペーハー、ｐＯ２、及びｐＣＯ２を測定するためそれぞれ３０分おきに流入（門静脈）及び流出（肝静脈）からサンプルを得た。そして、肝静脈からのサンプルは乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の測定に使用された。再潅流終了時に、胆汁酸採集率を計算するために潅流液から得たサンプルのタウロコール酸濃度が測定された。胆汁は２時間の再潅流終了時に、胆汁酸の濃度を測定するため、収集され、記録され、分析された。胆汁量はμｌ．（ｇ肝臓）−１．（１５分）−１またはμｌ．（ｇ肝臓）−１．（２時間）−１として表される。肝臓の重量は肝臓の正味重量と肝臓重量変化を得るために保存の前後に記録された。また、その肝臓の重量は重量の変化を計算するために再潅流期間の流量時に記録された。
【００８４】
１．５　．結果の提示
統計分析を提示し、かつ結果の視角化を容易にするために、観測結果のほとんどの実例を表とグラフの両方に提示する。
【００８５】
１．６　．統計分析
データは平均値±ＳＥＭ 全体（ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ）として表された。各実験グループの動物の数は特に述べない限り６（ｎ＝６）である。この論文で使用した統計テストは学生の「ｔ」テスト若しくはＤｕｎｎｅｔｓテストを用いた多重制御比較の一方向分析方法、または多重比較のためのＴｕｋｅｙテストである。有用性はＰ＜０．０５で想定された。
【００８６】
ゾル２０はゾル４〜１９から得られた結果をもとに開発された。２４時間冷えたネズミの肝臓を保存した際における溶液４とＵＷ溶液と新規溶液の効果結果を比較する。
【００８７】
１．５．１　 胆汁流出
これらの３つのグループでは、ゾル２０での胆汁生産はこのモデルで最もよく見られた。胆汁の流出は肝臓がサーキットに置かれてから５分以内に開始し、再潅流期間のうち２時間中続いた。各グループにおける胆汁の外観は素晴らしいものであった；色は深い黄色で、非常に澄んでいた。２時間で肝臓のグラムあたりの胆汁流量率は以下の通りになった；ゾル４、ＵＷ、及びゾル２０のグループにおいて、それぞれ９３．４±５．３、１０３．４±６．７、１９８．３±１８．０μｌであった。最も良い結果がゾル４またはＵＷグループ（図８０）のいずれかと比較した大きな差異を伴ってゾル２０に見られた。ゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中における継続的な１５分間の胆汁流出率の結果［μｌ．（ｇ肝臓）−１．（１５分）−１］は表６と図２の重複結果に示された。
【００８８】
【表６】
2004513955.tif 000007
【００８９】
１．５．２．　酵素放出
１．５．２．１　ＡＬＴ放出：再潅流期間に２４時間ゾル２０グループに保存された肝臓はＵＷまたはゾル４グループ（表７）の肝臓よりかなり少ないＡＬＴ（Ｕ／Ｌ）を放出した。その他には、ＵＷに保存された肝臓から放出したＡＬＴはゾル４と比べて違いがなかった。
【００９０】
【表７】
2004513955.tif 000008
【００９１】
１．５．２．２　ＡＳＴ放出：
ゾル２０に保存された肝臓から放出されるＡＳＴ（Ｕ／Ｌ）はＵＷやゾル４の肝臓よりも少なく、すすぎ時と、ＵＷグループと比較すると３０分と１２０分の時点、ゾル４のグループと比較すると３０、９０、１２０分の時点で再潅流（表８）中に大きな違いがあった。ゾル４とＵＷグループの間には違いがなかった。
【００９２】
【表８】
2004513955.tif 000009
【００９３】
１．５．２．３　ＬＤＨ放出：
ゾル２０グループに２４時間保存された肝臓はＵＷやゾル４グループと比べて非常に少ないＬＤＨ（Ｕ／Ｌ）を放出した（表９）。ゾル４の中に保存された肝臓はＵＷグループと比較して少ないＬＤＨを放出したが、その違いは統計的に重要でなかった。
【００９４】
【表９】
2004513955.tif 000010
【００９５】
１．５．３．　ゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中の胆汁における胆汁酸濃度はそれぞれ６７００±４１７、６７２５±３７１、６５２９±３１７μｍｏｌ／Ｌであり、これらのグループの間に大きな相違はなかった（図３）。ゾル２０グループの再潅流中の胆汁酸抽出（％）はゾル４やＵＷグループのそれよりも高かった（図４）。ＵＷグループと比較すると、ゾル４グループの胆汁酸抽出に大した違いはなかった。
【００９６】
１．５．４．　ゾル４、ＵＷまたはゾル２０の中に保存された肝臓重量は全て２４時間の冷却保存後に減少した。ゾル４とＵＷまたはゾル２０グループ（表１０）の間には重要な違いがあった。また、ゾル２０グループの肝臓重量は２時間の再潅流後に減少した。他の２つのグループでは肝臓重量は再潅流後に増加して、ゾル２０とゾル４またはＵＷの間には重要な違いがあった。
【００９７】
【表１０】
2004513955.tif 000011
【００９８】
１．５．５．　再潅流期間ゾル４、ＵＷ、及びゾル２０の中に保存された肝臓の酸素消費はそれぞれ０．３６０±０．００７、０．４１７±０．０１６及び０．６４６±０．０４μｍｏｌ．（ｇ肝臓）−１．（分）−１であり、ゾル４またはＵＷグループと比較するとゾル２０グループには重要な違いがあり、ＵＷとゾル４グループ（図５）間に重要な違いがあった。
【００９９】
さらに完全に独立した観測がＰＢＳＨでなされて、その結果は図６〜１０で包括的に示される。これらの結果は、ＰＢＳＬがＵＷ（図６）よりも肝臓の膨張を引き起こさないことを確実に証明する。ＰＢＳＬで保存した後の胆汁流量はＵＷ（図７）で保存した後の胆汁流量の２倍に近接していた。
【０１００】
ＡＳＴ放出はＡＬＴ（図９）とＬＤＨ（図１０）と同様にＰＢＳＬ（図８）の方が低かった。これらの全ての結果がＵＷ保存溶液を超えるＰＢＳＬの利点を確証するのに非常に重要であった。
【０１０１】
２．心臓保存：材料と方法
動物保護のための内務省ガイドラインに従って実験は内務省認可の下で行われた。
【０１０２】
２．１　潅流装置
Ｎｅｅｌｙ　ＪＲ（７）によって説明されるように、分離後の動いているネズミの心臓モデルは使用された。この装置は以下の部品から構成される；
１）底の出口にウオータジャケット（ｗａｔｅｒ ｊａｃｋｅｔ）とガラスフィルタのあるランゲンドルフリザーバ、
２）心臓室とカニューレアセンブリ。フッ素樹脂栓はひもを収納するための溝がある２つのステンレスカニューレを保持した。一方のカニューレは大動脈に適合させるためにまっすぐにされ、ランゲンドルフ潅流、心臓麻痺（ｃａｒｄｉｏｐｌｅｇｉａ）潅流、圧力、心拍数を測定し、大動脈の流出量を測定するための４つのサイドアームコネクタと適合させた。もう片方のカニューレは、左の心房のカニューレーションを容易にするために角張っていた。２つのカニューレにより支持された還流化心臓はウオータジャケット化された（ｗａｔｅｒ ｊａｃｋｅｔｅｄ）心臓室の中に緩く収まった。
【０１０３】
３．大動脈と心房性気泡トラップとコンプライアンス室。
４．酸素投与（ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ）を容易にするために大きい表面積を提供するテーパー接続された３つのウオータジャケット化コンデンサユニットを含む酸素投与室。
５．心臓の６０ｃｍ上に位置し、そこを通って保存溶液が心臓に注入される心臓麻痺（ｃａｒｄｉｏｐｌｅｇｉａ）リザーバ。
６．酸素投与室を通して潅流溶液を再生するのに使用されるぜん動ポンプとフィルタ。
７．心拍数と大動脈の圧力を記録する圧力計とペンレコーダー。
心臓再潅流装置を簡易化したダイヤグラムを図１ｂに示す。
【０１０４】
２．２　潅流媒体
潅流溶液は酸素９５％とＣＯ２５％を３７℃で均衡化したクレブスーヘンゼライト緩衝液（ＫＨＢ）を改良したものである。当該緩衝液の最終的な塩濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）は塩化ナトリウム１１８、塩化カリウム４．７、硫酸化マンガン１．２、塩化カルシウム２．５、リン酸水素カリウム１．２、炭酸水素ナトリウム２５であった。
【０１０５】
２．３　プロトコルの研究
雄のウィスターネズミ（２５０〜３２０ｇ）にナトリウムペントバルビトン（０．２６〜０．２８ｍｌ）を腹腔内投与して麻酔にかけた。ヘパリン（２５０ＩＵ）は外科手術の直前に静脈に注入された。胸部の露出を容易にするために腹部が開かれ、開胸術が施された。そして、心臓が切除されると、直ちに氷のように冷たい塩水の中に置かれた。次に、大動脈のカニューレーションが実施され、心臓が潅流装置に取付けられた後、心臓が鼓動状態を取り戻す初期洗浄と平衡の期間に３７℃のＫＨＢ溶液の潅流が行われた。
【０１０６】
この間、左心房は心臓がポンピングモードに切り換えられるようにカニューレ挿入された。この構成では、ＫＨＢは大動脈へ溶液を順番にポンプで送る左心室に排出し、そこからコンプライアンス室に移る。この室は別の強固システム（ｒｉｇｉｄ ｓｙｓｔｅｍ）に弾性を与える空気で一部満たされた。この室で圧力が発生すると強制的に溶液を流量計により心臓の１００ｃｍ上に位置する気泡トラップに入れ、そこから再生させるために酸素投与室を通して戻させる。
【０１０７】
心臓機能の制御測定値は５分毎に１５分間の心拍数（ＨＲ）、収縮期圧（ＳＰ）、大動脈内血流量（ＡＦ）、冠状動脈流（ＣＦ）、および心拍出量（ＣＯ）を含んでいた。４５ｍｌ／分未満の大動脈内血流量、１６ｍｌ／分未満の冠状動脈流、２４０ビート／分未満の心拍数に達した心臓は研究から除外された。その後、心臓は、心臓の上にある心臓麻痺（ｃａｒｄｉｏｐｌｅｇｉａ）リザーバから４℃で６時間保存された４つの保存溶液（２５ｍｌ）の１つで洗い流された（ｂｅ ｆｌｕｓｈｅｄ）。当該テスト溶液は聖トーマスの病院の溶液Ｎｏ．２（ＳＴＨ２）、ウィスコンシン大学溶液、セルシア（Ｃｅｌｓｉｏｒ）溶液（ＣＳ）、及びリン酸緩衝ショ糖液（ＰＢＳＨ）であった。各グループに含まれる心臓の最小数は６であった。
【０１０８】
必要な時間保存した後、１５分の平衡時間、ランゲンドルフモードで再潅流が実施された。それから、ランゲンドルフ潅流を止めて、左心房を通る潅流を開始することにより、心臓作動モードに変換した。作動する心臓モードは３０分間続き、その間、各々の虚血前制御値（ｐｒｅ−ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖａｌｕｅ）と比較するために心臓機能が５分毎に計測された。心臓機能の回復は虚血前制御値の割合として表された。
【０１０９】
プロトコルを概要すれば以下の通りであった；
ランゲンドルフモード（２〜３分）
作動モード（１５分）
心臓麻痺（心停止）（２５ｍｌのフラッシュ溶液）
保存（６時間）
ランゲンドルフ再潅流（１５分）
作動再潅流（３０分）
【０１１０】
統計的分析
各グループの結果は平均値±（オンライン可能か？）ＳＥＭとして示された。グループの平均値は一方向性の変化分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して比較された。統計的有意性は０．０５未満のＰ値で認められた。
【０１１１】
２．４　結果
４つの実験グループの結果（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）が表１１に示され、示された各々の血液動態パラメータに対するプレ虚血ｆｕｎｃｔｉｏｎのリカバリ割合として表現した。
【０１１２】
【表１１】
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【図面の簡単な説明】
【図１ａ】肝臓の再潅流サーキットを示す図である。
【図１ｂ】心臓の潅流サーキットを示す図である。
【図２】２４時間冷却保存後のゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中の胆汁流出率［μｌ．（ｇ肝臓）−１．（２時間）−１］を示す図である。
【図３】２４時間冷却保存後のゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中の胆汁における胆汁酸濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を示す図である。
【図４】２４時間冷却保存後のゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中の胆汁酸抽出（％）を示す図である。
【図５】２４時間冷却保存後のゾル４、ＵＷ及びゾル２０グループの再潅流中の酸素消費［μｍｏｌ．（ｇ肝臓）−１．（分）−１］を示す図である。
【図６】２４時間冷却保存後、かつ、２時間再潅流後のＵＷ及びＰＢＳＬグループの肝臓重量変化（％）を示す図である。
【図７】２４時間冷却保存後のＰＢＳＬ及びＵＷグループの継続的な１５分間における胆汁流量を示す図である。
【図８】２４時間冷却保存後のＰＢＳＬ及びＵＷグループの再潅流中のＡＳＴ放出を示す図である。
【図９】２４時間冷却保存後のＰＢＳＬ及びＵＷグループの再潅流中のＡＬＴ放出を示す図である。
【図１０】２４時間冷却保存後のＰＢＳＬ及びＵＷグループの再潅流中のＬＤＨ放出を示す図である。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2004513955.tif 000018
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年12月24日(2002.12.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分と共に
６）トロンボキサン反応抑制剤
を含む血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項２】
トロンボキサン反応抑制剤がアスピリンを含むことを特徴とする請求項１記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３】
５）少なくとも１つの陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）と、
７）少なくとも１つのコロイド浸透性質を有する成分
から選択される１つまたはそれ以上の追加的成分を含むことを特徴とする請求項１又は２記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項４】
サッカライドがサクロース、ラフィノース、マンニトールから選ばれることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項５】
ｐＨ緩衝液はリン酸ナトリウムバッファ、リン酸カリウムバッファ又はそれらの混合物から選ばれることを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項６】
カルシウム輸送ブロッカー（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｂｌｏｃｋｅｒ）はニカルジピン、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ニソルジビン（ｎｉｓｏｌｄｉｐｉｎｅ）、クロルプロマジン、およびトリフルオロペアジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）から選ばれることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項７】
抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分はカルシウムキレート（ｃｈｅｌａｔｅｒ）、好ましくはクエン酸塩であることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項８】
陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）はラクトビオン酸塩（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）又はラクトビオン酸を含むことを特徴とする請求項３ないし７のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項９】
コロイド浸透物質（ｏｓｍｏｔｉｃ）はポリエチレングリコール（ｐｅｇ）、サクシニル化されたゼラチン、フィコール（多糖）またはデンプン製品などの多糖類を含むことを特徴とする請求項３ないし８のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１０】
（８）無機的または有機的な溶質、
（９）カルシウムキレート化特性を有する成分または成分群、および
（１０）鉄のキレート化特性を有する成分または成分群
から選択される１つまたはそれ以上の成分を追加的に含むことを特徴とする請求項５ないし９のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１１】
無機溶質は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、ＯＨ−、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋から選択される陽イオン及び／又は陰イオンを含む電解質であることを特徴とする請求項１０記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１２】
（１１）１つ又は１つ以上のアミノ酸、
（１２）酸素フリーラジカルに対して有効な少なくとも１つの成分又は酸素フリーラジカル生成物（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）、及び、
（１３）エネルギー供給システムの少なくとも１つの成分、又は、エネルギー供給システム若しくはケトン体に影響を及ぼす少なくとも１つの成分
を追加的に含むことを特徴とする請求項１ないし１１のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１３】
アミノ酸はグルタミン、グリシン又はノルマルアセチルシステインから選択されることを特徴とする請求項１ないし１２のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１４】
酸素フリーラジカル抑制物はアロプリノール、還元されたグルタチオン及びその組合せから選択されることを特徴とする請求項１３又は１４記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１５】
（１４）筋肉中で架橋機能（ｃｒｏｓｓｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に逆に作用する、少なくとも１つの成分、望ましくはブタンジオンモノオキシム、
（１５）細胞膜の中外からの蛋白質の挿入と除去に影響を及ぼす少なくとも１つの成分、望ましくはタキソール、
（１６）少なくとも、細胞間信号形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）システム、又はこのシステムを修正する少なくとも１つの成分、望ましくはプロテインキナーゼ障害剤、又はカルモジュリン障害剤、
（１７）膜を安定させる作用を持つ少なくとも１つの成分、望ましくはラノラジーン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）
から選択される追加的な成分を含むことを特徴とする請求項１ないし１４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１６】
ｐＨが６．８〜７．０の範囲、及び／又は浸透圧重量モル濃度が３００〜４５０ｍｏｓｍｏｌ／Ｌの範囲、好ましくは３５０〜４００ｍｏｓｍｏｌ／Ｌの範囲であることを特徴とする請求項１ないし１５のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１７】
成分（２）の量は５０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、各成分（３）、（５）、（８）の総量は１５〜７５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（１１）の量は１５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（１２）の総量は最大５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（７）の量は０．５〜３．０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（６）の量は０．３〜１．０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（４）の量は０．０００５〜０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、他の成分は最大１モルＬの範囲の少量で存在することを特徴とする請求項１ないし１６のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項１８】
請求項１、３、１０及び１２に定義した成分種（５）、（８）、（１２）、（３）、（１１）、（２）、（６）、（４）、（７）の組合せを含む、腎臓、肝臓、すい臓、腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、腸（ｂｏｗｅｌ）などを保存するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項１９】
以下に掲げる特定種類の成分種の組合せを含む肝臓、腎臓、すい臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　　　類
５）　　　　　ラクトビオン酸
８）　　　　　ＫＯＨ
８）　　　　　ＮａＯＨ
１２）　　　　グルタチオン
３）　　　　　Ｎａ２ＨＰＯ４
３）　　　　　ＮａＨ２ＰＯ４
１１）　　　　グルタミン
２）　　　　　サクロース
６）　　　　　アスピリン
１２）　　　　アロプリノール
４）　　　　　　ニカルジピン
７）　　　　　ペグ（ＰＥＧ）（２万ＭＷ）
【請求項２０】
水が規定の体積になったとき、以下に掲げる特定種類の成分種の組合せで、かつ、示された量を実質的に含む肝臓、腎臓、すい臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　　　類　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
５）　　　　　ラクトビオン酸　　　　　　　　　　５０
８）　　　　　ＫＯＨ　　　　　　　　　　　　　　１５
８）　　　　　ＮａＯＨ　　　　　　　　　　　　　３５
１２）　　　　グルタチオン　　　　　　　　　　　３
３）　　　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　２６．４５
３）　　　　　ＮａＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　１６．６６
１１）　　　　グルタミン　　　　　　　　　　　　２０
２）　　　　　サクロース　　　　　　　　　　　　１００
６）　　　　　アスピリン　　　　　　　　　　　　０．５
１２）　　　　アロプリノール　　　　　　　　　　０．４
５）　　　　　　ニカルジピン　　　　　　　　　　　０．００５
７）　　　　　ペグ（ＰＥＧ）（２万ＭＷ）　　　　１
【請求項２１】
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分と、
８）無機的または有機的な溶質から選択された成分
を含む血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項２２】
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分と、
８）無機的または有機的な溶質から選択された成分
を含む血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液において、ｐＨが６．８〜７．０であるフラッシュ保護溶液。
【請求項２３】
１）注入用の水と、
２）少なくとも１つの糖質と、
３）少なくとも１つのｐＨ緩衝特性を有する成分と、
４）少なくとも１つのカルシウム輸送ブロッキング特性又は抗（ａｎｔｉ−）カルシウム活動性を有する成分と共に選択された成分と、
８）無機的または有機的な溶質
を含む血液が供給されないときに細胞を保存するためのフラッシュ保存溶液において、成分（２）の量が５０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、各成分（３）と各成分（８）の総量が１７〜７５ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、成分（４）の量が０．０００５〜０．１ｍｍｏｌ／Ｌの範囲、及び他の成分が最大１ｍｍｏｌ／Ｌの範囲の少量で存在するフラッシュ保存溶液。
【請求項２４】
カルシウム輸送ブロッカーは、ニカルジピン、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、ニソルジビン（ｎｉｓｏｌｄｉｐｉｎｅ）、クロルプロマジン、およびトリフルオロペアジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）から選ばれ、好ましくはジルチアゼムを含むことを特徴とする請求項２１ないし２３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２５】
サッカライドがサクロース、ラフィノース、マンニトールから選ばれることを特徴とする請求項２１ないし２４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２６】
ｐＨ緩衝液はリン酸ナトリウムバッファ、リン酸カリウムバッファ又はそれらの混合物から選ばれることを特徴とする請求項２１ないし２５のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２７】
無機溶質は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、ＯＨ−、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋から選択される陽イオン及び／又は陰イオンを含む電解質であることを特徴とする請求項２１ないし２６のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２８】
（１４）筋肉中で架橋機能（ｃｒｏｓｓｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に逆に作用する、少なくとも１つの成分から選択される追加的な成分を含むことを特徴とする請求項２２ないし２７のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項２９】
（１４）筋肉中で架橋機能（ｃｒｏｓｓｂｒｉｄｇｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に逆に作用する、少なくとも１つの成分がブタンジオンモノオキシムであることを特徴とする請求項２８に記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３０】
（１５）細胞膜の中外からの蛋白質の挿入と除去に影響を及ぼす少なくとも１つの成分、望ましくはタキソール、
（１６）少なくとも１つプロテインキナーゼ障害剤、又はカルモジュリン障害剤、
（１７）膜を安定させる作用を持つ少なくとも１つの成分、望ましくはラノラジーン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）から選択される付加的な成分を含むことを特徴とする請求項２２ないし２９のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３１】
浸透圧重量モル濃度が３００〜４５０ｍｏｓｍｏｌ／Ｌの範囲であることを特徴とする請求項２１ないし３０のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３２】
以下に掲げる特定種類の成分種の結合を含む心臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　類
３）　　　Ｎａ２ＨＰＯ４
３）　　　ＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ
３）　　　ＫＨ２ＰＯ４
２）　　　サクロース
８）　　　ＭｇＣｌ２
８）　　　ＣａＣｌ２
８）　　　ＮａＣｌ
４）　　　ジルチアゼム
【請求項３３】
以下に掲げる特定種類の成分種の組合せで、かつ、示された量を実質的に含む心臓を保存するためのフラッシュ保存溶液。
成分　　　　　　種　類　　　　　　　　　　　ｍｍｏｌ／Ｌ量
３）　　　Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　４２．３
３）　　　ＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　１０．６７
３）　　　ＫＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　　１６
２）　　　サクロース　　　　　　　　　　　　　　　１００
８）　　　ＭｇＣｌ２　　　　　　　　　　　　　　　　５
８）　　　ＣａＣｌ２　　　　　　　　　　　　　　　　０．６
８）　　　ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　　　　１２
４）　　　ジルチアゼム　　　　　　　　　　　　　　０．５
【請求項３４】
薬理（方）的に（ｐｈａｒｍｅｃｏｐｏｅｉａｌｌｙ）許容可能な条件の下で成分を追加した後、成分（７）ともしあれば不安定な成分を除いて、フラッシュ保存溶液の構成成分を水に添加し、次いで、もしあれば成分（７）を添加してほぼ目的の容量に近い溶液を作製し、最後にｐＨを整える容量まで増やし除菌と冷却することを含むことを特徴とする請求項１ないし３３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液の製造方法。
【請求項３５】
血液が供給されない場合に、細胞を保存するため、特に器官（ｏｒｇａｎｓ）、生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ）、および細胞への損傷を防ぐフラッシュ溶液、保存溶液、又はフラッシュ保存溶液として使用するための請求項１ないし２４のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液。
【請求項３６】
鼓動中の心臓又は鼓動していない心臓の提供者から器官（ｏｒｇａｎｓ）を含む臓器を移植中に、暖又は寒虚血（ｗａｒｍ ｏｒ ｃｏｌｄ ｉｓｃｈａｅｍｉａ）、心臓麻痺又は開心手術（ｏｐｅｎ ｈｅａｒｔ ｓｕｒｇｅｒｙ）、手足全部又は全身を保存するいかなる状況をも含む外科手術中に、生きた組織の実験中に、設計された細胞、組織、器官、手足又は全身を培養して保存する際に使用する請求項３５記載の保護溶液。
【請求項３７】
保護溶液を血管系を介して細胞、生きている組織、器官、手足又は全身に接触させ、かつ、任意に、追加的にフラッシュされた細胞、組織、および器官を保存するための保護溶液として作用させるために使用する請求項３５又は３６記載の保護溶液。
【請求項３８】
前記に定義した第１番目の溶液は細胞、組織、器官、手足又は身体をフラッシュするのに使用され、第２番目の溶液はそれらの保存に使用されるか、または部分的な保存に使用されるための請求項３５ないし３７のいずれかに記載されたフラッシュ保護溶液。
【請求項３９】
細胞、特に、生きた細胞、組織、器官を請求項１ないし３３のいずれかに記載の簡易な低体温保存用溶液に接触させ、当該細胞、組織または器官を溶液で洗い流し、定位置から取り除き、望ましくは通常ゼロから４℃の間の温度範囲に冷やして保管することで細胞をフラッシュ、保存またはフラッシュ保存するのに使用するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項４０】
細胞、組織または器官をフラッシュし、低体温状態にした後、侵入（ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ）または潅流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）により当該保存溶液と接触させることで、細胞、特に組織または器官を保護するのに使用するための請求項３９に記載されたフラッシュ保護溶液。
【請求項４１】
ある細胞、組織または器官の機能を保護する方法、及び／又は一時的にある機能を停止させる方法において、細胞、組織、器官または患者に対して、それらの機能を維持したり高めたりするために、有効な速度でまたは効果的な濃度で請求項１ないし３３のいずれかに記載の溶液を生物学的に効果的な量を付与することを含むことを特徴とする請求項３９及び４０のいずれかに記載されたフラッシュ保護溶液。
【請求項４２】
細胞をフラッシュし、低体温状態にした後、侵入（ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ）または潅流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）により前記に定義した請求項１ないし３３のいずれかに記載された保存溶液と接触させることで、細胞をフラッシュ、保存またはフラッシュ保存するのに使用するためのフラッシュ保存溶液。
【請求項４３】
ある細胞、組織または器官の機能を保護する方法、及び／又は一時的にある機能を停止させる方法において、細胞、組織、器官または患者に対して、それらの機能を維持したり高めたりするために、有効な速度でまたは効果的な濃度で請求項１ないし３３のいずれかに記載の溶液を生物学的に効果的な量を付与することを含む患者に対する治療方法。
【請求項４４】
フラッシュ潅流が最大３００ｍｍＨｇの圧力で実施されることを特徴とする請求項３５ないし４３のいずれかに記載された使用又は方法。
【請求項４５】
フラッシュ潅流が最大２００ｍｍＨｇの圧力で実施されることを特徴とする請求項３５ないし４３のいずれかに記載された使用又は方法。
【請求項４６】
フラッシュ潅流が最大１００ｍｍＨｇの圧力で実施されることを特徴とする請求項３５ないし４３のいずれかに記載された使用又は方法。
【請求項４７】
特定目的のための１つ又は１つ以上のフラッシュ溶液の製造に使用し、普遍的なフラッシュ、保存、またはフラッシュ保存溶液として機能させるために、成分（５）〜（１７）の１つ又は１つ以上から選択される個々の成分と、成分（１）〜（４）を含むことを特徴とする請求項１ないし３３のいずれかに記載のフラッシュ保存溶液を構成要素とする部品のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
虚血性損傷から腎臓細管のモルフォロジー（Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）を保護するための、リン酸ナトリウムとサクロースだけを含む簡易なフラッシュ溶液が１９８２年にアンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）とコフィー（Ｃｏｆｆｅｙ）により、１９８３年にコフィーとアンドリュースにより提示された。我々は機能テスト（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｅｓｔ）を実施し、確立した保存溶液（ＥＣとコリンズＣ２液）と比較すると、極めて小さい潅流（ｍｉｃｒｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）（ピリエ（Ｐｉｒｉｅ）とポッツ（Ｐｏｔｔｓ）、１９８６年）によって判断されるように、近似溶液（ＰＢＳ１４０）が腎臓細管の保存に非常に有効であると分かった。ＰＢＳ１４０は他の溶液よりも優れたモルフォロジーの保存と近位尿細管（ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ）の機能を提供するのが分かった。また、ＰＢＳ１４０は１９８８年と１９８９年にフェルワナ（Ｆｅｒｗａｎａ）、ピリエ、ポッツにより腎臓の全機能に有効であることも分かった。試験的な移植で、ラム（Ｌａｍ）、マーバー（Ｍａｖｏｒ）、ポッツ、ギルズ（Ｇｉｌｅｓ）はＰＢＳ１４０が高浸透圧性クエン酸塩とＵＷ溶液（ロッジ（Ｌｏｄｇｅ）、ペリィ（Ｐｅｒｒｙ）、スキンナー（Ｓｋｉｎｎｅｒ）、ポッツ、ギルズ、１９９１年）と比較して好しいことに（ｆａｖｏｕｒａｂｌｙ）効果の高い保存を可能にすることが分かった（１９８９年）。ＰＢＳ１４０はリーズで臨床試験がなされ、人間の腎臓移植に非常によく作用することが分かった（アーマッド（Ａｈｍａｄ）、カシ（Ｋａｓｈｉ）、ヘルミー（Ｈｅｌｍｙ）、ハーディングハム（Ｈａｄｉｎｇｈａｍ）、ポッツ、ロッジ、１９９７年）。
【特許文献１】
ＵＳ−Ａ−４９２００４４号
【特許文献２】
ＵＳ−Ａ−５１４５７７１号
【特許文献３】
ＵＳ−Ａ−５４０５７４２号
【特許文献４】
ＵＳ−Ａ−５３７０９８９号
【特許文献５】
ＣＮ−Ａ−１１７６７３８号
ＵＳ−Ａ−４９２００４４号には、マンニトール／Ｌあたり２０〜３７グラム、及びべラパミル／Ｌあたり０〜１．０グラムのバッファを含むフラッシュ貯蔵溶液について記載されている。また、当該溶液はマグネシウムとカルシウムイオン、アロプリノール、及びアデノシンを含んでいる。当該溶液のｐＨは７．２０〜７．５０であり、浸透圧重量モル濃度は２５５〜４２５ｏｓｍ／ｋｇである。当該溶液は例えば腎臓などの器官を移植する際に、フラッシュ溶液や貯蔵溶液としても使用される。貯法腎移植後における動物の生存、インシュリンクリアランス、腎臓の高速液体クロマトグラフィ生体組織検査法、血清クレオチン（ｃｒｅｏｔｉｎｓ）、及び同様の調査で５０時間冷却貯蔵した実施例が示されている。
ＵＳ−Ａ−５１４５７７１号には、フルクトース、グルコース、ニカルジピン（カルシウムブロッカー）、バッファ、溶質、アロプリノール、グルタチオン及び未改質ヒドロキシエチルスターチ（コロイド）を含む、移植用の器官と組織に用いるすすぎ又は保護用の溶液について記載されている。移植後の肝臓損傷（ＳＧＯＴ活性、凝固時間、ヘム、及び酸素留分調査で肝臓を１２時間冷却貯蔵した実施例が示されている。
ＵＳ−Ａ−５４０５７４２号には、外科手術中に器官を浄化や維持するため、または移植用の器官を保存するための血液代替溶液について記載されている。当該溶液は溶質、マンニトール、バッファ、グルタチオン、ラクトビオン酸塩である陰イオンを隔離するインパーミータ（ｉｍｐｅｒｍｅａｎｔ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｉｏｎ）、鉄キレート化剤、ニカルジピンなどのカルシウムチャンネルブロッカー、及びアロプリノールを含んでいる。バイパス後の血清レベルの調査で心臓を３時間冷却バイパス循環した実施例が示されている。
ＵＳ−Ａ−５３７０９８９号には、血管拡張剤及びＤ−グルコース、バッファ、無機イオン、さらに望ましくはカルシウムブロッカー、コロイド、アデノシンなどの他の成分を含む、器官を保存や維持するための溶液について記載されている。保存率（０〜５）の調査で心臓を２４時間保存した実施例が示されている。
ＣＮ−Ａ−１１７６７３８号には、砂糖、リン酸カリウムバッファ、カルシウムチャンネルブロッカーベラパミル、ラクトビオン酸塩、溶質、コロイド（デキストラン）、アロプリノール、及び還元型グルタチオンとアデノシンを含む、移植用の組織を保存する溶液について記載されている。




【国際調査報告】
2004513955.tif 000074
2004513955.tif 000075
2004513955.tif 000076
2004513955.tif 000077
2004513955.tif 000078