(57)【要約】【手段】ラテラルフロー免疫アッセイ装置１０は、サンプルの毛管移動が可能な膜ストリップ１２と、その膜上に配置された標識試薬２０とを含む。この標識試薬２０はそこを通って移動するサンプル中に浮遊するように配合される。ストリップ１２のサンプル移動経路上には捕捉試薬２２が固定化され、この捕捉試薬２２は標識試薬２０と結合してストリップ１２上に可視カラー部位を形成するように配合される。このストリップ１２をカラー部位の視認性を高める色に変えるために、上記カラー部位に対して補色となる色素２６をストリップ１２の中に組み込んでいる。【効果】試験結果の視認性に良好なコントラストをもたらすことができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体サンプルの毛管移動が可能な多孔質ストリップと、
そのストリップ上に配置され、移動するサンプル中に浮遊するよう配合される標識試薬と、
ストリップのサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してストリッ
プ上に視認できるカラー部位を形成するように配合される捕捉試薬と、
カラー部位の視認性を高めるためにカラー部位に対して補色背景を提供する手段とを有してなることを特徴とする、ラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項２】
補色背景を提供する手段が多孔質ストリップに組み込まれた色素である、請求項１に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項３】
補色背景を提供する手段が多孔質ストリップ上に配置された透明カラーフィルムである、請求項１に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項４】
フィルムが多孔質ストリップ上に浮かせてある、請求項３に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項５】
フィルムが多孔質ストリップに積層されている、請求項３に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項６】
カラー部位がブルーであり、補色背景がイエロー、イエロー−オレンジ、オレンジから選択される、請求項１ないし５のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項７】
カラー部位がレッドであり、補色背景がグリーン、ライトグリーン、蛍光グリーンおよびライムグリーンから選択される、請求項１ないし４のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項８】
液体サンプルの毛管移動が可能な白色の多孔質ニトロセルロース膜と、
そのストリップ上に配置され、移動するサンプル中に浮遊するように配合される標識試薬と、
ストリップのサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してストリップ上に視認カラー部位を形成するように配合される捕捉試薬と、
白色ストリップをカラー部位の視認性を高める色に変更する部材とを有してなることを特徴とする、ラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項９】
上記部材が膜に組み込まれた色素である、請求項８に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１０】
上記部材が膜上に配置された透明フィルムである、請求項８に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１１】
上記透明フィルムが膜に積層されている、請求項１０に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１２】
上記部材が膜を支持するためのカラーバッキングである、請求項８に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１３】
上記部材が膜を支持するためのクリアーバッキングおよび上記クリアーバッキングに接着された透明カラーフィルムである、請求項８に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１４】
カラー部位がブルーであり、増強色がイエロー、イエロー−オレンジ、オレンジからなる群より選択される、請求項８ないし１３のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１５】
カラー部位がレッドであり、増強色がグリーン、ライトグリーン、蛍光グリーンおよびライムグリーンからなる群より選択される、請求項８ないし１３のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１６】
液体サンプルの毛管移動が可能なストリップと、そのストリップ上に配置され、かつ、移動するサンプル中に浮遊するように配合される標識試薬と、ストリップのサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してストリップ上に視認できるカラー部位を形成するように配合される捕捉試薬とを有してなるラテラルフロー免疫アッセイ装置において、
カラー部位の視認性を高めるためのカラー背景を有することを特徴とする、ラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１７】
上記カラー背景が上記ストリップに固定された色素である、請求項１６に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１８】
上記カラー背景が上記ストリップ上に配置された透明フィルムである、請求項１６に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項１９】
上記カラー部位がブルーであり、上記カラー背景がイエローである、請求項１３ないし１８のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項２０】
上記カラー部位がレッドであり、上記カラー背景がグリーンである、請求項１３ないし１８のいずれか一項に記載のラテラルフロー免疫アッセイ装置。
【請求項２１】
液体サンプルの毛管移動が可能なストリップと、そのストリップ上に配置され、かつ、移動するサンプル中に浮遊するように配合される標識試薬と、ストリップのサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してカラー部位を形成するように配合される捕捉試薬とを有してなる免疫アッセイ装置において、
上記ストリップを上記カラー部位に対して補色とすることを特徴とする、カラー部位の視認性を高める方法。
【請求項２２】
液体サンプルの毛管移動が可能なストリップと、そのストリップ上に配置され、かつ、移動するサンプル中に浮遊するように配合される標識試薬と、ストリップのサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してカラー部位を形成するように配合される捕捉試薬とを有してなる免疫アッセイ装置において、
上記カラー部位に対して補色である透明フィルムで上記ストリップを着色することを特徴とする、カラー部位の視認性を高める方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、一般に生体液体サンプルにおけるアナライトの高感度検出を提供するための固相免疫アッセイ試験装置（サンドイッチ型、競合型を問わない）に関し、より詳しくはそれらのためのカラーコントラスト系に向けられる。固相免疫アッセイ試験装置にはリガンド−レセプター対のうちの一方、通常には抗体、抗原またはハプテンを結合させた固相が組み込んである。
【０００２】
【従来の技術】
ラテラルフロー（側流式）免疫アッセイ試験は、今日の典型的な使用では、一般にニトロセルロース膜の多孔質部材を、その中の特定の領域に塗布された特定の試薬とともに含有する。
上流領域は通常、試験するアナライトに特異的な結合試薬を金コロイドまたはカラーラテックス粒子などの可視標識に結合させたものを含んでいる。この標識試薬は試験ストリップにサンプルが適用された後に膜からのその放出を促進するように配合される。
【０００３】
典型的な競合アッセイでは、アナライトを含有するサンプルを試験ストリップのサンプル領域に導入する。サンプルの移動は多孔質膜内の毛管作用運搬によって起こり、ストリップ上のその定位置から標識試薬を再懸濁させる。試薬混合物がストリップに沿って移動すると、固定化された捕捉試薬と接触するようになる。サンプル中にアナライトが存在すれば、この移動中に標識試薬（抗体−可視標識）との結合が起こる。
【０００４】
アナライトの量が全ての結合部位を使い尽くすに十分なものであれば、可視標識の捕捉試薬への結合は起こらない。これは陽性結果となる。
サンプル中にアナライトが存在しない場合には可視標識が捕捉ストライプに結合し、カラーバンドまたはカラーストリップとして現れる陰性結果となる。
【０００５】
【発明が解決しようとるす課題】
大部分の場合でこれらの試験は肉眼で視覚的に解釈してアナライト（薬物）の有無が決定される。ニトロセルロースのような膜はカラーラインまたはカラーストライプの有無を視認する白色の背景を提供する。これまでのところニトロセルロース膜としては白一色だけが市販されている。
弱視、加齢および先天的な色覚欠陥は視覚的有効性が低下したりある種の色の組合せの認識が低下したりするといった認識変化をもたらすことがある。
【０００６】
本発明は補色を用いて試験結果の視認性に良好なコントラストをもたらすラテラルフロー免疫アッセイ装置を提供する。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明のラテラルフロー免疫アッセイ装置は、一般に液体サンプルの毛管移動を可能とする多孔質ストリップを含む。標識試薬はこのストリップ上に配置され、この標識試薬はそこを通って移動するサンプル中に浮遊するように配合される。捕捉試薬はストリップのサンプル移動経路上に固定化され、この捕捉試薬は標識試薬と結合してストリップ上に可視カラー部位を形成するように配合される。
【０００８】
また本発明は、このカラー部位の視認性を高めるためにカラー部位に対して補色背景を提供する手段も含む。
本発明のある実施形態では、この補色背景を提供する手段は、多孔質ストリップに組み込まれた色素である。本発明のもう一つの実施形態では、補色背景を提供する手段は多孔質ストリップ上に配置された透明カラーフィルムである。フィルムは接着剤でストリップに直接接触させてもよいし、ストリップと最小限の接触で、または全く接触せずにストリップ上に近接して浮かせてもよい。
【０００９】
多孔質ストリップとして白色の多孔質ニトロセルロース膜を用いる場合、本発明の手段は、実質的には、白色のストリップをカラー部位の視認性を高める色に変える部材である。
ニトロセルロース膜は当技術分野で周知のようにマイラーバッキング（Ｍｙｌａｒ ｂａｃｋｉｎｇ）上に形成してもよい（マイラー：ポリエステルフィルムの商標名）。本発明の場合、このマイラーバッキングは光透過性のイエローマイラーであってもよく、以下に述べるようにこのマイラーバッキングを通して膜が見える。
【００１０】
フィルムを用いる実施形態では、フィルムは上記のように多孔質ストリップに積層または接着してもよいし、それから離してもよい。
さらに具体的には、カラー部位がブルーである場合、補色背景はイエロー、イエロー−オレンジ、およびオレンジからなる群より選択すればよい。
カラー部位がレッドである場合には、グリーンの背景など、また別の補色の組合せを用いればよい。
【００１１】
本発明はまた、液体サンプルの毛管移動が可能なストリップ、ストリップ上に配置され、かつ、移動するサンプル中に浮遊するように配合される標識試薬、およびストリップのサンプル移動経路上に固定化され、かつ、標識試薬と結合してストリップ上に可視部位を形成するように配合される捕捉試薬を有してなる既存のラテラルフロー免疫アッセイ装置における改良を提供する。この改良はカラー部位の色の認知を高めるカラー背景を含んでなり、これは例えばストリップに組み込まれた色素、または感圧性接着剤でニトロセルロースストリップに直接積層されているか、もしくは薄い打ち抜きプラスチック支持体などで補助し、ストリップと最小限の接触で、または全く接触せずにストリップ上にかろうじて浮かせてある選択された背景色の透明フィルムであってよい。
【００１２】
免疫アッセイ装置のカラー部位の視認性を高める本発明の方法は、ストリップを、標識試薬と捕捉試薬の結合によって生じるカラー部位に対して補色にする、またはそのカラー部位に対して補色を有する透明フィルムを提供する工程を含む。
【００１３】
【発明の実施の形態】
図１に、本発明のラテラルフロー免疫アッセイ装置１０が示されている。ラテラルフロー免疫アッセイ装置１０は、一般に多孔質ストリップ１２を含み、これは典型的にはニトロセルロース膜などであり、ストリップ１２にサンプル１４を添加すると、矢印１６によって示されているようにそれに沿った液体サンプル１４の毛管移動が可能である。この添加は標識試薬が配置されているストリップの領域２０にするのが好ましい。標識試薬は当技術分野で周知のように、そこを通って移動するサンプル中に浮遊するように配合される。捕捉試薬はストリップ上の第二の領域２２に固定化され、標識試薬と結合してストリップ上に可視部位を形成するように配合される。
【００１４】
図１に示されている実施形態１０では、色素２６がカラー部位の視認性を高めるためにカラー部位に対して補色背景を提供する手段として働く部材として組み込まれている。色素２６は消えないものであることが好ましい。補色とはイエロー、ブルーおよびレッドの原色を含む通常の色相環で互いに反対側に現れる色である。
薬剤抗体と結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）したブルーラテックス微粒子などの典型的な標識試薬および固定化薬剤コンジュゲートなどの捕捉試薬は、ブルーの部位を生じる。ブルーに対する補色は暖色のイエローおよびオレンジであり、対象、すなわちブルーの部位を視覚的に前へ押し出すことができる。
【００１５】
上記のように引き立て合う色は反対色である。それらは色相環では互いに反対側にあり、例えばブルーの反対はオレンジおよびイエローである。これらの色は各々を引き立たせながら、互いに極大のコントラストとなる。例えば、明るいオレンジまたはイエローの背景はブルーを強調し、際だたせる。
これはアナライトの量によって読み取るシグナルがぼんやりとしか見えない場合にラテラルフロー試験の視認性に有利である。競合アッセイでは、その試験の提示限界値を下回るような少量のアナライトでは、可視シグナルは偽陽性を示す点までに弱くなる。本発明はカラーシグナルを見やすくするカラーコントラストシステムを提供する。典型的な「サンドイッチ」アッセイではカラーラインが陽性サンプルを示すが、本発明のカラーコントラストシステムが特に色覚欠陥を有する人において偽陰性を防止する助けとなる。
【００１６】
本発明に従い永久色素２６を使用することができるが、捕捉試薬中の標識試薬を結合させてカラー部位を形成させると同時に、実際にカラー背景を顕現させる化学成分をストリップに加えればよいと考えるべきである。例えば抗ＢＳＡ捕捉領域２８は捕捉領域２２の下およびさらに広く提供してもよく、ブルーラテックス母粒子を含んだ表面に、ＢＳＡを固定化したイエローラテックス微粒子を導入してもよい。サンプルを流した際、黄色の微粒子がＢＳＡ捕捉領域２８で止まってそれを黄色にし、薬物が存在すれば、青の微粒子が捕捉領域２２で止まる。
【００１７】
あるいは図２に示されているように、本発明の第二の実施形態３０のラテラルフロー免疫アッセイ装置は、矢印３６で示されているように毛管作用によってそれに沿ったサンプルの移動を可能とする多孔質ストリップ３２を含む。
標識試薬４０はこの膜に配され、上記のようにそこを通って移動するサンプル３４中に浮遊するように配合される。捕捉試薬４２はストリップ３２のサンプル移動経路上に固定化され、標識試薬と結合してストリップ上に可視カラー部位を形成するように配合される。
【００１８】
実施形態３０では、ストリップ３２は白色の多孔質膜であってよく、選択された色の透明フィルム５０は膜ストリップ３２の上に配置されている。一体の装置３０を提供するために、フィルム５０は膜ストリップ３２に積層すればよい。
あるいはフィルム５０はプラスチック支持体または封入材の形態であってもよく、これはストリップ３２の上に浮かせてもよく、光および下層の試験ストリップ３２を可視化させるよう透明色素を含む。
【００１９】
本発明のもう一つの実施形態６０が図３に示されている。図３に示されている一般参照番号は図１〜２に示されているものと同一または同等の番号に相当する。
実施形態６０は透明カラーバッキング、好ましくはイエローマイラー上に配置された多孔質膜３２を含む。あるいはクリアーマイラーバッキングを、図３の破線で示されているように透明カラーフィルム６４とともに用いてもよい。この実施形態では、アイコン６６で示されているように、膜３２はマイラー６２を通して見える。
【００２０】
（実験結果）
ラテラルフロー試験ストリップに対し、種々のレベルのアナライトおよび試料を試した。レベルは本試験装置の検出限界付近を中心とした。試験にはブルーラテックスカラー粒子を用いた。二組の同じ試験ストリップに試料を乗せた。一組の試験ストリップはイエローマイラーストリップで覆った。複数の人間がこれらのストリップを目で読み取り、黄色のフィルムで試験ストリップを覆った場合にストリップが読み取りやすく、青いラインの有無の結果がわかりやすくなったことをコメントした。
【００２１】
以上、特定の補色イエローおよびブルーを用いた本発明のラテラルフロー免疫アッセイ装置を説明したが、本発明はこれに限定されるものではなく、試験結果の視認性を高めるいずれの補色組の使用もさらに含むものとする。よって、当業者が考えうるあらゆる改変、変更または同等の配置も添付の請求の範囲で定義される本発明の範囲内にあるものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】
本発明のラテラルフロー免疫アッセイの斜視図であり、一般に多孔質ストリップ、そのストリップに固定化された捕捉試薬とともにストリップに配置された標識試薬および以下にさらに詳しく説明するカラー背景を提供するストリップに存在する色素の表示を示している。
【図２】
本発明のもう一つの実施形態の断面図であり、多孔質ストリップおよびそのストリップ上に配置された標識試薬の表示、そのストリップに固定化された捕捉試薬および補色背景を提供する透明フィルムを示している。
【図３】
カラーバッキング上にニトロセルロース膜を用いた本発明のもう一つの実施形態である。
【符号の説明】
１０  ラテラルフロー免疫アッセイ装置
１２  多孔質ストリップ
１４  サンプル
２０  ストリップの領域
２６  色素
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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