(57)【要約】本発明は、新規種類のリガンド、そのようなリガンド及び金属イオンを含んで成る錯体、及びそれらの金属錯体及び高分子のアダクトに関する。リガンド−金属錯体を製造し、そして使用するための組成物及び方法がまた記載される。本発明はまた、診断映像化の増強のためへの高分子アダクトの使用にも関する。特に、本発明は、（エチレン）−（プロピレン）−トリアミン五酢酸（EPTPA）誘導体類、それらの製造方法、及びNMR診断又は放射線診断又は放射製療法のための医薬剤の製造のためへのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式V：
【化１】
2004534808.tif 000042
［式中、ｎは０又は１であり；R’は、ａ)生物適合性高分子又は生物分子とカップリングするために適切な官能基、又はｂ）非−配位置換基から成る群から独立して選択され、そしてR’の少なくとも１つは、生物適合性高分子又は生物分子とカップリングするために適切な官能基であり、それにより、プロピレン又はブチレン単位における２つのR’は５−又は６−員環の一部であり得；そしてX’は、OZ（ここで、Zは水素原子又は金属イオン同等物を表し）、又はNR2（ここで、個々のRは非−配位置換基である）から成る群から独立して選択され；但し、少なくとも２つのX’はOZである］
で表される化合物；又はその塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物。
【請求項２】
下記式I：
【化２】
2004534808.tif 000043
［式中、Zは、水素原子又は金属イオン同等物を表し、
Aは、下記式：
【化３】
2004534808.tif 000044
［式中、
【化４】
2004534808.tif 000045
により特徴づけられる位置α及びβは、いずれかの隣接する窒素原子に結合され、R1はニトロ基、又は生物分子との反応中に入ることができる基である］
で表される基を表し、
Bは、下記式：
【化５】
2004534808.tif 000046
［式中、ｎは０又は１であり、そしてR2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9は、お互い独立して、水素原子、直鎖又は枝分かれ鎖の飽和又は不飽和C1-6アルキル基（任意には、１又は２個のヒドロキシ基により置換され得、そして/又は１又は２個の酸素原子を含むことができる）、及びアラルキル基（そのアリール基は任意には、アルキル又はアルコキシ基により置換され得る）から選択され、それにより、基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の２つは、５−又は６−員環の一部であり得、但し、基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の少なくとも１つ及び多くとも４個は水素原子ではない］で表される基を表す］
で表される化合物、及びその塩である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記基Aが、(ZOOC-CH2)2−N基にα−位置を通して結合されている請求項２記載の化合物。
【請求項４】
前記R1が、ニトロ、アミノ、イソシアネート、イソチオシアネート、ヒドラジン、セミカルバジド、チオセミカルバジド、クロロアセトアミド、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、アシルアミノ、マレイミド、マレイミドアシルアミノ、活性化されたエステル、混合無水物、アジド、ヒドロキシド、塩化スルホニル及びカルボジイミドから成る選択される請求項２又は３記載の化合物。
【請求項５】
基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の１又は２個が、メチル、エチル及びベンジルから成る基から選択され、そしてそれらの基の他は水素原子である請求項２〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
前記基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9が、Bが対称であるよう選択される請求項２〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
前記Bが、-CH2-CH2-CH(CH2-CH3)-, -CH(CH2-CH3)-CH2-CH2-, -CH2-C(CH3)2-CH2-, -CH2-CH(CH3)-CH2-, -CH2-CH(CH2-フェニル)-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-、下記式：
【化６】
2004534808.tif 000047
で表される化合物から成る群から選択される請求項２〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
ｎ＝０である、請求項１〜７のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
基Zの少なくとも２個が原子番号21〜29, 42, 44及び58〜70の常磁性元素の金属イオン同等物を表す請求項１〜８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０】
基Zの少なくとも２個が原子番号26, 27, 29, 31, 32, 37〜39, 43, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82及び83の放射性元素の金属イオン同等物を表す請求項１〜８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
下記一般式II：
【化７】
2004534808.tif 000048
［式中、Z及びBは、請求項２において定義された通りであり、そしてA’は下記式：
【化８】
2004534808.tif 000049
［式中、
【化９】
2004534808.tif 000050
により特徴づけられる位置α及びβは、いずれかの隣接する窒素原子に結合され、そしてBioは、フェニレン環に、反応基の基R1’を通して結合される生物分子の基を表す］で表される基を表す］で表される接合体、及びその塩。
【請求項１２】
前記生物分子が、バイオポリマー、タンパク質、合成的に修飾されたバイオポリマー、炭水化物、抗体、DNA及びRNAフラグメント、β−アミノ酸、細胞中へのトランスファーのためのベクターアミン、生物発生アミン、医薬剤、腫瘍学的調製物、生物学的標的物に指図される合成ポリマー、ステロイド、プロスタグランジン、タキソール及びその誘導体、エンドセリン、アルカロイド、葉酸及びその誘導体、生活性脂質、脂肪、脂肪酸エステル、合成的に修飾されたモノ−、ジ−及びトリ−グルセリド、表面上に誘導されたリポソーム、天然の脂肪酸又はペルフルオロアルキル化合物から成るミセル、ポリヒドリン、テキサフリン、拡張されたポリフィリン、チトクローム、インヒビター、ノイラミダーゼ、神経ペプチド、免疫モジュレーター、エンドグリコシダーゼ、酵素カルモドリンキナーゼ、カゼイン−キナーゼII、グルタチオン−S−トランスフェラーゼ、ヘパリナーゼ、マトリックス−メタロプロテアーゼ、β−インスリン−受容体−キナーゼ、UDP−ガラクトース、４−エピメラーゼ、フルコシダーゼ、G−タンパク質、ガラクトシダーゼ、グリコシダーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ及びキシロシダーゼにより攻撃される基質、抗生物質、ビタミン及びビタミン類似体、ホルモン、DNA−インターカレーター、ヌクレオシド、ヌクレオチド、レクチン、ビタミンB12、ルイス−X及び関連物質、ソラレン、ジエントリエン抗生物質、カルサイクリン、VEGF、ソマトスタチン及びその誘導体、ビオチン誘導体、抗ホルモン、腫瘍−特異的タンパク質及び合成剤、デンドリマー及びカスケードポリマー、及びそれらの誘導体、身体の酸性又は塩基性領域に蓄積するポリマー、ミオグロビン、アポミオグロビン、神経伝達ポリペプチド、腫瘍壊死因子、炎症組織に蓄積するペプチド、血液−プール試薬、アニオン及びカチオン−トランスポータータンパク質、ポリエステル、ポリアミド及びポリリン酸から成る群から選択される請求項11記載の接合体。
【請求項１３】
基Zの少なくとも２個が原子番号21〜29, 42, 44及び58〜70の常磁性元素の金属イオン同等物を表す請求項11又は12記載の接合体。
【請求項１４】
基Zの少なくとも２個が原子番号26, 27, 29, 31, 32, 37〜39, 43, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82及び83の放射性元素の金属イオン同等物を表す請求項11又は12記載の接合体。
【請求項１５】
生物分子との接合体の製造のための請求項１〜10のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項９又は10記載の少なくとも１つの生理学的適合できる化合物、又は請求項13又は14記載の少なくとも１つの生理学的に適合できる接合体、及び任意には、生薬に通常使用される添加剤を含む医薬剤。
【請求項１７】
NMR診断のための剤の製造のための請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物、又は請求項11〜12のいずれか１項記載の接合体の使用。
【請求項１８】
放射線診断又は放射線治療のための剤の製造のための請求項１〜８又は10のいずれか１項記載の化合物、又は請求項11, 12又は14のいずれか１項記載の接合体の使用。
【請求項１９】
Zが水素、及び原子番号26, 27, 29, 31, 32, 37〜39, 43, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82及び83の放射性元素の化合物である、請求項１〜８のいずれか１項記載の化合物、又は請求項11又は12記載の接合体を含んで成る放射性医薬剤の製造のためのキット。
【請求項２０】
請求項２記載の化合物、又は請求項11記載の接合体の製造方法であって、
下記式III：
H2N−A−NH−B−NH2        III
［式中、A及びBは請求項２記載の通りである］
で表される化合物を、下記式IV：
Nu−CH2−COOZ’      IV
［式中、Nuは離核性基を表し、そしてZ’は、水素原子、金属イオン同等物、又はカルボキシルのための保護基である］
で表される化合物と反応せしめ、次に、このようにして得られた化合物を任意には、生物分子と反応せしめ、それにより、基R1は、それがニトロである場合、まず、生物分子との反応中に入ることができる基に転換されるべきであり、そしてその後、及び任意に存在する保護基の除去の後、及び当業界において知られている手段で、所望には、少なくとも１つの金属酸化合物又は金属塩と反応せしめ、そして次に、任意には、このようにして得られる錯体にまだ存在する酸性水素原子が、無機及び/又は有機塩基、アミノ酸又はアミノ酸アミドのカチオンにより完全に又は部分的に置換される方法。
【請求項２１】
下記式VI：
【化１０】
2004534808.tif 000051
［式中、Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8又はZ9の少なくとも１つは、生物適合性高分子とのカップリングのために適切な官能基であり、そして残るZ2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8又はZ9の個々は非−配位置換基であり；X1, X2, X3, X4及びX5は独立して、OH又はNR2（ここで、個々のRは非−配置置換基である）であり；但し、X1, X2, X3, X4及びX5の少なくとも２つがOHである］
で表される化合物、又はその塩基又は酸付加塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物である請求項１記載の化合物。
【請求項２２】
個々の非―配位置換基が独立して、水素である請求項21記載の化合物。
【請求項２３】
個々のRが独立して、水素である請求項21記載の化合物。
【請求項２４】
生物適合性高分子とカップリングするために適切な官能基が、イソチアシアネート−ベンジルである請求項21記載の化合物。
【請求項２５】
X1, X2, X3, X4及びX5の個々がOHである請求項21〜24のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２６】
下記式VII：
【化１１】
2004534808.tif 000052
［式中、Z''は、水素、又は生物適合性高分子とカップリングするために適切な官能基である］
で表される化合物、又はその塩基又は酸付加塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物である請求項１記載の化合物。
【請求項２７】
Z''が、水素、ニトロ及びイソチオシアネートから成る群から選択される請求項26記載の化合物。
【請求項２８】
下記式VIII：
【化１２】
2004534808.tif 000053
［式中、Z'''は、生物学的材料又はいずれかの生物適合性高分子とカップリングするために適切な官能基である］
で表される化合物、又はその塩基又は酸付加塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物である請求項１記載の化合物。
【請求項２９】
前記生物学的材料とカップリングするために適切な官能基が、イソチオシアネートである請求項２８記載の化合物。
【請求項３０】
Z'''が、いずれかの生物学的に利用できるか又は生物適合性材料に共有又は非共有結合できるか、又は自己凝集できる官能基により置換されるベンジル基である請求項28記載の方法。
【請求項３１】
１又は２個のカルボキシレート基が、アミド官能基（いずれかのアミド）に転換される請求項30記載の化合物。
【請求項３２】
前記塩基又は酸付加塩が、医薬的に許容できる塩である請求項21〜31のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３３】
請求項21〜32のいずれか１項記載の化合物と金属との間での錯体。
【請求項３４】
前記金属が、原子番号21〜29、42−44及び57−83を有する元素からなる群から選択される請求項33記載の錯体。
【請求項３５】
前記金属が、２〜９の配位番号を有する二価及び三価の陽性金属から成る群から選択される請求項33記載の錯体。
【請求項３６】
前記金属が、８又は９の配位番号を有する三価の陽性金属から成る群から選択される請求項35記載の錯体。
【請求項３７】
前記金属が、ランタン、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム及びルテチウムから成る群から選択される請求項36記載の錯体。
【請求項３８】
前記金属がガドリニウム（III）である請求項33記載の錯体。
【請求項３９】
Z''又はZ'''が、生物適合性高分子に結合される請求項33記載の錯体。
【請求項４０】
前記生物学的分子がタンパク質である請求項39記載の錯体。
【請求項４１】
対象の磁気共鳴映像化方法であって、請求項33記載の錯体及び非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又は他のビークルを投与し、そして前記対象の少なくとも一部の磁気共鳴像を生成することを含んで成る方法。
【請求項４２】
前記対象がヒト患者である請求項41記載の方法。
【請求項４３】
対象を映像化するための方法であって、（ａ）請求項21に記載されるVIのリガンド、及び原子番号21−29, 42−44及び57−83を有する金属から成る群から選択された元素の生理学的に適合できる錯体を含んで成るコントラスト媒体を投与し；そして（ｂ）前記患者の映像化を得る段階を含んで成る方法。
【請求項４４】
前記映像化が、磁気共鳴映像化である請求項43記載の方法。
【請求項４５】
前記元素が、ランタニドから成る群から選択される請求項44記載の方法。
【請求項４６】
前記元素が、ガドリニウムである請求項45記載の方法。
【請求項４７】
前記対象がヒトである請求項46記載の方法。
【請求項４８】
前記映像化がX−線である請求項43記載の方法。
【請求項４９】
前記元素がビスマスである請求項48記載の方法。
【請求項５０】
前記映像化が、超音波映像化である請求項43記載の方法。
【請求項５１】
前記映像化が、シンチグラフィ映像化である請求項43記載の方法。
【請求項５２】
生物適合性高分子がタンパク質であり、そして金属が原子番号26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 49, 62, 64, 70, 75, 77, 82及び83を有する元素から成る群から選択される請求項33記載の錯体を適用する、ヒト対象の放射性免疫療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規種類のリガンド、そのようなリガンド及び金属イオンを含んで成る錯体、及びそれらの金属錯体及び高分子のアダクトに関する。リガンド−金属錯体を製造し、そして使用するための組成物及び方法がまた記載される。本発明はまた、診断映像化の増強のためへの高分子アダクトの使用にも関する。特に、本発明は、特許請求項の範囲に特徴づけられる対象、すなわち（エチレン）−（プロピレン）−トリアミン五酢酸（EPTPA）誘導体類、それらの製造方法、及びNMR診断又は放射線診断又は放射製療法のための医薬剤の製造のためへのそれらの使用に関する。
【０００２】
X−線は、ヒト及び非ヒト動物組織、例えば患者の内部器官の映像を生成するために長く使用されて来た。典型的には、患者は、X−線源と放射線に対して敏感なフィルムとの間に配置される。器官が射線の通路を干渉する場合、フィルムはは低く露出され、そして得られる現像されたフィルムが器官の状態の表示である。最近、核磁気共鳴（NMR）が、磁気共鳴映像法（MRI）として医学的映像化に適用されて来た。MRIは、X−線への露出に関連する有害な効果を回避する。
【０００３】
そのような診断像の品質を改良するために、患者はしばしば、映像の獲得の前、像増強剤又はコントラスト剤を与えられる。例えば、X−線診断においては、内部器官、例えば腎臓、尿管、消化管及び心臓血管系の高められたコントラストは、患者に放射線不透過剤を投与することによって得られる。従来のプロトンMRI診断においては、内部器官及び組織の高められたコントラストが、周囲のプロトンの弛緩速度を早める、常磁性金属種を含む組成物を投与することによって得られる。超音波診断においては、改良されたコントラストは、血液又は他の組織の音響インピーダンスとは異なるそのインピーダンスを有する組成物を投与することによって得られる。
【０００４】
多くの興味あるコントラスト剤は、有機酸リガンドが金属原子又はカチオンに配位結合されているそれらの剤である。リガンド又は錯化剤の置換基の性質は、コントラスト剤の組織特異性に対して有意な影響力を有することができる。例えば、親水性錯体は、間質性流体において凝集する傾向があり、そして親油性錯体は細胞に結合する傾向がある。従って、親水性の差異が、化合物の異なった適用を導く。金属−リガンド錯体は、荷電され得るか又は中性であり、そしてその電荷は溶解性に影響を及ぼすよう変更され得る。
【０００５】
酸性リガンドの水素原子のすべてとは限らないが中心（金属）イオン（又は中心イオン）により置換される場合、無機及び/又は有機塩基又はアミノ酸のカチオンにより残る水素原子を置換することによって、錯体塩の溶解性を高めることが好都合である。例えば、ナトリウム、カリウム又はリチウムの水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩が、適切な無機カチオンである。有機塩基の適切なカチオンは、中でも、第一、第二又は第三アミン、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、N, N−ジメチルグルカミン又は特にN−メチルグルカミンのそれらを包含する。リシン、アルギニン又はオルニチンが、一般的には他の塩基性の天然において存在するそのようなアミノ酸のそれらのカチオンのように、アミノ酸の適切なカチオンである。錯体塩がいくつかの遊離酸基を含む場合、カウンターイオンとして無機及び有機カチオンの両者を含む中性の混合された塩を生成することがしばしば好都合である。
【０００６】
錯化剤はまた、試験される特定の器官又は器官の一部において濃縮することが知られている生物分子と、接合体としてカップリングされ得る。それらの生物分子は、例えばホルモン（例えば、インスリン）、プロスタグランジン、ステロイドホルモン、アミノ糖、ペプチド、タンパク質、脂質、等を包含する。アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、又は抗体（例えば、腫瘍結合された抗原又はタンパク質、例えばミオシン、等に対して特異的なモノクローナル抗体）との接合体が特に注目に値する。それらから形成される診断剤が、腫瘍及び心筋梗塞を診断するために使用され得る。リポドームとの接合体、又はリポソームにおけるコントラスト剤の塩の包含（例えば、単層又は多層ホスファチジルコリン−コレステロールビークル）が、肝臓映像化のために適切である。
【０００７】
X−線診断に関しては、コントラスト剤における中心イオンは、X−線の十分な吸収を促進するために高い原子番号を有する元素に由来する。57〜83の原子番号を有する元素から選択された中心イオンを含む、生理学的に十分に許容される錯体塩を含む診断媒体がこの目的のために適切である。それらは、例えばランタン（III）、及びランタニド基、金（III）、鉛（II）又は特にビスマス（III）の他の二価及び三価イオンを包含する。
【０００８】
常磁性中心イオンを有する化合物は、MRI映像化のために有用である。２種の重要なMRI映像化パラメーターは、回転−格子（T1）、及び回転−回転及び回転−反響（T2）緩和時間である。緩和現象は実質的に機械的であり、それにより、最初に付与される高周波エネルギーが周囲環境に散逸される。従って、緩和時間は、核の環境（例えば、粘度及び温度）により影響される。エネルギー損失又は緩和速度はまた、隣接する常磁性核により影響され得る。常磁性核を組み込む化合物は、近くのプロトンに関するT1及びT2値を実質的に変更することができる。
【０００９】
MRIコントラスト剤において有用である核は、１〜７個の不対電子を有する有機遊離基又は遷移又はランタニア金属を包含する。一般的に、常磁性種、例えば21〜29, 42〜44及び58〜70の原子番号を有する元素のイオンが効果的である。適切なイオンの例は、クロム（III）、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）、鉄（III）、コバルト（II）、ニッケル（II）、銅（II）、プラセオジミウム（III）、ネオジミウム（III）、サマリウム（III）及びイッテルビウム（III）を包含する。それらの非常に強い磁気モーメントのために、ガトリニウム（III）、テルビウム（III）、ジスプロシウム（III）、ホルミウム（III）及びエルビウム（III）が好ましい。ガドリウム（III）イオンがMRIコントラスト剤として特に有用である。
【００１０】
典型的には、常磁性イオンは、有機錯化剤との錯体の形で投与されて来た。コントラスト剤を形成するために金属を結合するいずれかのリガンドの必要な先行条件は、得られるコントラスト剤が金属の損失及び身体におけるその続く蓄積を妨げるために安定できることである。そのような錯体は、可溶性非毒性形で常磁性イオンを供給し、そして映像化工程に続いて、身体からのそれらの急速なクリアランスを促進する。
【００１１】
当業界において認識されるコントラスト剤の例は、ジエチレントリアミン五酢酸（“DTPA”）と結合するガドリニウム（III）である。常磁イオン、例えばガドリニウム（III）は、DTPA、エチレンジアミン−四酢酸（“EDTA”）及び四アザ−シクロドデカン−N, N’, N'', N'''−四酢酸（“DOTA”）と強い錯体を形成することが見出されている。コントラスト剤としてのそれらの使用の他に、ランタニド（III）ポリ−アミノカルボキシレートがまた、蛍光免疫アッセイにおいて発光プローブとして広く使用される。
【００１２】
球形状分子の緩和性は分子量と共にほぼ直線的に上昇し、そして三価ガドリニウムGd(III)−含有コントラスト剤の緩和は主に、それらの早い回転運動により制限されるので、大きな構造体におけるGdキレートの組み込みは、それらの回転運動を遅くし、そして緩和性質を高める。そのような構造体は、ポリマー（Desser, など., J. Magn. Reson. Imaging 1994, 4, 467）; デンドリマー（Tacke, など., J. Magn. Reson. Imaging, 1997, 7, 678）; タンパク質（Lauffer and brady, J. Magn. Reson. Imaging, 1985, 3, 11）及びミセル（Andre, など., Chem. Eur. J., 1999, 5, 2977）を包含する。
【００１３】
コントラスト剤を製造するためのいくつかのアプローチは、超分子化学（Aime, など., Chem. Eur. J., 1999, 5, 1253; Jacques, など., Goord. Chem. Rev., 1999, 185, 451）、及び自己−組織化（Andre, など., Chem. Eur. J., 1999, 5, 2977）を使用する。例えば、ポリ−β−シクロデキストリンは、親油性フェニル末端を含むガドリニウムポリ−アミノカルボキシレートキレートを結合するために使用されており（Aime, など., Chem. Eur. J., 1999, 5, 1253）、そして多金属カドリニウム−含有構造体は、八面体遷移金属を包含する第二認識を通して自己アセンブリーされる（Sacques, など., Coord. Chem. Rev., 1999, 185, 451）。
【００１４】
効果的なMRIコントラスト剤を開発するための１つの重要なアプローチは、可逆的超分子構造体へのモノマーの結合を包含することができる。これは、相補的サイズ、形状及び化学官能価に基づいての分子認識のために使用され得る短距離相互作用（すなわち、水素結合、芳香族π−付着及びファンデルワールス相互作用）を開発することによって達成される。超分子コントラスト剤の形成のために使用されるモノマーは、相互作用表面間での良好な分子間コントラストを確保するために十分に硬質であるべきであり、そしてまた、凝集に基づいてのモノマーの翻訳エントロピーの損失を克服すべきである。
【００１５】
コントラスト剤は、金属毒性対象をもたらすことができる、錯体からの遊離金属イオンのインビボ開放により妨げられ得る。常磁性金属錯体の毒性は、錯化リガンドの性質により影響され得る。常磁性金属錯体のためのリガンドの企画に包含される主要因子は、金属−リガンド錯体の熱力学的安定定数（金属に対しての全体的に保護されていないリガンドの親和性）；条件付け安定定数（pH依存性であり、そして生理学的pH下での安定性を考慮する場合、重要である）；他の内因性金属イオン（例えば、亜鉛、鉄、マグネシウム及びカルシウム）に対する常磁性金属のためのリガンドの選択性；及びインビボトランス金属化反応を、錯体のクリアランス速度よりも一層、遅くする構造特徴を包含する。
【００１６】
核磁気共鳴（NMR）は現在、身体血管及び組織（腫瘍を包含する）が身体水におけるプロトンの磁気性質の測定を通して可視化され得るインビボ映像化において開発される、集中的に使用される医学診断方法である。このためには、例えば身体プロトンのNMRパラメーター（例えば、緩和時間T1及びT2）に影響を与えることによって、得られる像におけるコントラスト増強を生成するか、又はそれらの像を単に読み取り可能にするコントラスト媒体が使用される。常磁性イオン、例えばガドリニウム含有錯体（例えば、Magnevist（商標）が、緩和時間の短縮に対する常磁性イオンの効果のために、主に使用される。
【００１７】
診断及び治療目的のためへの放射線医薬剤の使用はまた、生物学的及び医学的研究の分野において長期間知られている。特に、放射線医薬剤は、一定の構造体、例えば骨格、器官又は組織を可視化するために使用される。診断適用は、研究されるべき患者における構造体への特異的な適用の後、濃縮されるそのような放射性剤の使用を必要とする。次に、局部に蓄積するそれらの放射性剤は、適切な検出体、例えばシンチレーションカメラ又は他の適切な映像化工程により追跡されるか、プロットされるか、又はシンチグラフィー処理される。検出された放射性剤の分散及び相対的強度が、放射性剤が見出される構造体の部位を特徴づけ、そして構造体及び機能における異常性、病理学的変化、等の存在が可視化され得る。
【００１８】
類似する態様においては、放射線医薬剤は、一定の病理学的処理又は領域を照射するための治療剤として使用され得る。そのような処理は、一定の構造体、器官又は組織において蓄積する放射性治療剤の製造を必要とする。
【００１９】
常磁性イオン、例えばGd3+, Mn2+, Cr3+, Fe3+及びCu2+, 及び多くの金属放射性核種は、それらは高い毒性であるので、遊離形での溶液として投与され得ない。それらのイオンを、インビボ適用のために適切にするためには、それらは一般的に錯体化される。例えば、EP−A−0071564号においては、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）のガドリニウム（III）錯体のメグルミン塩が、NMR断層撮影法のためのコントラスト媒体として記載されている。この錯体を含む調製物は、名称Magnevist（商標）として最初のNMRコントラスト媒体として世界じゅうで許容されている。このコントラスト媒体は、静脈内投与の後、非常に分散され、そして糸球体分泌により腎臓から排泄される。損なわれていない細胞膜の通過は実質的に観察されない。Magnevist（商標）は、病理学的領域（例えば、炎症、腫瘍）の可視化のために特に適切である。
【００２０】
しかしながら既知のコントラスト媒体及び放射線治療剤は、すべての適用のためには満足して使用され得ない。従ってそれらの剤の多くは、身体の全細胞外空間中に分散される。インビボ診断及び治療におけるそれらの剤の効率を高めるために、身体の標的細胞又は所望する領域及び構造体に対するそれらの特異性及び選択性を高める試みが行なわれる。それらの性質の改良は、例えば“Drug−Targeting”原理によれば、生物分子への金属錯体のカップリングにより達成される。考慮され得る生物分子は、抗体類、それらのフラグメント、ホルモン類、成長因子類、及び受容体及び酵素の基質を包含する（DE19536780A1）。
【００２１】
最近、疾病組織において特異的に蓄積する診断剤及び治療剤の必要性が高まって来た。選択的に蓄積する物質への錯化剤のカップリングにおいては、錯化剤の錯化性質が低められ、その結果、錯体安定性の弱体化が生じることがしばしば観察されている。この観点においては、生理学的に適切な割合の毒性金属イオンがインビボで接合体から放射されるかどうかの問題が発生する。さらに、キレート化剤における接合体形成による生物分子の特異性の低下が生じる。
【００２２】
DTPA誘導体類、及び反応性金属同位体を有するそれらのキレートが、アメリカ特許第5,248,768号に開示される。それらの誘導体の標的特異性は、ペプチドへのカルボキシル基によるDTPAのカップリングにより達成される。この場合、金属イオンの錯化のためのこのカルボニル基は損なわれ、その結果、毒性金属イオンの容易な放出の危険性が存在する。
【００２３】
カルボキシメチル側鎖のメチル−炭素原子に結合される反応性側基を有するDTPA誘導体が、EP−A−O297307号に開示される。これは、錯体結合部位のいずれも、反応性側鎖により阻止されず、この助けにより、誘導体は、例えば生物分子にカップリングされ得る利点を有する。他方では、この位置での反応性側鎖は、錯化、及び従って錯化定数に対して所望しない立体的影響を発揮する。
【００２４】
例えばエチレン橋上に反応性ベンジル基を有し、そして第２エチレン橋がまた置換されている他のDTPA誘導体が、アメリカ特許第4,831,175号及び第5,124,471号に開示される。
キレート化剤（エチレン）−（プロピレン）−トリアミン五酢酸（EPTPA）は、木材パルプを漂白する場合、紙の製造において使用され得る、重金属イオン、例えば鉄及びマンガンを錯化するために、すでにDE2918842A1号に記載されており、ここでそれは、木材パルプを含む水性システムからのそのようなイオンの除去を促進する。
【００２５】
MRIコントラスト媒体としてのEPTPAのガドリニウム（III）錯体の使用は、Yun−Ming Wangなど., J. Chem. Soc., Dalton Trans., 1998, 4113-4118により記載されている。さらに、この文献は、ガドリニウム（III）−EPTPA錯体がガドリニウム（III）−DIPA錯体に匹敵する安定定数を有することを、驚くべきことには十分に、当業者に開示している。従って、これは、DTPAにおけるエチレン橋のために、個々の場合、２つの隣接する窒素原子が、ガドリニウムイオンを錯化する場合、立体的に理想の５−環を、後者と共に形成し、ところが中心ガドリニウムイオンを有する立体的に低い理想の６−環が、プロピレン橋が、プロピレン橋の導入によりEPTPAにおいて形成されるべきであるので、特に驚くべきことであった。
【００２６】
さらに、できるだけ高い標的特異性を有し、そしてほとんどの場合、毒性である金属イオンに対してできるだけ高いインビボ安定性を有する診断及び治療のための入手できる剤を製造することが所望される。
【００２７】
従って、本発明の目的は、上記の欠点を示さず、そして特に高いインビボ安定性、良好な適合性及び主に器官−特異的性質を有する、NMR診断及び放射性診断、及び放射線治療のための利用できる新規剤を製造することであった。一方では、試験されるべき器官における残留は、明白な診断のために必要である像の数を、少ない用量で得るために十分であるべきであるが、他方では、できるだけすばやく、そして高い程度で完全である、身体からの金属の排泄が確保されるべきである。NMRコントラスト媒体はまた、高いプロトン緩和性を示すことであり、そして従って、シグナル強度を上昇する場合、その用量の低下を可能にする。
【００２８】
本発明は、新規種類のリガンド、そのようなリガンド及び金属イオンを含んで成る錯体、及びそれらの金属錯体が高分子にカップリングされる（共有又は非共有）アダクトを提供する。診断的映像化の増強のためのリガンド−金属錯体及び高分子アダクトを製造し、そして使用するための医薬組成物及び方法がまた記載される。
それらの金属−リガンド錯体類及びそれらの高分子アダクトは、MRIコントラスト剤、X線における診断剤、超音波又はシンチグラフィー像分析、放射線療法剤及び発光プローブとして有用である。高分子アダクトは予想外に高い緩和性を有するので、より低い量の錯体が、通常使用される像増強剤に比較して、対象に投与される必要がある。
【００２９】
本発明の化合物は、それらのGd（III）錯体の最適化された水交換速度を提供するキレート化リガンドである。
例えば、四アザ−シクロドデカン−N, N’, N'', N'''−四酢酸（“DOTA”）は、磁気共鳴映像化の業界において通常使用されるコントラスト増強剤である。このリガンドは、カルボキシレートアームの少なくとも１つが、式IIIaにより示されるように、１つのメチレン（-CH2）単位により延長されるか、又はその主鎖が、式IIaにより示されるように、１つのメチレン（−CH2−）単位により広くされるよう変性される。
【００３０】
【化１】
2004534808.tif 000002
【００３１】
当業界において認識されるコントラスト剤のもう１つの例は、ガドリニウム（III）及びジエチレントリアミン−五酢酸（“DTPA”）である。カルボキシアームの少なくとも１つは、式IVa及びVaに示されるように、変性され得る。
【００３２】
【化２】
2004534808.tif 000003
ある態様においては、主鎖の少なくとも１つの部分が、カルボキシレートアームの代わりに、又はそのアームの他に変性され得る。例が、式Iaにより示される。
【００３３】
【化３】
2004534808.tif 000004
さらなる例が、EPTPA、すなわち式Ibにより示される。
【００３４】
【化４】
2004534808.tif 000005
【００３５】
上記化合物は、高分子との共有又は非共有結合を促進するために変性され得る。高分子は、いずれかの生物学的に適合できる分子、例えばタンパク質、炭水化物、脂質又はいずれかの合成の生物適合性材料であり得る。キレート結合基は、Z''として、本明細書において言及される。Z'''基の１つの例は、ベンジルイソチオシアネート基である。
いくつかの例においては、キレートリガンドは、例えば、良く知られている方法に従って、高分子にリガンドをカップリングするためのリンカーとして機能することができるイソチオシアネート基への転換により、リンカー基としての使用のために変性を得る、ニトロ基を含む分子から合成され得る。
【００３６】
例えば、リガンドEPTPA−bz−NO2（式１）は、図１に記載のようにして合成された。キレートは、良く知られている方法に従って、高分子にリガンドをカップリングするためのリンカーとして機能することができる基を含む。そのような基の１つの例は、イソチオシアネート基である。高分子は、生物学的分子、例えばタンパク質、炭水化物、脂質、又はいずれかの合成の生物適合性材料であり得る。
【００３７】
本発明はまた、対象の少なくとも一部の磁気共鳴像の生成を可能にするのに十分な量で、本明細書に記載されるリガンドの生理学的に適合する常磁性金属錯体、及び非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルを含むコントラスト媒体を、ヒト又は非ヒト動物対象に投与することによっての磁気共鳴映像化方法を提供する。
さらに、本発明によれば、本発明の生理学的に適合する重金属錯体及び非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルを含んで成る診断剤を、ヒト又は非ヒト動物対象に投与し、そして対象の少なくとも一部のX−線、超音波又はシンチグラフィー像を生成することを含んで成る診断映像化方法が提供される。
【００３８】
さらに、本発明によれば、本発明の生理学的に適合する放射性金属錯体及び非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルを含んで成る放射性剤を、対象に投与することを含んで成る、ヒト又は非ヒト動物対象に対して行われる放射線療法が提供される。
【００３９】
特にことわらない限り、本明細書において使用されるすべての技法および科学用語は、本発明が属する当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるそれらの方法及び材料に類似するか又は同等の方法及び材料が下記に記載される。本明細書に言及されるすべての出版物、特許出願、特許及び他の引例は、引用により本明細書に組込まれる。抵触の場合、定義を包含する本明細書が管理するであろう。さらに、材料、方法及び例は、例示的であって、本発明を限定するものではない。
本発明の他の特徴及び利点は、次の詳細な記載からの明らかになるであろう。
【００４０】
上記問題は、下記式V：
【化５】
2004534808.tif 000006
［式中、ｎは０又は１であり；R’は、ａ)生物適合性高分子又は生物分子とカップリングするために適切な官能基、又はｂ）非−配位置換基、例えば下記に定義されるようなR2-R3から成る群から独立して選択され、そしてR’の少なくとも１つは、生物適合性高分子又は生物分子とカップリングするために適切な官能基であり、それにより、プロピレン又はブチレン単位における２つのR’は５−又は６−員環の一部であり得；そしてX’は、OZ（ここで、Zは水素原子又は金属イオン同等物を表し）、又はNR2（ここで、個々のRは非−配位置換基である）から成る群から独立して選択され；但し、少なくとも２つのX’はOZである］
で表される化合物；又はその塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物により解決され得ることが、現在見出された。
【００４１】
本発明はまた、上記に示されるような式IIIa、IVa及びVa内に存在する新規種類のリガンドを提供し、ここで少なくとも１つのカルボキシレートリンカーアームが、少なくとも１つのメチレン単位によりアームの長さを長くするよう変性されている。
本発明はまた、上記に示されるような式Ia, Ib及びIIaのリガンドを包含し、ここで主鎖における少なくとも１つのエチレン単位が少なくとも１つのメチレン単位により延長されている。
【００４２】
本発明はまた、上記に定義されるような非配位置換基、例えばR’を包含するよう変性される、上記に示されるような式IIa及びIIIaのリガンドを包含する。
本発明はまた、高分子へのリガンドのカップリングのために適切な官能基を包含するよう変性される上記リガンドを包含する。好ましい高分子は、生物学的に適合できる高分子である。いくつかの場合、本発明の化合物は、下記式VIII：
【化６】
2004534808.tif 000007
［式中、Z'''は生物学的材料又はいずれかの生物適合性高分子とのカップリングのための、ベンジル基、ニトロベンジル基又は官能基（例えば、インチオシアネート基）である］
で表される。
【００４３】
特に、上記問題は、エチレン橋が反応性ベンジル基により置換され、そしてプロピレン橋又はブチレン橋が追加の置換基を有する、（エチレン）−（プロピレン/ブチレン）−トリアミン五酢酸誘導体及び生物分子から成る接合体により解決される。従って、本発明は、
【００４４】
下記式I：
【化７】
2004534808.tif 000008
［式中、Zは、水素原子又は金属イオン同等物を表し、
【００４５】
Aは、下記式：
【化８】
2004534808.tif 000009
【００４６】
［式中、
【化９】
2004534808.tif 000010
により特徴づけられる位置α及びβは、いずれかの隣接する窒素原子に結合され、R1はニトロ基、又は生物分子との反応中に入ることができる基である］で表される基を表し、
【００４７】
Bは、下記式：
【化１０】
2004534808.tif 000011
【００４８】
［式中、ｎは０又は１であり、そしてR2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9は、お互い独立して、水素原子、直鎖又は枝分かれ鎖の飽和又は不飽和C1-6アルキル基（任意には、１又は２個のヒドロキシ基により置換され得、そして/又は１又は２個の酸素原子を含むことができる）、及びアラルキル基（このアリール基は任意には、アルキル又はアルコキシ基により置換され得る）から選択され、それにより、基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の２つは、５−又は６−員環の一部であり得、但し、基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の少なくとも１つ及び多くとも４個は水素原子ではない］
で表される基を表す］で表される化合物、及びその塩、好ましくは無機又は有機塩基の塩に関する。
【００４９】
反応性ベンジル基のために、本発明の化合物は、生物分子との接合体の形成のために適切であり、その結果、器官―特異的性質は容易にそれらに付与され、そして後者は単純に変更され得る。置換されたプロピレン又はブチレン橋にもかかわらず、本発明の化合物との金属錯体は高いインビボ安定性を有する。さらに、本発明の化合物類及び生物分子とのそれらの接合体は、良好な適合性及び良好な水溶解性を有し、その結果、それらは医薬剤として、特にNMR診断及び放射性診断、及び放射性療法のために適切である。本発明の錯体の緩和性は驚くべきほど高く、その結果、錯体は、それらが常磁性イオンを含む場合、特にNMR診断のために適切である。
【００５０】
本発明の式Iの化合物においては、Aは、下記式：
【化１１】
2004534808.tif 000012
で表される基を表す。
【００５１】
この基は、隣接する窒素原子のいずれかに、
【化１２】
2004534808.tif 000013
【００５２】
により特徴づけられる位置α及びβにおいて結合され得、すなわちこの基のベンジル置換基は、基Aが結合される２つの窒素原子の１つに隣接することができる。しかしながら、基Aは好ましくは、ベンジル置換基がこの基に隣接するよう、(ZOOC-CH2)2−N基に、位置αを通して結合される。
【００５３】
基Aのベンジル置換基のフェニレン基は、ニトロ基、又は生物分子との反応中に入ることができる基により置換される。この置換基R1は好ましくは、メタ又はパラ位置において、特にパラ位置においてフェニレン基に結合される。式I（ここで、R1は窒素基である）で表される化合物は、式I（ここで、R1は、生物分子との反応中に入ることができる基である）で表される化合物の生成のための中間化合物として十分に適切である。
【００５４】
生物分子との反応中に入ることができる適切な基は、例えばアミノ（−NH2）、イソシアネート（−NCO）、イソチオシアネート（−NCS）、ヒドラジン（−NHNH2）、セミカルバジド（−NHCONHNH2）、チオセミカルバジド（−NHCSNHNH2）、クロロアセトアミド（−NHCOCH2Cl）、ブロモアセトアミド（−NHCOCH2Br）、ヨードアセトアミド（−NHCOCH2I）、アシルアミノ、例えばアセチルアミノ（−NHCOCH3）、マレイミド、マレイミドアシルアミノ、例えば３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−プロピオニルアミノ、活性化されたエステル、例えば下記式：
【００５５】
【化１３】
2004534808.tif 000014
【００５６】
で表される化合物、混合無水物、アジド、ヒドロキシド、塩化スルホニル及びカルボジイミドである。
【００５７】
式Iにおいては、Bは、下記式：
【化１４】
2004534808.tif 000015
で表される基を表す。
【００５８】
この後、ｎは０又は１のいずれかであり、それにより、ｎ＝０である化合物が好ましい。置換基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9は、お互い独立して、水素原子、直鎖又は枝分かれ鎖の飽和又は不飽和C1-6アルキル基（任意には、１又は２個のヒドロキシ基により置換され得、そして/又は１又は２個の酸素原子を含むことができる）、及びアラルキル基（このアリール基は任意には、アルキル又はアルコキシ基により置換され得る）から選択される。これに関しては、それらの基の少なくとも１つ及び多くとも４個は、水素原子であるべきではなく、その結果、本発明の式Iの化合物におけるプロピレン橋又はブチレン橋は、少なくとも１つの及び多くとも４個の置換基を担持する。
【００５９】
橋Bの置換基は、任意には、１又は２個のヒドロキシ基により置換され得るか、又は１又は２個の酸素原子を含むことができるC1-6アルキル基であり得る。好ましくは、前記C1-6アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル又はtert−ブチル基である。同時に又は他方では、橋Bの１又は複数の置換基はアラルキル基であり得、それによりアリールーC1-6アルキル基及び特にベンジルが好ましい。それらのアラルキル基のアリール基は、好ましくは、アルキル又はアルコキシ基により、パラ位置で置換され得る。好ましくは、このアルキル基はC1-6アルキル基、例えば特にメチル又はエチルであり、そしてこのアルコキシ基はC1-6アルコキシ基、例えば特にメトキシ又はエトキシである。
【００６０】
橋Bは好ましくは、１又は２個のメチル、エチル又はベンジル基により置換される。
R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9が選択され、その結果、Bは対称である、本発明のそれらの化合物がまた好ましい。
【００６１】
さらに又は他のものとして、基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9の２つは、５−又は６−員環の一部であり得る。そのような環の環員の数は、環形成基R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8及びR9が結合される炭素原子、及び任意には、中間的であることが見出されるプロピレン橋又はブチレン橋Bの炭素原子を包含する。環は飽和又は不飽和であり得；５−及び６−員の飽和環が好ましい。
【００６２】
好ましいプロピレン又はブチレン橋Bは、-CH2-CH2-CH(CH2-CH3)-, -CH(CH2-CH3)-CH2-CH2-, -CH2-C(CH3)2-CH2-, -CH2-CH(CH3)-CH2-, -CH2-CH(CH2-フェニル)-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-、下記式：
【００６３】
【化１５】
2004534808.tif 000016
で表される化合物である。
本発明の化合物は、少なくとも１つのキラル中心を含む。本明細書及び特許請求の範囲における異なった鏡像異性体間に相違が存在しない場合でも、上記化合物は、他に示されなければ、両鏡像異性体、及びいくつかの立体中心の存在下で、またすべての可能なジアステレオマー並びにそれらの混合物を常に包含する。
本発明の式Iの化合物は、生物分子との接合体の生成のために適切である。それらの接合体は、下記一般式II：
【００６４】
【化１６】
2004534808.tif 000017
【００６５】
［式中、Z及びBは、上記で定義された通りであり、そしてA’は下記式：
【化１７】
2004534808.tif 000018
【００６６】
［式中、
【化１８】
2004534808.tif 000019
【００６７】
により特徴づけられる位置α及びβは、いずれかの隣接する窒素原子に結合され、そしてBioは、フェニレン環に、反応基の基R1’を通して結合される生物分子の基を表す］で表される基を表す］で表される化合物、及びその塩、好ましくは無機又は有機塩基の塩を有する。基R1’は好ましくは、生物分子とのその反応後、上記に定義されるようなR1である。
【００６８】
“生物分子”とは、身体に天然において存在するか、又は類似する構造体により合成的に生成されたいずれかの分子として本明細書において定義される。さらに、後者の中で、身体に存在する生物学的分子、又は例えば接合体が身体の一定の所望するスポットで蓄積することができるよう、そこで発生する相互作用における構造体と共に存在することができるそれらの分子が定義される。“身体”とは、いずれかの植物又は動物身体として本明細書において定義され、それによれば、動物及び特にヒト身体が好ましい。
本発明の化合物と接合体を形成するためには、次の生物分子が特に適切である：
【００６９】
生物ポリマー、タンパク質、例えば生物学的機能、HAS, BSA, 等を有するタンパク質、生物における一定のスポット（例えば、受容体、細胞膜、管、等）で蓄積するタンパク質及びペプチド、プロテアーゼにより切断され得るペプチド、分解の合成予定点を有するペプチド（例えば、不安定エステル、アミド、等）、メタロプロテアーゼにより分解されるペプチド、光分解性リンカーンを有するペプチド、酸化剤（オキシダーゼ）により分解され得る基を有するペプチド、天然及び非天然のアミノ酸を有するペプチド、糖タンパク質（糖ペプチド）、シグナル−タンパク質及び抗ウィルスタンパク質、合成的に修飾された生物ポリマー、例えばリンカーにより誘導される生物ポリマー、修飾されたメタロプロテアーゼ及び誘導体化されたオキシダーゼ、等、炭水化物（単糖〜多糖）、例えば誘導体化された糖、生物において分解され得る糖、シクロデキストリン及びその誘導体、
【００７０】
アミノ糖、キトサン、ポリスルフェート及びアセチルノイラミン酸誘導体、抗体、例えばモノクローナル抗体、抗体フラグメント、ポリクローナル抗体、ミニ硼化物（miniborides）、一本鎖（複数のフラグメントにリンカーにより結合されるそれらのフラグメント）、赤血球細胞及び他の血液成分、癌マーカー（例えば、CAA）及び細胞−付着物質（ルイスX及び抗−ルイスX誘導体）、DNA及びRNAフラグメント、例えば誘導体化されたDNA及びRNA（例えば、SELEX工程により見出されたそれら）、合成RNA及びDNA（また、非天然の塩基を含む）、PNA（Hoechst）及びアンチセンス、β−アミン酸（Seebach）、細胞中へのトランスファーのためのベクターアミン、生物発生アミン、医薬剤、腫瘍学的調製物、生物学的標的物（例えば、受容体）に指図される合成ポリマー、ステロイド（天然及び修飾された）、プロスタグランジン、タキソール及びその誘導体、エンドセリン、
【００７１】
アルカロイド、葉酸及びその誘導体、生活性脂質、脂肪、脂肪酸エステル、合成的に修飾されたモノ−、ジ−及びトリ−グルセリド、表面上に誘導されたリポソーム、天然の脂肪酸又はペルフルオロアルキル化合物から成るミセル、ポリヒドリン、テキサフリン、拡張されたポリフィリン、チトクローム、インヒビター、ノイラミダーゼ、神経ペプチド、免疫モジュレーター、例えばFK506、CAPE及び神経毒素、エンドグリコシダーゼ、酵素カルモドリンキナーゼ、カゼイン−キナーゼII、グルタチオン−S−トランスフェラーゼ、ヘパリナーゼ、マトリックス−メタロプロテアーゼ、β−インスリン−受容体−キナーゼ、UDP−ガラクトース、４−エピメラーゼ、フルコシダーゼ、G−タンパク質、ガラクトシダーゼ、グリコシダーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ及びキシロシダーゼにより攻撃される基質、
【００７２】
抗生物質、ビタミン及びビタミン類似体、ホルモン、DNA−インターカレーター、ヌクレオシド、ヌクレオチド、レクチン、ビタミンB12、ルイス−X及び関連物質、ソラレン、ジエントリエン抗生物質、カルサイクリン、VEGF（血管内皮成長因子）、ソマトスタチン及びその誘導体、ビオチン誘導体、抗ホルモン、デンドリマー及びカスケードポリマー、及びそれらの誘導体、腫瘍特異的タンパク質及び合成剤、身体の酸性又は塩基性領域において蓄積するポリマー（pH−調節された分散）、ミオグロビン、アポミオグロビン、等、神経伝達ポリペプチド、腫瘍壊死因子、炎症組織に蓄積するペプチド、血液−プール試薬、アニオン及びカチオン−トランスポータータンパク質、ポリエステル（例えば乳酸）、ポリアミド及びポリリン酸。
【００７３】
上記生物分子のほとんどは、例えばMerck, Aldrich, Sigma, Calibochem 及びBachemから市販されている。
さらに、WO96/23526号及びWO01/08712号に開示されるすべての“血漿タンパク質結合基”又は“標的結合基”が、生物分子として使用され得、従って、それらの２種の明細書の内容物は、本明細書に引用により組み込まれる。
【００７４】
本発明の化合物はまた、細胞内のそれらの位置を、エピ蛍光顕微鏡により決定するために、従来技術における蛍光色素と反応されるすべての分子に対する接合のために適切である。薬剤の投与の後、主に、いずれかの薬剤と化合物は接合され、次に例えば、NMR技法により生物内の輸送が追跡され得る。本発明の化合物及び生物分子からの接合体が、その生物分子上に接合されている他の追加の分子を含むことがまた可能である。従って、本発明における用語“生物分子”とは、生物学的システムにおいて存在するすべての分子及び生物適合性であるすべての分子を包含する。
【００７５】
一般式Iの化合物、及び生物分子とのその接合体は、下記式III：
H2N−A−NH−B−NH2      III
［式中、A及びBは上記で定義された通りである］で表される化合物と、下記式IV：
Nu−CH2−COOZ’      IV
【００７６】
［式中、Nuは離核性基を表し、そしてZ’は水素原子、金属イオン同等物、好ましくはアルカリ又はアルカリ土類金属、例えば特に、ナトリウムもしくはカリウム、又はカルボニルのための保護基を表す］
で表される化合物との反応により得られる。次に、このようにして得られた化合物は、生物分子と反応せしめられ得、それにより、基R1は、それがニトロである場合、まず、生物分子との反応中に入ることができる基に転換されるべきである。この後、及び任意にはまだ存在する保護基の除去の後、及び当業界において知られている手段で、反応は、所望には、所望する金属錯体を得るために、少なくとも１つの金属酸化物又は金属塩により行なわれ得る。このようにして得られた錯体においては、まだ存在する酸水素原子は、所望には、無機及び/又は有機塩基、アミノ酸又はアミノ酸アミドのカチオンにより完全に又は一部置換され得る。
【００７７】
離核性基として、都合良く使用される基は、Cl, I, Br, -OTs, -OMs及び−O−トリフレートである。
反応は、水及び有機溶媒、例えばイソプロパノール、エタノール、メタノール、ブタノール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ホルムアミド又はジクロロメタンの混合物において行われる。水、イソプロパノール及びジクロロメタンから成る三元混合物が好ましい。
反応は、−10℃〜100℃、好ましくは０℃〜30℃の範囲の温度で行なわれる。
【００７８】
任意には、まだ存在する遊離カルボキシル基の中和は、例えばナトリウム、カリウム、リチウム、マグネシウム又はカルシウムの無機塩基（例えば、水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩）、及び/又は有機塩基、例えば第一、第二及び第三アミン、例えばエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、N−メチルグルカミン及びN,N−ジメチルグルカミン、並びに塩基性アミノ酸、例えばリシン、アルギニン及びオルニチン又は元来中性又は酸性のアミノ酸のアミドの助けにより行なわれる。
【００７９】
中性錯体化合物の生成のためには、十分な所望する塩基が、中性点に達することを確かめるために、水溶液又は水性懸濁液中、酸錯体塩に添加され得る。次に、得られる液体が、真空下で乾燥状態に蒸発され得る。水混和性溶媒、例えば低級アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノール及び他のもの）、低分子量ケトン（アセトン及び他のもの）、極性エーテル（テトラヒドロフラン、ジオキサン、１，２−ジメチキシエタン及び他のもの）を添加することによって、形成された中性塩を沈殿せしめ、そして容易に単離され、そして容易に精製される結晶物を得ることが、しばしば好都合である。反応混合物の錯化の間で、できるだけ初期に所望する塩基を添加し、そして従って、処理段階を減じることが特に好都合であることがわかっている。
【００８０】
R1が−NO2であり、BがR−CH2−CH（−CH2−CH3）−であり、そしてZが水素を意味する、本発明の式Iの化合物の生成は、下記の好ましい化合物の例において説明される。下記式：
【００８１】
【化１９】
2004534808.tif 000020
で表される化合物の生成は、トリフルオロ酢酸による酸化水分解により、下記式１：
【００８２】
【化２０】
2004534808.tif 000021
【００８３】
で表されるｔ−ブチルエステル１から行なわれ得る。前記式１の化合物は、ブロモ酢酸−ｔ−ブチルエステルによる、下記式２：
【化２１】
2004534808.tif 000022
【００８４】
で表されるアミノのアルキル化により得られる。前記エステルは、Merck, Fluka又はAldrichから得られる。
【００８５】
アミン２は、下記式３：
【化２２】
2004534808.tif 000023
【００８６】
で表される所望する化合物から、トリフルオロ酢酸による加水分解により得られる。
化合物３は、１，３−ジアミノペンタン５によるメシレート４のアルキル化、及びアミノ混合物のクロマトグラフィー分離により入手できる：
【００８７】
【化２３】
2004534808.tif 000024
【００８８】
アミン５は、市販されている（Aldrich, fluka）。
メシレート４は、トリエチルアミンの存在下で塩化メタンスルホニルとアルコール６との反応により得られる：
【００８９】
【化２４】
2004534808.tif 000025
【００９０】
アルコール６は、テトラヒドロフラン/メタノール（８：１）における硼水素化ナトリウムによるエステル７の還元により得られる：
【００９１】
【化２５】
2004534808.tif 000026
【００９２】
４−ニトロフェニルアラニンメチルエステル７は、ジメチルホルムアミド中、炭酸水素ナトリウムの存在下で、ヨウ化メチルによるエステル化により、対応する酸８から生成さえ得る：
【００９３】
【化２６】
2004534808.tif 000027
【００９４】
酸８は、市販されている（Aldrich, Fluka）。
他の方法においては、成分３がフェニルアラニン８及び１−エチル−１，３−プロパンジアミン５からのアミド形成及びアミド結合の続く還元により得られる。クロマトグラフィー分離は、アミン成分が３−N−BOC誘導体として使用される場合、回避され得る。
合成のために必要とされるα、ω−ジアミンは、例えば、下記に示される合成方法を通して入手できる：
【００９５】
C−３ジアミン、C−２での置換基：
【化２７】
2004534808.tif 000028
【００９６】
C−３ジアミン、C-1での置換基：
【化２８】
2004534808.tif 000029
【００９７】
C−４ジアミン、C−４での置換基：
【化２９】
2004534808.tif 000030
【００９８】
一般式I（R1＝NO2）の化合物の一般式（R1がニトロに等しくない）の化合物への転換は、既知方法に従って行なわれる。ニトロ基のアミノ基への水素化は、例えば炭素上10％パラジウムにより可能である（EP475617号；EP173629号及びアメリカ特許第5,087,898号を参照のこと）。
【００９９】
アミノ基は、ニトロフェニル又はヒドロキシスクシンイミドエステルとの反応により、その対応するアミドに転換され得る。しかしながら、それはまた、チオウレアにアミノ基により直接的にカップリングする、イソチオシアネートにおけるチオホスゲンとの反応により転換され得る。イソチアネートはまた、チオセミカルバジドを形成するためにヒドラジンと反応することができ、次にこれは、チオセミカルバジドを形成するために、抗体の酸化された糖分子と特異的に反応せしめられる。
【０１００】
同様に、アミンは、ホスゲンと反応せしめられ、イソシアネートが形成され、そしてその後者は、ヒドラジンと反応せしめられ、セミカルバゾンが形成される。アニリノ基がまた、アシル化され得る。４−マレイミド酪酸（Fluka）の活性化されたエステルとの反応が行なわれる場合、−SH基に結合する特定の試薬が得られる。ハロ活性化されたエステルとアニリンとの反応により得られるハロアセトアミドはまた、−SH基に結合する。
アミノ基自体はまた、パートナー分子が還元性アミノ化の条件を許容する場合、酸化された糖のカルボニル基のための結合部位として使用され得る。
【０１０１】
NMR診断剤の生成のための錯体の生成は、EP71564号、EP130934号及びDE−OS3401052号に開示される手段により行なわれ得る。このためには、水及び/又は低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール又はイソプロパノール）中、所望する元素の金属酸化物又は金属塩（例えば、塩化物、硝酸塩、酢酸塩、炭酸塩又は硫酸塩）が、溶解されるか又は懸濁され、そして当量の本発明の錯化剤の溶液又は懸濁液と反応せしめられる。
錯化剤が放射線診断又は放射線治療剤の生成のために使用される場合、錯化剤からの錯体の生成は、“Radiotracers for Medical Applications”、Volume 1, CRC Press, Boca Raton, Floridaに記載される方法に従って行なわれ得る。
【０１０２】
錯体が特に、放射線医薬剤として使用される場合、その使用の直前、錯体を生成することが所望される。従って、本発明はまた、式Iの化合物及び式II（Zが水素である）の接合体、及び所望する金属の化合物を包含する放射線医薬剤の生成のためのキットを含んで成る。
本発明の対象はまた、一般式Iの少なくとも１つの生理学的に適合できる化合物、又は一般式IIの少なくとも１つの生理学的に適合できる接合体、及び任意には、生薬に通常使用される添加剤を含む医薬剤である。
【０１０３】
本発明の医薬剤の生成は、当業界において知られている手段で行なわれ、ここで錯体化合物、及び任意には、生薬に通常使用される添加剤が水性媒体に懸濁されるか又は溶解され、そして次に、その懸濁液又は溶液が任意には、殺菌される。適切な添加剤は、例えば錯化剤又は弱い錯体（例えば、ジエチレントリアミン五酢酸又は本発明の金属錯体に対応するCa錯体）、又は必要なら電解質、例えば塩化ナトリウム、又は必要なら抗酸化剤、例えばアスコルビン酸の添加を伴なっての、生理学的に無害な緩衝液（例えば、トロモエタミン）である。
【０１０４】
水又は生理学的塩溶液中、本発明の剤の懸濁液又は溶液が腸内投与又は他の目的のために所望される場合、それらは製薬に通常使用される１又は複数の添加剤（例えば、メチルセルロース、ラクトース、マンニトール）、及び/又は界面活性剤（例えば、レシチン、Tween（商標）, Myrj（商標））、及び/又は味覚矯正のための風味物質（例えば、エーテル性油）と共に混合される。
【０１０５】
原則として、錯体塩の単離を伴なわないでさえ、本発明の医薬剤を生成することがまた可能である。いずれの場合においても、本発明の塩及び塩溶液が毒性効果を有する錯化されていない金属イオンを実質的に有さないよう、キレート化の実施に特別な注意が払われるべきである。
【０１０６】
これは、例えば生成工程の間の調節滴定により、カラーインジケーター、例えばキシレノールオレンジの助を伴なって確保され得る。従って、本発明はまた、錯体化合物及びその塩の生成方法にも関する。単離された錯体塩の精製は、最後の安全性の目安である。
本発明の医薬剤は好ましくは、1fモル〜1.3モル/lの錯体塩を含み、そして一般的には、0.0001〜5mモル/kgの量で投与される。それらは、腸内及び非経口投与のために意図される。本発明の錯体化合物は、
【０１０７】
1．原子番号21−29, 42, 44及び58−70を有する元素の常磁性イオンを有するそれらの錯体の形でのNMR診断のために使用され、ここで適切なイオンは、例えばクロム（III）、鉄（II）、コバルト（II）、ニッケル（II）、銅（II）、プラセオジミウム（III）、ネオジミウム（III）、サマリウム（III）及びイッテルビウム（III）イオンであり；それらの強い磁気モーメントのために、ガドリニウム（III）、テルビウム（III）、ジスプロシウム（III）、ホルミウム（III）、エルビウム（III）、マンガン（II）及び鉄（III）イオンが、NMR診断のために特に好ましく、
【０１０８】
２．原子番号26, 27, 29, 31, 32, 37〜39, 43, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82及び83を有する元素の放射性同位体を有するそれらの錯体の形での放射線診断及び放射線治療のために使用される。
【０１０９】
本発明の剤は、核回転段層撮影法のためのコントラスト媒体としての適合性のための多くの異なった必要条件を満たす。経口又は非経口投与の後、それらはシグナル強度を高めることによって核回転断層撮影器の助けにより得られる像の情報価値を増強するために非常に適切である。それらはまた、可能な最少量の外来性物質を負荷する必要がある高い有効性、及び研究の非−侵襲性質を維持する必要がある良好な適合性を示す。
【０１１０】
本発明の剤の良好な水溶解性及び低い重量オスモル濃度は、適切な限界内での循環システムの体積負担を維持し、そして体液による希釈を補足するために高く濃縮された溶液の生成を可能にし、すなわちNMR診断剤は、NMR分光学よりも100〜1000倍、より水溶性である。さらに、本発明の剤は、高いインビトロ安定性を有するだけでなく、また驚くべきことには、高いインビボ安定性を有し、その結果、本来毒性であり、そして錯体において共有結合されないイオンの開放又は交換が、新規コントラスト媒体が再び完全に排泄される時間以内で非常にゆっくりと起こる。
【０１１１】
一般的に、NMR診断剤としての使用のための本発明の剤は、0.0001〜5mモル/kg、好ましくは0.005〜0.5mモル/kgの量で投与される。使用の詳細は、例えばH. J. Weinmannなど., Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984) に論じられる。
低用量（kg体重当たり1mg以下）の器官特異的NMR診断剤が、例えば腫瘍及び心筋梗塞を検出するために使用され得る。特に、低用量の本発明の錯体が、放射線療法及び放射線診断への使用のために適切である。
本発明の錯体化合物はまた、インビボNMR分光学のための感受性試薬及びシフト試薬として都合良く使用され得る。
【０１１２】
そこに含まれる錯体化合物のそれらの好都合な放射性性質及び良好な安定性のために、本発明の剤はまた、放射線診断剤及び放射線治療剤としても適切である。それらの使用及び用量の詳細は、例えば“Radiotracers for Medical Applications”、CRC Press, Boca Raton, Florida, 1983, 及びEur. J. Nucl. Med. 17 (1990)、346−364及びChem. Rev. 93 (1993) 1137−1156に記載される。
【０１１３】
放射性同位体によるもう1つの映像化方法は、陽電子−放射−断層撮影法であり、ここでは、陽電子−放射同位体、例えば43Sc, 44Sc, 52Fe, 55Co, 38Ga, 64Cu, 86Y及び94mTcを用いる（Heiss，W. D., Phelps, M. E. Positron Emission Tomography of Brain, Springer Veday Berlin, Heidelberg, New York 1983）。
本発明の化合物はまた、血液−脳バリアのない領域における悪性及び良性腫瘍を区別するためにも適切であり、驚くべきことには十分である。
それらは、それらが身体から完全に排除され、そして従って、十分に適合できることにおいて区別される。
【０１１４】
本発明の物質は悪性腫瘍において蓄積するので（健康な組織においては拡散が存在しないが、しかし腫瘍血管の透過性は高い）、それらはまた、悪性腫瘍の放射線治療を支持することができる。これは、使用される同位体の量及び型によってのみ、その対応する診断とは異なる。この場合の目的は、できるだけ広範囲の作用を伴なって、高エネルギーの短い波長の放射線による腫瘍細胞の破壊である。このためには、錯体に含まれる金属（例えば、ガドリニウム）と電離線（例えば、X線）又は中性子線との相互作用が、使用される。金属錯体が見出される部位（例えば、腫瘍における）での局部放射線量が、それらの効果により有意に高められ得る。
【０１１５】
悪性組織において同じ放射線量を生成するためには、健康組織に対する放射線暴露は、そのような金属錯体を用いる場合、相当に減じられ得、そして従って、耐えがたい負担となる副作用が患者から回避され得る。従って、本発明の金属錯体接合体はまた、悪性腫瘍の放射線治療において放射線感受性物質として適切である（Mossbauer効果の使用又は中性子捕獲治療において）。適切なβ放射イオンは、例えば46Sc, 47Sc, 48Sc, 72Ga, 73Ga, 90Y, 67Cu, 109Pd, 111Ag, 149Pm, 163Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re及び188Rcであり、それにより、90Y, 177Lu, 72Go, 163Sm及び67Cuが好ましい。α−放射性イオンを有する適切に短い半減期は、211At, 212Bi, 213Bi及び214Biであり、それにより、212Biが好ましい。適切な光子−及び電子−放射性イオンは、157Gaから中性子捕獲により得られる158Gdである。
【０１１６】
本発明の剤がR. L. Millsなど. (Nature Vol. 336, (1988), p. 787) により提案されている放射線療法の変法への使用のために意図される場合、中心イオンは、MoBbauer同位体、例えば57Fe又は161Euから誘導されるべきである。
本発明の治療剤のインビボ投与においては、後者は、適切なビークル、例えば血清又は生理学的に共通する塩溶液と共に、及びもう１つのタンパク質、例えばヒト血清アルブミンと共に投与され得る。この場合、用量は、細胞障害の型、使用される金属イオン及び映像化方法の型に依存する。
【０１１７】
本発明の治療は、非経口に、好ましくはi. v. 投与される。
放射線療法剤の適用の詳細は、例えばR. W. Kozakなど., TIBTEC, October 1988, 262 (上記Bioconjugate Chem. 12 (2001) 7-34を参照のこと)に論じられている。
要約すると、診断及び治療医学において新規可能性を開発する、新規錯化剤、金属錯体及び金属錯体塩を合成することが可能である。
本発明は、下記に示されるような、式VI：
【０１１８】
【化３０】
2004534808.tif 000031
【０１１９】
［式中、Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8又はZ9の少なくとも１つは、生物適合性高分子とのカップリングのために適切な官能基であり、そして残るZ2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8又はZ9の個々は非−配位置換基であり；X1, X2, X3, X4及びX5は独立して、OH又はNR2（ここで、個々のRは非−配置置換基である）であり；但し、X1, X2, X3, X4及びX5の少なくとも２つがOHである］
で表される化合物、又はその塩基又は酸付加塩、水和物、エステル、溶媒化合物、プロドラッグ、代謝物、立体異性体又は混合物内に分類される新規種類のリガンドを提供する。
【０１２０】
非−配位置換基は、金属に配位しないそれらの基、例えばアルキル基及び水素原子を包含する。
いくつかの態様においては、本発明は、下記式IX又はVII：
【０１２１】
【化３１】
2004534808.tif 000032
で表される化合物を包含する。
【０１２２】
好ましくは、塩基又は酸付加塩は、医薬的に許容できる塩である。用語“医薬的に許容できる塩”内に包含される塩は、本明細書に記載される化合物の“医薬的に許容できる酸付加塩”を生成するために、酸錯体と有機及び/又は無機塩基又はアミノ酸の生理学的に生物適合できるカチオンとの反応により一般的に調製される本発明の化合物の非毒性塩である。それらの化合物は、遊離錯体の生物学的有効性及び性質を保持する。例えば、リチウムイオン、カリウムイオン及び特にナトリウムが適切な無機カチオンである。有機塩基の適切なカチオンは中でも、第一、第二又は第三アミン、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、N, N−ジメチルグルカミン又は特にN−メチルグルカミンのそれらを包含する。リシン、アルギニン又はオルニチンは、アミン酸の適切なカチオンであり、同時に一般的に、塩基性の天然に存在するそのような酸のカチオンも適切である。
【０１２３】
MRIコントラスト剤としての本発明の錯体への使用のために適切である金属原子又はカチオンMは、原始番号21-29、42-44及び57-71を有する常磁性金属である。MRIコントラスト剤として使用するための錯体は、好ましい金属がEu, Gd, Dy, Hu, Cr, Mn又はFe, より好ましくはMn（II）又はFe（III）、及び最も好ましくはGd（III）であるそれらの錯体である。
【０１２４】
X−線又は超音波コントラスト剤としての本発明の錯体への使用のために適切である金属原子又はカチオンは、原子番号20-32, 42-44, 49及び57-83を有する重金属である。X−線又は超音波コントラスト剤として使用するための錯体は、好ましい金属が原子番号42-44, 49及び57-83を有する非放射性金属、最も好ましくはGd, Dy又はYbであるそれらの錯体である。
【０１２５】
シンチグラフィー及び放射線治療への使用のために適切である本発明の錯体の金属原子又はカチオンは、いずれかの従来の錯化できる放射性金属同位体の放射性金属、好ましくは原子番号20-32, 42-44, 49及び57-83を有するそれらの金属である。シンチログラフィーにおいては、最も好ましい金属は、99mTc又は111Inである。放射線療法においては、最も好ましい金属は、153Sm, 67Cu又は90Yである。
【０１２６】
発光エンハンサーとして使用するために適切である金属原子又はカチオンは、例えばEu及びTbを包含する。
希釈水溶液におけるLn3+イオン（Ln＝ランタニド、例えばランタナム（La）、ユーロピウム（Eu）、ルテチウム（Lu）、ガドリニウム（Gd）及びテルビウム（Tb））とH5Lリガンドとの相互作用は、１：１の化学量論の金属：リガンドを有する錯体を創造する。本発明の１：１のランタニド錯体は、生理学的条件下で高い熱力学的安定性を示す。
【０１２７】
本発明の化合物、例えば式VII、式IX及び式VIのそれらの化合物は、磁気共鳴映像化方法により生成される像を増強するために使用され得る。１つの態様においては、本発明の生理学的に適合できる錯体及び非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルから製造されるコントラスト媒体がヒト又は非ヒト動物（対象）に投与され；そして磁気共鳴像は、対象の少なくとも一部から生成される。前記化合物は、同様に、対象のX−線、超音波又はシンチグラフィー映像化により生成される像を増強するために使用され得る。
【０１２８】
本発明の診断分析方法は、所望するコントラスト（又はシフト）をもたらすのに十分な量、ヒト又は非ヒト動物対象又は宿主に本発明の化合物を投与し、そして次に、診断分析に前記宿主をゆだねることを包含する。好ましい診断分析は、MRI分析である。さらに、本発明の錯体は、X−線像分析、超音波分析又はシンチグラフィー分析による診断分析において有用である。主にコントラスト増強剤として記載されているが、本発明の錯体は、MRIシフト試薬として作用することができ、そしてそのような使用は本明細書における方法により企画される。
【０１２９】
コントラスト増強剤として使用される本発明の錯体は、所望するコントラストをもたすのに十分な量で投与される。MRIに関しては、この量は、錯体のMRIシグナルをもたらす量、すなわちMRIシグナルの回転−格子（T1）又は回転−回転又は回転−反響（T2）緩和時間を変更するであろう前記錯体のいずれかの量である。シフト試薬に関しては、十分な量の前記錯体が、他の類似する核に関する共鳴核のスペクトル位置を選択的にシフトするであろう。
【０１３０】
この変更は、前記緩和時間を低めることによって、又は錯体が投与されている宿主の領域又は宿主自体に関してそれらの時間を高めることによって、分析下の対象から受けるシグナルを増強するために幾分かもたらされる。もう１つの態様においては、MRIシグナルをもたらす錯体の量は、宿主におけるMRIシグナルの緩和時間を増強する他に、定義のより鋭いライン又はより高いコントラストが錯体を投与されている宿主及びそれを投与されていない宿主のそれらの部分間に得られるよう十分にそのような緩和時間を変えるであろう量である。
【０１３１】
MRI診断分析のための適切なパラメーターを選択するための理論的考慮の詳細な論議は、引用により本明細書に組込まれるアメリカ特許第4,749,560号に提供される。本発明の錯体を用いる、X−線像分析、超音波診断、シンチグラフィー像分析及び放射線療法はすべて、当業者に知られている十分に確立された技法に従って行なわれる。
本発明の錯体は、コントラスト増強量で、医薬組成物として宿主に投与され得る。医薬組成物は、非毒性の医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルと共に、コントラスト増強量の本発明のコントラスト剤を含む。組成物は、良く知られている経路、例えば経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮膚内、皮下、非経口、腸内及び同様の手段で投与され得る。投与の経路に依存して、医薬組成物は、保護膜を必要とする。
【０１３２】
注射使用のために適切な医薬形は、油又は水性媒体中、無菌溶液、懸濁液、エマルジョンシロップ又は分散液、及び無菌注射用溶液又は分散液の即座の調製のための粉末を包含する。すべての場合、究極的な溶液形は無菌で且つ流体であるべきである。典型的なキャリヤーは、例えば水、緩衝された水溶液（すなわち、生物適合性緩衝液）、エタノール、ポリオール（グルセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール及び同様のもの）、それらの適切な混合物、界面活性剤又は植物油を含む溶媒又は分散媒体を包含する。菌類は、当業界において認識される技法、例えば抗菌又は抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、メチロサール及び同様のもの（但し、それだけには限定されない）により達成され得る。さらに、等張剤、例えば糖又は塩化ナトリウムが対象組成物に組込まれ得る。
【０１３３】
対象のコントラスト剤を含む無菌注射用溶液の生成は、上記に列挙された種々の成分と共に、適切な溶媒中、必要とされる量のそれらの剤を導入し、必要なら、続いて殺菌し、好ましくはフィルター殺菌することによって達成される。無菌粉末を得るためには、上記溶液が必要により、真空乾燥されるか又は凍結乾燥される。
【０１３４】
経口投与のための固体投与形は、カプセル、錠剤、ピル、粉末、顆粒及びゲルを包含する。そのような固体投与形においては、活性化合物は、少なくとも１つの不活性希釈剤、例えばスクロース、ラクトース又はスターチと共に混合され得る。そのような投与形はまた、通常の実施におけるように、不活性希釈剤、例えば滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムを含んで成る。カプセル、錠剤及びピルの場合、投与形はまた、緩衝剤を含むことができる。錠剤及びピルはさらに、腸用被膜により調製され得る。経口投与のための液体投与形は、当業者において通常使用される不活性希釈材、例えば水を含む医薬的に許容できるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルを含むことができる。そのような組成物はまた、アジュバント、例えば湿潤剤、乳化及び沈殿防止剤、甘味剤、風味剤及び香料を含むことができる。
【０１３５】
従って、本発明のコントラスト剤は、コントラスト増強をもたらす用量での医薬的に許容できる適切なキャリヤー、アジュバント又はビークルと共に、医薬的有効量で便利且つ効果的な投与のために配合される。それらの量は、好ましくは１L当たり約１μモル〜１モルのコントラスト剤であり、約0.0001〜5mモル/kg体重の用量で投与される。好ましい組成物は、MR１診断に関しては約0.001〜5mモル/kg、好ましくは約0.005〜0.5mモル/kg；X−線診断に関しては約0.1〜5mモル/kg；及び超音波診断に関しては約0.1〜5mモル/kgの範囲で有効用量のコントラスト剤を提供する。シンチグラフィー診断に関しては、コントラスト剤の用量は、一般的に、MRI診断に関するよりも低くあるべきである。放射線療法に関しては、当業者に知られている従来の用量が使用され得る。
【０１３６】
本明細書において使用される場合、医薬的に許容できるキャリヤー、アジュバント又はビークルは、いずれかの及びすべての溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌及び抗真菌剤、等張剤及び同様のものを包含する。そのような媒体及び剤の使用は、当業界において良く知られている。
【０１３７】
いくつかの態様においては、式VIIのリガンドは、金属−リガンド錯体の形成の前、生物学的分子にカップリングされる。他の態様においては、式VIIのリガンドは、金属−リガンド錯体の形成が達成された後、生物学的分子にカップリングされる。有用な生物学的分子は、試験される特定の器官又は器官の一部において濃縮することが知られているそれらの分子である。それらの生物分子は、例えばホルモン（例えば、インスリン）、プロスタグランジン、ステロイドホルモン、アミノ糖、ペプチド、タンパク質、脂質、等を包含する。
【０１３８】
アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）又は抗体（例えば、腫瘍結合抗原又はタンパク質、例えばミオシン、等に対して特異的なモノクローナル抗体）との接合体が特に注目に値する。それから形成される診断剤は例えば、腫瘍及び梗塞診断への使用のために適切である。リボソームとの接合体、又はリポソーム（例えば、単層又は多層ホスファチジルコリン−コレステロール小胞）へのコントラスト剤の塩の封入が、肝臓映像化のために適切である。それらの錯体の使用は、対象の組織−又は器官−特異的診断分析を可能にする。例えば、コントラスト増強剤は、本発明の錯体が天然において親油性である場合、心筋組織において、器官及び組織特異性、例えば生物示差分布を示すことができる。
【０１３９】
本明細書に記載される新システムの利点は、種々の分野の医学、例えば脈管学及びインビボ温度マッピングへの適用を包含する。さらに、溶液における質量、形状及び超微粒子の数を変えることによる球状粒子の凝集の調節は、超分子凝集体の性質、例えばそれらの緩和性を可逆的に調節する能力のさらなる改良性を導くことができる。Lin, など., Nature, 1989, 339, 360を参照のこと。従って、本発明の分子は、MRIのためのコントラスト剤として及び医薬的マッピング適用のための発光染色として有用である。
【０１４０】
本発明の１又は複数の態様の詳細は、上記に示されて来た。本明細書に記載される方法及び材料に類似するか又は同様のいずれかの方法及び材料は本発明の実施又は試験に使用され得るが、好ましい方法及び材料が現在記載されている。本発明の他の特徴、目的及び利点は、前記の記載及び特許請求の範囲から明らかであろう。本明細書及び特許請求の範囲においては、単数形は、特にことわらない限り、複数対象を包含する。特にことわらない限り、本明細書に使用されるすべての技術的及び科学的用語は、当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に引用されるすべての特許及び出版物は、引用により本明細書に組込まれる。
【実施例】
【０１４１】
次の例は、本発明の好ましい態様をより十分に例示するためのものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
例１．
ａ）２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル：C15H20N2O6 (M＝324.34)
600ｍｌのジメチルホルムアミド中、50ｇ（161.0mモル）のBoc−NO2−Phe（Bachem）、40.5g（483mモル）の炭酸水素ナトリウム及び25.0g（177mモル）のヨウ素化メチルから成る懸濁液を、室温で４日間、撹拌した。その懸濁液を吸引し、そして固形物をジクロロメタンにより洗浄した。
【０１４２】
濾液を、回転蒸発器による蒸発により濃縮した。残留物を水に取り、そして酢酸エチル（それぞれ、150ml）により４度、抽出した。組合された有機相を、100mlの５％チオ硫酸ナトリウム溶液、100mlの5％炭酸水素ナトリウム溶液、50mlの飽和塩化ナトリウム溶液、100mlの10％クエン酸及び50mlの水により洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器での蒸発により濃縮した。89.4％に相当する、46.5g（143.5mモル）の原収率が得られた。
計算値：C55.55, H6.22, N8.64, O29.60
実測値：C55.59, H6.23, H8.62, O29.63
【０１４３】
ｂ）[２−ヒドロキシ−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル]−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C14H20N2O5 (M＝296.32)
8.9g（27.4mモル）の1aを、70mlのテトラヒドロフランに溶解した。2.0g（51.2mモル）の硼水素化ナトリウムを添加した。13mlのメタノールをゆっくり滴下した。反応溶液を一晩、撹拌した。
【０１４４】
その反応溶液を、2.8mlの酢酸と共に混合し、そして乾燥状態に蒸発した。残留物を水に取り、そして酢酸エチルにより抽出した。組合された有機相を、飽和塩化ナトリウムにより２度、洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして蒸発により濃縮した。トルエンと共に残留水を、回転蒸発器による共沸蒸留により除去した。所望する組成物を、79.0％（6.4g；21.6mモル）の収率で生成した。
計算値：C56.75, H6.80, N9.45, O27.00
実測：C56.69, H6.75, N9.47, O27.07
【０１４５】
ｃ）メタンスルホン酸２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピルエステル：
C15H22H2O7S (M＝374.41)
6.40g（21.6mモル）の1bを、5mlのジクロロメタン及び0.33g（3.24mモル）のトリエチルアミンに溶解した。その溶液を−5℃に冷却し、そして0.27g（2.38mモル）のメタンスルホン酸塩化物（いくらかのジクロロメタンに希釈された）と共にゆっくりと混合した。その懸濁液を２時間、撹拌し、そして撹拌された氷水（約50ml）上に注いだ。
【０１４６】
相を分離した。水性相を、ジクロロメタン（それぞれ50ml）により３度、抽出した。組合された有機相を、希（5％）HCl水溶液、水、希（5％）炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化ナトリウム溶液により２度、洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして回転蒸発器上で乾燥状態に蒸発した。98.9％の収率の粗生成物を生成した。
計算値：C48.12, H5.92, N7.48, O29.91, S8.56
実測値：C48.21, H5.89, N7.43, O29.90, S8.57
【０１４７】
ｄ）［２−（３−アミノ−ペンチルアミノ）−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C19H32N4O4 (M＝380.49)
10g（26.71mモル）の1cを、例3aに類似して、27.85g（267.1mモル）の１，３−ジアミノ−ペンタン、2.96g（29.3mモル）のトリエチルアミノ及び100mlのテトラヒドロフランと反応せしめた。所望する生成物を、50.6％（5.14g；13.51mモル）の収率で生成した。さらに、3.75g（9.87mモル）の［２−（３−アミノ−１−エチル−プロピルアミノ）−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステルを単離することが可能であった。
計算値：C59.98, H8.84, N14.73, O16.62
実測値：C59.90, H8.96, N14.75, O16.77
【０１４８】
ｅ）N’−［２−アミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−ペンタン−１，３−ジアミン：
C14H24N4O2 (M＝280.37)
3.65g（9.59mモル）の1ｄを、55ｍｌのジクロロメタンに溶解し、そして16.24ｇ（142.46mモル）のトリフルオロ酢酸と混合した。その溶液を室温で90分間、撹拌し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。それを、ジクロロメタンと共に２度、混合し、そして個々の場合、再び蒸発により濃縮した。粗生成物を100mlの5％アンモニア溶液と共に混合した。生成物を凍結乾燥した。記載される操作段階を反復した。所望する生成物を、2.39g（8.54mモル：89％）で生成した。
計算値：C59.98, H8.63, N19.98, O11.41
実測値：C59.90, H8.62, N19.92, O11.44
【０１４９】
ｆ）{［２−{［３−（ビス−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ）ペンチル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−酢酸tert−ブチルエステル：
C44H74N4O12 (M＝851.08)
31.06g（224.72mモル）の炭酸カリウム及び27.56g（141.3mモル）のブロモ酢酸−tert−ブチルエステルを、246mlのアセトニトリル−水混合物（５：１）中、5.27g (18.8mモル)の1eの溶液に添加した。
【０１５０】
反応懸濁液を70℃に加熱し、そして24時間、撹拌した。懸濁液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮し、350mlの水と共に混合し、そして酢酸エチルにより３度、抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上で乾燥状態に蒸発した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2、ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール８：１）により精製した。所望する生成物を、71.0％（11.36g, 13.35mモル）の収率で生成した。
計算値：C62.10, H8.76, N6.58, O22.56
実施値：C61.98, H8.75, N6.57, O22.59
【０１５１】
ｇ）{［２−{［３−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−ペンチル］−カルボキシメチル−アミノ}−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C24H34N4O12 (M＝570.55)
20.18g (23.71mモル)の1ｆを、アニソール中に導入した。それを、0℃に冷却した。23mlのトリフルオロ酢酸を添加した。それを室温で24時間、撹拌した。その反応溶液を蒸発により濃縮した。残留物を水に取り、そしてジエチルエーテルにより３度、抽出した。水性相を、100mlの5％アンモニア溶液と共に混合し、そして凍結乾燥した。上記操作段階を、反復した。所望する生成物を、91％（12.31g；21.58mモル）の収率で生成した。
計算値：C50.52, H6.01, N9.82, O33.65
実施値：C50.42, H6.00, N9.79, O33.69
【０１５２】
例２．
ａ）N3−［２−アミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−ペンタン−１，３−ジアミン：
C14H24N4O2 (M＝280.37)
1dからの2.92g (7.67mモル)の単離された副生成物を、40mのジクロロメタンに溶解し、そして12.99g (114.0mモル)のトリフルオロ酢酸と共に混合した。その溶液を室温で90分間、撹拌し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。それを、ジクロロメタンにより２度、混合し、そして個々の場合、再び蒸発により濃縮した。粗生成物を、100mlの5％アンモニア溶液と共に混合し、そして凍結乾燥した。上記操作段階を反復した。所望する生成物を、87％（1.87g、6.67mモル）の収率で生成した。
計算値：C59.98, H8,63, N19.98, O11.41
実施値：C59.89, H8.60, N19,93, O11.39
【０１５３】
ｂ）{［２−{［３−（ビス−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ）−１−エチル−プロピル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−酢酸tert−ブチルエステル：
C44H74N4O12 (M＝851.08)
11.80g（85.4mモル）の炭酸カリウム及び10.47g（53.7mモル）のブロモ酢酸−tert−ブチルエステルを、246mlのアセトニトリル−水混合物（５：１）中、6.18g (7.14mモル)の2aの溶液に添加した。
【０１５４】
反応懸濁液を70℃に加熱し、そして24時間、撹拌した。懸濁液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮し、350mlの水と共に混合し、そして酢酸エチルにより３度、抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上で乾燥状態に蒸発した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2、ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール８：１）により精製した。所望する生成物を、73.0％（4.44g, 5.21mモル）の収率で生成した。
計算値：C62.10, H8.76, N6.58, O22.56
実施値：C61.98, H8.77, N6.60, O22.55
【０１５５】
ｃ）{［２−{［３−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−１−エチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C24H34N4O12 (M＝570.55)
1.35g (1.58mモル)の2bを、アニソール中に導入した。それを、0℃に冷却した。1.53mlのトリフルオロ酢酸を添加した。それを室温で24時間、撹拌した。その反応溶液を蒸発により濃縮した。残留物を水に取り、そしてジエチルエーテルにより３度、抽出した。水性相を、蒸発により濃縮し、100mlの5％アンモニア溶液と共に混合し、そして凍結乾燥した。上記操作段階を、反復した。所望する生成物を、88％（793mg；１．３９mモル）の収率で生成した。
計算値：C50.52, H6.01, N9.82, O33.65
実施値：C50.43, H6.02, N9.80, O33.61
【０１５６】
例３．
ａ）N−［２−（３−アミノ−２，２−ジメチル−プロピルアミノ）−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−２，２−ジメチル−プロピオンアミド：
C19H32N4O2 (M＝364.49)
13.8g (134mモル)の１，３−ジアミン−２，２−ジメチルプロパンを、5mlのテトラヒドロフラン及び2.1ml（14.7mモル）のトリエチルアミン中、例1cからのメシレート5.0g (13.4mモル)の溶液に添加した。
【０１５７】
溶液を、50℃に４時間、加熱した。溶液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を水に取り、そして酢酸エチルにより３度、抽出した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2, ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール１：１→メタノール：アンモニア（10％）10：1）により精製し、収率73.2％（3.58g、9.80mモル）を得た。
計算値：C62.61, H8.85, N15.37, O13.17
実測値：C62.57, H8.86, N15.39, O13.17
【０１５８】
ｂ）N’−（３−アミノ−２，２−ジメチル−プロピル）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロパン−１，２−ジアミン：
C14H24N4O2 (M＝280.37)
5.23g (13.75mモル)の3aを、78mlのジクロロメタンに溶解し、そして次に、23.3g（204.26mモル）のトリフルオロ酢酸と共に混合した。その溶液を、90分間、撹拌し、そして蒸発により濃縮した。残留物を、100mlの5％アンモニア溶液に取り、そして凍結乾燥した。上記操作段階を反復し、8.21g（13.2mモル；95.9％）の生成物を生成した。
計算値：C59.98, H8.63, N19.98, O11.41
実測値：C59.91, H8.60, N19.91, O11.45
【０１５９】
ｃ）［（３−{［２−（ビス−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミン）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ］−酢酸tert−ブチルエステル：
C44H24N4O12（M＝851.08）
8.02g (12.9mモル)の3bを、170mlのアセトニトリル−水混合物（5：1）に溶解し、そして21.23g (153.6mモル)の炭酸カリウム及び13.6g (69.7mモル)のブロモ酢酸−ｔ−ブロモエステルと共に混合した。
【０１６０】
その反応溶液を70℃で24時間、加熱した。懸濁液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を300mlの水に取り、そして酢酸エチルにより３度、洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器により乾燥状態に蒸発した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2、ヘキサン−酢酸エチル１：１）により精製した。標記に言及される生成物9.79g（11.5mモル；89.32％）を生成した。
計算値：C62.10, H8.76, N6.58, O22.56
実測値：C62.19, H8.74, N6.57, O22.59
【０１６１】
ｄ）［（３−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C24H34N4O12 (M＝570.55)
5.30（5.23mモル）の3cを、43mlのアニソール中に−5℃で導入した。6.15ml（79.8mモル）のトリフルオロ酢酸を添加した。それを室温で一晩、撹拌した。その反応溶液を蒸発により濃縮した。残留物を水に取り、そしてジエチルエーテルにより３度、抽出した。水性相を、100mlの5％アンモニア溶液と共に混合し、そして凍結乾燥した。2.95g（5.17mモル）の所望する生成物を生成した。これは、83％の収率に相当する。
計算値：C50.52, H5.01, N9.82, O33.65
実測値：C50.43, H5.99, N9.85, O33.63
【０１６２】
例４．
ａ）３−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオンアミド：
C4H9NO（M＝103.12）
J. Amer. Chem. Soc. 117, 9 (1995), 2479-2490に類似して行なわれた。30.0g（225mモル）のβ−ヒドロキシ−イソ酪酸メチルエステル及び750mlの9Mのアンモニア性メタノール溶液から成る溶液を、50℃で７日間、気密ガラス容器において撹拌した。その溶液を、真空下の蒸発により濃縮した。残留物を、冷ジエチルエーテル（合計200ml）により洗浄した。15.77g（153mモル；68％）の白色固形物を得た。
計算値：C46.59, H8,80, N13.58, O31.03
実測値：C46.63, H8.83, N13.55, O31.06
【０１６３】
ｂ）３−アミノ−２−メチル−プロパン−１−オール：
C4H11NO (M＝89.14)
14.7g（140mモル）の4aを、50mlのテトラヒドロフランに懸濁し、そして400ml（400mモル）の１Mのボラン−THF−錯体溶液と共に0℃で混合した。その溶液を４時間、還流し、そして70mlの濃塩酸溶液と共に混合した。溶液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。希水酸化ナトリウム溶液（200mlの水中、140gの水酸化ナトリウム）を、前記溶液にO℃で添加した。それを、それぞれ100mlのクロロホルムにより4度、抽出した。組合された有機相を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして蒸発により濃縮した。残留物を水流ポンプ（92℃）下で蒸留した。所望する生成物9.23g（103.6mモル；74％）を生成した。
計算値：C53.90, H12.44, N15.71, O17.95
実測値：C53.80, H12.42, N15.68, O17.98
【０１６４】
ｃ）（３−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C9H19NO3 (M＝189.25)
63.0g（333mモル）の4bを、240mlのテトラヒドロフランに溶解し、そして60℃に冷却した。この温度で、THF95mlに溶解された72.6g（329.5mモル）のジ−tert−ブチルジカルボネート ((Boc)2O) を、滴下した。それを、室温に加熱し、そして１時間、撹拌した。その溶液を回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を400mlのジエチルエーテルに取り、そして100mlの0.01NのHCl、100mlの水及び100mlの炭酸水素ナトリウム溶液（5％）により洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。
計算値：C57.12, H10.12, N7.40, O25.36
実測値：C57.20, H10.10, N7.40, O25.39
【０１６５】
ｄ）メタンスルホン酸３−tert−ブトキシカルボニルアミノ−２−メチル−プロピルエステル：
C10H21NO5S (M＝267.34)
29.7ml（214.1mモル）のトリエチルアミンを、155mlのジクロロメタン中、27.0g（142.7mモル）の4cに添加した。その溶液を−5℃に冷却し、そして155mlのジクロロメタンに溶解された、11.7ml（149.8mモル）のメタンスルホン酸塩化物と共に混合した。その懸濁液を２時間、撹拌し、そして400mlの水と共に混合した。相を分離した。
【０１６６】
水性相を、それぞれ150mlのジクロロメタンにより２度、抽出した。組合された有機相を、200mlの0.1NのHCl溶液により２度、200mlの5％炭酸水素ナトリウム溶液により１度、及び100mlの水により１度、洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を、0℃でヘキサンにおいて再結晶化した。34.7g（129.9mモル）の所望する生成物を生成した。これは、91％の収率に相当する。
計算値：C44.93, H7.92, N5.24, O29.92, S11.99
実測値：C44.90, H7.89, N5.24, O29.90, S12.01
【０１６７】
ｅ）（３−アジド−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C9H18H4O2 (M＝214.27)
71.6g（268.6mモル）の4dを、490mlのDMSOに溶解し、そして21.0g（322.3m）のアジ化ナトリウムと共に混合した。反応溶液を40〜45℃で24時間、撹拌した。混合物を25℃に冷却し、そして500mlの水と共に混合した。溶液を、250mlのジクロロメタンにより5度、抽出した。組合された有機相を、それぞれ150mlの飽和塩化ナトリウム溶液により２度、洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器による蒸発により濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2、ヘキサン→ヘキサン−酢酸エチル１：１）により精製した。精製の後、43.7g（204mモル）（76％の収率に相当する）の生成物が存在した。
計算値：C50.45, H8,47, N26.15, O14.93
実測値：C50.51, H8.26, N26.12, O14.95
【０１６８】
ｆ）（３−アミン−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C9H20N2O2 (M＝168.27)
30.80（143.8mモル）の4eを、412mlの酢酸エチルに溶解し、そして4.5gのPd/C (10%)と共に混合した。反応溶液を、水素雰囲気下で24時間、25℃で撹拌した。溶液を濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（SiO2、ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール１：１）。収率：24.28g（129.0mモル、89.7％）。
計算値：C57.42, H10.71, N14.88, O17.00
実測値：C57.45, H10.73, N14.90, O16.99
【０１６９】
ｇ）{３−［２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−２−メチル−プロピル}−カルバミン酸tert−ブチルエステル：
C23H36N4O7 (M＝480.56)
21.7g（115mモル）の4fを、600mlのジクロロメタン/水（１：１）に溶解し、そして36.0g（115mモル）のBoc−保護されたニトロフェニルアラニン及び17.6g（115mモル）の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−H2O（HOBT）と共に混合した。その溶液を約−5℃に冷却した。
【０１７０】
24.1g（127mモル）の１−（ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（EDCI）を添加し、そいて25℃で７時間、及びさらに３日間、撹拌した。相を分離した。水性相を、ジクロロメタンにより２度抽出した。組合された有機相を、それぞれ150mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液及びいくらかの水により２度、洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を乳鉢において微粉砕し、そして冷ヘキサンにより洗浄した。それを、油ポンプにおいて乾燥した。収量：35.1g（73.1mモル；63.6％）。
計算値：C57.49, H7.55, N11.66, O23.30
実測値：C57.46, H7.55, N11,67, O23.32
【０１７１】
ｈ）２−アミン−N−{３−アミン−２−メチル−プロピル}−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピオンアミド：
C13H20N4O3 (M＝280.33)
10.3g (21.4mモル)の4gを、120mlの無水ジクロロメタン懸濁した。24.5ml（318mモル）のトリフルオロ酢酸を滴下し、そして１時間、撹拌した。混合物を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮し、100mlのジクロロメタンと共に混合し、そして蒸発により再び濃縮した。残留物を、ジエチルエーテルにより洗浄し、そして油ポンプにおいて40℃で乾燥した。100mlの5％アンモニア溶液を添加した。それを凍結乾燥した。5.55g（19.80mモル；92.5％）の所望する生成物を生成した。
計算値：C55.70, H7.19, N19.99, O17.12
実測値：C55.39, H7.21, N19.89, O17.19
【０１７２】
ｉ）（３−アミノ−２−メチル−プロピル）−［２−アミノ−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−アミノ塩酸塩：
C13H22N4O2 (M＝252.32)
9.25ｇ（18.2mモル）の4hを、130mlの無水THFに溶解した。128.5ml（128.5mモル）のボラン−THF錯体（１M）を、30分以内で0℃で滴下した。溶液を室温に加熱し、そして5時間、還流した。溶液を0℃に冷却し、35mlのメタノールと共に混合し、２時間、撹拌してそして蒸発により濃縮した。残留物を、2000mlのエタノールに溶解し、氷浴において冷却し、そして塩化水素ガスと共に混合した。混合物を、蒸発により濃縮し、そしてジエチルエーテルに取った、固形物を吸引し、ジエチルエーテルによりフラッシュし、そして真空下で乾燥した。5.49g（14.6mモル；80.3％）の所望する生成物を生成した。
計算値：C41.56, H0.71, N14.91, O8.52, Cl28.31
実測値：C41.59, H6.76, N14.92, O8.54, Cl28.26
【０１７３】
ｋ）［（３−{［２−（ビス−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミン）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ}−２−メチル−プロピル）−tert−ブトキシカルボニルメチル−アミノ］−酢酸tert−ブチルエステル：
C43H72N4O12 (M＝837.06)
10.37g (27.6mモル)の４iを、300mlのアセトニトリル−水（５：１）に溶解し、そして45.5g（329.2mモル）の炭酸カリウムと共に混合した。29.1g（149.4mモル）のブロモ酢酸−tert−ブチルエステルを添加した。
【０１７４】
そのバッチを70℃で24時間、撹拌した。反応溶液を、500mlの水と共に混合し、そしてそれぞれ150mlの酢酸エチルにより３度、抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を、カラムのクロマトグラフィー（SiO2、ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール８：１）により精製した。所望する生成物を、73.0％（16.87g；20.1mモル）の収率で生成した。
計算値：C61.70, H8.67, N6.69, O22.9X
実測値：C61.67, H8.66, N6.71, O22.91
【０１７５】
ｌ）［（３−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２−メチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C23H32N4O12 (M＝556.52)
38.76g（46.3mモル）の4kを、318mlのアニソール中に導入し、そして−5℃に冷却した。458mlのトリフルオロ酢酸を添加した。それを0℃で３時間、撹拌した。それを室温に加熱し、そして24時間、撹拌した。
【０１７６】
反応溶液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。残留物を、250mlの水に取り、そしてジエチルエーテルにより３度、抽出した。水性相を蒸発により濃縮した。メチル/アンモニア（5％）を添加し、そして再び、蒸発により濃縮した。次に、それを水に溶解し、そして凍結乾燥した。所望する生成物を、98.3％（40.9g；45.5mモル）の収率で生成した。
計算値：C49.64，H5.82, N10.07, O34.50
実測値：C49.53, H5.81, N10.01, O34.53
【０１７７】
例５．
ａ）２−ベンジル−マロン酸ジエチルエステル：
C14H16O4 (M＝250.29)
所望する生成物の合成は、文献（Synthesis, 12, 2000, 1949-1755）において知られている。
計算値：C67.18, H7.25, O25.57
実測体：C67.15, H7.26, O25.54
【０１７８】
ｂ）２−ベンジル−マロン酸アミド：
C10H12N2O2 (M＝192.22)
所望する生物の合成は、例15ｂに類似して行なわれた。
計算値：C62.49, H6.29, O16.65, N14.57
実測値：C62.59, H6.30, O16.64, N14.59
【０１７９】
ｃ）２−ベンジル−プロペン−１，３−ジアミン：
C10H16N2 (M＝164.25)
所望する生成物への還元が、例15cに類似して行なわれた。
計算値：C73.17, H9.82, N17.06
実測値：C73.09, H9,85, N17.09
【０１８０】
ｄ）［（２−ベンジル−３−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−プロピル）−カルボキシメチル−アミン］−酢酸
C29H35N4O12 (M＝632.62)
所望する生成物及びその前駆体の合成は、例15cに類似して行なわれた。
計算値：C55.06, H5.74, N8.86, O30.35
実測値：C55.09, H5.72, N8,84, O30.32
【０１８１】
例６．
例３に従っての化合物のGd錯体：
GdNa2C24H29N4O12 (M＝768.74)
142.6mg（0.25mモル）の3dを、４mlの蒸留水に懸濁し、80℃に加熱し、そして溶液にした。それを、45.3mg（0.125mモル）と共に少しづつ混合した。その懸濁液を80℃に加熱し、そして１時間、撹拌した。溶液を室温に冷却し、そして水酸化ナトリウム溶液（１M）によりpH７に調節した。水を、凍結乾燥により除去した。所望する生物192.2mg（0.25mモル；99.8％）を得た。
計算値：C37.50, H3.80, N7.29, O24.97, Gd13.87, No.5.98
実測値：C37.49, H3.77, N7.31, O24.99, Gd13,89, Na6.01
【０１８２】
例７．
（{３−［（２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−{４−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−プロピオニルアミノ］−フェニル}−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−２，２−ジメチル−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−酢酸
C30H41N5O13 (M＝691.69)
270.3mg (0.5mモル)のアニリン誘導体８及び328ml（4.54mモル）のN−メチルモリホリンを、2.5mlのジメチルスルホキシドに溶解し、そして134.16mg（0.61mモル）のマレイミドの活性化されたエステル、すなわちMPHS（Fluka）と共に混合した。その反応混合物を加熱し、その結果、均質溶液を生成した。それを40分間、撹拌し、そして真空蒸発により濃縮した。残留物をRP−HPLCにより精製した。180mg（0.26mモル；52％）の所望する生成物を得た。
計算値：（53.83, H5.97, N10.13, O30.07
実測値：（C53.74, H6.00, N10.08, O30.09
【０１８３】
例８．
［（３−{［３−（４−アミノ−フェニル）−２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C24H36N4O10（M＝540.57）
998mg (1.75mモル)の3d及び0.6gの炭素上パラジウム（10％）を、30mlのメタノール−水（４：１）に溶解し、そして計算された量の水素（39.2ml）が取られるまで、室温で水素雰囲気下で（通常の圧力）、水素化した。それを濾過し、そしてメタノールにより再洗浄した。それを回転蒸発器上での蒸発により濃縮し、トルエンに懸濁し、そして再び蒸発により濃縮した。所望する生成物746mg（1.3mモル；78.7％の収率）を得た。
計算値：C53.33, H6.71, N10.36, O29.60
実測値：C53.41, H6.74, N10.42, O29.61
【０１８４】
例９．
［（３−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−イソチオシアナト−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C25H34N4O10S (M＝582.63)
811mg（1.5mモル）の例８の生成物及び969mg（9.14mモル）の炭酸ナトリウムを、35mlの蒸留水及び70mlのクロロホルムに溶解した。132.8ml（1.74mモル）のチオホスゲンを、この２相システムに添加した。この溶液を３時間、撹拌した。その溶液を蒸留により濃縮し、0.1mlの希酢酸（１％）に取り、そしてRP−HPLC（25：74：１のアセトニトリル：水/酢酸）により精製した。所望する生成物を、64.2％（551mg；963mモル）の収率で生成した。
計算値：C51.54, H5.88, N9.62, O27.46, S5.50
実測値：C51.59, H5.88, N9.64, O27.50, S5.48
【０１８５】
例10．
{［３−（{２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３［４−（２−ブロモ−アセチルアミノ）−フェニル］−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−２，２−ジメチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C26H37BrN4O11 (M＝661.50)
81.1mg（0.15mモル）の例８の生成物を、3mlのエタノール、3mlの蒸留水及び3mlの飽和炭酸水素ナトリウムに溶解し、そして0.56g（2.18mモル）のブロモ酢酸無水物と共に混合した。固体炭酸水素ナトリウムの添加により、pHを8.5で維持した。反応溶液を、１時間、撹拌し、そして蒸発により濃縮した。残留物を詰綿上で濾過し、エタノールによりフラッシュし、蒸発により濃縮し、そしてRP−HPLCにより精製した。79.4mg（0.12mモル）の生成物を生成した。これは80％の収率に相当する。
計算値：C47.21, H5.64, N8.47, O26.60, Br12.08
実測値：C47.11, H5.68, N8.49, O26.54, Br12.00
【０１８６】
例11．
{［３−（{２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−［４−（２−ヨード−アセチルアミノ）−フェニル］−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−２，２−ジメチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C26H37ＩN4O11 (M＝708.50)
81.1mg（0.15mモル）の例８の生成物を、3mlのエタノール、3mlの蒸留水及び3mlの飽和炭酸水素ナトリウムに溶解し、そして771mg（2.18mモル）のヨード酢酸無水物と共に混合した。固体炭酸水素ナトリウムの添加により、pHを8.5で維持した。反応溶液を、１時間、撹拌し、そして蒸発により濃縮した。残留物を詰綿上で濾過し、エタノールによりフラッシュし、蒸発により濃縮し、そしてRP−HPLCにより精製した。69％（73.3mg；0.104mモル）の所望する生成物を生成した。
計算値：C44.08, H5.28, N7.91, O24.84, I17.91
実測値：C44.04, H5.29, N7.89, O24.75, I17.99
【０１８７】
例12．
［（３−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−チオセミカルバジド−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C25H38N6O10S (M＝614.67)
所望する生成物を、Colect. Czech. Chem. Commun., 57, 3, (1992), 656-659における説明に類似して、例８の化合物から得た。
計算値：C48.85, H6.23, N13.67, O26.03, S5.22
実測値：C48.77, H6.25, N13.62, O26.06, S5.25
【０１８８】
例13．
［（３−{［３−（４−アセチルアミノ−フェニル）−２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−プロピル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C26H38N4O11 (M＝532.60)
J. Amer. Chem. Soc., 120: 12, 1998, 2768-2779に類似して行なった。81.1mg（0.15mモル）の例８の生成物を、4.5mlのアセトニトリル−水（９：１）に溶解し、0℃に冷却し、そして38.3mg（375mモル）の無水酢酸と共に混合した。その溶液を室温で４時間、撹拌した。それを濾過し、そして真空下での蒸発により濃縮した。
計算値：C53.60, H6.57, N9.62, O30.21
実測値：C53.49, H6.54, N9.64, O30.24
【０１８９】
例14．
ａ）２，３−ジメチル−スクシノニトリル：
C6H8N2 (M＝108.14)
２，３−ジメチル−スクシノニトリルの合成を、Whiteley and Marianelli (Synthesis (1978), 392-394) による方法に従って、8.7g（149.8mモル）のアセトン、16ml（150.4mモル）のエチルシアノアセテート及び10g（154mモル）のシアン化カリウムから行った。粗生成物を、真空下での蒸留により精製した。収量：7.0g（64.7mモル；61％）。
計算値：C66.64, H7.46, N25.90
実測値：C66.60, H7.44, N25.92
【０１９０】
ｂ）２，３−ジメチル−ブタン−１，４−ジアミン：
C8H15N2 (M＝116.21)
２，３−ジメチル−ブタン−１，４−ジアミンの合成を、Alzencangなど. (J. Med. Chem. 38: 21, 1995, 4337-4341) の説明書に従って行ない、すなわち10.81mg（100mモル）の２，３−ジメチル−スクシノニトリルと飽和ジボラン−THF溶液とを反応せしめ、8.02g（69mモル；69％）の所望する生成物を、無色の液体として生成した。
計算値：C62.02, H13.88, N24.11
実測値：C62.19, H13.90, N24.12
【０１９１】
ｃ）［（４−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−２，２−ジメチル−ブチル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C25H36N4O12 (M＝584.58)
所望する生成物及びその対応する前駆体の合成を、例３に類似して行なった。
計算値：C51.37, H6.21, N9.58, O32,84
実測値：C51.34, H6.23, N9.61, O32.80
【０１９２】
例15．
ａ）シクロペンタン−１，１−ジカルボン酸ジエチルエステル：
C11H18O4 (M＝214.26)
前記物質の合成を、J. Amer. Chem. Soc., 109: 22, 1987, 6825-6836からの説明書に従って、１，４−ジブロモブタン及びマロン酸ジエステルから行なった。
計算値：C61.66, H8.47, O29.87
実測値：C61.69, H8.46, O29.82
【０１９３】
ｂ）シクロペンタン−１，１−ジカルボン酸ジアミド：
C7H12N2O2 (M＝156.18)
21.4g（100mモル）の15a及び500mlの9Mのアンモニア性メタノールの溶液を、気密性のガラス容器において、50℃で７日間、撹拌した。その溶液を、真空下での蒸発により濃縮した。残留物を、冷ジエチルエーテル（合計200ml）により洗浄した。10.0g（64mモル；64％）の白色固形物を得た。
計算値：C53.83, H7.74, N17.97, O20.49
実測値：C53.80, H7.71, N18.00, O20.52
【０１９４】
ｃ）C−（１−アミノメチル−シクロペンチル）−メチルアミン：
C7H16N2 (M＝128.22)
9.9g (63.4mモル)の15bを、50mlのテトラヒドロフランに懸濁した。400ml（400mモル）の１M−ボラン−THF錯体溶液を０℃で添加した。その溶液を、４時間、還流し、そして70mlの濃HCl溶液と共に0℃で混合した。その溶液を、回転蒸発器上での蒸発により濃縮した。希水酸化ナトリウム溶液（200mlの水中、水酸化ナトリウム140g）を、前記溶液に0℃で添加した。それを、それぞれ100mlのクロロホルムにより４度、抽出した。組み合わされた有機相を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして蒸発により濃縮した。残留物を真空下で蒸留した。所望する生成物5.85g (45.64mモル；72％)を得た。
計算値：C65.57, H12.58, N21.85
実測値：C64.49, H12.59, N21.87
【０１９５】
ｄ）{［１−（{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−メチル）−シクロペンチルメチル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C26H36N4O12 (M＝596.59)
所望する生成物及びその対応する前駆体の合成を、ジアミン15cを用いて、例３に類似して行なった。
計算値：C52.35, H6.08, N9.39, O32.18
実測値：C52.43, H6.09, N9.40, O32.21
【０１９６】
例16．
トランス−［（４−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３−（４−ニトロ−フェニル）−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−シクロヘキシル）−カルボキシメチル−アミノ］−酢酸：
C25H34N4O12 (M＝584.58)
所望する生成物及びその対応する前駆体の合成を、トランス−１，４−ジアミノシクロヘキサンを用いて、例３に類似して行なった。
計算値：C51.37, H6.21, N9.58, O32.84
実測値：C51.28, H6.23, N9.60, O32.88
【０１９７】
例17．
ａ）シス−２−アミノメチル−シクロヘキシルアミン：
C6H14N2 (M＝114.19)
前記化合物を、文献（Tetrahedron, 44, 5, 1988, 1464-1476）に記載のようにして生成した。
計算値：C65.57, H12.58, N21.85
実測値：C65.51, H12.61, N21.87
【０１９８】
ｂ）{［２−{［２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−シクロヘキシルメチル］−カルボキシメチル−アミノ}−１−（４−ニトロ−ベンジル）−エチル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸：
C26H36N4O12 (M＝596.58)
所望する生成物及びその対応する前駆体の合成を、ジアミン17aを用いて、例３に類似して行なった。
計算値：C52.35, H6.08, N9.39, O32.18
実測値：C52.30, H6.09, N9.36, O32.20
【０１９９】
例18．
{［３−（{２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３［４−（２−ブロモ−アセチルアミノ）−フェニル］−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−２，２−ジメチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸の抗体接合体：
自由に接近できるチオール基を有する、200μｇの抗体（例えば、HuM195 (Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1772を参照のこと；Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USから市販されている)、抗体が自由に接近できるチオール基を有さない場合、それは２−イミノチオランHClの使用により生成され得る（例えば、EP0607222B1））を、1.2mlの硼酸緩衝液（50mモル、pH8.5）に希釈し、例10の生成物238μg（240ｎモル）と共に混合し、50μlの硼酸緩衝液に溶解し（上記を参照のこと）、そして37℃で３時間、撹拌した。それを、NAP−５カラム（Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, Mobile Phase: PBS）上で精製した。
【０２００】
例19．
{［３−（{２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３［４−（２−ブロモ−アセチルアミノ）−フェニル］−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−２，２−ジメチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸のインジウム111−ラベルされた抗体接合：
自由に接近できるチオール基を有する、200μｇの抗体（例えば、HuM195 (Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1772を参照のこと；Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USから市販されている)、抗体が自由に接近できるチオール基を有さない場合、それは２−イミノチオランHClの使用により生成され得る（例えば、EP0607222B1））を、1.2mlの硼酸緩衝液（50mモル、pH8.5）に希釈し、例10の生成物238μg（240ｎモル）と共に混合し、50μlの硼酸緩衝液に溶解し（上記を参照のこと）、そして37℃で３時間、撹拌した。
【０２０１】
硼酸緩衝溶液を、個々の場合、200mlのNaOAc緩衝液に対して、Slide−A−Lyzer1000、Pierce MWCO（透析工程）において１時間、３度、0.1M（pH6.0）で調整されたサンプル溶液により、酢酸緩衝液と交換した。最終的に、それを、400mlのNaOAc緩衝液に対して一晩、0.1M（pH6）で調整した。前記溶液を、80μl（0.05MのHCl）の［111In］InCl3（27.88MBq）と共に混合し、そして室温で30分間、撹拌した。それを、NAP−５カラム（Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, Mobile Phase: PBS）上で精製した。
【０２０２】
例20．
{［３−（{２−（ビス−カルボキシメチル−アミノ）−３［４−（２−ブロモ−アセチルアミノ）−フェニル］−プロピル}−カルボキシメチル−アミノ）−２，２−ジメチル−プロピル］−カルボキシメチル−アミノ}−酢酸のイットリウム90−ラベルされた抗体接合：
自由に接近できるチオール基を有する、200μｇの抗体（例えば、HuM195 (Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1772を参照のこと；Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USから市販されている)、抗体が自由に接近できるチオール基を有さない場合、それは２−イミノチオランHClの使用により生成され得る（例えば、EP0607222B1））を、1.2mlの硼酸緩衝液（50mモル、pH8.5）に希釈し、例10の生成物238μg（240ｎモル）と共に混合し、50μlの硼酸緩衝液に溶解し（上記を参照のこと）、そして37℃で３時間、撹拌した。
【０２０３】
硼酸緩衝溶液を、個々の場合、200mlのNaOAc緩衝液に対して、Slide−A−Lyzer1000、Pierce MWCO（透析工程）において１時間、３度、0.1M（pH6.0）で調整されたサンプル溶液により、酢酸緩衝液と交換した。最終的に、それを、400mlのNaOAc緩衝液に対して一晩、0.1M（pH6）で調整した。前記溶液を、50MBｑの［90Y］YCl3と共に混合し、そして室温で30分間、撹拌した。それを、NAP−５カラム（Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, Mobile Phase: PBS）上で精製した。
【０２０４】
例21．
電位差計により決定された、３，６，10−トリ（カルボキシメチル）−３，６，10−トリアザドテカンジオン酸（例えば、ベンジル−Zリンカー基を有さない式VIIのリガンド）のGd（III）錯体の熱力学的安定定数は、logβ＝22.77である（Wangなど., Dalton, 1998, 41131）。DTPA類似物錯体に関しては、DTPA主鎖に結合される基が安定性を妨げることは良く知られている（例えば、EOB−DTPA及びDTPA）。類似性によれば、Gd（III）（EPTPA−bz−NO2）錯体（Zがニトロ基である式VIIのリガンド）に関しては、Gd（III）（EPTPA）について決定されるlogβと類似する安定定数を予測することができる。この高い安定性は、非常に低い毒性を確保する（Gd DTPAの毒性に比較して）。
【０２０５】
Gd（EPTPA−bz−NO2）錯体（式VII、ZはNO2である）は、17O NMR, EPR及び1H NMRDにより研究されている。17O化学シフトによれば、錯体は、１つの内部球状分子を有する。この結果は、Eu（III）錯体に対して行なわれたUV−Vis測定により支持される。得られる水交換速度は、Kex296＝1.4×108/Sであり、Gd（DTPA）にたいして測定されるその速度よりも40倍早い。
【０２０６】
Gd（III）錯体についての非常に高いプロトン緩和性を達成するためには、分子の回転相関時間を高め、そして水交換速度を最適化すべきである。回転相関時間の上昇は高分子の適用を比較的容易にするが、錯体の熱力学的安定性を低めないで水交換速度を精巧に調整することはより困難である。結果的に、高分子剤のプロトン緩和性は、遅い水交換により、非常にしばしばではあるが、制限される。
【０２０７】
Gd（EPTPA−bz−NO2）について得られる水交換速度は、高いプロトン緩和性を達成するためには最適範囲にある。高い熱力学的安定性と共に、この性質は、これまで知られているGd（III）キレート間でユニークな特徴であり、それは、Gd（EPTPA−bz−NO2）をいずれかの硬質の遅く混転する高分子剤に結合される理想的なシントンにする。30nsの回転相関時間（例えば、血清アルブミンの）を有する高分子へのこのキレートのカップリングは、モノマー自体は高い緩和性を有さないが、60MHzのプロトンラーモア周波数で50mM-1/Sの緩和性を達成するべきである。プロトン緩和性は、表１に示される。
【０２０８】
【表１】
2004534808.tif 000033
【０２０９】
この情報は、37℃（下部曲線）及び25℃（上部曲線）でGd（EPTPA−bz-NO2）のNMRDプロフィールを示す、図２にグラフで示される。
温度の関数として測定される0.34TでのGd（EPTPA−bz−NO2）のEPRバンドのピークからピークの線の幅が表２に示される。
【０２１０】
【表２】
2004534808.tif 000034
【０２１１】
種々の温度17O NMR緩和速度及び化学シフトが表３上に示される。
【０２１２】
【表３】
2004534808.tif 000035
【０２１３】
Powellなど., J. Am. Chem. Soc. 1996, 9333の方法に従っての同時分析において得られるような17O NMR、NMRD及びEPR実験データ（点）及び適合された曲線（線）が図３に示される：3A：上部左：低められた横（i＝2）及び縦（i＝1）の17O緩和速度（B＝9.4T）、3B：上部右：低められた17O化学シフト（B＝9.4T）、3C：低部左：NMRDプロフィール、3D：低部右：EPRにより測定される、0.34Tでの横電子回転緩和速度。
Gd（EPTPA−bz−NO2）及びGd（DTPA）についての17O NMR, EPR及びNMRDデータの同時分析において得られたパラメーターが表４に示される。
【０２１４】
【表４】
2004534808.tif 000036
【０２１５】
例22．
リガンドTRITA−bz-NO2（１）は、Maecke及び協同研究者［G. Ruser, W. Ritter, H. R. Moecke, Bioconjugate Chem., 1990, 1, 345-349］により記載のようにして、市販のジメチル（４−ニトロベンジル）マロネート［Aldrich］２を用いて、そして中間体12−（ｐ−ニトロベンジル）−１，４，７，10−テトラアザシクロトリデカン３のカルボキシメチル化反応を変性して合成された（下記スキーム１を参照のこと）。
【０２１６】
変性されたカルボキシメチル化は、類似するアミンについてCorson and Meares [ D. T. Corson, C. F. Meares, Bicojugate Chem., 2000, 11, 292-299] により記載されるのと同じ手段で行なわれ、ここでtert−ブチル−エステル基が還流下で6MのHClにおいて加水分解された。最終精製は、カチオン及び交換カラムの連続的使用により達成されて来た。キレートは、十分に証明されている方法に従って、高分子にリガンドをカップリングするためにリンカーとして機能することができるニトロ−ベンジル基を含む。これは、続くカップリング段階のために使用される分子（１）におけるチオシアネートへのニトロ基の転換を包含する。
【０２１７】
水交換の速度、Kesは、17O NMRによりGd（TRITA−bz−NO2）に対して測定されて来た。水交換速度、及び17O NMRデータの分析から得られる他のパラメーターは、表５に示される。実験データ、及び適合された曲線は、図４に与えられる。Gd（TRITA−bz−NO2）溶液に対して測定された実験的な数値データ（低められた横及び縦の17O緩和速度、低められた化学シフト）は、表６に示される。
【０２１８】
【表５】
2004534808.tif 000037
【０２１９】
【化３２】
2004534808.tif 000038
【０２２０】
17O化学シフトによれば、錯体は、１つの内部球状水分子を有する。得られる水交換速度は、Kex298−1.8×108/Sであり、Gd（DOTA）に対して測定されたその速度よりも40倍以上高い。
【０２２１】
電位差計により測定された、TRITA（リンカー基を有さない同じリガンド）のGd（III）錯体の熱力学安定数は、logβ＝19.2である［Clarke and Martell, Inorg, Chim. Acta. 1991, 1990, 37-46］。そのようなタイプのポリ（アミノカルボキシレート）錯体に関しては、炭素主鎖に結合される基は安定性を妨げないことが良く知られている（例えば、EOB-DTPA及びDTPA）。類似性よれば、Gd（III）（TRITA-bz−NO2）錯体に関しては、Gd（III）（TRITA）に付いて決定されたlogβと類似する安定定数を予測することができる。この高い安定性は、非常に低い毒性を確保する。
【０２２２】
Gd（III）錯体についての非常に高いプロトン緩和性を達成するためには、分子の回転相関時間を高め、そして水交換速度を最適化すべきである。回転相関時間の上昇は高分子の適用を比較的容易するが、錯体の熱力学安定性を低めないで、水交換速度を適切に調節することはより困難である。結果的に、高分子剤のプロトン緩和性は、非常にしばしばではあるが、遅い水交換により制限される。
Gd（III）（TRITA−bz−NO2）について得られる水交換速度は、DTPA−又はDOTA−型リガンドにおける１つのCH2による炭素主鎖の延長がGd（III）錯体についての水交換速度の相当な上昇をもたらすことを示す第２の例である。
【０２２３】
【表６】
2004534808.tif 000039
【０２２４】
例23．
２種のリガンド、すなわちDPTPA及びEPTPA−Bz−NO2のプロトン化定数、及びGd（III）及びいくつかの内因的に入手できるカチオンにより形成されるそれらの錯体の安定定数は、pH−電位差計により決定された。Gd(III)/Zn(II)についてのリガンドの選択性（log (KGdL/KZnL)）は、それがGd（III）コントラスト剤の安全性に直接的に関係するので、特に重要である。その結果は、表７に要約される。DPTPA及び錯体MDPTPA（M＝Gd及びZn；１＝0.1MのTMACI、ｔ＝25℃、CL＝CM＝2.06mM）の滴定曲線が図６に示される。
【０２２５】
【表７】
2004534808.tif 000040
【０２２６】
リガンド骨格の延長に基づいて、Gd（III）及びZn（II）錯体の熱力学的安定性は低下する。しかしながら、EPTPA−bz−NO2リガンドは、生物医学的使用のために十分であるランタニド錯体についての安定性を確保する。DPTPAは、下記スキーム２に従って調製された。
【０２２７】
【化３３】
2004534808.tif 000041
【０２２８】
前述の記載は、例示の目的のためのみ提供されて来たが、それらは本発明を制限するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０２２９】
【図１】図１は、本発明のリガンドの種類の１つの例の合成スキームを示す。
【図２】図２は、37℃（低部曲線）及び25℃（上部曲線）でのGd（EPTPA−bz−NO2)のNMRDプロフィールを示す。
【図３】図３は、GD（EPTPA）−bz−NO2）についての17O NMR, NMRO及びEPR実験データ（点）及び適合された曲線（線）を示す。3A：低められた横（i＝２）及び縦（i＝１）17O緩和速度（B＝9.4T）、3B: 低められた17O化学シフト（B＝9.4T）、3C：NMRDプロフィール、3D：EPRにより測定されるような0.34Tでの横電子回転緩和速度。
【図４】図４は、Gd（TRITA−bz−NO2）に対して測定された、低められた横及び縦17O緩和速度及び化学シフトを示す。実線は、適合された曲線を表す。B＝9.4テスラ。
【図５】図５は、DPTPA、EPTPA−Bz−NO2及びそれらの錯体の滴定曲線を示す。
【図６】図６は、DPTPA、EPTPA−Bz−NO2及びそれらの錯体の滴定曲線を示す。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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