(57)【要約】上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＥＧＦＲ−ＴＫ）の放射能標識された不可逆的阻害剤、ならびに陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）および単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの医学的放射線画像化を行うための生体マーカーとしてのその使用、そして放射線治療のための放射性医薬品としてのその使用が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式を有する放射能標識された化合物：
【化１】
2004525919.tif 000012
式中、
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択されるか、または、
Ｑ１は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択され、Ｑ２はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚである；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素および放射性炭素からなる群から選択される；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素、非放射性の誘導体化基、ならびに放射性臭素および放射性ヨウ素および放射性フッ素から選択される放射性の誘導体化基からなる群から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
ただし、化合物は少なくとも１個の放射性原子を含む。
【請求項２】
前記非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオカルボキシ、チオヒドロキシ、、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項３】
前記Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルである請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項４】
前記置換アルキルは放射性原子を含む請求項３の放射能標識された化合物。
【請求項５】
前記置換アルキルは、置換アミノ基を含む請求項３の放射能標識された化合物。
【請求項６】
前記置換アミノ基は、アルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基からなる群から選択される請求項５の放射能標識された化合物。
【請求項７】
前記置換アミノ基は前記放射性原子を含む請求項６の放射能標識された化合物。
【請求項８】
前記放射性原子は放射性炭素である請求項７の放射能標識された化合物。
【請求項９】
前記放射性炭素は炭素−１１である請求項８の放射能標識された化合物。
【請求項１０】
前記アルコキシはモルホリノ基を含む請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項１１】
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択される請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項１２】
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は水素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項１３】
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２はアルコキシである請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項１４】
前記アルコキシはモルホリノ基を含む請求項１３の放射能標識された化合物。
【請求項１５】
Ｘは前記−ＮＲ１−であり、Ｚは前記−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３である請求項１２の放射能標識された化合物。
【請求項１６】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれが水素である請求項１５の放射能標識された化合物。
【請求項１７】
Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルである請求項１５の放射能標識された化合物。
【請求項１８】
前記置換アルキルは放射性原子を含む請求項１７の放射能標識された化合物。
【請求項１９】
前記置換アルキルは、置換アミノ基を含む請求項１７の放射能標識された化合物。
【請求項２０】
前記置換アミノ基は、アルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基からなる群から選択される請求項１９の放射能標識された化合物。
【請求項２１】
前記置換アミノ基は放射性原子を含む請求項２０の放射能標識された化合物。
【請求項２２】
前記放射性原子は放射性炭素である請求項２１の放射能標識された化合物。
【請求項２３】
前記放射性炭素は炭素−１１である請求項２２の放射能標識された化合物。
【請求項２４】
Ｙは前記放射性炭素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項２５】
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つは前記放射性フッ素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項２６】
Ｄは前記放射性フッ素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項２７】
ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、そしてＣは水素である請求項２６の放射能標識された化合物。
【請求項２８】
Ａは前記放射性臭素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項２９】
Ａは前記放射性ヨウ素である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項３０】
前記放射性炭素は炭素−１１である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項３１】
ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である請求項３０の放射能標識された化合物。
【請求項３２】
Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である請求項３０の放射能標識された化合物。
【請求項３３】
ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である請求項９の放射能標識された化合物。
【請求項３４】
Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である請求項９の放射能標識された化合物。
【請求項３５】
ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である請求項２３の放射能標識された化合物。
【請求項３６】
Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である請求項２３の放射能標識された化合物。
【請求項３７】
前記放射性フッ素はフッ素−１８である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項３８】
前記放射性臭素は臭素−７６または臭素−７７である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項３９】
前記放射性ヨウ素は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１である請求項１の放射能標識された化合物。
【請求項４０】
Ｙは前記放射性炭素である請求項１４の放射能標識された化合物。
【請求項４１】
前記放射性炭素は炭素−１１である請求項４０の放射能標識された化合物。
【請求項４２】
ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である請求項４１の放射能標識された化合物。
【請求項４３】
Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である請求項４１の放射能標識された化合物。
【請求項４４】
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つは放射性フッ素、放射性臭素および放射性ヨウ素からなる群から選択される請求項１４の放射能標識された化合物。
【請求項４５】
有効成分としての請求項１の放射能標識された化合物と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む薬学的組成物。
【請求項４６】
患者の体内における上皮増殖因子受容体のレベルをモニターする方法であって、
（ａ）請求項１の放射能標識された化合物を患者に投与すること；および
（ｂ）体内または体内の一部における化合物の分布をモニターするために核画像化技術を用いること、
を含む方法。
【請求項４７】
前記技術は陽電子放射断層撮影法である請求項４６の方法。
【請求項４８】
前記技術は単光子放射型コンピューター断層撮影法である請求項４６の方法。
【請求項４９】
請求項１の放射能標識された化合物の治療効果的な量を患者に投与することを含む放射線治療法。
【請求項５０】
下記の式を有する放射能標識された化合物：
【化２】
2004525919.tif 000013
式中、
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、炭素−１１である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素および非放射性の誘導体化基からなる群から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
を合成する方法であって、
（ａ）前記Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、６位および／または７位が少なくとも１つの反応基によって置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして
（ｂ）前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、反応性の炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させること、
を含む方法。
【請求項５１】
前記非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオカルボキシ、チオヒドロキシ、、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される請求項５０の方法。
【請求項５２】
前記Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に存在する請求項５０の方法。
【請求項５３】
前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンである請求項５０の方法であって、工程（ｂ）の前に、
（ｃ）前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、前記４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元すること
をさらに含む方法。
【請求項５４】
前記４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されている請求項５０の方法であって、工程（ｂ）の前に、
（ｄ）前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させること
をさらに含む方法。
【請求項５５】
前記化学的反応基はモルホリノアルコキシ基を含む請求項５４の方法。
【請求項５６】
前記反応性の炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は、炭素−１１で標識されたアクリロイルクロリドである請求項５０の方法。
【請求項５７】
下記の式を有する放射能標識された化合物：
【化３】
2004525919.tif 000014
式中、
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素、非放射性の誘導体化基、およびフッ素−１８からなる群から選択され、ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがフッ素−１８である；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
を合成する方法であって
（ａ）前記Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識のアニリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがフッ素−１８である）を調製すること；
（ｂ）前記Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された前記フッ素−１８標識のアニリン型化合物を、６位および／または７位が少なくとも１つの反応基によって置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして
（ｃ）前記反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応して、その結果、α，β−不飽和カルボキシル基で置換されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、
を含む方法。
【請求項５８】
前記非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオカルボキシ、チオヒドロキシ、、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される請求項５７の方法。
【請求項５９】
前記Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に存在する請求項５７の方法。
【請求項６０】
前記反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、フッ素−１８で標識された４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンである請求項５７の方法であって、工程（ｃ）の前に、
（ｄ）前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、前記フッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元すること
をさらに含む方法。
【請求項６１】
前記４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されている請求項５７の方法であって、工程（ｃ）の前に、
（ｅ）前記反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させること
をさらに含む方法。
【請求項６２】
前記化学的反応基はモルホリノアルコキシ基を含む請求項６１の方法。
【請求項６３】
前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体はアクリロイルクロリドである請求項５７の方法。
【請求項６４】
Ｒ３は、前記１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルであり、前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は反応基が末端に存在している請求項５７の方法であって、
（ｆ）前記α，β−不飽和カルボキシル基によって置換された前記フッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応させること
をさらに含む方法。
【請求項６５】
前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は４−ブロモクロトニルクロリドである請求項６４の方法。
【請求項６６】
前記反応性の置換アルキルはジメチルアミンである請求項６４の方法。
【請求項６７】
下記の式を有する放射能標識された化合物：
【化４】
2004525919.tif 000015
式中、
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素、非放射性の誘導体化基、そして放射性臭素および放射性ヨウ素から選択される放射性原子からなる群から選択され、ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが前記放射性臭素または前記放射性ヨウ素である；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
を合成する方法であって、
（ａ）前記Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがハロゲン原子である）を、６位および／または７位が少なくとも１つの反応基によって置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが前記ハロゲン原子である）；
（ｂ）前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を放射性臭素または放射性ヨウ素で放射能標識して、その結果、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物（ただし、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが前記放射性臭素または前記放射性ヨウ素である）を得ること；そして
（ｃ）前記放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和誘導体と反応させること、
を含む方法。
【請求項６８】
前記放射性臭素は臭素−７６または臭素−７７である請求項６７の方法。
【請求項６９】
前記放射性ヨウ素は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１である請求項６７の方法。
【請求項７０】
前記非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオカルボキシ、チオヒドロキシ、、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される請求項６７の方法。
【請求項７１】
前記Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に存在する請求項６７の方法。
【請求項７２】
前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンである請求項６７の方法であって、工程（ｂ）の前に、
（ｄ）前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物（ただし、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが前記ハロゲンである）が得られるように、前記４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元すること
をさらに含む方法。
【請求項７３】
前記ハロゲンは臭素である請求項６７の方法。
【請求項７４】
前記４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されている請求項６７の方法であって、工程（ｃ）の前に、
（ｅ）前記放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させること
をさらに含む方法。
【請求項７５】
前記化学的反応基はモルホリノアルコキシ基を含む請求項７４の方法。
【請求項７６】
前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体はアクリロイルクロリドである請求項６７の方法。
【請求項７７】
Ｒ３は、前記１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルであり、前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は反応基が末端に存在している請求項６７の方法であって、
（ｆ）前記α，β−不飽和カルボキシル基によって置換された前記放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応させること
をさらに含む方法。
【請求項７８】
前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は４−ブロモクロトニルクロリドである請求項７７の方法。
【請求項７９】
前記反応性の置換アルキルはジメチルアミンである請求項７７の方法。
【請求項８０】
下記の式を有する放射能標識された化合物：
【化５】
2004525919.tif 000016
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素および非放射性の誘導体化基から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有し、かつ炭素−１１原子を含む置換アルキルである；
を合成する方法であって、
（ａ）前記Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、６位または７位が第１の反応基によって置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；
（ｂ）前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、第２の反応基を末端に有する前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応して、その結果、前記第２の反応基を末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；
（ｃ）前記第２の反応基を末端に有する前記α，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された前記４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応して、その結果、前記反応性の置換アルキルを末端に有する前記α，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして
（ｄ）前記反応性の置換アルキルを末端に有する前記α，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された前記４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、炭素−１１標識の反応性化合物と反応させること、
を含む方法。
【請求項８１】
前記非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオカルボキシ、チオヒドロキシ、、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される請求項８０の方法。
【請求項８２】
前記Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に存在する請求項８０の方法。
【請求項８３】
前記反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンである請求項８０の方法であって、工程（ｂ）の前に、
（ｅ）前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、前記４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元すること
をさらに含む方法。
【請求項８４】
前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体はアクリロイルクロリドである請求項８０の方法。
【請求項８５】
前記第２の反応基はハロゲンである請求項８０の方法。
【請求項８６】
前記ハロゲンは、臭素およびヨウ素からなる群から選択される請求項８５の方法。
【請求項８７】
前記第２の反応基を末端に有する前記反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は４−ブロモクロトニルクロリドである請求項８０の方法。
【請求項８８】
前記１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルはメチルアミンである請求項８０の方法。
【請求項８９】
前記炭素−１１標識の反応性化合物は炭素−１１ヨウ化メチルである請求項８０の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野および背景
本発明は、放射能標識された化合物、ならびに放射線画像化および／または放射線治療におけるその使用に関する。より詳細には、本発明は、上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＥＧＦＲ−ＴＫ）の放射能標識された不可逆的阻害剤、ならびに陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）および単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの医学的放射線画像化を行うための生体マーカーとしてのその使用、そして放射線治療のための放射性医薬品としてのその使用に関する。
【０００２】
放射性核種を医学目的のために使用することは、この分野では広く知られている。特定の細胞表面受容体に結合する生物学的に活性な化合物、または他の方法で細胞機能を変化させる生物学的に活性な化合物は、放射性医薬品としてかなり検討されており、従って、放射性核種で標識されたとき、そのような化合物は、放射線画像化および放射線治療における生体特異的な薬剤として使用される。
【０００３】
陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）は、人体内の放射能分布の三次元的な定量的測定を可能にする核医学画像化技術であるが、健康な状態および病理学的状態の両方において、生理学的機能、生化学的機能および薬理学的機能を分子レベルで測定するためのますます重要な手段になりつつある。ＰＥＴでは、１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃおよび１８Ｆ（これらは、半減期が、それぞれ、２分、１０分、２０分および１１０分である）などの陽電子放出核種（放射性トレーサー）で標識された分子を被験体に投与することが必要である。
【０００４】
単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）は、ガンマ線を放出する放射性核種で標識された放射性化合物からの放射線を使用して、生体内の放射能分布の断面画像が作製される化学的画像化の一形態である。ＳＰＥＣＴでは、９９ｍＴｃ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎおよび１２３Ｉなどのガンマ線放出核種で標識された分子を被験体に投与することが必要である。
【０００５】
増殖因子、分化因子およびホルモンなどのポリペプチドは、多くの場合、固有の細胞内タンパク質チロシンキナーゼ活性を有する細胞表面受容体に結合して、受容体を活性化することによって、その多面的な様々な作用を媒介する。上皮増殖因子受容体−チロシンキナーゼ（ＥＧＦＲ−ＴＫ）は、乳ガンおよび他の新生物において過剰に発現している。ＥＧＦＲ−ＴＫに結合する好適な放射性トレーサーにより、この受容体−キナーゼのマッピングおよび定量化が、ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴなどの核医学画像化技術によって可能になると考えられる。これにより、ホルモン療法または他の化学療法に対する応答をモニターすることを含む、この受容体の発現レベルの変化を調べることが可能になり、そして作用の治療的経過に関して、患者のより良好な管理および区別がもたらされ得る。
【０００６】
さらに、好適な放射性核種を含むそのような放射性トレーサーはさらに、放射線治療のために、ＥＧＦＲ−ＴＫの生体特異的薬剤として使用することができる。
【０００７】
最近、９９ｍＴｃで標識された抗ＥＧＦＲ抗体が合成され、生体分布および線量測定の研究がヒトにおいて行われた［１、２］。しかし、この標識された抗体は、他のタンパク質放射性医薬品と同様に、臨床的な適用のためには大きな問題となる肝臓における放射能の大きな長期の滞留をもたらしている。さらに、研究者は、バックグラウンドの放射能が変動するために、正常な器官の内部において腫瘍内の放射能を正確に定量することが困難であること、特に、体液および肺拡張不全を腫瘍と区別することができない肺の病巣における放射能の正確な定量が困難であることを発見した。
【０００８】
ＥＧＦそのものは、９９ｍＴｃ［３、４］およびインジウム−１１１［５、６］を含むガンマ線放出核種で、そして陽電子放出核種の臭素−７６［７、８］で、核医学画像化のために標識されている。後者（臭素−７６ＥＧＦ（ネズミ））の正常ラットにおける生体分布が報告された［８］が、実験室動物またはヒトにおける他のインビボ研究は報告されていない。
【０００９】
４−アニリノキナゾリン型化合物は、本明細書中では４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物としてもまた示されるが、ＥＧＦＲ−ＴＫ上の内膜のＡＴＰ結合部位に不可逆的に結合することによってＥＧＦＲ−ＴＫ活性を強力かつ選択的に阻害することが示されている。そのような化合物の原型が小分子のＰＤ１５３０３５［９］およびＡＧ１４７９［１０］である。ＭＤＡ−４８６細胞におけるインビトロでの結合研究を含む、ＰＤ１５３０３５の放射性ヨウ素化アナログの報告が提出されている［１１］。６，７−メトキシ基において炭素−１１で標識されたＰＤ１５３０３５が、ヒト神経芽細胞腫の異種移植片（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）が埋め込まれたラットにおいて評価されたが、特異的な取り込みは阻止研究では明らかにされなかった［１２］。ＰＤ１５３０３５はまた、７−メトキシ位において特異的に炭素−１１で標識され、生体分布実験が正常ラットにおいて行われたが、ＰＤ１５３０３５の酵素阻止量の投与は、調べた組織におけるトレーサー取り込みの増大をもたらしたので、取り込み特異性を明らかにすることができなかった［１３］。その同じ要約には、７−（２−フルオロエトキシ）ＰＤ１５３０３５アナログをフッ素−１８で標識することが報告されたが、このトレーサーを用いた生物学的実験は記載されていなかった。さらに、２−１８Ｆ−フルオロエチル基は、対応するアルケンエーテルをもたらす１８Ｆ−フッ化水素の脱離を大きい割合で受けやすく、その結果、骨におけるフッ素−１８の大きな取り込みを生じる可能性があり、そのため、不良なインビボ画像を与えることがある。さらに、これらの超強力な阻害剤（ＩＣ５０＜３０ｐＭ）は、生化学的な変化ではなく、流動または透過性の表面領域を測定し得るだけである［１４］。
【００１０】
米国特許第６１２６９１７号には、アニリン環がフッ素−１８で標識された、ＥＧＦＲ−ＴＫの可逆的な阻害剤である４−（アニリノ）キナゾリン誘導体が教示される。これらの化合物は、インビトロ、インビボで、そしてＰＥＴ画像分析によって試験された。これらの化合物のいくつかはインビトロで効果的（可逆的）な阻害活性を示したが、それらは、ｋｏｎおよびｋｏｆｆなどの速度論的因子ならびに迅速な血中クリアランスのために、インビボでＥＧＦＲ−ＴＫを画像化するためのトレーサーとして効果的でないことが見出された。このことは、フッ素−１８ＦＤＧとこれらの放射能標識された化合物との間における動物でのＰＥＴ比較研究によってさらに明らかにされた。勇気づけるインビトロ結果と失望させるインビボ結果との不一致は、化合物の結合部位でのＡＴＰの競合に由来すると推定される。
【００１１】
従って、より良好な画像化結果を達成するためには、放射能標識された化合物の非特異的な結合を減少させなければならない。これは、潜在的には、陽電子放出核種で標識されている不可逆的なＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤の誘導体を使用することによって達成することができる。そのような化合物の不可逆的な結合は、潜在的には、より優れた診断成績をもたらし得る。さらに、そのような不可逆的阻害剤は、好適な放射性核種で標識されたとき、ＥＧＦＲ−ＴＫを発現している腫瘍細胞に対するその大きい親和性およびそのような腫瘍細胞に対する不可逆的な結合に基づいて、効果的な放射線治療剤として十分に使用することができる。従って、ＥＧＦ受容体に標的化されるそのような放射能標識された化合物は、腫瘍細胞に優先的に結合することができ、そして放射性核種の高い効果的な濃度をもたらし、従って腫瘍部位において優先的な細胞殺傷を生じさせると考えられる。
【００１２】
最近、様々な不可逆的なＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤が開示された［１５、１６、１９、ならびに米国特許第６１５３６１７号および同第６１２７３７４号］。その不可逆的な結合は、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ結合部位においてＣｙｓ−７７３に共有結合的に結合するα，β−不飽和カルボキシル基（好ましくは、アクリルアミド基）でキナゾリン環の６位または７位が置換されている４−（アニリノ）キナゾリン誘導体によって達成される。これらの化合物のいくつかは、インビトロ実験およびインビボ実験の両方でＥＧＦＲ阻害に対する大きい効力を示した。しかしながら、これらの化合物は放射能標識されなかった。従って、これらの化合物は放射線画像化または放射線治療のために使用することができない。
【００１３】
従って、放射線画像化および放射線治療において使用されるＥＧＦＲ−ＴＫの放射能標識された不可逆的な阻害剤が必要であることが広く認識されており、そしてそのような不可逆的な阻害剤を提供することは非常に好都合であると考えられる。
【００１４】
発明の開示
本発明により、ＥＧＦＲ−ＴＫの不可逆的な阻害剤である新規な放射能標識された化合物、ならびに放射線画像化および放射線治療においてそのような化合物を使用する方法が提供される。
【００１５】
従って、本発明の１つの局面により、下記の式を有する放射能標識された化合物が提供される：
【化１】
2004525919.tif 000002
式中、
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択されるか、または、Ｑ１は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択され、Ｑ２はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚである；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素および放射性炭素からなる群から選択される；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素、非放射性の誘導体化基、ならびに放射性臭素および放射性ヨウ素および放射性フッ素から選択される放射性の誘導体化基からなる群から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
ただし、化合物は少なくとも１個の放射性原子を含む。
【００１６】
下記に示される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、非放射性の誘導体化基は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオヒドロキシ、チオカルボキシ、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノからなる群から選択される。
【００１７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択される。
【００１８】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は水素である。
【００１９】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２はアルコキシである。
【００２０】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、アルコキシはモルホリノ基を含む。
【００２１】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｘは−ＮＲ１−であり、Ｚは−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３である。
【００２２】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれが水素である。
【００２３】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルである。
【００２４】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、置換アルキルは放射性原子を含む。
【００２５】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、置換アルキルは、置換アミノ基を含み、例えば、アルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基を含む。
【００２６】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、置換アミノ基は放射性原子を含む。
【００２７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、放射性原子は放射性炭素であり、好ましくは炭素−１１である。
【００２８】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｙは放射性炭素である。
【００２９】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つは放射性フッ素である。
【００３０】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｄは放射性フッ素である。
【００３１】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｄは放射性フッ素であり、ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、そしてＣは水素である。
【００３２】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ａは放射性臭素または放射性ヨウ素である。
【００３３】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、放射性炭素は炭素−１１である。
【００３４】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｙは炭素−１１であり、ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である。
【００３５】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｙは炭素−１１であり、Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である。
【００３６】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、放射性フッ素はフッ素−１８である。
【００３７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、放射性臭素は臭素−７６または臭素−７７である。
【００３８】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、放射性ヨウ素は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１である。
【００３９】
本発明の別の局面により、有効成分としての本発明の放射能標識された化合物と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む薬学的組成物が提供される。
【００４０】
本発明のさらに別の局面により、患者の体内における上皮増殖因子受容体のレベルをモニターする方法が提供される。この方法は、（ａ）本発明の放射能標識された化合物を患者に投与すること；および（ｂ）体内または体内の一部における化合物の分布をモニターするために核画像化技術を用いること、を含む。
【００４１】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、核画像化技術は陽電子放射断層撮影法または単光子放射型コンピューター断層撮影法である。
【００４２】
本発明のさらに別の局面により、本発明の放射能標識された化合物の治療効果的な量を患者に投与することを含む放射線治療法が提供される。
【００４３】
本発明のさらなる局面により、下記の式を有する放射能標識された化合物を合成する方法が提供される：
【化２】
2004525919.tif 000003
式中、
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、炭素−１１である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素および非放射性の誘導体化基からなる群から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される。
【００４４】
この方法は、（ａ）Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、６位および／または７位が１つ以上の反応基によって置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして（ｂ）反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、反応性の炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させること、を含む。
【００４５】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンであり、そしてこの方法は、工程（ｂ）の前に、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元することをさらに含む。
【００４６】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されており、そしてこの方法は、工程（ｃ）の前に、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させることをさらに含む。
【００４７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、反応性の炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は、炭素−１１で標識されたアクリロイルクロリドである。
【００４８】
本発明のなおさらなる局面により、下記のように定義される、本明細書中上記に記載される式ＩＩの放射能標識された化合物を合成する方法が提供される：
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、（ｉ）水素、（ｉｉ）非放射性の誘導体化基、および（ｉｉｉ）フッ素−１８からなる群から選択され、ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがフッ素−１８である；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される。
【００４９】
この方法は、（ａ）Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識のアニリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがフッ素−１８である）を調製すること；（ｂ）Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識のアニリン型化合物を、６位および／または７位が１つ以上の反応基によって置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして（ｃ）反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和誘導体と反応して、その結果、α，β−不飽和基で置換されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、を含む。
【００５０】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、フッ素−１８で標識された４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンであり、この方法は、工程（ｃ）の前に、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、フッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元することをさらに含む。
【００５１】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されており、そしてこの方法は、工程（ｃ）の前に、反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させることをさらに含む。
【００５２】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体はアクリロイルクロリドである。
【００５３】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルであり、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は反応基が末端に存在しており、そしてこの方法は、α，β−不飽和カルボキシル基によって置換されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応させることをさらに含む。
【００５４】
本発明のなおさらなる局面により、下記のように定義される、本明細書中上記に記載される式ＩＩの放射能標識された化合物を合成する方法が提供される：
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、（ｉ）水素、（ｉｉ）非放射性の誘導体化基、そして（ｉｉｉ）放射性臭素および放射性ヨウ素から選択される放射性原子からなる群から選択され、ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが放射性臭素または放射性ヨウ素である；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される。
【００５５】
この方法は、（ａ）Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがハロゲン原子である）を、６位および／または７位が１つ以上の反応基によって置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；（ｂ）Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を放射性臭素または放射性ヨウ素で放射能標識して、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが放射性臭素または放射性ヨウ素である）を得ること；そして（ｃ）放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和誘導体と反応させること、を含む。
【００５６】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンであり、この方法は、工程（ｂ）の前に、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物（ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがハロゲンである）が得られるように、４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元することをさらに含む。
【００５７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、ハロゲンは臭素である。
【００５８】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、４−クロロキナゾリン型化合物は、第１および第２の反応基によって６位および７位が置換されており、そしてこの方法は、工程（ｃ）の前に、放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させることをさらに含む。
【００５９】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルであり、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は反応基が末端に存在しており、そしてこの方法は、α，β−不飽和カルボキシル基によって置換された放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応させることをさらに含む。
【００６０】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は４−ブロモクロトニルクロリドである。記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、反応性の置換アルキルはジメチルアミンである。
【００６１】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、化学的反応基はモルホリノアルコキシ基を含む。
【００６２】
本発明のさらなる局面により、下記のように定義される、本明細書中上記に記載される式ＩＩの放射能標識された化合物を合成する方法が提供される：
Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚは、キナゾリン環の６位または７位に存在する；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素である；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、（ｉ）水素、（ｉｉ）非放射性の誘導体化基、そして（ｉｉｉ）放射性臭素および放射性ヨウ素から選択される放射性原子からなる群から選択され、ただし、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが放射性臭素または放射性ヨウ素である；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、１個〜６個の炭素原子を有し、炭素−１１原子を含む置換アルキルである。
【００６３】
この方法は、（ａ）Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、６位または７位が第１の反応基によって置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；（ｂ）反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、第２の反応基を末端に有する反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応して、その結果、第２の反応基を末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；（ｃ）第２の反応基を末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応して、その結果、反応性の置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして（ｄ）反応性の置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、炭素−１１標識の反応性化合物と反応させること、を含む。
【００６４】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴により、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンであり、この方法は、工程（ｂ）の前に、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリン型化合物が得られるように、４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリン型化合物を還元することをさらに含む。
【００６５】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体はアクリロイルクロリドである。
【００６６】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、第２の反応基はハロゲンである。
【００６７】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、ハロゲンは、臭素およびヨウ素からなる群から選択される。
【００６８】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、第２の反応基を末端に有する反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体は４−ブロモクロトニルクロリドである。
【００６９】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルはメチルアミンである。
【００７０】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、炭素−１１標識の反応性化合物は炭素−１１ヨウ化メチルである。
【００７１】
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴により、Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に存在する。
【００７２】
本発明は、放射線画像化のための新規な不可逆的な生体マーカーおよび放射線治療のための放射性医薬品を提供することによって、現在知られている形態の様々な欠点を解決することに成功している。
【００７３】
図面の簡単な説明
本発明は、本明細書中には、例としてだけであるが、添付された図面を参照して記載される。次に図面を詳細に特に参照することにより、示される特定の事項は、例としてであり、かつ本発明の好ましい実施形態の例示的な議論のためだけであり、そして本発明の原理および概念的局面の最も有用かつ容易に理解される記載であると考えられるものを提供するために示されることに重点が置かれている。これに関連して、本発明の基本的な理解のために必要とされるよりも詳しく本発明の構造的詳細を示すことはなされておらず、しかし、図面とともに理解される説明により、本発明のいくつかの形態がいかにして実際に具体化され得るかが当業者には明らかになる。
図１は、ＩＣ５０値が０．０５１ｎＭであり、９５％信頼性区間として０．００８８／０．２９４の範囲を有する、本発明の化合物３に対する自己リン酸化阻害の用量応答曲線の一例を示す。
図２は、様々な濃度の化合物３とインキュベーションし、そして２時間および８時間のインキュベーション後時間においてＥＧＦ刺激溶解を行った後のＡ４３１細胞におけるＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである（ドット付きおよび無ドットの白棒は、ＥＧＦ刺激のないコントロールであり、四角パターンの棒は、ＥＧＦで刺激されたコントロールであり、それ以外の棒は、記載されたＥＧＦＲ自己リン酸化レベルを示す）。下の挿入図は、２時間および８時間のインキュベーション後時間におけるそれぞれの濃度に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
図３は、化合物３との様々なインキュベーション時間の後、８時間のインキュベーション後時間におけるＡ４３１細胞でのＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである（棒は２回の測定の結果である）。下の挿入図は、それぞれのデータ点に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
図４は、１ｎＭおよび３０ｎＭの化合物３との様々なインキュベーション時間の後、１時間のインキュベーション後時間におけるＡ４３１細胞でのＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである。下の挿入図は、それぞれのデータ点に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
【００７４】
好ましい実施形態の説明
本発明は、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）および単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの放射線画像化用の生体マーカーとして、そして放射線治療用の放射性医薬品として使用することができる新規な放射能標識された化合物に関する。詳細には、本発明の新規な放射能標識された化合物は、上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＥＧＦＲ−ＴＫ）に関連する疾患（例えば、ＥＧＦＲ−ＴＫの増幅、変異および／または過剰発現が生じている様々なガンなど）の定量化およびマッピングおよび放射線治療のために、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴの不可逆的な生体マーカーとして、かつ／または放射性医薬品として使用することができる。
【００７５】
本発明の原理および作用は、図面および付随する説明を参照してより十分に理解することができる。
【００７６】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示されるか、または実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実施することができ、または様々な方法で実施される。また、本明細書中で用いられている表現法および用語法は説明のためであり、従って限定として見なされるべきではないことを理解しなければならない。
【００７７】
本発明の１つの局面により、下記の式を有する放射能標識された化合物が提供される：
【化３】
2004525919.tif 000004
式中、
Ｑ１はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚであり、Ｑ２は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択されるか、または、Ｑ１は、水素、ハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノからなる群から選択され、Ｑ２はＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚである；
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＲ１−、−Ｏ−ＮＲ１−、−ＮＨ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＮＨ−、−ＣＨＲ１−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨＲ１−、−ＣＨＲ１−ＣＨ２−、および−ＣＨＲ１−Ｓ−からなる群から選択されるか、または存在しない；
Ｙは、非放射性炭素および放射性炭素からなる群から選択される；
Ｚは、−Ｒ２Ｃ＝ＣＨＲ３、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ３および−Ｒ２Ｃ＝Ｃ＝ＣＨＲ３からなる群から選択される；
Ｒａは、水素、または１個〜８個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；
Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、それぞれが独立して、水素、非放射性の誘導体化基、ならびに放射性臭素および放射性ヨウ素および放射性フッ素から選択される放射性の誘導体化基からなる群から選択される；
Ｒ１は、水素、および１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキルからなる群から選択される；
Ｒ２は、水素、ハロゲン、および１個〜６個の炭素原子を有するアルキルからなる群から選択される；そして
Ｒ３は、水素、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニルからなる群から選択される；
ただし、化合物は少なくとも１個（例えば、１個、２個または３個以上）の放射性原子を含む。
【００７８】
本明細書中において、本明細書中および下記の請求項の節で使用される表現「放射能標識された化合物」または表現「放射性原子」は（タイプが指定されているか否かにはかかわりなく）、１個以上の放射性原子を含む化合物、またはその原子についてバックグラウンドレベルの放射能を越える比放射能を有する放射性原子をいう。これに関して、天然に存在する元素は、そのいくつかが放射性同位体である様々な同位体の形態で存在することが広く知られている。天然に存在する元素の放射能は、これらの同位体の天然の分布の結果であり、一般的にはバックグラウンド放射能レベルとして示される。しかし、放射性である同位体で特定の元素を濃縮する様々な方法が知られている。そのような濃縮の結果は、その原子の天然集団よりも大きい放射能によって特徴づけられる原子集団であり、従って、その比放射能はバックグラウンドレベルを超えている。
【００７９】
従って、本発明の放射能標識された化合物は、対応する非標識の化合物よりも大きい比放射能を有しており、従って放射線画像化および放射線治療のための薬剤として使用することができる。
【００８０】
さらに、原子または誘導体化基に関して本明細書中で使用される用語「非放射性」は、放射性原子を含まない原子または誘導体化基を示しており、従って、その比放射能はバックグラウンドレベルである。
【００８１】
原子または誘導体化基に関して本明細書中で使用される用語「放射性」は、放射性原子を含む原子または誘導体化基を示しており、従って、その比放射能はバックグラウンドレベルを越えている。
【００８２】
本明細書中において、本明細書中および請求項の節で使用される用語「誘導体化基」は、別の基に共有結合的に結合している基の主要部分をいう。
【００８３】
本明細書中において、本明細書中および請求項の節で使用される用語「ハロゲン」は、本明細書中では「ハロ」としてもまた示されるが、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を示す。
【００８４】
本明細書中で使用される用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を示す。
【００８５】
本明細書中で使用される用語「アルキル」は、直鎖基および分枝鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素を示す。好ましくは、アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中型サイズのアルキルである。より好ましくは、アルキル基は、１個〜６個の炭素原子を有する低級アルキルである。最も好ましくは、アルキル基は、１個〜４個の炭素原子を有するアルキルである。アルキル基の代表的な例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルがある。
【００８６】
アルキル基は、本発明によれば、置換されてもよく、または非置換であってもよい。置換されるとき、置換基は、例えば、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ハロ、ペルハロ、トリハロメチル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、チオカルボキシ、カルバミル、シアノ、ニトロ、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、Ｎ１−ピペラジニル−Ｎ４−アルキル、Ｎ−ピロリジル、ピリジニル、Ｎ−イミダゾイル、Ｎ−モルホリノ、Ｎ−チオモルホリノ、Ｎ−ヘキサヒドロアゼピン、アミノまたはＮＲｂＲｃ（式中、ＲｂおよびＲｃは、それぞれが独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、Ｎ１−ピペラジニル−Ｎ４−アルキル、Ｎ−ピロリジル、ピリジニル、Ｎ−イミダゾイル、Ｎ−モルホリノ、Ｎ−チオモルホリノおよびＮ−ヘキサヒドロアゼピンである）にすることができる。
【００８７】
本明細書中で使用される用語「シクロアルキル」は、すべてが炭素の単環基または縮合環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。この場合、多くの環の１つは、完全に共役したπ電子系を有さない。シクロアルキル基の非限定的な例には、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエンおよびアダマンタンがある。
【００８８】
用語「アルコキシ」は、本明細書中上記に定義されるように、−Ｏ−アルキル基および−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。アルコキシ基の代表的な例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが含まれる。
【００８９】
−Ｏ−アルキル基および−Ｏ−シクロアルキル基は、本発明によれば、置換されてもよく、または非置換であってもよい。置換されるとき、置換基は、例えば、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、ハロ、ペルハロ、トリハロメチル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、チオカルボキシ、カルバミル、シアノ、ニトロ、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、Ｎ１−ピペラジニル−Ｎ４−アルキル、Ｎ−ピロリジル、ピリジニル、Ｎ−イミダゾイル、Ｎ−モルホリノ、Ｎ−チオモルホリノ、Ｎ−ヘキサヒドロアゼピン、アミノまたはＮＲｂＲｃ（式中、ＲｂおよびＲｃは、それぞれが独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、Ｎ１−ピペラジニル−Ｎ４−アルキル、Ｎ−ピロリジル、ピリジニル、Ｎ−イミダゾイル、Ｎ−モルホリノ、Ｎ−チオモルホリノおよびＮ−ヘキサヒドロアゼピンである）にすることができる。
【００９０】
用語「チオヒドロキシ」は、−ＳＨ基を示す。
【００９１】
用語「チオアルコキシ」は、本明細書中に定義されるように、−Ｓ−アルキル基および−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
【００９２】
用語「アミノ」は、−ＮＨ２基を示す。
【００９３】
用語「アルキルアミノ」は、本明細書中上記に定義されるような−ＮＲｂＲｃ基を示す。
【００９４】
用語「カルボキシ」は、−Ｃ（＝Ｏ）−基を示す。
【００９５】
用語「アルコキシカルボニル」基は、本明細書中では「カルボアルコキシ」としてもまた示されるが、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ’基（式中、Ｒ’は、本明細書中上記に定義されるようなアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、（環炭素を介して結合した）ヘテロアリールまたは（環炭素を介して結合した）ヘテロ脂環である）を示す。
【００９６】
「アルケニル」基は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなるアルキル基を示す。
【００９７】
「アリール」基は、完全に共役したπ電子系を有する、すべてが炭素の単環基または縮合多環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフタレニルおよびアントラセニルがある。
【００９８】
「フェニル」基は、本発明によれば、１個〜３個の置換基によって置換され得るか、または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノ、トリハロメチル、アルキルアミノまたは単環ヘテロアリールにすることができる。
【００９９】
用語「ヘテロアリール」基には、例えば、窒素、酸素およびイオウなどの原子の１個以上を環に有し、さらに完全に共役したπ電子系を有する単環基または縮合環（すなわち、隣接する原子対を共有する環）基が含まれる。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが含まれる。
【０１００】
「ヘテロ脂環」基は、窒素、酸素およびイオウなどの原子の１個以上を環に有する単環基または縮合環基を示す。環はまた、１つ以上の二重結合を有してもよい。しかし、環は、完全に共役したπ電子系を有さない。
【０１０１】
「アリールオキシ」基は、本明細書中に定義されるように、−Ｏ−アリール基および−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【０１０２】
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中に定義されるように、−Ｓ−アリール基および−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
【０１０３】
「トリハロメチル」基は、Ｘが本明細書中に定義されるようなハロゲンである−ＣＸ３基を示す。トリハロメチル基の代表的な例には、−ＣＦ３基がある。
【０１０４】
「ペルハロ」基は、そのすべての水素原子がハロゲン原子によって置換されている基を示す。
【０１０５】
「チオカルボキシ」基は、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’基（式中、Ｒ’は本明細書中に定義される通りである）を示す。
【０１０６】
「アルキルスルフィニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ’基（式中、Ｒ’は本明細書中に定義される通りである）を示す。
【０１０７】
「アルキルスルホニル」基は、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ’（式中、Ｒ’は本明細書中に定義される通りである）基を示す。
【０１０８】
「カルバミル」基は、−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲｂＲｃ基（式中、ＲｂおよびＲｃは本明細書中に定義される通りである）を示す。
【０１０９】
「ニトロ」基は、−ＮＯ２基を示す。
【０１１０】
「シアノ」基は、−Ｃ≡Ｎ基を示す。
【０１１１】
本発明の放射能標識された化合物は、Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基としてもまた本明細書中では定義されるα，β−不飽和カルボキシル基によってキナゾリン環の６位または７位が置換される誘導体化された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物である。
【０１１２】
本明細書中において、本明細書中および下記の請求項の節で使用される用語「α，β−不飽和カルボキシル基」は、−Ｃ（＝Ｏ）−基を含み、かつその遠位端において不飽和基に結合している任意の基を示す。カルボキシル基は、例えば、アミド、エステル、ヒドラジンアミドまたはケトンを挙げることができる。
【０１１３】
用語「不飽和基」は、少なくとも２個の炭素原子と、少なくとも１つの不飽和結合とを含む置換された炭化水素または非置換の炭化水素を示す。不飽和基の代表的な例には、アルケニル、アルキニルおよびジエンが含まれる。
【０１１４】
このクラスの誘導体化された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、アニリノキナゾリン環に結合したα，β−不飽和カルボキシル基のために、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ部位に不可逆的に結合することが知られている［１５、１６、ならびに米国特許第６１５３６１７号および同第６１２７３７４号］。このα，β−不飽和カルボキシル基は、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ結合部位においてＣｙｓ−７７３に共有結合的に結合することが見出されており、従って、マイケル型アクセプターとして作用する。
【０１１５】
このクラスの化合物が開示されるまでは、誘導体化された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ部位に可逆的に結合することが知られていた。これらの化合物の生物学的活性レベルは、そのアニリノ環における誘導体化基の性質によって影響を受ける。しかしながら、このクラスのキナゾリン型化合物に結合したα，β−不飽和カルボキシル基によってもたらされる受容体に対する共有結合的な結合により、様々な誘導体化基によって誘導体化される４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物のＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤としての使用が可能になる。それにもかかわらず、様々な誘導体化基を本発明の化合物のアニリン環およびキナゾリン環の両方に結合させることができる。これらの誘導体化基の性質は、受容体に対する化合物の結合親和性、ならびに特異性、化合物の代謝、および速度論的速度などの他の生物学的活性パラメーターに影響を及ぼし得る。
【０１１６】
従って、本発明の好ましい実施形態により、本発明の放射能標識された化合物の非放射性の誘導体化基はアニリン環に結合させられ、そのような誘導体化基には、例えば、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボアルコキシ、チオヒドロキシ、チオカルボキシ、チオアルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、ジアミノ、カルバミル、ジカルバモイル、ニトロおよびシアノが含まれる。これらの用語は本明細書中上記に定義されている。
【０１１７】
本発明の別の好ましい実施形態により、非放射性の誘導体化基は、（Ｑ１またはＱ２のいずれかによって本明細書中上記の式Ｉにおいて表されるように）キナゾリン環に結合させられ、そのような誘導体化基には、例えば、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アルキルアミノおよびアミノが含まれる。好ましくは、この誘導体化基はアルコキシ基であり、より好ましくは、モルホリノ基を含むアルコキシ基であり、例えば、３−（４−モルホリニル）プロポキシ基（これに限定されない）などである。このクラスの化合物におけるモルホリノ基の存在は、その生物学的利用性を増大させることが知られている［１５］。
【０１１８】
本発明の誘導体化された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物の結合力に影響を及ぼす別の要因は、キナゾリン環に結合しているα，β−不飽和カルボキシル基の位置である。６位のα，β−不飽和カルボキシル基は、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ部位に対してより大きい結合力を有する［１５、１６、ならびに米国特許第６１５３６１７号および同第６１２７３７４号］。従って、本発明の別の好ましい実施形態により、放射能標識された化合物のＸ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｚ基はキナゾリン環の６位に結合させられる。
【０１１９】
本発明のさらに別の好ましい実施形態により、６位のα，β−不飽和カルボキシル基はアクリルアミド基である。従って、本発明による好ましい放射能標識された化合物は、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ（これらの記号は上記に定義される通りである）によって誘導体化されている放射能標識されたＮ−［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アクリルアミド型化合物である。
【０１２０】
アクリルアミド基は、例えば、ハロゲン、カルボキシ、アルケニル、アルコキシ、カルボニル、置換アルキルまたは非置換アルキル、および置換フェニルまたは非置換フェニル（これらの用語は本明細書中上記に定義される通りである）を含む誘導体化基によってさらに誘導体化することができる。好ましくは、アクリルアミド基は置換アルキルによって誘導体化され、より好ましくは、アルキルは、アルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基（これらに限定されない）などのアミノ基によって置換される。より好ましくは、アルキルは、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノおよびジイソプロピルアミノ（これらに限定されない）などのジアルキルアミノ基によって置換される。必要な場合には、アルキルはモルホリノ基によって置換される。
【０１２１】
従って、本発明の別の好ましい実施形態により、α，β−不飽和カルボキシル基は４−（ジアルキルアミノ）−２−ブテンアミドである。ジアルキルアミノ基によって誘導体化されたα，β−不飽和カルボキシル基の存在は、ジアルキルアミノ基により、生理学的条件下での化合物の溶解性が増大し、従って、化合物の生物学的利用性が増大するために好都合である［１９］。さらに、ジアルキルアミノ基の存在は、電子的および立体的な効果のために、求核反応におけるマイケル型アクセプターとして化合物の不飽和中心の化学反応性を低下させる。このクラスの化合物における不飽和中心は、非常に反応性であり、従って、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ結合部位における標的化されたＣｙｓ−７７３に加えて、血液および他の器官に存在する他の−ＳＨ残基と反応するので、この低下した化学的反応性は好都合である。従って、その反応性を低下させることによって、ジアルキルアミノ基は、受容体に対する化合物の結合特異性を高める。
【０１２２】
米国特許第６１２６９１７号には、アニリノ基の６位がフッ素によって誘導体化された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物がＥＧＦＲ−ＴＫの強力な阻害剤であることがさらに教示されている。受容体に対する最大の親和性が、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）−アミノ］キナゾリン型化合物を使用して達成される。
【０１２３】
従って、本発明の好ましい実施形態により、Ｙは炭素であり、Ｘは−ＮＨであり、Ｚは
ＣＨ２＝ＣＨ−であり、Ｒａは水素であり、ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、そしてＤはフッ素である。これは下記では化合物３として示される。
【０１２４】
本発明の別の好ましい実施形態により、Ｙは放射性炭素であり、そして放射性炭素は炭素−１１である。
【０１２５】
本発明のさらに別の好ましい実施形態により、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つが放射性フッ素であり、そして放射性フッ素はフッ素−１８である。好ましくは、Ｄがフッ素−１８である。
【０１２６】
本発明のさらに別の好ましい実施形態により、Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である。
【０１２７】
従って、本発明の現時点で最も好ましい実施形態により、化合物３において、Ｙが炭素−１１である。
【０１２８】
本発明の別の現時点で好ましい実施形態により、化合物３において、Ｄがフッ素−１８である。
【０１２９】
本発明の別の好ましい実施形態により、Ｙは炭素であり、Ｘは−ＮＨであり、Ｚは（ＣＨ３）２Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｒａは水素であり、そして、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは本明細書中上記に定義される通りである。これは下記では化合物４として示される。
【０１３０】
好ましくは、化合物４において、ＡおよびＢはそれぞれが塩素であり、Ｃは水素であり、Ｄはフッ素である。あるいは、Ａは臭素またはヨウ素であり、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれが水素である。
【０１３１】
さらに好ましくは、化合物４において、Ｙは非放射性炭素であり、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つは放射性フッ素であり、そして放射性フッ素はフッ素−１８である。好ましくは、Ｄがフッ素−１８である。
【０１３２】
最も好ましくは、化合物４において、誘導体化ジメチルアミノ基におけるメチル基は放射性炭素を含み、そして放射性炭素は炭素−１１である。
【０１３３】
さらに、本発明の好ましい実施形態により、放射性原子は、臭素−７６および臭素−７７などの放射性臭素である。好ましくは、Ａが放射性臭素である。臭素−７６で標識された本発明の化合物はＰＥＴ放射線画像化のために使用することができ、一方、臭素−７７で標識された本発明の化合物は放射線治療のために使用することができる。
【０１３４】
本発明の別の好ましい実施形態により、放射性原子は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１などの放射性ヨウ素である。好ましくは、Ａが放射性ヨウ素である。ヨウ素−１２３で標識された本発明の化合物はＳＰＥＣＴ放射線画像化のために使用することができ、ヨウ素−１２４で標識された本発明の化合物はＰＥＴ放射線画像化および／または放射線治療の両方のために使用することができ、そしてヨウ素−１３１で標識された本発明の化合物は放射線治療のために使用することができる。
【０１３５】
放射性合成：
本発明の別の局面により、本発明の放射能標識された化合物を合成するための方法が提供される。
【０１３６】
化合物の放射能標識は、下記の３つの選択可能な方法を使用して行うことができる：
第１の方法は、フッ素−１８原子をアニリン環に取り込むことを伴い、従って、放射能標識することが、下記の実施例の節においてさらに例示されるように合計で４段階〜８段階の放射性合成を典型的には含む多段階放射性合成の最初の工程であることが避けられない。
【０１３７】
本発明に従って放射能標識するための第２の方法は、炭素−１１原子をα，β−不飽和カルボキシル残基に取り込むことを伴い、これは、合成の最終工程で行われ、従って、好都合な１段階放射性合成である。この方法による炭素−１１の取り込みは、α，β−不飽和カルボキシル残基のα−炭素またはω−炭素のいずれかにおいて行うことができる。
【０１３８】
第３の方法は、合成の最終工程に先立って、放射性臭素または放射性ヨウ素を４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物のアニリノ環に取り込むことを伴い、これにより、最終工程が簡便に行われる好都合な２段階の放射性合成がもたらされる（下記参照）。
【０１３９】
従って、本発明のさらに別の局面により、本明細書中上記に記載されるような、炭素−１１で標識された化合物を合成する方法が提供される。この方法は、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、６位および／または７位が１つ以上の反応基によって置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、そして反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性の炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させることによって達成される。あるいは、この方法は、反応性の置換４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物が得られるように、α，β−不飽和カルボキシル誘導体とのその反応の前に、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を化学的反応基と反応させることをさらに含む。
【０１４０】
本明細書中において、本明細書中および下記の請求項の節で使用される、基または誘導体に関する用語「反応性の」は、新しい官能基を含む新しい化合物が得られるように別の基と容易に反応し得る基または誘導体を示す。反応性の基（反応基）の代表的な例には、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、アルコキシおよびハロゲンが含まれる。カルボン酸塩化物は反応性の誘導体の代表的な例である。ヒドロキシアルキルの金属塩を含むアルコキシ基は、化学的に反応性の基（化学的反応基）の代表的な例である。好ましくは、化学的反応基は、本明細書中では３−（４−モルホリニル）プロポキシとしてもまた示される、３−（４−モルホリニル）−１−プロパノールの金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩またはリチウム塩）を含む。
【０１４１】
１つの反応基によってその６位が置換されるキナゾリン型化合物を含む１つの具体例において、３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリンが４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられ、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンが得られ、これは、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液によって還元され、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンが得られる。その後、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンは、炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（炭素−１１標識の化合物３）が得られるように、炭素−１１標識のアクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１４２】
場合により、出発物質は３−ブロモアニリンまたは３−ヨードアニリンであり、最終生成物は、それぞれ、Ｎ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドまたはＮ−｛４−［（３−ヨードフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドである。
【０１４３】
２つの異なる反応基によってその６位および７位が置換されるキナゾリン型化合物を含む別の具体例において、３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリンが４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられ、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンが得られる。その後、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンを３−（４−モルホリニル−１−プロパノール）のナトリウム塩と反応させて、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンが得られ、これは、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液によって還元されて、その結果、６−アミノ−４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンが得られる。その後、この生成物は、炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（炭素−１１標識のモルホリノ置換の化合物３）が得られるように、炭素−１１標識のアクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１４４】
場合により、出発物質は３−ブロモアニリンまたは３−ヨードアニリンであり、最終生成物は、それぞれ、｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドまたは｛４−［（３−ヨードフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドである。
【０１４５】
あるいは、そして本発明の別の局面に従って、本明細書中上記に記載されるような、炭素−１１で標識された化合物を合成する方法が提供される。この方法は、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物を、１つ以上の反応基によって６位および／または７位が置換された４−クロロキナゾリン型化合物とカップリングして、その結果、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、第２の反応基を末端に有する反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応して、その結果、第２の反応基を末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、得られた置換４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応して、その結果、反応性置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、そして反応性の置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、炭素−１１標識の反応性化合物と反応させることによって達成される。
【０１４６】
第２の反応基を末端に有する反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体の代表的な例には、ω−ハロゲン化α，β−不飽和カルボキシル誘導体が含まれ、例えば、４−ブロモクロトニルクロリド、４−クロロクロトニルクロリドおよび４−ヨードクロトニルクロリド（これらに限定されない）などが含まれる。
【０１４７】
反応性の置換アルキルの代表的な例には、アルキルアミンが含まれ、例えば、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミンおよびイソプロピルアミン（これらに限定されない）などが含まれる。
【０１４８】
炭素−１１の反応性化合物の代表的な例には、炭素−１１ヨウ化メチル、炭素−１１ヨウ化エチル、炭素−１１ヨウ化プロピルおよび炭素−１１メチルトリフラートが含まれる。
【０１４９】
１つの具体例において、３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリンが４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられ、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンが得られ、これは、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液によって還元されて、その結果、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンが得られる。その後、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを４−ブロモクロトニルクロリドと反応させて、その結果、４−ブロモ−Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−２−ブテンアミドが得られ、その後、これをメチルアミンと反応して、その結果、Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（メチルアミノ）−２−ブテンアミドが得られる。上記ブテンアミドの得られたメチルアミノ誘導体は、炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（炭素−１１標識の化合物４）が得られるように、炭素−１１標識のヨウ化メチルと反応させられる。
【０１５０】
場合により、出発物質は３−ブロモアニリンまたは３−ヨードアニリンであり、得られる生成物は、炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミドまたは炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３−ヨードフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミドである。
【０１５１】
本発明のさらに別の局面により、本明細書中上記に記載されるような、フッ素−１８で標識された化合物を合成する方法が提供される。この方法は、事前に選択されたニトロベンゼン型化合物を１８Ｆ−フッ化物イオンと反応し、その後、得られたフルオロニトロベンゼン型化合物をヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液により還元することによって、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたフッ素−１８標識のアニリン型化合物を調製することによって行われる。その後、誘導体化されたフッ素−１８標識のアニリン型化合物を、本明細書中に定義されるような１つ以上の反応基によって６位および／または７位が置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得て、そして反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させる。
【０１５２】
１つの具体例において、フッ素−１８標識の３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリンが、１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンを１８Ｆ−フッ化物イオンと反応させ、得られたフッ素−１８標識の３，４−ジクロロ−６−フルオロニトロベンゼンを本明細書中上記に記載されるように還元することによって調製される。その後、フッ素−１８標識のアニリン型化合物を４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させる。その後、得られたフッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンをヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液によって還元して、その結果、フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンが得られ、これは、フッ素−１８標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（フッ素−１８標識の化合物３）が得られるように、アクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１５３】
場合により、フッ素−１８標識のアニリン型化合物が４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられる。その後、得られた生成物を本明細書中上記に記載されるように還元して、その結果、フッ素−１８標識の６−アミノ−４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンが得られる。得られたフッ素−１８標識の置換アミノキナゾリンは、その後、モルホリノ基によって誘導体化された放射能標識（フッ素−１８標識）の化合物３が得られるように、アクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１５４】
さらに、場合により、得られたフッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンは、放射能標識（フッ素−１８標識）された化合物４が得られるように、４−ブロモクロトニルクロリドと反応させられ、その後、ジメチルアミンと反応させられる。
【０１５５】
本発明のさらに別の局面により、本明細書中上記に記載されるような、放射性臭素で標識された化合物または放射性ヨウ素で標識された化合物を合成する方法が提供される。この方法は、Ｒａ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化されたアニリン型化合物（この場合、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがハロゲンである）を、本明細書中に定義されるように１つ以上の反応基によって６位および／または７位が置換された４−クロロキナゾリンとカップリングして、その結果、本明細書中に定義されるようにＡ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること、そしてＡ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを触媒として使用して、ビストリブチルスズと反応して、その結果、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤによって誘導体化された反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物（この場合、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの少なくとも１つがトリブチルスズである）を得て、その後、スズ化生成物を酸化剤の存在下で放射性臭素または放射性ヨウ素と反応して、その結果、放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ることによって、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を放射能標識することによって達成される。その後、放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させる。
【０１５６】
１つの具体例において、３−ブロモアニリンが４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられ、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンが得られ、これは、その後、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液によって、対応する６−アミノキナゾリンに還元される。４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンは、その後、トリエチルアミン溶液中においてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの存在下でビストリブチルスズと反応させられる。得られたスズ化生成物は、その後、本明細書中上記に記載されるように、臭素−７６と反応させられる。得られた臭素−７６標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンは、その後、臭素−７６標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドが得られるように、アクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１５７】
場合により、臭素標識のアニリン型化合物は４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンと反応させられ、そして得られた生成物を、その後、本明細書中上記に記載されるように還元して、その結果、臭素標識の６−アミノ−４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンが得られる。得られた臭素標識の置換アミノキナゾリンは、その後、モルホリノ基によって誘導体化された臭素標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドが得られるように、アクリロイルクロリドと反応させられる。
【０１５８】
さらに、場合により、得られた臭素標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンは、放射能標識された化合物４が得られるように、４−ブロモクロトニルクロリドと反応させられ、その後、ジメチルアミンと反応させられる。
【０１５９】
放射線画像化および放射線治療：
本明細書中に記載される放射能標識された化合物は、放射線画像化剤および放射線治療剤として使用することができる。本発明の炭素−１１標識化合物、フッ素−１８標識化合物、臭素−７６標識化合物およびヨウ素−１２４標識化合物は、ＰＥＴ放射線画像化用の生体マーカーとして使用することができ、これに対して、本発明のヨウ素−１２３標識化合物はＳＰＥＣＴ放射線画像化用の生体マーカーとして使用することができる。本発明の臭素−７７標識化合物、ヨウ素−１２４標識化合物およびヨウ素−１３１標識化合物は放射線治療用の放射性医薬品として使用することができる。従って、本発明の放射能標識された化合物は、炭素−１１、フッ素−１８、臭素−７６、ヨウ素−１２３またはヨウ素−１２４で放射能標識された本明細書中に記載される化合物のいずれかを患者に投与し、そして体内またはその一部における化合物の分布をモニターするために、陽電子放射断層撮影法または単光子放射型コンピューター断層撮影法などの核画像化技術を用いることによって患者の体内における上皮増殖因子受容体のレベルをモニターする方法を行うために使用することができる。
【０１６０】
核画像化のための投薬は、化合物のその受容体に対する親和性、用いられた同位体、および標識の比活性に依存する。当業者は最適な核画像化投薬量および投薬方法を容易に決定することができる。
【０１６１】
本明細書中に記載される臭素−７７放射能標識化合物、ヨウ素−１２４放射能標識化合物およびヨウ素−１３１放射能標識化合物は、本明細書中に記載されるような放射能標識された化合物の治療効果的な量を、例えば、薬学的に受容可能なキャリアと混合して、患者に投与することによって放射線治療方法を行うために使用することができる。
【０１６２】
本発明の方法において使用される任意の化合物について、治療効果的な量は、本明細書中では治療効果的な用量としてもまた示されるが、最初に細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば、用量を、細胞培養において測定されるようなＩＣ５０またはＩＣ１００を含む循環濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて定めることができる。そのような情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。最初の投薬量はまた、インビボでのデータから見積もることができる。これらの初期指針を使用して、当業者は、ヒトにおける効果的な投薬量を決定することができる。
【０１６３】
さらに、本明細書中に記載される放射能標識された化合物の毒性および治療効力は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法によって、例えば、ＬＤ５０およびＥＤ５０を測定することによって明らかにすることができる。毒性作用と治療効果との用量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との比として表すことができる。大きい治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用について非毒性である投薬量範囲を定める際に使用することができる。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、毒性をほとんど伴わない又は毒性のない、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる投薬形態および使用される投与経路に依存して、この範囲内において変化させることができる。正確な配合および投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して、個々の医師によって選ぶことができる（例えば、Ｆｉｎｇｌ他、１９７５、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第１章、１頁を参照のこと）。
【０１６４】
投薬量および投薬間隔は、治療効果を維持するために十分である活性な化合物の血漿レベルを得るために個々に調節することができる。経口投与された通常の患者投薬量は約５０ｍｇ／ｋｇ／日〜２０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、一般には約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、好ましくは約１５０ｍｇ／ｋｇ／日〜７００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、最も好ましくは約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。好ましくは、治療効果的な血清レベルは、多数回の用量を日々投与することによって達成される。局所的投与または選択的取り込みの場合、薬物の効果的な局所濃度は血漿中濃度に関連しなくてもよい。当業者は、過度な実験を行うことなく、治療効果的な局所的投薬量を最適化することができる。
【０１６５】
薬学的組成物：
本明細書中に記載される放射能標識された化合物はどれも、疾患の放射線治療のために、または画像診断のために使用することができる薬学的組成物に配合することができる。そのような組成物は、本明細書中に記載される放射能標識された化合物のいずれかを有効成分として含み、そして薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【０１６６】
本明細書中で使用される「薬学的組成物」は、本明細書中に記載される放射能標識された化合物の１つ以上と、薬学的に好適なキャリアおよび賦形剤などの他の化学的成分との調製物を示す。薬学的組成物の目的は、生物に対する化合物の投与を容易にすることである。
【０１６７】
本明細書中下記において、用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、著しい刺激を生物に生じさせず、かつ投与された化合物の生物学的な活性および性質を妨げないキャリアまたは希釈剤を示す。キャリアの非限定的な例には、プロピレングリコール、生理的食塩水、有機溶媒と水とのエマルションおよび混合物がある。本明細書中における用語「賦形剤」は、化合物の投与をさらに容易にするために薬学的組成物に添加される不活性な物質を示す。賦形剤の非限定的な例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１６８】
薬物の配合および投与に関する様々な技術を、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）において見出すことができる。
【０１６９】
投与経路：好適な投与経路には、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、経皮送達、腸管送達または非経口的送達（筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびにくも膜下注射、直接的な脳室（心室）内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射または眼内注射を含む）が含まれる。
【０１７０】
組成物／配合物：本発明の薬学的組成物は、この分野で十分に知られている様々なプロセスによって、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣剤作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の従来のプロセスによって製造することができる。
【０１７１】
従って、本発明に従って使用される薬学的組成物は、薬学的に使用され得る調製物への活性な化合物の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアを使用して、従来の様式で配合することができる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
【０１７２】
注射の場合、本発明の化合物は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの有機溶媒とともに、または有機溶媒を用いることなく、水溶液において、好ましくは生理学的に適合し得る緩衝液（ハンクス溶液、リンゲル溶液または生理学的な生理的食塩水緩衝液など）において配合することができる。経粘膜投与の場合、浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
【０１７３】
経口投与の場合、化合物は、活性な化合物を、この分野で十分に知られている薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって容易に配合することができる。そのようなキャリアにより、本発明の化合物は、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤、懸濁物などとして配合することが可能になる。経口使用される薬理学的調製物を、固体の賦形剤を使用し、必要な場合には得られた混合物を粉砕し、そして錠剤または糖衣錠コアを得るために、所望する場合には好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して作製することができる。好適な賦形剤は、具体的には、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に受容可能なポリマーである。所望する場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
【０１７４】
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料が、活性な化合物の量を明らかにするために、または活性な化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。
【０１７５】
経口使用され得る薬学的組成物には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールされたカプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（ラクトースなど）、結合剤（デンプンなど）、滑剤（タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）および必要な場合には安定化剤と混合された有効成分を含有し得る。軟カプセルでは、活性な化合物を好適な液体（脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。さらに、安定化剤を加えることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路に好適な投薬形態でなければならない。
【０１７６】
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
【０１７７】
吸入による投与の場合、本発明に従って使用される化合物は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投薬量単位を、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。吸入器または吹き入れ器において使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジで、化合物と好適な粉末基剤（ラクトースまたはデンプンなど）との粉末混合物を含有するカプセルおよびカートリッジを配合することができる。
【０１７８】
本明細書中に記載される放射能標識された化合物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、必要な場合には保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多用量容器における単位投薬形態で提供され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルにおける懸濁物または溶液剤またはエマルションにすることができ、そして懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含有することができる。
【０１７９】
非経口投与される薬学的組成物には、水溶性形態での活性な調製物の水溶液が含まれる。さらに、活性な化合物の懸濁物を適切な油性の注射用懸濁物として調製することができる。好適な親油性の溶媒またはビヒクルには、脂肪油（ゴマ油など）、または合成脂肪酸エステル（オレイン酸エチルなど）、トリグリセリドまたはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁物はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために化合物の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
【０１８０】
あるいは、有効成分は、使用前に好適なビヒクル（例えば、滅菌されたパイロジェン非含有水）を用いて構成される粉末形態にすることができる。
【０１８１】
本発明の放射能標識された化合物はまた、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を使用して、坐薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物に配合することができる。
【０１８２】
本明細書中に記載される薬学的組成物はまた、ゲル相キャリアまたは賦形剤の好適な固体を含むことができる。そのようなキャリアまたは賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリマー（ポリエチレングリコールなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８３】
本発明のさらなる目的および利点および新規な特徴は、限定的であることを意図しない下記の実施例を検討したとき、当業者に明らかになる。さらに、本明細書中上記に規定され、そして下記の請求項の節に記載される本発明の様々な実施形態および局面のそれぞれは、実験的裏づけが下記の実施例に見出される。
【０１８４】
実施例
次に、下記の実施例が参照される。下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定的な様式で例示する。
【０１８５】
材料、合成および実験方法
合成：
材料および方法：
化学試薬を、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）またはＣａｒｌｏ  Ｅｒｂａから購入した。すべての化学試薬は、使用前に少なくとも１日間、活性化モレキュラーシーブ上で保存されたＤＭＳＯ、使用前に新たに蒸留されたＴＨＦ、そして広く知られている手順に従って臭化ビニルおよびマグネシウム切削片を反応させることによって使用前に新たに調製されたビニルマグネシウムを除き、購入時のまま使用した。マイクロ波加熱が、５００Ｗ（最大出力）で作動する通常のオーブン（ＢＲ７４０ＸＬ、Ｂｒｏｔｈｅｒ）において行った。
【０１８６】
［Ｆ−１８］フッ化物イオンの作製：１８Ｆ−フッ化物イオンを、Ｈａｄａｓｓａｈ−Ｈｅｂｒｅｗ大学のＩＢＡ１８／９サイクロトロン（ベルギー）において、標的としての約３５０μｌの１８Ｏ−濃縮水（９７％の同位体純度、Ｒｏｔｅｍ、イスラエル）に対する１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応によって得た。反応性の有機１８Ｆ−フッ化物イオンを、１０μｌ〜５０μｌの照射した標的水を水−アセトニトリルにおけるＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２（１０ｍｇ、２７μｌ）およびＫ２ＣＯ３（１ｍｇ）に加えることによって調製した。アセトニトリルとの水の共沸除去を、窒素流下で加熱することによって達成した。その後、乾燥させたＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２−１８Ｆ−フッ化カリウムを、放射能標識において使用するために、３００μｌの無水ＤＭＳＯに溶解した。
【０１８７】
炭素−１１ＣＯ２の作製：炭素−１１ＣＯ２を、Ｈａｄａｓｓａｈ−Ｈｅｂｒｅｗ大学のＩＢＡ１８／９サイクロトロン（ベルギー）において、標的としてのＮ２／０．５％Ｏ２の混合物に対する１４Ｎ（ｐ，α）１１Ｃ核反応によって得た。
【０１８８】
炭素−１１ヨウ化メチルの作製：炭素−１１ヨウ化メチルは、知られている手順［２０］に従って得られる。
【０１８９】
ＨＰＬＣを、Ｖａｒｉａｎ９０１２Ｑポンプ、２５４ｎｍで作動するＶａｒｉａｎ９０５０可変波長ＵＶ検出器、そしてＮａＩ結晶を用いたＢｉｏｓｃａｎフローカウント放射能検出器において行った。
【０１９０】
炭素−１１標識化合物、フッ素−１８標識化合物、放射性臭素標識化合物、および放射性ヨウ素標識化合物を、Ｃ１８逆相プレップカラムおよび下記の移動相系を使用する逆相システムで精製した：４８％ＣＨ３ＣＮ／５２％酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝３．８）、１５ｍｌ／分の流速。溶出画分（２．５ｍｌ）をフラクションコレクター（ＦＣ２０５、Ｇｉｌｓｏｎ）で集めた。調製された放射性トレーサーの分析を、溶出液として４０％ＣＨ３ＣＮ／６０％酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝３．８）を１．７ｍｌ／分の流速で使用して、Ｃ１８カラムのμＢｏｎｄａｐａｋ分析カラムで行った。
【０１９１】
放射性トレーサーの調製を下記のように行った。生成物を、５０ｍｌの水と１ｍｌのＮａＯＨ（１Ｎ）とを含むバイアルで集めた。溶液を、予備洗浄（１０ｍｌの水）した活性化Ｃ１８カートリッジに通し、そして１０ｍｌの滅菌水で洗浄した。生成物を、１ｍｌのエタノール、その後、５ｍｌの生理的食塩水を使用して溶出した。
【０１９２】
一般的な合成スキーム：
α，β−不飽和カルボキシル基（マイケル型アクセプター側鎖）によって置換された炭素−１１標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物：
α，β−不飽和カルボキシル基によって置換された炭素−１１標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を製造するための一般的な合成経路は、スキーム１に示すように、下記の工程を含む：（ｉ）誘導体化アニリン型化合物または非誘導体化アニリン型化合物を、反応基（Ｌ、スキーム１、下記の実施例を参照）によって６位または７位が置換されている４−クロロキナゾリンとカップリングさせて、その結果、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程；および（ｉｉ）反応性のキナゾリン型化合物を、炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル基の反応性の誘導体（Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｍ、スキーム１）と、適切な条件のもとで反応させて、その結果、α，β−不飽和カルボキシル基によってその６位または７位が置換された炭素−１１標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程。
スキーム１
2004525919.tif 000005
【０１９３】
従って、上記に記載される一般的経路（スキーム１）により、下記のα，β−不飽和カルボキシル側鎖基によって置換された炭素−１１標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を合成することができる：
アミン結合の側鎖：ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアミンに還元される。その後、アミンは、ＥＩまたはＡＣなどのカップリング剤の存在下において炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボン酸によってアシル化されるか、または酸塩化物によってアシル化される。
【０１９４】
酸素結合の側鎖：メトキシ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するヒドロキシル化合物が得られるように切断される。その後、ヒドロキシル化合物は、ＥＤＡＣなどのカップリング剤の存在下において炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボン酸によって、または酸塩化物によって、そのいずれかでアシル化される。
【０１９５】
炭素結合の側鎖：ヨウ素によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアリール亜鉛化合物に変換され、これを、活性化ハライドを含む炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル基とカップリングする。
【０１９６】
ヒドラジノ結合の側鎖：ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアミンに還元される。アミンをジアゾ化し、その後、ヒドラジン化合物に還元する。ヒドラジンの遠位側の窒素が、その後、当業者に広く知られている方法を使用して、適切な炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体によってアシル化される。
【０１９７】
ヒドロキシルアミノ−Ｏ−結合の側鎖：ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、適切な穏和な還元性条件下でヒドロキシルアミン化合物に還元される。その後、ヒドロキシルアミン化合物は、当業者に広く知られている方法を使用して、適切な炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体によってアシル化される。
【０１９８】
メチレンアミノ−Ｎ−結合の側鎖：ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアミンに還元される。アミンはジアゾ化され、その後、好ましくは銅塩触媒またはニッケル塩触媒の存在下でニトリルに変換される。その後、ニトリル化合物はメチルアミン化合物に還元され、そしてメチルアミン化合物は、当業者に広く知られている方法を使用して、適切な炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体によってアシル化される。
【０１９９】
メチレンオキシ−Ｏ−結合の側鎖：ヒドロキシメチルによって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、当業者には明かである方法を使用して製造される。例えば、ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアミンに還元され、そしてアミンは、上記に記載されるように、ジアゾ化され、そしてニトリルに変換され、その後、イミンに部分的に還元され、そして加水分解されて、対応するヒドロキシルメチルに還元される。ヒドロキシル基は、その後、当業者に広く知られている方法を使用して、適切な炭素−１１標識のα，β−不飽和カルボキシル誘導体によってアシル化される。
【０２００】
エタノ結合の側鎖：ヨウ素によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、有機亜鉛酸塩を介して、対応する銅塩に変換される。銅塩を、適切にモノ保護された炭素−１１標識のジビニルケトンと反応させ、その後、残っている不飽和官能性基の脱保護が行われる。
【０２０１】
アミノメチル−Ｃ−結合の側鎖：ニトロ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するアミンに還元される。アミンは、炭素−１１標識の１−ブロモブタ−３−エン−２−オンの二重結合が保護された誘導体によってアルキル化される。その後、保護基が、当業者に知られている方法によって除去される。
【０２０２】
ヒドロキシメチル−Ｃ−結合の側鎖：メトキシ基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するヒドロキシル化合物に切断される。ヒドロキシル化合物は、炭素−１１標識の１−ブロモブタ−３−エン−２−オンの二重結合が保護された誘導体によってアルキル化される。その後、保護基が、当業者に知られている方法によって除去される。
【０２０３】
チオメチル−Ｃ−結合の側鎖：ハライドによって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリンが、対応するメルカプト化合物に変換される。メルカプト化合物は、その後、炭素−１１標識の１−ブロモブタ−３−エン−２−オンの二重結合が保護された誘導体によってアルキル化される。その後、保護基が、当業者に知られている方法によって除去される。
【０２０４】
あるいは、α，β−不飽和カルボキシル側鎖を有する炭素−１１標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物が、（ｉ）誘導体化アニリン型化合物または非誘導体化アニリン型化合物を、反応基によって６位または７位が置換されている４−クロロキナゾリンとカップリングさせて、その結果、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；（ｉｉ）反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、第２の反応基を末端に有する反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させて、その結果、第２の反応基を末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；（ｉｉｉ）得られた置換４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、１個〜６個の炭素原子を有する反応性の置換アルキルと反応させて、その結果、反応性の置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ること；そして（ｉｖ）反応性の置換アルキルを末端に有するα，β−不飽和カルボキシル基によって６位または７位が置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、適切な条件下で、炭素−１１標識の反応性化合物と反応させること、によって合成される。
【０２０５】
α，β−不飽和カルボキシル側鎖（マイケル型アクセプター側鎖）を有するフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物：
α，β−不飽和カルボキシル側鎖を有するフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を製造するための一般的な合成経路は、スキーム２に示すように、下記の工程を含む：（ｉ）［Ｆ−１８］フッ化物イオンを対応するジニトロベンゼン誘導体と反応させ、その後、フッ素−１８標識のフルオロニトロベンゼンを還元することによってフッ素−１８標識のアニリン誘導体を調製する工程；（ｉｉ）フッ素−１８標識のアニリン誘導体を、反応基（Ｌ、スキーム２、下記の実施例を参照）によって置換されている４−クロロキナゾリンと反応させて、その結果、反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程；および（ｉｉｉ）反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物をα，β−不飽和カルボキシル基の反応性の誘導体（Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｍ、スキーム２）と反応させて、その結果、α，β−不飽和カルボキシル側鎖によってその６位または７位が置換されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程。
スキーム２
2004525919.tif 000006
【０２０６】
従って、様々なα，β−不飽和カルボキシル側鎖によって置換されたフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、上記に記載される一般的経路に従って合成することができる。反応性のフッ素−１８標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、本明細書中上記に記載される方法を使用して、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させることができる。
【０２０７】
α，β−不飽和カルボキシル側鎖（マイケル型アクセプター側鎖）を有する放射性臭素標識および放射性ヨウ素標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物：
α，β−不飽和カルボキシル側鎖を有する放射性臭素標識および放射性ヨウ素標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を製造するために一般的な合成経路は、スキーム３に示すように、下記の工程を含む：（ｉ）ハロゲンによって誘導体化されているアニリン型化合物を、反応基（Ｌ、スキーム３、下記の実施例を参照）によって置換されている４−クロロキナゾリンと反応させて、その結果、ハロゲンによって誘導体化されている反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程；（ｉｉ）ハロゲンによって誘導体化されている４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを触媒として使用して、ビストリブチルスズと反応させ、その後、得られたスズ化生成物を放射性臭素または放射性ヨウ素と酸化剤の存在下で反応させて、その結果、放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得ることによって、反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を放射能標識する工程；および（ｉｉｉ）放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の反応性の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物をα，β−不飽和カルボキシル基の反応性の誘導体（Ｘ−Ｙ（＝Ｏ）−Ｍ、スキーム３）と反応させて、その結果、α，β−不飽和カルボキシル側鎖によってその６位または７位が置換された放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を得る工程。
スキーム３
2004525919.tif 000007
【０２０８】
放射性臭素は臭素−７６または臭素−７７であり得るし、放射性ヨウ素は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１であり得る。
【０２０９】
従って、臭素−７６、臭素−７７、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１によって放射能標識され、かつ様々なα，β−不飽和カルボキシル側鎖によって置換された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物を、上記に記載される一般的経路に従って合成することができる。反応性の放射性臭素標識または放射性ヨウ素標識の４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物は、本明細書中上記に記載される方法を使用して、反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応させることができる。
【０２１０】
α，β−不飽和［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アミド型化合物の合成−一般的手順：
（ｉ）アニリンまたは誘導体化アニリン（１当量）を、ｉｓｏ−プロピルアルコールなどの極性溶媒中で４−クロロ−６−ニトロキナゾリン（３．５当量）と反応させる。生成物の４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンがろ過後に得られる。
（ｉｉ）４−（フェニルアミノ）−６−ニトロキナゾリンのエタノール／水および極性溶媒（ｉｓｏ−プロピルアルコールなど）における溶液を、還流温度で、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルと反応させる。反応混合物をろ過し、エバポレートし、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、生成物の４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリンを得る。
（ｉｉｉ）４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリンをＴＨＦ中において０℃でα，β−不飽和アシルクロリドと反応させて、最終生成物が定量的収率で得られる。
（ｉｖ）必要な場合には、４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリンを、反応性のハロゲン基を末端に有するα，β−不飽和アシルクロリドと、三級アミンの存在下、ＴＨＦ中において０℃で反応させ、その後、得られた生成物をＴＨＦ中において０℃で置換アルキルと反応させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、置換［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アルキルアミドを最終生成物として得る。さらに必要な場合には、得られた生成物を、その後、４０℃で、ヨウ化アルキルなどの反応性の化合物とさらに反応させて、最終生成物を得る。
【０２１１】
Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（化合物３）の合成：
（ｉ）３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリン（１当量）をｉｓｏ−プロピルアルコール中で４−クロロ−６−ニトロキナゾリン（３．５当量）と反応させた。ろ過後、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリン（化合物１）が７８％の収率で得られた。
（ｉｉ）４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリン（１．０９ｍｍｏｌ）を含む１８ｍｌの９：１のエタノール：水および１１ｍｌのｉｓｏ−プロピルアルコールにおける溶液を還流温度に加熱した。その後、２５０μｌのヒドラジン水和物および０．５ｍｌのラネー（登録商標）ニッケル（水溶液）を加えた。３０分後、さらに５０μｌのヒドラジン水和物を加え、還流を２０分間続けた。ろ過、エバポレーション、そしてシリカゲルクロマトグラフィー（９０％ＣＨ２Ｃｌ２／１０％ＭｅＯＨを溶出液として使用する）によって、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリン（化合物２）が７５％の収率で得られた。
（ｉｉｉ）アクリロイルクロリドをＴＨＦ中において０℃で４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンと反応させた。最終生成物が定量的収率で得られた。
【０２１２】
Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（モルホリノ置換の化合物３）の合成：
（ｉ）３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリン（１当量）をｉｓｏ−プロピルアルコール中で４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリン（３．５当量）と反応させた。ろ過後、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンが７８％の収率で得られた。
（ｉｉ）金属ナトリウム（５当量）を窒素雰囲気下で３−（４−モルホリニル）−１−プロパノール（４当量）のＴＨＦ溶液に加えた。得られた懸濁物を２０℃で２時間撹拌し、その後、窒素雰囲気下において４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンの溶液にカニューレで移した。反応混合物を１８時間還流し、その後、溶媒を減圧下で一部除き、残渣を水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を一緒にして乾燥し、エバポレーションおよびシリカゲルクロマトグラフィー（２０％ＭｅＯＨ／３０％ＣＨ２Ｃｌ２／５０％ＥｔＯＡｃの混合物を溶出液として使用する）によって、４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンが７２％の収率で得られた。
（ｉｉｉ）４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンを、本明細書中上記に記載されるように、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルと反応させて、６−アミノ−４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンが７５％の収率で得られた。
（ｉｖ）アクリロイルクロリドをＴＨＦ中において０℃で６−アミノ−４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンと反応させた。最終生成物が定量的収率で得られた。
【０２１３】
Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（化合物４）の合成：
（ｉ）オキサリルクロリド（３３ｍｍｏｌ）を、４−ブロモクロトン酸（１５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）における懸濁物に加えた。３滴のＤＭＦを加え、混合物を１．５時間撹拌した。その後、溶媒を減圧下で除き、残留オイルをＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。溶液を氷浴で冷却し、そして４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリン（化合物１）（上記に記載されるようにして調製）のＴＨＦ（５０ｍｌ〜１００ｍｌ）における溶液を滴下して加えた。その後、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）における溶液を加え、反応混合物を冷却して、１時間撹拌した。その後、酢酸エチル（８０ｍｌ）および水（１００ｍｌ）を加え、層を分離して、有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して、エバポレートした。４−ブロモ−Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−２−ブテンアミドが、４：１〜５：１の典型的な比率で４−クロロ生成物との分離できない混合物として、８４％の収率で得られた。
（ｉｉ）ジメチルアミンの溶液（ＴＨＦにおける２Ｍ、２５ｍｌ）を撹拌し、（氷浴で）冷却しながら、これに、４−ブロモ−Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−２−ブテンアミド（２．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）における溶液を滴下して加え、反応混合物を２時間撹拌した。その後、酢酸エチル（４５ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ３を加えて、層を分離した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレートし、そしてシリカゲルクロマトグラフィー（２０％ＭｅＯＨ／８０％ＣＨ２Ｃｌ２を使用する）による精製を行うことにより、生成物が５６％の収率で得られた。
【０２１４】
炭素−１１標識のα，β−不飽和［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アクリルアミド型化合物の合成−一般的手順：
放射性合成が、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ＭｅＩモジュールを使用して全自動の経路によって行われる。炭素−１１ＣＯ２（約７００ｍＣｉ）が−１６０℃で捕集され、その後、臭化ビニルマグネシウムをＴＨＦに含有する第１の反応器に、アルゴン流を使用して移される（９０％の捕集効率）。二塩化フタロイルおよびジｔｅｒｔブチルピリジンの添加により、炭素−１１標識のアクリロイルクロリドが得られる。標識されたアクリロイルクロリドは、３００μｌのＴＨＦを−５０℃で含有する第２の反応器に、アルゴン流（２０〜３０ｍｌ／分）を使用して１００℃で４分間蒸留される。蒸留が終了すると、温度が１０℃に上げられ、そして５ｍｇ〜７ｍｇの４−（フェニルアミノ）−６−アミノキナゾリンを含む３００μｌの無水ＴＨＦにおける溶液がこれに添加される。２分後、６００μｌのＨＰＬＣ溶媒（４８％ＣＨ３ＣＮ／５２％酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝３．８）など）が添加され、溶液がＨＰＬＣに注入される（Ｃ１８逆相プレップカラム、１５ｍｌ／分の流速）。生成物が、５０ｍｌの水および１ｍｌの１Ｍ  ＮｅＯＨを含有する固相抽出バイアルに集められる。溶液が、（１０ｍｌの水で）予備洗浄された活性化Ｃ１８カートリッジに通され、１０ｍｌの滅菌水で洗浄される。生成物が、１ｍｌのエタノール、その後、５ｍｌの生理的食塩水を使用して溶出され、１８％の崩壊補正（ＥＯＢ）放射化学収率で滅菌生成物バイアルに集められる。精製を含む全体の合成時間は３５分である。
【０２１５】
炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（化合物３）の合成：
炭素−１１標識のアクリロイルクロリドを上記に記載される一般的手順によって得た。これを５ｍｇ〜７ｍｇの４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンと２分間反応させた。その後、ＨＰＬＣ溶媒（６００μｌの４８％ＣＨ３ＣＮ／５２％酢酸塩緩衝液、ｐＨ＝３．８）を加え、そして溶液を、本明細書中上記に記載されるように、ＨＰＬＣ装置に注入した。生成物の保持時間は２２分であった。生成物を集め、水で洗浄された活性化Ｃ１８カートリッジに通した。生成物が、１８％の崩壊補正（ＥＯＢ）放射化学収率で滅菌生成物バイアルに集められた。その放射化学的純度を、溶出液として４０％ＣＨ３ＣＮ／６０％酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝３．８）を１．７ｍｌ／分の流速で使用して逆相ＨＰＬＣ（μＢｏｎｄａｐａｋ分析カラム）によって分析した（保持時間は１１．７分であった）。放射化学的純度は１００％であることが見出された（１７００Ｃｉ／ｍｍｏｌのＳＡ）。
【０２１６】
炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３−ブロモ／ヨードフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドの合成：
炭素−１１標識のアクリロイルクロリドを上記に記載される一般的手順によって得る。これを、上記に記載される一般的手順に従って４−［（３−ブロモ／ヨードフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンと反応させる。
【０２１７】
炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（モルホリノ置換の化合物３）の合成：
炭素−１１標識のアクリロイルクロリドを上記に記載される一般的手順によって得る。これを、上記に記載される一般的手順に従って６−アミノ−４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンと反応させる。
【０２１８】
炭素−１１標識のＮ−｛４−［（３−ブロモ／ヨードフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドの合成：
炭素−１１標識のアクリロイルクロリドを上記に記載される一般的手順によって得る。これを、上記に記載される一般的手順に従って６−アミノ−４−［（３−ブロモ／ヨードフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリンと反応させる。
【０２１９】
炭素−１１標識のα，β−不飽和［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド型化合物の合成−一般的手順：
炭素−１１標識のヨウ化メチルを、広く知られている手順［２０］によって第１の反応器において作製し、その後、本明細書中上記に記載される一般的手順によって得られる置換［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アルキルアミドの３ミリグラムを含有する第２の反応器に２分間〜３分間蒸留する。蒸留が終了すると、第２の反応器を密封して、１４０℃で数分間加熱する。その後、ＨＰＬＣ溶媒をこれに加えて、混合物を逆相ＨＰＬＣカラムで分離する。生成物を水で希釈して、固相抽出によって集める。
【０２２０】
炭素−１１標識のα，β−不飽和Ｎ−｛４−［３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（化合物４）の合成：
メチルアミンの溶液（ＴＨＦにおける２Ｍ、２５ｍｌ）を撹拌し、（氷浴で）冷却しながら、これに、本明細書中上記に記載されるようにして得られる４−ブロモ−Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−２−ブテンアミド（２．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）における溶液を滴下して加える。反応混合物２時間撹拌して、酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３を加え、層を分離する。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレートする。得られるＮ−｛４−（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（メチルアミノ）−２−ブテンアミドをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、そして本明細書中上記に記載される一般的手順に従って炭素−１１標識のヨウ化メチルと反応させる。
【０２２１】
フッ素−１８標識のα，β−不飽和［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アクリルアミド型化合物の合成−一般的手順：
上記に記載されるＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２−１８Ｆ−フッ化カリウム−ＤＭＳＯ溶液を、スクリュー栓試験管（８ｍｌ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の２ｍｇ〜３ｍｇの事前に選択されたジニトロベンゼン型化合物に加える。試験管に栓をして、試験管を振とうし、そして電子レンジにおいて３．５分間加熱する。試験管を周囲温度の水浴で冷却する。その内容物を１０ｍｌの水で希釈して、活性化（エタノール）および平衡化（水）されたＣ１８Ｓｅｐ−Ｐａｋ（クラシック、短型、Ｗａｔｅｒｓ）に負荷する。カートリッジを水（１０ｍｌ）で洗浄し、所望の対応する中間体であるフッ素−１８標識のフルオロニトロベンゼンをエタノール（２ｍｌ）で溶出して、小さいガラス試験管に入れる。還元反応容器を、平底ガラスバイアル（２５ｍｌ）に、順次、数個のホウケイ酸ガラスビーズ、１００μｌの４：１のエタノール−水、２５０μｌのラネー（登録商標）ニッケルスラリー、および６０μｌのヒドラジン一水和物を加えることによって準備する。（大きい直径のニードルで通気される）セプタムを備えたスクリュー栓で栓をした後、バイアルを振とうして、４０℃の加熱ブロックに入れる。フッ素−１８標識のフルオロニトロベンゼンのエタノール溶液を０．５ｍｌの水で希釈して、還元反応容器にゆっくり加える。５分後、容器を周囲温度の水浴で冷却して、バイアルの内容物を０．４５μｍのフィルター（Ｐｕｒａｄｉｓｃ、ポリプロピレン、Ｗｈａｔｍａｎ）でろ過して、別の２５ｍｌ平底バイアルに入れる。その後、８ｍｌの水および１０ｍｌのエーテルをろ過された溶液に加え、そして栓をし、数回ひっくり返して混合することによって、対応するフッ素−１８標識のフルオロアニリン還元反応生成物をエーテル層に抽出する。その後、８ｍｌのスクリュー栓試験管に、４ｍｇ〜５ｍｇの４−クロロ−６−ニトロキナゾリンを含む３００μｌの２−プロパノールにおける溶液を入れる。放射能標識されたアニリン型化合物のエーテル溶液を、ＭｇＳＯ４（２グラム）および新しい０．４５μｍフィルターに通すことによって試験管に加える。周囲温度の水浴で試験管を暖めながら、エーテルをヘリウム流のもとで除く。その後、濃ＨＣｌ（１μｌ）を加えて、栓をした試験管を１１０℃の油浴で１５分間加熱する。試験管を周囲温度の水で冷却した後、酸を中和し、そして５０μｌの５Ｍ  ＮａＯＨの添加によってフリーの塩基を遊離させる。ジクロロメタン（０．３ｍｌ）およびヘキサン（０．３ｍｌ）を試験管に加えて、溶液を０．２μｍフィルター（Ａｃｒｏｄｉｓｃ、ナイロン、Ｇｅｌｍａｎ）でろ過する。フッ素−１８標識の４−［（フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンをシリカＳＥＰ−ＰＡＫによって精製し、還元して、そのアミン誘導体が得られる。これはさらに、本明細書中に記載されるように、アクリロイルクロリドと反応させられる。
【０２２２】
フッ素−１８標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（化合物３）の合成：
フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリン（化合物１）を、１，２−ジクロロ−４−１８Ｆ−フルオロ−５−ニトロベンゼンを得るための１８Ｆ−フッ化物イオンとの反応において２ｍｇ〜３ｍｇの１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンを使用して、本明細書中上記に記載される放射性合成の手順によって得て、これを、記載されるように、対応するアニリン型化合物に還元して、４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させた。フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを、記載されるようにさらに反応して、フッ素−１８標識の最終生成物が得られた。
【０２２３】
フッ素−１８標識のＮ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（モルホリノ置換の化合物３）の合成：
フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンを、１，２−ジクロロ−４−１８Ｆ−フルオロ−５−ニトロベンゼンを得るための１８Ｆ−フッ化物イオンとの反応において１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンを使用して、本明細書中上記に記載される放射性合成の手順によって得て、これを対応するアニリン型化合物に還元する。得られるアニリン型化合物を、記載されるように、４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンと反応させる。フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンを、その後、本明細書中上記に記載されるように、３−（４−モルホリニル）−１−プロパノールのナトリウム塩と反応させる。フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンをさらに、上記に記載されるように、対応するアミノキナゾリン型化合物に還元し、アクリロイルクロリドと反応させて、フッ素−１８標識の最終生成物が得られる。
【０２２４】
フッ素−１８標識のＮ−｛４−［３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（化合物４）の合成：
フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリン（化合物１）を、１，２−ジクロロ−４−１８Ｆ−フルオロ−５−ニトロベンゼンを得るための１８Ｆ−フッ化物イオンとの反応において１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンを使用して、本明細書中上記に記載される放射性合成の手順によって得て、これを、記載されるように、対応するアニリン型化合物に還元し、そして４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させる。フッ素−１８標識の４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを対応するフッ素−１８標識の６−アミノキナゾリン型化合物に還元し、これをさらに、記載されるように、４−ブロモクロトニルクロリド（オキサリルクロリドと４−ブロモクロトン酸とを反応させることによって得られる）およびジメチルアミンと反応させて、フッ素−１８標識の最終生成物が得られる。
【０２２５】
臭素−７６標識および臭素−７７標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミドの合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを得て、その後、これを対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元する。その後、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを、反応触媒としてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムをトリエチルアミン溶液において使用してビストリブチルスズと反応させる。スズ化キナゾリンを、その後、酸化剤の存在下で臭素−７６または臭素−７７と反応させて、臭素−７６標識または臭素−７７標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを得て、これをさらに、記載されるように、アクリロイルクロリドと反応させて、臭素−７６標識または臭素−７７標識の最終生成物が得られる。
【０２２６】
臭素−７６標識および臭素−７７標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドの合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンを得て、これをその後、本明細書中上記に記載されるように、３−（４−モルホリニル）−１−プロパノールのナトリウム塩と反応させて、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンが得られる。モルホリノ置換された６−ニトロキナゾリンをその後、対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元し、これをさらに、本明細書中上記に記載されるように、ビストリブチルスズ、臭素−７６または臭素−７７、およびアクリロイルクロリドと反応させて、臭素−７６標識または臭素−７７標識の最終生成物が得られる。
【０２２７】
臭素−７６標識および臭素−７７標識のＮ−｛４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（化合物４）の合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを得て、これをその後、記載されるように、対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元する。その後、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを、反応触媒としてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムをトリエチルアミン溶液において使用してビストリブチルスズと反応させる。スズ化キナゾリンを、その後、酸化剤の存在下で臭素−７６または臭素−７７と反応させて、臭素−７６標識または臭素−７７標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを得て、これをさらに、記載されるように、４−ブロモクロトニルクロリド（オキサリルクロリドと４−ブロモクロトン酸とを反応させることによって得られる）およびジメチルアミンと反応させて、臭素−７６標識または臭素−７７標識の最終生成物が得られる。
【０２２８】
ヨウ素−１２３標識、ヨウ素−１２４標識およびヨウ素−１３１標識のＮ−｛４−［（３−ヨードフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミドの合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを得て、その後、これを対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元する。その後、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを、反応触媒としてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムをトリエチルアミン溶液において使用してビストリブチルスズと反応させる。スズ化キナゾリンを、その後、酸化剤の存在下でヨウ素−１２３またはヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１と反応させて、ヨウ素−１２３標識またはヨウ素−１２４標識またはヨウ素−１３１標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを得て、これをさらに、記載されるように、アクリロイルクロリドと反応させて、ヨウ素−１２３標識またはヨウ素−１２４標識またはヨウ素−１３１標識の最終生成物が得られる。
【０２２９】
ヨウ素−１２３標識、ヨウ素−１２４標識およびヨウ素−１３１標識のＮ−｛４−［（３−ヨードフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミドの合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−ニトロキナゾリンを得て、これをその後、本明細書中上記に記載されるように、３−（４−モルホリニル）−１−プロパノールのナトリウム塩と反応させて、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−ニトロキナゾリンを得る。モルホリノ置換された６−ニトロキナゾリンをその後、対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元し、これをさらに、本明細書中上記に記載されるように、ビストリブチルスズ、ヨウ素−１２３またはヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１、およびアクリロイルクロリドと反応させて、ヨウ素−１２３標識またはヨウ素−１２４標識またはヨウ素−１３１標識の最終生成物が得られる。
【０２３０】
ヨウ素−１２３標識、ヨウ素−１２４標識およびヨウ素−１３１標識のＮ−｛４−［３−ヨードフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミドの合成：
３−ブロモアニリンを４−クロロ−６−ニトロキナゾリンとカップリングして、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−ニトロキナゾリンを得て、その後、これを対応する６−アミノキナゾリン型化合物に還元する。その後、４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを、反応触媒としてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムをトリエチルアミン溶液において使用してビストリブチルスズと反応させる。スズ化キナゾリンを、その後、酸化剤の存在下でヨウ素−１２３またはヨウ素−１２４またはヨウ素−１３１と反応させて、ヨウ素−１２３標識またはヨウ素−１２４標識またはヨウ素−１３１標識の４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−アミノキナゾリンを得て、これをさらに、記載されるように、４−ブロモクロトニルクロリド（オキサリルクロリドと４−ブロモクロトン酸とを反応させることによって得られる）およびジメチルアミンと反応させて、ヨウ素−１２３標識またはヨウ素−１２４標識またはヨウ素−１３１標識の最終生成物が得られる。
【０２３１】
活性アッセイ：
Ａ４３１細胞溶解物における自己リン酸化阻害実験：
ＥＧＦＲ−ＴＫ源：ＥＧＦＲ−ＴＫ源として、Ａ４３１ヒト類表皮ガン細胞溶解物を使用した。Ａ４３１細胞を、１０％ウシ胎児血清および抗生物質（ペニシリンおよびストレプトマイシン）を含有するＤＭＥＭにおいて増殖させた。数日後、細胞を、ＰＢＳ／１ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液とともに３７℃で１時間インキュベーションすることによってフラスコから取り出した。細胞懸濁物の遠心分離（６００ｇ、５分間、室温）によって得られたペレットを、その後、溶解緩衝液（０．０２Ｍ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）、０．１２５Ｍ  ＮａＣｌ、１％トリトンＸ−１００、１０％グリセロール）に再懸濁して、氷中に１０分間置いた。細胞溶解物をさらなる遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０分間、４℃）によって得て、上清を集め、小分けにして−７０℃で凍結した。
【０２３２】
ＥＬＩＳＡアッセイ：ＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸化のＩＣ５０値をＥＬＩＳＡアッセイによって得た。下記のインキュベーションはすべて、絶えず振とうしながら室温で行われた。各ステップの後、プレートを水（５回）およびＴＢＳＴ緩衝液（１回）で洗浄した。各ウエルに対する最終容量は１５０μｌであった。
【０２３３】
Ｃｏｒｎｉｎｇ社の９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ（ｐＨ８．２）で希釈されたモノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体ｍ１０８（Ｓｕｇｅｎ  Ｉｎｃ．）でコーティングして、４℃で一晩保った。結合していないｍ１０８を除いた後、プレートを洗浄して、５％ミルク（１％脂肪）を含有するＰＢＳをブロッキングのために加えた（２５分間）。
【０２３４】
Ａ４３１細胞溶解物の小分け物の１つを解凍して、プレートに加えた。溶解物の量は、ｍ１０８の量と、Ａ４３１細胞溶解物中のＥＧＦＲ−ＴＫの量との間における最も良い比率を明らかにするために阻害剤の非存在下で行われた以前の試験に従って決められた。
【０２３５】
２５分後、７つの異なる濃度の各阻害剤を加えた。それぞれの場合について、１つのウエルを無阻害コントロール（阻害剤なし）として、そして１つのウエルを無ＥＧＦＲ−ＴＫコントロール（溶解物なし）として残した。阻害剤はＴＢＳ／ＤＭＳＯで希釈され、ＤＭＳＯの最終濃度は、（コントロールを含む）各ウエルにおいて０．０５％であった。
【０２３６】
２５分後、プレートを洗浄することなく、ＡＴＰ／ＭｎＣｌ２の溶液をそれぞれのウエルに加えた。最終濃度は３μＭ  ＡＴＰ／５ｍＭ  ＭｎＣｌ２であった。このステップでは、温度は２６℃で保たれ、プレートは一定の振とう下に置かれた。ＡＴＰ／ＭｎＣｌ２とのインキュベーションは５分間であった。
【０２３７】
その後、リン酸化反応を停止させるために、ＥＤＴＡを加えた（ｐＨ８、各ウエルにおける最終濃度：２０ｍＭ）。１分後、すべてのプレートを洗浄した。
【０２３８】
その後、ポリクローナル抗ホスホチロシン血清（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を加えた（５％ミルク含有ＴＢＳＴで抗体は希釈される）。インキュベーションは４５分間であった。
【０２３９】
ＥＧＦＲ−ＴＫにおけるホスホチロシンの比色法による検出のために、ＴＡＧＯ抗ウサギペルオキシダーゼ結合抗体（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．）をＴＢＳＴ／５％ミルクの溶液で加えた（４５分間）。
【０２４０】
洗浄後、比色測定反応を、クエン酸塩−リン酸塩緩衝液におけるＡＢＴＳ／Ｈ２Ｏ２を加えることによって行った。５分後〜１０分後、プレートを４０５ｎｍにおいてＤｙｎａｙｔｅｃ  ＭＲ５０００ＥＬＩＳＡリーダーで読み取った。
データの分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（バージョン２．０１、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用して行った。
【０２４１】
無傷のＡ４３１細胞における自己リン酸化阻害実験：
Ａ４３１細胞（１０６個）を６ウエルプレートに播種して、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および抗生物質を含有するＤＭＥＭ（高グルコース）において３７℃で６０％〜８０％のコンフルエンスに増殖させた。その後、細胞を無血清培地に３７℃で１８時間さらした。
【０２４２】
不可逆性アッセイ：０．０５ｎＭ〜５０ｎＭの範囲で様々な濃度物の阻害剤をＡ４３１細胞に加え、２時間インキュベーションした。阻害剤はビヒクル／ＤＭＳＯで希釈され、ＤＭＳＯの最終濃度は各ウエルにおいて０．０５％であった。その後、培地を阻害剤／無ＦＣＳ培地と交換して、細胞を２時間または８時間のいずれかで３７℃に置いた。８時間の期間中において、培地をさらに３回交換した。インキュベーション後の期間の後、細胞をＥＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）で５分間刺激し、その後、ＰＢＳで洗浄した。全細胞溶解物を、０．００１％ブロモフェノールブルーを含有する０．４ｍｌのＬｅａｍｍｌｉ緩衝液（１０％グリセロール、３％ドデシル硫酸ナトリウム、５％ｂ−メルカプトエタノール、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ６．８）を用いてウエル内の細胞を掻き取り、５分間煮沸することによって得た。サンプルを−２０℃で保存し、その後、本明細書中下記に記載されるタンパク質測定アッセイを行った。
【０２４３】
ＥＧＦＲ自己リン酸阻害速度の測定：Ａ４３１細胞（６ｘ１０５個）を、１分〜１０分の範囲で様々な時間にわたって、室温で阻害剤とインキュベーションした。インキュベーション後、培地を阻害剤／無ＦＣＳ培地と交換して、細胞を、１時間または８時間のいずれかで３７℃で保ち、その後、ＥＧＦで刺激し、そして本明細書中上記に記載されるように溶解した。その後、タンパク質測定アッセイを、インキュベーション後１時間の置かれた細胞の組合せの各時点についてはｎ＝１で、そしてインキュベーション後８時間の細胞の組合せについてはｎ＝２（各時点について）で、１回行った。
【０２４４】
タンパク質測定アッセイ：各溶解物におけるタンパク質量をろ紙アッセイによって測定した：各抽出物からの小分け物（３ｍｌ）をＷｈａｔｍａｎブロッティング紙の細片（１ｘ３ｃｍ）に載せ、そしてろ過された染色液（０．２５％クーマシーブルー、４０％ＭｅＯＨ、１０％酢酸）に、穏やかに振とうしながら、室温で２０分間浸した。その後、細片を脱色液（２０％ＭｅＯＨ、７％酢酸）で洗浄（１５分間、３回）し、乾燥した。各細片を、ドデシル硫酸ナトリウム溶液（３％、５００ｍｌ、３７℃）中で絶えず振とうすることによって抽出した。１時間後、溶出されたサンプルを９６ウエルプレートに移して、マイクロプレートリーダー（ＥＬＸ８００、Ｂｉｏｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）で５９５ｎｍにおいて読み取った。標準曲線を、ＢＳＡ（１ｍｇ／ｍｌ）を使用して作製した。
【０２４５】
ウエスタンブロット：各溶解物サンプルからの同一タンパク質量をポリアクリルアミドゲル（６％または１０％）に負荷し、電気泳動（Ｈｏｅｆｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、アメリカ）によって分離して、ニトロセルロースメンブレンに転写した（電源：ＥＰＳ５００／４００、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ニトロセルロースエクストラブロッティングメンブレン：Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＡＧ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、ドイツ）。標準の高分子量溶液を参照として負荷した。分子量バンドを可視化するために、メンブレンをポンソー試薬（０．０５％ポンソー、５％酢酸）に数分間浸け、その後、ＴＴＮ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、０．２％ツイーン２０、１７０ｍＭ  ＮａＣｌ）で２回洗浄し、そして水で１回洗浄した。メンブレンを、５％ミルク（１％脂肪）を含有するＴＴＮ（ブロッキングＴＴＮ）で一晩ブロッキングし、そしてブロッキングＴＴＮで１：２，０００希釈されたＰＹ２０抗ホスホチロシン抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、アメリカ）と９０分間インキュベーションした。その後、メンブレンをＴＴＮで洗浄（５分間、３回）し、そして西洋ワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体（ブロッキングＴＴＮで１：１０，０００希釈されたヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｈ＋Ｌ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）と９０分間インキュベーションし、最後にＴＴＮで再び洗浄（５分間、３回）した。メンブレンをルミノール系溶液中でインキュベーション（１分間、０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）、２５０μＭルミノール、４００μＭｐ−クマル酸、０．０３３％Ｈ２Ｏ２）し、そして化学発光検出を使用して可視化した。
【０２４６】
得られたＥＧＦＲ−Ｐ（タンパク質）バンド密度の定量を、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ５．０ＭＥプログラムおよびＮＩＨイメージ１．１６／ｐｐｃプログラムを使用して行った。
【０２４７】
実験結果
放射線画像化および放射線治療において使用される放射能標識された不可逆的なＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤を求めて、［４−（フェニルアミノ）キナゾリン−６−イル］アクリルアミドの誘導体（化合物３、置換された化合物３、および化合物４など）を、α，β−不飽和カルボキシル誘導体によって置換された他の放射能標識された４−（フェニルアミノ）キナゾリン型化合物に対する例示的な化合物として調製した。このクラスの化合物は、アニリン誘導体を反応基によって置換された４−クロロキナゾリンと反応し、得られた反応性生成物を反応性のα，β−不飽和カルボキシル誘導体と反応して、最終化合物を得ることによって調製される。
【０２４８】
Ｎ−｛４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］キナゾリン−６−イル｝アクリルアミド（化合物３）が、対応するアニリン誘導体を４−クロロ−６−ニトロキナゾリンと反応させて、化合物１を調製し（スキーム４）、その後、化合物１のニトロ基を、記載されるように、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液を使用してアミノ基に還元して、化合物２を得て、その後、化合物２をアクリロイルクロリドと０℃で反応して、最終生成物の化合物３を得ることによって調製された（スキーム４）。
スキーム４
2004525919.tif 000008
【０２４９】
放射能標識された化合物３が２つの選択的な標識化方法によって得られた。第１の方法では、既知の手順［１７］を使用してアニリン成分をその６位において標識するために、フッ素−１８の使用が含まれ、一方、第２の方法では、炭素−１１で標識されたアクリロイルシントン［１８］を最後の合成工程において使用することが含まれる。
【０２５０】
従って、フッ素−１８標識の化合物３が、１，２−ジクロロ−４，５−ニトロベンゼンを、ＤＭＳＯ溶液中で、フッ化カリウム、および相間移動触媒としてのＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２と反応させることによって得られた。フッ素−１８標識の生成物を、その後、ヒドラジン水和物およびラネー（登録商標）ニッケルのエタノール性溶液において還元して、フッ素−１８標識の３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリンが得られた（標識された化合物１、スキーム５）。フッ素−１８標識の最終生成物が、本明細書中上記に記載される工程を使用することによって得られた（スキーム４）。
スキーム５
2004525919.tif 000009
【０２５１】
炭素−１１標識の化合物３が、炭素−１１標識のアクリロイルクロリドを合成の最終工程で使用することによって得られた。炭素−１１標識のアクリロイルクロリドは、炭素−１１標識のＣＯ２を、臭化ビニルマグネシウム、塩化フタロイルおよびジｔｅｒｔブチルピリジンと反応させることによって得られ、その後、炭素−１１標識の最終生成物を得るために化合物２と反応させられた。この放射性合成は、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ＭｅＩモジュールを使用して全自動の経路によって行われた。
【０２５２】
本明細書中上記に記載される手順の改変を使用して、他の放射能標識された化合物、例えば、臭素標識およびヨウ素標識の化合物３、炭素−１１、フッ素−１８、放射性臭素および放射性ヨウ素によって放射能標識されたモルホリノ置換の化合物３、ならびに、炭素−１１標識、フッ素−１８標識、臭素標識およびヨウ素標識の化合物４を、本明細書中上記に詳しく記載されるように調製することができる。
【０２５３】
ＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸のＩＣ５０値を、ＰＥＴトレーサーとしてのその可能性を明らかにするために化合物３について測定した。方法では、抗ＥＧＦＲ抗体に基づくＥＬＩＳＡアッセイが用いられた。測定された化合物は不可逆的な阻害速度論を有するので、そのＩＣ５０値は、様々な傾きを有するＳ字形用量応答曲線に対する非線形回帰近似を使用して計算された見かけの値である。ＥＬＩＳＡアッセイが２回行われ、見かけのＩＣ５０平均値が４つの独立した用量応答曲線から得られた（ｎ＝４、ＩＣ５０ａｐｐ＝０．０４２ｎＭ＋／−０．０１６）。ＩＣ５０ａｐｐ値が０．０５１ｎＭであり、９５％信頼性区間として０．００８８／０．２９４の範囲を有する例示的な用量応答曲線のプロットが図１に示される（この場合、ｒ２は０．９９５に等しい）。
【０２５４】
化合物３−ＥＧＦＲ−ＴＫ結合の不可逆的な性質およびその速度論的パラメーターを、無傷のＡ４３１細胞株におけるＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸化の阻害を測定することによって評価した。受容体に対する化合物３の結合が不可逆的であることを明らかにするために、細胞を様々な阻害剤濃度とともに２時間インキュベーションした。インキュベーション後、培地を阻害剤／無ＦＣＳ培地と交換し、阻害作用を２時間後および８時間後に測定して、比較した。図２に示されるように、阻害剤／無ＦＣＳ培地において２時間後、約３５％、４０％および約１００％の阻害が、それぞれ、０．５ｎＭ、５ｎＭおよび５０ｎＭの阻害剤濃度で得られた。さらに、インキュベーション後８時間の後でさえ、阻害が５０ｎＭの阻害剤濃度については依然として明かであったことが示される（約９７％）。２時間および８時間の両方のインキュベーション後期間の後においてこの濃度で得られたこの大きい自己リン酸化阻害は、この濃度における阻害剤（ピコモル数）／ＥＧＦＲ（ピコモル数）の比率が大きいためであると考えられる。しかし、少量の自己リン酸化が８時間後に５０ｎＭで認められる。これは、細胞の増殖および新しい受容体の細胞表面における新しい生合成／発現によって説明することができる。
【０２５５】
図３および図４は、それぞれ、無傷なＡ４３１細胞と化合物３との様々なインキュベーション時間の後におけるＥＧＦＲ自己リン酸化の減少、および様々な阻害剤濃度の後におけるＥＧＦＲ自己リン酸化の減少を示している。ＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを１時間および８時間のインキュベーション後期間で測定した。
【０２５６】
図３に示されるように、１０分間のインキュベーション時間および３０ｎＭの阻害剤濃度が、８時間のインキュベーション後期間の後では８０％の阻害を得るために必要であった。同じ作用が、９分間のインキュベーション時間および３０ｎＭの阻害剤濃度について図４に示される。これらの結果は阻害剤の不可逆的な結合の性質を表しており、その不可逆な性質は、１時間および８時間の両方のインキュベーション後期間においてほぼ同じ阻害力を維持している。
【０２５７】
図４はさらに、これらの観測された結果を、阻害剤濃度が大きいときにだけこの大きい阻害作用を示すことによって裏づけている。
【０２５８】
従って、方法が、ＥＧＦＲ−ＴＫのＡＴＰ部位の放射能標識された不可逆的な阻害剤を合成するために開発された。これらの阻害剤のファミリーのメンバーは、非常に強力な不可逆的なＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤であり、かつ非常に強力な生物学的トレーサーであることが見出され、そして生物学的トレーサーとしてのその使用に好適な収率および反応時間で炭素−１１およびフッ素−１８の両方で放射能標識することに成功した。従って、このクラスの放射能標識された化合物は、ＥＧＦＲ−ＴＫ発現およびＡＴＰ結合部位の機能的占有の様々な相違をインビトロおよびインビボで測定するために使用することができ、そして効率的なＰＥＴトレーサーとして、例えば、ガンの診断および進行度決定および治療プロトコルの選択において、例えば、どの患者が、抗ＥＧＦ抗体またはＥＧＦ指向融合トキシンまたはＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤に基づく治療法などのＥＧＦ指向治療法から利益を受けるかを予測することにおいて使用することができる。これらの阻害剤のファミリーの別のメンバーは、放射性臭素または放射性ヨウ素のいずれかで放射能標識されるが、ＥＧＦＲ−ＴＫ発現に関して放射線画像化および放射線治療のために使用することができる。例えば、臭素−７６標識の化合物およびヨウ素−１２４標識の化合物はＰＥＴ放射線画像化のために使用することができ、ヨウ素−１２３標識の化合物はＳＰＥＣＴ放射線画像化のために使用することができ、一方、臭素−７７標識の化合物、ヨウ素−１２４標識の化合物およびヨウ素−１３１標識の化合物は放射線治療のために使用することができる。
【０２５９】
本発明がその具体的な実施形態とともに記載されているが、多くの代替および改変および変化が当業者には明かであることはいうまでもないことである。従って、本発明は、添付された請求項の精神および広い範囲に含まれるすべてのそのような代替および改変および変化を包含するものとする。本明細書中で言及されているすべての刊行物および特許および特許出願は、本出願では、個々の刊行物または特許または特許出願のそれぞれが、参考として本明細書中に組み込まれることが具体的かつ個々に示されていたかのようにそれと同じ程度に、参考として本明細書中にその全体が組み込まれる。さらに、本明細書中におけるいずれかの参照事項の引用または同一化は、そのような参照事項が本発明に対する先行技術として利用できるという許可として解釈してはならない。
【０２６０】
2004525919.tif 000010
2004525919.tif 000011
【図面の簡単な説明】
【０２６１】
【図１】ＩＣ５０値が０．０５１ｎＭであり、９５％信頼性区間として０．００８８／０．２９４の範囲を有する、本発明の化合物３に対する自己リン酸化阻害の用量応答曲線の一例を示す。
【図２】様々な濃度の化合物３とインキュベーションし、そして２時間および８時間のインキュベーション後時間においてＥＧＦ刺激溶解を行った後のＡ４３１細胞におけるＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである（ドット付きおよび無ドットの白棒は、ＥＧＦ刺激のないコントロールであり、四角パターンの棒は、ＥＧＦで刺激されたコントロールであり、それ以外の棒は、記載されたＥＧＦＲ自己リン酸化レベルを示す）。下の挿入図は、２時間および８時間のインキュベーション後時間におけるそれぞれの濃度に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
【図３】化合物３との様々なインキュベーション時間の後、８時間のインキュベーション後時間におけるＡ４３１細胞でのＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである（棒は２回の測定の結果である）。下の挿入図は、それぞれのデータ点に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
【図４】１ｎＭおよび３０ｎＭの化合物３との様々なインキュベーション時間の後、１時間のインキュベーション後時間におけるＡ４３１細胞でのＥＧＦＲの自己リン酸化レベルを表す棒グラフである。下の挿入図は、それぞれのデータ点に対するウエスタンブロットを示しており、棒と一緒に配置される。
【図１】
2004525919.tif 000017
【図２】
2004525919.tif 000018
【図３】
2004525919.tif 000019
【図４】
2004525919.tif 000020
【国際公開パンフレット】
2004525919.tif 000021
2004525919.tif 000022
2004525919.tif 000023
2004525919.tif 000024
2004525919.tif 000025
2004525919.tif 000026
2004525919.tif 000027
2004525919.tif 000028
2004525919.tif 000029
2004525919.tif 000030
2004525919.tif 000031
2004525919.tif 000032
2004525919.tif 000033
2004525919.tif 000034
2004525919.tif 000035
2004525919.tif 000036
2004525919.tif 000037
2004525919.tif 000038
2004525919.tif 000039
2004525919.tif 000040
2004525919.tif 000041
2004525919.tif 000042
2004525919.tif 000043
2004525919.tif 000044
2004525919.tif 000045
2004525919.tif 000046
2004525919.tif 000047
2004525919.tif 000048
2004525919.tif 000049
2004525919.tif 000050
2004525919.tif 000051
2004525919.tif 000052
2004525919.tif 000053
2004525919.tif 000054
2004525919.tif 000055
2004525919.tif 000056
2004525919.tif 000057
2004525919.tif 000058
2004525919.tif 000059
2004525919.tif 000060
2004525919.tif 000061
2004525919.tif 000062
2004525919.tif 000063
2004525919.tif 000064
2004525919.tif 000065
2004525919.tif 000066
2004525919.tif 000067
2004525919.tif 000068
2004525919.tif 000069
2004525919.tif 000070
2004525919.tif 000071
2004525919.tif 000072
2004525919.tif 000073
2004525919.tif 000074
2004525919.tif 000075
2004525919.tif 000076
2004525919.tif 000077
2004525919.tif 000078
2004525919.tif 000079
2004525919.tif 000080
2004525919.tif 000081
2004525919.tif 000082
2004525919.tif 000083
2004525919.tif 000084
2004525919.tif 000085
2004525919.tif 000086
2004525919.tif 000087
2004525919.tif 000088
2004525919.tif 000089
2004525919.tif 000090
2004525919.tif 000091
2004525919.tif 000092
2004525919.tif 000093
2004525919.tif 000094
2004525919.tif 000095
2004525919.tif 000096
2004525919.tif 000097
2004525919.tif 000098
2004525919.tif 000099
2004525919.tif 000100
2004525919.tif 000101
2004525919.tif 000102
2004525919.tif 000103
2004525919.tif 000104
2004525919.tif 000105
2004525919.tif 000106
2004525919.tif 000107
2004525919.tif 000108
2004525919.tif 000109
2004525919.tif 000110
2004525919.tif 000111
2004525919.tif 000112
2004525919.tif 000113
2004525919.tif 000114
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004525919.tif 000115
【国際調査報告】
2004525919.tif 000116