(57)【要約】本発明は、エキソ位の窒素とエンド位で縮合した５員環を有する式（Ｉ）またはエキソ位の窒素とエキソ位で縮合した５員環を有する式（Ｉａ）の置換されたヘテロ環−ノルボルニルアミノ誘導体（ここにおいてＲｎ、Ｈｅｔ、Ａ、ＢおよびＴは請求項に記載のとおりである）に関する。この新規化合物は抗高血圧剤、虚血的に引き起こされる障害の改善予防剤、神経系の虚血的障害、脳卒中、大脳浮腫、ショック、異常な呼吸反射の治療における外科的介入のための薬剤、緩下剤、抗外部寄生生物剤、胆石予防剤、アテローム性動脈硬化症治療剤、後期の糖尿病合併症、癌治療、線維症性疾患、内皮性疾患、器官の肥大および過形成に対する薬剤として有用である。この化合物は細胞性ナトリウム−プロトン交換輸送体の阻害剤である。血中のリポ蛋白に影響するので、アテローム性動脈硬化性の変化を防止しそれを後退させる。
2004517967.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エキソ配位の窒素とエンド縮合した５員または６員環を有する式（Ｉ）またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した５員または６員環を有する式（Ｉａ）の置換されたヘテロ環−ノルボルニルアミノ誘導体またはその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【化１】
2004517967.tif 000027
式中、
Ａは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキレンであり、
Ｔは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたはＨであり、
Ｂは飽和もしくは不飽和の炭素５員または６員環であり、それは非置換であるかまたはオキソ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルからなる群から選択される１〜３個の置換基を有し、
Ｈｅｔは５員または６員の飽和もしくは不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、Ｓ、ＮおよびＳｅよりなる群から選ばれた同一または異なった４個以下のヘテロ原子を有し、
Ｒは、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ２、フェニル、ＣＯ２Ｒ１、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたはアミノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ここにおいてアルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
Ｒ１はＨまたは非置換あるいはフッ素によって完全にまたは部分的に置換された（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ｎは０、１、２、３または４であり、ここにおいてｎが２、３または４の場合は、Ｒは互いに独立である。
【請求項２】
エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）において、
Ａは（Ｃ１−Ｃ２）−アルキレンであり、
ＴはＨまたはメチルであり、
Ｂは飽和または不飽和の炭素５員または６員環であり、
Ｈｅｔは５員または６員の飽和または不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、ＳおよびＮからなる群から選択された同一もしくは異なった３個以下のヘテロ原子を有し、
ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、沃素、アミノ、ヒドロキシメチル、ＯＨ、フェニル、ＣＯ２Ｒ１、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシであり、
ここにおいてアルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
Ｒ１はＨまたは非置換あるいはフッ素によって完全にまたは部分的に置換された（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ｎは０、１、２または３であり、ここにおいてｎが２または３の場合は対応する置換基Ｒは互いに独立である、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【請求項３】
エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）において、
Ａは（Ｃ１−Ｃ２）−アルキレンであり、
Ｔは水素であり、
Ｂは飽和もしくは不飽和の炭素５員または６員環であり、
Ｈｅｔは５員または６員の飽和または不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、ＳおよびＮからなる群から選択された同一または異なった２個以下のヘテロ原子を有し、
ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ここにおいてアルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
ｎは０、１または２であり、ここにおいてｎが２である場合は対応する置換基Ｒは互いに独立である、
請求項１または２に記載のの化合物またはその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【請求項４】
エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−３Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−フラン−３−イルメチル−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）アミン、
エキソ／エンド−フラン−２−イルメチル−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）アミン、
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−（ １Ｈ−ピロール−２−イルメチル）アミンまたは
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリミジン−５−イルメチルアミン
である請求項１に記載のエキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員環を有する式（Ｉａ）を有する化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【請求項５】
エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−３Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イル−メチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−（１Ｈ−ピロール−２−イルメチル）アミンまたは
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリミジン−５−イルメチルアミン
である請求項１に記載のエキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【請求項６】
ａ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）
【化２】
2004517967.tif 000028
の化合物を、式（ＩＩＩ）
【化３】
2004517967.tif 000029
（ここにおいてＴ、Ｂ、ＨｅｔおよびＲｎは上記の意味を有し、互いに独立してＡ’は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに、そしてＡ”はＨまたは（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、またＡ’およびＡ”はカルボニル基の炭素原子と一緒になって上記のＡと同じ炭素数を表す）の化合物と、適切な還元剤の存在下、場合によりルイス酸をも存在させて反応させ、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物を一挙に製造する、または、
ｂ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）と式（ＩＩＩ）の化合物から生成される、式（ＩＶ）または式（ＩＶａ）
【化４】
2004517967.tif 000030
（ここで、Ｔ＃は自由電子対であるかまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、後者の場合はオニウム性窒素が形成されることを意味し、それに対して例えば塩素、トシレート等の相対イオンが割り当てられる）の中間体を分離し、ついで適当な還元剤を用いて式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物に転換する、または、
ｃ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物を式（Ｖ）
【化５】
2004517967.tif 000031
（式中、Ｕは例えばハロゲン、アルキル−またはアリールスルホネートのような求核的に置換可能な基および上記で定義されたその他の基であるが、Ｕが結合している炭素原子はカルボニル基の炭素原子に対応する）のアルキル化剤と反応させる、または、
ｄ）式（ＶＩ）または（ＶＩａ）
【化６】
2004517967.tif 000032
（式中、Ａ＊は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、他の基は上記で定義したとおりである）のカルボキサミドを対応するアミンに還元する、または、
ｅ）式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物（ここでＴは水素に相当する）を式（ＶＩＩ）
Ｔ＊−Ｕ            ＶＩＩ
（式中、Ｔ＊は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、Ｕは上記の意味を有する）のアルキル化剤を用いてアルキル化し、この反応より第３級アミンを生成する、または、ｆ）式（ＶＩＩＩ）
【化７】
2004517967.tif 000033
のジシクロペンタジエニル白金錯体を式（ＩＸ）
【化８】
2004517967.tif 000034
（ここにおいて、Ｔ、ＲｎおよびＨｅｔは上記の意味を有し、互いに独立してＡ’は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに、およびＡ”はＨまたは（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、またＡ’およびＡ”は窒素に結合している炭素原子と一緒になって上記のＡと同じ炭素数を表す）のアミンと反応させ、次いで生成した中間体を還元して式（Ｉ）の化合物とし、場合によりその化合物を薬学的に許容しうる塩またはトリフルオロ酢酸塩に変換する
ことを含む、請求項１に記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の製造法。
【請求項７】
呼吸器系疾患の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項８】
呼吸疾患、特に睡眠時無呼吸のような睡眠に関連する呼吸疾患の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項９】
いびきの治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１０】
急性および慢性腎臓疾患、特に急性腎臓不全病および慢性腎臓不全の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１１】
腸機能疾患の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１２】
胆汁機能疾患の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１３】
末梢および中枢神経系の虚血性症状または脳卒中の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１４】
末梢器官および四肢の虚血性症状の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１５】
ショック症状の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１６】
外科的手術および臓器移植のために使用する医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１７】
外科的治療のための移植臓器を保存し貯蔵する医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１８】
細胞増殖が１次的または２次的原因である疾患の治療用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項１９】
脂質代謝疾患の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項２０】
外部寄生生物による発症の治療または予防用医薬を製造するための請求項１記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用。
【請求項２１】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の有効量を含有する治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、エキソ配位の窒素とエンド縮合した５員または６員環を有する式（Ｉ）の、またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した５員または６員環を有する式（Ｉａ）の置換されたヘテロ環−ノルボルニルアミノ誘導体およびその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩に関する。
【０００２】
【化９】
2004517967.tif 000003
式中、
Ａは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキレンであり、
Ｔは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたはＨであり、
Ｂは飽和もしくは不飽和の炭素５員または６員環であり、それは非置換であるかまたはオキソ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルからなる群から選択される１〜３個の置換基を有し、
Ｈｅｔは５員または６員の飽和もしくは不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、Ｓ、ＮおよびＳｅよりなる群から選ばれた同一または異なった４個以下のヘテロ原子を有し、
【０００３】
Ｒは、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ２、フェニル、ＣＯ２Ｒ１、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたはアミノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ここにおいてアルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
Ｒ１はＨまたは非置換あるいはフッ素によって完全にまたは部分的に置換された（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ｎは０、１、２、３または４であり、ここにおいてｎ＝２、３または４の場合は、Ｒは互いに独立である。
【０００４】
好ましい化合物は、エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）の、またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）の化合物およびその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩であり、その場合、式中、
Ａは（Ｃ１−Ｃ２）−アルキレンであり、
ＴはＨまたはメチルであり、
Ｂは飽和または不飽和の炭素５員または６員環であり、
Ｈｅｔは５員または６員の飽和または不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、ＳおよびＮからなる群から選択された同一もしくは異なった３個以下のヘテロ原子を有し、
【０００５】
ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、沃素、アミノ、ヒドロキシメチル、ＯＨ、フェニル、ＣＯ２Ｒ１、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシであり、
ここにおいて、アルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
Ｒ１はＨまたは非置換あるいはフッ素によって完全にまたは部分的に置換された（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ｎは０、１、２または３であり、ここにおいてｎ＝２または３の場合は対応する置換基Ｒは互いに独立である。
【０００６】
特に好ましい化合物は、エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）の、またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）の化合物およびその薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩であり、その場合、式中、
Ａは（Ｃ１−Ｃ２）−アルキレンであり、
Ｔは水素であり、
Ｂは飽和もしくは不飽和の炭素５員または６員環であり、
【０００７】
Ｈｅｔは５員または６員の飽和または不飽和のヘテロ環であり、それはＯ、ＳおよびＮからなる群から選択された同一または異なった２個以下のヘテロ原子を有し、
ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
ここにおいて、アルキル基は非置換であるかまたはフッ素によって完全にまたは部分的に置換されており、
ｎは０、１または２であり、ここにおいてｎ＝２である場合は対応する置換基Ｒは互いに独立である。
【０００８】
エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）の、またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員環または６員環を有する式（Ｉａ）の、さらに特に好ましい化合物として次のものが挙げられる：
エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
【０００９】
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−３Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−フラン−３−イルメチル−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）アミン、
エキソ／エンド−フラン−２−イルメチル−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）アミン、
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−（ １Ｈ−ピロール−２−イルメチル）アミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリミジン−５−イルメチルアミン
およびそれらの薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【００１０】
エキソ配位の窒素とエンド縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉ）の、またはエキソ配位の窒素とエキソ縮合した炭素５員または６員環を有する式（Ｉａ）の、極めて特に好ましい化合物として次のものが挙げられる：
エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピラジン−２−イルメチルアミン、
【００１１】
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）チオフェン−２−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−３Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イル−メチルアミン、
エキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−（１Ｈ−ピロール−２−イルメチル）アミン、
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリミジン−５−イルメチルアミン
およびそれらの薬学的に許容される塩またはトリフルオロ酢酸塩。
【００１２】
適切な酸付加塩は、薬理学的に許容されるあらゆる酸から作られるものであり、例えば塩酸塩のようなハライド、乳酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メチルスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、アジピン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、マレイン酸塩、およびパモエート（ｐａｍｏａｔｅ）である。このグループは生理学的に許容されるアニオン類に相当する。しかし、トリフルオロ酢酸塩も含まれる。
【００１３】
式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物が一またはそれ以上の不斉中心を含む場合は、それらはＳまたはＲ配位のいずれでもありうる。化合物は、光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその混合物として存在しうる。しかしノルボルニルシステム上のアミノ置換基はエキソであり、環はエンド−またはエキソ−縮合していなければならない。
上記のアルキルまたはアルキレン基は直鎖または分枝鎖であることができる。
【００１４】
特に適切なヘテロ環は次に示される。
【化１０】
2004517967.tif 000004
【００１５】
本発明はさらに式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の製法に関し、その製法は
ａ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）
【化１１】
2004517967.tif 000005
の化合物を、式（ＩＩＩ）
【化１２】
2004517967.tif 000006
（ここにおいてＴ、Ｂ、ＨｅｔおよびＲｎは上記の意味を有し、互いに独立してＡ’は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに、そしてＡ”はＨまたは（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、またＡ’およびＡ”はカルボニル基の炭素原子と一緒になって上記のＡと同じ炭素数を表す）の化合物と、適切な還元剤の存在下、場合によりルイス酸をも存在させて反応させ、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物を一挙に製造する、または、
【００１６】
ｂ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）と式（ＩＩＩ）の化合物から生成される、式（ＩＶ）または式（ＩＶａ）
【化１３】
2004517967.tif 000007
（ここで、Ｔ＃は自由電子対であるかまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、後者の場合はオニウム性窒素が形成されることを意味し、それに対して例えば塩素、トシレート等の相対イオンが割り当てられる）の中間体を分離し、ついで適当な還元剤を用いて式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物に転換する、または、
【００１７】
ｃ）式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物を式（Ｖ）
【化１４】
2004517967.tif 000008
（式中Ｕは例えばハロゲン、アルキル−またはアリールスルホネートのような求核的に置換可能な基および上記で定義されたその他の基であるが、Ｕが結合している炭素原子はカルボニル基の炭素原子に対応する）のアルキル化剤と反応させる、または、
【００１８】
ｄ）式（ＶＩ）または（ＶＩａ）
【化１５】
2004517967.tif 000009
（式中Ａ＊は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、他の基は上記で定義したとおりである）のカルボキサミドを対応するアミンに還元する、または、
【００１９】
ｅ）式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物（ここでＴは水素に相当する）を式（ＶＩＩ）
Ｔ＊−Ｕ            ＶＩＩ
（式中Ｔ＊は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、Ｕは上記の意味を有する）のアルキル化剤を用いてアルキル化し、第３級アミンを生成する、または、
【００２０】
ｆ）式（ＶＩＩＩ）
【化１６】
2004517967.tif 000010
のジシクロペンタジエニル白金錯体を式（ＩＸ）
【化１７】
2004517967.tif 000011
（ここにおいてＴ、ＲｎおよびＨｅｔは上記の意味を有し、互いに独立してＡ’は結合または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに、およびＡ”はＨまたは（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルに対応し、またＡ’およびＡ”はカルボニル基の炭素原子と一緒になって上記のＡと同じ炭素数を表す）のアミンと反応させ、次いで生成した中間体を還元して式（Ｉ）の化合物とし（Ｊ． Ｋ． Ｓｔｉｌｌｅ， Ｄ． Ｂ． Ｆｏｘ ＪＡＣＳ １９７０（９２）， １２７４）、場合によりその化合物を薬学的に許容しうる塩またはトリフルオロ酢酸塩に変換する。
【００２１】
フェニルアルキル置換されたノルボルニルアミノ誘導体がナトリウム−プロトン交換体３型サブタイプ（ＮＨＥ３）の有効な阻害剤であることは、すでに提唱された。この場合、いくつかの立体異性体の中でも、エキソ／エンド−配位のオクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン単位を有する化合物、つまり窒素原子がエキソで五員環がエンド縮合したものが特に活性なＮＨＥ３阻害剤のようである。エキソ／エキソ−配位のオクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン単位を有する物質は同様に著しいＮＨＥ３抑制作用を示したが、対応のエンド／エンドおよびエンド／エキソ誘導体はＮＨＥ３に対し極めて弱い作用しかなかった（ドイツ公開１９９ ６０ ２０４ Ａ１−ＨＭＲ ９９／Ｌ ０７３）。
驚くべきことに、そのフェニルアルキル置換基の芳香族残基をヘテロ芳香環で置換することができ、得られたものはＮＨＥ３抑制作用を持つことが見出された。
【００２２】
ＥＰ−Ａ ８２５ １７８（ＨＯＥ９６／Ｆ２２６）に開示され比較的長く知られており、比較的極性構造を持ちかつアシルグアニジン型化合物 （Ｊ．−Ｒ． Ｓｃｈｗａｒｋ等、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ（１９９８）４３６：７９７）に対応するナトリウム／プロトン交換体３型サブタイプの阻害剤と比較して、提案されたようなフェニルアルキルノルボルニルアミン型（ＤＥ １９９ ６０ ２０４．２−ＨＭＲ ９９／Ｌ ０７３）化合物同様、本発明の化合物は驚くほど親油性物質であり、アシルグアニジン型のものとは異なっている。上述したアシルグアニジンに関する研究の結果、スクアラミン（Ｍ． Ｄｏｎｏｗｉｔｚ等、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７６（Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ４５）： Ｃ１３６−Ｃ１４４）はその最大の効果を直後ではなく約１時間後に発揮する。また、上記のフェニルアルキルノルボルニルアミノ誘導体は、これまで公知のＮＨＥ３阻害剤４番目の物質群にすぎない。
【００２３】
本発明の化合物は、上記のアシルグアニジンと比較して膜通過能力において優れており、スクアアラミンと比較してより急速に作用開始する。
ＮＨＥ３は、さまざまな生物種の体、特には胆汁、腸および腎臓にある（Ｌａｒｒｙ Ｆｌｉｅｇｅｌ等、Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７６：７３５−７４１（１９９８）が、脳においても検出される（Ｅ． Ｍａ等、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ７９：５９１−６０３）．
【００２４】
本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、本態性および二次性高血圧の治療のための抗高血圧剤としての用途に適している。さらに、本化合物はそれら自体でまたは他のサブタイプ特異性のＮＨＥ阻害剤と組み合せて、虚血的に引き起こされる損傷を軽減するか予防することによって、急性または慢性的な酸素欠乏に陥った器官を保護することができる。このように、本化合物は例えば腎臓や肝臓の移植のような外科的介入においては、ドナーから臓器を摘出する前および摘出時の臓器保護、その臓器を処理したり生理学的浸漬液での貯蔵、移植者への移植の際の摘出臓器保護のための薬剤として、または急性もしくは慢性腎機能不全治療のための薬剤等として適切である。腸に対して虚血的に引き起こされた損傷を特に有効に避けることができる。
【００２５】
虚血的に引き起こされる損傷に対する保護作用に相応し、本発明の化合物は神経系とくに中枢神経系（ＣＮＳ）の虚血治療のための医薬品としても適しており、適当な場合には、例えば脳卒中や脳浮腫の治療に適している。さらに、本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、アレルギー性ショック、心原性ショック、血液量減少性ショック、細菌性ショックのような、各種のショックの治療に適している。
【００２６】
さらに、本発明の化合物は、呼吸作用を改良し、次の臨床症状および疾患における呼吸状態の治療に使われる：障害された中枢呼吸作用（例えば中枢性睡眠時無呼吸、突然の幼児死亡、手術後の酸素圧低下）、筋依存性呼吸障害、長期の人工換気後の呼吸障害、高山への順応の際の呼吸障害、妨害性および混合型の睡眠時無呼吸、酸素圧低下および低炭酸ガス血症を伴う急性および慢性の肺疾患。
本発明の化合物は加えて、上部気管内の筋張力を増し、その結果、いびきを抑制する。
【００２７】
ＮＨＥ阻害剤と、代謝性アシドーシスを生じて呼吸活性を増加さえするカルボニックアンヒドラーゼ阻害剤（ｃａｒｂｏａｎｈｙｄｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（例えばアセタゾールアミド）との組み合わせは、作用を増強し活性化合物の使用を減少させるので有利である。
【００２８】
本発明の化合物は、緩下剤作用を有し、したがって緩下剤としてまたは重篤な腸の閉塞の場合に有利に使うことができ、腸の領域の閉塞を伴う虚血性障害の予防のために特に有利であることがわかった。
【００２９】
さらに、本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の使用によって、胆石発生を予防することが可能である。
本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、さらに外部寄生生物に対抗する作用を示す。
【００３０】
そのうえ、本発明の式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は細胞増殖抑制作用、例えば繊維芽細胞の細胞増殖および滑面血管筋細胞の増殖を抑制する作用を発揮する。そのため、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、細胞増殖が第１あるいは第２の原因である疾患の効果的な治療剤として適当であり、したがって、抗アテローム性動脈硬化症剤として、末期の糖尿病性合併症、ガン、例えば肺線維症、肝臓線維症または腎臓線維症等の線維症性障害、内皮性不全、器官の発育不全および過形成、特に前立腺過形成または前立腺発育不全に対する治療剤として使うことができる。
【００３１】
本発明の化合物は、多くの疾患（本態性高血圧、アテローム性動脈硬化症、糖尿病等）において上昇し、例えば例えば赤血球、血小板または白血球のように容易にアクセスして計測できる細胞においてさえ上昇する、細胞性ナトリウム／プロトン対向輸送体（ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒ）の阻害剤として有効である。したがって、本発明の化合物は、優れた使用し易い科学的ツールとして適切であり、例えば高血圧の型の決定のみならず、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、増殖性疾患の型の決定や鑑別のための診断剤として適切である。さらに、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、例えば本態性高血圧のような高血圧の進行を予防する予防的治療に適している。
【００３２】
さらに、ＮＨＥ阻害剤が血清リポタンパク質に対し有利な影響を呈することが見出された。過剰に高い血液脂質値（『リポ蛋白過剰血症』）は、アテローム性動脈硬化症的な血管変化の形成、特に冠状動脈性心臓病に対する、重要な危険因子であることが一般に認識されている。そのため、増加した血清リポ蛋白質を低下することは、アテローム性動脈硬化症的な変化を予防し後退させるために極めて重要である。発明の化合物は、原因となる危険因子を排除することによって、アテローム性動脈硬化症的な変化を予防し後退させるために使用される。式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、内皮性機能不全症候群に対して血管を保護する作用があるので、冠状血管発作、アテローム発生およびアテローム性動脈硬化症、左心室肥大、拡張型心筋症、血栓症の予防および治療のための価値ある医薬品である。
【００３３】
したがって、ここに述べた化合物は、睡眠時無呼吸および筋依存性呼吸障害の予防治療剤の製造、いびきの予防治療剤の製造、血圧を下げる医薬品の製造、腸の閉塞を予防治療するための緩下作用を有する医薬品の製造、中枢性および末梢性器官の虚血および再潅流によって引き起こされる障害、例えば急性腎不全、脳卒中、内因性ショック症状、腸障害等の予防治療剤の製造、高コレステロール血症の治療剤の製造、アテローム発生およびアテローム性動脈硬化症の予防薬の製造、コレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患の予防治療剤の製造、内皮性機能不全によって引き起こされる疾患の予防治療剤の製造、外部寄生生物による攻撃の治療剤の製造に使用され、また、上記の疾患に対する治療剤を有利に製造するために血圧降下剤例えばアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびアンジオテンシンレセプターアンタゴニストと組み合せて使用される。式（Ｉ）または（Ｉａ）のＮＨＥ阻害剤と、血液脂質低下剤例えばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えばＬｏｖａｓｔａｔｉｎまたはＰｒａｖａｓｔａｔｉｎ）との組み合わせは、作用を増強し活性化合物の使用を減少する好ましい。その組合せにおいて、血液脂質低下剤は、脂肪低下効果を生じその結果として式（Ｉ）または（Ｉａ）のＮＨＥ阻害剤の脂肪低下作用を増強する。
【００３４】
式（Ｉ）または（Ｉａ）のナトリウム／プロトン交換阻害剤を上昇した血液脂質レベルを低下させる新規な医薬品として投与すること、および、ナトリウム／プロトン交換阻害剤と血圧降下および／または脂肪低下作用を有する医薬との組み合わせが請求される。
【００３５】
式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物を含んでいる医薬は、この場合、経口的または非経口的に、静脈内または直腸内に、あるいは吸入法によって投与される。好ましい投与法は、疾患のそれぞれの臨床的特性によって変化する。（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、この場合それ単独でまたは医薬賦形剤と共に、動物薬としておよび人間の薬の両方に使用される。
【００３６】
当業者は、その専門知識を基礎に、所望の医薬製剤に適している賦形剤に精通している。溶剤、ゲル化剤、坐薬基剤、錠剤賦形剤および他の活性化合物担体の外、抗酸化剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、着香剤、防腐剤、可溶化剤および／または着色剤等を使用することができる。
【００３７】
経口投与に適したものとするため、活性化合物は、適切な添加物例えば賦形剤、安定化剤または不活性な希釈剤と混合され、慣習的な方法によって、適切な投与剤形例えば錠剤、被覆錠剤、ハードゼラチンカプセル、水溶液、アルコール溶液あるいは油性溶液に製剤される。ここで使用され得る不活性担体は、例えば、アラビアゴム、マグネシア、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、乳糖、グルコースまたはトウモロコシデンプンのようなデンプンである。この場合、製剤化は、乾燥もしくは湿潤顆粒のいずれにも行いうる。使われ得る油性賦形剤または溶剤は、例えばヒマワリ油またはタラ肝油のような植物油または動物油である。
【００３８】
皮下投与または静脈内投与のために、活性化合物は、場合により例えば可溶化剤、乳化剤または更なる賦形剤ような慣用の物質と共に、溶液、懸濁液またはエマルションに製剤される。適切な溶剤は、例えば、水、生理的食塩水またはアルコール例えばエチルアルコール、プロパノール、グリセリンであり、さらには、グルコースまたはマンニトール溶液のような糖溶液、あるいはここに述べた溶媒の混合物であってもよい。
【００３９】
エアロゾルまたはスプレーの形の投与に適している医薬製剤は、例えば、式（Ｉ）または（Ｉａ）の活性化合物の薬学的に無害な溶剤中の溶液、懸濁液またはエマルションであり、溶剤としては例えばエチルアルコールまたは水またはこのような溶剤の混合物が用いられる。
【００４０】
必要であれば、製剤はさらに他の医薬賦形剤、例えば界面活性剤、乳化剤および安定化剤および噴射剤を含んでもよい。かかる製剤は、通常約０．１〜１０重量％、好ましくは約０．３〜３重量％の濃度の活性化合物を含んでいる。式（Ｉ）または（Ｉａ）の活性化合物の投与量、投与回数は、使用する化合物の作用の強さと持続時間、さらには、治療される疾患の性質と程度、そして、治療される哺乳動物の性別、年齢、体重およびそれぞれの反応性によって異なる。
【００４１】
平均して、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物の１日当たり投与量は、体重約７５ｋｇの患者の場合、０．００１ｍｇ／ｋｇ（体重当たり）以上、１００ｍｇ／ｋｇ以下であり、好ましくは１〜１０ ｍｇ／ｋｇである。疾患の急性症状の場合には、より高い特により頻繁な投与量が必要とされ、例えば集中治療室の梗塞患者の場合の、特に静脈内投与の場合には、例えば１日当たりの最高４回投与量まで、１日当たり２００ｍｇまで必要となる可能性がある。
【００４２】
実験の部
用いた略号；Ｃｌ：化学イオン化、ＤＩＰ：ジイソプロピルエーテル、ＥＡ：酢酸エチルエステル、ＥＳ：エレクトロスプレー、ＦＡＢ：高速原子衝撃、ｈ：時間、ＨＣｌ：塩酸、ＨＰＬＣ−ＲＴ：ＨＰＬＣ保持時間、ｂｐ：沸点、ＭｇＳＯ４：硫酸マグネシウム、ｍ．ｐ．：融点、ＭＳ：マススペクトル、ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム溶液、ＲＰ：逆相、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
【００４３】
【実施例】
特に記載されていない場合、ここに記載する実施例はラセミ体である。
ＨＰＬＣまたはＬＣＭＳの条件は次の通りであった：
ＤＡＤ探知器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓの１１００シリーズのＨＰＬＣおよびＨＰＬＣ−ＭＳＤシステム、Ｍｅｒｋ Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒカラム（３μ、２×５５ｍｍ）、カラム温度：３０℃、波長：２２０ｎｍ、流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、勾配：９５％の水（０．０５％のＴＦＡ）／５％のアセトニトリルから４分で５％の水（０．０５％のＴＦＡ）／９５％のアセトニトリル、ついで１．５分間５％の水（０．０５％のＴＦＡ）／９５％のアセトニトリルに保持。
【００４４】
＊を付した値は次の条件で測定した。
ＤＡＤ検知器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓの１１００シリーズのＨＰＬＣ−ＭＳＤスステム、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌカラム（Ｃ−１８、５μ、４×１２５ｍｍ）、カラム温度：４０℃、波長：２２０ｎｍ、流速：０．６５ｍｌ／ｍｉｎ、勾配：９５％の水（水／アセトニトリル ９：１、０．１％のＴＦＡ含有）／５％アセトニトリル（水／アセトニトリル １：９、０．１％のＴＦＡ含有）で２分間、ついで５％の水／９５％のアセトニトリル１０分間、ついで５％の水／９５％のアセトニトリルで５分間保持。
最終生成物の特徴づけのために、ＨＰＬＣ保持時間および別途実施した質量スペクトル測定結果が記載されている。
【００４５】
実施例１
（ｒａｃ）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
【化１８】
2004517967.tif 000012
ａ） エキソ／エンド−３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンおよびエキソ／エンド−（３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−３Ｈ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン
１０ｇのエキソ−５−イソチオシアナエート−５，６−ジヒドロエンドジシクロペンタジエン（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を６１ｍｌの蟻酸に溶解し、その溶液を４５時間の還流下で沸騰させた。冷却後、黒い沈降物を濾過して取り除き、そして、濾液を濃縮した。残渣を水で希釈し、１０ｇの水酸化ナトリウムをゆっくり熱しながら加えた。ついで混合物を室温に冷却し、トルエンで３回抽出し、有機層を合わせてＭｇＳＯ４を使用して乾燥し、ＭｇＳＯ４を濾過して除去し、濾液を濃縮した。残渣を蒸留して、澄明な油３．３８ｇを得た。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．１５分；ＭＳ（Ｃｌ＋）：１５０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００４６】
ｂ）（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン  １ａ）からの２重結合異性体混合物の３．３ｇを３０ｍｌのメタノールの溶かし、０．５ｇのパラジウム炭素触媒（１０％）を加え、その混合物を水素雰囲気中で４時間水素還元した。触媒を濾過して取り除き、メタノールで洗い、濾液を濃縮した。高真空で乾燥して、澄明な油３ｇを得た。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．３３分：ＭＳ（ＥＳ＋）：１５２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００４７】
ｃ）エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
１ｂ）で得られた３ｇのエキソ／エンド−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンと２．１５ｇのピリジン−３−カルボアルデヒドを２００ｍｌのトルエンに溶解した溶液を、触媒量のｐ−トルエンスルホン酸の添加後、水分離器中で５時間沸騰加熱し、一晩室温で放置し、溶剤を蒸留して除いた。残渣を１５０ｍｌのメタノールに溶かし、０．９１ｇの水素化ホウ素ナトリウムを少量ずつ氷冷した溶液に撹拌しながら加えた。混合物を数時間室温で撹拌した後、過剰のメタノール−塩酸で強酸性とした。回転蒸発機で濃縮した後に、残渣を水に溶解し、炭酸カリウム溶液でアルカリ性とした。ついで混合物をＥＡで３回抽出し、まとめた抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、エーテルー塩酸でてｐＨ １〜２とした。ついで溶剤をデカンテーションして沈殿生成物から除去し、残渣を温エタノールに溶かした。冷却後、生成物をエーテルを用いて沈殿させる。２．８５ｇの青白い結晶を得た。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３，１５、ＭＳ（ＥＳ＋）：２４３．２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００４８】
実施例２
（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
【化１９】
2004517967.tif 000013
ａ）  （＋）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンおよび（−）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン
表題の化合物は、実施例１ｂ）からのラセミ体（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンを出発原料として、キラルカラムを用いるクロマトグラフィーによって、またはキラル酸を用いる結晶化によって、エナンチオメトリックに純粋に製造することができる。例えば、Ｚ−バリンを用いて、（＋）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンは次のようにして得られる。
【００４９】
ａ１）Ｚ−バリンによる（＋）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンの分割
実施例１ｂ）からの５０ｇの（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンのラセミ混合物と、８３．２ｇのＺ−バリンを、１．５Ｌのテトラヒドロフランに溶かした溶液を加熱沸騰させた。澄明な溶液を、３時間かけて外界温度に冷ました。ついで更に２０時間外界温度で撹拌した。沈降物を吸引濾過し、５０ｍｌのテトラヒドロフランで洗浄し、４０℃で乾燥機で乾燥した。ジアステレオ純度６５％の塩５５ｇを得た。毎回１Ｌのテトラヒドロフランを用いて３回再結晶させることにより、ジアステレオ純度（９５％の塩３０ｇを得た。
【００５０】
上記のＺ−バリン塩の９．４ｇをトルエンと水各３０ｍｌ中に懸濁させた懸濁液に、１Ｎの水酸化ナトリウム溶液を、ｐＨが１１で一定するまで加えた。この際、固形物は溶解した。両相を分離し水相を毎回１０ｍｌのトルエンでさらに３回抽出した。トルエン相を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、トルエンを真空で蒸留して除いた。
このように得られたアミン（３．３ｇ、エナンチオメトリック純度＞９５％）は、さらに精製することなく反応させることができた。
【００５１】
ａ２）Ｚ−Ｄ−バリンによる（−）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンの分割
（−）エナンチオマ−はＺ−Ｄ−バリンを使用して上記の方法と同様に得られた。このように、実施例１ｂ）からの（＋）−（エキソ／エンド）−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン５００ｍｇから出発し、沈殿および２回の再結晶の後でジアステレオ純度＞９５％の塩４６８ｍｇが得られた。
【００５２】
ｂ）（＋）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
２ａ１）からの１．４ｇの（＋）−エキソ／エンド−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンおよび１ｇのピリジン−３−カルバルデヒドの１００ｍｌトルエン溶液に、触媒量のｐ−トルエンスルホン酸を添加した後、水分離器中での５時間加熱沸騰した。室温で一晩放置した後、溶媒を蒸留して除いた。残渣を７５ｍｌのメタノールに溶かし、０．４２ｇの水素化ホウ素ナトリウムを少量ずつ氷冷した溶液に加えた。混合物を室温で数時間撹拌し、一晩放置し、過剰のメタノール−塩酸で強酸性にした。結晶化は粉砕によって開始し、冷蔵庫に一晩おいて終了した。溶液をデカンテーションで除き、残渣を炭酸カリウム水溶液にとり、ｐＨ １１においてＥＡで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、メタノール−塩酸によってｐＨ １〜２に調整した。ついでエーテルを添加して生成物を沈殿させた。１．１ｇの青白の結晶が得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．２０、ＭＳ（Ｃｌ＋）：２４３．３（Ｍ＋Ｈ）＋；［α］Ｎａ５８９ｎｍ：＋３４，６（エタノール中
【００５３】
実施例３
（−）−エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
【化２０】
2004517967.tif 000014
２ａ２）からの１．４ｇの（−）−エキソ／エンド−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミンおよび１ｇのピリジン−３−カルバルデヒドの１００ｍｌトルエン溶液に、触媒量ｐ−トルエンスルホン酸を添加した後、水分離器中で５時間加熱沸騰し、一晩室温で放置した後溶媒を蒸留して除いた。残渣を７５ｍｌのメタノールに溶解し、０．４２ｇの水素化ホウ素ナトリウムを氷冷された溶液に撹拌しながら少量ずつ加えた。混合物を室温で数時間撹拌し、一晩放置し、ついで過剰なメタノール−塩酸により強酸性とした。結晶化は、粉砕によって開始し、冷蔵庫に一晩おいて終了した。溶液をデカンテーションによって除いた後、残渣を炭酸カリウム水溶液にとり、ｐＨ １１においてＥＡで３回抽出し、抽出液を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し濾過し、メタノール−塩酸によってｐＨ １〜２に調整した。ついでエーテルを添加して生成物を沈殿させた。淡色の結晶１．１ｇが得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．１２、ＭＳ（Ｃｌ＋）：２４３．３（Ｍ＋Ｈ）＋；［α］Ｎａ５８９ｎｍ：−３２，５（ エタノール中
【００５４】
実施例４
エキソ／エンド−フラン−２−イルメチル−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−アミン 塩酸塩
【化２１】
2004517967.tif 000015
実施例１ｂ）からの、２００ｍｇのエキソ／エンド−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン、１２７ｍｇの２−フリルアルデヒドおよび１０１ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸の、２０ｍｌトルエン（無水）溶液を４時間還流下で沸騰させた。一晩室温で放置した後、溶剤を蒸留して除いた。残渣を１５ｍｌのメタノールに溶解し、０．６ｇの水素化ホウ素ナトリウムを氷冷した溶液に撹拌しながら少量ずつ加えた。混合物を室温で数時間撹拌し、過剰なメタノール−塩酸によって酸性とした。回転蒸発機で濃縮し、残渣を２Ｎ ＮａＯＨにとり、ＥＡで３回抽出した。合わせた有機相を、メタノール−塩酸で酸性化し、濃縮した。油性残渣を、アセトニトリル／水（０．０５％のＴＦＡ）を使用し、ＲＰ−１８の調製ＨＰＬＣで精製した。きれいな画分を合わせ、アセトニトリルを回転乾燥機で除去し、混合物を炭酸カリウムでｐＨ １１に調整し、ＥＡで抽出した。合わせたＥＡ相を、ＭｇＳＯ４で乾燥して、ＭｇＳＯ４を濾過して取り除いた後に濃縮した。
残渣は、２Ｎ塩酸にとり凍結乾燥した。塩酸塩１１９ｍｇが白い固形物として得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．６０分；ＭＳ（ＥＳ＋）：２３２．２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５５】
実施例５
エキソ／エンド−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−ｙｌ）−チオフェン−２−イルアミンアミン 塩酸塩
【化２２】
2004517967.tif 000016
実施例１ｂからの２００ｍｇのエキソ／エンド−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン、１４８ｍｇのチオフェン−２−アルデヒドおよび１０１ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸を２０ｍｌのトルエン（無水）に溶解し、溶液を４時間還流下で沸騰させた。一晩室温で放置した後、溶剤を蒸留して除いた。残渣を１５ｍｌのメタノールに溶解し、０．０６ｇの水素化ホウ素ナトリウムを少量ずつ混ぜながら添加した。混合物を室温で数時間撹拌し、過剰なメタノール−塩酸で酸性にした。回転蒸発機で濃縮し、残渣を２Ｎ ＮａＯＨにとりＥＡで３回抽出した。合わせた有機相をメタノール−塩酸で酸性し、濃縮した。油性残渣を、アセトニトリル／水（０．０５％のＴＦＡ）を使用してＲＰ−１８の調製ＨＰＬＣにより精製した。きれいな画分を合わせ、アセトニトリルを回転蒸発機で除去し、混合物を炭酸カリウムでｐＨ １１に調整し、ＥＡで抽出した。合わせたＥＡ位相を、ＭｇＳＯ４を使用して乾燥し、ＭｇＳＯ４を濾過して取り除いた後に濃縮した。残渣を２Ｎ塩酸にとり凍結乾燥した。６１ｍｇに塩酸塩が白い固形物として得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．８４分；ＭＳ（Ｃｌ＋）：２４８．３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５６】
実施例６
エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
【化２３】
2004517967.tif 000017
ａ） オクタヒドロ−４，７−メタノ−インデン−５−オール
２５ｇのトリシクロ［５．２．１．０（２，６）］デカン−８−オン（Ａｌｄｒｉｃｈ）を、１００ｍｌのメタノールに溶解し、６．３ｇの固形水素化ホウ素ナトリウムで室温において緩やかに冷却、撹拌しながら少量ずつ２時間かけて処理した。ついで混合物を２時間撹拌し一晩放置した。冷却しながら約４０ｍｌの２Ｎ ＨＣｌを滴下し、ついで２０ｍｌの水を加えた。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルエステルで処理し、酢酸エチルエステル相を水で１回炭酸水素ナトリウム溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥の後、酢酸エチルエステル相を濾過して濃縮した。残った２６ｇの油を減圧蒸留により精製した。油状の液体２０．７ｇが得られた（ｂｐ ７６℃）。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝４．５５分；ＭＳ（Ｃｌ＋）：１３４．８（Ｍ−ＯＨ）＋
【００５７】
ｂ） ２−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−イソインドール−１，３−ジオン
１．７ｇのアゾジカルボン酸ジエチルを５ｍｌのＴＨＦで希釈し、６ａ）からの１．６６ｇのオクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−オール、１．４７ｇのフタルイミドおよび２．６２ｇのトリフェニルホスフィンを１５ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液にかき混ぜながら加えた。反応混合物を一晩放置後蒸発させ、残渣をエーテルで撹拌し、沈降物を吸引濾過で除き、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲル／トルエンで精製した。１．３６ｇの黄色の油が得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝５．８２分；ＭＳ（Ｃｌ＋）：２８２．２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５８】
ｃ） エキソ／エキソ−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン
０．４ｇのヒドラジン水和物を、６ｂ）からの１．１２ｇの２−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−イソインドール−１，３−ジオンの１５ｍｌのエチルアルコール溶液に滴下し、６５℃で２時間撹拌する対する。混合物を濃ＨＣｌでｐＨ １〜２に調整し、１０ｍｌのエチルアルコールで処理し、沈殿物を濾過して取り除き、濾液を濃縮した。残渣をアセトニトリル／水（０．０５％のトリフルオロ酢酸）を使用してＲＰ−１８の調製ＨＰＬＣにより精製した。凍結乾燥の後、５６７ｍｇの生成物をトリフルオロ酢酸塩として得た。水酸化ナトリウム溶液および酢酸エチルで処理して、３２２ｍｇの遊離のアミンを得た。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．４７分；ＭＳ（Ｃｌ＋）：１５２．０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５９】
ｄ） エキソ／エキソ−（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
６ｃ）からの３３２ｍｇのエキソ／エキソ−配位オクタヒドロ−４，７−メタノインデンイルアミンおよび２１５ｍｇのピリジン−３−カルバルデヒドの２０ｍｌトルエン溶液に触媒量のｐ−トルエンスルホン酸を添加後、５時間加熱還流する。一晩室温で放置し、溶剤を留去する。残渣を１５ｍｌのメタノールに溶解し、９１ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを少量ずつ撹拌しながら冷却した溶液に加えた。混合物を、数時間室温で撹拌し、ついで過剰なメタノール−塩酸により強酸性とした。回転蒸発機で濃縮した後、残渣を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にとった。ＥＡで３回抽出した後、抽出液を合わせて濃縮した、残渣をアセトニトリル／水（０．０５％のＴＦＡ）を使用してＲＰ−１８の調製ＨＰＬＣで精製した。生成物を含む画分を合わせて、凍結乾燥し、ＨＰＬＣで再度精製した。きれいな画分を合わせ、アセトニトリルを回転蒸発機で除き、残渣を炭酸カリウムでｐＨ １１に調整し、ＥＡで抽出した。合わせたＥＡ相をＭｇＳＯ４を使用して乾燥し、ＭｇＳＯ４を濾過して除いた後濃縮した。残渣を２Ｎ塩酸にとり凍結乾燥させた。３５ｍｇの塩酸塩が白い固形物として得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．２５分、ＭＳ（ＥＳ＋）：２４３．１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６０】
実施例７
エキソ／エンド−（３−クロロ−５−トリフルオロメチルピリジン−２−イルメチル）（オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イル）−アミン トリフルオ 酢酸塩
【化２４】
2004517967.tif 000018
実施例１ｂ）からの０．５ｍｍｏｌのエキソ／エンド−オクタヒドロ−４，７−メタノインデン−５−イルアミン、０．５ｍｍｏｌの３−クロロ−５−トリフルオロメチルピリジン−２−カルバルデヒド、１４０μｌのトリエチルアミンおよび１０ｍｌのジクロロメタンを導入し、トルエン中の四塩化チタンの１−モル溶液２５０μｌを滴下し、混合物を２４時間室温で撹拌した。ＴＨＦ中のナトリウムシアノボロハイドライドの１−モル溶液を徐々に加え、混合物を室温で３０分撹拌した。ついで混合物を１５ｍｌの２Ｎ ＮａＯＨで処理し、１５分間撹拌した。固形物を濾過して取り除き水で洗浄した。３０ｍｌのＥＡを濾液に加え、混合物を振盪し、有機相を分離した。乾燥の後、混合物を濃縮し、残渣を調製ＨＰＬＣ（ＲＰ１８、勾配アセトニトリル／水 ３０％〜＞９０％、両成分中０．１％のＴＦＡ含有）によって精製した。凍結乾燥の後、４．７ｍｇの白い固形物が得られた。
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝１１．２３分＊、ＭＳ（ＥＳ＋）：３４５．２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６１】
実施例８
エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）−ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
【化２５】
2004517967.tif 000019
ａ）ビス−（３−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）−ジアゼンＮ，Ｎ’−ジオキシド
３．３４ｇの亜硝酸イソアミルを、３．５６ｇのベンゾノルボルナジエン（Ｌ． ＦｒｉｅｄｍａｎおよびＦ． Ｍ． Ｌｏｇｕｌｌｏ（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ３４：３０８９−３０９２，（１９６９））の６ｍｌの氷酢酸と６ｍｌのエチルアルコールの溶液に加え、１５％強度の塩化水素ガスのエチルアルコール溶液８．５ｍｌを滴下した。結果として生じる懸濁液を室温で２時間半撹拌し、２０ｍｇのジイソプロピルエーテルで処理した。さらに３０分撹拌後、固形物を濾過した。淡色の結晶固体：ｍ．ｐ．１８７〜１８８℃
ＭＳ（ＦＡＢ）：４１５．１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６２】
ｂ）（エキソ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イルアミン
３ｇのビス−（３−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）−ジアゼンＮ，Ｎ′−ジオキシドを１５０ｍｌのメタノールに懸濁させ、ラネーニッケル触媒を用い１００バール１００℃にて２０時間オートクレーブ中で水素により水素化した。触媒を濾過して取り除き、溶剤を蒸発し、残渣を水で処理し、ＮａＯＨで強アルカリ性とし、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルによって繰り返し抽出した。有機相を乾燥さて、所望のアミンを淡い黄色の液体として得た。
ＭＳ（ＥＳ＋）：１６０．０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６３】
ｃ） エキソ／エンド−デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イルアミン
１ｇのエキソ／エンド−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イルアミンを１０ｍｌのメタノールおよび３０ｍｌの２Ｎ塩酸に溶解し、０．４ｇのＲｕＯ２を用い１００バール９０℃にて１０時間オートクレーブ中で水素により水素化した。触媒を分離した後、溶液を半量に蒸発し、このように得られた水溶液を１０Ｎ ＮａＯＨで強アルカリ性とし、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルによって繰り返し抽出した。乾燥後溶剤を蒸発させ、エキソ／エンド−デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イルアミンを無色の油として得た。これは好ましくはアルゴン中で貯蔵された。
ＭＳ（Ｃｌ＋）：１６６．２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６４】
ｄ） エキソ／エンド−（デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イル）−ピリジン−３−イルメチルアミン 塩酸塩
０．７１ｇのピリジン−３−アルデヒドおよび１．１ｇのエキソ／エンド−デカヒドロ−１，４−メタノナフタレン−２−イルアミンの４０ｍｌトルエン溶液を、少量の触媒量のｐ−トルエンスルホン酸（３〜５ｍｇ）を添加した後、４時間沸騰還流し、ついで溶剤を蒸留して除いた。油性残渣を約３０ｍｌの無水メタノールに溶かした後に、０．３３５ｇの水素化ホウ素ナトリウムの少量ずつで冷却、撹拌下において処理し、さらに２時間室温で撹拌し、一晩放置した。溶液をＨＣｌのメタノール溶液で酸性とし、沈降物は濾過して取り除き、溶剤を蒸発させた。残渣をエチルアルコールから再結晶した。ｍ．ｐ． ２８３〜２８５℃
ＨＰＬＣ−ＲＴ＝３．３８分、ＭＳ（Ｃｌ＋）：２５７．４（Ｍ＋Ｈ）＋
後述する化合物は、上記の実施例と同様な方で、文献記載の公知のカルボニル誘導体および適当なアミンから製造された。
【００６５】
【表１】
2004517967.tif 000020
【００６６】
【表２】
2004517967.tif 000021
【００６７】
【表３】
2004517967.tif 000022
【００６８】
【表４】
2004517967.tif 000023
【００６９】
薬理学データ
Ｃａｃｏ２モデルの説明
Ｃａｃｏ−２細胞株はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手し、非必須アミノ酸、Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシンおよび１０％強度のウシ胎児血清を補充したダルベッコ改変イーグル培地（高いグルコース量）において、１０％強度の炭酸ガス雰囲気下９５％強度の相対湿度３７℃の条件下の培養器に保たれた。細胞は、細胞培養フラスコ（１７５ｃｍ２）で育成した。
【００７０】
輸送体の試験用に、Ｃａｃｏ−２細胞をポリカーボネート細胞培養インサート（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌｓ（Ｒ）、細孔径：３μｍ、面積：４．７１ｃｍ２）に細胞密度６．５×１０４個／ｃｍ２で播種し、６穴培養プレートで、培地を４日後および８日後にそれ以後は一日おきに変えて培養した。２１〜２５日令の単層を実験に供した。
それぞれの試験系において、２１日令の単層を、透過性マーカーとして３Ｈ−デキストランを用いてその特性を調べた。輸送率（累積的な）の値が、１２０分後に２％の範囲のものとした。
【００７１】
尖端側および基底面側から成育培地を除いた後、単層を輸送緩衝液（Ｈａｎｋの平衡化塩溶液、ｐＨ７．８、２．８ｇ／Ｌのグルコース含有）ですすぎ、細胞を３７℃、１０％強度の炭酸ガス雰囲気で１５分平衡化した。ついでＨＢＳＳ緩衝液を除いた。試験化合物をＨＢＳＳ緩衝液とＤＭＳＯの混合液に溶解し、１％強度（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ溶液となるように尖端側緩衝液に添加する。第一の実験の試験濃度は１ｍＭとし、第二の実験では１００μＭとした。実験は３７℃で行い、１．５ｍｌの試験溶液をドナー側（尖端側）に添加して開始した。化合物を入れない輸送緩衝液２．５ｍｌを、レシピエント側（基底面側）に加えた。さまざまの時間段階で、サンプルを基底面側（１ｍｌ）から取り出し、３７℃で新しい緩衝液と取り替えた。尖端側サンプルを最初と最後（１２０分）にとり、これらの濃度および累積的な基底面濃度によって、化合物の回復率（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ）を決定した。
化合物は、ＨＰＬＣにより分析した。
【００７２】
見かけの透過係数（Ｐａｐｐ）は、以下の式で算出した：
【数１】
2004517967.tif 000024
ここで、ｄｃ／ｄｔは単層を通る流れ（μｇまたは化合物／ｍｌ×ｓ）、Ｖは収集チャンバ（ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｃｈａｍｂｅｒ）の液体体積（ｍｌ）、Ａは単層の表面積（ｃｍ２）、そしてｃＯはドナーチャンバの初期濃度（μｇまたは化合物／ｍｌ）である。単層を通る流れは、初期の直線的データカーブ（６０分まで直線的）を用いて、適当な時間における累積的な基底面濃度から算出した。それぞれの測定は３回の繰返しで行い、Ｐａｐｐの計算値は３回の測定の平均である。選択された化合物のＰａｐｐ値を文献に記載の公知の吸収値と対比し、シグモイド検量曲線を作った。Ａｒｔｕｒｓｓｏｎの研究（Ａｒｔｕｓｓｏｎ Ｐ．， Ｋａｒｌｓｓｏｎ Ｊ．； Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．１９９１；１７５ （３）：８８０−８８５）に従い、化合物の吸収率をこの曲線を用いて導くことができる。
【００７３】
結果
【表５】
2004517967.tif 000025
【００７４】
文献（Ｊ．−Ｒ． Ｓｃｈｗａｒｋ等、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ （１９９８） ４３６：７９７）において知られたアシルグアニジン型のＮＨＥ３活性化合物と比較して、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は明らかに優れた膜透過能力を有する。
【００７５】
ＮＨＥ活性の測定
大部分の分子生物学手法は「分子生物学の現代的プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」 （Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆ． Ｍ．， Ｂｒｅｎｔ， Ｒ．， Ｋｉｎｇｓｔｏｎ， Ｒ． Ｅ．， Ｍｏｏｒｅ， Ｄ． Ｄ．， Ｓｅｉｄｍａｎ， Ｊ． Ｇ．， Ｓｍｉｔｈ， Ｊ． Ａ．およびＳｔｒｕｈｌ， Ｋ．著Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ） および Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」 （Ｓａｍｂｒｏｃｋ， Ｊ．， Ｆｒｉｔｓｃｈ， Ｅ． Ｆ．，およびＭａｎｉａｔｉｓ， Ｔ．著Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８９））のプロトコールに従っている。
【００７６】
我々の研究では、安定にトランスフェクションされた細胞株は、いずれの場合も次のＮＨＥサブタイプの一つを発現した：ヒトＮＨＥ１ （Ｓａｒｄｅｔ 等、Ｃｅｌｌ ５６：２７１−２８０ （１９８９））、ウサギＮＨＥ２ （Ｔｓｅ 等、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８：１１９１７−１１９２４ （１９９３））、ヒトＮＨＥ３ （Ｂｒａｎｔ 等、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２６９ （Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ３８）， Ｃ１９８−Ｃ２０６ （１９９５））、またはラットＮＨＥ３ （Ｏｒｌｏｗｓｋｉ 等、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６７：９３３１−９３３９ （１９９２））．
【００７７】
Ｐｏｕｙｓｓｅｇｕｒ教授によって得られたそれぞれのＮＨＥサブタイプのｃＤＮＡクローンは、適切なリンカー配列の添加の後、発現プラスミドｐＭＡＭｎｅｏ（例えば、ＣＬＯＮＴＥＣＨ（ハイデルベルク）から入手可能）にクローンされており、そのプラスミドの制限エンドヌクレアーゼＮｈｅｌの認識配列はそれぞれのＮＨＥサブタイプの開始コードンの約２０〜１００塩基対前方にあり、全体のコード配列が構造物に存在する。ＲＴ−ＰＣＲによってヒトの腎臓ｍＲＮＡから得られたヒトのＮＨＥ３の場合は、得られたｃＤＮＡバンドがｐＭＡＭｎｅｏに適した切断部位をその末端に持つように、ＲＴ−ＰＣＲプライマが選択された。
【００７８】
「リン酸カルシウム法」（「分子生物学の現代的プロトコール」の章９．１に記載）に従い、ＮＨＥ−欠如細胞株ＬＡＰ１（Ｆｒａｎｃｈｉ 等、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８３：９３８８−９３９２（１９８６））をＮＨＥサブタイプのそれぞれのコード配列を取り込んだプラスミドでトランスフェクションさせた。Ｇ４１８を含有する培地で成育させて、トランスフェクション細胞を選別した後（トランスフェクションによってｎｅｏｇｅｎｅを得た細胞だけがこれらの条件の下で生存する）、機能的なＮＨＥ発現のために選別した。これのための、Ｓａｒｄｅｔの「酸負荷」（Ａｃｉｄ Ｌｏａｄ）法（Ｓａｒｄｅｔ 等、Ｃｅｌｌ ５６：２７１−２８０（１９８９））を用いた。機能的なＮＨＥサブタイプを発現する細胞は、ＣＯ２およびＨＣＯ３−の非存在下における本テストの酸性化を補償することができるが、トランスフェクトされなかったＬＡＰ１細胞はそれができない。「酸負荷」選抜を数回繰り返した後、生存している細胞を、統計的にウェル当たり１細胞となるよう、ミクロタイタープレートに接種した。ほぼ１０日後に、顕微鏡下で、１ウェル当たりどれくらにのコロニーが成長しているかをチェックした。それぞれのコロニーからの細胞数を、ＸＴＴ増殖キット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用い、「酸負荷」後の生存能と関連して調査した。最良の細胞株が次の試験に用いられ、トランスフェトされた配列の消失を避けるために、連続的選択圧の下でＧ４１８含有培地で培養された。
【００７９】
特定の物質による各ＮＨＥサブタイプの阻害のためのＩＣ５０値を決定するため、Ｓ．Ｆａｂｅｒが開発した「酸負荷」法を用いる試験（Ｆａｂｅｒ等、Ｃｅｌｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６， ３９−４９（１９９６））を僅かに修正して行った。この試験において、機能的なＮＨＥの場合には重炭酸塩が無い条件の下でも起きる酸性化後の菌体内ｐＨ（ｐＨｉ）の回復が測定された。このため、ｐＨｉをｐＨ感受性蛍光染料ＢＣＥＣＦ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，前駆体ＢＣＥＣＦ−ＡＭが使用される）を用いて測定した。細胞を最初にＢＣＥＣＦでロードした。ＢＣＥＣＦ蛍光は、比率蛍光分光形（Ｒａｔｉｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）（Ｐｈｏｔｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｓｏｕｔｈ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ， Ｎ．Ｊ．， ＵＳＡ）により、５０５および４４０ｎｍの励起波長および５３５ｎｍの発光波長において測定され、検量線によってｐＨｉに変換された。記述されたプロトコルと異なり、ＢＣＥＣＦロードの場合でもＮＨ４Ｃｌ緩衝液（ｐＨ ７．４）中で細胞をインキュベートした（ＮＨ４Ｃｌ緩衝液：１１５ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＮＨ４Ｃｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＳＯ４、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５ｍＭのグルコース、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、１ＭのＮａＯＨを使用してｐＨを７．４とした）。細胞内酸性化は、ＮＨ４Ｃｌ緩衝液中でインキュベートした細胞の各２５μｌにＮＨ４Ｃｌ不含の緩衝液中９７５（ｌを添加することによって引き起こされた。引き続いて起きるたｐＨ回復の速度を、ＮＨＥ１の場合２分間、ＮＨＥ２の場合５分間、ＮＨＥ３の場合３分間記録された。供試化合物の阻止能力を計算するため、細胞を最初に、完全なｐＨ回復が起きた緩衝液またはｐＨ回復が全く起きなかった緩衝液において調査した。完全なｐＨ回（１００％）のために、細胞をＮａ＋含有緩衝液（１３３．８ｍＭのＮａＣｌ、４．７ｍＭのＫＣｌ、１．２５ｍＭのＣａＣｌ２、１．２５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．９７ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、０．２３ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、５ｍＭのｈｅｐｅｓ、５ｍＭのグルコース、１ＭのＮａＯＨを使用してｐＨを７．０とした）でインキュベートした。０％値を決めるために、細胞をＮａ＋不含緩衝液（１３３．８ｍＭの塩化コリン、４．７ｍＭのＫＣｌ、１．２５ｍＭのＣａＣｌ２、１．２５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．９７ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、０．２３ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、５ｍＭのｈｅｐｅｓ、５ｍＭのグルコース、ＮａＯＨでｐＨを７．０とした）でインキュベートした。供試化合物は、Ｎａ＋含有緩衝液において調製された。物質のどの試験濃度の場合も、細胞内ｐＨの回復は、最大回復の比率（％）で表した。それぞれの物質のＩＣ５０値は、ｐＨ回復の％値から、それぞれのＮＨＥサブタイプのためのシグマプロットプログラム（Ｓｉｇｍａ Ｐｌｏｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）を基に算出された。
【００８０】
ＮＨＥ活性
【表６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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