(57)【要約】本発明は、ヒドラジン水和物と反応性を有する溶媒及びある範囲のタキサン類を含む溶液から１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法を記載する。溶液を、ヒドラジン水和物と接触させ、それによりその中のいくつかのタキサン類を１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化する。本方法は、Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有するタキサン類を標的とし得る。ヒドラジン水和物は、タキサンの溶質のエステル官能基を開裂する。本方法は、バイオマスの抽出物を溶媒とヒドラジン水和物の混合物に接触させることにより、バイオマスの抽出物から１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造するために使用することができる。溶媒は、ヒドラジンにより開裂される官能基を有してよい。酢酸エステル溶媒を意図している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶媒及びある範囲のタキサン類を含む第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させ、それにより１０−デアセチルバッカチンＩＩＩでない、該溶液中の数種のタキサン類を１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化することを含む、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法であって、該溶媒がヒドラジン水和物と反応性を有するものである、上記方法。
【請求項２】
該溶媒がヒドラジンにより開裂される官能基を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該溶媒がエステル官能基を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該溶媒が酢酸エステル溶媒である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該溶媒が酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル及び酢酸エチルから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
該溶媒が酢酸イソブチル及び酢酸イソプロピルから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
該第一の溶液中の１０−デアセチルタキソールが、該第一の溶液を該ヒドラジン水和物と接触させた後１．５時間以内に１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
該第一の溶液中の１０−デアセチルタキソールが、該第一の溶液を該ヒドラジン水和物と接触させた後３０分以内に１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
該第一の溶液が、該第一の溶液を該ヒドラジン水和物と接触させる前の該第一の溶液中の全溶解固体０．１０ｇに対して該溶媒１．０ｍｌの比率を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
該ヒドラジン水和物がヒドラジン一水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
該第一の溶液を、該第一の溶液中の全溶解固体１．０ｇに対して０．６ｍｌ〜４．０ｍｌのヒドラジン一水和物と接触させる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
該第一の溶液を、該第一の溶液中の全溶解固体１．０ｇに対しておよそ２．０ｍｌのヒドラジン一水和物と接触させる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
該第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させる工程の後に好適な失活剤を添加する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
該失活剤が希釈酸溶液及び塩化アンモニウム水溶液からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
該第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させる工程によって二相の溶液が形成され、且つ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが、該二相の溶液からその有機相と水相を分離することにより回収される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
該二相の溶液が、その該有機相と水相を分離する前に４５分〜１時間攪拌される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
該二相の溶液が周囲温度で攪拌される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
該二相の溶液の該有機相が、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル及び酢酸エチルから選択される溶媒を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
該有機相が活性炭と接触する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
該有機相が吸着カラムを通過する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが、非溶媒としてアセトニトリルを使用して、該有機相から結晶化される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが、非溶媒としてアセトニトリルを使用して、メタノールから再結晶化される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有する少なくとも１種のタキサンをその構成要素として含む、バイオマスの抽出物から１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法であって：
（ａ）バイオマスの抽出物を溶媒に接触させ、それによりＣ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有する少なくとも１種のタキサンの溶質を含む、第一の溶液を形成し、ここで該溶媒はヒドラジン水和物と反応性を有するものであり；そして
（ｂ）該第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させ、それによりタキサンの溶質の該エステル官能基を開裂する；
ことを含む上記方法。
【請求項２４】
該溶媒がヒドラジンにより開裂される官能基を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
該溶媒がエステル官能基を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
該溶媒が酢酸エステル溶媒である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
該溶媒が酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル及び酢酸エチルから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
該溶媒が酢酸イソブチル及び酢酸イソプロピルから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
該バイオマスの抽出物がイチイ属の植物に由来する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
該バイオマスの抽出物が、該バイオマスの抽出物を該溶媒に接触させる前に好適な基質上に吸着される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
該基質がシリカゲル、シリカ、砂及び珪藻土から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
該基質がシリカゲルである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
該第一の溶液が、該第一の溶液を該ヒドラジン水和物と接触させる前の該第一の溶液中の全溶解固体０．１０ｇに対して該溶媒１．０ｍｌの比率を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３４】
該ヒドラジン水和物がヒドラジン一水和物である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３５】
該第一の溶液を、該第一の溶液中の全溶解固体１．０ｇに対して０．６ｍｌ〜４．０ｍｌのヒドラジン一水和物と接触させる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
該第一の溶液を、該第一の溶液中の全溶解固体１．０ｇに対しておよそ２．０ｍｌのヒドラジン一水和物と接触させる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
該第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させる工程によって二相の溶液が形成され、その有機相と水相を分離することにより１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが該二相の溶液から回収される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３８】
該二相の溶液が、その該有機相と水相とを分離する前に４５分〜１時間攪拌される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
イチイ属の植物に由来するバイオマスの抽出物から１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法であって、バイオマスの抽出物を溶媒とヒドラジン水和物との混合物に接触させ、それにより１０−デアセチルバッカチンＩＩＩでないバイオマスの抽出物中の数種のタキサン類を１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化することを含み、且つ、該溶媒がヒドラジン水和物と反応性を有するものである、上記方法。
【請求項４０】
該溶媒がヒドラジンにより開裂される官能基を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
該溶媒がエステル官能基を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
該溶媒が酢酸エステル溶媒である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
該溶媒が酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル及び酢酸エチルから選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
該溶媒が酢酸イソブチル及び酢酸イソプロピルから選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
該バイオマスの抽出物が、該バイオマスの抽出物を該混合物に接触させる工程の前にシリカゲル上に吸着される、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本発明は、２０００年３月１６日に出願の米国特許出願第０９／５２７，００７号、現在は米国特許第６，２８１，３６８号、の一部継続出願である。
【０００２】
本発明は、一般に、有用な物質を生成するためのバイオマスの抽出物の精製に関する。より詳細には、本発明は、バイオマスの抽出物中の不要なタキサン類を、パクリタキセルの合成に使用し得るタキサン類へ転化することを意図するものである。具体的には、本発明は、不要なタキサン類を、パクリタキセルの生成に有用な前駆体である１０−デアセチルバッカチンＩＩＩへ転化することに関する。
【背景技術】
【０００３】
種々のタキサン化合物が、抗腫瘍活性を示すことが知られている。この活性の結果として、タキサン類は、科学及び医学界でますます注目を集めている。これらの中で第一のものは、文献中で「タキソール」とも言われているが、「パクリタキセル」として公知の化合物である。パクリタキセルは、難治の卵巣癌及び転移性の乳癌等の、数種の様々な腫瘍の化学療法による治療のために認可されている。肺、頭、首や他の癌の治療のためのそれらを含む臨床試験は、パクリタキセルが、広範囲の効力のある抗白血症及び腫瘍抑制に対する活性の見込みがあることを示している。この医薬の誘導及びその優れた同属体の同定の更なる進展は、癌の化学療法の継続的な発展に極めて重要である。
【０００４】
パクリタキセルは、次の式及び番号を有する。
【化１】
2004521948.tif 000002
【０００５】
パクリタキセルは、数種のイチイ種（ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｙｅｗ）（イチイ属（ｇｅｎｕｓ  Ｔａｘｕｓ）Ｔａｘａｃｅａｅ科）に見出される天然に存在するタキサンジテルペノイドである。生憎、この化合物の濃度は非常に低い。又常緑樹のイチイ種はゆっくり成長する。イチイの木の樹皮は典型的には、最高濃度のパクリタキセルを示すが、１ｋｇのパクリタキセルの生産には、凡そ１６，０００ポンドの樹皮を必要とする。このように単離によるパクリタキセルの入手に対する長期的な見込みは、悲観的である。
【０００６】
従って多くの努力が、近い関係の前駆体化合物からのパクリタキセルの部分合成に向けられてきた。イチイの木の中のパクリタキセルの存在は極めて低濃度であるが、バッカチンＩＩＩ、セファロマニン、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ等の種々の他のタキサン化合物類があり、これらもイチイから抽出され得る。これらのタキサン化合物類のいくつかは、より容易に高収率で抽出され得る。
【０００７】
パクリタキセルを首尾良く合成するためには、キラルの非ラセミ側鎖、及び有用なバッカチンＩＩＩ骨格の豊富な天然資源への便利な接近、並びに両者を結び付ける効果的な手段が必要である。しかし、保護されたバッカチンＩＩＩ骨格への側鎖のエステル化は、半球状の保護されたバッカチンＩＩＩ骨格の窪んだ領域内に存在する、バッカチンＩＩＩ骨格中で立体障害を受けるＣ−１３位のヒドロキシルの故に、困難である。天然に存在するジテルペノイド物質であるバッカチンＩＩＩ及び近い関係の１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ（「１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ」）からのパクリタキセルの部分合成に関する技術が発展しており、それ故に、それらはパクリタキセルの合成経路に使用される重要な前駆体になっている。バッカチンＩＩＩ及び１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは、次の式を有する。
【化２】
2004521948.tif 000003
【０００８】
１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは、バッカチンＩＩＩより自然界に豊富である。実際、比較的高濃度の１０−ＤＡＢ  ＩＩＩが、再生可能な資源としてのイチイの葉から抽出され得る。バイオマスのパクリタキセル、バッカチンＩＩＩ及び１０−ＤＡＢ  ＩＩＩと共に見出されて、バッカチンＩＩＩ又は１０−ＤＡＢ  ＩＩＩと同様のジテルペノイド構造を含む数種の近い関係のタキサン類がある。それらは、パクリタキセル又は１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを目的とする通常の精製工程で副流生成物として除去される。これらの副流生成物は、セファロマニン、ニチン、タキソールＣ、７−キシロシル−タキソール類、１０−デアセチル−タキソール及び数種の他のタキサン類及び非タキサン類を含む。表１に示す様に、これらのタキサン類の多くは、下記と同様の一般骨格構造を有する。
【化３】
2004521948.tif 000004
【０００９】
【表１】
2004521948.tif 000005
【００１０】
これらの副流生成物は、パクリタキセル、バッカチンＩＩＩ及び１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの構造と類似の一般構造を有するが、それらは一般に、パクリタキセル又は１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの精製工程の不要な廃棄物として放置されている。従って、その様に残された副流生成物をパクリタキセルの合成に有用な物質に変換し、それによってこの重要な制癌剤の入手可能性を増大することは、望ましいことである。
【００１１】
パクリタキセルに存在する種々のエステル基の選択的加水分解に関しては、僅かに２〜３の方法が報告されている。Ｍａｇｌｉ等は、テトラブチルアンモニウム水素化ホウ素を使用して、パクリタキセルのＣ−１３側鎖の選択的還元開裂について報告している（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９８６，  ５１，  ｐ３２３９−３２４２）。Ｃａｒｖｅｒ等の米国特許第５，２０２，４４８号及び第５，２５６，８０１号明細書は、ルイス酸の存在下で水素化ホウ素還元塩を使用して、部分的に精製されたタキサン混合物のバッカチンＩＩＩ及び１０−ＤＡＢ  ＩＩＩへの転化を教示している。
【００１２】
安息香酸エステル基のＣ−２における選択的加水分解は、三研究グループによって成された。Ｃｈｅｎ等による方法では、Ｒｅｄ−Ａｌで７位と１３位の二箇所を保護されたバッカチンＩＩＩが、対応する２位で脱ベンゾイル化された誘導体を７８％の収率で提供している（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４、４，ｐ４７９−４８２）。Ｃｈａｕｄｈａｒｙ等により報告された他の方法では、２’、７位の二箇所を保護されたパクリタキセルの、ＮａＯＨによる相転移条件下での加水分解により、対応する２位で脱ベンゾイル化されたパクリタキセル誘導体が適度の収率で生成した（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．,  １９９４,１１６,ｐ４０９７）。Ｄａｔｔａ等により報告された第３の方法では、バッカチンＩＩＩの誘導体のＣ−２及びＣ−４における選択的脱エステル化が、３級ブトキシ化カリウムを塩基として用いて、それぞれ６９％及び５８％の収率で達成された。
【００１３】
Ａｐｐｕｒｂａ  Ｄａｔｔａ、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｈｅｐｐｅｒｌｅ、及びＧｕｎｄａ  Ｉ．Ｇｅｏｒｇも、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．,１９９５,  ６０,  ｐ７６１−６３において、純粋なセファロマニン及びパクリタキセルのＣ−１０及びＣ−１３のエステル官能基を、ヒドラジン分解により除去するための選択的脱エステル化を報告している。その仕事は、アンモニアとヒドラジンの両者が穏やかな条件下でエステル基の除去のために使用され、その際酢酸エステル類が安息香酸エステル基よりも優先的に開裂されると言う認識によって見込みが持たれた。Ｄａｔｔａ、Ｈｅｐｐｅｒｌｅ及びＧｅｏｒｇは、ヒドラジン一水和物により室温で２時間処理されたパクリタキセルの９５％エタノール溶液が、得られる唯一の生成物として１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを生成することを報告した。１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ生成物は、パクリタキセルのＣ−１０及びＣ−１３におけるエステル結合の開裂によって生成された。Ｄａｔｔａ、Ｈｅｐｐｅｒｌｅ及びＧｅｏｒｇは、この反応を、主としてパクリタキセルとセファロマニン及び数種の他の微量の不純物からなる国立癌研究所混合物（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｍｉｘｔｕｒｅ）に拡大したが、この場合もヒドラジン一水和物と反応した時、すんなりと１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを生成した。９５％エタノール中のヒドラジン一水和物の溶液を利用するＤａｔｔａ、Ｈｅｐｐｅｒｌｅ及びＧｅｏｒｇにより報告された反応は、約ｐＨ１０において、強塩基であるヒドラジン一水和物が、他の塩基性の求核試薬に類似してエステル基を開裂する反応性を有する。
【００１４】
しかしながら、一般に高度に酸性のバイオマスの抽出物となる抽出工程からの副流生成物を、例えば１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ等の有用な生成物に転化するための簡単で効率的な方法を提供する必要性が残されている。特に、例えばセファロマニン、１０−デアセチルタキソール、バッカチンＩＩＩ及び数種の他のタキサン類等を比較的未精製の又は一部精製した形態で含むもののような、タキサン類の複合体混合物を、パクリタキセル及びその同属体類を合成するために、半合成の目的で精製され、利用され得る１０−ＤＡＢ  ＩＩＩへ転化する方法に対する必要性が残されている。本発明は、これらの要求を満たすことを意図するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の一つの目的は、タキサンの抽出工程からの副流生成物を、パクリタキセル合成のために有用な物質へ転化するための、新規で有用な方法を提供することである。
他の一つの目的は、タキサン類の複合混合物をパクリタキセル前駆体へ転化する、簡単で効率的な方法を提供することである。
更に他の一つの目的は、望ましい溶媒を使用してバイオマスの抽出物から有用な合成前駆体を製造することである。
【００１６】
なお更なる目的は、セファロマニン、１０−デアセチル−タキソール、バッカチンＩＩＩ及び数種の他のタキサン類等のタキサン類混合物から比較的純粋な１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを製造することである。
なお更に他の一つの目的は、Ｃ−１０位及び（又は）Ｃ−１３位にエステル官能基を有するタキサン類を含むバイオマスの抽出物から、パクリタキセル合成に有用な１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを製造することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
そして、本発明によれば、溶媒及びある範囲のタキサン類を含む第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させ、それにより１０−デアセチルバッカチンＩＩＩでない、該溶液中の数種のタキサン類を１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化することを含む１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法であって、該溶媒がヒドラジン水和物と反応性を有するものである方法が提供される。更に詳細には、溶媒は、例えば、エステル官能基等の、ヒドラジンにより開裂される官能基を含むことができる。具体的には、溶媒は、例えば、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル又は酢酸エチル等の、酢酸エステル溶媒であってよい。第一の溶液は、第一の溶液を該ヒドラジン水和物と接触させる前に、第一の溶液中の全溶解固体０．１０ｇに対して溶媒１．０ｍｌの比率に濃縮又は希釈され得る。ヒドラジン水和物は、好ましくはヒドラジン一水和物であり、第一の溶液中の全溶解固体１．０ｇに対して０．６ｍｌ〜４．０ｍｌの範囲のヒドラジン一水和物、好ましくは、全溶解固体１．０ｇに対して凡そ２．０ｍｌのヒドラジン一水和物である。
【００１８】
第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させる工程によって、二相の溶液を形成することができ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが、二相の溶液からその有機相と水相を分離することにより回収され得る。好ましくは二相の溶液が、その有機相と水相とを分離する前に４５分〜１時間、周囲温度で攪拌される。有機相は、活性炭と接触させ、又は吸着カラムを通過させることができ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを、非溶媒（ａｎｔｉ−ｓｏｌｖｅｎｔ）としてアセトニトリルを使用して有機相から結晶化させ、非溶媒としてアセトニトリルを使用してメタノールから再結晶化させることができる。
【００１９】
また本発明は、Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有する、少なくとも１種のタキサンをその構成要素として含むバイオマスの抽出物から、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法も提供する。その方法は、バイオマスの抽出物を溶媒に接触させ、それによりＣ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有する少なくとも１種のタキサンの溶質を含む第一の溶液を形成し、ここで該溶媒はヒドラジン水和物と反応性を有するものであり；そして第一の溶液をヒドラジン水和物と接触させ、それによりタキサンの溶質の該エステル官能基を開裂することを含む。バイオマスの抽出物は、イチイ属の植物に由来するものでよく、好ましくはバイオマスの抽出物を溶媒に接触させる前に、例えばシリカゲル、シリカ、砂又は珪藻土等の、好適な基質上に吸着される。
【００２０】
更に、本発明は、イチイ属の植物に由来するバイオマスの抽出物から１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを製造する方法であって、バイオマスの抽出物を溶媒とヒドラジン水和物との混合物に接触させ、それにより１０−デアセチルバッカチンＩＩＩでない、バイオマスの抽出物中の数種のタキサン類を１０−デアセチルバッカチンＩＩＩに転化することを含み、ここで該溶媒は、ヒドラジン水和物と反応性を有するものである方法を提供する。
【００２１】
本発明のこれらの及び他の目的は、本発明の下記の例示的実施態様の詳細な説明の考察から、容易に評価され理解されるであろう。
【００２２】
（例示的実施態様の詳細な説明）
本発明は、２０００年３月１６日に出願の米国特許出願第０９／５２７，００７号、現在は米国特許第６，２８１，３６８号、に開示されたヒドラジン分解（ｈｙｄｒａｚｉｎｏｌｙｓｉｓ）方法の代替方法を提供する。その明細書で論じられている様に、バイオマス資源に由来する未精製の形態のセファロマニン、１０−デアセチルタキソール、バッカチンＩＩＩ及び数種の他のタキサン類を含むタキサン類の複合混合物は、ヒドラジン水和物によって１０−ＤＡＢ  ＩＩＩに転化され、それはパクリタキセル、及びその同属体の半合成用に精製され、利用される。とりわけ該出願は、ヒドラジン分解方法における種々の溶媒、及び好ましくはエタノール又はメタノール等のアルコール溶媒の使用を記載している。
【００２３】
しかし本発明は、ヒドラジンに対して反応性を有する、例えば酢酸エステル溶媒等のある種の溶媒の使用に関し、従って、溶液中のタキサンの溶質のエステル官能基に対するいかなるヒドラジン活性をも失活することが予期されるであろう。特にヒドラジンによって開裂される、例えば酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）、酢酸イソブチル（ＩＢＡｃ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）等の、エステル官能基を有する溶媒は、米国特許出願第０９／５２７，００７号に記載されたヒドラジン分解方法におけるアルコール溶媒の代わりに使用される際に、有益な結果を与えることが見出されている。具体的には、このような酢酸エステル溶媒の使用は、ヒドラジン分解反応において、アルコール溶媒の使用に比較してより少量の不要な全溶解固体、容易な後処理及び短い反応時間を提供する。
【００２４】
例えば、ＩＰＡｃ、ＩＢＡｃ又はＥｔＯＡｃ、そして好ましくはＩＢＡｃ又はＩＰＡＣで抽出されたバイオマスの抽出物は、メタノール（ＭｅＯＨ）で抽出されたバイオマスの抽出物に比較して、全て価値あるタキサン類を有するが、より少量の全溶解固体（ＴＤＳ）を含有し、色は非常に薄い。反応混合物におけるより少量のＴＤＳの存在は、反応を非常にクリーンな方法で進行させる。特に反応は、より少量のヒドラジン水和物試薬のみを必要とし、短い反応時間を要し、高い純度の生成物を提供し、従って後処理後の生成物の更なる利用の前により少ない処理工程しか必要としない。
【００２５】
更に、抽出されたタキサン類を含有するＩＰＡｃ又はＩＢＡｃの溶液へのヒドラジンの添加の後に、反応混合物は、非常に暗褐色の底部の水層と淡黄色乃至は薄い褐色の上部の有機層との二相になり、これはその二相を分割する上での更なる努力を要しない。それに比較して、有機層を特別の順序及び組成に分離するためには、ＭｅＯＨ溶液による反応に更に溶媒が添加された。その上、ＭｅＯＨによる反応は、ヒドラジン分解反応に由来する全ての１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを抽出するためには、水層の更なる抽出を利用することを要した。
【００２６】
更に、反応時間は、酢酸エステル溶媒を使用する場合はアルコール溶媒を使用する場合に比較して実質的に短い。例えば、ＩＰＡｃ又はＩＢＡｃ溶液を使用する反応は、凡そ４５分で終了に至るが、一方アルコール溶媒を使用する溶液に関しては３時間に至る。
【００２７】
ヒドラジンと反応する溶媒、特にＩＰＡｃ、ＩＢＡｃ又はＥｔＯＡｃの様な酢酸エステル溶媒の使用によって与えられる有益な結果は、予期せざるものであり、この反応は驚くべき成果を提供する。溶媒自身はヒドラジンに対して反応性を有するので、当業者であれば、溶媒がタキサンのエステル官能基に対するヒドラジンの反応性を非常に減じるか又は失活させることを予期するであろう。実際、下記表２に示す様に、ヒドラジン単独とＩＰＡｃ、ＩＢＡｃ及びＥｔＯＡｃとの反応の実験は、それらのそれぞれのアルコールを生成し、従ってヒドラジンが事実上溶媒と反応し、それによってそれらのそれぞれのエステル官能基を開裂することを示している。とりわけ、１．０ｍｌのヒドラジン一水和物が、各々４．５ｍｌの容積のＩＢＡｃ、ＩＰＡｃ及びＥｔＯＡｃにそれぞれ添加された。その結果得られた二相の混合物を１．０時間攪拌し、それをＧＣ分析することにより、それぞれのアルコールの生成が確認された。
【００２８】
【表２】
2004521948.tif 000006
【００２９】
これらの実験から、ヒドラジン一水和物が酢酸エステル溶媒自身と反応し、その結果ヒドラジン一水和物は、酢酸エステル溶媒を含有する溶液に添加されると消費されることが期待されることが確認された。
【００３０】
本発明の方法は、ヒドラジン水和物が溶媒のエステル官能基と反応し、それを開裂するであろうことが期待され（且つ、実験結果がそれを示している）点で驚くべき結果を提供している。このことは、溶液中のタキサン類に対するヒドラジンの反応性を完全に又は実質的に減じることが予想される。反応はアルコール溶媒を用いる場合よりも非常に早く進んで完結するという事実を考慮すると、この反応の結果は一層驚くべきものである。従ってこの方法は、副生成物である副流タキサン類（ｓｉｄｅ  ｓｔｒｅａｍ  ｔａｘａｎｅｓ）を手間の掛かる精製工程なしに利用し、これらのタキサン類を極めて重要なタキサン、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ、パクリタキセルの半合成用の構成ブロック、ドセタキセル及びそれらの同属体に転化するための、予期せざる、しかし効率的なルートを提供する。
【００３１】
Ｉ．バイオマスの抽出物の調製
本発明は、部分的に又は最小限に精製することができ、且つ、イチイ属の植物由来の、バイオマスの抽出物を利用する。具体的には、バイオマスの抽出物は、例えば、タクサスバッカータ（Ｔａｘｕｓ  ｂａｃｃａｔａ）、タクサスブレビフォーリア（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）、タクサスカナデンシス（Ｔａｘｕｓ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、タクサスクスピダータ（Ｔａｘｕｓ  ｃｕｓｐｉｄａｔａ）、タクサスフロリダーナ（Ｔａｘｕｓ  ｆｌｏｒｉｄａｎａ）、タクサスメーディア（Ｔａｘｕｓ  ｍｅｄｉａ）及びタクサスワリキアーナ（Ｔａｘｕｓ  ｗａｌｌｉｃｈｉａｎａ）等のイチイ種に由来し得る。このようなバイオマスの抽出物は、例えば、セファロマニン、１０−デアセチルタキソール、バッカチンＩＩＩ及び他のタキサン類等の種々のタキサン類、並びに、例えば、フェノール性物質やカルボン酸類を含む植物物質等の、ある範囲の他の物質を含む。一般にバイオマスの抽出物は、例えば凡そ５パーセント（５％）のような僅か数重量パーセントのタキサン類から成る。残余は、例えば、酸性植物物質等の他のバイオマス由来の物質である。本発明で使用されるバイオマスの抽出物は、一般に、主成分のパクリタキセルの他に、例えば葉緑素及び植物性顔料等のある種の植物物質を除去するように処理されているイチイのバイオマスの、水性アルコール抽出物である。
【００３２】
それらバイオマスの抽出物の製造は、当業界で一般に公知である。本発明で使用するバイオマスの抽出物を製造する例示的な方法は、例えばＧａｕｌｌｉｅｒ等の米国特許第５，３９３，８９５号明細書、及びＭａｒｇｒａｆｆの米国特許第５，３９３，８９６号及び第５，７３６，３６６号明細書に部分的に記載されている。それらの文献の教示は、引用することにより本明細書の一部として取り込まれている。特にＧａｕｌｌｉｅｒ等の特許で考察されている様に、本発明で使用されるバイオマスの抽出物の製造の一方法は、アルコール抽出物を得るために、粉砕されたイチイの植物物質と、例えばメタノール等の脂肪族アルコールとの必要により加熱された混合物を攪拌することによって始まる。粉砕されたイチイの植物物質は、イチイの適切な部分から誘導することができ、イチイの断片を得るために粉砕及び必要により乾燥の操作によって得ることができる。このような断片を得るに際して、植物の若い部分を目的とした冷凍及び解凍の操作も必要により利用し得る。
【００３３】
アルコール抽出物は、先ず濃縮され、次いで水で希釈されて水アルコール性溶液を形成する。水アルコール性の溶液に不溶の生成物は、その後、例えばろ過、遠心分離又は沈降によって除去される。次いで、実質的に全てのアルコールは、例えば減圧蒸留によって水アルコール性の溶液から除去される。次いで、残りの水溶液は、例えばエーテル又は脂肪族エステル等の有機溶媒で抽出され、有機の抽出物は、必要により水及び（又は）弱塩基の水溶液で洗浄され、乾燥される。次に、有機溶媒は例えば減圧蒸留によって除去され、残留物を生成する。
【００３４】
残留物は、下記のヒドラジン分解反応で使用されるバイオマスの抽出物となる。このバイオマスの抽出物は、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ、並びに、例えばセファロマニン、１０−デアセチルタキソール、バッカチンＩＩＩ及び他のタキサン類等の、Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有するタキサン成分を含有することを認識する必要がある。１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは、下記のヒドラジン分解反応の反応条件下で安定であり、従って本発明は、上記工程によって抽出されたいかなる１０−ＤＡＢ  ＩＩＩをもまず分離し、除去するという余分の工程を要することなく、イチイの植物物質から良好な収率で１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを得ることを可能にすることが見出されている。
【００３５】
本発明で使用されるバイオマスの抽出物の製造の更なる方法は、例えばＭａｒｇｒａｆｆの特許で考察されている。一般にＧａｕｌｌｉｅｒ等によって教示されている方法に類似しているが、Ｍａｒｇｒａｆｆは、粉砕されたイチイの植物物質が、例えば２０℃〜６５℃の温度で３０分〜２時間の時間間隔で、最初に水で攪拌されることを教示している。次いで得られた水溶液は、例えばろ過、遠心分離又は沈降によって、懸濁液中に残留している植物物質から除去され、必要により冷却することができる。
【００３６】
次に、タキサン類は、例えばエーテル又は脂肪族エステル等の有機溶媒を水溶液に添加することによって水溶液から抽出されうる。有機の抽出物は水相から分離され、必要により水及び（又は）弱塩基の水溶液で洗浄し、乾燥し、その後、有機溶媒を例えば減圧蒸留によって除去し、残留物を生成する。
【００３７】
抽出の代替として、水溶液は、例えば吸着樹脂等の適切な基質に吸着させることができ、その後それは、例えばメタノール等の適切な溶媒で洗浄される。その結果得られる溶液は、例えばろ過により基質から除去され、例えば減圧蒸留によって濃縮、乾燥され、残留物を生成する。
【００３８】
Ｇａｕｌｌｉｅｒ等の教示に従って製造された残留物の場合と同様に、Ｍａｒｇｒａｆｆの文献によって教示された方法のいずれかに従って製造されたこのような残留物は、下記のヒドラジン分解反応で使用されるバイオマスの抽出物を構成する。また、このバイオマスの抽出物は、Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有するタキサン成分の他に、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを含むことを認識する必要がある。
【００３９】
代わりに、Ｇａｕｌｌｉｅｒ等及びＭａｒｇｒａｆｆの文献で考察されている様に、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは、下記のヒドラジン分解反応の前に、最初に残留物から除去することができる。これは、アセトニトリルを含んでもよい少なくとも１種の有機溶媒中の残留物の溶液から、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩを選択的に結晶化することにより達成される。１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの沈殿物は、例えば、ろ過、遠心分離又は沈降によって、残留物の溶液から分離される。１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの除去後の残留溶液は、本発明のヒドラジン分解反応で使用される代わりのバイオマスの抽出物を形成する。加えて、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの除去後の残留溶液は、例えば減圧蒸留によって濃縮され、更に別のタイプのバイオマスの抽出物を形成する。
【００４０】
１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの除去後でも、このバイオマスの抽出物は、例えば、セファロマニン、１０−デアセチルタキソール、バッカチンＩＩＩ及び他のタキサン類等の、Ｃ−１０位及びＣ−１３位の少なくとも一つにエステル官能基を有するタキサン成分を依然として含むことを認識する必要がある。更に、上記の方法の結果得られるバイオマスの抽出物は、有機相と水相の分離によってある程度精製されうるが、ＨＰＬＣによる精製は行われていないことに注目する必要がある。特に本発明の方法は、この様な更なる精製工程の必要性を最小化し、そうでなければ使用できなかったタキサン類を回収し使用する、魅力的且つ効率的なルートを提供するという点で望ましい。
【００４１】
ＩＩ．バイオマスの抽出物からの１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの製造及び精製
本発明は、エステル官能基、特にそのＣ−１０位及びＣ−１３位のエステル官能基の脱エステル化による、タキサン類の複合混合物の選択的変換の効率的な方法を提供する。この方法は、上記の様に、タキサン抽出工程から副流生成物として製造されるバイオマスの抽出物を利用する。
【００４２】
Ａ．ヒドラジン分解反応
本発明による例示的反応は次の通りである。
【化４】
2004521948.tif 000007
ここでＲ1は、アルキル基、オレフィン基、芳香族基、水素、又は酸素、窒素もしくは硫黄を含む基であり、Ｒ2は、水素、又はＲ3Ｃ＝Ｏ（ここでＲ3はアルキル基）であり得る。Ｒ1Ｃ＝Ｏは、具体的にはベンゾイル、チグロイル、フェニルアセチル又はヘキサノイルであり、Ｒ3Ｃ＝Ｏは、具体的にはアセチルであり得る。
【００４３】
上記反応で示される様に、Ｃ−１０位及びＣ−１３位のエステル官能基は、ヒドラジン分解反応によって開裂される。Ｃ−１０位がそれに結合する水酸基を含む（即ちＲ2はＨである）、従ってＣ−１０位のエステル官能基がない場合には、Ｃ−１３位の側鎖のみが影響されることを理解すべきである。更に、上記に例示された化学構造は、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩに見出される一般的なタキサンの骨格を有する、バイオマスの抽出物中に見出され、本発明に従って反応することができる、タキサン類の全ての可能な部分を網羅するものではないことを認識すべきである。
【００４４】
ＩＰＡｃが例示的方法の溶媒として示されているが、ヒドラジンと反応性を有する他の溶媒も、本発明の方法での使用が意図されているということをさらに認識すべきである。特に、例えばエステル官能基等の、ヒドラジンによって開裂される官能基を有する溶媒、特に、例えばＩＰＡｃ、ＩＢＡｃ、ＥｔＯＡｃ等の溶媒を意図している。加えて、本発明は、ヒドラジン分解反応で使用し得るアセトニトリル、ＴＨＦのようなエーテル溶媒等を含む他の溶媒の使用を意図しており、使用の程度については、当業者は理解している。
【００４５】
好ましい実施態様では、溶液は、Ｃ−１０位、Ｃ−１３位又は両者にエステル官能基を有するある範囲のタキサン類を含んで形成される。この溶液は、上記で製造されたバイオマスの抽出物を、ＩＰＡｃ、ＩＢＡｃ、ＥｔＯＡｃ、又はヒドラジンに対して反応性を有する他の溶媒と接触させることによって形成される。特に、溶媒抽出は、シリカゲル上に吸着され、カラム中に充填されたバイオマスの抽出物に対して行われることが好ましい。シリカゲルは、例えば、シリカ、砂、珪藻土又は他の高表面積の非反応性の基質等の、他の適切な基質で置換することができることを認識する必要がある。代わりに、溶媒をバイオマスの抽出物と直接混合して溶液を形成してもよい。いずれにしても、溶液中のタキサン類の重量パーセントは、概して５パーセント（５％）未満である。溶液は、好ましくは、５５℃以下で、回転蒸発器を使用して、全溶解固体０．１０ｇに対して１．０ｍｌの比率に濃縮される。この溶液に、ヒドラジン水和物、好ましくはヒドラジン一水和物（ヒドラジン６４重量％）が、溶液中に存在する全溶解固体１ｇに対して２．０ｍｌの好ましい比率で添加される。得られた反応混合物は、周囲温度で約４５分間攪拌される。ＨＰＬＣ分析用の数個のサンプルが、それぞれ１５分、３０分、４５分及び６０分の反応時間に対して得られた。種々のタキサン含有溶液の反応は、典型的には３０分までに行われ、４５分までに後処理された。反応は、２４時間に亘って定期的にサンプリングすることによって監視され、最適の反応時間は４５分であると決定された。反応速度と１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの収率の好ましいバランスは、全溶解固体１ｇに対して２．０ｍｌのヒドラジン水和物の比率を使用し、全溶解固体０．１０ｇに対して１ｍｌのＩＰＡｃ又はＩＢＡｃの溶液濃度で見出され、その条件下で４５分の反応時間を可能とした。
【００４６】
表３〜５に示す様に、数個のヒドラジン分解反応が、異なった酢酸エステル溶媒を使用して実施された。特に、表３、４及び５は、それぞれＩＢＡｃ、ＩＰＡｃ及びＥｔＯＡｃ溶媒を用いて実施された反応を示す。以下の表中の値は、時間に対して測定された１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ及び１０−デアセチルタキソール（１０−ＤＡＴ）のＨＰＬＣ面積％を示す。溶液中の種々のタキサン類の選択的脱エステルによる１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの生成は、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの濃度の増加及び１０−ＤＡＴの消失によって確認される。反応の完了の尺度として、本明細書では１０−ＤＡＴが使用されているが、溶液中の他のタキサン類も、ヒドラジン分解反応によって１０−ＤＡＢ  ＩＩＩに転化されることを認識する必要がある。特に３．０時間の時点を超える長引いた反応時間は、１０−ＤＡＢ  Ｖ（１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの７−位でのエピマー化生成物）を示したことも注目すべきである。又、表５に示す様に、ＥｔＯＡｃ中の反応は、他の酢酸エステル溶媒中のそれらよりも遅い。
【００４７】
【表３】
2004521948.tif 000008
【００４８】
【表４】
2004521948.tif 000009
【００４９】
【表５】
2004521948.tif 000010
【００５０】
このように、上記の表３〜５から明らかな様に、ヒドラジン分解反応において、ヒドラジンと反応性を有する種々の溶媒、特に酢酸エステル溶媒の使用は、溶液中の種々のタキサン類の１０−ＤＡＢ  ＩＩＩへの転化のための簡単で効率的な、しかし驚くべき方法を提供する。
【００５１】
全溶解固体に対するヒドラジン水和物の類似の比率が、例えば本明細書に記載されている酢酸エステル溶媒等の他の溶媒でも効果があると信じられることを認識する必要があるが、全溶解固体に対するヒドラジン水和物のいくつかの比が、メタノール溶媒を用いて試験された。特に、全溶解固体に対する溶媒の溶液濃度を、０．１ｇと０．１５ｇの間の全溶解固体に対して１ｍｌのメタノールの濃度とし、全溶解固体に対してヒドラジン水和物の比率を０．６ｍｌと４．０ｍｌの間で変化させて、３、４及び５時間の反応を実施した。これらの反応は、バイオマスのイチイのある程度精製されたメタノール抽出物を使用して実施された。反応速度を監視するために、１０−デアセチルタキソールの濃度が測定され、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの相対面積％として表した。
【００５２】
具体的には、４及び５時間の反応の間、全溶解固体１ｇに対しヒドラジン一水和物０．６ｍｌの比率で、及び３時間の反応の間、全溶解固体１ｇに対しヒドラジン水和物０．６ｍｌ、１．０ｍｌ、１．２ｍｌ、１．９ｍｌ、２．０ｍｌ、２．４ｍｌ、３．０ｍｌ及び４．０ｍｌの比率で、反応速度及び１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの収率が測定された。ヒドラジン水和物の全溶解固体に対する比率が過度に低いと、反応の完了に長時間を要する結果となり、一方ヒドラジン水和物の全溶解固体に対する比率が過度に高いと、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの低収率の結果となることが見出された。商業的な製法では、許容し得る収率が維持される程度に、より短い反応時間が望まれることを認識する必要がある。
【００５３】
本発明は、更に、バイオマスの抽出物が上記のタイプの溶媒とヒドラジン水和物、好ましくはヒドラジン一水和物の混合物と直接接触するヒドラジン分解反応を意図していることを認識する必要がある。そのような場合、ヒドラジンのタキサン類に対する活性を失活させることが予想される溶媒中の類似の官能基の存在に拘わらず、ヒドラジン水和物は、バイオマスの抽出物中に存在するタキサン類のＣ−１０位及びＣ−１３位のエステル官能基を開裂し、それによって、そのようなタキサン類を１０−ＤＡＢ  ＩＩＩに転化するものと考えられる。バイオマスの抽出物は、或いは又、混合物に接触させる前に適切な基質に吸着させてもよい。
【００５４】
Ｂ．１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの回収及び精製
ヒドラジン添加後の反応溶液は、非常に暗褐色の底部の水層と淡黄色乃至は薄い褐色の上部の有機層との二相になる。二相の反応混合物は、両相が分離する前に４５分〜１時間の間激しく攪拌される。タキサン類は上部の有機層に分配され、ヒドラジン及び生成するいかなる塩も底部の水層に分配され、有機層はそれから分離することを認識する必要がある。水層には、有意の割合の１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは残っていないと思われる。
【００５５】
代わりに、溶液は、例えば希釈酸溶液又は塩化アンモニウム水溶液等の適切な失活剤（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）で失活することができる。但し、この失活工程は全工程に必要な時間を３〜５時間延長する可能性がある。ヒドラジン分解反応が失活し得ない場合は、反応混合物を所望の反応時間の後に素早く分割し、タキサン類からヒドラジンを分離するのが好ましい。ヒドラジンのタキサン類との反応は、ヒドラジンがそこから分離される迄続くので、素早く分割しない反応混合物は、溶液中のいくらかの１０−ＤＡＢ  ＩＩＩが分解する結果、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの低収率を招き得ると考えられる。
【００５６】
分離された有機層は、好ましくは水（有機層の２０％の容積で２回）及び食塩水（有機層の２０％の容積で１回）で洗浄される。この段階で有機相に粉末の活性炭が添加され（好ましくは、有機相中の全溶解固体１．０ｇに対し活性炭０．５ｇ）、周囲温度で１時間攪拌され、ろ過される。
【００５７】
或いは又、上記の分割工程から回収された有機層は、炭素／アルミナ／シリカの吸着カラムを通過させて、全溶解固体及び着色を減少させることができる。以下に概要を記載するように、ヒドラジン分解反応の後であって結晶化工程の前に、吸着カラムを使用することは、結晶化のための濃縮中に沈殿物の生成を防止することにより、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの収率を最大化する助けになる。カラムは、好ましくは顆粒状の活性炭、アルミナＮ１及びシリカゲルの層を上部から底部に向かってこの順に含む。好ましい比率は、有機溶液中の全溶解固体１．０ｇに対して０．５ｇの炭素、１．０ｇのアルミナＮ１及び１．０ｇのシリカゲルである。カラムを通じて有機層を下方に流下させた後、カラムは、好ましくはカラム容量の三倍の酢酸イソブチル及び溶液と組み合わされたすすぎ液で溶出される。
【００５８】
その結果得られる溶液は、好ましくは回転蒸発器で、５５oＣ以下で凡そ０．３ｇ／ｍｌの全溶解固体残渣に迄濃縮し、好ましくはアセトニトリル（ＭｅＣＮ）を非溶媒として添加（全容量の凡そ１０％）して、アセトニトリルを含む酢酸エステル溶媒中で１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの結晶化を行うことができる。アセトニトリル中で他の大抵の化合物が良好な溶解性を示すのとは対照的に、アセトニトリル中での１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの低い溶解性は、それを１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの結晶化のための理想的な非溶媒にしている。得られる混合物は、周囲温度で少なくとも５時間攪拌され、その間に固体沈殿物が形成する。得られた固体はろ過され、ろ過ケーキは、９：１の酢酸エステル溶媒とアセトニトリルの溶液を用いて、全溶解固体１．０ｇに対して１．０ｍｌの比率で洗浄される。
【００５９】
洗浄された固体は、酢酸イソブチル濃縮物中の全溶解固体１．０ｇに対して３０ｍｌの比率で、好ましくはメタノールに溶解され、この溶液は、１μｍフィルターを通してろ過される。ろ過されたメタノール溶液は、好ましくは回転蒸発器で、５５oＣ以下で凡そ０．１３３ｇ／ｍｌの残渣に迄濃縮され、アセトニトリルを非溶媒として用いるメタノール中での１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの結晶化が、アセトニトリル（全容積の４０％）を周囲温度で添加し、５時間継続的に攪拌することによって実施される。形成された固体はろ過され、ろ過ケーキは、メタノールとアセトニトリル（７：３の容積比）を用いて、メタノール溶液中の全溶解固体１．０ｇに対して４ｍｌの比率で洗浄される。固体は、真空炉で８０℃以下で少なくとも１６時間乾燥され、残留メタノール濃度を０．５重量％以下に低減する。メタノールが、パクリタキセルの合成工程において１０−ＤＡＢ  ＩＩＩのアセチル化の邪魔をすることが見出されているので、このようなメタノールの低減は望ましい。
【００６０】
この段階での１０−ＤＡＢ  ＩＩＩは、ＨＰＬＣ面積で９５％を超え、パクリタキセル、ドセタキセル及びその同属体の半合成の出発物質として好適である。１０−ＤＡＢ  ＩＩＩ母液及び上記精製工程から生ずるすすぎ液は、多段のメタノール／アセトニトリル結晶化を使用しつつリサイクルされ、総合的な１０−ＤＡＢ  ＩＩＩの収率を増加させ得ることに注目すべきである。
【００６１】
このように、本発明は、特に本発明の例示的な実施態様に重点を置いてある程度詳細に記載した。しかし本発明は、先行技術に照らして構成された以下の請求項によって定義付けられ、本発明の例示的な実施態様の改良又は変更は、本明細書に含まれている発明概念を逸脱しないで成され得ると解釈すべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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