(57)【要約】本発明は、ヒト皮膚の光誘発老化を防止するために、化粧用または医薬用製剤中にＭＭＰ−１阻害物質としてフォトリアーゼ酵素およびＴ４エンドヌクレアーゼＶを使用することに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲンの光誘発分解を阻害するための化粧用局所皮膚処置組成物におけるＤＮＡ修復酵素の使用。
【請求項２】
マトリックス金属プロテイナーゼＭＭＰ１の発現または活性を阻害するための化粧用局所皮膚処置組成物におけるＤＮＡ修復酵素の使用。
【請求項３】
コラーゲンの光誘発分解を阻害するための医薬用局所皮膚処置組成物を製造するためのＤＮＡ修復酵素の使用。
【請求項４】
マトリックス金属プロテイナーゼＭＭＰ１の発現または活性を阻害するための医薬用局所皮膚処置組成物を製造するためのＤＮＡ修復酵素の使用。
【請求項５】
フォトリアーゼをＤＮＡ修復酵素として使用する請求項１〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
Ｔ４エンドヌクレアーゼＶをＤＮＡ修復酵素として使用する請求項１〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
フォトリアーゼとＴ４エンドヌクレアーゼＶとの混合物をＤＮＡ修復酵素として使用する請求項１〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
皮膚処置が予防的処置である請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
ＤＮＡ修復酵素を皮膚処置組成物全体に対して１×１０−６〜５×１０−２重量％の量で使用する請求項１〜８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
ビタミンＢ群のビタミン、プロビタミンもしくはビタミン前駆体またはその誘導体および２−フラノンの誘導体から選択される少なくとも１つの物質を含む、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物。
【請求項１１】
パンテノール、パントラクトン、ニコチン酸アミドおよびビオチンから選択される少なくとも１つの物質を含む、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つの植物抽出物を含む、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物。
【請求項１３】
没食子酸プロピル、プレコセン類、６−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，２−ジメチル−１（２Ｈ）−ベンゾピラン、３，４−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，２−ジメチル−１（２Ｈ）−ベンゾピランおよびその混合物から選択される他のＭＭＰ１阻害物質を少なくとも１つは含む、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物。
【請求項１４】
レチノール（ビタミンＡ１）とＣ２〜Ｃ１８カルボン酸とのエステルを少なくとも１つは含む請求項１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つのイオン性界面活性剤を含む請求項１０〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
８またはそれ以下のＨＬＢ値を持つ非イオン性界面活性剤を少なくとも１つは含む請求項１０〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
少なくとも１つの有機または無機もしくは改質無機ＵＶフィルタを含む請求項１０〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
少なくとも１つのタンパク質加水分解物および／またはその誘導体を含む請求項１０〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
グリシン、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ピログルタミン酸、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニンおよびヒスチジン、ならびにこれらのアミノ酸の亜鉛塩および酸付加塩から選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む請求項１０〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
少なくとも１つの単糖、オリゴ糖もしくは多糖および／またはその誘導体を含む請求項１０〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
少なくとも１つの薄膜形成性および／またはエマルション安定化および／または増粘性および／または接着性ポリマーを含む請求項１０〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
老化皮膚の弾性低下およびシワを減少させるための局所皮膚処置組成物または老化防止組成物としての請求項１０〜２１のいずれかに記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト皮膚の老化、特に光誘発老化を防止するための化粧組成物または医薬組成物に、一定のＤＮＡ修復酵素を、コラーゲン分解性マトリックス金属プロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）の阻害剤として使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
太陽光への曝露は皮膚の生化学的平衡に変化をもたらす。
真皮、特に真皮線維芽細胞では、ＵＶ成分および赤外線（熱）が、結合組織のコラーゲン成分を分解する酵素である間質コラゲナーゼＭＭＰ１の誘導を、様々な機序で引き起こす。本発明に関して、コラゲナーゼＭＭＰ１の誘導とは、この酵素の増量およびその活性の増加またはその両方を意味すると解釈することができる。ＭＭＰ１は繊維状三重らせんコラーゲンをその分子の特定の位置で切断する。２つの部分に分割された三重らせんは溶解し、他のコラゲナーゼによる分解を受けることが可能になる。巨視的には、コラーゲン量の減少は皮膚の弾性の低下およびシワの形成に反映される。ＵＶ線によるコラゲナーゼＭＭＰ１の誘導は、巨視的な皮膚老化作用の主な原因であると考えられる。
【０００３】
本発明に関して、ＭＭＰ１阻害剤とは、
（ａ）酵素ＭＭＰ１をコードするｍＲＮＡの産生を阻害し、よって同酵素の発現を減少させるかまたは防止し、そして／または、
（ｂ）酵素ＭＭＰ１の活性化を減少させ、そして／または、
（ｃ）酵素ＭＭＰ１の活性を減少させる
物質である。
【０００４】
したがってＭＭＰ１の合成および／またはＭＭＰ１活性を減少させることは、老化防止用皮膚化粧品、すなわち皮膚の老化を抑制する化粧製品の開発における重要な目標である。理想的な老化防止物質はＭＭＰ１の発現を低濃度でも阻害する。さらにその物質は、細胞にとって無毒であると共に、化粧用製剤および医薬製剤中で安定であるべきである。
【０００５】
皮膚にはＭＭＰ１の他にもマトリックス金属プロテイナーゼが存在する。他のＭＭＰは生理的に重要な機能を果たしているので、それらの合成または活性の減少は有利であるとは思われない。
【０００６】
先行技術から知られている老化防止物質は前記条件を十分には満たさない。ＷＯ  ９８／５５０７５は、皮膚の光誘発老化を抑制する、ＵＶ−Ａ遮断剤、ＵＶ−Ｂ遮断剤およびＭＭＰ阻害剤の三剤併用を特許請求している。この組成物はＵＶ光に曝露される７〜４８時間前に皮膚に適用しなければ有効でない。レチノイン酸（トレチノイン）およびレチノールは好ましいＭＭＰ阻害剤である。レチノイドは皮膚細胞の代謝に関与し、表皮角化細胞の増殖および分化を刺激する他、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を増加させる。さらにレチノールはコラーゲン分解酵素の形成を減少させるとされている（Ｎｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  ２０３１，  ４２−４６，  １９９６）。しかしレチノイン酸には催奇性があり、処方箋調剤薬でしか使用することができない。化粧用および医薬用局所製剤におけるレチノールの使用にはいくつかの理由で問題がある。例えばレチノールは比較的高い細胞毒性、特に光毒性を持つので、ヒトへの適用を意図する組成物には低濃度でしか使用できない。さらにレチノールは熱および／または光の作用下で酸化によって容易に分解され、化粧用製剤および医薬製剤中で安定化することが難しい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明が取り組んだ課題は、先行技術の欠点を改善し、太陽光誘発皮膚老化の美容処置に、より適した製剤を提供することだった。本発明が取り込んだもう一つの課題は、太陽光誘発皮膚老化の医薬処置に適した組成物を提供することだった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
驚くべきことに、酵素フォトリアーゼおよびＴ４エンドヌクレアーゼＶは皮膚におけるＭＭＰ１のＵＶ誘導発現を阻害することが、ここに見いだされた。
【０００９】
フォトリアーゼおよびＴ４エンドヌクレアーゼＶ（以下「Ｔ４Ｎ５」と略記する）はいわゆるＤＮＡ修復酵素として先行技術では既に知られている。本発明に関してＤＮＡ修復とはＤＮＡからのＵＶ誘導ピリミジン二量体の切断または除去であると解釈される。
【００１０】
「ピリミジン二量体」は、ＤＮＡの一定のピリミジン塩基から例えばＵＶ−Ｂ線などによって光化学的に生成する二量体に対して、先行技術でよく使用されている名称である。ピリミジンそのものはＤＮＡ塩基ではないが、以下の説明では「ピリミジン塩基二量体」という正しい用語の代わりに「ピリミジン二量体」という用語を使用する。ピリミジン塩基チミンでの二量化は、一本のＤＮＡ鎖の隣接するチミン単位が二量化して三環式化合物を形成することによって起こる。二量化生成物ｃｉｓ−ｓｙｎ−シクロブタンジピリミジン単位は遺伝暗号の伝達にエラーを引き起こしうる。特に表皮角化細胞はピリミジン誘導体の形成による影響を受ける。
【００１１】
フォトリアーゼは分類番号がＥＣ４．１．９９．３である酵素デオキシリボジピリミジンフォトリアーゼまたはＤＮＡフォトリアーゼの略称である。フォトリアーゼは下等真核生物、例えば酵母に見いだされた。活性化状態になるには波長範囲３５０〜５００ｎｍの光が必要である。この光はフォトリアーゼ分子中に存在する発色団によって吸収され、その発色団はさらに第２の発色団に電子を伝達する。さらなる電子伝達により、シクロブタンジピリミジン単位が分割され、元の２つのチミン塩基が再生される。特に効率のよいフォトリアーゼは光合成海洋微生物アナシスティス・ニデュランス（Ａｎａｃｙｓｔｉｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）から得られる。また、アナシスティス・ニデュランス由来のフォトリアーゼは、大腸菌から、商業上有意義な量で得られている。
【００１２】
酵素Ｔ４エンドヌクレアーゼＶはバクテリオファージＴ４のｄｅｎＶ遺伝子によって産生され、核酸の（５´−３´）結合を加水分解するホスホジエステラーゼに属する。エンドヌクレアーゼとしてＴ４Ｎ５は核酸鎖の内部を攻撃する。その際、この酵素はＵＶ誘導ピリミジン二量体による損傷を受けたＤＮＡ領域を選択的に認識し、それらを除去する。相補鎖を鋳型としてポリメラーゼによって新たな正しい塩基が組み込まれ、リガーゼによって元のＤＮＡ鎖に連結される。この除去修復機構は光活性化を必要としない暗反応である。Ｔ４Ｎ５は原核生物酵素であるが、この酵素はヒト細胞にも作用する。この酵素はｄｅｎＶ遺伝子を持つ大腸菌株から工業的に生産することができる。
【００１３】
フォトリアーゼおよびＴ４Ｎ５によるＤＮＡ修復に関する重要な研究結果の概要は、Ｄ．  Ｙａｒｏｓｈ  および  Ｅ．  Ｋｌｅｉｎ  により、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ  ３，  １７５−１８１，  １９９４に記載されている。
【００１４】
ＤＮＡ修復酵素は興味深い化粧組成物用活性物質である。先行技術において、好ましい化粧組成物は日焼け防止製剤および日焼け手入れ製品である。Ｔ４Ｎ５のリポソーム封入は  Ｃｅｃｃｏｌｉ  らによって  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ９３，  １９０−１９４，  １９８９に記載されている。化粧製剤におけるリポソーム封入型Ｔ４Ｎ５またはフォトリアーゼの使用は  Ｙａｒｏｓｈ（ＵＳ  ５，１９０，７６２；ＷＯ  ９４／１４４１９  Ａ１）および  Ｇｉｌｃｈｒｅｓｔ  ら（ＷＯ  ９４／１７７８１  Ａ１）によって記載されている。Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ  ら（ＥＰ  ０  ７０７  ８４４  Ａ２）は、ＤＮＡ修復酵素と、チロシン、チロシン誘導体、ビタミン群Ａ、ＣおよびＥのビタミンまたはプロビタミン、銅、亜鉛またはマグネシウムの糖タンパク質複合体、フォルスコリン、環状アデノシン一リン酸（ｃ−ＡＭＰ）、バイオフラボノイドまたは１０〜１４のＨＬＢ値を持つ乳化剤とのリポソーム封入型複合剤を含有する組成物、ならびに日焼け用化粧製剤および皮膚ケア製品の製造方法を開示している。
【００１５】
Ｔ４Ｎ５はメラニン形成の増加を促進するので、これを日焼け用製剤に使用することができるという事実は  ＥＰ  ０  ７０７  ８４４  Ａ２、ＷＯ  ９４／１４４１９  Ａ１および  ＷＯ  ９４／１７７８１  Ａ１に記載されている。フォトリアーゼはメラニン形成には影響しないので、皮膚美白製品に使用することができる（Ｓ．Ｈ．  Ｌｅｅ，  ＫＲ  ９７０３２８２８  Ａ）。リポソーム封入型フォトリアーゼは例えば  Ｐｈｏｔｏｓｏｍｅ（商標）として、またリポソーム封入型Ｔ４Ｎ５は例えば  Ｕｌｔｒａｓｏｍｅ（商標）として、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（米国フリーポート）から市販されている。
【００１６】
先行技術では、フォトリアーゼまたはＴ４Ｎ５はピリミジン二量体損傷ＤＮＡの修復に関連して開示されているにすぎない。また、Ｔ４Ｎ５の場合はメラニン形成の増加に関する記載がある。既知の効果はとりわけ表皮に関係する効果である。とりわけ真皮に関係するＭＭＰ１阻害効果は、先行技術では知られていない。フォトリアーゼまたはＴ４Ｎ５のＭＭＰ１阻害効果に関する仮説を以下に提示する。ＤＮＡのＵＶ損傷が起こると、通常は、細胞内修復機構−転写共役修復−が活性化される。この機構は表皮におけるインターロイキンＩＬ−１およびＩＬ−６の合成を増加させる。インターロイキンは真皮に移動し、線維芽細胞の受容体に結合する。これに反応してコラーゲン分解性ＭＭＰ１が線維芽細胞によって合成される。驚くべきことに、また当業者にとっても予想外なことに、ＤＮＡ修復酵素フォトリアーゼおよびＴ４Ｎ５は、細胞内転写共役修復機構が活性化されてＵＶ誘導ＭＭＰ１合成の因果連鎖が始動する前にＵＶ誘導ＤＮＡ損傷を回復させる能力を、明らかに持っている。
【００１７】
ＭＭＰ１の発現を阻害することおよびコラーゲンの分解を遅延させることを目的とする本発明によるフォトリアーゼまたはＴ４Ｎ５の使用は新規である。これは、皮膚老化の美容処置に、既知の応用を超えた新しい応用を切り開く。ＭＭＰ１阻害剤は、美容上望ましい効果がＭＭＰ１の阻害と関係する場合には、どの化粧品にも有効に使用することができる。したがって、例えばシワ防止クリーム剤、特に常に光に曝露されている顔、首または手の皮膚部分用のシワ防止クリーム剤に、フォトリアーゼまたはＴ４Ｎ５の使用が推奨される。ＭＭＰ１阻害剤としてフォトリアーゼまたはＴ４Ｎ５を含有する濃厚クリーム剤、ローション剤、プラスター剤およびパッチ剤を、シワの局所処置用に製造することができる。Ｔ４Ｎ５は、通常はまれにしか光に曝露されない身体部分に対して、例えば全身用クリーム剤およびローション剤として、ＵＶ曝露後のシワ処置にも使用することができる。というのも、この酵素の活性化には、処置部分の光への曝露は必要ないからである。本発明によれば、ＤＮＡ修復酵素は予防的美容処置に使用することができると共に、皮膚老化、特にヒト皮膚の太陽光誘発老化の巨視的効果を遅延させるために使用することもできる。
【００１８】
本発明の皮膚処置製剤は、最小紅斑量（ＭＥＤ）未満の日光曝露の場合にも、ＭＥＤを超える曝露の場合にも、皮膚の太陽光誘発老化を防止するのに適している。したがって、これらの製剤は、長期防止処置（日光への曝露がごくわずかな場合でも、毎日使用することにより皮膚が長期間にわたって保護される）にも、太陽光への大量曝露に対する防止にも適している。特に後者の場合は、ＭＭＰ１阻害組成物を日光への曝露前に使用しても曝露後にも使用してもよい。すなわち、本発明が要求する皮膚への効果はどちらの場合にも達成される。太陽光に曝露される比較的直前に皮膚に局所適用した場合でも、本発明のＭＭＰ１阻害剤が皮膚の太陽光誘発老化を防止する点は、特に有利である。この場合、比較的直前とは、具体的には１〜５時間前であると解釈される。
【００１９】
したがって第１の態様として、本発明は、コラーゲンの光誘発分解を阻害するための化粧用局所皮膚処置組成物におけるＤＮＡ修復酵素の使用に関する。
【００２０】
また本発明は、マトリックス金属プロテイナーゼＭＭＰ１の発現または活性を阻害するための化粧用局所皮膚処置組成物におけるＤＮＡ修復酵素の使用に関する。さらに本発明は、コラーゲンの光誘発分解を阻害する医薬用局所皮膚処置組成物を製造するためのＤＮＡ修復酵素の使用、およびマトリックス金属プロテイナーゼＭＭＰ１の発現または活性を阻害する医薬用局所皮膚処置組成物を製造するためのＤＮＡ修復酵素の使用に関する。
【００２１】
もう一つの態様として、本発明は、老化皮膚の弾性低下およびシワを減少させるための局所皮膚処置組成物または老化防止組成物におけるＤＮＡ修復酵素の使用に関する。好ましい一態様では、本発明で使用されるＤＮＡ修復酵素はフォトリアーゼである。リポソーム封入型フォトリアーゼは特に好ましい。
【００２２】
もう一つの態様では、本発明で使用されるＤＮＡ修復酵素はＴ４エンドヌクレアーゼＶである。リポソーム封入型Ｔ４エンドヌクレアーゼＶは特に好ましい。本発明によるフォトリアーゼとＴ４エンドヌクレアーゼＶとの混合物（好ましくはリポソーム封入型のもの）の使用は特に好ましい。もう一つの好ましい態様では、本発明の使用は予防のための使用である。好ましい一態様では、本発明で使用されるＤＮＡ修復酵素の量は、皮膚処置組成物全体に対して、１×１０−６〜５×１０−２重量％、より具体的には１×１０−５〜１×１０−２重量％である。
【００２３】
また本発明は、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含むと共に、ビタミンＢ群のビタミン、プロビタミンもしくはビタミン前駆体またはその誘導体および２−フラノンの誘導体から選択される少なくとも１つの物質を含む、化粧用または医薬用皮膚処置組成物に関する。
【００２４】
ビタミンＢ群、別名ビタミンＢ複合体には、例えば以下に挙げる物質が含まれる。
・ビタミンＢ１、慣用名チアミン、化学名３−［（４´−アミノ−２´−メチル−５´−ピリミジニル）メチル］−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウム塩化物。チアミン塩酸塩は、好ましくは、組成物全体に対して０．０５〜１重量％の量で使用される。
【００２５】
・ビタミンＢ２、慣用名リボフラビン、化学名７，８−ジメチル−１０−（１−Ｄ−リビチル）ベンゾ［ｇ］プテリジン−２，４（３Ｈ，１０Ｈ）−ジオン。遊離型では、リボフラビンは例えば乳清に見いだされる。他のリボフラビン誘導体は細菌および酵母から単離することができる。本発明の目的に同様に適しているリボフラビンの立体異性体はリキソフラビンである。これは魚粉または肝臓から単離することができ、Ｄ−リビチルの代わりにＤ−アラビチル残基を持っている。リボフラビンまたはその誘導体は、好ましくは、組成物全体に対して０．０５〜１重量％の量で使用される。
【００２６】
・ビタミンＢ３。化合物ニコチン酸およびニコチン酸アミド（ナイアシンアミド）はしばしばこの名称で呼ばれる。ニコチン酸アミドは本発明の目的にとって好ましく、本発明の組成物中に好ましくは０．０５〜１重量％の量で存在する。
【００２７】
・ビタミンＢ５（パントテン酸およびパンテノール）。パンテノールの使用は好ましい。本発明での使用に適したパンテノールの誘導体は、特に、パンテノールのエステルおよびエーテル、ならびに陽イオン的に誘導体化されたパンテノールである。本発明のもう一つの好ましい態様として、パントテン酸もしくはパンテノールに加えて、またはそれらの代わりに、以下の一般構造式を持つ２−フラノンの誘導体を使用してもよい。
【化学式１】
2004517844.tif 000002
【００２８】
好ましい２−フラノン誘導体は、置換基Ｒ１〜Ｒ６が互いに独立して水素原子、ヒドロキシル基、メチル、メトキシ、アミノメチルまたはヒドロキシメチル基、飽和または一もしくは二不飽和直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ４炭化水素基、飽和または一もしくは二不飽和分枝鎖または直鎖モノヒドロキシ−、ジヒドロキシ−またはトリヒドロキシ−Ｃ２〜Ｃ４炭化水素基、あるいは飽和または一もしくは二不飽和分枝鎖または直鎖モノアミノ−、ジアミノ−またはトリアミノ−Ｃ２〜Ｃ４炭化水素基を表す誘導体である。他の特に好ましい誘導体には、市販されている物質で、慣用名パントラクトンという慣用名を持つジヒドロ−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２（３Ｈ）−フラノン（Ｍｅｒｃｋ）、４−ヒドロキシメチル−γ−ブチロラクトン（Ｍｅｒｃｋ）、３，３−ジメチル−２−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトン（Ａｌｄｒｉｃｈ）および２，５−ジヒドロ−５−メトキシ−２−フラノン（Ｍｅｒｃｋ）があり、すべての立体異性体が明らかに包含される。本発明の目的に最も好ましい２−フラノン誘導体は、式（Ｉ）においてＲ１がヒドロキシル基であり、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３およびＲ４がメチル基であり、Ｒ５およびＲ６が水素原子であるパントラクトン（ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２（３Ｈ）−フラノン）である。立体異性体（Ｒ）−パントラクトンはパントテン酸の分解時に生成する。
【００２９】
上述のビタミンＢ５型化合物および２−フラノン誘導体は、好ましくは、本発明の組成物中に組成物全体に対して０．０５〜１０重量％の総量で存在する。０．１〜５重量％の総量は特に好ましい。
【００３０】
・ビタミンＢ６。これは単一の物質ではなく、ピリドキシン、ピリドキサミンおよびピリドキサールという慣用名で知られている５−ヒドロキシメチル−２−メチルピリジン−３−オールの誘導体である。ビタミンＢ６は、好ましくは、本発明の組成物中に０．０００１〜１．０重量％の量で、より具体的には０．００１〜０．０１重量％の量で存在する。
【００３１】
・ビタミンＢ７（ビオチン）。ビタミンＨまたは「皮膚ビタミン」とも呼ばれる。ビオチンは（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロチエノール［３，４−ｄ］イミダゾール−４−吉草酸である。ビオチンは、好ましくは、本発明の組成物中に０．０００１〜１．０重量％の量で、より具体的には０．００１〜０．０１重量％の量で存在する。
【００３２】
パンテノール、パントラクトン、ニコチン酸アミドおよびビオチンは本発明の目的には最も好ましい。
【００３３】
また本発明は、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶを含むと共に少なくとも１つの植物抽出物を含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物に関する。植物抽出物は通常は植物を丸ごと抽出することによって製造されるが、場合によっては花および／または葉および／または種子および／または他の植物部分だけから製造される。とりわけ分裂組織（すなわち植物の分裂可能な新細胞形成組織）の抽出物、および特別な植物、例えば緑茶、ハマメリス、カミツレ、マリゴールド、パンジー、シャクヤク、アロエベラ、セイヨウトチノキ、セージ、ヤナギ樹皮、シナモン、キク、オーク樹皮、イラクサ、ホップ、ゴボウ根、トクサ、サンザシ、ライム花、アーモンド、松葉、ビャクダン、ビャクシン、ココナツ、キーウィ、グアバ、ライム、マンゴ、アンズ、コムギ、メロン、オレンジ、グレープフルーツ、アボカド、ローズマリー、カバノキ、ブナ苗条、ゼニアオイ、ハナタネツケバナ、ヨウノコギリソウ、ヨウシュイブキジャコウソウ、タイム、セイヨウヤマハッカ、ハリモクシュク、ハイビスカス（タチアオイ）、ゼニアオイ（Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）、スミレ、クロフサスグリ葉、セイヨウワサビ、キジムシロ、ヤクヨウニンジン、ショウガ根およびサツマイモなどの抽出物は、本発明の目的にとって好ましい。
【００３４】
藻類抽出物も有効に使用しうる。本発明で使用される藻類抽出物は緑藻類、褐藻類、紅藻類または藍藻類（シアノバクテリア）から得られる。抽出に使用される藻類は天然の藻類でもよいし、生物工学的方法によって得ることもでき、所望により、天然型に対して改変を加えてもよい。これらの生物は、選択した栄養素を強化した培地で生育または培養することにより、遺伝的に改変することができる。好ましい藻類抽出物は海藻、藍藻、緑藻イモセミル（Ｃｏｄｉｕｍ  ｔｏｍｅｎｔｏｓｕｍ）および褐藻コンブ（Ｆｕｃｕｓ  ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）から得られる。特に好ましい藻類抽出物はマグネシウム強化培地で培養されたスピルリナ属の藍藻から得られる。
【００３５】
スピルリナ、緑茶、アロエベラ、分裂組織、ハマメリス、アンズ、マリゴールド、グアバ、サツマイモ、ライム、マンゴ、キーウィ、キュウリ、ゼニアオイ、ハイビスカスおよびスミレの抽出物は特に好ましい。本発明の組成物は、いくつかの、より具体的には２つの、異なる植物抽出物の混合物を含んでもよい。
【００３６】
上述した植物抽出物の製造に適した抽出剤は、例えば水、アルコール類およびその混合物などである。好ましいアルコール類はエタノールおよびイソプロパノールなどの低級アルコール、また特に、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびブチレングリコールなどの多価アルコールであり、これらは単独で使用しても、水との混合物の形で使用してもよい。比率１：１０〜１０：１の水／プロピレングリコールに基づく植物抽出物は、特に適切であることが判明した。本発明では蒸気蒸留は好ましい抽出方法の一つである。
【００３７】
本発明では、植物抽出物は純粋な形態でも希釈された形態でも使用することができる。希釈された形態で使用する場合、通常はそれらは約２〜８０重量％の活性物質を含むと共に、溶媒として、それらの製造に使用された抽出剤または抽出剤混合物を含む。選択した抽出剤によっては、可溶化剤の添加によって植物抽出物を安定化することが有利な場合もある。適切な可溶化剤は、例えば所望により水添されていてもよい植物油および動物油のエトキシル化生成物である。好ましい可溶化剤は４〜５０個のエチレンオキシド単位を持つＣ８〜Ｃ２２脂肪酸のエトキシル化モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド、例えばエトキシル化水添ヒマシ油、オリーブ油エトキシレート、扁桃油エトキシレート、ミンク油エトキシレート、ポリオキシエチレングリコールカプリル／カプリン酸グリセリド、ポリオキシエチレングリコールモノラウレートおよびポリオキシエチレングリコールヤシ油脂肪酸グリセリドなどである。
【００３８】
もう一つの好ましい態様では、いくつかの、より具体的には２つの、異なる植物抽出物の混合物を、本発明の組成物に使用する。
【００３９】
本発明で使用することができる植物抽出物としては、例えば「Ｌｅｉｔｆａｄｅｎ  ｚｕｒ  Ｉｎｈａｌｔｓｓｔｏｆｆｄｅｋｌａｒａｔｉｏｎ  ｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅｒ  Ｍｉｔｔｅｌ」第３版（Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｖｅｒｂａｎｄ  Ｋｏｅｒｐｅｒｐｆｌｅｇｅ−  ｕｎｄ  Ｗａｓｃｈｍｉｔｔｅｌ  ｅ．Ｖ．（ＩＫＷ）（フランクフルト）発行）の４４頁から始まる表に列挙されている抽出物などを挙げることができる。
【００４０】
また本発明は、フォトリアーゼおよび／またはＴ４エンドヌクレアーゼＶと、没食子酸プロピル、プレコセン類、６−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，２−ジメチル−１（２Ｈ）−ベンゾピラン、３，４−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，２−ジメチル−１（２Ｈ）−ベンゾピラン（Ｌｉｐｏｔｅｃ  Ｓ．Ａ．  から  Ｌｉｐｏｃｈｒｏｍａｎ  ６（登録商標）として市販されている）およびその混合物から選択される少なくとも１つの他のＭＭＰ１阻害物質とを含む化粧用または医薬用皮膚処置組成物に関する。プレコセン類は植物中に見いだされるクロメン誘導体であり、ホルモンとして知られている（「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」第１２版，  Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．  １９９６）。これらの物質のＭＭＰ１阻害効果は  ＤＥ  １００１６０１６  Ａ１に記載されている。これらは、組成物全体に対して０．１〜５重量％、好ましくは０．５〜２重量％の量で使用される。
【００４１】
特に好ましい一態様では、本発明の皮膚処置組成物はさらに、レチノール（ビタミンＡ１）とＣ２〜Ｃ１８カルボン酸とのエステルを少なくとも１つは含む。好ましいレチノールエステルは酢酸レチニルおよびパルミチン酸レチニルである。パルミチン酸レチニルは特に好ましい。レチノールエスエルは、組成物全体に対して０．１〜５重量％の量で、また好ましくは０．５〜２重量％の量で使用される。
【００４２】
もう一つの好ましい態様では、本発明の皮膚処置組成物は、乳化剤または分散剤として少なくとも１つの界面活性剤を含む。乳化剤は、分散した液滴が融合するのを防いでエマルションを安定化する水安定性または油安定性吸着層の、相界面での形成を促進する。したがって、乳化剤は界面活性剤と同様に疎水性分子部分と親水性分子部分から構成される。親水性乳化剤はｏ／ｗ型エマルションを優先的に形成し、疎水性乳化剤はｗ／ｏ型エマルションを優先的に形成する。親水性乳化剤なしで安定化されたｗ／ｏ型エマルションは  ＤＥ  １９８１６６６５  Ａ１および  ＤＥ  １９８０１５９３  Ａ１に開示されている。エマルションとは、界面活性剤によって安定化相界面を生成するのにエネルギーを使う、ある液体中の別の液体の液滴状分散物であると解釈される。これらの乳化界面活性剤または乳化剤の選択は分散させようとする物質、エマルションの外相および液滴粒径によって決定される。
【００４３】
本発明で使用することができる乳化剤の例を以下に挙げる。
・直鎖Ｃ８〜Ｃ２２脂肪アルコール、Ｃ１２〜Ｃ２２脂肪酸およびＣ８〜Ｃ１５アルキルフェノールにエチレンオキシド４〜３０モルおよび／またはプロピレンオキシド０〜５モルが付加した生成物。
・Ｃ３〜Ｃ６ポリオール（より具体的にはグリセロール）にエチレンオキシド１〜３０モルが付加した生成物のＣ１２〜Ｃ２２脂肪酸モノエスエルおよびジエステル。
・メチルグルコシド／脂肪酸エステル、脂肪酸アルカノールアミドおよび脂肪酸グルカミドへのエチレンオキシドおよびポリグリセロール付加生成物。
・Ｃ８〜Ｃ２２アルキルモノグリコシドおよびオリゴグリコシドならびにそのエトキシル化類似体。この場合、好ましいオリゴマー化度は１．１〜５、より具体的には１．２〜２．０であり、糖成分としてはグルコースが好ましい。
・アルキル（オリゴ）グルコシドと脂肪アルコールとの混合物、例えば市販品  Ｍｏｎｔａｎｏｖ（登録商標）６８。
【００４４】
・ヒマシ油および水添ヒマシ油へのエチレンオキシド５〜６０モルの付加生成物。
・３〜６個の炭素原子を含むポリオールの飽和Ｃ８〜Ｃ２２脂肪酸との部分エステル。
・ステロール類（ステリン類）。ステロール類とは、ステロイド骨格の３位の炭素原子にヒドロキシル基を持ち、動物組織（動物ステロール）からも植物性脂肪（植物ステロール）からも単離されるステロイドの群であると解釈される。動物ステロールの例はコレステロールおよびラノステロールである。適切な植物ステロールの例はβ−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロールおよびエルゴステロールである。ステロールは真菌および酵母からも単離される（いわゆる菌類ステロール）。
【００４５】
・例えばレシチンまたはホスファチジルコリンなどとして卵黄や植物種子（例えばダイズ）などから得られるリン脂質、とりわけグルコースリン脂質。
・糖および糖アルコール（例えばソルビトール）の脂肪酸エステル。
・ポリグリセロールおよびポリグリセロール誘導体、好ましくはポリグリセリル−２−ジポリヒドロキシステアレート（市販品  Ｄｅｈｙｍｕｌｓ（登録商標）ＰＧＰＨ）およびポリグリセリル−３−ジイソステアレート（市販品  Ｌａｍｅｆｏｒｍ（登録商標）ＴＧＩ）。
・直鎖および分枝鎖Ｃ６〜Ｃ３０脂肪酸ならびにそのＮａ、Ｋ、アンモニウム、Ｃａ、ＭｇおよびＺｎ塩。
【００４６】
本発明の組成物は、組成物全体に対して好ましくは０．１〜２５重量％、より具体的には０．５〜１５重量％の乳化剤を含有する。
【００４７】
特に好ましい一態様では、８またはそれ以下のＨＬＢ値を持つ非イオン性乳化剤が少なくとも１つは存在する（ＨＬＢ値の定義については、Ｊ．  Ｆａｌｂｅ、Ｍ．  Ｒｅｇｉｔｚ  編「Ｒｏｅｍｐｐ−Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ」第１０版、Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ、シュトゥットガルト／ニューヨーク（１９９７）、１７６４頁を参照されたい）。適切な乳化剤は、例えば、一般式：Ｒ１−Ｏ−Ｒ２に対応する化合物である［式中、Ｒ１は２０〜３０個の炭素原子を含む１級直鎖アルキル、アルケニルまたはアシル基であり、Ｒ２は水素、式：−（ＣｎＨ２ｎＯ）ｘ−Ｈで表される基（式中、ｘ＝１または２かつｎ＝２〜４）、または４〜６個の炭素原子と２〜５個のヒドロキシル基とを含むポリヒドロキシアルキル基である］。特に好ましい式：Ｒ１−Ｏ−Ｒ２の乳化剤は、Ｒ１が２２個の炭素原子を含む直鎖末端置換アルキル、アルケニルまたはアシル基であるベヘニルまたはエルシル誘導体である。
【００４８】
その他、８またはそれ以下のＨＬＢ値を持つ特に適切な乳化剤には、ベヘニルアルコール、エルシルアルコール、アラキジルアルコール、さらにはベヘン酸またはエルカ酸へのエチレンオキシまたはプロピレンオキシド１または２モルの付加生成物がある。他の好ましい乳化剤には、例えばペンタエリトリトール、トリメチロールプロパン、ジグリセロール、ソルビトール、グルコースおよびメチルグルコースなどのポリオールのＣ１６〜Ｃ３０脂肪酸モノエステルがある。そのような生成物の例にはモノベヘン酸ソルビタンまたはモノエルカ酸ペンタエリトリトールなどがある。
【００４９】
もう一つの特に好ましい態様では、陰イオン性、双性イオン性、両性および陽イオン性乳化剤から選択される少なくとも１つのイオン性乳化剤が存在する。好ましい陰イオン性乳化剤は、アルキルサルフェート、アルキルポリグリコールエーテルサルフェートおよびエーテルカルボン酸（アルキル基中に１０〜１８個の炭素原子を含みかつ分子中に最大１２個のグリコールエーテル基を含む）、アルキル基中に８〜１８個の炭素原子を含むスルホコハク酸モノアルキルおよびジアルキルエステルならびにアルキル基中に８〜１８個の炭素原子を含みかつ１〜６個のオキシエチル基を含むスルホコハク酸モノアルキルポリオキシエチルエステル、モノグリセリドサルフェート、アルキルおよびアルケニルエーテルホスフェート、ならびにタンパク質脂肪酸縮合物である。
【００５０】
双性イオン性乳化剤はその分子中に少なくとも１つの４級アンモニウム基と、少なくとも１つの−ＣＯＯ−または−ＳＯ３−基とを持っている。特に適切な双性イオン性乳化剤はいわゆるベタイン類、例えばアルキル基またはアシル基中に８〜１８個の炭素原子を含むＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシネートおよび２−アルキル−３−カルボキシメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン、ならびにココアシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートなどである。
【００５１】
両性乳化剤は、Ｃ８〜Ｃ２４アルキルまたはアシル基の他に、少なくとも１つの遊離アミノ基と少なくとも１つの−ＣＯＯＨまたは−ＳＯ３Ｈ基とをその分子中に含み、分子内塩を形成することができる。適切な両性乳化剤の例は、アルキル基中に８〜２４個程度の炭素原子を含むＮ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルアミノプロピオン酸、Ｎ−アルキルアミノ酪酸、Ｎ−アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ−アルキルタウリン、Ｎ−アルキルサルコシン、２−アルキルアミノプロピオン酸およびアルキルアミノ酢酸である。
【００５２】
イオン性乳化剤は、組成物全体に対して０．０１〜５重量％の量、好ましくは０．０５〜３重量％の量、より具体的には０．１〜１重量％の量で存在する。
【００５３】
もう一つの好ましい態様では、本発明の皮膚処置組成物は、少なくとも１つの有機または無機もしくは改質無機光フィルタを含む。光フィルタは、室温で液体または結晶体であり、紫外線を吸収すると共に吸収したエネルギーをより長波長の放射線、例えば熱の形で放出する能力を持つ物質である。ＵＶＡフィルタとＵＶＢフィルタがある。ＵＶＡフィルタとＵＶＢフィルタは個別に使用してもよいし、混合物の形で使用してもよい。フィルタ混合物の使用は本発明の目的には特に好ましい。
【００５４】
本発明で使用される有機ＵＶフィルタは、ジベンゾイルメタンの誘導体、ケイ皮酸エステル、ジフェニルアクリル酸エステル、ベンゾフェノン、カンファー、ｐ−アミノ安息香酸エスエル、ｏ−アミノ安息香酸エステル、サリチル酸エステル、ベンゾイミダゾール類、１，３，５−トリアジン類、４，４−ジアリールブタジエンカルボン酸エステルおよびカルボン酸アミドモノマーおよびオリゴマー、ケトトリシクロ（５．２．１．０）デカン、ベンザルマロン酸エステル、ならびに前記成分の混合物から選択される。有機ＵＶフィルタは油溶性であっても水溶性であってもよい。
【００５５】
本発明によれば、特に好ましい油溶性ＵＶフィルタは、１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４´−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオン（Ｐａｒｓｏｌ（登録商標）１７８９）、１−フェニル−３−（４´−イソプロピルフェニル）プロパン−１，３−ジオン、３−（４´−メチルベンジリデン）−Ｄ，Ｌ−カンファー、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−エチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−オクチルエステル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸アミルエステル、４−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシルエステル、４−メトキシケイ皮酸プロピルエステル、４−メトキシケイ皮酸イソペンチルエステル、２−シアノ−３，３−フェニルケイ皮酸２−エチルヘキシルエステル（オクトクリレン）、サリチル酸２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸４−イソプロピルベンジルエスエル、サリチル酸ホモメンチルエステル（サリチル酸３，３，５−トリメチルシクロヘキシル）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４´−メチルベンゾフェノン、２，２´−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、４−メトキシベンズマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル、２，４，６−トリアニリノ−（ｐ−カルボ−２´−エチル−１´−ヘキシルオキシ）−１，３，５−トリアジン（オクチルトリアゾン）およびジオクチルブタミドトリアジン（Ｕｖａｓｏｒｂ（登録商標）ＨＥＢ）ならびに前記化合物の混合物である。
【００５６】
好ましい水溶性ＵＶフィルタは、２−フェニルベンゾイミダゾール−５−スルホン酸ならびにそのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルカンモニウム塩、ベンゾフェノン類のスルホン酸誘導体、好ましくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸およびその塩、３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば４−（２−オキソ−３−ボルニリデンメチル）ベンゼンスルホン酸および２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）スルホン酸ならびにそれらの塩である。
【００５７】
本発明で好ましく使用される無機ＵＶ保護顔料は、微細分散金属酸化物および金属塩、例えば二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化鉄、酸化アルミニウム、酸化セリウム、酸化ジルコニウム、ケイ酸塩（タルク）、硫酸バリウムおよびステアリン酸亜鉛などである。粒子は１００ｎｍ未満、好ましくは５〜５０ｎｍ、より好ましくは１５〜３０ｎｍの平均直径を持つべきである。それらの形状は球形であってよいが、楕円粒子または非球状粒子も使用することができる。顔料は表面処理すなわち親水化または疎水化されていてもよい。典型例は、例えば  Ｔｉｔａｎｄｉｏｘｉｄ  Ｔ  ８０５（Ｄｅｇｕｓｓａ）または  Ｅｕｓｏｌｅｘ（登録商標）Ｔ２０００（Ｍｅｒｃｋ）などの被覆二酸化チタンである。適切な疎水性被覆材料には、例えばシリコーン、特にトリアルコキシオクチルシランまたはシメチコンなどがある。日焼け止め製品へのいわゆるマイクロ顔料またはナノ顔料の使用は好ましい。微粉化酸化亜鉛の使用は好ましい。
【００５８】
さらに、少なくとも１つのタンパク質加水分解物またはその誘導体を含むことは、本発明の皮膚処置組成物にとって特に有利であることが判明した。本発明では植物性および動物性タンパク質加水分解物をどちらも使用することができる。動物性タンパク質加水分解物は、例えばエラスチン、コラーゲン、ケラチン、シルクおよび乳タンパク質加水分解物などであり、これらは塩の形態でも存在しうる。植物性タンパク質加水分解物、例えばダイズ、コムギ、アーモンド、エンドウ、バレイショおよびコメタンパク質加水分解物などは、本発明の目的にとって好ましい。対応する市販品は、例えば  ＤｉａＭｉｎ（登録商標）（Ｄｉａｍａｌｔ）、Ｇｌｕａｄｉｎ（登録商標）（Ｃｏｇｎｉｓ）、Ｌｅｘｅｉｎ（登録商標）（Ｉｎｏｌｅｘ）およびＣｒｏｔｅｉｎ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ）である。
【００５９】
タンパク質加水分解物の代わりに、一方ではアミノ酸混合物を、また他方では個々のアミノ酸および生理学的に適合するその塩を使用することもできる。本発明の目的にとって好ましいアミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ピログルタミン酸、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニンおよびヒスチジン、ならびに前記アミノ酸の亜鉛塩および酸付加塩が挙げられる。
【００６０】
タンパク質加水分解物の誘導体、例えばその脂肪酸縮合産物も、使用することができる。対応する市販品は、例えばＬａｍｅｐｏｎ（登録商標）（Ｃｏｇｎｉｓ）、Ｇｌｕａｄｉｎ（登録商標）（Ｃｏｇｎｉｓ）、Ｌｅｘｅｉｎ（登録商標）（Ｉｎｏｌｅｘ）、Ｃｒｏｌａｓｔｉｎ（登録商標）またはＣｒｏｔｅｉｎ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ）などである。
【００６１】
本発明では、植物もしくは海洋生物に由来するかまたは生物工学によって得られるタンパク質加水分解物を基礎とする、陽イオン化タンパク質加水分解物も使用することができる。基礎となるタンパク質成分が１００〜２５，０００ダルトン、好ましくは２５０〜５，０００ダルトンの分子量を持つ陽イオン性タンパク質加水分解物は好ましい。また、陽イオン性タンパク質加水分解物は、４級アミノ酸およびその混合物を含むとも解釈される。また、陽イオン性タンパク質加水分解物を、さらに誘導体化することもできる。
【００６２】
本発明で使用される陽イオン性タンパク質加水分解物および誘導体の典型例には、「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（第７版、１９９７、米国化粧品工業会、ワシントン  ＤＣ  ２００３６−４７０２，  スイート３００，  Ｎ．Ｗ．，  １７ｔｈ  ストリート１１０１）にＩＮＣＩ名で挙げられている市販の製品のいくつかが含まれる：ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解カゼイン、ステアルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン、ステアルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解毛髪ケラチン、ラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチン、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コメタンパク質、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解シルク、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ダイズタンパク質、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コムギタンパク質、ココジモニウムヒドロキシプロピルシルクアミノ酸、ヒドロキシプロピルアルギニンラウリル／ミリスチルエーテルＨＣｌ、ヒドロキシプロピルトリモニウムゼラチン。植物原材料に基づく陽イオン性タンパク質加水分解物および誘導体は最も好ましい。
【００６３】
タンパク質加水分解物およびその誘導体またはアミノ酸およびその誘導体は、本発明の組成物中に、組成物全体に対して０．０１〜１０重量％の量で存在する。０．１〜５重量％、より具体的には０．１〜３重量％の量は、特に好ましい。
【００６４】
もう一つの有利な態様では、本発明の皮膚処置組成物は、少なくとも１つの単糖、オリゴ糖もしくは多糖またはその誘導体を含む。
【００６５】
本発明の目的に適した単糖は、例えばグルコース、フルクトース、ガラクトース、アラビノース、リボース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドースおよびタロース、デオキシ糖であるフコースおよびラムノース、ならびに例えばグルコサミンまたはガラクトサミンなどのアミノ糖である。グルコース、フルクトース、ガラクトース、アラビノースおよびフコースは好ましく、グルコースは特に好ましい。
【００６６】
本発明の目的に適したオリゴ糖は、例えばショ糖、乳糖またはトレハロースなどで、２〜１０個の単糖単位から構成される。特に好ましいオリゴ糖はショ糖である。主にグルコースとショ糖を含むハチミツの使用もとりわけ好ましい。
【００６７】
本発明の目的に適した多糖は１０個を超える単糖単位から構成される。好ましい多糖はα−Ｄ−グルコース単位から構成されるデンプン、ならびにアミロース、アミロペクチンおよびデキストリンなどのデンプン分解産物である。本発明によれば、化工デンプンおよび／または熱変性デンプン、例えばヒドロキシプロピルデンプンリン酸、ジヒドロキシプロピル二デンプンリン酸または市販品  Ｄｒｙ  Ｆｌｏ（登録商標）は特に有利である。デキストランおよびデキストラン誘導体、例えばデキストラン硫酸も好ましく、同様に、非イオン性セルロース誘導体、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロース、および陽イオン性セルロース誘導体、例えば市販品  Ｃｅｌｑｕａｔ（登録商標）および  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ＪＲ（登録商標）、好ましくは  Ｃｅｌｑｕａｔ（登録商標）Ｈ  １００、Ｃｅｌｑｕａｔ（登録商標）Ｌ  ２００および  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ＪＲ（登録商標）４００（ポリクオタニウム−１０）およびポリクオタニウム−２４なども好ましい。他の好ましい例には、フコース単位の多糖、例えば市販品  Ｆｕｃｏｇｅｌ（登録商標）がある。アミノ糖単位で構成された多糖、より具体的にはキチン、および脱アセチル化キチン誘導体、キトサン、およびムコ多糖は、特に好ましい。本発明の目的にとって好ましいムコ多糖には、ヒアルロン酸およびその誘導体、例えばヒアルロン酸ナトリウムおよびジメチルシラノールヒアルロネート、ならびにコンドロイチンおよびその誘導体、例えばコンドロイチン硫酸などがある。
【００６８】
特に有利な一態様では、本発明の皮膚処置組成物は、陽イオン性ポリマー、陰イオン性ポリマー、両性荷電ポリマーまたは非イオン性ポリマーのいずれであってもよい天然および合成ポリマーから選択される、少なくとも１つの薄膜形成性、エマルション安定化、増粘性または接着性ポリマーを含む。
【００６９】
陽イオン性、陰イオン性および非イオン性ポリマーは本発明の目的にとって好ましい。陽イオン性ポリマーのなかでは、４級化された基を含むポリシロキサン、例えば市販品  Ｑ２−７２２４（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ）、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）９２９  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ（アモジメチコン含有）、ＳＭ−２０５９（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）、ＳＬＭ−５５０６７（Ｗａｃｋｅｒ）および  Ａｂｉｌ（登録商標）−Ｑｕａｔ  ３２７０および３２７２（Ｔｈ．  Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ）が好ましい。
【００７０】
本発明で使用される活性物質の効果を補助することができる好ましい陰イオン性ポリマーはカルボキシレート基および／またはスルホネート基を含み、モノマーとして、例えばアクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、無水マレイン酸および２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸などを含む。酸性基はその全てまたは一部がナトリウム、カリウム、アンモニウム、モノまたはトリエタノールアンモニウム塩として存在しうる。好ましいモノマーは２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸およびアクリル酸である。最も好ましい陰イオン性ポリマーは唯一のモノマーまたはコモノマーとして２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸を含み、そのスルホン酸基は全てまたは一部が塩型で存在する。この態様では、少なくとも１つの陰イオン性モノマーと少なくとも１つの非イオン性モノマーとのコポリマーを使用することが好ましい。陰イオン性モノマーとしては、上記の物質が挙げられる。好ましい非イオン性モノマーはアクリルアミド、メタクリルアミド、アクリレート、メタクリレート、ビニルピロリドン、ビニルエーテルおよびビニルエステルである。
【００７１】
好ましい陰イオン性コポリマーは、アクリル酸／アクリルアミドコポリマー、そして特に、スルホン酸基を含むモノマーとのポリアクリルアミドコポリマーである。特に好ましい陰イオン性コポリマーは７０〜５５モル％のアクリルアミドと３０〜４５モル％の２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸とからなり、そのスルホン酸基は全てまたは一部がナトリウム、カリウム、アンモニウム、モノまたはトリエタノールアンモニウム塩として存在する。このコポリマーは架橋することもでき、好ましい架橋剤はオレフィン系ポリ不飽和化合物、例えばテトラアリルオキシエタン、アリルショ糖、アリルペンタエリトリトールおよびメチレンビスアクリルアミドなどである。そのようなポリマーの一つは  ＳＥＰＰＩＣ  の市販品  Ｓｅｐｉｇｅｌ（登録商標）３０５に含まれている。この化合物の使用は、本発明の目的には特に有利であることが判明した。イソヘキサデカンおよびポリソルベート８０との配合物の形で  Ｓｉｍｕｌｇｅｌ（登録商標）６００として販売されているアクリロイルジメチルタウリンナトリウムコポリマーは、本発明の目的にはとりわけ有効であることが判明した。
【００７２】
特に好ましい他の陰イオン性ホモポリマーおよびコポリマーは無架橋および架橋ポリアクリル酸である。ペンタエリトリトール、ショ糖およびプロピレンのアリルエーテルは好ましい架橋剤になりうる。このような化合物は例えば市販品  Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）である。特に好ましい陰イオン性コポリマーの８０〜９８％は、置換されていてもよい不飽和Ｃ３〜Ｃ６カルボン酸またはカルボン酸無水物を、また２〜２０％は、飽和Ｃ１０〜Ｃ３０カルボン酸の置換されていてもよいアクリレートを含み、このコポリマーは所望により上述の架橋剤で架橋されていてもよい。これに相当する市販品は  Ｐｅｍｕｌｅｎ（登録商標）ならびにＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９５４、９８０、１３４２および  ＥＴＤ  ２０２０タイプ（ｅｘ  Ｂ．Ｆ．  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ）である。
【００７３】
適切な非イオン性ポリマーは、例えば一部が鹸化されていてもよいポリビニルアルコール、例えば市販品  Ｍｏｗｉｏｌ（登録商標）、ならびにビニルピロリドン／ビニルエーテルコポリマーおよびポリビニルピロリドン、例えば市販品Ｌｕｖｉｓｋｏｌ（登録商標）（ＢＡＳＦ）である。
【００７４】
本発明のもう一つの好ましい態様では、脂肪化合物によって本発明組成物の効果をさらに最適化することができる。適切な脂肪化合物の例を以下に挙げる。
・植物油、例えばヒマワリ油、オリーブ油、大豆油、菜種油、アーモンド油、ホホバ油、オレンジ油、麦芽油、桃仁油、およびヤシ油の液体画分。
・流動パラフィン油、イソパラフィン油および合成炭化水素、例えば１，３−ジ（２−エチルヘキシル）シクロヘキサン（Ｃｅｔｉｏｌ（登録商標）Ｓ）またはポリデセン。
・合計１２〜３６個、より具体的には１２〜２４個の炭素原子を含むジ−ｎ−アルキルエーテル、例えばジ−ｎ−オクチルエーテル（Ｃｅｔｉｏｌ（登録商標）ＯＥ）、ジ−ｎ−ヘキシル−ｎ−オクチルエーテルおよびｎ−オクチル−ｎ−デシルエーテル。
【００７５】
・脂肪酸、特に直鎖および／または分枝鎖飽和および／または不飽和Ｃ８〜Ｃ３０脂肪酸。Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪酸は好ましい。例としては、イソステアリン酸およびイソパルミチン酸、例えば  Ｅｄｅｎｏｒ（登録商標）という名称で販売されている脂肪酸などが挙げられる。このような脂肪酸の他の典型例は、カプロン酸、カプリル酸、２−エチルヘキサン酸、カプリン酸、ラウリン酸、イソトリデカン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ペトロセリン酸、リノール酸、リノレン酸、エレオステアリン酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、ベヘン酸およびエルカ酸ならびにその工業用混合物である。通常、ヤシ油またはパーム油から得ることができる脂肪酸画分は特に好ましく、ステアリン酸の使用は特に好ましい。
【００７６】
・脂肪アルコール、特に６〜３０個、好ましくは１０〜２２個、より具体的には１２〜２２個の炭素原子を含む飽和またはモノもしくはポリ不飽和分枝鎖または非分枝鎖脂肪アルコール。これに相当する本発明での使用に適した脂肪アルコールは、例えばデカノール、オクタノール、オクテノール、ドデセノール、デセノール、オクタジエノール、ドデカジエノール、デカジエノール、オレイルアルコール、エルシルアルコール、リシノリルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、セチルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、アラキジルアルコール、カプリルアルコール、カプリンアルコール、リノレイルアルコール、リノレニルアルコールおよびベヘニルアルコール、ならびにそのゲルベアルコール、例えば２−エチルヘキサノールであるが、これらは単なる代表例であって、限定を意図するものではない。
【００７７】
・エステル油、すなわちＣ６〜Ｃ３０脂肪酸とＣ２〜Ｃ３０脂肪アルコールとのエステル。前記脂肪酸とＣ２〜Ｃ２４アルコールとのモノエステルは好ましい。エステル油のアルコール成分および酸成分は上に挙げた物質から選択してよい。ミリスチル酸イソプロピル、イソノナン酸Ｃ１６〜Ｃ１８アルキルエステル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−エチルヘキシルエステル、オレイン酸セチル、トリカプリル酸グリセロール、カプリン酸／カプリル酸ヤシ油脂肪アルコール、ｎ−ブチルステアレート、エルカ酸オレイル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸オレイル、ラウリン酸ヘキシルエステル、アジピン酸ジ−ｎ−ブチル、ミリスチン酸ミリスチル、イソノナン酸セテアリルおよびオレイン酸デシルエステルは、本発明の目的にとって特に好ましい。
【００７８】
・ヒドロキシカルボン酸アルキルエステル、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸またはクエン酸の完全エステルは好ましいが、β−ヒドロキシプロピオン酸、タルトロン酸、Ｄ−グルコン酸、糖酸、粘液酸またはグルクロン酸のエステルも好適であり、Ｃ１２〜Ｃ１５脂肪アルコールのエステル、例えば  ＥｎｉＣｈｅｍ，  Ａｕｇｕｓｔａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｅの市販品  Ｃｏｓｍａｃｏｌ（登録商標）は特に好ましい。
【００７９】
・ジカルボン酸エステル、例えばアジピン酸ジ−ｎ−ブチル、アジピン酸ジ−（２−エチルヘキシル）、コハク酸ジ−（２−エチルヘキシル）およびアゼライン酸ジイソトリデシルなど、ならびにジオールエステル、例えばジオレイン酸エチレングリコール、ジイソトリデカン酸エチレングリコール、ジ（２−エチルヘキサン酸）プロピレングリコール、ジイソステアリン酸プロピレングリコール、ジペラルゴン酸プロピレングリコール、ジイソステアリン酸ブタンジオール、ジカプリル酸ネオペンチルグリコールなど。
【００８０】
・炭酸と脂肪アルコールとの対称、非対称または環状エステル、例えば炭酸グリセロールまたは炭酸ジカプリリル（Ｃｅｔｉｏｌ（登録商標）ＣＣ）。
・飽和および／または不飽和直鎖および／または分枝鎖脂肪酸とグリセロールとのモノ、ジおよびトリ脂肪酸エステル、例えば  Ｍｏｎｏｍｕｌｓ（登録商標）９０−Ｏ１８、Ｍｏｎｏｍｕｌｓ（登録商標）９０−Ｌ１２またはＣｕｔｉｎａ（登録商標）ＭＤ。
【００８１】
・ロウ、特に密ロウおよびマルハナバチロウなどの昆虫ロウ、カンデリラロウおよびカルナウバロウなどの植物ロウ、果実ロウ、地ロウ、マイクロワックス、セレシン、パラフィン、ヒドロキシル化されていてもよい飽和Ｃ１６〜Ｃ３０脂肪酸のトリグリセリド、例えば水素添加トリグリセリド脂肪（水添パーム油、水添ヤシ油、水添ヒマシ油）、トリベヘン酸グリセリルまたはトリ−１２−ヒドロキシステアリン酸グリセリルなど、脂肪酸とグリコール（例えばＳｙｎｃｒｏｗａｃｈｓ（登録商標））またはＣ２〜Ｃ６ポリオールとの合成完全エステル、ヒドロキシル化されていてもよいＣ２〜Ｃ４カルボン酸とラノリンアルコールおよびＣ１２〜Ｃ１８脂肪アルコールとのエスエル、Ｃ１０〜Ｃ３０脂肪酸のコレステロールまたはラノステロールエステル、エトキシル化Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸グリコールエステル、Ｃ１２〜Ｃ２２アシル基とＣ２〜Ｃ４アルカノール基とを含む脂肪酸モノアルカノールアミド、合成脂肪酸／脂肪アルコールエステル、例えばステアリン酸ステアリルまたはパルミチン酸セチル、および天然脂肪酸と合成Ｃ２０〜Ｃ４０脂肪アルコールとのエステルロウ（ＩＮＣＩ名：Ｃ２０−４０  アルキルステアレート）。
【００８２】
・デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサシロキサンおよび架橋されていてもよいシリコーンポリマー、例えばポリジアルキルシロキサン、ポリアルキルアリールシロキサン、エトキシル化ポリジアルキルシロキサン、好ましくはジメチコンコポリオールというＩＮＣＩ名を持つ物質、およびアミンおよび／またはヒドロキシ基を持つポリジアルキルシロキサンから選択されるシリコーン化合物。
【００８３】
脂肪化合物は、組成物全体に対して０．１〜５０重量％の量、好ましくは０．１〜２０重量％の量、より具体的には０．１〜１５重量％の量で使用される。
【００８４】
本発明の組成物は、例えば以下に挙げるような他の活性物質、助剤および添加剤を含んでもよい。
・ビタミン群Ａ、Ｃ、ＥおよびＦから選択されるビタミン、プロビタミン、およびビタミン前駆体、より具体的には３，４−ジデヒドロレチノール（ビタミンＡ２）、β−カロテン（ビタミンＡ１のプロビタミン）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）およびパルミチン酸エステル、アスコルビン酸のグルコシドまたはリン酸エステル、トコフェロール、より具体的にはα−トコフェロールおよびそのエステル、例えば酢酸エステル、ニコチン酸エステル、リン酸エステルおよびコハク酸エステル、ならびにビタミンＦ、すなわち必須脂肪酸、具体的にはリノール酸、リノレン酸およびアラキドン酸。
・アラントイン。
・ビサボロール。
【００８５】
・酸化防止剤、例えばイミダゾール類（例えばウロカニン酸）およびその誘導体、Ｄ，Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシンおよびその誘導体（例えばアンセリン）などのペプチド、クロロゲン酸およびその誘導体、リポ酸およびその誘導体（例えばジヒドロリポ酸）、金チオグルコース、プロピルチオウラシルおよび他のチオール（例えばチオレドキシン、グルタチオン、システイン、シスチン、システアミン、およびそのグリコシル、Ｎ−アセチル、メチル、エチル、プロピル、アミル、ブチルおよびラウリル、パルミトイル、オレイル、γ−リノレイル、コレステリルおよびグリセリルエステル）およびそれらの塩、ジラウリルチオジプロピオネート、ジステアリルチオジプロピオネート、チオジプロピオン酸およびその誘導体（エステル、エーテル、ペプチド、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよび塩）、およびスルホキシミン化合物（例えばブチオニンスルホキシミン、ホモシステインスルホキシミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−およびヘプタ−チオニンスルホキシミン）（極わずかな適合投与量（例えばｐｍｏｌないしμｍｏｌ／ｋｇ）で）、
【００８６】
ならびに（金属）キレート剤（例えばα−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、ラクトフェリン）、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびその誘導体、不飽和脂肪酸およびその誘導体（例えばγ−リノレン酸、リノール酸、オレイン酸）、葉酸およびその誘導体、ユビキノンおよびユビキノールならびにそれらの誘導体、ベンゾイン樹脂の安息香酸コニフェリル、ルチン酸およびその誘導体、α−グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリリデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアヤク樹脂酸、ノルジヒドログアヤレト酸、トリヒドロキシブチロフェノン、尿酸およびその誘導体、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、亜鉛および亜鉛誘導体（例えばＺｎＯ、ＺｎＳＯ４）、セレンおよびその誘導体（例えばセレンメチオニン）、スチルベンおよびその誘導体（例えばスチルベンオキシド、トランス−スチルベンオキシド）、ならびにこれらの活性物質の、酸化防止剤として適切な誘導体（塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質）。
【００８７】
・セラミドおよびプソイドセラミド。
・トリテルペン、より具体的にはトリテルペン酸、例えばウルソール酸、ロスマリン酸、ベツリン酸、ボスウェリア酸およびブリオノール酸。
・カテコール類モノマー、より具体的にはカテコールおよびエピカテコール、ロイコアントシアニジン、カテコールポリマー（カテコールタンニン）ならびにガロタンニン。
・増粘剤、例えばゼラチン、植物性ガム、例えば寒天、グアーガム、アルギネート、キサンタンガム、アラビアガム、カラヤガムまたはローカストビーンガム、天然および合成粘土ならびに層状ケイ酸塩、例えばベントナイト、ヘクトライト、モンモリロナイトまたは  Ｌａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）、例えばポリビニルアルコールなどの完全合成親水コロイド、ならびに脂肪酸のＣａ、ＭｇまたはＺｎセッケン。
・植物グリコシド。
・マレイン酸および乳酸などの構造剤。
・ジメチルイソソルビド。
・α−、β−およびγ−シクロデキストリン、特にレチノール安定化用。
【００８８】
・溶剤、膨潤および浸透剤、例えばエタノール、イソプロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノエチルエーテル、グリセロールおよびジエチレングリコール、カーボネート、水素カーボネート、グアニジン、尿素、ならびに第一、第二および第三ホスフェート。
・香油、組成物着色用の顔料および染料。
・ｐＨ調節剤、例えばα−およびβ−ヒドロキシカルボン酸。
・錯化剤、例えばＥＤＴＡ、ＮＴＡ、β−アラニン二酢酸およびホスホン酸。
・乳白剤、例えばラテックス、スチレン／ＰＶＰおよびスチレン／アシルアミドコポリマー。
・パール光沢付与剤、例えばモノステアリン酸およびジステアリン酸エチレングリコールならびにジステアリン酸ＰＥＧ−３。
・噴射剤、例えばプロパン／ブタン混合物、Ｎ２Ｏ、ジメチルエーテル、ＣＯ２および空気。
【００８９】
本発明の皮膚処置組成物は、液体または固体の水中油型エマルション、油中水型エマルション、多重エマルション、マイクロエマルション、ＰＩＴエマルションまたはピカリングエマルション、ヒドロゲル、リポゲル、単相または多相溶液、泡状物、粉末、または医薬接着剤として適切な少なくとも１つのポリマーを含む混合物の形をとると有利である。本組成物は、無水型で、例えばオイルまたは香膏として投与することもできる。この場合は、植物油、動物油、鉱油、合成油またはそのような油の混合物を担体にすることができる。
【００９０】
ある特定の態様では、本発明の組成物をマイクロエマルションとして製剤化する。本発明に関して、マイクロエマルションは、熱力学的に安定なマイクロエマルジョンだけでなく、いわゆるＰＩＴエマルションも包含すると解釈される。ＰＩＴエマルションは水、油および乳化剤という三成分を含み、室温では水中油型エマルションとして存在する系である。加熱すると、これらの系は、一定の温度範囲（転相温度またはＰＩＴと呼ばれる）でマイクロエマルションを形成し、さらに加熱すると、油中水型（ｗ／ｏ）エマルションに変化する。冷却するとｏ／ｗエマルションが再形成されるが、これは−室温でさえ−マイクロエマルションとして、または超微粒子エマルションとして存在する（４００ｎｍ未満の平均粒径、より具体的には１００〜３００ｎｍの範囲の平均粒径を持つ）。本発明の目的には約２００ｎｍの平均粒径を持つマイクロエマルションまたはＰＩＴエマルションが好ましい場合がある。これらＰＩＴエマルションの詳細は、例えば雑誌Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  ９７，  ６５５−６６９  （１９８５）などに見ることができる。
【００９１】
以下、実施例によって本発明を例示するが、これらの実施例は決して本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００９２】
１．  多層皮膚モデルの研究
ＭＭＰ１の阻害に関するリポソーム封入型ＤＮＡ修復酵素の効果を、多層インビトロ皮膚モデルを使って調べた。この皮膚モデルは、線維芽細胞を含む真皮と角化細胞の表皮とからなるヒト皮膚等価物である。
【００９３】
この多層構造は特別な培養方法で形成される。培養培地に懸濁したヒト包皮の線維芽細胞２×１０５個／ｃｍ２を、キトサン、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンからなるマトリックス（Ｃｏｌｌｏｍｂｅｌ，  Ｃ．ら「コラーゲン、キトサンおよびグリコサミノグリカンを基礎とする生体材料、その製造方法およびヒト医学への応用（原題：Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｂａｓｅ  ｏｆ  ｃｏｌｌａｇｅｎ，  ｃｈｉｔｏｓａｎｅ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ，  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｔｈｅｍ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」、米国特許第５，１６６，１８７号に記載のマトリックス）に、ピペットで移すことにより、まず真皮等価物（ＤＥ）を作製した。培養培地は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン、１００ＵＩ／ｍｌペニシリン、１μｇ／ｍｌアンフォテリシンＢ、５０μｇ／ｍｌアスコルビン酸ナトリウムおよび４ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）からなった。この培地中で、真皮等価物を、ＣＯ２／空気雰囲気（５％／９５％，ｖ／ｖ）下に３７℃、湿度９０％で、培地を毎日新しくしながら、１４日間培養した。
【００９４】
皮膚等価物（ＳＥ）を得るために、１４日齢のＤＥ上にヒト包皮の角化細胞を２００，０００細胞／ｃｍ２の密度で播種し、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン、１００ＵＩ／ｍｌペニシリン、１μｇ／ｍｌアンフォテリシンＢ、５０μｇ／ｍｌアスコルビン酸ナトリウム、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０ｎｇ／ｍｌ表皮成長因子（ＥＧＦ）、０．４μｇ／ｍｌヒドロコルチゾン、０．１２ＵＩ／ｍｌインスリン、１０−９Ｍコレラ毒素、５ｎｇ／ｍｌトランスフェリンおよび１８０μＭアデニンを添加した６０％ＤＭＥＭ、３０％ＨＡＭ  Ｆ１２および１０％ＦＣＳからなる培地に浸漬した条件で、さらに７日間培養した。次に、皮膚等価物を、改変角化細胞培地（０．４μｇ／ｍｌヒドロコルチゾンおよび０．１２ＵＩ／ｍｌインスリンを添加したＤＭＥＭ−ＨＡＭ  Ｆ１２）中、気液界面で、さらに１４日間培養した。
【００９５】
このモデルでは角化細胞と線維芽細胞とが互いに密接に接触していて、生体内と同様にシグナル物質を交換することができるので、通常使用される単層培養物と比較すると、このモデルの方が生体内の状況にはるかによく対応している。また、上側の皮膚層は例えばＵＶＢ線などに対してフィルター機能も果たす。
【００９６】
２．  リポソーム封入型フォトリアーゼによるＭＭＰ１阻害の検出
リポソーム封入型フォトリアーゼによるＭＭＰ１阻害を検出するために、まず皮膚モデルをＵＶＢ線に曝露して、ピリミジン二量体を生成させた。次に、それらをＵＶＡ線に曝露することにより、この放射線が、角化細胞ＤＮＡの修復および線維芽細胞におけるＭＭＰ１の阻害に対して効果を発揮することができるように、フォトリアーゼを活性化した。
【００９７】
２．１  フォトリアーゼの活性化に必要なＵＶＡ量の決定
フォトリアーゼを活性化するには９Ｊ  ＵＶＡ／ｃｍ２の線量で十分であることが文献からわかっていた。使用したＵＶＡランプの出力は１．７ｍＷ／ｃｍ２なので、フォトリアーゼ活性化線量を得るには９０分の曝露時間が必要だった。
【００９８】
２．２  組み合わせＵＶＢ／ＵＶＡ照射後の細胞活性の評価
皮膚等価物の細胞が認容する高エネルギーＵＶＢ線の線量を決定するために、一連の予備
試験をもう一つ行なった。そのために、皮膚モデルをまず様々な線量のＵＶＢ（１００ｍＪ／ｃｍ２か
ら８００ｍＪ／ｃｍ２まで変化、すなわち使用したＵＶＢランプの出力１．２ｍＷ／ｃｍ２で、曝露時間を８３秒
から１１．１分まで変化させた）に曝露し、次に９Ｊ  ＵＶＡ／ｃｍ２の線量に曝露した。
【００９９】
曝露後に、皮膚モデルを、栄養培地中、気液界面で標準条件（３７℃、５体積％ＣＯ２および湿度９０％）で２４時間培養した。
最後に、ＭＴＴ試験（２．１．１で説明する方法）によって細胞の生存性を評価した。表１にこの生存性試験の結果を示す。無処置対照の生存性を基準（＝１００％）として使用し、他の全ての測定値をこれに関連づけた。
【０１００】
【表１】
2004517844.tif 000003
【０１０１】
上記の結果は、最高８００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢに曝露した後でも、細胞の約８０％はまだ生きていることを示している。ピリミジン二量体を生成させるためまたはＭＭＰ１合成を活性化するための皮膚モデルのＵＶＢ照射には、ＭＴＴ試験結果に基づいて、試験した線量の算術平均値に相当する線量３６０ｍＪ  ＵＶＢ／ｃｍ２（＝ＵＶＢへの５分間の曝露）を選択した。
【０１０２】
２．２．１  生存性を評価するためのＭＴＴ試験
ＭＴＴ試験は細胞増殖および細胞毒性に関する情報を与える。この試験では生細胞の代謝活性が測定される。テトラゾリウム塩である３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）は生細胞内で還元され、水不溶性のホルマザン塩に変換される。そのホルマザン塩を抽出し、光度測定法によって定量する。生成するホルマザン塩の量は、被験試料中の生細胞数の尺度である。詳しい試験操作は  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５，  ５５，  １９８３（Ｔ．  Ｍｏｓｍａｎｎ）に開示されているので、参照されたい。
【０１０３】
ＭＴＴ溶液を調製するために、２ｍｌのＭＴＴ溶液（濃度はリン酸緩衝食塩水（＝ＰＢＳ）中、１ｍｇ  ＭＴＴ／ｍｌ）を２４穴トレーの各ウェルにピペットで分注した。皮膚モデルをそのトレーに移し、ＣＯ２／空気（５％／９５％，ｖ／ｖ）雰囲気下に湿度９０％、３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーションが完了したら、皮膚モデルを遠心管に移し、生成したホルマザン塩を、４ｍｌの抽出剤（イソプロパノール２９２ｍｌ＋１Ｍ  ＨＣｌ  ８ｍｌ）により、振とう機で１．５時間抽出した。試料２００μｌの５４０ｎｍの波長での光学密度を９６穴プレートで測定した（Ｔｉｔｅｒｅｋ  Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ  ＭＣＣ  ３４０，  Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。
【０１０４】
２．３  ＭＭＰ１阻害の解析
フォトリアーゼを含むクリーム製剤による被照射ヒト皮膚等価物の処置が、ＵＶＢへの曝露によって誘導されるＭＭＰ１の合成を、どの程度低下させることができるかを評価するための試験を行なった。そのために、ヒト多層皮膚モデルを３６０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢ線量に曝露した後、０．１重量％Ｐｈｏｔｏｓｏｍｅ（商標）を含むクリーム剤で処置した。対照実験では、同時にＵＶＢ照射した皮膚モデルを（ｂ）Ｐｈｏｔｏｓｏｍｅ（商標）を含まないプラセボクリーム剤で処置するか、または（ｃ）無処置のままにしておいた。そのために、本発明のクリーム剤およびプラセボクリーム剤５μｌ（３．８ｍｇ／ｃｍ２に相当）を適用し、軟らかい刷毛で注意深く広げた。
【０１０５】
もう一つの対照実験では、皮膚モデルを曝露せず、処置も行なわなかった。次に、活性成分が確実に浸透するように、全ての皮膚等価物を、ＣＯ２／空気（５％／９５％，ｖ／ｖ）雰囲気下に湿度９０％、３７℃（標準条件）で３時間インキュベートした後、９Ｊ／ｃｍ２のＵＶＡ線量に曝露してフォトリアーゼを活性化した。
【０１０６】
皮膚モデルを標準条件でさらに４８時間インキュベートした。次に、Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．）の第４章、Ｒ．Ｅ．  Ｋｉｎｇｓｔｏｎら著「ＲＮＡの調製と解析（原題：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＲＮＡ）」（１９９７）の方法によって、細胞のＲＮＡを調製した。
【０１０７】
ＭＭＰ１遺伝子の発現をノーザンブロット実験で解析した。ＭＭＰ１のｍＲＮＡに特異的な放射性遺伝子プローブをこの目的に使用した。ｍＲＮＡの産生はＭＭＰ１の合成における最初のそしてそれゆえに最も重要なステップである。したがってｍＲＮＡ産生に影響を及ぼす物質は、ＭＭＰ１のタンパク質量および酵素活性にも影響を及ぼす。
【０１０８】
１８Ｓ−ＲＮＡ用のプローブを使った対照実験により、匹敵する量のＲＮＡを解析していることがわかった。ノーザンブロットシグナル強度を定量するために、オートラジオグラムをデンシトメトリーによって評価した。ＭＭＰ１のシグナルを１８Ｓ−ＲＮＡのシグナルに付随する値に対して標準化した。
【０１０９】
これらの解析方法は当業者には広く知られており、特に  Ｂｒｅｎｎｅｉｓｅｎ，  Ｐ．ら（１９９６），  Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ６４，  ８７７−８８５および  Ｐｏｓｗｉｇ，  Ａ．ら（１９９９），  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １１２，  １３−１８に詳述されているので、参照されたい。
【０１１０】
クリーム剤で処置しなかった被曝皮膚モデルの標準化ＭＭＰ１シグナル値を基準（＝１００％）として使用し、他の皮膚モデルの値は全てこれに関連づけた（表３）。
以下の皮膚モデル試料のＭＭＰ１を評価した。
試料１：ＵＶＢに曝露、クリーム剤による処置なし
試料２：ＵＶＢに曝露＋プラセボクリーム剤による処置
試料３：ＵＶＢに曝露＋本発明の  Ｐｈｏｔｏｓｏｍｅ（商標）クリーム剤による処置
試料４：ＵＶＢへの曝露なし、クリーム剤による処置なし
【０１１１】
【表２】
2004517844.tif 000004
【０１１２】
【表３】
2004517844.tif 000005
【０１１３】
フォトリアーゼを含むクリーム製剤による皮膚モデルの処置（試料３）は、ＭＭＰ１の発現を８０％近く減少させた。
９Ｊ／ｃｍ２の線量に相当するＵＶＡ光に対するヒト皮膚等価物の曝露は、ＭＭＰ１の有意な誘導をもたらさなかったので、測定された効果はＵＶＢによって誘導されたＭＭＰ１合成だけに帰することができた。
これらの解析の結果は、リポソーム封入型フォトリアーゼが、ＵＶＢによって誘導されるＭＭＰ１発現を効果的に減少させる能力を持つことを示している。
【０１１４】
３．  他の製剤例
【表４】
2004517844.tif 000006
【０１１５】
【表５−１】
2004517844.tif 000007
【０１１６】
【表５−２】
2004517844.tif 000008
【０１１７】
【表６】
2004517844.tif 000009
【０１１８】
【表７】
2004517844.tif 000010
【０１１９】
【表８】
2004517844.tif 000011
【０１２０】
【表９−１】
2004517844.tif 000012
【０１２１】
【表９−２】
2004517844.tif 000013
【０１２２】
【表９−３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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