(57)【要約】本発明は特にＩＤＤＭの患者のＱＴｃ間隔を短縮させる薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントの使用、および突然死または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群のリスクを軽減する薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＱＴｃ間隔を短縮させる薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントの使用。
【請求項２】
突然死または‘突然死’症候群のリスクを軽減する薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントの使用。
【請求項３】
薬剤がＱＴｃ間隔の延長を示す患者に投与される請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
薬剤がインシュリン依存型糖尿病または虚血性心疾患の患者に投与される請求項１〜３の何れかの項記載の使用。
【請求項５】
ＱＴｃ間隔は少なくとも５ミリ秒短縮される請求項１〜４の何れかの項記載の使用。
【請求項６】
薬剤は１００〜３００ｎＭのプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントを含有する請求項１〜５の何れかの項記載の使用。
【請求項７】
薬剤は１日量として５００〜７００ｎＭのプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントを提供することができる請求項１〜６の何れかの項記載の使用。
【請求項８】
ＱＴｃ間隔を短縮させるのに有効な量のプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントを哺乳動物に投与することからなる哺乳動物のＱＴｃ間隔を短縮させる方法。
【請求項９】
患者のＱＴｃ間隔を短縮させるのに有効な量のプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその変種、誘導体またはフラグメントを投与することからなる、突然死または‘突然死’症候群のリスクのあるヒトまたは動物の患者においてそのリスクを予防または軽減する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はそれによりＱＴ間隔の延長が正常化され、突然死または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群のリスクが軽減される治療法に関する。
【０００２】
小児期または青年期に突然死をひき起こしやすい家系は時々ＥＣＧ（心電図）においてＱＴ間隔の延長を伴なうことが観察されている（Ｄａｖｉｄｓｏｎの原理および臨床医学、第１７版、第２６６頁）。さらに詳しくは、幾つかの最近の研究はインシュリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）の患者がより高い罹患率のＱＴ間隔延長を有することを示している（ＬｅｎｇｙｅｌらのＯｒｖ Ｈｅｔｉｌ， １３８（６），　３３７〜４１ （１９９７年））。ＱＴ間隔は心筋室壁の電気活性化の開始とその再分極の終了との間の時間を反映する。ＱＴ期間は心拍数に依存し、心拍数の影響に関して補正した場合のＱＴをＱＴｃと表す。虚血性心疾患 （Ａｈｎｖｅらの「米国心臓ジャーナル」， １０８， ３９５〜４００ （１９８４年））、糖尿病（ＳａｗｉｃｋｉらのＤｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，３９， ７７〜８１ （１９９６年）） の患者、また薬物による自律神経系の調整後の患者 （ＴｅｎｔｏｌｏｕｒｉｓらのＥｕｒ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， ２７（１２），１０４９〜５４ （１９９７年）） の中でＱＴｃは延長される。ＱＴｃ延長の病因は知られておらず、延長されたＱＴｃのための薬剤または治療法は現在入手できない。
【０００３】
不整脈に伴なうことが知られているＱＴｃ延長は一見健康そうな糖尿病患者が直接の原因もなく突然死するインシュリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者の‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群に関与する。予備的な研究（ＴａｔｔｅｒｓａｌｌらのＤｉａｂｅｔ．　Ｍｅｄ．， ８， ４９〜５８ （１９９１年）） は５０才未満のＩＤＤＭ患者で一連の２２の原因不明の死亡を報告している。これらの死には明確なパターンがあり、夜中に起こって患者は翌朝乱れのないベッドで発見された。前日の患者の健康状態は良好であり、検死解剖の結果からはまったく死因は明らかにならなかった。ごく少数の患者だけが生前に糖尿病性合併症の徴候を示しており、自律性神経障害の明確な徴候があった患者はたった１人である。この現象は‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群として知られるようになった。１９９１年以来、北欧だけで８０人以上の若い糖尿病患者が突然死症候群で死亡している（ＷｅｓｔｏｎらのＤｉａｂｅｔ． Ｍｅｄ．， １６（８）， ６２６〜３１ （１９９９年））。したがって、その原因を明らかにすることは重要であり、さらに治療法を見つけることはもっと重要である。ＱＴｃ延長はアンギオテンシン変換酵素阻害剤またはβ−ブロッカーで軽減することができるが、有意な副作用を有するこれらの薬物投与のＱＴｃ延長への適用は認められていない。
【０００４】
本発明はプロインシュリンＣ−ペプチドがＱＴｃ間隔の延長を示す患者のＱＴｃ間隔を短縮させることができるという驚くべき観察に基いている。ＱＴｃ間隔の延長と‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群の立証された相関関係を考慮すると、この観察は‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群の新規な予防的処置を示唆している。特に、ＩＤＤＭ患者のＱＴｃ間隔を短縮させることができる。
【０００５】
Ｃ−ペプチドは長い間、生物学的活性を持たないと考えられていた。それは膵臓のベータ細胞で合成され、インシュリンと一緒に等モル量で血液循環に放出される。Ｃ−ペプチドのアミノ酸鎖はプロインシュリン分子の一部であり、正確なフォールディング構造の達成に関与すると考えられている。タンパク質分解プロセスが開始すると、プロインシュリンはインシュリンおよびＣ−ペプチドに分解される。ヒトＣ−ペプチドは次の配列：ＥＡＢＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱを有する３１アミノ酸ペプチドである。
【０００６】
Ｃ−ペプチドは細胞表面に結合し、おそらくＧ−プロテイン結合反応、その後のＣａ２＋−依存型細胞内シグナル経路の活性化によりＮａ＋Ｋ＋−ＡＴＰアーゼおよび内皮の一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）活性を刺激する。研究はＣ−ペプチドの投与が糸球体超ろ過を減少させ、血液網膜関門の機能を改善し（ＪｏｈａｎｓｓｏｎらのＪ．Ｃｌｉｎ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ＆ Ｍｅｔａｂ．， ７７， ９７６〜９８１ （１９９３年））、そしてＩＤＤＭ患者の自律神経および知覚神経の機能を改善することができることを証明している（ＪｏｈａｎｓｓｏｎらのＤｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ３９， ６８７〜６９５ （１９９６年））。糖尿病性神経障害、腎症および網膜症を治療する（ＷＯ９８／１３３８４）が、延長されたＱＴｃ間隔のような糖尿病の心筋合併症を改善しないＣ−ペプチドの活性フラグメントが開示されている。ある割合、おそらく２〜１０％のＩＤＤＭ患者が延長されたＱＴｃ間隔を示すが、このグループは必ずしも糖尿病性神経障害／腎症などを示さず、これらの症状の間に知られている関連性はない。
【０００７】
したがって、ある面において、本発明は典型的にはＱＴｃ間隔の延長を示す患者のＱＴｃ間隔を短縮させる薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドの使用を提供する。一般に、患者はＩＤＤＭを有する。しかしながら、ＱＴｃ間隔の延長は虚血性心疾患の患者や自律神経系を調節する薬剤を投与されている患者のような他の患者においても観察され、このような患者は本明細書で開示した治療法からも恩恵を受ける。
【０００８】
別の面から見ると、本発明は典型的にはＱＴｃ間隔の延長を示す患者、一般にはＩＤＤＭ患者のＱＴｃ間隔を短縮させるのに使用されるプロインシュリンＣ−ペプチドを提供する。
【０００９】
さらに別の面において、本発明は突然死または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群の予防的処置（すなわちリスクの軽減を含む予防）のための薬剤の製造におけるプロインシュリンＣ−ペプチドの使用を提供する。この症候群は上記で論じた通りであり、‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群のリスクがあると考えられる患者は典型的にはＱＴｃ間隔の延長を示す患者、一般にはＩＤＤＭ患者である。
【００１０】
別の面から見ると、本発明は突然死または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群の予防的処置に使用されるプロインシュリンＣ−ペプチドを提供する。
別の面によれば、本発明はＱＴｃ間隔を短縮させるのに有効な量のプロインシュリンＣ−ペプチドを哺乳動物に投与することからなる哺乳動物のＱＴｃ間隔を短縮させる方法を提供する。
【００１１】
さらに別の面において、本発明は患者のＱＴｃ間隔を短縮させるのに有効な量のプロインシュリンＣ−ペプチドを投与することからなる、突然死または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群のリスクのあるヒトまたは動物の患者においてそのリスクを予防または軽減する方法を提供する。‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群のリスクのある患者はＱＴｃ間隔の延長を示す患者として識別され、典型的にはＩＤＤＭ患者である。
【００１２】
本発明はヒトプロインシュリンＣ−ペプチドそのものだけでなく、その機能的に等価な変種、誘導体またはフラグメントに関する。このような変種には例えば様々な対立形質の変種があり、それらは例えば他の種として、または地理的変化などにより本質的に存在する。機能的に等価な誘導体にはアミノ酸置換、すなわち上記配列に対して配列中または末端の欠失または付加があり、さらにその化学的変更、例えば化学的に置換または修飾されたアミノ酸残基を含むが、ＱＴｃ間隔を短縮させる能力を保持するペプチドがある。変種、誘導体およびフラグメントはヒトプロインシュリンＣ−ペプチドの少なくとも４０％、好ましくは少なくとも６０％の活性を示すという点で機能的に等価である。活性は本明細書で開示したようにＱＴｃ間隔を短縮させる能力に関して測定される。
【００１３】
“天然”Ｌ−アミノ酸Ｃ−ペプチド配列の“非天然”異性体、例えばＤ−アミノ酸異性体を含有するペプチドの使用もまた本発明の範囲内に包含される。
【００１４】
プロテインまたはペプチドの配列をそれらの有用な活性を維持しながら変更することは当該技術分野で知られており、これは当該技術分野で標準的であり、文献に幅広く記載されている方法を使用して、例えばランダムまたは特定部位の突然変異誘発、核酸の分解およびライゲーション、ペプチドの化学合成などにより行なうことができる。
【００１５】
ペプチドは好都合にはヒトプロインシュリンＣ−ペプチドまたはその機能性フラグメント、あるいはＣ−ペプチドまたはそのフラグメントと７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％一致するアミノ酸配列を有する機能性ペプチドが選択される。
【００１６】
フラグメントに関する限り、これらには上記で述べたような天然のヒトプロインシュリンＣ−ペプチド配列のフラグメント、あるいは上記のような何れかの機能的に等価な変種または誘導体のフラグメントが含まれるが、そのフラグメントは“全”または“完全”分子の生物学的または治療的に有益な活性を維持する。好ましいフラグメントは天然Ｃ−ペプチドの１５〜３１個の残基、特に２０〜３１個の残基からなる。ペンタペプチドＥＧＳＬＱ（天然ヒトＣ−ペプチドの２７〜３１個の残基）からなるペプチドが特に好ましい。したがって、フラグメントの大きさは変動し、例えば２〜３０個のアミノ酸、好ましくは３〜２０個、例えば３〜１２個または４〜１０個の残基からなる。フラグメントは典型的には少なくとも５個のアミノ酸残基、例えば５〜１２個の残基を有する。
【００１７】
代表的なフラグメントは特にクリエイティブペプチドスウェーデンＡＢのＷＯ９８／１３３８４に記載のペプチドＡ（ＥＬＧＧＧＰＧＡＧ）またはペプチドＥ（ＥＧＳＬＱ）を含み、またはそれからなり、ペプチドＡおよびＥのサブフラグメントもまた使用することができ、これらはＷＯ９８／１３３８４により詳細に記載されている。例としてペプチドＢ （ＥＬＧＧ）、ペプチドＣ （ＥＬＧＧＧＰ）、ペプチドＤ （ＧＧＰＧＡ）およびペプチドＦ （ＧＳＬＱ）を挙げることができる。プロインシュリンＣ−ペプチドまたはそのフラグメントの配列に対してＮ−および／またはＣ−末端エクステンションを有するペプチド；あるいは側面配列もまた本発明の「プロインシュリンＣ−ペプチド」の定義の範囲内に包含される。このような側面またはエクステンション配列は非天然である。それぞれの「延伸した」誘導体の長さは変動するが、好ましくはペプチドは長さが５０個以下、例えば３０個以下、あるいは２５または２０個以下、特に１５または１０個以下のアミノ酸である。例えば、ペプチドは長さが３〜５０、３〜３０、３〜２５、３〜２０、３〜１５または３〜１０個のアミノ酸である。
【００１８】
したがって、「プロインシュリンＣ−ペプチド」とは修飾または非修飾にかかわらず天然の単離したプロインシュリンＣ−ペプチド、合成ペプチド、並びに上記で述べたようにすべてのこれらの変種、誘導体およびフラグメントを意味する。
【００１９】
さらに、「プロインシュリンＣ−ペプチド」なる用語はそれらのＣ−ペプチド由来の対応部分が示すものと同じ効果を示す非ペプチド化合物を包含する。このようなペプチドミメティックス、あるいは天然に存在するプロテインまたはペプチドの活性をまねることができる“小分子”はそれらの高い化学的安定性のため例えば経口デリバリーにより良く適していると考えられる。
【００２０】
現在、ペプチドまたはプロテインを基剤とする活性物質、例えば治療ペプチドを機能的に等価な活性を有するこのようなペプチドミメティックスに代えることは当該技術分野で一般的である。様々な分子ライブラリーおよび組合せ化学技術が存在し、標準法（Ｋｉｅｂｅｒ−Ｅｍｏｎｓ， Ｔ．らの「バイオテクノロジーの最新オピニオン」， ８， ４３５〜４４１ （１９９７年）） を使用してこのような化合物の同定、選択および／または合成を容易にすることができる。このような標準法を使用して本発明で使用されるペプチド様化合物、すなわち例えば本明細書の実施例に記載のペプチドと同じ、または実質的に同様の、またはさらにより良く短縮されたＱＴｃ間隔を示すペプチド様有機化合物を得ることができる。
【００２１】
本発明に使用される所定のプロインシュリンＣ−ペプチドの適合性は本明細書の実施例に記載のプロトコルに従ってＱＴｃ間隔を短縮させる能力により測定することができる。
【００２２】
ＱＴｃ間隔は患者に応じて変動するが、一般に男性は４２０ミリ秒、女性は４３０ミリ秒を越えると延長したとみなされる。ＱＴｃは（心拍数の影響に関して）補正されたＱＴ間隔である。それはバゼットの式（ＱＴｃ ＝ ＱＴ／√ＲＲ）に従って計算される。ＱＴおよびＲＲは好都合にはＥＣＧトレーシングに基いて定規を使用して測定される；ＱＴ間隔はＱＲＳ群の開始点からＴ波の等電位線と交差する終点まで測定される。図１の定型化した図を参照。ＲＲ間隔は図１に表示されているように一方のＲのピークから次のピークまで測定される。間隔の短縮は患者にとって有益であり、好ましくは間隔は少なくとも３ミリ秒短縮され、より好ましくは治療はＱＴｃ間隔を少なくとも５ミリ秒、特に好ましくは少なくとも８ミリ秒、さらに少なくとも１０ミリ秒短縮する。
【００２３】
さらに、糖尿病患者に投与される多くの薬剤はＱＴｃ間隔を広げるため、適度の短縮でさえ臨床的に重要である。
ＩＤＤＭ 患者は一般にプロインシュリンＣ−ペプチドの血中濃度が非常に低く、本発明の治療法は好ましくはプロインシュリンＣ−ペプチドの血中濃度を正常化する。好ましくは、患者は本発明の投与の結果として６０〜１４０、例えば８０〜１２０％の生理学的に正常なプロインシュリンＣ−ペプチド血中濃度を有する。
【００２４】
上記で定義されたようなプロインシュリンＣ−ペプチドを含有する組成物は好ましくは投与前に製剤化される。
したがって、本発明はプロインシュリンＣ−ペプチドを少なくとも１種の薬学的に許容しうる担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含有する、ＱＴｃ間隔の短縮および／または‘突然死（ｄｅａｄ ｉｎ ｂｅｄ）’症候群の予防に使用される医薬組成物もまた提供する。
【００２５】
このような組成物中における活性成分は製剤の重量の０．０５％〜９９％、より好ましくは０．１％〜１．０％である。
「薬学的に許容しうる」とは各成分が組成物の他の成分と適合し、受容者に対して生理学的に許容しうるものでなければならないことを意味する。
【００２６】
本発明の方法において使用される医薬組成物は当該技術分野でよく知られており、文献に幅広く記載されている技術および方法に従って製剤化することができ、何れかの知られている担体、希釈剤または賦形剤を含有する。もちろん、当該技術分野でよく知られている方法に従って他の成分、例えば安定剤、保存剤などを含有することもできる。製剤は薬学的に活性な成分の滅菌水溶液または懸濁液、エアゾール、軟膏などの形態である。
【００２７】
好ましい本発明の態様は当該技術分野でよく知られている持効性形態のプロインシュリンＣ−ペプチド、例えば微粒子、ナノ粒子、乳濁液、ナノ懸濁液、脂質粒子または油である。特に好ましいのは微粒子の持効性形態である。前記微粒子の製造に使用される物質は当該技術分野でよく知られており、例えばラクタイト、グリコライト、酢酸ビニル、デキストラン、デキストランスルフェート、ヒドロキシブチレート、バレロラクトン、カプロラクトン、アクリル酸またはメタクリル酸のモノ−またはコポリマーからなる。特に好ましいのはポリラクタイトまたはポリグリコライトを基材とする微粒子である。このような粒子の製造例は特許出願Ｎｏ．ＷＯ ９４／０９８９８に記載されている。
【００２８】
他の好ましい本発明の態様は表面上に塗布された、特殊な層に含まれた、またはマトリックス組成物中に含まれたプロインシュリンＣ−ペプチドを有するフィルム、パッチまたはフォリオである。特に好ましい態様は表面上に塗布された、または組成物中に含まれたプロインシュリンＣ−ペプチドを有する生分解性フォリオである。この好ましい生分解性フォリオの好ましい原料はラクタイトおよびグリコライトのポリマーまたはコポリマーである。
【００２９】
投与は医療分野で知られている適当な方法により、例えば経口、非経口、局所、皮下投与または吸入により行なうことができる。
ペプチドは一定の間隔で服用する単回投与、または例えば１日の間に１〜６回に分けて服用／投与する分割投与により投与することができる。持効性製剤は好ましくはより長い間隔で、例えば月に１〜２回または３ヵ月毎に投与される。
【００３０】
投与する活性化合物の正確な投与量、毎日または毎月の投与回数、および治療期間は幾つかの要因、例えば患者の年齢およびＱＴｃ間隔の延長の程度に依存する。
【００３１】
好都合には、Ｃ−ペプチドは静脈内的または皮下的に投与することができる。典型的な投与量は１日あたり３００〜１０００ ｎＭ、例えば１日あたり５００〜８００ｎＭの範囲であり、この全投与量は好ましくは２４時間で２回以上の投与に分割され、典型的には３または４回の投与に分割される。本明細書で提案した治療から恩恵を受ける患者は大抵１日に数回のインシュリン投与を（例えば皮下自己注射により）受けている患者であり、Ｃ−ペプチドの投与は同様のパターンに従うことができる。したがって、インシュリンおよびＣ−ペプチドは同時に、または実質的に同時に効果的に投与することができるが、好ましくは混合製剤ではない。Ｃ−ペプチドは注射により投与することができるため、それを含有する‘薬剤’は典型的には１種以上の溶剤および活性成分（複数可）を含有する液状形態である。治療プログラムは慢性治療の典型的なパターンに従い、何ヶ月もの間、ひょっとすると患者の一生の間続くと考えられる。
【００３２】
本組成物は文献でよく知られている技術および方法に従って製剤化することができ、何れかの知られている担体、希釈剤または賦形剤を含有することができる。したがって、例えば非経口投与に適した本発明の方法で使用される組成物は好都合には一般に塩化ナトリウム、グリセリン、グルコース、マンニトール、ソルビトールなどを使用して、好ましくは受容者の血液と等張にした薬学的に活性な成分の滅菌水溶液および／または懸濁液からなる。さらに、本組成物は幾つかの補助剤、例えば緩衝剤、保存剤、分散剤、作用の迅速な発現または作用期間の延長を促進する物質などを含有することができる。
【００３３】
経口投与に適した組成物は例えば好ましくは胃の中で活性ペプチドを分解（脱カルボキシル化または加水分解）から保護し、それにより歯肉または小腸でのこれらの物質の吸収を可能にする外膜（複数可）（腸溶カプセル）により被覆された滅菌精製ストック粉末形態のプロインシュリンＣ−ペプチド分子の活性フラグメント／ペプチドまたは全分子からなる。外膜（複数可）は幾つかの補助剤、例えば緩衝剤、保存剤、本組成物の最適な生体内利用をもたらす持続したまたは迅速な放出を促進する物質を含有することができる。さらに、局部または局所投与に適した本発明の方法で使用される組成物は知られている適当な成分、例えばパラフィン、ワセリン、セタノール、グリセロールなどと混合して適当な軟膏またはクリームを形成する無菌製剤としてのプロインシュリンＣ−ペプチド分子の活性フラグメントまたは全分子からなる。
【００３４】
添付の図面を参照しながら下記の実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００３５】
【実施例】
実施例１
１９９６年に行なわれたＪｏｈａｎｓｓｏｎらによる試験（この試験の別の面はＪｏｈａｎｓｓｏｎらの上記文献 （１９９６年）に報告されている）からの心電図を検討した。この文献は参照により本明細書に加入される。
この試験において、自律性神経障害を有する１２人のＩＤＤＭ患者（男性６人および女性６人）がランダムな二重盲検試験で２つの異なるセッションに参加した（１人の患者は１回だけ出席した）。彼らの平均年齢は４０歳で、平均糖尿病期間は２１年である。患者のうち８人の絶食血漿Ｃ−ペプチド濃度は検出限界未満（＜０．１０ナノモル／Ｌ）であり、残りの４人は０．１３〜０．２５ナノモル／Ｌの範囲であった。１１人の患者は自律性神経障害の証拠である深呼吸中の心拍変動が減少した。そのたびごとに試験の９〜１２時間前にインシュリンを静脈内的に投与し、夜の間１〜２時間毎に血糖値を測定した。インシュリンの注入は正常血糖値を達成するように調整した（５〜６ミリモル／Ｌ）。次に、患者に塩水またはＣ−ペプチド（静脈内）を１８０分間与えた。１分につき１ｋｇあたり６ピコモルを投与した。
【００３６】
３時間のセッションの前とその間に、深呼吸中の心拍変動を評価するために完全１２誘導心電図を記録した。次に、これらの記録を使用してバゼットの式（ＱＴｃ＝ＱＴ／√ＲＲ）に従って補正されたＱＴ間隔（ＱＴｃ）を求めた。４４のＥＣＧトレーシング（患者１人は第２のセッションに参加することができなく、また患者１人のＥＣＧトレーシングは評価することができなかった）を２人が盲目的に分析した。ＲＲおよびＱＴ間隔は定規で測定した。ＱＴ間隔をＱＲＳ群の開始点からＴ波の等電位線と交差する点まで取った。胸部誘導からの５つの間隔および肢誘導からの５つの間隔をそのたびごとに測定し、その平均を計算した。２人の観察者はそれらのＱＴｃ値を比較し、５％より大きい違いがある場合、再計算した。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であるとみなした。
【００３７】
平均Ｃ−ペプチド濃度は試験前の０．１１±０．０２ ナノモル／ＬからＣ−ペプチド注入中の１．７３±０．０４ナノモル／Ｌ （通常の生理学的範囲内）まで上昇するが、一方、塩水注入中のＣ−ペプチド血漿濃度は検出限界（０．１０ナノモル／Ｌ）より低いままであった。血糖値はＣ−ペプチド注入中に僅かに減少し（６．３〜５．９ミリモル／Ｌ）、塩水注入中にそれは殆んど変化しなかった。２つの試験時における基本ＱＴｃ間隔（０．４２９±０．００４ｓ）に違いはなかった。３時間のＣ−ペプチド投与の間に平均ＱＴｃ間隔は有意に減少したが（０．４２２±０．００６；ｐ＜０．０５）、一方、塩水注入（ｎ．ｓ．）中のＱＴｃ間隔は僅かに上昇した（図２）。この試験はＣ−ペプチドの注入がＱＴｃ間隔を有意に減少させることを示している。その短縮の割合は小さいが、減少は生理学的および臨床的に有意である。
【００３８】
実施例２
別の試験（異なる結果はＪｏｈａｎｎｓｏｎ、Ｂｏ−Ｌｅｎｎａｒｔらの「糖尿病治療薬」，第１７巻，第１８１〜１８９頁（２０００年）に開示されている）において、２１人のＩＤＤＭ患者をＣ−ペプチドおよび偽薬が３ヶ月投与されるランダムなクロスオーバー療法に従って６ヶ月間監視した。
試験の詳細は糖尿病治療薬に関する上記参照文献に記載されているが、要約すると生合成ヒトＣ−ペプチド（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社）またはＣ−ペプチド溶媒だけを含有する偽薬を１日に３回皮下注射した。２４時間にわたるＣ−ペプチドの全投与量は６００ナノモル（朝食の３０分前２２５ナノモル、夕食前１５０ナノモルおよび就寝時２２５ナノモル）であった。
【００３９】
ＥＣＧをプログラムの開始時、試験の３および６ヶ月後に記録した。次に、これらの記録を使用してＱＴｃ間隔を実施例１に記載のようにして求めた。
開始時に延長されたＱＴｃ間隔（＞４２０ミリ秒）を示す患者（６人）は偽薬投与と比べてＣ−ペプチド投与中にＱＴｃ間隔の明確な短縮を示した（図３）。
【００４０】
実施例３
別の試験において、短期間のＣ−ペプチド投与でもＱＴｃ間隔を短縮させるのに十分であることが示された。
Ｃ−ペプチドまたはＮａＣｌ偽薬が３時間注入されるランダムな二重盲検法において、１２人の患者を２回検査した。実施例１に記載の手順と同様にして行なった。
ＥＣＧを上記実施例に記載のようにして分析し、偽薬投与と比べてＣ−ペプチド処置中のＱＴｃ間隔の減少が図４に示されるように観察された。
百分率および実時間（ミリ秒）でのＣ−ペプチドおよびＮａＣｌの注入期間のＱＴｃ間隔の違いを図５に示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】
ＱＴおよびＲＲの間隔を示す典型的なＥＣＧトレースの略図である。Ｐ波は心房の活性化、ＱＲＳ群は心室の活性化、そしてＴ波は心室の回復を示す。
【図２】
実施例１に記載の試験結果に従って秒で表したＱＴｃ間隔におけるプロインシュリンＣ−ペプチドの影響を示すグラフである。
【図３】
６人のＩＤＤＭ患者に対して実施例２に記載のような処置を３ヶ月行なった後のＱＴｃ間隔におけるプロインシュリンＣ−ペプチドの影響を示すグラフである。
【図４】
１３人のＩＤＤＭ患者に対して実施例３に記載のような注入を３時間行なった後のＱＴｃ間隔におけるプロインシュリンＣ−ペプチドの影響を示すグラフである。１３人の患者はＱＴｃ延長を示す実施例１の患者８人と実施例３の患者（１２人のうちの）５人で構成される。
【図５】
図４の患者１３人と実施例２の患者６人に対して百分率（％）および実時間（ミリ秒）でのＣ−ペプチドおよび偽薬（ＮａＣｌ）の注入期間のＱＴｃ間隔の違いを示すグラフである。
【図６】
基本ＱＴｃが延長した患者のＱＴｃ間隔におけるプロインシュリンＣ−ペプチドおよび偽薬の影響を示すグラフである。この１９人の患者グループは図５と同じである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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