(57)【要約】活性剤のデリバリー用化合物および組成物が提供される、投与方法および調製方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物：
【化１】
2004521073.tif 000013
およびそれらの塩からなる群から選択される化合物。
【請求項２】
（Ａ）活性剤；及び
（Ｂ）少なくとも１つの請求項１の化合物を含む組成物。
【請求項３】
活性剤が生物学的活性剤、化学的活性剤、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
生物学的活性剤が、少なくとも１つのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ホルモン、多糖、ムコ多糖、炭水化物、または脂質を含む、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
生物学的活性剤が、成長ホルモン、ヒト成長ホルモン、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ファクタ、インターフェロン、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、ヒトインスリン、ヒト組換えインスリン、インスリン様成長ファクタ（ＩＧＦ）、ＩＧＦ−１、ヘパリン、未分割ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、非常に低い分子量のヘパリン、超低分子量ヘパリン、カルシトニン、サケカルシトニン、ウナギカルシトニン、ヒトカルシトニン、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、心房性ナチュレティック（ｎａｔｕｒｅｔｉｃ）ファクタ、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、プロテアーゼインヒビタ、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、ロイチナイジング（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン、小胞刺激ホルモン、グルコセレブロシダーゼ、トロンボポイエチン、フィルグラスチム、プロスタグランジン、シクロスポリン、バソプレシン、クロモリンナトリウム、クロモグリシン酸ナトリウム、クロモグリシン酸二ナトリウム、バンコマイシン、デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、ＰＴＨのフラグメント、抗菌剤、抗真菌剤、ビタミン；これらの化合物の類似体、フラグメント、模倣物、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）変性誘導体；及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３記載の組成物。
【請求項６】
生物学的活性剤が、インスリン、ヘパリン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、エリスロポイエチン、ヒト成長ホルモン、またはこれらの混合物からなる、請求項３記載の組成物。
【請求項７】
生物学的活性剤が、ヒト組換え成長ホルモンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項８】
生物学的活性剤が、副甲状腺ホルモンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項９】
生物学的活性剤が、インスリンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項１０】
生物学的活性剤が、ヘパリンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項１１】
生物学的活性剤が、カルシトニンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項１２】
生物学的活性剤が、インターフェロンからなる、請求項３記載の組成物。
【請求項１３】
（Ａ）活性剤；及び
（Ｂ）少なくとも１つの請求項１の化合物、その塩、およびこれらの混合物からなる群から選択された式を有する化合物を含むポリアミノ酸を含む組成物。
【請求項１４】
ポリアミノ酸がポリペプチドである、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
（Ａ）請求項２の組成物；及び
（Ｂ）（ａ）付形剤、
（ｂ）希釈剤、
（ｃ）崩壊剤、
（ｄ）潤滑剤、
（ｅ）可塑剤、
（ｆ）着色剤、
（ｇ）投与ビヒクル、または
（ｈ）これらの種々の組み合わせを含む、投与単位形態。
【請求項１６】
活性剤が生物学的活性剤、化学的活性剤、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項１７】
生物学的活性剤が、少なくとも１つのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ホルモン、多糖、ムコ多糖、炭水化物、または脂質を含む、請求項１６記載の投与単位形態。
【請求項１８】
生物学的活性剤が、成長ホルモン、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ファクタ、インターフェロン、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、ヒトインスリン、ヒト組換えインスリン、インスリン様成長ファクタ、インスリン様成長ファクタ−１、ヘパリン、未分割ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、非常に低い分子量のヘパリン、超低分子量ヘパリン、カルシトニン、サケカルシトニン、ウナギカルシトニン、ヒトカルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（ｎａｔｕｒｅｔｉｃ）ファクタ、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、プロテアーゼインヒビタ、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、ロイチナイジング（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン、小胞刺激ホルモン、グルコセレブロシダーゼ、トロンボポイエチン、フィルグラスチム、プロスタグランジン、シクロスポリン、バソプレシン、クロモリンナトリウム、クロモグリシン酸ナトリウム、クロモグリシン酸二ナトリウム、バンコマイシン、デスフェリオキサミン、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）のフラグメント、抗菌剤、抗真菌剤、ビタミン；これらの化合物の類似体、フラグメント、模倣物、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）変性誘導体；及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１６記載の投与単位形態。
【請求項１９】
生物学的活性剤が、インスリン、ヘパリン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、エリスロポイエチン、ヒト成長ホルモン、またはこれらの混合物からなる、請求項１６記載の投与単位形態。
【請求項２０】
生物学的活性剤が、ヒト組換え成長ホルモンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２１】
生物学的活性剤が、副甲状腺ホルモンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２２】
生物学的活性剤が、インスリンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２３】
生物学的活性剤が、ヘパリンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２４】
生物学的活性剤が、カルシトニンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２５】
生物学的活性剤が、インターフェロンからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２６】
投与単位形態が、錠剤、カプセル、粉末、又は液体を含む投与ビヒクルからなる、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２７】
投与ビヒクルが、水、１，２−プロパンジオール、エタノール、及びこれらの種々の組み合わせからなる群から選択された液体である、請求項１５記載の投与単位形態。
【請求項２８】
生物学的活性剤を、該活性剤を必要とする動物に投与する方法であって、該方法が、請求項３記載の組成物を動物に経口投与することを含む投与方法。
【請求項２９】
（Ａ）少なくとも１つの活性剤；
（Ｂ）請求項１記載の化合物；及び
（Ｃ）任意に、投与ビヒクルを混合することを含む、組成物の調製方法。
【請求項３０】
式：
【化２】
2004521073.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は独立に、Ｈ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、またはアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は任意に、ハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、又はＣ１−Ｃ４アルキルで置換されており；
Ｒ５は、任意にハロゲンで置換された、Ｃ２−Ｃ１６分枝アルキレンである）
を有する化合物またはその塩。
【請求項３１】
（Ａ）活性剤；及び
（Ｂ）少なくとも１つの請求項３０記載の化合物を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、活性剤、たとえば生物学的または化学的活性剤をターゲットにデリバリー（移送）するための化合物に関する。これらの化合物は、動物への経口、腸内、肺、及び他のルートでの投与用の活性剤と、非共有結合混合物を形成するのに非常に適している。このような組成物の調製方法および投与方法も開示する。
【０００２】
【従来の技術】
従来の活性剤デリバリー手段はしばしば、生物学的、化学的、および物理的バリアによって厳しく制限されている。典型的には、これらのバリアは、デリバリーが起こる環境、デリバリー用ターゲットの環境、および／またはターゲット自体に置かれている。生物学的および化学的活性剤は特にこのようなバリアに影響を受けやすい。
生物学的または化学的に活性な薬剤および治療剤の動物へのデリバリーにおいては、バリアは体に置かれている。物理的バリアの例は、皮膚、脂質の双層、および、ある種の活性剤に比較的非透過性であるが、ターゲットに達する前に横切らなければならない、循環系等の、種々の器官膜である。化学的なバリアとしては、胃腸（ＧＩ）管におけるｐＨ変化、および酵素の劣化などが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０００３】
これらのバリアは特に、経口デリバリーシステムのデザインに重要である。多くの生物学的または化学的活性剤の経口デリバリーは、生物学的、化学的、および物理的バリアがなければ、動物への投与用に選択されるルートである。経口投与に典型的には適さない多くの薬剤の中でも例を挙げると特に、カルシトニンおよびインスリンなどの生物学的または化学的活性ペプチド類；多糖類、特にムコ多糖類、たとえば、これに限定されるわけではないが、ヘパリン；ヘパリノイド類；抗生物質；および他の有機物質類が挙げられる。これらの薬剤は、早急に有効でなくなったり、酸加水分解、酵素等により胃腸管で破壊される。さらに、高分子ドラッグのサイズ及び構造が吸収を阻止する可能性がある。
【０００４】
破壊されやすい薬剤を経口投与する従来の方法は、腸壁の透過性を人工的に増加させるために、添加剤（レゾルシノール及び非イオン性界面活性剤、たとえばポリオキシエチレンオレイルエーテル及びｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）との共投与、並びに、酵素劣化を避けるために酵素阻害剤（たとえばすい臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスファート（ＤＦＦ）およびトラシロール）に依存するものであった。リポソームもまた、インスリンおよびヘパリンのドラッグデリバリーシステムとして記載されている。しかしながら、このようなドラッグデリバリーシステムを広範囲に使用することは、以下の理由から妨げられている：（１）システムが添加剤または阻害剤を毒性量使用する；（２）適当な低分子量のカルゴ、すなわち活性剤が入手可能ではない；（３）システムの安定性が乏しく、保存期間が適当でない；（４）システムが製造困難である；（５）活性剤（カルゴ：ｃａｒｇｏ）を保護するためのシステムがない；（６）システムが活性剤を逆に変える；および（７）活性剤の吸収を許可する又は促進するためのシステムがない。
【０００５】
プロテノイド微球体が、薬剤をデリバリーするのに使用されている。たとえば、米国特許第５，４０１，５１６号；５，４４３，８４１号；及びＲｅ．３５，８６２を参照されたい。さらに、ある種の変性アミノ酸が薬剤デリバリーに使用されている。たとえば、米国特許第５，６２９，０２０号；５，６４３，９５７号；５，７６６，６３３号；５，７７６，８８８号；及び５，８６６，５３６号を参照されたい。
特に最近は、ポリマー性デリバリー剤用に提供するため、ポリマーを、変性アミノ酸又は結合基を介したこれらの誘導体に共役させている。該変性ポリマーは、いかなるポリマーでもよいが、好ましいポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びこの誘導体であるが、これらに限られるわけではない。たとえば、国際出願第ＷＯ  ００／４０２０３号を参照されたい。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、広範囲の活性剤を種々のルートでデリバリー可能で、容易に調製される簡単で高価ではないデリバリーシステムが未だ必要とされている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、活性剤のデリバリーを促進する化合物及び組成物を提供する。本発明によるデリバリー剤化合物は、以下の式を有するもの及びその塩及びその混合物を含む。
【０００８】
【化３】
2004521073.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は独立に、Ｈ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニル、またはアリールであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は任意に、ハロゲン、−ＯＨ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、又はＣ１−Ｃ４アルキルで置換されており；
Ｒ５は、任意にハロゲンで置換された、Ｃ２−Ｃ１６分枝アルキレンである。）
ある好ましい実施態様においては、Ｒ５は、以下の式であらわされる。
【００１０】
【化４】
2004521073.tif 000003
【００１１】
（式中、ｍ及びｎは整数であり、ｍ及びｎの合計は０から１１であり；
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又は、部分的に又は完全にハロゲンで置換されたＣ１−Ｃ４アルキルであり；及び
Ｒ７及びＲ１０の少なくとも１つは、Ｈではない。）
【００１２】
他の好ましい実施態様では、Ｒ１−Ｒ４は独立に、Ｈ、ハロゲン、又はＣ１−Ｃ４アルキルである。さらに好ましくは、Ｒ１−Ｒ４は独立に、Ｈ、Ｃｌ、または、−ＣＨ３である。
他の好ましい実施態様では、ｍ及びｎの合計は１から６の範囲である。
また、他の好ましい実施態様では、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は水素であり、Ｒ７は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。さらに好ましくは、Ｒ７は−ＣＨ３である。
【００１３】
また、他の好ましい実施態様では、化合物は、以下に示される化合物またはその塩、またはその混合物を含む。
【００１４】
【化５】
2004521073.tif 000004
【００１５】
本発明はまた、上記式のデリバリー剤化合物の少なくとも１つと、少なくとも１つの活性剤を含む組成物を提供する。これらの組成物は、デリバリー剤化合物なしでの活性剤の投与と比較して、活性剤のバイオアベイラビリティーを増加または改善して、選択した生物学的システムに活性剤をデリバリーする。
本発明はまた、該組成物を含む投与単位形態を提供する。投与単位は、液体または固体、たとえば錠剤、カプセル、または、粉末またはサシェ（ｓａｃｈｅｔ）を含む粒子の形態であってもよい。
【００１６】
他の実施態様は、上記式のデリバリー剤化合物の少なくとも１つと、活性剤を含む組成物を動物に投与することによる、活性剤を該活性剤を必要とする動物に投与する方法である。
また、他の実施態様は、本発明の組成物を投与することによる、動物における所望の生理学的効果を達成するためのまたは疾患を治療するための方法である。
また、他の実施態様は、少なくとも１つの上記式の活性剤化合物と、少なくとも１つの活性剤を混合物することによる、本発明の組成物の調製方法である。
【００１７】
【発明の実施の形態】
デリバリー剤化合物
ここで使用する「アルキル」及び「アルケニル」なる用語は、直鎖及び分枝アルキル及びアルケニル置換基をそれぞれ含む。
本発明のデリバリー剤化合物は、それらの立体異性体及びエナンチオマーを含む。
【００１８】
デリバリー剤化合物は、カルボン酸又はその塩の形態であってもよい。適当な塩は、これらに限定されるわけではないが、有機及び無機塩、たとえば、アルカリ金属塩、たとえばナトリウム、カリウム、及びリチウム；アルカリ土類金属塩、たとえばマグネシウム、カルシウム、又はバリウム；アンモニウム塩；塩基アミノ酸、たとえばリジンまたはアルギニン；及び有機アミン、たとえばジメチルアミン又はピリジンである。好ましくは該塩は、ナトリウム塩である。該塩は、モノまたは多価塩、たとえば一ナトリウム塩、二ナトリウム塩であってもよい。該塩はまた、水和物、及びエタノールソルベートを含むソルベートであってもよい。
【００１９】
デリバリー剤化合物は、以下のように調製可能である。乾燥トルエン（濃度：０．５モル／Ｌ）中の、適当なアミン（１当量）、適当なカルボン酸（１．０３当量）、ホウ酸（０．０５当量）、及び２−アミノ−５−メチルピリジン（０．０５当量）の懸濁液を、窒素下、反応中に生じた水をディーンスタークユニットに共沸蒸留により除去しながら、４時間加熱還流（１１０℃）する。シリカゲル上の薄層クロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン：１／１）が反応終了を示す。反応を室温まで冷却し、生成物を標準実験方法に従って単離する。
本発明のデリバリー剤化合物の塩は、当該技術により調製可能である。たとえば、ナトリウム塩は、エタノール中にデリバリー剤化合物を溶解し、水酸化ナトリウム水溶液を添加する。
【００２０】
さらに、これらの１以上の化合物を含むポリアミノ酸及びペプチドも使用可能である。
アミノ酸は、少なくとも１つのフリーアミン基を有する種々のカルボン酸であり、天然および合成アミノ酸を含有する。ポリアミノ酸は、たとえばエステルまたは無水物結合などの結合可能な他の基によって形成される結合により結合した２以上のアミノ酸またはペプチド（ペプチド結合により結合した２以上のアミノ酸である）のいずれかである。ペプチドは、２つのアミノ酸を有するジペプチドから数百のアミノ酸を有するポリペプチドまで、種々の長さのものであってもよい。１以上のアミノ酸またはペプチド単位は、アシル化またはスルホン化されていても良い。
【００２１】
デリバリー剤化合物は、再結晶によって、または単独又は縦列に結合した、１以上の固体クロマトグラフサポート上での分離によって精製可能である。適当な再結晶溶媒系は、エタノール、水、ヘプタン、酢酸エチル、アセトニトリル、メタノール、およびテトラヒドロフラン、並びにこれらの混合物であるが、これらに限定されるわけではない。精製分離は、移動相としてメタノール／ｎ−プロパノール混合物を用いて、アルミナなどの適当なクロマトグラフサポート上で；移動相としてトリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物を用いて逆相クロマトグラフ上で；および、移動相として水または適当なバッファーを用いてイオン交換クロマトグラフィで行ってもよい。アニオン交換クロマトグラフィが行われる場合には、好ましくは０−５００ｍＭ塩化ナトリウム勾配が用いられる。
デリバリー剤は、
【００２２】
【化６】
2004521073.tif 000005
【００２３】
及び炭素−炭素結合からなる群から選択される結合基によりデリバリー剤と結合するポリマーを含有可能である。ただし、ポリマー性デリバリー剤はポリペプチドまたはポリアミノ酸ではない。ポリマーは、これらに限定されるわけではないが、動物に使用するのに安全である、交互コポリマー、ブロックコポリマー、及びランダムコポリマーを含む、いかなるポリマーであってもよい。好ましいポリマーは、これらに限定されるわけではないが、ポリエチレン；ポリアクリレート；ポリメタクリレート；ポリ（オキシエチレン）；ポリ（プロピレン）；ポリプロピレングリコール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；及びこれらの誘導体、及びこれらの組み合わせを含む。ポリマーの分子量は典型的には、約１００から約２００，０００ダルトンまでの範囲である。ポリマーの分子量は好ましくは約２００から約１０，０００ダルトンまでの範囲である。ある実施態様では、ポリマーの分子量は約２００から約６００ダルトンまで、より好ましくは約３００から約５５０ダルトンまでの範囲である。
【００２４】
活性剤
本発明において使用に適した活性剤は、生物学的活性剤、および化学的活性剤、たとえば、これらに限定されるわけではないが、殺虫剤、薬理学剤、及び治療剤を含む。適した活性剤は、酵素および酸加水分解等によって胃腸管中で、より効果的でなくなる、効果的でない、又は破壊されるものを含む。また、適した活性剤としては、物理化学的特徴、たとえばサイズ、構造、または電荷が、経口投与した場合に吸収を阻止または抵抗する、これらの高分子剤も含む。
【００２５】
たとえば、本発明において使用に適した生物学的または化学的活性剤は、これらに限定されるわけではないが、タンパク質；ポリペプチド；ペプチド；ホルモン；多糖、特にムコ多糖の混合物；炭水化物；脂質；小極性有機分子（すなわち、５００ダルトン以下の分子量を有する極性有機分子）；他の有機化合物；及び、特にそれ自体、胃腸管膜を通過しない（または、投与量のフラクションのみしか通過しない）、および／または、胃腸管中の酵素および酸によって化学開裂を受けやすい化合物；またはこれらの組み合わせを含む。
【００２６】
さらなる例としては、これらに限定されるわけではないが、以下の、合成、天然、または組換え由来のものが挙げられる。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、及びブタ成長ホルモンを含む、成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；成長ホルモン放出ファクタ、α−、β−、およびγ−インターフェロンを含む、インターフェロン；インターロイキン−１；インターロイキン−２；亜鉛、ナトリウム、カルシウム、及びアンモニウムを含むカウンターイオンを任意に有する、ブタインスリン、ウシインスリン、ヒトインスリン、ヒト組換えインスリンを含むインスリン；ＩＧＦ−１を含む、インスリン様成長ファクタ；未分割ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、非常に低い分子量のヘパリン、超低分子量ヘパリンを含む、ヘパリン；サケ、ウナギ、ブタ、ヒトカルシトニンを含む、カルシトニン；エリスロポイエチン（ＥＰＯ）；心房性ナチュレティック（ｎａｔｕｒｅｔｉｃ）ファクタ；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；プロテアーゼインヒビタ；アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；ロイチナイジング（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン；小胞刺激ホルモン；グルコセレブロシダーゼ；トロンボポイエチン；フィルグラスチム；プロスタグランジン；シクロスポリン；バソプレシン；クロモリンナトリウム（クロモグリシン酸ナトリウムまたはクロモグリシン酸二ナトリウム）；バンコマイシン；デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）；アレンドロネート、チリュドロネート、エチドロネート、クロドロネート、パミドロネート、オルパドロネート、及びインカドロネートを含む、ビスホスホネート；そのフラグメントを含む、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）；抗生物質、抗真菌剤、及び抗菌剤（ａｎｔｉ−ｆｕｎｇａｌ ａｇｅｎｔｓ）を含む抗菌剤（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ）；ビタミン；これらの化合物の類似体、フラグメント、模倣物、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）変性誘導体；及びこれらの組み合わせ。抗生物質の例は、限定的ではないが、グラム陽性性、殺菌性、およびシクロペプチド抗生物質、たとえば、ダプトマイシン及びその類似体等を含む。
【００２７】
デリバリーシステム
本発明の組成物は、１以上の、本発明のデリバリー剤化合物、および、１以上の活性剤を含有する。ある実施態様においては、１以上のデリバリー剤化合物またはこれらの化合物の塩、またはこれらの化合物または塩がその１以上の単位を形成するポリアミノ酸またはペプチドを、投与組成物を形成するために投与前に、活性剤と混合することによって、デリバリー剤として使用可能である。
【００２８】
投与組成物は液体形態であってもよい。溶液媒体は、水（たとえば、サケカルシトニン、副甲状腺ホルモン、及びエリスロポイエチン用）、２５％プロピレングリコール水溶液（たとえばヘパリン用）、及びホスフェート緩衝液（たとえばｒｈＧＨ用）であってもよい。他の投与ビヒクルは、ポリエチレングリコールを含む。投与溶液は、デリバリー剤化合物の溶液を活性剤の溶液と、投与直前に混合することにより調製可能である。または、デリバリー剤化合物（または活性剤）の溶液を、固体形態の活性剤（またはデリバリー剤化合物）と、混合しても良い。デリバリー剤化合物および活性剤はまた、製造工程中に混合されてもよい。
投与溶液は、任意に、リン酸緩衝塩、クエン酸、グリコール、または他の分散剤等の添加剤を含有可能である。安定化添加物を、好ましくは、約０．１から２０％（Ｗ／Ｖ）の範囲の濃度で、該溶液に添加してもよい。
【００２９】
投与組成物は、または、固体形態、たとえば、錠剤、カプセル、または、粉末またはサシャ等の粒子であってもよい。固体投与形態は、デリバリー剤化合物の固体形態を活性剤の固体形態と混合することにより調製可能である。または、固体は、デリバリー剤化合物と活性剤の溶液から、当該技術に公知の方法で、たとえば、フリーズドライ（凍結乾燥）、沈殿、結晶化、及び固体分散等により得ても良い。
本発明の投与組成物はまた、１以上の酵素インヒビタを含有可能である。このような酵素インヒビタは、アクチノニン（ａｃｔｉｎｏｎｉｎ）またはエピアクチノニン（ｅｐｉａｃｔｉｎｏｎｉｎ）およびこれらの誘導体等の化合物であるが、これらに限定されるわけではない。他の酵素インヒビタは、アプロチニン（トラシロール：Ｔｒａｓｙｌｏｌ）及びバウマン−バーク（Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋ）インヒビタであるが、これらに限定されるわけではない。
【００３０】
本発明の投与組成物中に使用される活性剤の量は、ターゲット指標に対してその活性剤の目的を達成するのに有効な量である。組成物中の活性剤の量は、典型的には、薬理学的、生物学的、治療的、または化学的有効量である。しかしながら、該量は、投与単位形態が多数のデリバリー剤化合物／活性剤組成物を含有可能であり、または、薬理学的、生物学的、治療的、または化学的有効量を分割して含有可能であるので、組成物が投与単位形態で使用される場合には、有効量よりも少ない可能性がある。全有効量はしたがって、全体として、活性剤の有効量を含有する累積単位として投与可能である。
【００３１】
使用されるべき活性剤の全量は、当業者に公知の方法により定めることができる。しかしながら、本発明の組成物は、活性剤を、活性剤単独で含有する組成物よりもより有効にデリバリーすることができるので、同等の血液レベル及び／または治療効果を達成しつつ、従来の投与単位形態またはデリバリーシステムよりも少ない量の生物学的または化学的活性剤を被検者に投与可能である。
【００３２】
本発明に記載したデリバリー剤化合物は、特に、経口、鼻腔内、舌下、十二指腸内、皮下、頬、結腸内、直腸、膣、粘膜、肺、経皮、皮膚内、非経口、静脈内、筋肉内、及び眼系で、生物学的および化学的活性剤のデリバリーを促進し、並びに、血液−脳バリアの横断を促進する。
投与単位形態はまた、付形剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、可塑剤、着色剤、香料、テイストマスキング剤、糖、甘味剤、塩、及び投与ビヒクル、たとえば、これらに限定されるわけではないが、水、１，２−プロパンジオール、エタノール、オリーブオイル、または任意のこれらの組み合わせを、単独で、または組み合わせて含有可能である。
【００３３】
本発明の化合物及び組成物は、生物学的または化学的活性剤を種々の動物、たとえば、これらに限定されるわけではないが、ニワトリ等の鳥；哺乳類、たとえばげっし動物、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、霊長目の動物、特にヒト；及びムシに投与するのに有用である。
このシステムは特に、化学的または生物学的活性剤を、活性剤が投与される動物の体内で、及び活性剤がそのターゲットゾーン（すなわちデリバリー組成物の活性剤が放出されるべき場所）に到達する前の条件によって、破壊されたり効果が少なくなる化学的または生物学的活性剤をデリバリーするのに優位である。特に、本発明の化合物および組成物は、通常経口デリバリーが不可能である活性剤、または、より改善されたデリバリーが望まれる活性剤を経口投与するのに有用である。
【００３４】
該化合物及び活性剤を含む組成物は、デリバリー剤なしでの活性剤投与の場合と比較すると、活性剤のバイオアベイラビリティーを増加または改善するのに有用性を有し、及び、活性剤を、選択した生物学的システムにデリバリーするのに有用性を有する。デリバリーは、ある時間に渡って、より活性剤をデリバリーすることにより、または、特別な時間中に（たとえばより早いまたは遅いデリバリーに有効なように）活性剤をデリバリーすることにより、または、特定な時間で、または経時的に（たとえば維持したデリバリー）活性剤をデリバリーすることにより、改善可能である。
【００３５】
本発明の他の実施態様は、本発明の組成物を投与することによる、動物における所望の生理学的効果、たとえば以下の表にあげたような、効果を達成するための、または、疾患の治療または予防するための方法である。活性剤の特定指標は、文献：Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ （５４ｔｈ Ｅｄ．， ２０００， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｉｎｃ．， Ｍｏｎｔｖａｌｅ， ＮＪ）に記載されており、該文献はここに参照して組み入れられるものである。以下の表中の活性剤は、これらの類似体、フラグメント、模擬物、及びポリエチレングリコール変性誘導体を含む。
【００３６】
【表１】
2004521073.tif 000006
【００３７】
たとえば、本発明のある実施態様は、インスリンと少なくとも１つの本発明のデリバリー剤化合物を投与することにより、糖尿病に苦しむ、または糖尿病になりやすい患者を治療する方法である。
投与後、組成物または投与単位形態に存在する活性剤は、血行に取りこまれる。活性剤のバイオアベイラビリティーは、血液中の公知の薬理活性を測定することにより、たとえば、ヘパリンによって引き起こされた血液凝固時間の増加や、カルシトニンによって引き起こされた血中のカルシウムレベルの減少を測定することにより、容易に評価することができる。または、活性剤自体の血中レベルは、直接測定可能である。
【００３８】
【好ましい実施態様の記載】
以下の実施例は、本発明を例解するものであるが、本発明はこれらに限定されるものではない。特記しない限り、全ての部は、重量基準である。
以下にリストした化合物のプロトン核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）分析は、特記しない限り、溶媒としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）を用いて、３００ＭＨｚブルッカー（Ｂｒｕｋｅｒ）スペクトル測定器で行った。
【００３９】
実施例１−化合物調製
化合物１の調製
化合物１（３Ｒ−５−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−４−メチルフェニル）アミノ］−３−メチル−５−オキソペンタン酸）の調製
５０ｍＬの乾燥トルエン中の、６−アミノ−２，４−ジクロロ−３−メチルフェノール（４．８１ｇ、２５．００ｍｍｏｌ）、メチル＝Ｒ−（＋）−３−メチルグルタレート（４．０８ｇ、２５．５０ｍｍｏｌ）、ホウ酸（０．０７８ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、および２−アミノ−５−メチルピリジン（０．１３５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、反応中に生成した水（０．５０ｍＬ）をディーンスターク分離ユニットで共沸蒸留にて除去しながら、４時間、窒素気流下、加熱還流（１１０℃）した。シリカゲルの薄層クロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ヘプタン：１／１）で、反応が完了したことを確認した。反応混合物を室温まで冷却し、次いで２ＮのＮａＯＨ水溶液（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応を４時間加熱還流し、次いで室温まで冷却した。冷却した反応混合物を次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈した。水層を酢酸エチルで２回（１００ｍＬ）洗浄した。注意深く分離した後、水層を約０−５℃まで冷却し、１０％塩酸溶液（１７．５０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）で酸性化し、得られた固体を濾過してヘキサンで洗浄し、真空乾燥した。ジクロロメタンで粉砕（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ）すると、所望の酸（６．４０ｇ、８０％）が、オフホワイトの固体として得られた。ＨＰＬＣ（カラム：Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００ Ｃ１８、水／アセトニトリル／酢酸：９５０／５０／１、３ｍＬ／分、２２０ｎｍ）、保持時間（Ｒｔ）５．２７分。融点＝１７１−１７３℃。
【００４０】
【数１】
2004521073.tif 000007
【００４１】
化合物２：（３Ｒ）−５−［（２−ヒドロキシ−４−メチルフェニル）アミノ］−３−メチル−５−オキソペンタン酸の調製
７０ｍＬの乾燥トルエン中の、２−アミノ−５−メチルフェノール（４．１１ｇ、３３．３４ｍｍｏｌ）、メチル＝Ｒ−（＋）−３−メチルグルタレート（５．３５ｇ、３３．３４ｍｍｏｌ）、ホウ酸（０．１０２ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、および２−アミノ−５−メチルピリジン（０．１７８ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、反応中に生成した水（０．６６ｍＬ）をディーンスターク分離ユニットで共沸蒸留にて除去しながら、４時間、窒素気流下、加熱還流（１１０℃）した。シリカゲルの薄層クロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ヘプタン：１／１）で、反応が完了したことを確認した。反応混合物を約４０℃まで冷却し、次いで２ＮのＮａＯＨ水溶液（３４ｍＬ、６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応を４時間加熱還流した。反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈した。混合物を３０分間撹拌し、層分離した。水層を酢酸エチルで２回（１００ｍＬ）洗浄した。注意深く分離した後、水層を５℃まで冷却し、１０％塩酸溶液（２４ｍＬ、７０ｍｍｏｌ）で酸性化し、得られた固体を濾過してヘキサンで洗浄し、真空乾燥した。１００ｍｌのヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（９０／１０：ｖ／ｖ）を用いて粉砕した。固体を濾過し、真空乾燥すると、所望の生成物（６．２９ｇ、７５％）が、オフホワイトの固体として得られた。ＨＰＬＣ（カラム：Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｋｒｏｍａｓｉｌ １００ Ｃ１８、水／アセトニトリル／酢酸：９５０／５０／１、３ｍＬ／分、２２０ｎｍ）、保持時間（Ｒｔ）３．７３分。融点＝１１７−１１８℃。
【００４２】
【数２】
2004521073.tif 000008
【００４３】
実施例２
サケカルシトニン（ｓＣＴ）経口デリバリー
水中の、デリバリー剤化合物およびサケカルシトニン（ｓＣＴ）の経口投与（ＰＯ）組成物を調製した。典型的には、４５０ｍｇのデリバリー剤化合物を２．０ｍＬの水中に添加した。デリバリー剤化合物のナトリウム塩を用いるか、もしくは、遊離酸を、得られた溶液を撹拌し、１当量の水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を添加し、水で希釈することによりナトリウム塩に変換した。該溶液を激しく撹拌し、次いで加熱（約３７℃）して、音波処理した。ｐＨをＮａＯＨまたはＨＣｌで約７（６．５から８．５）に調節した。株溶液からの９０μｇのｓＣＴを該溶液に添加した。水を次いで添加し、全容量を約３．０ｍＬ（デリバリー剤化合物の溶解度によって変わる）にした。最終デリバリー剤化合物投与量、ｓＣＴ投与量、および容量を以下の表１に挙げる。
【００４４】
典型的な投与およびサンプリングプロトコールは以下のようである。２００−２５０ｇの体重のオスのスプラグ−ダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットを２４時間断食させ、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロルプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与の１５分前に投与した。経口投与用に、１１ｃｍラッシュ（Ｒｕｓｃｈ）８フレンチカテーテルを、ピペット先端を有する１ｍＬシリンジにつけた。該シリンジに、カテーテルを通して該溶液を引き入れることにより投与溶液で満たし、次いで、カテーテルを拭いて乾燥した。カテーテルをラットの切歯を通り越して１ｃｍ残して、食道に入れた。溶液をシリンジプラグを押すことによって投与した。
【００４５】
血液サンプルを、典型的には０、１０、２０、３０、６０、および９０分で、尾の動脈から連続採取した。シーラムｓＣＴを、ＥＩＡキット（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ， ＣＡからの“Ｋｉｔ ＃ＥＩＡＳ−６００３”）を用いて、標準プロトコールを以下のように変えてテストすることにより決定した。すなわち、暗所で振とうしながら、２時間、５０μｌのペプチド抗体を用いてインキュベートし、プレートを洗浄し、シーラムおよびビオチン化したペプチドを添加し、４ｍＬのバッファーで希釈し、暗所で一昼夜、振とうした。時間＝０で得られたベースライン値にしたがって、数を調節した。各投与グループにおけて５匹のラットから得られた結果を各時間点で平均した。最大値を以下の表１に報告する。
【００４６】
【表２】
2004521073.tif 000009
【００４７】
ヘパリンデリバリー：    結腸内デリバリー
２５％プロピレングリコール水溶液中にデリバリー剤化合物およびヘパリンナトリウムＵＳＰを含む結腸内（ＩＣ）投与溶液を調製した。デリバリー剤化合物のナトリウム塩を用いるか、もしくは、遊離酸を、１当量の水酸化ナトリウムを用いてナトリウム塩に変換した。典型的には、デリバリー剤化合物とヘパリン（約１６６−１８２ＩＵ／ｍｇ）を乾燥粉末として激しく撹拌することにより混合した。該乾燥混合物を２５％ｖ／ｖプロピレングリコール水溶液に溶解し、激しく撹拌して、ソニケーター（約３７℃）中に置いた。ｐＨをＮａＯＨ水溶液（２Ｎ）で約７（６．５から８．５）に調節した。投与溶液を音波処理して透明な溶液にした。最終容量を３．０ｍＬに調節した。最終デリバリー剤化合物投与量、ｓＣＴ投与量、および容量を以下の表２に挙げる。
【００４８】
典型的な投与およびサンプリングプロトコールは以下のようである。２７５−３５０ｇの体重のオスのスプラグ−ダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットを２４時間断食させ、ケタミン塩酸塩（８８ｍｇ／ｋｇ）を、投与の直前に、筋肉内に投与して麻酔した。５匹のラットの１投与グループには、投与溶液の１つが投与された。結腸内（ＩＣ）投与用に、７．５ｃｍ８ｆｒラッシュ（Ｒｕｓｃｈ）カテーテルを、ピペット先端を有する１ｍＬシリンジにつけた。該投与カテーテルを、チューブが見えなくなるまで肛門から結腸に挿入した。投与溶液をゆっくり結腸に入れた。
【００４９】
ケタミン（８８ｍｇ／ｋｇ）を投与後、クエン酸化（ｃｉｔｒａｔｅｄ）血液サンプルを心臓（ｃａｒｄｉａｃ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）から、典型的には０．２５、０．５、１．０、および１．５時間で採取した。ヘパリン活性を文献：Ｈｅｎｒｙ，Ｊ．Ｂ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｂｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ；Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ；Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ（１９７９）記載の方法に従って、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を利用して定めた。以前の研究から約２０秒のベースライン値を示した。各グループにおける５匹のラットからの結果を、各時間点ごとに平均した。最大値を以下の表２に報告する。
【００５０】
【表３】
2004521073.tif 000010
【００５１】
低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）デリバリー
結腸内デリバリー
２５％プロピレングリコール水溶液中にデリバリー剤化合物および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）を含む結腸内（ＩＣ）組成物を調製した。デリバリー剤化合物のナトリウム塩を用いるか、もしくは、遊離酸を、１当量の水酸化ナトリウムを用いてナトリウム塩に変換した。典型的には、デリバリー剤化合物とＬＭＷＨ（パルナパリン（Ｐａｒｎａｐａｒｉｎ）、９１  ＩＵ／ｍｇ、平均分子量：約５，０００、Ｏｐｏｃｒｉｎ， Ｍｏｄｅｎａ、イタリアから入手可能）（典型的には９０−１０５ ＩＵ／ｍｇ、平均分子量：約５，０００）を、乾燥粉末として激しく撹拌することにより混合した。該乾燥混合物を２５％ｖ／ｖプロピレングリコール水溶液に溶解し、激しく撹拌して、ソニケーター（約３７℃）中に置き、透明な溶液にした。ｐＨを２ＮのＮａＯＨ水溶液で約７（６．５から８．５）に調節した。投与溶液を音波処理して透明な溶液にした。最終容量を３．０ｍＬに調節した。最終デリバリー剤化合物投与量、ＬＭＷＨ投与量、および容量を以下の表３に挙げる。
【００５２】
典型的な投与およびサンプリングプロトコールは以下のようである。２７５−３５０ｇの体重のオスのスプラグ−ダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットを２４時間断食させ、ケタミン塩酸塩（８８ｍｇ／ｋｇ）を、投与の直前に、筋肉内に投与して麻酔し、必要に応じて麻酔を再度持続させた。５匹の動物の１投与グループには、投与溶液の１つが投与された。結腸内（ＩＣ）投与用に、７．５ｃｍ、８ｆｒラッシュ（Ｒｕｓｃｈ）カテーテルを、ピペット先端を有する１ｍＬシリンジにつけた。該投与カテーテルを、チューブが見えなくなるまで肛門から結腸に挿入した。投与溶液をゆっくり、シリンジを押すことにより結腸に入れた。
【００５３】
ケタミン（８８ｍｇ／ｋｇ）を投与後、クエン酸化（ｃｉｔｒａｔｅｄ）血液サンプルを心臓（ｃａｒｄｉａｃ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）から、典型的には、投与後、０．５、１．０、２．０、３．０、および４．０時間で採取した。ＬＭＷＨ吸収は、アンチファクターＸａアッセイＣＨＲＯＭＯＳＴＲＡＴＥＴＭヘパリンアンチ−Ｘａアッセイ（Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｄｕｒｈａｍ，  ＮＣから入手可能）により測定したプラスマＬＭＷＨの増加により確認した。各グループにおける動物からのプラスマＬＭＷＨ濃度は、各時間点で平均し、これらの平均プラスマＬＭＷＨ濃度を時間に対してプロットした。これらの平均プラスマＬＭＷＨ濃度を、以下の表３に報告する。
【００５４】
【表４】
2004521073.tif 000011
【００５５】
組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）経口デリバリー
ホスフェートバッファ中の、デリバリー剤化合物およびｒｈＧＨの経口胃腸管（ＰＯ）投与溶液を調製した。該化合物の溶液は、化合物のナトリウム塩を用いるか、もしくは、遊離酸をそのナトリウム塩に変換することによって調製した。典型的には、化合物溶液は、ナトリウム塩を調製する場合には１当量の水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を添加して、ホスフェートバッファ中で調製し、撹拌した。最終投与溶液は、該化合物をｒｈＧＨ株溶液（１５ｍｇ  ｒｈＧＨ／ｍｌ）と混合し、所望の容量（通常は３．０ｍｌ）に希釈することにより調製した。化合物およびｒｈＧＨ投与量を以下の表３に挙げる。
【００５６】
典型的な投与およびサンプリングプロトコールは以下のようである。２００−２５０ｇの体重のオスのスプラグ−ダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットを２４時間断食させ、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびクロルプロマジン（１．５ｍｇ／ｋｇ）を投与の１５分前に投与した。５匹のラットの１投与グループに、投与溶液の１つを投与した。経口胃腸管（ＰＯ）投与用に、１１ｃｍラッシュ（Ｒｕｓｃｈ）８フレンチカテーテルを、ピペット先端を有する１ｍＬシリンジにつけた。該シリンジに、カテーテルを通して該溶液を吸い込むことにより投与溶液で満たし、次いで、カテーテルを拭いて乾燥した。カテーテルをラットの切歯を通り越して１ｃｍ残して、食道に入れた。溶液をシリンジプラグを押すことによって投与した。
【００５７】
血液サンプルを、典型的には、経口投与間、時間＝０、１５、３０、４５、６０、および９０分で、尾の動脈から連続採取した。各時間から５サンプルをプールした。シーラムｒｈＧＨ濃度は、ｒｈＧＨ免疫アッセイテストキット（Ｋｉｔ  ＃Ｋ１Ｆ４０１５、Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡから入手）によって定量した。以前の研究より、約ゼロのベースライン値が示された。
各グループの最大濃度を、以下の表４に報告する。
【００５８】
【表５】
2004521073.tif 000012
【００５９】
上記特許、出願、試験方法、および文献は、その全てがここに参照して組み入れられる。
本発明の多くの変換は、上記詳細な説明を考慮すれば、当業者には示唆されるものであろう。これら全ての明白な変換は、本願クレームの範囲内のものである。
【国際公開パンフレット】
2004521073.tif 000015
2004521073.tif 000016
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004521073.tif 000046
【国際調査報告】
2004521073.tif 000047
2004521073.tif 000048
2004521073.tif 000049
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