(57)【要約】本発明は、器官の微小血管構造に詰まった血栓を除去する方法および組成物を開示する。血栓を除去するために、器官を、ストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤が充分な量で添加された適当な潅流溶液を用いて、潅流、フラッシュ、洗浄することが可能である。血栓溶解剤を用いた器官の潅流、フラッシュ、または洗浄工程は現存する血栓に対して血栓溶解を促進し、器官における新しい血栓の形成を防止し、および／または器官の血管構造を開き、これにより血管抵抗を減少させて流れを増加する。本発明の方法は、血栓溶解剤を使用する潅流において器官の生存率が維持および／または回復可能である器官潅流装置を使用して実施される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血栓溶解を促進するかまたは新しい血栓形成を防止するために血栓溶解剤を用いて器官を処理する方法であって、前記器官を血栓溶解剤含有潅流溶液を用いて潅流することを含んで構成される方法。
【請求項２】
前記器官がヒトから除去された器官である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記潅流が、
ａ）前記器官を潅流回路に連結すること、および
ｂ）前記器官を通った潅流溶液を再循環すること
を含んで構成される請求項１記載の方法。
【請求項４】
血栓溶解が実質的に完了しかつ測定したパラメータが受け入れ可能な限界値内にあることがわかるまで、前記潅流を行う請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記血栓溶解剤が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ、他の組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ、アニストレプターゼ、アニソイル化ストレプトキナーゼ、レテプラーゼ、および他の突然変異ｔＰＡからなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記血栓溶解剤がストレプトキナーゼである請求項１記載の方法。
【請求項７】
使用した血栓溶解剤の量が１０，０００および１，５００，０００ＩＵの間にある請求項６記載の方法。
【請求項８】
使用した血栓溶解剤の量が１００，０００および３００，０００ＩＵの間にある請求項６記載の方法。
【請求項９】
使用した血栓溶解剤の量が約５，０００から約５８，０００，０００ＩＵ、または約１０から約３０またはそれより多い単位である請求項１記載の方法。
【請求項１０】
使用した血栓溶解剤の量が約２５０，０００ＩＵである請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記潅流溶液が血管拡張剤をさらに含有する請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記潅流回路が６０ｍｍＨｇより低い収縮期圧を有する請求項３記載の方法。
【請求項１３】
前記潅流回路が４５ｍｍＨｇおよび６０ｍｍＨｇの間の収縮期圧を有する請求項３記載の方法。
【請求項１４】
前記潅流回路が約５０ｍｍＨｇの収縮期圧を有する請求項３記載の方法。
【請求項１５】
前記潅流溶液が２℃および１０℃の間の温度で再循環される請求項３記載の方法。
【請求項１６】
前記潅流溶液が約５℃の温度で再循環される請求項３記載の方法。
【請求項１７】
前記器官が１〜２０時間潅流される請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記器官が少なくとも４時間潅流される請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記器官が４〜１２時間潅流される請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記器官が心臓、肝臓、腎臓、肺、膵臓、および腸からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項２１】
血栓溶解を促進し、または新しい血栓の形成を防止するために、血栓溶解剤を用いて腎臓を処理する方法であって、血栓溶解剤含有潅流溶液を用いて前記腎臓を潅流することを含んで構成される方法。
【請求項２２】
前記腎臓がヒトから除去した腎臓である請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記潅流が、
ａ）前記腎臓を潅流回路に連結すること、および
ｂ）前記腎臓を通った潅流溶液を再循環すること
を含んで構成される請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
血栓溶解が実質的に完了しかつ測定したパラメータが受け入れ可能な限界値内にあることがわかるまで、前記潅流を行う請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記血栓溶解剤が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ、他の組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ、アニストレプターゼ、アニソイル化ストレプトキナーゼ、レテプラーゼ、および他の突然変異ｔＰＡからなる群から選択される請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
前記血栓溶解剤がストレプトキナーゼである請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
使用した血栓溶解剤の量が１０，０００および１，５００，０００ＩＵの間にある請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
使用した血栓溶解剤の量が１００，０００および３００，０００ＩＵの間にある請求項２６記載の方法。
【請求項２９】
使用した血栓溶解剤の量が約５，０００から約５８，０００，０００ＩＵ、または約１０から約３０またはそれより多い単位である請求項１記載の方法。
【請求項３０】
前記腎臓が１〜２０時間潅流される請求項２１記載の方法。
【請求項３１】
前記腎臓が４〜１２時間潅流される請求項２１記載の方法。
【請求項３２】
前記潅流溶液が約５℃の温度で再循環される請求項２２記載の方法。
【請求項３３】
前記潅流回路が４５ｍｍＨｇより高くかつ６０ｍｍＨｇより低い収縮期圧を有する請求項３３記載の方法。
【請求項３４】
前記潅流回路が約５０ｍｍＨｇの収縮期圧を有する請求項２２記載の方法。
【請求項３５】
器官を潅流、洗浄、またはフラッシュするための溶液であって、
ａ）潅流溶液、および
ｂ）血栓溶解剤
を含有し、
前記血栓溶解剤がストレプトキナーゼの場合には前記ストレプトキナーゼが少なくとも約１０，０００ＩＵの量で使用される、溶液。
【請求項３６】
前記潅流溶液が器官潅流装置の低温モードに対して最適化される請求項３５記載の溶液。
【請求項３７】
前記血栓溶解剤が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ、他の組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ、アニストレプターゼ、アニソイル化ストレプトキナーゼ、レテプラーゼ、および他の突然変異ｔＰＡからなる群から選択される請求項３５記載の溶液。
【請求項３８】
前記血栓溶解剤がストレプトキナーゼである請求項３５記載の溶液。
【請求項３９】
使用した血栓溶解剤の量が１０，０００および１，５００，０００ＩＵの間にある請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
使用した血栓溶解剤の量が１００，０００および３００，０００ＩＵの間にある請求項３８記載の方法。
【請求項４１】
使用した血栓溶解剤の量が約５，０００から約５８，０００，０００ＩＵ、または約１０から約３０またはそれより多い単位である請求項３５記載の方法。
【請求項４２】
前記潅流溶液が潅流の間イオン的かつ膨張的支持を提供する適当な器官保存媒体を含有する請求項３５記載の溶液。
【請求項４３】
前記潅流溶液が血管拡張剤をさらに含有する請求項３５記載の溶液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本件は非仮出願であり、本出願は２０００年８月２５日出願の米国仮出願第６０／２２７，８４３号の利益を請求する。この仮出願の完全な開示をここに参照して本発明に包含する。
【０００２】
本発明は器官や潅流に関する。特に、本発明は組織の生存率を高めるために、ストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤を用いた器官潅流のための組成物および方法に関する。
【０００３】
【従来の技術】
器官は、温かい虚血時間が本質的にゼロに限定される方法で獲得されるのが理想的である。不幸にして、多くの器官は長時間（すなわち、４５分またはそれより長時間）の温かい虚血の後に獲得されるのが実際である。温かい虚血の発作に加えて、赤血球凝集や血栓形成を伴う微小血管交番（ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎｓ）が生じ、器官の完全性に悪影響を与える。
【０００４】
心臓非鼓動のドナー（ＮＨＢＤ：ｎｏｎ−ｈｅａｒｔ−ｂｅａｔｉｎｇ ｄｏｎｏｒ）から得た器官は典型的に長時間温かい虚血にさらされており、その心臓停止の時間は非常に重要である。これにより、赤血球／白血球凝集さらに微小血栓による微小血管系の障害が形成される。Ｈａｎｓｅｎ氏等「Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｉｃ．」 （１９９７） ２９：３５７７； Ｋｕｒｏｅ 氏等「Ｅｕｒ． Ｓｕｒｇ． Ｒｅｓ．」（１９９１）２３：２０を参照のこと。実験的研究により、これらの障害によってＮＨＢＤから得た器官に高血管抵抗をもたらすことが示された。
【０００５】
重篤な傷を受けた条件の下で、心臓鼓動ドナーは過剰のフィブリノーゲンを生成し始め、これにより、播種性血管内凝固（ＤＩＳ：Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）として知られる状態を引き起こす。血液中の過剰なフィブリノーゲンは不溶性のフィブリンゲルに転化され、種々の器官の微小血管系に詰まる。ＤＩＣはドナー器官の流体入力および出力と共に凝固因子を評価することにより診断可能であるが、その状態を初期に見落とすことが珍しくない。一般に、ＤＩＣは移植チームや潅流技師が器官を検査するまで報告されない。この段階で、ＤＩＣは、器官の毛細血管の破裂による小さい赤い斑点である点状出血の観察により診断される。
【０００６】
一旦ＤＩＣが診断されると、移植外科医はその器官の処置に関して３つのうち一つを選択する必要がある：つまり、ａ）ＤＩＣが僅かであるとの希望を抱いて器官を移植する、ｂ）器官を廃棄する、ｃ）ＤＩＣを除去する試みとして器官を潅流する。器官の潅流では、血管の閉塞により、器官の血管に対して灌水溶液が平衡になるのを妨げる。これらの妨害物を除去するための現在のプロトコルは、器官を損傷する可能性のある流圧を増加させることかあるいは血管を拡張してフィブリン凝血塊を洗い流すための試みとしてレジチン（フェナトールアミン）等の血管拡張剤を使用することのいずれかである。あいにく、高圧潅流（例えば約６０ｍｍＨｇより高い圧力）は、特に高圧下で血管を拡張することにより血管自体を保護するための神経的または内分泌的連結を器官が保持していない低体温下においては、器官の血管内皮層を洗い去り、一般に器官組織を損傷する。
【０００７】
殆どの場合において、フィブリン凝血の除去は成功せず、器官は廃棄されることになる。潅流した器官を移植する場合には、洗流し手順の有効性が移植片の後の生存率に対する主な決定要因となる。Ｙａｍａｕｃｈｉ氏等「Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」（２０００年５月）６９（９）：１７８０−１７８４参照のこと。
【０００８】
器官の潅流は一般的に潅流機器を使用して行われ、かつ低温で実施される。重要な進歩は器官潅流装置の設計においてなされてきた。Ｄａｅｍｅｎ氏等「Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ」（１９９６）；「９Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ１」：Ｓ７６−８０参照のこと。この文献は器官の低温機器潅流が制御された圧力下で潅水を配送するダイアフラムポンプまたはローラーを用いた低圧が好ましいことを開示している。Ｙｌａｎｄ氏等「Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ」（１９９６）；９（６）：５３５−５４０参照のこと。多くの制御回路およびポンプ形態がこの目的達成かつ潅流器官機械加工のために一般的に使用されてきた。例えば、Ｓａｄｒｉの米国特許第５，３３８，６６２号明細書および第５，４９４，８２２号明細書、Ｂａｕｅｒ氏等の米国特許第４，７４５，７５９号明細書、Ｆａｈｙ氏等の米国特許第５，２１７，８６０号明細書および第５，４７２，８７６号明細書、Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ氏等の米国特許第５，０５１，３５２号明細書、Ｃｌａｒｋ氏等の米国特許第３，９９５，４４４号明細書、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ氏等の米国特許第４，６２９，６８６号明細書、Ｔｈｏｒｎｅ氏等の米国特許第３，７３８，９１４号明細書および第３，８９２，６２８号明細書、Ｂａｃｃｈｉ氏等の第５，２８５，６５７号明細書および第５，４７６，７６３号明細書、ｍｃＧｈｅｅ氏等の米国特許第５，１５７，９３０号明細書、およびＳｕｇｉｍａｃｈｉ氏等の米国特許第５，１４１，８４７号明細書を参照のこと。
【０００９】
種々の灌水溶液が、従来技術において、低体温における長時間の潅流後に器官の生物的機能を保存または維持する必要性に対処するために開発された。例えば、Ｗｉｋｍａｎ−Ｃｏｆｆｅｌｔの米国特許第５，０６６，５７８号明細書は多量のピルビン酸塩を含有する有機保存溶液を開示する。Ｗｉｋｍａｎ−Ｃｏｆｆｅｌｔは、ピルビン酸塩が器官にながれて解糖、つまり、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を使用してピルピン酸塩を生成する細胞エネルギーサイクルの段階、を迂回し、その後ピルビン酸塩はミトコンドリアでＡＴＰを生成する酸化的リン酸化に利用されることを開示している。Ｗｉｋｍａｎ−Ｃｏｆｆｅｌｔは温かい温度で、血液または器官の血管からの他の破片を除去するために、かつ血管を拡張して流れを増加し、正常な基質（すなわちピルビン酸塩）の形態で細胞にエネルギーを供給するために、ピルピン酸塩含有第１保存溶液で器官を潅流または洗浄することを開示している。その後、器官の働きを停止させ、最大流れが得られるように血管を拡張し、ピルビン酸塩で細胞を負荷し続け、器官のエネルギー状態を保存するために、器官をピルビン酸塩および低いパーセントのエタノールを含有した第２潅流溶液で潅流する。最終的に、その器官は４℃から１０℃の温度で２４時間かそれより長く多量の第１溶液中の保存される。
【００１０】
器官を潅流するために使用する他の溶液は以下のものを含む：すなわち、主にリン酸カルシウム、硫酸マグネシウムおよびグルコースからなるコリン溶液；硫酸マグネシウムが省略された「ユーロコリン」という修正コリン溶液；リン酸塩アニオンの多くがラクトビオネートで置き換わり、かつグルコースがラフィノースで置き換わったウィスコンシン大学溶液（ＵＷ溶液）（これは低体温貯蔵の間細胞が膨張する悪影響に対してより良好に保護をもたらすことがわかった）；および「ベルザーマシーン潅流溶液」をいう修正ＵＷ溶液。他の適当な溶液は例えばＢｒａｓｉｌｅの米国特許第５，６４３，７１２号明細書および第５，６９９，７９３号明細書、および第５，８４３，０２４号明細書、Ｂｒａｓｉｌｅ等の米国特許第５，５９９，６５９号明細書および第５，７０２，８８１号明細書、２０００年７月２８日に出願したＴａｙｌｏｒの米国特許出願第０９／６２８，３１１号明細書に記載されている。これらを参照して本発明に包含するものとする。これらはそれぞれ器官に対する別々の蘇生および保存溶液を開示している。
【００１１】
しかしながら、器官にこれらの灌水を流すことによっては器官の微小血管中の血栓形成により引き起こされた問題は軽減されない。血栓により形成された血管の閉塞によって２０℃またはそれより高い温度で貯蔵された器官における必要な酸素や他の栄養の配送が害されるのみである。さらに、効果的な溶液の使用を決定する前に、器官の生存率の評価が必要である。
【００１２】
ストレプトキナーゼ；ウロキナーゼ；アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ（ＴＮＫアーゼ）、または他の組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）；アニストレプターゼまたは他の形態のアニソイル化ストレプトキナーゼ；レテプラーゼ、または他の突然変異ｔＰＡ等の血栓溶解剤を病院で急な血栓溶解のためにおよび血栓症を治療するために使用した。これらの蛋白質は内因性プラスミノゲンからプラスミンへの転化を刺激することにより血栓の崩壊を促進する。しかし、これらの薬剤の使用は、急性血栓症または陥入症の治療に大きく限定されてきた。最近、血栓溶解剤が、血栓が形成されうる心臓、肺、脳の動脈、足の深部の血管、または留置静脈カテーテルまたは人工心臓弁で血栓溶解のために使用される。また、これらの薬剤は確立された冠状動脈血栓症を患う患者の心筋梗塞の管理のためにおよび虚血性脳卒中の治療のために使用される。これらの薬剤に関連する最も頻繁な薬害反応は過剰出血である。
【００１３】
最近では、山内他、「移植」（２０００年５月）６９（９）：１７８０〜１７８４において心臓非鼓動のドナー（ＮＨＢＤ）から提供された肝臓を２５℃で７，５００国際単位（Ｉ．Ｕ．）までストレプトキナーゼを有するリンガー溶液を使用してプレフラッシュすることのラットにおける利益が開示されている。プレフラッシュに続いて４℃でＵＷ溶液による潅流を行う場合、グラフト潅流の著しい改良が観察された。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
器官の脈管構造に捕捉されたフィブリン塊、過剰フィブリノーゲンおよび凝集血液細胞が移植の前および／または後に、器官を適正に潅流することを阻害するかまたは器官に不適切な機能を引き起こす。しかし、このような物質により引き起こされた問題は本発明により防止されまたは軽減されうる。本発明の潅流、診断および輸送体工程および装置は、形成された血栓を壊し、器官からの副生成物を分解し、器官に微小血栓形成を防止し、かつ器官の脈管構造を開くのに適当な量の血栓溶解剤を含有する潅流溶液を用いて器官を潅流、フラッシュ、または洗浄することを含む生体外法を提供する。
【００１５】
本発明は患者またはドナーから除去され、ＤＩＣがあると決定された器官を、器官の微小脈管構造につまったフィブリン塊を除去するために潅流するための組成物および方法に関する。本発明はストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤を適当な有効量で器官潅流溶液に添加することが、潅流の間のＤＩＣに対する有効な治療であることを発見した。この治療は同様ではあるが血栓溶解剤の必要なく潅流した非ＤＩＣ器官と等価な生存率にまで潅流した器官の生存率を改良でき、これにより移植が可能になる。
【００１６】
器官は、ストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤を添加した適当な潅流溶液を用いて潅流、フラッシュ、または洗浄される。血栓溶解剤含有潅流溶液による器官の潅流、フラッシュ、または洗浄により、形成された血栓は分解され器官から洗い流され、および／または器官における新しい血栓の形成が減少され、または防止され得る。したがって、この方法により、器官の脈管構造を開いて器官の微小脈管構造に対する潅流溶液のより均一な平衡を可能にする。潅流の質において得られた改良により、器官の低温保存、および器官移植の生存率が改良されるであろう。また、この方法を使用することにより、所望の手順を行った後、のちに戻す患者から除去した器官における合併症を最小限にすることが可能である。
【００１７】
この方法は、２０００年８月２５日に出願した米国特許出願第０９／６４５５２５に開示したような適当な潅流、診断、および／または輸送装置を使用して実施することが可能であり、参照によりこの開示全体を本発明に取り込む。これらの装置は、例えば、器官に対する虚血性損傷を修復し、再潅流の損傷を防止し、疾病の治療および／または損傷の治療および／または器官性能の増強のため等、潅流パラメータを調節し、細胞代謝を制御するための、器官の細胞化学を検出する能力を一般的に有する。このような装置の利点は、生体外治療のために器官を利用できる時間を、例えば時間単位（例えば２〜１２時間またはそれより長い時間）で、または日単位（例えば２〜１２日またはそれより多い日）でまたは週単位（例えば１〜８週またはそれより長い週）で延ばすことである。
【００１８】
この潅流、診断および／または輸送装置を使用して特定の血栓溶解剤等の薬剤または溶液を器官に提供することが可能であり、この特定の溶液や薬剤を用いて器官をフラッシュまたは洗浄することを含む特定の治療を行うことが可能である。血栓溶解剤を用いた治療および他の生体外治療を、移植されるべき器官について実施することができ、患者から取り出し所望の手順を終了した後患者に戻される器官に対して実施することができる。
【００１９】
例えば、器官について研究を実施するために、他の生体外技術および方法を個々におよび／または本発明の方法および組成物と組み合わせ使用することが可能である。器官が保存され、および／または保持される期間の間、研究および開発のために種々の薬剤および他の治療を器官についておよび／または器官を用いて実施できる。
【００２０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、患者またはドナーから取り出した器官を、その器官の微小血管に詰まった血栓を除去するために潅流する方法を提供する。さらに、本発明はこのような方法において有益な、潅流溶液等の組成物を別に提供する。
【００２１】
本発明の態様では、改変した潅流溶液を提供できる。改変した潅流溶液は有効量で血栓溶解剤を添加した適当な従来の潅流溶液を含む。
【００２２】
本発明の態様によると、適当な血栓溶解剤を使用することが可能である。適当な血栓溶解剤としては、非制限的にストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ（ＴＮＫアーゼ）、または他の組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）、アニストレプターゼまたは他の形態のアニソイル化ストレプトキナーゼ、レテプラーゼ、または他の突然変異ｔＰＡ、その混合物等である。記載のどの薬剤でも、特定の薬剤に対する選り好みなく使用可能である。選択は利用性、所望の投与量、供給／包装の仕方、使い安さ、および器官の型および所望の潅流温度等の使用条件に基づいてなされる。これらの薬剤は主には酵素（蛋白質）であり、温度感受性である。したがって、幾つかの薬剤は低温で活性が低下し得る。これらの薬剤を伴う製品資料は使用前に、貯蔵の間および所望の潅流温度における再構成後の製品の安定性を確かめる必要がある。ストレプトキナーゼは低温においても活性を維持する便利で広く使用可能な血栓溶解剤である。しかし、いずれの血栓溶解剤も使用できる。
【００２３】
血栓溶解剤を単独で、または適当な溶液や媒体に添加して使用可能である。好ましくは、希釈および使い易さのために、血栓溶解剤を適当な溶液と組み合わせてあるいはその一部として使用可能である。例えば、血栓溶解剤を、器官の潅流、フラッシュ、または洗浄のために使用する場合、血栓溶解剤を目的とするように再構成し、混合し、または適当な潅流、フラッシュ、または洗浄溶液に添加する。いずれの適当な潅流溶液も使用可能であり、非制限的にＶｉａＳｐａｎ （商標）（デュポン社により市場化されたＵＷ溶液）、Ｂｅｌｚｅｒ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｏｒｇａｎ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ から得られるＢｅｌｚｅｒ ＭＰＳ ）、Ｃｕｓｔｏｄｉａｌ （登録商標）（Ｓａｎｇｓｔａｔ から得られる心臓麻痺溶液）、ユーロコリン、乳酸化リンガー溶液、生理食塩水、またはデキストランおよびＨＥＳ（ヒドロキシルエチル）等の膨張剤を含有する他の結晶質溶液、２０００年７月２８日に出願した米国特許出願第０９／６２８、３１１に記載した溶液、これらの混合物等を例示可能である。これらの完全な開示を参照により本発明に取り込む。さらに、これらの溶液は洗浄またはフラッシュに使用可能であるが、器官を潅流する際には実際的ではない。
【００２４】
血栓溶解剤を潅流溶液等適当な溶液に添加するか、あるいは混合する場合、血栓溶解剤を適当または有効量で組み合わせることが可能である。例えば、本発明の態様では、器官の潅流において使用する場合、血栓溶解剤を国際単位（Ｉ．Ｕ．）約５，０００またはそれより少ない量から約５８，０００，０００またはこれより多い量で、または約１０単位またはそれより少ない量から約３０単位またはそれより多い量で、例えば約５０、１００または２００単位で組み合わせることが可能である。参照標準はその薬剤に対して特異的であり、他の薬剤に対して使用される単位で比較することはできない。しかし、本発明ではこのような量に限定されず、所望の、より少ないまたはより多い量で使用可能である。明らかなように、使用される血栓溶解剤の投与量は使用される血栓溶解剤および例えば温度、使用条件、潅流体積等の他の条件に応じて変わる。本発明の開示に基づいて、当業者は特定の用途に対して適当量の特定の血栓溶解剤を選択して使用可能である。
【００２５】
例えば、ストレプトキナーゼを使用する本発明の態様では、約５，０００Ｉ．Ｕ．またはそれより少ない量から約５，０００，０００Ｉ．Ｕ．またはそれより多い量で、好ましくは約１００，０００Ｉ．Ｕ．から約４００，０００Ｉ．Ｕ．で、より好ましくは約２５，０００または約５０，０００から約４５０，０００または約５００，０００Ｉ．Ｕ．で、または約２００，０００から約３００，０００Ｉ．Ｕ．の適当な量で使用可能である。ストレプトキナーゼは約２５０，０００、７５０，０００または１，５００，０００Ｉ．Ｕ．のボトルまたはバイアルで一般に市販されており、そのまま、または分割して、または１つまたはそれより多いボトルまたはバイアルで使用可能である。約２５℃の温度にてフラッシュ溶液においてストレプトキナーゼを使用する態様では、１０，０００Ｉ．Ｕ．またはそれより多い量で使用するのが好ましい。
【００２６】
ストレプトキナーゼを使用する他の態様では、その量は例えば５，０００Ｉ．Ｕ．またはそれより少ないような少ない範囲、または２５０，０００Ｉ．Ｕ．またはそれより多いような多い範囲であることが好ましい。例えば、ウロキナーゼは一般的に約５，０００Ｉ．Ｕ．のボトルまたはバイアルで市販されており、これらは一般にカテーテルクリアランスについて使用されるか、または２５０，０００Ｉ．Ｕ．のボトルまたはバイアルで市販されており、推薦される投与量は約３バイアルである。無論、この試薬はそのままでまたは分割してまたは１つまたはそれより多いボトルまたはバイアルの組み合わせて使用可能である。
【００２７】
他の非制限的な例として、レテプラーゼを１０Ｕドースの投与量に対して包装されている。アニストレプターゼは一般に３０単位のバイアルで市販されている。アクチバースは２９，０００，０００ｉ．Ｕ．の５０ｍｇバイアルまたは５８，０００，０００Ｉ．Ｕ．の１００ｍｇバイアルで一般に市販されている。
【００２８】
勿論、上記のいずれか、または他の血栓溶解剤を量を変えて本発明に応じて使用することが可能である。したがって、例えば、器官の潅流が不可能な環境下において、実際的なおよび／または所望のより多い量の血栓溶解剤を潅流溶液に添加することが可能であり、得られた溶液を使用して器官を洗浄またはフラッシュ可能である。
【００２９】
本発明の潅流溶液は従来のまたは後に開発された潅流、診断、および／または移送装置において一般的に使用可能である。これらは２０００年８月２５日出願米国特許出願第０９／６４５，５２５号に開示されており、この完全な開示を参照して本発明に取り込む。本発明の方法によって、該溶液を適当な期間このような潅流装置において使用可能である。例えば、該溶液を約１時間またはそれより短い時間から約２０時間またはそれより長い時間、好ましくは約１時間から約２０時間、より好ましくは約３時間から約１５時間、さらに好ましくは約４時間から約１２時間該装置において使用してフィブリノーゲンを溶解することが可能である。器官の潅流に最適な時間および温度は本発明の開示に照らしてルチーン的な実験により調節可能である。しかし、具体的には、温度は約２℃から約１０℃であり、好ましくは約５℃である。本発明の態様の最適な温度範囲（約１５℃またはそれより低い温度）のために、低温条件に対して最適な潅流溶液が好ましい。しかし、正常温度に対するような異なる温度または条件に対して最適な溶液に１種またはそれより多い血栓溶解剤を組み合わせて使用することにより、受け入れ可能な結果を本発明によって得ることができる。
【００３０】
本発明では、潅流法を使用して処理されるべき器官の血栓の数および／または大きさを減少または除去することが可能である。好ましくは、既に血栓が形成された器官の場合、潅流は血栓を実質的に除去するために充分な条件下で充分な時間行われる。血栓の充分な除去は、血管クリアランスの程度に相関がある、流量の増加および血管抵抗の減少により示される。血栓溶解について観察可能な他の指標は、流れ出る液の色である。流出液は、溶血した赤血球生成物が器官から押し出されるにつれて明るい赤色に変化するであろう。
【００３１】
さらに、潅流工程は、潅流装置内の収縮期圧が器官の血管構造を損傷しない条件で行われる。高圧潅流（例えば、約６０ｍｍＨｇより高い圧力）は器官の血管内皮層を洗い去り器官組織を損傷する。これは、器官が、高圧に応答して血管構造を拡張することにより器官自体を保護する神経系または内分泌系の連結を持たない低温における特別な問題である。
【００３２】
特別な圧力、潅流時間の長さ、および特定の温度は、潅流されるべき温度に応じて変わる。例えば、心臓および腎臓は約１０から１００ｍｍＨｇの圧力および約３〜５ｍｌ／分の流速で正常温度において約２から４時間までの間潅流されるのが好ましい。これらのパラメータでの潅流を設計して器官の虚血前のエネルギーレベルを回復および／または維持することにより器官の生存率を維持および／または回復する。したがって、これらの器官は好ましくは約１０〜３０ｍｍＨｇの圧力、約１〜２ｍｌ／分の流速、貯蔵および／または移送のための低温では約７２時間から７日の期間で潅流される。しかし、これらの基準は特定の器官の条件、ドナーの体、および／または被提供者および／または特定の器官の大きさに応じて変わる。当業者は特定の条件をこれらのガイダンスに照らして過度の実験をすることなく選択可能である。本発明の方法にしたがって潅流される他の器官としては非制限的に肝臓、膵臓、肺、および腸を例示可能である。
【００３３】
本発明を実施する際には、器官の初期条件を評価する必要がある。器官は、例えば溢血点、血管の数、大動脈プラークの数、器官の他の異常性についてチェックされる。適正に評価されると、その後、器官の動脈に適当な大きさのカニューレを挿管する。その後、この器官を、４５ｍｍＨｇの収縮圧のような適当な圧力に設定された潅流回路に置く。
【００３４】
器官は医学的流体、好ましくは合成の医学的流体で潅流され、それは例えば簡単な結晶性溶液であり、または適当な酸素キャリアを用いて増加される。例えば酸素キャリアは洗浄されて、安定化した赤血球、架橋ヘモグロビン、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）化ヘモグロビンまたはフルオロカーボンベースエマルジョンであり得る。また、この医学的流体は生理学的環境中で過酸化またはフリーラジカルの損傷を減少させることで知られる抗酸化剤および組織保護を助けることで知られる特定の薬剤を含んでもよい。酸素化（例えば、架橋ヘモグロビンベース炭酸水素塩）溶液が正常温度潅流に対して好ましく、一方、非酸素化（例えば抗酸化剤で良好に増加する簡単な結晶性溶液）溶液は低温潅流に対して好ましい。
【００３５】
器官の初期潅流では、正常温度モードおよび低温モードのいずれかにおいて使用される潅流溶液を、器官の血管内皮層を洗去ったり、または損傷することを減少または防止するために設計する。低温潅流モードおよびフラッシュおよび／または静置貯蔵に対して、好ましい溶液は２０００年７月２８日に出願された米国特許出願第０９／６２８，３１１号に開示された溶液である。この完全な開示を参照して本発明に取り込む。本発明の潅流溶液で使用可能な添加剤としてはＨａｓｓａｎｅｉｎ氏による米国特許第６，０４６，０４６号明細書に開示されており、参照により完全な開示を本発明に取り込む。無論、当業界で知られた、他の適当な溶液および材料を使用することが可能である。この溶液は上記の１種またはそれより多い血栓溶解剤を含有すべく改変可能である。
【００３６】
好ましくは、ドナー器官の状態および初期条件を決定する際に援助のために、ドナーの病歴をドナーのヒストリー中医学的に適切な情報について検討される。さらに、ドナーおよび他の適切なドナー情報の病院の管理を検討することが可能である。特に、ドナーの病歴はＤＩＣの診断またはＤＩＣの存在可能性の指標に対して検討される。ＤＩＣを診断するために使用される重要な情報に凝固因子の評価（例えば、プロトロンビン時間、または血漿トロンボプラスチン前駆物質（凝固因子ＸＩまたはＰＴＡ））が含まれ、これはしばしば器官への流体の出入りを伴う標準肝臓酵素試験の成分である。
【００３７】
流体の出入りおよび器官抵抗（圧／流れ）、ｐＨ、ｐＯ２、ｐＣＯ２、ＬＤＨ、Ｔ／ＧＳＴ、Ｔ−蛋白質、乳酸塩、グルコース、塩基過剰およびイオン化カルシウムレベル等の他の流体特性を使用して器官の生存率を解析および決定することが可能である。該特性は、種々の要因の効果を解析して決定するために、個々に解析可能であり、または多重特性を解析することが可能である。該特性は器官の静脈からの流出を捕らえて、灌水流入に対してその化学特性を比較することにより測定可能である。静脈からの流出は直接捕らえて測定可能であり、あるいは期間中にわたる比較のための流体特性の粗い概算を得るために器官バッチを測定することが可能である。
【００３８】
ＤＩＣを診断された器官では、潅流回路の収縮期圧を例えば５０ｍｍＨｇにまで増加することが可能であり、上記にように、血栓溶解剤を潅流溶液に添加する。例えば、本発明の態様では、５，０００から５００，０００単位、好ましくは１００，０００〜４００，０００単位、より好ましくは２００，０００〜３００，０００単位、さらに好ましくは約２５０，０００単位のストレプトキナーゼ等の血栓溶解剤を潅流溶液または材料に添加可能である。このような態様では、器官の潅流温度は任意に約２℃から約１０℃の間であり、好ましくは約５℃である。しかし、別の温度を使用することも可能であり、それは当業者には明らかである。
【００３９】
血栓溶解剤を用いた器官の潅流、フラッシュ、または洗浄により、形成されたフィブリン塊は分解されおよび／または器官における新しい塊の形成が防止可能である。これにより、血管構造が開かれ、器官の微小血管構造へ潅流溶液がより均一に平衡化できる。潅流品質における得られた改良により器官の冷温保存を改良するのみならず器官移植の生存率が改良される。この方法は、患者から取り出し所望の手順を行った後にその患者に戻す器官における混乱を最小にするためにも使用可能である。
【００４０】
ＤＩＣを減少または好ましくは除去した後、移植のために器官をさらに処理する。移植のための器官のさらなる処理は、必要性または所望の注文にける、低温潅流、正常温度潅流、および／または静置貯蔵のうち、１つまたはそれ以上である。
【００４１】
本発明により処理される器官は、疾病を治療し、および／または損傷を治療し、および／または器官特性を強化するために、機械的、物理的、化学的、または遺伝子操作および／または改変による生体外処理をさらに受けることができる。器官サンプルを第１のからだから取り出し、第１のからだの外で改変し、処理し、および／または解析し、そして第１のからだに戻すか第２のからだに移植される。器官を血栓溶解剤で処理する利点は、器官を生体外で利用できる時間を、器官の微小血管構造の閉塞を引き起こすという逆の効果をもたらすことなく、時間の単位で（２〜１２時間またはそれより長い時間）または日の単位で（例えば２〜１２日またはそれより長い時間）または週の単位で（例えば１〜８週またはそれより長い週）延ばすことができることである。
【００４２】
他の生体外処理は例えば壊死した組織を除去するために器官を切断・縫合すること等、器官に外科的技術を施すことを含む。生体内で器官に行われる外科的または他の治療法は生体外でも行うことができる。このような生体外処理の利点は例えば器官に存在する腫瘍を治療する放射線療法または化学的療法において見られる。生体外治療は、患者の他の部分が治療の間外来性の放射線または化学療法を受けることを防止する。本発明の方法および組成物により、器官に特別な技術を施す前、間および／または後に器官を維持するために、外科医に付加的な時間が提供される
【００４３】
非制限的に実施例としてヒトの腎臓に対して実施した本発明の方法を説明する。腎臓を心臓が鼓動する条件下でドナーから腎臓を取り出した。摘出の後、腎臓をＶｉａＳｐａｎ （商標）（デュポン社により市場化されたＵＷ溶液）、またはデキストランおよびＨＥＳ（ヒドロキシルエチル）等の膨張剤を含有する他の結晶質溶液、２０００年７月２８日に出願した米国特許出願第０９／６２８、３１１に記載した溶液（これらの完全な開示を参照により本発明に取り込む）等を非制限的に含む適当な溶液または材料を用いてフラッシュできる。
【００４４】
本発明の方法を以下に纏める。
Ａ．腎臓を評価し、挿管し、潅流回路に置く。
１．腎臓を溢血点、管の数、大動脈プラークの存在、他の血管異常について外観を評価する。
２．動脈に適当なサイズのカニューレを挿管する。
３．腎臓を収縮期圧４５ｍｍＨｇに設定された潅流回路に連結する。
Ｂ．ドナーの病歴を以下について検討する。
１．ドナーの医学的ヒストリー
２．ドナーの病院での管理、他のドナー情報
３．ＤＩＣの診断
Ｃ．ＤＩＣが診断された場合、潅流回路の収縮期圧を５０ｍｍＨｇに高め、２５０，０００Ｉ．Ｕ．のストレプトキナーゼを潅流溶液に添加する。
Ｄ．灌水を５℃で腎臓に再循環させる。
Ｅ．腎臓を４〜１２時間潅流してフィブリン塊を分解する。
Ｆ．ＤＩＣを除去した後、腎臓を移植のためにさらに処理する。
【００４５】
上記の方法は圧力や流量を必要性に応じて改変して、子供の小さい器官および大きな大人の器官に対して使用できる。塊および副生成物の分解物を器官からフラッシュすると、その器官の生存率を評価可能であり、その器官の処分が決定される。
【００４６】
【実施例】
以下のドナー評価マーカーのうち１つまたはそれより多い評価マーカーが存在する場合、腎臓を２５０，０００単位のストレプトキナーゼで処理する。つまり、ドナーの病歴におけるＤＩＣまたは他の凝集の問題について記載された資料、ドナーの流体バランス（流入対流出）における大きな相違、ピトレシンの使用、腎臓の溢血点の外観である。
【００４７】
標準プロトコルにしたがって、腎臓を生検し、挿管する。腎臓を器官保存回路に置き、潅流技術者がベースラインのデータを得るために、３０分の最小限の間圧力、流出量、挿管された血管の抵抗、浸透圧、ｐＨ、ｐＣＯ２、ｐＯ２、Ｋ＋、および器官の塩基過剰を監視する。血栓溶解剤として２５０，０００単位のストレプトキナーゼ（再構成して凍結乾燥された粉末）のボーラスを潅流回路に注射し、上記変数の監視を継続する。
【００４８】
潅流溶液にストレプトキナーゼを添加する前に初期流れおよび血管抵抗を測定する。灌水の正常な色および不透明度は黄色を帯びた透明である。しかし、腎臓がストレプトキナーゼのボーラスを受けた後は灌水は動脈血に似た明るい赤に変わる。操作期間にわたって、動脈側受け器の流れには赤い細胞の沈殿が観察される。ストレプトキナーゼが血栓溶解を促進する間にわって、腎臓の血管抵抗は減少し、流出量が増加する。したがって、ストレプトキナーゼを潅流溶液に添加した後１時間および４時間において流れおよび血管抵抗を測定する。流れおよび血管抵抗の最終測定値は潅流回路から腎臓を除去する直前に得る。表１に上記プロトコルにしたがった処理後の流量および血管抵抗についての効果を纏める。
【００４９】
一般に、移植に不適切な腎臓は生検結果が異常である（前述）かおよび／または潅流パラメータが許容限界の外にあるかのいずれかである。限界値は絶対的ではないが、移植に対して受け入れ可能な腎臓は１００ｍｌ／分より多い流量を示し、０．４００Ｒ単位より低い血管抵抗を有することが期待される。これらの基準に適合しない腎臓は、移植に不適切と考えられるため、「医学的に処分」され、廃棄される。
【００５０】
医学的に廃棄される腎臓の３つのグループ間の開始点および終了点の比較により、流量および抵抗値が３グループの器官間で有意に異なっていないことがわかる。次に移植される腎臓の２グループの開始点の比較により、これらの２グループは流量も抵抗値も有意には異ならないことがわかる。
【００５１】
しかし、移植されるＤＩＣ処理腎臓および移植される非ＤＩＣ腎臓間の終了点の比較により流量および抵抗の測定値にもほとんど有意な相違がないことがわかる。この結果から、ＤＩＣ腎臓のストレプトキナーゼ処理が、正常な非ＤＩＣ腎臓に類似した方法の潅流工程に対して有効であることを示しており、流量および抵抗値が受け入れられる終了点になる。したがって、この例では、この処理により、捨てられるはずであった、１４の腎臓の移植が可能になった。
【００５２】
しかし、移植されるＤＩＣ処理腎臓およびＤＩＣ非処理腎臓（これらの全ては廃棄されなければならなかった）間の終了点の同様な比較により、流量および抵抗測定値において統計的に有意な相違が示される（流量についてはｐ＜０．０００１、血管抵抗についてはｐ＝０．０００２）。ＤＩＣ未処理および非ＤＩＣ腎臓の終了点間の相違も有意である（流量についてはｐ＝０．０００２、抵抗についてはｐ＜０．０００１）。これらの結果から明らかにわかることは、これらの普通では廃棄される腎臓が移植できる可能性を持っていると考えられる場合にはＤＩＣ腎臓の血栓溶解処理が有効かつ必要であることである。
【００５３】
この実施例で使用した腎臓の種々の特徴およびこの腎臓の最終的な処置を表２に纏める。
【００５４】
血栓溶解剤を用いたドナー器官の処理はＤＩＣを除去することにより成功するが、この器官は潅流の前の以下の生検の顕微鏡による検査によってまだ廃棄される必要性があるかもしれない。高血圧により引き起こされた血管構造における変化、糖尿病の初期の徴候、腎臓の特別なケース、腎糸球体の硬化における変化が腎臓が移植に適さないとされ得る条件の例である。
【００５５】
本発明を特定の態様について説明したが、当業者には種々の改変が可能であることは明らかである。したがって、本発明の好ましい態様は例示に過ぎず、本発明を制限するものではない。本発明の範囲内で種々の変更が可能である。
【００５６】
６グループの腎臓における流量および血管抵抗
（表示した値は、平均値±ＳＥＭである。）
【表１】
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グループの定義：
ＤＩＣ処理：ＤＩＣを有すると診断され、ストレプトキナーゼを添加した潅流溶液を用いて潅流された腎臓
ＤＩＣ未処理：ＤＩＣを有すると診断され、ストレプトキナーゼを添加しない潅流溶液を用いて潅流された腎臓
非ＤＩＣ：ＤＩＣがなく、ストレプトキナーゼを添加しない潅流溶液を用いて潅流された腎臓
【００５７】
【表２】
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ＭＶＡ＝自動車事故
ＩＣＢ＝能内出血
ＧＳＷ＝銃で撃たれた傷
合計保存時間＝ドナーにおいて腎臓を交差金具でクランプしてから受取人において流れを回復するまで
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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