(57)【要約】本発明は、新規化合物および不適当、過剰または望ましくない脈管形成が起こっている、および／または過剰のＴｉｅ受容体活性が生じている哺乳動物の疾患の治療法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004521118.tif 000004
（Ｉ）
［式中：
Ｒ１はアリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックアルキル、アロイルおよびアルカノイルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックアルキル、アルケニル、シクロアルケニルおよびアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ１およびＲ２は独立して置換されていてもよい］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩、溶媒和物および水和物。
【請求項２】
Ｒ１はアリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がフェニル、チオフェン、ピリジニルおよびピラゾールからなる群から選択され、置換されていても、されていなくてもよい請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が置換フェニルである請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１置換基が、Ｃ１−１０アルキル、ハロ、ハロ置換Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、アミノ、一置換アミノおよび二置換アミノから選択される前記請求項のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１置換基が、メチル、フルオロ、クロロ、ＣＦ３、メトキシおよびジメチルアミノから選択される前記請求項いずれか一つに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、Ｃ１−１０アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロサイクリックからなる群から選択され、置換されていても、されていなくてもよい前記請求項いずれか一つに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、Ｃ１−１０アルキル、シクロアルキル、置換アリールおよびヘテロサイクリックからなる群から選択される前記請求項いずれか一つに記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、置換フェニルおよびピランからなる群から選択される前記請求項いずれか一つに記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が置換フェニルであり、Ｒ２がＣ１−１０アルキル、シクロアルキルおよびヘテロサイクリックからなる群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がＣ１−４アルキル、シクロヘキシルおよびテトラヒドロピラニルからなる群から選択される請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１置換基がハロおよびＣ１−４アルキルから選択される請求項１０または１１記載の化合物。
【請求項１３】
３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２’，２−［Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素］；
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素；
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素；
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素；
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素；および
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６−］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
からなる群から選択される化合物。
【請求項１４】
有効で無毒量の前記請求項いずれか一つに記載の化合物と、医薬上許容される担体または希釈剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】
これを必要とする哺乳動物においてＴＩＥ介在疾患を治療する方法であって、当該哺乳動物に有効量の請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１６】
哺乳動物におけるＴＩＥ介在疾患の治療において使用される請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項１７】
哺乳動物におけるＴＩＥ介在疾患の治療用医薬の製造における請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物の使用。
【請求項１８】
これを必要とする哺乳動物における過剰、不適当または望ましくない血管形成により特徴づけられる疾患の治療法であって、当該哺乳動物に有効量の請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１９】
哺乳動物における過剰、不適当または望ましくない血管形成により特徴づけられる疾患の治療において用いられる請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物。
【請求項２０】
哺乳動物における過剰、不適当または望ましくない血管形成により特徴づけられる疾患の治療用医薬の製造における請求項１〜１３のいずれか一つに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物における、不適当、過剰または望ましくない血管形成が起こっている疾患および／または過剰のＴｉｅ２受容体活性が起こっている疾患の治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性増殖性疾患は、炎症および／または増殖性状態に寄与するか、またはこれを維持するか、あるいは血管の侵襲性増殖による組織破壊につながる明らかな血管形成を伴う（Ｆｏｌｋｍａｎ，ＥＸＳ７９：１−８，１９９７；Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ１：２７−３１，１９９５；Ｆｏｌｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈｉｎｇ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１０９３１，１９９２）。
血管形成は一般に新規または置換血管の発生を説明するために用いられる。これは必要かつ生理学的に正常なプロセスであり、これにより血管系が胚において確立される。排卵、月経、および創傷治癒の部位を除いて、ほとんどの正常な成人組織において一般に血管形成は起こらない。しかしながら、多くの疾患は、持続的で無秩序な血管形成により特徴づけられる。例えば、関節炎において、新規毛細血管は関節に侵入し、軟骨を破壊する（Ｃｏｌｖｉｌｌｅ−Ｎａｓｈ  ａｎｄ  Ｓｃｏｔｔ，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，５１，９１９，１９９２）。糖尿病（および多くの異なる眼病）において、新規血管は黄斑または網膜または他の眼構造に侵入し、失明を引き起こす可能性がある（Ｂｒｏｏｋｓら、Ｃｅｌｌ，７９，１１５７，１９９４）。アテローム性動脈硬化症のプロセスは血管形成と関連する（Ｋａｈｌｏｎら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．８，６０，１９９２）。腫瘍成長および転移は血管形成依存性であることが判明している（Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ，３，６５，１９９２；Ｄｅｎｅｋａｍｐ，Ｂｒ．Ｊ．Ｒａｄ．６６，１８１，１９９３；Ｆｉｄｌｅｒ  ａｎｄ  Ｅｌｌｉｓ，Ｃｅｌｌ，７９，１８５，１９９４）。
【０００３】
血管形成の阻害物質を同定および開発するための研究にともなって、血管形成の主な疾患における関与は認識されてきた。これらの阻害物質は一般に血管形成カスケードにおける別個の標的に応じて；例えば、血管形成シグナルによる内皮細胞の活性化；分解酵素の合成および放出；内皮細胞移動；内皮細胞の増殖；および毛細管の形成に応じて分類される。従って、血管形成は多くの段階において起こり、これら様々な段階での血管形成をブロックするために作用する化合物を発見し、開発する試みが進行中である。
様々なメカニズムにより作用する血管形成の阻害物質がガンおよび転移（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、Ｃｅｌｌ，７９，３１５，１９９４；Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８，５５５，１９９０）、眼病（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７０，１５００，１９９５）、関節炎（Ｐｅａｃｏｃｋら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５，１１３５，１９９２；Ｐｅａｃｏｃｋら、Ｃｅｌｌ，Ｉｍｍｕｎ．１６０，１７８，１９９５）および血管腫（Ｔａｒａｂｏｌｅｔｔｉら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８７，２９３，１９９５）。
【０００４】
血管形成シグナルは特定のリガンドとその受容体との相互作用から生じる。Ｔｉｅ１およびＴｉｅ２受容体は、シグナル貫膜、チロシンキナーゼ受容体である（ＴｉｅはイムノグロブリンおよびＥＧＦホモロジードメインを有するチロシンキナーゼ受容体を表す）。両方とも最近クローンされ、いくつかのグループにより報告された（Ｄｕｍｏｎｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ８：１２９３−１３０１、１９９３；Ｐａｒｔａｎｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：１６９８−１７０７，１９９２；Ｓａｔｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ８：１２９３−１３０１、１９９３；Ｐａｒｔａｎｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：１６９８−１７０７，１９９２；Ｓａｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：９３５５−９３５８、１９９３）。
Ｔｉｅ受容体は、一つの推定膜貫通領域を有するおよそ１２５ｋＤａのタンパク質である。これらの受容体の細胞外ドメインは、いくつかの領域に分類される：ＥＧＦ−様ドメインにおいて見いだされるシステイン発現のパターンを有する３つの領域があり；イムノグロブリン様ドメインと弱い相同性を有し、構造的特徴を有する２つの領域があり；フィブロノネクチンＩＩＩ繰り返し構造と相同性を有する３つの領域がある。細胞外ドメインのこの特定の組み合わせはＴｉｅ受容体に特有である。Ｔｉｅ２の細胞内部分はＦＧＦ−Ｒ１、ＰＤＧＦ−Ｒおよびｃ−ｋｉｔのキナーゼドメインと最も緊密に関連する（〜４０％同一性）。Ｔｉｅ２の細胞内部分は、ＧＸＧＸＸＧ  ＡＴＰ結合部位コンセンサス配列および典型的なチロシンキナーゼモチーフ（すなわち、ＨＲＤＬＡＡＲＮおよびＤＦＧＬ）を含むチロシンキナーゼの特徴の全てを含む。
【０００５】
これらの受容体は、その発現において主に内皮細胞に限定される、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）以外の、唯一の受容体チロシンキナーゼであるので非常に興味深い。Ｔｉｅ２が血管形成において重要であることを示すいくつかの証拠があり、これは次の節で詳細に記載する。
ａ．Ｔｉｅ１およびＴｉｅ２受容体位置
ｉ．発生学的血管発生
胚におけるＴｉｅ受容体の位置はインサイチュハイブリダイゼーションを用いて多くの研究者により研究されている。Ｋｏｒｈｏｎｅｎら（Ｂｌｏｏｄ  ８０：２５４８−２５５５、１９９２）は、Ｔｉｅ受容体のｍＲＮＡは全ての血管を形成する内皮細胞およびマウス胚の心内膜に位置する。胚発生中、Ｔｉｅ受容体の発現は主なＶＥＧＦ受容体、Ｆｌｋ−１の発現の次に、マウス胚発生中１２〜２４時間までに起こり、おそらくこのことはこれらの受容体システムの連続した異なる作用を示唆する（ＳｃｈｎｕｒｃｈおよびＲｉｓａｕ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１１９：９５７−９６８，１９９３）。ｌａｃＺ遺伝子と結合し、トランスジェニックマウスにおいて発現されたＴｉｅ２の１．２Ｋｂゲノム５’フランキング領域のクローニングは、胚発生中の内皮細胞における発現の選択的パターンを示した（Ｓｃｈｌａｅｇｅｒら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２１：１０８９−１０９８，１９９５）。従って、ＴｉｅプロモーターはＴｉｅ２の内皮細胞特異的発現を確実にするために作用する。
【０００６】
ｉｉ．成人組織において
胚血管形成と異常な血管形成間の類似性から、腫瘍または慢性炎症環境においてＴｉｅ機能をブロックすることは、例えば、血管形成をブロックし、従ってさらに細胞増殖をブロックし、治療的効果をもたらすという仮説がたてられる。ＴｉｅｍＲＮＡは、肉芽組織における増殖毛細管が豊富なＴｉｅｍＲＮＡを含む活性な創傷治癒の部位を除いて成人の皮膚において観察できない（Ｋｏｒｈｏｎｅｎら、Ｂｌｏｏｄ８０：２５４８−２５５５，１９９２）。正常な皮膚から得られるｃＤＮＡのＰＣＲ増幅は、Ｔｉｅ受容体のシグナルを示さない（Ｋａｉｐａｉｎｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：６５７１−６５７７，１９９４）。対照的に、強力なシグナルが転移性黒色腫から得られるｃＤＮＡに関して見られ、インサイチュ研究によりこのシグナルは血管内皮に限定される。Ｔｉｅ受容体発現は確立された脈管構造において減少調節されるが、排卵中の卵巣、創傷および腫瘍（乳ガン、黒色腫および腎臓細胞癌）脈管構造においておこる血管形成においては、成人における血管形成が胚血管形成メカニズムを取り入れるという有力な見解と一致して増加調節される。
【０００７】
ｂ．Ｔｉｅノックアウト動物
Ｔｉｅノックアウトを有するか、または「優性阻害（ｄｏｍｉｎａｎｔ−ｎｅｇａｔｉｖｅ）」Ｔｉｅ受容体をエンコードする導入遺伝子を有するホモ接合体マウスは、Ｔｉｅ受容体が胚発生に重要であることを確証した（Ｄｕｍｏｎｔら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．８：１８９７−１９０９，１９９４；Ｓａｔｏら、Ｎａｔｕｒｅ３７６：７０−７４，１９９５）。これらのマウスにおける胚の死は、血管不全のために起こり、内皮細胞の数が非常に減少した。脈管形成（すなわち、内皮細胞の分化および血管のインサイチュ形成）はＴｉｅ２のないマウスにおいて比較的正常であるように見える。その後の発生および再造形（その結果、血管枝の形成（血管形成）が起こる）は、Ｔｉｅ２突然変異マウス胚において非常に減少する。このように発生および血管形成がないと、実質的に成長、特に脳、神経管および心臓の成長が遅れ、その結果、生存能力が不足する。このことは、血管形成におけるＴｉｅの重要性を例示する。血管形成は多くの成長因子により調節されるので、このことは明らかである。興味深いことに、Ｆｌｋ（ＶＥＧＦ受容体）ノックアウトマウスは脈管形成において胚芽に致命的な欠陥を示し、これはＴｉｅ２破壊よりも早く起こる。Ｔｉｅ受容体の破壊は、非常に異なり、後に欠陥表現型を生じ；マウス胚は、本来なら適格な血管系の不十分な統合性のために起こる出血のために発生の後期に死ぬ。併せて考えると、これらの研究は、ＶＥＧＦ／Ｆｌｋ１およびＴｉｅシステムは連続して作動し、Ｔｉｅ２は血管形成において重要な役割を果たすことを示唆している。
【０００８】
ｃ．Ｔｉｅ２リガンド
最近、Ｔｉｅ２受容体の２つのリガンドが報告されている。アンギオポエチン１は結合し、Ｔｉｅ２のチロシンリン酸化を誘発し、そのインビボでの発現は血管の発生と近接している（Ｄａｖｉｓら、Ｃｅｌｌ８７：１１６１−１１６９，１９９６）。アンギオポエチン１が欠損するように操作されたマウスは、Ｔｉｅ２受容体のないマウスにおいてすでに見られるような脈管形成欠損を示し、このことはアンギオポエチン１がＴｉｅ２の主な生理学的リガンドであり、Ｔｉｅ２は重要なインビボ血管形成作用を有することを示す（Ｓｕｒｉら、Ｃｅｌｌ８７：１１７１−１１８０，１９９６）。アンギオポエチン２は同一性スクリーニングにより同定され、Ｔｉｅ２受容体の天然に存在する拮抗物質であることが示された。アンギオポエチン２のトランスジェニック過剰発現は、マウス胚において血管形成を妨害する（Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７７：５５−６０，１９９７）。これらの結果はあわせて、血管形成におけるＴｉｅ２受容体の役割を立証する。
【０００９】
ｄ．Ｔｉｅ阻害
血管形成におけるＴｉｅ受容体の重要性に基づいて、Ｔｉｅ２キナーゼ活性の阻害は、血管形成を妨害し、疾患特異的治療効果をもたらすと予想される。最近、Ｌｉｎら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２０７２−２０７８，１９９７）は、外来的に投与された可溶性Ｔｉｅ２受容体が動物モデルにおいて血管形成および癌の増殖を阻害することを証明した。従って、他の手段によるＴｉｅ２受容体の阻害、例えば、Ｔｉｅ２受容体キナーゼ活性の阻害は、血管形成を含む増殖性疾患において治療的有用性を有することが期待される。
本出願は、特定の構造を有する化合物はＴｉｅ２受容体のキナーゼ活性、そのシグナル変換を阻害でき、従って血管形成のシグナルを阻害することにより増殖性疾患について有用であるという新たな知見を示唆する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は新規化合物がＴｉｅ２キナーゼを阻害でき、これらの化合物は過剰または不適当な血管形成により引き起こされる慢性炎症性または増殖性または血管形成疾患を治療するために血管形成を阻害するために用いることができるという発見である。Ｔｉｅ２受容体キナーゼ阻害剤として用いられる好ましい化合物は、本明細書に記載する式（Ｉ）の化合物（その医薬上許容される塩、水和物および溶媒和物を包含する）である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明はＴｉｅ受容体キナーゼ阻害剤の阻害と関連した疾患の治療において用いられる式（Ｉ）の新規化合物に関する。
従って、本発明は式（Ｉ）の化合物およびその医薬上許容される塩、溶媒和物、および水和物（以下、包括的に「式（Ｉ）の化合物」と称する）：
【化１】
2004521118.tif 000002
（Ｉ）
（式中：
Ｒ１はアリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックアルキル、アロイル、およびアルカノイルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、およびアルキニルからなる群から選択され；
Ｒ１およびＲ２は独立して所望により置換されていてもよい）
を提供する。
【００１２】
本明細書で用いられる場合、次の用語は以下のことを意味する；
・「Ｃ１−１０アルキル」または「アルキル」−鎖の長さが限定されなければ、１〜１０の炭素原子を有する直鎖および分岐鎖ラジカルの両方を意味し、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびｎ−ペンチルを包含する。
・「シクロアルキル」は本発明において、好ましくは３〜８個の炭素原子を有する炭素環式ラジカルを意味し、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを包含する。
・「アリール」−フェニルおよびナフチル。
・「ヘテロアリール」（それ自体または任意の組み合わせ、例えば、「ヘテロアリールオキシ」または「ヘテロアリールアルキル」において）−１またはそれ以上の環が１またはそれ以上のＮ、ＯまたはＳからなる群から選択されるヘテロ原子を含む５〜１０員芳香環系、例えば、これらに限定されないが、ピロール、ピラゾール、フラン、チオフェン、キノリン、イソキノリン、キナゾリニル、ピリジン、ピリミジン、オキサゾール、チアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、イミダゾール、またはベンズイミダゾール。
・ヘテロサイクリック（それ自体または任意の組み合わせ、例えば、「ヘテロサイクリルアルキル」において）−１またはそれ以上の環がＮ、Ｏ、またはＳからなる群から選択される１またはそれ以上のヘテロ原子を含む飽和または部分的不飽和４〜１０員環系、例えば、これらに限定されないが、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロピラン、ピラン、またはイミダゾリジン。
・「アラルキル」または「ヘテロアリールアルキル」または「ヘテロサイクリックアルキル」は、本明細書において、特に明記しない限り、ベンジルおよびフェネチルを含む本明細書において定義されたアリール、ヘテロアリールまたはヘテロサイクリック部分に結合した前記定義のＣ１−４アルキルを意味する。
・「アロイル」−Ｃ（Ｏ）Ａｒ（式中、Ａｒはフェニル、ナフチル、または前記定義のようなアリールアルキル誘導体）。
・「アルカノイル」−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−１０アルキル（アルキルは前記定義の通りである）。
・「アルケニル」は、本明細書においてあらゆる場合において特に鎖長が限定されなければ、２〜１０個の炭素原子を有し、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖ラジカルを意味し、これらに限定されないが、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、および２−ブテニルを包含する。
・「シクロアルケニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有し、好ましくは５〜８個の炭素原子を有する環状ラジカルを意味し、これらに限定されないが、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルを包含する。
・「アルキニル」は、本明細書においてあらゆる場合に、特に鎖長が規定されない限り、２〜１０個の炭素原子を有し、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖ラジカルを意味し、これらに限定されないが、プロピニル、１−ブチニル、および２−ブチニルを包含する。
・「ハロ」または「ハロゲン」は、ハロゲン：クロロ、フルオロ、ブロモおよびヨードを包含する。
【００１３】
本明細書において用いられる場合、「置換されていてもよい」とは、特に定義しない限り、１またはそれ以上の基、例えば：
・ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）；
・ヒドロキシ；
・ヒドロキシ置換Ｃ１−１０アルキル；
・Ｃ１−１０アルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）；
・Ｓ（Ｏ）ｍアルキル（式中、ｍは０、１または２である）（例えば、メチルチオ、メチルスルフィニルまたはメチルスルホニル）；
・アミノ；
・一置換アミノ（例えば、モノＣ１−６アルキル置換アミノ）；
・二置換アミノ（例えば、ジ−Ｃ１−６アルキル置換アミノ）；
・Ｃ１−１０アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチルなど）；
・シクロアルキル；
・シクロアルキルアルキル（例えば、シクロプロピルメチル）；
・ハロ置換Ｃ１−１０アルキル（例えばＣＦ３）；
・アリール（例えばフェニル）またはアラルキル（例えば、ベンジルまたはフェネチル）（ここにおいて、アリール部分は前記定義のハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシ置換アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｓ（Ｏ）ｍアルキル、アミノ、一置換アミノ、二置換アミノ、Ｃ１−１０アルキル、またはハロ置換Ｃ１−１０アルキルで１〜２回置換されていてもよい）；
・アルケニル；
・アルキニル
で置換されている部分を意味する。
【００１４】
Ｒ２がアルケニル、シクロアルケニル、またはアルキニルである場合、不飽和結合、すなわち、ビニレンまたはアセチレン結合は好ましくは窒素と直接結合しない。同様に、化合物がアルケニルまたはアルキニル置換基を含まない場合、ビニルまたはアセチレン結合は好ましくは該化合物中に存在し得る窒素、酸素または硫黄と直接結合しない。
Ｒ１は、好ましくは、置換または非置換アリール（さらに好ましくはフェニル）およびヘテロアリールから選択され、さらに好ましくは、置換フェニルである。Ｒ２は好ましくは、Ｃ１−１０アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロサイクリックから選択される。例えば、Ｒ１は適当に置換されているかまたは置換されていないフェニル、チオフェン、ピリジニル、またはピラゾールである。このような置換されたＲ１の置換基は、さらに適当には１またはそれ以上、好ましくは１〜２の、Ｃ１−１０アルキル（好ましくはメチル）、ハロ（好ましくはフルオロ、クロロ）、ハロ置換Ｃ１−１０アルキル（好ましくはＣＦ３）、Ｃ１−１０アルコキシ（好ましくは、メトキシ）、アミノ、一置換アミノ、および二置換アミノ（好ましくはジメチルアミノ）から選択される基である。Ｒ１がフェニル誘導体である場合、置換基は、適当には、例えば、環の２−、３−、２，５−、２，６−、３，４−または３，５−位にある。Ｒ１がチオフェンまたはピラゾール誘導体である場合、置換基は、適当には、例えば環の２−位にある。
【００１５】
例えば、Ｒ２は適当には、Ｃ１−１０アルキル（好ましくはＣ１−４アルキル）、シクロアルキル、置換アリール（好ましくは置換フェニル）、およびヘテロサイクリックから選択される。さらに適当には、Ｒ２はメチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、置換フェニルおよびピランからなる群から選択される。置換フェニルは、さらに適当には、１またはそれ以上、好ましくは１〜２個の、ハロ（好ましくはフルオロ、クロロ）、およびＣ１−１０アルコキシ（好ましくはメトキシ）からなる群から選択される基で置換されている。Ｒ２がフェニル誘導体である場合、置換基は、適当には、例えば環の３−、４−、または３，４−位にある。
特に適当な化合物は、Ｒ１が置換フェニルであり、Ｒ２がＣ１−１０アルキル、シクロアルキル、またはヘテロサイクリック、さらに好ましくは、Ｃ１−４アルキル（例えば、ｔ−ブチル、メチル）、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピラニルである化合物を包含する。このようなＲ１について好ましい置換基は、ハロ（例えば、クロロ、フルオロ）およびＣ１−４アルキル（例えば、メチル）、例えば、２，６−ジクロロ、２−クロロ−６−フルオロ、および２，５−ジメチルである。
【００１６】
好ましいのは、次の化合物である：
３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２’−２−［Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素］；
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素；
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素；
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素；
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素；および
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素。
【００１７】
適当な医薬上許容される塩は当業者には周知であり、無機および有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、琥珀酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸の塩基性塩を包含する。加えて、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、例えば置換基がカルボキシ部分を含むならば、医薬上許容されるカチオンを用いて形成することもできる。適当な医薬上許容されるカチオンは、当業者には周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウムおよび第四アンモニウムカチオンを包含する。
本発明の化合物は、立体異性体、レジオアイソマーまたはジアステレオマーとして存在し得ると認識される。これらの化合物は、１またはそれ以上の不斉炭素原子を有し、ラセミまたは光学的に活性な形態において存在し得る。これらの化合物の全ては、本発明の範囲に含まれる。
【００１８】
合成法
以下で、本発明の化合物が容易に入手可能な出発物質からどのようにして調製できるかを説明する。
【化２】
2004521118.tif 000003
文献（Ｈａｗｅｓ、Ｅ．Ｍ．；Ｇｏｒｅｃｋｉ、Ｄ．Ｋ．Ｊ．Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．１９７２，９（３）、７０３）の方法による置換アセトニトリルとの４−アミノニコチンアルデヒド（Ｔｕｒｎｅｒ，Ｊ．Ａ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８３，４８，３４０１）の縮合により、２−アミノ−３−置換１，６−ナフチリジンが得られる。２−アミノ−３−置換１，６−ナフチリジン中間体の置換イソシアネートとの標準的条件下での反応により、２−ウレア−３−置換１，６−ナフチリジンが得られる。
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される酸付加塩は、公知方法、例えば、これを適当な溶媒の存在下、適当量の酸で処理することにより得ることができる。
【００１９】
本発明の化合物は、過剰またはそうでなければ不適当または望ましくない血管形成により悪化または特徴づけられる疾患常態の治療または予防において用いることができる。本明細書において用いられる「過剰またはそうでなければ不適当または望ましくない血管形成」なる用語は、これらに限定されないが、血管腫および眼病により特徴づけられる疾患、組織増殖を伴う血管（脈管構造）増殖により特徴づけられる疾患、例えば癌、転移、関節炎、乾癬およびアテローム性動脈硬化症において起こるもの、眼血管新生、例えば、糖尿病性網膜症および黄斑変性、腫瘍増殖および転移、アテローム性動脈硬化症、およびある種の関節炎状態を包含する。本発明のＴｉｅチロシンキナーゼ受容体阻害剤は、これらの疾患常態の血管形成成分のブロッキングにおいて有用である。
本発明の化合物を療法において用いるためには、これは通常、標準的調剤例に従って医薬組成物に処方される。従って、本発明は有効かつ無毒量の式（Ｉ）の化合物とその医薬上許容される担体または希釈剤とを含んでなる医薬組成物にも関する。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物、およびかかる化合物を組み入れた医薬組成物は、薬物投与に通常用いられる任意の経路、例えば、経口、局所、非経口または吸入により都合よく投与することができる。式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を標準的医薬担体と通常の手順に従って組み合わせることにより調製することができる。式（Ｉ）の化合物はまた、公知の第二の治療的に活性な化合物と組み合わせて通常の投与形態において投与することもできる。これらの手順は、成分を混合、顆粒化および圧縮し、または必要に応じて溶解して所望の製剤にすることを含む。医薬上許容される特性または希釈剤の形態および特徴は、組み合わせられる活性成分の量、投与経路および他の周知の変数により規定されることは理解されるであろう。担体は、処方の他の成分と適合性であり、受容者に対して有害でないという意味で「許容」されなければならない。
用いられる医薬担体は、例えば、固体または液体のいずれかであってよい。固体担体の例は、ラクトース、白陶土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などである。液体担体の例は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、水などである。同様に、担体または希釈剤は、当該分野に周知の遅延物質、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートを単独またはワックスとともに含んでもよい。
【００２１】
広範囲に及ぶ医薬形態を用いることができる。従って、固体担体が用いられる場合、製剤は、錠剤にするか、散剤またはペレット形態でハードゼラチンカプセル中に入れるか、あるいはトローチまたはロゼンジの形態にすることができる。固体担体の量は広範囲にわたって変化し得るが、好ましくは約２５ｍｇないし約１ｇである。液体担体を用いる場合、製剤は典型的にはシロップ、エマルジョン、ソフトゼラチンカプセル、滅菌注射可能な液体、例えばアンプルまたは非水性液体懸濁液の形態にされる。
式（Ｉ）の化合物は、非全身的（すなわち、化合物は著しく血液流中に侵入しない）、例えば、局所的に投与することができる。これは、式（Ｉ）の化合物を表皮または口腔に外部から適用すること、およびこのような化合物を耳、眼または鼻の中に滴下することを含み、該化合物が著しく血液流中に侵入しないようにする。
【００２２】
局所投与に適した処方は、疾患／炎症の部位に対して皮膚を通して浸透するために適した液体または半液体製剤、例えば、リニメント、ローション、クリーム、軟膏またはペースト、および眼、耳または鼻への投与に適した滴剤を含む。活性成分は、局所投与については、処方の０．００１％ないし１０％ｗ／ｗ、例えば、１％ないし２重量％を構成する。処方の１０％ｗ／ｗまでであってもよいが、５％ｗ／ｗ以下、さらに好ましくは０．１％ないし１％ｗ／ｗを構成する。
成する。
本発明のローションは、皮膚または眼への適用に適したものを含む。眼ローションは所望により殺菌剤を含んでもよい滅菌水性溶液を含んでもよく、滴剤の調製法と同様の方法により調製できる。皮膚へ適用するためのローションまたはリニメントは、乾燥を速め、皮膚を冷却する薬剤、例えば、アルコールまたはアセトン、および／またはモイスチャライザー、例えば、グリセロールまたは油、例えば、ヒマシ油または落花生油も含むことができる。
【００２３】
本発明のクリーム、軟膏またはペーストは、外部適用するための活性成分の半固体処方である。これらは、微粉砕または粉末化形態の活性成分を、単独あるいは水性または非水性液体中溶液または懸濁液中で、適当な機械の助けを借りて、グリース状または非グリース状基剤と混合することにより製造される。基剤は炭化水素、例えば、固体、液性または流動パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属セッケン；粘液；天然起源の油、例えば、アーモンド油、トウモロコシ油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油；羊毛脂またはその誘導体または脂肪酸、例えば、ステアリン酸またはオレイン酸をアルコール、例えばプロピレングリコールまたはマクロゲルとともに含んでもよい。処方は、任意の適当な界面活性剤、例えば、アニオン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤、例えばソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体を組み入れることができる。懸濁化剤、例えば、天然ゴム、セルロース誘導体または無機物質、例えば、珪質シリカ、および他の成分、例えば、ラノリンも含めることができる。
【００２４】
本発明の滴剤は、滅菌水性または油性溶液または懸濁液を含んでもよく、活性成分を殺菌剤および／または殺真菌剤および／または任意の他の適当な防腐剤の適当な水性溶液中に溶解させることにより調製することができ、好ましくは界面活性剤を含む。結果として得られる溶液は、濾過により透明にし、適当な容器に移し、これを次いで密封し、９８〜１００℃で半時間、オートクレーブ処理または維持することにより滅菌する。別法として、溶液を、濾過により滅菌し、無菌技術により容器に移すこともできる。滴剤中に含めるために好適な殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝酸または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、ベンザルコニウムクロリド（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油性溶液を調製するための適当な溶媒は、グリセロール、希アルコールおよびプロピレングリコールを含む。
式（Ｉ）の化合物は、全身的、例えば、経口または非経口（すなわち、静脈内、筋肉内、皮下、鼻内、直腸内、膣内または腹膜組織内投与）的に投与することができる。非経口投与の皮下および筋肉内形態が一般に好ましい。このような投与の適当な投与形態は、通常の技術により調製することができる。式（Ｉ）の化合物は、吸入、すなわち、鼻内および経口吸入投与により投与することができる。このような投与のための適当な投与形態、例えばエアゾル処方または計量式吸入器を通常の技術により調製することができる。他の経口投与のための適当な投与形態は、通常の技術により調製することができる。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物は、Ｔｉｅ受容体活性を阻害して、正常なレベルまで、あるいは場合によっては正常以下のレベルまで下方調節し、疾患常態を改善または予防するために十分な量において投与される。
本明細書において開示された式（Ｉ）の化合物の全ての使用法について、一日経口投薬レジメは、好ましくは全体重１ｋｇあたり約０．１ないし約８０ｍｇであり、好ましくは、約０．２ないし約３０ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは約０．５ないし約１５ｍｇ・ｋｇである。一日非経口投薬レジメは、全体重１ｋｇあたりの約０．１ないし約８０ｍｇであり、好ましくは約０．２ないし約３０ｍｇ／ｋｇであり、さらに好ましくは約０．５ｍｇないし約１５ｍｇ／ｋｇである。一日局所投薬レジメは、好ましくは０．１ｍｇないし約１５０ｍｇであり、毎日１ないし４回、好ましくは２または３回投与される。一日吸入投薬レジメは、好ましくは一日につき約０．０１ｍｇ／ｋｇないし約１ｍｇ／ｋｇである。式（Ｉ）の化合物の最適量および個々の投薬の間隔は、治療される状態の性質および程度、投与の形態、経路および部位、ならびに治療される特定の患者により決められ、このような最適値は通常の技術により決定できることも、当業者には理解されるであろう。治療の最適経路、すなわち、所定の日数の間、一日当たり投与される式（Ｉ）の化合物の投与回数は、治療決定試験の通常の手続きを用いて当業者が確定できる。
本発明の化合物を前記投薬レジメにおいて投与する場合に、有毒な効果は予想されない。
【００２６】
合成例
本発明を、単に例示的であって、本発明の範囲を制限すると解釈されない次の実施例に関連して説明する。
全ての温度は、摂氏度（℃）で記載し、全ての溶媒は入手可能な最高の純度であり、全ての反応は特に明記しない限りアルゴン雰囲気中、無水条件下で行う。マススペクトルは特に明記しない限り、ＶＧ  Ｚａｂマススペクトロメーターで、高速原子衝撃を用いるか、またはキャリア溶媒として９５：５ＣＨ３ＣＮ／ＣＨ３ＯＨと１％ギ酸を用いて、陽イオンモードにおいてミクロマスプラットホームエレクトロスプレーイオン化マススペクトロメーターで行った。１Ｈ  ＮＭＲ（以下、「ＮＭＲ」）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭ２５０またはＡＭ分光計を用いて２５０ＭＨｚで記録した。多重度は、ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線であり、ｂｒはブロードなシグナルを示す。Ｓａｔ．は、飽和溶液を表し、ｅｑは主な反応物質に対する試薬のモル当量の割合を表す。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）上で行う。
【実施例１】
【００２７】
３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２’−２−［Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素の調製
ａ）４−アミノニコチンアルデヒド
この実施例および他の実施例において、Ｔｕｒｎｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８３，４８，３４０１の方法により調製する。
ｂ）３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２−アミン
４−アミノニコチンアルデヒド（１００ｍｇ、０．７８ミリモル（以下、「ｍｍｏｌ」と記載）、２，６−ジクロロフェニルアセトニトリル（２１７ｍｇ、１．２ミリモル）、１０％水性ＮａＯＨ（０．１０ｍＬ、０．２５ミリモル）および７０μＬの無水エタノールを合わせて、６５℃で２４時間（以下、「ｈ」と記載）加熱する。反応混合物を周囲温度に冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させる。残留物を７００μＬのＤＭＳＯで希釈し、濾過し、分取逆相クロマトグラフィーで精製して、黄色固体として標記化合物を得る（１９１ｍｇ、収率８４％）。ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２９０
ｃ）３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２’−２−［Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素］
３−［２，６−ジクロロフェニル］−１，６−ナフチリジン−２−アミン（５１ｍｇ、０．１７６ミリモル）およびｔ−ブチルイソシアネート（１７ｍｇ、０．１７６ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中に溶解させる。ＮａＨ［６０％鉱油中分散液（７ｍｇ、０．１７６ミリモル）］を添加し、２４時間撹拌する。反応を濾過し、ＤＭＦ（１ｍＬ）で洗浄する。残留物を濃縮し、シリカゲル上クロマトグラフィーにより精製し、２５：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨで溶出して、白色固体として標記化合物を得る（２５ｍｇ、収率３６％）。ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９０。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：９．３２（ｓ、１Ｈ）、８．７２（ｍ、１Ｈ）、８．４０（ｍ、１Ｈ）、７．９５（ｍ、１Ｈ）、７．５５（ｍ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）。
実施例２〜７９は、ニトリルおよび／またはイソシアネートを以下に示すように工程（ｂ）および／または（ｃ）において変える以外は、実施例１と同様にして調製する。
【実施例２】
【００２８】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリルを用いる以外は、実施例１ｂおよびｃと同様。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３４９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３】
【００２９】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４】
【００３０】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロフェニルアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５】
【００３１】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトのトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３４９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６】
【００３２】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−ピリジン−２−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−ピリジルアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２２（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７】
【００３３】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３５１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例８】
【００３４】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３５７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例９】
【００３５】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−ｔｅｒｔ−ブチル−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３６９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１０】
【００３６】
１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリルを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３３５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１１】
【００３７】
１−シクロヘキシル−３−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１２】
【００３８】
１−シクロヘキシル−３−［３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３−（５−ジメチルアミノ）−［１，３，４］オキサジアゾール）−アセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８２（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１３】
【００３９】
１−シクロヘキシル−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＣ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３５３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１４】
【００４０】
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−シクロヘキシル−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１５】
【００４１】
１−シクロヘキシル−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１６】
【００４２】
１−シクロヘキシル−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１７】
【００４３】
１−シクロヘキシル−３−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１８】
【００４４】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−シクロヘキシル−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例１９】
【００４５】
１−シクロヘキシル−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてシクロヘキシルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３６１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２０】
【００４６】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール）−アセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１８（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２１】
【００４７】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２２】
【００４８】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（３，５−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３，５−ビス−トリフルオロメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝５１９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２３】
【００４９】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４３５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２４】
【００５０】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２５】
【００５１】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−（３−ピリジン−２−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−ピリジルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８４（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２６】
【００５２】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２７】
【００５３】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２８】
【００５４】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて５−アセチルチオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４３１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２９】
【００５５】
１−（３−アセチル−フェニル）−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて３−アセチル−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３０】
【００５６】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３１】
【００５７】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３−（５−ジメチルアミノ［１，３，４］オキサジアゾール）−アセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２８（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３２】
【００５８】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３３】
【００５９】
１−［３−（ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−３−（クロロ−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて３，５−ビス−トリフルオロメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝５２９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３４】
【００６０】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４４５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３５】
【００６１】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３６】
【００６２】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３７】
【００６３】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３８】
【００６４】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４４１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３９】
【００６５】
１−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて３−クロロ−４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４０７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４０】
【００６６】
１−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４１】
【００６７】
１−［３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール）−アセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８４（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４２】
【００６８】
１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３５５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４３】
【００６９】
１−［３−（ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３，５−ビス−トリフルオロメチル−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４４】
【００７０】
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４０１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４５】
【００７１】
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４６】
【００７２】
１−（３−ピリジン−２−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−ピリジルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３５０（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４７】
【００７３】
１−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４８】
【００７４】
１−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例４９】
【００７５】
１−（テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてテトラヒドロ−ピラン−２−イソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３６３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５０】
【００７６】
１−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５１】
【００７７】
１−エチル−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２９９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５２】
【００７８】
１−［３−（ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて３，５−ビス−トリフルオロメチル−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４２９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５３】
【００７９】
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３４５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５４】
【００８０】
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５５】
【００８１】
１−エチル−３−（３−ピリジン−２−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−−尿素
工程ｂにおいて３−ピリジルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２９４（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５６】
【００８２】
１−エチル−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５７】
【００８３】
１−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５８】
【００８４】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−エチル−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３４１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例５９】
【００８５】
１−エチル−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてエチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３０７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６０】
【００８６】
１−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６１】
【００８７】
１−［３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて３−（５−ジメチルアミノ−［１，３，４］オキサジアゾール）−アセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６２】
【００８８】
１−（４−フルオロ−フェニル）−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３６５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６３】
【００８９】
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６４】
【００９０】
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６５】
【００９１】
１−（４−フルオロ−フェニル）−３−（３−ピリジン−２−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−ピリジルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３６０（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６６】
【００９２】
１−（４−フルオロ−フェニル）−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３８９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６７】
【００９３】
１−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６８】
【００９４】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−（４−フルオロ−フェニル）−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４０７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例６９】
【００９５】
１−（４−フルオロ−フェニル）−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−メチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいて４−フルオロ−フェニルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３７３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７０】
【００９６】
１−［３−（３，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて３，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３０７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７１】
【００９７】
１−メチル−３−（３−チオフェン−３−イル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて３−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２８５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７２】
【００９８】
１−［３−（ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて３，５−ビス−トリフルオロメチル−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝４１５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７３】
【００９９】
１−［３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて２−クロロ−６−フルオロ−フェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７４】
【０１００】
１−［３−（２，５−ジメチル−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて２，５−ジメチルフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３０７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７５】
【０１０１】
１−［３−（２−メトキシ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて２−メトキシフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３０９（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７６】
【０１０２】
１−［３−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて３，４−ジフルオロフェニルアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３１５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７７】
【０１０３】
１−［３−（５−アセチル−チオフェン−２−イル）−［１，６］ナフチリジン−２−イル］−３−メチル−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝３２７（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例７８】
【０１０４】
１−メチル−３−（３−ｍ−トリル−［１，６］ナフチリジン−２−イル）−尿素
工程ｂにおいて５−アセチル−チオフェンアセトニトリル、工程ｃにおいてメチルイソシアネートを使用する以外は、実施例１ｂおよびｃと同様の方法。ＬＣ／ＭＳ  ＥＳ＋ｍ／ｚ＝２９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０５】
薬理学的試験法
Ａ．Ｔｉｅキナーゼ活性の測定
Ｔｉｅキナーゼ研究のためのタンパク質を製造するために、Ｔｉｅ２受容体の部分ｃＤＮＡクローンを用いる。一次スクリーニング分析を行うために、Ｔｉｅキナーゼドメインのバクロウイルス発現ＧＳＴ融合を構築し、市販のベクターｐＡｃＧａ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて発現する。
この最終構築物をバクロウイルス中にトランスフェクトし、可溶性ＧＳＴ融合産物をスクリーニング分析において使用する。従来の研究は、候補標的／シグナル化分子をスクリーンするためにネズミＴｉｅキナーゼドメインのバクロウイルス発現ＧＳＴ融合を使用することを記載している（Ｈｕａｎｇら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １１：２０９７−２１０３、１９９５）。
【０１０６】
Ｔｉｅキナーゼ活性分析
Ｔｉｅキナーゼ活性分析は典型的には以下に記載するような２つの方法のうちの一つにおいて行われる。この分析法に少し変更をしても同様の結果が得られる。
自己リン酸化フラッシュプレート分析
材料：
キナーゼ緩衝液（最終２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．０、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ）
ガンマ３３ｐ−ＡＴＰ（通常の最終量０．５〜１ｕＣｉ／ウェル）
ＡＴＰ（最終３０ｕＭ、または他の望ましい濃度）
フラッシュプレート（プラスチックシンチレーターでコートされたウェルを有する９６ウェルポリスチレンマイクロプレート）
トップカウント（マイクロプレートシンチレーションカウンター）
方法：
インキュベーターシェーカーを作動させ、温度を３０℃に調節する。
各ウェルあたり２０ｕｌの３Ｘキナーゼ緩衝液をフラッシュプレートに添加する。
バックグラウンド以外は各ウェルあたり２０ｕｌのタンパク質を添加する。
試験化合物、典型的にはＤＭＳＯストック中１〜２ｕｌを添加する。
各ウェルあたり２０ｕｌのガンマ３３ｐ−ＡＴＰおよび冷ＡＴＰの混合物（典型的には１：１ｖ／ｖ）を添加する。
合計体積は６０ｕｌである。
透明なポリエステルフィルムで覆う。
シェーカー中、３０℃で２時間、または所望の時間インキュベートする。
フラッシュプレートをシェーカーから取り出し、５回洗浄する（例えば、各ウェルにつき１ＸＰＢＳ中１０ｕＭ  ＡＴＰ（３００ｕｌ）を用いる）。
トップカウント上のプレートまたは他の計測数装置を読みとる。通常の計算法を用いて結果を阻害率（％）およびＩＣ５０として計算する。
【０１０７】
Ｔｉｅ２キナーゼの蛍光偏光
最終分析条件
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５
２％ＤＭＳＯ（化合物をスクリーニングする場合）
２５０ｕＭ  ＡＴＰ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１ｍＭ  ＤＴＴ
５０ｕＭ  バナジン酸ナトリウム
１０ｕＭ  ペプチド基質
活性化ｔｉｅ２キナーゼ
ペプチド基質：
ＲＦＷＫＹＥＦＷＲ−ＯＨ
ＭＷ（ＴＦＡ塩）＝１８７３Ｄａ
１ｍＭペプチドストックを調製し、−２０℃で貯蔵する。
使用直前に１００ｕＭに希釈する。
９Ｘキナーゼ緩衝液
４５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５
９００ｍＭ  ＮａＣｌ
４５０ｕＭ  バナジン酸ナトリウム
１８ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１００ｍＭ  ＤＴＴ
あらかじめ調製して、アリコートに分けて−２０℃で貯蔵できる。
ＡＴＰストック：
２５ｍＭ  ＡＴＰストックを調製し、アリコートに分けて−２０℃で必要になるまで貯蔵する。使用前に２．５ｍＭに希釈する。
Ｔｉｅ２キナーゼの活性化
最終緩衝液条件：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５
１２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１００ｍＭ  ＮａＣｌ
２０ｕＭ  バナジン酸ナトリウム
１ｍＭ  ＤＴＴ
３０ｕＭ  ＡＴＰ
方法：
１．５ｕＭのｔｉｅ２キナーゼを３００ｕＭ  ＡＴＰ中、前記のような緩衝条件でインキュベートする。
２．２７℃で２時間インキュベートする。
３．２．５ｍｌのインキュベートされたｔｉｅキナーゼ２反応ミックスを、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ２中であらかじめ平衡化させたＮＡＰ−２５脱塩カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈカタログ番号１７−０８５２−０２）に添加して、酵素からＡＴＰを分離する。
４．酵素を５．０ｍｌの２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌで溶出する；タンパク濃度はこの時点で２．５ｕＭでなければならない。
５．酵素を等分し、できるだけ早く−８０℃で貯蔵する。
方法：
５０ｕｌの反応物に対して、次のものを９６ウェルブラックハーフエリアプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３６９４）の各ウェルに添加する
１．５ｕｌの１０％ＤＭＳＯ中試験化合物
２．５ｕｌの９Ｘキナーゼ緩衝液
３．５ｕｌの２．５ｍＭ  ＡＴＰ
４．５ｕｌの１００ｕＭペプチド基質
５．２５ｕｌのＰＴＫ検出ミックス（Ｐａｎｖｅｒａ、Ｐ−２６５２、５０ｍｌ−ＵＫ配給業者はＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅである）
６．５ｕｌの活性化ｔｉｅ２キナーゼ（下記のプロトコル）を１Ｘ緩衝液中で希釈して、反応を開始する。
７．酵素活性に従って３０〜５０分間循環するＦＰ装置で偏光を読みとる。ＩＣ５０は通常の計算法を用いて偏光（％）から決定できる。
本発明の化合物は、１ナノモル〜１０４ナノモルの範囲、典型的には７００〜１０４ナノモルの範囲のＩＣ５０を有する。
【０１０８】
Ｂ．Ｔｉｅ２受容体シグナル変換の測定
ＨＥＬ細胞（ＡＴＣＣ＃ＴＩＢ１８０）を、懸濁培養として２ｍＭグルタミンおよび１０％ＦＢＳで補足されたＲＰＭＩ−１６４０培地中１から５×１０５ｍｌの間で培養する。実験の１６〜３６時間前に、必要な数の細胞を０．５％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ培地中に接種する。実験当日に、細胞を収穫し、０．５％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ中０．５〜１．０×１０７細胞ｍｌの濃度で再懸濁させ、６ウェルプレート中２〜３ｍｌ／ウェルで接種する。
別法として、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ−Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を分析のために使用することができる。２〜１２継代の間のＨＵＶＥＣを、補足されたＥＧＭ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）中６ウェルプレートにおいて各ウェルにつき２×１０５および１×１０６細胞でプレートする。２４時間後、培地を、３％ＢＳＡを含むＥＢＡ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）に変え、細胞を一夜培養し、翌日分析に用いる。
細胞を適当な濃度の阻害化合物で３０〜４５分間処理する。ウェルの内容物をロッカー上で短時間混合し（約３０秒）、次いで３７℃でインキュベートする。細胞を次に、血清または繊維芽細胞順化培地などの天然のリガンドの供給源で１０分間処理する。
１０分のインキュベーション時間の最後に、プレートを氷上におく。細胞を収穫し、培地を除去する。細胞を変性サンプル緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で溶解させる。懸濁液を中程度のセッティングで５パルス音波処理し、氷に戻す。Ｔｉｅ２受容体のリン酸化状態を、下記のようにして、ウェスタンブロッティングにより測定し、抗ホスホ−Ｔｉｅ２抗体により検出する（Ｈａｒｌｏｗ、Ｅ．およびＬａｎｅ，Ｄ．Ｐ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８）。３０ｕｌの溶解物を７％ＳＤＳ／ポリアクリルアミドゲルにかける。ゲルを次いでウェスタンブロッティングの製造業者の指示によりニトロセルロースまたはＰＶＤＦ膜に移す。
ブロットをＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄し、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで１時間、室温でブロックする。ブロットを次いでＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ中１ｕｇ／ｍｌ抗ホスホ−Ｔｉｅ２抗体（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ＢｅｅｃｈａｍまたはＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）とともに１時間インキュベートする。ブロットを次いでＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで４回（それぞれ５分）洗浄する。製造業者により推奨される希釈度で抗マウスＨＲＰ接合体二次抗体とともにブロットをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中１時間インキュベートする。ブロットをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中、４回（それぞれ５分）洗浄する。最後の洗浄の後、ブロットをＥＣＬ法（Ａｍｅｒｓｈａｍ）または同等の方法により展開させる。
デンシトメーターまたはグラフィックプログラム（例えば、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いて各ブロットをスキャンする。Ｔｉｅ−２バンドを単離し、各レーンについて「ブロック（ｂｏｘｅｄ  ｏｕｔ）」する。各サンプルについてのピクセルボリュームまたは匹敵する測定値を分析する。さらに、同じ大きさの適当なバックグラウンド領域を各サンプルについて決める。バックグラウンドについて調節した後、リン酸化を未処理対照に対するホスホチロシン染色の比として表す。リン酸化の減少は、Ｔｉｅ−２−キナーゼの阻害を示す。
【０１０９】
Ｃ．インビボでの脈管形成の測定−ネズミ気泡（ａｉｒ  ｐｏｕｃｈ）肉芽腫モデル：
Ｔｉｅ２を阻害することにより血管の過剰、不適切または望ましくない増殖の組織破壊が抑えられることを示すために用いられる炎症性脈管形成のモデルを以下に記載する。慢性炎症のネズミ気泡肉芽腫モデル（Ｋｉｍｕｒａら、１９８５、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ.、８：３９３−４００；Ｃｏｌｖｉｌｌｅ−Ｎａｓｈら、１９９５、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２７４：１４６３−１４７２）（その開示はその全体を出典明示により本発明の一部として参照される）は、炎症細胞の流入、線維組織の増殖および強度の脈管形成により特徴づけられる。これは炎症性脈管形成の代表であり、脈管形成成分を肉芽腫成長および大きさと独立して薬理学的に調節できることを示す。加えて、脈管形成は、血管キャスティング法により正確に計量できる。
−１日に、マウスをＡｅｒｒａｎｅ（イソフルラン）ガス（５％）または他の承認された方法を用いて麻酔し、その後、２７ｇ針を用いて３ｍｌの空気を背部皮下組織中に注射する。マウスを回復させる。
０日に、マウスを再びＡｅｒｒａｎｅまたは他の承認された方法を用いて麻酔し、一旦麻酔にかかったら、０．５ｍｌのフロインド完全アジュバントと０．１％ｖ／ｖクロトン油を−１日に形成された気泡中に注射する。動物に投薬レジメ（実験に応じた日数）を開始し、動物に典型的には０．２ｍｌのＮ，Ｎ，ジメチルアセトアセトアミド（ＤＭＡ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）／Ｃｒｅｍｅｐｈｏｒ  ＥＩ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）、食塩水（１０／１０／８）または他の適当なビヒクルを投与する。動物を回復させ、その後の投薬は、麻酔無しで動物に対して行う。
１〜５日に、動物にスケジュールにしたがって投薬する。
６日に、動物を再び麻酔し、その後、血管キャストが生じる（Ｋｉｍｕｒａら、１９８６、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ．、９：４４２−４４６）；これは、１ｍｌのカルミン赤（１０％）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）／ゼラチン（５％）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）溶液の尾静脈内注射を含む。動物を次いで致死量の麻酔薬により屠殺し、４℃で２時間冷却した後、肉芽組織を取り出す。
肉芽腫を取り出したら、秤量し、次いで３日間４５℃で乾燥し、再度秤量する。乾燥された組織を次に１２Ｕ／ｍｌ−１パパイン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）および０．３３ｇ／Ｌ−１Ｎ−アセチル−１−システイン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）を含む０．９ｍｌの０．０５Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７．０中で５７℃で３日間消化する。３日消化した後、０．１ｍｌの５ｍＭ  ＮａＯＨを添加することによりカルミン赤を可溶性にする。サンプルを遠心分離器にかけ、次いで０．２ｕｍのアクロディスクを用いて濾過する。カルミン未処理動物から抽出された組織において作成されるカルミン赤標準曲線（０．５〜２ｍｇ／ｍｌ）に対してカルミン含量を決定し、４９０ｎｍで読みとる。サンプルおよび標準値を、典型的にはＤｅｌｔａＳｏｆｔ  Ｅｌｉｓａ分析ソフトウェア（Ｂｉｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を用いて決定する。次に様々な処理についての血管指数を決定するためにカルミン含量を用い、血管指数はｍｇカルミン色素／ｇｍ乾燥組織である
化合物の血管密度に対する効果を典型的には肉芽腫誘発６日後に測定する。この時間は脈管形成のピークまたはピーク付近となるように決定された。正の対照メドロキシプロゲステロンとして、脈管形成ステロイド（Ｇｒｏｓｓら、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１１７６−１１８０）（その開示を出典明示により本発明の一部として参照する）を使用する。この対照は、このモデルにおいて５０％の最大減少を示す。メドロキシプロゲステロンは乾燥重量により測定される肉芽腫の大きさに対して影響を及ぼさない。
【０１１０】
Ｄ．インビボでの脈管形成の測定−マトリゲルモデル
細胞外マトリックスゲルを約１週間マウスの皮膚下にいれ、次いでゲルの脈管侵入を計量するためにいくつかの測定値を用いることにより脈管形成をインビボでモデル化する（Ｂｉａｎｃｏｎｅ，Ｌ．ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  Ｌｏｃａｌ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆａｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：１４７，１９９７）。簡単に説明すると、減少した成長因子、エンドトキシンのないマトリゲル（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｓｏｎ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）は低温でゲルである。抗体または公知の脈管形成剤をゲルと混合して、全体積の２％を超えないようにする。８週令以上のＣ５７メスマウスに０．５ｍｌのマトリゲルを冷却したシリンジから背部皮下注射により投与する。生理的温度で液体マトリゲルは急速に固体および粘着性ゲルを形成する。実験中、マウスに試験化合物または対照を前記のように投与する。６日後、マウスを屠殺し、マトリゲルプラグを回収する。Ｄｒａｂｋｉｎの方法（Ｄｒａｂｋｉｎ、ＤＬおよびＡｕｓｔｉｎ，ＪＨ：Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ＩＩ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｗａｓｈｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ；ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  ａｎｄ  ｓｕｌｆｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １１２：５１，１９３５）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によりゲルのヘモグロビン含量を分析し、前記のようなＣＤ３１染色で血管を計量することにより、脈管形成を計量する。
【０１１１】
本明細書において記載する特許および特許出願を包含するが、これらに限定されない全ての出版物は、各出版物を完全に記載したかのように本発明において参照される。
前記載事項は、その好ましい態様を含む本発明を完全に開示する。本明細書において具体的に開示された態様の修正および改良は以下の請求の範囲内に含まれる。さらに工夫することなく、前記載事項を用いて当業者らは本発明を最大限に利用することができると考えられる。従って、本発明の実施例は単に例示的であって、本発明の範囲を何ら限定するものではないと解釈されるべきである。排他的性質または優先権を主張される本発明の態様を請求の範囲に定義する。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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