(57)【要約】ＦａｓおよびＦａｓＬ発現の調整のための、または治療剤の効力の調整のための、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（式中、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される２〜１０塩基の合成オリゴヌクレオチド配列を含む組成物を使用する方法。組成物は、ＦａｓおよびＦａｓＬ発現を調整するため、疾患を治療するため、あるいは治療剤の効力を調整するために有効な量で、薬学的に許容可能な担体とともに、かつ任意に治療剤とともに動物またはヒトに投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される２〜１０塩基の合成オリゴヌクレオチド配列を含む組成物。
【請求項２】
前記配列は、４〜８塩基である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記配列は、５〜７塩基である請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記配列は、６塩基である請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記配列は、配列番号１〜配列番号１８のいずれかである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
薬学的に許容可能な担体をさらに含む請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
治療剤をさらに含む請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
動物またはヒトにおけるＦａｓまたはＦａｓＬ発現を調整する方法であって、動物またはヒトにおけるＦａｓまたはＦａｓＬ発現を調整するのに有効な量の請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容可能な担体を動物またはヒトへ投与することを含む方法。
【請求項９】
動物またはヒトにおける治療剤の効力を調整する方法であって、前記治療剤の投与の前、同時または後において、有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含み、前記量は、前記治療剤の効力を調整するのに有効である方法。
【請求項１０】
前記動物またはヒトは、疾患を有する請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患は、癌である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌は、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、膀胱癌および白血病からなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患は、自己免疫性である請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記動物またはヒトは、炎症、感染、移植片拒絶、組織拒絶または細胞拒絶を有する請求項８または９に記載の方法。
【請求項１５】
薬剤の製造における請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
動物またはヒトの細胞中においてＦａｓまたはＦａｓＬ発現を調整するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、前記動物またはヒトの細胞中でのＦａｓまたはＦａｓＬ発現を調整するのに有効な量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物を前記動物またはヒトへ投与することを含む使用。
【請求項１７】
治療剤の効力を調整するための請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、前記治療剤の効力を調整するのに有効な量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を前記動物またはヒトへ投与することを含む使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、細胞におけるＦａｓおよびＦａｓリガンド発現を調整するために有用な組成物、および治療剤の効力を調整するために有用な組成物に関する。
【０００２】
［発明の背景］
Ｆａｓ（Ａｐｏ−１、ＣＤ９５）およびＦａｓリガンド（ＦａｓＬ、ＣＤ９５Ｌ）系は、最もよく研究される細胞死系の１つである。Ｆａｓは、種々の組織中の細胞により、特に活性化Ｔ細胞、心細胞、腎細胞および肝細胞で豊富に発現されるＩ型細胞膜タンパク質である。ＦａｓＬは、特に活性化Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞で発現されるＩＩ型細胞膜貫通タンパク質であり（Ｎａｇａｔａ， Ｓ． Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔ． ３３：２９， １９９９）、免疫特権部位、例えば眼および精巣において構成的に発現される（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：６３０， １９９５）。
【０００３】
ＦａｓおよびＦａｓＬ相互作用（Ｆａｓ／ＦａｓＬ）は、免疫細胞の調節において、および自己反応性細胞の排除において不可欠な役割を果たす（Ｓａｂｅｌｋｏ−Ｄｏｗｎｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２：３３０， ２０００）。さらに、Ｆａｓ／ＦａｓＬは、癌細胞およびウイルス感染細胞の細胞死を媒介する（Ｆａｍｕｌａｒｏ ｅｔ ａｌ． Ｍｅｄ． Ｈｙｐｏｔｈ． ５３：５０， １９９９； Ｏｗｅｎ−Ｓｃｈａｕｂ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ． Ｊ． Ｏｎｃｏｌ． １７：５， ２０００）。対照的に、癌細胞で発現されるＦａｓＬは、免疫系の細胞を攻撃し得るか、（Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８４：１０７５， １９９６）、あるいは周囲組織を損傷することにより局所的腫瘍侵襲を促進しうる（Ｙｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ． Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． １５４：６９３， １９９９）。活性化Ｔ細胞で発現されるＦａｓＬは、劇症肝炎および移植片対宿主疾患における組織損傷にも関与し得る（Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ３：４０９， １９９７； Ｂｒａｕｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８３：６５７， １９９６）。
【０００４】
ＦａｓＬがＦａｓと結合すること、またはアゴニスト抗体によるＦａｓの架橋は、アポトーシスを誘導し（Ｎａｇａｔａ， Ｓ． Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔ． ３３：２９， １９９９）、細胞死を生じさせる。アポトーシスは、核クロマチンの凝集、細胞萎縮、核断片化、原形質膜小気胞化および膜結合アポトーシス体の形成を含めた独特の形態学的変化により特徴付けられる能動的細胞死過程である（Ｗｙｌｌｉｅ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ． Ｒｅｖ． Ｃｙｔｏｌ． ６８：２５１， １９８０）。アポトーシスの分子的特質は、内因性エンドヌクレアーゼが活性化される結果、オリゴヌクレオソーム長断片への細胞核ＤＮＡの断片化である（Ｗｙｌｌｉｅ Ａ． Ｎａｔｕｒｅ ２８４：５５５， １９８０）。カスパーゼ（システイン−アスパルチル特異的プロテアーゼ）は、アポトーシスの後期段階の実行における重要な酵素であるとされてきた。ＦａｓＬがＦａｓと結合すると、ＦＡＤＤアダプター（死亡ドメインを伴うＦａｓ関連タンパク質）によりカスパーゼのカスケードを活性化し、これにより種々の細胞性基質の切断およびＤＮＡ断片化がもたらされる（Ｎａｇａｔａ， Ｓ． Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔ． ３３：２９， １９９９）。
【０００５】
合成オリゴヌクレオチドは、細胞によりインターナライズされ（Ｖｌａｓｓｏｖ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ １１９７：９５， １９９４）、核酸（Ｗａｇｎｅｒ， Ｒ． Ｎａｔｕｒｅ：３７２：３３３， １９９４）、特定の細胞タンパク質（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７４：２６３６９， １９９９）、および特定の核タンパク質（Ｓｃａｇｇｉａｎｔｅ ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２５２：２０７， １９９８）と選択的に結合し、細胞増殖を抑制し得る多陰イオン性配列である。増殖は細胞周期を通しての細胞の進行のカルミネーション（ｃｕｌｍｉｎａｔｉｏｎ）であり、１個の細胞が２個の細胞に分裂する。細胞周期進行の変更はすべての癌において起こり、遺伝子の過剰発現、調節遺伝子の突然変異、またはＤＮＡ損傷チェックポイントの無効の原因になりうる（Ｈｏｃｈｈａｕｓｅｒ Ｄ． Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ８：９０３， １９９７）。
【０００６】
２つの５’プリンおよび２つの３’ピリミジンが隣接する非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する合成ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）は、マクロファージおよびＢ細胞によりサイトカインの合成を誘導し、ＮＫ細胞および細胞傷害性Ｔリンパ球の活性を増大し、かつ、Ｔ−を強化することが報告されている（Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ９３：２８７９， １９９６； Ｌｉｐｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２７：２３４０， １９９７）。２０塩基合成ＣｐＧモチーフは、活性化Ｂ細胞でのＦａｓ発現を遮断し、抗Ｆａｓモノクローナル抗体により誘導されるアポトーシスを遮断することが報告されている（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８０：１６２， １９９７）。光照射すると、癌細胞におけるＦａｓの発現をアップレギュレートすることが報告されている（Ｓｈｅａｒｄ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ７３：７５７， １９９７； Ｎｉｓｈｉｏｋａ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ３：２７５， １９９９）。
【０００７】
Ｆａｓ／ＦａｓＬ系を調整する能力は、腫瘍性自己免疫疾患、変性疾患および心臓血管性疾患（これらに限定されない）を含めた疾患に用いるための多数の臨床的用途を有する。しかしながら、従来のＦａｓ／ＦａｓＬ調整剤のほとんどは、臨床用途にあまり適切でないことが立証されている。さらに、これらの薬剤の多くは、非能率的であり、有毒であり、あるいは有意の副作用を有する。
【０００８】
したがって、細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの発現を調整する新規の組成物および方法が引き続き必要とされている。疾患においてＦａｓおよびＦａｓＬ調整剤の効力を調整する新規の組成物および方法も必要とされている。細胞におけるＦａｓまたはＦａｓＬの発現変更に関連した、動物またはヒトにおける疾患を治療するための、細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの発現を調整する新規の組成物および方法も必要とされている。
【０００９】
［発明の概要］
本発明は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後「配列」という）を含む新しい組成物であって、組成物中の塩基の総数が２〜１０個、好ましくは４〜８個、より好ましくは５〜７個、最も好ましくは６個である組成物を用いる新規の方法を提供することにより、上記の要求を満たす。
【００１０】
本発明は、これらの組成物に関する新規の使用を提供する。この組成物は薬学的に許容可能な担体と組合わされ、動物またはヒトにおけるＦａｓおよびＦａｓＬ発現を調整するための方法に用いられる。この組成物はまた、薬学的に許容可能な担体と組合せられ、動物またはヒトにおける疾患を治療するために、ＦａｓおよびＦａｓＬ発現を調整するのに有効な量で、疾患を有する動物またはヒトに投与される。この組成物はまた、ＦａｓおよびＦａｓＬ調整剤の効力を調整するために、動物またはヒトに投与され、該投与には、ＦａｓおよびＦａｓＬを調節するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調節剤、または疾患を有する動物またはヒトを治療するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調節剤の効力を調節するのに有効な量の上記組成物を投与することを含む。本発明に係る組成物に関する別の新規の使用は、疾患を治療するための治療剤の効力を調整し、好ましくは増強することであって、薬学的に許容可能な担体中で、任意の治療剤と組合せて、動物またはヒトに投与される治療剤の効力を調整するのに有効な量の組成物を投与することを含む。本発明の組成物は、治療剤の効力を調整するために、治療剤を投与する前、同時または後の任意の時点で投与することができる。本発明の組成物はさらに、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで、例えば動物またはヒトの細胞または組織に投与することができる。
【００１１】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される配列を含むが、ただし、組成物中の塩基の総数は６個である。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容可能な担体と組合せられたこの６塩基の配列を含む。さらに別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、治療剤および薬学的に許容可能な担体と組合せられたこの６塩基の配列を含む。これらの組成物は、前述の段落に記載されたいずれかの方法において、かつ本明細書を通して用いられ得る。
【００１２】
本発明の配列の予期せぬ意外な能力は、医療業界における要求を、かつヒトを含めた動物に重要な利益を提供する。
【００１３】
したがって、本発明の目的は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後、「配列」ともいう）を含む新しい組成物を提供することであるが、この場合、組成物中の塩基の総数は２〜１０である。
【００１４】
本発明の別の目的は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後、「配列」ともいう）を含む新組成物を提供することであるが、この場合、組成物中の塩基の総数は４〜８個である。
【００１５】
本発明のさらに別の目的は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後、「配列」ともいう）を含む新組成物を提供することであるが、この場合、組成物中の塩基の総数は５〜７個である。
【００１６】
本発明の別の目的は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後、「配列」ともいう）を含む新組成物を提供することであるが、この場合、組成物中の塩基の総数は６個である。
【００１７】
本発明のさらに別の目的は、薬学的に許容可能な担体と組合されている、本明細書中に記載された配列のいずれかを含む新規の組成物を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、治療剤および薬学的に許容可能な担体と組合されている、本明細書中に記載された配列のいずれかを含む新規の組成物を提供することである。
【００１９】
本発明のさらに別の目的は、薬剤を製造するための、本明細書中に記載された新規の組成物のいずれかの使用を提供することである。
【００２０】
本発明のさらに別の目的は、本発明の組成物に関する新規の使用を提供することである。
【００２１】
本発明のさらに別の目的は、細胞におけるＦａｓ発現を調整する方法を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、細胞におけるＦａｓＬ発現を調整する方法を提供することである。
【００２３】
本発明のさらに別の目的は、免疫細胞におけるＦａｓ発現を調整する方法を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、免疫細胞におけるＦａｓＬ発現を調整する方法を提供することである。
【００２５】
本発明のさらに別の目的は、癌細胞におけるＦａｓ発現を調整する方法を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、癌細胞におけるＦａｓＬ発現を調整する方法を提供することである。
【００２７】
本発明の別の目的は、ヒトを含めた動物における疾患の治療方法を提供することである。
【００２８】
本発明のさらに別の目的は、腫瘍性疾患の治療方法を提供することである。
【００２９】
本発明のさらに別の目的は、自己免疫疾患の治療方法を提供することである。
【００３０】
本発明の別の目的は、炎症性疾患の治療方法を提供することである。
【００３１】
本発明のさらに別の目的は、増殖性疾患の治療方法を提供することである。
【００３２】
本発明の別の目的は、リンパ増殖性疾患の治療方法を提供することである。
【００３３】
本発明のさらに別の目的は、変性疾患の治療方法を提供することである。
【００３４】
本発明のさらに別の目的は、神経変性疾患の治療方法を提供することである。
【００３５】
本発明の別の目的は、心臓血管疾性患の治療方法を提供することである。
【００３６】
本発明のさらに別の目的は、移植片拒絶の治療方法を提供することである。
【００３７】
本発明の別の目的は、感染を治療するのに有効な方法を提供することである。
【００３８】
本発明のさらに別の目的は、疾患を治療するための治療剤の効果を調整する方法を提供することである。
【００３９】
本発明のさらに別の目的は、疾患を治療するための治療剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４０】
本発明のさらに別の目的は、Ｆａｓ調整剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４１】
本発明の別の目的は、ＦａｓＬ調整剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４２】
本発明のさらに別の目的は、抗腫瘍剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４３】
本発明の別の目的は、免疫賦活剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４４】
本発明のさらに別の目的は、免疫抑制剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４５】
本発明の別の目的は、抗炎症剤の効果を増強する方法を提供することである。
【００４６】
容易に調製することができる組成物を提供することが、本発明の別の目的である。
【００４７】
本発明の別の目的は、レシピエントに対する毒性が最小限である組成物を提供することである。
【００４８】
本発明のこれらのおよびその他の目的、特徴および利点は、開示された実施形態の以下の詳細な説明および特許請求の範囲の検討後に明らかになるであろう。
【００４９】
［詳細な説明］
本発明は、新しい組成物およびこれらの組成物を用いる新しい方法を提供することにより、上記の必要性を満たす。本発明の組成物は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂおよびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチド（以後「配列」ともいう）を含むが、この場合、組成物中の塩基の総数は２〜１０、好ましくは４〜８、さらに好ましくは５〜７、最も好ましくは６である。本発明の組成物はさらに、薬学的に許容可能な担体と組み合わされた本明細書中に記載された配列のいずれかを含む。本発明の組成物はさらに、治療剤および薬学的に許容可能な担体と組合わされた本明細書中に記載された配列のいずれかを含む。
【００５０】
本発明は、これらの新規の組成物に関する新しい使用を提供する。この組成物は、薬学的に許容可能な担体と組合わされ、動物またはヒトにおけるＦａｓおよびＦａｓＬ発現を調整するのに有効な量が、動物またはヒトに投与される。この組成物はさらに、薬学的に許容可能な担体と組合わせられ、動物またはヒトにおける疾患を治療するために、ＦａｓおよびＦａｓＬ発現を調整するのに有効な量が、疾患を有する動物またはヒトに投与される。この組成物はまた、ＦａｓおよびＦａｓＬ調整剤の効力を調整するために、動物またはヒトに投与され、該投与は、ＦａｓおよびＦａｓＬを調節するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調節剤、または疾患を有する動物またはヒトを治療するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調節剤の効力を調節するのに有効な量の上記組成物を投与することを含む。本発明の組成物に関する別の新規の使用は、疾患を治療するための治療剤の効力を調整し、かつ好ましくは増強するために、薬学的に許容可能な担体中で、任意に治療剤と組合わせて、動物またはヒトに投与される治療剤の効力を調整するのに有効な量の組成物を投与することを含む。本発明の組成物は、治療剤の効力を調整するために、治療剤を投与する前、投与中または投与した後の任意の時点で投与することができる。
【００５１】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、（ＧＧ）ｎ、（ＧＴ）ｎ、ａ（ＧＴ）ｎｂ、ａ（ＧＡ）ｎｂ、およびａ（ＧＣ）ｎｂ（ここで、ｎは１と３の間の整数であり、ａおよびｂは別々に０個、１個またはそれ以上のＡ、Ｃ、ＧもしくはＴまたはそれらの組合わせである）からなる群から選択される配列を含むが、ただし、組成物中の塩基の総数は６である。別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容可能な担体と組合わせられたこの６塩基の配列を含む。さらに別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、治療剤および薬学的に許容可能な担体と組合わせられたこの６塩基の配列を含む。これらの組成物は、本特許出願に記載された方法のいずれかにおいて用いられ得る。
【００５２】
本明細書中で用いる場合、「配列」という語は、塩基総数が２〜１０、好ましくは４〜８、さらに好ましくは５〜７、最も好ましくは６である、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびチミン（Ｔ）からなる合成ホスホジエステルオリゴデオキシヌクレオチドを意味する。
【００５３】
本明細書中で用いる場合、「発現」という語は、ＦａｓまたはＦａｓＬの細胞表面濃度を意味する。
【００５４】
本明細書中で用いる場合、「応答」という語は、ＦａｓまたはＦａｓＬ発現のアップレギュレート（増大）またはダウンレギュレート（低減）を意味する。
【００５５】
本明細書中で用いる場合、「調整する」という語は、ＦａｓまたはＦａｓＬの発現における変化を意味する。このような変化は、ＦａｓまたはＦａｓＬ発現のアップレギュレートおよびダウンレギュレートを含む。調整するという語は、疾患を治療するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調整剤、またはＦａｓまたはＦａｓＬ発現を調整するためのＦａｓおよびＦａｓＬ調整剤を含む治療剤の効力を調整する本発明の新規の配列の能力を説明するためにも使用される。
【００５６】
本明細書中で用いる場合、「治療的に有効な」、「有効量」および「に有効な量」という語句は、ＦａｓまたはＦａｓＬの発現を調整するのに有効な配列の量を意味する。
【００５７】
本明細書中で用いる場合、「疾患」という語は、身体的健康が損なわれている状態を意味する。
【００５８】
本明細書中で用いる場合、「治療剤」という語句は、ヒトを含めた動物における疾患を治療するのに用いるための、郡または州政府の管理機関により認可された、あるいは米国薬局方またはその他の一般的に認められた薬局方に列挙された任意の薬剤である。
【００５９】
本明細書中で用いる場合、「抗腫瘍性の」という語は、癌細胞の発生、成熟、増殖または蔓延を防止することを意味する。
【００６０】
本明細書中で用いる場合、「増強する」という語は、添加分以上のより大きい相乗作用の程度を意味する。
【００６１】
本明細書中で用いる場合、「相乗作用」という語は、２つまたはそれ以上の薬剤の協調作用を意味する。
【００６２】
ヒトを含めた動物に有効量の本発明の配列を投与することは、例えば腫瘍性、自己免疫、増殖性、リンパ増殖性、変性、および心臓血管性疾患（これらに限定されない）などの疾患、感染、炎症、ならびに移植片、組織および細胞拒絶を防止、治療、または排除する治療的処置である。
【００６３】
１つまたはそれ以上の配列および薬学的に許容可能な担体を含む組成物は、配列および薬学的に許容可能な担体を均一にかつ密接に会合させることにより調製される。１つまたはそれ以上の配列、治療剤および薬学的に許容可能な担体を含む組成物は、配列、治療剤および薬学的に許容可能な担体を均一にかつ密接に会合させることにより調製される。薬学的に許容可能な担体としては、液体担体、固体担体またはその両方が挙げられる。液体担体は、水性担体、非水性担体またはその両方であり、例としては、溶液、懸濁液および乳濁液が挙げられるが、これらに限定されない。乳濁液としては、油乳濁液、油中水型乳濁液、油中水型乳濁液、部位特異的乳濁液が挙げられるがこれらに限定されない。担体は、生物学的担体、化学的担体またはその両方であり、その例としては、配列を持続的に放出することを可能にするウイルスベクター系、プラスミド、粒子、微小粒子、ナノ粒子、微小球、ナノ球、細菌細胞壁、ミニポンプ、および生分解性または非生分解性天然または合成ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
好ましい水性担体としては、水、生理食塩水および薬学的に許容可能な緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい非水性担体としては、鉱油または中性油、例えばジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質、脂質、油およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されず、この場合、油は、多不飽和脂肪酸および飽和脂肪酸の適切な混合物を含む。任意に、細胞に配列を提供するために用いられる薬学的に許容可能な担体と関係なく、安定剤および賦形剤が含まれていてもよい。
【００６５】
配列の治療的有効性は、例えば塩基、糖またはホスフェート主鎖の化学的修飾、適切な配列を含む細菌プラスミドを用いた配列の化学的補充またはバイオテクノロジー的増幅、配列の生物学的担体または化学的担体との複合、あるいは配列および組織型もしくは細胞型特異的リガンドまたは抗体とのカップリングといった方法（これらに限定されない）により増大され得る。
【００６６】
本発明の組成物はさらに、配列および治療剤を含む組成物を含むが、この場合、配列および治療剤が薬学的に許容可能な担体と組合わされ、疾患を有する動物またはヒトに投与される。配列は、疾患に及ぼす治療剤の効果を調整し、好ましくは増強する。
【００６７】
治療剤としては、抗腫瘍剤、抗炎症薬、抗自己免疫薬、抗変性薬、Ｆａｓ調整およびＦａｓＬ調整剤あるいはそれらの任意の組合わせ、ならびに放射線療法、または放射線療法と治療剤の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。これらの治療剤としては、生物学的物質、薬剤、化学療法薬、免疫賦活剤、免疫調整剤、免疫療法剤、抗ウイルス剤、抗感染剤、抗生物質、サイトカイン、抗原、抗体、核酸、ワクチン、アプタベース、核酸、アンチセンス核酸、テロメラーゼ阻害剤、カスパーゼ、生物学的操作および化学的合成薬剤、ならびに活性化または不活性化のために細胞死分子を標的にする薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
化学療法薬としては、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ架橋剤、抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、プリン阻害剤、ピリミジン阻害剤、微小管安定化剤、微小管不安定化剤、抗代謝剤、ホルモンアンタゴニスト、プロテインキナーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、サイクリン阻害剤、血管新生阻害剤、分化強化剤、ならびに分子生物学的修飾化ウイルス、細菌および外毒素剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
投与経路としては、経口、局所、皮下、経皮、真皮下、筋内、腹腔内、膀胱内、関節内、前立腺内、動脈内、静脈内、皮内、頭蓋内、病変内、腫瘍内、眼内、肺内、脊椎内、体腔内配置、鼻吸入および皮膚への塗布（ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物は、ｉｎ　ｖｉｖｏ、ｅｘ　ｖｉｖｏまたはｉｎ　ｖｉｔｒｏで投与することができると理解されるべきである。例えば本発明の組成物は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで動物またはヒトの細胞または組織に投与され得る。ｉｎ　ｖｉｔｒｏ投与のための適切な用量は、約１ｎＭ〜１ｍＭ、好ましくは約１０ｎＭ〜１００μＭ、さらに好ましくは約１００ｎＭ〜１０μＭである。
【００７０】
投与経路に応じて、１用量あたりの容積は、好ましくは約０．００１〜１００ｍｌ、さらに好ましくは約０．０１〜５０ｍｌ、もっとも好ましくは約０．１〜３０ｍｌである。薬学的に許容可能な担体中の配列、または薬学的に許容可能な担体中の配列および治療剤の組合わせは、および治療される疾患、レシピエントの状態および投与経路に適した期間にわたって、計画に従って単一用量処置もしくは多数回用量処置で投与されるか、または連続的注入される。さらに治療剤は、配列を投与する前に、同時に、または後に投与してもよい。
【００７１】
好ましくは投与される配列の１用量あたりの量は、約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは約０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、もっとも好ましくは約０．１〜５ｍｇ／ｋｇである。配列および化学療法剤の組合わせは、治療剤の作用を好ましくは増強する。好ましくは投与される治療剤の１用量あたりの量は、約０．００１〜１０００ｍｇ／ｍ２または約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．０１〜５００ｍｇ／ｍ２または約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ、もっとも好ましくは約０．１〜１００ｍｇ／ｍ２または約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。治療剤の一実施形態では、抗Ｆａｓ抗体が使用され、約０．００３〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００７２】
投与される特定の配列および特定の治療剤、１用量あたりの量、投与計画ならびに投与経路は、当業者に既知の方法を用いる専門医師により決定されるべきであり、疾患の種類、疾患の重篤度、疾患の位置、ならびにその他の臨床的因子、例えばレシピエントのサイズ、体重および身体症状により異なる。さらに、ｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイを任意に用いることにより、配列に関する最適範囲、および配列＋治療剤投与に関する最適範囲を同定するのに役立ち得る。
【００７３】
以下の実施例は、本発明をさらに例示するのに役立つが、しかしながら、同時に本発明を限定するものではない。これに反して、種々のその他の実施形態、修正物およびそれらの等価物に対して、本発明の精神を逸脱することなく当業者に示唆し得る方策が、本明細書中の記載内容を読了後に示され得ると明白に理解されるべきである。
【００７４】
実施例１
配列の調製
Ａｂａｃｕｓセグメント合成技術（Ａｂａｃｕｓ Ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いてＳｉｇｍａ−Ｇｅｎｏｓｙｓ（Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ， ＴＸ）により、ホスホジエステル配列を調製した。別記しない限り、オートクレーブ処理脱イオン水中に、または生理食塩水（これに限定されない）を含む薬学的に許容可能な緩衝液中に、使用する直前に配列を分散させた。
【００７５】
実施例２
細胞
細胞株はすべて、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）から入手し、ＡＴＣＣ推奨の培地中で培養した。表１は、細胞株、それらの起源およびそれらの特性を示す。
【００７６】
【表１】
2004507469.tif 000002
【００７７】
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｂａｉｅ ｄ’Ｕｒｆｅｅ， Ｑｕｅｂｅｃ， Ｃａｎａｄａ）密度勾配遠心分離により、ヒト血液から末梢血単核細胞（以後、「ＰＢＭＣ」という）を単離した。
【００７８】
癌細胞およびＰＢＭＣを６ウエル平底微小プレート中に播種し、５％ＣＯ２雰囲気下で３７℃で保持した。別記しない限り、１ｍｌあたり２×１０５の細胞を、０μｇ／ｍｌ（対照）または１００μｇ／ｍｌ（５．５μＭ）（処理）の配列とともに、４８時間インキュベートした。
【００７９】
実施例３
細胞表面でのＦａｓおよびＦａｓＬの測定
ＣＥＬＬＱｕｅｓｔプログラム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ， ＵＳＡ）で、抗ＦａｓＦＩＴＣ−接合モノクローナル抗体および抗ＦａｓＬ　ＰＥ−接合モノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーにより、ＦａｓおよびＦａｓＬ発現を測定した。
【００８０】
結果は、Ｆａｓの発現における増大パーセンテージ（％）として表される。
【００８１】
実施例４
ジャーカット白血病Ｔ細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ジャーカットヒト白血病Ｔ細胞は、非定型多剤耐性ヒト浮遊腫瘍細胞モデルである。表２に示した６塩基配列とともに、ジャーカットＴ細胞をインキュベートした。
【００８２】
【表２】
2004507469.tif 000003
【００８３】
実施例５
ＰＢＭＣにおけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
表３に示した６塩基配列とともに、ＰＢＭＣをインキュベートした。
【００８４】
【表３】
2004507469.tif 000004
【００８５】
実施例６
Ｔ−２４膀胱癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
Ｔ−２４膀胱癌細胞は、ｐ５３突然変異ヒト細胞株である。表４に示した６塩基配列とともに、Ｔ−２４細胞（１．０×１０５細胞／ｍｌ）をインキュベートした。
【００８６】
【表４】
2004507469.tif 000005
【００８７】
実施例７
ＵＭＵＣ−３膀胱癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ＵＭＵＣ−３膀胱癌細胞は、Ｐ−糖タンパク質過剰発現性ヒト細胞株である。表５に示した６塩基配列とともに、ＵＭＵＣ−３細胞（１．０×１０５細胞／ｍｌ）をインキュベートした。
【００８８】
【表５】
2004507469.tif 000006
【００８９】
実施例８
ＯＶＣＡＲ−３卵巣癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ＯＶＣＡＲ−３卵巣癌細胞は、ｐ５３突然変異、ｐ２１／ｗａｆ−１／Ｃｉｐ欠失転移性ヒト固形腫瘍モデルである。表６に示した６塩基配列とともに、ＯＶＣＡＲ−３細胞をインキュベートした。
【００９０】
【表６】
2004507469.tif 000007
【００９１】
実施例９
ＳＫ−ＯＶ３卵巣癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ＳＫ−ＯＶ−３卵巣癌細胞は、ｐ５３突然変異，ｐ２１／ｗａｆ−１／Ｃｉｐ欠失ｐ１５ｉｎｋ４Ｂ，ｐ１６ｉｎｋ４欠失転移性ヒト固形腫瘍モデルである。表７に示した６塩基配列とともに、ＳＫ−ＯＶ３細胞（１．０×１０５細胞／ｍｌ）をインキュベートした。
【００９２】
【表７】
2004507469.tif 000008
【００９３】
実施例１０
ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞は、ＴＧＦ−β１受容体陰性、アンドロゲン非依存性、転移性ヒト固形腫瘍モデルである。表８に示した６塩基配列とともに、ＬＮＣａＰ細胞をインキュベートした。
【００９４】
【表８】
2004507469.tif 000009
【００９５】
実施例１１
ＭＣＦ−７乳癌細胞におけるＦａｓおよびＦａｓＬの調整
ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞は、カスパーゼ−３陰性、エストロゲン依存性ヒト固形腫瘍モデルである。表９に示した６塩基配列とともに、ＭＣＦ−７細胞（１×１０５細胞／ｍｌ）をインキュベートした。
【００９６】
【表９】
2004507469.tif 000010
【００９７】
実施例１２
シクロヘキシミドによるジャーカットヒト白血病Ｔ細胞におけるＦａｓ発現の抑制
ジャーカットヒト白血病Ｔ細胞を、０．０μｇ／ｍｌ（−ＣＨＸ）のシクロヘキシミドまたは０．１μｇ／ｍｌのシクロヘキシミド（＋ＣＨＸ）とともに１時間、プレインキュベートした。１０μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌの配列番号５の６塩基配列（ＧＧＧＴＧＧ）を、−ＣＨＸおよび＋ＣＨＸ細胞の両方に添加し、２４時間および４８時間継続してインキュベートした（表１０）。
【００９８】
【表１０】
2004507469.tif 000011
【００９９】
表１０に示すように、配列番号５は、ジャーカットＴ細胞におけるＦａｓ発現をアップレギュレートした。１０μｇ／ｍｌの配列番号５を用いた場合、シクロヘキシミドは、Ｆａｓ発現を、２４時間後には９２％、４８時間後には４４％低減した。１００μｇ／ｍｌの配列番号５を用いた場合、シクロヘキシミドは、Ｆａｓ発現を、２４時間後には６５％、４８時間後には２３％低減した。これらのデータは、配列番号５の６塩基配列がＦａｓのｄｅ　ｎｏｖｏ合成を刺激することを示唆する。
【０１００】
実施例１３
ＵＭＵＣ−３膀胱癌細胞増殖の抑制に及ぼす配列番号５（ＧＧＧＴＧＧ）およびアゴニスト性抗Ｆａｓ抗体の相乗効果
０．００、０．０２および０．２０μｇ／ｍｌのアゴニスト性抗Ｆａｓモノクローナル抗体（クローンＣＨ−１１：Ｃｏｕｌｔｅｒ−Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ， Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ， Ｆｒａｎｃｅ）それぞれに加えて、０または１０μｇ／ｍｌの配列番号５とともに、ＵＭＵＣ−３膀胱癌細胞を４８時間インキュベートした。ジメチルチアゾール−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）還元を用いて、細胞増殖を測定した（Ｍｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ６５：５５， １９８３）。マルチプレート分光光度計読取器（ＥＬＸ８００、Ｂｉｏ−ＴＥＫ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．， Ｗｉｎｏｏｓｋｉ， ＶＴ）を用いて、５７０ｎｍの波長でＭＴＴを測定した。
【０１０１】
【表１１】
2004507469.tif 000012
【０１０２】
表１１に示すように、配列番号５の６塩基配列は、ＵＭＵＣ−３細胞増殖に及ぼす０．０２および０．２μｇ／ｍｌのアゴニスト性抗Ｆａｓ抗体の抑制活性を増強した。
【０１０３】
実施例１４
ジャーカット白血病Ｔ細胞増殖の抑制に及ぼす配列番号５（ＧＧＧＴＧＧ）およびアゴニスト性抗Ｆａｓ抗体の付加的効果
ジャーカット白血病Ｔ細胞を、０．００、０．０２及び０．２０μｇ／ｍｌのアゴニスト性抗Ｆａｓモノクローナル抗体（クローンＣＨ−１１）それぞれに加えて、０および１０μｇ／ｍｌの配列番号５とともに、４８時間インキュベートした。実施例１３の場合と同様に、細胞増殖を測定した。
【０１０４】
【表１２】
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【０１０５】
表１２に示すように、ジャーカットＴ細胞増殖に及ぼす配列番号５の６塩基配列ならびに０．０２および０．２μｇ／ｍｌのアゴニスト性抗Ｆａｓ抗体の作用は、付加的であった。
【０１０６】
実施例１５
ＥＬ−４ネズミＴに及ぼす６塩基配列およびアゴニスト性抗Ｆａｓ抗体の効果
ＥＬ−４ネズミＴリンパ腫細胞を、Ｃ５７／ＢＬ６ｌｐｒ／ｌｐｒ（Ｆａｓ陰性マウス）中に移植する。マウスを各１０匹づつの３０グループに分ける。０日目に、第１群マウスに生理食塩水を、第２群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号５を、第３群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１６を、第４群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１７を、第５群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１８を、第６群マウスには抗Ｆａｓ抗体を、第７群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号５および抗Ｆａｓ抗体を、第８群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１６および抗Ｆａｓ抗体を、第９群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１７および抗Ｆａｓ抗体を、第１０群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１８＋抗Ｆａｓ抗体を投与する。これらの種々の群において、約０．００３〜約０．３ｍｇ／ｋｇの範囲の任意の用量で、抗Ｆａｓ抗体を投与する。第１群マウスは最大量腫瘍質量を有し、第２、３、４、５および６群マウスは第１群マウスより腫瘍質量が少なく、第７、８、９および１０群マウスは最小の腫瘍質量を有する。配列番号５、配列番号１６および配列番号１７の効力は、用量依存性である。
【０１０７】
実施例１６
完全フロイントアジュバントと混合した０．５ｍｇのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）を含有する乳濁液を、雌（ＳＪＬ／ＪｘＰＬ／Ｊ）Ｆ１マウスの両方の大腿領域に皮下注射する。２４時間後、４００ｎｇの百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）毒素を腹腔内投与する。開始日（０日目）に、第１群マウスに生理食塩水を、第２群マウスに１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号５を、第３群マウスに１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１６を、第４群マウスに１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１７を、第５群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１８を、第６群マウスには抗Ｆａｓ抗体を、第７群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号５および抗Ｆａｓ抗体を、第８群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１６および抗Ｆａｓ抗体を、第９群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１７および抗Ｆａｓ抗体を、第１０群マウスには１、１０または１００ｍｇ／ｋｇの配列番号１８および抗Ｆａｓ抗体を、３日間、槽内投与により与える（２０μｇ／日）。これらの種々の群では、約０．００３〜の範囲の任意の用量で、抗Ｆａｓ抗体を投与する。第１、２、３、４および５群マウス。群７、８、９および１０マウスはＥＡＥの最小進行を示す。配列番号５、配列番号１６および配列番号１７の効力は、用量依存性である。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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