(57)【要約】しわを防ぎそして軽減するための、一酸化窒素合成酵素阻害剤の使用に関する方法、組成物、およびキットが提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者のしわを防ぐまたは治療する方法であって、該しわを軽減するまたは防ぐのに十分な量の一酸化窒素合成酵素（NOS）阻害剤を含む組成物を被検者に投与する段階を含む方法。
【請求項２】
しわが、UVB照射への曝露によって生じたしわである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
しわが縮緬皺である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
NOS阻害剤が局所的に投与される、請求項1記載の方法。
【請求項５】
NOS阻害剤が無菌組成物の状態で提供される、請求項1記載の方法。
【請求項６】
NOS阻害剤がL-NAMEである、請求項1記載の方法。
【請求項７】
被検者のしわを軽減する方法であって、
しわの軽減を必要としている被検者を識別する段階；
被検者にNOS阻害化合物を投与する段階；および
しわに対する投与の影響を評価する段階
を含む方法。
【請求項８】
しわが、UVB照射への曝露によって生じたしわである、請求項7記載の方法。
【請求項９】
しわが縮緬皺である、請求項7記載の方法。
【請求項１０】
NOS阻害剤が局所的に投与される、請求項7記載の方法。
【請求項１１】
NOS阻害剤が無菌組成物の状態で提供される、請求項7記載の方法。
【請求項１２】
NOS阻害剤がL-NAMEである、請求項7記載の方法。
【請求項１３】
NOS阻害剤および薬学的に許容される担体を含む、しわを防ぐまたは治療するための組成物。
【請求項１４】
NOS阻害剤がL-NAMEである、請求項13記載の組成物。
【請求項１５】
L-NAMEの重量パーセントが0.01%から10%の範囲である、請求項13記載の組成物。
【請求項１６】
L-NAMEの重量パーセントが0.1%から5%の範囲である、請求項13記載の組成物。
【請求項１７】
芳香剤をさらに含む、請求項13記載の組成物。
【請求項１８】
被検者にしわ予防を提供する方法であって、
NOS阻害剤を含む組成物を被検者に供給する段階；
しわを防ぐまたは軽減するための該組成物の使用に関する取扱説明を被検者に供給する段階
を含む方法。
【請求項１９】
NOS阻害剤がL-NAMEである、請求項18記載の方法。
【請求項２０】
しわ予防が縮緬皺予防である、請求項18記載の方法。
【請求項２１】
日光への曝露に先立って皮膚に組成物を適用する指示が取扱説明に含まれる、請求項18記載の方法。
【請求項２２】
組成物が、化粧品成分をさらに含む、請求項18記載の方法。
【請求項２３】
被検者のしわを防ぐためのキットであって、
NOS阻害物を含む組成物；および
しわを防ぐための組成物の使用に関する取扱説明
を含むキット。
【請求項２４】
NOS阻害剤がL-NAMEである、請求項23記載のキット。
【請求項２５】
しわが縮緬皺である、請求項23記載のキット。
【請求項２６】
組成物が、化粧品成分をさらに含む、請求項23記載のキット。
【請求項２７】
皮膚に組成物を適用する指示が取扱説明に含まれる、請求項23記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は2001年1月25日に出願された米国仮出願第60/264,176号の恩典を主張するものであり、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
背景
本発明はしわを防ぐためにNOS阻害剤を使用することに関する。
【０００３】
一酸化窒素（NO）は、現在までのところ血管拡張、神経伝達、知覚、および免疫応答を含む、ありとあらゆる生理学的過程に関わるとされている（Qureshiらの総説（1996）、Arch Dermatol、132：889-893）。標準状態においては、低濃度で産生されたNOは、遷移金属や他のフリー・ラジカルとの直接的相互作用を介し、メッセンジャーおよび細胞保護（抗酸化）因子として作用する（Liaudetら（2000）、Crit Care Med 28（4 Suppl）：N37-52）。異常な高レベルにおいては、NOは細胞傷害性であり、炎症、循環性ショック、および虚血再灌流障害の病理生理学に関係する（同上）。ヒト組織におけるNOレベルを調節する治療は、心血管適応症および抗炎症適応症ならびに性的不全を対象とした最先端医術となっている（Janero（2000）、Free Radic Biol Med 28：1495-506）。
【０００４】
NOは、一酸化窒素合成酵素（NOS）がL-アルギニンのグアニジン窒素を酸化し、NOとシトルリンを産生することにより、合成される。神経細胞に見出されるタイプI、マクロファージに見出されるタイプII、および内皮細胞に見出されるタイプIII、の3つのNOSアイソフォームが特徴づけられている。NOは、それらの細胞種の3つ全てが見出される皮膚において、活発に産生される。NOの存在下では、ヒト皮膚の微小循環における血流が著しく増加し、NOS阻害剤の存在下では、血管拡張が害される（Warren（1994）、FASEB J、8：247-51；Ralevicら（1992）、Br J Pharmacol、106：650-655）。NOおよびNOSの皮膚における役割についての他の研究では、NOが、乾癬、アトピー性皮膚炎に関与し、およびUV誘導性メラニン産生におけるパラクリンの介在に関与している可能性が示唆される（Kolb-Bachofenら（1994）、Lancet、344：139； Moritaら（1995）、Int J Dermatol、34：294； Romero-Grailletら（1997）、J Clin Invest、 99：635-642）。さらに、様々な皮膚細胞における一酸化窒素合成が、多様な炎症性および免疫性刺激によって調節されるという証拠があり、ヒト皮膚の保持および生理におけるNOおよびNOSの役割を裏付けている（Bruch-Gerharzらの総説、（1998）、J Invest Dermatol、110：1-7）。
【発明の開示】
【０００５】
発明の概要
一般に本発明は、例えば縮緬皺等のしわ、乾燥、またはひび割れといった皮膚の老化症状を防ぐまたは軽減するような、皮膚を治療する方法を特徴とする。その方法は、例えばヒト等の被検者に、有効量のNOS阻害剤、例えばL-NAMEを投与し、例えばしわまたは縮緬皺等の皮膚の老化症状を防ぐまたは治療することを含む。好ましい態様においては、被験者の皮膚は、例えば、被検者が日光に当たった等で、UV照射等の照射（例えばUVB照射）に曝されているか、または被検者がしわ等の皮膚の老化症状を呈する。好ましい態様においては、NOS阻害剤は局所的に投与される。NOS阻害剤は、顔面、胸部、頚部、手、および身体の他の部分に投与され得る。処置は、NOS阻害剤の1回を超す投与、例えば少なくとも2回、3回、または4回の投与を含み得る。処置は、NOS阻害剤を毎日投与することをもまた含み得る。
【０００６】
他の態様においては、この方法は、しわ形成を防ぐまたは治療する必要のある被検者を識別する段階、NOS阻害化合物を投与する段階、および投与のしわ形成に対する効果を評価する段階を含む。好ましい態様においては、被検者の皮膚はUV照射、例えばUVB照射、に曝されている。しわ形成を防ぐまたは治療する必要がある被検者の識別は、例えば、被検者によって、医療サービス機関によって、または化粧品業者によって行われ得る。NOS阻害剤は、例えば、被検者によって、医療サービス機関によって、または化粧品業者によって投与されてもよい。同様に、しわ形成に対する効果の評価は、例えば、被検者によって、医療サービス機関によって、または化粧品業者によって行われてもよい。
【０００７】
本発明は、しわ、例えば縮緬皺を防ぐまたは治療するためのNOS阻害剤を含む組成物をもまた特徴とする。好ましい態様においては、NOS阻害剤は、薬学的に許容される組成物の状態で提供される。好ましい態様においては、その組成物は無菌である。好ましい態様においては、NOS阻害剤の重量パーセントは、0.01%から10%の範囲である。他の好ましい態様においては、NOS阻害剤の重量パーセントは、0.05%から10%の範囲である。その組成物を皮膚に適用した場合、例えば少なくとも2日から100日、より好ましくは少なくとも7日から90日、なお一層好ましくは14から60日の期間、一時的にしわの出現を軽減する効果があるか、またはそれは、より長い期間、例えば少なくとも3か月から9か月、より好ましくは4か月から8か月、または約6か月の間、しわの出現を軽減する効果があり得る。好ましい態様においては、その組成物は芳香剤、保存料、または例えば保湿剤のようなその他の化粧品成分、または例えばオクチルメトキシ桂皮酸、アミノ安息香酸、オキシベンゾン、パディメートO、ホモサラート、もしくは二酸化チタンのような日焼け止め剤をもまた有している。その組成物はクリーム、ローション、フォーム、ゲル、またはその他の化粧品の状態で提供される。
【０００８】
いくつかの態様においては、NOS阻害剤は、例えば誘導体化されるかまたは他の分子と共役される等の修飾を受けていてよい。好ましい態様においては、例えばNOS阻害剤を、より活性、より安定、またはより溶解性にする等、NOS阻害剤はヒトの利用により適するように修飾される。
【０００９】
他の局面において、本発明は、本明細書に記載のNOS阻害組成物、例えばL-NAMEを、好ましくは、UV曝露、例えば太陽光曝露等のUVB曝露に先立ってまたは曝露後に適用するとした取扱説明とともに、被検者に供給することによって、被検者にしわ予防を提供する方法を特徴とする。
【００１０】
他の局面において、本発明は、L-NAME 等のNOS阻害剤を含む組成物と、使用に関する取扱説明、例えば、UV、例えば太陽光曝露のようなUVB等への曝露に先立ってまたは曝露後にその組成物を適用するとした取扱説明とを含む、被検者にしわ予防を提供するためのキットを特徴とする。
【００１１】
本明細書に記載の方法の好ましい態様においては、縮緬皺等のしわは、被検者において、少なくとも5%、好ましくは少なくとも10%、より好ましくは少なくとも20%、25%またはそれより多く減少する。
【００１２】
別段の定義がない限り、本明細書で用いる全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者に通常に理解されるものと同様の意味を有する。本発明の実施または試験においては、本明細書に記載のものと類似または同等な方法および材料を用いることが出来るが、適当な方法および材料を以下に示す。本明細書において言及される全ての文献は、その全体が参照として組み入れられる。矛盾がある場合は、定義を含む本明細書が統制する。加えて、材料、方法、および実施例は、説明的なものにすぎず、限定することを意図するものではない。
【００１３】
本発明のその他の特徴または長所は、以下のいくつかの態様の詳細な説明から、および添付の特許請求の範囲からも明らかになる。
【００１４】
詳細な説明
本発明は、NOS阻害化合物を被検者に投与することにより、しわ形成を防ぐまたは軽減する方法に関する。好ましいNOS阻害剤はL-NAMEである。本発明のもう一つの局面は、NOS阻害剤を有効成分とする組成物を特徴とする。
【００１５】
しわは一般に皮膚の自然な老化過程、および日光の紫外線に曝露した結果である。しわは、組織学的なレベルでの特異的形態変化を伴わない、皮膚の表面における形状変化である。一般にしわは、参照として本明細書に組み入れられたKligmanら（1985）、Br J Derm、113：37-42に記載のとおりに分類される。Kligmanはしわを3つのクラス、線状皺、縦溝状皺、および縮状皺に分類する。線状皺は、直線状であり、顔面の皮膚に見出され、自然な老化過程または紫外線への曝露によって生じる。縦溝状皺は、外見上、しわでできた三角形または四角形の形状をなし、太陽光に曝される顔面、手、および首に見出され、紫外線への曝露により、または皮膚日射により（dermatoheliosis）悪化する。縮状皺は、たるんだ皮膚上の縮れたしわで、皮膚のどこにでも見出されるが、主として手の甲および眼瞼に見出される。
【００１６】
本明細書において、線状皺はさらに(a)普通皺および(b) 縮緬皺に下位分類される。普通皺は、長く、深く、明瞭であって、烏の足とも呼ばれる。縮緬皺は、細く、浅い。例えば、（本質的に、Takasuら（1996）、J Soc Cosmet Chem Japan、29：394-405；および1995年5月2日公開の日本公開特許出願第07-113623号に記載のとおりに、例えば資生堂リンクルアナライザー3D Proシステムを用いて）3次元形状データを2次元フーリエ変換により周波数領域のデータに変換して得られるパワー・スペクトルを使って計算すると、普通皺は、少なくともおよそ155ミクロン（0〜32ヘルツ）、好ましくはおよそ160から250ミクロンの幅を有する。縮緬皺はおよそ154ミクロンより小さく、好ましくはおよそ40から154ミクロン（32-126ヘルツ）の幅を有する。
【００１７】
本明細書で提供する、被検者のしわ、特に縮緬皺を治療しまたは軽減する方法には、被検者にNOS阻害剤を含む組成物を投与することが含まれる。NOS阻害剤のL-NG-ニトロ-アルギニンメチルエステル（L-NAME）は、マウスの背の皮膚に70%エタノール中1%の濃度において投与した場合、UVB曝露によって生じる縮緬皺の形成を防いだ（実施例2）。本発明における使用に適するその他のNOS阻害剤は、N-モノメチル-L-アルギニン（L-NMMA）；N-G-モノメチル-L-アルギニン（NMA）；L-NNA；ARL17477；L-NIL；アミノグアニジン；およびADMAを含むが、それらに限定されない。L-NAMEが好ましいNOS阻害剤である。他のNOS阻害剤は、例えばGapudら、米国特許第5,981,511号； Mjalliら、米国特許第5,723,451号； Hallinanら、米国特許第6,143,790号、Hansenら、米国特許第6,071,906号；Hansenら、米国特許第6,043,261号に記載されており、それらの全ては参照として本明細書に組み入れられる。
【００１８】
本発明における組成物の有効量は、被検者への投与において、被検者のしわ、または縮緬皺の形成を防ぐか、または被検者のしわ、または縮緬皺の出現を軽減する組成物の量として定義される。被検者に投与すべき有効量は、一般的に、年齢、性別、体表面積、体重、および皮膚の状態を含む様々な要因に基づく。体の表面積は、患者の身長および体重から大体求められる。例えば、「Scientific Tables」、ガイギー製薬（Geigy Pharmaceuticals）、Ardley、New York、1970、537を参照のこと。有効量は、当業者において認められるように、投与経路、賦形剤の使用、および例えばその他のしわ軽減組成物を使用するような他の治療との共用の可能性に依存して変化する。
【００１９】
本明細書で用いられるように、「しわを防ぐまたは治療すること」とは、縮緬皺等のしわを有するか、しわになる素因を有するか、または例えばUVB照射等のUV照射のようなしわの原因となる恐れのある要因に曝露された被検者に対する、しわの出現またはしわの形成を軽減し、改善し、緩和し、改め、治療し、和らげ、または影響を及ぼす目的を持った、治療剤の適用または投与を意味する。本発明に係る組成物は、被検者自身によって、または、例えば医療サービス提供者もしくは化粧品業者等の他の者によって、被検者に投与される。
【００２０】
その方法および組成物は、予防的に用いることができ、または被検者において、さらなるしわ形成を防ぐもしくはしわの出現を軽減するために、それらを用いることができる。しわを防ぐまたは治療するための薬剤または化粧品の生産を目的とした、その組成物の使用もまた本発明の範囲内にある。
【００２１】
NOS阻害組成物の投与
しわの防止または軽減のための医薬組成物は、経口、局所、皮下、腹腔内、筋肉内、鼻腔内、および静脈内を含む、非経口の経路を介して投与されてもよい。局所投与が好ましい。組成物の連続投与、例えば連続局所投与を利用することができる。一つより多くの投与経路を同時に、例えば局所投与を経口投与と共同して、利用することができる。非経口投薬形態の例としては、等張食塩水、5%グルコースまたはその他のよく知られた薬学的に許容される賦形剤における主作用物の水溶液が含まれる。サイクロデキストリンのような可溶化剤、または当技術分野に親しい者によく知られたその他の可溶化剤を、しわ軽減組成物の送達のための医薬賦形剤として用いる事ができる。
【００２２】
本発明の組成物は、慣用的な方法を利用し、他の投与経路のための投薬形態に配合することもできる。医薬組成物は、経口投与のための投薬形態である、カプセル、錠剤（それぞれ除放性および持効性の製剤を含む）、またはゲルシールに配合できる。カプセルは、例えばゼラチンまたはセルロース誘導体のような、任意の標準的な薬学的に許容される素材で構成され得る。錠剤は、NOS阻害化合物、固形担体、および潤滑剤の混合物を圧縮することによる慣用的な手段に従って配合できる。固形担体の例には、でんぷんおよび糖のベントナイトが含まれる。しわを軽減する組成物は、例えば結合剤としての乳糖またはマンニトール、慣用的な充填剤、および錠剤加工剤を含む固い殻の錠剤またはカプセルの形状で投与することもできる。
【００２３】
本明細書に記載の、しわを軽減する化合物の局所的な投与においては、上述の多くの異なる経路のうち、好ましい投与の経路が提示される。局所的な適用のために、本発明に係る組成物には、皮膚との相性がよい媒体を含めることができる。そのような局所的医薬組成物は様々な形状であってよく、例えば、溶液、クリーム、軟膏、ゲル、ローション、シャンプー、またはエアロゾルの形状をとり、皮膚への適用に適した製剤であり得る。しわを防ぐまたは軽減するのに有効な、組成物中の有効成分すなわちNOS阻害化合物の重量パーセントは、薬学的に許容される担体との混合物の状態において、0.01%から10%の範囲である（組成物の総重量に基づく）。本発明に係るしわ軽減組成物には、例えばアルコール、アロエベラゲル、アラントイン、グリセリン、ビタミンAおよびビタミンEオイル、ミネラルオイル、ならびにポリエチレングリコールのような、多種多様の担体素材を用いることができる。その他の添加物、例えば保存料、芳香剤、日焼け止め剤、またはその他の化粧品成分が組成物中に存在していてよい。その局所組成物は、適用してから速やかに除去してもよく、あるいはそれを適用してから、例えば一晩または終日のような長時間に渡って、顔面等の皮膚表面に残したままにしておいてもよい。
【００２４】
しわの測定
しわの形成または出現における組成物の効果は、例えば目視検査によって質的に、または例えばしわの形態についてのコンピューターを用いた測定によって量的に評価できる。好ましくは、しわの形態は量的に解析される。しわを測定する定量的方法の例には、参照として本明細書に組み入れられるHoshinoら（1992）、Pixel、45：121提案のレーザー光線を用いた光学的切断法；または例えば資生堂リンクルアナライザー3D Proシステム（Takasuら（1996）、J Soc Cosmet Chem Japan、29：394-405；日本公開特許出願第07-113623号、公開日1995年5月2日（米国特許出願第08/364,346号に相当））等の3次元皮膚レプリカを解析する方法が含まれるが、それらに限定されるものではない。SILFLO（Flexico Development Ltd.）システムまたは同様のシステムが皮膚のレプリカをとるために用いられる。皮膚レプリカの表面のでこぼこ、例えばしわは、例えば資生堂リンクルアナライザー3D Proシステムまたは同様のシステムにより解析され、皮膚に対応する二次元平面上の地点における高さから、三次元形状データが与えられる。その三次元形状データに従い、それぞれのしわの長さ、幅、深さ、面積、および容積が計算される。従って、本明細書に記載された普通皺および縮緬皺のパラメーターに従い、普通皺および縮緬皺のサブクラスを含む異なるクラスのしわを個別に認識し、点数をつけることができる。
【００２５】
本発明に係るしわ軽減組成物およびそのような組成物の動物実験について記述する以下の特定の実施例は、単に説明的なものであると解釈され、方法の如何を問わず、決して本開示の他の部分を制限するものではない。
【００２６】
実施例
実施例１
NOS阻害剤の皮膚への局所的適用による刺激の可能性を検査するために、耳腫脹反応の測定を以下のように行った：10週齢メスBalb/Cマウス3匹それぞれの両耳の厚さを隙間ゲージ（Mitsutoyo Corp.）により測定した。それぞれの右耳に70%エタノール水溶液中1%のL-NAME（L-NG-ニトロ-アルギニンメチルエステル）を10マイクロリットル適用し、対照として、それぞれの左耳に70%エタノール水溶液を10マイクロリットル適用した。それらの溶液の投与から連続2日に渡り、耳の厚さを観測した。3匹のマウスからの測定値を平均化し、表1に提供する。図のように、対照耳およびL-NAME処理耳の間で、耳の厚さに統計的に有意な差はなく、70%エタノール中1%のL-NAMEが皮膚炎症の原因にならないことを示した。加えて、L-NAME処理耳では、対照に対し、赤みまたは剥離のような他の皮膚刺激または炎症の徴候は観察されなかった。
【００２７】
【表１】
2004520388.tif 000002
【００２８】
実施例2
しわ形成に対するL-NAMEの効果を検査するために、マウス（HR-1無毛系統、メス、5週齢、n=3）の背の皮膚を用いて、皮膚レプリカを取り解析することにより、しわ測定実験を行った。
【００２９】
マウスは、0.3mW/cm2から開始し、週3回、10週に渡ってUVB照射に曝露した。合計の曝露量は4.662J/cm2であった。70%エタノール中1%のL-NAME、または対照として70%エタノールを、それぞれのUVB照射の後、100マイクロリットル適用した。最後のUVB照射から3日目に、SILFLO（Flexico Development Ltd.）の方法によって背部領域の皮膚レプリカを取った。レプリカは資生堂のリンクルアナライザー3D Proシステムにより評価した（本質的にTakasuら（1996）、J Soc Cosmet Chem Japan、29：394-405に記載のとおり）。普通皺および縮緬皺のしわ体積および幅は、3次元データによって計算した。結果を表2に提供する。認められるとおり、L-NAME処理マウスは未処理対照マウスに比して縮緬皺の軽減を示し、70%エタノール中1%のL-NAMEによりUVB照射を原因とするしわ形成を防止できることが示された。
【００３０】
【表２】
2004520388.tif 000003
【国際公開パンフレット】
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2004520388.tif 000005
2004520388.tif 000006
2004520388.tif 000007
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2004520388.tif 000011
2004520388.tif 000012
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【国際調査報告】
2004520388.tif 000018