(57)【要約】温血動物にてＣＲＦの分泌過多を示す、発作などの障害の治療を含め、種々の障害の治療にて有用性を有するＣＲＦ受容体アンタゴニストを開示する。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、立体異性体、プロドラッグおよび医薬上許容される塩を含む、以下の式（Ｉ）の構造を有する。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ａ、ＸおよびＹは本明細書に定義したとおりである。ＣＲＦ受容体アンタゴニストを医薬上許容される担体と組み合わせて含有する組成物ならびにその組成物の使用法も開示されている。
2004530702.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式：
【化１】
2004530702.tif 000020
［式中：
Ａは結合またはＣ＝（Ｚ）であり；
Ｘは窒素またはＣＲ３であり；
Ｙは−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｃ（Ｒ８）＝または−Ｏ−であり；
ＺはＯ、ＳまたはＮＲ９であり；
Ｒ１はアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ２は水素、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、シアノまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は水素、アルキル、置換アルキル、ハロまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、アリール、置換アリール、ヘテロサイクルまたは置換ヘテロサイクルであり；
Ｒ５は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ６は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ７は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ８は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）アルキル、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ９は水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；および
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールを意味する］
で示される化合物あるいはその立体異性体、プロドラッグまたは医薬上許容される塩。
【請求項２】
ＸがＣＲ３である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが窒素である請求項１記載の化合物。
【請求項４】
次式：
【化２】
2004530702.tif 000021
［式中、
Ｒ１はアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ２は水素、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、シアノまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は水素、アルキル、置換アルキル、ハロまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、アリール、置換アリール、ヘテロサイクルまたは置換ヘテロサイクルであり；
Ｒ５は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ６は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ７は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ８は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）アルキル、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；および
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールを意味する］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
次式：
【化３】
2004530702.tif 000022
［式中、
Ｒ１はアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ２は水素、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、シアノまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は水素、アルキル、置換アルキル、ハロまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、アリール、置換アリール、ヘテロサイクルまたは置換ヘテロサイクルであり；
Ｒ５は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ６は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；
Ｒ８は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）アルキル、ＮＲ１０Ｒ１１またはシアノであり；および
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールを意味する］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−５−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチルフェニル］１,２,２ａ,３,４,５−ヘキサヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン；
３−メチル−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル；
４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−３−メチル−ベンゾニトリル；
３−クロロ−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル；
３−クロロ−４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル；
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン；
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６−トリアザ−アセナフチレン
からなる群にて選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
請求項１記載の化合物を医薬上許容される担体または希釈体と組み合わせて含む、組成物。
【請求項８】
温血動物にてＣＲＦの分泌過多を示す障害の治療方法であって、当該動物に有効量の請求項７記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項９】
障害が卒中である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
障害が鬱病である、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
障害が不安である、請求項８記載の方法。
【請求項１２】
障害が過敏性腸症候群（ＩＢＳ）である、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
障害が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、請求項８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに、およびかかるアンタゴニストをそれを必要とする温血動物に投与することによる障害の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最初の副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）はヒツジの視床下部より単離され、４１−アミノ酸ペプチドであると同定された（Valeら、Science ２１３：１３９４−１３９７、１９８１）。その後、ヒトおよびラットＣＲＦが単離され、その配列は同一であるが、４１個のアミノ酸残基の７個にてヒツジＣＲＦと異なると決定された（Rivierら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA ８０：４８５１、１９８３；Shibaharaら、EＭBO J. ２：７７５、１９８３）。
【０００３】
ＣＲＦは内分泌腺、神経および免疫系機能にて著しい変化をもたらすことが判明した。ＣＲＦは副腎皮質刺激ホルモン（「ＡＣＴＨ」）、β−エンドルフィンおよび他のプロオピオメラノコルチン（「ＰＯＭＣ」）誘導ペプチドの下垂体前葉からの基底およびストレス放出の主たる生理学的調整物質であると考えられる（Valeら、Science ２１３：１３９４−１３９７、１９８１）。簡単に言えば、ＣＲＦは、脳（DeSouzaら、Science ２２４：１４４９−１４５１、１９８４）、下垂体（DeSouzaら、Methods Enzymol. １２４：５６０、１９８６；Wynnら、Biochem. Biophys. Res. Comm. １１０：６０２−６０８、１９８３）、副腎（Udelsmanら、Nature ３１９：１４７−１５０、１９８６）および脾臓（Webster, E.L.およびE.B. DeSouza、Endocrinology １２２：６０９−６１７、１９８８）全体に分布していることが分かっている原形質膜受容体に結合することでその生物学的作用を発揮すると考えられる。ＣＲＦ受容体は、ＣＲＦ刺激のｃＡＭＰの細胞内産生の増加を媒介する、ＧＴＰ−結合蛋白（Perrinら、Endocrinology １１８：１１７１−１１７９、１９８６）にカップリングする（Bilezikjian、L.M.およびW.W. Vale、Endocrinology １１３：６５７−６６２、１９８３）。今では、ＣＲＦの受容体は、ラット（Perrinら、Endo １３３（６）：３０５８−３０６１、１９９３）およびヒトの脳（Chenら、PNAS ９０（１９）：８９６７−８９７１、１９９３；Vitaら、FEBS ３３５（１）：１−５、１９９３）からクローンされている。この受容体は７つの膜スパンニング領域を含む４１５個のアミノ酸蛋白である。ラットとヒトの配列の間で同一性を比較すると、アミノ酸レベルで高度の相同性（９７％）を示す。
【０００４】
ＡＴＣＨおよびＰＯＭＣの産生を刺激するという役割に加えて、ＣＲＦはまたストレスに対する内分泌、自律神経および行動応答の多くを調整すると考えられる。情動障害の病理発生に関与しているかもしれない。その上、ＣＲＦは、免疫系、中枢神経系、内分泌系および心血管系の間の連絡における重要な中間体であると考えられる（Croffordら、J. Clin. Invest. ９０：２５５５−２５６４、１９９２；Sapolskyら、Science ２３８：５２２−５２４、１９８７；Tildersら、Regul. Peptides ５：７７８４、１９８２）。全体として、ＣＲＦは極めて重要な中枢神経系伝達物質の一つであるのは明らかであり、身体のストレスに対するすべての応答を一体化する重大な役割を果たす。
ＣＲＦを脳に直接投与すると、ストレスの多い環境に曝された動物に観察される応答と同じ行動的、生理学的および内分泌応答が惹起される。例えば、ＣＲＦを脳室内に注入すると、行動活性化（Suttonら、Nature ２９７：３３１、１９８２）、脳波図の持続的活性化（Ehlersら、Brain Res. ２７８：３３２、１９８３）、交感神経副腎髄質経路の刺激化（Brownら、Endocrinology １１０：９２８、１９８２）、心拍数および血圧の上昇（Fisherら、Endocrinology １１０：２２２２、１９８２）、酸素消費の増加（Brownら、Life Sciences ３０：２０７、１９８２）、胃腸活性の変更（Williamsら、Am. J. Physiol. ２５３：Ｇ５８２、１９８７）、食物消費の抑制（Levineら、Neuropharmacology ２２：３３７、１９８３）、性行動の修飾（Sirinathsinghjiら、Nature ３０５：２３２、１９８３）および免疫機能減弱（Irwinら、Am. J. Physiol. ２５５：Ｒ7４４、１９８８）がもたらされる。
【０００５】
さらには、臨床データは、ＣＲＦが鬱病、不安−関連障害、および拒食症の脳において分泌過多である可能性のあることを示唆する（DeSouza、Ann. Reports in Med. Chem. ２５：２１５−２２３、１９９０）。したがって、臨床データは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦの分泌過多を示す精神神経障害の治療に有用であるかもしれない、新規な抗欝薬および／または抗不安薬である、可能性のあることを示唆する。
最初のＣＲＦ受容体アンタゴニストはペプチドであった（例えば、Rivierら、米国特許第４６０５６４２号；Rivierら、Science ２２４：８８９、１９８４を参照のこと）。これらのペプチドはＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦに対する薬理応答を弱め得ることを確立したが、ペプチド性ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、安定性の欠如および経口活性の制限を含む、ペプチド治療薬の一般的な欠点を有する。さらに最近になって、小型分子ＣＲＦ受容体アンタゴニストが報告された。例えば、置換４−チオ−５−オキソ−３−ピラゾリン誘導体（Abreuら、米国特許第５０６３２４５号）および置換２−アミノチアゾール誘導体（Courtemancheら、オーストラリア特許ＡＵ−Ａ−４１３９９／９３）はＣＲＦ受容体アンタゴニストとして報告されている。これら、個々の誘導体は、ＣＲＦのその受容体との結合を、各々、１−１０μＭの範囲および０.１−１０μＭの範囲にて阻害するのに効果的であることが判明した。
【０００６】
ＣＲＦのこの生理学的有意性のため、有意なＣＲＦ受容体結合活性を有し、ＣＲＦ受容体に拮抗作用を及ぼすことのできる、生物学的に活性な小型分子を開発することは、いまなお、望ましい目標である。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストは内分泌、一般にストレス関連障害を含む、精神病理学および神経学的症状または病気の治療に有用であろう。
ＣＲＦ受容体アンタゴニストを投与することでＣＲＦの制御を獲得することに向かう有意な一歩がなされたが、当該分野には効果的な小型分子のＣＲＦ受容体アンタゴニストに対する要求が今なお存在する。さらには、かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物ならびに、例えば、ストレス関連障害を治療するためのその使用に関する方法に対する要求もある。本発明はこれらの要求を満たすものであり、関連する別の利点も提
供する。
【０００７】
（発明の要約）
要約すれば、本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに、さらに詳細には、以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
2004530702.tif 000003
（Ｉ）
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ａ、ＸおよびＹは下記と同意義である］
で示される、立体異性体、プロドラッグまたは医薬上許容される塩を含む、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに関する。
【０００８】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは広範囲に及ぶ治療用途にわたって有用性を有し、ストレス関連障害を含む、種々の障害または病気の治療に用いることができる。かかる方法は、好ましくは医薬組成物の形態の、有効量の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストをそれを必要とする動物に投与することを含む。したがって、もうひとつ別の具体例において、１またはそれ以上の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを、医薬上許容される担体および／または希釈体と組み合わせて含有する医薬組成物が開示される。
本発明のこれらのおよび他の態様は、以下の詳細な記載を参考にして明らかとなるであろう。このために、さらに詳細な特定の操作、化合物および／または組成物を記載する種々の文献が本明細書にて引用されており、その出典を明示することで本明細書の一部とする。
【０００９】
（発明の詳細な記載）
本発明は、一般に、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）受容体アンタゴニストとして有用な化合物に関する。
第１の具体例において、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、次式（Ｉ）：
【化２】
2004530702.tif 000004
（Ｉ）
【００１０】
［式中：
Ａは結合またはＣ＝（Ｚ）であり；
Ｘは窒素またはＣＲ3であり；
Ｙは−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒ7）−、−Ｃ（Ｒ8）＝または−Ｏ−であり；
ＺはＯ、ＳまたはＮＲ9であり；
Ｒ1はアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ2は水素、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロ、シアノまたはハロアルキルであり；
Ｒ3は水素、アルキル、置換アルキル、ハロまたはハロアルキルであり；
Ｒ4は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ1、アリール、置換アリール、ヘテロサイクルまたは置換ヘテロサイクルであり；
Ｒ5は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ1、ＮＲ10Ｒ11またはシアノであり；
【００１１】
Ｒ6は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ1、ＮＲ10Ｒ11またはシアノであり；
Ｒ7は水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ1、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ8は水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、チオアルキル、Ｃ（Ｏ）アルキル、ＮＲ10Ｒ11またはシアノであり；
Ｒ9は水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ10およびＲ11は、同一または異なっていてもよく、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールを意味する］
で示される化合物あるいはその立体異性体、プロドラッグまたは医薬上許容される塩である。
【００１２】
本明細書中で用いる場合、上記した語は以下の意味である：
「アルキル」とは、炭素数１ないし１０の、直鎖または分岐鎖の、非環状または環状の、不飽和または飽和の、脂肪族炭化水素を意味する。「低級アルキル」なる語は、アルキルと同じ意義を有するが、炭素数が１ないし６である。代表的な飽和直鎖アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等を包含するのに対して、飽和分岐鎖アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、イソペンチル等を包含する。代表的な飽和環状アルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ＣＨ2シクロプロピル、−ＣＨ2シクロブチル、−ＣＨ2シクロペンチル、−ＣＨ2シクロヘキシル等を包含するのに対して、不飽和環状アルキルはシクロペンテニルおよびシクロヘキセニル等を包含する。環状アルキルは「同素環式環」とも言われ、デカリンおよびアダマンチルなどのジ−およびポリ−同素環式環を包含する。不飽和アルキルは隣接する炭素原子の間に少なくとも１個の二重または三重結合を含有する（各々、「アルケニル」または「アルキニル」と称される）。代表的な直鎖および分岐したアルケニルは、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−ブテニル、２,３−ジメチル−２−ブテニル等を包含するのに対して、代表的な直鎖および分岐したアルキニルは、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル等を包含する。
【００１３】
「アリール」はフェニルまたはナフチルなどの芳香族炭素環式部分を意味する。
「アリールアルキル」は、少なくとも１個のアルキル水素原子がベンジル、−ＣＨ2−（１または２−ナフチル）、−（ＣＨ2）2フェニル、−（ＣＨ2）3フェニル、−ＣＨ（フェニル）2等で置換されている、アルキルを意味する。
「ヘテロアリール」とは、単環式および二環式環系を含め、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含有する、５ないし１０員の芳香族複素環式環を意味する。代表的なヘテロアリールは（限定するものではないが）フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンズチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタルアジニルおよびキナゾリニルを包含する。
【００１４】
「ヘテロアリールアルキル」は、少なくとも１個のアルキルの水素原子が−ＣＨ2ピリジニル、−ＣＨ2ピリミジニル等で置換されているアルキルを意味する。
「ヘテロサイクル」（本明細書中で「ヘテロサイクル環」ともいう）は、５−ないし７−員の単環式、または７−ないし１４−員の多環式の、飽和、不飽和または芳香族の、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される１ないし４個のヘテロ原子を含有するヘテロサイクル環をいい、その窒素および硫黄ヘテロ原子は所望により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は所望により４級化されていてもよく、上記したヘテロサイクルのいずれかがベンゼン環に縮合した二環式環ならびに三環式（およびそれ以上の）複素環式環を包含する。ヘテロサイクルはヘテロ原子または炭素原子を介して結合していてもよい。ヘテロサイクルは上記したヘテロアリールを包含する。かくして、上記した芳香族へテロアリールに加えて、ヘテロサイクルはまた、（限定するものではないが）モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル等を包含する。
【００１５】
「ヘテロサイクルアルキル」は、少なくとも１個のアルキル水素原子がヘテロサイクルで置換されているアルキル、例えば、−ＣＨ2モルホリニル等を意味する。
「シクロアルキル」は、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロヘキセン等の３ないし８個の炭素原子を含有する飽和または不飽和（芳香族ではない）炭素環式環を意味する。
「シクロアルキルシクロアルキル」は、デカリンなどの、シクロアルキル環に縮合したシクロアルキル環を意味する。
「シクロアルキルアリール」は、テトラリンなどのアリールに縮合したシクロアルキルを意味する。
「シクロアルキルヘテロサイクル」は、ヘテロサイクル環に縮合したシクロアルキル環を意味する。
【００１６】
本明細書にて用いる「置換」なる語は、少なくとも１個の水素原子が一の置換基により置換されている、上記したいずれかの基（例えば、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクル、ヘテロサイクルアルキル等）を意味する。ケト置換基（「−Ｃ（＝Ｏ）−」）の場合には、２個の水素原子が置換されている。置換されている場合、本発明の文脈内にある「置換基」は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクル、置換ヘテロサイクル、ヘテロサイクルアルキル、置換ヘテロサイクルアルキル、−ＮＲaＲb、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）Ｒb、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）ＯＲb、−ＮＲaＳＯ2Ｒb、−ＯＲa、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＳＨ、−ＳＲa、−ＳＯＲa、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒa、−ＯＳ（＝Ｏ）2Ｒa、−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＲaを包含する。ここで、ＲaおよびＲbは、同一または異なり、独立して水素、アルキル、ハロアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクル、置換ヘテロサイクル、ヘテロサイクルアルキルまたは置換ヘテロサイクルアルキルである。
【００１７】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。
「ハロアルキル」は、少なくとも１つの水素原子がハロゲンで置換されているアルキル、例えばトリフルオロメチル等を意味する。
「アルコキシ」は、酸素架橋を介して結合したアルキル部分（すなわち、−Ｏ−アルキル）、例えば、メトキシ、エトキシ等を意味する。
「アルキルチオ」は、硫黄架橋を介して結合したアルキル部分（すなわち、−Ｓ−アルキル）、例えば、メチルチオ、エチルチオ等を意味する。
「アルキルスルホニル」は、スルホニル架橋を介して結合したアルキル部分（すなわち、−Ｓ０２−アルキル）、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル等を意味する。
「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」は、窒素架橋を介して結合した１または２個のアルキル部分（すなわち、−Ｎ−アルキル）、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等を意味する。
【００１８】
「ヒドロキシアルキル」は少なくとも１つのヒドロキシル基で置換されたアルキル基を意味する。
「モノ−またはジ（シクロアルキル）メチル」は、１または２個のシクロアルキル基で置換されたメチル基、例えばシクロプロピルメチル、ジシクロプロピルメチル等をいう。
「アルキルカルボニルアルキル」はＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルをいう。
「アルキルカルボニルオキシアルキル」はＣ（＝Ｏ）Ｏアルキル基または−ＯＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルをいう。
「アルキルオキシアルキル」はＯ−アルキル基で置換されたアルキルをいう。
「アルキルチオアルキル」はＳ−アルキル基で置換されたアルキルをいう。
「モノ−またはジ（アルキル）アミノ」は、各々、１個のアルキルまたは２個のアルキルで置換されたアミノをいう。
「モノ−またはジ（アルキル）アミノアルキル」はモノ−またはジ（アルキル）アミノで置換されたアルキルをいう。
【００１９】
Ａ、ＸおよびＹ置換基に応じて、本発明の代表的化合物は以下の構造式（ＩＩ）ないし（ＸＩＩ）の化合物を包含する：
【化３】
2004530702.tif 000005
【００２０】
本発明のさらに詳細な具体例において、本発明の代表的なＲ1基は、（限定するものではないが）２,４−ジクロロフェニル、２,４−ジメチル−フェニル、２−クロロ−４−メチルフェニル、２−メチル−４−クロロフェニル、２,４,６−トリメチルフェニル、２−クロロ−４−メトキシフェニル、２−メチル−４−メトキシフェニル、２,４−ジメトキシフェニル、２−トリフルオロメチル−４−クロロフェニル、３−メトキシ−４−クロロフェニル、２,５−ジメトキシ−４−クロロフェニル、２−メトキシ−４−トリクロロメチルフェニル、２−メトキシ−４−イソプロピルフェニル、２−メトキシ−４−トリフルオロメチルフェニル、２−メトキシ−４−イソプロピルフェニル ２−メトキシ−４−メチルフェニル、４−メチル−６−ジメチルアミノピリジン−３−イル、４−ジメチルアミノ−６−メチル−ピリジン−３−イル、６−ジメチルアミノ−ピリジン−３−イルおよび４−ジメチルアミノ−ピリジン−３−イルを包含する。
同様に、代表的なＲ2基は、水素およびアルキル、例えば、メチルおよびエチルを包含し、代表的なＲ3基は、水素、ハロゲン、例えば、塩素、フッ素および臭素、アルキル、例えば、メチルおよびエチル、またはハロアルキル、例えば、トリフルオロメチルを包含する。
【００２１】
本発明の好ましい化合物は、
７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−５−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチルフェニル］１,２,２ａ,３,４,５−ヘキサヒドロ１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン（５−１−１）；
３−メチル−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル（５−１−２）；
４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−３−メチル−ベンゾニトリル（５−１−３）；
３−クロロ−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル（５−１−４）；
３−クロロ−４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル（５−１−５）；
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン（５−１−６）；
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６−トリアザ−アセナフチレン（６−１−１）である。
【００２２】
本発明の化合物は、一般に、遊離塩基として利用することができる。また、本発明の化合物は酸付加塩として用いることもできる。本発明の遊離塩基アミノ化合物の酸付加塩は、当該分野にて周知の方法により調製することができ、有機および無機酸から形成することができる。
適当な有機酸は、マレイン酸、リンゴ酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸を包含する。適当な無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸を包含する。かくして、構造式（Ｉ）の「医薬上許容される塩」なる語は、いずれの、およびすべての許容される塩の形態を包含するものである。
一般に、構造式（Ｉ）の化合物は、当業者に知られている有機合成技法に従って、ならびに実施例に記載される代表的方法に従って製造することができる。
【００２３】
特に、式（ＸＩａ）の化合物は、化合物（ＸＩＩＩ）（そのヒドロキシ基は適当な保護基（ｐｇ）で保護されている）から出発する、次のスキーム１に従って調製することができる。その製法は以下の実施例に記載されている：
【化４】
2004530702.tif 000006
【００２４】
ここで、
工程ａ：例えば、オゾン化による二重結合の酸化開裂に付し、つづいて還元的後処理に付す工程を示す。
工程ｂ：ヒドロキシ基の脱離基、例えばメシラートへの変換を示す。
工程ｃ：強塩基性条件下、適当なアニリン誘導体Ｒ1ＮＨ2を用いてアルキル化に付し、つづいて「系内」分子内環化に付す工程を示す。
工程ｄ：ヒドロキシ保護基の脱保護（例えば、ＤＭＦ中、室温で一夜、Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦを用いる脱保護）を示す。
工程ｅ：ヒドロキシ基の脱離基、例えばメシラートへの変換を示す。
工程ｆ：加熱による適当なアミンＲ4ＮＨ2との反応を示す。
工程ｇ：適当な酸化剤（例えば、ＤＤＱ）を用いる酸化による脱水素化を示す。
【００２５】
出発化合物（ＸＩＩＩ）は、通常、次のスキーム２に従って調製することができる：
【化５】
2004530702.tif 000007
【００２６】
ここで、
工程ａ’：適当なアミジンとの反応および塩基性条件（すなわち、ＭｅＯＮａ、還流トルエン）下での分子内環化を示す。
工程ｂ’：塩素化を示す（Wayne G. C.ら、J. Prakt. Chem.、（２０００）、３４２（５）、５０４−７に記載の塩素化と同様の方法にて行う）
工程ｃ’：０℃での塩基性条件（例えば、ＬｉＨＭＤＳ）でヨウ化アリルを用いるアリル化を示す。
工程ｄ’：通常の条件（ＣＨ2Ｃｌ2、０℃ないし室温）下、適当な還元剤、例えば、ＤＩＢＡＩ−Ｈでのエステル基の還元を示す。
工程ｅ’：好ましくは、触媒としてのＤＭＡＰを含むＤＭＦ中のｔ−ＢｕＰｈ2ＳｉＣｌ（ＴＢＰ）でのヒドロキシ基の保護（０℃ないし室温）を示す。
【００２７】
式（ＸＩｂ）の化合物は、都合よくは、式（ＸＸＶ）の化合物から出発する、次のスキーム３に従って調製できる：
【化６】
2004530702.tif 000008
【００２８】
ここで、
工程ａ”：ｎ−ＢｕＬｉのような適当な有機塩基の存在下、適当なイリドを用いるウィッティヒ反応による炭素原子のホモログ化を示す。該反応はアセトニトリルなどの非プロトン性溶媒またはテトラヒドロフランなどのエーテル中で行われる。
工程ｂ”：エノールエーテル（ＸＸＶＩ）の酸性条件（例えば、ＴＨＦ中ＨＣｌ）における一般的加水分解を示す。
工程ｃ”：適当な還元剤（例えば、ＮａＢＨ4）によるアルデヒド基の還元を示す。
工程ｄ”：イミダゾールおよびＤＭＡＰを触媒として含むＤＭＦ中の、好ましくはｔ−ＢｕＭｅ2ＳｉＣｌ（ＴＢＳ）を用いるヒドロキシの保護を示す。
工程ｅ”：適当なアニリン誘導体Ｒ1ＮＨ2とのマイクロ波アシストバックウォルド反応を示す。
工程ｆ”：ヒドロキシ保護基の脱保護を示す（例えば、ＤＭＦ中のＥｔ3Ｎ・３ＨＦ、室温、一夜）。
工程ｇ”：ヒドロキシ基の脱離基、例えばメシラートへの変換を示す。
工程ｈ”：塩基性条件における分子内環化を示す。
【００２９】
別法として、最終化合物（ＸＩｂ）は、分子内環化、例えば、塩基性条件（すなわち、Ｅｔ3Ｎ）にてヒドロキシ基をメシル化し、つづいて系内環化（工程ｉ）に付すことにより化合物（ＸＸＸＩ）から得ることができる。
化合物（ＸＩａ）および（ＸＩｂ）に関する本発明の好ましい具体例において、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6およびＲ8は水素である。
適当なヒドロキシ保護基として、例えば、トリメチルシリルまたはｔ−ブチルジメチルシリルエーテルなどのトリヒドロカルビルシリルエーテルが挙げられる。ヒドロキシル保護基は周知の標準的操作（J F W ＭcOmie（Plenum Press、１９７３）により編集された、Protective Groups in Organic Chemistry、４６−１１９頁に記載の操作）により除去することができる。例えば、Ｒbがｔ−ブチルジメチルシリル基である場合、トリエチルアミン三臭化水素酸塩で処理することにより除去することができる。
【００３０】
本発明はまた、１またはそれ以上の原子が通常天然に存在する原子量または質量数と異なる原子量または質量数を有する原子により置換されているという事実を別にすれば、式Ｉにて示される化合物と同一である、同位体標識された化合物を包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体として、例えば、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、ヨウ素および塩素、例えば、3Ｈ、11Ｃ、14Ｃ、8Ｆ、123Ｉおよび125Ｉが挙げられる。上記した同位体および／または別の原子の他の同位体を含有する本発明の化合物および当該化合物の医薬上許容される塩は本発明の範囲内にある。同位体標識された本発明の化合物、例えば、3Ｈ、14Ｃなどの放射性同位元素を組み込んだ化合物は薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化された、すなわち、3Ｈおよびカーボン１４、すなわち14Ｃ同位元素がその調製および検出を容易にするのに特に好ましい。11Ｃおよび8Ｆ同位元素がＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）にて特に有用であり、125ＩがＳＰＥＣＴ（単光子放出コンピュータ断層撮影）にて特に有用であり、そのすべてが脳撮像にて有用である。さらには、重水素、すなわち、2Ｈなどの重同位元素を用いて置換することで、より大きな代謝安定性に由来のある治療的利点、例えば、インビボ半減期の増加または投与量の減少を得ることができるため、ある環境下では好ましい可能性がある。同位体標識された本発明の式Ｉの化合物等は、一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識された試薬を用いて、スキームおよび／または実施例に開示されている操作を実施することで調製することができる。
【００３１】
一の化合物のＣＲＦ受容体アンタゴニストとしての有用性は、種々のアッセイ方法により測定することができる。本発明の適当なＣＲＦアンタゴニストはＣＲＦのその受容体との特異結合を阻害し、ＣＲＦに付随する活性に拮抗作用を及ぼす能力を有する。構造式（Ｉ）の化合物を、DeSouzaら（J. Neuroscience ７：８８、１９８７）およびBattagliaら（Synapse １：５７２、１９８７）に開示されているアッセイ（これに限定されない）を含む、この目的に一般に許容される１またはそれ以上のアッセイにより、ＣＲＦアンタゴニストとしての活性を評価してもよい。上記したように、適当なＣＲＦアンタゴニストはＣＲＦ受容体アフィニティを示す化合物を包含する。ＣＲＦ受容体アフィニティは、放射性標識されたＣＲＦ（例えば、［125Ｉ］チロシン−ＣＦＲ）のその受容体（例えば、ラットの大脳皮質膜から調製された受容体）への結合を阻害する化合物の能力を測定する結合実験により測定することができる。DeSouzaら（前掲、１９８７）に記載の放射性リガンド結合アッセイは、化合物のＣＲＦ受容体に対するアフィニティを測定するためのアッセイを提供する。かかる活性は、典型的には、放射性標識されたリガンドの５０％を受容体からディスプレイスさせるのに必要な化合物の濃度としての、ＩＣ５０から計算され、次式：
【数１】
2004530702.tif 000009
［式中、Ｌは放射性リガンドを示し、ＫDは放射性リガンドの受容体に対するアフィニティを示す（Cheng and Prusoff、Biochem. Pharmacol. ２２：３０９９、１９７３）］
で示される式によって計算される「Ｋi」値として報告されている。
【００３２】
化合物のＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、ＣＲＦ受容体の結合を阻害することに加えて、化合物のＣＲＦに付随する活性に拮抗作用を及ぼす能力によって確立されてもよい。例えば、ＣＲＦは、アデニレートシクラーゼ活性を含む、種々の生化学工程を刺激することが分かっている。したがって、例えば、ｃＡＭＰレベルを測定することにより、ＣＲＦ−刺激のアデニレートシクラーゼ活性に拮抗作用を及ぼすその能力により化合物をＣＲＦアンタゴニストとして評価することもできる。Battagliaら（前掲、１９８７）によって記載されているＣＲＦ刺激のアデニレートシクラーゼ活性アッセイは、ＣＲＦ活性に拮抗作用を及ぼす化合物の能力を測定するためのアッセイを提供する。したがって、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、一般に、（DeSouza（前掲、１９８７）により開示されるような）初期結合アッセイを、つづいて（Battaglia（前掲、１９８７）により開示されるような）ｃＡＭＰスクリーニングプロトコルを含む、アッセイ技法により測定することができる。
【００３３】
ＣＲＦ受容体結合アフィニティに関して、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは１０μＭよりも小さなＫi値を有する。本発明の好ましい具体例において、ＣＲＦ受容体アンタゴニストは１μＭよりも小さなＫiを有し、より好ましくは０．２５μＭ（すなわち、２５０ｎＭ）よりも小さなＫiを有する。以下により詳細に述べるように、本発明の代表的な化合物のＫi値は実施例７に記載の方法によりアッセイすることができる。
【００３４】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストはＣＲＦ受容体部位で活性を示し、内分泌障害、精神病理学、神経学的障害または疾病を含む、広範囲にわたる障害または疾病の治療薬として用いることができる。さらに詳細には、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦの分泌過多に起因する生理学的症状または障害の治療に有用である。ＣＲＦはストレスに対して内分泌腺、行動および自己応答を活性化し、調整する極めて重要な神経伝達物質であると考えられるため、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを用いて神経精神障害を治療することができる。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストで治療できる神経精神障害は、鬱病などの情動障害；全般性不安障害、パニック障害、強迫障害、異常攻撃、心血管異常、例えば、不安定狭心症および反応型高血圧などの不安関連障害；および拒食症、過食症および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）などの摂食障害を包含する。ＣＲＦアンタゴニストはまた、種々の病態に付随するストレス誘発免疫抑制の治療、ならびに発作の治療に有用である。本発明のＣＲＦアンタゴニストの他の用途として、炎症性症状（関節リウマチ、ブドウ膜炎、喘息、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および胃腸の運動性など）、クッシング病、乳児痙攣、子供および大人両方における癲癇および他の発作、および種々の薬物濫用症状（アルコール依存症を含む）の治療が挙げられる。
【００３５】
本発明のもうひとつ別の具体例において、１またはそれ以上のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物が開示される。投与のために、本発明の化合物を医薬組成物として処方してもよい。本発明の医薬組成物は本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニスト（すなわち、構造式（Ｉ）の化合物）および医薬上許容される担体および／または希釈体を含む。ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、個々の障害の治療に効果的な量にて、すなわち、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性をもたらし、好ましくは患者に対する毒性が許容しうる、十分な量にて、組成物に配合されている。本発明の医薬組成物は、投与経路に応じて、用量当たり０．１ｍｇないし２５０ｍｇの量のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含むことが好ましい。より好ましくは１ｍｇないし６０ｍｇの量である。適当な濃度および用量は当業者が容易に決定することができる。
【００３６】
医薬上許容される担体および／または希釈体は当業者に周知である。液体として処方される組成物の場合、許容される担体および／または希釈体はセイラインおよび滅菌水を包含し、所望により酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および他の一般的添加剤を含んでいてもよい。組成物はまた、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、希釈体、分散および界面活性剤、結合剤および滑沢剤を含有する、ピル、カプセル、顆粒または錠剤として処方することもできる。当業者はさらには、ＣＲＦ受容体アンタゴニストをRemington's Pharmaceutical Sciences、Gennaro、Ed.、Ｍack Publishing Ｃo.、Easton、PＡ１９９０に開示されている許容される薬務に従って、適当な方法にて処方してもよい。
加えて、プロドラッグも本発明の範囲内にある。プロドラッグとは、かかるプロドラッグが患者に投与されると、インビボにて構造式（Ｉ）の化合物を放出するキャリアの共有結合した物質である。プロドラッグは、一般に、慣用的操作によるか、またはインビボのいずれかで修飾が切断され、親化合物を生成するように、官能基を修飾することにより調製される。
【００３７】
立体異性体に関して、構造式（Ｉ）の化合物はキラル中心を有し、ラセミ体、ラセミ体混合物として存在してもよく、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在してもよい。かかるすべての異性体は、その混合物を含め、本発明の範囲内にある。さらには、構造式（Ｉ）の化合物の結晶形のいくつかは多形体として存在してもよく、それらも本発明の範囲内にある。加えて、構造式（Ｉ）の化合物のいくつかはまた、水または他の有機溶媒との溶媒和物を形成することもできる。かかる溶媒和物も同様に本発明の範囲内にある。
【００３８】
もうひとつ別の具体例において、本発明は、内分泌障害、精神病理学、神経学的障害または疾病を含む、種々の障害または疾病の治療方法を提供する。かかる方法は本発明の化合物を温血動物に当該障害または疾病を治療するのに十分な量にて投与することを含む。かかる方法は、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを、好ましくは医薬組成物の形態にて、全身投与することを含む。本明細書にて用いる場合、全身投与は経口および非経口的投与方法を包含する。経口投与の場合、ＣＲＦ受容体アンタゴニストの適当な医薬組成物は散剤、顆粒、ピル、錠剤およびカプセル、ならびに液体、シロップ、懸濁液およびエマルジョンを包含する。これらの組成物はまた、矯味矯臭剤、保存剤、懸濁化剤、増粘剤および乳化剤、ならびに他の医薬上許容される添加剤を含んでいてもよい。非経口投与の場合、本発明の化合物は、水性注射溶液として調製でき、それはＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、緩衝剤、酸化防止剤、静菌剤、およびかかる溶液に一般に使用される他の添加剤を含有してもよい。
【００３９】
上記したように、本発明の化合物を投与して、多種の障害または疾病を治療することができる。特に、本発明の化合物は、鬱病、不安障害、パニック障害、強迫障害、異常攻撃、不安定狭心症、反応型高血圧、拒食症、過食症、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ストレス誘発性免疫抑制、発作、炎症、クッシング病、乳児痙攣、癲癇および薬物濫用を治療するために温血動物に投与することができる。
次に実施例を用いて本発明を説明するが、何も限定するものではない。
【００４０】
実施例
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、実施例１ないし６に開示されている方法を用いて調製することができる。実施例７は受容体結合活性（Ｋi）の測定方法を提供し、実施例８は本発明の化合物をＣＲＦ刺激アデニレートシクラーゼ活性についてスクリーニングするアッセイを開示する。
中間体および実施例において、特記しない限り：
融点（ｍ．ｐ．.）はGallenkamp融点測定装置を用いて測定しており、修正されていない。温度は℃で示す。赤外線スペクトルはＦＴ−ＩＲ装置で測定した。プロトン磁気共鳴スペクトル（1Ｈ−ＮＭＲ）は４００ＭＨｚで記録し、化学シフトは内部標準として用いられるＭｅ４Ｓｉからのｐｐｍダウンフィールド（ｄ）にて報告されており、一重腺（ｓ）、二重線（ｄ）、二重線の二重線（ｄｄ）、三重腺（ｔ）、四重腺（ｑ）または多重線（ｍ）として表す。カラムクロマトグラフィはシリカゲル（Merck AG Darmstaadt、Germany）上で実施された。本明細書中では以下の略語を用いる：ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ｃＨｅｘ＝シクロヘキサン、ＣＨ2Ｃｌ2＝ジクロロメタン、Ｅｔ2Ｏ＝ジエチルエーテル、ＤＤＱ＝２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン；ＤＭＦ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＩＰＥＡ＝Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＭｅＯＨ＝メタノール、Ｅｔ3Ｎ＝トリエチルアミン、ＴＢＳ＝tert−ブチルジメチルシリル；ＴＢＰ＝tert−ブチルジフェニルシリル；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＤＩＢＡＬ−Ｈ＝ジイソブチルアルミニウムハイドライド、ＤＭＡＰ＝ジメチルアミノピリジン、ＬＨＭＤＳ＝リチウムヘキサメチルジシラザン；Ｔｌｃはシリカプレートでの薄層クロマトグラフィをいい、乾燥とは溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させることをいう；ｒ．ｔ．（ＲＴ）とは室温をいう。
【００４１】
実施例１
代表的なピリジン中間他の合成
【化７】
2004530702.tif 000010
【００４２】
化合物２
クロロピリジン１をＴＨＦに溶かし、−７８℃でのＬＡＨのＴＨＦ中攪拌懸濁液に加える。その混合物を室温で６時間および−３０℃で１時間攪拌した。ついで、該混合物を水、１５％水性ＮａＯＨおよび水で激しく攪拌しながら注意して処理する。混合物を室温にまで加温し、濾過する。その白色沈殿物を酢酸エチルでざっと洗浄する。合した有機部分を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の化合物２を得る。
【００４３】
化合物３
ＤＭＳＯ（６当量）を−７０℃での塩化オキサリル（３当量）のジクロロメタン中攪拌溶液に加える。１５分後、ジクロロメタン中のアルコール２（１当量）を添加し、つづいてトリエチルアミンを添加する。混合物を室温にまで加温し、１時間攪拌する。この混合物を水性炭酸水素ナトリウム（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の生成物３を得る。
【００４４】
化合物４
ＴＨＦ中の臭化アルケニルマグネシウム（１当量）を、−７８℃でのアルデヒド３（１当量）のＴＨＦ中攪拌溶液に加える。混合物をこの温度で３０分間攪拌し、室温にまで加温し、水性炭酸水素ナトリウムでクエンチする。ついで、該混合物を酢酸エチルで抽出し、合した抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の生成物４を得る。
【００４５】
実施例２
代表的なピリミジン中間体の合成
【化８】
2004530702.tif 000011
【００４６】
化合物２
クロロピリミジン１をＴＨＦに溶かし、−７８℃でのＬＡＨのＴＨＦ中攪拌懸濁液に加える。該混合物をこの温度で６時間、−３０℃で１時間攪拌する。ついで、該混合物を水、１５％水性ＮａＯＨおよび水で激しく攪拌しながら注意して処理する。混合物を室温にまで加温し、濾過する。その白色沈殿物を酢酸エチルでざっと洗浄する。合した有機部分を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の生成物２を得る。
【００４７】
化合物３
ＤＭＳＯ（６当量）をー７０℃での塩化オキサリル（３当量）のジクロロメタン中攪拌溶液に加える。１５分後、ジクロロメタン中のアルコール２（１当量）を添加し、つづいてトリエチルアミンを添加する。混合物を室温にまで加温し、１時間攪拌する。この混合物を水性炭酸水素ナトリウム（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の生成物３を得る。
【００４８】
化合物４
ＴＨＦ中の臭化アルケニルマグネシウム（１当量）を、−７８℃でのアルデヒド３（１当量）のＴＨＦ中攪拌溶液に加える。混合物をこの温度で３０分間攪拌し、室温にまで加温し、水性炭酸水素ナトリウムでクエンチする。ついで、該混合物を酢酸エチルで抽出し、合した抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィを介して精製し、所望の生成物４を得る。
【００４９】
実施例３
構造式（Ｉ）の代表的な化合物の合成
【化９】
2004530702.tif 000012
【００５０】
化合物２：
エタノール（２０ｍＬ）中のエノン１（上記した実施例１および２の化合物４、４.２６ミリモル）、Ｒ1ＮＨ2（４.３ミリモル）およびトルエンスルホン酸一水和物（４.３ミリモル）を６０℃で１６時間加熱する。その混合物を濃縮し、酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶かし、水性ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出）上で精製し、生成物２を得る。
【００５１】
化合物４：
ＴＨＦ（０.３２５Ｍ、０.８３ｍＬ、０.２７ミリモル）中のＬＤＡを、−２５℃でのホスフィンオキシド（６６ｍｇ、０.２７ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）中攪拌溶液に加える。１５分後、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の化合物２（１１ｍｇ、０.０３４ミリモル）を加え、該混合物を１５分間攪拌する。ＮａＨ（３０ｍｇ）を加え、その混合物を室温にまで加温し、１６時間攪拌する。該混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４ｘ１０ｍＬ）で抽出する。合した抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製して油を得、ついでそれを、１３０℃で１６時間、ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏ（４.２ｍｇ、０.０２２ミリモル）およびＲ4ＮＨ2（０.０８５ミリモル）で処理する。混合物を室温に冷却し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣで精製して化合物４を得る。
【００５２】
化合物３：
化合物２（６８ｍｇ、０.２３ミリモル）およびＲ4ＨＮＮＨ2（０.３５ミリモル）を１４０℃で５時間加熱する。混合物を室温まで冷却し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、化合物３を得る。
【００５３】
実施例４
構造式（Ｉ）の代表的な化合物の合成
【化１０】
2004530702.tif 000013
【００５４】
化合物２：
エタノール（２０ｍＬ）中のエノン１（上記した実施例１および２の化合物４、４.２６ミリモル）、Ｒ1ＮＨ2（４.３ミリモル）およびトルエンスルホン酸一水和物（４.３ミリモル）を６０℃で１６時間加熱する。その混合物を濃縮し、酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶かし、水性ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出）上で精製し、生成物２を得る。
【００５５】
化合物３：
ケトン２（０.１６ミリモル）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３０ｍｇ、０.１６ミリモル）およびＲ4ＮＨ2（０.１８ミリモル）をエタノール（０.５ｍＬ）に溶かし、密閉管中、８０℃で２０時間加熱する。該混合物を室温にまで冷却し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、生成物３を得る。
【００５６】
化合物４ａ：（Ｚ＝Ｏ、Ｙ＝Ｏ）
ケトン３（０.０９５ミリモル）をメタノール（１ｍＬ）に溶かし、ホウ水素化ナトリウム（２５ｍｇ、０.６６ミリモル）で処理する。混合物を４時間攪拌し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣をトルエン（１ｍＬ）に溶かし、ホスゲンのトルエン中溶液（２０％、０.１ｍＬ）で処理する。１６時間後、該溶液を減圧下にて濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、黄色油として３２ｍｇ（７５％）のカルボナート４ａを得る。
【００５７】
化合物４ｂ：（Ｚ＝Ｓ、Ｙ＝Ｏ）
ケトン３（０.０９５ミリモル）をメタノール（１ｍＬ）に溶かし、ホウ水素化ナトリウム（２５ｍｇ、０.６６ミリモル）で処理する。混合物を４時間攪拌し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣をトルエン（１ｍＬ）に溶かし、チオホスゲンのトルエン中溶液（２０％、０.１ｍＬ）で処理する。１６時間後、該溶液を減圧下にて濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、黄色油として２５ｍｇ（５５％）の７ｂを得る。
【００５８】
化合物４ｃ：（Ｚ＝Ｏ、Ｙ＝ＮＲ7）
ケトン３（０.０９５ミリモル）およびアミン（０.２０ｍＬ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶かし、シアノホウ水素化ナトリウム（２５ｍｇ）で処理する。酢酸（１滴）を加え、混合物を４時間攪拌し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣をトルエン（１ｍＬ）に溶かし、ホスゲンのトルエン中溶液（２０％、０.１ｍＬ）で処理する。１８時間後、該溶液を減圧下にて濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、尿素４ｃを得る。
【００５９】
化合物４ｄ：（Ｚ＝Ｓ、Ｙ＝ＮＲ7）
ケトン３（０.０９５ミリモル）およびアミン（０.２０ｍＬ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶かし、シアノホウ水素化ナトリウム（２５ｍｇ）で処理する。酢酸（１滴）を加え、混合物を４時間攪拌し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣をトルエン（１ｍＬ）に溶かし、チオホスゲンのトルエン中溶液（２０％、０.１ｍＬ）で処理する。１８時間後、該溶液を減圧下にて濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、チオ尿素４ｄを得る。
【００６０】
化合物５ａ：（Ｚ＝Ｏ）
ケトン３（０.１６ミリモル）、尿素（３０ｍｇ）およびＺｎＣｌ2（２５ｍｇ）を２００℃で５時間加熱する。混合物を室温にまで冷却し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、尿素５ａを得る。
【００６１】
化合物５ｂ：（Ｚ＝ＮＲ9）
上記した操作の尿素（５ａ、０.０７０ ミリモル）およびＰＣｌ５（１５ｍｇ、０.０７０ミリモル）をトルエン中９０℃で３時間加熱する。その間に白色固体を形成する。混合物を室温にまで冷却し、アミン（０.１０ｍＬ）と反応させる。攪拌を３０分間続ける。その混合物を水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、グアニジン５ｂを得る。
【００６２】
化合物５ｃ：（Ｚ＝Ｓ）
上記した操作の尿素（５ａ、０.０７０ ミリモル）およびＰ４Ｓ１０（５０ｍｇ）をトルエン中９０℃で２０時間加熱する。混合物を室温にまで冷却し、水性ＮａＨＣＯ3（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（４ｘ２ｍＬ）で抽出する。合した有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ4）させ、減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＴＬＣに付して精製し、チオ尿素５ｃを得る。
【００６３】
実施例５
構造式（ＸＩａ）の代表的な化合物の合成
【化１１】
2004530702.tif 000014
【００６４】
中間体１
（４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イル）−酢酸メチルエステル
ナトリウム（１.７４ｇ、３当量）を、窒素雰囲気、０℃で、無水ＭｅＯＨ（６０ｍＬ）に少しずつ添加した。金属ナトリウムが消費された後、アセトアミジン塩酸塩（７.０６ｇ、３当量）を添加した。２０分間攪拌した後、沈殿したＮａＣｌを濾去した。２−エトキシカルボニル−コハク酸ジエチルエステル（６.０４ｇ、２４.５ミリモル）の無水ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液を遊離アセトアミジンの溶液に添加し、その混合物を室温で２日間攪拌した。反応混合物を真空下で濃縮乾固させ、得られた黄色泡沫体（８.６９ｇ）をＰＯＣｌ3（７０ｍＬ）と混合し、３.５時間加熱還流した。得られた溶液を室温にまで冷却し、攪拌しながらゆっくりと氷／水（６００ｍＬ）およびＮＨ4ＯＨ（５０ｍＬ）中に注いだ。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）およびＥｔ2Ｏ（３ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液をＨ2Ｏ（６０ｍＬ）およびブライン（４０ｍＬ）で洗浄しＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。その粗油状物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ ９：１）に付して精製した。中間体１を黄色固体として得た（４.２７ｇ；７３％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ５.８５（ｍ,１Ｈ）、５.１５（ｄｑ,１Ｈ）、５.１１（ｄｑ,１Ｈ）、３.６１（ｄｔ,２Ｈ）、２.６７（ｓ,３Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０２［Ｍ］+.２Ｃｌ；１６７［ＭＨ−Ｃｌ］+、１Ｃｌ。
【００６５】
中間体２
２−（４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イル）−ペンタ−４−エン酸メチルエステル
窒素下、−７８℃での無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の中間体１（３ｇ、１当量）の溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（１６.０３ｍＬ、１.２５当量）を滴下した。反応混合物を０℃で冷却し、３０分間攪拌した。該反応混合物をー７８℃で冷却し、ヨウ化アリル（１.５８ｍＬ、１.３５当量） を１.５時間で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。ついで、水（３０ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ６０ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、飽和.水性ＮａＣｌ（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、５％ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン）に付して精製した。中間体２を白色固体として得た（２.４ｇ、８.７６ミリモル、６８％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ５.７７（ｍ,１Ｈ）、５.０３（ｍ,２Ｈ）、４.４３（ｄｄ,１Ｈ）、３.７６（ｓ,３Ｈ）、３.１２（ｍ,１Ｈ）、２.７８（ｍ,１Ｈ）、２.７３（ｓ,３Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５［ＭＨ］+。
【００６６】
中間体３
２−（４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イル）−ペンタ−４−エン−１−オール
窒素下、−７８℃での無水ＣＨ2Ｃｌ2（９．３ｍｌ）中の中間体２（２５７ｍｇ、０.９３７ミリモル）の溶液に、ＤＩＢＡｌ−Ｈ（ヘキサン中１Ｍ溶液、５.６ｍＬ、６当量）を添加した。ＤＩＢＡｌ−Ｈを添加した後、この反応混合物を−７８℃で１時間そして０℃で２時間攪拌した。該反応混合物を氷中０．５Ｎ塩酸溶液に注ぎ、ＣＨ2Ｃｌ2（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮させた。２００ｍｇの中間体３を無色油として得た（収率８６％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ５.７６（ｍ,１Ｈ）、５.１２（ｍ,１Ｈ）、５.０１（ｍ,１Ｈ）、４.１６（ｍ,１Ｈ）、４.０６（ｍ,１Ｈ）、３.９１（ｍ,１Ｈ）、２.８−２.６（ｍ,２Ｈ）、２.７０（ｓ,３Ｈ）、１.５０（ｔ,１Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７［Ｍ］+、２Ｃｌ。
【００６７】
中間体４
５−［１−（tert−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−ブタ−３−エニル］−４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン
窒素下、０℃での中間体３（１５２ｍｇ、０.６１ミリモル）の無水ＤＭＦ（４ｍｌ）中溶液に、４−ＤＭＡＰ（３.８ｍｇ、０.０５当量）、イミダゾール（４２０ｍｇ、１０ 当量）およびＰｈ2ｔＢｕＳｉＣｌ（０.３２ｍＬ、２当量）を加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。この溶液に、５ｍｌの飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液を加え、当該混合物をＥｔ2Ｏ（２ｘ１５ｍｌ）で抽出した。合した有機抽出液を水で１回、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させ、その粗黄色油をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９５：５）に付して精製した。中間体４を無色油として得た（２７０ｍｇ、０.５５ミリモル、９０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.６５（ｄｄ,２Ｈ）、７.５６（ｄｄ,２Ｈ）、７.４９−７.３６（ｍ,６Ｈ）、５.６７（ｍ,１Ｈ）、５.０３（ｄｄ,１Ｈ）、４.９４（ｄｄ,１Ｈ）、４.１７（ｍ,１Ｈ）、４.００（ｍ,２Ｈ）、２.７０（ｓ,３Ｈ）、２.６９（ｍ,１Ｈ）、２.５５（ｍ,１Ｈ）、０.９８（ｓ,９Ｈ）.
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８５［ＭＨ］+、２Ｃｌ
【００６８】
中間体５
４−（tert−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシ）−３−（４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イル）−１−オール
−７８℃での中間体４（１.５２ｇ、３.１４ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ混合液（４／１  ｖ／ｖ、５０ｍＬ）に、Ｏ3を攪拌しながら１５分間通気した。反応混合物を無水ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で希釈し、ＮａＢＨ4（４７５ｍｇ、４当量）をー７８℃で添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌し、ついで飽和水性ＮＨ4Ｃｌ（１５ｍＬ）でクエンチし、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ６０ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。その固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ８：２）に付して精製した。中間体５を黄色油として得た（１.１４ｇ、２.３４ミリモル、７４％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ７.５５−７.３３（ｍ,１０Ｈ）、４.４６（ｔ,１Ｈ）、４.０９、３９７、２.９２（ｍ,３Ｈ）、３.４０−３.２０（ｍ,２Ｈ）、２.００−１.７６（ｍ,２Ｈ）、２.５６（ｓ,３Ｈ）、０.８４（ｓ,９Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８９［ＭＨ］+。
【００６９】
中間体６
メタンスルホン酸４−（−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシ）−３−（４,６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イル）−ブチルエステル
０℃での中間体５（１.１４ｇ、２.３３ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（４６ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ（１.６ｍＬ、５当量）およびＭｓＣｌ（３７８μＬ、２.１当量）を添加した。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ついで水（１５ｍＬ）を加え、反応混合物ＣＨ2Ｃｌ2（３x６０ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ８：２）に付して精製した。中間体６を黄色油として得た（１.２８ｇ、２.２６ミリモル、９７％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ７.６０−７.３０（ｍ,１０Ｈ）、４.２０、４.１０−３.９０（ｍ,ｍ,５Ｈ）、３.０７（ｓ,３Ｈ）、２.５７（ｓ,３Ｈ）、２.３４−２.０６（ｍ,２Ｈ）、０.８４（ｓ,９Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７［ＭＨ］+。
【００７０】
中間体７
５−（tert−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−４−クロロ−２−メチル−８−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチル−フェニル］−５,６,７,８−テトラヒドロ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン
０℃での２,４−ビス（トリフルオロメチル）アニリン（１５.６ｍｇ、１当量）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、油中８０％ＮａＨ（４.５ｍｇ、２.２当量）を添加した。反応混合物を０℃で１５分間、ついで室温で１５分間攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、中間体６（３８.７ｍｇ、０.０６８ミリモル）の無水ＤＭＦ（０.３ｍＬ）中溶液を添加した。反応混合物を室温で１.５時間攪拌した。次いで水（２ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ７ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１x１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。中間体７を黄色油として得た（１９.４ｍｇ、０.０２９ミリモル、４３％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.９８、７.９４（ｄ,ｄ,１Ｈ）、７.８８、７.８０（ｄｄ,ｄｄ,１Ｈ）、７.７７−７.５８、７.４４−７.３２（ｍ,ｍ,３Ｈ）、７.３５、７.１４（ｄ,ｄ,１Ｈ）、３.９８、３.９４（ｄｄ,ｄｄ,１Ｈ）、３.７３、３.５５（ｔ,ｍ,１Ｈ）、３.６３、３.５９（ｍ,ｍ,１Ｈ）、３.４４−３.３６（ｍ,２Ｈ）、３.３８−３.３０（ｍ,２Ｈ）、２.５５、２.４０（ｍ,ｍ,１Ｈ）、２.１７、２.１５（ｓ,ｓ,１Ｈ）、２.０４、１.９０（ｍ,ｍ,１Ｈ）、０.９８（ｓ,９Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：６６４［ＭＨ］+。
【００７１】
中間体８
｛４−クロロ−２−メチル−８−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチル−フェニル］−５,６,７,８−テトラヒドロ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−５−イル｝−メタノール
窒素下、室温での中間体７（５２ｍｇ、０.０７８ミリモル）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ（１０２μＬ、８当量）を添加し、反応混合物を室温で一夜攪拌した。ついでそれを水（２ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ2Ｏ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ７ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ６：４）に付して精製した。中間体８を透明な油として得た（２７ｍｇ、０.０６３ミリモル、８１％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ８.２６−８.１２（ｍ,２Ｈ）、７.９０−７.８０（ｄ,１Ｈ）、５.０８−４.９８（ｔ,１Ｈ）、３.９０−３.６０（２Ｈ）、３.７０−３.３０（２Ｈ）、３.２４−３.１０（１Ｈ）、２.３０（ｍ,１Ｈ）、２.０９（ｓ,３Ｈ）、２.００−１.８０（ｍ,１Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２５［ＭＨ］+。
【００７２】
中間体９
メタンスルホン酸４−クロロ−２−メチル−８−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチル−フェニル］−５,６,７,８−テトラヒドロ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−５−イル−メチルエステル
０℃での中間体８（１３０ｍｇ、０.３０６ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（４ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ（２１３μＬ、５当量）およびＭｓＣｌ（５０μＬ、２.１当量）を添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。ついで水（８ｍＬ）を添加し、反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2（３x２０ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１x１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ６５／３５）に付して精製した。中間体９を透明な油として得た（１３８ｍｇ、０.２７４ミリモル、９０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ８.３０−８.１４（ｍ,２Ｈ）、７.９５−７.８０（ｄ,ｄ,１Ｈ）、４.５６−４.２０（２Ｈ）、３.９−３.４（ｍ,３Ｈ）、３.２５（ｓ,３Ｈ）、２.１１（ｓ,３Ｈ）、２.２−１.９（ｍ,２Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２５［ＭＨ］+。
【００７３】
中間体１０
７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−５−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチル−フェニル］−１,２,２ａ,３,４,５−ヘキサヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン
中間体９（１３５ｍｇ、０.２７ミリモル）およびヘプチル−４−アミン（０.５ｍＬ、１２当量）の混合物を１３０℃（スクリューキャップ式バイアル、砂浴）で３時間加熱した。ついで、反応混合物を室温にまで冷却し、ＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）で希釈した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。中間体１０を黄色固体として得た（２９.４ｍｇ、０.０６ミリモル、２３％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.９９（ｓ,１Ｈ）、７.８３（ｄ,１Ｈ）、７.４８（ｄ,１Ｈ）、４.０６−３.２４（ｂｍ,５Ｈ）、２.２３−２.２（ｂｍ,４Ｈ）、１.７４−１.１（ｂｍ,１０Ｈ）、０.９７（ｔ,３Ｈ）、０.９１（ｔ,３Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８７［ＭＨ］+。
【００７４】
中間体１１
４−［５−（tert−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−４−クロロ−２−メチル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−８−イル］−３−メチル−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での４−アミノ−３−メチルベンゾニトリル（１４ｍｇ、０.１０６ミリモル）のＤＭＦ（３.５ｍＬ）中溶液に、油中８０％ＮａＨ（４.５ｍｇ、０.１１２ミリモル）を加えた。３０分後、中間体６（６０ｍｇ、０.１０６ミリモル）を加え、反応混合物を室温で２時間攪拌した。ついで、それを室温にまで冷却し、水（２０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ ８０％）に付して精製した。中間体１１を透明な油として得た（２８ｍｇ、０.５２ミリモル、収率４７％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.６５（ｓ,１Ｈ）、７.５５（ｍ,４Ｈ）、７.３５（ｍ,６Ｈ）、７.１０（ｄ,１Ｈ）、６.９５（ｄ,１Ｈ）、３.９２（ｍ,１Ｈ）、３.８（ｍ,２Ｈ）、３.５−３.３（ｍ,２Ｈ）、２.２１（ｍ,１Ｈ）、２.４４（ｓ,３Ｈ）、２.１０（ｓ,３Ｈ）、１.６１（ｍ,１Ｈ）、１.１０（ｓ,９Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７［ＭＨ］+。
【００７５】
中間体１２
４−（４−クロロ−５−ヒドロキシメチル−２−メチル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−８−イル）−３−メチル−ベンゾニトリル
窒素下、室温での中間体１１（２８ｍｇ、０.０５ミリモル）の無水ＤＭＦ（２.５ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ（４４μＬ、０.２９０ミリモル）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。それを水（２０ｍＬ）で希釈し、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ６：４）に付して精製した。中間体１１を透明な油として得た（２２ｍｇ、０.０８ミリモル、７５％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.６１−７.５８（ｍ,２Ｈ）、７.２７（ｍ,１Ｈ）、３.９２−３.８１（ｍ,３Ｈ）、３.５０−３.３５（ｍ,２Ｈ）、２.４（ｍ,１Ｈ）、２.２６（ｓ,３Ｈ）、２.１９（ｓ,３Ｈ）、１.８（ｍ,１Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２９［ＭＨ］+。
【００７６】
中間体１３
４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−２,２ａ,３,４−テトラヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−３−メチル−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での中間体１２（４３ｍｇ、０.１３１ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（２.５ｍＬ）中溶液に、ＭｓＣｌ（１３μＬ、０.３２８ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（８７μＬ、０.６５５ミリモル）を加え、反応混合物を室温で１時間攪拌し、ついで水（２０ｍＬ）で希釈した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を３−アミノ−ペンタン（１４３μＬ、１.２３ミリモル.）に溶かし、反応混合物を１００℃（スクリュキャップ式バイアル、砂浴）で１６時間加熱した。ついで、それを室温にまで冷却し、その反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）に付して精製した。中間体１３を白色固体として得た（２３ｍｇ、０.０７４ミリモル、５０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.５０（ｄ,１Ｈ）、７.３０（ｄｄ,１Ｈ）、７.５５（ｄ,１Ｈ）、３.８６（ｍ,１Ｈ）、３.７０−３.２３（ｔ＋ｔ,２Ｈ）、３.４３（ｍ,１Ｈ）、３.６３（ｍ,２Ｈ）、２.２７（ｓ,３Ｈ）、２.２４（ｓ,３Ｈ）、２.１８（ｍ,１Ｈ）、１.７４（ｍ,１Ｈ）、１.５９−１.４５（ｍ,４Ｈ）、０.９９−０.７８（ｔ＋ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６２［ＭＨ］+。
【００７７】
中間体１４
３−メチル−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−２,２ａ,３,４−テトラヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での中間体１２（１４ｍｇ、０.０４３ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＭｓＣｌ（４μＬ、０.１０９ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（２８μＬ、０.２１６ミリモル）を加え、反応混合物を室温で１時間攪拌し、ついで水（２０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を４−ヘプチルアミン（５０μＬ、０.３４９ミリモル）に溶かし、反応混合物を１００℃（スクリュキャップ式バイアル、砂浴）で１６時間加熱した。ついでそれを室温にまで冷却し、反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）に付して精製した。中間体１４を白色固体として得た（５.０ｍｇ、０.０２０ミリモル、４０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.７３（ｓ,１Ｈ）、７.６５（ｄｄ,１Ｈ）、７.４１（ｄ,１Ｈ） ３.９５（ｍ,１Ｈ）、３.７８−３.６（ｍ,２Ｈ）、３.５−３.２４（ｔ,２Ｈ）、２.２７（ｍ,１Ｈ）、２.１８（ｓ,３Ｈ）、２.１０（ｓ,３Ｈ）、１.６５（ｍ,１Ｈ）、１.５５−１.４０（ｍ,４Ｈ）、１.３８−１.１０（ｍ,４Ｈ）、０.９５−０.８８（ｔ＋ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８９［ＭＨ］+。
【００７８】
中間体１５
４−［５−（tert−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−４−クロロ−２−メチル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−８−イル］−３−クロロ−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での４−アミノ−３−クロロベンゾニトリル（８６ｍｇ、０.５６６ミリモル）のＤＭＦ（３.５ｍＬ）中溶液に、油中８９％ＮａＨ（１７ｍｇ、０.５６６ミリモル）を加えた。３０分後、中間体６（３０８ｍｇ、０.５４６ミリモル）を加え、反応混合物を室温で２時間攪拌した。ついで、それを室温にまで冷却し、水（３０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ４５ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ８：２）に付して精製した。中間体１５を透明な油として得た（１１０ｍｇ、０.１８４ミリモル、３５％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.６５（ｓ,１Ｈ）、７.５５（ｍ,４Ｈ）、７.３５（ｍ,６Ｈ）、７.１０（ｄ,１Ｈ）、６.９５（ｄ,１Ｈ）、３.９２（ｍ,１Ｈ）、３.８（ｍ,２Ｈ）、３.５−３.３（ｍ,２Ｈ）、２.２１（ｍ,１Ｈ）、２.１０（ｓ,３Ｈ）、１.６１（ｍ,１Ｈ）、１.１０（ｓ,９Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５８７［ＭＨ］+。
【００７９】
中間体１６
３−クロロ−４−（４−クロロ−５−ヒドロキシメチル−２−メチル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド［２,３−ｄ］ピリミジン−８−イル）−ベンゾニトリル
窒素下、室温での中間体１５（１１０ｍｇ、０.１９ミリモル）の無水ＤＭＦ（２.５ｍＬ）中溶液に、、Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ（２６０μＬ、１.９１ミリモル）を添加し、その反応混合物を室温で１２時間攪拌した。それを水（２０ｍＬ）で希釈し、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ６：４）に付して精製した。中間体１６を透明な油として得た（５３ｍｇ、０.１５ミリモル、８１％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.９５−８.８（ｍ,２Ｈ）、７.３（ｄ,１Ｈ）、３.９（ｍ,１Ｈ）、３.（ｍ,２Ｈ）、３.５−３.３（ｍ,２Ｈ）、２.２（ｍ,１Ｈ）、２.１５（ｓ,３Ｈ）、１.８（ｍ,１Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４９［ＭＨ］+。
【００８０】
中間体１７
３−クロロ−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−２,２ａ,３,４−テトラヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での中間体１６（５２ｍｇ、０.１４９ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＭｓＣｌ（１６μＬ、０.３７３ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（９０μＬ、０.７４５ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、ついで水（２０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を４−ヘプチルアミン（１８８μＬ、１.４９ミリモル.）に溶かし、反応混合物を１００℃（スクリュキャップ式バイアル、砂浴）で１６時間加熱した。ついで、それを室温にまで冷却し、反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ８：２）に付して精製し、中間体１７を白色固体として得た（３６.０ｍｇ、０.０８４ミリモル、６０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.７４（ｄ,１Ｈ）、７.５６（ｄｄ,１Ｈ）、７.４９（ｄ,１Ｈ） ４.０５（ｍ,１Ｈ）、３.７８−３.６（ｍ,２Ｈ）、３.５−３.２４（ｔ,２Ｈ）、２.２７（ｓ,３Ｈ）、２.１８（ｍ,１Ｈ）、１.５５−１.４０（ｍ,４Ｈ）、１.３８−１.１０（ｍ,４Ｈ）、０.９５−０.８８（ｔ＋ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１０［ＭＨ］+。
【００８１】
中間体１８
３−クロロ−４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−２,２ａ,３,４−テトラヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
窒素下、０℃での中間体１６（３５ｍｇ、０.１１２ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＭｓＣｌ（１２μＬ、０.２７７ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（６８μＬ、０.５６０ミリモル）を加え、反応混合物を室温で１時間攪拌し、ついで水（２０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を３−アミノ−ペンタン（１５８μＬ、１.１２ミリモル）に溶かし、反応混合物を１００℃（スクリュキャップ式バイアル、砂浴）で１６時間加熱した。ついで、それを室温にまで冷却し、反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）に付して精製した。中間体１８を白色固体として得た（１８.０ｍｇ、０.０８４ミリモル、５３％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.７４（ｄ,１Ｈ）、７.５５（ｄｄ,１Ｈ）、７.５０（ｄ,１Ｈ）、３.９５（ｍ,１Ｈ）、３.７８−３.６５（ｍ,２Ｈ）、３.４５（ｍ,１Ｈ）、３.６９−３.２３（ｔ＋ｔ,２Ｈ）、２.２８（ｓ,３Ｈ）、２.１８（ｍ,１Ｈ）、１.５５−１.４６（ｍ,４Ｈ）、０.９７−０.７８（ｔ＋ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［ＭＨ］+。
【００８２】
中間体１９
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−１,２,２ａ,３,４,５−ヘキサヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン
窒素下、０℃での中間体８（４５ｍｇ、０.１０６ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（２.５ｍＬ）中溶液に、ＭｓＣｌ（１０μＬ、０.２６５ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（７０μＬ、０.５３０ミリモル）を加え、反応混合物を室温で１時間攪拌し、ついで水（２０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を３−アミノ−ペンタン（１８４μＬ、０.９９２ミリモル）に溶かし、反応混合物を１００℃（スクリュキャップ式バイアル、砂浴）で１６時間加熱し、ついで、それを室温にまで冷却し、その反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）に付して精製した。中間体１９を白色固体として得た（２８.０ｍｇ、０.０６４ミリモル、６０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ７.９８（ｄ,１Ｈ）、７.８３（ｄｄ,１Ｈ）、７.４９（ｄ,１Ｈ）、３.８７（ｍ,１Ｈ）、３.７０−３.２３（ｔ＋ｔ,２Ｈ）、３.４４（ｍ,１Ｈ）、３.６３（ｍ,２Ｈ）、２.２３（ｓ,３Ｈ）、２.１８（ｍ,１Ｈ）、１.５５−１.４７（ｍ,４Ｈ）、０.９９−０.８８（ｔ＋ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８［ＭＨ］+。
【００８３】
実施例５−１−１
７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−５−［４−（１,１,２−トリフルオロ−エチル）−２−トリフルオロメチルフェニル］１,２,２ａ,３,４,５−ヘキサヒドロ１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン
中間体１０（２１ｍｇ、０.０４３ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.０ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（９.７ｍｇ、１当量）を加えた。反応混合物を室温で３.５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。実施例５−１−１を透明な油として得た（１４ｍｇ、０.０２８ミリモル、６７％）。
【００８４】
実施例５−１−２
３−メチル−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
中間体１４（１５ｍｇ、０.０３８ミリモル）のＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（９.６ｍｇ、０.０４２ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。実施例５−１−２を白色固体として得た（８ｍｇ、０.０２１ミリモル、５６％）。
【００８５】
実施例５−１−３
４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−３−メチル−ベンゾニトリル
中間体１３（１８ｍｇ、０.０４９ミリモル）のＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（１４.５ｍｇ、０.０６４ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。実施例５−１−３を白色固体として得た（１０ｍｇ、０.０２９ミリモル、６０％）。
【００８６】
実施例５−１−４
３−クロロ−４−［７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
中間体１７（１５ｍｇ、０.０４ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.０ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（１４.５ｍｇ、０.０６４ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。実施例５−１−４を白色固体として得た（８.１ｍｇ、０.０２ミリモル、５６％）。
【００８７】
実施例５−１−５
３−クロロ−４−［１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン−５−イル］−ベンゾニトリル
中間体１８（１２ｍｇ、０.０３２ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.０ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（１０.５ｍｇ ０.０４２ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。実施例５−１−５を白色固体として得た（８.０ｍｇ、０.０２ミリモル、６０％）。
【００８８】
実施例５−１−６
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（１−エチル−プロピル）−７−メチル−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６,８−テトラアザ−アセナフチレン
中間体１９（２０ｍｇ、０.０４４ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１.５ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（１２.５ｍｇ、０.０５３ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。実施例５−１−６を白色固体として得た（１１ｍｇ、０.０２４ミリモル、６０％）。
【００８９】
分析データのすべてを以下の表１に示す。
【化１２】
2004530702.tif 000015
【００９０】
【表１】
2004530702.tif 000016
【００９１】
実施例６
構造式（ＸＩｂ）の代表的な化合物の合成
【化１３】
2004530702.tif 000017
【００９２】
中間体２０
４−クロロ−３−（２−メトキシ−ビニル）−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン
窒素下、０℃での（メトキシメチル）−トリフェニルホスホニウムクロリド（７０ｍｇ、３当量）の無水ＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＴＨＦ中１．６Ｍ ＢｕＬｉ（１２８μＬ、３当量）を滴下した。得られた赤色反応混合物を０℃で１０分間攪拌し、さらに室温で２０分間攪拌した。ついで、反応混合物を０℃に冷却し、４−クロロ−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン−３−カルボアルデヒド（J. Heterocyclic Chem.；１９９６、３３、３０３；J. Heterocyclic Chem.；１９９２、２９、３５９；Heterocycles；２０００、５３、１１、２４１５；Tetrahedron；１９８５、４１、１０、１９４５に報告されている操作に従って製造した。分析データ：ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ８.４９（ｓ,１Ｈ）、７.７０（ｓ,１Ｈ）、１０.４（ｓ,１Ｈ）、２.５３（ｓ,３Ｈ）、４.５７（ｍ,１Ｈ）、１.９２／１.７９（ｍ／ｍ,４Ｈ）、１.７０／０.９０（ｍ／ｍ,４Ｈ）、０.７７（ｔ,６Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９３［ＭＨ］+）（２０ｍｇ、０.０６８ミリモル）の無水ＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液を滴下した。
【００９３】
反応混合物を室温で１時間攪拌した。ついで、水（３ｍＬ）を加え、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９５：０５）に付して精製した。中間体２０を黄色油として得た（１５ｍｇ、０.０４６ミリモル、７０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ（トランス）６.９８（ｓ,１Ｈ）、２.５９（ｓ,３Ｈ）、６.６９、（ｓ,１Ｈ）、６.８１（ｄ,１Ｈ）、６.４０（ｄ,１Ｈ）、４.２１（ｍ,１Ｈ）、１.８２（ｍ,４Ｈ）、１.５３（ｍ,４Ｈ）、０.８５（ｄｔ,６Ｈ）、３.８３（ｓ,３Ｈ０；（シス）６.９４（ｓ,１Ｈ）、２.５９（ｓ,３Ｈ）、７.６２、（ｓ,１Ｈ）、４.２１（ｍ,１Ｈ）、１.８２（ｍ,４Ｈ）、１.５３（ｍ,４Ｈ）、０.８５（ｄｔ,６Ｈ）、６.１９（ｄ,１Ｈ）、６.３０（ｄ,１Ｈ）、３.７２（ｓ,３Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２１［ＭＨ］+。
【００９４】
中間体２１
［４−クロロ−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン−３−イル］−アセトアルデヒド
窒素下、０℃での中間体２０（８５ｍｇ、０.２６ミリモル）の無水ＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、２Ｎ ＨＣｌ（２ｍＬ）を滴下した。得られた黄色反応混合物を７０℃で１.５時間攪拌した。ついで飽和水性ＮａＨＣＯ3（１ｍＬ）を加え、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ８：２）に付して精製した。中間体２１を黄色油として得た（５５ｍｇ、０.１７９ミリモル、７０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＣＤＣｌ3）：δ ９.８５（ｓ,１Ｈ）、７.０７（ｓ,１Ｈ）、７.０１、（ｓ,１Ｈ）、４.２１（ｍ,１Ｈ）、４.０４（ｓ,２Ｈ）、２.６０（ｓ,３Ｈ）、１.８２（ｍ,４Ｈ）、１.１６（ｍ,４Ｈ）、０.８５（ｄｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０７［ＭＨ］+。
【００９５】
中間体２２
［４−クロロ−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン−３−イル］−エタノール
窒素下、０℃での中間体２１（５３ｍｇ、０.１７３ミリモル）の無水ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中溶液に、ＮａＢＨ4（１３.１ｍｇ、２当量）を加えた。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。ついで水（１ｍＬ）を加え、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ７：３）に付して精製した。中間体２２を黄色油として得た（４９.８ｍｇ、０.１６１ミリモル、９３％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ７.３７（ｓ,１Ｈ）、７.３３（ｓ,１Ｈ）、４.６３（ｔ,１Ｈ）、３.６４（ｔ,２Ｈ）、３.０１（ｔ,２Ｈ）、２.４４（ｓ,３Ｈ）、１.７７（ｍ,４Ｈ）、０.８９−１.７９（ｍ,４Ｈ）、０.７７（ｔ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０９［ＭＨ］+
【００９６】
中間体２３
３−［２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−４−クロロ−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン
窒素下、０℃での中間体２２（４９.８ｍｇ、０.１７３ミリモル）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、イミダゾール（１１０ｍｇ、１０当量）、ＴＢＳＣｌ（６７ｍｇ、２.８当量）、ＤＭＡＰ（２ｍｇ、０.１当量）を加えた。反応混合物を室温で一夜攪拌した。ついで水（１ｍＬ）を加え、生成物をＥｔ2Ｏ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。中間体２３を黄色油として得た（６５ｍｇ、０.１５４ミリモル、９５％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ６.９５（ｓ／ｓ,１／１Ｈ）、４.１７（ｍ,１Ｈ）、３.９１（ｔ,２Ｈ）、３.１６（ｔ,２Ｈ）、２.５８（ｓ,３Ｈ）、１.８０（ｍ,４Ｈ）、１.１４−１.０５（ｍ／ｍ,４Ｈ）、０.８８（ｓ,９Ｈ）、０.８５（ｔ,６Ｈ）、０.００（ｓ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２３［ＭＨ］+。
【００９７】
中間体２４
（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−［３−［２−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン−４−イル］−アミン
トリス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（３.７ｍｇ、０.１当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−２'−メチルビフェニル（４.４ｍｇ、０.３当量）、Ｋ３ＰＯ4（２３ｍｇ、２.８当量）の混合物に、窒素下、室温での中間体２３（１７ｍｇ、０.０４ミリモル）および２,４−ビス（トリフルオロメチル）アニリン（１８ｍｇ、２当量）の無水ＤＭE（１ｍＬ）中溶液を添加した（クリンプキャップマイクロウェーブバイアル）。その反応混合物を、CEM Focused Microwave Synthesis System（Model Discovery）中、１００℃、１５０Ｗ、６０Ｐｓｉで２０分間（cooling on）放射線照射を行った。ついで、水（１ｍＬ）を加え、生成物をＥｔ2Ｏ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９５：０５）に付して精製した。中間体２４を黄色油として得た（２１.５ｍｇ、０.０３５ミリモル、８８％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ７.８３（ｄ,１Ｈ）、７.７９（ｄｄ,１Ｈ）、８.１６（ｄ,１Ｈ）、８.２３（ｓ,１）、７.２２（ｓ,１Ｈ）、７.１６（ｓ,１Ｈ）、２.４３（ｓ,３Ｈ）、４.３５（ｍ,１Ｈ）、３.７７（ｔ,２Ｈ）、２.９４（ｔ,２Ｈ）、１.８（ｍ,４Ｈ）、１.１５、０.９５（ｍ／ｍ,４Ｈ）、０.７９（ｔ,６Ｈ）、０.６８（ｓ,９Ｈ）、−０.３１（ｓ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：６１６［ＭＨ］+。
【００９８】
中間体２５
２−［４−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−６−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１Ｈ−ピロロ［３,２−ｃ］ピリジン−３−イル］−エタノール
室温での中間体２４（６０ｍｇ、０.０９７ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ（１３３.６μＬ、８.４当量）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌した。ついで、水（２ｍＬ）を加え、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。中間体２５を白色固体として得た（２４.４ｍｇ、０.０４８ミリモル、５０％）。
ＮＭＲ（1Ｈ、ＤＭＳＯ）：δ ９.０１（ｓａ,１Ｈ）、８.０７（ｄ,１Ｈ）、７.８１（ｓ,１Ｈ）、７.７６（ｄｄ,１Ｈ）、７.１９（ｓ,１Ｈ）、７.１０（ｓ,１Ｈ）、５.１９（ｓａ,１Ｈ）、４.３５（ｍ,１Ｈ）、３.６３（ｍ,２Ｈ）、２.８８（ｍ,２Ｈ）、２.３８（ｓ,３Ｈ）、１.８５−１.６５（ｍ,４Ｈ）、１.２０、０.９０（ｍ,４Ｈ）、０.８０（ｍ,６Ｈ）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２［ＭＨ］+。
【００９９】
実施例６−１−１
５−（２,４−ビス−トリフルオロメチル−フェニル）−７−メチル−１−（１−プロピル−ブチル）−１,３,４,５−テトラヒドロ−１,５,６−トリアザ−アセナフチレン
室温での中間体２５（２３.４ｍｇ、０.０４ミリモル）の乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ3Ｎ（１３.５μＬ、２当量）およびＭｓＣｌ（６.１６μＬ、２当量）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。ついで、水（２ｍＬ）を加え、生成物をＣＨ2Ｃｌ2（３ｘ５ｍＬ）で抽出した。合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（１ｘ５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた。固体を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、それをフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ ９：１）に付して精製した。実施例６−１−１を黄色油として得た（６ｍｇ、０.０１２ミリモル、３１％）。
【０１００】
すべての分析データを以下の表１に示す。
【化１４】
2004530702.tif 000018
【０１０１】
【表２】
2004530702.tif 000019
【０１０２】
実施例７
ＣＲＦ受容体結合活性
DeSouzaら（J. Neurosci. ７：８８−１００、１９８７）に記載される標準的放射性リガンド結合アッセイによって、本発明の化合物をＣＲＦ受容体との結合活性について評価することができる。放射性標識した種々のＣＲＦリガンドを利用することで、このアッセイを用いて、本発明の化合物といずれかのサブタイプのＣＲＦ受容体との結合活性を評価することもできる。簡単に言えば、結合アッセイは、放射性標識したＣＲＦリガンドのＣＲＦ受容体からのディスプレイスメントを含むものである。
さらに詳細には、当該結合アッセイは、１．５ｍＬのエッペンドルフ型試験管中、試験管当たりヒトＣＲＦ受容体を安定してトランスフェクトした約１ｘ１０6個の細胞を用いて行われる。各試験管には、非特異的結合を測定するのに標識されていないソーバジン（sauvagine）、ウロテンシンＩまたはＣＲＦ（最終濃度１μＭ）を含むまたは含まない約０．１ｍＬのアッセイバッファー（例えば、ダルベッコリン酸緩衝セイライン、１０ｍＭ塩化マグネシウム、２０μＭバシトラシン）、０．１ｍｌの［125Ｉ］チロシン−ヒツジＣＲＦ（最終濃度約２００ｐＭまたはスキャッチャード分析により測定されるようなおおよそのＫDを有する物質）およびＣＲＦ受容体を含有する細胞の０．１ｍｌの膜懸濁液を入れる。その混合物を２２℃で２時間インキュベートし、つづいて遠心分離により結合および遊離放射性リガンドを分離する。そのペレットを２回洗浄した後、そのペレットのすぐ上で試験管を切断し、ガンマカウンターにて略８０％の効率で放射活性についてモニターする。非線形最小自乗曲線適合プログラム、LIGAND of Munson and Rodbard（Anal. Biochem. １０７：２２０，１９９０）を用いてすべての放射性リガンド結合データを分析することができる。
【０１０３】
実施例８
ＣＲＦ−刺激のアデニレートシクラーゼ活性
本発明の化合物は種々の機能試験により評価することもできる。例えば、ＣＲＦ−刺激のアデニレートシクラーゼ活性について本発明の化合物をスクリーンしてもよい。ＣＲＦ−刺激のアデニレートシクラーゼ活性を測定するためのアッセイは、一般に、Battagliaら（Synapse １：５７２、１９８７）の記載に従い、そのアッセイを全細胞調製物に適合するように修飾して、行うことができる。
さらに詳しくは、標準アッセイ混合物は、０．５ｍＬの最終容量にて、以下の成分を含有する：ＤＭＥＭ緩衝液中に２ｍＭ Ｌ−グルタミン、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび１ｍＭ ＩＭＢＸ。刺激実験においては、トランスフェクトされたＣＲＦ受容体を含む全細胞を２４ウェルプレートに入れ、種々の濃度のＣＲＦ−関連および非関連のペプチドと一緒に３７℃で１時間インキュベートし、特定のサブタイプの受容体の薬理学的序列特性を確立する。インキュベートした後、培地を吸引し、そのウェルを新たな培地で一度軽くすすぎ、当該培地を吸引する。細胞内ｃＡＭＰの量を測定するために、３００μｌの９５％エタノールおよび２０ｍＭ水性塩酸の溶液を各ウェルに加え、得られた懸濁液を−２０℃で１６ないし１８時間インキュベートする。溶液を１．５ｍＬのエッペンドルフ試験管に取り出し、ウェルをさらに２００μｌのエタノール／水性塩酸で洗浄し、最初のフラクションと一緒にプールする。サンプルを凍結乾燥させ、ついで５００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液に再度懸濁させる。サンプル中のｃＡＭＰの測定をBiomedical Technologies Inc.（Stoughton、MA）からのシングル抗体キットを用いて行う。化合物の機能を評価する場合、ｃＡＭＰ産生の刺激を８０％惹起する、単一濃度のＣＲＦまたは関連ペプチドを、種々の濃度（１０-12ないし１０-6Ｍ）の競合化合物と一緒にインキュベートする。
【０１０４】
本発明の具体例は説明を目的として本明細書に記載されているが、種々の修飾を本発明の精神および範囲を逸脱することなく行うことができることが認識されるであろう。
したがって、本発明は、添付した特許請求の範囲に記載されているものを除き、限定されるものではない。
【国際公開パンフレット】
2004530702.tif 000023
2004530702.tif 000024
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【国際調査報告】
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