(57)【要約】本発明は脂肪酸合成酵素であるＦａｂＨの阻害剤としての化合物の利用に関するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004513887.tif 000006
［式中：
Ｒ１はメチル、ＣＯ２Ｒ４、ＣＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨ（ＯＨ）Ｒ４、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリールおよび置換されたヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ２はＨもしくは炭素数が１〜４のアルキルを表わしており；
Ｒ３はＨもしくは炭素数が１〜４のアルキルを表わしており；
Ｒ４は炭素数が１から４のアルキル基を表わしており；
Ｒ５およびＲ６は、独立して、Ｈ、低級アルキルであるか、あるいは一緒になってピペリジン、モルホリン、ピペラジン、Ｎ−メチルピペラジンおよびヒドロキシピペリジンからなる群より選択される５ないし６員の複素環を形成しており；
ｎは１〜１２までの整数である］
で示される化合物またはその塩あるいはその医薬上許容される複合体の有効量を、それを必要とする患者に投与することで細菌感染を治療する方法。
【請求項２】
化合物が：
１−（３−フェニル−プロパノイル）−アゼチジン−２−オン；
１−ヘキサノイル−アゼチジン−２−オン；
１−（２−フェニル−エタノイル）−アゼチジン−２−オン；
１０−オキソ−１０−（２−オキソ−アゼチン−１−イル）−デカン酸メチルエステル；
８−オキソ−８−（２−オキソ−アゼチジン−１−イル）−オクタン酸メチルエステルからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１０−オキソ−１０−（２−オキソ−アゼチン−１−イル）−デカン酸メチルエステル。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は脂肪酸合成酵素であるＦａｂＨの阻害剤としての、Ｎ−アシルベータラクタム化合物の使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
飽和脂肪酸の生合成経路は原核生物と真核生物とでかなり似ている。しかし化学反応は異ならないのだが、生合成器官の体制はかなり違うものである。脊椎動物や酵母はそれぞれ、すべての酵素活性が１本か２本のポリペプチド鎖上にコードされているＩ型脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）を持っている。アシルキャリア蛋白（ＡＣＰ）がその複合体の一部を形成する。対照的に大部分の細菌や植物のＦＡＳ（ＩＩ型）では、各反応は別個の単一の機能を持つ酵素を触媒として起こり、ＡＣＰは分離した蛋白である。マイコバクテリアはＩ型とＩＩ型両方のＦＡＳを持つという点で独特である。つまりＩ型は基本的な脂肪酸合成に関与し、ＩＩ型はミコール酸のような複雑な細胞外被の脂質合成に関与している。それゆえ広域抗菌剤による細菌系の選択的阻害の可能性がかなりあるように思われる（Ｊａｃｋｏｗｓｋｉ，Ｓ．、１９９２ Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｎｄ Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．　Ｅｄ．Ｊ．Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ＆Ｎ．Ｇｅｏｒｇｏｐａｐａｄａｋｏｕ． Ｃｈａｐｍａｎ＆Ｈａｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ； Ｊａｃｋｏｗｓｋｉ，Ｓら（１９８９）．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，７６２４−７６２９）。
【０００３】
生合成サイクルの第一工程は、ＦａｂＨによるマロニルＡＣＰとアセチルＣｏＡとの縮合である。その後のラウンドでマロニルＡＣＰは伸長鎖アシルＡＣＰと縮合する（ＦａｂＢとＦａｂＦによるもので、それぞれ合成酵素のＩ型とＩＩ型である）。延長サイクルの第二工程は、ＮＡＤＰＨ依存性βケトアシルＡＣＰ還元酵素（ＦａｂＧ）によるケトエステル還元である。次にβヒドロキシアシルＡＣＰ脱水酵素（ＦａｂＡもしくはＦａｂＺ）により脱水されてトランス−２−エノールＡＣＰとなり、さらにＮＡＤＨ依存性エノールＡＣＰ還元酵素（ＦａｂＩ）によってアシルＡＣＰとなる。このサイクルのさらなるラウンドにおいて、１サイクルにつき２つの炭素原子が付加することでパルミトールＡＣＰができ、その結果パルミトールＡＣＰによるＦａｂＨとＦａｂＩのフィードバック阻害のため、このサイクルは大部分が停止する（Ｈｅａｔｈら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ　２７１，１８３３−１８３６）。そのためＦａｂＨは重要な生合成酵素であり、全生合成経路において重要な調節部位となる（Ｈｅａｔｈ，Ｒ．Ｊ．ａｎｄ Ｒｏｃｋ，Ｃ．Ｏ．１９９６．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７１，１８３３−１８３６；Ｈｅａｔｈ，Ｒ．Ｊ．ａｎｄ Ｒｏｃｋ，Ｃ．Ｏ．１９９６．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１０９９６−１１０００）。
【０００４】
抗生物質のチオラクトマイシンは生体内、生体外どちらにおいても広域抗菌活性を持ち、縮合酵素を３つとも特異的に阻害することが示されている。これは毒性がなく、哺乳類のＦＡＳを阻害しない（Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．ら、１９８４．Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ３７，１４５６−１４６１；Ｍｉｙａｋａｗａ，ら，１９８２．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３５，４１１−４１９；Ｎａｗａｔａ Ｙら、１９８９．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｃ４５，９７８−９７９；Ｎｏｔｏ，Ｔら、１９８２．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ３５，４０１−４１０；Ｏｉｓｈｉ，Ｈら、１９８２．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ３５，３９１−３９６）。同様にセルレニンはＦａｂＢとＦａｂＨの強力な阻害剤であり殺菌性があるが、両方の型のＦＡＳに共通の脂肪酸アシル結合部位に競合するため、真核生物に対して毒性を持つ（Ｄ’Ａｇｎｏｌｏ，Ｇら、１９７３．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．３２６，１５５−１６６）。これらの阻害剤の幅広い研究により、これらの酵素が生存能力に必要不可欠であることが証明されている。グラム陽性菌についてはあまり研究されていない。
まだ研究されていないが、既存の耐性機構の影響をうけにくい新しい種類の抗生物質の開発を行う必要がある。市販の抗生物質は脂肪酸合成経路を標的としておらず、そのためこの型の新しい抗生物質は既存の耐性機構によって不活性化されにくい。そのうえこれは広域の病原菌を標的とする可能性がある。それゆえ、ＦａｂＨ阻害剤はこのまだ満たされていない要求を満足させるのに役立つであろう。
【０００５】
（発明の開示）
本発明は、Ｎ−アシルβラクタム化合物、この化合物を含む医薬組成物およびグラム陽性、陰性菌の感染の治療に抗生物質として有用であるＦａｂＨ阻害剤としての使用に関する。
本発明はさらに、本発明の化合物の有効量を、それを必要とする動物に投与することを含む、ヒトを含む動物におけるグラム陰性、陽性菌の感染の治療法を構成する。
【０００６】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明の化合物は式（Ｉ）：
【０００７】
【化２】
2004513887.tif 000002
［式中：
Ｒ１はメチル、ＣＯ２Ｒ４、ＣＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨ（ＯＨ）Ｒ４、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、および置換されたヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ２はＨもしくは炭素数が１〜４のアルキルを表わしており；
Ｒ３はＨもしくは炭素数が１〜４のアルキルを表わしており；
Ｒ４は炭素数が１〜４のアルキルを表わしており；
Ｒ５とＲ６は独立して、Ｈ、低級アルキルであるか、もしくは一緒にピペリジン、モルホリン、ピペラジン、Ｎ−メチルピペラジンおよびヒドロキシピペリジンからなる群より選択された５ないし６員の複素環を形成しており；
ｎは１〜１２までの整数である］
で表わされる。
【０００８】
医薬上許容される塩の複合体も本発明に含まれる。
本明細書中で用いる場合、「アルキル」は炭素鎖の長さが特に決められていない限り、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどを含む、１〜６個の炭素原子の直鎖および分岐鎖の両方を意味するが、これらに限定されるものではない。またアルキルには、ヒドロキシ、カルボキシ、アルコキシなどの置換基がついてもよい。
本発明の化合物は１つもしくはそれ以上の不斉炭素原子を含んでいてもよく、ラセミ体や光学活性の形態で存在してもよい。そういった化合物やジアステレオマーはすべて本発明の範囲内であると考えられる。
【０００９】
本発明の化合物のいくつかは有機溶媒のような溶媒から結晶化、あるいは再結晶化されうる。そのような場合、溶媒化合物が形成されている。本発明では、その範囲内に、化学量論量の水和物を含む溶媒和物、ならびに凍結乾燥などの過程により生成される種々の量の水を含む化合物を包含する。
本発明の抗生物質は医薬組成物としての利用を目的としているので、これらは例えば少なくとも６０％の純度であり、少なくとも７５％の純度があればより適当であり、少なくとも８５％の純度があれば好ましく、少なくとも９５％の純度があれば特別であり、少なくとも９８％の純度があれば格別である（％は重量／重量を基礎とする）といった実質的に純粋な形態で提供されるということは容易に理解されるであろう。化合物の不純な調製剤は、医薬組成物として利用されるさらに純粋な状態を調製するために用いられる。つまりこうした化合物のあまり純粋でない調製剤は、式（Ｉ）の化合物もしくはその塩を少なくとも１％含むべきであり、少なくとも５％あればより適当であり、１０〜４９％あれば好ましい。
本発明の好ましい化合物は、
１−（３−フェニル−プロパノイル）−アゼチジン−２−オン；
１−ヘキサノイル−アゼチジン−２−オン；
１−（２−フェニル−エタノイル）−アゼチジン−２−オン；
１０−オキソ−１０−（２−オキソ−アゼチン−１−イル）−デカン酸メチルエステル；
８−オキソ−８−（２−オキソ−アゼチジン−１−イル）−オクタン酸メチルエステル；
３，３−ジメチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オン；
３−メチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オン；
３−メチル−１−（６−フェニルヘキサノイル）−アゼチジン−２−オン
を包含する。
【００１０】
（調製方法）
本発明は式（Ｉ）の化合物を提供する。式（Ｉ）の化合物はスキーム１で概略が述べられている方法により調製される。この特別な例として、Ｒ１はフェニル、Ｒ２とＲ３はともにＨで、ｎ＝２である。
【００１１】
【化３】
スキーム１
2004513887.tif 000003
ａ）ポリスチレン上の２−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ぺルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（ポリスチレン上のＢＥＭＰ、Ｆｌｕｋａ）、アセトニトリル、１時間，室温； ｂ）塩化ヒドロシンナモイル、５時間、室温
【００１２】
市販されている２−アゼチジノン１；スキーム１（Ａｌｄｒｉｃｈ）を、ポリマー結合した塩基、ポリスチレン上の２−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ぺルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（ポリスチレン上のＢＥＭＰ、Ｆｌｕｋａ）で処理し、つづいて所望の酸塩化物を加える。今回の例ではＮ−アシルβラクタム２を提供するために塩化ヒドロシナモイルを選択した。どのような酸塩化物も、それに相当する酸から標準的な方法で調製することができるので、この方法は市販されている酸塩化物に限定されるものではない。その方法は塩化オキサリルや塩化チオニルによる処理を含むが、これに限定されるものではない。加えて、上記の例で利用されている塩基は一般的にポリスチレン上のＢＥＭＰの使用や、ポリマー結合試薬の使用に限定されない。種々の可溶性塩基を利用して所望の結果を得てもよい。そうした適する塩基には水素化ナトリウム、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、２−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ぺルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（ＢＥＭＰ）、ｎ−ブチルリチウムが含まれる。
【００１３】
アゼチジノン環のＣ−３位がジメチルやメチルで置換された式（Ｉ）の化合物は、それぞれスキーム２および３に概説されている方法により調製される。これらの個々の例として、Ｒ１はフェニルであり、Ｒ２とＲ３はともにメチルであるか（スキーム１の場合）、もしくはＲ２はメチルでＲ３はＨであり（スキーム３の場合）、ｎは２である。
【００１４】
【化４】
スキーム２
2004513887.tif 000004
ａ）ｉ．リチウムジイソプロピルアミド、テトラヒドロフラン、ｉｉ．ヨウ化メチル；ｂ）メタノール、塩酸；ｃ）ｉ．水素化ナトリウム、テトラヒドロフラン、ｉｉ．塩化フェニル酢酸
アゼチジノン３（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９６，６（８）， ９８３−９８６）を、２当量のリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）などの強塩基で処理し、つづいて２当量のヨウ化メチルを加える（スキーム２）。ついで、メタノールおよび水性塩酸を用いる非求核性条件下でシリル保護基を除去する。この方法によりジメチルアゼチジノン４が得られる。ヨウ化メチルの代わりに他のアルキル化剤を用いて別のジアルキル化誘導体を得ることができる。水素化ナトリウムのような塩基で４を処理し、つづいて所望の酸塩化物、この場合には塩化フェニルアセチルによりアシル化すると、所望のアシル化合物５が提供される。いずれの望ましい酸塩化物も使用することができ、その範囲はスキームに示される例に限定されない。
【００１５】
【化５】
スキーム３
2004513887.tif 000005
ａ）ヨウ化２−クロロ−１−メチルピリジニウム、トリエチルアミン、アセトニトリル、還流；ｂ）ｉ．水素化ナトリウム、テトラヒドロフラン、ｉｉ．塩化フェニル酢酸
【００１６】
アゼチジノン環のＣ−３位に１つのメチル置換基を含む化合物はスキーム３に概説されている例により調製される。この例では３−アミノイソ酪酸（６）をヨウ化２−クロロ−１−メチルピリジニウムで処理することによりアゼチジノン７に変換する。この例では３−アミノイソ酪酸のラセミ体が用いられているが、所望により、この酸はどちらかの鏡像異性体を用いて光学活性の形態で利用してもよい。ついで、メチルアゼチジノン（７）をスキーム２に示されているようにアシルβラクタムに変換し、こうして８を得る。これにも、どんな所望の酸塩化物を使用してもよい。
【００１７】
（合成例）
本発明を以下の実施例を用いて説明する。かかる実施例は単なる例示にすぎず、本発明の範囲を限定するものと解すべきではない。温度はすべて摂氏で与えられ、溶剤は他に示されていなければすべて可能な限り純粋なものになっている。
実施例１
１−（３−フェニル−プロパノイル）−アゼチジン−２−オンの調製
ネジ蓋式ガラス瓶中の２−アゼチジノン（０．０５ｇ、０．７ミリモル）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に、ポリスチレン上のＢＥＭＰ＊（０．３８ｇ、０．８４ミリモルのＢＥＭＰ、Ｆｌｕｋａ）を加えた。反応物を室温で１時間振盪させた。この混合物に塩化ヒドロシンナモイル（０．０９３ｍＬ、０．６ミリモル）を加え、反応物を室温で５時間振盪させた。濾過によりポリマーを除去し、塩化メチレンで洗浄した。合した濾液を真空下で濃縮し、透明な油として所望の生成物（０．０２８ｇ、２３％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２０４．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
＊ＢＥＭＰ： ２−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ぺルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン
【００１８】
実施例２
１−ヘキサノイル−アゼチジン−２−オンの調製
標記化合物を実施例１の塩化ヒドロシンナモイルを塩化ヘキサノイルに置き換えた操作により調製した。生成物は黄色い油として得られた。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１７０．０「Ｍ＋Ｈ］＋。
【００１９】
実施例３
１−（２−フェニル−エタノイル）−アゼチジン−２−オンの調製
標記化合物を実施例１の塩化ヒドロシンナモイルを塩化フェニルアセチルに置き換えた操作により調製した。生成物を高速液体クロマトグラフィーによる精製に付して白い固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１９０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００２０】
実施例４
１０−オキソ−１０−（２−オキソ−アゼチジン−１−イル）−デカン酸メチルエステルの調製
ネジ蓋式ガラス瓶中の２−アゼチジノン（０．１ｇ，１．４ミリモル）のアセトニトリル（４ｍＬ）中溶液に、ポリスチレン上のＢＥＭＰ（０．７７ｇ、１．６９ミリモルのＢＥＭＰ）を加えた。反応物を室温で１時間振盪させた。この懸濁液に１０−クロロ−１０−オキソデカン酸メチル（０．２８ｍＬ、１．２６ミリモル）を加え、反応物を室温で１８時間振盪させた。ポリマーを濾過で除去し、塩化メチレンで洗浄した。合した濾過液を真空下で濃縮し、透明な油として所望の生成物（０．２８５ｇ，７６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２７０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００２１】
実施例５
８−オキソ−８−（２−オキソ−アゼチジン−１−イル）−オクタン酸メチルエステルの調製
標記化合物を実施例４の１０−クロロ−１０−オキソデカン酸メチルを８−クロロ−８−オキソオクタン酸メチルに置き換えた操作により調製した。生成物は透明な油として得られた。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２４２．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００２２】
実施例６
３，３−ジメチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オンの調製
ａ）３，３−ジメチル−アゼチジン−２−オン
アルゴン雰囲気下、−７８℃で、ジイソプロピルアミン（０．９６ｍＬ、６．８ミリモル）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中溶液にｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ、４．０ｍＬ、６．３ミリモル）を加えた。この反応混合物を０℃まで温め、その温度で２０分間攪拌した。混合物を−７８℃に冷却する前に、シリンジを介して１−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニル）−アゼチジン−２−オン（５３０ｍｇ、２．８ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を加えた（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９６，６（８），９８３−９８６により調製した）。混合物を−７８℃で０．５時間攪拌した後、ヨウ化メチル（０．９７ｇ、６．８６ミリモル）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）中溶液を加えた。得られた混合液を−２０℃に温め、２時間攪拌した。反応物を塩酸（１Ｎ）溶液でクエンチし、酢酸エチルを用いて生成物を抽出した。有機抽出物を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。真空下で溶媒を除去し、粗製生成物を得た。構造を調べるためにＨ１ＮＭＲを用いた。粗製生成物はこれ以上精製せずに使用した。
粗製アゼチジノンをメタノール（２０ｍＬ）に溶かし、塩酸（１Ｎ，３ｍＬ）で処理した。得られた混合物を室温で６時間攪拌した。反応物に炭酸水素ナトリウム（飽和水溶液）を加えてクエンチさせた。溶液を蒸発乾固させ、ジクロロメタンに再び溶解させた。スラリーを水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固させて所望の生成物（９４ｍｇ、二工程で３１％）を得た。この生成物はこれ以上精製せずに用いた；１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）３．１２（ｓ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，３Ｈ）、１．３１（ｓ，３Ｈ）。
【００２３】
ｂ）３，３−ジメチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オン
０℃、アルゴン下で３，３−ジメチル−アゼチジン−２−オン（６ａ；９４ｍｇ，０．９ミリモル）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中溶液に水素化ナトリウム（４０ｍｇ，１ミリモル）を加えた。得られた混合物を０℃で５分間攪拌した後、塩化フェニルアセチル（０．１３２ｍＬ，１ミリモル）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、２時間攪拌した（薄層クロマトグラフィーでモニターした）。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で蒸発乾固させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中２０％酢酸エチル）により精製すると、所望の生成物（５０ｍｇ、２５％）が油として得られる。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．３０（ｍ，５Ｈ）、４．０６（ｓ，２Ｈ）、３．３９（ｓ，２Ｈ）、１．３８（ｓ，６Ｈ）；ＩＲ　１７８１、１７００、１３６６、１３１３、１２９０ｃｍ−１。
【００２４】
実施例７
３−メチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オンの調製
ａ）３−メチル−アゼチジン−２−オン
ヨウ化２−クロロ−１−メチルピリジニウム（４．１１ｇ，０．０１６ミリモル）のアセトニトリル（７３０ｍＬ）中溶液にトリエチルアミン（４ｍＬ，０．０２９モル）を加えた。溶液をアルゴン下で加熱して還流させ、（ＤＬ）−３−アミノイソ酪酸を３時間にわたって数回に分けて加えた。完全に加えた後、反応混合物をさらに２時間還流した。溶媒を真空下で除去し、得られた残渣をジクロロメタンに再び溶かし、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中１０〜３０％酢酸エチル）で精製し、所望の生成物（４３０ｍｇ，４３％）を液体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）６．２３（ｂｓ，１Ｈ）、３．４４（ｔ，Ｊ＝５．０３Ｈｚ，１Ｈ）、３．２４（ｍ，１Ｈ）、２．９２（ｍ，１Ｈ）、１．３０（ｄ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２５】
ｂ）３−メチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オン
標記化合物は、６ａの代わりに７ａを用いて修飾されている、上記した６ｂの操作に従って調製された。生成物は油として得られた（１６ｍｇ、２５％）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．３０（ｍ，５Ｈ）、４．０４（ｓ，２Ｈ）、３．３７（ｍ，１Ｈ）、３．３０（ｍ，１Ｈ）、３．２２（ｍ，１Ｈ）、１．３７（ｄ，Ｊ＝７．３８Ｈｚ，３Ｈ）；ＩＲ　１７８２、１７００、１３６６、１３１７、１３００ｃｍ−１。
【００２６】
実施例８
３−メチル−１−（２−フェニルエタノイル）−アゼチジン−２−オンの調製
６−フェニルヘキサン酸（０．２５ｇ、１．２９ミリモル）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、塩化オキサリル（０．９６ｍＬ，１．９４ミリモル）および１滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。分離フラスコに３−メチル−アゼチジン−２−オン（７ａ；１００ｍｇ，１．１８ミリモル）のテトラヒドロフラン（３ｍＬ）中溶液を入れ、０℃に冷却した。水素化ナトリウム（５２ｍｇ、１．２９ミリモル）を加え、得られた混合物を放置して室温にまで温めながら、１０分間攪拌した。この混合物に、あらかじめ調製しておいた酸塩化物溶液を加え、得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルと水の間で分配し、反応抽出物を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／へキサン）により精製し、所望の生成物（３５ｍｇ、２７％）を固体で得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．１６（ｍ，３Ｈ）、３．７２（ｍ，１Ｈ）、３．２７（ｍ，１Ｈ）、３．１９（ｍ，１Ｈ）、２．６９（ｔ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，２Ｈ）、２．６１（ｔ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，２Ｈ）、１．６３（ｍ，４Ｈ）、１．４０（ｍ，５Ｈ）；ＩＲ　１７８２、１７００、１３８７、１３０８ｃｍ−１。
【００２７】
生物学的分析
ｈｉｓ−タグを付したエス・アウレウスＦａｂＤおよびシグマ社より購入したアシルキャリア蛋白を用いる結合フォーマットにてＦａｂＨをアッセイした。凍結乾燥したＡＣＰはリン酸塩緩衝液中のβメルカプトエタノールを用いて還元した。マロニル−ＣｏＡおよびＦａｂＤを還元したＡＣＰに加え、こうしてマロニル−ＡＣＰを生成した。ＦａｂＤの反応が平衡に達した後に〔１４Ｃ〕アセチルＣｏＡおよび阻害剤を加え、ＦａｂＨを加えて反応を開始させた。ＴＡＣ沈降および濾過を用いて〔１４Ｃ〕アセチルＣｏＡ基質を生成物であるアセトアセチルＣｏＡから分離した。
第一スクリーンでのヒットを向上させるため、適当な再現性、感度、スループットおよび解析力を有する第二および第三スクリーンを特徴付け、現行の使用にて有効であるようにする。化合物を、精製された哺乳類の脂肪酸合成酵素、イー・コリのＦａｂＨ、ＦａｂＢおよびヒトの肺細胞への細胞傷害性の分析に付して評価する。
【００２８】
加えて、全細胞の抗菌活性を、標準的かつ新規な蛍光を基礎とする手法を用いて、一連の臨床的に関連する野生型および流出障害の細菌について決定する。ＦａｂＨの分析は動力学的に完全に特徴付けられ、一の反応機構が提案された。詳細な研究により、チオラクトマイシンを含む、ツール化合物による阻害の機構についての新しいデータがでてきた。使用におけるスクリーンは治療目的、つまり感染部位からの細菌の根絶（治癒）に直接関連している。現状では、数種の細菌感染の、動物モデルの使用が、このおよびＳＢでの多くの他の研究において利用でき、有意義であり、最新のものである現在使用されている。既知の抗菌性に関する多くの今までの経験により、生体外や動物モデルでの細菌の殺傷は、生体内での細菌の殺傷や感染の治癒における優れたインジケータであることが確認される。
【００２９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物または医薬上許容される塩あるいはその生体内で加水分解されうるエステルと、医薬上許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。本発明の化合物はそれらの経口、局所、非経口での使用に適した形態を含み、ヒトを含む哺乳類の細菌感染の治療に用いられるだろう。
本発明による抗生物質は、他の抗生物質を用いて類推することにより、ヒトや動物用の医薬での使用に都合のよい方法にて投与されるように処方することができる。
組成物は経口、局所、非経口などのいずれかの経路で、特に経口による投与に適するように処方することができる。組成物は錠剤、カプセル、散剤、顆粒、トローチ、クリームや、経口もしくは滅菌した非経口の溶液や懸濁液のような液体調製剤といった形態をとるであろう。
本発明の局所での処方は、例えば軟膏、クリームやローション、眼軟膏、点眼剤や点耳剤、含浸包帯、エアロゾルとして提供されるであろうし、また保存剤、薬剤の浸透を助ける溶剤、皮膚軟化剤などの適当な慣用的添加剤を軟膏やクリームに含めることができる。
処方はまた、クリームや軟膏の基剤、ローション用のエタノールやオレイルアルコールのような適合しうる慣用的な担体も含むことができる。そのような担体は処方のおよそ１％から９８％までで配合されている。処方の８０％くらいまでで配合されているのがより標準的である。
【００３０】
経口投与用の錠剤やカプセルは単位投与形とすることができ、結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントガムまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば乳糖、糖質、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばポテト澱粉あるいはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿潤剤等の賦形剤を含有していてもよい。錠剤は通常の製薬慣習にてよく知られている方法によりコーティングしてもよい。
【００３１】
経口の液体調合剤は、例えば水性もしくは油性の懸濁液や溶液、乳濁液、シロップ、エリキシル剤といった形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元する乾燥生成物として提供されてもよい。そのような液体調合剤は懸濁剤、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムのゲル、水素化した食用脂や、乳化剤、例えばレシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含んでいてもよい）、例えば扁桃油や、グリセリンなどの油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、ソルビン酸、もし望むのであれば慣用される香味料や着色料などの慣用的添加剤を含んでいてもよい。
坐剤は通常の坐剤基剤、例えばカカオバターや他のグリセリドを含むだろう。
【００３２】
非経口投与では、流体の単位投与形は化合物や滅菌した賦形剤、好ましくは水を利用して調製される。化合物は、使用される賦形剤や濃度により、賦形剤に懸濁させるか、溶解させることができる。液剤の調製で、化合物を適当なガラス瓶やアンプルに入れ、密封する前に注射用水に溶かし、滅菌濾過することができる。好ましくは、ｐＨをおよそ３．５〜７の範囲で維持するために、液剤は緩衝液（例えばリン酸塩）を含む。ジメチルスルホキシドやアルコール溶剤が式（Ｉ）の化合物の溶解や浸透を促進させるために（０．０１〜１０ｍＬ／Ｌくらいの濃度で）存在してもよい。局所麻酔剤、防腐剤、緩衝液のような薬剤が賦形剤に溶けていれば都合がよい。安定性を向上させるために、化合物をガラス瓶に入れ、水を真空下で除去した後に凍結させることもできる。凍結乾燥した散剤はその後にガラス瓶に密封し、付属の注射用の水のガラス瓶を用いて使用前に液体に復元できる。非経口懸濁液は、化合物を溶かす代わりに賦形剤中に懸濁することと、濾過では滅菌できないことを除けば、実質的に同じ方法で調製される。化合物は滅菌した賦形剤中に懸濁する前に、エチレンオキシドに曝して滅菌できる。化合物が一様に分布しやすくするように、化合物中に表面活性剤や湿潤剤が含まれていれば都合がよい。
【００３３】
組成物は投与の方法により、重量で０．１％以上、好ましくは重量で１０〜６０％の活性物質を含んでいてもよい。組成物が投与単位を構成する場合には、各単位は５０〜５００ｍｇの活性成分を含むのが好ましい。大人のヒトの治療に使用される投与量は投与の経路や頻度により、体重１ｋｇ当たり１〜１４０ｍｇの範囲に及ぶのが好ましい。β−ケトアシル−ＡＣＰシンターゼ（ＦａｂＨ）の阻害剤は、静脈注射、筋注射、腹膜内注射、経口のいずれかの方法により液剤で投与される。液剤はｐＨをおよそ３．５〜７の範囲に保つために、緩衝液（リン酸塩など）を含むのが好ましい。ジメチルスルホキシドやアルコール溶剤が、β−ケトアシル−ＡＣＰシンターゼ（ＦａｂＨ）の阻害剤の溶解や浸透を促進させるために（０．０１〜１０ｍＬ／Ｌくらいの濃度で）配合されていてもよい。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物あるいはその医薬上許容される塩またはインビボで加水分解されうるエステルが上記の投与量の範囲で投与された場合は、許容できない毒性効果があるとは考えられない。
式（Ｉ）の化合物が本発明の組成物中の唯一の治療薬であってもよく、あるいは他の抗生物質または式（Ｉ）の化合物の抗菌活性を向上させる化合物と組み合わせて用いることもできる。
本発明の抗生物質は、既存の抗生物質に耐性のある単離体を含み、エシェリヒア・コリやクレブシエラ・ニュモニエのようなグラム陰性菌、およびスタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ニュモニエ、エンテロコッカス・フェカーリス、エンテロコッカス・フェシウムなどのグラム陽性菌をともに含む広範囲の微生物に対して活性を持つ。
【００３５】
本明細書で引用した特許および特許出願を含め、これらに限定するものではないが、すべての刊行物は、仮に十分に記載されており、たとえ各々個々の刊行物が具体的かつ個別的に出典を明示することで本明細書の一部とするとしていても、その出典を明示することにより本明細書の一部とするものである。
上記の記述はその提起された具体例を含む本発明を十分に開示している。ここで開示されている具体例の修正および改良は以下の請求項の範囲内である。この分野に熟練した人なら、さらに推敲しなくても、上記の記述を用いて最大限に本発明を利用できるだろう。それゆえここであげた実施例は、決して本発明の範囲の限界というわけではなく、単なる実例として解釈されねばならない。独占的な所有権や特権が請求されている本発明の具体例は、上記で限定されている通りである。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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