(57)【要約】本発明は、タンパク質構成成分を含む生物学的試料を分析するための、アルカリ性ｐＨを有する自由溶液におけるキャピラリー電気泳動法に関する。該方法は、分析緩衝液を含むキャピラリーチューブに試料を導入する少なくとも１つの工程を含むことを特徴とする。該分析緩衝液はまた、１つ以上のタンパク質構成成分と疎水性相互作用でき、該タンパク質構成成分（群）に、１つ以上の負の荷電を与え、その電気泳動度を変化できる少なくとも１つの添加剤を含む。本発明は、該方法を実施するための分析緩衝組成物にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質構成成分を含む試料を分析するための、アルカリ性ｐＨの自由溶液のキャピラリー電気泳動法であって、試料を緩衝系を含むキャピラリーチューブに導入する少なくとも１つの工程を含むことを特徴とし、該緩衝系はさらに、１つ以上のタンパク質構成成分と疎水的に相互作用することができ、該タンパク質構成成分に、１つ以上の負の荷電を与え、電気泳動度を調整できる、少なくとも１つの添加剤を含む、前記電気泳動法。
【請求項２】
構成成分を泳動により分離し、構成成分を検出することをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
試料が、生物学的試料であることを特徴とする、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項４】
試料が、血液、溶血した血液、血漿、尿または脳脊髄液の試料であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
構成成分が血液タンパク質であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
構成成分が、アルブミンおよびα１、α２、β、またはβ１、β２およびγグロブリン画分であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
該添加剤が、９より高いｐＨを有するアニオン極および疎水性部分を含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
該添加剤が、４〜２０個の炭素原子を含む少なくとも１つの直鎖または非直鎖アルキル鎖および／または芳香族であってもなくてもよい１〜１０環の組合せからなる少なくとも１つの疎水性部分、およびスルホネート、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェートおよびカルボネートから選択した１つ以上の基により構成されるアニオン極を含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
該添加剤が、コレート、Ｃ６〜Ｃ１０アルキルスルホネート、テトラデセンスルホネート、ナフタレンスルホネート、Ｃ６〜Ｃ１４アルキルカルボキシレート、ナフタレンカルボキシレート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルスルフェート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルカルボネート、ベンゼンスルホネート、ベンゼンカルボキシレートおよび双性イオン生物学的緩衝液から選択されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
添加剤がＣ６〜Ｃ１０アルキルスルホネートであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
添加剤はオクタンスルホネートであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
緩衝液中の添加剤の濃度が、０．１ｍＭ〜５００ｍＭの範囲であり、適切である場合、該緩衝液中の該添加剤の臨界ミセル濃度を超えないことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
該緩衝液中の該添加剤の濃度が、１ｍＭ〜４ｍＭの範囲であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
緩衝液中の添加剤の濃度が２．５ｍＭのオーダーであることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
該緩衝系のｐＨが９〜１１の範囲である、請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
キャピラリーが融合シリカであることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
緩衝系が、さらに、少なくとも１つのｐＨ調整剤を含むことを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
ｐＨ調整剤が、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水酸化セシウム、水酸化フランシウム、または、アルキル部分に１〜８個の炭素原子を含むモノ−、ジ−、トリ−またはテトラ−アルキルアンモニウムハイドロオキサイドから選択されることを特徴とする、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
緩衝系において電気泳動により、アルブミンおよび以下の画分：α１；α２；βまたはβ１およびβ２；およびγグロブリンを含む試料中のタンパク質構成成分を分離する方法であって、該構成成分を含む該試料を、アルブミンと疎水的に相互作用することができる少なくとも１つのさらなる添加剤を含む緩衝系を含むキャピラリーに通すことを含む、前記方法。
【請求項２０】
液体試料中のタンパク質構成成分のアルカリ性ｐＨの自由溶液のキャピラリー電気泳動による電気泳動分離法であって、該構成成分を含む試料を、少なくとも１つの添加剤をさらに含む緩衝系を含むキャピラリーに通すことを含み、該添加剤が、９より高いｐＨを有するアニオン極および疎水性部分を含む化合物である、前記電気泳動分離法。
【請求項２１】
緩衝系が、さらに、硫酸ナトリウムを含むことを特徴とする、請求項１〜２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも１つの緩衝液および適切な支持体においてアルブミンと疎水的に相互作用することができる添加剤を含むことを特徴とする、キャピラリー電気泳動用の電解質組成物。
【請求項２３】
少なくとも１つの緩衝系、および、４〜２０個の炭素原子を含む少なくとも１つの直鎖または非直鎖アルキル鎖および／または芳香族であってもなくてもよい１〜１０環の組合せからなる少なくとも１つの疎水性部分、およびスルホネート、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェートおよびカルボネートから選択した１つ以上の基により構成されるアニオン極を含む添加剤を含むことを特徴とする、キャピラリー電気泳動用の組成物。
【請求項２４】
該添加剤が、コレート、Ｃ６〜Ｃ１０アルキルスルホネート、テトラデセンスルホネート、ナフタレンスルホネート、Ｃ６〜Ｃ１４アルキルカルボキシレート、ナフタレンカルボキシレート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルスルフェート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルカルボネート、ベンゼンスルホネート、ベンゼンカルボキシレート、および双性イオン生物学的緩衝液から選択されることを特徴とする、請求項２３記載のキャピラリー電気泳動用の組成物。
【請求項２５】
添加剤がＣ６〜Ｃ１０アルキルスルホネートであることを特徴とする、請求項２２〜２４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２６】
添加剤がオクタンスルホネートであることを特徴とする、請求項２２〜２５のいずれか１項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、キャピラリー電気泳動によるタンパク質およびペプチドの分離法、および、該分離に使用するための添加剤を含む緩衝組成物に関する。
【０００２】
血清などの生物学的液体中のタンパク質を、診断目的で、特に、通常、電気泳動、ゲル電気泳動またはキャピラリー電気泳動によりタンパク質を分離することにより、分析物質について分析する。キャピラリー電気泳動の１つの利点は、ほんの僅かな量の生物学的液体しか分析に必要ではないという事実に存する。さらに、技術を使用した分離は非常に迅速であり得る。なぜなら、分離中に試料をあまりにも加熱しなくても高い電圧を使用できるからである。
【０００３】
血液タンパク質を分離するために、キャピラリー電気泳動は、慣用的には、アルカリ性緩衝液を用いて実施する。通常、得たタンパク質プロファイルは、５または６個の画分、すなわちアルブミン画分、α１およびα２グロブリン画分、βグロブリン画分またはβ１およびβ２グロブリン画分、およびγグロブリン画分を含む。
【０００４】
該分離は、米国の再発行の特許米国特許第Ｒｅ−３６０１１号または欧州特許第Ａ−０５１８４７５号に記載のような緩衝系および技術の助けをかりて、キャピラリー電気泳動を使用して実施できる。
【０００５】
しかし、現在まで、キャピラリー電気泳動によるアルブミンまたはα１グロブリンの分離は、満足のいくものではなかった。
【０００６】
出願人は今回、分離、特にアルブミン／α１グロブリン分離の向上を、緩衝系用の添加剤を使用することにより達成できることを実証し、該添加剤は、９より高いｐＨを有するアニオン極および疎水性部分を含む。該添加剤は、１つ以上のタンパク質構成成分と疎水性相互作用でき、また、タンパク質構成成分または構成成分群に１つ以上の負の荷電を与え、電気泳動度を調整できる。
【０００７】
したがって、本発明は、タンパク質構成成分を含む試料を分析するための、アルカリ性ｐＨの自由（フリー）溶液のキャピラリー電気泳動法に関し、ここで、該試料は、緩衝系を含むキャピラリーチューブに導入し、該緩衝系はさらに、１つ以上のタンパク質構成成分と疎水性相互作用でき、該タンパク質構成成分または構成成分群に、１つ以上の負の電荷を与え、電気泳動度を調整できる少なくとも１つの添加剤をさらに含む。この段階に続いて、一般に、泳動によるタンパク質構成成分の分離および構成成分の検出を実施する。
【０００８】
本発明はまた、緩衝系における電気泳動による、アルブミンおよび以下の画分；α１；α２；β（またはβ１およびβ２）；およびγグロブリンを含む試料中のタンパク質構成成分を分離する方法に関し、ここでの緩衝系は、アルブミンと少なくとも疎水性相互作用できるさらなる添加剤を含む。
【０００９】
本発明はまた、液体試料中のタンパク質構成成分の、アルカリ性ｐＨの自由溶液のキャピラリー電気泳動による、電気泳動分離法に関し、この方法では、該構成成分を含む試料を、少なくとも１つの添加剤をさらに含む緩衝系を含むキャピラリーに通し、該添加剤が、９より高いｐＨを有するアニオン極および疎水性部分を含む化合物である。
【００１０】
本発明のキャピラリー電気泳動緩衝系に添加剤として使用できる化合物は、アルブミンと疎水性相互作用でき；これらの化合物は、例えば、ＭＥＣＣ（ミセル電気運動キャピラリークロマトグラフィー）に使用したようなアニオン性界面活性剤であり得るが、しかしその臨界ミセル濃度より低い濃度でである。本発明では、我々は、自由溶液ＣＥ中のこれらの化合物を使用し：該化合物は、アルブミンに、アルブミンの疎水性残基とこれらの化合物の疎水性部分の間の疎水性相互作用による負の荷電を与え、したがって、他のタンパク質の移動度と比べて、アルブミンの移動度は減少する。１つの結果は、α１画分からのアルブミンの分離の向上である。
【００１１】
最後に、本発明は、少なくとも１つの緩衝液、および、適切な支持体においてアルブミンと疎水性相互作用できる添加剤を含む、キャピラリー電気泳動用の電解質組成物に関する。
【００１２】
実施例から明らかになるように、本発明の添加剤の使用により、アルブミンおよびα１グロブリン画分の分離の向上が可能となる。それはまた、通常の緩衝液と比べて、これらの２つの画分の間の基線戻りも向上する。
【００１３】
本発明の他の特徴および利点は、添付図面および実施例を参照して作成した以下の詳細な説明から明らかとなろう。
【００１４】
引用できるアルブミンの疎水性部分と相互作用できる、本発明に記載の緩衝液用の添加剤は、９より高いｐＨを有するアニオン極および疎水性部分を含む化合物である。疎水性部分は、４〜２０個の炭素原子を含む分岐していてもしていなくてもよい少なくとも１つのアルキル鎖、および／または芳香族であってもなくてもよい１〜１０個の環の少なくとも１つの組合せからなり得る。好ましくは１〜４の環の組合せを使用する。当業者により容易に理解されるように、この疎水性部分は、例えば１つ以上のヒドロキシルまたはアミン官能基などの、その疎水性を本質的に修飾しない残基または官能基を含むことができる。
【００１５】
アニオン極は、以下のリスト：スルホネート、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、カルボネートからの化学基または機能の１つ以上により構成できる。
【００１６】
以下を特に引用できる：コレート、Ｃ６〜Ｃ１０アルキルスルホネート、テトラデカンスルホネート、ナフタレンスルホネート、Ｃ６〜Ｃ１４アルキルカルボキシレート、ナフタレンカルボキシレート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルスルフェート、Ｃ４〜Ｃ１４アルキルカーボネート、ベンゼンスルホネート、ベンゼンカルボキシレートおよび双性イオン生物学的緩衝液。
【００１７】
上記の名称では、アルキル基は好ましくは直鎖である。
【００１８】
添加剤として引用できる特定の双性イオン生物学的緩衝液は、ＣＡＰＳ（３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸）およびＣＨＥＳ（２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸）であるが、任意の他の双性イオン生物学的緩衝液も、本発明の内容で使用できる。
【００１９】
前記で引用したもの由来の好ましい添加剤は、Ｃ６〜Ｃ１０アルキルスルホネート、およびＣ６〜Ｃ１０アルキルスルホネートであり、オクタンスルホネートが好ましい。
【００２０】
これらの化合物は、それ自体既知であり、商業的に入手可能である。それらは酸または塩基の形であり得る。
【００２１】
「本発明に記載の試料」なる語は、例えば適切な希釈溶液または緩衝系で希釈した、または純粋な、分析すべき生物学的試料を意味する。
【００２２】
分析用の試料は、健康なヒトまたはヒト患者由来の任意の生物学的液体であり得る。ヒト生物学的液体は、正常血清でも異常血清でもよく、また、溶血した血清、血漿、尿または脳脊髄液でもよい。ヒトの生物学的試料に加えて、動物起源の試料を分析できる。試料はまた、合成タンパク質でもよく、その後、本発明の方法は、例えば製造対照用である。
【００２３】
本発明の添加剤は、特に、血清を分析するのに、そしてヒト由来の試料中の血液タンパク質を分離するのに適用する。
【００２４】
血液試料では、分離すべき血液タンパク質は主にアルブミンおよびα１；α２；β（またはβ１およびβ２）；およびγグロブリン画分である。
【００２５】
緩衝系は、一般に電気泳動に、特にキャピラリー電気泳動に使用する、所望の分離に適応した、任意の既知の緩衝系であり得る。引用できる例は、ホウ酸、リン酸および炭酸緩衝液、アミノ酸に基づいた緩衝液および生物学的緩衝液として知られる緩衝液である。
【００２６】
引用できる生物学的緩衝液の例は、ビス−トリス（２−ビス〔２−ヒドロキシエチル〕アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）、ＡＤＡ（Ｎ−〔２−アセトアミド〕−２−イミノジ酢酸）、ＡＣＥＳ（２−〔２−アセトアミノ〔−２−アミノエタンスルホン酸〕、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−〔Ｎ−モルホリノ〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ビス−トリスＰＲＯＰＡＮＥ（１，３−ビス〔トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノプロパン〕）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス〔２−ヒドロキシエチル〕−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−〔Ｎ−モルホリノ〕プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（２−〔２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチルアミノ〕エタンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ′−（２−エタンスルホン）酸）、ＤＩＰＳＯ（３−Ｎ，Ｎ−ビス〔２−ヒドロキシエチル〕アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＭＯＢＳ（４−Ｎ−モルホリノブタンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（３〔Ｎ−トリス−ヒドロキシメチル−メチルアミノ〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＴＲＩＳ（２−アミノ−２−〔ヒドロキシメチル〕−１，３−プロパンジオール）、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ′−〔２−ヒドロキシプロパンスルホン〕酸）、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−ビス〔２−ヒドロキシプロパンスルホン〕酸）、ＴＥＡ（トリエタノールアミン）、ＥＰＰＳ（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ′−〔３−プロパンスルホン〕酸）、ＴＲＩＣＩＮＥ（Ｎ−トリス〔ヒドロキシメチル〕メチルグリシン）、ＧＬＹ−ＧＬＹ（ジグリシン）、ＢＩＣＩＮＥ（Ｎ，Ｎ−ビス〔２−ヒドロキシエチル〕グリシン）、ＨＥＰＢＳ（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ′−〔４−ブタンスルホン〕酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−トリス〔ヒドロキシメチル〕メチル−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＡＭＰＤ（２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール）、ＴＡＢＳ（Ｎ−トリス〔ヒドロキシメチル〕メチル−４−アミノブタンスルホン酸）、ＡＭＰＳＯ（３−〔（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）アミノ〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＣＨＥＳ（２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−〔シクロヘキシルアミノ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＡＭＰ（２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール）、ＣＡＰＳ（３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸）、およびＣＡＢＳ（４−〔シクロヘキシルアミノ〕−１−ブタンスルホン酸）、好ましくはＡＭＰＤ、ＴＡＢＳ、ＡＭＰＳＯ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳＯ、ＡＭＰ、ＣＡＰＳまたはＣＡＢＳとして知られるものである。
【００２７】
添加剤を含む緩衝系中の生物学的液体のｐＨは、２および１２の間であり得る。しかし、アルカリ性ｐＨのキャピラリー電気泳動では、ｐＨは８〜１２の範囲、好ましくは９〜１１の範囲、より特定すると好ましくは約１０である。
【００２８】
本発明の緩衝系はまた、少なくとも１つのｐＨ調整化合物を含むことができる。ＰＨ調整化合物は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ルビジウム、水酸化セシウム、水酸化フランシウム、またはアルキル部分に１〜８個の炭素原子を含むモノ−、ジ−、トリ−またはテトラ−アルキルアンモニウムハイドロオキサイドから選択した化合物であり得る。
【００２９】
本発明により、生物学的緩衝液は、通常の条件下で、１０〜５００ｍＭのオーダーで、好ましくは２００ｍＭの緩衝系の濃度で使用する。
【００３０】
本発明の添加剤は、０．１ｍＭ〜５００ｍＭ、しかし、緩衝系のその臨界ミセル濃度は超えない濃度で使用する。
【００３１】
この臨界ミセル濃度の値は、界面活性剤である添加剤に適用可能である。
【００３２】
オクタンスルホネートを使用する場合、緩衝液中のその濃度は１〜４ｍＭのオーダーであり；好ましくは濃度は約２．５ｍＭである。
【００３３】
本発明の方法では、緩衝系はまた、硫酸ナトリウムも含むことができる。
【００３４】
本発明の緩衝組成物は、緩衝系組成物を調製する場合に普通の様式で、すなわち、液体形で、または希釈すべき固体として構成成分を、許容可能な支持体に添加することにより調製する。通常、支持体は、蒸留または脱ミネラル化した水である。
【００３５】
キャピラリーに使用する材料は、キャピラリー電気泳動に通常使用するものである。内径が５〜２００μｍの融合シリカキャピラリーを使用できる。好ましくは、２００μｍ未満の、より好ましくは１００μｍ未満の内径のキャピラリーを使用する。好ましくは、処理していない内表面を有するキャピラリーを使用する。当業者は、キャピラリーの性質およびサイズを、分析必要条件に適合できる。
【００３６】
実施例
材料および方法
Ａ）キャピラリー電気泳動（方法Ａ）
キャピラリー電気泳動は、内径２５μの融合シリカキャピラリーを備えたＣＥ装置を使用して、臨床試料に実施した。検出は２００ｎｍで実施した。試料は装置の試料チェンジャーに入れ、水力学的注入（７秒間で５０ミリバール）により自動的に注入した。試料を、約４００Ｖ／ｃｍの電場を適用することにより１０分以内に分離した。キャピラリーは、各分析前に０．５Ｍの水酸化ナトリウムで洗浄し、その後、緩衝系で洗浄した。
【００３７】
緩衝系：
分析等級の化学物質を使用した。
【００３８】
１５０ｍＭのグリシン緩衝液を、１１．２６ｇのグリシン（モル質量７５．０７ｇ／モル）を１リットル（ｌ）の脱ミネラル化水に溶かすことにより調製した。最終濃度は１５０ｍＭであり、ｐＨは水酸化ナトリウムペレット（モル質量：４０．０ｇ／モル）を添加することにより１０．０に調整した。
【００３９】
１５０ｍＭのホウ酸緩衝液を、９．３ｇのホウ酸（モル質量６１．８３ｇ／モル）を、１リットルの脱ミネラル水および５．１ｇの水酸化ナトリウム（モル質量：４０．０ｇ／モル）に溶かすことにより調製した。最終濃度は１５０ｍＭであり、ｐＨは１０．０であった。
【００４０】
Ｂ）アガロースゲル電気泳動（方法Ｂ）
アガロースゲルを使用して、血液タンパク質の比較分析を実施した。１０μｌの血清を、欧州特許第Ａ−０４９３９９６号、米国特許第Ａ−５４６４５１５号および米国特許第Ａ−５４０５５１６号に記載のメンブラン・アプリケーターの各ウェルに添加した。その後、添加したアプリケーターを３０秒間アガロースゲルの表面に適用した。このアガロースゲルに適用した試料は、２０℃まで温度を調節できる装置を使用して、２０Ｗの電力で、約７．５分間、電気泳動により分離した。泳動後、ゲルを乾燥し、アシドブラックで染色した。染色後、ゲルを脱色し、再度乾燥した。その後、ゲルを、濃度測定により分析し、タンパク質プロファイルを作成した。
【００４１】
Ｃ）臨床試料：
ＣＥでは、ヒト血清を、緩衝系で１０分の１に希釈した。
【００４２】
実施例１（比較）
グリシン緩衝系を前記のように調製した。正常な血清を分析した。
【００４３】
電気泳動は、前記の方法Ａを使用して実施した。
【００４４】
図１から分かるように、得た電気泳動図は、左から右に読んで、γ、β、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する５つの連続的なピークを示した。
【００４５】
実施例２
２．５ｍＭの濃度のオクタンスルホネートを、実施例１の緩衝系に加えた。
【００４６】
電気泳動を、実施例１に記載の通り実施した。
【００４７】
図２から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、５つの連続的なピークを示す。実施例１の結果との比較により、α１グロブリンとアルブミンの２つの画分の間の分離は実質的に向上し、基線への戻りも向上することが示される。
【００４８】
実施例３（比較）
実施例１の手順を追随し、緩衝系は前記したように調製したホウ酸緩衝液である。
【００４９】
電気泳動は、実施例１に記載の通りに実施した。
【００５０】
図３から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β２、β１、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、６つの連続的なピークを示した。
【００５１】
実施例４
２．５ｍＭの濃度のオクタンスルホネートを、実施例４の緩衝系に加えた。
【００５２】
電気泳動を実施例１に記載のように実施した。
【００５３】
図４から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β２、β１、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、６つの連続的なピークを示す。α１グロブリンとアルブミンの２つの画分の間の分離は実質的に向上し、基線への戻りも向上する。
【００５４】
実施例５（比較）
図５の電気泳動図は、前記の方法Ｂを使用して前の実施例と同じ血清を分析することにより得た。実施例２および４で得た結果と比較することにより、これらの実施により、アガロースゲルで得た分解能と実質的に同等な分解能が得られることが示される。
【００５５】
実施例６（比較）
１５０ｍＭのグリシン緩衝系を調製した。
【００５６】
高いα１およびα２グロブリン含量を含む血清を分析した。
【００５７】
電気泳動は実施例１に記載の通り実施した。
【００５８】
図６から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、５つの連続的なピークを示す。
【００５９】
実施例７
２．５ｍＭの濃度のオクタンスルホネートを、実施例７の緩衝系に加えた。
【００６０】
電気泳動を、実施例６に記載の通りに実施した。
【００６１】
図７から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、５つの連続的なピークを示す。実施例６の結果と比較することにより、α１グロブリンとアルブミンの２つの画分の間の分離は実質的に向上し、基線への戻りも向上する。
【００６２】
実施例８（比較）
実施例６の手順を追随し、緩衝液は１５０ｍＭホウ酸緩衝液である。
【００６３】
電気泳動は、実施例６に記載の通りに実施した。
【００６４】
図８から分かるように、得た電気泳動図は、それぞれγ、β２、β１、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、６つの連続的なピークを示す。
【００６５】
実施例９
２．５ｍＭの濃度のオクタンスルホネートを、実施例８の緩衝系に加えた。
【００６６】
電気泳動を、実施例６に記載の通りに実施した。
【００６７】
図９から分かるように、同じ条件下で得た電気泳動図は、それぞれγ、β２、β１、α２、α１グロブリンおよびアルブミン画分に帰する、６つの連続的なピークを示す。α１グロブリンとアルブミンの２つの画分の間の分離は実質的に向上し、基線への戻りも向上する。α１画分は、２つのピークからなることが判明し、その１つは、オソロムコイドに対応し、オクタンスルホネートの非存在下では、アルブミンピークと同化している。
【００６８】
実施例１０（比較）
図１０の電気泳動図は、実施例６〜９と同じ血清を、前記の方法Ｂを使用して分析することにより得た。実施例７および９で得た結果と比較することにより、これらの実施により、アガロースゲルで得た分解能と実質的に同等である分解能を得ることができることが示された。
【００６９】
実施例１１
α１グロブリンおよびアルブミンの比較移動度（ｍｎ−１）は、前記の方法Ａを使用して、ｐＨが１０であるホウ酸緩衝液（１５０ｍＭ）中で測定した。アルキル鎖長（ｎ）（Ｃ４、Ｃ６、Ｃ８、およびＣ１０について、ｎは、４、６、８および１０を示し、ｎ＝０は、アルキルスルホネートを含まない緩衝液に対応する）の次第に増加するアルカリスルホネートを、２．５ｍＭの濃度のホウ酸緩衝液に加えた。α−１画分およびアルブミン画分の移動度を計算し、図１１のグラフ上に示した。α−１画分の移動度と比べた、アルブミンの移動度の実質的な降下は、Ｃ６鎖以上で見ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、グリシン緩衝液を使用して、キャピラリー電気泳動により分析した正常なヒト血清の電気泳動図を示す。
【図２】
図２は、本発明の添加剤と共に同じグリシン緩衝液を使用して、キャピラリー電気泳動により分析した正常なヒト血清の電気泳動図を示す。
【図３】
図３は、ホウ酸緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により分析した正常なヒト血清の電気泳動図を示す。
【図４】
図４は、本発明の添加剤と共に同じホウ酸緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により分析した正常なヒト血清の電気泳動図を示す。
【図５】
図５は、アガロースゲル電気泳動により得た正常なヒト血清の電気泳動図を示す。
【図６】
図６は、グリシン緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により得た、急性炎症症候群を提示する患者由来の血清の電気泳動図を示す。
【図７】
図７は、本発明の添加剤と共に同じグリシン緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により得た、急性炎症症候群を提示する患者由来の血清の電気泳動図を示す。
【図８】
図８は、ホウ酸緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により得た、急性炎症症候群を提示する患者由来の血清の電気泳動図を示す。
【図９】
図９は、本発明の添加剤と共に同じホウ酸緩衝液を使用してキャピラリー電気泳動により得た、急性炎症症候群を提示する患者由来の血清の電気泳動図を示す。
【図１０】
図１０は、アガロースゲル電気泳動により得た、急性炎症症候群を提示する患者由来の電気泳動図を示す。
【図１１】
図１１は、種々の長さの炭素鎖のアルキルスルホネートが付加されたホウ酸緩衝液における、α１グロブリン画分の移動度およびアルブミン画分の移動度を示す。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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