(57)【要約】本発明は、イソクマリン誘導体および癌治療におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、放射線治療および／または化学治療に対する腫瘍の感受性を増大すると共に、腫瘍新生血管形成、すなわち、新脈管形成を阻害することによって、癌を予防または処置する際のイソクマリン誘導体の使用に関する。最も広範の局面において、本発明は、癌の処置において、以下の式（ＩＩＩ）のイソクマリン誘導体、電離放射線および／または化学療法剤の組み合わせを使用して、癌の質量または転移能力を減少させる点において、放射線および／または化学療法剤単独で得られるよりも増強された治療効果を提供することに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞の増殖を阻害するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該腫瘍細胞を以下の式：
【化１】
2004521929.tif 000014
のイソクマリン誘導体と接触させる工程であって、ここで、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３の各々は、独立して、硫黄または酸素であり、Ｘ４は、硫黄、酸素または−ＮＨ−基であり；Ｒ１は、水素またはＣ１−６アルキルであり、そしてＲ２およびＲ３は、同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、Ｃ１−６アルキル、およびＣ７−１０アルカリール、ヒドロキシまたは水素を表し；そしてｎは、０または１〜３の整数である、工程：
（ｂ）さらに、該腫瘍細胞を、電離放射線もしくは化学療法剤、またはそれらの組み合わせと接触させる工程であって、ここで、一定用量の該イソクマリン誘導体は、一定量の該電離放射線もしくは該化学療法剤、または該電離放射線もしくは該化学療法剤の組み合わせと合わされる場合、該腫瘍細胞の増殖を阻害するのに効率的な用量である、工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記イソクマリン誘導体が、請求項１に記載の式の化合物を含み、ここで、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３の各々は、酸素であり；Ｘ４は、酸素または硫黄であり；Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素およびＣ１−６アルキルから選択され；そしてｎは、０、１、または２である、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、前記イソクマリン誘導体が、以下の式：
【化２】
2004521929.tif 000015
を有し、ここで、Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；そしてＲ２およびＲ３は、それぞれ、水素またはＣ１−６アルキルを表し；そしてｎは、０、または１である、方法。
【請求項４】
前記腫瘍細胞が、前記イソクマリン誘導体および放射線と接触される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記腫瘍細胞が、前記イソクマリン誘導体および電離放射線と接触される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記腫瘍細胞が、前記イソクマリン誘導体および化学療法剤と接触される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記腫瘍細胞が、前記イソクマリン誘導体および電離放射線と接触させる、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記腫瘍細胞が、イソクマリン誘導体、およびＴｕｂｕｌｉｎ相互作用剤もしくはＤＮＡ相互作用剤、または代謝拮抗物質から選択される、化学療法剤と接触させる、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記化学療法剤が、Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤が、パクリタキセルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記化学療法剤が、ＤＮＡ相互作用剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＤＮＡ相互作用剤が、シクロホスファミンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学療法剤が、代謝拮抗物質である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記代謝拮抗物質が、５−フルオロウラシルである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ヒト患者の癌を処置するための方法であって、該方法は、以下：
請求項１に記載の式のイソクマリン誘導体を、該ヒト患者に投与する工程；および
電離放射線もしくは化学療法剤、または該電離放射線もしくは該化学療法剤の組み合わせを、第２処置様式として該ヒト患者に投与する工程、
を包含し、ここで、一定用量の該イソクマリン誘導体は、該第２処置様式と組み合わされた場合、該腫瘍を処置するのに効率的な用量である、
方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記イソクマリン誘導体が、請求項１に記載の式の化合物を含み、ここで、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３の各々は、酸素であり；Ｘ４は、酸素または硫黄であり、Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；そしてＲ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素およびＣ１−６アルキルから選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法であって、前記イソクマリン誘導体が、以下の式：
【化３】
2004521929.tif 000016
を有し、ここで、Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；そしてＲ２およびＲ３は、それぞれ、水素またはＣ１−６アルキルであり、そしてｎが、０または１である、方法
【請求項１８】
前記第２処置様式が、放射線のみである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２処置様式が、化学療法剤のみである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２処置様式が、電離放射線と化学療法剤との組み合わせである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記化学療法剤が、Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤、ＤＮＡ相互作用剤、および代謝拮抗物質から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記化学療法剤が、Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤が、パクリタキセルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学療法剤が、ＤＮＡ相互作用剤である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＤＮＡ相互作用剤が、シクロホスファミドである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記化学療法剤が、代謝拮抗物質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記代謝拮抗物質が、５−フルオロウラシルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１または２に記載の方法であって、前記腫瘍が、皮膚癌細胞、前立腺癌細胞、肺癌細胞、脳癌細胞、乳癌細胞、卵巣癌細胞、子宮頚癌細胞、肝臓癌細胞、膵臓癌細胞、結腸癌細胞、胃癌細胞、および白血病細胞からなる群から選択される、方法。
【請求項２９】
請求項４または１８に記載の方法であって、前記電離放射線が、γ線、ｘ線、マイクロ波線、および紫外線からなる群から選択される、方法。
【請求項３０】
請求項１５または１６に記載の方法であって、前記癌が、皮膚癌、前立腺癌、肺癌、脳癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌細胞、肝臓癌細胞、膵臓癌細胞、結腸癌細胞、胃癌細胞、および白血病細胞からなる群から選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（１．発明の分野）
本発明は、イソクマリン誘導体および癌治療におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、放射線治療および／または化学治療に対する腫瘍の感受性を増大すると共に、腫瘍新生血管形成、すなわち、新脈管形成を阻害することによって、癌を予防または処置する際のイソクマリン誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（２．関連分野の説明）
正常な組織恒常性は、細胞増殖の速度と細胞死の速度との間の複雑なバランスによって達成される。細胞増殖速度の増加または細胞死速度の減少のいずれかによるこのバランスの崩壊は、細胞の異常な増殖を生じ得、これは癌の発生における主な現象であると考えられる。癌の影響は、破局的であり、米国のみで一年間あたり５０万人を越える死亡を引き起こす。癌の処置のための従来のストラテジーとしては、化学治療、放射線治療、手術、生物学的治療またはそれらの組み合わせが挙げられる。しかし、これらのストラテジーにおけるさらなる進歩は、正常細胞に対する特異性および過剰な毒性の欠損により制限される。さらに、特定の癌は、処置（例えば、化学治療）およびこれらのストラテジーのいくつか（例えば、手術）に対して不応性であり、そして常に実行可能な代替なわけではない。
【０００３】
一旦、癌の診断が確立されると、最も緊急の問題は、この疾患が局在化しているか、リンパ節および遠位器官に拡がっているかということである。癌の最も恐ろしい局面は、転移であり、この恐怖は十分に証明されている。患者の約５０％において、一次新生物の外科的切除は効果がない。なぜなら、腫瘍が切除するのに十分に大きくなるまでに、転移が起こるからである（Ｓｕｇａｒｂａｋｅｒ、１９７９；ＦｉｄｌｅｒおよびＢａｌｃｈ、１９８７）。転移は、異なる器官および同じ器官の異なる領域に存在し得、手術、放射線、薬物または生物治療による完全な除去を困難にする。さらに、組織微小環境は、治療に対する腫瘍細胞の応答（Ｆｉｄｌｅｒ，１９８５）、および抗癌剤の有効性に有意に影響し、これは、所望しない副作用を引き起こすことなく、細胞を破壊するのに十分な量で腫瘍病巣に送達されなければならない（ＦｉｄｌｅｒおよびＰｏｓｔｅ，１９８５）。さらに、転移性癌の処置は、癌細胞の生物学的異質性、およびほとんどの従来の抗癌剤に対して耐性になる腫瘍細胞の迅速な出現に起因して、非常に妨害される（ＦｉｄｌｅｒおよびＰｏｓｔｅ，１９８５）。
【０００４】
一次および二次（転移性）腫瘍の両方の増殖に関与するプロセスの１つは、新生血管形成、すなわち、腫瘍に成長する新血管の形成である。この新生血管形成は、新脈管形成と呼ばれ（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８６；Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８９）、これは、増殖中の腫瘍に、血液供給および必須の栄養分を提供する。直径１〜２ｍｍの腫瘍は、拡散によって全ての栄養分を受けとり得るが、さらなる増殖は、新脈管形成を介する適切な血液供給の発生に依存する。新脈管形成の阻害は、宿主環境の操作による転移を処置するための新規なさらに一般的なアプローチを提供する。
【０００５】
腫瘍内皮細胞およびこの腫瘍内皮細胞を取りまく正常細胞の両方によって放出されるいくつかの血管形成分子は、新脈管形成の誘発を媒介する。腫瘍の血管前段階は、局所両性腫瘍に関連し、一方、血管段階は、転移し得る腫瘍に関連する。さらに、光学顕微鏡および免疫組織化学を使用する研究により、異なるヒト癌における微小血管の数および密度は、それらが浸潤して転移を生じる可能性と直接相関することが結論付けられた（Ｗｅｉｄｎｅｒら、１９９１；Ｗｅｉｄｎｅｒら、１９９３）。全ての新脈管形成腫瘍が、転移を生じるわけではないが、新脈管形成の阻害は、一次部位および二次部位の両方における腫瘍内皮細胞の増殖を阻止し、従って、転移の発生を阻止し得る。
【０００６】
制御された新脈管形成および制御されていない新脈管形成の両方は、類似の様式で進行すると考えられる。基底膜により取り囲まれる内皮細胞および周皮細胞は、毛細血管を形成する。新脈管形成は、内皮細胞および白血球により放出される酵素による基底膜の浸食で始まる。次いで、血管の管腔の裏に存在する内皮細胞は、基底膜を通って突出する。脈管形成刺激因子は、この浸食された基底膜を通って移動するように内皮細胞を誘導する。この移動細胞は、親血管からの「出芽（ｓｐｒｏｕｔ）」を形成し、ここでこの内皮細胞は有糸分裂を受け、そして増殖する。この内皮出芽は、各々他の出芽と結合して、毛細血管わなを形成し、新しい血管を形成する。
【０００７】
持続的かつ調節されていない新脈管形成は、腫瘍増殖に特徴的であり、これは、癌において見られる病理学的損傷を支持する。従って、腫瘍増殖は、新脈管形成依存性プロセスである（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９７１）。最初の血管前段階の後に、腫瘍内皮細胞集団における全ての増加は、この腫瘍上に集中する新しい毛細管における増加により予想される。この期間を越える腫瘍容量の拡大は、新しい毛細血管の誘導を必要とする。
【０００８】
新脈管形成プロセスの遮断が、重要な抗癌ストラテジーとして現れた。マウス保有皮下ルイス肺癌（３ＬＬ）において、一次腫瘍または局所性腫瘍が、アンギオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）と命名される新脈管形成阻害物質を放出することが証明された（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｌｙら、１９９４）。アンギオスタチンは、内皮細胞の増殖を選択的に阻害するプラスミノーゲンの３８ｋＤａフラグメントである。アンギオスタチンは従来の治療に対するアジュバントとして使用される場合、血管新生、故に、転移の増大を抑制することが示されている（例えば、米国特許第５，７３３，８７６号を参照のこと）。いくつかの研究は、このモデルと一致する結果を得ている。全身投与の後、精製アンギオスタチンは、転移においてアポトーシスを生じ得（Ｈｏｌｍｇｒｅｎら、１９９５）、そしてヌードマウスに皮下移植されたいくつかのヒト腫瘍の休止状態を維持する（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、１９９６）。
【０００９】
明らかに、新脈管形成は、腫瘍の発生および維持において主な役割をはたす。上記のように、従来の癌治療レジメンは、癌細胞が腫瘍増殖と戦うために使用される治療様式に適応しそしてこれに対して耐性になる能力により、妨害される。特定のイソクマリン誘導体は、血管新生に対する阻害効果を有することが知られており（例えば、米国特許第６，０２０，３６３号（これは、本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、そしてこのようなイソクマリン誘導体は、その新脈管形成阻害特性によって、腫瘍の増殖、サイズ、拡散の減少、および他の場合には腫瘍の有害な影響を軽減する際に有用であるようである。有意には、本発明によると、イソクマリン誘導体処置はまた、内皮細胞および確立された腫瘍を電離放射線および／または従来の化学治療の細胞障害性効果に対して感作することが示されている。従って、イソクマリン誘導体のこれらの特性の組み合わせは、有望な癌治療ストラテジーを提供し、これらの薬物についての新規の医学的用途を確立する。
【００１０】
イソクマリン誘導体、特に、３−ヒドロキシメチル−６−メトキシ−８−ヒドロキシ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−１−オン（後にサイトゲニン（ｃｙｔｏｇｅｎｉｎ）と命名される）（以下の式Ｉ）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｅｕｒｏｃｉｄｉｃｕｍのＭ１４３−３７Ｆ１１株によって産生される化合物として最初に同定された。サイトゲニンは、種々の動物細胞およびヒト癌細胞に対するその増殖阻害活性に起因して、抗生物質Ｍ１４３−３７Ｆ１１の名で注目された（日本特許公報第２１７７／’９１号）。経口投与により投与されたサイトゲニンは、いくつかの移植可能なマウス固腫瘍に対する抗腫瘍活性を示した。しかし、この化合物は、培養された腫瘍細胞に対する秘奥に低い抗増殖阻害活性、ならびにマウスおよびイヌにおける低い毒性を示した。サイトゲニンの抗腫瘍活性の作用機構は、増殖中の腫瘍における血管形成を中断させるその能力に関連することが見出された。サイトゲニンは、抗腫瘍剤としての期待を証明したが、そのインビボでの不安定性により、臨床開発に不適当である。サイトゲニンの化学的誘導体の研究は、親化合物の重要な生物学的特性を維持する非常に安定なアナログ（本明細書中で、ＮＭ−３（以下の式ＩＩ）と称する）を同定した。ＮＭ−３は、このクラスの化合物の最も広範に研究されたメンバーであり（例えば、米国特許第６，０２０，３６３号を参照のこと）、そして本発明の処置方法において有用なイソクマリン誘導体の主な例として働く。
【００１１】
【化４】
2004521929.tif 000002
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（３．発明の要旨）
最も広範の局面において、本発明は、癌の処置において、以下の式（ＩＩＩ）のイソクマリン誘導体、電離放射線および／または化学療法剤の組み合わせを使用して、癌の質量または転移能力を減少させる点において、放射線および／または化学療法剤単独で得られるよりも増強された治療効果を提供することに関する。
【００１３】
本発明の方法において有用なイソクマリン誘導体は、以下の式ＩＩＩ：
【００１４】
【化５】
2004521929.tif 000003
の化合物を含み、ここで、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、硫黄または酸素であり；そしてＸ４は、硫黄、酸素または−ＮＨ−であり；Ｒ１は、水素またはＣ１−６アルキルであり、そしてＲ２およびＲ３は、同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、Ｃ１−６アルキル、およびＣ７−１０アルカリール、ヒドロキシまたは水素を表し；そしてｎは、０または１〜３の整数である。式ＩＩＩのイソクマリン誘導体は、放射線感作物質および／または化学的増強剤（ｃｈｅｍｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ）であり、一方でイソクマリン誘導体により得られる利益、または他方で電離放射線もしくは化学療法剤により得られる利益（いずれか、単一の処置様式として使用される場合）よりも相加的または相乗的である、癌の処置における治療的利益を提供する。
【００１５】
従って、本発明は、以下の工程を包含する腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供する：腫瘍細胞を、上記の式ＩＩＩのイソクマリン誘導体、および第２の増殖阻害様式（または処置のモード）（一定量の電離放射線もしくは化学療法剤またはこの放射線および化学療法剤の組み合わせから選択される）と接触させる工程、ここで、上記の一定用量のイソクマリン誘導体は、第２の増殖阻害様式で合わせる場合、腫瘍細胞の増殖を阻害するのに効率的な用量である。
【００１６】
１つの実施形態において、本発明は、以下の工程を包含する、ヒト患者の癌を処置する方法をさらに提供する：上記の式ＩＩＩのイソクマリン誘導体をヒト患者に、一定量の電離放射線および／または化学療法剤とともに投与する工程、ここで、この一定用量のイソクマリン誘導体は、一定量の電離放射線および／もしくは化学療法剤と合わせる場合、癌を処置するのに効率的な用量である。この実施形態において、処置される癌被験体は、適切に、皮膚癌、前立腺癌、肺癌、脳癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸癌、胃癌、リンパ腫および白血病からなる群から選択される。本発明の方法において、イソクマリン誘導体は、適切に、電離放射線および／または化学療法剤の前に、または同時に投与される。本発明は、さらに、以下の工程を包含する、腫瘍上での電離放射線を増強する方法を提供する：腫瘍細胞を、上記の式ＩＩＩのイソクマリン誘導体と接触させる工程、および次いで、この腫瘍細胞を、電離放射線と接触させる工程。そして本発明は、以下の工程を包含する、腫瘍細胞を、増殖阻害有効量または細胞殺傷有効量の化学療法剤で感作する方法：腫瘍細胞を、上記の式ＩＩＩのイソクマリン誘導体と接触させる工程、および次いで、この腫瘍細胞を、この化学療法剤と接触させる工程。
【００１７】
さらに、本明細書中で使用される場合、化学療法剤は、癌の処置および予防に使用される、従来の全ての細胞傷害性試薬および細胞増殖抑制性試薬を含み、これには、作用の観点から、Ｔｕｂｕｌｉｎ相互作用剤、ＤＮＡ相互作用剤、代謝拮抗物質および葉酸代謝拮抗薬、抗ホルモン剤、抗生物質、抗ウイルス剤、ＯＤＣインヒビター、および他の細胞障害剤、ならびにプロドラックが挙げられる。
【００１８】
（５．発明の詳細な説明）
本発明は、あるクラスのイソクマリン誘導体を使用することによって、動物の癌、特に、このような癌を有するヒトの処置における従来の化学治療および／または放射線の効力を増大する方法を提供し、このイソクマリン誘導体は、化学治療剤および／または放射線と組み合わせて用いられた場合に、固有の放射線増感活性および／または化学相乗作用特性を示す。本発明のイソクマリン誘導体を従来の化学治療および／または放射線と組み合わせて使用することは、この処置の腫瘍細胞殺傷効果および増殖阻害効果におけるより大きな効力を増大するだけではなく、より少ない毒性および／または有害な副作用を処置被験体に与える処置レジメンを提供する。なぜなら、この処置の投薬量および／または強度は、イソクマリン誘導体の処置促進効果の結果として、減少され得るからである。
【００１９】
（Ａ．イソクマリン誘導体）
本発明において有用である得、上記の式ＩＩＩのイソクマリン誘導体は、好ましくは、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が、酸素であり；Ｘ４が、酸素または硫黄であり；Ｒ１が、Ｃ１−３アルキルであり；Ｒ２およびＲ３が、水素またはＣ１−６アルキルであり；そしてｎが、０、１または２であるイソクマリン誘導体、あるいはその薬学的に受容可能な塩を含む。この好ましい実施形態における適切なイソクマリン誘導体およびチアイソクマリン誘導体としては、以下が挙げられる：
２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）酢酸；
２−（８−ヒドロキシ−６−エトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）プロピオン酸；
２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾチオピラン−３−イル）酢酸；
２−（８−ヒドロキシ−６−エトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾチオピラン−３−イル）酢酸；
２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）プロピオン酸；
２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾチオピラン−３−イル）プロピオン酸。
【００２０】
より好ましい実施形態において、本発明の方法で用いられるイソクマリン誘導体は、以下の式ＩＶに従う化学構造を有する：
【００２１】
【化６】
2004521929.tif 000004
ここで、Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり、そしてＲ２およびＲ３は、同じであっても異なっていてもよく、そして各々が、水素原子またはＣ１−６アルキルを表し、そしてｎは、０または１である。もっとも好ましくは、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、水素であり、そしてＲ３は、メチルであり、ｎは、整数１である。この最も好ましいイソクマリンは、上記の式ＩＩに記載され、そして本明細書中以下では、ＮＭ−３と称される。
【００２２】
本発明の方法において有用であるイソクマリン誘導体は、従来技術において記載される種々の合成方法を使用して、従来の出発物質から調製され得、この合成方法としては、以下に記載される合成方法が挙げられる：米国特許第６，０２０，３６３号；同第３，９７５，５３５号；同第３，９６０，８９２号；独国特許ＤＥ２４４８３８７；刊行物「Ａ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｃｏｎｃｉｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ３−ａｒｙｌ−ａｎｄ  ３−ａｌｋｙｌ−１Ｈ−２−ｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｙｒａｎ−１−ｏｎｅｓ（ｔｈｉｏｉｓｏｃｏｕｍａｒｉｎ）」、Ｃｏｕｔｕｒｅ，Ａｘｅｌら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９０）（１２），１１３３−４；「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  １−ｏｘｏ−１Ｈ−２−ｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｒａｎ−３−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、Ｂａｒｅ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｍ．ら、（Ｒｉｃｈａｒｄ−Ｍｅｒｒｅｌｌ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）（１９７７），４ｐｐ．，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｕ．Ｓ．３，６９０，８９２；「Ｖｉｎｙｌ  ａｚｉｄｅｓ  ｉｎ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｐａｒｔ  ９．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ  ａｌｋａｌｏｉｄ  ｓｉａｍｉｎｅ  ｂｙ  ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｚａ−ｗｉｔｔｉｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ」、Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１（１９８７），（６），１３９５−８；Ｂｒｉｎｇｍａｎｎら、Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，［４７２］２７５−２８４（１９９４）；Ｂｒｉｎｇｍａｎｎら、Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．Ｂ［５２］３５５−３５８（１９９７）；Ｌｅｔｃｈｅｒら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋ．Ｔｒａｎｓ．１［１０］１７１５−１７２０（１９９８）；ＤｉｊｋｓｍａｎおよびＮｅｗｂｏｌｄ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２１３，１２１６（１９５１）；ＫｉａｎｇおよびＭａｎｎ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９０９，１９１４（１９５１）；Ｃｏｕｔｕｒｅら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［１２］１１３３−１１３４（１９９０）；Ｗｏｏｄｒｏｏｆｅら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋ．Ｔｒａｎｓ．２［１］５５−６０（２０００）；Ｐａｄｗａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．［６４］３５９５−３６０７（１９９９）；Ｎｏｒｉｓｕｋｅ，Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊａｐａｎ［５８］１０８８−１０９３（１９８５）；Ｓｐａｓｓｏｖら、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓ．Ｃｈｅｍ．［２３］７９５−７９９（１９８５）；ＨａｔａおよびＡｔｓｕｓｈｉ，Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，３０９−３１２（１９８３）；Ｙｏｕｓｉｆら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ［３０］１６８０−１６９１（１９８２）；Ｓｉｎｇｈら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［１０］７９１−７９３（１９８３）；ならびにＳａｋａｍｏｔｏら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．［３３］６２６−６３３（１９８５）（これら全ては本明細書中に参考として援用される）。米国特許第６，０２０，３６３号に記載の技術は、本発明に従う好ましいイソクマリン（ＮＭ−３を含む）の合���において特に有用であり、一方、米国特許第３，９７５，５３５号に記載の合成方法は、本発明で用いられるより広いクラスのイソクマリン誘導体（チアイソクマリンアナログを含む）に有用である。
【００２３】
本発明の方法で用いられるイソクマリン誘導体は、種々の従来の薬学的処方物の形態で処方され得、そして従来的に用いられる薬物投与経路（経口投与、静脈内投与、動脈内投与、非経口投与、または腹腔内投与が挙げられる）のいずれか１つによって、処置を必要とする癌患者に投与され得る。本発明において、好ましい投与経路としては、静脈内（ＩＶ）投与、腹腔内（ＩＰ）投与および経口投与が挙げられ、経口投与が、本発明に従うＮＭ−３および他のイソクマリン誘導体により示される高レベルの経口バイオアベイラビリティーを利用するために最も好ましい。
【００２４】
経口投与のために、本発明のイソクマリン誘導体は、例えば、不活性希釈剤または吸収可能食用キャリアを用いて処方され得るか、または硬質ゼラチンカプセルもしくは軟質ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得るか、または治療食の食品に直接組み込まれ得る。経口治療投与について、活性化合物は、賦形剤中に組み込まれ得、そして経口摂取可能錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル剤、エリキシル、懸濁剤、シロップ、カシェ剤などの形態で使用され得る。もちろん、このような組成物および調製物は、異なり得、都合良くは、単位重量の約２〜６０％の間であり得る。このような治療的に有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投薬量が得られるような量である。
【００２５】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などはまた、以下：結合剤、ガムトラガカント、アカシア、コーンスターチ、またはゼラチン；賦形剤（例えば、リン酸二カルシウム）；崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ジャガイモスターチ、アルギン酸など）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）；ならびに甘味剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリン（添加され得る））または矯味矯臭剤（例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油もしくはチェリー矯味矯臭剤）を含み得る。投薬単位がカプセル剤である場合、上記型の物質に加えて、液体キャリアを含み得る。種々の他の物質がコーティングとしてまたは投薬単位の物理的形態をそれ以外で改変するために存在し得る。例えば、錠剤、丸剤、またはカプセル剤は、シェラック、糖、またはその両方でコーティングされ得る。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてのスクロース、保存剤としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素および矯味矯臭剤（例えば、チェリー矯味矯臭剤もしくはオレンジ矯味矯臭剤）を含み得る。もちろん、投薬単位形態を調製する際に使用される任意の物質が、使用される量において、薬学的に純粋かつ実質的に非毒性であるべきである。さらに、他の化学療法化合物は、徐放調製物および処方物に組み込まれ得る。
【００２６】
注射可能な使用に適切な本発明に従うイソクマリン誘導体の薬学的処方物としては、滅菌水溶液または分散物、および滅菌注射可能な溶液または分散物の即時の調製のための滅菌粉末が挙げられる。全ての場合において、この形態は、滅菌でなければならず、そして、各々の注入可能性が存在する程度まで流体でなければならない。この処方物は、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして微生物（例えば、細菌および真菌）の汚染作用に対して保存されなければならない。キャリアは、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、そして界面活性剤の使用によって、含有する溶媒または分散媒体であり得る。微生物の作用の阻害は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得る。多くの場合において、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能な組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、アルミニウムモノステアレートおよびゼラチン）の組成物での使用によってもたらされ得る。
【００２７】
滅菌注射可能な溶液は、必要量で適切な溶媒中の活性なイソクマリン化合物を、上に列挙される種々の他の成分と混ぜ、必要に応じて、続いて、濾過滅菌することによって調製される。一般的に、分散物は、ベーシックな分散媒体および上に列挙される成分から必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクル中に、種々の滅菌された活性成分を混ぜることによって調製される。滅菌注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、これは、活性成分およびこの以前に滅菌濾過された溶液からの任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」としては、任意の溶媒および全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合性である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補助的活性成分もまた、この組成物中に混ぜられ得る。
【００２９】
（Ｂ．化学療法剤）
本発明の方法において有用な化学療法剤としては、癌細胞を殺傷し、そして／または癌細胞の増殖を阻害することにおいて活性であることが公知の全ての範囲（ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の組成物および化合物が挙げられる。化学療法剤（作用の機構によってグループ分けされる）としては、ＤＮＡ相互作用剤、代謝拮抗剤、チューブリン不活化剤、抗ホルモン剤、抗ウイルス剤、ＯＤＣ阻害剤および他の細胞傷害剤（例えば、ヒドロキシ−尿素）が挙げられる。これらの薬剤のうちのいずれかが本発明の方法での使用に適する。
【００３０】
ＤＮＡ相互作用剤としては、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、アルトレタミン；ＤＮＡ鎖破壊剤（例えば、ブレオマイシン）；インターカレーティングトポイソメラーゼＩＩインヒビター（例えば、ダクチノマイシンおよびドキソルビシン）；非インターカレーティングトポイソメラーゼＩＩインヒビター（例えば、エトポシドおよびテニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ））；ならびにＤＮＡ副溝結合剤プリカマイシンが挙げられる。
【００３１】
アルキル化剤は、細胞性のＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質分子、ならびにより小さなアミノ酸、グルタチオンおよび類似の化学物質と共有結合化学付加物を形成する。一般的に、これらのアルキル化剤は、細胞成分中の求核性原子（例えば、核酸、タンパク質、アミノ酸またはグルタチオン中のアミノ基、カルボキシル基、ホスフェート基、スルフヒドリル基）と反応する。癌治療におけるこれらのアルキル化剤の機構および役割は、十分に理解されていない。代表的なアルキル化剤としては、以下が挙げられる：ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、シクロホスファミド、イソファミド（Ｉｓｏｆａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード）；アジリジン（例えば、チオテパ（Ｔｈｉｏｔｅｐａ））；メタンスルホネートエステル（例えば、ブスルファン）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾトシン）；白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）；生体還元（ｂｉｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ）アルキレーター（例えば、マイトマイシンおよびプロカルバジン、ダカルバジンおよびアルトレタミン）；ＤＮＡ鎖破壊剤（ブレオマイシンを含む）。トポイソメラーゼは、鎖の自由回転を可能にするために、複製の間、一過的にＤＮＡ鎖の破壊を開始する遍在する細胞性酵素である。これらの酵素の機能は、ＤＮＡの複製プロセスに重要である。これらの機能が無い場合、ＤＮＡヘリックスのねじれひずみは、自由回転を妨げ、このＤＮＡ鎖は、適切に分離することができず、そしてこの細胞は、最終的に分裂することなく死滅する。トポＩは、ＤＮＡ一本鎖切断部の３’末端に連結し、一方、トポＩＩは、二本鎖ＤＮＡ切断部の５’末端に連結する。ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩインヒビターとしては、以下が挙げられる：インターカレーター（例えば、アムサクリン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、およびミトザントロン）；ノンインターカレーター（ｎｏｎｉｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒ）（例えば、エトポシドおよびテニポシド）；カムトテシン（ｃａｍｔｏｔｈｅｃｉｎ）（イリノテカム（ＣＤＴ−ＩＩ）およびトポテカンを含む）。代表的なＤＮＡ副溝結合剤は、プリカマイシンである。
【００３２】
代謝拮抗剤は、一般的に、２つの主要な機構のうちの一方または他方により核酸の産生を妨害することによって細胞傷害活性を発揮する。いくつかのこの薬物は、ＤＮＡ合成の中間前駆体であるデオキシリボヌクレオシド三リン酸の産生を阻害し、従って、ＤＮＡ複製を阻害する。いくつかの化合物は、同化ヌクレオチド経路においてプリンまたはピリミジンを置換し得る十分に類似したプリンまたはピリミジンである。次いで、これらのアナログは、ＤＮＡおよびＲＮＡの通常の対応物の代わりに、ＤＮＡおよびＲＮＡ中へと置換され得る。本明細書中で有用な代謝拮抗剤としては、以下が挙げられる：葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート）；ピリミジンアンタゴニスト（例えば、フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、シタラビン、およびフロクスウリジン）；プリンアンタゴニスト（メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビン、ペントスタチンを含む）；糖改変アナログ（シタラビン、フルダラビンを含む）；リボヌクレオチドレダクターゼインヒビター（ヒドロキシウレアを含む）。
【００３３】
チューブリン相互作用剤は、チューブリン（重合して細胞性微小管を形成するタンパク質）の特定の部位に結合することによって細胞分裂を妨害する。微小管は、重要な細胞構造単位である。相互作用剤がタンパク質上で結合する場合、この細胞は、適切に微小管を形成できない。チューブリン相互作用剤としては、ビンクリスチンおよびビンブラスチン（ともに、アルカロイド）ならびびタキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）が挙げられる。
【００３４】
これらの作用の機構は異なるが、タキサンおよびビンカアルカロイドの両方が、細胞微小管に対してそれらの生物学的効果を発揮する。タキサンは、チューブリン（紡錘体微小管のタンパク質サブユニット）の重合を促進するように作用する。最終の結果は、微小管の解重合の阻害であり、これは、安定な非機能性の微小管の形成を引き起こす。これは、微小管系内の動的平衡を破壊し、そして後期のＧ２期およびＭ期において細胞周期を停止し、これは、細胞複製を阻害する。
【００３５】
タキサンと同様に、ビンカアルカロイドもまた、細胞内の微小管系に影響するように作用する。タキサンとは対照的に、ビンカアルカロイドは、チューブリンに結合し、そしてチューブリンサブユニットの微小管への重合を阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）かまたは阻害する（ｐｒｅｖｅｎｔ）。ビンカアルカロイドはまた、微小管の解重合を誘導し、これは、微小管構築を阻害し、そして細胞中期停止を媒介する。ビンカアルカロイドはまた、核酸およびタンパク質合成；アミノ酸、サイクリックＡＭＰ、およびグルタチオン合成；細胞呼吸に対して効果を発揮し；そして高い濃度では免疫抑制活性を発揮する。
【００３６】
抗ホルモン剤は、末端レセプター器官においてホルモン作用を遮断することによって細胞傷害性活性を発揮する。いくつかの異なる型の新生物が、細胞複製を増殖させるためにホルモン刺激を必要とする。ホルモン作用を遮断することによる抗ホルモン剤は、新生物細胞から複製に必要な刺激を奪う。細胞がそれらの生活環の最後に達すると、それらは、分裂およびさらなる悪性細胞の産生なく、正常に死ぬ。抗ホルモン剤は、代表的に、天然の供給源から誘導され、以下が挙げられる：エストロゲン、結合エストロゲンおよびエチニルエストラジオールおよびジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｂｅｓｔｒｏｌ）、クロルトリアニセン（Ｃｈｌｏｒｔｒｉａｎｉｓｅｎ）およびイデネステロール（Ｉｄｅｎｅｓｔｒｏｌ）；プロゲスチン（例えば、ヒドロキシプロゲステロンカプロレート、メドロキシプロゲステロン、およびメゲストロール）；アンドロゲン（例えば、テストステロン、テストステロンプロピオネート）；フルオキシメステロン、メチルテストステロン。
【００３７】
副腎コルチコイドは、天然の副腎コルチゾールまたはヒドロコルチゾンに由来する。これらは、それらの抗炎症性の利点および有糸分裂を阻害しそしてＤＮＡ合成を停止するいくらかの能力に起因して使用される。これらの化合物としては、プレドニゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾン、およびプレドニゾロンが挙げられる。
【００３８】
ロイチン化（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）放出ホルモン剤または性腺刺激ホルモン放出ホルモンアンタゴニストは、前立腺癌の処置において主に使用される。これらとしては、酢酸ロイプロリドおよびゴセレリンアセテートが挙げられる。これらは、精巣におけるステロイドの生合成を阻害する。
【００３９】
抗ホルモン抗原としては、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド）、ならびに抗副腎（Ａｎｔｉａｄｒｅｎａｌ）剤（例えば、ミトーテンおよびアミノグルテチミド）が挙げられる。
【００４０】
ＯＤＣ（またはオルニチンデカルボキシラーゼ）インヒビターは、ＯＤＣ（新生物細胞増殖に重要なポリアミン生合成の律速酵素）の活性を欠乏させるかまたは妨害することによって、癌性および前癌性の細胞の増殖を阻害する。特に、オルニチンがポリアミン、プトレシンに変換され、プトレシンが続いてスペルミジンおよびスペルミンに変換されるポリアミン生合成は、種々の癌性細胞および癌細胞株において新生物増殖（ｇｒｏｗｔｈ）の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）において必須の生化学事象であるようであり、そしてこのような新生物細胞におけるＯＤＣ活性の阻害またはＯＤＣの阻害の欠乏は、このような細胞におけるポリアミンレベルを減少し、細胞増殖の停止、より分化した細胞の形態学ならびに一様な細胞老化および死を導くことが示されている。この点について、ＯＤＣまたはポリアミン合成インヒビターは、癌の再発または前癌細胞の癌細胞への転換を妨げるように機能する、細胞傷害性剤または細胞死滅剤よりも強力な細胞傷害剤であると考えられる。適切なＯＤＣインヒビターは、エフロルニチンまたはα−ジフルオロメチル−オルニチン（経口利用可能な不可逆的なＯＤＣの阻害インヒビター）ならびに種々のポリアミンアナログ（前臨床研究および臨床研究の種々の段階にある）である。
【００４１】
他の細胞傷害剤としては、細胞機能または細胞有糸分裂の維持に不可欠ないくつかの細胞プロセスを干渉するか、またはブロックする薬剤、ならびに、アポトーシスを促進する薬剤が挙げられる。このことについて、ヒドロキシ尿素は、酵素リボヌクレオチドレダクターゼのインヒビターを介して作用しそうであるが、アスパラギナーゼは、アスパラギンを非機能的なアスパラギン酸に酵素的に転化し、これによって、腫瘍中のタンパク質合成をブロックする。
【００４２】
本発明に従う組合せ治療において特に有用な化学療法剤としては、以下が挙げられる：チューブリン相互作用剤（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）；ＤＮＡ相互作用剤（例えば、シクロホスファミド、クロラムブシル、シスプラチンおよびドキソルビシン）；ならびに代謝拮抗物質（例えば、５−フルオロウラシルおよびメトトレキサート）。本発明の組合せ治療における使用のための好ましい化学療法剤としては、パクリタキセルおよびシクロホスファミドが挙げられる。本発明の処置方法において使用される場合、最適な化学療法剤は、現在市販されている任意の処方物中で、そして、単一薬剤使用について認可されたラベル用法未満またはその範囲内に収まる投薬量で簡便に使用され得、本発明に従う組合せ治療において、化学療法剤の有効性が増強され、対応するより低量の投薬量を可能にすることが理解される。
【００４３】
（Ｃ．電離放射線）
本発明において、用語「電離放射線」は、十分なエネルギー有するか、または電離（電子を得るか、または失う）を生成するような核相互作用を介して、十分なエネルギーを生成し得る粒子、またはプロトンを含む放射線を意味する。例示的で、かつ好ましい電離放射線は、Ｘ−放射線である。Ｘ−放射線を標的組織または細胞に送達するための手段は、当該分野で周知である。所定の細胞中で必要とされる電離放射線の量は、一般的に、その細胞の性質に依存する。有効量の放射線を決定する手段は、当該分野で周知である。本明細書中で使用する場合、用語、電離の「有効量」は、本発明のイソクマリン誘導体とともに与えた（必要に応じて、さらに化学療法剤と組合せて）場合、細胞傷害または細胞死の増加を産出する、電離放射線量を意味する。
【００４４】
Ｘ−線についての用量範囲は、長期（３週間〜４週間）の間の、５０レントゲン〜２００レントゲンの１日量から、２０００レントゲン〜６０００レントゲンの単回線量の範囲である。放射性同位体についての線量範囲は、広範に変化し、そして、同位体の半減期、放射された放射線の強度および型、ならびに腫瘍細胞の取り込みに依存する。
【００４５】
放射線を組織に送達するための任意の適切な手段は、外的手段に加えて、本発明で使用され得る。例えば、放射線は、腫瘍の抗原と免疫反応する放射性標識化抗体を最初に提供し、続いて、有効量の放射性標識化抗体を腫瘍に送達することによって、送達され得る。さらに、放射性同位体を使用して、電離放射線を組織または細胞に送達し得る。
【００４６】
（Ｄ．処置方法）
本発明の方法を用いて適切に処置され得る腫瘍としては、以下の腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない：脳（神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、星状細胞腫、突起膠腫、上衣細胞腫）、肺、肝臓、脾臓、腎臓、リンパ節、小腸、膵臓、血球、結腸、胃、胸部、子宮内膜、前立腺、精巣、卵巣、皮膚、頭頸部、食道、骨髄、血液および他の組織。この腫瘍は、転移性および非転移性として区別され得る。
【００４７】
イソクマリン誘導体を用いる処置は、秒〜週の範囲にわたる間隔によって、放射線および／または化学療法に先行し得るか、もしくはこれらに続き得、ならびに／またはこのような処置と同時に投与され得る。イソクマリン誘導体ならびに放射線および／または化学療法が、細胞に別個に適用される実施形態において、段階は、有意な期間が各送達期間に終わらないことを保証するようにされるべきであり、その結果、２つまたは３つの処置の組合せは、なお、細胞に対して、有利な組合せ効果を及ぼし得る。このような場合、細胞と処置薬剤または処置モダリティーとを、互いに０．１時間〜２５時間内、より好ましくは互いに約１時間〜約４時間内で接触させることが意図され、たった約１時間〜約２時間の遅延時間が、最も好ましい。ある場合において、処置期間を有意に延長することが所望されるが、この場合、各投与の間に、数日（２、３、４、５、６または７）または数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過する。任意の場合では、本発明は、イソクマリン誘導体が電離放射線および／または化学療法剤の前、後またはさらに同時に与えられ得ることを、意図する。
【００４８】
本発明の方法の１つの好ましい実施形態において、イソクマリン誘導体（例えば、ＮＭ−３）は、電離放射線か、または化学療法剤のいずれかの投与の前に、数週間の間（少なくとも３週間）、定期的なベース（週毎か日毎のいずれか）で投与される。別の実施形態において、延長されたイソクマリン誘導体の投与に続いて、放射線用量または化学療法剤の用量が複数回投与され得る。さらに、放射線および／または化学療法の複数の用量が断続性のベースで使用される場合、イソクマリン誘導体は、放射線または化学療法が与えられない休息時間で、投与され得る。さらなる利益が、本発明のイソクマリン誘導体の投与と、化学療法剤に続く単回線量以上の放射線とを組み合わせることで、達成され得るということもまた、予測される。この場合、３つの処置は、所望の処置効果が達成されるまで、適切な休息時間とともに、繰り返しベースで与えられ得る。
【００４９】
本発明の方法において、使用されるイソクマリン誘導体の実際の投薬量は、以下を含む種々の因子に依存する：処置される癌の型および重篤度、ならびにイソクマリン誘導体および他の選択された処置モダリティーの相加効果または相乗効果。一般に、イソクマリン誘導体について、体重（ｋｇ）あたり約０．１ｍｇ〜体重（ｋｇ）あたり約４００ｍｇの間の投薬量が、本発明の処置方法に適切である。好ましくは、体重（ｋｇ）あたり０．５ｍｇ〜１５０ｍｇが、イソクマリン誘導体の複数の投与が、電離放射線および／または化学療法剤の投薬よりも前に与えられる場合、投薬レベルとして使用される。
【００５０】
（Ｅ．生物学的効果）
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために、含まれる。続く実施例中に開示される技術は、本発明を実施する際に十分に機能するような、本発明者らによって開示された技術を表し、従って、その実施のために好ましい様式を構成するように考慮され得るということは、当業者によって理解される。しかし、当業者は、本開示を考慮して、本発明の意図および範囲から逸脱することなく、多くの変化が、開示される特定の実施形態においてなされ得、そして、なお、同様の結果か、または類似の結果を得ることを理解する。
【００５１】
（実施例１：腫瘍細胞に対するＮＭ−３の細胞傷害性）
ＮＭ−３［２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）プロピオン酸］が、ヒト腫瘍細胞および正常マウス細胞の増殖を阻害する程度を決定するためにか、またはＮＭ−３が、ヒト腫瘍細胞および正常マウス細胞に対して細胞傷害性であるかを決定するために、種々の細胞株を、ＮＭ−３の存在下で増殖させた。使用したヒト細胞株は、Ｋ５６２（白血病細胞）、ＨＴ２９（結腸腫瘍細胞）、ＨＴ１０８０（細網芽肉腫（ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｂｌａｓｔ  ｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌ）、およびＭＣＦ７（胸部腫瘍細胞）であった。使用したマウス細胞は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（線維芽細胞）であった。全ての細胞株を、９６ウェルプレート中で２〜５×１０３細胞／ウェルの密度で培養した。次いで、培養培地（ＲＰＭＩ  １６４０および１０％  ＦＢＳ）単独または試験したいくつかの濃度のうちの１つの濃度でのＮＭ−３を含む培養培地を、この培養物に添加し、さらに３日間増殖させた。細胞増殖を評価するために、１０μｌのＷＳＴ−１試薬（生細胞に対する色素形成試薬）を各ウェルに添加し、そしてインキュベーションを３時間３７℃で続けた。次いで、４５０ｎｍでの吸光度を、プレートリーダーを用いて決定した。各細胞型について、ＮＭ−３についてのＩＣ５０を、表１に報告する。全てのＩＣ５０が、１００μｇ／ｍｌよりも大きいことが見出されたので、これらの結果は、ＮＭ−３のインビボ抗腫瘍活性が、腫瘍細胞増殖の直接的な阻害から生じたものではないことを示す。
【００５２】
【表１】
2004521929.tif 000005
（実施例２：エールリッヒ固形腫瘍増殖に対するＮＭ−３の効果）
インビボにおける固形腫瘍の増殖に対するＮＭ−３の抗腫瘍効果を決定するために、１マウスあたり４×１０６個のエールリッヒ癌腫細胞を、ＩＣＲマウス（雌性、６週齢）の鼡径部に皮下移植した。ＮＭ−３を、経口経路を介して１４日間連続的に投与した。次いで、腫瘍重量を１５日目に測定した（表２）。コントロール動物由来の腫瘍が平均サイズ１２２９ｍｇまで増殖したのに対し、１．２５〜５ｍｇ／ｋｇのＮＭ−３で処理した動物は、そのサイズが有意に減少した。最も低い用量のＮＭ−３（０．６３ｍｇ／ｋｇ）を受けた動物からの腫瘍もまた、そのサイズが減少したが、コントロール値と有意に異なるほどではなかった。従って、ＮＭ−３処理は、固形腫瘍の増殖における有意な減少と関連する。
【００５３】
【表２】
2004521929.tif 000006
（実施例３：実験的な腫瘍転移に対するＮＭ−３の効果）
転移性腫瘍増殖に対するＮＭ−３の抗腫瘍効果を決定するために、Ｂ１６−ＢＬ６黒色腫細胞（２×１０４細胞／マウス）を、ＢＤＦ１マウス（雌性、５週齢）に尾静脈を介して移植した。ＮＭ−３を、腫瘍細胞の移植後、１３日間経口経路を介して連続的に投与した。１４日目に、肺を摘出し、固定し、そして転移性コロニー数を計数した。ＮＭ−３（０．０８〜５ｍｇ／ｋｇ）で処理した動物は、コントロール動物と比較して、胸膜転移性病巣の数の低下を経験した（表３）。これらの結果は、ＮＭ−３が、腫瘍転移を生じる小さい腫瘍の増殖に対して抗腫瘍効果を与え得ることを示唆する。
【００５４】
【表３】
2004521929.tif 000007
（実施例４：結腸２６腺癌に対する、シクロホスファミドを用いた組み合わせ治療におけるＮＭ−３の効果）
同時のシクロホスファミド処理と組合わせたＮＭ−３処理の、腫瘍増殖に対する効果を決定するために、結腸２６腺癌細胞（５×１０４細胞／マウス）を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、７週齢）の鼡径部に皮下移植した。シクロホスファミドを投与した１４日目以外は、ＮＭ−３を、移植後の１日目〜７２日目まで、連続的に経口投与した。平均生存日数を、記録し、そして以下の表４に報告した。シクロホスファミド処理単独は、生存時間の有意な延長（コントロールの１４５％）をもたらしたが、ＮＭ−３処理単独（１〜５ｍｇ／ｋｇ）では、生存時間を増加しなかった。動物を両方の処理を施した場合、生存時間は、コントロール値に対して有意に増加し、そして５ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド処理単独の群よりも有意に長かった。
【００５５】
従って、これらの結果は、ＮＭ−３処理が、腫瘍増殖を阻害するシクロホスファミドの能力を有意に増大させることを示唆し、このことは、付随する生存時間の増加を生じる。
【００５６】
【表４】
2004521929.tif 000008
（実施例５：ＩＭＣ癌腫に対する、シクロホスファミドを用いた組み合わせ治療におけるＮＭ−３の効果）
同時のシクロホスファミド処理と組合わせたＮＭ−３処理の、ＩＭＣ癌腫増殖に対する効果を決定するために、ＩＭＣ癌腫細胞（１×１０６細胞／マウス）を、ＣＤＦ１マウス（雌性、１０週齢）の鼡径部に皮下移植した。シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｋｇ）を静脈内注射した１４日目以外は、５％  ＤＭＳＯ＋Ｔｗｅｅｎ８０を用いて溶解したＮＭ−３を、移植後の１日目〜４１日目まで、連続的に経口投与した。腫瘍重量を、４２日目に腫瘍の切除後に測定し、そしてこれを表６に示す。シクロホスファミド処理単独は、腫瘍重量を７０．７％で有意に減少させたが、ＮＭ−３処理単独は、腫瘍重量を有意に減少させなかった。腫瘍重量はまた、シクロホスファミドおよびＮＭ−３の組合わせ処理によって有意に減少された。低用量のＮＭ−３（１ｍｇ／ｋｇ）の場合、腫瘍重量は、シクロホスファミド処理動物由来の腫瘍に対して、有意に減少された。従って、シクロホスファミドの抗腫瘍活性は、ＮＭ−３処理によって増大され得る。
【００５７】
【表５】
2004521929.tif 000009
（実施例６：ＮＭ−３は、照射に対する内皮細胞の感受性を増大させる）
ヒト臍静脈細胞（ＨＵＶＥＣ）を、培養培地中で種々の濃度のＮＭ−３の存在下または非存在下で、一定量のγ照射に曝露した。異なる処理後に形成されたＨＵＶＥＣコロニーの数を記録し、そしてコントロール条件（ＮＭ−３なし）下で形成されたコロニーの数に対して正規化し、そしてこの結果を、図１に示す。ＮＭ−３処理により減少したＨＵＶＥＣコロニー形成は、用量依存様式であり、約１μｇ／ｍｌのＥＤ５０である（図１Ａを参照のこと）。比較のために、ＨＵＶＥＣ細胞を、アンジオスタチンまたはエンドスタチン（２種類のさらなる抗脈管形成タンパク質）のいずれかで処理した。アンジオスタチンもエンドスタチンも、ＮＭ−３の程度までＨＵＶＥＣ増殖を阻害することはなかった（図１Ｂおよび図１Ｃを参照のこと）。
【００５８】
ＨＵＶＥＣ照射感受性の別の研究において、細胞を、漸増する線量のγ照射（Ｘ線）に細胞を曝露する１時間前に、ＮＭ−３（１００ｎｇ／ｍｌ）を用いて処理した。異なる処理後に形成されたＨＵＶＥＣコロニーの数を記録し、そしてコントロール条件下で形成されたコロニーの数に対して正規化した（図２を参照のこと）。ＮＭ−３の非存在下における漸増する線量のＸ線は、ＨＵＶＥＣコロニー生存を、試験した最も高い線量において１０％生存の最小値まで低下させた。ＮＭ−３の存在下において、ＨＵＶＥＣコロニー生存は、最も高いＸ線において初期生細胞の０．０１％まで低下させた。したがって、ＮＭ−３処理は、Ｘ線誘導性の致死に対するこれらの細胞の感受性を、最も高いＸ線線量において約１０００倍増加させた。
【００５９】
（実施例７：ＮＭ−３は、インビボにおいて、Ｌｅｗｉｓ肺癌腫の照射感受性を増大させる）
ＮＭ−３処理がインビボにおいて腫瘍の照射感受性を増大させるか否かを決定するために、Ｌｅｗｉｓ肺癌腫（ＬＬＣ）腫瘍を、ＮＭ−３処理および照射処理の前に、Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウス（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）中に確立した。ＬＬＣ細胞（１×１０６細胞）を、このマウスの右後ろ肢に注射し、そして腫瘍を２５０〜３５０ｍｍ３の容量まで増殖させた。腫瘍の容量は、カリパスを用いた直接的な測定によって測定し、式：Ｖ＝長さ×幅×深さ／２により計算した。次いで、マウスを群に分け、照射治療を始める前に２日間ＮＭ−３（総量１００ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳで処理した。次いで、照射処理の約４時間前に、ＮＭ−３（２５ｍｇ／ｋｇ／日、ｉ．ｐ．）またはＰＢＳを動物に受けさせた。腫瘍を、ＧＥ  Ｍａｘｉｔｒｏｎ  Ｘ線発生機（１５０ｋＶ、３０ｍＡで作動）を用いて、１ｍｍのアルミニウムフィルターを用いて１８８ｃＧｙ／分の線量速度で照射した。マウスは、後肢の腫瘍保有領域以外を鉛で遮蔽した。処置および腫瘍の測定を、１７日の期間続けた（図４を参照のこと）。Ｘ線処理単独は、腫瘍増殖に高度に有意な遅延をもたらした。コントロール腫瘍は８日後に８初期腫瘍容量（Ｖｏ）に達したが、Ｘ線処理した腫瘍は、このサイズに増殖するには１６日を必要とした。ＮＭ−３処理を放射線治療に加えた場合、さらなる腫瘍増殖は、顕著に減少され、そして１５日後にやっと見え始めた。この結果は、ＮＭ−３の直接的な抗腫瘍効果に起因するものではなかった。なぜなら、ＮＭ−３単独では腫瘍の増殖を全く阻害しなかったからである。これらの結果は、図３Ａに示されるように、ＮＭ−３処理が、後の放射線治療に対する内部で増殖している腫瘍の感受性を劇的に増強することを示す。比較のために、データを、２つのさらなる抗脈管形成剤（アンジオスタチンおよびエンドスタチン）を用いてプロットする（図３Ｂおよび図３Ｃを参照のこと）。アンジオスタチンは、いくらか照射の増感を示したが、エンドスタチンは増感を示さなかった。
【００６０】
第２の類似する実験において、Ｘ線処理およびＮＭ−３処理と組合わせたＸ線処理を、ＬＬＣ腫瘍増殖を阻害するこれらの相対的な能力について比較した。しかし、処理期間は、いずれの処理レジメンが完全な腫瘍治癒を開始し得るかを決定するために延長した。動物を１０６個の細胞を用いて最初に注射し、そして開始腫瘍容量は、約５００ｍｍ３であった。腫瘍を２日目および４日目に２０ＧｙのＸ照射で照射した。ＮＭ−３を最初の４日間にわたって毎日２５μｇ／ｋｇで投与した。両群の腫瘍は、処理開始後にサイズがわずかに増加し、その後数日後に減少し始めた。Ｘ線のみの群の腫瘍は、連続処理の１０日目後に、着実にサイズが増加し始めた。対照的に、ＮＭ−３＋Ｘ線群の腫瘍は、初期増殖期後にそのサイズが減少し続けた。結局、ＮＭ−３＋Ｘ線処理を受けた１０匹の動物のうちの９匹が、完全な治癒を経験し、一方、１０匹のうちの３匹のみが、Ｘ線処理単独によって治癒された。
【００６１】
要約すると、これらの結果は、ＮＭ−３が、照射増感剤として有意な治療的な見込みを保持することを実証する。インビトロ実験は、ＮＭ−３曝露の結果としての、照射に対する内皮細胞の増強した感受性を証明し、そしてヒト腫瘍の処置に対する理論的解釈を示唆する。インビボ腫瘍研究は、腫瘍増殖を妨害するというこのストラテジーが有効な処置であり得ることを示す。
【００６２】
（実施例８：ヌードマウスにおけるＭＤＡＭＢ−４３５ヒト胸部正常位モデルに対する、パクリタキセルと組合わせたＮＭ−３の抗腫瘍活性を評価するために設計されたインビボ研究）
ヒト胸部腫瘍異種移植片に対するＮＭ−３と細胞傷害性薬物（パクリタキセル）との組み合わせの効果を決定するために、雌性ＮＣＲＮＵヌードマウスの腋窩下乳房脂肪パッドに、ＭＤＡＭＢ−４３５細胞を移植した。ＮＭ−３を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を介して毎日１０〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与し；パクリタキセルを、ｉ．ｐ．注射を介して０日目から開始して７日毎に１０ｍｇ／ｋｇで投与した。
【００６３】
単一の薬剤として、パクリタキセルは、７日毎にｉ．ｐ．注射を介した場合、１０ｍｇ／ｋｇで最小の効果を示したが、２０ｍｇ／ｋｇが腫瘍増殖阻害に対して有意な効果を有した。図４は、時間に対してプロットした平均腫瘍容量を示し、そしてこの研究の結果を、以下の表６に要約する。単一の薬剤として１００ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．にて毎日投与したＮＭ−３は、１５．２９％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を生じた。１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ７ｄでのパクリタキセルの添加は、７２．３５％のＴＧＩを生じた。５つの完全な応答が存在した。パクリタキセル単独または１０ｍｇ／ｋｇの低用量のＮＭ−３（ｉ．ｐ．にて毎日）と組合わせたパクリタキセルは、腫瘍増殖阻害を生じなかった。実質的な体重の低下は、このプロトコル全体にわたる群のいずれにおいても観察されなかった。
【００６４】
【表６】
2004521929.tif 000010
第２の研究において、処置を、腫瘍容量が１００ｍｍ３に達したときに開始した。パクリタキセルを、１２．５ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄの固定用量で投与し、そしてＮＭ−３を、１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．にて毎日２８日間投与した。図５は、時間に対してプロットした平均腫瘍容量比を示す。この研究の結果を、以下の表７に要約する。１０ｍｇ／ｋｇの用量を毎日与えたＮＭ−３単独は、有意な腫瘍増殖阻害を示さず、一方、１００ｍｇ／ｋｇのＮＭ−３は、２６．６７％のＴＧＩを生じた。１２．５ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄにて単独で投与したパクリタキセルは、２６．５２％のＴＧＩを生じ、そしてＮＭ−３と組合わせた場合、ＴＧＩは４６．１０％であった。全ての処置は十分に耐性があり、実質的な体重の低下は観察されなかった。
【００６５】
【表７】
2004521929.tif 000011
この組み合わせ研究において、異なる送達経路のＮＭ−３間での比較もまた行った。パクリタキセルと組合わせて、ｉ．ｐ．にて、毎日または１日２回（ｂｉｄ）、そしてＡｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプを連続的に用いて連続的に与えたＮＭ−３を、腫瘍増殖を減少させる際の有効性について評価した。図６は、時間に対してプロットした平均腫瘍容量を示し、以下の表８はそのデータを要約する。ＮＭ−３を用いた１日２回の投与は、パクリタキセルと組合わせた場合、毎日の投与よりもより有効であった。しかし、皮下移植したミニポンプを用いた連続送達は、ｉ．ｐ．送達ほど有効ではなかった。
【００６６】
【表８】
2004521929.tif 000012
（実施例９：ヌードマウスにおけるＭＤＡＭＢ−４３５ヒト胸部正常位モデルに対する、５−フルオロウラシルと組合わせたＮＭ−３の抗腫瘍活性）
ＭＤＡＭＢ−４３５ヒト胸部腫瘍異種移植に対する５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と組合わせたＮＭ−３の抗腫瘍活性を評価するために、雌性ＮＣＲＮＵヌードマウスの腋窩下乳房脂肪パッドに、ＭＤＡＭＢ−４３５細胞を移植した。腫瘍が５０ｍｍ３と８０ｍｍ３との間であったときに、ＮＭ−３細胞を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を介して毎日１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで投与し；５−ＦＵを、ｉ．ｐ．注射を介して０日目および１４日目に１０ｍｇ／ｋｇで投与した。マウスを毎週に２回秤量し、そして腫瘍の測定を、毎週２回カリパスによって取得した。マウスを、処置期間の最後に安楽死させた（ｅｕｔｈｅｎｉｚｅ）。最後のときに、マウスを秤量し、屠殺し、そしてそれらの腫瘍を切除した。１群あたりの平均腫瘍重量を計算し、そしてこの処理ありの平均腫瘍重量／コントロールの平均腫瘍重量×１００％を、１００％から除算し、各群についての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を得た。
【００６７】
５−ＦＵを用いて最初の研究を行い、ＮＭ−３と組合わせた投与された場合のこの薬剤の最適用量を決定した。５−ＦＵを１０ｍｇ／ｋｇ、ｑ１４ｄで投与した場合、有意なＴＧＩは存在しなかった。単一の薬剤として投与したＮＭ−３（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、毎日）で処理した動物は、コントロール群より有意に異ならない最終平均腫瘍重量を有した。ＮＭ−３（１００ｍｇ／ｋｇの用量、ｉ．ｐ．、毎日）と組合わせた５−ＦＵは、５０．８０％のＴＧＩを生じた。図７は、時間に対してプロットした平均腫瘍容量比を示し、そして以下の表９は、そのデータを要約する。実質的な体重の低下は、このプロトコル全体にわたる群のいずれにおいても観察されなかった。
【００６８】
【表９】
2004521929.tif 000013
（実施例１０：ＮＭ−３は、電離放射線（ＩＲ）の能力を増強して、インビボにおいて腫瘍の増殖を阻害する）
腫瘍増殖に対するＮＭ−３およびＩＲの効果を、Ｃ５７ＢＬ／６ヌードマウスに移植した、Ｌｅｗｉｓ肺癌腫（ＬＬＣ）、Ｓｅｇ−１、およびＳＱ−２０Ｂ腫瘍において評価した。
【００６９】
７日目までに、コントロール群およびＮＭ−３群中のＬＬＣ腫瘍は、それぞれ、元々の容量の８．０２±１．２４倍および６．１９±０．４４倍に増殖した。これらの処置群中の動物を、全身腫瘍組織量が原因で７日目に屠殺した。ＩＲ（２０＋２０Ｇｙ）群中のＬＬＣ腫瘍は、最初増殖し、その後、元々の容量の１．０６±０．０８倍に退行した（７日目）。退行の後、実験を終了した１５日目における元々の容量の２．９８±０．８３倍への再増殖が続いた。ＮＭ−３とＩＲとの組み合わせ処理は、ＩＲ単独を用いた３日目、４日目、５日目、９日目、１１日目、１３日目、および１５日目と比較した場合、平均腫瘍容量を有意に減少させた（図８Ａ）。
【００７０】
コントロール群およびＮＭ−３処理群におけるＳｅｇ−１腫瘍は、１５日目までに（このとき、全身腫瘍組織量が原因で動物を屠殺した）元々の容量の６．３０±０．４２倍および６．７４±０．６２倍に増殖した。ＩＲ群（５Ｇｙの４線量）中の腫瘍は、最初退行し（７日目に、元々の容量の０．６４±０．０３倍）、その後再増殖した（１５日目に、１．８３±０．１１）。ＮＭ−３とＩＲとの組み合わせ処理は、ＩＲ処理単独と比較した場合、１５日目、１７日目、１９日目、２１日目、および２３日目に平均腫瘍容量を有意に減少させた（図８Ｂ）。この組み合わせ処理群は、コントロール群に対して比較して１４日の増殖遅延を示し、そしてＩＲ単独群と比較して３日の増殖遅延を示した。
【００７１】
ＳＱ−２０Ｂ腫瘍を用いて実行した実験において、コントロール腫瘍は、２０日目までに元々の容量の５．２±０．９４倍まで増殖した。類似のパターンの腫瘍増殖が、ＮＭ−３単独処理群において観察された（２０日目、４．３±１．０３）。これらの２つの群の動物を、全身腫瘍組織量が原因でその後に屠殺した。ＩＲ処理群（６５Ｇｙ）中の腫瘍は、６日目までにサイズが二倍になり、そして２３日目に元々の容量の５０％に退行した。３８日目までに、ＩＲ処理腫瘍は、元々の容量の２倍まで再増殖した。ＮＭ−３およびＩＲを用いて処理した動物は、６日目までにサイズが２倍になり、次いで、２３日目までに元々の容量の７７％に退行した。ＩＲ単独で処理した腫瘍と異なり、ＮＭ−３およびＩＲの組合わせた治療を受けた腫瘍は、３８日目までに元々の容量に達しなかった（ｐ＝０．００６、ｔ検定）。
【００７２】
ＮＭ−３は、腫瘍退行によって測定した場合、３つの異なる腫瘍モデル系（マウスおよびヒトの両方）において、ＩＲの抗腫瘍効果を増大させた。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、処理後に形成されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）コロニーの数に対する、種々の濃度のＮＭ−３、アンギオスタチンおよびエンドスタチンと組み合わせた一定量のγ線の効果を示す、一連の３つのグラフである。
【図２】図２は、処理後に形成されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）コロニーの数に対する、γ線およびγ線とＮＭ−３との組み合わせの効果を示すグラフである。
【図３】図３は、Ｃ５７Ｂ４６マウス異種移植片におけるルイス肺癌腫瘍増殖に対する、ＮＭ−３、アンギオスタチンまたはエンドスタチンのいずれかと組み合わせたγ線の効果を示す、一連の３つのグラフである。
【図４】図４は、ヌードマウモデル系における５０ｍｍ３の既存のＭＤＡＡＭＢ４３５ヒト乳房腫瘍異種移植片に対する、ＮＭ−３単独およびパクリタキセルと組み合わせた場合の腫瘍増殖阻害効果を示すグラフである。
【図５】図５は、ヌードマウスモデル系における１００ｍｍ３の既存のＭＤＡＡＭＢ４３５ヒト乳房腫瘍異種移植片に対する、ＮＭ−３単独およびパクリタキセルと組み合わせた場合の腫瘍増殖阻害効果を示すグラフである。
【図６】図６は、ヌードマウスモデル系における１００ｍｍ３の既存のＭＤＡＡＭＢ４３５ヒト乳房腫瘍異種移植片に対するＮＭ−３の腫瘍増殖阻害効果に対する、ＮＭ−３の異なる投薬レジメンの効果を示すグラフである。
【図７】図７は、ヌードマウスモデル系における５０ｍｍ３の既存のＭＤＡＡＭＢ４３５ヒト乳房腫瘍異種移植片に対する、ＮＭ−３単独および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と組み合わせた場合の腫瘍増殖阻害効果を示すグラフである。
【図８】図８は、マウスモデル系における確立されたルイス肺癌腫瘍に対する、ＮＭ−３、放射線およびその組み合わせの効果を示すグラフである。
【図９】図９は、ヌードマウスモデルにおけるＳｅｑ−１腫瘍の増殖に対する、ＮＭ−３、放射線およびその組み合わせの効果を示すグラフである。
【図１】
2004521929.tif 000017
【図２】
2004521929.tif 000018
【図３】
2004521929.tif 000019
【図４】
2004521929.tif 000020
【図５】
2004521929.tif 000021
【図６】
2004521929.tif 000022
【図７】
2004521929.tif 000023
【図８】
2004521929.tif 000024
【図９】
2004521929.tif 000025
【国際公開パンフレット】
2004521929.tif 000026
2004521929.tif 000027
2004521929.tif 000028
2004521929.tif 000029
2004521929.tif 000030
2004521929.tif 000031
2004521929.tif 000032
2004521929.tif 000033
2004521929.tif 000034
2004521929.tif 000035
2004521929.tif 000036
2004521929.tif 000037
2004521929.tif 000038
2004521929.tif 000039
2004521929.tif 000040
2004521929.tif 000041
2004521929.tif 000042
2004521929.tif 000043
2004521929.tif 000044
2004521929.tif 000045
2004521929.tif 000046
2004521929.tif 000047
2004521929.tif 000048
2004521929.tif 000049
2004521929.tif 000050
2004521929.tif 000051
2004521929.tif 000052
2004521929.tif 000053
2004521929.tif 000054
2004521929.tif 000055
2004521929.tif 000056
2004521929.tif 000057
2004521929.tif 000058
2004521929.tif 000059
2004521929.tif 000060
2004521929.tif 000061
2004521929.tif 000062
2004521929.tif 000063
2004521929.tif 000064
2004521929.tif 000065
2004521929.tif 000066
2004521929.tif 000067
2004521929.tif 000068
2004521929.tif 000069
2004521929.tif 000070
2004521929.tif 000071
【国際調査報告】
2004521929.tif 000072
2004521929.tif 000073
2004521929.tif 000074
2004521929.tif 000075