(57)【要約】本発明は、１又は複数の酵素、錠剤化の助剤、崩壊系及び実質的に固体でない又は凝固していない洗剤成分を含んで成る、錠剤形の酵素組成物、その製造方法並びに織物材料の処理のためのその様な酵素組成物の使用及び紙及びパルプ産業における使用、に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１又は複数の酵素、錠剤化の助剤、崩壊系及び実質的に固体でない又は凝固していない洗剤成分を含んで成る、錠剤形の酵素組成物であって、デンプン、糖、糖アルコール又はその様な成分の混合物が含まれない組成物。
【請求項２】
崩壊系が発泡系又は発泡系と、機械的なものを基とした崩壊系（膨潤機構）とを組み合わせたものを含んで成り、発泡系が固体の酸あるいは１又は複数のその塩及び、酸と相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成る、請求項１に記載の酵素組成物。
【請求項３】
発泡系がクエン酸、マレイン酸、酒石酸、シュウ酸、アジピン酸、リン酸水素のアルカリ金属塩及び／又は他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものと、この酸のもとと相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成ることを特徴とする、請求項２に記載の酵素組成物。
【請求項４】
酵素がセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、カタラーゼ、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ又は任意な他のオキシドレダクターゼ若しくはデンプン、織物若しくはパルプ及び紙の加工における使用に関連する他の酵素である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の酵素組成物。
【請求項５】
錠剤化助剤がセルロース、セルロース誘導体、結合剤、例えばポリエチレングリコール又は高度にエトキシル化された脂肪アルコール誘導体、滑剤及び／又は崩壊剤を含んで成る、請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素組成物。
【請求項６】
０．１〜９０重量％の酵素、１０〜９０重量％の錠剤化助剤、５〜９０重量％の発泡成分及び任意な追加成分を含んで成る、請求項１〜５のいずれか１項に記載の酵素組成物。
【請求項７】
乾燥粉末型の成分を混合し、そして適当な金型において当該混合物を圧縮することによって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の酵素組成物を製造するための方法。
【請求項８】
圧縮から５分未満の溶解時間を有し、そして２〜２０ｋｐの硬度を示す請求項１〜６のいずれか１項に記載の酵素組成物を含んで成る錠剤の製造方法。
【請求項９】
織物材料の処理のための、デンプン加工産業における使用のための、又はパルプ及び製紙産業における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の酵素組成物の使用。
【請求項１０】
液体の処理槽中で酵素を含んで成る錠剤を溶解し、又は液体の処理槽に添加する前にそれを水にあらかじめ溶解することによる、請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、錠剤形の酵素組成物、その様な錠剤形の組成物の製造方法並びに、織物材料の処理のためのその使用、デンプン産業におけるその使用、又はパルプ及び紙の加工におけるその使用、に関する。
【０００２】
本文において、「酵素」は、特定の基質に対して限定された性能を示すタンパク質として定義される。
【０００３】
錠剤形の酵素組成物は、当該酵素が医薬として利用されることが考えられる場合（ＦＲ ２３０５１９４）又は、より一般的には当該酵素が洗剤の錠剤のあまり重要でない活性成分である場合（ＥＰ ８５１０２３， ＷＯ ９７／０３１７７）には当業界で周知である。更に、酵素を含む錠剤は、ＷＯ ９７／１８２８８， ＵＳ ４６９０７７３及びＪＰ ９０３０９５６で言及されており、この中では、プロテアーゼ及び／又はリパーゼ酵素が、コンタクトレンズを洗浄するために使用される錠剤について特許請求の範囲に記載されている。ＷＯ ９５／００１２１は、錠剤を製造する条件を限定することなしに、錠剤に変形されうる圧縮可能な酵素粉末を開示している。更に、ＷＯ ９５／００１２１は、アレルギーの可能性に関してスプレー乾燥した酵素粉末を使用する場合の問題を記載しており、そしていわゆる湿式顆粒化技術を用いることによってこの問題を克服している。
【０００４】
本発明の目的は、有効量の酵素を含む錠剤形の酵素組成物であって、錠剤が粉末形の酵素を用いることによって形成されることを特徴とする酵素組成物を提供することである。本発明の本質は、ＷＯ ９５／００１２１に詳細に記載されているいわゆる湿式顆粒化技術のいずれも用いることなく、粗製酵素粉末を圧縮性の混合物に変換し、そしてこの混合物を錠剤に変換することにある。
【０００５】
本発明の更なる目的は、向上した溶解時間、液体、好ましくは水の中でそれぞれ良好な溶解、を示す進歩性のある酵素錠剤を得ることである。上文で言及したＷＯ ９５／００１２１において、４３０ｍｇの重量を有する錠剤は、水中で、３７℃の温度で１０分以内、それぞれ５又は６分の溶解時間を有しており、一方、本発明の錠剤の水中での溶解時間は、３７℃より低温、好ましくは２５℃で５分以内である。溶解が測定される場合、水中での溶解は、２５℃で２分間の期間の後、好ましくは８０％〜１００％である。溶解を決定するための方法の詳細な説明は後述する。
【０００６】
本発明に従い、その様な錠剤は、発砲系に必要な酸性成分が錠剤に組み込まれ、そしてデンプン、糖、糖アルコール又はそれらの混合物を含まないが、１０％超の活性の低下無しに、４０℃の温度でさえも最大６ヶ月安定に保存される。このことが驚くべき事であるのは、ＷＯ ９５／００１２１でも引用されているＵＳ ３５１５６４２では、ソルビトールのような安定化化合物が、保存安定性のある錠剤を得るために必要であると教示しているためである。
【０００７】
リパーゼ又はプロテアーゼ以外の酵素タンパク質と酸性成分の組み合わせは、そのような高度に圧縮された系においては新規であり、そしてその様な錠剤の保存安定性が驚くほど良好であるのは、従来技術の水準（ＷＯ ９７／２３６０６）が、遊離（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）層及び特別なコーティングは、すなわち、安定な酵素含有顆粒を製造するために必要であることを教示しているためである。ＷＯ ９７／２３６０６に記載の多層系を含まない顆粒又は錠剤は、非常に保存安定性が無く、そして酸性の系において損傷を受ける。
【０００８】
本発明に従う錠剤は、有効量の酵素、例えばセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、カタラーゼ、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ又は任意な他のオキシドレダクターゼ若しくはデンプン、織物若しくはパルプ及び紙の加工における使用に関連する他の酵素を含む。酵素の有効量は、所望とされる利用の効果を達成するために必要な酵素の量として定義される。上文で言及した、従来技術の織物以外の利用と比較して、この酵素量は一般的に有意に多い。
【０００９】
従って、本発明は、１又は複数の酵素、錠剤化の助剤、崩壊系及び実質的に固体でない又は凝固していない洗剤成分を含んで成る、錠剤形の酵素組成物に関する。当該酵素は天然のものであってもよく、あるいはそれらは遺伝子工学処理されてもタンパク質工学処理によって修飾されてもよい。
【００１０】
好ましくは、当該酵素はセルラーゼ又はカタラーゼであり、これらは天然のものであっても、あるいはそれらは遺伝子工学処理されてもタンパク質工学処理によって修飾されてもよい。
【００１１】
当該酵素は、固体の又は凝固されたタンパク質として組成物に組み込まれ、そして好ましくは、限定しないが、文献に記載されている様々な方法によって濃縮された培養液又は培養抽出液（固体状態の培養物）からのタンパク質の沈殿によって得られた固体を含むタンパク質を乾燥する培養液のスプレー乾燥産物である。
【００１２】
市販のセルラーゼとしては、例えば「Ｄｅｎｉｍａｘ」の商品名のもと販売されているＮｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋの製品、例えば「Ｉｎｄｉａｇｅ」又は「Ｐｒｉｍａｆａｓｔ」の商品名のもと販売されているＧｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの製品、例えば「Ｄｅｎａｂｒｉｄｅ」の商品名のもと販売されているＩｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのセルラーゼ製品、例えば「Ｒｏｃｋｓｏｆｔ」の商品名のもと販売されているＤｙａｄｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｒｉｏｎａｌのセルラーゼ製品、例えば「Ｅｃｏｓｔｏｎｅ」の商品名のもと販売されているＲｏｈｍ Ｅｎｚｙｍｅ Ｆｉｎｌａｎｄのセルラーゼ製品、明治製菓のセルラーゼ製品、Ｒａｋｕｔｏ Ｋａｓａｉのセルラーゼ製品、例えばＥＰ ９２１１８８に記載のＣｌａｒｉａｎｔのセルラーゼ製品がある。
【００１３】
市販のアミラーゼの例として、例えば、「Ａｑｕａｚｍｅ」の商品名のもと販売されているＮｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋの製品、「Ｏｐｔｉｓｉｚｅ」の商品名のもと販売されているＧｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌのアミラーゼ製品又は「Ｂｉｏｋｌｅｉｓｔａｓｅ」の商品名のもと販売されているＤａｉｗａ Ｋａｓａｉのアミラーゼ製品がある。
【００１４】
本発明の錠剤組成物に存在する酵素の量は広範に変化しうる。それは、使用する酵素の活性に依存し、そしてそれは当該材料に含まれる酵素タンパク質の純度に非常に関連している。任意な酵素を含む材料の酵素量は、ビシンコニン酸アッセイ（Ｒ．Ｅ． Ｂｒｏｗｎ， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ １８０ （１９８９）， ｐ１３６）を用いて決定される。その結果、市販の材料のいずれもがＥＣＭ（”Ｅｎｚｙｍｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ”（酵素含有材料））として定義されるのは、しばしば添加物が当該製品を商品化するためにタンパク質に添加されるためである。
【００１５】
高タンパク質含量のＥＣＭが使用され、又は当該酵素の純度が高い場合、すなわち当該酵素が遺伝子操作によって産生される場合、錠剤の酵素量が、錠剤の重量に関して０．１〜５重量％（ｗｔ−％）の範囲内にありうるのは、当該酵素が非常に効率的であるためである。未精製培養液のスプレー乾燥ＥＣＭ、すなわち大量の非活性タンパク質材料（特定の利用に関して不活性）を含むＥＣＭ、又はより活性の酵素とあまり活性でない酵素の混合物が使用される場合、ＥＣＭ含量は少なくとも１０ｗｔ−％でなければならないが、錠剤の重量に関して９０ｗｔ−％ほどの高くてもよい。実際には、非常に純粋な酵素が使用される場合を除いて、含量は２〜３０ｗｔ−％である。非常に純粋な酵素が使用される場合、含量は０．０００１ｗｔ−％程度の低さであることがある。
【００１６】
しばしば賦形剤と称される錠剤化の助剤は当業界で周知であり、そして、例えば結合剤、フローエイド（ｆｌｏｗ−ａｉｄ）、崩壊剤及び滑剤を含んで成る。結合剤及び／又は崩壊剤の目的は、錠剤の成分を一緒にすることであるが、処置用の液体、好ましくは水の中でなおも溶解させるものである。結合剤の組み込みはまた、より低い圧縮の圧力の使用を可能にし、また、処置用の液体中での崩壊を支持もする。より低い圧縮の圧力は、錠剤の加工の間処理量がより大きく、同時に高ストレスに起因して機械的に破壊される可能性がある部分が減少することを意味する。変更可能な圧縮の圧力は、錠剤の形成の間の機械的なストレスに対して様々な酵素の異なる安定性を考慮するのに更に重要である。しかしながら、結合剤及び／又は崩壊剤は、錠剤に存在する大量の酵素と適合するべきであり、そして当該錠剤が使用される織物材料の処理工程を妨げるべきではない。
【００１７】
適当な材料の例として、あらゆる型のセルラーゼ及びセルラーゼ誘導体、微結晶性のセルロース性線維、微結晶性のセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びあらゆる型の粘土等がある。
【００１８】
市販されている製品の例として、Ａｖｉｃｅｌ（商標）、Ｖｉｖａｐｕｒ（商標）、Ａｒｂｏｃｅｌ（商標）、Ｌｉｇｎｏｃｅｌｌ（商標）、ＥＣＣ Ｃｈｉｎａ ｃｌａｙ（あらゆる型の粘土の一例）及びあらゆる型の化学的に修飾された天然の炭水化物、例えばＴｙｌｏｓｅ（商標）の商品名のＣｌａｒｉａｎｔの製品がある。
【００１９】
滑剤として使用される他の錠剤添加物には、例えばステアリン酸塩、ワックス、硬化植物油、固体のエトキシル化脂肪アルコール、固体のエトキシル化脂肪アミン、固体のエトキシル化脂肪酸、及びポリエチレングリコールがある。
【００２０】
従って、本発明の更なる態様は、上述のような酵素組成物であって、錠剤化助剤が担体、例えばセルロース、セルロース誘導体、結合剤、例えばポリエチレングリコール又は高度にエトキシル化された脂肪アルコール誘導体、滑剤及び／又は崩壊剤を含んで成る組成物である。
【００２１】
任意な成分として、充填剤、例えば硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び他の非反応性の塩、液体の界面活性剤（ｔｅｎｓｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（微量）及び消泡剤がある。
【００２２】
液体界面活性剤には、例えば一般式ＣｎＨ２ｎＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（ここで、ｎは６〜３０、好ましくは９〜１８に及び、そしてｍは１〜２０，好ましくは２〜１０に及ぶ）のエトキシル化アルコールがある。その様な化合物は、商品名Ｌｕｔｅｎｓｏｌ（商標）のもとＢＡＳＦから、又はＧｅｎａｐｏｌ（商標）のもとＣｌａｒｉａｎｔから市販されている。
【００２３】
消泡剤には、例えばＷａｃｋｅｒ−Ｃｈｅｍｉｎｅ ＧｍｂＨ又はＴｈ．Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｔｔ ＧｍｂＨのシリコン消泡剤、例えばＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３８５又はＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３６９， Ｗａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ８８２，又はＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ ＳＥ ２があり、これらは市販されている。
【００２４】
液体、好ましくは水における錠剤の良好な溶解のために、化学に基づいた崩壊系、例えば発泡系を組み込むことも一般的である。これは、固体の酸又は酸性塩、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、シュウ酸、アジピン酸、リン酸水素のアルカリ金属塩及び／又は他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものを、この酸のもとと相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分と組み合わせて含む。例えば、炭酸ナトリウム及びカリウム並びに炭酸水素塩及びセスキ炭酸ナトリウムがある。他の（物理的な）崩壊系は、水との接触の後膨潤し、そしてこのように物理的な錠剤の破壊を招く材料を基としている。その様な物理的崩壊剤の例は、例えばＥＰ １０４３３８９， ＷＯ ９８／４０４６３又はＤＥ−Ａ−４４０４２７９に詳細に記載されている。
【００２５】
従って、本発明の更なる態様は、上述のような酵素組成物であって、崩壊系が発泡系又は発泡系と、機械的なものを基とした崩壊系（膨潤機構）とを組み合わせたものを含んで成り、発泡系が固体の酸あるいは１又は複数のその塩及び、当該酸と相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成る、酵素組成物に関する。
【００２６】
組成物中での酵素の安定性を保護するために、緩衝液系が、酵素系が安定である所定の範囲内のｐＨ値を維持するために含まれることがある。その様な緩衝液系は発泡成分と同一であってもよく、あるいはそれはリン酸塩、ホウ酸塩又は有機酸若しくは塩基の任意な混合物であって、塩を形成しうるものを含んで成ることもある。
【００２７】
全ての固体の酸が、酵素錠剤における酸の供与体として使用され得るわけではない。
【００２８】
好ましくは、固体の酸は、結晶の結合水を全く含むべきではなく、又は吸湿性の動態を示すべきではない。
【００２９】
更に好ましくは、アジピン酸並びにあらゆるリン酸水素のアルカリ金属塩及び他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものが使用される。
【００３０】
酵素錠剤中の様々な成分の好ましい量は、全組成物の重量当たり、
０．１〜９０ｗｔ−％ ＥＣＭ（特定のタンパク質の純度及び強度に依存する）
１０〜９０ｗｔ−％ 錠剤化助剤（結合剤及び／又は崩壊剤）
５〜９０ｗｔ−％ 発泡成分及び緩衝液
である。
【００３１】
本発明の好ましい態様は、上述のような、０．１〜９０ｗｔ−％のＥＣＭ、１０〜９０ｗｔ−％の錠剤化助剤、５〜９０ｗｔ−％の発泡成分及び任意の追加成分を含んで成る酵素組成物である。重量パーセンテージは、錠剤の重量に関連する。
【００３２】
本発明に従う錠剤の形態にある酵素組成物は、周知の錠剤化工程によって製造され得る。基本的に、当該成分は、任意に制塵剤を用いて、乾燥型で均一に混合される。当該成分はフローエイドと混合され、そして最後に適当な金型において常用の圧力で圧縮される。適当な圧力条件は後述する。当業者にとって、高圧及び高温が酵素を変性させることがあり、そしてそれ故にその様な条件は避けるべきであることは自明である。
【００３３】
本発明に従う錠剤形の酵素組成物は、織物材料の処理のために、更に具体的にはその様な織物材料が酵素で処理され、それらに特別な外観、例えばストーンウォッシュ風の外観を与えるような工程で使用される。
【００３４】
好ましくは、アミラーゼ組成物は、その後の処理、例えば染色のための材料を調製するためにのりを除去するためにデンプンノリで処理された衣料のノリ抜きに使用される。その様な工程において、錠剤は、所望の効果を達成するのに有用な酵素濃度を得るための処理槽において溶解される。
【００３５】
好ましくは、カタラーゼ組成物は、織物、例えば綿材料を脱色するために使用される過酸化水素含有液の処理に使用される。その様な工程において、当該錠剤は、使用している液体に加えられ、それにより過酸化水素が破壊される。
【００３６】
好ましくは、ペクチナーゼ組成物は、すなわち未処理綿に存在するペクチン化合物を除去するための織物のいわゆる「生物学的酸化（ｂｉｏｓｏｕｒｉｎｇ）」工程に使用される。
【００３７】
好ましくは、セルラーゼ組成物は、綿、更に具体的にはデニム材料の処理のために使用され、それらにいわゆる「ストーンウォッシュ型」の外観を与える。その様な工程において、当該錠剤は、所望な効果を達成するのに有用な濃度を得るために処理槽において溶解され、このことは、更なる工程のために、風合い又は外観を修飾するため、あるいは織物材料を前処理するためのいずれかで表面に効果を及ぼしうる。デニム及び他の綿材料の処理のために、表面修飾の眼に見える効果を得るために使用しなければならない濃度は、後述する活性セルラーゼタンパク質の品質に依存する。
【００３８】
以下の例は、セルラーゼタンパク質を含む様々な市販のＥＣＭの広範な量を例示する。以後、％ ｏｗｇ（ｏｎ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｇａｒｍｅｎｔ（衣料の重量当たり））として線維に関連する量で示す。
【００３９】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）ＢＴの場合、０．１％ ｏｗｇ〜１０％ ｏｗｇ、好ましくは０．２％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４０】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）５０１ Ｓの場合、０．０５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４１】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）３９９ Ｓの場合、０．０１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０５％〜１％ ｏｗｇが使用される。
【００４２】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）９９１ Ｓの場合、０．０２％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４３】
ＩｎｄｉＡｇｅ（商標）Ｓｕｐｅｒ ＧＸの場合、０．０１５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４４】
ＩｎｄｉＡｇｅ（商標）Ｎｅｕｔｒａ Ｇの場合、０．０１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０５％〜１％ ｏｗｇが使用される。
【００４５】
Ｄｅｎａｂｒｉｄｇｅ ＬＢＧ（商標）の場合、０．０５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４６】
Ｍｅｉｊｉ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ＨＥＰ １００（商標）の場合、０．０００１％ ｏｗｇ〜０．５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０００５％〜０．０５％ ｏｗｇが使用される。
【００４７】
Ｍｅｉｊｉ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ＥＮＭ ３０６４（商標）の場合、０．０００１％ ｏｗｇ〜０．５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０００５％〜０．０５％ ｏｗｇが使用される。
【００４８】
Ｒｏｃｋｓｏｆｔ Ｕｌｔｒａ Ｕｌｔｒａ Ｐ（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００４９】
Ｒｏｃｋｓｏｆｔ Ｕｌｔｒａ ＮＣＥ ＥＡ（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００５０】
Ｅｃｏｓｔｏｎｅ ＮＧＣ １６００（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００５１】
これらの例から、本発明に従う錠剤において使用されるＥＣＭの量が、狭い範囲に限定され得ないことは明らかである。性能は、ＥＣＭの性質及び純度に依存する。最大量は、現実の利用条件に近い試験、すなわち、請求により本出願人から入手可能な、１９９９年９月２８日に改訂された「Ｃｌａｒｉａｎｔ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｊｅａｎｓ ｗａｓｈ ｅｆｆｅｃｔ」によってのみ決定されうる。
【００５２】
錠剤形の酵素組成物を用いる利点は、容易な扱い、迅速な崩壊時間、向上した保存安定性及び正確で且つ対処しやすい酵素系の量に見られる。
【００５３】
錠剤の製造の詳細な説明
Ａ．直接的に圧縮可能な混合物の製造
本発明の工程において、酵素混合物（表１）は周知の混合手順で、例えばハイシェアーミキサーによって、例えばＬｏｄｉｇｅ（商標）ミキサーによって作成されうる。液体酵素調製物を使用しているＷＯ ９５／００１２１において使用された湿式顆粒技術と反対に、本発明は乾燥ＥＣＭを使用し、そして吸引による粉塵除去と組み合わせた制塵剤による前処理による粉塵の問題を回避する。制塵剤は、好ましくは水を含まない液体で前処理される担体材料から成ることがあり、これは酵素活性に影響を与えない。当該担体は、水を含まない液体を取り込み、且つ当該液体及び酵素と一緒に均一な化合物を形成することができる、化学的に活性でない物質である。好ましくは、当該担体は密度が低く且つ面積が広いセルロース材料である。水を含まない液体はまた、化学的に活性でない物質であって、好ましくは７０℃（１ａｔｍ）超の沸点を有する非イオン性の、水を溶解する液体である。好ましくは、限定しないが、ポリエチレンオキシド誘導体、例えば２０００Ｄ未満の分子量を有するポリエチレングリコール、すなわちポリエチレングリコール４００又はポリエチレングリコエーテル、ポリエチレングリコエステル、同一の分子量を有するポリエチレングリコール−カーボネートである。その後、担体とＥＣＭの混合物は錠剤化のための均一な混合物を形成するための他の錠剤化成分と混合される。
【００５４】
Ｂ．錠剤化の手順
上述の混合物は、一般的な錠剤化機器、例えばＦａ． ＫｏｒｓｃｈのＲｕｎｄｌａｕｆｅｒ ＰＨ ４００を用いて錠剤に変換される。錠剤の形状は、任意な形状、例えば円筒、立方体、直方体又は球状であってもよい。好ましくは、それは円筒の形状にある。錠剤を製造する技術は、ＥＰ ８７１６９８に記載されている。錠剤化混合物は極微量の水を含むはずである。水の含量（湿度）はＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ（商標）Ｔｙｐ ＬＪ １６湿度計によって決定される。水分含量は、混合物の重量に関して２ｗｔ−％未満、好ましくは１ｗｔ−％未満であるべきである。圧力は１０〜９０ｋＮ、好ましくは２５〜７５ｋＮの範囲で変化することがある。得られた錠剤は、２〜２０ｋｐ、好ましくは３〜１５ｋｐ、そして最も好ましくは４〜１０ｋｐの硬度を示す。円筒状の錠剤の直径は１０〜６０ｍｍ、好ましくは２０〜５０ｍｍ、最も好ましくは３５〜４５ｍｍである。その様な錠剤の重量は１〜１００ｇ、好ましくは１０ｇ〜５０ｇである。その様な錠剤の高さは、パンチの直径、混合物の組成及び圧力に依存して、５〜３０ｍｍの間で変化しうる。液体、好ましくは水におけるその様な錠剤の溶解時間は、製剤の成分、圧力、重量及び使用するパンチの直径に依存する。上文で言及したパラメーターは、錠剤テスター（Ｍｏｄｅｌ Ｄｒ． ｓｃｈｌｅｕｎｉｇｅｒ（商標），Ｔｙｐ ６Ｄ ｔａｂｌｅｔ ｔｅｓｔｅｒ）を用いて製造後に直接的に決定される２５℃の温度で５分未満の溶解時間を有する錠剤を得るために調整される。当該錠剤の溶解動態は、保存時間に依存して決定される。本発明の錠剤は、５分未満の溶解時間を有しており、これは製造後（２４時間未満）に直接的に決定された。室温で２ヶ月間の錠剤の保存の後、溶解時間は最大７分にまで増大することがある。室温で２ヶ月間の保存の後、溶解時間は最大１０分にまで増大することがある。一般的に好ましいのは、最大４０℃の任意な保存温度で、５分未満の溶解時間を示す錠剤である。
【００５５】
溶解時間の決定
１Ｌの水を３Ｌのビーカーにおいて２５℃で保持する。５００ｒｐｍ（ｒｏｕｎｄ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ）の撹拌速度の、６ｃｍの長さ及び１ｃｍの長さを有するマグネットスターラー及び振とう機を用いて撹拌しながら、錠剤をビーカーに据える。２分後、ビーカーの中身を金属のふるい（孔径１ｃｍ）を介して注ぎ、任意に、生じた錠剤の残査を回収し、そして乾燥させる。溶解動態は、２５℃で２分後の錠剤のもとの重量の％で表される。
【００５６】
Ｃ．研究室における錠剤の製造
製剤成分を最適化するために、錠剤は、研究室においてＩＲ加圧成形を行うためのＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｐｒｅｓｓ又はＰａｕｌ−Ｏｔｔｏ Ｗｅｂｅｒ ＧｍｂＨ（Ｄ−７３６３０ Ｒｅｍｓｈａｌｄｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）のｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍを用いて製造される。
【００５７】
以下の実施例は本発明を例示する。当該実施例において、全ての部分及びパーセンテージは、断らない限り重量当たりのものであり、そして全ての温度が摂氏温度で示される。
【００５８】
例１〜４
２０ｗｔ．−％の乾燥セルラーゼが、「Ｌｏｄｉｇｅ」ミキサーを用いて５ｗｔ．−％のポリエチレングリコール４００及び５ｗｔ．−％のシリコン系消泡剤（Ｗａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３８５）と少なくとも１５分間均一に混合され、ｉｎ ｓｉｔｕの担体系を製造する。この混合物に対し、５〜２０ｗｔ．％のスプレー乾燥したＥＣＭ粉末又は様々なＥＣＭ混合物が、あらゆる粉塵の発生を避けるために真空系を用いて添加される。当該混合物は、直ちに担体表面上に分配される。この混合物に対し、５０〜６５ｗｔ．−％の炭酸水素ナトリウムが添加される。この混合物は最終的に、「Ｌｏｄｉｇｅ」ミキサー内で他の錠剤化助剤と徹底的に混合される。表１は、その様な組成物についての例を示す。これらの組成物は、２５ｇの重量及び３８ｍｍの直径及び１７ｍｍの高さ及び６ｋｐ±０．５ｋｐの硬度を有する円筒状の錠剤を形成するために使用される。
【表１】
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【００５９】
適用
本発明の方法を用いて製造した錠剤は、所望の摩耗の程度及び適用時間に依存して、０．０１％〜１％の量で適用において使用され得る。ロータリードラム洗濯機において、３ｋｇのノリ抜きされたジーンズを、０．１％ ｏｗｇの上述の錠剤を用いて、５０℃で６０分間ｐＨ５〜７で処理する。ジーンズは最終的にすすがれ、そして評価のために乾燥される。きれいに洗浄された程度は、錠剤組成物に依存する。
【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年6月3日(2002.6.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【書類名】明細書
【発明の名称】錠剤形の酵素組成物
【特許請求の範囲】
【請求項１】粗製酵素粉末と乾燥粉末形の他の成分を混合し、そして適当な金型において当該混合物を圧縮することによって製造される錠剤形の酵素組成物であって、
ａ）セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ又は任意な他のオキシドレダクターゼから選択される１又は複数の酵素、
ｂ）発泡系又は発泡系と、機械的なものを基とした崩壊系（膨潤機構）とを組み合わせたものを含んで成る崩壊系（ここで、当該発泡系は、固体の酸あるいは１又は複数のその塩及び、当該酸と相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成る）、
ｃ）錠剤化の助剤、
を含んで成る組成物。
【請求項２】発泡系がクエン酸、マレイン酸、酒石酸、シュウ酸、アジピン酸、リン酸水素のアルカリ金属塩及び／又は他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものと、この酸のもとと相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成ることを特徴とする、請求項１に記載の酵素組成物。
【請求項３】錠剤化助剤が、担体、例えばセルロース、セルロース誘導体、結合剤、例えばポリエチレングリコール又は高度にエトキシル化された脂肪アルコール誘導体、滑剤及び／又は崩壊剤を含んで成る、請求項１又は２に記載の酵素組成物。
【請求項４】０．１〜９０重量％の酵素、１０〜９０重量％の錠剤化助剤、５〜９０重量％の発泡成分及び任意な追加成分を含んで成る、請求項１〜３のいずれか１項に記載の酵素組成物。
【請求項５】乾燥粉末型の成分を混合し、そして適当な金型において当該混合物を圧縮することによって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素組成物を製造するための方法。
【請求項６】圧縮から５分未満の溶解時間を有し、そして２〜２０ｋｐの硬度を示す請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素組成物を含んで成る錠剤の製造方法。
【請求項７】織物材料の処理のための、デンプン加工産業における使用のための、又はパルプ及び紙産業における使用のための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の酵素組成物の使用。
【請求項８】液体の処理槽中で酵素を含んで成る錠剤を溶解し、又は液体の処理槽に添加する前にそれを水にあらかじめ溶解することによる、請求項７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、錠剤形の酵素組成物、その様な錠剤形の組成物の製造方法並びに、織物材料の処理のためのその使用、デンプン産業におけるその使用、又はパルプ及び紙の加工におけるその使用、に関する。
【０００２】
本文において、「酵素」は、特定の基質に対して限定された性能を示すタンパク質として定義される。
【０００３】
錠剤形の酵素組成物は、当該酵素が医薬として利用されることが考えられる場合（ＦＲ ２３０５１９４）又は、より一般的には当該酵素が洗剤の錠剤のあまり重要でない活性成分である場合（ＥＰ ８５１０２３， ＷＯ ９７／０３１７７）には当業界で周知である。更に、酵素を含む錠剤は、ＷＯ ９７／１８２８８， ＵＳ ４６９０７７３及びＪＰ ９０３０９５６で言及されており、この中では、プロテアーゼ及び／又はリパーゼ酵素が、コンタクトレンズを洗浄するために使用される錠剤について特許請求の範囲に記載されている。ＷＯ ９５／００１２１は、錠剤を製造する条件を限定することなしに、錠剤に変形されうる圧縮可能な酵素粉末を開示している。更に、ＷＯ ９５／００１２１は、アレルギーの可能性に関してスプレー乾燥した酵素粉末を使用する場合の問題を記載しており、そしていわゆる湿式顆粒化技術を用いることによってこの問題を克服している。
【０００４】
本発明の目的は、有効量の酵素を含む錠剤形の酵素組成物であって、錠剤が粉末形の酵素を用いることによって形成されることを特徴とする酵素組成物を提供することである。本発明の本質は、ＷＯ ９５／００１２１に詳細に記載されているいわゆる湿式顆粒化技術のいずれも用いることなく、粗製酵素粉末を圧縮性の混合物に変換し、そしてこの混合物を錠剤に変換することにある。
【０００５】
本発明の更なる目的は、向上した溶解時間、液体、好ましくは水の中でそれぞれ良好な溶解、を示す進歩性のある酵素錠剤を得ることである。上文で言及したＷＯ ９５／００１２１において、４３０ｍｇの重量を有する錠剤は、水中で、３７℃の温度で１０分以内、それぞれ５又は６分の溶解時間を有しており、一方、本発明の錠剤の水中での溶解時間は、３７℃より低温、好ましくは２５℃で５分以内である。溶解が測定される場合、水中での溶解は、２５℃で２分間の期間の後、好ましくは８０％〜１００％である。溶解を決定するための方法の詳細な説明は後述する。
【０００６】
本発明に従い、その様な錠剤は、発砲系に必要な酸性成分が錠剤に組み込まれ、そしてデンプン、糖、糖アルコール又はそれらの混合物を含まないが、１０％超の活性の低下無しに、４０℃の温度でさえも最大６ヶ月安定に保存される。このことが驚くべき事であるのは、ＷＯ ９５／００１２１でも引用されているＵＳ ３５１５６４２では、ソルビトールのような安定化化合物が、保存安定性のある錠剤を得るために必要であると教示しているためである。
【０００７】
リパーゼ又はプロテアーゼ以外の酵素タンパク質と酸性成分の組み合わせは、そのような高度に圧縮された系においては新規であり、そしてその様な錠剤の保存安定性が驚くほど良好であるのは、従来技術の水準（ＷＯ ９７／２３６０６）が、遊離（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）層及び特別なコーティングは、すなわち、安定な酵素含有顆粒を製造するために必要であることを教示しているためである。ＷＯ ９７／２３６０６に記載の多層系を含まない顆粒又は錠剤は、非常に保存安定性が無く、そして酸性の系において損傷を受ける。
【０００８】
本発明に従う錠剤は、有効量の酵素、例えばセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ又は任意な他のオキシドレダクターゼ若しくはデンプン、織物若しくはパルプ及び紙の加工における使用に関連する他の酵素を含む。酵素の有効量は、所望とされる利用の効果を達成するために必要な酵素の量として定義される。上文で言及した、従来技術の織物以外の利用と比較して、この酵素量は一般的に有意に多い。
【０００９】
従って、本発明は、１又は複数の酵素、錠剤化の助剤、崩壊系及び実質的に固体でない又は凝固していない洗剤成分を含んで成り、糖、糖アルコール又はその様な成分の混合物が含まれる錠剤形の酵素組成物に関する。
【００１０】
当該酵素は天然のものであってもよく、あるいはそれらは遺伝子工学処理されてもタンパク質工学処理によって修飾されてもよい。
【００１１】
好ましくは、当該酵素はセルラーゼ又はカタラーゼであり、これらは天然のものであっても、あるいはそれらは遺伝子工学処理されてもタンパク質工学処理によって修飾されてもよい。
【００１２】
当該酵素は、固体の又は凝固されたタンパク質として組成物に組み込まれ、そして好ましくは、限定しないが、文献に記載されている様々な方法によって濃縮された培養液又は培養抽出液（固体状態の培養物）からのタンパク質の沈殿によって得られた固体を含むタンパク質を乾燥する培養液のスプレー乾燥産物である。
【００１３】
市販のセルラーゼとしては、例えば「Ｄｅｎｉｍａｘ」の商品名のもと販売されているＮｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋの製品、例えば「Ｉｎｄｉａｇｅ」又は「Ｐｒｉｍａｆａｓｔ」の商品名のもと販売されているＧｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの製品、例えば「Ｄｅｎａｂｒｉｄｅ」の商品名のもと販売されているＩｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのセルラーゼ製品、例えば「Ｒｏｃｋｓｏｆｔ」の商品名のもと販売されているＤｙａｄｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｒｉｏｎａｌのセルラーゼ製品、例えば「Ｅｃｏｓｔｏｎｅ」の商品名のもと販売されているＲｏｈｍ Ｅｎｚｙｍｅ Ｆｉｎｌａｎｄのセルラーゼ製品、明治製菓のセルラーゼ製品、Ｒａｋｕｔｏ Ｋａｓａｉのセルラーゼ製品、例えばＥＰ ９２１１８８に記載のＣｌａｒｉａｎｔのセルラーゼ製品がある。
【００１４】
本発明の錠剤組成物に存在する酵素の量は広範に変化しうる。それは、使用する酵素の活性に依存し、そしてそれは当該材料に含まれる酵素タンパク質の純度に非常に関連している。任意な酵素を含む材料の酵素量は、ビシンコニン酸アッセイ（Ｒ．Ｅ． Ｂｒｏｗｎ， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ １８０ （１９８９）， ｐ１３６）を用いて決定される。その結果、市販の材料のいずれもがＥＣＭ（”Ｅｎｚｙｍｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ”（酵素含有材料））として定義されるのは、しばしば添加物が当該製品を商品化するためにタンパク質に添加されるためである。
【００１５】
高タンパク質含量のＥＣＭが使用され、又は当該酵素の純度が高い場合、すなわち当該酵素が遺伝子操作によって産生される場合、錠剤の酵素量が、錠剤の重量に関して０．１〜５重量％（ｗｔ−％）の範囲内でありうるのは、当該酵素が非常に効率的であるためである。未精製培養液のスプレー乾燥ＥＣＭ、すなわち大量の非活性タンパク質材料（特定の利用に関して不活性）を含むＥＣＭ、又はより活性の酵素とあまり活性でない酵素の混合物が使用される場合、ＥＣＭ含量は少なくとも１０ｗｔ−％でなければならないが、錠剤の重量に関して９０ｗｔ−％ほどの高くてもよい。実際には、非常に純粋な酵素が使用される場合を除いて、含量は２〜３０ｗｔ−％である。非常に純粋な酵素が使用される場合、含量は０．０００１ｗｔ−％程度の低さであることがある。
【００１６】
しばしば賦形剤と称される錠剤化の助剤は当業界で周知であり、そして、例えば結合剤、フローエイド（ｆｌｏｗ−ａｉｄ）、崩壊剤及び滑剤を含んで成る。結合剤及び／又は崩壊剤の目的は、錠剤の成分を一緒にすることであるが、処置用の液体、好ましくは水の中でなおも溶解させるものである。結合剤の組み込みはまた、より低い圧縮の圧力の使用を可能にし、また、処置用の液体中での崩壊を支持もする。より低い圧縮の圧力は、錠剤の加工の間処理量が多く、同時に高ストレスに起因して機械的に破壊される可能性がある部分が減少することを意味する。変更可能な圧縮の圧力は、錠剤の形成の間の機械的なストレスに対して様々な酵素の異なる安定性を考慮するのに更に重要である。しかしながら、結合剤及び／又は崩壊剤は、錠剤に存在する大量の酵素と適合するべきであり、そして当該錠剤が使用される織物材料の処理工程を妨げるべきではない。
【００１７】
適当な材料の例として、あらゆる型のセルラーゼ及びセルラーゼ誘導体、微結晶性のセルロース性線維、微結晶性のセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びあらゆる型の粘土等がある。
【００１８】
市販されている製品の例として、Ａｖｉｃｅｌ（商標）、Ｖｉｖａｐｕｒ（商標）、Ａｒｂｏｃｅｌ（商標）、Ｌｉｇｎｏｃｅｌｌ（商標）、ＥＣＣ Ｃｈｉｎａ ｃｌａｙ（あらゆる型の粘土の一例）及びあらゆる型の化学的に修飾された天然の炭水化物、例えばＴｙｌｏｓｅ（商標）の商品名のＣｌａｒｉａｎｔの製品がある。
【００１９】
滑剤として使用される他の錠剤添加物には、例えばステアリン酸塩、ワックス、硬化植物油、固体のエトキシル化脂肪アルコール、固体のエトキシル化脂肪アミン、固体のエトキシル化脂肪酸、及びポリエチレングリコールがある。
【００２０】
従って、本発明の更なる態様は、上述のような酵素組成物であって、錠剤化助剤が担体、例えばセルロース、セルロース誘導体、結合剤、例えばポリエチレングリコール又は高度にエトキシル化された脂肪アルコール誘導体、滑剤及び／又は崩壊剤を含んで成る組成物である。
【００２１】
任意な成分として、充填剤、例えば硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び他の非反応性の塩、液体の界面活性剤（ｔｅｎｓｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（微量）及び消泡剤がある。
【００２２】
液体界面活性剤には、例えば一般式ＣｎＨ２ｎＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（ここで、ｎは６〜３０、好ましくは９〜１８に及び、そしてｍは１〜２０，好ましくは２〜１０に及ぶ）のエトキシル化アルコールがある。その様な化合物は、商品名Ｌｕｔｅｎｓｏｌ（商標）のもとＢＡＳＦから、又はＧｅｎａｐｏｌ（商標）のもとＣｌａｒｉａｎｔから市販されている。
【００２３】
消泡剤には、例えばＷａｃｋｅｒ−Ｃｈｅｍｉｎｅ ＧｍｂＨ又はＴｈ．Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｔｔ ＧｍｂＨのシリコン消泡剤、例えばＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３８５又はＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３６９， Ｗａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ８８２，又はＷａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ ＳＥ ２があり、これらは市販されている。
【００２４】
液体、好ましくは水における錠剤の良好な溶解のために、化学に基づいた崩壊系、例えば発泡系を組み込むことも一般的である。これは、固体の酸又は酸性塩、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、シュウ酸、アジピン酸、リン酸水素のアルカリ金属塩及び／又は他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものを、この酸のもとと相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分と組み合わせて含む。例えば、炭酸ナトリウム及びカリウム並びに炭酸水素塩及びセスキ炭酸ナトリウムがある。他の（物理的な）崩壊系は、水との接触の後膨潤し、そしてこのように物理的な錠剤の破壊を招く材料を基としている。その様な物理的崩壊剤の例は、例えばＥＰ １０４３３８９， ＷＯ ９８／４０４６３又はＤＥ−Ａ−４４０４２７９に詳細に記載されている。
【００２５】
本発明の目的は、粗製酵素粉末と乾燥粉末形の他の成分を混合し、そして適当な金型において当該混合物を圧縮することによって製造される錠剤形の酵素組成物であって、
ａ）セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、カタラーゼ、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ又は任意な他のオキシドレダクターゼから選択される１又は複数の酵素、
ｂ）発泡系又は発泡系と、機械的なものを基とした崩壊系（膨潤機構）とを組み合わせたものを含んで成る崩壊系（ここで、当該発泡系は、固体の酸あるいは１又は複数のその塩及び、当該酸と相互作用する際に二酸化炭素を出す塩基性成分から成る）、
ｃ）錠剤化の助剤、
を含んで成る組成物にある。
【００２６】
組成物中での酵素の安定性を保護するために、緩衝液系が、酵素系が安定である所定の範囲内のｐＨ値を維持するために含まれることがある。その様な緩衝液系は発泡成分と同一であってもよく、あるいはそれはリン酸塩、ホウ酸塩又は有機酸若しくは塩基の任意な混合物であって、塩を形成しうるものを含んで成ることもある。
【００２７】
全ての固体の酸が、酵素錠剤における酸の供与体として使用され得るわけではない。
【００２８】
好ましくは、固体の酸は、結晶の結合水を全く含むべきではなく、又は吸湿性の動態を示すべきではない。
【００２９】
更に好ましくは、アジピン酸並びにあらゆるリン酸水素のアルカリ金属塩及び他の金属塩であって、あらゆる型のリン酸水素アンモニウムを含むものが使用される。
【００３０】
酵素錠剤中の様々な成分の好ましい量は、全組成物の重量当たり、
０．１〜９０ｗｔ．−％ ＥＣＭ（特定のタンパク質の純度及び強度に依存する）
１０〜９０ｗｔ．−％ 錠剤化助剤（結合剤及び／又は崩壊剤）
５〜９０％ｗｔ．−％ 発泡成分及び緩衝液
である。
【００３１】
本発明の好ましい態様は、上述のような、０．１〜９０ｗｔ．−％のＥＣＭ、１０〜９０ｗｔ．−％の錠剤化助剤、５〜９０ｗｔ．−％の発泡成分及び任意の追加成分を含んで成る酵素組成物である。重量パーセンテージは、錠剤の重量に関する。
【００３２】
本発明に従う錠剤の形態にある酵素組成物は、周知の錠剤化工程によって製造され得る。基本的に、当該成分は、任意に制塵剤を用いて、乾燥型で均一に混合される。当該成分はフローエイドと混合され、そして最後に適当な金型において常用の圧力で圧縮される。適当な圧力条件は後述する。当業者にとって、高圧及び高温が酵素を変性させることがあり、そしてそれ故にその様な条件は避けるべきであることは自明である。
【００３３】
本発明に従う錠剤形の酵素組成物は、織物材料の処理のために、更に具体的にはその様な織物材料が酵素で処理され、それらに特別な外観、例えばストーンウォッシュ風の外観を与えるような工程で使用される。
【００３４】
好ましくは、ペクチナーゼ組成物は、すなわち未処理綿に存在するペクチン化合物を除去するための織物のいわゆる「生物学的酸化（ｂｉｏｓｏｕｒｉｎｇ）」工程に使用される。
【００３５】
好ましくは、セルラーゼ組成物は、綿、更に具体的にはデニム材料の処理のために使用され、それらにいわゆる「ストーンウォッシュ型」の外観を与える。その様な工程において、当該錠剤は、所望な効果を達成するのに有用な濃度を得るために処理槽において溶解され、このことは、更なる工程のために、風合い又は外観を修飾するため、あるいは織物材料を前処理するためのいずれかで表面に効果を及ぼしうる。デニム及び他の綿材料の処理のために、表面修飾の眼に見える効果を得るために使用しなければならない濃度は、後述する活性セルラーゼタンパク質の品質に依存する。
【００３６】
以下の例は、セルラーゼタンパク質を含む様々な市販のＥＣＭの広範な量を例示する。以後、％ ｏｗｇ（ｏｎ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｇａｒｍｅｎｔ（衣料の重量当たり））として線維に関連する量で示す。
【００３７】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）ＢＴの場合、０．１％ ｏｗｇ〜１０％ ｏｗｇ、好ましくは０．２％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００３８】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）５０１ Ｓの場合、０．０５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００３９】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）３９９ Ｓの場合、０．０１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０５％〜１％ ｏｗｇが使用される。
【００４０】
Ｄｅｎｉｍａｘ（商標）９９１ Ｓの場合、０．０２％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４１】
ＩｎｄｉＡｇｅ（商標）Ｓｕｐｅｒ ＧＸの場合、０．０１５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４２】
ＩｎｄｉＡｇｅ（商標）Ｎｅｕｔｒａ Ｇの場合、０．０１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０５％〜１％ ｏｗｇが使用される。
【００４３】
Ｄｅｎａｂｒｉｄｇｅ ＬＢＧ（商標）の場合、０．０５％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．１％〜２％ ｏｗｇが使用される。
【００４４】
Ｍｅｉｊｉ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ＨＥＰ １００（商標）の場合、０．０００１％ ｏｗｇ〜０．５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０００５％〜０．０５％ ｏｗｇが使用される。
【００４５】
Ｍｅｉｊｉ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ＥＮＭ ３０６４（商標）の場合、０．０００１％ ｏｗｇ〜０．５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０００５％〜０．０５％ ｏｗｇが使用される。
【００４６】
Ｒｏｃｋｓｏｆｔ Ｕｌｔｒａ Ｕｌｔｒａ Ｐ（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００４７】
Ｒｏｃｋｓｏｆｔ ＮＣＥ ＥＡ（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００４８】
Ｅｃｏｓｔｏｎｅ ＮＧＣ １６００（商標）の場合、０．００１％ ｏｗｇ〜５％ ｏｗｇ、好ましくは０．０１％〜０．５％ ｏｗｇが使用される。
【００４９】
これらの例から、本発明に従う錠剤において使用されるＥＣＭの量が、狭い範囲に限定され得ないことは明らかである。性能は、ＥＣＭの性質及び純度に依存する。最大量は、現実の利用条件に近い試験、すなわち、請求により本出願人から入手可能な、１９９９年９月２８日に改訂された「Ｃｌａｒｉａｎｔ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｊｅａｎｓ ｗａｓｈ ｅｆｆｅｃｔ」によってのみ決定されうる。
【００５０】
錠剤形の酵素組成物を用いる利点は、容易な扱い、迅速な崩壊時間、向上した保存安定性及び正確で且つ対処しやすい酵素系の量に見られる。
【００５１】
錠剤の製造の詳細な説明
Ａ．直接的に圧縮可能な混合物の製造
本発明の工程において、酵素混合物（表１）は周知の混合手順で、例えばハイシェアーミキサーによって、例えばＬｏｄｉｇｅ（商標）ミキサーによって作成されうる。液体酵素調製物を使用しているＷＯ ９５／００１２１において使用された湿式顆粒技術と反対に、本発明は乾燥ＥＣＭを使用し、そして吸引による粉塵除去と組み合わせた制塵剤による前処理による粉塵の問題を回避する。制塵剤は、好ましくは水を含まない液体で前処理される担体材料から成ることがあり、これは酵素活性に影響を与えない。当該担体は、水を含まない液体を取り込み、且つ当該液体及び酵素と一緒に均一な化合物を形成することができる、化学的に活性でない物質である。好ましくは、当該担体は密度が低く且つ面積が広いセルロース材料である。水を含まない液体はまた、化学的に活性でない物質であって、好ましくは７０℃（１ａｔｍ）超の沸点を有する非イオン性の、水を溶解する液体である。好ましくは、限定しないが、ポリエチレンオキシド誘導体、例えば２０００Ｄ未満の分子量を有するポリエチレングリコール、すなわちポリエチレングリコール４００又はポリエチレングリコエーテル、ポリエチレングリコエステル、同一の分子量を有するポリエチレングリコール−カーボネートである。その後、担体とＥＣＭの混合物は錠剤化のための均一な混合物を形成するための他の錠剤化成分と混合される。
【００５２】
Ｂ．錠剤化の手順
上述の混合物は、一般的な錠剤化機器、例えばＦａ． ＫｏｒｓｃｈのＲｕｎｄｌａｕｆｅｒ ＰＨ ４００を用いて錠剤に変換される。錠剤の形状は、任意な形状、例えば円筒、立方体、直方体又は球状であってもよい。好ましくは、それは円筒の形状にある。錠剤を製造する技術は、ＥＰ ８７１６９８に記載されている。錠剤化混合物は極微量の水を含むはずである。水の含量（湿度）はＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ（商標）Ｔｙｐ ＬＪ １６湿度計によって決定される。水分含量は、混合物の重量に関して２ｗｔ−％未満、好ましくは１ｗｔ−％未満であるべきである。圧力は１０〜９０ｋＮ、好ましくは２５〜７５ｋＮの範囲で変化することがある。得られた錠剤は、２〜２０ｋｐ、好ましくは３〜１５ｋｐ、そして最も好ましくは４〜１０ｋｐの硬度を示す。円筒状の錠剤の直径は１０〜６０ｍｍ、好ましくは２０〜５０ｍｍ、最も好ましくは３５〜４５ｍｍである。その様な錠剤の重量は１〜１００ｇ、好ましくは１０ｇ〜５０ｇである。その様な錠剤の高さは、パンチの直径、混合物の組成及び圧力に依存して、５〜３０ｍｍの間で変化しうる。液体、好ましくは水におけるその様な錠剤の溶解時間は、製剤の成分、圧力、重量及び使用するパンチの直径に依存する。上文で言及したパラメーターは、錠剤テスター（Ｍｏｄｅｌ Ｄｒ． ｓｃｈｌｅｕｎｉｇｅｒ（商標），Ｔｙｐ ６Ｄ ｔａｂｌｅｔ ｔｅｓｔｅｒ）を用いて製造後に直接的に決定される２５℃の温度で５分未満の溶解時間を有する錠剤を得るために調整される。当該錠剤の溶解動態は、保存時間に依存して決定される。本発明の錠剤は、５分未満の溶解時間を有しており、これは製造後（２４時間未満）に直接的に決定された。室温で２ヶ月間の錠剤の保存の後、溶解時間は最大７分にまで増大することがある。室温で２ヶ月間の保存の後、溶解時間は最大１０分にまで増大することがある。一般的に好ましいのは、最大４０℃の任意な保存温度で、５分未満の溶解時間を示す錠剤である。
【００５３】
溶解時間の決定
１Ｌの水を２５℃で３Ｌのビーカーに注ぐ。５００ｒｐｍ（ｒｏｕｎｄ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ）の撹拌速度の、６ｃｍの長さ及び１ｃｍの長さを有するマグネットスターラー及び振とう機を用いて撹拌しながら、錠剤をビーカーに据える。２分後、ビーカーの中身を金属のふるい（孔径１ｃｍ）を介して注ぎ、任意に、生じた錠剤の残査を回収し、そして乾燥させる。溶解動態は、２５℃で２分後の錠剤のもとの重量の％で表される。
【００５４】
Ｃ．研究室における錠剤の製造
製剤成分を最適化するために、錠剤は、研究室においてＩＲ加圧成形を行うためのＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｐｒｅｓｓ又はＰａｕｌ−Ｏｔｔｏ Ｗｅｂｅｒ ＧｍｂＨ（Ｄ−７３６３０ Ｒｅｍｓｈａｌｄｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）のｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍを用いて製造される。
【００５５】
以下の実施例は本発明を例示する。当該実施例において、全ての部分及びパーセンテージは、断らない限り重量当たりのものであり、そして全ての温度が摂氏温度で示される。
【００５６】
例１〜４
２０ｗｔ．−％の乾燥セルラーゼが、「Ｌｏｄｉｇｅ」ミキサーを用いて５ｗｔ．−％のポリエチレングリコール４００及び５ｗｔ．−％のシリコン系消泡剤（Ｗａｃｋｅｒ ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｔｉｆｏａｍ Ｓ ３８５）と少なくとも１５分間均一に混合され、ｉｎ ｓｉｔｕの担体系を製造する。この混合物に対し、５〜２０ｗｔ．％のスプレー乾燥したＥＣＭ粉末又は様々なＥＣＭ混合物が、あらゆる粉塵の発生を避けるために真空系を用いて添加される。当該混合物は、直ちに担体表面上に分配される。この混合物に対し、５０〜６５ｗｔ．−％の炭酸水素ナトリウムが添加される。この混合物は最終的に、「Ｌｏｄｉｇｅ」ミキサー内で他の錠剤化助剤と徹底的に混合される。表１は、その様な組成物についての例を示す。これらの組成物は、２５ｇの重量及び３８ｍｍの直径及び１７ｍｍの高さ及び６ｋｐ±０．５ｋｐの硬度を有する円筒状の錠剤を形成するために使用される。
【表１】
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【００５７】
適用
本発明の方法を用いて製造した錠剤は、所望の摩耗の程度及び適用時間に依存して、０．０１％〜１％の量で適用において使用され得る。ロータリードラム洗濯機において、３ｋｇのノリ抜きされたジーンズを、０．１％ ｏｗｇの上述の錠剤を用いて、５０℃で６０分間ｐＨ５〜７で処理する。ジーンズは最終的にすすがれ、そして評価のために乾燥される。きれいに洗浄された程度は、錠剤組成物に依存する。
【国際調査報告】
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