(57)【要約】活性化ポリ（エチレングリコール）およびその他同種類のポリマーの高分子量誘導体を、大きなＰＥＧ分子を小さなＰＥＧ分子に結合体化することにより高純度で調製する。ここで、ポリマー誘導体が、約１２０個以下の反復単位を有する、少なくとも１つの第２の水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントに、少なくとも１つの連結部分を介して共有結合的に結合した、少なくとも約２００個の反復単位を有する、１つ以上の第１の水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントを含有する。大抵の反応工程を、高分子量誘導体の困難な精製を回避するために、より容易に精製される低分子で達成し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性化ポリマー誘導体であって、該ポリマー誘導体が、約１２０個以下の反復単位を有する、少なくとも１つの第２の水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントに、少なくとも１つの連結部分を介して共有結合的に結合した、少なくとも約２００個の反復単位を有する、１つ以上の第１の水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントを含有し、ここで、該第１および第２のポリマーセグメントの該単位が、同一であっても異なっていてもよく、ここで、該少なくとも１つの連結部分が、該ポリマー誘導体の特性を実質的に変化させず、該ポリマー誘導体が、該第１および第２のポリマーセグメントのうちの１つに位置した求電子性部分および求核性部分からなる群から選択される少なくとも１つの活性部分を有する、ポリマー誘導体。
【請求項２】
前記少なくとも１つの活性部分が、前記第２のポリマーセグメント上に位置する単一の部分である、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項３】
前記第１のポリマーセグメントが、保護された官能基をさらに含有する、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項４】
請求項１に記載のポリマー誘導体であって、ここで、前記第１および第２のポリマーセグメントが、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オレフィン性アルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカリド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリフォスファーゼン、ポリオキサゾリン、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、およびコポリマー、ターポリマー、ならびにそれらの混合物からなる群から独立して選択される、ポリマー誘導体。
【請求項５】
前記第１のポリマーセグメントが、約２００〜２０００個の反復モノマー単位を有する、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項６】
前記第１のポリマーセグメントが、約２００〜７００個の反復単位を有する、請求項４に記載のポリマー誘導体。
【請求項７】
前記第２のポリマーセグメントが、１〜約１２０個の反復単位を有する、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項８】
前記第２のポリマーセグメントが、約４０〜８０個の反復単位を有する、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項９】
前記第１および第２のポリマーセグメントが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項１０】
前記第１および第２のポリマーセグメントの間の前記連結部分が、アミド結合またはカルバメート結合から選択される親水性部分である、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項１１】
請求項１に記載のポリマー誘導体であって、ここで、前記活性部分が、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、活性エステル、活性カーボネート、アセタール、アルデヒド、アルデヒド水和物、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、活性スルホン、アミン、保護されたアミン、ヒドラジド、保護されたヒドラジド、チオール、保護されたチオール、カルボン酸、保護されたカルボン酸、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ビニルスルホン、ジチオピリジン、ビニルピリジン、ヨードアセトアミド、エポキシド、グリオキサール、ジオン、メシラート（ｍｅｓｙｌａｔｅ）、トシラート（ｔｏｓｙｌａｔｅ）、チオスルホナート、およびトレシラート（ｔｒｅｓｙｌａｔｅ）からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項１２】
前記ポリマーセグメントが、直鎖、分枝鎖、およびマルチアームのポリマーセグメントからなる群から選択される、請求項１に記載のポリマー誘導体。
【請求項１３】
活性化ポリマー誘導体であって、該ポリマー誘導体が、１〜１２０個の反復モノマー単位を有する直鎖状ポリ（エチレングリコール）セグメントの一端に、少なくとも１つのアミド結合部分またはカルバメート結合部分を介して共有結合的に結合した約２００〜７００個の反復モノマー単位を有する、直鎖状モノメトキシポリ（エチレングリコール）セグメントを含有し、そしてここで、１〜１２０個の反復モノマー単位の該ポリ（エチレングリコール）セグメントが、２００〜７００個の反復モノマー単位の該ポリ（エチレングリコール）セグメントの反対側のその末端に求電子性部分および求核性部分からなる群から選択される、少なくとも１つの活性部分を含む、ポリマー誘導体。
【請求項１４】
モノメトキシポリ（エチレングリコール）−ｐ−トルエン
チオスルホナート；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−プロピオン酸；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−プロピオン酸，Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−プロピオン酸，メチルエステル；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−ブタン酸；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−ブタン酸，Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−ブタン酸，メチルエステル；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−アミン；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−プロピオンアルデヒド；モノメトキシポリ（エチレングリコール）−プロピオンアルデヒド，ジエチルアセタール；ジ−モノメトキシポリ（エチレングリコール）−リジンプロピオンアルデヒド；ジ−モノメトキシポリ（エチレングリコール）−リジンプロピオンアルデヒド，ジエチルエーテル；およびモノメトキシポリ（エチレングリコール）−マレミド（ｍａｌｅｍｉｄｅ）からなる群から選択されるポリマー誘導体であって；ここで、該ポリマー誘導体が、少なくとも約１０，０００ダルトンの分子量を有し、そして該ポリマー誘導体が、連結基により結合される少なくとも２つの異なるポリ（エチレングリコール）セグメントを有する、ポリマー誘導体。
【請求項１５】
生物学的に活性な分子に結合体化された請求項１４に記載のポリマー誘導体。
【請求項１６】
構造（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙを有する請求項１に記載のポリマー誘導体であって、ここで、（Ｐｏｌｙ）ａが約２００個よりも多い反復単位を有する水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントであり、Ｘが該ポリマー誘導体の特性を実質的に変化させない連結部分であり、（Ｐｏｌｙ）ｂが１〜約１２０個の反復単位を有する水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントであり、（Ｐｏｌｙ）ａと同一であっても異なっていてもよく、そしてＹが求電子性部分または求核性部分である、ポリマー誘導体。
【請求項１７】
構造Ｙ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙを有する請求項１に記載のポリマー誘導体であって、ここで、（Ｐｏｌｙ）ａが約２００個よりも多い反復単位を有する水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントであり、Ｘが該ポリマー誘導体の特性を実質的に変化させない連結部分であり、（Ｐｏｌｙ）ｂが１〜約１２０個の反復単位を有する水溶性で非ペプチド性のポリマーセグメントであり、そしてここで、Ｙが求電子性部分または求核性部分である、ポリマー誘導体。
【請求項１８】
請求項１に記載のポリマーであって、ここで、前記活性部分が−（ＣＨ２）ｒＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２ＮＳ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２Ｂｔ、−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＲ）２、−（ＣＨ２）ｒＣＨＯ、−（ＣＨ２）２−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｒＭ、−（ＣＨ２）ｒ−Ｓ−ＳＯ２−Ｒからなる群から選択され、ここで、ｒが１〜５であり、ｒ’が０〜５であり、Ｒがアリールまたはアルキルであり、ＮＳがＮ−スクシンイミジルであり、Ｂｔが１−ベンゾトリアゾリルであり、そしてＭがＮ−マレイミジル（ｍａｌｅｉｍｉｄｙｌ）である、ポリマー。
【請求項１９】
請求項１に記載のポリマーであって、ここで、前記第１および第２のポリマーセグメントのうち１つかまたは両方が前記モノマーの間で加水分解的または酵素的に分解する基をさらに含有する、ポリマー。
【請求項２０】
組成ＰＥＧ−［Ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｙ］ｑを有するポリマーであって、ここで：
ＰＥＧが加水分解的もしくは酵素的に分解可能な結合を有するかまたは有さない、直鎖のポリ（エチレングリコール）、アルコキシ−ポリ（エチレングリコール）、分枝鎖のポリ（エチレングリコール）、およびフォーク状のポリ（エチレングリコール）から選択される水溶性で非ペプチド性のポリマーであって、ここで、該ポリ（エチレングリコール）が少なくとも２００個の反復モノマー単位を有し、
Ｘが連結部分であり、
ｍが１〜約１２０であり、
Ｙが末端の求電子性基または求核性基を有する部分であり、そして
ｑが１〜約５００である、ポリマー。
【請求項２１】
請求項２０に記載のポリマーであって、ここでＹがヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、活性エステル、活性カーボネート、アセタール、アルデヒド、アルデヒド水和物、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、活性スルホン、アミン、保護されたアミン、ヒドラジド、保護されたヒドラジド、チオール、保護されたチオール、カルボン酸、保護されたカルボン酸、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ビニルスルホン、ジチオピリジン、ビニルピリジン、ヨードアセトアミド、エポキシド、グリオキサール、ジオン、メシラート、トシラート、チオスルホネート、およびトレシラートからなる群から選択される、ポリマー。
【請求項２２】
請求項２０に記載のポリマーであって、ここでｑが２である場合、Ｙがヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、活性エステル、活性カーボネート、アセタール、アルデヒド、アルデヒド水和物、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、活性スルホン、アミン、保護されたアミン、ヒドラジド、保護されたヒドラジド、チオール、保護されたチオール、カルボン酸、保護されたカルボン酸、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ビニルスルホン、ジチオピリジン、ビニルピリジン、ヨードアセトアミド、エポキシド、グリオキサール、ジオン、メシラート、トシラート、チオスルホネート、およびトレシラートからなる群から独立して選択される、ポリマー。
【請求項２３】
請求項２０に記載のポリマーであって、ここでＹが−（ＣＨ２）ｒＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２ＮＳ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２Ｂｔ、−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＲ）２、−（ＣＨ２）ｒＣＨＯ、−（ＣＨ２）２−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｒＭ、−（ＣＨ２）ｒ−Ｓ−ＳＯ２−Ｒから選択され、ここで、ｒが１〜５であり、ｒ’が０〜５であり、Ｒがアリールまたはアルキルであり、ＮＳがＮ−スクシンイミジルであり、Ｂｔが１−ベンゾトリアゾリルであり、そしてＭがＮ−マレイミジルである、ポリマー。
【請求項２４】
Ｘがアミド結合またはカルバメート結合である請求項２０に記載のポリマー。
【請求項２５】
前記ポリ（エチレングリコール）が約２００〜２０００個の反復単位を有する請求項２０に記載のポリマー。
【請求項２６】
組成Ｒ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｙを有するポリマーであって、
ここで：
Ｒが１〜５個の炭素原子を有するアルキル基および末端に求電子性基または求核性基を有する機能的部分から選択され、
ｎが２００より大きく、
ｍが１と約１２０との間であり、
Ｘが連結部分であり、ならびに
Ｙが末端の求電子性基または求核性基を有する部分であり、Ｒと同一であっても異なっていてもよい、ポリマー。
【請求項２７】
少なくとも１つの官能基を有する水溶性で非ペプチド性のポリマーを生成する方法であって、該方法は、以下の工程：
少なくとも約２００個の反復単位から構成され、そして少なくとも１つの第１の官能基を有する、第１の水溶性で非ペプチド性のポリマーを提供する、工程；
１〜約１２０個の反復単位から構成され、そして少なくとも１つの第２の官能基を有する、第２の水溶性で非ペプチド性のポリマーを提供する工程であって、該第２の官能基が少なくとも高分子量のポリマーの該第１の官能基と反応性であり；そしてここで、該第１および第２のポリマーのうちの少なくとも１つが該第１および第２の官能基のいずれか１つとも反応性でない官能基をさらに含有する、工程、
該第１および第２の官能基を反応させる工程であって、これによって該第１および第２のポリマーを共有結合的に結合して、少なくとも１つの官能基を有する、水溶性で非ペプチドのポリマーを提供する、工程
を包含する、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、ここで前記第１および第２の官能基が、Ｎ−スクシンイミジルカーボネート、アミン、ヒドラジド、プロピオン酸スクシンイミジルおよびブタン酸スクシンイミジル、コハク酸スクシンイミジル、スクシンイミジルエステル、炭酸ベンゾトリアゾール、グリシジルエーテル、オキシカルボニルイミダゾール、炭酸ｐ−ニトロフェニル、アルデヒド、マレイミド、オルトピリジル−ジスルフィド、アクリロール、ならびにビニルスルホンから選択される、方法。
【請求項２９】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記第１および第２の官能基と反応性でない前記官能基が、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、活性エステル、活性カーボネート、アセタール、アルデヒド、アルデヒド水和物、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、活性スルホン、アミン、保護されたアミン、ヒドラジド、保護されたヒドラジド、チオール、保護されたチオール、カルボン酸、保護されたカルボン酸、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ビニルスルホン、ジチオピリジン、ビニルピリジン、ヨードアセトアミド、エポキシド、グリオキサール、ジオン、メシラート、トシラート、チオスルホネート、およびトレシラートからなる群から選択される、方法。
【請求項３０】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記第１および第２の官能基が、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ベンゼン、キシレン、およびそれらの組合わせからなる群から選択される溶媒の存在下で反応される、方法。
【請求項３１】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記ポリマーが各々単官能基性および二官能基性の直鎖、分枝鎖、マルチアーム、およびフォーク状の形態からなる群から選択される、ポリ（エチレングリコール）である、方法。
【請求項３２】
前記第１のポリマーが直鎖のメトキシ−ポリ（エチレングリコール）である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１および第２の官能基に対して反応性でない官能基を生物学的に活性な因子に結合体化する工程をさらに包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記生物学的に活性な因子が、タンパク質、ペプチド、炭水化物、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および脂質から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記第１のポリマーが保護された反応性基を含有し、そして共有結合的に結合された高分子量ポリマーおよび低分子量ポリマーから保護する部分を除去してさらなる官能性を形成する工程をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ポリ（エチレングリコール）の誘導体および関連するポリマー、ならびにこれらを合成するための方法に関する。より特定すると、本発明は、高分子量の誘導体、および高分子量の誘導体を生成する方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
親水性ポリマーであるポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧと略され、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯと略される）としても公知）の、分子および表面への共有結合は、生物工学および医学において、かなり有用である。その最も通常の形態であるＰＥＧは、各末端にヒドロキシル基を有して終結する直鎖状ポリマーである：
ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ。
【０００３】
上記ポリマー（α，ω−ジヒドロキシポリ（エチレングリコール））は、その簡略形態で、ＨＯ−ＰＥＧ−ＯＨと表され得、ここで、−ＰＥＧ−とは、以下の構造単位：
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−
を表す記号であることが理解される。ここで、ｎは、代表的に、約３〜約４０００の範囲である。
【０００４】
ＰＥＧは、通常、メトキシ−ＰＥＧ−ＯＨ（または短くは、ｍＰＥＧ）として使用され、ここで、一方の末端は、比較的不活性なメトキシ基であり、一方で他の末端は、容易に化学修飾を受けやすいヒドロキシル基である。ｍＰＥＧの構造を、以下に与える：
ＣＨ３Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ。
【０００５】
エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのコポリマーは、その化学がＰＥＧに密接に関連しており、そしてこれらは、その適用の多くにおいて、ＰＥＧと交換され得る。
【０００６】
ＨＯ−ＣＨ２ＣＨＲＯ（ＣＨ２ＣＨＲＯ）ｎＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ
ここで、Ｒは、Ｈまたはアルキル（例えば、ＣＨ３）である。
【０００７】
ＰＥＧはまた、複数の直鎖状ＰＥＧが中心コアに付着した、マルチアーム形態で通常使用される：
Ｒ（−Ｏ−ＰＥＧ−ＯＨ）ｎ
ここで、Ｒは、例えば、ペンタエリスリトールまたはグリセロールオリゴマーから誘導されるコアである。ＰＥＧはまた、骨格に分解可能な結合を有して調製され得る。
【０００８】
ＰＥＧは、水および多くの有機溶媒における溶解度の特性を有し、毒性がなく、そして免疫原性のない、ポリマーである。ＰＥＧの１つの用途は、ポリマーを不溶性分子に共有結合させて得られるＰＥＧ−分子「結合体」を可溶性にすることである。例えば、水に不溶性の薬物であるパクリタキセルは、ＰＥＧと結合すると、水溶性になることが示されている。Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６０：３３１−３３６（１９９５）。
【０００９】
ＰＥＧを分子（例えば、タンパク質）に結合させるためには、しばしば、ＰＥＧを「活性化」させて、末端に官能基を有するＰＥＧの誘導体を調製することが必要である。この官能基は、タンパク質の特定の部分（例えば、アミノ基）と反応し得、これによって、ＰＥＧ−タンパク質結合体を形成する。ＰＥＧの多くの活性化誘導体が、記載されている。このような活性化誘導体の例は、スクシンイミジルスクシネート「活性エステル」である：
ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−Ｏ２Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＯ２−ＮＳ
ここで、ＮＳは、以下である：
【００１０】
【化１】
2004525212.tif 000002
本明細書中以下において、スクシンイミジル活性化エステル部分を、−ＣＯ２−ＮＳで表す。このような活性化ＰＥＧはまた、上記マルチアーム形態から、または以下：
（ＰＥＧ−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ）２ＬＹＳ−ＮＳ
のような分枝形態（Ｈａｒｒｉｓら、米国特許第５，９３２，４６２号（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されている）から、調製され得る。
【００１１】
官能基は、出発ヒドロキシルから他の形態への直接的な転換によって、またはヒドロキシル基に有機スペーサー基を結合させることによって、ＰＥＧの末端に付着され得る。例えば、上記スクシネートＰＥＧは、無水コハク酸をＰＥＧに付着させることによって、調製される。同様に、無水グルタミン酸を反応させて、グルタミン酸ＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｏ２Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＣＯ２Ｈ）を調製し得る。より大きな脂肪族スペーサーさえ、付加され得る。Ｏｋａｍｏｔｏら、Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９，３４１−３４６（１９８３）に記載されるように、ＰＥＧは、ＰＥＧ−ＯＨをＯＮＣ−（ＣＨ２）６−ＮＣＯと反応させ、次いで残りのイソシアネートをアミン生成物ＰＥＧ−Ｏ２ＣＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ２に転換することによって、ＰＥＧアミンに転換され得る。
【００１２】
ＰＥＧ化学の適用がより洗練されるにつれて、高分子量の、高純度のＰＥＧ誘導体に対する必要性が高まってきた。これらの化合物の合成は、多段階の調製の間に蓄積されるポリマー不純物の除去の困難によって、複雑である。低分子不純物は、通常、単純な手順（例えば、沈澱）によって、容易に除去される。しかし、高分子量のポリマー副生成物は、一般に、除去が非常に困難であり、そして時間を消費する高価なクロマトグラフィー技術の利用を必要とする。当該分野において、高分子量のＰＥＧ誘導体を調製する、改善された方法に対する必要性が残っている。
【００１３】
（発明の要旨）
本発明は、高分子量の活性化ポリマー誘導体およびこれらを作製するための方法を包含する。小さな二官能性オリゴ（エチレングリコール）（「ＯＥＧ」）誘導体またはより小さなオリゴマーもしくは小さなポリマーが、大きなポリ（エチレングリコール）ポリマー（「ＰＥＧ」）誘導体または類似のポリマーに共有結合される。この様式で、ほとんどの化学転換が、オリゴマーまたは小さなポリマー化合物において実施され得る。大きなポリマー不純物は、より小さな不純物より、所望の生成物から分離することがより困難であり、そしてこれらのポリマーが関与するこれらの反応の生成物は、代表的に、未反応試薬、架橋を生じ得る二官能性成分、部分的に反応した成分、および他のポリマー不純物を含む。本発明は、大きなポリマーを作製するために必要とされる反応の数を減少させることによって、これらの不純物を回避する。
【００１４】
従って、以下に示されるように、複雑なオリゴマー（例えば、Ｙ’−ＯＥＧ−Ｙ（ここで、ＹおよびＹ’は、活性部分である））を、単純な高分子量ポリマー化合物（例えば、ｍＰＥＧ−Ｚ（ここで、ＺがＹまたはＹ’の１つと反応する））と反応させて、大きい方のＰＥＧと小さい方のＰＥＧとの間に、新たな連結基Ｘを作製することによって、１工程で、複雑なポリマー化合物を作製し得る。この様式で、ポリマー不純物が蓄積しない。ＹおよびＹ’は、同じであるかまたは異なり得るが、これら２つの部分が適合性であり、そして互いに反応しないように、選択されるべきである。
【００１５】
高分子量の単官能性高分子を生成するための代表的な反応において、モノメトキシポリ（エチレングリコール）が、より小さなＰＥＧポリマーと反応され、ここで、単官能性の大きい方のＰＥＧポリマーにおける官能基Ｚは、ヘテロ二官能性の小さい方のポリマーにおける官能基Ｙ’と反応する。高分子量の生成物は、活性基Ｙを維持する。これらの反応物は、Ｚ部分とＹ’部分との反応によって形成するＸ基によって、連結される。この反応は、以下のように示され得る：
ｍＰＥＧ−Ｚ  ＋  Ｙ’−ＯＥＧ−Ｙ  →  ｍＰＥＧ−Ｘ−ＯＥＧ−Ｙ。
【００１６】
例えば、分子量３２，０００のｍＰＥＧ−プロピオン酸（これは、ｍＰＥＧ−ＯＨから代表的に数工程で作製される化合物である）が、ｍＰＥＧ−ＯＨから１工程で調製した活性化ｍＰＥＧカーボネート３０，０００を、２０００の分子量のα−アミノ−ω−プロピオン酸と反応させることによって、単一の工程で調製され得る。ほとんどの化学転換が、小さな、安価な、より容易に精製されるＰＥＧ２０００において実施され得る。
【００１７】
単官能性、ホモ二官能性、およびヘテロ二官能性の高分子が、本発明の実施によって調製され得るが、必ずしも全てが等価な結果を伴うわけではない。複数の反応工程と共に不純物が増加する場合、生成物分子の大きい方のポリマー成分に複雑さを導入する傾向のある反応は、この方法の有効性を減少させ得る。
【００１８】
より大きな特異性を有するポリ（エチレングリコール）ポリマーを示す、いくらかより一般化された実施形態において、本発明の生成物の構造は、以下のように記載され得る：
Ｒ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ）ｍ−Ｙ。
【００１９】
上記構造は、Ｒ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−ＺをＹ’−（ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ）ｍ−Ｙと反応させることによって調製され、ここで、Ｚは、Ｙ’と反応性の基であり、そしてＹとＲとのいずれも、ＺまたはＹ’と反応性ではない。
【００２０】
Ｒは、キャッピング部分であり得、種々のアルキル部分（代表的に、ＰＥＧに付着する場合のメトキシ）が挙げられる。Ｒはまた、反応性基または保護された反応性基Ｙ”であり得、ここで、この反応性基は、後の所望のいずれかの時点に、脱保護され得、反応のために利用可能になり得る。Ｙ”が、保護された基、または生成物分子を作製するために使用される反応には関与しない異なる基である場合には、ＹおよびＹ”は同一であり得る。官能基としては、アルデヒド、マレイミド、活性エステル、チオスルホネートまたはアミンが挙げられるが、これらに限定されない。Ｘは、アミドまたはカルバメートのような、小さな親水性リンカーであり；ｎは、約２００〜２０００であり；そしてｍは、約１〜１２０である。Ｘは、望ましくは、得られる高分子量ポリマーの化学的特性および物理的特性に不利に影響を与えない、小さな親水性部分である。
【００２１】
あるいは、二官能性であるかまたはさらなる官能基を有する、大きなポリマーセグメントが、１つ以上の官能基において、小さい方の分子に連結され得る。この生成物である高分子の官能基は、望まれるように、大きなポリマーセグメントまたは小さい方のオリゴマーセグメントもしくはポリマーセグメントを起源とし得る。ポリマー骨格は、生成物分子の制御された分解性のために望ましい場合、加水分解または酵素分解を受けやすい基またはリンカーが、その骨格に組み込まれ得る。
【００２２】
上記ポリマーセグメントは、広義に、大きなポリマーセグメントについては（Ｐｏｌｙ）ａと考えられ得、そして小さい方のポリマーセグメントについては（Ｐｏｌｙ）ｂと考えられ得、ここで、Ｐｏｌｙとは、ポリ（エチレングリコール）をその種々の形態で含むポリマー、および当該分野において類似の特徴のポリマーであるとみなされるポリマーのいずれかであり得る。
【００２３】
従って、高分子量のポリマーが、より低分子量のポリマー（これは、不純物を除去するためにさほど厄介ではない）およびより高分子量のポリマー（これは、一連の反応にも、ポリマー不純物を除去するための複雑な精製工程にも供されていない）から調製され得る。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
ここで、本発明を、本明細書中以下においてより完全に記載する。しかし、本発明は、多くの異なる形態で実施され得、そして本明細書中に記載される実施形態に限定されるとはみなされない；むしろ、これらの実施形態は、本開示が十分かつ完全であるように、そして本発明の範囲を当業者に完全に伝えるために、提供される。
【００２５】
（定義）
用語「官能基」、「活性部分」、「活性基」、「反応性部位」、「末端基」、「化学的に反応性の基」、および「化学的に反応性の部分」は、当該分野および本明細書中において、分子の明確で定義可能な部分またはユニットをいうように使用される。これらの用語は、化学の分野においていくらか類義であり、そして本明細書中において、何らかの機能または活性を果たし、そして他の分子と反応性である、分子の部分を示す。官能基と組み合わせて使用される場合に、用語「活性」とは、反応するために強い触媒または高度に非実用的な反応条件を必要とする基（すなわち、「非反応性」基または「不活性」基）とは対照的に、他の分子における求電子性基または求核性基と容易に反応する官能基を含むことが意図される。例えば、当該分野において理解されるように、用語「活性エステル」は、アミンのような求核性基と容易に反応するエステルを含む。例示的な活性エステルとしては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルまたは１−ベンゾトリアゾリルエステルが挙げられる。代表的に、活性エステルは、水性媒体中で、ほんの数分でアミンと反応し、一方で特定のエステル（例えば、メチルエステルまたはエチルエステル）は、求核性基と反応するために、強い触媒を必要とする。
【００２６】
用語「アルキル」とは、代表的には約１〜約１２個の範囲の炭素原子の長さの炭化水素鎖をいい、そして直鎖および分枝鎖を含む。この炭化水素鎖は、飽和であっても不飽和であってもよい。用語「置換アルキル」とは、１つ以上の非妨害性の置換基で置換されたアルキル基をいい、この置換基は、例えば、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチルなど）；アセチレン；シアノ；アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシなど）；低級アルカノイルオキシ（例えば、アセトキシ）；ヒドロキシ；カルボキシル；アミノ；低級アルキルアミノ（例えば、メチルアミノ）；ケトン；ハロ（例えば、クロロまたはブロモ）；フェニル；置換フェニルなどであるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、「非ペプチド性」とは、実質的にペプチド結合のないポリマー骨格をいう。しかし、このポリマー骨格は、その骨格の長さに沿って間隔を空けた少数のペプチド結合（例えば、約５０のモノマー単位あたり約１のペプチド結合など）を含み得る。
【００２８】
「ポリマー結合体」とは、本明細書中に規定されるような、生物学的に活性な分子に共有結合した水溶性ポリマー骨格をいう。ポリマー結合体が第二のポリマーと反応して伸長したポリマー骨格を形成する場合、これらのポリマーの結合がペプチド結合または他の結合を有するものであってもそうでなくても、用語「ポリマー結合体」とは、生物学的に活性な因子に結合したポリマーの全体の長さをいう。
【００２９】
「結合」、「リンカー」、または「連結基」は、本明細書中において、化学反応の結果として通常形成される基または結合をいい、そして代表的に、共有結合である。加水分解に対して安定な結合とは、その結合が水中で実質的に安定であり、そして長期間にわたって（好ましくは永久に）、有用なｐＨ（例えば、生理学的条件）の水と反応しないことを意味する。加水分解に対して不安定な結合または加水分解性の結合とは、その結合が水中または水溶液（例えば、血液が挙げられる）中で分解可能であることを意味する。酵素的に不安定な結合または酵素分解性の結合とは、その結合が１種以上の酵素によって分解され得ることを意味する。
【００３０】
用語「生物学的に活性な分子」、「生物学的に活性な部分」、「生物学的に活性な薬剤」、または「薬物」は、本明細書中で使用される場合、生物学的組織（ウイルス、細菌、真菌、植物、動物、およびヒトが挙げられるがこれらに限定されない）の任意の物理的特性または生化学的特性に影響を及ぼし得る任意の物質を意味する。特に、本明細書中で使用される場合、生物学的に活性な分子として、ヒトまたは他の動物における疾患の診断、治療緩和、処置、または予防に適した任意の物質、あるいは、そうでなければ、ヒトまたは動物の物理的または精神的な健康を増強する任意の物質が挙げられる。生物学的に活性な分子の例として、ペプチド、タンパク質、酵素、低分子薬物、色素、脂質、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、細胞、ウイルス、リポソーム、微粒子、およびミセルが挙げられるがこれらに限定されない。本発明における使用に適した生物学的に活性な薬剤のクラスとして、抗生物質、殺真菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、心臓血管剤、抗不安剤、ホルモン、成長因子、ステロイド剤などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３１】
用語「低分子量ポリマー（“ｌｏｗ  ｗｅｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｍｅｒ”および“ｌｏｗ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｍｅｒ”）」は、１〜約１２０の反復単位を有する水溶性の非ペプチド性ポリマーを含む、直鎖状、分枝状、マルチアーム状、またはフォーク状のポリマー骨格に対して広く言及される。これらのポリマーは、代表的に、１〜２個の官能基（これらは代表的に、直鎖状ポリマーの反対の末端に位置する）から約３００個の官能基（これらは、高度な分枝状またはマルチアーム状構造の末端に位置し得る）を有するが、それよりも少ない数が、ポリマー骨格に沿って位置し得る。適切なポリマーとして、ポリ（アルキレングリコール）［例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマーなど］、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ならびにそれらのコポリマー、ターポリマー、誘導体、および混合物が挙げられるがこれらに限定されない。オリゴマー長およびモノマー長さえも上記の中に含まれることが理解されるべきである。小ポリマーまたはオリゴマーの分子量は変化し得るが、代表的には、約１００Ｄａ〜約１０，０００Ｄａの範囲であり、当然、個々の反復単位の分子量に依存する。ＰＥＧの場合、１つのＰＥＧモノマー単位は、約４４Ｄａの分子量を有し、低分子量ポリマーは、約４４Ｄａ〜約５２８０Ｄａの分子量を有する。２０００、３２００、３４００、および５，０００の分子量は、市販されている。当業者は、実質的に水溶性の非ペプチド性のポリマー骨格についての上記リストが排除ではなく例示にすぎず、そして上記の性質を有する全てのポリマー材料が意図されることを認識している。
【００３２】
用語「高分子量ポリマー（“ｈｉｇｈ  ｗｅｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｍｅｒ”および“ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｍｅｒ”）」は、約２００より多い反復単位を有する水溶性の非ペプチド性ポリマーを含む、直鎖状、分枝状、またはマルチアーム状のポリマー骨格に対して広く言及される。これらのポリマーは、代表的に、１〜２個の官能基（これらは代表的に、直鎖状ポリマーの反対の末端に位置する）から約３００個の官能基（これらは、ポリマー骨格に沿って、あるいは高度な分枝状またはマルチアーム状構造の末端に位置し得る）を有する。末端が分枝しており、２つの官能基を提供するフォーク状構造もまた、意図される。適切なポリマーとして、低分子量ポリマーを選択したのと同一のポリマーが挙げられるがこれらに限定されない。このポリマーの分子量は変化し得るが、代表的には、約８，０００Ｄａよりも大きく、当然、個々のモノマー単位の分子量に依存する。ＰＥＧの場合、高分子量ポリマーは、約８，８００Ｄａより大きい分子量を有する。市販のＰＥＧとして、１０，０００、１２，０００、１５，０００、１８，０００、および２０，０００、３０，０００、４０，０００およびそれより大きいの名目上の分子量を有するＰＥＧが挙げられる。分枝状ＰＥＧは、高分子量で容易に入手可能である。当業者は、実質的に水溶性の非ペプチド性のポリマー骨格についての上記リストが排除ではなく例示にすぎず、そして上記の性質を有する全てのポリマー材料が意図されることを認識している。
【００３３】
用語「ＰＥＧ」は、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ単位を有する水溶性の非ペプチド性ポリマーを含む、直鎖状、マルチアーム状、または分枝状のポリマー骨格に対して広く言及される。ポリマーα，ω−ジヒロドキシポリ（エチレングリコール）は、ＨＯ−ＰＧＥ−ＯＨとして簡易形式で示され得る。−ＰＥＧ−の記号は、以下の構造単位：−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−（ｎは、代表的に、約３〜約２０００の範囲である）を示すことが理解される。ＰＥＧファミリーのポリマーは、一般的に、水および多くの有機溶媒への溶解性、毒性の欠如、および免疫原性の欠如の特性を示す。用語ＰＥＧは、包括的であり、そして直鎖状、分枝状、またはマルチアームの任意の形態のポリ（エチレングリコール）（アルコキシＰＥＧ、二官能性ＰＥＧ、フォーク状ＰＥＧ、分枝状ＰＥＧ、ペンダント状ＰＥＧ、または分解可能な連結を含むＰＥＧを含む）を含むことが理解されるべきである。
【００３４】
本明細書に記載される任意の形態のＰＥＧは、代表的に、透明、無色、無臭、水溶性、熱安定性、多くの化学薬剤に対して不活性であり、加水分解または変質（ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｅ）せず（特にそのように示されない限り）、そして、一般的に、非毒性である。ポリ（エチレングリコール）は、生物適合性であるとみなされ、すなわち、ＰＥＧは害を引き起こすことなく生存組織または生存生物と共存し得る。より詳細には、ＰＥＧは、実質的に非免疫原性であり、すなわち、身体内で免疫応答を生成する性質を有さないと言われている。身体における何らかの所望の機能を有する分子（例えば、生物学的に活性な薬剤）に取り付けられる場合、ＰＥＧは、その薬剤をマスクする性質を有し、いずれかの免疫応答を低減または消滅させ得、その結果、生物は、その薬剤の存在に耐性を有し得る。ＰＥＧ結合体は、実質的な免疫応答を生成するかまたは凝固もしくは他の望ましくない効果を引き起こす性質を有さない。
【００３５】
エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのランダムコポリマーまたはブロックコポリマーは、本発明の高分子量ポリマーまたは低分子量ポリマーのいずれかのコポリマーを示し、ここで、−ＰＥＧ−は：
−ＣＨ２ＣＨＲＯ（ＣＨ２ＣＨＲＯ）ｃＣＨ２ＣＨＲ−
で置換され、そしてここで、各Ｒは独立してＨまたはＣＨ３であり、そしてｃは分子が小さいか大きいかに依存してｍおよびｎについての上記の通りである。
【００３６】
用語「ポリマー誘導体」は、時々、連結によって接続された高分子量ポリマーセグメントおよび低分子量ポリマーセグメントを有する本発明の高分子量ポリマー生成物を説明するために使用される。この用語は、利便性のための用語にすぎず、示される場合、その生成ポリマーを、その高分子量ポリマーおよび低分子量ポリマーの成分から区別するために使用される。
【００３７】
本発明において有用な１つの形式において、高分子量ポリマーは、ヒドロキシル基を有する一方の末端および官能基Ｚを有する他方の末端で終了する直鎖状ＰＥＧである：
ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｚ
上記ポリマーは、ＨＯ−ＰＥＧ−Ｚとして簡易形式で示され得る。−ＰＥＧ−の記号は、以下の構造単位：
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−
（ｎは、高分子量ポリマーについて２００より大きく、代表的には、約２００〜約２０００の範囲である）を示すことが理解される。このポリマーはまた、Ｒ−（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｚとしてより一般的に示され得る。（Ｐｏｌｙ）ａは、本発明の大ポリマー成分を表し、Ｒは、キャップ部分または適切な反応基もしくは保護された反応基Ｙ’’である。
【００３８】
本発明の高分子量ポリマーとして有用な別の型のＰＥＧ、（Ｐｏｌｙ）ａは、メトキシ−ＰＥＧ−Ｚまたは簡易形式でｍＰＥＧ−Ｚであり、ここで、１つの末端が比較的不活性なメトキシ基であり、他方の末端が官能基Ｚである。ｍＰＥＧの構造は、以下：
ＣＨ３Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｚ
により与えられる。ここで、ｎは上記の通りである。官能基Ｚを有するかあるいはアルキル、アリール、または他の非反応性基もしくは保護基でキャップされた、Ｚ以外のポリマーの他の活性部位を有するｍＰＥＧの使用は、高分子量ポリマーの自己重合化および反応混合物中の他の分子との望ましくない結合を防ぐ。
【００３９】
高分子量ポリマーの官能基Ｚは、Ｚ基が、低分子量ポリマーで見出される対応する反応種ＹまたはＹ’と容易に共有結合を形成し、それによって反応した場合に高分子量ポリマーと低分子量ポリマーとの間に連結Ｘを形成するよう選択される。適切な官能基は以下で議論される。
【００４０】
本発明の実施において有用な形式の例として、低分子量ポリマーは、一方の末端が、高分子量ポリマーのＺ成分と反応した場合に加水分解安定性の連結基を容易に形成し得る官能基ＹまたはＹ’、および生物学的に活性な薬剤と共有結合を形成し得るかまたは生物学的に活性な薬剤との共有結合を形成し得る形態に修飾され得るさらなる官能基ＹまたはＹ’で終了する直鎖状のポリマーである。
Ｙ’−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ
上記ポリマーは、Ｙ’−ＰＥＧ−Ｙとして簡易形式で示され得る。−ＰＥＧ−の記号は、以下の構造単位：
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−
（ｍは、低分子量ポリマーについて、１〜約１２０の範囲であり、代表的には、約６０未満である）を示すことが理解される。より詳細には、このポリマーは、Ｙ’−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙとして示され得る。（Ｐｏｌｙ）ｂは、本発明の小ポリマー成分を表す。低分子量ポリマーの官能基Ｙ’およびＹは、それらが、反応条件下で互いに容易に結合せず、それによって、この低分子量ポリマーの自己重合化を回避するように選択される。許容可能なＹ’およびＹ基は、以下でより十分に詳述される。
【００４１】
以下は、それらの化学においてＰＥＧに緊密に関連し、そしてまた、ポリマー骨格として使用され得る。
【００４２】
ポリマー骨格はまた、代表的に、中心分枝コア部分および中心コアに連結された複数のポリマー鎖（好ましくは、直鎖状ポリマー鎖）を有する、分枝状構造を含み得る。１つの実施形態において、ＰＥＧは、例えば、種々のポリオール中心コア構造（例えば、グリセロール、グリセロールオリゴマー、ペンタエリスリトール、およびソルビトール）にエチレンオキシドを付加することによって調製された分枝形態で使用される。ポリマー鎖への結合に利用可能な複数のヒドロキシル基を提供する任意のポリオールが、本発明の実施において使用され得る。ポリオール性分枝状コア構造は、約３〜約１００個、代表的に約３〜約２０個の利用可能なヒドロキシル基を提供し得、その結果、分枝状ポリマー構造は、約３〜約１００個のポリマー鎖を有する。この型の分枝状ポリ（エチレングリコール）分子は、一般式においてＲ（−ＰＥＧ−ＯＨ）ａとして示され得る。ここでＲは、中心コア部分（例えば、グリセロール、グリセロールオリゴマー、およびペンタエリスリトール）に由来し、「ａ」は、アームの数（代表的には、約３〜約２０）を示す。
【００４３】
高分子量ポリマーとして使用するために、分枝状ＰＥＧのヒドロキシル基は、通常、低分子量ポリマーとの混合の前に官能基Ｚに変換される。分枝状またはマルチアームの高分子量ポリマーは、形式Ｒ（−ＰＥＧ−Ｚ）ａを有し、そして、分枝の程度または活性基を有するアームの数に依存して、約３〜約２０個の本発明の低分子量ポリマーと結合し得る。分枝状分子の中心コア部分は、多くのアミノ酸のいずれか（例えば、リジン）に由来し得る。ここで、この中心コア部分は、代表的に、ポリマー鎖の結合のために、２つ以上の部位（例えば、アミノ基）を提供する。マルチアームのＰＥＧ分子（例えば、米国特許第５，９３２，４６２号（本明細書中でその全体が参考として援用される）に記載されるＰＥＧ分子）もまた、ポリマー骨格として使用され得る。
【００４４】
高分子量ポリマーのポリマー骨格は、代替的に、フォーク状ＰＥＧを含み得る。フォーク状ＰＥＧの例は、ＰＥＧ−ＡＣＨＺ２により示される。ここで、Ａは連結基であり、Ｚは、規定された長さの原子の鎖によりＣＨに連結された活性化末端基である。国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／０５３３３（その内容は、本明細書中で参考として援用される）は、本発明の１つの実施形態において使用するための、種々のフォーク状ＰＥＧ構造を開示している。Ｚ官能基を分枝した炭素原子に連結する原子の鎖は、テザー基として機能し、例えば、アルキル鎖、エーテル鎖、エステル鎖、アミド鎖、およびそれらの組み合わせを含み得る。Ｚ官能基は、本発明において、低分子量ポリマー上の官能基ＹまたはＹ’のうちの１つと反応し、低分子量ポリマーと高分子量ポリマーとの間に連結を形成するために使用され得る。
【００４５】
低分子量ポリマーまたは高分子量ポリマーのいずれかのポリマー骨格は、場合によって、ＰＥＧ鎖の末端ではなくＰＥＧ骨格に沿って共有結合された、官能基Ｚ、Ｙ、またはＹ’を有するペンダントＰＥＧ分子を含み得る。ペンダント反応基は、直接的にかまたは連結部分（例えば、アルキレン）を通じてＰＥＧ骨格に取り付けられ得る。
【００４６】
１つより多い官能基Ｚを有する高分子量ポリマーの場合、低分子量ポリマー上の対応する官能基ＹまたはＹ’が結合し得る多くの部位が、ポリマーに沿って存在する。それらから生成されたポリマー誘導体は、便宜上、以下：
ＰＥＧ−［Ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｙ］ｑ
として示される。ここで、ＰＥＧは、直鎖状ポリ（エチレングリコール）、アルコキシ−ポリ（エチレングリコール）、分枝状ポリ（エチレングリコール）、またはフォーク状ポリ（エチレングリコール）である。ここで、ＰＥＧは、少なくとも約２００、好ましくは約１０００より多く、そして好ましくは約２０００未満の重合度を有し、Ｘは連結基であり、ｍは１〜１２０、好ましくは６０未満であり、Ｙは生物学的に活性な薬剤への結合のための官能基であり、そしてｑはポリマー末端基の数に等しく、約１〜約５００であり得る。ｑは２である場合、Ｙは同じであっても異なってもよいが、ｑが３または４よりもはるかに大きい場合、Ｙは通常、全て同一の基である。より一般的には、上記構造において、ＰＥＧは、類似の小ポリマー、コポリマー、オリゴマーなどを含むよう、（Ｐｏｌｙ）ａであり得、そしてモノマー単位ＣＨ２ＣＨ２Ｏは、（Ｐｏｌｙ）ｂとして示され得る。
【００４７】
上記形態のＰＥＧに加えて、骨格に１つ以上の弱い連結または分解可能な連結を有する任意の上記ポリマーもまた調製され得る。例えば、加水分解を受け易いポリマー骨格にエステル連結を有するＰＥＧが調製され得る。以下に示されるように、この加水分解は、低分子量のフラグメントへのポリマーの切断を生じる。
−ＰＥＧ−ＣＯ２−ＰＥＧ−＋Ｈ２Ｏ  →  −ＰＥＧ−ＣＯ２Ｈ＋ＨＯ−ＰＥＧ−
同様に、ポリマー骨格は、弱いかまたは分解可能な結合部分を介して、生物学的に活性な薬剤に共有結合し得る。例えば、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸と生物学的に活性な薬剤上のアルコール基との反応によって形成されるエステル結合は、一般的に、薬剤を放出するための生理学的条件下で加水分解する。
【００４８】
ポリマー骨格内の分解性結合またはポリマー骨格を生物学的に活性な薬剤へ結合する分解性結合のいずれかとして有用な他の加水分解性結合としては、カルボネート結合；イミン結合（例えば、アミンおよびアルデヒドの反応から生じる、（例えば、Ｏｕｃｈｉら、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ、３８（１）：５８２−３（１９９７）（これは、本明細書中において参考として援用される））；ホスフェートエステル結合（例えば、アルコールとホスフェート基との反応によって形成される）；ヒドラゾン結合（代表的に、ヒドラジドおよびアルデヒドの反応によって形成される）；アセタール結合（代表的に、アルデヒドとアルコールとの間の反応によって形成される）；オルトエステル結合（例えば、ホルメートとアルコールとの間の反応によって形成される）；ペプチド結合（アミン基（例えば、ＰＥＧのようなポリマーの末端における）およびペプチドのカルボキシル基によって形成される）；ならびにオリゴペプチド結合（例えば、ホスホルアミダイト基（例えば、ポリマーの末端における）およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって形成される）が挙げられる。
【００４９】
多くの他のポリマーはまた、本発明に適切である。非ペプチドでありそして水溶性であるポリマー骨格は、本発明において特に有用である。上で詳述される方法においてＰＥＧの代わりに使用され得る適切なポリマーの例としては、限定しないが、他のポリ（アルキレングリコール）（例えば、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ））、エチレングリコールおよびプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカリド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）（例えば、米国特許第５，６２９，３８４号（これは、その全体が参考として援用される）に記載される）、ならびにこれらのコポリマー、ターポリマー、および混合物が挙げられる。
【００５０】
当業者は、実質的に水溶性のポリマーについての上記リストが、決して排他的ではなく、単に例示であること、および上記の質を有する全てのポリマー性材料が企図されることを理解する。
【００５１】
（Ｘ連結基を形成する成分）
上記のように、この方法および得られる官能性ポリマーは、以下によって表され得る：
Ｒ−（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｚ＋Ｙ’−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙ  →  Ｙ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙ
Ｚは、高分子量ポリマー（Ｐｏｌｙ）ａの官能基化末端基であり、そしてＹおよびＹ’は、低分子量ポリマー（Ｐｏｌｙ）ｂの官能基化末端基である。Ｒは、示されるように、ホモ二官能性ポリマーを作製することが望ましい場合、官能基化末端基Ｚを含み得るか、またはヘテロ二官能性のより大きなポリマーが望ましい場合、異なる基Ｙ’’で活性化された、別の活性化されたより小さなポリマーに後に結合するための保護された活性基を含み得る。
【００５２】
種々の反応性基Ｙ、Ｙ’、Ｙ’’およびＺとしては、限定しないが、以下が挙げられる：Ｎ−スクシンイミジルカルボネート（例えば、米国特許第５，２８１，６９８号、同第５，４６８，４７８号を参照のこと）、アミン（例えば、Ｂｕｃｋｍａｎｎら、Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８２：１３７９（１９８１），Ｚａｐｌｉｐｓｋｙら、Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１９：１１７７（１９８３）を参照のこと）、ヒドラジド（例えば、Ａｎｄｒｅｓｚら、Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１７９：３０１（１９７８）を参照のこと）、スクシンイミジルプロピオネートおよびスクシンイミジルブタノエート（例えば、Ｏｌｓｏｎら、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ１７０−１８１，Ｈａｒｒｉｓ  ＆  Ｚａｐｌｉｐｓｋｙ  Ｅｄｓ．，ＡＣＳ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９９７を参照のこと；米国特許第５，６７２，６６２号も参照のこと）、スクシンイミジルスクシネート（例えば、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．７：１７５（１９８４）およびＪｏｐｐｉｃｈら、Ｍａｃｒｏｌｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：１３８１（１９７９）を参照のこと）、スクシンイミジルエステル（例えば、米国特許第４，６７０，４１７号を参照のこと）、ベンゾトリアゾールカルボネート（例えば、米国特許第５，６５０，２３４号を参照のこと）、グリシジルエーテル（例えば、Ｐｉｔｈａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９４：１１（１９７９），Ｅｌｌｉｎｇら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３：３５４（１９９１）を参照のこと）、オキシカルボニルイミダゾール（例えば、Ｂｅａｕｃｈａｍｐら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３１：２５（１９８３），Ｔｏｎｄｅｌｌｉら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １：２５１（１９８５）を参照のこと），ｐ−ニトロフェニルカルボネート（例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１１：１４１（１９８５）；およびＳａｒｔｏｒｅら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２７：４５（１９９１）を参照のこと）、アルデヒド（例えば、Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄ．２２：３４１（１９８４）、米国特許第５，８２４，７８４号、米国特許第５，２５２，７１４号）、マレイミド（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：３４３（１９９０）、Ｒｏｍａｎｉら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ２：２９（１９８４））、およびＫｏｇａｎ，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍ．２２：２４１７（１９９２）を参照のこと）、オルトピリジル−ジスルフィド（例えば、Ｗｏｇｈｉｒｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．４：３１４（１９９３）を参照のこと）、アクリロール（ａｃｒｙｌｏｌ）（例えば、Ｓａｗｈｎｅｙら、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２６：５８１（１９９３）を参照のこと）、ビニルスルホン（例えば、米国特許第５，９００，４６１号を参照のこと）。上記参考文献の全てが本明細書中において参考として援用される。
【００５３】
末端基ＺおよびＺと反応性のＹ、Ｙ’、またはＹ’’の基は、末端基が、反応条件下で互いに容易に反応して、連結基Ｘ（これは、代表的に、生理学的条件下で加水分解的に安定である）を形成するという意味で、末端基部分が相補的であるように選択される。これは、高分子量ポリマーを低分子量ポリマーに結合し、それによって全体的に高分子量の官能基化されたポリマー誘導体を形成する、連結基Ｘの形成である。
【００５４】
Ｙ、Ｙ’、およびＹ’’は、それらが互いに反応性である限り、同じであっても異なっていても良い。さらに、少なくとも１つの反応性基ＹまたはＹ’は、完全なポリマーに官能性を与えるために、Ｚと反応するべきではない。
【００５５】
低分子量のポリマー上の官能基または化学的反応性基は、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、活性エステル、活性カルボネート、アセタール、アルデヒド、アルデヒドハイドレート、アルケニル、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、活性スルホン、アミン、保護されたアミン、ヒドラジド、保護されたヒドラジド、チオール、保護されたチオール、カルボン酸、保護されたカルボン酸、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ビニルスルホン、ジチオピリジン、ビニルピリジン、ヨードアセトアミド、エポキシド、グリオキサール、ジオン、メシレート、トシレート、チオスルホネート、およびトレシレート（ｔｒｅｓｙｌａｔｅ）からなる群より選択され得る。
【００５６】
反応性末端基は、以下の１つまたは組み合わせから選択され得る：−（ＣＨ２）ｒＣＯ２Ｈ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２ＮＳ、−（ＣＨ２）ｒ’ＣＯ２Ｂｔ、−（ＣＨ２）ｒＣＨ（ＯＲ）２、−（ＣＨ２）ｒＣＨＯ、−（ＣＨ２）２−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｒＭ、−（ＣＨ２）ｒ−Ｓ−ＳＯ２−Ｒ（ここで、ｒは、１〜５であり、ｒ’は、０〜５であり、Ｒは、アリールまたはアルキルであり、ＮＳは、Ｎ−スクシンイミジルであり、Ｂｔは、１−ベンゾトリアゾールであり、そしてＭは、Ｎ−マレイミジルである）。
【００５７】
代表的には、連結部分Ｘは、親水性であり、そして短い。しかし、連結基は、親水性であるかまたは疎水性であるかに関わらず、連結基がポリマーの性質を実質的に変えない限り、疎水性成分から調製され得る。すなわち、ＰＥＧの場合、連結基は、ＰＥＧの定義において上記されるように、その性質を変更すべきでない。
【００５８】
（反応条件）
Ｘ連結基の形成における、ＺおよびＹ、Ｙ’、またはＹ’’の末端基の反応のための媒体を提供する適切な溶媒としては、限定しないが、以下が挙げられる：
トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ベンゼン、キシレン、および類似の化学的特徴を有する溶媒。
【００５９】
本発明の改変されそして結合された低分子量ポリマーが、類似の改変されたかまたは結合された高分子量の以前のポリマーよりも、より効率的でより良い結果で濾過、分離および精製され得ることが発見された。一般的に、類似の高分子量のポリマーを用いるよりも、低分子量のポリマーの混合物を成分種に分離することが容易である。
【００６０】
末端基の改変および結合は、一般的に、多工程プロセスであり、官能基化のそれぞれの工程が、ポリマー性不純物を生じる。精製が効果がない場合（これは、高分子量ポリマーを扱う場合であり得る）、不純物は、ポリマーの官能基化全体を通して受け入れ不可能なレベルまで蓄積する。最初に低分子量ポリマー上で官能基化および精製のプロセスを行い、次いで、精製された低分子量ポリマーを本発明に従って高分子量ポリマーにつなげることによって、高分子量ポリマーに関係する処理工程は、最小化され、全体的に所望の純度の高分子量の官能基化されたかまたは結合されたポリマー誘導体を生じる。
【００６１】
（本発明の高分子量の活性化ポリマーを形成する方法）
少なくとも１つの官能基Ｚを有する、高分子量の水溶性非ペプチドポリマーは、低分子量の代表的にはオリゴマー性水溶性非ペプチドポリマー（少なくとも２つの官能基Ｙ’およびＹを有し、これらは、ＹがＹ’と反応性ではなく、そしてＺが、ＹまたはＹ’のうちの少なくとも１つと反応性である限り、同じであっても異なっていても良い）に共有結合する。本発明はまた、官能基化ポリマー誘導体が本発明に従って生成された後に、生物学的に活性な薬剤とポリマー誘導体とのの結合を具体化する。
【００６２】
一般的に、この方法および得られる官能基化ポリマーは、以下により表される：
（Ｐｏｌｙ）ａ−Ｚ＋Ｙ’−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙ  →  （Ｐｏｌｙ）ａ−Ｘ−（Ｐｏｌｙ）ｂ−Ｙ
ここで、（Ｐｏｌｙ）ａは、少なくとも約２００の繰り返し単位、代表的には、少なくとも約１０００の繰り返し単位、そしてより代表的には、１０００と２０００との間の繰り返し単位を有し；そして（Ｐｏｌｙ）ｂは、約１２０の繰り返し単位、代表的には、６０未満の繰り返し単位を有する。ＹおよびＹ’は、Ｙ’がＹと反応性ではなく、そして官能基である限り、同じであっても異なっていても良く、そしてＸは、ＺおよびＹまたはＹ’成分の反応によって形成される連結分子である。上記例において、Ｚは、Ｙ’と反応性であり、連結Ｘを形成する。（Ｐｏｌｙ）ａは、さらに官能基化されて、Ｙ反応性基がそれぞれの末端にある、ホモ二官能性ポリマーを生成する。さらなる基が反応から保護される場合、保護基は、得られるポリマー結合体から除去されて、ヘテロ二官能性ポリマーを作製し得る。
【００６３】
本発明の得られるポリマー誘導体は、低分子量水溶性ポリマーセグメントに、連結基を介して共有結合される、高分子量水溶性ポリマーセグメントを含む。低分子量ポリマーセグメントは、官能基化末端基Ｙを有し、この末端きに加えて、これは、高分子量ポリマーセグメントと有する連結を提供する。低分子量ポリマーセグメント上のさらなる官能基化末端基Ｙは、生物学的に活性な薬剤と共有結合するためまたはこのような基に変換するための連結基を提供する。
【００６４】
以下は、本発明の非制限的な例として提供される。
【００６５】
（実施例１．α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−メタンスルホネートＰＥＧ（３４００）の合成）
α−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−ヒドロキシＰＥＧ（３４００）（ＭＷ３３１８Ｄａ、４．０ｇ、０．００１２モル）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐ．）を、乾固するまで３５℃で、ロータリーエバポレーターにおいてクロロホルム（８０ｍｌ）中で共沸し、そしてクロロホルム（５０ｍｌ）を残渣のシロップに添加した。この溶液を、アルゴン下で４℃まで冷却し、そしてトリエチルアミン（０．３１ｍｌ、０．００２２モル）を注入し、続いて、メタンスルホニルクロリド（０．１５ｍｌ、０．００１９モル）をゆっくり注入した。反応混合物を一晩アルゴン下で攪拌し、一方、浴を周囲温度まで上げた。無水炭酸ナトリウム（４．０ｇｍ）を反応混合物に添加し、そして得られた溶液を室温で１時間攪拌した。次いで、この混合物を濾過し、そして濾液を乾固するまで濃縮した。イソプロパノール（４０ｍｌ）を添加し、そして沈殿した生成物を濾過によって収集し、そして減圧下で乾燥した。収量：３．７ｇのα−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−メタンスルホネートＰＥＧ（３４００）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．３７ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣ（ＣＨ３）３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．３１ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２ＳＯ２−），６．７６ｐｐｍ（−ＣＨ２ＮＨ−ＣＯ−）。この実施例は、低分子量ポリマー、α−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−メタンスルホネートＰＥＧ（３４００）の官能基Ｙが、良好な収率の改変された低分子量ポリマーを用いてどのように改変されるかを実証する。
【００６６】
（実施例２．α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）の合成）
α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−メタンスルホネートＰＥＧ（３４００）（実施例１の生成物）（１．０ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、乾固するまで３５℃で、ロータリーエバポレーターにおいてクロロホルム（３０ｍｌ）中で共沸し、そして無水エタノール（１５ｍｌ）を残渣のシロップに添加した。ｐ−トルエンチオスルホン酸カリウム（２９２ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの混合物を一晩アルゴン下で攪拌した。溶媒を４０℃でロータリーエバポレーターで除去し、そして残渣を、３０分間減圧下で乾燥させた。粗生成物を、１００ｍｌの１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝溶液（１０重量％ＮａＣｌを含む）（ｐＨ５．８）中に溶解させ、そして得られた溶液をジクロロメタン（１００ｍｌ×３）で抽出した。ジクロロメタン相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濾液を、ロータリーエバポレーターでほぼ乾固するまで濃縮した。生成物を、イソプロパノール／エーテル（４０ｍｌ／２０ｍｌ）の添加によって沈殿させ、濾過によって回収し、そして減圧下で乾燥させた。収量：０．７ｇのα−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）。ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．３７ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣ（ＣＨ３）３），２．４３ｐｐｍ（ｓ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），６．７６ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２ＮＨ−ＣＯ−），７．４９ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），７．８２ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ）。この実施例は再び、低分子量ポリマー、α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−メタンスルホネートＰＥＧ（３４００）の官能基Ｙが、良好な収率の改変された低分子量ポリマーを用いてどのように改変されるかを実証する。
【００６７】
（実施例３．α−ＮＨ２−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）の合成）
α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）（実施例２の生成物）（０．７ｇ）を、アルゴン下で、無水ジクロロメタン（３．５ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．５ｍｌ）中に溶解させた。この溶液を室温で１時間攪拌し、そして乾固するまで濃縮した。イソプロパノール（２０ｍｌ）を添加し、そして沈殿した生成物を濾過によって収集し、そして減圧下で乾燥した。収量：０．６ｇのα−ＮＨ２  アミノ−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．４３ｐｐｍ（ｓ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），２．９５ｐｐｍ（ｔ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），７．４９ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），７．８２ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ）。この実施例は再び、低分子量ポリマー、α−ｔ−Ｂｏｃ  アミノ−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートＰＥＧ（３４００）の官能基Ｙが、良好な収率の改変された低分子量ポリマーを用いてどのように改変されるかを実証する。
【００６８】
（実施例４．ｍＰＥＧ（２３．４ｋＤａ）−ｐ−トルエンチオスルホネートの合成）
ＭＰＥＧ（２０ｋＤａ）−１−ベンゾトリアゾール（８１３ｍｇ、ＭＷ２１ｋＤａ、０．０３９ｍｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐ．）およびＰＥＧ（３４００）−α−ＮＨ２−ω−ｐ−トルエンチオスルホネート（実施例３の生成物）（ＭＷ  ３８０５Ｄａ、２００ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で無水ジクロロメタン（２０ｍｌ）中に溶解させ、そしてトリエチルアミン（３０．８μｌ、０．２２ｍｍｏｌ）を注入した。この溶液を室温で一晩攪拌し、次いで、乾固するまで濃縮した。２−プロパノール（１０ｍｌ）を添加し、そして沈殿した生成物を濾過によって収集し、そして減圧下で乾燥させた。収量：８４３ｍｇ。５０ｍＬの脱イオン水中の粗製のｍＰＥＧ（２３．４ｋＤａ）−ｐ−トルエンチオスルホネート（５６０ｍｇ）を、５０ｍｌ  Ｐｏｒｏｓ媒体をパックしたカラムに充填した。カラムを１００ｍｌ脱イオン水で溶出した。塩化ナトリウム（１５ｇ）をこの溶出液に添加し、そして得られた溶液をジクロロメタン（１００ｍｌ×３）で抽出した。抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濾液を、ロータリーエバポレーターでほぼ乾固するまで濃縮した。エチルエーテル（５０ｍｌ）を添加して、生成物を沈殿させた。生成物を濾過によって収集し、そして減圧下で乾燥させた。収量：４９５ｍｇのｍＰＥＧ（２３．４ｋＤａ）−ｐ−トルエンチオスルホネート。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．４３ｐｐｍ（ｓ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），７．２３ｐｐｍ（ｔ，−ＮＨＣＯＯ−），７．４９ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ），７．８２ｐｐｍ（ｄｄ，ＣＨ３−ＣＨ２＝ＣＨ２／Ａｒ）。この実施例は、Ｚ官能基（ベンゾトリアゾール）とＹ’官能基（アミン）とを反応させて、高分子量ポリマーセグメントと低分子量ポリマーセグメントとの間に連結基を形成することによる、高分子量ポリマー、ＭＰＥＧ（２０ｋＤａ）−１−ベンゾトリアゾールと改変低分子量ポリマー、ＰＥＧ（３４００）−α−ＮＨ２−ω−ｐ−トルエンチオスルホネートとの結合を実証する。
【００６９】
（実施例５：α１−アンチトリプシンのＰＥＧ化（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ））  １００ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２、１ｍｌ）中のα１−アンチトリプシン（１ｍｇ、Ｓｉｇｍａ，ＭＷ  ２５ｋＤａ）の溶液に、２．８ｍｇのｍＰＥＧ  ｐ−トルエンチオスルホネート（実施例４の生成物）（２４ｋＤａ）を添加し、そしてこの溶液を室温で一晩撹拌した。キャピラリー電気泳動によって、ＰＥＧ  α１−アンチトリプシン結合体が、収率３６％で形成されたことが示された。ＳＤＳゲル電気泳動により、ＰＥＧ結合体が存在することも示された。このＰＥＧ結合体をβ−メルカプトエタノールで処理することにより、ゲル電気泳動によって証明されるように、α１−アンチトリプシンが形成し、従って、ＰＥＧ  α１−アンチトリプシン結合体中のジスルフィド結合の存在が示された。この実施例は、生物学的に活性な因子であるα１−アンチトリプシンと、実施例４の高分子量ポリマー誘導体との、官能性末端基Ｙであるｐ−トルエンチオスルホネートを介する結合を例示する。
【００７０】
（実施例６：ｍ−ＰＥＧ（２２ＫＤａ）−プロピオン酸）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（２．０ｇ、０．０００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、ＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸（０．２４ｇ、０．０００１２ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびトリエチルアミン（０．０６０ｍｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで、この混合物を濾過し、そして溶媒を乾固するまでエバポレートした。この粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、そしてイソプロピルアルコールで沈殿させた。湿った生成物を減圧下で乾燥した。収量１．９ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．４４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。陰イオン交換クロマトグラフィーによって、ｍ−ＰＥＧ（２２ＫＤａ）−プロピオン酸（９３％）およびｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）（７％）を得た。この実施例は、高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートと低分子量ポリマーのＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸との、官能性カートネート（Ｚ）およびアミノ（Ｙ’）末端基を介する結合を例示する。
【００７１】
（実施例７：ｍ−ＰＥＧ（２２ＫＤａ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）
無水塩化メチレン（１０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２２ＫＤａ）−プロピオン酸（実施例６の生成物）（１．１ｇ、０．００００５０ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．００６３ｇ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加し、続いて１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（塩化メチレン中１．０Ｍ溶液、０．０５ｍｌ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、アルゴン下、室温で一晩撹拌した。次いで、この混合物を濾過し、そして溶媒をエバポレートした。粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、イソプロピルアルコールで沈殿させ、そして減圧下で乾燥した。収量０．９ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．８１ｐｐｍ（ｓ，−ＣＨ２−ＣＨ２−（スクシネート）），２．９２ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０３ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、プロピオン酸からプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルへの、実施例６で生成されたポリマーの官能基（Ｙ）の変更を例示する。
【００７２】
（実施例８：ＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸メチルエステル）
無水塩化メチレン（１００ｍｌ）中のＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸（１０ｇ、０．００５０ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．３０ｇ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１．０ｇ）、メチルアルコール（３．２ｇ、０．１００ｍｏｌ）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（塩化メチレン中１．０Ｍ溶液、７．５ｍｌ、０．００７５ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、アルゴン下、室温で一晩撹拌した。次いで、この混合物を、約５０ｍｌになるまで濃縮し、濾過し、そして８００ｍｌの冷ジエチルエーテルに添加した。沈殿した生成物を濾去し、そして減圧下で乾燥した。収量９．５ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．５３ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），２．９５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−アミン），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格）。この実施例は、低分子量ポリマーのＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸の官能性末端基（Ｙ）の、プロピオン酸からプロピオン酸メチルエステルへの変更を例示する。
【００７３】
（実施例９：ｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸メチルエステル）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（３０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（３．０ｇ、０．０００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、ＰＥＧ（２ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオン酸メチルエステル（実施例８の生成物）（０．２４ｇ、０．０００１２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０６０ｍｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン下、室温で一晩撹拌した。次いで、この混合物を濾過し、そして溶媒をエバポレートした。粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、イソプロピルアルコールで沈殿させ、そして減圧下で乾燥した。収量２．８ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．５３ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、実施例８で生成された低分子量ポリマーと、高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（３０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートとの、Ｚ（ベンゾトリアゾールカートネート）およびＹ’（アミノ官能基）を介する結合を例示する。
【００７４】
（実施例１０：ｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸）
ｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸メチルエステル（実施例９の生成物）（２．８ｇ、０．００００８２ｍｏｌ）を、２０ｍｌの脱イオン水に溶解し、そして０．５ＭのＮａＯＨ溶液を用いて、ｐＨを１２．０に調整した。この反応混合物を、ｐＨ＝１２．０＋／−０．１で１．５時間撹拌した。次いで、塩化ナトリウム（３ｇ）を添加し、そして５％リン酸を用いてｐＨを３に調整した。生成物を、塩化メチレンで３回抽出し、そして合わせた抽出物を、無水塩化マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、そして生成物を減圧下で乾燥した。収量１．６ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．４４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。陰イオン交換クロマトグラフィーによって、ｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸（９７．５％）およびｍ−ＰＥＧ（３０ＫＤａ）（２．５％）を得た。この実施例は、実施例９で生成されたポリマーの官能基（Ｙ）の、プロピオン酸メチルエステルからプロピオン酸への変更を例示する。
【００７５】
（実施例１１：ｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）
無水塩化メチレン（１０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（３２ＫＤａ）−プロピオン酸（実施例１０の生成物）（１．６ｇ、０．００００５０ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．００６３ｇ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加し、続いて１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（塩化メチレン中１．０Ｍ溶液、０．０５ｍｌ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、アルゴン下、室温で一晩撹拌し、濾過し、そして溶媒をエバポレートした。粗生成物を塩化メチレンに溶解し、イソプロピルアルコールで沈殿させ、そして減圧下で乾燥した。収量０．９ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．８１ｐｐｍ（ｓ，−ＣＨ２−ＣＨ２−（スクシネート）），２．９２ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−）、３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０３ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、実施例９で生成されたポリマーの官能基（Ｙ）の、プロピオン酸からプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルへの変更を例示する。
【００７６】
（実施例１２：ｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−ブタン酸）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中のｍ−ｐＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（２．０ｇ、０．０００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、ＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミノ−ω−ブタン酸（０．４５ｇ、０．０００１２ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびトリエチルアミン（０．０６０ｍｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで、この混合物を濾過し、そして溶媒を乾固するまでエバポレートした。粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、イソプロピルアルコールで沈殿させ、そして生成物を減圧下で乾燥した。収量２．２ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．７２ｐｐｍ（ｑ，ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−），２．２４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．４０ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。陰イオン交換クロマトグラフィーによって、ｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−ブタン酸（９２％）およびｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）（８％）を得た。この実施例は、低分子量ポリマーのＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミノ−ω−ブタン酸と高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートとの、ベンゾトリアゾールカートネート（Ｚ）およびアミノ（Ｙ’）官能基を介する結合を例示する。
【００７７】
（実施例１３：ｍ−ＰＥＧ（２２ＫＤａ）−ブタン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）
無水塩化メチレン（１０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−ブタン酸（実施例１２の生成物）（１．１７ｇ、０．００００５０ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．００６３ｇ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加し、続いて１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（塩化メチレン中１．０Ｍ、０．０５ｍｌ、０．００００５５ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、アルゴン下、室温で一晩撹拌し、濾過し、そして溶媒を乾固するまでエバポレートした。粗生成物を塩化メチレンに溶解し、イソプロピルアルコールで沈殿させ、そして減圧下で乾燥した。収量１．０ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．８３ｐｐｍ（ｑ，ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−），２．７０ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−ＣＯＯ−），２．８１ｐｐｍ（ｓ，−ＣＨ２−ＣＨ２−（スクシネート）），２．９２ｐｐｍ，３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０３ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、実施例１２で生成されたポリマーの官能基（Ｙ）の、ブタン酸からブタン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルへの変更を例示する。
【００７８】
（実施例１４：ｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−アミン）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（２．０ｇ、０．０００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、トリエチレングリコールジアミン（ＦＷ＝１４８．２１）（０．３ｇ、０．００２０ｍｏｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン下、室温で２時間撹拌した。次いで、溶媒を乾固するまでエバポレートし、そして粗生成物を塩化メチレンに溶解し、そしてイソプロピルアルコールで沈殿させた。この生成物を、減圧下で乾燥した。収量１．８ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．６４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−アミン−），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。陽イオン交換クロマトグラフィーによって、ｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−アミン（９７．５％）を得た。この実施例は、低分子量ポリマーのトリエチレングリコールジアミンと高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートとの、ベンゾトリアゾールカートネート（Ｚ）およびアミノ（Ｙ’）官能基を介する結合を例示する。
【００７９】
（実施例１５：ＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミノ−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール）
トルエン（２０ｍｌ）およびジクロロメタン（５ｍｌ）の混合物中のＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−ヒドロキシ−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（ＮＯＦ）（１．０ｇ、０．０００２９４ｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．０７ｍｌ。０．０００５０２ｍｏｌ、化学量論量の１７１％）およびメタンスルホニルクロリド（０．０２８ｍｌ、０．０００３６２ｍｏｌ、化学量論量の１２３％）を添加し、そして得られた混合物を、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。この混合物を濾過し、そして溶媒を減圧下で留去した。残渣を、１６ｍｌの濃水酸化アンモニウムおよび１．６ｇの塩化アンモニウムの混合物に添加し、そして室温で４２時間撹拌した。反応生成物を、ジクロロメタンで抽出した（３×２０ｍｌ）。抽出物を、５ｍｌの１Ｍ塩酸、５ｍｌの蒸留水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。次いで、溶媒を減圧下で蒸留し、０．７８ｇのＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミン塩酸塩−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタールを得た。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．１０ｐｐｍ（ｔ，ＣＨ３−，アセタール），１．７４ｐｐｍ（ｑ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−，アセタール），２．９４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−アミン塩酸塩），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．５５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ−，アセタール），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、低分子量ポリマーのＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−ヒドロキシ−ω−プロピオンアルデヒドの官能性末端基（Ｙ’）の、ヒドロキシ基からアミン基への変更を例示する。
【００８０】
（実施例１６：ｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（２．０ｇ、０．０００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、ＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミン−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（０．３６ｇ、０．０００１０６ｍｏｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで、溶媒を乾固するまでエバポレートした。粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、そしてイソプロピルアルコールで沈殿させた。湿った生成物を、減圧下で乾燥した。収量１．８ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．１０ｐｐｍ（ｔ，ＣＨ３−，アセタール），１．７４ｐｐｍ（ｑ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−，アセタール），３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），４．５５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ−，アセタール），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、実施例１５で生成された低分子量ポリマーのＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミン−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタールと高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートとの、ベンゾトリアゾールカートネートＺおよびアミノ（Ｙ’）官能基を介する結合を例示する。
【００８１】
（実施例１７：ｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒド）
ｍ−ＰＥＧ（２３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（実施例１６の生成物）（１．８ｇ）を、２０ｍｌの水に溶解し、そして希リン酸を用いて、この溶液のｐＨを３に調整した。この溶液を室温で３時間撹拌し、そして０．５Ｍ水酸化ナトリウムを使用して、この溶液のｐＨを７に調整した。生成物を、塩化メチレンで抽出し、この抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そして溶媒を減圧下で留去した。収量：１．６ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．６０ｐｐｍ（ｄｔ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−，アルデヒド），３．２４ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｍ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−），９．６５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ，アルデヒド）。この実施例は、実施例１６で生成されたポリマーの官能基（Ｙ）の、プロピオンアルデヒドジエチルアセタールからプロピオンアルデヒドへの変更を例示する。
【００８２】
（実施例１８：分枝鎖ＰＥＧ２（４３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール）
塩化メチレン（８ｍｌ）中の分枝鎖ＰＥＧ２（４０ＫＤａ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１．０ｇ，０．００００２５ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、ＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミン塩酸塩−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（０．１２ｇ、０．００００３５２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０１ｍｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで、溶媒を乾固するまでエバポレートした。粗生成物を、塩化メチレンに溶解し、ジエチルエーテルで沈殿させた。湿った生成物を減圧下で乾燥した。収量０．８３ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：１．１０ｐｐｍ（ｔ，ＣＨ３−，アセタール），１．７４ｐｐｍ（ｑ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−，アセタール），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．５５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ−，アセタール）。この実施例は、低分子量ポリマーのＰＥＧ（３．４ＫＤａ）−α−アミン塩酸塩−ω−プロピオンアルデヒドジエチルアセタールと高分子量分枝鎖ポリマーのＰＥＧ２（４０ＫＤａ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルとの、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｚ）およびアミン塩酸塩（Ｙ’）官能基を介する結合を例示する。
【００８３】
（実施例１９：分枝鎖ＰＥＧ２（４３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒド）  分枝鎖ＰＥＧ２（４３．４ＫＤａ）−プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（実施例１８の生成物）（０．４ｇ）を、１０ｍｌの水に溶解し、そして希リン酸を用いて、この溶液のｐＨを３に調整した。この溶液を室温で３時間撹拌し、そして０．５Ｍ水酸化ナトリウムを使用して、この溶液のｐＨを７に調整した。生成物を、塩化メチレンで抽出した。この抽出物を、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そして溶媒を減圧下で留去した。収量０．３５ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．６０ｐｐｍ（ｄｔ，−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−，アルデヒド），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），９．６５ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ，アルデヒド）。この実施例は、実施例１８で生成されたポリマーの末端基（Ｙ）の、プロピオンアルデヒドジエチルアセタールからプロピオンアルデヒドへの変更を例示する。
【００８４】
（実施例２０：ｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−マレイミド）
塩化メチレン（２００ｍｌ）中のｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネート（２０．０ｇ、０．００１ｍｏｌ）（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の溶液に、マレイミド−トリエチレングリコール−アミンＴＦＡ（０．６８ｇ、０．００２ｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（０．４４ｍｌ、０．００４ｍｏｌ）を添加した。この反応物を、アルゴン下、室温で４時間撹拌した。次いで、溶媒を乾固するまでエバポレートし、そしてイソプロピルアルコール（１０００ｍｌ）で沈殿させた。この沈殿物を、吸引濾過によって回収し、そして減圧下で一晩乾燥した。収量１９．５ｇ。ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：３．１１ｐｐｍ（ｑ，−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２４ｐｐｍ（ｓ，−ＯＣＨ３），３．５１ｐｐｍ（ｓ，ＰＥＧ骨格），４．０４ｐｐｍ（ｔ，−ＣＨ２−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−），７．０４（ｓ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ＝ＣＨ＝−（Ｃ＝Ｏ）−），７．１１ｐｐｍ（ｔ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）。この実施例は、高分子量ポリマーのｍ−ＰＥＧ（２０ＫＤａ）−ベンゾトリアゾールカートネートと低分子量ポリマーのマレイミド−トリエチレングリコール−アミンＴＦＡとの、ベンゾトリアゾールカートネート（Ｚ）およびアミン（Ｙ’）官能基を介する結合を例示する。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004525212.tif 000037
【国際調査報告】
2004525212.tif 000038
2004525212.tif 000039
2004525212.tif 000040