(57)【要約】本発明は、細胞小器官の膜安定性および／または機能に関与するポリペプチドをコードする核酸分子において、前記核酸分子が（ａ）本発明において開示したアミノ酸配列をコードする核酸分子の相補鎖と、定められた条件下でハイブリダイズし；（ｂ）本発明で定義された核酸分子の相補鎖と、定められた条件下でハイブリダイズし；（ｃ）（ａ）の核酸分子に対して縮重し；（ｄ）細胞小器官の膜安定性および／または機能に関与するポリペプチドの一部分であり、かつ推定される膜貫通ドメイン領域を含有する、少なくとも１つの、有利には少なくとも２つの、より有利には少なくとも３つの、特に有利には少なくとも４つの、非常に有利には少なくとも５つの、および最も有利には少なくとも６つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし、（ｅ）前記ポリペプチドを示すアミノ酸配列と、少なくとも８５％、有利には少なくとも９０％、より有利には少なくとも９５％、特に有利には少なくとも９８％、および９９．６％まで相同なポリペプチドをコードし；（ｇ）本発明によって開示されたアミノ酸配列と、少なくとも３５％、有利に少なくとも５０％、より有利に少なくとも６０％、特に有利に少なくとも７０％、非常に有利に少なくとも８０％、特に有利に少なくとも９０％、さらに有利に少なくとも９５％、および最も有利に少なくとも９９％相同なポリペプチドをコードし；（ｈ）突然変異により（ａ）〜（ｇ）の核酸分子と異なり、この際、前記突然変異は、コードされるポリペプチドの変化、欠失、重複または未熟終結を起こすか；あるいは（ｉ）本発明で開示された配列を有することを特徴とする、細胞小器官の膜安定性および／または機能に関与するポリペプチドをコードする核酸分子。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞小器官の膜安定性および／または機能に関与するポリペプチドをコードする核酸分子において、前記核酸分子が
（ａ）０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳを含有する溶液中、６５℃で、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ１４および／またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５２のアミノ酸配列をコードする核酸分子および／またはその相補鎖とハイブリダイズし；
（ｂ）０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳを含有する溶液中、６５℃で、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、７または５３、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３および／またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５１のアミノ酸配列をコードする核酸分子および／またはその相補鎖とハイブリダイズし；
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸分子と縮重し；
（ｄ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０、６１および６２に記載される少なくとも１つの、有利には少なくとも２つの、より有利には少なくとも３つの、特に有利には少なくとも４つの、非常に有利には少なくとも５つの、および最も有利には少なくとも６つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし、
（ｅ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ８と少なくとも８５％、有利には少なくとも９０％、より有利には少なくとも９５％、特に有利には少なくとも９８％、および９９．６％まで相同なポリペプチドをコードし、
（ｆ）ＳＥＱＩＤ　ＮＯ：５４と少なくとも９０％、有利には少なくとも９５％、より有利には少なくとも９８％、および９９．６％まで相同なポリペプチドをコードし、
（ｇ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０，１２、１４または５２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列と、少なくとも３５％、有利に少なくとも５０％、より有利に少なくとも６０％、特に有利に少なくとも７０％、非常に有利に少なくとも８０％、特に有利に少なくとも９０％、さらに有利に少なくとも９５％、および最も有利に少なくとも９９％相同なポリペプチドをコードし、
（ｈ）突然変異により（ａ）〜（ｇ）の核酸分子と異なり、この際、前記突然変異は、コードされるポリペプチドの変化、欠失、重複または未熟終結を起こし、
（ｉ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、１１、１３または５１に記載される配列を有する
ことを特徴とする、細胞小器官の膜安定性および／または機能に関与するポリペプチドをコードする核酸分子。
【請求項２】
ＤＮＡであることを特徴とする、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与する前記ポリペプチドが、ミトコンドリアおよび／またはペルオキシソーム中で発現されることを特徴とする、請求項１または２に記載の核酸分子。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、前記膜の維持に関与していることを特徴とする、請求項３に記載の核酸分子。
【請求項５】
細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与する前記ポリペプチドが、輸送体分子および／または輸送体分子の制御因子であることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記ポリペプチドが変性ポリペプチドであることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記変性ポリペプチドがミトコンドリアタンパク質の修飾因子であることを特徴とする、請求項６に記載の核酸分子。
【請求項８】
前記ミトコンドリアタンパク質がＵＣＰファミリーのメンバーであることを特徴とする、請求項７に記載の核酸分子。
【請求項９】
ＵＣＰファミリーの前記メンバーが、ＵＣＰ１、ＵＣＰ２、ＵＣＰ３、ＵＣＰ４、ＵＣＰ５、ＳｔＵＣＰまたはＡｔＵＣＰであることを特徴とする、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子を含むことを特徴とする、ベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載のベクターで形質転換されていることを特徴とする、非ヒト宿主有機体。
【請求項１２】
好適な条件下で請求項１１に記載の宿主細胞を培養し、産生されるポリペプチドを単離することを含むことを特徴とする、ポリペプチドの製造方法。
【請求項１３】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子でコードされているかまたは請求項１２に記載の方法で製造されることを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする融合タンパク質またはそのフラグメント。
【請求項１５】
前記した融合タンパク質のフラグメントが、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０のいずれか１つに記載される少なくとも１つ、有利には少なくとも２つ、より有利には少なくとも３つ、さらに有利には少なくとも４つ、特に有利には少なくとも５つ、最も有利には６つのアミノ酸配列を含有することを特徴とする、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子または請求項１３に記載のポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質を特異的に認識することを特徴とする、抗体、そのフラグメントまたは誘導体あるいはアプタマーまたは別のレセプター。
【請求項１７】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ハイブリダイゼーションプローブまたは増幅プライマー。
【請求項１８】
請求項１３に記載のポリペプチドまたは請求項１４に記載の融合タンパク質を発現し、請求項１０に記載のベクターで形質転換し、または請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子を含むことを特徴とする、非ヒト動物。
【請求項１９】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸、またはそのホモログ、パラログまたはオルトログがサイレント突然変異体および／または突然変異体であることを特徴とする、非ヒト動物。
【請求項２０】
マウス、ラット、ヒツジ、ハムスター、ブタ、イヌ、サル、ウサギ、子ウシ、ウマ、線形動物、ハエおよサカナから成る群より選択されることを特徴とする、請求項１８または１９に記載の非ヒト動物。
【請求項２１】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の宿主、請求項１３に記載のポリペプチド、請求項１４または１５に記載の融合タンパク質、請求項１６に記載の抗体、そのフラグメントまたは誘導体またはアプタマーまたは別のレセプターまたは請求項１７に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ハイブリダイゼーションプローブまたは増幅プライマーの、遺伝子および／または請求項１から９までのいずれか１項に記載のポリペプチドで変性および／または修飾されている遺伝子産物の働きをモニターしかつ／または調節するための、使用。
【請求項２２】
前記遺伝子および／または遺伝子産物が、細胞小器官中で発現される遺伝子および／または遺伝子産物であることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【請求項２３】
前記細胞小器官がミトコンドリアまたはペルオキシソームであることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記遺伝子および／または遺伝子産物がＵＣＰファミリーのメンバーであることを特徴とする、請求項２１から２３までのいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の宿主、請求項１３に記載のポリペプチド、請求項１４または１５に記載の融合タンパク質、請求項１６に記載の抗体、そのフラグメントまたは誘導体またはアプタマーまたは別のレセプター、または請求項１７に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ハイブリダイゼーションプローブまたは増幅プライマーを含有することを特徴とする、組成物。
【請求項２６】
診断用組成物であることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
製薬学的組成物であることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
細胞、細胞マス、器官および／または被験者の障害を検出および／または確認するための、請求項２５または２６に記載の組成物の使用。
【請求項２９】
細胞、細胞マス、器官および／または被験者の障害の治療、緩和および／または予防のための、請求項２５または２７に記載の組成物の使用。
【請求項３０】
前記障害が、代謝障害またはミトコンドリア障害であることを特徴とする、請求項２８または２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記代謝障害が、肥満、脂肪過多症、摂食障害（過食症、拒食症）、カヘキシー（衰弱）、膵臓の機能不全および／またはＲＯＳ産生に関する障害から選択されることを特徴とする、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の宿主、請求項１３に記載のポリペプチド、請求項１４または１５に記載の融合タンパク質、請求項１６に記載の抗体、そのフラグメントまたは誘導体またはアプタマーまたは別のレセプターまたは請求項１７に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ハイブリダイゼーションプローブまたは増幅プライマーの、請求項１３に記載のポリペプチドと相互作用できる物質を同定するための、使用。
【請求項３３】
前記ポリペプチドと相互作用できる前記物質が、アンタゴニストまたはアゴニストであることを特徴とする、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
動物の細胞代謝に関与するかまたはホメオスタシスを変化させることのできるポリペプチドまたは物質を同定する方法が、以下のステップ：
（ａ）収集されたポリペプチドまたは物質が、請求項１３に記載のポリペプチドまたはそのフラグメントまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質またはその（ａ）フラグメントと相互作用するかを、読み取り系を使用して試験し；
（ｂ）ステップ（ａ）で相互作用が陽性であったポリペプチドまたは物質を同定する
を含むことを特徴とする、ポリペプチドまたは物質を同定する方法。
【請求項３５】
動物の細胞代謝に関与するかまたはホメオスタシスを変化させることのできるポリペプチドまたは物質を同定する方法が、以下のステップ：
（ａ）収集されたポリペプチドまたは物質が、請求項３４に記載の方法で同定されたポリペプチドと相互作用するかどうかを試験し；
（ｂ）ステップ（ａ）で相互作用が陽性であったポリペプチドを同定し；場合により
（ｃ）同定されたポリペプチドを用いて、ステップ（ａ）および（ｂ）を１回以上反復し、この際、新規に同定されたポリペプチドは、さらに相互作用するポリペプチドを同定するために、以前に同定されたポリペプチドをベイトとして置換する
を含むことを特徴とする、ポリペプチドまたは物質を同定する方法。
【請求項３６】
１種以上の相互作用（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子を同定するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
ほ乳動物の体重を制御することに関与するポリペプチドの同定方法において、前記方法が以下のステップ：
（ａ）収集された（ポリ）ペプチドを、（ポリ）ペプチドの結合可能な条件で、請求項１３に記載のポリペプチドまたはその（ａ）フラグメントまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質またはその（ａ）フラグメントと接触させ；
（ｂ）請求項１３に記載のポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質とステップ（ａ）で結合しなかった（ポリ）ペプチドを、収集されたポリペプチドから除き、および
（ｃ）請求項１３に記載のポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質と結合する（ポリ）ペプチドを同定する
を含むことを特徴とする。ほ乳動物の体重を製造することに関与するポリペプチドの同定方法。
【請求項３８】
請求項１３に記載の前記ポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の前記融合タンパク質が、固体支持体へ固定されていることを特徴とする、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記固体支持体が、ゲル濾過クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーの支持体であることを特徴とする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ステップ（ｃ）での同定の前に、前記結合（ポリ）ペプチドを解離させることを特徴とする、請求項３７から３９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記解離が、溶離により実施されることを特徴とする、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
１種以上の結合（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子を同定するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項３７から４１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子の発現に影響を及ぼす化合物の同定法において、前記方法が、以下のステップ：
（ａ）請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子または請求項３６または４２に記載の方法により同定され、動作可能に読み取り系へ連結された核酸分子を含む発現ベクターを有する宿主を、化合物または化合物混合物と接触させ；
（ｂ）前記接触の結果が、前記読み取り系によって起こるシグナル強度を変化させるかどうかを分析し、場合により
（ｃ）ステップ（ｂ）においてシグナルの変化を誘導する化合物を化合物混合物から同定する
（ここでは、シグナル強度の前記変化は、前記核酸分子の発現の変化に相関する）
を含むことを特徴とする、請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子の発現に影響を及ぼす化合物の同定法。
【請求項４４】
請求項１３に記載のポリペプチドの活性に影響を及ぼす化合物を同定する方法において、前記方法が、以下のステップ：
（ａ）効果的に読み取り系と連結する、請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子を含みかつ／または読み取り系と連結する本発明の（ポリ）ペプチドを有する発現ベクターを有する宿主を、化合物または化合物混合物と接触させ、
（ｂ）前記接触の結果、読み取り系によって起こるシグナル強度の変化があるかどうかを分析し；場合により
（ｃ）ステップ（ｂ）でシグナル変化を誘導する化合物を化合物混合物から同定する（ここでは、前記シグナル変化が前記（ポリ）ペプチドの活性変化に相関することを特徴とする）
を含むことを特徴とする、請求項１３に記載のポリペプチドの活性に影響を及ぼす化合物を同定する方法。
【請求項４５】
前記宿主が、真核宿主細胞であることを特徴とする、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
真核宿主細胞がほ乳動物宿主細胞であることを特徴とする、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記宿主がバクテリアまたは酵母であることを特徴とする、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記シグナル強度の変化がシグナル強度の上昇であることを特徴とする、請求項４３から４７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記シグナル強度の変化が、シグナル強度の低下であることを特徴とする、請求項４３から４７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
請求項１３に記載の１種以上のポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の１種以上の融合タンパク質の動物での発現のインパクトを評価する方法において、前記方法が以下のステップ：
（ａ）請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子または請求項３６から４２項までのいずれか１項に記載の方法で同定された核酸分子を前記動物で過剰発現させ；
（ｂ）前記動物の体重が増加するか減少するか、代謝変化が誘導されかつ／または摂取挙動が変化するかどうかを測定する
を含むことを特徴とする、発現のインパクトを評価する方法。
【請求項５１】
請求項１３に記載の１種以上のポリペプチドまたは請求項１４または１５に記載の１種以上の融合タンパク質の動物中での発現のインパクトを評価する方法において、前記方法が以下のステップ：
（ａ）請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子または請求項３６または４２に記載の方法で同定された核酸分子を前記動物中で過少発現させ、
（ｂ）前記動物の体重が増加するかまたは減少するか、代謝変化が誘導されかつ／または接触挙動が変化するかどうかを測定する
を含むことを特徴とする、発現のインパクトを評価する方法。
【請求項５２】
請求項１３に記載のポリペプチドと結合標的／薬剤の相互作用を変化させる薬剤をスクリーニングする方法において、前記方法が以下のステップ：
（ａ）
（ａａ）請求項１３に記載のポリペプチド、またはそのフラグメントまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質またはそのフラグメント
（ａｂ）前記（ポリ）ペプチドまたは融合タンパク質またはそのフラグメントの結合標的／薬剤、
（ａｃ）候補薬剤
を含有する混合物を、前記（ポリ）ペプチド、融合タンパク質またはそのフラグメントが基準親和性で前記結合標的／薬剤と特異的に結合する条件でインキュベートし、
（ｂ）前記（ポリ）ペプチド、融合タンパク質またはそのフラグメントと前記結合標的との結合親和性を検出し、（候補）薬剤の偏向親和性を測定し、
（ｃ）（候補）薬剤偏向親和性と基準親和性との差を決定する
を含むことを特徴とする、スクリーニング方法。
【請求項５３】
請求項４３から４９までのいずれか１項に記載の方法で同定された化合物または請求項５２に記載の方法で同定された薬剤を精製する方法において、前記方法が以下のステップ
（ａ）前記化合物を偽ペプチドでモデリングし、
（ｂ）モデル化合物を化学的に合成する
を含むことを特徴とする、精製法。
【請求項５４】
請求項４３から４９までのいずれか１項に記載の化合物または請求項５２に記載の方法により同定された薬剤または請求項５３に記載の方法により精製された化合物を製薬学的に使用可能な担体および／または希釈液と配合して含有する組成物を製造する方法。
【請求項５５】
請求項４３から４９までのいずれか１項に記載の方法で同定された化合物または請求項５２に記載の方法で同定された薬剤を含有する組成物を製造する方法において、前記方法が以下のステップ：
（ａ）請求項４３から４９までのいずれか１項に記載の方法で同定された化合物または請求項５２に記載の薬剤を出発化合物として変性して、
（ｉ）カルボキシル基のエステル化、または
（ｉｉ）ヒドロキシル基のカルボン酸によるエステル化、または
（ｉｉｉ）ヒドロキシル基をエステル化して、例えばホスフェート、ピロホスフェートまたはスルフェートまたはヘミサクシネートとする、または
（ｉｖ）製薬学的に使用可能な塩の形成、または
（ｖ）製薬学的に使用可能な錯体の形成、または
（ｖｉ）製薬学的に活性なポリマーの合成、または
（ｖｉｉ）親水性部の導入、または
（ｖｉｉｉ）芳香族または側鎖上の置換基の導入／変換、置換パターンの変更、または
（ｉｘ）等配電子または生物等比体積部の導入による変性、または
（ｘ）類似化合物の合成、または
（ｘｉ）分枝側鎖の導入、または
（ｘｉｉ）アルキル置換基の環状類似体への変換、または
（ｘｉｉｉ）ヒドロキシル基のケタール、アセタールへの誘導、または
（ｘｉｖ）アミド、フェニルカルボメートへのＮ−アセチル化
（ｘｖ）マンニッヒ塩基、イミンの合成、または
（ｘｖｉ）ケトンまたはアルデヒドのシッフの塩基、オキシム、アセタール、ケタール、エノレスター、オキサゾリジン、チアゾリジンへの変性、
またはそれらの組合せによる、
（ｉ）作用部位、活性スペクトル、器官特異性の変性、および／または
（ｉｉ）力価の改善、および／または
（ｉｉｉ）毒性の低下（治療係数の増加）、および／または
（ｉｖ）副作用の減少、および／または
（ｖ）治療作用の開始、有効期間の変性
（ｖｉ）薬物動態パラメーター（再吸収、分布、代謝および分泌）の変性、および／または
（ｖｉｉ）物理化学パラメーター（溶解度、吸湿性、色、味、臭い、安定性、状態）の変性、および／または
（ｖｉｉｉ）一般的特性、器官／組織特異性の改善、および／または
（ｉｘ）適用形および適用経路の至適化
を実施し；かつ
（ｂ）前記のように変性した生成物を製薬学的に使用可能なキャリアーと配合する
を含むことを特徴とする、薬剤を含有する組成物を製造する方法。
【請求項５６】
前記組成物が製薬学的組成物であることを特徴とする、請求項５４または５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記組成物が、肥満、脂肪過多症、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能不全および／またはＲＯＳ産生に関する障害を予防、緩和または治療するための製薬学的組成物であることを特徴とする、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
（ａ）請求項１３に記載の、または請求項３４、３５または３７から４１までのいずれか１項に記載の方法で同定された、または請求項５３に記載の方法で精製された（ポリ）ペプチドのインヒビター、
（ｂ）請求項３６から４２までのいずれか１項に記載の方法で同定された遺伝子発現に対するインヒビター、および／または
（ｃ）請求項４３または４４に記載の方法で同定された化合物
を含むことを特徴とする、組成物。
【請求項５９】
（ａ）請求項１３に記載の、または請求項３４、３５または３７から４１までのいずれか１項に記載の方法で同定された、または請求項５３に記載の方法で精製された（ポリ）ペプチドの刺激物質、
（ｂ）請求項３６または４２に記載の方法で同定された遺伝子発現に対する刺激物質、および／または
（ｃ）請求項４３または４４に記載の方法で同定された化合物
を含むことを特徴とする、組成物。
【請求項６０】
製薬学的組成物であることを特徴とする、請求項５８または５９に記載の組成物。
【請求項６１】
（ａ）請求項３４、３５、３７から４１または４３から４９までのいずれか１項に記載の方法で同定された、または請求項５３に記載の方法で精製された（ポリ）ペプチドのインヒビター；
（ｂ）請求項３６または４２に記載の方法で同定された遺伝子の発現に対するインヒビター；および／または
（ｃ）請求項４９に記載の方法で同定された化合物
の、肥満、脂肪過多症、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能不全および／またはＲＯＳ産生に関する障害を治療するための製薬学的組成物を製造するための使用。
【請求項６２】
（ａ）請求項３４、３５、３７から４１または４３から４９までのいずれか１項に記載の方法で同定された、または請求項５３に記載の方法で精製された（ポリ）ペプチドの刺激物質；
（ｂ）請求項３６または４２に記載の方法で同定された遺伝子の発現に対する刺激物質；および／または
（ｃ）請求項４８に記載の方法で同定された化合物
の、肥満、脂肪過多症、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能不全および／またはＲＯＳ産生に関する障害を治療するための製薬学的組成物を製造するための使用。
【請求項６３】
肥満、脂肪過多症、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能不全および／またはＲＯＳ産生に関する障害を治療、緩和および／または予防するための製薬学的組成物を製造するための、請求項５２に記載の方法により同定された薬剤の使用。
【請求項６４】
ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３または４に記載の核酸分子またはそのフラグメントの、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３または４またはそのフラグメントによりコードされた遺伝子産物を過剰または過少発現する非ヒト動物の製造のための使用。
【請求項６５】
前記非ヒト動物が、ショウジョウバエまたはマウスであることを特徴とする、請求項６４に記載の使用。
【請求項６６】
請求項６４に記載の非ヒト動物、例えば請求項６５に記載のショウジョウバエまたはマウスの、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与することができ、ミトコンドリアタンパク質を修飾することができ、および／または細胞代謝に影響を及ぼすことのできるポリペプチドを検出するための、使用。
【請求項６７】
少なくとも
（ａ）請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子
（ｂ）請求項１０に記載のベクター
（ｃ）請求項１１に記載の宿主
（ｄ）請求項１３に記載のポリペプチド
（ｅ）請求項１４または１５に記載の融合タンパク質
（ｆ）請求項１６に記載の抗体またはそのフラグメントまたは誘導体または抗血清、アプタマーまたは別のレセプター；および
（ｇ）請求項１７に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ハイブリダイゼーションプローブまたは増幅プライマー
の１つを含有することを特徴とする、キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与するポリペプチドをコードする核酸分子に関し、前記核酸分子は、（ａ）所定のストリンジェントな条件下で、ここに開示したアミノ酸配列をコードする核酸分子の相補鎖にハイブリタイズし；（ｂ）所定の条件下で、ここに開示した核酸分子の相補鎖にハイブリタイズし；（ｃ）核酸分子（ａ）と縮重し；（ｄ）推定膜貫通領域としてここに記載される、少なくとも１つ、有利には少なくとも２つ、より有利には少なくとも３つ、より有利には少なくとも４つ、より有利には少なくとも５つおよび最も有利には６つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし；（ｅ）細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与するポリヌクレオチドにより示されるここに記載のアミノ酸と、少なくとも８５％、有利には少なくとも９０％、より有利には少なくとも９５％、より有利には少なくとも９８％、および９９．６％まで同一であるポリペプチドをコードし；（ｆ）細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与するポリヌクレオチドにより示されるここに記載のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、有利には少なくとも９５％、より有利には少なくとも９８％、および９９．６％まで同一であるポリペプチドをコードし；（ｇ）ここに記載のアミノ酸配列と、少なくとも３５％、有利には少なくとも５０％、より有利には少なくとも６０％、より有利には少なくとも７０％、より有利には少なくとも８０％、より有利には少なくとも９０％、最も有利には少なくとも９５％および最も有利には少なくとも９９％が同一であるポリペプチドをコードし；（ｈ）突然変異により（ａ）〜（ｇ）の核酸分子と異なり（前記突然変異は、コードされたポリペプチド中に変化、欠失、重複または未熟終結を起こす）；または（ｉ）ここに開示した配列を有する。さらに本発明は、前記核酸分子を含むベクターを提供する他に、前記ベクターを用いて形質転換させた宿主も提供する。本発明はまた、前記核酸分子によりコードされるポリペプチドおよび抗体、そのフラグメントまたはその誘導体、またはアプタマー、または本発明の核酸分子またはポリペプチドを特異的に認識する他のレセプターに関する。本発明には、核酸分子、ベクター、宿主、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、そのフラグメントまたは誘導体、またはアプタマー、またはその他のレセプター、または本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物も記載されている。有利にはこれらの組成物は、診断用組成物または医薬品組成物である。さらに本発明は動物または植物における細胞代謝に関するか、またはホメオスタシスを変化させることのできるポリペプチドまたは物質を同定する方法、および哺乳動物の体重調節に関与するポリペプチドを同定する方法を提供する。本発明はまた、本発明の核酸分子またはポリペプチドの発現に影響する化合物を同定する方法に関する。加えて、本発明の１つ以上の化合物の発現の影響を評価する方法を開示した。最終的に、本発明は本発明の（ポリ）ペプチドの阻害剤および／または刺激剤を含む組成物を提供し、本発明の化合物を含むキットを提供する。
【０００２】
ミトコンドリアは動物細胞のエネルギー供給者である。炭水化物、脂肪等の代謝栄養素から得られるエネルギーの大部分は、ミトコンドリア内膜にプロトン勾配を生成するために用いられる。このプロトン勾配は、細胞の主要な燃料物質であるＡＴＰを産出する酵素ＡＴＰシンテターゼを推進する（ＭｉｔｃｈｅｌｌＰ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２０６、１９７９、１１４８−１１５９）。褐色脂肪組織のミトコンドリアには、ミトコンドリア内膜を通ってプロトンを通過させるタンパク質（脱共役タンパク質１）が存在する（レビュー：ＫｌｉｎｇｅｎｂｅｒｇＭ、ＨｕａｎｇＳＧ、Ｂｉｏｃｈｉｍ　ＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ　１９９９、１４１５（２）：２７１−９６）。従って、プロトン勾配に貯蔵されたエネルギーは熱として放出され、ＡＴＰ合成には使用されない。
【０００３】
動物のエネルギー摂取が消費を超える場合、余分なエネルギーは脂肪組織に脂肪として貯蔵できる。脱共役タンパク質の活性化によってミトコンドリア内膜を通して放出されるプロトンの発生は、熱量効率を減少させ、動物の健康に悪影響を及ぼす過剰な体脂肪の蓄積（肥満症）を回避する。しかし、ヒトの場合、褐色脂肪組織は成人にほとんど見られない。以上の点から、ＵＣＰ１がヒト肥満症の形成または予防において主要な因子であるとは考えられていなかった。近年、ヒト組織（例えば白色脂肪組織、筋肉）に広範に発現する類似の配列（ＵＣＰ２−ＵＣＰ５）を有するタンパク質が発見され、ＵＣＰファミリーのメンバーが医薬品研究の標的として重要であることが示された（レビュー：ＡｄａｍｓＳＨ、Ｎｕｔｒ２０００、１３０（４）：７１１〜４）。意外にも、Ｒｉｃｑｕｉｅｒ、ＢｉｏｃｈｅｍＪ．３４５（２０００）、１６１〜１７９においてレビューされているように、特に、植物ＵＣＰであるＳｔＵＣＰ（由来：Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｕｍ ジャガイモ）およびＡｔＵＣＰ（由来：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ シロイヌナズナ）のような別のホモログが同様に同定されている。これらのタンパク質のｉｎ　ｖｉｖｏにおける機能はまだ未知であるが、ＵＣＰ活性に影響を及ぼす可能性は、肥満症および関連疾患の治療または予防のための治療法として想定できる。
【０００４】
ミトコンドリアはエネルギー変換において非常に特殊な機能を有し、前記機能はその形態学的構造、すなわち固有の内膜によるものである。この内膜は電子輸送プロセスに対するフレームワークを実現するばかりでなく、高度に特殊な酵素を内包する各細胞小器官において大きな細胞内コンパートメントを作成する。以上の点から、ミトコンドリアのエネルギー代謝と細胞小器官生化学的／生物物理学的な性質とは密接に関連している。
【０００５】
本発明の根底にある技術的問題は、ミトコンドリアの生物学的／生化学的活性を調節するための手段および方法を提供することであり、この方法では、ＡＴＰレベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比、および／またはスーパーオキシド産生を調節するために、エネルギー消費、体温、産熱、過剰なまたは過少な基質の供給に対する細胞代謝に影響する、真核細胞の代謝条件が調節される。
【０００６】
この技術的問題は、請求項において特徴づけた態様により解決される。
【０００７】
従って、本発明は、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与する、ポリペプチドをコードする核酸分子に関し、前記核酸分子は、
（ａ）６５℃にて０．２ｘＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を含んでいる溶液中で、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４および／またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５２のアミノ酸配列をコードする核酸分子および／またはその相補鎖とハイブリタイズし；
（ｂ）６５℃にて０．２ｘＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を含んでいる溶液中で、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、７または５３、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３および／またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５１で示される核酸分子および／またはその相補鎖とハイブリダイズし；
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸分子と縮重し；
（ｄ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０、６１および６２の任意の１つに示される、少なくとも１つ、有利には少なくとも２つ、より有利には少なくとも３つ、より有利には少なくとも４つ、より有利には少なくとも５つ、および最も有利には６つのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし；
（ｅ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８と少なくとも８５％、有利には少なくとも９０％、より有利には少なくとも９５％、より有利には少なくとも９８％、および９９、６％まで相同なポリペプチドをコードし；
（ｆ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４と少なくとも９０％、有利には少なくとも９５％、より有利には少なくとも９８％および９９、６％まで相同なポリペプチドをコードし；
（ｇ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、１２、１４または５２の任意の１つに示されるアミノ酸と、少なくとも３５％、有利には少なくとも５０％、より有利には少なくとも６０％、より有利には少なくとも７０％、より有利には少なくとも８０％、より有利には少なくとも９０％、最も有利には少なくとも９５％および最も有利には少なくとも９９％相同なポリペプチドをコードし；
（ｈ）突然変異のために（ａ）から（ｇ）の核酸分子と異なり（前記突然変異は、コードされるポリペプチドに変化、欠失、重複または未熟終結を起こす）；または
（ｉ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、１１、１３または５１に記載の配列を有する。
【０００８】
補足実施例に記載するように、本発明は、細胞小器官、特にミトコンドリアの膜安定性および／または機能に直接的または間接的に寄与する遺伝子および遺伝子産物を提供する。
【０００９】
ここに使用する用語「膜安定性」は、小器官の膜の全体のみならず、局所的な安定性も意味し、例えば、内膜および外膜、特に内膜である。従って、用語「膜安定性」は、規定の膜組成を導くタンパク質−タンパク質相互作用ならびにタンパク質−脂質相互作用によって提供される膜の構造上の特徴に関連する。
【００１０】
先に使用した「細胞小器官の膜機能への寄与」という表現は、特に、輸送機能（例えばイオン、代謝産物、ビタミン、などの能動および受動輸送）、その他の膜タンパク質の制御因子機能（例えば輸送体、キャリアー）またはその他（膜）のタンパク質の修飾機能（例えば増強／抑制機能）および／または以下に定義したその他の機能を含む、上記定義のポリペプチド機能に関するものである。
【００１１】
ここに使用する「細胞小器官」という表現は、ミトコンドリアに関連するのみならず、ペルオキシソームまたは植物細胞小器官、例えば葉緑体のような細胞小器官にも関するものである。
【００１２】
本発明で使用する「ハイブリタイズする」および「ハイブリダイジング」という用語は、有利には特に前記のストリンジェントな条件、例えば６５℃にて０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）の条件に関するものである。前記条件にはハイブリダイゼーション条件、特に洗浄条件が含まれる。洗浄条件はハイブリダイゼーション条件よりもストリンジェントなほうが望ましい。ハイブリダイゼーション条件を設定することによって、当業者は厳密に相補的な配列または相同性の高いまたは低い配列が検出されるかどうかを決定することができる。条件の設定は当業者が熟知しており、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、またはＨａｍｅｓａｎｄ　Ｈｉｇｇｉｎｓ、”Ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、ａ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ”、ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９８５）に記載されるプロトコールに従って決定される。ホモログや正確には相補的でない配列の検出に対しては、あまりストリンジェントでないハイブリダイゼーション条件を６５℃にて６ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）に設定することができる。
【００１３】
本発明の核酸分子とハイブリダイズする分子はまた、肥満症を調節し、引き起こし、またはそれに寄与する（ポリ）ペプチドをコードする上述の核酸分子のフラグメント、誘導体および対立遺伝子変異体を含む。この点で、フラグメントは前記（ポリ）ペプチドをコードするために十分に長い核酸分子の部分として定義される。用語「誘導体」は、ハイブリダイズする分子の配列が上述の核酸分子の配列と１つ以上の位置で異なること、およびこれらの配列に対して高度な相同性を示すことを意味する。例えば、相同性とは、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、１２、１４　または５２において同定された配列に対する配列同一性が少なくとも３５％、具体的には少なくとも４５％の同一性、有利には５０％以上、より有利には６０％以上、より有利には７０％以上、より有利には８０％以上およびまだより有利には９０％以上の配列同一性であることを意味する。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８として同定された配列を考慮する場合、前記相同性は少なくとも８５％の配列同一性を意味する。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４において描写した配列に関しては、少なくとも９０％の配列同一性が「相同性」と考慮される。当業者は、相同性値を決定するためにコンピュータプログラムおよびパッケージを使用することができる。一般に、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列の同一性／相同性は、２つのセグメント間で最も相同性の高いセグメントを見出すために、ＢＬＡＳＴＩＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ＮＡＬＩＧＮ、ＰＡＬＩＧＮのような周知のコンピュータプログラム、または特定のアルゴリズムを使用するｂｌ２ｓｅｑを使用することによって従来通りに決定することができる。
【００１４】
補足実施例に示すように、本発明に照らして同一性のパーセントのアミノ酸レベルでの比較分析は、有利には次のパラメータを使用するＮＣＢＩからの「ｂＩ２ｓｅｑ」プログラムを使用して得る：オープンギャップコスト：１１およびギャップ伸長コスト：１。但し、プログラムは前記値に対して任意の正の整数を許容するものとする。
【００１５】
さらには、本発明に照らして、異なる核酸配列のヌクレオチドレベルでの同一性のパーセントの比較分析は、これに反して、次のパラメータを使用する［エンボス］パッケージの「ｍａｔｃｈｅｒ」プログラムを使用して得ることができる：ギャップ罰則値：１６およびギャップ長の数値：　４、あるいはプログラムは任意の正の整数であってよい。これらのパラメータは、特に分析された異なる配列間の異なるレベルの相同性を考慮すると、参照ヌクレオチドまたはアミノ酸配列上の同一性パーセントを算出するために最高に適していることが見出された。上述の核酸分子と比較する場合に発生する任意の偏差は、欠失、置換、挿入または組換えによって引き起こされる。
【００１６】
さらに、相同性は、機能上および／または構造上の同等性がそれぞれの核酸分子間に、またはそのコードするタンパク質間に存在することを意味する。上述の分子に対して相同であり、これらの分子の誘導体を表す核酸分子は一般に、同一生物学的機能を発揮する修飾を形成するこれらの分子の誘導体である。これらの変異は天然の変異であり得る。変異は自然に発生する変異であってよく、例えば他の生物体、または突然変異体に由来する配列によって突然変異体が自然に出現してよく、または特定の変異誘発の手段によって導入されてもよい。さらに、変異が合成的に産生された配列であり得る。対立遺伝子変異体は天然に発生する可能性がある他、合成的に産生された変異体または組換えＤＮＡ技術によって産生される変異体である可能性もある。
【００１７】
本発明記載の核酸分子の種々の変異体によってコードされたタンパク質は、特定の共通した特徴を示す。これらの特徴には、生物学的活性、分子量、免疫学的な反応性、高次構造などが含まれてよく、また、ゲル電気泳動における移動度、クロマトグラフィーの特徴、沈降係数、溶解度、分光学的な性質、安定性、最適ｐＨ、最適温度などのような物理的な性質等も含まれる。
【００１８】
有利には、上記の核酸分子は、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０、６１および６２の任意の１つに示される、少なくとも１つ、最も有利には少なくとも６つのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。前記ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：は予想された膜貫通領域／ドメインに関連し、また補足実施例および図に記載される。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜２６、６１および６２に示す配列は、キイロショウジョウバエから取得可能な本発明の核酸分子において演繹された膜貫通領域に関連し（対応アミノ酸配列も含む）、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７〜３８は、ヒトから取得可能な核酸分子において演繹された膜貫通ドメインに関連し、およびＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３９〜５０は、ここに定義したタンパク質の膜貫通ドメインに関連し、マウスから演繹可能である。また本発明の範囲内には、以上の点から、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０、６１および６２の任意の１つに示される少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む本発明の核酸分子によってコードされたポリペプチドも含まれている。本発明は、但し、異種からの膜貫通領域／ドメインが人工的に結合する構成物も含む。また、前記（ｄ）の核酸分子は、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７〜５０の任意の１つに描写した、少なくとも１つ、より有利には少なくとも６つの、マウスおよびヒトから演繹されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするのが最も望ましい。なお、望ましい組み合わせには、１つの種からの少なくとも１つ、そして有利には全ての膜貫通領域が含まれる。
【００１９】
本発明の核酸分子は、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与するポリペプチドをコードし、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８５％および９９、６％まで同一であり、またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％および９９、６％までが同一であることが望ましい。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８には特に、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７でコードされたポリペプチドが示され、そして意外にも細胞小器官の膜機能および／または安定性に関与することが分かり、そして具体的には、ＵＣＰｓを修飾できることが分かったショウジョウバエのタンパク質を表す；補足実施例も参照のこと。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５４に示すアミノ酸配列（特に、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５３によってコード済）は、上記タンパク質のスプライス変異型を含む。補足実施例において実証されたように、記載のポリペプチド（核酸分子をコードする）は、キイロショウジョウバエ遺伝子ｄＵＣＰｙの過剰発現が原因で生じたショウジョウバエにおける特定の眼表現型を修飾（例えば抑制）することができる。ショウジョウバエの複眼におけるｄＵＣＰ（ヒトＵＣＰｓに対する相同性を有する）の過剰発現は、明らかに可視的な眼欠陥を引き起こした（補足実施例および図を参照）。これは遺伝的「修飾因子スクリーニング」に対する「読み取り」として使用することができる。
【００２０】
前記「修飾因子スクリーニング」において、その眼中発現を活性化するために、数千の異なる遺伝子を変異誘発させた。変異誘発させた遺伝子の１つがｄＵＣＰｙと相互に影響し、その活性を修飾する場合、眼欠陥の増強または抑制が発生する。そのようなハエは容易に同定できるので、相互作用遺伝子を単離するために選択することができる。
【００２１】
補足実施例に示すように、ｄＵＣＰｙ活性によって誘発された眼欠陥を抑制する遺伝子を演繹せしめた。この遺伝子を、［脱共役タンパク質１の抑制因子］（ＳＯＵＰ１）と称す。
【００２２】
本発明はまた、本発明の核酸分子によってコードされたＳＯＵＰ１タンパク質に関連するものであり、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、１２、１４および５２に示されている。コードされたポリペプチドは、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、１２、１４または５２の任意の１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも３５％および最も有利には少なくとも９９％アミノ酸配列に同一であることが望ましい。ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０はＳＯＵＰ１のヒトホモログを示し、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２および１４はマウスＳＯＵＰ１の２つの変異体を示し、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５２はゼブラフィッシュ（ゼブラダニオ）のＳＯＵＰ１を示す。
【００２３】
ここに記載されたＳＯＵＰ１ポリペプチド（および遺伝子）における突然変異は、表現型および／または生理的な変化を引き起こすことが構想され、これには、ミトコンドリア活性の修飾および変異が含まれる。これは次々に、特にエネルギー代謝の変化、産熱および／または変異エネルギーホメオスタシスの変化を引き起こすことができる。
【００２４】
望ましい態様において、上記の本発明の核酸分子はＤＮＡである。これに関連して、用語「核酸分子」は、コーディングおよび、場合により、特に、５’および３’非コーディング配列のような非コーディング配列を含むことが理解される。前記５’および／または３’非コーディング領域は、転写および随意的にポリ−Ａシグナルの開始を保証し、転写の終結および／または転写の安定化を保証する（特定の）調節配列を含むことができる。追加の５’および３’非コーディング領域は、プロモーターおよび／または転写のほかに翻訳エンハンサーも含むことができる。さらには、用語「核酸分子」は、場合により。イントロンおよびスプライス変異体を含むことができる。
【００２５】
ここに使用した用語「ＤＮＡ」には、特に一本鎖または二本鎖ＤＮＡ、例えば合成ＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡなどが含まれる。さらには、本発明の核酸分子はｍＲＮＡのようなＲＮＡ分子でもあり得る。本発明に基づいて、用語「核酸分子」にはまた、核酸プローブがハイブリダイズできる核酸誘導体が含まれる。前記核酸プローブ自体が、前記核酸分子または前記誘導体に対してハイブリダイズ可能な核酸分子の誘導体であり得る。用語「核酸分子」にはさらに、アミド主鎖結合を有するＤＮＡ類似物を含んでいるペプチド核酸（ＰＮＡｓ）が含まれる（Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４（１９９１）、１４９７−１５００）。
【００２６】
これに関連して、本発明の核酸分子は、特に当分野で周知であり市販されている、例えばＡＢＩ３９４ＤＮＡ−ＲＡＮ−シンセサイザーのようなシンセサイザーを使用して化学的に合成され得ることもあることが強調されなくてはならない。
【００２７】
本発明の核酸分子がポリペプチドをコードして、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与し、細胞小器官において膜安定性および／または機能に寄与する前記ポリペプチドがミトコンドリアおよび／またはペルオキシソーム中に発現されることが望ましい。前記ポリペプチドが前記膜の維持に関与することは特に望ましい。
【００２８】
さらには、本発明の核酸分子がポリペプチドをコードし、細胞小器官における膜安定性および／または機能に寄与する前記ポリペプチドが、輸送体分子および／または輸送体分子の制御因子であることが構想される。例えば、本発明の核酸分子によってコードされたポリペプチドが、イオン、代謝産物またはビタミンのような分子を細胞膜を横切って輸送することができる担体および／または輸送分子を直接的にまたは間接的に制御すること、および／または前記ポリペプチドがそのような輸送体／担体分子であることが構想される。
【００２９】
本発明の核酸分子が上記に定義したように、ポリペプチドをコードし、前記ポリペプチドｈｓ変性ポリペプチドであることは特に望ましい。特に望ましい変性ポリペプチドには、ミトコンドリアのタンパク質の修飾因子、例えばＵＣＰファミリーメンバー修飾が含まれる。
【００３０】
前記ＵＣＰ（脱共役タンパク質）ファミリーのメンバーは分野で周知であり、ＵＣＰ１、ＵＣＰ２、ＵＣＰ３、ＵＣＰ４、ＵＣＰ５、ＳｔＵＣＰまたはＡｔＵＣＰを含む。特に前掲のＲｉｃｑｕｉｅｒ（２０００）を参照。上記のミトコンドリアのタンパク質の修飾、具体的にはＵＣＰｓのタンパク質の修飾は、前記タンパク質との直接相互作用によって、または、前記ミトコンドリアのタンパク質の機能または活性に必要な、または前記ミトコンドリアのタンパク質の活性によって生成される、イオン、代謝産物またはビタミン、およびその他同種類のものを供給／移入／搬出することによっても（またはこれらのプロセス遮断によって）発生させることができる。以上の点から、前記「修飾」もまた、輸送現象および供給現象に関連するものである。さらには、前記「修飾」には、１つ以上のタンパク質／ポリペプチド、有利にはＵＣＰファミリーのメンバーの機能のコントロールが含まれる。最も望ましいのは、細胞代謝、具体的にはエネルギー代謝に影響する事象を含む「修飾」である。
【００３１】
本発明はまた、上記に指摘したように、ここに記載する核酸分子の「変異体」に関連する。
【００３２】
用語「変異体」は、ここで、１つ以上のヌクレオチド位置において、細胞小器官の膜安定性および／または機能に寄与する上述の核酸分子および（ポリ）ペプチドの配列と異なり、同時に前記核酸分子に対して高度な相同性を持つヌクレオチドおよびそれがコードするアミノ酸配列を意味する。相同性とは上記の定義であると理解される。上記の核酸分子配列からの偏差は、例えば、ヌクレオチド置換、欠失、付加、挿入および／または組換えの結果であり得る。相同性は、それぞれの核酸分子またはコードするタンパク質が機能的および／または構造的に等価であることをさらに暗示することができる。上記の核酸分子に対して相同性を有し、前記核酸分子の誘導体である核酸分子は、例えば、同一生物学的機能を有し、具体的には同一または実質上同一の生物学的機能を有するタンパク質をコードする前記核酸分子の変化である。それらは、その他の哺乳類または突然変異体に由来する配列の天然の変化であり得る。用語「変異体」はこれに関連して、特に、上記のように対立遺伝子変動またはスプライス変異体をさらに含む。天然のＳＯＵＰ１タンパク質またはｓｏｕｐ１遺伝子変異体は「対立遺伝子変異体」と称され、生物体の染色体上の所定の遺伝子座を占有するいくつかの遺伝子の交代形態１つである。（ＧｅｎｅｓＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８５）および最新版）。これらの対立遺伝子変異体は、ポリヌクレオチドおよび／または（ポリ）ペプチドレベルのいずれかで変化し得る。あるいは、非自然発生の変異体は、変異誘発技術または直接合成によって産生することができる。タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の周知の方法を用いて変異体を生成して、ここに記載されたＳＯＵＰ１タンパク質／ｓｏｕｐ１遺伝子の特徴を改善または変質することができる。以上の点から、用語「対立遺伝子変異型」には、合成的に産生または遺伝子操作された変異体も含まれる。
【００３３】
本発明の核酸分子は、天然に起源するもの、合成または半合成物、または誘導体のいずれでも差し支えない。
【００３４】
上記の（ポリ）ペプチド、例えばＳＯＵＰ１の野生型形態および変異形態、および／またはそのフラグメントをコードする本発明の核酸分子は、翻訳可能な転写物、ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲ法プライマーとしての使用、または例えば適切に被覆されたチップのような核酸の発現プロフィールの作成、または診断用および／または医薬用の使用を含んだ、さまざまな適用例が見出されている。有用なＰＣＲ法プライマーは当業者によって本発明の核酸分子から演繹することができる。特に有用なプライマーは、特に補足実施例において使用されている。
【００３５】
具体的には、それらのプライマーは、ＳＯＵＰ１の遺伝子および遺伝子転写物の存在の検出において、およびｓｏｕｐ１ホモログまたは構造上の類似体をコードする核酸の検出および／または増幅において、それぞれ使用することができる。ここに開示するプローブ、材料および方法、特にｃＤＮＡおよびゲノムライブラリの探索を前提とし、当業者は対応するホモログを回復することができる。下記のように、本発明の核酸分子は、特異的発現ベクターの一部であり得、発現およびスクリーニングのために組換え細胞へ導入されてよく、機能的研究（例えばＳＯＵＰ１の発現に関連する疾病のための候補薬物の有効性）のために遺伝子組換え動物に導入されてもよい。
【００３６】
さらには、診断において、ここに記載されたｓｏｕｐ１遺伝子およびｓｏｕｐ１対立遺伝子に存在する単一ヌクレオチド多型に関連する、特異的ハイブリダイゼーションプローブは、臨床実験および研究実験用サンプル中の野生型の同定、および変異体ｓｏｕｐ１対立遺伝子の同定に使用することができる。変異体対立遺伝子は特に、対立遺伝子−特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）プローブ（例えば、高処理量の臨床診断用）を生成するために使用される。治療学的なアプローチのため、上記および下記の本発明の核酸分子を用いて、本発明の細胞発現または細胞内の濃度または活性（ポリ）ペプチドの利用能を調節することができる。これらの核酸分子は、アンチセンス鎖であってよく、すなわち本発明の開示する核酸の相補鎖を含む一本鎖配列であってよい。
【００３７】
本発明の核酸分子は、前記の核酸分子の単独または組み合わせのいずれかを含んでいる、組換えにより産生されたキメラ核酸分子であり得る。有利には、前記核酸分子はベクターの一部である。
【００３８】
本発明は以上の点から、本発明核酸分子を含んでいる、ベクターにも関連するものである。本発明のベクターは例えば、従来遺伝工学に使用されているプラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージまたは他のベクターであり得、望ましい宿主細胞中および望ましい条件下において前記ベクターの選択を許容する、マーカー遺伝子のような遺伝子をさら含むことができる。さらには、本発明のベクターは、本発明の核酸配列に加えて、望ましい宿主においてコード領域を適切に発現させることのできる、発現制御因子を含むことができる。そのような制御因子は当事者に周知であり、プロモーター、スプライスカセット、翻訳開始コドン、ベクターに挿入するための挿入部位を含むことができる。有利には、本発明の核酸分子は、動作可能なように前記発現コントロール配列に連結し、原核または真核細胞における発現を許容する。
【００３９】
原核および真核細胞発現を保証する調節要素は、当業者に公知である。上記のように、調節要素には普通、転写の開始を保証する調節配列、および場合により、転写の終結および転写の安定化を保証するポリＡシグナルが含まれる。付加的な調節要素は、転写エンハンサーのほかに翻訳エンハンサー、および／または自然付随したプロモーターまたは異種プロモーター領域も含むことができる。例えば哺乳動物の宿主細胞などにおいて発現を容認する、ありうる調節要素には、ＣＭＶ−ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０、ＲＳＶ−プロモーター（ラウス筋節ウイルス）、ヒト伸長因子、プロモーター、ａＰＭ−Ｉプロモーター（Ｓｃｈａｆｆｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６０（１９９９）、４１６−４２５）、または誘導型プロモーター、例えばメタロチオネインまたはテトラサイクリン、またはエンハンサー、例えばＣＭＶエンハンサーまたはＳＶ４０　エンハンサーが含まれる。真核細胞における発現に関しては、例えば、ｔａｃ−ｌａｃプロモーターまたはｔｒｐプロモーターを含んだ、多数のプロモーターが記載されている。転写の開始を担う要素に加えて、そのような調節要素は、転写終結シグナル、例えばＳＶ４０ポリＡ部位またはｔｋポリＡ部位、ポリヌクレオチドの下流も含むことができる。これに関連して、Ｏｋａｙａｍａ−ＢｅｒｇｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（ファルマシア社）、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（インビトロゲン社）、ｐＳＰＯＲＴ１（ギブコ社）、Ｃａｓｐｅｒ、Ｃａｓｐｅｒ−ＨＳ４３、ｐＵＡＳＴ、またはラムダｇｔ１１のような真核発現ベクターのような、望ましい発現ベクターが当分野で周知されている。本発明の核酸分子に加えて、ベクターはさらに、分泌シグナルをコードする核酸配列を含むことができる。そのような配列は当業者に公知である。さらには、（ポリ）ペプチドを細胞コンパートメントに配向する能力を持つリーダー配列を使用した発現システムは、本発明の核酸分子のコード配列に追加されることができ、当分野で周知されている。リーダー配列は、翻訳、開始および終結配列と共に適当な部位に構築され、有利には、リーダー配列は、翻訳済タンパク質の分泌、またはそのタンパク質を周辺質のスペースまたは細胞外の培地に配向する能力を有する。随意的に、異種配列は、所望の特徴、例えば、発現された組換え生成物の安定化または単純精製を付与する、Ｃ末端同定またはＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードすることができる。ベクターが一旦適切な宿主に取り込まれると、宿主はヌクレオチド配列の高レベル発現に望ましい条件下で維持され、所望に応じて、本発明（ポリ）ペプチドまたはそのフラグメントの収集および精製を次に行う。
【００４０】
さらには、本発明のベクターは、遺伝子伝達または遺伝子標的ベクターでもあり得る。治療学的な遺伝子を体外技術または生体内技術によって細胞生に導入することに基づく遺伝子療法は、最も重要な遺伝子伝達の適用例の１つである。試験管内または生体内の遺伝子療法に対する望ましいベクター、方法または遺伝子配達システムは、文献に記載されており、当業者には周知である；例えば、Ｇｉｏｒｄａｎｏ，Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ２（１９９６），５３４−５３９；Ｓｃｈａｐｅｒ，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９（１９９６），９１１−９１９；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６（１９９２），８０８−８１３，Ｉｓｎｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ３４８（１９９６），３７０−３７４；Ｍｕｈｌｈａｕｓｅｒ，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７７（１９９５），１０７７−１０８６；Ｏｎｏｄｕａ，Ｂｌｏｏｄ９１（１９９８），３０−３６；Ｖｅｒｚｅｌｅｔｔｉ，Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．９（１９９８），２２４３−２２５１；Ｖｅｒｍａ，Ｎａｔｕｒｅ３８９（１９９７），２３９−２４２；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ３９２（Ｓｕｐｐ．１９９８），２５−３０；Ｗａｎｇ，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ４（１９９７），３９３−４００；Ｗａｎｇ，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ２（１９９６），７１４−７１６；ＷＯ９４／２９４６９；ＷＯ９７／００９５７；ＵＳ５，５８０，８５９；ＵＳ５，５８９，４６６；ＵＳ４，３９４，４４８ｏｒＳｃｈａｐｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　７（１９９６），６３５−６４０，引用参照を参照。具体的には、前記ベクターおよび／または遺伝子送達系はまた、脂肪細胞における（特に、ＵＳ５、８６９、０３７またはＺｈｏｕ、ＰＮＡＳＵＳＡ９６（１９９９）、２３９１−２３９５を参照）または視床下部における（特に、Ｇｅｄｄｅｓ、ＦｒｏｎｔＮｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（１９９９）、２９６−３１６またはＧｅｄｄｅｓ、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３（１９９７）、１４０２−１４０４を参照）遺伝子療法アプローチについても記載されている。本発明の核酸分子およびベクターは、細胞へ直接導入できるように、またはリポソーム、ウィルスベクター（例えばアデノウイルスベクター、レトロウイルス性ベクター）、電気穿孔法、弾道的な送達法（例えば遺伝子銃）またはその他の送達系を介して細胞へ導入できるようにデザインされていてよい。そのうえ、バキュロウイルスシステムを原核発現システムとして本発明の核酸分子に対して使用することができる。
【００４１】
下記に記載されているように、本発明の核酸分子および／または本発明の上記ベクター／宿主は、特に医薬品組成物として有用であリ得る。前記医薬品組成物は、例えば遺伝子療法アプローチのような診断および／または治療学的なアプローチにおいて使用することができる。これに関連して、本発明の核酸分子および／またはベクターを用いて、本発明の細胞発現および／または（ポリ）ペプチドの細胞内濃度またはそのフラグメントを調節、変性および／または修飾できることが構想される。前記調節、変性および／または修飾は、ここに記載されたＳＯＵＰ１遺伝子のＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチドおよび／または遺伝子産物のアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションを導くことができる。さらには、前記治療学的なアプローチは、活性ＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチド／タンパク質／遺伝子産物の利用能の改変および／または調節を導くことができる。これに関連して、用語「活性」は、生物体で（正常な）細胞機能を実践できる能力を意味する。
【００４２】
遺伝子療法適用例に関して、本発明の（ポリ）ペプチドをコードする核酸またはそのフラグメントは、遺伝子伝達システム、例えばウイルス、ならびに感染した細胞または生物体において感染および疾病の寛解または治療効果を授与するために使用されるウイルスへクローン化することができる。
【００４３】
上記のように、核酸分子および／またはベクターを用いてＳＯＵＰ１タンパク質／（ポリ）ペプチドの遺伝子発現または細胞内の濃度を調節／変性することができる。前記調節／変性はアンチセンス・アプローチによって達成することができる。
【００４４】
ＳＯＵＰ１発現のアンチセンス調節は、動作可能なように遺伝子調節配列に連結したアンチセンス核酸を使用することができる。例えば、遺伝子転写により、ｍＲＮＡをコードする内在性ｓｏｕｐ１に結合する能力を持つアンチセンス転写が成されるように配向されたプロモーター配列を有するｓｏｕｐ１配列を含むベクターで、細胞は形質移入される。アンチセンス核酸の転写は構成型または誘導型であり得、ベクターは安定した染色体外の維持および統合を提供することができる。あるいは、ゲノムＤＮＡまたは本発明の（ポリ）ペプチドまたはそのフラグメントをコードするｍＲＮＡに結合する一本鎖アンチセンス核酸を、前記（ポリ）ペプチドの発現にかなりの減少をもたらす濃度で、宿主の中または宿主から一時的に単離された標的細胞に投与することができる。さらには、本発明の（ポリ）ペプチドの発現は、アンチセンスアプローチ以外の手段によって影響され、抑制され得ることが構想される。以上の点から、本発明の（ポリ）ペプチドの発現の減少は、アンチセンス核酸のあるいは二本鎖ＲＮＡを適用するＲＮＡ媒介遺伝子干渉によって達成することができる（Ｓｈａｒｐ，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．１３（１９９９），１３９−１４１を参照）。二本鎖ＲＮＡまたはＲＮＡｉアプローチによる遺伝子抑制は、Ｈｕｎｔｅｒ、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０（２０００）、Ｒ１３７−Ｒ１４０にも記載されている。
【００４５】
本発明の核酸分子は以上の点から、本発明のＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチドの野生型または変異体バージョンのいずれかをコードする核酸分子の機能を抑制することができる適切なアンチセンスオリゴヌクレオチドの作成のために使用され得る。前記アンチセンスヌクレオチドは、有利には少なくとも１５ヌクレオチド、より有利には少なくとも２０ヌクレオチド、さらにより有利には３０ヌクレオチドおよび最も有利には少なくとも４０ヌクレオチドを含む。
【００４６】
加えて、リボザイムアプローチもまた、本発明において構想されている。リボザイムは本発明の核酸分子を特異的に切断することができる。
【００４７】
本発明に照らしてリボザイムは、特にハンマーヘッド型リボザイム、変異コア配列またはデオキシリボザイムを有するハンマーヘッド型リボザイム（例えば、Ｓａｎｔｏｒｏ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４（１９９７）、４２６２を参照）を含み、天然および生体外選択および／または合成リボザイムを含むことができる。肥満症を調節、誘発するかまたは肥満症に寄与し、および／または体重調節に関与する哺乳動物の（ポリ）ペプチドをコードするタンパク質／（ポリ）ペプチド（下記を参照）をコードする核酸分子に相補的な本発明記載の核酸分子は、本発明の核酸分子を特異的に切断する適切なリボザイム（例えば、ＥＰ−Ｂ１０２９１５３３、ＥＰ−Ａｌ０３２１２０１、ＥＰ−Ａ２０３６０２５７を参照）の作成に使用し得る。適切な標的部位および対応リボザイムの選択は、Ｓｔｅｉｎｅｃｋｅ，Ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ細胞Ｂｉｏｌｏｇｙ５０，Ｇａｌｂｒａｉｔｈ，ｅｄｓ．ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９５），４４９−４６０に記載された参考例の通りに行うことができる。
【００４８】
本発明はまた、本発明のベクターまたは本発明のベクターを保有する非ヒト宿主で形質移入または形質転換された宿主細胞、すなわち、本発明記載の核酸分子またはそのような核酸分子を含むベクターで遺伝的に修飾された宿主細胞または宿主に関連するものである。用語「遺伝的に修飾された」とは、宿主細胞または宿主がその天然ゲノムに加えて、細胞または宿主またはその前任／親の１つに導入された核酸分子または本発明記載のベクターを含むことを意味する。核酸分子またはベクターは、遺伝的に修飾された宿主細胞または宿主中に、ゲノム外の非依存性の分子として、有利には複製可能な分子として、または宿主細胞または宿主のゲノムに安定して統合された状態のいずれかで存在することができる。
【００４９】
本発明の宿主細胞は、任意の真核または原核細胞であり得る。望ましい真核細胞は、一般に大腸菌または枯草菌のようなクローン化に使用されるものである。さらには、原核細胞は、例えば真菌細胞または動物細胞を含む。望ましい真菌細胞の例としては、酵母菌細胞、有利にはサッカロミセス属の真菌細胞および最も有利にはサッカロミセスセレビジエ種の真菌細胞があげられる。望ましい動物細胞は例えば、昆虫細胞、脊椎動物細胞、有利には、例えばＣＨＯ、Ｈｅｌａ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＭＯＬＴ−４、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋ５６２、ＨｅｐＧ２、３Ｔ３−４４２Ａ、３Ｔ３−Ｌ１（およびその誘導体）、ＨＩＢ−１Ｂ（Ｖｉｌｌｅｎａ、ＢｉｏｃｈｅｍＪ．３３１（１９９８）、１２１−１２７を参照）、ＨＥＫ２９３、ＰＡＺ６（Ｓｔｒｏｂｅｌ、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ４２（１９９９）、５２７−５３３を参照）のような哺乳動物の細胞である。当分野で周知の、さらに望ましい細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）のような細胞株寄託機関から入手可能である。
【００５０】
より望ましい実施例において、本発明のベクターで形質転換させた宿主細胞は、哺乳動物の細胞、特にそれから得た脂肪細胞、脳細胞、苔類細胞、上皮性細胞、血球または細胞（株）である。
【００５１】
非ヒト宿主は、有利には非ヒト哺乳類、最も有利にはマウス；ラット、ヒツジ、子ウシ、イヌ、サルまたは類人猿であり、またサンドラット（Ｐｓａｍｍｏｍｙｓｏｂｅｓｕｓ）を含んでもよい。前記哺乳類は、治療法、有利には肥満症、脂肪過多症、摂食障害および／または病理学的な体重問題を引き起こす障害に対する治療法を開発する上で不可欠であり得る。さらには本発明の宿主は、本発明の（ポリ）ペプチド（またはそのフラグメント）の産出において部分的に有用であり得る。前記（ポリ）ペプチド（またはそのフラグメント）が前記宿主から単離されることが構想される。
【００５２】
本発明の非ヒト宿主は、下記のように非ヒト遺伝子組換え動物（実施例１０を参照）であリ得る。特に、本発明は、本発明の核酸分子の変異形態を含む非ヒト遺伝子組換え動物、または本発明の核酸分子が欠失および／または不活化された非ヒト遺伝子組換え動物を構想する。前記欠失は部分的欠失であり得る。特に望ましい非ヒト遺伝子組換え動物は、ショウジョウバエ、線形動物（例えば線虫）、マウス、ラット、ヒツジその他同種類のものである。
【００５３】
さらには、本発明は、前記（ポリ）ペプチドの合成を許容し、培養により産生される（ポリ）ペプチドを回収および／または単離する望ましい条件下で、本発明の宿主細胞を培養することを含む、本発明の核酸分子によってコードされた（ポリ）ペプチドを産出する方法に関連するものである。
【００５４】
形質転換された宿主細胞を当分野で周知の技術に従って発酵槽において増殖および培養して、至適な細胞増殖を達成することができる。本発明の（ポリ）ペプチドを、次に、増殖培地、細胞可溶化液、細胞膜画分または包含体から単離することができる。発現されると、本発明のタンパク質を、硫酸アンモニウム沈殿、親和性カラム（アフィニティーカラム）、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法その他同種類のものを含む、当分野の標準製法に従って精製することができる；Ｓｃｏｐｅｓ，”ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照。例えば、”ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”（２０００，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ）は精製プロトコルを提供する。さらなる精製スキームは当分野で周知であり、膜タンパク質の精製も提供する。例えば、酵母菌／酵母菌発現系中での発現から精製を行うことは、Ｍｕｒｄｚａ−ｌｎｇｌｉｓ（１９９１）、ＪＢＣ２６６、１１８７１−１１８７５に記載されており、細菌における精製／発現は、Ｋａｐｌ（１９９６）、Ｊ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ．Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．２８、４１−４７に、または原核細胞における精製／発現は、（Ｃａｓｔｅｉｌｌａ（１９９０）、ＰＮＡＳ８７、５１２４−５１２８）おいて開示されている。少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０〜９７％の同質性を有する実質上純粋なタンパク質が望ましく、９８〜９９％以上の同質性が医薬品用として最も望ましい。部分的に、または所望の同質性で精製された後、タンパク質を、治療（体外を含む）またはアッセイの開発および実施に使用することができる。
【００５５】
加えて、本発明は、本発明の核酸分子によってコードされるか、または上述の方法によって産生または取得可能な（ポリ）ペプチド関連するものである。ここに使用された用語「（ポリ）ペプチド」は、ペプチド、完全長タンパク質またはそのフラグメントのいずれかを意味する。ペプチドは、有利には本発明の（ポリ）ペプチドのフラグメントである。用語「（ポリ）ペプチド」は、アミノ酸残基が共有結合のペプチド結合によって連鎖されている、任意の長さのアミノ酸鎖を含むペプチドまたは（ポリ）ペプチドを含む。有利には、「ペプチド」の前記アミノ酸鎖は、少なくとも１０アミノ酸、より有利には少なくとも２０、より有利には少なくとも３０、より有利には少なくとも４０、さらにより有利には少なくとも５０および、最も有利には少なくとも６０アミノ酸を含む。本発明の（ポリ）ペプチドが少なくとも１００、より望ましい少なくとも２００、より望ましい少なくとも３００、より望ましい少なくとも４００、より望ましい少なくとも５００、さらにはより望ましい少なくとも６００アミノ酸を含んでいることがより望ましい。
【００５６】
本発明において本発明の（ポリ）ペプチドに照らして使用されている用語「またはそのフラグメント」は、特定のペプチド、本明細書で開示されている（ポリ）ペプチドのアミノ酸伸長を含む。前記「そのフラグメント」は機能的フラグメントであることが望ましい。用語「機能的フラグメント」は、少なくとも部分的に、本発明の（ポリ）ペプチドの生理的および／または構造上の活性を満たす、上記で同定された本発明の（ポリ）ペプチドの部分を意味する。但し、前記フラグメントが、本発明の（ポリ）ペプチドに対して介在性および／または抑制性の分子として機能することも構想される。例えば、本発明の（ポリ）ペプチドのフラグメントは、構造的および／または生理的に本発明の（ポリ）ペプチドと相互に影響し、それによって前記（ポリ）ペプチドの機能を抑制することが構想される。
【００５７】
本発明の（ポリ）ペプチドは、細菌、酵母菌、またはその他の原核細胞のような、哺乳動物細胞または昆虫細胞のような、宿主細胞において発現された組換え（ポリ）ペプチドであり得る。あるいは、それらはウィルス製剤から単離することができる。
【００５８】
本発明における他の実施例では、合成（ポリ）ペプチドを使用することができる。以上の点から、そのような（ポリ）ペプチドは、本発明の核酸分子によってコードされた、天然アミノ酸残基のみを含む（ポリ）ペプチドであり得るが、修飾を含んでいる（ポリ）ペプチドでもあり得る。これらには、共有結合性誘導体、例えばカルボキシル基の脂肪族エステルまたはアミノ、ヒドロキシル基を含む残基のＯ−アセチル誘導体、アミノ基を含む残基のＮ−アシル誘導体が含まれる。そのような誘導体は、アミノ酸残基の側鎖およびタンパク質のＮ−末端およびＣ−末端に存在する反応可能基を連結することによって製造することができる。さらには、（ポリ）ペプチドは、放射標識または、共有結合希土類キレートのような検出可能基を用いて標識すること、または蛍光部分に抱合させることができる。本発明の（ポリ）ペプチドは、例えば、そのような（ポリ）ペプチド、化学的修飾の生成物をコードするヌクレオチド配列の発現の生成物であり得るし、またはウィルス製剤（調合）のような天然源から精製することができる。さらには、（ポリ）ペプチドのドメインの共有結合連鎖の生成物であり得る。
【００５９】
ペプチド／（ポリ）ペプチドはまた、生化学的技術または合成技術産生によっても産出することができる。それらの方法は当分野では周知である（例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５（１９６３），２１４９−２１４６；Ｓｔｅｗａｒｔ，”ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ＷＨＦｒｅｅｍａｎＣｏ，ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ（１９６９）；Ｓｃｏｐｅｓ，”ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（１９８７）；Ｊａｎｓｏｎ，”ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，高ＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，ＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ（１９８９）；Ｗｒｅｄｅ，”ＣｏｎｃｅｐｔｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＤｅｓｉｇｎ”，ＷａｌｔｅｒｄｅＧｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９４）を参照）。
【００６０】
そのうえ、本発明の範囲内には、前述のアミノ酸および／またはペプチド結合が機能的類似物、特に疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）によって置換されている、ペプチド／（ポリ）ペプチドがある。疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）は当分野で公知であり、この方法を記載する対応技術は以下に記載されている。以上の点から、本発明はまた、特定のＳＯＵＰＩ由来ペプチドを含む、機能的誘導体および／または前記ペプチドの類似体を包含する。ペプチド／（ポリ）ペプチドの調製に対する方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ｌｏｃ．ｃｉｔ．，ｏｒｉｎＯｘｅｎｄｅｒａｎｄＦｏｘ（１９８７）”ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ＡｌａｎＬｉｓｓＩｎｃ．ＮｅｗＹｏｒｋにおいて記載されている。化学的誘導体および／または類似体のタンパク質調製（調合は、例えば、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ”ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ”，ＳｐｒｉｎｇｅｒＥｄｉｔｉｏｎＮｅｗＹｏｒｋ，ｏｒｉｎ”ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ．において記載されている。
【００６１】
本発明はまた、本発明の（ポリ）ペプチドまたはそのフラグメントを含む、融合タンパク質に関連するものである。以上の点から、本発明の（ポリ）ペプチドに加えて、前記融合タンパク質は少なくとも１つのドメインを含み、前記ドメインは共有結合または非共有結合によって結合されている。結合は、当分野で周知の方法に従った遺伝的融合に基づくものであってよく（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前掲のＡｕｓｕｂｅｌ，”ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”，ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓａｎｄＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））または
例えば、ＷＯ９４／０４６８６において記載されたように、例えば化学的架橋結合によって実施することができ、本発明の（ポリ）ペプチドを含んだ融合タンパク質に存在する追加ドメインは、有利には可動性のリンカーによって連鎖することができ、有利に前記（ポリ）ペプチドリンカーは、前記ドメインのＣ末端と、ペプチド、（ポリ）ペプチドまたは抗体のＮ末端間との距離にまたがる、あるいはその逆の、充分な長さの、複数、親水性の、ペプチド結合されたアミノ酸を含んでいる（ポリ）ペプチドリンカーである。上記の融合タンパク質は、切断可能なリンカーまたは例えば、タンパク質分解酵素または化学薬品によって特異的に認識および切断される切断部位を含むことができる。そのうえ、前記の少なくとも１つのドメインは、所定の特異性または機能を有したドメインであり得る。これに関連して、本発明の（ポリ）ペプチドは、当分野で周知の従来の方法によって修飾され得ることが理解される。これは、本発明の（ポリ）ペプチドおよびその他の機能的アミノ酸配列、例えば、細胞小器官の局在性シグナル、転写促進ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、ホルモン結合ドメイン、タンパク質タグ（例えばＧＳＴ、ＧＦＰ、ｈ−ｍｙｃペプチド、フラグ、ＨＡペプチド、連鎖球菌）、膜貫通ドメインまたは異種タンパク質から得られる脂肪酸添付モチーフを含んだ、融合タンパク質の作成を許容する。
【００６２】
本発明の融合タンパク質は、モザイク（ポリ）ペプチドでもあり得る。本発明の（ポリ）ペプチドの少なくとも２つのエピトープを含んでいる前記モザイク（ポリ）ペプチドであってよく、前記モザイク（ポリ）ペプチドは、通常、未変性のＳＯＵＰ１タンパク質のエピトープ間に介在するアミノ酸が欠失している。
【００６３】
特に、そのようなモザイク（ポリ）ペプチドは、単一ペプチドまたは（ポリ）ペプチド内に直線的、またはリジンの場合において多抗原ペプチドシステムとして存在している可能性がある多数の関連エピトープを含み得るので、ここに記載する適用例および方法において有用である。関連エピトープはスペーサー領域によって分離することができる。
【００６４】
前記ポリペプチドまたはそのフラグメントを含んでいる本発明の融合タンパク質が、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５〜５０、６１または６２に示す任意のアミノ酸配列を、少なくとも１つ、有利には少なくとも２つ、より有利には少なくとも３つ、より有利には少なくとも４つ、より有利には少なくとも５つ、および最も有利には６つ含むことが特に望ましい。上記に開示したように、前記配列は、ここに記載したようにＳＯＵＰ１タンパク質の特異的に演繹された膜貫通領域に関連する。本発明の融合タンパク質が、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７〜５０に示す任意のアミノ酸配列を、少なくとも１つのおよび最も有利には少なくとも６つ含むことは特に望ましい。前記融合タンパク質が、異なる種、例えばヒト、マウスまたはゼブラフィッシュから得られる膜貫通領域を含むことも構想される。なお、最も望ましいのは、１つの種からの膜貫通領域を含む融合タンパク質である。
【００６５】
本発明の核酸分子、（ポリ）ペプチド（そのほかにここに記載したように抗体またはそのフラグメントまたは誘導体、アプタマーまたはその他のレセプター）、融合タンパク質、モザイク（ポリ）ペプチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、検出可能な程度に標識化することができる。生体分子を標識化用の入手可能な種々の技術は、当業者に公知であり、本発明の範囲内に含まれているものとする。そのような技術は、例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ，”Ｐｒａｃｔｉｃｅａｎｄ　ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｂｕｒｄｅｎ，ＲＨ　ａｎｄ　ｖｏｎ　Ｋｎｉｐｐｅｎｂｕｒｇ（Ｅｄｓ），Ｖｏｌｕｍｅ１５（１９８５），”Ｂａｓｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ”；Ｄａｖｉｓ　ＬＧ，Ｄｉｂｍｅｒ　ＭＤ；Ｂａｔｔｅｙ　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９９０），Ｍａｙｅｒｅｔａｌ．，（Ｅｄｓ）”ｌｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ”Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９８７），ｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｉｅｓ”Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．のシリーズに記載されている。
【００６６】
多くの異なる標識および標識化の方法が当分野では周知である。本発明において使用することができる標識タイプの例には、酵素、放射性同位元素（例：３２Ｐまたは１２５Ｉ）、コロイド性金属、蛍光性化合物／蛍光色素（例：フルオレッセインローダミン、テキサスレッドなど）、化学発光化合物、および化学または生物発光の化合物（例：ジオキセタン、ルミノールまたはアクリジニウム）が含まれる。
【００６７】
一般に使用される標識には、特に酵素（例：西洋わさび過酸化酵素、ベータガラクトシダーゼ、アルカリ性の脱リン酸酵素）、ビオチンまたはジゴキシゲニンが含まれる。酵素またはビオチン化基の共有結合カップリング、ヨウ素化、リン酸化、ビオチン化、ランダムな初回抗原刺激、ニックトランスレーション、テーリング（末端トランスフェラーゼ（転移酵素）を使用）のような標識化製法は当分野で周知である。
【００６８】
検出方法には、オートラジオグラフィー蛍光顕微鏡、直接および間接酵素的な反応などが含まれるがそれに限定されるものではない。
【００６９】
本発明は、さらにはそのうえ抗体またはそのフラグメントまたは誘導体または抗血清またはアプタマーまたは核酸上のエピトープ（抗原決定基）を特異的に認識する他のレセプター、または本発明の（ポリ）ペプチドに関連するものである。抗体を産出するための一般的な方法論は、公知であり、モノクローナル抗体に対して、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ２５６（１９７５），４９４　ａｎｄ　ｒｅｖｉｅｗｅｄ　ｉｎ　Ｊ．Ｇ．Ｒ．Ｈｕｒｒｅｌ，ｅｄ．，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，ＣＲＣ　ＰｒｅｓｓＩｎｃ．，Ｂｏｃｏ　Ｒａｒｏｎ，ＦＬ（１９８２）に記載されている。本発明に記載の用語「抗体」は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体に関連するものである。ポリクローナル抗体（抗血清）は、従来のプロトコルに従って取得することができる。抗体フラグメントまたは誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメントを含む；実施例を参照。Ｈａｒｌｏｗ　ａｎｄ　Ｌａｎｅ，”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，ＣＳＨＰｒｅｓｓ１９８８．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ。有利には本発明の抗体はモノクローナル抗体である。さらには、本発明に基づいて、本発明の誘導体は、疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）によって産生することができる。本発明に照らした用語「アプタマー」は、ＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ（ｓｓ＝一本鎖）、修飾ＲＮＡ、修飾ｓｓＤＮＡまたは、高特異性および親和性を有し、複数の標的配列を結合するＰＮＡｓのような核酸を含む。アプタマーは当分野で周知であり、特に、Ｆａｍｕｌｏｋ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（１９９８）、３２０−３２７に記載されている。アプタマーの調製は当分野で公知であり、結合部位を同定するため、特に組み合わせＲＮＡライブラリの使用を含む場合がある（Ｇｏｌｄ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４（１９９５）、７６３−７９７）。前記の他レセプターは、例えば疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）によって前記抗体などから得ることができる。認識の特異性は、その他の周知のタンパク質、分子が結合していないことを暗示する上記の復唱された化合物に接触する特異性を評価する望ましい宿主は、核酸分子のエピトープ（抗原決定基）または本発明の（ポリ）ペプチドのほかに、当分野で周知の、例えばタンパク質または核酸分子からの、例えばイムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）形態における対応化合物を含み、本発明の化合物のみに結合するが、前記対応化合物とは有意な範囲でほとんど交差反応しないそれらの抗体などを同定することをも暗示する。
【００７０】
本発明はまた、本発明の核酸分子のアンチセンスオリゴヌクレオチドに関連するものである。前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、科学的な目的におけるほかに、診断目的または治療学的な目的においてもまた使用することができる。
【００７１】
さらに本発明は、本発明のポリペプチドまたは本発明の融合タンパク質または、本発明の核酸分子を含んだ本発明のベクターで形質移入した融合タンパク質を発現する非ヒト動物を提供する。
【００７２】
例えば、非ヒト動物が本発明のポリペプチドを過剰発現または過小発現することが構想される。さらには、本発明は、本発明の核酸分子またはそのホモログ、パラログまたはオルソログがサイレント突然変異および／または変異されるような、非ヒト動物に関連するものであり。
【００７３】
上記の非ヒト動物は、有利にはマウス、ラット、ヒツジ、ハムスター、ブタ、イヌ、サル、ウサギ、子ウシ、ウマ、線形動物、ハエおよびサカナから成るグループから選択される。
【００７４】
本発明はまた、遺伝子組換えマウス、ラット、ハムスター、イヌ、サル、ウサギ、ブタ、線虫、ショウジョウバエ、サカナ（例：ゼブラフィッシュまたはシビレエイ）のような遺伝子組換え非ヒト動物に関連するものである。核酸分子または本発明のベクターを含んでいる前記動物は、本発明の（ポリ）ペプチドの単一またはいくつかの形態をコードし、肥満症を調節、誘発またはそれに寄与、または体重調節に関与する、単一またはいくつか同一または異なる核酸分子のコピーを有することができる。これらの動物は、ここに記載したようにように、肥満症、脂肪過多、摂食障害、体重／体質量の喪失および／またはその他の障害の研究モデルとして、部分的に有用である。さらには、前記遺伝子組換え非ヒト動物は、上記のＳＯＵＰ１タンパク質の変異体形態に関連して、例えば薬物の薬理学的な研究に良く適している。
【００７５】
他の実施例において、本発明は、ここに定義されたようにポリペプチド、例えばＳＯＵＰ１によって影響および／または修飾される、遺伝子および／または、遺伝子産物の機能をコントロールする、核酸分子、ベクター、宿主、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、フラグメントまたはその誘導体またはアプタマーまたは他のレセプターまたは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用に関連するものである。前記の影響／修飾は、タンパク質／タンパク質フラグメント間の直接相互作用によって、および／または前記遺伝子および／または遺伝子産物の機能、活性および／または発現に必要な、代謝化合物、またはイオンを供給することによって発生させることができる。前記遺伝子および／または遺伝子産物が、細胞小器官に発現する遺伝子および／または遺伝子産物であることは特に望ましい。前記細胞小器官は、特にミトコンドリアまたはペルオキシソームであり得る。
【００７６】
前記遺伝子および／または遺伝子産物が、ＵＣＰファミリーのメンバーでありことは特に望ましい。ＵＣＰファミリーのメンバーは公知であり、上記に記載されている。
【００７７】
本発明はさらに、核酸分子、ベクター、宿主、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、フラグメントまたはその誘導体またはアプタマーまたは他のレセプターまたは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む成分を提供する。前記成分は、特に診断用組成物または、例えばヒトまたは動物薬用などの治療学的な成分医薬品であり得る。さらに、その成分には、望ましい担体、希釈剤および／または補助剤を含むことができる。
【００７８】
加えて、本発明は、細胞障害、細胞塊、器官および／または被験者および／または治療、細胞障害の軽減および／または予防、細胞塊、器官および／または被験者を検出および／または検証するためにここに定義した成分の使用法を提供する。前記障害は、聴覚障害、網膜症、進行性の脳障害（ｅｎｚｅｌｏｐａｔｈｉｅｓ）、運動失調、痙性対麻痺、代謝性アシドーシスおよびその他のような障害を含むミトコンドリアの障害、代謝障害またはミトコンドリアの障害であり得る。
【００７９】
前記代謝障害には、肥満症、脂肪過多、摂食障害（過食症、拒食症）、カヘキシー（衰弱）、膵臓の機能障害（例：糖尿病、具体的には２型の糖尿病）および／またはＲＯＳ（活性酸素種）産生（具体的には老化および発癌における感染に対する反応）に関連する障害を含むことができる。
【００８０】
例えば、ＵＣＰｓは、例えば糖尿病のような膵臓の障害に関与することが示されている。脱共役タンパク質の糖尿病における役割は、げっ歯類のストレプトゾトシン糖尿病におけるＵＣＰ３の誘発によって実証されている（特に、Ｈｉｄａｋａ、Ｐｒｏｃ　Ｓｏｃ　Ｅｘｐ　Ｂｉｏｌ　Ｍｅｄ２２４：１７２−１７７（２０００）、Ｈｉｄａｋａ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ４８：４３０−４３５（１９９９）を参照）。
【００８１】
さらにはＵＣＰ２膵臓のベータ−細胞における発現は、ベータ−細胞機能およびインシュリン分泌を影響することが示されている（Ｗａｎｇ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４８：１０２０−１０２５（１９９９）；Ｃｈａｎ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ４８：１４８２−１４８６（１９９９））。
【００８２】
活性酸素種（ＲＯＳ）ｃを引き起こす膜機能障害、ＤＮＡ損傷および不活性化タンパク質の病理学的な結果には、癌、関節炎および神経変性の疾病が含まれる。ＲＯＳ制限代謝は、細胞損傷から保護するための主要な機構である。具体的には肥満症は、増加された酸化ストレスを誘発することができる（Ｈａｙｅｓ、Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃ　Ｒｅｓ３１：２７３−３００（１９９９）；Ｙａｎｇ、Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ３７８：２５９−２６８（２０００））。
【００８３】
対照的に、マクロファージにおける増加されたＲＯＳ産出は、免疫の反応を改善することができる。同様にＵＣＰ２も、感染に対してより高耐性マウスを特定の病原体を用いてノックアウトすることができる。
【００８４】
以上の点から、修飾能力を有する本発明の化合物、特にＵＣＰｓは、上記に同定された目的に良く適している。
【００８５】
さらなる実施例において、本発明は、ここで定義したとおり、ポリペプチドと相互作用可能な物質を同定するために、核酸分子、ベクター、宿主、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、フラグメントまたはその誘導体またはアプタマーまたは他のレセプターまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用法に関連するものである。前記ポリペプチドと相互作用可能な前記物質は、拮抗薬または作用薬であり得る。
【００８６】
なお、さらなる実施例においては、本発明は、ポリペプチドまたは、動物の細胞代謝に関与する物質または恒常性を修飾する能力のある物質を同定する方法を提供し、そのステップは下記の通りである：
（ａ）本発明のポリペプチド、そのフラグメントまたは本発明の融合タンパク質またはそのフラグメントとの相互作用に関する、ポリペプチドまたは物質の収集を読み取り系を使用して検査するステップ；および
（ｂ）ステップ（ａ）において正の相互作用を示したポリペプチドまたは物質を同定するステップ。
【００８７】
上記の用語「細胞代謝」は、細胞小器官の細胞膜を横切ったイオン輸送、ビタミン輸送または代謝産物輸送の調節に関与する代謝イベントを含むことができる。これらの輸送イベントまたはその調節は、エネルギー恒常性、貯蔵化合物の累積および／または根治的生成／除去に影響することができる。
【００８８】
ポリペプチドまたは上記の開示方法によって同定された物質は、特にポリペプチドまたは直接的または直接的に本発明のポリペプチド、すなわちＳＯＵＰ１タンパク質および／またはそのフラグメントと相互作用する物質（例えばリンカータンパク質経由または生理的パラメータ経由）であり得る。ここに広義に使用された用語「物質」は、生理的および非生理的な物質、例えば合成物質に関連するものである。
【００８９】
明細書において使用されている用語「フラグメント」とは、少なくとも５、有利には少なくとも１０、より有利には少なくとも１５およびさらにより有利には少なくとも２５アミノ酸を含む、および／またはさらに少なくとも１つ、有利には少なくとも２、より有利には少なくとも３、より有利には少なくとも４、より有利には少なくとも５および最も有利には少なくとも６つの膜貫通領域を含んだＳＯＵＰ１タンパク質のフラグメントに関連するものである。なお、ここに使用されたフラグメントは、ＳＯＵＰ１タンパク質のＮ−またはＣ−終端を表すことも構想される。
【００９０】
上記ステップ（ａ）の相互作用に関する前記検査は、当事者に周知の方法によって行うことができ、その方法をここに記載した。具体的には、これらの測定法は、生化学的、免疫学的なおよび／または分子生物学的な測定法を含む。
【００９１】
読み取り系を使用する前記相互作用測定法は、当分野で周知であり、特に２つのハイブリッドスクリーニング（特に、ＥＰ−０９６３３７６、ＷＯ９８／２５９４７、ＷＯ００／０２９１１に記載されている）、ＧＳＴプルダウンカラム、記載された通りの細胞抽出物からの共沈殿測定法、特にＫａｓｕｓ−Ｊａｃｏｂｉ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９（２０００），２０５２−２０５９，”ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ−ｔｒａｐ”ｓｙｓｔｅｍｓ、（記載された通りの、特に、ＵＳ６、００４、７４６における）発現クローン化（例えばｌａｍｄａｇｔｌｌ）、ファージディスプレイ（記載されたとおりの、特にＵＳ５、５４１、１０９における）、生体外結合測定法、その他同種類のものを含む。さらなる相互作用測定法の方法および対応する読み取り系は、特に、ＵＳ５、５２５、４９０、ＷＯ９９／５１７４１、ＷＯ００／１７２２１、ＷＯ００／１４２７１またはＷＯ００／０５４１０に記載されている。
【００９２】
同様に、相互作用する分子／（ポリ）ペプチドは、当分野で公知の細胞基調技術によって演繹することができる。これらの測定法には、特にレポーター遺伝子構成物の発現、または記載されたように、例えば遺伝子発現に影響する薬物／小化合物の同定に関する「ノックイン」測定法」が含まれている。前記「ノックイン」測定法は、組織培養細胞における「ノックイン」のほかに、（遺伝子組換え）動物におけるノックイン測定法を含むことができる。成功した「ノックイン」の実施例は、当分野で周知である（特に、Ｔａｎａｋａ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．４１（１９９９）、５２４−５３９またはＭｏｎｒｏｅ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１１（１９９９）、２０１−２１２を参照）。さらには、生化学的測定法を用いことができる。本発明の（ポリ）ペプチド（またはそのフラグメント）のその他の分子／（ポリ）ペプチド、ペプチドに対する結合、または本発明の（ポリ）ペプチド（またはそのフラグメント）のそれ自体に対する結合（二量体化、オリゴマー形成、多量体化）および、前記相互作用の特にシンチレーション近接測定法による測定が含まれるがそれに限定されるものではない。（ＳＰＡ）または同種時間分解蛍光測定法（ＨＴＲＦＡ）。
【００９３】
さらに使用できる方法には、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー伝達；特に、Ｎｇ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２８３（１９９９）、２０８５−２０８９で記載されたとおり）、または蛍光極性化測定法が含まれる。これらの方法は当分野で周知であり、特にＦｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２（１９９８），５４７−６０３において記載されている。
【００９４】
前記「相互作用の検査」はまた、複合体形成の測定も含むことができる。複合体形成の測定は、当分野で公知であり、特に異種系および均一系による測定を含む。均一系による測定は、結合パートナーが溶液中に残存する測定法を含み、凝集測定法のような測定法を含む。異種性の測定法は、特にイムノアッセイ、例えばＥＬｌＳＡｓ、ＲＩＡｓ、ＩＲＭＡｓ、ＦＩＡｓ、ＣＬｌＡｓまたはＥＣＬｓのような測定法を含む。
【００９５】
相互作用および／または本発明の（ポリ）ペプチドの結合パートナーを同定する、またはこの（特定の）細胞内結合パートナー／標的を有する、本発明の（ポリ）ペプチドの結合を妨害可能な薬剤／化合物の同定に関する、さらなる方法および測定法を、以下に開示する。前記追加のおよび／またはさらなる方法および測定法は、体重調節に関与し、および／または本発明のＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチドと相互作用可能な、上記の（ポリ）ペプチドを同定する方法において使用できる。
【００９６】
本発明の方法の任意の測定または検出のステップは、コンピュータ技術によって補助することができる。例えば、本発明に基づいて、前記検出および／または測定ステップは、イメージ分析、分光法または流動細胞計測法を含んだ種々の手段によって自動化することができる。
【００９７】
なお別の実施例において、本発明は、１つ以上の相互作用する（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子同定するステップをさらに含む、上記の方法に関連するものである。
【００９８】
そのような核酸分子の同定は当分野で公知であり、特に特定プライマーおよび／または変性プライマーの使用法を含む。さらには、組換え技術はＳａｍｂｒｏｏｋ，ｌｏｃ．ｃｉｔ．ｏｒｉｎＧｌｉｃｋ（１９９４），”ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”，ＡＳＭＰｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎにおいて記載されたとおりに使用することができる。
【００９９】
なお、さらなる実施例においては、本発明は、ポリペプチドまたは、動物の細胞代謝に関与する物質または恒常性を修飾する能力のある物質を同定する方法に関連し、そのステップは下記の通りである：
（ａ）本発明のポリペプチドとの相互作用のため、または上記の方法によって同定されたのポリペプチドまたは物質の収集を検査するステップ；および
（ｂ）ステップ（ａ）において正の相互作用を示したポリペプチドを同定するステップ；および随意的に
（ｃ）同定されたポリペプチドを用いてステップ（ａ）および（ｂ）を１回以上繰返すステップ。このステップでは、新規に同定されたポリペプチドは、さらに相互作用するポリペプチドを同定するために、以前に同定されたポリペプチドをベイトとして置換する。
【０１００】
上記の方法はさらに、１つ以上の相互作用する（ポリ）ペプチドコードする核酸分子を同定するステップを含むことができる。
【０１０１】
本発明はまた、ここに記載したように、核酸分子の使用法、またはここに記載されたように、ポリペプチド検出および／または遺伝子および／または遺伝子産物の単離、細胞代謝の機能的カスケード、具体的にはエネルギー代謝の機能的カスケードに関与する使用法を提供する。
【０１０２】
そのうえ、本発明は、哺乳動物における体重調節に関与するポリペプチドを同定する方法に関連するものであり、そのステップは下記の通りである：
（ａ）本発明のポリペプチド、そのフラグメントまたは本発明の融合タンパク質またはそのフラグメントを有するポリペプチドの収集物に、前記（ポリ）ペプチドの結合を許容する条件下で接触させるステップ；および
（ｂ）ステップ（ａ）で本発明の前記ポリペプチドまたは本発明の融合タンパク質に対して結合しなかった（ポリ）ペプチドの前記収集から（ポリ）ペプチドを除去するステップ。および
（ｃ）本発明の前記ポリペプチドまたは本発明の融合タンパク質に結合する（ポリ）ペプチドを同定するステップ。
【０１０３】
上記の方法は、当業者によって実行されることができる。ステップ（ａ）の前記「接触」は、本発明の（ポリ）ペプチドおよび／またはそのフラグメントと共役する（磁石）ビーズを使用して、特に溶液中で行うことができる。例えば、磁力分離、重力、親和性カラム系および対応洗浄、その他同種類のものを含む、非結合（ポリ）ペプチドは、当分野で周知の方法によって容易に除去することができる。
【０１０４】
結合（ポリ）ペプチドを同定する方法は、当分野で周知であり、特にＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）分析、およびウエスタンブロット法を含む。さらには、２Ｄゲル電気泳動、ゲル内温浸、マイクロシークエンシング、Ｎ末端シークエンシング、ＭＡＬＤＩ−ＭＳ、質量分析におけるペプチドの分析、ペプチド質量フィンガープリント法、ＰＳＤ−ＭＡＬＤＩ−ＭＳおよび／または（ミクロ）ＨＰＬＣのような技術がある。同定される分離ポリペプチドは、特にエドマン分解法、ＭＡＬＤＩ−ＭＳ法、ラダーシークエンシング法（Ｔｈｉｅｄｅ、ＦＥＢＳ３５７（１９９５）、６５）によって、さらに分析することができる。
【０１０５】
上記の（およびその他の当分野で周知の）方法を使用することによって、同定される（ポリ）ペプチドのアミノ酸配列は演繹および配列される。これらの配列されたアミノ酸のフラグメントから、変性オリゴヌクレオチドは、演繹および合成することができ、これらを用いて、例えばゲノムまたはｃＤＮＡライブラリをスクリーニングし、対応遺伝子／ｃＤＮＡを同定およびクローン化することができる。
【０１０６】
さらには、ファージディスプレイアプローチを本発明の方法に使用することができる。ファージディスプレイは、所定の分子と相互に影響するタンパク質の同定を許容する。それぞれ異なるペプチドエピトープ（抗原決定基）を示すファージのライブラリは、所定の分子に対する結合に関してテストされる。結合ファージは精製することができ、ペプチドエピトープ（抗原決定基）をコードする挿入フラグメントを配列することができる。ファージディスプレイキットは当分野で周知であり、市販の例としてはＤｉｓｐｌａｙＳｙｓｔｅｍｓＢｉｏｔｅｃｈＣａｔ．Ｎｏ．３００−１１０があげられる。
【０１０７】
本発明は、さらに別の実施例において、前記本発明の（ポリ）ペプチドが固形担体に固定されている、ここに記載の方法に関連するものである。
【０１０８】
固形担体は当分野で周知であり、特に市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁力ビーズ、膠質金属粒子、ガラスおよび／またはシリコン素子およびシリコン面、ニトロセルロース条片、膜、シート、ｄｕｒａｃｙｔｅｓ、反応トレーのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどを含む。本発明の前記（ポリ）ペプチドを固定化／不動化するのに望ましい方法は公知であり、イオン性相互作用、疎水性相互作用、共有結合相互作用およびその他同種類が含まれるがそれに限定されるものではない。
【０１０９】
特定の望ましい実施例において、前記固形担体はゲルろ過または親和性クロマトグラフィー材料である。
【０１１０】
上記の本発明の方法のより望ましい実施例において、前記結合（ポリ）ペプチドは、ステップ（ｃ）における前記同定に先行して解離される。
【０１１１】
前記解離は、溶出によって発効することができる。そのような溶出方法は当分野で周知であり、特に異なるイオン強度または異なるｐＨの溶液を用いた溶出、または薬剤／分子／ペプチドのインターカレートまたは競合を利用した溶出を含む。
【０１１２】
さらには、より望ましい実施例において、本発明は、前記方法に１つ以上の結合（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子を同定するステップが含まれている本発明の上記の方法に関連するものである。
【０１１３】
上記に指摘したように、前記核酸分子を、特に変性プライマー／オリゴヌクレオチドまたは発現クローン化を用いて演繹して、対応遺伝子および／またはｃＤＮＡを検出することができる。
【０１１４】
本発明の核酸分子の発現に影響する化合物を同定する方法は下記のステップから成る。
【０１１５】
（ａ）請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子または請求項３６または４２に記載の方法により同定され、動作可能に読み取り系へ連結された核酸分子を含む発現ベクターを有する宿主を、化合物または化合物混合物と接触させるステップ、
（ｂ）前記接触の結果が、前記読み取り系によって起こるシグナル強度を変化させるかどうかを分析するステップ、場合により
（ｃ）ステップ（ｂ）においてシグナルの変化を誘導する化合物を化合物混合物から同定するステップ（ここでは、シグナル強度の前記変化は、前記核酸分子の発現の変化に相関する）。
【０１１６】
さらに本発明は、上記の定義のとおりに（ポリ）ペプチドの活性に影響する化合物を同定する方法を提供し、その方法は下記のステップから成る。
【０１１７】
（ａ）効果的に読み取り系と連結する、請求項１から９までのいずれか１項に記載の核酸分子を含みかつ／または読み取り系と連結する本発明の（ポリ）ペプチドを有する発現ベクターを有する宿主を、化合物または化合物混合物と接触させるステップ、
（ｂ）前記接触の結果、読み取り系によって起こるシグナル強度の変化があるかどうかを分析するステップ；場合により
（ｃ）ステップ（ｂ）でシグナル変化を誘導する化合物を化合物混合物から同定するステップ（ここでは、前記シグナル変化が前記（ポリ）ペプチドの活性変化に相関することを特徴とする）。
【０１１８】
本発明の方法に照らして上記に使用された用語「活性」には、本発明の（ポリ）ペプチドの「機能」も含まれる。前記機能は上記のように、酵素活性またはその他の機能、特にシグナル伝達経路における介入などを含むことができる。そのような活性およびそのような活性の修飾因子は、ここに記載したように好都合な生体外または生体内測定法によって、またはその変動によって決定および／または同定することができる。根底にある技術は、広範かつ一般的に当業者に周知されている。
【０１１９】
本発明の核酸分子に動作可能なように連鎖した、または本発明の（ポリ）ペプチドに連鎖した読み取り系はここに開示され、放射性の標識に基づく測定法、発光、蛍光などが含まれるがそれに限定されるものではなく、特に、前記読み取り系は、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）を含むことができる。上記の方法は、特に（自動化）高処理量スクリーニングにおいて有用である。本発明に照らして、上記の「動作可能なように本発明の核酸分子に連鎖した読み取り系」はまた、例えば核酸分子、特にその他のプラスミド、ベクターなどのような、異なる分子上に位置する読み取り系をも含む。
【０１２０】
上記方法のステップ（ａ）の前記宿主は、原核宿主細胞であり得る。前記宿主細胞は、酵母菌細胞または植物細胞であり得る。前記真核生物の宿主細胞が哺乳動物の宿主細胞であることは特に望ましい。但し、前記宿主細胞は、例えば細菌のような真核細胞でもあり得る。特に望ましいのは、真核（宿主）細胞が上記の場合である。
【０１２１】
本発明の方法における用語「化合物」には、単一物質または同一または同一でない複数物質が含まれる。前記化合物は、例えば試料、例えば植物、動物または微生物などからの抽出細胞に含まれることができる。さらには、前記化合物は当分野で周知であるが、本発明の（ポリ）ペプチドの活性に影響可能なこと、または本発明の核酸分子の発現に影響可能であることは、それぞれ周知されていない。複数個の化合物は、例えば生体外試料に添加すると培地を培養または細胞に注入することができる。
【０１２２】
試料（化合物の収集）が、本発明の方法において同定された化合物を含んでいる場合、化合物を該当の化合物を含んでいると同定された本来の試料から単離すること、または本来の試料をさらに細区画すること、例えば、資料に複数の異なる化合物が含まれている場合、試料ごとに含まれている異なる物質の数を減少させるため、本来の試料の細区画をさらに細区画する作業を繰返すことはいずれも可能である。前記試料または化合物が所望の特性を示すかどうかはここに記載した当分野で周知の方法によって決定することができる。試料の複雑さにより、上記のステップを何回か繰り返すことができるので、試料が本発明の方法によって限定された数、または１つのみの物質を含むと同定されるまで、ステップを繰返すことが望ましい。前記試料が類似の化学的および／または物理的な性質の物質を含みことが望ましく、前記物質が全て同一であることが最も望ましい。本発明の方法は、当業者によって、例えば従来の技術に記載されているその他の細胞基調測定法に従って容易に実施およびデザインすることができる（例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ４０３５０６を参照）。さらには、当業者は、どの化合物および／または細胞が本発明の方法を実施するために使用することができるかを容易に認識できる。例えば、上記の宿主細胞または酵素は、必要に応じて、例えば前駆物質化合物を、次々に本発明の核酸分子の発現に影響および／または本発明の（ポリ）ペプチドの活性に影響する、活性化合物に転換する。
【０１２３】
そのような本発明方法の順応は、当業者の能力範囲で行なうものとし、必要以上の実験を行なわずに実施され得る。
【０１２４】
本発明に記載の方法に従って使用できる化合物には、特にペプチド、タンパク質、およびｃＤＮＡ発現ライブラリ、抗体、小有機の化合物、結合基、ＰＮＡｓその他同種類のものを含んだ核酸が含まれる。前記化合物はまた、機能的誘導体または周知の活性化剤または阻害剤の類似体であり得る。化学的誘導体および類似体の調製（調合）のための方法は、当業者に公知であり、例えばＢｅｉｌｓｔｅｉｎ（前掲）に記載されている。さらには、前記誘導体および類似体の効果は、当分野で周知の方法および／またはここに記載した方法に従ってテストすることができる。さらには、疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）および／または本発明の核酸分子の発現の適切な活性化剤または阻害剤のコンピュータ支援設計、または本発明の（ポリ）ペプチドの活性のコンピュータ支援設計を、例えば、ここに記載した方法に従って用いることができる。例えば、タンパク質およびペプチドのコンピュータ支援設計のための適切なコンピュータ装置は、従来の技術、例えばＢｅｒｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２（１９９４），１０３３−１０３６；Ｗｏｄａｋ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５０１（１９８７），１−１３；Ｐａｂｏ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２５（１９８６），５９８７−５９９１に記載されている。上述のコンピュータ分析から得た成果は、本発明の方法、例えば、「周知の化合物、物質または分子の最適化」と共に使用することができる。適切な化合物はまた、連続的な化学的修飾および結果として生じる化合物の検査、例えば、ここに記載の方法を通して、疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）組み合わせライブラリの合成によって同定することができる。生成および疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）組み合わせライブラリの使用法に関する方法は、従来の技術、例えばＯｓｔｒｅｓｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２６７（１９９６），２２０−２３４　ａｎｄ　Ｄｏｒｎｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４（１９９６），７０９−７１５において記載されている。さらには、三次元および／またはＳＯＵＰ１タンパク質またはｓｏｕｐ１核酸分子の阻害剤または活性化剤の結晶学的な構造は、本発明の方法においてテストされる、本発明の（ポリ）ペプチドの疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）阻害剤または活性化剤のために使用することができる（Ｒｏｓｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３５（１９９６），１２９３３−１２９４４；Ｒｕｔｅｎｂｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４（１９９６），１５４５−１５５８）。
【０１２５】
特に望ましい実施例において、上記の本発明の方法では、シグナル強度の前記変化はシグナル強度の上昇またはシグナル強度の減少を意味する。本発明の核酸分子の発現および／または本発明の（ポリ）ペプチドの活性に影響する、化合物を同定するための本発明の上記方法は、前記化合物のスクリーニングにも使用することができる。
【０１２６】
なお、さらなる実施例において、本発明は、動物における本発明の１つ以上のポリペプチドまたは１つ以上の融合タンパク質の発現の影響を評価する方法を提供し、その方法は下記のステップから成る。
【０１２７】
（ａ）核酸分子コーディングを前記動物における本発明のポリペプチドまたは融合タンパク質に対して過剰発現するステップ；および
（ｂ）前記動物の重量が増加したか減少したか、代謝変化が誘発されたかどうか、および／または摂食行為が修飾されかたどうかを、それぞれ判定するステップ。
【０１２８】
同様に、本発明はまた、動物における本発明の１つ以上の（ポリ）ペプチドまたは１つ以上の融合タンパク質の発現の影響を評価する方法に関連し、その方法は下記のステップから成る。
【０１２９】
（ａ）核酸分子コーディングを前記動物における本発明のポリペプチドまたは融合タンパク質に対して低発現するステップ；および
（ｂ）前記動物の重量が増加または減少したか、代謝変化が誘発されたかどうか、および／または摂食行為が修飾されかたどうかを、それぞれ判定するステップ。
【０１３０】
上記の遺伝子組換え動物は、上記の１つ以上の本発明の（ポリ）ペプチドの発現の影響を評価する方法にとって特に有用であり得る。上記の本発明の核酸分子の「低発現」には、特に、両対立遺伝子の全欠損、または任意単一の対立遺伝子の除去が含まれる。さらに、前記用語には、試験動物における低機能的タンパク質／（ポリ）ペプチドの発現を引き起こす突然変異の生成が含まれる。
【０１３１】
上述のポリペプチドの結合標的および薬剤との相互作用を調整する薬剤をスクリーニングする方法は下記のステップから成る。
【０１３２】
（ａ）
（ａａ）請求項１３に記載のポリペプチド、またはそのフラグメントまたは請求項１４または１５に記載の融合タンパク質またはそのフラグメント
（ａｂ）前記（ポリ）ペプチドまたは融合タンパク質またはそのフラグメントの結合標的／薬剤、
（ａｃ）候補薬剤
を含有する混合物を、前記（ポリ）ペプチド、融合タンパク質またはそのフラグメントが基準親和性で前記結合標的／薬剤と特異的に結合する条件でインキュベートし、
（ｂ）前記（ポリ）ペプチド、融合タンパク質またはそのフラグメントと前記結合標的との結合親和性を検出し、（候補）薬剤の偏向親和性を測定し、
（ｃ）（候補）薬剤偏向親和性と基準親和性との差を決定する。
【０１３３】
上記に指摘したように、本発明の（ポリ）ペプチドの特定の結合標的および薬剤は、シグナル伝達経路および／または特定のレセプターの本発明の（ポリ）ペプチドとの接触に関与する分子を含むことができる。但し、本発明の（ポリ）ペプチドの前記結合標的および薬剤は、前記（ポリ）ペプチド自体であり、特に二量体化または多量体化を引き起こすことも構想される。さらなる（天然および人工）結合標的および薬剤は、当分野で周知な方法および本明細書で開示する方法によって同定され得る。
【０１３４】
本発明の（ポリ）ペプチドの相互作用の「リファランス親和性」およびその結合標的および薬剤は、当分野で周知の方法によって確立および／または演繹され得る。前記方法には、生体外および生体内方法が含まれるがそれに限定されるものではなく、ここに記載したように結合アッセイを含み得る。具体的には、前記結合アッセイは、本発明の（ポリ）ペプチドの結合標的および薬剤との分子相互作用が評価されるような任意の測定法を含む。前記結合標的および薬剤は、天然（例えば細胞内の）結合標的および薬剤、例えば、ＳＯＵＰ１基質、ＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチド自体、ＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチド制御因子および／またはシグナル伝達カスケードの分子を含むことができる。本発明の範囲内では但し、本発明の（ポリ）ペプチドの非天然の結合パートナーは、例えば、抗体または誘導体および／またはそのフラグメント、アプタマーのほかに、非天然のレセプター分子をも含むことができる。前記結合標的および薬剤はまた、アンタゴニストのほかに本発明の（ポリ）ペプチドのアゴニストもまた含む。
【０１３５】
本発明の（ポリ）ペプチドの特定の親和性、活性および／または機能は、好都合な生体外、細胞基調または生体内測定法、例えば動物における生体外結合アッセイ、細胞培養測定法（例えば遺伝子療法、遺伝子組換え）、などによって決定することができる。結合アッセイは、本発明の（ポリ）ペプチドの分子の結合標的との相互作用が評価される任意の測定法を含む。結合標的は、前記本発明の（ポリ）ペプチド自体のオリゴマー形成（二量体化、多量体化）、基質または前記本発明の（ポリ）ペプチドの調節タンパク質または、本発明の（ポリ）ペプチドの活性または（細胞）局在性を直接的に調整する他の制御因子のような、天然細胞内結合標的であり得る。さらなる結合標的および薬剤は、抗体のような特定の免疫のタンパク質のような非天然結合標的、または以下に記載されたようにスクリーニング測定法において同定されたようなＳＯＵＰ１（ポリ）ペプチド特定の薬剤を含む。
【０１３６】
特定のスクリーニング測定法は、特にＵＳ５、８５４、００３またはＵＳ５、６３９、８５８において開示されている。本発明の（ポリ）ペプチドの特定の結合薬剤は、ヘプタぺリカルレセプターのファミリーのレセプターのようなＳＯＵＰ１特異性のレセプターを含むことができる。その他の天然ＳＯＵＰ１結合標的は、開示された材料および方法およびその他の当分野で周知の方法を用いて、細胞、細胞膜および細胞抽出物および画分をスクリーニングすることによって、容易に同定される。例えば、本発明の（ポリ）ペプチドの天然細胞内結合の標的は、１−ハイブリッド、２−ハイブリッド、および３−ハイブリッドスクリーンのような測定法を用いて同定され得る。加えて、生化学的精製製法、細胞抽出物からの共沈殿測定法、相互作用捕集装置、発現クローン化（例えば、ラムダｇｔ１１を使用する細菌中、またはプラスミド発現ベクターを使用する原核細胞系中）、ファージディスプレイ、その他同種類の方法が、天然のｓｏｕｐ１結合薬剤を同定するために利用し得る。非天然の細胞内結合薬剤は、以下に記載されたように、化学的ライブラリのスクリーンにおいて取得し得る。
【０１３７】
本発明は、ＳＯＵＰ１の調節可能な細胞機能のレベルで、薬理学的な薬剤、化合物または主要化合物薬剤活性を同定する効果的な方法を提供する。一般に、これらのスクリーニング方法は、天然のＳＯＵＰ１結合標的を用いて本発明の（ポリ）ペプチド相互作用調節する化合物の測定法に関与する。標識化生体外タンパク質−タンパク質結合アッセイ、免疫測定法、細胞基調測定法などを含んだ薬剤結合のためのさまざまな測定法が提供されている。これらの方法は自動化、主要化合物のための化学的ライブラリのコスト効果の高い高処理量スクリーニングができるように修正可能であり、直ちに使用できるアプリケーションが国内および国際向けの医薬品およびバイオテクノロジー薬物開発プログラム用に広範に用意されている。同定された試薬は、医薬品工業において動物およびヒト試行用にその用途を見出すであろう。例えば、医薬品開発のために、試薬を誘導体化し、生体外および生体内測定法で再スクリーンを行なうと、活性を最適化し、毒性を最小にすることができる。
【０１３８】
生体外結合アッセイは、例えばタグ検出または固着などのような他のペプチドまたは（ポリ）ペプチドを用いた融合生成物の一部であり得る本発明の（ポリ）ペプチド含む成分の混合体を使用する。これらの方法において使用される本発明の（ポリ）ペプチドまたはそのフラグメントは、普通単離された部分的に純粋または純粋形態において加えられ、典型的に組換え型に産生される。アッセイ混合物はまた、候補薬理学的な薬剤を異なる濃度で含む。候補薬剤は、多くの化学クラスを含み、典型的には有機の化合物だが；有利には小有機の化合物である。小有機化合物は、５０Ｄａ以上だが約２、５００Ｄａ以下、有利には約１、０００Ｄａ以下、より有利には、約５００Ｄａ以下の分子量を有する。候補薬剤は、タンパク質および／またはＤＮＡ、および典型的には少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基、有利には少なくとも２つの機能的化学的基、より有利には少なくとも３つの機能的化学的基との構造上の相互作用に必要な機能的化学的基を含む。候補薬剤はしばしば、周期性の炭素または複素環式構造および／または芳香族または１つ以上の前記機能的基と置換されたポリ芳香族構造を含む。候補薬剤はまた、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、プリミジン（ｐｙｒｉｍｉｄｉｅｓ）、誘導体、構造上の類似体またはその組み合わせ、その他同種類のものを含んだ生体分子間に見出される。薬剤が存在するところ、または形質移入された核酸によコードされるところでは、前記核酸は典型的にＤＮＡまたはＲＮＡである。
【０１３９】
候補薬剤は、合成または天然化合物のライブラリを含んだ、さまざまな源から取得する。例えば、さまざまな有機化合物および生体分子のランダムおよび直接合成のための多くの手段が入手可能である。あるいは、細菌、真菌、植物、および動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリは入手可能であり、容易に産生される。そのうえ、従来の化学的、物理的、および生化学的な手段を通して、天然および合成的に産生されたライブラリおよび化合物は、容易に修飾される。加えて、アシル化、アルキル化、エステル化、アミジン化（ａｍｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）などのような周知の薬理学的薬剤は、構造上の類似体を産出するために、有向またはランダムな化学的修飾の対象であり得る。
【０１４０】
種々の他の試薬も、混合物に含まれ得る。これらには、生化学的エネルギー源として必要な試薬、例えばＡＴＰまたはＡＴＰ類似体、例えば核酸結合アッセイにおける核酸、塩類、緩衝剤、中性のタンパク質、例えばアルブミン、至適なタンパク質−タンパク質および／またはタンパク質−核酸結合を促進するために、および／または非特異性またはバックグラウンド相互作用を減少させるために使用することができる洗浄剤などが含まれる。また、プロテアーゼ阻害剤、核酸分解酵素阻害剤、抗菌の薬剤などのような測定法の効率を改善する試薬を使用することができる。
【０１４１】
結果として生じる混合物は、候補薬理学的薬剤の存在のため、ＳＯＵＰ１ポリペプチドが特異的に細胞結合標的、部分または参照結合親和性を有する類似物を結合する条件下でインキュベートされる。混合体成分は、必要な結合およびインキュベーションを提供するような任意の順序で加えることができ、任意の温度で実施することができ、至適な結合を促進する。インキュベーション期間も同様に至適結合のために選択するが、同時に急速な、高処理量スクリーニングを促進するために最小化も行なう。一般に複数の測定法配合は、種々の濃度に対して異なる反応を得るために異なる薬剤濃度と並行して実施される。典型的に、これらの濃度の１つは、ネガティブコントロール（すなわちゼロ濃度または測定法の検出限界以下の濃度）として役に立つ。
【０１４２】
インキュベーション後、薬剤バイアス結合および／または本発明の（ポリ）ペプチドおよび１つ以上の結合標的間の親和性は、任意の好都合な方法によって検出される。無細胞結合型測定法に関して、分離ステップが、結合成分から未結合成分を分離するためにしばしば用いられる。分離ステップは種々の方法で達成できる。好都合にも、少なくとも１つの成分が固形基質上に固定化される。その固形基質は任意の固形で良く、未結合成分は好都合に分離される。固形基質は、例えばマイクロタイターのプレート、ミクロビーズ、尿試験紙、樹脂粒子などのさまざまな材料からさまざまな形状で作成することができる。基質は、信号雑音比を最大にするように選択され、主にバックグラウンド結合を最小にして、洗浄およびコストを容易／緩和する。
【０１４３】
分離は、例えば、ビーズまたは尿試験紙を貯蔵槽から除去することによって、等マイクロタイタープレートウェルのような貯蔵槽を空にまたは希釈するすることによって、ビーズ（例えば鉄コア付きのビーズは、磁石を用いて容易に単離および洗浄することができる）、粒子、クロマトグラフィーのカラムまたは洗浄溶液または溶剤を有するフィルタをリンス（洗浄処理）することによって発効できる。典型的に、分離ステップには、拡張リンスまたは洗浄または複数のリンスおよび洗浄が含まれる。例えば、固形基質がマイクロタイターのプレートである場合、典型的に、塩類、緩衝剤、洗剤、非特異性のタンパク質などのような特定の物質との結合するに関与しない、インキュベーション混合体の成分が含まれている、ウェルを洗浄溶液を用いて数回にわたって洗浄する。
【０１４４】
あるいは、無細胞の結合型測定法は、例えばシンチレーション近接測定法（ＳＰＡ）や同種の時間分解蛍光測定法（ＨＴＲＦＡ）のような分離ステップを必要としない、均一形態において実施することができる。さらに使用できる方法は、蛍光極性化（ＦＰ）および蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）含む方法である。
【０１４５】
検出は任意の好都合な方法で発効し得る。１つ、２つ、および３つのハイブリッドスクリーンのような細胞基調測定法に対しては、ＳＯＵＰ１標的結合から生じた転写は普通、直接的または直接的に検出可能な生成物をコードする（例えばガラクトシダーゼ活性、ルシフェラーゼ活性など）。無細胞の結合アッセイに対しては、普通、成分の１つが標識を含むか、または標識に共役される。さまざまな標識が使用されるが、本質的には結合タンパク質の検出を提供する標識に限られる。標識は、放射能、発光、光の分極化、光学的または電子濃度などの直接検出を提供することができ、またはエピトープタグ、酵素などのような間接検出も提供できる。標識は、タンパク質、例えば亜リン酸の放射性同位元素を含んでいるリン酸塩基に付属することができ、またはタンパク質構造、例えば硫黄の放射性同位元素を含んでいるメチオニン残基に取り込まれることもできる。
【０１４６】
種々の方法を用いて、標識の性質およびその他の測定法成分によるが、特定の標識を検出することができる。例えば、標識を含んだ固形基質または結合複合体の一部に結合した標識は、その固形基質から分離された後に検出することがでる。標識は、光学または電子濃度、照射性の放出、非照射性エネルギー伝達、分極光放出などを通して直接的に検出することができ、または抗体抱合体などを用いて直接的に検出することができる。例えば、放射性標識における場合、例えば粒子カウンタを用いると、放出を直接的に検出することができ、または例えばシンチレーション反応混液およびカウンタを用いると間接的に検出することができる。
【０１４７】
薬剤の欠如における標的に対する本発明の（ポリ）ペプチドの結合親和性における差異は、薬剤の存在下で結合親和性と比較すると、薬剤が、ＳＯＵＰ１ポリペプチドのＳＯＵＰ１結合標的に対する結合を調整するを示す。ここに使用される差異は、統計的に有意であり、有利には少なくとも５０％、より有利には少なくとも９０％の差異を表す。
【０１４８】
類似して、細胞基調測定法において、薬剤が存在するする場合と欠如している場合の　ＳＯＵＰ１依存的活性の差異は、薬剤がＳＯＵＰ１細胞機能またはＳＯＵＰ１発現を調整することを示す。そのような細胞基調アプローチには、一過性または安定発現アッセイが関与する。この方法において、細胞は、つまり一部の本発明の（ポリ）ペプチドおよびｓｏｕｐ１反応性のプロモーターの転写コントロール下にあるレポーターを含むポリペプチドをコードする１つ以上の構成物によって形質移入される。細胞はまた、ＳＯＵＰ１活性化剤、例えばレセプター刺激可能なＳＯＵＰ１活性などをコードする構成物によって有利に形質移入されることができる。あるいは、脂肪プロモーター自体が、望ましいレポーター遺伝子、例えばルシフェラーゼに連鎖することができ、および細胞−３０基調測定法で用いられると、上方制御または下方制御を経由して脂肪発現の調節可能な化合物用にスクリーニングすることができる。
【０１４９】
ここに記載された方法は、特にロボット液体予製のワークステーションを使用する自動化高処理量薬物スクリーニングに適している。類似のロボット自動化は、高処理量細胞メッキおよび種々の測定法読み取りの検出のために利用できる。
【０１５０】
結合パートナーを用いて、本発明の核酸分子の発現または本発明の（ポリ）ペプチドの関連を調節するために示された候補薬剤は、動物およびヒト試行用に役立つ試薬を医薬品工業に提供する。標的治療学的指標は、標的ｓｏｕｐ１細胞機能（例えば、結合パートナーを用いる遺伝子発現または関連）が調節の対象となる場合のみに限定されている。特に、候補薬剤から取得した薬物スクリーニング測定法および被験者組成物、例えばｓｏｕｐ１に由来する核酸または治療学的なポリペプチドは、肥満症の治療、癌のような喪失に関連した障害、感染性の疾病およびＨＩＶ感染、または過食症を含んだ体重調節およびエネルギー恒常性のに関連した疾病における治療学的な治療的用例を提供する。下記に記載されているように、治療学的な用途に対しては、組成物および薬剤は、任意の好都合な方法、有利には非経口的に、好都合なことには生理的に受容可能な担体、例えばリン酸塩緩衝生理食塩水で、生理食塩水、脱イオンされた水、またはその他同種類のものによって投与することができる安定剤、殺菌剤などのような、その他の添加物も含むことができる。典型的には組成物は、血液のような保持された生理的液体または滑液の液体に加えられる。一般に、投与量は経験的に決定され、例えば治療学的な目的、投与経路、患者および条件によって決まる。典型的に、臨床家は、投与量が必要とされる生物学的効果を提供する量に達するまで本発明の分子を投与する。この療法の進歩状況は、従来の測定法によって容易にモニターされる。
【０１５１】
化合物を精製する方法または本発明の方法によって同定された薬剤は下記から成る。
【０１５２】
（ａ）前記化合物によって疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）のモデリング；および
（ｂ）モデル化合物の化学的合成
疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）は当分野で公知であり、特にＢｅｅｌｅｙ，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｔｅｃｈ１　２（１９９４），２１３−２１６，Ｗｉｌｅｙ，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１３（１９９３），３２７−３８４，Ｈｒｕｂｙ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ４３（１９９７），２１９−２６６、において開示され、または参照に引用または上記参照に引用されている。
【０１５３】
生成の方法および疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）組み合わせライブラリの使用法は、従来の技術において記載されている、例えばＯｓｔｒｅｓｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２６７（１９９６），２２０−２３４　ａｎｄ　Ｄｏｒｎｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４（１９９６），７０９−７１５において。化学的誘導体および類似体の化学的合成および／または調製（調合）のための方法は、当業者に公知であり、例えばＢｅｉｌｓｔｅｉｎ（前掲）および”ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｕ．Ｓ．Ａ（前出）に記載されている。
【０１５４】
上記の疑ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）方法および／または化学的合成、修飾または精製に関する方法はまた、本発明の化合物上、例えば（ポリ）ペプチド上または本発明の融合タンパク質上に直接的に使用することができことが本発明において構想されている。
【０１５５】
本発明は、本発明の化合物を含み処方する成分を産出する方法、ここに記載した方法によって同定された化合物または薬剤、または、医薬用に受容可能な担体および／または希釈剤を用いて上記の方法によって精製された化合物に関連するものである。
【０１５６】
望ましい医薬品担体の実施例、賦形剤および／または希釈剤は当分野で周知であり、リン酸塩緩衝生理食塩水溶液、水、乳濁液、油／水のような乳濁液、種々のタイプの湿潤剤、消毒した溶液などが含まれる。そのような担体を含む組成物は、従来の公知の方法によって調剤することができる。これらの医薬品組成物は、被験者に望ましい投与量で投与されたすることができる。望ましい組成物の投与は、幾つかの異なる方法、例えば、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所的投与、皮内投与、鼻腔内投与または気管支内投与によって発効することができる。投与量の投与計画は、主治医および臨床の要因によって決定されることができる。医術分野において公知のように、任意の患者に対する投与量は、患者のサイズ、体図面積、年令、投与される特定の化合物、性別、投与の時間および経路、一般的な健康、およびその他の同時に投与される薬物を含んだ多くの要因に依存する。タンパク性の医薬用活性物質は、１投与当たり１ｎｇ〜１０ｍｇの量処方してよい。但し、特に前記の要因を考慮すると、この模範的範囲の以下または以上も想定される。投与計画が継続的な注入の場合、投与範囲は体重１キロ当たり毎分１μｇ〜１０ｍｇ単位とする。進歩状況は定期的なアセスメントによってモニターされ得る。本発明の組成物は、局所的または全身的に投与することができる。本発明の組成物はまた、直接的に標的部位、例えば遺伝子銃送達によって、内部または外部の標的部位に投与、またはカテーテルによって動脈内の部位に送達することもできる。非経口的な投与の製剤（調合）には、消毒水溶性または非水溶性溶液、検査液、および乳濁液が含まれる。非水溶性溶剤の例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような野菜油、および注射用のオレイン酸エチルのような有機のエステルがあげられる。水溶性担体には、乳濁液または検査液、生理食塩水および緩衝培地を含んだ水、アルコール性／水溶性の溶液、が含まれる。非経口的な媒介物には、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖リンゲル液、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または不揮発性油が含まれる。静脈内の媒介物には、液体および栄養素補充薬、電解質補充薬（ブドウ糖リンゲル液上の基調のような）、その他同種類のものが含まれる防腐剤およびその他の添加物、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、および不活性ガス、その他同種類のものも存在する。さらには、本発明の医薬品組成物は、医薬品組成物の使用目的によって、さらなる薬剤を含むことができる。
【０１５７】
そのうえ、本発明は、本発明の化合物または化合物または本発明の方法によって同定された薬剤を含む成分を産出する方法を提供し、その方法は下記のステップから成る。
【０１５８】
（ａ）本発明の化合物または本発明の方法によって同定された化合物または薬剤を出発化合物として変性し、
（ｉ）カルボキシル基のエステル化、または
（ｉｉ）ヒドロキシル基のカルボン酸によるエステル化、または
（ｉｉｉ）ヒドロキシル基をエステル化して、例えばホスフェート、ピロホスフェートまたはスルフェートまたはヘミサクシネートとする、または
（ｉｖ）製薬学的に使用可能な塩の形成、または
（ｖ）製薬学的に使用可能な錯体の形成、または
（ｖｉ）製薬学的に活性なポリマーの合成、または
（ｖｉｉ）親水性部の導入、または
（ｖｉｉｉ）芳香族または側鎖上の置換基の導入／変換、置換パターンの変更、または
（ｉｘ）等配電子または生物等比体積部の導入による変性、または
（ｘ）類似化合物の合成、または
（ｘｉ）分枝側鎖の導入、または
（ｘｉｉ）アルキル置換基の環状類似体への変換、または
（ｘｉｉｉ）ヒドロキシル基のケタール、アセタールへの誘導、または
（ｘｉｖ）アミド、フェニルカルボメートへのＮ−アセチル化
（ｘｖ）マンニッヒ塩基、イミンの合成、または
（ｘｖｉ）ケトンまたはアルデヒドのシッフの塩基、オキシム、アセタール、ケタール、エノレスター、オキサゾリジン、チアゾリジンへの変性、
またはそれらの組合せによる、
（ｉ）作用部位、活性スペクトル、器官特異性の変性、および／または
（ｉｉ）力価の改善、および／または
（ｉｉｉ）毒性の低下（治療係数の増加）、および／または
（ｉｖ）副作用の減少、および／または
（ｖ）治療作用の開始、有効期間の変性
（ｖｉ）薬物動態パラメーター（再吸収、分布、代謝および分泌）の変性、および／または
（ｖｉｉ）物理化学パラメーター（溶解度、吸湿性、色、味、臭い、安定性、状態）の変性、および／または
（ｖｉｉｉ）一般的特性、器官／組織特異性の改善、および／または
（ｉｘ）適用形および適用経路の至適化
を実施するステップ；および
（ｂ）前記のように変性した生成物を製薬学的に使用可能なキャリアーと配合するステップ。
【０１５９】
上記のように、医薬品受容可能担体は当分野で周知である。また、本発明の化合物、すなわち本発明の融合タンパク質の（ポリ）ペプチドまたは、本発明の核酸分子が、成分を産出する上記の方法において使用されることが構想される。有利には、前記成分は、ここに記載したように医薬品組成物である。
【０１６０】
以上の点から、より望ましい実施例において、本発明は、本発明の化合物または本発明の方法によって同定された化合物または薬剤を含んでいる成分を産出する方法に関連するものである。ここで、前記成分は、特に、以下に記載されたように、肥満症、脂肪過多症、摂食障害、過食症、衰弱および／または体重／体質量の増加または減少を引き起こす障害を防止または治療する医薬品組成物である。
【０１６１】
本発明は、本発明の化合物または本発明の方法によって同定された化合物または薬剤を含んでいる成分を産出する方法に関連するものである。ここで、前記成分は、特に、以下に記載されたように、肥満症、脂肪過多症、摂食障害（例：神経性過食症、神経性食欲不振症）、消耗性症候群（例：カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能障害（例：糖尿病）、インシュリン抵抗性の予防、ＲＯＳ産出に関連する障害（例：感染、癌、老化に対する反応）を防止、軽減または治療する医薬品組成物であることは特に望ましい。
【０１６２】
なお他の実施例において、本発明は、下記の成分からなる化合物を提供する。
【０１６３】
（ａ）本発明の方法によって同定または精製された本発明の（ポリ）ペプチドの阻害（抑制）薬；
（ｂ）ここに記載した方法または本発明の核酸分子によって同定された遺伝子の発現の阻害（抑制）薬；および／または
（ｃ）本発明の方法によって同定された化合物。
【０１６４】
本発明の（ポリ）ペプチド前記阻害（抑制）薬は、野生型の本発明の（ポリ）ペプチド、ＳＯＵＰ１タンパク質の阻害（抑制）薬として機能する化合物であり得る。体重減少の誘発を引き起こすことができる前記阻害（抑制）薬は、調節細胞（膵臓のベータ−細胞）に影響し、それによってベータ−細胞機能を改善し、またはインシュリン抵抗性を防止し、ＲＯＳ（活性酸素種）産出を変更し、減少したＲＯＳ濃度（老化において減少された分子損傷、発癌および増加された虚血耐性を誘発）を引き起こすことができる。但し逆の効果も、組織特定の反応および代謝状況のために発生し得る。前記阻害（抑制）薬はまた、本発明の（ポリ）ペプチド変異形態と特異的に相互作用する阻害（抑制）薬でもあるため、体重の減少を引き起こしたり、または現在の体重を維持を維持することができる。
【０１６５】
本発明の方法によって同定された用語（ポリ）ペプチドの「阻害（抑制）薬」はまた、本発明の方法によって同定されるにつれて相互作用する（ポリ）ペプチドの活性および／または機能に影響する阻害（抑制）薬に関連するものであることが理解されている。前記相互作用は直接または間接のいずれでもあり得る。前記「阻害（抑制）薬」はまた、ここに定義されたようにその結合標的および薬剤を用いて、本発明の（ポリ）ペプチドの相互作用を妨害および／またはを修飾することができる。上記は、用語「本発明の核酸分子の発現の阻害（抑制）薬または本発明の方法によって同定された遺伝子の阻害（抑制）薬」に準用する。前記阻害（抑制）薬は、転写および／または翻訳プロセスを妨害する場合がある。
【０１６６】
同様に、本発明は下記の成分からなる組成物に関連する。
【０１６７】
（ａ）上記の方法によって同定または精製された本発明の（ポリ）ペプチドまたは（ポリ）ペプチドの刺激剤；
（ｂ）本発明の核酸分子の発現の刺激剤または本発明の方法によって同定された遺伝子の刺激剤；
（ｃ）本発明の方法によって同定された化合物；および／または
（ｄ）本発明のベクター。
【０１６８】
本発明の用語「（ポリ）ペプチドの刺激作用」は、本発明の（ポリ）ペプチドの刺激剤（活性化剤）として機能する化合物に関連するものである。前記刺激剤／活性化剤は、重量増加の誘発を引き起こすことができ、および喪失治療に有用である。前記刺激剤／活性化剤はまた、免疫の反応における有効性の増加を引き起こすＲＯＳ産出を変化することができる。なお、組織特定の反応および代謝状況のために、逆の効果もまた構想するされる。ここに記載された「刺激剤」は、特に本発明の（ポリ）ペプチドのその結合標的との相互作用の増加を引き起こすことができる。この用語はまた、本発明の（ポリ）ペプチドの変異形態の刺激剤／活性化剤に関連するものである。変異形態の前記刺激剤は、体重の増加または現体重の維持をもたらすことができる。
【０１６９】
「阻害剤」のほかに「本発明の（ポリ）ペプチドの刺激剤」もまた、当分野で周知であり、本明細書で開示された方法によって、演繹および／または評価することができる。
【０１７０】
用語「本発明の方法によって同定または精製された（ポリ）ペプチドの刺激剤」はまた、本発明の方法によって同定されたように（相互作用する）（ポリ）ペプチドの活性／機能に影響する刺激剤にも関連するものである。それらは、前記（ポリ）ペプチドとにおける直接様式または間接様式のいずれかで相互に影響することができる。既述のように、用語「阻害（抑制）薬」は、上記に定義したように、用語「本発明の核酸分子の発現の刺激剤または本発明の方法によって同定された遺伝子」に対して準用する。
【０１７１】
上記の「阻害剤」および「刺激剤」は、（ポリ）ペプチドに関連するばかりでなく、（ポリ）ペプチドおよび／または本発明の核酸分子または本発明の方法によって同定された（ポリ）ペプチドおよび／または遺伝子に結合し、妨害し、および／または相互に影響する小分子も含むことができる。そのような小分子の実施例には、小ペプチド、有機のおよび／または有機の物質またはペプチド同様の分子、例えばＤアミノ酸偽ペプチドをが含まれるがそれに限定されるものではない。抗体、誘導体および／またはそのフラグメント、アプタマーまたは特定の（オリゴ）ヌクレオチドを含む前記「阻害剤」および「刺激剤」をさらに含むことができる。「阻害剤」および「刺激剤」は、本明細書で開示されているように、医薬品および／または診断組成物の一部である。
【０１７２】
上記に指摘したように、前記「阻害剤」または「刺激剤」はまた、上記の定義のとおり小有機の化合物も含むこともできる。
【０１７３】
加えて、本発明は、本発明の核酸分子、本発明の（ポリ）ペプチド、本発明の融合タンパク質、抗体またはフラグメントまたはその誘導体または本発明のアプタマーまたは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む成分に関連するものである。さらには、前記成分は、本発明の方法によって同定されたように、（ポリ）ペプチド、核酸分子、遺伝子および／または化合物または薬剤を含むことができる。
【０１７４】
本発明の望ましい実施例において、前記成分は、医薬品、例えば治療学的成分である。随意的に、医薬用に受容可能な担体をを含む医薬品組成物は上記に記載されている。本発明の医薬品組成物は、治療および／または食欲調節および／またはエネルギー代謝の複雑な障害の予防に特に有用である。
【０１７５】
前記医薬品組成物が、肥満症、脂肪過多、摂食障害、過食症、体重／体質量の障害の治療および／または防止において使用されることは特に望ましい。但し、前記医薬品組成物が障害様、特に、衰弱（カヘキシー）、癌または感染性の疾患が原因の体重減少または免疫不全の患者、例えばＨＩＶ患者における体重減少において使用されることも構想される。
【０１７６】
さらには、本発明の医薬品組成物は、体重／質量障害の治療において使用されたその他の薬剤と共に使用できることが構想される。前記薬剤には、食物摂取を減少／促進する薬剤、栄養素吸収を遮断／活性化する薬剤、熱産生を増加／減少する薬剤、脂肪および／またはタンパク質代謝または保管を調節する薬剤、体重を調節する中枢制御機構を調節する薬剤が含まれるがそれに限定されるものではない。
【０１７７】
前記薬剤は、特に、シブトラミン、オーリスタット、エフェドリンまたはカフェイン、ジエチルプロピオン、フェンテルミン、フルオキセチン、セルトラリン、またはフェニルプロパノールアミンのような薬剤を含む。
【０１７８】
さらに、本発明は、本発明の核酸分子、本発明の（ポリ）ペプチド、本発明の融合タンパク質、抗体または誘導体またはそのフラグメントまたは本発明のアプタマー、ここに定義された少なくともプライマーまたはプライマーのセットまたは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む成分に関連するものである。特に望ましいプライマーは、補足実施例において使用されるプライマーおよび／またはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５５〜６０に描写されているプライマーである。
【０１７９】
例えば、本発明の核酸分子から演繹されたプライマーは、診断または科学的な目的に使用されることが構想される。前記プライマーを用いて、特に個体における突然変異体ＳＯＵＰ１の遺伝子を見出すことおよび／または検証することができる。有利には、前記個体はヒトである。さらには、本明細書で開示する核酸配列から演繹されたプライマーは、具体的にはＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、１１、１３および５１に示すような配列からのプライマーは、さらなる種において相同性配列を検出および／または単離するために使用することができる。
【０１８０】
特定の望ましい実施例において、前記成分は診断用組成物である。前記診断用組成物は、上記の成分を含むことができ、前記成分は、上記の定義のとおりに固形担体結合に付着および／または連鎖する。前記診断用組成物が（ミクロ）チップ上に本発明の化合物を含むことがさらに構想される。以上の点から、前記診断用組成物は、特に本発明の核酸分子を、いわゆる「遺伝子チップ」上または本発明の（ポリ）ペプチドを、いわゆる「タンパク質チップ」上に含む。診断遺伝子チップは、例えば、動物の（具体的にはヒトの診断組成物および具体的には上記の診断遺伝子チップ）ＳＯＵＰ１遺伝子における突然変異体を特異的に検出する、本発明の核酸分子の収集を含み、肥満症、脂肪過多症（ａｄｉｐｏｓｉｔａｓｅ）、体重／体質量の障害、または摂食障害の根底にあるような患者の（遺伝的な）欠陥をスクリーニングに特に有用であリ得る。
【０１８１】
診断用組成物において使用される本発明の前記化合物は、検出可能な程度に標識化されることが望ましい。生体分子を標識化用の入手可能な種々の技術は、当業者に公知であり、本発明の範囲内に含まれているものとする。そのような技術は、例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ，”Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｂｕｒｄｅｎ，ＲＨａｎｄｖｏｎＫｎｉｐｐｅｎｂｕｒｇ（Ｅｄｓ），Ｖｏｌｕｍｅ１５（１９８５），”Ｂａｓｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ”；ＤａｖｉｓＬＧ，ＤｉｂｍｅｒＭＤ；Ｂａｔｔｅｙ　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９９０），Ｍａｙｅｒら、（Ｅｄｓ）”ｌｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ”ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９８７），または”Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．のシリーズに記載されている。
【０１８２】
多くの異なる標識および標識化の方法が当分野では周知である。本発明において使用することができる標識タイプの例には、酵素、放射性同位元素、コロイド性金属、蛍光性化合物、化学発光化合物、および生物発光の化合物が含まれる。
【０１８３】
さらには、本発明は下記の使用法に関連する。
【０１８４】
（ａ）本発明の方法によって同定または精製された（ポリ）ペプチドの阻害（抑制）薬；
（ｂ）本発明の方法によって同定された遺伝子の発現の阻害（抑制）薬；および／または
（ｃ）本発明の方法によって同定された化合物；
肥満症、脂肪過多、摂食障害、消耗性症候群（例えばカヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能障害、ＲＯＳ産出に関連する障害のための医薬品組成物治療の調製（調合）用。
【０１８５】
同様に、本発明は下記の使用法も提供する。
【０１８６】
（ａ）本発明の方法によって同定または精製された（ポリ）ペプチドの刺激剤；
（ｂ）本発明の方法によって同定された遺伝子の発現の刺激剤；および／または
（ｃ）本発明の方法によって同定された化合物；
肥満症、脂肪過多、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー）、ミトコンドリアの障害、膵臓の機能障害、ＲＯＳ産出に関連する障害のための医薬品組成物治療の調製（調合）用。
【０１８７】
さらには、本発明は、肥満症、脂肪過多、摂食障害、消耗性症候群（カヘキシー、また癌、ＨＩＶ−感染においても）、ここに記載したミトコンドリアの障害、膵臓の機能障害（例：糖尿病）、障害に関連するＲＯＳ産出（例：癌、老化、感染）に対する治療、軽減および／または予防の対する医薬品組成物の調製（調合）用に本発明の方法によって同定された薬剤の使用法に関連するものである。
【０１８８】
加えて、本発明は、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３または４またはそのフラグメントによってコードされた遺伝子産物を過剰表現または低発現する、非ヒト動物の調製（調合）に対するＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３または４（ｄＵＣＰ）またはそのフラグメントに描写した核酸分子の使用法に関連するものである。前記非ヒト動物は有利にはショウジョウバエである。上記の使用法は補足実施例に図解する。
【０１８９】
特定の望ましい実施例において、本発明は、細胞小器官における膜安定性および／または機能に寄与可能な、ミトコンドリアのタンパク質を修飾可能な、および／または細胞代謝に影響可能な上記に定義したポリペプチドの検出用のショウジョウバエの使用法に関連するものである。
【０１９０】
さらには、本発明は、核酸分子、ベクター、宿主、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体またはフラグメントまたはその誘導体または抗血清、アプタマーまたは他のレセプターおよび本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのうち、少なくとも１つを含むキットを提供する。
【０１９１】
有利に、本発明のキットは、随意的に反応緩衝剤、貯蔵溶液および／または残存試薬または科学的または診断測定法を行なう上に必要とされる材料または他同種類をさらに含む。さらには、本発明のキットの部品は、バイアルまたはビンまたはその組み合わせ容器または多容器単位で個別にパッケージすることができる。
【０１９２】
本発明のキットは、特に本発明の（ポリ）ペプチド産出の方法を実行するため有利に使用することができ、ここに参照する種々の適用例、例えば、診断キット、研究用具または予防接種用具に使用することができる。そのうえ、本発明のキットは、科学的な医療および／または診断目的に望ましい検出の手段を抱合することができる。キットの製造は、有利には当業者に周知の標準製法に従う。
【０１９３】
この実施例は本発明を図解するものである。
【０１９４】
実施例１：ヒト脱共役タンパク質（ＵＣＰｓ）に対して相同性を有するキイロショウジョウバエ遺伝子のクローン化
［ブラスト］相同性検索を公共データベース（ＮＣＢＩ／ＮＩＨ）において実施し、ヒトＵＣＰ２およびＵＣＰ３遺伝子に対して配列相同性を有するショウジョウバエ遺伝子を探した。検索は、ＵＣＰ相同性を有するショウジョウバエ遺伝子ファミリーの配列フラグメントを産出した。それらは明らかに、隣接する関連ミトコンドリアのタンパク質（オキシグルタミン酸担体）と異なる。
【０１９５】
この遺伝子の１つの配列フラグメントを使用して（ｄＵＣＰｙと称する）、ＰＣＲ法プライマーペアを生成した（上位５’−ＣＴＡＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＡＣＡＴＡＧ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ）、下位５’−ＡＡＡＡＧＡＣＡＴＡＧＡＡＡＡＴＡＣＧＡＴＡＧＴ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２））。そして標準ＰＣＲ法条件を使用して、ＰＣＲ法反応をショウジョウバエｃＤＮＡ上に実施した。増幅生成物を放射的に標識化し、成体のショウジョウバエハエ（ストラタジーン社）から作成したｃＤＮＡライブラリをスクリーニングするために使用した。完全長ｃＤＮＡクローン化を単離し、配列し（図１）、さらに先の実験に使用した。
【０１９６】
実施例２：ｄＵＣＰｙｃＤＮＡのショウジョウバエ発現ベクターへのクローン化　ショウジョウバエ細胞におけるｄＵＣＰｙの発現効果をテストするために、制限部位ＮｏｔｌおよびＫｐｎｌを使用して、ｄＵＣＰｙｃＤＮＡを発現ベクターｐＵＡＳＴにクローン化した。（参照：ＢｒａｎｄＡ＆ＰｅｒｒｉｍｏｎＮ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１９９３，１１８：４０１−４１５）得られた発現構成物を、ショウジョウバエ胚の生殖細胞系列およびショウジョウバエの菌株に注入して、安定した構成物の統合が生成された。発現ベクターｐＵＡＳＴは、ショウジョウバエのｃｅｉｌｓには正常に非存在の酵母菌転写因子Ｇａｌ４によって活性化されるので、これらの遺伝子組換え動物にはｄＵＣＰｙがまだ発現されていない。ｐＵＡＳＴ−ｄＵＣＰｙハエが、Ｇａｌ４を組織特定の様式で発現する第２のショウジョウバエ菌株と交雑する場合、この交配によるの子孫ハエは、組織を発現するＧａｌ４においてｄＵＣＰｙを発現する。
【０１９７】
その本体の全細胞においてＧａｌ４を発現する菌株とのｐＵＡＳＴ−ｄＵＣＰｙハエの交雑種は（アクチンプロモーターの制御下で）生存可能な子孫を示さなかった。これは、全体細胞におけるｄＵＣＰｙの過剰発現は致死的であることを意味する。この発見は、ｄＵＣＰｙの過剰発現は細胞エネルギーの産出の崩壊を引き起こすという仮定と一致している。
【０１９８】
眼のような（「無眼」遺伝子の眼特異性のプロモーターの制御下にあるＧａｌ４）、非重要器官におけるｄＵＣＰｙの発現は、可視に損傷された眼を持つハエという結果を招く（図２）。この容易に可視の眼表現型が、ＵＣＰ活性を修飾できる遺伝子産物に対する遺伝的なスクリーニングの根拠である。
【０１９９】
実施例３：ｄＵＣＰｙ修飾因子のスクリーニング
眼におけるＧａｌ４発現を有する菌株のゲノム部分およびｐＵＡＳＴ−ｄＵＣＰｙ構成物を保有する菌株を、ゲノム組換えを用いて１つの染色体上に混合した。得られたハエ菌株は、ｄＵＣＰｙ発現によって永久に損傷された眼を有する。この菌株のハエを変異誘発されたハエ菌株の大きな収集のハエと交雑種せしめた。この変異体収集において、特別発現システム（ＥＰ−ｅｌｅｍｅｎｔ，参照：ＲｏｒｔｈＰ，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１９９６，９３（２２）：１２４１８−２２）を異なるゲノム遺伝子座においてランダムに統合した。酵母菌転写因子Ｇａｌ４はＥＰエレメントに結合することができず、ＥＰエレメントの統合部位を閉じる内在性遺伝子の転写を活性化する。遺伝子の活性化は以上の点から、ｄＵＣＰｙを過剰発現する同一細胞（眼）において発生する。変異体収集には、ＥＰエレメントの異なる統合部位を有する数千の菌株を含まれるので、その発現がｄＵＣＰｙ活性と相互作用する、多数の遺伝子をテストすることが可能である。遺伝子がＵＣＰ活性エンハンサーとして振る舞う場合には、眼欠陥は悪化する；抑制因子は欠陥を回復させる。
【０２００】
このスクリーニングを使用して、抑制活性を有する新規遺伝子を発見した。この遺伝子をここに［脱共役タンパク質（ＳＯＵＰ１）の抑制因子］と称する。ショウジョウバエ眼におけるｄＵＣＰｙと共のＳＯＵＰ１の発現は、ｄＵＣＰｙ誘発欠陥の救出を引き起こす（図２）。
【０２０１】
実施例４：ショウジョウバエ（ｄＳＯＵＰ１）からのＳＯＵＰ１のクローン化
ＥＰエレメントを救出する眼欠陥に近接するゲノムＤＮＡを、クローン化および配列せしめた。この配列を、公共ショウジョウバエ遺伝子データベースにおいて［ブラスト］検索に用いた。同一の配列を有するｃＤＮＡクローンＧＨ２２１３９（ショウジョウバエのゲノムプロジェクト）からの短い配列フラグメント（ＥＳＴ）を、データベース検索において発見した。この公的に利用できるｃＤＮＡクローンを要求し、完全に配列化せしめた（図３ａ）。
【０２０２】
実施例５：ショウジョウバエ眼におけるＧＨ２２１３９の過剰発現
ＧＨ２２１３９が遺伝的に同定されたｄＵＣＰｙ抑制因子ＳＯＵＰ１に対してコードすることを確実にするために、ＧＨ２２１３９ｃＤＮＡを発現ベクターｐＵＡＳＴにクローン化した（制限部位ＢｇｌｌｌおよびＸｈｏｌを使用）。生殖系列注入により、遺伝子組換え動物を生成さしめた。ｐＵＡＳＴ−ＧＨ２２１３９遺伝子組換えハエを眼にｄＵＣＰｙを発現するハエと交雑せしめた。この交雑種の子孫（ｄＵＣＰｙおよびＧＨ２２１３９を発現するハエ）において、眼欠陥を救出せしめた。これはＧＨ２２１３９ｃＤＮＡがＳＯＵＰ１ををコードすることを証明した。
【０２０３】
実施例６：ｄＳＯＵＰ１の配列分析
生物情報学用具を用いたＳＯＵＰ１ｃＤＮＡの演繹アミノ酸配列の分析（参照：Ｊ．Ｇｌａｓｇｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｓｉｘｔｈ　Ｉｎｔ．Ｃｏｎｆ．ｏｎ　Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　ｆｏｒ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ．１７５−１８２，ＡＡＡＩＰｒｅｓｓ，１９９８）は、ＳＯＵＰ１タンパク質が、６膜貫通ドメインを有するミトコンドリアの担体タンパク質の特有の型を持つ（図４ａ）ことを示した。
【０２０４】
実施例７：ｄＳＯＵＰ１のありうるスプライス変異体および公共データベースにおける予想遺伝子との比較
配列アライメント、膜貫通ドメイン予測およびスプライス予測は、ショウジョウバエＳＯＵＰ１遺伝子が異なるスプライス変異体に存在する（図３ｂ、ｃ、および図５ａ）ことを示唆している。ｃＤＮＡクローンＧＨ２２１３９は、異なる第６ＴＭドメインを有する２つのスプライス変異体（ｄＳＯＵＰ１およびｄＳＯＵＰ１−ｓｐ１）を形成することができる。公共データベースにおける完全に配列されたショウジョウバエゲノムの探索は、７つのＴＭドメインを有するスプライス変異型を示唆する遺伝子予測（ｄＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６、参照Ａｄａｍｓ、Ｍ．Ｄ．ら、２０００Ｓｃｉｅｎｃｅ２８７：２１８５）を明らかにした。
変異型間の相同性は：
アミノ酸相同性％　　　　　　　　　　　　　　　　（同一性／類似性）
ｄＳＯＵＰ１−ｄＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６　　　　　　（８２／８２）
ｄＳＯＵＰ１ｓｐｌ−ｄＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６　　　（８９／８９）
ｄＳＯＵＰ１−ｄＳＯＵＰ１ｓｐ１　　　　　　　　　　（９３／９４）
異なるスプライス変異型の予想ＴＭドメインのアミノ酸は図５ｂ〜ｆに描写されている。
【０２０５】
実施例８：ヒト（ｈＳＯＵＰ１）、マウス（ｍＳＯＵＰ１）、およびゼブラフィッシュ（ｚＳＯＵＰ１）からのＳＯＵＰ１ホモログのクローン化
公共データベースにおいて、ショウジョウバエＳＯＵＰ１の完全なｃＤＮＡ配列を使用して、［ブラスト］検索を実施した。異なる種（ゼブラフィッシュ、ヒヨコ、マウス、マカク、ヒト）からのいくつかの短い、未完成の配列フラグメントが発見された。データベースの配列のいずれもが完全なヒト配列でなかったので、フラグメントを使用してＰＣＲプライマーを合成した。ＰＣＲ法によって増幅された生成物を放射的に標識化し、ヒト脂肪細胞ｃＤＮＡライブラリおよびヒト海馬ｃＤＮＡをライブラリをスクリーニングするためのプローブとして使用した。両方のライブラリから、ｃＤＮＡクローンを単離することができた。ヒトＳＯＵＰ１の配列を図６に示す。これには、特有の６膜貫通ドメイン型も示されている（図４ｃ）。次のＰＣＲ法プライマーを用いて、ヒトＳＯＵＰ１遺伝子のＯＲＦを増幅することができる：上位５’−ＡＴＧＧＡＣＴＡＣＧＧＧＧＡＣＴＴＴＡＴＣＡＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：：５５）、下位５’−ＡＣＣＧＡＣＧＣＣＴＴＣＴＴＴＣＣＡＡＣＴ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５６）。
【０２０６】
マウスＳＯＵＰ１の遺伝子の同定は、等価なアプローチで行なった。ｍＳＯＵＰ１の配列を図７に示す。これには、特有の６膜貫通ドメイン型も示されている（図４ｄ）。次のＰＣＲ法プライマーを用いて、マウスＳＯＵＰ１遺伝子のＯＲＦを増幅することができる：上位５’−ＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＡＴＣＡＣＧ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：：５７）、下位５’−ＴＧＣＣＴＣＡＡＧＡＡＣＡＴＡＧＡＣＴＧ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５８）。
【０２０７】
マウスＳＯＵＰ１ｃＤＮＡクローンの単離中、代替配列を持つクローン６ｉを単離した。オープン・リーディングフレームの配列を図８に示す。演繹アミノ酸配列は、その他のマウスＳＯＵＰ１クローンと３つの位置で異なる。
【０２０８】
ゼブラフィッシュＳｏｕｐ１遺伝子の同定を等価なアプローチで行なった。ｚＳＯＵＰ１の配列を図９に示す。これには、特有の６膜貫通ドメイン型も示されている（図４ｅ）。次のＰＣＲ法プライマーを用いて、ゼブラフィッシュＳＯＵＰ１遺伝子のＯＲＦを増幅することができる：上位５’−ＡＴＧＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＴＴＴＣＣＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＣ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：：５９）、下位５’−ＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＴＣＧＣＣＣＡＡＡＡＧＣＡＡＧＣＧＴＧＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６０）。
【０２０９】
実施例９：フラグ−タグ付きｍＳＯＵＰ導入遺伝子の生成
カルボキシ末端にフラグ−タグ付きｍＳＯＵＰ導入遺伝子（ここではｍＳＯＵＰフラグと称する）を、ｍＳＯＵＰ遺伝子特異性プライマー（ｍＳＯＵＰフォーワードプライマー：５’ＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＡＴＣＡＣＧ３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６３）、フラグ−タグ付きｍＳ０ＵＰ逆プライマー：５’ＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＣＡＴＣＧＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＣＴ３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６４））を使用して、ＲＴ−ＰＣＲをマウス膵臓ＲＮＡから得たｃＤＮＡ上で実施することによって生成した。
【０２１０】
実施例１０：ベータアクチン−ｍＳＯＵＰフラグ遺伝子組換えマウスの生成
ｍＳＯＵＰフラグ（実施例９を参照）を、当業者であれば周知の技術（例えば、Ｇｕｎｎｉｇら（１９８７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ／Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４、４８３１−４８３５を参照）を使用して、遍在性のヒトベータアクチンプロモーターの制御下のマウスにおいて発現させた。遺伝子組換え構成物ＤＮＡを、標準技術（例えば、Ｂｒｉｎｓｔｅｒら（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ８２、４４３８−４４４２を参照）を使用して、Ｃ５７／ＢＬ６マウス胚（ＨａｒｌＷｉｎｋｅｌｍａｎｎ、Ｂｏｒｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に注入した。この技術を使用して、８つの非依存性マウス創始ライン（ｆｏｕｎｄｅｒｌｉｎｅ）を生成した。
【０２１１】
実施例１１：ＴａｑＭａｎ分析を経由したｍＳＯＵＰ発現分析
ｍＳＯＵＰフラグ導入遺伝子の発現をＴａｑＭａｎ分析によってモニターした。この分析に対して、異なるマウス組織（例えば、大腸、心臓、肝臓、肺、胃、腸、白色脂肪組織（ＷＡＴ）、胸腺、脾臓、筋肉、腎臓）に由来する、ｌ−ｌ００ｎｇ、有利には５０ｎｇｃＤＮＡ、およびｍＳＯＵＰ特定プライマー／プローブペア（ｍＳＯＵＰフォーワードプライマー（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６５））を使用した：５’−ＣＴＣＴＧＴＣＧＣＡＧＣＧＣＴＡＴＣＣ−３’、ｍＳＯＵＰ逆プライマー（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６６）：５’−ＧＡＡＧＧＣＧＧＧＣＴＣＴＣＡＣＡＡＣ−３’、ｍＳＯＵＰプローブ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６７）：５’−ＡＡＴＡＴＴＴＧＣＣＧタグＣＡＧＣＡＡＣＡＴＡＣＣＣＧＴ−３’）。
【０２１２】
ＴａｇＭａｎ分析を、当業者であれば周知の標準技術を使用して実施した。
【０２１３】
分析した８つの非依存性マウス創始ライン（ｆｏｕｎｄｅｒｌｉｎｅ）において、野生型マウスを基準として使用する異所性のｍＳＯＵＰ発現は、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）からの全組織部から検出された。最も高い導入遺伝子発現レベルを示す２つの創始ライン（ｆｏｕｎｄｅｒｌｉｎｅ）を、さらなる分析に用いた。
【０２１４】
実施例１２：ノーザンブロット分析を経由したｍＵＣＰ２発現分析
遍在性の効果を研究するため、遺伝子組換えマウスモデル生体内における異所性のｍＳＯＵＰフラグ発現、アクチン−ｍＳＯＵＰフラグ遺伝子組換えマウスにおける（およびにコントロール同腹仔における）ｍＵＣＰ２発現を、完全なＵＣＰ２オープン・リーディングフレームをプローブとして含む２０ｇの全ＲＮＡおよび１．０ｋｂのｍＵＣＰ２ｃＤＮＡを使用して、ノーザンブロット分析によってモニターした。平等な取り込みを確実にするために、１．４ｋｂのヒト−アクチンｃＤＮＡをプローブとしてノーザンブロットをプレハイブリダイズした（ｒｅｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ）。ノーザンブロット分析を標準技術を用いて実行した（例えばＳａｍｂｒｏｏｋらの（１９８９）（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕａｌ．Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ）を参照。
【０２１５】
マウスＵＣＰ２の発現がテストした全ての組織において検出された（図１０を参照）。遺伝子組換えマウスにおけるｍＵＣＰ２発現レベルのコントロール同腹仔に対する比較は、分析したいくつかの異なる組織において、増加したｍＵＣＰ２発現を明らかにした。
【０２１６】
インスタントイメージャーおよびに対応分析ソフトウェアを使用した定量化分析は、野生型コントロール同腹仔（図１０Ｂを参照）に対して、１．５−４．１倍の増加されたｍＵＣＰ２発現を、アクチン−ｍＳＯＵＰフラグ遺伝子組換えマウスの肺、小腸、胸腺、ＷＡＴ、脾臓および腎臓に示した。
【０２１７】
実施例１３：ＮＩＨ３Ｔ３細胞における、マウスＳｏｕｐ局在性蛍光顕微鏡分析　ＮＩＨ３Ｔ３細胞は、マウスＳｏｕｐに対して抗血清を用いて固定および免疫染色された、マウスＳｏｕｐの発現ベクターを用いて一過性に形質移入された。免疫蛍光を、６３０ｘ拡大率およびＣｙ３標識化済み二次抗体に対して適切なフィルタを用いて検討した。ＮＩＨ３Ｔ３細胞（図１１を参照）のミトコンドリアにおいてＳｏｕｐが明瞭で局在的であることが示された。
【０２１８】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞に、ポリＤリジン被覆のカバーガラス（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）の付きの２４個のウェルプレートに、ウェル当たり２５，０００細胞を播種した。播種の翌日、細胞は、製造者の指示に従って、ＣＭＶプロモーターリポフェクトアミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ）プラス（ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅドイツ国）の制御下でＳｏｕｐ発現構成物によって一過性に形質移入させた。形質移入の４８時間後、細胞を４％パラホルムアルデヒドに固定し、Ｄｏｒｎｅｒら（１９９８）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７３：２０２６７−７５）に従って免疫染色せしめた。つまり、細胞を、ＰＢＳにおいて０．７５％トリトンＸ−１００を用いて１０分間透過処理した。１０分間ＰＢＳにおいて０．１ＮａＢＨ４を用いて、細胞の治療によって遮断された内在性自動蛍光。短いＰＢＳ洗浄後、細胞を、遮断緩衝剤（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、５％ヤギ血清、０．０４５％サカナゼラチン）において、１時間インキュベートせしめた。主要抗血清（１：２５、一晩）および二次抗体（抗ウサギＣｙ３、１：２００、１時間）を遮断緩衝剤において適用し、その後遮断緩衝剤において洗浄した。カバーガラスをガラスのスライド上に取り付け、Ｃｙ３用に設定した適切なフィルタを用いて蛍光マイクロスコープにおいて、免疫染色せしめた細胞を検査した。
【０２１９】
実施例１４：抗ｍＳＯＵＰ抗体
抗マウスＳＯＵＰ抗体を、マウスＳＯＵＰタンパク質（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４からのＣ−ａ．ａ．３００−３１６）のＣ終端に対応する合成ペプチドＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６８：ＣＹＥＮＶＳＨハエＤＬＲＥＫＫＶＳを用いて免疫化によってウサギにおいて産生せしめた。抗体を、製造者のプロトコルに従って合成ペプチドＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６８：（ＣＹＥＮＶＳＨＦＬＹＤＬＲＥＫＫＶＳ）を有するスルホリンクカラム（注文番号ピアス社４４８９５）を使用して親和性精製した。
【図面の簡単な説明】
【図１】
本発明によるショウジョウバエＵＣＰｙヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す図。ここに図示されたのは、全長鎖ｃＤＮＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３）、オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４）、および演繹されたアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５）である。
【図２】
本発明によるショウジョウバエＵＣＰｙの眼における過剰発現を示す図。この写真の左部に示されているハエにおいては、ｄＵＣＰｙ発現は正常であり、眼は正常に発達している。この写真の右部に示されているハエにおいては、ｄＵＣＰｙ発現は正常であり、眼は正常に発達している。過剰発現されており、観察される表現型はハエ眼の低下を示す。ＳＯＵＰ１がこの表現型において同時発現する場合、眼欠陥は救出（治癒）することができる。そのような救出ハエ（図示されていない）の眼は、ほとんど左ハエの正常眼と同一である。
【図３ａ】
本発明によるキイロショウジョウバエアクセッション番号ＧＨ２２１３９のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す図。全長ｃＤＮＡｎｔ１−２９５３（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６）、オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７）、および演繹されたアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８）を示す。
【図３ｂ】
本発明によるスプライス変異型のキイロショウジョウバエアクセッション番号ＧＨ２２１３９のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を示す図。ｄＳＯＵＰ−ｓｐ１オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６のｎｔ６８８−１４９７および２４８２−２６４１）、およびＳＯＵＰスプライス変異型ｄＳＯＵＰ−ｓｐ１の演繹されたアミノ酸配列を示す。
【図３ｃ】
公共データベースにおけるＳＯＵＰ１遺伝子座からの遺伝子予測を示す図。公共データベースから予想された、スプライス変異型ｄＳＯＵＰ−ＣＧ８０２６（ｎｔ６８８−ｌ５６９、２２８０−２３２０およびＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６の２４８２−２６４１）のオープン・リーディングフレーム、およびスプライス変異型ｄＳＯＵＰ−ＣＧ８０２６の演繹されたアミノ酸配列を示す。
【図４ａ】
本発明によるショウジョウバエＳＯＵＰ１の膜貫通ドメインプロットを示す図。
【図４ｂ】
本発明によるヒトＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６の膜貫通ドメインプロットを示す図。
【図４ｃ】
本発明によるヒトＳＯＵＰ１の膜貫通ドメインプロットを示す図。
【図４ｄ】
本発明によるマウスＳＯＵＰ１の膜貫通ドメインプロットを示す図。
【図４ｅ】
本発明によるゼブラフィッシュＳＯＵＰ１の膜貫通ドメインプロットを示す図。
【図５ａ】
本発明による膜貫通ドメインＳＯＵＰ１の変異体において、異なるショウジョウバエＳＯＵＰ１変異体の比較を示す図。ヌクレオチド番号付けは、ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６における配列に関連するものである。スプライス変異型（ｖａｒｉａｎｓ）ｄＳＯＵＰ１およびｄＳＯＵＰ１−ｓｐ１の膜貫通ドメインは異なる。スプライス変異型ｄＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６は、７つの膜貫通ドメインを有するタンパク質を生成する。
【図５ｂ】
本発明によるｄＳＯＵＰ１における膜貫通ドメインを示す図。
【図５ｃ】
本発明による変異型ｄＳＯＵＰ１−ｓｐ１における膜貫通ドメインを示す図。
【図５ｄ】
本発明による変異型ｄＳＯＵＰ１−ＣＧ８０２６における膜貫通ドメインを示す図。
【図５ｅ】
本発明によるヒトＳＯＵＰ１（ｈＳＯＵＰ１）における膜貫通ドメインを示す図。
【図５ｆ】
本発明によるマウス（ｍＳＯＵＰ１）における膜貫通ドメインを示す図。
【図６】
本発明によるヒトＳＯＵＰ１を示す図。オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９）、および演繹されたアミノ酸配列ヒトＳＯＵＰ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０）を示す。
【図７】
本発明によるマウスＳＯＵＰ１を示す図。オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１）、および演繹されたアミノ酸配列マウスＳＯＵＰ（ＳＥＱＩＤ１５ＮＯ：１２）を示す。
【図８】
本発明による代替マウスｇｅｎ６ｉを示す図。オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３）、および演繹されたアミノ酸配列マウス６ｉ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４）を示す。
【図９】
本発明によるダニオレオ（Ｄａｎｉｏｒｅｒｏ）ＳＯＵＰ１を示す図。オープン・リーディングフレーム（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５１）、および演繹されたアミノ酸配列マウスＳＯＵＰ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５２）を示す。
【図１０ａ】
本発明によるベータアクチン−ｍＳＯＵＰ−ｆｌｇ遺伝子組換えマウスモデル生体内におけるＵＣＰ２の発現をノーザンブロットで示す図。
【図１０ｂ】
本発明によるベータアクチン−ｍＳＯＵＰ−ｆｌｇ遺伝子組換えマウスモデル生体内におけるＵＣＰ２の発現をノーザンブロット分析の結果をデータ定量化した図。
【図１１】
本発明によるＮＩＨ３Ｔ３細胞のミトコンドリアにおけるＳＯＵＰ１の局在性を示す図。ＮＩＨ３Ｔ３細胞は、マウスＳｏｕｐに対して抗血清を用いて固定および免疫染色された、マウスＳｏｕｐの発現ベクターを用いて一過性に形質移入された（実施例１３を参照）。
【図１】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図４ｄ】
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【図４ｅ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図５ｄ】
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【図５ｅ】
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【図５ｆ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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