(57)【要約】本発明は、ＭＲＰ１により耐性の一部または全てが付与される耐性新生物の阻害に有用である式（Ｉ）：【化１】2004525952.tif 000011で表される化合物に関する。
2004525952.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2004525952.tif 000006
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩。
【請求項２】
ＡがＮであり、ＢがCH2である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が（CH2）nC（O）R4である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がNHR7、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
哺乳動物におけるＭＲＰ１の阻害方法であって、そのような方法を必要とする哺乳動物に、式Ｉ：
【化２】
2004525952.tif 000007
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩を有効な量で投与することを含む方法。
【請求項６】
ＡがＮであり、ＢがCH2である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ１が（CH2）nC（O）R4である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ４がNHR7、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
哺乳動物における耐性新生物または耐性になりやすい新生物を阻害する方法であって、そのような方法を必要とする哺乳動物に式Ｉ：
【化３】
2004525952.tif 000008
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩の有効量を、１種以上の腫瘍崩壊剤の有効量と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項１０】
ＡがＮであり、ＢがCH2である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ１が（CH2）nC（O）R4である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ４がNHR7、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチンおよびエトポシドから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
新生物が、ウィルムス型、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣または甲状腺のものであるか、あるいは新生物が急性のリンパ芽球性および骨髄芽球性の白血病、神経芽腫、軟組織肉腫、ホジキンリンパ腫および非ホジキン性リンパ腫または気管支原性癌と関連している、請求項９または１３に記載の方法。
【請求項１５】
式Ｉ：
【化４】
2004525952.tif 000009
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩を、１種以上の製薬的なキャリア、希釈剤または賦形剤とともに含有する医薬製剤。
【請求項１６】
（ａ）式Ｉ：
【化５】
2004525952.tif 000010
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩、
（ｂ）１種以上の腫瘍崩壊剤、ならびに、
（ｃ）１種以上の薬学的なキャリア、希釈剤または賦形剤
を含有する医薬製剤。
【請求項１７】
腫瘍崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチンおよびエトポシドから選択される、請求項１６に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
外科手術および放射線療法と共に、化学療法は多数の癌に対して有効な治療であり続けている。事実、いくつかのタイプの癌（例えば、ホジキン病、大細胞型リンパ腫、急性リンパ性白血病、睾丸癌および初期乳癌）は、現在、化学療法により治癒可能であると認識されている。他方、未だ治癒可能ではない他の癌（例えば、卵巣癌、小細胞肺癌および進行性乳癌）は、併用化学療法に対して陽性反応を示す。
【０００２】
癌治療における解決されていない最も重要な問題のうちの１つは薬物耐性である。１つの細胞障害性薬物に対する耐性に関しての選択の後、細胞は異なる構造および細胞標的を有する全範囲の薬物（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗物質、ホルモン、プラチナ含有薬物および天然産物）に対して交差耐性となるかもしれない。この現象は多剤耐性（ＭＤＲ）として知られている。いくつかのタイプの細胞において、耐性は遺伝的なものであるが、他方、小細胞肺癌のような他のものでは通常、後天的なものである。
【０００３】
このような耐性は多要素的であることが知られており、少なくとも２つのタンパク質（170kDa P-糖タンパク質（MDR1）およびより近年に同定された190kDa多剤耐性タンパク質（MRP1））により付与される。MDR1およびMRP1は両方とも輸送タンパク質のATP−結合カセットスーパーファミリーに属するが、これらは構造的には非常に異なる分子であり、15％未満のアミノ酸ホモロジーを共有している。２個のタンパク質間の構造的相違にもかかわらず、1994年までは、MDR1およびMRP1細胞株の耐性パターンにおける一貫した差異は知られていなかった。しかしながら、MRP1と特定の腫瘍細胞崩壊剤に対する耐性との関連、またはその欠如は公知である。Coleら、「Pharmacological Characterization of Multidrug Resistant MRP-transfected Human Tumor Cells」、Cancer Research, 54:5902-5910, 1994を参照のこと。ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、パクリタキセル、 ミトザントロン、メルファランおよびエトポシドはMRP1の基質である（すなわち、MRP1はこれらの腫瘍崩壊剤に結合し得、それらを作用部位である核から細胞外へと再分配する）（前述、ならびにMarquardt, D.およびCenter, M.S., Cancer Research, 52：3157, 1992）。
【０００４】
ドキソルビシン、ダウノルビシンおよびエピルビシンはアントラサイクリンクラスの腫瘍崩壊剤のメンバーである。これらはストレプトミセス属の種々の株の単離物であり、核酸合成の阻害により機能する。これらの薬剤は、骨、卵巣、膀胱、甲状腺および特に胸部の新生物の治療に有用である。また、急性のリンパ芽球性および骨髄芽球性の白血病、ウィルムス腫瘍、神経芽腫、軟組織肉腫、ホジキンリンパ腫および非ホジキン性リンパ腫ならびに気管支原性癌の治療に有用である。
【０００５】
ビンクリスチン（ビンカアルカロイドクラスの腫瘍崩壊剤のメンバー）は、一般的な開花ハーブであるツルニチ草植物（Vinca rosea Linn）の単離物である。ビンクリスチンの作用機構は未だに研究中であるが、紡錘体における微小管形成の阻害に関連している。ビンクリスチンは急性白血病、ホジキン病、非ホジキン性悪性リンパ腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫およびウィルムス腫瘍の治療に有用である。
【０００６】
エトポシド（エピポドフィロトキシンクラスの腫瘍崩壊剤のメンバー）は、ポドフィロトキシンの半合成誘導体である。エトポシドはトポイソメラーゼインヒビターとして作用し、精巣および肺の新生物の治療に有用である。
【０００７】
細胞株がMDR1またはMRP1メカニズムを介した耐性を獲得するかどうかを何が決定するのかは現在未知である。これらのトランスポーターの組織特異性に起因して、および／またはあるメカニズムが優性である、もしくは排他的なものである場合には、他のものよりも選択的なインヒビターを用いることが有用である。さらに、いずれかのタンパク質の基質である薬物を投与する場合には、そのタンパク質の選択的なインヒビターである薬剤を同時投与することが特に有益である。それゆえ、MDR1またはMRP1の選択的インヒビターである化合物を提供することが望ましい。
【０００８】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
2004525952.tif 000003
［式中、
ＢはNR3またはCH2のいずれかであり、ＡはCHまたはNのいずれかである。ただし、ＢがNR3である場合はＡはCHであり、ＢがCH2である場合にはＡはNである。
Ｒ1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル、（CH2）nC（O）R4、（C1-C4アルキル）NH2、（CH2）nNHC（O）R5、S（O）2R6、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または場合により置換されているヘテロ環であり、
nは、0、1または2であり、
pは、0、1、2、3または4であり、
Ｒ２は、水素またはオキソであり、
Ｒ３は、水素またはBOCであり、
Ｒ４は、C1-C4アルコキシ、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環、NHR7または（CH2）p-O-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ５は、C1-C4アルコキシ、場合により置換されているフェニル、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニル、または（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ６は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは場合により置換されているヘテロ環であり、
Ｒ７は、（CH2）p-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である。］
で表される化合物またはその薬学的な塩に関する。
【０００９】
さらに、本発明は哺乳動物においてMRP1を阻害する方法に関し、この方法はそのような方法を必要とする哺乳動物に式Ｉの化合物またはその薬学的な塩を有効量で投与することを含む。
【００１０】
別の実施態様において、本発明は、哺乳動物における耐性新生物または耐性になりやすい新生物を阻害する方法に関し、この方法はそのような方法を必要とする哺乳動物に式Ｉの化合物またはその薬学的な塩の有効量を、腫瘍崩壊剤の有効量と組み合わせて投与することを含む。
【００１１】
さらに、本発明はMRP1の阻害用医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はまた、耐性新生物の阻害用医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１２】
本発明はまた、式Ｉの化合物またはその薬学的な塩を、それらに対する１種以上の腫瘍崩壊剤、薬学的なキャリア、希釈剤または賦形剤と共に含有する医薬製剤に関する。
【００１３】
本発明は、選択群の化合物（式Ｉの化合物）が多剤耐性タンパク質（MRP1）の選択的インヒビターであり、それゆえ耐性新生物および耐性になりやすい新生物においてMRP1が付与する多剤耐性（MDR）の処置に有用であるという発見に関する。
【００１４】
用語、MRP1に関連する場合の「阻害する」および「MRP1の阻害」は、腫瘍崩壊剤の作用部位（多くの場合は新生物の核）から離れた部位、および細胞外へ腫瘍崩壊剤を再配置するMRP1の能力の進行の阻止、軽減、改善、停止、抑制、遅延または後退、またはその能力の減少を意味する。
【００１５】
本明細書中で用いる用語「式Ｉの化合物の有効量」は、MRP1を阻害し得る本発明の化合物の量を意味する。用語「腫瘍崩壊剤の有効量」は、耐性であるか、またはそうではない新生物を阻害し得る腫瘍崩壊剤の量を意味する。
【００１６】
用語「耐性新生物、または耐性になりやすい新生物の阻害」は、耐性新生物および／または耐性になりやすい新生物の増殖の進行を予防、停止、抑制、遅延または後退すること、その増殖を減少すること、または殺すことを意味する。
【００１７】
用語「耐性新生物」とは、化学療法に対して耐性である新生物を意味し、この場合の耐性はMRP1により部分的または完全に付与される。このような新生物としては、膀胱、骨、胸部、肺（小細胞）、精巣および甲状腺の新生物が挙げられ（しかしこれらに限定されない）、そしてまた、より具体的な癌のタイプとしては例えば、急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病、ウィルムス腫瘍、神経芽腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキン性リンパ腫および気管支原性癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
「耐性になりやすい」新生物とは、新生物の耐性が本質的なものではなく、また現在は存在するものではないが、化学療法が始まった後にMRP1により付与され得る、新生物である。それゆえ、本発明の方法は、式Ｉの化合物の予防的および治療的投与を意味する。
【００１９】
用語「化学療法」は、少なくとも１つの腫瘍崩壊剤がMRP1の基質である、１つ以上の腫瘍崩壊剤の使用を意味する。「MRP1の基質」とは、MRP1に結合し、それにより腫瘍崩壊剤作用部位（新生物の核）から離れたところへ、そして細胞外へと再分配される腫瘍崩壊剤であり、このため治療効果を低くする。
【００２０】
用語「治療（処置）」または「治療（処置）する」は、多剤耐性腫瘍におけるMRP1由来薬物耐性の進行を阻害、予防、軽減、改善、停止、抑制、遅延または逆転あるいはその重篤度を減少させることを含む一般的な意味を有する。
【００２１】
本明細書の一般式において、一般的な化学用語は通常の意味を有する。例えば、用語「C1〜C4アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、シクロブチル、s-ブチルおよびt-ブチルを意味する。用語「C1〜C6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む１価の直鎖、分枝鎖または環式の飽和炭化水素を意味し、C1-C4アルキル基を包含する。さらに、C1〜C6アルキルはまた、シクロペンチル、ペンチル、ヘキシル、シクロヘキシルなどを含むが、これらに限定されない。
【００２２】
用語「場合により置換されているC1〜C4アルキル」は、場合によりヒドロキシ基で１回置換されているC1〜C4アルキルを意味する。
【００２３】
用語「C1〜C4アルコキシ」および「C1〜C6アルコキシ」は、それぞれ、式O-（C1〜C4アルキル）およびO-（C1〜C6アルキル）の部分を意味する。
【００２４】
用語「ハロ」または「ハロゲン化物（ハライド）」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。
【００２５】
用語「場合により置換されているフェニル」は、場合により１〜３個のC1〜C6アルキル、C1〜C4アルコキシ、ハロ、ベンジル、フェニル、トリフルオロメチルまたはオキソ基で独立して置換されているフェニル環を意味する。
【００２６】
用語「ヘテロ環」は、酸素、硫黄および窒素からなる群から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、一価の飽和、不飽和または芳香族の、合計５〜７個の原子の単環または縮合環系を意味する。
【００２７】
用語「場合により置換されているヘテロ環」は、場合により、１〜２個のC1〜C6アルキル、C1〜C4アルコキシ、ハロ、ベンジル、フェニル、トリフルオロメチルまたはオキソ基で独立して置換されているヘテロ環式環を意味する。
【００２８】
用語「保護基」（Ｐｇ）は、アミノ保護基またはヒドロキシ保護基を意味する。保護基の種類は、「Ｐｇ」基が窒素原子に結合している（アミノ保護基）か、または酸素原子に結合している（ヒドロキシ保護基）かによって明らかである。
【００２９】
本明細書中で使用する用語「アミノ保護基」は、化合物上の他の官能基を反応させる間、アミノ官能基をブロックまたは保護するために一般的に使用されるアミノ基の置換基を意味する。このようなアミノ保護基の例としては、ホルミル基、トリチル基、フタルイミド基、アセチル基、トリクロロアセチル基、クロロアセチル、ブロモアセチルおよびヨードアセチル基、ウレタン型保護基（例えば、ベンジルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（「FMOC」）など）ならびに類似のアミノ保護基が挙げられる。誘導体化したアミノ基が分子の他の位置における以後の反応条件に対して安定であり、分子の残りの部分を破壊することなく適切な点で取り除かれ得る限り、用いられるアミノ保護基の種類は重要ではない。セファロスポリン、ペニシリンおよびペプチドの分野で用いられる類似のアミノ保護基もまた、上記の用語内に含まれる。上記の用語により意味される基のさらなる例は、T. W. Greene,「Protective Groups in Organic Synthesis」、John WileyおよびSons、New York, N. Y., 1991,第７章（以下、この本を「Greene」と称する）に記載されている。好ましいアミノ保護基はt-ブチルオキシカルボニルである。
【００３０】
用語「ヒドロキシ保護基」は、Greeneの第２章に記載される型の、有機化学の分野の当業者により理解される基を意味する。代表的なヒドロキシ保護基としては、例えば、エーテル基［メチルおよび置換メチルエーテル基（例えば、メチルエーテル、メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、tert-ブチルチオメチルエーテル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、p-メトキシベンジルオキシメチルエーテルおよびtert-ブトキシメチルエーテル）、置換エチルエーテル基（例えば、エトキシエチルエーテル、1-（2-クロロエトキシ）エチルエーテル、2,2,2-トリクロロエトキシメチルエーテルおよび2-（トリメチルシリル）エチルエーテルなど）、イソプロピルエーテル基、フェニルおよび置換フェニルエーテル基（例えば、フェニルエーテル、ｐ−クロロフェニルエーテル、ｐ−メトキシフェニルエーテルおよび2,4-ジニトロフェニルエーテル）、ベンジルおよび置換ベンジルエーテル基（例えば、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、o-ニトロベンジルエーテルおよび2,6-ジクロロベンジルエーテル）およびアルキルシリルエーテル基（例えば、トリメチル−、トリエチル−およびトリイソプロピルシリルエーテル、ジメチルイソプロピルシリルエーテルおよびジエチルイソプロピルシリルエーテルのような混合型アルキルシリルエーテル基）を含む］およびエステル保護基（例えば、ホルメートエステル、ベンジルホルメートエステル、モノ−、ジ−およびトリクロロアセテートエステル、フェノキシアセテートエステルおよびｐ−クロロフェノキシアセテート）などが挙げられる。誘導体化したヒドロキシ基が中間体分子の他の位置に対する以後の反応条件に対して安定であり、ヒドロキシ保護基以外の任意のものを含む分子の残りの部分を破壊することなく適切な点で選択的に取り除くことができる限り、用いられるヒドロキシ保護基の種類は重要ではない。
【００３１】
一般的に、形容詞的な意味として使用する場合、用語「薬学的（製薬上）」は、生存生物に対して実質的に非毒性であることを意味する。例えば、本明細書中で使用する用語「薬学的な塩」は生存生物に対して実質的に非毒性である式Ｉの化合物の塩を意味する。例えば、Berge, S. M, Bighley, L. D., and Monkhouse, D. C.,「Pharmaceutical Salts」、J. Pharm. Sci., 66: 1,1977を参照のこと。代表的な薬学的な塩としては、式Ｉの化合物の無機的または有機的な酸または塩基との反応により製造される塩が挙げられる。そのような塩は、それぞれ、酸付加塩または塩基付加塩として公知である。これらの製薬上の塩は、しばしば、それらが由来する化合物と比較して高い溶解性特性を有し、従って、液体または乳濁液としての製剤にしやすいことが多い。
【００３２】
用語「酸付加塩」は、式Ｉの化合物の無機または有機酸との反応により製造される式Ｉの化合物の塩を意味する。薬学的な酸付加塩の例に関しては、例えば、Berge, S. M, Bighley, L. D.およびMonkhouse, D. C., J. Pharm. Sci., 66: 1, 1977を参照のこと。本発明の化合物は性質は塩基性であり得るので、それゆえ多数の無機及び有機酸のいずれかと反応して薬学的な酸付加塩を形成する。
【００３３】
代表的には、本発明の薬学的な酸付加塩は、式Ｉの化合物を等量または過剰量の酸と反応させることにより形成される。通常、反応物を相互溶媒（例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ベンゼンなど）中で混合する。通常、塩は約１時間〜約10日間で溶液から析出し、ろ過または他の従来的な方法により単離され得る。
【００３４】
酸付加塩を形成するために通常使用される酸は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸など）および有機酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、蓚酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、琥珀酸、クエン酸、安息香酸、酢酸など）である。従って、製薬上許容される塩の例は、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、蓚酸塩、マロン酸塩、琥珀酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−1,4−二酸塩（dioate）、ヘキシン−1,6−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、1,5−ナフタレン−二スルホン酸塩、ナフタレン-1-スルホン酸塩、ナフタレン-2-スルホン酸塩、マンデル酸塩などである。
【００３５】
用語「塩基付加塩」は、式Ｉの化合物の無機または有機塩基との反応により製造される式Ｉの化合物の塩を意味する。薬学的な塩基付加塩の例示に関しては、例えば、Berge, S. M, Bighley, L. D.およびMonkhouse, D. C., J. Pharm. Sci., 66: 1,1977を参照のこと。また、本発明は式Ｉの化合物の薬学的な塩基付加塩を考慮する。当業者は、式Ｉの化合物のいくつかは本質的に酸性であり、それゆえ、多数の無機及び有機塩基の任意のもののいずれかと反応して薬学的な塩基付加塩を形成し得ることを理解するであろう。薬学的な塩基付加塩の例は、式Ｉの化合物のアンモニウム、リチウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、メチルアミノ、ジエチルアミノ、エチレンジアミノ、シクロヘキシルアミノおよびエタノールアミノの塩などである。
【００３６】
本発明の化合物は全て有用であるが、特定の化合物が特に興味深く、好ましい。以下のリストは、好ましい化合物のいくつかのグループを記載する。各リストは他のリストと組み合わせて別の好ましい実施態様のグループを作製することができることが理解される。
ａ）ＡはＮである、
ｂ）Ｒ１は（CH2）nC（O）R3である、
ｃ）ｎは０である、
ｄ）Ｒ２は水素である、
ｅ）Ｒ４は、NHR7、（場合により置換されているC1-C4アルキル）-場合により置換されているフェニルまたは（CH2）p-場合により置換されているヘテロ環である、
ｆ）ｐは３である、
ｇ）化合物は薬学的な塩である、
ｈ）化合物は塩酸塩である、
ｉ）実施例の章の化合物、
ｊ）哺乳動物がヒトである場合の方法、
ｋ）腫瘍崩壊剤がドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチンおよびエトポシドから選択される方法、
ｌ）新生物がウィルムス型、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣または甲状腺のものであるか、あるいは新生物が急性のリンパ芽球性および骨髄芽球性の白血病、神経芽腫、軟組織肉腫、ホジキンリンパ腫および非ホジキン性リンパ腫または気管支原性癌と関連している場合の方法、
ｍ）腫瘍崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチンおよびエトポシドから選択される製剤。
【００３７】
本発明の化合物は種々の方法により製造することができ、これらのうちのいくつかを以下の反応式に例示する。式Ｉの化合物を製造するために必要とされる工程の特定の順番は、合成される特定の化合物、出発化合物および置換部分の相対的な不安定度に依存する。
【００３８】
式Ｉの化合物は以下の反応式１［式中、Ａ、Ｂ、Ｒ１およびＲ２は上記の通りであるか、またはＲ１が保護基である。］に例示される式ＩＩの化合物から製造され得る。
【００３９】
【化２】
2004525952.tif 000004
【００４０】
式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物を適切な溶媒（好ましくはジメチルホルムアミド）中に溶解または懸濁し、適切な塩基（カリウムメトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、炭酸カリウム、ナトリウムヘキサメチルジシラザンおよびカリウムヘキサメチルジシラザン）を添加することにより製造することができる。代表的には、塩基は１対１の比で利用される。しかし、当業者であれば理解するように、わずかにモル過剰、通常、式ＩＩの化合物に比較して約1.1〜約３倍モル過剰が許容される。
【００４１】
代表的には、反応物質は約0℃〜約100℃の温度で混合する。好ましくは、反応物質は室温で混合し、代表的には、得られた溶液を約５分間〜約18時間、好ましくは、約５分〜約１時間混合する。
【００４２】
式Ｉの環化化合物中に残存する保護基はいずれもGreeneに教示されるように取り除いてさらなる式Ｉの化合物を得ることができる。保護基の好ましい選択および除去方法は、以下の製造例および実施例の章に見出すことができる。
【００４３】
Ｒ１が保護基であるか、またはＲ１およびＲ２が上記のとおりであり、ＡがＮであり、ＢがCH2である場合、式ＩＩの化合物は反応式２の記載に従って製造することができる。
【００４４】
【化３】
2004525952.tif 000005
【００４５】
式Ｖの化合物は、当業者に周知の方法により対応する酸ハロゲン化物へと変換され得る。式ＩＩの化合物は、式Ｖの化合物の酸ハロゲン化物を、適切な溶媒中に溶解または懸濁し、適切な溶媒中の式ＩＶの化合物を添加することにより製造することができる。トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物は便利な溶媒である。このアミド形成反応はまた、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）の存在下で行なうことが好ましい。好ましくは、式Ｖの化合物は、式ＩＶの化合物に関して対応するカルボン酸であり、等量で用いるが、わずかに過剰（約0.05〜約0.15モル過剰）であることも許容される。DMAPは触媒様式で使用される。例えば、式IVの化合物に関して約５モル％〜約１５モル％が、通常、用いられる。通常、１０モル％が好ましい。
【００４６】
式ＩＶおよびＶの化合物は当該分野において周知であり、市販されていない場合（to the extent not commercially available）、当該分野において通常用いられる標準的な方法により簡単に合成される（例えば、製造例の章を参照のこと）。
【００４７】
本発明の任意の塩の一部を形成する特定の対イオンは、塩が全体として薬理学的に許容され、そして対イオンが全体として塩に望ましくない特性の一因とならない限り重要な性質のものではないことが認識されるべきである。
【００４８】
反応式１〜２の反応を行うために最適の時間は、従来的なクロマトグラフィー技術を介して反応の進行をモニターすることにより決定することができる。さらに、本発明の反応は不活性雰囲気（例えば、アルゴンまたは特に窒素）下で行なうことが好ましい。通常、溶媒の選択は、用いられる溶媒が進行する反応に対して不活性であり、所望の反応をもたらすために十分に反応物質を溶解する限り、重要なものではない。好ましくは、化合物は続いての反応での使用前に単離し、精製する。いくつかの化合物は形成中に反応溶液から析出するかもしれず、次いで、ろ過により回収してもよいし、または抽出、エバポレーションまたはデカンテーションにより反応溶媒を取り除いてもよい。所望されるならば、再結晶またはシリカゲルもしくはアルミナのような固体支持体でのクロマトグラフィーのような通常の技術により式Ｉの中間体および最終生成物をさらに精製することができる。
【００４９】
当業者であれば、全ての置換機が全ての反応条件と適合性であるわけではないことを理解する。これらの化合物は、当該分野において周知の方法により合成における都合のよい点で保護または修飾され得る。例えば、式ＩＶの化合物のＲ１置換機が保護基である場合、これは式Ｉの化合物の合成の間に任意の都合の良い時点で除去することができる。保護基は当該分野において周知の方法により除去することができ（例えば、Greeneを参照のこと）、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は標準的な化学技術を通じて付加することができる（例えば、Larock, Comprehensive Organic Transformation，785-820頁、1640-1641頁、1941-1949頁および1973-1976頁、VCH Publishers New York, N.Y., 1999およびMarch J, Advanced Organic Chemistry, 1985, 第３版、377-378頁を参照のこと）。
【００５０】
以下の製造例および実施例は、本発明の実施をより良く明瞭にするために提供され、いかなる様式においても本発明の範囲を制限するように理解されるべきではない。当業者であれば、本発明の精神および範囲から逸脱せずに種々の変更が行われ得ることを理解する。本明細書中に記載の全ての刊行物は本発明が寄与する分野における当業者のレベルの指標である。本明細書の製造例および実施例で用いる用語および略語は、特に記載しない限り、通常の意味を有する。例えば、「℃」、「N」、「mmol」、「g」、「mL」、「M」、「HPLC」、「IR」、「MS（FD）」、「MS（IS）」、「MS（FIA）」、「MS（FAB）」、「MS（EI）」、「UV」および「1H NMR」は、それぞれ、摂氏温度、規定（normal）または規定度、ミリモル、グラム、ミリリットル、重量モル濃度、高性能液体クロマトグラフィー、赤外分光法、電解脱離質量分析法、イオンスプレー質量分析法、フローインジェクション分析質量分析法、高速原子衝撃質量分析法、電子衝撃質量分析法、紫外分光法およびプロトン核磁気共鳴を意味する。さらに、IRスペクトルに関して列挙する吸収極大は単なる一例であり、観察された極大の全てではない。
【００５１】
製造例
製造例１
3-アミノ-ピペリジン-2-オン２塩酸塩
ナトリウムメトキシド（458 mL, メタノール中0.5M溶液, 229.0 mmol）をL-オルニチンメチルエステル塩酸塩（25.09g, 114.5 mmol）のメタノール（250 mL）溶液に30分かけて滴下する。溶液を室温で10分間攪拌する。ジエチルエーテル（708 mL）を溶液に加え、塩化ナトリウムを析出させる。30分後、反応系をろ過し、ろ液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、適切な体積（500mL）まで濃縮させる。得られた溶液をHCl（g）/MeOH（飽和溶液、約300mL）を用いて酸性化させ、濃縮して白色粘性油状物を得る（23 g）。この物質にクロロホルム（100 mL）を加え、スラリーを濃縮して（残留メタノールを取り除くため）表題化合物を白色粉末として定量的な収率で得る（21.58 g）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）115（M++1）。
【００５２】
製造例２
3-（トリチル-アミノ）-ピペリジン-2-オン
トリフェニルメチルクロリド（35.11 g, 126.0 mmol）を3-アミノ-ピペリジン-2-オン２塩酸塩（21.42 g, 114.5 mmol）のテトラヒドロフラン（250 mL）中の懸濁液に加え、続いてトリエチルアミン（55.9 mL, 400.8 mmol）を滴下する。反応系を窒素下、室温で一晩攪拌する。混合物をろ過し、テトラヒドロフランで洗浄し、ろ液を黄色油状物になるまで濃縮し、物質を20％イソプロパノール/クロロホルムと水の間で分配する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜1.25％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色泡状物として得る（18.50 g，収率45％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）113（M+-1）。
【００５３】
製造例３
ピペリジン-3-イル-トリチル-アミン
3-（トリチル-アミノ）-ピペリジン-2-オン（3.56 g, 10.0 mmol）を数回に分けてテトラヒドロフラン（25 mL）中のLiAlH4（1.00 g, 26.5 mmol）の懸濁液に加える。反応系を窒素雰囲気下で一晩加熱還流する。反応系を室温まで冷却し、水（1.0 mL）を加え、続いて15％ NaOH（3.0 mL）および水（3.0 mL）を加える。混合物をろ過し、テトラヒドロフランで洗浄し、濃縮する。物質をジエチルエーテルおよび水の間で分配する。水層が清澄になるまで5.0N水酸化ナトリウムを加える。生成物を水層からジエチルエーテルを用いて抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して表題化合物を清澄な油状物として得る（2.91 g, 収率85％）。1H NMR：構造式と一致。
【００５４】
製造例４
3-（トリチル-アミノ）-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル
トリエチルアミン（3.73 mL, 26.7 mmol）をピペリジン-3-イル-トリチル-アミン（7.63 g, 22.3 mmol）のジクロロメタン（125 mL）溶液に加え、続いてクロロギ酸メチルを滴下する（1.76 mL, 22.7 mmol）。反応系を窒素雰囲気下、室温で一晩攪拌する。反応系を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜20％酢酸エチル/ヘキサンで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（6.51 g，収率73％）。1H NMR：構造式と一致。
【００５５】
製造例５
3-アミノ-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル
HCl（g）飽和酢酸（100 mL,HCl中約3N）を3-（トリチル-アミノ）-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル（6.51 g, 16.2 mmol）に加える。溶液を室温で２時間、激しく攪拌する。反応系を濃縮し、続いてアセトニトリルを添加し、酢酸の除去を助けるために濃縮した（×２）。得られた物質を１N HClと酢酸エチルとの間で分配し、層を分離し、有機層を1N HClで抽出する。合わせた水層を、5N水酸化ナトリウムで塩基性化し、20％イソプロパノール/クロロホルムで抽出する（×３）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して2.45 g of the 表題化合物を白色固体として得た（2.45g，収率95％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）158（M+）。
【００５６】
製造例６
3-{[3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボニル]-アミノ}-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル
4-ジメチルアミノ-ピリジン（0.19 g, 1.5 mmol）、トリエチルアミン（3.2 mL, 23.2 mmol）および3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボニルクロリド（5.53 g, 20.1 mmol）を3-アミノ-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル（2.45 g, 15.5 mmol）のジクロロメタン（100 mL）溶液に加える。反応系を室温で、一晩、窒素下で攪拌する。反応系を1N HCl、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（0.75％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を黄色泡状物として得る（5.49 g，収率90％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）396（M+）.
【００５７】
製造例７
（ピリジン-3-イルオキシ）-酢酸塩酸塩
水酸化リチウム一水和物（28 mg, 0.66 mmol）の水（2 mL）溶液を、2-（3-ピリジルオキシ）酢酸エチル（60 mg, 0.33 mmol）のジオキサン（3 mL）溶液に加える。反応系を室温で30分間攪拌する。反応系を1N HClでクエンチし、濃縮して表題化合物を黄色油状物を定量的な収率で得る（100 mg）。MS（イオンスプレー）154（M++1）。
【００５８】
製造例８
2-ブロモ-N-（3,4,5-トリメチルフェニル）-アセトアミド
トリエチルアミン（1.53 mL, 11.0 mmol）およびブロモアセチルブロミド（0.87 mL, 10.0 mmol）を3,4,5-トリメトキシ-アニリン（1.74 g, 9.5 mmol）のテトラヒドロフラン（30 mL）溶液に0℃で滴下する。反応系を室温まで一晩、昇温させる。混合物をろ過し、テトラヒドロフランで洗浄し、濃縮する。得られた茶色の固体をクロロホルムに溶解し、1N HCl、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を橙色の固体として得る（2.50 g，収率87％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）304（M+）。
【００５９】
製造例９
[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-酢酸
水酸化リチウム一水和物（7 mg, 0.17 mmol）の水（2 mL）溶液を[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-酢酸エチルエステル（45.7 mg, 0.11 mmol）のジオキサン（3 mL）溶液に加える。反応系を室温で１時間、攪拌する。反応系を濃縮する。クロロホルムに溶解し、濃縮（x3）して溶媒の除去を助け、表題化合物を白色固体として定量的な収率で得る（50.5 mg）。MS（イオンスプレー）376（M+）。
【００６０】
製造例10
2-ブロモ-N-（3,4,5-トリメトキシ-フェニル）-アセトアミド
トリエチルアミン（1.53 mL, 11.0 mmol）およびブロモアセチルブロミド（0.87 mL, 10.0 mmol）を０℃で3,4,5-トリメトキシアニリン（1.74 g, 9.5 mmol）のテトラヒドロフラン（30 mL）溶液に滴下する。反応系を室温まで一晩昇温させる。混合物をろ過し、テトラヒドロフランで洗浄し、濃縮する。得られた茶色の固体をクロロホルムに溶解し、1N HCl、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を橙色の固体として得る（2.50 g, 収率87％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）304（M+）。
【００６１】
製造例11
ピリジン-3,5-ジカルボン酸ジエチルエステル
濃H2SO4（5 mL, 触媒）を3,5-ピリジンジカルボン酸（10.0 g, 60.0 mmol, Aldrich）のEtOH（300 mL）中のスラリーに加え、一晩還流する。室温まで冷却し、濃縮乾固させる。CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3（２×）で洗浄し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物を黄色固体として得る（13.0 g, 97％）。MS（IS）224.1（M+1）; 計算値（C11H13NO4・0.02CHCl3について）C, 58.67; H, 5.87; N, 6.27。実測値：C, 58.71; H, 5.73; N, 6.34。
【００６２】
製造例12
ピペリジン-3,5-ジカルボン酸ジエチルエステル酢酸塩
ピリジン-3,5-ジカルボン酸ジエチルエステル（13.4 g, 60.0 mmol）をEtOH（100 mL）およびHOAc（35 mL）中でPtO2（2.7 g, 触媒）を用いて一晩、室温で、60 psiで水素化する。セライトを通してろ過して濃縮乾固する。飽和水性NaHCO3およびCHCl3の間で分配する。CHCl3で３回抽出する。飽和水性NaHCO3で洗浄し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固する。MS（IS）231.1（M+2）。さらなる精製を行なわずに実施する。
【００６３】
製造例13
ピペリジン-1,3,5-トリカルボン酸 1-tert-ブチルエステル3,5-ジエチルエステル
K2CO3（46.2 g, 44.4 mmol）およびジ-t-ブチルジカーボネート（8.0 g, 37.0 mmol）をピペリジン-3,5-ジカルボン酸ジエチルエステル酢酸塩（8.5 g, 37.0 mmol）のTHF（80 mL）および水（80 mL）中の溶液に加える。室温で一晩攪拌し、次いで濃縮乾固する。20％ iPrOH/CHCl3および水の間で分配する。CHCl3で２回抽出する。飽和水性NaHCO3で洗浄し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固する。10％ EtOAc/ヘキサンを溶離液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固して表題化合物を白色固体として得る（6.5 g, 51％）。MS（IS）330.2（M+）;計算値（C16H27NO6について）：C, 58.34; H, 8.26; N, 4.25。実測値：C, 58.66; H, 8.47; N, 4.36。
【００６４】
製造例14
ピペリジン-1,3,5-トリカルボン酸 1-tert-ブチルエステル3-エチルエステル
リパーゼ（1.7 g, Amano AY30）をピペリジン-1,3,5-トリカルボン酸 1-tert-ブチルエステル3,5-ジエチルエステル（5.8 g, 17.6 mmol）のpH 7.2のリン酸緩衝液（58 mL）中のスラリーに加える。48時間攪拌し、次いで、水で希釈し、1N HClを用いてpH 2.5まで酸性化する。EtOAcで３回抽出する。ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物をcis異性体の混合物として白色固体として得る（5.0 g, 94％）。MS（IS）300.2（M-1）; 計算値（C14H23NO6・0.5CHCl3について）： C, 54.91; H, 7.56; N, 4.56。実測値：C, 54.90; H, 7.59; N, 4.55。
【００６５】
製造例15
5-（2-トリメチルシラニル（trimethylsilanyl）-エトキシカルボニルアミノ）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル
Et3N（2.45 mL, 17.6 mmol）をピペリジン-1,3,5-トリカルボン酸 1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル（4.8 g, 16.0 mmol）のトルエン（200 mL）中のスラリーに加える。ジフェニルホスホリルアジド（DPPA）（3.8 mL, 17.6 mmol）を加える。３時間、還流し、次いでトリメチルシリルエタノール（3.5 mL, 24.0）を加える。一晩還流し、次いで濃縮乾固させる。CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させる。EtOAc/ヘキサンを溶離液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固して表題化合物（5.2 g, 78％）を無色の油状物としてcis異性体の混合物として得る。MS（IS）417.2（M+）；計算値（C19H23N2O6Si・0.10CHCl3について）： C, 53.53; H, 8.49; N, 6.54。実測値：C, 53.46; H, 8.42; N, 6.41。
【００６６】
製造例16
5-{[3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボニル]-アミノ}-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸 1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル
樹脂結合型テトラブチルアンモニウムフッ化物（TBAF）（22 g, 22.0 mmol, 1.6 mmol F/g）を5-（2-トリメチルシラニル-エトキシカルボニルアミノ）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸1-tert-ブチルエステル3-エチルエステル（4.63 g, 11.0 mmol）のTHF（150 mL）溶液に加える。48時間還流し、室温まで冷却し、濃縮乾固する。CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固する。Et3N（4.6 mL, 33.0 mmol）およびDMAP（5 mg,触媒）を残渣（3.0 g, 11.0 mmol）のCH2Cl2（100 mL）溶液に加える。3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-3-メチル-イソキサゾール-4 カルボニルクロリド（4.3 g, 15.4 mmol, Great Lakes Chemical）を加え、一晩室温で攪拌する。CHCl3を加える。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固する。EtOAc/ヘキサンを溶離液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固して表題化合物を黄色泡状物としてcis異性体の混合物として得る（2.6 g, 46％）。MS（IS）510.2（M+）；計算値（C24H29ClFN3O4・0.05CHCl3について）：C, 55.99; H, 5.68; N, 8.14。実測値：C, 55.91; H, 5.72; N, 8.03。
【００６７】
製造例17
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-メタンスルホニルオキシメチル-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
DMAP（5 mg, 触媒）および塩化メシル（0.2 mL, 2.5 mmol）を3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-ヒドロキシメチル-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル（0.95 g, 2.1 mmol）のピリジン（10 mL）中の溶液に加える。一晩、室温で攪拌し、次いで濃縮乾固させる。EtOAcおよび水の間で分配する。EtOAcで２回抽出し、合わせた有機物をブラインで3回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物をcis異性体の混合物として白色固体として得る（0.87 g, 79％）。MS（IS）526.0（M+）；TLC（50％ EtOAc/ヘキサン）Rf＝0.65。
【００６８】
製造例18
3-アジドメチル-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
NaN3（0.33 g, 5.1 mmol）を3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-メタンスルホニルオキシメチル-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチル エステル（0.87 g, 1.7 mmol）のDMF（20 mL）溶液に加える。24時間、60℃で加熱し、0℃まで冷却し、水でクエンチする。濃縮乾固させる。20％iPrOH/CHCl3と水との間で分配する。CHCl3で３回抽出する。合わせた有機物をブラインで2回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物をcis異性体の混合物の白色泡状物として得る（0.67 g, 84％）。MS（IS）473.2（M+）; TLC（50％ EtOAc/ヘキサン）Rf＝0.8。
【００６９】
製造例19
1-（3-アミノ-ピペリジン-1-イル）-4-フェニル-ブタン-1-オン
4-フェニル酪酸（462 mg, 2.82 mmol）をジクロロメタン（10mL）中のN,N-ジメチルホルムアミド（２滴）と合わせる。塩化オキサリル（0.49 mL, 5.61 mmol）をシリンジを用いて滴下し、酸塩化物の形成が完了するまで室温で攪拌する。混合物を減圧下で濃縮し、トリエチルアミン（5.0 mL, 35.9 mmol）および3-アミノピペリジン ２塩酸塩（750 mg, 4.33 mmol）とジクロロメタン（30 mL）中で室温で合わせる。反応が完了した時点で混合物をジクロロメタンで希釈し、水性重炭酸ナトリウムで洗浄する。濃縮し、メタノール/ジクロロメタンを用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけてビスアミドおよび所望のモノアミド生成物を得る（265 mg, 38％）。MS（ES）：（M+1）+ 246.9, 248.0 m/z。
【００７０】
製造例20
3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボン酸[1-（4-フェニル-ブチリル）-ピペリジン-3-イル]-アミド
1-（3-アミノ-ピペリジン-1-イル）-4-フェニル-ブタン-1-オン（250 mg, 1.02 mmol）を3-（2-クロロ-6-フルオロフェニル）-5-メチルイソキサゾール-4-カルボン酸（260 mg, 1.02 mmol）、1.3-ジシクロヘキシルカルボジイミド（209 mg, 1.01 mmol）および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（138 mg, 1.02 mmol）とTHF中で合わせ、室温で一晩攪拌する。濃縮し、THF/ジクロロメタンを用いてシリカゲルから溶離して所望の生成物を得る（326 mg, 66％）。MS（ES）：（M+1）+ 484.1, 486.1 m/z。
【００７１】
実施例
実施例１
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル
カリウムビス（トリメチルシリル）-アミド（5.5 mL, 2.73  mmol, トルエン中0.5 M）を3-{[3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボニル]-アミノ}-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル（0.72 g, 1.82 mmol）のジメチルホルムアミド（56 mL）溶液に加える。５分後、反応系を1N HClでクエンチし、濃縮する。得られた物質を20％イソプロパノール/クロロホルムおよび1N HClの間で分配する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜0.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（632 mg, 収率92％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）376（M+）。
【００７２】
実施例２
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（hydroiodide）
ヨードトリメチルシラン（1.87 mL, 13.16 mmol）を3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル（2.06 g, 5.48 mmol）のジクロロメタン（40 mL）溶液に加える。溶液を室温で窒素下で一晩攪拌する。メタノール（3.2 mL, 78.93 mmol）を滴下し、反応系を室温で30分間攪拌する。反応系を濃縮し、ジエチルエーテルに加え、超音波処理し、ろ過する。固体をバキュームポンプで乾燥させて表題化合物を褐色の固体として得る（2.36 g，収率97％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）318（M+）。
【００７３】
実施例３
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（3-フェニル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、ヒドロ桂皮酸（20 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30 μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下、室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、1.0N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（39.3 mg，収率78％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）450（M+）。
【００７４】
実施例４
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（3-ピリジン-3-イル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、3-ピリジンプロピオン酸（20 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）, 4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、1.0N HCl、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮させる。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（0.5〜3.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（22.9 mg, 収率45％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）451（M+）。
【００７５】
実施例５
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（3-ピリジン-2-イル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、2-ピリジンプロピオン酸（20 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30 μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜２％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（38.5 mg, 収率76％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）451（M+）。
【００７６】
実施例６
9-クロロ-3-メチル-5-{1-[2-（ピリジン-3-イルオキシ）-アセチル]-ピペリジン-3-イル}-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、2-ピリジンプロピオン酸（100 mg, 0.33 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜２％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（38.5 mg, 収率76％）。1H NMR：構造式と一致。  MS（イオンスプレー）451（M+）。
【００７７】
実施例７
2-[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-N-（3,4,5-トリメトキシ-フェニル）-アセトアミド
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、2-ブロモ-N-（3,4,5-トリメトキシフェニル）-アセトアミド（38 mg, 0.12 mmol）およびテトラヒドロフラン（3 mL）を丸底フラスコに加える。室温で窒素下で一晩、攪拌し、ヨウ化カリウム（2 mg, 0.01 mmol）および炭酸カリウム（34 mg, 0.25 mmol）を加える。反応系を濃縮し、水と20％イソプロパノール/クロロホルムの間で分配し、分離する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜0.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を橙色固体として得る（37.6 mg，収率62％）。1H NMR：構造式と一致。  MS（イオンスプレー）541（M+）。
【００７８】
実施例８
9-クロロ-5-[1-（2-ヒドロキシ-3-フェニル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-3-メチル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、D-フェニル乳酸（22 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30 μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜２％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（37.0 mg, 収率71％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）466（M+）。
【００７９】
実施例９
9-クロロ-5-[1-（2-ヒドロキシ-3-フェニル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-3-メチル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、L-フェニル乳酸（22 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を乾燥丸底フラスコに加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜２％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（47.3 mg, 収率90％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）466（M+）。
【００８０】
実施例10
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸ベンジルアミド
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）のテトラヒドロフラン（3 mL）中の懸濁液に、イソシアン酸ベンジル（16μL, 0.12 mmol）、続いて炭酸カリウム（23 mg, 0.17）を加える。混合物を室温で窒素下で一晩攪拌する。混合物を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムおよび水の間で分配し、分離する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜0.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を橙色の固体として得る（44.4 mg, 収率88％）。1H NMR：構造式と一致。  MS（イオンスプレー）451（M+）。
【００８１】
実施例11
9-クロロ-3-メチル-5-（1-フェニルメタンスルホニル-ピペリジン-3-イル）-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）のエタノール（5 mL）中の懸濁液（0℃）に、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（42μL, 0.28 mmol）を加える。溶液を10分間攪拌する。溶液にα-トルエン-スルホニルクロリド（21 mg, 0.11 mmol）を加え、反応系を０℃で窒素下で30分間攪拌する。反応系を1N HClでクエンチし、濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムで抽出する（×２）。合わせた有機層を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜0.4％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（37.9 mg, 収率72％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）472（M+）。
【００８２】
実施例12
9-クロロ-5-[1-（2-ヒドロキシ-3-フェニル-プロピル）-ピペリジン-3-イル]-3-メチル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（100 mg, 0.22 mmol）のエタノール（5 mL）中の懸濁液に、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（40μL, 0.27 mmol）を加える。溶液を窒素下で攪拌する。溶液に（2,3-エポキシプロピル）-ベンゼンを加え、約60℃まで加熱し、窒素下で一晩攪拌する。反応系を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、1N HCl、1N チオ硫酸ナトリウム、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮させる。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜1.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（85.0 mg, 収率84％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）452（M+）。
【００８３】
実施例13
9-クロロ-5-[1-（3-ヒドロキシ-3-フェニル-プロピオニル）-ピペリジン-3-イル]-3-メチル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
乾燥丸底フラスコに、9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、（S）-3-ヒドロキシ-3-フェニルプロパン酸（22 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30 μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、1N HCl、1Nチオ硫酸ナトリウムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜1.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（34.5 mg，収率66％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）466（M+）。
【００８４】
実施例14
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（キノリン-2-カルボニル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
乾燥丸底フラスコに9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）、キナルジン酸（23 mg, 0.13 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（26 mg, 0.13 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（18 mg, 0.13 mmol）、4-ジメチルアミノ-ピリジン（1 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で一晩、室温で攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、1N チオ硫酸ナトリウム、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を白色固体として得る（40.6 mg, 収率77％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）466（M+）。
【００８５】
実施例15
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（3-フェニル-プロピル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（50 mg, 0.11 mmol）のメタノール（3 mL）中の懸濁液に、微細に破砕した３Åシーブ（約100mg）を加え、混合物を室温で30分間攪拌する。懸濁液に、シアノホウ化水素ナトリウム（sodium cyanoborohydride）（21 mg, 0.34 mmol）を加え、混合物を室温で窒素下で一晩攪拌する。溶液を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を黄色泡状物として得る（23.9 mg, 収率49％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）436（M+）。
【００８６】
実施例16
[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-酢酸エチルエステル
9-クロロ-3-メチル-5-ピペリジン-3-イル-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オンヨウ化水素酸塩（446 mg, 1.0 mmol）のテトラヒドロフラン（20 mL）中の懸濁液に、ブロモ酢酸エチル（0.11 mL, 1.0 mmol）を加え、続いて炭酸カリウム（346 mg, 2.5 mmol）を加える。混合物を室温で窒素下で一晩攪拌する。混合物を濃縮し、水と20％イソプロパノール/クロロホルムの間で分配し、分離する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜１％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を清澄な油状物として得る（261 mg, 収率65％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）404（M+）。
【００８７】
実施例17
2-[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-N-ピリジン-3-イル-アセトアミド
乾燥丸底フラスコに、[3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-イル]-酢酸（50 mg, 0.11 mmol）、3-アミノ-ピリジン（16 mg, 0.17 mmol）、1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（33 mg, 0.17 mmol）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（23 mg, 0.17 mmol）, 4-ジメチルアミノ-ピリジン（2 mg, 0.01 mmol）およびジメチルホルムアミド（3 mL）を加える。反応系を窒素下で攪拌し、トリエチルアミン（30 μL, 0.22 mmol）を滴下する。溶液を窒素下で室温で一晩攪拌する。混合物を濃縮し、20％イソプロパノール/クロロホルムおよび水の間で分配し、分離する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮する。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（０〜0.5％メタノール/クロロホルムで溶離）により精製して表題化合物を橙色固体として得る（19.8 mg, 収率33％）。1H NMR：構造式と一致。MS（イオンスプレー）452（M+）。
【００８８】
実施例18
5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリニル）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル
KHMDS（1.6 mL, 0.80 mmol, トルエン中0.5 M）を、5-{[3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボニル]-アミノ}-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸 1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル（0.27 g, 0.53 mmol）のDMF（10 mL）中の溶液に加える。５分後、水を用いてクエンチし、濃縮乾固させる。20％ iPrOH/CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させる。EtOAc/ヘキサンを溶離液として用いてラジアルクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固して表題化合物を無色油状物としてcis異性体の混合物として得る（94 mg, 35％）。MS（IS）490.1（M+）; HPLC（100％ EtOH、Chiralpak AD（0.46×25cm）1.0 mL/分流速; 20μL Inj. Vol.; 225 nM）Rt＝5.688分（66.3％）, 6.462分（22.9％）。
【００８９】
実施例19
5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸 1-tert-ブチルエステル
LiOH（370 mg, 15.5 mmol）の水（50 mL）溶液を5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリニル）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸1-tert-ブチルエステル 3-エチルエステル（1.5 g, 3.1 mmol）のジオキサン（50 mL）溶液に加える。室温で４時間攪拌し、濃縮乾固させる。20％ iPrOH/CHCl3および水の間で分配する。5N HClを用いてpH１に酸性化する。20％ iPrOH/CHCl3を用いて２回抽出する。合わせた有機物をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物を黄色泡状物としてcis異性体の混合物として得る（1.43 g, 100％）。MS（IS）460.4（M-1）; TLC（10％ MeOH/CHCl3）Rf＝0.31。
【００９０】
実施例20
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-[（ピリジン-3-イルメチル）-カルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル
HOAt（30 mg, 0.22 mmol）、EDCI（41 mg, 0.22 mmol）、Et3N（0.075 mL, 0.54 mmol）およびDMAP（5 mg, 触媒）を5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸1-tert-ブチルエステル（83 mg, 0.18 mmol）のDMF（5 mL）溶液に加える。室温で一晩攪拌し、濃縮乾固する。20％ iPrOH/CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、濃縮乾固する。MeOH/CHCl3勾配を溶離液として用いてラジアルクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固する。残渣をエーテル/ヘキサン中でスラリー化し、濃縮乾固させて表題化合を白色泡状物としてcis異性体の混合物として得る（44 mg, 50％）。MS（IS）552.2（M+）; HPLC（100％ EtOH 0.2％ DMEA、Chiralpak AD（0.46×25cm）1.0 mL/分流速；20μL Inj. Vol.; 225 nM）Rt＝6.291分（67.8％）、13.156分（24.4％）。
【００９１】
実施例21
5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-3-カルボン酸（ピリジン-3-イルメチル）-アミド２塩酸塩
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-[（ピリジン-3-イルメチル）-カルバモイル]-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル（30 mg, 0.05 mmol）のHCl-飽和HOAc（5 mL）溶液を室温で２時間攪拌し、次いで濃縮乾固する。トルエン中に２回溶解し、濃縮乾固して表題化合物（26 mg, 100％）を白色油状物としてcis異性体の混合物として得る。MS（IS）452.1（M+）; HPLC（（0.1％ TFA/水）中5-95％（0.1％ TFA/CH3CN）、3.8分、YMC ODS-A（0.46×50mm）5 μL/分; 25℃）Rt＝1.6（分100％）。
【００９２】
実施例22
3-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-5-ヒドロキシメチル-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
BH3SMe2（3.2 mL, 6.4 mmol, THF中2.0 M）を5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1,3-ジカルボン酸 1-tert-ブチルエステル（1.5 g, 3.2 mmol）のTHF（20 mL）溶液に０℃で加える。氷浴を取り除き、３０分間攪拌する。MeOHを滴下してクエンチし、濃縮乾固する。20％ iPrOH/CHCl3および水の間で分配する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させる。MeOH/CHCl3を溶離液として用いてラジアルクロマトグラフィーにより精製し、濃縮乾固させて表題化合物（0.95 g, 66％）を白色泡状物としてcis異性体の混合物として得る。MS（IS）448.2（M+）; HPLC（40％ IPA 60％ ヘプタン、Chiralpak AD（0.46×25cm）1.5 mL/分流速; 25μL Inj.; 225 nM）Rt＝3.28分（72.1％）, 4.48分（27.8％）。
【００９３】
実施例23
3-アミノメチル-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
3-アジドメチル-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル（0.65 g, 1.4 mmol）をTHF（7.5 mL）およびEtOH（50 mL）中で5％ Pd/C（0.132 g）を用いて50 psiおよび室温で24時間、水素化する。セライトを通してろ過し、濃縮乾固させる。CHCl3に溶解する。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させて表題化合物を褐色の泡状物としてcis異性体の混合物として得る（413 mg, 66％）。MS（IS）447.1（M+）; TLC（10％ MeOH/CHCl3）Rf＝0.14。
【００９４】
実施例24
3-（ベンゾイルアミノ-メチル）-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
塩化ベンゾイル（0.11 mL, 0.98 mmol）を3-アミノメチル-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル（0.4 g, 0.89 mmol）のCH2Cl2（10 mL）溶液に加える。Et3N（0.4 mL, 2.67 mmol）およびDMAP（5 mg,触媒）を加える。室温で４時間、攪拌し、次いでCHCl3を加える。飽和水性NaHCO3で２回洗浄し、1N HClで２回洗浄し、ブラインで２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮乾固させる。MeOH/CHCl3勾配を溶離液として用いてラジアルクロマトグラフィーにより精製する。EtOAc/ヘキサン勾配を溶離液として用いてラジアルクロマトグラフィーにより再度精製し、濃縮乾固させ表題化合物を白色泡状物としてcis異性体の混合物として得る（0.258 g, 53％）。MS（IS）551.3（M+）。キラルHPLC（Chiralcel OD 4.6x250mm。溶離液：35％ IPA, 65％ヘプタン。流速：1.0 mL/分、UV: 240 nM）により精製する。クロマトグラフィーにより表題化合物の異性体１を白色固体として得る（59 mg, 23％）。MS（IS）551.3（M+）; Rt＝7.0分。クロマトグラフィーにより表題化合物の異性体２を白色固体として得る（124 mg, 48％）。MS（IS）551.3; Rt＝15.0分。
【００９５】
実施例25
N-[5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-3-イルメチル]-ベンズアミド塩酸塩−異性体１
3-（ベンゾイルアミノ-メチル）-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル 異性体1（46 mg, 0.08 mmol）のHCl飽和HOAc（5 mL）溶液を３時間、室温で攪拌する。濃縮乾固させる。CH3CN中でスラリー化し（×２）、濃縮乾固させる。Et2O中でトリチュレートし、ろ過し、減圧下で乾燥させて表題化合物の異性体１を白色固体として得る（22 mg, 56％）。MS（IS）451.1（M+）。HPLC（50％ EtOH/ヘプタン、Chiralcel OD（0.46×25cm）1.0 mL/分流速; μL Inj. Vol.; 225 nM）Rt＝6.6分。
【００９６】
実施例26
N-[5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-3-イルメチル]-ベンズアミド塩酸塩−異性体２
3-（ベンゾイルアミノ-メチル）-5-（9-クロロ-3-メチル-4-オキソ-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-5-イル）-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル 異性体２（110 mg, 0.20 mmol）のHCl飽和HOAc（5 mL）溶液を３時間、室温で攪拌する。濃縮乾固させる。CH3CN中でスラリー化し（×２）、濃縮乾固させる。Et2O中でトリチュレートし、ろ過し、減圧下で乾燥させて表題化合物の異性体１を白色固体として得る（82 mg, 84％）。MS（IS）451.1（M+）; HPLC（50％ EtOH/ヘプタン、Chiralcel OD（0.46×25cm）1.0 mL/分流速;μL Inj. Vol.; 225 nM）Rt＝7.4分。
【００９７】
実施例27
9-クロロ-3-メチル-5-[1-（4-フェニル-ブチリル）-ピペリジン-3-イル]-5H-イソキサゾロ[4,3-c]キノリン-4-オン
3-（2-クロロ-6-フルオロ-フェニル）-5-メチル-イソキサゾール-4-カルボン酸[1-（4-フェニル-ブチリル）-ピペリジン-3-イル]-アミド（300 mg, 0.62 mmol）をN,N-ジメチルホルムアミド（4 mL）に周囲温度で窒素雰囲気下で溶解する。カリウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液（トルエン中0.5 M, 1.49 mL, 0.75 mmol）を加え、周囲温度で２０分間攪拌する。水でクエンチし、続いて固体の塩化ナトリウムを加える。酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。濃縮し、シリカゲルから溶離させて所望の生成物を得る（83 mg，29％）。MS（ES）:（M+1）+ 464.1, 466.1 m/z。
【００９８】
本発明の化合物はMRP1のインヒビターである。それゆえ、本発明の化合物は、腫瘍崩壊剤に対して先天的及び／または後天的な耐性（部分的にまたは完全にMRP1により付与されている）を有する任意の新生物を阻害するために使用することができる。言い換えると、このような新生物を本発明の化合物を有効量で用いて処置することにより、MRP1によって有効性が低下した化学療法に対する該新生物の感受性が高くなる。
【００９９】
ビンクリスチン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびエトポシドはMRP1の基質である腫瘍崩壊剤の例である。Coleら、「Pharmacological Characterization of Multidrug Resistant MRP-transfected Human Tumor Cells」, Cancer Research, 54: 5902-5910,1994を参照のこと。MRP1は、哺乳動物、特にヒトにおいて遍在的である（Nooter, K,ら、「Expression of the Multidrug Resistance-Associated Protein (MRP) Gene in Human Cancers」, Clin. Can. Res., 1: 1301-1310, (1995)）ので、任意の薬剤を用いて新生物を阻害することを目的とする化学療法はMRP1により効果が弱められる可能性がある。したがって、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣および甲状腺の新生物、さらに具体的なタイプの癌（例えば、急性リンパ芽球性および骨髄性白血病、ウィルムス腫瘍, 神経芽腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキン性リンパ腫、ならびに気管支癌腫）は、上記の腫瘍崩壊剤の１つ以上と本発明の化合物との組み合わせを用いて阻害することができる。
【０１００】
本発明の化合物の生物学的活性は、初期スクリーニングアッセイを用いて評価した。この方法でMRP1またはMDR1を阻害する際の試験化合物の活性を迅速かつ正確に測定した。この逆転（reverse)能力を評価するために有用なアッセイは当該分野において周知である。例えば、T. McGrathら、Biochemical Pharmacology, 38: 3611,1989; D. MarquardtおよびM. S. Center, Cancer Research, 52: 3157,1992; D. Marquardtら、Cancer Research, 50: 1426,1990;ならびにColeら、Cancer Research, 54: 5902-5910,1994を参照のこと。
【０１０１】
MRP1媒介ドキソルビシン耐性およびMDR1媒介ビンクリスチン耐性の逆転に関するアッセイ
HL60/ADRおよびHL60/VCRは継代細胞株であり、これらは、HL60（ヒト急性骨髄性白血病細胞株）を高濃度のドキソルビシンまたはビンクリスチン中で、非常に耐性の変異体が得られるまで培養することにより、それぞれ、ドキソルビシンおよびビンクリスチン耐性に関して選択した。
【０１０２】
HL60/ADRおよびHL60/VCR細胞を、10％ウシ胎仔血清(FBS) および250μg/ml GENTAMICINTM (Sigma)を含むRPMI 1640 (Gibco)中で増殖させた。細胞を回収し、アッセイ培地（培養培地と同じ）で２回洗浄し、計測し、アッセイ培地中で２×105細胞/mlまで希釈した。細胞（50μｌ）を96ウェル組織培養プレートのウェルに分注した。各96ウェルプレートの１列はネガティブコントロールとして用い、これには細胞無しでアッセイ培地をいれる。
【０１０３】
試験化合物及び参照化合物を、５mMの濃度でジメチルスルホキシド(DMSO) に溶解した。サンプルはアッセイ培地で20μＭに希釈し、各試験化合物（25μl）を６ウェルに加えた。アッセイ標準は４連で行った。0.4％DMSO（25μl）を溶媒コントロールとして４ウェルに加えた。アッセイ培地を全てのウェルに加えて最終体積を100μl／ウェルにした。
【０１０４】
プレートを、湿潤インキュベーター（５％二酸化炭素雰囲気）中で37℃で72時間インキュベートした。細胞生存率および生命力を、標準条件を用いてテトラゾリウム塩の酸化により測定した。プレートを37℃で３時間インキュベートした。蛍光は、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、490nmで測定した。
【０１０５】
試験化合物のHL60/ADRおよびHL60/VCR細胞のドキソルビシンに対する耐性を逆転させる能力を、腫瘍崩壊剤（ドキソルビシン）に加えて試験化合物を含むウェルの吸光度を腫瘍崩壊剤を含むが試験化合物は含まないウェルの吸光度と比較することにより測定した。コントロールは、バックグラウンドを取り除くため、そして結果が偽りではないことを確実にするために用いた。アッセイの結果は細胞増殖の阻害％として表した。通常、試験濃度では腫瘍崩壊剤単独ではHL60/ADRまたはHL60/VCR細胞の増殖を阻害しない。
【０１０６】
式Ｉの代表的な化合物は、MRP1多剤耐性を逆転させる際に顕著な効果を示した。化合物の多くは、腫瘍崩壊剤単独の場合とは反対に、腫瘍崩壊剤と組み合わせると活性の非常に顕著な増加を示した。さらに、試験した化合物の大多数が、HL60/VCR細胞株よりもHL60/ADR細胞株の顕著な程度での選択的阻害を示した。
【０１０７】
本発明の方法の実施において腫瘍崩壊剤を投与する際、用いる腫瘍崩壊剤の量は可変的である。実際に投与される腫瘍崩壊剤の量が、関連する状況（処置される状態、選択した投与経路、実際の投与される腫瘍崩壊剤、患者個人（哺乳動物）の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重篤度を含む）を考慮に入れて医師により決定されることは理解されるだろう。当然のことながら、投与される腫瘍崩壊剤の量は、その患者の医師により決定され、厳密にモニターされるべきである。用いられるべき腫瘍崩壊剤を決定した後は、「The Physician's Desk Reference（登録商標）」（Medical Economics Company、Montvale刊行、NJ 07645-1742）が投与する腫瘍崩壊剤の量を決定する際に医師にとって有用な情報源であり、これは毎年、改訂されている。
【０１０８】
好ましい製剤およびこれらの製剤を用いる本発明の方法は、腫瘍崩壊剤を含まないものである。それゆえ、本発明の化合物は腫瘍崩壊剤とは分けて投与されることが好ましい。本明細書中に記載の腫瘍崩壊剤は市販されており、本発明の方法に適した処方前の形態で購入することができる。
【０１０９】
単独、または場合により腫瘍崩壊剤と組み合わせた式Ｉの化合物は、通常、医薬製剤の形態で投与される。これらの製剤は、種々の経路により投与することができる（経口、経直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内及び鼻内をふくむ）。このような製剤は、製薬分野で周知の方法により製造され、式Ｉの活性化合物を少なくとも１種含む。
【０１１０】
また、本発明は、医薬キャリアと一緒に、活性成分として式Ｉの化合物、及び場合により腫瘍崩壊剤を含有する医薬製剤を用いる方法を包含する。本発明の製剤を製造する際、通常、活性成分は賦形剤と混合されるか、賦形剤により希釈されるか、あるいはカプセル、サシェ、紙または他の容器の形態であり得るそのようなキャリア内に封入されている。賦形剤が希釈剤として働く場合、固体、半固体または液体材料であり得、これは活性成分に対するビヒクル、キャリアまたは媒体として機能する。それゆえ、製剤は錠剤、丸薬、散剤、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ、エアロゾル（固体として、または液体媒体中で）、例えば10重量％以下の活性化合物を含有する軟膏、ゼラチンの軟および硬ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液および滅菌パッケージの散剤の形態であり得る。
【０１１１】
製剤を製造する際に、他の成分と混合する前に活性成分を粉砕して適切な粒子サイズを提供する必要があるかもしれない。活性化合物が実質的に不溶性である場合、通常、200メッシュ未満の粒子サイズまで粉砕する。活性成分が実質的に水溶性である場合、通常、粒子サイズは製剤中での実質的に均一な分配を提供するために、粉砕により、例えば約40メッシュに調節される。
【０１１２】
適切な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、でんぷん、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギナート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップおよびメチルセルロースが挙げられる。さらに、製剤は、滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラルオイル）、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤（例えば、メチル-およびプロピルヒドロキシベンゾエート）、甘味料、および香料を含み得る。本発明の製剤は、当該分野において公知の方法を用いることにより、患者への投与後の、活性成分の即時、徐放または遅延型放出を提供するように処方され得る。
【０１１３】
好ましくは、製剤は単位投薬形態で製剤化され、各投薬は約５〜約100mg、通常、約10〜約30mgの各活性成分を含有する。用語「単位投薬形態」とは、ヒト被検体および他の哺乳動物に対する単位投薬として適した、物理的に別個のユニットを意味し、各ユニットは、所望の治療効果を生じるように計算された規定量の活性物質を、適切な医薬賦形剤とともに含む。
【０１１４】
式Ｉの化合物は、広範な投薬範囲にわたり有効である。例えば、1日あたりの投薬量は、通常、約0.5〜約30mg/体重kgの範囲内にある。成人の治療においては、単回または分割投薬での約１〜約15mg/kg/日の範囲が、特に好ましい。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、関連する状況（処置される状態、選択した投与経路、実際に投与される化合物、患者個人の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重篤度を含む）を考慮に入れて医師により決定され、それゆえ上記の投薬範囲はいかなる様式においても本発明を限定することは意図しないことが理解されるべきである。いくつかの例では、上記の範囲の下限未満の投薬レベルがより適切であり、他方、さらに高い投薬量は、まず、1日を通しての投与用に数回のより低い投薬量へと分割されるならば、いずれの有害な副作用も伴わずにこのような高い投薬量が用いられ得る。
【０１１５】
錠剤のような固体製剤を製造するには、主活性成分を医薬賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一な混合物を含有する、固体予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物が均一であるという場合、それは活性成分が製剤中に均一に分散し、結果としてその製剤が、等しく有効な単位投薬形態（例えば、錠剤、丸剤およびカプセル剤）に簡単にさらに分けることができることを意味する。次いで、この固体予備製剤を、本発明の活性成分を0.1〜約500mg含有する上記のタイプの単位投薬形態にさらに分ける。
【０１１６】
本発明の錠剤または丸剤はコーティングまたは配合することにより、長期作用の利点をもたらす投薬形態を提供する。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬と外部投薬成分とを含み得、後者は前者を覆う皮膜の形態である。2つの成分は胃の中での分解に抵抗するように働く腸溶層により分離されており、該層は内部成分がインタクトなままで十二指腸まで通過するか、または放出が遅延されるようにする。このような腸溶層またはコーティングには種々の材料（多数のポリマー酸、ポリマー酸とセラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料との混合物を含む）が使用され得る。
【０１１７】
液体形態である新規な製剤も経口投与または注射用に本発明に含まれ得、これには水溶液、適当に味付けしたシロップ、水性もしくは油性懸濁液および綿実油、ごま油、ココナッツ油またはピーナッツ油のような食用油を用いた風味のある乳剤、ならびにエリキシルおよび類似の医薬ビヒクルが挙げられる。
【０１１８】
吸入（inhalationまたはinsufflation）用の製剤としては、医薬用の水性もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の液剤および懸濁剤、ならびに散剤が挙げられる。液体または固体製剤は上記のような適切な医薬賦形剤を含有し得る。好ましくは、製剤は局所的または全身的な効果のため、経口または経鼻呼吸経路により投与される。好ましくは、医薬溶媒中の組成物を、不活性ガスを用いて噴霧することができる。噴霧溶液は、噴霧装置から直接吹き込まれるか、または噴霧装置をフェイスマスク、テントまたは間欠的陽圧呼吸機に取り付けてもよい。液剤、懸濁剤または散剤製剤は、好ましくは経口または経鼻的に、適切な様式で製剤を送達するデバイスから投与され得る。
【０１１９】
以下の製剤例は単なる例示であり、いかなる意味においても本発明の範囲を制限することは意図しない。「活性成分」は、場合により、１つ以上の腫瘍崩壊剤を含む、式Ｉに記載の化合物またはその製薬上の塩を意味する。
【０１２０】
本発明の方法に用いる別の好ましい製剤は、経皮送達デバイス（「パッチ」）を用いる。このような経皮パッチを用いて、制御された量で、本発明の化合物の連続的または非連続的な注入を提供することができる。製薬薬剤の送達のための経皮パッチの構築および使用は、当該分野において周知である。例えば、米国特許第5,023,252号（1991年6月11日発行）を参照のこと（これは本明細書中に参照して組み込む）。このようなパッチは製薬薬剤の連続的、周期的、または要求時送達のために構築され得る。
【０１２１】
しばしば、医薬製剤を脳に、直接的または間接的のいずれかで導入することが望ましいか、または必要である。通常、直接法は、血液脳関門を迂回するために患者の脳質系への薬物送達カテーテルの配置を伴う。身体の特定の解剖学的領域への生物学的因子の送達のために使用されるこのような埋め込み送達系の１つは、米国特許第5,011,472号（1991年4月30日発行）に記載されている（これは本明細書中に参照して組み込む）。
【０１２２】
一般的に好ましい間接法は、通常、親水性薬物を脂質溶解性薬物またはプロドラッグに変換することにより薬物潜伏化を提供する組成物を処方することを伴う。一般的に、潜伏化は、薬物上に存在するヒドロキシ、カルボニル、スルフェートおよび第１アミン基を保護することにより達成されて薬物をより脂質溶解性にし、血液脳関門を通る移動をしやすくする。あるいは、親水性薬物の送達が、高張性溶液の動脈内注入（一過的に血液脳関門を開かせることができる）により増強され得る。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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