(57)【要約】本発明は、式Ｉの化合物を提供し：ここでＡは、ＮまたはＣＲであり、そしてＧ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、本明細書中に記載されるとおりである。これらの化合物は、プロテインキナーゼのインヒビターであり、特に細胞増殖、細胞死、および細胞外刺激に対する応答に関連するＳｒｃ哺乳動物プロテインキナーゼのインヒビターである。本発明はまた、これらのインヒビターを生成するための方法に関する。本発明はまた、本発明のインヒビターを含む薬学的組成物、ならびに種々の疾患の処置および予防においてこれらの組成物を利用する方法を提供する。
2004534754.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式Ｉ：
【化１】
2004534754.tif 000032
の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体であって、ここで：
Ｇは、−ＸＲまたは−ＸＡｒであって；
各Ｘは、Ｃ１−６アルキリデン鎖から独立して選択され、ここでＸの１つまたは２つの非隣接メチレン単位は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ−、または−ＮＲＳＯ２ＮＲ−によって独立して置換され；
Ａは、ＮまたはＣＲであり；
各Ｒは、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−８脂肪族基から独立して選択されるか；または、同一の窒素に結合している２つのＲ基は、該窒素と一緒になって、Ｒに結合する該窒素原子に加えて窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する３〜７員の複素環式環を形成し；ただし、Ｇが−Ｎ（Ｒ）２である場合、この２つのＲ基は、一緒になって環を形成せず；
Ａｒは、窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された５〜６員の飽和単環式環、部分的に不飽和の単環式環、もしくは全て不飽和の単環式環、または窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された８〜１０員の飽和二環式環、部分的に不飽和の二環式環、もしくは全て不飽和の二環式環であり；
Ｒ１は、Ｔ（ｎ）−ＲまたはＴ（ｎ）−Ａｒであり；
ｎは、０または１であり；
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−から選択され；
Ｒ２は、水素、Ａｒ、またはオキソ、ＯＲ、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ）２、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＮ（Ｒ）２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、＝ＮＮＨＣＯ２Ｒ、＝ＮＮＨＳＯ２Ｒ、Ａｒ、ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、ＮＲＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、もしくはＮＲＳＯ２Ｎ（Ｒ）２から独立して選択される１〜３個の基で必要に応じて置換されるＣ１−８脂肪族基から選択され；そしてＲ３は、ＲまたはＡｒから選択される、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、ここで：
Ｇは、−Ｘ−Ｒまたは−Ｘ−Ａｒであり、ここで：
各Ｘは、Ｃ１−４アルキリデン鎖から独立して選択され、ここで、Ｘの１つまたは２つの非隣接メチレン単位は、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−、または−ＮＨ−によって独立して置換され；
Ｒは、必要に応じて置換されるＣ１−６脂肪族基であり；
Ａｒは、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された５〜６員の飽和環もしくはアリール環であるか、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された９〜１０員の二環式アリール環もしくはヘテロアリール環であり；そしてＲ３は、５〜７員の環状脂肪族、または窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換される６員の飽和単環式環、部分的に不飽和の単環式環、もしくは全て不飽和の単環式環から選択される、
化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、ここで：
Ｒは、ハロ、ＣＮ、オキソ、Ｎ（ＲＯ）２、ＯＨ、ＯＲＯ、ＣＯ２ＲＯ、Ｃ（Ｏ）ＲＯ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、ＮＲＯＣＯ２ＲＯ、ＳＲＯ、ＮＲＯＳＯ２ＲＯ、ＳＯ２ＲＯ、ＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯ、ＯＣ（Ｏ）ＲＯ、またはＮＲＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２で必要に応じて置換されるＣ１−４脂肪族基であり、ここで各ＲＯ基は、水素またはＣ１−４脂肪族から独立して選択され；
Ａｒは、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、［１，３］ジオキサニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、ピペラジニル、チオモルホリニル、ナフチル、オキサゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、ジチオラニル、ジオキサラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、またはインドリルから選択される、必要に応じて置換された環であり；そして
Ｒ３は、必要に応じて置換されたシクロヘキシル、シクロペンチル、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、またはピリダジニル環から選択される、
化合物。
【請求項４】
請求項２に記載の化合物であって、ここで：
Ｒ２は、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２、またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで：
各Ｒは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−４脂肪族から独立して選択され、そして
Ａｒは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環または不飽和環である、
化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、ここで：
Ｒ１は、Ｔ（ｎ）−Ａｒであって、ここで、ｎは、０であり；そして
Ａｒは、０〜２個の窒素原子を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環もしくはアリール環、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された９〜１０員の部分的に不飽和の二環式環もしくは全て飽和の二環式環から選択される、
化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物であって、ここで：
Ｒ１は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニル、またはインダニルであって、ここで：
Ｒ１は、ＲＯ、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲＯ、ＳＲＯ、Ｎ（ＲＯ）２、ＣＯ２ＲＯ、Ｃ（Ｏ）ＲＯ、ＣＯＮ（ＲＯ）２、フェニル、ＳＯ２ＲＯ、またはＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯから独立して選択される１〜３個の基で必要に応じて置換され、ここで、各ＲＯは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−４脂肪族から独立して選択される、化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１は、メチル、エチル、オキソ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｃ（Ｏ）Ｍｅ、Ｃ（Ｏ）フェニル、ＣＨ≡ＣＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＳＭｅ、ＣＯ２Ｍｅ、フルオロ、ＳＯ２Ｍｅ、ＮＯ２、ＣＮ、クロロ、Ｎ（Ｍｅ）２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｍｅ、ＮＨ２、シアノフェニル、ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＭｅ、３−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニル、または３−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルから独立して選択される１〜３個の基で必要に応じて置換される、化合物。
【請求項８】
請求項５に記載の化合物であって、ここで：
Ｒ２は、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２、またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで：
各Ｒは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−４脂肪族から独立して選択され、そして
Ａｒは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環または不飽和環である、
化合物。
【請求項９】
請求項２に記載の化合物であって、ここで、該化合物は、以下の化合物：
【数１】
2004534754.tif 000033
2004534754.tif 000034
2004534754.tif 000035
2004534754.tif 000036
2004534754.tif 000037
から選択される、化合物。
【請求項１０】
請求項５に記載の化合物であって、ここで、該化合物は、以下の化合物：
【数２】
2004534754.tif 000038
2004534754.tif 000039
2004534754.tif 000040
から選択される、化合物。
【請求項１１】
請求項８に記載の化合物であって、ここで、該化合物は、以下の化合物：
【数３】
2004534754.tif 000041
から選択される、化合物。
【請求項１２】
請求項２に記載の化合物であって、ここで、該化合物は、以下の化合物：
【数４】
2004534754.tif 000042
2004534754.tif 000043
2004534754.tif 000044
から選択される、化合物。
【請求項１３】
請求項２に記載の化合物であって、ここで、該化合物は、以下の化合物：
【数５】
2004534754.tif 000045
2004534754.tif 000046
から選択される、化合物。
【請求項１４】
ＪＮＫ３キナーゼ活性、Ｌｃｋキナーゼ活性、またはＳｒｃキナーゼ活性を検出可能に阻害する量の請求項１に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクルを含有する、組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組成物であって、抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤、神経栄養性因子、心臓血管疾患を処置するための薬剤、肝臓疾患を処置するための薬剤、抗ウイルス剤、血液障害を処置するための薬剤、糖尿病を処置するための薬剤、または免疫不全障害を処置するための薬剤から選択されるさらなる治療的薬剤をさらに含有する、組成物。
【請求項１６】
生物学的サンプルにおいてＪＮＫ３キナーゼ活性、Ｌｃｋキナーゼ活性、またはＳｒｃキナーゼ活性を阻害する方法であって、該方法は、該生物学的サンプルと、以下：
ａ）請求項１に記載の化合物；または
ｂ）請求項１４に記載の組成物
とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１７】
患者において、ＪＮＫ３−媒介性、Ｌｃｋ−媒介性もしくはＳｒｃ−媒介性の疾患または状態の重症度を処置または軽減する方法であって、該方法は、請求項１４に記載の組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊的骨障害、増殖障害、感染症、神経変性疾患、アレルギー、発作における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、臓器低酸素症、血管過形成、心肥大、トロンビン誘発血小板凝集または炎症性誘発サイトカインに関連する状態の重症度を処置または軽減する方法であって、該方法は、請求項１４に記載の組成物を前記患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
急性膵炎、慢性膵炎、ぜん息、アレルギーまたは成人呼吸促進症候群から選択される炎症性疾患を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
糸球体腎炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、グレーヴズ病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸結腸炎、クローン病、乾癬または対宿主性移植片病から選択される自己免疫疾患を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
変形性関節症、骨粗しょう症または多発性骨髄腫関連骨疾患から選択される破壊的骨障害を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポージ肉腫または多発性骨髄腫から選択される増殖疾患を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンティングトン病、または外傷性損傷、グルタミン酸神経毒性もしくは低酸素症によって引き起こされる大脳虚血もしくは神経変性疾患から選択される神経変性疾患を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
発作における再灌流／虚血もしくは心筋虚血、腎臓虚血、心発作、臓器低酸素症またはトロンビン誘発血小板凝集を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
Ｔ細胞活性化または病理学的免疫応答に関連する状態を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
固形腫瘍、眼性新生血管形成または乳児性血管腫から選択される脈管形成障害を処置または予防するために使用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患が、高カルシウム血症、再狭窄、高カルシウム血症、骨粗しょう症、変形性関節症、骨転移の対症療法、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、対宿主性移植片病、Ｔ細胞媒介過敏症疾患、橋本甲状腺炎、ギャン−バレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触皮膚炎、癌、パジェット病、ぜん息、虚血障害もしくは再灌流障害、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性鼻炎から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記疾患が、高カルシウム血症、骨粗しょう症、変形性関節症または骨転移の対症療法から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記疾患が、自己免疫疾患、アレルギー、慢性関節リウマチおよび白血病から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１７に記載の方法であって、該方法は、抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤、神経栄養因子、心臓血管疾患を処置するための薬剤、肝臓疾患を処置するための薬剤、抗ウイルス剤、血液障害を処置するための薬剤、糖尿病を処置するための薬剤、または免疫不全障害を処置するための薬剤から選択されるさらなる治療剤を前期患者に投与するさらなる工程を包含し、ここで：
該さらなる治療剤は、処置されるべき疾患のために適切であり；そして
該さらなる治療剤は、単回投与形態として前記組成物と一緒にかまたは複数回投与形態の一部として前記組成物と別々に投与される、
方法。
【請求項３１】
請求項１に記載の化合物および移植可能なデバイスをコーティングするのに適切なキャリアを含む該移植可能なデバイスをコーティングするための組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の組成物でコーティングされた移植可能なデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）ならびにＳｒｃファミリーのプロテインキナーゼに属するキナーゼ、特に、ＳｒｃプロテインキナーゼおよびＬｃｋプロテインキナーゼのインヒビターに関する。Ｓｒｃファミリーキナーゼは、癌、免疫障害および骨の疾患に関与する。本発明はまた、本発明のインヒビターを含有する薬学的組成物および種々の障害の処置におけるこれら組成物の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
哺乳動物細胞は、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼファミリーのメンバーによって媒介されるシグナル伝達カスケードを活性化させることによって、細胞外刺激に応答する。このメンバーとしては、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼおよびｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）が挙げられる。ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）は、種々のシグナル（増殖因子、サイトカイン、ＵＶ照射、およびストレス誘発因子）によって活性化される。ＭＡＰＫは、セリン／トレオニンキナーゼであり、これらの活性化は、その活性化ループ内のＴｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒセグメントにおける、トレオニンおよびチロシンの二重リン酸化によって生じる。ＭＡＰＫは、転写因子を含む種々の基質をリン酸化し、次いで、特定のセットの遺伝子発現を調節し、それによって刺激に対する特定の応答を媒介する。
【０００３】
特定の目的のキナーゼファミリーの１つは、キナーゼのＳｒｃファミリーである。これらのキナーゼは、癌、免疫系機能不全および骨のリモデリング疾患に関与する。一般的な総説については、ＴｈｏｍａｓおよびＢｒｕｇｇｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）１３，５１３；ＬａｗｒｅｎｃｅおよびＮｉｕ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．（１９９８）７７，８１；ＴａｔｏｓｙａｎおよびＭｉｚｅｎｉｎａ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２０００）６５，４９；Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）を参照のこと。
【０００４】
Ｓｒｃファミリーのメンバーとしては、哺乳動物の以下の８つのキナーゼが挙げられる：Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｆｇｒ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、ＬｃｋおよびＢｌｋ。これらは、５２ｋＤ〜６２ｋＤの分子量範囲の非レセプタープロテインキナーゼである。これら全てが、６つの異なる機能性ドメインからなる共通の構造組織によって特徴付けられる：Ｓｒｃ相同性ドメイン４（ＳＨ４）、特有のドメイン、ＳＨ３ドメイン、ＳＨ２ドメイン、触媒ドメイン（ＳＨ１）、およびＣ末端調節領域。Ｔａｔｏｓｙａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）６５，４９−５８（２０００）。
【０００５】
公開された研究に基づいて、Ｓｒｃキナーゼは、種々のヒト疾患に対する潜在的な治療標的とみなされている。Ｓｒｃを欠乏したマウスは、大理石骨病を発症するか、または骨が沈着する。これは、破骨細胞による骨吸収が抑制されることに起因する。このことは、異常に高い骨吸収から生じる骨粗鬆症が、Ｓｒｃを阻害することにより処置され得るということを示唆する。Ｓｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６９，５５１（１９９２）、およびＳｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６４，６９３（１９９１）。
【０００６】
関節骨の破壊の抑制は、リウマチ様滑膜細胞および破骨細胞中でのＣＳＫの過剰発現によって、達成された。Ｔａｋａｙａｎａｇｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４，１３７（１９９９）。ＣＳＫ（すなわち、Ｃ末端Ｓｒｃキナーゼ）は、リン酸化し、それによって、Ｓｒｃ触媒活性を阻害する。このことは、Ｓｒｃ阻害が、関節破壊（これは、慢性関節リウマチに罹患する患者において特徴的である）を防止し得ることを意味する。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。
【０００７】
Ｓｒｃはまた、Ｂ型肝炎ウイルスの複製における役割を担う。ウイルスによりコードされた転写因子ＨＢｘは、そのウイルスの増殖に必要な段階において、Ｓｒｃを活性化する。Ｋｌｅｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１８，５０１９，（１９９９）およびＫｌｅｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１７，６４２７（１９９７）。
【０００８】
多くの研究は、Ｓｒｃ発現を、癌（例えば、結腸癌、乳癌、肝癌および膵臓癌）、特定のＢ細胞白血病、およびリンパ腫に関連付けている。Ｔａｌａｍｏｎｔｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１，５３（１９９３）；Ｌｕｔｚら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．２４３，５０３（１９９８）；Ｒｏｓｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，１３７５４（１９８６）；Ｂｏｌｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２２５１（１９８７）；Ｍａｓａｋｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２７，１２５７（１９９８）；Ｂｉｓｃａｒｄｉら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７６，６１（１９９９）；Ｌｙｎｃｈら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，７，１４１６（１９９３）。さらに、卵巣腫瘍細胞および結腸腫瘍細胞において発現されるアンチセンスＳｒｃが、腫瘍増殖を阻害することが示されている。Ｗｉｅｎｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５，２１６４（１９９９）；Ｓｔａｌｅｙら、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆ．，８，２６９（１９９７）。
【０００９】
他のＳｒｃファミリーキナーゼもまた、潜在的な治療標的である。Ｌｃｋは、Ｔ細胞シグナル伝達において役割を担う。Ｌｃｋ遺伝子を欠いたマウスは、胸腺細胞を発達させる能力が乏しい。Ｔ細胞シグナル伝達のポジティブ活性化因子としてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋインヒビターが自己免疫疾患（例えば、慢性関節リウマチ）を処置するのに有用であり得ることを示唆する。Ｍｏｌｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ，３５７，１６１（１９９２）。Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＬｙｎは、骨髄性白血病におけるインテグリンシグナル伝達の重要なメディエータとして同定されている。Ｌｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６５，３１３（１９９９）。従って、これらのキナーゼメディエータの阻害は、炎症を処置するのに有用であり得る。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。
【００１０】
ＪＮＫとしても公知の、ｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２−末端プロテインキナーゼにおいて、３つの異なる遺伝子（ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＪＮＫ３）が同定されており、ＪＮＫの少なくとも１０個の異なるスプライシングアイソフォームが、哺乳動物細胞中に存在している［Ｇｕｐｔａら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１５，２７６０−７０（１９９６）］。このＪＮＫファミリーのメンバーは、炎症誘発性（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびインターロイキン−ｌβ（ＩＬ−１β））によって、ならびに環境ストレス（アニソマイシン、ＵＶ照射、低酸素症、および浸透圧性ショックを含む）によって、活性化される［Ｍｉｎｄｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１３３３，Ｆ８５−Ｆ１０４（１９９７）］。
【００１１】
ＪＮＫの下流基質としては、転写因子ｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ−２、Ｅｌｋ１、ｐ５３および細胞死ドメインタンパク質（ＤＥＮＮ）が挙げられる［Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，２５８６−９１（１９９８）］。各ＪＮＫアイソフォームは、異なる親和性でこれらの基質に結合し、このことは、インビボにて異なるＪＮＫの基質特異性による、シグナル伝達経路の調節を示唆する。（Ｇｕｐｔａら、前出）。
【００１２】
他のＭＡＰＫとともに、ＪＮＫは、癌、トロンビン誘導性血小板凝集、免疫欠損障害、自己免疫疾患、細胞死、アレルギー、骨粗鬆症および心臓疾患に対する細胞性応答の媒介に関与している。ＪＮＫ経路の活性化に関連した治療状態としては、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性関節リウマチ、ぜん息、変形性関節症、虚血、癌および神経変性疾患が挙げられる。
【００１３】
いくつかの報告は、肝臓疾患または肝虚血の発症に関連するＪＮＫ活性化の重要性を詳述している［Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２１，３２６−９（１９９９）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４２０，２０１−４（１９９７）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，１９４２−５０（１９９８）；Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２８，１０２２−３０（１９９８）］。
【００１４】
ＪＮＫが種々の形態の心臓性ストレスに対する肥大性応答を媒介することが示されたので、心臓血管疾患（例えば、心筋梗塞またはうっ血性心不全）におけるＪＮＫの役割もまた、報告されている［Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８３，１６７−７８（１９９８）；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９７，１７３１−７（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２８０５０−６（１９９７）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９，１６２−７３（１９９６）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７８，９４７−５３（１９９６）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７，５０８−１４（１９９６）］。
【００１５】
ＪＮＫカスケードもまた、Ｔ細胞活性化（ＩＬ−２プロモーターの活性化を含む）において役割を担うことが、実証されている。従って、ＪＮＫのインヒビターは、病理学的免疫応答を変化させる際に、潜在的な治療価値を有する［Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２，３１７６−８７（１９９９）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８，３８６７−７７（１９９８）；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６，９４１−５３（１９９７）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６，９８９−９４（１９９６）］。
【００１６】
種々の癌におけるＪＮＫ活性化の役割もまた、確立されており、これは、癌におけるＪＮＫインヒビターの潜在的な用途を示唆する。例えば、構成的に活性化されたＪＮＫは、ＨＴＬＶ−１媒介性腫瘍形成に関連する［Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １３，１３５−４２（１９９６）］。カポージ肉腫（ＫＳ）細胞に対するｂＦＧＦおよびＯＳＭの増殖効果は、ＪＮＫシグナル伝達経路の活性化によって媒介される［Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９，１７９８−８０４（１９９７）］。ＫＳ増殖に関与する他のサイトカイン（例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−６およびＴＮＦα）の他の増殖効果もまた、ＪＮＫによって媒介される。さらに、ｐ２１０  ＢＣＲ−ＡＢＬ形質転換細胞におけるｃ−ｊｕｎ遺伝子の調節は、ＪＮＫの活性と対応し、このことは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の処置におけるＪＮＫインヒビターの役割を示唆する［Ｂｌｏｏｄ  ９２，２４５０−６０（１９９８）］。
【００１７】
ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、種々の組織において広範に発現される。対照的に、ＪＮＫ３は、脳において選択的に発現され、そしてより低い程度で心臓および精巣において選択的に発現される［Ｇｕｐｔａら、前出；Ｍｏｈｉｔら、Ｎｅｕｒｏｎ  １４，６７−７８（１９９５）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．３５，４７−５７（１９９６）］。ＪＮＫ３は、カイニン酸によって誘導される神経性アポトーシスに関連づけられており、グルタミン酸神経毒性の病理におけるＪＮＫの役割を示す。成人のヒトの脳において、ＪＮＫ３発現は、海馬のＣＡ１領域、ＣＡ４領域および鉤状回領域ならびに新皮質の層３および５において錐体ニューロンの亜集団に局在される［Ｍｏｈｉｔら、前出］。急性の低酸素症を患う患者のＣＡ１ニューロンは、正常な患者の脳組織由来の海馬ニューロンの最少の散財した細胞染色と比較して、強い核のＪＮＫ３免疫応答性を示した［Ｚｈａｎｇら、前出］。従って、ＪＮＫ３は、海馬におけるＣＡ１ニューロンの低酸素損傷および虚血損傷に関与することが明らかである。
【００１８】
さらに、ＪＮＫ３は、アルツハイマー病において脆弱性を有するニューロンと免疫化学的に共局在化する［Ｍｏｈｉｔら、前出］。ＪＮＫ３遺伝子の破壊は、興奮毒性グルタミン酸レセプターアゴニストのカイニン酸に対するマウスの耐性を生じＪＮＫ３シグナル伝達経路を示す（発作活性、ＡＰ−１転写活性および海馬ニューロンのアポトーシスに対する影響を含む）、グルタミン酸神経毒性の病原における決定的な構成成分であることを示した（Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ，３８９，８６５−８７０（１９９７））。
【００１９】
これらの知見に起因して、ＪＮＫシグナル伝達（特にＪＮＫ３のシグナル伝達）は、以下のようなアポトーシス駆動神経変性疾患の領域に関連していた：アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、てんかんおよび発作、ハンティングトン病、外傷性脳損傷、ならびに虚血および出血性発作。
【００２０】
従って、ＪＮＫ３、ＳｒｃおよびＬｃｋの活性化と関連する種々の疾患または状態の処置において有用である、ＪＮＫ３、ＳｒｃおよびＬｃｋのタンパク質キナーゼの強力なインヒビターを開発する多大な必要性がなお存在している。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
（発明の要旨）
本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な組成物は、Ｓｒｃ、ＬｃｋおよびＪＮＫ３タンパク質キナーゼのインヒビターとして有効であることが見出された。これらの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体は、一般式Ｉを有し、
【００２２】
【化２】
2004534754.tif 000003
ここで、Ａは、窒素またはＣＨであり、そしてＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＧは、以下に記載されるとおりである。
【００２３】
これらの化合物およびその薬学的に受容可能な組成物は、種々の疾患（例えば、癌、自己免疫疾患、骨粗しょう症および炎症性疾患）を処置またはこれらの重症度減少するために有用である。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、以下の式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体に関し：
【００２５】
【化３】
2004534754.tif 000004
ここで：
Ｇは、−ＸＲまたは−ＸＡｒであって；
各Ｘは、Ｃ１−６アルキリデン鎖から独立して選択され、ここでＸの１つまたは２つの非隣接メチレン単位は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ−、または−ＮＲＳＯ２ＮＲ−によって独立して置え換えられ；
Ａは、ＮまたはＣＲであり；
各Ｒは、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−８脂肪族基から独立して選択されるか；または、同一の窒素に結合している２つのＲ基は、窒素と一緒になって、Ｒ基に結合している窒素に加えて窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する３〜７員の複素環式環を形成し；ただし、Ｇが−Ｎ（Ｒ）２である場合、この２つのＲ基は、一緒になって環を形成せず；
Ａｒは、窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された５〜６員の飽和環、部分的に不飽和の環、もしくは全て不飽和の単環式環であるか、または窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された８〜１０員の飽和環、部分的に不飽和の環、もしくは全て不飽和の二環式環であり；
Ｒ１は、Ｔ（ｎ）−ＲまたはＴ（ｎ）−Ａｒであり；
ｎは、０または１であり；
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−から選択され；
Ｒ２は、水素、Ａｒ、またはオキソ、ＯＲ、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ）２、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＮ（Ｒ）２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、＝ＮＮＨＣＯ２Ｒ、＝ＮＮＨＳＯ２Ｒ、Ａｒ、ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、ＮＲＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、もしくはＮＲＳＯ２Ｎ（Ｒ）２から独立して選択される１〜３個の基で必要に応じて置換されるＣ１−８脂肪族基から選択され；そしてＲ３は、ＲまたはＡｒから選択される。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、以下の定義は、他に指示されない限り、適用される。
【００２７】
句「必要に応じて置換された」は、句「置換または非置換の」と交換可能に使用される。他に指示されない限り、必要に応じて置換された基は、この基の各置換可能な位置に置換基を有し得、各置換は、他に依存しない。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、用語「脂肪族」または「脂肪族基」とは、完全に飽和であるかまたは１単位以上の不飽和を含む直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ８炭化水素鎖、あるいは完全に飽和であるかまたは１単位以上の不飽和を含む単環式Ｃ３〜Ｃ８炭化水素または二環式Ｃ８〜Ｃ１２炭化水素を意味するが、これらは、芳香族ではなく、（本明細書中では、「炭素環」または「シクロアルキル」ともいわれる）この分子の残りの部分への単一の結合点を有し、ここで、この二環式環系における任意の個々の環は、３〜７員を有する。例えば、適切な脂肪族基としては、直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基およびこれらのハイブリッド（例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
単独またはより大きな部分のうちの一部として用いられる、用語「アルキル」、「アルコキシ」、「ヒドロキシアルキル」、「アルコキシアルキル」、および「アルコキシカルボニル」は、１〜１２個の炭素原子を含む直鎖および分枝鎖の両方を含む。単独またはより大きな部分のうちの一部として用いられる、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、２〜１２個の炭素原子を含む直鎖および分枝鎖の両方を含む。
【００３０】
用語「ヘテロ原子」とは、窒素、酸素、または硫黄を意味し、そして窒素および硫黄の任意の酸化形態、ならびに任意の塩基性窒素の四級化形態を含む。また、用語「窒素」は、複素環式環の置換可能な窒素を含む。例としては、酸素、硫黄または窒素より選択される０個〜３個のヘテロ原子を有する飽和または部分的に不飽和の環において、窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおけるように）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるように）またはＮＲ＋（Ｎ置換ピロリジニルにおけるように）であり得る。
【００３１】
単独または「アラルキル」、「アラルコキシ」、もしくは「アリールオキシアルキル」のようなより大きな部分のうちの一部として用いられる、用語「アリール」とは、全部で５〜１４個の環のメンバーを有する単環式環系、二環式環系および三環式環系をいい、そしてこの系における少なくとも１つの環は、芳香族であり、ここでこの系における各々の環は、３〜７個の環のメンバーを含む。用語「アリール」はまた、用語「アリール環」と交換可能に用いられ得る。用語「アリール」は、本明細書中の以下に定義されるヘテロアリール環系をいう。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、または「複素環式」とは、５個〜１４個の環のメンバー（そのうち１つ以上の環のメンバーは、ヘテロ原子である）を有する非芳香族の、単環式環系、二環式環系または三環式環系を意味し、ここでこの系における各々の環は、３〜７個の環のメンバーを含む。
【００３３】
単独または「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアリールアルコキシ」のようなより大きな部分のうちの一部として用いられる、用語「ヘテロアリール」とは、全部で５〜１４個の環のメンバーを有する単環式環系、二環式環系および三環式環系をいい、ここで、この系における少なくとも１つの環は、芳香族であり、この系における少なくとも１つの環は、１個以上のヘテロ原子を含み、そしてこの系における各々の環は、３個〜７個の環のメンバーを含む。用語「ヘテロアリール」は、用語「ヘテロアリール環」または用語「ヘテロ芳香族」と交換可能に用いられ得る。
【００３４】
アリール（アラルキル、アラルコキシ、アリールオキシアルキルなどを含む）基またはヘテロアリール（ヘテロアラルキル、およびヘテロアリールアルコキシなどを含む）基は、１個以上の置換基を含み得る。アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、またはヘテロアラルキル基の不飽和炭素原子上の適切な置換基は、ハロゲン、−ＲＯ、−ＯＲＯ、−ＳＲＯ、１，２−メチレン−ジオキシ、１，２−エチレンジオキシ、必要に応じてＲＯで置換された（Ｐｈ）；必要に応じてＲＯで置換された−Ｏ（Ｐｈ）、必要に応じてＲｏで置換された−ＣＨ２（Ｐｈ）、必要に応じてＲＯで置換された−ＣＨ２ＣＨ２（Ｐｈ）、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ（ＲＯ）２、−ＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯ、−ＮＲＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、−ＮＲＯＣＯ２ＲＯ、−ＮＲＯＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯ、−ＮＲＯＮＲＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、−ＮＲＯＮＲＯＣＯ２ＲＯ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＲＯ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＲＯ、−ＣＯ２ＲＯ、−Ｃ（Ｏ）ＲＯ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＲＯ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＯ）２、−Ｓ（Ｏ）ＲＯ、−ＮＲＯＳＯ２Ｎ（ＲＯ）２、−ＮＲＯＳＯ２ＲＯ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＯ）２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（ＲＯ）２、または−（ＣＨ２）ｙＮＨＣ（Ｏ）ＲＯから選択され、ここで、各ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたＣ１〜６脂肪族基、非置換の５〜６員環のヘテロアリールまたは複素環式環、フェニル、−Ｏ（Ｐｈ）、または−ＣＨ２（Ｐｈ）から独立して選択される。脂肪族基上の任意の置換基ＲＯは、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃ１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）、またはハロ（Ｃ１〜４脂肪族）から選択される。
【００３５】
脂肪族基または非芳香族ヘテロ環式環は、１つ以上の置換基を含み得る。脂肪族基または非芳香族へテロ環式環の飽和炭素上の適切な置換基は、アリール基またはヘテロアリール基の不飽和炭素について上に列挙される置換基および以下から選択される：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＨＲ＊、＝ＮＮ（Ｒ＊）２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣＯ２（アルキル）、＝ＮＮＨＳＯ２（アルキル）、または＝ＮＲ＊、ここで各々のＲ＊は、独立して、水素または必要に応じて置換されたＣ１〜６脂肪族から選択される。Ｒ＊の脂肪族基上の必要に応じた置換基は、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃｌ−４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）、またはハロ（Ｃ１〜４脂肪族）より選択される。
【００３６】
非芳香族ヘテロ環式環の窒素上の必要に応じた置換基は、−Ｒ＋、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−ＣＯ２Ｒ＋、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−ＳＯ２Ｒ＋、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ＋）２、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ＋）２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ＋）２、または−ＮＲ＋ＳＯ２Ｒ＋より選択され；ここでＲ＋は水素、必要に応じて置換されたＣ１〜６脂肪族、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換された−Ｏ（Ｐｈ）、必要に応じて置換された−ＣＨ２（Ｐｈ）、必要に応じて置換された−ＣＨ２ＣＨ２（Ｐｈ）、または非置換５〜６員ヘテロアリール環もしくはヘテロ環式環である。Ｒ＋の脂肪族基またはフェニル環上の必要に応じた置換基は、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃ１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）、またはハロ（Ｃ１〜４脂肪族）より選択される。
【００３７】
用語「アルキリデン鎖」とは、完全に飽和であり得るかまたは１以上の不飽和単位を有し得、そして分子の残りに対して２箇所の結合を有し得る、直鎖状炭素鎖または分枝炭素鎖をいう。
【００３８】
置換基または変数の組み合わせは、このような組み合わせが、安定または化学的に実現可能な化合物を生じる場合に限り許容される。安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、４０℃以下の温度で湿気または他の化学的に反応性の条件の非存在下で、少なくとも１週間維持された場合、実質的に変更されない化合物である。
【００３９】
本発明の特定の化合物が、その化合物の互変異性体形態で存在し得、このような互変異性体形態の化合物全てが、本発明の範囲内であることは、当業者に明らかである。
【００４０】
他に記載のない限り、本明細書中に示される構造はまた、その構造の全ての立体化学的形態（すなわち、各不斉中心に対するＲ配置およびＳ配置）を含むことを意味する。従って、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、ならびに鏡像異性体混合物およびジアステレオマー混合物は、本発明の範囲内である。他に記載のない限り、本明細書中に示される構造はまた、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下においてのみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、重水素もしくはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ−濃縮炭素もしくは１４Ｃ−濃縮炭素による炭素の置換を除いて本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００４１】
式Ｉの好ましいＧ基は、−Ｘ−Ｒおよび−Ｘ−Ａｒであり、ここで、Ｘは、Ｃ１−４アルキリデン鎖であり、そしてここで、Ｘの１つまたは２つの非隣接メチレン単位は、独立して、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−または−ＮＨ−によって置換される。式Ｉのより好ましいＸ基は、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−から選択される。
【００４２】
式Ｉの−Ｘ−Ｒ部分内の好ましいＲ基は、必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族基、より好ましくは、必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルから選択される。式Ｉの−Ｘ−ＲのＲ基上の好ましい置換基は、ハロ、ＣＮ、オキソ、Ｎ（ＲＯ）２、ＯＨ、ＯＲＯ、ＣＯ２ＲＯ、Ｃ（Ｏ）ＲＯ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２、ＮＲＯＣＯ２ＲＯ、ＳＲＯ、ＮＲＯＳＯ２ＲＯ、ＳＯ２ＲＯ、ＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯ、ＯＣ（Ｏ）ＲＯ、またはＮＲＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＯ）２から選択され、ここで、各ＲＯ基は、独立して、水素もしくはＣ１−４脂肪族から選択される。式Ｉの−Ｘ−Ｒの最も好ましいＲ基は、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、プロピル、ブチル、フェニル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２シクロプロピル、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）２、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ（Ｍｅ）２から選択される。
【００４３】
式Ｉの−Ｘ−Ａｒ部分内の好ましいＡｒ基は、窒素、酸素もしくは硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された５〜６員の飽和環、もしくはアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された９〜１０員の二環式アリール環もしくはヘテロアリール環から選択される。より好ましくは、式Ｉの−Ｘ−Ａｒ内のＡｒ基は、必要に応じて、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、［１，３］ジオキサニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、ピペラジニル、チオモルホリニル、ナフチル、オキサゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、ジチオラニル、ジオキサラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、またはインドリルから選択される、必要に応じて置換された環である。
【００４４】
式Ｉの好ましいＲ１基は、Ｔ（ｎ）−Ａｒである。Ｒ１部分内の好ましいＡｒ基は、０〜２個の窒素を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環もしくはアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された９〜１０員の部分的に不飽和もしくは完全に不飽和の二環式環から選択される。より好ましくは、Ｒ１部分内のＡｒ基は、フェニル、シクロへキシル、ピリジル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニル、またはインダニルから選択される、必要に応じて置換された環である。
【００４５】
式ＩのＲ１のＡｒ上の好ましい置換基は、ＲＯ、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲＯ、ＳＲＯ、Ｎ（ＲＯ）２、ＣＯ２ＲＯ、Ｃ（Ｏ）ＲＯ、ＣＯＮ（ＲＯ）２、フェニル、ＳＯ２ＲＯ、またはＮＲＯＣ（Ｏ）ＲＯから選択され、ここで、各ＲＯは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−４脂肪族から独立して選択される。式ＩのＲ１のＡｒ上のより好ましい置換基は、メチル、エチル、オキソ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｃ（Ｏ）Ｍｅ、Ｃ（Ｏ）フェニル、ＣＨ≡ＣＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＳＭｅ、ＣＯ２Ｍｅ、フルオロ、ＳＯ２Ｍｅ、ＮＯ２、ＣＮ、クロロ、Ｎ（Ｍｅ）２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｍｅ、ＮＨ２、シアノフェニル、ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＭｅ、３−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニル、または３−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルから選択される。
【００４６】
式Ｉの好ましいＲ２基は、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２、またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで：Ｒは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−４脂肪族であり、そしてＡｒは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環または不飽和環である。式Ｉのより好ましいＲ２基は、メチル、エチル、ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）２、ＣＨ２Ｎ（Ｅｔ）２、ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）ＣＨ２ＣＯ２ＣＨ３、またはＣＨ２（ピペラジン−１−イル）である。
【００４７】
式Ｉの好ましいＲ３基は、５〜７員の環状脂肪族、または窒素、硫黄、もしくは酸素から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された６員の飽和環、部分的に不飽和の環、もしくは全て不飽和の単環式環から選択される。式Ｉのより好ましいＲ３基は、必要に応じて置換されたシクロヘキシル、シクロペンチル、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、またはピリダジニル環から選択される。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態は、以下の一般式ＩＡ：
【００４９】
【化４】
2004534754.tif 000005
によって示されるような、Ｇが、Ｓ−Ｒである式Ｉの化合物、またはその薬学的に受容可能な誘導体に関連し、ここで、Ａ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上記の定義の通りである。
【００５０】
式ＩＡの好ましいＲ基、Ｒ１基、Ｒ２基、およびＲ３基は、上記式Ｉに記載される基である。
【００５１】
より好ましい実施形態に従って、本発明は、式ＩＩＡの化合物：
【００５２】
【化５】
2004534754.tif 000006
またはその薬学的に受容可能な誘導体に関し、ここで、Ａ、Ｒ、Ａｒ、Ｒ２、およびＲ３は、上記の定義の通りである。
【００５３】
式ＩＩＡの好ましいＡｒ基、Ｒ２基、およびＲ３基は、上記の式Ｉについて記載された基である。
【００５４】
表１は、ＩＩＡ化合物の代表的な例を以下に示し、ここで、Ａは、Ｎであり、そしてＡｒは、必要に応じて置換されたフェニル環である。
【００５５】
（表１．式ＩＩＡの化合物の例：）
【００５６】
【表１】
2004534754.tif 000007
2004534754.tif 000008
2004534754.tif 000009
2004534754.tif 000010
2004534754.tif 000011
式ＩＩＡの化合物の例（ここで、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ３は、フェニルであり、そしてＲ１は、フェニル以外である）が、以下の表２に示される。
【００５７】
（表２．式ＩＩＡの化合物の例）
【００５８】
【表２】
2004534754.tif 000012
2004534754.tif 000013
2004534754.tif 000014
式ＩＩＡの化合物の代表的な例（ここで、Ａは、ＣＨであり、Ｇは、Ｓ−Ｍｅであり、Ｒ１は、フェニルであり、Ｒ３は、フェニルであり、そしてＲ２は、メチル以外である）が、以下の表３に示される。
【００５９】
（表３．化合物ＩＩＡの例）
【００６０】
【表３】
2004534754.tif 000015
本発明の別の実施形態は、以下の式ＩＢまたはＩＢ’の化合物：
【００６１】
【化６】
2004534754.tif 000016
またはその薬学的に受容可能な誘導体に関し、ここで、各Ｘは、独立して、Ｃ１−４アルキリデン鎖から選択され、そしてここで、Ｘの１つまたは２つの非隣接メチレン単位は、独立して、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−、または−ＮＨ−によって置換され、そしてここで、Ａ、Ｒ、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上記の定義の通りである。
【００６２】
式ＩＢおよびＩＢ’内の好ましいＲ基、Ａｒ基、Ｒ１基、Ｒ２基、およびＲ３基は、式Ｉに関して上記の定義の通りである。
【００６３】
以下の表４は、式ＩＢおよびＩＢ’化合物の特定の例を示す。
【００６４】
（表４．ＩＢ化合物の例）
【００６５】
【表４】
2004534754.tif 000017
2004534754.tif 000018
2004534754.tif 000019
本発明の他の実施形態は、式Ｉの化合物に関し、ここで、Ｇは、−ＮＨ−Ｒ（式ＩＣ）であり、Ｇは、−ＮＨ−Ａｒ（式ＩＤ）であり、Ｇは、−Ｏ−Ｒ（式ＩＥ）であり、Ｇは、−Ｏ−Ａｒ（式ＩＦ）であり、Ｇは、−ＳＯ２−Ｒ（式ＩＧ）であり、Ｇは、−ＳＯ２−Ａｒ（式ＩＨ）であり、Ｇは、−Ｓ（Ｏ）−Ｒ（式ＩＪ）であり、そしてＧは、−Ｓ（Ｏ）−Ａｒ（式ＩＫ）である。これらの実施形態の特定の例（ここで、Ｒ３は、フェニルである）が、以下の表５に示される。
【００６６】
（表５：）
【００６７】
【表５】
2004534754.tif 000020
2004534754.tif 000021
本発明の化合物は、以下の一般的なスキームおよびそれに続く調製例によって例示されるように、類似の化合物について、当業者に公知の方法によって一般に調製され得る。
【００６８】
（スキームＩ）
【００６９】
【化７】
2004534754.tif 000022
試薬および条件：（ａ）（ＣＨ３ＣＯ）２Ｃ＝Ｃ（ＳＲ）２、６０℃；（ｂ）ＤＭＦ−ＤＭＡ、トルエン、還流；（ｃ）Ｒ１−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ＭｅＯＨ、還流。
【００７０】
上記のスキームＩは、本発明の化合物（ここで、Ｒ３は、ピリジルである）を調製するための一般的な経路を示す。工程（ａ）において、ピリジニルヒドラジンを、例えば、３−（ビス−メチルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオンを使用して、３−（ビス−アルキルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオンと縮合させ、２（ここで、Ｒはメチルである）を提供する。工程（ｂ）に従って、２をジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール（ＤＭＦ−ＤＭＡ）と処理することで、エナミン３を提供し得る。化合物３を、種々のグアニジン誘導体と環化させることで、式ＩＩＡの化合物を提供し得る。ＩＩＡ化合物を、オキソンで酸化することで、式ＩＧの対応するスルホニル化合物を提供する。次に、ＩＧのスルホニル基を、種々のアミンによって置換することで、ＩＣを提供し得る。あるいは、このスルホニル基または対応するスルホキシド基は、当業者に公知の方法を使用して、−ＳＡｒ、−ＳＲ、−ＯＡｒ、または−ＯＲによって置換され、本発明の他の化合物を提供し得る。
【００７１】
ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃのインヒビターとして、本発明において利用される化合物の活性は、当該分野で公知の方法に従って、インビトロ、インビボ、または細胞株中でアッセイされ得る。インビトロアッセイは、活性化ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃのリン酸化活性またはＡＴＰａｓｅ活性のいずれかの阻害を決定する、アッセイを含む。あるいは、インビトロアッセイにより、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃに結合するインヒビターの能力を定量する。インヒビター結合は、結合前にインヒビターを放射性標識し、インヒビター／ＪＮＫ３、インヒビター／Ｌｃｋ、またはインヒビター／Ｓｒｓ複合体を単離し、そして放射標識結合の量を決定することによって測定され得る。あるいは、インヒビター結合は、新しいインヒビターが、公知の放射性リガンドに結合したＪＮＫ３、Ｌｃｋ，またはＳｒｃとともにインキュベートされる、競合実験を実施することにより決定され得る。ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃキナーゼのインヒビターとして、本発明において利用される化合物をアッセイするための詳細な条件が、以下の実施例に記載されている。
【００７２】
別の実施形態に従って、本発明は、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な誘導体および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントもしくはビヒクルを含む組成物を提供する。本発明の組成物における化合物の量は、プロテインキナーゼ、特に、生物学的サンプルまたは患者において、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃを検出可能に阻害するのに有効である量である。好ましくは、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者に投与するために処方される。最も好ましくは、本発明の組成物は、患者への経口投与のために処方される。
【００７３】
本明細書中で使用される場合、用語「患者」は、動物を意味し、好ましくは、哺乳動物を意味し、そして最も好ましくは、ヒトを意味する。
【００７４】
用語「薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクル」は、処方される化合物の薬理学的活性を破壊しない、非毒性のキャリア、アジュバント、またはビヒクルをいう。本発明の組成物中に使用され得る、薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクルとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝剤（リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、プロタミンスルフェート、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、ジンク塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベース物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ろう、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂））。
【００７５】
用語「検出可能に阻害する」とは、本明細書中で使用される場合、上記組成物およびＪＮＫ３キナーゼ、Ｌｃｋキナーゼ、またはＳｒｃキナーゼを含むサンプルと、上記組成物の非存在下、ＪＮＫ３キナーゼ、Ｌｃｋキナーゼ、またはＳｒｃキナーゼを含む等価なサンプルとの間のＪＮＫ３活性、Ｌｃｋ活性、またはＳｒｃ活性における測定可能な変化をいう。
【００７６】
「薬学的に受容可能な誘導体」とは、本発明の化合物の任意の非毒性の塩、エステル、エステルの塩または他の誘導体であって、レシピエントに投与した際、本発明の化合物またはそれらの阻害活性代謝物もしくは残留物を、直接的または間接的のいずれかで提供できるものを意味する。
【００７７】
本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、薬学的に受容可能な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から誘導されるものを含む。適切な酸塩の例としては、以下が挙げられる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩。それ自体が薬学的に受容可能でないが、他の酸（例えば、シュウ酸）は、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な酸付加塩の入手における中間体として有用な塩の調製において使用され得る。
【００７８】
適切な塩基から誘導される塩としては、以下が挙げられる：アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）の塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の塩、アンモニウム塩およびＮ＋（Ｃ１−４アルカリ）４塩。本発明はまた、本明細書中に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化を想定する。水溶性もしくは油溶性または水分散性もしくは油分散性の生成物は、このような四級化によって入手され得る。
【００７９】
本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入噴霧により、局所的に、直腸内に、鼻内に、頬内に、膣内に、または移植したレザバを介して、投与され得る。本明細書中で使用される場合、用語「非経口的」とは、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝臓内、病巣内および頭蓋内の注射および注入技術を含む。好ましくは、この組成物は、経口的、腹腔内または静脈内で投与される。本発明の組成物の滅菌注射可能形態は、水性懸濁液または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、当該技術分野で公知の技術に従って処方され得る。この滅菌注射可能調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能溶液または懸濁液であり得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として、従来から使用されている。
【００８０】
この目的のために、任意の無刺激の不揮発性油が使用され得、これには、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドが挙げられる。脂肪酸（例えば、オレイン酸）およびそのグリセリド誘導体は、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはヒマシ油、特に、それらのポリオキシエチル化した形態）と同様に、注射可能物の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース）または類似の分散剤（これらは、一般的に、乳濁液または懸濁液を含む薬学的に受容可能な投薬形態を処方する際に、使用される）を含有し得る。他の一般的に使用される界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓおよび他の乳化剤）または生体利用能エンハンサー（これらは、薬学的に受容可能な固体、液体または他の投薬形態を製造する際に、一般的に使用される）もまた、処方の目的のために使用され得る。
【００８１】
本発明の薬学的組成物は、任意の経口的に受容可能な投薬形態（これには、カプセル、錠剤、水性懸濁液または溶液が含まれるが、それらに限定されない）で、経口投与され得る。経口用途のための錠剤の場合には、一般的に使用されるキャリアとしては、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）もまた、代表的には、添加される。カプセル形態での経口投与に有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。経口用途のために水性懸濁液が必要な場合、活性成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。所望の場合、特定の甘味料、香料または着色剤がまた添加され得る。
【００８２】
あるいは、本発明の薬学的組成物は、直腸投与のための座剤の形態で投与され得る。これらは、この薬剤と、適切な非刺激性の賦形剤（これは、室温で固体であるが、直腸温では液体であり、従って、直腸で融解し薬物を放出する）とを混合することにより、調製され得る。このような物質には、ココアバター、蜜蝋およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００８３】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、特に、治療の標的が局所的な適用により容易に到達可能な領域または器官（目、皮膚または下部腸管の疾患を含む）を含む場合、局所的に投与され得る。これらの領域または器官のそれぞれに適切な局所処方物は、容易に調製される。
【００８４】
下部腸管に対する局所適用は、直腸座剤処方（上記）により、または適当な浣腸処方にて、達成され得る。局所的経皮パッチもまた、使用され得る。
【００８５】
局所的な適用のために、薬学的に受容可能な組成物は、１種以上のキャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適当な軟膏で処方され得る。本発明の化合物の局所投与用のキャリアとしては、鉱油、流動パラフィン、白色鉱油、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、この薬学的に受容可能な組成物は、１種以上の薬学的に受容可能なキャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適切なローションまたはクリームで処方され得る。適切なキャリアとしては、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
眼科用途には、この薬学的に受容可能な組成物は、防腐剤（例えば、ベンジルアルコニウムクロライド）と共にまたはそれなしのいずれかで、ｐＨを調整した等張性滅菌生理食塩水の微細化懸濁液として、または、好ましくは、ｐＨを調整した等張性滅菌生理食塩水の溶液として、処方され得る。あるいは、眼科用途のために、この薬学的に受容可能な組成物は、軟膏（例えば、ペトロラタム）で処方され得る。
【００８７】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、鼻エアロゾルまたは鼻吸入により投与され得る。このような組成物は、製薬処方の技術分野で周知の技術に従って調製され、そして生理食塩水中の溶液として、ベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して調製され得る。
【００８８】
最も好ましくは、本発明の薬学的に受容可能な組成物は、経口投与のために処方される。
【００８９】
単回投薬形態の組成物を作製するためにキャリア物質と組合わされ得る本発明の化合物の量は、処置される宿主、投与の特定の様式に依存して変動する。好ましくは、この組成物は、１日あたり０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇのインヒビターの投薬量が、これらの組成物を受容する患者に投与され得るように処方されるべきである。
【００９０】
あらゆる特定の患者のための特定の投薬量および処置レジメンは、種々の因子（使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物の組合せ、および処置する医師の判断、ならびに処置されるべき特定の疾患の重篤度を含む）に依存することもまた理解されるべきである。組成物中の本発明の化合物の量もまた、その組成物中の特定の化合物に依存する。
【００９１】
処置または予防されるべき特定の状態または疾患に依存して、付加的な治療剤（これは、通常、単独療法でこの状態を処置または予防するために投与される）もまた、本発明の組成物中に存在され得る。本明細書中で使用される場合、通常、特定の疾患または状態を処置または予防するために投与される付加的な治療剤は、「処置される疾患または状態に適切」であるとして公知である。
【００９２】
例えば、化学療法剤または他の抗増殖性剤は、本発明の化合物と組合わされて、増殖性疾患または癌を処置し得る。公知の化学療法剤の例としては、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、タキソール、インターフェロン、および白金誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
薬剤の他の例として、本発明の化合物はまた、以下に挙げられるがこれらに限定されないものと組合わされ得る：抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１  ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびスルファサラジン）；免疫調節剤および免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノレートモフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、およびスルファサラジン）；神経栄養因子（例えば、アセチルコリンエステラーゼインヒビター、ＭＡＯインヒビター、インターフェロン、抗痙攣剤、イオンチャネルブロッカー、リルゾール（ｒｉｌｕｚｏｌｅ）、および抗パーキンソン症候群薬剤；心血管疾患を処置するための薬剤（例えば、β−ブロッカー、ＡＣＥインヒビター、利尿剤、ニトレート、カルシウムチャネルブロッカー、およびスタチン（ｓｔａｔｉｎ）；肝疾患を処置するための薬剤（例えば、コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロン、および抗ウイルス剤）；血液障害を処置するための薬剤（例えば、コルチコステロイド、抗白血病剤、および増殖因子）；糖尿病を処置するための薬剤（例えば、インスリンまたはインスリンアナログ、α−グリコシダーゼインヒビター、ビグアナイド、およびインスリン感作物質）；ならびに免疫不全障害を処置するための薬剤（例えば、γ−グロブリン）。
【００９４】
本発明の組成物中に存在する付加的な治療剤の量は、活性薬剤としてのみこの治療剤を含む組成物中に通常投与される量よりも少ない。好ましくは、本開示の組成物中の付加的な治療剤の量は、治療的に活性な薬剤としてのみこの薬剤を含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲である。
【００９５】
別の実施形態に従って、本発明は、生物学的サンプルにおいてＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｓｒｃのキナーゼ活性を阻害する方法に関し、この方法は、この生物学的サンプルを、本発明の化合物、またはこの化合物を含む組成物と接触させる工程を包含する。
【００９６】
用語「生物学的サンプル」は、本明細書中で使用される場合、限定することなく、細胞培養物またはこれらの抽出物；哺乳動物から入手した生検物質またはこれらの抽出物；および血液、唾液、尿、便、精液、涙、もしくは他の体液またはこれらの抽出物を含む。
【００９７】
生物学的サンプル中のＪＮＫ３、Ｌｃｋ、またはＳｒｃキナーゼ活性の阻害は、当業者に公知の種々の目的について有用である。このような目的の例としては、輸血、臓器移植、生物学的検体の保存、および生物学的アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
別の実施形態に従って、本発明は、患者における重篤度のＪＮＫ３−、Ｌｃｋ−またはＳｒｃ−に媒介される疾患または状態を処置または減少させる方法を提供し、この方法は、本発明に従う組成物をこの患者に投与する工程を包含する。
【００９９】
用語「ＪＮＫ−媒介性疾患」は、本明細書中で使用される場合、ＪＮＫが関与することが公知である任意の疾患または他の有害な状態をいう。このような状態としては、限定することなく、以下が挙げられる：炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、癌、感染性疾患、神経変性疾患、アレルギー、発作における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、器官低酸素症、脈管肥厚、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する状態。
【０１００】
本発明の化合物によって処置または予防され得る炎症性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギー、および成人呼吸促進症候群。
【０１０１】
本発明の化合物によって処置または予防され得る自己免疫疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糸球体腎炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、硬皮症、慢性甲状腺炎、グレーヴズ病、自己免疫胃炎、糖尿病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活性肝炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｃｔｉｖｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、または移植片  対  宿主疾患。
【０１０２】
本発明の化合物によって処置または予防され得る破壊性骨障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：骨粗鬆症、変形性関節症および多発性骨髄腫関連骨障害。
【０１０３】
本発明の化合物によって処置または予防され得る増殖性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポージ肉腫、多発性骨髄腫およびＨＴＬＶ−１媒介性腫瘍形成。
【０１０４】
本発明の化合物によって処置または予防され得る脈管形成障害としては、固形腫瘍、眼性新生血管形成（ｏｃｕｌａｒ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌｉｚａｔｉｏｎ）、乳児性血管腫が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物によって処置または予防され得る感染性疾患としては、敗血症、敗血症性ショック、および細菌性赤痢が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
本発明の化合物によって処置または予防され得るウイルス性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：急性肝炎感染（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含む）、ＨＩＶ感染およびＣＭＶ網膜炎。
【０１０６】
本発明の化合物によって処置または予防され得る神経変性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、癲癇、発作、ハンティングトン病、外傷性脳損傷、虚血性および出血性の発作、大脳虚血または神経変性疾患（外傷性損傷、急性低酸素症、虚血またはグルタメート神経毒性によって引き起こされるアポトーシス駆動性神経変性疾患を含む）。
【０１０７】
「ＪＮＫ−媒介性疾患」はまた、発作における虚血／再灌流、心臓発作、心筋性虚血、器官低酸素症、脈管肥厚、心肥大、肝性虚血、肝疾患、うっ血性心不全、Ｔ細胞活性化によって引き起こされるような異常免疫応答およびトロンビン誘導性血小板凝集。
【０１０８】
さらに、本発明の化合物は、誘導性プロ炎症性タンパク質の発現を阻害し得る。従って、本発明の化合物によって処置され得る他の「ＪＮＫ−媒介性状態」は、水腫、無痛覚症、熱および疼痛（例えば、神経筋の痛み、頭痛、癌の痛み、歯の痛みおよび関節炎の痛み）を含む。
【０１０９】
本発明の化合物はまた、Ｓｒｃ−ファミリーのキナーゼ（特に、ＳｒｃおよびＬｃｋ）のインヒビターとして有用である。用語「Ｓｒｃ−媒介性疾患またはＬｃｋ−媒介性疾患」は、本明細書中で使用される場合、ＳｒｃまたはＬｃｋが関与することが公知である任意の疾患または他の有害な状態をいう。従って、これらの化合物は、１つ以上のＳｒｃ−ファミリーのキナーゼの活性によって影響されることが公知である疾患または状態を処置するために有用である。このような疾患または状態としては、以下が挙げられる：高カルシウム血症、再狭窄、骨粗鬆症、変形性関節症、骨転移の対症療法（ｓｙｍｐｏｍａｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、移植片  対  宿主疾患、Ｔ細胞媒介性過敏性疾患、橋本甲状腺炎、ギヤン−バレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触皮膚炎、癌、パジェット病、喘息、虚血性または再灌流損傷、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎、およびアレルギー性鼻炎。Ｓｒｃ活性によって影響される疾患としては、特に以下が挙げられる：高カルシウム血症、骨粗鬆症、変形性関節症、癌、骨転移の対症療法、およびパジェット病。Ｌｃｋ活性によって影響される疾患としては、特に以下が挙げられる：自己免疫疾患、アレルギー、慢性関節リウマチ、および白血病。
【０１１０】
好ましい実施形態は、以下から選択されるＪＮＫ−媒介性疾患を処置または予防するために使用される方法に関する：炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、神経変性疾患、アレルギー、発作における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、器官低酸素症、脈管肥厚、心肥大、またはトロンビン誘導性血小板凝集。
【０１１１】
別の好ましい実施形態は、以下から選択されるＳｒｃ−媒介性疾患またはＬｃｋ−媒介性疾患を処置または予防するために使用される方法に関する：高カルシウム血症、骨粗鬆症、変形性関節症、または骨転移の対症療法。
【０１１２】
代替的な実施形態において、付加的な治療剤を含まない組成物を使用する本発明の方法は、付加的な治療剤をこの患者に別個に投与するさらなる工程を包含する。これらの付加的な治療剤が、別個に投与される場合、これらは、本発明の組成物の投与の前、連続、または後に患者に投与され得る。
【０１１３】
本発明の化合物またはその薬学的組成物はまた、移植可能な医療デバイス（例えば、人工器官、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテル）をコーティングするための組成物中に組み込まれ得る。血管ステントは、例えば、再狭窄（損傷後の血管壁の再狭小化）を克服するために使用されている。しかし、ステントまたは他の移植可能デバイスを使用する患者は、血餅形成または血小板の活性化の危険に曝される。これらの望ましくない作用は、このデバイスを、キナーゼインヒビターを含む薬学的に受容可能な組成物で予めコーティングすることによって、予防または緩和され得る。適切なコーティングおよびコーティングされた移植可能デバイスの一般的な調製は、米国特許第６，０９９，５６２号；同第５，８８６，０２６号；および同第５，３０４，１２１号に記載されている。このコーティングは、代表的には、生体適合性ポリマー材料（例えば、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレンビニルアセテート、およびこれらの混合物）である。コーティングは、組成物において制御された放出特性を与えるための適切なトップコート（フルオロシリコーン、ポリサッカリド、ポリエチレングリコール、リン脂質またはこれらの組合せ）によってさらに覆われ得る。本発明の化合物でコーティングされた移植可能デバイスは、本発明の別の実施形態である。
【０１１４】
本明細書中に記載される発明が、より完全に理解され得るために、以下の実施例が記載される。これらの実施例は、単に例示的な目的のためであり、そして任意の様式において本発明を限定するように解釈されるべきでないことが、理解されるべきである。
【実施例】
【０１１５】
（合成実施例）
（実施例１．  ３−（ビス−メチルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオン：）
２，４−ペンタンジオン（１．０当量）、二硫化炭素（１．５当量）およびＫ２ＣＯ３（１．５当量）のＤＭＦ懸濁物を、０℃で３時間攪拌した。得られた懸濁物に、ヨードメタン（３．０当量）を０℃で添加し、反応混合物を、室温まで暖め、その温度で一晩攪拌した。この反応混合物に、酢酸エチルおよびブラインを添加し、有機層をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濾過した。溶媒を減圧下で除去し、生成物を結晶化し、表題の化合物を８３％の収率で提供した。
【０１１６】
（実施例２．  １−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−エタノン：）
【０１１７】
【化８】
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ピリジン−２−イル−ヒドラジン（１．０当量）および３−（ビス−メチルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオン（１．０当量）の混合物を、６０℃で一晩攪拌した。この反応混合物に、酢酸エチルおよびブラインを添加し、有機相をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濾過した。有機溶媒を減圧下で除去し、表題の化合物を提供した。
（実施例３．  ３−ジメチルアミノ−１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−プロペノン：）
【０１１８】
【化９】
2004534754.tif 000024
１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−エタノン（１．０当量）およびＤＭＦ−ＤＭＡ（１０．０当量）のトルエン溶液を、一晩加熱還流した。この反応混合物に、酢酸エチルおよびブラインを添加し、有機層をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濾過した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をクロマトグラフィーで精製し、表題の化合物を提供した。
【０１１９】
（実施例４．  Ｎ−（３−ベンジルオキシ−フェニル）−グアニジン：）
３−ベンジルオキシアニリン（１．０当量）およびシアナミド（１．０当量）の４Ｎ  ＨＣｌジオキサン懸濁物を、１００℃で一晩攪拌した。この反応混合物に、水およびエーテルを添加した。水層をエーテルで２回洗浄した。水層を、１Ｍ  ＮａＯＨを使用して、ｐＨ１０を超えるように調整し、所望のグアニジンを、塩化メチレンへと抽出し、沈殿し、そして濾過した。濾滓は、Ｎ−（３−ベンジルオキシ−フェニル）−グアニジン（８０％を超える収率）であった。
【０１２０】
（実施例５．  （３−ベンジルオキシ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−ｌ−ピリジン−２−イル−ｌＨ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１２４）：）
【０１２１】
【化１０】
2004534754.tif 000025
３−ジメチルアミノ−１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−プロペノン（１．０当量）およびＮ−（３−ベンジルオキシ−フェニル）−グアニジン（１．０当量）のメタノール溶液を、一晩還流した。分析ＨＰＬＣは、反応が４０％完了であることを示した。この反応混合物に、酢酸エチルおよびブラインを添加した。有機相をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濾過した。生成物を沈殿し、濾過し、表題の化合物を４０％の収率で提供した。
【０１２２】
（実施例６．  フェニル−ヒドラジンカルボジチオ酸メチルエステル：）
【０１２３】
【化１１】
2004534754.tif 000026
乾燥アセトニトリル（２０ｍＬ）中のフェニルヒドラジン（３０ｍｍｏｌ、１当量）の攪拌溶液に、トリチオカルボン酸ジメチルエステル（３０ｍｍｏｌ、１当量）を、氷浴温度でゆっくりと添加した。この混合物を、１８時間攪拌し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。得られた白色個体を、濾過し、エーテルで洗浄し、窒素下で乾燥し、表題の化合物を得た。
【０１２４】
（実施例７．  １−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−エタノン：）
【０１２５】
【化１２】
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アセトニトリル（１０ｍＬ）中のＮ−フェニル−ヒドラジンカルボジチオ酸メチルエステル（１．９８ｇ，１０ｍｍｏｌ）、３−クロロ−２，４−ペンタンジオン（１．３５ｇ，ｌ０ｍｍｏｌ）、およびジエチルイソプロピルアミン（２．０ｍＬ，１２ｍｍｏｌ）を、１０時間、７０℃まで加熱した。混合物を、酢酸エチル（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）で希釈した。有機層を水で洗浄した（３０ｍＬ）。水層を、酢酸エチルで（３０ｍＬ、２回）戻し抽出した。合わせた有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮した。得られた固体を、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で再結晶化し、薄黄色の表題の化合物を得た。
【０１２６】
（実施例８．  ３−ジメチルアミノ−１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−プロペノン：）
【０１２７】
【化１３】
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１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−ｌＨ−ピラゾール−４−イル）−エタノン（１．２ｇ，５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ｆｏｒａｍｉｄｅ）ジメチルアセタール（１．３２ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍＬ）中に希釈し、８０℃で３６時間加熱した。この混合物を、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）およびヘキサン（２０ｍＬ）で希釈し、短く加熱した。黄色固体を回収し、ジエチルエーテル（５ｍＬ）で洗浄した。
【０１２８】
（実施例９．  ［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−フェニル−アミン（ＩＩＡ−１）：）
【０１２９】
【化１４】
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３−ジメチルアミノ−１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−プロペノン（３０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）およびＮ−フェニルグアニジン（１５ｍｇ，１．１当量）を、アセトニトリル（０．５ｍＬ）中でスラリーにし、１００℃で２４時間加熱した。この混合物を、メタノール（２ｍｌ）で希釈し、短く加熱し、そして冷却した。得られた固体を、濾過し、メタノール（１ｍＬ）で洗浄した。この固体を、減圧下で乾燥し、表題の化合物を得た。
【０１３０】
Ｎ−フェニルグアニジンを適切に置換されたＮ−フェニルグアニジンに置き換えた以外は、上記の実施例９に記載される手順を使用して、以下の化合物を調製した。これらの化合物を、逆相ＨＰＬＣによって精製し、ＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳの両方によって特徴付けた。
【０１３１】
（実施例１０．  （４−フルオロ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−９））
（実施例１１．  （４−クロロ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１１４））
（実施例１２．  （３−クロロ−フェニル）−４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１１５））
（実施例１３．  （４−ニトロ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１１６））
（実施例１４．  （３−ベンジルオキシ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１１７））
（実施例１５．  （４−ベンジルオキシ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（ＩＩＡ−１１８））
（実施例１６．  ３−［４−（５−メチル−３−メチルスルファニル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−フェノール（ＩＩＡ−１１９））
（Ｓｒｃ阻害アッセイ）
化合物を、放射能に基づくアッセイか、または分光学的アッセイのいずれかを使用して、ヒトＳｒｃキナーゼのインヒビターとして、評価した。
【０１３２】
（放射能ベースのアッセイ）
この化合物を、バキュロウイルス細胞から発現および精製した、全長組換えヒトＳｒｃキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製、カタログ番号１４−１１７）のインヒビターとしてアッセイした。Ｓｒｃキナーゼ活性を、組成物のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒポリマー基質（Ｇｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ−０２７５））のチロシンへの、ＡＴＰからの３３Ｐの取り込みに従ってモニターした。アッセイ成分の最終濃度は、以下であった：０．０２５Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．６）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、１０μＭ  ＡＴＰ（１反応につき１〜２μＣｉ  ３３Ｐ−ＡＴＰ）、５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位の組換えヒトＳｒｃキナーゼ。典型的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全反応成分を、予め混合し、そして、アッセイプレートウェルにアリコートした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターをウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。このアッセイプレートを、３３Ｐ−ＡＴＰとの反応を開始する前に、１０分間、３０℃にてインキュベートした。反応の２０分後、反応を、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含む１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を用いてクエンチした。次いで、クエンチしたサンプルを、フィルタープレート減圧マニフォールドに組み込まれた９６ウェルのフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ、ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｆ  Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｔｅｒ、カタログ番号７７００−３３１０）へ移した。フィルタープレートを、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含む１０％  ＴＣＡを用いて４回洗浄し、次いで、メタノールを用いて４回洗浄した。次いで、２００μｌのシンチレーション流体を、各ウェルに添加した。このプレートを密封し、そして、フィルターと会合する放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターで定量した。組み込まれた放射能を、インヒビター濃度の関数としてプロットした。このデータを、競合阻害速度論モデルに適合させて、この化合物についてのＫｉを得た。
（分光学的アッセイ）
ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ基質のヒト組換えＳｒｃキナーゼ触媒リン酸化によってＡＴＰから生成されたＡＤＰを、結合酵素アッセイ（Ｆｏｘら、（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．７、２２４９）を使用して定量した。このアッセイにおいて、キナーゼ反応において生成されたＡＤＰの各分子について、ＮＡＤＨの１分子を、ＮＡＤへと酸化する。ＮＡＤＨの消失を、３４０ｎｍで簡単に追跡し得る。
【０１３３】
アッセイ成分の最終濃度は、以下であった：０．０２５Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．６）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および２５ｎＭの組換えヒトＳｒｃキナーゼ。この結合酵素系の成分の最終濃度は、２．５ｍＭのホスホエノールピルベート、２００μＭのＮＡＤＨ、３０μｇ／ｍｌのピルベートキナーゼおよび１０μｇ／ｍｌの乳酸デヒドロゲナーゼであった。
【０１３４】
典型的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全反応成分を、予め混合し、そして、アッセイプレートウェルへアリコートした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターをこれらのウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。このアッセイプレートを、１００μＭのＡＴＰとの反応を開始する前に、１０分間、３０℃にてインキュベートした。３４０ｎｍでの吸光度の経時的変化（反応速度）を、分子デバイスプレートリーダー上でモニターした。インヒビター濃度の関数としての速度データを、競合阻害速度論モデルに適合させて、この化合物についてのＫｉを得た。
【０１３５】
Ｓｒｃ阻害アッセイにおいて試験された本発明の化合物の多くは、１μＭよりも低いＫｉ値を提供した。
【０１３６】
（Ｌｃｋ阻害アッセイ）
化合物を、放射能に基づくアッセイか、または分光学的アッセイのいずれかを使用して、ヒトｓｒｃキナーゼのインヒビターとして、評価した。
【０１３７】
（放射能ベースのアッセイ）
この化合物を、バキュロウイルス細胞から発現および精製した、全長ウシ胸腺Ｌｃｋキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製、カタログ番号１４−１０６）のインヒビターとしてアッセイした。Ｌｃｋキナーゼ活性を、組成物のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒポリマー基質（Ｇｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ−０２７５））のチロシンへの、ＡＴＰからの３３Ｐの取り込みに従ってモニターした。アッセイ成分の最終濃度は、以下であった：０．０２５Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．６）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、１０μＭ  ＡＴＰ（１反応につき１〜２μＣｉ  ３３Ｐ−ＡＴＰ）、５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位の組換えヒトＳｒｃキナーゼ。典型的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全反応成分を、予め混合し、そして、アッセイプレートウェルにアリコートした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターをウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。このアッセイプレートを、３３Ｐ−ＡＴＰとの反応を開始する前に、１０分間、３０℃にてインキュベートした。反応の２０分後、反応を、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含む１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を用いてクエンチした。次いで、クエンチしたサンプルを、フィルタープレート減圧マニフォールドに組み込まれた９６ウェルのフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ、ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｆ  Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｔｅｒ、カタログ番号７７００−３３１０）へ移した。フィルタープレートを、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含む１０％  ＴＣＡを用いて４回洗浄し、次いで、メタノールを用いて４回洗浄した。次いで、２００μｌのシンチレーション流体を、各ウェルに添加した。このプレートを密封し、そして、フィルターと会合する放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターで定量した。組み込まれた放射能を、インヒビター濃度の関数としてプロットした。このデータを、競合阻害速度論モデルに適合させて、この化合物についてのＫｉを得た。
（分光学的アッセイ）
ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ基質のヒト組換えＬｃｋキナーゼ触媒リン酸化によってＡＴＰから生成されたＡＤＰを、結合酵素アッセイ（Ｆｏｘら、（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．７、２２４９）を使用して定量した。このアッセイにおいて、キナーゼ反応において生成されたＡＤＰの各分子について、ＮＡＤＨの１分子を、ＮＡＤへと酸化する。ＮＡＤＨの消失を、３４０ｎｍで簡単に追跡し得る。
【０１３８】
アッセイ成分の最終濃度は、以下であった：０．０２５Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．６）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および５０ｎＭの組換えヒトＬｃｋキナーゼ。この結合酵素系の成分の最終濃度は、２．５ｍＭのホスホエノールピルベート、２００μＭのＮＡＤＨ、３０μｇ／ｍｌのピルベートキナーゼおよび１０μｇ／ｍｌの乳酸デヒドロゲナーゼであった。
【０１３９】
典型的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全反応成分を、予め混合し、そして、アッセイプレートウェルへアリコートした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターをこれらのウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。このアッセイプレートを、１５０μＭのＡＴＰとの反応を開始する前に、１０分間、３０℃にてインキュベートした。３４０ｎｍでの吸光度の経時的変化（反応速度）を、分子デバイスプレートリーダー上でモニターした。インヒビター濃度の関数としての速度データを、競合阻害速度論モデルに適合させて、この化合物についてのＫｉを得た。
【０１４０】
Ｌｃｋ阻害アッセイにおいて試験された本発明の化合物の多くは、１μＭよりも低いＫｉ値を提供した。
【０１４１】
（ＪＮＫ阻害アッセイ）
（ＪＮＫ３タンパク質のクローニング、発現および精製）
ＥＳＴデータベースのＢＬＡＳＴ検索は、照会として、公開されたＪＮＫ３α１  ｃＤＮＡを使用して、ヒトＪＮＫ３α１の全コード配列を含むＥＳＴクローン（＃６３２５８８）を同定した。ｐｆｕポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ）を用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、ＮｃｏＩ部位およびＢａｍＨＩ部位でのｐＥＴ−１５Ｂベクターへのクローニングのために、ｃＤＮＡへ制限部位を導入した。このタンパク質を、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させた。発現した全長タンパク質（Ｍｅｔ１〜Ｇｌｎ４２２）の乏しい溶解性に起因して、４０位でのＳｅｒ残基（Ｓｅｒ  ４０）から開始するＮ末端短縮型タンパク質を、生成した。この短縮型は、ＪＮＫ１タンパク質およびＪＮＫ２タンパク質のＳｅｒ２に対応し、そしてこれはメチオニン（開始）残基およびグリシン残基の後にある。このグリシン残基は、発現ベクターへのクローニングのためのＮｃｏＩ部位を導入するために添加された。さらに、系統的なＣ末端短縮型にＰＣＲを実行して、回折−品質の（ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ−ｑｕａｌｉｔｙ）結晶を生じる構築物を同定した。このような構築物の１つは、ＪＮＫ３α１のアミノ酸残基Ｓｅｒ４０〜Ｇｌｕ４０２をコードし、そしてＭｅｔ残基およびＧｌｙ残基の後にある。
【０１４２】
この構築物を、プライマーとして以下のデオキシオリゴヌクレオチドを使用して、ＰＣＲによって調製し：
【０１４３】
【化１５】
2004534754.tif 000030
（下線を引かれた開始コドンを有する順方向プライマー）（配列番号１）および
【０１４４】
【化１６】
2004534754.tif 000031
（下線を引かれた終止コドンを有する逆方向プライマー）（配列番号２）、そしてＤＮＡ配列決定によって確認した。コントロールの実験は、短縮されたＪＮＫ３タンパク質が、インビトロで上流のキナーゼＭＫＫ７で活性化された場合、ミエリン塩基性タンパク質に対して等価なキナーゼ活性を有することを示した。
【０１４５】
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１株（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）を、ＪＮＫ３発現構築物で形質転換し、そして３０℃にて、シェイカーフラスコ中の１００μｇ／ｍｌカルベニシリンを補充したＬＢで、細胞が対数増殖期（ＯＤ６００約０．８）になるまで、増殖させた。イソプロピルチオ−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（ＩＰＴＧ）を、最終濃度０．８ｍＭになるまで添加し、そして２時間後に細胞を遠心分離によって回収した。
【０１４６】
ＪＮＫ３を含むＥ．ｃｏｌｉ細胞ペーストを、１０容積／ｇ溶解緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．２、１０％グリセロール（ｖ／ｖ）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２μｇ／ｍｌ  ペプスタチン、各々１μｇ／ｍｌのＥ−６４およびロイペプチン含有）に再懸濁した。マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて細胞を氷上で溶解し、そして１００，０００×ｇで３０分間４℃にて遠心分離した。この１００，０００×ｇの上清を、緩衝液Ａ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．０、１０％  グリセロール（ｖ／ｖ）、２ｍＭ  ＤＴＴ）を用いて１：５に希釈し、そしてＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カチオン交換クロマトグラフィー（カラムの寸法：２．６×２０ｃｍ）で、４℃にて精製した。この樹脂を、５カラム体積の緩衝液Ａ、続いて５カラム体積の５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む緩衝液Ａで洗浄した。結合ＪＮＫ３を、５０〜３００ｍＭ  ＮａＣｌの７．５カラム体積の直線勾配で溶出した。ＪＮＫ３を、１５０〜２００ｍＭのＮａＣｌの間で溶出した。
【０１４７】
（実施例９．ＪＮＫ３の活性化）
５ｍｇのＪＮＫ３を、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ、２０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＡＴＰを含む５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に０．５ｍｇ／ｍｌまで希釈する。ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）を、ＧＳＴ−ＭＫＫ７：ＪＮＫ３を１：２．５のモル比で添加し、２５℃にて３０分間のインキュベーションの後、反応混合物を、Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ−３０（Ａｍｉｃｏ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）中の限外ろ過により５倍まで濃縮し、１０ｍｌに希釈し、そしてさらに１ｍＭ  ＡＴＰを加えた。この手順を３回繰返して、ＡＤＰを除き、そしてＡＴＰを再び補充する。ＡＴＰの最終添加は、５ｍＭであり、そして混合物を４℃にて一晩インキュベートした。
【０１４８】
活性化ＪＮＫ３／ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）反応混合物を、透析または限外ろ過により、５ｍＭ  ＤＴＴおよび５％グリセロール（ｗ／ｖ）を含む５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に交換する。反応混合物を、１．１Ｍリン酸カルシウム（ｐＨ７．５）に調整し、そしてＲａｉｎｉｎ  Ｈｙｄｒｏｐｏｒｅカラムを用いて、疎水性相互作用クロマトグラフィー（２５℃）により精製する。ＧＳＴ−ＭＭＫ７および非活性化ＪＮＫ３は、これらの条件下で結合せず、その結果、１．１〜０．０５Ｍのリン酸カルシウム勾配を１ｍｌ／分の流速で６０分にわたり展開する時に、二回リン酸化したＪＮＫ３は、１回リン酸化したＪＮＫから分離される。活性化ＪＮＫ３（すなわち、二回リン酸化したＪＮＫ３）を、０．２５〜１ｍｇ／ｍｌで−７０℃にて保存する。
【０１４９】
（実施例１０．ＪＮＫ阻害活性）
化合物を、分光光度法による酵素結合アッセイにより、ＪＮＫ３の阻害についてアッセイする。このアッセイにおいて、固定した濃度の活性化ＪＮＫ３（１０ｎＭ）を、ＤＭＳＯに溶解した種々の濃度の潜在的インヒビターと共に、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２．５ｍＭホスホエノールピルビン酸、２００μＭ  ＮＡＤＨ、１５０μｇ／ｍＬピルビン酸キナーゼ、５０μｇ／ｍＬ乳酸デヒドロゲナーゼ、および２００μＭ  ＥＧＦレセプターペプチドを含む０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を含む緩衝液中で３０℃にて１０分間インキュベートする。このＥＧＦレセプターペプチドは、配列ＫＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲ（配列番号３）を有し、そしてこれは、ＪＮＫ３が触媒するキナーゼ反応におけるホスホリルレセプターである。反応を、１０μＭ  ＡＴＰの添加により開始し、そしてアッセイプレートを、３０℃に維持した分光光度計のアッセイプレートコンパートメントに挿入する。３４０ｎｍでの吸収の低下を、時間の関数としてモニターし、そして阻害％を決定する。
【０１５０】
ＪＮＫ３阻害アッセイにおいて試験した本発明の化合物の多くは、ＪＮＫ３を阻害することが見出された。
【０１５１】
本発明者らは、本発明の多数の実施形態を記載してきたが、本発明者らの基本的な例は、変更されて、本発明の化合物および方法を利用する他の実施形態を提供し得ることが理解される。従って、本発明の範囲は、例示として提示されている特定の実施形態よりはもむしろ添付の特許請求の範囲により規定されることが理解される。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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2004534754.tif 000199
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