(57)【要約】本発明は、アミロイドβ−ペプチドにおけるβプリーツシート形成を阻害することができる阻害ペプチドである。阻害ペプチドは、アミロイドβ−ペプチドにおけるβプリーツシート形成を阻害することができるβシートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβシートブレーカーペプチド類似物である。本発明は、また、アミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質における構造変化を阻害することができる阻害ペプチドを含む。阻害ペプチドは、アミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質における構造変化を阻害することができるβシートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβシートブレーカーペプチド類似物である。加えて、本発明は構造ＰＭｉＡβ５を持つペプチド模倣物を含む。別の実施形態において、ペプチド模倣物は構造ＰＭｉＰｒＰ１３を有する。なお別の実施形態において、ペプチド模倣物は構造ＰＭｉＰｒＰ５を有する。
2004513873.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβ−ペプチドにおけるβ−プリーツシート形成を阻害することができるβ−シートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβシートブレーカーペプチド類似物であって、アミロイドβ−ペプチドにおけるβプリーツシート形成を阻害することができる阻害ペプチド。
【請求項２】
前記β−シートブレーカーペプチドが５残基アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５（Ｓｅｑ．Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ）である請求項１に記載の阻害ペプチド。
【請求項３】
前記化学修飾が、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５のＮ−およびＣ−末端部の変更、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５の少なくとも一つの残基をα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）により置換すること、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５の少なくとも一つの残基のα炭素のメチル化、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５の少なくとも一つのＬ−鏡像異性残基をＤ−鏡像異性残基により置換すること、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５の頭−尾環化を形成すること、前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５中のアミド結合をアミド結合代理物により置換すること、およびそれらの組合せからなる群から選択される方法により達成される、請求項２に記載の阻害ペプチド。
【請求項４】
前記アルツハイマー阻害剤ペプチドｉＡβ５のＮ−およびＣ−末端部の前記変更がアセチル化、アミド化、脱アミノ化、アルコール処理およびそれらの組合せから選択される方法により達成される、請求項３に記載の阻害ペプチド。
【請求項５】
阻害ペプチドが
【化１】
2004513873.tif 000018
からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記阻害ペプチドがａｃ−ＬｅｕＰｒｏＰｈｅＰｈｅＡｓｐ−ａｍである請求項５に記載の阻害ペプチド。
【請求項７】
前記阻害ペプチドが以下からなる群から選択される請求項３に記載の阻害ペプチド：
【化２】
2004513873.tif 000019
【化３】
2004513873.tif 000020
【請求項８】
アミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質の構造変化を阻害することができるβシートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカーペプチド類似物であって、アミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質の構造変化を阻害することができる阻害ペプチド。
【請求項９】
前記βシートブレーカーペプチドが１３残基プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３（Ｓｅｑ．ＡｓｐＡｌａＰｒｏＡｌａＡｌａＰｒｏＡｌａＧｌｙＰｒｏＡｌａＶａｌＰｒｏＶａｌ）である、請求項８に記載の阻害ペプチド。
【請求項１０】
前記化学修飾が、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３のＮ−およびＣ−末端部の変更、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３の少なくとも一つの残基をα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）により置換すること、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３の少なくとも一つの残基のα炭素のメチル化、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３の少なくとも一つのＬ−鏡像異性残基をＤ−鏡像異性残基により置換すること、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３の頭−尾環化を形成すること、前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３中のアミド結合をアミド結合代理物により置換すること、およびそれらの組合せからなる群から選択される方法により達成される、請求項９に記載の阻害ペプチド。
【請求項１１】
前記プリオン阻害剤ペプチドｉＰｒＰ１３のＮ−およびＣ−末端部の前記変更がアセチル化、アミド化、脱アミノ化、アルコール処理およびそれらの組合せから選択される方法により達成される、請求項１０に記載の阻害ペプチド。
【請求項１２】
阻害ペプチドが以下からなる群から選択される請求項１１に記載の化合物：
【化４】
2004513873.tif 000021
【請求項１３】
前記阻害ペプチドが以下からなる群から選択される請求項１０に記載の阻害ペプチド：
【化５】
2004513873.tif 000022
【化６】
2004513873.tif 000023
【化７】
2004513873.tif 000024
【請求項１４】
以下の構造を持つペプチド模倣物：
【化８】
2004513873.tif 000025
【請求項１５】
以下の構造を持つペプチド模倣物：
【化９】
2004513873.tif 000026
【請求項１６】
以下の構造を持つペプチド模倣物：
【化１０】
2004513873.tif 000027
【請求項１７】
βシート構造への異常な折り畳みの前か後のいずれかにおいて、アミロイドβペプチドを請求項１に記載のペプチドの有効量の存在下にすることを含む、アミロイドβペプチドのβシート構造への異常折り畳みに関係するアミロイドまたはアミロイド様沈着物の形成を減少させるか、または既にβシート構造へと形成された前記アミロイドβペプチドの量を減少させるための方法。
【請求項１８】
アミロイド沈着物への構造変化の前か後のいずれかにおいて、プリオンＰｒタンパク質を請求項８に記載のペプチドの有効量の存在下にすることを含む、プリオンＰｒタンパク質の構造変化に関係するアミロイドまたはアミロイド様沈着物の形成を減少させるか、または既にアミロイドまたはアミロイド様沈着物へと形成された前記プリオンＰｒタンパク質の量を減少させるための方法。
【請求項１９】
以下からなる群の一つから選択されるペプチド模倣物の投与によりアミロイドまたはアミロイド様沈着物の形成を減少させるための方法：
【化１１】
2004513873.tif 000028
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は１９９９年１１月５日に出願された米国特許仮出願第６０／１６３，９１１号からの優先権を主張する。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明はアルツハイマーおよびプリオン病などのタンパク質構造性疾患を持つ哺乳動物の治療における生体内使用に適するβ−シートブレーカーペプチドのペプチド類似物およびペプチド模倣物に関する。さらに詳細には、本発明は、新規なペプチド類似物および模倣物、こうしたペプチド類似物および模倣物の一つまたは混合物を含有する医薬組成物、および病理学的β−シート構造を有するアミロイドまたはアミロイド様沈着物またはそれらの前駆体への異常なタンパク質折り畳みに関係する障害または疾患を予防し、治療し、または検出するための方法を目指す。
【０００３】
関連技術の説明
いくつもの多様な障害が、同じ分子的機序を有する、すなわちタンパク質構造における変化を有することを示す広範囲に及ぶ証拠が集まってきている（Ｔｈｏｍａｓ　ｅｔ．ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２０：４５６〜４５９，１９９５；Ｓｏｔｏ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：４１２〜４１８，１９９９）。これらのタンパク質構造性疾患には、アルツハイマー病、プリオン関連障害、全身性アミロイドーシス、セルピン（ｓｅｒｐｉｎ）欠乏症、ハンチントン病および筋萎縮性側索硬化症が挙げられる（上述のＳｏｔｏ　１９９９）。タンパク質構造性障害における顕著な特徴事象は通常タンパク質の二次および三次構造の変質であり、一次構造の変質はない。構造的に変性されたタンパク質は、直接毒性活性、通常に折り畳まれたタンパク質の生物学的機能の欠如、または不適切な輸送によって疾患に関わってくることが可能である（上述のＴｈｏｍａｓ　ｅｔ．ａｌ．，１９９５）。タンパク質が毒性である場合に、それは通常自己会合し、組織損傷を誘発する多様な器官におけるアミロイドフィブリルとして沈着することになる（上述のＴｈｏｍａｓ　ｅｔ．ａｌ．，１９９５；Ｋｅｌｌｙ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：１１〜１７、１９９６；上述のＳｉｔｏ，１９９９）。
【０００４】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、短期間記憶喪失、見当識障害、および判断力および論理的思考の機能障害を特徴とする壊滅的な神経変性の難題である。ＡＤは高齢者層における最も一般的な痴呆である。世界中で二千五百万を超える人々がＡＤの影響をいくらかは受けていると推定される（Ｔｅｐｌｏｗ，Ａｍｙｌｏｉｄ　５：１２１〜１４２，１９９８）。ＡＤにおける顕著な特徴事象は脳実質および大脳血管壁の中のアミロイドとして知られる不溶性タンパク質凝集体の沈着である。アミロイドの主成分は、染色体２１上に極めて長い前駆タンパク質（ＡＰＰ）の部分としてコード化されるアミロイドベータ−ペプチド（Ａβ）と呼ばれる４．３ＫＤａ疎水性ペプチドである（Ｓｅｌｋｏｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７５：６３０〜６３１，１９９７）。ここ１０年間で集められた遺伝子的、生物化学的および神経病理学的証拠によれば、アミロイドはＡＤの早期病原性に重要な役割を果たし、恐らく疾患の引き金を引いているであろうことが強く示唆されている（Ｓｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ６３：１１９１〜１１９８，１９９４；上述のＳｅｌｋｏｅ，１９９７；上述のＴｅｐｌｏｗ，１９９８；Ｓｉｓｏｄｉａ　ａｎｄ　Ｐｒｉｃｅ，ＦＡＳＥＢ　Ｊ．９：３６６〜３７０，１９９５；Ｓｏｔｏ，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ５：３４３〜３５０，１９９９）。
【０００５】
アミロイドは共通の構造モチーフ、すなわちβ−プリーツシート構造を有するフィブリルの凝集体を指す普通名称である（Ｓｅｒｐｅｌｌ　ｅｔ．ａｌ．，Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．５３：８８７，１９９７；Ｓｉｐｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：９４７〜９７５，１９９２）。これらの凝集体は、コンゴレッドによる染色後緑色の複屈折の輝きを発する能力、およびフルオロクロム、チオフラビンＳを結合する能力を含む特定の色特性を示す（上述のＳｉｐｅ，１９９２；Ｇｈｉｓｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．８：４９〜６４，１９９４）。細胞損傷、器官機能障害、および死に至る多様な組織におけるアミロイドの細胞外沈着を特徴とする各種病因の１ダースを超えるヒト疾患がある。アミロイドーシスに伴う疾患の中でも、アルツハイマー病、プリオン関連障害（また伝染性海綿状脳症として知られる）、および全身性アミロイドーシスを強調することは可能である（表１）。アミロイドフィブリルは、通常、正常なまたは突然変異の遺伝子産物のタンパク質分解断片から成る。識別可能な組織におけるアミロイド沈着に関与する１６にわたる各種のタンパク質（表１）がある（上述のＧｈｉｓｏ　ｅｔ．ａｌ．，１９９４）。
【０００６】
アミロイドの形成は、基本的に、それによって主としてランダムコイルの可溶性ペプチドがβ−プリーツシート構造を取って凝集することになるタンパク質折り畳みの問題である（上述のＫｅｌｌｙ，１９９６、上述のＳｏｔｏ，１９９９）。アミロイド形成は、ペプチド相互作用に際して構造的にβ−シート構造中に組織化されることになる構造的に変性されたアミロイド発生中間体間の疎水的相互作用により推進される。疎水性は、モノマーを凝集に導くように相互作用を誘発させるためには重要であると思われ、一方でβ−シート構造はアミロイドフィブリルにおける凝集物の順序付けを決定することが可能である。アミロイドフィブリル形成を阻害しようとする一つの試みにおいて、これら二つの特性は、配列相同性を有する短い合成ペプチド、および構造変化に関係するがしかしβ−シート構造を取る傾向性は極めて低いペプチド領域として同様程度の疎水性を設計することにより分離された（β−シートブレーカーペプチドと呼ばれる）（上述のＳｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，１９９６；上述のＳｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，１９９８）。目的は、生理学的な構造を安定化させ、異常なペプチド構造を不安定化させる複合体を形成するアミロイド発生ペプチドに対して特定的に結合する能力を持つペプチドを設計することである（上述のＳｏｔｏ　１９９９）。
【０００７】
【表１】
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【０００８】
β−シートブレーカーペプチドは、今まで、それぞれアルツハイマーおよびプリオン病の病因に関係するＡβおよびプリオンタンパク質（ＰｒＰ）の両方において起こる構造変化を阻止するように設計されてきた。先行技術は、これまで、Ａβの中央疎水性部に相同な１１−および５−残基β―シートブレーカーペプチド（すなわち、それぞれ、ｉＡβ１およびｉＡβ５）が、アミロイド形成およびまた生体外での溶解前形成フィブリルをもたらすペプチド構造変性を阻害することを示してきた（Ｓｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２２６：６７２〜６８０，１９９６；Ｓｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄ．４：８２２〜８２６，１９９８）。加えて、５−残基ペプチドは、細胞培養実験におけるβ−シートに富むオリゴマーＡβ構造の形成により誘発される神経細胞の死を予防することができる（上述のＳｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，１９９８）。さらに、ＡβＩ−４２の脳内注入により誘発されるアミロイドーシスのラットモデルを用いることにより、先行技術は、ラット脳において、５−残基β−シートブレーカーペプチドの共注入が脳のＡβ集積を減じると共に、完全にフィブリルアミロイド様損傷の沈着を阻止することを示してきた（上述のＳｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，１９９８）。最終的に、Ａβ注入後８日間注入されたβ−シートブレーカーペプチドは、生体内でアミロイド沈着物のサイズ減少をもたらすラット脳内前形成Ａβフィブリルを分解することができた（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ，Ｆｒａｎｇｉｏｎｅ，Ｓｏｔｏ、提出された原稿）。興味深いことに、β−シートブレーカーペプチドによるアミロイド除去は、ニューロン収縮および小グリア活性化を含み、関連脳組織学的損傷を元に戻す。
【０００９】
β−シートブレーカーペプチドは、また、プリオン（ＰｒＰ）に起因する構造変化を予防するかまたは元に戻すように設計されてきた。同じ原理に基づき且つテンプレートとしてＰｒＰ配列１１４〜１２２を用いて、β−シートブレーカーペプチドのセットが合成される場合に、１３−残基ペプチド（ｉＰｒＰ１３）は最大の活性を表すことが先行技術により示されてきた（上述のＳｏｔｏ，１９９９）。いくつかの生体外細胞培養および生体内アッセイは阻害活性を試験するために用いられ、結果は明確にＰｒＰＣ→ＰｒＰＳＣ変換を予防することのみならずさらに興味深いことに感染性ＰｒＰＳＣカンフォーマー（ｃｏｎｆｏｒｍｅｒ）をＰｒＰＣに類似の生物化学的および構造的状態に戻すことも可能であることを示した（Ｓｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．、提出された原稿）。
【００１０】
短いペプチドは薬剤中の薬物として広範囲に利用されてきた（Ｒａｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｃ．Ｂａｓａｖａ　ａｎｄ　Ｇ．Ｍ．Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ，ｅｄｓ．Ｂｏｓｔｏｎ：Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ，ｐｐ．１８１〜１９８，１９９４）。しかし、ペプチド薬物の開発は、生体内での酵素分解に起因するそれらの経口的生物学的利用能の不足およびそれらの短期間の作用により強く限定される（Ｆａｕｃｈｅｒｅ　ａｎｄ　Ｔｈｕｒｉｅａｕ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓ．２３：１２７〜１５９，１９９２）。タンパク質分解に対してより低い感受性を持つペプチド類似物（偽ペプチドおよびペプチド模倣物など）産生に向けての近年の進歩は、構造的にそれらの親ペプチドに関連する有用な薬物を得るための確率を増大させてきた（上述のＦａｕｃｈｅｒｅ　ａｎｄ　Ｔｈｕｒｉｅａｕ，１９９２）。プロテアーゼに対するペプチド安定性を改善することは、循環中化合物の半減期を増大させるのみならず、輸送および吸収が膜またはバリアの生物活性化学種への暴露時間に高度に依存すると思われるので、腸吸収および血液−脳バリア透過性を含む各種レベルで輸送されるかまたは吸収されるその能力をも強化する（上述のＦａｕｃｈｅｒｅ　ａｎｄ　Ｔｈｕｒｉｅａｕ，１９９２）。
【００１１】
発明の概要
本発明はアミロイドβ−ペプチドにおけるβ−プリーツシート形成を阻害することができる阻害ペプチドであり、該阻害ペプチドはアミロイドβ−ペプチドにおけるβ−プリーツシート形成を阻害することができるβ−シートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカーペプチド類似物である。
【００１２】
ペプチドは、（１）ペプチドのＮ−およびＣ−末端部に対する修飾；（２）アミノ酸置換を含むことができる側鎖の変更；（３）メチル化、アルキル化および脱水素化を含むα−炭素における修飾；（４）Ｄ−をＬ−残基に置き換えることによるキラリテイー変更；（５）頭−尾環化；および（６）アミド結合置換の導入、すなわち、ペプチド（またはアミド）結合に関与する原子を変更すること、により化学的に変更される。
【００１３】
本発明は、また、アミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質の構造変化を阻害することができる阻害ペプチドを含み、該阻害ペプチドはアミロイドーシスに関係するプリオンＰｒＰタンパク質の構造変化を阻害することができるβ−シートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカーペプチド類似物である。
【００１４】
加えて、本発明は以下の構造を持つペプチド模倣物を含む：
【化１２】
2004513873.tif 000004
【００１５】
別の実施形態において、ペプチド模倣物は以下の構造を有する：
【化１３】
2004513873.tif 000005
【００１６】
なお別の実施形態において、ペプチド模倣物は以下の構造を有する：
【化１４】
2004513873.tif 000006
【００１７】
本発明は、また、病的ベータ−シート構造を有する、アミロイドまたはアミロイド様沈着物またはそれらの前駆体中への異常タンパク質折り畳みに関係する障害または疾患を予防し、治療し、または検出するための方法を含み、これはクレームされる。
【００１８】
本発明の詳細な説明
本発明において、阻害ペプチドの生物学的利用能および安定性は親ペプチドを化学修飾することにより改善されて、好ましくは経口的に投与される、生体内使用にさらに適する誘導体を生成する。阻害ペプチドはアミロイドβ−ペプチドにおけるβ−プリーツシート形成を阻害することができる。さらに、阻害ペプチドはアミロイドβ−ペプチドにおけるβ−プリーツシート形成を阻害することができるβ−シートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカーペプチド類似物である。
【００１９】
本発明は、また、アミロイドーシスに関与するプリオンＰｒＰ タンパク質における構造変化を阻害することができる阻害ペプチドを含み、該阻害ペプチドはβ−シートブレーカーペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカーペプチド類似物であり、アミロイドーシスに関与するプリオンＰｒＰタンパク質における構造変化を阻害することができる。
【００２０】
図１において、一般的なペプチド主鎖が示され、化学修飾に対する可能な標的が強調されている。可能な標的には以下が含まれる：（１）ペプチドのＮ−およびＣ−末端部に対する修飾（標的ａおよびｂ）；（２）通常アミノ酸置換に関係する側鎖（標的ｃ）の変更；（３）メチル化、アルキル化および脱水素化を含むα−炭素（標的ｄ）の修飾；（４）Ｄ−をＬ−残基に置換するキラリテイー変更；（５）頭−尾環化；および（６）アミド結合置換の導入（標的ｅ）、すなわち、ペプチド（またはアミド）結合に関与する原子を変更すること。後者の誘導体は偽ペプチドまたはアミド結合代理物として知られる。
【００２１】
天然ペプチドは、通常、特定のエンドペプチダーゼおよび不特定のエクソペプチダーゼの協調作用により分解する。エンドペプチダーゼは多くの場合組織および細胞室中に存在し、ペプチドを２以上の不活性断片に変換する。エクソペプチダーゼは一般に血液および抹消器官中に存在し、完全なペプチドまたはそれらの断片の構成アミノ酸への分解を行い、その結果、血液循環からのペプチド消失に寄与する。エクソペプチダーゼはペプチド中の遊離アミノ基またはカルボキシル基を認識する。従って、それらの基の変更は多くの場合エクソペプチダーゼ分解を減少させるかまたは排除する。頭−尾ペプチド環化は遊離端−端末基が結果として不在となり、また、その結果としてエクソペプチダーゼによる切断を最小化する。他方、エンドペプチダーゼはアミド結合に関係する原子を認識する。従って、アミド結合置換は劇的にエンドペプチダーゼによる分解を減少させる。同じことは通常α−炭素に対する変更に伴い起こる。大部分（すべてでないとしても）のエクソ−およびエンド−プロテアーゼは立体特異性であるので、天然Ｌ−アミノ酸のＤ−立体異性体による置換はペプチド安定性の明確な増加をもたらす。結局、ペプチド模倣物は通常タンパク質分解に対して完全に抵抗性があり、多くの場合経口的に投与することができる。
【００２２】
リード（ｌｅａｄ）ペプチドの化学修飾により設計されるβ−シートブレーカー類似物
５−残基アルツハイマー阻害ペプチド（ｉＡβ５、Ｓｅｑ．ＬＰＦＦＤ−またＬｅｕＰｒｏＰｈｅＰｈｅＡｓｐと表示される）および１３−残基プリオン阻害ペプチド（ｉＰｒＰ１３、Ｓｅｑ．ＤＡＰＡＡＰＡＧＰＡＶＰＶ−またＡｓｐＡｌａＰｒｏＡｌａＡｌａＰｒｏＡｌａＧｌｙＰｒｏＡｌａＶａｌＰｒｏＶａｌと表示される）から出発して、以下に記載される修飾が設計される。本発明において用いられるペプチドは、バーグマンらにより開示され本明細書において参考として包含される標準プロトコルを用いて合成される（Ｂｅｒｇｍａｎｎ　＆　Ｚｅｒｖａｓ，Ｂｅｒｉｃｈｔｅ　ｄｅｒ　Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅｎ　Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ（１９３２）６５：１１９２〜１２０１）。
【００２３】
ａ）Ｎ−およびＣ−末端修飾．　Ｎ−末端アセチル化または脱アミノ化（ｄｅｓａｍｉｎａｔｉｏｎ）は多くのアミノペプチダーゼによる消化に対する保護を付与し、一方で、Ｃ−末端カルボキシル基を置換するアミドまたはアルコールの存在は、カルボキシペプチダーゼＡおよびＢを含むいくつかのカルボキシペプチダーゼによる分割を防止する。これらの修飾を含む変更ペプチド配列には以下があり、ここにおいてａｃはアセチル化であり、ａｍはアミド化であり、ｄｅｓは脱アミノ化であり、およびａｌｃはアルコール処理である：
【表２】
2004513873.tif 000007
【００２４】
ｂ）側鎖変更．　非天然アミノ酸の存在は通常ペプチド安定性を増大させる。加えて、これらのアミノ酸（α−アミノイソ酪酸またはＡｉｂ）の少なくとも一つは、それらの構造的な可撓性を減少させてモデルペプチドに対する有意な拘束を強いる。特に、Ａｉｂのβ−シートモデルペプチド中への組込みはこの構造の完全な破壊を誘発する。Ａｉｂのβ−シート遮断活性は、ペプチド中においてβ−シート遮断剤として用いられる天然残基プロリンと同等であるかまたはより大きい。従って、Ａｉｂの導入はペプチド安定性および阻害活性を同時に強化することが期待される。
【表３】
2004513873.tif 000008
【００２５】
ｃ）α−炭素における修飾．　ペプチド安定性を改善するために最も普通に用いられるα−炭素修飾はα−メチル化である。加えて、Ｐｈｅ、ＶａｌまたはＬｅｕのα−炭素に結合された水素原子の置換は、β−ベンド構造の採用に有利に働き、β−プリーツシート構造の形成には極めて不利に働くことが示されてきた。本発明によれば、阻害剤ペプチドにおける残基のメチル化は安定性および有効性を強化することが期待される。
【表４】
2004513873.tif 000009
【００２６】
ｄ）キラリテイー変更．　天然Ｌ−残基のＤ−鏡像異性体による置換は劇的にタンパク質分解への抵抗性を増大させる。Ｄ−残基の導入による安定性の増大は既に１１−残基β−シートブレーカーペプチド（ｉＡβ１）に対して実証されてきた。生体内研究において、天然配列を持つペプチドはラット血漿中で急速に分解されることが示された。実際、約９０％のｉＡβ１が静脈注入後数分内で分解した。逆に、Ｄ−形態を取るすべての残基を含有するｉＡβ１の誘導体は、注入後１５分間にわたり血漿中で実質的に何の分解も示さなかった。検出のために、標準手順を用いてペプチドを放射線−ヨウ素処理した。ラットへの静脈内ボーラス注入後トリクロロ酢酸での沈殿反応によりペプチド安定性を評価した。また完全ペプチドの評価はペーパークロマトグラフィにより行われた。従って、すべてのＤ残基を含有するｉＡβ５およびｉＰｒＰ１３ペプチド（それぞれ図３Ａおよび図３Ｂ）およびエクソペプチダーゼ分解を防止するためにＮ−およびＣ−末端部にのみＤ−残基を含有するペプチドが本発明の化合物に含まれる。後者に加えて、Ｄ−残基は、頻繁に起こるエンドペプチダーゼ切断部位がプロリルエンドペプチダーゼとして知られる酵素によりこの残基の後であることが報告されてきているので、各プロリンアミノ酸後に用いられる。
【表５】
2004513873.tif 000010
小文字で書かれたアミノ酸はＤ−残基を表す。
【００２７】
ｅ）環状ペプチド．　構造的に拘束された環状ペプチドは、エクソペプチダーゼ切断に対するそれらの低減された構造的な可撓性および改善された抵抗性のせいで、線形ペプチドよりも良好な薬物候補を示す。線形配列を環状構造に変換するために、二つの代替戦略が用いられてきた。一つはジスルフィド架橋形成を通して環化を達成するためのシステイン残基の導入であり、他は樹脂結合頭−尾環化を含む側鎖結合戦略である。ペプチド配列の変更を避けるために、後者の方法が用いられる。β−シートブレーカーペプチドは、プロリンがそのターンおよびループ形成を促進する能力のせいで多くの自然に起こるまたは人工的に合成される環状ペプチドの構成物質であるので、マクロ環化を容易にするための理想的な配列を含有する。
【表６】
2004513873.tif 000011
【００２８】
ｆ）偽ペプチド．　偽ペプチドまたはアミド結合代理物は一部の（またはすべての）ペプチド結合の化学修飾を含有するペプチドを意味する。アミド結合置換は、通常、「ｐｓｉ−ブラケット」として知られる述語を用いて、側鎖によるアミノ酸指定を保持し、α−炭素間で起こる変化を指定することにより表される。
【００２９】
例えば、表現ＡｌａΨ［ＣＨ２ＣＨ２］ＧｌｙはＮＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ部を意味する。いくつかのアミド結合代理物を以下の表２に記載した。
【表７】
2004513873.tif 000012
【００３０】
それらの一部は自然に起こるペプチド類似物（Ψ［ＣＨＯＨ］、Ψ［ＣＳＮＨ］、Ψ［ＣＯＯ］など）に見出され、一方で他は人工的に合成されてきた。アミド結合代理物の導入は、ペプチド分解を低減させるだけでなく、ペプチドの生物化学的特性の一部、特に構造的な可撓性および疎水性を有意に変更することも可能である。恐らく、構造的な可撓性の増大は、阻害剤をＡβおよびＰｒＰ結合部位にドッキングするために有利である。他方、アミロイド発生タンパク質と阻害剤間の相互作用は大部分を疎水性相互作用に依存しているように見えるので、恐らく、疎水性を増大するアミド結合置換は親和性および結果として阻害剤の有効性を強化することが可能である。加えて、増大した疎水性は、また、膜を通してのペプチド輸送を強化し、その結果バリア透過性（血管−脳バリアおよび腸バリア）を改善することもあり得る。従って、偽ペプチドを合成するためにΨ［ＣＨ２ＣＨ２］およびΨ［ＣＨ２Ｓ］などのアミド結合置換が用いられそれによって可撓性および疎水性を増大させる。置換しようとするアミド結合は、頻発するエンドペプチダーゼ切断部位がプロリルエンドペプチダーゼとして知られる酵素によりこの残基後に起こることが記載されてきたので、エクソプロテアーゼ分解を防止するためにペプチド末端に、およびそれぞれのプロリン後に位置させる。保護される必要がある追加のアミド結合は、血漿および組織におけるβ−シートブレーカーペプチド分解の分析を含む実験研究によって測定される。
【表８】
2004513873.tif 000013
【００３１】
ｇ）いくつかの変更の混合．　市場に出ているまたは現在開発中のペプチド薬物の特徴を考慮に入れると、タンパク質分解に対して成功裡に安定させられたペプチドの殆どがいくつかのタイプの上述の変更の混合から成っていることは明白である。この結論は、多くの異なる酵素がペプチド分解に関係しているという知識の観点から理解できる。以下の構造は化学修飾の各種タイプの組合せを含有する。
【表９】
2004513873.tif 000014
【表１０】
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【００３２】
また経口的に活性な化合物の生成をもたらし得る安定性を改善するための別な方法は、ペプチド模倣物を産生することである。ペプチド模倣物は、ペプチドの生物学的活性を真似るが、しかしもはや化学的性質においてペプチドではない分子である。用語ペプチド模倣物は、時に、偽ペプチド、半ペプチドまたはペプトイドなどの性質が部分的にペプチドである分子を説明するために用いられてきたが、しかし、厳密な定義および本出願において用いられるものは、もはやいかなるペプチド結合をも含有しない有機分子である。ペプチド模倣物は親ペプチドの誘導体ではなく、むしろ、新たにペプチドの構造的および機能的特性を真似ることを試みて化学的に合成される。ペプチド模倣物の合理的な設計は、ペプチドの活性および詳細な構造情報を担う薬理担持（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｉｃ）基の十分な知識を必要とする。目的は、それらを組み込むために有機テンプレートを用いて薬理活性基の空間位置を再構築することである。テンプレートの選択は重要であり、ペプチドの構造モデルに基づくサイズと可撓性を考慮に入れなければならない。
【００３３】
β−シートブレーカーペプチド特性を真似るために設計されるペプチド模倣物
ペプチド模倣物の合理的な設計は、ペプチドの活性および詳細な構造情報を担う化学基の十分な知識を必要とする。目的は、それらを組み込むために有機テンプレートを用いて薬理活性基の位置を再構築することである。テンプレートの選択は重要であり、ペプチドの構造モデルに基づくサイズと可撓性を考慮に入れなければならない。単一アミノ酸置換を担う各種のβ−シートブレーカー配列の活性研究から、阻害のための鍵である残基が決定されてきた。加えて、リードアルツハイマーおよびプリオンβ−シートブレーカーペプチドの三次元構造（図３Ａおよび図３Ｂ）は、モデル化されるかまたは実験的に測定された。Ａβフィブリロジェネシスの５−残基阻害剤は、エネルギー最小化およびコンピュータープログラムＩＣＭを用いるモンテカルロ（Ｍｏｎｔｅ　Ｃａｒｌｏ）シミュレーションによりモデル化された。プリオンタンパク質構造変化の１３−残基阻害剤の構造は、実験的に２Ｄ−ＮＭＲにより計算された。
【００３４】
Ｊｏａｃｈｉｍ　ＧａｎｔｅおよびＩｗａｏ　Ｏｊｉｍａらによる最近の検討に記載されているようにペプチド模倣物の設計および合成には数多くの接近手段があり、これらは本明細書において参考のために包含される。
【００３５】
以下に示すペプチド模倣物は本発明のさらなる態様を表す。
アルツハイマーの阻害剤
【化１５】
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【化１６】
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【００３６】
後者（ＰＭｉＰｒＰ５）は化学的に活性な基を含有するより短くより合成が容易な種類であり、５−残基プリオンβ−シートブレーカーペプチドに類似である。
【００３７】
アミロイドまたはアミロイド様沈着物またはそれらの病理学的β−シート−リッチ前駆体に関係する障害または疾患を予防するかまたは治療する方法として、本発明の化合物がそれを必要としている対象に有効量において投与され、該対象はヒトまたは動物であり得る。同様に、こうした障害または疾患を検出する方法には、公知の画像化技術によりフィブリル沈着物またはそれらの前駆体に対するその結合を可視化するために、設計化合物の十分な量を投与することも含まれる。
【００３８】
本明細書において用いられる、対象におけるアルツハイマー病または他のアミロイドーシス障害などの疾病の「予防」という用語は、疾患の臨床開始の前に本発明による化合物を投与することを意味する。「治療」は疾患の臨床開始後での保護用化合物の投与を意味する。例えば、障害または疾患の発生後での本発明化合物の成功した投与は、疾患の「治療」に含む。本発明はヒトの治療および動物における獣医の使用に有用である。
【００３９】
本発明の化合物は、その意図された目的を達成するあらゆる手段により、好ましくは経口により投与することが可能である。例えば、投与は、皮下、静脈内、皮内、筋内、腹腔内、大脳内、鼻腔内、口、経皮的、または頬の経路に限定されないがそれらを含む多くの各種非経口的経路によることが可能である。非経口的投与は静脈内ボーラス注入かまたは長期にわたる緩やかな灌流によることが可能である。
【００４０】
アミロイドまたはアミロイド様沈着物に関係する疾病を予防、抑制、または治療するための一般的な投薬計画は、（１）０．５〜１０ｍｇ、さらに好ましくは０．５〜５ｍｇの範囲にある高濃度化合物の１または２投薬量中の有効量の投与、または（２）数ヶ月から数年（これらを含み）までの期間にわたり１０〜１０，０００μｇ、さらに好ましくは５０〜５００μｇの範囲にある低濃度の多投薬量中に投与された化合物の有効量の投与、のいずれかを含む。
【００４１】
投与される投薬量は年齢、性、健康度、および受容者の重量、ある場合に併用治療の種類、治療頻度、および期待される効果の性質に応じて決まることは理解される。各治療に必要な全投薬量は多投薬または単一投薬によって投与することが可能である。「有効量」とは、アミロイドまたはアミロイド様沈着物またはそれらの病的β−シート前駆体の、または溶解性前形成フィブリル沈着物の形成を遅らせるかまたは阻害することができる化合物の濃度を意味する。こうした濃度は当業者により日常的に決定することができる。投薬量は投与された化合物の安定性に応じて決めることが可能であることも当業者により理解されるであろう。安定性のより少ない化合物は多投薬における投与を必要とし得る。
【００４２】
非経口投与用の調合物には、技術上知られる補助薬剤または付形剤を含有することが可能である滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、および乳化液が含まれる。錠剤およびカプセルなどの医薬組成物も通常の方法により調製することができる。
【００４３】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、化合物がその意図された目的を達成するために有効な量で含有されるすべての組成物を含む。加えて、医薬組成物は、活性化合物を薬剤的に用いることができる調合物に加工することを容易にする付形剤および補助品を含む、適する医薬的に許容可能な担体を含有することが可能である。適する医薬的に許容可能な賦形剤は技術上公知であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａｌｆｏｎｓｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ　１９９０，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，この分野における標準参照テキスト、に記載されている。医薬的に許容可能な賦形剤は、投与様式および化合物の溶解度および安定性によって日常的に選択することができる。例えば、静脈内投与に対する配合物は、緩衝剤、希釈剤および他の適する添加物をも含有することができる滅菌水溶液を含むことが可能である。
【００４４】
非経口投与に適する配合物には、水可溶性形態、例えば水可溶性塩中の活性化合物の水溶液が含まれる。加えて、適切な油質の注入懸濁液としての活性化合物の懸濁液は投与することが可能である。適する脂肪親和性溶媒または賦形剤には、脂肪油、例えば、ゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリドが挙げられる。懸濁液粘度を増大させる物質を含有し得る水性注入懸濁液には、例えば、カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランが挙げられる。場合により、懸濁液は安定剤を含有することも可能である。
【００４５】
アミロイドまたはアミロイド様沈着物中、または本発明の医薬組成物を投与することにより治療または予防しようとするような沈着物の病理学的なβ−シート−リッチ前駆体中への異常タンパク質折り畳みに関係する障害または疾患には、アルツハイマー病、ＦＡＦ、ダウン症候群、他のアミロイドーシス障害、ヒトプリオン疾患、例えばクール（ｋｕｒｕ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・ストラウス・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、プリオン関連ヒト神経変性疾患、および動物プリオン疾患、例えばスクレピー、海綿状脳症、伝染性ミンク脳症およびミュールジカおよびヘラジカの慢性消耗病が挙げられるがそれらに限定されない。
【００４６】
実施例
ペプチドの薬物としての使用に対する主要な欠点の一つは、生体流体および組織内におけるそれらの急速なタンパク質分解である。生体外実験において、ｉＡβ５（ＳｅｑＬＰＦＦＤ−また本明細書においてＬｅｕＰｒｏＰｈｅＰｈｅＡｓｐと記される）は新鮮ヒト血漿による培養後生体外で極めて急速に分解した。図４ａに示されるように、ペプチドｉＡβ５の５０％は血漿の存在中において約５分で消失した。タンパク質分解消化の結果としてのいかなる代謝断片も識別することは可能でないので、恐らく、分解は主として非特定のエクソペプチダーゼにより行われると考えられる。この結論は、それぞれアセチル化およびアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）によるペプチドのアミノ−およびカルボキシ−末端の保護（Ａｃ−ｉＡβ５−Ａｍ−また本明細書においてＡｃ−ＬｅｕＰｒｏＰｈｅＰｈｅＡｓｐ−Ａｍと記される−を形成するために）が生体外においてペプチドの安定性を劇的に増大させる、という発見により支持される。図４ｂに示すように、本発明の末端保護修飾ペプチド（Ａｃ−ｉＡβ５−Ａｍ）はヒト血漿中において２４時間を超える期間にわたり安定したままであった。（修飾ペプチドは、また、３７℃で１時間の培養後ペプチドの８１．５％および７６．３％が中でそれぞれヒトおよびラットの組織ホモジェネートにおいて完全なままであったヒトおよびラットの肝臓ミクロソーム中で生体外において代謝が遅かった。）
【００４７】
さらなる生体外研究において、Ａｃ−ｉＡβ５−Ａｍがアミロイド形成（図５ａを参照すること）を阻害することにおいてｉＡβ５と類似の活性を有すると共に、効果は図５ｂおよび５ｃに示されるように非修飾ペプチドの活性と類似の投薬量依存性に従うことが示された。図５ａに戻り、ＢｏｃによるＮ−末端基の修飾がｉＡβ５により示される生体外活性を保持し、一方でいくつかの非関連ペプチド（ＣＰ１：ＶＨＶＳＥＥＧＴＥＰＡ、ＣＰ２：ＧＹＬＴＶＡＡＶＦＲＧ、ＣＰ１０：ＩＳＥＶＫＭＤＡＥＦ）または短いＡβ断片（Ａβ１８〜２１、Ａβ１〜１６など）は、同じ濃度において、恐らくフィブリル中への組込みにより、フィブリロジェネシスに全く効果がないか、またはわずかにアミロイド形成を増加させたことを見ることができる。
【００４８】
生体内のＡｃ−ｉＡβ５−Ａｍの効果を評価するために、我々は、アミロイドーシスが非凝集化Ａβ１〜４２の脳内注入により導入されるラットモデルを用いた。暫時後、ペプチドはラット脳内部に凝集し注入場所において単一アミロイド様沈着物の形成をもたらす。これらの損傷はアルツハイマーのアミロイドプラークと同じ色（コンゴレッド複屈折およびチオフラビンＳ結合）およびより半透明（電子顕微鏡下フィブリル構造）な特性を有すると共に、広範囲な神経収縮、星状細胞増加症および小グリア活性を含む、ＡＤ脳に見られるものに類似のいくつかの脳損傷を誘発する。このモデルを用いて、我々は、以前に、非保護ｉＡβ５とＡβ１〜４２との共注入がアミロイドプラーク形成の５０％阻害を誘発し、既にアミロイドプラークを含有する動物中へのｉＡβ５のｉ．ｃ．注入は前形成沈着物の６７％溶解を生み出すことを示してきた（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．，Ｐｅｒｍａｎｎｅ，Ｂ．Ｓｏｔｏ，Ｃ．，Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ，Ｔ．＆　Ｆｒａｎｇｉｏｎｅ，Ｂ．（２０００）Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ　ｏｆ　ａｍｙｌｏｉｄ−β　ｄｅｐｏｓｉｔｓ　ｉｎ　ｒａｔ　ｂｒａｉｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５９：１１〜１７）。以前の実験においては、非保護ペプチドをアミロイドが位置する脳領域に直接注入した。本実験において、アミロイド−β５ペプチドをラットの小脳扁桃中に注入した。十分にアミロイド沈着物を形成してしまうために必要な時間である７日後に、１３ｍｇ／ｍｌのＡｃ−ｉＡβ５−Ａｍを含有する１００μＬ溶液を、側脳室に接続されたＡＬＺＥＴ注入ポンプを用いて３週間にわたり注入した。動物を犠牲にし、免疫組織化学により脳にアミロイド沈着物が存在するかを分析した。このモデルにおいて、詰まったアミロイドプラークはＡβ１〜４２を含有する溶液が沈着する場所（小脳扁桃）で得られ、また、いくつかのより小さいアミロイド沈着物は脳室により近い領域におけるカニューレ行路を通して見られた（図６、左パネル）。結果は、ペプチド注入が小脳扁桃中に前形成アミロイドプラークの３０％溶解および脳室の近くに位置する沈着物の８３％溶解を誘発することを示す（図６）。
【００４９】
実験手順
ペプチド安定性の生体外アッセイ．　水中１μｇ／μｌ溶液としてペプチドを調製した。２０μｌのペプチド溶液を新鮮ヒト血漿８０μｌ中に希釈した。溶液を３７℃において各種の時間にわたり培養し、プロテアーゼ阻害剤の完全なカクテルを添加することにより反応を停止した。血漿タンパク質の大部分（ペプチドは全くない）を−２０℃で１時間にわたり冷メタノール中で沈殿させた（混合物／ＭｅＯＨ、４／５、ｖ／ｖ）。沈殿タンパク質を遠心分離法（１００００ｇ、１０分、４℃）によりペレット化した。ペプチドを含有する浮遊物を真空下で５回濃縮し、逆相ＨＰＬＣにより分離した。完全なペプチドに対応するピーク面積を測定し、血漿なしで培養した等価試料と比較した。
【００５０】
活性度の生体外アッセイ．　アミロイド形成をアミロイドフィブリルに結合されたチオフラビンＴ（ＴｈＴ）の蛍光発光により定量的に評価した。０．１Ｍトリス中、ｐＨ７．４で調製された０．５ｍｇ／ｍｌ濃度でのＡβ分取標本を、各種濃度のｉＡβ５および誘導体の不在下または存在下において、３７℃で７日間にわたり培養した。培養期間の終わりに、５０ｍＭグリシン、ｐＨ９．２および２μＭＴｈＴを添加して最終体積２ｍｌとした。パーキンエルマー、モデルＬＳ５０Ｂ蛍光分光計において、励起４３５ｎｍおよび発光４８５ｎｍで蛍光を測定した。
【００５１】
脳ＡＰ沈着の動物モデルを用いる生体内研究．　雄のフィッシャー−３４４ラットは到着時２５０〜３００ｇ重量および３〜４月齢であった。動物を籠当り２匹で飼い、餌および水は自由に取れるようにし、１２時間の明−暗サイクルを維持し、手術の前に彼らの新しい環境に２〜３週間にわたり慣れさせた。手術をペントバルビタール・ナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）麻酔下で行った。動物に麻酔をかけるとすぐに、硫酸アトロピン（０．４ｍｇ／ｋｇ）およびアンピシリン・ナトリウム塩（５０ｍｇ／ｋｇ）を皮下注入した。Ａβ１〜４２をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解し、次に水で１６．７％ＤＭＳに希釈した。耳間（ｉｎｔｅｒａｕｒａｌ）ライン下３．３ｍｍでの切歯バーセットを備えるコッフ（Ｋｏｐｆ）定位固定装置を用いることにより、動物に５．０ｎモルＡβ１〜４２を各小脳扁桃中に両側注入した。ブレグマおよび頭蓋骨から測定された注入座標（ＡＰ−３．０、ＭＬ±４．６、ＤＶ−８．８）をパキシノスおよびワトソンの環椎に基づき経験的に決定した。ＣＭＡ／１００ミクラシリンジポンプを用いて３．０μｌ体積を６分（流量０．５μｌ／分）にわたり投与した。注入後、カニューレをそのままで２分間置き、次にそれを０．２ｍｍ引き出して３分間置き、５分後にカニューレをゆっくりと引き抜いた。手術後、動物を、彼らが彼らの立ち直り反射を取り戻すまで電気座布団の上に置いた。Ａｃ−ｉβ５−ＡＭの効果を評価するために、動物に第１手術後１週間でＡＬＺＥＴ注入ポンプが製造業者指示書に従って脳室に接続されている第２の手術を受けさせた。ＰＢＳ／１０％ＤＭＳＯ１００μｌ中の全部で１．３ｇのペプチドを３週間にわたり側脳室中に送り込んだ。この後で、大動脈を通って灌流されるペントバルビタール・ナトリウムの過剰投与（１５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）により動物を犠牲にした。組織学のために、脳の連続冠状断面（４０μｍ）を切断し、エチレングリコール凍結防止剤中に置き、−２０℃で染色するまで保存した。組織断面を、Ｓｏｔｏ．Ｃ．Ｓｉｇｕｒｓｓｏｎ．Ｅ．，Ｍｏｒｅｌｌｉ，Ｌ，Ｋｕｍａｒ，Ｒ．Ａ．，Ｃａｓｔａｒｉｏ，Ｅ．Ｍ．ａｎｄ　Ｆｒａｎｇｉｏｎｅ，Ｂ．（１９９８）β−ｓｈｅｅｔ　ｂｒｅａｋｅｒ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ａ　ｒａｔ　ｂｒａｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ　ｍｅｄ．４：８２２〜８２６に記載されているようにＡβ１〜４２抗体により染色した。アミロイド沈着物のサイズを決定するために画像分析システムを用いた。二方向ＡＮＯＶＡ続いてこの後の比較用のニューマン−クールズ多重範囲試験によりデータを分析した。全部の脳沈着物を不対ｔ−検定、両側検定を用いて分析した。
【００５２】
今本発明を十分に説明したので、同じことが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、且つ正当な実験なしで、等価変数、濃度、および条件の広い範囲内で実施できることが当業者によって理解される。
【００５３】
本発明はその特定の実施形態との関連において記載されてきたが、一方で、さらなる変更が可能であることは理解される。本出願は、一般に本発明の原理に従い、且つ本発明が関係する技術内の知られたまたは習慣的なやり方の範囲内にあるような、および以下のように添付クレームの範囲内で上に定義された本質的な特徴に適用できるような本開示からの逸脱を含む本発明のあらゆる変化、使用、または適用を網羅するように意図されている。
【００５４】
雑誌論文または要約、公開または相当の米国または外国の特許出願、発行された米国または外国特許、またはあらゆる他の文献を含む本明細書において引用されるすべての文献は、引用文献中に示されるすべてのデータ、表、図、およびテキストを含んで、全体を本明細書において参考のために包含する。加えて、本明細書において引用される文献内で引用される文献の全体内容も、全部を参考のために包含する。
【００５５】
知られた方法段階、従来の方法段階、知られた方法または従来の方法に対する言及は、決して本発明のいかなる態様、説明または実施形態も関連技術において開示され、教示されまたは示唆されたという是認になるものではない。
【００５６】
特定の実施形態の前述の説明は、本発明の一般性質を十分に明らかにしているので、その結果、他者は、当該技術分野内の適用知識（本明細書において引用される文献の内容を含み）により、必要以上の実験なしで、本発明の一般概念から逸脱することなく、容易にこうした特定の実施形態を種々の応用例に変更しおよび／または改造することができる。従って、こうした改造および変更は、本明細書において示される教示および指図に基づき、開示された実施形態の同等物の意味および範囲内にあるように意図されている。本明細書における用語または述語は、本明細書の述語または用語が当業者の知識と組合せられて、本明細書において示される教示および指図に照らして当業者によって解釈できるようにという説明の目的のためであり、限定のためでないことは理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
ペプチド結合およびペプチド修飾用に可能な標的部位の略図である。
【図２】
その天然Ｌ−構造および非天然Ｄ−形態におけるアルツハイマーのアミロイドーシス（Ｓｅｑ．ＲＤＬＰＦＹＰＶＰＩＤ）の１１−残基β−シートブレーカーペプチド阻害剤の薬物動力学を表現するグラフである。
【図３】
Ａ、Ｂそれぞれアルツハイマーおよびプリオンβ−シートブレーカーペプチドのｉＡβ５およびｉＰｒＰ１３の三次元構造の表示である。
【図４】
ｉＡβ５およびＡｃ−ｉＡβ５−Ａｍそれぞれの時間に対する生物学的利用能および安定性を示すグラフである。
【図５Ａ】
種々の他ペプチドにより培養したＡβ１〜４０のグラフ上の比較を示す。
【図５Ｂ】
アミロイド形成対Ａｃ−ｉＡβ５−Ａｍ濃度のグラフである。
【図５Ｃ】
アミロイド形成対ｉＡβ５濃度のグラフである。
【図６】
脳室分野における沈着物の８３％溶解および小脳扁桃におけるアミロイドプラークの３０％溶解があるモデルを示す。
【図１】
2004513873.tif 000029
【図２】
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【図４Ａ】
2004513873.tif 000031
【図４Ｂ】
2004513873.tif 000032
【図５Ａ】
2004513873.tif 000033
【図５Ｂ】
2004513873.tif 000034
【図５Ｃ】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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