(57)【要約】タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの誘導体およびサイクリン-依存性キナーゼからなる医薬組成物、ならびにタキサンは中断して投与され、ソテレ（登録商標）は14日および23日に投与され、サイクリン−依存性キナーゼは反復して同一サイクル内で投与する投与形態が記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の構成成分がタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの誘導体であり、第二の構成成分がサイクリン−依存性キナーゼである、少なくとも2つの構成成分からなる医薬組成物。
【請求項２】
サイクリン−依存性キナーゼがフラボピリドールである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の構成成分を投与する方法において、上記投与が別々に行われる方法。
【請求項４】
請求項１または２に記載の構成成分を投与する方法において、上記投与が別々に、ある時間間隔を置いて行われる方法。
【請求項５】
タキソテレ（登録商標）およびフラボピリドールからなる新生物疾患の処置における治療的相乗作用を有する医薬組成物。
【請求項６】
組成物の構成成分が別々に、ある時間を置いて投与される請求項５記載の方法。
【請求項７】
タキソテレ（登録商標）は１０日サイクルの最初の日および最後の日に投与され、フラボピリドールは１０日サイクルの最初の４日間および最後の４日間に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項８】
タキソテレ（登録商標）は１４日および２３日に投与され、フラボピリドールは１４〜１７日および２０〜２３日に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項９】
新生物疾患は乳癌である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１０】
新生物疾患は肺癌である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１１】
構成成分が別々に投与され、フラボピリドールが経口的に投与される、請求項２記載の組成物の構成成分の投与方法。
【請求項１２】
上記構成成分が別々に、ある時間間隔を置いて投与され、フラボピリドールは経口的に投与される請求項２記載の組成物における構成成分の投与方法。
【請求項１３】
フラボピリドールは経口的に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１４】
タキソテレ（登録商標）は１４日および２５日に投与され、フラボピリドールは１４〜１８日および２１〜２５日に経口的に投与される請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１５】
第一の構成成分がタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの誘導体であり、第二の構成成分がフラボピリドールであり、上記構成成分は別々にある時間間隔を置いて投与され、フラボピリドールは経口的に投与される新生物の処置のための医薬組成物。
【請求項１６】
新生物疾患は乳癌である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１７】
新生物疾患は肺癌である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１８】
新生物疾患は乳癌である請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１９】
新生物疾患は肺癌である請求項１６記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの同族体および新生物疾患の処置に治療的に有用な他の化合物の組み合わせに関する。さらに特定すれば、本発明はタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）およびそれらの同族体と、サイクリン−依存性キナーゼの組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
タキサンおよびタキソイドは、天然に存在するジテルペン化合物のファミリーを構成し、強力な抗腫瘍薬、パクリタキセルを包含する。パクリタキセル（タキソール、登録商標）は最初、太平洋イチイの樹（Taxus brevifolia）の皮から単離され、以前から乳癌および卵巣癌患者のアジュバントおよびネオ−アジュバント治療にきわめて有効であることが示されてきた。さらに最近になって、その半合成同族体、ドセタキセル（タキソテレ、登録商標）も乳癌の化学療法に有効であることが見出され、さらにこのクラスの抗腫瘍薬に感受性の多くの疾患、たとえば肺癌および結腸癌に拡大されている。タキソール（登録商標、パクリタキセル）およびタキソテレ（登録商標、ドセタキセル）の両者はチューブリンに結合し、微小管を分解的に阻害し、有糸分裂を傷害して細胞サイクルのM期からの進行を遮断し、アポトーシスを促進する。
【０００３】
タキソイドの臨床的有効性は疑わしいにもかかわらず、一部の腫瘍はこれらの薬物に対して抵抗性を示す。この薬物抵抗性は腫瘍の固有の特徴であり、あるいは長期にわたって腫瘍に発生する。薬物抵抗性には３つの主要な機構が報告されている。すなわち（ｉ）チューブリン遺伝子の点突然変異、（ii）タキサンに対する結合性の低いチューブリンアイソフォームの選択、および（iii）mdr1遺伝子によってコードされるＰ−糖タンパク質（P-gp）エフラックスポンプが仲介する多剤抵抗性（MDR）表現型の発現である。機構（iii）は多くの場合、固有にP-gpを発現する腫瘍たとえば結腸癌および腎臓癌におけるタキソール（登録商標）およびタキソテレ（登録商標）に対する固有の抵抗性を説明するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明による組み合わせまたは共同は、多面発現性抵抗（pleiotropic resistance）または「多剤抵抗性」現象の回避または遅延を可能にする。
【０００５】
タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）およびそれらの誘導体の製造は、たとえば、欧州特許EP 0,253,738およびEP 0,253,739および国際特許出願PCT WO 92/09, 589の主題を形成する。
【０００６】
タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）、およびそれらの同族体が、それらを抗腫瘍処置に治療的に有用でありこれらのタキサンと同一または異なる機構を有する少なくとも１種の物質と組み合わせて投与した場合に、顕著に改善された効果を示すことが今回見出され、このことが本発明の主題を形成する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
タキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）、およびそれらの同族体との共同または組み合わせに使用される物質中では、酵素たとえばＬ−アスパラギナーゼおよびサイクリン依存性キナーゼ、たとえばフラボピリドール、ケルシチンおよびゲニスタインを挙げることができる。様々な薬物たとえば生物学的応答のモディファイヤーまたは成長因子インヒビター、たとえばインターフェロンまたはインターロイキンも使用することができる。
【０００８】
生成物の活性は使用させる用量に依存するので、造血型の成長因子、たとえばG−CSFもしくはGM−CSFまたはある種のインターロイキンをタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの同族体と組み合わせることにより毒性現象を低下またはその発生を遅延させながら、高用量を使用して活性を増大させることができる。
【０００９】
さらに特定すれば、本発明はタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）、およびそれらの同族体と、サイクリン依存性キナーゼたとえばフラボピリドールの組み合わせに関する。
【００１０】
サイクリン依存性キナーゼ（CDK）は、細胞周期のタイミングおよび調整をコントロールする重要なレギュレーターである。たとえば、CDKはそれらの必須のサイクリンパートナーと細胞周期における鍵となる接合部を介して転移をコントロールする可逆性の複合体を形成する。たとえば、活性化CDK1−サイクリンD1複合体はG1期を通じての進行をコントロールし、一方CDK1−サイクリンB1複合体は細胞周期の有糸分裂期への進行をコントロールする。内因性サイクリンキナーゼ阻害タンパク質（CDKI）はCDKまたはサイクリン成分のいずれかに結合し、キナーゼ活性を阻害することが知られている。多くの腫瘍たとえばメラノーマ、膵臓癌および食道癌には、これらの天然のCDKIsがないか、突然変異している。したがって、選択的なCDK阻害剤は効果的な化学療法剤であることが証明されている。
【００１１】
フラボピリドール（シス-5,7-ジヒドロキシ-2-(2-クロロフェニル)-8-[4-(3-ヒドロキシ-1-メチル)-ピペリジニル]-1-ベンゾピラン-4-オン）は、様々な腫瘍細胞系、たとえばヒト肺癌、乳癌に対して抗腫瘍活性を有し、また異種移植片モデルにおける腫瘍の増殖を阻止することが示されている合成フラボンである。それは細胞周期のG1およびG2両期で細胞の休止を誘導することも示されている。フラボピリドールは強力かつ選択的なCDKのインヒビターであり、その抗腫瘍活性はそのCDK阻害活性に関連している。研究の結果、その腫瘍細胞増殖阻害活性は細胞周期特異的な様式で起こることが明らかにされた（Bioorg. & Med. Chem. Letters 10: 1937-1941, 2000参照）。
【００１２】
タキソテレ（登録商標）およびフラボピリドールがそれぞれその有効性を改善できる機構は異なる。本発明の組み合わせにおいて改善された有効性は、治療的相乗作用の決定により示すことができる。その組み合わせが至適用量で使用される構成成分の一方または他方より治療的に優れている場合、組み合わせは治療的な相乗作用を示す（T. H. Corbettら, Cancer Treatment Reports, 66, 1187, 1982）。
【００１３】
組み合わせの有効性を示すためには、問題の研究における別個の構成成分それぞれの最大許容性と組み合わせたものの最大許容性とを比較することが必要である。この有効性は、たとえばlog10死滅細胞により定量することができる。すなわち、
log10死滅細胞＝T−C（日数）／3.22×Td
式中、T−Cは細胞の増殖に要する時間を表し、それは処置群（T）の腫瘍の日数での平均時間、および処置群（C）の腫瘍が予め定められた値（たとえば１g）に到達するまでの日数であり、Tdは対照動物の腫瘍の容量が倍増するため必要な時間（日数）である（T. H. Corbettら, Cancer, 40, 2660-2680, 1977; F, M. Schabelら, Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc. 1979）。製品はlog10死滅細胞が0.7より大きいかそれに等しい場合に活性とみなされる。製品はlog10死滅細胞が2.8より大きい場合にきわめて活性とみなされる。
【００１４】
構成成分それぞれが一般に最大許容性用量を越えない用量で存在する組み合わせがそれ自体の最大許容性で使用され、それが単独投与で投与された場合に最良の構成成分におけるlog10死滅細胞の値より、log10細死滅胞が大きい場合、治療的相乗作用が表出されることになる。
【００１５】
固形腫瘍に対する組み合わせの有効性は以下の方法により実験的に測定される。
【００１６】
実験に付した動物は一般にマウスであり、日０に30〜60 mgの腫瘍フラグメントを皮下に両側に移植した。腫瘍を有する動物は様々な処置およびコントロールに付す前に混合した。進行した腫瘍を処置する場合には、腫瘍を所望のサイズまで増殖させ、腫瘍の増殖が不十分な場合は動物を除去した。選択された動物をランダムに処置およびコントロール群に分配した。腫瘍をもたない動物も、腫瘍を有する動物と同じ処置に付し、腫瘍に対する特異的な効果から毒性作用を解離するために使用した。化学療法は一般に腫瘍のタイプによって移植の３〜22日後に開始し、毎日観察する。別の動物群で最大の体重減少が達成されるまで１週に３または４回体重を測定し、この群は試験の終了時まで１週に少なくとも１回、体重を測定する。
【００１７】
腫瘍は１週に２または３回、腫瘍が約２ｇに到達するまで、または腫瘍が２ｇに達する前に動物が死亡した場合はそれまで秤量する。動物を屠殺した場合には剖検を実施する。
【００１８】
抗腫瘍活性は、表１および２に記載の様々なパラメーターによって測定する。
【００１９】
組み合わせの白血病に対する研究では、動物に特定数の細胞を移植し、抗腫瘍活性は、コントロールに比較した処置マウスの生存時間の延長によって決定する。生存時間の延長が27％より大きい場合、その製品は活性であるとみなし、P388白血病の場合、それが75％より大きい場合、きわめて活性とみなす。
【００２０】
以下の実施例において、マウスは乳房の腺癌MA 13/Cが移植され、投与スケジュールおよび投与様式の異なるタキソテレ（登録商標）およびフラボピリドールの組み合わせで処置した。タキソールおよびタキソテレならびにフラボピリドールは経口的にならびに静脈内に投与することができる。これらのスケジュールの一部は明らかな治療の相乗性を示す。
【００２１】
本発明の付加的な目的および利点は、一部を以下に掲げ、一部は以下の説明から自明であるか、または本発明の実務から習得される。本発明の目的および利点は、添付された特許請求の範囲にとくに指摘されたエレメントおよび組み合わせによって具現化され、達成される。
【００２２】
以上の一般的な説明および以下の詳細な説明はいずれも、単に例示的かつ説明的なものであり、請求された本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００２３】
組み合わせの各構成成分、タキソテレ（登録商標）およびフラボピリドールの活性を測定するために、それぞれの単独をMA 13C担癌マウスに投与した。タキソテレ（登録商標）は15日および21日に静脈内に投与し、各回の用量は30 mg/kg, 総用量は60 mg/kgとした。単独で使用したこの用量は4.7のlog10死滅細胞を生じ、このように処置した５例のマウスすべてで完全な応答が示された。フラボピリドール単独の投与は15日および21日にいずれの日も６ mg/kgの用量で行い、総用量は12 mg/kgであり、処置した５例のマウスに完全な応答は示されなかった。
【００２４】
次に、２つのやり方で化合物を合わせて中断スケジュールで試験した。最初の組み合わせでは、フラボピリドールを最初に15日および20日に投与し（総投与量９ mg/kg）、タキソテレ（登録商標）は16日および21日に与えた（総投与量45 mg/kg）。この様式で投与した場合、log10死滅細胞は5.5で、処置マウス５例中５例に完全な応答を生じた。この中断スケジュールでは、log10死滅細胞はタキソテレ（登録商標）を単独で与えた場合より良好で、この組み合わせでは対照よりもタキソテレ（登録商標）が25％少なく、フラボピリドールが25％少ないという事実にもかかわらず、なお５例中５例に完全な応答を生じた。
【００２５】
組み合わせの構成成分を逆転させ、タキソテレ（登録商標）を最初に15日および20日に与え、フラボピリドールを16日および21日に同量投与した場合には、log10死滅細胞はタキソテレ（登録商標）単独よりもわずかに低下していたが、この場合もまた５例中５例に完全な応答を生じた。表１にはこれらの結果を示す。結果はフラボピリドールおよびタキソテレ（登録商標）の組み合わせを25％少なく投与してもタキソテレ（登録商標）単独と類似の有効性を示した。
【００２６】
【表１】
2004521140.tif 000002
【実施例２】
【００２７】
フラボピリドールの投与日を増加し、MA 13/C担癌マウスに、10日サイクル中８日間にフラボピリドールを投与し、この間タキソテレ（登録商標）は10日サイクルの最初と最後の日に投与する類似の用量に暴露した場合、明らかな相乗作用が認められた。
【００２８】
以下の表２は、各成分単独、96.8 mg/kgのタキソテレ（登録商標）および23.2 mg/kgのフラボピリドールの最大非毒性総用量を投与した結果を示す。構成成分を組み合わせて投与し、タキソテレ（登録商標）は14日および23日に、フラボピリドールは14日〜17日および20日〜23日に投与した場合、３種の組み合わせは明らかな相乗作用を示し、第四の組み合わせはタキソテレ（登録商標）単独に等しい効果を示した。４種のすべての組み合わせは６例中６例で完全な応答、すなわち100％の完全応答が得られた。
【００２９】
3-アームの用量-応答試験は、治療開始時（230 mg）において測定可能な腫瘍を有するC3H/HeNマウスで実施した。選択されたモデルはマウス乳房の腺癌MA 13/Cであり、ドセタキセルに対する化学療法感受性に基づいて選択された。雄性マウスはFlavo（すなわち腫瘍移植後14〜17および20〜23日に１日１回）またはドセタキセル（すなわち、14日および23日）またはそれらの組み合わせで処置された。結果：最高非毒性用量（HNTD, 2.9 mg/kg/用量, 総用量 23.2 mg/kg）でFlavoを静脈に単一薬剤として投与した場合は不活性で、−0.4正味log10死滅細胞を示し（正味log10死滅細胞＝腫瘍の増殖遅延−処置期間／3.32×腫瘍倍増時間）、完全な退縮（CR）はなかった。ドセタキセル単独のHNTD（48.1 mg/kg/用量, 注射, 総用量 96.8 mg/kg）はきわめて活性で（３正味log10死滅細胞、CR 6/6）であることが見出された。最高非毒性用量の組み合わせ（Flavo 1.93 mg/kg/用量およびドセタキセル53.2 mg/kg/注射）では7.6正味log10死滅細胞およびCR 6/6が得られた。この組み合わせには十分な許容性があり、最後の処置の６日後、nadirにおける13％の体重減少が誘導された。相乗効果は２つの付加的用量レベルでもドセタキセルのHNTDが維持された。この相乗効果はFlavoを経口的に投与した場合にも観察された。
【００３０】
【表２】
2004521140.tif 000003
【実施例３】
【００３１】
タキソテレは腫瘍移植後14日および25日に静脈注射し、Flavoは14日〜18日および21日〜25日に経口投与した。
【００３２】
【表３】
2004521140.tif 000004
【００３３】
実施例２に示したように、ドセタキセルおよび毎日反復したフラボピリドールの組み合わせは、等毒性用量においていずれの単一薬剤より高い活性を示すことが見出された。相乗効果は死滅細胞においてlog ４倍の上昇を示した。
【００３４】
本発明の他の実施態様は本明細書およびここに開示された本発明の実務を考察すれば、本技術分野の熟練者には自明の通りである。明細書および実施例は単なる例示を意図したものであって、本発明の真の範囲および精神は別掲の特許請求範囲の記載に示される。
【国際公開パンフレット】
2004521140.tif 000005
2004521140.tif 000006
2004521140.tif 000007
2004521140.tif 000008
2004521140.tif 000009
2004521140.tif 000010
2004521140.tif 000011
2004521140.tif 000012
2004521140.tif 000013
2004521140.tif 000014
2004521140.tif 000015
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004521140.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成15年9月22日(2003.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の構成成分がタキソテレ（登録商標）であり、第二の構成成分がサイクリン−依存性キナーゼである、少なくとも２つの構成成分からなる医薬組成物。
【請求項２】
サイクリン−依存性キナーゼがフラボピリドールである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の構成成分を投与する方法において、上記投与が別々に行われる方法。
【請求項４】
請求項１または２に記載の構成成分を投与する方法において、上記投与が別々に、ある時間間隔を置いて行われる方法。
【請求項５】
タキソテレ（登録商標）およびフラボピリドールからなる新生物疾患の処置における治療的相乗作用を有する医薬組成物。
【請求項６】
組成物の構成成分が別々に、ある時間を置いて投与される請求項５記載の方法。
【請求項７】
タキソテレ（登録商標）は１０日サイクルの最初の日および最後の日に投与され、フラボピリドールは１０日サイクルの最初の４日間および最後の４日間に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項８】
タキソテレ（登録商標）は１４日および２３日に投与され、フラボピリドールは１４〜１７日および２０〜２３日に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項９】
新生物疾患は乳癌である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１０】
新生物疾患は肺癌である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１１】
構成成分が別々に投与され、フラボピリドールが経口的に投与される、請求項２記載の
組成物の構成成分の投与方法。
【請求項１２】
上記構成成分が別々に、ある時間間隔を置いて投与され、フラボピリドールは経口的に投与される請求項２記載の組成物における構成成分の投与方法。
【請求項１３】
フラボピリドールは経口的に投与される請求項５記載の医薬組成物。
【請求項１４】
タキソテレ（登録商標）は１４日および２５日に投与され、フラボピリドールは１４〜１８日および２１〜２５日に経口的に投与される請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１５】
第一の構成成分がタキソール（登録商標）、タキソテレ（登録商標）またはそれらの誘導体であり、第二の構成成分がフラボピリドールであり、上記構成成分は別々にある時間間隔を置いて投与され、フラボピリドールは経口的に投与される新生物の処置のための医薬組成物。
【請求項１６】
新生物疾患は乳癌である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１７】
新生物疾患は肺癌である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１８】
新生物疾患は乳癌である請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１９】
新生物疾患は肺癌である請求項１６記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2004521140.tif 000017
2004521140.tif 000018
2004521140.tif 000019
2004521140.tif 000020