(57)【要約】肝細胞への薬物送達方法は、化合物を肝細胞の原形質膜を通して輸送する輸送体であって、化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない輸送体を持つ肝細胞に、カルボキサミジン基含有化合物を供給するステップを含む。さらなる意図される方法は、意図される化合物を細胞含有系内の細胞に与える、細胞含有系におけるフラビウイルスのファミリーのウイルスの増殖を阻害する方法を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性からなる群から選ばれる活性を有するカルボキサミジン基を持つ化合物を供給すること；
肝細胞が、肝細胞の原形質膜を通して前記化合物を輸送する輸送体であって、前記化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない輸送体を含むことを確定すること；及び、
輸送体に前記化合物を与えることを含む、肝細胞へ薬物を送達する方法。
【請求項２】
前記化合物が糖と結合した塩基を持つヌクレオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記塩基が単環式の塩基を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記単環式の塩基が１，２，４−トリアゾールを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記糖がβ−リボフラノースを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ヌクレオシドが１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記ヌクレオシドが１−ベータ−Ｌ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
肝細胞において前記カルボキサミジン基がカルボキサミド基に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記カルボキサミド基が酵素的にリン酸化され、それにより肝細胞に蓄積される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ウイルス活性がフラビウイルスに対する抗ウイルス活性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
フラビウイルスに対する前記抗ウイルス活性が、疫病のウイルス及びＣ型肝炎ウイルスに対する抗ウイルス活性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗腫瘍活性が腫瘍性肝細胞に対する抗腫瘍活性を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記輸送体がＡＴＰ依存性輸送体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記輸送体が膜透過性タンパクを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
肝細胞が病変している、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物の輸送が、カルボキサミジン基を持つ第二の化合物により阻害される輸送を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
カルボキサミジン基を持つ薬剤組成物を供給すること、及び、前記化合物が細胞の原形質膜を通して輸送され、前記化合物の輸送が実質的にリバビリンによって阻害されない前記薬剤組成物を、細胞含有系内の細胞に与えることを含む、細胞含有系においてフラビウイルスのファミリーに属するウイルスの複製を阻害する方法。
【請求項１８】
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ウイルスがＣ型肝炎ウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞含有系がインビトロ系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞含有系がインビボ系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
インビボ系がウイルスに感染した少なくとも１つの肝細胞を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬剤化合物が１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジン＊ＨＣｌを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬剤化合物がＬ−配置である、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願は、２０００年８月２２日に出願された米国特許仮出願第６０／２２６８６９号、及び２０００年１０月１３日に出願された米国特許仮出願第６０／２４０６２７号（これらはいずれも本明細書に参照により組み込まれる）の利益を主張している。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明の技術分野は薬学である。
【０００３】
（発明の背景）
多くの薬理学的に活性な分子は、（たいていは哺乳動物、及び典型的にはヒトである）系に経口又は非経口投与されているが、しかしながらそれらは、細胞質又は核のような細胞内区画において所望の活性を示す。従って、このような分子は、作用する領域に到達するために細胞膜を通過する必要がある。さまざまな他の薬理学的に活性な分子の中で、抗ウイルス薬を細胞質及び／又は核に到達させることは、適切な抗ウイルス活性のために特に重要である。
【０００４】
多くの修飾がこのような分子の標的細胞への輸送を促進することが知られている。例えば、いくつかの修飾は、細胞輸送体の一部分又は完全な基質を含む（例えば、ＧＬＵＴ−１におけるグルコース、アシアロ糖タンパクにおけるポリ塩基性アミノ酸など）。残念ながらこのような追加は、高い頻度で、分子量を増大させるか又は薬理学的に活性な分子に所望されない代謝経路を加える。分子の化学構造又は修飾の型に依存して、受容体媒介性の取り込みが、多様な膜輸送体を通して起こり得る。例えば、多様なモノカルボキシレート薬は、モノカルボキシレート輸送体によって移入されてもよく、一方、いくつかの内因性アミン及び生体異物は、有機カチオン輸送体によって細胞内に移入されることが知られている。さらに他の輸送体は、ヌクレオシドを、濃度依存もしくはエネルギー依存の方法で細胞内に移入する。多様な膜輸送体の再考は、Ｌｅｅ，Ｖ．Ｈ．（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１１，Ｓｕｐｐｌ．２（２０００）：４１−５１）（これは本明細書に参照により組み込まれる）により公開されている。
【０００５】
他の修飾は、部位もしくは器官に特異的な修飾を含む。例えば、肝胆道系での該分子の循環を増強するために、薬理学的に活性な分子から胆汁酸付加物を形成してもよい。しかしながら、このような修飾は、溶解性を減少させる傾向があり、従って、全達成可能濃度を減少させる可能性がある。他の例において、リン酸基上の修飾（例えばホスホネートエステルの形成）は、薬物分子を、器官特異的な酵素系によって元の薬物に変換される、比較的高い器官特異性を持つ、プロドラッグに変換する（米国特許第６，２２５，４６０号又は米国特許第６，１１０，９０３号を参照）。またさらなる修飾は、抗体を持つ薬理学的に活性な分子の標的特異性を高めるために、抗体またはその断片を含む。比較的高い抗体選択性にもかかわらず、抗体は、免疫原性及びそれらの生成及び／又は精製に関して問題がある傾向がある。
【０００６】
当該技術分野において既知の薬理学的に活性な分子への多様な修飾があるにもかかわらず、それらの全て又は殆ど全てが、１又はそれ以上の不都合を有する。従って、薬理学的に活性な分子の特異性を増強するために改良された方法及び組成物を提供することが、まだなお必要とされている。
【０００７】
（発明の概要）
本発明は、肝細胞へ薬物を送達する方法、及び細胞含有系におけるフラビウイルスの増殖を阻害する方法に関する。
【０００８】
本発明の主題の一つの形態において、肝細胞へ薬物を送達する方法は、カルボキサミジン基を持つ抗ウイルス又は抗腫瘍化合物を供給する一つのステップを含む。さらなるステップにおいて、肝細胞は、肝細胞の原形質膜を通して前記化合物を輸送する輸送体であって、前記化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない輸送体を含むことが確定され、及びまたさらなるステップにおいて、前記輸送体は前記化合物を与えられる。
【０００９】
本発明の主題の他の形態において、意図される化合物は、糖と結合した複素環塩基を持つヌクレオシドを含み、塩基は、好ましくは単環の塩基（例えば１，２，４−トリアゾール）であり、及び、糖は、好ましくはベータ−リボフラノースを含む。特に好ましくは、化合物は、Ｄ−及びＬ−ビラミジンＴＭを含む。
【００１０】
本発明の主題のさらなる形態において、意図される化合物のカルボキサミジン基は肝細胞でカルボキサミド基に変換される、及び、化合物が肝細胞で酵素的にリン酸化されて、それにより蓄積されることがさらに好ましい。肝細胞は病変している（例えばウイルスの感染又は侵入）ことが特に意図される。意図される輸送体は、特にＡＴＰ依存性輸送体及び膜透過性タンパクを含む。
【００１１】
本発明の主題のまたさらなる形態において、細胞含有系におけるフラビウイルスのファミリーのウイルスの増殖を阻害する方法は、カルボキサミジン基を持つ薬剤組成物を供給するステップを含む。他のステップにおいて、細胞含有系内の細胞は、化合物が細胞の原形質膜を通して輸送され、及び化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない薬剤組成物を与えられる。
【００１２】
本発明の多様な目的、特性、形態、及び利点は、添付の図面と共に以下に示す本発明の好ましい実施態様の詳細な説明からより明らかとなるであろう。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（リバビリン）のヒト赤血球への輸送についての研究は、リバビリンが、６−［（４−ニトロベンジル）チオ］−９−ベータ−Ｄ−リボフラノシルプリン（ＮＢＭＰＲ）−感受性ヌクレオシド輸送体によって赤血球に進入することを示した。また、リバビリンの赤血球への輸送が約０．９９ｎＭのＩＣ５０でＮＢＭＰＲによって阻害されたことが証明されている（例としてＪａｒｖｉｓ等，１９９８年を参照）。
【００１４】
驚くべきことに、本発明者らは、近縁化合物である１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジン（ビラミジンＴＭ）の肝細胞への輸送が、リバビリンの肝細胞への輸送と異なる細胞輸送体を伴うと思われることを見出した。リバビリン及びビラミジンＴＭ両方の構造式を、以下の式１及び２に示す。
【００１５】
【化１】
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【００１６】
さらに本発明者らは、ビラミジンＴＭの肝細胞への取り込みの速度は、肝細胞における全濃度と同様に、リバビリンと比較して著しく高く、このことから、肝細胞における抗ウイルス剤の有効濃度を増加させるための新規な手段を提供することを見出した。
【００１７】
リバビリン及びビラミジンＴＭが同様のヒト肝細胞への進入形態をとるかどうかを決定するために、本発明者らはいくつかの実験を行った。第一に、多様な株の肝細胞（Ｈｅｐ３Ｂ、ＨｅｐＧ２、及びＨｕｈ７）を、多様なヌクレオチド類縁体（例えばリバビリン、レボビリン（リバビリンのＬ−異性体）、及びビラミジンＴＭ）と共にインキュベートした、及び、ヌクレオシドの取り込み実験の結果を図１に示す。取り込み実験の試験データは、３つのトリアゾール型ヌクレオシド類縁体の全てが、異なる速度及び／又は量であるが、試験された全ての肝細胞中に取り込まれることを明確に示している。より具体的には、リバビリンのＤ−異性体は、リバビリンのＬ−異性体よりも、より効果的に取り込まれた。より著しくは、カルボキサミジン含有のヌクレオシド類縁体であるビラミジンＴＭは、Ｄ−及びＬ−配置のカルボキサミド含有のヌクレオシド類縁体よりも著しく高い度合いで、３つの細胞系の全てに取り込まれたことが明らかになる。
【００１８】
これらの、及び他の実験（データは示されていない）は、本発明者らに、ヌクレオシドであるリバビリン及びビラミジンＴＭの取り込みが、実際は異なる取り込みメカニズムによって起こり得ることを示唆した。この疑問を解決するために、本発明者らは、放射性同位体で標識されたリバビリン及びビラミジンＴＭが、標識されていないビラミジンＴＭ及びリバビリンそれぞれと取り込みを競合する、取り込みの競合の実験を行った。これらの実験の結果を図２及び３に示す。驚くべきことに、両実験は、肝細胞によるビラミジンＴＭ及びリバビリンの異なる取り込みを明確に示唆する、リバビリンとビラミジンＴＭの間での少なくとも部分的な競合を示した。
【００１９】
従って、本発明者らは、肝細胞が、完全でなくとも少なくとも部分的にリバビリンのための輸送体の系（すなわちＮＢＭＰＲ感受性ヌクレオシド輸送体）と異なる、ビラミジンＴＭもしくは他のカルボキサミジン含有化合物のための細胞取り込み及び／又は輸送体の系を含むことを意図する。このことから、肝細胞が、ビラミジンＴＭの取り込み及び／又は輸送体の系を選択的に利用する薬理学的分子の標的となり得ることが意図される。「輸送体の系」及び「輸送体」という用語は、本明細書において同じ意味で用いられ、及び、原形質膜を通して細胞への化合物の流入を促進する、膜に関連のタンパク又はタンパク複合体（膜透過性タンパク、又は、外側又は内側の細胞膜に位置した／固定されたタンパク）を指して言う。典型的には、該輸送体はエネルギー依存性（例えばＡＴＰ依存性）であり、及び意図される輸送体は多様な因子（例えば膜電位、Ｃａ２＋濃度、ｃＧＴＰなど）によってさらに調節され得る。さらに、適当な輸送体の系はカルボキサミジン基を持つ第二の化合物によって阻害され得ることが意図される。
【００２０】
意図される薬理学的分子に関して、適当な分子はビラミジンＴＭだけでなく多くのビラミジンＴＭの修飾を含むことが認識されるべきである。例えば、特に意図される修飾は、ビラミジンＴＭのＬ−異性体を含む。さらに意図される修飾は、特に、モノ、ジ、及びトリリン酸塩の形状のビラミジンＴＭ、及び全ての化学的及び／又は生理的に適当なプロドラッグ形状を含む。該プロドラッグ形状の例は、２００１年３月１５日出願の、発明の名称が「ヌクレオシド化合物及びその使用」であるＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０１／０８７１３（これは本明細書に参照により組み込まれる）に示されている。
【００２１】
さらに、さらなる適当なヌクレオシド及びヌクレオシド類縁体は、カルボキサミジン機能もしくは修飾されたカルボキサミド機能を含むヌクレオチド及びヌクレオチド類縁体を含むことが意図される（「修飾されたカルボキサミド機能」という用語は、詳しくは以下の構造を持つ基を含む：
【００２２】
【化２】
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式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、独立して、これらの全てが直鎖又は分枝鎖であってもよい、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びアルカリルを含み、及びさらに官能基を含んでいてもよい）。特に好ましい官能基は、極性の、塩基性の、酸性の、求電子性の、及び求核性の基（カルボキシレート、チオール、第３級又は第４級アンモニウム基、エステル、ヒドロキシル、アミド、イミド、エーテルなど）、及びハロゲンを含む。さらなる代わりの形態において、適当なヌクレオシドもしくはヌクレオチド類縁体の塩基は、非自然発生の塩基と同様に自然発生の塩基を含むことが意図され、及び特に意図される代わりの塩基は、グアニン、ヒポキサンチン、ウラシル、シチジン、アデニン、シチジン、フルオロウラシル、単環の塩基（例えば１，２，４−トリアゾール）などである。
【００２３】
同様に、糖部分は、天然の及び／又は修飾された糖を含んでいてもよい。例えば、天然の糖が好ましい場合は、アラビノースのような非リボフラノース糖が取り込まれてもよい。一方、非天然の糖は、立体配置的に制限されたもしくは固定された糖、水酸基以外の置換基（例えばエチニル、ハロゲン、アルキル）を持つ糖、又はデオキシ糖を有利に含んでいてもよい。特に好ましいヌクレオシドは、フラビウイルスに対する抗ウイルス活性及び特にＣ型肝炎ウイルス（例えばＨＣＶウイルス又は疫病のウイルス）に対する抗ウイルス活性、又は腫瘍性肝細胞に対する抗腫瘍活性を示す。
【００２４】
肝細胞以外の多くの細胞（これらは腫瘍性細胞であってもよく、そうでなくてもよい）もまた意図され、及び適当な細胞は、一般的に、図２及び３の実験で使用される濃度範囲で競合しているリバビリンによって実質的に影響を受けないビラミジンＴＭの取り込みを示す全ての細胞を含むであろうことが、さらに認識されるべきである。実質的に影響を受けないという用語は、１５％より多くない、好ましくは１０％より多くない、より好ましくは８％より多くないビラミジンＴＭの取り込みの減少を指して言う。しかしながら、一般的に、肝細胞、及び特に病変した肝細胞（例えばウイルスの感染又は侵入）が好ましい細胞であると意図される。
【００２５】
従って、ヌクレオシドもしくはヌクレオチド化合物の毒性は、前に定義されるカルボキサミジン基もしくは修飾されたカルボキサミジン基を含み、修飾された化合物の標的細胞が輸送体の系を含み、非標的細胞が欠如するような化合物の修飾によって、低減することができることが認識されるべきである。例えば、リバビリンは、赤血球及び肝細胞によって容易に取り込まれ、細胞内でリン酸化された後に保持されて、患者がリバビリンの高用量もしくは長期の投与計画下にある場合に、しばしば患者に溶血性貧血を引き起こす。しかしながら興味深いことに、ビラミジンＴＭは、肝細胞によって取り込まれるが、赤血球によって取り込まれない。この取り込みにおける差異は、ビラミジンＴＭの取り込み及び／又は輸送体の系の欠如に起因する。実際、実験は、認識されるいかなる度合いにおいてもビラミジンＴＭが赤血球中に検知される量で取り込まれない（データは示されていない）ことを示している。
【００２６】
さらに、肝細胞における比較的高いデアミナーゼ／デアミダーゼ活性に起因して、ビラミジンＴＭは肝臓でリバビリンに変換され（未公開の結果）、その後に細胞内でリン酸化されて、典型的に肝細胞で保持されるリバビリンモノホスフェートとなる。従って、分子にカルボキサミジン基を含むこと及び肝細胞の比較的高いデアミナーゼ／デアミダーゼ活性を利用することによって、分子は、肝臓で特異的に標的とされ得ることが意図される。−Ｃ（ＮＲ１）（ＮＲ２Ｒ３）基を持つ意図される分子に関して、肝細胞の多様なデアミナーゼ／デアミダーゼ活性は、該化合物をプロドラッグ形状から活性薬物形状へと変換するのに十分に高い（例えば薬物の活性はカルボキサミド基が存在するときに増強する）ことが認識されるべきである。
【００２７】
特定の理論又は酵素的なメカニズムが必至であることを望まないが、カルボキサミジン含有化合物の相応するカルボキサミド含有化合物への変換は、酵素的な変換を含んでいてもよく、及び、カルボキサミジン含有化合物を相応するカルボキサミド含有化合物に変換する（例えばビラミジンＴＭをリバビリンに変換する）酵素は、アミノヒドロラーゼのクラスに属することが意図される。特に意図されるアミノヒドロラーゼは、アデノシン−もしくはシトシン−デアミナーゼ、アリール−デアミダーゼ、及びグルタメート−ピルベートトランスアミナーゼを含む。
【００２８】
従って、本発明者らは、薬物を肝細胞へ送達する方法が、カルボキサミジン基を持つ抗ウイルスもしくは抗腫瘍化合物が供給される一つのステップを含むことを意図する。他のステップにおいて、肝細胞が、化合物を肝細胞の原形質膜を通して輸送する輸送体であって、化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない輸送体を含むことが確定される。「リバビリンによって実質的に阻害されない」という用語は、実験の項で定義された試験条件下でリバビリンの濃度が１００μＭから２ｍＭの間であるところの、２０％より多くない、より典型的には１５％より多くない、さらにより典型的には１０％より多くない、及び最も典型的には８％より多くない阻害を指して言う。またさらなるステップにおいて、輸送体は化合物を与えられる。
【００２９】
本発明の主題のさらなる形態において、本発明者らは、特定のウイルスのファミリー、より具体的にはフラビウイルスの増殖が、いくつかの意図される化合物、特にビラミジンＴＭの塩酸塩（１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジン＊ＨＣｌ）を細胞含有の媒地に添加することによって、細胞含有の媒地中で阻害され得ることを見出した（データは示されていない）。フラビウイルスのファミリーは、近年、７例の報告された死亡及び少なくとも６２例の重篤な疾病の事例を招いた米国東部における西ナイルウイルス脳炎の数回の発生によって、特別な注目を受けている。さらに、Ｃ型肝炎類似ウイルス（及びＨＣＶウイルス）もまた、フラビウイルスのファミリーに属し、公衆及び個人の健康に関してフラビウイルスの深刻さにさらに拍車をかけている。特定の理論又は仮説が必至であることを望まないが、増強したビラミジンＴＭ＊ＨＣｌの輸送は、フラビウイルス感染の治療に対して特に有益であることが意図される。
【００３０】
従って、特にビラミジンＴＭ＊ＨＣｌを用いて治療されることが意図される感染は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、ココベラウイルス、マリーバレー脳炎、クンジュンウイルス、及びランガトウイルス、並びに、ダニ媒介脳炎ウイルス群、日本脳炎群、及びデング熱群からのウイルスを含む。
【００３１】
従って、細胞含有系におけるフラビウイルスのファミリーに属するウイルスの増殖を阻害する方法は、カルボキサミジン基を持つ薬剤組成物が供給されるステップを含むであろう。他のステップにおいて、細胞含有系内の細胞は、化合物が細胞の原形質膜を通して輸送され、化合物の輸送はリバビリンによって実質的に阻害されない薬剤組成物を与えられる。特に好ましい細胞含有系は、インビトロ（例えばペトリ皿又は細胞培養）及びインビボの系（例えば哺乳動物及び特にヒト）を含み、及びさらに、適当な細胞はウイルスに感染した肝細胞を含むことが特に意図される。
【００３２】
（Ｄ−又はＬ−配置のいずれかの）ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌは、任意の適当な医薬製剤として、及び任意の適当な手順で投与されるであろうことが意図される。従って、投与は、経口、（皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、胸骨内注射もしくは注入の手法を含む）非経口、吸入スプレー、又は経腸、局所などにより、及び、一般的な非毒性の薬学的に許容できる担体、補助剤、及びビヒクルを含む投与単位製剤で行われてもよい。実施例によって、ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌは、薬学的に許容できる担体との混合物で処方され得ることが意図される。例えば、ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌは、薬学的に許容される塩として経口的に投与され得る。ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌは殆ど水に溶解することから、（例えば約７．２から７．５のｐＨに緩衝された）生理食塩水溶液で、静脈注射で投与され得る。リン酸、重炭酸、又はクエン酸のような一般的な緩衝剤をこの目的で使用することができる。当然ながら、当業者は、ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌを不安定にすることなく、又はその治療活性を損なうことなく、それぞれの投与経路のための多くの製剤を提供するために、明細書の教示の範囲内で製剤を修飾してもよい。詳しくは、水又は他のビヒクルへの溶解性をより高めるためのビラミジンＴＭ＊ＨＣｌの修飾は、例えば、当業者が十分に行なうことができる小規模の修飾（塩の形成、エステル化等）によって容易に達成することができる。本化合物の薬物動態を患者において最大の有利な効果を持つようにするために、特定の化合物の投与経路及び投与計画を修飾することもまた、当業者が十分に行うことができる。
【００３３】
いくつかの薬学的投与形状において、特に本化合物の、アシル化（アセチル化、又はその他の）誘導体、ピリジンエステル、及び多様な塩の形状を含む、化合物のプロドラッグ形状が好ましい。当業者は、容易に本化合物を修飾して宿主器官もしくは患者の標的領域への活性化合物の送達を促進するためのプロドラッグ形状にする方法を理解するであろう。当業者はまた、本化合物の宿主器官もしくは患者の標的領域への送達において化合物の意図される効果を最大化するために、適切であれば、プロドラッグ形状の好ましい薬物動態学パラメーターを利用するであろう。
【００３４】
さらに、前記の感染もしくは病状の治療のために、ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌは、単独で、又は他の成分と併用して投与されてもよい。本発明の併用療法は、少なくとも一つの本発明の化合物もしくはその機能性誘導体、及び少なくとも一つの他の薬学的に活性な成分の投与を含む。活性成分及び薬学的に活性な薬剤は、別々に又は合わせて投与されてもよく、及び、別々に投与される場合は、同時に、又はいずれの順序でもよく別々に投与されてもよい。活性成分及び薬学的に活性な薬剤の量、及び対応する投与のタイミングは、所望の併用療法効果を達成するように選択されるであろう。好ましくは、併用療法は、ビラミジンＴＭ＊ＨＣｌもしくはその生理学的機能性誘導体、及び本明細書で以下に記載される一つの薬剤の投与を含む。
【００３５】
ビラミジンＴＭとの併用において有効であることが意図される他の薬剤又は活性成分の例は、インターフェロンα及びγを含むがこれらに限定されない多様なインターフェロン、リバビリン、アシクロビル、及びＡＺＴＴＭのような抗ウイルス薬；トルナフテート、フンギゾンＴＭ、ロトリミンＴＭ、マイセレクスＴＭ、ナイスタチン、及びアンホテラシンのような抗真菌薬；ミンテゾールＴＭ、ニクロシドＴＭ、ベルモックスＴＭ、及びフラジールＴＭのような駆虫薬、イモジウムＴＭ、ロモチルＴＭ、及びファザイムＴＭのような腸用薬；インターフェロンα及びγ、アドリアマイシンＴＭ、シトキサンＴＭ、イムランＴＭ、メトトレキサート、ミトラシンＴＭ、チアゾフリンＴＭ、タキソールＴＭのような抗腫瘍薬；アクロベートＴＭ、シクロコートＴＭ、デノレクスＴＭ、フロロンＴＭ、オキソラレンＴＭ、コールタール、及びサリチル酸のような皮膚用薬；エルゴタミン化合物のような片頭痛薬；シクロスポリン、ジプロソンＴＭ、ヒドロコルチゾンを含む、前に記載されていないステロイド及び免疫抑制薬；フロロンＴＭ、リデックスＴＭ、トピコート、及びバリソン；及びインシュリンのような代謝性の薬剤、及び、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、及びＩＬ１２のようなサイトカインを含む、前記のカテゴリーに適切に当てはまらない他の薬剤である。特に好ましい主要な薬剤は、ＡＺＴ、３ＴＣ、８−置換グアノシン類縁体、２，３−ジデオキシヌクレオシド、インターロイキンＩＩ、ＩαＢ−インターフェロンのようなインターフェロン、ツカレソール、レバミソール、イソプリノシン及びシクロリグナンである。
【００３６】
このような追加の治療薬の例は、ＡＺＴ、３ＴＣ、８−置換グアノシン類縁体、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、インターロイキンＩＩ、α−インターフェロンのようなインターフェロン、ツカレソール、レバミソール、イソプリノシン、及びシクロリグナンのような、免疫系の調節又は関連する病状に有効な薬剤を含む。本発明のいくつかの化合物は、他の化合物の代謝を低減させるか又は不活化することによって本発明のいくつかの薬剤の生物学的活性を高めるために有効であってもよく、及びこのことから、この意図される効果のために共に投与される。
【００３７】
１〜２００ｍｇ／日及びそれより少ない用量を含む、多様な代わりの用量もまた適用できると意図される。好ましい実施態様において、適当な用量は、１０〜２００ｍｇ／日の範囲である。より好ましい実施態様において、用量は、５０〜２００ｍｇ／日の範囲であり、及びさらにより好ましい実施態様において、用量は、５〜１００ｍｇ／日の範囲である。一般的に、適当な用量は、ウイルス感染の型、ウイルス感染の段階、所望されるビラミジンＴＭの血漿濃度、治療の期間等を含む複数のパラメーターに依存するであろう。例えば、いくつかのウイルス感染では、比較的低いビラミジンＴＭの血漿濃度で治療の成功が達成し得る一方で、他のウイルス感染は、比較的高用量を必要とし得る。
【００３８】
活性化合物の投与は、連続的投与（静脈点滴）から、日毎の数回の経口投与（例えばＱ．Ｉ．Ｄ．）にわたっていてもよく、及び、他の投与経路の中でも、経口、局所、非経口、筋肉内、静脈内、皮下、（浸透促進剤を含んでもよい）経皮、口腔内、及び坐剤の投与を含んでいてもよい。
【００３９】
本発明の薬剤組成物を調製するために、治療学的に有効量の１又は２以上の本発明の化合物は、好ましくは、投与形を製造するための一般的な薬剤調合方法に従って、薬学的に許容できる担体とよく混合される。担体は、例えば経口又は非経口といった投与に対して望まれる製剤の形状に依存して、幅広い多様な形状をとることができる。経口投与形の薬剤組成物の調製において、任意の一般的な薬学的媒体を使用することができる。従って、懸濁剤、エリキシル剤、及び溶液剤のような液状の経口製剤としては、水、グリコール、油、アルコール、香料、保存剤、着色剤などを含む適当な担体及び添加剤を使用してもよい。粉末剤、錠剤、カプセルのような固形の経口製剤、及び、坐剤のような固形の製剤としては、デンプン、（デキストロース、マンニトール、乳糖、及び関連する担体のような）糖担体、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを含む適当な担体及び添加剤を使用してもよい。所望ならば、錠剤又はカプセル剤は、一般的な手法によって腸溶性皮膜又は放出制御を施してもよい。
【００４０】
非経口製剤としては、担体は、滅菌水又は塩化ナトリウム水溶液を通常含むであろうが、分散を補助する成分を含む他の成分を含んでいてもよい。当然ながら、滅菌水が無菌の状態で使用されて保持される場合、組成物及び担体もまた滅菌される。注射用の懸濁剤もまた調製され、この場合、適当な液状の担体、懸濁化剤などを使用してもよい。
【００４１】
（実施例）
異なるヒト肝細胞系による、リバビリン、ビラミジンＴＭ、及びレボビリンＴＭの取り込み
Ｈｅｐ３Ｂ、ＨｅｐＧ２、及びＨｕｈ７細胞系を、２４穴プレート内で、５０，０００細胞／穴の濃度で使用し、及び、［３Ｈ］−標識されたリバビリン、レボビリンＴＭ、及びビラミジンＴＭ（２０μＣｉ／ｍｌ）と共に、１０μＭの冷却したヌクレオシドを加えて、３７℃で４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し溶解して、及び、細胞溶解物中の放射能（すなわち、細胞によって取り込まれた、標識されたヌクレオシドの量）を、シンチレーションカウンターで測定した。
【００４２】
ヌクレオシド競争アッセイ
５０，０００ＨｅｐＧ２細胞／穴を、２４穴プレート内に入れ、及び、［３Ｈ］−標識されたヌクレオシド（２０μＣｉ／ｍｌ）と共にインキュベートした。競争を、冷却した（０、１００μＭ、５００μＭ、及び２ｍＭ）競合ヌクレオシドの濃度を増加させて行った。インキュベーションの時間は３７℃で２時間であった。その後、細胞をＰＢＳで洗浄し溶解した。細胞溶解物中の放射能（すなわち、細胞によって取り込まれた、標識されたヌクレオシドの量）を、シンチレーションカウンターで測定した。
【００４３】
上述のように、肝細胞への薬物送達方法及びフラビウイルス感染の治療方法の具体的な実施態様を開示してきた。しかしながら、本明細書に記載の本発明の思想から逸脱することなく、既に記載されたものに加えて多くのさらなる修飾が可能であることは、当業者に明らかであろう。従って、本発明の主題は、添付された特許請求の範囲の精神を除いて限定されるものではない。さらに、明細書及び特許請求の範囲の両方の解釈において、全ての用語は、文脈と合致した方法で可能な限り広く解釈されるべきである。特に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、言及される要素、構成成分もしくはステップが、明確に言及されていない他の要素、構成成分もしくはステップと共に、存在してもよく、又は使用されてもよく、又は組み合わされてもよいことを示す非排他的な方法で、要素、構成成分、又はステップに言及したものとして解釈されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は異なる肝細胞系へのヌクレオシドの取り込みを示すグラフである。
【図２】図２はＨｅｐＧ２細胞におけるリバビリン及びビラミジンＴＭによる［３Ｈ］−リバビリンの取り込みの競争を示すグラフである。
【図３】図３はＨｅｐＧ２細胞におけるリバビリン及びビラミジンＴＭによる［３Ｈ］−ビラミジンＴＭの取り込みの競争を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年3月13日(2002.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性からなる群から選ばれる活性を有するカルボキサミジン基を持つ化合物を供給すること；
肝細胞が、肝細胞の原形質膜を通して前記化合物を輸送する輸送体であって、前記化合物の輸送がリバビリンによって実質的に阻害されない輸送体を含むことを確定すること；及び、
原形質膜を通して肝細胞への前記化合物の流入を促進する、膜に関連のタンパク又はタンパク複合体である輸送体に、前記化合物を与えることを含む、肝細胞へ薬物を送達する方法。
【請求項２】
前記化合物が糖と結合した塩基を持つヌクレオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記塩基が単環式の塩基を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記単環式の塩基が１，２，４−トリアゾールを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記糖がβ−リボフラノースを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ヌクレオシドが１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記ヌクレオシドが１−ベータ−Ｌ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
肝細胞において前記カルボキサミジン基がカルボキサミド基に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記カルボキサミド基が酵素的にリン酸化され、それにより肝細胞に蓄積される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ウイルス活性がフラビウイルスに対する抗ウイルス活性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
フラビウイルスに対する前記抗ウイルス活性が、疫病のウイルス及びＣ型肝炎ウイルスに対する抗ウイルス活性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗腫瘍活性が腫瘍性肝細胞に対する抗腫瘍活性を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記輸送体がＡＴＰ依存性輸送体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記輸送体が膜透過性タンパクを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
肝細胞が病変している、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物の輸送が、カルボキサミジン基を持つ第二の化合物により阻害される輸送を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
カルボキサミジン基を持つ薬剤組成物を供給すること、及び、前記化合物が細胞の原形質膜を通して輸送され、前記化合物の輸送が実質的にリバビリンによって阻害されない前記薬剤組成物を、細胞含有系内の細胞に与えることを含み、前記輸送における輸送体が、原形質膜を通して肝細胞への前記化合物の流入を促進する、膜に関連のタンパク又はタンパク複合体である細胞含有系において、フラビウイルスのファミリーに属するウイルスの複製を阻害する方法。
【請求項１８】
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ウイルスがＣ型肝炎ウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞含有系がインビトロ系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞含有系がインビボ系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
インビボ系がウイルスに感染した少なくとも１つの肝細胞を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬剤化合物が１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミジン＊ＨＣｌを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬剤化合物がＬ−配置である、請求項１７に記載の方法。
【国際調査報告】
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