(57)【要約】【課題】肥満症や糖尿病と関連する遺伝子を同定する。【解決手段】ある分子又はその誘導体若しくは同族体をコードするヌクレオチド配列又はコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子であって、痩せた動物に比べ太った動物又は絶食させた動物に比べ餌を与えた動物の視床下部組織若しくは筋肉組織の一方又は両方でより大量に発現される核酸分子を提供する。肥満症、拒食症、体重維持、筋発達の低下、糖尿病及び／又は代謝エネルギーレベルと関連する生理的過程のモジュレーター及び／又はモニターとしてこのような核酸の発現産物を利用する方法を提唱する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ある分子又はその誘導体若しくは同族体をコードするヌクレオチド配列又はそれをコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子であって、痩せた動物と比べ太った動物であるいは絶食させた動物と比べ餌を与えた動物の視床下部組織又は筋肉組織の一方又は両方で、より大量に発現される核酸分子。
【請求項２】
該核酸分子が配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列又はそれに少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：１若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
該核酸分子が配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列又はそれに少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：２若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
該核酸分子が配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列又はそれに少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：３若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
該核酸分子が配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列又はそれに少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：４若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
該核酸分子が配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列又はそれに少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：５若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
該核酸分子が配列番号：１に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
該核酸分子が配列番号：２に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項９】
該核酸分子が配列番号：３に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１０】
該核酸分子が配列番号：４に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
該核酸分子が配列番号：５に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
ヌクレオチドの配列又は核酸分子によりコードされるアミノ酸の配列であって痩せた動物に比べ太った動物の又は絶食した動物に比べ餌を与えられた動物の視床下部組織若しくは筋組織の一方又は両方でより大量に発現される配列を含む単離された分子。
【請求項１３】
配列番号：１に記載されたような核酸分子又は配列番号：１に少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：１若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１２記載の単離された分子。
【請求項１４】
配列番号：２に記載されたような核酸分子又は配列番号：２に少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：２若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１２記載の単離された分子。
【請求項１５】
配列番号：３に記載されたような核酸分子又は配列番号：３に少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：３若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１２記載の単離された分子。
【請求項１６】
配列番号：４に記載されたような核酸分子又は配列番号：４に少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：４若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１２記載の単離された分子。
【請求項１７】
配列番号：５に記載されたような核酸分子又は配列番号：５に少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：５若しくはその相補型に低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１２記載の単離された分子。
【請求項１８】
該分子がタンパク質である、請求項１３又は請求項１４又は請求項１５又は請求項１６又は請求項１７に記載の単離された分子。
【請求項１９】
配列番号：１に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２０】
配列番号：２に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２１】
配列番号：３に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２２】
配列番号：４に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】
配列番号：５に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項１８記載の単離されたタンパク質。
【請求項２４】
下記のタンパク質、即ち
(i)  痩せた動物に比べ太った動物の視床下部組織若しくは筋肉組織で異なって発現される核酸分子によりコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物又は模倣体、
(ii) 絶食した動物に比べ餌を与えられた動物の肝臓組織で異なって発現される核酸分子によりコードされるタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物又は模倣体、
(iii)  配列番号：１に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(iv) 配列番号：２に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(ｖ）配列番号：３に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(vi) 配列番号：４に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(vii)  配列番号：５に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(viii) 配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(ix) 配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(ｘ）配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(xi) 配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(xii)配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(xiii) ホモ二量体型であるパラグラフ（ｉ）〜 (xii)のいずれか一つで定義されたようなタンパク質、及び
(xiv)  ヘテロ二量体型であるパラグラフ（ｉ）〜 (xii)のいずれか一つで定義されたようなタンパク質、
から成るリストから選択される単離されたタンパク質。
【請求項２５】
哺乳動物における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の一つ以上の発現を調節する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203を、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現のモジュレーターの有効量と、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現を高レベル調節若しくは低レベル調節若しくはその他の方法で調節するのに十分な時間及び条件の下で、接触させる工程を含む方法。
【請求項２６】
哺乳動物における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性を調節する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性を増加若しくは減少させるのに十分な時間及び条件の下で、ある分子の調節に有効な量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項２７】
肥満症、拒食症、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上により特徴付けられる状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現を調節するのに十分な、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の活性を調節するのに十分な時間及び条件の下で、ある薬物の有効量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項２８】
肥満症、拒食症、糖尿病又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上により特徴付けられる疾病状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の有効量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項２９】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を調節できる薬物の使用。
【請求項３０】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の活性を調節できる薬物の使用。
【請求項３１】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の使用。
【請求項３２】
AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の発現、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性のモジュレーター、及び薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤の一つ以上を含む組成物。
【請求項３３】
被験体由来の生体試料中の AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、該生体試料を AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203又はその抗原性誘導体若しくは抗原性同族体と、複合体が形成するのに十分な時間及び条件の下で接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、視床下部組織又は骨格筋組織で発現され、且つ、ディファレンシャルディスプレイ技術やマクロアレイ技術、あるいは異なる生理的状態における核酸分子の差異発現を検出することができる他の技術を用いて同定される、核酸分子に関する。本発明の核酸分子からできる発現産物は、健康状態、肥満症、拒食症、体重維持、筋発達の低下、糖尿病及び／又は代謝エネルギーレベル、改変された生理状態の一つ以上に関連があるかそれらの標識となるものである。本発明の核酸分子及びそれらの発現産物及び／又はそれらの誘導体、同族体、類似体、模倣体の同定は、治療薬や診断薬として、あるいは肥満症、拒食症、体重維持、筋発達の低下、糖尿病及び／又は代謝エネルギーレベル、その他の生理状態と関連する生理的プロセスのモジュレータ及び／又はモニターとして作用する物質の標的として役立つと提案される。
【背景技術】
【０００２】
本明細書中のいかなる先行技術の引用も、オーストラリアや他のあらゆる国において、この先行技術が一般的な知識に含まれることを承認するもの、又はそのように示唆するものでもなく、またそのように解すべきでもない。
【０００３】
組換えDNA技術のさらなる洗練により、獣医及び緊密に結びついたヒトや動物の健康の分野の研究と開発が大いに促進している。これは、特定の疾病状態の病因に関連する遺伝的基礎の研究においては特にそうである。疾病率と死亡率の観点から見てとりわけ重要な状態の一つは、肥満症であり、そして２型糖尿病（以前には、インシュリン非依存性真性糖尿病、又は NIDDM）及び心疾患と肥満症の関連である。
【０００４】
肥満症は病理学上の体脂肪の超過と定義され、持続した期間におけるエネルギー摂取とエネルギー消費の不均衡の結果である。肥満症は裕福な国で見られる最も一般的な代謝病である。裕福な国での肥満症の罹患率は警戒すべきほどに高く、幾つかの部分集団では10％から50%にまで上昇している（非特許文献１を参照）。特に気になるのは、肥満症の罹患率が裕福な社会で着実に上昇しているようであり、それほど裕福でない国でも裕福になるにつれ、及び／又は裕福な国の文化的習慣を取り入れるにつれ、肥満症の罹患率は今や急速に上昇しているという事実である（非特許文献２を参照）。
【０００５】
たとえばオーストラリアでは、1995年の成人人口の19%が肥満症（BMI＞30）であった。平均すると、1995年の女性の体重は1980年の女性よりも4.8kg増加し、男性では3.6kg増加した（オーストラリアン・インスティチュート・オブ・ヘルス・アンド・ウェルフェア（AIHW）、ハート、ストローク、ヴァスキュラー・ディジーズ、オーストラリアン・ファクト。 AIHW Cat. No. CVD 7キャンベラ： AIHWとハート・ファンデーション・オブ・オーストラリア, 1999）。もっと最近では、1999年から2000年の間に行われた AusDiab研究では、25歳〜64歳の男性の65%、女性の45%が太り過ぎであった（非特許文献３を参照）。米国での肥満症の罹患率も1991年から1998年の間に堅実に増加しており、この期間にアメリカ人では12%から18%に増加した（非特許文献４を参照）。
【０００６】
高く且つ増加しつつある肥満症の罹患率は、個人と社会全体の双方に健康にかかわる重大な意味合いを含んでいる。肥満症は複雑で異質な障害であり、２型真性糖尿病や心臓血管疾患などの他のいくつかの代謝状態の危険性を増大させるので、予防可能な罹病率や死亡率の重要な危険指標であると認識されてきた（非特許文献５、非特許文献６を参照）。肥満症と並行して糖尿病も急速に広がりつづけている。オーストラリアでは1995年に約70万人が糖尿病で、一方米国では糖尿病の罹患率が1990年には4.9%であったが1999年には6.9%にまで増加した（非特許文献７を参照）。オーストラリアでは、糖尿病や他の疾患状態と関連する肥満症の年間コストは、1992年〜1993年の間で控えめに見積もっても8億1千万AU$になるとされた（ナショナル・ヘルス・アンド・メディカル・リサーチ・カウンシル、アクティング・オン・オーストラリアズ・ウェイト： A strategy for the prevention of overweight and obesity。キャンベラ：ナショナル・ヘルス・アンド・メディカル・リサーチ・カウンシル, 1996）。米国では、ナショナル・ヘルス・インタビュー・サーベイ（NHIS）が1995年に肥満症の経済的コストを約990億US$と推定したが、それは当時の米国の全医療費の5.7%に相当するものであった（ウォルフとコルディッツ, Obes Res。6：97-106,  1998）。
【０００７】
肥満症の病因の遺伝的基礎は、とりわけ一般的集団の体重変化における変動の25〜80%が遺伝的影響で説明できると示唆する、双子の研究や養子縁組研究並びに人口に基づく分析により示されている（非特許文献１、非特許文献８及び非特許文献９を参照）。。遺伝子が個人の体脂肪率の可能範囲を決定し、その時々に個人が置かれた環境がその範囲内でのポイントに影響を与えると考えられている（非特許文献１を参照）。しかしながら、肥満症の病因に関連があると考えられる遺伝子に関する研究が数多くあるにもかかわらず、この分野での重要な発見は驚くほど少なかった。加えて、さまざまな集団グループでゲノム全体を走査したが、肥満症に大きな効果を有する染色体領域についての決定的な証拠はみつかっていない。
【非特許文献１】
ブーチャード, 肥満症の遺伝学, ボカラトーン： CRCプレス, 1994。
【非特許文献２】
ズィメット, Diabetes Care 15(2)： 232-247, 1992。
【非特許文献３】
デ・ルーパーとバーティア, Australia's Health Trends 2001, オーストラリアン・インスティチュート・オブ・ヘルス・アンド・ウェルフェア（AIHW）Cat. No. PHE 24, キャンベラ：AIHW, 2001。
【非特許文献４】
モクダッドら, JAMA，282(16)： 1519-22, 1999。
【非特許文献５】
マストら, JAMA。282(16)： 1523-1529, 1999。
【非特許文献６】
コペルマン, Nature 404： 635-643, 2000）。
【非特許文献７】
モクダッド, Diabetes Care 24(2)： 412, 2001）。
【非特許文献８】
コペルマンら, Int J Obesity 18： 188-191, 1994。
【非特許文献９】
ラヴシン, Metabolism 44（Suppl 3）：12-14, 1995。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
幾つかの器官/組織が、肥満症及び２型糖尿病の病理生理学に関係があるとされてきたが、特に関心があるのは視床下部である。視床下部は長い間、エネルギー摂取の調整に関わる脳の重要な部位であると考えられてきた（ステラー, Psychol Rev 61: 5-22, 1954）。そして今では、視床下部がエネルギーのホメオスタシスや、視床下部によって産生され及び／又は視床下部に作用する数多くの因子の統合や連携における中心的な役割を担っているということが広く受け入れられている。ニューロペプチドＹ、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、メラニン凝集ホルモン、レプチン、インシュリンを含む、これらの因子のいくつかは、エネルギー・バランスと体重の調整におけるその役割について研究されてきた。視床下部でエネルギー・バランスを調整している代謝経路を混乱させる遺伝子改変は、肥満、そして続いて糖尿病の進行に寄与しうるであろうと提唱されてきた。こうして、動物の代謝の調節における視床下部の機能を理解する際の重要なステップとして、これらのホルモンの標的を同定する必要がある。このような標的となるのは、器官全体でありうるし、これらのホルモンによってその発現が調節される遺伝子であることもある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、本発明者らは、痩せた動物と太った動物で、あるいは餌を与えない動物と比較して餌を与えたた動物で異なって発現される遺伝子配列を同定しようとした。ディファレンシャルディスプレイ（differential display) 分析やマクロアレイ（即ち、膜を用いるマイクロアレイ）分析といった技術を使用して、本発明者らは肥満症、拒食症、体重維持、糖尿病、筋発達及び／又は代謝エネルギーレベル及び／又は他の改変された生理的状態など、これらに限定されないが、の健康状態や疾病状態と結びつく、一つ以上の生物学的機能に関連すると思われる遺伝子を同定した。
【００１０】
発明の概要
本明細書を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」（"comprise"）という語、ならびにその変化形（"comprises", "comprising"など）は、述べられた要素、整数、要素又は整数の群の包含を示すものであるが、いかなる要素、整数、要素又は整数の群の排除を意味するものではないと理解されるものとする。
【００１１】
ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、配列識別番号（SEQ ID NO：）で表される。この配列識別番号は <400>1、<400>2などの配列識別子に数字で対応する。配列表は請求の範囲の後に提示する。
【００１２】
視床下部組織又は筋組織由来の遺伝物質のディファレンシャルディスプレイ分析やマクロアレイ（即ち、膜を用いるマイクロアレイ）分析などの技術を用いて、健康状態又は、肥満症、拒食症、体重維持、糖尿病、筋発達、代謝エネルギーレベルといった生理学的状態に関連する遺伝子配列の候補を同定した。イスラエル・サンド・ラット（プサモミス・オベズス(Psammomys obesus)）を含む動物モデルを採用した。次の代謝表現型に基づき、グループＡ、Ｂ、Ｃと命名された３グループの動物を用いた：
グループＡ：    痩せた動物；
グループＢ：    肥満であるが、糖尿病でない動物；及び
グループＣ：    肥満、且つ、糖尿病の動物。
【００１３】
動物は餌が与えられた状態又は餌が与えられなかった状態、あるいは、高若しくは低グルコース若しくはインシュリンの状態に維持され、遺伝子配列はディファレンシャルディスプレイとマクロアレイ分析によって分析された。これらの技術を使用した好ましい実施態様では、異なって発現されたと推定された４つの配列が視床下部細胞から同定され、ここではそれぞれ配列識別子SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2 、 SEQ ID NO: 3 、 SEQ ID NO: 4 を有するＡGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202と命名された。もう一つ挙げると、AGT-203（SEQ ID NO:5）が骨格筋で異なって発現された。
【００１４】
差異発現とは、ある一組の条件下で他方と比較して、遺伝子配列の発現レベルにおける上昇を意味する。ある実施態様では、AGT-106の発現は、痩せた動物と比べ餌を与えた動物において上昇した。太った動物では、AGT-106は餌を与えた場合でも抑制されることが見出された。AGT-106は、空腹に反応して、エネルギー利用及び体重の調節に関与する。AGT-113は、痩せた健康な動物と比べ、糖尿病の肥満症の動物でより高く発現する。このことはAGT-113が体重調節とエネルギー・ホメオスタシスに関与しており、そして視床下部でのインシュリンの作用やインシュリン抵抗性にも関与していることを示唆する。AGT-201はマクロ分析を用いて同定されたが、AGT-201は飢えた動物の方が発現は低い。AGT-201は、飢えとエネルギー・ホメオスタシスへの中枢反応に関与する。AGT-201は糖尿病においても一つの役割を持っているようである。AGT-202もマクロ分析によって同定され、絶食の動物と比較して餌を与えた動物の視床下部で上昇が見られ、エネルギー調節及び／又は体重維持に関与している可能性がある。最後に、AGT-203は、太った糖尿病の動物に対する痩せた糖尿病でない動物では、マクロアレイ分析を使用すると骨格筋で異なって発現された。AGT-203は、骨格筋でのグルコース代謝や脂肪代謝において一つの役割を持っており、そのため体重とインシュリン作用に影響を与える可能性がある。AGT配列の概要は表1に示す。
【００１５】
これらの変動して発現する配列を同定すれば、発現産物と拮抗でき又これを助長できる分子の合理的デザイン及び／又は選択を可能にし、及び／又はスクリーニング検定法の開発を可能にする。スクリーニング検定法は、たとえば、特定の対象の生理的状態を評価する工程を含む。
【００１６】
従って、本発明の一つの側面は、タンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、模倣体をコードするヌクレオチド配列若しくはコードする配列に相補的な配列を含む核酸分子であって、痩せた動物と比べ肥満動物の視床下部組織若しくは筋肉組織でより大量に発現される核酸分子を提供する。又は、あるいは加えて、この核酸分子は絶食の動物よりも餌を与えられた動物の視床下部組織又は筋組織においてより多く発現される。
【００１７】
好ましい実施態様では、核酸分子はSEQ ID NO:1、若しくはSEQ ID NO:2、若しくはSEQ ID NO:3、若しくはSEQ ID NO:4、若しくはSEQ ID NO:5で実質的に表されるようなヌクレオチド配列、又は、SEQ ID NO:1、若しくはSEQ ID:NO2、若しくはSEQ ID NO：3、若しくはSEQ ID NO：4若しくはSEQ ID NO:5のすべて若しくは一部と少なくとも約30%の類似性を持ち且つ／又は42℃での低ストリンジェンシー条件下でSEQ ID NO:1、若しくはSEQ ID NO:2、若しくはSEQ ID NO:3、若しくはSEQ ID NO:4、若しくはSEQ ID NO：5又はこれらの相補形の一つ以上とハイブリッド形成をすることができるヌクレオチド配列を含む。
【００１８】
本発明の別の一側面は、痩せた動物と比較すると太った動物の視床下部組織でより多く生産され、及び／又は絶食の動物と比較すると餌を与えた動物の支障下部組織でより多く生産される、単離された分子、若しくはその同族体、類似体、又は模倣体を提供する。
【００１９】
該分子は一般的にタンパク質であるが、ｍRNA、イントロン、又はエキソンであることもある。
【００２０】
該分子は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、若しくはSEQ ID NO:5で実質的に表されるヌクレオチド配列、又ははSEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、若しくはSEQ ID NO:5のすべて又は一部と少なくとも30%の類似性を持ち、且つ／又は、42℃の低ストリンジェンシー条件下で、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、若しくはSEQ ID NO:5とハイブリッドを形成することができるヌクレオチド配列によってエンコードされる。
【００２１】
この側面では、該分子は本ヌクレオチド配列の発現産物であると考えてよい。
【００２２】
本発明の好ましい遺伝子配列は、本明細書では、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203と呼ぶ。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203によりコードされる発現産物は本明細書ではそれぞれAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203と呼ぶ。好ましい発現産物はタンパク質である。
【００２３】
本発明の更なる側面は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203により定義されるタンパク質などの発現産物又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203のアゴニスト若しくはアンタゴニストを、薬学的に許容しうる一つ以上の担体及び／又は希釈剤と共に含む組成物に関する。
【００２４】
さらに、本発明は、被験体を治療する方法であって、治療上有効量のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体、又はそれを含む遺伝子配列、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203のアゴニスト若しくはアンタゴニスト、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の遺伝子発現を、治療を行なうのに十分な時間及び条件の下で被験体に投与する工程を含む方法を意図する。
【００２５】
本発明のこの側面ならびに他の側面に基づき、本発明で意図された治療には、肥満症、拒食症、体重維持、エネルギーの不均衡、ならびに糖尿病が含まれるが、これらに限定されない。治療は医薬組成物の投与によりあるいは遺伝子治療の場合遺伝子配列の投与によって行いうる。治療は畜産業に重要な動物などの動物だけでなく、人間も対象として意図される。
【００２６】
本発明のさらに別の一側面は、肥満症、拒食症、体重維持、エネルギーの不均衡、及び／又は糖尿病のような状態、これらに限定されないが、を監視若しくは診断する際に使用するための診断薬に関する。この診断薬はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体に対する抗体、及び種々の技術中でもＰＣＲ、ハイブリダイゼーション、ＲＦＬＰに有用な遺伝子配列に対する抗体から選択される。
【００２７】
本明細書を通じて使用される配列識別子の要約は表２に示す。
【００２８】
【表１】
2004533810.tif 000002
【００２９】
【表２】
2004533810.tif 000003
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
本発明は、一部では、とりわけエネルギー均衡の調節、肥満症及び糖尿病、及び／又は筋発達と関連する、新しい遺伝子の同定に基づいている。該遺伝子は、痩せた動物と太った動物の間、及び／又は餌を与えた動物と絶食動物の間で、視床下部又は骨格筋の mRNAのディファレンシャル・スクリーニング又はマクロアレイ分析を含むいくつかの手段によって同定された。
【００３１】
「ディファレンシャル」アレイという用語は、同じ動物又は別の動物の、別のタイプの組織での核酸配列の発現と比べた場合のあるタイプの組織での核酸配列の発現を含むその最も広い意味で使用する。「別の」動物とは、同じ動物であるが餌を与えたものと与えないものといった食道状態が異なるものを含む。マクロアレイ（即ち、膜に基づくマイクロアレイ）分析は、ディファレンシャル・ハイブリダイゼーションの特性を示す核酸発現産物（例えば、mRNA又は PCR産物）の配列の集合を含むことが好ましい。
【００３２】
従って、本発明の一側面では、発現産物又はその誘導体、同族体、類似体、及び模倣体をコードするヌクレオチド配列又はそれをコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、痩せた動物と比べると太った動物の視床下部又は筋組織により大量に発現する核酸分子を提供する。
【００３３】
関連する実施態様では、発現産物又はその誘導体、同族体、類似体及び模倣体をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、絶食の動物と比べると餌を与えた動物の視床下部又は筋組織でより大量に発現される核酸分子を提供する。
【００３４】
該発現産物はタンパク質又は mRNA であることがあり、あるいは切断されたエキソン又はイントロン（例えば、RNA構築物由来の）であってもよい。
【００３５】
「痩せた」と「太った」という用語は、最も一般的な意味に使用するが、肥満症を測定する標準的な基準と比較して考慮されなければならない。一般的に、人間が対象の場合、肥満症の定義はBMI＞30（リスク・ファクター・プレバレンス・スタディー・マネジメント・コミティー, Risk Factor Prevalence Study: Survey No.3 1989 。キャンベラ：ナショナル・ハート・ファウンデーション・オブ・オーストラリア・アンド・オーストラリアン・インスティチュート・オブ・ヘルス, 1990；ウォーターズとベネット, 「心臓血管病の危険因子：オーストラリアのデータの概要」, キャンベラ：オーストラリアン・インスティチュート・オブ・ヘルス・アンド・ウェルフェア、1995）。
【００３６】
太った動物と痩せた動物の効果を研究するために動物モデルが便宜的に採用されるであろう。とりわけ、本発明では食餌誘発型肥満症及びNIDDMの動物モデルとしてプサモミス・オベズス（イスラエル・サンド・ラット）動物モデルを用いて例証する。その天然の砂漠での習性である活発な生活様式と塩性低木の食餌により、プサモミス・オベズスは痩せと血糖正常状態を保っている（シャフリルとガットマン, J Basic Clin Physiol Pharm４: 83-99, 1993）。しかしながら、実験室での無制限摂取の食餌設定では（この設定では他の動物の多くは健康のままである）、ある範囲の病理生理学的反応が見られる（バーネットら, Diabetologia 37: 671-676, 1994a ; バーネットら, Int. J. Obesity 18: 789-794, 1994b; バーネットら, Diabete Nutr Metab 8: 42-47, 1995）。生後16週までで、これらの動物の半分以上が肥満症になり、およそ3分の1がNIDDMを発症する。過食の動物だけが高血糖症が発症し、プサモミス・オベズスにおける肥満症とNIDDMの病理生理学における過剰なエネルギー摂取の重大性が浮き彫りになる（コリアら, Ann New York Acad Sci 827: 50-63, 1997a ; ウォルダーら, Obesity Res 5: 193-200, 1997a）。高インシュリン血症、異脂質血症、ならびに耐糖能障害を含む他の表現形が発見された（コリアら、[1997a; 前掲];コリアら、Exp Clin Endocrinol Diabetes 105: 36-37, 1997b）。プサモミス・オベズスは、ある範囲の体重分布、及び「膵臓のスターリング曲線」として知られる、反転したＵの形をした血糖値とインシュリン・レベルの関係を含む、ヒト集団で見出されたパターンに極めて類似する連続曲線を形成する血糖値とインスリンレベルを示す。肥満症とNIDDMの病因と病理生理学の研究の理想的なモデルとするのは、プサモミス・オベズスの表現型反応である。
【００３７】
プサモミス・オベズス動物は、便宜上３つのグループ、すなわち、痩せた正常血糖且つ正常インシュリンのグループＡ動物、太った正常血糖且つ高インシュリンのグループＢ動物、ならびに、太った高血糖且つ高インシュリンのグループＣの動物に分類する。
【００３８】
本発明のもう一つの側面は、発現産物又はその誘導体、同族体、類似体、模倣対をコードするヌクレオチド配列若しくはコードする配列に相補的な配列を含む核酸分子であって、該ヌクレオチド配列がSEQ ID NO：1、若しくはSEQ ID NO:2、若しくはSEQ ID NO:3、若しくはSEQ ID NO：4、若しくはSEQ ID NO:5で実質的に表されるもの、又は、該ヌクレオチド配列がSEQ ID NO：1、若しくはSEQ ID NO:2、若しくはSEQ ID NO:3、若しくはSEQ ID NO：4、若しくはSEQ ID NO:5のすべて若しくは一部と30％の類似性を持ち且つ／又は42℃での低ストリンジェンシー条件下でSEQ ID NO：1、若しくはSEQ ID NO:2、若しくはSEQ ID NO:3、若しくはSEQ ID NO：4、若しくはSEQ ID NO:5又はこれらの相補形の一つ以上とハイブリッド形成をすることができるものであり、痩せた動物と比較した場合太った動物の視床下部組織若しくは筋組織で、及び／又は絶食の動物と比較した場合い餌を与えた動物の視床下部組織若しくは筋組織でより大量に発現される核酸分子を提供する。
【００３９】
本明細書で言う類似性は、一般的に、少なくとも15個の連続した若しくは実質的に連続したヌクレオチド、あるいは少なくとも５つの連続した若しくは実質的に連続したアミノ酸残基の比較のレベルにおいてである。好ましい類似度は、少なくとも約40％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％、ならびに少なくとも約90％若しくはそれ以上である。
【００４０】
本明細書で使用される「類似性」という語は、ヌクレオチドレベル若しくはアミノ酸レベルで比較される配列間の正確な同一性を含む。ヌクレオチドレベルで同一性がない場合は、「類似性」は、結果として異なるアミノ酸であるがそれにもかかわらず構造的、機能的、生化学的、及び／又はコンホーメーション的なレベルで互いに関連する配列間の相違を含む。アミノ酸レベルで同一性がない場合は、「類似性」は、それにもかかわらず構造的、機能的、生化学的、及び／又はコンホーメーション的なレベルで互いに関連するアミノ酸を含む。とりわけ好ましい実施態様においては、類似性ではなく同一性のレベルで、ヌクレオチドの比較と配列の比較を行った。
【００４１】
２つ以上のポリヌクレオチド若しくはポリペプチド間の配列の関係を記述するために使用する用語として、「配列参照」、「比較窓」、「配列類似性」、「配列同一性」、「配列類似性パーセンテージ」、「配列同一性パーセンテージ」、「実質的な類似性」、ならびに「実質的な同一性」が挙げられる。「参照配列」は、ヌクレオチドとアミノ酸残基を含め、長さとして、少なくとも12であるが、高い頻度で15から18であり、30モノマー単位のように少なくとも25以上であることもよくある。２つのポリヌクレオチドはそれぞれが（1）２つのポリヌクレオチド間で類似する配列（即ち、完全なポリヌクレオチド配列の一部）、ならびに（2）２つのポリヌクレオチド間で相違する配列を含むことがあるため、２つ（又はそれ以上）のポリヌクレオチド間の配列の比較は、２つのポリヌクレオチドを「比較窓」の上で比較し、配列類似性の局所的な範囲を同定しそして比較することにより行われるのが典型的である。「比較窓」とは、参照配列と比較される通常12の連続した残基の概念的セグメントを指す。比較窓は、２つの配列の最適整列において、参照配列（追加もしくは欠失を含まない）と比べ、約20％以下の追加もしくは欠失（即ち、ギャップ）を含むことがある。比較窓に整列させるための配列の最適整列は、アルゴリズム（GAP、BESTFIT、FASTA、ならびにTFASTA。これらは、ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウェア・パッケージリリース 7.0、ジェネティクス・コンピュータ・グループ、575 サイエンス・ドライブ  マディソン郡、ウィスコンシン州、米国に含まれる。）をコンピュータで実施して、あるいは、観察及び選択された種々の方法のいずれかで作成された、最良の配置（即ち、比較窓上で最も高いホモロジーパーセンテージを生ずるもの）によって、実施されるうる。例えば、アルチュルら（Nucl. Acids Res. 25: 3389, 1997)により開示されたBLAST ファミリーのプログラムを参照してもよい。配列分析の詳細な議論は、オースベルら（『分子生物学における現在のプロトコル』ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社、1994-1998、15章）のユニット19.3にある。
【００４２】
「配列類似性」ならびに「配列同一性」という用語は、本明細書では、比較窓の上でヌクレオチド毎若しくはアミノ酸毎に、配列が同一である程度、又は機能的若しくは構造的に類似している程度を指すのに使用する。従って、例えば「配列同一性パーセンテージ」は、比較窓の上で最適に整列された２つの配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、A、T、C、G、I）若しくは同一のアミノ酸残基（例えば、Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys、ならびにMet）が双方の配列で生ずる位置の数を決定して適合した位置の数を求め、その適合位置の数を比較窓内の位置の総数（即ち、窓のサイズ）で割り、その結果を100倍して配列同一性のパーセンテージを求めることにより計算される。本発明においては、「配列同一性」はDNASISコンピュータプログラム（バージョン2.5 ウィンドウズ用。日立ソフトウェアエンジニアリング社製、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア、米国）で、ソフトウェアに添付のリファレンス・マニュアルで使用されているとおりの標準の設定値を使用して計算された「適合パーセンテージ」を意味すると解釈する。同様のコメントは配列類似性についても当てはまる。
【００４３】
本明細書で言う低ストリンジェンシーは、ハイブリッド形成用に、少なくとも約０から少なくとも約15％ v/vまでのホルムアミド及び少なくとも約1Mから少なくとも約2Mまでの塩を、並びに洗浄条件用に少なくとも約1Mから少なくとも2Mの塩を含み且つ包含する。一般的に、低ストリンジェンシーは約25-30℃から約42℃までである。この温度は変わる場合があり、ホルムアミドの置換、及び／又は、代わりのストリンジェンシー条件を与えるために、より高い温度が使用されることがある。代わりのストリンジェンシー条件は必要な場合に適用されうるが、それは、ハイブリッド形成用に、少なくとも約16％ v/vから少なくとも約30％ v/vまでのホルムアミドと少なくとも約0.5Mから少なくとも約0.9Mの塩を、並びに洗浄条件用に少なくとも約0.5Mから少なくとも約0.9Mの塩を含み且つ包含する中ストリンジェンシー、又は、ハイブリッド形成用に少なくとも約31％ v/vから少なくとも約50％ v/vのホルムアミドと少なくとも約0.01Mから少なくとも約0.15Mの塩を、並びに洗浄条件用に少なくとも約0.01Mから少なくとも約0.15Mの塩を含み且つ包含する高ストリンジェンシーなどである。一般的に、洗浄は Tm = 69.3 + 0.41 (G+C)%で実施される(マーマーとドーティ、J. Mol. Biol. 5: 109, 1962)。しかしながら、２本鎖DNAのTmは、適合しない塩基対の数が1%増えるごとに1℃減少する（ボナーとラスキー、Eur. J. Biochem. 46: 83, 1974）。これらのハイブリッド形成条件ではホルムアミドは任意選択的である。したがって、特に好ましいレベルのストリンジェンシーは次のように定義される：低ストリンジェンシーは6 x SSC緩衝液、25-42℃で0.1% w/v SDS、中ストリンジェンシーは、2 x SSC 緩衝液、20℃から65℃の温度範囲で0.1% w/v SDS、高ストリンジェンシーは、0.1 x SSC緩衝液、少なくとも65℃の温度で0.1% w/v。
【００４４】
本発明のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列は、自然に発生する遺伝子（若しくは対応するcDNA）又はタンパク質と全く同じ配列に対応することがあり、又は一つ以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失を有することがある。配列番号：１、配列番号：２、又は配列番号：３又は配列番号：４、又は配列番号：５で表されるヌクレオチド配列は、本明細書でAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203とそれぞれ呼ばれる遺伝子に相当する。対応するタンパク質は、それぞれAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203である。本明細書で言うAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203には、適切な場合には、ゲノム遺伝子、又はcDNAだけでなく、自然に発生した又は誘導した任意の誘導体への言及が含まれる。ヌクレオチド配列の置換、欠失、及び／又は付加とは別に、本発明は更に、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、ならびにAGT-203に相当するヌクレオチド配列の突然変異、断片、一部及び部分を包含する。
【００４５】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、ならびにAGT-203の発現パターンは、とりわけ、肥満症、糖尿病、及び／又はエネルギー代謝の一つ以上の調節への関与を示すために測定されてきた。痩せた動物に対する太った動物、及び餌を与えた動物に対する絶食の動物の視床下部組織若しくは筋組織におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の差別的発現に加えて、これらの遺伝子は筋及び肝臓をも含むが決してこれに限定されない他の組織においても発現することがある。対象としている核酸分子は、cDNA配列又はゲノム配列などのデオキシリボ核酸の配列であることが好ましい。ゲノム配列はエキソン及びイントロンをも含みうる。しかしながら、本発明はタンパク質に翻訳されるかどうかにかかわらず、遺伝子ネットワークにも関与するmRNA、イントロン及びエキソンにまで及ぶ。
【００４６】
同族体は、別の動物種からのAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203遺伝子であると考える。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203遺伝子は本明細書ではプサモミス・オベズスの視床下部から例証される。本発明は、しかしながら、人間、霊長類、家畜動物（例えば、牛、羊、豚、馬、ロバ）、実験動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ウサギ）、愛玩動物（例えば、猫、犬）、ならびに捕獲した野生動物（例えば、齧歯動物、キツネ、シカ、カンガルー）からのヌクレオチド配列、及び／又は機能によって決定されたような、同族体遺伝子にまで及ぶ。
【００４７】
本発明の核酸、とりわけAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203及びその誘導体と同族体は、単離若しくは精製された形であることがあり、及び／又は発現ベクターなどのベクターに連結される場合がある。発現は真核細胞系（例えば、哺乳類、昆虫、若しくは酵母の細胞）内と微生物細胞（例えば、E. Coli）内のいずれか、又は両方で起こる。
【００４８】
本発明の核酸分子の誘導体には、オリゴヌクレオチド、PCRプライマー、アンチセンス分子、共互抑に使用するのに適した分子、及び融合核酸分子が含まれる。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203及びそのmRNAを対象とするリボザイム及びDNA酵素も、本発明では意図される。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の誘導体と同族体は、42℃の低ストリンジェンシー条件下で、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、又は配列番号：５とハイブリッド形成できるヌクレオチド配列により、都合の良いことに包含される。
【００４９】
本発明は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の発現産物に及ぶ。好ましい発現産物は、タンパク質、又はその変異体、誘導体、同族体、若しくは類似体である。
【００５０】
誘導体には、融合タンパク質を含む天然ソース、合成ソース、若しくは組み替えソースからの断片、部分、部位、変異体、変種及び模倣体が含まれる。部分又は断片は、例えば、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の活性領域を含む。誘導体は、アミノ酸の挿入、欠失、若しくは置換から誘導される場合がある。アミノ酸の挿入誘導体は、単一若しくは複数のアミノ酸の配列内挿入だけでなく、アミノ及び／又はカルボキシル末端の融合をも含む。挿入アミノ酸配列の変種は、該タンパク質中に一つ以上のアミノ酸残基がタンパク質内の予め定めた位置に導入されたものであるが、得られる産物の適切なスクリーニングを使用すれば無作為の挿入も可能ではある。欠失変種は、配列から一つ以上のアミノ酸が除去されているのが特徴である。置換アミノ酸変種は、その配列内の少なくとも一つの残基が除去され、異なる残基がその位置に挿入されたものである。置換アミノ酸変種の一例は、アミノ酸の同類置換である。アミノ酸の同類置換には、通常次のグループの範囲内での置換が含まれる、即ちグリシンとアラニン、バリン，イソロイシン及びロイシン、アスパラギン酸とグルタミン酸、アスパラギンとグルタミン、セリンとトレオニン、リジンとアルギニン、フェニルアラニンとチロシンである。アミノ酸配列への付加は他のペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質との融合を含む。
【００５１】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の化学的及び機能的等価物は、これらの分子の機能的な活性の任意の一つ以上示す分子であると解釈すべきであり、化学的に合成若しくは天然産物スクリーニングなどのスクリーニング工程を経て同定されるような、なんらかのソースから誘導されうる。
【００５２】
該誘導体は、特定のエピトープを有する断片、又はペプチド、ポリペプチド若しくは他のタンパク質性又は非タンパク質性の分子と融合したタンパク質全体の部分を持つ断片を含む。
【００５３】
本発明のもう一つの側面は、痩せた動物と比べて太った動物の視床下部組織でより大量に生産される、単離されたタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体を提供する。
【００５４】
本発明のさらに好ましい側面では、単離されたタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体であって、該タンパク質が配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、若しくは配列番号：５で表されるようなヌクレオチド配列で実質的にコードされたアミノ酸配列であるか、又はその全体又は一部と少なくとも30%の類似性を持つアミノ酸配列を含むものであり、且つ、該タンパク質が痩せた動物と比べて太った動物の視床下部若しくは筋組織でより大量に生産されるものである、単離されたタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体を提供することである。
【００５５】
本発明のさらなる側面は、単離されたタンパク質、若しくはその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体であって、該タンパク質が配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、若しくは配列番号：５で実質的に表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、若しくは配列番号：５の全て又は一部と少なくとも30%の類似性を持ち且つ／又は配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、若しくは配列番号：５又はその相補形と42℃の低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされるものである単離されたタンパク質、若しくはその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体を対象とするものである。
【００５６】
本明細書でのAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203への言及は、単離された若しくは精製された自然発生のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203タンパク質分子、並びにその誘導体、同族体、類似体、及び模倣体への言及を含む。誘導体は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の部分、断片、及び一部、並びにAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203への１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加を含む。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203の誘導体は、都合の良いことに、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、若しくは配列番号：５と42℃の低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる分子によって包含される。
【００５７】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203の他の誘導体は、化学的類似物を含む。本明細書で意図するAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203の類似体は、側鎖修飾、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質合成の間での非天然型アミノ酸及び／又はその誘導体の組み込み、及び、クロスリンカーならびにタンパク質性分子又はその類似体に対するコンホーメーションについての制約を課す他の手法の使用を含むが、これに限定しない。
【００５８】
本発明で意図する側鎖修飾の例は、アルデヒドと反応させ次いでNaBH4で還元する還元的アルキル化、メチルアセティミデート（methylacetimidate）によるアミディネーション（amidination）、無水酢酸によるアシル化、シアン酸塩によるアミノ基のカルバモイル化、2、4、6-トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBS）によるアミノ基のトリニトロベンジル化、無水コハク酸とテトラヒドロフタル酸無水物によるアミノ基のアシル化、及び、ピリドキサル-5-リン酸塩との反応の後NaBH4での還元によるリジンのピリドキシル化（pyridoxylation）、などのアミノ基の修飾を含む。
【００５９】
アルギニン残基のグアニジン基は、2,3-ブタンジオン（butanedione）、フェニルグリオキサール、グリオキサールのような試薬を用いる複素環式縮合生成物の形成によって修飾されうる。
【００６０】
カルボキシル基は、O-アシルイソ尿素形成を介するカルボジイミド活性化に続いて、例えば相当するアミドへの誘導化により修飾されうる。
【００６１】
スルフヒドリル基は、ヨード酢酸又はヨードアセトアミド、システイン酸への過ギ酸酸化、他のチオール化合物による混合ジスルフィドの形成、マレイミド、無水マレイン酸及びその他の置換マレイミドとの反応、４-クロロ水銀フェニルスルホン酸、塩化フェニル水銀、2-クロロ水銀-4-ニトロフェノール、及び他の水銀剤を用いた水銀誘導体の形成、アルカリ性pHでのシアン塩酸とのカルバモイル化などの手法で修飾されうる。
【００６２】
トリプトファン残基は、例えば、N-ブロモスクシンイミドによる酸化、又は2-ヒドロキシ-5-ニトロベンジルブロマイド若しくはハロゲン化スルフェニルによるインドール環のアルキル化によって、修飾されうる。一方チロシン残基は、テトラニトロメタンでニトロ化し、3-ニトロチロシン誘導体を形成することにより改変されうる。
【００６３】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体によるアルカリ化、又はジエチルピロ炭酸塩によるN-カルベトキシル化によって行われうる。
【００６４】
ペプチド合成の間に非天然型アミノ酸及び誘導体を組込む例には、ノルロイシン、4-アミノ酪酸、4-アミノ-3-ヒドロキシ-5-フェニルペンタン酸、6-アミノヘキサン酸、t-ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、サルコシン、4-アミノ-3-ヒドロキシ-6-メチルヘプタン酸、2-チエニルアラニン、及び／又は、アミノ酸のD-異性体の使用を含むが、これらに限定されない。本明細書で意図する非天然型アミノ酸の一覧を表３に示す。
【００６５】
【表３】
2004533810.tif 000004
【００６６】
【表３−１】
2004533810.tif 000005
【００６７】
【表３−２】
2004533810.tif 000006
【００６８】
【表３−３】
2004533810.tif 000007
【００６９】
架橋剤は、例えば、 (CH2)nスペーサ基（n=1からn=6まで）を有する２官能性イミドエステル、グルタルアルデヒド、N-ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのホモ−２官能性架橋剤、及び、通常はN-ヒドロキシスクシンイミドのようなアミノ反応性部分と、マレイミド若しくはジチオ（SH）の部分若しくはカルボジイミド（COOH）のように別の基と特異的に反応する部分を含むヘテロ−２官能性試薬を用いて、３Dコンホーメーションを安定させるために使用できる。さらにペプチドは、たとえば、CαとNα-メチルアミノ酸の組込み、Cαアミノ酸原子とCβアミノ酸原子間に２重結合の導入、及びN末端とC末端間、2つの側鎖間、又は側鎖とN末端若しくはC末端間のアミド結合の形成のような共有結合の導入による環状ペプチド若しくは類似体の形成により、コンホーメーション的に制約することができる。
【００７０】
このような修飾は全て、体内投与プロトコルにおける使用、又は診断目的での使用のためにAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の分子を安定させるのにも役立ちうる。
【００７１】
本発明の核酸分子は、単離された形か、又は発現ベクターのようにベクターに連結されていることが好ましい。「単離された」とは、核酸分子が少なくとも１度の精製工程を経たことを意味し、例えば、分子量、コード化活性、ヌクレオチド配列、塩基組成、又はその他の便利な手段で決定された場合、他の組成物に対して、これは少なくとも約１０％の本核酸分子、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約３０％、それよりも好ましくは少なくとも約４０％〜５０％、さらに好ましくは少なくとも約６０〜７０％、もっと好ましくは８０〜９０％若しくはそれ以上の本核酸分子を含む組成物によって便宜的に定義される。本発明の核酸分子はまた、好ましい実施態様においては、生物学的に純粋であると考えてよい。
【００７２】
「タンパク質」という用語は、ペプチド、ポリペプチド、ならびにタンパク質を包含すると解釈されるべきである。タンパク質はグリコシル化されてもされなくてもよく、且つ／又はアミノ酸、脂質、炭水化物、若しくは他のペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質などの、タンパク質に融合、連結、結合又はその他の方法で結合した他の様々な分子を含んでいてもよい。本明細書で以降「タンパク質」とは、アミノ酸の配列を含むタンパク質、並びにアミノ酸、脂質、炭水化物、若しくはその他のペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質のような他の分子と結合したタンパク質をも含むものとする。
【００７３】
特に好ましい実施態様では、AGT-106に相当するヌクレオチド配列は、配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列を含むcDNA配列、又は配列番号：１に類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体、若しくは類似体である。
【００７４】
別の特定の好ましい実施態様では、AGT-113に相当するヌクレオチド配列は配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列を含むcDNA配列、又は配列番号：２に類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体、若しくは類似体である。
【００７５】
また別の特に好ましい実施態様では、AGT-201に相当するヌクレオチド配列は、配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列を含むcDNA配列、又は配列番号：３に類似性有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体、若しくは類似体である。
【００７６】
さらに別の特に好ましい実施態様では、AGT-202 に相当するヌクレオチド配列は配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列を含むcDNA、又は配列番号：４に類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体、及び類似体である。
【００７７】
また別の特に好ましい実施態様では、AGT-203 に相当するヌクレオチド配列は配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列を含むcDNA、又は配列番号：５に類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体である。
【００７８】
該核酸分子は、原核細胞（例えば、大腸菌）又は真核細胞（例えば、酵母菌、かび細胞、昆虫の細胞、哺乳類の細胞、及び植物の細胞）において発現できる発現ベクターに連結されうる。該核酸分子は、例えばシグナルペプチドのような別の実体をコードする核酸分子と連結又は融合、若しくは他の方法で結合されうる。該核酸分子はまた、3'末端部分と5'末端部分のいずれか、又は3'末端部分と5'末端部分の両方で融合、連結若しくは他の方法で結合した追加のヌクレオチド配列の情報をも含みうる。該核酸分子はまた、発現ベクターなどのベクターの一部であってもよい。後者の実施態様は、本発明でその形状が包含されるスフィンゴシンキナーゼの組み換え型の生産を促進させる。
【００７９】
本発明は上で定義したように、該核酸分子の発現産物にまで及ぶ。この発現産物は好ましくはタンパク質であるが、ｍRNA、RNA、イントロン、及びエキソンにまで及ぶ。
【００８０】
該発現産物はそれぞれ配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４若しくは配列番号：５によりコードされる、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、及びAGT-203であり、あるいはその誘導体、類似体、同族体、化学的等価物、若しくは模倣体であることが好ましい。
【００８１】
本発明のもう一つの側面は、下記のタンパク質、即ち
（i）痩せた動物に比べ太った動物の視床下部組織若しくは筋組織で異なって発現される核酸分子によりコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物又は模倣体、
（ii）絶食した動物に比べ餌を与えられた動物の肝臓組織で異なって発現される核酸分子によりコードされるタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物又は模倣体、
（iii）配列番号：１に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（iv）配列番号：２に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（v）配列番号：３に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（vi）配列番号：４に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（vii）配列番号：５に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又は、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、その誘導体、同族体若しくは類似体又はこの配列に少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（viii）配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ix）配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（x）配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（xi）配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（xii）配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（xiii）ホモ二量体型であるパラグラフ（i）〜（xii）のいずれか一つで定義されたようなタンパク質、及び
（xiv）ヘテロ二量体型であるパラグラフ（i）〜（xii）のいずれか一つで定義されたようなタンパク質、
から成るリストから選択される単離されたタンパク質を対象とする。
【００８２】
本発明のタンパク質は、単離された形であるのが好ましい。「単離された」という用語が意味するのは、タンパク質が少なくとも一度の精製工程を経ていることであり、これは、分子量、アミノ酸配列、又はその他の便利な手段により決定された場合、他の組成物と比べ、例えば少なくとも約１０％の本タンパク質、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも約３０％、それよりも好ましくは少なくとも約４０％〜５０％、さらに好ましくは少なくとも約６０〜７０％、もっと好ましくは８０〜９０％若しくはそれ以上の本タンパク質を含む組成物によって便利に定義される。
【００８３】
本発明の理論や作用様式を制限することなしに、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現は体重及び中性脂肪の循環に関係があると考えられる。これらの遺伝子発現の修飾は、とりわけエネルギー摂取に及ぼす効果及び糖質／脂質の代謝に及ぼす効果によって、エネルギー均衡を調節すると考えられる。エネルギー摂取の効果は中枢神経系に仲介されるようであるが、糖質と脂質の両方の代謝に及ぼす末梢神経の効果もありそうである。これらの遺伝子の発現はまた、絶食と摂食でも調節されるようであり、従ってこれらの遺伝子若しくはその発現産物の発現及び／又は活性を調節することは、体重、及び糖質代謝と脂質代謝を含むエネルギー代謝の両方を調節するメカニズムを提供することができるであろう。
【００８４】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203を同定すると、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現を調節でき、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の活性を調節できる様々な治療用分子の作成が可能になる。本発明が意図するモジュレーターは、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203発現のアゴニストとアンタゴニストを含む。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203発現のアンタゴニストには、アンチセンス分子、リボザイム及び共抑制分子が含まれる。アゴニストはプロモータ活性を増進させる分子、又は負の調節メカニズムを妨害する分子を含む。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203のアンタゴニストは抗体及び阻害剤ペプチド断片を含む。このような分子は全て、最初は細胞膜を貫通できるように修飾される必要があるかもしれない。その代わりに、遺伝要素を導入してAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現を調節するためにウィルス性因子を用いてもよい。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203が、レプチンをコードする ob 遺伝子のような他の遺伝子と一緒に作用する限りにおいては、治療用分子はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、並びに ob 遺伝子、若しくはその翻訳産物を標的としうる。
【００８５】
従って、本発明は、哺乳動物におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の一つ以上の発現を調節する方法であって、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203遺伝子を、高レベル調節若しくは低レベル調節、又はその他の方法でAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現を調節するのに十分な時間及び条件の下で、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はGT-203の発現のモジュレーターの効果的な量と接触させる工程を含む方法を意図する。例えば、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203をコードする核酸分子又はその誘導体若しくは同族体を、ある細胞に導入してその細胞のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の生産能力を高めてもよいし、逆に、オリゴヌクレオチドのようなAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203のアンチセンス配列を導入して、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203分子の利用可能性を減少させてもよい。
【００８６】
本発明のもう一つの側面では、哺乳動物におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の活性を調節する方法であって、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の活性を増加若しくは減少させるのに十分な時間及び条件の下で、ある分子の調節に有効な量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法を意図する。該分子はタンパク質性の分子、又は化学的実体であってもよく、またAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の誘導体又はその配位子であってもよい。
【００８７】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現のレベルの調節は、肥満症、拒食症、エネルギー不均衡、糖尿病、代謝症候群、ジスリピデミア（dyslipidemia) 、高血圧症、インシュリン抵抗性及び筋発達状態のような、様々な状態の治療に重要である。より痩せた動物、あるいは必要であれば、より太った動物を作り出すのに役立つことはまた、農産業にも有用である。従って、本発明で意図する哺乳動物は、人間、霊長類、家畜動物（例えば、豚、羊、牛、馬、ロバ）、実験室試験動物（例えば、マウス、ネズミ、モルモット、ハムスター、ウサギ）、愛玩動物（例えば、犬、猫）、及び捕獲された野生動物（例えば、キツネ、カンガルー、鹿）を含むが、これに限定されない。
【００８８】
従って、本発明はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203のアゴニスト体及びアンタゴニスト体に加え、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203アミノ酸及び核酸分子の治療的及び予防的使用を意図する。
【００８９】
本発明は従って、哺乳動物におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現を調節する方法であって、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現を高レベル調節又は低レベル調節若しくは他の方法で調節するのに十分な時間及び条件の下で、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203遺伝子を、ある薬剤の効果的な量と接触させる工程を含む方法を意図する。例えばオリゴヌクレオチドのようなアンチセンス配列が、活用されるであろう。
【００９０】
逆に、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203をコードする核酸分子又はその誘導体を、一つ以上の特定機能の活性を高レベル調節するために導入してもよい。
【００９１】
本発明の別の一側面では、被験体におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性を調節する方法であって、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性を増加又は減少させるのに十分な時間及び条件の下で、ある薬物の調節に有効な量を該被験体に投与する工程を含む方法を意図する。
【００９２】
ある薬物を哺乳動物に投与することによる該活性の調節は、
（i）AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現を調節する分子、
（ii）AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203のアンタゴニストとして機能する分子、
（iii）AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203のアゴニストとして機能する分子、
を含むタンパク質性又は非タンパク質性の分子、これらに限定されないが、を該哺乳動物に導入する工程を含む幾つかの手法の一つによって達成できる。
【００９３】
タンパク質性分子は、融合タンパク質又は以下に挙げる、例えば自然産物スクリーニングなどを含む、天然の供給源又は組み換え供給源に由来しうる。該非タンパク質性分子は、例えば核酸分子であったり、例えば自然産物スクリーニングなどの天然ソースに由来したり、化学的に合成されたりすることがある。本発明では、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の化学的類似体、又はアゴニスト若しくはアンタゴニストとして作用できる低分子を意図する。化学的アゴニストは必ずしもAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203に由来する必要はないが、特定の構造的な類似性を共有する場合がある。代わりに、化学的アゴニストは、特に、ある種の生理化学的な特性を模倣して特別に設計してもよい。アンタゴニストは、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203が正常な生物学的機能を実行するのを阻止、抑制、若しくは他の方法で阻害できる何らかの化合物であってもよい。アンタゴニストには、哺乳動物細胞内におけるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203遺伝子又はmRNAの転写若しくは翻訳を阻止するモノクローナル抗体及びアンチセンス核酸が含まれる。発現の調節は、抗原、RNA、リボザイム、DNAザイム、RNAアプタマー、及び抗体を用いて達成しうる。
【００９４】
タンパク質性又は非タンパク質性の分子は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202／又はAGT-203の発現、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性に、直接的あるいは間接的に作用して調節しうる。該分子は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、あるいはAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203に結合すると直接的に作用し、発現又は活性を調節する。該分子は、他の分子がAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現、あるいはAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性を直接的あるいは間接的に調節するAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203以外の分子、あるいはAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203以外の分子と結合すると間接的に作用する。従って本発明の方法は、調節段階のカスケードの誘発を介する AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現あるいはAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性の調節を包含する。
【００９５】
本発明に基づいて哺乳動物に投与される該分子はまた、これらの分子を標的の細胞に特異的に送達するモノクローナル抗体のような標的化手段と連結させてもよい。
【００９６】
本発明の更なる側面は、哺乳動物の疾病状態に関わる本発明の使用に関する。例えば、本発明は肥満症、拒食症、糖尿病、又はエネルギー不均衡の治療的処置又は予防的処置における使用において特に有用であるが、これらに限定されない。
【００９７】
従って、本発明の別の一側面は、肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡の一つ以上の症状により特徴付けられる状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の発現を調節するのに十分な、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203の活性を調節するのに十分な時間及び条件の下で、ある薬物の有効量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法に関する。
【００９８】
別の一側面において、本発明は肥満症、拒食症、糖尿病又はエネルギー不均衡の一つ以上の症状を特徴とする疾病状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、有効量のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、あるいはAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203を該哺乳動物に投与する工程を含む方法に関する。
【００９９】
「有効量」とは、所望の免疫反応を手に入れたり、発症を遅らせたり、進行を抑制し、又は治療すべき個体、治療すべき個体の分類学的な群のある特定の状態の発症若しくは進行の全体を停止させ、望ましい保護の程度、ワクチンの形成、医学的状態及び他の関連要因の評価を達成するのに少なくとも部分的に必要な量を意味する。この量は、日常の試行を通じて決定できるかなり広い範囲にわたることが予想される。
【０１００】
これらの方法に従って、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又は該分子の発現又は活性を調節できる薬物は、他の化合物若しくは他の分子の一つ以上と共に投与されることがある。「共に投与される」とは、同じ製剤中での同時投与、又は二つの異なる製剤中で、同じ経路又は異なる経路による同時投与、又は同じ経路又は異なる経路による逐次投与を意味する。「逐次」投与とは、２種類の分子の投与間隔が数秒、数分、数時間及び数日の時間差であることを意味する。これらの分子は任意の順序で投与されうる。
【０１０１】
さらに別の一側面では、本発明は、肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はその誘導体、同族体、類似体の発現を調節できる薬物の使用に関する。
【０１０２】
さらに別の一側面では、本発明は、肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物、及び模倣体の活性を調節できる薬物の使用に関する。
【０１０３】
本発明の更なる側面は、肥満症、拒食症、糖尿病、筋発達の低下及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はその誘導体、同族体及び類似体、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はその誘導体、同族体、模倣体、化学的等価物及び模倣体の使用に関する。
【０１０４】
本発明のまた別の一側面は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又はその誘導体、同族体及び類似体の発現を調節するのに用いられる薬物に関する。
【０１０５】
更なる側面は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、及びその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物及び模倣体の活性を調節するのに用いられる薬物に関する。
【０１０６】
本発明のまた他の側面は、肥満症、拒食症、糖尿病、筋発達の低下及び／又はエネルギー不均衡の一つ以上の症状によって特徴付けられる状態を治療するために使用されるAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／若しくはAGT-203、若しくはその誘導体、同族体、類似体、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／又はAGT-203、又は AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及び／若しくはAGT-203、若しくはその誘導体、類似体、同族体、化学的等価物及び模倣体に関する。
【０１０７】
本発明の関連する側面において、治療を受ける哺乳動物は、治療的処置若しくは予防的処置の必要な、人間又は動物でありうる。
【０１０８】
従って、本発明では一つの実施例において、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の活性のモジュレーター、並びに薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤の一つ以上を含む組成物を意図する。別の実施態様においては、この組成物はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体、並びに薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤の一つ以上を含む。該組成物はまた、レプチン及びレプチン活性若しくはob発現のモジュレーターを含んでもよい。
【０１０９】
略して、このような組成物中のこのような成分を「活性成分」と称する。
【０１１０】
注射用に適した形状の活性成分の組成物は、無菌の水溶液（ここでは水溶性）と無菌の注射可能な溶液の即時調製用の無菌の粉末を含む。全ての場合において、該形状は無菌でなければならず、容易に注入できる程度の流体でなければならない。該形状は、製造及び保存の条件において安定していなければならず、細菌や菌類などの微生物による汚染作用から保護されなければならない。
【０１１１】
該担体は、溶剤、又は例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレン・グリコール及び液体ポリエチレングリコール、及びその類）、その適当な混合物、ならびに植物性油脂を含む媒体である。
【０１１２】
微生物の作用は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、サーメローサル（thirmerosal）、及びその類の、様々な抗細菌性薬物及び抗真菌性薬物により、防ぐことができる。多くの場合、例えば糖や食塩などの等張性薬物を含むことが望ましい。例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの、吸収遅延性薬物を成分中で使用すると、注射可能な成分の長時間吸収が達成できる。
【０１１３】
無菌の注射用溶液は、活性成分を必要量、任意選択的には他の成分と共に、適切な溶媒に組込み、必要であれば、続いて例えば濾過滅菌、放射線照射、及び他の便利な手段で滅菌して調製する。無菌注射用溶液の調製用の無菌粉末の場合は、あらかじめ濾過滅菌したその溶液から、活性原料に別の所望の成分を加えた粉末が得られる、真空乾燥技術ならびに凍結ー乾燥技術が好ましい調製方法である。
【０１１４】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、並びにAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203が、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203そのものも含め、適切に保護されている場合は、これらは例えば不活性希釈剤若しくは同化可能な食用担体と共に経口投与されたり、又は硬い殻又は柔らかい殻のゼラチンカプセルに封入されたり、又は圧縮して錠剤にされたり、又は食事の食物中に直接組み入れられうる。経口の治療的投与のために、活性化合物は賦形剤に組み入れられ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、サスペンション、シロップ、ウェハースなどの形で使用される場合がある。このような組成物及び調製物は、活性化合物の少なくとも１重量％を含むべきである。この組成物及び調製物のパーセンテージは、もちろん変化してもよく、便宜上、単位重量の約５％から約８０％の間であればよい。このような治療に有用な組成物に含まれる活性合成物の量は、適切な用量が得られるような量である。本発明の好ましい組成物又は調製物は、経口の投薬単位剤形が、0.1μgから2000mgの間の活性合成物を含むように調製される。
【０１１５】
錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどはまた、次に挙げるものも含む：トラガカントガム、アカシア、コーンスターチ若しくはゼラチンなどの結合剤、二カルシウムリン酸塩などの賦形剤、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び、スクロース、ラクトース若しくはサッカリンなどの甘味料、又はペパーミント、ウィンターグリーン油、又はチェリー香料のような香料が添加される場合がある。投薬単位剤形がカプセルである場合は、上に挙げた種類の原料に加えて、それは液状の担体を含んでもよい。他の様々な材料が被覆剤として、又は投薬単位の物理的形状をそれ以外の方法で変えるために存在してもよい。例えば、錠剤、ピル、若しくはカプセルは、セラック、糖、若しくはその両方で被覆されてもよい。シロップ又はエリキシル剤は、該活性合成物、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、色素、及びチェリー又はオレンジ香料などの香料を含んでもよい。もちろん、如何なる投薬単位剤形の調製に使用される如何なる原料も、薬学的に純粋であり、使用される量においては実質的に無害でなければならない。加えて、該活性合成物は、徐放性の調製物や製剤にも組み込んでよい。
【０１１６】
薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤は、溶媒、分散媒、被覆剤、抗細菌薬又は抗真菌薬、等張薬及び吸収遅延薬などのいずれか及び全てを含む。薬学的な活性物質にこのような媒体及び薬物を使用することは、当分野で良く知られている。従来の媒体若しくは薬物が該活性原料と不適合である場合のみを除いて、治療用組成物におけるその使用が意図される。補足的な活性成分もまた、該組成物に組み込むことができる。
【０１１７】
服用の容易さ及び服用量の均一性のために、投薬単位剤形においては、非経口用の組成物を製剤化することがとりわけ有利である。本明細書で使用するとき投薬単位剤形とは、治療対象の哺乳動物被験体への単位の投薬に適した物理的に分離した単位を指し、それぞれの単位は、必要な薬学的担体と共に所望の治療効果を引き出すために計算された予め定めた量の活性物質を含む。本発明の新規な投薬単位剤形の詳細は、（a）活性物質の独特の特性及び得られるべき特定の治療的効果、ならびに（ｂ）本明細書で詳細に開示したような、肉体上の健康を害している疾病状態の生きた被験体における病気の治療に用いるこのような活性物質を混合するという技術における固有の限界によって、決定付けられ、そしてこれらに直接的に依存するものである。
【０１１８】
主要な活性成分は、投薬単位剤形においてその十分な量が適切な薬学的に許容しうる担体と共に、便利な且つ効果的な投与のため混合される。たとえば、ある投薬単位剤形は、0.5μgから2000mgの範囲の量で主要な活性成分を含むことが可能である。比率で表すと、該活性化合物は、一般的に約0.5μから約2000mg/mlの担体中に存在することになる。補足的な活性成分を含む組成物の場合、その服用量は、該成分の通常の投与量や投与の方法を参照して決定される。
【０１１９】
一般論として、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の有効量は、0.01 ng/kg/体重から10,000 mg/kg/体重を超える範囲に及ぶ。代替的な量はは、0.1 ng/kg/体重から1000 mg/kg/体重以上の範囲に及ぶ。AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203は、治療される状態に応じ、分、時間、日、月、及び年毎に投与されうる。投与の経路は、変化してもよく、静脈内、腹膜腔内、皮下、筋肉内、鼻孔内、座薬により、注入により、点滴により、経口、又はその他の便利な手段を含む。
【０１２０】
該薬学的組成物はまた、標的細胞をトランスフェクトでき且つAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の発現、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の活性を調節できる核酸分子を運搬するベクターのような遺伝子物質を含んでもよい。該ベクターは、例えば、ウィルスベクターであってもよい。
【０１２１】
本発明のさらに別の側面は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、並びにその誘導体及び同族体の抗体を対象とする。このような抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであってもよく、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203に対して自然に発生した抗体から選択してもよく、又、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体若しくは同族体に対して特に形成させてもよい。後者の場合、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203又はその誘導体若しくは同族体は、まず、担体分子と一緒にする必要があるかも知れない。本発明の該抗体及び／又は組み換えAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体は、治療薬又は診断用薬として、特に有用である。
【０１２２】
例えば、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203並びにその誘導体は、ある種の自己免疫病、又はくは細胞死が起こっているところで発生することがある、自然に発生するAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203に対する抗体をスクリーニングするために使用できる。これらは、例えばある自己免疫病で発生しうる。また、ある特定の抗体は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203をスクリーニングするために使用できる。このような検定技術は当分野で良く知られており、例えばサンドイッチ検定法やELISAを含む。
【０１２３】
本発明のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203に対する抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよく、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203に対して自然発生する抗体から選別してもよく、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体に対して特に形成させてもよい。後者の場合、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203タンパク質はまず、担体分子と一緒にする必要があるかも知れない。代わりに Fab断片などの抗体の断片を用いてもよい。さらに、本発明は組み換え抗体及び合成抗体に及び、そして抗体のハイブリッドにまで及ぶ。「合成抗体」は本明細書では抗体の断片及びハイブリッドを含むと考える。本発明のこの側面の抗体は、とりわけ免疫療法に有用であり、また診療用の道具として、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203を精製する手段としても用いうる。
【０１２４】
例えば、特定の抗体はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203タンパク質をスクリーニングするために使用することができる。後者は、例えば細胞抽出物若しくは他の生体液中のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203のレベルをスクリーニングする手段として、又は培養上清液から組み換え手段によって作られたAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203を精製する手段として重要となるであろう。本明細書で意図する検定法の技術は、当分野で良く知られており、例えば、サンドイッチ検定法やELISAを含む。
【０１２５】
上で議論した最初に述べた抗体を対象とする何らかの第２の抗体（モノクローナル、ポリクローナル又は抗体の断片）を含むことは、本発明の範囲内である。第１抗体と第２抗体の両者は、検出検定で使用されることがあり、又は第一の抗体を市販されている抗免疫グロブリン抗体と共に使用してもよい。本明細書で意図するような抗体は、特にAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の任意の部分に特異的な任意の抗体を含む。
【０１２６】
ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体はいずれも、酵素若しくはタンパク質で免疫化されることにより入手でき、いずれのタイプも免疫検定に利用できる。両方のタイプの血清を得る方法は当分野で良く知られている。ポリクローナル血清は、あまり好ましくないが、適切な実験動物に効果的な量のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその抗原性部分を注射し、該動物から血清を回収し、特定の血清を既知の免疫吸着技術のいずれかで単離することにより比較的容易に調製される。この方法で生産した抗体は、事実上はどんな種類の免疫学的検定にも使用できるが、該生産物の潜在的な不均一性のため、一般的にはあまり好ましくない。
【０１２７】
免疫検定におけるモノクローナル抗体は、該産物の大量に生産できることと、その均質性のため、特に好ましい。不死の細胞系と免疫原性調製物に感作させたリンパ球を融合することにより誘導したモノクローナル抗体生産用のハイブリドーマ細胞系の調製は、当業者には良く知られた技術を用いて行うことができる（例えば、ドゥイラードとホフマン、ハイブリドーマの基本事実、Compendium of Immunology Vol. II, シュバルツ編, 1981; コーラーとミルスタイン、Nature 256: 495-499, 1975 ; コーラーとミルスタイン、European Journal of Immunology 6: 511-519, 1976）。
【０１２８】
本発明の別の一側面では、被験体からの生物試料中のAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、該生物試料を、複合体が形成されのに十分な時間及び条件の下で、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその抗原性誘導体若しくは同族体に対して特異的な抗体と接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法を意図する。
【０１２９】
該複合体の存在は、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の存在を示す。この検定法は、肥満症若しくは他の状態を発症させる性質を決定するため、又は治療計画をモニターするために定量化若しくは半定量化してもよい。
【０１３０】
AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の存在は、ウェスタンブロット法やELISA法などによるなどの幾つかの方法で得ることができる。米国特許 No. 4016043号公報、4424279号公報、及び4018653号公報に見られるとおり、広範囲にわたる免疫検定技術が利用できる。これらはもちろん、伝統的な競合的な結合検定だけでなく、非競合的なタイプの１部位検定、２部位検定の両者、又は「サンドイッチ」検定を含む。これらの検定はまた、標的に対する標識抗体の直接的な結合をも含む。
【０１３１】
サンドイッチ検定は中でも最も有用であり、一般的に使用されている検定法である。サンドイッチ検定法の様々な変法が存在するが、本発明ではそれらを全て包含するつもりである。簡単に述べると、典型的な前方検定では、無標識抗体が固体基板上に固定され、試験されるべき試料がその結合した分子と接触させられる。適当な期間、即ち、抗体と AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203の複合体が形成するのに十分な時間培養した後、次に検出可能な信号を発するレポーター分子で標識をつけられた、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203に対して特異的な第２抗体を添加し、抗体−AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202、AGT-203 −標識抗体という別の複合体が形成するのに十分な時間インキュベートさせる。未反応の物質を全て洗い流し、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の存在を、レポーター分子が発する信号を観察することにより測定される。その結果は、可視的信号の単純な観察による定性的なものであってもよく、又は既知の量のハプテンを含む対照用の試料と比較することによる定量的なものであってもよい。前方検定法の変法には、試料と標識抗体の両者が、結合抗体に同時に添加される同時検定を含む。これらの技術は、当業者に良く知られており、すぐに分かるように、任意の僅かな変法を含んでいる。本発明に基づく試料は細胞抽出、組織生検又は可能であれば血清、唾液、粘膜分泌物、リンパ液、組織液及び呼吸流体を含め、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203を含むかも知れないものである。該試料は、従って、一般的に生体液を含む生物試料であるが、発酵液体や細胞培養などからの上清液にも及ぶ。
【０１３２】
固体表面は、通常ガラス又はポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニール、ポリプロピレンである。該固体支持体は、管、ビーズ、マイクロプレートの円盤の形状、又は免疫検定法を実施するのに適した他の如何なる表面であってもよい。該結合工程は当技術分野においてはよく知られており、一般的には架橋共有結合、又は物理吸着から成り、ポリマー−抗体複合体を、該試験試料に備えて洗浄する。次に試験される試料の一部を該固相の複合体に添加し、該抗体中に存在する任意のサブユニットを結合させるのに十分な時間（例えば、２〜４０分、又はさらに都合がよければ一晩）及び相応しい条件(例えば、室温から約３７℃まで)の下で培養する。培養期間に続いて、該抗体サブユニットの固相を洗浄し、乾燥し、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203の一部に特異的な第２抗体と共に培養する。該第２抗体は、第２抗体がAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203と結合したことを示すために用いられるレポーター分子と連結させる。
【０１３３】
代替法は、該生物試料中の標的の分子を固定化する工程、次いで固定された標的を、レポーター分子で標識化され又は標識化されていない特異的抗体と接触させる工程を含む。標的の量とレポーター分子の信号の強さ次第では、結合された標的は、該抗体での直接標識により検出できるかもしれない。もう一つの方法では、第１抗体に特異的な標識化された第２抗体を、標的−第１抗体複合体と接触させて標的−第１抗体−第２抗体という第３抗体を形成させる。
【０１３４】
本明細書で使用されるとき「レポーター分子」とは、その化学的性質によって、抗原結合抗体を検出させる、分析的に同定可能な信号を発する分子を指す。検出は定性的でも定量的でもよい。この種の検定で最も一般的に使用されるレポーター分子は、酵素、発蛍光団、放射性核種を含む分子（即ち、放射性同位元素）のいずれか、及び化学発酵分子である。
【０１３５】
酵素免疫学的検定の場合、一般的に、酵素はグルタルアルデヒド、又は過ヨウ素酸を用いて第２抗体に結合させる。しかしながら、容易に認識されるように、幅広い種類の様々な結合技術が存在し、それらは熟練した技術者には容易に利用できるものである。一般的に使用される酵素には、数ある中でも、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリ・ホスファターゼが含まれる。これらの特定の酵素と共に使用される基質は、一般的には、該当酵素により加水分解された場合に、検出できる色の変化を生み出すために選択される。適切な酵素の例には、アルカリ・ホスファターゼとペルオキシダーゼが含まれる。上記の発色性基質ではなく蛍光性産物を生じる蛍光源基質を採用することも可能である。全ての場合において、酵素で標識された抗体を第１抗体ハプテン複合体に添加し、結合させ、過剰な試薬を洗い流す。次いで適切な基質を含む溶液を、抗体−抗原−抗体の複合体に添加する。該基質は第２抗体と連結した酵素と反応し、定性的な可視的信号を発するが、その信号は通常分光光度法によりさらに定量化して、該試料中に存在するハプテンの量を求めてもよい。「レポーター分子」はまた、ラテックスビーズ上の赤血球などのように、細胞の凝集若しくは凝集の阻害の使用にまで及ぶ。
【０１３６】
また、フルオレセイン及びローダミンのような蛍光性化合物は、自分の結合能力を変更することなしに化学的に抗体と結合しうる。ある特定の波長の光で照射されて活性化すると、蛍光色素で標識された抗体は光エネルギーを吸収し、分子内で励起状態を誘発し、次いで光学顕微鏡で視覚的に検出できる特徴的な色で光を放出する。EIAの場合と同様に、蛍光で標識された抗体は第１抗体−ハプテン複合体と結合させられる。結合していない試薬を洗浄して除いた後、残った第３複合体を適切な波長の光に曝露すると、観察される蛍光は目的のハプテンの存在を示す。免疫蛍光法及びEIA法は共に、当分野で十分に確立されており、本発明の方法にはとりわけ好ましいものである。しかしながら、放射性同位元素、化学発光分子又は生物発光分子のような他のレポーター分子が採用される場合もある。
【０１３７】
本発明では、AGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はその誘導体を検出するためのPCR分析を含むなどの、遺伝子検定法をも意図する。
【０１３８】
本発明の検定法は、ob又はレプチンと共同してAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203、又はAGT-106、AGT-113、AGT-201、AGT-202及びAGT-203を測定する方法にも及びうる。
【０１３９】
本発明は、下記の非限定的な実施例によりさらに説明する。
【実施例１】
【０１４０】
プサモミス・オベズスのコロニー
プサモミス・オベズスのコロニーはオーストラリア国，ビクトリア州，ギーロング，ワールンポンズのディーキン・ユニバーシティにおいて、増殖用の番いにアルファルフア及び標準的実験室食の食餌を自由に与えて維持される。動物を４週齢で乳離れさせ、エネルギーの12％が脂肪に、63％が糖質にそして25％がタンパク質に由来する標準的実験室食で飼育される（オーストラリア国, パケンハム, バラストック）。動物を、12-12 時間の明暗周期の湿度及び温度を制御した部屋（22±１℃）の中で飼育する。
【０１４１】
Ａ群の動物は痩せて正常血糖値且つ正常血中インスリン値であり、Ｂ群の動物は肥満で正常血糖値且つ高インスリン血症であり、Ｃ群の動物は肥満で高血糖症且つ高インスリン血症である。
【実施例２】
【０１４２】
実験動物
18週齢で動物の体重を測定し、餌を与えた状態で尾部静脈から血液を採取した。この動物を犠牲にし、直ちに組織を取り出し、秤量し、液体窒素中で凍結させ、-80 ℃で保存した。体脂肪パーセントは、総体重のパーセンテージとして表された腸間膜の、肩甲骨上の、腎周囲の、精巣上体の、そして筋肉内の（腓腹筋のヘッド間から）脂肪パッドの合算重量から見積もられた。動物をその血糖値及び血中インスリン濃度に基づいてＡ群、Ｂ群又はＣ群に分類した。高血糖症及び高インスリン血症に対する遮断値はそれぞれ８ミリモル／Ｌ及び 150μU/mlであった。絶食させた動物を秤量し、餌を与えた状態で採血し、次いで24時間絶食させた後、秤量し、犠牲の前に再度採血した。
【実施例３】
【０１４３】
分析法
血中グルコースの総量は酵素を用いるグルコース・アナライザー（モデル27, オハイオ, イエロー・スプリングズ・インスティチュート）により直ちに測定した。血漿インスリン濃度は二重抗体固相放射免疫検定法（スエーデン，カビ・ファルマシア・ダイアグノスティックス，ファデセフ）を用いて測定した。
【実施例４】
【０１４４】
ＲＮＡ抽出及び逆転写
ＲＮＡは各組織型について、トリゾール（TriZol)(メリーランド, ロックビルのライフ・テクノロジーズ) を用い製造者の勧めに従って組織から抽出した。ＲＮＡを 260 nm で分光光度法により定量し( カリフォルニア, フラートンのベックマン・インストルーメンツ) 、２μｇを１％w/v グリオキザル・アガロース・ゲルを通して電気泳動してその完全さをチェックした。このＲＮＡを次にオリゴ(dT)プライマー（ウィスコンシン，マジソンのプロメガ）と AMV逆転写酵素を用いて逆転写した。
【実施例５】
【０１４５】
統計的分析
全てのデータは平均値± S.E.M. として表す。一元配置分散分析を事後の最小有意差又はグームズ−ハウエル・テストと組み合わせて使用して群間の平均値を比較した、そして適当な場合はｔ−検定を使用した。遺伝子発現と表現型の間の関係を分析するため両側のピアソン相関を行なった。血糖値と血漿インスリン濃度を正規分布に近似させるため分析の前に対数変換を行なった。差はＰ＜0.05で有意であると考えた。
【実施例６】
【０１４６】
ディファレンシャル・ディスプレーＰＣＲ
ＲＮＡは、トリゾール（メリーランド, ロックビルのライフ・テクノロジーズ) を用いて組織から抽出し、ＤＮアーゼ処理（ライフ・テクノロジーズ）、フェノール：クロロホルム（４：１）抽出及びエタノール沈殿を行なった。ＲＮＡを 260 nm で分光光度法（カリフォルニア, フラートンのベックマン・インストルーメンツ) により定量し、２μｇを１％w/v グリオキザル・アガロース・ゲル（テキサス，オースチンのアンビオン）を通して電気泳動してその完全さをチェックした。次いで、このＲＮＡをスーパースクリプトII逆転写酵素（ライフ・テクノロジーズ）及び固定したオリゴ（dT）プライマーを用いて逆転写した。ディファレンシャル・ディスプレーＰＣＲは、餌を与えた状態及び絶食した状態の肥満及び痩せたプサモミス・オベズスから得た視床下部のｃＤＮＡ試料について、ＲＮＡイメージｍＲＮＡディファレンシャル・ディスプレー・システム（テネシー，ナシュヴィルのゲンハンター社）を用いて行なった。そのＰＣＲ産物を６％ w/v  ポリアクリルアミド・ゲル上で分離し、異なって発現されたＰＣＲ断片は乾燥したゲルをｘ線フィルムに露出させることにより可視化した。そのゲルから候補の帯を切り出し、適当なプライマーの組み合わせを用いるＰＣＲにより再増幅した。ABI PRISM Big-Dye ターミネーター・サイクル・シーケンシング・レディ・リアクション・キットを用いて配列決定反応を行い、ABI 373A DNAシーケンサー上で分析した。遺伝子データベースのサーチは、BLAST ネットワークサービスを用い、ナショナル・センター・フォア・バイオテクノロジー・インフォーメーションで行なわれた。
【実施例７】
【０１４７】
マクロアレイ
ＲＮＡは、トリゾール（メリーランド, ロックビルのライフ・テクノロジーズ) を用いて組織から抽出し、ＤＮアーゼ処理（ライフ・テクノロジーズ）、フェノール：クロロホルム（４：１）抽出及びエタノール沈殿を行なった。ＲＮＡを 260 nm で分光光度法（カリフォルニア, フラートンのベックマン・インストルーメンツ) により定量し、２μｇを１％w/v グリオキザル・アガロース・ゲル（テキサス，オースチンのアンビオン）を通して電気泳動してその完全さをチェックした。研究グループのそれぞれについてプールしたＲＮＡ試料を33P d-ATP で標識し、ヒト GF 201 膜ミクロアレイフィルター( リサーチ・ジェネティクス) にハイブリダイズさせた。この膜に既知の遺伝子及び発現配列標識を含む総計 5184 個の遺伝子をスポットした。各遺伝子に結合するレベルをホスホルイメージャーを用いて定量し、パスウエイズ・ソフトウェア（リサーチ・ジェネティクス）を用いて比較した。
【実施例８】
【０１４８】
ＡＧＴ−１０６
AGT-106 はイスラエル・サンド・ラット（ＩＳＲ）の視床下部においてディファレンシャル・ディスプレーＰＣＲの技術を用いて異なって発現されるものとして同定され、絶食したサンドラットに比べ餌を与えられたものでは AGT-106の発現はより高レベルであった。
【０１４９】
使用したプライマーは、
AGT-106:
前向きプライマー： 5'-ＣＡＡＴＣＡＣＣＧＣＴＴＴＴＡＡＧＡＴＡＧＴＴＴＧＴ-3'                   [ 配列番号：12]
逆向きプライマー： 5'-ＡＧＣＡＴＴＡＡＡＡＡＧＧＧＣＴＣＧＣＡ-3'                   [ 配列番号：13]
【０１５０】
プサモミス・オベズスのAGT-106 のｃＤＮＡの部分ヌクレオチド配列は次のとおりである。
2004533810.tif 000008
【０１５１】
Blast 分析から、AGT-106 ｃＤＮＡ配列とネズミ TROY mRNAの間の配列相同性が明らかにされた。TROYは腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーの新たに同定された構成員である（コジマら, J. Biol. Chem. 275 (27): 20742-20747, 2000) 。ISR TROY mRNA とマウス TROY mRNAのヌクレオチド配列相同性は85％である。
【０１５２】
視床下部における AGT-106の発現はプサモミス・オベズスでは絶食により減少した（図１，２）。この主要な効果はＡ群の餌を与えられた動物及びＡ群の絶食させた動物で観察され、AGT-106 の発現の場合絶食によりほぼ50％減少した。絶食による AGT-106の発現におけるこの劇的な減少はＢ群及びＣ群の動物では明らかでなく、これらの肥満群の両方で餌を与えられた動物は絶食させたＡ群の動物に類似していた。これらの結果から、肥満動物の視床下部におけるAGT-106 の発現は餌を与えられた状態でさえも抑制されたままであることを明らかにし、このことはこれらの動物ではこの遺伝子の異常調節があることを示唆する。
【０１５３】
興味深いことに、24時間絶食後の体重の変化（デルタ体重) と視床下部における AGT-106の発現の間の有意の関係も証明された（図３）。この関係は、全ての動物が合わされた場合も見られたが、動物を痩せたものと太ったものに分けた場合はこの関係は痩せた動物では消滅した（図４）が、太った群では強化された（図５）。視床下部の AGT-106発現と血糖値及び血中インスリン濃度との間には関係は存在しなかった。
【０１５４】
これは、従って、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（TNFRSF) の構成員であるTROY (AGT-106)のゲッ歯類における絶食に応答したエネルギー利用及び体重の調節における新規な役割を証明する。AGT-106 は体重及びエネルギー均衡の調節のための脳内の重要部位である視床下部における受容体であるから、この調節は、ＮＦ−κＢ経路又は他のこれまで未同定の経路を経るホメオスタシスに関与する遺伝子の下流転写調節を含みうる。または、この調節は体内のエネルギー均衡の状態について視床下部へ情報をフィードバックする循環しているメッセンジャー／分子の作用を含みうる。
【実施例９】
【０１５５】
ＡＧＴ−１１３
AGT-113 はディファレンシャル・ディスプレーを用いて発見され、Ａ群（痩せた健康な）動物よりもＣ群（太った、糖尿病の）動物の視床下部でより高レベルで発現されるようであった。
【０１５６】
実時間ＰＣＲによりこれが確認され（図６）、そしてＡ群動物は、餌を与えられた状態及び絶食させた状態の両方で、Ｂ群（太った、グルコース耐性異常の）動物やＣ群動物よりも視床下部でこの遺伝子の遙かにより低い発現レベルを有する（餌を与えたＡ：餌を与えたＣ，ｐ＝0.031 、絶食したＡ：絶食したＢ，ｐ＝0.028 、絶食したＡ：絶食したＣ，ｐ＝0.023)。
【０１５７】
餌を与えられた状態では、視床下部の AGT-113遺伝子の発現は体重（p＜0.001 、図７Ａ）、体脂肪パーセント（ｐ＝0.002 、図７Ｂ）及び血漿インスリンレベル（p ＝0.026 、図７Ｃ）と相関していた。絶食した状態では、視床下部の AGT-113遺伝子の発現は体重（ｐ＝0.002 、図７Ｄ）としか相関しなかった。
【０１５８】
ｃＤＮＡ試料それぞれの遺伝子発現は ABIプリズム7700シーケンス・ディテクター (PEアプライド・バイオシステムズ, カリフォルニア, フォスターシティ) 上でタックマン PCRテクノロジーを用いて定量化された。反応に添加したｃＤＮＡの量を標準化するための内部対照としてシクロフィリンを用いた。ＰＣＲの条件は 50 ℃で２分, 95℃で10分の後、95℃で15秒及び60℃で１分の40サイクルを行なった。全ての試料を２連で検定した。AGT-201(実施例10) 、AGT-203(実施例11) 及びシクロフィリンについては、5'末端にレポーター色素である FAMが付着し且つ 3' 末端には消光色素であるTAMRA が付着した発蛍光性プローブをタックマン・ユニバーサルPCR マスター・ミックス(PE アプライド・バイオシステムズ) と共に使用した。AGT-202 、AGT-106 (Troy)及びAGT-113 の場合は、プローブは使用せず、その代わりに SYBR グリーン・マスター・ミックス(PE アプライド・バイオシステムズ) を使用した。「無関係の遺伝子(house-keeping gene)」であるシクロフィリンの発現レベルを各群で検討し、太った状態、糖尿病状態又は絶食させられた状態で変わらないことを明らかにした。
【０１５９】
使用したプライマーは次のとおりである。
AGT-113:
前向きプライマー：5'- ＣＡＴＧＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧ -3'                   [配列番号：16]
逆向きプライマー：5'- ＴＣＣＣＡＡＡＧＴＡＡＡＴＴＡＡＡＣＡＣＡＴＣＡＧＡＡ -3'                   [配列番号：17]
シクロフィリン：
前向きプライマー：5'- ＣＣＣＡＣＣＧＴＧＴＴＣＴＴＣＧＡＣＡＴ -3'                   [配列番号：18]
逆向きプライマー：5'- ＣＣＡＧＴＧＣＴＣＡＧＡＧＣＡＣＧＡＡＡ -3'                   [配列番号：19]
プローブ：        5'- ＣＧＣＧＴＣＴＣＣＴＴＣＧＡＧＣＴＧＴＴＴＧＣ-3'                   [配列番号：20]
【０１６０】
プサモミス・オベズス AGT-113の部分ヌクレオチド配列は次のとおりである。
2004533810.tif 000009
【０１６１】
この配列はヒトのクローン RP11-368J13 (ゲンバンク寄託番号 AC008070)に一部相同性（65ヌクレオチドにわたって84％の相同性) を有する。
【０１６２】
この遺伝子発現パターンは、AGT-113 が視床下部におけるその作用を通じ体重調節及びエネルギーホメオスタシスにおいて一つの役割を担っていることを示唆する。AGT-113 は視床下部におけるインスリンの作用又はインスリン耐性に関与することもある。
【実施例１０】
【０１６３】
ＡＧＴ−２０１
AGT-201 は視床下部の膜に基づくミクロアレイ（マクロアレイ) 分析によりプサモミス・オベズスで異なって発現されることが決定された。
【０１６４】
使用したプライマーは次のとおりである。
AGT-201
前向きプライマー：5'- ＧＣＡＴＧＣＣＴＧＧＴＴＧＣＣＴＧ-3'                    [配列番号：9]
逆向きプライマー：5'- ＴＴＴＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＴＧＧＣＧ-3'                    [配列番号：10]
プローブ：        5'- ＣＣＣＴＧＧＣＡＧＧＴＧＡＧＴＴＣＡＴＣＡＡＧＧＣ-3'                    [配列番号：11]
【０１６５】
プサモミス・オベズス AGT-201の部分ヌクレオチド配列は次のとおりである。
2004533810.tif 000010
長さ： 360ヌクレオチド
【０１６６】
プサモミス・オベズス AGT-201の配列の分析から、ヒト AGT-201 (88％, X94910) 及びラット同族体, Erp29 (89 ％, Y10264) との高い配列相同性が明らかとなった。
【０１６７】
AGT-201は染色体 12 上に位置し、インターバル D12S78-D12S79に位置付けられた。AGT-201 の近くには、2 動物の QTLs, Qsbw 及びウエイト1 が位置している (シャグノンら, Obes Res. 8(1): 89-117, 2000) 。
【０１６８】
３群の動物の全体をみると、視床下部の AGT-201の発現はＡ群及びＢ群の動物では絶食により有意に減少した（図８）が、Ｃ群の動物では絶食による発現の減少は見られなかった。これらの結果はＣ群の糖尿病の動物では視床下部の AGT-201の発現が異常調節されていることを示唆する。
【０１６９】
餌を与えられた動物と比べ絶食した動物での視床下部の AGT-201の発現は有意に低くなった（図９）。
【０１７０】
視床下部における AGT-201遺伝子の発現は餌を与えられた状態又は絶食した状態で体重、血糖値又は血中インスリン濃度と相関しなかった。
【０１７１】
これらの結果から、絶食及びエネルギーホメオスタシスに対する中枢の応答において、おそらく小胞体中に存在する分泌性タンパク質の発現、保持、修復又は折り畳みを変えることにより、 AGT-201が一つの役割を果していることが示唆される。さらに、これらの結果は、この調節における AGT-201の役割が糖尿病の状態のなかで変えられることから、この遺伝子が糖尿病の治療の開発のための潜在的な標的として同定されることを示唆する。
【実施例１１】
【０１７２】
ＡＧＴ−２０２
AGT-202 はマクロアレイ分析によりプサモミス・オベズスの視床下部で異なった発現されると決定された。
【０１７３】
使用したプライマーは次のとおりである。
AGT-202:
前向きプライマー：5'- ＣＴＧＣＡＡＡＡＣＧＣＣＣＡＴＴＣＧ-3'                    [配列番号：14]
逆向きプライマー：5'- ＴＣＡＴＡＧＴＣＴＣＧＣＴＣＧＣＡＧＴＡＧＧ-3'                    [配列番号：15]
【０１７４】
遺伝子発現研究のためのプライマーを設計するため、プサモミス・オベズスの AGT-202の配列の一部を得た。
2004533810.tif 000011
【０１７５】
プサモミス・オベズスの AGT-202の配列（154 ヌクレオチド) の分析から、ヒトAGT-202 (88 ％, L35246) 及びラットの同族体である AGT-202 (86％, AF096685) と高い配列相同性が示された。
【０１７６】
AGT-202はヒト染色体５に位置する。肥満又は糖尿病に関連する QTLは見出されなかった。
【０１７７】
AGT-202遺伝子の発現は広範なように思われる。ｃＤＮＡ供給源には、大動脈、血液、脳、乳房、結腸、生殖細胞、腎臓、喉頭、肺臓、筋肉、卵巣、膵臓、混合したもの、前立腺、胃、精巣、扁桃、子宮、全胚、脳、頸、結腸、眼、頸（ネック）、腎臓、肺臓、卵巣、膵臓、前立腺、腫瘍、皮膚、胸腺、混合したもの、子宮、全血が含まれる。
【０１７８】
抗 AGT-202抗体を用いる骨格筋での免疫局在化研究により、 AGT-202はＺラインに存在し、一部成人筋線維分節のフィラメントを横切っていることが示された。
【０１７９】
全体的に、絶食させられた動物と比べ餌を与えられた動物の視床下部では AGT-202遺伝子の有意に大きな発現があった（ｐ＝0.013) (図10) 。加えて、Ｃ群の動物と比べＡ群及びＢ群の餌を与えた動物の視床下部では AGT-202遺伝子のより大きな発現があるようであるが、これらの相違は有意ではなかった（図11) 。
【０１８０】
AGT-202遺伝子の発現と体重、体脂肪パーセント又は血糖値又はインスリンレベルの間には相関関係はなかった。
【実施例１２】
【０１８１】
プレセニリンズ（presenilins)と相互作用するロムボイド様プロテアーゼ(AGT-203) 
寄託番号 AA131464 を持つ発現配列タグ（ＥＳＴ）の形のヒト遺伝子は、膜を用いるミクロアレイ（マクロアレイ）により、肥満の、糖尿病の動物に対し痩せた糖尿病でない動物の骨格筋で異なって発現されることが見出された。ＥＳＴ AA131464 と合致した完全なコード配列を持つヒトｍＲＮＡが最近ゲンバンクに追加された (2000年11月1 日に、寄託番号 AF197937)。このｍＲＮＡは 379アミノ酸のタンパク質をコードし、プレセニリンズと相互作用するロムボイド様プロテアーゼ (AGT-203)と名付けられた。
【０１８２】
使用したプライマーは次のとおりである。
AGT-203:
前向きプライマー：5'- ＣＣＣＡＣＣＴＣＴＧＧＡＡＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴ-3'                    [配列番号：6]
逆向きプライマー：5'- ＣＣＴＧＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＡＧＴＧＡＡＧＡ-3'                    [配列番号：7]
プローブ：        5'- ＴＴＡＴＣＣＴＴＣＣＣＣＣＴＡＣＣＣＴＡＴＡＡＧＡＡＣＴＴ
ＴＧＧＴＧ-3'[配列番号：8]
【０１８３】
遺伝子発現研究のためのプライマーを設計するために、プサモミス・オベズスの AGT-203の配列の一部を得た。これを以下に示す。
2004533810.tif 000012
【０１８４】
この AGT-203遺伝子は広範な組織発現のパターンを有するようである。 AGT-203 mRNA に対応するＥＳＴｓは、副腎、血液、骨、脳、乳房、結腸、包皮、生殖細胞、心臓、腎臓、肺臓、リンパ液、骨髄、筋肉、卵巣、膵臓、上皮小体甲状腺、胎盤、前立腺、皮膚、脾臓、胃、精巣、扁桃、子宮及び全胚で見出された。
【０１８５】
ヒト AGT-203遺伝子のエキソン／イントロン構造は、ヒトゲノムの全体配列決定クローン類にｍＲＮＡ配列を整列させ、次いでＧＴ−ＡＧ規則（ＧＴで出発するイントロンは全てＡＧで終わるという規則）を適用することにより導き出された。ヒト AGT-203遺伝子は10個のエキソンを持っている。最初の４エキソンは染色体３由来のクローン RP11-315J22（寄託番号 AC068644)上にあった。最後の６エキソンは染色体１７由来のクローン RP11-637N15（寄託番号 AC020694)上にあった。これらのクローンの一つは誤って位置付けられた可能性があると考えられる。どれが正しい染色体であるかを調べる研究が現在進行中である。
【０１８６】
タックマンＰＣＲによる遺伝子発現の研究（図１２）は、痩せたＡ群の動物と比較すると太った高インスリン血症のＢ群及びＣ群の動物の骨格筋での AGT-203遺伝子の発現は減少する（Ｂ群ｐ＝0.014 、Ｃ群ｐ＝0.011)ことを明らかにした。この関係は骨格筋での AGT-203遺伝子の発現とｌｏｇインスリン（ｐ＝0.001)、体重（ｐ＝0.011)及び体脂肪パーセント（ｐ＝0.006)の間の相関関係によりさらに支持された。血糖レベルとの有意な相関関係は見られなかった。
【０１８７】
AGT-203遺伝子の発現は太った高インスリン血症のプサモミス・オベズスの骨格筋では減少することが見出された。体重及び血漿インスリンレベルとは負の相関関係が見られた。 AGT-203は、プレセニリン（presenilin) タンパク質と相互作用し、タンパク質切断と関わりがあるものと考えられる。
【０１８８】
プレセニリンは APPやNOTCH などの膜貫通タンパク質のタンパク質分解処理に関与する。APP は中枢神経系で最も高レベルで発現されるが、それは普遍的に発現され、そしてその骨格筋における役割は知られていない。糖尿病はアルツハイマー病の危険因子であることが知られており、AGT-203 は両方の疾病で何らかの役割を果たすかも知れない。NOTCH は膜受容体であり、膜内でのタンパク質分解処理の後、核に移動し遺伝子発現を活性化する能力を有する。AGT-203 は NOTCHを介して作用して代謝に関与する遺伝子の発現に影響を与えるかも知れない。または、肥満症や糖尿病におけるAGT-203 の役割は未だ同定されていない別の膜貫通タンパク質の処理を介するものであるかも知れない。
【０１８９】
プレセニリンのための他の可能な役割には、アポトーシス及び／又はカルシウムホメオスタシスの調節が挙げられる。従って、AGT-203 の発現の減少が骨格筋中のグルコース代謝又は脂肪代謝で何らかの役割を担うことができ、それにより体重及びインスリンの作用に影響を与えるであろう幾つかの異なる経路が存在する。
【０１９０】
当業者は本明細書に記載された本発明が具体的に記載されたもの以外の改変及び修飾を受けうることを認めるであろう。本発明はこのような改変及び修飾の全てを包含するものと理解すべきである。本発明は本明細書で言及又は示した工程、特徴、組成物及び化合物の全てを、個別的に又は集合的に、そして該工程や特徴の任意のそして全ての二つ以上の組み合わせをも包含するものである。
【図面の簡単な説明】
【０１９１】
【図１】図１は、プサモミス・オベズス動物の餌を与えた群と餌を与えなかった群の視床下部における AGT-106遺伝子発現のグラフ表示である。それらの視床下部では、AGT-106 発現はＡ群の動物では飢えにより減少し、Ｂ群及びＣ群の動物では飢えにより変化することなく維持された。Ａ群動物における飢えによる減少は５５％の減少を示したが、これはゲームズ−ハウエルの事後試験を用いるＡＮＯＶＡにより比較した場合、有意には達しなかった。
【図２】図２は、プサモミス・オベズス動物の餌を与えた群と餌を与えなかった群の視床下部における AGT-106遺伝子発現のグラフ表示である。 AGT-106の発現は、全ての動物を合わせた場合、飢えにより有意に減少した（ｐ＝0.035)。
【図３】図３は、飢えたプサモミス・オベズス動物の体重当たりの AGT-106遺伝子発現のグラフ表示である。その視床下部では、 AGT-106の発現は、24時間絶食の後の体重変化と有意に負に相関した(R＝0.483, p＝0.023,全ての絶食動物）。
【図４】図４は、絶食した痩せたプサモミス・オベズス動物の体重当たりの AGT-106遺伝子発現のグラフ表示である。痩せたＡ群の動物では、視床下部の AGT-106発現は、24時間絶食の後の体重変化と関連しなかった。
【図５】図５は、絶食した肥えたプサモミス・オベズス動物の体重当たりの AGT-106遺伝子発現のグラフ表示である。肥えたＢ群及びＣ群の動物では、視床下部の AGT-106発現は、24時間絶食の後の体重変化と負に有意に関連した（R ＝0.678 ，p ＝0.005)。
【図６】図６は、プサモミス・オベズス動物の餌を与えた及び絶食させた群Ａ、Ｂ、Ｃの視床下部における AGT-113遺伝子発現のグラフ表示である。
【図７】図７は、（Ａ）体重（餌を与えた動物）、（Ｂ）体脂肪パーセント（餌を与えた動物）、（Ｃ）血漿インスリン（餌を与えた動物）、及び（Ｄ）体重（絶食させた動物）と視床下部における AGT-113遺伝子発現との相関のグラフ表示である。
【図８】図８は、餌を与えた及び絶食させたプサモミス・オベズス動物の視床下部における AGT-201の遺伝子発現のグラフ表示である。
【図９】図９は、餌を与えた及び絶食させたプサモミス・オベズス動物の視床下部における AGT-201の発現のグラフ表示である。
【図１０】図１０は、餌を与えた及び絶食させたプサモミス・オベズス動物の視床下部における AGT-202の発現のグラフ表示である。
【図１１】図１１は、餌を与えた及び絶食させたプサモミス・オベズス動物の視床下部における AGT-202の発現のグラフ表示である。
【図１２】図１２は、（Ａ）プサモミス・オベズスのＡ、Ｂ及びＣ群の緋腹筋における AGT-203遺伝子発現、（Ｂ）緋腹筋における AGT-203遺伝子発現と血漿インスリンレベルとの相関、（Ｃ）緋腹筋における AGT-203遺伝子発現と体重との相関、及び（Ｄ）緋腹筋における AGT-203遺伝子発現と体脂肪パーセントとの相関、を示すグラフ表示である。
【図１】
2004533810.tif 000013
【図２】
2004533810.tif 000014
【図３】
2004533810.tif 000015
【図４】
2004533810.tif 000016
【図５】
2004533810.tif 000017
【図６】
2004533810.tif 000018
【図７Ａ】
2004533810.tif 000019
【図７Ｂ】
2004533810.tif 000020
【図７Ｃ】
2004533810.tif 000021
【図７Ｄ】
2004533810.tif 000022
【図８】
2004533810.tif 000023
【図９】
2004533810.tif 000024
【図１０】
2004533810.tif 000025
【図１１】
2004533810.tif 000026
【図１２Ａ】
2004533810.tif 000027
【図１２Ｂ】
2004533810.tif 000028
【図１２Ｃ】
2004533810.tif 000029
【図１２Ｄ】
2004533810.tif 000030
【国際公開パンフレット】
2004533810.tif 000031
2004533810.tif 000032
2004533810.tif 000033
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2004533810.tif 000115
2004533810.tif 000116
【手続補正書】
【提出日】平成15年5月12日(2003.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ある分子又はその誘導体若しくは同族体をコードするヌクレオチド配列又はそれをコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子であって、痩せた動物に比べ太った動物のあるいは絶食させた動物に比べ餌を与えた動物の視床下部組織又は筋肉組織の一方又は両方で、より大量に発現され、且つ
(ｉ）配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列又は最適整列後にそれに少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：１若しくはその相補型に高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含む核酸分子、
（ii) 配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列又は最適整列後にそれに少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：２若しくはその相補型に高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含む核酸分子、
(iii)配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列又は最適整列後にそれに少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：３若しくはその相補型に高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含む核酸分子、
(iv) 配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列又は最適整列後にそれに少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：４若しくはその相補型に高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含む核酸分子、
(ｖ）配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列又は最適整列後にそれに少なくとも約９０％の同一性を有するヌクレオチド配列又は配列番号：５若しくはその相補型に高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できるヌクレオチド配列を含む核酸分子、
から選択される核酸分子。
【請求項２】
該核酸分子が配列番号：１に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
該核酸分子が配列番号：２に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
該核酸分子が配列番号：３に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
該核酸分子が配列番号：４に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
該核酸分子が配列番号：５に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
請求項１の核酸分子中にコードされた単離された分子。
【請求項８】
配列番号：１に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項７記載の単離されたタンパク質。
【請求項９】
配列番号：２に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項７記載の単離されたタンパク質。
【請求項１０】
配列番号：３に記載されたヌクレオチド配列によりコードされる請求項７記載の単離されたタンパク質。
【請求項１１】
該核酸分子が配列番号：５に記載されたヌクレオチド配列を含むものである、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
配列番号：５に記載されたヌクレオチド配列によりコードされた請求項７記載の単離されたタンパク質。
【請求項１３】
痩せた動物と比べ肥満動物の視床下部組織若しくは筋肉組織で異なって発現される核酸分子によってコードされる単離されたタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、及び／又は絶食させた動物と比べ餌を与えた動物の肝臓組織中で異なって発現される核酸分子によってコードされる単離されたタンパク質又は下記のタンパク質、即ち
(i)  配列番号：１に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又は最適整列後にこの配列に少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(ii) 配列番号：２に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又は最適整列後にこの配列に少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(iii)  配列番号：３に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又は最適整列後にこの配列に少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(iv) 配列番号：４に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又は最適整列後にこの配列に少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(ｖ）配列番号：５に実質的に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体又は最適整列後にこの配列に少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列によってコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
(vi) 配列番号：１に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(vii)  配列番号：２に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(viii) 配列番号：３に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(ix) 配列番号：４に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(ｘ）配列番号：５に記載されたようなヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と高ストリンジェンシー条件下でハイブリッドを形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
(xi) ホモ二量体型である、パラグラフ（ｉ）〜 (ｘ）のいずれか一つで定義されたタンパク質、
(xii)ヘテロ二量体である、パラグラフ（ｉ）〜 (ｘ）のいずれか一つで定義されたタンパク質、
から成るリストから選択されるその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【請求項１４】
哺乳動物における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の一つ以上の発現を調節する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203を、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現のモジュレーターの有効量と、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現を高レベル調節若しくは低レベル調節若しくはその他の方法で調節するのに十分な時間及び条件の下で、接触させる工程を含む方法。
【請求項１５】
哺乳動物における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性を調節する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性を増加若しくは減少させるのに十分な時間及び条件の下で、ある分子の調節に有効な量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項１６】
肥満症、拒食症、糖尿病、及び／又はエネルギーの不均衡の症状の一つ以上により特徴付けられる状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の発現を調節するのに十分な、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の活性を調節するのに十分な時間及び条件の下で、ある薬物の有効量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項１７】
肥満症、拒食症、糖尿病又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上により特徴付けられる疾病状態を患う哺乳動物を治療する方法であって、 AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203の有効量を該哺乳動物に投与する工程を含む方法。
【請求項１８】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を調節できる薬物の使用。
【請求項１９】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の活性を調節できる薬物の使用。
【請求項２０】
肥満症、拒食症、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡により特徴付けられる状態を治療するための医薬の製造における AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び／又は AGT-203及び／又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の使用。
【請求項２１】
AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の発現のモジュレーター、又は AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203の活性のモジュレーター、及び薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤の一つ以上を含む組成物。
【請求項２２】
被験体由来の生体試料中の AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、該生体試料を AGT-106、AGT-113 、AGT-201 、AGT-202 及び AGT-203又はその抗原性誘導体若しくは抗原性同族体と、複合体が形成するのに十分な時間及び条件の下で接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法。
【国際調査報告】
2004533810.tif 000117
2004533810.tif 000118