(57)【要約】本発明は概して、環状ＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼインヒビター化合物を投与することによる、パーキンソン病の処置のための新規治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
パーキンソン病を処置する方法であって、ｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ５）を阻害する化合物の治療上有効な量を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は概して、環状ＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼインヒビター化合物を投与することによる、パーキンソン病の処置のための新規治療方法に関する。
【０００２】
【発明の背景】
パーキンソン病（ＰＤ）は、振戦および筋肉の協調障害によって特徴付けられる中枢神経系（ＣＮＳ）の進行性変性疾患である。この疾患は、処置がなされなければ致命的なものとなる。５０歳の年齢を超えたアメリカ人のおよそ１％がＰＤに冒されているているが、６０歳の年齢を超えるアメリカ人の１０％もで、この疾患の認識されていない初期症状があるかもしれないと報告されている。現在のところ、米国で１００万から１５０万人の人々がＰＤに罹患しているかもしれないとの予測がなされている。この疾患はいかなる年齢でも現れ得るものであるが、発症の危険性は年齢に応じて増加する。したがって、先進国における個体の平均年齢が次第に増加するにつれて、次の半世紀でＰＤの発生は増大するものと予測される。米国に関してこの人口高齢化の現象は、結果的にＰＤの頻度を３乃至４倍増加させることとなり、つまり数百万人がＰＤに苦しめられる結果をもたらすと予測されている。
【０００３】
他のＣＮＳ変性障害と同様、ＰＤは知らない間に発症する。患者の傍にいる人々が、患者が気付くより前に問題に気付くかもしれない。患者の顔の表情は憂鬱なものか、または無表情なもの（仮面顔貌）となり得、その声は音量が下がり単調な調子になり得る。患者は、筋肉の脱力または硬直を訴えるかもしれない。振戦または脚の内側屈曲（筋緊張異常（ジストニア））などの不随意な動きが問題になるかもしれない。これらの症状は、日常的な活動の際に認められるか、または患者が歩いたり書きものをしたりしている特定の時間に限って発現し得る。ＰＤの初期段階において、多くの患者は動作にかかる問題を抱えてはいない。そうでなくて、患者らは不安と睡眠障害を訴えるかもしれない。しかしながら運動系の機能障害の徴候は、神経学的診察および身体検査で明らかになる。
【０００４】
ＰＤの顕著な特徴となる徴候は、振戦、歯車様硬直および運動緩慢である。第四番目の顕著な特徴となる徴候として、姿勢反射不良が含まれることがある。姿勢反射が不適切な場合、患者はごくわずかに前か後に押されるただけで、またはバスか電車などの動く乗り物で立っていると、倒れることがある。ＰＤにおいて、振戦は典型的には安静時に起こるが、腕を上げた場合にも生じ得る（姿勢振戦）。歯車様硬直とは、他動関節可動域内でのラチェット様抵抗として試験官によって感じられる調子の増大のことを言う。運動緩慢とは、不随意および／または随意的な動作が緩慢になることを言う。ＰＤの仮面顔貌は、不随意の動作が緩慢になった例である。
【０００５】
ＰＤの平均的な継続期間は、約１４年である。しかしながら、処置を施さなければ、臨床徴候の提示と死との間の期間は約９年に短縮される。疾患の進行速度は、ニューロン損失の速度に直接的に相関すると考えられる。
【０００６】
対症療法が、ＰＤに対する処置の最も一般的な形態である。これらの療法は、伝統薬の基礎的な指図を満たして、苦痛を軽減しようとするものである。これらの薬物は、単独療法または付加的な対症療法のいずれかとして使用されるように設計されているが、たとえあったとしてもごくわずかしか、根底にある疾患の原因または病因に対する有益な効果はない。対症療法用化合物は、それらの薬理学的作用に基づき　２群すなわち、ドーパミン作動薬と非ドーパミン作動薬に分けることができる。
【０００７】
ＰＤは基底核の黒質におけるドーパミン伝達の不具合に起因するものと考えられるので、ほとんどの対症療法用ＰＤ薬は、脳内ドーパミンである神経伝達物質の効果を補充、模倣、または増強しようとするものである。ドーパミン自体は胃腸管内によく吸収されることも、また血液脳関門を超えて効果的に移送されることもない。Ｌ−ドーパは、ドーパミン前駆物質療法剤である。Ｌ−ドーパは、血液脳関門を超えて脳内に浸透し、脳内で酵素ドーパ脱炭酸酵素を介してドーパミンへと変換される。Ｌ−ドーパは生体利用効率が悪く、そして単独療法で投与された場合の半減期が短い。酵素であるドーパ脱炭酸酵素およびカテコール−Ｏ−メチル転移酵素（ＣＯＭＴ）による、末端での迅速な代謝のため、経口投与されたＬ−ドーパの１％未満しか脳に浸透しない。その生体利用効率を改善するために、Ｌ−ドーパは脱炭酸酵素インヒビターと共に製剤化されている。米国においては、脱炭酸酵素インヒビターであるカルビドーパは、ここ２０年間に処方されたほとんどすべてのＬ−ドーパ製品に含有されている。ここ３０年、Ｌ−ドーパはＰＤ療法剤の柱として機能してきている。しかしながら、Ｌ−ドーパで長期間処置することで、身体に障害を引き起こす合併症を招来することが多い。多くの患者で、薬物で誘発される不随意運動と共に、Ｌ−ドーパに対して非持続的または予測不能な応答が現れる。Ｍｅｎａ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｏｖ　Ｄｉｓｏｒｄ　７：　２３（１９９２）によれば、Ｌ−ドーパは細胞毒性があり、それによって黒質ニューロンの変性が促進されるのかもしれないとさえ推論されている。
【０００８】
長期間にわたるＬ−ドーパの使用の不都合のゆえに、Ｌ−ドーパ療法を開始する必要を先送りにするための初期ＰＤにおける単独療法としての使用を目的として、そしてＬ−ドーパ投薬の低減または有益なドーパミン作動効果の増強を可能とすべく疾患の後期での付加療法としての使用を目的として、ドーパミンアゴニストが開発されている。アゴニストは脳内のドーパミン受容体を直接的に刺激し、したがってそれらの作用はＬ−ドーパに無関係なものである。
【０００９】
研究をなされるべき２つの最初のドーパミン作動性アゴニストである、アポモルフィン（Ｃｏｔｚｉａｓ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｒａｎｓ　Ａｍ　Ｎｅｕｒｏｌ　Ａｓｓ　９７：　１５６（１９７２））、およびピレベジル（Ｖａｋｉｌ，ｅｔ　ａｌ．，　Ａｄｖａｎ　Ｎｅｕｒｏｌ　３：　１２１（１９７３））はこれまで、それらの副作用のために中止されている。ブロモクリプチンは麦角誘導体で、Ｃａｌｎｅ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｌａｎｃｅｔ　２：　１３５５−１３５６（１９７４）に記載のごとく、ＰＤの処置に対して有効であることが見出されているドーパミンアゴニストである。１９９７年に、ＰＤに対する装備に３つの新しいドーパミンアゴニストすなわち、カルベルゴリンならびに２つの非エルゴリン薬物であるプラミペキソールおよびロピニロールが付け加えられた。ＰＤの処置に対するドーパミンアゴニストの使用における高い興味は尽きることなく、そしてこのような他のアゴニストがいくつも、現在臨床試験において試されているところである。
【００１０】
他の代謝酵素経路の遮断もまた、Ｌ−ドーパの効果を増強するか、または脳内ドーパミンレベルを維持するために使用することができる。ドーパミンに対する中心的な代謝経路の一つは、酵素であるモノアミンオキシダーゼＢ型（ＭＡＯＢ）で媒介される。Ｗｅｓｓｅｌ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ　７０：　４５９（１９９２）は、薬物であるセレギリンがＭＡＯＢを阻害することを立証し、これはＬ−ドーパと組み合わせて使用される付加的な抗パーキンソン治療剤として米国で承認されている。別のＭＡＯＢインヒビターであるラザベミドは、初めはＰＤにおける付加的な治療剤として試験されたのであるが、現時点では活発に開発されていない。Ｈｕｂｂｌｅ，ＪＰ，　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎｉｃｓ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａ　８３（２）：　５２５−５３６（１９９９）。化合物のラサギリンもまた、酸化的モノアミン代謝酵素を阻害する。初期の未処置ＰＤにおけるラサギリンの効果が研究されている。Ｈｕｂｂｌｅ、前出。
【００１１】
別の酵素経路には、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼが関与している。環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ類（ＰＤＥｓ）は、環状ヌクレオチド依存性のシグナル伝達プロセスに不可欠な制御因子である。それらは、セカンドメッセンジャーであるアデノシン３’，５’−環状モノホスフェート（ｃＡＭＰ）およびグアノシン３’，５’−環状モノホスフェート（ｃＧＭＰ）の作用を、それぞれの５’−ヌクレオシドモノホスフェートへと加水分解することによって終結させる。それらの生物学的特性に基づき、ＰＤＥｓはいくつかの包括的なファミリーに分類され得る。たとえば、Ｃａ２＋／カルモジュリン刺激型ＰＤＥ（Ｉ型）、ｃＧＭＰ刺激型ＰＤＥ（ＩＩ型）、ｃＧＭＰ阻害型ＰＤＥ（ＩＩＩ型）、ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ（ＩＶ型）、ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ（Ｖ型）、およびｃＧＭＰ特異的光受容体ＰＤＥ（ＶＩ型）が挙げられる。
【００１２】
線条体のドーパミン作動性受容体がアデニル酸シクラーゼと密接に関わっていることが発見されて後、ドーパミンアゴニストとホスホジエステラーゼインヒビターとの組み合わせが検証された。ドーパミンの作用は、環状ＡＭＰを生産するアデニル酸シクラーゼによって媒介される。したがって、Ｃａｌｎｅ，ＤＢ  ｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＢｒａｄｆｏｒｄおよびＭａｒｓｄｅｎ（編）２１〜２６頁（１９７６）に記載されるごとく、ｃＡＭＰの分解を妨害するホスホジエステラーゼインヒビターの投与によって、ＰＤに罹患している患者を助けられるかもしれない。
【００１３】
たとえば、カフェインはｃＡＭＰを加水分解すると知られている環状３’，５’−ヌクレオチドホスホジエステラーゼの作用を非選択的に阻害することが知られている。しかしながら、Ｋａｒｔｚｉｎｅｌ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ　２６：　７４１−７４３（１９７６）に記載されるとおり、カフェインとブロモクリプチンとをＰＤの患者へ同時に投与しても、ブロモクリプチンの抗パーキンソン作用を増強することはなかった。加うるに、Ｓｈｏｕｌｓｏｎ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ　２５：　７２２−７２４（１９７５）は、カフェインをレボドパまたはピリベジルと組み合わせて投与すると同様の結果になることを立証した。
【００１４】
米国特許第４，１４７，７８９号は、ＰＤの処置のための６−メチル−８−チオメチル−エルゴレン誘導体と非選択的ホスホジエステラーゼインヒビターとの組み合わせを開示している。米国特許第４，１４７，７８９号には、特異的なホスホジエステラーゼインヒビターを使用することは開示されておらず、またＬ−ドーパをホスホジエステラーゼインヒビターと組み合わせることもこれには開示されていない。
【００１５】
Ｃａｓａｃｃｈｉａ，ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　１５（３）：　３２９−３３４（１９８３）は、選択的なｃＡＭＰホスホジエステラーゼインヒビターであるロリプラムが、ＰＤの治療におけるＬ−ドーパおよびドーパミン作動性麦角誘導体の有効性を向上させるであろうか否かを研究した。ロリプラムが、Ｌ−ドーパとリスリドの効果を増強させることはなかった。
【００１６】
【発明の要約】
本発明は、ＰＤに罹患している患者における、Ｖ型ＰＤＥインヒビターに対する新規な治療上の使用を提供するものである。本発明は、１種またはそれ以上の種類の本発明のＶ型ＰＤＥ（ＰＤＥ５）インヒビターの治療上有効な量を投与することによって、ＰＤの進行を阻止および／もしくは緩徐化する、またはＰＤの臨床症状を低減もしくは排除する方法を提供する。本明細書において使用する場合、ＰＤの「臨床症状」には、振戦、歯車様硬直、運動緩慢、姿勢反射の不良、およびその他の臨床的に定義付けされたＰＤの身体的または精神的な徴候が包含される。
【００１７】
「ＩＣ５０」なる用語は、単回投与応答実験にて５０％の酵素阻害をもたらす化合物の濃度として定義される。したがってＩＣ５０値は、ＰＤＥ５を含めたＰＤＥｓを阻害する化合物の有効性の尺度である。ある化合物のＩＣ５０値の定量は、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　２２：　３０９９−３１０８（１９７３）に概略的に記載された既知のインビトロの方法論によって容易に実施される。
【００１８】
「阻害」または「阻害する」なる用語は、ＰＤの臨床症状を低減する、またはＰＤの臨床症状の再発を予防するのに充分な程度にまで、ＰＤＥ５の酵素活性を遮ることをいう。
【００１９】
「医薬上有効な量」なる語は、ＰＤＥ５を阻害することができ、そしてＰＤの臨床症状の改善をもたらし、および／または症状の再発を防止もしくは低減する化合物の量を表す。
【００２０】
「ＰＤＥ５インヒビター」なる用語は、ＰＤＥ５を阻害する化合物をいう。本発明において有用なＰＤＥ５インヒビターは、ＰＤＥ５を阻害し、そしてヒト組み換えＰＤＥ５に対して約１０ｎＭ以下のＩＣ５０値を有する化合物である。好ましくは、ＰＤＥ５インヒビターのＩＣ５０値は約５ｎＭ以下、より好ましくは約３ｎＭ以下、そして最も好ましくは約１ｎＭ以下である。最も好ましいＰＤＥ５インヒビターは選択的ＰＤＥ５インヒビター、すなわちＰＤＥ５を阻害するが他のＰＤＥ酵素（特にＰＤＥ６およびＰＤＥ１ｃ）を有意に阻害しないものである。選択性に関しては、好ましいＰＤＥ５インヒビターは少なくとも２００のＰＤＥ６／ＰＤＥ５およびＰＤＥ１ｃ／ＰＤＥ５  ＩＣ５０阻害商を呈し、これは１，０００以上の範囲におよぶことができる。ＰＤＥ６／ＰＤＥ５  ＩＣ５０阻害商は、ある化合物のＰＤＥ６に対するＩＣ５０値と、同じ化合物のＰＤＥ５に対するＩＣ５０値の割合である。ＰＤＥ１ｃ／ＰＤＥ５阻害商は、ＰＤＥ１ｃとＰＤＥ５に対して同様に定義される。本発明の完全な利点を成し遂げるためには、化合物は少なくとも１００のＰＤＥ６／ＰＤＥ５およびＰＤＥ１ｃＰＤＥ５  ＩＣ５０阻害商と、約５ｎＭ以下（たとえば約０．１乃至約５ｎＭ）のＰＤＥ５に対するＩＣ５０を有するものである。したがって、好ましい阻害剤では、ＰＤＥ５インヒビターのＩＣ５０値はＰＤＥ６またはＰＤＥ１ｃに対するＩＣ５０値の約１００倍低く、より好ましくはＰＤＥ６またはＰＤＥ１ｃに対するＩＣ５０値の約５００倍低く、そして最も好ましくはＰＤＥ６またはＰＤＥ１ｃに対するＩＣ５０値の約１０００倍低い。
【００２１】
本発明において有用なＰＤＥ５インヒビターは、化学構造がきわめて多様であり、本発明の方法におけるＰＤＥ５インヒビター使用は、特定の化学構造に依存するものではない。しかしながら、ＰＤＥ５を阻害する能力を有する好ましい化合物には（好ましい選択性を有していなくても）、構造式（Ｉ）：
【００２２】
【化１】
2004500425.tif 000002
【００２３】
（式中、Ｒ１はメチルまたはエチルであり；Ｒ２はｎ−プロピルであり；Ｒ３はエチル、ｎ−プロピル、またはアリルであり；Ｒ４はＣＯＣＨ２ＮＲ５Ｒ６、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０、または１−メチル−２−イミダゾリルであり；Ｒ５およびＲ６はそれらに付くチッ素原子と一緒になってモルホリノまたは４−Ｎ（Ｒ１１）ピペラジニル基を表し；Ｒ９およびＲ１０はそれらに付くチッ素原子と一緒になって４−Ｎ（Ｒ１２）ピペラジニル基を表し；Ｒ１１はメチルまたはアセチルであり；そしてＲ１２はＨ、メチル、２−プロピル、または２−ヒドロキシエチルである）
を有する化合物が含まれる。
【００２４】
構造式（Ｉ）の化合物、およびそれらの調製は、ＥＰ  ０  ７０２  ５５５に開示されており、その開示内容は、引用することにより本明細書に盛り込むこととする。式（Ｉ）の好ましい化合物に含まれるのは、
５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン：
５−（２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（２−アリルオキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（２−エトキシ−５−［４−（２−プロピル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−（２−エトキシ−５−（１−メチル−２−イミダゾリル）フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；およびそれらの組み合わせである。
【００２５】
好ましい化合物の他のクラスのものが、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号およびＤａｕｇａｎらの米国特許第５，９８１，５２７号（これら各々を、引用することにより本明細書に特に盛り込むこととする）に開示されている。このクラスの化合物には、強力且つ選択的なＰＤＥ５インヒビターが含まれており、ＰＤを処置するのに有用であって、以下の構造式（ＩＩ）およびそれらの塩または溶媒和物を有している：
【００２６】
【化２】
2004500425.tif 000003
【００２７】
（式中、Ｒ１３は水素、ハロゲン、およびＣ１−６アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１４は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ハロ、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキルＣ１−３アルキル、ならびにアリールＣ１−３アルキル（アリールはフェニルまたは、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびメチレンジオキシからなる群より独立して選択される１乃至３の置換基で置換されたフェニルである）、ならびにヘテロアリールＣ１−３アルキル（ヘテロアリールは、チエニル、フリル、またはピリジルであり、各々はハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシからなる群より独立して選択される１乃至３の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
Ｒ１５は任意に置換された、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択された単環式芳香環、または任意に置換された二環式環
【００２８】
【化３】
2004500425.tif 000004
【００２９】
であって、ベンゼン環炭素原子の１つを介して当該分子の残部に付いているものであり、式中縮合環Ａは飽和または部分的もしくは完全に不飽和の５員環または６員環であって炭素原子と、酸素、イオウおよびチッ素から選択される１または２のヘテロ原子を任意に含むものであり；そして
Ｒ１６は水素、またはＣ１−３アルキルを表し、あるいはＲ１４とＲ１６は共に、３員もしくは４員アルキルまたは５員環または６員環のアルケニル鎖成分を表す）。
【００３０】
構造式（ＩＩ）の好ましい化合物は、Ｒ１３は水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルであり；Ｒ１４は水素またはＣ１−６アルキルであり；Ｒ１５は二環式環
【００３１】
【化４】
2004500425.tif 000005
【００３２】
または
【００３３】
【化５】
2004500425.tif 000006
【００３４】
であって、ハロゲンおよびＣ１−３アルキルから独立して選択される１以上の基によって任意に置換されることができるものであり；そしてＲ１６は水素またはＣ１−３アルキルである。
【００３５】
構造式（ＩＩ）の好ましい化合物には、
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−３−メチル−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２，３−ジメチル−ピラジノ［２’１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２−イソプロピル−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
それらの生理学的に容認され得る塩および溶媒和物；ならびにそれらの混合物が含まれる。構造式（ＩＩ）の化合物は、他のＰＤＥ酵素をしのぐＰＤＥ５の阻害の選択性ゆえに、とりわけ有利である。
【００３６】
本発明の方法において有用なＰＤＥ５インヒビターのさらに別の例には、Ｄａｕｇａｎらの米国特許第６，００１，８４７号；ＷＯ  ９７／４３２８７、ＷＯ  ９８／５３８１９、ＷＯ  ９９／２１８３１、ＷＯ  ９９／２４４３３、ＷＯ  ９９／２６９４６、ＷＯ  ９９／２８３１９、ＷＯ  ９９／２８３２５、ＷＯ  ９９／４２４５２、ＷＯ  ９９／５４２８４、ＷＯ  ９９／５４３３３（各々は、引用することにより本明細書に盛り込むこととする）に記載されたものがある。
【００３７】
本発明において使用するための化合物のさらなる例は、米国を指定し、「化学的化合物」の名称でＡ．  ＢｏｍｂｒｕｎとＦ．  Ｇｅｌｌｉｂｅｒｔを発明者とする米国を指定するＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０６０５０）に開示されており、その開示は引用することにより特に本明細書に盛り込むこととする。このクラスの化合物は、以下の構造式（ＩＩＩ）ならびにそれらの塩および溶媒和物（たとえば水和物）を有している：
【００３８】
【化６】
2004500425.tif 000007
【００３９】
（式中、Ｃ環は酸素、チッ素、およびイオウからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む５員または６員のヘテロアリール基を表し；
Ｒ１７は水素またはハロゲンを表し；
Ｒ１８は水素、ニトロ（ＮＯ２）、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ（ＣＮ）、
酸素、チッ素、およびイオウからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含み、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａまたはＣ１−４アルキルで任意に置換された５員または６員のヘテロ環状基、
ＯＲｈで任意に置換されたＣ１−６アルキル、
Ｃ１−３アルコキシ、
Ｃ（＝Ｏ）Ｒｈ、
ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、
Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｈ、
Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
Ｃ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、
ＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、
Ｃ１−４アルキレンＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｉＳＯ２Ｒｊ、
Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
Ｃ１−４アルキレンＮＲｈＲｉ、
Ｃ２−６アルキレンＮＲｈＲｊ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈＲｉ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈＲｊ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈＣ１−４アルキレンＯＲｉ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＲｉ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲｈＲｉ、
ＯＣ１−４アルキレンＣＨ（ＯＲｈ）ＣＨ２ＮＲｈＲｉ、
ＯＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＣ２−４アルキレンＯＲｈ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲｈＣ（＝Ｏ）ＯＲｉ
ＮＲｈＲｉ、
ＮＲｈＣ１−４アルキレンＮＲｈＲｉ
ＮＲｈＣ（＝Ｏ）Ｒｉ、
ＮＲｈＣ（＝Ｏ）ＮＲｈＲｉ、
Ｎ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）２、
ＮＲｈ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）、
ＳＯ２ＮＲｈＲｉ、
ならびにＯＳＯ２トリフルオロメチルからなる群より選択され；
Ｒ１９は水素、ハロゲン、ＯＲｈ、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、およびＮＲｈＲｉからなる群より選択され；
またはＲ１８およびＲ１９は共に、３員もしくは４員アルキレンまたは少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含む５員環もしくは６員環のアルキレン鎖成分を形成し；
Ｒ２０は水素、ハロゲン、ＮＯ２、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−６アルキル、ＯＣ１−６アルキル、およびＣ（＝Ｏ）Ｏｈからなる群より選択され；
Ｒ２１は水素であり；
またはＲ１８およびＲ１９は共に、３員もしくは４員アルキレンまたは少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含む５員環もしくは６員環のアルキレン鎖成分を形成し；
Ｈｅｔは酸素、チッ素、およびイオウからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含み、Ｃ１−４アルキルで任意に置換された５員または６員のヘテロ環状基を表し；
ＲｈおよびＲｉは同じでも異なっていることもでき、水素およびＣ１−６アルキルから独立して選択され；
ＲｊはフェニルまたはＣ４−６シクロアルキル（フェニルまたはＣ４−６シクロアルキルは、１以上のハロゲン原子、１以上のＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、または１以上のＯＲｈで任意に置換されることができる）を表し；
ｎは整数１、２、または３であり；
ｍは整数１または２である）。
【００４０】
構造式（ＩＩＩ）の好ましい化合物では、Ｃは少なくとも１つのチッ素またはイオウを含むヘテロアリール基であり、Ｒ１９は水素であり、そしてＲ１８はＮＲｈＲｉおよび、少なくとも１つのチッ素を含みＣ１−４アルキルで任意に置換された５員または６員のヘテロ環状基からなる群より選択される。
【００４１】
ＰＤＥ５インヒビターは、他の既知の抗ＰＤ薬を含めた他の薬物と同時に投与されてもよいと考えられ、この場合組み合わせ療法の際に治療効果を奏するのに必要とされる各薬剤の投薬量は、単独療法で有効性のために必要とされる投薬量も少なくなり得る。同時投与のための薬物の例には、Ｌ−ドーパ、カルボ−レボ、アポモルフィン、ピレベジル、ブロモクリプチン、カルベルゴリン、プラミペキソール、ロピニロール、セレギリン、ラザベミド、ラサギリン、シルデナフィルクエン酸塩（バイアグラ）、カフェイン、ミラペックス、ナプレラン、オキシブチンおよびアスピリンが含まれるがこれらに限定されることはない。
【００４２】
本発明はさらに、ＰＤを処置するための医薬品の製造におけるＰＤＥ５インヒビターの使用を提供するものである。
【００４３】
ＰＤＥ５類の比活性を定量するアッセイは当該技術分野においてよく知られており、かかるアッセイを本明細書に開示された治療方法で有用なインヒビターを同定するのに使用することができる。好ましいインヒビターは、ＰＤの処置における治療上の使用にとって望ましい物理的および生物学的性質、たとえば充分な水溶性、生物学的利用能、および代謝安定性を有するものである。
【００４４】
ＰＤＥ５インヒビターの抗ＰＤ治療上有効な量としては、ＰＤの進行を緩徐化または防止するのに有効な量、そしてＰＤの臨床症状を緩和または低減するのに有効な量が挙げられる。ＰＤＥ５インヒビターは、成人の場合毎日約０．１ｍｇから約１０００ｍｇの範囲の投薬量で、より好ましくは毎日約１ｍｇから約１００ｍｇの範囲の投薬量でヒトに投与することができる。さらにより好ましくは、投薬量は２４時間にわたって約２ｍｇから約２０ｍｇの範囲とされる。最も好ましいのは、有効な循環血液レベルを提供するように算出された投薬量である。ＰＤＥ５インヒビターの等価薬用量をさらに長い間隔にて、たとえばより大量の投薬量を毎週１回か２回投与することができる。処置に携わる医師によって決定されるとおりに、薬物の投薬量は増加または低減してもよく、また処置の期間を短縮または延期してもよい。投薬の頻度は薬剤の薬物動態学的パラメータ、および投与の経路に依存するはずである。至適な医薬剤形は、投与の経路および望ましい投薬量によって当業者により決定されよう。たとえば、引用することによってその開示を本明細書に盛り込むこととするＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（１９９０、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ  １８０４２）１４３５〜１７１２頁を参照されたい。かかる剤形は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、インビボでの遊離速度、インビボでのクリアランスの速度に影響を及ぼし得る。
【００４５】
当業者であれば、良好な医療実務および個々の患者の臨床状態により決定されるような有効投薬量および投薬計画を難なく至適化するであろう。投与の様式に関わらず、特定の投薬量は体重、体表面積または臓器のサイズにしたがって算出され得る。前記剤形の各々を用いる処置に対する適切な投薬量を決定するために必要とされる計算をさらに精巧にすることは、過度の実験を行わずとも当業者によって日常的に行われるものである。適切な投薬量は、血中レベル投薬量を定量するための確立されたアッセイを、適切な投薬量−応答データを併せて使用することで確実にされ得る。最終的な投与計画は、薬物の作用を動かす様々の因子、たとえば薬物の比活性、患者の損傷の重症度および応答性、患者の年齢、状態、体重、性および食事、臨床症状の重症度、投与の時間ならびに他の臨床的な因子を考慮し、担当医師によって決定されよう。
【００４６】
ＰＤＥ５インヒビターは、たとえば経口、静脈内、筋肉内または皮下の経路を介して全身に投与され得る。薬物は肺への投与用にエアロゾル化しても、鼻への投与用にスプレーに製剤化しても、脳脊髄液内へと、脳室内もしくはクモ膜下内に投与しても、または連続注入ポンプを介して静脈内に投与してもよい。薬物はまた、たとえば滴剤（特に点眼薬）、軟膏、パッチ、またはたとえば坐薬もしくは浣腸といった経直腸的経路を介して局所投与してもよい。組み合わせ処置のためには、ＰＤＥ５インヒビターおよび他の抗ＰＤ剤を同時かまたは連続的に投与することができる。
【００４７】
本発明の方法において用いられる化合物を何等の製剤化もせず直接投与することは可能ではあるが、かかる化合物は通常、医薬上容認され得る賦形剤と少なくとも一種の有効成分とを含む医薬組成物の形態にて投与される。これらの組成物は、経口、口腔内、直腸内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および鼻内を含めた種々の経路によって投与することができる。本発明の方法において用いられる化合物の多くは、注射用および経口用組成物の何れとしても有効である。かかる組成物は、医薬技術分野においてよく知られた方法にて調製され、少なくとも一種の活性な化合物を含むものである。
【００４８】
本発明において用いられる組成物を製造する際に、有効成分は通常、賦形剤と混合、賦形剤によって希釈、またはカプセル、袋（ｓａｃｈｅｔ）、紙または他の容器の形態とすることができる担体などの中に封入される。賦形剤が希釈剤としての機能を果たす場合、固形、半固形、または液体材料であることができ、これが有効成分のための媒体、担体または媒質として作用する。かくして組成物は、錠剤、丸剤、散剤、舐剤、袋剤、カシェー（餅嚢剤）、エリキシル剤、懸濁化剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（液状媒質中に個体として）、  たとえば１０重量％を上限とした活性化合物を含有する軟膏剤、軟質および硬質ゼラチンカプセル剤、坐剤、滅菌注射可能液剤、および滅菌充填散剤の形態にすることができる。
【００４９】
製剤を調製する際、他の成分と合わせる前に活性な化合物を粉体化し、適切な粒子サイズを提供することができる。活性な化合物が実質的に不溶性であれば、普通は２００メッシュ未満の粒度に粉砕される。活性な化合物が実質的に水溶性であれば、粒度は通常、たとえば約４０メッシュの、製剤中に実質的に均一に分布することとなるよう、粉砕によって調整される。
【００５０】
本発明において使用される組成物は、当該技術分野において知られている手法を用いることによって、患者に投与した後有効成分が迅速に、持続的にまたは遅延性に遊離することとなるように製剤化することができる。
【００５１】
組成物は好ましくは、単回服用量形態に製剤化される。「単回服用量形態」なる語は、ヒト被験者および他の哺乳動物に対する単一の服用量として好適な、物理的に個別の単位を称するもので、各々の単位は所望の治療効果を生み出すように算出された活性物質の所定量を好適な医薬用賦形剤と共に含有している。活性な化合物は一般的に、広い投薬量範囲にわたって有効である。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、医師により関連状況に鑑みて決定されるものであることは理解されよう。
【００５２】
以下の本発明の実施態様を考慮することで、当業者には本発明の多くのさらなる特徴および利点が明らかになるはずである。実施例１には、ＰＤＥ５の調製を記載している。実施例２には、ＰＤＥ５活性のアッセイを記載している。実施例３には、ＰＤＥ５インヒビターの効果を測定するアッセイを記載している。実施例４には、ＰＤに罹患している患者へのＰＤＥ５インヒビター化合物の投与を記載している。
【００５３】
［実施例１：インヒビターアッセイにて使用するためのヒトＰＤＥ５の調製］
ヒトＰＤＥ５の組み換え生産は以下の点を除き、基本的に米国特許第５，７０２，９３６号（引用することにより本明細書に盛り込むこととする）の実施例７に記載されるとおりに行った。すなわち、Ｖ．Ｐｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５，３０８〜３１８頁（１９９０）に記載の基本のＡＤＨ２プラスミドに由来するものである、用いた酵母形質転換ベクターは、ＡＤＨ１プロモーターおよびターミネーター配列でなく酵母ＡＤＨ２プロモーターおよびターミネーター配列を組み込んだものとし、そしてサッカロミセス・セレビシエ宿主は、１９９８年８月３１日にアメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、バージニアに寄託された受託番号７４４６５の、プロテアーゼ欠損株ＢＪ２−５４であった。形質転換された宿主細胞は、微量金属、およびビタミンを含む２ＸＳＣ−ｌｅｕ培地、ｐＨ６．２にて生育した。２４時間後に、グリセロールを含有するＹＥＰ培地を２Ｘ ＹＥＰ／３％グリセロールの最終濃度になるように添加した。およそ２４時間後に細胞を回収し、洗浄して−７０℃で保存した。
【００５４】
細胞ペレット（２９ｇ）は等容量の溶解用緩衝液（２５ｍＭ　Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ　８、５ｍＭ　ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭジチオスレイトール、１ｍＭベンズアミジン、および１０μＭ  ＺｎＳＯ４）で氷上にて解凍した。細胞はＮ２を用い２０，０００ｐｓｉでミクロフルイダイザーにて溶解した。溶解液は遠心分離し、０．４５μＭの使い捨てフィルターを通して濾過した。濾液はＱセファロースファストフロー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の１５０ｍｌカラムに付した。カラムを１．５容量の緩衝液Ａ（２０ｍＭ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓプロパン、ｐＨ  ６．８、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭジチオスレイトール、１０μＭ  ＺｎＳＯ４）で洗浄し、そして１２５ｍＭ  ＮａＣｌを含む緩衝液Ａの段階的勾配、次いで１２５〜１０００ｍＭ  ＮａＣｌを含む緩衝液Ａの直線的勾配で溶出を行った。
【００５５】
直線的勾配からの活性な画分は、緩衝液Ｂ（２０ｍＭ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓプロパン（ｐＨ  ６．８）、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭジチオスレイトール、１０μＭ  ＺｎＳＯ４、および２５０ｍＭ  ＫＣｌ）中の１８０ｍｌヒドロキシルアパタイトカラムに付した。負荷後に、カラムを２倍容量の緩衝液Ｂで洗浄し、そして０〜１２５ｍＭのリン酸カリウムを含む緩衝液Ｂの直線的勾配で溶出した。活性画分をプールして、６０％硫酸アンモニウムで沈澱させ、そして緩衝液Ｃ（２０ｍＭ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓプロパン、ｐＨ  ６．８、１２５ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５ｍＭジチオスレイトール、および１０μＭ  ＺｎＳＯ４）に再懸濁させた。プールはセファクリルＳ−３００  ＨＲの１４０ｍｌカラムに付して、緩衝液Ｃで溶出させた。活性画分を５０％グリセロールとなるように希釈し、そして−２０℃にて保存した。得られた調製物はＳＤＳ−ＰＡＧＥによれば約８５％の純度であった。
【００５６】
［実施例２：ＰＤＥ５活性のアッセイ］
ＰＤＥ５調製物の活性は、当該技術分野における標準的なアッセイによって測定することができる。たとえば、何れのＰＤＥの比活性も、以下のとおりにして定量することができる。チャコール分離技術を利用するＰＤＥアッセイは本質的に、Ｌｏｕｇｈｎｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．　２７１：７９６−８０６（１９９６）に記載されるとおりに実施する。このアッセイにおいてＰＤＥ５活性は、存在するＰＤＥ５活性の量に比例して［３２Ｐ］ｃＧＭＰを［３２Ｐ］５’ＧＭＰに変換する。その［３２Ｐ］５’ＧＭＰは次いで、ヘビ毒５’−ヌクレオチダーゼの作用によって遊離型の［３２Ｐ］リン酸塩と非標識のアデノシンに定量的に変換される。よって、遊離した［３２Ｐ］リン酸塩の量は酵素活性に比例する。アッセイは、最終濃度で４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ  ８．０）、１μＭ  ＺｎＳＯ４、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、および０．１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含有する１００μＬの反応混液中で、３０℃にて実施する。ＰＤＥ５は、基質の加水分解総量の３０％未満のを生じる量で存在する（直線的なアッセイ条件）。アッセイは基質（１ｍＭ  ［３２Ｐ］ｃＧＭＰ）の添加によって開始され、混合液は１２分間インキュベートされる。次いで７５μｇのガラガラヘビ毒を添加し、そしてインキュベーションをさらに３分間（合計１５分間）続ける。反応は、２００μＬの活性炭（０．１Ｍ  ＮａＨ２Ｐ０４、ｐＨ  ４中の２５ｍｇ／ｍｌ懸濁液）を添加することによって停止させる。活性炭を沈降させるための遠心分離（７５０Ｘｇ、３分間）の後、シンチレーション計数器での放射活性測定のために上清の試料を取り、ＰＤＥ５活性を算出する。
【００５７】
［実施例３：ＰＤＥ５インヒビターの効果を測定するためのアッセイ］
ＰＤＥ５調製物の酵素活性に対する本発明のインヒビターの効果は、主として規模が互いに異なるがＩＣ５０値とすれば本質的に同じ結果をもたらす２種のアッセイのいずれかにて評価することができる。何れのアッセイとも、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，３８４，４３０　（１９７５）の手法の変法を用いたものである。
【００５８】
アッセイの第１のものは、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ　７．５、３ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ　ＥＧＴＡ、５０μｇ／ｍｌヘビ毒ヌクレオチダーゼおよび５０ｎＭ［３Ｈ］−ｃＧＭＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有する２００μｌの総容量中で実施する。本発明の化合物は、アッセイ液に最終的に２％存在するＤＭＳＯ中に溶解させる。アッセイ液は３０℃にて３０分間インキュベートし、そして１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．５、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭテオフィリン、０．１ｍＭアデノシン、および  ０．１ｍＭグアノシンを８００μｌ添加することによって停止させる。混合液は０．５ｍｌのＱＡＥセファデックスカラムに負荷し、そして２ｍｌの０．１Ｍギ酸塩（ｐＨ  ７．４）によって溶出する。溶出された放射活性は、Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｈｉｓａｆｅ  ３にてシンチレーション計数することによって測定する。
【００５９】
第２のミクロプレートＰＤＥアッセイでは、マルチスクリーンプレートおよび真空マニフォルドを使用する。アッセイ液（１００μｌ）は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．５、５ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび２５０μｇ／ｍｌヘビ毒ヌクレオチダーゼを含有する。反応混液の他の成分は、前記と同様である。インキュベーションの終わりに、アッセイ液の総容量をＱＡＥセファデックスミクロカラムプレートに濾過によって負荷する。遊離の放射活性を２００μｌの水で溶出し、このうち５０μｌのアリコートを前記と同様にシンチレーション計数によって分析する。
【００６０】
［実施例４：ＰＤＥ５インヒビター化合物の投与］
本発明のＰＤＥ５インヒビターを投与された患者には、パーキンソン病の好転、すなわち症状の低減が認められた。ＰＤＥ５インヒビターは、５−（２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（別名シルデナフィルクエン酸塩（バイアグラ（登録商標））として知られている）であった。
【００６１】
現在のところ好ましい本発明の実施態様の、以上詳説した記載を考慮すれば、本発明の実施における多くの修飾および変更が当業者に想起されることが予期される。したがって、本発明の範囲に付されるべき限定は、特許請求の範囲にあるもののみに限られる。
【国際公開パンフレット】
2004500425.tif 000008
2004500425.tif 000009
2004500425.tif 000010
2004500425.tif 000011
2004500425.tif 000012
2004500425.tif 000013
2004500425.tif 000014
2004500425.tif 000015
2004500425.tif 000016
2004500425.tif 000017
2004500425.tif 000018
2004500425.tif 000019
2004500425.tif 000020
2004500425.tif 000021
2004500425.tif 000022
2004500425.tif 000023
2004500425.tif 000024
2004500425.tif 000025
2004500425.tif 000026
2004500425.tif 000027
2004500425.tif 000028
2004500425.tif 000029
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500425.tif 000030
【国際調査報告】
2004500425.tif 000031
2004500425.tif 000032
2004500425.tif 000033