(57)【要約】式（Ｉ）の化合物が提供され、ここで、Ｘは、環系である；Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基であるとき、該ステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表わす；そしてここで、該化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって：
【化１】
2004506741.tif 000067
ここで、
Ｘは、環系であり；
Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種であり；
Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種であり；
ここで、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基であるとき、該ステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表し；そして
ここで、該化合物が、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害し得るか、そして／あるいは細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用し得る、
化合物。
【請求項２】
前記環系が、多環系である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記環系が、次式である、請求項２に記載の化合物：
【化２】
2004506741.tif 000068
【請求項４】
前記環系が、少なくとも３個の環を含む、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
前記環系が、次式である、請求項４に記載の化合物：
【化３】
2004506741.tif 000069
【請求項６】
前記環系が、少なくとも４個の環を含む、請求項１、２または３に記載の化合物。
【請求項７】
前記環系が、次式である、請求項６に記載の化合物：
【化４】
2004506741.tif 000070
【請求項８】
Ｒ１が、環Ａに結合されている、請求項３、５または７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、環Ｂに結合されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２が、環Ｃに結合されている、請求項５に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が、環Ｄに結合されている、請求項６に記載の化合物。
【請求項１２】
前記環系が、ステロイド性であるか、または擬似ステロイド環である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
前記環系が、ステロイド性である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記環系が、エストロゲン性である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記環系が、エストロゲンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
前記環系が、エストロンおよびエストラジオールから選択される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、式Ｉａを有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物であって：
【化５】
2004506741.tif 000071
ここで、Ｒ３は、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基である、
化合物。
【請求項１８】
前記化合物が、式ＩＩを有する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物であって：
【化６】
2004506741.tif 000072
ここで、Ｒ３は、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基である、
化合物。
【請求項１９】
Ｒ３が、オキシ炭化水素基である、請求項１７または１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３が、アルコキシ基である、請求項１７または１８に記載の化合物。
【請求項２１】
前記アルコキシ基が、メトキシである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ３が、ヒドロカルビル基である、請求項１７または１８に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ３が、アルキル基である、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記アルキル基が、メチルまたはエチルである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
式ＩＶを有する、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物：
【化７】
2004506741.tif 000073
【請求項２６】
式Ｖを有する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物：
【化８】
2004506741.tif 000074
【請求項２７】
式ＶＩを有する、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物：
【化９】
2004506741.tif 000075
【請求項２８】
式ＶＩＩを有する、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物：
【化１０】
2004506741.tif 000076
【請求項２９】
Ｒ１が、スルファメート基である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ２が、スルファメート基である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１およびＲ２が、スルファメート基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
前記化合物が、少なくとも２個のスルファメート基を含み、ここで、該スルファメート基が、同じ環上にはない、請求項１に記載の化合物。
【請求項３３】
前記スルファメート基が、次式である、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物であって：
【化１１】
2004506741.tif 000077
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、別個に、Ｈおよびヒドロカルビルから選択される、
化合物。
【請求項３４】
Ｒ４およびＲ５の各々が、別個に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表わし、該アルキレンが、必要に応じて、該アルキレン鎖中に１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含有する、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個が、Ｈである、請求項３３または３４に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ４およびＲ５の両方が、Ｈである、請求項３３、３４または３５に記載の化合物。
【請求項３７】
式ＶＩＩＩの化合物であって：
【化１２】
2004506741.tif 000078
ここで、
Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種であり、そして；
ここで、該化合物が、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害し得るか、そして／あるいは細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用し得る、
化合物。
【請求項３８】
式ＩＸである、請求項３７に記載の化合物：
【化１３】
2004506741.tif 000079
【請求項３９】
Ｒ２が、スルファメート基である、請求項３７または３８に記載の化合物。
【請求項４０】
前記スルファメート基が、次式である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の化合物であって：
【化１４】
2004506741.tif 000080
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、別個に、Ｈおよびヒドロカルビルから選択される、
化合物。
【請求項４１】
Ｒ４およびＲ５の各々が、別個に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、アリールアルキル、または一緒になって、アルキレンを表わし、該アルキレンが、必要に応じて、該アルキレン鎖中に１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含有する、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個が、Ｈである、請求項４０または４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ４およびＲ５の両方が、Ｈである、請求項４０または４１に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｒ４およびＲ５の各々が、別個に、Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＣＨ３、ＣＨ２Ｃ６Ｈ５およびＣＨ３から選択される、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４５】
式Ｘである、請求項３７〜４４のいずれか１項に記載の化合物であって：
【化１５】
2004506741.tif 000081
ここで、Ｒ６は、ＯＨまたはオキシヒドロカルビル基である、
化合物。
【請求項４６】
式ＸＩである、請求項３７に記載の化合物であって：
【化１６】
2004506741.tif 000082
ここで、Ｒ６は、ＯＨまたはオキシヒドロカルビル基である、
化合物。
【請求項４７】
Ｒ６が、オキシヒドロカルビル基である、請求項４５または４６に記載の化合物。
【請求項４８】
前記オキシヒドロカルビル基が、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ６Ｈ５であり、ここで、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、好ましくは、１、２または３である、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
以下の工程を包含する、方法：（ａ）請求項１〜４８のいずれか１項で定義した式を有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞増殖および／またはアポトーシスを調節できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞増殖および／またはアポトーシスを調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【請求項５０】
以下の工程を包含する、方法：（ａ）請求項１〜４８のいずれか１項で定義した式を有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性を阻害できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖を調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【請求項５１】
請求項４９または請求項５０に記載の方法により同定された、化合物。
【請求項５２】
薬剤で使用する、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５３】
必要に応じて、薬学的に受容可能な担体、希釈剤、賦形剤または補助剤と混合した、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の化合物を含有する、製薬組成物。
【請求項５４】
ＳＴＳおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖に関連した病気または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項５５】
逆ＳＴＳレベルおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖に関連した病気または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、化合物に関する。
【０００２】
特に、本発明は、化合物およびその化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明はまた、この化合物または組成物を治療用途で使用することに関する。
【０００３】
（発明の背景）
エストロゲンは内分泌依存性組織（例えば、乳房または子宮内膜）での腫瘍の増殖の促進に関与している主要な分裂促進因子であるという根拠が示唆されている。血漿エストロゲン濃度は、乳癌がある女性と乳癌がない女性とで類似しているものの、乳房腫瘍エストロンおよびエストラジオールのレベルは、正常な乳房組織または血液中よりも著しく高い。エストロゲンのインサイチュ合成は、腫瘍内の高いレベルのエストロゲンに大きく寄与していると考えられており、従って、エストロゲン生合成の阻害剤（特に、特異的阻害剤）は、内分泌依存性腫瘍の処置に対して、潜在的に重要となる。
【０００４】
過去２０年間にわたって、アンドロゲン前駆体であるアンドロステンジオンをエストロンに転化するアロマターゼ経路の阻害剤を開発することに、相当な関心が集まっている。しかしながら、現在、エストロンスルファターゼ（Ｅ１−ＳＴＳ）経路（すなわち、エストロンスルフェートのエストロンへの加水分解（Ｅ１ＳからＥ１））は、このアロマターゼ経路とは対照的に、乳房腫瘍での主要なエストロゲン源であるという証拠がある。この理論は、乳癌をアロマターゼ阻害剤（例えば、アミノグルテチミドおよび４−ヒドロキシアンドロステンジオン）で処置した閉経後の女性での血漿エストロゲン濃度の緩やかな減少により、また、これらのアロマターゼ阻害剤処置を受けた患者での血漿Ｅ１Ｓ濃度が比較的に高いままであるという事実により、支持されている。非結合エストロゲンの半減期（２０分間）と比較した血液中のＥ１Ｓの長い半減期（１０〜１２時間）、および肝臓、および正常な乳房組織および悪性の乳房組織における高いレベルのステロイドスルファターゼ活性もまた、この理論を支持している。
【０００５】
ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、エストロン依存性の腫瘍（特に、乳癌）の処置で使用する新規なステロイドスルファターゼ阻害剤およびそれらを含有する薬学的組成物を教示している。これらのステロイドスルファターゼ阻害剤は、スルファミン酸エステル（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルエストロゲン−３−スルファメート、好ましくは、エストロゲン−３−スルファメート；これは、別に、「ＥＭＡＴＥ」として知られている）である。ＥＭＡＴＥは、以下の構造を有する：
【０００６】
【化１７】
2004506741.tif 000002
ＥＭＡＴＥは、０．１ｍＭでインタクトなＭＣＦ−７細胞においてＥ１−ＳＴＳ活性を９９％より高く阻害するので、強力なＥ１−ＳＴＳ阻害剤であることが知られている。ＥＭＡＴＥはまた、時間および濃度に依存した様式で、Ｅ１−ＳＴＳ酵素を阻害し、このことは、それが活性部位指向失活剤として作用することを意味している。ＥＭＡＴＥは、最初は、Ｅ１−ＳＴＳを阻害するために設計されたものの、これはまた、デヒドロエピアンドロステロンスルファターゼ（ＤＨＡ−ＳＴＳ）（これは、エストロゲン性ステロイドアンドロステンジオールの生合成を制御する際に中心的な役割を果たすと考えられている酵素である）も阻害する。また、現在では、アンドロステンジオールが、乳房腫瘍の増殖の促進剤として、さらに重要であり得ることを示唆する証拠がある。ＥＭＡＴＥはまた、経口投与または皮下投与のいずれかで投与したときに生じるラット肝臓のＥ１−ＳＴＳ活性（９９％）およびＤＨＡ−ＳＴＳ活性（９９％）の殆ど完全な阻害として、インビボで活性である。さらに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて記憶促進効果を有することが示されている。マウスでの研究により、ＤＨＡ−ＳＴＳ活性と免疫応答の一部の調節との間の関係が示唆された。これはまた、ヒトでも起こり得ると考えられている。ＥＭＡＴＥ中のスルファメート部分の架橋Ｏ原子は、阻害活性に重要である。それゆえ、この３−Ｏ−原子が、エストロン−３−Ｎ−スルファメートおよびエストロン−３−Ｓ−スルファメートにおけるように、他のヘテロ原子で置換される場合、これらのアナログは、弱い時間非依存性失活剤である。
【０００７】
Ｅ１−ＳＴＳの阻害に最適な効力は、ＥＭＡＴＥで達成され得るものの、スルファターゼ阻害中にてエストロンが放出され得る可能性があり、また、ＥＭＡＴＥおよびそのエストラジオール同族体がエストロゲン活性を有し得る可能性がある。
【０００８】
Ａｈｍｅｄら（Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　１９９９年１月２７日；２５４（３）：８１１−５）は、ＳＴＳのステロイド性阻害剤および非ステロイド性阻害剤の構造−活性関係研究について報告している。
【０００９】
本発明は、Ｅ１−ＳＴＳの阻害および他の治療用途に適切な新規化合物を提供しようと試みる。
【００１０】
（発明の簡単な局面）
本発明は、特定の化合物が、有効なステロイドスルファターゼ阻害剤として、および／または細胞周期に影響を与えることができる試薬として、および／またはアポトーシスに影響を与えることができる試薬として使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１１】
１局面では、本発明は、特定のビスサルフェート化合物および特定のＤ環置換ステロイド性化合物が、有効なステロイドスルファターゼ阻害剤として、および／または細胞周期のモジュレーターとして、および／またはアポトーシスのモジュレーターとして使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１２】
これらの化合物は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基から選択される少なくとも２個の基を含有する。これらの環系化合物は、少なくとも１個の環成分を含有する。その環成分は、その環内に、少なくとも４個の原子を含有する。典型的には、これらの４個の原子は、炭素原子である。それゆえ、典型的には、その環成分は、ヒドロカルビル基である。
【００１３】
本発明の化合物は、他の置換基を含有し得る。これらの他の置換基は、例えば、本発明の化合物の活性をさらに高め得、そして／または（エキソビボおよび／またはインビボでの）安定性を高め得る。
【００１４】
（発明の詳細な局面）
本発明の１局面によれば、式Ｉの化合物が提供される：
【００１５】
【化１８】
2004506741.tif 000003
ここで、Ｘは、環系である；Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基である場合、このステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表わす；そしてここで、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害し得、そして／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用できる。
【００１６】
本発明の１局面によれば、式ＶＩＩＩの化合物が提供される：
【００１７】
【化１９】
2004506741.tif 000004
ここで、Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害し得、そして／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用し得る。
【００１８】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）式Ｉの１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）この候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞増殖および／またはアポトーシスを調節し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞増殖および／またはアポトーシスを調節できるこの候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００１９】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）式Ｉを有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）この候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性を阻害し得るか否かを決定する工程；および（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞増殖および／またはアポトーシスを調節し得る候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００２０】
本発明の方法のいずれか１方法では、１個またはそれ以上の追加工程が存在し得る。例えば、この方法はまた、（例えば、化学技術および／または酵素技術により）同定した候補化合物を改変する工程および改変した化合物をＳＴＳ阻害効果について試験する追加工程（これは、その効果が大きいか異なることを調べるためにあり得る）を包含し得る。さらに別の例として、この方法はまた、（例えば、結晶技術を使用することにより）同定した候補化合物の構造を決定する工程、次いで、例えば、そのＳＴＳ阻害活性をさらに高めるために、コンピューターモデル化研究を実行する工程を包含し得る。それゆえ、本発明はまた、該同定した候補化合物用のデータセット（例えば、結晶配位）を有するコンピューターを包含する。本発明はまた、その分析（例えば、タンパク質結合研究）用のコンピュータースクリーン上で存在している場合の同定した候補化合物を包含する。
【００２１】
本発明の１局面によれば、本発明の方法により同定された化合物が提供される。
【００２２】
本発明の１局面によれば、薬剤で使用するための本発明の化合物が提供される。
【００２３】
本発明の１局面によれば、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤または補助剤と混合した本発明記載の化合物を含有する薬学的組成物が提供される。
【００２４】
本発明の１局面によれば、ＳＴＳおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖に関連した状態または疾患を処置する際に使用するための医薬の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２５】
本発明の１局面によれば、有害なＳＴＳレベルおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖に関連した状態または疾患を処置する際に使用するための医薬の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２６】
本発明はまた、本発明の新規化合物（例えば、本明細書中で提示したもの）、およびそれらを製造する方法（例えば、本明細書中で提示した方法）、およびこれらのプロセスで使用する新規中間体（例えば、本明細書中で提示したもの）を包含する。
【００２７】
参照し易くするために、本発明のこれらの局面およびさらに別の局面は、ここで、適切な節の表題で、論述する。しかしながら、各節での教示は、必ずしも、各特定の節には限定されない。
【００２８】
（好ましい局面）
好ましい局面では、環系は、多環系である。疑念を避けるために、一般式Ｉの環Ｘは、１個またはそれ以上の環を表わし得る。この環は、縮合、非縮合、または縮合と非縮合との組合せであり得る。
【００２９】
好ましい局面では、前記環系は、次式である：
【００３０】
【化２０】
2004506741.tif 000005
好ましい局面では、前記環系は、少なくとも３個の環を含む。
【００３１】
好ましい局面では、前記環系は、次式である：
【００３２】
【化２１】
2004506741.tif 000006
好ましい局面では、前記環系は、少なくとも４個の環を含む。
【００３３】
好ましい局面では、前記環系は、次式である：
【００３４】
【化２２】
2004506741.tif 000007
好ましい局面では、Ｒ１は、環Ａに結合されている。
【００３５】
好ましい局面では、Ｒ２は、環Ｂに結合されている。
【００３６】
好ましい局面では、Ｒ２は、環Ｃに結合されている。
【００３７】
好ましい局面では、Ｒ２は、環Ｄに結合されている。
【００３８】
非常に好ましい局面では、Ｒ１は、環Ａに結合されており、そしてＲ２は、環Ｂに結合されている。
【００３９】
非常に好ましい局面では、Ｒ１は、環Ａに結合されており、そしてＲ２は、環Ｃに結合されている。
【００４０】
非常に好ましい局面では、Ｒ１は、環Ａに結合されており、そしてＲ２は、環Ｄに結合されている。
【００４１】
好ましい局面では、前記環系は、ステロイド性であるか、またはステロイド環を模倣する。
【００４２】
好ましい局面では、前記環系は、ステロイド性である。
【００４３】
好ましい局面では、前記環系は、エストロゲン性である。さらに好ましくは、前記環系は、エストロゲンである。
【００４４】
好ましい局面では、前記環系は、エストロンおよびエストラジオールから選択される。
【００４５】
好ましい局面では、前記化合物は、式Ｉａを有する：
【００４６】
【化２３】
2004506741.tif 000008
ここで、Ｒ３は、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基である。
【００４７】
好ましい局面では、前記化合物は、式ＩＩを有する：
【００４８】
【化２４】
2004506741.tif 000009
ここで、Ｒ３は、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基である。
【００４９】
好ましい局面では、Ｒ３は、オキシ炭化水素基である。
【００５０】
好ましい局面では、Ｒ３は、アルコキシ基、好ましくは、メトキシである。
【００５１】
さらに好ましい局面では、Ｒ３は、ヒドロカルビル基、例えば、アルキル基、好ましくは、メチルまたはエチルである。
【００５２】
好ましい局面では、前記化合物は、式ＩＶを有する：
【００５３】
【化２５】
2004506741.tif 000010
好ましい局面では、前記化合物は、式Ｖを有する：
【００５４】
【化２６】
2004506741.tif 000011
好ましい局面では、前記化合物は、式ＶＩを有する：
【００５５】
【化２７】
2004506741.tif 000012
好ましい局面では、前記化合物は、式ＶＩＩを有する：
【００５６】
【化２８】
2004506741.tif 000013
好ましくは、Ｒ１は、スルファメート基である。
【００５７】
好ましくは、Ｒ２は、スルファメート基である。
【００５８】
好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、スルファメート基である。
【００５９】
好ましい局面では、本発明の化合物は、少なくとも２個のスルファメート基を含み、ここで、該スルファメート基は、同じ環上にはない。
【００６０】
好ましい局面では、前記スルファメート基は、次式を有する：
【００６１】
【化２９】
2004506741.tif 000014
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビルから選択される。
【００６２】
好ましい局面では、スルファメートのＲ４およびＲ５の各々は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表わし、該アルキレンは、必要に応じて、該アルキレン鎖中に１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【００６３】
好ましい局面では、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個は、Ｈである。
【００６４】
非常に好ましい局面では、Ｒ４およびＲ５の両方は、Ｈである。
【００６５】
上で述べたように、本発明は、式ＶＩＩＩの化合物を提供する：
【００６６】
【化３０】
2004506741.tif 000015
ここで、Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、該化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害し得、そして／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用し得る。
【００６７】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＩＸを有する：
【００６８】
【化３１】
2004506741.tif 000016
好ましい局面では、式ＶＩＩＩまたは式ＩＸの化合物のＲ２は、スルファメート基である。
【００６９】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩまたは式ＩＸの化合物のＲ２は、次式のスルファメート基である：
【００７０】
【化３２】
2004506741.tif 000017
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビルから選択される。
【００７１】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩまたは式ＩＸの化合物のＲ２は、次式のスルファメート基である：
【００７２】
【化３３】
2004506741.tif 000018
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、アリールアルキル、または一緒になって、アルキレンを表わし、該アルキレンが、必要に応じて、該アルキレン鎖中に１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【００７３】
好ましくは、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個は、Ｈである。
【００７４】
好ましくは、Ｒ４およびＲ５の両方は、Ｈである。
【００７５】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩまたは式ＩＸの化合物のＲ２は、次式のスルファメート基である：
【００７６】
【化３４】
2004506741.tif 000019
ここで、Ｒ４およびＲ５の各々は、独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＣＨ３、ＣＨ２Ｃ６Ｈ５およびＣＨ３から選択される。
【００７７】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩの化合物は、式Ｘを有する：
【００７８】
【化３５】
2004506741.tif 000020
ここで、Ｒ６は、ＯＨまたはオキシヒドロカルビル基である。
【００７９】
好ましい局面では、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＸＩを有する：
【００８０】
【化３６】
2004506741.tif 000021
ここで、Ｒ６は、ＯＨまたはオキシヒドロカルビル基である。
【００８１】
好ましくは、式ＸまたはＸＩのＲ６は、オキシヒドロカルビル基である。好ましくは、前記オキシヒドロカルビル基は、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ６Ｈ５であり、ここで、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、好ましくは、１、２または３である。
【００８２】
好ましくは、前記環系は、全ての置換基を含めて、最大で約５０個の炭素原子、さらに普通には、約３０〜４０個以下の炭素原子を含有する。
【００８３】
ある用途には、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果が全くないか、最小限のエストロゲン効果しか有しない。
【００８４】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果を有する。
【００８５】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、可逆作用を有する。
【００８６】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、非可逆作用を有する。
【００８７】
１実施形態では、本発明の化合物は、乳癌の治療に有用である。
【００８８】
本発明はまた、本発明の化合物を調製するのに有用な新規中間体を包含する。例えば、本発明は、該化合物用の新規アルコール前駆体を包含する。別の例として、本発明は、該化合物用のビス保護前駆体を包含する。該前駆体の各々の例は、本明細書中で提示する。本発明はまた、本発明の化合物を合成するために該前駆体の各々または両方を含む方法を包含する。
【００８９】
（利点）
本発明の１つの重要な利点は、本発明のスルファメート化合物がＳＴＳ阻害剤として作用できることにある。
【００９０】
本発明の化合物の他の利点は、それらがインビボで効能があり得ることにある。
【００９１】
本発明の化合物の一部は、非エストロゲン性化合物であり得る。ここで、「非エストロゲン性」との用語は、エストロゲン活性を全く示さないか、実質的に全く示さないことを意味する。
【００９２】
他の利点は、これらの化合物の一部がホルモン活性を示すか誘発する化合物に代謝でき得ないことにある。
【００９３】
本発明の化合物の一部はまた、経口活性であり得る点で、有利である。
【００９４】
本発明の化合物の一部は、特に、医薬品を最初から投与する必要があり得るとき、癌（例えば、乳癌）の治療だけでなく（またはその代わりに）、非悪性状態（例えば、自己免疫疾患）の防止にも有用であり得る。
【００９５】
それゆえ、本発明の化合物の一部はまた、内分泌依存性癌の治療（例えば、自己免疫疾患の治療）以外の治療用途を有すると考えられている。
【００９６】
本発明の化合物はまた、アポトーシスの誘発剤としても有用であり得る。
【００９７】
本発明の化合物はまた、細胞成長阻害剤としても有用であり得る。
【００９８】
（ステロイドスルファターゼ）
ステロイドスルファターゼは、時には、数種のスルファターゼステロイド（例えば、エストロンサルフェート、デヒドロエピアンドロステロンサルフェートおよびコレステロールサルフェート）を短時間で加水分解するためのステリルスルファターゼまたは「ＳＴＳ」と呼ばれる。ＳＴＳは、酵素番号ＥＣ　３．１．６．２を割り当てられている。
【００９９】
ＳＴＳは、クローン化され発現される。例えば、Ｓｔｅｉｎら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１３８６５〜１３８７２（１９８９））およびＹｅｎら（Ｃｅｌｌ　４９：４４３〜４５４（１９８７））を参照せよ。
【０１００】
ＳＴＳは、多数の疾患状態に関係している酵素である。
【０１０１】
例として、研究者は、ＳＴＳが全く欠乏すると魚鱗癬が起こることを発見した。一部の研究者によれば、ＳＴＳの欠乏は、日本で、かなり蔓延している。同じ研究者（Ｓａｋｕｒａら、Ｊ　Ｉｎｈｅｒｉｔ　Ｍｅｔａｂ　Ｄｉｓ　１９９７年１１月；２０（６）：８０７−１０）はまた、アレルギー性疾患（例えば、気管支喘息、アレルギー性鼻炎またはアトピー性皮膚炎）がステロイドスルファターゼの欠乏に関連し得ることを報告している。
【０１０２】
ＳＴＳ活性が全く欠けていることにより起こる疾患状態に加えて、高いレベルのＳＴＳ活性もまた、疾患状態を誘発し得る。例として、上で述べたように、乳癌の成長および転移におけるＳＴＳの役割を支持する強力な証拠がある。
【０１０３】
ＳＴＳはまた、他の疾患状態にも関係している。例として、Ｌｅ　Ｒｏｙら（Ｂｅｈａｖ　Ｇｅｎｅｔ　１９９９年３月；２９（２）：１３１−６）は、ステロイドスルファターゼ濃度とマウスでの攻撃挙動の開始との間で遺伝的な相関があり得ると決定した。著者は、ステロイドのスルファターゼ付加が複雑なネットワーク（突然変異誘発による攻撃性に関係していることが分かった遺伝子を含めて）の原動力であり得ると結論づけている。
【０１０４】
（ＳＴＳ阻害）
ＳＴＳ活性に関連した一部の疾患状態は、非活性スルファターゼエストロンが活性非硫酸化エストロンに変換することによると考えられている。ＳＴＳ活性に関連した疾患状態では、ＳＴＳ活性を阻害することが望まれている。
【０１０５】
ここで、「阻害」との用語は、ＳＴＳの有害な作用を少なくするか、および／またはなくすか、および／または遮蔽するか、および／または防止することを含む。
【０１０６】
（ＳＴＳ阻害剤）
本発明によれば、本発明の化合物は、ＳＴＳ阻害剤として作用できる。
【０１０７】
ここで、本発明の化合物に関して本明細書中で使用する「阻害剤」との用語は、ＳＴＳ活性を阻害できる（例えば、ＳＴＳの有害な作用を少なくできるか、および／またはなくすことができるか、および／または遮蔽できるか、および／または防止できる）化合物を意味する。このＳＴＳ阻害剤は、アンタゴニストとして作用し得る。
【０１０８】
化合物がエストロンサルフェート活性を阻害する性能は、無傷ＭＣＦ−７乳癌細胞または胎盤ミクロソームのいずれかを使用して、評価できる。それに加えて、動物モデルが使用され得る。適切なＡｓｓａｙ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓに関する詳細は、以下の節で提示される。ＳＴＳ活性（それゆえ、ＳＴＳ阻害）を測定するために、他のアッセイが使用できることに注目すべきである。例えば、ＷＯ−Ａ−９９／５０４５３の教示が参照され得る。
【０１０９】
好ましくは、一部の用途には、この化合物は、もし、そのスルファメート基がサルフェート基で置換されてサルフェート誘導体を形成するなら、このサルフェート誘導体は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能である（すなわち、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートしたとき）という機能により、さらに特徴付けられる。
【０１１０】
好ましい１実施形態では、もし、この化合物のスルファメート基がサルフェート基で置換されてサルフェート化合物を形成するなら、そのサルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能であり、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートしたとき、２００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１５０ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、７５ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、５０ｍｍｏｌａｒ未満のＫｍ値を生じる。
【０１１１】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により、加水分解可能ではない。
【０１１２】
ある用途には、好ましくは、本発明の化合物は、望ましい標的（例えば、ＳＴＳ）に対する少なくとも約１００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３５０倍の選択性を有する。
【０１１３】
本発明の化合物は、それがＳＴＳ活性を阻害する性能に加えてまたはその代わりに、他の有益な特性を有し得ることに注目すべきである。
【０１１４】
（Ｋ基）
Ｘは、単一環であるとき、ヒドロカルビル基Ｋで置換され得る。それゆえ、この局面では、本発明は、式ＸＩＩの化合物を提供する：
【０１１５】
【化３７】
2004506741.tif 000022
ここで、Ｘは、環である；Ｋは、ヒドロカルビル基である；Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基であるとき、該ステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表わす；そしてここで、該化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞成長のモジュレーターとして作用できる。
【０１１６】
Ｋ基は、環状構造である必要はない。このことに関して、Ｋ基は、直鎖構造であり得、これは、インビボのとき、環に適合する性能を有し得る。
【０１１７】
好ましい局面では、Ｋ基は、環状基Ｋを形成するように、環状である。
【０１１８】
環状基Ｋは、必ずしも、環Ｘと縮合する必要はない。このことに関して、それらは、ヒドロカルビル基であり得る適切なスペーサ基により、分離され得る。
【０１１９】
好ましい局面では、環状基Ｋは、環Ｘに縮合される。
【０１２０】
Ｋ基は、多環式基であり得、これは、縮合多環である必要はない。
【０１２１】
それゆえ、好ましい局面では、Ｋ基およびＸ環は、多環式化合物を構成する。本明細書中の「多環式」との用語は、縮合環構造および非縮合環構造（それらの組合せを含めて）を含む。
【０１２２】
環状基ＫおよびＸの少なくとも１個は、複素環基（複素環）または非複素環基であり得る。
【０１２３】
環状基ＫおよびＸの少なくとも１個は、飽和環構造または不飽和環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【０１２４】
好ましくは、これらの環状基の少なくとも１個は、アリール環である。
【０１２５】
もし、この環状基が多環式であるなら、その化合物の環成分の一部または全部は、一緒に縮合され得るか、または１個またはそれ以上の適切なスペーサ基を介して接合され得る。
【０１２６】
この多環式化合物は、多数の縮合環を含有し得る。この局面では、これらの縮合環は、異なるサイズの環（例えば、３個の６員環（６，６，６）、１個の６員環、１個の７員環および１個の６員環（６，７，６）、１個の６員環および２個の８員環（６，８，８）など）の組合せを含有し得る。
【０１２７】
１局面では、本発明は、その多環式化合物が（６，６，７）環以外のものである化合物に関する。さらに他の局面では、本発明は、その多環式化合物が７員以外ものを有する環だけを含む化合物に関する。
【０１２８】
好ましくは、この多環式化合物は、全ての置換基を含めて、約５０個以下の炭素原子、さらに普通には、約３０〜４０個以下の炭素原子を含有する。
【０１２９】
この多環式化合物は、少なくとも２個の環成分、または少なくとも３個の環成分、または少なくとも４個の環成分を含有できる。
【０１３０】
好ましくは、この多環式化合物は、４個の環成分を含有する。
【０１３１】
好ましい多環式化合物は、ステロイド環成分またはそのバイオアイソスター（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅｓ）を有する。
【０１３２】
（ヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「ヒドロカルビル基」との用語は、少なくともＣおよびＨを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。この置換基が環状基である可能性に加えて、置換基を組み合わせて環状基が形成され得る。もし、このヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有するなら、これらの炭素は、必ずしも、互いに連結される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、連結され得る。それゆえ、このヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、イオウ、窒素および酸素が挙げられる。ヒドロカルビル基の非限定的な例には、アシル基がある。
【０１３３】
典型的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。ここで、「炭化水素」との用語は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基（この基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはアリール基のいずれか１個を意味する。炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が挙げられる。もし、この炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造であるなら、その置換基は、炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得る；あるいは、これらの置換基は、この炭化水素骨格上および分枝上にあり得る。
【０１３４】
（スルファメート基）
１実施形態では、環Ｘは、置換基として、スルファメート基を有する。本明細書中で使用する「スルファメート」との用語は、スルファミン酸のエステル、またはスルファミン酸のＮ−置換誘導体のエステル、またはそれらの塩を含む。
【０１３５】
もし、Ｒ３がスルファメート基であるなら、本発明の化合物は、スルファメート化合物と呼ばれる。
【０１３６】
典型的には、このスルファメート基は、次式を有する：
（Ｒ４）（Ｒ５）Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、別個に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール、またはそれらの組合せから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表わし、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１３７】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ４および／またはＲ５がアルキルであるとき、好ましい値には、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ別個に、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から選択される。Ｒ４およびＲ５は、共にメチルであり得る。Ｒ４および／またはＲ５がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ４およびＲ５がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ４およびＲ５は、一緒に接合するとき、典型的には、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を表わし、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１３８】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、当該化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１３９】
ある実施形態では、このサルフェート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１４０】
ある実施形態では、１個より多いスルファメート基が存在し得る。例として、２個のスルファメート基（すなわち、ビス−スルファメート化合物）が存在し得る。もし、これらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）スルファメート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１４１】
ある実施形態では、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個は、Ｈである。
【０１４２】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ４およびＲ５の各々は、Ｈである。
【０１４３】
（ホスホネート基）
もし、Ｒ３が、ホスホネート基であるなら、本発明の化合物は、ホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１４４】
典型的には、このホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ６）−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルまたはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１４５】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ６がアルキルであるとき、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ６は、メチルであり得る。Ｒ６がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ６がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ６は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１４６】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１４７】
ある実施形態では、このホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１４８】
ある実施形態では、１個より多いホスホネート基が存在し得る。例として、２個のホスホネート基（すなわち、ビス−ホスホネート化合物）が存在し得る。もし、これらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）ホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１４９】
（チオホスホネート基）
もし、Ｒ３が、チオホスホネート基であるなら、本発明の化合物は、チオホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１５０】
典型的には、このチオホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ７）−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルまたはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１５１】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ７がアルキルであるとき、Ｒ７は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ７は、メチルであり得る。Ｒ７がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ７がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ７は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１５２】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１５３】
ある実施形態では、このチオホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１５４】
ある実施形態では、１個より多いチオホスホネート基が存在し得る。例として、２個のチオホスホネートが存在し得る（すなわち、ビス−チオホスホネート化合物）。もし、これらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、このステロイド核の１７位に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）チオホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１５５】
（スルホネート基）
もし、Ｒ３が、スルホネート基であるなら、本発明の化合物は、スルホネート化合物と呼ばれる。
【０１５６】
典型的には、このスルホネート基は、次式を有する：
（Ｒ８）−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルまたはアリール、あるいはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１５７】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ８がアルキルであるとき、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ８は、メチルであり得る。Ｒ８がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ８がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ８は、同様に、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１５８】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールで置換される基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１５９】
ある実施形態では、このスルホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１６０】
ある実施形態では、１個より多いスルホネート基が存在し得る。例として、２個のスルホネートが存在し得る（すなわち、ビス−スルホネート化合物）。もし、これらの化合物が、ステロイド核に基づいているなら、このステロイド核の１７位に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）スルホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１６１】
（スルホネート／ホスホネート／チオホスホネート／スルファメートの組合せ）
本発明のある化合物に対して、本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの１種；および本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの他種が存在し得る。例として、本発明の化合物は、１個のスルファメート基および１個のホスホネート基を含有し得る。
【０１６２】
もし、本発明の化合物が、ステロイド核に基づいているなら、好ましくは、これらの基の他方は、このステロイド核の１７位に位置している。
【０１６３】
（擬似）
１局面では、環系ＸまたはＫと組み合わせた単環Ｘは、擬似ステロイド環構造であり得る。
【０１６４】
本明細書中で使用する「擬似」との用語は、類似または異なる構造を有するが類似の機能効果を有することを意味する。言い換えれば、Ｋ基および環Ｘは、一緒になって、ステロイドの環のバイオアイソスターまたはその活性部分であり得る。
【０１６５】
好ましい局面では、Ｋ基および環Ｘは、一緒になって、エストロンの環のバイオアイソスターまたはその一部であり得る。
【０１６６】
（ステロイド環構造）
好ましい１局面では、環系ＸまたはＫと組み合わせた単環Ｘは、ステロイド環構造、すなわち、シクロペンタノフェナントレン骨格またはそのアイソスターを構成する。
【０１６７】
当該技術分野で周知であるように、古典的なステロイド環構造は、以下の一般式を有する：
【０１６８】
【化３８】
2004506741.tif 000023
上式では、それらの環は、通常の様式で標識されている。
【０１６９】
バイオアイソスターの例は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が複素環であるとき、ならびに／あるいは環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が置換されているとき、ならびに／あるいは環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が変性されているときである；しかし、ここで、このバイオアイソスターは、スルファメート基なしでも、ステロイド特性を有する。
【０１７０】
このことに関して、好ましい多環式構造の構造は、以下として提示できる：
【０１７１】
【化３９】
2004506741.tif 000024
ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、別個に、複素環または非複素環を表わすが、これらの環は、別個に、置換または非置換であり得、飽和または不飽和であり得る。
【０１７２】
例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個またはそれ以上は、別個に、適切な基（例えば、アルキル基、アリール基、水酸基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など）で置換され得る。
【０１７３】
Ｄ’の例には、少なくとも１個の置換基を有する５員または６員の非複素環がある。
【０１７４】
好ましい１実施形態では、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【０１７５】
もし、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個が複素環であるなら、好ましくは、その複素環は、Ｃ原子と少なくとも１個のＮ原子および／または少なくとも１個のＯ原子との組合せを含有する。他の複素環原子は、その環内に存在し得る。
【０１７６】
本発明の化合物の適切な好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’の例には、デヒドロエピアンドロステロンおよびエストロゲン（エストロンを含めて）の環Ａ〜Ｄが挙げられる。
【０１７７】
本発明の化合物の好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’には、以下の環Ａ〜Ｄが挙げられる：
エストロンおよび置換エストロン、すなわち：
エストロン
２−ＯＨ−エストロン
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン
２−ＭｅＯ−エストロン
１７−デオキシエストロン。
【０１７８】
エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール
１７−デオキシエストラジオール。
【０１７９】
エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：
エストリオール
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール
１７−デオキシエストリオール。
【０１８０】
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
アンドロステンジオール。
【０１８１】
大まかに言えば、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非妨害置換基を含有し得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、１個またはそれ以上のヒドロキシ、アルキル（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、第二級ブチル、第三級ブチル、ｎ−ペンチルおよび他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）またはハロゲン（例えば、フルオロ）置換基を含有し得る。
【０１８２】
（非ステロイド構造）
代替実施形態では、本発明の化合物は、ステロイド核を含有しないか、またはベースにしないかもしれない。このことに関して、この多環式化合物は、非ステロイド環系（例えば、ジエチルスチルベストロール、スチルベストロール、クマリン、フラボノイド、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）および他の環系）を含有し得るか、またはこれらをベースにし得る。本発明の組成物中でまたは本発明の組成物として使用する他の適切な非ステロイド化合物は、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１で見られ得る。
【０１８３】
（他の置換基）
本発明の化合物は、Ｒ１およびＲ２以外の置換基を有し得る。例として、これらの他の置換基は、以下の１種またはそれ以上であり得る：１個またはそれ以上のスルファメート基、１個またはそれ以上のホスホネート基、１個またはそれ以上のチオホスホネート基、１個またはそれ以上のスルホネート基、１個またはそれ以上のスルホンアミド基、１個またはそれ以上のハロ基、１個またはそれ以上のＯ基、１個またはそれ以上の水酸基、１個またはそれ以上のアミノ基、１個またはそれ以上のイオウ含有基、１個またはそれ以上のヒドロカルビル基（例えば、オキシヒドロカルビル基）。
【０１８４】
（オキシヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「オキシヒドロカルビル」との用語は、少なくとも、Ｃ、ＨおよびＯを含有し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る基を意味する。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。これらの置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せは、環状基を形成し得る。もし、このオキシヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有するなら、これらの炭素は、必ずしも、互いに結合される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、結合され得る。それゆえ、このオキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、これには、例えば、イオウおよび窒素が挙げられる。
【０１８５】
本発明の１実施形態では、このオキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【０１８６】
本明細書中で、「オキシ炭化水素」との用語は、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基（これらの基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはオキシアリール基のいずれか１種を意味する。オキシ炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が含まれる。もし、このオキシ炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造であるなら、この置換は、その炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得る；あるいは、これらの置換は、この炭化水素骨格上および分枝上であり得る。
【０１８７】
典型的には、このオキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１〜６Ｏ（例えば、Ｃ１〜３Ｏ）である。
【０１８８】
（癌細胞を使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル１））
（ＭＣＦ−７細胞でのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
インビトロで、無傷ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を使用して、ステロイドスルファターゼ活性を測定する。このホルモン依存性細胞系は、ヒト乳癌細胞の成長の制御を研究するのに、広く使用されている。それは、著しいステロイドスルファターゼ活性を有し（Ｍａｃｌｎｄｏｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２３，１２８１〜１２８７（１９８８）；Ｐｕｒｏｈｉｔ　＆　Ｒｅｅｄ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５０，９０１〜９０５（１９９２））、米国において、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、また、英国において、例えば、Ｔｈｅ　Ｉｍｐｅｒｉａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｕｎｄから入手できる。
【０１８９】
細胞を、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）（これは、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、５％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミン、非必須アミノ酸および０．０７５％重炭酸ナトリウムを含有する）で維持する。３０回まで複製して、２５ｃｍ２組織培養フラスコに、上記培地を使用して、約１×１０５個の細胞／フラスコを播種する。細胞は、８０％のコンフルーエンシーまで成長し、その培地は、３日ごとに交換する。
【０１９０】
ＭＣＦ−７細胞の無傷単層を、３連で２５ｃｍ２組織培養フラスコにて、アール平衡塩溶液（ＥＢＳＳ；ＩＣＮ　Ｆｌｏｗ，Ｈｉｇｈ　Ｗｙｃｏｍｂｅ，Ｕ．Ｋ．）で洗浄し、そして３７℃で、３〜４時間にわたって、無血清ＭＥＭ（２．５ｍｌ）中にて、エストロン−３−スルファメート（１１種の濃度；０；１ｆＭ；０．０１ｐＭ；０．１ｐＭ；１ｐＭ；０．０１ｎＭ；０．１ｎＭ；１ｎＭ；０．０１ｍＭ；０．１ｍＭ；１ｍＭ）と共に、５ｐｍｏｌ（７×１０５ｄｐｍ）の［６，７−３Ｈ］エストロン−３−サルフェート（比活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）と共にインキュベートする。インキュベーション後、各フラスコを冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）を含む）にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−サルフェートが取り出されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を取り出し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により、決定する。エストロン−３−サルフェート加水分解物の質量は、得られた３Ｈのカウント（これは、使用した培地および有機相の容量ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比活性から計算した。実験の各バッチは、スルファターゼ陽性ヒト胎盤（陽性対照）および細胞なしフラスコ（この基質の見かけの非酵素的加水分解を評価するために）から調製したミクロソームのインキュベーションを含む。１フラスコあたりの細胞核の数は、その細胞単層をＺａｐｏｎｉｎで処理した後、Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して決定する。トリパンブルー排除法を使って、各バッチあたり１個のフラスコを使用して、細胞膜の状態および生存度を評価する（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｈ．Ｊ．（１９７３）：Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，［編者：Ｋｒｕｓｅ，Ｄ．Ｆ．およびＰａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｋ．］；４０６〜４０８ページ；Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）。
【０１９１】
ステロイドスルファターゼ活性の結果は、このインキュベーション期間（２０時間）中に形成された全生成物（エストロン＋エストラジオール）の平均±１標準偏差として表わされ、これは、エストロン−３−スルファメートを含有しないインキュベーションに対する低下割合（阻害）として、１０６個の細胞について、統計的に有意性を示す値について、計算される。片側Ｓｔｕｄｅｎｔ　ｔ−検定を使用して、結果の統計的な有意性を試験した。
【０１９２】
（胎盤ミクロソームを使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル２））
（胎盤ミクロソームでのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
正常な妊娠期間の終わりから得たスルファターゼ陽性ヒト胎盤をハサミで十分に細かく刻み、そして冷リン酸緩衝液（ｐＨ　７．４、５０ｍＭ）で１回洗浄し、次いで、冷リン酸緩衝液（５ｍｌ／組織１ｇ）に再懸濁した。Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを使って、氷中での２分間の冷却期間で隔てられた３回の１０秒間バースト（ｂｕｒｓｔ）を使用して、均質化を達成する。２０００ｇで３０分間遠心分離（４℃）することにより、核および細胞の細片を除去し、その上清の一部（２ｍｌ）を２０℃で保存する。これらの上清のタンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄの方法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７２，２４８〜２５４（１９７６））により、決定する。
【０１９３】
１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度、２０ｍＭ［６，７−３Ｈ］エストロン−３−サルフェートの基質濃度（比活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）および２０分間のインキュベーション時間を使用して、３７℃でインキュベーション（１ｍｌ）を実行する。必要なら、以下の８種の化合物濃度を使用する；０（すなわち、対照）；０．０５ｍＭ；０．１ｍＭ；０．２ｍＭ；０．４ｍＭ；０．６ｍＭ；０．８ｍＭ；１．０ｍＭ。インキュベーション後、各試料を冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）を含む）にピペットで採取した。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−サルフェートが取り出されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を取り出し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により決定した。エストロン−３−サルフェート加水分解物の質量は、得られる３Ｈのカウント（これは、使用した培地および有機相の容量ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比活性から計算する。
【０１９４】
（ＳＴＳ活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル３））
（インビボでのエストロンスルファターゼ活性の阻害）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）で研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０１９５】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／ｋｇ／日）をラットに経口投与し、別の群の動物にビヒクル（プロピレングリコール）だけを与える。この研究の終了時点で、肝臓組織の試料を得、以前に記述されているように（ＰＣＴ／ＧＢ９５／０２６３８を参照）、基質として３Ｈエストロンサルフェートを使用して、エストロンスルファターゼ活性をアッセイした。
【０１９６】
（エストロゲン性活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル４））
（インビボエストロゲン性の欠如）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）で研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０１９７】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／ｋｇ／日）をラットに経口投与し、別の群の動物にビヒクル（プロピレングリコール）だけを与えた。この研究の終了時点で、子宮を得、秤量して、その結果を、子宮重量／全体重×１００として表した。
【０１９８】
子宮の成長に対して著しい効果がない化合物は、エストロゲン性ではない。
【０１９９】
（ＳＴＳ活性を決定する生物工学アッセイ（プロトコル５））
化合物がエストロンスルファターゼ活性を阻害する性能もまた、例えば、高処理能力スクリーンにおいて、ＳＴＳをコード化するアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、または活性断片、それらの誘導体、相同体または変異体を使用して、評価できる。
【０２００】
適切な標的（例えば、アミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列）のいずれか１個またはそれ以上は、種々の薬剤スクリーニング技術のいずれかにおいて、ＳＴＳを調節することができる試薬を同定するのに使用され得る。このような試験で使用される標的は、溶液中で遊離し得るか、固体支持体に固着され得るか、細胞表面に保有され得るか、または細胞内に位置し得る。標的活性の消滅または標的と試験する試薬との間での結合複合体の形成が、測定され得る。
【０２０１】
本発明のアッセイは、スクリーンであり得、それにより、多数の試薬が試験される。１局面では、本発明のアッセイ方法は、高処理能力スクリーンである。
【０２０２】
薬剤スクリーニング技術は、１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎの欧州特許出願第８４／０３５６４号で記述された方法に基づき得る。要約すると、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、固体基質（例えば、プラスチックピンまたはある種の他の表面）で合成する。これらのペプチド試験化合物を、適切な標的またはその断片と反応させて、洗浄する。結合した要素を、次いで、例えば、当該技術分野で周知の適切に適合させた方法により、検出する。精製した標的はまた、薬剤スクリーニング技術で使用するプレート上に、直接被覆できる。あるいは、このペプチドを捕捉して固体支持体上で固定化するために、非中和抗体が使用できる。
【０２０３】
本発明はまた、競合薬剤スクリーニングアッセイの使用も考慮しており、このアッセイでは、標的を結合できる中和抗体は、標的を結合する試験化合物と特異的に競合する。
【０２０４】
他のスクリーニング技術は、これらの基質に対する適切な結合親和性を有する薬剤の高処理能力スクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、ＷＯ８４／０３５６４で詳細に記述された方法に基づいている。
【０２０５】
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の小規模スクリーニングおよび大規模スクリーニングの両方、ならびに定量アッセイで適切であると予想される。
【０２０６】
好ましい１局面では、本発明は、ＳＴＳを選択的に調節する薬剤を同定する方法に関し、これらの化合物は、式（１ａ）を有する。
【０２０７】
（レポーター）
本発明のアッセイ方法（およびスクリーン）では、広範囲のレポーターが使用され得、好ましいレポーターは、（例えば、分光法により）便利に検出可能な信号を提供する。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変える反応を触媒する酵素をコード化し得る。
【０２０８】
他のプロトコルには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。２個の非妨害エピトープと反応性のモノクローナル抗体を利用する２部位モノクローナルベース免疫測定さえ、使用され得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、特に、Ｈａｍｐｔｏｎ　Ｒら（１９９０，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ　Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ　Ｐａｕｌ　ＭＮ）およびＭａｄｄｏｘ　ＤＥら（１９８３，Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　１５　８：　１２１　１）で記述される。
【０２０９】
レポーター分子の例には、β−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼおよびグルコアミラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、放射標識または蛍光タグ標識ヌクレオチドは、初期の（ｎａｓｃｅｎｔ）転写物に取り込むことができ、これは、次いで、オリゴヌクレオチドプローブに結合したとき、同定される。
【０２１０】
さらに別の例として、多数の企業（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ），Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＵＳ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ））は、アッセイ手順用の市販のキットおよびプロトコルを供給している。標識に適切なレポーター分子には、それらの放射性核種、酵素、蛍光薬剤、化学発光薬剤または色素生産薬剤、ならびに基質、補助因子、阻害剤、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示している特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ−４３６６２４１が挙げられる。
【０２１１】
（宿主細胞）
本発明に関連した「宿主細胞」との用語は、本発明の薬剤用の標的を含有できる任意の細胞を含む。
【０２１２】
それゆえ、本発明のさらに他の実施形態は、本発明の標的であるかそれを発現するポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされる宿主細胞を提供する。好ましくは、該ポリヌクレオチドは、この標的であるかまたはこの標的を発現するポリヌクレオチドを複製および発現するためのベクターで運ばれる。これらの細胞は、該ベクターと適合するように選択され、例えば、原核（例えば、細菌）細胞、真菌細胞、酵母菌細胞または植物細胞であり得る。
【０２１３】
グラム陰性菌Ｅ．ｃｏｌｉは、異種遺伝子発現のための宿主として、広く使用されている。しかしながら、その細胞の内部には、大量の異種タンパク質が蓄積する傾向にある。時には、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内タンパク質のバルクから所望のタンパク質を引き続いて精製することが困難であり得る。
【０２１４】
Ｅ．ｃｏｌｉとは対照的に、バシラス属に由来の細菌は、それらが培地にタンパク質を分泌する能力があるために、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切な他の細菌には、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属に由来のものがある。
【０２１５】
本発明のポリペプチドをコード化するポリヌクレオチドの性質、および／または発現したタンパク質をさらに処理することの好適性に依存して、真核生物宿主（例えば、酵母菌または他の真菌）が好まれ得る。一般に、酵母菌細胞は、操作し易いので、真菌細胞よりも好ましい。しかしながら、ある種のタンパク質は、酵母菌細胞からの分泌が少ないか、ある場合には、適切に処理されない（例えば、酵母菌での糖鎖形成過剰）かいずれかである。これらの場合には、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０２１６】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例には、真菌（例えば、アスペルギルス属）（例えば、ＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ−０２８４６０３）およびトリコデルマ属；バシラス属のような細菌（例えば、ＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５で記述されたもの）、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属；および酵母菌（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属（例えば、ＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０で記述されたもの））およびサッカロミセス属がある。例として、典型的な宿主は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｌａｃｔｉｓおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから選択され得る。
【０２１７】
適切な宿主細胞（例えば、酵母菌、真菌および植物宿主細胞）の使用は、本発明の組換え発現産物上で最適な生体活性を与えるのに必要であり得るように、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、糖鎖形成、短縮、脂質化（ｌａｐｉｄａｔｉｏｎ）、およびチロシン、セリンまたはスレオニンリン酸化）を提供し得る。
【０２１８】
（生物）
「生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含有できる任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母菌または植物が挙げられ得る。
【０２１９】
「トランスジェニック生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含有する任意の生物を含む。
【０２２０】
（宿主細胞／宿主生物の形質転換）
先に示したように、この宿主生物は、原核生物または真核生物であり得る。適切な原核生物宿主の例には、Ｅ．ｃｏｌｉおよび枯草菌が挙げられる。原核宿主の形質転換に関する教示は、当該技術分野でよく引証されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，２版、１９８９，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０２２１】
原核生物宿主を使用する場合、そのヌクレオチド配列は、形質転換前に、例えば、イントロンの除去により、適切に改変される必要があり得る。
【０２２２】
他の実施形態では、このトランスジェニック生物は、酵母菌であり得る。このことに関して、酵母菌はまた、異種遺伝子発現のためのビヒクルとして、広く使用されている。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種は、歴史上、長く工業で使用されており、これらは、異種遺伝子発現でそれを使用することが含まれる。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子の発現は、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７，Ｙｅａｓｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄ　Ｒ　Ｂｅｒｒｙら著、４０１〜４２９ページ、Ａｌｌｅｎ　ａｎｄ　Ｕｎｗｉｎ，Ｌｏｎｄｏｎ）およびＫｉｎｇら（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｙｅａｓｔｓ，Ｅ　Ｆ　Ｗａｌｔｏｎ　ａｎｄ　Ｇ　Ｔ　Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ編、１０７〜１３３ページ、Ｂｌａｃｋｉｅ，Ｇｌａｓｇｏｗ）により概説されている。
【０２２３】
いくつかの理由のために、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、異種遺伝子発現によく適している。第一に、それは、ヒトに対して病原性がなく、特定のエンドトキシンを産生できない。第二に、それは、種々の目的のための何世紀にもわたる商取引の開発に続いて、歴史上、長い間にわたって安全に使用されている。これにより、大衆に広く受け入れられている。第三に、その生物に向けられた広範な商業用途および研究の結果、その遺伝子および生理学ならびにＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの大規模な発酵特性についての豊富な知識が得られている。
【０２２４】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子発現および遺伝子産物の分泌の原理は、Ｅ　Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ　Ｅ　Ｋｅｎｎｙ（１９９３，「Ｙｅａｓｔ　ａｓ　ａ　ｖｅｈｉｃｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　ｇｅｎｅｓ」、Ｙｅａｓｔｓ，５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ　Ｈ　Ｒｏｓｅ　ａｎｄ　Ｊ　Ｓｔｕａｒｔ　Ｈａｒｒｉｓｏｎ編、２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ．）により概説されている。
【０２２５】
数種の酵母菌ベクターが入手でき、これには、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクター（これは、それらの維持のために、宿主ゲノムを使った組換えが必要である）および自己複製プラスミドベクターが挙げられる。
【０２２６】
トランスジェニックサッカロミセスを調製するために、酵母菌での発現のために設計された構築物にヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築物が調製される。異種発現に使用されるいくつかの型の構築物が開発されている。これらの構築物は、このヌクレオチド配列と融合される酵母菌で活性なプロモーターを含有し、通常、酵母菌起源のプロモーター（例えば、ＧＡＬ１プロモーター）が使用される。通常、酵母菌起源のシグナル配列（例えば、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコード化する配列）が使用される。酵母菌で活性なターミネーターは、この発現系を終了する。
【０２２７】
酵母菌の形質転換のために、数種の形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックサッカロミセスは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＵＳＡ　７５，１９２９）；Ｂｅｇｇｓ，Ｊ　Ｄ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）；およびＩｔｏ，Ｈら（１９８３，Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　１５３，１６３〜１６８）に従うことにより、調製できる。
【０２２８】
形質転換された酵母菌細胞は、種々の選択マーカーを使用して選択される。形質転換に使用されるマーカーには、多数の栄養要求マーカー（例えば、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４およびＴＲＰ１）および主要抗生物質耐性マーカー（例えば、アミノグリコシド抗生物質マーカー（例えば、Ｇ４１８））がある。
【０２２９】
他の宿主生物には、植物がある。遺伝的に組換えられた植物の構築における基本原理は、挿入した遺伝物質を安定に維持するために、その植物ゲノムに遺伝情報を挿入することにある。この遺伝情報を挿入するいくつかの技術が存在しており、その２つの主要な原理は、遺伝情報の直接的な導入およびベクター系を使用することによる遺伝情報の導入がある。一般的な技術の概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ［１９９１］４２：２０５〜２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｈｉ−Ｔｅｃｈ　Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ　１９９４　１７〜２７）による文献で見られ得る。植物形質転換に関するさらなる教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５で見られ得る。
【０２３０】
それゆえ、本発明はまた、標的であるか標的を発現するヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチド配列で形質転換される宿主細胞は、そのコード化したタンパク質の発現に適切な条件下にて、培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、その細胞の表面に提示され得る。もし望ましいなら、当業者が理解しているように、コード化配列を含有する発現ベクターは、特定の原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を通って、これらのコード化配列を直接分泌するシグナル配列を用いて設計され得る。他の組換え構築物は、このコード化配列を、ポリヌクレオチドをコード化するヌクレオチド配列（これは、可溶タンパク質の精製を容易にする）に接合し得る（Ｋｒｏｌｌ　ＤＪら（１９９３）　ＤＮＡ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ　１２：４４１〜５３）。
【０２３１】
（改変体／相同体／誘導体）
本明細書中で言及した特定のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列に加えて、本発明はまた、改変体、相同体およびそれらの誘導体の使用を包含する。ここで、「相同性」との用語は、「同一性」と同等とみなすことができる。
【０２３２】
本発明の背景では、相同体配列は、少なくとも７５％、８５％または９０％同一であり得、好ましくは、少なくとも９５％または９８％同一であり得るアミノ酸配列を含むと見なされる。相同体はまた、類似性（すなわち、類似した化学特性／機能を有するアミノ酸残基）の点で考慮できるものの、本発明の背景では、配列同一性の点で相同性を表現することが好ましい。
【０２３３】
相同性の比較は、目で見て行うことができるか、さらに普通には、容易に入手できる配列比較プログラムの助けを借りて行うことができる。これらの市販のコンピュータープログラムは、２個またはそれ以上の配列間の相同性％を計算できる。
【０２３４】
相同性％は、隣接した配列に対して計算され得、すなわち、１配列は、他の配列と整列され、１配列中の各アミノ酸は、１個の残基ごとに、他の配列中の対応しているアミノ酸と直接比較される。これは、「アンギャップド」整列と呼ばれている。典型的には、このようなアンギャップド整列は、比較的に短い数の残基にわたってのみ、実行される。
【０２３５】
これは、非常に単純で矛盾のない方法ではあるものの、例えば、他の点では同じ対の配列において、１個の挿入または欠失によって次のアミノ酸残基が整列から外れ、それにより、全体的な整列を実行するとき、相同性％が大きく減少する可能性があることを考慮していない。結果的に、殆どの配列比較方法は、過度の全体的な相同性点数にペナルティーを課することなく、可能な挿入および欠失を考慮する最適な整列を生じるように設計されている。これは、局所相同性を最大にするように、その配列整列に「ギャップ」を挿入することにより、達成される。
【０２３６】
しかしながら、これらのさらに複雑な方法は、その整列で起こる各ギャップに対して、「ギャップペナルティー」を割り当て、その結果、同数の同じアミノ酸に対して、できるだけ少数のギャップを使った配列整列（これは、２個の比較した配列間での高い関連性を反映している）は、多くのギャップを有するものよりも高い評点を達成する。典型的には、「Ａｆｆｉｎｅギャップコスト」が使用されるが、これは、ギャップの存在に対して、比較的に高いコストを課し、また、ギャップにある各連続残基に対して、小さいペナルティーを課する。高いギャップペナルティーは、もちろん、少ないギャップを有する最適化した整列を生じる。殆どの整列プログラムによれば、これらのギャップペナルティーを修正できる。しかしながら、配列を比較するためにこのようなソフトウェアを使用するとき、その初期値を使用するのが好ましい。例えば、ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（以下を参照）を使用するとき、アミノ酸配列に対する初期ギャップペナルティーは、１ギャップに対して−１２であり、また、各伸長部に対して、−４である。
【０２３７】
従って、最大相同性％の計算には、第一に、ギャップペナルティーを考慮して、最適な整列を生じる必要がある。このような整列を実行するのに適切なコンピュータープログラムは、ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１２：３８７）である。配列比較が実行できる他のソフトウェアの例には、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、１８章を参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０３〜４１０を参照）およびＧＥＮＥＷＯＲＫＳスイートの比較ツールが挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡの両方は、オフラインおよびオンラインの検索に利用できる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、７−５８〜７−６０ページを参照）。しかしながら、このＧＣＧ　Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用するのが好ましい。
【０２３８】
さらに有用な言及には、ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ　１９９９年５月１５日；１７４（２）：２４７５０で見出されるものがある（そして公開された正誤表は、ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ　１９９９年８月１日；１７７（１）：１８７−８にある）。
【０２３９】
最終相同性％は、同一性の点で測定できるものの、その整列過程は、典型的には、全てか無かの対比較には基づいていない。その代わりに、目盛りを付けた類似性評点マトリックスが一般に使用され、これは、化学的類似性または進化距離に基づいて、各ペアでの比較に対する評点を割り当てる。通例使用されるこのようなマトリックスの例には、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスがあり、これは、プログラムのＢＬＡＳＴスイートに対する初期値マトリックスである。ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、一般に、一般初期値またはカスタムシンボル比較表（もし、提供されたなら）のいずれかを使用する（詳細は、ユーザー取扱説明書を参照）。ＧＣＧパッケージについては、一般初期値を使用するのが好ましく、または他のソフトウェアの場合、この初期値マトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２）を使用するのが好ましい。
【０２４０】
一旦、このソフトウェアが最適な整列を生じたなら、相同性％、好ましくは、配列同一性％を計算することが可能となる。このソフトウェアは、典型的には、この配列比較の一部としてこれを行い、数値結果を作成する。
【０２４１】
これらの配列はまた、サイレントチェンジ（ｓｉｌｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ）を作り機能的に等価な物質を生じるアミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有し得る。慎重なアミノ酸の置換は、この物質の二次結合活性が保持されている限り、それらの残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいて、行われ得る。例えば、負に荷電したアミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含有する；正に荷電したアミノ酸は、リシンおよびアルギニンを含有する；そして類似の親水性値を有する荷電していない極性ヘッド基を備えたアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンを含有する。
【０２４２】
保存的な置換は、例えば、以下の表に従って、行われ得る。第二列の同じ枠、好ましくは、第三列の同じ行にあるアミノ酸は、互いに置換され得る。
【０２４３】
【化４０】
2004506741.tif 000025
（発現ベクター）
この標的として使用するか標的を発現するヌクレオチド配列は、組換え複製可能ベクターに取り込むことができる。このベクターは、適合性宿主細胞内および／またはそれに由来のヌクレオチド配列を複製し発現するのに使用され得る。発現は、制御配列（これは、プロモーター／エンハンサーおよび他の発現調節シグナルを含む）を使用して、制御され得る。原核生物プロモーター、および真核生物細胞内で機能するプロモーターが使用され得る。組織特異的プロモーターまたは刺激特異的プロモーターが使用され得る。キメラプロモーターもまた使用され得、これは、上記２個またはそれ以上の異なるプロモーターに由来の配列エレメントを含有する。
【０２４４】
このヌクレオチド配列の発現による宿主組換え細胞により産生されるタンパク質は、使用する配列および／またはベクターに依存して、分泌され得るか、または細胞内に含有され得る。このコード化配列は、特定の原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を通って物質コード化配列の分泌を指示するシグナル配列を使って、設計できる。
【０２４５】
（融合タンパク質）
この標的アミノ酸配列は、例えば、抽出および精製を助けるために、融合タンパク質として産生され得る。融合タンパク質パートナーの例には、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６×Ｈｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写性活性化ドメイン）および（−ガラクトシダーゼが挙げられる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、その融合タンパク質パートナーと対象タンパク質配列との間に、タンパク質分解開裂部位を含ませることもまた、好都合であり得る。
【０２４６】
この融合タンパク質は、抗原、または本発明の物質に融合した抗原性決定基を含有し得る。この実施形態では、この融合タンパク質は、天然には生じない融合タンパク質であり得、これは、その免疫系の一般化刺激を与えるという意味でアジュバントとして作用し得る物質を含有する。この抗原または抗原性決定基は、この物質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに結合され得る。
【０２４７】
本発明の他の実施形態では、このアミノ酸配列は、融合タンパク質をコード化する異種配列に連結され得る。例えば、この物質の活性に影響を与えることができる薬剤のペプチドライブラリをスクリーニングするために、異種エピトープ（これは、市販の抗体により認識される）を発現するキメラ物質をコード化することが有用であり得る。
【０２４８】
（治療）
本発明の化合物は、治療剤として（すなわち、治療用途で）使用され得る。
【０２４９】
「治療」との用語は、治癒効果、軽減効果および予防効果を含む。
【０２５０】
この治療は、ヒトまたは動物（好ましくは、雌性の動物）に行われ得る。
【０２５１】
（製薬組成物）
１局面では、本発明は、製薬組成物を提供し、これは、本発明に従う化合物および必要に応じて、薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含めて）を含有する。
【０２５２】
この製薬組成物は、医学および獣医学においてヒトまたは動物に使用され得、典型的には、薬学的に受容可能な希釈剤、担体または賦形剤のいずれか１種またはそれ以上を含有し得る。治療用途に受容可能な担体または希釈剤は、製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編　１９８５）で記述されている。薬学的担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図した投与経路および標準的な製薬慣行に関連して、選択できる。これらの製薬組成物は、この担体、賦形剤または希釈剤として、またはそれに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含有し得る。
【０２５３】
この製薬組成物には、防腐剤、安定剤、染料および香料でさえ、供給され得る。防腐剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。酸化防止剤および懸濁剤もまた、使用され得る。
【０２５４】
異なる送達システムに依存して、異なる組成物／処方要件が存在し得る。例として、本発明の製薬組成物は、ミニポンプを使用して、または粘膜経路により（例えば、スプレー式点鼻薬またはエアロゾル（吸入液または経口摂取液用）として）、または非経口的（ここで、この組成物は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路による送達のための注射可能形態により、処方される）に処方され得る。あるいは、この処方は、両方の経路により送達されるように、設計され得る。
【０２５５】
この試薬は、胃腸粘膜を通って粘膜送達される場合、胃腸管を通過中に安定なままであるべきである；例えば、それは、タンパク質分解に対して耐性であり、酸性ｐＨで安定であり、そして胆汁の界面活性効果に対して耐性であるべきである。
【０２５６】
適切な場合、これらの製薬組成物は、吸入により、座剤またはペッサリーの形態で、ローション、溶液、クリーム、軟膏または粉剤の形態で局所的に、皮膚パッチを使用することにより、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含有する錠剤の形態で経口的に、あるいはカプセルまたは卵剤（ｏｖｕｌｅｓ）をいずれか単独でまたは賦形剤と混合して、またはエリキシル剤、溶液または懸濁液（これは、香料または着色剤を含有する）の形態で投与できるか、またはそれらは、例えば、静脈内、筋肉内または皮下で、非経口的に注射できる。非経口投与には、これらの組成物は、無菌水溶液の形態で最もよく使用され得、これは、他の物質（例えば、その溶液を血液と等張性にするのに十分な塩または単糖類）を含有し得る。頬側または舌下投与には、これらの組成物は、錠剤またはトローチ剤（これは、通常の様式で処方できる）の形態で投与され得る。
【０２５７】
（組合せ調合薬）
本発明の化合物は、１種またはそれ以上の他の活性剤（例えば、１種またはそれ以上の他の製薬活性剤）と併用され得る。
【０２５８】
例として、本発明の化合物は、他のＳＴＳ阻害剤および／または他の阻害剤（例えば、アロマターゼ阻害剤（例えば、４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））および／またはステロイド（例えば、天然に生じるステルニューロステロイドデヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ））およびプレグネノロンサルフェート（ＰＳ）および／または他の構造上類似した有機化合物）と併用され得る。他のＳＴＳ阻害剤の例は、上記参考文献で見られ得る。例として、本発明で使用されるＳＴＳ阻害剤には、ＥＭＡＴＥ、およびその２−エチルおよび２−メトキシ１７−デオキシ化合物のいずれかまたは両方が挙げられる。
【０２５９】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、生体応答調整物質と併用され得る。
【０２６０】
生体応答調整物質（「ＢＲＭ」）との用語は、サイトカイン、免疫調節剤、成長因子、造血調節因子、コロニー刺激因子、走化因子、溶血因子および血栓溶解因子、細胞表面レセプター、リガンド、白血球接着分子、モノクローナル抗体、予防および治療ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどが挙げられる。ある用途には、好ましくは、この生体応答調節剤は、サイトカインである。サイトカインの例には、以下が挙げられる：インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦ−α；インターフェロンα、βおよびγ；ＴＧＦ−β。ある用途には、好ましくは、このサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。ある用途には、このＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（それらの誘導体または混合物を含めて））であり得る。さらに好ましくは、このサイトカインは、ＴＮＦ−αである。ＴＮＦに関する教示は、当該技術分野で見られ得る（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）。
【０２６１】
（投与）
典型的には、医師は、個々の被験体に最も適切な実際の投薬量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重および応答により変化する。以下の投薬量は、平均的な場合の例である。もちろん、それより高いまたは低い範囲が有益な場合が個々に存在し得る。
【０２６２】
本発明の組成物は、直接的な注射により、投与され得る。この組成物は、非経口投与、粘膜投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、眼内投与または経皮投与用に処方され得る。その試薬は、必要に応じて、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、投与され得る。
【０２６３】
さらに別の例として、本発明の試薬は、１日１〜４回、好ましくは、１日１回または２回のレジメンに従って、投与され得る。任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルおよび投薬頻度は、変化し得、種々の要因に依存しており、これには、使用する特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用期間、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食生活、投与様式および投与時間、排泄の速度、薬剤組合せ、特定の状態の重症度および治療を受ける宿主が挙げられる。
【０２６４】
上で示した典型的な送達様式は別として、「投与する」との用語はまた、脂質媒介トランスフェクション、リポソーム、イムノリポソーム、リポフェクチン、カチオン性表面両親媒性物質（ＣＦＡｓ）およびそれらの組合せのような技術による送達を含む。このような送達機構の経路には、粘膜経路、鼻内経路、経口経路、非経口経路、胃腸経路、局所経路または舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６５】
「投与する」との用語には、粘膜経路による（例えば、スプレー式点鼻薬またはエアロゾル（吸入液または経口摂取液用）としての）；非経口的経路（ここで、送達は、注射可能形態（例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路）による）による送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６６】
それゆえ、調合薬投与には、本発明のＳＴＳ阻害剤は、任意の適切な様式（これは、従来の製薬処方技術および薬学的担体、補助剤、賦形剤、希釈剤などを使用する）で、通常、非経口投与用に処方できる。大体の有効投薬割合は、当該化合物の個々の活性に依存して、平均的な体重（７０ｋｇ）の患者に対して、１〜１０００ｍｇ／日、例えば、１０〜９００ｍｇ／日、さらに、１００〜８００ｍｇ／日の範囲であり得る。好ましいさらに活性が高い化合物のためのさらに通例の投薬割合は、２００〜８００ｍｇ／日、さらに好ましくは、２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは、２００〜２５０ｍｇ／日の範囲である。それらは、単一用量レジメン、分割用量レジメンおよび／または複数用量レジメン（これは、数日にわたって続けられる）で投与され得る。経口投与には、それらは、錠剤、カプセル、溶液または懸濁液（これは、単位用量あたり、１００〜５００ｍｇの化合物を含有する）で処方され得る。あるいは、好ましくは、これらの化合物は、適切な非経口投与可能な担体で処方され、これは、２００〜８００ｍｇ、好ましくは、２００〜５００ｍｇ、さらに好ましくは、２００〜２５０ｍｇの範囲の単回毎日投薬割合で供給される。このような有効毎日用量は、しかしながら、その活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変わり、このような変動は、医師の技術および判断の範囲内である。
【０２６７】
（細胞周期）
本発明の化合物は、細胞周期障害の治療方法で、有用であり得る。
【０２６８】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ」、３版、Ｌｏｄｉｓｈら、１７７〜１８１頁で述べられているように、異なる真核細胞は、極めて異なる速度で成長し分裂できる。例えば、酵母菌細胞は、１２０分ごとに分裂でき、ウニや昆虫の胚性細胞にある受精卵の第一分裂は、１個の大きな既存細胞が細分されるので、１５３０分間しかかからない。しかしながら、最もよく成長する植物および動物の細胞は、数が２倍になるのに１０〜２０時間かかり、一部のものは、ずっと遅い速度で２つに分裂する。成体中の多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、全く分裂しない；創傷の治癒を助ける線維芽細胞のような他のものは、要求に応じて成長するが、そうでなければ、静止している。
【０２６９】
さらに、分裂する各真核細胞は、２個の娘細胞に同じ遺伝物質を供与する準備ができていなければならない。真核生物でのＤＮＡ合成は、この細胞分裂周期を通して起こるのではなく、細胞分裂前のその一部に制限される。
【０２７０】
真核ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関係は、成長および分裂が全て可能な哺乳動物細胞の培養物中で、十分に分析されている。細菌とは対照的に、真核細胞は、ＤＮＡ合成においてその時間の一部しか費やさないことが分かり、それは、細胞分裂の何時間も前に完了する（有糸分裂）。それゆえ、ＤＮＡ合成後および細胞分裂前に、時間のギャップが生じる；他のギャップは、分裂後およびＤＮＡ合成の次の過程で起こることが分かった。この分析により、真核細胞周期は、Ｍ（有糸分裂）期、Ｇ１期（第一ギャップ）、Ｓ（ＤＮＡ合成）期、Ｇ２期（第二ギャップ）からなり、そしてＭに戻ると結論付けられた。有糸分裂間（Ｇ１、ＳおよびＧ２）の局面は、総称して、間期として知られている。
【０２７１】
組織内での多くの非分裂細胞（例えば、全ての静止線維芽細胞）は、有糸分裂後およびＤＮＡ合成の直前に、この周期を一時停止する；このような「休止」細胞は、その細胞周期から出ていったと言われ、Ｇｏ状態にあると言われている。
【０２７２】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用することにより、その細胞周期の３つの間期段階のうちの１つにある細胞を同定してそれらの相対的なＤＮＡ含量を測定することが可能である；Ｇ１（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定量ｘのＤＮＡを有する；Ｓ（ＤＮＡ複製）中にて、それは、ｘと２ｘとの間にある；Ｇ２（またはＭ）のとき、それは、２ｘのＤＮＡを有する。
【０２７３】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は、以下のとおりである：
（ａ）間期。間期のＧ２段階は、有糸分裂の開始のすぐ前に先行する。染色体ＤＮＡは、このＳ期中に、複製され、そしてタンパク質に結合されるが、染色体は、はっきりした構造としてはまだ見られない。その核小体は、唯一の核の下部構造であり、これは、光学顕微鏡下にて、見られる。ＤＮＡ複製前の２倍体細胞では、各型の２個の形態染色体が存在しており、その細胞は、２ｎと言われている。Ｇ２では、ＤＮＡ複製後、この細胞は、４ｎである。４コピーの各染色体ＤＮＡが存在している。その姉妹染色体は、互いからまだ分離されていないので、姉妹染色分体と呼ばれている。
【０２７４】
（ｂ）初期の分裂前期。中心小体は、各々、新たに形成された娘中心小体を備えているが、その細胞の反対側の分裂極に向かって移動し始める；これらの染色体は、長い糸として見られ得る。その核膜は、小胞に解離し始める。
【０２７５】
（ｃ）中期および後期の分裂前期。染色体の凝縮が完結する；各々の可視染色体構造は、それらのセントロメアで一緒に保持された２個の染色分体から構成される。各染色分体は、２個の新たに複製された娘ＤＮＡ分子のうちの１個を含有する。その微小管紡錘体は、それらの中心小体にすぐ隣接した領域から放射し始め、これらは、それらの分裂極に近づいて移動する。一部の紡錘体繊維は、分裂極から分裂極に及ぶ；殆どは、染色分体に進み、動原体で付着する。
【０２７６】
（ｄ）分裂中期。これらの染色体は、その細胞の赤道に向かって移動し、その場所で、それらは、その赤道面で整列される。その姉妹染色分体は、まだ分かれていない。
【０２７７】
（ｅ）分裂後期。２個の姉妹染色分体は、別個の染色体に分かれる。各々は、紡錘体繊維で１極に連結された動原体を含有し、それは、この極に移動する。それゆえ、各染色体の１コピーは、各娘細胞に供与される。同時に、この細胞は、極−極紡錘体に関して、伸長する。その開裂溝が形成し始めるにつれて、細胞質分裂が始まる。
【０２７８】
（ｆ）分裂終期。その娘核の周りで、新たな膜が形成される；これらの染色体は、解かれ、区別しにくくなり、その核小体が再度見えるようになり、その核膜は、各娘核の周りで、形成される。細胞質分裂がほぼ完結し、この紡錘体は、それらの微小管および他の繊維が解重合するにつれて、見えなくなる。有糸分裂全体にわたって、各極にある「娘」中心小体は、全長になるまで、成長する。分裂終期では、最初の中心小体の各々の複製が完結し、新たな娘中心小体は、次の間期の間に、発生する。
【０２７９】
（ｇ）間期。細胞質分裂が完結すると、この細胞は、その細胞周期のＧ１期に入り、再度、その周期を進む。
【０２８０】
細胞周期が非常に重要な細胞プロセスであることが認識されている。正常な細胞周期から逸脱すると、多くの医学的な障害が生じ得る。細胞周期が高まったり、および／またはその制限がなくなると、癌が起こり得る。細胞周期が低下すると、変性状態が起こり得る。本発明の化合物を使用すると、このような障害や状態を治療する手段が得られる。
【０２８１】
それゆえ、本発明の化合物は、細胞周期障害（例えば、癌（ホルモン依存性癌およびホルモン非依存性癌を含めて））の治療で使用するのに適切であり得る。
【０２８２】
それに加えて、本発明の化合物は、乳癌、卵巣癌、子宮体癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌などのような癌、および他の固形腫瘍を治療するのに適切であり得る。
【０２８３】
ある用途には、細胞周期は、阻害および／または防止および／または制止され、好ましくは、ここで、細胞周期は、防止および／または制止される。１局面では、細胞周期は、Ｇ２／Ｍ期で、阻害および／または防止および／または制止され得る。１局面では、細胞周期は、非可逆的に防止および／または阻害および／または制止され得、好ましくは、ここで、細胞周期は、不可逆的に防止および／または制止される。
【０２８４】
「不可逆的に防止および／または阻害および／または制止される」との用語は、本発明の化合物を適用した後、その化合物を除去しても、この化合物の効果、すなわち、細胞周期の防止および／または阻害および／または制止が依然として観察できることを意味する。さらに詳しく言えば、「不可逆的に防止および／または阻害および／または制止される」との用語は、本明細書中で提示した細胞周期アッセイプロトコルに従ってアッセイしたとき、対象化合物で処理した細胞は、プロトコルＩの段階２の後、コントロール細胞よりも小さい成長を示すことを意味する。このプロトコルの詳細は、以下で提示する。
【０２８５】
それゆえ、本発明は、以下を引き起こす化合物を提供する：細胞周期を防止および／または阻害および／または制止することによる、インビトロで、エストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）およびＥＲ陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の成長の阻害；ならびに／あるいはインタクトな動物（すなわち、卵巣切除していない動物）における、ニトロソメチル尿素（ＮＭＵ）で誘発した乳房腫瘍の退行、および／または癌細胞での細胞周期の防止および／または阻害および／または制止；ならびに／あるいは細胞周期を防止および／または阻害および／または制止することによる、インビボでの作用、および／または細胞周期アゴニストとしての作用。
【０２８６】
（細胞周期アッセイ）
（プロトコル６）
手順
段階１
マルチウェル培養皿に、１０５個の細胞／ウェルの密度で、ＭＣＦ−７乳癌細胞を播種する。細胞は、以下のように処理したときに約３０％が集密するまで、付着させ成長させた：
コントロール−未処理
対象化合物（ＣＯＩ）２０μＭ
細胞は、このＣＯＩを含有する成長培地において、６日間成長させ、培地／ＣＯＩを３日ごとに変える。この期間の終了時点で、コールター細胞カウンタを使用して、細胞数を数えた。
【０２８７】
段階２
ＣＯＩで６日間処理した後、細胞を、１０４個の細胞／ウェルの密度で、再播種する。それ以上の処理は、追加しない。細胞を、成長培地の存在下にて、さらに６日間成長させる。この期間の終了時点で、細胞数を再度数える。
【０２８８】
（癌）
上で述べたように、本発明の化合物は、細胞周期障害の治療で有用であり得る。特定の細胞周期障害には、癌がある。
【０２８９】
癌は、依然として、西洋諸国において、主な死亡原因である。今までに開発された癌の治療法には、ホルモンの作用または合成を阻害してホルモン依存性腫瘍の成長を阻害することが挙げられていた。しかしながら、現在では、ホルモン非依存性の腫瘍を治療するために、さらに積極的な化学療法が使用されている。
【０２９０】
それゆえ、化学療法に付随した副作用の一部または全部をなくしたホルモン依存性および／またはホルモン非依存性腫瘍の抗癌治療用の医薬品が開発されると、大きな治療上の進歩になる。
【０２９１】
エストロゲンが、それらの合成後、多数のヒドロキシル化反応および共役反応を受けることは、知られている。最近まで、このような反応は、最終的にエストロゲンを水溶性にして体内からの排出を高める代謝過程の一部であると考えられていた。現在では、一部のヒドロキシ代謝物（例えば、２−ヒドロキシおよび１６−α−ヒドロキシ）および結合体（例えば、エストロゲンサルフェート、Ｅ１Ｓ）は、体内でエストロゲンが有する複雑な作用の一部を決定する際に重要であることが明らかである。
【０２９２】
研究者は、乳癌のリスクを変える条件に関連して２−および１６−ヒドロキシル化エストロゲンの形成を研究した。現在、１６−α−ヒドロキシル化を増加する因子が乳癌のリストを高め得るのに対して、２−ヒドロキシラーゼ活性を高める因子が、癌のリスクを低くすることに関連しているという証拠がある。エストロゲン代謝物の生物学的な役割の点で、２−メトキシエストラジオールが抗有糸分裂特性を備えた内生代謝物である一連の証拠により、さらに興味が刺激されている。２−ＭｅＯＥ２は、カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼ（これは、体内全体にわたって広く分布している酵素である）により、２−ヒドロキシエストラジオール（２−ＯＨＥ２）から形成される。
【０２９３】
研究者は、インビボで、２−ＭｅＯＥ２が、Ｍｅｔｈ　Ａ肉腫、Ｂ１６黒色腫またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５エストロゲンレセプター陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の皮下注射から生じる腫瘍の成長を阻害することを明らかにした。それはまた、内皮細胞の増殖および移動、およびインビトロ血管形成を阻害する。２−ＭｅＯＥ２がインビボでの腫瘍の成長を阻害する能力は、腫瘍細胞の増殖を直接阻害するよりもむしろ、腫瘍誘発血管形成を阻害する性能が原因であり得ることが示唆された。
【０２９４】
２−ＭｅＯＥ２がその強力な抗分裂促進効果および抗血管形成効果を発揮する機構は、依然として、解明中である。それは、高濃度では、微小管重合を阻害し、チューブリンに結合するコルヒチンの弱い阻害剤として作用するという証拠がある。しかしながら、最近では、有糸分裂を阻害する濃度で、細胞内のチューブリンフィラメントは、解重合されず、タキソール処理後に見られるものと同じ形態を有することが分かった。従って、乳癌および卵巣癌の治療に使用される薬剤である２−ＭｅＯＥ２は、タキソールのように、微小管の動態を安定化することにより作用する可能性がある。
【０２９５】
癌の新たな治療法としての２−ＭｅＯＥ２の同定は、重要な進歩ではあるものの、経口投与エストロゲンの生体利用能は、乏しい。さらに、それらは、最初に肝臓を通っている間に、広範囲にわたる代謝を受ける。乳癌治療用のステロイドスルファターゼ阻害剤を開発するための研究プログラムの一部として、エストロン−３−Ｏ−スルファメート（ＥＭＡＴＥ）は、強力な活性部位特異的阻害剤として同定された。予想外なことに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて、エストラジオールよりも１００倍も高い経口子宮向性（ｕｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）活性を備えた強力なエストロゲン特性を有することが判明した。その高いエストロゲン性は、それが赤血球（ｒｂｃｓ）（これは、それが肝臓を通る間に不活性化することから保護し、また、長期間にわたる遅延放出用のレザバとして作用する）に吸収されることから生じると考えられている。多数のＡリング変性アナログが合成され、試験されているが、これらには、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートが挙げられる。この化合物は、ステロイドスルファターゼ阻害剤として、ＥＭＡＴＥと等しい効力を有するものの、エストロゲン性が欠けていた。
【０２９６】
本発明者は、本発明の化合物が癌（特に、乳癌）を治療する手段を提供すると考えている。
【０２９７】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、白血病を含めた癌および固形腫瘍（例えば、乳房腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍および膵臓腫瘍）の成長を阻害する際に有用であり得る。
【０２９８】
（エストロゲンに関係した治療）
本発明の化合物の一部は、体内（特に、女性の体内）のエストロゲンレベルを制御する際に有用であり得ると考えられる。それゆえ、これらの化合物の一部は、受精能を制御する手段（例えば、経口避妊錠剤、ピル、溶液またはトローチ剤）を提供するものとして、有用であり得る。あるいは、この化合物は、移植片またはパッチの形態であり得る。
【０２９９】
それゆえ、本発明の化合物は、エストロゲンに関連したホルモン状態を治療する際に有用であり得る。
【０３００】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、エストロゲンに関連した疾患に加えてホルモン状態を治療する際に有用であり得る。それゆえ、本発明の化合物はまた、ホルモン活性に影響を与えることができ得、また、免疫応答に影響を与えることができ得る。
【０３０１】
（神経変性疾患）
本発明者らは、本発明の化合物の一部が神経変性疾患および類似の状態の治療で有用であり得ると考えている。
【０３０２】
例として、ＳＴＳ阻害剤は、記憶喪失、頭部外傷、アルツハイマー病、癲癇性痴呆、初老期痴呆、外傷後痴呆、老人性痴呆、血管性痴呆および卒中後痴呆のような病気に罹っている患者、または記憶向上を求めている個人の記憶機構の増強に有用であると考えられている。
【０３０３】
（ＴＨ１）
本発明者らは、本発明の化合物のいくつかがＴＨ１に関連して有用であり得ると考えている。
【０３０４】
例として、マクロファージまたは他の抗原提示細胞内にＳＴＳインヒビターが存在していると、感作Ｔ細胞がＴＨ１（高ＩＬ−２、ＩＦＮγ低ＩＬ−４）応答を高める能力を低くし得ると考えられている。従って、他のステロイド（例えば、グルココルチコイド）の正常な調節作用が優勢となる。
【０３０５】
（炎症性状態）
本発明者らは、本発明の化合物のいくつかが炎症性状態（例えば、以下のいずれか１種以上に関連した状態）を処置する際に有用であり得ると考えている：自己免疫（例えば、慢性関節リウマチ、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、甲状腺炎、脈管炎、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、皮膚障害（例えば、乾癬および接触性皮膚炎）；移植片対宿主病；湿疹；喘息および移植後の器官拒絶。
【０３０６】
例として、ＳＴＳインヒビターは、ＤＨＥＡまたは関連したステロイドの免疫応答および／または炎症応答に対する通常の生理学的効果を防止し得ると考えられている。
【０３０７】
本発明の化合物は、内因性グルココルチコイド様効果を現す医薬品の製造において有用であり得る。
【０３０８】
（他の治療法）
本発明の化合物／組成物が他の重要な医学的関連性を有し得ることがまた、理解される。
【０３０９】
例えば、本発明の化合物または組成物は、すなわち、ＷＯ−Ａ−９９／５２８９０で列挙された障害の処置で有用であり得る。
【０３１０】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５で列挙された障害の処置で有用であり得る。参照し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：癌、炎症疾患または炎症性疾患、皮膚障害、発熱、心血管効果、出血、凝血および急性期応答、悪液質、拒食症、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再灌流傷害、髄膜炎、片頭痛およびアスピリン依存性抗血栓；腫瘍の成長、浸潤および展開、血管形成、転移、悪性、腹水および悪性胸水；脳虚血、虚血性心臓疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、発作、脈管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周病、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜症および手術による創傷の治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、過敏症；再狭窄、鬱血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症またはエンド硬化症（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）。
【０３１１】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９で列挙された障害の処置で有用であり得る。参照し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制または免疫刺激活性（例えば、免疫不全症（ヒト免疫不全ウイルスへの感染を含めて）の処置；リンパ球増殖の調節；癌および多くの自己免疫疾患の処置、および移植拒絶の防止または腫瘍免疫の誘導）；造血の調節（例えば、骨髄疾患またはリンパ疾患の処置））；骨、軟骨、腱、靱帯および神経組織の増殖の促進（例えば、創傷の治癒、火傷、潰瘍および歯周病および神経変性を処置するため）；卵胞刺激ホルモンの阻害または活性化（受精能の調節）；走化性／化学動態ホルモン（例えば、特定の細胞型を傷害部位または感染部位に移動させるため）；出血活性および血栓崩壊活性（例えば、血友病および発作の処置のため）；抗炎症活性（例えば、敗血症性ショックまたはクローン病を処置するため）；抗菌剤として；例えば、代謝または挙動の調節剤；鎮痛剤として；特定の欠乏症を処置する；例えば、ヒトおよび獣医学における乾癬の処置。
【０３１２】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５で列挙された疾患の処置において有用であり得る。参照し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：マクロファージ阻害および／またはＴ細胞阻害活性、それゆえ、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、細胞性免疫応答および／または体液性免疫応答（炎症と関連していない応答を含めて）に対する阻害効果；マクロファージおよびＴ細胞が細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに付着する性能ならびにＴ細胞で上方制御されるｆａｓレセプター発現を阻害する；不要な免疫反応および炎症を阻止することであって、これには、関節炎（慢性関節リウマチを含めて）、過敏症に関連した炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病および他の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症に関連した炎症、動脈硬化症、アテローム硬化型心臓病、再灌流傷害、心不全、心筋梗塞、血管炎症障害、呼吸窮迫症候群または他の心肺疾患、消化管潰瘍に関連した炎症、潰瘍性大腸炎および胃腸管の他の疾患、肝臓線維症、肝硬変または他の肝臓病、甲状腺炎または他の腺疾患、糸球体腎炎または他の腎臓病および泌尿器病、耳炎または他の耳鼻咽喉病、皮膚炎または他の皮膚病、歯周病または他の歯の疾患、精巣炎または副睾丸精巣炎、不妊症、睾丸外傷または他の免疫関連精巣病、胎盤機能不全、胎盤機能不全症、習慣性流産、子癇、子癇前症および他の免疫関連および／または炎症関連婦人病、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎または類嚢胞黄斑浮腫）、交感性眼炎、強膜炎、網膜色素変性症、変性底疾患の免疫成分および炎症成分、眼の外傷の炎症成分、感染により引き起こされる眼の炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経障害、過剰傷瘢痕（例えば、緑内障濾過手術後の）、眼移植物に対する免疫反応および／または炎症反応ならびに他の免疫および炎症関連眼病、自己免疫疾患または状態または障害に関連した炎症（中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の器官の両方において、免疫抑制および／または炎症抑制が有益である）；パーキンソン病、パーキンソン病の処置の合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆複合ＨＩＶ関連脳症、デビック病、シデナム舞踏病、アルツハイマー病および他の変性疾患、ＣＮＳの状態または障害、発作の炎症成分、ポリオ後症候群、精神障害の免疫および炎症成分、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性汎脳炎、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギラン・バレー症候群、シデナム舞踏症、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン舞踏症、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧縮またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳの感染の炎症成分、筋萎縮および筋ジストロフィーの炎症成分、および中枢および末梢神経系の免疫および炎症関連の疾患、病気または障害、外傷後炎症、敗血症性ショック、感染症、手術の炎症性の合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、遺伝子治療の炎症および／または免疫の合併症および副作用（例えば、ウイルスキャリアでの感染が原因のもの）、またはＡＩＤＳに関連した炎症、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を抑制すること、単球またはリンパ球の量を少なくすることにより単球または白血球増殖疾患（例えば、白血病）を処置または改善すること、天然または人工の細胞、組織および器官（例えば、角膜、骨髄、器官、水晶体、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織）の移植の場合での移植片拒絶の防止および／または処置。
【０３１３】
（他の局面）
他の局面では、本発明は、以下を提供する：
・細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖を調節する医薬を製造する際の化合物の使用であって、ここで、この化合物は、次式である：
【０３１４】
【化４１】
2004506741.tif 000026
ここで、Ｘは、環系である；Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；
・好ましくは、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基であるとき、このステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表わす；
・好ましくは、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用できる；
・好ましくは、この医薬は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）を阻害する。
【０３１５】
・細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞増殖を調節する方法であって、この方法は、（必要に応じて、この処置が必要な）被験体に、次式の化合物を投与する工程を包含する：
【０３１６】
【化４２】
2004506741.tif 000027
ここで、Ｘは、環系である；Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；
・好ましくは、Ｘがステロイド構造であり、Ｒ１およびＲ２の両方がスルファメート基であるとき、このステロイド環系（Ｘ）は、エストロゲンを表わす；
・好ましくは、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用できる；
・好ましくは、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）を阻害する。
【０３１７】
・式ＩＩの化合物：
【０３１８】
【化４３】
2004506741.tif 000028
Ｒ１は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；Ｒ２は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；そしてＲ３は、Ｈ以外の基である；
・好ましくは、この化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞増殖のモジュレーターとして作用できる；
・好ましくは、Ｒ３は、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基、さらに好ましくは、オキシヒドロカルビル基であるが、さらにより好ましくは、アルコキシ基（その用語の各々は、本明細書中で定義されている）である。
【０３１９】
（化合物の調製）
本発明の化合物は、適切なアルコールと適切な塩化物とを反応させることにより、調製され得る。例として、本発明のスルファメート化合物は、適切なアルコールと、式Ｒ４Ｒ５ＮＳＯ２Ｃｌの適切な塩化スルファモイルとを反応させることにより、調製され得る。
【０３２０】
この反応を実行する典型的な条件は、以下のとおりである。
【０３２１】
塩化ナトリウムおよび塩化スルファモイルを、０℃で、このアルコールの無水ジメチルホルムアミド攪拌溶液に添加する。引き続いて、この反応物を室温まで暖め、それから、さらに２４時間にわたって、攪拌を継続する。その反応混合物を重炭酸ナトリウムの冷飽和溶液に注ぎ、得られた水相をジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥する。濾過に続いて減圧中で溶媒エバポレーションし、トルエンと共にエバポレートさせると、粗残留物が得られ、これを、フラッシュクロマトグラフィーでさらに精製する。
【０３２２】
好ましくは、このアルコールは、適切なら、この塩化スルファモイルとの反応前に、誘導体化される。必要な場合、このアルコール中の官能基は、公知様式で保護され得、その保護基は、その反応の最後に除去される。
【０３２３】
好ましくは、このスルファメート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示に従って調製される。
【０３２４】
このホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示とＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示とを適切に組み合わせることにより、調製され得る。
【０３２５】
このスルホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適切に改造することにより、調製され得る。
【０３２６】
このチオホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９１／００２７０の教示を適切に改造することにより、調製され得る。
【０３２７】
好ましい調製はまた、以下の本文で提示される。
【０３２８】
（要約）
要約すると、本発明は、ステロイドスルファターゼインヒビターおよび／またはアポトーシスモジュレーターおよび／または細胞周期モジュレーターおよび／または細胞増殖モジュレーターとして使用する新規化合物、およびそれらを含有する製薬組成物を提供する。
【０３２９】
（実施例）
ここで、本発明を、例としてのみ、説明する。しかしながら、これらの実施例はまた、本発明の好ましい化合物だけでなく、それらを製造する好ましい経路およびそれらの調製で有用な中間体を提供する。
【０３３０】
（合成）
（３−Ｏ−ベンジル−１７−α−スルファモイル−エストラジオールおよび３−Ｏ−ベンジル−１７−β−Ｏ−スルファモイル−エストラジオールの調製）
エストロン（Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている）から出発して、３−Ｏ−位置の保護を、ベンジル化によって行って、ＢＬＥ９９０４９を得た。ホウ化水素ナトリウムによって還元して、ほぼ定量的な様式で、３−Ｏ−ベンジル−１７−β−エストラジオールＢＬＥ９９０５１を得た。
【０３３１】
【化４４】
2004506741.tif 000029
エストラジオールの１７位置の立体配置の反転を、光延反応を使用して、達成した。トリフェニルホスフィンおよびＤＥＡＤにより形成される錯体を、８０℃で、トルエン中にて、３−Ｏ−ベンジル−１７−β−エストラジオールＢＬＥ９９０５１およびｐ−ニトロ安息香酸と反応させて、３−Ｏ−ベンジル−１７−α−ｐ−ニトロエストラジオールＢＬＥ９９０５３を得た。
【０３３２】
炭酸カリウムを使用してＢＬＥ９９０５３のエステル部分を加水分解すると、収率８４．５％で、清浄に、３−Ｏ−ベンジル−１７−β−エストラジオールＢＬＥ９９０５６が得られた。
【０３３３】
その１７−位置でのスルファモイル化は、新しい方法を使用して実行したが、この方法には、塩基としてのＴＨＦ中の１．２当量のｔ−ＢｕＯＫ（１Ｍ）および５当量の塩化スルファモイル（トルエン中の０．７Ｍ）が関与しており、それにより、高収率のスルファメート誘導体ＢＬＥ９９０５２およびＢＬＥ９９０５９が得られた。
【０３３４】
（１７−α−および１７−α−エストラジオール誘導体のビスアルキル化またはアシル化、水素化分解および最終スルファモイル化）
この１７−α化合物ＢＬＥ９９０５９を塩化ベンジルでビスアルキル化すると、収率４７％で、ビスアルキル化化合物ＢＬＥ９９０６１が生じ、引き続いて、水素化分解によりベンジル脱保護すると、収率９０．５％で、ＢＬＥ９９０６６が得られた。
【０３３５】
【化４５】
2004506741.tif 000030
１７−β誘導体ＢＬＥ９９０５２を、塩化ベンジル、ヨウ化メチルでビスアルキル化し、塩化アセチルでアシル化すると、それぞれ、良好な収率で、ＢＬＥ９９０６０、ＢＬＥ９９０６７およびＢＬＥ９９０５８が得られた。Ｈ２Ｐｄ／Ｃ（１０％）を使用した水素化分解による引き続いたベンジル脱保護により、それぞれ、１７−スルファメート化エストラジオールＢＬＥ９９０６０、ＢＬＥ９９０６４およびＢＬＥ９９０５８が得られた。
【０３３６】
【化４６】
2004506741.tif 000031
その３−Ｏ−位置での最終スルファモイル化は、出発物質の溶解度に依存して、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミド中にて、塩基として３当量のＤＢＭＰを使用して、また、トルエン中の５当量の塩化スルファモイル（０．７Ｍ）を使用して、行った。
【０３３７】
【化４７】
2004506741.tif 000032
先のストラテジー（上記参照）に従って、本発明者らは、以下の２種の化合物を調製した：
・３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７４
・３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８３Ａ
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７４）
１７−β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０７０（報告２での調製を参照）を臭化ペンチルでビスアルキル化すると、収率９２．５％で、ビスアルキル化化合物ＢＬＥ９９０７２が生じ、引き続いて、水素化分解によりベンジル脱保護すると、収率８０％で、ＢＬＥ９９０７３が得られた。その３−Ｏ−位置での最終スルファモイル化は、ジクロロメタン中にて塩基として３当量のＤＢＭＰを使用し、また、トルエン中の５当量の塩化スルファモイル（０．７Ｍ）を使用して、収率８９％で進行し、ビススルファメート誘導体ＢＬＥ０００７４が得られた。
【０３３８】
【化４８】
2004506741.tif 000033
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８３Ｂ）
ビススルファメートＢＬＥ０００８３Ｂを調製するのに使用した経路は、ＢＬＥ０００７４の経路と同じである。１７−Ｏ−β−スルファメートＢＬＥ０００７０と比較して１７−Ｏ−α−スルファメートＢＬＥ０００７７のアルキル化の収率が低いことは、これらの１７−Ｏ−α−スルファメートエストラジオール誘導体が、酸性媒体または極性溶媒（ＳｉＯ２またはＣＤＣｌ３は、時には、この分解を促進するのに十分に酸性である）中にて、あまり安定ではないという事実に由来している。化合物ＢＬＥ０００８２の最終スルファモイル化では、本発明者らは、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した後、２種の３−Ｏ−スルファメートを単離した：１７−メチル−ゴナ−１，３，５（１０），１３（１７）−テトラエン−３−Ｏ−スルファメートＢＬＥ０００８３Ａおよび３−Ｏ−スルファモイルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８３Ｂ。
【０３３９】
【化４９】
2004506741.tif 000034
（実験）
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンＢＬＥ９９０４９）
エストロン（３．３５ｇ、１２．３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液に、室温で、窒素雰囲気下にて、炭酸カリウム（３．４５ｇ、２５ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（２．２５ｍｌ、１８．７５ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を２４時間攪拌し、次いで、Ｈ２Ｏでクエンチし、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を、Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、そして乾燥した（ＭｇＳＯ４）。その乾燥剤を濾過し、その溶媒を、減圧下で、蒸発させた。その残留物をＥｔ２Ｏで粉砕し、濾過し、そして蒸発させて、白色固形物として、３．４８ｇ（７８％収率）の３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンＢＬＥ９９０４９を得た。
【０３４０】
【化５０】
2004506741.tif 000035
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−オールＢＬＥ９９０５１）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンＢＬＥ９９０４９（３．４６ｇ、９．５９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（３８ｍｌ）懸濁液に、０℃で、ホウ水素化ナトリウム（０．３６ｇ、９．５８ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を、室温で、３０分間攪拌し、次いで、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液１０ｍｌでクエンチし、そしてＨ２Ｏ（５０ｍｌ）を添加した。その沈殿物を濾過により集め、そしてＨ２Ｏで洗浄して、白色固形物として、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−オ−ルＢＬＥ９９０５１（３．５０ｇ、粗収率１００％）を得た。
【０３４１】
【化５１】
2004506741.tif 000036
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５２）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−オ−ルＢＬＥ９９０５１（１．２０ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３５ｍｌ）溶液に、０℃で、Ｎ２雰囲気下にて、ｔ−ＢｕＯＫ（１Ｍ）のＴＨＦ（４ｍｌ、４．００ｍｍｏｌ）溶液を処理した。その反応混合物を、０℃で、１５分間攪拌し、次いで、０℃で、塩化スルファモイル（約０．７Ｍ）のトルエン（２４ｍｌ、１６．３２ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。この溶液を、室温で、２時間攪拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液を、０℃で添加し（１５ｍｌ）、次いで、水（６０ｍｌ）を添加し、その溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出した。その有機層でブライン（３×１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、黄色がかった粗固形物１．４８ｇを得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中で再結晶（２×）すると、白色結晶、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５２（１．２９ｇ、収率８８％）が得られた。
【０３４２】
【化５２】
2004506741.tif 000037
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾエートＢＬＥ９９０５３）
トリフェニルホスフィン（２．１０ｇ、８．０ｍｍｏｌ）の無水トルエン（１３．３ｍｌ）溶液に、０〜５℃ジエチルアゾジカルボキシレート（１．２６ｍｌ、８．０ｍｍｏｌ）を滴下し、その溶液を、０〜５℃で、１時間攪拌した。３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−オ−ルＢＬＥ９９０５１（１．４５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）およびｐ−ニトロ安息香酸（２．６７ｇ、１６ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で添加し、次いで、その反応混合物を、８０℃で、２時間攪拌した。この反応混合物を室温まで冷却した後、Ｈ２Ｏを添加し、その混合物を、ＥｔＯＡｃ（３×８０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、次いで、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。その乾燥剤を濾過し、その溶媒を、減圧下で、蒸発させた。その残留物を、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜７：１を使用するカラムクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２３ｃｍ）により精製して、（ヘキサン：ＥｔＯＡｃで再結晶した後）、白色／ピンク色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾエートＢＬＥ９９０５３（０．８５ｇ）を得た。
【０３４３】
【化５３】
2004506741.tif 000038
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−オールＢＬＥ９９０５６）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾエートＢＬＥ９９０５３（０．８２ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍｌ）およびＭｅＯＨ（６ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（０．２２ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を添加し、そして室温で、２時間攪拌した。その反応混合物をＨ２Ｏ（３０ｍｌ）でクエンチし、そしてＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、次いで、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして真空中で蒸発させた。その粗生成物を、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２２ｃｍ）により精製して、白色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−オールＢＬＥ９９０５６（０．４９ｇ、収率８４．５％）を得た。
【０３４４】
【化５４】
2004506741.tif 000039
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５９）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−オールＢＬＥ９９０５６（０．４９ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５ｍｌ）溶液に、０℃で、Ｎ２雰囲気下にて、ｔ−ＢｕＯＫ（１Ｍ）のＴＨＦ（１．６２ｍｌ、１．６２ｍｍｏｌ）溶液を処理した。その反応混合物を、０℃で、１５分間攪拌し、次いで、０℃で、塩化スルファモイル（約０．７Ｍ）のトルエン（９．９３ｍｌ、６．７６ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。この溶液を、室温で、２時間攪拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液を、０℃で添加し（５ｍｌ）、次いで、水（２０ｍｌ）を添加し、その溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×７０ｍｌ）で抽出した。その有機層でブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、白色固形物として、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５９（０．５９ｇ、収率９８％）を得た。
【０３４５】
【化５５】
2004506741.tif 000040
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０５５）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５２（０．３０ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．３３ｍｌ、２．７２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、０．０６ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、一晩攪拌した。この反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（３０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）でさらに洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２３ｃｍ）により精製して、白色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０５５（０．３８ｇ、収率８９％）を得た。
【０３４６】
【化５６】
2004506741.tif 000041
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６１）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５９（０．３０ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．３３ｍｌ、２．７２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、０．０６ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、２８時間攪拌した。この反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（５０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）でさらに洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝９：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、白色固形物（ヘキサン中で再結晶後）、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６１（０．２０ｇ、収率４７％）を得た。
【０３４７】
【化５７】
2004506741.tif 000042
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５４）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５２（０．３０ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、０．０２７ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）および塩化アセチル（５３．１μｌ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を、１６時間攪拌した。その溶媒を真空中で除去し、その粗混合物を、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：１〜１：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２３ｃｍ）により精製して、出発物質ＢＬＥ９９０５２（０．１０ｇ、収率３３％）を得、次いで、白色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５４（０．１５ｇ、収率４６％）を得た。
【０３４８】
【化５８】
2004506741.tif 000043
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６４）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０５２（０．３０ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、０．０６０ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．１６９ｍｌ、２．７２ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を、一晩攪拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（５０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、淡黄色粗固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６４（０．３１ｇ、粗収率９９％）を得た。
【０３４９】
【化５９】
2004506741.tif 000044
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６０）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０５５（０．２０ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍｌ）溶液に、炭素上１０％パラジウム（０．１０ｇ）を添加した。その反応混合物を、水素雰囲気下にて、室温で、７時間攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６０（０．２３ｇ、収率８３．５％）を得た。
【０３５０】
【化６０】
2004506741.tif 000045
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６６）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６１（０．１９５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）およびＴＨＦ（５ｍｌ）溶液に、炭素上１０％パラジウム（０．０７５ｇ）を添加した。その反応混合物を、窒素雰囲気下にて、室温で、３時間攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６６（０．１５ｇ、収率９０．５％）を得た。
【０３５１】
【化６１】
2004506741.tif 000046
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５８）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５４（０．１１ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）溶液に、炭素上１０％パラジウム（０．０５ｇ）を添加した。その反応混合物を、水素雰囲気下にて、室温で、５時間攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５８（０．０９ｇ、収率８７％）を得た。
【０３５２】
【化６２】
2004506741.tif 000047
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６７）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６４（０．３１ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（５ｍｌ）溶液に、炭素上１０％パラジウム（０．１５ｇ）を添加した。その反応混合物を、水素雰囲気下にて、室温で、一晩攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６７（０．２０５ｇ、収率８２％）を得た。
【０３５３】
【化６３】
2004506741.tif 000048
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６３）
３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６０（０．２０ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．２３ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（２．７７ｍｌ、１．８８ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、１６時間攪拌した。ジクロロメタン（４０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（４０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、無色オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４：１〜３：２を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により分画して、白色固形物（泡状物）、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６３（０．１９４ｇ、収率８４．５％）を得た。
【０３５４】
【化６４】
2004506741.tif 000049
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６８）
３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６６（０．１２２ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（７ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．１４ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（１．６９ｍｌ、１．１５ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、１９時間攪拌した。ジクロロメタン（３０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（３０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、無色オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４：１〜３：２を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により分画して、白色固形物、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジベンジル）スルファメートＢＬＥ９９０６８（０．０７３ｇ、収率５２％）を得た。
【０３５５】
【化６５】
2004506741.tif 000050
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０６５）
３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０５８（６７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．１０５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（１．２５ｍｌ、０．８５ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、７時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（４０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×４０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝１．５ｃｍ、ｈ＝２３ｃｍ）により分画して、淡橙色固形物、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ−アセチル）スルファメートＢＬＥ９９０６５（２７ｍｇ、収率３４％）を得た。
【０３５６】
【化６６】
2004506741.tif 000051
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６９）
３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６７（１８０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．２９２ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（３．４９ｍｌ、２．３７ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、１９時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（４０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×４０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝３：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により分画して、白色固形物、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ９９０６９（０．１９５ｇ、収率９０％）を得た。
【０３５７】
【化６７】
2004506741.tif 000052
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７２）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−スルファメートＢＬＥ９９０７０（０．４０ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）および臭化ペンチル（０．４５ｍｌ、３．６２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１２ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、７２．５ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、１６時間攪拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（３０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝９：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により分画して、白色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７２（０．４９ｇ、収率９２．５％）を得た。
【０３５８】
【化６８】
2004506741.tif 000053
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７９）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−スルファメートＢＬＥ０００７７（０．４０ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）および臭化ペンチル（０．４５ｍｌ、３．６２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１２ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、７２．５ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、１６時間攪拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（３０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）でさらに洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得、これを、溶離液としてヘキサン、次いでヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４０：３〜８：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２２ｃｍ）により精製して、無色オイル、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７９（０．３２ｇ、収率６１％）を得た。
【０３５９】
【化６９】
2004506741.tif 000054
（３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ０００７８）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−スルファメートＢＬＥ０００７７（０．４０ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．２２５ｍｌ、３．６２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、室温で、Ｎ２雰囲気下にて、水素化ナトリウム（鉱油中で６０％、８０ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、一晩攪拌した。その反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、続いて、水（３０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）でさらに洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得、これを、溶離液としてヘキサン、次いでヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４０：３〜８：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、白色固形物、すなわち、３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル）スルファメートＢＬＥ０００７８（０．２５ｇ、収率５９％）を得た。
【０３６０】
【化７０】
2004506741.tif 000055
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７３）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７２（０．４６ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍｌ）およびＴＨＦ（７ｍｌ）溶液に、１０％炭素担持パラジウム（０．１５ｇ）を添加した。その反応混合物を、水素雰囲気下にて、室温で、２時間１５分間攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７３（０．３１ｇ、収率８０％）を得た。
【０３６１】
【化７１】
2004506741.tif 000056
（３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８２）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７９（０．３１ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍｌ）およびＴＨＦ（８ｍｌ）溶液に、１０％炭素担持パラジウム（０．１０ｇ）を添加した。その反応混合物を、水素雰囲気下にて、室温で、８時間攪拌した。その触媒を濾過した後、その溶媒を、減圧下にて蒸発させて、白色固形物として、３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８２（０．３１ｇ、収率８０％）を得た。
【０３６２】
【化７２】
2004506741.tif 000057
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７４）
【０３６３】
【化７３】
2004506741.tif 000058
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０７３（０．２６ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．３３ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（３．９５ｍｌ、２．６９ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、１８時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（５０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５：１を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２１ｃｍ）により分画して、白色固形物、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７β−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００７４（０．２７ｇ、収率８９％）を得た。
【０３６４】
【化７４】
2004506741.tif 000059
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８３）
３−ベンジルオキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８２（０．１７ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）溶液に、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（０．２１ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加し、そして注射器を経由して、塩化スルファモイル（０．７Ｍ）のトルエン（２．５１ｍｌ、１．７１ｍｍｏｌ）溶液を滴下した。その反応混合物を、室温で、７時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を添加し、そしてＨ２Ｏ（５０ｍｌ）を添加した。その水層を分離すると、その有機層をブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させて、オイルを得、これを、溶離液としてヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：４に次いで１：３を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝３ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により分画して、白色固形物、すなわち、１７−メチル−ゴナ−１，３，５（１０），１３（１７）−テトラエン−３−Ｏ−スルファメートＢＬＥ０００８３Ａ（０．０３ｇ、収率２６％）および有色オイル、すなわち、３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ０００８３Ｂ（０．０５ｇ、収率２６％）を得た。
【０３６５】
（１７−メチル−ゴナ−１，３，５（１０），１３（１７）−テトラエン−３−Ｏ−スルファメートＢＬＥ０００８３Ａ）
【０３６６】
【化７５】
2004506741.tif 000060
（３−Ｏ−スルファモイル−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７α−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジペンチル）スルファメートＢＬＥ９９０８３Ｂ）
【０３６７】
【化７６】
2004506741.tif 000061
（生物学的データ）
生物学的データを、上記ＳＴＳ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓに従って、そして、以下のアッセイに従って、決定した。
【０３６８】
（微小血管形成アッセイ）
このアッセイを、「ＡｎｇｉｏＫｉｔ」を使用して、実行する。
【０３６９】
Ａｎｇｉｏｋｉｔは、２４ウェルプレートであり、これは、最適化した培地で成人線維芽細胞の床内で共培養したＨＵＶＥＣｓを備えている（ＴＣＳ　Ｃｅｌｌｗｏｒｋｓ，ＵＫ）。
【０３７０】
ＡｎｇｉｏＫｉｔを、この実験の初めから終わりまで、３７℃で、５％ＣＯ２湿潤雰囲気で、インキュベートした。１日目に、この培地を吸引し、そして実験培地（これは、３７℃で、５％ＣＯ２湿潤雰囲気で、３０分間にわたって、予め平衡化した）で置き換え、そして温め最適化した培地にて、薬剤希釈を行った。４、７および９日目に、この培地を変え、１日目と同じ新鮮な薬物を添加した。負対照として、スラミン（２０μＭ）を使用し、また、正対照として、ＶＥＧＦ（２ｎｇ／ｍｌ）を使用した。
【０３７１】
１１日目に、細胞を固定し、そして染色した。この培地を吸引し、各ウェルを、１ｍｌ洗浄緩衝液Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｉｎｅで洗浄した。各ウェルに、７０％エタノール（−２０℃）１ｍｌを添加し、これらの細胞を固定した。次いで、これらのウェルを、１ｍｌのブロッキング緩衝液（１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，ＵＫ）で補足した洗浄緩衝液１×）で洗浄した。細胞を、ｖｏｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　Ｆａｃｔｏｒで染色した。各ウェルに、希釈（ブロッキング緩衝液中で１：２００）一次抗体（ヒツジ抗ヒトｖｏｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　ＴＣＳ　ｃｅｌｌｗｏｒｋｓ，ＵＫ）０．５ｍｌを添加し、そのプレートを、３７℃で、１時間インキュベートした。次いで、これらのウェルを、ブロッキング緩衝液１ｍｌで３回洗浄した後、各ウェルに、希釈（ブロッキング緩衝液中で１：４００）二次抗体結合体（ロバ抗ヒツジＩｇＧ　Ｈｏｒｓｅｒｅｄｉｓｈ　Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ共役物ＴＣＳ　ｃｅｌｌｗｏｒｋｓ，ＵＫ）０．５ｍｌを添加した。このプレートを、３７℃で、さらに１時間インキュベートした。この後、これらのウェルを、蒸留水で３回洗浄した。次いで、各ウェルに、基質緩衝液（ＴＣＳ　Ｃｅｌｌｗｏｒｋｓ，ＵＫ）中の３，３’−ジアミノ−ベンジジンテトラヒドロクロライド（ＤＡＢ）金属基質１：１０（０．５ｍｌ）を添加し、これを、３７℃で、細管が黒褐色に発色するまで（約３０分間）、インキュベートした。次いで、これらのウェルを１ｍｌ蒸留水で３回洗浄し、そして空気乾燥した。
【０３７２】
次いで、細管形成の程度を、目で見て評価した。このプレートの裏に、細いマーカーを使用して、マス目を描く（図２．１を参照）。その顕微鏡に、チョークレー（ｃｈａｌｋｌｅｙ）接眼レンズ計数線（Ｐｙｓｅｒ　ＳＧＩ　Ｌｔｄ．，ＵＫ）を取り付け、低出力を使用して、２４個の可能な計数領域（これらの場所では、そのマス目線が交差している）を走査し、最も多い細管形成があるように見える５個を計数した。その接眼レンズは、２５個のスポットを有し、細管と重なり合っている各スポットは、１個として数えた。これを、各ウェルについて繰り返した。
【０３７３】
（コルヒチン置換アッセイ）
チューブリン結合用のアッセイのプロトコルを、以下で示す。
【０３７４】
【化７７】
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適切なブランク、対照は、同時に維持し、加えた全数を決定する。
【０３７５】
（結果）
（ＭＣＦ−７細胞ＳＴＳアッセイ）
２−ＥｔＥ２ＢｉｓＭＡＴＥ　 ＩＣ５０−３３ｎＭ
（ＭＤＡ細胞増殖アッセイ）
２−ＭｅＯＥ２ＢｉｓＭＡＴＥ　ＩＣ５０−０．４５μＭ
２−ＥｔＥ２ＢｉｓＭＡＴＥ　 ＩＣ５０−０．３２μＭ
（微小血管形成アッセイ）
（ＨＵＶＥＣｓ＋線維芽細胞同時培養）
【０３７６】
【化７８】
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（コルヒチン置換アッセイ（％））
【０３７７】
【化７９】
2004506741.tif 000064
【０３７８】
【化８０】
2004506741.tif 000065
【０３７９】
【化８１】
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上記明細書で言及した全ての文献および特許および特許出願の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０３８０】
本発明の種々の改良および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかとなる。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記述されているものの、請求された発明がこのような特定の実施形態には過度に限定されないことが理解できるはずである。実際、本発明を実行するために記述した様式の種々の改良は、化学、生物学または関連した分野の当業者に明らかであるが、上記請求の範囲の範囲内であることが意図される。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004506741.tif 000184
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