(57)【要約】要約書なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
標準的な胃内容排出アッセイ法で測定した場合に、酸化窒素（ＮＯ）活性を増加させる化合物の治療的有効量を、哺乳類に投与する段階を含む、疾患に罹患しているかまたは疾患にかかりやすい哺乳類における、胃腸疾患を治療する方法。
【請求項２】
標準的な酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）タンパク質発現アッセイ法で測定した場合に、ｎＮＯＳを増加させる少なくとも一つの化合物の治療的有効量を、哺乳類に投与する段階を含む、疾患に罹患しているかまたは疾患にかかりやすい哺乳類における、胃腸疾患を治療する方法。
【請求項３】
哺乳類が、ＮＯ活性およびｎＮＯＳレベルの少なくとも一つを増加させる治療のために同定および選択されており、次に同定および選択された哺乳類に化合物を投与する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
投与する化合物の量が、標準的なｃＧＭＰアッセイ法によって測定した場合に、神経の環状グアノシン３’−一リン酸（ｃＧＭＰ）レベルを増加させるのに十分である、請求項１から３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
胃腸疾患が、小腸、大腸、結腸、食道または胃の少なくとも一つにおける低運動性または運動過剰を特徴とする、請求項１から４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
胃腸疾患が、悪心、嘔吐、胸焼け、食後の不快感、下痢、便秘、および消化不良の少なくとも一つをさらに特徴とする、請求項１から５のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
疾患が、糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、および胃腸障害の少なくとも一つに関連している、請求項１から６のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
疾患が糖尿病性胃疾患である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
偽性腸閉塞が、偽性結腸閉塞（オギルビー症候群）、特発性胃不全麻痺、および特発性便秘（巨大結腸）の少なくとも一つである、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
胃腸障害が外科的介入の結果である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
胃腸疾患が、肥厚性幽門狭窄、機能的腸疾患、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、バレット化生またはバレット食道の少なくとも一つである、請求項１から９のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
機能的腸疾患が、過敏性腸症候群または機能的消化不良の少なくとも一つである、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
哺乳類が、クローン病または潰瘍性大腸炎に罹患しているかまたはかかりやすい、請求項１から４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
ＰＤＥ阻害剤化合物を投与する、請求項１から１４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
インスリン、インスリンの生物学的に活性な変異体、またはインスリンの効果もしくはレベルを増強する化合物である、請求項１から１４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
インスリンの効果またはレベルを増強する化合物が、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンである、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
胃内容排出アッセイ法で測定した場合に、酸化窒素（ＮＯ）産生を増大させるのに十分な量のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤の治療的有効量を、哺乳類に投与する段階を含む、疾患に罹患しているかまたは疾患にかかりやすい哺乳類における、胃腸疾患を治療する方法。
【請求項１８】
標準的な酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）タンパク質発現アッセイ法で測定した場合に、インスリン、その生物学的に活性な変異体、またはｎＮＯＳレベルを増加させるのに十分な量に、インスリンの効果もしくはレベルを増強しうる、他の化合物の治療的有効量を、哺乳類に投与する段階を含む、疾患に罹患しているかまたは疾患にかかりやすい哺乳類における、胃腸疾患を治療する方法。
【請求項１９】
ＰＤＥ阻害剤が、標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５アッセイ法の少なくとも一つによって決定される、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）特異的ＰＤＥの活性を減少させる、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
阻害剤が５型ＰＤＥ（ＰＤＥ５）の活性を減少させる、請求項１７または１９記載の方法。
【請求項２１】
ＰＤＥ阻害剤が、標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５アッセイ法において、約０．５ ｍＭまたはそれ未満のＩＣ５０を有する、請求項１７、１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
投与されるＰＤＥ阻害剤の量が、標準的な環状グアノシン３’一リン酸（ｃＧＭＰ）アッセイ法で測定した場合に、神経のｃＧＭＰを増加させるのにさらに十分である、請求項１７または１９から２１のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
インスリンの効果またはレベルを増強させる化合物が、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンである、請求項１８記載の方法。
【請求項２４】
インスリンの効果またはレベルを増強させる化合物が、ＰＤＥ阻害剤化合物と共に投与される、請求項１８または２３に記載の方法。
【請求項２５】
投与される化合物の少なくとも一つが、その薬学的に許容される塩および溶媒和化合物と同様に、上記の式ＩからＸＩＩＩのいずれかによって表される、請求項１から２４のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
投与される化合物が、ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、もしくはピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン、またはそれらの薬学的に許容される塩の少なくとも一つである、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
投与される化合物が、上記の式ＩからＶの一つまたは複数によって上記される、以下の化合物の少なくとも一つである、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
投与される化合物が以下の一つまたは複数である、請求項２５記載の方法：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、
１−エチル−５−［５−（ｎ−ヘキシルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
１−エチル−５−（５−ジエチルスルファモイル−２−ｎ−プロポキシ−フェニル）−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
５−［５−（Ｎ−シクロヘキシルメチル−Ｎ−メチルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−エチル−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
６−（５−ブロモ−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−（５−モルフォリノスルホニル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−カルボキシビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルエチル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
２−｛５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
８−メチル−２−｛５−［２−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）−エテニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−キナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
８−カルバモイル−２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル｝−キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−エチルカルバモイル−２−（２−ｎ−プロポキシフェニル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
２−［２−エトキシ−５−（４−エトキシカルボニルピペリジノ−スルホニル）フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−［５−（４−カルボキシピペリジノスルホニル）−２−エトキシフェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［（ビス−３−ピリジルスルホニル）アミノ］−フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項２９】
バイアグラを哺乳類に投与する、請求項１から２８のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
投与される化合物が、標準的なｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法で測定した場合に、胃腸神経またはカハールの間質細胞におけるｎＮＯＳを少なくとも約１０％増加させる、請求項１から２９のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
投与される化合物が、標準的なｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法で測定した場合に、胃腸神経またはカハールの間質細胞におけるｎＮＯＳを約１５％から約５０％増加させる、請求項１から３０のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
化合物がｃＧＭＰアッセイ法で測定した場合に、ｃＧＭＰを少なくとも約１０％増加させる、請求項１から３１のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
投与される化合物が、標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５活性アッセイ法の少なくとも一つで測定した場合に、ＰＤＥ５活性を少なくとも約１０％減少させる、請求項１から３２のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
投与される化合物が、標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５活性アッセイ法の少なくとも一つで測定した場合に、ＰＤＥ５活性を約２０％から約５０％減少させる、請求項１から３３のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
上記の式ＩからＸＩＩＩによって上記される化合物の、一つもしくは複数またはそれらの薬学的に許容される塩の、治療的な量を哺乳類に投与する段階を含む、哺乳類における糖尿病性胃疾患を予防または治療する方法。
【請求項３６】
投与される化合物が、上記の式ＩからＶによって示される化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の少なくとも一つである、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
投与される化合物が、ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、もしくはピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン、またはその薬学的に許容される塩の少なくとも一つである、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
投与される化合物が、以下の化合物の少なくとも一つである、請求項３５記載の方法：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、
１−エチル−５−［５−（ｎ−ヘキシルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
１−エチル−５−（５−ジエチルスルファモイル−２−ｎ−プロポキシ−フェニル）−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
５−［５−（Ｎ−シクロヘキシルメチル−Ｎ−メチルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−エチル−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
６−（５−ブロモ−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−（５−モルフォリノスルホニル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−カルボキシビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルエチル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−８−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−メチル−２−｛５−［２−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）−エテニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−カルバモイル−２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル｝−キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−エチルカルバモイル−２−（２−ｎ−プロポキシフェニル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
２−［２−エトキシ−５−（４−エトキシカルボニルピペリジノ−スルホニル）フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−［５−（４−カルボキシピペリジノスルホニル）−２−エトキシフェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［（ビス−３−ピリジルスルホニル）アミノ］−フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３９】
投与される化合物がバイアグラである、請求項３５記載の方法。
【請求項４０】
インスリン、インスリンの生物学的に活性な変異体、またはインスリンの効果もしくはレベルを増強することができる化合物を、哺乳類に投与する、請求項３５から３９のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
インスリンの効果またはレベルを増強する化合物が、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンである、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
インスリン、インスリンの生物学的に活性な変異体、または哺乳類においてインスリンの効果もしくはレベルを増強することができる化合物の、一つまたは複数の治療的な量を哺乳類に投与する段階を含む、哺乳類における糖尿病性胃疾患を予防または治療する方法。
【請求項４３】
哺乳類が糖尿病性胃疾患に罹患していると同定され、かつ糖尿病性胃疾患の治療のために選択される、請求項３５から４２のいずれか一項記載の方法。
【請求項４４】
上記の式ＩからＸＩＩＩによって上記される化合物の一つもしくは複数、またはそれらの薬学的に許容される塩の有効量を、哺乳類に投与する段階を含む、糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、胃腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎に罹患しているか、またはかかりやすい哺乳類を治療する方法。
【請求項４５】
投与される化合物が、上記の式ＩからＶによって表される化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の少なくとも一つである、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
投与される化合物が、ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、もしくはピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン、またはそれらの薬学的に許容される塩の少なくとも一つである、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
投与される化合物が、以下の化合物の少なくとも一つである、請求項４４記載の方法：
５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、
１−エチル−５−［５−（ｎ−ヘキシルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
１−エチル−５−（５−ジエチルスルファモイル−２−ｎ−プロポキシ−フェニル）−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
５−［５−（Ｎ−シクロヘキシルメチル−Ｎ−メチルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−エチル−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
６−（５−ブロモ−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−（５−モルフォリノスルホニル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−カルボキシビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６−［５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルエチル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
２−｛５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−８−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−メチル−２−｛５−［２−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）−エテニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−カルバモイル−２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル｝−キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
８−エチルカルバモイル−２−（２−ｎ−プロポキシフェニル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、
２−［２−エトキシ−５−（４−エトキシカルボニルピペリジノ−スルホニル）フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−［５−（４−カルボキシピペリジノスルホニル）−２−エトキシフェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
２−｛２−エトキシ−５−［（ビス−３−ピリジルスルホニル）アミノ］−フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項４８】
投与される化合物がバイアグラである、請求項４４記載の方法。
【請求項４９】
インスリン、インスリンの生物学的に活性な変異体、またはインスリンの効果もしくはレベルを増強する化合物を哺乳類に投与する、請求項４４から４８のいずれか一項記載の方法。
【請求項５０】
インスリンの効果またはレベルを増強する化合物が、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンである、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
哺乳類が、糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、胃腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎に罹患していると同定され、かつ哺乳類が糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、胃腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎の治療のために選択される、請求項４４から５０のいずれか一項記載の方法。
【請求項５２】
哺乳類が霊長類、齧歯類、ウサギ、または家畜動物である、請求項１から５１のいずれか一項記載の方法。
【請求項５３】
哺乳類がヒト患者である、請求項５２記載のいずれか一つの方法。
【請求項５４】
哺乳類が少なくとも一つのプロカイネティック（ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃ）物質による治療に供されている、または供される予定である、請求項１から５３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５５】
方法が、少なくとも一つのプロカイネティック物質の治療的有効量を哺乳類に投与する段階をさらに含む、請求項１から５４のいずれか一項記載の方法。
【請求項５６】
プロカイネティック物質がメトクロプラミド、ドンペリドン、エリスロマイシン、またはシサプリドである、請求項５４または５５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その出願の開示が参照として本明細書に組み入れられる、２０００年４月１９日に提出された、米国特許仮出願番号第６０／１９８，５４５号の恩典を主張する。
【０００２】
米国政府の支援に関する声明
本発明の資金は、米国公衆衛生局から助成金番号第ＤＡ−００２６６号、研究科学者アウォード第ＤＡ−０００７４号、およびフェローシップ第ＭＨ−１９５４７号によって、米国政府の支援を一部受けた。したがって、米国政府は本発明に一定の権利を保有する。
【０００３】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は一般的に、胃腸（ＧＩ）疾患を予防または治療する方法に関する。一つの局面において、本発明は、特にＧＩ神経における酸化窒素（ＮＯ）シグナル伝達経路を調節することによって、疾患を治療する方法を提供する。本発明の方法は、一般的に、ＮＯ活性または神経の酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルの一つまたは複数を増加させることによって経路を調節する、少なくとも一つの化合物を投与する段階を含む。本発明は、少なくとも一つのインスリン、またはシルデナフィル（バイアグラ（商標））のような、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤の治療的な量を投与することによって、多様な胃疾患を治療する段階を含む、広範囲の有用な応用を有する。
【０００４】
２．背景
低運動性は、広範囲の胃腸（ＧＩ）疾患の一つの特徴である。例えば、胃内容排出の遅延を伴う胃の低運動性が記述されている。腸に影響を及ぼす内容物鬱滞も同様に知られている。一般的に、マッカラム（ＭｃＣａｌｌｕｍ， Ｒ．Ｗ．）（１９８９）、「胃腸疾患（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）」、第４版（Ｓｌｅｉｓｅｎｇｅｒ， Ｍ．Ｈ．およびＦｏｒｄｔｒａｎ， Ｊ．Ｓ．編）、Ｗ．Ｂ．ソンダース社、フィラデルフィア；ならびにそこに引用されている参考文献を参照のこと。
【０００５】
ほとんどのＧＩ疾患の症状には一般的に、悪心、嘔吐、胸焼け、食後の不快感、および消化不良が含まれる。場合によっては、ＧＩ管内の酸逆流が潰瘍形成を引き起こして、内出血および感染症に至ることもありうる。ＧＩ疾患の多くに関連する疼痛は、医療費がかさみ、生命を脅かす可能性の高い、喘息または心筋梗塞の誤診につながることもありうる。ブラントン（Ｂｒｕｎｔｏｎ， Ｌ．Ｌ．）、「治療の薬理学的基礎（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、第８版（Ｇｉｌｍａｎ， Ａ．Ｇ．ら編）、マグローヒル社、ニューヨークを参照のこと。
【０００６】
特定の疾患は、ＧＩ管における低運動性または鬱滞に関連している。例えば、糖尿病性ニューロパシー、神経性食欲不振、および無塩酸症は、しばしば胃の低運動性を伴う。例えば、外科的介入後のＧＩ管の疾患は、実質的な胃内容鬱滞を引き起こしうる。
【０００７】
胃の低運動性に関する現在の治療は一般的に、プロカイネティック物質、一般的にドンペリドン、シサプリド、またはメトクロプラミドの投与を含む。しかし、そのような薬剤は胃の鬱滞に必ずしも影響を及ぼさず、副作用に関連することがあると報告されている。ブラントン（Ｂｒｕｎｔｏｎ， Ｌ．Ｌ．）ら、上記を参照のこと。
【０００８】
糖尿病は、世界中でＧＩ機能疾患、胃腸機能疾患を含む重大な合併症をもたらす、一般的な疾患である。ポース（Ｐｏｒｓｅ， Ｄ．）およびハルター（Ｈａｌｔｅｒ， Ｊ．Ｂ．）、（１９９９）、「糖尿病性ニューロパシー（Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）」、ディック（Ｄｙｃｋ， Ｐ．Ｊ．）およびトーマス（Ｔｈｏｍａｓ， Ｐ．Ｋ．）編、Ｗ．Ｂ．ソーンダース社、フィラデルフィア、ペンシルバニア州；およびポスター（Ｐｏｓｔｅｒ， Ｄ．Ｗ．）（１９９８）、「ハリソン内科学の原理（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」、（Ａ．Ｓ． Ｆａｕｃｉら編）、マグローヒル、ニューヨークを参照のこと。
【０００９】
動物モデルを用いることによって、ヒトの糖尿病を研究する試みがなされている。そのようなモデルには、ストレプトゾトシン誘発（ＳＴＺ−誘発）糖尿病およびＮＯＤ（非肥満糖尿病）マウスのような齧歯類変異体が含まれる。
【００１０】
糖尿病性胃疾患は、胃内容排出の協調に役に立つ臓器である幽門括約筋の、正常な弛緩の乱れを伴うと認識されている。
【００１１】
ＮＯＳ酵素は多くの関心を集めている。適当な条件では、酵素は酸化窒素（ＮＯ）を産生する。例えば、ＮＯＳおよびＮＯに関する一般的な開示に関しては、スナイダー（Ｓ．Ｈ． Ｓｎｙｄｅｒ）らの米国特許第５，４３９，９３８号；第６，１０３，８７２号；および第６，１６８，９２６号を参照のこと。同様に、ザカリー（Ｚａｋｈａｒｙ， Ｒ．）（１９９７）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９４：１４８４８も参照のこと。
【００１２】
ＮＯが神経伝達物質として機能することは、ほぼ普遍的に認識されている。ＮＯがＧＩ管、特に腸、胃および幽門における機能を提供することに関する証拠が現れつつある。例えば、ヒュアン（Ｈｕａｎｇ， Ｐ．Ｌ．）ら、（１９９３）Ｃｅｌｌ ７５：１２７３を参照のこと。
【００１３】
特に、幽門のｎＮＯＳの喪失は、胃の内容物排出の閉塞に関連している。ＮＯはまた、単離された幽門圧力波の減少、胃内の液体グルコースの分布の変化、胃内容排出の遅延、および胃緊張の減少に関係している。
【００１４】
ＮＯの効果とＧＩ機能のあいだにしっかりした関係を確立するには問題がある。
【００１５】
例えば、ＮＯはヒトにおいて胃内容排出を阻害する可能性があると考えられているが、いくつかの動物モデルにおいて、ｎＮＯＳはその過程を遅延させると考えられている。さらに、特にインビボでｎＮＯＳ発現がどのように調節されるかを確立することは難しい。これらおよび他の欠点のために、内因性ＮＯレベルを増加または減少させる段階を含む治療法を開発するための努力は妨害されてきた。
【００１６】
環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）は、重要な細胞伝達分子であると一般的に理解されている。ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）と呼ばれる酵素は、一般的にｃＧＭＰと水との加水分解反応を触媒することによって、主にｃＧＭＰの破壊に関与する。それぞれが明確な組織、細胞、および細胞下分布を有するＰＤＥファミリー１０個に関する報告がある。いくつかのＰＤＥファミリーは、基質としてｃＧＭＰの代わりに環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）を好むと考えられている。
【００１７】
多数のＰＤＥ阻害剤が開示されている。例えば、ＰＤＥのＩＩＩ型およびＩＶ型阻害剤が報告されている。例えば、米国特許第４，７５３，９４５号；第４，８３７，２３９号；第４，９７１，９７２号；第５，０９１，４３１号；第６，０５４，４７５号；第６，１２７，３６３号；および第６，１５６，７５３号、ならびにそこに引用されている参考文献を参照のこと。同様に、コマス（Ｋｏｍａｓ）ら「ホスホジエステラーゼ阻害剤（Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）」、（１９９６）（Ｓｃｈｕｄｔら編）、アカデミック出版、サンディエゴ、カリフォルニア州も参照のこと。
【００１８】
ｃＧＭＰ嗜好酵素の一つであるＶ型ＰＤＥの阻害剤に、特に注目が集まっている。例えば、シルデナフィル（バイアグラ（商標））のような特定の阻害剤は、男性の勃起機能疾患を治療すると報告されている。例えば、米国特許第６，１００，２７０号；第６，２０７，８２９号およびそこに引用されている参考文献を参照のこと。
【００１９】
インスリンの生物学的効果を扱う多くの研究がある。一般的に、カーン（Ｋａｈｎ， Ｃ．Ｒ．）らの「治療の薬理学的基礎（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、第８版（Ｇｉｌｍａｎ， Ａ．Ｇ．ら編）マグローヒルインク、ニューヨーク州を参照のこと。
【００２０】
同様に、米国特許第４，９１６，２１２号；第４，７０１，４４０号；１９８４年６月２７日に提出されたＨ２４５；第４，６５２，５４７号；および第４，６５２，５２５号（多様なインスリン分子を開示する）も参照のこと。
【００２１】
酸化窒素（ＮＯ）のシグナル伝達の調節を含む胃腸（ＧＩ）疾患を治療する方法があれば有用であると考えられる。神経の酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）が病的なレベルで存在する場合に、正常なＮＯシグナル伝達を増強、または好ましくは回復するＧＩ疾患を治療する方法があれば特に望ましいと考えられる。
【００２２】
発明の概要
本発明は一般的に、胃腸（ＧＩ）疾患を予防または治療する方法を含む。一つの局面において、本発明は、特にＧＩ神経において酸化窒素（ＮＯ）シグナル伝達経路を調節することによって、疾患を治療する方法を提供する。好ましい本発明の方法は、ＮＯ活性または神経の酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルの一つまたは複数を増加させることによって、経路を調節する少なくとも一つの化合物を投与する段階を含む。本発明は、インスリン、またはシルデナフィル（バイアグラ（商標））のようなホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤の治療的な量を投与することによって、多様な胃疾患を治療する段階を含む、広範囲の有用な適用を有する。
【００２３】
本発明者らは、ＧＩ神経におけるＮＯシグナル伝達経路を調節することによって、広範囲の疾患を予防または治療することが可能であることを発見した。特に、多くの哺乳類ＧＩ疾患において特定のＮＯシグナル伝達経路が疾患を受けていることが判明した。好ましい本発明の方法は一般的に、経路における特定の同定された分子、典型的にＮＯ分子、またはその分子の産生を促進する酵素、すなわちｎＮＯＳ酵素の活性を増強することによって、そのような疾患を予防または治療する。好ましい本発明の方法は、正常な神経のＮＯシグナル伝達を適切に増加させ、より好ましくは回復させ、それによって多くのＧＩ疾患に関連した症状を予防するか、症状の重症度を減少させるか、または症状を消失させるのに役立つ。
【００２４】
より詳しく述べると、本発明者らは、全てではないが多くのＧＩ疾患が異常な神経ＮＯシグナル伝達に関連することを発見した。例えば、そして下記に考察するように、そのような多くの疾患が重要なＮＯシグナル伝達分子の喪失を伴うと考えられている。下流のシグナル伝達経路はこの喪失を被ると考えられている。理論に拘束されることは望まないが、重要なシグナル伝達成分の喪失は、正常なＧＩ機能にとって重要な多様な細胞機能に負の影響を及ぼすと考えられている。すなわち、細胞機能は有意で正常なＮＯ調節から外される。その制御の喪失は、ＧＩ疾患の発症を促進し、またはＧＩ疾患を悪化させると考えられている。このように、その制御の増加または回復は本発明の重要な目的である。重要なことに、本発明が、ＮＯシグナル伝達経路を調節することによって、ＧＩ疾患を予防または治療する治療的方法を初めて提供する。考察するように、好ましい本発明の方法は、特にＧＩ神経における、より多くのｎＮＯＳ酵素またはＮＯ分子の活性の増加の、少なくとも一つを提供する。
【００２５】
したがって、一つの局面において、本発明は疾患に罹患しているか、または疾患にかかりやすい哺乳類における、少なくとも一つおよび好ましくは一つの胃腸疾患を予防または治療する方法を提供する。一つの態様において、方法は好ましくは以下の少なくとも一つを得る、少なくとも一つの化合物の治療的有効量を哺乳類に投与する段階を含む：
ａ）標準的な胃内容排出アッセイ法（本明細書において定義されたアッセイ法）で測定される、例えば胃腸神経もしくはカハールの間質細胞における酸化窒素（ＮＯ）活性の増加、または
ｂ）標準的なｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法（本明細書において定義されたアッセイ法）で測定される、例えば胃腸神経または間質細胞における酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルを増加させる。
【００２６】
前述の一般的な本発明の方法は、適切にはＮＯシグナル伝達経路を調節する。より詳しく述べると、本方法は、異常なレベルのＮＯまたはｎＮＯＳ酵素が存在する場合に、この重要な経路を治療的に増幅する方法を初めて提供する。このように、本方法は、ＮＯ活性の増加、またはｎＮＯＳ酵素レベルの増加の少なくとも一つを、「危険に曝されている」または疾患に罹患しているＧＩ神経に有益に提供する。この重要な本発明の特徴は、正常なＧＩ神経に典型的なＮＯシグナル伝達を望ましくは増加させ、好ましくは回復させる。さらに、本発明の方法は、例えば過敏性腸症候群またはその他の疾患の治療において重要な治療的利益を有しうる、ＮＯ、ｎＮＯＳ、ｃＧＭＰの上生理的（正常以上の）レベルを提供する可能性がある。いかなる理論にも拘束されないが、そのような作用によって、ＧＩ疾患は本発明の方法を実践することによって予防または治療されうる。
【００２７】
本発明のいくつかの態様において、引用した化合物は適切にＮＯ活性とｎＮＯＳレベルの双方を増加させる。しかし、ほとんどの態様において、好ましい化合物は、それらの特徴の一つのみを選択的に増加させると考えられる。
【００２８】
他の態様において、本発明は、第一の化合物が好ましくはＮＯ活性を増加させ、第二の化合物が好ましくはｎＮＯＳ酵素レベルを増加させる、上記の化合物の少なくとも二つを投与する段階を提供する。本発明のこの説明は、それがＮＯシグナル伝達を治療的に増加させる、すなわち第一の化合物によってＮＯ活性を増強し、第二の化合物によってｎＮＯＳレベルを増加させることによる、「二股の」アプローチのよい例であるため、重要である。この治療戦略は、被験者が、特に処置しがたいか、または慢性ＧＩ疾患に罹患しているか、またはかかりやすい状況に指定してもよい。第一および第二の化合物の投与は、必要に応じて、例えば意図する治療成果を得るために、実質的に同じ時期（第一と第二の化合物の共投与）または異なる時期に行うことができる。
【００２９】
本発明に従う好ましい方法は、哺乳類、好ましくは霊長類、ウサギ、または齧歯類、より好ましくはヒト被験者を用い、哺乳類は本発明に従う治療的治療のために同定および選択されている。すなわち、哺乳類は、上記のようにＮＯ活性またはｎＮＯＳレベルの少なくとも一つの増加によって利益が得られるように、同定および選択されている。この場合、同定および選択された哺乳類に、少なくとも一つの化合物を投与する。二つまたはそれ以上の化合物の投与を意図する態様では、そのような投与は、特定のＧＩ疾患を予防または治療するために必要に応じて、同時または一つもしくは複数の異なる時期となりうる。
【００３０】
本発明の方法の他の例において、投与される化合物の量は一般的に、標準的なｃＧＭＰアッセイ法によって測定した場合に、適切に神経のグアノシン３’−一リン酸（ｃＧＭＰ）レベルを増加させるのに十分である。上記のように、ｃＧＭＰは、細胞へのシグナル伝達を補助すると考えられているＮＯに関連して、「下流の」重要な分子である。ｃＧＭＰレベルを増強することによって、本発明は、特に最適より下のＮＯ分子またはｎＮＯＳ酵素レベルの条件で、そのような伝達を促進する。下記の考察および実施例において標準的なｃＧＭＰアッセイ法を提供する。
【００３１】
本発明の治療は、広範囲のＧＩ疾患の予防または治療にとって特に有効である。好ましいＧＩ疾患は、好ましくは、ＧＩ管に関連した神経におけるＮＯシグナル伝達経路を調節することによって、本発明に従って予防または治療することができる疾患である。さらに好ましい疾患には、小腸、大腸、結腸、食道、または胃の少なくとも一つにおける、低運動性または運動過剰を特徴とする疾患である。そのような好ましいＧＩ疾患はさらに、以下の適応の少なくとも一つを特徴とする：悪心、嘔吐、胸焼け、食後の不快感、下痢、便秘、消化不良、または関連症状。
【００３２】
本発明に従うさらに好ましいＧＩ疾患は、糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、または関連疾患の少なくとも一つに関連している。特定のＧＩ疾患の例は、典型的に糖尿病に関連した胃疾患である。
【００３３】
本発明によって適当に予防または治療されるさらに好ましいＧＩ疾患には、より特定の偽性腸閉塞、好ましくは結腸偽閉塞（オギルビー症候群）、特発性胃不全麻痺、および特発性便秘（巨大結腸）の少なくとも一つが含まれる。
【００３４】
本発明によって適切に予防または治療される、なおさらに好ましいＧＩ疾患は、ＧＩ管への意図的な、または偶発的な損傷によって生じた疾患、例えば衝撃または外科的介入に由来する疾患である。本発明に従うその他の好ましいＧＩ疾患には、肥厚性幽門狭窄、機能的腸疾患、および胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）が含まれる。好ましくは、機能的腸疾患は、過敏性腸症候群または機能的消化不良の少なくとも一つである。
【００３５】
本発明にはまた、一つまたは複数のＰＤＥ阻害剤および／もしくはインスリンまたはその生物学的に活性な変異体の有効量を、そのような疾患に罹患しているかまたはかかりやすい患者に投与する段階を含む、クローン病および潰瘍性大腸炎を治療または予防（すなわち予防的治療）する方法が含まれる。
【００３６】
本発明の実践は、細胞シグナル伝達経路の調節能を有する広範囲の化合物と適合する。そのような化合物の例には、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。本発明に従う特定のＰＤＥ阻害剤は、米国特許第６，１００，２７０号；第６，００６，７３５号；第６，１４３，７５７号；第６，１４３，７４６号；第６，１４０，３２９号；第６，１１７，８８１号；第６，０４３，２５２号；第６，００１，８４７号；第５，９８１，５２７号；および第６，２０７，８２９ Ｂ１号において既に報告されており、その特許の開示は参照として本明細書に組み入れられる。
【００３７】
同様にＰＣＴ／ＥＰ第９５／０４０６５号；国際公開公報−Ａ−第９３／０６１０４号；国際公開公報−Ａ−第９３／０７１４９号；国際公開公報−Ａ−第９３／１２０９５号；国際公開公報−Ａ−第９４／００４５３号；欧州特許第０ ４６３７５６ Ｂ１号；および国際公開公報−Ａ−第９４／０５６６１号も参照のこと。
【００３８】
同様に、米国特許第４，７５３，９４５号；第５，０１０，０８６号；第６，１２１，２７９号；第６，１５６，７５３号；第６，０５４，４７５号；第５，０９１，４３１号；第６，１２７，３６３号；および第６，０４０，３０９号も同様に参照のこと。
【００３９】
同様に、コマス（Ｋｏｍａｓ）ら、上記（本発明において用いるのに適したさらなるＰＤＥ阻害剤を開示する）を参照のこと。
【００４０】
本発明によって用いるために好ましいＰＤＥ阻害剤には、特定の二環式複素環ＰＤＥ阻害剤、より好ましくはピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
特に好ましいピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンは、５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンとしても知られる、シルデナフィル（バイアグラ（商標））、ならびにそれらの薬学的に許容される塩である。
【００４２】
本発明に従うさらに好ましい化合物には、インスリン、または対立遺伝子変異体を含むその生物学的に活性な変異体が含まれる。好ましいインスリンは、霊長類、ウサギ、または齧歯類インスリン、より好ましくは組換え型として提供されるヒトインスリンである。許容される多様なインスリン分子が開示されている。本発明に従って用いられる、特にＰＤＥ阻害剤と共に共投与療法において用いられるさらに好ましい化合物は、投与時に被験者のインスリン効果またはレベルを増強することができる（例えば、インスリンの放出を増強する、インスリンに対する細胞の感受性を増強する、またはインスリンの効果を増強することによって）、一つまたは複数の化合物である。
【００４３】
本発明の一つの局面を以下に記載する。
【００４４】
発明の詳細な説明
上記のように、本発明は、異常なＮＯシグナル伝達によって調節される、多様な胃腸（ＧＩ）疾患の予防および治療のための、治療方法を特徴とする。そのような方法には一般的に、標準的な胃内容排出アッセイ法で測定した場合に、胃腸神経またはカハールの間質細胞における少なくとも一つの酸化窒素（ＮＯ）活性を増加させるか、または標準的なｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法において測定した場合に、胃腸神経または間質細胞における酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルを増加させる化合物の治療的有効量を、そのような治療を必要とする哺乳類、好ましくはヒト患者に投与する段階が含まれる。
【００４５】
理論に拘束されないが、本発明の方法は、ＮＯを誘導するか、促進するか、またはそうでなければ結果的に神経において形成させて、次に隣接する筋肉に拡散して、そこでこれが環状ＧＭＰの形成を刺激し、そのレベルは、ＰＤＥ阻害剤化合物および／またはインスリン、インスリン変異体またはその他のインスリン促進化合物の投与によって増加する。
【００４６】
好ましい本発明の化合物には、Ｉ〜Ｖ型ホスホジエステラーゼに影響を及ぼすような、ＰＤＥ阻害剤が含まれる。本発明の方法において用いられる特に好ましいＰＤＥ阻害剤を下記に開示する。
【００４７】
その他の好ましい化合物には、対立遺伝子変異体を含むその生物学的に活性な変異体を含む、霊長類、齧歯類、またはウサギインスリンが含まれ、より好ましくは組換え型で利用できるヒトインスリンである。特に好ましいヒトインスリンの供給源には、イーライリリー（インディアナポリス、インディアナ州４６２８５）からヒュームリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ）（商標）（ヒトインスリンｒＤＮＡ起源）として入手できる製剤のような、薬学的に許容されるおよび滅菌製剤が含まれる。「医師用卓上参考書（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」、第５５版（２００１年）、メディカルエコノミクス、トンプソンヘルスケア（他の適したヒトインスリンを開示する）を参照のこと。なおさらに好ましい化合物には、投与時に被験者のインスリンの効果またはレベルを増強することができる物質、例えばグリピジドおよび／またはロシグリタゾンが含まれる。
【００４８】
同様に考察されるように、ＧＩ神経に関連するＮＯシグナル伝達経路を調節することによって、広範囲のＧＩ疾患を予防または治療することが可能であることが発見された。すなわち、「危険に曝されている」または疾患に罹患しているＧＩ神経において、ＮＯシグナル伝達の増強を提供することによって、本発明はそのような疾患および関連する適応症の発症または重症度を変化させることができる。より詳細に述べると、特に神経が利用できるＮＯがより少ない場合、神経のＮＯ（ｎＮＯＳ）を提供する酵素のレベルを増加させる、および／または神経のＮＯ機能を増強することによって、有用なＮＯシグナル伝達を増加または回復させることができることが判明した。これおよび本発明の他の特徴は、一つまたは多様なＧＩ疾患を予防または治療することができる、非常に有効な治療効果を提供する。
【００４９】
本発明の治療には一般的に、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤のような、本発明に従う少なくとも一つの化合物の治療的有効量を、そのような治療を必要とする被験者に投与する段階が含まれる。例としての被験者には、哺乳類、特に霊長類、齧歯類およびウサギが含まれる。好ましい霊長類は、本発明によって提供される治療を必要とするヒト被験者である。
【００５０】
本発明に従うより典型的な被験者には、先に開示したＧＩ疾患、ＧＩ神経において機能的なＮＯシグナル伝達経路を好ましく調節することによるＧＩ疾患、特に小腸、大腸、結腸、食道、または胃の少なくとも一つにおける、低運動性または運動過剰を典型とする疾患に、罹患しているかまたはかかりやすい、ヒト患者のような哺乳類が含まれる。さらに好ましい哺乳類被験者には、悪心、嘔吐、胸焼け、食後の不快感、下痢、便秘、消化不良または関連症状の少なくとも一つを特徴とする、ＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすい被験者が含まれる。
【００５１】
さらなる哺乳類被験者には、糖尿病、神経性食欲不振、過食症、無塩酸症、噴門痙攣、肛門裂傷、過敏性腸症候群、偽性腸閉塞、強皮症、または関連疾患の少なくとも一つに関連した、ＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすい、ヒト被験者が含まれる。関係する特定の被験者には、糖尿病、特に糖尿病性胃疾患に関連したＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすい被験者が含まれる。
【００５２】
さらに好ましい被験者には、偽性腸閉塞、好ましくは偽性結腸閉塞（オギルビー症候群）、特発性胃不全麻痺、および特発性便秘（巨大結腸）の少なくとも一つを含む、ＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすいヒト被験者が含まれる。上記のように、本発明にはまた、クローン病および潰瘍性大腸炎の治療および予防が含まれる。
【００５３】
本発明に従うなおさらに好ましい被験者は、衝撃または外科的介入に由来するＧＩ管の損傷に関連する、ＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすいヒト被験者である。ＧＩ疾患に罹患しているかまたはかかりやすいその他の好ましい被験者には、肥厚性幽門狭窄、機能的腸疾患、および胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）が含まれる。ＧＥＲＤの合併症となりうるバレット化生またはバレット食道を有するまたはかかりやすい被験者もまた、治療してもよい。好ましくは、機能的腸疾患は、過敏性腸症候群または機能的消化不良の少なくとも一つである。
【００５４】
被験者は、被験者がその疾患を発症する素因、例えば遺伝的素因または既往もしくは限定されないが腹部の手術のような、予定された治療的介入によって影響を受ける素因を有する場合に、本発明に従って治療すべきＧＩ疾患または他の疾患もしくは疾患に対して「かかりやすい」。
【００５５】
考察するように、本発明は、ＰＤＥに影響を及ぼす化合物を含む広範囲の化合物の投与に十分に適合する。例えば、本明細書において定義される標準的なインビボおよびインビトロアッセイ法を用いることによって、単純な試験で適した化合物を容易に同定することができる。特に、適した化合物は、アッセイ法が以下の段階ａ）〜ｅ）の少なくとも一つおよび好ましくは全てを含む、実施例において下記で考察したインビボの胃内容排出アッセイ法を用いることによって同定することができる：ａ）生存するマウス、例えばｎＮＯＳ−／−遺伝子型を有するマウスの胃に、検出可能に標識した溶液を経口投与する；ｂ）投与溶液によって約０〜約４時間のあいだマウスをインキュベートする；ｃ）マウスから胃を切除する；ｄ）胃をホモジナイズする；およびｅ）胃のホモジネートに残っている検出可能な標識溶液の量を測定する。本明細書において「標準的なインビボ胃内容排出アッセイ法」または「標準的な胃内容排出アッセイ法」またはその他の類似の用語は、段階ａ）〜ｅ）を含むプロトコールを示す。
【００５６】
インビボの胃内容排出アッセイ法について用いられる好ましい溶液は、デキストロースのような溶解した糖とフェノールレッドとを組み合わせたものであるが、その他の検出可能に標識した溶液も同様に用いてもよい。好ましくは、候補となる治療化合物を方法の段階ａ）の前またはあいだに、通常、段階ａ）を行う約１分〜１時間前に加える。適した対照は、調べる化合物を含まない生理食塩液または溶解した糖溶液である。
【００５７】
前述の標準的なインビボ胃内容排出アッセイ法は、胃腸神経またはカハールの間質細胞における、酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルを増加させる化合物を含む、他の化合物を調べるように容易に適合される。例えば、方法は、ｎＮＯＳ−／−遺伝子型を有するマウスの代わりに、ＮＯＤ−糖尿病マウスを用いることができる。下記に考察するように、ＮＯＤマウスは糖尿病を発症する遺伝的素因を有すると理解されている。または、本方法は、例えばストレプトゾトシン（ＳＴＺ）のような毒性の糖の投与によって、糖尿病を発症するように予め操作されているマウスでの使用に適している。インビボの胃内容排出アッセイ法に関するこれらの特定の例において、被験マウスを準備して、実施例の章において考察する方針に沿って定量した。用いる特定のマウスの種類の選択は、それに対するスクリーニングが望ましい化合物の種類のような、理解されたパラメータによって誘導されると考えられる。同様に、前述の標準的なインビボの胃内容排出アッセイ法に関連した、より詳しい開示に関しては、下記の実施例を参照のこと。
【００５８】
本発明の治療方法に関して用いられる好ましい化合物は、そのような標準的なインビボ胃内容排出アッセイ法において、試験化合物の非存在下で得られる胃内容排出と比較して、胃内容排出の少なくとも約１０％の増加、より好ましくは対照と比較して胃内容排出の少なくとも約１５％または２０％の増加、およびさらにより好ましくは、標準的なインビボ胃内容排出アッセイ法において試験化合物の非存在下と比較して、胃内容排出の少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％の増加を誘導する。
【００５９】
より詳しい阻害化合物は、標準的なインビボ胃内容放出アッセイ法において、半減期（ｔ１／２、検出可能な標識溶液の約５０％を排出するために必要な時間）約１分〜約１時間、好ましくは約１０分〜約４５分、より好ましくは約１５分〜約３０分を示す。
【００６０】
さらに好ましい本発明の化合物は、標準的なインビトロのｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法において測定した場合に、ＧＩ神経およびカハールの間質細胞においてｎＮＯＳレベルを増加させる。適した化合物は、以下の実施例に開示するように発現アッセイ法を用いることによって同定することができ、これには、以下の段階ａ）〜ｅ）が含まれる：ａ）哺乳類被験者、例えばＮＯＤ−糖尿病マウスからＧＩ組織を摘出する、ｂ）組織をホモジナイズして、ホモジネートをＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動によって分離する、ｃ）分画したホモジネートをＰＶＤＦのような、許容される膜に転写する、ｄ）適した抗−ｎＮＯＳ抗体に膜を接触させる、およびｅ）好ましくは従来のウェスタンブロット技法を用いることによって、抗ｎＮＯＳ−抗体と分画したホモジネートとのあいだに形成された複合体を検出する。そのようなブロットからのシグナルは、標準的な密度測定分析技術を用いて検出および定量することができる。本明細書において「標準的なインビトロｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法」または「標準的なｎＮＯＳ発現アッセイ法」またはその他の類似の用語は、直前の段階ａ）〜ｅ）を含むプロトコールを示す。
【００６１】
そのような標準的なインビトロｎＮＯＳタンパク質アッセイ法において、候補となる治療化合物は方法の段階ａ）の前またはあいだ、通常、段階ａ）を行う約１分〜約２週間のあいだ、より好ましくはその段階を行う約８時間〜約１週間前のあいだに加える。適した対照は、化合物を含まない生理食塩液または溶解した糖溶液である。望ましければ、被験哺乳類を段階ａ）の前に、通常その段階を行う約１分から約１〜２日前のあいだに７−ニトロインダゾールのような従来のＮＯＳ阻害剤によって処置することができる。
【００６２】
本発明の治療方法による使用に好ましい化合物は、そのような標準的なインビトロｎＮＯＳ発現アッセイ法において、試験化合物の非存在下で産生されたｎＮＯＳタンパク質と比較してｎＮＯＳタンパク質発現の少なくとも約１０％の増加、より好ましくは対照と比較してｎＮＯＳタンパク質発現の少なくとも約１５％または２５％の増加、およびさらにより好ましくはそのような標準的なインビトロｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法において試験化合物の非存在下と比較してｎＮＯＳタンパク質発現の少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または約１００％の増加を誘導する。
【００６３】
本発明に従うなおさらに好ましい化合物は、当技術分野で既知の標準的なインビトロｃＧＭＰアッセイ法のいずれか一つによって測定した場合に、神経における神経の環状グアノシン３’−一リン酸（ｃＧＭＰ）を増加させるのに十分である。そのようなアッセイ法は、その開示が参照として本明細書に組み入れられる、「実験薬理学ハンドブック（Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂ． Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）」（１９８３）５８：題名「環状ヌクレオチド（Ｃｙｃｌｉｃ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）」、Ｐｔ．Ｉ：生化学、ナザンソン（Ｊ．Ａ． Ｎａｔｈａｎｓｏｎ）およびコバビアン（Ｊ．Ｗ． Ｋｏｂａｂｉａｎ）編（スプリンガー出版、ニューヨーク）において報告されている。
【００６４】
本発明に従って用いられる好ましいｃＧＭＰアッセイ法は、細胞および組織におけるｃＧＭＰレベルをモニターする放射免疫アッセイ法である。そのような放射免疫アッセイ法は、アマシャム・ファルマシア・バイオテック社（Ａｍｅｒｃｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）からのように市販されている。アマシャム社のアッセイ法は、シンチレーション近接アッセイ法を利用し、これはアマシャム製品の文献にさらに記載される。本明細書において言及されるように、「ｃＧＭＰアッセイ法」またはその他の類似の用語は、そのようなアマシャムファルマシア社の市販の放射免疫アッセイキットによって実施されるアッセイ法を意味する。
【００６５】
本発明の治療的方法によって用いることが好ましい化合物は、そのような標準的なインビトロｃＧＭＰアッセイ法において、試験化合物の非存在下で産生されたｃＧＭＰと比較して、ｃＧＭＰの少なくとも約５％の増加、より好ましくは対照と比較してｃＧＭＰの少なくとも約１０％または２０％の増加、そしてさらにより好ましくはそのようなアッセイ法において試験化合物の非存在下と比較して、ｃＧＭＰの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％の増加を誘導する。
【００６６】
本発明に従うさらに好ましい化合物は、米国特許第６，１００，２７０号；国際公開公報−Ａ−第９３／０６１０４号；国際公開公報−Ａ−第９３／０７１４９号；国際公開公報−Ａ−第９３／１２０９５号；国際公開公報−Ａ−第９４／００４５３号；および国際公開公報−Ａ−第９４／０５６６１号に記載されるように、ｃＧＭＰ ＰＤＥまたはＰＤＥ５阻害作用を決定するためのインビトロ試験方法の任意の一つにおいて、約０．０１ ｍＭ〜約１０ ｍＭ、好ましくは約０．１ ｍＭ〜約１ ｍＭ、より好ましくは約０．５ ｍＭまたはそれ未満のＩＤ５０を示すと考えられる。
【００６７】
より詳しい本発明の態様には、疾患に罹患しているかまたは疾患にかかりやすい哺乳類における、胃腸疾患を予防または治療する段階が含まれる。一つの例において、方法は、以下の少なくとも一つの治療的有効量を哺乳類に投与する段階を含む：
ａ）胃内容排出アッセイ法において測定した場合に、胃腸神経における酸化窒素（ＮＯ）を増強するのに十分な量の、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、または
ｂ）標準的なｎＮＯＳタンパク質発現アッセイ法において測定した場合に、胃腸神経または間質細胞における酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）レベルを増加させるのに十分な量で、インスリンまたはその生物学的に活性な変異体、および／または投与した場合に、被験者のインスリンの効果またはレベルを増強することができる物質（例えば、インスリン放出を増強する、インスリンに対する細胞の感受性を増加する、またはインスリンの効果を増強する）。
【００６８】
好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、本明細書に記載の標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５アッセイ法の少なくとも一つによって測定した場合に、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）特異的ＰＤＥの活性を減少させる。いくつかの態様において、５型ＰＤＥ（ＰＤＥ５）の活性を特異的に減少させることが有用であると考えられる。しかし、他の態様では、ＰＤＥ５の阻害の有無によらず、Ｉ〜ＩＶ型酵素の阻害は、特定のＧＩ適応を予防または治療するためにより望ましいかも知れない。
【００６９】
同様に好ましくは、ＰＤＥ阻害剤のＩＣ５０は、標準的なＰＤＥまたはＰＤＥ５アッセイ法において約０．５ ｍＭまたはそれ未満である。そのような好ましいＰＤＥ阻害剤も同様に、望ましくは、標準的なｃＧＭＰアッセイ法によって測定した場合に、神経において神経の環状グアニン３’−一リン酸（ｃＧＭＰ）を増加させると考えられる。
【００７０】
インスリン物質、すなわちインスリン、その生物学的に活性な変異体、または投与するとインスリンレベルの効果またはレベルを増強することができる物質は、多様な治療物質となる可能性がある。インスリンの好ましい生物学的に活性な変異体を下記に考察する。インスリンの効果またはレベルを増強する適した物質には、グリピジドのようなスルホニル尿素、およびロシグリタゾンのようなチアゾリジンジオンが含まれる。チアゾリジンジオンの他にＰＰＡＲ−γ受容体アゴニストも同様に適していると考えられる。インスリンの効果およびインスリンのレベルを増強しうる適した物質は、例えば米国特許第５，４８９，６０２号；第５，８１１，４３９号；第５，９６５，５８９号；および第５，７２，９７３号に開示される。インスリンの効果およびインスリンのレベルを増強するさらなる物質を同定する方法は、米国特許第５，４６６，６１０号および第６，１００，０４７号に開示される。
【００７１】
同様に、特にｎＮｏｓ発現を増加させるために、本発明に従って患者に投与することができるインスリンの様々な生物活性型、特に経口型は特に好ましい。
【００７２】
好ましい治療方法には特に、少なくとも一つ、例えば約１〜約、好ましくは約２〜約５個、より好ましくは本明細書に開示の化合物約１個を投与することを含む。
【００７３】
上記のＰＤＥ阻害剤化合物の他に、本発明の方法において用いるために適したＰＤＥ阻害剤化合物を下記に開示し、これらには、本発明によって用いることが一般的に好ましい、以下の式Ｉ〜ＸＩＩＩの化合物が含まれる。本発明は、いかなる特定のＰＤＥ阻害剤化合物にも限定されず、かつ本発明は、現在既知の、またはその後に発見もしくは開発される、任意のそのようなＰＤＥ阻害剤化合物にも適用可能であると理解されるべきである。
【００７４】
より詳しく述べると、本発明の一つの態様において、投与される化合物の少なくとも一つは、米国特許第６，１００，２７０号に記載のような、二環式複素環ＰＤＥ阻害剤、好ましくはその薬学的に許容される塩を含む、以下の式Ｉ〜Ｖに記載される以下のピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、またはピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オンの少なくとも一つである。
【００７５】
適したＰＤＥ阻害剤化合物には、以下の式Ｉの化合物ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる：
【化１】
2004525857.tif 000002
式Ｉにおいて、Ｒ１はメチルまたはエチルであり；Ｒ２はエチルまたはｎ−プロピルである；ならびにＲ３およびＲ４はそれぞれ独立してＨ、またはＣ５〜Ｃ７シクロアルキルもしくはモルフォリノによって選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【００７６】
適したＰＤＥ阻害剤化合物にはまた、以下の式ＩＩの化合物ならびにその薬学的な塩が含まれる：
【化２】
2004525857.tif 000003
式ＩＩにおいて、Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキルである；Ｒ２はＨ、メチル、またはエチルである；
Ｒ３はＣ２〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ４はＨ；ＮＲ５Ｒ６、ＣＮ、ＣＯＮ５Ｒ６、もしくはＣＯ２Ｒ７によって選択的に置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル；ＣＮ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、もしくはＣＯ２Ｒ７によって選択的に置換されたＣ２〜Ｃ４アルケニル；ＮＲ５Ｒ６によって選択的に置換されたＣ２〜Ｃ４アルカノイル；ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６；ＣＯＮＲ５Ｒ６；ＣＯ２Ｒ７、またはハロである。
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、ＨもしくはＣ１〜Ｃ４アルキルである；またはそれらが結合する窒素原子と共に、ピロリジノ、ピペリジノ、モルフォリノ、４−（ＮＲ８）−１−ピペラジニル、もしくは１−イミダゾリル基を形成し、これらの基は選択的に一つもしくは二つのＣ１〜Ｃ４アルキル基によって置換される；
Ｒ７はＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである；
ならびにＲ８はＨ；Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または（ヒドロキシ）Ｃ２〜Ｃ３アルキルである。
【００７７】
さらに適したＰＤＥ阻害剤化合物には、以下の式（ＩＩＩ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる：
【化３】
2004525857.tif 000004
式ＩＩＩにおいて、Ｒ１はＨ；Ｃ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシまたはＣＯＮＲ５Ｒ６である；
Ｒ２はＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ３はＣ２〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ４はＨ；ＮＲ７Ｒ８によって選択的に置換されたＣ２〜Ｃ４アルカノイル；ＮＲ７Ｒ８によって選択的に置換された（ヒドロキシ）Ｃ２〜Ｃ４アルキル；ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｒ９；ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ７Ｒ８；ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｒ９；ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＲ７Ｒ８；ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８；ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲ７Ｒ８、またはイミダゾリルである；
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立してＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立してＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである；またはそれらが結合する窒素原子と共に、ピロリジノ、ピペリジノ、モルフォリノ、または４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基を形成し、これらの任意の基がＣＯＮＲ５Ｒ６によって選択的に置換される；
Ｒ９はＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ１０はＨ；Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または（ヒドロキシ）Ｃ２〜Ｃ３アルキルである；
ならびにｎは２、３、または４である。
但し、Ｒ１がＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４アルコキシである場合、Ｒ４はＨではない。
【００７８】
適したＰＤＥ阻害剤化合物には、以下の式ＩＶの化合物ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる：
【化４】
2004525857.tif 000005
式中、Ｒ１はＣ１〜Ｃ４アルキル；Ｒ２はＣ２〜Ｃ４アルキルである；
Ｒ３はＨまたはＳＯ２ＮＲ４Ｒ５である；
Ｒ４およびＲ５はそれらが結合する窒素原子と共に、ピロリジノ、ピペリジノ、モルフォリノ、または４−（ＮＲ６）−１−ピペラジニル基を形成する；
ならびにＲ６はＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【００７９】
さらに適したＰＤＥ阻害剤化合物には、以下の式（Ｖ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる：
【化５】
2004525857.tif 000006
式Ｖにおいて、Ｒ１はＨ；Ｃ１〜Ｃ４アルキル；ＣＮまたはＣＯＮＲ４Ｒ５である；Ｒ２はＣ２〜Ｃ４アルキル；Ｒ３はＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＯ２；ＮＨ２；ＮＨＣＯＲ８；ＮＨＳＯ２Ｒ８またはＮ（ＳＯ２Ｒ８）２である；
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立してＨおよびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される；または
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立して、Ｈおよび選択的にＣＯ２Ｒ９、ＯＨ、ピリジル、５−イソキサゾリン−３−オニル、モルフォリノ、もしくは１−イミダゾリジン−２−オニルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである；またはそれらが結合する窒素原子と共に、ピロリジノ、ピペリジノ、モルフォリノ、１−ピラゾリルもしくは４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基を形成し、これらの任意の基がＣ１〜Ｃ４アルキル、ＣＯ２Ｒ９、ＮＨ２およびＯＨから選択される一つもしくは二つの置換基によって選択的に置換されてもよい；
Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルまたはピリジルである；
Ｒ９はＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである；
ならびにＲ１０はＨ；Ｃ１〜Ｃ４アルキル、または（ヒドロキシ）Ｃ２〜Ｃ３アルキルである。
【００８０】
上記の式Ｉの化合物の好ましい基には、以下である化合物ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる：
Ｒ３がＨ；メチルまたはエチルである；
Ｒ４が、シクロヘキシルまたはモルフォリノによって選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである；ならびに
Ｒ１およびＲ２が式（Ｉ）に関して先に定義した通りである。
【００８１】
上記の式ＩＩの好ましい化合物には、Ｒ１がｎ−プロピルである；Ｒ２がＨまたはメチルである；Ｒ３がエチルまたはｎ−プロピルである；Ｒ４がＨ；ＣＯＮＲ５Ｒ６またはＣＯ２Ｒ７によって置換されたエチル；ＣＯＮＲ５Ｒ６またはＣＯ２Ｒ７によって置換されたビニル；ＮＲ５Ｒ６によって置換されたアセチル；ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６；ＣＯＮＲ５Ｒ６；ＣＯ２Ｒ７またはブロモである；Ｒ５およびＲ６が、それらが結合する窒素原子と共にモルフォリノ、４−（ＮＲ８）−１−ピペラジニル、または２，４−ジメチル−１−イミダゾリル基を形成する；Ｒ７がＨまたはｔ−ブチルである；ならびにＲ８がメチルまたは２−ヒドロキシエチルである化合物、ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる。
【００８２】
上記の式ＩＩＩの好ましい化合物には、Ｒ１がＨ；メチル；メトキシまたはＣＯＮＲ５Ｒ６である；Ｒ２がＨまたはメチルである；Ｒ３がエチルまたはｎ−プロピルである；Ｒ４がＨ；ＮＲ７Ｒ８によって選択的に置換されたアセチル；ＮＲ７Ｒ８によって置換されたヒドロキシエチル；ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｒ９；ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ７Ｒ８；ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｒ９；ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８；ＳＯ２ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＲ７Ｒ８または１−イミダゾリルである；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ独立してＨまたはエチルである；Ｒ７およびＲ８が、それらが結合する窒素原子と共に、ピペリジノ、４−カルバモイルピペリジノ、モルフォリノ、または４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基を形成する；Ｒ９がＨまたはｔ−ブチルである；およびＲ１０がＨ；メチルまたは２−ヒドロキシエチルである；ただし、Ｒ１がＨ、メチル、またはメトキシである場合Ｒ４はＨではない化合物、ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる。
【００８３】
上記の式ＩＶの好ましい化合物には、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立してエチルまたはｎ−プロピルである；Ｒ４およびＲ５が、それらが結合する窒素原子と共に４−（ＮＲ６）−１−ピペラジニル基を形成する；ならびにＲ３およびＲ６が式ＩＶに関して先に定義したとおりである化合物、ならびにその薬学的に許容される塩が含まれる。
【００８４】
上記の式Ｖの好ましい化合物には、Ｒ１がＨ；ｎ−プロピル；ＣＮまたはＣＯＮＨ２である；Ｒ２がエチルである；Ｒ３がＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＯ２；ＮＨ２；ＮＨＣＯＣＨ（ＣＨ３）２；ＮＨＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２；ＮＨＳＯ２（３−ピリジル）またはＮ［ＳＯ２（３−ピリジル）］２である；Ｒ６がＨ；メチルまたは２−ヒドロキシエチルである；Ｒ７が２−ピリジルもしくは５−イソキサゾリン−３−オニルによって選択的に置換されたメチルである；またはＯＨ、ＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３、モルフォリノもしくは１−イミダゾリジン−２オニルによって置換されたエチルである；またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素原子と共に４−（ＣＯ２Ｒ９）ピペリジノ、５−アミノ−３−ヒドロキシ−１−ピラゾイルもしくは４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基である；Ｒ９がＨまたはエチルである；ならびにＲ１０がＨ；メチルまたは２−ヒドロキシエチルである化合物が含まれる。
【００８５】
特に好ましい化合物の群は、Ｒ１がメチル；ＣＯＮＨ２またはＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３である；Ｒ２がＨである；Ｒ３がエチルまたはｎ−プロピルである；Ｒ４がＨ；アセチル；１−ヒドロキシ−２−（ＮＲ７Ｒ８）エチル；ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３；ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ７Ｒ８；ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８または１−イミダゾリルである；Ｒ７およびＲ８が、それらが結合する窒素原子と共に４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基を形成する；ならびにＲ１０がメチルまたは２−ヒドロキシエチルである；但し、Ｒ１がメチルである場合、Ｒ４はＨではない、上記の式ＩＩＩの化合物；Ｒ１がｎ−プロピルである；Ｒ２がエチルである；およびＲ３が１−ピペラジニルスルホニルまたは４−メチル−１−ピペラジニルスルホニルである式（ＩＶ）の化合物；ならびにＲ１がｎ−プロピルまたはＣＮである；Ｒ２がエチルである；Ｒ３がＳＯ２ＮＲ６Ｒ７；ＮＨＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２；ＮＨＳＯ２（３−ピリジル）またはＮ［ＳＯ２（３−ピリジル）２］である；Ｒ６がＨまたはメチルである；Ｒ７がメチル；またはＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３；モルフォリノもしくは１−イミダゾリジン−２−オニルによって２−置換されたエチルである；またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素原子と共に（４−ＣＯ２Ｒ９）ピペリジノもしくは４−（ＮＲ１０）−１−ピペラジニル基を形成する；Ｒ９はＨまたはエチルである；ならびにＲ１０はＨ；メチルまたは２−ヒドロキシエチルである、式（Ｖ）の化合物である。
【００８６】
本発明の特に好ましい個々の化合物には、以下が含まれる：
１−エチル−５−［５−（ｎ−ヘキシルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
１−エチル−５−（５−ジエチルスルファモイル−２−ｎ−プロポキシ−フェニル）−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；
５−［５−（Ｎ−シクロヘキシルメチル−Ｎ−メチルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−エチル−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン
６−（５−ブロモ−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−メチル−６−（５−モルフォリノスルホニル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
６−［５−（２−カルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
６−［５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルエチル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン；
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン；
２−｛５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−８−メチルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン；
８−メチル−２−｛５−［２−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）−エテニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン；
８−カルバモイル−２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル｝キナゾリン−４（３Ｈ）−オン；
８−エチルカルバモイル−２−（２−ｎ−プロポキシフェニル）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン；
２−［２−エトキシ−５−（４−エトキシカルボニルピペリジノ−スルホニル）フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；
２−［５−（４−カルボキシピペリジノスルホニル）−２−エトキシフェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；
２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリジン−４（３Ｈ）−オン；
および２−｛２−エトキシ−５−［（ビス−３−ピリジルスルホニル）アミノ］−フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリジン−４（３Ｈ）−オン。
【００８７】
本発明のもう一つの態様において、投与した化合物の少なくとも一つは、米国特許第６，１４３，７４６号に記載される、およびその薬学的に許容される塩を含む以下の式ＶＩ〜ＩＸに記載のような、四環式ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ阻害剤である。
【００８８】
より詳しく述べると、適した化合物には、以下の式ＶＩの化合物、ならびにその薬学的な塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）が含まれる：
【化６】
2004525857.tif 000007
式ＶＩにおいて、Ｒ０は水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルを表す；
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキルＣ１−３アルキル、アリールＣ１−３アルキル、またはヘテロアリールＣ１−３アルキルを表す；
Ｒ２は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択される選択的に置換された単環式芳香環であるか、またはベンゼン環の炭素原子の一つによって分子の残りに結合し、融合環Ａが５員環もしくは６員環であって、飽和または部分もしくは完全に不飽和であってもよく、炭素原子と、選択的に酸素、硫黄、および窒素から選択される一つもしくは二つのヘテロ原子とを含む、選択的に置換された以下の二環式環を表す：
【化７】
2004525857.tif 000008
Ｒ３は水素、Ｃ１−３アルキル、またはＲ１とＲ３とが共に炭素原子３個または４個のアルキルまたはアルケニル鎖を表す。
【００８９】
適した化合物にはまた、以下の式ＶＩＩの化合物ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば水和物）が含まれる：
【化８】
2004525857.tif 000009
式ＶＩＩにおいて、Ｒ０は水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルを表す；
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキルＣ１−３アルキル、アリールＣ１−３アルキル、またはヘテロアリールＣ１−３アルキルを表す；および
Ｒ２は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択される選択的に置換された単環式芳香環であるか、またはベンゼン環の炭素原子の一つによって分子の残りに結合し、融合環Ａが飽和または部分もしくは完全不飽和であってもよい５員環または６員環であって、炭素原子と、選択的に酸素、硫黄、および窒素から選択される一つまたは二つのヘテロ原子とを含む、選択的に置換された以下の二環式環を表す：
【化９】
2004525857.tif 000010
【００９０】
本発明の方法において用いるために好ましい式ＶＩの化合物のさらなる亜群は、以下の式ＶＩＩＩの化合物ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば水和物）である：
【化１０】
2004525857.tif 000011
式ＶＩＩＩにおいて：
Ｒ０は水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルを表す；
Ｒ１は水素またはＣ１−６アルキルを表す；
Ｒ２は、
【化１１】
2004525857.tif 000012
または
【化１２】
2004525857.tif 000013
を表し、ハロゲンおよびＣ１−３アルキルから選択される一つまたは複数の置換基によって選択的に置換されうる二環式環を表す；ならびに
Ｒ３は、水素またはＣ１−３アルキルを表す。
【００９１】
上記の式ＶＩＩにおいて、Ｒ１に関して、アリールＣ１−３アルキル基の一部としての「アリール」という用語は、フェニル、またはハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびメチレンジオキシから選択される一つもしくは複数（例えば、１、２もしくは３）の置換基によって置換されたフェニルを意味する。ヘテロアリールＣ１−３アルキル基の一部としての「ヘテロアリール」という用語は、それぞれが選択的にハロゲン、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから選択される一つもしくは複数（例えば、１、２、もしくは３）の置換基によって選択的に置換されたチエニル、フリル、またはピリジルを意味する。Ｃ３−８シクロアルキルＣ１−３アルキル基の全体または一部としての「Ｃ３−８シクロアルキル」という用語は、炭素原子３〜８個を含む単環式環を意味する。適したシクロアルキル環の例には、Ｃ３−６シクロアルキル環、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【００９２】
上記の式ＶＩＩにおいて、Ｒ２に関して、選択的なベンゼン環置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＣＯ２Ｒｂ、ハロＣ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルコキシ、シアノ、ニトロ、およびＮＲａＲｂを含む一つまたは複数（例えば、１、２、または３）の原子または基から選択され、式中ＲａおよびＲｂはそれぞれ水素もしくはＣ１−６アルキルであるか、またはＲａはＣ２−７アルカノイルもしくはＣ１−６アルキルスルホニルも表しうる。残りの環系の選択的な置換基は、先に定義したようにＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびアリールＣ１−３アルキルを含む、一つまたは複数（例えば、１、２または３）の原子または基から選択される。二環式環：
【化１３】
2004525857.tif 000014
は、例えば、ナフタレン、ベンズオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイソキサゾール、ベンズイミダゾール、キノリン、インドール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、またはｎが１もしくは２の整数であって、ＸおよびＹがそれぞれＣＨ２Ｏ、Ｓ、またはＮＨを表しうる
【化１４】
2004525857.tif 000015
のような、複素環を表しうる。
【００９３】
特に明記していなければ、上記の式と共に本明細書において記載した他の式において、置換基または置換基の一部としての「アルキル」という用語は、直鎖または利用可能であれば、表示の数の炭素原子を含む分岐鎖部分を意味する。例えば、これは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、およびｔ−ブチルによって表されるように、Ｃ１−４アルキル基を表しうる。本明細書において用いられるように「アルケニル」という用語には、ビニルおよびアリル基のような表示の数の炭素原子を含む、直鎖および分岐鎖アルケニル基が含まれる。本明細書において用いられる「アルキニル」という用語には、表示の数の炭素原子を含む、直鎖および分岐鎖アルキニル基、適切にはアセチレンが含まれる。
【００９４】
特に明記していなければ、上記の式と共に本明細書において記載した他の式において、本明細書における「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。
【００９５】
特に明記していなければ、上記の式と共に本明細書において記載した他の式において、「ハロＣ１−６アルキル」という用語は、一つまたは複数（例えば、１、２または３）のハロゲン原子によって、一つまたは複数の炭素原子が置換された、炭素原子１個〜６個を含む上記のアルキル基を意味する。同様に、ハロＣ１−６アルコキシは、酸素原子によってＲ２ベンゼン環に結合した上記のハロＣ１−６アルキル基である。ハロＣ１−６アルキル基の例には、トリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチルが含まれる。ハロＣ１−６アルコキシ基の例には、トリフルオロメトキシが含まれる。「Ｃ２−７アルカノイル」という用語は、Ｃ１−６アルキル部分が先に定義したとおりであるＣ１−６アルカノイル基を意味する。適したＣ２−７アルカノイル基の例は、Ｃ２アルカノイル基アセチルである。
【００９６】
特に明記していなければ、上記の式と共に本明細書において記載した他の式において、Ｒ０はハロゲン原子またはＣ１−６アルキル基であり、この置換基は、四環式環のフェノール部分上の任意の利用可能な位置に存在しうる。しかし、特定の結合部位は環の１０位である。
【００９７】
式ＶＩの化合物は、二つまたはそれ以上の不斉中心を含むことができ、このように、エナンチオマーまたはジアステレオマーが存在しうる。特に、上記の式ＶＩＩにおいて、二つの環のカイラル中心を星印で示す。本発明には、式（ＶＩＩ）の化合物の混合物および異なる個々の異性体の双方が含まれると理解すべきである。
【００９８】
式ＶＩの化合物はまた、互変異性型で存在し得て、本発明には、互変異性型の混合物および異なる個々の互変異性型の双方が含まれる。
【００９９】
本発明において用いられる特定の群の化合物は、Ｒ０が水素またはハロゲン（例えばフッ素）、特に水素である式ＶＩの化合物である。
【０１００】
本発明の方法において用いられるもう一つの特定の群の化合物は、Ｒ１が水素、Ｃ１−４アルキル、ハロＣ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、ピリジルＣ１−３アルキル、フリルＣ１−３アルキル、または選択的に置換されたベンジルを表す、式ＶＩの化合物である。この特定の群の化合物において、Ｃ１−４アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルおよびｎ−ブチルである。Ｃ３−６シクロアルキルメチル基の例は、シクロプロピルメチルおよびシクロヘキシルメチルである。選択的に置換されたベンジル基の例には、ベンジルおよびハロベンジル（例えば、フルオロベンジル）が含まれる。
【０１０１】
本発明の方法において用いられるさらなる群の化合物は、式ＶＩの化合物であり、式中Ｒ２は選択的に置換されたベンゼン、チオフェン、フラン、ピリジン、もしくはナフタレン環、またはｎが１もしくは２であり、ＸおよびＹがそれぞれＣＨ２もしくはＯである選択的に置換された二環式環：
【化１５】
2004525857.tif 000016
を表す。この特定の化合物の群において、置換されたベンゼン基の例は、ハロゲン（例えば、塩素）、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、またはｉ−プロピル）、Ｃ１−３アルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）、ＣＯ２Ｒｂ、ハロメチル（例えば、フルオロメチル）、ハロメトキシ（例えば、トリフルオロメトキシ）、シアノ、ニトロ、またはＮＲａＲｂの一つによって置換されたベンゼンであって、式中ＲａおよびＲｂがそれぞれ水素もしくはメチルであるか、またはＲａがアセチル、もしくはジハロ（例えば、ジクロロ）もしくはＣ１−３アルコキシ（例えば、メトキシ）、およびハロゲン（例えば、塩素）およびヒドロキシの一つによって置換されたベンゼンである。置換チオフェン環の例は、ハロ（例えば、ブロモ）置換チオフェン環である。
【０１０２】
式ＶＩの化合物のなおさらなる特定の群は、Ｒ３が水素であるか、またはＲ１とＲ３とが共に炭素原子３個のアルキル鎖を表す化合物である。
【０１０３】
本発明の化合物の好ましい基は、以下の式（ＩＸ）によって示される式ＶＩのシス異性体およびラセミ混合物を含むそのシス光学エナンチオマー、ならびにこれらの化合物の塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）であり：
【化１６】
2004525857.tif 000017
式中Ｒ０は水素またはハロゲン（例えば、フッ素）、特に水素であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は先に定義したとおりである。
【０１０４】
式ＩＸによって表される単一の異性体、すなわち６Ｒ、１２ａＲ異性体が特に好ましい。
【０１０５】
式ＩＸに関する先の定義において、Ｒ１は好ましくはＣ１−４アルキル（例えば、メチル、エチル、ｉ−プロピルおよびｎ−ブチル）、Ｃ３−６シクロアルキル（例えば、シクロペンチル）、またはＣ３−６シクロアルキルメチル（例えば、シクロプロピルメチル）を表しうる。
【０１０６】
Ｒ２は好ましくは、Ｃ１−３アルコキシ（例えば、メトキシ）またはＣ１−３アルコキシ（例えば、メトキシ）およびハロゲン（例えば、塩素）によって置換されたベンゼンのような置換ベンゼン環、特に４−メトキシフェニルまたは３−クロロ−４−メトキシフェニルを表しうる、またはＲ２は好ましくは３，４−メチレンジオキシフェニルを表しうる。
【０１０７】
上記の式の特に好ましい化合物の亜群は、Ｒ０が水素である化合物である。
【０１０８】
特に好ましい亜群には、Ｒ１が水素、メチル、およびイソプロピルから選択される化合物が含まれる。
【０１０９】
好ましくは、Ｒ２は以下の非置換二環式環を表しうる：
【化１７】
2004525857.tif 000018
【０１１０】
式ＩＸの化合物のなおさらなる群は、Ｒ３が水素またはメチルである化合物である。
【０１１１】
本発明は上記の特定のおよび好ましい群の適当な組み合わせを全て包含すると理解すべきである。
【０１１２】
本発明の方法において用いるために適した特定の化合物には、以下およびその薬学的に許容される溶媒和化合物（例えば、水和物）が含まれる：
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−（４−ピリジル−メチル）−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］フラン−５−イル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ブロモ−２−チエニル）−２−メチルピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−ブチル−６−（４−メチルフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−イソプロピル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−シクロペンチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−シクロプロピルメチル−６−（４−メトキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（５ａＲ，１２Ｒ，１４ａＳ）−１，２，３，５，６，１１，１２，１４ａ−オクタヒドロ−１２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピロロ［１”，２”：４，５］−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−５−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−３−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２，３−ジメチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ベンゾフラニル）−２−イソプロピル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン。
【０１１３】
本発明はまた、その化合物の少なくともいくつかが、上記の米国特許第６，１４３，７４６号に記載されている、米国特許第６，１４０，３２９号に開示される、特定のｃＧＭＰ ＰＤＥ阻害剤の投与と矛盾しない。米国特許第６，１４０，３２９号の好ましい化合物は、その薬学的に許容される塩を含む、以下の式Ｘに記載される：
【化１８】
2004525857.tif 000019
式Ｘにおいて、
Ｒ０は水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルである；
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、ハロＣ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキルＣ１−３アルキル、アリールＣ１−３アルキル、またはヘテロアリールＣ１−３アルキルを表す；
Ｒ２はベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンから選択される選択的に置換された単環式芳香環、またはベンゼン環の炭素原子の一つによって分子の残りに結合し、融合環Ａが飽和または部分もしくは完全不飽和であってもよい５員環または６員環であって、炭素原子と、選択的に酸素、硫黄、および窒素から選択される一つまたは二つのヘテロ原子とを含む、選択的に置換された二環式環
【化１９】
2004525857.tif 000020
を表す：ならびに
Ｒ３は水素、Ｃ１−３アルキル、またはＲ１とＲ３とが共に炭素原子３個または４個のアルキルまたはアルケニル鎖を表す。
【０１１４】
治療において用いるためにさらに適した本発明の個々の化合物には、以下、ならびにその生理学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）が含まれる：
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−（４−ピリジルメチル）−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］フラン−５−イル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（５−ブロモ−２−チエニル）−２−メチルピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−ブチル−６−（４−メチルフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−イソプロピル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−シクロペンチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−シクロプロピルメチル−６−（４−メトキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−メチル−ピラジノ［２’，１’；６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（５ａＲ，１２Ｒ，１４ａＳ）−１，２，３，５，６，１１，１２，１４ａ−オクタヒドロ−１２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピロロ［１”，２”：４’，５’］−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−５−１，４−ジオン；
シス−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−シクロプロピル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン；
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−３−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン。
【０１１５】
本発明の方法において用いるために特に適した化合物には、以下、ならびにその生理学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）が含まれる：
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（化合物Ａ）；および
（３Ｓ，６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２，３−ジメチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’；６，１］−ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（化合物Ｂ）。
【０１１６】
もう一つの本発明の態様において、投与する化合物の少なくとも一つは、米国特許第６，０４３，２５２号および第６，１１７，８８１号に記載のように、カルボリン誘導体、Ｎ−シナモイル誘導体、または（β）カルボリンである。そのような好ましい化合物は、その薬学的に許容される塩を含む以下の式ＸＩおよびＸＩＩＩに記載される。
【０１１７】
式ＸＩの化合物は、以下の式によって表され、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）である：
【化２０】
2004525857.tif 000021
式ＸＩにおいて：
Ｒ０は、水素またはハロゲンを表す；
Ｒ１は、水素、ＮＯ２、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ、酸素、窒素、および硫黄から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含み、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａもしくはＣ１−４アルキルによって選択的に置換された５員環もしくは６員環、−ＯＲａによって選択的に置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｃ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｏ−Ｃ１−４アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｃ１−４アルキレン−Ｏ−Ｃ１−４アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＳＯ２Ｒｃ、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、Ｃ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、Ｃ２−６アルケニレンＮＲａＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｃ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＯＲｂＣ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＨｅｔ、ＯＲａＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＯＣ１−４アルキレン−ＣＨ（ＯＲａ）ＣＨ２ＮＲａＲｂ、Ｏ−Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、Ｏ−Ｃ２−４アルキレン−ＯＲａ、Ｏ−Ｃ２−４アルキレン−ＮＲａ−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、ＮＲａＲｂ、ＮＲａＣ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、Ｎ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）２、ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、およびＯＳＯ２トリフルオロメチルからなる群より選択される；Ｒ２は水素、ハロゲン、ＯＲａ、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、およびＮＲａＲｂからなる群より選択される、
または、Ｒ１とＲ２は共に、選択的に少なくとも一つのヘテロ原子を含む、５員環または６員環の炭素原子３個または４個のアルキレンまたはアルケニレン鎖成分を形成する；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ＮＯ２、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ（＝Ｏ）ＯＲａからなる群より選択される；Ｒ４は水素である、
またはＲ３およびＲ４は共に、選択的に少なくとも一つのヘテロ原子を含む、５員環または６員環の炭素原子３個もしくは４個のアルキレンもしくはアルケニレン鎖成分を形成する；
Ｈｅｔは酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含み、選択的にＣ１−４アルキルによって置換される５員環または６員環の複素環基を表す；
ＲａおよびＲｂは、同じまたは異なっていてもよく、水素およびＣ１−６アルキルから独立して選択される；
Ｒｃは、フェニルまたはＣ４−６シクロアルキルを表し、式中フェニルまたはＣ４−６シクロアルキルは、一つもしくは複数のハロゲン原子、一つもしくは複数の−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、または一つもしくは複数の−ＯＲａによって選択的に置換されうる；
ｎは１、２および３から選択される整数である；
ｍは１および２から選択される整数である。
【０１１８】
上記の式ＸＩにおいて、本明細書において用いられるアルキルまたはアルキレンという用語はそれぞれ、表示の数の炭素原子を含み、直鎖および分岐アルキルまたはアルキレン基、典型的にメチル、メチレン、エチル、およびエチレン基、ならびに直鎖および分岐鎖プロピル、プロピレン、ブチル、およびブチレン基が含まれる。式ＸＩに関して用いられるＣ２−６アルケニレンという用語は、炭素原子２個〜６個を含む基を意味し、直鎖および分岐鎖アルケニレン基、特にエテニレン等が含まれる。式ＸＩにおいて、Ｃ４−６シクロアルキルという用語は、炭素原子４個〜６個を含む環状基、すなわち、シクロブタン、シクロペンタン、およびシクロヘキサンを意味する。式ＸＩにおいて、本明細書において用いられるようにハロゲンという用語には、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。式ＸＩにおいて、本明細書において用いられる５員環または６員環複素環基には、５員環または６員環のヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリール基、例えば、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピロリジニル、モルフォリニル、ピリジル、イミダゾリル、フリル、およびテトラゾイル基が含まれる。式ＸＩにおいて、ふさわしくは、Ｒ０は水素を表す。または、Ｒ０はハロゲン、特にフッ素を表しうる。式ＸＩにおいて、Ｒ１は−ＯＲａ、−Ｏ−Ｃ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキレンＨｅｔおよび−Ｏ−Ｃ２−４アルキレン−ＯＲａを表す。特に、Ｒ１は−Ｏ−Ｃ２−４アルキレンＮＲａＲｂを表し、式中Ｃ２−４アルキレンはエチレンとなりえて、ＲａおよびＲｂは独立してメチルを表しうる。特に適したＲ２は水素である。またはＲ１とＲ２とが共に、先に記載したように少なくとも一つのヘテロ原子を選択的に含む、５員環または６員環の炭素原子３個または４個のアルキレンまたはアルケニレン鎖成分を形成する場合、Ｒ１とＲ２とは共にメチレンジオキシ鎖、エチレンオキシ鎖、エチレンジオキシ鎖、エテニレンオキシ鎖、プロピレン鎖、ブチレン鎖または−ＮＲａエチレン−Ｏ−を形成する。適切に、Ｒ１とＲ２とは共に、メチレンジオキシ、プロピレン、または−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｏ−を形成する。
【０１１９】
上記の式ＸＩにおいて、ふさわしくはＲ３とＲ４とは共に、先に記載したように少なくとも一つのヘテロ原子を選択的に含む、５員環または６員環の炭素原子３個または４個のアルキレンまたはアルケニレン鎖成分を形成する。適切に、Ｒ３とＲ４とは、メチレンジオキシ鎖、エチレンオキシ鎖、エチレンジオキシ鎖、エテニレンオキシ鎖、プロピレン鎖、ブチレン鎖または−ＮＲａエチレン−Ｏ−を形成する。適切に、Ｒ３およびＲ４は、メチレンジオキシ鎖、エチレンオキシ鎖、エチレンジオキシ鎖、エテニレンオキシ鎖、またはプロピレン鎖を形成する。特に、Ｒ３およびＲ４は共に、メチレンジオキシまたはエチレンオキシ、最も特にエチレンオキシを形成する。
【０１２０】
本発明の方法において用いられる化合物の特定の亜群には、以下の式（ＸＩＩ）の化合物、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えばその水和物）が含まれる：
【化２１】
2004525857.tif 000022
式中、Ｒ５は−ＯＨ、−ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、およびＯ−Ｃ１−４アルキレンＨｅｔからなる群より選択され、Ｈｅｔは先に記述したとおりである、ならびに
Ｒ６は、以下の式を表し、
【化２２】
2004525857.tif 000023
式中、Ｃは、飽和または部分的もしくは完全な不飽和であってもよく、炭素原子と、選択的に酸素、硫黄、および窒素から選択される一つまたは二つのヘテロ原子とを含みうる５員環または６員環を表す。
【０１２１】
その式ＸＩＩにおいて、典型的に、Ｒ５は−ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、特に−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２を表す。または、Ｒ５は、Ｈｅｔがピペリジル、ピロリジニル（選択的にＣ１−４アルキル、例えばメチルによって置換される）、またはモルフォリニルとなりうる−Ｏ−Ｃ１−４アルキレンＨｅｔを表しうる。
【０１２２】
特に、Ｒ６は：
【化２３】
2004525857.tif 000024
または
【化２４】
2004525857.tif 000025
特に
【化２５】
2004525857.tif 000026
を表す。
【０１２３】
本発明の方法において用いるための、さらに特定の化合物には、以下、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）が含まれる：
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−フルオロメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−メトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］アセトアミド；
（Ｅ）−１−［１−（４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−ホルミルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−（４−ニトロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］アセトアミド；
（Ｅ）−１−［１−（４−ニトロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−メチルフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−プロペニル］フェニル］アセトアミド；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（２−クロロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−ブロモフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−クロロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−エトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸フェニルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−ホルミルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］−３−フェニル尿素；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−アミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−［（４−ビス（メチルスルホニル）−アミノフェニル］−プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］フェニル］メタンスルホンアミド；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド］；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−シアノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−クロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−トリフルオロメトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−メチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］尿素；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−ヒドロキシメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−ベンジル−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２，４−ジクロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−フルオロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−インダン−５−イル−１−プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンゾイル］ベンゼンスルホンアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，４−ジクロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−メチル−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］アセトアミド；
（Ｅ）−２，２−ジメチル−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］プロピオンアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，５−ジメトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｎ）−｛４−［３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−フルオロ−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−オキソプロペニル］−フェニル｝−アセトアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−［４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル］イソブチルアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−フルオロ−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−（２−メトキシエチル）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−メトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−［４−（２−ジメチルアミノメトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−（２−モルフォリン−４−イルエチル）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−［４−（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）フェニル］プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−アミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−シクロヘキシル−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（テトラヒドロフラン−２−イルメチル）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−シアノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−（４−ピペリジン−４−カルボン酸エチルエステル）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−Ｎ−（４−ピペリジン−４−カルボン酸）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−（２−ピペラジン−１−イルエチル）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］酢酸エチルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−テトラゾロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−２−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−１−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル）ピペリジン−４−カルボン酸エチルエステル；
（Ｅ）−Ｎ−（１−エチルピロリジン−２−イル−メチル）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，５−ジｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−３−［３−オキソ−３−［１−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−２−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェノキシ）酢酸エチルエステル；
（Ｅ）−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル）酢酸；
（Ｅ）−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェノキシ）酢酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロ−４−クロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（５−ニトロ−２−クロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−３−クロロ−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンジルオキシ）酢酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（５−アミノ−２−クロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−３−クロロ−４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−２−クロロ−５−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジイソプロピルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−２−クロロ−５−［３−オキソ−３−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ヒドロキシ−４−ニトロ−フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３，５−ジメチル−４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−（２−ジメチルアミノエトキシ）−４−ニトロ−フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−（２−ジメチルアミノエトキシ）−４−アミノ−フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−クロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−メトキシ−フェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−クロロ−５−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２，６−ジクロロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−メチルアミノメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−メチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−メチル−（４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンゼンスルホンアミド；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ヒドロキシ−４−アセチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−クロロ−５−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロ−２−ピペリジン−１−イルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−イソプロピルフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｓ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（４−メチルフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−クロロ−５−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−Ｎ−（テトラヒドロフラン−２−イルメチル）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］ベンズアミド；
（Ｅ）−１−［１−（インダン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−アセチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，４］−オキサジン−６−イル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−ヒドロキシ−５−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−１−［１−（ベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−３−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル）トリフルオロメタンスルホン酸フェニルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（ベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−ジメチルアミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−ピペリジン−１−イルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（ベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−４−［３−（１−ベンゾフラン−５−イル−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−オキソ−フェニル］安息香酸；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−（１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）プロペニル］フェニル）トリフルオロメタンスルホン酸フェニルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（２−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−［１−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−［４−ピロリジン−１−イルフェニル］プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−［４−イミダゾル−１−イルフェニル］プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−［１−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−オキソ−プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−［１−（２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−オキソプロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｓ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−アミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｓ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｓ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（１−（Ｓ）−メチルピロリジン−２−イル−メトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノ−１−メチルエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−（１−フェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）−３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（１−（Ｓ）−メチルピロリジン−２−イル−メトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノ−１−メチルメトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−フルオロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸メチルエステル；
（Ｅ）−（Ｒ）−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−４−［３−オキソ−３−［１−（３，４−フルオロフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］プロペニル］安息香酸；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−アミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−アミノフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（３−ニトロフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−モルフォリン−４−イルエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−エチルメチルアミノ）エトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（３−ジメチルアミノ）プロペニル）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（３−ジメチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−ホルミルフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−プロピルアミノメチル）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−［４−（２−ジメチルアミノエチルアミノ）フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−アミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルプロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−メチルアミノメチル）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−イソプロピルアミノメチル）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−ジメチルアミノメチル）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−［４−（３−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル］プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−ピペリジン−１−イルエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−１−［１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−（４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル）プロペン−１−オン；
（Ｅ）−（Ｒ）−［２−（４−｛３−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル］−３−オキソプロペニル｝−フェノキシ）エチル］メチルカルバミン酸ｔ−ブチルエステル；
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−［４−（２−メチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン。
【０１２４】
本発明の特定の化合物は、
（Ｅ）−（Ｒ）−１−［１−（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）−１，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン−２−イル）］−３−（４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル）プロペン−１−オン、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物（例えば、水和物）である。
【０１２５】
発明のもう一つの態様において、投与される化合物の少なくとも一つは、米国特許第６，１４３，７５７号および第６，００１，８４７号に記載される、化学化合物である。そのような好ましい化合物は、その薬学的に許容される塩を含む以下の式ＸＩＩＩに記載される。
【化２６】
2004525857.tif 000027
式ＸＩＩＩにおいて、
Ｒ０は、水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキルを表す；
Ｒ１は、以下からなる群より選択される：
（ａ）水素、
（ｂ）フェニル、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒａおよび−ＮＲａＲｂから選択される一つまたは複数の置換基によって選択的に置換されたＣ１−６アルキル、
（ｃ）Ｃ３−６シクロアルキル、
（ｄ）フェニル、および
（ｅ）酸素、窒素、および硫黄から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含み、一つまたは複数のＣ１−６アルキルによって選択的に置換され、およびＣ１−６アルキルによってＲ１が結合している窒素に選択的に結合している５員環または６員環の複素環；
Ｒ２は、以下からなる群より選択される：
（ｆ）Ｃ３−６シクロアルキル、
（ｇ）−ＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、ハロゲン、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、シアノ、およびニトロから選択される一つまたは複数の置換基によって選択的に置換されたフェニル、
（ｈ）酸素、窒素、および硫黄から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含む５員環または６員環の複素環；ならびに
（ｉ）ベンゼン環炭素原子の一つによって分子の残りに結合した、以下の二環式環：
【化２７】
2004525857.tif 000028
式中、Ａは、（ｈ）において定義した５員環または６員環である；ならびに
ＲａおよびＲｂは独立して水素またはＣ１−６アルキルを表す。
【０１２６】
上記の式ＸＩＩＩにおいて、「Ｃ１−６アルキル」という用語は、炭素原子１個〜６個を含む任意の直鎖または分岐鎖も意味し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等が含まれる。「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素を意味する。
【０１２７】
式ＸＩＩＩに従う化合物の特定の群は、Ｒ０が水素、メチル、臭素、およびフッ素のいずれかを表す化合物であるが、式ＸＩＩＩに示したＲ０の定義には、他のＣ１−６アルキルおよびハロゲン基がその範囲に含まれる。
【０１２８】
上記の式ＸＩＩＩにおいて、Ｒ１は、好ましくはメチル、エチル（選択的に一つまたは複数の塩素原子によって置換される）、ブチル、シクロヘキシル、およびベンジルから選択される置換基を表しうる。他のＲ１置換基には、水素；シクロプロピルのようなシクロアルキル基；Ｃ１−６アルキル、典型的にジメチルアミノ置換基のような−ＮＲａＲｂ置換基によって置換されたエチルまたはプロピル；エチルのようなＣ１−６アルキル鎖等を通してＲ１が結合している窒素原子に選択的に結合したフェニル；およびＣ１−６アルキル、例えば、−ＣＨ２ＣＯ２Ｅｔ（ＥｔはＣＨ２ＣＨ３）等のような−ＣＯ２Ｒａによって置換されたメチルが含まれる。
【０１２９】
式ＸＩＩＩのＲ１の定義における適した複素環には、ピリジル、モルフォリニル、ピペラジニル、ピロリジニル、およびピペリジニルが含まれる。一般的に、そのような複素環は、Ｃ１−６アルキル鎖、よりふさわしくはＣ１−４アルキル鎖によってＲ１が結合している窒素原子に結合している。
【０１３０】
Ｒ２によって表される特定の置換基は以下である：
【化２８】
2004525857.tif 000029
【０１３１】
その他のＲ２置換基には、チエニル、ピリジル、フリル、およびフェニルが含まれ、式中、フェニルは、−ＯＲａ（例えば、メトキシ）、−ＮＲａＲｂ（例えば、ジメチルアミノ）、ハロゲン（特に塩素またはフッ素）、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、シアノ、およびニトロから選択される一つまたは複数の置換基によって置換されうる。またはＲ２はシクロヘキシル等のようなＣ３−６シクロアルキル基を表しうる。
【０１３２】
塩基性中心を含む式ＸＩＩＩの化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸によって形成された酸付加塩である。例には、塩化水素、臭化水素、硫酸または重硫酸、リン酸またはリン酸水素、酢酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸塩が含まれる。式ＸＩＩＩの化合物はまた、塩基との薬学的に許容される金属塩、特にアルカリ金属塩を提供しうる。例には、ナトリウムおよびカリウム塩が含まれる。
【０１３３】
上記の特定のおよび好ましい群の適当な組み合わせは、全て本発明に包含されると理解すべきである。
【０１３４】
本発明の方法において用いるために適している、上記の式のさらなる特定の化合物には、以下、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物が含まれる：
シス−２−ベンジル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ベンジル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−５−（４−メトキシフェニル）−２−メチル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−エチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−エチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−エチル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−エチル−５−（２−チエニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−ジメチルアミノフェニル）−２−エチル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−９−メチル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−９−ブロモ−２−ブチル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−９−フルオロ−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−９−フルオロ−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（３−クロロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（３−クロロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（４−クロロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−クロロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−フルオロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（４−シアノフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−シアノフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（４−ニトロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−ニトロフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（３−ピリジル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（３−チエニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（３−チエニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ブチル−５−（３−フリル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（３−フリル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−シクロヘキシル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−シクロヘキシル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−シクロヘキシル−９−フルオロ−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−シクロヘキシル−９−フルオロ−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ベンジル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ベンジル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
（５Ｒ，１１ａＲ）−２−ベンジル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ベンジル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−（２−クロロエチル）−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ベンジル−５−シクロヘキシル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ベンジル−５−シクロヘキシル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−シクロヘキシル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−シクロヘキシル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−エトキシカルボニルメチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−２−［２−（２−ピリジル）−エチル］−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−シクロプロピル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−フェネチル−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−フェニル−２−（２−ピリジルメチル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−フェニル−２−（４−ピリジルメチル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−２−（３−ピリジルメチル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−（２−ジメチルアミノエチル）−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−（３−ジメチルアミノプロピル）−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−（２−モルフォリン−４−イル−エチル）−５−フェニル−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−２−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プロピル］−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−２−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−２−［２−（１−メチル−ピロリジン−２−イル）−エチル］−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン。
【０１３５】
特に好ましい本発明の化合物は：
（５Ｒ，１１ａＲ）−２−ベンジル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−シクロヘキシル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
トランス−２−ブチル−５−（４−メトキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
シス−２−ベンジル−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−５，６，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［１’，５’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，３（２Ｈ）−ジオン；
ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和化合物である。
【０１３６】
考察するように、本発明は、対立遺伝子変異体を含むその生物学的に活性な変異体を含む多様なインスリン分子（例えば、ブタ、ウサギ、マウス、またはヒトインスリン）と適合性である。「生物学的変異体」という用語は、特にヒトインスリンに関連して用いられる場合、カーン（Ｋａｈｎ， Ｃ．Ｒ．）らの「治療の薬理学的基礎（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、第８版（Ｇｉｌｍａｎ， Ａ．Ｇ．ら編）、マグローヒルインク、ニューヨークの１４６４頁に記載される、ヒトインスリンの完全長で成熟した配列と比較した場合に、少なくとも一つのアミノ酸置換、欠失、または付加を有する分子を意味する。
【０１３７】
完全長で成熟したインスリン配列のより詳しい生物学的に活性な変異体は、好ましくは先に述べた完全長で成熟したインスリン配列の活性の少なくとも約８０％または８５％、好ましくは９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、およびより好ましくは少なくとも約１００％を示すと考えられる。インスリン活性を決定する方法は既知であり、標準的なインビトロインスリンアッセイ法として本明細書において時に言及されるものが含まれる。そのアッセイ法は、絶食したウサギにある量のインスリンを投与して、そのウサギにおける血中のグルコース濃度を決定する段階を意味する。標準的なインビトロインスリンアッセイ法は、そこにおける引用文献と共に、カーン（Ｋａｈｎ， Ｃ．Ｒ．）により詳しく記載されている。インスリン１単位は、標準的なインビトロインスリンアッセイ法における血液中のグルコース濃度を、数時間未満で約４５ ｍｇ／ｄｌ（２．５ ｍＭ）に減少させるために必要な量に等しい。
【０１３８】
完全長で成熟したインスリン配列の生物学的に活性な変異体は、適切に、配列同一性をＢＬＡＳＴプログラムによって決定すると、改変されていないインスリンと実質的な同一性、例えば改変されていない霊長類、ウサギ、または齧歯類インスリンと、好ましくはヒトインスリンのような改変されていない霊長類インスリンと少なくとも約７０％、８０％、または８５％、好ましくは９０％、より好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を有すると考えられる。
【０１３９】
本発明に従う特定のインスリン調製物は、約２０〜約４０インスリン単位／ｍｇを含む、組換え型ヒトインスリンである。典型的な製剤には、インスリン約１〜約５ｍｇ／ｍｌが含まれる。約５００ Ｕ／ｍｌまでの、より濃縮されたインスリン溶液も利用可能である。
【０１４０】
生物活性インスリン変異体を作製する方法は既知であり、一般的に、核酸レベルで変異を作製する段階、例えば、変異体をコードする実質的に相同な核酸分子を提供しうる置換、付加、または欠失（連続または非連続）を作製する段階を含む。特に、所定のヌクレオチド配列をインビトロまたはインビボで変異させて、ヌクレオチド変異体を作製する、例えば新しいもしくはさらなる制限エンドヌクレアーゼ部位を形成する、または既存の部位を破壊して、それによってさらなるインビトロ改変を促進することができる。インビトロ定方向変異誘発（ハッチンソン（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ）ら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５３：６５５１（１９７８））、ＴＡＢ登録ＴＭリンカー（ファルマシア社）の使用、ＰＣＲによる変異誘発等を含むがこれらに限定されない、当技術分野で既知の任意の変異誘発技術を用いることができる。
【０１４１】
特に明記していない限り、「薬学的に許容される」または「生理学的に許容される」塩および／または溶媒和化合物という用語は、塩基性中心を含む本発明の化合物の塩を意味し、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸のような無機酸、有機カルボン酸、または有機リン酸によって形成される非毒性の酸付加塩である。本発明の化合物はまた、塩基との薬学的に許容される金属塩、特に非毒性のアルカリ金属塩を提供しうる。例には、ナトリウムおよびカリウム塩が含まれる。適した薬学的な塩に関する論評に関しては、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． １９７７、６６、１を参照のこと。
【０１４２】
本発明の化合物は、ふさわしくは米国特許第６，１００，２７０号；第６，００６，７３５号；第６，１４３，７５７号；第６，１４３，７４６号；第６，１４０，３２９号；第６，１１７，８８１号；第６，０４３，２５２号；第６，００１，８４７号；第５，９８１，５２７号；および第６，２０７，８２９ Ｂ１号に記載される方法に従って調製することができる。シルデナフィル（バイアグラ（商標））のようないくつかの治療化合物が、市販されている。
【０１４３】
考察するように、好ましいヒト組換え型インスリンはまた、いくつかの販売元からも得ることができる。上記の医師用卓上参考書を参照のこと。
【０１４４】
本発明はさらに、哺乳類、好ましくは霊長類、齧歯類またはウサギ、より好ましくはヒト被験者における糖尿病性胃疾患を予防または治療する、より詳しい方法を提供する。一つの態様において、方法は、以下の少なくとも一つの治療的な量を哺乳類に投与する段階を含む：
ａ）その式が上記の上記の式Ｉ〜ＸＩＩＩによって上記で表される化合物と同様に、その薬学的に許容される塩の一つまたは複数、および
ｂ）対立遺伝子変異体を含むインスリンまたはその生物学的に活性な変異体、好ましくは薬学的に許容される滅菌製剤として提供されるヒトインスリン、または被験者においてインスリンの効果またはレベルを増強する化合物。
【０１４５】
上記の方法の一つの態様において、投与される化合物は、その式が上記の式Ｉ〜Ｖによって表される化合物と同様に、その薬学的に許容される塩の少なくとも一つである。好ましくは投与される化合物は、ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、キナゾリン−４−オン、プリン−６−オン、もしくはピリド−［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン、またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４６】
より好ましくは、投与される本発明の化合物は、以下の化合物の少なくとも一つ：
ａ）５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、
ｂ）１−エチル−５−［５−（ｎ−ヘキシルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
ｃ）１−エチル−５−（５−ジエチルスルファモイル−２−ｎ−プロポキシ−フェニル］−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
ｄ）５−［５−（Ｎ−シクロヘキシルメチル−Ｎ−メチルスルファモイル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−エチル−３−メチル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
ｅ）６−（５−ブロモ−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
ｆ）３−メチル−６−（５−モルフォリノスルホニル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
ｇ）６−［５−（２−カルボキシビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン
ｈ）６−［５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−３−メチル−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン
ｉ）３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルビニル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン
ｊ）３−メチル−６−［５−（２−モルフォリノカルボニルエチル）−２−ｎ−プロポキシフェニル］−１−ｎ−プロピル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン
ｋ）２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン
ｌ）２−｛５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−８−メチルキナゾリン−４−（３Ｈ）−オン
ｍ）８−メチル−２−｛５−［２−（４−メチル−１−ピペラジニルカルボニル）−エテニル］−２−ｎ−プロポキシフェニル｝−キナゾリン−４−（３Ｈ）−オン
ｎ）８−カルバモイル−２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルスルホニル］フェニル｝−キナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
ｋ）８−エチルカルバモイル−２−（２−ｎ−プロポキシフェニル）キナゾリン−４−（３Ｈ）−オン、
ｌ）２−［２−エトキシ−５−（４−エトキシカルボニルピペリジノ−スルホニル）フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
ｍ）２−［５−（４−カルボキシピペリジノスルホニル）−２−エトキシフェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
ｎ）２−｛２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル−スルホニル］フェニル｝−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
ｏ）２−｛２−エトキシ−５−［（ビス−３−ピリジルスルホニル）アミノ］−フェニル］−８−ｎ−プロピルピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１４７】
特に好ましいのは、シルデナフィル（バイアグラ（商標））の投与である。
【０１４８】
先にも考察したように、本発明に従って投与するための典型的な被験者は、霊長類のような哺乳類、特にヒトである。獣医学での適用に関して、広範囲の被験動物、例えばウシ、ヒツジ等のような家畜；ならびに飼育動物、特にイヌおよびネコのようなペットが適している。
【０１４９】
本発明の治療的方法において、治療を必要とする哺乳類のような被験動物、例えば、先に明記したようなＧＩ疾患、好ましくは糖尿病性胃疾患に罹患している被験者を適切に選択して、そのように選択した被験者に本発明に従う治療化合物を投与する。
【０１５０】
本発明の化合物は、プロトン化および水溶性型、例えば有機または無機酸、例えば塩酸、硫酸、ヘミスルフェート、リン酸、硝酸、酢酸、シュウ酸、クエン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸等の薬学的に許容される塩として被験者に投与されることが適している。同様に、酸性基が治療化合物に存在する場合、アンモニウム塩、有機アミンの塩、またはカリウム、カルシウムもしくはナトリウム塩のようなアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属の塩のような、有機または無機塩基の薬学的に許容される塩を用いることができる。特に適した薬学的に許容される塩も同様に、上記に開示されている。これまでに記載された化合物の適した溶媒和化合物も同様に意図される。
【０１５１】
本発明の方法において、インスリンまたはＰＤＥ阻害剤化合物のような治療化合物を、非経口（静脈内、皮下、筋肉内および皮内を含む）、局所（口腔内、舌下を含む）、経口、鼻腔内等を含む多様な経路によって、被験者に投与してもよい。
【０１５２】
本発明の方法において用いられる治療化合物は、単独または一つもしくは複数のプロカイネティック剤を含む、一つもしくは複数の他の治療物質と組み合わせて、従来の賦形剤、すなわち活性化合物と有害な反応をせず、そのレシピエントに対しても有害でない、望ましい投与経路にとって適した、薬学的に許容される有機もしくは無機担体物質と混合した、薬学的組成物として用いることができる。適した薬学的に許容される担体には、水、塩溶液、アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、ペトロエスラル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ）脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が含まれるが、これらに限定されない。薬学的調製物は滅菌して、望ましければ、補助剤、例えば活性化合物と有害な反応をしない潤滑剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝剤、着色剤、着香料および／または芳香物質等と混合することができる。
【０１５３】
経口投与の場合、特に適しているのは溶液、好ましくは油性または水性溶液、ならびに懸濁液、乳液、または坐剤を含むインプラントである。アンプルは簡便な単位用量である。
【０１５４】
腸内投与の場合、特に適しているのは、タルクおよび／または炭化水素担体結合剤等を有する錠剤、糖衣丸、またはカプセルであり、担体は好ましくは乳糖および／またはコーンスターチおよび／またはジャガイモデンプンである。甘味媒体を用いるシロップ剤、エリキシル剤等を用いることができる。活性化合物を、特異に分解するコーティングによって、例えば、微小封入、多数のコーティング等によって保護する徐放性組成物を処方することができる。錠剤、カプセル剤、およびシロップ剤または他の液体が、一般的に経口投与にとって好ましい。
【０１５５】
一つ以上の異なる治療化合物の単一または組み合わせを、特定の治療において投与してもよい。この点において、特定の治療は最適な治療化合物、特に最適なＰＤＥ阻害剤化合物、または多数のインスリン変異体および／またはＰＤＥ阻害剤化合物の最適な「カクテル」を選択することによって、最適にすることができる。そのような最適な化合物は、以下に述べる実施例のインビトロおよびインビボアッセイ法によって、当業者によって容易に同定されうる。
【０１５６】
同様に、先に述べたように、他の薬学的物質を本発明の治療化合物、特にＰＤＥ阻害剤化合物の投与と共に投与してもよい。例えば、プロカイネティック物質、特にメトクロプラミド、ドンペリドン、エリスロマイシン、またはシサプリド、の少なくとも一つを、例えば個別に、または二つの物質を一つにした薬学的組成物として処方することによって、実質的に同時に患者に投与する。
【０１５７】
所定の治療において用いられる活性化合物の実際の好ましい量は、用いられる特定の化合物、処方される特定の組成物、適用様式、特定の投与部位等に従って変化すると認識されると考えられる。所定の投与プロトコールに関して最適な投与速度は、前述のガイドラインに関して実施される従来の用量決定試験を用いて、当業者によって容易に確認することができると考えられる。シルデナフィル（バイアグラ（商標））および組換え型ヒトインスリンのような、少なくともいくつかの治療化合物がこれまでに臨床的に用いられており、このようにそのような化合物の安全性が確立されている。同様に、そのようなこれまでの臨床応用において用いられる用量は、本発明の方法にとって好ましい用量に関するさらなる指針を提供すると考えられる。
【０１５８】
少なくとも一つのプロカイネティック物質の治療量による治療を受けている、または受ける予定である哺乳類において、少なくとも一つのＧＩ疾患を予防または治療する方法が、本発明によってさらに提供される。適したプロカイネティック物質の例には、ギルマン（Ｇｉｌｍａｎ， Ｅｄ）、上記によって記述される物質、例えば、一つまたは複数のメトクロプラミド、ドンペリドン、エリスロマイシンまたはシサプリドが含まれる。本発明によって用いるための特定のプロカイネティック物質の選択および用量は、治療すべきＧＩ疾患、個人の身長および体重等を含む認識されたパラメータによって、誘導されると考えられる。プロカイネティック物質を投与するための好ましい投与プロトコールは、ギルマン（Ｇｉｌｍａｎ， Ｅ．Ｄ．）、上記において報告されている。
【０１５９】
考察され、以下の実施例からより明らかとなるように、本発明者らは、ｎＮＯＳの標的化ゲノム欠失を有するマウスを用いた、エキソビボ臓器浴用剤（ｂａｔｈ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）において、胃内容排出および幽門の神経生理学をモニターすることによって胃幽門機能におけるｎＮＯＳの役割を評価した。本発明者らは、ｎＮＯＳ−／−マウスの幽門において胃内容排出の遅延およびＮＯ媒介非アドレナリン作動性非コリン作動性（ＮＡＮＣ）弛緩の喪失を認めた。二つのマウス糖尿病モデルを用いて、本発明者らは糖尿病マウスが、ｎＮＯＳ−／−マウスの表現型に類似の胃内容排出の遅延および幽門におけるＮＯ媒介ＮＡＮＣ弛緩の喪失を発症することを発見した。ｎＮＯＳタンパク質およびｍＲＮＡは、糖尿病マウスの幽門腸管筋神経において枯渇しており、これはＮＯ媒介幽門弛緩がないことと一致する。インスリン処置は糖尿病マウスの異常な生理学を逆転させ、幽門のｎＮＯＳタンパク質およびｍＲＮＡを回復する。糖尿病動物を、ＮＯシグナル伝達を増強するｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤であるシルデナフィルによって処置すると、胃内容排出の遅延が逆転される。したがって、マウスにおける糖尿病性胃疾患の重要な特徴は、ｎＮＯＳの可逆的なダウンレギュレーションを反映する。
【０１６０】
本明細書において言及した全ての文書は、参照として本明細書に組み入れられる。以下の非制限的な実施例は本発明の例示である。
【０１６１】
以下の実施例１〜４は、その開示が参照として本明細書に組み入れられる、以下の参考文献において提供される：ワトキンス（Ｃ．Ｃ． Ｗａｔｋｉｎｓ）ら、（２０００）、Ｊ． ｏｆ Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １０６：３７３。
【０１６２】
実施例１：ｎＮＯＳ−／−マウスは胃内容排出の遅延と幽門ＮＡＮＣ弛緩の欠如を示す
ｎＮＯＳ−／−マウスの幽門の肥厚および胃の弛緩は、幽門の機能におけるＮＯの重要な役割を示唆している（１５）。ｎＮＯＳは胃、幽門および腸の全体に発現されており（３３〜３５）、これらの組織は全て、胃の内容物排出の協調した調節を異なる様式でもたらす（１０）。このように、本発明者らは、ｎＮＯＳ−／−マウスにおける胃の幽門の生理学に及ぼす、ｎＮＯＳゲノム欠失の全体的な機能的効果を決定することを望んだ。これに取り組むために、マウスにおける液体食の胃からの排出を測定するために、分光光度法を適合させた（３０、３６）。これらの実験において、マウスの口腔−胃に小さいカテーテルを挿入した後、既知量のフェノールレッドを含む液体を注入した。その後適当な時間に、胃に残っているフェノールレッドを分光光度法によって定量した。生理食塩液は、ｔ１／２が８分で急速に排出されるのに対し、１０％および２０％デキストロースはより遅く排出され（１０％および２０％デキストロースに関してそれぞれ、ｔ１／２＝２４分および３２分）、カロリー負荷の増加に反応した胃内容放出の正常な生理的な遅延を反映している（図１ａ）。ｎＮＯＳ−／−マウスにおいて、生理食塩液（ｔ１／２＝３４分）、１０％デキストロース（ｔ１／２＝５０分）、および２０％デキストロース（ｔ１／２＝７５分、図１ｂ）に関して胃内容排出の実質的な遅延を認めた。このように、胃内容排出は、ｎＮＯＳ−／−マウスでは遅延し、胃内容排出におけるｎＮＯＳの重要な役割と一致する。
【０１６３】
幽門の局所的な収縮は胃からの排出を妨害しうるため（９，１０）、幽門弛緩疾患がｎＮＯＳ−／−マウスにおける胃内容排出の遅延の原因であるかも知れない。この可能性を調べるために、本発明者らは、マウス幽門のエキソビボ臓器浴用剤を用いた。ｎＮＯＳ−／−幽門は、アセチルコリン（Ａｃｈ）、サブスタンスＰ（ＳＰ）、およびニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）に対して正常な反応を示し、このことは、平滑筋機能がｎＮＯＳの喪失によって影響を受けないことを示唆している。ＮＡＮＣ条件で、幽門を０．１ マイクロモル濃度のＳＰによって予め収縮させ、ＮＯ依存的弛緩を電場刺激によって誘発した。野生型の幽門は、ＥＦＳに反応して実質的なＮＡＮＣ弛緩を示した（図１、ｃおよびｄ）。この弛緩は、これが０．１ ｍＭ Ｌ−ＮＮＡおよび０．１ ｍＭを含むｎＮＯＳ阻害剤によって遮断されることからＮＯによって媒介される。同じ条件で、ＮＡＮＣ弛緩はｎＮＯＳ−／−幽門ではほぼ消失する（図１、ｃおよびｄ）。野生型幽門におけるＥＦＳ誘発弛緩は、０．１マイクロモル濃度のＴＴＸによって完全に遮断され、これはＮＯの神経源と一致した。これらの結果は、ｎＮＯＳ−由来ＮＯが幽門におけるＮＡＮＣ弛緩の原因であること、かつＮＯ媒介ＮＡＮＣ弛緩が胃内容排出の遅延を引き起こすことを示唆している。
【０１６４】
図１は、以下のようにより詳細に説明される：ｎＮＯＳ−／−マウスは、胃内容排出の遅延およびＮＯ依存的ＮＡＮＣ弛緩の喪失を示す。（ａ）野生型（ＷＴ）マウスおよび（ｂ）ｎＮＯＳ−／−マウスにおける胃内容排出。方法に記載するように、フェノールレッド標識生理食塩液（丸）、１０％デキストロース（三角）、または２０％デキストロース（四角）を、各時点につき５匹〜１０匹のマウスの群の胃に注入した。マウスを表示の時間に屠殺して胃内容排出の手段としてそれらの胃に残っているフェノールレッドの分画を決定した。個々のデータポイントは、個々のマウスの群に由来する各時点での５回〜１０回測定の平均値（±ＳＥＭ）を表す。場合によっては、誤差のバーは小さく、印の中に含まれている。カロリー含有量の増加に反応して認められた胃内容排出の遅延は、既知の胃の生理学と一致し、ｎＮＯＳ−／−マウスにおいて保存されている。（ｃ）ＥＦＳ誘発ＮＡＮＣ弛緩は、記載のように（方法を参照のこと）野生型およびｎＮＯＳ−／−幽門からモニターした。ＳＰ（０．１マイクロモル濃度）によって予め収縮させた後、野生型幽門は、ＥＦＳ（４０ Ｖ、１０ Ｈｚ、５ｍｓパルスを５秒間の持続）に反応して弛緩（＞９５％）を示したのに対し、弛緩は、ｎＮＯＳ−／−マウスではほとんど認めない（＜５％）。全てのＥＦＳ−誘発弛緩は、０．１マイクロモル濃度のＴＴＸおよびｎＮＯＳ阻害剤Ｌ−ＮＮＡ（０．１ ｍＭ）および７−Ｎｔ（０．１ ｍＭ）によって遮断された。示した例は、代表的な実験からである。（ｄ）野生型およびｎＮＯＳ−／−に関してＥＦＳに反応したＮＡＮＣ誘導弛緩の定量。野生型およびｎＮＯＳ−／−マウスを表すいくつかの幽門を用いて、ＥＦＳに反応したＮＡＮＣ弛緩の程度を定量的に測定した。示したデータは、マウスの各群に関する数回の測定（野生型幽門に関してｎ＝２０およびｎＮＯＳ−／−幽門に関してｎ＝１０）の平均値（±ＳＥＭ）である。Ａ野生型標本と比較してｐ、０．０１。
【０１６５】
実施例２：糖尿病マウスは、ｎＮＯＳ−／−マウスと類似して胃内容排出を遅延させ、ＮＯ依存的ＮＡＮＣ弛緩を減少させた
ｎＮＯＳ−／−マウスにおいて認められた胃内容排出の遅延は、ヒトの糖尿病性胃疾患と類似である（４〜６、３７〜３９）。さらに、これまでの報告は、ｎＮＯＳ発現が糖尿病ラットにおいて変化している可能性があることを示唆した（２５〜２７）。ｎＮＯＳが糖尿病性胃疾患において役割を果たすか否かを確認するために、胃幽門を二つのマウス糖尿病モデルにおいて評価した。ＮＯＤマウスは、約１４週齢で、膵臓のＢ細胞の自己免疫破壊によって自然発生的に糖尿病を発症する（４０）。このように、若いＮＯＤマウス（ＮＯＤ前糖尿病）は、正常なインスリンおよびグルコースレベルを有するが、年老いたＮＯＤ糖尿病マウスは、インスリン欠乏性の糖尿病を有する。第二のマウス糖尿病モデルは、膵臓のＢ細胞によって選択的に取り込まれる毒性のグルコース誘導体であるＳＴＺを利用する（２９）。本発明者らは、ＳＴＺ（２００ ｍｇ／ｋｇ；方法において記載するように）の１回注射によって糖尿病を誘導し、８週間後にＳＴＺ糖尿病マウスの胃幽門機能を調べた。ＮＯＤ前糖尿病マウスは、年齢を合わせた野生型対照と類似の正常な胃内容排出速度を有するが、胃内容排出はＮＯＤ糖尿病マウスでは著しく遅れている（図２ａ）。ＮＯＤ糖尿病マウスと同様に、ＳＴＺ糖尿病マウスは、ｎＮＯＳ−／−マウスと類似して実質的に遅れた胃内容排出を示す（図２ａ）。このように、胃内容排出の遅延は、マウスの異なる糖尿病モデルにおいて起こる。
【０１６６】
正常な食後の範囲内の血中グルコースレベルを含む高血糖症は、正常および糖尿病の人において胃内容排出を遅延させうるが（４１〜４７）、幽門の収縮の増加は、正常な血糖症における胃内容排出の遅延には関与しない可能性がある（４８）。このように、高血糖症のみが糖尿病マウスにおいて認められた、胃内容排出の遅延を説明する可能性がある。この可能性を調べるために、本発明者らは、皮下インプラント（方法を参照のこと）を用いて、インスリンによってＳＴＺ糖尿病動物を処置して、血清中のグルコースレベルをモニターした。グルコースレベルは、インスリン治療後１２時間までにほぼ４００ ｍｇ／ｄＬから約１００ ｍｇ／ｄＬまで減少したのに対し、偽手術を行った動物は、その血清中のグルコースレベルに有意な変化を示さなかった（図２ｂ）。本発明者らは、偽手術を行ったＳＴＺ糖尿病、インスリン処置ＳＴＺ糖尿病、および野生型マウスにおける胃内容排出をモニターした。野生型マウスにおける胃内容排出のｔ１／２は３６分であったのに対し、ＳＴＺ−糖尿病マウスでは６０分である（図２ｃ）。１２時間のインスリン処置後、本発明者らは、胃内容排出速度にごくわずかな増加を認め、ｔ１／２は５４分である。このように、高血糖症のみでは糖尿病マウスにおいて認められた胃内容排出の遅延を説明できない。
【０１６７】
ｎＮＯＳ−／−マウスにおける胃内容排出の遅延が胃の肥大に関連すると仮定して、本発明者らは、糖尿病に罹患しているおよび罹患していないマウス由来の、胃の大きさおよび重量をモニターした（図２、ｄおよびｅ）。３０週〜３２週齢（糖尿病の発症後１６週〜１８週）までに、ＮＯＤ−糖尿病マウスは、ｎＮＯＳ−／−標本と類似した胃の肥大を発症した（図２ｄ）。この肥大は、ＮＯＤ−糖尿病動物から得られた胃の重量に反映される（図２ｅ）。ＳＴＺ−糖尿病マウス由来の胃（ＳＴＺ処置後８週間）は、しばしば野生型標本より幾分大きいように思われるが、ＳＴＺ−糖尿病の胃の重量は野生型標本の胃とは統計学的に有意差を示さない（図２、ｄおよびｅ）。このように、ＮＯＤ−糖尿病マウスは、ｎＮＯＳ−／−マウスと同様に、糖尿病の１６〜１８週間後に胃の肥大を発症する。
【０１６８】
ｎＮＯＳ−／−マウスにおける胃内容排出の遅延は、幽門のＮＯ依存的ＮＡＮＣ伝達の欠如を反映することから、本発明者らは、エキソビボ臓器浴用剤を用いて、糖尿病マウスに由来する幽門におけるＮＯ依存的ＮＡＮＣ伝達をモニターした。ＮＯＣ糖尿病およびＳＴＺ糖尿病マウス由来の幽門は、ＳＰ、Ａｃｈ、およびＳＨＰに対して反応し、これは野生型幽門と類似である。ｎＮＯＳ−／−幽門は、２ Ｈｚ、５ Ｈｚ、１０ ＨｚでＮＡＮＣ弛緩をほぼ完全に喪失したのに対し、ＮＯＤ前糖尿病幽門は、１０ Ｈｚで最大弛緩を示して野生型と類似である（図３ａ）。対照的に、ＮＯＤ糖尿病およびＳＴＺ糖尿病幽門におけるＮＡＮＣ弛緩は、大きく減少する（図３ａ）。ＮＯ媒介弛緩の喪失を定量するために、本発明者らは、各群の動物を代表する多数の幽門から、ＥＦＴ（１０ Ｈｚ）に反応して得られた最初のＮＡＮＣ弛緩に由来するデータを分析した（図３ｂ）。ＳＴＺ−糖尿病およびＮＯＤ−糖尿病幽門はいずれも、ＮＯ依存的ＮＡＮＣ弛緩の劇的な減少を示し、これはｎＮＯＳ−／−幽門に類似する（図３ｂ）。データは、糖尿病マウスにおける胃内容排出の遅延は、ＮＯ媒介幽門弛緩の喪失を反映することを示唆している。
【０１６９】
図２を下記により詳細に説明する。糖尿病マウスは、高血糖症および胃の肥大が原因ではない胃内容排出の遅延を示す。（ａ）糖尿病マウスにおける胃内容排出（２０％デキストロース）。１０週齢のＮＯＤ前糖尿病マウス（黒丸）は、野生型マウス（黒四角）と類似の胃内容排出速度を示す。ＳＴＺ−糖尿病マウス（白三角）およびＮＯＤ糖尿病マウス（白丸）は、ｎＮＯＳ−／−マウス（黒三角）と類似の胃内容排出の有意な遅延を示す。それぞれのデータポイントは、動物４〜６匹の群の平均値（±ＳＥＭ）を表す。糖尿病動物は全て、胃内容排出に何らかの遅延を示し、これは、示される誤差のバーに反映されている。場合によっては、誤差のバーが小さく、印の中に含まれている。この実験は２回行って、同じ結果を得た。（ｂ）インスリン処置後のＳＴＺ糖尿病マウスの血清グルコースレベル。ＳＴＺ−糖尿病マウスは、偽手術を行うか（ｎ＝５）、またはインスリン放出インプラント（ｎ＝５；方法を参照のこと）の皮下留置によって処置した。次に、血清グルコースレベルを表示の時点で決定した。示したデータは、各時点での５回測定の平均値（±ＳＥＭ）である。血清グルコースレベルは１２時間までに約１００ ｍｇ／ｄＬまで減少し、類似のレベルを４８時間維持する。（ｃ）インスリン処置１２時間後のＳＴＺ−糖尿病マウスにおける胃内容排出。ＳＴＺ−糖尿病マウスは、胃内容排出を測定する１２時間前に、偽手術（ＳＴＺｄ）を行うか、またはインスリン放出インプラントの皮下留置（ＳＴＺｄｓ）を行って作製した。示したデータは、各時点での５回〜７回測定の平均値（±ＳＥＭ）である。（ｄ）野生型、ＮＯＤ前糖尿病（ＮＯＤｐｄ）、ｎＮＯＳ−／−、ＮＯＤ−糖尿病（ＮＯＤｄ）およびＳＴＺ−糖尿病（ＳＴＺｄ）マウスから切除した胃の写真を撮影して、ＮＯＤ−糖尿病マウスにおける胃の肥大を証明した。写真は、各群の動物について調べた標本５個〜８個の代表的なものである。（ｅ）野生型、ＮＯＤ−前糖尿病、ｎＮＯＳ−／−、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスは、４時間絶食した後に体重を測定した。示したデータは各群における標本５個の平均値（±ＳＥＭ）である。ＮＯＤ−糖尿病およびｎＮＯＳ−／−マウスからの胃は、野生型からの胃より有意に重量が大きかった。ａ 野生型と比較したｎＮＯＳ−／−胃に関して、およびＮＯＤ前糖尿病と比較した糖尿病標本に関してｐ＜０．０５。
【０１７０】
図３は以下のようにより詳細に説明する。糖尿病マウスからの幽門は、ＮＯ媒介ＮＡＮＣ弛緩を欠損する：これはインスリン処置によって逆転される。（ａ）ＥＦＳ−誘発ＮＯ−媒介ＮＡＮＣ弛緩は、野生型幽門と比較するとｎＮＯＳ−／−幽門では２ Ｈｚ、５ Ｈｚおよび１０ Ｈｚで実質的に減少している。ＮＯＤ−前糖尿病幽門は、１０ Ｈｚで最大弛緩を示し、野生型マウスと類似であった。ＮＯＤ糖尿病幽門は、２ Ｈｚ、５ Ｈｚおよび１０ ＨｚでＮＡＮＣ弛緩をほとんど示さず、ｎＮＯＳ−／−幽門と類似したが、ＮＯＤ−糖尿病動物にインスリン処置（１週間）を行うと、ＮＡＮＣ弛緩を部分的に回復する。ＳＴＺ−糖尿病マウスからの幽門におけるＮＡＮＣ弛緩は、有意に減少してｎＮＯＳ−／−マウスからの幽門と類似であり、ＳＴＺ−糖尿病動物にインスリン処置（１週間）を行うと、ＮＡＮＣ弛緩を回復する。対照実験において、本発明者らは、２ Ｈｚ、５ Ｈｚおよび１０ Ｈｚ、または逆の順序の１０ Ｈｚ、５ Ｈｚ、および２ ＨｚでのＥＦＳ刺激に対する野生型幽門の反応を比較したが、明らかな差を認めなかった。示した結果は、異なる動物からの幽門調製物５個〜１０個の代表的な試料である。（ｂ）糖尿病幽門におけるＥＦＳに反応したＮＡＮＣ弛緩の定量。マウスの表示の群を代表するいくつかの幽門を用いて、ＥＦＳに対する反応におけるＮＡＮＣ弛緩の程度を定量的に分析した。示したデータは、各群のマウスに関する数個の測定の平均値（±ＳＥＭ）である：野生型に関してｎ＝１０；ｎＮＯＳ−／−に関してｎ＝８；ＮＯＤ−前糖尿病に関してｎ＝５；ＳＴＺ−糖尿病に関してｎ＝８；インスリン処置ＮＯＤ−糖尿病（ＮＯＤ）に関してｎ＝５；およびインスリン処置ＳＴＺ−糖尿病（ＳＴＺ）に関してｎ＝８。ａ 野生型標本と比較したｎＮＯＳ−／−およびＳＴＺ−糖尿病に関して、ＮＯＤ前糖尿病標本と比較したＮＯＤ−糖尿病に関して、ＮＯＤ糖尿病標本と比較したインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病標本に関して、およびＳＴＺ−糖尿病試料と比較したインスリン処置ＳＴＺ−糖尿病標本に関して、Ｐ＜０．０１。
【０１７１】
実施例３：ｎＮＯＳ−タンパク質およびｍＲＮＡ発現は糖尿病マウスでは失われている
糖尿病およびｎＮＯＳ−／−マウスは、類似の異常な胃幽門生理学を示すことから、本発明者らは、ｎＮＯＳ発現が糖尿病幽門において変化しているか否か疑問に思った。このため、本発明者らは、免疫組織化学によってｎＮＯＳタンパク質の発現を調べ、かつインサイチューハイブリダイゼーションによってｎＮＯＳ ｍＲＮＡの発現を調べた。免疫組織化学により、野生型（図４ａ）およびＮＯＤ−前糖尿病幽門における腸管筋神経では、ｎＮＯＳに関して明確に染色されることが判明した。染色はｎＮＯＳ−／−マウスでは存在せず（図４ａ）、抗体の特異性を確認する。ｎＮＯＳ染色は、ＮＯＣ糖尿病幽門ではほぼ消失し、ＳＴＺ−糖尿病幽門では実質的に減少する（図４ａ）。これらの変化を定量するために、本発明者らは、高倍率視野（ｈｐｆ）あたりのｎＮＯＳ−陽性神経の数を測定した。ｎＮＯＳ−陽性神経は、ＳＴＺ−糖尿病幽門では約６５％減少し、ＮＯＤ糖尿病マウスでは約８０％減少する（図４ｂ）。インサイチューハイブリダイゼーションにより、ｎＮＯＳ−／−、ＮＯＤ−糖尿病、およびＳＴＺ−糖尿病幽門におけるｎＮＯＳ ｍＲＮＡ発現の著しい減少が判明した（図５ａ）。ｎＮＯＳ−陽性核は、ＮＯＤ−糖尿病幽門では７８％、およびＳＴＺ−糖尿病幽門では５３％減少する（図５ｂ）。
【０１７２】
図４を以下のようにより詳細に説明する。幽門の腸管筋神経におけるｎＮＯＳタンパク質発現は、糖尿病マウスでは枯渇しており、これはインスリン処置によって逆転される。（ａ）ｎＮＯＳタンパク質発現の免疫組織化学分析。ｎＮＯＳは野生型に存在して、ｎＮＯＳ−／−幽門腸管筋神経には存在しないのに対し、ｎＮＯＳ発現は、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスの双方では失われている。ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病動物をインスリン処置（１週間）すると、ｎＮＯＳ発現の喪失は逆転される。（ｂ）ｎＮＯＳタンパク質発現の定量。ｈｐｇ（４０倍）あたりのｎＮＯＳ発現神経の数を、各群の動物に関して顕微鏡視野１０個に関して測定し、ＳＥＭを誤差のバーとして示す。これらの結果は、各群についてマウス４〜６匹の二つの異なる実験において得られている。野生型試料と比較したｎＮＯＳ−／−およびＳＴＺ−糖尿病試料に関して、ＮＯＤ−前糖尿病試料と比較したＮＯＤ−糖尿病に関して、ＮＯＤ−糖尿病試料と比較したインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病に関して、およびＳＴＺ−糖尿病標本と比較したインスリン処置ＳＴＺ−糖尿病に関して、Ｐ＜０．０１。
【０１７３】
ｎＮＯＳ発現の糖尿病誘発枯渇が幽門に対して独自であるか、または全ての腸組織の一般的特徴であるか否かを確認するために、本発明者らは、ｎＮＯＤ−前糖尿病、ＮＯＤ−糖尿病、およびインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病マウスに由来する様々な腸組織における、ウェスタンブロットによってｎＮＯＳ発現をモニターした（図６）。幽門、食道、および回腸においてｎＮＯＳの顕著な枯渇を認めた（図６）。幽門洞および胃底では、ＮＯＤ−糖尿病組織においてｎＮＯＳ発現の部分的枯渇を認め（図６）、これは糖尿病ラットにおける先の報告と一致する（２６、２７）。ｎＮＯＳの部分的枯渇はまた、結腸においても認める（図６）。脳におけるｎＮＯＳの発現には変化を認めず、このことは、糖尿病におけるｎＮＯＳの枯渇が腸の神経系（ＥＮＳ）にとって特異的である可能性があることを示唆している。このように、糖尿病マウスにおいて、ｎＮＯＳのダウンレギュレーションは腸全体に起こるが、幽門、食道、および回腸において最も大きい。
【０１７４】
ｎＮＯＳ発現およびｍＲＮＡレベルの減少は、ｎＮＯＳ発現の変化を反映するか、またはｎＮＯＳを発現する神経の喪失が原因である可能性がある。腸の神経の喪失が、ｎＮＯＳ免疫反応性神経の減少を説明するか否かを決定するために、本発明者らは、神経マーカーであるシナプトフィシン（ＳＹＮ）、微小管関連タンパク質−２（ＭＡＰ−２）、およびニューロフィラメント（ＮＦ；データは示していない）に対する抗体を用いて、幽門試料を染色した。ＭＡＰ−２およびＳＹＮ免疫反応性はｎＮＯＳ−／−、ＮＯＤ−糖尿病、またはＳＴＺ−糖尿病幽門において変化せず、このことは、神経の喪失がｎＮＯＳ発現の枯渇を説明しないことを示している（図７）。本発明者らはまた、血管活性腸ペプチド（ＶＩＰ）とｎＮＯＳとが腸管筋神経内に同時に局在する可能性があることから（４９〜５０）、ＶＩＰ発現をモニターした。ＶＩＰ染色はＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病幽門の双方において保存されている（図７）。これらのデータは、ｎＮＯＳの減少が腸管筋神経の喪失を反映していないことを示している。
【０１７５】
シルデナフィルは、糖尿病マウスにおける胃内容排出の遅延を逆転させる。いくつかのタンパク質の発現は、糖尿病動物において起こるインスリン枯渇によって減少すると想定される。ｎＮＯＳは、平滑筋細胞における可溶性のグアニレートシクラーゼによるｃＧＭＰ産生の活性化によって、平滑筋弛緩を媒介する。性的不能のようなＮＯ−依存的平滑筋弛緩の何らかの疾患は、ｃＧＭＰを分解するｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ５）の阻害によって治療することができる（５２、５３）。ｎＮＯＳの喪失が胃内容排出の遅延の原因であるか否かを決定するために、本発明者らはシルデナフィルを用いた。これはＰＤＥ５が幽門において多量に存在することから用いた（５４）。ＰＤＥ５の阻害によって、より低いＮＯレベルの存在下でｃＧＭＰが蓄積することができる。本発明者らは、糖尿病動物をシルデナフィルによって処置すると、胃内容排出を加速するか否かを疑問に思った。したがって、本発明者らは、ＳＴＺ−糖尿病およびＮＯＤ−糖尿病マウスをシルデナフィル（１ｍｇ／ｋｇ）で処置して、胃内容排出をモニターした。シルデナフィルは、ＳＴＺ−糖尿病およびＮＯＤ−糖尿病マウスの双方の胃内容排出の遅延を逆転させ、胃内容排出のｔ１／２は、シルデナフィル処置ＳＴＺ−糖尿病およびシルデナフィル処置ＮＯＤ−糖尿病動物に関してそれぞれ、３０分および３６分である（図８）。これらのデータは、糖尿病マウスにおいて胃内容排出の遅延が起こる機構として、ＮＯシグナル伝達の疾患を暗示している。
【０１７６】
図５を下記に説明する。幽門の腸管筋神経におけるｎＮＯＳ ｍＲＮＡ発現は、糖尿病マウスでは枯渇し、インスリン処置によって逆転する。（ａ）ｎＮＯＳ発現のインサイチューハイブリダイゼーション分析。ｎＮＯＳ ｍＲＮＡ発現は、野生型では存在し、ｎＮＯＳ幽門腸管筋神経では枯渇しているが、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスの双方では有意に減少している。（ｂ）ｎＮＯＳ ｍＲＮＡ発現の定量。ｈｐｆあたりのｎＮＯＳ ｍＲＮＡの陽性核の数は、各治療群について顕微鏡視野１０個について決定し、ＳＥＭを誤差のバーとして示す。これらの結果は、１群あたりマウス４匹〜６匹の異なる二つの実験において得られた。野生型試料と比較してｎＮＯＳ−／−およびＳＴＺ−糖尿病試料に関して、ＮＯＤ−糖尿病試料と比較したインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病に関して、ＳＴＺ−糖尿病標本と比較したインスリン処置ＳＴＺ−糖尿病に関して、Ｐ＜０．０１。
【０１７７】
図６を下記のようにより詳細に説明する。ｎＮＯＳタンパク質は、ＮＯＤマウスにおいて腸の全体を通して枯渇し、インスリンによって逆転される。ＮＯＤ−前糖尿病、ＮＯＤ−糖尿病、およびインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病マウスに由来する腸のいくつかの領域からの試料を用いて、ｎＮＯＳタンパク質発現に関するウェスタンブロット分析を行った。ｎＮＯＳタンパク質は、幽門、食道、および回腸においてほぼ完全に枯渇し、他の腸の領域ではごく部分的に枯渇したに過ぎなかった。脳におけるｎＮＯＳ発現に明らかな変化を認めない。インスリン処置（１週間）を行うと、ｎＮＯＳタンパク質の喪失が完全に逆転される。結果は１試料あたり２個ずつ示し、各群の動物６匹の代表的なものである。
【０１７８】
図７を以下により詳細に説明する。糖尿病マウスの幽門は、神経を喪失することなくｎＮＯＳ発現の喪失を示す。腸管筋神経は、ｈｐｆあたりの陽性神経の数を計数することによって定量した。ＳＴＺ−糖尿病またはＮＯＤ−糖尿病マウスに関して、ＳＹＮ、ＭＡＰ２、またはＢＩＰの発現に変化を認めなかった。示したデータは、顕微鏡視野少なくとも１０個の測定の平均値（±ＳＥＭ）であり、組織切片が由来する動物の処置条件に対して実験者は盲検である。
【０１７９】
図８を以下により詳細に説明する。ＰＤＥ５阻害は、糖尿病マウスにおける胃内容排出の遅延を逆転させる。ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスは、方法に記載するように、胃内容排出を測定する２０分前にシルデナフィル（ｓｆ）によって処置した。示したデータは、各データポイントに関して動物４匹を示す、１試料あたり４回ずつの測定の平均値（±ＳＥＭ）である。糖尿病動物にシルデナフィル処置を行うと、糖尿病動物における胃内容排出の遅延が逆転される。
【０１８０】
実施例４：ｎＮＯＳ発現およびＮＯ依存的ＮＡＮＣ弛緩はインスリン処置によって回復する  ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスはいずれも、低いインスリンレベルで血清中のグルコースレベルが上昇した。本発明者らは、埋め込み型インスリン装置による処置によって、これらの異常を修正した（表１）。インスリン処置の１週間後、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスの双方における胃内容排出は、正常に回復する（図９ａ）。インスリン処置はまた、インスリン処置ＮＯＤ−糖尿病またはＳＴＺ−糖尿病動物からの幽門におけるＥＦＳ誘導ＮＡＮＣ弛緩を回復する（図３、ｂおよびｃ）。インスリン処置ＮＯＤ−糖尿病幽門からのＥＦＳ−誘導弛緩に及ぼすインスリンの回復作用は、インスリン処置ＳＴＺ−糖尿病幽門において認められた作用より大きかった。この知見は、ＮＯＤ−糖尿病マウスにおいて認められたより劇的なｎＮＯＳ発現の喪失を反映しうる（図４ｂおよび５ｂ）。
【０１８１】
インスリン処置は、多くの遺伝子の発現を変化させる可能性がある。ｎＮＯＳ発現の誘導が、胃内容排出に及ぼすインスリンの作用を媒介するか否かを決定するために、本発明者らは、インスリン処置ＳＴＺ−糖尿病およびインスリン処置ＮＯＤ−糖尿病マウスにおいて、ｎＮＯＳ阻害剤７−ＮＩの投与後３０分での胃内容排出をモニターした。７−ＮＩはインスリン処置糖尿病マウスにおける正常な胃内容排出の回復を逆転させ（図９ｂ）、このことはｎＮＯＳのカラリリック（ｃａｒａｌｙｒｉｃ）作用が、胃内容排出に及ぼすインスリン処置の作用を媒介することを示している。インスリンは糖尿病幽門におけるＮＡＮＣ弛緩を回復するため、本発明者らは、０．１ ｍＭ ７−ＮＩの存在下でＮＡＮＣ弛緩を調べた。これらの条件では、ＮＡＮＣ弛緩は完全に遮断され、ｎＮＯＳ発現がまた、幽門の弛緩に及ぼすインスリンの回復効果を説明することを示している。
【０１８２】
インスリン処置は、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病幽門におけるｎＮＯＳ発現をほぼ正常レベルに回復する（図４、ａおよびｂ）。インサイチューハイブリダイゼーションから、インスリン処置が同様に、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病幽門の双方におけるｎＮＯＳ ｍＲＮＡを実質的に回復することが判明する（図５、ａおよびｂ）。腸全体を通してのｎＮＯＳ発現の枯渇は、インスリンによって完全に逆転されるが、糖尿病は、いくつかの腸組織ではｎＮＯＳタンパク質のごく部分的な枯渇を誘導するに過ぎない（図６）。
【０１８３】
図９を以下のようにより詳細に説明する。インスリン処置は、胃内容排出の遅延を逆転させる。（ａ）ＳＴＺ−糖尿病およびＮＯＤ−糖尿病マウスをインスリンによって処置（１週間）することにより、胃内容排出の遅延（２０％デキストロース）が逆転する。示したデータは、各データポイントに関して動物４匹を表す、１試料あたり４回の測定の平均値（±ＳＥＭ）である。（ｂ）７−ＮＩによってｎＮＯＳを阻害すると、インスリン処置糖尿病マウスにおける胃内容排出を遅らせる。方法に記載するように、糖尿病マウスをインスリンによって処置し（１週間）、その後ｎＮＯＳ阻害剤７−ＮＩ（５０ ｍｇ／ｋｇ）によって処置した。胃内容排出を測定し、マウスを３０分で屠殺した。示したデータは、各群における動物５匹を反映する５回の測定の平均値（±ＳＥＭ）である。インスリン処置ＮＯＤ−糖尿病マウスと比較した７−ＮＩ注射、インスリン処置ＮＯＤ−糖尿病動物に関して、およびインスリン処置ＳＴＺ−糖尿病動物と比較した７−ＮＩ注射インスリン処置ＳＴＺ−糖尿病動物に関して、Ｐ＜０．０１。
【０１８４】
前述の実施例１〜４において、必要に応じて以下の材料および方法を用いる。
【０１８５】
動物
マウスを、実験によって指示される絶食時を除き、食餌および水を自由に与えた。実験に用いた動物群の体重および血清中のグルコースレベルを表１に示す。野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）は、ジャクソン研究所（バーハーバー、メイン州、アメリカ）から購入した。ｎＮＯＳ−／−マウスは、ｎＮＯＳの標的化ゲノム欠失後に得られ（１５）、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（２８）の遺伝的背景を有する。ＳＴＺ−誘発糖尿病に関して、あちらこちらで記載されているように（２９）、成体雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）にＳＴＺ（２００ ｍｇ／ｋｇの０．１ Ｍクエン酸ナトリウム溶液）１回量を腹腔内注射し、対照マウスには等量の溶媒（クエン酸ナトリウム）を注射した。ＳＴＺ−処置マウスは、ＳＴＺ注射の８週間後に実験に用いた。ＳＴＺ処置後、血清中のグルコースレベルを、１２時間絶食した動物の尾静脈採血によって、アキュ・チェックイージーブラッドグルコースモニター（モデル７８８；ベーリンガーマンハイム社、インジアナポリス、インディアナ州、アメリカ）を用いて毎週モニターした。野生型動物および注射後８週間のＳＴＺ糖尿病マウスの血清グルコースレベルの平均値はそれぞれ、９９ ｍｇ／ｄＬおよび３８８ ｍｇ／ｄＬであった（表１）。成体の雄性非肥満糖尿病（ＮＯＤ／ＬｔＪ［ＮＯＤ］）マウスを８〜１０週齢で得た（ジャクソン研究所）。血清中のグルコースレベルも同様に、アキュ・チェックモニターによって毎週モニターした。ＮＯＤ−前糖尿病マウスおよびＮＯＤ−糖尿病マウスの血清中グルコースレベルの平均値はそれぞれ、８８ ｍｇ／ｄＬおよび２３２ ｍｇ／ｄＬであった（表１）。表記の実験に関して、ＮＯＤ−前糖尿病マウスは、血清中のグルコースレベルを確認後、１０週齢で屠殺し、一方ＮＯＤ−糖尿病マウスは、血清中のグルコースレベルの上昇を確認後、３０週〜３２週齢で屠殺した。
【０１８６】
インスリン処置は、リンビット、徐放性インスリンインプラント（０．１ Ｕ／ｄ／インプラント；リンシンカナダインク、トロント、オンタリオ州、カナダ）を用いて行った。ジエチルエーテルによって軽く麻酔した後、インスリンインプラントをベタジン溶液（マッケソン、サンフランシスコ、カリフォルニア州、アメリカ）に速やかに浸して、１２ゲージ針によって皮下に埋め込んだ。血清中のグルコースレベルをモニターして、表記のようにインスリン治療の１２時間後または１週間後に、インスリン処置動物を実験に用いた。インスリン処置１週間後の血清中のグルコースレベル（表１）を、インスリン処置１２時間後の血清中のグルコースレベルと同様に示す（図２ｂを参照のこと）。
【０１８７】
表記のように、インスリン処置糖尿病マウスをｎＮＯＳ阻害剤である７−ニトロインダゾール（７−ＮＩ；ランカスター、ウィンダム、ニューハンプシャー州、アメリカ）のゴマ油（シグマケミカル社、セントルイス、ミズーリ州、アメリカ）懸濁液を、胃内容排出測定の２４時間前および３０分前に２回腹腔内注射（５０ ｍｇ／ｋｇ）することによって処置した。他の実験において、ＮＯＤ−糖尿病およびＳＴＺ−糖尿病マウスをシルデナフィル（１ｍｇ／ｋｇ水溶液；ファイザー社、グロトン、コネチカット、アメリカ）を、胃内容排出の測定の２０分前に腹腔内注射することによって処置した。全ての実験に関して、対照動物に溶媒（ゴマ油または水のいずれか）を同様に注射した。
【０１８８】
胃内容排出
液体の胃内容排出は、既に記載されているように測定した（３０）。糖尿病マウスを用いるあらゆる実験に関して、全ての動物の血清中のグルコースレベルは、胃内容排出をモニターする直前に確認した。成体マウスをジエチルエーテルで軽く（＜３０秒）鎮静させた。マウスは鎮静から１分より短い間に完全に回復した。短い鎮静のあいだに、薄いプラスチックカテーテル（長さ８ｃｍ）に適合させた２１ゲージ針によって、経口−胃挿管を行った。次に、１ｍｇ／ｍｌフェノールレッド標識２０％デキストロース（または指示されれば他の溶液）０．２ ｍｌを胃に注入した。マウスを屠殺するまできれいな空のケージに入れた。表記の時間（０分〜１２０分）に、マウスを断頭して速やかに屠殺し、胃を切除した。十二指腸を結紮した後、下位食道を横に切断して、胃を体腔から摘出した。切除した胃をポリトロン（ブリンクマン、ウェストバリー、ニューヨーク、アメリカ）ホモジナイザーによって９５％エチルアルコール３ｍｌ中でホモジナイズした。遠心後（４０，０００ ｇで２０分）、少量の上清を用いて、フェノールレッド含有量を測定した。標準曲線を作製して、フェノールレッドの１ μｇ〜２０ μｇの範囲で、直線であることを認めた。フェノールレッド含有量は４１０ ｎｍでモニターし、エタノールによって抽出する際に、単一の吸収ピークを認めた。このように、胃内容排出データは、残っているフェノールレッドの割合として示し、これを、図の説明文に示すように各時点での数匹の動物からの数個の測定の平均値（±ＳＥＭ）として計算する。食餌を含むフェノールレッドの５０％を胃から排出するために必要な時間（半減期［ｔ１／２］）は、グラフにしたデータから直接導いた。
【０１８９】
器官槽（ｏｒｇａｎ ｂａｔｈ）の生理学
マウスを断頭によって屠殺して、下位食道括約筋から遠位十二指腸までの胃腸を体腔から摘出し、Ｃａ２＋不含クレブスヘンゼライト（ＫＨ）緩衝液中に入れた。幽門の括約筋をＣａ２＋不含ＫＨ中で切除して、２つのＬ型組織フックのあいだにつるした。次に、エキソビボ調製物を、３７℃でＫＨ緩衝液（シグマケミカル社）を含む２５ ｍＬチャンバーに入れて、９５％Ｏ２、５％ＣＯ２を絶えず通気した。同質異性力変換器によって張力をモニターして、チャートレコーダーに記録した。日常的な実験に関して、幽門をＫＨ緩衝液中で４．９ ｍＮの張力を加えて１時間平衡にした。次に、幽門をアトロピン（１．０ マイクロモル濃度）、プロプラノロール（１．０マイクロモル濃度）、およびインドメタシン（１０．０マイクロモル濃度）によって３０分前処置して、コリン媒介、アドレナリン媒介、およびプロスタグランジン媒介反応をそれぞれ遮断した。幽門のエキソビボ調製物は、通常の相動性収縮を示すが、弛緩を直接測定することができる有意な自然発生緊張（緊張性収縮）を起こさない。このため、幽門筋のサブスタンスＰ（ＳＰ）による前収縮を用いて、緊張性の筋収縮を引き起こし、弛緩の測定を可能にした。幽門を０．１マイクロモル濃度のＳＰによって収縮させ、持続的な緊張性の収縮を示すそれらの標本を実験に用いた。ＮＡＮＣ弛緩は、電場刺激（ＥＴＳ；４０ Ｖ、２ Ｈｚ〜１０ Ｈｚ、５ｍｓパルスを表示のように５秒または２秒間）によって、ＳＰによる収縮後１０秒〜２０秒間誘導された。弛緩の定量的測定に関して、本発明者らは、図の説明文に示すように、任意の所与の処置条件に関してもいくつかの幽門を用いて、ＮＡＮＣ条件で最初のＥＦＳから得た弛緩を用いた。実験によっては、幽門は最初１０ Ｈｚで、次に５Ｈｚ、そして２Ｈｚによって刺激し、他の実験では、刺激の順序を逆転させた。野生型幽門において、ＥＦＳに対する反応は、刺激の程度にかかわらず同様であった。他の実験において、ＳＰ収縮後の単一の刺激として与えた２ Ｈｚ、５ Ｈｚまたは１０ Ｈｚに対して、類似の反応を認めた。ＮＡＮＣ弛緩の誘発における神経の脱分極の役割を確認するために、レトロドトキシン（ＴＴＸ；０．１マイクロモル濃度；リサーチバイオケミカル社、ナティック、マサチューセッツ州、アメリカ）を用いた。ＮＡＮＣ弛緩のＮＯ依存性は、ＥＦＳの前に０．１ ｍＭ Ｎ−ニトロ［−アルギニン（Ｌ−ＮＮＡ；シグマケミカル社）、または０．１ ｍＭ ７−ＮＩのいずれかと共に、３０分間インキュベートすることによって確認した。
【０１９０】
免疫組織化学
非糖尿病試験に関して、野生型動物または１０週齢のＮＯＤ−前糖尿病動物を用いた。糖尿病試験に関しては、本発明者らはＳＴＺ注射（ＳＴＺ糖尿病）後８週間の動物または３０週齢のＮＯＤマウス（ＮＯＤ糖尿病）を用いた。幽門または他の組織を切除して、直ちに包埋し（ティシューテックＯＣＴ ４５８３；サクラフィネテック社、トレンス、カリフォルニア州、アメリカ）、ドライアイス中に入れて凍結させた。低温槽（−１９℃；ライカミクロム、アレンダール、ニュージャージー州、アメリカ）を用いて一般的な切片（１０ μｍ）を作製した。免疫染色に関して、切片を４．０％パラホルムアルデヒド中で５分間固定して、ＰＢＳ中で洗浄し、０．１％トリトンＸ−１００のＰＢＳ溶液によって透明にした。次に、スライドガラスを表記のように一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした；抗−ｎＮＯＳ（１：８０００；ディアソリン、スティルウォーター、ミネソタ州、アメリカ）、抗シナプトフィシン（１：５００；シグマケミカル社）、抗−ＶＩＰ（１：４０００；カルビオケム−ノババイオケム社、サンディエゴ、カリフォルニア州、アメリカ）、および抗Ｍａｐ−Ｚ（１：２００；ベーリンガーマンハイム社）。抗原は、適当な二次抗体およびベクタステインＡＢＣキット（ベクターラボラトリーズ社、バーリンガム、カリフォルニア州、アメリカ）を用いて可視化した。
【０１９１】
インサイチューハイブリダイゼーション
ｎＮＯＳのインサイチューハイブリダイゼーションは、先に記載された通りに行った（３１、３２）。
【０１９２】
ウェスタンブロット分析
マウス組織を、５０ ｍＭトリス（ｐＨ ７．４、２５℃）、１００ ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、およびプロテアーゼ阻害剤（４μｇ／ｍｌロイペプチン、２μｇ／ｍｌアンチペイン、２μｇ／ｍｌペプスタチン、および１ｍＭ ＰＭＳＦ）を含む氷冷緩衝液中でホモジナイズした。遠心（１．５分、１６，０００ ｇ）後、上清を回収して、タンパク質含有量を測定した（クーマシータンパク質アッセイ法；ピアスケミカル社、ロックビル、イリノイ州、アメリカ）。試料（５０ μｇタンパク質）に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（４％〜１２％勾配のゲル；ビストリスヌページ、ノベックス、サンディエゴ、カリフォルニア州、アメリカ）を行って、次に、ＰＶＤＦ膜（イモビロン−Ｐ；ミリポア社；ベッドフォード、マサチューセッツ州、アメリカ）に転写した。ウェスタンブロット分析に関して、ブロットをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ、０．１％ツイーン−２０、５％脱脂乳）中で２５℃で３０分間インキュベートした。次に、ブロットをブロッキング緩衝液中の、１：１０００の一次抗体（抗−ｎＮＯＳ抗体；ＭＡＢ１２６５；トランスダクションラボラトリーズ、レキシントン、ケンタッキー州、アメリカ）と共に軽く攪拌しながら２５℃で１時間インキュベートした後、ブロッキング緩衝液によって５分間の洗浄を３回行った。次に、ブロットをブロッキング緩衝液中の、１：５０００倍の二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ；アマシャムライフサイエンシズインク、アーリントンハイツ、イリノイ州、アメリカ）と共に、２５℃で３０分間インキュベートした後、ブロッキング緩衝液によって５分間の洗浄を３回行った後、ＰＢＳによって５分間の洗浄を２回行った。免疫活性タンパク質を、強化化学発光（ルネッサンスウェスタンブロット化学発光試薬プラス；ＮＥＮライフサイエンスプロダクツインク、ボストン、マサチューセッツ州、アメリカ）を用いて可視化した。
【０１９３】
統計分析
データは、グラフパッドプリズムソフトウェア（バージョン２．０１；グラフパッドソフトウェアインク、サンディエゴ、カリフォルニア州、アメリカ）を用いて分析した。有意性は、対応のある両側のスチューデントｔ検定を用いて分析し、特に明記していなければ、データは平均値（±ＳＥＭ）として表記する。表記のように、実験マウスの群の単一比較を適当な対照群に対して行った。
【０１９４】
考察
胃疾患は糖尿病患者の罹患率の主な原因である。二つのマウス糖尿病モデルを用いて、糖尿病マウスがｎＮＯＳタンパク質およびｍＲＮＡの選択的枯渇、ならびにｎＮＯＳのゲノム欠失を有するマウスの表現型と類似する、ＮＯ−媒介ＮＡＮＣ神経伝達の喪失に伴う胃内容排出の遅延を示すことが発見された。上記の実施例は、糖尿病ラットの胃標本におけるｎＮＯＳ発現の減少およびＮＡＮＣ弛緩に関する、最近の報告と一致するデータを提供する（２５〜２７）。
【０１９５】
少なくとも２つの系列の証拠が、これらのマウスモデルにおける糖尿病性胃疾患における原因として、ｎＮＯＳ欠損を支持する。第一に、減少したＮＯレベルの効果を増強する強力で選択的なＰＤＥ５阻害剤であるシルデナフィルは、糖尿病マウスにおける胃内容排出を回復させることができる。第二に、インスリンで糖尿病動物を処置すると、腸管筋ｎＮＯＳタンパク質およびｍＲＮＡを回復させ、ＮＯ−媒介ＮＡＮＣ神経伝達を回復させ、胃内容排出の遅延を逆転させる。このように、糖尿病マウスにおける胃内容排出の遅延は、腸管筋神経内でのｎＮＯＳ発現の可逆的な喪失が原因であり、これはシルデナフィルによって逆転させることができる。
【０１９６】
胃内容排出は、近位の胃（胃底）、幽門洞、幽門、および十二指腸の協調した活性によって起こる（１０）。ｎＮＯＳ−／−または糖尿病マウスにおける胃底弛緩の喪失は、胃内容排出を加速させることができ、幽門または十二指腸弛緩の喪失は胃内容排出を遅らせる可能性がある。ｎＮＯＳ−／−および糖尿病マウスの双方において、ｎＮＯＳの喪失は、胃内容排出の遅延に関連し、これは幽門機能に対する主な生理的作用と一致する。この知見は、胃底および幽門洞、ならびにこれらの動物において認められた解剖学的変化と比較すると、幽門においてｎＮＯＳがより強く枯渇するという本発明者らの知見によって支持される。興味深いことに、最近糖尿病であると診断された患者において、何人かの研究者が胃内容排出の加速を記述した（３９、５５、５６）。これらの知見は、初期の糖尿病における胃底または幽門洞において、圧倒的にｎＮＯＳが喪失することを反映する可能性がある。
【０１９７】
糖尿病患者は小腸および結腸と共に胃において運動性疾患を示し（５、６）、最近の証拠は、ＮＯメカニズムがヒトの小腸運動性を調節することを示唆している（６６）。糖尿病において、下痢は、細菌の過剰増殖を引き起こす小腸の運動性低下の表れである可能性があり、便秘は結腸における運動性不良が原因である可能性がある。幽門以外の腸組織において認めたｎＮＯＳ発現の減少は、他の糖尿病胃腸症候群に関与すると考えられている。興味深いことに、糖尿病性胃疾患および他の糖尿病性胃腸症候群は、患者がインスリンを服用しない場合、または病気に関連したグルコース制御が不良である場合に悪化する可能性がある（５、６、６７）。インスリン治療の再開または血清中のグルコースレベルの制御の改善によって、症状の改善がしばしば得られる。したがって、本明細書において報告するように、ｎＮＯＳ発現の可逆的な減少は、糖尿病性胃腸症候群に関連した再発と寛解という臨床経過の根底にある可能性がある。
【０１９８】
糖尿病とは無関係な他の胃腸疾患も同様に、腸管筋神経におけるｎＮＯＳの調節疾患が原因で起こる可能性がある。例えば、肥厚性幽門狭窄を有する乳児の幽門はｎＮＯＳの選択的喪失を示す（１６、１７）。この状態では、ｎＮＯＳの喪失によって、幽門の肥大および胃内容排出の完全な遮断が起こる。食道においてｎＮＯＳ発現神経の喪失は、下位食道の括約筋の機能疾患に関連して、噴門痙攣が起こる（６８〜７８）。過敏性腸症候群および機能的消化不良を含む機能的腸疾患は、運動性疾患に罹患している大きな群の患者に影響を及ぼす（７１、７２）。最近の報告は、胃内容排出の遅延がこれらの患者において一般的であることを示唆している（７３、７４）。
【０１９９】
上記に示した実施例は治療的意味を有する。現在、糖尿病性胃疾患の治療において用いられる主な薬剤には、ドンペリドン、メトクロプラミド、シサプリド、およびエリスロマイシンが含まれる（５、６）。これらの薬剤は、胃の収縮を増加させることによって作用する。その限られた臨床的有用性は、糖尿病性胃疾患における異常が胃幽門機能の収縮成分よりむしろ、主にＮＡＮＣ弛緩にあるという知見を反映する可能性がある。ＮＯ、またはそのエフェクターであるｃＧＭＰの作用を増強する薬剤は、おそらく幽門の弛緩を引き起こすと考えられる。本発明者らは、ＰＤＥ５阻害剤であるシルデナフィルによって糖尿病マウスを処置することにより、胃内容排出の遅延が逆転することを発見した。この知見は、幽門におけるＰＤＥ５の濃縮を証明する最近の研究と一致する（５４）。興味深いことに、最近の報告は、シルデナフィルが噴門痙攣患者における食道の運動性を阻害しうることを示唆している（７４）。このように、シルデナフィルのようなＰＤＥ５選択的阻害剤は、糖尿病性胃疾患および関連疾患の治療において有効であると考えられる。
【０２００】
したがって、一つの局面において、本発明は、糖尿病患者において一般的な胃腸機能疾患を、予防または治療する有用な方法を提供する。マウスにおける遺伝的（非肥満型糖尿病）および毒素誘発（ストレプトゾトシン）糖尿病モデルにおいて、本明細書に記載した結果は、胃内容排出、幽門筋の非アドレナリン非コリン弛緩の欠如を示し、これは神経の酸化窒素シンターゼ遺伝子（ｎＮＯＳ）の欠失を有するマウスにおける欠如と類似する。糖尿病マウスは、幽門のｎＮＯＳタンパク質およびｍＲＮＡに顕著な減少を示す。糖尿病マウスにおけるｎＮＯＳの減少は、腸管筋神経の喪失が原因ではない。ｎＮＯＳ発現および幽門機能は、インスリン処置によって正常レベルまで回復する。このように、マウスにおける糖尿病性胃疾患は、ｎＮＯＳのインスリン感受性の可逆的喪失の表れである。糖尿病動物において、胃内容排出の遅延は、ホスホジエステラーゼ阻害剤であるシルデナフィルによって逆転させることができる。本発明は、重要な治療的用途を有し、糖尿病性胃疾患の病因の解明を促進すると考えられる。
【０２０１】
以下の特定の参考文献は、同様に参照として本明細書に組み入れられ、括弧内の数字によって上記の実施例および考察において示される。
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【０２０２】
本発明は、その好ましい態様を参照して詳細に説明してきた。しかし、当業者は、本開示を検討することによって、修正および改善を行ってもよく、それらも本発明の趣旨および範囲に含まれると認識されると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ〜Ｄ】ｎＮＯＳ−／−マウスが、胃内容排出の遅延およびＮＯ依存的な非アドレナリン、非コリン作動性（ＮＡＮＣ）弛緩の喪失を有することを示すグラフである。
【図２】Ａ〜ＣおよびＥは、糖尿病マウスが、高脂血症および胃の肥大によらない胃内容排出の遅延を有することを示すグラフである。Ｄは、様々な野生型および（非肥満糖尿病）ＮＯＤ変異体の胃を示す写真である。
【図３Ａおよび３Ｂ】糖尿病マウスの幽門はＮＯが媒介するＮＡＮＣ弛緩を欠損すること、およびインスリン処置による逆転を示すグラフである。
【図４】Ａは、幽門腸管筋神経におけるｎＮＯＳタンパク質発現が、糖尿病マウスにおいて枯渇していることを示す顕微鏡写真を示す。Ｂは、図４Ａに示すデータの定量を示すグラフである。
【図５】Ａは、幽門腸管筋神経におけるｎＮＯＳ ｍＲＮＡ発現が、糖尿病マウスにおいて枯渇していることを示す顕微鏡写真を示す。Ｂは、図５Ａに示したデータの定量を示すグラフである。
【図６】ｎＮＯＳタンパク質がＮＯＤマウスの腸全体において枯渇しており、インスリンによって逆転されることを示す、ウェスタンイムノブロットを示す。
【図７】糖尿病マウスの幽門が、神経を喪失することなくｎＮＯＳ発現を喪失することを示すグラフである。
【図８】５型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ５）の阻害が、糖尿病マウスにおいて胃内容排出の遅延を逆転させることを示すグラフである。
【図９Ａおよび９Ｂ】インスリン処置が胃内容排出の遅延を逆転させることを示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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