(57)【要約】本発明により、ラパマイシンなどのｍＴＯＲインヒビター、およびゲムシタビンもしくはフルオロウラシルなどの代謝拮抗性抗腫瘍剤の組み合わせの、腫瘍の治療における使用が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍の治療を要する哺乳動物における腫瘍の治療法であって、該哺乳動物に、ｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤から成る組み合わせの有効量を提供することを含む方法。
【請求項２】
ｍＴＯＲインヒビター、代謝拮抗物質のいずれかまたは両方を治療量以下の有効量で提供する、請求項１記載の腫瘍治療法。
【請求項３】
ｍＴＯＲインヒビターを治療量以下の有効量で提供する、請求項２記載の方法。
【請求項４】
代謝拮抗物質を治療量以下の有効量で提供する、請求項２または請求項３記載の方法。
【請求項５】
腫瘍が、腎臓癌、柔組織癌、乳癌、肺の神経内分泌腫瘍、子宮頚癌、膀胱癌、頭部ならびに頚部癌、神経膠腫、非小肺細胞癌、前立腺癌、膵臓癌、リンパ腫、黒色腫、小細胞肺癌、卵巣癌、結腸癌、食道癌、胃癌、白血病、結腸直腸癌、および未知の一次癌の一つである、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
組み合わせが生化学的変更剤をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
生化学的変更剤がロイコボリンまたはレボホリネートである、請求項６記載の方法。
【請求項８】
代謝拮抗物質がゲムシタビンである、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
腫瘍が膵臓癌である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
代謝拮抗物質が５−フルオロウラシルである、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
組み合わせが生化学的変更剤をさらに含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物に、ｍＴＯＲインヒビター、５−フルオロウラシル、およびロイコボリンの組み合わせの有効量を提供することを含む、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍が結腸直腸癌である、請求項１０〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
ｍＴＯＲインヒビターがラパマイシンである、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
ラパマイシンがラパマイシンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
ラパマイシンが４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
ラパマイシンが３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステルである、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
ｍＴＯＲインヒビターと代謝拮抗性抗腫瘍剤の有効量を含む、抗腫瘍組み合わせ。
【請求項１９】
生化学的変更剤をさらに含む、請求項１８記載の組み合わせ。
【請求項２０】
ｍＴＯＲインヒビターがラパマイシンである、請求項１９記載の組み合わせ。
【請求項２１】
ラパマイシンがラパマイシンである、請求項１９記載の組み合わせ。
【請求項２２】
ラパマイシンが４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、請求項１９記載の組み合わせ。
【請求項２３】
ラパマイシンが３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステルである、請求項１９記載の組み合わせ。
【請求項２４】
哺乳動物における腫瘍の治療における、同時、別個、または連続使用のための組み合わせ製剤としての、ｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤を含む製品。
【請求項２５】
生化学的変更剤をさらに含む、請求項２４記載の製品。
【請求項２６】
腫瘍が、腎臓癌、柔組織癌、乳癌、肺の神経内分泌腫瘍、子宮頚癌、膀胱癌、頭部ならびに頚部癌、神経膠腫、非小肺細胞癌、前立腺癌、膵臓癌、リンパ腫、黒色腫、小細胞肺癌、卵巣癌、結腸癌、食道癌、胃癌、白血病、結腸直腸癌、および未知の一次癌の一つである、請求項２４または請求項２５記載の製品。
【請求項２７】
ｍＴＯＲインヒビターがラパマイシンである、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の製品。
【請求項２８】
ラパマイシンがラパマイシンである、請求項２７記載の製品。
【請求項２９】
ラパマイシンが４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、請求項２７記載の製品。
【請求項３０】
ラパマイシンが３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステルである、請求項２７記載の製品。
【請求項３１】
代謝拮抗物質がゲムシタビンまたは５−フルオロウラシルである、請求項２４〜３０のいずれか１項記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍コンビネーション、より詳細には、ｍＴＯＲインヒビター（例えば、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステル（ＣＣＩ−７７９））および代謝拮抗性抗腫瘍剤の組み合わせの、腫瘍の治療における使用に関する。
【０００２】
発明の背景
ラパマイシンは、特にカンジダ・アルビカンス(Candida albicans)に対する抗菌活性を有することがインビトロおよびインビボで見出されている[C. Vezina et al., J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H. A. Baker et al., J. Antibiot. 31, 539(1978); U.S. 特許 3, 929,992号およびU.S. 特許3,993,749号]、ストレプトマイセス・ヒグロスコピカス(Streptomyces hygroscopicus)により産生される大環状トリエン抗生物質である。さらに、ラパマイシン単独(U.S.特許第4,885,171号）またはピシバニルとの組み合わせ(U.S.特許第4,401,653号）が抗腫瘍活性を有することが示されている。
【０００３】
ラパマイシンの免疫抑制作用が、FASEB 3, 3411 (1989)に開示されている。シクロスポリンＡとＦＫ−５０６、他の大環状分子も免疫抑制剤として有効であり、それゆえ移植拒絶の予防に有用であることが示されている[FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R. Y. Calne et al., Lancet 1183 (1978); およびU.S.特許5,100,899号]。R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48(1977)]は、ラパマイシンが、多発性硬化症のモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルに、リウマチ性関節炎のモデルであるアジュバント関節炎のモデルに有効であり、ＩｇＥ−様抗体の形成を効果的に阻害することを開示する。
【０００４】
ラパマイシンはさらに、全身性エリテマトーデス[U.S.特許第5,078,999号]、肺炎[U.S.特許第5,080,899号]、インシュリン依存性真性糖尿病[U.S.特許第5,321,009号]、乾癬などの皮膚疾患[U.S.特許第5,286,730号]、内臓疾患[U.S.特許第5,286,731号]、平滑筋細胞増殖および血管傷害後の脈管内膜肥厚[U.S.特許第5,288,711号および5,516,781号]、成人Ｔ−細胞白血病／リンパ腫[ヨーロッパ特許出願第525,960A1号]、眼の炎症[U.S.特許第5,387,589号]、悪性癌[U.S.特許第5,206,018号]、心臓炎症疾患[U.S.特許5,496,832号]、および貧血[U.S.特許5,561,138号]を予防または治療するのに有用である。
【０００５】
３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステル（ＣＣＩ−７７９）は、インビトロおよびインビボモデルの両方で腫瘍増殖においてかなりの阻害効果を示しているラパマイシンのエステルである。ＣＣＩ−７７９を含むラパマイシンのヒドロキシエステルの調製および使用が、U.S.特許第5,362,718号に開示されている。
【０００６】
ＣＣＩ−７７９は、細胞毒性に対するものとしての、細胞増殖抑制性を示し、腫瘍進行までの時間および腫瘍再発までの時間を遅延し得る。ＣＣＩ−７７９は、シロリマス(sirolimus)のものと同様の活性メカニズムを有すると考えられている。ＣＣＩ−７７９は、細胞質タンパク質ＦＫＢＰと結合して、それと複合体を形成し、これは酵素ｍＴＯＲ（ＦＫＢＰ１２−ラパマイシン結合タンパク質[ＦＲＡＰ]としても知られる、哺乳動物のラパマイシンのターゲット）を阻害する。ｍＴＯＲのキナーゼ活性の阻害により、サイトカイン刺激性細胞増殖、細胞周期のＧ１相を調節するいくつかの重要なタンパク質のｍＲＮＡの翻訳、およびＩＬ−２−誘導性の転写を含む種々のシグナル伝達経路が阻害され、Ｇ１からＳ相への細胞周期の進行が阻害されるに至る。ＣＣＩ−７７９の活性のＧ１からＳ相のブロックを生じるメカニズムは、抗癌薬に関しては新規である。
【０００７】
インビトロで、ＣＣＩ−７７９は多くの組織学的に多様な腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている。中枢神経系（ＣＮＳ）癌、白血病（Ｔ−細胞）、乳癌、前立腺癌、および黒色腫系統が、ＣＣＩ−７７９に最も感受性があった。化合物は、細胞周期のＧ１相で細胞を停止した。
【０００８】
ヌードマウスにおけるインビボ試験により、ＣＣＩ−７７９が種々の組織学的タイプのヒト腫瘍異種移植片に対して活性を有することが立証されている。神経膠腫は特にＣＣＩ−７７９に感受性があり、化合物はヌードマウスにおける同所神経膠腫モデルにおいて活性があった。インビトロでのヒト神経膠芽細胞腫細胞系統の成長因子（血しょう板由来の）−誘導性の刺激が、ＣＣＩ−７７９により明らかに抑制された。ヌードマウスにおけるいくつかのヒト膵臓腫瘍ならびにインビボで試験された２つの乳癌系統の１つの増殖も、ＣＣＩ−７７９により阻害された。
【０００９】
発明の記載
本発明により、ｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤の組み合わせの、抗腫瘍組み合わせ化学療法としての使用が提供される。特に、これらの組み合わせは、腎臓癌、柔組織癌、乳癌、肺の神経内分泌腫瘍、子宮頚癌、膀胱癌、頭部ならびに頚部癌、神経膠腫、非小肺細胞癌、前立腺癌、膵臓癌、リンパ腫、黒色腫、小細胞肺癌、卵巣癌、結腸癌、食道癌、胃癌、白血病、結腸直腸癌、および未知の一次癌の治療に有用である。本発明によりさらに、抗腫瘍組み合わせ化学療法としての使用のためのｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤の組み合わせであって、ｍＴＯＲインヒビターまたは代謝拮抗性抗腫瘍剤のいずれかまたは両方の投与量を治療量以下の有効投与量で用いるものが提供される。
【００１０】
本発明に従い用いられる、「治療」なる用語は、腫瘍疾患を有する哺乳動物を、当該哺乳動物に有効量のｍＴＯＲおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤の組み合わせを、そのような哺乳動物において腫瘍の増殖を阻害する、腫瘍を撲滅する、または哺乳動物を軽減する目的で提供することにより治療することを意味する。
【００１１】
本発明に従い用いられる、組み合わせを提供することに関して「提供する」なる用語は、組み合わせを直接投与すること、または体内で組み合わせの有効量を形成する組み合わせの成分の一つまたは両方のプロドラッグ、誘導体、または類似体を投与することのいずれかを意味する。
【００１２】
ｍＴＯＲは、ラパマイシンの哺乳動物の標的であり、ＦＫＢＰ１２−ラパマイシン結合タンパク質[ＦＲＡＰ]としても知られる。ｍＴＯＲのキナーゼ活性の阻害により、サイトカイン刺激性細胞増殖、細胞周期のＧ１相を調節するいくつかの重要なタンパク質のｍＲＮＡの翻訳、およびＩＬ−２−誘導性の転写を含むいくつかのシグナル伝達経路が阻害され、Ｇ１からＳへの細胞周期の進行が阻害される。
【００１３】
ｍＴＯＲは、特定の細胞周期調節タンパク質の翻訳に関与する少なくとも２つのタンパク質の活性を調節する(Burnett,P.E., PNAS 95: 1432 (1998) および Isotani, S., J. Biol. Chem. 274: 33493 (1999))。これらのタンパク質ｐ７０ｓ６キナーゼの一つは、セリン３８９ならびにトレオニン４１２においてｍＴＯＲによりリン酸化される。このリン酸化は、成長因子で処置した細胞において、これらの細胞の全細胞抽出物の、リン酸セリン３８９残基に特異的な抗体を用いるウェスタンブロッティングにより観察することができる。
【００１４】
本発明に従い用いられる、「ｍＴＯＲインヒビター」は、ｍＴＯＲによるｐ７０ｓ６キナーゼのセリン３８９のリン酸化を阻害することによってＧ１からＳへの細胞周期の進行を遮断することにより細胞の複製を阻害する化合物またはリガンドを意味する。
【００１５】
以下の標準的な薬理学的試験を用いて、化合物が本明細書中に定義するようなｍＴＯＲインヒビターであるかどうかを決定した。成長因子で刺激した細胞の、ラパマイシンなどのｍＴＯＲインヒビターでの処置により、ウェスタンブロットにより明らかにされるように、セリン３８９のリン酸化が完全にブロックされ、それ自体でｍＴＯＲ阻害に関する優れたアッセイである。つまり、ｍＴＯＲインヒビターの存在下の成長因子（たとえば、ＩＧＦ１）刺激培養細胞からの全細胞溶解物は、アクリルアミドゲル上に、ｐ７０ｓ６Ｋのセリン３８９に特異的な抗体で標識され得るバンドを示さない。
【００１６】
2004525950.tif 000002
【００１７】
方法：
Ａ．細胞溶解物の調製
細胞を、１０％の牛胎児血清およびペニシリン／トレプトマイシンを追加した最適基本培地にて増殖させた。リン酸化試験のために、細胞を６ウェルのプレート中で二次培養した。細胞を完全に付着させた後、それらをいずれも血清飢餓とした。ｍＴＯＲインヒビターでの処置は、２〜１６時間に及んだ。薬物処置後、細胞をＰＢＳ（Ｍｇ＋＋およびＣａ＋＋を含まないリン酸緩衝塩水）で一回すすぎ、次いで、ウェル当たり１５０−２００μｌのNuPAGE LDSサンプルバッファー中で溶解した。溶解物を短時間超音波処理し、次いで１４０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離した。溶解物は、−８０℃にて使用まで保存した。
【００１８】
試験法は、細胞を、それらを完全に付着させた後、増殖培地中で一晩インキュベートすることによっても行うことができる。
Ｂ.ウェスタンブロット分析
１）チューブ当たり２２．５μｌの溶解物を入れてトータルタンパク質サンプルを調製し、次いで２．５μｌのNuPAGEサンプル還元試薬を追加する。サンプルを７０℃にて１０分間加熱する。NuPAGEゲルおよびNuPAGE SDSバッファーを用いて電気泳動にかける。
２）ゲルをニトロセルロース膜に、NuPAGEトランスファーバッファーを用いて移す。膜を１時間ブロッキングバッファー（０．１％−トウィーンおよび５％脂肪不含ミルクを含むトリス緩衝塩水）でブロックする。膜を２回、ウォッシングバッファー（０．１％−トウィーン含有トリス緩衝塩水）でリンスする。
【００１９】
３）ブロット／膜を、Ｐ−ｐ７０ Ｓ６Ｋ（Ｔ３８９）一次抗体（１：１０００）と共に、ブロッキングバッファー中で一晩４℃にて回転プロットフォームにてインキュベートする。
４）ブロットを３回それぞれ１０分間ウォッシングバッファーでリンスし、次いで二次抗体（１：２０００）と共にブロッキングバッファー中で１時間室温にてインキュベートする。
５）二次抗体結合後、ブロットを３回それぞれ１０分間、ウォッシングバッファーで洗浄し、次いで２回それぞれ１分間トリス−緩衝塩水で洗浄した後、化学ルミネセント（ＥＣＬ）検出を行い、次いで化学ルミネセンスフィルムに暴露する。
【００２０】
本発明に従い用いられるように、「ラパマイシン」なる用語は、基本のラパマイシン環（以下に示す）を含む免疫抑制化合物のクラスを意味する。本発明のラパマイシンは、ラパマイシン環の誘導体など、化学的もしくは生物学的に変更されていてよいが免疫抑制性は保持し得る化合物を含む。従って、「ラパマイシン」なる用語には、ラパマイシンのエステル、エーテル、オキシム、ヒドラゾン、およびヒドロキシルアミン、ならびにラパマイシン環の官能基が例えば還元または酸化により変更されたラパマイシンが含まれる。「ラパマイシン」なる用語はさらに、ラパマイシンの医薬上許容される塩であって、酸性または塩基性基のいずれかを含んでいるがためにそのような塩を形成することができるものも含まれる。
【００２１】
【化１】
2004525950.tif 000003
【００２２】
ラパマイシンのエステルおよびエーテルは、ラパマイシン環の４２−および／または３１−位におけるヒドロキシン基のもの、２７−位のヒドロキシル基（２７−ケトンの化学的還元後）のエステルおよびエーテルであること、およびオキシム、ヒドラゾン、およびヒドロキシルアミンは、ラパマイシン環の４２−位のケトン（４２−ヒドロキシル基の酸化後）のもの、および２７−ケトンのものであることが好ましい。
【００２３】
ラパマイシンの好ましい４２−および／または３１−エステルは、本明細書中に出典明示により全て組み込む以下の特許文献に開示されている：アルキルエステル(U.S.特許第4,316,885号);アミノアルキルエステル(U.S.特許第4,650,803号);フッ素化エステル(U.S.特許第5,100,883号);アミドエステル(U.S.特許第5,118,677号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,118,678号);シリルエーテル(U.S.特許第5,120,842号);アミノエステル(U.S.特許第5,130,307号); アセタール(U.S.特許第5,51,413号);アミノジエステル(U.S.特許第5,162,333号);スルホネートおよびスルフェートエステル(U.S.特許第5,177,203号);エステル(U.S.特許第5,221,670号);アルコキシエステル(U.S.特許第5,233,036号);Ｏ−アリール、−アルキル、−アルケニル、および−アルキニルエーテル(U.S.特許第5,258,389号);カルボネートエステル(U.S.特許第5,260,300号);アリールカルボニルおよびアルコキシカルボニルカルバメート(U.S.特許第5,262,423号);カルバメート(U.S.特許第5,302,584号);ヒドロキシエステル(U.S.特許第5,362,718号);障害の大きな(hindered)エステル(U.S.特許第5,385,908号);ヘテロ環エステル(U.S.特許第5,385,909号);ジェム−二置換エステル(U.S.特許第5,385,910号);アミノアルカノイックエステル(U.S.特許第5,389,639号);ホスホリルカルバメートエステル(U.S.特許第5,391,730号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,411,967号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,434,260号);アミジノカルバメートエステル(U.S.特許第5,463,048号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,480,988号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,480,989号);カルバメートエステル(U.S.特許第5,489,680号);;障害の大きなＮ−オキシドエステル(U.S.特許第5,491,231号);ビオチンエステル(U.S.特許第5,504,091号)、Ｏ−アルキルエーテル(U.S.特許第5,665,772号);およびラパマイシンのＰＥＧエステル(U.S.特許第5,780,462号)。これらのエステルおよびエーテルの調製が、前記の特許文献に開示されている。
【００２４】
ラパマイシンの好ましい２７−エステルおよびエーテルが、本明細書中に出典明示により組み込むU.S.特許第5,256,790号に開示されている。これらのエステルおよびエーテルの調製が、前記の特許文献に開示されている。
ラパマイシンの好ましいオキシム、ヒドラゾン、およびヒドロキシルアミンが、本明細書中に出典明示により組み込むU.S.特許第5,373,014号、5,378,836号、5,023,264号および5,563,145号に開示されている。これらのオキシム、ヒドラゾン、およびヒドロキシルアミンの調製が、前記特許文献に開示されている。４２−オキソラパマイシンの調製が、本明細書中に出典明示により組み込む5,023,263号に開示されている。
【００２５】
特に好ましいラパマイシンには、ラパマイシン[U.S.特許第3,929,992号]、ＣＣＩ−７７９[３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２エステル; U.S.特許第5,362,718号]、および４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン[U.S.特許第5,665,772号]が含まれる。
【００２６】
適切な場合、ラパマイシンの医薬上許容される塩は、ラパマイシンが適当な塩基性基を含む場合、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩化水素酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸、およびに同様に公知の許容される酸などの有機および無機酸から形成することができる。塩は、ラパマイシンが適当な酸性基を含む場合、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム、リチウム、またはカリウム）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるアルキルアンモニウム塩、または各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるジアルキルアンモニウム塩、および各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるトリアルキルアンモニウム塩などの、有機および無機塩基から形成されてもよい。
【００２７】
本発明の抗腫瘍コンビネーションに用いられるｍＴＯＲインヒビターはラパマイシンであることが好ましく、ｍＴＯＲインヒビターがラパマイシン、ＣＣＩ−７７９、または４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンであることがより好ましい。
【００２８】
本明細書中に記載するように、ＣＣＩ−７７９は、本発明のｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗物質の組み合わせにおける典型的なｍＴＯＲインヒビターとして評価された。
ＣＣＩ−７７９の調製は、本明細書中に出典明示により組み込むU.S.特許第5,362,718号に記載されている。ＣＣＩ−７７９を抗腫瘍剤として用いる場合、最初の静脈内注射投与量は、毎日投与管理において投与される場合（毎日５日間、２−３週ごと）約０．１〜１００ｍｇ／ｍ２であり、および週１回の投与管理で投与される場合、約０．１〜１０００ｍｇ／ｍ２であることが計画される。経口または静脈内注入が好ましい投与経路であり、静脈内がより好ましい。
【００２９】
本発明に従い用いられる、「代謝拮抗物質」なる用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの合成に至る生化学的経路における重要な天然中間体（代謝産物）に構造上類似する物質であって、宿主によりその経路において用いられるが、その経路の完了（即ち、ＤＮＡまたはＲＮＡの合成）を阻害するのに作用する物質を意味する。より詳しくは、代謝拮抗物質は、典型的には、（１）ＤＮＡまたはＲＮＡ合成における重要酵素の触媒または調節部位に関して代謝産物と競争することにより、または（２）ＤＮＡまたはＲＮＡに通常組み込まれる代謝産物を置換し、それにより、複製を維持することができないＤＮＡまたはＲＮＡを産生することにより典型的には機能する。代謝拮抗物質の主要なカテゴリーには、（１）ジヒドロホレート−トレダクターゼ（ＤＨＦＲ）のインヒビターである葉酸類似体；（２）天然プリン（アデニンまたはグアニン）を擬似するが構造的に異なっており、その結果ＤＮＡまたはＲＮＡの核プロセシングを競争的もしくは不可逆的に阻害するプリン類似体；および（３）天然ピリミジン（システイン、チミジン、およびウラシル）を擬似するが構造的に異なっており、その結果ＤＮＡまたはＲＮＡの核プロセシングを競争的もしくは不可逆的に阻害するピリミジン類似体が含まれる。
【００３０】
以下は、本発明の代謝拮抗物質の典型例である。
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ；５−フルオロ−２,４（１Ｈ,３Ｈ）−ピリミジンジオン）は、局所クリーム(FLUOROPLEXまたはEFUDEX)、局所溶液(FLUOROPLEXまたはEFUDEX)にて、および５０mg/mL５−フルオロウラシル(ADRUCILまたはフルオロウラシル）を含む注射可能物質として市場入手可能である。
【００３１】
フロックスウラジン(２’−デオキシ−５−フルオロウリジン）は、５００ｍｇ／バイアルのフロックスウラジン（FUDRまたはフロックスウラジン）を含む注射可能物質として市場入手可能である。
チオグアニン（２−アミノ−１,７−ジヒドロ−６−Ｈ−プリン−６−チオン）は、４０ｍｇの経口錠剤（チオグアニン）にて市場入手可能である。
【００３２】
シタラビン（４−アミノ−１−（ベータ）−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、１０ｍｇ／ｍＬのシタラビン（DEPOCYT)を含むリポソーム注射可能物質として、または１ｍｇ−１ｇ／バイアルまたは２０ｍｇ／ｍＬ(シタラビンまたはCYTOSAR-U)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
フルダラビン（９−Ｈ−プリン−６−アミン,２−フルオロ−９−（５−Ｏ−ホスホノ−（ベータ）−Ｄ−アラビノ−フラノシル）は、５０ｍｇ／バイアル（FLUDARA)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
【００３３】
６−メルカプトプリン（１,７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン）は、５０ｍｇの経口錠剤（PURINTHOL)にて市場入手可能である。
メトトレキサート(ＭＴＸ;Ｎ−[４−[[（２,４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル]メチルアミノ]−ベンゾイル]−Ｌ−グルタミン酸）は、２．５−２５ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ−１ｇ／バイアル（メトトレキセートナトリウムまたはFOLEX)を含む液体注射可能物質として、および２．５ｍｇの経口錠剤（ナトリウムメトトレキサート）にて市場入手可能である。
【００３４】
ゲムシタビン（２’−デオキシ−２’,２’−ジフルオロシチジンモノヒドロクロライド（（ベータ）−異性体）は、２００ｍｇ−１ｇ／バイアル（GEMZAR)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
カペシタビン（５’−デオキシ−５−フルオロ−Ｎ−[（ペンチルオキシ）カルボニル]−シチジン）は、１５０または５００ｍｇの経口錠剤（XELODA)として市場入手可能である。
【００３５】
ペントスタチン（（Ｒ）−３−（２−デオキシ−（ベータ）−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル）−３,６,７,８−テトラ−ヒドロイミダゾ[４,５−ｄ][１,３]ジアゼピン−８−オール）は、１０ｍｇ／バイアル（NIPENT)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
トリメトレキサート（２,４−ジアミノ−５−メチル−６−[（３,４,５−トリメトキシアニリノ）メチル]−キナゾリンモノ−Ｄ−グルクロネート）は、２５−２００ｍｇ／バイアル（NEUTREXIN)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
クラドリビン（２−クロロ−６−アミノ−９−（２−デオキシ−（ベータ）−Ｄ−エリトロペント−フラノシル）−プリン）は、１ｍｇ／ｍＬ(LEUSTATIN)を含む液体注射可能物質として市場入手可能である。
以下の表は、前記代謝拮抗物質の推奨投与量のいくつかを簡単にまとめたものである。
【００３６】
【表１】
2004525950.tif 000004
【００３７】
【表２】
2004525950.tif 000005
【００３８】
本発明は、生化学的変更剤が化学治療管理の部分である、ｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗物質の使用をも包含する。「生化学的変更剤」なる用語は、その抗腫瘍活性を強化するのに、ならびに代謝拮抗物質の副作用を打ち消すのに役立つ代謝拮抗療法に対する補助として付与される薬剤として、当該分野の専門家には周知であり、理解されている。ロイコボリンおよびレボホリネートが、メトトレキサートおよび５−ＦＵセラピーに対する生化学的変更剤として典型的に用いられる。
【００３９】
ロイコボリン（５−ホルミル−５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸）は、５−１０ｍｇ／ｍＬまたは５０−３５０ｍｇ／バイアル（ロイコボリンカルシウムまたはWELLCOVORIN)を含む注射可能物質として、および５−２５ｍｇの経口錠剤（ロイコボリンカルシウム）として市場入手可能である。
レボホリネート（５−ホルミルテトラヒドロ葉酸の薬理学的に活性な異性体）は、２５−７５ｍｇのレボホリネート（ISOVORIN)を含む注射可能物質として、または２．５−７．５ｍｇ経口錠剤(ISOVORIN)として市場入手可能である。
【００４０】
本発明の好ましいｍＴＯＲインヒビター＋代謝拮抗物質の組み合わせは、ＣＣＩ−７７９＋ゲミシタビン；ＣＣＩ−７７９＋５−フルオロウラシル；およびＣＣＩ−７７９＋５−フルオロウラシル＋ロイコボリンを含む。ＣＣＩ−７７９＋ゲミシタビンの組み合わせは膵臓癌を治療するのに用いられ、およびＣＣＩ−７７９＋５−フルオロウラシルの組みあわせ（ロイコボリンを含むまたは含まない）は、結腸直腸癌を治療するのに用いられることが好ましい。
【００４１】
ＣＣＩ−７７９＋代謝拮抗物質の組み合わせの抗腫瘍活性は、本発明の典型的な組み合わせとしてＣＣＩ−７７９＋ゲムシタビン；およびＣＣＩ−７７９＋５−フルオロウラシルの組み合わせを用いるインビトロおよびインビボ標準薬理学的試験法にて確認した。用いた方法および得られた結果を以下に簡単に記載する。
【００４２】
ヒト横紋筋肉腫系統Ｒｈ３０およびＲｈ１およびヒト神経膠芽細胞腫系統ＳＪ−ＧＢＭ２を、ＣＣＩ−７７９および代謝拮抗物質剤を用いるインビトロ組み合わせ試験に用いた。インビトロ試験は、ヒト神経芽細胞腫（ＮＢ１６４３）およびヒト結腸系統ＧＣ３を用いた。
【００４３】
投与反応曲線を、目的の薬物のそれぞれに関して決定した。細胞系統Ｒｈ３０、Ｒｈ１およびＳＪ−Ｇ２を、６−ウェルクラスタープレートに、６×１０３、５×１０３、および２．５×１０４細胞／ウェルでそれぞれ蒔いた。２４時間のインキュベーション期間後、およ薬物を、それぞれＲｈ３０およびＲｈ１に関しては１０％ＦＢＳ＋ＲＰＭＩ１６４０中、およびＳＪ−Ｇ２に関しては１５％ＦＢＳ＋ＤＭＥ中にて添加した。培地を含む薬物に数日間暴露した後、細胞を低調液で、次いで洗浄剤で処理することにより核を放出した。核を次いでコールターカウンターでカウントした。実験の結果をグラフに示し、各薬物のＩＣ５０（増殖の５０％阻害を生じる薬物濃度）を外挿法により決定した。ＩＣ５０は実験間でわずかに変化したので、各薬物のＩＣ５０をまとめた２つの値を相互作用試験に用いた。２つの薬物間の最大の相互作用のポイントは、イソボールが通常の形である場合、薬物が１：１比で存在する場合に生じる。それゆえ３つの概算ＩＣ５０濃度のＣＣＩ−７７９のそれぞれを、３つの概算ＩＣ５０濃度のゲミシタビンまたは５−ＦＵのそれぞれと１：１の比で混合した。これより結果的に、９つの、各実験の薬物＋３つのＩＣ５０濃度のＣＣＩ−７７９ならびに他の薬物の１：１の組み合わせを生じた。このプロトコルより通例により、ＩＣ５０値を含んでいる各薬物に関して少なくとも１つの組み合わせを得た。ＩＣ５０濃度のＣＣＩ−７７９および各化学治療薬の１：１の組み合わせを次いで用いて、混和性(additivity)、共同作用性(synergism)、またはアンタゴニズムを、Berenbaumの式：ｘ／Ｘ５０＋ｙ／Ｙ５０,＝１、＜１、＞１を用いて算定した。単独で試験した３つの濃度のＣＣＩ−７７９が、単独で試験した他の化合物の３つのＩＣのいずれとも適合するＩＣを生じなかった場合、全１：１組み合わせを検査して、単独に試験した薬物の適当なＩＣの範囲内にそれらのＩＣが入るかどうかを確認した。それらがそのＩＣに入った場合、効果は有効であると見なした。
【００４４】
インビトロ標準薬理学的試験法にて得られた結果は、組み合わせが増殖の５０％未満の阻害を生じることはなかったことを示し、組み合わせが少なくとも相加的であり、アンタゴニズムの形跡はなかったことを示す。
【００４５】
雌のＣＢＡ／ＣａＪマウス(Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME)、４週齢を胸腺摘出により免疫除去し、３週間後、１３７Ｃ源を用いて全身照射（１２００ｃＧｙ）を施した。マウスに３×１０６個の核形成させた骨髄細胞を、照射の６−８時間以内に与えた。約３ｍｍ３の腫瘍片をマウスの背面横腹の間隔に植え付け、腫瘍増殖を開始させた。腫瘍を有するマウスを、治療を開始する前に７群に無作為に分けた。腫瘍が約０．２０−１ｃｍの直径になったとき、腫瘍を有するマウスにそれぞれ薬物を与えた。腫瘍サイズをコンピューターと連結したディジタルVernierキャリパーを用いて７日間隔で測定した。腫瘍の体積を、腫瘍が球形であるとみなして、式[（π／６）×ｄ３]（式中、ｄは平均直径である）を用いて算定した。ＣＣＩ−７７９を、５連日２週間のスケジュールで、このサイクルを２１日ごとに３サイクル繰り返して与えた。これにより、結果的にＣＣＩ−７７９は、１−５日、８−１２日（サイクル１）；２１−２５日、２８−３２日（サイクル２）；および４２−４６日、４９−５３日（サイクル３）にて与えた。各試験に関する他の化学治療薬のスケジュールは次のようであった：ゲムシタビン１、４、８日目１サイクルのみ。
【００４６】
ＣＣＩ−７７９およびゲムシタビンの組み合わせを、ヒト結腸（ＧＣ）マウス異種移植片試験法にて評価した。この試験法では、ＣＣＩ−７７９を毎日×５、２連続週２１日ごと３サイクルにて与え、ゲムシタビンを１、４、および８日にて第一サイクルのみで与えた。ＣＣＩ−７７９の存在はゲムシタビン処置での第一サイクルにて認められる腫瘍の軽減の程度を増さなかった。しかし、ＣＣＩ−７７９にて処置した群は、オリジナルな前処置腫瘍体積の２−３倍（対ゲムシタビン単独）に達するのに必要な時間を遅延し、組み合わせ処置から少なくとも相加的な利点が誘導されることを示した。
【００４７】
これらの標準的薬理学的試験法の結果に基き、ｍＴＯＲインヒビター＋代謝拮抗物質化学治療薬の組み合わせは、抗腫瘍セラピーとして有用である。より詳細には、これらの組み合わせは、腎臓癌、柔組織癌、乳癌、肺の神経内分泌腫瘍、子宮頚癌、膀胱癌、頭部ならびに頚部癌、神経膠腫、非小肺細胞癌、前立腺癌、膵臓癌、リンパ腫、黒色腫、小細胞肺癌、卵巣癌、結腸癌、食道癌、胃癌、白血病、結腸直腸癌、および未知の一次癌の治療に有用である。これらの組み合わせは少なくとも２つの活性抗腫瘍薬を含むので、そのような組み合わせの使用により、薬剤のそれぞれの組み合わせの使用であって、薬剤の１または両方を治療量以下の有効投与量で用いる使用も提供され、それにより、個々の化学治療薬に伴う毒性を減じる。
【００４８】
化学治療を提供するに際して、異なる様式の活性を有する複数の試薬が、化学セラピー「カクテル」の部分として典型的に用いられる。本発明の組み合わせを、治療されるべき腫瘍形成の性質により１またはそれ以上の追加的抗腫瘍薬を含んでよい化学セラピーカクテルの部分として用いる。例えば、本発明はさらに、他の化学治療薬、アルキル化剤(例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ストレプタゾイン、メルファラン、クロラムブシル、カルムスチン、メトクロレトアミン(methclorethamine)、ロムスチン、ビサルファン(bisulfan)、チオテパ、イフォファミド、またはシクロホスファミド）；ホルモン剤（例えば、エストラムスチン、タモキシフェン、トレミフェン、アナストロゾール、またはレトロゾール）；抗生物質（例えば、プリカマイシン、ブレオマイシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ダクチノマイシン、ミトマイシン、ドキソルビシン、またはダウノルビシン）；免疫調整剤（例えば、インターフェロン、ＩＬ−２、またはＢＣＧ）；抗有糸分裂剤(例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、テニポシド、またはビノレルビン）；トポイソメラーゼインヒビター（例えば、トポテカン、イリノテカン、またはエトポシド）；および他の薬物（例えば、ヒドロキシウレア、トラスツズマブ、アルトレタミン、レツキシマブ(retuximab)、パクリタキセル、ドセタキセル、Ｌ−アスパラギナーゼ、またはゲムツズマブオゾガミシン）などと組み合わせて用いられるｍＴＯＲインヒビター／代謝拮抗物質組み合わせの使用をも包含する。
【００４９】
本発明に用いられるように、組み合わせ管理は同時に与えることができ、または、ｍＴＯＲインヒビターを化学治療のコース中、代謝拮抗物質とは異なる時点で投与する時差をもたせた管理にて与えることができる。この時差は、２つの薬物の投与の間、数分、数時間、数日、数週、またはそれ以上に渡ってよい。それゆえ、組み合わせなる用語は必ずしも同時にまたは単一投与として投与されることを意味せず、成分のそれぞれが所望の治療期間中に投与されることを意味する。薬物は、異なる経路で投与されてもよい。例えば、ｍＴＯＲインヒビター＋代謝拮抗物質の組み合わせにおいて、ｍＴＯＲインヒビターは経口または非経口で投与され、非経口が好ましく、一方、代謝拮抗物質は、非経口、経口または他の許容される手段により投与されてよいことが予想される。ゲムシタビンとのＣＣＩ−７７９コンビネーションに関しては、ゲムシタビンは、非経口投与されることが好ましい。ＣＣＩ−７７９の５−ＦＵおよびロイコボリンとの組み合わせに関しては、５−ＦＵおよびロイコボリンは非経口で投与されることが好ましい。これらのコンビネーションは、毎日、毎週、および月１回でも投与し得る。化学治療管理に関して典型的なように、化学治療のコースは、数週後に反復してよく、および２つの試薬の投与に関して同じ時間間隔を伴ってよく、または患者の反応に基いて調節してよい。
【００５０】
従って、本発明により、哺乳動物における腫瘍の治療における同時、別個、または連続使用のための組み合わせ製剤としての、ｍＴＯＲインヒビターおよび代謝拮抗性抗腫瘍剤を含む製品がさらに提供される。
【００５１】
代表的なＣＣＩ−７７９＋代謝拮抗物質コンビネーションを用いて得られた結果に基き、ｍＴＯＲインヒビターの初期静脈内注入投与量は、約０．１〜１００ｍｇ／ｍ２であるように計画され、約２．５〜７０ｍｇ／ｍ２が好ましい。ｍＴＯＲインヒビターは、典型的には３０分にわたり静脈内にて投与され、１週間に約１回投与されることがさらに好ましい。代謝拮抗物質成分の初期投与量は用いられる成分に依存し、選択される試薬と共に、主治医の経験にまず基く。
【００５２】
ＣＣＩ−７７９＋代謝拮抗物質の組み合わせを用いて得られた結果に基き、ｍＴＯＲインヒビター＋ゲムシタビンの組み合わせに関して、ｍＴＯＲインヒビターの初期静脈内注入投与量は、約０．１〜１００ｍｇ／ｍ２であることが計画され、約２．５〜７０ｍｇ／ｍ２であることが好ましく、およびゲムシタビンの初期静脈内注入投与量は、約４００〜１５００ｍｇ／ｍ２であり、約８００から１０００ｍｇ／ｍ２の間が好ましい。患者は、ｍＴＯＲインヒビターの３０分の静脈内注入を受けることがまず計画され、その後すぐ、または２１日の治療サイクルの１および８日目にゲムシタビンの３０分の静脈内注入を受けることが計画される。１またはそれ以上の治療サイクルの後、得られた結果および認められる副作用に基き、投与量を増減して調整することができる。
【００５３】
得られた結果に基き、ＣＣＩ−７７９を５−ＦＵおよびロイコボリンとの組み合わせに用いる場合、ｍＴＯＲインヒビター＋５ＦＵ＋ロイコボリン管理において、ｍＴＯＲインヒビターの初期静脈内注入投与量は、０．１〜１００ｍｇ／ｍ２であり、約２．５〜７０ｍｇ／ｍ２が好ましく、ロイコボリンの初期静脈内注入投与量は、約５０〜５００ｍｇ／ｍ２であり、約２００ｍｇ／ｍ２が好ましい；および５−ＦＵの初期静脈内注入投与量は約５００〜７５００ｍｇ／ｍ２であり、約１０００〜５０００ｍｇ／ｍ２が好ましい。組み合わせは以下の管理に従い投与することがまず計画される：患者にロイコボリンの１時間の静脈内注入を週１回、各６週の治療サイクル中に与える；ロイコボリンの各投与後すぐ、５−ＦＵを２４時間の継続静脈内中注入として投与する。ｍＴＯＲインヒビターは、サイクル１の８日目に開始投与し、週１回、３０分の静脈内注入として与える。各６週の治療サイクルを、次の６週の治療サイクルを開始する前の１週間の休止の後に続ける。１またはそれ以上の治療サイクルの後、得られた結果および認められる副作用により、投与量を増減して調整することができる。
【００５４】
市場入手可能な代謝拮抗物質に関して、現存の投与製剤を、所望により投与量を分けて、用いることができる。別法として、市場入手可能でないそのような試薬または代謝拮抗物質は、常套の製薬法に従い処方することができる。本発明の活性化合物を含む経口製剤は、錠剤、カプセル、頬面製剤、トローチ、飴剤、および経口液、懸濁液、または溶液を含むいずれかの都合よく用いられる経口製剤を含んでよい。カプセルは、不活性充填剤および／または希釈剤、例えば医薬上許容されるデンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモ、またはタピオカデンプン）、砂糖、人工甘味剤、クリスタリンセルロースおよびミクロクリスタリンセルロースなどの粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガムなどとの活性化合物の混合物を含んでよい。有用な錠剤製剤は、常套の圧縮、湿式造粒または乾燥造粒法により製造されてよく、および制限するものではないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、ミクロクリスタリンセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアガム、キサンタンがム、クエン酸ナトリウム、複合シリカ、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、リン酸２カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプンおよび乾燥砂糖を含む、医薬上許容される希釈剤、結合剤、滑剤、崩壊剤、表面改質剤（界面活性剤を含む）、懸濁もしくは安定剤を用いてよい。好ましい表面改質剤には、非イオン性およびアニオン性表面改質剤が含まれる。表面改質剤の典型的な例には、制限するものではないが、ポロクサマー１８８、塩化ベンズアルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトスチールアルコール、セトマクロゴル乳化ワックス、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化シリコン、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、珪酸マグネシウムアルミニウム、およびトリエタノールアミンが含まれる。本明細書中の経口製剤は、常套の遅延または時間放出製剤を用いて活性化合物の吸収を変化させてよい。経口製剤は、所望のように適当な可溶化剤または乳化剤を含む水または果汁に活性成分を投与することから成ってもよい。
【００５５】
いくつかの場合において、化合物は、エアゾールの形態で気道に直接投与することが望まれ得る。
化合物は、非経口または腹腔内投与されてもよい。遊離塩基または医薬上許容される塩としてのこれらの活性化合物の溶液または懸濁液を、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適当に混合された水中に調製することができる。分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそのオイル中の混合物にて調製することもできる。貯蔵および使用の常套の条件の下、これらの製剤は微生物の増殖を妨げる保存剤を含む。
【００５６】
注射可能使用に適した医薬製剤は、無菌注射可能溶液または懸濁液の即席調製のための無菌水溶液または分散液および無菌粉末を含む。全場合において、製剤は無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動的でなければならない。製造および貯蔵の条件下でそれは安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染活性から保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含む溶媒または分散媒質、適当なその混合物および植物油であり得る。
【００５７】
本開示の目的のために、経皮投与は、体の表面、および上皮ならびに粘膜組織を含む体管の内膜を横切る全投与を含むことが理解される。そのような投与は、本発明の化合物、または医薬許容されるその塩を用いて、ローション、クリーム、泡、パッチ、懸濁液、溶液、および坐薬（直腸および膣内）にて行われてよい。
【００５８】
経皮投与は、活性化合物および活性化合物に対して不活性で、皮膚に対して無毒で、薬物の送達を可能とする、皮膚を経た血流への全身吸収のためのキャリアを含む経皮パッチの使用により達成されてよい。キャリアは、例えば、クリームおよび軟膏、ペースト、ゲル、および閉塞装置などの数個の形態をとってよい。クリームおよび軟膏は、水中油型または油中水型いずれかの粘性の液体または半固体エマルジョンであってよい。活性成分を含むペトロレウムまたは親水性ペトロレウム中に分散された吸収性の粉末から成るペーストも適当であり得る。種々の閉塞装置、必要に応じてキャリアを含む活性成分を含むリザーバーを覆っている半透膜、または活性成分を含んでいるマトリックスなどを用いて、活性成分を血流へと放出してよい。他の閉塞装置が、文献にて公知である。
【００５９】
坐薬製剤は、座薬の融点を変更するためのワックス、およびグリセリンを必要に応じて添加した、ココアバターを含む常套の物質から作製されてよい。水溶性の座薬基剤、種々の分子量のポリエチレングリコールなどを用いてよい。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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