(57)【要約】本発明は、血栓を画像表示及び診断する新規方法並びに核スピントモグラフィーを用いて血栓を表示するための造影剤を製造するための粒子懸濁液の使用に関する。
2004508123.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者にまず粒子状ＭＲ造影剤を投与し、かつ血栓及び／又は境を接する血管壁及び周囲内で造影剤が富化した後に核スピントモグラムを撮影することを特徴とする、血栓を画像表示及び診断する方法。
【請求項２】
粒子状造影剤が超常磁性鉄酸化物粒子（ＳＰＩＯ）を含有する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
超常磁性鉄酸化物粒子が５０ｎｍ未満の平均粒子直径を有する超微細な超常磁性鉄酸化物粒子（ＵＳＰＩＯ）である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
核スピントモグラムをＴ１強調画像として撮影する、請求項１記載の方法。
【請求項５】
核スピントモグラムをＴ２又はＴ２＊強調画像として撮影する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
粒子分散液の、核スピントモグラフィーを用いた血栓を表示するための造影剤を製造するための使用。
【請求項７】
粒子懸濁液が超常磁性鉄酸化物粒子の分散液である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
超常磁性鉄酸化物粒子が５０ｎｍ未満の平均直径を有する超微細な超常磁性鉄酸化物粒子である、請求項７記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、血栓を画像表示及び診断する新規方法並びに核スピントモグラムを用いて血栓を表示するための造影剤を製造するための粒子懸濁液の使用に関する。
【０００２】
血栓は、血管内の血液凝固により動脈又は静脈内で生じる限局性の血液固化である。血栓症、即ち動脈又は静脈の部分的又は完全な閉塞は、貧血症又は器官の組織死（梗塞）を生じる恐れがある。動脈血栓症のための典型的な例は、心臓冠状動脈の血栓（冠状血栓症）である。血栓が血管壁から溶離すると、該血栓は血流で洗い流される。この血栓は、血栓塞栓に従って副次的な細い血管を閉鎖することがある。脳を世話する動脈は、動脈内の血栓塞栓のための典型的な例である。骨盤−及び脚部静脈の極めてしばしばの血栓症は、典型的に肺動脈の血栓塞栓症を生じる。肺動脈血栓塞栓症は、認識するのが困難でありかつしばしば死を招くので、特に恐れられる。
【０００３】
従来、血栓は種々の方法で診断される。最も頻繁に使用される方法は、カテーテルＸ線血管造影法、Ｘ線静脈造影法及び種々の超音波法である。
【０００４】
血管造影法は、ますます核スピントモグラフィー（核スピン血管造影法）により実施され、この場合には血管内の血流が表示される。この方法の１例は、Ｓｉｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌによって Ｆｏｒｔｓｃｈｒ． Ｒｏｅｎｔｇｅｎｓｔｒ． １５６ （１９９２）， ｐ． ５４９−５５４に記載されている。この方法は、血栓を血管内の血流が不足しているエリアとして表示する。血流が緩慢であるか又は不足している小さな静脈内では、エラーの可能性が生じる。このような血管は、結像されない。造影剤を使用した核スピン血管造影法は、血流に依存する方法に対する１つの改良である。このような方法の１例は、Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ． によってＦｏｒｔｓｃｈｒ． Ｒｏｅｎｔｇｅｎｓｔｒ． １７０ （１９９９）， ｐ． ３１６−３２１に記載されている。静脈内注射された造影剤は、血液と混合され、かつ造影剤が混合された血液が分配される血管を選択的に表示する。血栓は、血管内の窪み（充填欠陥）として間接的に視覚可能になる。
【０００５】
Ｘ線静脈造影法の場合には、全ての血管は達成されない。超音波法のうちでは、しばしば使用される方法はデュプレックス・ソノグラフィー（Ｄｕｐｌｅｘ−Ｓｏｎｏｇｒａｐｈｉｅ： ＦＫＤＳ）の方法であり、該方法は、尤も表面の静脈のみを表示しかつ骨盤の領域では機能を発揮しない。これらの全ての診断法は、疑いのない結果をもたらさずかつ誤診を生じることがある。
【０００６】
国際特許出願ＷＯ９８／１６２５６には、キレート化剤とそれに結合されたインテグリン結合する分子からなる造影剤を患者に適用する、核スピントモグラフィーによる血栓の表示方法が提案されている。キレート化剤は、常磁性金属イオン、例えばガドリニウムイオンを錯体化する。
【０００７】
類似した造影剤は、国際特許出願ＷＯ９５／２０６０３に提案されている。これに記載された剤は、それぞれ１つの錯形成剤が結合されたペプチドである。該錯形成剤は、核スピントモグラフィーにおける造影剤として使用するために適当である、放射性ビームを放出することができかつガンマカメラで検出することができるか、又はガドリニウムイオンもしくは別の常磁性金属イオンである金属イオンを錯体化することができる。
【０００８】
これらの特許出願は、尤も造影剤の合成及び最初の試験管内実験を記載しているに過ぎない。該剤の有効性を疑いなく実証することができる生体内実験又は核スピントモグラフは示されていない。従来、このような造影剤は、製薬会社によって開発されておらず又は使用できる造影剤として市販されていない。
【０００９】
従って、更に、動脈及び静脈血栓のための新規の、疑いのないかつ確実な診断法並びにこのような方法のために適当な造影剤に対する必要性が生じる。
【００１０】
従って、本発明の課題は、動脈及び静脈血栓のための新規の診断法並びにこのような方法のために適当な造影剤を見出すことである。
【００１１】
前記課題は、請求項１記載の新規方法並びに請求項６記載の造影剤を製造するための粒子分散液の使用により解決される。
【００１２】
驚異的にも、ＭＲブラッド・プール（ｂｌｏｏｄ ｐｏｏｌ）造影剤、例えば超常磁性鉄酸化物（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ ｉｒｏｎ ｏｘｉｉｄｅ， ＳＰＩＯ）は、特に小さい粒子（ｕｌｔｒａｓｍａｌｌ ｉｒｏｎ ｏｘｉｄｅ， ＵＳＰＩＯ）を有する製剤において動物モデルで実験血栓内に富化されかつ複数の血液半減期の一定の時間インターバル後に核スピントモグラムで視覚可能でありかつ診断で利用可能であることが判明した。該造影剤は、有利に血栓内で、しかししばしばまた境を接する血管壁及び周囲において富化されることが判明した。
【００１３】
従って、本発明による方法では、まず患者に粒子状ＭＲ造影剤を投与し、かつ血栓及び／又は境を接する血管壁及び周囲内での造影剤の富化後（即ち、複数の血液半減期の時間インターバル後）に核スピントモグラムを撮影する。特に良好な表示は、Ｔ１強調核スピントモグラムで達成される。血栓のマクロファージ（食細胞）内の造影剤の細胞内受容後に、Ｔ２強調画像内の効果も発生させることができる。
【００１４】
以下に詳細に記載する実験で使用した超微細な超常磁性鉄酸化物（ＵＳＰＩＯ）は、鉄酸化物コア及びカルボキシデキストランシェルからなる。粒子の平均直径は、有利には５０ｎｍ未満、特に有利には約２５ｎｍである。このような粒子の製造は、例えば特許明細書ＥＰ６５６３６８及びＷＯ９８／０５４３０に記載されている。このような粒子を含有する造影剤は、最近シェリング社（Ｆｉｒｍａ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）によって開発された。
【００１５】
鉄含有造影剤は、例えばＦｅ２００μｍｏｌ／体重ｋｇの用量で使用される。
【００１６】
造影剤が血栓内で富化される複数の血液半減期の待ち時間後に、画像を核スピントモグラフィーで撮影する。血栓は、そうして得られた画像内で明確に視覚可能である。
【００１７】
造影剤が細胞外で富化されると、そのＴ１効果により強い信号でＴ１強調画像で可視化することができる。造影剤が、血栓分解（Ｔｈｒｏｍｂｕｓｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ）の範囲内で規則的に血管壁又は血栓の周辺部へ移行するマクロファージ（食細胞）によって吸収されると、造影剤のＴ２効果が優位になり、それによりマークされた組織は信号不足でＴ２又はＴ２＊強調画像内に現れる。
【００１８】
以下に、２５匹の家ウサギで血栓をカテーテル塞栓形成及びトロンビン注射により外頸静脈内に発生させた動物実験を詳細に記載する。１，３，５，７及び９日後に、Ｔ１ｗ−ＭＰ−ＲＡＧＥ及びＴ２＊ｗ−ＦＬＡＳＨ核スピントモグラムを用いて１．５テスラでＦｅ２００μｍｏｌ／体重ｋｇの用量で超微細な超常磁性鉄酸化物（ＵＳＰＩＯ、粒度約２５ｎｍ）の静脈注射前及び２４時間後に測定した。Ｘ線静脈造影法及びヒストロジーを、基準（ｇｏｌｄｓｔａｎｄａｒｔ）として利用した。Ｔ１ｗ−ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成において視覚可能な血栓の長さを、真の血栓長さに対する比で表した。Ｔ２＊ｗ技術における血栓の構造、信号強度及びコントラスト度合を、規定のスケーリングを有する主観的分析にかけた。発生期間に相応の血栓を有する２５匹のイエウサギを対照として利用した。
【００１９】
この実験は本発明を明らかにするためのものであって、本発明をこれに制限するものではない。
【００２０】
粒子状造影剤の注射後に核スピントモグラフィーにより実験的血栓の検出のための例
材料及び方法
造影剤
超微細な超常磁性鉄酸化物（ＵＳＰＩＯ）の製剤を使用した。該粒子は、全直径２５ｎｍを有する鉄酸化物コアとカルボキシデキストランシェルからなる。ラットにおいて、有効血漿半減期は５６±１７分間及びＬＤ５０はＦｅ３５ｍｍｏｌ／体重ｋｇである。家ウサギにおいては、推測血漿半減期は約６時間である。該造影剤を、容量２〜３ｍｌで用量Ｆｅ２００μｍｏｌ／体重ｋｇで健全な側の耳静脈に緩慢にかつ生理食塩水２ｍｌを伴って注射した。
【００２１】
動物モデル
実験は、ドイツ国動物保護法と一致して実施した。所轄官庁の同意を得た。両種のキンキラ−バスタード（Ｃｈｉｎｃｈｉｌｌａ−Ｂａｓｔａｒｄ）イエウサギ（２．６〜３．８ｋｇ）を使用した。全ての検査は、ケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎ）ＨＣｌ（Ｋｅｔａｎｅｓｔ−５０， Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ ＧｍｂＨ， Ｂｅｒｌｉｎ）４０ｍｇ／ｋｇ及びキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎ）ＨＣｌ（Ｒｏｍｐｕｎ ２％； Ｂａｙｅｒ， Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ）１７ｍｇ／ｋｇの皮下注射により深い麻酔で実施した。血栓誘発の前に、頸静脈をまず耳静脈への標準造影剤の注射を伴うＸ線静脈撮影法により２つの面で記録した。ウェスラー（Ｗｅｓｓｌｅｒ）によって使用された方法に倣って、鬱血性血栓を血液鬱血及び凝固性亢進により発生させた［Ｗｅｓｓｌｅｒ． Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｔａｓｉｓ． Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ １９６２； ３３： ６４８−６６６］。しかし、鬱血は静脈の手術的結紮によってではなく、カテーテル塞栓形成により生じさせた。耳静脈から、スルース（Ｓｃｈｌｅｕｓｅ）及びガイドワイヤを用いて長さ約２０ｃｍのカテーテルガイド（３フレンチ）を外頸静脈に押し込んだ。カテーテルガイドを介して、外径０．６１ｍｍを有するマイクロカテーテルをカテーテル尖端で第４又は第５の頸椎の高さに位置決めした。塞栓形成剤（Ｅｍｂｏｌｉｓａｔ）、油性のヨード含有リンパ管造影−Ｘ線造影剤（Ｌｉｐｉｄｏｌ， Ｂｙｋ Ｇｕｌｄｅｎ， Ｋｏｎｓｔａｎｚ）とブチルシアノアクリレート組織接着剤（Ｈｉｓｔｏｒａｃｒｙｌ， Ｂ． Ｂｒｒｕｎ， Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ）との１：１の比からなる混合物を、一方では血管壁に対する塞栓形成剤の付着及び他方では塞栓形成剤と血液の混合が行われ得るように緩慢に注射した。血管の閉塞後に、第２のマイクロカテーテルを介してウシのトロンビン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ， Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ）１００単位を投与した。塞栓形成剤は、数日間血管の通過閉塞を引き起こすべきである。塞栓形成剤は、ヨード成分のためにＸ線静脈撮影法でＸ線を透過せずかつまた接着剤内に固定された血液分解生成物のために著しく鮮明に（ｈｙｐｅｒｉｎｔｅｎｓ）Ｔ１強調画像で視覚可能であるべきである。
【００２２】
実験設計
５０匹の血栓を持った実験動物を、無作為に造影剤グループ（Ｄ）又は対照グループ（Ｋ）に分けた。更なる小分けは、最初のＭＲＴ測定の時点での血栓の形成後の期間（１，３，５，７又は９日）で行った。従って、それぞれ５つの造影剤グループ（Ｄ１，Ｄ３，Ｄ５，Ｄ７及びＤ９）及び２つの対照グループ（Ｋ１，Ｋ３，Ｋ５，Ｋ７及びＫ９）への配属が生じた。それぞれのサブグループは、５匹の実験動物から構成されていた。全ての実験動物において、初期ＭＲＴの前にＸ線静脈撮影法によって血栓を証明した。造影剤グループ（Ｋ）の動物には、この初期ＭＲＴ後に造影剤を与えかつ２４時間のインターバル後に経過ＭＲＴを得た。グループＤ３においては、例えば０日での塞栓形成後に、３日で初期ＭＲＴ及び４日で経過ＭＲＴを行った。対照から、グループＫ１，Ｋ３及びＫ５の動物のみにで経過ＭＲＴを得たが、しかし、経過インターバルがなお確定されない、実験の初期に測定したグループＫ７及びＫ９では経過ＭＴＲを得なかった。
【００２３】
ＭＲＴ
検査は、標準ニーコイル（Ｓｔａｎｄｒｄ−Ｋｎｉｅｓｐｕｌｅ）を有する１．５テスラマグネット（Ｖｉｓｉｏｎ， Ｓｉｅｍｅｎｓ， Ｅｒｌａｎｇｅｎ）で実施した。麻酔した動物を、Ｕ字形フォーム支持台内に仰臥位で背面位置に置いた。脂肪飽和を改良するために、腹側の首側面に水を入れたプラスチック袋を置いた。
【００２４】
Ｔ１強調画像を、３Ｄ−磁化準備高速グラジエント・エコー・イメージング・シーケンス（３Ｄ−ＭＰ−ＲＡＧＥ）で冠状スライスに配向した［Ｍｕｇｌｅｒ ＪＰｄ， Ｂｒｏｏｋｅｍａｎ ＪＲ． Ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ−ｐｒｅｐａｒｅｄ ｒａｐｉｄ ｇｒａｄｉｅｎｔ−ｅｃｈｏ ｉｍａｇｉｎｇ （３Ｄ ＭＰ ＲＡＧＥ）． Ｍａｇｎ Ｒｅｓｏｎ Ｍｄ １９９０； １５：１５２−７］。使用したシーケンスは、脂肪のからの信号をシーケンス固有の選択性水励起パルスによりかつ血液の信号を遅延時間の選択により抑制する［Ｍｏｏｄｙ ＡＲ， Ｐｏｌｌｏｃｋ ＪＧ， Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ＡＲ， Ｂａｇｎａｌｌ Ｍ． Ｌｏｗｅｒ−ｌｉｍｂ ｄｅｅｐ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ： ｄｉｒｅｃｔ ＭＲ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｕｓ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９８； ２０９：３４９−５５．］。以下のパラメータを使用した：繰り返し時間１０．３ｍｓ；エコー時間４．０ミリ秒；フリップ角度１５°；反転時間２０ミリ秒；遅延時間１０００ミリ秒；スライスの数１００；データ収集１；スライス厚０．８ｍｍ；像野１００×２００ｍｍ；マトリックス１２８×２５６；データ収集時間５：３０分；ピクセルサイズ０．７８×０．７８×０．８ｍｍ。２Ｄソース画像から、厚さ約１．５ｃｍの３Ｄ最大強度投影再構成（ＭＩＰ）を作成した。
【００２５】
Ｔ２＊強調軸方向画像を、３Ｄ勾配エコーシーケンス（Ｆａｓｔ Ｌｏｗ Ａｎｇｌｅ Ｓｈｏｔ， ＦＬＡＳＨ）で形成した［Ｆｒａｈｍ Ｊ， Ｈａａｓｅ Ａ， Ｍａｔｔｈａｅｉ Ｄ． Ｒａｐｉｄ ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ＭＲ ｉｍａｇｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＦＬＡＳＨ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｊ． Ｃｏｍｐｕｔ． Ａｓｓｉｓｔ． Ｔｏｍｏｇｒ． １９８６； １０： ３６３−８］。該シーケンスは、シーケンス固有のブライト・ブラッド効果（Ｂｒｉｇｈｔ−Ｂｌｏｏｄ−Ｅｆｆｅｃｔｓ）により静脈管腔を脂肪及び筋肉に対して著しく強調して示す。中程度のＴ２＊強調により、細胞内に富化された血液分解生成物又はＳＰＩＯは弱い信号で結像される。以下の撮影パラメータを使用した：繰り返し時間５４ミリ秒；エコー時間１８ミリ秒；フリップ角度１５°；反転時間２０ミリ秒；遅延時間１０００ミリ秒；層の数１００；収集１；ブロック緻密厚８０ｍｍ；分割４０；スライス厚２ｍｍ；画像部分８０×８０ｍｍ；マトリックス２５６×２５６；データ収集時間２２：０８分；ピクセルサイズ０．３１×０．３１×０．３ｍｍ。
【００２６】
パトロジー：
経過ＭＲＴ後に、動物をキシラジンの過剰投与により死亡させた。該頸静脈の尾部及び頭部のセグメント及び顔面静脈の標本を作製し、１０パーセントのホルマリン中に２４時間固定しかつ長さ３ｍｍのそれぞれ５つの脈管円筒体に分割した。パラフィン内に埋め込んだ後に、それぞれの円筒体の尾部の端部を厚さ３μｍに切断しかつベルリンブルーで氷上で着色した。
【００２７】
画像分析：
ヒストロジー切片、静脈撮影及びＭＲＴのハードコピーを、ラジオロジーにより評価した。外頸静脈内の血栓の長さを、静脈撮影法により測定した。ヒストロジーは、特に造影剤によって包囲されない新しい閉塞する血栓における、血栓の第２の検出法として役立つ。しかしながら、この方法は、ヒストロジー処理中の周知の収縮アーチファクトのために制限付きで長さ測定のために適当であるに過ぎない。
【００２８】
引き続き、血栓の長さをＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスのＴ１強調３Ｄ再構成で測定した。血栓が周囲から高い強度でかつ鮮明に境界付け可能である場合、該血栓を視覚可能であると定義した。隙間のある表示の場合には、視覚可能な血栓部分のみを測定した。個々のかつ血栓形成期に依存する、血栓長さの変動を排除するために、基準により決められた血栓長さを１．０に標準化しかつＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成で測定された血栓長さを１．０の割り当て、例えば０．４で示した。
【００２９】
Ｔ２強調勾配エコーシーケンス画像を品質分析のみにかけた。評価のために、一義的に参照法により把握されかつ個々の血栓のために特徴的であった代表的スライスを選び出した。周囲の血液から血栓の境界設定性が乏しい場合には、血栓を局在化するために、参照法を用いた。血栓を、“均一”、“不均一−無秩序”又は“不均一−同心性”（ｃｅｎｔｒａｌ ｈｙｐｅｒｉｎｔｅｎｓ， ｐｅｒｉｐｈｅｒ ｈｙｐｏｉｎｔｅｎｓ）に分けた。“均一”な血栓の信号強度、リードする信号強度、即ち“不均一−無秩序”の血栓の最大の視覚可能な血栓成分又は“不均一−同心性”血栓の場合の中心の信号強度を、無信号から強信号までの５点スケールに等級付けた：
１：無信号、緻密な骨又は背景のような信号強度、
２：弱い信号、１と３の間、
３：中間信号強度（ｍｕｓｋｅｌｉｓｏｉｎｔｅｎｓ）、
４：強い信号、３と５の間、
５：極めて強い信号、“白熱ランプ効果”に相当。
【００３０】
血栓のコントラスト度合を、信号強度の定義を基礎として最低と最大の信号強度の間の差として決定した。４点スケールが生じた。
【００３１】
血栓を持つ静脈において壁及び血管周囲の造影剤富化を検査するために、該富化をＴ２＊強調シーケンスの代表的スライスで筋肉等強度（ノーマル）又は弱い信号に等級付けた。
【００３２】
統計：
データを、平均値及び標準偏差を用いてグループ（対照、造影剤）および血栓形成の期間（日）に基づき分けてまとめて又はグラフで示した（Ｓｔａｔ Ｖｉｅｗ ４．５， ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．， Ｃｒａｙ， ＮＣ， ＵＳＡ）。最初の測定と経過測定との比較を、それぞれグループＤとＫのために分離して対比較のためのｔ試験で行った。個々のグループ、例えばＤ１対Ｋ１を、分散分析（ＡＮＯＶＡ）で比較し、そのためにフィッシャー試験（Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ Ｌｅａｓｔ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ， ＰＬＳＤ）を用いた重要度試験を実施した。重要度レベルは、あらゆる場合ｐ＜０．０５であった。
【００３３】
結果：
動物モデル
７匹の動物がカテーテル塞栓形成中又はその後にショック反応、おそらく血圧調節剤による物理的刺激により、塞栓形成剤の肺内への洗い流しにより又は不明瞭な原因により死亡した。これらの動物は、実験から排除した。その他の動物で、全ての事例で血栓を発生させた。塞栓形成剤は、リピオドール成分に基づき全ての事例でＸ線静脈造影撮影法で識別することができた（図１及び２）。５０例の４４例において、これはＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ−ＭＩＰ再構成でも強い信号で視覚可能であった。その他の６例では、少なくともＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの２Ｄソース画像で確認することができた。
【００３４】
Ｘ線静脈造影撮影で、対照のグループＫ１の外頸静脈内の血栓の長さは４３±８ｍｍであり、かつ造影剤動物のグループＤ１の血栓の長さは３６±１０ｍｍであった。該長さは、実験時間内に明らかに減少しかつグループＫ９及びＤ９ではそれぞれ２３±１０ｍｍ及び１１±８ｍｍであった（図３）。同じ血栓形成後の期間の対照グループと造影剤グループの間の著しく異なった長さは、如何なる時点でも生じなかった。
【００３５】
ヒストロジー的に、グループＫ１及びＤ１において、フィブリンビームで仕切られた緊密な赤血球（鬱血）からなる新鮮な血栓が存在し、グループＫ３及びＤ３においては、個々の動物において赤血球の中心部溶解を伴う緊密な鬱血が存在し、グループＫ５及びＤ５においては、全ての事例で血栓中心部内の赤血球の溶解（均一化）並びに単核細胞の周縁部の拡散が存在し、グループＫ７及びＤ７においては、単核細胞による血栓の増大する浸透及び個別に出芽する毛管を伴う開始する内皮化が存在し、かつグループＫ９及びＤ９においては、開始する結合組織形成を伴う単核細胞及び毛管による血栓のほぼ完全な浸透が存在する。
【００３６】
ＭＲＴ
血栓は、Ｔ１強調ＭＰ−ＲＡＧＡシーケンスの３Ｄ再構成でワーム状の高い強度の構造として視覚可能であった（図１及び２）。個別に、造影剤動物での経過測定において残留血管造影効果に基づき大きな頸部血管内での僅かに高められた信号も見られた。血栓発生後の期間を考慮しなければ、グループＫにおいては初期ＭＲＴの３Ｄ−ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンス及び０．２±０．３、Ｄでは０．１±０．３静脈造影法の相対的血栓長さの一致が見られた。グループＤの動物（ｎ＝２５）において、２４時間の経過でコントラスト投与前の０．１±０．３の一致する相対的血栓長さの、投与後２４時間の０．５±０．５への重要な増大が見られた、ｐ＝０．００１（図１、２及び４）。しかしながら、対照（グループＫ１、Ｋ３及びＫ５）では見られなかった、ｐ＝０．３４。個々の日毎グループの分析は、ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスにおいて視覚可能な、血栓発生後の期間の血栓成分の依存性を示す（図４）。これはグループＫ１，Ｋ３及びＫ５における短い血栓発生後の期間では０．２±０．３〜０．４±０．５であり、かつグループＫ７及びＫ９における長い血栓発生後の期間では０．１±０．１及び０であった。造影剤投与後に、以下のグループにおいて視覚可能な血栓成分の重要な増大が判明した：Ｄ３で０．６±４から０．８±０．４、Ｄ５で０．１±０．１から１±０．１、及びＤ７で０から０．６±０．４への増大が見られた。グループＤ１及びＤ９においては、重大な差異は見られなかった。
【００３７】
中程度のＴ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスは、構造、信号強度及びコントラスト度合の著しい血栓発生後の期間に依存する可変性を示した。個々の例は、図５に見られる。対照においては、第７日まで“不均一−無秩序”及び“不均一−同心性”の血栓構造が優位になる（図６）。第７日目から、対照において“均一な”血栓構造が支配する。血栓の主要な信号強度は、対照Ｋ１においては“中程度”、即ち筋肉組織に対して等強度（ｉｓｏｉｎｔｅｎｓ）であるが、しかし明らかな散乱を伴う。第３日目まで、血栓の信号強度は対照においては傾向上“強い信号”に増大し、第９日目までは“弱い信号”と定義される強度に低下した。新たな血栓のコントラスト度合は、グループＫ１では平均して１．６でありかつＫ９では０．４であった（図８）。全体で、グループＫの４匹の動物においてのみ造影剤投与後に中程度Ｔ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおける血栓の信号低下が見られ、これを可能な造影剤効果として評価した（図５）。初期測定と経過測定の比較により、全体において又は血栓発生後の期間に基づき分離して血栓構造（図６）、血栓信号（図７）又は血栓のコントラスト度合（図８）の重大な変化は判明しなかった。
【００３８】
Ｔ２＊強調シーケンスの代表的スライス上に、５０匹の動物の６匹において既に自然に壁及び直接的血管周囲の部分的な（ｎ＝４）又は円形の（ｎ＝２）弱い信号が見られた。造影剤投与後に、全部で６匹の動物において弱い信号が存続した。別の１１匹の動物において、経過対照においてのみ、壁及び直接的血管周囲の弱い信号が見られ、そのうちの２匹の動物においては円形の弱い信号及び９匹の動物においては部分的な弱い信号が見られた。これらの１１匹の動物のうちの１匹は対照であった。その他に１０匹には、造影剤を投与した。これらの１０匹のコントラスト強化した検査のうち、グループＤ１から４匹及びＤ３から４匹であった、即ち、静脈壁及び直接的血管周囲の造影剤富化は、特に５例のうちのそれぞれ４例における若い血栓段階において見られた。
【００３９】
図面の詳細な説明
図１
Ｘ線静脈造影撮影法（ａ）において、血栓誘発３日後に左の外頸静脈の不完全な閉塞が明らかである。該外頸静脈は、中間の顔面静脈からの別の供給を受ける。造影剤の流出は、部分的に反対側を介して行われる。閉塞（矢印）は、静脈造影撮影法においてＸ線を透過しない（ａ）。ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成において超常磁性鉄酸化物の投与前（ｂ）及び投与２４時間後（ｃ）が矢印によりマークされている。視覚可能な血栓部分の頭部の端部は、それぞれ矢印ヘッドでマークされている（ｂ及びｃ）。造影剤投与後（ｃ）ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスにおいて、初期ＭＲＴ（ｂ）に比較して付加的な頭部の血栓成分を見ることができる。造影剤投与後、ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスと基準における血栓長さの完全な一致が存在する。また、その他の頸部血管における造影剤の残留血管造影効果が明らかである。
【００４０】
図２
塞栓形成５日後のＸ線静脈造影撮影法（ａ）において、塞栓（矢印）が識別される。個々の血栓成分は、頭側の内頸静脈内で周囲を洗われる（ａ、矢印尖端）。同側の側副枝が見られる（ａ、細い矢印）。元来のＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成において、血栓は識別されずかつ塞栓は僅かに識別される（ｂ、矢印）。造影剤投与２４時間後に（ｃ）、塞栓（矢印）から頭側の外頸静脈（矢印尖端）までの全部の血栓及び横に位置する耳静脈を見ることができる。
【００４１】
図３
外頸静脈内の血栓の長さ。１日目から９日目までの血栓長さの減少が明らかである。
【００４２】
図４
造影剤動物（Ｄ）及び対照（Ｋ）並びに血栓発生後の期間（１〜９日）に基づき分離したＴ１強調ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成及びＸ線静脈造影撮影法における相対的血栓長さの一致。初期ＭＲＴ及び２４時間経過ＭＲＴの結果が示されている。不一致は値０により、完全な一致は１により表される。ＤＤＭ３４の投与後に、ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスにおいて視覚可能な血栓長さの著しく高い一致がグループＤ３、Ｄ５及びＤ７において見られるが、しかし新鮮（Ｄ１）及び組織化された血栓（Ｄ９）では見られなかった。
【００４３】
図５
中程度の強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおいて、造影剤投与前（ａ）に外頸静脈（矢印）内に“均一”と定義される血栓構造及び“平均”の信号強度を有する発生７日後のの血栓が判明した。造影剤投与後は、“弱い信号”（ｂ、矢印）である。ＳＰＩＯ投与後の脊柱の明らかな信号損失（ｂ、矢印尖端）。
【００４４】
図６
日数（第１〜第９日）に基づき分離した対照（Ｋ）と造影剤投与前の動物（Ｄ）におけるＴ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおいる血栓構造。第７日まで、不均一な血栓構造が不均一−不規則及び不均一−同心的の優位にある。。約７日目から、均一な血栓構造が支配する。
【００４５】
図７
信号なし（１）、弱い信号（２）、筋肉等強度（３）、強い信号（４）及び極めて強い信号（５）の５点スケールでのＴ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおける血栓の信号強度。血栓発生期間の基づき分離した対照（Ｋ）及び造影剤動物のグループが示されている。初期ＭＲＴ並びにまた経過ＭＲＴが示されており、Ｋ７及びＫ９の対照においては、経過ＭＲＴは存在しない。
【００４６】
図８
Ｔ２＊強調勾配シーケンスにおける実験的血栓のコントラスト度合。コントラスト度合は対照（Ｋ）においてもまたコントラスト平均化においても（Ｄ）９日の期間内で低下する、即ち、血栓は均一になることが明らかである。初期検査と経過検査の間のコントラスト度合の重要な変化は、如何なるグループｂおいても見られなかった。
【図面の簡単な説明】
【図１】
Ｘ線静脈造影撮影法（ａ）において得られたＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成において超常磁性鉄酸化物の投与前（ｂ）及び投与２４時間後（ｃ）を示す写真である。
【図２】
血栓形成５日後のＸ線静脈造影撮影法（ａ）において得られたＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成の写真である。
【図３】
Ｘ線静脈造影撮影法における外頸静脈内の血栓の長さを示す図である。
【図４】
造影剤動物（Ｄ）及び対照（Ｋ）並びに血栓発生期間（１〜９日）に基づき分離したＴ１強調ＭＰ−ＲＡＧＥシーケンスの３Ｄ再構成及びＸ線静脈造影撮影法における相対的血栓長さの一致を示す図である。
【図５】
中程度の強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおいて、造影剤投与前（ａ）に外頸静脈（矢印）内に“均一”と定義される血栓構造及び“平均”の信号強度を有する発生７日後の血栓を示す図である。
【図６】
日数（第１〜第９日）に基づき分離した対照（Ｋ）と造影剤投与前の動物（Ｄ）におけるＴ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおいる血栓構造を示す図である。
【図７】
５点スケールでのＴ２＊強調ＦＬＡＳＨシーケンスにおける血栓の信号強度を示す図である。
【図８】
Ｔ２＊強調勾配シーケンスにおける実験的血栓のコントラスト度合を示す図である。
【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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