(57)【要約】本発明は、含硫アミノ酸を安定化させるための、および／または、血液サンプル中の含硫アミノ酸の連続的形成を阻害するための組成物に関する。また、本発明は、そのための、および、任意により、血液中の含硫アミノ酸を測定するための好適な物質および組成物の使用に関する。さらに、本発明は、適当な方法および前記適当な方法において使用される血液採集装置に関する。
2004534766.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素に対する少なくとも１種の非排他的な競合阻害剤を含む、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物。
【請求項２】
阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
血球の溶解のための薬剤を含有しない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
阻害剤がＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤である、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
阻害剤がコファクターＮＡＤの枯渇を伴うＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの不活性化をもたらすものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
阻害剤がネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、（Ｚ−またはＥ−）４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択される、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
酸と、ホモシステインの代謝形成に関与する酵素に対する少なくとも１種の阻害剤とを含む、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物。
【請求項８】
阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
血球の溶解のための薬剤を含有しない、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
酸がアスコルビン酸、クエン酸、シトラリンゴ酸、シトラコン酸、フマル酸、乳酸、シュウ酸および酒石酸からなる群より選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
酸が粉末形態または凍結乾燥形態で存在する、請求項７〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の阻害剤がメチルトランスフェラーゼの阻害剤である、請求項７〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の阻害剤がＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤である、請求項７〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
阻害剤が２’−デオキシアデノシン（ＤＥＯＡ）、５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミド（５（４）−ＡＭＣＡ）、９（Ｓ）−（２，３−ジヒドロキシプ
ロピル）−アデノシン（（Ｓ）−ＤＨＰＡ）、（Ｒ，Ｓ）−３−アデニン−９−イル−２−ヒドロキシプロパン酸（（Ｒ，Ｓ）−ＡＨＰＡ）、アデニン−ジアルデヒド、５−デアザアデノシン、５−デオキシ−５−メチル−チオアデノシン、５−デオキシアデノシン（アリステロマイシン）、ネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、（Ｚ−またはＥ−）４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
異なる阻害剤の組み合わせを含む、請求項７〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
２’−デオキシアデノシンが５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミドと組み合わせられる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
緩衝剤をさらに含有する、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
抗凝固剤をさらに含有する、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
ホモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の非排他的な阻害剤を阻害剤として使用する、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための、ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素の阻害剤の使用。
【請求項２０】
使用される阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
阻害剤が血球の溶解のための薬剤を伴わずに使用される、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤を使用する、請求項１９〜２１のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
コファクターＮＡＤの枯渇を伴うＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの不活性化をもたらす阻害剤を使用する、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
使用される阻害剤がネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デアザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、Ｚ−またはＥ−４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】
含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻
害のための、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２６】
含硫アミノ酸がホモシステイン、システイン、システイニルグリシン、グルタチオンおよびその誘導体から選択される、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
血液試料の安定化および／または保存のための、請求項１９〜２６のいずれかに記載の使用。
【請求項２８】
酸を用いる場合において、酸が被験血液の１ｍｌあたり２〜１０ｍｇの濃度範囲にある、請求項２５〜２７のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】
阻害剤が被験血液の１ｍｌあたり１５〜２１０μｇの濃度範囲にある、請求項１９〜２８のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
阻害剤の使用と同時またはその後に少なくとも１種の含硫アミノ酸および任意によりさらに別の血液成分を測定するための試験を実施する、請求項１９〜２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
採血後の血液を請求項１９〜２４のいずれかに記載の阻害剤と、または、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物と混合する、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための方法。
【請求項３２】
任意により、血液中の含硫アミノ酸の量および／または他の血液成分を測定する請求項３１記載の方法であって、
（ａ）血液採集装置中に請求項１９〜２４のいずれかに記載の阻害剤または請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物を投入する工程と、
（ｂ）血液採集装置中に血液を投入する工程と、
任意により、（ｃ）含硫アミノ酸が安定な状態で存在するか、そして／または含硫アミノ酸の連続形成が阻害される所定の期間、血液採集装置中に投入された血液を保存する工程と、
任意により、（ｄ）血液試料中の所望の含硫アミノ酸および任意により別の血液成分の量を測定する工程とを含む方法。
【請求項３３】
工程（ａ）と工程（ｂ）が逆転している、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
所望の含硫アミノ酸の量がＨＰＬＣにより測定される、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
所望の含硫アミノ酸の量が酵素免疫測定により測定される、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
請求項１９〜２４のいずれかに記載の阻害剤または請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物を含む血液採集装置。
【請求項３７】
従来の血液採取手段と連結可能な装置を含む、請求項３６に記載の血液採集装置。
【請求項３８】
モノベットの形態に設計された、請求項３６または３７に記載の血液採集装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は採取された血液中の含硫アミノ酸の安定化のための組成物、そのための、および、任意により、血液中の含硫アミノ酸を測定するための好適な物質および組成物の使用、これら目的のための方法、並びに、この方法に適宜適用される血液採集装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの予測的試験および症例研究において、血漿中のホモシステインが心臓血管病、アテローム性動脈硬化症、神経学的疾患および老人病の独立した非可逆的な危険因子であることがこれまで明らかにされている。全体的人口の約８％および冠動脈または末梢血管の疾患を有する患者の２０〜４０％において、ホモシステインの中等度に上昇した血漿中濃度が認められている。ホモシステインの顕著な増大がホモシステイン尿症を有する患者において認められており、これは生来の代謝欠陥に基づいている。ホモシステインの血漿中濃度と心臓血管病の間の相関は、明らかには解明されていない。本質的な標的は内皮細胞であると考えられる。ホモシステインは生育を阻害し、グルタチオンパーオキシダーゼの活性を低下させ、遺伝子発現の変化、トロンボモジュリンの発現の低下、および、組織プラスミノーゲン活性化物質の結合の低下、並びに「ｖｏｎ−Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ」因子の分泌低下をもたらす。更にまた、ホモシステインは血管平滑筋の増殖を誘発すると考えられる。更に有害な機序として、鉄または銅イオンの存在下でホモシステインによるフリーラジカルの形成が報告されており、これは低密度リポ蛋白の酸化性修飾をもたらすと考えられる。
【０００３】
報告されている機序は主に動物試験および細胞培養により得られたデータに基づいているため、ホモシステイン自体が心臓血管の罹患危険性が増大する原因であるかどうかは明らかではない。これらの試験においてはむしろ高濃度のホモシステインが使用されている（１〜１０ｍｍｏｌ／ｌ）。更にまた、大部分のインビトロの試験において使用されている低濃度のホモシステインは１μｍｏｌ／ｌ未満の濃度で存在している。
【０００４】
従って、これまで行なわれている臨床治験の更なる問題点は、血漿中ホモシステインの測定値は、血球が採血後可能な限り早く（＜３０分）に遠心分離されることにより血清を可能な限り早く得ることができる場合にのみ、信頼性のあるものとして捕らえることができるという点である。しかしながら、この方法は経験のある医師および臨床従事者の両方にとって特に実現不可能なものである。
【０００５】
従って、採血後であっても血球によりホモシステインが更に生成されるため、上記した最速の血清獲得法が必要となる（１時間後には、血漿中濃度は４０％まで上昇する）。これは恐らくは血球中のＳ−アデノシルメチオニンによるメチル基の連続的変換が行なわれているためであると考えられる。Ｓ−アデノシルメチオニンの形成は、血清または血漿が赤血球にメチオニンを提供できる限り、進行する。一旦Ｓ−アデノシルメチオニンがメチル基を提供すると、Ｓ−アデノシルホモシステインがこれにより生成され、次にこれが更に加水分解されてホモシステインとなる。従って、血清中のメチオニン濃度および血清を得るまでの時間の両方がその血清中のホモシステイン濃度に対してかなり影響する。このことは、人間における冠動脈および末梢血管の疾患に対するホモシステイン濃度の重要性に関して決定的な結果が多く得られていないことの原因となっている。ホモシステインを適切に再現性良く測定するためには、ホモシステインの真の測定のための分析前の条件を満足すべきであり、即ち、ホモシステインの連続的形成を中断させなければならない。
【０００６】
この分野の初期の研究は、臨床生化学会（ＡＣＢ）の会議における講演において、Ｆ．Ａｌ−Ｋｈａｆａｊｉ，Ａ．Ｂｏｗｒｏｎ，Ａ．Ｄａｙ，Ｊ．ＳｃｏｔｔおよびＤ．Ｓｔａｎｓｂｉｅにより発表されている（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ＡＣＢ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  １９９８，Ｇｌａｓｇｏｗ，１９９８年５月１１〜１５日、ｐ２１）。これらによれば、メチオニンから２−アデノシルメチオニンへの分解の阻害はＮａＦを用いることにより良好に行なえ、従って、血液試料中のホモシステインの増大は観察されなかったと報告されている。阻害剤ＮａＦを用いた場合、信頼性のある調製分析医療としては望ましくない、初期値（採血時）と比較した場合の血中のホモシステイン濃度の低下が認められている。
【０００７】
更にまた、上記研究者等はホモシステイン濃度の安定化に対するＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの既知の阻害剤である３−デアザアデノシンの有効性を研究している。それらによれば、Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼからホモシステインへの反応はこの従来の阻害剤により７２時間まで効果的に阻害できるとされている。この研究者グループはより詳細な試験結果を短い報告書において発表している（Ｆ．Ａｌ−Ｋｈａｆａｊｉ，Ａ．Ｂｏｗｒｏｎ，Ａ．Ｄａｙ，Ｊ．ＳｃｏｔｔおよびＤ．Ｓｔａｎｓｂｉｅ, Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９９８，３５，７８０−７８２）。酵素Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼに対するこの従来の可逆的競合阻害剤の添加により２４時間まで血液中のホモシステイン濃度の増大は観察されていない。その後に生じた採血後７２時間の時点における約１０％のホモシステイン濃度の増大はやはり、従来使用されている抗凝固剤エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）のみを含有した採取バイアルの比較数値よりも遥かに低値であった。
【０００８】
３−デアザアデノシンを用いる場合に生じる問題点は、ホモシステインの場合は６０時間で２μｍｏｌ／ｌまでの範囲、そして、システインの場合は６０時間で６０μｍｏｌ／ｌまでの範囲にある、無視できない測定値の変動が起こる点である。更にまた、システイニルグリシンおよびグルタチオンの量は、３−デアザアデノシンがこれらの形成を阻害しないことから、測定することができない。更に別の問題点は、３−デアザアデノシンは室温では安定ではなく冷却された状態（＋４℃）でのみ保存でき、このこともその出荷適性を制限している。しかしながら、試薬の取扱が簡便であることは、例えば採取された血液は未修飾の形態で存在し、例えば冷却等のために多大な経費を必要とすること無く長期間にわたり輸送可能でなければならないことから、極めて重要なものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は含硫アミノ酸の評価のための調製分析医療を改善することである。特に、ホモシステインおよびシステインの濃度の変動、システイニルグリシンおよびグルタチオンの量の測定、容易な取扱、保存および出荷の適性に関する従来技術における問題点は解決されなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本目的は、ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素に対する少なくとも１種の非排他的な競合阻害剤を含む、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物を提供することにより、本発明の第１の局面において解決される。
【００１１】
或いはまた、本目的は、酸およびホモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の阻害剤が組成物中に組み合わせられて含有される、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物を提供することにより、本発明のさらなる局面において解決される。
【００１２】
本発明のさらなる主題は、ホモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の非排他的な阻害剤を阻害剤として使用する、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための、ヘモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の阻害剤の使用である。更にまた、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための、第１および第２の局面に関して上記した組成物の使用も本発明の主題である。
【００１３】
本発明のさらなる主題は、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための方法、および、任意により、血液中の含硫アミノ酸および／または他の血液成分の量の測定に関し、その際、採血後の血液を第１および第２の局面に関して記載した上記組成物と、または、ホモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の非排他的な競合阻害剤と混合する。該方法は、（ａ）血液採集装置中に組成物または阻害剤を投入し、（ｂ）血液採集装置中に採取血液を投入し、任意により、（ｃ）含硫アミノ酸が安定な状態で存在するか、そして／または含硫アミノ酸の連続形成が阻害される所定の期間、血液採集装置中に投入された血液を保存し、任意により、（ｄ）血液試料中の所望の含硫アミノ酸および任意により別の血液成分の量を測定することで実施できる。
【００１４】
本発明のさらなる主題は本発明の物質または本発明の組成物を含む血液採集装置である。
【００１５】
本発明の作用と利点を用いて、その目的を上記の通り、そして他の方法で達成することは以下の本発明の詳細な説明および好ましい実施形態から明らかにされる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下において、本発明および本発明の好ましい実施形態の作用および利点を、添付のグラフ化した図面を参照しながら説明する。
【００１７】
本発明により適用される少なくとも１種の阻害剤は、ホモシステインの代謝形成に関与する酵素を阻害するものである。任意により、この阻害剤はホモシステインの形成に関与する別の酵素の阻害剤であってもよい。好ましくは、Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼ、メチルトランスフェラーゼ、ただしＳ−アデノシルメチオニンがメチル供与体となるもの、またはホモシステインの形成またはホモシステインの分解に関与する何らかの他の酵素が阻害の標的となってよい。
【００１８】
本発明の全ての局面に適用できる少なくとも１種の阻害剤は、好ましくは、赤血球膜を透過することの可能な非イオン性および／または疎水性の構造を有する。即ち阻害剤は、試薬ＮａＦや、或いは、ＥＤＴＡまたはクエン酸のようなキレート形成剤を用いたカルシウムイオンの結合を介して行われる間接的な安定化とは異なるものである。このような好ましい阻害剤の構造により、血球の溶解が必要で無くなる。更に血球の溶解の回避が好都合であるため、本発明によれば、血球の溶解のための薬剤を用いないという好適性がある。
【００１９】
酸を用いることなく阻害剤が所望の作用を達成するという本発明の第１の局面によれば、適用される阻害剤は、ホモシステイン形成に関与する酵素に対してのみ排他的に競合的阻害作用を有するものではない。即ち、この概念は、安定化において比較的強力な変動を示す従来から使用されている競合阻害剤３−デアザアデノシンとは明らかに異なる。非排他的な競合阻害剤の群は、好ましくは非可逆的な阻害剤、特に所謂、自殺阻害剤を含む。ホモシステインの形成に関与する考えられる酵素の内、酵素Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼが相当する阻害剤により阻害されるとすれば、好都合である。コファクターＮＡＤ+の枯渇を伴うＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの不活性化をもたらす上記阻害剤はとりわけ、本発明の第１の局面に関して特に有効に使用される。好都合な阻害剤には、ネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デアザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、（Ｚ−またはＥ）−４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体が包含される。これらの阻害剤は、抗ウィルス剤として、Ｓ．Ｌｉｕ，Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｔ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９（１９９２），ｐ．２４７−２６５により、所謂第２世代のＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼ阻害剤として包括的に記載されている。排他的競合阻害剤との明らかな相違点の原因は、上記阻害剤が、適用した阻害剤の３−ケト型への酸化、任意により、酵素内の酸化３’−ケト型の安定な結合をともなった、使用可能なコファクターＮＡＤ+の枯渇をもたらす点にある。
【００２０】
別の好都合な作用は別の添加剤により達成することができる。即ち、意外にも、第２の局面の枠組内において、本発明の第２の局面による組成物を用いることによりほぼ同じ効果で、本発明の問題点が容易に解決できることが解かった。ホモシステインの形成に関与する酵素に対する少なくとも１種の阻害剤のほかに、更に少なくとも１種の酸を含む組成物により、含硫アミノ酸の進歩した安定化、および／または、血液中の含硫アミノ酸の形成の進歩した阻害が達成できるのである。この場合、３−デアザアデノシンのような従来の競合阻害剤であっても酸の補助により得られる相乗作用のため、使用可能である。
【００２１】
酸と組み合わせるべき本発明のこれらの組成物において使用されるホモシステインの形成に関与する少なくとも１種の酵素に対する阻害剤は以下の群、即ち：
２’−デオキシアデノシン（ＤＥＯＡ）、５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミド（５（４）−ＡＭＣＡ）、９（Ｓ）−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−アデノシン（（Ｓ）−ＤＨＰＡ）、（Ｒ，Ｓ）−３−アデニン−９−イル−２−ヒドロキシプロパン酸（（Ｒ，Ｓ）−ＡＨＰＡ）、アデニン−ジアルデヒド、３−デアザアデノイシン、５−デオキシ−５−メチル−チオアデノシン、５−デオキシアデノシン（アリステロマイシン）、ネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デアザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、Ｚ−またはＥ−４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体から選択して良い。抗ウィルス剤としてそれ自体知られている化合物については、やはり、上記した参考文献、Ｓ．Ｌｉｕ，Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｔ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９（１９９２），ｐ．２４７−２６５（および別の引用物）を参照できる。
【００２２】
本発明の第２の局面に特に適する阻害剤については、３−デアザアデノシン、５−デオキシ−５−メチル−チオアデノシンおよびその阻害性誘導体、並びに、好ましくは、前記酵素の非可逆的な阻害剤、例えばネプラノシンＡおよび３−デアザネプラノシンＡおよび本発明の第１の局面に関して上記した化合物の阻害性誘導体が挙げられる。
【００２３】
阻害剤の種類とは独立して組成物中に適用される本発明の第２の局面における酸は、好ましくは有機酸、特に、赤血球の溶解を生じさせないものである。酸は、好ましくは、以下の群、即ち：アスコルビン酸、クエン酸、シトラリンゴ酸、シトラコン酸、フマル酸、乳酸、シュウ酸、酒石酸および他の有機のモノ、ジ、およびより多価の酸から、単独または組合わせで選択される。赤血球の溶解の発生はそれにより生じる希釈効果に基づいて調製分析医療の無効化する場合がある。もっとも好ましい酸はクエン酸である。
【００２４】
酸は基本的には如何なる所望の形態で組成物に添加しても良い。しかしながら本発明者等は意外にも、含硫アミノ酸に対する安定化作用は、酸が固体形態、好ましくは、粉末で組成物中に存在する場合に良好なものとなることを発見した。本発明に従って組成物に適用する酸は、それが凍結乾燥された形態で存在する場合に特に好ましい作用を有していた。
【００２５】
本発明の組成物を用いることにより、従来の安定化系と比較してより低い変動で、採取された血液中のホモシステインおよびシステインの量のみならず、システイニルグリシンおよびグルタチオンの量も５４時間まで、好ましくは７２時間まで、特に１００時間以上まで、一定状態に安定化させることができる（例えば、３−デアザアデノシンＡでは室温では少なくとも１４３時間のホモシステインの安定化）。更にまた、本発明の組成物と混合した血液試料は室温でより長時間に渡り、保存可能であり、そして出荷することができる。
【００２６】
１種以上の競合阻害剤および／または前述した酵素に対する１種以上の非可逆的阻害剤の組み合わせは、望ましく相加された作用により、全血中のホモシステイン濃度の安定化のために好都合である。これは、メチルトランスフェラーゼの少なくとも１種の阻害剤および／またはＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの少なくとも１種の競合的または非競合阻害剤が存在する場合に、特に有効である。とりわけ、２種の阻害剤、２’−デオキシアデノシンおよび５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミドの組み合わせにより良好な結果が達成される。
【００２７】
更にまた、本発明の組成物は、血液の調製分析医療のための組成物中に従来より使用されている何れかの別の添加物も含有して良い。
【００２８】
例えば、生理学的に望ましい数値にｐＨ値を調節することが本発明の組成物のために有用である。従って、緩衝剤を例えば固体、液体または凍結乾燥された形態の本発明の組成物に添加して良い。緩衝剤の比率は、それが物質との混合の後に十分な緩衝作用を示し、これによりｐＨ値を約ｐＨ５〜約ｐＨ９、好ましくは約ｐＨ６〜ｐＨ８、特に約ｐＨ６．５〜約ｐＨ７．５に調節できるように決定される。従来のリン酸塩緩衝液および好ましくはリン酸２ナトリウムを用いたリン酸塩緩衝液を、０．００１モル／ｌ〜１モル／ｌ、好ましくは０．００５モル／ｌ〜０．０５モル／ｌ、特に約０．０１モル／ｌ程度の範囲で使用することが、含硫アミノ酸の安定化のために望ましいことが解かっている。例えば、ＮａＣｌ、安息香酸および更に別の一般的に使用されている緩衝液成分からなる群より選択される化合物を緩衝液成分に添加して良い。
【００２９】
別の添加物、特に、血液のブロッティングに退行する抗凝固剤、例えばＥＤＴＡ、ヘパリン（例えばナトリウムヘパリネート）、クエン酸塩（例えばクエン酸ナトリウム）も本発明の組成物に添加して良い。更にまた、他の典型的な血漿安定化剤、例えばＥｕｘｙｌも、望ましい作用を有する。更に別の従来から使用されている補助剤および添加剤、例えば別の血液成分を測定するための試薬もまた組成物に有用な特性を与えるものである。
【００３０】
本発明の組成物は、好ましくは固体形態、凍結乾燥形態、または、液体、例えば水に溶解されたものとして提供される。
【００３１】
前述の通りの特性を有する本発明の組成物は、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中、例えば採血された全血中、血漿中、または血清中、または、尿のような他の体液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のために本発明に従って適用される。
【００３２】
本発明によれば、阻害剤は、それが本発明の第１の局面に関するものである限り、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のために、ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素に対して、単独で使用することができる。この点に関し、本発明の第１の局面に適する阻害剤に関する、並びに、幾つかのこのような阻害剤の組み合わせに関する上記説明が参照されるものとする。
【００３３】
阻害剤単独または本発明の組成物のいずれかの使用は、血中の含硫アミノ酸の安定化を意図している。即ち、適当な血液試料を与える血液を、阻害剤または本発明の組成物と混合した後、十分な期間保存して良く、即ち採血後数時間または数日以降に試験して良い。調製分析医療の本質的な利点は、より長い保存耐性、調製分析医療の拡張された可能性、特に採血と血液の含硫アミノ酸測定並びに血液試料の輸送との時間的分離、および、長期間室温で保存した後にも測定アミノ酸が一定値を確保されることから生じている。
【００３４】
阻害剤または本発明の組成物は調製分析医療および血中のホモシステイン、システイン、システイニルグリシン、グルタチオンおよびそれらの誘導体のような含硫アミノ酸の測定に特に適用される。
【００３５】
本発明の酸含有組成物を使用する場合、酸の濃度は、好ましくは被験全血１ｍｌ当たり２〜１０ｍｇの範囲に調節する。
【００３６】
単独または組合わせた阻害剤、または、組成物中に含有される阻害剤の量は、被験全血１ｍｌ当たり１５〜２１０μｇ、好ましくは２０〜１００μｇの量が使用されるように、適宜調節する。
【００３７】
血中の含硫アミノ酸の安定化のための本発明の方法において、工程（ａ）においては、単独または組合わせて用いる阻害剤または記載した第１または第２の局面による本発明の組成物を血液採集装置に所定量投入する。阻害剤または組成物の量は阻害剤および任意により酸の前述の濃度範囲が採取された、または、測定すべき血液に対して調節されるように決定する。
【００３８】
その後、工程（ｂ）において、採取された血液を血液採集装置に供給し、得られた混合物を直接混合する。この混合を採血後早期に行なうほど調製分析医療が良好なものとなり、これによりその後の分析または含硫アミノ酸の分析医療が良好なものとなる。
【００３９】
工程（ｃ）において、血液採集装置内に投入され、阻害剤または本発明の組成物と混合された血液は、所望の期間保存して良く、その間、含硫アミノ酸は安定化された形態で存在し、或いは、含硫アミノ酸の連続形成が阻害される。達成可能な保存期間は使用する阻害剤または組成物により異なり、そして、通常は４８〜７２時間の範囲にあるが、１００時間を越える範囲にあることもできる。
【００４０】
保存の後、含硫アミノ酸および任意により所望に応じて別の血液成分の分析または分析医療を任意により行なってよい。所望のアミノ酸の測定は、通常は血液そのものにおいて、例えば全血、血漿および／または血清を用いて行なう。分析または分析医療のためには、従来技術において知られている方法のいずれか、例えばＨＰＬＣによるか酵素免疫測定による測定を用いて良い。免疫学的試験に各々基づいた測定方法が好ましい。
【００４１】
本発明の方法は、阻害剤または阻害剤を含有する組成物を血液採集装置中に投入しないが、使用する物質を血液試料投入後可能な限り速く添加するような操作法において行ってもよい。従って、採血後即座に血液を阻害剤または本発明の組成物と接触および混合すれば、如何なる考えられる形態の採血も可能である。
【００４２】
どのような順序で本発明の方法を実施するかに応じて、異なる血液採集装置を使用することが必要となる場合がある。
【００４３】
本発明によれば、血液採集装置は単独で用いられる阻害剤または阻害剤の組合わせまたは本発明の組成物のいずれかを含む。固体、粉末様、液体または凍結乾燥形態で阻害剤または組成物を血液採集装置に投入することにより、採取された血液は可能な限り速く投入された物質と混合される。血液採集装置は単一の阻害剤または支持された形態の組成物を含んでいて良い。
【００４４】
血液採集装置は、採取された血液を即座に阻害性物質と接触させることができるためには、好ましくは注射針またはＢｒａｕｎｕｌｅのような従来の採血装置と直接または配管を介して連結することのできる装置を保有するように設計される。従って、血液採集装置が単一の阻害剤または本発明の組成物を所望の形態で含むモノベットの形態に設計することが好ましい。
【００４５】
血液および阻害剤または組成物の充填されたモノベットは密封し、冷却することなく、保存および出荷してよい。
【００４６】
次に本発明を以下の実施例により更に詳述するが、これらは本発明を限定するものではない。
実施例１〜１５および比較例１〜３
材料および方法
メチルトランスフェラーゼまたはＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの以下の阻害剤を試験した。
１．  ５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミド（５（４）−ＡＭＣＡ）
２．  ２’−デオキシアデノシン（ＤＥＯＡ）
３．  ５−デオキシ−５−メチル−チオアデノシン（５−ＤＥＭＥＴ）
４．  ３−デアザアデノシン（３−ＤＥＡＤ）
５．  ネプラノシンＡ（ＮｅｐｌＡ）
６．  ３−デアザネプラノシンＡ（３ＤＡ−ＮｅｐｌＡ）
阻害剤の有効性は以下の酸との組合わせにおいて試験した。
１．  アスコルビン酸（ＶｉｔＣ）
２．  クエン酸（ＣＳ）
３．  シトラリンゴ酸（ＣＭＳ）
４．  シトラコン酸（ＣＯＳ）
５．  エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）
６．  フマル酸（ＦＳ）
７．  乳酸（ＭＳ）
８．  シュウ酸（ＯＳ）
９．  酒石酸（ＷＳ）
別の試薬の組成は以下の通りである。
混合物Ａ：５（４）−ＡＭＣＡ（５．２ｍｇ）およびＤＥＯＡ（３．２ｍｇ）、リン酸塩緩衝液５００μｌに溶解。
【００４７】
混合物Ａ用の緩衝液の組成は以下の通りである。
０．０１ＭのＮａ2ＰＯ4、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．１％の安息香酸、０．１％のＥｕｘｙｌ  ｋ１００
他の物質は全て、水に溶解した。
採血および試料の処置
安定化剤の相当する量を各実施例または比較例につきＥＤＴＡ−またはＮａ−ヘパリン−モノベットに投入した（表１参照）。採血は安定化剤の入った、または入っていないモノベット中で行なった。対照値として、モノベットを採血後３０分間遠心分離した。
結果
実施例および比較例の結果を表１および図１〜８に総括した。
【００４８】
図１および図２によれば、クエン酸およびＮａ−ＥＤＴＡ単体を試料に添加しても含硫アミノ酸（ＨＣＹ、ＣＹＳ、ＣＹＳＧＬＹ、ＧＬＵ）の安定化は得られなかった。フマル酸およびアスコルビン酸は、４０時間に渡りＨＣＹ濃度およびＣＹＳ濃度の安定化を確保していたが、これは恐らくは赤血球の溶解により生じた希釈効果にのみ基づいていると考えられる。
【００４９】
しかしながら、酸と阻害剤の混合物はこれらのアミノ酸に対する強力な安定化剤であることがわかった（表１）。Ａとクエン酸の混合物（表１）は５０時間に渡りＨＣＹ、ＣＹＳ、ＣＹＳＧＬＹおよびＧＬＵの濃度の同時安定化に関して最も良好な結果を達成した（表１）。
【００５０】
これらの結果は図２〜８に示す通りであり、３−デアザアデノシンによる試料の安定化により得られたデータと比較している。５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミドまたは２’−デオキシアデノシンを用いた場合は、含硫アミノ酸の有意な安定化は達成されなかった。このことは、これらの物質の阻害作用がプロトン供与体の存在下に増強されることを示唆している。
【００５１】
これらの試験において、３ＤＡ−ＮｅｐｌＡは全血中のＨＣＹの安定化に関して最も良好な結果（１４３時間、変動係数ＶＫ＜５％）を示している。
【００５２】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）およびクエン酸を含有するバイアル中に採集した全血中のホモシステイン（ＨＣＹ）の濃度の増大を示す。試料は室温で保存した。
【図２】ＥＤＴＡを含有するバイアル中に採集した全血中のＨＣＹ濃度の増大を示す。試料は室温で保存した。
【図３】ＨＣＹ濃度に対する、クエン酸＋Ａ（ＥＤＴＡ、５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミドおよび２’−デオキシアデノシンの混合物）および３−デアザアデノシンの安定化作用を示す。試料はクエン酸＋Ａまたは３−デアザアデノシンを含有するＥＤＴＡバイアル中にいれた。これらは室温で保存した。
【図４】ＨＣＹ濃度に対するクエン酸＋３−デアザアデノシン（３−ＤＥＡＤ）および３−デアザアデノシンの安定化作用を示す。試料はクエン酸＋３−ＤＥＡＤまたは３−ＤＥＡＤを含有するＥＤＴＡバイアルにいれた。これらは室温で保存した。
【図５】システイン（ＣＹＳ）の濃度に対するクエン酸＋Ａおよび３−デアザアデノシンの安定化作用を示す。試料はクエン酸＋Ａまたは３−デアザアデノシンを含有するＥＤＴＡバイアルにいれた。これらは室温で保存した。
【図６】システイニルグリシン（ＣＹＳＧＬＹ）の濃度に対するクエン酸＋Ａおよび３−デアザアデノシンの安定化作用を示す。試料はクエン酸＋Ａまたは３−デアザアデノシンを含有するＥＤＴＡバイアルにいれた。これらは室温で保存した。
【図７】グルタチオン（ＧＬＵ）の濃度に対するクエン酸＋Ａおよび３−デアザアデノシンの安定化作用を示す。試料はクエン酸＋Ａまたは３−デアザアデノシンを含有するＥＤＴＡバイアルにいれた。これらは室温で保存した。
【図８】ＨＣＹ濃度に対する３−デアザアデノシンＡ（３ＤＡ−ＮｅｐｌＡ）の安定化作用を示す。試料は各々３−ＤＡ−ＮｅｐｌＡの入ったＥＤＴＡバイアルまたはＮａ−ヘパリンバイアルにいれ、室温で保存した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年4月14日(2003.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素に対する少なくとも１種の非排他的な競合阻害剤、および、更に、抗凝固剤および／または血漿安定化剤を含む、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物。
【請求項２】
阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
血球の溶解のための薬剤を含有しない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
阻害剤がＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤である、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
阻害剤がコファクターＮＡＤの枯渇を伴うＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの不活性化をもたらすものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
阻害剤がネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、（Ｚ−またはＥ−）４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択される、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
酸およびホモシステインの代謝形成に関与する酵素に対する少なくとも１種の阻害剤、および、更に、抗凝固剤および／または血漿安定化剤を含む、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための組成物。
【請求項８】
阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
血球の溶解のための薬剤を含有しない、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
酸がアスコルビン酸、クエン酸、シトラリンゴ酸、シトラコン酸、フマル酸、乳酸、シュウ酸および酒石酸からなる群より選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
酸が粉末形態または凍結乾燥形態で存在する、請求項７〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の阻害剤がメチルトランスフェラーゼの阻害剤である、請求項７〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の阻害剤がＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤である、請求項７〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
阻害剤が２’−デオキシアデノシン（ＤＥＯＡ）、５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミド（５（４）−ＡＭＣＡ）、９（Ｓ）−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−アデノシン（（Ｓ）−ＤＨＰＡ）、（Ｒ，Ｓ）−３−アデニン−９−イル−２−ヒドロキシプロパン酸（（Ｒ，Ｓ）−ＡＨＰＡ）、アデニン−ジアルデヒド、５−デアザアデノシン、５−デオキシ−５−メチル−チオアデノシン、５−デオキシアデノシン（アリステロマイシン）、ネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、（Ｚ−またはＥ−）４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
異なる阻害剤の組み合わせを含む、請求項７〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
２’−デオキシアデノシンが５（４）−アミノイミダゾール−４（５）−カルボキサミドと組み合わせられる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
緩衝剤をさらに含有する、前述の請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
ホモシステインの代謝形成に関与する酵素の少なくとも１種の非排他的な阻害剤を阻害剤として使用する、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための、ホモシステインの代謝形成に関与する少なくとも１種の酵素の阻害剤の使用。
【請求項１９】
使用される阻害剤が非イオン系および／または疎水性であることにより赤血球膜を透過することが可能である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
阻害剤が血球の溶解のための薬剤を伴わずに使用される、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２１】
Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの阻害剤を使用する、請求項１８〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２２】
コファクターＮＡＤの枯渇を伴うＳ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼの不活性化をもたらす阻害剤を使用する、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
使用される阻害剤がネプラノシンＡ、３−デアザネプラノシンＡ、９−（トランス−２’、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタン−４’−エニル）−アデノシン（ＤＨＣｅＡ）、３−デアザ−ＤＨＣｅＡ、９−（トランス−２’−、トランス−３’−ジヒドロキシシクロペンタニル）−アデノシン（ＤＨＣａＡ）、３−デアザ−ＤＨＣａＡ、β−４’−メチル−ＤＨＣａＡ、β−４’−ビニル−ＤＨＣａＡ、Ｚ−またはＥ−４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−５’−フルオロ−アデノシン（Ｚ−ＤＤＦＡまたはＥ−ＤＤＦＡ）および５’−デオキシ−５’−ジフルオロ−アデノシン（ＤＦＡ）並びに上記組成物の阻害性の誘導体または類縁体からなる群より選択される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２４】
含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項２５】
含硫アミノ酸がホモシステイン、システイン、システイニルグリシン、グルタチオンおよびその誘導体から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
血液試料の安定化および／または保存のための、請求項１８〜２５のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】
酸を用いる場合において、酸が被験血液の１ｍｌあたり２〜１０ｍｇの濃度範囲にある、請求項２４〜２６のいずれかに記載の使用。
【請求項２８】
阻害剤が被験血液の１ｍｌあたり１５〜２１０μｇの濃度範囲にある、請求項１８〜２７のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】
阻害剤の使用と同時またはその後に少なくとも１種の含硫アミノ酸および任意によりさらに別の血液成分を測定するための試験を実施する、請求項１８〜２８のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
調製分析医療のための、請求項１８〜２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
採血後の血液を請求項１８〜２３のいずれかに記載の阻害剤と、または、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物と混合する、含硫アミノ酸の安定化のため、および／または、血液中の含硫アミノ酸の連続形成の阻害のための方法。
【請求項３２】
任意により、血液中の含硫アミノ酸の量および／または他の血液成分を測定する請求項３１記載の方法であって、
（ａ）血液採集装置中に請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物を投入する工程と、
（ｂ）血液採集装置中に血液を投入する工程と、
任意により、（ｃ）含硫アミノ酸が安定な状態で存在するか、そして／または含硫アミノ酸の連続形成が阻害される所定の期間、血液採集装置中に投入された血液を保存する工程と、
任意により、（ｄ）血液試料中の所望の含硫アミノ酸および任意により別の血液成分の
量を測定する工程とを含む方法。
【請求項３３】
工程（ａ）と工程（ｂ）が逆転している、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
所望の含硫アミノ酸の量がＨＰＬＣにより測定される、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
所望の含硫アミノ酸の量が酵素免疫測定により測定される、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物を含む血液採集装置。
【請求項３７】
従来の血液採取手段と連結可能な装置を含む、請求項３６に記載の血液採集装置。
【請求項３８】
モノベットの形態に設計された、請求項３６または３７に記載の血液採集装置。
【国際調査報告】
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