(57)【要約】本発明は、オルトチオロエステルまたはカルボキシエステルチオールを含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物、製造および使用の方法に関する。この化合物および方法は、有機合成、たとえばペプチドチオエステル、ポリペプチドチオエステル、その他のポリマーチオエステルの生成において、幅広い応用可能性を有する。本発明は、特に、強力な求核物質が使用される条件下で製造された前駆物質たとえばＦｍｏｃ　ＳＰＰＳを用いて製造されたペプチドまたはポリペプチドから、活性化チオエステルを製造するのに有効であり、また、関心のある特定の連結または複合反応に導くために選択されるいくつかの両立する方法を必要とする（または、これらの方法の使用によって利益を受ける）多段連結または複合方法において有効である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒを有し、Ｘが、求核開裂条件下で除去できる、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を随意に有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’が、非求核開裂条件下で除去できる、求核物質に対して安定な保護基であり、Ｒが、オルトチオロ成分−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−に適合する任意の基であることを特徴とする、求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項２】
Ｘが、求核物質に対して不安定な保護基によって保護されているアミンを有することを特徴とする、請求項１に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項３】
前記アミンが、アミノ酸、ペプチドおよびポリペプチドから成るグループから選択される成分上に存在することを特徴とする、請求項２に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項４】
前記求核物質に対して不安定な保護基がＦｍｏｃであることを特徴とする、請求項２に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項５】
Ｒ’が、アルキル、アリールおよびベンジルから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項６】
Ｒが、アリール、ベンジルおよびアルキルから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項７】
Ｒが、求核物質に対して安定なリンカーに共有結合していることを特徴とする、請求項１に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項８】
前記リンカーが、求核物質に対して安定な樹脂に共有結合していることを特徴とする、請求項１に記載の求核物質に対して安定なオルトチオロエステル。
【請求項９】
オルトチオロエステルを有することを特徴とする、求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂。
【請求項１０】
式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒ−リンカー−樹脂を有し、Ｘが、求核開裂条件下で除去できる、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’が、非求核開裂条件下で除去できる、求核物質に対して安定な保護基であり、Ｒが、オルトチオロ成分−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−に適合する任意の基であり、また前記リンカーと樹脂が求核物質に対して安定であることを特徴とする、請求項９に記載の求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂。
【請求項１１】
式Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’を有し、Ｘが、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’’が、水素または非求核物質に対して安定な基であり、ｎが１または２であり、Ｒ’’’が、水素、保護基、または、非求核条件下で除去できる樹脂または保護基に結合された、酸、還元もしくは光に対して不安定なリンカーであることを特徴とする求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１２】
Ｘが、求核物質に対して不安定な保護基によって保護されているアミンを有することを特徴とする、請求項１２に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１３】
前記アミンが、アミノ酸、ペプチドおよびポリペプチドから成るグループから選択される成分上に存在することを特徴とする、請求項１３に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１４】
前記求核物質によって開裂させることのできる保護基がＦｍｏｃであることを特徴とする、請求項１２に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１５】
Ｒ’’が、水素、メチル、脂肪族、枝分かれ脂肪族、ヘテロ原子、カルボニル、ベンジル、置換ベンジル、ニトリル、スルホキシおよびスルホンから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１６】
Ｒ’’’が、水素、アリール、ベンジルおよびアルキルから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１７】
Ｒ’’またはＲ’’’が、求核物質に対して安定なリンカーに共有結合されていることを特徴とする、請求項１１に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１８】
前記リンカーが求核物質に対して安定な樹脂に共有結合されていることを特徴とする、請求項１７に記載の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオール。
【請求項１９】
カルボキシエステルチオールを有することを特徴とする、求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂。
【請求項２０】
式Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−リンカー−樹脂またはＸ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’−リンカー−樹脂）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’を有し、Ｘが、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’’が、水素または非求核物質に対して安定な基であり、ｎが１または２であり、Ｒ’’’が、水素、保護基、または、非求核条件下で除去できる樹脂または保護基に結合された、酸、還元もしくは光に対して不安定なリンカーであり、該リンカーと樹脂が求核物質に対して安定であることを特徴とする、請求項１９に記載の求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂。
【請求項２１】
チオエステル反応性の求核基と、非環状オルトチオロエステル、環状オルトチオロエステル、カルボキシエステルアリールチオール、カルボキシエステルベンジルチオールおよびカルボキシエステルアルキルチオールから選択される求核物質に対して安定な基とから成ることを特徴とするポリマー。
【請求項２２】
前記ポリマーが、ペプチドおよびポリペプチドから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項２１に記載のポリマー。
【請求項２３】
前記チオエステル反応性の求核基が、前記ペプチドまたはポリペプチドのアミノ末端にあることを特徴とする、請求項２２に記載のポリマー。
【請求項２４】
前記求核物質に対して安定な基が、前記ペプチドまたはポリペプチドのカルボキシ末端にあることを特徴とする、請求項２２に記載のポリマー。
【請求項２５】
保護されたチオエステル反応性の求核基と、非環状オルトチオロエステル、環状オルトチオロエステル、カルボキシエステルアリールチオール、カルボキシエステルベンジルチオールおよびカルボキシエステルアルキルチオールから選択される求核物質に対して安定な基とから成ることを特徴とするポリマー。
【請求項２６】
前記ポリマーが、ペプチドおよびポリペプチドから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項２５に記載のポリマー。
【請求項２７】
前記保護されたチオエステル反応性の求核基が、前記ペプチドまたはポリペプチドのアミノ末端にあることを特徴とする、請求項２６に記載のポリマー。
【請求項２８】
前記求核物質に対して安定な基が、前記ペプチドまたはポリペプチドのカルボキシ末端にあることを特徴とする、請求項２６に記載のポリマー。
【請求項２９】
ポリマーの化学連結の方法であって、
ｉ）連結条件下で第一および第二のポリマーを連結して、連結生成物を生成させ、前記第一のポリマーが、チオエステル反応性の求核基と、非環状オルトチオロエステル、非環状オルトチオロエステル、カルボキシエステルアリールチオール、カルボキシエステルベンジルチオールおよびカルボキシエステルアルキルチオールから選択される求核物質に対して安定な基とから成り、前記第二のポリマーが活性化チオエステル基から成る、
ステップから成ることを特徴とする方法。
【請求項３０】
さらに、
ｉｉ）前記連結生成物の前記求核物質に対して安定な基を活性化チオエステルに転化し、該チオエステルにチオエステル反応性求核基を有する第三のポリマーを連結する、
ステップを含むことを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
関心のある分子を含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物を合成する方法であって、
ｉ）関心のある分子を、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物に共有結合させ、求核物質に対して安定な該チオエステル生成組成物が、非求核条件下で活性化チオエステルに転化させることのできる求核物質に対して安定なオルトチオロエステルから成り、前記関心のある分子が、求核物質に対して不安定な保護基によって保護されているアミン基を有し、
ｉｉ）前記求核基に対して不安定な保護基を、前記関心のある分子から、求核開裂条件下での開裂によって除去して、前記求核物質に対して安定なオルトチオロエステルに共有結合した前記関心のある分子を含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物が生成されるようにする、
各ステップから成ることを特徴とする方法。
【請求項３２】
さらに、
ｉｉｉ）ステップｉ）とｉｉ）を一回以上繰返す、
ことを含むことを特徴とする，請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記オルトチオロエステルが、リンカーによって樹脂に共有結合されており、前記リンカーが求核開裂条件下で安定であることを特徴とする，請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記オルトチオロエステルが、リンカーによって樹脂に共有結合されており、前記リンカーを非求核開裂条件下で開裂させることができることを特徴とする請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
さらに、前記リンカーを非求核開裂条件下で開裂させることを含むことを特徴とする請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
関心のある分子を含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物を合成する方法であって、
ｉ）関心のある分子を、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物に共有結合させ、該求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物が、非求核条件下で活性化チオエステルに転化させることのできる求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールから成り、前記関心のある分子が、求核物質に対して不安定な保護基によって保護されているアミン基を有し、
ｉｉ）前記求核基に対して不安定な保護基を、前記関心のある分子から、求核開裂条件下での開裂によって除去して、前記求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールに共有結合した前記関心のある分子を含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成組成物が生成されるようにする、
各ステップから成ることを特徴とする方法。
【請求項３７】
さらに、
ｉｉｉ）ステップｉ）とｉｉ）を一回以上繰返す、
ことを含むことを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記カルボキシエステルチオールが、リンカーによって樹脂に共有結合されており、前記リンカーが求核開裂条件下で安定であることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記カルボキシエステルチオールが、リンカーによって樹脂に共有結合されており、前記リンカーを非求核開裂条件下で開裂させることができることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
さらに、前記リンカーを非求核開裂条件下で開裂させることを含むことを特徴とする、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物（ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｅ−ｓｔａｂｌｅ　ｔｈｉｏｅｓｔｅｒ　ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、その製造および使用の方法、に関する。
【０００２】
（背景技術）
チオエステルは求核物質と容易に反応する重要な種類の分子を代表する。チオエステルは複合と化学選択連結反応において特に有用である。化学連結は、第一の化学成分を第二の化学成分に化学選択的に共有結合させることを含む。第一および第二の成分上に存在する特有の相互反応性官能基を、連結反応を化学選択的にするのに使用することができる。たとえば、チオエステルは、通常、ペプチドおよびポリペプチドの化学選択的化学連結を導くために使用される。いくつかの異なるチオエステル仲介化学反応が、この目的のために、たとえば自然な化学連結のために使用されている（Ｄａｗｓｏｎ，ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９４）２６６：７７６−７７９；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ ９６／３４８７８；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ ９８／２８４３４）。
【０００３】
困ったことに、ペプチドその他のチオエステルを製造する、いくつかの例で使用されている通常の条件（Ｈｏｊｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｅｐｔ．Ｃｈｅｍ．（１９９２），Ｖｏｌｕｍｅ Ｄａｔｅ １９９１，２９ｔｈ　ｐｐ．１１５−２０；Ｃａｎｎｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄ．Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９５）３６：１２１７−２０；Ｈａｃｋｅｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ．（１９９９）９６：１００６８−７３）は、非求核合成方法に限定されている。たとえば、Ｎα−９−フルオレニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌ）メチルオキシカルボニル（“Ｆｍｏｃ”）を基材とするペプチド合成を使用してチオエステル活性化ペプチドを製造する試みにおいて直面する問題は、強力な求核物質たとえばピペリジンまたはペプチドの合成時にピペリジンから生成される水酸化物イオンによる、チオエステル成分の望ましくない破壊である。これは重要な問題である。Ｆｍｏｃを基材とする有機合成の各サイクルにおいてＮα−Ｆｍｏｃ基を除去するために使用される好ましい反応物が、ピペリジンを含んでいるからである。ピペリジンは、他の強塩基性または求核化合物（以下、“求核物質（ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｅ）”と呼ぶ）と同様に、ペプチドのチオエステル成分を破壊し、該ペプチドを、後続のチオエステル仲介反応で役に立たないものとする。
【０００４】
この問題を処理するために、いくつかの試みがなされている。Ｃｌｉｐｐｉｎｇｄａｌｅほか（Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｃｉ．（２０００）６：２２５−２３４）は、Ｆｍｏｃを基材とする固相ペプチド合成（“ＳＰＰＳ”）を使用して製造されたペプチドのＮα−Ｆｍｏｃ基を除去するために、非求核塩基を使用した。この方法はいくつかの問題を含んでいる。たとえば、望ましくない欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、副生物、および主鎖保護方策の必要性の発生である。その他のグループ、たとえば、Ｂｅｒｔｏｚｚｉほか（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９９）１２１：１１６８４−１１６８９）およびＰｅｓｓｉほか（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ；１９９９；１２１：１１３６９−１１３７４．）は、Ｆｍｏｃ　ＳＰＰＳを、アルキル化されるまで求核物質に対して安定である、‘Ｋｅｎｎｅｒ’の安全捕捉（ｓａｆｅｔｙ−ｃａｔｃｈ）リンカーとともに使用して、Ｆｍｏｃ　ＳＰＰＳを、完全に保護されたペプチドチオエステル溶液を製造するのに適合させている。この方法の欠点は保護されたペプチドの溶液中の溶解度が低いということである。この方法のその他の欠点としては、たとえば、この方法に固有の副反応がある。たとえば、リンカーがアルキル化されたときに望ましくないアルキル化副生物が生成されて、該リンカーを不安定にし、したがって多くの応用が非実用的になる。同様の不満は、ペプチド以外の分子たとえば小さな有機分子の求核物質を基材とする合成法の場合にも感じられる。
【０００５】
したがって、必要とされていることは、いろいろな有機合成法において使用するための、有機および水性反応条件に適合し、またチオエステル仲介反応を使用する複合反応および化学的選択連結反応に適合する、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物および組成物を、生成させるための汎用性のあるしっかりとした方法である。本発明は、この必要およびその他の必要に関心を向けるものである。
【０００６】
（発明の開示）
本発明は、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物に関係する方法と組成物に関する。一つの実施態様において、本発明は、式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒを有し、Ｘが、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を随意に有する、関心のある目標分子であり、Ｒが、オルトチオロ成分−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−に適合する任意の基であり、Ｒ’が、非求核条件下で除去できる、求核物質に対して安定な保護基であることを特徴とする、求核物質に対して安定なオルトチオロエステル（ｏｒｔｈｏｔｈｉｏｌｏｅｓｔｅｒ）、の提供を意図する。本発明は、もう一つの実施態様において、式Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’を有し、Ｘが、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’’が、非求核物質に対して安定な基であり、ｎが１または２であり、Ｒ’’’が、水素、保護基、または、非求核条件下で除去できる樹脂または保護基に結合された、酸または還元に対して不安定なリンカーであることを特徴とする求核物質に対して安定なカルボキシエステルアルキルチオール、の提供を意図する。本発明は、また、オルトチオロエステルまたはカルボキシエステルチオールから成る、求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂にも関する。この求核物質に対して安定なチオエステル生成樹脂は、式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒ−リンカー−樹脂、Ｘ−Ｃ（（ＯＲ１’−リンカー−樹脂）（ＯＲ２’））−Ｓ−Ｒ、Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−リンカー−樹脂、またはＸ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’−リンカー−樹脂）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’、を有する。やはり提供するのは、本発明の求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物、中間組成物の製造方法、および使用の方法である。
【０００７】
本発明の化合物は、求核物質仲介有機合成法、たとえばＦｍｏｃを基材とするＳＰＰＳにおいて、集中（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ）または両立（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）選択連結過程の間に、より一般的に言えば、水酸化物イオンその他の強力な求核物質が存在するかまたは生成される条件下で、使用される求核物質に対して安定であり、したがって幅広い用途が見出される。たとえば、求核物質に対して安定なオルトチオロエステルまたはカルボキシエステルチオール含有成分を、水酸化物イオンその他の強力な求核物質の存在下で製造し、そのあと都合の良いときに、活性チオールに転化させることができる。求核物質に対して安定なオルトチオロエステルを活性化させるためには、非求核物質たとえば強酸を使用して、酸素保護基をオルトチオロエステルから除去するだけでよい。そのようにして得られるチオエステル活性化成分はいくつかのチオエステル仲介連結反応のどれにおいても使用することができる。本発明の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールは、チオール触媒を混合することによって活性化させることができる。チオール触媒の添加により、分子内チオエステルの生成が促進され、したがって求核基を含む関心のある成分とのチオエステル仲介連結反応が促進される。
【０００８】
したがって、本発明の、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物と本発明の方法とは、求核物質合成法、特に、固相または溶液相のＦｍｏｃを基材とする小分子およびペプチド合成法における用途を大きく拡大するものである。すなわち、そのような方法で得られる生成物を、特に、小さな有機分子、ぺプチド、ポリペプチド、他のポリマー、その他の製造のための、幅広いチオエステル仲介連結反応において使用することができる。
【０００９】
（発明の実施形態の説明）
本発明は、オルトチオロエステルまたはカルボキシエステルチオールを含む、求核物質に対して安定なチオエステル生成化合物、製造の方法、および使用に関する。この化合物および方法は、有機合成、たとえばペプチドチオエステル、ポリペプチドチオエステル、その他のポリマーチオエステルの生成において、幅広い応用可能性を有する。本発明は、特に、強力な求核物質が使用される条件下で製造された前駆物質たとえばＦｍｏｃ　ＳＰＰＳを用いて製造されたペプチドまたはポリペプチドから、活性化チオエステルを製造するのに有効であり、また、関心のある特定の連結または複合反応に導くために選択されるいくつかの両立する保護方法を必要とする（または、これらの方法の使用によって利益を受ける）多段連結または複合方法において有効である。
【００１０】
本発明の求核物質に対して安定なオルトチオロエステルは、式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒを有し、ここで、Ｘは、求核物質によって開裂できる一つ以上の保護基を随意に有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’は、非求核開裂条件下で除去できる、求核物質に対して安定な保護基であり、Ｒは、オルトチオロエステル−Ｃ（ＯＲ’）−Ｓ−に適合する任意の基である。本発明は、また、求核物質に対して安定なオルトチオロエステルチオエステル生成樹脂をも提供する。該樹脂は、式Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−Ｒ−リンカー−樹脂、またはＸ−Ｃ（（ＯＲ１’−リンカー−樹脂）（ＯＲ２’））−ＳＲを有し、ここで、Ｘ、Ｒ’、およびＲは、前記のものと同じであり、またリンカーと樹脂は、固相有機合成での使用に適した、任意の、求核物質に対して安定なリンカーと樹脂であり、たとえば、引続いて開裂のために求核物質に対して不安定なリンカーに転化させることのできる安全捕捉リンカーである。
【００１１】
目標分子Ｘの非限定例としては、求核物質に対して不安定な保護基（すなわち、求核条件下で開裂できる保護基）によって保護された、一つ以上の反応性官能基たとえばアミン、たとえば、求核物質に対して不安定なＦｍｏｃ基によって保護されたアミノ酸のＮαアミノ基、を有する任意の成分がある。したがって、Ｘには、天然に産する、反応性官能基を含む化合物、またはそのような官能基を含むように作られた化合物、たとえばアミノ酸またはアミノ酸誘導体、ペプチド、ポリペプチド、核酸、脂質、炭水化物、水溶性ポリマー（たとえばポリアルキレンオキシド、ポリアミド、これらのコポリマー、その他）が含まれうる。ただし、これらに含まれる少なくとも一つの反応性官能基が求核物質に対して不安定な保護基となるものとする。多くのそのような保護基が公知であり、ここでの目的のために適当である（たとえば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ　Ｃａｔａｌｏｇ　２０００；“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａ　Ｕｓｅｒ’ｓ　Ｇｕｉｄｅ，”Ｇ．Ａ．Ｇｒａｎｔ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　＆　Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｗ．Ｄ．．Ｂｅｎｎｅｔ，Ｊ．Ｗ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｌ．Ｋ．Ｈａｍａｋｅｒ，Ｍ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．Ｒｈｏｄｅｓ，ａｎｄ　Ｈ．Ｈ．Ｓａｎｅｉｉ，Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ，１９９８；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．，”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９３；“Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　ａｎｄ　Ａ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９４；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ，”Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｅｄ．，Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１９９４，を参照されたい）。
【００１２】
Ｒの非限定例としては、アリール、ベンジル、およびアルキル基がある。好ましい実施形態は、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルチオエステル、ベンジルチオエステル、メルカプト酢酸チオエステル、およびメルカプトプロピオン酸ロイシンエステルがある（たとえば、Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９４）２６６：７７６−７７９；Ｃａｎｎｅ　ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．（１９９５）３６：１２１７−１２２０；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ９６／３４８７８；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ　９８／２８４３４；Ｉｎｇｅｎｉｔｏ　ｅｔ　ａｌ．，ＪＡＣＳ（１９９９）１２１（４９）：１１３６９−１１３７４；Ｈａｃｋｅｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９９）９６：１００６８−１００７３，を参照されたい）。
【００１３】
Ｒ’の非限定例としては、求核物質に対しては安定であるが（すなわち、求核物質に対して安定な保護基）、酸性条件下では不安定な（すなわち、非求核物質に対して不安定な保護基）保護基、たとえば触媒を含む水素発生物質（“Ｈ２／Ｃａｔ．”その他の還元剤）、または強酸たとえばトリフルオロ酢酸（“ＴＦＡ”）またはフッ化水素（“ＨＦ”）、がある。ただし、保護基Ｒ’には、求核物質に対して安定で、非求核物質に対して不安定であるならば、Ｆｍｏｃ　ＳＰＰＳと両立する任意の保護基が含まれる。多くのそのような保護基が公知であり、ここでの目的のために適当である（たとえば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ　Ｃａｔａｌｏｇ　２０００；“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａ　Ｕｓｅｒ’ｓ　Ｇｕｉｄｅ，”Ｇ．Ａ．Ｇｒａｎｔ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　＆　Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｗ．Ｄ．．Ｂｅｎｎｅｔ，Ｊ．Ｗ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｌ．Ｋ．Ｈａｍａｋｅｒ，Ｍ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．Ｒｈｏｄｅｓ，ａｎｄ　Ｈ．Ｈ．Ｓａｎｅｉｉ，Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ，１９９８；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．，”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９３；“Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　ａｎｄ　Ａ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９４；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ，”Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｅｄ．，Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１９９４，を参照されたい）。
【００１４】
Ｒ’基は、オルトチオロエステル−Ｃ［（ＯＲ１’）（ＯＲ２’）］上の独立のオキシ基と複合する独立の保護基とすることができる。ここでは、この基を特に取り上げて言う場合には、“非環状オルトチオロエステル保護基”と呼ぶことにする。あるいは、Ｒ’基は、ジオキシサイクリック構造をなし、二つのオキシ基−Ｃ（Ｏ−Ｒ’−Ｏ）に結合して、保護するものとすることができる。ここでは、この基を特に取り上げて言う場合には、“環状オルトチオロエステル保護基”と呼ぶことにする。これらの化合物を、下に示す。左の化合物が環状オルトチオロエステルであり、右の化合物が非環状オルトチオロエステルである。
【００１５】
【化１】
2004507557.tif 000002
【００１６】
環状オルトチオロエステルの場合、（ｎ）＝１〜７炭素であり、Ｒ３は存在するかまたは存在しないかであって、独立に存在することができ、あるいはジオキシサイクリック主鎖上の二つ以上の同一または混合置換基として存在することができ、これは非求核物質に対するＲ’の不安定性を調節する成分である。Ｒ３は、好ましくは、非求核保護基Ｒ’の除去に対する安定性を向上させる、電子吸引基または電子供与基である。この環状オルトチオロエステルにおいては、（ｎ）＝１〜５、より好ましくは（ｎ）＝１〜３であり、（ｎ）＝１〜２がもっとも好ましく、Ｒ３はアルキル、ベンジル、またはアリール基とするのが好ましい。このＲ３アルキル、ベンジル、またはアリール基は、それぞれの環状オルトチオロエステルの性質を意図するその最終用途に応じて調節するために選択された、線状、枝分かれ、置換または非置換環状芳香族または非芳香族、複素環式芳香族または非芳香族構造とすることができ、あるいはそのような構造を含むことができる。一般に、このＲ３アルキル、ベンジル、およびアリール基は、ＳＰＰＳで使用されるものであり、酸または還元開裂に適合するものである。適当な電子吸引基の非限定例としては、いろいろな酸化状態（Ｏ−を除く）のヘテロ原子、カルボニル、ニトリル、スルホキシ、スルホン、スルフェート、およびハロゲン基がある。適当な電子供与基の非限定例としては、脂肪族、枝分かれ脂肪族、ベンジル、置換ベンジル基がある。好ましい電子吸引基としては、ケトン、エステル、アミド、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ニトリル、スルホキシ、スルホン、および一つ以上の電子吸引基で置換されたベンジル基がある。好ましい電子供与基としては、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２（ＣＨ３）２、および一つ以上の電子供与基で置換されたベンジル基がある。一つの好ましい実施形態においては、Ｒ３は求核開裂条件下で安定（すなわち、求核物質に対して安定）な電子吸引基を有する。ここで使用するのに適当な、いろいろな電子供与および吸引基たとえば前記のものは、“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，”４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｊ．Ｍａｒｃｈ（Ｅｄ．），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２　の１８ページに記載されている。容易にわかるであろうが、Ｒ３はスペーサー基一般に−ＣＨ２−基を有することができ、これは非求核開裂に対するＲ’保護基の安定性を調節するため、または特定の目標分子の合成の容易化もしくは改善のために選択することができ、還元形または非還元形で備えることができる。
【００１７】
非環状オルトチオロエステルにおいては、Ｒ’は独立のオキシ保護基Ｒ１’およびＲ２’であり、このＲ１’およびＲ２’基は、同じものまたは異なるものとすることができ、アルキル、ベンジル、またはアリール基から選択する。好ましいＲ１’およびＲ２’アルキル、ベンジル、またはアリール基は電子吸引基または電子供与基であり、好ましくは同じものである。Ｒ１’およびＲ２’基は、線状、枝分かれ、置換または非置換環状芳香族または非芳香族、複素環式芳香族または非芳香族構造から成ることができ、それぞれの非環状オルトチオロエステルの意図する最終用途に応じてその性質を調節するために選択される。一般に、Ｒ１’およびＲ２’基はＳＰＰＳで使用されるものであり、酸性および還元性開裂に適合するものである。好ましい実施形態においては、Ｒ１’およびＲ２’基は、求核開裂条件に対して安定（すなわち、求核物質に対して安定）な電子吸引基から成る。適当な電子吸引基の非限定例としては、いろいろな酸化状態（Ｏ−を除く）のヘテロ原子、カルボニル、ニトリル、スルホキシ、スルホン、スルフェート、およびハロゲン基がある。適当な電子供与基の非限定例としては、脂肪族、枝分かれ脂肪族、ベンジル、置換ベンジル基がある。好ましい電子吸引基としては、ケトン、エステル、アミド、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ニトリル、スルホキシ、スルホン、および一つ以上の電子吸引基で置換されたベンジル基がある。好ましい電子供与基としては、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２（ＣＨ３）２、および一つ以上の電子供与基で置換されたベンジル基がある。ここで使用するのに適当な、いろいろな電子供与および吸引基たとえば前記のものは、“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，”４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｊ．Ｍａｒｃｈ（Ｅｄ．），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２　の１８ページに記載されている。容易にわかるであろうが、Ｒ３はスペーサー基一般に−ＣＨ２−基を有することができ、これは非求核開裂に対するＲ’保護基の安定性を調節するため、または特定の目標分子の合成の容易化もしくは改善のために選択することができ、還元形または非還元形で備えることができる。
【００１８】
本発明の求核物質に対して安定なオルトチオロエステルは、当業者にとって公知の標準的有機化学技術に従い、また本明細書で述べるようにして、溶液中で、またはポリマー支持合成によって、またはそれらの組合せにより、合成することができる。たとえば、“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，”４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｊ．Ｍａｒｃｈ（Ｅｄ．），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｇｒｏｕｐ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，”Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ（Ｅｄ．），ＶＣＨ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８９；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９；Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ，Ｓｅｒ．Ｃ（１９６８）２６６（２０）：１５０６−１５０７；Ｈｏｎｍａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９７６）２４（４）：８１８−８２０，を参照されたい。本発明のオルトチオロエステルチオエステル生成樹脂を合成する液相と固相の方法を、Ｆｍｏｃ−アミノ酸に関して、下記の方法Ｉ〜ＩＩＩに例示する。方法Ｉ〜ＩＩＩにおいて、Ｒｓは関心のあるアミノ酸側鎖であり、これは遺伝子的にコード化されたもしくはコード化されていないアミノ酸側鎖またはその誘導体とすることができ、保護されたものまたは保護されていないものとすることができる。また、Ｚは、存在してもしなくても良い保護基であり、それぞれの合成法に応じていろいろな基とすることができ、たとえばＦｍｏｃ、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ−またはＣｂｚ−）、またはｔ−ブチルオキシカルボニル（“Ｂｏｃ”）基とすることができる。合成に使用する反応物は多くの商業的供給源から得ることができるが、新たに作っても良い。また、容易にわかるように、出発成分およびいろいろな中間体、たとえば第一アミノ酸または他の化合物Ｘを有するオルトチオロエステルチオエステル生成化合物を、適当な有機合成方法による後続合成でのあとからの使用のために、キットその他の形で保存することができる。
【００１９】
一般に、オルトチオロエステルは、チオール交換反応により、前駆物質のオルトエステルをオルトチオロエステルに転化することによって製造される。もっと詳しく言えば、オルトエステルＸ−Ｃ（ＯＲ’）３を、標準的な手順にしたがって、当該の、求核物質に対して安定な必要な保護基を含む前駆物質として製造する（たとえば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．４３７ｆｆ，１９９９；ＭｃＥｌｖｉｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９４２）６４：１８２５；Ｒ．Ｈ．Ｄｅｗｏｌｆ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９７４）１５３；Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ，Ｓｅｒ．Ｃ（１９６８）２６６（２０）：１５０６−１５０７；Ｈｏｎｍａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９７６）２４（４）：８１８−８２０，を参照されたい）。好ましい実施形態においては、オルトエステル前駆物質が最終的なルイス酸触媒トランスオルトエステル化反応に関与するニトリルから製造される。これを、下記の方法Ｉに示す。この方法の場合、ニトリルの形の目標分子Ｘが、強酸たとえばＨＣｌまたはＨＢｒおよび過剰の第一（ｐｒｉｍｉｎｇ）アルコールたとえばメタノールもしくはエタノールまたはアルコールの形の保護基Ｒ’すなわちＲ’ＯＨ、と混合される。次に、第一アルコール改質ニトリルを、適当なルイス酸たとえばＡｌＣｌ３、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ、またはＳｎＣｌ４の存在下での、必要なアルコールの形の保護基Ｒ’ＯＨとの反応によって、所望のオルトエステル前駆物質Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）３に転化させる。あるいは、このニトリルは、第一のアルコールＲ’ＯＨによってイミノエステルに転化させることができ、そのあと、ルイス酸触媒の存在下で第二のアルコールＲ’ＯＨの添加により所望の前駆物質オルトエステルＸ−Ｃ（ＯＲ’）３に転化させる。大部分の場合、第一および第二のアルコールＲ’ＯＨは同じものであるが、混合オルトエステルが必要な場合には、異なるものとすることができる。たとえば、混合構成が必要な場合、第一のアルコールを第一アルコールとすることができる。環状オルトチオロエステル前駆物質を生成させるためには、ジアルコールの形の必要な保護基すなわちＯＨ−Ｒ’−ＯＨを、ルイス酸を触媒として、第一アルコール改質オルトエステルまたはイミノエステルから誘導されたオルトエステルと混合する。非環状の前駆物質を生成させるためには、モノアルコールを使用する。オルトエステル前駆物質は酸から製造することもできるが、この方法はあまり好ましくない。場合によっては、非ルイス酸１，１，１−トリハライドを触媒として使用することができるが、これもあまり好ましくない。
【００２０】
【化２】
2004507557.tif 000003
【００２１】
オルトエステル前駆物質Ｘ−Ｃ（ＯＲ’）３を作ったら、あとで使用するために保存することができ、あるいはただちに、標準手順に従う、ルイス酸たとえばＡｌＣｌ３の存在下での適当なアルキル、ベンジル、またはアリールチオールとの交換反応により所望のオルトチオロエステルＸ−Ｃ（ＯＲ’）２−Ｓ−に転化させることができる（Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ，Ｓｅｒ．Ｃ（１９６８）２６６（２０）：１５０６−１５０７；Ｈｏｎｍａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９７６）２４（４）：８１８−８２０）。これを、Ｆｍｏｃ−アミノ酸オルトチオロエステルに関して、下記の方法ＩＩおよびＩＩＩに示す。
【００２２】
【化３】
2004507557.tif 000004
【００２３】
【化４】
2004507557.tif 000005
【００２４】
図１は、求核物質に対して安定なＦｍｏｃオルトチオロエステルチオエステル生成樹脂と、いろいろな求核物質に対して安定な中間体および目標の活性化チオエステルＸ−Ｃ（Ｏ）ＳＲを製造するための反応機構とを示す。この図は、前記物質を使用することにより可能となる、化学物質合成に対する、両立選択保護法の相当な柔軟性を示している。本発明によれば、酸に対する不安定性が同じかまたは異なる連結リンカーおよび残基保護基の選択が可能になる。同様に、酸の添加（リンカーの開裂および／またはチオエステルの生成のため）は、塩基の添加（Ｆｍｏｃ成分の除去のため）の前またはあとに、実行することができる。本発明は、たとえば、適当な酸不安定な保護基たとえばベンジル、Ｔｒｔ、その他を選択することにより、まだ樹脂に結合している間に、保護解除しうる生成物を合成することができる（すなわち、残基保護基を、リンカーよりも酸不安定であるように選択する）。あるいは、樹脂から解放してから保護解除することのできる生成物を合成することもできる（すなわち、残基保護基を、リンカーよりも酸不安定性が小さくなるように選択する）。したがって、合成法の無数の変形が可能である。
【００２５】
たとえば、（Ａ）と（Ｂ）に示すように、合成された材料を、求核物質または塩基（たとえば、ピペリジン）の存在下で、Ｆｍｏｃ基を開裂させるのに十分な条件下において、そのあとオルトチオロエステル−Ｃ（ＯＲ’）２Ｓ−をチオエステル−Ｃ（Ｏ）Ｓ−に転化させるのに十分な酸性条件下において、定温放置することができる。（Ａ）に示すように、ポリペプチドを樹脂に連結するのに使用するリンカーは、チオエステルの生成に十分な条件下での酸（ＨＦ、ＴＦＡ、その他）開裂に対して抵抗力があるように選択することができる。たとえば、この実施形態の場合、Ｆｍｏｃによって保護されているアミノ基は保護解除され、チオエステルが生成されるが、ポリペプチドは固体支持体に連結されたままである。あるいは、（Ｂ）に示すように、ポリペプチドを樹脂に連結するのに使用するリンカーは、チオエステル生成に使用する条件下で開裂されるように、選択することができる。たとえば、この実施形態の場合、Ｆｍｏｃによって保護されているアミノ基は保護解除され、チオエステルが生成されて、ポリペプチドは固体支持体から解放される。
【００２６】
あるいは、（Ｃ）と（Ｄ）に示すように、合成された材料を、求核物質または塩基（たとえば、ピペリジン）の存在下で、Ｆｍｏｃ基を開裂させるのに十分な条件下において、定温放置することができるが、このとき、オルトチオロエステル−Ｃ（ＯＲ’）２Ｓ−をチオエステル−Ｃ（Ｏ）Ｓ−に転化させるのに十分な酸性条件下において反応物を定温放置することはしない。これらの実施形態においては、チオエステルの生成なしで、Ｆｍｏｃ基を除去することができる。たとえば、（Ｃ）に示すように、Ｆｍｏｃ基を除去して、固体支持体からポリペプチドまたはたんぱく質を開裂させるかまたはチオエステルを生成させる前に、リンカーよりも酸開裂を受けにくい残基を保護解除することができる。あるいは、（Ｄ）に示すように、Ｆｍｏｃ基を除去し、固体支持体からポリペプチドまたはたんぱく質を開裂させてから、チオエステル生成前に他の保護されている残基を保護解除することができる。
【００２７】
本発明の方法によれば、前記のやり方のいろいろな組合せを使用することができる（たとえば、同じ合成において、いくつかの残基に対してはリンカーよりも酸に対して不安定な基を保護解除し、他の残基に対してはリンカーよりも酸に対して安定な他の基を保護解除する、など）。
【００２８】
図２は、求核物質に対して安定なＦｍｏｃカルボキシエステルアルキルチオールチオエステル生成樹脂と、チオール触媒による活性化によって、いろいろな求核物質に対して安定な中間体および活性化チオエステル目標Ｘ−Ｃ（Ｏ）ＳＲを製造する方法とを示す。この図は、前記物質の使用によって得られる化学物質合成の相当な柔軟性を示している。たとえば、（Ｅ）に示すように、リンカーと残基保護基は、合成された材料を、Ｆｍｏｃ保護基を除去するのに十分な条件下で定温放置し、そのあと保護基がリンカーよりも酸不安定な残基を保護解除するのに十分な条件下で定温放置することができるように、選択する。この実施形態の場合、Ｆｍｏｃ保護残基と酸不安定な残基は、チオエステルの生成または樹脂からの合成物質の解放なしで、保護解除される。そのあと、適当な条件下でのリンカーの開裂を使用して、化合物カルボキシエステルアルキルチオールを溶液中に解放することができる。それから、該化合物を、触媒チオールの添加により、チオールエステルに転化させることができる。あるいは、（Ｆ）に示すように、リンカーと残基保護基は、合成された材料を、Ｆｍｏｃを除去し、チオエステルの生成なしで、樹脂から合成生成物を解放するのに十分な一つ以上の組合せの条件下で定温放置することができるように、選択することができる。この実施形態の場合、合成された材料は樹脂から解放され、リンカーよりも不安定な前記の選択された残基保護基が除去され、一方リンカーよりも酸に対して安定な前記の選択された残基保護基は保持される。もう一つの実施形態（Ｇ）においては、チオール触媒が添加され、カルボキシチオールチオエステルがチオエステルに転化されるようにされる。そのような添加は、塩基または酸の添加の前またはあとに行うことができる。たとえば、合成生成物がＦｍｏｃ保護解除されたあと、任意の順序で、該生成物は樹脂から開裂させるか、または保護されている残基を保護解除することができる。さらに、本発明の方法によれば、前記のやり方のいろいろな組合せを使用することができる（たとえば、同じ合成において、いくつかの残基に対してはリンカーよりも酸に対して不安定な基を保護解除し、他の残基に対してはリンカーよりも酸に対して安定な他の基を保護解除する、など）。
【００２９】
図１と２に示すように、オルトチオロエステルは、目標分子ＸのＦｍｏｃに適合する合成により、樹脂に結合させることができる。リンカーと樹脂の系はそれぞれの最終用途に応じて選択される。多くのそのような系が周知であり、ここでの目的に適する（たとえば、Ｔｈｅ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　Ｉｎｄｅｘ，Ｂ．Ａ．Ｂｕｎｉｎ，Ａｃｅｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，１９９８；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ　Ｃａｔａｌｏｇ　２０００；“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａ　Ｕｓｅｒ’ｓ　Ｇｕｉｄｅ，”Ｇ．Ａ．Ｇｒａｎｔ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　＆　Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｗ．Ｄ．．Ｂｅｎｎｅｔ，Ｊ．Ｗ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｌ．Ｋ．Ｈａｍａｋｅｒ，Ｍ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．Ｒｈｏｄｅｓ，ａｎｄ　Ｈ．Ｈ．Ｓａｎｅｉｉ，Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ，１９９８；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄｅｄ．，”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９３；“Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．，”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　ａｎｄ　Ａ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９４，を参照されたい）。
【００３０】
リンカーと樹脂の系と組合せて保護基Ｒ’を選択することにより、さらなる柔軟性が与えられる。たとえば、保護基Ｒ’およびオルトチオロエステルを樹脂に結合するリンカーに応じて、任意の数の両立する選択的または非選択的樹脂上合成、開裂、およびチオエステル活性化方策を使用することができる。両立する選択的保護法には、異なる化学的機構によって除去される二つ以上の種または基が関与し、したがって他の種の存在下で任意の順序で除去することができる。両立する選択的方法は相当に穏やかな全体的条件の可能性を与える。選択性は、反応速度ではなく化学物質の違いによって実現できるからである。たとえば、Ｆｍｏｃ化学物質がペプチド合成に使用される場合、すなわち、ＸがＦｍｏｃ保護アミノ酸またはペプチドであるがアミノ酸添加の各サイクルにおいてピペリジンが使用される場合、オルトチオロエステルは安定である。問題の最後の結合サイクルが完了したら、Ｆｍｏｃ基を、ピペリジン反応混液を用いて除去することができる。そのあと、一般に、ペプチド樹脂の強酸たとえばＴＦＡによる処理を行い、存在するすべての他のＴＦＡ不安定側鎖保護基を除去する。ＴＦＡに対して不安定なオルトオキシ保護基Ｒ’がオルトチオロエステルに使用されている場合、ＴＦＡ処理によって求核物質に対して不安定なペプチドチオエステルが生成される。たとえば、ＴＦＡ不安定なリンカーたとえばＲｉｎｋリンカーを含む合成用の樹脂が使用されている場合、ペプチド−チオエステルが同時に生成され、樹脂から開裂され、活性化ペプチド−チオエステルが溶液中に解放される。すると、この開裂生成物が後続の必要なチオエステル仲介反応に適したものとなる。あるいは、ＨＦ不安定なオルトオキシ保護基の系を使用し、またＴＦＡ不安定なリンカーを有する合成用樹脂を使用する場合、ＴＦＡ処理により求核物質に対して安定なペプチドオルトチオロエステルが溶液中に生成される。これは、Ｃ末端求核安定オルトチオロエステルとともにＮ末端反応性基たとえばシステインを有するペプチドの生成に特に有効である（たとえば、図３を参照されたい）。酸安定リンカーを使用する場合には、チオエステルペプチドが樹脂に結合したままになる。これは酵素または安全捕捉開裂可能なリンカーを使用する場合に起こりうることである。両立選択性保護は、合成される目標分子Ｘにも適用することができる。これは、集中複合または連結法において使用される中間体の製造におけると同様にある種の構造の合成にも有効でありうる（たとえば、図３および４参照）。オルトチオロエステルまたはカルボキシエステルチオール、リンカー、および合成された目標分子Ｘ上の、非求核物質に対して不安定な保護基が、同じ組合せの条件に対して不安定であり、同時に開裂する、非選択的方法は、ある種の目標に対しては有効でありえて、化学的ステップ数の減少に寄与しうる。すでに明らかなように、ペプチドに関して前述したものと同じ基本設計の方法を、関心のある他の目標分子たとえば他のポリマーおよび小さな分子に適用することができ、樹脂上または溶液中の部分保護または完全非保護目標分子Ｘの生成に使用することができる。
【００３１】
図３は、自然な化学連結反応により、目標分子を合成する集中的方法（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ　ｓｃｈｅｍｅ）を示す。この実施例では、仮想的なペプチドセグメントＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤと、求核物質に対して安定なＦｍｏｃ生成オルトチオロエステルセグメントとに自然な化学連結反応を起こさせ、システイン連結部位での天然アミド結合によって結合されたポリペプチド連結生成物Ａ−ｃｙｓ−Ｂ−ｃｙｓ−Ｃ−ｃｙｓ−Ｄを生成させる。この図は、たんぱく質、ポリペプチド、およびポリマーの二方向有機合成を仲介する本発明の方法の偉力を示す。この図に示すように、この方法は、複数の“セグメント”を結合することができる（これらのセグメントは、誘導体に変換されたたんぱく質、ポリペプチド、アミノ酸、樹脂、核酸、炭水化物、ポリマー、その他とすることができる）。任意の数のそのようなセグメントを結合することができる。この方法によれば、“セグメントＡ”チオエステルのチオエステル成分は“セグメントＢ”チオエステルのシステイン残基と反応する。この“セグメントＢ”チオエステルはオルトチオロエステル成分をも含む。システイン残基のアミノ窒素とイオウ原子とは“セグメントＡ”チオエステルの炭素を攻撃して、５員環の過渡的形成をもたらす。この環は自然に分解して連結された“セグメントＡＢ”生成物を生じる。該生成物においては、アミド結合により前の方のチオエステルの炭素とアミノ窒素原子とが結合され、またシステイン残基が再生成される。“セグメントＡ”と“セグメントＢ”との間の反応は、“セグメントＢ”のオルトチオロエステル成分に関係せず、またこれに影響しない。本発明の方法を使用することにより、“セグメントＢ”のオルトチオロエステル成分はチオエステルに転化され、それによって、“セグメントＡ”と同様にさらに延長しうる化合物が生成される。“セグメントＡ”と“セグメントＢ”との間のこの反応は、アミノからカルボキシへの向きのペプチド合成を示す。図３に示す第二の実施形態では、カルボキシからアミノへの向きのペプチド合成が与えられる。“セグメントＣ”（保護された（“ＰＧ”）システイン残基とチオエステルを含む、誘導体に変換されたたんぱく質、ポリペプチド、ポリマー、炭水化物、核酸、またはアミノ酸）が、“セグメントＤ”（システイン、またはＮ末端システイン含有たんぱく質、ポリペプチド、ポリマー）と反応する。セグメントＡとＢの場合と同様に、この反応により、分解が起こり、連結された“セグメントＣＤ”生成物を生じる。該生成物においては、アミド結合により前の方のチオエステルの炭素とセグメントＤの前の方のＮ末端Ｃｙｓのアミノ窒素原子とが結合され、またシステイン残基側鎖チオールが再生成される。ＰＧ保護基が除去されると、連結された分子は、“セグメントＤ”と同様に、さらに延長することができる。重要なことは、セグメントＡＢ連結生成物は、そのチオエステル成分の生成により、セグメントＣＤ連結生成物に連結することができ、したがってセグメントＡＢＣＤ連結生成物の製造のための集中合成法が構成されるということである。
【００３２】
図４は、目標分子の自然な化学連結反応に関して図３に示したものに代わりうる集中的方法を示す。この実施例では、仮想的なペプチドセグメントＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤを、求核物質に対して安定なＦｍｏｃ生成オルトチオロエステルセグメントに連結し、システイン連結部位での天然アミド結合によって結合されたポリペプチド連結生成物Ａ−ｃｙｓ−Ｂ−ｃｙｓ−Ｃ−ｃｙｓ−Ｄを生成させる。
【００３３】
本発明の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールは、式Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’を有し、Ｘが、求核物質に対して不安定な一つ以上の保護基を有する、関心のある目標分子であり、Ｒ’’が、非求核物質に対して安定な基であり、ｎが１または２であって、ｎ＝１が好ましく、Ｒ’’’が、水素、保護基、または、非求核条件下で除去できる樹脂または保護基に結合された、酸性、もしくは還元性不安定な、または安全捕捉リンカーである。求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールを基材とするチオエステル生成樹脂も提供される。このチオエステル生成樹脂は、式Ｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−リンカー−樹脂、またはＸ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ（Ｒ’’−リンカー−樹脂）−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ’’’、を有し、この式で、Ｘ、Ｒ’’、ｎ、およびＲ’’’は前記のものであり、またリンカーおよび樹脂は、固相有機合成での使用に適する、求核物質に対して安定な任意のリンカーおよび樹脂である。
【００３４】
目標分子Ｘの非限定例としては、求核物質に対して不安定な保護基（すなわち、求核条件下で開裂できる保護基）によって保護された、一つ以上の反応性官能基たとえばアミン、たとえば、求核物質に対して不安定なＦｍｏｃ基によって保護されたアミノ酸のＮαアミノ基、を有する任意の成分がある。したがって、Ｘには、天然に産する、反応性官能基を含む化合物、またはそのような官能基を含むように作られた化合物、たとえばアミノ酸またはアミノ酸誘導体、ペプチド、ポリペプチド、核酸、脂質、炭水化物、水溶性ポリマー（たとえばポリアルキレンオキシド、ポリアミド、これらのコポリマー、その他）が含まれうる。ただし、これらに含まれる少なくとも一つの反応性官能基が求核物質に対して不安定な保護基となるものとする。多くのそのような保護基が公知であり、ここでの目的のために適当である（たとえば、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ　Ｃａｔａｌｏｇ　２０００；“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａ　Ｕｓｅｒ’ｓ　Ｇｕｉｄｅ，”Ｇ．Ａ．Ｇｒａｎｔ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　＆　Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｗ．Ｄ．．Ｂｅｎｎｅｔ，Ｊ．Ｗ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｌ．Ｋ．Ｈａｍａｋｅｒ，Ｍ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．Ｒｈｏｄｅｓ，ａｎｄ　Ｈ．Ｈ．Ｓａｎｅｉｉ，Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｔｅｃｈ，１９９８；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．，”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９３；“Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ　ｅｄ．”Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　ａｎｄ　Ａ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９４；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ，”Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｅｄ．，Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１９９４，を参照されたい）。
【００３５】
Ｒ’’基は、ｉ）エステルを酸または還元開裂条件に対して安定（すなわち、非求核物質に対して安定）なものとし、ｉｉ）触媒チオールの存在下でのチオエステル化交換反応を可能にする、という性質を有するように選択されたいろいろな電子吸引または供与基の任意のものとすることができる。適当なＲ’’基は、脂肪族、枝分かれ脂肪族、ヘテロ原子、カルボニル、ベンジル、ニトリル、スルホキシ、スルホン、スルフェート、およびハロゲン基から選択することができる。好ましい実施形態は、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ２（ＣＨ３）２、メトキシ、ケトン、エステル、アミド、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ニトリル、スルホキシ、スルホン、および一つ以上の電子吸引または供与基で置換されたベンジル基を含む。チオール触媒は、非複合メルカプタンまたは複合チオールとすることができる。好ましい触媒チオールとしては、ベンジルメルカプタン、チオフェノール、１−チオ−２−ニトロフェノール、２−チオ−安息香酸、２−チオ−ピリジン、４−チオ−２−ピリデン（ｐｙｒｉｄｅｎ）カルボン酸、および４−チオ−２−ニトロフェノールがあり、チオフェノールがもっとも好ましい。
【００３６】
本発明の求核物質に対して安定なカルボキシエステルチオールの製造は、たとえば方法ＶＩＩ〜ＩＸ、例に述べるような方法の任意のものを使用し、また当業者にとって公知の標準的な有機化学の方法に従って実施することができる。たとえば、“Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ”４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｍａｒｃｈ（Ｅｄ．），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２；“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｇｒｏｕｐ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，”Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ（Ｅｄ．），ＶＣＨ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８９；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９，を参照されたい。好ましい方法においては、式ＰＧ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ（Ｒ’’）ＯＨのチオアルコール前駆物質または式ＰＧ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ（Ｒ’’）のチオケトンを使用する。ここで、ＰＧは求核物質に対して安定な保護基である。チオアルコールと塩基触媒（たとえば、ジメチルアミノピリジン“ＤＭＡＰ”のような塩基触媒）カルボキシエステル化とを使用する固相合成を、下記の方法ＩＶ〜ＶＩに例示する。これらは、Ｆｍｏｃ−アミノ酸カルボキシエステルチオールの生成を示す。方法ＩＶには、チオールによるリンカーへの結合が示されており、この場合、Ｒ’’’は遊離基である。方法Ｖは、示されているように、Ｒ’’による結合である。同じ基本合成法を非アミノ酸に対しても使用することができる。また、チオケトン前駆物質の場合、ケトンはチオアルコールの形に転化され、そのあとカルボキシエステル化が行われる。使用するリンカーは好ましくは酸に不安定な、たとえばＴＦＡ開裂可能なリンカー−樹脂の系、たとえばＷａｎｇ樹脂である。
【００３７】
【化５】
2004507557.tif 000006
【００３８】
【化６】
2004507557.tif 000007
【００３９】
【化７】
2004507557.tif 000008
【００４０】
本発明の求核物質に対して安定なチオエステル生成オルトチオロエステルおよびカルボキシエステルチオールは、複合および連結反応で使用されるチオエステルの合成に特別の用途を見出す。たとえば、これらの生成物は、ペプチドおよびポリペプチドのチオエステル仲介化学選択連結たとえば自然な化学連結に使用することができる（Ｄａｗｓｏｎ，ｅｔ　ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９４）２６６：７７６−７７９；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ　９６／３４８７８；Ｋｅｎｔ，ｅｔ　ａｌ．，ＷＯ　９８／２８４３４）。Ｃ末端または側鎖チオエステルを含むペプチドは、本発明のオルトチオロエステルおよびカルボキシエステルチオール組成物を、Ｆｍｏｃ合成とともに使用して、製造することができる。Ｎ末端Ｃｙｓ残基を有するペプチドまたはポリペプチドは、意図する最終用途に応じて、ＦｍｏｃもしくはＢｏｃ化学物質を使用するか、生物学的手段たとえば組換えＤＮＡ発現によるか、またはこれらの組合せによるかして、製造することができる。
【００４１】
このように、本発明の方法と組成物は、求核物質に対して鈍感な方法（たとえば、Ｂｏｃたんぱく質法）ばかりでなく、求核物質に敏感な（たとえば、Ｆｍｏｃその他）保護方策の使用を可能にするという利点を与える。そのような化学的方法は、酸に不安定な基、たとえばステロイド、フルオレセイン、および葉酸を、合成たんぱく質またはポリペプチドに連結することを可能にする。さらに、本発明は、通常のＦｍｏｃ反応物質および改質Ｆｍｏｃ反応物質を、化学連結反応に使用することを可能にする。特に、本発明は、任意の所望の合成ペプチドまたはポリペプチドのＦｍｏｃ　ＭＡＰ（複数の抗原性ペプチド）誘導体の製造を可能にする。Ｆｍｏｃ　ＭＡＰ反応物質は、一般に、リジンコアマトリックスから枝分かれしている複数の（たとえば、４または８個）のペプチドアームを有する。この反応物質の使用は、ペプチド（ｐｅｏｔｉｄｅ）の抗原性を高めると考えられる。試験的なワクチン設計で使用されたＭＡＰペプチドは、天然たんぱく質を認識する抗ペプチド抗体の大きな力価を引き出した（Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５４０９−５４１３；Ｐｏｓｎｅｔｔ，Ｄ．Ｎ．ｅｔ　ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，１７１９−１７２５；Ａｕｒｉａｕｌｔ，Ｃ．ｅｔ　ａｌ．（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅｓ．４，６−１１）。抗Ｖ３ループ（ｌｏｏｐ）エイズワクチンが、他のワクチンに比して高い濃度の抗体を刺激し、より持続的な免疫応答を誘起するということが報告されている（Ｗａｎｇ，Ｃ．Ｙ．ｅｔ　ａｌ．，（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４，２８５−２８８）。さらに、ＭＡＰペプチドの場合に、コーティング能力と結合活性との増大による、固相免疫検定における抗体−抗原相互作用の感度と信頼性との向上が、観察されている（Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．，ａｎｄ　Ｚａｖａｌａ，Ｆ．，（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１２４，５３−６１）。ＭＡＰ法は、ペプチドを、抗原決定基を変化させうるキャリアたんぱく質に複合させる必要をなくす。
【００４２】
本発明の方法は、反応性の基の両立選択保護を容易にし、したがって複数（ペプチド）セグメント連結のための集中合成法の実行が可能になり、そのため生成物の理論最大収率が上昇する。
【００４３】
両立選択保護の向上を与える本発明の能力により、単一の反応器、または本発明と異なる場合に必要となるものよりも少ない反応器で複数の反応を実施することが可能になる。
【００４４】
さらに、Ｆｍｏｃの化学作用の使用によりペプチドおよびポリペプチドを合成する能力により、合成されたペプチドの転化にペプチド転化技術を使用するのが容易になり、したがって下記のように、ペプチドのＣ末端にいろいろな変更を導入することが可能になる（たとえば、Ｍ．Ｄａｖｉｅｓ　ｅｔ　ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．８６９６−８７０３；Ｍ．Ｄａｖｉｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，（１９９７）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．１０９：１１３５−１１３８，を参照されたい）。
【００４５】
【化８】
2004507557.tif 000009
【００４６】
本明細書で引用した公刊物および特許出願書類は、すべて、それぞれの公刊物および特許出願書類がそれぞれ個別に参照によって組み入れられる場合と同じ程度に、参照によって本明細書に組み入れられるものとする。
【００４７】
以上、本発明を一般的に説明した。本発明は、以下の実施例を参照することにより、より十分に理解されるであろう。これらの実施例は、説明のためのものであり、特に明記しない限り、本発明の限定を意図するものではない。
【００４８】
（実施例）
以下に示す製造手順と実施例は、当業者が、本発明をよりはっきりと理解し、実施することができるように、示すものである。これらは、本発明の範囲を限定するものではなく、単に本発明の代表例を説明するものであると理解すべきである。
【００４９】
実施例１：クロロ−Ｗａｎｇ樹脂（ｐ−ベンジルオキシベンジルクロリド樹脂）の製造
クロロ−Ｗａｎｇ樹脂（ｐ−ベンジルオキシベンジルクロリド樹脂）を、Ｎ−クロロスクシンイミド（５ｍｍｏｌ、６６７ｍｇ）を１０ｍｌのＴＨＦに溶解させることによって製造した。トリフェニルホスフィン（５ｍｍｏｌ　１．３１ｇ）を、１０ｍｌのＴＨＦに溶解させ、Ｎ−クロロスクシンイミド溶液に加えた。白色固体が沈殿した。これに、さらに１０ｍｌのＴＨＦを加え、５分後に、１ｇのＷａｎｇ樹脂（０．７ｍｍｏｌ／ｇ）を混合物に加え、反応を一晩進行させた。次に、クロロ−Ｗａｎｇ樹脂をＤＭＦとＤＣＭで数回洗浄し、真空乾燥した。
【００５０】
実施例２：ｐ−ベンジルオキシベンジルチオエタノール樹脂の製造
Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を結合するためのｐ−ベンジルオキシベンジルチオエタノール樹脂を、以下のようにして製造した。１．５ｍｌの２−メルカプトエタノール、３ｍｌのＤＩＥＡ、および８ｍｌのＤＭＦから成る混合物を、実施例１で製造したクロロ−Ｗａｎｇ樹脂３５０ｍｇに加えた。２．５ｍｌのフローウォッシュ（ｆｌｏｗ　ｗａｓｈ）を使用し、反応を一晩進行させた。次に、樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで数回洗浄し、真空乾燥した。
【００５１】
実施例３：ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２プロパノール樹脂の製造
Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の結合のためのｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２プロパノール樹脂を、下記のようにして製造した。実施例１で製造したクロロ−Ｗａｎｇ樹脂３５０ｍｇに、１．５ｍｌの１−メルカプト−２プロパノール、３ｍｌのＤＩＥＡ、および８ｍｌのＤＭＦから成る混合物を加えた。２．５ｍｌのフローウォッシュを使用し、反応を一晩進行させた。次に、樹脂を、ＤＭＦおよびＤＣＭで数回洗浄し、真空乾燥した。
【００５２】
実施例４：Ｆｍｏｃ−グリシンのｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２プロパノール樹脂への結合
以下のようにして、ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２−プロピル−Ｆｍｏｃグリシンエステル樹脂を製造した。８３０ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−グリシン、０．２２ｍｌ（１．４ｍｍｏｌ）のＤＩＣ、１７．２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ、および２２ｍｇ（ｏ．１６ｍｍｏｌ）のＨＯＢＴを３ｍｌのＤＭＦに加えた混合物を、３０分間予備活性化してから、ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２プロパノール樹脂に加えた。反応を、一晩進行させた。
【００５３】
実施例５：ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２−プロピル−Ｆｍｏｃグリシンエステル樹脂上でのペプチドのＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ
配列ＦＫＬＡＧのペプチドを、標準的なＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ手順にしたがって、Ｆｍｏｃグリシンｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２プロパノール樹脂上で合成した。特に、Ｆｍｏｃ保護解除は、ＤＭＦに２０％のピペリジンを溶解させた溶液を使用して、実施した（アミノ酸添加サイクルあたり、３分ずつ２回）。標準的なＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ活性化を使用して、鎖集成（ａｓｓｅｍｂｌｙ）を実施した。このようにして、ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２−プロピル−ペプチドエステル樹脂を製造した。
【００５４】
実施例６：ｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２−プロピル−ペプチドエステル樹脂の酸開裂
ペプチド−カルボキシエステルチオールを、実施例５の樹脂結合ペプチドの酸開裂によって製造した。実施例５からのｐ−ベンジルオキシベンジルチオ−２−プロピル−ペプチドエステル樹脂（３５０ｍｇ）を、５ｍｌのＴＦＡ、０．２ｍｌの水、および０．２５ｍｌのチオアニソールによって、２時間処理した。ＦＫＬＡＧカルボキシエステルチオール、１−メルカプト，２−プロピルペプチドエステル、から成る開裂生成物を、ＨＰＬＣによって精製し、質量分析によって分析した。精製した開裂生成物は、予想された質量６０９．７Ｄａｌｔｏｎを示した。
【００５５】
実施例７：１−メルカプト，２−プロピルペプチドカルボキシエステルのＮ末端システイン−ペプチドへのチオエステル仲介連結
チオール触媒の存在下で活性化チオエステルペプチドに転化するペプチド−カルボキシエステルチオールの能力を、ペプチドを含むＮ末端システインに連結するペプチドの能力を試験することによって調べた。約０．３ｍｇの実施例６の１−メルカプト，２−プロピルペプチドエステル（ＦＫＬＡＧ−カルボキシエステルイソプロピルチオール）および０．６ｍｇのＮ末端システインペプチド（ＣＡＲＨＴＶＨＱＲＨＬＦＧ）、分子量１５６２を、室温で、０．２５ｍｌの６モルのグアニジニウム緩衝液ｐＨ７および０．０２ｍｌのチオフェノールと混合した。さらに、０．０２ｍｌのチオフェノールを加え、反応を進行させた。四日後、ＨＰＬＣにおける主ピークを、質量分析計によって分析した。このピークは、所望の連結反応生成物における質量２０７８Ｄａ（予想質量２０７９Ｄａ）に一致する。
【００５６】
実施例８：Ｆｍｏｃ−グリシンオルトトリメチルエステルの製造
アミノアセトニトリルＨＣＬ塩（１ｍｍｏｌ（９２．５３ｍｇ））を、ＤＭＦ　２ｍｌおよびＤＩＥＡ　２ｍｍｏｌ　０．３５ｍｌに溶解させた。次に、Ｆｍｏｃ−スクシンイミジル（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ジカーボネート　１．１ｍｍｏｌ（３５０ｍｇ）を加え、反応を一晩進行させた。水と希釈ＨＣＬを加えて、ｐＨを２とした。生成物を、酢酸エチルで３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＮを得た。１ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＮ（２７８ｍｇ）を、ＨＣｌガスで泡立てた２ｍｌの無水メタノールに溶解させた。反応を、０℃で４０時間継続させ（Ｖｏｓｓ　ａｎｄ　Ｇｅｒｌａｃｈ　Ｈｅｌｖ．Ｃｈｅｍ．Ａｃｔａ（１９８３）６６：２２９４）、所望のＦｍｏｃ−グリシンオルトトリメチルエステル（Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）３）を得た。
【００５７】
実施例９：Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル樹脂の樹脂上での製造
Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステルチオエステル生成樹脂の樹脂上での製造を、下記のように実施した。３，３´−ジチオジプロピオン酸ジ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル）（１０ｍｍｏｌ（４．０４ｇ））を、５ｍｌのＤＭＦ中で、ＮＨ２−｛Ｒｉｎｋリンカー｝−樹脂（１ｍｍｏｌ）に結合させた。結合は、ニンヒドリン試験によって調べた。得られた樹脂を、ＤＭＦで洗浄し、ＤＭＦに１０％ピペリジンと１０％のβメルカプトエタノールを溶解させた混合物を樹脂に加え、このとき、３０分間にわたって、１ｍｌのフローウォッシュと５ｍｌの回分処理とを実施した。樹脂を、ＤＭＦで洗浄し、１２ｍｌのＤＣＭ中で、１ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３（１３３ｍｇ）の存在下で、実施例８からの１０ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）３（３．５６ｇ）と反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌａｂ．Ｓｙｎ．Ｏｒｇ．Ｂ．，Ｆａｃ．Ｓｃｉ．Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ，Ｆｒ．Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ　Ｓｅｒ．Ｃ．（１９６８）２６６（２０）：１５０６−１５０７）、Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル樹脂を得た。
【００５８】
実施例１０：Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル酸の溶液相製造　Ｂｚｌ保護Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステルを、溶液中で、下記のようにして製造した。Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）３（１ｍｍｏｌ（３５６ｍｇ））を、０．１ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３（１３３ｍｇ）および２ｍｌのＤＣＭの存在下で、１ｍｍｏｌ　１９６ｍｇのＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌエステルと反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌａｂ．Ｓｙｎ．Ｏｒｇ．Ｂ．，Ｆａｃ．Ｓｃｉ．Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ，Ｆｒ．Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ　Ｓｅｒ．Ｃ．１９６８，２６６（２０）：１５０６−１５０７）、溶液中で、Ｂｚｌ保護Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル（Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌ）を得た。
【００５９】
ベンジル保護基を除去するために、Ｈ２／Ｐｔによる還元開裂を使用した（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２，ｐｐ２５０−２５２；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ，”Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｅｄ．，Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１９９４，ｐｇ．１３７）。１ｍｍｏｌのＢｚｌ保護Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌを、無水メタノール１０ｍｌに溶解させ、室温で、Ｈ２とともに３時間１００ｍｇのＰｔ触媒上で処理して、生成物Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨを得た。このＦｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル酸は、溶液相での結合のために使用することができ、あるいは標準的なＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ結合手順を使用してＮＨ２−Ｒｉｎｋ樹脂に結合させて、Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステル樹脂を得ることができる。
【００６０】
実施例１１：Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルエステルの製造
Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＮ（１ｍｍｏｌ（２７８ｍｇ））を、ＴＨＦ中で、ＨＣｌガスおよび１等量（ｍｍｏｌ）のエタノール（４６ｍｇ）と反応させて、イミノエステル中間体を得た。このイミノエステルを、同じ混合物中で、１ｍｍｏｌのエタンジオール［ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ］（６２ｍｇ）と反応させ、環状オルトエチルエステルＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−ＯＥｔを得た。また、実施例８で製造したＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＣＨ３）３　１ｍｍｏｌ（３５６ｍｇ）を、無水ＴＨＦ中で、０．１ｍｍｏｌのｐ−トルエンスルホン酸（１９ｍｇ）の存在下で、１ｍｍｏｌのエタンジオール［ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ］（６２ｍｇ）と反応させて、環状オルトエチルエステルＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−ＯＣＨ３を得た。
【００６１】
実施例１２：Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステル樹脂の樹脂上での製造
Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステル樹脂の樹脂上での製造を、下記のようにして実施した。実施例１１で製造したＦｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｏ−ＣＨ３　１０ｍｍｏｌ（３．５４ｇ）を、１２ｍｌのＤＣＭ中で、１ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３（１３３ｍｇ）と混合し、実施例９のようにして製造したチオール樹脂１ｍｍｏｌと反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌａｂ．Ｓｙｎ．Ｏｒｇ．Ｂ．，Ｆａｃ．Ｓｃｉ．Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ，Ｆｒ．Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ　Ｓｅｒ．Ｃ．（１９６８）２６６（２０）：１５０６−１５０７）、Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂を得た。また、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｏ−ＣＨ３　１０ｍｍｏｌ（３．５４ｇ）を、１２ｍｌのジクロロエタン中で、１ｍｍｏｌのＳｎＣｌ４（２６０ｍｇ）と混合し、実施例９で製造したチオロ樹脂１ｍｍｏｌと反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｈｏｎｍａ　ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９７６）２４（４）：８１８−８２０）、Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂を得た。
【００６２】
実施例１３：Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステル酸の溶液相製造
Ｂｚｌ保護Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステルを下記のようにして製造した。Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｏ−ＣＨ３（１ｍｍｏｌ（３５４ｍｇ））を、ＡｌＣｌ３（０．１ｍｍｏｌ　１３３ｍｇ）および２ｍｌのＤＣＭの存在下で、ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌエステル（１ｍｍｏｌ　１９６ｍｇ）と反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｆｅｕｇｅａｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌａｂ．Ｓｙｎ．Ｏｒｇ．Ｂ．，Ｆａｃ．Ｓｃｉ．Ｍａｒｓｅｉｌｌｅｓ，Ｆｒ．Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｐａｒｉｓ　Ｓｅｒ．Ｃ．１９６８，２６６（２０）：１５０６−１５０７）、溶液中で、Ｂｚｌ保護Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステル（Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌ）を生成させた。同じ化合物は、また、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｏ−ＣＨ３（１ｍｍｏｌ　３５４ｍｇ）を、２ｍｌのジクロロエタン中で、ＳｎＣｌ４（０．１ｍｍｏｌ　２６ｍｇ）の存在下で、ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌエステル（１ｍｍｏｌ　１９６ｍｇ）と反応させて、チオール交換を起こさせ（Ｈｏｎｍａ　ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９７６）２４（４）：８１８−８２０）、化合物Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌを生成させることによっても、得られる。
【００６３】
ベンジル保護基を除去するために、Ｈ２／Ｐｔによる還元開裂を使用した（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２，ｐｐ２５０−２５２；“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ　Ｇｒｏｕｐｓ，”Ｐ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｅｄ．，Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１９９４，ｐｇ．１３７）。１ｍｍｏｌのＢｚｌ保護Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯ−Ｂｚｌ化合物を、無水メタノール１０ｍｌに溶解させ、室温で、Ｈ２とともに３時間、１００ｍｇのＰｔ触媒上で処理して、生成物Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ［Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ］−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨを得た。このＦｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステル酸を、溶液相での結合のために使用し、あるいは標準的なＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ結合手順を使用してＮＨ２−Ｒｉｎｋ樹脂に結合させて、Ｆｍｏｃ−グリシン環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂を得た。
【００６４】
実施例１４：Ｆｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステルチオエステル生成樹脂上のペプチドのＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ
実施例９で製造したＦｍｏｃ−グリシンオルトジメチルチオロエステルチオエステル生成樹脂を使用して、標準的なＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ手順に従い、配列ＦＫＬＡＧのペプチドを合成した。Ｆｍｏｃ保護解除を、ＤＭＦ中に２０％溶解させたピペリジンにより、実行した（各サイクルにおいて、３分間ずつ２回）。標準的なＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ活性化を使用して、鎖集成を実施した。この活性化においては、２．１ｍｍｏｌのＦｍｏｃアミノ酸、３．８ｍｌの、ＤＭＦにＨＢＴＵを溶解させた０．５Ｍ溶液、および１ｍｌのＤＩＥＡを使用し、各結合サイクルあたり、１分の予備活性化および３０分の反応時間を使用する。保護解除と結合反応のステップのあと、得られたペプチド樹脂を、ＤＭＦで洗浄した。
【００６５】
実施例１５：オルトジメチルチオロエステルチオエステル生成樹脂からのＦＫＬＡＧペプチドの酸開裂
ＦＫＬＡＧチオエステルペプチドを、実施例１４の樹脂結合ペプチドの酸開裂によって生成させた。３５０ｍｇのこの樹脂を、５ｍｌのＴＦＡ、０．２ｍｌの水、および０．２５ｍｌのチオアニソールで、２時間処理した。ＴＦＡを真空中で蒸発させ、エチルエーテルを使用して、所望のペプチドチオエステルを沈殿させた。ＦＫＬＡＧチオエステルから成る開裂生成物を、ＨＰＬＣによって精製した。エレクトロスプレー（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）質量分析法による分析で得られたこの生成物の質量は、実験誤差の範囲で計算質量と一致した。
【００６６】
実施例１６：オルトジメチルチオロエステル生成ＦＫＬＡＧチオエステルペプチドのＮ末端システインペプチドへのチオエステル仲介連結
実施例１５で製造したＦＫＬＡＧチオエステルペプチドを、ペプチドＣＡＲＨＴＶＨＱＲＨＬＦＧを含むＮ末端システインに連結した。約０．３ｍｇのＦＫＬＡＧチオエステルペプチドと０．６ｍｇのＮ末端システインペプチドＣＡＲＨＴＶＨＱＲＨＬＦＧとを、室温で、０．２５ｍｌの６ｍｏｌのグアニジニウム緩衝液ｐＨ７および０．０２ｍｌのチオフェノールと混合し、反応を一晩進行させた。反応をＨＰＬＣによって調べ、連結生成物をエレクトロスプレー質量分析法によって特性決定し、実験誤差の範囲内で、予想される質量を有することを示した。
【００６７】
実施例１７：Ｆｍｏｃグリシン環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂上でのペプチドのＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ
実施例１２で製造したＦｍｏｃグリシン環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂を使用し、標準的なＦｍｏｃ　ＳＰＰＳ手順に従って、配列ＦＫＬＡＧのペプチドを合成した。Ｆｍｏｃ保護解除を、ＤＭＦ中に２０％溶解させたピペリジンにより、実行した（各サイクルにおいて、３分間ずつ２回）。標準的なＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ活性化を使用して、鎖集成を実施した。この活性化においては、２．１ｍｍｏｌのＦｍｏｃアミノ酸、３．８ｍｌの、ＤＭＦにＨＢＴＵを溶解させた０．５Ｍ溶液、および１ｍｌのＤＩＥＡを使用し、各結合サイクルあたり、１分の予備活性化および３０分の反応時間を使用する。ペプチド樹脂の中間洗浄を、ＤＭＦを用いて実施した。
【００６８】
実施例１８：環状オルトエチルチオロエステルチオエステル生成樹脂からのＦＫＬＡＧペプチドの酸開裂
ＦＫＬＡＧチオエステルペプチドを、実施例１７の樹脂結合ペプチドの酸開裂によって生成させた。３５０ｍｇのこの樹脂を、室温で、５ｍｌのＴＦＡ、０．２ｍｌの水、および０．２５ｍｌのチオアニソールで、２時間処理した。ＴＦＡを真空中で蒸発させ、エチルエーテルを使用して、所望のペプチドチオエステルを沈殿させた。ＦＫＬＡＧチオエステルペプチドから成る開裂生成物を、ＨＰＬＣによって精製した。エレクトロスプレー質量分析法による分析で得られたこの生成物の質量は、実験誤差の範囲で計算質量と一致した。
【００６９】
実施例１９：環状オルトエチルチオロエステル生成ＦＫＬＡＧチオエステルペプチドのＮ末端システインペプチドへのチオエステル仲介連結
実施例１８で製造したＦＫＬＡＧチオエステルペプチドを、下記のようにして、ペプチドＣＡＲＨＴＶＨＱＲＨＬＦＧを含むＮ末端システインに連結した。約０．３ｍｇのＦＫＬＡＧチオエステルペプチドと０．６ｍｇのＮ末端システインペプチドＣＡＲＨＴＶＨＱＲＨＬＦＧとを、室温で、０．２５ｍｌの６ｍｏｌのグアニジニウム緩衝液ｐＨ７および０．０２ｍｌのチオフェノールと混合し、反応を、室温で、一晩進行させた。反応をＨＰＬＣによって調べ、連結生成物をエレクトロスプレー質量分析法によって特性決定した。
【００７０】
以上、本発明を、特定の実施形態に即して説明したが、本発明はさらなる変更が可能であると理解すべきである。また、本発明は、本発明の原理に従ってなされる本発明のすべての変形、使用、または適用を包括的に含むことを意図し、また、本発明が関係し、ここで述べた本質的な特徴を適用できる種類の公知または通常の実施法に含まれる、本発明の開示内容からの逸脱は、本発明に含まれる、と理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、求核物質に対して安定なＦｍｏｃオルトチオロエステルチオエステル生成樹脂と、いろいろな求核物質に対して安定な中間体および目標の活性化チオエステルＸ−Ｃ（Ｏ）ＳＲを製造するための反応機構とを示す。
【図２】
図２は、求核物質に対して安定なＦｍｏｃカルボキシエステルアルキルチオールチオエステル生成樹脂と、チオール触媒による活性化によって、いろいろな求核物質に対して安定な中間体および活性化チオエステル目標Ｘ−Ｃ（Ｏ）ＳＲを製造する方法とを示す。
【図３】
図３は、自然な化学連結反応により、目標分子を合成する集中的方法（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ　ｓｃｈｅｍｅ）を示す。
【図４】
図４は、目標分子の自然な化学連結反応に関して図３に示したものに代わりうる集中的方法を示す。
【図１】
2004507557.tif 000010
【図２】
2004507557.tif 000011
【図３】
2004507557.tif 000012
【図４】
2004507557.tif 000013
【国際公開パンフレット】
2004507557.tif 000014
2004507557.tif 000015
2004507557.tif 000016
2004507557.tif 000017
2004507557.tif 000018
2004507557.tif 000019
2004507557.tif 000020
2004507557.tif 000021
2004507557.tif 000022
2004507557.tif 000023
2004507557.tif 000024
2004507557.tif 000025
2004507557.tif 000026
2004507557.tif 000027
2004507557.tif 000028
2004507557.tif 000029
2004507557.tif 000030
2004507557.tif 000031
2004507557.tif 000032
2004507557.tif 000033
2004507557.tif 000034
2004507557.tif 000035
2004507557.tif 000036
2004507557.tif 000037
2004507557.tif 000038
2004507557.tif 000039
2004507557.tif 000040
2004507557.tif 000041
2004507557.tif 000042
2004507557.tif 000043
2004507557.tif 000044
2004507557.tif 000045
2004507557.tif 000046
2004507557.tif 000047
2004507557.tif 000048
2004507557.tif 000049
2004507557.tif 000050
2004507557.tif 000051
2004507557.tif 000052
2004507557.tif 000053
【国際調査報告】
2004507557.tif 000054