(57)【要約】種々の医学的状態を処置、診断、または評価する方法。ケモカインまたはケモカインレセプター発現と医学的状態との相関を提供する。本発明は、皮膚炎症障害および創傷治癒における、ケモカインおよびケモカインレセプターアゴニストおよびアンタゴニストの相関関係の認識に一部基づいている。本発明はまた、本明細書中に記載されるようなケモカインの発現を評価することにより、皮膚損傷または皮膚へ影響を与える状態を診断または評価する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の損傷および皮膚に影響を及ぼす状態を診断または評価する方法であって、該方法は以下：
ａ）ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、ＳＤＦ−１、またはＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）から選択されるケモカイン；あるいは
ｂ）ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＸＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、またはＣＸＣＲ４から選択されるケモカインレセプター、
の発現を評価する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記状態が、エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、皮膚の創傷、皮膚の治癒、または炎症状態から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記評価工程が、以下：
ａ）複数の前記発現レベルを測定する工程；
ｂ）ｍＲＮＡレベルを測定する工程；または
ｃ）タンパク質レベルを測定する工程、
である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
皮膚に影響を及ぼす状態を処置する方法であって、該方法は、以下：
ａ）ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＩＧ（ＣＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、またはＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）から選択されるケモカイン；あるいは
ｄ）ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＸＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、またはＣＸＣＲ４から選択されるケモカインレセプター、
のアンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。
【請求項５】
前記投与が、以下：
ａ）複数の前記アンタゴニストである；または
ｂ）別の治療剤と組み合わせてである、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アンタゴニストが、以下：
ａ）前記ケモカインとそのレセプター；または
ｂ）前記ケモカインレセプターとそのリガンド、
の相互作用を防止する抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記処置が予防的処置である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記状態がエリスマトーデスであり、そして前記アンタゴニストが以下：
ａ）ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、またはリンホタクチン（ＸＣＬ１）から選択されるケモカイン；あるいは
ｄ）ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、またはＸＣＲ１から選択されるケモカインレセプター、
のアンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記状態がアトピー性皮膚炎であり、そして前記アンタゴニストが以下：
ａ）ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、またはＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）から選択されるケモカイン；あるいは
ｄ）ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、またはＣＣＲ８のケモカインレセプター、
のアンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ３（ＣＣＬ７）、ＭＣＰ１（ＣＣＬ２）、ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、またはＳＤＦ−１から選択されるケモカインを、創傷に苦しむ個体に投与する工程を包含する、創傷治癒を加速させる方法。
【請求項１１】
前記投与が、以下：
ａ）複数の前記ケモカインである；
ｂ）別の治療剤と組み合わせてである；または
ｃ）核酸の発現による、
請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記治癒が、火傷による皮膚の喪失からの治癒である、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、哺乳動物遺伝子および関連試薬の用途に関する。より詳細には、本発明は、発現レベルが皮膚または創傷治癒に影響を与える医学的状態、例えば、炎症性皮膚状態に関与する哺乳動物の遺伝子の同定に関する。診断用途および治療的用途が生じる。
【０００２】
（発明の背景）
炎症性反応は、しばしばサイトカイン活性またはケモカイン活性によって媒介されるので、これらのシグナル伝達分子の合成を評価するための方法は、選択された疾患の診断に有利である。本発明は、一般的に、皮膚または創傷治癒に影響を与える医学的状態を処置または状態を評価するのに、直接有用であり得る遺伝子の同定に関する（例えば、以下を参照のこと；Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋら、（１９９３年編）Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  第４版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ＮＹ；Ｂｏｓ（１９８９年編）Ｓｋｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ；Ｃａｌｌｅｎ（１９９６）Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ；Ｒｏｏｋら（１９９８編）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ；Ｈａｂｉｆｏｒ  ａｎｄ  Ｈａｂｉｅ（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｌｏｒ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｍｏｓｂｙ；ならびにＧｒｏｂ（１９９７年編）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ、Ｃａｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ；ＨｅｓｓおよびＳａｌｃｉｄｏ（２０００）Ｗｏｕｎｄ  Ｃａｒｅ  Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ  Ｐｕｂ  Ｃｏ（ＩＳＢＮ：１５８２５５０５４９）；Ｍａｎｉら（１９９９）Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ（ＩＳＢＮ：０７０２０２２０６３）；ＷｙｎｇａａｒｄｅｎおよびＳｍｉｔｈ（編）Ｃｅｃｉｌ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．１９８５）；Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１９８２）；ならびにＨａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第１２版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．（１９９１）、これらのすべてが、本明細書中に参考として援用される。
【０００３】
皮膚表面または創傷に関する問題は、深刻に、苛立たせるか、あるいは外観を損ね得、最終的には、より深刻な合併症へつながり得る。それゆえ、これらの状態の症状を軽減するための、有効な治療（予防的および治療的の両方）への必要性が、存在する。あるいは、診断方法（例えば、これらの組織の異常または改変した健康の診断方法）が、有用である。本発明は、この両方を提供する。
（発明の要旨）
本発明は、皮膚炎症障害および創傷治癒における、ケモカインおよびケモカインレセプターアゴニストおよびアンタゴニストの相関関係の認識に一部基づいている。
【０００４】
本発明は、皮膚損傷または皮膚へ影響を与える状態を診断または評価する方法を提供し、この方法は、以下より選択されるケモカイン；ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、リンホタクチン（ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ）（ＸＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、またはＳＤＦ−１；あるいは、以下より選択されるケモカインレセプター；ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＸＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、またはＣＸＣＲ４の発現を評価する工程を包含する。代表的に、この状態は、エリスマトーデス、アトピー性皮膚炎、皮膚の損傷、皮膚の治癒、または炎症性状態より選択されるか；またはこの評価は、：複数の発現レベルを測定するか；ｍＲＮＡレベルを測定するか；またはタンパク質レベルを測定することである。
【０００５】
本発明は、さらに、皮膚へ影響を与える状態を処置する方法を提供し、その方法は、以下より選択されるケモカイン：ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＩＧ（ＣＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、またはＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）；あるいは、以下より選択されるケモカインレセプター：ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＸＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、またはＣＸＣＲ４のアンタゴニストを投与する工程を包含する。代表的に、投与は、複数のアンタゴニスト、または別の治療剤の組み合わせである。いばしば、アンタゴニストは、ケモカインとそのレセプターの相互作用、またはケモカインレセプターとそのリガンドの相互作用を妨害する抗体であるか、またはこの処置は、予防的である。
【０００６】
様々な実施形態において、この状態は、エリスマトーデスであり、そしてアンタゴニストは、以下より選択されるケモカイン：ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）；ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）；ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、またはリンホタクチン（ＸＣＬ１）；あるいは、以下より選択されるケモカインレセプター：ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、またはＸＣＲ１のアンタゴニストである。他の実施形態において、この状態は、アトピー性皮膚炎であり、そしてアンタゴニストは、以下より選択されるケモカイン：ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＰ−１０、ＭＩＧ、もしくはＩＴＡＣ；またはＣＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ４、またはＣＣＲ８ケモカインレセプターのアンタゴニストである。
【０００７】
さらに、本発明は、損傷に苦しむ個体へ以下より選択されるケモカインを投与する工程を包含する創傷治癒を加速する方法を提供する；ケモカイン：リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ３（ＣＣＬ７）、ＭＣＰ１（ＣＣＬ２）、ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、またはＳＤＦ−１。いくつかの実施形態において、投与は、複数のケモカインであるか；または別の治療剤との組み合わせであるか；または核酸の発現によるものである。しばしば、治癒は、やけどによる皮膚欠損に由来する。
【０００８】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
概要
Ｉ．一般
Ａ．炎症性皮膚疾患および状態
Ｂ．創傷治癒
Ｃ．ケモカインおよびレセプター
ＩＩ．アンタゴニストおよびアゴニスト
Ａ．ブロッキングリガンド
Ｂ．ブロッキングレセプター
Ｃ．アゴニスト
ＩＩＩ．診断用途；治療用組成物、方法
Ａ．表示
Ｂ．併用組成物
Ｃ．単位用量
Ｄ．投与。
【０００９】
（Ｉ．一般）
皮膚は、生物を、敵対生物および抗原を含む、その環境から分離する重要な境界である。それゆえ、皮膚で生じるプロセス（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）は、重要である。炎症性皮膚効果は、非常に不快であり得るか、あるいは有意な医学的問題を導き得る。
【００１０】
同様に、創傷治癒は、皮膚または内部器官の修復に関与する重要なプロセスである。治癒の速度または創傷は、特定のケモカインまたはケモカインレセプターの存在によって、調節または影響され得る。
【００１１】
本発明は、ケモカインまたはケモカインレセプターの改善された発現が、例えば、皮膚炎症または創傷治癒に影響する状態に相関するか否かに関する研究に起因した。ケモカインの増加した発現は、炎症性細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、またはリンパ球）のリクルートメント（皮膚炎症および関連状態における病巣の進展に貢献し得る）を生じ得る。これらとしては、いくつかのケモカインおよびケモカインレセプターが挙げられる。
【００１２】
（ＩＩ．アンタゴニストおよびアゴニスト）
シグナル伝達経路の遮断は、ケモカインのアンタゴニスト（例えば、リガンドに対する抗体、レセプターに対する抗体など）によって達成され得る。リガンドレセプター相互作用の妨害は、アンタゴニストの開発に関する効果的なストラテジーであることが証明されてきた。
【００１３】
リガンドによって媒介されるシグナル伝達をアンタゴナイズするには、様々な方法がある。顕著な２つの方法は、リガンドを抗体によってブロックすることであり；レセプターを抗体でブロックすることである。様々なエピトープが、それらの相互作用を阻害する（例えば、相互作用をブロックする立体構造的障害を引き起こす）各々の上に存在する。シグナル伝達をブロックする能力の相関関係は、リガンドまたはレセプターのいずれかへの結合親和性に相関することが必ずしも予想されていない。別の方法は、レセプター結合活性を保持するが、レセプターシグナル伝達を誘導することができない、リガンドムテインを使用することである。ムテインは、シグナル伝達リガンドの競合的インヒビターであり得る。
【００１４】
あるいは、低分子ライブラリーが、同定されたリガンド−レセプター対によって媒介される相互作用またはシグナル伝達をブロックし得る化合物に関してスクリーニングされ得る。
【００１５】
本発明は、好ましくは、哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、ラット、またはマウス）の特定のケモカインリガンドへ特異的に結合する抗体または結合組成物の用途を提供する。抗体は、天然に存在する（全長の）形態またはそれらの組換え形態の両方において、個体、多型改変体、対立遺伝子改変体、系統改変体、種改変体およびそのフラグメントを含む、様々なケモカインタンパク質に対して惹起され得る。さらに、抗体は、ネイティブ（もしくはは活性）形態または不活性（例えば、変性）形態の両方において、レセプタータンパク質に対して惹起される。抗−イディオタイプ抗体もまた、使用され得る。
【００１６】
多数の免疫源が、抗体（リガンドまたはレセプタータンパク質と特異的に反応性のある）を生成するために選択され得る。組換えタンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の生産のための、好ましい免疫原である。適切な供給源（例えば、霊長類、げっ歯類など）由来の天然に存在するタンパク質はまた、純粋な形態または不純な形態のいずれかにおいて使用され得る。適切なタンパク質配列を使用して作製される合成ペプチドはまた、抗体の産生のための免疫原として使用され得る。組換えタンパク質は、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９５編および定期的補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７編および定期的補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹに記載されるように、真核細胞または原核細胞において発現され、そして精製され得る。天然でフォールディングしたまたは変性した材料も、適切なものとして、抗体を生成するために使用され得る。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかは、例えば、タンパク質を測定するための免疫アッセイにおけるその後の使用のために、または免疫精製法のために、産生され得る。
【００１７】
ポリクローナル抗体の産生のための方法は、当業者に周知である。代表的に、免疫原（好ましくは精製タンパク質）は、アジュバントと混合され、動物を、この混合物を用いて免疫する。免疫原調製物に対する動物の免疫応答を、試験出血を採取し、目的のタンパク質に対する反応性力価を決定することによりモニターした。例えば、免疫原に対する適切な高力価抗体を得る場合、通常反復的な免疫の後、血液を、動物から収集し、抗血清を調製する。タンパク質に対して反応性の抗体を富化するための抗血清のさらなる分画を、所望する場合、実行し得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ；またはＣｏｌｉｇａｎを参照のこと。免疫はまた、他の方法（例えば、ＤＮＡベクター免疫）を介しても成され得る（例えば、Ｗａｎｇら、（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２２８：２７８−２８４を参照のこと）。
【００１８】
モノクローナル抗体は、当業者によく知られている種々の技術によって獲得され得る。代表的に、所望の抗原で免疫された動物に由来する脾臓細胞が、一般に骨髄腫細胞との融合により不死化される。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照のこと。不死化の代替的な方法として、エプスタイン−バーウイルス、癌遺伝子、またはレトロウイルスを用いた形質転換、あるいは当該分野で公知の他の方法が挙げられる。例えば、Ｄｏｙｌｅら編（１９９４、定期的補遺）Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと。単一の不死化細胞に由来するコロニーを、抗原に対する所望の特異性および親和性をもつ抗体の産生のためにスクリーニングし、これらの細胞により産生されるモノクローナル抗体の収量は、脊椎動物の宿主腹膜腔への注入を含む、種々の技術により増強され得る。あるいは、当業者は、例えば、Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１に概説される一般的手順に従って、ヒトＢ細胞に由来するＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列を単離し得る。
【００１９】
リガンドまたはレセプタータンパク質の所定のフラグメントに対する、結合フラグメントおよび単鎖体バージョン（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ）を含む抗体または結合組成物は、キャリアタンパク質と上記フラグメントとの結合体を用いる動物の免疫により惹起され得る。モノクローナル抗体を、所望の抗体を分泌する細胞から調製する。これらの抗体は、通常のタンパク質または欠損タンパク質への結合についてスクリーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は、通例少なくとも約１ｍＭのＫＤで、より通常は少なくとも約３００μＭのＫＤで、代表的には少なくとも約１０μＭのＫＤで、より代表的には約３０μＭのＫＤで、好ましくは少なくとも約１０μＭのＫＤで、そしてより好ましくは少なくとも約３μＭのＫＤかまたはより良好に、結合する。
【００２０】
いくつかの場合において、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス，げっ歯動物、霊長類、ヒトなど）から調製することが望ましい。このようなモノクローナル抗体を調製するための技術の説明は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（編）、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｌａｎｇｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ  Ａｌｔｏｓ、ＣＡ、およびこの中に引用された文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；および特に、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（ここでは、モノクローナル抗体の一つの産生方法が議論される）に見出され得る。要約すると、この方法は、免疫原で動物に注射する工程を包含する。次いでこの動物を、屠殺し、その脾臓から細胞を採取し、次いでこの細胞を、骨髄腫細胞と融合する。得られたものは、インビトロで繁殖できるハイブリッド細胞すなわち「ハイブリドーマ」である。次いでハイブリドーマの集団を、各々が免疫原に対する単一抗体主を分泌する、個々のクローンを単離するためにスクリーニングする。このようにして、得られた個々の抗体種は、免疫原性物質上に認識される特定の部位に応答して産生される、免疫動物に由来する不死化されクローン化された単一のＢ細胞の産物である。
【００２１】
他の適切な技術は、ファージまたは類似のベクター中にある抗体ライブラリーの選択を包含する。例えば、Ｈｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｌａｒｇｅ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｒｅｐｅｒｔｏｒｉｅ  ｉｎ  Ｐｈａｇｅ  Ｌａｍｂｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体は、改変されてかまたは改変されずに使用され得、キメラ抗体またはヒト化抗体を含む。しばしば、このポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを供給する物質と、共有結合または非共有結合のいずれかをすることにより標識される。広範囲の標識技術および結合体化技術が、公知であり、そして科学文献および特許文献の両方において広範に報告されている。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが、挙げられる。このような標識の使用を教示する特許として、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換え免疫グロブリンも産生され得（Ｃａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３を参照のこと）；またはトランスジェニックマウスにおいて産生され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６を参照のこと；またＡｂｇｅｎｉｘおよびＭｅｄａｒｅｘの技術も参照のこと）。
【００２２】
抗体は、特異的結合組成物の単なる一つの形態である。他の結合組成物（しばしば同様の用途を有す）としては、例えば、結合パートナー−結合パートナー様式、抗体−抗原相互作用、または天然の生理学的に関連するタンパク質−タンパク質相互作用で共有結合または非共有結合のいずれかで、リガンドまたはレセプターに対し特異的に結合する分子（例えば、所望のタンパク質と特異的に会合するタンパク質）が挙げられる。この分子は、ポリマーまたは化学試薬であり得る。機能的アナログは、構造上の修飾を有するタンパク質であり得、または構造的に無関係な分子（例えば、適当な結合決定基と相互作用する分子形態を有する分子）であり得る。
【００２３】
本発明の抗体結合化合物（結合フラグメントを含む）は、重要な診断上または治療上の価値を有し得る。これらの化合物は、非中和結合化合物として有用であり得、そしてその結合化合物が抗原と結合する場合に、その抗原を（例えばその表面上で）発現する細胞を殺すように、毒素または放射性核種と連結され得る。さらに、これらの結合化合物は、薬物またはその他の治療薬剤と、直接的にかまたはリンカーによって間接的に結合化され得、かつ薬剤標的化をもたらし得る。
【００２４】
アゴニストは、同定されたケモカインタンパク質が挙げられる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋおよび他の公共配列データベースを参照のこと。これらの配列のタンパク質、またはその改変体は、レセプターシグナル伝達を誘導するために使用される。
【００２５】
（ＩＩＩ．診断上の使用；治療用組成物、方法）
本発明は、多様な皮膚の状態（例えば、炎症の症状を伴う状態）に対処するための手段を供給する。病因および病理は、しばしば十分には理解されないが、患者における有意な不快感または病的状態を引き起こす。細胞移動およびケモカイン産生の変化が、ある皮膚の関連する状態に関係するようである。
【００２６】
まとめて、これらの研究は、これらのケモカインまたはそのレセプターを適切な実体を用いてアンタゴナイズすることが、皮膚の状態または疾患（例えば、炎症状態）における治療上の様式を提供し得ることを示唆する。
【００２７】
診断方法は、予後の予測；特定の治療過程に対して、応答または応答しないかいずれかである患者のサブセットの定義；皮膚疾患または皮膚状態サブタイプもしくは皮膚疾患サブタイプの診断；あるいは、治療に対する応答の評価のような、局面を包含する。例えば、炎症疾患のサブタイプは、ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＭＩＰ３ｂ（ＣＣＬ１９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＩＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、もしくはＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）から選択されるケモカイン；またＣＣＲ５，ＣＣＲ７，ＣＸＣＲ３，ＣＸＣＲ５，ＸＣＲ１、もしくはＣＣＲ２から選択されるケモカインレセプター；あるいはこれらの種々の組み合わせの相対的発現レベルによって分子的に規定され得る。
【００２８】
シグナル伝達を媒介するケモカインに対するアンタゴニストは、有意な治療上の効果（例えば、症状の発生の減少または抑制）を示唆する様式で関連付けられてきた。７回膜貫通型レセプターおよびケモカインレセプターに対する低分子アンタゴニストは、周知である。百日咳毒素は、このようなレセプターと、結合したシグナル伝達Ｇタンパク質共役型レセプターとの相互作用を遮断し得る。
【００２９】
本発明のアンタゴニストおよび／またはアゴニストは、単独でか、あるいは同一の経路または付随的な経路の別のインヒビターもしくはアゴニストまたは症状の処置のために使用される他の化合物（例えば、アンタゴニスト、またはグルココルチコイドのようなステロイド）と組み合わせて、投与され得る。
【００３０】
あるアンタゴニストまたはアゴニストは、創傷治癒状況において進行を遅らせるために有用であり得る。従って、ケロイド治癒または過形成性瘢痕の問題は、創傷治癒過程の減速から有利に処置され得る。逆に、例えば、慢性潰瘍または慢性創傷においては治癒速度の増加が所望され得る。これは、直接的なタンパク質の投与またはおそらくは遺伝子治療法ストラテジーを使用することのいずれかによって達成され得る。拮抗作用は、例えば、アンチセンス処置、抗体、またはその他のケモカイン効果の抑制によって、達成され得る。非皮膚性の創傷治癒はまた、例えば、腹部またはその他の手術、軟骨または関節の手術、口腔外科、および間質組織に関与する多くの傷害における）、処置の標的であり得る。例えば、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ編（２００１）Ｓａｂｉｓｔｏｎ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ：Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｓａｕｎｄｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０７２１６８２６９３）；ＳａｂｉｓｔｏｎおよびＬｙｅｒｌｙ編（１９９７）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ：ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｓａｕｎｄｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０７２１６５８８７３）；ＭｏｒｒｉｓおよびＭａｌｔ編（１９９４）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：０１９２６１８００８）；およびＣｌｕｎｉｅ編（１９９７）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（ＩＳＢＮ：０８６７９３３５３４）を参照のこと。種々のケモカインのカスケードの時機および順序は、これらの過程が、種々の細胞型の浸潤事象の時間的な連続を反映することを示唆する。
【００３１】
抗体、その結合組成物、ケモカインアゴニスト、または低分子アンタゴニストを含む薬学的組成物または無菌の組成物を調製するため、その実体が、好ましくは不活性である薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合される。このような薬学的組成物の調製は、当業者に公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８４）を参照のこと。
【００３２】
抗体、結合組成物、またはケモカインは、通常、非経口的に、好ましくは静脈内に、投与される。このようなタンパク質またはペプチドは、免疫原性であり得るので、これらは従来型のＩＶ投与セットによりまたは皮下沈着物からのいずれかで（例えば、Ｔｏｍａｓｉら、米国特許第４，７３２，８６３号の教示のように）、好ましくはゆっくりと投与される。免疫学的な反応を最小化するための手段が、適用され得る。低分子実体は、経口使用し得る。
【００３３】
非経口的に投与される場合、生物製剤は、薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと共に単位投薬注射形態（溶液、懸濁液、エマルジョン）で処方される。このようなビヒクルは、代表的には、本質的に無毒性かつ非治療的である。治療剤は、種々の添加剤および／または希釈剤を含むかまたは含まずに、水性ビヒクル（例えば、水、生理食塩水、または緩衝化したビヒクル）で投与され得る。あるいは、懸濁液（例えば、亜鉛懸濁液）は、ペプチドを含むように調製され得る。このような懸濁液は、皮下（ＳＱ）注射または筋肉（ＩＭ）注射に有用であり得る。生物製剤および添加剤の比率は、両方が効果的な量で存在する限り広範囲にわたって変わり得る。抗体は、好ましくは、約５〜３０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは、１０〜２０ｍｇ／ｍｌ）の濃度で凝集体、他のタンパク質、内毒素などを実質的に含まない精製された形態で処方される。好ましくは、内毒素のレベルは２．５ＥＵ／ｍｌよりも低い。例えば、Ａｖｉｓら、（編）（１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ  第２版，  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（１９９０編）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ  第２版，  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ  ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（１９９０編）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｆｏｄｏｒら、（１９９１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：  ７６７−７７３，  Ｃｏｌｉｇａｎ  （編）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ；  Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ；  Ｐａｕｌ  （編）  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ；  Ｐａｒｃｅら、（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：２４３−２４７；  Ｏｗｉｃｋｉら、（１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７  ：  ４００７−４０１１；ならびにＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ  （１９７６）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００３４】
治療のための投与レジメンの選択は、いくつかの要因に依存しており、これには、その実体の血清または組織の代謝回転率、症状のレベル、その実体の免疫原性、および標的細胞の接近性、投与のタイミングなどが挙げられる。好ましくは、投与レジメンは、副作用の受容可能なレベルに一致する、患者へ送達される治療剤の量を、最大化する。従って、送達される生物製剤の量は、特定の実体および処置される状態の重篤度に依存する。適切な抗体の用量を選択する手引きは、例えば、Ｆｅｒｒｏｎｅら、（１９８５編）  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｎｏｇｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｐａｒｋ  Ｒｉｄｇｅ，  ＮＪのＢａｃｈら、２２章；およびＨａｂｅｒら、（編）  （１９７７）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ  （Ｒｕｓｓｅｌｌ，３０３−３５７頁，およびＳｍｉｔｈら、３６５−３８９頁）に見出される。あるいは、ケモカインまたは低分子の用量は、標準的な方法論を使用して決定される。
【００３５】
適切な用量の決定は、臨床医によって行なわれる（例えば、処置に影響することが当該分野で公知であるかまたは推測されているか、あるいは、処置に影響することが予想される、パラメーターまたは因子を使用して）。一般的に、用量は、最適な用量より幾分低い量から始められ、そしてその後、任意の頁の副作用と比較して、望ましい効果または最適な効果が、達成されるまで、少しづつ増加される。重要な診断尺度としては、例えば、炎症の症状または産生された炎症性サイトカインのレベルの尺度が挙げられる。好ましくは、使用される生物製剤は、処置に標的化される動物と同じ種に由来し、それによって、試薬に対する体液性応答を最小化する。
【００３６】
リガンドまたはレセプターに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントについての総週間用量範囲は、一般的に、体重１ｋｇにつき、約１０μｇ、さらに一般的には約１００μｇ、代表的には約５００μｇ、さらに代表的には約１０００μｇ、好ましくは約５ｍｇ、そしてさらに好ましくは約１０ｍｇからの範囲にある。一般的に、その範囲は、体重１ｋｇにつき、１００ｍｇより低く、好ましくは約５０ｍｇより低く、そしてさらに好ましくは約２５ｍｇより低い。アゴニスト治療剤または低分子治療剤は、同様のモル濃度で使用され得る。
【００３７】
ケモカインレセプター媒介シグナル伝達のアンタゴニスト（例えば、抗体または結合フラグメント）の週間用量範囲は、体重１ｋｇにつき、約１μｇから、好ましくは少なくとも約５μｇ、そしてさらに好ましくは少なくとも１０μｇの範囲にある。一般的に、その範囲は、体重１ｋｇにつき、約１０００μｇより低く、好ましくは約５００μｇより低く、そしてさらに好ましくは約１００μｇより低い。投薬は、所望の処置をもたらすスケジュールで行なわれ、より短期間またはより長期間にわたって周期的に行われ得る。一般に、範囲は、体重１ｋｇにつき、少なくとも約１０μｇから約５０ｍｇまで、好ましくは約１００μｇから約１０ｍｇまでである。ケモカインアゴニスト治療剤または低分子治療剤は、代表的に、同様のモル濃度量で使用されるが、それらはおそらくより低い分子量を有するので、より少ない重量の用量を有する。
【００３８】
本発明はまた、例えば、炎症に関連する症状を軽減する公知の治療剤（例えば、ステロイド、特に、グルココルチコイド）、あるいは抗生物質または抗感染薬の組み合わせにおける生物製剤の投与を提供する。グルココルチコイドの毎日の投薬量は、１日につき、少なくとも約１ｍｇから、一般的には少なくとも約２ｍｇ、および好ましくは少なくとも約５ｍｇの範囲にある。一般的に、投薬量は、１日につき、約１００ｍｇより少なく、代表的には約５０ｍｇより少なく、好ましくは約２０ｍｇより少なく、およびさらに好ましくは少なくとも約１０ｍｇである。一般的にその範囲は、１日につき、少なくとも約１ｍｇから約１００ｍｇまで、好ましくは約２ｍｇから５０ｍｇまでである。抗生物質、抗感染薬、または抗炎症剤との適切な組み合わせの用量もまた、公知である。
【００３９】
句「有効量」は、医学的状態の症状または徴候を改善するのに十分な量を意味する。代表的な哺乳動物の宿主には、マウス、ラット、ネコ、イヌ、およびヒトを含む霊長類が挙げられる。特定の患者に対する有効量は、処置される状態、患者の全体的な健康状態、投与の方法経路および用量、ならびに副作用の重篤度のような因子に依存して変わり得る。組み合わせの場合、有効量は、成分の組み合わせに対する比率であり、そして効果は、個々の成分単独で制限されない。
【００４０】
治療剤の有効量は、代表的には、少なくとも約１０％；通常は、少なくとも約２０％；好ましくは、少なくとも約３０％まで；またはさらに好ましくは、少なくとも約５０％、症状を減少させる。本発明は、本明細書中の他に記載される（例えば、記載される徴候（例えば、炎症状態（慢性または急性）、創傷治癒など）に関連する障害の処置についての一般的な記載）ような治療適用においての用途を見出す、試薬を提供する。例えば、Ｄａｙｅｒ  （１９９９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４：  １３３７−１３３９；Ｇｒａｃｉｅら、（１９９９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４：  １３９３−１４０１；  Ｂｅｒｋｏｗ  （編）  Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ
Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｒａｈｗａｙ，  Ｎ．  Ｊ．；  Ｔｈｏｒｎら、  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  ＮＹ；  Ｇｉｌｍａｎら、（編）  （１９９０）  ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ’ｓ  ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版．，  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版．  （１９９０），  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐｅｎｎ  ；  Ｌａｎｇｅｒ  （１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：  １５２７−１５３３；  Ｍｅｒｅｋ  Ｉｎｄｅｘ，  Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，  Ｒａｈｗａｙ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ；  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  （ＰＤＲ）を参照のこと。
【００４１】
本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照して最もよく理解され、この実施例は、特定の実施形態に本発明を制限することを意図されない。
【００４２】
（実施例）
（Ｉ．一般的な方法）
標準的な方法のいくつかは、例えば、以下に参照または記載される：Ｍａｎｉａｔｉｓら、（１９８２）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；  Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（第２版），第１〜３巻，  ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ；  Ａｕｓｕｂｅｌら、  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，  ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および定期的補遺）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。タンパク質精製の方法には、硫安沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などの方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および定期的補遺）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ  （１９９０）「Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」ｉｎ  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，第１８２巻およびこのシリーズの他の巻；ならびにタンパク質精製製品の使用に関する製造者（例えば、  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  Ｎ．  Ｊ．，またはＢｉｏ−Ｒａｄ，  Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，  ＣＡ）の文献。組換え技術の組み合わせは、適切なセグメント（例えば、ＦＬＡＧ配列またはプロテアーゼによって除去可能な配列を介して融合され得る等価物）への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ  （１９９０）  「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔａｌ  Ｃｈｅｌａｔｅ  Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」ｉｎ  Ｓｅｔｌｏｗ  （編）  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２：  ８７−９８，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．  Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら、（１９９２）  ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ  ：  Ｔｈｅ  Ｈｉｇｈ  Ｌｅｖｅｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ＆  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＱＩＡＧＥＮ，  Ｉｎｃ．，  Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，  ＣＡを参照のこと。
【００４３】
コンピューター配列解析は、例えば、ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およびＧｅｎＢａｎｋの供給源からのプログラムを含む、利用可能なソフトウェアプログラムを使用することによって実施される。公の配列データベースはまた、例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどから使用される。
【００４４】
（ＩＩ．生検サンプル）
６ｍｍのパンチ生検を、（インフォームドコンセントを行なった後）乾癬、アトピー性皮膚炎、または皮膚エリテマトーデスのいずれかの状態の患者の損傷性の皮膚から、あるいは正常で健康な個体から採取した。皮膚のサンプルを、液体窒素で瞬時に凍結し、そして−８０℃で保存した。この研究を、倫理委員会によって認められたプロトコルの下で実施した。
【００４５】
（ＩＩＩ．皮膚創傷治癒モデル）
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（８〜１２週齢）に、麻酔中に、脊椎傍の完全な皮膚切開（２ｃｍ）を与えた。最初の損傷後１２時間および２４時間ならびに２日、３日、５日、７日および１０日で、創傷皮膚を取りだし、そしてＲＮＡ抽出分析、組織学分析、免疫組織化学分析、およびコラーゲン分析に使用した。
【００４６】
（ＩＶ．細胞単離および細胞培養）
ヒト初代表皮性ケラチノサイト、真皮性線維芽細胞、メラニン細胞、および真皮性微小血管内皮細胞を、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入し、そしてケラチノサイト増殖培地（ＫＧＭ）、線維芽細胞増殖培地（ＦＧＭ）、メラニン細胞増殖培地（ＭＧＭ）、または内皮細胞増殖培地（ＥＧＭ−２）増殖培地（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で培養した。細胞を、ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍｌ）／ＩＬ−１β（５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−４（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１０（１００ｎｇ／ｍｌ）（ａｌｌ  Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）で処理したか、または未処理のまま置いた。表皮性γδＴ細胞株７−１７を、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｂｏｉｓｍｅｎｕ（Ｔｈｅ  Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）によって提供していただき、そして培養した。Ｂｏｉｓｍｅｎｕら、（１９９６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５７：  ９８５−９９を参照のこと。表皮性のγδＴ細胞は、未処理のまま置いたか、またはＣｏｎ  Ａ、ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍｌ）／ＩＬ−ｌβ（５ｎｇ／ｍｌ）で６時間または１８時間刺激した。臍帯血ＣＤ３４＋造血性前駆細胞由来または末梢血単球由来の樹状細胞の産生を行なった。Ｄｉｅｕら、（１９９８）  Ｊ．Ｅｘ  Ｍｅｄ．１８８：３７３−３８６を参照のこと。ヒトの皮膚由来のランゲルハンス細胞（ＬＣ）を、正常な皮膚または形成外科手術を受けている患者から単離し、そして濃縮した。Ｄｕｂｏｉｓら、（１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６２：  ３４２８−３４３６を参照のこと。ＰＢＭＣを、標準的な技術を使用して単離し、そしてＴ細胞の濃縮を、細胞濃縮カラム（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）を使用して実施した。
【００４７】
（Ｖ．ケモカインおよびケモカインレセプター発現の分析）
皮膚生検およびマウス皮膚サンプルを、Ｍｉｋｒｏ−Ｄｉｓｍｅｍｂｒａｔｏｒ  Ｕ（Ｂｒａｕｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて液体窒素中でホモジナイズし、そしてＲＮＡを、ＲＮＡｚｏｌを用いて、製造者のプロトコル（Ｔｅｌ−Ｔｅｓｔ、Ｆｒｉｅｄｅｎｓｂｕｒｇ、ＴＸ）に従って抽出した。４μｇのＲＮＡを、標準的なプロトコルを用いて、ＤＮａｓｅＩ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて処理し、そしてオリゴｄＴ１４−１８（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）およびランダムヘキサマープライマー（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて逆転写した。ｃＤＮＡを、終濃度５ｎｇ／μｌまで希釈した。１０μｇのｃＤＮＡを、１２．５μｌのＴａｑＭａｎ（登録商標）ユニバーサルマスターミックス（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）、０．６２５μｌの遺伝子特異的なＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブ、０．５μｌの遺伝子特異的な順方向プライマーおよび逆方向プライマー、ならびに０．５μｌの水の存在下で増幅させた。内部ポジティブコントロールとして、０．１２５μｌの１８Ｓ  ＲＮＡ特異的なＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブおよび０．１２５μｌの１８Ｓ  ＲＮＡ特異的な順方向プライマーおよび逆方向プライマーを、各反応物に添加した。以下のヒトおよびマウスのケモカインおよびケモカインレセプターに特異的なプライマーおよびプローブを設計および確認し、そしてＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）から入手した：ＣＣＲ１（ＣＣＲ９）、ＣＸＣＲ１（ＣＸＣＲ５）、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１；ＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ−１β（ＣＣＬ４）、ＭＩＰ−１δ（ＣＣＬ１５）、ＭＩＰ−３β（ＣＣＬ１９）、６Ｃｋｉｎｅ（ＣＣＬ２１）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、Ｉ−ＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＨＣＣ−１（ＣＣＬ１４）、ＨＣＣ−４（ＣＣＬ１６）、Ｇｒｏ−α／β（ＣＸＣＬ１／２）、ＥＮＡ７８（ＣＸＣＬ５）、エオタキシン（ＣＣＬ１１）、エオタキシン−２（ＣＣＬ２４）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、フラクタルキン（ＣＸ３ＣＬ１）、ＳＤＦ−１α（ＣＸＣＬ１２）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＴＥＣＫ（ＣＣＬ２５）、およびＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、ＭＣＰ４（ＣＣＬ１３）。遺伝子特異的プローブはレポーターとしてＦＡＭを使用し、一方、内部ポジティブコントロール（１８Ｓ  ＲＮＡ）のプローブは、ＪＯＥレポーターまたはＶＩＣレポーターのいずれかと結合させた。サンプルに、以下の段階を施した：段階１、５０℃で２分間；段階２、９５℃で１０分間；および段階３、１９５℃で１５秒間；その後、６０℃で１分間。段階３を４０回繰り返した。遺伝子特異的ＰＣＲ産物を、４０サイクルの間に連続的に、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００配列検出システム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）により測定した。プライマープローブの組み合わせの特異性を、全ての公知のケモカインレセプターのプラスミド（ＣＣＲ１〜ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ１〜ＣＸＣＲ５、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１）および以下のケモカインのパネルに対して実施した交差反応性研究において確認した：ＭＩＰ−１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ−１β（ＣＣＬ４）、ＭＩＰ−１δ（ＣＣＬ１５）、ＭＩＰ−３β（ＣＣＬ１９）、６Ｃｋｉｎｅ（ＣＣＬ２１）、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、Ｉ−ＴＡＣ（ＣＸＣＬ１１）、ＨＣＣ−１（ＣＣＬ１４）、ＨＣＣ−４（ＣＣＬ１６）、Ｇｒｏ−α／β（ＣＸＣＬ１／２）、ＥＮＡ７８（ＣＸＣＬ５）、エオタキシン（ＣＣＬ１１）、エオタキシン−２（ＣＣＬ２４）、ＤＣ−ＣＫ１（ＣＣＬ１８）、ＢＣＡ−１（ＣＸＣＬ１３）、フラクタルキン（ＣＸ３ＣＬ１）、ＳＤＦ−ｌα（ＣＸＣＬ１２）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）リンホタクチン（ＸＣＬ１）、ＩＬ−８（ＣＸＣＬ８）、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）、ＴＥＣＫ（ＣＣＬ２５）およびＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、ＭＣＰ−２（ＣＣＬ８）、ＭＣＰ−３（ＣＣＬ７）、ＭＣＰ４（ＣＣＬ１３）。標的遺伝子の発現を、その内部ポジティブコントロールの発現の値に基づき、異なるサンプル間で正規化した。この研究において使用したヒトｃＤＮＡライブラリーを作製した。例えば、Ｒｏｓｓｉら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１０３３−１０３６；Ｂｏｌｉｎら（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：５４９３−５５０２；およびＶｉｃａｒｉら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２９１−３０１を参照のこと。
【００４８】
（ＶＩ．免疫組織化学）
凍結させた６μｍの組織切片を、免疫染色の前にアセトンそしてパラホルムアルデヒド中で固定した。アビジン、ビオチン系成分の非特異的結合、または内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックするために、切片を、アビジンＤおよびビオチン溶液（Ｂｌｏｃｋｉｎｇキット、Ｖｅｃｔｏｒ、Ｂｉｏｓｙｓ  ＳＡ、Ｃｏｍｐｉｅｇｎｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて各工程１０分間、および０．３％過酸化水素（Ｓｉｇｍａ、Ｆｒａｎｃｅ）を含むＰＢＳを用いて室温で１５分間、前処理した。ＰＢＳ中で簡単に洗浄した後、この切片を、両方の一次抗体を添加する前に少なくとも３０分間、ブロッキング用血清（２％健常ウサギ血清）と共にインキュベートした。切片を、加湿雰囲気中、室温にて１時間、抗ＴＡＲＣ、抗ＩＰ−１０、抗ＭＩＧ，抗ＩＴＡＣ、抗ＣＸＣＲ３、および抗ＣＸＣＲ４で染色した。ヤギＩｇＧの結合を、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧを用い、その後、ストレプトアビジンペルオキシダーゼを用いて検出し（両方ともＶｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣキット：Ｇｏａｔ  ＩｇＧ  ＰＫ−４００５、Ｖｅｃｔｏｒ）に含まれる）、そしてマウスＩｇＧ１の結合を、加湿雰囲気中、室温にて同時にウサギアルカリホスファターゼ標識抗マウスＩｇＧ（Ｄ０３１４、Ｄａｋｏ、Ｇｌｏｓｔｒｕｐ、Ｄｅｎｍａｒｋ）により検出した。ペルオキシダーゼ活性およびアルカリホスファターゼ活性を、室温にて５〜１０分間、それぞれ、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）基質（ＳＫ−４２００、Ｖｅｃｔｏｒ）およびアルカリホスファターゼ基質ＩＩＩ（ＳＫ−５３００、Ｖｅｃｔｏｒ）を用いて明らかにした。ネガティブコントロールを、一次抗体として非特異的なアイソタイプコントロールを添加することにより確立した。
【００４９】
本明細書中の全ての参考文献は、各々の個々の刊行物または特許出願が参考として援用されるよう詳細にかつ個々に示されるのと同程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００５０】
当業者に明らかなように、本発明の多くの改変および変形が、本発明の意図および範囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書に記載される特定の実施形態は例示のみの目的で提供され、本発明は、添付の特許請求の範囲の記載によって（このような請求項により権利が与えられる等価物の十分な範囲と共に）限定され；そして本発明は、本明細書中に例示目的で示される特定の実施形態によって限定されない。
【国際公開パンフレット】
2004517078.tif 000002
2004517078.tif 000003
2004517078.tif 000004
2004517078.tif 000005
2004517078.tif 000006
2004517078.tif 000007
2004517078.tif 000008
2004517078.tif 000009
2004517078.tif 000010
2004517078.tif 000011
2004517078.tif 000012
2004517078.tif 000013
2004517078.tif 000014
2004517078.tif 000015
2004517078.tif 000016
2004517078.tif 000017
2004517078.tif 000018
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004517078.tif 000019
【国際調査報告】
2004517078.tif 000020
2004517078.tif 000021
2004517078.tif 000022
2004517078.tif 000023
2004517078.tif 000024