(57)【要約】遺伝子発現を制御するための複合体であって、核酸結合ドメイン、遺伝子調節領域、および複合体が細胞膜を通過して移行するのを可能にする因子を含む複合体。ここで核酸結合ドメインは、天然において該遺伝子調節領域と関連する核酸結合ドメインに対して異種性であり、遺伝子の保存配列に結合する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子発現を制御するための複合体であって、
核酸結合ドメイン、
遺伝子調節領域、および
前記複合体が細胞膜を通過して移行することを可能にする因子
を含み、該核酸結合ドメインは、天然において該遺伝子調節領域と関連する核酸結合ドメインと異種性であって、該遺伝子に特異的な配列に結合する複合体。
【請求項２】
保存配列が、異種遺伝子中に見出されない、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記核酸結合ドメインは、前記遺伝子の上流調節性ドメインに結合することが可能である、請求項１または２に記載の複合体。
【請求項４】
前記核酸結合ドメインは、ジンクフィンガーモチーフを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項５】
前記遺伝子調節領域は、遺伝子発現のエンハンサーである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項６】
前記核酸結合ドメインは、ＤＮＡ結合ドメインである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項７】
前記移行因子は、アンテナペディアのホメオドメイン、またはその機能的変異体を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項８】
治療における使用のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の複合体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１０】
遺伝子発現の内因性調節に影響され得る症状のための薬剤の製造における、請求項１〜８のいずれかに記載の複合体の使用。
【請求項１１】
前記遺伝子発現が活性化される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記遺伝子は、エリスロポエチンを発現する、請求項１０または１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体の生産方法であって、標的遺伝子に特異的なＤＮＡ配列を選択すること、保存配列に対する親和性に関して、一連の潜在的なＤＮＡ結合ペプチドまたはタンパク質をスクリーニングすること、親和性を有するペプチドまたはタンパク質を選択すること、および前記ＤＮＡ結合ドメインとして、該選択したペプチドまたはタンパク質を有する複合体を生産することとを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、選択された遺伝子の発現を制御するために投与され得るタンパク質複合体に関する。
【０００２】
［発明の背景］
多細胞生物における遺伝子発現は、ＤＮＡ配列および転写因子として既知の核タンパク質の膨大なレパートリーを含む相互作用の複合ネットワークにより、一時的かつ空間的に調節された様式で制御される。これらのタンパク質は、発現遺伝子配列の上流に位置する特定のＤＮＡ標的配列に選択的に結合する能力を有する。ＤＮＡ配列へ転写因子を結合させると、種々の遺伝子群の発現を活性化または抑制することができる。
【０００３】
異なる細胞型での遺伝子発現は、その細胞型で合成される転写因子の性質、および遺伝子上流に対応するＤＮＡ標的配列の存在に依存するであろう。個々の転写因子を活性化または抑制することができるホルモンを特に除いて、外因性ＤＮＡを導入することなく、特定の細胞型の内因性遺伝子発現を調整するのは非常に困難であることが証明されている。現段階では、サイトカインおよび細胞成長因子のような医学的に関連する内因性遺伝子産物は、精製組換えタンパク質として投与される。この戦略は、分泌タンパク質にしか適用することができないため、一定の制限がある。種々の細胞型の内因性遺伝子発現は、ウイルスプロモーターの転写制御下で発現されるべき遺伝子のコピーを過剰に細胞に供給することにより改変され得る。このアプローチを用いるには、生物へ外来ＤＮＡを導入すること、および高速かつ安定な転写速度を確実にするためにウイルスプロモーターを使用することを要する。
【０００４】
国際公開第Ａ−９９／１０３７６号は、転写活性化領域および融合タンパク質を細胞へ侵入させるためのタンパク質伝達ドメインを有する融合タンパク質を開示する。その融合タンパク質は、細胞機能に対する所定の化合物の効果を研究するためのｉｎ　ｖｉｔｒｏツールとして主に意図される。その転写活性化領域は、ＤＮＡ結合領域および転写を活性化する領域を含むように設計される。適切であるとされているＤＮＡ結合タンパク質の例は、Ｅ２Ｆ−１、Ｃ−Ｍｙｂ、Ｆｏｓ、Ｇａｌ４、ＥＳＴ１、Ｅｌｆ−Ｉ、およびＴ７ＲＮＡポリメラーゼである。しかしながら、これらのＤＮＡ結合タンパク質は、多くの異なる遺伝子において広く見出されるＤＮＡ領域に特異的であり、したがって、多くの異なる遺伝子が、その融合タンパク質の標的となり得る。
【０００５】
国際公開第Ａ−９９／１１８０９号は、アンテナペディアのホメオドメインを含む複合体に関する。そのホメオドメインは、１００以上のアミノ酸から成るタンパク質の移行を可能にするように調製される。そのホメオドメインおよびＤＮＡ結合タンパク質を含む複合体が開示されている。しかしながら、言及される特定ＤＮＡ結合タンパク質は、国際公開第Ａ−９９／１０３７６号に記載されるＤＮＡ結合タンパク質と類似しており、多くの遺伝子に見出されるＤＮＡ領域に結合することが予測される。
【０００６】
［発明の概要］
本発明は、内因性遺伝子発現を調整する際の多くの制限を克服して、任意の所定の内因性遺伝子を選択的に誘導しうる可能性を有する戦略を開示する。
【０００７】
本発明によれば、遺伝子発現を制御するための複合体は、
核酸結合ドメイン、
遺伝子調節領域、および
上記複合体が細胞膜を通過して移行することを可能にする因子
を含み、ここで上記核酸結合ドメインは、天然において上記遺伝子調節領域と関連する核酸結合ドメインと異種性であって、上記標的遺伝子に特異的な配列に結合する。
【０００８】
核酸結合ドメインは、所定の遺伝子に選択的に結合するその能力によって選択される。核酸結合ドメインは、適切な部位にて局所的に遺伝子調節を活性化し、所望の効果を発揮する。典型的に、核酸結合ドメインは、標的遺伝子上流の領域に結合することが可能であろう。しかしながら、核酸結合ドメインは、既知の調節ドメインだけでなく、任意の適切な領域に結合するように設計され得る。
【０００９】
従来技術の複合体と対照的に、核酸結合ドメインの標的部位は、内因性ＤＮＡ結合タンパク質が結合する部位でなく、かつ標的遺伝子のみに特異的な特有の部位である。さらに、この結合ドメインは、遺伝子を選択的にターゲティングするために、標的部位に結合するように設計され得る。
【００１０】
本発明の第２の態様によれば、本発明の複合体は、治療、特に、遺伝子発現の内因性調節に影響されうる症状のための薬剤の製造において使用される。
【００１１】
本発明の第３の態様によれば、複合体は、まず標的遺伝子上流の保存ＤＮＡ配列または特有のＤＮＡ配列を選択すること、選択した配列に対する親和性に関して、一連の潜在的なＤＮＡ結合ペプチド（またはタンパク質）をスクリーニングすること、親和性を有するペプチドを選択すること、および核酸結合ドメインとして選択したペプチドを有する複合体を生産することにより調製される。
【００１２】
本発明により、複合体が特定遺伝子を選択的に標的とすることが可能になる。標的遺伝子と特に関連しない遺伝子調節因子を送達するための複合体であって、特定遺伝子を（例えば、エンハンサーまたはプロモーター配列を介して）標的とする複合体を選択することが可能である。遺伝子上の多くのエンハンサーまたはプロモーター配列は、細胞特異的であり、例えば、免疫グロブリンエンハンサーは、Ｂ−リンパ球でのみ機能する。しかしながら、本発明の複合体を用いると、免疫グロブリン遺伝子に広範の種々の遺伝子調節因子を送達することが可能であり得る。
【００１３】
本発明は、添付の図面を参照して説明される。
【００１４】
［発明の説明］
本発明の複合体は、３つの異なる領域：複合体が細胞膜を通過して移行することを可能にする因子を含む第１の領域、遺伝子調節ドメインを含む第２の領域、および核酸結合ドメインを含む第３の領域を有するように設計される。
【００１５】
第１の領域は、細胞膜を通過して移行することを可能にする任意の因子を含み得る。この能力を有する多くの因子が既知であり、特に、アンテナペディアのホメオドメイン、単純ヘルペスウイルス由来のＶＰ２２、およびＨＩＶウイルス由来のｔａｔすべてが、移行因子として十分に特徴付けられている。好ましくは、複合体が核を標的するように、核局在化シグナルとして機能する配列が存在すべきである。核局在化シグナルは、当業者に既知である。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態では、移行因子は、アンテナペディアのホメオドメインに由来する。
【００１７】
ショウジョウバエから得られるＡｎｔｐ遺伝子のホメオドメインは、国際公開第Ａ−９９／７１８０９号に開示されている。このホメオドメインに相同性のある配列が、脊椎動物、哺乳動物およびヒトを含む他の生物から単離されており、これらは、本発明に含まれる。ホメオドメインは、Ｊｏｌｉｅｔ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ， １９９１； ８８：１８６４−１８６８に記載される手法を用いて、クローニングのような標準的な方法を使用して調製され得る。さらに、国際公開第Ａ−９９／１１８０９号は、１００アミノ酸長より大きいタンパク質を移行させることが可能なＡｎｔｐ構築物の調製について開示する。これは、本発明のＡｎｔｐ構築物を調製する際の好ましい方法である。
【００１８】
多細胞生物中のＡｎｔｐ配列は一般に、自然状態で保存されるが、これは、必ずしもそのような配列である必要はなく、他のかかる配列が、本発明中に含まれる。例えば、移行因子は、ショウジョウバエから得ることができる配列と、約５０％以上、例えば、６０％、７０％、８０％、または９０％の配列同一性を有し得る。配列同一性は、ＧＡＰのような市販のプログラムを用いて決定され得る。
【００１９】
さらに、合成変異体は、それらが膜を通過して移行する能力を有する限り、使用され得る。合成変異体は一般に、天然に存在するタンパク質と、置換、特に保存的置換されることにより異なるであろう。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸群、すなわち疎水性群、極性群、酸性群または塩基性群の１つに由来するアミノ酸を、同一群内由来のアミノ酸で置換することを意味する。かかる置換の例は、バリンをメチオミンにより置換する、およびその逆の置換である。
【００２０】
別個の好ましい実施形態では、移行因子は、ヒストンであるか、またはヒストンの機能的断片である。移行因子として作用するヒストン断片は、Ｚａｉｔｓｅｖ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ， １９９７； ４： ５８６−５９２、および同時係属国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ０１／０１６９９号に開示されている。
【００２１】
複合体の第２の領域は、遺伝子調節因子を含む。遺伝子調節因子は、遺伝子発現の活性化因子、または発現のリプレッサーであってもよい。好ましくは、その因子は、発現のエンハンサーである。その因子は、タンパク質であってもよく、あるいはポリヌクレオチド、例えば、遺伝子発現を活性化するのに使用され得るプロモーターまたはエンハンサー配列であってもよい。したがって、因子は、標的遺伝子と内因的に関連するプロモーター配列よりも、効果的に機能するプロモーター核酸配列であってもよい。適切な活性化因子は、国際公開第Ａ−９９／１０３７６号に開示されている。多くの遺伝子調節因子が既知である。例えば、核タンパク質Ｏｃｔ−１は、遺伝子転写の活性化因子として十分に特徴付けられている。この因子は、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子の共通調節ドメインである共通配列ＡＴＧＣＡＡＡＴを有する８量体モチーフに特異的である。
【００２２】
別の活性化因子は、単純ヘルペスウイルス視覚タンパク質１６（ＶＰ１６）であり、そのアミノ酸配列は、Ｔｒｉｅｚｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．， １９８８； ２： ７１８−７２９に開示されている。
【００２３】
遺伝子調節因子は、複合体が結合する遺伝子配列に対して、その位置からその遺伝子調節効果を発揮しなくてはならない。発現レベルをモニターするために適切な試験を実施することができ、結果を対照系と比較することができることは理解されるであろう。
【００２４】
遺伝子調節因子は、ゲノムＤＮＡに対して直接その遺伝子調節効果を発揮してもよく、あるいは例えば発現に必要な成分を標的とすることで、間接的に遺伝子機能を制御するように作用してもよい。
【００２５】
標的部位（標的遺伝子）は、任意の遺伝子配列であり、その標的遺伝子の発現を、調節する必要がありうる。遺伝子配列が、例えば、突然変異遺伝子（癌遺伝子）である場合には、その突然変異遺伝子の発現は抑制されるべきである。さらに、遺伝子配列が、宿主ゲノムに組み込まれるウイルスＤＮＡであってもよい。その場合、ある組み込まれたウイルス遺伝子は、病因ともなりうるため、これらを抑制することが望ましい。ある遺伝子の過剰発現もまた、疾患をもたらしうるので、その遺伝子を選択的にターゲティングして、さらにその遺伝子を抑制することが望ましい。例えば、成長因子またはホルモンの過剰発現は一般に望ましくなく、したがって遺伝子発現の制御は、有用な治療法である。
【００２６】
遺伝子の過小発現もまた、内因性産物の欠如に起因して疾患をもたらすであろう。したがって、その欠陥を修正するために、これらの遺伝子発現を高めることが望ましい。例えば、所定の遺伝子が、代謝で使用される産物をコードしている場合には、その遺伝子が正常に発現することは、健常な代謝機能を維持するのに必要である。
【００２７】
第３の領域は、核酸結合ドメインを含む。核酸結合ドメインは、ＤＮＡ結合ドメインまたはＲＮＡ結合ドメインであり得る。典型的に、結合ドメインはＤＮＡ結合ドメインであるが、ＲＮＡ結合ドメインである場合には、ドメインは、典型的に、選択部位にてＤＮＡから転写される新生ＲＮＡを標的とするであろう。核酸結合ドメインは、所定の遺伝子上の選択配列、または所定の遺伝子に関連した選択配列に結合するその能力に基づいて選択される。選択配列は、転写因子の内因性結合部位でなく、所定の遺伝子に対するその特異性に基づいて選択される。標的配列は、調節領域である必要はなく、結合ドメインは、所定の遺伝子中で高度に保存される別の配列に結合するように設計されてもよい。結合ドメインは、天然において遺伝子調節因子と関連する結合ドメインに対して異種性であろう。
【００２８】
標的遺伝子配列に関する「保存」という用語の使用は、その遺伝子に特異的な、すなわち他の関連しない遺伝子中には見出されない標的配列を指すことが意図される。配列は通常、６個のヌクレオチドより多く、好ましくは８個のヌクレオチドより多く、より好ましくは１０個のヌクレオチドより多く、最も好ましくは１６個以上のヌクレオチドであろう。適切な標的遺伝子は、従来の配列分析ソフトウェアプログラムを用いて、他の遺伝子配列との比較により同定することができ、ここで他の遺伝子配列とは、ヒトゲノムプロジェクトの一部として利用可能にされた配列情報に基づいて明らかにされている。例えば、標的とされる遺伝子を選択したら、従来のコンピュータプログラムを用いて遺伝子配列が分析されて、その遺伝子に特異的な配列を同定することができる。次に、この配列を標的として使用して、適切な結合タンパク質を設計する。
【００２９】
ＤＮＡに結合する分子の例としては、ジンクフィンガーモチーフもしくはロイシンジッパーモチーフを有するタンパク質、またはヘリックス・ターン・ヘリックスモチーフを有するタンパク質が挙げられる。結合ドメインはまた、適切な調節性タンパク質、すなわち正の調節因子または負の調節因子に由来し得る。例えば、結合ドメインは、λリプレッサータンパク質、例えばλ  Ｃｒｏ由来の適切なＤＮＡ結合ドメインを含んでもよい。あるいは、プロタミンの適切な領域を使用してもよい。これらの既知のＤＮＡ結合タンパク質は、標的配列に対する特有の結合親和性を有するように改変または設計される。
【００３０】
結合ドメインは、従来の技法を用いて選択され得る。保存的遺伝子配列がいったん選択されると、これをアッセイでの標的として使用して、適切な結合タンパク質または結合ペプチドを選択することができる。組換えＤＮＡ技法を用いて従来の結合タンパク質を適合および／または改変させて、保存配列に特異的に結合するタンパク質を生産してもよい。
【００３１】
特に適切な技法は、ファージディスプレイであり、その概説は、Ｃａｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＩＶＤ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９６； Ｎｏｖ／Ｄｅｃ：２２−３１に記載されている。ファージディスプレイとは、多数の多様なタンパク質／ペプチドを生産して、特定標的に結合するタンパク質／ペプチドを選択する効果的な方法である。代替的技法、例えば、リボソームディスプレイもまた、保存配列に結合するタンパク質を選択するのに使用され得る。
【００３２】
さらに、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ２００１； ９８（４）：１４３２−１４３６、およびＭｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ２００１； ９８（４）１４３７−１４４１は、ポリジンクフィンガーペプチドが、新規な結合特異性を有する「デザイナーペプチド」を生産するのに適応させることができることを開示する。これらの刊行物は、ゲノム上の特有の部位に結合するペプチドを設計することが可能であることを示す。好ましい実施形態では、核酸結合ドメインは、標的遺伝子配列上にあるか、または標的遺伝子配列にある特有のＤＮＡ配列に結合するマルチジンクフィンガーペプチドである。好ましくは少なくとも４個、より好ましくは６個のジンクフィンガーが結合ドメインを構成する。
【００３３】
本発明による複合体の生産方法は、当業者に明らかであろう。特に、融合タンパク質の生産が既知であり、適切な宿主系で所望の複合体を発現する適切な遺伝子構築物の構築方法が既知である。
【００３４】
３つの領域はすべてが複合体の一部である場合に機能的であろう。さらに、それらの領域は、いかなる順序で複合体上に組み込まれてもよい。
【００３５】
好ましい実施形態では、複合体は、融合タンパク質であり、構築物の各成分をコードするＤＮＡ分子を連結して、ハイブリッドＤＮＡ分子を生産することにより生産される。宿主細胞にて、例えば細菌細胞またはバキュロウイルス系にて発現される場合、ハイブリッドＤＮＡ分子が発現され、融合タンパク質が生産される。ハイブリッドＤＮＡ分子はまた、発現を助長するプロモーター配列またはエンハンサー配列を含んでもよい。
【００３６】
本発明の複合体は、疾患の治療のための薬学的組成物の製造にて使用されてもよい。組成物は、薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤または補助剤を任意に含んでもよい。薬学的に許容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤は、対象とする投与経路および標準的な薬学的実践を考慮して選択され得る。
【００３７】
薬学的組成物は、任意の適切な経路により投与され得る。特に、経口、経皮、非経口または経粘膜送達が適切であり得る。
【００３８】
複合体は、任意の動物、特にヒトを治療するのに使用され得る。獣医学的用途もまた意図される。適切な投与量は、当業者に既知の様々な要素にしたがって選択され得る。
【００３９】
投与される場合、複合体は所望の遺伝子配列にて局在化し、遺伝子調節をもたらすであろう。好ましい実施形態では、複合体は、生物に対して有益な効果を有する産物を発現する遺伝子を標的とする。一例では、標的遺伝子は、エリスロポエチンを発現し、その発現が調節され得て、それにより、患者におけるさらなるエリスロポエチンの生産を促進する。
【００４０】
主に治療用途または予防用途を対象とするが、本発明の複合体は、診断用途、例えば、特定遺伝子の発現の研究または遺伝子機能の調査を目的とするインビトロアッセイにて使用されてもよい。
【００４１】
以下の実施例において、本発明をさらに説明する。
【００４２】
以下の実施例では、アンテナペディアタンパク質（Ａｎｔｐ）のホメオドメインを、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）由来のテトラサイクリンリプレッサー（ＴｅｔＲ）のＣ末端に融合した。ＨｅＬａ細胞とともに融合タンパク質をインキュベートすることにより、融合タンパク質を核へ送達した。送達後の遺伝子調節を評価するために、ＨｅＬａ細胞をさらにＴｅｔＲ調節可能プロモーターを含有するルシフェラーゼレポータープラスミドとともにインキュベートした。ルシフェラーゼ発現は、融合タンパク質とともにインキュベートした細胞中で抑制された。
【００４３】
ＨｅＬａ細胞中でＴｅｔＲＡｎｔｐ融合タンパク質を発現するために、１８０ｂｐのＡｎｔｐホメオボックスドメインをプラスミドｐｃＤＮＡ６／ＴＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングして、ｐｃＤＮＡ６／ＴＲＡｎｔｐを創出した（図１）。ＴｅｔＲのＤＮＡ結合領域がタンパク質のＮ末端に位置するように、ＡｎｔｐをＴｒｔＲのＣ末端に融合させた。Ａｎｔｐを、従来の技法を用いて鋳型プラスミドからＰＣＲにより増幅して、ＴｅｔＲのＣ末端にあるＥｃｏｒＩ部位にインフレームでクローニングした。得られたＴｅｔＲＡｎｔｐ融合をシークエンス法により確認した。
【００４４】
ＴｅｔＲまたはＴｅｔＲＡｎｔｐ融合タンパク質による発現レベルを評価するために、ｐＣＭＶｔｅｔＯ２プロモーターの制御下でルシフェラーゼを発現するレポータープラスミドを構築した。ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃレポータープラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ）は、改変したサイトゾル形態のホタル（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓ）ルシフェラーゼ遺伝子（ｌｕｃ＋）を含む。ルシフェラーゼが発現されるように、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃは、正確な方向で機能性真核生物プロモーターを挿入する必要がする。ＴＡＴＡボックスと転写開始部位との間に挿入された２つのテトラサイクリン（Ｔｃ）オペレーター（ｔｅｔＯ２）配列を含むＣＭＶプロモーター（ｐＣＭＶｔｅｔＯ２）は、ｐｃＤＮＡ４／ＴＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から得られた。ｐＣＭＶｔｅｔＯ２を含むＡ７２６ｂｐの断片をＭｌｕＩからＸｈｏＩまで切り出し、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃにクローニングして、ｐＧＬ３Ｂ／ＴＯを創出した（図２）。
【００４５】
ｐＣＭＶｔｅｔＯ２の挿入は、機能性プロモーターからの高度のルシフェラーゼ発現をもたらした。
【００４６】
６：１の比のｐｃＤＮＡ６／ＴＲＡｎｔｐ：ｐＧＬ３Ｂ／ＴＯでトランスフェクトした細胞では、ルシフェラーゼ発現は、テトラサイクリン（Ｔｃ）の非存在下において抑制された。Ｔｃを培地に添加すると、ルシフェラーゼ発現は６倍にまで誘導された。ＴｅｔＲＡｎｔｐによる抑制は、ＴｅｔＲ単独による抑制と非常に類似していた。Ｔｃによる誘導をすると、ルシフェラーゼ発現が６倍に増加した。
【００４７】
ＴｅｔＲおよびＴｅｔＲＡｎｔｐが同様のレベルで発現されると仮定すると、これらの結果は、ＴｅｔＲのＣ末端に融合したＡｎｔｐは、Ｔｃに対するＴｅｔＲの応答性に対して、またはＴｅｔＲの転写を抑制する能力に対して影響を受けないことを示唆する。したがって、この融合タンパク質は移行することができ、転写抑制のための適切な部位を選択することができたことを示唆する。この結果は、選択した遺伝子を標的化して抑制することが可能であることを示し、ＤＮＡ結合成分を改変することにより、多用途の一連のリプレッサー分子を生産し、種々の内因性遺伝子を選択的に標的とすることができることを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【図１】
アンテナペディアおよびテトラサイクリンリプレッサーの融合タンパク質をコードする発現プラスミドを示す。
【図２】
テトラサイクリンプロモーター配列の制御下にあるルシフェラーゼ遺伝子を含むレポータープラスミドを示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004500888.tif 000015
【国際調査報告】
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