(57)【要約】遺伝的に引起こされた二つの現象型に少なくとも二つの現象型の実証に関係する参照配列ないしはこれに機能的に特徴付けられた変異に対するオリゴヌクレオチドの選択性を持つヌクレオチド基板で、オリゴヌクレオチドの配列が参照配列に対して同一または相補的である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝的に引起こされた二つの表現型に少なくとも関係する参照配列の断片に対して同一又は相補的であるオリゴヌクレオチド配列の選択性を有するヌクレオチド基板。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドの選択が一つの表現型のすべての関連現象の重要な部分を決定することを特徴とする請求項１記載のヌクレオチド基板。
【請求項３】
参照配列が次の遺伝子銀行（ＧｅｎＢａｎｋ）ナンバーの配列グループから選ばれることを特徴とする請求項１または２記載のヌクレオチド基板。
−　　 Ｋ０３０２０， ＮＭ ０００２７７， Ｌ４７７２６， Ｕ４９８９７；
−　　 ＮＭ ０００３２０， Ｍ１６４４７， Ｘ０４８８２；
−　　 Ｚ１４０９３；
−　　 Ｍ５５５７５；
−　　 Ｘ６６７８５；
−　　 Ｍ６００９１， ＮＭ ０００１５５； Ｌ４６３５４〜４６３６５， Ｌ４６６９１〜４６７２４；
−　　 ＮＭ ００２０４４， ＮＭ ０００１５４， Ｌ７６９２７， Ｕ２６４０１， Ｍ８４４４３；
−　　 Ｌ４１６６８；
−　　 ＮＭ ００００７１， Ｌ１４５７７， Ｘ９８８１０〜Ｘ９８８２３， Ｘ８８５６２， Ｘ８７８１５， Ｘ８７８１６， Ｘ９１９１０；
−　　 ＡＦ０２５７９４， ＮＭ ００２４５４；
−　　 Ｕ０９８０６， ＡＦ１０５９８８〜ＡＦ１０５９９８；
−　　 Ｕ６３２７４， Ｕ０３２７４；
−　　 Ｍ１６８２７， Ｍ９１４２２〜Ｍ９１４３２， ＮＭ ００００１６；
−　　 ＮＭ ０００５２７， Ｌ００３３６〜００３５２， Ｌ２９４０１；
−　　 Ｘ０４５０６， Ｍ１４１６２；
−　　 ＮＭ ０００４９２， Ｍ５５１３１；
−　　 ＮＭ ０００１３８， Ｘ６３５５６， Ｌ１３９２３；
−　　 Ｚ３７９７６；
−　　 ＡＦ０３４５４４；
−　　 Ｍ２６８５６， Ｍ１３９３５， Ｍ１３９３６；
−　　 ＮＭ ０００１０２， Ｍ１４５６４， Ｍ３１１４６．
【請求項４】
オリゴヌクレオチドが第６．１．１表から６．１２．５表までの表において特徴付けられる配列のグループから選ばれることを特徴とする請求項１から３のいずれか１つに記載のヌクレオチド基板。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドが、１５から２５の長さ（ｍｅｒ）、特に１５から１８の長さ（ｍｅｒ）のヌクレオチドを有することを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載のヌクレオチド基板。
【請求項６】
基板が金で被覆されたガラスからなることを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載のヌクレオチド基板。
【請求項７】
フェニルケトン尿症およびガラクトース血症の実証となるオリゴヌクレオチドの組合せからなることを特徴とする請求項１から６のいずれかに記載のヌクレオチド基板。
【請求項８】
ビオチニダーゼ欠乏症の実証となるオリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項７記載のヌクレオチド基板。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか１つに記載のヌクレオチド基板を、以下の疾病のグループから選んだ少なくとも二つの疾病の診断に同時に使用することを特徴とするヌクレオチド基板の使用方法。
フェニルケトン尿症；
メープルシロップ尿症；
ガラクトース血症；
ホモシスチン尿症；
ビオチニダーゼ欠乏症；
中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ欠乏症；
遺伝性ハイパーコレステリン血症；
遺伝性アポリポ蛋白−Ｂ欠陥；
嚢胞性線維症；
マルファン症候群；
スミス−レムリ−オピッツ症候群；
副腎性器症候群。
【請求項１０】
請求項１から８のいずれか１つに記載のヌクレオチド基板を新生児の検査に使用することを特徴とするヌクレオチド基板の使用方法。
【請求項１１】
請求項１から８のいずれか１つに記載のヌクレオチド基板を出生前の検査に使用することを特徴とするヌクレオチド基板の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、特定の遺伝子配列を検出するためオリゴヌクレオチドの選択性を有する結合されたオリゴヌクレオチドのためのヌクレオチド基板に関し、内容的に関連するドイツ特許出願第１０００２４４６．７号の優先権を主張する。
【０００２】
ハイブリダイゼーション技術、即ち２つの相補的な核酸を互いに目標に合うように積み重ねることは、多数の分子生物学的方法における重要なステップを表すものである。この技術によれば、個々の遺伝子又はゲノムＤＮＡの調製における遺伝子の部分又は遺伝子の転写生成物（ｍＲＮＡ）が実証される［Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ、Ｆｒｉｔｓｃｈ ＥＦ、Ｍａｎｉａｔｉｓ著「分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）」Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．第２版、第２巻、１９８９年、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１３．９６−９７；Ｃｏｎｓｔａｎｚｉ Ｃ、Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ Ｄ著「迅速なブロット：セルからのＤＮＡ及びＲＮＡの同定（Ｆａｓｔ ｂｌｏｔｓ：ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ ｆｒｏｍ ｃｅｌｌｓ）」、Ｉｎ著「分子クローニング技術へのガイド（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、Ｂｅｒｇｅｒ ＳＲ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ ＡＲ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．出版、 Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ著「酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）」１９８７年、１５２、５８２−８７頁、Ｓｃｈｅｎａ Ｍ ｅｔ ａｌ著「相補的ＤＮＡマイクロアレイによる形質発現の定量的モニタリング（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ ｍｉｃｒｏａｒａｙ）」Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９５年；２７０。４６７−４７０頁］。
【０００３】
ハイブリダイゼーションの最も重要な利用の１つは、個々の遺伝子の変化又は変異（ミューテーション）の検査である［Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ、Ｂｒｅｎｔ Ｒ、Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ＲＥ、Ｍｏｏｒｅ ＤＥ、Ｓｅｉｄｍａｎ ＪＧ、Ｓｍｉｔｈ Ｋ著「分子生物学における現代のプロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ）、１９９８年、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ］。
【０００４】
通常、ハイブリダイゼーションは、核酸配列の検出反応及びそれに続く同定と組み合わされる。そのため、第１の核酸ストランドは例えば色素、放射能又は化学ルミネッセンス分子又は発光分子によりマーキングされ、第２の核酸ストランドは固相と結合される。しばしば使用されるＤＮＡ分析のためのサザンブロット及びＲＮＡ分析のためのノーザンブロットにおいては、固相はニトロセルロース膜又はナイロン膜によって形成される。
【０００５】
この従来のブロットシステムにおいては、ゲノムＤＮＡ又はＲＮＡ、いわゆるターゲット配列は、アガロースゲルを介して電気泳動法により分離され、ニトロセロース膜又はナイロン膜上に写し取られ、プローブとしての公知のＤＮＡ配列ないしＲＮＡ配列とハイブリダイゼーションされる。ハイブリダイゼーションはプローブのあらかじめのマーキングにより検出され、場合によっては定量化される。この方法は高度の特殊性を特徴とする。しかしこの方法は、ブロット過程の実施が非常に労力と時間を要し、１つの過程においてそれぞれ僅かの配列しか同時に検査することができないという欠点を持っている。
【０００６】
ターゲットによるプローブのハイブリダイゼーションは、最近ではいわゆるジーンチップによっても行うことができる［Ｌｏｃｋｈａｒｔ ＤＪ、Ｄｏｎｇ Ｈ、Ｂｙｍｅ ＭＣ、Ｆｏｌｌｅｔｔｉｅ ＭＴ、Ｇａｌｌｏ ＭＶ、Ｃｈｅｅ ＭＳ、Ｍｉｔｔｍａｎｎ Ｍ、Ｗａｎｇ Ｃ、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｍ、Ｈｏｒｔｏｎ Ｈ及びＢｒｏｗｎ ＥＬ著「高密度オリゴヌクレオチド アレイへのハイブリダイゼーションによる発現モニタリング（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｂｙ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ Ｈｉｇｈ−Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｒｒａｙｓ）」Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１４巻、１６７５−１６８０頁、１９８６年、Ｗｏｄｉｃｋａ Ｌ、Ｄｏｎｇ Ｈ、Ｍｉｔｔｍａｎｎ Ｍ、Ｈｏ ＭＨ及びＬｏｃｋｈａｒｔ ＤＪ著「出芽酵母におけるゲノム幅の発現モニタリング（Ｇｅｎｏｍｅ−Ｗｉｄｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）」Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ第１５巻、１３５９−１３６７頁、１９９７年］。ジーンチップは例えば合成樹脂又はガラス製の基板からなり、その上に数千程度のオリゴヌクレオチドをプローブとして貼り付けることができる。僅か数平方ｃｍの大きさのチップの表面はオリゴヌクレオチドの「芝生」で覆われ、それによりＤＮＡ又はＲＮＡサンプルの相補的な核酸配列をハイブリダイゼーションすることができる。ターゲット配列は、ハイブリダイゼーションの後の検証を行うために前もってマーキングされる。
【０００７】
ジーンチップの使用は、数千の異なる配列の検査を同時にすることができ、従って従来のブロット法に対し改良することができる。更にチップ上のハイブリダイゼーションはスキャナーを介して評価することができ、その結果この方法は十分に自動化が可能である。
【０００８】
ジーンチップ又は遺伝子結合的検査媒体の製造のために種々の技術が開発されてきており、例えばリトグラフ法、絹紗スクリーン又は反応チャネル法、電気化学的／合成法、インクジェットシステム、マイクロピン法又はオープンキャピラリーチップがある。またマイクロビーズの使用も知られている［Ｌａｃｋｎｅｒ ＫＪ他著「ＤＮＡアレイに代る発光マイクロビーズにおける複合ＤＮＡ及びＲＮＡ解析（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＤＮＡ−ｕｎｄ ＲＮＡ−Ａｎａｌｙｓｅ ａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｚｅｎｔｅｎ Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ ａｌｓ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｚｕｍ ＤＮＡ−Ａｒｒａｙ）」、Ｓｔａｔｕｓｓｅｍｉｎａｒ Ｃｈｉｐｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ ｆｕｅｒ ＤＮＡ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ ｕｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｚａｎａｌｙｓｅ ｉｎ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ．ＤＥＣＨＥＭＡ １９９９年］。
【０００９】
遺伝子におけるミューテーションは遺伝子情報の配列決定により同定することができる（Ｓａｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ７４、５４６３−５４６７頁、１９７７年）。核酸の配列決定は一般に非常に費用がかかり、その結果実際上はミューテーションは大抵間接的に、即ちその生物化学的及び／又は生理的効果の検査を介して生物化学的方法（例えば酵素結合免疫測定法）、分析法（例えば高出力液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー又は質量分析）、又は細菌学的法（いわゆるグトリ生長阻止テスト）により実証される。
【００１０】
このやり方は、ミューテーションがしばしばミューテーションにより生じた代謝障害又は病状が現れた後始めて知ることができ、その結果可能な治療処置を時間が経過した後始めて選択し導入することができるという欠点を持っている。そのため場合によっては取り返しのつかない障害が始まってしまう事がある。
【００１１】
症状が現れるのを避けるためには、遺伝子欠陥の診断と治療ないし予防策の開始との間の時間ができるだけ短く保たれなければならない。このことはミューテーションが直接に、即ち核酸の平面上で検出されることによって行うことができる。このことはしかもできるだけ、早い小児期に行うべきである。
【００１２】
配列決定と並んで、遺伝子異常の同定を（既に述べた）ハイブリダイゼーションにより行うことができる。これは、ジーンチップの使用が可能であり、従って自動化された評価技術の効果的な手段を使用することができるという利点を持っている。
【００１３】
米国特許第５８３７８３２号明細書から次のようなＤＮＡチップが知られている。すなわちこのチップを使用することによって、可能なミューテーションに関する既知の配列を精査することができる。そのため先ず、問題になっているいわゆる参照配列に相補的な配列−いわゆる野生型配列−であって、それぞれとりわけ１２〜１８の塩基対の長さの断片を含むもの、並びにそれぞれこれらの野生型配列断片の単一の塩基においてのみ異なる配列が合成される。これらのいわゆる置換配列の数は、各塩基置換による理論的に可能なミューテーションの数に相応する。
【００１４】
次いで配列はチップ上に定められたモデルに貼り付けられ、好ましくはそれぞれ５個の互いに並行した列を有するブロックを形成する。これらのブロックはそれぞれ、野生型配列と、それに平行に配置されてそれぞれ交換された塩基の１つを有する３個の置換配列とを含む。５番目の配列は再び野生型配列に相応する。これに従い配列内における単一のヌクレオチド内のすべての理論的に可能な塩基交換を表示するためには５つの列と配列が必要である。
【００１５】
米国特許第５８３７８３２号明細書においては、この規準に従って人の遺伝子がミューテーションについて検査され、例えば嚢胞性線維症と関連して討議された遺伝子の特定のエクソンＣＦＴＲ、又は癌抑制遺伝子のエクソンｐ５３（そのミューテーションは癌発病と結び付けられている）が検査される。
【００１６】
このやり方の欠点は、比較的短い鎖の遺伝子において早くも、理論的に可能なすべてのミューテーションスペクトラムをカバーするためには、考えられるハイブリダイゼーション箇所として数万ないし数十万の配列をジーンチップ上に設けなければならないことである。検査すべき遺伝子又は遺伝子断片又は２つ又はそれ以上の遺伝子又は遺伝子断片の同時の検査の配列長さが長くなるにつれて、ハイブリダイゼーションの有効なスクリーニングに必要な数は、対応するジーンチップの製作及び変換を不可能にするオーダに達する。
【００１７】
例えば現在ゲノム検査のために重要な約４０，０００のヒトの遺伝子を上述の原理を使用して精査すべき場合には、少なくとも４×１０８のハイブリダイゼーション箇所を持ったジーンチップを必要とするであろう。このようなチップの製作は今日の従来技術では、また従来技術において見通しのあるとされた開発によってさえ、実現不可能である。相応して遺伝子欠陥の広範囲に及ぶ、早期の時宜を得た、迅速な検査は、実際に関連する範囲においては実施不可能である。
【００１８】
それ故本発明の課題は、結合されたオリゴヌクレオチドのためのヌクレオチド基板及び結合されたオリゴヌクレオチドのためのヌクレオチド基板のための配列の選択、又は類似の遺伝子結合された検査媒体、特に新生児スクリーニングのための検査媒体に関し、それによって、病気に関連する遺伝子ないし遺伝子断片（参照配列）のゲノム状態の検査が可能になるものを提供することにある。
【００１９】
この課題は、独立請求項に記載された特徴により解決される。有利な構成は従属請求項に記載されている。
【００２０】
この課題は、詳細には、公知の形式で決定される表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）（以下では「現象型」ということもある。）を生じる機能的に特徴のあるミューテーションを持ったオリゴヌクレオチドの選択が可能なヌクレオチド基板によって解決される。このオリゴヌクレオチドは参照配列に同一又は相補的である。
【００２１】
突然変異したオリゴヌクレオチドは、本発明によれば参照配列断片のすべての理論的に可能なミューテーションのスペクトラムから適切に選択され、結合される。
【００２２】
このように選択され、特殊の表現型を生じるミューテーションは、第２の表現型を根拠付ける少なくとも１つのオリゴヌクレオチドと共にジーンチップ上に設けられる。
【００２３】
ここで表現型という概念は、広く定義され、選択された参照配列と結び付けられるか、又はこれらの配列の検出を介して実証され得るすべての現れ方、外観及び結末に関連する。
【００２４】
この場合、表現型は例えば身体機能、生理的機能（例えば代謝障害）又はゲノムに基づく医学的意味における病気（例えば特定の癌）への素因を表す。
【００２５】
本発明によるチップは、それぞれ限られた数のハイブリダイゼーション箇所のみを必要とするだけであるという顕著な利点を有し、その結果ハイブリダイゼーション作用に続く解析にジーンチップを実際の医療において有効に利用することが可能である。
【００２６】
本発明によるジーンチップの他の利点は、迅速で、コスト的に有利で、とりわけ信頼できる検査法が提供されることにあり、その感度は従来の生理学的方法のそれを凌駕するものである。
【００２７】
本発明の特に有利な構成は、出生前及び新生児の分野の遺伝的状態の検査を可能にする。
【００２８】
新生児のためのスクリーニングプログラムにおいては、遺伝に基づく多数の代謝疾病を僅かの血液を使用して検出することができる。本発明によれば、以下の疾病の少なくとも２つ又はそれ以上に対するオリゴヌクレオチドを１つのチップ上で選択することができる。
【００２９】
フェニルケトン尿症、メープルシロップ尿症、ガラクトース血症、ホモシスチン尿症、ビオチニダーゼ欠乏症、中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ欠陥、遺伝性ハイパーコレステリン血症、遺伝性アポリポＢ蛋白欠陥、嚢胞性線維症、マルファン症候群、スミス−レムリ−オピッツ症候群、副腎性器症候群。
【００３０】
特に疾病「フェニルケトン尿症」及び「ガラクトース血症」に対するオリゴヌクレオチドを有するチップは有利である。このチップは更に「ビオチニダーゼ欠乏症」のためのオリゴヌクレオチドと有利に組み合わせられる。
【００３１】
上述の疾病は全体として２１の定められた遺伝子上のミューテーションにより生じ、この遺伝子は機能的に関連する調製範囲を含めて約１５０，０００のヌクレオチドを含んでいる。各ヌクレオチドはそれぞれ４個の塩基、アデニン、グアニン、シトシン及びチミンの１つと存在することができ、また挿入、欠失又は転位も考慮しなければならないから、約９００，０００の異なるミューテーションの可能性が生じる。更に例えばいわゆる小さなインデルス（挿入／欠失）のような複雑なミューテーションが含まれると、数百万の異なるミューテーションが生じる。
【００３２】
従って、従来技術によるジーンチップは、数百万の対応するハイブリダイゼーション箇所を有しなければならないことになる。このような配列の数は既知のジーンチップ上には有効に設けることも、評価することもできない。
【００３３】
オリゴヌクレオチドの本発明による選択によれば、疾病の検出のためジーンチップ上に必要な配列、即ちハイブリダイゼーション個所は約５，０００に減少され得る。それによって単一のジーンチップ上で同時のミューテーション検出が可能である。上述の疾病の検出に必要なオリゴヌクレオチドのもとで再び選択を行い、、疾病のただ１つ又は僅かのものを診断することも可能である。
【００３４】
この特別の構成において診断される疾病においては、ヒトの最も重要な遺伝子に基づく疾病の目標とする選択が対象となる。その選択は更に操作性及び全住民中の著しい頻度の規準に従い行われる。更にそれらは本質的に既に既知のミューテーションに帰するものである。その場合、機能的に特徴付けられたミューテーションが組み合わされ、そのミューテーションはそれぞれ観察される実際の疾病の９０〜９５％を発生する。
【００３５】
しかしながら、この原理によれば、その遺伝子上の原因が既知の他の疾病も単独で、又は組み合わせて検出することができる。
【００３６】
同様に、他の有機体、例えば動物における病気又は表現型を同定すること、又は検出することも可能である。
【００３７】
以下に本発明を病気の選択の例について詳細に説明する。
【００３８】
本発明によるジーンチップ及び本発明による選択の基礎になっているものはヒトゲノムの２１の遺伝子上にある参照配列、従ってそれに相補的な配列をも検出するためのオリゴヌクレオチドである。この場合具体的にはバイオテクノロジー情報国立センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）の遺伝子銀行のコードで挙げられている次の配列が対象となる。診断すべき疾病はそれぞれ括弧内に挙げられている。
【００３９】
１．フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、ＰＡＨ（フェニルケトン尿症の診断）
［遺伝子銀行ナンバー：Ｋ０３０２０、ＮＭ０００２７７、Ｌ４７７２６、Ｕ４９８９７］
２．キノイド デヒドロプテリディンレダクターゼ、ＱＤＰＲ（フェニルケトン尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ０００３２０、Ｍ１６４４７、Ｘ０４８８２］
３．ミトコンドリア分枝鎖状アルファ−ケト酸ヒドロゲナーゼ、α−ペプチド、ＢＣＫＤＨＡ（メープルシロップ尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｚ１４０９３］
４．ミトコンドリア分枝鎖状アルファ−ケト酸ヒドロゲナーゼ、β−ペプチド、ＢＣＫＤＨＢ（メープルシロップ尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｍ５５５７５］
５．分枝鎖状ディヒドロリポアミドトランスアシラーゼ、ＤＢＴ（メープルシロップ尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｘ６６７８５］
６．ガラクトース−１−リン酸塩 ウリディルトランスフェラーゼ、ＧＡＬＴ（ガラクトース血症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｍ６００９１、ＮＭ０００１５５；Ｌ４６３５４〜４６３６５、Ｌ４６６９１〜４６７２４］
７．ガラクトキナーゼ、ＧＡＬＫ１（ガラクトース血症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ００２０４４、ＮＭ０００１５４、Ｌ７６９２７、Ｕ２６４０１、Ｍ８４４４３］
８．ウリジン二リン酸−ガラクトース−４−エピメラーゼ、ＧＡＬＥ（ガラクトース血症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｌ４１６６８］（ガラクトース血症の診断）
９．シスタチン−ベータ−シンターゼ、ＣＢＳ［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ００００７１、Ｌ１４５７７、Ｘ９８８１０〜Ｘ９８８２３、Ｘ８８５６２、Ｘ８７８１５、Ｘ８７８１６、Ｘ９１９１０］
１０． メチルテトラヒドロフォラート−Ｌ−ホモシスティン−Ｓ−メチルトランスフェラーゼ、ＭＴＲ（ホモシスチン尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＡＦ０２５７９４、ＮＭ００２４５４］
１１． ５，１０−メチレンテトラヒドロフォラート レダクターゼ（ＮＡＤＰＨ）、ＭＴＨＦＲ（ホモシスチン尿症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｕ０９８０６、ＡＦ１０５９８８〜ＡＦ１０５９９８］
１２． ビオチニダーゼ、ＢＴＤ（ビオチニダーゼ欠乏症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｕ６３２７４、Ｕ０３２７４］
１３． 中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ、ＡＣＡＤＭ（中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ欠乏症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｍ１６８２７、Ｍ９１４２２〜Ｍ９１４３２、ＮＭ００００１６］
１４． 低密度リポ蛋白レセプタ、ＬＤＬＲ（遺伝性ハイパーコレステリン血症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ０００５２７、Ｌ００３３６〜００３５２、Ｌ２９４０１］
１５． アポリポ蛋白Ｂ（遺伝性アポリポＢ蛋白欠陥の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｘ０４５０６、Ｍ１４１６２］
１６． 「嚢胞性線維症 トランスメンブラン コンダクタンスレギュレータ、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ０００４９２、Ｍ５５１３１］
１７． フィブリリン−１、ＦＢＮ１（マルファン症候群の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ０００１３８、Ｘ６３５５６、Ｌ１３９２３］
１８． 「潜伏性形質転換型成長因子」、ベータ−結合蛋白−２、ＬＴＢＰ２（マルファン症候群の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｚ３７９７６］
１９． デルタ−７−ステロールレダクターゼ、ＤＨＣＲ７（スミス−レムリ−オピッツ症候群の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＡＦ０３４５４］
２０． ステロール２１−ヒドロキシラーゼ、ＣＹＰ２１（副腎性器症候群の診断）［遺伝子銀行ナンバー：Ｍ２６８５６、Ｍ１３９３５、Ｍ１３９３６］
２１． ステロール１７−ヒドロキシラーゼ、ＣＹＰ１７（副腎性器症候群の診断）［遺伝子銀行ナンバー：ＮＭ０００１０２、Ｍ１４５６４、Ｍ３１１４６］
【００４０】
本発明によるジーンチップは、参照配列の対応する断片と同一又はそれと相補的なオリゴヌクレオチド配列を含むこともできる。更に、機能的に特徴のあるミューテーション又はそれに相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドを設けることができる。ミューテーションにおいては、塩基置換、挿入及び欠失が対象とされ得る。同様に置換及びインデルス（Ｉｎｄｅｌｓ）（挿入／欠失）のような複合ミューテーションも可能である。
【００４１】
ジーンチップ上に設けられるオリゴヌクレオチドの長さは、１５〜２５ヌクレオチドの値であってよい。特に１５〜１８ｍｅｒを使用すると有利である。
【００４２】
参照配列の断片と同一のオリゴヌクレオチドがチップ上に設けられる場合には、それに相補的な配列は検査すべきサンプルから合成することができる。この合成はハイブリダイゼーションの後で行われる実証のために必要なマーキング反応の間に行われる。
【００４３】
本発明によるジーンチップ上に、ＤＮＡ配列をＲＮＡ配列と共に貼り付けることができる。相応してヌクレオチドをウラシルと共に使用することができる。同様に塩基類似体を使用することができる。
【００４４】
本発明によるジーンチップは、チップが今後配列決定される機能的に特徴のあるオリゴヌクレオチドで補足され得るという利点を有する。
【００４５】
以下に本発明を実施例により詳細に説明する。
【００４６】
実施例１：
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）のミューテーション検出のためのＤＮＡチップ
第１表に示される参照配列の配列に相補的なオリゴヌクレオチドが、例えばドイツ特許第１９６１２３５６号明細書又は米国特許第５８３７８３２号明細書に記載されているような標準技術を使用して、適切な基板上に設けられる。この基板は金で被覆されたガラスからなるのが有利である。オリゴヌクレオチドは１５ヌクレオチドの長さを有する。個々の場合によって１６〜２５ヌクレオチドの配列も可能である。
【００４７】
基板は多数のフィールドに分けられ、フィールドはそれぞれ１つのミューテーションを含むただ１つの配列を備えている。この場合、フィールド内の配列は、ミューテーションが参照配列断片に対しできるだけ中心にあるように位置決めされている。
【００４８】
フェニルアラニンヒドロキシラーゼ遺伝子（ＰＨＡ遺伝子）内のフェニルケトン尿症を生じさせるミューテーションの診断のために、本発明によるジーンチップ上で全部で５４８のフィールドが使用される。この場合、例えばフィールド１．１は参照配列断片ＣＣＡＧＣＡＴＧＴＣＣＡＣＴＧに相補的な配列ＣＡＧＴＧＧＡＣＡＴＧＣＴＧＧを有し（第１表、行１、列２）、フィールド１．２は変異した参照配列断片ＣＣＡＧＣＡＴＡＣＣＡＣＴＧに相補的な対応する変異したオリゴヌクレオチドＣＡＧＴＧＧＡＴＡＴＧＣＧＧである（表１、行１、列３；ミューテーションはアンダーライン）。
【００４９】
フィールド２．１、２．２及びすべての他のフィールドを占めるために、第１表の行２の配列情報が連続的に対応して使用される。
【００５０】
第１表は核酸配列のリストであって、その相補的な配列がチップ上に設けられる。見易くするため、１５〜２５（ｍｅｒ）の中央の領域のみが一部分として示されている。記載されていない配列部分は参照配列に相補的である。参照配列に対する位置は、コドンナンバーの表示から明らかである。
【００５１】
変異した参照配列断片に相補的なオリゴヌクレオチドは基板上の新たに決定された場所に設けられる。参照配列から外れたヌクレオチドは表の列３から明らかである。
【００５２】
表に記載された配列情報は遺伝子銀行ナンバーＵ４９８９７を有する参照配列に関連する。ミスセンス又はナンセンス−ミューテーション（第１表Ａ）並びにスプライシング変種（第１表Ｂ）、欠失（第１表Ｃ及び第１表Ｅ）、挿入（第１表Ｄ）、インゲルス及び複合再配列が選択されている。
【００５３】
第１表：
【表１】
2004500076.tif 000002
2004500076.tif 000003
2004500076.tif 000004
2004500076.tif 000005
2004500076.tif 000006
2004500076.tif 000007
2004500076.tif 000008
2004500076.tif 000009
【００５４】
実施例２：
新生児スクリーニング用ＤＮＡチップ
ＤＮＡチップは実施例１において詳細に示したようなやり方で作られる。この場合でも１５から１８（ｍｅｒ）の長さのオリゴヌクレオチド配列が基板上に既知の技術にてもたらされる。その際、オリゴヌクレオチドは相応する参照配列の断片ないし変異した配列領域に対して相補的である。
【００５５】
参照配列は以下の遺伝子に存在する。
フェニルアラニンヒドロキシラーゼ，ＰＡＨ（フェニルケトン尿症の診断）
キノイドデヒドロプテリディンレダクターゼ，ＱＤＰＲ（フェニルケトン尿症の診断）．
ミトコンドリア分枝アルファケト酸デヒドロゲナーゼ，α−ペプチド， ＢＣＫＤＨＡ （メープルシロップ症の診断）．
ミトコンドリア分枝アルファケト酸デヒドロゲナーゼ，β−ペプチド， ＢＣＫＤＨＢ （メープルシロップ症の診断）．
分枝鎖状ディヒドロリポアミドトランスアシラーゼ，ＤＢＴ （メープルシロップ症の診断）．
ガラクトース−１−燐酸塩ウリディルトランスフェラーゼ，ＧＡＬＴ （ガラクトース血症の診断）．
ガラクトキナーゼ， ＧＡＬＫ１ （ガラクトース血症の診断）．
ＵＤＰ−ガラクトース−４−エピメラーゼ， ＧＡＬＥ （ガラクトース血症の診断）．
シスタチオン−ベータ−シンターゼ，ＣＢＳ （ホモシスチン尿症の診断）．
５，１０−メチレンテトラヒドロフォラートレダクターゼ （ＮＡＤＰＨ）， ＭＴＨＦＲ （ガラクトース血症の診断）．
メチレンテトラヒドロフォラート−Ｌ−ホモシステイン−Ｓ−メチルトランスフェラーゼ，ＭＴＲ （ガラクトース血症の診断）．
ビオチニダーゼ，ＢＴＤ （ビオチニダーゼ欠乏症の診断）．
中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ，ＡＣＡＤＭ （中間鎖状アシル−ＣｏＡ−デヒドロゲナーゼ欠乏症の診断）．
低密度リポ蛋白レセプタ，ＬＤＬＲ （遺伝性ハイパーコレステリン血症の診断）
アポリポ蛋白 Ｂ （遺伝性アポリポＢ蛋白欠陥の診断）．
”シスチックフィブロシストランスメンブランコンダクタンスレギュレータ”， ＣＦＴＲ （嚢胞性線維症の診断）．
フィブリリン−１−， ＦＢＮ１ （マルファン症候群の診断）．
”潜伏性形質転換型成長因子”， ベータ結合蛋白−２， ＬＴＢＰ２ （マルファン症候群の診断）．
デルタ−７−ステロールレダクターゼ， ＤＨＣＲ７ （スミス−レムリ−オピッツ症候群の診断）．
ステロール２１−ヒドロキシラーゼ， ＣＹＰ２１ （副腎性器症候群の診断）．
ステロール１７−ヒドロキシラーゼ， ＣＹＰ１７ （副腎性器症候群の診断）．
【００５６】
これらの遺伝子から、「バイオテクノロジー情報国立センター（ＮＣＢＩ）」の遺伝子銀行（ＧｅｎＢａｎｋ）のコードナンバーを介して同定される第２表に示される参照配列が選ばれる。
【００５７】
本発明に基づく新生児スクリーニング用ジーンチップ上には、機能的に特徴付けられた変異に対して相補的なオリゴヌクレオチドの選択物が付着される。これらの変異は６．１．１表から６．１２．５表の中で、参照配列上での位置と関連するアミノ酸とで特徴付けられる。
【００５８】
新生児スクリーニング用に導入されるジーンチップ上には、処理頻度の高い１２の遺伝病の診断用の少なくとも３３４８のハイブリダイゼーションが存在する。一つの基板上にこれらのオリゴヌクレオチド配列が共通に存在することによって、ただ一つの患者サンプルでこれらの疾病の同時診断が可能となる。それゆえ、このＤＮＡチップは特に出産直後または出産前のスクリーニングプログラムにおいて導入するのに適している。
【００５９】
第２表には診断すべき疾病に関するさらなる情報が示されている。
【００６０】
第２表：
【表２】
2004500076.tif 000010
2004500076.tif 000011
【００６１】
実施例３：
ビオチニダーゼ欠症の診断用ＤＮＡチップ
この例においては、第３表にリストアップした参照配列のオリゴヌクレオチドが直接既知の標準技術の助けを借りて適宜の基板上に配設される。例１と同様に、普通は１５−ｍｅｒｅが用いられるが、個別のケースでは１６ないし２５ｍｅｒｅのオリゴヌクレオチドが用いられる。その際、配列は再び、変異した参照配列内に存する配列偏位が参照配列に対してほぼ中央に位置するように選ばれる。
【００６２】
この場合でも、基板のフィールド毎にそのつどただ一つのオリゴヌクレオチドのみが配設される。
【００６３】
ビオチニダーゼ欠乏症の検査のためには２８の機能的に特徴付けられた変異がチップ上に施されるので、２８のフィールドが得られる。その際、たとえばフィールド１．１は、参照配列断片ＣＣＡＧＣＡＴＧＴＣＣＡＣＴＧ （第１表第１行第３列）を担持する。これはＧｅｎＢａｎｋナンバーＵ６３２７４を持つ遺伝子配列から導かれ、フィールド１．２は相応する変異配列ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＴＧＣＴＧＧ （第１表第１行第４列；変異は下線が引かれている）を示す。
【００６４】
他のフィールドに対しては、第３表に示されている配列情報が、第３表の第２から１４行に相応して引用されている。
【００６５】
ハイブリダイゼーションの検出のために必要なマーキング反応用としてコード化されるべき参照配列のストランド（意味ストランドとも呼ばれる）に相補的なストランドから適当なプライマーを選択することにより、マークされた遺伝子断片がチップ上に施されるオリゴヌクレオチド配列に対して相補的であることが保証される。
【００６６】
第３表：
第３表はビオチニダーゼ欠乏症の診断用チップ上に施された核酸配列のリストを含んでいる。見やすくするために１５から２５ｍｅｒのオリゴヌクレオチドの中央領域のみが示されている。位置はコドンナンバーを示すことにより参照配列に対して相対的に特徴付けられている。各変異参照配列に対して基板上の正確に定義付けられた場所において第３列に記載された正常な参照配列が施される。表示されていない配列断片は参照配列のそれに相応する。
【００６７】
【表３】
2004500076.tif 000012
2004500076.tif 000013
【００６８】
第４表：本発明によるヌクレオチド基板でもって認識される疾病
この表は実施例に記述したヌクレオチド担体でもって診断可能な先天的遺伝性疾患及びこれに関連する参照配列を示す。更にこの表は既に記述した変異によって相応する遺伝子に惹起される臨床疾病のパーセンテージのデータを含む。
【００６９】
【表４】
2004500076.tif 000014
2004500076.tif 000015
2004500076.tif 000016
2004500076.tif 000017
2004500076.tif 000018
【００７０】
第５表：下記疾病に関係する遺伝子のリスト
【表５】
2004500076.tif 000019
【００７１】
第 ６．１．１ ないし ６．１２．５表は、ヌクレオチド基板（ＮＴ）上で所定の疾病に対して関連するオリゴヌクレチドを特定する。すなわち、関係位置、関係遺伝子、参照配列のコドンナンバー、参照配列の関連ヌクレオチド、変異した配列および変異の表現型を示している。見易さのためにそれぞれ直接関係する配列領域のみが示されている。掲げられていないオリゴヌクレオチド断片は参照配列の相応する配列と同一であるかまたは相補的である。欠失したヌクレオチドは小文字で示してある。
【００７２】
第６表：
【表６】
2004500076.tif 000020
2004500076.tif 000021
2004500076.tif 000022
2004500076.tif 000023
2004500076.tif 000024
2004500076.tif 000025
2004500076.tif 000026
2004500076.tif 000027
2004500076.tif 000028
2004500076.tif 000029
2004500076.tif 000030
2004500076.tif 000031
2004500076.tif 000032
2004500076.tif 000033
2004500076.tif 000034
2004500076.tif 000035
2004500076.tif 000036
2004500076.tif 000037
2004500076.tif 000038
2004500076.tif 000039
2004500076.tif 000040
2004500076.tif 000041
2004500076.tif 000042
2004500076.tif 000043
2004500076.tif 000044
2004500076.tif 000045
2004500076.tif 000046
2004500076.tif 000047
2004500076.tif 000048
2004500076.tif 000049
2004500076.tif 000050
2004500076.tif 000051
2004500076.tif 000052
2004500076.tif 000053
2004500076.tif 000054
2004500076.tif 000055
2004500076.tif 000056
2004500076.tif 000057
2004500076.tif 000058
2004500076.tif 000059
2004500076.tif 000060
2004500076.tif 000061
2004500076.tif 000062
2004500076.tif 000063
2004500076.tif 000064
2004500076.tif 000065
2004500076.tif 000066
2004500076.tif 000067
2004500076.tif 000068
2004500076.tif 000069
2004500076.tif 000070
2004500076.tif 000071
2004500076.tif 000072
2004500076.tif 000073
2004500076.tif 000074
2004500076.tif 000075
2004500076.tif 000076
2004500076.tif 000077
2004500076.tif 000078
2004500076.tif 000079
2004500076.tif 000080
2004500076.tif 000081
2004500076.tif 000082
【００７３】
配列リスト
＜１１０＞　Ｃｕｌｌｅｎ， Ｐａｕｌ
Ｓｅｅｄｏｒｆ， Ｕｄｏ
＜１２０＞　Ｇｅｎｅ ｃｈｉｐ ｆｏｒ ｎｅｏｎａｔｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
＜１３０＞　４４８００， ４４８０１， ４４８０３
＜１４０＞　ＰＣＴ／ＥＰ０１／００１３９
＜１４１＞　２００１−０１−０９
＜１６０＞　２９５
＜１７０＞　ＰａｔｅｎｔＩｎ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．１
＜２１０＞　１
＜２１１＞　２２
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１
2004500076.tif 000083
＜２１０＞　２
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２
2004500076.tif 000084
＜２１０＞　３
＜２１１＞　２３
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３
2004500076.tif 000085
＜２１０＞　４
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　４
2004500076.tif 000086
＜２１０＞　５
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　５
2004500076.tif 000087
＜２１０＞　６
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　６
2004500076.tif 000088
＜２１０＞　７
＜２１１＞　２３
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　７
2004500076.tif 000089
＜２１０＞　８
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　８
2004500076.tif 000090
＜２１０＞　９
＜２１１＞　２３
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　９
2004500076.tif 000091
＜２１０＞　１０
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１０
2004500076.tif 000092
＜２１０＞　１１
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１１
2004500076.tif 000093
＜２１０＞　１２
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１２
2004500076.tif 000094
＜２１０＞　１３
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１３
2004500076.tif 000095
＜２１０＞　１４
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１４
2004500076.tif 000096
＜２１０＞　１５
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１５
2004500076.tif 000097
＜２１０＞　１６
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１６
2004500076.tif 000098
＜２１０＞　１７
＜２１１＞　２５
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１７
2004500076.tif 000099
＜２１０＞　１８
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１８
2004500076.tif 000100
＜２１０＞　１９
＜２１１＞　３１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　１９
2004500076.tif 000101
＜２１０＞　２０
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２０
2004500076.tif 000102
＜２１０＞　２１
＜２１１＞　３１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２１
2004500076.tif 000103
＜２１０＞　２２
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２２
2004500076.tif 000104
＜２１０＞　２３
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２３
2004500076.tif 000105
＜２１０＞　２４
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２４
2004500076.tif 000106
＜２１０＞　２５
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２５
2004500076.tif 000107
＜２１０＞　２６
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２６
2004500076.tif 000108
＜２１０＞　２７
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２７
2004500076.tif 000109
＜２１０＞　２８
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２８
2004500076.tif 000110
＜２１０＞　２９
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　２９
2004500076.tif 000111
＜２１０＞　３０
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３０
2004500076.tif 000112
＜２１０＞　３１
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３１
2004500076.tif 000113
＜２１０＞　３２
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３２
2004500076.tif 000114
＜２１０＞　３３
＜２１１＞　３５
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３３
2004500076.tif 000115
＜２１０＞　３４
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３４
2004500076.tif 000116
＜２１０＞　３５
＜２１１＞　２１
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３５
2004500076.tif 000117
＜２１０＞　３６
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３６
2004500076.tif 000118
＜２１０＞　３７
＜２１１＞　２３
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３７
2004500076.tif 000119
＜２１０＞　３８
＜２１１＞　２０
＜２１２＞　ＤＮＡ
＜２１３＞　Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞　３８
2004500076.tif 000120
＜２１０＞　３９
＜２１１＞　２２
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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