(57)【要約】本発明は、被験体において、不適切なＣＤ１５４活性化に関連する状態を処置するための、新規なＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物ならびにそれらの化合物、およびそれらを含む薬学的組成物の使用に関する。詳細には、本発明は、特異的にＣＤ１５４と結合し、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害し得る化合物に関して、低分子のライブラリーをスクリーニングすることによって同定される化合物を提供する。本発明の目的、特徴ならびに利点、ならびに本発明自体は、本明細書からより完全に理解される。
2004521861.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2004521861.tif 000048
のＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害する化合物であって、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキルアリール、Ｃ１〜５アルキルシクロアルキル、Ｃ１〜５アルキルヘテロアリール、Ｃ１〜５アルケニルヘテロシクロ、シクロアルキル、シクロアルキルアリール、Ｃ１〜５アルケニルアリール、ＣＲｇＲｈＣＯ２ＨおよびＣＲｇＲｈＣＯ２アルキルからなる群から選択され；ここで、アリールまたはヘテロアリールは、必要に応じて、Ｒｄから選択される１〜４の置換基で置換され、そしてアルキルは、必要に応じて、Ｒｉで置換され；またはＲ１およびＲ２、Ｒ３およびＲ４、Ｒ５およびＲ６、ならびにＲ７およびＲ８は、独立して、結合している窒素とともに５〜６員環を形成し、この５〜６員環は、必要に応じて、窒素、硫黄および酸素からなる群から選択されるヘテロ原子で置換され、ここで、該窒素は、必要に応じて、アルキルまたはアルキルアリールで置換され得、そして該環は、必要に応じて、Ｒｊで置換され得；
Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、必要に応じて、Ｈ、アルキルおよびアルキルアリールからなる群から選択され；
Ｒｄは、ハロゲン、アルキルオキシ、ＮＯ２、ＮＨ２、アルキル、ＳＯ２ＮＨ２、ヒドロキシルおよびアリールからなる群から選択され；  ＲｅおよびＲｆは、独立して、Ｈ、アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され；あるいはＲｅＲｆは、結合している元素とともに４〜７員環を形成し、該４〜７員環は、０〜３つのヘテロ原子を含み、該へテロ原子は、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択され、ここで、ＲｅＲｆは、結合している原子とともに１または２の芳香族環に縮合し得；
ＲｇおよびＲｈは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルキルアリールおよびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され；ここで、アルキルは、必要に応じて、Ｒｋで置換され；そしてアリールは、必要に応じてＲｌで置換され；あるいはＲｇＲｈは、結合している炭素とともに５〜８員環を形成し、該５〜８員環は、二環式であり得；
Ｒｉは、以下からなる群から選択され：ＮＲｅＲｆ、アルキルオキシ、アリールオキシ、Ｃ（Ｏ）アリール、アリール、ＯＣ（Ｏ）アルキル、アルキルアリールオキシおよびヒドロキシル；ここで、アルキルは、必要に応じて、ハロゲンで置換され、そしてアリールは、必要に応じて、Ｒｄで置換され；
Ｒｊは、（ＣＨ２）ｙＮＲｅＲｆ、（ＣＨ２）ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、アルキルアリールおよびアリールからなる群から選択され；
ここで、アリールは、必要に応じて、Ｒｄから選択される１〜４の置換基で置換され；
Ｒｋは、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、アルキルチオ、ＮＨ２、ヘテロアリール、ヘテロアルキル，ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ１〜５アルキルヒドロキシル、ヒドロキシルおよびアルキルオキシからなる群から選択され；
Ｒｌは、ヒドロキシル、ＮＯ２およびＣ１〜５アルキルからなる群から選択され；
Ｕは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｙ、ＮＲｃ、ＮＲＣＣ（Ｏ）、ＮＲＣＣ（Ｏ）ＮＲＣ〜なる群から選択され；
Ｗは、（ＣＲａＲｂ）Ｘ、（ＣＲａＲｂ）ｙＵ（ＣＲａＲｂ）ｙ、Ｃ２〜３アルキニル、Ｃ２〜３アルケニルからなる群から選択され；
各々のＸは、独立して、０〜３であり；
各々のＹは、独立して、０〜２であり；
各々のＺは、独立して、１〜２である、化合物。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
2004521861.tif 000049
のＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害する化合物であって、
式中、
Ｒ９は、Ｃ１〜５アルキルアリール、シクロアルキルおよびアルケニルアリールからなる群から選択され；ここで、該アルキルは、必要に応じて、アリールで置換され、そして該アリールは、必要に応じて、１〜４つのハロゲン、アリール、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換され；
Ｒ１０は、アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され；そして
Ｒ１１は、Ｈおよびアルキルからなる群から選択される、化合物。
【請求項３】
式ＩＩＩ
【化３】
2004521861.tif 000050
のＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害する化合物であって、
式中、
Ｒ９は、Ｃ１〜５アルキルアリールからなる群から選択され；ここで、アルキルおよびアリールは、必要に応じて、アリールで置換される、化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、前記化合物が、Ｓ−アミンから誘導され、ここで、該化合物が、以下の式：
【化４】
2004521861.tif 000051
【化５】
2004521861.tif 000052
【化６】
2004521861.tif 000053
【化７】
2004521861.tif 000054
からなる群から選択される、化合物。
【請求項５】
請求項１または２に記載の化合物であって、前記化合物が、Ｓ−アミンから誘導され、ここで、該化合物が、以下の式：
【化８】
2004521861.tif 000055
【化９】
2004521861.tif 000056
【化１０】
2004521861.tif 000057
【化１１】
2004521861.tif 000058
【化１２】
2004521861.tif 000059
【化１３】
2004521861.tif 000060
【化１４】
2004521861.tif 000061
【化１５】
2004521861.tif 000062
【化１６】
2004521861.tif 000063
【化１７】
2004521861.tif 000064
【化１８】
2004521861.tif 000065
および
【化１９】
2004521861.tif 000066
からなる群から選択される、化合物。
【請求項６】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載の化合物であって、前記化合物が、Ｓ−アミンから誘導され、ここで、該化合物が、以下の式：
【化２０】
2004521861.tif 000067
【化２１】
2004521861.tif 000068
【化２２】
2004521861.tif 000069
【化２３】
2004521861.tif 000070
および
【化２４】
2004521861.tif 000071
からなる群から選択される、化合物。
【請求項７】
薬学的に受容可能なキャリア、および請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項８】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態の重篤度を軽減するための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態の影響を抑制するための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態の進行を防ぐための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態の発症を遅らせるための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態を阻害するための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１３】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態を逆転させるための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
被験体において、ＣＤ１５４が媒介する不適切な活性化に関連する状態を予防するための方法であって、該方法は、請求項７に記載の有効量の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１６】
前記被験体が、霊長類である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記霊長類がヒトである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記状態が、所望でない免疫応答である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記状態が、所望でない炎症応答である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記状態が、自己免疫疾患である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記状態が、アレルギーである、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記状態が、治療剤に対するインヒビター応答である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記状態が、ドナー臓器の拒絶である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記状態が、Ｂ細胞癌である、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法であって、前記状態が、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、ループス神経炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、気腫、多発性硬化症、ブドウ膜炎、アルツハイマー病、外傷性脊髄損傷、発作、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈再狭窄、虚血性うっ血性心不全、肝硬変、Ｃ型肝炎、糖尿病性ネフロパシー、糸球体腎炎、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、放射能誘導型線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性骨髄腫および悪液質からなる群から選択される、方法。
【請求項２６】
以下の式：
【化２５】
2004521861.tif 000072
のＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害する化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、被験体における不適切なＣＤ１５４活性化に関連した状態を処置するための、新規なＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害物（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｏｒ）化合物、ならびにこれらの化合物およびこれらを含む薬学的組成物の使用に関する。詳細には、本発明は、ＣＤ１５４に特異的に結合し得、そしてＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害し得る低分子について、低分子のライブラリーをスクリーニングすることによって同定される化合物を提供する。
【０００２】
（発明の背景）
Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞レセプター（「ＴＣＲ」）媒介シグナル、および同時に送達された同時刺激シグナルの両方を要することを確立するデータが、過去２０年間にわたって蓄積されてきた。例えば、タンパク質抗原に応答するＢリンパ球による抗体生成は、Ｔリンパ球との特異的な同時刺激相互作用を要する。このＢ細胞／Ｔ細胞相互作用は、ＴＣＲの係合に加えて、いくつかのレセプター−リガンド結合事象を通じて媒介される。例えば、Ｎｏｅｌｌｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １３：４３１〜４３３（１９９２）を参照のこと。また、Ｈｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら．ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：４３１３〜４３２１（１９９２）も参照のこと。これらのさらなる結合事象は、Ｔ細胞上のＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ、そしてｇｐ３９、Ｔ−ＢＡＭ、５ｃ８抗原、ＣＤ４０ＣＲ、およびＴＲＡＰとしても公知）に対するＢ細胞上のＣＤ４０の結合を含む。ヒトＣＤ４０は、成熟Ｂ細胞、ならびにマクロファージ、樹状細胞、線維芽細胞、および活性化内皮細胞上で発現された５０キロダルトンの細胞表面タンパク質である。ＣＤ４０は、細胞シグナル伝達、およびプログラムされた細胞死に関与するレセプター（Ｆａｓ／ＣＤ９５および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αレセプターを含む）のクラスに属する。ヒトＣＤ１５４（ＴＮＦαに対して相同性を有する、３２ｋＤのＩＩ型膜糖タンパク質）は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーであり、そして主に活性化されたＴ細胞上で一過性に発現される。ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合は、Ｔ細胞依存性抗体応答について必要であることが示されている。詳細には、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合は、抗アポトーシスシグナル、および／またはリンホカイン刺激シグナルを提供する。例えば、Ｋａｒｐｓａｓら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  １５，１０２１〜１０３９（１９９５）、米国特許出願第０９／１８０，２０９号、およびＷＯ９７／００８９５（これらの全ての開示は本明細書において参考として援用される）を参照のこと。
【０００３】
Ｔ細胞依存性の生物学的応答を促進することにおけるＣＤ４０：ＣＤ１５４の重要性は、機能的なＣＤ１５４を欠失しているヒトにおけるＸ連鎖ＩｇＭ過剰症候群（Ｘ−ＨＩＧＭ）の発生によって、強調される。これらの個体は、正常なＩｇＭレベルまたは高いＩｇＭレベルを有するが、ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、またはＩｇＥ抗体を生成することはできない。罹患した個体は、再発、時には重篤な細菌性感染（最も通常には、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、およびＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、および特定の珍しい寄生生物感染、ならびにリンパ腫および腹部癌の頻度の上昇を被る。これらの疾患の臨床的な兆候は、静脈内免疫グロブリン補充療法によって管理され得る。
【０００４】
Ｘ−ＨＩＧＭの効果を、ＣＤ１５４をコードする遺伝子を無効化（ｎｕｌｌｉｚｙｇｏｕｓ）された動物（ノックアウト動物）でシミュレートする。無効化を用いた研究によって、Ｂ細胞は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合の非存在においてＩｇＭを生成し得るが、それらはアイソタイプ切り替えを受けることも正常に生存し、そして親和性成熟を受けることもできないことが確認された。機能的なＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用の非存在について、脾臓およびリンパ節胚中心は、適切に発達せず、そして記憶Ｂ細胞の発生が障害される。これらの欠損は、二次（成熟）抗体応答の重度の低下または欠如に寄与する。
【０００５】
Ｘ−ＨＩＧＭおよびＣＤ１５４無効化を有する個体はまた、細胞性免疫において欠損を有する。これらの欠損は、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓの感染、ならびに慢性Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉ感染によって明らかになる。マウス無効化は、マウスがＬｅｉｓｈｍａｎｉａ感染に対して戦う能力の欠損である。これらの細胞媒介欠損の多くは、ＩＬ−１２またはＩＦＮ−γの投与によって逆転可能である。これらのデータは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合がＩ型ヘルパーＴ細胞応答の発生を促進するという見解を実証する。マクロファージ活性化がＣＤ１５４欠損設定において欠損であるという観察、そしてマウスに対する抗ＣＤ１５４抗体の投与によって、マウスがＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ感染を排除する能力が低下したという観察から、さらなる支持が導かれる。ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合の遮断（ブロック）は、マクロファージが一酸化窒素を生じる能力（多くのマクロファージのプロ炎症（炎症促進）活性を媒介する）を低下するようである。しかし、機能的ＣＤ１５４を欠く動物は、有意な頻度でウイルス感染を発症させないということに注目すべきである。
【０００６】
多くの前臨床研究（同時係属の、同一出願人による、ＷＯ９８／３０２４１、ＷＯ９８／３０２４０、ＷＯ９８／５２６０６、ＷＯ９８／５８６６９、およびＷＯ９９／４５９５８として公開されたＰＣＴ特許出願公開に記載されたものを含む）は、免疫調節剤としてＣＤ４０：ＣＤ１５４結合を妨害し得る見込みの薬剤を記載している。マウスの系において、ＣＤ１５４に対する抗体は、インビトロおよびインビボの両方で、内因性抗原に対する一次免疫応答および二次免疫応答をブロックする。ＣＤ１５４に対する抗体は、マウスおよびサルにおいて胚中心の減少を起こすが、これは、ＣＤ１５４免疫不全のデータと一致している。３ヶ月齢の狼瘡易発生性（ｌｕｐｕｓ−ｐｒｏｎｅ）マウスに対する抗ＣＤ１５４抗体の３用量の投与により、実質的に二本鎖ＤＮＡおよびヌクレオソームに対する力価は減じ、重篤な腎炎の発症は遅延し、そして死亡率は減少した。さらに、重篤な腎炎を有する５〜７ヶ月例のマウスに対する抗ＣＤ１５４抗体の投与は、腎疾患を安定化するかまたは逆転さえすることが示された。休止している小さい異種遺伝子のリンパ球と同時に投与した抗ＣＤ１５４抗体によって、マウス膵臓島同種移植片の限定された生存が可能になった。他の動物モデルにおいて、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合の妨害によって、体液性の機構および細胞性の機構の両方で媒介される、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患）、移植片拒絶（例えば、心臓同種移植片、宿主対移植片病）、および塩化第二水銀誘導性糸球体腎炎の症状が軽減することが実証された。
【０００７】
抗ＣＤ１５４抗体を用いるこのような研究は、免疫応答を調節するための重要な標的としてのＣＤ１５４の役割を実証する。
【０００８】
これらの研究は、治療剤としてのＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｏｒ）の有用性を確立する。結果として、これらはまた、新規なＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤の可能性を示唆する。
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、ＣＤ１５４を特異的に結合しそしてＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる、抗ＣＤ１５４抗体および可溶性のＣＤ４０タンパク質またはＣＤ４０融合タンパク質以外の、新規の化合物を提供する。本発明はまた、これらの化合物含む薬学的組成物を提供する。本発明はまた、不適切なＣＤ１５４活性化に関連する状態を処置するためにこれらの化合物を使用する方法を提供する。
【００１０】
本発明の前述の目的および他の目的、特徴ならびに利点、ならびに本発明自体は、好ましい実施形態の以下の説明からより完全に理解される。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
以下の考察は、本発明が実施され得る種々の状況および状態を例証および例示し、かつ本発明の特定の実施形態を提供する。
【００１２】
（新規なＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤）
好ましい実施形態において、本発明は、式（式Ｉ）：
【００１３】
【化２６】
2004521861.tif 000003
によって示される、ＣＤ１５４に結合し、そして好ましくはＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる、一般的な化合物を提供し、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５，Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ１〜５アルキル−アリール、Ｃ１〜５アルキル−シクロアルキル、Ｃ１〜５アルキル−へテロアリール、Ｃ１〜５アルケニル−ヘテロシクロ、シクロアルキル、シクロアルキル−アリール、Ｃ１〜５アルケニル−アリール、ＣＲｇＲｈＣＯ２ＨおよびＣＲｇＲｈＣＯ２アルキルからなる群より選択され；ここで、アリールまたはヘテロアリールは、必要に応じて、Ｒｄから選択される１〜４個の置換基で置換され、そしてアルキルは、必要に応じて、Ｒｉで置換され；またはＲ１およびＲ２、Ｒ３およびＲ４、Ｒ５およびＲ６、ならびにＲ７およびＲ８は、独立して、これらが結合する窒素と一緒になって、窒素、硫黄および酸素からなる群より選択されるヘテロ原子で、必要に応じて置換された５〜６員環を形成し、ここで、この窒素は、必要に応じて、アルキルまたはアルキル−アリールで置換され得、そしてこの環は、必要に応じて、Ｒｊで置換され得る；
Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、独立して、Ｈ、アルキルおよびアルキル−アリールからなる群より選択され；
Ｒｄは、ハロゲン、アルキルオキシ、ＮＯ２、ＮＨ２、アルキル、ＳＯ２ＮＨ２、ヒドロキシルおよびアリールからなる群より選択され；
ＲｅおよびＲｆは、独立して、Ｈ、アルキルおよびシクロアルキルからなる群より選択され；またはＲｅＲｆは、これらが結合する原子と一緒になって、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される０〜３個のヘテロ原子を含む４〜７員環を形成し、ここで、ＲｅＲｆは、これらが結合する原子と一緒になって、１〜２個の芳香族環に縮合され得；
ＲｇおよびＲｈは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルキル−アリールおよびアルキル−シクロアルキルからなる群より選択され；ここで、アルキルは、必要に応じて、Ｒｋで置換され；そしてアリールは、必要に応じて、Ｒ１で置換され；またはＲｇＲｈは、これらが結合する炭素と一緒になって、二環式であり得る５〜８員環を形成し；
Ｒｉは、ＮＲｅＲｆ、アルキルオキシ、アリールオキシ、Ｃ（Ｏ）アリール、アリール、ＯＣ（Ｏ）アルキル、アルキルアリールオキシおよびヒドロキシルからなる群より選択され；ここで、アルキルは、必要に応じて、ハロゲンで置換され、そしてアリールは、必要に応じて、Ｒｄで置換され；
Ｒｊは、（ＣＨ２）ｙＮＲｅＲｆ、（ＣＨ２）ｚＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、アルキルアリールおよびアリールからなる群より選択され；ここで、アリールは、必要に応じて、Ｒｄから選択される１〜４個の置換基で置換され；
Ｒｋは、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、アルキルチオ、ＮＨ２、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ１〜５アルキルヒドロキシル、ヒドロキシルおよびアルキルオキシからなる群より選択され；
Ｒｌは、ヒドロキシル、ＮＯ２およびＣ１〜５アルキルからなる群より選択され；
Ｕは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｙ、ＮＲｃ、ＮＲｃＣ（Ｏ）、ＮＲｃＣ（Ｏ）ＮＲｃからなる群より選択され；
Ｗは、（ＣＲａＲｂ）ｘ、（ＣＲａＲｂ）ｙＵ（ＣＲａＲｂ）ｙ、Ｃ２〜３アルキニル、Ｃ２〜３アルケニルからなる群より選択され；
各Ｘは、独立して、０〜３であり；
各Ｙは、独立して、０〜２であり；
各Ｚは、独立して、１〜２である。
【００１４】
「アルキル」ならびに接頭語「ａｌｋ」を有する他の基（例えば、アルコキシ、アルカノイル）は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る炭素鎖を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニルなどが挙げられる。
【００１５】
「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む炭素鎖を意味し、そしてこれは、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る。アルケニルの例としては、ビニル、アリル、イソプロペニル、ペンテニル、へキセニル、へプテニル、１−プロペニル、２−ブテニル、２−メチル−２−ブテニルなどが挙げられる。
【００１６】
「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む炭素鎖を意味し、そしてこれは、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る。アルキニルの例としては、エテニル、プロパルギル、３−メチル−１−ペンテニル、２−へプチニルなどが挙げられる。
【００１７】
「シクロアルキル」は、単環式または二環式の飽和の炭素環式環を意味し、これらの各々は、３〜１０個の炭素原子を有する。この用語はまた、結合の地点が非芳香族部分上であるアルキル基に縮合される単環式環を含む。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、テトラヒドロナフチル、デカヒドロナフチル、インダニルなどが挙げられる。
【００１８】
「アリール」は、炭素原子のみを含む単環式または二環式の芳香属環を意味する。この用語はまた、結合の地点が芳香族部分上である単環式シクロアルキルまたは単環式ヘテロシクリル基に縮合されたアリール基を含む。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、インダニル、インデニル、テトラヒドロナフチル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾピラニル、１，４−ベンゾジオキサニルなどが挙げられる。
【００１９】
「ヘテロアリール」は、各環が５〜６個の原子を有する、Ｎ、ＯおよびＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む単環式または二環式の芳香族環を意味する。ヘテロアリールの例としては、ピロリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラニル、トリアジニル、チエニル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、フロ（２，３−ｂ）ピリジル、キノリル、インドリル、イソキノリルなどが挙げられる。
【００２０】
「ヘテロシクリル」は、Ｎ、ＳおよびＯより選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む単環式または二環式の飽和環を意味し、この環の各々は、結合の地点が炭素または窒素であり得る３〜１０個の原子を有する。この用語はまた、結合の地点が非芳香族部分上であるアリール基またはヘテロアリール基に縮合された単環式複素環を含む。「ヘテロシクリル」の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、２，３−ジヒドロフロ（２，３−ｂ）ピリジル、ベンゾキサジニル、テトラヒドロヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、ジヒドロインドリルなどが挙げられる。この用語はまた、芳香族環ではない部分的に不飽和の単環式環（例えば、窒素を介して結合した２−ピリドンまたは４−ピリドン、またはＮ−置換−（１Ｈ、３Ｈ）ピリミジン−２，４−ジオン（Ｎ−置換ウラシル））を含む。
【００２１】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含む。
【００２２】
より好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物の亜属である化合物を提供し、この化合物（これは、ＣＤ１５４に結合し、そして好ましくはＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（式ＩＩ）：
【００２３】
【化２７】
2004521861.tif 000004
によって表され、
ここで、
Ｒ９は、Ｃ１〜５アルキル−アリール、シクロアルキルおよびアルケニルアリールからなる群より選択され；ここで、アルキルは、必要に応じて、アリールで置換され、そしてアリールは、必要に応じて、１〜４個のハロゲン、アリール、ＮＨ２またはＮＯ２で置換され；
Ｒ１０は、アルキルおよびシクロアルキルからなる群より選択され；そして
Ｒ１１は、Ｈおよびアルキルからなる群より選択される。
【００２４】
別のより好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物の別の亜属であり、そして式（ＩＩ）の化合物の亜属である化合物を提供し、この化合物（これは、ＣＤ１５４に結合し、そして好ましくはＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（式ＩＩＩ）：
【００２５】
【化２８】
2004521861.tif 000005
によって表され、
ここで、
Ｒ９は、Ｃ１〜５アルキル−アリールからなる群より選択され；ここで、アルキルおよびアリールは、必要に応じて、アリールで置換される。
【００２６】
本発明はまた、上の化合物の各々の全ての立体異性体（エナンチオマーを含む）を提供する。好ましい実施形態において、この化合物は、Ｓ−アミン（Ｌアミノ酸）から誘導される。
【００２７】
本発明の最も好ましい実施形態は、以下に示される２１個の化合物である。２１個全ての化合物は、式（Ｉ）に従う化合物である。２１個全ての化合物は、Ｓ−アミンから誘導される。２１個の化合物の１７個はまた、式（ＩＩ）に従う化合物であり；これらの１７個の化合物の５個はまた、式（ＩＩＩ）従う化合物である。
【００２８】
化合物１（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物１は、式：
【００２９】
【化２９】
2004521861.tif 000006
によって表され、
ここで、化合物１は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００３０】
化合物２（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（Ｉ）に従う化合物であり；化合物２は、式：
【００３１】
【化３０】
2004521861.tif 000007
によって表され、
ここで、化合物２は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００３２】
化合物３（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物３は、式：
【００３３】
【化３１】
2004521861.tif 000008
によって表され、
ここで、化合物３は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００３４】
化合物４（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩＩ）に従う化合物であり；化合物４は、式：
【００３５】
【化３２】
2004521861.tif 000009
によって表され、
ここで、化合物４は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００３６】
化合物５（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩＩ）に従う化合物であり；化合物５は、式：
【００３７】
【化３３】
2004521861.tif 000010
によって表され、
ここで、化合物５は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００３８】
化合物６（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩＩ）に従う化合物であり；化合物６は、式：
【００３９】
【化３４】
2004521861.tif 000011
によって表され、
ここで、化合物６は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００４０】
化合物７（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物７は、式：
【００４１】
【化３５】
2004521861.tif 000012
によって表され、
ここで、化合物７は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００４２】
化合物８（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物８は、式：
【００４３】
【化３６】
2004521861.tif 000013
によって表され、
ここで、化合物８は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００４４】
化合物９（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物９は、式：
【００４５】
【化３７】
2004521861.tif 000014
によって表され、
ここで、化合物９は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００４６】
化合物１０（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物１０は、式：
【００４７】
【化３８】
2004521861.tif 000015
によって表され、
ここで、化合物１０は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００４８】
化合物１１（これは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨げる）は、式（ＩＩ）に従う化合物であり；化合物１１は、式：
【００４９】
【化３９】
2004521861.tif 000016
によって表され、
ここで、化合物１１は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００５０】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１２は、式（ＩＩ）による化合物であり；化合物１２は、以下の式によって代表される：
【００５１】
【化４０】
2004521861.tif 000017
ここで：化合物１２は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００５２】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１３は、式（ＩＩＩ）による化合物であり；化合物１３は、以下の式によって代表される：
【００５３】
【化４１】
2004521861.tif 000018
ここで：化合物１３は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００５４】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１４は、式（ＩＩ）による化合物であり；化合物１４は、以下の式によって代表される：
【００５５】
【化４２】
2004521861.tif 000019
ここで：化合物１４は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００５６】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１５は、式（ＩＩＩ）による化合物であり；化合物１５は、以下の式によって代表される：
【００５７】
【化４３】
2004521861.tif 000020
ここで：化合物１５は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００５８】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１６は、式（ＩＩ）による化合物であり；化合物１６は、以下の式によって代表される：
【００５９】
【化４４】
2004521861.tif 000021
ここで：化合物１６は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００６０】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１７は、式（Ｉ）による化合物であり；化合物１７は、以下の式によって代表される：
【００６１】
【化４５】
2004521861.tif 000022
ここで：化合物１７は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００６２】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１８は、式（Ｉ）による化合物であり；化合物１８は、以下の式によって代表される：
【００６３】
【化４６】
2004521861.tif 000023
ここで：化合物１８は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００６４】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物１９は、式（Ｉ）による化合物であり；化合物１９は、以下の式によって代表される：
【００６５】
【化４７】
2004521861.tif 000024
ここで：化合物１９は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００６６】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物２０は、式（ＩＩ）による化合物であり；化合物２０は、以下の式によって代表される：
【００６７】
【化４８】
2004521861.tif 000025
ここで：化合物２０は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００６８】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する化合物２１は、式（ＩＩ）による化合物であり；化合物２１は、以下の式によって代表される：
【００６９】
【化４９】
2004521861.tif 000026
ここで：化合物２１は、Ｓ−アミンから誘導される。
【００７０】
好ましい実施形態において、本発明は、ＣＤ１５４を特異的に結合し、そして好ましくは、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用を妨害する、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を提供する。好ましくは、これらの化合物は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の妨害に対する、約３１０μＭ以下；より好ましくは、約１２５μＭ以下；そしてなおより好ましくは、約５０μＭ以下のＩＣ５０を有する。
【００７１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、ＣＤ１５４を特異的に結合し；ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害因子であり；そしてＴＲＮ−α：ＴＮＦＲｐ６０の結合妨害因子ではない（すなわち、ＴＮＦ−αに結合せず、そしてＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０の結合妨害因子ではない）、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を提供する。好ましくは、これらの化合物は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対する、約１２５μＭ以下のＩＣ５０、およびＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０に対する１２５μＭを越えるＩＣ５０を有する。
【００７２】
ＩＣ５０とは、本明細書中で使用される場合、化合物がタンパク質とそのレセプターとの相互作用を、実施例７（ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用の妨害に対して）および実施例８（ＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０の相互作用の妨害に対して）に示されるアッセイにおいて、５０％の相互作用まで妨害する濃度である。このようなタンパク質およびレセプターの対の例は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４およびＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０である。
【００７３】
化合物４〜６および１１は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対して、Ａの範囲（５０μＭ未満）のＩＣ５０を有することが示された。化合物１、７〜１０および１３は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対して、Ｂの範囲（５０μＭ〜１２５μＭ）のＩＣ５０を有することが示された。化合物２〜３は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対して、Ｃの範囲（１２５μｍより大）のＩＣ５０を有することが示された。さらに、化合物１２、１４および１６〜２１は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対して、Ｂの範囲（５０μＭ〜１２５μＭ）のＩＣ５０を有することが示され、そして化合物１５は、Ａの範囲（５０μＭ未満）のＩＣ５０を有することが示された。化合物１〜４は、ＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０の結合妨害に対して、１２５μＭより大きいＩＣ５０を有することが示された。表Ｉは、これらの２１個の化合物についてのＣＤ４０：ＣＤ１５４の結合妨害に対するＩＣ５０、および質量分析データを列挙する。
【００７４】
【表１】
2004521861.tif 000027
化合物４、７〜１１の化学合成は、実施例１〜６に示される。当業者は、他の化合物（化合物１〜３、５〜６および１２〜２１）が、慣用的方法によって、実施例１〜６に開示される中間体および／または生成物から合成され得ることを理解する。当業者はまた、他の慣用的方法を、これらの化合物を合成するために使用し得ることを理解する。当業者は、従来の方法を使用して、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の任意の化合物を合成し得ることを理解するはずである。
【００７５】
化合物がＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害するか否かを決定するための特定のアッセイは、実施例７に示される。化合物がＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０相互作用を妨害するか否かを決定するための特定のアッセイは、実施例８に示される。他の周知のアッセイが、この両方の決定のために使用され得る。化合物がＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害するか否かを決定するための１つのこのようなアッセイは、実施例９に示される。ＣＤ４０とＣＤ１５４との相互作用によって、Ｉ−ＣＡＭ１のアップレギュレートが生じる。ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｏｒ）は、このアップレギュレートを阻害する。
【００７６】
（被験体における不適切なＣＤ１５４誘導性活性化に関連する状態）
本発明によって提供されるＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物は、不適切なＣＤ１５４誘導性活性化に関連する状態を有する被験体を予防または処置するために使用され得る。被験体における不適切なＣＤ１５４誘導性活性化に関連する状態の処置は、特に、この状態の重篤度を弱める工程、この状態の影響を抑制する工程、この状態を阻害する工程、およびこの状態を除去する工程を包含する。
【００７７】
被験体における不適切なＣＤ１５４媒介性活性化に関連する状態の例としては、特に、所望でない免疫応答、所望でない炎症応答、自己免疫疾患、アレルギー、治療剤に対するインヒビター応答、ドナー器官の拒絶およびＢ細胞癌が挙げられる。
【００７８】
被験体における不適切なＣＤ１５４媒介性活性化に関連する状態の例としては、特に、以下が挙げられる：全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、ループス神経炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、気腫、多発性硬化症、ブドウ膜炎、アルツハイマー病、外傷性脊髄損傷、発作、アテローム性動脈硬化症、冠動脈再狭窄、虚血性うっ血性心不全、肝硬変、Ｃ型肝炎、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、放射線誘導性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性骨髄腫および悪液質。
【００７９】
（被験体）
本発明によって提供されるＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤は、不適切なＣＤ１５４の活性化に関連する状態に罹患しているかまたは罹患しそうな任意の哺乳動物被験体を処置または予防するために投与され得る。好ましくは、この被験体は、霊長類であり、より好ましくは高等霊長類であり、最も好ましくはヒトである。他の実施形態において、この被験体は、商業的に重要な哺乳動物、またはコンパニオン動物または価値のある他の動物（例えば、多数の絶滅の危機に瀕した動物）であり得る。従って、被験体は、特に、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ラットおよびマウスであり得る。
【００８０】
（投与経路）
本発明により提供されるＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物は、医学的に受容可能な任意の様式で投与され得る。特定の状況に基づき、局所投与または全身投与が所望され得る。局所投与は、例えば、結膜下投与され得る。好ましくは、この妨害化合物は、経口により、経腸により、または非経口経路（例えば、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、眼窩内、心室内、腹腔内、被膜下、頭蓋内、脊椎内、局所、または鼻腔内への注射、注入、または吸入）により投与される。妨害化合物はまた、被験体への注入ポンプの移植または生物適合性もしくは生物腐食性の持続放出性移植により投与され得る。
【００８１】
（処置の用量および頻度）
一般に、本明細書中で記載される方法は、少なくとも２または３週間にわたって、所望の間隔（例えば、毎日、１週間に２回、毎週、隔週、毎月または適切とみなされる他の間隔）で、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物を投与する工程を包含する。この投与スケジュールは、必要に応じて、被験体における不適切案ＣＤ１５４の活性化に関連する状態を処置するように、調節される。病気が後に発症した場合、特定の処置レジメンが繰り返され得る。
【００８２】
不適切なＣＤ１５４誘導性活性化に関連する所定の免疫学的疾患のための、患者に投与される任意の特定のＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物の投薬の量および頻度は、医療分野および薬学分野の当業者および医師の範囲内である。一般的な投薬量および投与レジメンは、前臨床試験および臨床試験によって確立され得、これらの試験は、化合物の最適な投与パラメーターを決定するための広範であるが慣用的な研究を含む。このような推奨が行われた後でさえ、医師はしばしば、種々の考慮（例えば、個体の年齢、医療状態、体重、性別および他の医薬との同時処置）に基づいて、被験体によって投薬量を変更する。使用される各合成ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物の最適な投薬量および投与レジメンの決定は、医療分野および薬学分野の当業者にとって慣用的な事項である。
【００８３】
一般に、投薬の頻度は、主治医または同様の熟練した医師によって決定され得、そしてより少ない頻度の投薬（例えば、毎月またはそれより長い間隔）に代えて、より多い投薬頻度の期間（例えば、毎日または毎週の間隔）を含み得る。
【００８４】
ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤についての投薬の考慮を例示するために、抗ＣＤ１５４  ｍＡｂについての投与方法の以下の例が示される。このような例示的な投与量は、本発明に従う他のタイプの抗ＣＤ１５４化合物について容易に調節され得る。一般に、約０．０５ｍｇ／ｋｇ患者の体重と約５０ｍｇ／ｋｇ患者の体重との間の単回投薬量が、意図され、投薬量は、最も頻繁には、１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲である。緊急処置（例えば、移植の前もしくは移植時、または移植片拒絶が始まる任意の事象に応答して）について、代表的な抗体（例えば、ｍＡｂ  ５ｃ８）（この抗体は、本発明に従う化合物の投薬量の指標基準として役立ち得る）の有効用量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１〜５日間にわたって毎日投与され、好ましくはボーラス静脈内投与によって投与され得る。同じ投薬量および投薬スケジュールが、負荷維持レジメンの負荷期間に使用され得、維持期間は、静脈内投与または筋肉内投与を含み、この投与は、１週間から３ヶ月のいずれかの処置期間の間、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の抗ＣＤ１５４  ｍＡｂの投与としてパターン化される。長期の処置もまた、維持レジメンによって行われ、この維持レジメンは、抗体が静脈内経路または筋肉内経路によって、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で、約１週間〜約３ヶ月の範囲の投薬間間隔で投与されるようにパターン化される。さらに、長期の処置は、断続的なボーラス静脈内レジメンによって行われ得、このレジメンは、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重と約１００ｍｇ／ｋｇ体重との間の抗ＣＤ１５４  ｍＡｂが投与され、連続処置の間の間隔が１〜６ヶ月であるようにパターン化される。断続的なボーラスレジメン以外の全てについて、投与はまた、経口経路、経肺経路、経鼻経路または皮下経路によってであり得る。
【００８５】
処置について、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物は、薬学的組成物または予防的組成物に処方され得、これらの組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に分散された、それぞれ、薬学的に有効な量または予防的に有効な量のＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物を含む。いくつかの実施形態において、この薬学的組成物または予防的組成物はまた、薬学的に有効な量または予防的に有効な量の別の免疫抑制化合物または免疫調節化合物を含み、これには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＤ２８、ＣＤ８０またはＣＤ８６によるＴ細胞同時刺激シグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｔｇ）；カルシニュリンシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムスのようなマクロライド、以前はＦＫ５０６として公知）；コルチコステロイド；または抗増殖剤（例えば、アザチオプリン）。ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害剤と共に使用するために適切な他の治療的に有効な化合物としては、ラパマイシン（シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）としても公知）；ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）（ＭＭＦ）、ミゾリビン、デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、ブレキナルナトリウム。レフルノミド、アザスピラン（ａｚａｓｐｉｒａｎｅ）などが挙げられる。
【００８６】
被験体における不適切なＣＤ１５４活性化に関連する状態の処置のための、本発明に従う組み合わせ治療は、Ｂ細胞に標的化された薬剤（例えば、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２８抗体または抗ＣＤ２０抗体（結合されていないかまたは放射標識されている）、ＩＬ−１４アンタゴニスト、ＬＪＰ３９４（ＬａＪｏｌｌａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓレセプターブロッカー）、ＩＲ−１１１６（Ｔａｋｅｄａ低分子）および抗ＩＧイデオタイプモノクローナル抗体）と共に、合成ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物を使用することを包含する。あるいは、この組み合わせは、Ｔ細胞／Ｂ細胞標的薬剤（例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、ＩＬ−２アンタゴニスト、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、レセプターアンタゴニスト、抗ＣＤ８０／ＣＤ８６モノクローナル抗体、ＴＮＦ、ＬＦＡ１／ＩＣＡＭアンタゴニスト、ＶＬＡ４／ＶＣＡＭアンタゴニスト、ブレキナルおよびＩＬ−２トキシン結合体（例えば、ＤＡＢ）、プレドニゾン、抗ＣＤ３  ｍＡｂ（ＯＫＴ３）、ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）（ＭＭＦ）、シクロホスファミド、およびカルシニュリンシグナルブロッカーのような他の免疫抑制剤（例えば、限定されないが、タクロリムス（ＦＫ５０６）））を含み得る。組み合わせはまた、Ｔ細胞標的剤（例えば、ＣＤ４アンタゴニスト、ＣＤ２アンタゴニストおよび抗ＩＬ−１２抗体）を含み得る。
【００８７】
不適切なＣＤ１５４の活性化に関連する状態を有する被験体に、合成ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物と同時投与され得る免疫調節性化合物は、ＣＤ４５、ＣＤ２、ＩＬ２Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＲＡＮＫ  Ｆｃからなる群から選択されるタンパク質に特異的に結合する抗体であり得る。
【００８８】
（処方物）
一般的に、本発明のＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤に、懸濁、溶解または分散される。得られる治療組成物は、レシピエントのホメオスタシス、特に、電解質のバランスに悪影響を与えない。従って、代表的なキャリアは、正常生理食塩水（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．０〜７．４）を含む。他の受容可能なキャリアは、当該分野で周知であり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９０に記載される。受容可能なキャリアとしては、生体適合性の不活性であるかまたは生体吸収性の塩、緩衝剤、オリゴ糖類もしくは多糖類、ポリマー、粘弾性化合物（例えば、ヒアルロン酸）、粘度改良剤、保存剤などが挙げられ得る。
【００８９】
本発明によって提供されるＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物は、薬学的有効量で、予防的有効量で、または治療的有効量で投与され得、この有効量は、不適切なＣＤ１５４の活性化に関連する状態の危険があるかまたはこの状態に罹患した被験体に対して検出可能な（好ましくは、医学的に有益な）効果を生じるのに十分な量である。医学的に有益な効果としては、被験体の医学的状態の悪化の予防、阻害、排除または弱化、またはこの状態の検出可能な改善が挙げられる。
【００９０】
（実施例）
以下の実施例は、新規のＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物に関する本発明の好ましい実施形態、および被験体における不適切なＣＤ１５４の活性化に関連する状態を処置または予防するためのこれらの化合物の使用を例示する。これらの実施例は、限定とみなされるべきではなく、これらの実施例は、例示の目的のみのために、包含される。
【００９１】
以下の方法は、質量コード化コンビナトリアルライブラリの調製、および本発明に開示されるＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害化合物を得るために適用されるスクリーニング技術を記載する。この方法は、ＣＤ１５４のような目的の任意の生体分子に密接に結合する化合物を同定するために使用され得るために、有利である。記載されるスクリーニング技術は、大量並行スクリーニング能を提供するために小型化され得る。
【００９２】
質量でコードされたコンビナトリアルライブラリーを製造するための方法は、１９９９年７月１５日に刊行されたＰＣＴ特許出願ＷＯ９９／３５１０９（この開示は、本明細書中で参考として援用されている）において開示されている。
【００９３】
ＷＯ９９／３５１０９に従う一つの方法は、質量でコードされたコンビナトリアルライブラリーのメンバー（単数または複数）の同定を可能にし、このメンバーは、生体分子に対するリガンド（例えば、ＣＤ１５４のようなタンパク質）である。この方法は、以下の工程を包含している：（１）質量でコードされた分子ライブラリーと生体分子を接触させる工程であって、これにより、生体分子に対するリガンドである質量でコードされた分子ライブラリーのメンバーは、生体分子に結合して生体分子−リガンド複合体を形成し、そして生体分子に対するリガンドではない質量でコードされたライブラリーのメンバーは、未結合のままである、工程；（２）質量でコードされた分子ライブラリーの未結合メンバーから生体分子リガンド複合体を分離する工程；（３）この生体分子リガンド複合体を分離する工程；および（４）各リガンドに存在する末梢部分のセットを同定するために各リガンドの分子量を決定する工程。
【００９４】
ＷＯ９９／３５１０９の方法は、多数の数の化合物を含む質量でコードされたコンビナトリアルライブラリーの迅速な製造を可能にする。この質量でコードすることは、分子量によって足場部分および末梢部分の個々の組み合わせの同定を可能にする。得られたライブラリーはまた、所定の生体分子（例えば、ＣＤ１５４）に対するリガンドである化合物の迅速な同定をも可能にする。
【００９５】
ＷＯ９９／３５１０９の方法の一つは、化合物の質量でコードされたセット（例えば、質量でコードされたコンビナトリアルライブラリー）の調製を可能にする。これらの化合物は、一般式Ｘ（Ｙ）ｎの化合物であり、ここで、Ｘは足場であり、各Ｙは末梢部分であり、そしてｎは４である。ＷＯ９９／３５１０９および本明細書中で使用されるような、用語「足場」は、４つの末梢部分が共有結合を介して結合される分子フラグメントをいう。この足場は、化合物の質量でコードされるセットの各メンバーに共通している分子フラグメントである。ＷＯ９９／３５１０９および本明細書中で使用されるような、用語「末梢部分」は、足場に結合される分子フラグメントをいう。質量でコードされた化合物のセットの各メンバーは、この足場に結合された４つの末梢部分の組み合わせを含み、そしてこの化合物のセットは、質量でコードされたコンビナトリアルライブラリーを形成する。
【００９６】
コンビナトリアルライブラリーに関連して、ＷＯ９９／３５１０９および本明細書中で使用されるような、用語「質量」または「分子量」は、分子または化学部分のコレクションの正確な質量をいい、ここで、各原子は、特定の元素にとって最も豊富に天然に存在する同位体である。正確な質量および質量分光測定によるそれらの決定は、以下によって議論されている：Ｐｒｅｔｓｃｈら、Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｐｅｃｔｒａｌ  Ｄａｔａ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，第２版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（１９８９）、およびＨｏｌｄｅｎら、Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．５５：１１１９−１１３６（１９８３）（これらの各々の内容は、その全体が本明細書中で参考として援用されている）。
【００９７】
式ＩＶによって表される足場前駆体（これは、末梢部分前駆体反応性基と反応して共有結合を形成し得る４つの反応性基を有する）を、本発明に従う化合物の合成のために出発物質として選択した。スキームＩ（後述）において使用した、この足場前駆体は、Ｋ．Ｅ．Ｐｒｙｏｒら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５４：４１０７−４１２４（１９９８）（この開示は、本明細書中で参考として援用されている）に記載されている。足場前駆体Ｖ−ＶＩ（それぞれ、スキームＩＩおよびＩＩＩ（後述）において使用される）を、Ｐｒｙｏｒらによって示される反応スキームに従って合成し、続いて従来の化学的保護技術を用いてさらに改変した。
【００９８】
【化５０】
2004521861.tif 000028
末梢部分前駆体は、足場前駆体の反応性基に対して相補的である反応性基を含む化合物である。この反応性基に加えて、末梢部分前駆体は、広範な種々の構造特性を含み得る。例えば、この末梢部分前駆体は、この反応性基に加えて、１つ以上の官能基を含み得る。任意のさらなる官能基は、適切にマスクされるか、または足場前駆体と末梢部分前駆体との間の反応を妨害しないようにするべきである。マスクするための適切な保護基は、種々の官能基に関する分野において公知である（ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｏｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９１）、および第３版、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９９）（これらの両方の開示は、本明細書中で参考として援用されている））。特に有用な保護基としては、ｔ−ブチルエステルおよびｔ−ブチルエーテル、アセタール、トリチルエーテルおよびトリチルアミン、アセチルエステル、トリメチルシリルエーテル、ならびにトリクロロエチルエーテルおよびトリクロロエチルエステルが挙げられる。さらに、２つの末梢部分前駆体は、使用される条件下で、共に反応するべきではない。例えば、末梢部分前駆体のサブセットは、反応性基に加えて、一定の範囲の、電荷、疎水性／親水性、およびサイズに及ぶ基から選択される官能基を含み得る。例えば、末梢部分前駆体は、負の電荷、正の電荷、親水性基または疎水性基を含み得る。
【００９９】
本発明の目的のために、２つの反応性基が一緒に反応して共有結合を形成する場合、この２つの反応性基は、相補的である。好ましい実施形態において、この結合形成反応は、副生成物の実質的な形成なく、周辺温度で迅速に生じる。好ましくは、所定の反応性基は、所定の相補的な反応性基と正確に一度、反応する。
【０１００】
相補的な求電子性基および求核基は、任意の２個の基を含み、これらの基は、適切な条件下で求核置換を介して反応し、共有結合を形成する。適切な求電子基の例は、酸塩化物である。適切な求核基としては、１級アミノ基および２級アミノ基が挙げられる。
【０１０１】
適切な末梢部分前駆体の例を、以下の表ＩＩに図示する。各末梢部分前駆体としては、１級アミノ基または２級アミノ基が挙げられ、これらは、足場前駆体と反応して、アミド結合を形成する。
【０１０２】
【表２】
2004521861.tif 000029
2004521861.tif 000030
2004521861.tif 000031
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コンビナトリアルライブラリーセット内の化合物は、適切な末梢部分前駆体のサブセットの選択の結果として、質量コードされる。質量コードされたセットの化合物は、コンビナトリアルライブラリーとして溶液中で合成される。
【０１０３】
１つの実施形態において、足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）前駆体を、同時に、末梢部分前駆体サブセットの全てのメンバーと接触させる。一般的に、４つの反応性基を有する足場前駆体を、選択されたサブユニットから、末梢部分前駆体の足場前駆体に対して少なくとも約４モル当量と接触させる。例えば、足場前駆体を、ほぼ等しい濃度で、サブセットのそれぞれのメンバーを含む溶液と接触させ得る。１つの実施形態において、以下に示される反応プロトコル（スキームＩ）が使用された。
【０１０４】
【化５１】
2004521861.tif 000044
１：３〜１０個の異なるアミン（合計４．２当量の末梢部分前駆体）、ＤＣＭ、塩基性アンバーライト樹脂；
２：ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン  ９３：５：２。
【０１０５】
別の実施形態において、以下に示される反応プロトコル（スキームＩＩ）が使用された。
【０１０６】
【化５２】
2004521861.tif 000045
１：３〜１５個の異なるアミン（合計２．１当量）ＤＣＭ、塩基性アンバーライト樹脂；
２：ＬｉＯＨ、ＴＨＦ
３：２．２当量の（Ｓ）−（＋）−１−（２−ピロリジニルメチル）ピロリジン、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ
４：ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン  ９３：５：２。
【０１０７】
別の実施形態において、以下に示される反応プロトコル（スキームＩＩＩ）が使用された。
【０１０８】
【化５３】
2004521861.tif 000046
１：３〜１５個の異なるアミン（合計２．１当量）、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ
２：ＬｉＯＨ、ＴＨＦ
３：２．２当量の（Ｓ）−（＋）−１−（２−ピロリジニル）ピロリジン、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ
４：ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン  ９３：５：２。
【０１０９】
それぞれの足場前駆体反応性基と末梢部分前駆体との反応に続いて、保護されたさらなる官能基を有する任意の末梢部分が、当該分野において公知の方法を使用して、脱保護され得る。
【０１１０】
このような混合物から誘導される個々の足場および末梢部分の組み合わせを同定する能力は、ライブラリーの質量コードおよび分子量を同定する質量分析法の能力の結果である。これによって、特定の生体分子（例えば、ＣＤ１５４）に結合するような、特定の活性を有するセット内の個々の足場および末梢部分の組み合わせの同定が可能になる。
【０１１１】
１つの実施形態において、生体分子（例えば、ＣＤ１５４）に結合するかまたは生体分子（例えば、ＣＤ１５４）に対するリガンドである、質量コードされたコンビナトリアルライブラリー内の化合物を同定するための方法が提供される。質量コードされるコンビナトリアルライブラリーは、例えば、上に開示される方法によって作製され得る。標的生体分子（例えば、ＣＤ１５４）を、質量コードされたコンビナトリアルライブラリーと接触させ、そしてライブラリーのいずれかのメンバーが、標的生体分子に対するリガンドである場合、生体分子−リガンド複合体が形成する。標的生体分子に結合しない化合物は、生体分子−リガンド複合体から分離される。生体分子−リガンド複合体が解離され、そしてリガンドが分離され、そしてそれらの分子質量が、質量分析法によって決定される。コンビナトリアルライブラリーの質量コードに起因して、所与の分子量は、末梢部分の独特の組み合わせまたはほんの少しの数のこのような組み合わせの特徴である。従って、リガンド分子量は、その組成の決定を可能にする。
【０１１２】
一旦、単一のリガンドが上記プロセスによって同定されると、種々のレベルの分析を適用して、ＳＡＲ情報を得、そしてリガンドの親和性、特異性および生体活性についてのさらなる最適化をガイドし得る。同じ足場から誘導されるリガンドについて、３次元の分子モデリングを使用して、リガンドに共通する有意な構造的特徴を同定し得、これによって、標的生体分子の共通部位におそらく結合する小分子リガンドのファミリーを作製し得る。
【０１１３】
特定の結合部位に対する、一致した最も高い親和性リガンドを同定するために、この分析は、標的に対するそれらの親和性に関して、所与のリガンドファミリーのメンバーの等級付けを含むべきである。このプロセスは、１つの実験で標的生体分子に対する低い親和性リガンドおよび高い親和性リガンドの両方を同定することによってこの情報を提供し得る。
【０１１４】
それぞれの質量コードされるセットの化合物が限定された数の末梢部分前駆体を用いて合成される場合、記載されるアプローチは、特定の場合において、別のライブラリー内で合成される分子の構造的特徴を組み合わせる優れたリガンドを同定し得る。
【０１１５】
可能である場合、リガンドの構造的特徴の分析は、標的生体分子の構造に関する情報に基づき、ここで、仮定の一致したリガンドは、推定の結合部位とコンピューター上で結合する。さらなるコンピューター分析は、複数の最も低いエネルギーコンフォメーションの動的検索を含み得、これにより、異なる足場から誘導される高い親和性リガンドの比較を可能にする。最終の目的は、最も高い結合親和性／特異性を生じる末梢部分の最適機能性および最適ベクトル提示の両方の同定である。これは、改善された第２世代足場の合成のための基礎を提供し得る。
【０１１６】
上で考察される方法の利点は、目的の任意の生体分子（例えば、ＣＤ１５４）にきっちりと結合する化学化合物を同定するために使用され得ることである。
【０１１７】
（新規ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合インタラプター（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｏｒ）についての質量コードされたコンビナトリアルライブラリーのスクリーニング）  化学混合物における化合物を同定するための方法は、２０００年４月２０日に公開された、ＰＣＴ特許出願ＷＯ００／２２６４９（この開示は、本明細書によって参考として援用される）に記載される。これらの方法およびＷＯ９９／３５１０９に開示される方法は、化合物の混合物（質量コードされたコンビナトリアルライブラリー）からＣＤ１５４に結合する化合物を同定するために使用された。
【０１１８】
ＷＯ００／２２６４９出願は、一般的に、質量分析に関し、そしてより詳細には、有機化合物の複合混合物中の有機分子の同定に関する。
【０１１９】
質量コードされるコンビナトリアルライブラリーは、スキームＩ〜ＩＩＩに示される反応プロトコールを使用する、表ＩＩに示される構築ブロックのプールを用いて、反応性足場前駆体（式ＩＶ〜ＶＩで示される）を処理することによって調製された。
【０１２０】
質量コードされるコンビナトリアルライブラリーは、本明細書中に記載される方法に従って、新規なＣＤ４０：ＣＤ１５４結合インタラプターについてスクリーニングした。ライブラリーは、最初に、ＣＤ１５４に結合する化合物についてスクリーニングされた。ＣＤ１５４と相互作用する化合物を、同定し、単離し、そしてそれらの化学的組成を、質量分析を用いて確認した。次いで、ＣＤ１５４と相互作用する化合物を、以下に記載される方法に従って大スケールでそれぞれ合成した。
【０１２１】
次いで、この化合物を、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を阻害する能力についてスクリーニングした。当業者は、本発明に従って設計された化合物が、特異的にＣＤ１５４に結合するか否か、および本発明の化合物が、ＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を妨害するか否かを評価するための従来のアッセイを十分知っている。これらのアッセイは、例えば、ＣＤ１５４とＣＤ４０との間の相互作用を介して活性化Ｔ細胞によってＢ細胞が活性化される程度を検出する。例えば、Ｂ細胞におけるＣＤ２３レベル、またはＢ細胞による免疫グロブリンの分泌のモニタリングは、ＣＤ４０とＣＤ１５４との間の相互作用を介する活性化Ｔ細胞によるＢ細胞の活性化を示す。例えば、米国特許第５，４７４，７７１号を参照のこと。従って、このようなアッセイの例は、以下である：実施例７のアッセイ、Ｂ細胞のＴ細胞活性化についてのインビトロアッセイ；Ｂ細胞による免疫グロブリン産生についてのインビトロアッセイおよび体液性免疫応答の阻害についてのインビボアッセイ。
【０１２２】
一旦、上記方法によって、化合物が発見されると、その結合および／または阻害の特性をさらに改善または改変するために、その原子または側鎖のいくつかにおいて、従来の方法によって置換がなされ得る。次いで、このような置換化学化合物は、ＣＤ１５４に対する結合およびＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用の阻害について分析され得る。
【０１２３】
（実施例１  化合物７の化学合成）
工程１：ケリダム酸一水和物（１．００ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）および五臭化リン（８．４５ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃まで３時間温めた。クロロホルム（１００ｍＬ）を温かい反応混合物に添加し、そして得られたスラリーを濾過した。濾液を減圧下で濃縮してピンク色の固体を得た。この固体をエタノール中に溶解させ（激しい反応）、０．５時間攪拌し、次いで、減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。この固体をエーテル（２５０ｍＬ）中に溶解させ、飽和水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、そして減圧下で濃縮して、１．３０ｇの白色固体を得た。
【０１２４】
工程２：無水エタノール（４０ｍＬ）中のＫＯＨ（０．８３ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、無水エタノール（１００ｍＬ）中の工程１からの化合物（３．８５ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、３時間かけて滴下した。白色沈殿が形成された。攪拌されていないスラリーを、室温（ＲＴ）で７時間静置し、次いで、０℃で一晩静置した。スラリーを濾過し、そして得られた白色固体を水（１００ｍＬ）中に溶解させ、０℃に冷却し、そして１Ｎ  ＨＣｌを用いてｐＨ１まで酸性化した。スラリーを濾過し、そして得られた白色固体を減圧下で乾燥させて、３．００ｇの白色固体を得た。
【０１２５】
工程３：触媒ＤＭＦおよび２．０Ｍ塩化オキサリル／ジクロロメタン（４．５ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン中の工程２からの化合物（１．２０ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）の溶液に室温で添加した。この反応溶液を、泡立ちが止むまで攪拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残留物をトルエン（２０ｍＬ）中に溶解させ、そしてピリジン（１０ｍＬ）中のＬ−シクロヘキシルグリシンｔブチルエーテル・ＨＣｌ（１．２０ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）の溶液に室温で滴下した。反応物を室温で一晩攪拌し、エーテルで希釈し、水で洗浄して、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、そして減圧下で濃縮して、油状物を得た。この油状物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（９５：５塩化メチレン／酢酸エチル）によって精製して、１．０１ｇの無色油状物を得た。
【０１２６】
工程４：無水ＤＭＦ（７ｍｌ）中の工程３からの化合物（０．５００ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコレート）ジボラン（０．３００ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・塩化メチレン（０．０２６ｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（０．３１５ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下で２時間、８０℃に温めた。次いで、この反応物を、室温に冷却し、酢酸エチル（７０ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸（２５ｍＬ）で洗浄し、５％重炭酸ナトリウム（２５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、そして減圧下で濃縮して、褐色油状物を得た。
【０１２７】
工程５：３−フェニル−１−プロピルアミン（４．０ｍＬ、２８．１ｍｍｏｌ）を、０℃で濃硝酸に滴下した。反応物を一晩室温に温めた。反応物を５０℃で２時間暖め、濃硝酸（１０ｍＬ）を添加し、そして反応物を０℃に冷却し、そして氷水に注いだ。黄色沈殿物を濾過により単離して、水で洗浄し、そして空気乾燥して、１．３０ｇの黄色固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲは、パラ異性体のみの形成を示した。
【０１２８】
工程６：触媒ＤＭＦおよび２．０Ｍ  塩化オキサリル／ジクロロメタン（４．５ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の工程２からの化合物（１．２０ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で添加した。反応溶液を、泡立ちが止むまで攪拌し、減圧下で濃縮した。残留物をトルエン（２０ｍＬ）中に溶解させ、そしてピリジン（１０ｍＬ）中の工程５からの化合物（１．２０ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で滴下した。反応物を室温で一晩攪拌し、エーテルで希釈し、水で洗浄して、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、そして減圧下で濃縮して、油状物を得た。この油状物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（９０：１０塩化メチレン／酢酸エチル）によって精製して、０．５１ｇの黄色固体を得た。
【０１２９】
工程７：水性２Ｍ  炭酸ナトリウム（２．７０ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ中の工程４からの化合物、工程６からの化合物（０．５１ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・塩化メチレン（０．０２６ｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を一晩８０℃に温めた。次いで、ＲＴに冷却し、酢酸エチルで希釈して、水およびブライン洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、そして減圧下で濃縮して、褐色油状物を得た。
【０１３０】
工程８：水酸化リチウムを、室温で、２：１ＴＨＦ／水中の工程７からの化合物の溶液に添加した。全ての出発エステルがＨＰＬＣ分析によって消費されたとき、反応物を冷水で希釈し、そして酢酸エチルで洗浄した。水相を塩化アンモニウムで飽和させ、そしてＴＨＦで抽出した。合わせた有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、そして減圧下で濃縮した。得られた固体を水で洗浄し、空気乾燥させて、１．２０ｇの暗色固体を得た。（約５０％の所望の物質）。
【０１３１】
工程９：Ｓ−（＋）−１−（２−ピロリジニルメチル）ピロリジン（０．８０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．０ｇ、５．３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．８ｍＬ、１０．３ｍｍｏｌ）を、ＲＴで、無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の工程８からの化合物（１．２ｇ）の溶液に添加した。
【０１３２】
この反応物を、室温にて一晩攪拌した。減圧下で揮発物質を除去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、そして水で洗浄した。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（１００：１０：２  酢酸エチル／メタノール／トリエチルアミン）により精製して、０．６５０ｇの茶色の固体を得た。
【０１３３】
工程１０：工程９の化合物（０．０３０ｇ）を含有する２：１  ＴＦＡ／塩化メチレン溶液（６ｍＬ）を、室温にて３時間攪拌した。次いで、この反応物を減圧下で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）により精製して、白色の固体を得た。
【０１３４】
（実施例２  化合物８の化学合成）
工程１：実施例１の工程１〜９を実施した。
【０１３５】
工程２：触媒の１０％  Ｐｄ／Ｃを、工程１の化合物（０．１００ｇ）を含有する酢酸エチル溶液に添加した。この反応物を、水素雰囲気下（１ａｔｍ）で一晩攪拌した。次いで、この反応物を遠心分離し、上清をデカントし、そして減圧下で濃縮した。
【０１３６】
工程３：工程２の化合物（０．０２０ｇ）を含有する２：１  ＴＦＡ／塩化メチレン溶液（６ｍＬ）を、室温にて２時間攪拌した。次いで、この反応物を減圧下で濃縮し、そして逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）により精製して、オフホワイトの固体を得た。
【０１３７】
（実施例３  化合物４の化学合成）
工程１：実施例１の工程１および２を実施した。
【０１３８】
工程２：触媒のＤＭＦおよび２．０Ｍ塩化オキサリル／ジクロロメタン（３．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）を、工程１の化合物（２．７２ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を含有するジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）に室温にて添加した。この反応溶液を、発泡が止まるまで攪拌し、トルエン（４０ｍＬ）で希釈し、そして減圧下で容量を減らした。３−フェニル−１−プロプルアミン（１．７ｍＬ、１１．９ｍｍｏｌ）を含有するピリジン溶液（８ｍＬ）を添加し、そして得られた溶液を室温にて一晩攪拌した。この反応溶液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、水（１５０ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（１５０ｍＬ×３）、および水（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して油状物を得た。この油状物を、１：１  飽和水性水酸化リチウム／ＴＨＦに溶解し、そして室温にて一晩攪拌した。次いで、この反応物を１Ｎ  ＨＣｌにより酸性にし、酢酸エチルで抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して３．４５６ｇの油状物を得た。
【０１３９】
工程３：工程２の化合物（３．４５６ｇ、９．５１５ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコレート）ジボラン（２．６５８ｇ、１０．５４ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・メチレンクロリド（１．０２９ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（３．８８ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）を含有する無水ＤＭＦ溶液（６０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で２．５時間、８０℃になるまで温めた。次いで、この反応物を室温まで冷まし、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、そして１Ｎ水酸化ナトリウム（２００ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸エチル（２５０ｍＬ×２）で洗浄し、濃ＨＣｌによりｐＨ０まで酸性化し、そして酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して油状物を得、この油状物を、エーテルを用いてスラリーにした。得られた薄茶色の固体を濾過し、そして風乾して１．４８ｇの生成物を得た。この母液を減圧下で濃縮し、１．７８ｇの生成物を得た。
【０１４０】
工程４：Ｌ−シクロへキシルグリシンｔブチルエステル・ＨＣｌ（１．７１７ｇ、６．８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．６１８ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（４．００ｍＬ、２３．０ｍｍｏｌ）を、実施例１、工程２の化合物（１．７０４ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）を含有する無水ＤＭＦ溶液（１０ｍＬ）に室温にて添加した。この反応物を室温にて２．５時間攪拌した。この反応物を飽和水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）で希釈し、そしてエーテル（１５０＋１００ｍＬ）で抽出した。有機相を水（１００＋５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して２．９９４ｇの黄色の油状物を得た。
【０１４１】
工程５：飽和水性水酸化リチウム（３ｍＬ）を、工程４の化合物（２．９９４ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）を含有するＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）に室温にて添加した。１時間後、飽和水性重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）を添加した。次いで、このスラリーを０℃まで冷却し、１Ｎ  ＨＣｌにより酸性にし、そして酢酸エチル（４００＋１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、２．２３８ｇの薄黄色の粉末を得た。
【０１４２】
工程６：２Ｍ  水性炭酸ナトリウム（７．５５ｍＬ、１５．１ｍｍｏｌ）を、工程３の化合物（０．８２０ｇ、２．００ｍｍｏｌ）、５の化合物（０．８８３ｇ、２．００ｍｍｏｌ）、および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・メチレンクロリド（０．２６７ｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）を含有する無水ＤＭＦ溶液（１０ｍＬ）に添加した。この反応物を、２．５時間、８５℃になるまで温めた。次いで、これを室温まで冷まし、酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、そして水（１５０ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄し、そして１Ｎ  ＨＣｌで酸性にした。得られたスラリーを酢酸エチル（４００＋１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して、白色の固体を得た。この白色の固体を、エーテルを用いてスラリーにし、濾過し、そして風乾して０．９３２ｇの生成物を得た。母液を減圧下で濃縮することにより、さらに０．３５９ｇの所望の生成物を得た。
【０１４３】
工程７：Ｓ−（＋）−１−（２−ピロリジニルメチル）ピロリジン（０．２００ｍＬ、１．２３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４３４ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（０．３００ｍＬ、１．７２ｍｍｏｌ）を、工程６の化合物（０．３５９ｇ、０．５５７ｍｍｏｌ）を含有する無水ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に室温にて添加した。この反応物を室温にて３時間攪拌した。この反応物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、飽和水溶性炭酸ナトリウム（５０ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して０．６７５ｇの油状物を得た。
【０１４４】
工程８：ＴＦＡ（４ｍＬ）および水（０．１００ｍＬ）を、工程７の化合物（０．６７５ｇ）を含有するアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）に添加した。４時間後、この反応物を減圧下で濃縮し、そして逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）により精製し、０．１２３ｇの生成物を得た。
【０１４５】
（実施例４  化合物１０の化学合成）
工程１：実施例１の工程１および２を実施した。
【０１４６】
工程２：Ｓ−（＋）−１−（２−ピロリジニルメチル）ピロリジン（５．３ｇ、３４．４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１７．５ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（１７ｍＬ、９７．６ｍｍｏｌ）を、工程１の化合物（８．５０ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）を含有する無水ＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）に室温にて添加した。この反応物を室温にて０．７５時間攪拌した。この反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して、１３ｇの所望の生成物を得た。
【０１４７】
工程３：工程２からの化合物（６．５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を、１：１ＴＨＦ／飽和水酸化リチウム水溶液（５０ｍＬ）中に室温で溶解した。２時間後、反応物を減圧で濃縮し、飽和塩化アンモニウムで酸性化し、そして減圧下濃縮した。得られた固体をＴＨＦ中に懸濁させ、濾過した。濾液を減圧下濃縮して、所望の生成物を得た。
【０１４８】
工程４：Ｌ−シクロヘキシルグリシンｔ−ブチルエステル・ＨＣｌ（３．７５ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（７．５ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１０ｍＬ、５７ｍｍｏｌ）を、工程３からの化合物の無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に室温で添加した。反応物を室温で０．５時間攪拌した。反応物を酢酸エチルで希釈して、飽和重炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥して（ＭｇＳＯ４）、減圧下濃縮して所望の生成物を得た。
【０１４９】
工程５：工程２からの化合物（６．５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコレート）ジボラン（４．４ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・塩化メチレン（０．３８８ｇ、０．４７５  ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（４．７ｇ、４７．９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液を、窒素雰囲気下、８０℃で２時間加熱した。次いで、反応物を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、５％クエン酸および５％重炭酸ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下濃縮して褐色油状物を得た。
【０１５０】
工程６：２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（４０ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を、工程４からの化合物、工程５からの化合物、および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）・塩化メチレンの無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液に添加した。反応物を８０℃で一晩加熱した。次いで、室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウムで酸性化し、ＴＨＦで抽出した（１０回）。合わせた有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下濃縮して、カルボン酸を得た。この物質の半分を粗原料として使用し、そして半分を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）を通して精製した。
【０１５１】
工程７：ジエチルシアノメチルホスホネート（２．７ｍＬ、１６．７ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ／鉱油（０．７３０ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液に、室温で滴下して加えた。最初の泡立ちが終了した後に、反応物を加熱して０．２５時間還流した。３−ニトロベンゾフェノン（１．９０ｇ、８．３６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を、滴下して加え、そして反応物を加熱して３時間還流した。室温まで冷却した後、反応物をクエン酸溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出した（２回）。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン）を通して精製し、１．８１ｇの油状物を得た。
【０１５２】
工程８：１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５００ｇ）および工程７からの化合物（１．８１ｇ）の酢酸エチル（５０ｍＬ）中の懸濁液を、室温で水素雰囲気（６０ｐｓｉ）にさらした。１８時間後、反応懸濁液を濾過し、そして減圧下濃縮して、１．５０ｇの所望の生成物を得た。
【０１５３】
工程９：１Ｍボランテトラヒドロフラン錯体／ＴＨＦ（２８ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を、工程８からの化合物（１．５０ｇ）の無水ＴＨＦ溶液に添加した。反応物を加熱して、３日間還流し、室温まで冷却して、メタノールでクエンチした。最初の泡立ちが終了した後、さらにメタノール（１５ｍＬ）を添加して、反応物を加熱して０．５時間還流させた。反応物を減圧下濃縮し、メタノールで希釈して、濾過して、そして濾液を減圧下濃縮して所望の生成物を得た。
【０１５４】
工程１０：工程９からの化合物（０．１２７ｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１１０ｇ、０．２８９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（過剰）を、工程６からの化合物の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に室温で添加した。反応物を室温で０．５時間攪拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下濃縮して、逆相ＨＰＬＣを通して精製して、０．００５の所望の生成物を得た。
【０１５５】
工程１１：工程１０からの化合物の１：１ＴＦＡ／塩化メチレン溶液を、室温で２時間攪拌し、減圧下濃縮し、そして逆相ＨＰＬＣを通して精製して０．００１５ｇの所望の生成物を得た。
【０１５６】
（実施例５  化合物１１の化学合成）
工程１：４−ニトロジフェニルメタン（１．００ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）を、カリウムｔ−ブトキシド（１．０５ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の懸濁液に、室温でゆっくりと添加した。５分後、ｔ−ブチル  ブロモアセテート（１．０ｍＬ、６．７７ｍｍｏｌ）を添加して、反応物を室温で一晩攪拌した。反応物をエーテルで希釈し、５％クエン酸溶液および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下濃縮して油状物を得た。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（６０：４０塩化メチレン／ヘキサン）を通して精製し、無色の固体を得た。
【０１５７】
工程２：工程１からの化合物を、１：１ＴＦＡ／塩化メチレン（２０ｍＬ）に室温で溶解した。０．５時間後、反応物を減圧下濃縮した。残渣を無水塩化メチレンに溶解し、ＤＭＦ（１滴）および２Ｍオキサリルクロリド／塩化メチレン（１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。０．５時間の泡立ちが終了した後、反応物を減圧下濃縮した。残渣をトルエン（２５ｍＬ）に溶解し、アンモニアガスを反応物へと０．５時間泡立たせた。反応物を酢酸エチルで希釈し、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下濃縮して、０．５６０ｇの無色油状物を得た。
【０１５８】
工程３：１Ｍボランテトラヒドロフラン錯体／ＴＨＦ（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を、工程２からの化合物（０．５６０ｇ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応物を加熱して一晩還流し、室温まで冷却して、メタノールでクエンチした。最初の泡立ちが終了した後、さらにメタノール（１０ｍＬ）を添加し、反応物を加熱して０．５時間還流した。反応物を減圧下濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（８０：２０：２酢酸エチル／メタノール／トリエチルアミン）を通して精製して、０．１３０ｇの淡黄色油状物を得た。
【０１５９】
工程４：ジイソプロピルエチルアミン（０．２００ｍＬ、１．１２ｍｍｏｌ）を、工程３からの化合物（０．１３０ｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）、実施例４の工程６からの化合物（０．２５０ｇ、０．３１３ｍｍｌ）およびＨＡＴＵ（０．２００、０．５２６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、室温で添加した。０．５時間後、反応物を減圧下濃縮し、酢酸エチルに溶解し、飽和重炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下濃縮して、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）を通して精製して、０．１４０ｇのオフホワイト粉末を得た。
【０１６０】
工程５：工程４からの化合物（０．０１０ｇ）の１：１ＴＦＡ／塩化メチレン（４ｍＬ）溶液を、室温で２時間攪拌した。次いで反応物を減圧下濃縮して、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）を通して精製して、白色固体を得た。
【０１６１】
（実施例６  化合物９の化学合成）
工程１：２Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタン／ヘキサン（０．１００ｍＬ、０．２００ｍｍｏｌ）を、実施例３の工程８からの化合物（０．０２０ｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（０．５ｍＬ）溶液に添加した。反応物を室温で０．２５時間攪拌し、減圧下濃縮して、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）を通して精製し、白色固体を得た。
【０１６２】
（実施例７  化合物がＣＤ１５４に結合するかどうか、およびＣＤ４０：ＣＤ１５４相互作用を阻害するかどうかを評価するための結合アッセイ）
１）Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐの９６ウェルプレートを、１ウェルあたり１００μｌ、５〜１０μｇ／ｍｌのＰｉｃｈｉａ細胞中で産生したヒトＣＤ４０−Ｉｇ（ＰＢＳ中、ｐＨ７．２）でコーティングし、プレートシーラー（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３０９５）で覆い、４℃で一晩保存した。
【０１６３】
２）ＣＤ４０−Ｉｇでコーティングされたプレートを振りごみを落として水分を吸い取って乾燥させた。
【０１６４】
３）ＣＤ４０−Ｉｇでコーティングされたプレートを、１ウェルあたり３００μｌのＰＢＳ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、１％ＢＳＡ、ｐＨ７．２）で室温で１時間または冷蔵庫で３週間までブロックした。
【０１６５】
４）ＣＤ４０−Ｉｇでコーティングされたプレートを、ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．４）で、プレート洗浄器（ｐｌａｔｅ  ｗａｓｈｅｒ）を用いて室温で洗浄した（３回）。
【０１６６】
５）プレートを必要に応じて水分を吸い取って乾燥させる。
【０１６７】
６）化合物の一次スクリーニング：
ａ．化合物を、Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）中で１００ｍＭのＨｅｐｅｓ＋０．００５％のＢＳＡ（ｐＨ７．２）で滴定し、次いで、５０μｌの滴定された化合物をプレートの各ウェルに添加した。
ＩＣ５０パラメータ：
化合物あたり１つの７点曲線を作製し、各点は、三連で行った。２倍希釈系列を使用して、曲線を作成した。
試験化合物のアッセイにおける最大濃度は、１２５μＭであった。
ｂ．１００ｍＭのＨｅｐｅｓ＋０．００５％のＢＳＡ（ｐＨ７．２）の０．０７〜１．６μｇ／ｍｌビオチン−ＣＤ１５４の５０μｌ／ウェルを、１ウェルあたり添加した。ビオチン−ＣＤ１５４の最終濃度は、０．０３５〜０．０８μｇ／ｍｌであった。プレートにおいて、各ウェル中の化合物と混合した。
ｃ．プレートをプレートシーラーで覆い、室温で１時間インキュベートした。
【０１６８】
７）プレートを、プレート洗浄器を用いてＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．４）を用いて室温で洗浄した（３回）。
【０１６９】
８）プレートを必要に応じて水分を吸い取って乾燥させた。
【０１７０】
９）ＨＲＰ−Ｓｔｒｅｐ／Ａｖｉｄｉｎ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｄｅ３＃０１６−０３０−０８４）の１／３００，０００希釈物１００μｌを、各ウェルに添加した。希釈緩衝液は以下であった：ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０。プレートをプレートシーラーで覆い、室温で１時間インキュベートした。
【０１７１】
１０）プレートを室温でプレート洗浄器で洗浄した（３回）。
【０１７２】
１１）プレートを必要に応じて水分を吸い取って乾燥させた。
【０１７３】
１２）ＴＭＢ（１成分）（Ｋｉｒｋｅｇａｒｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｓ，Ｐｒｏｄ＃５０−７６−０４）１００μｌ／ウェルを、各ウェルに添加して、室温で約１０分インキュベートした。
【０１７４】
１３）１００μｌ／ウェルの０．１８Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を加えて、プレート中の反応を停止した。
【０１７５】
１４）このプレートを、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏ．）により４５０ｎＭで、反応の停止から３０分以内に読み出した。
【０１７６】
ＣＤ１５４に結合し、ＣＤ４０：ＣＤ１５４の相互作用をブロックする化合物は、ＣＤ１５４が、固定化したＣＤ４０−Ｉｇに結合するのを防ぎ、そして低吸光度読み取り値を与えた。
【０１７７】
（コントロール：）
１．全反応：反応ウェルは、５０μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含んだ（試験化合物は含まない）。
２．ポジティブコントロール：反応ウェルは、１０μｌの１ｍｇ／ｍｌ  ５ｃ８（抗−ＣＤ１５４  ｍＡｂ）および５０μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含んだ。
３．ブランクコントロール：反応ウェルは、１００μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含んだ。
４．化合物コントロール：三連のＢＩＯ−００２１０８−００における滴定系。
【０１７８】
ＢＩＯ−００２１０８−００は、スラミンの誘導体のうちの１つである（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ  カタログ番号５７４６２５）。ＢＩＯ−００２１０８−００およびスラミンの他の誘導体は、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害因子（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｏｒ）であることが実証されている。ＢＩＯ−００２１０８−００は、このアッセイによって決定されるように、ＣＤ４０：ＣＤ１５４結合妨害について、Ａの範囲（５０μＭ未満）においてＩＣ５０を有する。ＢＩＯ−００２１０８−００は、ＴＮＦ−α：ＴＮＦＲｐ６０結合妨害について、１２５μＭ（平均値）より高いＩＣ５０を有する。ＢＩＯ−００２１０８−００は、以下の構造を有する：
【０１７９】
【化５４】
2004521861.tif 000047
これを、以下の方法によって合成した：
（工程１）
２Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタン／ヘキサン（５０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を、ｔｅｃｈ．３−アミノ−２−ナフトエ酸（３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）含有メタノール（３００ｍＬ）溶液に、室温にて滴下した。灰色沈殿物を形成した。この反応物を遠心分離し、その上清をデカントし、減圧下で濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン）によって精製して、１．７８ｇの黄色結晶固体を得た。
【０１８０】
（工程２）
工程１からの化合物（０．２０５ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）および３−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（０．２５０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を含有するピリジン（５ｍＬ）溶液を、室温にて０．５時間攪拌した。次いで、この反応物を、１Ｎの塩酸水溶液（１００ｍＬ）中に注ぎ、塩化メチレンで抽出した（２×１００ｍＬ）。合わせた有機相を、１Ｎの塩酸水溶液（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮して、０．３８０ｇの赤味を帯びたシロップを得た。
【０１８１】
（工程３）
１０％  Ｐｄ／Ｃ（０．００５ｇ）を、工程２からの化合物（０．３８０ｇ）を含有する１：１  酢酸エチル／メタノール（５０ｍＬ）溶液に加えた。この反応物を、水素雰囲気下（１ａｔｍ）で１６時間攪拌した。この反応物を遠心分離し、その上清をデカントし、減圧下で濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（９５：５  塩化メチレン／酢酸エチル）によって精製して、０．２７８ｇの白色固体を得た。
【０１８２】
（工程４）
工程３からの化合物（０．００６ｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（０．０３０ｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）を含有する無水ＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を、一晩還流した。次いで、この反応物を、室温まで冷却し、減圧下で濃縮し、そして逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）によって精製して、０．０１８ｇの白色固体を得た。
【０１８３】
（工程５）
水酸化リチウム（０．１００ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）を、工程４からの化合物（０．０１８ｇ）を含有する２：１：１  ＴＨＦ／メタノール／水（２０ｍＬ）溶液に加えた。室温にて一晩攪拌した後、この反応物を、１Ｎの塩酸水溶液（２５ｍ）中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した（２×５０ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）によって精製して、０．００１ｇの白色固体を得た。ＭＳ（ＥＳＰ−）７０９．０９（Ｍ−１）。
【０１８４】
（実施例８）
（化合物がＴＮＦ−αに結合し、ＴＮＦ−α／ＴＮＦＲｐ６０の相互作用を阻害するか否かを評価するための、結合アッセイ）
１）９６ウェルプレートのＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐを、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中で、１００μｌ／ウェルの０．６μｇ／ｍｌ  腫瘍壊死因子レセプターｐ６０（ＴＮＦＲｐ６０）（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ，Ｊ．Ｌ．；Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｉ．；Ｎｇａｍ−ｅｋ，Ａ．；Ｂｏｕｒｄｏｎ，Ｐ．Ｒ．；Ｅｈｒｅｎｆｅｌｓ，Ｂ．Ｎ．；Ｍｉａｔｋｏｗｓｋｉ，Ｋ．；Ｚａｆａｒｉ，Ｍ．；Ｙａｍｐａｇｌｉａ，Ａ．Ｍ．；Ｌａｗｔｏｎ，Ｐ．；Ｍｅｉｅｒ，Ｗ．；Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｃ．Ｐ．；Ｈｅｓｓｉｏｎ，Ｃ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５４，３３〜４６）でコーティングし、プレートシーラー（Ｃｏｓｔａｒ，カタログ番号３０９５）で覆い、そして４℃にて一晩保存した。
【０１８５】
２）このコーティングプレートを振って乾かし、乾燥ブロットした。
【０１８６】
３）ＴＮＦＲｐ６０コーティングプレートを、３００μｌ／ウェルのＰＢＳ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０、１％  ＢＡＳ（培地調製物から作製））で、４℃にて１時間ブロックした。プレートを、４℃にて３週間保存した。
【０１８７】
４）このプレートを、室温にてプレート洗浄器によって、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄した。
【０１８８】
５）このプレートを、必要に応じて乾燥ブロットした。
【０１８９】
６）化合物の一次スクリーニングを、１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ＋０．００５％  ＢＡＳ（ｐＨ７．２）を含有するＴｉｔｅｒｔｕｂｅ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）中で滴定し、次いで、５０μｌの滴定化合物を、各ウェルのプレートに加えた。
【０１９０】
ＩＣ５０パラメータ：各点が三連で移動する、１化合物あたりの７点曲線の１つを、作製した。２回希釈系を使用して、曲線を作成した。試験化合物のアッセイにおける最高濃度は、１２５μＭであった。
【０１９１】
５０μｌ／ウェルの８ｎｇ／ｍｌ  Ｂｉｏｔｉｎ−ＴＮＦ−α（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を含有する１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ＋０．００５％  ＢＡＳ（ｐＨ７．２）を加えた。Ｂｉｏｔｉｎ−ＴＮＦαの最終濃度は、４ｎｇ／ｍｌであった。これを、プレートの各ウェル中の化合物と混合した。このプレートを、シーラーで覆い、室温にて１時間インキュベートした。
【０１９２】
７）このプレートを、室温にて、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を用いて、洗浄器によって３回洗浄した。
【０１９３】
８）このプレートを、必要に応じて乾燥ブロットした。
【０１９４】
９）１００μｌのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ（ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０中、１：３００，０００で希釈）を、各ウェルに添加した。このプレートを、シーラーで覆い、室温にて１時間インキュベートした。
【０１９５】
１０）このプレートを、室温にて３回、プレート洗浄器で洗浄した。
【０１９６】
１１）このプレートを、必要に応じて、乾燥ブロットした。
【０１９７】
１２）１００μｌ／ウェルのＴＭＢ（１成分）（Ｋｉｒｋｅｇａｒｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｓ，Ｐｒｏｄ  ＃５０−７６−０４）を室温にて加え、暗環境下で約１０分間インキュベートした。
【０１９８】
１３）１００μｌ／ウェルの０．１８Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を加えて、反応を停止した。
【０１９９】
１４）このプレートを、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏ．）により４５０ｎＭで、停止試薬を加えてから３０分以内に読み出した。
【０２００】
（コントロール：）
全反応：反応ウェルは、５０μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含んだ（試験化合物は含まない）。
【０２０１】
ポジティブコントロール：反応ウェルは、１０μｌの１．５ｍｇ／ｍｌ  抗−ＴＮＦ−αおよび５０μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含んだ。
【０２０２】
ブランクコントロール：反応ウェルは、１００μｌの１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／０．００５％  ＢＡＳを含む。
【０２０３】
化合物コントロール：三連のＢＩＯ−００２１０８−００における滴定系。
【０２０４】
ＴＮＦ−α／ＴＮＦＲｐ６０の相互作用をブロックする化合物は、ＴＮＦ−αが、固定化したＴＮＦＲｐ６０に結合するのを防ぎ、低吸光度の読み取り値を与えた。
【０２０５】
上記アッセイをまた、ＴＮＦＲｐ６０の代わりにＴＮＦＲｐ６０−Ｆｃを使用して、実行し得る。
【０２０６】
前記アッセイ（実施例７〜８）に加えて、以下の結合アッセイを使用して、本発明に従う化合物の活性を評価し得る。
【０２０７】
（実施例９）
（ＩＣＡＭアッセイ）
１．以下を含有するウェルを設定する：
−異なる濃度の化合物を含有する、５０μＬのＲＰＭＩ（１０％  血清、４ｍＭ  グルタミン、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ）
−５０μＬ中、０．５μｇのＣＤ４０リガンド
−１００μＬ中、２×１０５個の２Ｇ６細胞。
【０２０８】
以下の群を設定する：
細胞のみ
細胞＋化合物
細胞＋リガンド
細胞＋リガンド＋１０μｇの５ｃ８  ｍＡｂ。
【０２０９】
各群は、２００μＬのウェル中で最終容量を有さなければならない。ＤＭＳＯの濃度が０．２２％よりも高い場合、コントロール＋リガンドでなければならない。
ｂ．ＣＯ２インキュベータ内で１８時間、３７℃にてこのプレートをインキュベートする。
ｃ．４０μＬの溶解緩衝液（Ｅｎｄｏｇｅｎ  ＥＨ−５４００製のｓＩＡＣＭ−１キットの一部）を、ウェルに加え、ピペットで出し入れ（ｕｐ  ａｎｄ  ｄｏｗｎ）する。
ｄ．ロッカープラットフォーム上、１５０ＲＰＭ／分で、室温にて１／２時間振盪する。
ｅ．Ｆａｌｃｏｎマイクロ試験のフレキシブルアッセイプレート中で、１：１の希釈を行う（４０μＬの溶解物＋Ｅｎｄｏｇｅｎ  ＥＨ−５４００製のｓＩＣＡＭ−１キットからの４０μＬの希釈剤）。
ｆ．この混合物２５μＬを、ＥＬＩＳＡキットプレート（ｓＩＣＡＭ−１薄メッキプレート、Ｅｎｄｏｇｅｎ）内にピペットで入れる。また、このプレート上に、２５μＬの標準をピペットで入れる。
ｇ．（Ｅｎｄｏｇｅｎ  ＥＨ−５４００製のｓＩＣＡＭ−１キットからの）７５μｌのＨＲＰ結合抗ＩＣＡＭ−１抗体を、ブランクを除く全てのウェルに加える。
ｈ．このプレートを覆い、プラットフォームを１５０ＲＰＭ／分で振盪させながら、室温にて２時間インキュベートする。
ｉ．プレート洗浄器によって、Ｔ細胞プロトコルを使用してプレートを洗浄する。洗浄緩衝液は、ＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０である。
ｊ．（１５ｍＬ／プレートを使用する、Ｅｎｄｏｇｅｎ  ＥＨ−５４００製のｓＩＣＡＭ−１キットからの）基質緩衝液５ｍＬあたり１錠剤のＯＰＤを溶解する。
ｋ．１００μＬを各ウェルにピペットで入れる。
ｌ．覆いをせずに、室温にて３０分間インキュベートする。
ｍ．５０μＬの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を加えて、この反応を停止する。
ｎ．４９０ｎＭで吸光度を読み出す。
ポジティブコントロール：細胞＋リガンド
ネガティブコントロール：細胞のみ、リガンドなし
実験用コントロール：細胞＋リガンド＋１０μｇの５ｃ８  ｍＡｂ。
【０２１０】
（等価物）
本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で例示され得る。従って、前出の実施形態は、全ての局面において、本明細書中に開示される本発明を制限するのではなく、例示するとみなされるべきである。特許請求の範囲と等価な意味および範囲内にある全ての変更は、特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004521861.tif 000173
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