(57)【要約】本発明は、癌などの、前立腺および精巣の疾患および症状の診断法、治療法、および予防法に用いるための、前立腺特異的または精巣特異的な新規の核酸分子、ポリペプチド、抗体、および調節化合物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド配列が配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかの配列と実質的に同一な配列を含む、実質的に純粋な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド。
【請求項２】
ポリペプチド配列が配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかの配列を含む、請求項１記載の実質的に純粋な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド。
【請求項３】
請求項１記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
【請求項４】
核酸分子が配列番号：２３、２８、３１、３３、３５、４０、または５２のいずれかの配列を含む、請求項３記載の単離された核酸。
【請求項５】
配列番号：１〜１２、２２、２７、３０、および５１と実質的に同一な配列を含む、前立腺特異的または精巣特異的な単離された核酸分子。
【請求項６】
本質的に配列番号：１５〜２１、２４〜２６、４２〜５０、および５４〜７０からなる、前立腺特異的または精巣特異的な単離された核酸分子。
【請求項７】
哺乳動物に由来する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項８】
哺乳動物がヒトである、請求項７記載のポリペプチド。
【請求項９】
請求項３、５、または６記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項１０】
請求項３、５、または６記載の単離された核酸分子を含む細胞。
【請求項１１】
請求項９記載のベクターを含む細胞。
【請求項１２】
請求項３、５、または６記載の単離された核酸分子を含む、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項１３】
配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、または５４〜７０のいずれか記載の配列の相補物と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする単離された核酸分子。
【請求項１４】
配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片に記載された任意の前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子のコード鎖に対するアンチセンス配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項１５】
断片が少なくとも６残基のアミノ酸を含み、プローブが前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子の少なくとも一部と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片のいずれかをコードする配列に対して５５％を上回るヌクレオチド配列同一性を有する、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはその相同物もしくは断片を分析するためのプローブ。
【請求項１６】
断片が少なくとも６残基のアミノ酸を含み、プローブが前立腺特異的および精巣特異的な核酸分子の少なくとも一部と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片のいずれかをコードする核酸分子に対して１００％の相補性を有する、請求項１５記載のプローブ。
【請求項１７】
ポリペプチドが配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかのアミノ酸配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含む、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドに特異的に結合する抗体。
【請求項１８】
前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子、またはその断片を細胞中で検出する方法であり、以下の段階を含む方法：
断片長が約１８ヌクレオチドを上回る、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片のいずれかの核酸分子を、高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で該細胞由来のゲノムＤＮＡの調製物と接触させる段階；および
配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、または５４〜７０のいずれかに対して約５５％以上のヌクレオチド配列同一性を有するＤＮＡ配列を検出し、それにより前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはその断片を同定する段階。
【請求項１９】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの発現または活性を調節する被験化合物を同定する方法であり、以下の段階を含む方法：
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを被験化合物に接触させる段階；
および
被験化合物が前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの発現または活性に及ぼす作用を決定する段階。
【請求項２０】
前立腺または精巣の疾患を有する哺乳動物を治療する方法であり、以下の段階を含む方法：
化合物が哺乳動物の該疾患に有効な作用を有する、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの活性または発現を調節する治療的有効量の化合物を哺乳動物に投与する段階。
【請求項２１】
疾患が前立腺癌である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前立腺または精巣の疾患の治療用に製剤化される、薬学的に許容される担体中の、少なくとも単回用量の治療的有効量の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたはその断片を含む薬学的組成物。
【請求項２３】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドが、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、３８、３９、４１、５３、または７１〜７３、ならびにそれらの断片および類似体のアミノ酸配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含む、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
哺乳動物がヒトである、請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
被験者内に存在する前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子分析用の核酸分子プローブを含む、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子の分析用のキット。
【請求項２６】
被験者内に存在する前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド分析用の抗体を含む、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの分析用のキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は一般に、前立腺および精巣の機能不全および細胞増殖に関連する疾病の治療に関し、また特に、このような疾患の診断および治療のための新規の遺伝子群の同定および使用に関する。
【０００２】
発明の背景
尿生殖器疾患は、効果的に診断および治療することが困難なことが多い。これは、尿生殖器疾患が非特異的に存在するためである。尿生殖器疾患の２つの原因とは、前立腺および精巣の疾患である。
【０００３】
前立腺は、雄の骨盤内にある大きさが多様な腺であり、上皮細胞およびストローマ細胞を含む多種多様な細胞からなる。前立腺が関連する疾患には、前立腺癌、良性前立腺肥大、および前立腺炎などがある。雄のホルモンであるテストステロンや他のアンドロゲン関連ホルモンは、前立腺の成長および機能に大きな役割を果たす。精巣も、発生異常、炎症、および癌を含む多くの疾患が起こる器官である。
【０００４】
男性において、前立腺癌は最も多く診断されている癌であり、皮膚癌に次ぐ癌による死亡要因の第２位である。初期段階では、前立腺癌は、その増殖をアンドロゲンに依存しており、この依存性は、アンドロゲン除去療法（ａｎｄｒｏｇｅｎ ａｂｌａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）の基礎となっている。しかし多くの場合、前立腺癌はアンドロゲンに依存しない表現型に進行し、そのような場合、現時点で有効な治療法はない。
【０００５】
現在、前立腺癌の進行に関する分子レベルの詳細に関する情報は限られたものしかない。いくつかの独立した方法によって、この過程で固有の役割を果たすと考えられる、前立腺で多く発現されている数種の遺伝子群が同定されている。このような遺伝子の最初の例が前立腺特異的抗原（Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ；ＰＳＡ）であり、この遺伝子の検出は現在、制限が大きいにもかかわらず、診断ツール、さらには前立腺癌の進行を示すマーカーとして用いられている。さらに最近になって、他のいくつかの前立腺で多く発現する遺伝子群が同定されている。これらには、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺癌腫瘍抗原１（ＰＣＴＡ−１）、ＮＫＸ３．１、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＤＤ３、およびＰＣＧＥＭ１などが含まれる。
【０００６】
前立腺および精巣、ならびに他の組織が関連する疾患の診断および治療に有用な試薬を提供することは有益であると考えられる。
【０００７】
発明の概要
本発明は一般に、癌などの前立腺および精巣の疾患および症状の診断法、治療法、および予防法に用いられる、前立腺特異的または精巣特異的な新規の核酸分子、ポリペプチド、抗体、および調節化合物を提供する。
【０００８】
第１の局面において本発明は、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかの配列と実質的に同一な配列を含む実質的に純粋な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを提供する。第１の局面の好ましい態様においては、実質的に純粋な、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドは、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかの配列を含む。別の好ましい態様において本発明は、第１の局面のポリペプチドをコードする単離された核酸分子、例えば、配列番号：２３、２８、３１、３３、３５、４０、または５２のいずれかの配列を含む核酸分子を提供する。好ましくは、ポリペプチドは哺乳動物（例えばヒト）に由来する。
【０００９】
第２の局面において本発明は、配列番号：１〜１２、２２、２７、３０、および５１と実質的に同一な配列を含む前立腺特異的または精巣特異的な単離された核酸分子を提供する。
【００１０】
第３の局面において本発明は、本質的に配列番号：１５〜２１、２４〜２６、４２〜５０、および５４〜７０からなる前立腺特異的および精巣特異的な単離された核酸分子を提供する。
【００１１】
上記のいくつかの局面の好ましい態様において本発明は、ベクター、細胞、ベクターを含む細胞、および単離された核酸分子を含む非ヒトトランスジェニック動物を提供する。
【００１２】
第４の局面において本発明は、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、または５４〜７０に記載されたいずれかの配列の相補物と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。
【００１３】
第５の局面において本発明は、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片に記載された前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子のいずれかのコード鎖に対するアンチセンス配列を含む、単離された核酸分子を提供する。
【００１４】
第６の局面において本発明は、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはそれらの相同物もしくは断片を分析するための、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片のいずれかをコードする配列に対して５５％を上回るヌクレオチド配列同一性を有するプローブを提供する。この場合、断片は少なくとも６残基のアミノ酸からなり、プローブは前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子の少なくとも一部と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。この局面の好ましい態様においては、プローブは、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０、またはそれらの断片のいずれかをコードする核酸分子と１００％の相補性を有する。この場合、断片は、少なくとも６残基のアミノ酸からなり、プローブは前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子の少なくとも一部と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。
【００１５】
第７の局面において本発明は、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、４１、または５３のいずれかのアミノ酸配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含む、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドに特異的に結合する抗体を提供する。
【００１６】
第８の局面において本発明は、配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、もしくは５４〜７０またはそれらの断片（断片長は約１８ヌクレオチドを上回る）のいずれかの核酸分子を、細胞由来のゲノムＤＮＡ調製物と高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で接触させる段階、および配列番号：１〜１２、１５〜２８、３０、３１、３３、３５、４０、４２〜５０、５１、５２、または５４〜７０のいずれかに対して約５５％以上のヌクレオチド配列同一性を有するＤＮＡ配列を検出することで、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはその断片を同定する段階を含む、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはその断片を細胞中で検出する方法を提供する。配列番号：３８、３９、または７１〜７３のポリペプチドをコードするヌクレオチドを、この局面の態様に使用することもできる。この局面の好ましい態様においては、本方法は、例えば前立腺癌などの癌にかかりやすい患者、または癌のリスクが高い患者における新生細胞または癌細胞を検出する段階を含む。
【００１７】
第９の局面において本発明は、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを被験化合物に接触させる段階、および被験化合物が前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの発現または活性に及ぼす作用を決定する段階を含む、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを発現または活性を調節する被験化合物を同定する方法を提供する。この局面の好ましい態様においては、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドは、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、３８、３９、４１、５３、または７１〜７３、ならびにそれらの断片および類似体のアミノ酸配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含む。
【００１８】
第１０の局面において本発明は、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの活性または発現を調節する、哺乳動物の疾患に有益な作用をもたらす治療的有効量の化合物を哺乳動物に投与する段階を含む、前立腺または精巣の疾患を有する哺乳動物を治療する方法を提供する。この局面の好ましい態様においては、疾患は前立腺癌であり、哺乳動物はヒトであり、または前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドは、配列番号：１４、２９、３２、３４、３６、３８、３９、４１、５３、または７１〜７３、ならびにそれらの断片および類似体のアミノ酸配列と実質的に同一なアミノ酸配列を含む。
【００１９】
第１１の局面において本発明は、薬学的に許容される担体に含まれる前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチド、またはその断片の治療的有効量の少なくとも単回用量を含む薬学的組成物を提供する。この場合、組成物は前立腺または精巣疾患の治療用に製剤化されている。
【００２０】
第１２の局面において本発明は、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子を分析するためのキットを提供し、キットは、被験者に存在する前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子分析用の核酸分子プローブを含む。
【００２１】
第１３の局面において本発明は、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを分析するためのキットを提供し、キットは、被験者に存在する前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド分析用の抗体を含む。
【００２２】
本明細書で用いる「ポリペプチド」、「タンパク質」、または「ポリペプチド断片」とは、何らかの翻訳後修飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）がされたかどうかに関わらず、天然または非天然のポリペプチドの全体または一部を構成する２個またはそれ以上のアミノ酸の鎖を意味する。「翻訳後修飾」とは、合成中または合成後にポリペプチドまたはポリペプチド断片に生じる任意の変化を意味する。翻訳後修飾は、（例えば細胞内における合成中に）天然の状態で生じる場合も、（例えば組換えまたは化学的な方法で）人工的に作り出されてもよい。タンパク質は１個または複数のポリペプチドから作られてもよい。
【００２３】
「実質的に純粋なポリペプチド」、または「実質的に純粋かつ単離されたポリペプチド」とは、天然の状態で伴う成分から分離されたポリペプチド（またはその断片）を意味する。典型的には、このようなポリペプチドは、天然の状態で結合しているタンパク質および天然有機分子群を少なくとも６０％（重量％）含まない状態であれば実質的に純粋である。好ましくは、このようなポリペプチドは、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９９％（重量％）純粋な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドである。実質的に純粋な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドは、標準的な手法により、例えば天然供給源（例えば前立腺または精巣の組織または細胞系）からの抽出により、前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドをコードする組換え体の核酸の発現により、またはポリペプチドを化学的に合成することにより得られる。純度は任意の適切な方法、例えばカラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析で測定することができる。
【００２４】
タンパク質またはポリペプチドは、天然状態ではこれに付随している混入物と分離された場合、天然の状態で結合する成分を実質的に含まない。したがって、化学的に合成されたタンパク質、または天然の起源の細胞とは異なる細胞系で作られたタンパク質は、天然の状態で結合する成分を実質的に含まない。したがって実質的に純粋なポリペプチドは、真核生物に由来するポリペプチドを含むだけでなく、大腸菌または他の原核生物で合成されたポリペプチドも含む。
【００２５】
本明細書で用いられる「同一性」という用語は、特定の核酸分子またはポリペプチドの配列が、同じ型の参照分子の配列と関連することを意味する。例えば、ポリペプチドまたは核酸分子が同じアミノ酸残基またはヌクレオチド残基を、整列させた参照分子と比較して任意の位置に有する場合、対象位置において「同一性」があると言われる。
【００２６】
参照分子に対する核酸分子またはポリペプチドの配列同一性のレベルは、典型的には、配列解析用のソフトウェアを、最適アラインメントを達成するためのギャップの導入といった、ソフトウェアで指定されるデフォルトのパラメータを用いて測定される。したがって２種もしくはそれ以上の核酸配列またはポリペプチド配列の「同一性」という用語は、「計算的分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、レスク（Ｌｅｓｋ）、Ａ．Ｍ．編、オックスフォードユニバーシティプレス（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８８；「生物計算：インフォマティクスおよびゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、スミス（Ｓｍｉｔｈ）、Ｄ．Ｗ．編、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９３；「配列データのコンピューター分析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ）」、第一巻、グリフィン（Ｇｒｉｆｆｉｎ）、Ａ．Ｍ．およびグリフィン（Ｇｒｉｆｆｉｎ）、Ｈ．Ｇ．編、ヒューマナプレス（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー、１９９４；「分子生物学における配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、１９８７；および「配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ）」、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＤｅｖｅｒｅｕｘ編、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９１；ならびにカリロー（Ｃａｒｉｌｌｏ）およびリップマン（Ｌｉｐｍａｎ）、ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８：１０７３、１９８８に記載された方法を含むがこれらに限定されない既知の方法で容易に計算されうる。
【００２７】
同一性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムを利用することができる。２つの配列間の同一性を決定するコンピュータープログラム方法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（１）：３８７、１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５；４０３（１９９０））が含まれるがこれらに限定されない。公知のスミス−ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズムを用いて同一性を決定することもできる。ＢＬＡＳＴプログラムは、ＮＣＢＩおよび他の提供先から公的に利用可能である（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢＩ ＮＬＭ ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、２０８９４）。検索を、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／ｕｎｆｉｎｉｓｈｅｄｇｅｎｏｍｅ．ｈｔｍｌ；またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢｌａｓｔＳｅａｒｃｈ／ｂｌａｓｔ．ｃｇｉなどのＵＲＬで実行することができる。これらのソフトウェアプログラムは、類似の配列を、さまざまな置換、欠失、また他の修飾に対する相同性の程度を割り当てることでマッチさせる。保存的な置換とは典型的には、以下の群内における置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。
【００２８】
核酸分子またはポリペプチドは、その全長にわたって、参照分子の配列に対して少なくとも５０％、６０％、または７０％、好ましくは少なくとも８０％、または９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を示せば、参照分子に対して「実質的に同一である」と言われる。ポリペプチドに関しては、比較配列の長さは少なくとも１６アミノ酸であり、好ましくは少なくとも２０アミノ酸、または少なくとも２５アミノ酸であり、より好ましくは少なくとも３５アミノ酸であり、最も好ましくは完全長のポリペプチドである。核酸分子に関しては、比較配列の長さは少なくとも５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも６０ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７５ヌクレオチド、または少なくとも１１０ヌクレオチド、最も好ましくは完全長の核酸分子である。代替的には、または追加的には、２種の核酸配列は、それらが高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする場合に「実質的に同一である」。
【００２９】
「単離された核酸分子」、「実質的に純粋な核酸分子」、または「実質的に純粋かつ単離された核酸分子」とは、本発明の核酸分子が由来する生物体の天然のゲノム中で対象核酸に隣接する遺伝子を含まない核酸分子（例えばＤＮＡ）を意味する。この用語には例えば、ベクター；自律的に複製するプラスミドもしくはウイルス；または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれる組換えＤＮＡが含まれ、または他の配列とは独立した別の分子（例えば、ｃＤＮＡまたはＰＣＲもしくは制限酵素による切断で生じるゲノムもしくはｃＤＮＡの断片）として存在する組換えＤＮＡが含まれる。付加的なポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡも含まれる。
【００３０】
核酸分子について本明細書で使用される「アンチセンス」とは、本明細書に記載される前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする核酸分子のコード鎖の少なくとも７５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１００ヌクレオチド、１５０ヌクレオチド、または２００ヌクレオチドに相補的な核酸配列（長さは問わない）を有する分子を意味する。アンチセンス分子には、コード領域の上流または下流に、数十塩基対〜数万塩基対の距離をおいて位置しうる転写エンハンサー、ホルモン応答配列、リボソームおよび受容体ポリメラーゼとの結合部位などの調節配列が含まれうる。アンチセンスの核酸分子は例えば、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子にコードされる前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの産生または発現を選択的に低下させる能力を有しうる。
【００３１】
「前立腺特異的な」または「精巣特異的な」核酸分子とは、本明細書の例えば図４、図１１、および図１４に記載された核酸に対して少なくとも５０％、６０％、または７５％、より好ましくは少なくとも８０％、８５％、または９５％、最も好ましくは９９％のアミノ酸同一性を有するゲノムＤＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子、またはＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）分子などの核酸分子を意味する。さらに、ＳＴＭＰ１（配列番号：１４）の１位〜２００位のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列、好ましくはＳＴＭＰ１の４０位〜１５０位のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％、６０％、または７５％、より好ましくは少なくとも８０％、８５％、または９５％、最も好ましくは９９％のヌクレオチド同一性を有する核酸分子は、前立腺または精巣に特異的な核酸分子とみなすことができる。この定義から特に除外される核酸は、ＳＴＥＡＰ（ＡＦ１８６２４９）（Ｈｕｂｅｒｔ、Ｒ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６、１４５２３〜１４５２８、１９９９）、ならびにＥＳＴ ＡＦ１３２０２５、ＡＦ１７７８６２、ＢＡＢ２３６１５、ＢＡＡ９１８３９、ＢＡＢ１５５５９、およびＮＰ＿０３２１９０に記載された、またはこれをコードする核酸分子配列である。
【００３２】
好ましい前立腺特異的核酸分子は、前立腺組織において少なくとも一つの非前立腺組織、好ましくは他のすべての非前立腺組織における同じ核酸分子のレベルより少なくとも５倍高く、好ましくは少なくとも１０倍高く、より好ましくは少なくとも１５倍高く、最も好ましくは少なくとも２０倍高く、選択的に発現されうる。前立腺特異的核酸分子は、非前立腺組織においても高レベルで発現されうるが、一般に発現レベルは前立腺において最も高い。ときとして、本明細書に記載されるように、前立腺特異的核酸分子は、前立腺より非前立腺組織（例えば、胎盤、肺、または肝臓）において高レベルで発現される。
【００３３】
好ましい精巣特異的核酸分子は、精巣組織において少なくとも一つの非精巣組織、好ましくは他のすべての非精巣組織における同じ核酸分子のレベルより少なくとも５倍高く、好ましくは少なくとも１０倍高く、より好ましくは少なくとも１５倍高く、最も好ましくは少なくとも２０倍高く、選択的に発現されうる。精巣特異的核酸分子は、非精巣組織においても高レベルで発現されうるが、一般に発現レベルは精巣において最も高い。ときとして、本明細書に記載されるように、精巣特異的核酸分子は、精巣より非精巣組織（例えば、胎盤、肺、または肝臓）において高レベルで発現される。
【００３４】
「前立腺特異的な」もしくは「精巣特異的な」ポリペプチド、または「前立腺特異的な」もしくは「精巣特異的な」タンパク質とは、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子にコードされたポリペプチドを意味する。前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドはまた、本明細書（例えば図４、図１１、および図１４）に記載されたポリペプチドに対して少なくとも５０％、６０％、または７５％、より好ましくは８０％、８５％、または９５％、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドと定義されうる。この定義から特に除外されるポリペプチドは、ＳＴＥＡＰ（ＡＦ１８６２４９）（Ｈｕｂｅｒｔ、Ｒ．Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６、１４５２３〜１４５２８、１９９９）、ならびにＥＳＴ ＡＦ１３２０２５、ＡＦ１７７８６２、ＢＡＢ２３６１５、ＢＡＡ９１８３９、ＢＡＢ１５５５９、およびＮＰ＿０３２１９０に記載されたまたはコードされたポリペプチド配列である。また、ＳＴＭＰ１（配列番号：１４）の１位〜２００位のアミノ酸、好ましくはＳＴＭＰ１の４０位〜１５０位のアミノ酸に対して少なくとも５０％、６０％、または７５％、より好ましくは少なくとも８０％、８５％、または９５％、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドは、前立腺または精巣に特異的なポリペプチドとみなすことができる。
【００３５】
好ましい前立腺特異的ポリペプチドは、前立腺組織において少なくとも一つの非前立腺組織、好ましくは他のすべての非前立腺組織における同じポリペプチドのレベルより少なくとも５倍高く、好ましくは少なくとも１０倍高く、より好ましくは少なくとも１５倍高く、最も好ましくは少なくとも２０倍高く、選択的に発現される。前立腺特異的ポリペプチドは、非前立腺組織においても高レベルで発現されうるが、一般に発現レベルは前立腺において最も高い。ときとして、本明細書に記載されるように、前立腺特異的ポリペプチドは、前立腺より非前立腺（例えば、胎盤、肺、肝臓）において高レベルで発現される。
【００３６】
好ましい精巣特異的ポリペプチドは、精巣組織において少なくとも一つの非精巣組織、好ましくは他のすべての非精巣組織における同じポリペプチドのレベルより少なくとも５倍高く、好ましくは少なくとも１０倍高く、より好ましくは少なくとも１５倍高く、最も好ましくは少なくとも２０倍高く、選択的に発現される。精巣特異的ポリペプチドは、非精巣組織においても高レベルで発現されうるが、一般に発現レベルは精巣において最も高い。ときとして、本明細書に記載されるように、精巣特異的ポリペプチドは、精巣より非精巣（例えば、胎盤、肺、肝臓）において高いレベルで発現される。
【００３７】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドという用語は、本明細書に記載された配列の相同体、類似体、断片、およびイソ型（例えば選択的スプライシングのイソ型）が含まれる。「生物学的に活性のある断片」とは、例えば、細胞外輸送、細胞内情報伝達、または完全長の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの性質と比較して少なくとも３０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも１００％の他の性質を示す前立腺または精巣特異的ポリペプチドのポリペプチド断片を意味する。「類似体」とは、由来するポリペプチドの細胞外輸送または細胞内情報伝達の性質と比較して少なくとも３０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも１００％の性質を示す、前立腺または精巣特異的ポリペプチドのアミノ酸配列の任意の置換、付加、または欠失を意味する。断片、相同体、および類似体は、標準的な手法、例えば固相ペプチド合成法、またはポリメラーゼ連鎖反応で作製することができる。例えば点変異は、ｃＤＮＡ上のアプリン、アピリミジン、または構造的に損なわれた部位に由来する配列の任意の位置に生じうる。または点変異は、ランダムまたは部位特異的な変異導入法（例えば、オリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ、または誤りの多いＰＣＲ）で導入することができる。同様に、欠失および／または挿入を配列に導入することも可能であり、好ましい挿入には、５’および／または３’における、レポーター部分または親和的部分をコードするポリヌクレオチドとの融合体が含まれる。他の好ましい挿入は、プロモーター、エンハンサー、ホルモン応答配列、複製起点、転写および翻訳の開始部位などの機能性要素をさらに含む核酸などがある。挿入が１個または複数の機能性要素を伴う場合は、得られる核酸は直線状または環状である（例えば、転写または発現のカセット、プラスミドなど）と理解されるであろう。
【００３８】
本発明の方法の使用において、「前立腺に特異的な」または「精巣に特異的な」ポリペプチドという表現はさらに、ＥＳＴ ＡＦ１３２０２５、ＡＦ１７７８６２、ＢＡＢ２３６１５、ＢＡＡ９１８３９、ＢＡＢ１５５５９、およびＮＰ＿０３２１９０に記載された、またはコードされたポリペプチド配列を含むがＳＴＥＡＰを含まず、また前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子は、ＥＳＴ ＡＦ１３２０２５、ＡＦ１７７８６２、ＢＡＢ２３６１５、ＢＡＡ９１８３９、ＢＡＢ１５５５９、およびＮＰ＿０３２１９０に記載されたまたはコードされたヌクレオチド配列を含むが、ＳＴＥＡＰを含まない。
【００３９】
「前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子または相同体もしくはそれらの断片」とは、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする遺伝子、または遺伝子の相同体を意味する。
【００４０】
「特異的に結合する」とは、化合物、例えば抗体が、タンパク質またはポリペプチド（例えば前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド）を認識して結合すること、および検出用標識された場合に、検出用標識されていない過剰な化合物によって対象タンパク質またはポリペプチドに対して結合不能となることを意味する。非特異的に結合する化合物は、過剰な検出用標識化合物によって結合不能とならない。好ましい抗体は、図４、図１１、および図１４に記載されたポリペプチド配列、または図３、図４、図１１、および図１４に記載された任意のヌクレオチド配列にコードされたポリペプチド配列、またはその一部分と実質的に同一な前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド配列に結合する。
【００４１】
「化合物」、「被験化合物」、または「候補化合物」とは、天然の分子、または人工的に作製された分子を意味し、例えばペプチド、タンパク質、合成有機分子、天然有機分子、核酸分子、およびこれらの成分を含む。
【００４２】
「高ストリンジェントな条件」とは、０．５ Ｍ ＮａＨＰＯ４、ｐＨ ７．２、７％ ＳＤＳ、１ ｍＭ ＥＤＴＡ、および１％ ＢＳＡ（画分Ｖ）を含む緩衝液中で６５℃の温度で、または４８％ ホルムアミド、４．８×ＳＳＣ、０．２ Ｍ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ ７．６、１×デンハルト溶液、１０％ 硫酸デキストラン、および０．１％ ＳＤＳを含む緩衝液中で４２℃の温度で（これらは高ストリンジェントなノーザンハイブリダイゼーションまたはサザンハイブリダイゼーション用の典型的条件）、長さが少なくとも５００ヌクレオチドのＤＮＡプローブを用いたときに生じるハイブリダイゼーションと同等のハイブリダイゼーションを可能とする条件を意味する。高ストリンジェントなハイブリダイゼーションはまた、高ストリンジェントなＰＣＲ、ＤＮＡ配列決定、１本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）分析、およびインサイチューハイブリダイゼーションなどの、分子生物学者によって日常的に行われる数多くの手法が成功するか否かにも依存する。ノーザンハイブリダイゼーションおよびサザンハイブリダイゼーションに対して、以上の手法は通常、比較的短いプローブ（ＰＣＲまたは配列決定の場合は通常１６ヌクレオチドまたはそれ以上、インサイチューハイブリダイゼーションの場合は４０ヌクレオチドまたはそれ以上）を用いて行われる。このような手法に用いられる高ストリンジェントな条件は分子生物学分野の当業者に周知であり、例えば、参照として本明細書に組み入れられる、アウスベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら、「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９９８に記載されている。
【００４３】
「プローブ」または「プライマー」とは、相補的配列（「標的」）を含む第２のＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子と塩基対を形成する一定の配列を有する１本鎖のＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を意味する。得られるハイブリッドの安定性は、生じる塩基対形成の程度に依存する。この安定性は、プローブと標的分子間の相補性の程度、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーの程度などのパラメータの影響を受ける。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーの程度は、温度、塩濃度、および有機分子（例えばホルムアミド）濃度などのパラメータの影響を受け、また当技術分野で周知の方法によって決定される。前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子に特異的なプローブまたはプライマーは、本明細書に記載されたアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して、好ましくは４５％を上回る配列同一性、より好ましくは５５％〜７５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも７５％〜８５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも８５％〜９９％の配列同一性、最も好ましくは１００％の配列同一性を有する。プローブは、放射性物質または非放射性物質を用いて、当技術分野で周知の方法で検出用に標識することができる。プローブは、核酸の配列決定、ポリメラーゼ連鎖反応による核酸の増幅、１本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）分析、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析、サザンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーション、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）、および当技術分野で周知の他の方法などの核酸ハイブリダイゼーションが関わる方法に使用することができる。
【００４４】
例えば、オリゴヌクレオチドのプローブもしくはプライマーの分子、遺伝子もしくはその断片、ｃＤＮＡ分子、ポリペプチド、または抗体は、試料中における存在を直接同定可能とする印が付けられる場合に、「検出用に標識」されると言われる。分子を検出用に標識する方法は当技術分野で周知であり、放射性標識（例えば３２Ｐまたは３５Ｓなどの同位体を用いる方法）、および非放射性標識（例えば、フルオレセインなどの蛍光標識を用いる方法や、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を含む構築物を作製する方法）を含むがこれらに限定されない。
【００４５】
「トランスジェニック」とは、ＤＮＡ配列、または人工的に細胞に挿入されることで細胞から発生する生物体のゲノムの一部となる導入遺伝子を含む任意の細胞を意味する。本明細書で使用されるトランスジェニック生物は一般に、トランスジェニック動物（例えばマウス、ラット、およびヤギ）であり、ＤＮＡ（導入遺伝子）は人工的に核ゲノムに挿入される。「導入遺伝子」とは、人工的に細胞に挿入されることで細胞から発生する生物体のゲノムの一部となる任意のＤＮＡ片を意味する。このような導入遺伝子には、トランスジェニック生物に対して部分または全体が異種（すなわち外来）の遺伝子が含まれうるほか、対象生物の内因性遺伝子に相同な遺伝子の場合がある。「ノックアウト変異」とは、通常コードされるポリペプチドの生物学的活性を、非変異型遺伝子に対して少なくとも８０％低下させる、核酸配列上に人工的に誘導された変化（組換えＤＮＡ技術、または変異源に故意に曝露させて作製された変化）を意味する。このような変異は、挿入、欠失、フレームシフト変異、またはミスセンス変異であるがこれらに限定されない。ノックアウト変異は、エクスビボ（例えば、組織培養細胞、または一次細胞）、またはインビボで存在することができる。「ノックアウト動物」とは哺乳動物、好ましくは、上記で定義されたノックアウト変異を含むマウスである。
【００４６】
「試料」とは、組織生検、細胞、血液、血清、尿、便、または患者もしくは被験者から得られる他の標本を意味する。試料は分析されて、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする遺伝子中の変異、または前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを、当技術分野で周知の方法、または本明細書に記載された方法で例えば癌の進行を示すものとして検出される。例えば、患者試料に由来するＰＣＲ産物の配列決定、１本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）分析、または制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析などの方法を用いて前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする遺伝子上の変異を検出することが可能であり、ＥＬＩＳＡ法で前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドのレベルを測定することが可能であり、またＰＣＲで前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする核酸のレベルを測定することが可能である。
【００４７】
「薬学的に許容される担体」とは、投与対象化合物の治療的特性を保持しながら、治療対象の哺乳動物に対して生理学的に許容される担体を意味する。一つの例示的な薬学的に許容される担体は生理的食塩水である。他の薬学的に許容される担体およびその剤形は当技術分野で周知であり、例えばレミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）の「調剤の科学と実践（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ）」（第１９版）、Ａ．ゲナーロ（Ｇｅｎｎａｒｏ）編、１９９５、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルベニア州イーストンに記載されている。
【００４８】
薬物の投与量に関して、本明細書に記載される「治療的有効量」とは、特定の疾患に特徴的な症状を呈する個々の患者に合わせた、特定の量の薬学的に活性のある薬剤（例えば、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、核酸分子、または調節化合物）を投与することを指す。例えば、本発明の治療を受ける患者は前立腺癌に罹患している可能性がある。当業者であれば、投与薬剤の最適用量が個人によって変動することを認識すると思われる。個々の患者の投与量については、患者の身長、体重、吸収速度、および対象薬剤の代謝速度、治療対象疾患の病期、および併用投与されている他の薬剤を考慮すべきである。
【００４９】
「治療する」、または「治療」とは、疾患、病的症状、または疾患の治癒、低下、安定化、または予防を意図した患者の医学的管理を意味する。この用語は、積極療法、すなわち改善を特に意図した治療、または疾患、病的症状、もしくは疾患の治癒に関する治療法に加えて、原因療法、すなわち関連する疾患、病的症状、または疾患の原因の除去を意図した治療法も含む。また、この用語は姑息療法、すなわち疾患、病的症状、または疾患を治癒するというより症状の緩和を意図した治療法に加えて、予防療法、すなわち関連する疾患、病的症状、もしくは疾患の発生を最小化、または部分的もしくは完全に抑制することを意図とした治療法、さらには支援療法、すなわち関連する疾患、病的症状、または疾患の改善を意図した他の特定の治療法を補助するために用いられる治療法が含まれる。「治療」という用語にはまた、対症療法、すなわち、関連する疾患、病的症状、または疾患の全身症状を対象とした治療法も含まれる。
【００５０】
「前立腺または精巣の疾患」とは、外的要因、遺伝的素因、物理的もしくは化学的な外傷、またはこれらの組み合わせに起因する、生物体における前立腺または精巣の機能および／または構造の疾患を意味する。このような疾患には、前立腺細胞または精巣細胞の増殖が含まれる。「細胞の増殖」とは、類似の細胞の成長または再生を意味し、本発明では増殖を抑制する試薬、および増殖を促進する試薬を提供する。「増殖を抑制する」とは、類似の細胞の数を少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも５０％低下させることを意味する。「増殖を促進する」とは、類似の細胞の数を少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも５０％上昇させることを意味する。
【００５１】
本明細書に記載された試薬、例えばアンチセンスを発現するベクター、アンタゴニスト、または前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチド、または核酸分子の阻害物質を用いて、例えば前立腺細胞または精巣細胞の過剰な増殖を抑制することができる。前立腺細胞または精巣細胞において前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、または核酸分子の発現または活性をブロックすると癌細胞内の分子経路が変化することで、アポトーシス、すなわち死にゆく細胞が一連の十分解明された生化学的特徴（サイトレマル（ｃｙｔｏｌｅｍｍａｌ）小胞形成、細胞体の収縮、クロマチンの凝縮、およびＤＮＡのラダー形成など）を示す細胞死の過程が生じうる。
【００５２】
前立腺または精巣の疾患には、前立腺癌、良性前立腺肥大、急性前立腺炎、精巣癌、前立腺または精巣の発生異常（停留精巣、および牽引精巣または消失精巣など）が含まれる。
【００５３】
「増殖性疾患」とは、不適切に高いレベルの細胞分裂、不適切に低いレベルのアポトーシス、またはこれらの両方の結果生じる疾患を意味する。例えば、前立腺癌、精巣癌、リンパ腫、白血病、黒色腫、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、および肺癌などの癌はいずれも増殖性疾患の例である。
【００５４】
「調節する」、または「調節性」とは、本明細書に記載された前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子またはポリペプチドの発現または生物学的活性を低下または上昇させることで変化させることを意味する。任意のアッセイ法で調節化合物によりもたらされる調節の程度は変化するものの、当業者であれば、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子またはポリペプチドを調節する化合物を同定する生物学的活性のレベルの統計学的に有意な変化を判定することができると思われる。
【００５５】
本発明は、いくつかの利点を提供する。例えば本発明は、前立腺および精巣に関連した疾患、ならびに、本明細書に記載される試薬（例えばポリペプチド、核酸、抗体）の生物学的活性に感受性のある他の疾患および症状の診断および治療に使用可能な方法および試薬を提供する。本発明の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドは、前立腺および精巣で強く発現されることがわかっているので、これらのポリペプチドはまた、前立腺および精巣に関連した疾患を治療する治療法のスクリーニングに使用することもできる。このようなポリペプチドは他の組織でも発現されており、細胞増殖性疾患の治療法および診断法として使用することができる。
【００５６】
本発明の他の特徴および利点は、発明の詳細な説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになると考えられる。
【００５７】
発明の詳細な説明
正常な前立腺および精巣、ならびに前立腺癌および精巣癌の開始および進行の基礎的な生物学はまだほとんどわかっていない。したがって、これらの過程の基礎となる分子機構を明らかにすることが求められている。この目的を達成するために発明者らは、遺伝子産物が前立腺および精巣の正常な生理と病態生理の両方に重要な役割を果たす、前立腺および精巣で多く発現している遺伝子の同定、クローニング、特性解析を行った。このような遺伝子産物はまた、特定の遺伝子産物についてさまざまな程度の低い発現、またときには極めて高い発現がノーザン分析で検出可能な組織、例えば心臓、脳、肝臓、膵臓、腎臓、および結腸などにおける他の疾患にも重要な役割を果たしている。
【００５８】
本発明は、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドおよび核酸分子（下記参照）、ならびにこれらのポリペプチドおよび核酸分子を用いる診断法および治療法を提供する。本発明はまた、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドおよび核酸分子の生物学的活性を調節する化合物を同定する方法、ならびにこれらの化合物を用いる治療法も提供する。本発明の診断法、治療法、およびスクリーニング法について最初に説明した後に、これらの方法を実施するために用いられる一般的なアプローチについて説明する。そして最後に、本発明の方法を支持する実験結果を説明する。
【００５９】
バイオアッセイ法
前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドは、前立腺および精巣で発現されるほか、腎臓、膵臓、肝臓、肺、および結腸などの他の組織でも発現される。特定の細胞および組織における前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドの発現パターンを指標に、前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドが作用する細胞標的を同定すること、ならびに特定の前立腺および精巣に関連した疾患、例えば前立腺癌、精巣癌、良性前立腺肥大、急性前立腺炎、および精巣発生異常に関連する生物学的活性を同定することができる。
【００６０】
前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドの治療および診断における有用性は、例えばインビトロでバイオアッセイ法を実施することで同定される。前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドの発現パターンを、アンドロゲン受容体などの特定の受容体の分布とともに反映する培養系を選択する。例えばＬＮＣａＰ細胞はアンドロゲン受容体を発現し、また、さまざまなバイオアッセイ法で前立腺および精巣に特異的なポリペプチドの１種または複数のイソ型に反応する。前立腺および精巣に特異的なポリペプチド（例えば、ＳＴＭＰ１、ＳＳＨ９、ＰＳＬ２２）の活性は、増殖の抑制、アポトーシス、シグナル伝達（例えばキナーゼ活性の変化）、転写因子活性（例えばアンドロゲン受容体の転写因子活性）の変化、細胞内輸送、または細胞内情報伝達を含むがこれらに限定されないさまざまな用量反応アッセイ法で姉妹培養を用いて比較される。前立腺特異的および精巣特異的なポリペプチドの相対的な力価は、例えばタンパク質濃度を元に決定される。
【００６１】
前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子、ポリペプチド、および抗体を用いる診断法
前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子、ポリペプチド、および抗体が、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の変異、または不適当な発現が関わる疾患および症状を含むさまざまな疾患および症状の診断法またはモニタリング法に用いられる。前立腺特異的または精巣特異的な発現は、上述のようにさまざまな組織で明らかにされている。したがって、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群、またはその発現の異常の検出が、診断法、治療法、またはこのような組織における疾患発生のモニタリング法に用いられる。
【００６２】
本発明の診断法は、例えば、その病理を決定することで適切な治療経路の選択を促す目的で、前立腺または精巣に関連した疾患、例えば前立腺癌または精巣癌の患者に用いられる。この診断法はまた、前立腺または精巣に関連した疾患をまだ発症していないが、このような疾患を発症するリスクのある患者、またはこのような疾患の初期発症段階にある患者にも用いられる。前立腺または精巣に関連する多くの疾患は発生中に生じるので、本発明の診断法は、胎児または発生中の胚を対象に実施されることもある。また本発明の診断法は例えば、前立腺または精巣に関連する劣性変異の保有者である親を同定するための出生前遺伝子検査に用いられる。
【００６３】
本発明の診断法で検出される前立腺特異的または精巣特異的な異常には、例えば（ｉ）前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの異常、（ｉｉ）このようなポリペプチドの産生を生じる変異を含む、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群、および（ｉｉｉ）前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの異常な量の産生を生じる変異、によって特徴が明らかにされる異常が含まれる。
【００６４】
患者試料の前立腺特異的または精巣特異的な発現のレベルは、当技術分野で周知の任意のいくつかの標準的な手法で決定される。例えば、患者に由来する生物試料（例えば、血液、前立腺もしくは精巣の組織試料、または羊水）中における前立腺特異的または精巣特異的な発現を、標準的なノーザンブロット分析、または定量ＰＣＲでモニタリングする（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９９８；「ＰＣＲ技術：ＤＮＡ増幅の原理と応用（ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」、Ｈ．Ａ．Ｅｈｒｌｉｃｈ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州；Ｙａｐら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ． Ｒｅｓ、 １９：４２９４、１９９１を参照）。
【００６５】
患者から採取した生物試料を、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子における一つまたは複数の変異の有無に関してミスマッチ検出法で分析することができる。一般に、この方法では、患者試料に由来する核酸分子のＰＣＲ増幅を行った後に、ハイブリダイゼーションの変化、電気泳動ゲル上の移動度の異常、ミスマッチ結合タンパク質による結合もしくは切断を検出するか、または核酸分子配列を直接決定することで変異（すなわちミスマッチ）の同定を行う。このような手法をいずれも、変異型の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の検出を促すために使用することが可能であり、当技術分野で周知である。このような手法の例は例えば、オリタ（Ｏｒｉｔａ）ら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：２７６６〜２７７０、１９８９）により、およびシェフィールド（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ）ら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：２３２〜２３６、１９８９）により記載されている。
【００６６】
ミスマッチ検出法は、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子が関与する疾患発症の素因を症状発現前に診断する機会も提供する。例えば、正常な前立腺特異的または精巣特異的な生物学的活性または発現を抑制する、前立腺特異的または精巣特異的な変異をヘテロ接合でもつ患者は、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子に関連する疾患の臨床症状がみられない場合があるが、前立腺または精巣の疾患を発症する確率が正常より高い場合がある。このような診断の場合、患者に、有害環境因子に対する曝露を最小化して、医学的症状の慎重なモニタリング（例えば頻繁な理学的検査の実施）を行う予防措置をとることができる。上述の通り、この種の診断法を、出生前スクリーニングにおける前立腺特異的または精巣特異的な変異の検出に用いることもできる。
【００６７】
上述の前立腺特異的または精巣特異的な診断アッセイ法は、前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子が通常発現されている任意の生物試料（例えば、血液、前立腺もしくは精巣の組織試料、または羊水）を用いて実施することができる。変異型の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子を、このような供給源を被験試料として用いることで同定することもできる。あるいは、前立腺特異的または精巣特異的な変異を、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子が関わる疾患の素因を調べる診断の一部として、任意の細胞に由来するＤＮＡ試料を用いて、例えばミスマッチ検出法で検討することができる。ＰＣＲ増幅を行ってから、ＤＮＡ試料を分析することが好ましい。
【００６８】
本発明のさらに別の診断法では、イムノアッセイ法を用いて、生物試料中の前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の発現の検出またはモニタリングを行う。前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドに対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（後述）を任意の標準的なイムノアッセイ法フォーマット（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、またはＲＩＡ；例えば前述のＡｕｓｕｂｅｌらの文献を参照）を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド量を測定することができる。これらのレベルは、野生型の前立腺特異的または精巣特異的なレベルと比較される。例えば、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの産生の増加は、後期前立腺癌などの前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの生物学的活性の過剰発現が関わる状態に対する症状または素因を示す場合がある。
【００６９】
免疫組織化学的な手法を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを検出することもできる。例えば組織試料を患者から採取し、切片を作製し、前立腺特異的または精巣特異的な抗体（後述）、および任意の標準的な検出系（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体を含む系）を用いて前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの有無を判定するために染色を行う。このような手法に関する一般的な手引きは、例えばバンクロフト（Ｂａｎｃｒｏｆｔ）ら、「組織学的技術の理論と実践（Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、チャーチルリビングストン（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）、１９８２、およびアウスベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）らの文献（前述）に記載されている。
【００７０】
好ましい例においては、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の産生の評価（例えば、免疫学的手法またはタンパク質切断試験（ＰＴＴ）（Ｈｏｇｅｒｒｏｒｓｔら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １０：２０８〜２１２、１９９５）、およびより微細な前立腺特異的または精巣特異的な変異（例えば点変異）の同定を意図する核酸分子に基づく検出法の評価を含む複合型の診断法を用いることができる。上述の通り、いくつかのミスマッチ検出アッセイ法を当業者であれば利用することが可能であり、任意の好ましい手法を用いることができる。前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子上の変異は、前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドもしくは核酸分子の発現の喪失もしくは獲得、または正常な前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドもしくは核酸分子の生物学的活性の喪失もしくは獲得の結果を検出することができる。
【００７１】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸を用いて、前立腺癌の経過とＰＳＡ以外のマーカーとを相関させる、抗癌療法の経過のモニタリングを行う、または系内に含まれる腫瘍細胞を検出することができる。例えば、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードするＲＮＡについて事前に決定された量は、例えば生検で得られた腫瘍細胞の存在と相関する。全ＲＮＡを生検標本から抽出し、前立腺特異的または精巣特異的な配列に特異的なプライマー対による個々の反応を用いたリアルタイムの定量ｒｔ−ＰＣＲを、癌細胞を含まないことがわかっている生検標本と並行して行う。検出された前立腺特異的または精巣特異的なｍＲＮＡ量が対照標本のｍＲＮＡ量より少なくとも５倍多い場合に、生検標本は癌細胞を含むと判定する。全ＲＮＡの例示的な抽出には、ＢｉｏＲｏｂｏｔ ９６００系を備えたキアゲン（Ｑｕｉａｇｅｎ） ＢｉｏＲｏｂｏｔキットを用い、リアルタイムｒｔＰＣＲは、パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７７００で行う。
【００７２】
本発明の主題の別の局面においては、腫瘍細胞を検出する方法は、前立腺または精巣の組織に由来する生検組織に限定される必要はないが、リンパ腫の腫瘍細胞、およびさまざまな固形腫瘍細胞を含むさまざまな他の組織を、このような腫瘍細胞が前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドのｍＲＮＡを過剰に産生する限りにおいて用いうる。適切な他の腫瘍細胞は上述の方法で容易に同定することができる。同様に、この系は、哺乳動物に制限する必要はないが、インビトロで成長させた細胞および組織の培養物、ならびに哺乳動物以外の動物に由来する腫瘍細胞および試料も含む場合がある。例えば、インビトロで成長させた腫瘍細胞および組織は、このような細胞に対する薬剤作用の調査に有利に用いることが可能であり、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードする配列を、腫瘍マーカーとして好都合に利用することができる。あるいは、腫瘍細胞を含む場合もあれば含まない場合もある体液（例えば血清や唾液など）も、それらが前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドをコードするある程度のｍＲＮＡを含む限り、本明細書に記載された方法で用いられる適切な基質となる。
【００７３】
対象となる方法のさらに別の局面においては、ポリペプチド量は、組織が癌細胞を含むことを判定するために、対象標本より少なくとも５倍多い量に必ずしも制限されない。例えばポリペプチド濃度がホルモンに依存する場合、３倍〜８倍およびそれ以上の量が適切でありうる。これとは対照的に、生検標本に含まれる癌細胞の濃度が比較的低い場合、５倍未満の量（１．５倍〜４．９倍およびそれ未満を含む）が対象となる。
【００７４】
検出過程には、蛍光検出、発光検出、シンチグラフィー、オートラジオグラフィー、および色素形成を含めることができる。例えば生検標本の顕微鏡的分析では、ルシフェラーゼで標識したプローブを、発光基質（例えばルシフェリン）に結合させることが、特に有利である。次に発光の定量を、ＣＣＤカメラおよび画像解析系を用いて行うことができる。同様に液体中の、または固相支持体上の組織切片を対象としたオートラジオグラフィーまたはシンチグラフィー手法で放射能を検出することができる。プローブが、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの天然リガンドまたは合成リガンドの場合、このようなリガンドには、ポリペプチドとの親和性を上昇するように、および／またはポリペプチドに対する不可逆的な結合を誘導するように化学的に修飾された分子群を含めることができる。例えば、このようなポリペプチドによって触媒される特定の反応に対する遷移状態の類似体または細胞死阻害物質が特に対象となる。抗体、抗体断片、小分子の標識、および標識物の結合は当技術分野で周知の手法であり、既知のすべての方法は、本明細書で対象となる方法に関する使用に一般に適している。またプローブは、フルオレセインで標識された抗体に制限される必要がなく、また別のプローブは抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦａｂなど）を含む。
【００７５】
さらに別の意図される変法には、配列上の１個または複数の原子または官能基と、放射性の原子または官能基との置換が含まれる。例えばｃＤＮＡがハイブリダイゼーションに特異的なプローブとして用いられる場合、フルオロフォアまたは酵素（例えば色素生成用のβ−ガラクトシダーゼ、または発光用のルシフェラーゼ）を配列に結合させることで、相補的配列の位置および／または量を同定することができる。あるいは、対象ｃＤＮＡを親和的単離法に用いる場合、ｃＤＮＡを、ビオチンまたはオリゴヒスチジンタグなどの高親和性（すなわちＫｄ＜１０−４ ｍｏｌ−１）の相手を有することが既知の分子に結合させることができる。別の例では、一つまたは複数のリン酸基を、３２Ｐまたは３３Ｐの同位体を含む放射性リン酸基と交換することで、放射標識されたｃＤＮＡをハイブリダイゼーション用のプローブとして用いることで、検出および定量を支援することができる。
【００７６】
前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子、ポリペプチド、および抗体を用いる治療法
本発明は、前立腺特異的または精巣特異的な疾患の治療法または予防法を含む。治療法は、前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子欠損、または不適当もしくは過剰な前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子発現を迂回する、または克服することで、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子またはタンパク質の欠損が関わる状態を調節、および可能であれば緩和するように設計される。さまざまな治療法を考慮する際に、このような治療法が好ましくは、罹患した器官または罹患する恐れのある器官（例えば前立腺または精巣）を標的とすることは明らかである。前立腺特異的または精巣特異的な生物学的活性を調節する際に用いられる試薬には、完全長の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド；前立腺特異的または精巣特異的なｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはアンチセンスＲＮＡ；前立腺特異的または精巣特異的な抗体；および前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子の生物学的活性、発現、または安定性を調節する任意の化合物を含めることができるがこれらに限定されない。
【００７７】
変異型の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子によって生じる疾患の治療または予防は例えば、変異型の前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子を正常な前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子と置換することで、正常な前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子を投与することで、変異型の前立腺特異的もしくは精巣特異的なタンパク質の機能を調節することで、正常な前立腺特異的もしくは精巣特異的なタンパク質を適切な細胞に輸送することで、または正常もしくは変異型の前立腺特異的もしくは精巣特異的なタンパク質の量を変化させることで達成される。また、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子欠損を修正して、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質が関与する生理学的経路（例えば細胞内輸送経路）を修飾することも可能である。
【００７８】
変異タンパク質を正常タンパク質に置換するためには、または、十分なもしくは正常な前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子タンパク質を発現していない細胞にタンパク質を添加するためには、大量の純粋な前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質を、対象タンパク質が発現している培養細胞系から得ることが必要な場合がある（例えば後述参照）。タンパク質の罹患組織への輸送は、適切なパッケージング系または投与系を用いることでその後達成できる。あるいは、前立腺特異的または精巣特異的な分子のアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する小分子類似体を投与することで、所望の生理学的効果を得ることができる（後述参照）。
【００７９】
遺伝子治療は、前立腺または精巣に特異的な遺伝子欠損によって生じる疾患を予防する、または緩和する別の治療法である。野生型の前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質をコードする核酸分子は、十分正常な前立腺特異的または精巣特異的な生物学的活性を欠く細胞（例えば前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群に変異を有する細胞）に輸送可能である。核酸分子は、それらが細胞に取り込まれて、有効な前立腺特異的または精巣特異的な機能をもたらすために十分な量のタンパク質が産生されるような形式でこれらの細胞に送達されなければならない。あるいは、一部の前立腺特異的または精巣特異的な変異の場合、遺伝子上に第２の変異を有する別のコピーの相同遺伝子を導入して得られる疾患の進行を遅らせたり前立腺特異的もしくは精巣特異的な活性を調節すること、対象となる変異を変化させること、または、別の遺伝子を用いて任意の負の作用をブロックすることが可能な場合がある。
【００８０】
レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルスのベクターを導入することは、体細胞を対象とした遺伝子治療に用いることができる。これは特に、感染効率ならびに安定な組込みおよび発現の効率が高いためである（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：４２３〜４３０、１９９７；Ｋｉｄｏら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：８３３〜８４４、１９９６；Ｂｌｏｏｍｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６６４１〜６６４９、１９９７；Ｎａｌｄｉｎｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３〜２６７、１９９６；およびＭｉｙｏｓｈｉら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：１０３１９〜１０３２、１９９７を参照）。例えば、完全長の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子、またはその一部をレトロウイルスベクターにクローニングして、その内因性プロモーターから、レトロウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）から、または対象標的細胞（大動脈細胞または他の血管細胞など）に特異的なプロモーターのいずれかから発現を開始させることができる。使用可能な他のウイルスベクターは例えば、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、またはヘルペスウイルス（エプスタイン・バーウイルスなど）を含むことができる（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １５〜１４、１９９０；Ｆｒｉｅｄｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５〜１２８１、１９８９；Ｅｇｌｉｔｉｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６０８〜６１４、１９８８；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １：５５〜６１、１９９０；Ｓｈａｒｐ、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ３３７：１２７７〜１２７８、１９９１；Ｃｏｒｒｅｔｔａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３６：３１１〜３２２、１９８７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２６：４０１〜４０９、１９８４；Ｍｏｅｎ、 Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ １７：４０７〜４１６、１９９１；またはＭｉｌｌｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：９８０〜９９０、１９８９に記載されたベクターも参照）。レトロウイルスベクターは特によく開発されており、臨床の場で用いられている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ ３２３：３７０、１９９０；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号）。
【００８１】
遺伝子導入を、カルシウムリン酸法、ＤＥＡＥデキストラン法、エレクトロポレーション法、プロトプラスト融合法、およびリポソーム法を含むがこれらに限定されない、任意の標準的な手法によるインビトロにおけるトランスフェクションを含む非ウイルス的手法を用いて達成することもできる。患者の罹患組織への正常遺伝子の移植は、正常な前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子を、培養可能な細胞にエクスビボで移した後に、細胞（またはその子孫）を標的組織に注入することにより達成することもできる。遺伝子治療を用いて前立腺特異的または精巣特異的な機能を抑制する他の方法には、前立腺特異的もしくは精巣特異的な抗体、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な抗体の一部を細胞内で発現させる方法などがある。例えば、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドに特異的に結合し、かつその生物学的活性を阻害するモノクローナル抗体をコードする遺伝子（または遺伝子断片）を、組織特異的な遺伝子調節配列の転写制御下に配置する。別の治療法では、前立腺特異的または精巣特異的な組換えポリペプチドを、罹患する恐れのある組織部位または実際に罹患した組織部位に（例えば注入により）直接投与するか、または（例えば任意の従来の組換えタンパク質投与法により）全身に投与する。前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの投与量は、個々の患者の大きさおよび健康状態を含むいくつかの因子の影響を受けるが、一般には１日あたり約０．００６ ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ ｍｇ／ｋｇが、任意の薬学的に許容される剤形で成体に投与される。
【００８２】
非ウイルス的な方法を用いて、治療用ＤＮＡを、前立腺特異的または精巣特異的な疾患が関わる疾患が発症すると予測される細胞内に導入することもできる。例えば、前立腺特異的もしくは精巣特異的な核酸分子、またはアンチセンスの核酸分子を、リポフェクション法（Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４：７４１３、１９８７；Ｏｎｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７：２５９、１９９０；Ｂｒｉｇｈａｍら、Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｓｃｉ． ２９８：２７８、１９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １０１：５１２、１９８３）、アシアロオロソムコイド−ポリリシン接合法（Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３：１４６２１、１９８８；Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６４：１６９８５、１９８９）、または、それほど好ましくはないものの、外科的条件下におけるマイクロインジェクション法（Ｗｏｌｆｆら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５、１９９０）で細胞に導入することができる。
【００８３】
遺伝子治療法に用いられる前立腺特異的または精巣特異的なｃＤＮＡの発現は、任意の適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインのプロモーター）から誘導することが可能であり、任意の適切な哺乳動物の調節配列によって調節することができる。例えば、望ましいならば、特定の細胞で遺伝子発現を選択的に誘導することが知られているエンハンサーを用いることで、前立腺特異的または精巣特異的な発現を誘導することができる。使用されるエンハンサーには、組織または細胞に特異的なエンハンサーとして特徴づけられるエンハンサーが含まれうるが、これらに限定されない。あるいは、前立腺特異的または精巣特異的なゲノムクローンを、治療用構築物（このようなクローンを前立腺特異的または精巣特異的なｃＤＮＡを用いたハイブリダイゼーションで同定できる、前述）として用いることができれば、調節は、同種の調節配列によって、または望ましいならば、上述の任意のプロモーターまたは調節配列を含む異種供給源に由来する調節配列によって仲介して行うことができる。
【００８４】
アンチセンスに基づく戦略を、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子機能を調べるためおよび、治療薬を設計する基礎として用いることができる。これらの戦略は、配列特異的な（転写または翻訳を介する）遺伝子発現の抑制が、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡと相補的アンチセンス種との細胞内ハイブリダイゼーションによって達成可能であるという原理に基づいている。ハイブリッドＲＮＡ二重鎖が形成すると、標的となる前立腺特異的もしくは精巣特異的なコードゲノムＤＮＡ分子の転写、または標的となる前立腺特異的もしくは精巣特異的なｍＲＮＡ分子のプロセシング、輸送、翻訳、もしくは安定性が妨害される。
【００８５】
アンチセンス戦略を、さまざまなアプローチによって実施することができる。例えば、アンチセンスのオリゴヌクレオチド、またはアンチセンスのＲＮＡを、細胞へ取り込まれる状態で被験者に直接導入（例えば静脈内注射）することができる。あるいは、アンチセンスＲＮＡ（またはアンチセンスＲＮＡの断片）をコードするウイルスベクターまたはプラスミドベクターを細胞内にインビボまたはエクスビボで導入することができる。アンチセンスによる効果は、対照（センス）配列によって誘導可能であるが、表現型の変化の程度は非常に変化しやすい。アンチセンスによる効果によって誘導される表現型にもたらされる効果は、タンパク質量、タンパク質の活性測定値、および標的ｍＲＮＡ量などの基準値の変化に基づく。
【００８６】
例えば、前立腺または精巣に特異的な遺伝子治療は、前立腺特異的または精巣特異的なアンチセンスｍＲＮＡを、野生型または変異型の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの発現によって有害な影響を受けると予想される細胞に直接投与することでも達成できる。アンチセンスの前立腺特異的または精巣特異的なｍＲＮＡを、任意の標準的な手法で作製および単離することができるが、高効率プロモーター（例えばＴ７プロモーター）の制御下に配置したアンチセンスの前立腺特異的または精巣特異的なｃＤＮＡを用いたインビトロ転写法で最も容易に作製することができる。アンチセンスの前立腺特異的または精巣特異的なｍＲＮＡの細胞への投与は、上述のような直接的な核酸分子導入法の任意の方法で実施することができる。
【００８７】
遺伝子治療を用いて前立腺または精巣に特異的な機能を抑制する別の戦略には、前立腺特異的もしくは精巣特異的な抗体、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な抗体の一部の細胞内発現などがある。例えば、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドに特異的に結合してその生物学的活性を抑制するモノクローナル抗体をコードする遺伝子（または遺伝子断片）を、組織特異的な遺伝子調節配列の転写制御下に配置することができる。
【００８８】
本発明に含まれる別の治療法では、組換え型の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを、罹患する可能性がある組織部位、または実際に罹患した組織部位に直接（例えば注射により）投与するか、または全身的に（例えば任意の従来の組換えタンパク質投与法で）投与する。前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの投与量は、個々の患者の大きさおよび健康状態を含むいくつかの因子の影響を受けるが、一般には１日あたり０．１ ｍｇ〜１００ ｍｇが、任意の薬学的に許容される剤形で成体に投与される。
【００８９】
前立腺特異的もしくは精巣特異的な変異遺伝子、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な疾患を有すると診断された患者、あるいは、前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子変異、前立腺特異的もしくは精巣特異的な異常なポリペプチドもしくは核酸分子の発現（たとえ変異または発現パターンが前立腺特異的または精巣特異的な発現または生物学的活性に異常を未だ生じないとしても）、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な疾患に感受性があると診断された患者では、上述の任意の治療を、疾患表現型が発現する前に実施する。また、前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドもしくは核酸分子の発現、または前立腺特異的もしくは精巣特異的なポリペプチドもしくは核酸分子の生物学的活性を調節することを示す化合物を、罹患する恐れのある患者または実際に罹患している患者に、任意の標準的な投与量および投与経路で投与する。あるいは、前立腺特異的または精巣特異的なアンチセンスｍＲＮＡの発現構築物を用いた遺伝子治療を行うことで、完全な疾患発症が始まる前に遺伝子欠損を逆転または予防することができる。
【００９０】
本発明の治療法は、いくつかの場合においては出生前治療を標的としている。例えば、前立腺特異的または精巣特異的な変異を有することがわかっている胎児に、前立腺特異的または精巣特異的な正常遺伝子を含む遺伝子治療用ベクターを投与する、または正常な前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質を投与する。このような治療は、わずかな時間しか必要としない場合もあれば、状況によっては患者の生涯を通して行う必要もある。しかし治療の継続を必要とするか否かは、例えば上述の診断法を用いて決定される。また上述の通り、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、または核酸分子の異常は、成人における疾患と関連しうるので、成人も本発明の治療法の対象となる。
【００９１】
さらに、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを用いて、例えば前立腺癌細胞に対する免疫を生じやすくするために免疫系を高めることもできる。
【００９２】
本発明の方法を用いて、本明細書に記載された任意の哺乳動物（例えばヒト、ペット、または家畜）に生じた疾患の診断または治療を行うことができる。非ヒト哺乳動物を治療または診断する場合は、使用する前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、核酸分子、または抗体は、好ましくは対象種に特異的なものである。
【００９３】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子の、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子によって調節される生物学的活性を調節する分子の同定
（本明細書に記載される）前立腺特異的または精巣特異的なｃＤＮＡの単離もまた、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子の生物学的活性を上昇または低下させる分子群の同定を促進する。同様に、活性が前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子の生物学的活性によって調節される分子群を同定することができる。一つの方法では、さまざまな濃度の候補分子を、前立腺特異的または精巣特異的なｍＲＮＡを発現する細胞の培養物に添加する。そして次に前立腺特異的または精巣特異的な生物学的活性を標準的な手法で測定する。生物学的活性の測定には、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質および核酸分子の発現レベルの測定、アンドロゲンに対する応答の測定、または細胞内における局在および輸送の測定が含まれるがこれらに限定されない。
【００９４】
望ましいならば、候補調節因子が発現に及ぼす作用も、同じ一般的な方法および標準的な免疫学的検出法（前立腺特異的または精巣特異的な抗体（後述）を用いたウェスタンブロッティング、または免疫沈降法など）を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質産生のレベルで測定することができる。
【００９５】
上述の方法でスクリーニング対象となる被験化合物は、化学物質でも、天然物質でも、または人工的に作製されたもののいずれでもよい。このような化合物には例えば、ポリペプチド、合成有機分子、天然有機分子、核酸分子、およびこれらの成分などが含まれるがこれらに限定されない。候補となる前立腺特異的または精巣特異的な調節因子には、ペプチド分子ならびに非ペプチド分子（例えば、細胞抽出物、哺乳動物の血清、または哺乳動物細胞を培養している増殖培地中に見出されるペプチド分子または非ペプチド分子）が含まれる。
【００９６】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子、ならびに、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子の合成および機能の調節因子の投与
前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質、核酸分子、または調節因子を、薬学的に許容される希釈物、担体、または賦形剤に含まれる状態で、単位投与量を患者または実験動物に投与する。また従来の薬学的な処置を用いて、前立腺特異的もしくは精巣特異的な中和抗体、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な抑制性化合物（例えば、前立腺特異的もしくは精巣特異的なアンチセンス分子、または前立腺特異的もしくは精巣特異的な優性的に負の変異体）を、前立腺癌、精巣癌、良性前立腺肥大、または前立腺もしくは精巣の発生疾患などの前立腺特異的もしくは精巣特異的な疾患に罹患した患者に投与する適切な製剤または組成物を提供する。投与は、患者が症状を呈する前または後に始めることができる。
【００９７】
任意の適切な投与経路を採用することが可能であり、例えば投与は、非経口的、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼内、脳室内、関節内、髄腔内、大槽内、腹腔内、鼻腔内へ、肺深部への吸入、エアロゾル、坐薬使用、経口的、または局所的（例えば皮膚に浸透して血流に入る製剤を含む接着性パッチの貼付）であることができる。投与は、前立腺組織または精巣組織などの罹患組織に局所的であることが好ましい。治療用の剤形は、液状または懸濁液状とすることが可能であり、経口投与用には剤形は錠剤またはカプセル剤とすることが可能であり、また鼻腔内注入する剤形には粉末、点鼻薬、またはエアロゾルとすることが可能である。上記の任意の剤形は、徐放性の製剤であってよい。
【００９８】
製剤を作製する当技術分野で周知の方法は、例えば「レミントン薬理学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルベニア州イーストンに記載されている。非経口投与用の剤形は例えば、滅菌水もしくは生理食塩水；ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール；植物油；または水素化ナフタレンなどの賦形剤を含む場合がある。徐放性で生体適合性があり、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコライド共重合体、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体を用いて化合物の放出を制御することができる。前立腺特異的または精巣特異的な調節化合物用の、有用であると考えられる他の非経口的輸送系には、エチレン−ビニル酢酸共重合体粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入システム、およびリポソームなどが含まれる。吸入用の製剤には、例えば乳糖などの賦形剤が含まれうるほか、例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸、およびデオキシコール酸を含む水溶液とすることができるほか、点鼻薬またはゲル剤として投与する油性溶液とすることができる。
【００９９】
前立腺特異的または精巣特異的な断片
前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質のさまざまな部分を含むポリペプチド断片は、タンパク質間相互作用および転写などの生物学的活性に重要な役割を果たすドメインの同定に有用である。本明細書に記載されたヌクレオチド配列を用いて、このような断片を作製する方法は当技術分野で周知である（例えばＡｕｓｕｂｅｌらの前述の論文を参照）。例えば前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の断片は、前立腺特異的または精巣特異的な所望の核酸分子断片を、前立腺特異的または精巣特異的な核酸配列を元に設計したオリゴヌクレオチドプライマーを用いてＰＣＲ増幅することで作製することができる。オリゴヌクレオチドプライマーは、増幅後の断片の、発現ベクター（例えば哺乳動物の発現ベクター、上記参照）のクローニング部位への挿入を可能とする固有の制限酵素切断部位を含むことが好ましい。次にこのベクターを、本明細書に記載された当技術分野で周知のさまざまな任意の方法で細胞（例えば哺乳動物細胞；上記参照）に人工的に導入し、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド断片を、この発現ベクターを含む細胞内に産生させる。
【０１００】
前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド断片（例えばキメラの融合タンパク質）を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドのさまざまな領域に特異的な抗体を産生させることもできる。好ましい前立腺特異的または精巣特異的な断片には、ＳＴＭＰ１のＮ末端ドメイン（アミノ酸１位〜２００位）、Ｐ５ＣＲドメイン、およびそれらの断片を含む断片が含まれるがこれらに限定されない。
【０１０１】
前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質、ポリペプチド、およびポリペプチド断片の合成
分子生物学分野の当業者であれば、さまざまな発現系を用いて組換え型の前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質を作製することができることを理解すると思われる。用いられる宿主細胞の種類は本発明に重要ではない。前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質は、原核生物の宿主（例えば大腸菌）、または真核生物の宿主（例えば出芽酵母（Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、Ｓｆ９細胞などの昆虫細胞、ＣＯＳ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＣＨＯ、またはＨｅＬａ細胞などの哺乳動物細胞）中で作製することができる。これらの細胞は例えば米国菌培養収集所（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）メリーランド州ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）（Ａｕｓｕｂｅｌら、「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９９８も参照）から市販されている。形質転換の方法、および発現用輸送体（例えば発現ベクター）の選択は、選択される宿主系によって決まる。形質転換およびトランスフェクションの方法は、例えばアウスベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら、「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９９８に記載されており、発現用輸送体は例えば、パウエルズ（Ｐｏｕｗｅｌｓ）ら、「クローニングベクター：実験室マニュアル（Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）」、１９８５、補遺、１９８７に記載されたものから選択することができる。
【０１０２】
前立腺特異的または精巣特異的な核酸分子の特徴は、このような遺伝子群を、さまざまな細胞に導入することで、またはインビトロにおける細胞外の系を用いて分析される。次に、このような細胞または系で作られる前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の機能をさまざまな生理学的条件で調べる。また生化学的特性解析、大規模生産、抗体産生、および患者の治療に用いる前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の精製を可能とする、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子産物を過剰発現する細胞系を作製することができる。
【０１０３】
本発明のポリペプチドはインビボまたはインビトロで作製することが可能であり、また化学的に、および／または酵素を用いて修飾することができる。このようなポリペプチドは、ホルモン依存性の状態にある場合もない場合もある前立腺組織または前立腺癌細胞から単離することができる。あるいは、また特に大量（すなわち＞１０ ｍｇ）が望ましい場合、組換え体の（例えば、細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞系における）産生を有利に用いて、かなりの量の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドを作製することができる。
【０１０４】
さらに、組換え体の産生は、本発明のポリペプチドを作製する、より経済学的な方法を提供するだけでなく、特定の生化学的、触媒的、および物理的な性質に合わせたアミノ酸配列および組成の特異的な修飾も可能とする。例えば可溶性が高いことが望ましい場合、１個または複数の疎水性アミノ酸を親水性アミノ酸と置換するとよい。あるいは、触媒活性を上昇または低下させる必要がある場合は、１種または複数のアミノ酸を置換または除去するとよい。
【０１０５】
さらに別の例では、本発明のポリペプチドは、例えば、酵素学的に活性な相手（例えば色素形成用、または基質変換用）、およびＧＦＰ、ＥＧＦＢ、ＢＦＰなどの蛍光性の相手との融合体を含む融合タンパク質として合成することができる。
【０１０６】
対象となるポリペプチドの化学的および酵素学的な修飾に関しては、一機能性（ｍｏｎｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）および二機能性（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）のリンカーの付加、タンパク質性および非タンパク質性の巨大分子との結合、およびグリコシル化を含む多くの修飾が適切である。例えば一機能性および二機能性のリンカーは、ポリペプチドを固相支持体に固定する場合に、または対象ポリペプチドの免疫原性を高める分子に共有結合させる場合（例えばＫＬＨまたはＢＳＡとの結合）に特に有利である。あるいは、このようなポリペプチドを抗体または抗体断片に結合させることで、分子混合物からポリペプチドを速やかに回収することができる。他の結合には、血清中の半減期を延長させ、および／または免疫源性を低下させる分子（シクロデキストリンおよびポリエチレングリコールなど）とポリペプチドとの共有結合の形成および非共有結合の形成などがある。
【０１０７】
前立腺特異的または精巣特異的な抗体の利用
前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質に対する抗体を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質を検出する、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質の生物学的活性を抑制することができる。例えば、抗体または抗体の一部をコードする核酸分子を細胞内で発現させて、前立腺特異的または精巣特異的な機能を抑制することができる。また、このような抗体に、診断用または治療用に放射性核種やリポソームなどの化合物を結合させることができる。前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドの活性を抑制する抗体は、野生型または変異型の前立腺特異的もしくは精巣特異的な遺伝子の不適当な発現に起因する疾患発生の予防または遅延にも有用でもある。例えば本発明の抗体を用いて、前立腺または精巣の組織切片における（例えば前立腺癌または精巣癌における）疾患特異的なマーカーの位置を決めたり、局所定量を行うことができる。
【０１０８】
前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子発現の検出
既に記載した通り、上述の抗体を用いて、前立腺特異的または精巣特異的なタンパク質発現のモニタリングを行うことができる。ＲＮＡのインサイチューハイブリダイゼーションを行うことで、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の発現を検出することができる。ＲＮＡインサイチューハイブリダイゼーション手法は、個々の細胞または組織に含まれる細胞ＲＮＡに対する特異的に標識した核酸プローブのハイブリダイゼーションを元にしている。したがってＲＮＡインサイチューハイブリダイゼーションは、組織または時間に特異的な遺伝子発現を調べる強力な方法である。この方法では、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の固有の部分に対応するオリゴヌクレオチド、クローニングされたＤＮＡ断片、またはクローニングされたＤＮＡ断片のアンチセンスＲＮＡ転写物を用いて、例えばマウスなどの動物組織に含まれる特定のｍＲＮＡ種を、さまざまな発生段階において検出する、または腫瘍の進行のモニタリングを行う。他の遺伝子発現検出法は当技術分野で周知であり、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子発現の検出に使用することができる。
【０１０９】
付加的な前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の同定
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびＤＮＡハイブリダイゼーション、ならびにＳＳＨおよび本明細書に記載された他の手法などの標準的な手法を用いて、他の種で前立腺特異的または精巣特異的な相同物を、およびヒトにおける他の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群をクローニングすることができる。前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子および相同物は、ヒトの前立腺特異的または精巣特異的なプローブまたはプライマーを用いたストリンジェンシーを落としたＤＮＡハイブリダイゼーション、またはストリンジェンシーを落としたＰＣＲを行って容易に同定することができる。ヒトの前立腺特異的または精巣特異的なアミノ酸をコードする縮重プライマーを用いるＲＴ−ＰＣＲにより付加的な前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子および相同物をクローニングすることができる。
【０１１０】
他の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群には、病的な前立腺または精巣（例えば、前立腺癌、良性前立腺肥大、または精巣癌）に関わるさまざまな成長期および発生期で発現される遺伝子群、および薬剤療法の結果発現される遺伝子群が含まれる。
【０１１１】
トランスジェニック動物およびノックアウト動物の構築
前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子群の特性を解析することで、相同組換えによる前立腺特異的または精巣特異的なノックアウト動物モデルの開発を可能とする情報が得られる。好ましくは、前立腺特異的または精巣特異的なノックアウト動物は哺乳動物、最も好ましくはマウスである。同様に、前立腺特異的または精巣特異的な過剰発現の動物モデルは、一つまたは複数の前立腺特異的または精巣特異的な配列を標準的なトランスジェニック手法で動物ゲノムに組み込むことによって作製することができる。また、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子変異（例えば優性遺伝子変異）の作用は、変異型の前立腺特異的または精巣特異的な導入遺伝子を有するトランスジェニックマウスを用いて、またはそのような変異を標準的な相同組換え法で内因性の前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子に導入することで調べることができる。
【０１１２】
ノックアウトモデルの作製に使用可能な置換型標的ベクターは、例えば１２９／Ｓｖ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｉｎｃ．、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）などのマウス系列に由来するアイソジェニックなゲノムクローンを用いて構築することができる。標的ベクターを、適切に抽出した胚性幹（ＥＳ）細胞系にエレクトロポレーション法で導入することで、前立腺特異的または精巣特異的な遺伝子の大きな切断型を有するＥＳ細胞系を作製することができる。キメラの初代マウスを作製するためには、標的細胞系をマウスの胞胚期胚に注射する。ヘテロ接合の子孫どうしを交配してホモ接合の個体を作製することができる。前立腺特異的または精巣特異的なノックアウトマウスは、胚発生および疾患において前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドおよび核酸分子の果たす役割を調べるためのツールとなる。また、このようなマウスは、インビボにおいて、前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子に依存した経路、または前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドまたは核酸分子が影響を受けた経路が関わる疾患または状態を緩和させる治療化合物を検討するための手法となる。
【０１１３】
動物モデル
本発明の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチドやアンチセンス化合物などを、前立腺または精巣の疾患の動物モデルで用いることで、本発明の治療法、診断法、およびスクリーニング法を検討することもできる。トランスジェニックマウスの例示的な前立腺癌モデルはＴＲＡＭＰと呼ばれ、ＳＶ４０のラージＴ抗原が前立腺に対する標的とされている（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ ９２、３４３９〜３４４３、１９９５）。別の試験系には、当技術分野で周知であり、また本明細書に記載されているＣＷＲ２２（アンドロゲン依存性）およびＣＷＲ２２Ｒ（アンドロゲン非依存性）の異種移植片がある。このような異種移植片の成長、ＰＳＡ分泌、転移などは、本発明の前立腺特異的または精巣特異的なポリペプチド、核酸分子、および他の化合物の有無をモニタリングすることができる。他の動物モデルには、例えば、他の種類の癌、または免疫不全動物（例えばヌードマウス）の動物モデルを使用することもできる。
【０１１４】
以下に挙げる実施例は、当業者が本発明ならびにその原理および利点をより適切に理解することを助けるために紹介する。これらの実施例は、本発明を説明するものであって、本発明の範囲を制限しない。
【０１１５】
実施例１
前立腺特異的および精巣特異的な遺伝子群の抑制サブトラクション（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ）およびＰｚｅｒｏへのサブクローニング
１０種の異なる正常なヒト組織のポリＡ＋ ＲＮＡに由来するｃＤＮＡを、正常なヒト前立腺のｃＤＮＡに対して、抑制サブトラクションハイブリダイゼーション（ＳＳＨ）（Ｄｉａｔｃｈｅｎｋｏ、Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９３、６０２５〜６０３０、１９９６）により差し引き、得られたｃＤＮＡ断片を適切なベクターにクローニングした。ＳＳＨは、正常なヒト組織（心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、脾臓、胸腺、および卵巣）から回収されたポリＡ＋ ＲＮＡのプールに対する前立腺のポリＡ＋ ＲＮＡを用いて文献記載の手順で行った（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ＰＣＲ−Ｓｅｌｅｃｔ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ）。二次ＰＣＲ増幅（１２サイクル）を行う際、反応物をフェノール／クロロホルムで抽出し、ＤＮＡをエタノールで沈殿させ、ペレットを７０％エタノールで洗浄した。乾燥後にＤＮＡペレットを０．２×ＴＥまたはＭＱ ｄＨ２Ｏに溶解し、２０ μｌの反応液中で３７℃で２時間かけてＲｓａＩで切断してアダプターを切り出した。切断後、反応物を１．５％のアガロースゲルに、同じゲルの別のレーンにアプライした分子量マーカーとともに５ Ｖ／ｃｍで４０分かけて泳動した。この際、ゲルを短波長の紫外光に曝さないように注意した。アダプターのバンドを切り出し、ゲルを５ Ｖ／ｃｍで１５分間、逆電場中で泳動してｃＤＮＡのバンドを濃縮した。
【０１１６】
このゲルを可視化（長波長の紫外光）し、増幅された１００ ｂｐ〜１ ｋｂのｃＤＮＡを切り出した。このＤＮＡをＱＡＩＥＸゲルＤＮＡ精製キットで精製した。精製したＤＮＡを、ＥｃｏＲＶで切断して脱リン酸化したｐＺＥＲＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。連結反応は、５％ ＰＥＧ、１×Ｔ４リガーゼ緩衝液の存在下で最終用量１０ μｌ中で３７℃で一晩行い、１ μｌの連結混合物（ＰＳＬ）の１／５の希釈液をＤＨ１０Ｂのエレクトロコンピテント細胞（効率は＞１０１０）または同等物に導入した。コロニーを選択してｃＤＮＡの挿入片があることを確認した。このために、コロニーから直接、Ｔ７およびＳＰ６をプライマーとしてＰＣＲを行った。１０％の反応物を１．５％のアガロースゲルに泳動し、増幅産物を可視化した。挿入片を有するコロニーを増殖させてグリセロールストック（１５％）を作製して−８０℃で保存した。
【０１１７】
実施例２
リバースノーザンブロットおよび配列解析
ＰＳＬ中のアンドロゲン応答遺伝子をクローニングするためにリバースノーザン手法を用いた（Ｈｅｄｒｉｃｋ、Ｓ．Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３０８、１４９〜１５３、１９８４；Ｓａｋａｇｕｃｈｉ、Ｎ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ ５：２１３９〜２１４７、１９８６）。この手法では、比較対象の２つの細胞集団から作製したＲＮＡを用いてｃＤＮＡプローブを作製した後に、２種の同一なクローン群とハイブリダイズさせた。このためにＰＳＬクローンをＰＣＲで増幅し、９６ウェルのフォーマットでナイロンフィルター上にスポットして、各セットが９２クローンからなる２つの同一なブロットを作製した（残りの４スポットは正負の対照用に用いた）。プローブを作製するために、アンドロゲンに応答する前立腺癌細胞系ＬＮＣａＰを使用し（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚ、Ｊ．Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、４３、１８０９〜１８１８、１９８３）、残りは未処理（（−）プローブ）のままとするか、または合成アンドロゲンＲ１８８１で２４時間かけて処理した（（＋）プローブ）。ポリＡ＋ ＲＮＡをこの細胞から単離し、３２Ｐ標識プローブの作製に用いた。（−）プローブおよび（＋）プローブとのハイブリダイゼーションを行った後に、異なるハイブリダイゼーションを示したクローンを選択してさらに分析した（２次的なリバースノーザンブロット、およびノーザンブロットによる確認）。
【０１１８】
ｃＤＮＡクローンに対するリバースノーザンスクリーニングは、基本的に文献に記載された手順を一部改変して行った（Ｈｅｄｒｉｃｋ、Ｓ．Ｍ．ら、前述；Ｓａｋａｇｕｃｈｉ、Ｎ．ら、前述）。段階６のＰＣＲ増幅物に由来するＤＮＡ（約４００ ｎｇ）を、２００ μｌの０．４ Ｍ ＮａＯＨ、１０ ｍＭ ＥＤＴＡで希釈し、ピペット操作によって十分混合した。９５℃で５分間〜１０分間インキュベートした後に試験管を氷中で冷却した。変性ＤＮＡを、２枚の別のＺｅｔａ Ｐｒｏｂｅ ＧＴ＋ メンブレン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上に、ドット−ブロット装置（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いてブロットした。陽性対照（前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）のｃＤＮＡ）および陰性対照（グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）のｃＤＮＡ）のコロニーを各ブロット上（下の右側）に２個含めた。このメンブレンを２×ＳＳＣで洗浄して風乾した後に８０℃で３０分間加熱した。例示的なリバースノーザン分析を図１に示す。ここで、（−）ブロット（非刺激細胞から調製したプローブ）と比較して（＋）ブロット（アンドロゲンで刺激した細胞から調製したプローブ）でＰＳＡハイブリダイゼーションに実質的な上昇がみられたが、Ｇ３ＰＤＨのハイブリダイゼーションでは２つのブロット間に有意な変化が見られないことに注意されたい。矢頭は同実験で同定された陽性クローンを示す。
【０１１９】
単離された配列の組織特異的な性質を検証するために、陽性クローンを、複数の非前立腺組織試料のＲＮＡ調製物に対する標準的なノーザンブロットで調べた。図２は、ＮＫＸ３Ａをプローブとして用いた複数の組織を対象としたノーザンブロットを示し、陽性クローンで見られる例示的な組織発現パターンを示す。レーン１〜１０およびレーン１２〜１６は非前立腺組織に由来するＲＮＡ調製物であり、レーン１１は前立腺に由来するＲＮＡ調製物であり、レーン１２は精巣に由来するＲＮＡ調製物である。
【０１２０】
既知の配列に対して有意な相同性をもたない（ＢＬＡＳＴ解析による）１２個のクローンを前立腺組織およびＬＮＣａＰ細胞から単離した。配列番号：１〜９は、前立腺において異なって発現されるアンドロゲン応答性遺伝子群として同定され、配列番号：１０〜１２は、ＬＮＣａＰ細胞において異なって発現されるアンドロゲン応答性遺伝子群として同定された。
【０１２１】
実施例３
ＳＴＭＰ１の遺伝子およびｍＲＮＡの単離および特性解析
正常な前立腺のｃＤＮＡライブラリーを対象に、５’ＲＡＣＥ解析および３’ＲＡＣＥ解析によりスクリーニングを行い、Ｌ７４について完全長のｃＤＮＡを得た。Ｌ７４の推定アミノ酸配列のコンピュータを用いた二次構造予測から、Ｃ末端側に６回膜貫通ドメインの存在が示唆されたので、Ｌ７４を前立腺の６回膜貫通タンパク質１（ＳＴＭＰ１）と命名した。
【０１２２】
完全長のＳＴＭＰ１のｃＤＮＡを用いてＢＬＡＳＴ解析を行ったところ、３’ＵＴＲ領域にある３１３ ｂｐの反復ユニットを除いてＢＡＣクローン（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣ００２０６４）にマッチすることがわかったので、これをＳＴＭＰ１遺伝子と認定し、第７染色体の長腕２１番（Ｃｈｒ７ｑ２１）に位置付けた。反復領域は、ＢＡＣクローンのクローニングまたは配列決定の過程で生じた人為産物（ａｒｔｉｆａｃｔ）である可能性が高い。コンピュータによるエキソン／イントロンの境界分析、および完全長のｃＤＮＡ配列とＢＡＣクローンとのアラインメントの結果、ＳＴＭＰ１遺伝子が、６個のエキソンおよび５個のイントロンから構成されることが判明した（図４Ａ）。転写開始部位、エキソンおよびイントロンの位置および大きさ、ならびに部分的なｃＤＮＡクローンＬ７４の位置（黒い四角）を示す。開始コドン（ａｔｇ）および終止コドン（ｔｇａ）、ならびに推定ポリアデニル化シグナル（ｐＡ）も示す。先頭から２つのエキソンは短い非コード性のエキソン（８３ ｂｐと６１ ｂｐ）であり、エキソン３〜６は、読み枠（ＯＲＦ）をコードしており、それぞれ５２５ ｂｐ、５２８ ｂｐ、１６５ ｂｐ、および３２８１ ｂｐである（図４Ｃ）。ＳＴＭＰ１遺伝子全体は２６ ｋｂであり、これは部分的には、極めて大きなサイズのイントロン２（１２７１３ ｂｐ）の存在による。ＳＴＭＰ１の開始コドンの上流４ ｋｂ以内には３か所の異なるプロモーターが予測されるが、いずれにも明瞭なＴＡＴＡボックスまたはＣＡＡＴボックスのコンセンサス配列は認められないので、ＳＴＭＰ１がＴＡＴＡを含まないプロモーターから転写されることが示唆される。
【０１２３】
ＳＴＭＰ１のｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ００８４４５）は、約１ ｋｂの推定５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）（ＲＡＣＥ解析で推定）および、全ｃＤＮＡ配列の〜７７％を占める約４ ｋｂの異常に長い３’ＵＴＲを有する。ＯＲＦは第３エキソン内から開始し、４９０アミノ酸のタンパク質をコードすると推定される（図４Ｂ）。タンパク質モチーフを探索した結果、Ｆ２０９から開始する、ＳＴＭＰ１のＣ末端側に６か所の推定膜貫通ドメインが見出された（図４Ｂおよび４Ｅ）。図にはＯＲＦ周囲のｃＤＮＡ配列のみを示す。エキソン−イントロンの境界を示し、また推定膜貫通ドメインの位置を強調表示する（ＴＭ１〜６）（図４Ｂ）。終止コドンには星印を付けて表示した。ＳＴＭＰ１には図４Ｆ〜４Ｋ に示すように、２通りの選択的スプライシングの結果、２種のイソ型タンパク質を生じると推定される。
【０１２４】
実施例４
ＳＴＭＰ１は、６回膜貫通ドメインを有するタンパク質の新規のサブファミリーのタンパク質である
ＳＴＭＰ１の推定アミノ酸配列を対象としたＧｅｎＢａｎｋのＢＬＡＳＴ解析で、最近発見された、前立腺で多く発現する細胞膜タンパク質である２種の独立したＥＳＴおよびＳＴＥＡＰが同定された。ＣｌｕｓｔａｌプログラムおよびＧｅｎＤｏｃプログラムで得られたこれらの配列のアラインメントを図５に示す。完全に保存された残基を黒い影をつけて示す。２つまたは３つの配列に保存されている残基は、それぞれ明灰色と暗灰色の影を付けて示す。このアラインメントから、ＥＳＴ ＢＡＡ９１８３９のｃＤＮＡは完全長に近いが、ＢＡＢ１５５５９のｃＤＮＡは部分的な配列であることが示唆された。
【０１２５】
ＳＴＭＰ１に関連する２つのタンパク質の配列を決定した（図４Ｌと４ＭにそれぞれＳＴＭＰ２とＳＴＭＰ３を示す）。ＳＴＭＰ２およびＳＴＭＰ３の配列にはＥＳＴ配列が含まれる。ＳＴＭＰ２のＧＦＰ融合体はＳＴＭＰ１と類似の局在を示している。ＳＴＭＰ２もＳＴＭＰ３も広く分布しており、前立腺以外の一部の組織ではより高いレベルで存在する。例えばＳＴＭＰ２は胎盤および肺での発現が最も高く、心臓、肝臓、前立腺、および精巣でも強く発現しているのに対し、ＳＴＭＰ３は肝臓での発現が最も高く、また心臓、胎盤、肺、腎臓、膵臓、前立腺、精巣、小腸、および結腸でも強く発現している。
【０１２６】
ＳＴＭＰ１とＳＴＭＰ２間の配列類似性は少なく、推定６回膜貫通のコードドメインが開始するＳＴＭＰ１の２１０位の残基より手前では有意ではない。これはＮ末端領域が、ＳＴＥＡＰとは異なる６回膜貫通タンパク質サブファミリーを形成するＳＴＭＰタンパク質間で構造的および機能的に関連することを示唆している。
【０１２７】
実施例５
ＳＴＭＰ１の発現は前立腺に高度に集中している
次にＳＴＭＰ１の発現プロファイルを、さまざまなヒト組織で、複数の組織を対象としたノーザンブロットとＳＴＭＰ１プローブとをハイブリダイズさせるノーザン分析により決定した（「材料および方法」の項を参照）。図６Ａに示すように、ＳＴＭＰ１は、前立腺組織の６．５ ｋｂの主要ｍＲＮＡ、および２．２ ｋｂ、４．０ ｋｂ、および４．５ ｋｂの３種の非主要ｍＲＮＡとハイブリダイズした。心臓および骨格筋の試料でＧ３ＰＤＨとの間で観察されるより強いハイブリダイゼーションは、これらの組織における強い発現に起因する。各レーンは以下の対象を示す：１＝心臓、２＝脳、３＝胎盤、４＝肺、５＝肝臓、６＝骨格筋、７＝腎臓、８＝膵臓、９＝脾臓、１０＝胸腺、１１＝前立腺、１２＝精巣、１３＝卵巣、１４＝小腸、１５＝結腸、１６＝末梢血白血球。完全長の６．５ ｋｂのｍＲＮＡの位置、ならびに低分子量のＳＴＭＰ１の位置を図の左側の矢印で示した。６．５ ｋｂのバンドは、前立腺と比較して心臓、脳、腎臓、膵臓、および卵巣で１５倍〜２０倍低いｍＲＮＡの発現を示し、他の組織では発現は検出されなかった。これとは対照的に、ＳＴＭＰ１の選択的スプライシングによりコードされる３種の低分子量のｍＲＮＡは前立腺のみで検出された。グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）のｃＤＮＡプローブとのハイブリダイゼーションでは、Ｇ３ＰＤＨが他の組織より多く含まれることがわかっている心臓および骨格筋を除いたレーンでほぼ同等のシグナルが得られた。以上のデータは、ＳＴＭＰ１の発現が他の組織でも見られるものの前立腺で強いことと、ＳＴＭＰ１が前立腺における発現が限定されるイソ型を有することを示している。
【０１２８】
実施例６
ＳＴＭＰ１発現の特性解析
アンドロゲンは、正常な前立腺、および早期前立腺癌に対する主要なホルモン刺激なので、ＳＴＭＰ１のアンドロゲン調節を、アンドロゲン応答性の前立腺癌細胞系ＬＮＣａＰ中でノーザン分析によって評価した。細胞は処理を行わなかったものと、図６に示すように時間の経過とともに増量した合成アンドロゲンＲ１８８１（１０−８ Ｍ）で処理し、回収し、全ＲＮＡを単離してＳＴＭＰ１のｃＤＮＡをプローブとしたノーザン分析を行ったものの２通りとした。同じメンブレンを対象に、アンドロゲン依存性遺伝子ＰＳＡをプローブとしてノーザン分析も行った。ｍＲＮＡ蓄積の相対的な誘導については、ホスフォイメージャー分析（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）で決定された値をレーンの下に示す。ＣＷＲ２２の異種移植片をヌードマウスで成長させ、腫瘍試料を性腺摘除前（ｔ＝０）、または性腺摘除の１週間後、２週間後、４週間後に回収した。全ＲＮＡを単離して同じプローブによるノーザン分析に用いた。臭化エチジウムで染色した１８Ｓ ＲＮＡを、ＲＮＡの全体性およびローディングの対照として示す。６時間後の時点で、ＳＴＭＰ１の発現は約２５％上昇していたが、２４時間までにこれは失われ、最終的には４８時間の時点で基礎レベルと比較して２０％低下していた。これとは対照的に、アンドロゲン制御遺伝子ＰＳＡのｍＲＮＡの蓄積は、アンドロゲンで刺激後に予想通り時間の経過とともに大きく上昇し、最終的には４８時間後の時点で約２２倍高いレベルとなった。ＳＴＭＰ１のｍＲＮＡの蓄積の相対的な誘導をホスフォイメージャー分析で決定した値をレーンの下に示す。図６Ｂに示すように、ＳＴＭＰ１は、未処理のＬＮＣａＰ細胞およびＲ１８８１で処理したＬＮＣａＰ細胞とで同様の発現レベルを示した。この結果は、ＳＴＭＰ１の発現が、ＬＮＣａＰ細胞中においてアンドロゲンによって大きく調節されているわけではないことを示している。
【０１２９】
インビボにおけるＳＴＭＰ１発現のアンドロゲンによる調節の可能性を判定するために、原発性ヒト前立腺腫瘍に由来するアンドロゲン依存性の異種移植モデルＣＷＲ２２を用いた（Ｗａｉｎｓｔｅｉｎ、Ｍ．Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４、６０４９〜６０５２、１９９４）。成長がアンドロゲンに依存することから、ヌードマウスにおけるＣＷＲ２２の腫瘍は、性腺摘除後に顕著な退縮を示し、完全に退縮してもよい。ＣＷＲ２２の異種移植片をヌードマウスで、テストステロンペレットを持続的に放出させながら成長させた。腫瘍が成長後、マウスの性腺を摘除し、テストステロンペレットを除き、退縮しつつある腫瘍を性腺摘除の１週間後、２週間後、４週間後に採取した。この腫瘍試料から全ＲＮＡを調製してノーザン分析に用いた。図６Ｂに示すように、ＬＮＣａＰ細胞で見られた結果と同様に、ＣＷＲ２２腫瘍におけるＳＴＭＰ１ ｍＲＮＡの蓄積には、性腺摘除後に有意な変化は認められず、またアンドロゲンの存在の影響を受けなかった（ＣＷＲ２２の２週間後の時点における試料に対するＲＮＡのローディング量が少ないことに注意されたい）。これとは対照的に、アンドロゲンで制御される遺伝子ＰＳＡのｍＲＮＡの蓄積は、性腺摘除後に大きく低下し、性腺摘除の２週間後までに摘除前の量の約１６％に落ち込んだ。以上の結果はＬＮＣａＰ細胞で得られた知見と一致するので、前立腺癌細胞におけるＳＴＭＰ１の発現がアンドロゲンによって有意に調節されていないことがわかる。ＳＴＭＰ１の発現は、ＬＮＣａＰ細胞と比較してＣＷＲ２２腫瘍では実質的に低かった。
【０１３０】
ＳＴＭＰ１の発現プロファイルについても、アンドロゲンに依存しない前立腺癌細胞系ＰＣ３およびＤＵ１４５、ならびに進行前立腺癌（図６Ｃ）の代表である４種の独立したＣＷＲ２２腫瘍の再発性派生物（ＣＷＲ２２Ｒと命名）で分析した（Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎ、Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５６、３０４２〜３０４６、１９９６）。ＬＮＣａＰ細胞（Ｒ１８８１（１０−８ Ｍ）の存在下（＋）または非存在下（−））、ＰＣ−３細胞、またはＤＵ−１４５細胞を成長させて全ＲＮＡを単離した。アンドロゲンに依存しないヒト前立腺癌異種移植片ＣＷＲ２２Ｒの４種の独立系列をヌードマウスで成長させ、腫瘍を採取して全ＲＮＡを単離し、ＳＴＭＰ１またはアンドロゲン標的遺伝子ＮＫＸ３．１のｃＤＮＡをプローブとしたノーザン分析に用いた。臭化エチジウムで染色した１８Ｓ ＲＮＡを、ＲＮＡの全体性およびローディングの対照として示す。ホスフォイメージャー分析（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）で決定したＳＴＭＰ１およびＮＫＸ３ＪのｍＲＮＡ蓄積の相対的な誘導をレーンの下に示す。図６Ｃに示すように、ＳＴＭＰ１の発現は、ＬＮＣａＰ細胞では強かったものの、アンドロゲン標的遺伝子ＮＫＸ３．１の約９倍の誘導と比較して、Ｒ１８８１処理に応じた変化は有意ではなかった。アンドロゲンに依存しない前立腺癌細胞系ＰＣ−３またはＤＵ−１４５では、ＮＫＸ３．１の場合と同様にＳＴＭＰ１の発現は認められなかった。これとは対照的に、検討した４種すべての独立したＣＷＲ２２Ｒ異種移植片系列に由来する腫瘍ではＳＴＭＰ１の発現は有意であり、その範囲はＬＮＣａＰ細胞で認められた値の約３０％〜６０％であった。同様の過剰発現パターンはＮＫＸ３．１（図６Ｃ）でも認められ、これは過去の知見と一致していた（Ｋｏｒｋｍａｚ、Ｋ．Ｓ．ら、Ｇｅｎｅ ２６０、２５〜３６、２０００）。
【０１３１】
ＳＴＭＰ１の発現プロファイルの興味深い特徴は、たとえアンドロゲン依存性のＣＷＲ２２の異種移植片で低く発現する場合であっても、アンドロゲン受容体（ＡＲ）が陽性であるもののアンドロゲンには応答しない再発性のＣＷＲ２２Ｒで強く発現するという点である。これは前立腺腫瘍がアンドロゲンに依存する相からアンドロゲンに依存しない相へ進行するとＳＴＭＰ１の発現が脱制御されることを意味する。またＳＴＭＰ１はＡＲ陰性の前立腺癌細胞系ＰＣ−３およびＤＵ−１４５では発現されないが、ＡＲ陽性の細胞系ＬＮＣａＰ、ならびにＣＷＲ２２およびＣＷＲ２２Ｒの異種移植片では強く発現される。したがってＳＴＭＰ１の発現は、細胞内における機能型ＡＲの有無に相関する。
【０１３２】
アンドロゲンが、正常な前立腺の発生および維持、ならびに前立腺癌の開始および進行の両方に重要な役割を果たすことは５０年以上も前から知られている。アンドロゲンを除去すると、正常な前立腺、ならびにアンドロゲンに依存する疾患の初期段階の前立腺腫瘍に退縮がみられる。したがって、アンドロゲンの除去は通常、腫瘍の成長を逆転させる治療法として用いられている。しかしながら前立腺腫瘍の場合は、アンドロゲンに依存しない状態においては、数か月または数年後にほぼすべての症例で腫瘍が再発する。現時点で有効な治療法はなく、また生存時の予後は極めて悪い。ＳＴＭＰ１は、このような後期アンドロゲン非感受性状態で過剰に発現されるので、前立腺癌の診断および治療に応用する際の有用なツールとなる。
【０１３３】
これらのデータは、ＳＴＭＰ１の発現が、前立腺癌がアンドロゲン依存性状態からアンドロゲン非依存性状態へ進行したときに調節解除されることを示している。
【０１３４】
実施例７
ＳＴＭＰ１の細胞内における局在
ＳＴＭＰ１の細胞内における局在パターンを解明するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）−ＳＴＭＰ１融合タンパク質を作製した。このようなＧＦＰキメラタンパク質の使用は最近になって、細胞内におけるタンパク質の局在および動態を評価する標準的な方法となりつつある。ＣＯＳ−１細胞に一過的にＧＦＰ−ＳＴＭＰ１をトランスフェクトして固定し、「材料および方法」で説明した共焦点顕微鏡による観察用に処理した。
【０１３５】
ｚ軸に沿った一連の１１枚の共焦点観察用の切片を１個の細胞から名目上１００ ｎｍの間隔をおいて得た。３枚の連続切片と、全１１枚の切片を観察した投射像を図７Ａに示す。矢印は、大きさ、形状、および位置の異なる管状−小胞状の構造（ｔｕｂｌａｒ−ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ；ＶＴＳ）を示す（バーの長さは５ μｍ）。全１１枚のｚ面切片のうち、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１は、ゴルジ複合体に特徴的な明るい核周辺分布パターンを示した。またＧＦＰ−ＳＴＭＰ１は、細胞質全体および細胞周辺部（ｚ−７、投射像）において、さまざまな大きさのスポット内で分散していた。このような明るい蛍光スポットの一部は、形状が管状（ｚ−６、矢印および図８）、または小胞状（ｚ−５、矢印）である。
【０１３６】
ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１がゴルジ複合体に局在するか否かをより直接的に判定するために、発明者らは、その細胞内分布を、２種の十分に特性が明らかなゴルジマーカーである、ゴルジ装置の内側にある酵素マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）（Ｒａｂｏｕｉｌｌｅ、Ｃ．ら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １０８、１６１７〜１６２７、１９９５）、およびコートタンパク質β−ＣＯＰ（Ｐｅｐｐｅｒｋｏｋ、Ｒ．ら、Ｃｅｌｌ ７４、７１〜８２、１９９３）と比較した。ＣＯＳ−１細胞にＧＦＰ−ＳＴＭＰ１をトランスフェクトし、固定し、適切な一次抗体および二次抗体で標識し、共焦点レーザー走査型顕微鏡で画像を得た。緑色のＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の蛍光、ならびに赤色（テキサスレッドで標識した二次抗血清）のβ−ＣＯＰおよびＭａｎＩＩの蛍光を共焦点レーザー顕微鏡で検出した。右側のパネルは、共局在の領域を示す黄色／橙色染色のオーバーレイ画像を示す。バーの長さは５ μｍを示す。図７Ｂに示すように、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の分布がゴルジ複合体全体に拡張していたことは、ＭａｎＩＩとβ−ＣＯＰの両方と有意に共局在することから明らかであった。しかしながら、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１と両ゴルジマーカーとの間で重複していない一部の領域が認められ、これはＳＴＭＰ１が、２つのマーカーと比べて少なくとも部分的にはゴルジ複合体内で異なって局在することを示唆している。
【０１３７】
ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１はＶＴＳと結びついているので（図７Ａおよび図８）、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の、形質膜、分泌小胞、またはリソソームへ向かうタンパク質のソーティングに重要な部位であるトランス−ゴルジ網（ＴＧＮ）へのより特異的な局在の評価を行った（Ｆａｒｑｕｈａｒ、Ｍ．Ｇ．およびＰａｌａｄｅ、Ｇ．Ｅ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８、２〜１０、１９９８；Ｍｅｌｌｍａｎ、Ｉ．およびＷａｒｒｅｎ、Ｇ．、Ｃｅｌｌ １００、９９〜１１２、２０００；Ｌｅｍｍｏｎ、Ｓ．Ｋ．およびＴｒａｕｂ、Ｌ．Ｍ．、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １２、４５７〜４６６、２０００）。ＴＧＮと形質膜の間を往復するＴＧＮに存在するタンパク質であるＴＧＮ４６に対する抗体（Ｐｒｅｓｃｏｔｔ ＡＲら、Ｅｕｒ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ７２、２３８〜２４６、１９９７；Ｐｏｎｎａｍｂａｌａｍ、Ｓ．ら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ． １０９、６７５〜６８５、１９９６）を、免疫蛍光顕微鏡を用いた上述の実験に用いた。図７Ｂに示すように、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１は、ＴＧＮ４６とともに広範囲に共局在し、これはＭａｎＩＩおよびβ−ＣＯＰで観察される結果より大きいことから、ゴルジ複合体ではＳＴＭＰ１が主にＴＧＮに局在していることがわかる。またＴＧＮ４６に関する画像が低倍率の対物レンズで得られた点に注意されたい。
【０１３８】
実施例８
ＳＴＭＰ１は、ゴルジと形質膜の間を往復し、初期エンドソームと共局在する
ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の動的特性および細胞内輸送を、生細胞を対象に共焦点低速度画像化法で調べた。ＣＯＳ−１細胞にＧＦＰ−ＳＴＭＰ１を一過的にトランスフェクトさせ、その１６時間後に、１２枚の連続画像を生細胞を対象に２０秒ごとに３７℃で、共焦点レーザー走査型顕微鏡を用いて得た（図８）。上のパネルは、ＶＴＳの拡張とゴルジ体への復帰を示す（白い矢印）。中央のパネルと下のパネルの最初の画像（１６０ｓ）では、赤い矢印が、ＶＴＳがゴルジ体から細胞周辺部へ移動したことを示す。下のパネルでは、黄色の矢印が、細胞端からゴルジ体へのＶＴＳの動きを示している。以上の結果は、複数の低速度分析の代表的な結果であって、画像の変化が焦点面からの運動によらないことに注意されたい。バーの長さは５ μｍを示す。
【０１３９】
図８に示すように、ＶＴＳの一部は、ゴルジ複合体と解離または結合していた。このようなＶＴＳは極めて動的であり、大きさはさまざまであった。ＶＴＳの一部は直線的または曲線的な経路をたどり、一部は、少し進んでは止まるように移動し、一部は跳躍的な動きを示した。上のパネルで示すＶＴＳ（白い矢印）は、ゴルジから離れた後に再び戻ってきた。中央のパネルと下のパネルの最初の画像におけるＶＴＳ（赤い矢印）はゴルジ複合体から離れ、一時停止した後に、細胞周辺部に向かって、細胞の端で消失するまで動いた。これはＳＴＭＰ１が分泌性経路と関連していることを示唆している。下のパネルのＶＴＳ（黄色の矢印）は、細胞周辺部からゴルジ体へ動いており、ＳＴＭＰ１が飲食作用経路に局在することを示唆している。
【０１４０】
実施例９
ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１と初期エンドソームマーカーＥＥＡ１との共局在
ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１が飲食作用経路と結合するか否かを調べるために、ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の細胞内分布を、初期エンドソームタンパク質ＥＥＡ１（Ｓｔｅｎｍａｒｋ、Ｈ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１、２０４０４８〜２０４０５４、１９９６）の細胞内分布と比較した。ＣＯＳ−１細胞にＧＦＰ−ＳＴＭＰ１を一過的にトランスフェクトし、固定し、ＥＥＡ１抗体で免疫染色を行い、共焦点レーザー走査型顕微鏡で観察した。緑色のＧＦＰ−ＳＴＭＰ１の蛍光と、赤色（テキサスレッドで標識した二次抗血清）のＥＥＡ１の蛍光を共焦点レーザー顕微鏡で検出した。右側のパネルは、共局在領域を示す黄色／橙色の染色とのオーバーレイ画像を示す。矢印はＥＥＡ１とＳＴＭＰ１の両方を含む細胞周辺部におけるＶＴＳの例を示す。バーの長さは５ μｍを示す。図９に示すように、ＥＥＡ１は、トランスフェクト細胞と非トランスフェクト細胞の両方で類似の細胞内分布を示した。またＧＦＰ−ＳＴＭＰ１は、細胞周辺部とさらには核周辺領域（図９、矢印）の両方でＥＥＡ１とともに顕著に共局在していたことから、ＳＴＭＰ１が初期エンドソームおよび飲食作用経路と結びついていることが示唆される。
【０１４１】
実施例１０
ＳＳＨ９の遺伝子およびｍＲＮＡの単離と特性解析
ＳＳＨ９遺伝子を同定して遺伝子地図作製した（ｍａｐｐｅｄ）（図１０）。推定プロモーター部位、転写開始部位、ならびにエキソンおよびイントロンの位置および大きさを示す。開始コドンおよび終止コドン、ならびに２種類の選択的スプライシング転写物を生じる２か所のポリアデニル化シグナルも合わせて示す。図１１Ａ〜Ｃは、ＳＳＨ９のヌクレオチド配列および予測アミノ酸配列、ならびに推定プロモーター配列およびエキソン−イントロン境界を示す。
【０１４２】
さまざまなヒト組織を対象にノーザン分析（図１２Ｃ）で決定したＳＳＨ９の発現プロファイルから、ＳＳＨ９の０．７ ｋｂのスプライス変種が、高度に精巣特異的であり、また１．４ ｋｂの転写物が前立腺および精巣の両方で発現されていることがわかった。
【０１４３】
アンドロゲンによりＳＳＨ９の調節がなされるか否かはＬＮＣａＰ細胞およびＣＷＲ２２異種移植片（図１２Ａ）で調べ、ＳＳＨ９がＬＮＣａＰ細胞では調節されていないが、ＣＷＲ２２異種移植片では調節されていることがわかった。ＳＳＨ９の発現プロファイルについても、アンドロゲンに依存しない前立腺癌細胞系ＰＣ３およびＤＵ１４５、ならびにＣＷＲ２２Ｒ細胞（図１２Ａ）で調べた。
【０１４４】
実施例１１
ＰＳＬ２２の遺伝子およびｍＲＮＡの単離と特性解析
ＰＳＬ２２遺伝子を同定して遺伝子地図作製した（図１３）。エキソンおよびイントロンの位置および大きさ、部分的なｃＤＮＡクローンの位置（黒い四角）、ならびに完全長のｃＤＮＡクローンとＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣ００８５５１およびＡＣ０１１４４９とのアラインメントを示す。図１４Ａ〜Ｃは、ＰＳＬ２２のＯＲＦのヌクレオチド配列、ｃＤＮＡおよび推定アミノ酸配列、ならびに推定プロモーター、エキソン、およびＵＴＲ配列を示す。
【０１４５】
ＰＳＬ２２の推定アミノ酸配列とＧｅｎＢａｎｋのＢＬＡＳＴ解析から、ＰＳＬ２２がＲｈｏ結合タンパク質であることがわかった。図１５に、ＰＳＬ２２と関連タンパク質との複数の配列アラインメントを示す。完全に保存された残基を黒色で示し、３種の配列で認められる残基は影を付けて示す。
【０１４６】
さまざまなヒト組織を対象にノーザン分析（図１６Ｂ）で決定されたＰＳＬ２２の発現プロファイルから、最も強い発現が前立腺で認められ、強い発現が腎臓、膵臓、および結腸で認められることがわかった。
【０１４７】
アンドロゲンによるＰＳＬ２２の調節を、ＬＮＣａＰ細胞、アンドロゲンに依存しない前立腺癌細胞系ＰＣ３およびＤＵ１４５、ならびにＣＷＲ２２Ｒ細胞で調べた（図１６Ａ）。この結果から、ＰＳＬ２２が、それを高度に発現するＬＮＣａＰ細胞ではアンドロゲンで調節されるが、ＰＣ３細胞およびＤＵ１４５細胞ではアンドロゲンで調節されないことがわかった。
【０１４８】
実施例１２
材料および方法
以下の材料および方法を用いて、本明細書に記載される例示的な実験を行った。これらの材料および方法が、本発明の性質を変えずに変更されることが当業者には理解される。
【０１４９】
プローブ
ポリＡ＋ ＲＮＡ      １ μｇ ［（−）または（＋）］
ランダムプライマー（Ｎ７）      ２００ ｎｇ
ＲＮＡｓｅ非含有滅菌水を加えて２０ μｌにする。
７０℃で１０分間加熱し、氷上で冷却する。
【０１５０】
ＲＮＡ試料を加熱しながら以下の溶液を調製する：
５×第１鎖緩衝液      １０ μｌ
０．１ ｍＭ ＤＴＴ      ５ μｌ
各１０ ｍＭのｄＴＴＰ＋ｄＧＴＰ      ２ μｌ
３２Ｐα ｄＡＴＰ      ５ μｌ
３２Ｐα ｄＣＴＰ      ５ μｌ
Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（２００ Ｕ／μｌ、ＢＲＬ）      ２ μｌ
【０１５１】
この溶液をピペッティングで混合し、軽く遠心し、２５℃で５分間インキュベートした後に３７℃で１時間さらにインキュベートした。２ μｌの１０ ｍＭ ｄＣＴＰ＋ｄＡＴＰを添加し、混合物を３７℃で３０分間インキュベートした後に７０℃で１０分間加熱して不活性化した。取り込まれなかったヌクレオチドは、Ｇ２５カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて除いた。また比活性（５×１０８ ｃｐｍ／μｇを上回らなければならない）を算出した。
【０１５２】
ハイブリダイゼーション
調製直後の２５ ｍｌのハイブリダイゼーション混合物（７％ ＳＤＳ、０．５ Ｍ ＮａＨＰＯ４、１ ｍＭ ＥＤＴＡ）を６５℃で事前に保温し、その１２．５ ｍｌを各メンブレンのプレハイブリダイゼーション（６５℃で５分〜１０分）に用いた。このプローブを３分間〜５分間９５℃で加熱して変性させ、６５℃のプレハイブリダイゼーション混合物に移した。ハイブリダイゼーションは６５℃で一晩行った。
【０１５３】
洗浄
洗浄液Ｉ（２×ＳＳＣおよび１％ ＳＤＳ）および洗浄液ＩＩ（０．１×ＳＳＣおよび０．５％ ＳＤＳ）を事前に保温しておき、メンブレンを溶液Ｉで１回洗浄し、その後溶液ＩＩで３０分間６５℃で洗浄した。メンブレンをプラスチック製ラップで覆い、ホスフォイメージャースクリーン（ｐｈｏｓｈｏｒｉｍａｇｅ ｓｃｒｅｅｎ）を感光した。
【０１５４】
選択
（−）ブロットと（＋）ブロットで差を示したクローンを選択した（通常、各ブロット対につき１個〜８個）。第２ラウンドの、確認目的のリバースノーザン分析を行った（この場合、個々のクローンを各ブロットに２回スポットした）。ホスフォイメージャー分析を行った後に、０．１×ＳＳＣおよび０．５％ ＳＤＳ中で２×１５分間かけて９５℃でブロットから付着物をはがし、ＰＳＡプローブとハイブリダイズさせた（または使用されるホルモンに応じて、検討対象組織の任意の多量の標的遺伝子用プローブを用いた）。ＰＳＡとは異なることが確認されたクローンについては、二次的なリバースノーザン分析における発現の差については、確立されたプロトコールにしたがってノーザン分析を行った。Ｒ１８８１によるＬＮＣａＰ細胞、ならびにアンドロゲン除去時はＣＷＲ２２異種移植片モデル（Ｗａｉｎｓｔｅｉｎ、Ｍ．Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５４、６０４９〜６０５２、１９９４）、およびアンドロゲンに依存しないＣＷＲ２２Ｒ再発性異種移植片（Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎ、Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６、３０４２〜６、１９９６）の誘導の経時変化を用いた。
【０１５５】
配列解析
配列解析は、ＡＢＩ自動シーケンサーを用いてジデオキシ鎖停止法で行った。相同性検索は基本的なＢＬＡＳＴアルゴリズムで行った。図３は単離されたクローンのＢＬＡＳＴ解析で得られた結果、および既知遺伝子に対する相同性の表を示す（有意な相同性のカットオフ値は同一性５０％とした）。
【０１５６】
ＬＮＣａＰ細胞からの前立腺癌関連遺伝子群の単離
前立腺癌細胞系ＬＮＣａＰを２つのバッチで、文献で報告された条件と同様の培養条件で培養した（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚ ＪＳら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、４３：１８０９〜１８１８、１９８３）。最初のバッチは未処理のままとし、第２のバッチは、合成アンドロゲンＲ１８８１で２４時間処理した。両バッチに由来する細胞を回収して、各バッチから全ＲＮＡを単離した。全ＲＮＡから、ポリＡ＋ ＲＮＡを標準的手法で回収し、抑制サブトラクションハイブリダイゼーション（ＳＳＨ；Ｄｉａｔｃｈｅｎｋｏら、前述）手法に用いて、ホルモンで調節される遺伝子群を同定した。ＳＳＨ手法のテスターは未処理細胞に由来するｃＤＮＡとし、ドライバーはＲ１８８１で処理された細胞に由来するｃＤＮＡとした。抑制サブトラクションのプロトコールは、元の記述の方法にしたがって行った（Ｄｉａｔｃｈｅｎｋｏら、前述）。
【０１５７】
細胞培養
ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、およびＤＵ−１４５の各細胞を日常的な方法で維持し、文献に記載された方法で処理した（Ｋｏｒｋｍａｚ、Ｋ．Ｓ．ら、ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９、４９９〜５０６、２０００；Ｋｏｒｋｍａｚ、Ｋ．Ｓ．ら、Ｇｅｎｅ ２６０、２５〜３６、２０００）。
【０１５８】
異種移植片の調査
ＣＷＲ２２異種移植片、およびＣＷＲ２２Ｒ異種移植片を有するマウスの腫瘍の移植、成長、および回収は文献に記載された方法で行った（Ｗａｉｎｓｔｅｉｎ、Ｍ．Ａ．、前述、Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎ、Ｍ．、前述）。
【０１５９】
クローニングおよびプラスミドの構築
２６２ ｂｐのｃＤＮＡ断片を、前立腺特異的ライブラリーのスクリーニングから最初に得て（Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｆ．Ｍ．ら、（１９９７） 「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク）、Ｌ７４と命名した。ｃＤＮＡ末端５’迅速増幅法（５’ＲＡＣＥ法）を、正常な前立腺組織（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、および／または製造業者の推奨にしたがって作製したＳＭＡＲＴ−ＲＡＣＥ ＬＮＣａＰ ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から調製したＭａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡを用いて行った（オリゴヌクレオチド配列は要望に応じて開示）。ＲＡＣＥ産物をｐＣＲＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、陽性クローンをサザン分析法で確認し、配列を決定した。並行して、正常なヒト前立腺のプール（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から作製したλｇｔ１０ ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングを確立した手法で行って追加のクローンを得た。重複するクローンを用いて完全長のＳＴＭＰ１のｃＤＮＡ配列を推定した。
【０１６０】
完全長のＳＴＭＰ１のＯＲＦを、開始コドンおよび終止コドンの中央付近に相当するプライマー（配列は要望に応じて開示）を用いて増幅し、ベクターｐｃＤＮＡ３．１−ＮＴ−ＧＦＰ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて同じフレームで緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）のＣ末端に融合させてＧＦＰ−ＳＴＭＰ１を作製した。
【０１６１】
ノーザン分析
全ＲＮＡを１段階グアニジンチオシアネート手法で調製し、ノーザン分析に用いた（１８）。１レーンにつき１５ μｇの全ＲＮＡを用いた。プローブはランダムプライミング法で作製され、＞３×１０８ ｄｐｍ／μｇの比活性を有していた。１４５ ｂｐ〜２２０２ ｂｐのＳＴＭＰ１のｃＤＮＡ断片をプローブとして用いた。バンドを可視化して、ホスフォイメージャー分析（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）で定量した。
【０１６２】
共焦点顕微鏡による観察
ＣＯＳ−１細胞に、ＢＴＸ方形波パルス発生装置を用いるエレクトロポレーション法で、１５０ Ｖで１ ｍｓの設定で一過的にトランスフェクトした。細胞は、間接免疫蛍光用には６ウェルの組織培養プレート上に置いたカバースリップ上、または生細胞の顕微鏡観察用にはＬａｂ−Ｔｅｋチャンバードカバーグラス（Ｃｈａｍｂｅｒｅｄ Ｃｏｖｅｒｇｌａｓｓ）（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）上で成長させた。一過的にトランスフェクトした細胞は、トランスフェクションの１６時間後にライカ社製のＴＣＳ−ＳＰ共焦点顕微鏡で観察した。生細胞を対象としたすべての操作を３７℃で行った。
【０１６３】
間接免疫蛍光法
間接免疫蛍光法は文献に記載された方法で実施した（Ｍｉｓｔｅｌｉ、Ｔ．およびＳｐｅｃｔｏｒ、Ｄ．Ｌ． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ３、６９７〜７０５、１９９９）。以下に挙げる抗体を用いた：抗β−コートタンパク質（β−ＣＯＰ）抗血清（Ｊ． Ｌｉｐｐｍｃｏｔｔ−Ｓｃｈｗａｒｔｚから供与）、抗マンノシダーゼＩＩ（Ｔ． Ｍｉｓｔｅｌｉから供与）、抗ＴＧＮ４６（Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｊ．Ｓ． Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏから供与）、および抗ＥＥＡ１（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。マウスおよびウサギに特異的なテキサスレッドを結合させた二次抗体は、ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社（ＣｏｓｔａＭｅｓａ、ＣＡ）から購入した。
【０１６４】
その他の態様
本明細書で言及したすべての出版物および特許出願は、個々の独立した出版物または特許出願が、具体的および個別に参照として組み入れられる同じ程度で参照として本明細書に組み入れられる。本発明は、本発明の特定の態様について記載されているが、さらなる変更が可能であることが理解され、またこの出願は、一般に、本発明の原理に従う、本発明の任意の変形形態、使用、または応用を含むことを意図し、本発明が関する当技術分野の既知の実行法または慣行に含まれる本発明の開示からの逸脱が含まれ、また、上文に記載された本質的特徴に応用されうることが理解され、添付の特許請求の範囲に従う。
【図面の簡単な説明】
【図１】前立腺特異的なｃＤＮＡライブラリーの複数のクローンの例示的なリバースノーザン分析を示す。
【図２】複数の組織の例示的なノーザンブロットを示す。
【図３】前立腺組織およびＬＮＣａＰ細胞から単離された１２個のクローンのヌクレオチド配列（配列番号：１〜１２）を示す表である。
【図４Ａ】ＳＴＭＰ１遺伝子の構造を示す略図である。
【図４Ｂ】ＳＴＭＰ１のイントロン境界配列を含むヌクレオチド配列（配列番号：１３）、および推定アミノ酸配列（配列番号：１４）を示す。
【図４Ｃ】ＳＴＭＰ１のエキソンおよび３’ＵＴＲのヌクレオチド配列を示す（配列番号：１５〜２１）。
【図４Ｄ】ＳＴＭＰ１のＯＲＦのヌクレオチド配列を示す（配列番号：２２）。
【図４Ｅ】ＳＴＭＰ１のｃＤＮＡ配列（配列番号：２３）、および推定アミノ酸配列（配列番号：１４）を示す。
【図４Ｆ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ２のエキソンおよび３’ＵＴＲのヌクレオチド配列（配列番号：１７〜２０および２４〜２６）を示す。
【図４Ｇ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ２のＯＲＦのヌクレオチド配列（配列番号：２７）を示す。
【図４Ｈ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ２のｃＤＮＡ配列（配列番号：２８）、および推定アミノ酸配列（配列番号：２９）を示す。
【図４Ｉ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ３のエキソンおよび３’ＵＴＲのヌクレオチド配列（配列番号：１７〜１９および２４〜２６）を示す。
【図４Ｊ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ３のＯＲＦのヌクレオチド配列（配列番号：３０）を示す。
【図４Ｋ】ＳＴＭＰ１ ＯＲＦ３のｃＤＮＡ配列（配列番号：３１）、および推定アミノ酸配列（配列番号：３２）を示す。
【図４Ｌ】ＳＴＭＰ２のｃＤＮＡ配列（配列番号：３３）、および推定アミノ酸配列（配列番号：３４）を示す。
【図４Ｍ】ＳＴＭＰ３のｃＤＮＡ配列（配列番号：３５）、および推定アミノ酸配列（配列番号：３６）を示す。
【図５】ＳＴＭＰ１（配列番号：１４）の配列とＳＴＥＡＰ（配列番号：３７、アクセッション番号ＡＦ１８６２４９）、および２つのＥＳＴ（アクセッション番号ＢＡＡ９１８３９およびＢＡＢ１５５５９；それぞれ配列番号：３８および３９）との配列アラインメントを示す。
【図６】図６Ａは、ＳＴＭＰ１またはＧ３ＰＤＨのｃＤＮＡをプローブとして、複数の組織のノーザンブロットを示す。図６Ｂは、アンドロゲン応答性の前立腺癌細胞系ＬＮＣａＰ、およびＣＷＲ２２ヒト前立腺癌異種移植片モデルにおける、ＳＴＭＰ１およびＰＳＡをプローブとしたノーザンブロットである。図６Ｃは、ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、およびＤＵ−１４５の細胞系、ならびにＣＷＲ２２Ｒヒト前立腺癌異種移植片モデルにおける、ＳＴＭＰ１およびＮＫＸ３Ａをプローブとしたノーザンブロットである。
【図７Ａ】ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１で一過的にトランスフェクトしたＣＯＳ−１細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。
【図７Ｂ】ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１で一過的にトランスフェクトし、ゴルジマーカーに対する抗体で標識したＣＯＳ−１細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。
【図８】ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１で一過的にトランスフェクトし、生細胞を共焦点顕微鏡で観察したＣＯＳ−１細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。
【図９】ＧＦＰ−ＳＴＭＰ１で一過的にトランスフェクトし、初期エンドソームマーカーに対する抗体で標識したＣＯＳ−１細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。
【図１０】ＳＳＨ９遺伝子の構造およびＳＳＨ９遺伝子から転写された２種のｍＲＮＡを示す略図である。
【図１１Ａ】ＳＳＨ９のｃＤＮＡ（配列番号：４０）および推定アミノ酸配列（配列番号：４１）を示す。
【図１１Ｂ】ＳＳＨ９の推定プロモーター配列（配列番号：４２）を示す。
【図１１Ｃ】ＳＳＨ９の推定イントロン−エキソン境界（配列番号：４３〜５０）を示す。
【図１２】図１２Ａは、アンドロゲン応答性の前立腺癌細胞系ＬＮＣａＰ細胞において、およびＣＷＲ２２ヒト前立腺癌異種移植片モデルにおいて、ＳＳＨ９をプローブとしたノーザンブロットである。図１２Ｂは、ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、およびＤＵ−１４５の細胞系、ならびにＣＷＲ２２Ｒヒト前立腺癌異種移植片モデルにおいて、ＳＳＨ９をプローブとしたノーザンブロットである。図１２Ｃは、ＳＳＨ９またはＧＡＰＤＨのｃＤＮＡをプローブとした、複数の組織のノーザンブロットである。
【図１３】ＰＳＬ２２遺伝子構造を示す略図である。
【図１４Ａ】ＰＳＬ２２のＯＲＦのヌクレオチド配列（配列番号：５１）を示す。
【図１４Ｂ】ＰＳＬ２２のｃＤＮＡ配列（配列番号：５２）および推定アミノ酸配列（配列番号：５３）を示す。
【図１４Ｃ】ＰＳＬ２２のＴＡＴＡプロモーターおよび転写開始部位、エキソン、ならびに５’および３’のＵＴＲのヌクレオチド配列を示す（配列番号：５４〜７０）。
【図１５】ＰＳＬ２２（ＲｈｏＢＰ）（配列番号：５３）の、ＥＳＴ ＮＰ０３２１９０（ｍＲｈｏｐｈ）、ＡＦ１３２０２５（ｄＲｈｏｐｈ）、およびＢＡＢ２３６１５（配列番号：７１〜７３）との配列アラインメントを示す。
【図１６】図１６Ａは、ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３、およびＤＵ−１４５細胞系、ならびにＣＷＲ２２Ｒ ヒト前立腺癌異種移植片モデルにおける、ＰＳＬ２２をプローブとしたノーザンブロットである。図１６Ｂは、ＰＳＬ２２のｃＤＮＡをプローブとした、複数の組織のノーザンブロットである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図４Ｊ】
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【図４Ｋ】
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【図４Ｌ】
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【図４Ｍ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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