(57)【要約】一般構造式の化合物、および治療剤としての当該化合物ならびにその塩および溶媒和物の使用。
2004513128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式を有する化合物、ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物：
【化１】
2004513128.tif 000042
式中、
Ｒ０は独立して、ハロおよびＣ１〜６アルキルからなるグループから選択され；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ１〜３アルキル、アリールＣ１〜３アルキル、およびヘテロアリールＣ１〜３アルキルからなるグループから選択され；
Ｒ２は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなるグループから選択される任意に置換された単環芳香族環と、以下の任意に置換された二環系の環：
【化２】
2004513128.tif 000043
（式中、縮合環Ａは、飽和型または一部または完全不飽和型の５員環または６員環であり、炭素原子と、酸素、硫黄および窒素から選択される１個または２個の任意のヘテロ原子とを含む）とから選択され；
Ｒ３は、水素およびＣ１〜３アルキルからなるグループから選択されるか、
あるいは、Ｒ１およびＲ３は共に、５員環または６員環の３員または４員のアルキル鎖要素またはアルケニル鎖要素を表し；
ＸおよびＹは独立して、Ｃ（＝Ｏ）、ＳＯ、ＳＯ２、Ｃ（＝Ｓ）およびＣ（Ｒａ）２からなるグループから選択され、ただし、ＸおよびＹの少なくとも一方がＣ（＝Ｏ）とは異なり；
Ｒａは水素またはＣ１〜６アルキルまたはベンジルであり；
ｑは、０、１、２、３または４である。
【請求項２】
下記の式：
【化３】
2004513128.tif 000044
によって表される請求項１に記載の化合物、ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物。
【請求項３】
ｑが０である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、任意に置換されたベンジル、Ｃ３〜６シクロアルキルメチル、ピリジルＣ１〜３アルキル、およびフリルＣ１〜３アルキルからなるグループから選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ３が共に、３員アルキル鎖要素または４員アルキル鎖要素を表す請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、
【化４】
2004513128.tif 000045
（式中、ｎは１または２の整数であり、Ｘは独立して、Ｃ（Ｒａ）２、Ｏ、ＳまたはＮＲａである）である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
任意に置換されたＲ２が、下記の基：
【化５】
2004513128.tif 000046
および、
【化６】
2004513128.tif 000047
からなるグループから選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、ハロゲン、Ｃ１〜３アルキル、ＯＲａ、ハロメチル、およびハロメトキシからなるグループから選択される置換基によって置換される請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ＸおよびＹが独立して、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｒａ）２およびＣ（＝Ｏ）からなるグループから選択され、ただし、ＸおよびＹの少なくとも一方がＣ（＝Ｏ）とは異なる請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ＸがＣ（＝Ｏ）である場合、ＹがＣ（Ｒａ）２またはＳＯ２である請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
ＸがＣ（Ｒａ）２である場合、ＹがＣ（＝Ｏ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＸがＣ（＝Ｓ）である場合、ＹがＣ（＝Ｓ）またはＣ＝Ｏである請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
（６Ｒ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−３，４，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−オン、（６Ｓ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−３，４，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−オン、（６Ｒ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジチオン、（６Ｒ，１２ａＳ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジチオン、およびそれらの薬学的に許容可能な塩および溶媒和物からなるグループから選択される化合物。
【請求項１５】
下記の化合物：
【化７】
2004513128.tif 000048
【化８】
2004513128.tif 000049
【化９】
2004513128.tif 000050
からなるグループから選択される化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物を薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に含む薬学的組成物。
【請求項１７】
ｃＧＭＰに特異的なＰＤＥの阻害が治療的に有用である状態において雄性動物または雌性動物を処置する方法であって、請求項１に記載の化合物を薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に含む薬学的組成物の有効量を当該動物に投与することを含む方法。
【請求項１８】
状態が男性の勃起機能不全である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
処置が経口処置である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
状態が女性の性的興奮障害である請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
処置が経口処置である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
状態が、安定型狭心症、不安定型狭心症、異型狭心症、高血圧、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患、悪性高血圧症、クロム親和性細胞腫、急性呼吸窮迫症候群、鬱血性心不全、急性腎不全、慢性腎不全、アテローム性動脈硬化症、血管能力低下状態、末梢血管疾患、血管障害、血小板血症、炎症性疾患、心筋梗塞、発作、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、消化性潰瘍、消化管運動障害、経皮経管冠動脈形成術後、頸動脈血管形成術、バイパス手術後グラフト狭窄症、骨粗鬆症、早産、良性前立腺肥大および過敏性腸症候群からなるグループから選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
ヒトまたはヒト以外の動物において、ｃＧＭＰに特異的なＰＤＥの阻害が治療的に有用である状態を処置する方法であって、請求項１に記載の化合物の治療的有効量を当該動物に投与することを含む方法。
【請求項２４】
雄の勃起機能不全または雌の性的興奮障害を治療的または予防的に処置する方法であって、請求項１に記載の化合物ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物の有効量を動物に投与することを含む方法。
【請求項２５】
ｃＧＭＰに特異的なＰＤＥの阻害が治療上有用である状態の治療的または予防的処置のための医薬品を製造するための請求項１に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、一連の化合物、これら化合物の調製方法、これら化合物を含有する薬学的組成物、および治療剤としてのその使用に関する。
具体的には、本発明は、環状グアノシン３’，５’−モノリン酸に特異的なホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ）（特に、ＰＤＥ５）の強力な選択的阻害剤である化合物であって、心臓血管障害および勃起機能不全の処置を含む、かような阻害が効果的であると考えられる様々な治療領域において有用な化合物に関する。
【０００２】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記の式（Ｉ）の化合物：
【０００３】
【化１０】
2004513128.tif 000003
【０００４】
（式中、Ｒ０は独立して、ハロおよびＣ１〜６アルキルからなるグループから選択され；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ１〜３アルキル、アリールＣ１〜３アルキル、およびヘテロアリールＣ１〜３アルキルからなるグループから選択され；
Ｒ２は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなるグループから選択される任意に置換された単環芳香族環と、以下の任意に置換された二環系の環：
【０００５】
【化１１】
2004513128.tif 000004
【０００６】
（式中、縮合環Ａは、飽和型または一部または完全不飽和型の５員環または６員環であり、炭素原子と、酸素、硫黄および窒素から選択される１個または２個の任意のヘテロ原子とを含む）とから選択され；
Ｒ３は、水素およびＣ１〜３アルキルからなるグループから選択されるか、
あるいは、Ｒ１およびＲ３は共に、５員環または６員環の３員または４員のアルキル鎖要素またはアルケニル鎖要素を表し；
ＸおよびＹは独立して、Ｃ（＝Ｏ）、ＳＯ、ＳＯ２、Ｃ（＝Ｓ）およびＣ（Ｒａ）２からなるグループから選択され、ただし、ＸおよびＹの少なくとも一方がＣ（＝Ｏ）とは異なり；
Ｒａは水素またはＣ１〜６アルキルまたはベンジルであり；
ｑは、０、１、２、３または４である。）ならびにその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物を提供する。
【０００７】
本明細書で使用する「アルキル」の語には、提示した数の炭素原子を含有する直鎖状および分枝状の炭化水素基が含まれ、通常、メチル基、エチル基、そして直鎖および分枝状のプロピル基およびブチル基が含まれる。
「アルキル」の語には、「架橋アルキル」、すなわち、Ｃ６〜Ｃ１６のビシクロ炭化水素基または多環炭化水素基が含まれ、例えば、ノルボルニル、アダマンチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［３．２．１］オクチルまたはデカヒドロナフチルが含まれる。
「シクロアルキル」の語は、環状のＣ３〜Ｃ８炭化水素基として定義され、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシルまたはシクロペンチルである。
「アルケニル」および「アルキニル」の語は、炭化水素基がそれぞれ炭素−炭素の二重結合または炭素−炭素の三重結合を含有することを除いて、「アルキル」の語と同様に定義される。
「シクロアルケニル」の語は、炭素−炭素の二重結合が環上に存在することを除いて、シクロアルキルと同様に定義される。
炭化水素基は、１６個までの炭素原子を含有することができる。
【０００８】
「ハロ」または「ハロゲン」の語は、本明細書において、フッ素、臭素、塩素およびヨウ素を含むものと定義される。
【０００９】
「ハロアルキル」の語は、本明細書において、１つ以上のハロ置換基で置換されたアルキル基、すなわち、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードまたはそれらの組合せのいずれかで置換されたアルキル基として定義される。
同様に、「ハロシクロアルキル」の語は、１つ以上のハロ置換基を有するシクロアルキル基として定義される。
【００１０】
「アリール」の語は、本明細書において、それ単独または組合せで非置換であり得るか、または、例えば、１つ以上、好ましくは１〜３個のヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アルキル、ＣＯ２Ｒａ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニルおよびアルキルスルホニルで置換され得る単環または多環の芳香族基、好ましくは、単環または二環の芳香族基、例えば、フェニルまたはナフチルとして定義される。
アリール基の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、２−クロロフェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メトキシフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−ニトロフェニルなどがある。
「アリールＣ１〜３アルキル」および「ヘテロアリールＣ１〜３アルキル」の語は、Ｃ１〜３アルキル置換基を有するアリール基またはヘテロアリール基として定義される。
【００１１】
「ヘテロアリール」の語は、本明細書において、１つまたは２つの芳香族環を含有し、かつ少なくとも１個の窒素原子または酸素原子またはイオウ原子を芳香族環に含有する単環系または二環系であって、非置換であり得る単環系または二環系として、あるいは、例えば、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ＣＯ２Ｒａ、アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニルおよびアルキルスルホニルのような置換基の１つ以上、好ましくは１〜３個で置換され得る単環系または二環系として定義される。
【００１２】
ヘテロアリール基の例として、チエニル、フリル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリルおよびチアジアゾリルがある。
【００１３】
「アルコキシ」の語は、Ｒがアルキルである−ＯＲとして定義される。
【００１４】
「アルコキシアルキル」の語は、１つの水素がアルコキシ基によって置換されているアルキル基として定義される。
「（アルキルチオ）アルキル」の語は、酸素原子ではなくイオウ原子が存在することを除いて、同様に定義される。
【００１５】
「ヒドロキシ」の語は、−ＯＨとして定義される。
【００１６】
「ヒドロキシアルキル」の語は、ヒドロキシ基がアルキル基に結合しているものとして定義される。
【００１７】
「アミノ」の語は−ＨＮ２として定義され、「アルキルアミノ」の語は、少なくとも１つのＲがアルキルであり、もう１つのＲがアルキルまたは水素である−ＮＲ２として定義される。
【００１８】
「アシルアミノ」の語は、ＲがアルキルまたはアリールであるＲＣ（＝Ｏ）Ｎとして定義される。
【００１９】
「アルキルチオ」の語は、Ｒがアルキルである−ＳＲとして定義される。
【００２０】
「アルキルスルフィニル」の語は、ＲがアルキルであるＲ−ＳＯ２として定義される。
【００２１】
「アルキルスルホニル」の語は、ＲがアルキルであるＲ−ＳＯ３として定義される。
【００２２】
「ニトロ」の語は、−ＮＯ２として定義される。
【００２３】
「トリフルオロメチル」の語は、−ＣＦ３として定義される。
【００２４】
「シアノ」の語は、−ＣＮとして定義される。
【００２５】
好ましい実施形態において、Ｒ２は、任意に置換された以下の二環系の環系：
【００２６】
【化１２】
2004513128.tif 000005
【００２７】
であり、この二環系の環は、例えば、ナフタレンもしくはインデン、または複素環、例えば、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾイミダゾール、キノリン、インドール、ベンゾチオフェンもしくはベンゾフラン、または
【００２８】
【化１３】
2004513128.tif 000006
【００２９】
（式中、ｎは１または２の整数であり、Ｘは独立して、Ｃ（Ｒａ）２、Ｏ、ＳまたはＮＲａである）を表す。
Ｒ２置換基を含む二環系の環は、通常、フェニル環炭素原子によって分子の残部に結合する。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物の好ましい官能基として、Ｒ２は、任意に置換される以下の二環系の環：
【００３１】
【化１４】
2004513128.tif 000007
【００３２】
（式中、ｎは１または２であり、Ｘは独立して、ＣＨ２またはＯである）によって表される。
特に好ましいＲ１置換基には、下記の官能基：
【００３３】
【化１５】
2004513128.tif 000008
【００３４】
および、
【００３５】
【化１６】
2004513128.tif 000009
【００３６】
が含まれる。
【００３７】
これら化合物での特定の官能基に関して、二環系の環に対する置換基の例として、ハロゲン（例えば、塩素）、Ｃ１〜３アルキル（例えば、メチル、エチルまたはｉ−プロピル）、ＯＲａ（例えば、メトキシ、エトキシまたはヒドロキシ）、ＣＯ２Ｒａ、ハロメチルまたはハロメトキシ（例えば、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシ）、シアノ、ニトロ、およびＮ（Ｒａ）２があるが、これらに限定されない。
【００３８】
式（Ｉ）の一般的な範疇内にある化合物の特に好ましいサブクラスが、下記の式（ＩＩ）の化合物：
【００３９】
【化１７】
2004513128.tif 000010
【００４０】
（ＩＩ）
によって表される。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物は１つ以上の非対称中心を含むことができ、従って、立体異性体として存在し得る。
本発明は、式（Ｉ）の化合物の混合物および分離された個々の立体異性体の双方を含む。
式（Ｉ）の化合物にはまた、互変異性体が存在し得るので、本発明は、それらの混合物および分離された個々の互変異性体の双方を含む。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容可能な塩として、薬学的に許容可能な酸で形成される酸付加塩を挙げることができる。
好適な塩として、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩の塩があるが、これらに限定されない。
式（Ｉ）の化合物は、塩基を含む薬学的に許容可能な金属塩、特に、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩をも提供することができる。
その例として、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩およびカルシウム塩がある。
【００４３】
本発明の化合物は、ｃＧＭＰに特異的なＰＤＥ５の強力な選択的阻害剤である。
従って、式（Ｉ）の化合物は、治療用途での使用、具体的には、ＰＤＥ５の選択的阻害が有用であると考えられる様々な状態を処置するための使用が注目されている。
【００４４】
【発明が解決しようとする課題】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）などの環状ヌクレオチドの加水分解を触媒する。
ＰＤＥは、少なくとも７つのイソ酵素ファミリーに分類されており、多くの組織に存在している（Ｊ．Ａ． Ｂｅａｖｏ、Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｒｅｖ．、７５、ｐ．７２５（１９９５））。
【００４５】
ＰＤＥ５の阻害は、特に注目される標的である。
ＰＤＥ５の強力な選択的阻害剤は、血管拡張効果、弛緩効果および利尿効果をもたらし、これらはすべて、様々な疾患状態の処置において有用である。
この領域での研究により、ｃＧＭＰの基本構造に基づく数種類の阻害剤が明らかにされている（Ｅ． Ｓｙｂｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｔ． Ｏｐｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔ．， ７，ｐ．６３１（１９９７））。
【００４６】
従って、ＰＤＥ５阻害剤が呈する生化学的効果、生理学的効果および臨床的効果によって、その有用性が、平滑筋機能、腎臓機能、止血機能、炎症機能および／または内分泌機能を調節することが望ましい様々な疾患状態において示唆されている。
従って、式（Ｉ）の化合物は、安定型および不安定型および異型（プリンズメタル型）の狭心症、高血圧、肺高血圧症、鬱血性心不全、急性呼吸窮迫症候群、急性腎不全および慢性腎不全、アテローム性動脈硬化症、血管能力が低下した状態（例えば、経皮経管冠動脈形成術後もしくは頸動脈血管形成術またはバイパス手術後グラフト狭窄症）、末梢血管疾患、血管障害（レイノ病など）、血小板血症、炎症性疾患、発作、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、骨粗鬆症、早産、良性前立腺肥大、消化性潰瘍、男性の勃起機能不全、女性の性的興奮障害、ならびに消化管運動障害を特徴とする疾患（例えば、過敏性腸症候群）を含む多数の障害を処置することにおいて有用である。
【００４７】
特に重要な用途として、インポテンスの一形態であり、一般的な医学的問題でもある男性の勃起機能不全の処置がある。
インポテンスは、男性の性交力欠如として定義でき、陰茎勃起および／または射精を達成できないことが包含される。
勃起機能不全の発生率は年齢とともに増大し、４０歳をこえる男性の約５０％が、ある程度の勃起機能不全に罹っている。
【００４８】
さらに重要な用途として、女性の性的興奮障害の処置がある。
女性の性的興奮障害とは、性的興奮によって十分な潤滑／膨張応答を呈し、または性行為の完了に至るまでそのような応答を満足に維持できないこととして定義される。
性的興奮応答は、骨盤の血管充血、膣潤滑、ならびに外性器の拡張および膨張からなる。
【００４９】
【発明の実施の形態】
式（Ｉ）の化合物は、男性の勃起機能不全および女性の性的興奮障害の処置において有用であることが考えられる。
従って、本発明は、ヒトを含む雄性動物での勃起機能不全およびヒトを含む雌性動物での性的興奮障害の治療用または予防用の医薬品を製造するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはそれらのいずれかを含有する薬学的組成物の使用に関する。
【００５０】
「処置」の語には、処置されている状態または症状の進行または重篤度を防止、低下、停止または逆転させることが含まれる。
そのため、語「処置」の語には、必要であれば、医学的治療および／または予防のための投与が含まれる。
【００５１】
「式（Ｉ）の化合物」またはその生理学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物は、化合物それ自体、またはそれらを含有する薬学的組成物として投与されることも考えられる。
【００５２】
本発明の化合物は、男性の勃起機能不全および女性の性的刺激障害などのヒトにおける性的機能不全を処置する用途が主に考えられるが、本発明の化合物はまた、他の様々な疾患状態を処置するためにも使用することができる。
【００５３】
従って、本発明のさらなる態様は、安定型および不安定型および異型（プリンズメタル型）の狭心症、高血圧、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患、鬱血性心不全、急性呼吸窮迫症候群、急性腎不全および慢性腎不全、アテローム性動脈硬化症、血管能力が低下した状態（例えば、ＰＴＣＡ後またはバイパス手術後グラフト狭窄症）、末梢血管疾患、血管障害（レイノ病など）、血小板血症、炎症性疾患、心筋梗塞の予防、発作の予防、発作、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、骨粗鬆症、早産、良性前立腺肥大、男性および女性の勃起機能不全、あるいは消化管運動障害を特徴とする疾患（例えば、ＩＢＳ）を処置する際に使用される式（Ｉ）の化合物を提供することである。
【００５４】
本発明の他の態様によれば、上記した状態および障害を処置する医薬品を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用が提供される。
【００５５】
さらなる態様において、本発明は、ヒトまたはヒト以外の動物での上記状態および障害を処置する方法を提供する。
この方法は、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物を生体に投与することを含む。
【００５６】
本発明の化合物は、任意の好適な経路で投与でき、例えば、経口投与、口内投与、吸入投与、舌下投与、直腸投与、膣内投与、経尿道投与、鼻腔投与、局所投与、皮膚を介した（すなわち、経皮的）投与、または非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および冠状動脈内投与を含む）で投与できる。非経口投与は、ニードルおよびシリンジを使用して、またはＰＯＷＤＥＲＪＥＣＴ（登録商標）のような高圧技術を使用して行うことができる。
【００５７】
経口投与は、本発明の化合物の好ましい投与経路である。
経口投与は、最も好適な投与であり、これにより、他の投与経路で認められる様々な不都合が避けられる。
嚥下障害の患者または経口投与後の薬物吸収が損なわれている患者については、薬物を非経口的に投与することができ、例えば、舌下投与または口内投与を行うことができる。
【００５８】
本発明での使用に好適な化合物および薬学的組成物には、有効成分が、その意図された目的を達成するに足る有効量で投与されるものが含まれる。
具体的には、「治療的有効量」とは、処置されている患者の発症を防止するために効果的な量、または処置されている患者の既に存在する症状を緩和するに効果的な量を意味する。
効果的な量の決定は、特に、本明細書中に示される詳細な開示を考慮すれば、当業者であれば十分に決定可能な範囲内のものである。
【００５９】
「治療効果用量」とは、所望の効果を呈する化合物の量である。
これら化合物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％致死量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療効果が認められる用量）を決定するための細胞培養または実験動物などの標準的な薬学的手法によって決定することができる。
毒性効果と治療効果との用量比は、ＬＤ５０とＥＤ５０との比として表される治療指数である。
治療指数が大きな化合物が好ましい。
これらデータから得られる情報は、ヒトに用いる投与量範囲を明確化するために使用することができる。
これら化合物の投与量は、好ましくは、毒性を多少なりとも伴わず、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内とする。
投与量は、用いられる投与形態および利用される投与経路によって、この範囲内で変化させることができる。
【００６０】
正確な処方、投与経路および投与量は、患者の状態を考慮して、個々の医師によって決定することができる。
投与量および投与間隔は、治療効果を維持する上で十分な活性成分の血漿中レベルを得るために個々を調節することができる。
【００６１】
組成物の投与量は、処置されている患者、患者の体重、疼痛の程度、投与形態および処方医師の判断によって決定される。
【００６２】
具体的には、上記した状態および障害の治療または予防のための処置においてヒトに投与される場合、式（Ｉ）の化合物の経口投与量は、一般に、平均的な成人患者（７０ｋｇ）で、１日あたり約０．５ｍｇ〜約１０００ｍｇである。
従って、一般的な成人患者の場合、個々の錠剤またはカプセルは、１日あたり１回または数回、単回用量または多回用量で投与するために、０．２ｍｇ〜５００ｍｇの活性な化合物を、好適な薬学的に許容可能な賦形剤または担体に含有せしめる。
静脈内投与または口内投与または舌下投与での投与量は、一般的には、必要に応じて、単回用量あたり０．１ｍｇ〜５００ｍｇである。
実際には、医師によって、個々の患者に対して最も好適な実際の投与法が決定されるが、投与量は、患者の年齢、体重および応答状態によって変化する。
上記投与量は、平均的事例を示すものであるが、個々の症例に応じて、上記投与量よりも大きいまたは少ない投与量で効果が得られる場合があり、かようなことも本発明の範囲内の事項である。
【００６３】
ヒトに用いる場合、式（Ｉ）の化合物は単独で投与することができるが、一般的には、意図された投与経路および標準的な製薬手順において選択された薬学的担体と共に混合されて投与される。
よって、本発明に従って用いられる薬学的組成物は、薬学的に使用される調製物への式（Ｉ）の化合物の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む一つ以上の生理学的に許容可能な担体を使用して、従来の方法によって調合することができる。
【００６４】
これら薬学的組成物は、従来の方法で、例えば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣錠調製プロセス、研和化プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、包括化プロセスまたは凍結乾燥プロセスによって製造することができる。
好適な配合は、選択された投与経路によって定まる。
治療的有効量の本発明の化合物が経口投与される場合、組成物は、一般的には、錠剤、カプセル、粉末剤、溶液剤またはエリキシル剤の形態とする。
錠剤形態で投与される場合、組成物は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体の担体をさらに含有することができる。
錠剤、カプセルおよび粉末剤は、約５％〜約９５％、好ましくは、約２５％〜約９０％の本発明の化合物を含有する。
液体形態で投与される場合、水、鉱油、または動物起源もしくは植物起源の油液などの液体の担体を加えることができる。
液状形態の組成物には、生理食塩水、デキストロースもしくは他の糖の溶液、またはグリコールをさらに含有することができる。
液状形態で投与される場合、組成物は、約０．５重量％〜約９０重量％、好ましくは、約１重量％〜約５０重量％の本発明の化合物を含有する。
【００６５】
治療的有効量の本発明の化合物が、静脈内注射、経皮注射または皮下注射によって投与される場合、組成物は、パイロジェンを含まない非経口的に許容可能な水溶液の形態とする。
このような非経口的に許容可能な溶液剤の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを適正に考慮すれば、当業者に自明の範囲内のものである。静脈内注射、経皮注射または皮下注射のための好ましい組成物は、一般的に、本発明の化合物に加えて、等張性のビヒクルを含有する。
【００６６】
経口投与される場合、式（Ｉ）の化合物と当該技術分野で周知の薬学的に許容可能な担体とを組み合わせることによって、化合物を容易に配合することができる。
このような担体は、本発明の化合物を、処置される患者によって経口摂取される、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などへの配合を可能とする。
経口使用される薬学的調製物は、式（Ｉ）の化合物を固体の賦形剤とともに加え、必要に応じて混合物を粉砕し、そして錠剤または糖衣錠コアを得るために、必要に応じて好適な補助剤を加えた後に、顆粒の混合物を加工することで得ることができる。
好適な賦形剤には、例えば、充填剤およびセルロース調製物が含まれる。
必要に応じて、崩壊剤を加えることができる。
【００６７】
吸入により投与される場合、本発明の化合物は、好適な噴射剤の使用によって、加圧パックまたはネブライザーからもたらされるエアロゾルスプレーの形態で好適に供給される。
加圧されたエアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量を供給するためのバルブで決めることができる。
吸入器または吹き入れ器において使用されるカプセルやカートリッジ（例えば、ゼラチン）に、ラクトースやデンプンなどの好適な粉末基剤と本発明の化合物との粉末混合物を配合することができる。
【００６８】
本発明の化合物を、注射による非経口投与、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。
注射用剤は、保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多回用量容器内での単位用量投与形態で提供することができる。
組成物は、懸濁物、溶液、または油性もしくは水性の賦形剤によってエマルションの形態とすることができ、そして、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの調合剤を含有することができる。
【００６９】
非経口投与される薬学的組成物は、水溶性形態の活性な化合物の水溶液を含む。
さらに、活性な化合物の懸濁物を、好適な油性の注射用懸濁物として調製することができる。
好適な親油性の溶媒または賦形剤には、液状油脂また合成脂肪酸エステルが含まれている。
水性の注射用懸濁物には、懸濁物の粘度を増大させる物質を含有することができる。
また、懸濁剤には、任意に、化合物の溶解性を増大させ、かつ高濃度の溶液剤の調製を可能にする好適な安定化剤または薬剤を含有せしめることができる。
あるいは、本発明の組成物は、使用前に、好適な賦形剤、例えば、滅菌されたパイロジェン非含有水で構成される粉末形態とすることができる。
【００７０】
本発明の化合物はまた、例えば、従来の坐薬基剤を含有する坐薬または滞留型浣腸剤などの直腸用組成物に配合することができる。
前述の組成物に加えて、本発明の化合物は、デポ剤調製物にも配合することができる。
かような長期作用性の調合物は、（例えば、皮下または筋肉内への）埋め込みによって、または筋肉内注射によって投与できる。
従って、例えば、本発明の化合物は、好適なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、許容可能な液状油脂でのエマルションとして）またはイオン交換樹脂と共に配合することができ、あるいは、やや難溶性の誘導体、例えば、やや難溶性の塩として配合することができる。
【００７１】
本発明の化合物の多くは、薬学的に適合し得る対イオンを有する塩として提供できる。
このような薬学的に許容可能な塩基付加塩とは、遊離酸の生物学的有効性と生物学的性質を保持し、好適な無機塩基または有機塩基との反応によって得られる塩である。
【００７２】
特に、式（Ｉ）の化合物は、デンプンまたはラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態で、または単独もしくは賦形剤との混合物のいずれかを含むカプセルもしくは卵型剤型で、または矯味矯臭剤もしくは着色剤を含有するエリキシル剤もしくは懸濁剤の形態で経口投与、口内投与または舌下投与することができる。このような液体調製物は、懸濁剤などの薬学的に許容可能な添加剤を用いて調製することができる。
また、本発明の化合物は、非経口的に注射することができ、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与または冠状動脈内に投与することができる。
非経口投与される場合、本発明の化合物は、溶液と血液とを等張にするための物質、例えば、塩またはマンニトールやグルコースなどの単糖を含有し得る滅菌済水溶液の形態で最もよく使用される。
【００７３】
獣医学的に用いる場合、式（Ｉ）の化合物またはその非毒性の塩は、通常の獣医学的用途において好適に許容される調合物として投与される。
獣医は、特定の動物について最適である投与法および投与経路を容易に決定することができる。
【００７４】
従って、本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物を、それに対して薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に含む薬学的組成物を提供する。
さらに、本発明によって、式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物を調製する方法が提供される。
この方法は、式（Ｉ）の化合物を、それに対して薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に混合することを含む。
【００７５】
特定の実施態様によれば、本発明は、ヒトを含む雄性動物における勃起機能不全またはヒトを含む雌性動物における性的興奮障害の治療または予防のための処置に用いる薬学的組成物を含む。
この組成物は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、薬学的に許容可能な希釈剤または担体と共に含む。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物は、当該技術分野で周知の任意の好適な方法によって、または本発明の一部を形成する以下のプロセスによって調製することができる。
以下の方法において、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３、ならびにＸおよびＹは、前出の構造式（Ｉ）において定義されている。
特に、構造式（Ｉ）の化合物は、以下の合成スキームに従って調製することができる。
方法Ａは、Ｘおよび／またはＹがＣ（＝Ｓ）である化合物の調製のために使用することができる。
方法Ｂは、ＹがＣＨＲａであり、Ｒａが水素またはＣ１〜６アルキルまたはベンジルである化合物を調製するために使用することができる。
方法Ｃおよび方法Ｄは、ＸがＣＨ２である化合物を調製するために使用することができる。
方法Ｅは、ＹがＳＯ２である化合物を調製するために使用することができる。
【００７７】
特に、本明細書に参考までに取り込んだ、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号には、以下の構造式（ＩＩＩ）の化合物の調製が開示されている。
【００７８】
【化１８】
2004513128.tif 000011
【００７９】
つまり、構造式（ＩＩＩ）の化合物、すなわち、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号での中間体１および中間体２のシス異性体が、以下の反応スキームに従って調製された。
【００８０】
【化１９】
2004513128.tif 000012
【００８１】
Ｄ−トリプトファンメチルエステル
【００８２】
【化２０】
2004513128.tif 000013
【００８３】
ピペロナール
【００８４】
【化２１】
2004513128.tif 000014
【００８５】
【化２２】
2004513128.tif 000015
【００８６】
（ＩＩＩ） （ｃｉｓ−異性体）
【００８７】
【化２３】
2004513128.tif 000016
【００８８】
（ＩＩＩａ） （ｔｒａｎｓ−異性体）
構造式（Ｉ）の化合物は、トリプトファンエステル、または好適なＲ０置換基で置換されたトリプトファンエステルを、所望するＲ２置換基をもたらす好適なアルデヒドと反応することによって同様に調製される。
得られた生成物は、その後、構造式（Ｉ）の化合物を得るために、好適なアミンとの反応によって環化される。この環化反応は、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号に開示されている。
【００８９】
構造式（Ｉ）の化合物の合成において、当業者に周知のクロロギ酸ベンジルおよびクロロギ酸トリクロロエチルのような保護化合物や保護基を使用することができる。
このような保護基は、例えば、Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ．， ’’Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第３版）’’（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．、ＮＹ、ＮＹ（１９９９））に開示されている。
これらの保護基は、合成の最終工程において、当業者に自明の塩基性条件、酸性条件または水素化分解条件の下で除かれる。
化学官能基を適切に操作および保護することで、本明細書にて具体的に示されていない構造式（Ｉ）の化合物の合成を、以下に示されるスキームに類似する方法によって行うことができる。
例えば、構造式（Ｉ）の化合物の構造は、Ｒ２の置換基を変化させる上で適切なアルデヒドを使用することによって、または、ハロ置換もしくはアルキルフェニル置換のトリプトファンエステルを使用することによって変化させることができる。
【００９０】
式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の他の化合物に変換することができる。
よって、化合物が置換芳香族環を含有する場合には、好適に置換された式（Ｉ）の他の化合物の調製などが可能となる。
適切な相互変換の例として、（例えば、ＢＢｒ３、ＳｎＣｌ２などの薬剤や、パラジウム担持カーボンなどのパラジウム触媒を使用する）好適な手段によってＯＲａをヒドロキシにすることや、標準的なアシル化条件もしくはスルホニル化条件を使用してアミノをアルキルアミノなどの置換アミノにすることなどがあるが、これらに限定されない。
【００９１】
構造式（Ｉ）の化合物は、以下に例示した五つの合成スキームのいずれかに従って調製することができる。
【００９２】
方法Ａ（Ｘおよび／またはＹがＣ＝Ｓである）
一例として、一般式（ＩＶ）の１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン類を、例えば、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号およびＡ． Ｍａｄｒｉｇａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、６３、ｐ．２７２４ （１９９８）に記載のピクテット−スペングラー反応によって調製することができる。
得られる二級アミンは、その後、好適なアシル化条件下でアミノ酸または酸塩化物のいずれかで処理され、アミド−エステルにされる。
ジケトピペラジン（Ｖ）にするために、エステルに対する分子内アミンの攻撃によって閉環がなされる。
アミンは、一級アミン化合物と反応する脱離基を有する好適な側鎖に由来する。
従って、化合物（Ｖ）のカルボニル基は、ローエソン試薬のようなチオン化試薬を用いることで、チオカルボニル基に変換することができる。Ｍ．Ｐ． Ｃａｖａ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、４１、５０６１（１９８５）を参照のこと。
【００９３】
【化２４】
2004513128.tif 000017
【００９４】
【化２５】
2004513128.tif 000018
【００９５】
【化２６】
2004513128.tif 000019
【００９６】
方法Ｂ（ＹがＣＨＲａであり、ＲａはＨまたはＣ１〜６アルキルまたはベンジルである）
１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン（ＩＶ）は、好適な脱離基をα位に有するアルデヒドまたはケトンと、還元的アミン化条件下（Ｌａｍ、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１３５ （１９７５）またはＡｂｄｅｌ−Ｍａｙｏ、Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ．， ３１、ｐ．５５９５ （１９９０） を参照のこと）で反応する。
アミドにするために、一級アミンと共に化合物（ＶＩＩ）を好適な溶媒中で加熱することで閉環される。
【００９７】
【化２７】
2004513128.tif 000020
【００９８】
【化２８】
2004513128.tif 000021
【００９９】
方法Ｃ（Ｘ＝ＣＨ２）
化合物（ＩＶ）は、例えば、ＬｉＡｌＨ４を使用してアルコール（ＶＩＩＩ）に還元される（Ａ． Ｍｏｎｓｅｅｓ、Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ．／Ｒｅｃｕｅｉｌ、５５３（１９９７）を参照のこと）。
二級アミン（ＶＩＩＩ）を好適なアシル化条件下で、アミノ酸またはα−クロロ酸塩化物のいずれかで処理し、その後、一級アミンと反応することによって、アミド（ＩＸ）が得られる。
モノケトピペラジンにするために、好適な脱離基、例えば、クロリドまたはメシラートを有するＣ−６に対する分子内アミン攻撃によって閉環が行われる。
【０１００】
【化２９】
2004513128.tif 000022
【０１０１】
【化３０】
2004513128.tif 000023
【０１０２】
方法Ｄ（Ｘ＝ＣＨ２）
あるいは、エステル部分をアルコール（ＶＩＩ）に還元した後、アルコール（ＶＩＩ）を、脱離基、例えば、メシラート（Ｘａ）を用いて活性化でき、そして、アミノ酸で処理して（ＸＩ）にすることができる。
化合物（ＸＩ）はまた、アルデヒド（Ｘｂ）およびアミノ酸から、還元的アミン化工程によって調製することができる。
ＤＣＣを用いて二級アミン（ＸＩ）をカルボン酸とカップリングすることにより、式中のＸがＣＨ２である化合物（Ｉ）が得られた。
【０１０３】
【化３１】
2004513128.tif 000024
【０１０４】
方法Ｅ（Ｘ＝ＳＯ２）
塩基性条件下での１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン（ＩＶ）のクロロメタンスルホニルクロリドによる処理（Ｌ． Ｐａｑｕｅｔｔｅ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、１２１、８１２６ （１９９９）を参照のこと）により、化合物（ＸＩＩ）が得られる。
スルホンアミド（ＸＩＩ）と一級アミンとの反応により、式中のＹがＳＯ２である化合物（Ｉ）が得られる。
【０１０５】
【化３２】
2004513128.tif 000025
【０１０６】
式（Ｉ）の化合物は、個々の立体異性体またはラセミ混合物として、上記の方法によって調製することができる。
本発明の化合物の個々の立体異性体は、ラセミ混合物をその構成する立体異性体に分離するために、当該技術分野で周知の方法で分割することで、例えば、Ｈｙｐｅｒｓｉｌナフチルウレアなどのキラルなカラムを利用したＨＰＬＣを用いる分割によって、または立体異性体の塩の分離を利用する分割によって、ラセミ体から調製することができる。
本発明の化合物は、適切な溶媒からの結晶化、または適切な溶媒の蒸発によって、溶媒分子との会合状態で単離することができる。
【０１０７】
塩基性中心を含む式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容可能な酸付加塩を、従来の手法で調製することができる。
例えば、遊離塩基の溶液を、好適な酸で直接的に、または好適な酸溶液で処理し、次いで、得られる塩を、減圧下での反応溶媒の蒸発または濾過によって単離することができる。
薬学的に許容可能な塩基付加塩は、式（Ｉ）の化合物の溶液を好適な塩基で処理することで、同様の手法によって得ることができる。
両タイプの塩は、イオン交換樹脂技術を使用して形成または相互変換させることができる。
従って、本発明のさらに他の態様によれば、（ｉ）塩の形成、または（ｉｉ）溶媒和物（例えば、水和物）の形成を伴う、式（Ｉ）の化合物または塩もしくは溶媒和物（例えば、水和物）の調製方法が提供される。
【０１０８】
【実施例】
以下の略号が、本願実施例にて使用される。
ｒｔ （室温）、ｍｉｎ （分）、ｈ （時間）、ｇ （グラム）、ｍｍｏｌ （ミリモル）、ｍ．ｐ． （融点）、ｅｑ （当量）、Ｌ （リットル）、ｍＬ （ミリリットル）、μＬ （マイクロリットル）、ＣＨ２Ｃｌ２ （塩化メチレン）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＮａＨＣＯ３ （重炭酸ナトリウム）、Ｎａ２ＳＯ４ （硫酸ナトリウム）、ＮａＯＨ （水酸化ナトリウム）、Ｅｔ３Ｎ （トリエチルアミン）、ＭｅＮＨ２ （メチルアミン）、ＡｃＯＨ （酢酸）、ＤＭＳＯ （ジメチルスルホキシド）、ＤＣＣ （ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＣＯＣｌ２ （塩化チオニル）、ＭｓＣｌ （メタンスルホニルクロリド）、ＬｉＡｌＨ４ （水素化アルミニウムリチウム）、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ （トリアセトキシホウ水素化ナトリウム）、ＮａＢＨ３ＣＮ （シアノホウ水素化ナトリウム）、および ＴＨＦ （テトラヒドロフラン）。
【０１０９】
実施例１の調製
（６Ｒ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−３，４，６，７，１２，１２ａ−
ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−オン
【０１１０】
【化３３】
2004513128.tif 000026
【０１１１】
実施例１を、以下の合成スキームに示されるようにして、（＋）−カルボリン（ＩＩＩ）から調製した。
還元的アミン化の反応時間を短くすることによって、トランス異性体へのエピマー化が避けられた。
【０１１２】
【化３４】
2004513128.tif 000027
【０１１３】
【化３５】
2004513128.tif 000028
【０１１４】
ｃｉｓ−２−クロロエチル−β−カルボリン（中間体１）の調製
トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（４．９３ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）を、（＋）−カルボリン（ＩＩＩ）（８．１４ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）と、クロロアセトアルデヒド（２．９５ｍＬ、２３．３ｍｍｏｌ、Ｈ２Ｏにおける５０：５０ｗ／ｗ）と、酢酸（３．０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）とのＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）における混合物に加え、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。
得られた黄色の懸濁物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で洗浄した。
有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で（２０ｍＬで２回）洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して、溶媒を減圧下で除き、黄色のオイルを得た。
残渣を、塩化メチレン／酢酸エチル（２５：１）で溶出する、短いシリカゲルの充填層を具備した迅速クロマトグラフィーによって精製して、明るい黄色を呈する固体の中間体１を得た（２．１ｇ、２２％）：ＴＬＣ Ｒｆ（塩化メチレン）＝０．６８；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．５５〜７．４６（ｍ、１Ｈ）、７．３７〜７．０３（ｍ、４Ｈ）、６．９４〜６．７７（ｍ、３Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、５．９６（ｓ、１Ｈ）、５．３９（ｓ、１Ｈ）、３．９９〜３．９０（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．５０〜３．３９（ｍ、１Ｈ）、３．３０〜２．９３（ｍ、５Ｈ）。
【０１１５】
実施例１の調製
中間体１（８２４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）およびメチルアミン（６．０ｍＬ、ＴＨＦにおける２．０Ｍ、１２．０ｍｍｏｌ）のメタノール（１８ｍＬ）おける混合物を、窒素雰囲気下において、４０℃で１８時間加熱した。
得られた黄色の溶液を減圧下で濃縮し、残渣を、塩化メチレン／酢酸エチル（１０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体の実施例１を得た（３８５ｍｇ、５１％）。
生成物を、メタノール（２ｍＬ）と共に粉砕することで、さらに精製した：融点２１４〜２１９℃；ＴＬＣ Ｒｆ（９：１の塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．４１；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ６Ｄ６における４３％ＣＤＣｌ３）δ：７．５７〜７．５３（ｍ、１Ｈ）、７．１０〜７．０４（ｍ、２Ｈ）、６．９３〜６．８５（ｍ、２Ｈ）、６．８０（ｓ、１Ｈ）、６．６９〜６．６３（ｍ、２Ｈ）、５．５４（ｓ、１Ｈ）、５．５２（ｓ、１Ｈ）、４．０５（ｓ、１Ｈ）、３．６９（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．５、３．９、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、４．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．０６〜２．９４（ｍ、２Ｈ）、２．７１（ｓ、３Ｈ）、２．６６（ｄｄ、Ｊ＝１３．６、４．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１〜２．４４（ｍ、１Ｈ）、２．１１（ｄｔ、Ｊ＝１１．８、３．６Ｈｚ、１Ｈ）；ＡＰＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３７６ ［Ｃ２２Ｈ２１Ｎ３Ｏ３＋Ｈ］＋；［α］Ｄ２５℃＝＋６７．６９°（ｃ＝０．５、ＣＨＣｌ３）。
元素分析、計算値（Ｃ２２Ｈ２１Ｎ３Ｏ３−０．２５Ｈ２Ｏ）：Ｃ、６９．５５；Ｈ、５．７０；Ｎ、１１．０６。
実測値：Ｃ、６９．５０；Ｈ、５．８４；Ｎ、１１．０８。
実施例１の類似体についての立体化学、すなわち、一連のＮＯＥ示差実験によって、３．２５ｐｐｍのＣ１２ａプロトンから４．０５ｐｐｍのＣ６プロトンへの正のＮＯＥ増強；４．０５ｐｐｍのＣ６プロトンから３．２５ｐｐｍのＣ１２ａプロトンへの正のＮＯＥ増強が認められ、所望のシス異性体であることが確認された。
【０１１６】
実施例２の調製
（６Ｓ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−３，４，６，７，１２，１２ａ−
ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１−オン
【０１１７】
【化３６】
2004513128.tif 000029
【０１１８】
実施例２を、以下の合成スキームに示されるようにして、中間体（ＩＩＩ）から調製した。
還元的アミン化条件下では、エピマー化が生じ、トランス異性体のみが得られた。
【０１１９】
【化３７】
2004513128.tif 000030
【０１２０】
【化３８】
2004513128.tif 000031
【０１２１】
ｔｒａｎｓ−２−クロロエチル−β−カルボリン（中間体２）の調製
トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１．９１ｇ、９．０ｍｍｏｌ）を、（＋）−カルボリン（ＩＩＩ）（２．１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）、クロロアセトアルデヒド（０．８４ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ、Ｈ２Ｏにおける５０／５０ｗ／ｗ）、酢酸（０．３９ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）の混合物に加え、得られた混合物を室温で１８時間撹拌した。
さらにトリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１．９１ｇ、９．０ｍｍｏｌ）およびクロロアセトアルデヒド（０．８４ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ、Ｈ２Ｏにおける５０／５０ｗ／ｗ）を加え、得られた混合物を４０℃でさらに１６時間撹拌した。
得られた黄色の懸濁物を１ＮのＮａＯＨ水溶液（ｐＨ１１）で処理して、塩化メチレン（７０ｍＬ）で希釈した。
有機層を塩性溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して、溶媒を減圧下で除いた。
残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、中間体２を白色の固体として得た（０．９５ｇ、３８％）。
このものは、ＮＯＥ示差実験（増強なし）によってトランス異性体であることが確認された：ＴＬＣ Ｒｆ（ＣＨ２Ｃｌ２）＝０．９２；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．５５〜７．４７（ｍ、１Ｈ）、７．３１（ｂｓ、１Ｈ）、７．２０〜７．０４（ｍ、３Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５〜６．７４（ｍ、２Ｈ）、５．９６（ｓ、１Ｈ）、５．９１（ｓ、１Ｈ）、５．３６（ｓ、１Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４０〜３．２０（ｍ、４Ｈ）、３．１６〜３．０８（ｍ、２Ｈ）。
【０１２２】
実施例２の調製
中間体２（０．９５ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）、メチルアミン（１１．６ｍＬ、ＴＨＦでの２．０Ｍ、２３．１ｍｍｏｌ）およびメタノール（２０ｍＬ）の混合物を、窒素雰囲気下で、５０℃で１８時間加熱した。
得られた黄色の溶液を減圧下で濃縮し、残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル（５：１）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、実施例２を、白色の固体として得た（０．５９ｇ、５９％）。
このものは、ＮＯＥ示差実験（増強なし）によってトランス異性体であることが確認された：融点２６９〜２７５℃；ＴＬＣ Ｒｆ（４：１の塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．２３；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１０．６（ｓ、１Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．９０〜７．１０（ｍ、２Ｈ）、６．８９〜６．８０（ｍ、１Ｈ）、６．７３（ｓ、１Ｈ）、６．５３（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．９８（ｓ、１Ｈ）、５．９７（ｓ、１Ｈ）、５．１２（ｓ、１Ｈ）、３．５０〜３．００（ｍ、５Ｈ）、２．８２（ｓ、３Ｈ）、２．７８〜２．６５（ｍ、１Ｈ）、２．５０〜２．３８（ｍ、１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１６８．５、１４６．０、１４６．６、１３６．１、１３２．９、１３２．１、１２６．１、１２２．４、１２０．８、１１８．２、１１７．７、１１０．９、１０９．５、１０７．５、１０６．６、１００．８、６１．２、５３．９、４７．６、４５．７、３３．４、２４．１ｐｐｍ；ＣＩ ＭＳ（メタン）ｍ／ｚ ３６７ ［Ｃ２２Ｈ２１Ｎ３Ｏ３＋Ｈ］＋；［α］Ｄ２５℃＝＋１６７．４°（ｃ＝０．５、ＤＭＳＯ−ｄ６）。
元素分析、計算値（Ｃ２２Ｈ２１Ｎ３Ｏ３）：Ｃ、７０．３８；Ｈ、５．６４；Ｎ、１１．１９。実測値：Ｃ、７０．０９；Ｈ、５．５９；Ｎ、１０．８２。
【０１２３】
実施例３の調製
実施例３は、トランス異性体中間体（ＩＩＩａ）を用いて、実施例１および実施例２と同様にして調製された。
【０１２４】
【化３９】
2004513128.tif 000032
【０１２５】
実施例３
実施例４の調製
実施例４は、方法Ｃの合成法に従って調製された。
【０１２６】
【化４０】
2004513128.tif 000033
【０１２７】
実施例４
実施例５の調製
（６Ｒ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−
ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジチオン
【０１２８】
【化４１】
2004513128.tif 000034
【０１２９】
【化４２】
2004513128.tif 000035
【０１３０】
ローエソン試薬（３．２０ｇ、７．９１２ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）での（６Ｒ，１２ａＲ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（中間体３、３．００ｇ、７．７０９ｍｍｏｌ）のスラリーに加えた。
中間体３の合成は、本明細書に参考までに取り入れたＤａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号に紹介されている。
混合物を、窒素雰囲気下で、室温で、３日間撹拌した。
反応混合物を、４０℃未満の温度において真空下で濃縮して、オレンジ色の半固体にした。
生成物を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２）で精製し、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶した。
ろ過して生成物を回収し、７０％ＭｅＯＨ／Ｈ２ＯおよびＨ２Ｏで洗浄して、０．８２ｇ（２５％）の実施例５を、淡黄色の固体として得た：融点１５８〜１６２℃；ＴＬＣ Ｒｆ（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）＝０．４５；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．４７（ｓ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｓ、１Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｔｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｔｄ、Ｊ＝１．０Ｈｚ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．７５（ｄ、Ｊ＝１．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．５９（ｄｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．９５（ｄｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、Ｊ＝１．０Ｈｚ、２Ｈ）、５．００（ｄ、Ｊ＝１７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．８５（ｄ、Ｊ＝１８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８１（ｍ、１Ｈ）、３．６１（ｄｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、Ｊ＝１６Ｈｚ、１Ｈ）、３．５３（ｓ、３Ｈ）、３．４４〜３．３７（ｍ、１Ｈ）。
ＭＳ（ＡＰＩ）ｍ／ｚ ４２０（Ｍ−Ｈ）；［α］Ｄ２５℃＝−５３１．３°（ｃ＝０．３５、ＤＭＳＯ）。
元素分析、計算値（Ｃ２２Ｈ１９Ｎ３Ｓ２・０．５Ｈ２Ｏ）：Ｃ、６１．３７；Ｈ、４．６８；Ｎ、９．７６、Ｓ、１４．９０。
実測値：Ｃ、６１．１７；Ｈ、４．５４；Ｎ、９．５９；Ｓ、１４．９８。
生成物についての相対的立体化学、すなわち、ＮＯＥ示差実験（ＤＭＳＯ−ｄ６）での４．７３ｐｐｍのＣ１２ａプロトンから７．４２ｐｐｍのＣ６プロトンへの正のＮＯＥ増強によって、シス異性体であることが確認された。
【０１３１】
実施例６の調製
（６Ｒ，１２ａＳ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−
ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジチオン
【０１３２】
【化４３】
2004513128.tif 000036
【０１３３】
ローエソン試薬（３．２０ｇ、７．９１２ｍｍｏｌ）を、トルエン（４０ｍＬ）での（６Ｒ，１２ａＳ）−６−ベンゾ［１，３］ジオキソル−５−イル−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（３．００ｇ、７．７０９ｍｍｏｌ）のスラリーに加えた。
この出発物質の合成は、Ｄａｕｇａｎの米国特許第５，８５９，００６号に記載されている。
混合物を加熱還流し、その間に、オレンジ色の溶液が得られた。
出発物質は、１時間後には検出されなかった。
反応液を室温にまで冷却し、真空下で濃縮した。
生成物をシリカゲルで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２を使用して、生成物を溶出した。
透明な画分を回収および濃縮して、黄色の固体（２．８５ｇ）を得た。
これをＭｅＯＨに溶解し、水を加えて、生成物を結晶化させた。
生成物をろ過して回収し、７０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏおよび水で洗浄することによって、２．２ｇ（６７％）の実施例６が、５０℃で真空乾燥した後に、淡黄色の固体として得られた：融点１７７〜１８２℃；ＴＬＣ Ｒｆ（１００％ＣＨ２Ｃｌ２）＝０．５３；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．２９（ｓ、１Ｈ）、８．１１（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝１．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７０（ｄｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、Ｊ＝１．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、２Ｈ）、４．９６（ｓ、２Ｈ）、４．７３（ｄｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．５２（ｄｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、Ｊ＝１５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．３８（ｓ、３Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１２．１Ｈｚ、Ｊ＝１５．０Ｈｚ、１Ｈ）。
ＭＳ（ＡＰＩ）ｍ／ｚ ４２０（Ｍ−Ｈ）；［α］Ｄ２５℃＝＋２８６．４°（ｃ＝０．２３、ＤＭＳＯ）。
元素分析、計算値（Ｃ２２Ｈ１９Ｎ３Ｏ２Ｓ２）：Ｃ、６２．６８；Ｈ、４．５４；Ｎ、９．９７、Ｓ、１５．２１。
実測値：Ｃ、６２．２２；Ｈ、４．６２；Ｎ、９．７６；Ｓ：１５．０２。
生成物についての相対的立体化学、すなわち、ＮＯＥ示差実験（ＤＭＳＯ−ｄ６）での４．７３ｐｐｍのＣ１２ａプロトンから８．１１ｐｐｍのＣ６プロトンへのＮＯＥ増強がなく、３．５２ｐｐｍのＣ１２プロトンによる正の増強によって、トランス異性体であることが確認された。
【０１３４】
実施例７の調製
【０１３５】
【化４４】
2004513128.tif 000037
【０１３６】
実施例７は、以下の反応手順によって調製される。
【０１３７】
【化４５】
2004513128.tif 000038
【０１３８】
【化４６】
2004513128.tif 000039
【０１３９】
実施例８
【０１４０】
【化４７】
2004513128.tif 000040
【０１４１】
実施例８は、方法Ｅの反応手順によって調製される。
【０１４２】
本発明の化合物は、経口投与用錠剤に配合することができる。
例えば、式（Ｉ）の化合物は、本明細書に参考までに取り込んだ国際公開公報第ＷＯ９６／３８１３１号に記載の共沈殿法によって、ポリマー担体を用いて分散物にすることができる。
共沈殿させた分散物は、その後、賦形剤と混合され、錠剤に圧縮成形することができ、錠剤は任意にフィルムコーティングされる。
【０１４３】
構造式（Ｉ）の化合物を、ＰＤＥ５の阻害能力について試験した。
化合物がＰＤＥ５活性を阻害する能力は、化合物のＩＣ５０値、すなわち、酵素活性の５０％を阻害するために必要とされる阻害剤の濃度に関連する。
構造式（Ｉ）の化合物のＩＣ５０値は、組換えヒトＰＤＥ５を使用して測定された。
【０１４４】
本発明の化合物は、一般的には、組換えヒトＰＤＥ５に対して約５０μＭ未満、好ましくは約２５μＭ未満、より好ましくは約１５μＭ未満のＩＣ５０値を示す。
本発明の化合物は、一般的には、組換えヒトＰＤＥ５に対して約１μＭ未満のＩＣ５０値を示し、多くの場合、約０．０５μＭ未満のＩＣ５０値を示す。
本発明の利点を最大限引き出すために、本発明のＰＤＥ５阻害剤は約０．１ｎＭ〜約１５μＭのＩＣ５０を有する。
【０１４５】
組換えヒトＰＤＥの産生およびＩＣ５０の測定は、当該技術分野で周知の方法によって行うことができる。
その一例を、以下に示す。
【０１４６】
ヒトＰＤＥの発現
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（酵母）での発現
ヒトのＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ２、ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５およびＰＤＥ７の組換え生産を、以下の点を除いて、本明細書に参考までに取り込んだ米国特許第５，７０２，９３６号の実施例７に記載の組換え生産法と同様に行った。
すなわち、本実施例では、酵母ＡＤＨ２プロモーター配列およびターミネーター配列が組み込まれた、Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、ｐｐ．３０８〜３１８ （１９９０）に記載のＡＤＨ２基本プラスミドに由来する酵母形質転換ベクターを用い、そして、ヴァージニア州マナサスに所在のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに１９９８年８月３１日に寄託されて、受託番号ＡＴＣＣ ７４４６５が付与されたプロテアーゼ欠損ＢＪ２−５４株をＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ宿主として用いた。
形質転換された宿主細胞を、微量金属およびビタミンを含んだ２×ＳＣ−ｌｅｕ培地（ｐＨ６．２）で増殖させた。
２４時間後に、ＹＥＰ培地含有グリセロールを２×ＹＥＴ／３％グリセロールの最終濃度になるまで加えた。
約２４時間後に細胞を回収して、これを洗浄して、−７０℃で保存した。
【０１４７】
ヒトホスホジエステラーゼ調製物
ホスホジエステラーゼ活性の決定
調製物のホスホジエステラーゼ活性を、以下のようにして決定した。
活性炭分離技術を利用するＰＤＥアッセイを、Ｌｏｕｇｈｎｅｙ ｅｔ ａｌ．， （１９９６）の記載に従って実施した。
このアッセイでは、ＰＤＥ活性によって、［３２Ｐ］ｃＡＭＰまたは［３２Ｐ］ｃＧＭＰが、存在するＰＤＥ活性の量に比例して、対応する［３２Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［３２Ｐ］５’−ＧＭＰに変換される。
［３２Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［３２Ｐ］５’−ＧＭＰは、その後、ヘビ毒の５’−ヌクレオチダーゼの作用によって遊離の［３２Ｐ］リン酸および標識付けされていないアデノシンまたはグアノシンに定量的に変換された。
従って、放出された［３２Ｐ］リン酸の量は、酵素活性に比例している。
このアッセイは、４０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１μＭのＺｎＳＯ４、５ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（いずれも最終濃度）を含有する１００μＬの反応混合物において、３０℃で行われた。
ＰＤＥ酵素は、基質の総加水分解が３０％未満となる量で存在していた（直線的アッセイ条件）。
このアッセイは、基質（１ｍＭの［３２Ｐ］ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰ）の添加によって開始され、混合物を１２分間インキュベーションした。
その後、７５μｇのガラガラヘビ（Ｃｒｏｔａｌｕｓ ａｔｒｏｘ）毒液を加えて、インキュベーションを３分間続けた（合計で１５分間）。
２００μＬの活性炭（０．１ＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ４）における２５ｍｇ／ｍＬの懸濁物）を添加して、反応を停止した。
遠心分離（７５０×ｇ、３分間）によって活性炭を沈降させた後、上清のサンプルを採取して、シンチレーションカウンターで放射能測定を行い、ＰＤＥ活性を計算した。
【０１４８】
Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからのＰＤＥ５の精製
細胞ペレット（２９ｇ）を、等容量の溶解緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ８）、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのベンズアミジンおよび１０μＭのＺｎＳＯ４）と共に氷上で解凍した。
２０，０００ｐｓｉの窒素を利用するＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐ．）で、細胞を溶解した。
溶解液を遠心分離して、０．４５μｍのディスポーザブルフィルターに通してろ過した。
ろ液を、Ｑ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）Ｆａｓｔ−Ｆｌｏｗ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の１５０ｍＬのカラムに負荷した。
このカラムを、１．５容量の緩衝液Ａ（２０ｍＭのビス−トリスプロパン（ｐＨ６．８）、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭのＤＴＴ、１０μＭのＺｎＳＯ４）で洗浄して、緩衝液Ａの１２５ｍＭのＮａＣｌによる段階的勾配で溶出し、続いて、緩衝液Ａの１２５ｍＭ〜１０００ｍＭのＮａＣｌによる直線勾配で溶出した。
直線勾配から得られる活性画分を、緩衝液Ｂ（２０ｍＭのビス−トリスプロパン（ｐＨ ６．８）、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭのＤＴＴ、１０μＭのＺｎＳＯ４および２５０ｍＭのＫＣｌ）内の１８０ｍＬのヒドロキシアパタイトカラムに負荷した。
負荷後、カラムを２容量の緩衝液Ｂで洗浄し、そして、緩衝液Ｂでの０ｍＭ〜１２５ｍＭのリン酸カリウムの直線勾配で溶出した。活性画分を回収し、６０％硫酸アンモニウムで沈殿させ、そして緩衝液Ｃ（２０ｍＭのビス−トリスプロパン（ｐＨ ６．８）、１２５ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのＤＴＴおよび１０μＭのＺｎＳＯ４）に再懸濁した。
これらを回収したものを、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）Ｓ−３００ＨＲの１４０ｍＬのカラムに負荷し、緩衝液Ｃで溶出した。
活性画分を、５０％グリセロールで希釈し、−２０℃で保存した。
【０１４９】
得られた調製物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、約８５％の純度であると決定された。
これら調製物は、約３μｍｏｌのｃＧＭＰ加水分解／分／ｍｇタンパク質の比活性を有していた。
【０１５０】
ｃＧＭＰ−ＰＤＥに対する阻害作用
本発明の化合物のｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性を、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ、３８４、４３０ （１９７５）から改変した１段階アッセイによって決定した。
反応媒体は、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、５ｍＭの酢酸マグネシウム、２５０μｇ／ｍｌの５’−ヌクレオチダーゼ、１ｍＭのＥＧＴＡ、および０．１５μＭの８−［Ｈ３］−ｃＧＭＰを含んでいた。
特に断りのない限り、用い酵素は、ヒト組換えＰＤＥ５（ＩＣＯＳ ＣＯＲＰ．， ボウゼル、ワシントン）であった。
【０１５１】
本発明の化合物は、ＤＭＳＯに溶解され、アッセイの最後には２％で存在していた。
インキュベーション時間は３０分間であり、その間、基質の総変換は３０％を越えなかった。
【０１５２】
検討した化合物に対するＩＣ５０値は、１０ｎＭ〜１０μＭの範囲の濃度が一般的に用いられる濃度−応答曲線から求めた。
標準的な方法論を使用する他のＰＤＥ酵素に対する試験を行ったところ、本発明の化合物が、ｃＧＭＰに特異的なＰＤＥ酵素に対して選択的であることが示された。
【０１５３】
生物学的データ
本発明による化合物は、通常、５００ｎＭ未満のＩＣ５０値を示すことが認められた。
【０１５４】
本発明の代表的な化合物に対するインビトロ試験のデータを、以下の表に示した。
【０１５５】
【表１】
2004513128.tif 000041
【０１５６】
本願発明の趣旨と範囲から逸脱することなく、本願明細書に記載した本願発明に対して無数の修正と変更が加えられようことは明らかであるので、添付の請求の範囲に記載した限定のみが、本願発明に付加されるべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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