(57)【要約】アミノ酸、ペプチド、ペプチドミメティック、およびヌクレオチドアナログなどが含まれる水酸官能基またはアミノ官能基を有する化合物の新規ホスホラミデート誘導体を記載する。この化合物は、対応するリン酸塩エステルまたはアミドとしての薬剤の細胞内デリバリーを増強しうる。ホスホラミデート化合物は抗増殖活性を示す。医薬調剤を癌治療のために提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
である化合物。
（前記式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキル又は（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項２】
前記ｎは４であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ｎは５であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒはメチル基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記ｈａｌｏは塩素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｘは塩素または臭素であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
リン酸塩エステルまたはアミドとして、薬剤の細胞内デリバリーを増強するためのホスホラミデートプロドラッグの調製方法であって、
化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）Ｘ
の中間体化合物の形成につながる条件下で、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物と水酸官能基またはアミノ官能基を有する薬剤化合物（Ｄｒｕｇ−ＺＨ）とを反応させるステップと、
前記中間体を酸化させ、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のホスホラミデートプロドラッグを形成するステップからなる調製方法。
（前記式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｚは、ＯまたはＮであり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項８】
前記Ｄｒｕｇ−ＺＨ はアミノ酸、または活性ペプチドもしくはペプチドミメティックであることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｄｒｕｇ−ＺＨ は化学式
【化１】
2004538240.tif 000076
のペプチドミメティックであることを特徴とする請求項８に記載の方法。
（前記式中、
ＺはＯまたはＮであり；
ｑおよびｋは、それぞれ１または０から独立に選択され、
Ｂは、Ｈ，アミノ，保護されたアミノ，またはＣ１−Ｃ４のアルカノイルアミノである。）
【請求項１０】
前記Ｄｒｕｇ−ＺＨ は生物学的に活性のあるヌクレオチドアナログであることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
一般式Ｄｒｕｇ−ＺＨの水酸官能基またはアミノ官能基から形成されるホスホラミデート化合物であって、
当該プロドラッグが化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物であることを特徴とするホスホラミデート化合物。
（前記式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｚは、ＯまたはＮであり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項１２】
前記Ｄｒｕｇはアミノ酸、または活性ペプチドもしくはペプチドミメティックであることを特徴とする請求項１１に記載のプロドラッグ。
【請求項１３】
前記Ｄｒｕｇ−ＺＨ は化学式
【化２】
2004538240.tif 000077
のペプチドミメティックであることを特徴とする請求項１２記載の方法。
（前記式中、
ＺはＯまたはＮであり；
ｑおよびｋは、独立に１または０から選択され、
Ｂは、Ｈ，アミノ，保護されたアミノ，またはＣ１−Ｃ４のアルカノイルアミノである。）
【請求項１４】
前記Ｄｒｕｇは生物学的に活性のあるヌクレオチドアナログであることを特徴とする請求項１１に記載のプロドラッグ。
【請求項１５】
化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）ｍ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物の調製方法であって、
それぞれ酸スカベンジャーの存在下で、化学式
Ｐ（Ｏ）ｍｈａｌｏ３
の化合物を、１）化学式ＲｒＣＨ２ＯＨのアルコール、及び、２）化学式ＨＮＲ（ＣＨ２）ｎＸのアミンと反応するステップからなることを特徴とする調製方法。
（前記式中、
ｍは、０または１であり；
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項１６】
一般式Ｄｒｕｇ−ＺＰＯ３−の化合物の細胞内デリバリーの増強のための化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のホスホラミデートプロドラッグの調製方法であって、
前記プロドラッグ形成につながる条件下で、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物と、化学式Ｄｒｕｇ−ＺＨの水酸官能基またはアミノ官能基を有する薬剤化合物を反応するステップを含む方法。
（前記式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｚは、ＯまたはＮであり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項１７】
一般式Ｄｒｕｇ−ＺＨの水酸官能基またはアミノ官能基を有する薬剤化合物から形成されるホスホラミデート化合物と、そのための医薬上許容可能なキャリアーとを含む医薬組成物であって、
前記プロドラッグが、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物であることを特徴とする医薬組成物。
（前記式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｚは、ＯまたはＮであり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。）
【請求項１８】
Ｄｒｕｇ−ＺＨ はアミノ酸、または生物学的に活性のあるペプチドまたはペプチドミメティックであることを特徴とする請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
Ｄｒｕｇ−ＺＨ は化学式
【式３】2004538240.tif 000078
のペプチドミメティックであることを特徴とする請求項１８記載の医薬組成物。（前記式中、
ＺはＯまたはＮであり；
ｑおよびｋは、１または０から独立に選択され、
Ｂは、Ｈ，アミノ，保護されたアミノ，またはＣ１−Ｃ４のアルカノイルアミノである。）
【請求項２０】
前記Ｄｒｕｇ−ＺＨ はヌクレオチドアナログであることを特徴とする請求項１７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
＜発明の属する技術分野＞
本発明は、リン酸塩に置換した治療上の化合物の細胞内デリバリーに関する。特に、本発明は、ある特定のリン酸塩前駆体および方法およびそのための中間体を対象とする。
【０００２】
＜発明の背景および概要＞
重要な研究努力が、生物学的に活性のあるペプチドおよびヌクレオチドのようなリン酸塩に置換された化合物の細胞内デリバリーを増強するためのシステムの開発を対象としているが、これらの化合物の高い負電荷のために、細胞浸透率が非常に低い。例えば、癌細胞の無秩序な増殖の阻害に使用するためのチロシンリン酸ペプチドおよびペプチドミメティックの細胞内デリバリーに大きな興味が持たれている。この点について、タンパク質チロシンキナーゼは、細胞周期進行の重要な調節因子であり、新規な抗癌物質の理論的デザインのための魅力的なターゲットの代表的なものである。タンパク質チロシンキナーゼは、キナーゼに特異的なチロシン残基のリン酸化で活性化し、そのリン酸化チロシン残基は３つの隣り合うアミノ酸とともに（ｐＹ−Ｅ−Ｅ−Ｉ）、細胞内シグナル伝達系タンパク質のＳｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ２（ＳＨ２）ドメインの結合部位として働く。細胞内シグナル伝達系分子のＳＨ２ドメインと、活性化されたタンパク質チロシンキナーゼ間の相互作用は、効果的な細胞周期進行において不可欠である。それゆえ、タンパク質チロシンキナーゼのリン酸チロシン成分を模倣し、ＳＨ２ドメインに対するタンパク質チロシンキナーゼの結合を阻害する分子は、癌治療のための有望な抗増殖性物質の代表的なものである。
【０００３】
チロシンがリン酸化されたタンパク質チロシンキナーゼにおけるリン酸ジアニオンは、キナーゼとＳＨ２ドメインの相互作用に重要である。多くのリガンド−ＳＨ２ドメインの結晶構造が報告されており、その相互作用はモデル化され、多くの異なる阻害剤が合成されている。これらのリン酸チロシンペプチドおよびペプチドミメティック阻害剤の全てにおいて、リン酸チロシン残基は、チロシンリン酸成分のリン酸ジアニオンとＳＨ２ドメインの幅広い相互作用に必要な水素結合および電荷間の複雑なネットワークに関与している。このジアニオン相互作用の重要性は、リン酸基を幅広い種類の他の陰イオンや中性の水素結合の置換基に置換すると、結合親和性の著しい損失を招くことである。したがって、リン酸塩が重要なジアニオンの形状をしているチロシンリン酸ペプチドおよびペプチドミメティックの細胞内デリバリーは重要である。
【０００４】
ヌクレオチドアナログは、無秩序なウイルスまたは細胞の複製によって引き起こされた疾病を治療する際に用いるための他のクラスの有望な作用物質の代表的なものである。チロシンリン酸ペプチドミメティックのように、ヌクレオチドアナログのリン酸ジアニオンは、ウイルスや細胞の複製を阻害するため、これらの化合物の能力に重要である。治療物質として、最も広く用いられているヌクレオチドアナログの使用方法は、プロドラッグとしてのヌクレオチドアナログを細胞膜を横切って輸送し、細胞内機構に依存して、対応するヌクレオシドアナログを形成するため、プリンまたはピリミジンにリン酸基を結合させるというものである。しかしながら、治療上の期待がかかる多くのヌクレオシドは、既存の細胞内伝達により、対応するヌクレオチドに改変することができない。さらに、癌細胞またはウイルス感染細胞は、ヌクレオシドキナーゼの活性を低下させることにより、処理に対し耐性になるかもしれないし、以前開発された多くのヌクレオチドプロドラッグにとっては、細胞内で有効なヌクレオチド濃度が蓄積できないほど、細胞内活性化プロセスの効率が悪い。
【０００５】
本発明において利用されるリン酸塩を含む化合物の細胞内デリバリーのための一般的な方法がスキーム１に概略されている。
【０００６】
【式１】
2004538240.tif 000002
簡単に説明すると、細胞内で輸送されるリン酸塩に置換された化合物が合成され（上記スキーム１において付加されたリン酸を有するＲ）、輸送基（ＤＥＬＩＶＥＲＹ）およびマスキング基（ＭＡＳＫ）と結合している。マスキング基は、細胞内において加水分解され輸送基が完全である限り安定であるが輸送基の細胞内活性化で解離される中間体を生成するハロアルキルアミンの成分からなる。輸送基は、ニトロフリル基またはペルヒドロオキサジンのように、細胞内で加水分解して中間体を生成し、細胞内環境でその中間体を環化しＰ−Ｎ結合を切断して（すなわち、自発的加水分解）、望ましいリン酸含有化合物を放出する基であってもよい。
【０００７】
前記スキーム１に記載されたものに関連する化学的作用を利用するアルキル化剤とヌクレオチドの細胞内デリバリーシステムは、以前開発されている。しかしながら、以前の方法では、生物学的に不活性な加溶媒分解生産物として５０％のプロドラッグは“失われ”、望ましいヌクレオチドへの細胞内転化率は、およそ５０％しかなかった。本発明は、上記化学的作用の新たに発見された改良を対象とし、これは、チロシンリン酸ペプチドおよびペプチドミメティックに必須の構成要素であるヌクレオチドアナログやフェノールリン酸基の両方に適用を広げる。本発明は、ハロエチルからハロブチル（又は、ハロペンチル）基にマスキング基の構造を変更すると、望まれるヌクレオチドまたはリン酸含有ペプチドに対して、迅速でかつ定量的な細胞内転化（例えば、およそ１００％の転化率）が生じるという発見に基づく。本発明の新たな化学的作用は、ヌクレオチドアナログ、リン酸チロシンペプチド、およびペプチドミメティックに適用でき、リン酸成分を含有する幅広い他の医薬的に重要な化合物にも適用できる。
【０００８】
保護されたリン酸チロシン前駆体のホスホラミデートの開発により、ホスホチロシンペプチドおよびペプチドミメティックの合成を容易に行うことができるようになる。したがって、本発明は、保護されたリン酸チロシン前駆体や、例えば、Ｎ−ＢＯＣおよびフルオレニルメタオキシカルボニル基を有する保護された関連ペプチドをも対象とする。
【０００９】
本発明の一実施態様において、ホスホラミデートプロドラッグ化合物が提供され、水酸基の官能基を有する生物学的に活性な化合物が、その水酸基の官能基と共有結合し、細胞内において対応する薬剤のリン酸塩に転換する生物学上不安定なホスホラミデート基を形成する。生物学上不安定なホスホラミデート基は、薬剤物質のより効率的な細胞内デリバリーを可能にし、対応するリン酸エステルの形状で薬剤物質の生物学上重要な細胞内濃度を達成するための手段となる。他の実施態様では、生物学上活性のある化合物がアミノ官能基を有し、それは、そのアミノ官能基と共有結合して、細胞内でホスホラミドに（−ＯＰＯ２ＮＨ−Ｄｒｕｇ）転換する生物学上不安定なホスホラミデートを形成する。
【００１０】
本発明は、他の実施態様では、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の中間体ハロホスホラミダイトを提供する。式中、ｎは４または５であり、Ｒは低級アルキル又は（ＣＨ２）ｎＸであり、Ｘは結合している炭素原子から求核的に置換されることができる求電子基であり、ＲｒＣＨ２−基は生物学上不安定なエステル形成基であり、特に、細胞内で容易に加水分解されるエステル形成基である。この化合物は、本発明の方法の実施態様を用いて、前記記載のホスホラミデートプロドラッグ化合物を調製するための中間体薬剤として用いることができる。この本発明の実施態様においては、生物学的に活性のある化合物（Ｄｒｕｇ−ＯＨ）は、ハロホスホラミダイト中間体と反応し、対応する薬剤薬剤と反応した中間体である
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
を形成し、その後、酸化してホスホラミデートプロドラッグを形成する。この方法は、標準の保護基で保護された、カルボキシル官能基およびアミノ官能基を有する水酸基を持つ官能アミノ酸で始めたり、活性ペプチド、ペプチドミメティック、又はヌクレオチドアナログから始めたりして、細胞内薬剤のリン酸塩のホスホラミダイト前駆体を形成するために用いることができる。本発明に従って、ホスホラミデートプロドラッグは、ＲｒＣＨ２−エステル形成基の加水分解の後、対応するリン酸塩に転化される。ひきつづき、環化された５員環又は６員環の（−Ｎ（ＣＨ２）ｎＸ基の環化で生成された）両性中間体の加水分解により、唯一のリン含有生成物として、対応するリン酸塩が生じる。類似した合成手順が、本明細書中では一般にＤｒｕｇＮＨ２として表されるアミノ官能基を有する活性化合物で行うことができる。
【００１１】
＜発明の詳細な説明＞
本発明は、ペプチド、ペプチドミメティックリン酸塩、ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログを、細胞膜を透過して細胞内に移行する新規プロドラッグの化学的作用を対象とする。本発明の一実施態様は、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の中間体化合物を提供することにある。
【００１２】
式中の
Ｒは、Ｃ１−Ｃ４のアルキル又は（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは、４または５であり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；および
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。
【００１３】
求電子基Ｘはハロゲンが好ましく、例えば、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。しかしながら、本発明によるホスホラミダイトプロドラッグの投与後、ｉｎ ｖｉｖｏでリン結合窒素原子の環化や同時に起こる四分割を可能にする優れた離脱基になるのであれば、その基の性質は重要ではない。他の求電子離脱基としては、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフロロメタンスルホン酸塩、ハロ酢酸塩、などを用いることができる。
【００１４】
本発明を定義する際用いられる用語“生物学上不安定なエステル形成基”とは、エステル誘導体を形成するアルコールに由来するエステル形成基を意味し、薬剤製造や保存状態において安定なものであるが、ｉｎ ｖｉｖｏで生物学的状態にさらされるときには、加水分解される。特に、本発明に従って用いられるエステル形成基は、細胞外の体液中では加水分解に対し最低限の感受性しか示さないが、エステルを分解する還元状態が顕著な細胞内では加水分解されるのが好ましい。従って、本発明の一実施態様において、本発明のホスホラミデートプロドラッグ上の生物学上不安定なエステル形成基は、Ｒｒがニトロフリル、ニトロチエニル、ニトロピローイル（ｎｉｔｒｏｐｙｒｒｏｙｌ）、ニトロイミダゾール、およびその類似体、インダニル、ナフトクイノリル（ｎａｐｔｈｏｑｕｉｎｏｌｙｌ）、並びにペルヒドロオキサジンなどの基を含むニトロアリルである基を含む弱い還元状態において加水分解されやすいエステル形成基である。エステル形成基ＲｒＣＨ２−としては、その基が細胞内において加水分解されやすければ、つまり典型的には、還元能を示す生物学的状態であれば、その基の性質は重要ではない。
【００１５】
治療用化合物は、ホスホラミデートプロドラッグ化合物を生成できるように、本発明に従って変化できるものであって、必ず二重に保護された（カルボキシル基の保護およびアミノ基の保護）形状のアミノ酸、ペプチド、タンパク質、ペプチドミメティック、ヌクレオチドアナログ、および、対応するリン酸塩としての生物学的活性を示す他の水酸基を含む機能的薬剤化合物を含む。本発明の好ましい一実施態様としては、本発明による、対応するホスホラミデートに変化する薬剤は、フルオロデオキシウリジンのようなヌクレオチドアナログであり、それは、対応するモノリン酸塩誘導体として抗癌活性を示す。その他の実施態様においては、薬剤はアミノ酸、ペプチド、ペプチドミメティックなどである。
【００１６】
本発明によるホスホラミデートプロドラッグ化合物は、いくつかの合成手順により、対応する水酸基を含む機能的薬剤から調製することができる。好ましい一実施態様において、ホスホラミデートプロドラッグは、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の中間化合物の生成につながる条件下で、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物に対して水酸基を含む機能性薬剤を反応させ、その後、その中間体を酸化して、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のホスホラミデートプロドラッグを生成する。式中のＲｒ，Ｒ，ｎ，およびＸは、前記定義と同じである。化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の中間化合物を形成する条件は、さまざまな条件をとることができるが、反応を第３アミン塩基のような酸捕捉剤（ａｃｉｄ ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）の存在下で低温度にて行うことが好ましい。一実施態様として、反応媒体として無水ピリジンを用いて低温度（−７０℃から−１０℃ぐらい）で反応が行われる。化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
中間体化合物の、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のホスホラミデートプロドラッグ化合物への酸化は、様々な弱い酸化状態の下で同様に行うことができる。リン原子を＋５の酸化状態にするという、要求される酸化に影響することができるものであれば、酸化剤の性質は、重要ではない。酸化剤としては、例えば、過酸、過酸化物、ヒドロペルオキシド、等が含まれる。酸化は、通常、約０℃以下の温度で行うが、それほど重要ではない。
【００１７】
化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の中間体ハロホスホラミダイトは、通常、第三アミン塩基の存在下で不活性の有機溶媒中で、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＨ
のアルコールと共に低温度でホスホラストリクロライドを反応させることにより調製することができ、その生成物を、化学式
ＨＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のアミンと反応させる。本件のホスホラミデートプロドラッグを形成するために、通常は、酸スカベンジャーの存在下で、水酸基を含む機能的薬剤化合物との反応の前に、直ちに中間体を生成することが好ましい。
【００１８】
本発明のホスホラミデートプロドラッグの調製の他の方法において、水酸基を含む機能的薬剤化合物を、同様の一般的反応物を用いて、最後の酸化ステップを省略する他は前記記載の条件で、（ホスホラストリクロライドに対するものとして）ホスホラスオキシトリクロライドで反応を開始することから得られるクロロホスホラミデート中間体と反応させる。
【００１９】
前述した各反応は、対応する化合物
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＮＨ Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
を提供するために、アミノ官能基を含む薬剤（Ｄｒｕｇ ＮＨ２）を用いて同様の手順で行うことができる。
【００２０】
本発明の他の実施態様において、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）ｍ（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物を調製方法し、それぞれ酸スカベンジャーの存在下で、１）化学式ＲｒＣＨ２ＯＨのアルコールと、２）化学式ＨＮＲ（ＣＨ２）ｎＸのアミンと、 化学式
Ｐ（Ｏ）ｍｈａｌｏ３
の化合物との反応ステップを含む方法を提供する。ここで、上記化学式中、
ｍは０または１であり；
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル又は（ＣＨ２）ｎＸであり；
ｎは４または５であり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。
【００２１】
また、本発明の他の実施態様において、一般式Ｄｒｕｇ−ＯＰＯ３の化合物の細胞内薬剤デリバリーを増強させるための化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のホスホラミデートプロドラッグの調製方法を提供する。この方法は、プロドラッグの形成を誘導する条件の下で、化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の化合物と化学式Ｄｒｕｇ−ＯＨの治療用の化合物とを反応するステップを含む。
【００２２】
ここで、上記化学式中、
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル又は（ＣＨ２）ｎＸ；
ｎは４または５であり；
Ｘは、Ｘに結合している炭素原子から求核的に置換され得る求電子基であり；
ｈａｌｏは、塩素、臭素、またはヨウ素であり；
ＲｒＣＨ２−基は、生物学上不安定なエステル形成基である。
【００２３】
上記に述べたように、ここに記載された化学作用は、一般式Ｄｒｕｇ−ＮＨ２の生物学的に活性のある化合物と中間化合物
ＲｒＣＨＯＰ（Ｏ）（ｈａｌｏ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
との反応による、化学式
ＲｒＣＨＯＰ（Ｏ）（ＮＨ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
のプロドラッグホスホラミデートの調製に、同じまたは同様の条件を用いて適用することができる。なお、式中のＲｒ，ｈａｌｏ，Ｒ，ｎ，およびＸは前記記載で定義されたものである。この化学作用は、化学式Ｄｒｕｇ−ＮＨＰＯ３の治療用上の化合物の細胞内デリバリーのための方法を提供する。したがって、例えば、５′−アミノ ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログは、対応する５’−ＮＨＰＯ３誘導体の高効率細胞内デリバリーのための、対応するプロドラッグホスホラミデートとして誘導することができる。
【００２４】
本件発明のホスホラミダイト化合物はそれ自身プロドラッグか、または、例えば、チロシンホスホラミデートの場合には、ペプチドまたはペプチドミメティックプロドラッグの合成に用いることができる。本件発明のホスホラミダイトの合成に関与する化学作用は、ホスホラミデート合成の化学作用に関与するようには意図されていない反応開始薬剤化合物上に存在するヒドロキシ、カルボキシ、チオール、アミンの官能基が、当業者が認める保護基で保護されるべきであるというようなものであるということは、当業者には認識されるだろう。そのような保護基、さまざまな官能基保護するための応用およびこれらの除去条件に対する参考文献は満ちあふれている。そのような保護基の使用は、当業者によく知られており、ホスホラミダイトプロドラッグおよび中間体の合成を実行する際に保護基を使用することは本件発明に含まれない。
【００２５】
本件発明に従って調製されるホスホラミダイトプロダクトは、その分野で認められている技術を用いて、誘導されない薬剤化合物と同じまたは同様の調剤形で調剤し、用いることができる。
【００２６】
本発明の一実施態様において、スキーム２に示された反応を行う。
【００２７】
【式２】
2004538240.tif 000003
この反応では、プロドラッグ３Ａを、ホスホラミディックジクロロライド１に、ニトロフリルアルコールとｐ−クレゾールを順次加えることにより合成した。それから、プロドラッグ３を、エタノール／水溶液バッファー中、亜ジオチン酸ナトリウムで還元することにより活性化したが、そこではニトロフリル基が還元され、ホスホラミデートアニオン４Ａが放出されることになる。この中間体の次に続く反応を３１ＰＮＭＲによりモニターした。中間体４Ａは、スムーズに環化して５員環の両性中間体になり、水に攻撃されることにより、唯一のリン含有生成物としてのリン酸クレゾールを得たことが、ＮＭＲによりわかった。
【００２８】
本発明の他の実施態様をスキーム３に示す。
【００２９】
【式３】
2004538240.tif 000004
この反応は、ホスホラミデート１１Ａの合成を目的とし、ｐ−ヒドロキシ安息香酸９Ａのニトロフリルホスホラミデートの調製、および５−アセチルサリチルアミドから調製したベンジルアミン１０Ａとこの生成物とのカップリングを含む。簡単に説明すると、安息香酸誘導体９Ａを合成するために、ｐ−ヒドロキシ安息香酸を、そのカリウム塩とアリルブロマイドとの反応により、アリルエステル６Ａに転化した。アリルエステルを、ＰＯＣｌ３と反応させ、中間体ホスホリルジクロライドを、トリエチルアミンの存在下で、メチルクロロブチルアミンで処理し、ホスホラミディッククロライド７Ａを得た。５−ニトロ−２ヒドロキシメチルフランのリチウム塩と７Ａとの反応により、ホスホラミデート８Ａを得た。アリルエステルの脱保護が、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４／ｐ−トルエンスルフィン酸ナトリウムとの反応で行われ、安息香酸ホスホラミデート９Ａを得た。トリエチルアミンの存在下で、クロロギ酸イソブチルと９Ａを反応させ、続いて、ベンジルアミン１０Ａを添加し、望んでいたペプチドミメティックプロドラッグ１１Ａを作製した。１２Ａへの１１Ａの活性化化学作用が、予測どおりに進行することを確認するために、１１Ａをエタノール／水中で、次亜硫酸塩ナトリウムによって還元し、反応を３１ＰＮＭＲによりモニターした。１１からホスホラミデート陰イオンへの転化は数分以内で完了した；ホスホラミデートアニオンを、スムーズに、かつ、排他的に３７℃で２１分の半分の時間でリン酸塩１２Ａに転化した。１１Ａの活性化に対応するリン酸塩１２Ａを合成し、５．６μＭの結合親和性でｐｐ６０ｓｒｃ ＳＨ２ドメインに結合することを示した。
【００３０】
本発明のさらに他の実施態様において、異なる中間体を、チロシンリン酸塩ホスホラミデートを形成するためのスキーム３に示した一連の反応に組み込むために用いた。スキーム３で示された反応が行われたとき、その結果として生じる生成物とともに、中間体１７Ａを以下に示した。
【００３１】
【式４】
2004538240.tif 000005
中間体１７Ａを、反応系の３番目のステップにおいて５−ニトロ−２−ヒドロキシメチルフランの代わりに２−ヒドロキシメチル−１，４−ジメトキシナフタレンを用いるほかは、スキーム３で化合物９Ａに対して記載したように調製した。それから、化合物１７Ａをアミン１０Ａ（スキーム３）と結合させ、数分で精製物が高収率で得られる新たな条件を用いて、アミド１８Ａを得た。最後に、ジメトキシナフタレン１８Ａを、硝酸セリウムアンモニウムで酸化させることにより、ナフトキノン１９Ａにスムーズに転化した。
【００３２】
さらに、本発明の他の実施態様においては、マスクされたホスホチロシン含有ペプチドを、スキーム化学式４に示したように合成した：
【００３３】
【式５】
2004538240.tif 000006
Ｎ−ＢＯＣ−チロシンカリウム塩をアリルブロマイドと反応させ、ＢＯＣ−チロシンアリルエステル１３Ａを得た。エステルをそのセリウムフェノール塩に転化し，Ｎ−メチル−Ｎ−クロロブチルホスホラミディックジクロライドと反応させ、アダクト（ａｄｄｕｃｔ）１４Ａを得た。最後に、ホスホラミディッククロライドを５−ニトロ−２−ヒドロキシメチルフランのリチウム塩と反応させ、チロシンホスホラミデートエステル１５Ａを得た。アリル保護基の除去により、優秀な純収率でＢＯＣ−保護されたチロシンホスホラミデート１６Ａを得た。このアナログは、全体的にさまざまなアミンをカップリングするのに適しているであろうし、自動化されたペプチド合成における試薬としても有用であるだろう。
【００３４】
スキーム４で示された合成反応は、フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）保護基で保護されたチロシンホスホラミデートの開発にまで広げられた。ＦＯＭＣで保護されたアミノ酸は、ペプチド合成で広く用いられ、保護基を塩基で触媒されるする条件のもとで迅速にかつきれいに取り除くことができるという利点がある。チロシンホスホラミデート１６ＡのＦＭＯＣアナログ、すなわちスキーム４の上記化合物２０Ａは、スキーム４と同様な反応系により調製することができる。ＦＭＯＣ保護基は、ジクロロメタン中で、ジアザビシクロアンデカン（ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏｕｎｄｅｃａｎｅ）と５分間反応させることにより、迅速にかつきれいに取り除くことができる。最後に、１６Ａと２０Ａをメチルグリシン酸塩とカップリング反応が行われ、これらの化合物をペプチド合成反応に用いることができることを明らかにした。
【００３５】
本件発明の他の実施態様において、ニトロフリルクロロブチルヌクレオシド３の合成が、スキーム５に示すように中間体の単離なしで、１つの操作で行われた。
【００３６】
【式６】
2004538240.tif 000007
メチレンクロライド中のホスホラストリクロライドを、−７８℃において１等量のニトロフリルアルコールと反応させ、中間体ジクロライドを、Ｎ−メチル−Ｎ−クロロブチルアミンの塩酸塩で処理し、モノクロライド中間体Ａを得た。この中間体に５−フルオロ−２’−デオキシウリジンを含むピリジン溶液を添加した。その結果として生じるホスホラミデートを、ｔ−ブチルヒドロペルオキサイドで酸化し、ヌクレオシドホスホラミデート３を得た。この合成の収率は低く、また値にばらつきがあった（２０−６０％）。
【００３７】
本発明の代替実施態様において、類似したチミジン化合物質を調製した（即ち、３においてＦ＝ＣＨ３）。チミジンホスホラミデートを、３７℃で水系バッファー／アセトニトリル中、亜ジチオン酸ナトリウムでニトロフリル基を還元することにより活性化し、反応物を３１ＰＮＭＲでモニターした。１０分以内でホスホラミデートアニオンに対する共鳴が消失し、３１ＰＮＭＲにより唯一のリン含有生成物としてのチミジン−５’−ホスフェートに対応する新たなピークが現れた。それから、ヌクレオシドホスホラミデート３を、ｉｎ ｖｉｖｏでＬ１２１０白血病細胞の増殖阻害能に対して評価した。細胞は、２，８，２４，および４８時間、薬剤にさらされた；結果を以下に要約する：
【表１】
2004538240.tif 000008
クロロブチルホスホラミデート３は、類似したブロモエチル化合物に比べ、有意に効き目がよく、調製したヌクレオチドプロドラックで最も効き目のよい１つである。
【００３８】
本発明の関連ある実施態様において、中間体４を前記記載の反応スキーム中に組み込み、新たな薬剤５を製造した：
【００３９】
【式７】
2004538240.tif 000009
ジメトキシナフタレン類似体４を、最初のステップにおいて２−ヒドロキシメチル−１，４−ジメトオキシナフアレンアナログ４を、５−ニトロ−２−ヒドロオキシメチルフランに代えて用いるほかは、スキーム５で示される方法と同様の方法で合成した。ジメトオキシナフタレン４を硝酸セリウムアンモニウムで酸化することにより、スムーズにナフトキノン５に転化した。化合物５を前記化合物３と比較して、Ｌ１２１０白血病細胞増殖阻害剤として評価した。
【００４０】
【表２】
2004538240.tif 000010
両方の化合物は、Ｌ１２１０細胞の増殖の非常によい阻害剤であり、化合物５は、この分析で化合物３よりおよそ３倍の効能を示した。
【００４１】
本発明の一態様において、ホスホラミデートプロドラッグは、化学式
【化８】
2004538240.tif 000011
の化合物であり、 化学式
ＲｒＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（Ｚ−Ｄｒｕｇ）ＮＲ（ＣＨ２）ｎＸ
の水酸官能基またはアミノ官能基を含むペプチドミメティック（Ｄｒｕｇ ＺＨ）を用いて形成した。
【００４２】
なお、式中のＺは、ＯまたはＮであり；
ｑおよびｋは、独立に選ばれた１または０であり、そして
Ｂは、Ｈ，アミノ，保護されたアミノ，またはＣ１−Ｃ４のアルカノイルアミノである。
【００４３】
前記化合物の１群は式中のｑおよびｋがそれぞれ０であるベンズアミド化合物であり、例えば、以下のものがある。
【化９】
2004538240.tif 000012
【００４４】
前記化合物の他の群はｑが１でｋが０のフェニルアセチル化合物であり、例えば、以下のものがある。
【化１０】
2004538240.tif 000013
【００４５】
また、ペプチドミメティック（ＤｒｕｇＺＨ）の他の群はｑが１でｋが１のチロシル誘導体であり、例えば、以下のものがある。
【化１１】
2004538240.tif 000014
【００４６】
前記化合物のいくつかは、抗増殖活性が予測され、トランスフェクトしたＪ７７細胞においてルシフェラーゼ発現の阻害を著しく示すことがわかった。
【００４７】
本発明に従って、”ＤｒｕｇＺＨ”をヌクレオチドアナログとしたいくつかのホスホラミデート化合物を調製し、Ｌ１２１０マウス白血病細胞において、著しく増殖抑制を示すことを見い出した。前記化合物は、本発明の抗増殖性物質の好ましい一群の一部である。多数のヌクレオチドアナログは抗増殖性活性を示すことが文献で報告されており、本件のホスホラミデートと、水酸官能基またはアミノ官能基によって共有結合することができるものを含め、それらどの化合物も、本件化合物の調製に用いることができる。
【００４８】
また、本発明の他の実施態様において、ホスホラミデート化合物はアミノ酸または化学式
【化１２】
2004538240.tif 000015
のアミノ酸エステルの誘導体である。ここで、式中のＺ，ｑ，ｋ，およびＢは、前記記載で定義され、Ｒは水素またはカルボキシルの保護基、特にエステル形成基を意味する。前記チロシンまたはチロシンアナログは、ペプチドリン酸塩またはペプチドミメティックリン酸塩の細胞内での材料として、容易な膜輸送が可能なペプチドまたはペプチドミメティック化合物の調製に役立つ。もう１つの方法として、前記化合物は、対応するアミノ酸またはアミノ酸アナログを細胞内に提供することができる。
【００４９】
例えば、以下の化合物がある。
【化１３】
2004538240.tif 000016
【００５０】
さらに、本件発明は癌治療のためのプロドラッグホスホラミデート化合物の有効量を含有する医療調剤を提供する。ここで用いられるプロドラッグ化合物の有効量は、患者に投与する際に、腫瘍細胞の成長／増殖を阻害するか、悪性細胞を殺すか、腫瘍の量若しくはサイズを減少させるか、または治療を受けた患者において腫瘍を完全に除去する化合物の量として定義される。
【００５１】
患者に投与する有効量は、通常、身体表面積、患者の体重、および患者の状態に基づく。動物およびヒトの投与量の相互関係（身体表面積の平方メー トルあたりのミリグラムに基づく）は、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ， Ｅ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．，５０（４）：２１９（１９６６）に記載されている。身体表面積は、患者の身長および体重からおおよそ決定してもよい（例えば、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔａｂｌｅｓ， Ｇｅｉｇｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ａｒｄｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ５３７−５３８ページ（１９７０）参照）。本件発明のホスホラミデート化合物の有効量は、一投与量当たり、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり、約０．２５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、最も典型的には、約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。また、有効量は、当業者に認識されているように、投与ルート、賦形剤の使用、他の化学療法薬および放射線療法を含む他の治療処置を併用する可能性に依存して変わる。
【００５２】
治療調剤は、皮下注射、腹腔内投与、筋肉内投与、および静脈注射を含む非経口ルートで投与してもよい。非経口投与形態の例としては、等張食塩水、５％のグルコースまたは他のよく知られた医薬上許容可能な液体キャリアー中の活性薬剤の水溶液または懸濁液が挙げられる。本件医薬組成の一態様においては、ホスホラミデート化合物を５％のジメチルスルホキシドおよび約１０％のＣｒｅｍｐｈｏｒ ＥＬ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）を含有する食塩水に溶解する。より可溶性の本件化合物との複合体を形成することができるシクロデキストリンのような可溶化剤や、あるいは、当業者によく知られた他の可溶化剤を癌治療のための本件化合物のデリバリーに医薬賦形剤として用いることもできる。
【００５３】
あるいは、本件化合物は、よく知られた方法を用いて、他の投与ルートのための投与形態形状に製剤化することもできる。医薬組成物は、例えば、カプセル、ゲルシール，または錠剤といった経口投与のための投与形態で調剤されることもできる。カプセルは、ゼラチンまたはセルロース誘導体のようなよく知られている医薬上許容可能などんな材料を含んでいてもよい。錠剤は、活性ホスホラミデート、および当業者によく知られた固形キャリアーや潤滑剤の混合物を圧縮することにより、従来の方法に従って、製剤化することとしてもよい。固形キャリアーの例としては、でんぷん、糖、ベントナイトなどを挙げることができる。本発明の化合物は、また、例えば、結合剤としてのラクトース若しくはマンニトール、および従来の増量剤および錠剤化剤を含有する硬殻錠剤またはカプセルの形態で投与することもできる。
【００５４】
＜実験手順および実施例＞
【化１４】
2004538240.tif 000017
５−フルオロ−２’−デオキシウラジル５−ニトロフルフリルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（３）：
ホスホラストリクロライド（２Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液；０．８１ ｍＬ；１．６３ ｍｍｏｌ）をアルゴンの下で−７８℃に冷却した。５−ニトロフルフリルアルコール（２３３ ｍｇ；１．６３ ｍｍｏｌ）を無水のＣＨ２Ｃｌ２ １２ ｍＬに溶解し、冷やしたＰＣｌ３を加えた後、純粋でかつ無水のｉＰｒ２Ｎｅｔ（０．．５７ ｍＬ； ３．２５ ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応は−７８℃ から−７０℃の間で１５分間攪拌して行った。無水のＣＨ２Ｃｌ２ １６ ｍＬにＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）アミンヒドロクロライド（２５７ ｍｇ； １．６３ ｍｍｏｌ）を溶解し、反応混合物に加えた後、上記無水でかつ純粋なｉＰｒ２Ｎｅｔ（１．１３ ｍＬ； ６．５０ ｍｍｏｌ）を滴下添加し、この反応混合物を−７８℃ から−７０℃の間で３０分間攪拌した。この反応混合物を、あらかじめ−６５℃で冷やした、２ ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２と２ ｍＬの無水ピリジンに溶解した５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（２００ ｍｇ； ０．８１２ ｍｍｏｌ）溶液に、カニューレで注入した。反応は、−６５℃ から−６０℃の間で１時間攪拌して行った。この反応混合物にｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６分 ｄｅｃａｎｅ； ０．４４ ｍＬ）を、−６５℃で攪拌しながら加えた。温度を−４０℃まで上昇させ、３０分以上−４０℃から０℃まで上昇させながら攪拌した。この反応混合物をセライトに流し込み、減圧濃縮した。粗生成物（１：１のＣＨ２Ｃｌ２／アセトン）のカラムクロマトグラフィーにより、黄色の泡状の物質１（１５５ ｍｇ； ３４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ９．６８ （ｍ， １Ｈ）； ７．８０ ａｎｄ ７．７４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．２２ Ｈｚ ａｎｄ ６．４１ Ｈｚ）； ７．３０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．４８ Ｈｚ）； ６．７１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．３０）； ６．２２ （ｍ， １Ｈ）； ５．０３ （ｍ， ２Ｈ）； ４．５２ （ｍ， １Ｈ）； ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）； ４．０７ （ｍ， １Ｈ）； ３．５７ （ｍ， ２Ｈ）； ３．０７ （ｍ， ２Ｈ）； ２．６８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １０．２５ Ｈｚ）； ２．４９ （ｍ， １Ｈ）； ２．１８ （ｍ， １Ｈ）， １．７４ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１５．５９ ａｎｄ −１５．７８．
ＨＰＬＣ （３５：６５ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］）：  ８．６６７分．， ９２％．
ＥＳＩ ＭＳ（高分解能）： Ｃ１９Ｈ３５ＣｌＦＮ４Ｏ１０Ｐについて計測： ｍ／ｚ ５５５．１０５９ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ５５５．１０５９．
【００５５】
【化１５】
2004538240.tif 000018
５−フルオロ−２’−デオキシウリジル２−（１，４−ジメタオキシナフチル）メチルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（４）：
ホスホラミデート４を、前記コンパウンド３と同様に無水のトリクロライド（２分 ＣＨ２Ｃｌ２； ０．４１ ｍＬ； ０．８１２ ｍｍｏｌ）、１，４−ジメタオキシ−２−ヒドロキシメチルナフタレン（１７７ ｍｇ， ０．８２３ ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）アミンヒドロクロライド（１２８ ｍｇ， ０．８１２ ｍｍｏｌ）、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（１００ ｍｇ， ０．４０６ ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６分 ｄｅｃａｎｅ； ０．２３ ｍＬ）から調製した。粗生成物（１：１のＣＨ２Ｃｌ２／アセトン）のカラムクロマトグラフィーにより、薄いオレンジ色の泡状の物質４（１３４ ｍｇ； ５２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．２２ （ｄｄ， １Ｈ）； ８．０４ （ｄｄ， １Ｈ）； ７．７４ ａｎｄ ７．６６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．２３ ＆ ６．３９）； ７．５５ （ｍ， ２Ｈ）； ６．８３ （ｓ， １Ｈ）； ６．１６ （ｍ， １Ｈ）； ５．２６ （ｍ， ２Ｈ）； ４．５１ （ｍ， １Ｈ）； ４．２３ （ｍ， ２Ｈ）； ４．０５ （ｍ， １Ｈ）； ３．９９ （ｓ， ３Ｈ）； ３．９３ （ｓ， ３Ｈ）； ３．５０ （ｍ， ２Ｈ）； ３．０８ （ｍ， ２Ｈ）； ２．６５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ９．７０ Ｈｚ）； ２．４２ （ｍ， ２Ｈ）； １．６６ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１２．８２ ａｎｄ −１２．９０
ＨＰＬＣ （５０：５０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］）：  ７．０１７分．； ９５％．
ＦＡＢ ＭＳ （ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）： Ｃ２７Ｈ３４ＣｌＦＮ３Ｏ４Ｐについて計測： ｍ／ｚ ６３０．１７８４ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ６３０．１７６０．
【００５６】
【化１６】
2004538240.tif 000019
５−フルオロ−２’−デオキシウリジル２−（１，４−ｎａｐｔｈｏｑｕｉｎｏｎｙｌ）メチル Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（５）：
硝酸セリウムアンモニウム（２２５ ｍｇ， ０．４１ ｍｍｏｌ）水溶液（３ ｍＬ）を、４（１００ ｍｇ， ０．１６ ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液 （３ ｍＬ）に１５分間以上かけて滴下添加した。反応は室温で１時間攪拌して行い、ＣＨＣｌ３ で３回抽出した。有機層を一つにまとめ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（５％ ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３）により精製し、黄色の泡状の物質５（８７．６ ｍｇ， ９３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．１０ （ｍ， ２Ｈ）； ７．７７ （ｍ， ２Ｈ）； ７．７２ （ｍ， １Ｈ）； ７．０３ （ｓ， １Ｈ）； ６．１８ （ｍ， １Ｈ）； ５．０２ （ｍ， ２Ｈ）； ４．５８ （ｍ， １Ｈ）； ４．２９ （ｍ， ２Ｈ）； ４．０５ （ｍ， １Ｈ）； ３．５７ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １０．０７ Ｈｚ）； ２．４７ （ｍ， １Ｈ）； ２．３１ （ｍ， １Ｈ）； １．７５ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１２．６７ ａｎｄ −１２．９９．
ＨＰＬＣ （５０：５０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］）：  ４．６５０分．； １００％．
ＦＡＢ ＭＳ（高分解能）： Ｃ２５Ｈ２８ＣｌＦＮ３Ｏ９Ｐについて計測： ｍ／ｚ ６００．１３１４ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ６００．１３２７．
【００５７】
【化１７】
2004538240.tif 000020
５−フルオロ−２’−デオキシウリジル２−（５−メタオキシ−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｉｎｄｏｌｏｑｕｉｎｏｎｅ）メチルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（６）：
ホスホラストリクロライド（２Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２ 溶液； ０．１３ ｍＬ； ０．２５８ ｍｍｏｌ）をアルゴン中で−６０℃に冷却した。２−ヒドロキシメチル−５−メタオキシ−Ｎ−メチルインドロキノン（５７ ｍｇ； ．２５８ ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ３ＣＮ １ ｍＬを添加した無水ＣＨ２Ｃｌ２ ６ ｍＬに溶解し、あらかじめ冷却したＰＣｌ３に加えた後、純粋なｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（０．０７ ｍＬ； ０．３８６ ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応は−６０℃で２５分間攪拌して行った。 無水のＣＨ２Ｃｌ２ １ ｍＬに、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）アミンヒドロクロライド（４０．７ ｍｇ； ０．２５８ ｍｍｏｌ）を溶解させ、反応混合物に添加した後、純粋なｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（０．１４ ｍＬ； ０．７７３ ｍｍｏｌ） を滴下添加し、−６０℃で２５分間攪拌した。５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（３１．７ ｍｇ； ０．１２９ ｍｍｏｌ）を無水ピリジンと共に蒸発させ、無水のピリジン ２ ｍＬ中に溶解し、−４５℃に冷却した。ＦＵｄＲが消失するまで、このピリジン溶液を、以前に作成した混合液で滴定した。ＦＵｄＲの消失は、３０％のメタノールを含むクロロホルムを用いてＴＬＣによりモニターした。１時間後、反応を−４０℃でｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６ Ｍ ｄｅｃａｎｅ 溶液； ０．０６ ｍＬ）により酸化させ、３０分以上かけて−４０℃から０℃まで上昇させながら攪拌した。飽和させたＮＨ４Ｃｌ（３ ｍＬ）を加え、いくつかの層を分離させ、無水の層をＣＨＣｌ３（５回 ５ｍＬ）で抽出した。有機層を一つに混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧濃縮した。この粗反応混合物を、１５％のメタノールを含むクロロホルムを用いてシリカゲルのプラグを通過させた。シリカゲル（１：９ ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）クロマトグラフィーにより、さらに精製し、黄オレンジ色の泡状の物質６（３３ ｍｇ； ４１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ  ８．９９ （ｂｒ， １Ｈ）； ７．６２ （ｍ， １Ｈ）； ６．６２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．７６ Ｈｚ）； ６．１１ （１Ｈ， Ｊ ＝ ４．３０）； ５．６４ （ｓ， １Ｈ）； ４．９５ （ｍ， ２Ｈ）； ４．４６ （ｍ， １Ｈ）； ４．１３ （ｍ， ２Ｈ）； ３．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４．０３ Ｈｚ）； ３．８６ （ｍ， １Ｈ）； ３．７６ （ｓ， ３Ｈ）； ３．４７ （ｍ， ２Ｈ）； ３．９５ （ｍ， ２Ｈ）； ２．５８ （ｍ， ３Ｈ）； ２．４１ （ｍ， １Ｈ）； ２．１１ （ｍ， １Ｈ）； １．６５ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１４．６５ 及び −１４．７１．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントで３０分以上）：２０．３２分．； ８０％．
ＦＡＢ ＭＳ（高分解能）： Ｃ２５Ｈ３１ＣｌＦＮ４Ｏ１０Ｐについて測定：  ｍ／ｚ ６３３．１５２９ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ６３３．１５０６．
【００５８】
【化１８】
2004538240.tif 000021
Ｎ−アリルオキシカルボニルアラビノシルサイトシン（７）：
ピロ炭酸ジエチル（８６．８ ｍｇ，  ０．４５２ ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（５ ｍＬ）で希釈し、室温でアラビノシルシトシン（１００ ｍｇ， １．６１ ｍｍｏｌ）の水溶液 （ｄｄＨ２Ｏ １ ｍＬ）に加えた。この反応混合物をオイルバスに浸し、２時間還流した後、溶媒を減圧除去し、得られた白い残留物に無水のピリジン（３回、 ５ｍＬ）を加え、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中１５％ ＭｅＯＨ ）により精製し、白い泡状物質７（９１ ｍｇ， 出発原料を基準にした回収率７６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ６）：  ｄ  １０．７５ （ｂｒ， １Ｈ）； ８．０４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．５１ Ｈｚ）； ７．００ （ｄ， １ｈ， Ｊ ＝ ７．５１ Ｈｚ）； ６．０４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．８５ Ｈｚ）； ５．９５ （ｍ， １Ｈ）； ５．４６ （ｍ， １Ｈ）； ５．３９ ＆ ５．２５ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．４７ ＆ ３５．３４ Ｈｚ）； ５．３２ ＆ ５．２１ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．１ ＆ ２３．３２ Ｈｚ）， ５．１１ （ｍ， １Ｈ）； ４．６２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．３１ Ｈｚ）； ４．０４ （ｍ， １Ｈ）； ３．９１ （ｍ， １Ｈ）； ３．８１ （ｍ， １Ｈ）； ３．６０ （ｍ， ２ Ｈ）．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントで３０分以上）：１２．１８分．； ９９％．  ＥＳＩ ＭＳ （低分解能）： （Ｍ＋Ｈ） ＝ ３２８ ｍ／ｚ； Ｃ１３Ｈ１７Ｎ３Ｏ７のＭＷ ＝ ３２７．
【００５９】
【化１９】
2004538240.tif 000022
Ｎ−アリルオキシカルボニルアラビノシルサイトシル５−ニトロフルフリルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（８）：
ホスホラミデート８を、前記記載のコンパウンド６と同様に、ホスホラストリクロライド（２Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液； １．１４ ｍＬ； ２．２８ ｍｍｏｌ）、５−ニトロフルフリルアルコール（３２６ ｍｇ， ２．２８ ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチルアミン）ヒドロクロライド（３６０ ｍｇ， ２．２８ ｍｍｏｌ）、Ｎ−アリルオキシカルボニルアラビノシルサイトシン（２４０ ｍｇ， ０．７３３ ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６ Ｍ デカン 溶液； ０．４８ ｍＬ）から調製した。粗生産物（１０％ メタノールを含むＣＨＣｌ３）のカラムクロマトグラフィーを行い、薄黄色の泡状物質８（２２７ ｍｇ； ５０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．２３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．３３ Ｈｚ）； ７．２３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １．３３ Ｈｚ）； ６．６９ （ｍ， １Ｈ）； ６．１５ （１Ｈ）； ５．９１ （ｍ， １Ｈ）； ５．３４ （ｍ， ３Ｈ）； ５．０２ （ｍ， ２Ｈ）； ４．５５ （ｍ， ４Ｈ）； ４．２３ （ｍ， ２Ｈ）； ３．５５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６８ Ｈｚ）； ３．０３ （ｍ， ２Ｈ）； ２．６７ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １０．２６ Ｈｚ）； １．７３ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１５．５４ および −１５．７６．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントで３０分以上）： ２０．０１分．； ９５％．
ＥＳＩ ＭＳ（高分解能）： Ｃ２３Ｈ３１ＣｌＮ５Ｏ１２Ｐについて計測： ｍ／ｚ ６３６．１４７４ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ６３６．１４７４．
【００６０】
【化２０】
2004538240.tif 000023
アラビノシルサイトシル５−ニトロフルフリルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート：
テトラキス（トリフェニルフォスフィリン）パラジウム（３．４５ ｍｇ， ２９．９ ｍｍｏｌ）を、 にホスホラミデート８（３８ ｍｇ， ５９．８ ｍｍｏｌ） のＴＨＦ溶液（４００ ｍＬ）に加え、続いてにｐ−トルエンスルフィン酸（１１．７１ ｍｇ， ６５．７ ｍｍｏｌ）水溶液 （ｄｄＨ２Ｏ、２４０ ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で２．５時間攪拌し、その後、それをシリカゲル（２０％ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）のプラグを通過させ、薄黄色の泡状物質（２５．１ ｍｇ， ７６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ）：  ｄ ７．８５ （ｍ， ２Ｈ）； ７．４９ （ｍ， １Ｈ）； ６．８９ （ｍ， １Ｈ）； ６．５７ （ｍ， １Ｈ）； ５．９５ （ｍ， １Ｈ）； ５．１１ （ｍ， ２Ｈ）； ４．１９ （ｍ， ５Ｈ）； ３．６６ （ｍ， ２ Ｈ）； ３．１１ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７２ （ｍ， ３Ｈ）； １．７９ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ， ＴＰＰＯ）： ｄ −１４．１８ ａｎｄ −１４．３７
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントで３０分以上）：２１．４３ 分．； ９５％．
ＥＳＩ ＭＳ（高分解能）： Ｃ１９Ｈ２７ＣｌＮ５Ｏ１０Ｐについて計測： ｍ／ｚ ５５２．１２６２ （Ｍ＋Ｈ）＋； Ｆｏｕｎｄ： ５５２．１２５１．
【００６１】
【化２１】
2004538240.tif 000024
２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジル５−ニトロフルフリルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（１０）：
ホスホラミデート１０を前記記載のコンパウンド６と同様に、ホスホラストリクロライド（２分 ＣＨ２Ｃｌ２； ０．４５ ｍＬ； ０．８９２ ｍｍｏｌ）、５−ニトロフルフリルアルコール（１２８ ｍｇ， ０．８９２ ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチルアミン）ヒドロクロライド（１４１ ｍｇ， ０．８９２ ｍｍｏｌ）、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジル（１００ ｍｇ， ０．４４６ ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６ Ｍ デカン溶液； ０．４８ ｍＬ）から調製した。粗生産物（５％ メタノール含有ＣＨＣｌ３）のカラムクロマトグラフィーにより、白い泡状物質１０（８０．５ ｍｇ； 出発原料を基準にした回収率４８％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．１９ （ｓ， １Ｈ）； ７．２９ （ｍ， １Ｈ）； ７．１９ （ｓ， １Ｈ）； ６．９８ （ｍ， １Ｈ）； ６．６６ （ｍ， １Ｈ）； ６．３４ （ｍ， １Ｈ）； ５．９１ （ｍ， １Ｈ）； ４．９９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ９．９７ Ｈｚ）； ４．１６ （ｍ， ２Ｈ）； ３．５６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．５９ ＆ ６．１３ Ｈｚ）； ３．０６ （ｍ， ２Ｈ）； ２．６３ （ｍ， ３Ｈ）； １．８７ （２ｓ， ３Ｈ）； １．７１ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１３．５８および−１３．９９．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントを３０分以上）：２２．７５および２３．１８分．； ９０％．
ＥＳＩ ＭＳ（高分解能）： Ｃ２０Ｈ２６ＣｌＮ４Ｏ９Ｐについて計測： ｍ／ｚ ５３３．１３５８ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ５３３．１３５０．
【００６２】
【化２２】
2004538240.tif 000025
２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジル２−（１，４−ジメタオキシナフチル）メチルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（１１）：
ホスホラミデート１１を前記記載のコンパウンド６と同様に、ホスホラストリクロライド（２分 ＣＨ２Ｃｌ２； ０．４５ ｍＬ； ０．８９２ ｍｍｏｌ）、１，４−ジメタオキシ−２−ヒドロオキシメチルナフタレン（１９５ ｍｇ， ０．８９２ ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチルアミン）ヒドロクロライド（１４１ ｍｇ， ０．８９２ ｍｍｏｌ）、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジル（１００ ｍｇ， ０．４４６ ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルヒドロペルオキサイド（４．６分 ｄｅｃａｎｅ； ０．４５ ｍＬ）から調製した。粗生産物（５％ ｍｅｔｈａｎｏｌ 含有ＣＨＣｌ３）のカラムクロマトグラフィーにより、白い泡状物質１１（１２１ ｍｇ； 出発原料を基準にした回収率５６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．２４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．０６ Ｈｚ）； ８．０５ （ ｍ， ２Ｈ）； ７．５４ （ｍ， ２Ｈ）； ７．１９ （ｓ， １Ｈ）； ６．９８ （ｓ， １Ｈ）； ６．８４ （ｓ， １Ｈ）； ６．３１ （ｍ， １Ｈ）； ５．５８ （ｍ， １Ｈ）； ５．２４ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．６９ Ｈｚ）； ４．９８ （ｍ， １Ｈ）； ４．１５ （ｍ， ２Ｈ）； ４．９８ （ｍ， ６Ｈ）； ３．５０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８６ ＆ ６．３１ Ｈｚ）； ３．０４， ｍ， ２Ｈ）； ２．６１ （ｍ， ３Ｈ）； １．８６ （ｓ， ３Ｈ）； １．７１ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１３．４４および−１３．８８．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］のグラジエントで３０分以上）：２８．０８および２８．３０ 分．； ８７％．
ＥＳＩ ＭＳ（低分解能）： Ｃ２８Ｈ３５ＣｌＮ３Ｏ８Ｐについて計測： ６０８ （Ｍ＋Ｈ）＋； 実測値： ６３０ （Ｎａ付加）．
【００６３】
【化２３】
2004538240.tif 000026
２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジル ２−（１，４−ナプトキノニル）メチルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミデート（１２）：
硝酸セリウムアンモニウム（２２５ ｍｇ， ０．．４１１ ｍｍｏｌ）水溶液（３ ｍＬ）を、１１（１００ ｍｇ， ０．１６４ ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液（３ ｍＬ）に１５分以上かけて滴下添加した。反応を１時間、室温で攪拌して行い、ＣＨＣｌ３で抽出した（３回）。有機層を一つに混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（５％ ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３）による精製を行い、黄色の泡状物質１２（７８ ｍｇ， ８２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ８．０９ （ｍ， ２Ｈ）； ８．０１ （ｓ， １Ｈ）； ７．７９ （ｍ， ２Ｈ）； ７．１７ （ｓ， １Ｈ）； ６．９９ （ｍ， ２Ｈ）； ６．３５ （ｍ， １Ｈ）； ５．９３ （ｍ， １Ｈ）； ５．００ （ｍ， ３Ｈ）； ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）； ３．５６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８６ ＆ ６．３１ Ｈｚ）； ３．１１ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １０．０７ Ｈｚ）； １．９０ （ｓ， ３Ｈ）； １．７４ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）： ｄ −１３．４９および−１３．８４．
ＨＰＬＣ（０％から７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ ［０．１％ＴＦＡ］を３０分以上かけたグラジエント）：２４．８２および２５．０２ 分．； ９５％．
ＦＡＢ ＭＳ（高分解能）： Ｃ２５Ｈ２９ＣｌＮ３Ｏ８Ｐについて計測： ｍ／ｚ ６００．１２７９ （Ｎａ＋ ａｄｄｕｃｔ）； 実測値： ６００．１２９７ （Ｎａ＋付加）．
【００６４】
【化２４】
2004538240.tif 000027
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ブロモブチル）アミンヒドロブロマイド：
臭化水素酸（２０ ｍＬ， ０．３８ ｍｍｏｌ， ４８重量％）を０℃でＮ−メチル−Ｎ−ブタン−４−オル（４．０ ｇ， ０．３９ ｍｍｏｌ）にゆっくりと攪拌しながら加えた。この反応混合物を２時間、還流して温めた。蒸留装置を設置し、蒸留物１０ ｍＬを回収し、４８％ ＨＢｒを１０ ｍＬ（０．１８ ｍｍｏｌ）加えた。４時間還流した後、蒸留によって１０ ｍＬ減少したため、４８％ ＨＢｒを１０ ｍＬ（０．１８ ｍｍｏｌ）加え、反応を一晩還流して行った。この反応混合物を蒸留し（およそ２０ ｍＬの蒸留物）、蒸留容器の残留物を−７８℃のアセトンを注いだ。白い沈殿物が形成され、濾過により回収した（４．２４ ｇ， ４４％）。
１Ｈ ＮＭＲ： ＣＤＣｌ３：  ｄ ９．０８ （ｓ， １Ｈ）； ３．４６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．９５ Ｈｚ）； ３．０４ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７２ （ｔ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ５．６７ Ｈｚ）； ２．０５ （ｍ， ４Ｈ）； １．７０ （ｓ， １Ｈ）．
Ｄ２Ｏ： ２．８４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．１３ Ｈｚ）； ２．３９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．３２ Ｈｚ）； ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）； １．２３ （ｍ， ４Ｈ）．
【００６５】
【化２５】
2004538240.tif 000028
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）アミンヒドロクロライド：
室温で攪拌しながらの、Ｎ−メチル−Ｎ−ブタン−４−オル（２．０ ｇ， １９．３８ ｍｍｏｌ）の ＣＨ２Ｃｌ２溶液１０ ｍＬ に、リトマス紙が赤（ｐＨ＝２）に変わるまでＨＣｌガスを泡立たせた。この反応混合物を０℃に冷却し、塩化チオニル（１．４１ ｍＬ， １９．３８ ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応を室温で一晩攪拌して行った。溶媒を減圧除去して白い固体（２．９ ｇ， ９５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ： ＣＤＣｌ３：  ｄ ８．７９ （ｓ， １Ｈ）； ３．５９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．９５）； ２．９７ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７０ （ｓ， ３Ｈ）； ２．０６ （ｍ， ２Ｈ）； １．９５ （ｍ， ２Ｈ）； １．６３ （ｓ， １Ｈ）．
Ｄ２Ｏ：  ｄ ３．５０ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７５ （ｍ， ２Ｈ）； ２．５５ （ｓ， ３Ｈ）； １．７０ （ｍ， ４Ｈ）．
ＣＩ ＭＳ（低分解能）： （Ｍ＋Ｈ）＋ ＝ １２２ ｍ／ｚ； Ｃ５Ｈ１２ＮＣｌ についてのＭＷ ＝ １２１．
【００６６】
【化２６】
2004538240.tif 000029
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミディックジクロライド：
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）アミンヒドロクロライド（２．０ ｇ， １２．７３ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して−４０℃に冷却した。ホスホラスオキシクロライド（１．２ ｍＬ， １２．７３ ｍｍｏｌ）を適当に加えた後、トリエチルアミン（３．６ ｍＬ， ２５．４６ ｍｍｏｌ） のＣＨ２Ｃｌ２溶液５ ｍＬを添加した。この反応物を０℃に加温し、室温までゆっくりと戻した。そして、室温で６時間、攪拌しながら反応させた。この反応混合物を氷に注ぎ、飽和塩化物アンモニウムを加えて層を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出し、有機層を一つに混合し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（３：１ Ｈｅｘ／ ＥｔＯＡｃ）により精製し、透明なオイル（２．５７ ｇ， ８５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ３．５８ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．９５ Ｈｚ）； ３．２９ （ｍ， ２Ｈ）； ２．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １５．９３ Ｈｚ）； １．７９ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）：  ｄ −６．６．
【００６７】
【化２７】
2004538240.tif 000030
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ブロモブチル）ホスホラミディックジブロマイド：
Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ブロモブチル）アミンヒドロブロミド（２．０ ｇ， ８．０９ ｍｍｏｌ）を用いて、前記記載のように（一晩攪拌して反応を行うことを除いて）同様の手順を行った。シリカゲルクロマトグラフィー（３：１ Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ）を用いて精製し、透明なオイル（２．０ ｇ， ９２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：  ｄ ３．４６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０５ Ｈｚ）； ３．３０ （ｑ， ２Ｈ）； ２．８５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １６．１１ Ｈｚ）； １．８８ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）：  ｄ −６．７５．
【００６８】
【化２８】
2004538240.tif 000031
５−ニトロ−２−フリルメチルＮ−メチル−Ｎ−（４−クロロブチル）ホスホラミディッククロライド：
テトラヒドロフルフリルアルコール（２４０ ｍｇ， １．６８ ｍｍｏｌ）を無水のＴＨＦ １０ ｍＬ中に溶解し、−７８℃に冷却した。リチウムヘキサメチルジシラザン（１．８４ ｍＬ， １．８４ ｍｍｏｌ）を滴下添加し、−７８℃で１０分間攪拌して反応を行った。この反応混合物に、ホスホラミディックジクロライド（４００ ｍｇ， １．６８ ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液１０ ｍＬ を滴下添加した。−７８℃から−６０℃までゆっくりと加温して反応を行い、−６０℃で１時間攪拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌで急冷し、層を分離し、水層を３回ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を一つに混合し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１０：１ ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン）を用いて精製し、薄茶色のオイル（３２０ ｍｇ， ５５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）： ｄ ７．２９， （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）； ６．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）； ５．１４ （ｄｄ， ２Ｈ）； ３．５６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８６）； ３．２０ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １３．５８ Ｈｚ）， １．７９ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）：  ｄ −７．８８ ．
【００６９】
【化２９】
2004538240.tif 000032
５−ニトロ−２−フリルメチルＮ−メチル−Ｎ−（４−ブロモブチル）ホスホラミディッククロライド：
出発原料としてニトロフルフリルアルコール（２４５ ｍｇ， １．７８ ｍｍｏｌ）およびホスホラミディックジクロライド（５００ ｍｇ， １．７８ ｍｍｏｌ）を用いて、前記記載と同様の手順を行った。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１０：１， ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン）を用いて精製し、薄茶色のオイル（３６０ ｍｇ， ５２％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）： ｄ ７．２９， （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）； ６．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）； ５．１４ （ｄｄ， ２Ｈ）； ３．４３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．３２）； ３．１９ （ｍ， ２Ｈ）； ２．７２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ １３．７３ Ｈｚ）， １．７９ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ）：  ｄ −７．８８．
【００７０】
【化３０】
2004538240.tif 000033
ホスホラミディックジクロライドの合成．
ジイソプロピルアミン（８．８２ ｍＬ， ５０．６１ ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン２０ ｍＬで希釈し、あらかじめ冷やした、ＰＯＣｌ３（２．３６ ｍＬ， ２５．３１ ｍｍｏｌ）とＮ−メチル−４−クロロブチルアミンヒドロクロライド（４ｇ， ２４．３１ ｍｍｏｌ）とを含む 無水ジクロロメタン 溶液４０ ｍＬに、−２０℃でゆっくりと加えた。反応混合物を１０℃に徐々に加温しながら、３．５時間攪拌した。反応混合物を飽和塩化物アンモニウムで急冷させ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を回収し、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水して、蒸発乾固し、黄色の液体を回収した。粗生成物を３：１ Ｈｅｘａｎｅｓ／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、透明な液体としてのホスホラミディックジクロライド（５．０７ｇ， 回収率８４％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ３．５９ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １６．１１ Ｈｚ）， １．８０ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ） ｄ： −６．６３ ｐｐｍ．
【００７１】
【化３１】
2004538240.tif 000034
１−プロペニルベンゾエート１２ａの合成．
４−ヒドロキシ安息香酸（５ｇ， ３６．２０ ｍｍｏｌ） の臭化アリル懸濁液 ８６ ｍＬに、ジイソプロピルアミン（６．３１ ｍＬ， ３６．２０ ｍｍｏｌ）を適当に添加した。この反応混合物を２時間還流しながら攪拌し、室温に冷却した。過剰な臭化アリルを減圧蒸留して取り除き、残ったオイルをＥｔＯＡｃで希釈し、水、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して黄色のオイルを回収した。 粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、白い固体物である安息香酸エステル（５．０３ｇ， 回収率７８ ％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７９ Ｈｚ）， ６．８６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７９ Ｈｚ）， ６．０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．６８ Ｈｚ）．
ＨＰＬＣ （５０：５０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ６．１７ 分 （９７．２％）．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ：１７９ （Ｍ＋Ｈ）
ＧＣＭＳ ｍ／ｚ： １７９ （Ｍ＋Ｈ）．
【００７２】
【化３２】
2004538240.tif 000035
１−プロペニルエステル１２ｂの合成．
エステル１２ｂを１２ａについての記載と同様に合成し、白い固体として得た（回収率７８％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．７７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４１ Ｈｚ）， ７．５６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４１ Ｈｚ）， ７．４３−７．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．２８ Ｈｚ）， ６．７３ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．２８ Ｈｚ）， ５．９４−５．８０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３５−５．２４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．９１ （ｓ， １Ｈ）， ４．６２ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４８−４．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｔ， １Ｈ）， ３．０６ （ｔ， ２Ｈ）．
ＨＰＬＣ （５０：５０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： １１．７５ 分 （９９．９９％）
【００７３】
【化３３】
2004538240.tif 000036
１−プロペニルエステル１２ｃの合成．
エステル１２ｃを１２ａについての記載と同様に合成し、白い固体として得た（回収率８０ ％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ６．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．４２ Ｈｚ）， ６．７３ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．４２ Ｈｚ）， ５．８４ （ｍ， １Ｈ）， ５．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．８６ Ｈｚ）， ３．０２ （ｍ， １Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）．
ＨＰＬＣ （３０：７０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ８．９５ 分 （９７％）．
【００７４】
【化３４】
2004538240.tif 000037
１−プロペニルエステル１２ｄの合成．
エステル１２ｄを１２ａについての記載と同様に合成し、白い固体として得た（回収率８０％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．２０−７．０９ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９９−５．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３５−５．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９３−４．８５ （ｍ， １Ｈ）， ４．６１ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．８６ Ｈｚ）， ３．２６−３．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．００ （ｓ， ３Ｈ） ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０：７０， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ５．６３， ５．８ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２８６ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００７５】
【化３５】
2004538240.tif 000038
１−プロペニルエステル１２ｅの合成．
エステル１２ｅを１２ａについての記載と同様に合成し、緑色のオイルとして得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．３２−７．１９ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９８−５．８２ （ｍ， １Ｈ）， ５．３１−５．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．６８ Ｈｚ）， ３．６４ （ｓ， ２Ｈ） ｐｐｍ．ｂ
ＨＰＬＣ （３０：７０， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ４．３３ 分．
【００７６】
【化３６】
2004538240.tif 000039
１−プロペニルエステル１３の合成．
ｐ−アミノ安息香酸カリウム（２ｇ， １１．４１ ｍｍｏｌ） のＤＭＦ 懸濁液４０ ｍＬ に、臭化アリル（０．９９ ｍＬ， １１．４１ ｍｍｏｌ）を添加した。反応を一晩攪拌して行い、それから水で急冷し、数回ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を一つに混合し、塩水で洗浄して、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して黄色液体を回収した。 粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、 黄色の固体物として１３を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ７．０８ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ６．０５−５．９７ （ｍ， １Ｈ）， ５．５１−５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８２−４．７８ （ｍ， ２Ｈ） ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （グラジエント ３０−１００％ ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ ３５ 分以上）： ７．６８ 分
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： １７８ （Ｍ＋Ｈ）， ２００ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００７７】
【化３７】
2004538240.tif 000040
ホスホラミディックモノクロライド１４ａの合成．
ホスホラミディックジクロライド（０．２ ｇ， ０．８４ ｍｍｏｌ）とエステルアリル１２ａ（０．１５ｇ， ０．８４ ｍｍｏｌ）を含む、あらかじめ冷やした無水ＤＣＭ溶液 ３ ｍＬ に、ジイソプロピルエチルアミン（０．３ ｍＬ， １．６８ ｍｍｏｌ）を−１５℃で適当に添加した。反応は、−１５℃で１時間、−５℃で３時間攪拌して行い、飽和塩化アンモニウムで急冷した。得られた層を分離した。それから、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して黄色の液体を回収した。粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、透明の液体として１４ａを回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．１０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．３３ Ｈｚ）， ７．３４ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．３３ Ｈｚ）， ６．０９−５．９８ （ｍ， １Ｈ）， ５．４５−５．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８４−４．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７ （ｔ， ２Ｈ）， ３．３５−３．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８４ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １３．５５）， １．８２−１．７９ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１３．０７ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （グラジエント ３０−１００％， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １６．０５ 分．
【００７８】
【化３８】
2004538240.tif 000041
ホスホラミディックモノクロライド１４ｂの合成．
ホスホラミディックジクロライド１１（０．４５ｇ， １．８９ ｍｍｏｌ）を無水のＴＨＦ ２ ｍＬ中に溶解させ、−２０℃であらかじめ冷やした、 １２ｂ（０．８４ｇ， １．８９ ｍｍｏｌ）とＬｉＨＭＤＳ（２．０８ ｍｍｏｌ）を含む無水ＴＨＦ溶液２ ｍＬにカニューレで添加した。反応を０℃まで加温し、５時間攪拌して行った。続いて、反応を飽和塩化アンモニウムで急冷し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を一つに混合し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水して蒸発乾固し黄色のオイルを回収した。 粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、黄色のオイルとして１４ｂ（０．８５ｇ， 回収率７０％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．７７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４２ Ｈｚ）， ７．５７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４２ Ｈｚ）， ７．４４−７．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１９−７．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９１−５．８１ （ｍ， １Ｈ）， ５．３４−５．２５ （ｍ， ３Ｈ）， ４．６６−４．６０ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４９−４．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｔ， １Ｈ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２７−３．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１７−３．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８２ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １３．５４ Ｈｚ）， １．８１−１．７８ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ） ｄ： −１２．６４ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （７０：３Ｏ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ溶液）： ６．８３３ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６４５／６４７ （Ｍ＋Ｈ）， ６６７／６６９ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００７９】
【化３９】
2004538240.tif 000042
ホスホラミディックモノクロライド１４ｃの合成．
１４ｃを１４ｂについての記載と同様に合成し薄黄色のオイルとして得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．１６ （ｍ， ４Ｈ）， ５．８ （ｍ， １Ｈ）， ５．３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．６８ Ｈｚ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０５ （ｍ， １Ｈ）， ２．８２ （ｄ， ３Ｈ）， １．７９ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＯ） ｄ： −１２．５ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （ｇｒａｄｉｅｎｔ ３０−１００％， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ｏｖｅｒ ３５ 分）： ９．８３ 分．
【００８０】
【化４０】
2004538240.tif 000043
ホスホラミディックモノクロライド１４ｄの合成．
１４ｄを１４ａと同様の手順で合成した。この反応混合物を一晩攪拌し、薄黄色のオイルを回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．２０−７．０９ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９９−５．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３５−５．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９３−４．８５ （ｍ， １Ｈ）， ４．６１ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．８６ Ｈｚ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２６−３．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８３ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １３．５５ Ｈｚ）， ２．００ （ｓ， ３Ｈ）， １．９６−１．７５ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： １２．７１
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４６５／４６７ （Ｍ＋Ｈ）．
【００８１】
【化４１】
2004538240.tif 000044
ホスホラミディックモノクロライド１４ｅの合成．
１４ｅを１３ａと同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．３２−７．１９ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９８−５．８２ （ｍ， １Ｈ）， ５．３１−５．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．６８ Ｈｚ）， ３．６４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２５−３．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８３ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １３．５５ Ｈｚ）， １．８０−１．７８ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１２．６６ ｐｐｍ．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３９４／３９６ （Ｍ＋Ｈ）．
【００８２】
【化４２】
2004538240.tif 000045
ホスホラミディックモノクロライド１５の合成．
ホスホラミディックジクロライド１１（０．７ ｇ， ２．９４ ｍｍｏｌ）とエステルアリル１３（０．５２ ｇ， ２．９４ ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン溶液１０ ｍＬ に、ジイソプロピルエチルアミン（０．５１ｍＬ， ２．９４ ｍｍｏｌ）を適当に添加した。反応を１０日間還流しながら攪拌し、室温まで冷却し、ジクロロメタンで希釈して飽和塩化アンモニウムで急冷した。層を分離して、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水して、蒸発乾固して黄色のオイルを回収した。 粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、 薄緑色のオイル（０．２２ ｇ， 回収率２０％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ７．０８ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ６．０５−５．９７ （ｍ， １Ｈ）， ５．５７ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ２．２９ Ｈｚ）， ５．５１−５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８２−４．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５４ （ｔ， ２Ｈ）， ３．３６−３．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７４ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １４．３７ Ｈｚ）， １．８７−１．６４ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１１．２８ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １２．６０ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ３７９／３８１ （Ｍ＋Ｈ）， ４０１／４０３ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００８３】
【化４３】
2004538240.tif 000046
ホスホラミデート１６の合成．
ホスホラミディックモノクロライド１４ａ（０．６３ｇ， １．２１ ｍｍｏｌ）を無水のＴＨＦ ２ ｍＬ中に溶解し、−７８℃であらかじめ冷却したニトロフリルアルコール（０．１９ｇ， １．３３ ｍｍｏｌ）とＬｉＨＭＤＳ（１．４６ ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液 ２ ｍＬ にカニューレで添加した。反応を−４０℃にし、５．５時間攪拌して行った。飽和塩化アンモニウムを反応混合物に加え、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を一つに混合し、塩水で洗浄し、過剰のＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して黒っぽいオイルを回収した。 粗生産物を１０：１ ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、 濃いオレンジ色のオイルとしてホスホラミデート１６（０．３０ｇ， 回収率５２％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．０５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ７．２６ （ｍ， ３Ｈ）， ６．６４ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．４８ Ｈｚ）， ６．０５ （ｍ， １Ｈ）， ５．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１５ Ｈｚ）， ４．８２ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ５．４９ Ｈｚ）， ３．５３ （ｔ， ２Ｈ）， ３．１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７２ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．２５ Ｈｚ）， １．６７ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −２１．７
ＨＰＬＣ （６０：４Ｏ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ＴＦＡ）： ７．１１７ 分．
【００８４】
【化４４】
2004538240.tif 000047
ホスホラミデート１７の合成．
ホスホラミデート１７を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．２３ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ）， ８．０７−７．９１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．６６−７．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ６．８０ （ｓ， １Ｈ）， ６．１９−５．８８ （ｍ， １Ｈ）， ５．４４−５．２０ （ｍ， ４Ｈ）， ４．９２−４．７９ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２４−２．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７１ （ｄ， ３Ｈ，  ｊ ＝ １０．２５ Ｈｚ）， ２．８４−１．８３ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．９４ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （７０：３０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．０１％ ＴＦＡ 溶液）： ７．９６７ 分
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ５８４／５８６ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００８５】
【化４５】
2004538240.tif 000048
ホスホラミデート１８の合成．
ホスホラミデート１８を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ：  ７．７７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４２ Ｈｚ）， ７．５７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．４２ Ｈｚ）， ７．４４−７．２４ （ｍ， ５Ｈ）， ７．１３−６．９３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５９ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ６．０７−５．７０ （ｍ， １Ｈ）， ５．４７−５．２３ （ｍ， ４Ｈ）， ５．０５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１６ Ｈｚ）， ４．７４−４．６１ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５６−４．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２０ （ｔ， １Ｈ）， ３．５１ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２０−２．９９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７０ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．３４ Ｈｚ）， １．８２−１．５３ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．９２
ＨＰＬＣ （７０：３０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ溶液）： ６．１２ 分．
【００８６】
ホスホラミデート１９の合成．
【化４６】
2004538240.tif 000049
ホスホラミデート１９を１６と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．２８ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）， ７．１６ （ｍ， ４Ｈ）， ６．６３ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）， ５．８ （ｍ， １Ｈ）， ５．３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．９８ Ｈｚ）， ４．６ （ｄ， ２Ｈ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０５ （ｍ， １Ｈ）， ２．８２ （ｄ， ３Ｈ）， １．７９ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ  （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２
ＨＰＬＣ （６０：４０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ８．２ 分．
【００８７】
【化４７】
2004538240.tif 000050
ホスホラミデート２０の合成．
ホスホラミデート２０を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．２８ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．７５ Ｈｚ）， ７．２１−６．９８ （ｍ， ４Ｈ）， ６．６３ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．７５ Ｈｚ）， ６．０５−５．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．４４−５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１５ Ｈｚ）， ５．０１−４．７８ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２−４．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６６−３．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２３−２．９９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７１ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．３４ Ｈｚ）， ２．００ （ｓ， ３Ｈ）， １．８３−１．６０ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．０３ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １５．７０ 分
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５７２／５７４ （Ｍ＋Ｈ）．
【００８８】
【化４８】
2004538240.tif 000051
ホスホラミデート２１の合成．
ホスホラミデート２１を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．８１ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ７．２２−７．０５ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９９ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ６．０２−５．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．４５−５．１０ （ｍ， ４Ｈ）， ５．００−４．７９ （ｍ， １Ｈ）， ４．６３−４．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５３ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２３−２．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．７２ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．３５ Ｈｚ）， ２．００ （ｓ， ３Ｈ）， １．８５−１．５８ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２１ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １７．２０ 分
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５８８／５９０ （Ｍ＋Ｈ）， ６１０／６１２ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００８９】
【化４９】
2004538240.tif 000052
ホスホラミデート２２の合成．
ホスホラミデート２２を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ：  ７．２６−７．０４ （ｍ， ５Ｈ）， ６．６０ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．５８ Ｈｚ）， ５．９９−５．７５ （ｍ， １Ｈ）， ５．４３−５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１６ Ｈｚ）， ４．７２−４．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５１ （ｔ， ２Ｈ）， ３．１８−２．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７１ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．２６ Ｈｚ）， １．７７−１．５５ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．０１ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １５．５０ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５０１／５０３ （Ｍ＋Ｈ）， ５２３／５２５ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００９０】
【化５０】
2004538240.tif 000053
ホスホラミデート２３の合成．
ホスホラミデート２３を１６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．８０ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ７．３３−７．０９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９９ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ６．０８−５．６８ （ｍ， １Ｈ）， ５．４６−５．０７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．７８−４．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５１ （ｔ， ２Ｈ）， ３．３０−２．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７２ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．３４ Ｈｚ）， １．８７−１．４８ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２１ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （グラジエント ３０−１００％， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２０．１７ 分．
【００９１】
【化５１】
2004538240.tif 000054
ホスホラミデート２４の合成．
ホスホラミデート２４を１６についての記載と同様の手順で合成した。
【００９２】
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．９６ ９ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ７．２６ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ６．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ６．６５ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ６．１６−５．８４ （ｍ， １Ｈ）， ５．５１−５．１９ （ｍ， ３Ｈ）， ５．０９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．４３ Ｈｚ）， ４．９２−４．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５２ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２２−２．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．５３ Ｈｚ）， １．８５−１．６１ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１５．６０ ｐｐｍ
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １２．６０ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ４８６／４８８ （Ｍ＋Ｈ）， ５０８／５１０ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００９３】
【化５２】
2004538240.tif 000055
ホスホラミデート２５の合成．
ＴｏｌＳＯ２Ｎａ（０．２９ｇ， １．６１ ｍｍｏｌ）を水 ２．５ ｍＬ中に溶解し、ホスホラミデート１６（０．７１ｇ， １．４７ ｍｍｏｌ）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０８ｇ， ７３．４１ｍｍｏｌ） のＴＨＦ 溶液６ｍＬに加えた。反応を室温で３０分間攪拌して行った。ジエチルエーテルを反応混合物に添加し、水で数回洗浄した。水性の抽出物を一つに混合し、エーテルで洗浄し、２％のＨＣｌでｐＨ ３に酸性にしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を混合し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水して、蒸発乾固してオレンジ色の泡状物質としてホスホラミデート２５（０．５１ｇ， 回収率７８％）を回収した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．０８ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６Ｈｚ）， ７．３１ （ｍ， ３Ｈ）， ６．６６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ５．１１ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１６ Ｈｚ）， ３．５３ （ｔ， ２Ｈ）， ３．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７４ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．４４ Ｈｚ）， １．７ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −２０．４
ＨＰＬＣ （６０：４０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ溶液）： ４．０１７ 分．
【００９４】
【化５３】
2004538240.tif 000056
ホスホラミデート２６の合成．
ホスホラミデート２６を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．３２−８．２２ （ｍ， １Ｈ）， ８．１３−７．９８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．６４−７．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３３ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ６．８１ （ｓ， １Ｈ）， ５．３５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．０５ Ｈｚ）， ３．９５  （ｓ， ３Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４９ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２５−２．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７３ （ｄ， ３Ｈ，  ｊ ＝ １０．２５ Ｈｚ）， １．８０−１．５２ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．９９ ｐｐｍ
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １８．６０ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ５４４／５４６ （Ｍ＋Ｎａ）．
【００９５】
【化５４】
2004538240.tif 000057
ホスホラミデート２７の合成．
ホスホラミデート２７を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ：  ７．７７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．２３ Ｈｚ）， ７．５８ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ７．２３ Ｈｚ）， ７．４３−７．２３ （ｍ， ５Ｈ）， ７．１８−６．８９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．６７−６．４７ （ｍ， １Ｈ）， ５．４８−５．３０ （ｍ， １Ｈ）， ５．１８−４．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７９−４．０７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６０−３．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２７−２．９８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８２−２．５９ （ｍ， ３Ｈ）， １．７９−１．５６ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．４４， −１９．６３ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １７．９３ 分．
【００９６】
【化５５】
2004538240.tif 000058
ホスホラミデート２８の合成．
ホスホラミデート２８を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．２８ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）， ７．１６ （ｍ， ４Ｈ）， ６．６３ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６６ Ｈｚ）， ５．０５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．９８ Ｈｚ）， ３．５８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０５ （ｍ， １Ｈ）， ２．８２ （ｄ， ３Ｈ）， １．７９ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （６０：４０ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ）： ４．６５ 分．
【００９７】
【化５６】
2004538240.tif 000059
ホスホラミデート２９の合成．
ホスホラミデート２９を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．３０−７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．２３−６．８３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８０−６．４７ （ｍ， １Ｈ）， ５．０９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．２５ Ｈｚ）， ５．０１−４．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７６−３．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３６−２．９８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．９８−２．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．１４−１．７７ （ｄ， ３Ｈ）， １．８９−１．５５ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２５， −１９．４３ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １１．６８ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ５５４／５５６ （Ｍ＋Ｎａ）， ５３２／５３４ （Ｍ＋Ｈ）．
【００９８】
【化５７】
2004538240.tif 000060
ホスホラミデート３０の合成．
ホスホラミデート３０を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．８７−７．７３ （ｍ， １Ｈ）， ７．１４−７．０４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．０３−６．９５ （ｍ， １Ｈ）， ５．３４−５．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１１−４．９６ （ｍ， １Ｈ）， ４．９５−４．８１ （ｍ， １Ｈ）， ３．６０−３．４６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２６−３．０３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．８５−２．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０５−１．９２ （ｍ， ３Ｈ）， １．８４−１．６２ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．４１， −１９．６１ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １３．１０ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ５４８／５５０ （Ｍ＋Ｈ）．
【００９９】
【化５８】
2004538240.tif 000061
ホスホラミデート３１の合成．
ホスホラミデート３１を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ：  ７．２６−７．０４ （ｍ， ５Ｈ）， ６．６０ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．５８ Ｈｚ）， ５．４３−５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１６ Ｈｚ）， ３．６２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５１ （ｔ， ２Ｈ）， ３．１８−２．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７１ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．２６ Ｈｚ）， １．７７−１．５５ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．０１ ｐｐｍ．
【０１００】
【化５９】
2004538240.tif 000062
ホスホラミデート３２の合成．
ホスホラミデート３２を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．８０ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ７．３３−７．０９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９９ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ４．１２ Ｈｚ）， ５．２２ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．５２ Ｈｚ）， ３．６３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｔ， ２Ｈ）， ３．３０−２．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７３ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．２５ Ｈｚ）， １．９２−１．４０ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２９ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １５．１３ 分．
【０１０１】
【化６０】
2004538240.tif 000063
ホスホラミデート３３の合成．
ホスホラミデート３３を２５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ７．９６ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ７．２６ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ６．９９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ６．６５ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６７ Ｈｚ）， ６．４５−６．２５ （ｍ， １Ｈ）， ５．０９ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．４３ Ｈｚ）， ３．５２ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２２−２．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．５３ Ｈｚ）， １．８５−１．６１ （ｍ， ４Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１５．４０ ｐｐｍ
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ９．１３， ９．３７ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ４４４／４４６ （Ｍ−Ｈ）．
【０１０２】
【化６１】
2004538240.tif 000064
プロドラッグ３５の合成．
ホスホラミデート２５（０．１０５ｇ， ０．２３ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬの無水ＤＭＦに溶解し、ベンジルアミン３４（０．０７３５ｇ， ０．２３ ｍｍｏｌ）、４−メチルモルフォリン（０．０６ ｍＬ， ０．５８８ ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢＴ（０．０３８２ｇ， ０．２８ ｍｍｏｌ）を含む無水ＤＭＦ溶液３ ｍｌ に０℃でカニューレで添加した後、ＥＤＣＩ（０．０５４１ｇ， ０．２８ ｍｍｏｌ）を添加した。反応は、室温まで加温し、一晩攪拌して行った。この反応混合液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出した有機物を一つに混合し、飽和重炭酸ナトリウム、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して濃いオレンジ色のオイルを回収した。生成物を、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏが７５：２５の混合溶液を用いて逆相シリカでクロマトグラフィーにかけ、 白い泡状の３５を得た（５８．７ ｍｇ ，回収率３５％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．２５ （ｄ， １Ｈ）， ７．７２ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．４２Ｈｚ）， ７．５０ （ｄ， １Ｈ）， ７．２４ （ｍ， ３Ｈ）， ６．９５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．４２Ｈｚ）， ６．６３ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ３．６６Ｈｚ）， ５．２８ （ｔ， １Ｈ）， ５．０７ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ９．１６ Ｈｚ）， ３．９３ （ｄ， ２Ｈ）， ３．５２ （ｔ， ２Ｈ）， ３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７０ （ｄ， ３Ｈ）， １．８７−１．５８ （ｍ， １４Ｈ）， １．４８−０．８５ （ｍ， ４Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −２１．２ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （６０：４Ｏ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ＴＦＡ）： ８．８１７ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７２７／７２９ （Ｍ＋Ｎａ）， ７０５／７０７ （Ｍ＋Ｈ）．
ＭＳ ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：  計算値： ７０５．２４５６； 実測値： ７０５．２４３２．
【０１０３】
【化６２】
2004538240.tif 000065
ホスホラミデート３６の合成．
ジイソプロピルエチルアミン（０．１１ ｍＬ， ０．６１ ｍｍｏｌ）をあらかじめ冷却した、ホスホラミデート２６（０．１４ｇ， ０．２８ ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン３４（０．０８ｇ， ０．３１ ｍｍｏｌ）、およびＰｙＢＯＰ（０．１４ｇ， ０．２８ ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ溶液２ ｍＬ に０℃で加えた。反応は、０℃で１０分間、および室温で３０分間攪拌して行った。反応を、飽和塩化アンモニウムおよびＤＣＭで急冷した。層を分離し、有機層は塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して薄黄色いオイルを回収した。粗生成物を９：１ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、白い泡状の３６（０．１６ｇ， ７５％ ｙｉｅｌｄ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．３４−８．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１１−８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．９２−７．７８ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．７１ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６０ Ｈｚ）， ７．６３−７．４３ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２８−７．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９５ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ６．８ （ｓ， １Ｈ）， ６．２７ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ７．７９ Ｈｚ）， ５．８４−５．６７ （ｂｓ， １Ｈ）， ５．４３−５．１６ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４７ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２１−２．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．５２ Ｈｚ）， １．９６−１．４９ （ｍ， １４Ｈ）， １．４１−０．９３ （ｍ， ５Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．８２ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２４．０５ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ８０２／８０４ （Ｍ＋Ｎａ）， ７８０／７８２ （Ｍ＋Ｈ）．
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７８０．３１８１； 実測値： ７８０．３１６８．
【０１０４】
【化６３】
2004538240.tif 000066
プロドラッグ３７の合成．
硝酸セリウムアンモニウム（０．１１ｇ， ０．２１ ｍｍｏｌ）を１ ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解し、３．７ ｍＬのアセトニトリルおよび１．９ ｍＬのＨ２Ｏにホスホラミデート３６（０．０８ｇ， ９９．８３ ｕｍｏｌ）を含有した溶液をゆっくりと加えた。反応を１．５時間攪拌して行い、それから飽和塩化アンモニウムを加えて急冷し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を一つにまとめ、食塩水で洗浄して、ＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発乾固して薄黄色いオイルを回収した。粗生成物を９：１ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨの混合液を用いてクロマトグラフィーにかけ、薄黄色い泡状の３７を得た（０．０３ｇ， 回収率６５％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．３４−８．２１ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１１−８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．９２−７．７８ （ｂｓ， １Ｈ）， ７．７２ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６０ Ｈｚ）， ７．２８−７．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９５ （ｄ， ２Ｈ， ｊ ＝ ８．６０ Ｈｚ）， ６．９４ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ６．９ （ｓ， １Ｈ）， ６．４１ （ｄ， １Ｈ， ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ）， ５．８４−５．６７ （ｂｓ， １Ｈ）， ５．４３−５．１６  （ｍ， ３Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９１ （ｓ， ５Ｈ）， ３．４７ （ｔ， ２Ｈ）， ３．２１−２．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｄ， ３Ｈ， ｊ ＝ １０．５２ Ｈｚ）， １．９６−１．４９ （ｍ， １４Ｈ）， １．４１−０．９３ （ｍ， ５Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．０
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２１．４５ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７７２／７７４ （Ｍ＋Ｎａ）， ７５０／７５２ （Ｍ＋Ｈ）．
ＭＳ ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７５０．２７１１； 実測値： ７５０．２７０８．
【０１０５】
【化６４】
2004538240.tif 000067
プロドラッグ３８の合成．
プロドラッグ３８を３６についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．２６−８．１１ （ｍ， １Ｈ）， ８．０９−７．９９ （ｍ， １Ｈ）， ７．９５−７．７６ （ｍ， １Ｈ）， ７．２４−７．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０８−６．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９６−６．８２ （ｍ， １Ｈ）， ６．７２−６．５５ （ｍ， １Ｈ）， ６．５０−６．２０ （ｍ， １Ｈ）， ６．１８−６．５４ （ｍ， １Ｈ）， ５．１６−４．８２ （ｍ， ３Ｈ）， ４．７９−４．４６ （ｍ， １Ｈ）， ４．０３−３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６２−３．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１５−２．８１ （ｍ， ５Ｈ）， ２．８０−２．５１ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０４−１．８９ （ｍ， ３Ｈ）， １．８７−１．５６ （ｍ， １０Ｈ）， １．４９−０．９０ （ｍ， ８Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．９４ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％グラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １９．０３， １９．２５ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７９０／７９２ （Ｍ＋Ｈ）， ８１２／８１４ （Ｍ＋Ｎａ）
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７９０．２９８４； 実測値： ７９０．２９８１．
【０１０６】
【化６５】
2004538240.tif 000068
プロドラッグ３９の合成．
プロドラッグ３９を３５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．２１−８．０９ （ｍ， １Ｈ）， ８．０８−７．９８ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３−７．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３−７．０４ （ｍ， ６Ｈ）， ６．６６−６．４７ （ｍ， １Ｈ）， ６．３６−６．１６ （ｍ， １Ｈ）， ６．１１−５．８０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０−５．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１４−４．８１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７５−４．４８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２−３．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６２−３．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１３−２．８２ （ｍ， ５Ｈ）， ２．８２−２．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０４−１．９２ （ｍ， ３Ｈ）， １．８４−１．５３ （ｍ， ９Ｈ）， １．５１−０．８７ （ｍ， ９Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．１６ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％グラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２０．１７， ２０．３５ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ８０６／８０８ （Ｍ＋Ｈ）， ８２８／８３０ （Ｍ＋Ｎａ）
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ８０６．２７５５； 実測値： ８０６．２７５８．
【０１０７】
【化６６】
2004538240.tif 000069
プロドラッグ４０の合成．
プロドラッグ４０を３５についての記載と同様の手順で合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．１０−８．００ （ｍ， １Ｈ）， ７．９９−７．８６ （ｍ， １Ｈ）， ７．４５−７．０９ （ｍ， ７Ｈ）， ６．９８−６．８５ （ｍ， １Ｈ）， ６．６９−６．５６ （ｍ， １Ｈ）， ６．０５−５．８９ （ｍ， １Ｈ）， ５．８７−５．６９ （ｍ， １Ｈ）， ５．１９−４．９５ （ｍ， ３Ｈ）， ４．０２−３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６４−３．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２６−２．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８７−２．５２ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０２−１．５７ （ｍ， １１Ｈ）， １．５４−０．８９ （ｍ， ６Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＴＰＰＯ） ｄ： −１８．９１， −１８．９９ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２０．６５ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７１９／７２１ （Ｍ＋Ｈ）， ７４１／７４３ （Ｍ＋Ｎａ）
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７１９．２６１３； 実測値： ７１９．２６００．
【０１０８】
【化６７】
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プロドラッグ４１の合成．
プロドラッグ４１を３５についての記載と同様に合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．１４−８．００ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３−７．８０ （ｍ， １Ｈ）， ７．８１−７．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．４２−７．３０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２７−７．０６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．０４−６．９３ （ｍ， １Ｈ）， ６．９３−６．８１ （ｍ， １Ｈ）， ６．２３−５．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２７−５．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１３−４．９３ （ｍ， １Ｈ）， ３．９９−３．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６０−３．３８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２１−２．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８５−２．６２ （ｍ， ３Ｈ）， １．９２−１．５９ （ｍ， １１Ｈ）， １．５０−０．９７ （６Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ） ｄ： −１９．２６
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： ２１．７７ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７３５／７３７ （Ｍ＋Ｈ）， ７５７／７５９  （Ｍ＋Ｎａ）．
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７３５．２３８４； 実測値： ７３５．２３５８．
【０１０９】
【化６８】
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プロドラッグ４２の合成．
プロドラッグ４２を３５についての記載と同様に合成した。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＭＳ） ｄ： ８．２２ （ｄ ， １Ｈ， ｊ ＝ ２．０１ Ｈｚ）， ７．９６−７．８１ ９ｍ， １Ｈ）， ７．６１ （ｄ， ２Ｈ， ｊ＝ ８．１５ Ｈｚ）， ７．５６−７．４０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５−７．１３ （ｍ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， ２Ｈ， ｊ＝ ８．１５ Ｈｚ）， ６．８２−６．６６ （ｍ， １Ｈ）， ６．６６−６．５３ （ｍ， １Ｈ）， ６．２７−６．００ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３５−５．１０ （ｍ， １Ｈ）， ５．０３ （ｄ， ２Ｈ， ｊ＝９．２５ Ｈｚ）， ３．９０ （ｄ， ２Ｈ， ｊ＝ ５．８６ Ｈｚ）， ３．４８  （ｔ， ２Ｈ）， ３．１８−２．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６４ （ｄ， ３Ｈ， ｊ＝ １０．５３ Ｈｚ）， １．９４−１．４７ （ｍ， １０Ｈ）， １．３８−０．９８ （ｍ， ７Ｈ） ｐｐｍ．
３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ＴＰＰＯ） ｄ： −１４．９６ ｐｐｍ．
ＨＰＬＣ （３０−１００％のグラジエント， ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−０．１％ ＴＦＡ， ３５ 分以上）： １７．２８ 分．
ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ： ７０４／７０６ （Ｍ＋Ｈ）， ７２６／７２８  （Ｍ＋Ｎａ）．
ＭＳ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： 計算値： ７０４．２６１６； 実測値： ７０４．２６３３．
Ｌ１２１０マウス白血病細胞の増殖抑制
薬剤の原液を無水エタノールで調製し、段階的に希釈された薬剤をエタノールで調製した。また、Ｌ１２１０細胞を、１０％のウマ血清、１％のグルタミン、および１％の抗生物質溶液を添加したＦｉｓｈｅｒ’ｓ培地に懸濁し、最終濃度３−６×１０４細胞／ｍＬの細胞懸濁液１０ｍＬを作製した。薬剤溶液の適切な量を細胞懸濁液に加え、２、８、２４、または４８時間インキュベートした。この細胞を遠心機で沈降させ、薬剤を添加していない新たな培地で再び懸濁し、インキュベーターに戻した。薬剤で処理開始後、４８時間後に最終の細胞数を測定した。このデータを細胞数 ｖｓ ． Ｌｏｇ（薬剤の濃度）のＳ字形カーブフィットにより分析し、その結果をＩＣ５０（コントロール値に対し、５０％まで細胞増殖を阻害するのに必要な薬剤濃度）で表した。
【０１１０】
【表３】
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【０１１１】
トランスフェクトされたＪ７７細胞におけるルシフェラーゼ阻害
Ｊ７７細胞（５００ ｍＬのＦＢＳを含まないＲＰＭＩ培地中、２×１０７個の細胞）に、１５ ｍｇのＮＦ−ＡＴ−ルシフェラーゼ・プラスミドをトランスフェクトした。細胞を、１０ ｍＬの完全ＲＰＭＩ培地の入ったフラスコに移し、２４時間インキュベートした。その後、細胞を遠心機で沈降させ、１２ ｍＬの完全ＲＰＭＩ培地で再び懸濁し、６−ウエルプレート（２ ｍＬ／ウエル）に分割した。ＤＭＳＯに溶解した薬剤の原液を調製し、異なった濃度で各ウエルを処理し、２時間インキュベートした。それから、各ウエルを、１．２５ ｍｇのＰＭＡおよび９ ｍｇのイオノマイシンを加えたＦＢＳ を含まないＲＰＭＩ １１５ ｍＬのうちの１０ ｍＬで処理し、その後、２ ｍｇの抗ＣＤ３抗体を添加した。細胞を６時間インキュベートし、遠心機で沈降させ、ＰＢＳで洗浄し、１５分間溶解し、遠心した。上澄み液を回収し、−７８℃で一晩保存した。５０ ｍＬのルシフェラーゼ基質と１０ ｍＬの上澄み液との混合液に対してルミノメーターを用い、ルシフェラーゼ活性を測定した。
【０１１２】
【表４】
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【０１１３】
Ｌ１２１０、ＬＭ、およびＬＭ（ＴＫ−）細胞のトリチウムアッセイ
薬剤の原液を無水エタノールで調製した。Ｌ１２１０細胞をＦｉｓｈｅｒ’ｓ培地に懸濁し、ＬＭおよびＬＭ（ＴＫ−）細胞を、ＭＥＭ（分ｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）に懸濁し、最終濃度１１．２４×１０６細胞／ｍＬになるように調製した。この細胞懸濁液（４４５ μＬ）をエッペンドルフチューブに入れた後、５ μＬの薬剤溶液を加え、３７℃で２時間インキュベートした。トリチウム放出反応（Ｔｒｉｔｉｕｍ ｒｅｌｅａｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ）は、１ ｍＣｉ ［５−３Ｈ］ｄＣｙｔを添加した０．５ ｍＭのｄＣｙｔ溶液を含む無血清培地 ５０ μＬを加えて開始した。その後、３７℃の撹拌装置付きウォーターバス（ｓｈａｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ）で、６０分間インキュベートした。４％の過塩素酸溶液に活性炭を懸濁した２０％の混合液 １００ μＬを含むエッペンドルフチューブに、反応混合液 １００ μＬを添加して反応を終了させた。そのチューブを激しくボルテックスし、それから小型遠心機で遠心した。
【０１１４】
その後、上澄み液 １００ μＬの放射能を、シンチエレーション・スペクトロメーターを用いて測定した。このデータをＣＭＰ ｖｓ ． Ｌｏｇ（薬剤の濃度）のＳ字形カーブフィットにより分析し、その結果をＩＣ５０（コントロール値の５０％まで細胞増殖を阻害する薬剤濃度）で表した。
【０１１５】
【表５】
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【０１１６】
医薬調剤
癌治療に用いるために以下の非経口調剤を調製した。
【０１１７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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