(57)【要約】ＩＫおよび／またはＳＫチャネルオープナーとして有用な式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体。ＳＫイオンチャネル、特にＳＫ１のスクリーニング法、ならびに尿生殖器、呼吸、心血管、ニューロン疾患、睡眠障害、鎌状赤血球貧血、疼痛、炎症および腸疾患（ＩＢＤ）の治療のための医薬が開示される。
2004532188.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＫおよび／またはＳＫチャネルオープナーとして有用な式（Ｉ）：
【化１】
2004532188.tif 000017
［式中、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同一または異なって、各々、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は同一または異なって、各々、水素、Ｃ３−５シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ベンジルまたは非置換もしくはヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルであるか；またはＲ８およびＲ９はＪと一緒になってモルホリノ基、ピロリジン基またはアゼチジン基を形成し；
ｎは０または１であり；
ＷはＯまたはＳであり；
ＪはＯまたはＮであり；および
（ａ）破線ｅは単結合であり、破線ｄは二重結合であって、破線ａ、破線ｂおよび破線ｃは存在せず；
Ｒ５、Ｒ６、ＴおよびＹは存在せず；
Ｒ１はＣＨ２またはＯであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；ＺはＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｑは炭素であるか、または
（ｂ）破線ｅは存在せず；
破線ｄは単結合または二重結合であり、破線ｃは結合または存在せず、但し、破線ｄが二重結合である場合、破線ｃおよびＴは存在せず；破線ｄが単結合である場合、Ｔおよび破線ｃのうち１つは存在せず；
破線ｂは単結合であり、破線ａは単結合または存在せず、あるいは
【化２】
2004532188.tif 000018
は単結合を示し；
破線ｄが二重結合である場合、ＱはＣＨであり、破線ｄが単結合である場合、ＱはＣＨ２であり；
Ｔは水素またはヒドロキシであり；
ＸはＣＲ７またはＣＨＲ７であり、ここに、Ｒ７は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロキシ、Ｃ１−６アシルオキシまたはＣ１−４アルコキシであり；
ＹはＣまたはＣＨであり；
Ｚは（ｉ）破線ａが結合である場合、ＣＨ２、酸素または硫黄であり；または（ｉｉ）破線ａが存在しない場合、水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；または（ｉｉｉ）Ｒ５およびＲ６がＹと一緒になってカルボニル基を形成する場合、
【化３】
2004532188.tif 000019
は結合を示し；
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｒ５は水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであるか、またはＲ５およびＲ６はＹと一緒になってカルボニル基を形成するか；または
（ｃ）破線ｅは存在せず；破線ｄは単結合または二重結合であり、但し、破線ｄが二重結合である場合、Ｔは存在せず；
破線ｃは存在せず；および
【化４】
2004532188.tif 000020
は存在せず；
ＱおよびＴは上記（ｂ）で定義したとおりであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｚは水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；および
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりである］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体。
【請求項２】
増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害の治療のための医薬の製造における請求項１記載の化合物の使用。
【請求項３】
障害が尿生殖器障害、呼吸障害、心血管障害、、ニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害、中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択される請求項２記載の使用。
【請求項４】
尿生殖器障害が膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁から選択される請求項２または３記載の使用。
【請求項５】
呼吸障害が喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症から選択される請求項２または３記載の使用。
【請求項６】
心血管障害が高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血から選択される請求項２または３記載の使用。
【請求項７】
ニューロン興奮性亢進障害が過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病から選択される請求項２または３記載の使用。
【請求項８】
治療上有効量の式（Ｉ）：
【化５】
2004532188.tif 000021
［式中、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同一または異なって、各々、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は同一または異なって、各々、水素、Ｃ３−５シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ベンジルまたは非置換もしくはヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルであるか；またはＲ８およびＲ９はＪと一緒になってモルホリノ基、ピロリジン基またはアゼチジン基を形成し；
ｎは０または１であり；
ＷはＯまたはＳであり；
ＪはＯまたはＮであり；および
（ａ）破線ｅは単結合であり、破線ｄは二重結合であって、破線ａ、破線ｂおよび破線ｃは存在せず；
Ｒ５、Ｒ６、ＴおよびＹは存在せず；
Ｒ１はＣＨ２またはＯであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；ＺはＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｑは炭素であるか、または
（ｂ）破線ｅは存在せず；
破線ｄは単結合または二重結合であり、破線ｃは結合または存在せず、但し、破線ｄが二重結合である場合、破線ｃおよびＴは存在せず；破線ｄが単結合である場合、Ｔおよび破線ｃのうち１つは存在せず；
破線ｂは単結合であり、破線ａは単結合または存在せず、あるいは
【化６】
2004532188.tif 000022
は単結合を示し；
破線ｄが二重結合である場合、ＱはＣＨであり、破線ｄが単結合である場合、ＱはＣＨ２であり；
Ｔは水素またはヒドロキシであり；
ＸはＣＲ７またはＣＨＲ７であり、ここに、Ｒ７は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロキシ、Ｃ１−６アシルオキシまたはＣ１−４アルコキシであり；
ＹはＣまたはＣＨであり；
Ｚは（ｉ）破線ａが結合である場合、ＣＨ２、酸素または硫黄であり；あるいは（ｉｉ）破線ａが存在しない場合、水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルコキシであり；あるいは（ｉｉｉ）Ｒ５およびＲ６がＹと一緒になってカルボニル基を形成する場合、
【化７】
2004532188.tif 000023
は結合を示し；
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｒ５は水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであるか、またはＲ５およびＲ６はＹと一緒になってカルボニル基を形成するか；または
（ｃ）破線ｅは存在せず；破線ｄは単結合または二重結合であり、但し、破線ｄが二重結合である場合、Ｔは存在せず；
破線ｃは存在せず；および
【化８】
2004532188.tif 000024
は存在せず；
ＱおよびＴは上記（ｂ）で定義したとおりであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｚは水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；および
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりである］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体を治療の必要な患者に投与することを特徴とする、増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害を患った患者の治療法。
【請求項９】
障害が尿生殖器障害、呼吸障害、心血管障害、、ニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害、高アルカリ血症、中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１０】
尿生殖器障害が膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁から選択される請求項８または９記載の使用。
【請求項１１】
呼吸障害が喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症から選択される請求項８または９記載の使用
【請求項１２】
心血管障害が高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血から選択される請求項８または９記載の使用。
【請求項１３】
ニューロン興奮性亢進障害が過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病から選択される請求項８または９記載の使用
【請求項１４】
とりわけ、疼痛、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害、高アルカリ血症、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）からなる群から選択される疾患または障害の治療に有用な候補薬剤の同定方法であって、
（ａ）候補薬剤を提供し；
（ｂ）ＳＫ−１チャネルを該候補薬剤と接触させ；
（ｃ）該ＳＫ−１チャネルの開口を調節する候補薬剤を選択し；
（ｆ）工程（ｃ）の薬剤を合成および／または精製してもよい
工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
疼痛、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害、高アルカリ血症、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）からなる群から選択される疾患または障害の治療方法であって、
（ａ）候補薬剤を提供し；
（ｂ）ＳＫ−１チャネルを該候補薬剤と接触させ；
（ｃ）該ＳＫ−１チャネルの開口を調節する（すなわち、促進する）候補薬剤を選択し；
（ｄ）工程（ｃ）の薬剤を合成および／または精製してもよく；
（ｅ）工程（ｃ）または（ｄ）の薬剤を臨床上必要のある哺乳動物患者、特にヒトに投与する
工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
疾患または障害が疼痛である請求項１４または１５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、カルシウム依存性（activated）カリウムチャネルのオープナーおよび増強したカルシウム依存性カリウムチャネル活性に応答する障害の治療におけるその使用に関する。本発明は、また、上記チャネルのモジュレーターの同定のためのスクリーニング方法、医学的治療方法およびそれを含んでなる医薬に関する。
【０００２】
発明の背景
カルシウム依存性カリウム（Ｋ＋）チャネルは、ニューロン、上皮細胞、Ｔリンパ球および骨格筋を包含する多くの細胞型の興奮性および機能の調節において重要な役割を果たす。カルシウム依存性Ｋ＋チャネルは、細胞内カルシウムのマイクロモル以下の増加によって活性化され、該活性化はカルモジュリンによって調節される。興奮性細胞において、ＳＫチャネルの活性化が過分極性Ｋ＋電流を生じ、それが活動電位に次いで起こる後過分極化（ＡＨＰ）に寄与する。該ＡＨＰは細胞発火頻度およびスパイク頻度順応を調節し、それにより、ニューロン興奮性に影響を及ぼす。ＳＫチャネルは、学習および記憶のような種々の生理学的および異常生理学的機能、シナプス増強および長期増強（long term potentiation）に関与している。
【０００３】
カルシウム依存性カリウムチャネルは、３つの主要なクラス：大きなコンダクタンス（ＢＫ）、中程度のコンダクタンス（ＩＫ）および小さなコンダクタンス（ＳＫ）カルシウム依存性Ｋ＋チャネルに分けることができる。ＳＫチャネルはリガンド感受性（ligand-gated）イオンチャネルのクラスに属し、今までに３つのサブタイプ（ＳＫ−１、ＳＫ−２、ＳＫ−３）が同定されている。ＩＫおよびＳＫ−１、ＳＫ−２およびＳＫ−３チャネルのクローニングは、ＷＯ９８／１１１３９に記載されている。ＳＫチャネルは、２５ｐＳ未満のカリウムに対する小さい単一チャネルコンダクタンスを有し、電位独立性である。ミツバチ毒ペプチド毒素アパミンは、ＳＫ−２およびＳＫ−３チャネルを特異的に阻害するが、ＳＫ−１チャネルを阻害しない。ＩＫチャネルは電位非感受性であり、カリブドトキシン（charybdotoxin）およびクロトリマゾールによって阻害できる。ＩＫおよびＳＫイオンチャネルのクローニング、発現および配列特徴については、ＷＯ９８／１１１３９を参照のこと。該公報は、特に全体として本明細書中に組み込まれ、読者は特にそれを参照すること。
【０００４】
発明の概要
本発明は、ある種の化合物がＳＫおよびＩＫチャネルのオープナーとして作用し、したがって、これらの化合物が増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害の治療に有用であり得るという知見に基づく。
【０００５】
したがって、本発明は：
ＩＫおよび／またはＳＫチャネルオープナーとして有用な式（Ｉ）：
【化１】
2004532188.tif 000003
【０００６】
［式中、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同一または異なって、各々、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は同一または異なって、各々、水素、Ｃ３−５シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ベンジルまたは非置換もしくはヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルであるか；またはＲ８およびＲ９はＪと一緒になってモルホリノ基、ピロリジン基またはアゼチジン基を形成し；
ｎは０または１であり；
ＷはＯまたはＳであり；
ＪはＯまたはＮであり；および
（ａ）破線ｅは単結合であり、破線ｄは二重結合であって、破線ａ、破線ｂおよび破線ｃは存在せず；
Ｒ５、Ｒ６、ＴおよびＹは存在せず；
Ｒ１はＣＨ２またはＯであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；ＺはＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｑは炭素であるか、または
【０００７】
（ｂ）破線ｅは存在せず；
破線ｄは単結合または二重結合であり、破線ｃは結合または存在せず、但し、破線ｄが二重結合である場合、破線ｃおよびＴは存在せず；破線ｄが単結合である場合、Ｔおよび破線ｃのうち１つは存在せず；
破線ｂは単結合であり、破線ａは単結合または存在せず、あるいは
【化２】
2004532188.tif 000004
は単結合を示し；
破線ｄが二重結合である場合、ＱはＣＨであり、破線ｄが単結合である場合、ＱはＣＨ２であり；
Ｔは水素またはヒドロキシであり；
ＸはＣＲ７またはＣＨＲ７であり、ここに、Ｒ７は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロキシ、Ｃ１−６アシルオキシまたはＣ１−４アルコキシであり；
ＹはＣまたはＣＨであり；
Ｚは（ｉ）破線ａが結合である場合、ＣＨ２、酸素または硫黄であり；または（ｉｉ）破線ａが存在しない場合、水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；または（ｉｉｉ）Ｒ５およびＲ６がＹと一緒になってカルボニル基を形成する場合、
【化３】
2004532188.tif 000005
は結合を示し；
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｒ５は水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであるか、またはＲ５およびＲ６はＹと一緒になってカルボニル基を形成するか；または
（ｃ）破線ｅは存在せず；破線ｄは単結合または二重結合であり、但し、破線ｄが二重結合である場合、Ｔは存在せず；
破線ｃは存在せず；および
【化４】
2004532188.tif 000006
は存在せず；
ＱおよびＴは上記（ｂ）で定義したとおりであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｚは水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；および
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりである］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体を提供し；
かくして本発明の化合物はＩＫおよび／またはＳＫチャネルを活性化する方法において使用してもよく；
【０００８】
増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害の治療のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用；
治療上有効量の式（Ｉ）の化合物のを治療を必要とする患者に投与することを特徴とする、増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害を患った患者の治療法を提供する。
【０００９】
好ましくは、該障害は、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）、両極性障害および精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害および高アルカリ血症から選択される。さらに、該障害は、癲癇のような中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択できる。
【００１０】
二環式アミド誘導体は、ＷＯ９４／２６６９３において強力な中枢系筋弛緩薬として開示される。ＷＯ９５／３０６４４は、中枢系筋弛緩薬として、および不安、炎症、関節炎および疼痛の治療において、新規な炭素環式アミドをその塩、溶媒和物および生理学的に活性な誘導体と共に開示する。ＷＯ９５／３０６４５は、特に炎症性疾患の治療において、一連の置換した炭素環式アミドを開示する。これらの公報は、特に、出典明示により本明細書の一部とされる。読者は特に各公報を参照すること。
【００１１】
本発明の別の態様において、とりわけ、疼痛、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害および高アルカリ血症からなる群から選択される疾患または障害の治療に有用な候補薬剤の同定方法であって、
（ａ）候補薬剤を提供し；
（ｂ）ＳＫ−１チャネルを該候補薬剤と接触させ；
（ｃ）該ＳＫ−１チャネルの開口を調節する候補薬剤を選択し；
（ｄ）工程（ｃ）の薬剤を合成および／または精製する
工程を含むことを特徴とする方法が提供される。
【００１２】
本発明のさらなる態様は、癲癇のような中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択できる障害の治療に有用な候補薬剤の同定のための上記の方法である。
【００１３】
本発明の別の態様において、発明者らは、疼痛、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤおよび尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患および脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群、両極性障害および精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害および高アルカリ血症からなる群から選択される疾患または障害の治療方法であって、
（ａ）候補薬剤を提供し；
（ｂ）ＳＫ−１チャネルを該候補薬剤と接触させ；
（ｃ）該ＳＫ−１チャネルの開口を調節する（すなわち、促進する）候補薬剤を選択し；
（ｄ）工程（ｃ）の薬剤を合成および／または精製し；
（ｅ）工程（ｃ）または（ｄ）の薬剤を臨床上必要のある哺乳動物患者、特にヒトに投与する
工程を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００１４】
本発明のさらなる態様は、癲癇のような中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から選択できる障害の治療に有用な候補薬剤の同定のための上記の方法である。
【００１５】
発明の詳細な記載
本発明は、カルシウム依存性カリウムチャネルオープナーとして有用な式（Ｉ）：
【化５】
2004532188.tif 000007
【００１６】
［式中、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同一または異なって、各々、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は同一または異なって、各々、水素、Ｃ３−５シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェニル、ベンジルまたは非置換もしくはヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルであるか；またはＲ８およびＲ９はＪと一緒になってモルホリノ基、ピロリジン基またはアゼチジン基を形成し；
ｎは０または１であり；
ＷはＯまたはＳであり；
ＪはＯまたはＮであり；および
（ａ）破線ｅは単結合であり、破線ｄは二重結合であって、破線ａ、破線ｂおよび破線ｃは存在せず；
Ｒ５、Ｒ６、ＴおよびＹは存在せず；
Ｒ１はＣＨ２またはＯであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；ＺはＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｑは炭素であるか、または
【００１７】
（ｂ）破線ｅは存在せず；
破線ｄは単結合または二重結合であり、破線ｃは結合または存在せず、但し、破線ｄが二重結合である場合、破線ｃおよびＴは存在せず；破線ｄが単結合である場合、Ｔおよび破線ｃのうち１つは存在せず；
破線ｂは単結合であり、破線ａは単結合または存在せず、あるいは
【化６】
2004532188.tif 000008
は単結合を示し；
破線ｄが二重結合である場合、ＱはＣＨであり、破線ｄが単結合である場合、ＱはＣＨ２であり；
Ｔは水素またはヒドロキシであり；
ＸはＣＲ７またはＣＨＲ７であり、ここに、Ｒ７は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロキシ、Ｃ１−６アシルオキシまたはＣ１−４アルコキシであり；
ＹはＣまたはＣＨであり；
Ｚは（ｉ）破線ａが結合である場合、ＣＨ２、酸素または硫黄であり；または（ｉｉ）破線ａが存在しない場合、水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；または（ｉｉｉ）Ｒ５およびＲ６がＹと一緒になってカルボニル基を形成する場合、
【化７】
2004532188.tif 000009
は結合を示し；
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりであり；
Ｒ５は水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであるか、またはＲ５およびＲ６はＹと一緒になってカルボニル基を形成するか；または
（ｃ）破線ｅは存在せず；破線ｄは単結合または二重結合であり、但し、破線ｄが二重結合である場合、Ｔは存在せず；
破線ｃは存在せず；および
【化８】
2004532188.tif 000010
は存在せず；
ＱおよびＴは上記（ｂ）で定義したとおりであり；
Ｘは水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｚは水素、ハロゲンまたはＣ１−６アルキルであり；および
Ｒ１はＲ２、Ｒ３およびＲ４について上記で定義したとおりである］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体を提供する。
【００１８】
典型的には、Ｊは窒素であり、Ｗは酸素である。
式（Ｉ）の好ましい具体例において、破線ａおよび破線ｂは存在し、破線ｃは存在しない。
別の好ましい具体例において、Ｒ８およびＲ９のうち１つは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルであり、好ましくはシクロプロピルである。
【００１９】
別の好ましい具体例において、該化合物は、式（ＩＩ）：
【化９】
2004532188.tif 000011
【００２０】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は各々、独立して、水素、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルであり；
Ｒ５は水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであり；
またはＲ５およびＲ６はそれらが結合している炭素原子と一緒になってカルボニル基を形成し；
Ｒ７は水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、ハロゲンまたはアシルオキシ基であり；
Ｒ８およびＲ９は各々、独立して、水素、Ｃ３−５シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ベンジル、フェニル、または非置換もしくはヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルであり；
またはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素と一緒になって、モルホリノ基、ピロリジン基またはアゼチジン基を形成し；
Ｚは結合、ＣＨ２、−Ｏ−または−Ｓ−であり、Ｒ５およびＲ６がそれらが結合している炭素と一緒になってカルボニル基を形成する場合、常に結合であり；および
ＷはＯまたはＳである］
で示される化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体である。
【００２１】
式（ＩＩ）の好ましい化合物は、式（ＩＩａ）：
【化１０】
2004532188.tif 000012
【００２２】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は各々、水素およびフルオロから選択され、２以上ではなく少なくとも１つはフルオロであり；
Ｒ５は、水素またはＣ１−４アルキルから選択され、Ｒ６は水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシであり、またはＲ５およびＲ６は、それらが結合している炭素原子と一緒になってカルボニル基を形成し；
Ｒ７は水素、ヒドロキシであり；
Ｒ８およびＲ９は各々、独立して、水素、Ｃ１−４アルキルおよびＣ３またはＣ４シクロアルキルであり、またはそれらが結合している窒素と一緒になってモルホリノ基を形成する］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体である。
【００２３】
別の好ましい具体例において、化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化１１】
2004532188.tif 000013
【００２４】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は独立して、クロロ、フルオロ、ブロモ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６ハロアルキルから選択され、但し、Ｒ１およびＲ２の両方がフルオロであることはなく；および
Ｒ３およびＲ４は独立して、水素およびＣ１−６アルキルから選択される］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体である。
【００２５】
別の好ましい具体例において、該化合物は、式（ＩＶ）：
【化１２】
2004532188.tif 000014
【００２６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は各々、水素およびフルオロから選択され、２以上ではなく、少なくとも１つはフルオロであり；
Ｒ５は水素およびＣ１−４アルキルから選択され、Ｒ６は水素、Ｃ１−４アルキルおよびヒドロキシから選択され、またはＲ５およびＲ６は環炭素と一緒になってカルボニル基を形成し；
Ｒ７は水素およびヒドロキシから選択され；
Ｒ８およびＲ９は各々、水素、Ｃ１−４アルキルおよびシクロ（Ｃ３またはＣ４）アルキルから選択されるか、または窒素と一緒になってモルホリノ基を形成し；
Ｘは結合、メチレンおよび−Ｏ−から選択され、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７のいずれかが水素以外である場合、常に結合または−Ｏ−であり、Ｒ５およびＲ６が環炭素と一緒になってカルボニル基を形成する場合、常に結合である］
で示される化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能的な誘導体である。
【００２７】
他の好ましい化合物は：
（Ｅ）−２−（４−クロロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（４−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−１−（２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）アセチル）ピロリジン、
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−フェニルアセトアミド、
（Ｅ）−１−（２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）アセチル）アゼチジン、
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド、
（Ｚ）−２−（６−フルオロ−２−ニトロキシ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（２，３−ジブロモ−６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
【００２８】
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）チオアセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロペンチル−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（２−アセトキシ−６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（２−ブロモ−６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（７−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−シアノ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（２−ブロモ−４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−ブロモ−１−インダニリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−ブロモ−１−インダニリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド、
【００２９】
（Ｅ）−２−（６−メトキシ−１−インダニリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（７−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
（Ｅ）−２−（５−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２（１，２，３，４−テトラヒドロ−７−メトキシ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロペンチル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６−メトキシ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−ベンジル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）プロピオンアミド、
【００３０】
（Ｅ）−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド，
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−メチル−Ｎ−メトキシアセトアミド、
（Ｚ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，２−ジメチル−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，２−ジメチル−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアニリド、
（Ｅ）−１−（２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセチル）アゼチジン、
（Ｅ）−１−（２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセチル）ピロリジン、
【００３１】
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−７−メチル−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−５−メトキシ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
（Ｚ）−２−（７−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
（Ｚ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−７−メトキシ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−Ｎ−シクロペンチル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド、
（Ｚ）−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）−Ｎ−フェニルアセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−クロロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イリデン）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
【００３２】
（Ｅ）−２−（６−クロロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド、
（Ｅ）−２−（６−クロロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾチオピラン−４−イリデン）アセトアミド、
（Ｅ）−Ｎ−２−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾチオピラン−４−イリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド、
（Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾチオピラン−４−イリデン）アセトアミドおよび
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピルメチル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタリデン）アセトアミド、またはその塩または溶媒和物または生理学的に機能的な誘導体である。
【００３３】
式（ＩＩＩ）の化合物の好ましい群は、式（ＩＩＩａ）：
【化１３】
2004532188.tif 000015
【００３４】
［式中、
Ｒ１ａはクロロであり、Ｒ２ａはクロロ、フルオロ、ブロモまたはメチルであり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、水素、メチルおよびエチルから選択される］
で示される化合物である。
【００３５】
式（Ｉ）の好ましい化合物は：
（Ｅ）−２−（４−クロロ−６−フルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド；
（Ｅ）−２−（４−クロロ−６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（４，６−ジクロロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−４−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−４−メチル−１−インダニリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−クロロ−４−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（４−ブロモ−６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（４−クロロ−６−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド
を包含する。
【００３６】
式（ＩＶ）の化合物の別の群は、式中、
（ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち１つがフルオロである；
（ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち２つがフルオロである；
（ｉｉｉ）Ｒ１がフルオロである；
（ｉｖ）Ｒ２がフルオロである；
（ｖ）Ｒ３がフルオロである；
（ｖｉ）Ｒ４がフルオロである；
（ｖｉｉ）Ｒ５が水素である；
（ｖｉｉｉ）Ｒ５がＣ１−４アルキル、好ましくは１、２または３個の炭素原子を有するアルキル、より好ましくはメチルまたはエチルである；
（ｉｘ）Ｒ６は水素である；
（ｘ）Ｒ６はＣ１−４アルキル、好ましくは１、２または３個の炭素原子を有するアルキル、より好ましくはメチルまたはエチルである；
（ｘｉ）Ｒ６はヒドロキシである；
（ｘｉｉ）Ｒ５およびＲ６は環炭素と一緒になってカルボニル基を形成する；
（ｘｉｉｉ）Ｒ７は水素である；
（ｘｉｖ）Ｒ７はヒドロキシである；
（ｘｖ）Ｒ８は水素である；
（ｘｖｉ）Ｒ８はＣ１−４アルキル、好ましくは１、２または３個の炭素原子を有するアルキル、より好ましくはメチル、エチルまたはイソプロピルである；
（ｘｖｉｉ）Ｒ８はシクロ（Ｃ３またはＣ４）アルキル、好ましくはシクロプロピルである；
（ｘｖｉｉｉ）Ｒ９は水素である；
（ｉｘｘ）Ｒ９はＣ１−４アルキル、好ましくは１、２または３個の炭素原子を有するアルキル、より好ましくはメチル、エチルまたはイソプロピルである；
（ｘｘ）Ｒ９はシクロ（Ｃ３またはＣ４）アルキル、シクロプロピルである；
（ｘｘｉ）Ｒ８およびＲ９は窒素と一緒になってモルホリノ基を形成する；
（ｘｘｉｉ）Ｘは結合である；
（ｘｘｉｉｉ）Ｘはメチレンである；
（ｘｘｉｖ）Ｘは−Ｏ−である
化合物を包含する。
化合物のクラスとして好ましくは、式中、＞Ｃ＝Ｏ基およびベンゼン環がエキソ二重結合の反対側にあるものである。
【００３７】
式（ＩＩ）の個々の好ましい化合物は：
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−３−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（６−フルオロ−３−メチル−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−３，３−ジメチル−１−インダニリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（６−フルオロ−３−エチル−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（５，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（５，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−メチルアセトアミド；
（Ｅ）−２−（５，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（５，７−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ−イソプロピルアセトアミド；
（Ｅ）−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
【００３８】
（Ｚ）−２−（４，６−ジフルオロ−２−ヒドロキシ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−Ｎ−シクロプロピル−２−（６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｚ）−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−３，３−ジメチル−１−インダニリデン）アセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−３−エチル−１−インダニリデン）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
（Ｅ）−２−（６−フルオロ−３−ヒドロキシ−１−インダニリデン）アセトアミド
を包含する。
特に好ましくは、（Ｅ）−２−（４，６−ジフルオロ−１−インダニリデン）アセトアミドである。
【００３９】
本明細書中で使用される場合：
（ａ）「Ｃ１−６アルキル」なる語は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、１、２、３または４個の炭素原子を有するＣ１−４アルキル基を意味する。かかる基は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル基であってもよい。適当なアルキル基は、好ましくは、１〜４個の炭素原子を有し、より好ましくは、メチル、エチル、プロピル、プロプ−２−イル、ブチル、ブト−２−イル、または２−メチルプロプ−２−イルである。アルキル基は、最も好ましくはメチルまたはエチルである。
（ｂ）基または基の一部として「Ｃ１−６アルコキシ」なる語は、酸素原子を介して親の基に結合した１〜６個の炭素原子を有する１価の直鎖または分枝鎖基を意味する。かかるアルコキシ基は、好ましくは、１〜４個の炭素原子を有し、より好ましくはメトキシまたはエトキシ、最も好ましくはメトキシである。
（ｃ）「Ｃ１−６ハロアルキル」なる語は、１〜５個のフルオロまたはクロロ原子、好ましくはフルオロ原子、例えば、１、２、３、４または５個のフルオロ原子で置換された、（ａ）において定義されたようなＣ１−６アルキル基を意味する。適当な基は、ペルフルオロ基、例えば、トリフルオロメチルを包含する。
（ｄ）「Ｃ３−５シクロアルキル」なる語は、３、４または５個の炭素原子を有するシクロアルキル基、例えば、シクロプロピルまたはシクロブチルを意味する。好ましくは、シクロプロピルである。
【００４０】
（ｅ）「Ｃ１−６アシルオキシ」なる語は、酸素原子を介して親の基に結合した、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アシル基を意味する。かかるアシルオキシ基は、好ましくは、１〜４個の炭素原子を有し、好ましくはアセトキシである。
（ｆ）「ハロゲン」なる語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、好ましくは、フッ素、塩素または臭素を意味する。
（ｇ）「塩」なる語は、さらに下記で定義される塩基性塩を意味する。式（ＩＩ）の化合物に関し、「塩」なる語は、Ｒ８およびＲ９のうち１つが水素である場合に形成される塩基性塩を意味する。
（ｈ）「溶媒和物」なる語は、本発明の化合物とその溶媒との一定の割合における組み合わせを意味する。
（ｉ）「生理学的に機能的な誘導体」なる語は、ヒトなどのレシピエントへの投与時に、本発明の化合物またはその活性代謝産物を（直接または間接的に）提供することのできる本発明の化合物のいずれか他の生理学上許容される誘導体、例えば、エステルを意味する。
【００４１】
本発明の化合物が、本発明の化合物の個々のＥおよびＺ異性体ならびにいずれかの割合でのかかる異性体の混合物を包含する種々の幾何異性体形態または幾何異性体の混合物の形態で存在できることは、明らかであろう。式（Ｉ）の好ましい化合物は、式中、エキソ二重結合に隣接する基およびカルボニル基がエキソ二重結合の反対側にあるものである。本発明の化合物は、１以上の炭素中心がキラルである形態で存在していてもよい。本発明はその範囲内に、実質的に遊離の、すなわち、５％未満のいずれか他の光学異性体と結合した各可能な光学異性体、ならびにそのラセミ混合物を包含するいずれかの割合の１以上の光学異性体の混合物を包含する。
【００４２】
医薬上許容される塩は本発明の範囲内にあり、その親（すなわち、基礎）化合物と比べてより大きい水溶性のため、医学的応用に特に適当である。かかる塩は、明らかに、医薬上許容されるアニオンまたはカチオンを有さなければならない。適当な医薬上許容される塩基性塩は、アンモニウム塩、ナトリウムまたはカリウム塩などのアルカリ金属塩、およびマグネシウムおよびカルシウム塩などのアルカリ土類塩を包含する。医薬上許容されないアニオンを有する塩もまた、医薬製造工程において医薬上許容される塩の調製または精製のための有用な中間体として、本発明の範囲内にある。
【００４３】
本発明の化合物は、典型的に、ＩＫまたはＳＫチャネルオープナー、好ましくはＳＫ−１チャネルオープナーとして作用する。ＩＫチャネルオープナーは、ＩＫチャネルを活性化する化合物である。ＳＫチャネルオープナーは、ＳＫチャネルを活性化する化合物である。ＩＫまたはＳＫチャネルは、開口すると活性化されて、カリウムイオンが該チャネルを介して流される。好ましくは、本発明の化合物は、Ｃａ２＋感受的にＩＫおよび／またはＳＫチャネルを開口する。Ｃａ２＋感受的にＩＫおよび／またはＳＫチャネルを開口する化合物は、典型的に、Ｃａ２＋の存在下にのみ該チャネルのＫ＋チャネル活性を活性化する。
【００４４】
本発明の化合物は、ＩＫ、ＳＫ−１、ＳＫ−２およびＳＫ−３チャネルを活性化することができ、または１以上のチャネルサブタイプを選択的に活性化することができる。例えば、本発明の化合物は、ＳＫチャネルを選択的に活性化しうる。ＳＫチャネルを選択的に活性化する化合物は、ＳＫチャネルを活性化するが、ＩＫチャネルを活性化しないか、またはあまり強く活性化しないであろう。別法では、本発明の化合物はＩＫチャネルを活性化しうる。ＩＫチャネルを選択的に活性化する化合物は、ＩＫチャネルを活性化するが、ＳＫチャネルを活性化しないか、またはあまり強く活性化しないであろう。化合物は、ＳＫチャネルのサブタイプを選択的に活性化しうる。例えば、ＳＫ−１チャネルを選択的に活性化する化合物は、ＳＫ−１チャネルを活性化するが、ＳＫ−２およびＳＫ−３チャネルを活性化しないか、またはより小さな程度にだけ活性化するであろう。
【００４５】
本発明は、増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害を患った患者の治療法であって、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物または本発明のスクリーニング法によって同定された化合物を治療の必要な患者に投与することを特徴とする方法を提供する。治療の必要な患者は、典型的には、膀胱興奮性亢進、ＭＥＤまたは尿失禁のような尿生殖器障害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または嚢胞性繊維症のような呼吸障害、高血圧、狭心症、虚血性心臓疾患または脳虚血のような心血管障害、過敏性大腸症候群、両極性障害または精神病のようなニューロン興奮性亢進障害、鎌状赤血球貧血、睡眠障害および高アルカリ血症を患っている。本発明のさらなる態様は、癲癇のような中枢神経系の障害、炎症、疼痛および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療法である。
【００４６】
増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害を患った患者に対する本発明の化合物の投与は、典型的に、該障害を患った患者の状態を改善し、および／または該障害の症状を緩和するであろう。
本発明は、また、増強したＩＫおよび／またはＳＫチャネル活性に応答する障害の治療のための医薬の製造における本発明の化合物の使用を提供する。
疼痛および／または過敏性大腸症候群および／または癲癇の治療のための医薬の製造におけるＳＫ−１イオンチャネルアクチベーターの使用が提供される。
【００４７】
スクリーニング法
本発明のスクリーニング法は、一般に、細胞（機構上基礎となる担体は排除されないが）によって発現されたＳＫチャネル、特にＳＫ−１を開口または活性化する能力について候補薬剤をスクリーニングすることを含むであろう。該細胞は天然にＳＫチャネルを発現することができ、その場合、細胞のさらなる操作は必要とされない。しかしながら、より好ましくは、通常ＳＫチャネルを発現しない細胞を組換えＤＮＡ技術によって形質転換してＳＫチャネルを発現（好ましくは過剰発現）させる。これは、当業者によく知られた、または当業者に明らかな技術によって達成されうる。簡単に言うと、ＳＫチャネル（ラット、ネズミまたは他の哺乳動物種でもよいが、好ましくはヒトの）をコードしているポリヌクレオチドを適当なベクター中に挿入し、次いで、それを宿主細胞中に、例えば、トランスフェクションによって挿入する。適当なベクターは、プラスミド、ファージ、ミニ染色体またはトランスポゾンであってもよく、プラスミドが特に好ましい。ベクターは典型的に、プロモーター、オペレーター、アクチベーター、レプレッサーおよび／またはエンハンサー、転写、翻訳、開始および終止配列などの他の調節エレメントを含むであろう。特に好ましくは、ドラッグスクリーニングアッセイに適するレベルでその発現を提供するために、ＳＫチャネルをコードしているポリヌクレオチドに作動可能に連結された調節エレメントを含むベクターである。幅広く種々の調節エレメントのいずれを用いてもよく、調節可能、例えば、誘導可能であってもよい。「作動可能に連結された」なる語は、直鎖状ポリヌクレオチド配列の一部が同じ直鎖状配列の他の部分の活性に影響を及ぼすことのできる状態をいう。例えば、翻訳可能なように配置される場合、リボソーム結合部位をコーディング配列に作動可能に連結する。ＳＫチャネルを発現している宿主細胞（天然か、または形質転換によるもの）は、典型的に真核生物細胞であり、好ましくは、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞のような哺乳動物細胞である。もちろん、天然に生じるＳＫタンパク質の変種、たとえば、１以上のアミノ酸が置換、欠失、挿入、再配列または修飾されたもの（特に、保存的変化として当該分野で考えられるもの）、末端切断物および突然変異蛋白が、それらが実質的に天然に生じるＳＫチャネルタンパク質の機能的特徴を保持するかぎり、本発明の範囲内にあることは、当業者に明らかであろう。
【００４８】
幅広い意味において、本発明のスクリーニング法は、機能的ＳＫチャネル、特にＳＫ−１を候補薬剤に接触させ、その反応を観察することを含む。次いで、該反応を用いて、候補薬剤が潜在的なＳＫチャネルオープナーであるかどうかを決定でき、かかる候補薬剤を選択し、臨床的使用のためにさらに開発してもよい。本発明によって同定されたＳＫチャネルオープナーはＳＫチャネルファミリーに選択的であることが好ましいが、より好ましくは、ＳＫ−１のようなＳＫチャネルサブクラスに選択的である。ＳＫチャネルを発現している細胞を候補薬剤の存在下にインキュベートし、その反応をパッチクランピングのような通常の電気生理学的方法または蛍光イメージプレートリーダー（Molecular Devices)ＦＬＩＰＲアッセイのような通常の分光学的方法を用いて測定してもよい。本発明のスクリーニング法において使用されうる市販のプレートに基づくアッセイの例は、ＶＩＰＲ（Aurora Sciences）、ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices）またはＷＯ９９／６６３２４（その全体は出典明示により本明細書の一部とされ、読者は特に参照すること）において開示されるような生物発光共鳴エネルギー転移（ＢＲＥＴ）を含む方法を包含する。
【００４９】
候補薬剤は、有機化学的小型分子の形態をとってもよい。スクリーニング法は、当業者によく知られた、または明らかな方法にしたがって、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適応させてもよい。該具体例において、複数の候補薬剤が典型的に、通常は数千であるが、少なくとも数百の候補薬剤からなる化学ライブラリーとして提供される。該ライブラリーは、高い構造的多様性の薬剤を含んでいてもよく、または構造上関連した薬剤の一群を含んでいてもよい。該一群の薬剤は、最も有望な候補薬剤を見出すために一群の薬剤が調査されるべき情報を提供しうる高い構造的多様性を有する薬剤からなるライブラリーに対しての最初のスクリーン後、本発明のスクリーン（いわゆる「焦点を合わせたスクリーン（focussed screen）」）において用いてもよい。もちろん、（典型的には、標的イオンチャネル、例えば、ＳＫ−１を活性化する能力に基づいて、および／または標的についての選択性プロファイルに基づいて）該スクリーンから最終的に選択される候補薬剤は、次いで、下記するように生理学上許容される医薬組成物の形態で患者に投与するための準備をする前に、薬物動力学および／または毒物学プロファイルなどの他のパラメーターを考慮して構造的に修飾してもよい。
【００５０】
医薬組成物
本明細書中で言及される場合、活性成分として本発明の化合物（式Ｉを有する化合物、ならびに本明細書中に記載されるスクリーニング法において同定された薬剤を包含する用語）を含む医薬組成物はまた、経口、直腸、局所的および非経口（皮下、経皮、筋内および静脈内を包含する）を包含するいずれか適当な経路によって治療のために投与してもよい。また、好ましい経路は、レシピエントの状態および年齢ならびに選択された活性成分によって変化することが明らかであろう。
【００５１】
障害の治療のための個々の活性成分の必要量は、もちろん、障害の症状の重篤度およびレシピエントの個性を包含する多くの因子に依存し、最終的に、付き添いの内科医の裁量によるであろう。
一般に、上記の条件に関し、本発明の化合物の適当な投与量は、１日にレシピエントの体重１ｋｇあたり０．０５〜１００ｍｇの範囲、好ましくは１日にレシピエントの体重１ｋあたり０．１〜５０ｍｇの範囲、最も好ましくは１日にレシピエントの体重１ｋｇあたり０．５〜２０ｍｇの範囲、最適には１日にレシピエントの体重１ｋｇあたり１〜１０ｍｇの範囲である。所望の投与量を２、３、４、５、６またはそれ以上のサブ投与量として１日に適当な間隔をあけて与える。これらのサブ投与量は、単位投与形態、例えば、単位投与形態につき１〜１５００ｍｇ、好ましくは５〜１０００ｍｇ、最も好ましくは１０〜７００ｍｇの活性成分を含有する形態で投与してもよい。
【００５２】
活性成分は単独で投与できるが、医薬組成物として投与することが好ましい。本発明の組成物は、少なくとも１つの上記に定義されたような活性成分を１以上の許容される担体および所望により他の治療剤と一緒に含んでなる。各担体は、組成物の他の成分と相溶性であり、レシピエントに有害でないという意味で「許容され」なければならない。試験薬剤は、製薬分野でルーチンであり、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Eastern Pennsylvania 17th Ed. 1985に十分に記載されるような標準的な担体および／または賦形剤と共に処方してもよい。
【００５３】
組成物は、経口、直腸、局所または非経口（皮下、筋内、経皮、および静脈内を包含する）投与に適当な組成物を包含する。該組成物は、好都合には、単位投与形態において提供され、製薬の分野でよく知られたいずれかの方法によって調製されうる。かかる方法は、活性成分と１以上の付属成分を構成する担体との会合をもたらす工程を包含する。一般に、組成物は、活性成分と液体担体または微細に分割された固体担体あるいはその両方との会合を均一に、完全にもたらし、次いで、必要ならば、製品に成形することによって調製される。
【００５４】
経口投与に適当な本発明の組成物は、各々、予め決定された量の活性成分を含有するカプセル、カシェ剤または錠剤のような分離した単位として；粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョンとして提供されうる。活性成分はまた、ボーラス、舐剤またはパスタ剤として提供されてもよい。
錠剤は、所望により１以上の付属成分と共に、圧縮または成形によって作成されうる。圧縮錠剤は、適当な機械中で、所望により結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤と混合した、粉末または顆粒のような流動形態における活性成分を圧縮することによって調製されうる。成形錠剤は、適当な機械中で、湿った粉末状化合物と不活性液体希釈剤との混合物を成形することによって作成されうる。該錠剤は、所望により、コートしてもよく、または刻み目を入れてもよく、活性成分のゆっくりとした、または制御された放出を提供するように、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを所望の放出プロファイルを提供するための様々な割合で用いて処方されうる。錠剤は、所望により、胃以外の消化管部分に放出するように、腸溶性コーティングと共に提供されてもよい。
【００５５】
上記のような経口使用に適当な組成物は、また、胃の酸度を中和するように設計された緩衝剤を含んでいてもよい。かかる緩衝剤は、その共役塩と混合した弱酸または塩基などの種々の有機または無機薬剤から選択されうる。
直腸投与のための組成物は、例えば、ココアバターまたはサリチル酸塩を含む適当な基剤を有する坐剤として提供されうる。
【００５６】
非経口投与に適当な組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤および組成物を目的のレシピエントの血液と等張にする溶質を含有しうる水性および非水性等張滅菌注射溶液；および該化合物を１以上の器官に導くように設計されたリポソームまたは他の微粒子系のような、懸濁化剤および濃化剤を含みうる水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。該組成物は、単一投与または複数投与用の密閉容器、例えば、アンプルまたはバイアル中で提供され、使用直前に滅菌液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保管されうる。即席の注射溶液および懸濁液は、上記した種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されうる。
【００５７】
経皮投与に適当な組成物は、レシピエントの表皮との密着を長期間保持するように適応させた分離した貼剤として提供されうる。かか貼剤は、典型的に、例えば、０．１〜０．２Ｍ濃度の活性化合物の緩衝化していてもよい水性溶液として該活性化合物を含有する。１の特別の可能性として、活性化合物は、Pharmaceutical Research 3(6), 318 (1986)において一般に記載されるように、イオン泳動によって貼剤から送達されうる。
好ましい単位投与組成物は、活性成分の上記したような一日分の投与量または単位、一日分のサブ投与量、またはその適当なフラクションを含有するものである。
【００５８】
特に上記した成分のほかに、本発明の組成物は、該組成物の型を考慮して、当該分野で慣用的な他の薬剤を含みうることが理解されるべきである。例えば、経口投与に適当な組成物は、甘味料、濃化剤およびフレーバー剤のようなさらなる薬剤を含みうる。
本発明の化合物は、いずれかの通常の方法、例えば、ＷＯ９５／３０６４５、ＷＯ９５／３０６４４またはＷＯ９４／２６６９３に記載されるような方法で調製できる。
【００５９】
好ましくは上記のスクリーニング法によって同定された、式Ｉを有する化合物以外のＳＫ−１イオンチャネルアクチベーターの、疼痛および／または過敏性大腸症候群および／または癲癇の治療のための医薬の製造における使用が提供される。該ＳＫ−１イオンチャネルアクチベーターを用いる疼痛の治療法もまた、提供される。
下記の実施例は本発明を説明するものである。
【００６０】
実施例１：ＳＫ／ＩＫチャネルのクローニングおよび安定した細胞系統の作成
全長ｈＳＫ−１、２、３およびＩＫクローンをＰＣＲおよび５’−ＲＡＣＥのいずれかによって、ヒトｃＤＮＡライブラリー（Genbank受け入れ番号ｈＳＫ１ Ｕ６９８８３；ｈＳＫ−２非公開）から、またはＩｎｃｙｔｅもしくはｄｂＥＳＴデータベース（Incyte Pharmaceuticals, Inc., ｈＳＫ３ ＡＪ２５１０１６、ｈＩＫ ＡＦ０２２７９７）から得た。最適Ｋｏｚａｋ配列をその開始部位に加え、ｃＤＮＡをＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、次いで、哺乳動物発現用のＩＲＥＳベクターｐＣＩＮ５中でクローン化した。
【００６１】
全ＳＫ／ＩＫ安定細胞系統は、５００μｇ／ｍｌジェネチシン耐性についての選択下、ｐＣＩＮ５構築物を用いてＣＨＯ−Ｋ１において誘導された。５μｇの精製プラスミドＤＮＡを用いて、５ｘ１０６ＣＨＯ―Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＲＬ９６１８）をエレクトロポレーション（BIORAD Gene Pulser IIを用いる標準的なプロトコール）によってトランスフェクトした。アルファ−ＭＥＭ（Gibco BRL, Cat No.22571）および１０％ＦＢＳ（Gibco BRL）中、ペトリ皿における２日の生育後、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌでの抗生物質Ｇ４１８−硫酸塩（Calbiochem）の添加によって化学的選択を開始した。さらに２週間培養後、４７個の抗生物質耐性クローンを単離し、抗生物質選択下で増殖させ、次いで、液体窒素中で冷凍してさらなる分析まで保管した。
【００６２】
チャネル活性は、電気生理学（下記参照）または膜電位感受性蛍光色素ＤｉＢＡＣ４（３）を用いるＦＬＩＰＲ機（Molecular Devices）における蛍光アッセイのいずれかを用いて測定した。細胞を透明底黒壁面の滅菌９６ウェルプレートに１ウェルあたり５０，０００細胞にて播種し、３７℃５％ＣＯ２にて２−３日間生育させた。次いで、３７℃にて４５分間、細胞に５μＭ ＤｉＢＡＣ４を負荷した後、ＦＬＩＰＲピペッターヘッドを用いてＣａ２＋動員剤（例えば、ＵＴＰ）またはイオノマイシン（ionomycin）（１μＭ）を添加した。チャネルの開口時に蛍光の減少が観察され、これを膜過分極と同等とみなす。各チャネルについて最も高い活性（例えば、最も高い過分極）を有する細胞系統をさらに希釈クローン化し、チャネル活性について再び選択した。正しいチャネルの存在は、遺伝子特異的プライマーを用いるＲＴ−ＰＣＲおよび特異的抗体を用いるイムノブロッティングによって決定された。安定した細胞系統を、１０％熱不活性化胎仔ウシ血清（Gibco BRL, Cat.No. 10108-165）を含有するα−ＭＥＭ（Gibco BRL, Cat  No. 22571）中３７℃および１０％ＣＯ２にて培養した。
【００６３】
実施例２：電気生理学
標準的なホールセル（whole-cell）パッチクランプ電気生理学的方法を用いて、ＳＫまたはＩＫチャネルのいずれかを発現している単一細胞由来の膜電流を記録する。細胞をガラスカバースリップ上に塗布し、倒立顕微鏡（Nikon Diaphot 200）の台上の小さな（容積＜５００μｌ）チェンバー中に置いた。重力流動系を用いて、細胞（１ｍｌ／分）を、ｐＨ７．４に緩衝化した１４４ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＣａＣｌ２を含有する外部塩溶液（浸透度３００ｍｏｓ）で灌流する。全実験は室温（２０−２２℃）で行う。アナログ−デジタルインターフェースを介してＰｅｎｔｉｕｍマイクロプロセッサーと連結したＡｘｏｐａｔｃｈ ２００ＢまたはＨＥＫＡ ＥＰＣ−９パッチクランプ増幅器を用いて、膜電流を増幅し、記録する。パッチピペットは、２−４ｍΩの最終的なチップ抵抗を与えるように、外径１．５ｍｍのホウ珪酸ガラス（Clark Electromedical）から引き（Sutterモデル９７）、火仕上げする（Narishige Microforge）。ピペットに、１４４ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２および３０ｎＭ〜１μＭの範囲の遊離Ｃａ２＋濃度が得られるように算出された濃度のＣａＣｌ２を含有する内部溶液を詰める。銀／塩化銀ペレットを浴（参照）電極として用いる。シグナルは、バンド幅５ｋＨｚでプレフィルタし、２０ｋＨｚでサンプリングする。キャパシタンストランジェントおよびシリーズ抵抗エラーは、増幅器回路構成を用いて補償される（８０−８５％）。
【００６４】
０ｍＶの保持電位から電圧ランプ（ramp）プロトコール（５０ｍｓ間で−１００ｍＶ、次いで、＋１００ｍＶまで１ｓランプ）を該細胞に適用して、膜電流を追跡する。ランプは、１０秒毎にアプライする。外部溶液をゼロＫ＋（ｐＨ７．４に緩衝化した１４４ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＣａＣｌ２（浸透度３００ｍｏｓ））を含有するものに置きかえたとき、非特異的「リーク電流」を０ｍＶでの残余電流によって定義付ける。一旦、安定したベースラインＣａ２＋−活性化Ｋ＋電流を記録したならば（通常、全細胞記録コンフィグレーションが達成された３−５分後に、振幅５０−５００ｐＡ）、薬物溶液を「Ｕ管」系を介して細胞にアプライする。これは、２つのソレノイドバルブおよび薬物含有溶液の貯蔵器に取りつけられた１００μＭの細胞内に配置されたファインミクロフィル管より構成される。
【００６５】
１０μＭ濃度でのａ、ｂ、ｃおよびｄによって類型化された薬物の適用は、非トランスフェクト細胞中ではなく、ＳＫ／ＩＫ細胞中の全細胞Ｋ＋電流を増加し、それらが特異的ＳＫ／ＩＫオープナーであることを示す。これらの薬剤の影響は、典型的には１００ｎＭ−３００μＭの濃度に関係する。一般に、該影響は洗浄時に逆転することができた。
いくつかの実験において、ａ、ｂ、ｃおよびｄによって類型化された薬物の効能に対する内部Ｃａ２＋濃度の影響は、ピペット溶液中３０ｎＭ、１００ｎＭまたは３００ｎＭのいずれかの遊離Ｃａ２＋を用いて記録された細胞間の応答を比較することによって調査された。典型的には、Ｃａ２＋濃度が高い場合、チャネルを活性化するために、より低濃度のオープナーが必要とされた。すなわち、これらの薬剤の活性はＣａ２＋−感受性でありうる。代表的データセットを図１に示す。
【００６６】
実施例３：電圧感受性色素を用いるスクリーニング
新規なＳＫ−１オープナーについてスクリーンするために、９６ウェルまたは３８４ウェルのいずれかのフォーマットにおいて、ＦＬＩＰ−Ｒ ＤｉＢＡＣ実験を行う。ｈＳＫ−１ ＣＨＯ（またはＨＥＫ）細胞を透明底黒壁面の滅菌ウェルプレート中、１ウェル（９６）あたり５０，０００細胞にて播種し、３７℃、５％ＣＯ２にて２−３日間生育させた。次いで、３７℃にて４５分間、細胞に５μＭ ＤｉＢＡＣ４を負荷し、次いで、ＦＬＩＰＲ機（Molecular Devices）上で蛍光強度を読取った。通常１０−５０μｌの容量で、ＦＬＩＰＲピペッターヘッドを用いて試験化合物をラインに加えた（通常、１ｐＭ−３０μＭの最終試験濃度）。ＤｉＢＡＣ蛍光は、さらに１０分間モニターする。ＳＫ−１チャネルのオープナーは、濃度依存的に蛍光を減少させ、それは、膜過分極化として解釈される。野生型非トランスフェクト細胞において、ＳＫ−１チャネルの「真」のオープナーは（色素「クエンチャー」または非特異的膜過分極化剤とは対照的に）、ＤｉＢＡＣ蛍光を変化させない。ＳＫ−１チャネルについての選択性（好ましくは＞１０倍）は、ｈＳＫ−１、ｈＳＫ−３またはｈＩＫＣａ２＋依存性Ｋ＋チャネルのいずれかでトランスフェクトされた安定した細胞系統において同様の実験を行うことによって評価される。
【００６７】
実施例４：電気生理学を用いるスクリーニング
標準的なホールセルパッチクランプ電気生理学法を用いて、ＳＫ−１チャネルを発現している単一細胞由来の膜電流を記録する。細胞をガラスカバースリップ上に塗布し、倒立顕微鏡（Nikon Diaphot200）の台上の小さい（容積＜５００μｌ）チェンバー中に置く。重力流動系を用いて、細胞（１ｍｌ／分）を、ｐＨ７．４に緩衝化した１４４ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＣａＣｌ２を含有する外部塩溶液（浸透度３００ｍｏｓ）で灌流する。全実験は室温（２０−２２℃）で行う。アナログ−デジタルインターフェースを介してＰｅｎｔｉｕｍマイクロプロセッサーと連結したＡｘｏｐａｔｃｈ ２００ＢまたはＨＥＫＡ ＥＰＣ−９パッチクランプ増幅器を用いて、膜電流を増幅し、記録する。パッチピペットは、２−４ｍΩの最終的なチップ抵抗を与えるように、外径１．５ｍｍのホウ珪酸ガラス（Clark Electromedical）から引き（Sutterモデル９７）、火仕上げする（Narishige Microforge）。ピペットに、１４４ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２および３０ｍＭ〜１μＭの範囲の遊離Ｃａ２＋濃度が得られるように算出された濃度のＣａＣｌ２を含有する内部溶液を詰める。銀／塩化銀ペレットを浴（参照）電極として用いる。シグナルは、バンド幅５ｋＨｚでプレフィルタし、２０ｋＨｚでサンプリングする。キャパシタンストランジェントおよびシリーズ抵抗エラーは、増幅器回路構成を用いて補償される（８０−８５％）。
【００６８】
０ｍＶの保持電位から電圧ランププロトコール（５０ｍｓ間で−１００ｍＶ、次いで、＋１００ｍＶまで１ｓランプ）を該細胞に適用して、膜電流を追跡する。ランプは、１０秒毎にアプライする。外部溶液をゼロＫ＋（ｐＨ７．４に緩衝化した１４４ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＣａＣｌ２（浸透度３００ｍｏｓ））を含有するものに置きかえたとき、非特異的「リーク電流」を０ｍＶでの残余電流によって定義付ける。一旦、安定なベースラインＣａ２＋−活性化Ｋ＋電流を記録したならば（通常、全細胞記録コンフィグレーションが達成された３−５分後に、振幅５０−５００ｐＡ）、薬物溶液を「Ｕ管」系を介して細胞にアプライする。これは、２つのソレノイドバルブおよび薬物含有溶液の貯蔵器に取りつけられた１００μＭの細胞内に配置されたファインミクロフィル管より構成される。ＳＫ−１チャネルオープナーは、通常１ｎＭ−１００μＭの範囲にある濃度にて５秒〜１０分の期間、該細胞に適用することによって検出される。オープナーは、非トランスフェクト細胞ではなく、ＳＫ／ＩＫ細胞において全細胞Ｋ＋電流を増加し、それらが特異的であることを示す。これらの薬剤の影響は、典型的には１００ｎＭ−３００μＭの濃度に関係する。一般に、該影響は洗浄時に逆転することができる。
【００６９】
実施例５：動物モデルにおける薬物スクリーニング
ニューロパシーおよび／または炎症性疼痛の動物モデルにおけるＳＫ−１オープナーの効力は、標準的な技術、例えば、慢性収縮傷害（ＣＣＩ）モデル（Bennett & Xie, 1988 Pain, 33, 87-107）あるいはカラゲーニンまたは完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）の足底内投与を用いて測定できる。例えば、ＣＣＩにおいて、雄性Ｒａｎｄｏｍ Ｈｏｏｄｅｄラット（１８０−２００ｇ）の共通の左座骨神経を、イソフルラン（Isoflurane）麻酔下に中央大腿レベルにて露出させた。クロミック腸線（４．０）の４つの結紮を各々、１ｍｍの間隔を空けて神経の回りにゆるく作った。次いで、傷を閉じ、縫合クリップで固定した。外科的手法は、座骨神経を結紮しなかったことを除き、偽手術動物について同一であった。該動物を１２日間手術から回復させた後、いずれかの行動試験を始めた。機械的な足を引っ込める閾値におけるＣＣＩ誘導性減少に対する試験化合物の影響を、痛覚計を用いて測定した（Randall & Slitto, 1957）。機械的異疼痛の存在は、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ｈａｉｒモノフィラメント（範囲：４．１９−８４．９６ｇ）を用いて評価した。ラットを軽く拘束し、金属グリッド面上に置き、その下からモノフィラメントを後足の足底表面に当てた。引っ込める行動を生じるのに最小のモノフィラメントが、記録された応答であった。異疼痛および／または機械的な足を引っ込める閾値に対する薬物の影響は、好ましくは経口、腹膜内または皮下経路のいずれかを介して、急性的または慢性的のいずれかで動物に投与することによって評価された。
【００７０】
ラットにおけるフロイントの完全アジュバント（ＦＣＡ：マイクロバクテリウム・チューバークロシス（Microbacterium tuberculosis（１ｍｇ／ｍｌ）１００μｌ）の足底内投与は、注射したラットの足において重量減少（付随的疼痛／痛覚過敏の測定）および関連した浮腫（急性炎症応答）を生じる。ＳＫ−１オープナーの影響は、「急性」単関節炎プロトコール（ＦＣＡの１時間前に薬剤投与；痛覚過敏および浮腫はＦＣＡ６時間後に評価）および炎症性発作（「確立された」単関節炎）において調べられる。ラットの足底内に投与すると、カラゲーニンは足の特徴的な傷害および炎症を誘導し、それは、自発的な疼痛（異疼痛）および炎症（浮腫）をもたらし、約３時間でピークになる。絶食したラットにビヒクルまたは試験化合物（好ましくは経口、皮下または腹膜内）を投与し、３０分後にイソフランで簡単に麻酔する。０．１ｍｌの２％カラゲーニン溶液を、左の後足の下方足底表面に注射する。麻酔から回復するまでラットを観察する。カラゲーニン注射の３時間後に、ラットを個々に、重量支持機械上の透明のＰｅｒｓｐｅｘ拘束手段中に置く。ラットが２個の別個の重量支持台上に置かれたその後足で正しく立っているのをチェックする。８秒間の２つの台の平均重量分布を評価する。
【００７１】
内臓疼痛モデルにおけるＳＫ−１オープナーの効力は、結腸膨張に応答する偽効果的心血管反射応答を用いて評価できる。どちらかの性別の絶食したＡＨＡラット（２８０−３４０ｇ）をペントバルビタール（６０ｍｇ／ｋｇ、腹膜内）で麻酔した。麻酔薬投与、薬物投与および血圧測定の各々のために、大腿部静脈および大腿部動脈にカニューレ挿入した。気管にもカニューレ挿入した。結腸を１０ｍｌのセーラインで洗浄した後、肛門から１ｃｍで６ｃｍバルーンを挿入した。ペントバルビタールの２０ｍｇ／ｋｇ／時間の連続的注入によって、麻酔を維持した。各々、血圧における反射的低下を生じる８０ｍｍＨｇ相性膨張が５分毎に２０秒間行われた。ＳＫ−１オープナーを膨張の間、前の膨張の２分半後に静脈内投与する。アンタゴニスト研究を除き、薬物を投与する前に、４つの連続的な再現性のある対照応答が得られた。この場合、安定した応答が得られたらすぐに、アンタゴニストを投与（静脈内）し、１５分後にアゴニストを投与した（静脈内）。ＳＫ−１オープナーは、膨張によって引き起こされる血圧低下を減少させたであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、式（Ｖ）：
【化１４】2004532188.tif 000016
の化合物によるＣＨＯ−Ｋ１細胞において発現されるｈＩＫチャネルの活性化を示す。図１ａは全細胞電流を示し、図１ｂは活性化の時間推移を示し；図１ｃは４つの異なる細胞における濃度応答曲線を示し；図１ｄはＩＫブロッカー、カリブドトキシン（１００ｎＭ）による阻害を示す。
【図１ａ】
2004532188.tif 000025
【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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