(57)【要約】本発明は、新規ベンズアゼピノン誘導体、それらの合成、およびαｖインテグリン受容体拮抗物質としてのそれらの使用に関する。より詳細には、本発明の化合物は、インテグリンαｖβ３およびαｖβ５の拮抗物質であり、従って、骨吸収の抑制、骨粗鬆症の治療および／または予防、ならびに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、癌および転移性腫瘍増殖の抑制に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式Ｉ：
【化１】
2004528373.tif 000043
［式中、
Ｘは、下記：
【化２】
2004528373.tif 000044
（この式中、
芳香族環の炭素原子は、非置換であるかまたは一つのＲ２置換基で置換されており、非芳香族環の炭素原子は、非置換であるかまたは一つまたは二つのＲ２置換基で置換されており；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから成る群より選択され；または二つのＲ２置換基は、同じ非芳香族環の炭素原子上にある時、それらが結合している炭素原子と一緒に、シクロプロピル基を形成してよく；
Ｒ１が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、ならびに
Ｒ３およびＲ４は、各々、独自に、水素またはＣ１〜４アルキルである）
から成る群より選択される］
の化合物またはその医薬適合性の塩もしくはエステル。
【請求項２】
Ｒ１が、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
下記構造式ＩＩ：
【化３】
2004528373.tif 000045
（式中、＊の付いた炭素原子は、立体配置（Ｓ）を有する）
の、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
下記：
【化４】
2004528373.tif 000046
またはそれらの医薬適合性の塩である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物および医薬適合性の担体を含む医薬組成物。
【請求項６】
ａ）有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレータ、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレータ、
ｄ）細胞毒／増殖抑制剤、
ｅ）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、
ｆ）上皮由来、線維芽由来または血小板由来の成長因子の阻害剤、
ｇ）ＶＥＧＦの阻害剤、
ｈ）成長因子に対するまたは成長因子受容体に対する抗体、
ｉ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１の阻害剤、
ｊ）カテプシンＫ阻害剤、
ｋ）成長ホルモン分泌促進物質、
ｌ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼの阻害剤、
ｍ）ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕ−ＰＡ）の阻害剤、
ｎ）腫瘍特異的抗体−インターロイキン−２融合蛋白質、
ｏ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤、
ｐ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤またはゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシル／ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ二重阻害剤、および
ｑ）副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）類似体；
ならびにこれらの混合物から成る群より選択された有効成分をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記有効成分が、
ａ）有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレータ、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレータ、
ｄ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼの阻害剤、
ｅ）副甲状腺ホルモン類似体、および
ｆ）カテプシンＫ阻害剤；
ならびにこれらの混合物から成る群より選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステルが、アレンドロン酸１ナトリウム３水和物である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
治療有効量の請求項１に記載の化合物をその必要がある哺乳動物に投与することを含む、骨吸収、再狭窄、新脈管形成、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎および腫瘍増殖から成る群より選択される症状を抑制する方法。
【請求項１０】
抑制される症状が、骨吸収である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
治療有効量の請求項５に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物において骨吸収を抑制する方法。
【請求項１２】
治療有効量の請求項７に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物において骨吸収を抑制する方法。
【請求項１３】
骨粗鬆症の治療または予防が必要な哺乳動物に、治療または予防有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、骨粗鬆症を治療または予防する方法。
【請求項１４】
骨粗鬆症の治療または予防が必要な哺乳動物に、治療または予防有効量の請求項１に記載の化合物を有効量の有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステルと併せて投与することを含む、骨粗鬆症を治療または予防する方法。
【請求項１５】
前記有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステルが、アレンドロン酸１ナトリウム３水和物である、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンズアゼピノン誘導体、それらの合成、およびαｖインテグリン受容体拮抗物質としてのそれらの使用に関する。より詳細には、本発明の化合物は、インテグリン受容体αｖβ３、αｖβ５、および他のβサブユニットを伴うαｖインテグリン受容体の拮抗物質であり、また、骨吸収の抑制、骨粗鬆症の治療および／または予防、ならびに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、癌および転移性腫瘍増殖の抑制に有用である。
【背景技術】
【０００２】
様々な疾病の状態および症状は、インテグリン受容体への作用によって媒介され得、従って、インテグリン受容体拮抗物質は、薬物の一つの有用な種類であると考えられる。インテグリン受容体は、ヘテロダイマー性経膜的受容体であり、これらによって、細胞は、細胞外基質および他の細胞と結合および連絡している（Ｓ．Ｂ．Ｒｏｄａｎ  ａｎｄ  Ｇ．Ａ．Ｒｏｄａｎ，「破骨細胞におけるインテグリンの機能（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ）」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１５４：Ｓ４７−Ｓ５６（１９９７）参照。この論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。
【０００３】
本発明の一つの側面において、本明細書で開示する化合物は、骨吸収の抑制に有用である。骨吸収は、破骨細胞として知られている細胞の作用により媒介される。破骨細胞は、脊椎動物における鉱物化組織、主として炭酸カルシウムおよびリン酸カルシウムを吸収する直径約４００ｍｍまでの大きな多核細胞である。破骨細胞は、骨の表面に沿って移動する活発な運動性細胞であり、骨に結合し、必要な酸およびプロテアーゼを分泌し、その結果、骨から鉱物化組織を実際に吸収することができる。より具体的には、破骨細胞は、少なくとも二つの生理学的状態、すなわち、分泌状態および移動または運動状態で存在すると考えられる。分泌状態の破骨細胞は、扁平であり、密着ゾーン（シーリングゾーン）により骨基質に結合し、高分極状態となり、波打った縁を形成し、リソソーム酵素およびプロトンを分泌して骨を吸収する。骨の表面への破骨細胞の付着は、骨吸収における重要な初期段階である。移動または運動状態の破骨細胞は、骨基質を渡って移動し、再び骨に付着するまでは吸収に貢献しない。
【０００４】
インテグリンは、破骨細胞の付着、活性化および移動に関わる。破骨細胞、例えば、ラット、ニワトリ、マウスおよびヒトの破骨細胞上で最も豊富なインテグリンは、αｖβ３として知られているインテグリン受容体であり、これは、骨においてＲＧＤ配列を含む基質蛋白と相互作用すると考えられる。αｖβ３に対する抗体は、インビトロでの骨吸収を阻止する。このことは、このインテグリンがその吸収プロセスにおいて重要な役割を果たすことを示している。哺乳動物におけるインビボでの破骨細胞媒介骨吸収の抑制にαｖβ３リガンドを有効に用いることができることを示唆する証拠は、増えつつある。
【０００５】
一般の関心が高い現在の主要な骨疾患は、骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症、骨転移に起因する骨減少症、歯周病、副甲状腺機能亢進、リウマチ様関節炎における関節周囲の侵食症、パジェット病、固定により誘発される骨減少症、およびグルココルチコイド誘発性骨粗鬆症である。これらの症状のすべてが、骨量減少を特徴とし、この骨量減少は、骨吸収（すなわち、破壊）と骨形成の間のバランスがくずれることから生じ、平均年約１４％の割合で生涯を通して継続する。しかし、骨の交替率は、部位によって異なり、例えば、脊椎の骨梁および顎の歯槽骨のほうが、長骨の皮質より高い。骨量減少の可能性は、骨の交替に直接関係し、閉経直後の脊椎では年に５％を越えることもあり、こうした状態は、骨折の危険の増加を招く。
【０００６】
米国では、現在、２０，０００，０００人に、骨粗鬆症に起因する脊椎の骨折が認められる。加えて、年間約２５０，０００の、骨粗鬆症に起因する股関節骨折がある。この臨床状況には最初の二年以内で１２％の死亡率が付随し、患者の３０％が、骨折後に家庭看護を必要としている。
【０００７】
上に挙げたすべての症状で苦しむ個体が、骨吸収を抑制する薬剤での治療の恩恵を受ける。
【０００８】
加えて、αｖβ３配位子は、再狭窄（すなわち、心臓弁に対する矯正手術後の狭窄の再発）、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、黄斑変性および新脈管形成（すなわち、新しい血管の形成）の治療および／または抑制、ならびにウイルス性疾患の抑制に有用であることがわかっている。さらに、腫瘍の増殖は、適切な血液供給に依存し、腫瘍細胞への新しい血管の成長にも依存し、それ故、新脈管形成を阻害することにより、動物モデルにおいて腫瘍を抑制することができると仮定されている（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第１２編，１９９１参照。この文献は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。従って、新脈管形成を抑制するαｖβ３拮抗物質は、腫瘍増殖の抑制による癌の治療に有用でありうる（例えば、Ｂｒｏｏｋｓら，Ｃｅｌｌ，７９，１１５７−１１６４（１９９４）参照。この論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。
【０００９】
新脈管形成が、関節炎性疾患の開始および持続における中心的要因であること、ならびに脈管インテグリンαｖβ３は、炎症性関節炎における好ましいターゲットでありうることを示唆する証拠も提示されている。従って、新脈管形成を抑制するαｖβ３拮抗物質は、慢性関節リュウマチなどの関節炎性疾患の治療への新規治療アプローチの代表でありうる（Ｃ．Ｍ．Ｓｔｏｒｇａｒｄら，「αｖβ３拮抗物質で治療したウサギにおける新脈管形成および関節炎性疾患の減少（Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｎ  αｖβ３  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０３：４７−５４（１９９９）；「シレンギチド（Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）」，Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  Ｆｕｔｕｒｅ，２５：６７４−６７８（２０００）；およびＡ．Ｍ．Ｂａｄｇｅｒら，「ラットのアジュバント誘発関節炎におけるＳＢ  ２７３００５、経口活性、非ペプチドαｖβ３（ビトロネクチン受容体）拮抗物質の疾病修飾活性（Ｄｉｓｅａｓｅ−Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＳＢ  ２７３００５，Ａｎ  Ｏｒａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ，Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  αｖβ３（Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ｉｎ  Ｒａｔ  Ａｄｊｕｂａｎｔ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）」，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４４：１２８−１３７（２００１）参照。これらの各論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。
【００１０】
さらに本発明の化合物は、インテグリン受容体αｖβ５の拮抗物質として作用することにより新生血管形成を抑制することもできる。αｖβ５に対するモノクローナル抗体は、ウサギ角膜およびひよこ漿尿膜モデルにおいてＶＥＧＦ誘発新脈管形成を抑制することが、証明されている（Ｍ．Ｃ．Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：１５００−１５０２（１９９５）参照。この論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。それ故、αｖβ５に拮抗作用を及ぼす化合物は、黄斑変性、糖尿病性網膜症、癌および転移性腫瘍増殖の治療に有用である。
【００１１】
加えて、本発明の化合物は、αｖβ６およびαｖβ８などの他のβサブユニットを伴うαｖインテグリン受容体の拮抗物質として作用することにより、新脈管形成および炎症を抑制することができる（例えば、Ｍｅｌｐｏ  Ｃｈｒｉｓｔｏｆｉｄｏｕ−Ｓｏｌｏｍｉｄｏｕら，「ヒト皮膚／ＳＣＩＤマウスキメラにおける創傷誘発ヒト新脈管形成の際の内皮細胞αｖインテグリン受容体の発現および機能（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｃｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  αｖ  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｗｏｕｎｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｋｉｎ／ＳＣＩＤ  Ｍｉｃｅ  Ｃｈｉｍｅｒａｓ）」，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１５１：９７５−８３（１９９７）およびＸｉａｏ−Ｚｈｕ  Ｈｕａｎｇら，「インテグリンβ６サブユニット遺伝子の不活性化により、肺および皮膚における炎症を調節する際の上皮インテグリンの役割を明らかにする（Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  β６  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ  ｉｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｌｕｎｇｓ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ）」，：９２１−２８（１９９６）参照。これらの各論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。
【００１２】
加えて、本発明の化合物は、αｖβ３受容体とαｖβ５受容体の両方に拮抗作用を及ぼすこともでき、故に、骨吸収の抑制、骨粗鬆症の治療および予防、ならびに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、癌および転移性腫瘍増殖の抑制に有用である。
【００１３】
αｖβ３インテグリン受容体のペプチジルならびにペプチド様拮抗物質は、化学文献と特許文献の両方に記載されている。例えば、Ｗ．Ｊ．Ｈｏｅｋｓｔｒａ  ａｎｄ  Ｂ．Ｌ．Ｐｏｕｌｔｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：１９５−２０４（１９９８）を参照することができ、ならびに国際公開公報第９５／３２７１０号、同第９５／３７６５５号、同第９７／０１５４０号、同第９７／３７６５５号、同第９８／０８８４０号、同第９８／１８４６０号、同第９８／１８４６１号、同第９８／２５８９２号、同第９８／３１３５９号、同第９８／３０５４２号、同第９９／１５５０６号、同第９９／１５５０７号、同第００／０３９７３号、欧州特許第８５３０８４号、同第８５４１４０号、同第８５４１４５号、米国特許第５，２０４，３５０号、同第５，２１７，９９４号、同第５，６３９，７５４号、同第５，７４１，７９６号、同第５，７８０，４２６号、同第５，９２９，１２０号、同第５，９５２，３４１号、同第６，０１７，９２５号および同第６，０４８，９６１号の中で引用されている文献を参照することができる。インビトロおよびインビボで骨吸収を予防するαｖβ３インテグリン受容体拮抗物質の能力の証拠は、呈示されている（Ｖ．Ｗ．Ｅｎｇｌｅｍａｎら，「αｖβ３インテグリンのペプチド様拮抗物質は、インビトロでは骨吸収を抑制し、インビボでは骨粗鬆症を予防する（Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  αｖβ３  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｂｏｎｅ  Ｒｅｓｏｒｐｏｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ）」，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｉｎｖｅｓｔ．９９：２２８４−２２９２（１９９７）；Ｓ．Ｂ．Ｒｏｄａｎら，「高親和性非ペプチドαｖβ３配位子は、インビトロおよびインビボで破骨細胞の活性を抑制する（Ａ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  αｖβ３  Ｌｉｇａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ）」，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１１：Ｓ２８９（１９９６）；Ｊ．Ｆ．Ｇｏｕｒｖｅｓｔら，「αｖβ３ビトロネクチン受容体の非ペプチド配位子でのＯＶＸ誘発骨量減少の予防（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ＯＶＸ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｏｎｅ  Ｌｏｓｓ  Ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ  Ｌｉｇａｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  αｖβ３  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」，Ｂｏｎｅ  ２３：Ｓ６１２（１９９８）：Ｍ．Ｗ．Ｌａｒｋら，「経口活性ビトロネクチン受容体αｖβ３拮抗物質は、卵巣摘出ラットにおいてインビトロおよびインビボで骨吸収を予防する（Ａｎ  Ｏｒａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  αｖβ３  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｂｏｎｅ  Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ  Ｒａｔ）」，Ｂｏｎｅ  ２３：Ｓ２１９（１９９８）参照）。
【００１４】
αｖβ３インテグリン受容体は、その同源の基質および細胞表面グリコプロテインにおいてＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）トリペプチド配列を認識する（Ｊ．Ｓａｍａｎｅｎら，「インテグリンαｖ拮抗物質についての血管適応（Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  αｖ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｄｅｓｉｇｎ  ３：５４５−５８４（１９９７）参照）。ベンズアゼピン核は、中でも、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  ａｎｄ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍにより、Ｎ末端がへテロ環式アルギニン擬似体で置換されている非ペプチドαｖβ３インテグリン受容体拮抗物質を合成するための立体配座拘束Ｇｌｙ−Ａｓｐ擬似体として用いられている（Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，「効力ある非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）拮抗物質の開発（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（αｖβ３）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：２２８９−２２９２（１９９７）；Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，「１，４−ベンゾジアゼピン非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）拮抗物質におけるアルギニン擬似体としてのベンズイミダゾール誘導体（Ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  Ａｓ  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ  ｉｎ  １，４−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（αｖβ３）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：３１６５−３１７０（１９９８）；およびＲ．Ｍ．Ｋｅｅｎｅら，「再狭窄モデルにおいて効能を有するイミダゾピリジン含有１，４−ベンゾジアゼピン非ペプチドビトロネクチン受容体（αｖβ３）拮抗物質の発見（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎ  Ｉｍｉｄａｚｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  １，４−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（αｖβ３）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ  Ｍｏｄｅｌ）」，Ｂｉｏｏｒｇ，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：３１７１−３１７６（１９９８）参照）。こうしたベンズアゼピン、ならびに関連ベンゾジアゼピンおよびベンゾシクロヘプテン、αｖβ３インテグリン受容体を開示している、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍに譲渡された特許には、国際公開公報第９６／００５７４号、同第９６／００７３０号、同第９６／０６０８７号、同第９６／２６１９０号、同第９７／２４１１９号、同第９７／２４１２２号、同第９７／２４１２４号、同第９８／１４１９２号、同第９８／１５２７８号、同第９９／０５１０７号、同第９９／０６０４９号、同第９９／１５１７０号、同第９９／１５１７８号、同第９９／１５５０６号および米国特許第６，１５９，９６４号が挙げられ、また、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに譲渡されたものには、国際公開公報第９７／３４８６５号が挙げられる。ジベンゾシクロヘプテン、ジベンゾシクロヘプタンおよびジベンゾキサゼピン骨格も、αｖβ３拮抗物質を生じるためのＧｌｙ−Ａｓｐ擬似体として���いることができる（国際公開公報第９７／０１５４０号、同第９８／３０５４２号、同第９９／１１６２６号、同第９９／１５５０８号、同第００／３３８３８号、米国特許第６，００８，２１３号および同第６，０６９，１５８号参照。これらは、すべて、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍに譲渡された特許である）。
【００１５】
立体配座的に環が拘束されている骨格が組み込まれている他のインテグリン受容体拮抗物質が、特許文献に記載されている。フェニルが拘束されている拮抗物質を開示している公開特許出願または発行特許には、国際公開公報第９８／００３９５号、同第９９／３２４５７号、同第９９／３７６２１号、同第９９／４４９９４号、同第９９／４５９２７号、同第９９／５２８７２号、同第９９／５２８７９号、同第９９／５２８９６号、同第００／０６１６９号、欧州特許第０８２０，９８８号、同第０８２０，９９１号、米国特許第５，７４１，７９６号、同第５，７７３，６４４号、同第５，７７３，６４６号、同第５，８４３，９０６号、同第５，８５２，２１０号、同第５，９２９，１２０号、同第５，９５２，３８１号、同第６，０２８，２２３号および同第６，０４０，３１１号が挙げられる。単環式の環が拘束されている拮抗物質を開示している公開特許出願および発行特許には、国際公開公報第９９／２６９４５号、同第９９／３０７０９号、同第９９／３０７１３号、同第９９／３１０９９号、同第９９／５９９９２号、同第００／００４８６号、同第００／０９５０３号、欧州特許第０７９６，８５５号、同第０９２８，７９０号、同第０９２８，７９３号、米国特許第５，７１０，１５９号、同第５，７２３，４８０号、同第５，９８１，５４６号、同第６，０１７，９２６号および同第６，０６６，６４８号が挙げられる。二環式の環が拘束されている拮抗物質を開示している公開特許出願および発行特許には、国際公開公報第９８／２３６０８号、同第９８／３５９４９号、同第９９／３３７９８号、欧州特許第０８５３，０８４号、米国特許第５，７６０，０２８号、同第５，９１９，７９２号および同第５，９２５，６５５号が挙げられる。
【００１６】
αｖインテグリン拮抗物質に関するさらなる科学文献および特許文献については以下のレビューにも言及しておく：Ｍ．Ｅ．Ｄｕｇｇａｎら，「インテグリン受容体αｖβ３のリガンド（Ｌｉｇａｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  αｖβ３）」，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１０：１３６７−１３８３（２０００）；Ｍ．Ｇｏｗｅｎら，「骨粗鬆症のための新療法（Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）」，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，５：１−４３（２０００）；Ｊ．Ｓ．Ｋｅｒｒら，「小分子αｖインテグリン拮抗物質：新規抗癌剤（Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  αｖ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ）」，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，９：１２７１−１２９１（２０００）；およびＷ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒら，「インテグリンαｖβ３（ビトロネクチン受容体）の小分子拮抗物質の同定およびインビボでの効能（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  αｖβ３（ｔｈｅ  ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，５：３９７−４０８（２０００）。
【００１７】
しかし、すでに記載されている化合物を越える改善された効力、薬力学的特性および薬物動態学的特性（経口バイオアベイラビリティおよび作用持続など）を示す小分子、非ペプチド選択的αｖインテグリン受容体拮抗物質は、未だ必要とされている。こうした化合物は、αｖインテグリン受容体の結合ならびに細胞の付着および活性化により媒介される、上に列挙した様々な病状の治療、予防または抑制を強化する。
【００１８】
国際公開公報第００／４８６０３号（２０００年８月２４日）および国際公開公報第００／４６２１５号（２０００年８月１０日）において、本発明者らは、αｖインテグリン受容体拮抗物質である一連のジベンズアゼピン誘導体およびベンズアゼピン誘導体をそれぞれ開示している。本発明には、効力あるαｖインテグリン受容体拮抗特性を有する新規ベンズアゼピノン誘導体を記載する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
従って、本発明の目的は、αｖインテグリン受容体拮抗物質として有用である新規ベンズアゼピノン誘導体を提供することである。
【００２０】
本発明のもう一つの目的は、αｖβ３受容体拮抗物質として有用である新規ベンズアゼピノン誘導体を提供することである。
【００２１】
本発明のもう一つの目的は、αｖβ５受容体拮抗物質として有用である新規ベンズアゼピノン誘導体を提供することである。
【００２２】
本発明のもう一つの目的は、αｖβ３／αｖβ５受容体二重拮抗物質として有用である新規ベンズアゼピノン誘導体を提供することである。
【００２３】
本発明のもう一つの目的は、αｖインテグリン受容体拮抗物質を含む医薬組成物を提供することである。
【００２４】
本発明のもう一つの目的は、本発明の医薬組成物を製造するための方法を提供することである。
【００２５】
本発明のもう一つの目的は、本発明の化合物および本発明の化合物を含有する医薬組成物を投与することにより、その必要がある哺乳動物においてαｖインテグリン受容体拮抗作用を惹起するための方法を提供する。
【００２６】
本発明のもう一つの目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、癌および転移性腫瘍増殖の抑制に有用な化合物および前記化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００２７】
本発明のもう一つの目的は、骨粗鬆症の治療に有用な化合物および前記化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００２８】
本発明のもう一つの目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、癌および転移性腫瘍増殖を抑制するための方法を提供することである。
【００２９】
本発明のもう一つの目的は、骨粗鬆症を治療するための方法を提供することである。
【００３０】
これらおよび他の目的は、後に続く詳細な説明によって容易に明らかになる。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
本発明は、下記構造式Ｉ：
【００３２】
【化１】
2004528373.tif 000002
の化合物またはそれらの医薬適合性の塩またはエステルに関する。
【００３３】
本発明は、前記本発明の化合物および医薬適合性の担体を含む医薬組成物にも関する。
【００３４】
本発明は、前記本発明の化合物を含む医薬組成物を製造するための方法にも関する。
【００３５】
本発明は、前記本発明の化合物および前記本発明の化合物を含有する医薬組成物を投与することをにより、その必要がある哺乳動物においてαｖインテグリン受容体拮抗作用を惹起するための方法にも関する。
【００３６】
本発明は、前記本発明の化合物および前記本発明の化合物を含有する医薬組成物を投与することによる、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、癌および転移性腫瘍増殖を抑制するための方法にも関する。
【００３７】
本発明は、前記本発明の化合物および前記本発明の化合物を含有する医薬組成物を投与することによる、骨粗鬆症を治療するための方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
本発明は、下記構造式Ｉ：
【００３９】
【化２】
2004528373.tif 000003
［式中、
Ｘは、下記：
【００４０】
【化３】
2004528373.tif 000004
（この式中、
芳香族環の炭素原子は、非置換であるかまたは一つのＲ２置換基で置換されており、非芳香族環の炭素原子は、非置換であるかまたは一つまたは二つのＲ２置換基で置換されており；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびＣ３〜６シクロアルキルから成る群より選択され；または二つのＲ２置換基は、同じ非芳香族環の炭素原子上にある時、それらが結合している炭素原子と一緒に、シクロプロピル基を形成すると考えられ；
Ｒ１が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、ならびに
Ｒ３およびＲ４は、各々、独自に、水素またはＣ１〜４アルキルである）
から成る群より選択される］
の化合物またはそれらの医薬適合性の塩を含む。
【００４１】
本発明の一定の実施形態において、本化合物は、アスタリスクがついている、立体異性体を生じる炭素原子が（Ｓ）指定の立体化学を有する、下記式ＩＩ：
【００４２】
【化４】
2004528373.tif 000005
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上に記載したとおりである）
に該当する。
【００４３】
αｖインテグリン受容体拮抗物質として有用な本発明の化合物の実例（限定例ではない）は、下記：
【００４４】
【化５】
2004528373.tif 000006
2004528373.tif 000007
またはそれらの医薬適合性の塩である。
【００４５】
医薬品に使用するため、本発明の化合物の塩は、非毒性の「医薬適合性の塩」に当てはまる。しかしながら、本発明の化合物またはそれらの医薬適合性の塩の調製には、他の塩も有用であることがある。用語「医薬適合性の塩」の範囲に包含される「塩基性化合物の塩」は、本発明の化合物の非毒性塩を指し、一般には、遊離塩基を適する有機または無機酸と反応させることによって調製される。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボネート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクリン酸塩、トシル酸塩、トリエチオダイドおよび吉草酸塩。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、本発明の化合物の適する医薬適合性の塩には、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、第二マンガン塩、第一マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩などを含む無機塩基から誘導された塩が挙げられるが、これらに限定されない。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩が、特に好ましい。医薬適合性有機非毒性塩基から誘導される塩には、第一アミン、第二アミン、第三アミン、環状アミンの塩および塩基性イオン交換樹脂（アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、２−メチル−２−アミノ−１−プロパノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンおよびこれらに類するものなど）が挙げられる。
【００４６】
本発明の化合物は、キラル中心を有し、それ故、ラセミ体、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして生じうり、すべての異性体形が、本発明に包含される。従って、化合物がキラルである場合、実質的に他の異性体形がない単独のエナンチオマーおよびジアステレオマーは、本発明の範囲に包含され、さらに、二つのエナンチオマーのすべての混合物が、包含される。
【００４７】
本明細書に記載されている化合物の一部は、オレフィン性二重結合を含み、特に指定が無い限り、ＥとＺ、両方の幾何異性体を含むという意味を持つ。
【００４８】
本明細書に記載されている化合物の一部は、互変異性体と呼ばれる、水素の結合点が異なる異性体形で存在しうる。こうしたものの例は、ケトンおよびそのエノール形であり、これらは、ケト−エノール互変異性体として知られている。個々の互変異性体ならびにそれらの混合物は、本発明の化合物の中に包含される。
【００４９】
本発明の化合物は、例えば、適する溶媒（例えば、メタノールもしくは酢酸エチルまたはそれらの混合物）からの分別結晶によって、エナンチオマーのジアステレオマーペアに分けることができる。こうして得られたエナンチオマーのペアは、通常の手段、例えば、分割剤として光学活性酸を使用することによって、またはキラル固定相を用いるＨＰＬＣによって、個々の立体異性体に分けることができる。あるいは、本発明のいずれのエナンチオマーも、光学的に純粋な出発原料または立体配置がわかっている試薬を使用する立体特異的合成によって得ることができる。
【００５０】
本発明の化合物の多形および溶媒和化合物（水和物など）も、本発明の範囲に包含される。
【００５１】
本発明は、本発明の化合物のプロドラッグをその範囲に包含する。一般に、こうしたプロドラッグは、求められている化合物にインビボで容易に転化する本発明の化合物の官能性誘導体である。それ故、本発明の治療法において、用語「投与する」は、特定的に開示されている化合物で、または具体的に開示されていないこともあるが、患者への投与後にインビボで特定の化合物に転化する化合物で、記載されている様々な症状を治療することを包含するものとする。適するプロドラッグ誘導体を選択および調製するための通常の手順は、例えば、「プロドラッグの設計（Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇ）」，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。この文献は、全文、本明細書に参照して組み込まれる。これらの化合物の代謝産物には、本発明の化合物を生物学的環境に導入すると生じる活性種が含まれる。
【００５２】
用語「治療有効量」は、研究者または臨床医によって探求される、組織、系、動物または人間の生物学的応答または医学的応答を惹起する薬物または薬剤の量を意味するものとする。
【００５３】
本明細書中で用いられる場合、用語「αｖインテグリン受容体」は、αｖβ３受容体もしくはαｖβ５受容体のいずれかに結合および拮抗する化合物、またはこれらの受容体を組み合わせたものに結合および拮抗する化合物（例えば、αｖβ３／αｖβ５受容体二重拮抗物質）を指す。
【００５４】
本明細書中で用いられる場合、用語「骨吸収」は、破骨細胞が骨を分解するプロセスを指す。
【００５５】
本発明の化合物は、αｖインテグリン受容体、特に、αｖβ３受容体およびαｖβ５受容体にマイクロモル未満の親和性を示す。従って、本発明の化合物は、骨吸収の増大によって生じたまたは媒介された骨の症状に苦しむ、そうした治療が必要な哺乳動物の治療に有用である。薬理学的有効量の本化合物（その医薬適合性の塩を含む）を哺乳動物に投与して、哺乳動物の破骨細胞の活性を抑制する。
【００５６】
本発明の化合物は、そうした治療が、例えば骨粗鬆症の予防または治療の際などに必要である場合、αｖβ３受容体に拮抗するために有効な投薬量で投与される。
【００５７】
本発明の実例として、αｖインテグリン受容体拮抗作用がαｖβ３拮抗作用である方法が、挙げられる。より詳細には、前記αｖβ３拮抗作用は、骨吸収の抑制、再狭窄の抑制、新脈管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、癌の抑制および転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。本方法の一つの実施形態において、αｖβ３拮抗作用は、骨吸収の抑制である。
【００５８】
本発明のもう一つの例は、αｖインテグリン受容体拮抗作用がαｖβ５拮抗作用である方法である。より詳細には、前記αｖβ５拮抗作用は、再狭窄の抑制、新脈管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、癌の抑制および転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。
【００５９】
さらに、本発明の実例として、αｖインテグリン受容体拮抗作用がαｖβ３／αｖβ５二重拮抗作用である方法が、挙げられる。より詳細には、前記αｖβ３／αｖβ５二重拮抗作用は、骨吸収の抑制、再狭窄の抑制、新脈管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、癌の抑制および転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。
【００６０】
さらに特に本発明の実例として、本発明の化合物および医薬適合性の担体を含む医薬組成物が、挙げられる。本発明のもう一つの例は、上記化合物と医薬適合性の担体を併用することによって製造される医薬組成物である。本発明のもう一つの実例は、上記化合物と医薬適合性の担体を含む医薬組成物を製造するための方法である。
【００６１】
さらに、本発明の実例として、治療有効量の上記化合物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物において、αｖインテグリン受容体の拮抗作用によって媒介された症状を治療および／または予防する方法が、挙げられる。好ましくは、前記症状は、骨吸収、骨粗鬆症、再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、新脈管形成、アテローム性動脈硬化症、炎症性関節炎、癌、腫瘍増殖および転移から選択される。さらに好ましくは、前記症状は、骨粗鬆症および癌から選択される。最も好ましくは、前記症状は、骨粗鬆症である。
【００６２】
さらに具体的には、本発明の例として、治療有効量の本化合物または上に記載したいずれかの本医薬組成物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物においてαｖインテグリン拮抗作用を惹起する方法が、挙げられる。好ましくは、前記αｖインテグリン拮抗作用は、αｖβ３拮抗作用であり、さらに具体的には、前記αｖβ３拮抗作用は、骨吸収の抑制、再狭窄の抑制、アテローム性動脈硬化症の抑制、新脈管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、癌または転移性腫瘍増殖の抑制から選択される。最も好ましくは、前記αｖβ３拮抗作用は、骨吸収の抑制である。あるいは、前記αｖインテグリン拮抗作用は、αｖβ５拮抗作用またはαｖβ３／αｖβ５二重拮抗作用である。αｖβ５拮抗作用の例は、再狭窄の抑制、アテローム性動脈硬化症の抑制、新脈管形成の抑制、糖尿病性網膜症の抑制、黄斑変性の抑制、炎症性関節炎の抑制、癌の抑制および転移性腫瘍増殖の抑制である。
【００６３】
本発明のさらなる例は、治療有効量の本化合物または上に記載したいずれかの本医薬組成物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物において、骨吸収を抑制する方法ならびに骨粗鬆症を治療および／または予防する方法である。
【００６４】
本発明のさらなる実例は、治療有効量の本化合物または上に記載したいずれかの本医薬組成物を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物にいおて、悪性高カルシウム血症、骨転移に起因する骨減少症、歯周病、副甲状腺機能亢進、リウマチ様関節炎における関節周囲の侵食症、パジェット病、固定により誘発される骨減少症を治療する方法、およびグルココルチコイド治療の方法である。
【００６５】
さらに特に、本発明の実例として、その必要がある哺乳動物において骨粗鬆症を治療および／または予防するための医薬品の調製における上記化合物の使用が、挙げられる。さらになお、本発明の実例として、骨吸収、転移性腫瘍増殖、癌、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎および／または新脈管形成を治療および／または予防するための医薬品の調製における上記化合物の使用が、挙げられる。
【００６６】
ａ）有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレータ、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレータ、
ｄ）細胞毒／増殖抑制剤、
ｅ）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、
ｆ）上皮由来、線維芽由来または血小板由来の成長因子の阻害剤、
ｇ）ＶＥＧＦの阻害剤、
ｈ）成長因子に対するまたは成長因子受容体に対する抗体、
ｉ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１の阻害剤、
ｊ）カテプシンＫ阻害剤、
ｋ）成長ホルモン分泌促進物質、
ｌ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼの阻害剤、
ｍ）ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕ−ＰＡ）の阻害剤、
ｎ）腫瘍特異的抗体−インターロイキン−２融合蛋白質、
ｏ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤、
ｐ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤またはゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシル／ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ二重阻害剤、および
ｑ）副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）類似体、
ならびにこれらの混合物から成る群より選択された有効成分をさらに含む組成物も、本発明の例である（Ｂ．Ｍｉｌｌａｕｅｒら，「Ｆｌｋ−１の陰性優勢の抑制は、インビボで多くの腫瘍タイプの増殖を抑制する（Ｄｏｍｉｎａｎｔ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＬＫ−１  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｈｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｍａｎｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔｙｐｅｓ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ）」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５６，１６１５−１６２０（１９９６）参照。この論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる）。
【００６７】
好ましくは、前記有効成分は、
ａ）有機ビスホスホネートまたはその医薬適合性の塩もしくはエステル、
ｂ）エストロゲン受容体モジュレータ、
ｃ）アンドロゲン受容体モジュレータ、
ｄ）破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼの阻害剤、
ｅ）副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）類似体、および
ｆ）カテプシンＫ阻害剤、
ならびにこれらの混合物から成る群より選択される。
【００６８】
上記ビスホスホネートの非限定的な例には、アレンドロネート、シマドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、パミドロネート、ピリドロネート、リセドロネート、チルドロネートおよびゾレンドロネート、ならびにそれらの医薬適合性の塩およびエステルが挙げられる。特に好ましいビスホスホネートは、アレンドロネート、とりわけ、アレンドロン酸１ナトリウム３水和物である。
【００６９】
エストロゲン受容体モジュレータの非限定的な例には、エストロゲン、プロゲステリン、エストラジオール、ドロロキシフェン、ラロキシフェンおよびタモキシフェンが挙げられる。
【００７０】
細胞毒／増殖抑制剤の非限定的な例は、タキソール、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびドキソルビシンである。
【００７１】
正式にはカテプシンＯ２として知られているカテプシンＫは、システインプロテアーゼであり、１９９６年５月９日公開のＰＣＴ国際出願公開公報番号第９６／１３５２３号；１９９６年３月３日発行の米国特許第５，５０１，９６９号；および１９９８年４月７日発行の米国特許第５，７３６，３５７号に記載されている。これらの特許は、全文、本明細書に参照して組み込まれる。システインプロテアーゼ、特にカテプシンは、腫瘍転移、炎症、関節炎および骨リモデリングなどの多数の疾病状態に関連づけられている。酸性ｐＨで、カテプシンは、Ｉ型コラーゲンを分解することができる。カテプシンプロテアーゼ阻害剤は、コラーゲン線維の分解を抑制することにより、破骨細胞性骨吸収を抑制することができ、それ故、骨粗鬆症などの骨吸収疾患の治療に有用である。
【００７２】
「スタチン」として知られている、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤類の構成員は、骨粗鬆症の結果として失われた骨量に代わる新しい骨を成長させる引き金となることが見出された（Ｔｈｅ  Ｗａｌｌ  Ｓｔｒｅｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９９年１２月３日金曜日、頁Ｂ１参照）。従って、スタチンは、骨吸収の治療に期待がもてる。スタチンの非限定的な例は、ロバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチンおよびロスバスタチンである。
【００７３】
新脈管形成、腫瘍浸潤、炎症、ならびに創傷治癒および発育中の基質リモデリングにおけるウロキナーゼ−ウロキナーゼ受容体（ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ）の非常に重要な役割の証拠が、呈示されている［Ｙ．Ｋｏｓｈｅｌｎｉｃｋら，「ウロキナーゼ受容体によるシグナリングおよびその細胞応答のメカニズム（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ８２：３０５−３１１（１９９９）、およびＦ．Ｂｌａｓｉ，「蛋白質加水分解、細胞接着、走化性および浸潤は、ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ−ＰＡＩ−１系によって調節される（Ｐｒｏｔｅｌｏｙｓｉｓ，Ｃｅｌｌ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ，Ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ，ａｎｄ  Ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ  Ａｒｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ−ＰＡＩ−１  ｓｙｓｔｅｍ）」，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ８２：２９８−３０４（１９９９）参照］。それ故、ｕ−ＰＡＲへのｕ−ＰＡの結合に対して特異的な拮抗物質は、インビトロモデルとインビボモデルの両方において、細胞表面プラスミノーゲン活性化、腫瘍増殖および新脈管形成を抑制する。
【００７４】
Ｈ．Ｎ．Ｌｏｄｅおよび共同研究者は、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９６：１５９１−１５９６（１９９９）で、自発的腫瘍転移の根絶における抗脈管形成性αｖインテグリン拮抗物質と腫瘍特異的抗体−サイトカイン（インターロイキン−２）融合蛋白質との間の相乗作用を観察した。彼らの結果は、この組合せが、癌および転移性腫瘍増殖の治療の可能性を有することを示唆していた。
【００７５】
破骨細胞の頂端膜上に見出されるプロトンＡＴＰアーゼは、骨吸収プロセスにおいて有意な役割を果たすことが報告されている。従って、このプロトンポンプは、骨粗鬆症および関連代謝性疾患の治療および予防に有用である可能性を秘めている骨吸収抑制剤を設計するための魅力的なターゲットである（Ｃ．Ｆａｒｉｎａら，「新規骨吸収防止剤としての破骨細胞空胞性プロトンＡＴＰアーゼの選択的阻害剤（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｖａｃｕｏｌａｒ  ｐｒｏｔｏｎ  ＡＴＰａｓｅ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｂｏｎｅ  ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ」，ＤＤＴ，４：１６３−１７２（１９９９）参照）。
【００７６】
アンドロゲンステロイドが、男性および女性の骨量の成長おいて生理学的役割を果たす証拠、ならびにアンドロゲンが、骨に直接作用する証拠は、呈示されている。アンドロゲン受容体は、ヒト骨芽細胞様細胞系において証明され、アンドロゲンは、骨細胞の増殖および分化を直接刺激することが確認されている。考察については、Ｓ．Ｒ．Ｄａｖｉｓ，「女性におけるアンドロゲンの治療的使用（Ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｓ  ｉｎ  ｗｏｍａｎ）」，Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６９：１７７−１８４（１９９９）およびＫ．Ａ．Ｈａｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｓ．Ｐ．Ｔ．Ｔｈｏ，「アンドロゲンおよび骨の健康（Ａｎｄｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｎｅ  Ｈｅａｌｔｈ）」，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１６：１２９−１３４（１９９８）を参照する。それ故、アンドロゲン受容体モジュレータは、ヒトの骨量減少の治療および予防に有用でありうる。
【００７７】
血管新生因子ＶＥＧＦが、破骨細胞上のその受容体と結合することにより、単離成熟ウサギ破骨細胞の骨吸収活性を刺激することは確認されている（Ｍ．Ｎａｋａｇａｗａら，「血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）は、破骨細胞性骨吸収および成熟破骨細胞の生残を直接増進する（Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｉｃ  ｂｏｎｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｍａｔｕｒｅ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ」，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ，４７３：１６１−１６４（２０００）参照）。従って、ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１およびＦｌｔ−１などの破骨細胞受容体に結合するＶＥＧＦの拮抗物質の開発によって、骨吸収の治療および予防へのさらなるアプローチをさらに提供することができる。
【００７８】
チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）などのペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）の活性化によって、破骨細胞様細胞形成および骨吸収がインビトロで抑制される。Ｒ．ＯｋａｚａｋｉらがＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４０，５０６０−５０６５ページ（１９９９）で報告した結果は、骨髄細胞に関する局所的メカニズムならびにグルコース代謝に関する全身性メカニズムを指摘している。ＰＰＡＲγ活性化因子の非限定的な例には、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびＢＲＬ  ４９６５３が挙げられる。
【００７９】
骨粗鬆症の治療のための副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の使用が、当該技術分野において提唱された。ＰＴＨは、骨芽細胞（骨を形成する細胞）の活性を増大させ、その結果、新しい骨の合成を促進することが判明した（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，第３巻，Ｎｏ．８，２０００）。２０００年６月にシカゴで開催された骨粗鬆症に関する第一回世界会議（ｔｈｅ  Ｆｉｒｓｔ  Ｗｏｒｌｄ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｎ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）で報告された研究において、女性は、ＰＴＨ−エストロゲン併用療法で、脊柱の骨量の１２．８％増加および股関節全質量の４．４％増加を示した。同会議において呈示されたもう一つの研究により、ＰＴＨは、骨のサイズならびに密度を増加させうることが示された。閉経後の骨粗鬆症の女性に対するヒト副甲状腺ホルモン１〜３４フラグメント［ｈＰＴＨ（１〜３４）］の効果についての臨床試験は、２２ヶ月（中央値）の治療後、脊柱骨折で６５％以上の減少、および脊柱以外の骨折で５４％の減少という結果であった［Ｊ．Ｍ．Ｈｏｃｋ，Ｂｏｎｅ，２７：４６７−４６９（２０００）およびＳ．Ｍｏｈａｎら，Ｂｏｎｅ，２７：４７１−４７８（２０００）、ならびにこれらの文献中に引用されている参考文献参照］。それ故、ＰＴＨおよびそのフラグメント［ｈＰＴＨ（１〜３４）など］は、単独で、または他の薬剤（本発明のαｖβ３インテグリン拮抗物質など）と併用で、骨粗鬆症の治療において効能があることがわかる。
【００８０】
本発明は、本発明の化合物と、骨粗鬆症の予防または治療に有用な一つ以上の薬剤との併用にも関する。例えば、本発明の化合物は、有効量の他の薬剤（有機ビスホスホネート、エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、カテプシンＫ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＰＰＡＲγ活性化因子、ＶＥＧＦ受容体拮抗物質、破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼ阻害剤、またはＰＴＨ類似体など）との併用で、有効に投与することができる。
【００８１】
本発明のさらなる実例は、治療有効量の上記化合物および細胞毒性／増殖抑制性であることが知わかっている一つ以上の薬剤を哺乳動物に投与することを含む、その必要がある哺乳動物において癌または転移性腫瘍増殖を治療する方法である。また、本発明の化合物は、癌および転移性腫瘍増殖を治療するために放射線療法と組合せて投与することができる。
【００８２】
加えて、本発明のインテグリンαｖβ３拮抗物質は、カルシウムまたはリン酸塩代謝障害ならびに関連疾病の治療的または予防的治療において、成長ホルモン分泌促進物質を併用して有効に投与することができる。これらの疾病には、骨吸収の低下により恩恵を受ける症状が含まれる。骨吸収の低下は、吸収と形成の間のバランスを改善し、骨量減少を低下させるか、骨の増加をもたらす。骨吸収を低下させることによって、溶骨性病変に随伴する疼痛を緩和し、これらの病変の発生率および／または増大を低減することができる。これらの疾病には、骨粗鬆症（エストロゲン不全、固定化、グルココルチコイド誘発性のものおよび老人性のものを含む）、骨形成異常、パジェット病、骨化性筋炎、ベヒテフ病、悪性高カルシウム血症、代謝性骨疾患、歯周病、胆石症、腎石症、尿石症、動脈の硬化（硬化症）、関節炎、滑液包炎、神経炎およびテタニーが挙げられる。骨吸収の増加は、病理学的に高い、血漿中カルシウムおよびリン酸塩濃度を随伴しうる。それらは、この治療によって緩和される。同様に、本発明は、成長ホルモン不全の患者における骨量の増加に有用である。それ故、本発明のαｖβ３受容体拮抗物質と成長ホルモン分泌促進物質との同時または交替治療（有機ビスホスホネート、好ましくはアレンドロン酸１ナトリウム３水和物を含む第三成分を場合によっては含む）は、好ましい併用である。
【００８３】
本発明の方法によると、併用される個々の成分は、治療過程おける異なる時点で別々に投与してもよいし、または分割されたもしくは単一の併用形態で同時に投与してもよい。従って、本発明は、こうした同時治療方式または交替治療方式すべてを包含するものとご理解いただきたく、また、用語「投与する」は、それに応じて解釈していただきたい。本発明の化合物と、インテグリンによって媒介される症状の治療に有用な他の薬剤との併用範囲は、原則として、骨粗鬆症の治療に有用なあらゆる医薬組成物とのあらゆる併用を包含するもの理解されよう。
【００８４】
本明細書中で用いられる場合、用語「組成物」は、指定の化合物を指定の量含む製品、ならびに指定の成分を指定の量で併用することによって直接的または間接的に生じるあらゆる製品を包含するものとする。
【００８５】
本発明の化合物は、錠剤、カプセル（これらは、各々、持続放出性または持効性調合物を含む）、ピル、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ、懸濁液、シロップおよびエマルジョンなどの経口剤形で投与することができる。同様に、静脈内投与（ボーラスまたは注入）形態、腹腔内投与形態、局所投与形態（例えば、点眼液）、皮下投与形態、筋肉内投与形態または経皮投与形態（例えば、パッチ）で投与することもでき、これらの使用形態は、すべて、製薬技術分野の通常の技術者によく知られている。有効だが非毒性の量の所望される本化合物をαｖβ３拮抗物質として用いることができる。
【００８６】
本発明の化合物を用いる薬剤投与計画は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および診療状況；治療を受ける症状の重篤度；投与経路；患者の腎および肝機能；ならびに用いられる個々の化合物またはその塩を含む様々な因子に従って選択される。通常の熟練医師、獣医または臨床医は、その症状の進行を予防、阻止または停止させるために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【００８７】
示した効果のために用いる際の本発明の経口投薬量は、体重１ｋｇあたり１日約０．０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の間、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、および最も好ましくは０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。経口投与のための本組成物は、治療を受ける患者への投薬量をその症候に基づき調節するために、０．０１ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．５ｍｇ、５．０ｍｇ、１０．０ｍｇ、１５．０ｍｇ、２５．０ｍｇ、５０．０ｍｇ、１００ｍｇおよび５００ｍｇの有効成分を含有する錠剤の形態で提供される。一つの医薬品は、典型的には約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇの有効成分、好ましくは約１ｍｇ〜約１００ｍｇの有効成分を含有する。静脈投与に最も好ましい用量は、定速注入の間、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲である。有利なことに、本発明の化合物は、１日１回量で投与することができ、または全日用量を１日２、３または４回の分割量で投与することができる。さらに、本発明の化合物は、適する鼻腔内投与用ビヒクルの局所使用によって、または通常の当業者によく知られている経皮パッチの形態を用いる経皮経路によって、鼻腔内投与形態で投与することができる。経皮送達系形態で投与するための投薬は、勿論、その薬剤投与計画を通して間欠的ではなく継続的なものである。
【００８８】
本発明の方法において、本明細書に詳細に記載している化合物は、有効成分であり、また、意図する投与形態（すなわち、経口用錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなど）を基準にして適切に選択され、通常の製薬の実施に矛盾しない、適する製薬用希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では、総して「担体」と呼ぶ）との混合剤で典型的には投与される。
【００８９】
例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与のための活性薬成分は、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸２カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールおよびこれらに類するものなどの経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併用することができ；液体形態で経口投与するための経口薬成分は、エタノール、グリセロール、水およびこれらに類するものなどのあらゆる経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併用することができる。さらに、所望されるまたは必要な際には、適する結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤もその混合物に配合することができる。適する結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβ−ラクトースなど）、コーンスターチ、天然および合成ゴム（アラビアゴム、トラガカントゴムまたはアルギン酸ナトリウムなど）カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、蝋などが挙げられる。これらの剤形で用いられる潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
本発明の化合物は、小さな単層胞、大きな単層胞および多層胞などのリポソーム送達系の形態でも投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【００９１】
本発明の化合物は、本化合物分子とカップリングさせる個々の担体としてモノクローナル抗体を用いることにより、送達することもできる。本発明の化合物は、目標を定めることができる薬物担体としての可溶性ポリマーとカップリングさせることもできる。こうしたポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルタミド−フェノール、またはポリエチレンオキシド−（パルミトイル残基で置換されているポリリシン）を挙げることができる。さらに、本発明の化合物は、薬物の制御放出の達成に有用な種類の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリε−カプロラクタム、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーにカップリングさせることができる。
【００９２】
下の図式および実施例における様々な試薬の記号および略記は、次の意味を有する：
ＡｃＯＨ：酢酸
Ａｒ：アルゴン
９−ＢＢＮ：９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン
ＢＯＣ（Ｂｏｃ）：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＣＢＺ（Ｃｂｚ）：カルボベンジルオキシまたはベンジルオキシカルボニル
ＣＨ２Ｃｌ２：塩化メチレン
ＣＨ３ＣＮ：アセトニトリル
ＣＨＣｌ３：クロロホルム
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＦ：１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミン
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｇＳＯ４：硫酸マグネシウム
ＮＥｔ３：トリエチルアミン
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
Ｐｄ／Ｃ：活性炭担持パラジウム触媒
ＰＰｈ３：トリフェニルホスフィン
Ｐｈ：フェニル
ＲＴ：室温
ｐＴＳＡ：ｐ−トルエンスルホン酸
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
構造式Ｉの化合物は、下の図式および実施例で詳述する手順によって調製することができる。下記調製手順の条件および方法の既知変形を利用して本化合物を調製できることは、当業者には容易にご理解いただけよう。別様に述べられていない限り、すべての操作は、室温または周囲温度で行った。また、すべての温度は、摂氏度（℃）である。
【実施例１】
【００９３】
【化６】
2004528373.tif 000008
【００９４】
【化７】
2004528373.tif 000009
段階Ａ：（４Ｓ）−３−オキソ−８−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エトキシ］−２−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−２−ベンズアゼピン−４−酢酸メチル（１−３）
９：１のＴＨＦ／ＤＭＦ（５ｍＬ）中の１−１（０．２１６ｇ、１．２１ｍｍｏｌ；国際公開公報第９９／４５９２７号に記載されているとおり調製したもの）、１−２（０．４０ｇ、１．２１ｍｍｏｌ；国際公開公報第９８／１４１９２号に記載されているとおり調製したもの）およびトリフェニルホスフィン（０．３８ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）（０．２８５ｍＬ、１．４５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。その混合物を放置して周囲温度に温め、１５時間攪拌し、その後、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（０％〜５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）によって、１−３を無色の油として生じた（７０ｍｇ）。
【００９５】
質量スペクトル：Ｃ２５Ｈ２８Ｆ３Ｎ３Ｏ４についての計算値：４９１．２；実測値：４９２．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００９６】
段階Ｂ：（４Ｓ）−３−オキソ−８−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エトキシ］−２−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−２−ベンズアゼピン−４−酢酸（１−４）
ジオキサン中の１−３の溶液（２ｍＬ）に、ＮａＯＨ（水中１Ｎのもの、０．６０ｍＬ）を添加した。３時間後、追加のＮａＯＨ溶液０．６ｍＬを添加した。さらに６時間後、ＨＣｌ（水中１Ｎのもの、１．２ｍＬ）を添加し、その混合物を濃縮乾固した。シリカゲルクロマトグラフィー（２０：１０：１：１から１０：１０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ）によって、１−４を無色の固体として生じた（６２ｍｇ）。
【００９７】
質量スペクトル：Ｃ２４Ｈ２６Ｆ３Ｎ３Ｏ４についての計算値：４７７．２；実測値：４７８．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００９８】
【化８】
2004528373.tif 000010
【実施例２】
【００９９】
【化９】
2004528373.tif 000011
【０１００】
【化１０】
2004528373.tif 000012
2004528373.tif 000013
トリフルオロメタンスルホン酸６−（メチルピリジン−３−イル）（２−２）
−７８℃で、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の２−メチル−５−ヒドロキシピリジン（２−１、５ｇ、４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍのもの、１８．３ｍＬ、４６ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加して、透明な溶液を生じた。その後、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（７．６９ｍＬ、４６ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加して、濃い赤色の溶液を生じた。０．２５時間後、１ＮのＮａＯＨを１００ｍＬ添加することによって、反応を停止させた。その混合物をエーテルで希釈し、分離して、有機部分を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させることによって、２−２を赤色の油として生じた（６．１ｇ）。
【０１０１】
【化１１】
2004528373.tif 000014
【０１０２】
２−（ブト−３−エニル）−イソインドール−１，３−ジオン（２−３）
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の４−ブロモ−１−ブテン（２０ｇ、１４８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、カリウムフタルイミド（２５ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を１８時間、７０℃で攪拌した。室温に冷却した後、混合物をエーテルで希釈し、水およびブラインで洗浄して、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、２−３を白色の固体として得た。
【０１０３】
【化１２】
2004528373.tif 000015
【０１０４】
２−［４−（６−メチルピリジン−３−イル）ブチル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２−４）
２−３（１２．７ｇ、６３．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ中の９−ＢＢＮの溶液（０．５Ｍ溶液を１３２ｍＬ、６５．８ｍｍｏｌ）を添加した。１５時間攪拌した後、炭酸カリウムの粉末（１４．５ｇ、１０５ｍｍｏｌ）および２−３（１２．７ｇ、５２．７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、この混合物に、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中でＰｄ（ＯＡｃ）２（１．７８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＦ（４．９６ｇ、８．９ｍｍｏｌ）を予め混合して脱気し熟成した（激しく攪拌しながら８０℃で３０分間）懸濁液をカニューレにより添加し、得られた混合物を、３０分間、アルゴンでのバブリングにより脱気した。その後、その混合物を７０℃で３時間加熱した。冷却後、混合物を減量して濃厚スラリーにし、エーテルで希釈して、水およびブラインで洗浄した。その有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、褐色の油を得た。この残留物をシリカゲル（４０％〜６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）でのクロマトグラフに付して、２−４（９．６ｇ）を黄色の固体として得た。
【０１０５】
【化１３】
2004528373.tif 000016
【０１０６】
４−（６−メチルピリジン−３−イル）ブタン−１−アミン（２−５）
２−４（７．２ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）、ヒドラジン（３．８ｍＬ）およびエタノール（５００ｍＬ）の混合物を、４時間、還流させながら加熱した。得られた混合物を冷却して、濾過し、濾液を濃縮して、多少フタルヒドラジンで汚染されている黄色の固体として２−５を得た（４．７ｇ）。
【０１０７】
【化１４】
2004528373.tif 000017
【０１０８】
２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン（２−６）
２−５（４．０２ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（鉱物油中６０％のもの２．９３ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）およびキシレン（１００ｍＬ）の混合物を３０分間攪拌して、アルゴンでパージし、その後、１３０℃で４日間加熱した。その混合物を１０％炭酸カリウムで失活させ、酢酸エチルで希釈して、ブラインで洗浄した。その有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。この残留物をシリカゲル（０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）でのクロマトグラフに付して、２−６（２．２ｇ）を黄色の固体として得た。
【０１０９】
【化１５】
2004528373.tif 000018
【０１１０】
その後、国際公開公報第９９／４５９２７号に開示されている１−１を調製するための手順を用いて、２−６を２−７に転化させた。その後、図式１に記載した１−１から１−４を調製するための方法を用いて、２−７を２−８に転化させた。
【０１１１】
［（４Ｓ）−３−オキソ−８−［２−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）エトキシ］−２−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−２−ベンズアゼピン−４−イル］酢酸（２−８）
【０１１２】
【化１６】
2004528373.tif 000019
【実施例３】
【０１１３】
【化１７】
2004528373.tif 000020
実施例３（化合物３−１３）は、図式３に概略するように調製する。
【０１１４】
【化１８】
2004528373.tif 000021
2004528373.tif 000022
2004528373.tif 000023
【実施例４】
【０１１５】
【化１９】
2004528373.tif 000024
実施例４（化合物４−７）は、図式４に概略するように調製する。
【０１１６】
【化２０】
2004528373.tif 000025
2004528373.tif 000026
【０１１７】
【化２１】
2004528373.tif 000027
2004528373.tif 000028
2004528373.tif 000029
2004528373.tif 000030
Ｎ−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−Ｌ−アスパラギン（Ａ−２）
０℃の酸Ａ−１（４．３９ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（１．４９ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）、ジオキサン（３０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（３０ｍＬ）の攪拌溶液に、塩化ピプシル（１０．３４ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を添加した。〜５分後、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）に溶解したＮａＯＨ（１．４９、３７．２ｍｍｏｌ）を添加し、その後、冷却浴を取外した。２．０時間後、その反応混合物を濃縮した。残留物をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）に溶解し、その後、ＥｔＯＡｃで洗浄した。その水性部分を０℃に冷却し、その後、濃ＨＣｌで酸性化した。固体を回収し、その後、Ｅｔ２Ｏで洗浄して、酸Ａ−２を白色の固体として生じた。
【０１１８】
【化２２】
2004528373.tif 000031
【０１１９】
２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−３）
０℃のＮａＯＨ（７．１４ｇ、１８１．８ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（４０ｍＬ）の攪拌溶液に、Ｂｒ２（１．３０ｍＬ、２４．９ｍｍｏｌ）を十分間かけてゆっくりと添加した。〜５分後、酸Ａ−２（９．９ｇ、２４．９ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（２．００ｇ、４９．８ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（３５ｍＬ）を併せ、０℃に冷却し、その後、その反応混合物に一回で添加した。０℃で２０分間攪拌した後、反応混合物を３０分間、９０℃に加熱し、その後、再び０℃に冷却した。濃ＨＣｌを一滴ずつ添加することによって、そのｐＨを〜７にした。固体を回収して、ＥｔＯＡｃで洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、酸Ａ−３を白色の固体として生じた。
【０１２０】
【化２３】
2004528373.tif 000032
【０１２１】
２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニンエチル・塩酸塩（Ａ−４）
０℃で、１０分間、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の酸Ａ−３（４．０ｇ、１０．８１ｍｍｏｌ）の懸濁液をＨＣｌガスで迅速にバブリングした。冷却浴を取外し、その反応混合物を６０℃に加熱した。１８時間後、反応混合物を濃縮して、エステルＡ−４を白色の固体をして生じた。
【０１２２】
【化２４】
2004528373.tif 000033
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸エチル（Ａ−５ａ）
エステルＡ−５（７００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）（調製については、米国特許第５，７４１，７９６号（１９９８年４月２１日）の図式２９（中間体２９−３）を参照）、１０％Ｐｄ／Ｃ（３５０ｍｇ）およびＥｔＯＨの混合物を、１気圧（Ｈ２）のもとで攪拌した。２０時間後、その反応混合物をセライトパッドに通して濾過し、その後、濃縮して、エステルＡ−５ａを褐色の油として生じた。
【０１２３】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２３（シリカ、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）
【０１２４】
【化２５】
2004528373.tif 000034
【０１２５】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸・塩酸塩（Ａ−６）
６ＮのＨＣｌ（１２ｍＬ）中のエステルＡ−５ａ（６２５ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の懸濁液を６０℃に加熱した。〜２０時間後、その反応混合物を濃縮して、酸Ａ−６を黄褐色の固体として得た。
【０１２６】
【化２６】
2004528373.tif 000035
【０１２７】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニンエチルエステル（Ａ−７）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の酸１５−６（４００ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）、アミンＡ−４（６８６ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３５８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（２５２ｍｇ、１．８６ｍｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（６３２μＬ、５．７２ｍｍｏｌ）の溶液を〜２０時間攪拌した。その反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、その後、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ、その後、５％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）によって、アミドＡ−７を白色の固体として生じた。
【０１２８】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４（シリカ、１０％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）
【０１２９】
【化２７】
2004528373.tif 000036
【０１３０】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−８）
エステルＡ−７（２００ｍｇ、０．３２１３ｍｍｏｌ）および６ＮのＨＣｌ（３０ｍＬ）の溶液を６０℃に加熱した。〜２０時間後、その反応混合物を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、２０：２０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）によって、酸Ａ−８を白色の固体として生じた。
【０１３１】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（シリカ、２０：２０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）
【０１３２】
【化２８】
2004528373.tif 000037
【０１３３】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル）ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタニル−フェニルスルホニルアミノ−β−アラニン（Ａ−９）
ヨウ化物Ａ−８（７０ｍｇ、０．１１７８ｍｍｏｌ）、［（ＣＨ３）３Ｓｎ］２（４９μＬ、０．２３５６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５ｍｇ）およびジオキサン（７ｍＬ）の溶液を９０℃に加熱した。２時間後、その反応混合物を濃縮し、その後、分取ＨＰＬＣ（Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ  Ｃ１８  １５μＭ  １００Å、４０ｘ１００ｍｍ；９５：５、その後５：９５のＨ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ）によって精製して、そのトリフルオロ酢酸塩を生じた。その塩をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）に懸濁させて、ＮＨ４ＯＨ（５滴）で処理し、その後、凍結乾燥させて、アミンＡ−９を白色の固体として生じた。
【０１３４】
【化２９】
2004528373.tif 000038
【０１３５】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−４−１２５ヨード−フェニルスルホニルアミノ−β−アラニン（Ａ−１０）
ヨードビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ）を、５ｍＣｉのＮａ１２５Ｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＩＭＳ３０）の輸送バイアルに入れ、５分間、室温で攪拌した。１０％Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨ（０．０５ｍＬ）中のＡ−９（０．１ｍｇ）の溶液を作り、直ちにそのＮａ１２５Ｉ／ヨードビーズバイアルに添加した。３分間、室温で攪拌した後、その反応混合物がｐＨ６〜７になるように約０．０４ｍＬから０．０５ｍＬのＮＨ４ＯＨを添加した。精製のために、その反応混合物全部をＨＰＬＣに注入した［Ｖｙｄａｃ  ペプチド−蛋白質  Ｃ−１８カラム、４．６ｘ２５０ｍｍ、３０分にわたって１０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）から９０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）の直線傾斜、１ｍＬ／分］。これらの条件下でのＡ−１０の保持時間は、１７分である。放射能の大部分を含む画分をプールして、凍結乾燥させ、エタノールで希釈して、約１ｍＣｉのＡ−１０を得た。これをＨＰＬＣ分析でＡ−８の基準試料と共同溶離した。
【０１３６】
【化３０】
2004528373.tif 000039
【０１３７】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸エチルエステル（Ｂ−２）
アセトニトリル（３ｍＬ）およびＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢ−１（０．２３ｇ、０．７２ｍｍｏｌ；調製については、米国特許第５，７４１，７９６号参照）、Ａ−４（０．３４３ｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．１７９ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．１２６ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．３１６ｍＬ、２．８６ｍｍｏｌ）の混合物を２時間、周囲温度で攪拌し、その後、酢酸エチルで希釈して、水、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物をシリカゲル（７０：２５：５のＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）でのクロマトグラフに付して、Ｂ−２を白色の固体として得た。
【０１３８】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２２（シリカ、７０：２５：５のＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）
【０１３９】
【化３１】
2004528373.tif 000040
【０１４０】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−３）
Ｂ−２（０．３８ｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）および６ＮのＨＣｌ（５０ｍＬ）の混合物を１４時間、６０℃で攪拌した。室温に冷却した後、その混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル（２５：１０：１：１から１５：１０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）でのクロマトグラフに付して、Ｂ−３を白色の固体として得た。
【０１４１】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４３（シリカ、１０：１０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）
【０１４２】
【化３２】
2004528373.tif 000041
【０１４３】
３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタナニル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸（Ｂ−４）
Ｂ−３（０．１０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルジスタナン（０．０６５ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、およびジオキサン（１０ｍＬ）の混合物を１時間、９０℃で攪拌した。室温に冷却した後、その混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル（５０：１０：１：１から２５：１０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）でのクロマトグラフに付して、Ｂ−４を白色の固体として得た。
【０１４４】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４８（シリカ、１５：１０：１：１のＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）
【０１４５】
【化３３】
2004528373.tif 000042
高分解能質量スペクトル：Ｃ２９Ｈ３６Ｎ４Ｏ５ＳＳｎについての期待値：６６５．１５３３（１１２Ｓｎ）および６７３．１５０７（１２０Ｓｎ）、実測値：６６５．１５１０および６７３．１５０５。
【０１４６】
２（Ｓ）−（４−１２５ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−５）
攪拌棒、メタノール（０．０５ｍＬ）およびヨードビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ）をＮａ１２５Ｉ（１０ｍＣｉ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＩＭＳ３００）の輸送バイアルに入れ、５分間、室温で攪拌した。メタノール（０．０４ｍＬ）中のＢ−４（〜０．１ｍｇ）の溶液を作り、一部（０．０２ｍＬ）を、メタノール（０．０２５ｍＬ）中のＨ２ＳＯ４（０．００５ｍＬ）の混合物に添加し、この溶液を直ちにそのＮａ１２５Ｉ／ヨードビーズバイアルに添加した。２分間、室温で攪拌した後、ＮＨ４ＯＨ（０．０４ｍＬから０．０５ｍＬ）で反応を停止させて、精製のため、その反応混合物全部をＨＰＬＣに注入した［Ｖｙｄａｃ  ペプチド−蛋白質  Ｃ−１８カラム、４．６ｘ２５０ｍｍ、２０分にわたって１０％アセトニトリル：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）から９０％アセトニトリル：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）の直線傾斜、１ｍＬ／分］。これらの条件下でのＢ−５の保持時間は、１６分である。放射能の大部分を含む画分をプールして、凍結乾燥させ、エタノールで希釈して、約１ｍＣｉのＢ−５を得た。これをＨＰＬＣ分析でＢ−３の基準試料と共同溶離した。
【０１４７】
器機使用：解析および分取ＨＰＬＣは、Ｒｈｅｏｄｙｎｅ  ７１２５インジェクタを備えた０．１ｍＬヘッドと、Ｇｉｌｓｏｎ  ＦＣ２０３  微量画分検出装置を備えたＷａｔｅｒｓ  ９９０  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒとを具備したＷａｔｅｒｓ  ６００Ｅ  Ｐｏｗｅｒｌｉｎｅ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて実施した。解析および分取ＨＰＬＣには、Ｖｙｄａｃ  ペプチド−蛋白質  Ｃ−１８カラム、４．６ｘ２５０ｍｍを、Ｃ−１８  Ｂｒｏｗｎｌｅｅモジュラーガードカラムとともに用いた。ＨＰＬＣ分析に用いたアセトニトリルは、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｏｐｔｉｍａグレートであった。用いたＨＰＬＣ放射能検出装置は、Ｂｅｃｋｍａｎ  １７０  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ検出装置であった。Ｖｙｄａｃ  Ｃ−１８  蛋白質・ペプチドカラム、３．９ｘ２５０ｍｍを、解析および分取ＨＰＬＣのために用いた。放射能溶液は、Ｓｐｅｅｄｖａｃ真空遠心分離機を用いて濃縮した。校正曲線および化学物質濃度は、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｍｏｄｅｌ  ８４５２Ａ  ＵＶ／Ｖｉｓ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて決定した。試料の放射能は、Ｐａｃｋａｒｄ  Ａ５５３０  γ線計測装置で計測した。
【０１４８】
本発明の化合物のαｖβ３およびαｖβ５結合活性ならびに骨吸収抑制活性を測定するために利用した試験手順を下に記載する。
【０１４９】
骨吸収窩アッセイ
破骨細胞が骨吸収に携わると、破骨細胞は、それらが作用する骨の表面に小窩を形成させる。従って、破骨細胞を阻害する能力について化合物を試験する時、抑制化合物が存在する際に破骨細胞がこれらの吸収窩を作る能力を測定することは有用である。
【０１５０】
６ｍｍ柱体のウシ大腿骨幹からの連続２００ｍｍ厚の断面を低速ダイアモンドソー（Ｉｓｏｍｅｔ，Ｂｅｕｌｅｒ，Ｌｔｄ．，Ｌａｋｅ  Ｂｌｕｆｆ，Ｉｌ）で切取る。骨の切片は、プールし、１０％エタノール溶液に入れて、その後の使用まで冷凍しておく。
【０１５１】
実験前に、ウシの骨の切片をＨ２Ｏ中で２回、各２０分間、超音波洗浄する。洗浄した切片は、対照に２レーンおよび薬物投与量にそれぞれ１レーンが利用できるように、９６ウエルのプレートに配置する。各レーンは、３つの同じ培養物または４つの同じ培養物を表す。９６ウエルプレート内の骨の切片をＵＶ照射により滅菌する。破骨細胞とともにインキュベーションする前に、骨の切片は、５％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ（ｐＨ６．９）０．１ｍＬの添加により水和する。
【０１５２】
生後７日から１４日のウサギ［ニュージーランドホワイトヘア（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｌｅ  Ｈｅａｒ）］からの長骨を切開し、軟細胞を洗浄して、２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するαＭＥＭに入れる。それらの骨は、断片が１ｍｍ未満になるまで鋏を用いて切り刻み、２５ｍＬ量で５０ｍＬの試験管に移す。その試験管を手でゆっくりと前後に６０周期揺り動かし、組織を１分間沈降させて、上清を除去する。別の２５ｍＬの培地をその組織に添加し、再び前後に揺り動かす。第二上清を第一上清と併せる。赤血球を除く細胞の数を数える（典型的には、細胞数〜２ｘ１０７／ｍＬ）。５％ウシ胎仔血清、１０ｎＭの１，２５（ＯＨ）２Ｄ３およびペニシリン−ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ  １ｍＬ中、５ｘ１０６個から成る細胞浮遊液を調製する。２００ｍＬ量をウシの骨の切片（２００ｍｍｘ６ｍｍ）に加えて、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で、２時間インキュベートする。培地をマイクロピペットで穏やかに除去し、試験化合物を含有する新しい培地を添加する。それらの培養物を４８時間インキュベートし、培地用Ｃｒｏｓｓｌａｐｓ（Ｈｅｒｌｅｖ、デンマーク）によって、ｃ−末端ペプチド（Ｉ型コラーゲンのａｌ鎖のフラグメント）について検定した。
【０１５３】
ウシの骨の切片を２０時間から２４時間、破骨細胞に暴露し、染色用に加工する。組織培養の培地を各々の骨の切片から除去する。各ウエルを２００ｍＬのＨ２Ｏで洗浄し、その後、骨の切片を２．５％グルタルアルデヒド、０．１Ｍカコジラート（ｐＨ７．４）中で２０分間固定する。固定後、０．２５ＭのＮＨ４ＯＨの存在下で２分間超音波処理し、続いて２回、１５分間、Ｈ２Ｏ中で超音波処理することによって、残存する一切の細胞破壊片を除去する。直ちに、骨の切片を、濾過した１％トルイジンブルーおよび１％ホウ砂で６分間から８分間染色する。
【０１５４】
骨の切片が乾いたら、試験切片および対照切片における吸収窩を数える。吸収窩は、Ｎｉｋｏｎ  ＩＧＳ  偏光フィルタキューブを用いてＭｉｃｒｏｐｈｏｔ  Ｆｘ（Ｎｉｋｏｎ）蛍光顕微鏡で視覚化する。試験投薬量の結果を対照と比較し、得られたＩＣ５０値を、試験した化合物各々について判定する。
【０１５５】
哺乳動物（ヒトを含む）の疾病状態にこのアッセイからのデータを外挿することの適正さは、Ｓａｔｏ，Ｍ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｂｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，第５巻，Ｎｏ．１，３１−４０ページ，１９９０において見出せる教示によって裏付けられる。この論文は、全文、本明細書に参照して組み込まれる。この論文は、一定のビスホスホネートが、臨床使用されており、パジェット病、悪性高カルシウム血症、骨転移に起因する溶骨性病変、および固定化または性ホルモン不全に起因する骨量減少の治療に有用であるように見えることを教示している。そこで、これらの同じビスホスホネートを上記の吸収窩アッセイで試験して、それらの既知有用性と前記アッセイで陽性の性能との間の相関関係を確認する。
【０１５６】
ＥＩＢアッセイ
Ｄｕｏｎｇら（Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，８：Ｓ３７８（１９９３））は、ヒトインテグリンαｖβ３を発現するための系を記載している。インテグリンに対する抗体、またはエキスタチン（欧州公報第３８２４５１号）などのＲＧＤ含有分子は、骨吸収を有効に阻止することができるので、インテグリンは、骨基質への破骨細胞の結合を刺激するということが、示唆されている。
【０１５７】
反応混合物：
１．  １７５μＬのＴＢＳバッファ（５０ｍＭのトリス・ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＢＳＡ、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２）。
２．  ２５ｍＬの細胞抽出液（１００ｍＭのオクチルグルコシドバッファで希釈して、２０００ｃｐｍ／２５μＬにする）。
３．  １２５Ｉ−エキスタチン（２５μＬ／５０，０００ｃｐｍ）（欧州特許第３８２４５１号参照）。
４．  ２５μＬのバッファ（全結合）または非標識エキスタチン（非特異的結合）。
【０１５８】
そこで、上記反応混合物を１時間、室温でインキュベートした。Ｓｋａｔｒｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用い、濾過によって、未結合のαｖβ３と結合しているαｖβ３とを分離した。その後、そのフィルタ（１０分間、１．５％ポリエチレンイミン中で予湿潤させたもの）を洗浄バッファ（５０ｍＭのトリスＨＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２／ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．２）で洗浄した。その後、フィルタをγ線計測装置で計測した。
【０１５９】
ＳＰＡＶ３アッセイ
材料：
１．コムギ胚芽凝集素シンチレーション近接アッセイ用ビーズ（ＳＰＡ）：Ａｍｅｒｓｈａｍ
２．オクチルグルコピラノシド：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
３．ＨＥＰＥＳ：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
４．ＮａＣｌ：Ｆｉｓｈｅｒ
５．ＣａＣｌ２：Ｆｉｓｈｅｒ
６．ＭｇＣｌ２：ＳＩＧＭＡ
７．フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）：ＳＩＧＭＡ
８．オプチプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）：ＰＡＣＫＲＤ
９．化合物Ａ−１０（比放射能  ５００〜１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）
１０．試験化合物
１１．精製したインテグリン受容体：αｖβ３は、Ｐｙｔｅｌａ（Ｅｎｓｙｍｏｌｏｇｙ，１４４：４７５，１９８７の中の方法）に従って、αｖβ３を過発現している２９３の細胞（Ｄｕｏｎｇら，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．，８：Ｓ３７８，１９９３）から精製した。
１２．結合バッファ：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．８）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａ２＋／Ｍｇ２＋、０．５ｍＭのＰＭＳＦ）
１３．結合バッファ中５０ｍＭのオクチルグルコシド：５０−ＯＧバッファ
【０１６０】
手順：
１．ＳＰＡビーズの前処理：
５００ｍｇの凍結乾燥ＳＰＡビーズを、最初に、２００ｍＬの５０−ＯＧバッファで４回、１００ｍＬの結合バッファで１回洗浄し、その後、１２．５ｍＬの結合バッファに再び懸濁させた。
２．ＳＰＡビーズと受容体の混合物の調製
各アッセイ用試験管内で、２．５μＬ（４０ｍｇ／ｍＬ）の前処理したビーズを９７．５μＬの結合バッファおよび２０ｍＬの５０−ＯＧバッファに懸濁させた。３０分間、室温で、攪拌しながら、５ｍＬ（〜３０ｎｇ／μＬ）の精製した受容体を前記懸濁液中のビーズに添加した。その後、前記混合物を４℃で１０分間、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＰＲ  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ遠心分離機において、２，５００ｒｐｍで遠心分離した。ペレットを、その後、５０μＬの結合バッファおよび２５μＬの５０−ＯＧバッファに再び懸濁させた。
３．反応
下記のものを対応するウエル内のオプチプレートに順次添加した：
（ｉ）受容体／ビーズ混合物（７５μＬ）
（ｉｉ）次のものを各２５μＬ：試験する化合物、全結合用の結合バッファまたは非特異的結合用のＡ−８（最終濃度１μＭ）
（ｉｉｉ）結合バッファ中のＡ−１０（２５μＬ、最終濃度４０ｐＭ）
（ｉｖ）結合バッファ（１２５μＬ）
（ｖ）各プレートをＰＡＣＫＡＲＤのプレートシーラーで封止し、４℃で前後に揺り動かしながら一晩インキュベートした。
４．ＰＡＣＫＡＲＤ  ＴＯＰＣＯＵＮＴを用いて、プレートをカウントした。
５．抑制％は、次のようにして計算した：
Ａ＝全結合のカウント
Ｂ＝非特異的結合のカウント
Ｃ＝試料のカウント
抑制％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）ｘ１００
【０１６１】
ＯＣＦＯＲＭアッセイ
リボヌクレオシドおよびデオキシリボヌクレオシド、１０％ウシ胎仔血清およびペニシリン−ストレプトマイシンを含有するαＭＥＭ培地中の、元はマウスの頭蓋冠から得られた骨芽細胞様細胞（細胞数１．８）を、ＣＯＲＮＩＮＧ  ２４ウエル組織培養プレートにプレーティングした。午前中に、細胞を４０，０００／ウエルで接種した。午後、生後６週間の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスから、次のようにして骨髄細胞を準備した：
マウスを犠牲にして、頸骨を除去し、上記培地に入れた。末端を切除し、２７．５ゲージの針を備える１ｍＬの注射器を用いて骨髄をその腔から試験管内に洗い流した。ピペットで吸い上げ、吸い出すことにより、骨髄を懸濁させた。懸濁液を１００ｍｍより厚いナイロン製細胞濾過器に通した。得られた懸濁液を７分間、３５０ｘｇで遠心分離した。ペレットを再び懸濁させ、試料を２％の酢酸中で希釈して、赤血球を溶解した。残存する細胞を血球計数器で計数した。細胞をペレット化し、細胞数１ｘ１０６／ｍＬで再び懸濁させた。５０μＬを細胞数１．８の各ウエルに添加して、細胞数５０，０００／ウエルにし、各ウエルに１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３（Ｄ３）を添加して、最終濃度１０ｎＭにした。それらの培養物を、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。骨髄の添加から７２時間後、Ｄ３を含有する新しい培地とともに、試験化合物を全く同じ４つのウエルに添加した。４８時間後、Ｄ３を含有する新しい培地とともに試験化合物を再び添加した。さらに４８時間後、培地を除去し、細胞を、１０分間、室温で、リン酸緩衝生理食塩水中１０％のホルムアルデヒドで固定し、その後、エタノール：アセトン（１：１）で１分から２分処理して、空気乾燥させた。その後、次のようにして、細胞に酒石酸塩耐性酸性ホスファターゼ染色を施した：
３０ｍＭの酒石酸ナトリウム、０．３ｍｇ／ｍＬのファストレッド・バイオレットＬＢ塩（Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  Ｖｉｏｌｅｔ  ＬＢ  Ｓａｌｔ）および０．１ｍｇ／ｍＬのナフトールＡＳ−ＭＸリン酸塩を含有する５０ｍＭの酢酸塩バッファ（ｐＨ５．０）を用いて、室温で、１０〜１５分間、細胞を染色した。染色後、プレートを脱イオン水で広範囲にわたって洗浄し、空気乾燥させた。各ウエルの染色陽性多核細胞を計数した。
【０１６２】
ＳＰＡＶ５アッセイ
材料：
１．コムギ胚芽凝集素シンチレーション近接アッセイ用ビーズ（ＳＰＡ）：Ａｍｅｒｓｈａｍ
２．オクチルグルコピラノシドおよびホルボ−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
３．トリス−ＨＣｌ、ＮａＣｌおよびＣａＣｌ２：Ｆｉｓｈｅｒ
４．最小必須培地（ＭＥＭ）：Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ
５．ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）：Ｈｙｃｌｏｎｅ
６．ＭｇＣｌ２、ＭｎＣｌ２、および塩化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）：ＳＩＧＭＡ
７．プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤：Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ
８．オプチプレート−９６ウエル：ＰＡＣＫＲＤ
９．Ｂ−５は、放射性標識リガンド（比放射能  ５００〜１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）として用い、Ｂ−３（２．５μＭ）は、抑制１００％を達成するために用いた。
１０．試験化合物
１１．αｖβ５インテグリンを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（Ｓｉｍｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２９３８０−２９３８９，１９９７）を、１０％ＦＢＳ／ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）中、１５０ｍｍ皿で培養する。
１２．溶解バッファ：１００ｍＭのオクチルグルコシド、５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５ｍＭのＰＭＳＦおよびプロテアーゼ阻害剤（錠剤１個／バッファ５０ｍＬ）
１３．結合バッファ：５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２および１ｍＭのＭｎＣｌ２
１４．結合バッファ中５０ｍＭのオクチルグルコピラノシド：５０−ＯＧバッファ
【０１６３】
手順：
１．αｖβ５−細胞溶解産物：αｖβ５インテグリンを発現しているＨＥＫ２９３細胞を、集密になるまで培養した。その後、０．５％ＦＢＳを含有する培地中で、一晩、細胞を飢えさせ、その後、１００ｎＭのＰＭＡで２０分間処理した。細胞を冷リン酸緩衝生理食塩水（４℃）で２回洗浄し、氷の上で３０分間、溶解バッファに溶解した。２０，０００ｘｇでＢｅｃｋｍａｎ  ＪＡ−２０を用いて、溶解産物を清澄した。清澄した溶解産物の蛋白質濃度を、ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡ  ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて測定し、一定量ずつ、８０℃で保管した。
２．ＳＰＡビーズの前処理：
５００ｍｇの凍結乾燥ＳＰＡビーズを、最初に、２００ｍＬの５０−ＯＧバッファで４回、１００ｍＬの結合バッファで１回洗浄し、その後、１２．５ｍＬの結合バッファに再び懸濁させた。
３．ＳＰＡＶ５結合反応の準備
各アッセイ用ウエルのオプチプレートに、下記のものを順次添加した：
（ｉ）１ウエルあたり最終量１２５μＬにするための結合バッファ
（ｉｉ）２２μＬの５０−ＯＧバッファで希釈した３μＬ（１２０μｇ／ウエル）の前処理したビーズ
（ｉｉｉ）１５μｇのαｖβ５−細胞溶解産物蛋白質
（ｉｖ）５０，０００ｃｐｍのＢ−５
（ｖ）２５μＬの傾斜濃度の試験化合物
（ｖｉ）各プレートをＰＡＣＫＡＲＤのプレートシーラーで封止し、４℃で前後に揺り動かしながら一晩インキュベートした。
４．ＰＡＣＫＡＲＤ  ＴＯＰＣＯＵＮＴマイクロプレートシンチレーションカウンタを用いて、プレートをカウントした。
５．抑制％は、次のようにして計算した：
Ａ＝全結合のカウント（Ｂ−５への受容体の結合）
Ｂ＝非特異的結合のカウント（２．５μＭの冷却リガンドの存在下でのＢ−５への受容体の結合）
Ｃ＝試験化合物に結合している受容体からのカウント
抑制％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）ｘ１００
試験化合物のＩＣ５０を抑制５０％として計算した。
【０１６４】
医薬調合の実施例
経口用組成物の特定の実施形態として、１００ｍｇの本発明の化合物を、Ｏサイズの硬質ゲルカプセルを満たす全量５８０ｍｇから５９０ｍｇを提供するために充分な超微粒子ラクトースと配合する。
【０１６５】
本発明を、その一定の好ましい実施形態を参照して記載し、説明してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、本発明において様々な変項、変形および代用の実施が可能なことは、当業者にはご理解いただけよう。例えば、吸収によって生じた骨疾患の苦しさに対する治療を受けている哺乳動物の応答が変化した結果として、または上で示した本発明の化合物についての他の適応症のために、本明細書中で上に記載した好ましい用量以外の有効な投薬量を適用することも可能である。同様に、観察される特定の薬理応答は、選択される個々の活性化合物、または医薬用担体が存在するか否か、ならびに調合のタイプおよび用いられる投与方式に従って、また、依存して変化しうり、そうした予測される変化または結果の違いは、本発明の目的および実施に合わせて考察する。従って、本発明は、後続の特許請求の範囲の範囲によってのみ制限され、また、前記特許請求の範囲は、妥当であるかぎり広く解釈されるものと考える。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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