(57)【要約】活性酸素種（ＲＯＳ）インヒビターまたはスカベンジャーおよび少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与を含む、単球の成熟を促進する方法が開示される。単球の成熟を促進するための組成物も同様に開示される。薬剤組成物には、薬学的に許容できる担体中で組み合わせられた、単球の成熟を促進するのに有効な化合物と、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーとが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの単球成熟促進剤、ならびに少なくとも１つのＲＯＳ産生および放出インヒビターまたはＲＯＳスカベンジャーを、単球を含む細胞集団に投与することを含む、単球の成熟を促進する方法。
【請求項２】
前記単球成熟促進剤が、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび前記少なくとも１つの単球成熟促進剤がｉｎ  ｖｉｖｏで投与される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与が同時に行われる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与が、前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与の２４時間以内に行われる請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の用量で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日の用量で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーが、約０．１〜約２０ｍｇ／日の用量で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ａ）薬学的に許容できる形態のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを細胞集団へ投与すること、
ｂ）単球成熟増強剤を投与することであって、該単球成熟増強剤の単球成熟効果が増大される、投与すること
を含む、単球成熟増強剤の活性を増大する方法。
【請求項１０】
前記単球成熟増強剤がサイトカインである請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択される請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦである請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記サイトカインが、約５００から約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の投薬量で投与される請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記サイトカインが、約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日の投薬量で投与される請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与が同時に行われる請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与が、前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与の２４時間以内に行われる請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび少なくとも１つの単球成熟促進剤を含む組成物の、癌の治療用薬剤の製造のための使用であって、前記治療が、
ａ）癌を有する被験体を判別すること、
ｂ）薬学的に許容できる形態の前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを投与すること、および
ｃ）前記少なくとも１つの単球成熟促進剤を投与すること
を含む使用。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択されるサイトカインである請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の用量で投与される請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日の用量で投与される請求項１７に記載の使用。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤および前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与が同時に行われる請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与が、前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与の２４時間以内に行われる請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび少なくとも１つの単球成熟促進剤からなる組成物の、慢性感染症治療用薬剤の製造のための使用であって、前記治療が、
ａ）慢性感染症を患う被験体を判別すること、
ｂ）薬学的に許容できる形態のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを投与すること、および
ｃ）少なくとも１つの単球成熟促進剤を投与することであって、前記単球成熟促進剤が単球の成熟を促進する、投与すること
を含む使用。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤が、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択されるサイトカインである請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記慢性感染症がウィルスによって引き起こされる請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
前記ウィルスが、アデノウィルス、サイトメガロウィルス、エプスタイン−バーウィルス、単純ヘルペスウィルス１、単純ヘルペスウィルス２、ヒトヘルペスウィルス６、水痘帯状疱疹ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、パピローマウィルス、パルボウィルスＢ１９、ポリオーマウィルスＢＫ、ポリオーマウィルスＪＣ、Ｃ型肝炎ウィルス、麻疹ウィルス、風疹ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウィルスＩ、およびヒトＴ細胞白血病ウィルスＩＩからなる群から選択される請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記慢性感染症が寄生虫によって引き起こされる請求項２３に記載の使用。
【請求項２８】
前記寄生虫が、レーシュマニア、トキソプラズマ、トリパノソーマ、プラスモジウム、シストゾーマ、およびエンセファリトゾーンからなる群から選択される請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤および前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与が同時に行われる請求項２３に記載の使用。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの単球成熟促進剤の投与が、前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与の２４時間以内に行われる請求項２３に記載の使用。
【請求項３１】
単球の成熟を促進するのに有効な化合物およびＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを、薬学的に許容できる担体中に組み合わせて含む薬剤組成物。
【請求項３２】
単球の成熟を促進するのに有効な前記化合物が、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択される請求項３１に記載の薬剤組成物。
【請求項３３】
単球の成熟を促進するのに有効な前記化合物がＧＭ−ＣＳＦである請求項３１に記載の薬剤組成物。
【請求項３４】
前記ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーが、ヒスタミン、ヒスタミン二塩酸塩、リン酸ヒスタミン、他のヒスタミン塩、エステル、プロドラッグ、ヒスタミン受容体アゴニスト、セロトニン、５ＨＴアゴニスト、および内因性ヒスタミン放出化合物からなる群から選択される請求項３１に記載の薬剤組成物。
【請求項３５】
前記ＲＯＳスカベンジャーが、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、アスコルビン酸ペルオキシダーゼ、ビタミンＡ、ビタミンＥ、またはビタミンＣからなる群から選択される請求項３１に記載の薬剤組成物。
【請求項３６】
ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよび少なくとも１つの単球の成熟を促進する化合物を薬学的に許容できる形態で提供することを含む薬剤組成物の製造方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１つの単球の成熟を促進する化合物が、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択される請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記単球の成熟を促進する化合物がＧＭ−ＣＳＦである請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の背景］
［発明の分野］
開示される本発明は、単球の成熟を促進するための組成物および方法に関する。さらに詳細には、開示される本発明は、癌または感染症を患う被験体を、１つまたは複数の単球の成熟を促進する化合物で治療することに関する。
【０００２】
［関連技術の説明］
単球、マクロファージ、および樹状細胞は体の免疫防衛システムにおいて最も重要であり、その抗原提示能力およびＴリンパ球機能制御能力によって、後天性免疫反応の誘発において中心的な役割を果たす。
【０００３】
単球は、骨髄幹細胞に由来する単核食細胞白血球である。単球は血流中で循環した後、組織内へ移動し、この時点でマクロファージへ成熟する。単球およびマクロファージは免疫プロセスにおける第一の防衛線の１つである。単核食細胞は、適応的免疫反応の認識および活性化の局面で補助細胞として機能する。その主な機能は、抗原をＴリンパ球により認識可能な形で表示し、Ｔ細胞活性化のための二次的な信号として役立つ膜タンパク質および分泌タンパク質を産生することである。いくつかの単核食細胞は樹状細胞へ分化し得て、タンパク質抗原に対するＴリンパ球応答の誘発において重要な役割を果たす。
【０００４】
発達中、循環単球はマクロファージを形成するために実質的に全ての身体器官中へ遊走し、この際、組織の局在性に基づいて非常に不均一な表現型および機能を示す。免疫プロセスの間は、信号が骨髄へ送達されて、前単球が循環中へ増殖および放出されるのを促進し、これらは単球として知られる。
【０００５】
コロニー刺激因子および特定のサイトカインなどの多数の化合物は、単核食細胞の発達を制御することが分かっている。例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、種々の免疫学的に活性な細胞集団の分化、増殖および活性化を誘発するサイトカインである。ＧＭ−ＣＳＦは細胞性免疫の発達を容易にし、最近の研究では、ＧＭ−ＣＳＦのこの作用において、強力な抗原提示細胞である樹状細胞へ単球の分化を誘発することが重要な現象であると示唆されている（Ｂｅｌｌ， Ｄ．ら， Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ７２：２５５−３２４ （１９９９）、Ａｖｉｇａｎ， Ｄ．， Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．， １３：５１−６４ （２０００））。
【０００６】
ＧＭ−ＣＳＦなどの化合物の免疫アジュバントとしての効力によって、癌および慢性感染症に関連する弱い免疫学的応答を克服するためにこれらを使用することに対して特に関心が集中している（レビューとしては、Ｌａｗｓｏｎ， Ｄ．およびＫｉｒｋｗｏｏｄ， Ｊ．Ｍ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， １８：１６０３−１６０５ （２０００） が参照される）。例えば、高危険性の悪性黒色腫患者をかなりの割合で再発および死から保護するために、ＧＭ−ＣＳＦによる治療が提唱されている。Ｓｐｉｔｌｉｅｒおよび共同研究者たちによる研究では、ＧＭ−ＣＳＦで治療された黒色腫患者（ＩＩＩ期またはＩＶ期の疾患）の生存期間中央値は、対応のコントロール患者のものと比較して３倍増加した（Ｓｐｉｔｌｉｅｒら， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， １８：１６１４−１６２１ ）。
【０００７】
これらの結果にもかかわらず、腫瘍性疾患および慢性感染症の治療において、単球成熟促進療法の改良が必要とされている。
【０００８】
［発明の概要］
開示される本発明は、単球の成熟を促進するための組成物および方法に関する。１つの実施形態では、単球の成熟を促進するための方法が提供される。活性酸素種（ＲＯＳ）阻害または捕捉化合物および単球成熟促進剤を含む組成物は、複数の単球を標的として単球成熟を促進するために同時投与される。単球成熟促進剤としては、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＴＮＦ−α、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、またはインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）を挙げることができる。単球成熟促進剤は単独でも投与できるし、ワクチン、複数の抗原、またはアジュバントと組み合わせて投与することもできる。ＲＯＳ阻害化合物は、ヒスタミンおよび／または、ヒスタミン二塩酸塩、リン酸ヒスタミン、およびヒスタミン受容体アゴニストなどのヒスタミン関連化合物などでよい。単球の樹状細胞への発達を容易にするために、過酸化水素や、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼまたはアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどのＲＯＳ捕捉化合物も、単球成熟促進剤と組み合わせて投与できる。
【０００９】
単球成熟の促進方法は、ＲＯＳ阻害化合物および少なくとも１つの単球成熟促進剤をｉｎ  ｖｉｖｏで投与することによって達成されるのが有利である。単球成熟促進剤とＲＯＳ阻害または捕捉化合物の投与は同時に実行できる。あるいは、ＲＯＳ阻害化合物の投与は、単球成熟促進剤の投与の２４時間以内に完了されてもよい。
【００１０】
本発明のもう１つの態様では、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは、約０．１〜約２０ｍｇ／日の用量で投与される。好ましくは、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは約０．５〜約８ｍｇ／日の用量で投与される。さらにより好ましくは、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの量は、約１〜約６ｍｇ／日である。単球成熟促進剤は約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の投薬量で投与されるのが有利であり、より好ましくは、量は約１，０００〜約５００，０００Ｕ／ｋｇ／日であり、さらにより好ましくは、投与される単球成熟促進剤量は約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日である。
【００１１】
もう１つの実施形態では、単球成熟増強剤の活性を増大する方法が提供される。方法には、薬学的に許容できる形態のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーと、単球成熟増強剤とを投与することが含まれ、これにより、単球成熟増強剤の単球成熟効果が増大される。好ましくは、単球成熟増強剤は少なくとも１つのサイトカインである。さらに好ましくは、サイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＴＮＦ−α、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、またはインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）である。単球成熟促進剤は単独で投与することもできるし、ワクチン、複数の抗原、またはアジュバントと組み合わせて投与することもできる。最も好ましくは、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。
【００１２】
サイトカインは約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の投薬量で投与されるのが有利であり、より好ましくは、量は約１，０００〜約５００，０００Ｕ／ｋｇ／日であり、さらにより好ましくは、投与されるサイトカイン量は約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日である。ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは、約０．１〜約１０ｍｇ／日の用量で投与できる。好ましくは、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは約０．５〜約８ｍｇ／日の用量で投与される。さらにより好ましくは、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの量は、約１〜約５ｍｇ／日である。
【００１３】
開示される本発明のもう１つの態様は、さらに、腫瘍性疾患を有する被験体をＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーと単球成熟促進剤とで治療する方法も考慮する。方法には、腫瘍性疾患を有する被験体を判別し、薬学的に許容できる形態のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを投与し、単球成熟促進剤を同時に投与することが含まれる。あるいは、単球成熟促進剤は、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの安定濃度が達成された後で被験体へ投与されることもできる。単球成熟促進剤は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、またはＩＬ−１８などのサイトカインでよい。単球成熟促進剤は約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の用量で投与されるのが有利であり、より好ましくは、量は約１，０００〜約５００，０００Ｕ／ｋｇ／日であり、さらにより好ましくは、投与される単球成熟促進剤量は約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日である。
【００１４】
もう１つの実施形態では、慢性感染症を有する被験体を治療する方法が提供される。方法には、慢性感染症を患う被験体を判別し、薬学的に許容できる形態のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを投与し、少なくとも１つの単球成熟促進剤を投与することが含まれ、単球成熟促進剤は、単球の樹状細胞への成熟を容易にする。単球成熟促進剤とＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーとは同時に添加できる。あるいは、単球成熟促進剤は、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの安定濃度が達成された後で添加されることもできる。好ましい実施形態では、単球成熟促進剤は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８からなる群から選択されるサイトカインである。
【００１５】
慢性感染症はウィルスによって発生し得る。ウィルスは、アデノウィルス、サイトメガロウィルス、エプスタイン−バーウィルス、単純ヘルペスウィルス１、単純ヘルペスウィルス２、ヒトヘルペスウィルス６、水痘帯状疱疹ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、パピローマウィルス、パルボウィルスＢ１９、ポリオーマウィルスＢＫ、ポリオーマウィルスＪＣ、Ｃ型肝炎ウィルス、麻疹ウィルス、風疹ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウィルスＩ、またはヒトＴ細胞白血病ウィルスＩＩでよい。
【００１６】
あるいは、慢性感染症は寄生虫によっても発生し得る。寄生虫としては、レーシュマニア、トキソプラズマ、トリパノソーマ、プラスモジウム、住血吸虫、またはエンセファリトゾーンなどの種を挙げることができる。
【００１７】
薬学的に許容できる単一の担体中に、単球の成熟を促進するのに有効な化合物およびＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを組み合わせて含む薬剤組成物も同様に提供される。単球の成熟を促進するのに有効な化合物は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、またはＩＬ−１８を含むことができる。好ましくは、単球の成熟を促進するのに有効な化合物はＧＭ−ＣＳＦである。
【００１８】
さらにもう１つの実施形態では、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーと少なくとも１つの単球の成熟を促進する化合物とを薬学的に許容できる形態で提供することを含む、薬剤組成物の製造方法が開示される。好ましくは、単球の成熟を促進する化合物には、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、またはＩＬ−１８が含まれる。さらに好ましくは、単球の成熟を促進する化合物はＧＭ−ＣＳＦである。
【００１９】
［好ましい実施形態の詳細な説明］
開示される本発明は、単球の成熟を増強するための組成物および方法に関する。癌および種々の感染症疾患を含む様々な病状を患っている被験体の免疫系を増強するために、１つまたは複数の単球の成熟を促進する化合物が投与される。本明細書に開示される組成物および方法は、哺乳動物細胞の免疫系における最も強力な抗原提示細胞の一部である樹状細胞への単球の成熟を増強する。したがって、本明細書に開示される組成物および方法は種々の病状の治療において有用であり、疾病の回復には、樹状細胞による抗原提示と、それに続く宿主免疫系による根絶とが包含される。
【００２０】
顆粒球成熟コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などの特定サイトカインの作用の重要なメカニズムは、非常に効率的な抗原提示細胞である樹状細胞への単球の分化を誘発させることである。ＧＭ−ＣＳＦのこれらの特性は、例えば転移性の悪性黒色腫などの種々の病状の治療において、ＧＭ−ＣＳＦを免疫アジュバントとして使用する重要な背景となっている。単球成熟の速度を増強する化合物を同定することは重要であろう。さらに、既知の単球成熟化合物を増強する化合物の同定も、種々の病状の治療において有用であろう。既知の単球の成熟を促進する化合物には、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦが含まれる。このような化合物は、単球上に樹状細胞の細胞表面マーカー特徴の発現を誘発する。
【００２１】
ＣＤ８６（以前はＢ７−２）は、樹状細胞の細胞表面マーカーである（ＫｉｅｒｔｓｃｈｅｒおよびＲｏｔｈ， Ｊ．， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．， ５９：２０８−２１８）。ＣＤ８６は、細胞性免疫の発達のための重要な同時刺激分子でもある（Ｇｉｅｓｅｌｅｒら， Ｄｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ６：２５−３９ （１９９８）、Ｓｌａｖｉｃら， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｓ．， １９：１−２４ （１９９９）、Ｃｒｏｆｔら， Ｃｒｉ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １７：８９−１１８ （１９９７））。通常は、単球または他の抗原提示細胞上のＣＤ８６は、Ｔ細胞上に発現された抗原ＣＤ２８と相互作用をする（Ｓｌａｖｉｋ， Ｊ．Ｍ．ら， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｓ．， １９：１−２４ （１９９９））。このＣＤ２８／ＣＤ８６相互作用はＴ細胞へ活性化信号を提供し、Ｔ細胞受容体と抗原の相互作用によって誘発されるＴ細胞の活性化を増大および持続させる（ＭｃＣｏｙ， Ｋ．Ｄ．ら， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．， ７７：１−１０）。
【００２２】
開示される本発明は、１つには、ＲＯＳを阻害または捕捉する化合物が単球の成熟を促進することができるという驚くべき発見に基づく。ヒスタミンは、単球およびマクロファージによって誘発される酸化的阻害からＴ細胞およびＮＫ細胞を保護する。このメカニズムによって、ヒスタミンは、ＩＬ−２またはα−ＩＦＮなどの活性化サイトカインに応答してリンパ球の活性化を最適化する。第３相の臨床試験では、例えば悪性黒色腫の患者に、ヒスタミン二塩酸塩がＩＬ−２と共に投与された。初期結果は、ＩＬ−２治療の療法にヒスタミンを追加すると、肝臓転移のある黒色腫患者の生存が著しく改良されることを示唆した。
【００２３】
ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーはｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト単球上のＣＤ８６抗原の発現を増強し、ヒスタミンおよびヒスタミン関連化合物が単球からの樹状細胞の発生を容易にすることが示唆される。したがって、本発明の１つの実施形態は、単球成熟を促進する特定の化合物の作用を増大するために、ＲＯＳ産生および放出インヒビター、ならびにＲＯＳスカベンジャーの投与を提供する。本明細書における使用では、「単球成熟促進剤」には、単球の樹状細胞への成熟を促進する全ての物質が含まれる。このような物質としては、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＴＮＦ−α、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、およびインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）などの特定のサイトカインがあるが、これらに限定はされない。
【００２４】
ＲＯＳ量を低減する化合物は、単独もしくはＧＭ−ＣＳＦまたは別の単球成熟促進剤と組み合わせて投与された場合に、相乗的に作用して単球の樹状細胞への成熟を刺激することができる。単球成熟は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、腫瘍性疾患および慢性感染症の発生に対する宿主の防衛において重要な役割を果たす。したがって、ＲＯＳのスカベンジャー、もしくは細胞内ＲＯＳの産生または放出を阻害する化合物を単独または別の単球成熟促進剤と組み合わせて投与すると、持続性ウィルスまたは寄生虫による感染によって引き起こされるような癌および慢性感染症を含む（限定はされない）種々の病状の治療において有効である。
【００２５】
従って、本発明の１つの態様は、単球成熟を増強する組成物および方法を包含する。１つの実施形態では、単球成熟促進剤は、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーと組み合わせて投与される。単球成熟促進剤は、単球の樹状細胞への発達および分化を容易にするどんな化合物でもよい。適切な単球成熟促進剤には、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８が含まれるが、これらに限定はされない。好ましくは、単球成熟促進剤はＧＭ−ＣＳＦである。ＲＯＳ産生および放出インヒビター、ならびにＲＯＳスカベンジャーは、これらの化合物の投与が単球成熟の速度または効率を増大できるので、単球成熟促進剤とも考えられる。
【００２６】
ヒスタミンもしくは他のＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは、単球成熟を増強するために、単独で、あるいは少なくとも１つの他の単球成熟促進剤と組み合わせて投与される。本明細書中で使用される「ヒスタミン」という用語は、種々のヒスタミンおよびヒスタミン関連化合物を含むＲＯＳインヒビターならびにＲＯＳスカベンジャーを包含する。例えば、ヒスタミン、二塩酸塩の形態のヒスタミン（ヒスタミン二塩酸塩）、リン酸ヒスタミン、他のヒスタミン塩、ヒスタミンエステル、またはヒスタミンプロドラッグ、およびヒスタミン受容体アゴニストは、「ヒスタミン」という用語に包含される。患者自身の組織貯蔵所からの内因性ヒスタミンの放出を誘発する化合物の投与も、本明細書で使用される「ヒスタミン」という用語の定義範囲内に含まれる。このような化合物には、ＩＬ−３、レチノイド、９−シス−レチノイン酸、オールトランス−レチノイン酸、およびアレルゲンが含まれる。ジフェニレンヨードニウムのようなＮＡＤＰＨオキシダーゼインヒビターなどのその他のＲＯＳ産生および放出阻害性化合物は開示される本発明の範囲内にあり、本明細書で使用される「ヒスタミン」という用語の定義に含まれる。同様に、セロトニンおよび５ＨＴアゴニストも、本明細書で使用される「ヒスタミン」の定義に含まれる。
【００２７】
開示される本発明の方法および組成物はさらに、単球の樹状細胞への発達を容易にするために単球成熟促進剤と共にＲＯＳスカベンジャーの投与を考慮し、これにより、特定の標的細胞の抗原提示およびそれに続く根絶が増強される。既知のＲＯＳスカベンジャーとしては、酵素カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼがある。さらに、ビタミンＡ、Ｅ、およびＣは、スカベンジャー活性を有することが分かっている。セレンおよびマンガンなどのミネラルもＲＯＳを捕捉するのに有効な化合物であり得る。開示される本発明は記載した化合物および同様のＲＯＳインヒビター活性を有する化合物の投与を含むことが意図される。
【００２８】
ヒスタミンまたはヒスタミン関連化合物および単球成熟促進剤は、単球成熟を増強するために単独で投与されてもよいし、種々の病状に有効な治療を提供するために複数の薬剤、ワクチン、抗原、またはアジュバントと組み合わせられてもよい。
【００２９】
単球成熟促進剤の投与
上記で議論した阻害または捕捉化合物と共に、単球の樹状細胞への発達を増強するための１つまたは複数の単球成熟促進剤の投与は、当業者によく知られている多数の方法のいずれかによってｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで達成することができる。開示される本発明の組成物をｉｎ  ｖｉｖｏで投与する場合、適切な送達方法には、静脈内、腹腔内、または筋肉内注射による非経口送達が含まれる。単球成熟促進剤およびＲＯＳスカベンジャーは別々に投与されても、単一の組成物として投与されてもよい。別々に投与される場合、単球成熟促進剤は最初か最後に投与されると考えられる。
【００３０】
本明細書に開示される化合物は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤を含む、または含まない水中で投与することができる。分散は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、および油などを利用するものも考えられる。抗菌化合物も製剤へ添加することができる。注射可能な製剤としては、滅菌水溶液または分散系、および使用前に滅菌環境に希釈または懸濁可能な粉末がある。水、エタノールポリオール、および植物油などを始めとする溶媒や分散媒などの担体も、本明細書に記載される化合物へ添加することができる。組成物の適切な流動性を保持するために、レシチンおよび界面活性剤などのコーティングも使用できる。モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの活性化合物の吸収を遅延させることが意図される製品と同様に、糖または塩化ナトリウムなどの等張剤も添加できる。注射可能な滅菌溶液は当業者によく知られた方法に従って調製され、貯蔵および／または使用の前にろ過することができる。滅菌粉末は、溶液または懸濁液から真空または凍結乾燥することができる。徐放性の製剤および配合物も本発明によって考慮される。本発明の組成物に使用される材料はどれも薬学的に許容できなければならず、使用量において実質的に無毒でなければならない。
【００３１】
全ての製剤は、投薬量を均一にし、投与を容易にするために、投薬単位の形態で提供されてもよい。それぞれの投薬単位形態は、薬学的に許容できる担体量と関連して所望の効果を生成するように計算された所定量の活性成分を含む。
【００３２】
化合物は単一用量として投与することもできるが、より好ましくは、長期間にわたって投与できることは理解されるべきである。通常は、約１週間までの期間、１ヶ月、さらに１年よりも長い期間にわたって治療を行うことができる。１つの実施形態では、最高３年またはそれ以上の間、治療を行うことができる。ある場合には、治療を中断し、後で再開してもよい。１日量は単一用量で投与されることもできるし、特に悪い副作用が観察される場合には、何回かの用量に分けることもできる。さらに、化合物は単一組成物として、あるいは別々に投与することができる。別々に投与する場合には、単球成熟促進剤の活性が増強されるように、化合物は同じ日に与えられるべきである。
【００３３】
好ましい投薬量の範囲は、当業者に既知の技法を用いて決定できる。単球成熟促進剤は約５００〜約１，０００，０００Ｕ／ｋｇ／日の量で投与でき、より好ましくは、量は約１，０００〜約５００，０００Ｕ／ｋｇ／日であり、さらにより好ましくは、量は約３，０００〜約２００，０００Ｕ／ｋｇ／日である。それぞれの場合において、単球成熟促進剤の用量が投与される化合物の活性に依存することは、当業者には理解されるであろう。
【００３４】
細胞内ＲＯＳの放出または形成を阻害する化合物、もしくはＲＯＳスカベンジャーは、約０．１〜約２０ｍｇ／日の量で投与できる。好ましくは、量は約０．５〜約８ｍｇ／日である。さらにより好ましくは、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの量は、約１〜約６ｍｇ／日である。しかしながら、それぞれの場合において、用量は投与される化合物の活性に依存する。特定の宿主に適切な用量は、当業者によく知られた経験的技法によって容易に決定できる。
【００３５】
単球の成熟を促進する化合物とＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーとの組み合わせによって、癌または慢性感染症の患者を治療する方法が記載される。癌は、単一の異常細胞子孫の進行性で無秩序な成長によって引き起こされる。本明細書で使用される「癌」という用語には、腫瘍性疾患、腫瘍性細胞、腫瘍、腫瘍細胞、悪性腫瘍、ならびに固形腫瘍および散在性の腫瘍性疾患の両方を含む任意の形質転換細胞が含まれる。歴史的には、癌細胞は体の他の非癌性細胞と同一の遺伝物質を含有するので、癌細胞は、一般的に、免疫系による検出および破壊を免れると考えられている。体内における癌細胞および健常細胞の遺伝的な同一性または類似性は、おそらく、癌細胞を正常細胞から区別するのが困難である原因となり、したがって、体内の癌細胞の持続性で明らかなように、免疫系は有効な免疫反応を起こすことができない。
【００３６】
それと反対に、種々の腫瘍関連抗原（ＴｕＡＡ）は免疫反応を誘発でき、そして実際に誘発すると記載されている。多数の研究は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで種々のＴｕＡＡに由来のペプチドを提示する標的細胞を殺すことができる腫瘍浸潤リンパ球について記載している。ある実施形態では、本発明の組成物は癌治療のために被験体へ投与される。既知の単球成熟促進剤をヒスタミンまたはヒスタミン関連化合物と組み合わせて投与すると、単球の樹状細胞への成熟が容易になる。その結果、より多くの抗原提示細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球に対してＴｕＡＡを提示する。細胞傷害性Ｔリンパ球は、次に、腫瘍細胞を特異的に攻撃して殺すことができる。したがって、ＴｕＡＡをその細胞表面に提示できる樹状細胞の数を増大させることは、癌の治療にとって有益であろう。
【００３７】
１つの実施形態では、薬学的に許容できる形態の少なくとも１つの単球成熟促進剤は、癌を示す被験体へ投与される。ある実施形態では、ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーおよびさらなる単球成熟促進剤が、いずれも薬学的に許容できる形態で同様に投与される。単球成熟促進剤およびＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは、別々に、あるいは単一の組成物として投与できる。ＲＯＳ阻害またはスカベンジャーと共に、多数の単球成熟促進剤が投与されるのが有利である。別々に投与される場合、少なくとも１つの単球成熟促進剤は最初か最後のどちらかに投与されると考えられる。適切な単球成熟促進剤には、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８が含まれる。好ましくは、単球成熟促進剤はＧＭ−ＣＳＦである。
【００３８】
本明細書に記載される方法は、当業者が決定するとおりに、単独で利用されても、他の抗癌療法と組み合わせて利用されてもよい。例えば、ＲＯＳインヒビターまたはＲＯＳスカベンジャーおよび少なくとも１つの単球成熟促進剤と、癌ワクチン、アジュバントおよび／または抗癌剤との同時投与が特に考えられる。
【００３９】
慢性感染症を治療する方法も同様に考えられる。慢性感染症は、宿主の免疫系による検出とそれに続く根絶を免れることができる病原体による感染に起因することが多い。このような病原体の例としては、特定のウィルス、原生動物、または他の生物体が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００４０】
宿主生物体において慢性感染症を確立するために、持続性病原体によって多様なメカニズムが使用される。共通の特徴は抗原発現の減少または変更である。ウィルス抗原提示は、プロテアソームによるウィルス抗原のペプチドへの消化と共に開始する。プロテアソームがタンパク質をペプチドへ消化した後、いくらかのペプチドは小胞体中のクラスＩ複合体上へロードされ、細胞表面へ輸送される。細胞表面において、クラスＩ−ペプチド複合体は細胞傷害性Ｔリンパ球表面のＴ細胞受容体によって認識され、感染細胞は殺される。
【００４１】
特定のウィルスおよび他の細胞内寄生虫は、感染細胞の効率的なＴ細胞認識に必要な宿主分子の発現を下方制御することによって、Ｔ細胞認識を免れるかもしれない。アデノウィルス、サイトメガロウィルス、エプスタイン−バーウィルス、単純ヘルペスウィルス１、単純ヘルペスウィルス２、ヒトヘルペスウィルス６、水痘帯状疱疹ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、パピローマウィルス、パルボウィルスＢ１９、ポリオーマウィルスＢＫ、ポリオーマウィルスＪＣ、Ｃ型肝炎ウィルス、麻疹ウィルス、風疹ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウィルスＩ、およびヒトＴ細胞白血病ウィルスＩＩによって引き起こされるような慢性感染症は、宿主がこれらのウィルスに対して十分な細胞傷害性Ｔ細胞応答を起こすことができないので、宿主中で持続する。同様に、レーシュマニア、トキソプラズマ、トリパノソーマ、プラスモジウム、住血吸虫、またはエンセファリトゾーンなどの種のような多数の寄生虫も宿主中で持続する。特定の理論に限定されることなく、このような持続性は、宿主免疫系による不十分な病原体の認識とそれに続く解決、すなわち、細胞傷害性Ｔリンパ球が感染標的細胞を判別して殺せないことに起因すると仮定される。あるいは、マクロファージがＲＯＳを作る際、ＲＯＳがＴ細胞を殺すので、マクロファージが抗原を提示できないという説もある。ヒスタミンおよびヒスタミン関連化合物はスイッチとして機能でき、ＲＯＳ量が減少される。したがって、樹状細胞表面でＣＤ８６の増大が観察され、樹状細胞による抗原提示の増大が予め示される。
【００４２】
本明細書に記載され、当該技術でまだ認識されていないように、ヒスタミンなどの成熟促進化合物を必要な被験体へ投与することによって、樹状細胞へ成熟する単球の速度と数を増大させることが可能である。この投与は、抗原提示細胞によるウィルス抗原提示を増大する働きをする。抗原提示のために単球の樹状細胞への発達を容易にすることによって、より多くの抗原提示細胞が慢性ウィルス感染症に関連する抗原をその細胞表面に表示するであろう。細胞傷害性Ｔリンパ球上の受容体は抗原提示細胞表面に表示された抗原と結合し、その結果、慢性的に感染した細胞は細胞傷害性Ｔリンパ球により殺されるであろう。
【００４３】
したがって、慢性感染症を有する被験体を治療する方法が開示される。慢性感染症は上記の種のようなウィルスまたは寄生虫によって引き起こされる。慢性感染症を示す被験体が判別された後、薬学的に許容できる形態のヒスタミンまたはヒスタミン関連化合物などのＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを被験体に投与する。１つの実施形態では、少なくとも１つの単球成熟促進剤も、薬学的に許容できる形態で被験体へ投与される。もう１つの実施形態では、複数の単球成熟促進剤が投与される。少なくとも１つの単球成熟促進剤およびＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーは別々に、あるいは単一の組成物として投与することができる。別々に投与される場合、単球成熟促進剤は最初か最後のどちらかで投与されることが考えられる。適切な単球成熟促進剤には、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−１８が含まれる。好ましくは、単球成熟促進剤はＧＭ−ＣＳＦである。上記のような慢性感染症の治療方法は、熟練した当業者が決定するように、単独、または他の抗ウィルスまたは抗寄生虫療法と組み合わせて利用できる。例えば、単球成熟促進剤およびＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーの投与は、被験体の免疫系を刺激するために、当業者に既知の抗ウィルスワクチンまたは種々のアジュバントの投与を伴うことが可能である。
【００４４】
以下の実施例は、単球成熟促進剤と共にＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを投与することによって単球の樹状細胞への成熟を促進するために本明細書に開示される方法および組成物を教示する。これらの実施例は単なる例示であって、ここに開示される本発明の範囲を限定する意図はない。以下に記載される治療方法は、当業者によく知られた経験的技法を用いて最適化することができる。さらに、当業者は、以下の実施例に記載される教示を用いて、本明細書に開示される本発明の全範囲を実行できるであろう。
【００４５】
実施例１
ヒスタミンおよびＧＭ−ＣＳＦによる単球の処理
単球の分離  Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｒｅ， Ｓａｈｌｇｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｇｏｔｅｂｏｒｇ， Ｓｗｅｄｅｎで４人の健康な供血者から新しく調製したロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）として末梢静脈血を得た。血液（６５ｍｌ）を、９２．５ｍｌのイスコフ培地、３５ｍｌの６％デキストラン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）および７．５ｍｌのＡＣＤ（Ｂａｘｔｅｒ， Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ， Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）と混合した。室温で１５分間インキュベートした後、注意深く、上清をフィコール−ハイパック（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ， Ｎｙｅｇａａｒｄ， Ｎｏｒｗａｙ）上で層にした。３８０ｇで１５分間の遠心分離の後に単核細胞を界面で採取し、ＰＢＳで２回洗浄した後、１０％ヒトＡＢ＋血清を含むイスコフ培地中に再懸濁させた。
【００４６】
単核細胞では、さらに、Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄ， Ｋら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５３：４９４０−４９４７ （１９９４）に詳細に記載されるような向流遠心エルトリエーション（ＣＣＥ）技法を用いて単球が濃縮された。簡単には、緩衝ＮａＣｌ中に０．０５％ＢＳＡおよび０．０１５％ＥＤＴＡを含有するエルトリエーション緩衝液に単核細胞を再懸濁させ、２１００ｒｐｍのＪＥ−６ＢロータでＢｅｃｋｍａｎ Ｊ２−２１超遠心分離機に入れた。１８ｍｌ／分の流速で、＞９０％単球（ＣＤ１４抗原の発現によって反映される）を有する画分が得られた。
【００４７】
処理および細胞染色  単球（１ｍｌの全体積中に３×１０５細胞／ｍｌ）を２４ウェルマイクロプレート中、３７℃で一晩（１６時間）インキュベートした。インキュベーション中、最終濃度１０μＭのヒスタミン二塩酸塩（Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＵＳＡから購入）および／または最終濃度０．１５μｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｋｏｍａｘ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ， Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ， Ｓｗｅｄｅｎ）で単球を処理した。インキュベーションが完了したら細胞を遠心分離し、Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄ， Ｋ．ら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３：４９４０−４９４７ （１９９４） に記載されるように、ＣＤ１４（ｐａｎ−単球抗原）またはＣＤ８６（樹状細胞マーカー）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ， Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ， Ｓｗｅｄｅｎから購入）に対するモノクローナル抗体を染色のためにペレットへ添加した。洗浄した後、ＣＤ１４およびＣＤ８６の細胞表面発現について細胞を分析した。
【００４８】
結果
ＧＭ−ＣＳＦによる一晩のインキュベーションの後、平均８８％の単球がＣＤ８６を発現した。ＧＭ−ＣＳＦ＋ヒスタミンで処理した単球では、対応する値は９７％であった。
【００４９】
ヒスタミンは、ＧＭ−ＣＳＦにより誘発されるＣＤ８６抗原発現強度のアップレギュレーションを増大した。特に、ＣＤ８６の細胞表面発現の強度（どれくらいのＣＤ８６分子が各細胞上に発現されたかを反映する）は、ヒスタミン処理によって適度に増強され、ヒスタミン＋ＧＭ−ＣＳＦの組み合わせは、ヒスタミン単独またはＧＭ−ＣＳＦ単独のいずれかで処理した場合よりも高いＣＤ８６の発現をもたらした（以下の表１）。ヒスタミン＋ＧＭ−ＣＳＦで処理した単球上のＣＤ８６の発現は、全ての実験において、ＧＭ−ＣＳＦ単独で処理した単球の場合よりも高かった。ヒスタミン＋ＧＭ−ＣＳＦで処理した単球におけるＣＤ８６の細胞表面発現の中央値は、ＧＭ−ＣＳＦ単独で処理した対応の単球の場合の３５２％（平均）／３６６％（中央値）であった。
【００５０】
【表１】
2004532803.tif 000002
【００５１】
ＣＤ１４の細胞表面発現は、ＧＭ−ＣＳＦで処理された単球およびＧＭ−ＣＳＦ＋ヒスタミンで処理された単球において同様であり、ヒスタミン＋ＧＭ−ＣＳＦによるＣＤ８６発現の増強は非特異的な抗体取り込みの増強の結果ではないことが示唆された。
【００５２】
ヒスタミンはヒト単球上のＣＤ８６同時刺激性分子のＧＭ−ＣＳＦ誘発による発現を増強することが分かった。ヒスタミンは単球ＨＬＡ−ＤＲ発現をアップレギュレートし、これは樹状細胞上で特徴的に高かった。ＧＭ−ＣＳＦなどの単球成熟促進剤と共にヒスタミンを投与すると、単球成熟促進剤の活性が増大された。ヒスタミンのＧＭ−ＣＳＦとの同時投与は、樹状細胞のための細胞表面マーカーＣＤ８６のかなりの増加をもたらした。さらに、ヒスタミンは、単球およびマクロファージ上の重要な同時刺激性分子のアップレギュレーションを誘発した。ヒスタミンは、単球の樹状細胞への成熟におけるＧＭ−ＣＳＦの効果を増強する。ヒスタミンの投与は、単球からプロフェッショナル抗原提示樹状細胞が発達しやすくすることによって、適応的免疫と大きく関連している。
【００５３】
実施例２
酸化的に誘発されるアポトーシスに対してＮＫ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫリンパ球を保護するためのヒスタミン二塩酸塩の投与
酸化的ストレス、すなわち活性酸素種（ＲＯＳ）により課せられる毒性は、悪性腫瘍部位および慢性ウィルス感染症において、免疫抑制状態に寄与することが提言されている。腫瘍内または腫瘍に隣接して存在するリンパ球は、より高度のアポトーシスおよび欠陥性膜貫通情報伝達を含む酸化的損傷の兆候を示す。腫瘍成長部位における酸化的ストレスは、単球／マクロファージ（ＭＯ）または好中球（ＧＲ）などの隣接食細胞が産生したＲＯＳによって伝えられると考えられる。食細胞におけるＲＯＳ産生のインヒビターであるヒスタミンは、現在、サイトカイン効率を高める目的で、ＩＬ−２およびＩＦＮ−αなどのリンパ球活性化サイトカインの補助剤として使用される。臨床試験の結果は、肝臓黒色腫転移の患者および慢性Ｃ型肝炎の患者がヒスタミン治療によって利益を得ることを示唆し、これは、ヒスタミンが肝臓組織において選択的に有効であることを示唆する。
【００５４】
ヒトの肝臓中では、末梢血中よりも、ＮＫ細胞ならびにＮＫ／Ｔ細胞がはるかに豊富である。したがって、３つのタイプのヒトリンパ球、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ３−／５６＋ＮＫ細胞、およびＣＤ３＋／５６＋ＮＫ／Ｔ細胞の感受性を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで酸化的に誘発されたアポトーシスと比較した。自己由来のＭＯまたはＧＲと共にインキュベートした後、もしくは酸素の活性種である過酸化水素で処理した後、３つの細胞型は全てアポトーシスを示すようになった。このように、リンパ球対ＭＯ比が１：１では、３５±５％のＮＫ細胞、および７６±７％のＮＫ／Ｔ細胞がアポトーシスを示すようになった。リンパ球対ＧＲ比が１：１における対応のアポトーシス頻度は２１±４％（Ｔ細胞）、３０±７％（ＮＫ細胞）、および６６±８％（ＮＫ／Ｔ細胞）であった。全てのデータは平均±標準誤差（ｎ＝１５〜３０供血者）である。全ての細胞型におけるアポトーシスはヒスタミンによって顕著に防止された（ｐ＜０．００１）。ＮＫ／Ｔ細胞およびＮＫ細胞中で酸化的に誘発されるアポトーシスへの感受性がより高いことは、アポトーシスが外因性過酸化水素により誘発される実験で確認され、２５μＭの過酸化水素では、３５±５％のＴ細胞、６５±７％のＮＫ細胞、および７８±７％のＮＫ／Ｔ細胞（ｎ＝８）がアポトーシスになった。肝臓型リンパ球、特にＮＫ／Ｔ細胞は、酸化的ストレスに特に敏感であると結論される。したがって、ヒスタミンなどの抗酸化剤は、肝臓浸潤リンパ球で酸化的に誘発されるアポトーシスに対して感受性がより高い結果、肝臓新形成または慢性感染症においてより有効であることが提言される。
【００５５】
慢性ウィルス感染症の治療
ウィルスまたは他の細胞内寄生虫による感染症の回復の成功には、宿主免疫系が感染細胞を「異物」として認識し、感染作用物の成長および転移を阻害するのに十分な応答を起こすことを必要とする。ウィルスは宿主自身の細胞に感染するので、感染細胞の認識とそれに続く破壊は困難であり得る。宿主の免疫系が感染細胞を「異物」として区別できず、従って、感染細胞に向けられる有効な細胞傷害性Ｔ細胞応答を起こせないので、幾つかのウィルスおよび細胞内寄生虫は宿主中で生き残る。ここに開示される本発明の組成物および方法は、慢性ウィルス感染症を治療するために使用できる。ＲＯＳインヒビターまたはスカベンジャーを単球成熟促進剤と同時投与すると、ウィルス感染に対する免疫反応の増大がもたらされるであろう。
【００５６】
実施例３
陰部ヘルペスの治療
ヘルペスウィルス科のウィルスは、例えば、いくつかの最も重要な既知のヒト病原体を含む。ヘルペス感染症は再発性であると共に、ひどい痛みを伴う。不快感のレベルは、ヘルペスウィルスが被験体の三叉神経節で休止状態にあり、次に発動中に神経を通って皮膚表面へ至ることが原因だと考えられる。
【００５７】
陰部ヘルペスを患う女性被験者は、配合物の０．７重量％濃度のリン酸ヒスタミンおよび配合物の０．１５重量％濃度のＧＭ−ＣＳＦを含有するクリームが投与される。膣内のヘルペス病変を治療するために、アプリケータを用いて、クリームは膣空間内へ注入される。クリームは１日３回、５日間塗布される。組成物が単球の成熟を増強する働きをすることにより、被験体の免疫系はウィルス感染細胞を攻撃できるようになる。有害反応は全くなく、この治療はウィルス感染を根絶する。
【００５８】
実施例４
水疱瘡の治療
弱毒化水疱瘡ウィルス、ワクチンの０．０２５重量％のＧＭ−ＣＳＦ、およびワクチンの１．０重量％のヒスタミンを含むワクチンは、被験体への非経口投与のために調合される。ヒスタミンは単球成熟促進剤としてＧＭ−ＣＳＦの活性を増大する働きをする。水疱瘡ウィルスに対して、被験体による免疫反応が起こる。
【００５９】
実施例５
ＨＩＶの治療
ＨＩＶ感染症を示す被験体は、有効量のプロテアーゼインヒビターと、薬学的に許容できる形態のヒスタミン受容体アゴニストと、薬学的に有効な形態のＧ−ＣＳＦとを含む組成物が静脈内に投与される。組成物が単球の成熟を増強する働きをすることにより、被験体の免疫系はウィルス感染細胞を攻撃できるようになる。ＨＩＶ抗原を提示する樹状細胞の数の増大が観察される。ヒスタミン受容体アゴニストは単球の樹状細胞への成熟を増強する。
【００６０】
慢性寄生虫感染症の治療
慢性感染として宿主中に存在できる病原体の例としては、レーシュマニア、トキソプラズマ、トリパノソーマ、プラスモジウム（マラリアの原因物質）、住血吸虫、およびエンセファリトゾーンなどの原生動物が挙げられる。このような生物体は世界中で重大な健康危機を引き起こす。例えばマラリアは国際的に破壊力のある病気であり、４億人を超える人々を感染させ、年間３００万人を死亡させる。
【００６１】
実施例６
マラリア感染症の治療
マラリアを示す被験体には、１００，０００Ｕ／ｋｇ／日の割合のＧＭ−ＣＳＦと、６ｍｇ／日の投薬量のセロトニンとが非経口投与される。組成物が単球成熟を増強する働きをすることにより、被験体の免疫系はプラスモジウム種に感染した細胞を根絶できるようになる。特に、セロトニンはＧ−ＣＳＦの単球成熟促進活性を増強する。プラスモジウムに関連する抗原を提示する樹状細胞の数の増大が観察される。Ｔ細胞はプラスモジウム抗原を異物として認識し、攻撃し、細胞を殺す。感染細胞の数は減少する。
【００６２】
腫瘍性疾患の治療
毎年診断される癌の症例数は米国では約１５０万であり、世界中では５００万を超える。白血病、癌腫、リンパ腫、星状細胞腫、肉腫、神経膠腫、網膜芽細胞腫、黒色腫、ウィルムス腫瘍、膀胱癌、乳癌、結腸癌、すい臓癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、子宮頸癌、精巣癌、腎細胞癌、および脳腫瘍などの癌は、重大な健康危機を引き起こし、治療しないままだと死に至るであろう。
【００６３】
癌患者は、外科的切除、化学療法、放射線療法、および骨髄移植を含む無数の治療の選択が可能である。従来の多くの癌療法は新生物の成長を阻止する上で有効であることが多いが、正常な細胞も高い頻度で影響を受ける。したがって、従来の癌療法には、多数の副作用が付随する。
【００６４】
癌との戦いにおいて、近年は、腫瘍関連抗原を表示する腫瘍性細胞を根絶して、従来の癌療法に関連する副作用を回避するために、患者の免疫系の協力を得ることに努力が集中している。単球の抗原提示樹状細胞への成熟を容易にすることは、腫瘍細胞に対する宿主の免疫反応を増強する。
【００６５】
ヒスタミンおよびヒスタミン二塩酸塩などのヒスタミン関連化合物は、単球により（特に、マクロファージにより）誘発される酸化的阻害からＴ細胞およびＮＫ細胞を保護することが分かっている。このメカニズムによって、ヒスタミンは、ＩＬ−２またはＩＦＮ−αなどの活性化サイトカインに応答してリンパ球の活性化を最適化する。継続的な臨床試験では、転移性黒色腫、腎細胞癌、急性骨髄性白血病、およびＣ型肝炎患者に、ＩＬ−２のみと組み合わせて、あるいはＩＦＮ−αと組み合わせて、ヒスタミン二塩酸塩が投与されている。結果は、ＩＬ−２療法にヒスタミンを加えると、肝臓転移のある黒色腫患者の生存が著しく改良されることを示唆する。ＧＭ−ＣＳＦは、有効な抗原提示細胞である樹状細胞への単球の分化を誘発する。ＧＭ−ＣＳＦのこれらの特性は、転移性黒色腫における免疫アジュバントとしてのＧＭ−ＣＳＦの使用の重要な背景となっている。
【００６６】
実施例７
転移性黒色腫の治療
肝臓の転移性黒色腫を示す女性被験者には、２００，０００Ｕ／ｋｇ／日のＧ−ＣＳＦおよび１０ｍｇ／日の用量のリン酸ヒスタミンが投与される。投与された作用薬が単球の成熟を増強する働きをすることにより、被験体の免疫系は、肝臓中の癌細胞を攻撃できるようになる。腫瘍質量の減少が観察される。
【００６７】
実施例８
前立腺癌の治療
前立腺癌を示す男性被験者には、３００，０００Ｕ／ｋｇ／日のＧＭ−ＣＳＦ、１００，０００Ｕ／ｋｇ／日のＩＬ−１２、および４ｍｇ／日の用量のヒスタミン二塩酸塩が投与される。投与された作用薬が単球の成熟を増強する働きをすることにより、被験体の免疫系は、腫瘍性細胞を攻撃できるようになる。腫瘍質量の減少が観察される。
【００６８】
以上の説明は本発明の特定の実施形態を詳述する。しかしながら、上記の内容がどんなに詳細に本文中に示されていても、本発明は多くの方法で実行できることは理解されるであろう。また上記のように、注目すべきは、本発明の特定の特徴または態様を説明する際の特定の専門用語の使用が、その専門用語が本明細書中で再定義されて、その専門用語が関連する本発明の特徴または態様の特定の特質を含むことに限定されることを意味すると解釈されてはならないことである。したがって、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびその等価物に従って解釈されるべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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