(57)【要約】環境に対して敏感であるか、または揮発性のコア物質を完全に閉じ込めることができ、かつ水との接触により前記コア物質を放出できるマイクロカプセル。水溶性マイクロカプセルの製造方法は、水溶性セルロース物質、水溶性グルコピラノシジル物質、少なくとも２つの界面活性物質、およびコア物質を混合することと、前記混合物を急激な圧力変化に晒すことと、その圧力処理された混合物を乾燥させることとからなる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性マイクロカプセルの調製方法であって、水不溶性コア物質、水溶性グルコピラノシジル物質および乳化組成物の水性混合物を気圧力に晒して水性ミクロエマルジョンを形成するとと、前記ミクロエマルジョンから水を除去することとからなる方法。
【請求項２】
前記ミクロエマルジョンを噴霧乾燥させることによって水が除去されて、前記マイクロカプセルを形成する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記水溶性グルコピラノシジル物質が天然由来の二糖類である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記グルコピラノシジル物質がグルコピラノシドのポリヒドロキシアルキルオキシエーテルである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記グルコピラノシジル物質がイソモルトまたはショ糖である、請求項５に記載の方法。
【請求項６】
前記混合物がさらに噴霧乾燥促進剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記促進剤が化学的に修飾された水溶性セルロース物質である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記物質が水酸基のアルキルアルキルセルロースまたはカルボキシアルキエウセルロースの金属塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記物質がヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースの金属塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記乳化組成物が第１のポリマー界面活性物質および第２の単糖類界面活性物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記乳化組成物が前記混合物の約０．５〜約３重量パーセントを構成する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記乳化組成物が前記混合物の約１重量パーセントを構成する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記乳化組成物が約５〜約３０パーセントの第１の界面活性物質と、約７０〜約９５パーセントの第２の界面活性物質とからなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
室温において約３秒未満で水に溶解する水溶性マイクロカプセルを生成する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１に従って生成された水溶性マイクロカプセル。
【請求項１６】
その蒸気の放出が室温ではマスクされる、低蒸気圧を有する有機化合物を含むコアを備える、請求項１に従って生成された水溶性マイクロカプセル。
【請求項１７】
前記混合物が、約１〜約６０パーセントの二糖類またはその誘導体と、約１〜約３５パーセントのコア物質とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記混合物が約２０パーセントの二糖類またはその誘導体と、約１０パーセントのコア物質と含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記急激な圧力は、約１３．８ＭＰａ（２，０００ｐｓｉ）〜約１３８ＭＰａ（２０，０００ｐｓｉ）の圧力で、１秒間未満にわたって加えられる、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
水不溶性コア物質と、水溶性グルコピラノシジル物質、少なくとも１つのポリマー界面活性物質、単糖類エステル界面活性物質および水溶性の化学的に修飾されたセルロース物質を含む水溶性シェルとからなる水溶性カプセル。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（本発明の技術分野）
本発明は、水溶性マイクロカプセル組成物、該組成物の調製のプロセス、および該組成物の食品業界、栄養補給業界、および製薬業界を含む様々な用途における使用法に関連する。
【０００２】
（本発明の背景）
カプセルは様々な機能を果すために開発されてきている。カプセル化の一般的な目的の一つは、適切な時間または条件が存在するまで、その環境からコア物質を保護するか、または隔離することである。これらの状況において、コア物質はシェルによって環境から保護される。コア物質がシェルを通って浸透または拡散し得ることがあるので、そのような保護は必ずしも容易に達成されるとは限らない。一方では、一部のシェルの「漏れ」の特徴を周囲の環境へのコア物質の解放速度を制御するために活用することが可能である。
【０００３】
カプセル化は、温度、ｐＨ、または酸化環境および還元環境などの化学的反応性環境のような環境条件から化合物を保護することが可能である。そのような酸化および還元環境は化学薬品からなり得、その化学薬品にはカプセルが付与されてきた。他の場合において、コアの保護のためだけでなく、コアを形成する化合物との反応から外部環境を保護するためにも、ある種の化合物をカプセル化することは望ましい。カプセル化のためのこの用途の一般的一例として、化学組成物の味および／または芳香のマスキングがある。そのような場合において、カプセル化は、苦味、毒性、あるいは望ましくない味または芳香の認知に対する保護を提供し得る。皮膚および呼吸器刺激物、並びに毒素のカプセル化は、そのような物質を取扱う人を被曝から保護するための１つの重要な方法である。
【０００４】
様々なミクロカプセル方法および組成物は当業界において知られている。これらの組成物は、例えば、製品に風味をつけるため、苦い薬の味をマスクするため、長期化された投薬形態を処方するため、非融和性の物質を分離するため、湿気または酸化から化学薬品を保護するため、あるいは取り扱いおよび／または処理を容易にするために物質の物理的特性を変更するために、食物や、農業・製薬調合物において使用される。
【０００５】
例えば香料油および芳香油のような多くの液体は、極わずかな熱に晒しただけで蒸発してしまう、揮発性のアルコールおよび芳香物質の混合物を含んでいる。実際に、多くのそのような物質は、しばしば、揮発によりカプセル化プロセスの間にそれらの物質の元の重量の４５％をも損失する。そのような損失は不経済であり、費用が嵩む。さらに、これらの方法により生じる最終製品は、多くの場合において、元の液体ほど、強烈な味がしなかったり、または望ましく匂わない。
【０００６】
マイクロカプセル化に用いられる技術の多くは、ミクロスフェアの外側シェルを形成するために、ポリ尿素のような樹脂の重合または硬化を伴う。代表的な製薬カプセル化組成物としては、例えば、ゼラチン、ポリビニルアルコール、エチルセルロース、セルローズアセテートフタレート、スチレン無水マレイン酸がある。「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．、ペンシルバニア州イーストン（Ｅａｓｔｏｎ）、（１９９０年）を参照されたい。他の技術は、外側シェルを成膜して形成するために、主として脂肪、ろうまたはポリマーを使用する。
【０００７】
揮発物質用の保持媒体としての脂肪の使用は、１９７６年４月６日に発行されたジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）らの米国特許第３，９４９，０９４号に示されている。上記特許において、揮発性香味料、シーズニング、着色剤、調味料などは、超大気条件下で類脂質物質と混合され、その後、噴霧冷却（ｓｐｒａｙ　ｃｈｉｌｌｉｎｇ）プロセスによって微粒子へ処理または変換される。圧力下における脂肪内の揮発物質の保持は処理前の揮発を低減するが、ジョンソンの噴霧冷却カプセル化法の間に過度の損失が依然生じる。
【０００８】
解決策として、米国特許第５，４６０，７５６号は、圧力パルス技術を使用する安定した脂質またはろうシェル内に液体を捕捉することを記載している。
リム（Ｌｉｍ）らの米国特許第４，３８９，４１９号は、アルカリ金属アルギンの連続相水溶液と、多糖類などの水溶性かつアルコール不溶性のフィラーと、親油性物質の分散相とからなるエマルジョンの処方を開示している。このように生成されたエマルジョンは、その後、小滴に形成される。その小滴は多価カチオンのアルコール溶液に浸漬されて、沈殿した多糖類によって充填されるとともに、複数の油滴を封入した、水不溶性で形状保持性のアルギンマトリックスを生成する。
【０００９】
ビタミンまたはチアミンのような無機栄養素をカプセル化するのに使用された別の著しく異なるアプローチは、１９８０年１月８日に発行されたホール（Ｈａｌｌ）らの米国特許第４，１８２，７７８号に記載されている。ホールらは、ガス流中に栄養物質を流体化し、前記栄養物質を微細に霧化されたコーティング溶液の小滴と接触させることにより、カプセル化することを記載している。
【００１０】
ボイル（Ｂｏｙｌｅ）らの米国特許第５，９２５，３８１号は、親油性物質およびポリマーからのエマルジョンを形成し、次に、親油性組成物を閉じ込めるためにポリマーのヒートセットおよび／または架橋結合を用いることにより、親油性物質をマイクロカプセル化することを記載している。その後、さらに親油性物質を保護するために、このプロセスは第２のポリマーまたは第３のポリマーを用いて、同一または異なるメカニズムで、架橋を伴うかまたは伴わないで繰り返される。
【００１１】
米国特許第４，３５３，９６２号は、例えば、界面活性物質を含み得る水性エマルジョンからの膜形成ポリマー、特にアクリルポリマーを用いた、除草や殺虫などの用途用の物質のインフライト・カプセル化を記載している。前記エマルジョンは、硬化したＸ架橋型アクルルカプセル化シェルに閉じ込められた物質の形態にある目標上に噴霧乾燥される。当業界において、カプセル化シェルが高度に水溶性である、調合薬、除草剤、殺虫剤、香料および芳香剤のような活性成分を閉じ込めるマイクロカプセルが必要とされている。そのようなマイクロカプセルは活性成分が水性環境へ即時に放出されだろう場合において、水性環境と接触させられるまで閉じ込めたコア物質を保護するように作用するだろう。
【００１２】
（既報の開発）
水溶性マイクロカプセルは、水溶性シェル物質として１種または別の種のデンプン物質を用いて、貯蔵安定性を有する香料および芳香剤を調製するために、長年にわたって特許文書に報告されてきた。
【００１３】
米国特許第３，４５５，８３８号は、代用されたジカルボン酸の糊精化されたデンプン酸性エステルから成るシェル中にカプセル化されたレモン油を開示している。前記カプセル化は、レモン油と修飾デキストリンの水溶液とを混合し、コロイドミルを通過させて、そのエマルジョンを噴霧乾燥することにより調製される。
【００１４】
米国特許第３，４９９，９６２号は、１４０°Ｆより高い温度で不溶性物質をアミロース溶液と混合して、その混合物を噴霧乾燥することにより、高度にアミロースを含有したデンプン物質によって水不溶性物質をカプセル化することを開示している。
【００１５】
米国特第許５，３７０，８８１号は、イソモルトのような水溶性ショ糖誘導体のマトリックス中への香料油の微粒分散を開示している。前記マトリックスはフラッシュフロープロセスにおいて形成される。また、生成物は香料の迅速な放出を提供すると記載されている。
【００１６】
米国特許５，９７６，５７５号は、油を糖の水溶液、デンプンカプセル化剤および酸化防止剤と乳化し、高圧ホモジナイザーを使用して、分散を均質化し、生じた微細分散エマルジョンを噴霧乾燥することにより調製された、カプセル化されたカロテノイド油を開示している。
【００１７】
セルロース物質のような他の親水性のポリマーを外側シェルとして使用することが、カプセル化された香料および薬剤物質向けにも記載されている。
米国特許第３，６６４，９６３号は、アルカリセルロース、セルロースエーテルおよびエステル系溶剤のような水溶性セルロースの化合物を含む水溶性親水ポリマーから調製された水溶性シェルにカプセル化されたレモン油マイクロカプセルを開示する。前記カプセルは、レモン油とポリマーとの水中油型エマルジョンから調製されている。前記エマルジョンは、酸化防止剤および界面活性物質を含む他の成分を含有してもよい。前記エマルジョンは圧力ホモジナイザーによって分散され、水溶性シェルから水を除去するためにポリエチレングリコール上に噴霧され得る。生じたカプセルは、ポリエチレングリコールの層で被覆されている。ポリエチレングリコールによって被覆されたマイクロカプセルは、冷水に急速に溶け、空気が存在する状態での貯蔵において長期間にわたってそれらの新鮮なレモン風味を保持すると記載されている。
【００１８】
米国特許４，５４０，０６２番は、水溶性高分子物質によってほとんど可溶でない薬剤をカプセル化することを開示している。前記水溶性高分子量物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなセルロース誘導体、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩、およびデンプン、アラビアゴムなどの他のポリマー物質のうちの１つまたは組み合わせであり得る。薬剤および高分子量物質の水溶液は噴霧乾燥されてマイクロカプセルを形成する。’０６３特許は、エマルジョンがポリソルベート８０、ＨＣＯ−６０硬化ヒマシ油のエチレンオキシドとの付加重合体のような界面活性剤を含み得るエマルジョンに言及しているが、このような使用は溶血を生じ得る。前記開示の後、’０６２特許は、溶血効果がないことから、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムのような少量の界面活性物質、ショ糖脂肪酸および同種のものが使用され得ることを開示している。
【００１９】
蛋白質に基づいた物質およびリン脂質の使用を含む他の系も、シェル物質として使用されてきた。
米国特許第５，６０１，７６０号は、デンプンまたは糖とともに水に分散され、オレンジ油と混合され、低速および高速ホモジナイザーを用いて乳化され、噴霧乾燥された乳漿たんぱくに基づいたシェル物質を使用してオレンジ油をマイクロカプセル化することを開示している。
【００２０】
米国特第許５，９８９，５８３号は、固体脂肪およびリン脂質、および界面活性物質の均質化しそのリポソーム組成物を噴霧乾燥することにより調製された迅速溶解性パウダーとして記載されるリポソーム組成物を開示している。
【００２１】
米国特許第５，３１７，００４号、溶融した水不溶性コア物質をそのコアが溶融したままであり得る温度に熱した界面活性物質を含む水溶性膜形成ポリマーの水溶液と混合し、次にそのエマルジョンを噴霧乾燥することにより、低可溶性の除草物質をマイクロカプセル化することを開示している。ポリマーの具体例としてはＰＶＡ、ＰＶＰおよびカルボキシメチルセルロースがある。典型的な界面活性物質はジオクチルスルホ琥珀酸ナトリウムがある。
【００２２】
水溶性シェル物質により水不溶性物質をカプセル化する方法は多様であるが、標準状態で数ヶ月にわたって貯蔵が安定しており、香料、芳香剤、農業および薬剤物質のような敏感なコア物質に対する酸化および／または蒸発損失の影響を最小限にする条件下で調製され得る即時溶解可能なマイクロカプセルシステムに対する必要性が存在する。
【００２３】
（発明の概要）
本発明は、水不溶性コア物質と、水溶性グルコピラノシジル（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｙｌ）物質、少なくとも２つの界面活性物質および水溶性セルロース物質を含むカプセル化水溶性シェルとを含む水溶性マイクロカプセルに関連する。
【００２４】
本発明は、さらに、水溶性マイクロカプセルの調製方法に関連する。前記調製方法は、水不溶性コア物質、水溶性グルコピラノシジル物質、水溶性セルロース物質および乳化組成物の水性混合物に圧力を付与して水性ミクロエマルジョンを形成することと、前記ミクロエマルジョンから水を除去することとからなる。本発明は、さらに、前記方法によって生成された水溶性マイクロカプセルに関連する。
【００２５】
本発明の主要な利点は、閉じ込められた水不溶性コア物質との環境上の接触を防ぐとともに、前記水不溶性コア物質は周囲温度で水環境と接触することによりそのカプセル化シェルから即時に放出されるマイクロカプセルを調製することである。予期しない利点のさらなる説明および本発明の利点については、以下においてより完全に述べる。
【００２６】
（詳細な説明）
下記に定義される以下の用語は本明細書の全体にわたって使用される。
カプセル化とは、コア物質を囲むシェルの適切な物質からの形成に適用される。形成されるカプセルは、固体、液体、気体、または多相であるコア物質を有し得る。その用語は文献に特に定義されていないが、約１ミクロンから数ミリメートルに及ぶサイズを有するカプセルを概してマイクロカプセルと呼ぶ。カプセルおよび／またはマイクロカプセルは一様な球状である必要がないが、不規則な形状の固体結晶コアを囲むシェルを有するもののような不規則な形状の物体からなってよい。
【００２７】
本願に使用されるように、用語「シェル」および「壁」は環境からコア物質を隔てる、コア物質を囲む障壁を表わすために区別なく使用される。シェルまたは壁は同様に異なる組成物の多重壁を有する複合体であり得る。したがって、自身のコア、およびシェルを備える第１のカプセルを有し、その第１のカプセルが同一又は異なる物質から形成されたシェルを備える第２のカプセルのためのコアを形成することが可能である。
【００２８】
用語「コア物質」とは、単一の化合物または化合物の混合物を含み、かつカプセルのシェルまたは壁物質によって被覆またはカプセル化されている物質、好ましくは、有機物質を定義することを意味する。カプセルコアは、単一の固体結晶、化合物、エマルジョン、液体、異なる固体物質または他のサスペンジョンの混合物であってもよいし、または、より小さなカプセルの組み合わせであってもよい。コア材料の特定の実施形態は、低沸点アルコールのような揮発性の有機媒体または塩化メチレンのような低沸点アルキレンハロゲン化物、または低融点脂肪酸または脂肪族アルコールのような不揮発性の担体油に溶解された水不溶性化合物を含む。概して、浮遊粒子、コロイドまたはエマルジョンの形態でのように、水性媒体中においてその形状および構成を保持する任意の物質は、コア物質として使用することが可能である。
【００２９】
用語「水不溶性」は、物質が室温で水に容易に溶解しないことを意味する。本願では、物質が、ごく少量が部分的に水中に混和する可能性がある化合物の混合物である場合、物質は、水不溶性であるとみなす。
【００３０】
用語「周囲温度」は約５°Ｃ〜約３５°Ｃを意味する。最も好ましい周囲温度は、約１５°Ｃ〜約２５°Ｃまである。
用語「即時に放出された」とは、本質的に、約５秒未満以内にコア物質がすべてその環境へ放出されることを意味する。好ましい即時放出時間は、約３秒未満であり、最も好ましい時間は約２秒未満である。
【００３１】
用語「乳化組成物」は、１種以上の無毒な界面活性物質、好ましくは有機界面活性物質を含む組成物を意味する。好ましい乳化組成物は、水不溶性コア物質を含む混加物中において水性乳剤を形成することが可能である。
【００３２】
用語「気圧力」は急激な気圧変化、高圧ポンプ装置または超音波装置にさらされた組成物によって経験される圧力の迅速な変動に起因する圧力衝撃波、煎断力および／またはキャビテーションを意味する。好ましい気圧力は、高圧圧縮室内、および商業上利用可能な装置の中にあるバッフル室または煎断室内での後続の減圧中のいずれかまたは双方で生じると考えられる。
【００３３】
用語「噴霧乾燥」は、高圧で狭いノズルを介して組成物をある体積の空気中または真空中へ押し進めて、前記空気中または真空中で水を蒸発させることにより、水性組成物から水を除去することを意味する。
【００３４】
本発明のマイクロカプセルシェルは周囲温度条件で水溶性である。好ましい態様において、本発明のマイクロカプセルは、周囲温度で水に即時に溶解することにより、そのコア物質を水環境へ放出する。
【００３５】
食品および飲料産業における本発明の利点は、加熱することなく、水に混合されて、閉じ込められた香料または芳香剤を直ちに放出し得る香料および芳香剤を提供するための能力を有する。最も好ましいマイクロカプセルは、緩やかに攪拌するだけで、冷水中、すなわち氷点より若干高い温度で即時に溶解する。さらに好ましい水溶性マイクロカプセルは芳香性コア物質、好ましくは、低蒸気圧を有し、周囲温度および約１気圧の圧力で揮発性である１つ以上の化合物を含む有機組成物を含む。前記蒸気圧は周囲温度では抑制されている。
【００３６】
本発明の利点は製薬業界を含む多くの産業界へ敷衍される。製薬業界では、ニトログリセリンのような粘膜吸収可能な活性成分がマイクロカプセルとして調剤され、経口投与のためのタブレットに圧縮されるか、または鼻または気管支吸入投与のために粉末として使用され得る。口、鼻の通路または肺の肺胞（ａｖｅｏｌｉ）の湿った、体温の粘膜と接触すると、活性成分は、患者の血流へ吸収されるために即時に放出されるだろう。
【００３７】
さらに本発明は他の産業に利益を与え得る。例えば、除草剤および殺虫剤を、それらが自然の雨または人の手のいずれかによる水の付与で放出する乾燥した小粒として植物に適用されるように調剤することができる。
【００３８】
本マイクロカプセルは、水不溶性または若干だけ水溶性であり、かつ水溶性グルコピラノシジル化合物のマトリックスおよび乳化組成物を含む水溶性シェルで被覆されるコア物質、好ましくは、有機物質を含む。
【００３９】
「グルコピラノシジル（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｙｌ）物質」は、グルコピラノシジル環構造を有する化合物を含む組成物、およびその混合物を意味する。グルコピラノシジル物質の特別の実施形態は、天然二糖類およびそのエナンチオマーを含む二糖類を含む。一方、別の特別の実施形態は、酵素的または化学的に修飾された天然二糖類の誘導体を含む。前記天然二糖類の誘導体としては、天然二糖類の水素化誘導体、メチル化誘導体、酸化誘導体、アセチル化誘導体、アミノ化誘導体、酵素的に再配列された誘導体（ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）がある。
【００４０】
本願に使用される「二糖類」は、縮合重合によってアルドースまたはケトースから形成された単糖単位を繰り返す分岐、直鎖、ループ状、またはコイル状ポリマーである多糖類の加水分解から誘導されたものと見なされる有機二量体物質を意味する。ヘキソースに由来した典型的な多糖類は一般式（Ｃ６Ｈ１０Ｏ５）ｎを有する。二糖類は２つの単糖単位から構成されたグルコピラノシジル化合物である。典型的な天然由来の二糖類の慣用名は、マルトース、ショ糖、ラクトース、セロビオース、トレハロース、ゲンチオビオース（ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ）、イソマルトース、メルビオース（ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ）、プリエベロース（ｐｒｉｅｖｅｒｏｓｅ）およびルチノース（ｒｕｔｉｎｏｓｅ）である。
【００４１】
天然の二糖類の誘導体を含む典型的なグルコピラノシジル化合物は、マルトビオン酸、オクタ−Ｏ−メチル−Ｄ−マルトビオン酸、セロビオースオクタアセテート（ｃｅｌｌｕｂｉｏｓｅ　ｏｃｔａａｃｅｔａｔｅ）、ラクトビオン酸、イソマルトース（６−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトース）、１，２；４，５−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−ベータ−Ｄ−フルクトピラノース、１，２；５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−アルファ−Ｄ−グルコフラノース、２，３；５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ラクチトール一水和物；（＋）−ツラノース、コージビオース、ラクトサミン、ラクトースジアミン、ラミナリビオース（ｌａｍｉｎａｒａｂｉｏｓｅ）、ニゲロース（ｎｇｅｒｏｓｅ）、ソホロース、トレハロサミン（ｔｒｅｈａｌｏｓａｍｉｎｅ）、アルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，１−Ｄ−マンニトールおよびアルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，６−Ｄ−ソルビタル、およびイソモルト、特に、アルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，１−Ｄ−マンニトールおよびアルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，６−Ｄ−ソルビタルの等モル混合物がある。
【００４２】
これらの誘導体の特に好ましいサブグループは、約５〜６個の炭素原子環と合計約１２〜１４個の炭素原子とを含むアルキル基有し、その側鎖が約４〜６個の水酸基および任意で１〜２個のカルボニル基を含む、グルコピラノシドの１−Ｏ−または６−Ｏ−ポリヒドロキシアルキルーテル類に基く化合物を含む。二糖類誘導体もまた、従来の糖アルコール、糖カルボン酸、または糖ジカルボン酸へのグルコースの１−Ｏまたは６−Ｏエーテル結合の結果として述べられ得る。前記糖アルコール、糖カルボン酸、または糖ジカルボン酸の例としては、グルシトール、ガラクチトール、マンニトールおよびグリトールなどのヘキシトール類；アラビニトール、リビトールおよびキシリトールのようなペンチトール類；トレイトールおよびエリトリトールのようなテトリトール類またはグリセリンがある。また、そのような糖アルコールの誘導体は、Ｌ−ラムニトール、リボン酸、グルコン酸およびグロン酸、および酒石酸、ガラクタル酸、並びにグルカル酸のような１個または複数個の酸素が脱酸素（ｄｅｓｏｘｙｇｅｎａｔｅｄ）された糖アルコールであり得る。
【００４３】
これらの糖アルコールおよび糖カルボン酸は、Ｄ形もしくはＬ形、または天然の形態もしくは好ましい基礎的な天然の糖に相当する形態を有するラセミ体として存在し得る。
【００４４】
最も好ましいグルコピラノシジル物質は、対応する還元性二糖類（ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）の選択的なラネーニッケル水素化処理によって調製され得るグルコピラノシドの１−ポリヒドロキシアルキルーテル類である。前記還元性二糖類は、ショ糖およびトレハロース以外の天然二糖類をすべて含み、さらに、ショ糖とトレハロースのような非還元性二糖類の酵素的に再配列された生成物（ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を含む。この発明の特別の実施例は、グルコピラノシジル物質として、イソモルト（Ｉｓｏｍｏｌｔ（商標）として市販されているアルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，１−Ｄ−マンニトールおよびアルファ−Ｄ−グルコピラノシル−１，６−Ｄ−ソルビタルの等モルの混合物を用いる。
【００４５】
好ましいマイクロカプセルは、約２〜約６０重量パーセントの二糖類のまたはその誘導体と、約１〜約３５パーセント、より好ましくは約１０〜約３０パーセントのコア物質とを含有する。マイクロカプセルの特別の実施形態は、約５０パーセントの二糖類のおよび約２０パーセントのコア物質を含む。最も好ましいマイクロカプセルは、約２０パーセントの二糖類のおよび約１０パーセントのコア物質を含む。乳化組成物は、乾燥したマイクロカプセルの約０．５〜約３重量パーセントを構成するが、好ましいマイクロカプセルは、約１重量パーセントの乳化組成物を含む。
【００４６】
乳化組成物は、好ましくは、少なくとも２種の無毒な界面活性物質を含む。アニオン性、カチオン性、非イオン性の多くの界面活性物質があり、それらは使用されるべき疎水性物質に応じて用いられ得る。本発明の方法で有用な周知の界面活性物質の中には、１０〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸のソルビタンエステル類；８０％までのエチレンオキシドを有するＣ１０〜Ｃ２２脂肪酸のポリオキシエチレンソルビタンエステル；Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪酸のポリオキシエチレンソルビトールエステル類、６〜２０個の炭素原子および８０％以内のエチレンオキシドを有する脂肪フェノールのポリオキシエチレン誘導体；１０〜２２個の炭素原子を有する脂肪アミノベタイン類および脂肪アミドベタイン類；５〜１６炭素原子の脂肪族アルコール、Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪酸のポリオキシエチレン縮合物または８０％以内のエチレンオキシドを有する脂肪族アルコール；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック重合体；アルキル基中に６〜２０個の炭素を有するアルキルアリールスルホネートのようなイオン性界面活性剤；Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪酸セッケン；Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪サルフェート類；Ｃ１０〜Ｃ２２アルキルスルフォナート類；Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪族アミン酸化物；Ｃ６〜Ｃ２２炭素原子の脂肪イミダゾリン類；１０〜２２個の炭素原子を有する脂肪アミドスルホベタイン類；１０〜２２個の炭素原子を有する脂肪アンモニウム化合物のような４級界面活性物質；Ｃ１０〜Ｃ２２脂肪モルホリン酸化物、８０％以内のＥ．Ｏ．を有する、カルボキシル化およびエトキシル化（ｅｔｈｏｘｙｌａｔｅｄ）されたＣ１０〜Ｃ２２アルコール類のアルカリ金属塩、８０％以内のＥ．Ｏ．を有するグリセリン類のＣ１０〜Ｃ２２脂肪酸モノエステル類のエチレンオキシド縮合物、およびＣ１０〜Ｃ２２脂肪酸のモノ−またはジエタノールアミド類などがある。界面活性物質の分野で周知のように、アニオン界面活性剤の場合の対イオンは、アルカリ金属、アンモニアまたはトリメチルアミンまたはトリエタノールアミンのような置換アンモニアのいずれかであり得る。通常、アンモニウム、ナトリウムおよびカリウムが好ましい。アニオン界面活性剤の場合には、対イオンは、通常ハロゲン化物、サルフェートまたはメトサルフェート、最も一般に産業上利用可能な化合物である塩化物がある。前述の化合物は脂肪族誘導体に対する特定の参考文献に記載されている。それは通常、親油性の強い部分を形成する脂肪族部分である。一般的な脂肪族基は天然または合成由来のアルキル基である。ほとんどの実例において、アルキル基は、一般に自然界に生じるように、１つ以上のエチレン結合を有する対応するエチレン性飽和基（ｅｔｈｙｌｅｎｅｉｃａｌｌｙ　ｓａｔｕｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）によって置換され得る。一般的な不飽和基はオレイル、イノレイル、デセニル、ヘキサデセニル、デセニルなどである。適切な場合において、当業界において知られているように、アルキル基は環式、すなわちシクロアルキル類であるか、または直鎖又は分鎖であり得る。
【００４７】
見出だされた界面活性物質中で、本発明に従って特に有用なのは、ノニルフェノールポリオキシエチレン縮合物、ソルビタン、およびソルビタルモノエステル類、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸、およびそれらのエチレンオキシド縮合物である。
【００４８】
他の代表的な第１の界面活性物質は以下のとおりである：ソルビトールモノラウレートエチレンオキシド縮合物；ソルビトールモノミリステートエチレンオキシド縮合物；ソルビトールモノステアリン酸塩エチレンオキシド縮合物；ドデシルフェノール−エチレンオキシド縮合物；ミリスチルフェノールエチレンオキシド縮合物；オクチルフェニルエチレンオキシド縮合物；ステアリルフェノールエチレンオキシド縮合物；ラウリルアルコールエチレンオキシド縮合物；ステアリルアルコールエチレンオキシド縮合物；市販のエチレンオキシドで縮合されたＣ１４〜Ｃ１５第２アルコール（「Ｔｅｒｇｉｔｏｌ」として商業上利用可能）などの第二アルコールエチレンオキシド縮合物；デシルアミノベタイン；ココヤシ（ｃｏｃｏ）アミノベタイン；セチルアミノベタイン；ココヤシアミドベタイン；ココヤシアミドスルホベタイン；オレイルアミドベタイン、ココヤシイミダゾリン；ココヤシスルホイミダゾリン、セチルイミダゾリン、１−ヒドロキシエチル−２−ヘプタデセニルイミダゾリン；１−ヒドロキシエチル−２−混合ヘプタデセニルヘプタデカジエニルイミダゾリン；ｎ−ココヤシモルホリンオキシド；デシルジメチルアミンオキシド；ココヤシアミドジメチルアミンオキシド；エチレンオキシドで縮合されたソルビタントリステアレート；エチレンオキシドで縮合されたソルビタントリオレアート；ソルビタントリオレアート；ドデシル硫酸ナトリウムまたはカリウム；ステアリン酸ナトリウムまたはカリウム；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムまたはカリウム；ステアリルスルホン酸ナトリウムまたはカリウム；硫酸ドデシルのトリエタノールアミン塩；トリメチルドデシルアンモニウムクロリド；トリメチルステアリルアンモニウムメトサルフェート；１０％〜８０％のエチレンオキシド（重量による）、および９００〜１６，０００の分子量を有するポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンブロックポリマー；ラウリン酸ナトリウム；ミリスチン酸ナトリウムまたはカリウムｅ；およびステアリン酸ナトリウムまたはカリウム。
【００４９】
ポリオキシエチレン界面活性物質のＨＬＢは分子の親水性部分上に縮合されたエチレンオキシドの量に依存して規則的に変化させることが可能であるので、ポリオキシエチレン縮合物は、本発明において特に便利である。これは、適当なＨＬＢを有する第１の界面活性物質の選択を容易にする。
【００５０】
本発明のプロセスに従って、多くの例において、第１の界面活性物質として作用するのに単一の界面活性物質を使用するれば十分であり得るが、混合された第１の界面活性物質を使用することは、本発明の迅速に溶解する態様の達成において特に重要である。ノニルフェノールの一連のポリオキシエチレン縮合物から第１または第２の界面活性物質を選ぶ場合、商業上利用可能な縮合物は、例えば、１個、４個のまたは９個のノニルフェノールと縮合されたエチレンオキシド単位を含み得る。そのような一連の化合物において、１部のノニルフェノール・マルチドット４ＥＯ（ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ．ｍｕｌｔｉｄｏｔ．４ＥＯ）と１部のノニルフェノール・マルチドット９ＥＯとの混合物は、ノニルフェノール・マルチドット４ＥＯまたはノニルフェノール・マルチドット９ＥＯのいずれかのみより、第１の界面活性物質として、より有効であることを示し得る。
【００５１】
上記に示されるように、任意の所与の油相に対する第１の界面活性物質の適応性は単純な手順によって試験され得る。最も好都合なことに、一連の関連する界面活性物質は、一連のアルキルアルコールのように、可変量のエチレンオキシドと縮合されるものと見なされる。少量、例えば、１／４グラムの想定される第１の界面活性物質は、数ミリリットル（例えば１０ｍｌ）の分散するための油相に溶解される。分散するための油相が、溶媒中に分散されるべき疎水性物質の溶液である場合、試験はその溶液上で行なわれるべきである。透明な溶液が生じた場合には、第一の界面活性物質をより高いＨＬＢ（つまりより多くのエチレンオキシド）を有するシリーズから選択して、試験を繰り返す。新しい界面活性物質が十分に高いＨＬＢを有するとき、その界面活性物質を添加することにより、透明な溶液ではなく濁ったサスペンジョンを生じるであろう。この方法において、親油性相のための界面活性物質（あるいは界面活性物質混合物）は、油相中で界面活性物質を可溶にするために必要とされるより実質的に低くないＨＬＢを有して選択されている。
【００５２】
実際上、一連の界面活性物質は個々のＨＬＢ値によって異なる。したがって、界面活性物質の選択において、一連の第１の要素および第２の要素の実際的なＨＬＢは高すぎることがあり、一連の第４の要素および第５の要素のＨＬＢは低すぎるであろう。その場合には、たとえ第３の要素が、簡単な試験によって示されるように親油性相において完全に可溶でないことがあっても、第３の要素が選択されるだろう。
【００５３】
化合物のＨＬＢは界面活性物質分野でよく確立された概念であり、一般に両性の分子を構成する親水性部分および親油性部分の相対的な親和力を述べるために使用される。高いＨＬＢを有する物質は通常水において容易に可溶な比較的強い極性基と、比較的弱い親油性基を有している。通常は、そのような物質は油ではなく水に可溶である。反対に、低いＨＬＢを備えた物質は、通常、大きな親油基によって支配され、油に可溶である。任意の溶媒のＨＬＢスケールを定義するためのいくつかの試みがなされてきたが、本発明の目的のためには、乳化されるべき特定の油層および水相と共に使用されるべき両性界面活性剤のＨＬＢを試験することがより実用的である。
【００５４】
本発明の実施において、有用で好ましい界面活性物質は、第１の界面活性物質として少なくとも１つのポリオキシアルキレンオキシドの脂肪酸エステルと、第２の界面活性物質として単糖類の脂肪酸エステルを含む。
【００５５】
乳化組成物は、約５〜３０パーセントの第１のポリオキシアルキレンオキシド界面活性物質と、約７０〜約９５パーセントの第２の単糖類界面活性物質とを含む。本発明において有用で最も好ましい界面活性物質は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアラートとしても知られており、トゥイーン６０という商標で市販されているポリソルベート６０と、スパン６０という商標で市販されているソルビタンモノステアラートであり、双方とも食品および製薬業界で一般に使用されている。単糖類界面活性物質に対するポリマー界面活性物質の最も好ましい比率は約１〜９である。
【００５６】
好ましいマイクロカプセルはまた、そのシェル中にセルロース物質を含む。前記セルロース物質は、例えば噴霧乾燥によってその組成物を乾燥させる好ましい方法を容易にする。セルロース物質は、マイクロカプセルの重量の約１〜約１５パーセントの量で含有されるが、好ましい重量は約２〜約１０パーセントである。好ましいセルロース物質は、ヒドロキシルアルキルアルキルセルロースおよびカルボキシアルキルセルロース金属塩を含む。最も好ましいセルロース物質は、ヒドロキシルプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース金属塩を含む。最も好ましいセルロース物質はカルボキシメチルセルロースのナトリウム塩である。
【００５７】
二糖類物質、セルロース物質および乳化組成物界面活性物質は、すべて、好ましくは無毒であり、摂取物にとって安全で、医薬として許容可能であるものとして一般に認められている。
【００５８】
マイクロカプセルは、コア物質、水溶性二糖類物質、乳化組成物および好ましくは噴霧促進剤の水性混合物を急激な気圧変化にさらし、好ましくは、次いで噴霧乾燥によって水性媒体を除去することによって生成される。
【００５９】
シェルおよびコア物質を混合して、分散、すなわち微小に分散された状態または均質化された状態を形成することは、バッチミキサー、スタティックミキサー、モーションレスミクスチャ、ホモジナイザーおよび流動化設備として知られているものを含む任意の従来公知の装置によって行なわれ得る。コアおよびシェル物質は水性媒体中のコアとシェルの物質の十分に均質な分散を形成するために適当に混合されるべきである。微小分散（ｍｉｃｒｏ−ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）は、巨視的なレベルでは、概して均質であるが、完全に均質なわけではない。
【００６０】
本発明の方法によってカプセルを形成するために、水性媒体中のコアおよびシェル物質の均質化された分散物を圧力パルス装置に通過させる。該圧力パルス装置は、コア物質のマイクロカプセル化を促進するのに十分な急激な圧力パルス、高い煎断力および／またはキャビテーション力を与えるマイクロ流動化装置（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）、ウルトラホモジナイザーまたは他の高圧パルス装置であり得る。圧力パルスの適用は、米国特許第５，２７１，８８１号に記載の油圧ポンプによって行なわれて得る。前記特許は本願に参照によって援用される。好ましい装置は、内部にサスペンジョンが圧送され、そのサスペンジョンに煎断力および／またはキャビテーション力が与えられるバッフル室を備える。
【００６１】
以下にマイクロカプセルを形成するために使用される圧力パルス装置の機能について簡潔に述べる。コアおよびシェル物質の分散物はポンプ貯蔵器内に配置され、重力下で開放した吸込弁に都合よく供給され、前記吸込弁は、コアおよびシェル物質の分散物が圧縮室に流れ込むことを許容する。その後、吸込弁は閉鎖され、空気モータに高圧空気が供給され、前記空気モータがピストンを圧縮室内へと下方に駆動することにより、圧縮室内に収容されているコアおよびシェル物質の分散物に急激な気圧変化を付与する。出口弁が開放される前にピストンの圧縮および後続する希薄化ストロークからなる１回以上のストロークサイクルが、圧縮室内のコアおよびシェルの分散物に適用され得る。圧縮室内の事実上非圧縮性物質に対するピストンの衝突および後退は、液体媒体内において圧力衝撃波、煎断力および恐らくキャビテーションを生じる急激な気圧変化を発生する。分散物がこれらの力にさらされた後、出口バルブが開放され、液体媒体は圧縮室から、バッフル室に通じるカプセル排出ラインに流れ込む。
【００６２】
圧力パルス装置の好ましい実施形態はバッフル室を用いる。前記バッフル室は、カプセル含有混合物の流れの乱流を中断、遅延、および増加させるバッフルを有する、内部室に通じる小径部分からなる。
【００６３】
バッフル室は時として「安定化チューブ」と呼ばれる。ポンプが安定化チューブを介してカプセル混合物を圧送すると、流体は流体速度を増大させる小径チャネルに遭遇する。
【００６４】
パルス圧力で処理された混合物は、その後、噴霧乾燥されてカプセル化プロセスを完了し、水溶性マイクロカプセルが回収される。以下の例は、本発明の一実施形態をより詳細に説明する。
【００６５】
実施例１：水溶性マイクロカプセル化されたオレンジ油
配合：
１．イソモルト　　　８０ｇ
２．ブラノース（Ｂｌａｎｏｓｅ（商標））７ＬＦ（ＮａＣＭＣ）　１０ｇ
３．トゥイーン６０　１．８ｇ
４．スパン６０　　　０．２ｇ
５．蒸留水　　　　　４００ｍｌ
６．オレンジ油香料　４０ｇ
【００６６】
手順：
蒸留水にブラノース（カルボキシメチルセルロースの商標）を、混合物が透明になるまで混合しながら徐々に加える。透明なったブラノース溶液にトゥイーン６０とスパン６０との混合物を加えて、約２０分間混合し続ける。混合物にイソモルトを加えて、最低２０分間混合し続ける。オレンジ油香料を加えて、混合物をさらに５分間均質化する。均質化されたオレンジ油混合物を６２０ｋＰａ（９０ｐｓｉ）の入力気圧でベータ水圧ポンプ内に通過させる。圧力処理された混合物を１１０°Ｃ、２．０ｋｇｆ／ｃｍ２（霧化圧力）、０．３４立方フィート空気流で、ポンプ速度ｎｏ．２に設定して噴霧乾燥させる。バッフル室の前で測定された圧力は約５５．２ＭＰａ（８，０００ｐｓｉ）である。
【００６７】
噴霧乾燥したオレンジ油マイクロカプセルは本質的に無臭である。約０．１グラムのマイクロカプセルを約１０ｍｌの冷水道水に添加した場合、室温で緩やかに攪拌すると、約３秒未満でカプセルは消失して、オレンジ油を放出する。更に、安定試験を行なったところ、６５日後に、カプセル化されたオレンジ油のリモネンオキシド含有量は、０．３ｍｇ／オレンジ油１ｇ〜０．９ｍｇ／１ｇオレンジ油しか増加しなかった。カプセル化剤（Ｎ−Ｌｏｋ（登録商標））を含むオレンジ油を噴霧乾燥することにより調製された最良の比較マイクロカプセルは、６５日で、約０．３ｍｇ／ｇから約２．９〜３．６ｍｇ／ｇのリモネンオキシド含有量の増加を示す。
【００６８】
例２：水溶性のマイクロカプセル化されたオレンジ油（配合２）
配合：
１．　ショ糖　　　　　　　　　　　　　　　７５ｇ
２．　ブラノース　７ＬＦ（ＮａＣＭＣ）　　１４ｇ
３．　トゥイーン６０　　　　　　　　　　２．７ｇ
４．　スパン６０　　　　　　　　　　　　０．３ｇ
５．　蒸留水　　　　　　　　　　　　　　４００ｍｌ
６．　オレンジ油香料　　　　　　　　　　　４０ｇ
【００６９】
手順：
混合物が透明になるまで混合しながら、蒸留水にブラノース（カルボキシメチルセルロースの商標）を徐々に加える。透明になったブラノース溶液にトゥイーン６０とスパン６０との混合物を加えて、約２０分間混合し続ける。混合物にショ糖を加えて、さらに最低２０分間混合し続ける。オレンジ油香料を加えて、さらに５分間混合物を均質化する。６２０ｋＰａ（９０ｐｓｉ）の入力気圧でベータ水圧ポンプ内に均質化されたオレンジ油混合物を一回通過させる。圧力処理された混合物を１１０°Ｃ、２．０ｋｇｆ／ｃｍ２（霧化圧力）、０．３４立方フィートの空気流で、ポンプ速度ｎｏ．２に設定して噴霧乾燥する。バッフル室の前で測定された圧力は約５５．２ＭＰａ（８，０００ｐｓｉ）である。
【００７０】
噴霧乾燥したオレンジ油のマイクロカプセルは本質的に無臭である。約０．１グラムのマイクロカプセルを約１０ｍｌの冷水道水に添加する場合、室温で緩やかに攪拌すると約５秒未満でカプセルが消失して、オレンジ油を放出した。本配合は実施例１と本質的に同様の安定特性を有する。
【００７１】
実施例３．ニフェジピン薬剤
配合：
１．　ショ糖　　　　　　　　　　　　　　５０ｇ
２．　ブラノース７ＬＦ（ＮａＣＭＣ）　　１２ｇ
３．　トゥイーン６０　　　　　　　　　２．７ｇ
４．　スパン６０　　　　　　　　　　　０．３ｇ
５．　Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ．Ｗａｔｅｒ　４００ｍｌ
６．　ニフェジピン粉末　　　　　　　　　ｌ４ｇ
塩化メチレン　　　　　　　　　　１００ｍｌ
【００７２】
手順：
約３０分間にわたって混合しながら、蒸留水にトゥイーン６０とスパン６０の混合物を徐々に加える。界面活性物質溶液にブラノース（カルボキシメチルセルロースの商標）を加えて、約３０分間混合し続ける。混合物にショ糖を加えて、さらに最低１０分間混合し続ける。ニフェジピンのメチレン塩化物中（１００ｍｌ）溶液を加えて、さらに５分間混合する。６２０ｋＰａ（９０ｐｓｉ）の入力気圧でベータ水圧ポンプ内に乳化した混合物を２回通過させる。圧力処理された混合物を１１０°Ｃの入口温度、５５°Ｃの出口温度および２．５ｋｇｆ／ｃｍ２の霧化圧力で噴霧乾燥する。
【００７３】
実施例４．ニフェジピン薬剤
配合：
１．　ショ糖　　　　　　　　　　　　　１５６ｇ
２．　ブラノース７ＬＦ（ＮａＣＭＣ）　　２５ｇ
３．　トゥイーン６０　　　　　　　　　４．５ｇ
４．　スパン６０　　　　　　　　　　　０．５ｇ
５．　蒸留水　　　　　　　　　　　　　８００ｍｌ
６．　ニフェジピン粉末　　　　　　　　　１４ｇ
【００７４】
手順：
約３０分間にわたって混合しながら蒸留水にトゥイーン６０とスパン６０との混合物を徐々に加える。界面活性物質溶液にブラノース（カルボキシメチルセルロースの商標）を加えて、約３０分間混合し続ける。混合物にショ糖を加えて、さらに最低１０分間混合し続ける。ニフェジピンを加えて、さらに５分間混合する。６２０ｋＰａ（９０ｐｓｉ）の入力気圧でベータ水圧ポンプ内に乳化した混合物を２回通過させる。圧力処理された混合物を、３００Ｆの入り口温度、２２５Ｆの出口温度で、霧化圧力を５５２ｋＰａ（８０ｐｓｉ）に設定して噴霧乾燥させる。
【００７５】
噴霧乾燥されたニフェジピンのマイクロカプセルの外側シェルは、約５秒未満で冷水に即時に溶解して、ニフェジピンの水不溶性微細結晶を生じる。
【国際公開パンフレット】
2004509739.tif 000002
2004509739.tif 000003
2004509739.tif 000004
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2004509739.tif 000021
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2004509739.tif 000023
2004509739.tif 000024
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004509739.tif 000025
【国際調査報告】
2004509739.tif 000026
2004509739.tif 000027