(57)【要約】本発明は新規カルシライティック化合物およびその使用法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）：
【化１】
2004509077.tif 000006
［式中：
ＡはＣまたはＮを意味する；ただし環Ｉは１つまたは２つのＮを有し；
ＤはＣまたはＮを意味する；ただし環ＩＩは１つまたは２つのＮを有し、示したように４または５位で環Ｉに結合し；
ＸはＣＮ、ＮＯ２、Ｃｌ、ＦおよびＨから成る群から選択され；
Ｙは、ＡがＣである場合、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＩおよびＨから成る群から選択され；
Ｑは、ＤがＣである場合、Ｈ、Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１’、Ｒ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ’１、テトラゾール、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＨ、ＳＯ２ＮＲ１’Ｒ１’’、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１’Ｒ１’’およびＮＲ１ＳＯ２Ｒ１’から成る群から選択され、ここにＲ１は、独立して、結合、水素、Ｃ１−４アルキルおよび置換されていてもよいアルキルから成る群から選択され；
Ｒ１’およびＲ１’’は、独立して、水素、Ｃ１−４アルキルおよび置換されていてもよいアルキルから成る群から選択されるか、またはＲ１’およびＲ１’’は、一緒になって３〜７員の置換されていてもよいヘテロサイクリック環を形成し；
Ａｒは非置換または置換されているフェニルまたはナフチルであるか、ヘテロ環がＮ、ＯまたはＳを含んでいてもよく、芳香族、ジヒドロまたはテトラヒドロであってもよい、非置換または置換されているヘテロアリールまたは縮合ヘテロアリールである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−　ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
から成る群から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
カルシウム受容体に拮抗する方法であって、それを必要とする対象に有効量の請求項１記載の化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項４】
異常な骨または鉱物の恒常性により特徴付けられる疾患または障害の治療方法であって、該治療を必要とする対象に有効量の請求項１記載の化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項５】
骨または鉱物疾患または障害が骨肉腫、歯周病、骨折性治癒、変形性関節症、関節置換、リウマチ様関節炎、パジェット病、体液性高カルシウム血症、悪性腫瘍および骨粗鬆症から成る群から選択される請求項４記載の方法。
【請求項６】
骨または鉱物疾患または障害が骨粗鬆症である請求項５記載の方法。
【請求項７】
化合物が抗吸収剤と共投与される請求項６記載の方法。
【請求項８】
抗吸収剤がエストロゲン、１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、カルシトニン、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、Ｖ−Ｈ＋−ＡＴＰアーゼ阻害剤、ｓｒｃＳＨ２アンタゴニスト、ビスホスホネートおよびカテプシンＫ阻害剤から成る群から選択される請求項７記載の方法。
【請求項９】
血清副甲状腺レベルの増加方法であって、治療を必要とする対象に有効量の請求項１記載の化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項１０】
化合物が抗吸収剤と共投与される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
抗吸収剤がエストロゲン、１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、カルシトニン、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、Ｖ−Ｈ＋−ＡＴＰアーゼ阻害剤、ｓｒｃＳＨ２アンタゴニスト、ビスホスホネートおよびカテプシンＫ阻害剤から成る群から選択される請求項１０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は新規カルシライティック（ｃａｌｃｉｌｙｔｉｃ）化合物、それらの化合物を含んで成る医薬組成物、およびカルシウム受容体アンタゴニストとしてのその使用に関する。
【０００２】
哺乳類において、細胞外Ｃａ２＋は、厳密に恒常性制御されており、種々のプロセス、例えば血液クロッティング、神経および筋肉興奮、および適当な骨形成を調節している。細胞外Ｃａ２＋は、副甲状腺細胞からの副甲状腺ホルモン（「ＰＴＨ」）の分泌を阻害し、破骨細胞による骨吸収を阻害し、Ｃ細胞からのカルシトニンの分泌を刺激する。カルシウム受容体蛋白は、ある種の特異化された細胞を細胞外Ｃａ２＋濃度の変化に応答させることができる。
ＰＴＨは、血液中および細胞外液中の、Ｃａ２＋の恒常性を調節する重要な内分泌因子である。骨および腎臓細胞に作用することにより、ＰＴＨは血液中のＣａ２＋のレベルを増加させる。ついで、細胞外Ｃａ２＋のこの増加は、負のフィードバックシグナルとして作用し、ＰＴＨ分泌を低下させる。細胞外Ｃａ２＋とＰＴＨ分泌の間の相互関係は、体内のＣａ２＋の恒常性を維持する重要な機構を形成している。
【０００３】
細胞外Ｃａ２＋は副甲状腺細胞に直接的に作用してＰＴＨ分泌を調節する。細胞外Ｃａ２＋の変化を検出する副甲状腺細胞表面蛋白の存在が確認されている。Ｂｒｏｗｎ ら、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：５７４， １９９３参照。副甲状腺細胞において、この蛋白、カルシウム受容体は、細胞外Ｃａ２＋の受容体として作用し、細胞外Ｃａ２＋のイオン濃度の変化を検出し、機能的な細胞の応答、ＰＴＨ分泌を開始する。
細胞外Ｃａ２＋は、Ｎｅｍｅｔｈ ら、Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ １１：３１９， １９９０に概説されているように、種々の細胞機能に影響を及ぼす。例えば、細胞外Ｃａ２＋は、傍濾胞細胞（Ｃ細胞）および副甲状腺細胞において役割を果たす。Ｎｅｍｅｔｈ， Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ １１：３２３， １９９０参照。骨の破骨細胞における細胞外Ｃａ２＋の役割もまた研究されている。Ｚａｉｄｉ， Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：４９３， １９９０参照。
【０００４】
種々の化合物が、カルシウム受容体分子上で、細胞外Ｃａ２＋の効果を模倣することが知られている。カルシライティックはカルシウム受容体活性を阻害することができる化合物であり、したがって、細胞外Ｃａ２＋により誘発される１つまたはそれ以上のカルシウム受容体活性を減少させる。カルシライティックは、Ｃａ２＋受容体で活性である有用なカルシウムモジュレーターの発見、発展、設計、修飾および／または構築におけるリード誘導分子として有用である。該カルシライティックは、１つまたはそれ以上の要素、例えばホルモン、酵素または成長因子のようなポリペプチドの異常なレベル、１つまたはそれ以上のＣａ２＋受容体での活性により調節されるか、または影響を受けるそれらの発現および／または分泌により特徴付けられる種々の病態の治療において有用である。カルシライティック化合物に対する標的疾患または障害は、異常な骨および鉱物の恒常性を含む疾患を含む。
【０００５】
異常なカルシウム恒常性は、１つまたはそれ以上の以下の活性：血清カルシウムの異常な増加または減少；カルシウムの尿排泄の異常な増加または減少；骨カルシウムレベルの異常な増加または減少（例えば、骨鉱物密度測定により評価される）；食物カルシウムの異常吸収；ＰＴＨおよびカルシトニンのような血清カルシウムレベルに影響を及ぼすメッセンジャーの産生および／または放出の異常な増加または減少；および血清カルシウムレベルに影響を及ぼすメッセンジャーにより誘発される応答の異常変化により特徴付けられる。
したがって、カルシウム受容体アンタゴニストは異常な骨または鉱物の恒常性に付随する疾患、例えば副甲状線機能低下症、骨肉腫、歯周病、骨折性治癒、変形性関節症、リウマチ様関節炎、パジェット病、悪性腫瘍および骨折性治癒に付随する体液性高カルシウム血症および骨粗鬆症の薬物療法に対する独特のアプローチを提供する。
【０００６】
発明の概要
本発明は以下の式（Ｉ）により示される新規カルシウム受容体アンタゴニストおよび異常な骨または鉱物の恒常性に関する種々の疾患、限定するものではないが、副甲状線機能低下症、骨肉腫、歯周病、骨折性治癒、変形性関節症、リウマチ様関節炎、パジェット病、悪性腫瘍および骨折性治癒に関する体液性高カルシウム血症および骨粗鬆症の治療におけるカルシウム受容体アンタゴニストとしてのその使用を含む。
さらに、本発明はヒトを含む動物におけるカルシウム受容体に拮抗する方法であって、それを必要とする動物に、有効量の以下に示される式（Ｉ）の化合物を投与することを特徴とする方法を提供する。
さらに、本発明はヒトを含む動物における血清副甲状線レベルの増加方法であって、それを必要とする動物に、有効量の以下に示される式（Ｉ）の化合物を投与することを特徴とする方法を提供する。
【０００７】
発明の詳細な記載
本発明の化合物は下記の式（Ｉ）：
【化２】
2004509077.tif 000002
【０００８】
［式中：
ＡはＣまたはＮを意味する；ただし環Ｉは１つまたは２つのＮを有し；
ＤはＣまたはＮを意味する；ただし環ＩＩは１つまたは２つのＮを有し、示したように４または５位で環Ｉに結合し；
ＸはＣＮ、ＮＯ２、Ｃｌ、ＦおよびＨから成る群から選択され；
Ｙは、ＡがＣである場合、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＩおよびＨから成る群から選択され；
Ｑは、ＤがＣである場合、Ｈ、Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１’、Ｒ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ’１、テトラゾール、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＨ、ＳＯ２ＮＲ１’Ｒ１’’、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１’Ｒ１’’およびＮＲ１ＳＯ２Ｒ１’から成る群から選択され、ここにＲ１は、独立して、結合、水素、Ｃ１−４アルキルおよび置換されていてもよいアルキルから成る群から選択され；
Ｒ１’およびＲ１’’は、独立して、水素、Ｃ１−４アルキルおよび置換されていてもよいアルキルから成る群から選択されるか、またはＲ１’およびＲ１’’は、一緒になって３〜７員の置換されていてもよいヘテロサイクリック環を形成し；
Ａｒは非置換または置換されているフェニルまたはナフチルであるか、ヘテロ環がＮ、ＯまたはＳを含んでいてもよく、芳香族、ジヒドロまたはテトラヒドロであってもよい、非置換または置換されているヘテロアリールまたは縮合ヘテロアリールである］
で示される化合物から選択される。
【０００９】
本明細書において用いられる「アルキル」なる用語は、炭素−炭素単結合により結合され、共に結合される１〜２０個の炭素原子を有する所望により置換されていてもよい炭化水素基を意味する。アルキル炭化水素基は、直鎖、分枝鎖または環状であってもよく、飽和でも不飽和でもよい。好ましくは置換されていてもよいアルキルの置換基は、アリール、ＣＯ２Ｒ、ＣＯ２ＮＨＲ、ＯＨ、ＯＲ、ＣＯ、ＮＨ２、ハロ、ＣＦ３、ＯＣＦ３およびＮＯ２から成る群から選択され、ここに、ＲはＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−５アルケニル、Ｃ２−５アルキニル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール、Ｃ１−４アルキルを意味し；付加的な置換基はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ、ＳおよびＯから選択される。好ましくは、３つ以上の置換基は存在しない。より好ましくは、アルキルは１〜１２個の炭素原子を有し、非置換である。好ましくは、アルキル基は直鎖である。
本明細書において用いられる「シクロアルキル」なる用語は、所望により置換されていてもよい３〜７員のカルボサイクリック環であり、ここに、いずれの置換基も、特記しない限り、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ（Ｒ４）２、ＳＲ４およびＯＲ４から成る群から選択される。
【００１０】
本明細書において用いられる「アリール」なる用語は、２つまでの共役または縮合環系を含む、共役パイ電子系を有する少なくとも１つの環により所望により置換されていてもよい芳香族を意味する。アリールはカルボサイクリックアリールおよびビアリール基を含み、これらの全ては、所望により置換されていてもよい。好ましいアリールはフェニルおよびナフチルを含む。より好ましいアリールはフェニルを含む。好ましい置換基は、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＭｅ、ＣＮ、ＯＳＯ２ＲおよびＮＯ２から成る群から選択され、ここにＲはＣ１−４アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルを意味する。
【００１１】
本明細書において用いられる「アルケニル」なる用語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含み、共に結合している５つまでの炭素原子を含む所望により置換されていてもよい炭化水素基を意味する。アルケニル炭化水素鎖は直鎖、分枝鎖または環状であってもよい。いずれの置換基はハロゲン、Ｃ１−４アルキル、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＭｅ、ＣＮ、ＯＳＯ２ＲおよびＮＯ２から成る群から選択され、ここに、ＲはＣ１−４アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルを意味する。
本明細書において用いられる「アルキニル」なる用語は、少なくとも１つの炭素原子間の炭素−炭素三重結合を含み、共に結合される５つまでの炭素原子を含む、所望により置換されていてもよい炭化水素基を意味する。アルキニル炭化水素基は、直鎖、分枝鎖または環状であってもよい。いずれの置換基はハロゲン、Ｃ１−４アルキル、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＭｅ、ＣＮ、ＯＳＯ２ＲおよびＮＯ２から成る群から選択され、ここにＲはＣ１−４アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルを意味する。
【００１２】
本発明の化合物は、１つまたはそれ以上の不斉炭素原子を含んでいてもよく、ラセミ体および光学活性形態で存在できる。これらの全ての化合物およびジアステレオマーは本明細書の範囲に含まれる。
【００１３】
本発明の好ましい化合物は：
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
【００１４】
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン；
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；および
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン；
を含む。
【００１５】
医薬上許容される塩はそれらを投与する量および濃度で非毒性の塩である。
医薬上許容される塩は、硫酸塩、塩酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキナ酸塩を含む酸付加塩を含む。好ましい塩は塩酸塩である。医薬上許容される塩は、塩酸、マレイン酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸およびキナ酸のような酸から得ることができる。
また、医薬上許容される塩は、カルボン酸またはフェノールのような酸官能基が存在する場合、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、アルキルアミンおよび亜鉛を含む塩基付加塩を含む。
【００１６】
本発明は標準的な方法を用いて調製できる上記式（Ｉ）で示される化合物を提供する。本明細書に記載の好ましい化合物の全ての調製法は、本節に記載のように行うことができる。以下の実施例は特定の化合物の合成を説明する。模範として本明細書に記載されるプロトコルを用いて、当業者は本発明の他の化合物を容易に製造できる。
全ての試薬および溶媒は市販店から入手した。出発物質は標準的な方法および手段を用いて合成した。
【００１７】
【化３】
2004509077.tif 000003
【００１８】
【化４】
2004509077.tif 000004
【００１９】
【化５】
2004509077.tif 000005
【００２０】
多くの化合物の合成に用いられる一般的な手段は、上記スキーム１に記載のように行うことができる。アセトン中のビアリールの溶液を適当な塩基、例えばＫ２ＣＯ３を用いて、１５分間加熱して処理した。Ｒ−グリシジルノシレートを加え、反応を一晩続けて、対応するグリシジルエーテル（スキーム１）を得た。無水エタノール、アセトニトリル、ＴＨＦ、ジオキサンまたはいずれかの他の同様の溶媒中の置換グリシジルエーテルおよび過剰のアミン（例えば、１，１−ジメチル−２−（４−メチルオキシフェニル）エチルアミン）の溶液を、適当な触媒、例えばＬｉＣｌＯ４の存在下で一晩撹拌しながら還流した。
生成物をクロマトグラフィーにより精製した。塩酸塩を、気相または４Ｍのジオキサン溶液中のいずれかで、対応する遊離塩基をＨＣｌで処理することにより、もしくはいずれかの他の標準的な方法により調製した。ビアリールフェノールを調製する方法はスキーム２および３に概説した。
【００２１】
ＤＭＦ中の２−フルオロ−４−ブロモベンゾニトリルを、ボロネート、酢酸カリウムおよび触媒ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）を用いて８０℃で処理した。臭化アリールが消費された後（約２時間）、反応物を室温に冷却し、アリール酸、２Ｍの炭酸ナトリウムおよび付加的なパラジウム触媒で処理し、ついで１８時間加熱してフッ素置換ビアリール生成物を得た。
フッ素をアセトニトリル中の酢酸カリウムを用いて、１８−クラウン−６の存在下で置換し、対応するフェノールを得た（スキーム２を参照）。別法として、２−メトキシ−４−ブロモベンゾニトリルをホウ酸置換アリールカルボン酸と、触媒量のテトラキストリフェニルホスフィンパラジウムを用いて、トルエンおよび２Ｍの炭酸ナトリウムの混合物中でカップリングさせてビアリールメチルエーテルを得ることができる。メチルエーテルを脱保護し（例えば、ヨウ化リチウム、コリジンで）、ついでエステル化することにより対応するビアリールフェノールを得た（スキーム３）。
【００２２】
式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を、ヒトおよび他の哺乳類の治療に用いるために、通常、医薬組成物として標準的な医薬方法に従って処方される。
カルシライティック化合物は、静脈内、腹膜内、皮下、筋肉内、経口、局所（経皮）または粘膜投与を含む異なる経路により投与できる。全身性投与に関しては、経口投与が好ましい。経口投与に関しては、例えば、化合物は従来の経口剤形、例えばカプセル、錠剤および液体調製物、例えばシロップ、エリキシルおよび濃縮ドロップに処方できる。
【００２３】
別法として、注射（非経口投与）が、例えば筋肉内、静脈内、腹膜内および皮下に用いることができる。注射に関しては、本発明の化合物は溶液、好ましくは生理学的互換性のある緩衝液または溶液、例えば生理食塩水溶液、ハンク溶液またはリンガー溶液で処方される。加えて、本発明の化合物は、固体形態に処方でき、使用直前に再溶解または懸濁できる。また、凍結乾燥形態にも製造できる。
【００２４】
また、全身性投与は、粘膜または経皮的手段により行うことができる。粘膜または経皮投与に関しては、浸透すべきバリアーに適当な浸透剤を処方に用いる。該浸透剤は、一般的には当該分野で公知のものであり、例えば粘膜投与に関しては胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体を含む。加えて、界面活性剤を浸透を促進させるために用いることができる。例えば、粘膜投与は鼻噴霧、直腸坐剤または膣坐剤により行うことができる。
局所投与用の、本発明の化合物は、一般には当該分野で公知のものである軟膏、膏剤、ゲルまたはクリームに処方できる。
【００２５】
投与されるべき種々のカルシライティック化合物の量は、化合物ＩＣ５０、ＥＣ５０、化合物の生物学的半減期、患者の年齢、大きさおよび体重ならびに患者が患っている疾患または障害のような因子を考慮する標準的な手段により決定できる。考慮されるべきこれらおよび他の因子の重要性は当該分野で公知のものである。
また、投与量は投与経路および経口生物学的利用能の程度に依存する。例えば、低経口生物学的利用能を有する化合物に関しては、相対的に高投与量で投与されなければならないだろう。
好ましくは、組成物は単位剤形である。経口適用に関しては、例えば、錠剤またはカプセルが投与でき、経鼻適用に関しては、計量エアロゾルが投与でき、経皮適用に関しては、局所処方およびパッチが投与でき、粘膜デリバリーに関しては、口腔パッチが投与できる。各々の場合において、投与量は患者が単回用量で投与できるものである。
【００２６】
経口投与に関する各々の単位投与量は、適当には、遊離塩基として計算して、０．０１〜５００ｍｇ／Ｋｇ、好ましくは０．１〜５０ｍｇ／Ｋｇの式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含む。非経口、鼻、経口吸入、粘膜または経皮経路に対する１日の投与量は、適当には０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇの式（Ｉ）で示される化合物を含む。局所処方は、適当には０．０１〜５．０％の式（Ｉ）で示される化合物を含む。活性成分は、例えば、望ましい活性を示すのに十分な量で、１日当たり１〜６回、好ましくは１回投与でき、このことは当業者には容易に理解できる。
【００２７】
本明細書において用いられる疾患の「治療」なる用語は、限定するものではないが、疾患の防止、遅延および予防を含む。
影響される細胞に基いて、治療または予防できる疾患および障害は、
骨および鉱物に関する疾患および障害；副甲状線機能低下症；中枢神経系の疾患、例えば発作、卒中、頭蓋骨損傷、脊椎傷害、例えば心不全または新生児出血で生じる低酸素誘発神経細胞損傷、癲癇、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病、痴呆、筋肉緊張、鬱病、不安症、パニック疾患、強迫疾患、外傷後ストレス障害、精神分裂症、神経弛緩剤悪性症候群およびトゥーレット症候群；腎臓による過剰の水再吸収を含む疾患、例えばＡＤＨ不適合分泌症候群（ＳＩＡＤＨ）、肝硬変症、鬱血性心不全およびネフローゼ；高血圧；カチオン性抗生物質（アミノグリコシド抗生物質）からの腎臓毒性の防止および／または減少；腸運動疾患、例えば下痢および痙攣性結腸；胃腸潰瘍疾患；過剰カルシウム吸収を伴う胃腸疾患、例えばサルコイドーシス；自己免疫疾患および臓器移植拒絶；扁平上皮細胞癌；および膵炎を含む。
【００２８】
本発明の好ましい具体例において、本発明の化合物を血清副甲状線ホルモン（「ＰＴＨ」）レベルを増加させるために用いる。血清ＰＴＨレベルの増加は、副甲状線機能低下症、骨肉腫、歯周病、骨折、変形性関節症、リウマチ様関節炎、パジェット病、体液性高カルシウム血症悪性腫瘍および骨粗鬆症のような疾患の治療に有用であり得る。
本発明の好ましい具体例において、本発明の化合物は抗吸収剤と共投与される。該薬剤は、限定するものではないが、エストロゲン、１，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、カルシトニン、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、Ｖ−Ｈ＋−ＡＴＰアーゼ阻害剤、ｓｒｃＳＨ２アンタゴニスト、ビスホスホネートおよびカテプシンＫ阻害剤を含む。
本発明の他の態様は、患者の治療方法であって、該患者に血清ＰＴＨレベルを増加させるために十分な量の本発明の化合物を投与することを特徴とする方法を記載している。好ましくは、該方法は、治療的効果を有するために十分な血清ＰＴＨレベルの持続時間および／または量を増加させるのに有効な量の化合物を投与することにより行う。
【００２９】
種々の具体例において、患者に投与される化合物は１時間まで、約１〜約２４時間、約１〜約１２時間、約１〜約６時間、約１〜約５時間、約１〜約４時間、約２〜約５時間、約２〜約４時間または約３〜約６時間の持続時間を有する血清ＰＴＨの増加を引き起こす。
本発明の別の具体例において、患者に投与される化合物は、抗吸収剤と共投与される場合、約２４時間よりも長い持続時間を有する血清ＰＴＨの増加を引き起こす。
さらなる異なる具体例において、患者に投与される化合物は、患者の最大血清ＰＴＨよりも２倍まで、２〜５倍、５〜１０倍および少なくとも１０倍多くの血清ＰＴＨの増加を引き起こす。最大血清レベルは治療を受けていない患者に関して測定する。
【００３０】
経口で投与される場合活性である、式（Ｉ）で示されるおよびその医薬上許容される塩の組成物は、シロップ、錠剤、カプセルおよびロゼンジとして処方できる。シロップ処方は、一般的には、液体担体、例えばエタノール、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリンまたは水中の化合物または塩とフレーバーまたは着色剤の懸濁液または溶液から成るだろう。組成物が錠剤の形態である場合、固体処方を調製するために慣用的に用いられるいずれの医薬担体を用いることができる。該担体の例として、ステアリン酸マグネシウム、テラ・アルバ、タルク、ゼラチン、アカシア、ステアリン酸、デンプン、ラクトースおよびシュークロースが挙げられる。組成物がカプセルの形態である場合、例えばハードゼラチンカプセル殻に上記の担体を用いる、いずれの慣用的なカプセル化が適当である。組成物がソフトゼラチン殻カプセルの形態である場合、分散液または懸濁液の調製に慣用的に用いられるいずれの医薬担体を考えることができ、例えば水性ガム、セルロース、ケイ酸塩または油であり、ソフトゼラチンカプセル殻に組み入れる。
【００３１】
典型的な非経口組成物は、非経口で許容される油、例えばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、ラッカセイ油またはゴマ油を所望によりを含んでいてもよい、滅菌水性または非水性担体中の化合物または塩の溶液または懸濁液から成る。
吸入用の典型的な組成物は、乾燥粉末として投与できる溶液、懸濁液または乳濁液の形態、または従来の噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタンを用いるエアロゾルの形態である。
典型的な坐剤処方は、この方法で投与される場合活性である式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩と、結合剤および／または滑剤、例えば重合体グリコール、ゼラチン、ココアバターまたは他の低融点の植物性ワックスもしくはこれらの合成アナログを含む。
典型的な皮膚および経皮的な処方は、従来の水性または非水性ビヒクル、例えばクリーム、軟膏、ローションまたはペーストを含み、薬用プラスター、パッチまたは膜の形態である。
好ましくは、組成物は、患者が単回用量を投与できるように、例えば錠剤、カプセルまたは計量エアロゾルのような単位剤形である。
本発明の化合物を本発明に従って投与する場合、受け入れられない毒性効果はないことが期待される。
【００３２】
式（Ｉ）で示される化合物の生物学的活性を以下の試験により示す。
【００３３】
（Ｉ）カルシウム受容体阻害剤アッセイ
カルシライティック活性は、ヒトカルシウム受容体を安定して発現するＨＥＫ２９３　４．０−７細胞において、細胞外Ｃａ２＋により誘発される細胞内Ｃａ２＋の増加を遮断することに関する試験化合物のＩＣ５０を決定することにより測定した。ＨＥＫ２９３　４．０−７細胞はＲｏｇｅｒｓら、Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ． Ｒｅｓ． １０ Ｓｕｐｐｌ． １：Ｓ４８３， １９９５（ここに出典明示し本明細書に組み入れる）に記載されているように構築した。細胞内Ｃａ２＋増加が細胞外Ｃａ２＋を１から１．７５ｍＭに増加させることにより誘発された。細胞内Ｃａ２＋はフルオ−３、蛍光カルシウムインジケーターを用いて測定した。
【００３４】
手順を以下に示す：
１．細胞をＴ−１５０フラスコ中で、選択培地（１０％のウシ胎仔血清および２００μｇ／ｍＬのヒグロマイシンＢを捕捉したＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２：９５％の空気下、３７℃で維持し、９０％の集密度まで成長させた。
２．培地をデカントし、細胞単層を３７℃に保ったリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２度洗浄した。第２の洗浄の後、６ｍＬのＰＢＳ中の０．０２％ＥＤＴＡを加え、３７℃で４分間インキュベートした。インキュベーションについで、細胞を静かに撹拌することにより分散させた。
３．２または３個のフラスコからの細胞を集め、ペレット化した（１００ｘｇ）。細胞のペレットを１０〜１５ｍＬのＳＰＦ−ＰＣＢ＋中に再懸濁し、遠心分離により再びペレット化した。この洗浄を２度行った。
硫酸塩およびリン酸塩不含副甲状線細胞緩衝液（ＳＰＦ−ＰＣＢ）は、２０ｍＭのＮａ−ヘペス、ｐＨ７．４、１２６ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌおよび１ｍＭのＭｇＣｌ２を含む。ＳＰＦ−ＰＣＢを調製し、４℃で貯蔵した。使用する日に、ＳＰＦ−ＰＣＢに１ｍｇ／ｍＬのＤ−グルコースおよび１ｍＭのＣａＣｌ２を捕捉し、ついで２つのフラクションに分割した。１つのフラクションにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；フラクションＶ、ＩＣＮ）を５ｍｇ／ｍＬで加えた（ＳＰＦ−ＰＣＢ＋）。この緩衝液を細胞を洗浄、取り込みおよび維持するために使用した。ＢＳＡ不含フラクションを蛍光測定するためキュベット中で細胞を希釈するために使用した。
【００３５】
４．ペレットを２．２μＭフルオ−３（分子プローブ）を含む１０ｍＬのＳＰＦ−ＰＣＢ＋中に再懸濁し、室温で３５分間インキュベートした。
５．インキュベーション期間についで、細胞を遠心分離によりペレット化した。得られたペレットをＳＰＦ−ＰＣＢ＋で洗浄した。この洗浄後、細胞を密度１〜２×１０６細胞／ｍＬでＳＰＦ−ＰＣＢ＋中に再懸濁した。
６．蛍光シグナルを記録するために、３００μＬの細胞懸濁液を１ｍＭのＣａＣｌ２および１ｍｇ／ｍＬのＤ−グルコースを含む１．２ｍＬのＳＰＦ緩衝液で希釈した。蛍光の測定を３７℃で一定に撹拌しながら分光蛍光計で行った。励起および発光波長を各々４８５および５３５ｎｍで測定した。蛍光シグナルを校正するため、ジギトニン（エタノール中５ｍｇ／ｍＬ）を加えＦｍａｘを得、見かけのＦｍｉｎをトリス−ＥＧＴＡ（２．５Ｍのトリス−塩基、０．３ＭのＥＧＴＡ）を添加することにより測定した。細胞内カルシウムの濃度を以下の等式を用いて計算した：
細胞内カルシウム＝（Ｆ−Ｆｍｉｎ／Ｆｍａｘ）×Ｋｄ；ここにＫｄ＝４００ｎＭ
７．試験化合物の潜在的カルシライティック活性を測定するため、細胞を試験化合物（または対照としてのビヒクル）と共に９０秒間インキュベートし、ついで細胞外Ｃａ２＋の濃度を１から２ｍＭに増加させた。カルシライティック化合物を濃度依存法で細胞外Ｃａ２＋により誘発される細胞内Ｃａ２＋の濃度の増加を遮断するその能力により検出した。
【００３６】
一般に、カルシウム受容体阻害剤分析においてより低いＩＣ５０値を有するこれらの化合物がより好ましい化合物である。５０μＭよりも大きいＩＣ５０を有する化合物は不活性であると考えた。好ましい化合物は１０μＭまたはそれ以下のＩＣ５０を有するものであり、より好ましい化合物は１μＭのＩＣ５０を有し、最も好ましい化合物は０．１μＭまたはそれ以下のＩＣ５０を有する。
【００３７】
（ＩＩ）カルシウム受容体結合分析
ヒト副甲状線カルシウム受容体（「ＨｕＰＣａＲ」）で安定にトランスフェクトされるＨＥＫ２９３　４．０−７細胞をＴ１８０組織培養フラスコにスケールアップした。原形質膜を、１μＭのロイペプチン、０．０４μＭのペプスタチンおよび１ｍＭのＰＭＳＦを含むプロテアーゼ阻害剤カクテルの存在下、ポリトロン均質化または緩衝液（５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、３ｍＭのＭｇＣｌ２）中でのガラスダウンシング（ｇｌａｓｓ ｄｏｕｎｃｉｎｇ）により得る。アリコートした膜を急速冷凍し、−８０℃で貯蔵した。３Ｈ標識化合物を４４Ｃｉ／ｍｍｏｌｅの放射性比活性に放射性標識し、アリコートし、放射化学的に安定な液体窒素中に貯蔵した。
【００３８】
典型的な反応混合物は、０．５ｍＬの反応容量で０．１％ゼラチンおよび１０％ＥｔＯＨを含む均質化緩衝液中に、２ｎＭの３Ｈ化合物（（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−４’−メトキシ−ｔ−３−３’−メチル−１’−エチルフェニル−１−（１−ナフチル）エチルアミン）または３Ｈ化合物（Ｒ）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（３−クロロ−２−シアノフェノキシ）プロピル］−１，１−ジメチル−２−（４−メトキシフェニル）エチルアミンの４〜１０μｇの膜を含む。インキュベーションは氷浴中の１２×７５ポリエチレン管中で行う。各々の管に２５μＬの１００％ＥｔＯＨ中の試験試料、ついで４００μＬの冷インキュベーション緩衝液、および２５μＬの１００％ＥｔＯＨ中の４０ｎＭの３Ｈ−化合物を加え、最終濃度を２ｎＭとした。結合反応をインキュベーション緩衝液で希釈した５０μＬの８０〜２００μｇ／ｍＬのＨＥＫ２９３　４．０−７膜を添加することにより開始させ、４℃で３０分間インキュベートする。洗浄緩衝液は０．１％のＰＥＩを含む５０ｍＭのトリス−ＨＣｌである。非特異性結合を１００倍過剰な非標識相同性リガンドを添加することにより測定し、一般に、総結合の２０％である。結合反応は１％のＰＥＩ予備処理ＧＦ／Ｃフィルター上ででブランデル・ハーベスター（Ｂｒａｎｄｅｌ Ｈａｒｖｅｓｔｏｒ）を使用して急速濾過することにより完了する。フィルターをシンチレーション液流中に移し、放射活性を液体シンチレーション計数することにより評価する。
【００３９】
実施例
核磁気共鳴スペクトルは、各々、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ ２５０またはＢｒｕｋｅｒ ＡＣ ４００を使用して３００または４００ＭＨｚいずれかで測定した。ＣＤＣｌ３は、重クロロホルム、ＤＭＳＯ−ｄ６は、ヘキサ重水素ジメチルスルホキシド、ＣＤ３ＯＤはテトラ重水素メタノールである。ケミカルシフトは、内部標準テトラメチルシランからの１００万分の１（δ）ダウンフィールドで与える。ＮＭＲデータの略語は：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｄｄ＝ダブレットダブレット、ｄｔ＝ダブレットトリプレット、ａｐｐ＝アパレント、ｂｒ＝ブロードである。Ｊは、ヘルツで測定したＮＭＲカップリング定数を示す。連続赤外スペクトル（ＩＲ）はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ６８３赤外分光計で記録し、フーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルは、Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｉｍｐａｃｔ４００ Ｄ赤外分光計で測定した。ＩＲおよびＦＴＩＲスペクトルは、転送方式で測定し、赤外吸収帯は波数の逆数（ｃｍ−１）で示す。質量スペクトルは、高速原子衝撃（ＦＡＢ）またはエレクトロスプレー（ＥＳ）イオン化法を使用して、ＶＧ７０ＦＥ，ＰＥ Ｓｙｘ ＡＰＩ ＩＩＩまたはＶＧ ＺＡＢ ＨＦ装置のいずれかで測定した。元素分析は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４０Ｃ元素分析器を使用して得た。融点は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点測定器で測定し、回収しなかった。全ての温度は摂氏で記録する。
【００４０】
アナルテックシリカゲルＧＦおよびイー・メルクシリカゲル６０Ｆ−２５４薄層クロマトグラフィーを薄層クロマトグラフィーに使用した。フラッシュおよび比重クロマトグラフィーはイー・メルクキーゼルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）６０（２３０〜４００メッシュ）シリカゲルで行った。分析および分離ＨＰＬＣはＲａｉｎｉｎまたはＢｅｃｋｍａｎクロマトグラフで行った。ＯＤＳは、オクタデシルシリル誘導シリカゲルクロマトグラフサポートを意味する。５μＡｐｅｘ−ＯＤＳは、Ｊｏｎｅｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ， Ｃｏｌｏｒａｄｏにより製造された５μの公称粒経を有するオクタデシルシリル誘導シリカゲルクロマトグラフサポートを示す。ＹＭＳ ＯＤＳ−ＡＱ（登録商標）はＯＤＳクロマトグラフサポートであり、日本の京都のＹＭＣ Ｃｏ．Ｌｔｄ．の登録商標である。ＰＲＰ−１（登録商標）は、高分子（スチレン−ジビニルベンゼン）クロマトグラフサポートであり、米国ネバダ州リーノーのＨａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏ．の登録商標である。セライト（登録商標）は、酸洗浄した珪藻類シリカから成るフィルターであり、米国コロラド州のデンバーのＭａｎｖｉｌｌｅ Ｃｏｒｐ．の登録商標である。
上記の一般的な方法に従って、以下の化合物を合成した：
【００４１】
実施例１
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ａ）５−（４−シアノ−３−フルオロ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル
ＤＭＦ中の２−フルオロ−４−ブロモベンゾニトリルの溶液を酢酸カリウム、ビスピナコレートボロネート（１．１当量）および触媒のＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）で処理し、２時間８０℃で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、４−ブロモニコチン酸（１当量）を新しい触媒および２ＭのＮａ２ＣＯ３を加え、得られた混合物を８０℃で１８時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を還流エタノール中の４ＮのＨＣｌ／ジオキサンで１８時間処理した。反応物を蒸発させ、酢酸エチル中の残渣をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて５−（４−シアノ−３−フルオロ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステルを得た。
【００４２】
ｂ）５−（４−シアノ−３−ヒドロキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル
ＭｅＣＮ中の実施例１ａからの５−（４−シアノ−３−フルオロ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル、酢酸カリウム（２当量）および１８−クラウン−６エーテル（２当量）の混合物を３６時間加熱還流した。混合物を冷却し、炭酸ナトリウム水溶液を加え、室温で一晩撹拌した。混合物をエーテルで抽出した（廃棄した）。水層を１ＮのＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥して濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して５−（４−シアノ−３−ヒドロキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステルを得た。
【００４３】
ｃ）５−（４−シアノ−３−Ｒ−オキシラニルメトキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル
アセトン中の実施例１ｂからの５−（４−シアノ−３−ヒドロキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル（１当量）、炭酸カリウム（２当量）およびＲ−グリシジル−３−ニトロベンゼンスルホネート（１当量）の混合物を２４時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して５−（４−シアノ−３−Ｒ−オキシラニルメトキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステルを得た。
【００４４】
ｄ）Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン
ジオキサン中の実施例１ｃからの５−（４−シアノ−３−Ｒ−オキシラニルメトキシ−フェニル）−ニコチン酸エチルエステル（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００４５】
実施例２
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１ｄからの化合物の撹拌溶液に２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化して、二塩酸塩としてＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００４６】
実施例３
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１ｃからの化合物（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００４７】
実施例４
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例３からの化合物の撹拌溶液に、２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化し、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００４８】
実施例５
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１ｃ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−エチルカルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００４９】
実施例６
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例５の化合物の撹拌溶液に２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加え、室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化し、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［５−カルボキシル］−３−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００５０】
実施例７
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ａ）６−（４−シアノ−３−Ｒ−オキシラニルメトキシ−フェニル）−ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル．
実施例１ａの４−ブロモニコチン酸の代わりに６−ブロモピコリン酸を用いること以外は、実施例１ａ−ｃに概説した方法を利用して６−（４−シアノ−３−Ｒ−オキシラニルメトキシ−フェニル）−ピリジン−２−カルボン酸エチルエステルを得た。
ｂ）Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン
ジオキサン中の実施例７ｂ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００５１】
実施例８
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例７ｂからの化合物の撹拌溶液に、２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化して、二塩酸塩としてＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００５２】
実施例９
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例７ｂ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏに加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００５３】
実施例１０
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例９からの化合物の撹拌溶液に、２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏに加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００５４】
実施例１１
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例７ｂ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏに加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−エチルカルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００５５】
実施例１２
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１１からの化合物の撹拌溶液に２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−５−［［３−カルボキシル］−２−ピリジル］フェノキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００５６】
実施例１３
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ａ）２−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン
ＴＨＦ中の２−ブロモ−３−ヒドロキシ−ピリジン（１当量、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）の溶液をＮａＨ（１当量）で０℃で３０分間処理した。ヨウ化メチル（１当量）を加え１８時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に加え、５％のＮａ２ＣＯ３（水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発して２−ブロモ−３−メトキシ−ピリジンを得た。
【００５７】
ｂ）３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリル
ＤＭＳＯ中の実施例１３ａから２−ブロモ−３−メトキシ−ピリジンの溶液をＮａＣＮで１２０℃で１８時間処理した。反応混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に加え、５％のＮａ２ＣＯ３（水溶液）で加え、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリルを得た。
【００５８】
ｃ）６−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリル
ＣＣｌ４中の実施例１３ｂからの３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリルの溶液をＮ−ブロモスクシニミド（１当量）および触媒の２，２−アゾビスイソブチロニトリルで処理し、１８時間加熱還流した。反応混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に加え、５％のＮａ２ＣＯ３（水溶液）、５％のＮａ２Ｓ２Ｏ３（水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて６−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリルをえた。
【００５９】
ｄ）４−（６−シアノ−５−メトキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステル
トルエン中の実施例１３ｃからの６−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン−２−カルボニトリルの溶液を２ＭのＮａ２ＣＯ３（水溶液）、４−カルボキシルフェニルホウ酸（１当量）、エタノールおよび触媒の（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄで処理し、１８時間８０℃に加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣をジオキサン中の４ＮのＨＣｌと共にエタノール中に溶解させ１８時間加熱還流した。反応混合物を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に加え、５％のＮａ２ＣＯ３（水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて４−（６−シアノ−５−メトキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステルを得た。
【００６０】
ｅ）４−（６−シアノ−５−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステル
コリジン中の実施例１３ｄからの４−（６−シアノ−５−メトキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステルの溶液をＬｉＩで処理し、１２０℃で２４時間処理した。反応混合物を蒸発させ、残渣を水中に加え、１ＮのＨＣｌで中和した。得られた沈殿を回収し、乾燥して４−（６−シアノ−５−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステルを得た。
【００６１】
ｆ）４−（６−シアノ−５−オキシラニルメトキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステル
アセトン中の実施例１３ｅからの化合物（１当量）、炭酸カリウム（２当量）およびＲ−グリシジル−３−ニトロベンゼンスルホネート（１当量）を２４時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して４−（６−シアノ−５−オキシラニルメトキシ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エチルエステルを得た。
【００６２】
ｇ）Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン
ジオキサン中の実施例１３ｆ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００６３】
実施例１４
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１３ｇからの化合物の撹拌溶液に２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加え、室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化してＮ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（５−クロロチエニル）エチルアミンを得た。
【００６４】
実施例１５
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１３ｅ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００６５】
実施例１６
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１５からの化合物の撹拌溶液に、２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ中に加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化して、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］］−１，１−ジメチル−２−（インダン−２−イル）エチルアミンを得た。
【００６６】
実施例１７
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例１３ｅ（１当量）、過塩素酸リチウム（１当量）および１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミン（１．１当量）の混合物を４８時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮し、Ｈ２Ｏに加え、Ｈ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−エチルカルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００６７】
実施例１８
Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンの調製
ジオキサン中の実施例５からの化合物の撹拌溶液に２．５ＮのＮａＯＨ（水溶液）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏに加え、２ＮのＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化して、Ｎ−［（２Ｒ）−ヒドロキシ−３−［［２−シアノ−４−［［４−カルボキシル］フェニル］−３−ピリジロキシ］プロピル］］−１，１−ジメチル−４−（メトキシフェニル）エチルアミンを得た。
【００６８】
実施例１９
非経口処方
非経口投与用の医薬組成物を、適当な式（Ｉ）で示される化合物を、ポリエチレングリコールに加熱して溶解することにより調製する。ついで、この溶液を注射用水で１００ｍＬに希釈する。ついで、溶液を０．２２ミクロンの膜フィルターを通して濾過することにより滅菌し、滅菌容器にシールする。
【００６９】
限定するものではないが、本明細書に示される特許および特許出願を含む全ての公開は、各々完全に出典明示し、本明細書に組み入れる。
【国際公開パンフレット】
2004509077.tif 000007
2004509077.tif 000008
2004509077.tif 000009
2004509077.tif 000010
2004509077.tif 000011
2004509077.tif 000012
2004509077.tif 000013
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2004509077.tif 000037
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004509077.tif 000038
【国際調査報告】
2004509077.tif 000039