(57)【要約】表面接触の後にアレルギー症状（他の内で、ラテックスゴム及びネコアレルゲンと関係するもの）を誘発するアレルゲン上のＩｇＥ結合性エピトープをブロックすることができる。これらのエピトープに結合する分子を同定して合成し、次いで、処方して、アレルゲン性表面を被覆し又は該表面とブレンドして、患者のＩｇＥがそのアレルゲン性エピトープに近づくのを阻止することができる。一具体例において、これらの分子は、アレルギー応答を誘出するエピトープに選択的に結合する抗体又は抗体断片である。他の具体例においては、マスキング試薬は、抗体断片を真似してアレルゲン上の関連エピトープに結合するペプチドである。第３の具体例において、関連抗原に結合するＦａｂ断片をコードするｃＤＮＡを単離し、これらのｃＤＮＡによりコードされるＦａｂタンパク質を製造する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
物質中のアレルゲンに対するアレルギー反応を、その物質をＩｇＥと結合するアレルゲン中のエピトープをマスクする有効量の試薬（その物質にさらされた個人におけるアレルギー応答を減じるのに有効な量）と接触させることによって低減させる方法であって、
この試薬を、アレルゲンに結合する抗体又は抗体断片、アレルゲンに結合する抗体の超可変領域に対応するペプチド及びアレルゲンに結合する合成化学化合物よりなる群から選択し、そして
この試薬がマスト細胞上のＩｇＥレセプターに結合せず、それらを架橋せず、且つ毒性でも刺激性でもない、
上記の方法。
【請求項２】
マスキング試薬が、タンパク質アレルゲン上のＩｇＥエピトープと反応性の抗体又は抗体断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
マスキング試薬が、組換えライブラリーのスクリーニングにより同定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
マスキング試薬が、組合せライブラリーのスクリーニングにより同定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
マスキング試薬が、ラテックスゴムアレルゲンをブロックする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
マスキング試薬が、動物アレルゲンをブロックする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
マスキング試薬が、空気又は真空が通過して循環するフィルター中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
マスキング試薬を、内面に適用することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
物質に対するアレルギー反応を低減させるための組成物であって、
ＩｇＥと結合するアレルゲン中のエピトープをマスクする試薬を、この物質にさらされた個人におけるアレルギー応答を低減させるのに十分な量で含み、
この試薬を、アレルゲンに結合する抗体又は抗体断片、アレルゲンに結合する抗体の超可変領域に対応するペプチド及びアレルゲンに結合する合成の化学化合物よりなる群から選択し、そして
この試薬が、マスト細胞上のＩｇＥレセプターと結合せず、それらを架橋せず且つ毒性でも刺激性でもなく、そして
この物質をマスキング試薬と接触させるための適当なキャリアー
を含む、上記の組成物。
【請求項１０】
動物への適用に適している、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ラテックス物質をコートするための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
マスキング試薬を、空気又は真空フィルター中に固定する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
マスキング試薬が、内面への適用のための配合物中にある、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
マスキング試薬が、ラテックスタンパク質上のＩｇＥエピトープを改変する化学化合物である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
皮膚その他の組織表面に直接接触するラテックス完成品の表面への適用に適した粉末又は液体形態の、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
マスキング試薬が、動物の毛、皮又は鱗屑上のＩｇＥエピトープに結合する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
マスキング試薬が、昆虫タンパク質、カビ又は花粉中のＩｇＥエピトープに結合する、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
この発明は、一般に、ラテックスその他の物質等の表面アレルゲンに対するアレルギー反応を低減させる組成物の分野にある。
【０００２】
アレルギー疾患は、一般的な健康上の問題である。アレルギーは、食物、カビ、花粉、草、木、昆虫、ペット、ノミ、ダニその他の環境に存在する物質に対して存在する。幾つかのアレルギー反応（特に、食物及び昆虫に対するもの）は、生命を脅かす程に重大であり得る。上記のアレルゲンの大部分は、摂取、吸入又は注射した際に反応を誘出する。アレルゲンは又、皮膚との接触だけで反応を誘出することもできる。動物の毛は、一つの一般的なアレルゲンである。他の周知の例は、医療用品及び個人用防護備品等の多くの製品で用いられているラテックスゴムである。
【０００３】
ラテックスゴム製品は、ゴムの木ヘベアブラジリエンシスに由来する乳状の液体及び他の加工化学物質から製造される。ラテックスゴム中のタンパク質は、一定範囲のアレルギー反応を引き起こし得る。加えて、これらのアレルギー反応の原因となり得るタンパク質は、ラテックスゴム手袋中に入れるパウダーに付着し得る。このパウダーは、吸入され得て、肺からの曝露を引き起こす。２つの型の反応：刺激性接触皮膚炎及び即時的全身性過敏症が、ラテックスゴムに感受性の個人に起こり得る。これらの反応は、ＩｇＥにより媒介される。
【０００４】
抗体と相互作用するラテックスゴム中に見出されるタンパク質は、二次元電気泳動により特性決定されてきた。５６、４５、３０、２０、１４及び６．５ｋｄ未満のタンパク質画分が、検出されている（Ｐｏｓｃｈ Ａ．等、（１９９７） Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）， ３８５−３９５）。ＩｇＥ抗体と反応する８〜１４ｋｄ及び２２〜２４ｋｄの酸性タンパク質も同定された（Ｐｏｓｃｈ Ａ．等、（１９９７） Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）， ３８５−３９５）。ヘベアブラジリエンシス由来のタンパク質のプロヘベイン及びヘベインは、主なラテックスゴムアレルゲンであってＩｇＥと相互作用することが知られている（Ａｌｅｎｉｕｓ，Ｈ．等、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ２５（７），６５９−６６５；Ｃｈｅｎ等、（１９９７）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３），４０２−４０９）。このタンパク質のヘベインレクチンファミリーは、ジャガイモのレクチン及び蛇毒ディスインテグリンと相同性を有することが示されている（Ｋｉｅｌｉｓｑｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ｌ．等、（１９９４） Ｐｌａｎｔ Ｊ．５（６），８４９−８６１）。
【０００５】
ＩｇＥ結合ドメインは、主としてヘベイン画分中にあることが示されているが、エピトープもプロヘベインに特異的なドメイン中に存在する（Ｃｈｅｎ Ｚ．等、（１９９７） Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３），４０２−４０９）。プロヘベインの主なＩｇＥ結合性エピトープは、Ｎ末端の４３アミノ酸断片中にあると考えられている（Ａｌｅｎｉｕｓ Ｈ．等、（１９９６） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（４），１６２８−１６２５）。
【０００６】
アレルギーは、マスト細胞によるヒスタミンその他の炎症メディエーターの放出により顕在化され、それは、マスト細胞表面のレセプターに結合されたＩｇＥ抗体が抗原により架橋されたときに引き金を引かれて作用する。回避（これは、しばしば問題である）及び薬物（例えば、抗ヒスタミン剤、鬱血除去剤及びステロイド剤）での治療（これらは、単に、症状を緩和させるだけである）以外では、現在医学的に受け入れられているアレルギーの治療は、免疫療法である。
【０００７】
免疫療法は、患者をアレルゲンに対して脱感作するためのアレルゲン抽出物の反復注射を含む。不都合なことに、伝統的な免疫療法は、時間がかかり、通常、数年間の治療を含み、しばしば、患者をアレルゲンに対して脱感作するというゴールに到達することができない。
【０００８】
患者のアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体を涸渇させるアレルゲン非特異的抗ＩｇＥ抗体を用いる初期の試みは、初め、有望にみえた（Ｂｏｕｌｅｔ等、１９９７；１５５：１８３５−１８４０；Ｆａｈｙ等、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９７；１５５：１８２８−１８３４；Ｄｅｍｏｌｙ Ｐ．及びＢｏｕｓｑｕｅｔ Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊ Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９７；１５５：１８２５−１８２７）。他方、免役原性ペプチド（Ｔ細胞エピトープを代理する）を用いる試みは、くじかれた（Ｎｏｒｍａｎ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７；９９：Ｓ１２７）。プラスミドＤＮＡの注射を利用する他の形態のアレルゲン特異的免疫療法（Ｒａｚ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９９４；９１：９５１９−９５２３；Ｈｚ等、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６；８：１４０５−１４１１）は、立証されないままである。
【０００９】
アレルギーの、特に、伝統的な免疫療法が、患者に対するリスクと効果の欠如のために軽率となるアレルギーの安全且つ有効な治療に対する要求がある。治療のための別法（例えば、最も問題であるアレルゲンがマスクされた食物、材料及び物質の創成）に対する要求もある。
【００１０】
それ故、アレルゲンのアレルゲン性を、関連エピトープをマスクすることによりＩｇＥがそれらに結合するのを阻止し、それによりアレルギー応答を軽減させる化合物を生成することにより低減させる方法を提供することは、本発明の目的である。
【００１１】
発明の要約
表面接触に際してアレルギー症状（例えば、他のものの内で、ラテックスゴム及びネコアレルゲンに関連するもの）を誘発するアレルゲン上のＩｇＥ結合性エピトープを、本明細書中で「マスキング試薬」と呼ぶブロッキングリガンドとの相互作用によって覆うことができる。これらのエピトープに結合する分子は、下記のように同定して合成することができる。次いで、これらの分子を、処方して、表面タンパク質のアレルゲン性潜在能力を、患者のＩｇＥがアレルゲン性エピトープに接近するのを阻止することにより中和する。
【００１２】
一具体例において、これらの分子は、アレルギー応答を誘出するエピトープに選択的に結合する抗体断片である。標準的技術を用いて、関連表面アレルゲンに対してアレルギー性の患者の末梢血単球から単離したｍＲＮＡから組合せＩｇＥライブラリーを生成することができる。このライブラリーを、関連抗原を用いるパニングによりスクリーニングすることができる。関連抗原に特異的な組換えＦａｂ断片を生成する陽性クローンを同定して、そのＦａｂ断片をコードするｃＤＮＡを単離する。このｃＤＮＡを用いて、トランスフォームした細菌、酵母又は昆虫細胞からの組換えタンパク質の大規模製造のための標準的方法により又は他の組換えタンパク質の発現のための高アウトプットシステムによって、多量の組換えＦａｂ断片の合成を駆動することができる。この組換えＦａｂタンパク質を単離して、関連表面抗原のＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として直接利用することができる。
【００１３】
アレルギー応答を誘出するエピトープに特異的に結合する天然の抗体（ヒト又は動物の抗体）又はそれらの断片も又、利用することができる。或は、アレルゲン反応性ＩｇＥを生成する患者の末梢血単球由来のハイブリドーマを生成することができる。所望であれば、標準的方法を用いて、Ｆａｂ断片を天然のモノクローナル抗体から、タンパク質分解により又はクローニング及び組換え発現により製造することができる。もう一度、これらのＦａｂは、ブロッキング剤として直接利用することができる。
【００１４】
他の具体例においては、上記のように単離したｃＤＮＡを配列決定して、抗原結合に関与する２０〜３０アミノ酸に対応するタンパク質配列である超可変領域を決定する。この配列に対応するペプチドは、標準的技術によって化学合成され又は組換えタンパク質の大規模製造のための標準的方法によって合成されよう。このペプチドを直接、関連表面抗原のＩｇＥ結合性エピトープをブロックするために利用する。
【００１５】
好適具体例においては、天然物化学ライブラリー又は組合せ合成化学ライブラリーに由来する、患者のＩｇＥの特異的エピトープへの結合をブロックする化学的化合物を同定し又は合成する。これを達成するためには、上記のように同定したＦａｂ断片又はモノクローナル抗体を、個人のＩｇＥの関連アレルゲン上の各エピトープへの結合をブロックする化学化合物のスクリーニングにおいて利用する。モノクローナル抗体又は組換えモノクローナルＦａｂのこのアッセイにおける利用は、未分画ＩｇＥよりも、個人のエピトープに対するＩｇＥの結合をブロックする化合物の同定を可能にする。これらの抗体又は抗体断片をアッセイで用いて、組合せ合成化学ライブラリー又は天然物化学ライブラリーを、関連抗原に結合してモノクローナル抗体又は組換えＦａｂ断片の結合をブロックする化合物についてスクリーニングする。次いで、これらの化合物を、関連表面抗原上のＩｇＥ結合性エピトープをブロックする薬剤として直接利用する。
【００１６】
すべての場合において、ブロッキング剤として用いる分子自体がアレルギー応答を引き起こさないことを測定することは、重要である。これは、標準的技術（即ち、皮膚試験等）を用いて達成することができる。
【００１７】
これらのマスキング化合物は、直接適用することもできるし、製造時又は製造後に物質とブレンドすることもできる。物質は、典型的には、マスキング化合物のエピトープへの結合のための条件を最適化するキャリアーにて適用する。例えば、抗体を利用する場合には、それらの抗体又は抗体断片を、生理的ｐＨの緩衝液又はパウダーに懸濁させ、次いで、マスキング化合物に結合するのに十分な時間にわたって基材に適用する。これらの物質は、ラテックス配合物等の組成物、又はイヌ若しくはネコ等の動物であってよい。ラテックス手袋の場合には、この物質を、好ましくは、容易に手袋中に分配されるパウダー又はコーティングにて適用し又は手の全面に手袋への挿入前に適用する。これらの用いる物質は、芳香を加え又は適用若しくは除去を容易にする他の物質と合わせることができよう。ネコ、イヌ等の場合には、鱗屑を減らすエンハンサー又は毛の光沢若しくは臭いをよりよくするための添加剤を加えることができる。これらの化合物は又、アレルゲンを引きつけることのありそうな表面例えば動物又はそれらの毛及び鱗屑が落ちているであろう壁、床、カーテン類、カーペット及び家具に加えることもできよう。これらは、エアゾールスプレー、ロールワン又は他の一般に利用可能な手段を用いて適用することができる。
【００１８】
発明の詳細な説明
定義
下記の定義を、ここでは、用いる。
抗原は、抗体の産生（液性応答）又はＴ細胞由来のの抗原特異的反応（細胞性応答）を誘出する分子である。
【００１９】
アレルゲンは、他のアイソタイプの抗体に加えてＩｇＥ生成を誘出する抗原のサブセットである。
【００２０】
アレルギー反応は、ＩｇＥに媒介され、皮膚（ユティカリア、皮膚脈管炎、そう痒症）、呼吸器系（ぜいぜい、咳、喉頭浮腫、鼻漏、なみだ眼／かゆい眼）、消化器系（嘔吐、腹痛、下痢）及び心臓血管系（全身性の反応が起きた場合）の少なくとも１つを主として含む臨床症状を伴うものである。
【００２１】
エピトープは、免疫グロブリンにより結合され得又は抗原提示細胞により主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と共に提示された場合にＴ細胞レセプターにより認識される約６〜１５アミノ酸のアミノ酸モチーフよりなる結合部位である。リニアーエピトープは、アミノ酸が単一直鎖状配列のコンテキストにおいて認識されるものである。コンホメーショナルエピトープは、アミノ酸が特定の三次元構造のコンテキストにおいて認識されるものである。
【００２２】
減少したアレルギー反応は、アレルゲンへの曝露に伴う症状の、治療の後での臨床症状の減少により特徴付けられる（呼吸器、胃腸、皮膚、眼、耳及び粘膜表面を一般に含み得る）。
【００２３】
軽い刺激から生命を脅かす程の重さまで及び得るアレルギー応答を誘出する多くのアレルゲンが知られている。これらのアレルゲンの多くは、ここに記載の技術を用いて中和することができる。例には、ラテックスゴムタンパク質、動物の毛及び／又は鱗屑（特に、ペット例えばトリ、イヌ及びネコ並びに家畜例えばウマ）が含まれる。他の例には、昆虫アレルゲン特にノミ、マダニ、ダニ、蟻、蜂及びゴキブリ由来のタンパク質が含まれる。他の典型的アレルゲンには、カビ、埃及び花粉が含まれる。
【００２４】
Ｉ．マスキング試薬
好適な試薬は、組換え抗体断片、抗体超可変領域に由来する合成ペプチド及びエピトープへの抗体結合を真似しそれによりＩｇＥの結合をブロックする合成分子である。すべての場合において、これらの試薬自体がアレルギー応答を引き起こさず且つＩｇＥ抗体に結合せず、マスト細胞上のＦｃεレセプターを架橋しない（該架橋は、マスト細胞の脱顆粒を引き起こす）ということは、臨界的である。
【００２５】
組換えＩｇＥのＦａｂ断片
標準的技術を用いて、組合せＩｇＥライブラリーを、関連表面抗原に対してアレルギー性の患者から生成することができる（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１０９６７−１０９８２（１９９６））。このライブラリーを、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ等により記載されたように、関連アレルゲンを用いるパニングによりスクリーニングすることができる。関連抗原に特異的な組換えＦａｂ断片を生成する陽性クローンを、それにより、同定し、Ｆａｂ断片をコードするｃＤＮＡを単離することができる。このｃＤＮＡを用いて、多量の組換えＦａｂ断片の合成を、組換えタンパク質の大規模製造のための標準的方法に従って、駆動する。この組換えＦａｂタンパク質を単離して、関連表面アレルゲンのエピトープへのＩｇＥの結合をブロックする薬剤として直接利用する。
【００２６】
Ａ．ライブラリーの調製及びスクリーニング
ＩｇＥ結合部位：組み換えライブラリー及び組み換えケミストリーをブロックする化合物を得るための主要な方法は、２つある。
組み換えファージディスプレイライブラリーを適用することによってＩｇＥ結合部位と相互作用する化合物の識別
ＩｇＥライブラリーの調製及びスクリーニング
Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ等（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｐ．，Ｋｒａｆｔ  Ｄ．及びＶａｌｅｎｔｒａ  Ｒ．（１９９６）”Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ＩｇＥ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＥ  Ｆａｂｓ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  Ｔｉｍｏｔｈｙ  Ｇｒａｓｓ  ｐｏｌｌｅｎ  ａｎｔｉｇｅｎ，”  Ｐｈｌ  ｐ．５  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１０９６７−１０９７２）は、草アレルギー性患者の末梢血単核細胞から分離されたｍＲＮＡから組み合せＩｇＥファージディスプレイライブラリーを調製した。アレルゲン特異性ＩｇＥが、ＩｇＥ  Ｆａｂを９６ウエルマイクロタイタープレート上に固定されたアレルゲンに対して表面上で発現する繊維状ファージを選り分けることによって選択された。次いで、ｃＤＮＡが、アレルゲン結合ファージから分離され、多量の単クロール性組み換えアレルゲン特異性ＩｇＥ  Ｆａｂを産生するために大腸菌の中に転換された。この技術は、線形及び立体配座の両方のエピトープについて有効になる。
【００２７】
ライブラリースクリーニングが患者血清中に存在するアレルゲン特異性ＩｇＥの完全なインベントリーを生じていたかどうかを求めるために、免疫競合アセイを行うことができる。プールされた組み換えＦａｂは、固定されたアレルゲンと共にあらかじめインキュベートされることになる。次いで、洗浄して未結合のＦａｂを除いた後に、固定されたアレルゲンは、患者血清と共にインキュベートされることになる。未結合の血清タンパク質を除いた後に、ＩｇＥ  Ｆｃ領域について特異性のレセプター結合された二次抗体によるインキュベーションが行われることになる。結合されたレセプターの検出は、血清ＩｇＥが組み換えＦａｂによって妨げられてアレルゲンに結合されなかった程度の定量化を可能にしよう。非競合の血清ＩｇＥ結合のレベルは、Ｆａｂと共にあらかじめインキュベートされていない又はナンセンスＦａｂと共にインキュベートされているアレルゲンを使用して求められることになる。
【００２８】
Ｂ．遮蔽用化合物の産生
抗体又は抗体フラグメント
関係する抗原について特異性の組み換えＦａｂフラグメントを産生するｃＤＮＡクローンを、組み換え発現システムから組み換えタンパク質を大規模生産するための標準方法に従って、使用して多量の組み換えＦａｂフラグメントの合成を推進することになる。組み換えＦａｂタンパク質は、分離され、関連のある表面抗原のＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として利用されることになる。
【００２９】
バクテリア、酵母及びバキュロウイルス−昆虫細胞システムを含む原核性又は真核性宿主における発現が、多量（ｍｇ）のタンパク質遮蔽用化合物の産生するのに使用されるのが典型的である。バクテリアにおいて産生するための方法の例は、Ｓｐｏｒｅｎｏ等、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ６（３），２５５−２６４、及びＰａｄｋｅｒ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１１（１１），１２７１−１２７７（１９９３）（大腸中の「ミニ−抗体」）を含み、及びほ乳類において産生するための方法の例は、Ｗｅｒｎｅｒ等、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２（１−２），５１−６８（１９９２）を含む。
【００３０】
トランスジェニック植物又は動物もまた組み換えタンパク質遮蔽用化合物を造るのに使用することができる。
【００３１】
植物及び動物を処理する方法は、十年も前から良く知られている。例えば、植物については、Ｄａｙ，（１９９６）  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．  ＆  Ｎｕｔ．３６（Ｓ），５４９−５６７を参照。また、Ｆｕｃｈ及びＡｓｔｗｏｏｄ（１９９６）  Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈ．８３−８８も参照。組み換え動物を造る方法もまた十分に確立されている。例えば、Ｃｏｌｍａｎ，Ａ  ”Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｌｋ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ”（１９９８）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｓｙｍｐ．６３，１４１−１４７；Ｅｓｐａｎｉｏｎ及びＮｉｅｍａｎｎ，（１９９６）  ＤＴＷ  Ｄｔｘｃｈ  Ｔｉｅｒａｚａｒａｔｌ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  １０３（８−９），３２０−３２８；及びＣｏｌｍａｎ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｒｉｎ．Ｎｕｔｒ．６３（４），６３９８−６４５５Ｓを参照。
【００３２】
超可変性ペプチド配列
関係する抗原に結合するｃＤＮＡコード化Ｆａｂフラグメントを上記した通りにして分離する。これらのｃＤＮＡを配列し、抗原結合超可変性領域に相当するタンパク質配列を求めることができる。この配列に相当するペプチド「抗体擬態者」は、標準の技術に従って化学合成されることになる。このペプチドを、関係する表面アレルゲンのＩｇＥ結合エピトープをブロックするのに直接使用することができる。一般的に言えば、ペプチドは、アミノ酸１０〜１５の長さになるであろうが、アミノ酸３０程に長くすることができよう。代わりに、ペプチドに、結合親和力及び／又は安定性を増大させる代替を識別するために、インビトロ変異誘発を施すことができる。
【００３３】
合成化学分子
ＩｇＥのアレルゲンへの結合を、ＩｇＥ結合エピトープを遮蔽することによってブロックするのに、非ペプチド化合物を利用することが好ましくなり得る場合がいくつかある。関係するアレルゲンに結合するｃＤＮＡコード化Ｆａｂフラグメントを分離し、これらのｃＤＮＡによってコード化されたＦａｂタンパク質を上記した通りにして調製する。次いで、これらのタンパク質を、関係する抗原に結合しかつ組み換えＦａｂフラグメントへの結合をブロックする化合物についての組み合せ化学ライブラリーをスクリーンするためのアセイにおいて使用することができる。これらの化合物は、関係する表面抗原上のＩｇＥ結合エピトープをブロックする薬剤として直接使用することになる。
【００３４】
抗原は、マイクロタイタープレートのウエルに接着することにより又は固相樹脂に共有結合することによって固定されることになる。マイクロタイタープレートの各々のウエル（又は抗原結合された樹脂の個々のアリコート）は、化学化合物と共にインキュベートされることになる。テストする各々の物質は、組み合せ化学合成プロトコルの生成物になる或は天然産又は合成化学化合物のライブラリーに由来することになる。未結合の化学化合物を、マイクロタイターウエルを又は適当な緩衝剤中の樹脂アリコートをすすぐことによって除くことになる。続いて、上記した通りにして誘導した抗原特異性Ｆａｂフラグメントの内の一種を含有する溶液を各々のウエルに加える又は各々の樹脂アリコートと混合することになる。緩衝剤中で洗浄して未結合のＦａｂフラグメントを除いた後に、フルオレセイン又はホースラディッシュペルオキシダーゼのような検出試薬に結合しかつヒトＩｇＥ  Ｆａｂフラグメントに対して向ける二次抗体を加えることになる。代わりに、標準の分子生物学技術を、緑色蛍光タンパク質のような検出可能なシグナルエンティティーをＦａｂフラグメントそれ自体に結合するのに、採用することができる。この場合、二次抗体インキュベートが必要になる。二次抗体結合を、検出シグナルを測定することによって定量化することになる。アレルゲン上のＩｇＥ結合エピトープに結合しかつ該エピトープをブロックするそれらの化合物は、その上、Ｆａｂフラグメント、故に検出可能な二次抗体の結合を防ぐことになる。かくして、懸案の化合物は検出信号を低減させるものと同定されるであろう。任意のブロッキング化合物はＩｇＥ Ｆａｂフラグメントに結合することによるよりもむしろアレルゲン上のエピトープに結合することによってそのブロッキング効果を達成するということを示すことが臨界的に重要である。ＩｇＥ Ｆａｂドメインに結合する化合物は、アレルゲンに結合する患者のＩｇＥ結合をブロックすることが予測される一方で、これらの患者のＩｇＥ分子を架橋させることもあり、かくしてブロッキング化合物の適用によって防止することが意図されるマスト細胞の脱顆粒反応を誘発することがある。かくして、このアッセイによって同定されるそれぞれの化合物は、それがＦａｂフラグメントに結合する能力についてアッセイされる。Ｆａｂフラグメントは、固体樹脂に対する共有結合によって固定化される。Ｆａｂ樹脂は、懸案の化合物と共にインキュベートされ、その後に未結合化合物は適宜の緩衝剤中で洗浄することによって除去される。このＦａｂ樹脂は次いで関連アレルゲンの放射能標識付けされたものと共にインキュベートされる。抗原の放射能標識付けは、［３５Ｓ］−メチオニンによるバクテリアの生合成的標識付け（アレルゲンが組み換え手段によって作られた場合）又は［１２５Ｉ］による元のアレルゲンの酵素触媒放射性ヨウ素標識付けによって達成される。Ｆａｂ樹脂へのアレルゲンの結合は、シンチレーションをカウントすることによって定量化される。懸案の化合物がＦａｂフラグメントに結合すれば、これは放射能標識付けされたアレルゲンの結合を防止するであろう。かくして、Ｆａｂ樹脂への放射能標識付けされたアレルゲンの結合を減少させる��合物はＦａｂフラグメントと直接相互作用しなければならない。この方法は、化合物の固定化及び固定化された化合物へのＦａｂフラグメントの結合についてのテストにも同様にうまく適用することができる。アレルゲンへのＦａｂの結合はブロックするがしかしＦａｂフラグメントに直接結合することはないという化合物のみが潜在的な治療上有用な物質としてさらに追求される。
【００３５】
有用な試薬の同定はまた、「インヴィトロ遺伝学」又は組合せ化学と称されているものの中でランダムな分子の複雑な混合物から選択される分子を用いて達成することもできる（Ｓｚｏｓｔａｋ、ＴＩＢＳ １９：８９、１９９２）。このアプローチにおいては、ランダムな画定された配列の大きいプールが合成され、次いでここに記載されたもののようなスクリーニング技術を用いて選別及び富化プロセスに付される。
【００３６】
上に概説したスクリーニング技術によって同定される化学試薬は、標準的な合成化学を用いて調製することができる。
【００３７】
ここではブロッキング剤、即ちエピトープに結合してＩｇＥの相互作用を防止する化合物を参照して説明したが、場合によってはアレルゲンに結合のではなくてむしろこれを変性するブロッキング剤を用いてＩｇＥ結合を防止することもできるであろう。例えば、ラテックスの場合、ラテックス製造のプロセスの間にラテックスミルクに蛋白質変性剤を添加することができるだろう。もしもこれらの試薬がラテックス自体の物性を有意に変化させることなく１種以上のエピトープを除去するような態様で蛋白質を変化させれば、これらは効果的なブロッキング剤として働くであろう。例えば、ジスルフィド結合を減少させる化学物質及び／又はアルキレートシステインを減少させてジスルフィド結合の再形成を防止する化学物質は、特にエピトープが配座的である場合には、これらのエピトープを混乱させる（ｐｅｒｔｕｒｂ）ことが予測されるであろう。同様に、アミノ基と相互作用する試薬（即ちｎ−ヒドロキシスクシンイミド）又はカルボキシル基と相互作用する試薬（即ちダンシルクロリド）は、もしもこれらの試薬によって変性された基がエピトープに臨界的に寄与すれば、ＩｇＥ結合に影響を及ぼすであろう。
【００３８】
ＩＩ．  物質の処理
マスキング化合物は、アレルギー応答を顕在化させる物質をコーティングするために適用され又はこの物質とブレンドされる。マスキング化合物は、この化合物が患者のアレルギー応答を減少させる（好ましくはＩｇＥ結合が媒介する応答の少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９８％減少させる）のに充分に結合をブロックするのを確実にするために、処理されてアッセイされることが予定される物質に適用される。実際の量は、ＥＬＩＳＡ及び好塩基性アッセイのようなＩｇＥ結合についての標準的なアッセイを用いて、それぞれのアレルゲン及び試薬について最適化されるであろう。
【００３９】
コーティングは、吸収によるもの、吸着によるもの又は共有結合若しくは疎水結合の形成による結合によるものであってよい。蛋白質を化学的にカップリングするための方法はよく知られており、米国ミズーリ州セントルイス所在のシグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）のような業者から入手できる。マスキング化合物は、典型的には、適当な溶剤（例えば蛋白質については燐酸塩緩衝塩水、又は水溶液中に可溶ではない化合物については有機溶剤）中で適用されるであろう。
【００４０】
ラテックスについては、ブロッキング化合物は最終表面に適用することもでき、製造のある段階の際にラテックスミルク中にブレンドすることもできる。動物については、ブロッキング剤は、エアゾールスプレー、ローション又はその他の通常利用可能な手段を用いて適用することもでき、動物に対して用いることができるある種のシャンプー又はリンスに添加することもできる。さらに、ブロッキング化合物は、ペットやその毛と接触する表面、例えば壁、床、カーテン、カーペット又は家具に対して、これらの表面に吸着されたアレルゲンがアレルギー反応を顕在化させるのを防止するために、適用することができる。かくして、ペットを処理する必要なくペットアレルギー症状を少なくとも部分的に処置することができる。追加的に、内部表面に適用できるようにブロッキング化合物を配合することは、昆虫アレルギー、特にゴキブリ、ノミ及びダストダニに対するアレルギー、又はカビ及び／若しくは花粉に対するアレルギーを処置する上で、特に有益であろう。カーペット、家具及び暖房用ダクト等上に堆積したアレルゲンのアレルゲン性を中和する手助けをするために、すべての利用可能な表面にエアゾールでスプレーしたり、家の中の空気を処理されたフィルターに通したりすることができる。マスキング剤はまた、殺虫剤や成長阻害剤のような昆虫駆除手段と組み合わせて配合することもでき、この場合には表面上にスプレーすることができる。さらに別の具体例において、マスキング剤は、飛行機のような密閉された場所で、ピーナッツ蛋白質のようなアレルゲンをブロックするために、フィルターに適用される。
【００４１】
動物に対する適用のための１つの具体例においては、担体が動物（特に猫）に対して毒性ではないことが重要である。何故ならば、それらは互いに毛繕いをし、それによって適用されたコーティングを摂取するからである。典型的な担体には、界面活性剤、接着剤、オイル、香料、顔料及びその他の物質（エアゾール中で適用される場合の噴射剤を含む）が包含され得る。手袋、避妊具、カーペット等に関連した１つの具体例においては、コーティングがその物質と接触する人に対して毒性であったり刺激性であったりすることがないということが重要である。
【００４２】
マスキング化合物で処理した後の免疫学的な変化を評価するためのアッセイは、当業者に周知である。慣用のアッセイには、ＲＡＳＴ（Ｓａｍｐｓｏｎ ａｎｄ Ａｌｂｅｒｇｏ、１９８４）、ＥＬＩＳＡ（Ｂｕｒｋｓら、１９８６）免疫ブロット法（Ｂｕｒｋｓら、１９８８）、及びインヴィヴォスキンテスト（Ｓａｍｐｓｏｎ及びＡｌｂｅｒｇｏ、１９８４）が含まれる。目的の臨床症状を処理された物質の投与の前後においてモニターすることによって、臨床症状の変化を決定することができる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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