(57)【要約】本発明は、虚血、外傷又は中毒由来の損傷後疾患の処置のための、特定のトリペプチドの使用に関する。このトリペプチド誘導体は、式（Ｉ）［式中、Ｘは、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルコキシ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ1-5−アルキル、Ｎ（Ｃ1-5−アルキル）2を表し；Ｒ1は、アミノ酸：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ（それぞれ、場合により（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又はハロゲン原子により置換されていてもよい）、及びＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はＩｌｅのいずれかから誘導される残基であり；Ｒ2は、アミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｐＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ及びＡｓｎのいずれかから誘導される残基であり；Ｒ3及びＲ4は、独立にＨ、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルキル、又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し（ただし、Ｒ3及びＲ4は、両方ともＯＨ又は（Ｃ1-5）アルコキシであることはない）；Ｒ5は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルキル又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し；そしてＲ0は、好ましくはシンナモイル残基を表す］、又は薬学的に許容しうるその塩を満たす。
2004526701.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
虚血、外傷又は中毒由来の損傷後疾患の処置に有用な医薬の製造のための、下記式（Ｉ）：
【化１】
2004526701.tif 000005
［式中、Ｘは、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルコキシ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ1-5−アルキル、Ｎ（Ｃ1-5−アルキル）2を表し；
Ｒ1は、アミノ酸：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ（それぞれ、場合により（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又はハロゲン原子により置換されていてもよい）、及びＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はＩｌｅのいずれかから誘導される残基であり；
Ｒ2は、アミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｐＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ及びＡｓｎのいずれかから誘導される残基であり；
Ｒ3及びＲ4は、独立にＨ、ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ5）アルキル、又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し（ただし、Ｒ3及びＲ4は、両方ともＯＨ又は（Ｃ1-5）アルコキシであることはない）；
Ｒ5は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルキル又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し；そして
Ｒ0は、下記式：
【化２】
2004526701.tif 000006
（式中、Ｙは、−ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−又は−ＯＣＨ2ＣＯ−を表し、そしてＺは、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、（Ｃ1-4）アルコキシ基、（Ｃ1-4）アルキル基を表すか；あるいは２つの隣接する置換基は、（Ｃ1-3）アルキレンジオキシ基を形成してもよく；そしてｎは、０又は１〜５の整数である）で示される基を表す］で示される化合物、又は薬学的に許容しうるその塩の使用。
【請求項２】
Ｒ1が、アミノ酸：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ（それぞれ、場合により（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又はハロゲン原子により置換されていてもよい）のいずれかから誘導される残基、又はアミノ酸：Ｉｌｅから誘導される残基である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Ｒ1が、場合により（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又はハロゲン原子により置換されていてもよいＰｈｅから誘導される残基である、請求項２記載の使用。
【請求項４】
Ｘが、（Ｃ1-5）アルコキシ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ1-5−アルキル、又はＮ（Ｃ1-5−アルキル）2である、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
Ｒ2が、アミノ酸：Ｇｌｙ又はＩｌｅから誘導される残基である、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
Ｒ0が、シンナモイル基である、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、シンナモイル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−プロリンアミド、シンナモイル−イソロイシル−フェニルアラニル−Ｌ−プロリンエチルアミド、シンナモイル−イソロイシル−イソロイシル−プロリンアミド、又は薬学的に許容しうるこれらの塩である、請求項１〜６のいずれか１項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経系の損傷後疾患、特に例えば、虚血、外傷又は中毒のような、壊死由来の疾患の処置のための、トリペプチド誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経又は神経組織の虚血は、一般に血管疾患により、例えば、塞栓症又は血栓症のため引き起こされる。よって、例えば、脳梗塞により、中枢神経系の神経は影響を受けることがある。虚血は、最終的に患部組織の壊死をもたらす。
【０００３】
外傷による衝撃もまた、このような神経の死をもたらすことがある。例えば、脊髄損傷及び末梢神経の機械的傷害が知られている。更に、毒性物質、例えば、重金属による環境的影響により神経の壊死に至ることもある。
【０００４】
このような神経損傷に対する新しい治療的アプローチは、別々のニューロン集団の生存、成長及び分化に著しい影響を及ぼすとされている、神経栄養因子又はニューロトロフィンの投与を特徴とする。ニューロトロフィンファミリーは、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、ニューロトロフィン−４（ＮＴ−４）及びＣＮＴＦ−ファミリー（毛様体神経栄養因子）を含む。ニューロトロフィンは、分子量２６〜２８kDaの塩基性の小タンパク質である。ＮＧＦは、多くの異なる組織において活性を示す、ニューロトロフィンファミリーの最もよく性状解析されたメンバーである。
【０００５】
末梢神経系（ＰＮＳ）において、ＮＧＦは、交感神経及びある種の知覚神経の発生に決定的に重要である。中枢神経系（ＣＮＳ）において、ＮＧＦは、前脳基底部のコリン作動性ニューロンの発生及び維持における栄養的役割を担う。これはまた、ニューロン再生における成体ＣＮＳ組織においても、ある役割を演じる。
【０００６】
例えば、外傷、虚血又は中毒由来の損傷後ニューロン疾患の処置のための神経栄養因子の使用は、これまでのところ期待される成功をおさめていない。
【０００７】
特に脳における神経損傷の処置の場合には、神経栄養因子は、血液脳関門を通過せず、このため非経口又は経腸投与に利用できないため、適していない。
【０００８】
損傷後疾患の処置に必要な神経成長に及ぼす刺激作用は、例えば、EP 0,316,218 B1に記載された物質の向知性作用とは区別されるべきであり、後者は、もっぱら投与中一時的に観察されるだけであり、永続的な神経再生をもたらすことはない。
【０００９】
発明の概要
よって、本発明の基礎をなす目的は、神経成長を刺激し、このため例えば、虚血、外傷又は中毒由来の疾患のような損傷後ニューロン疾患の処置に適している物質を提供することである。
【００１０】
本発明のこの目的は、虚血、外傷又は中毒由来の損傷後疾患の処置に有用な医薬の製造のための、式（Ｉ）：
【００１１】
【化３】
2004526701.tif 000003
【００１２】
［式中、Ｘは、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルコキシ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ1-5−アルキル、Ｎ（Ｃ1-5−アルキル）2を表し；
Ｒ1は、アミノ酸：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ（それぞれ、場合により（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又はハロゲン原子により置換されていてもよい）、及びＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はＩｌｅのいずれかから誘導される残基であり；
Ｒ2は、アミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｐＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ及びＡｓｎのいずれかから誘導される残基であり；
Ｒ3及びＲ4は、独立にＨ、ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ5）アルキル、又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し（ただし、Ｒ3及びＲ4は、両方ともＯＨ又は（Ｃ1-5）アルコキシであることはない）；
Ｒ5は、Ｈ、ＯＨ、（Ｃ1-5）アルキル又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し；そして
Ｒ0は、下記式：
【００１３】
【化４】
2004526701.tif 000004
【００１４】
（式中、Ｙは、−ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−又は−ＯＣＨ2ＣＯ−を表し、そしてＺは、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、（Ｃ1-4）アルコキシ基、（Ｃ1-4）アルキル基を表すか；あるいは２つの隣接する置換基は、（Ｃ1-3）アルキレンジオキシ基を形成してもよく；そしてｎは、０又は１〜５の整数である）で示される基を表す］で示される化合物、又は薬学的に許容しうるその塩の使用により解決される。
【００１５】
詳細な説明
他に記載がなければ、アミノ酸残基は、Ｌ型だけでなくＤ型のいずれとしても存在しうる（Ｌ型が好ましい）。
【００１６】
好ましい化合物は、Ｒ1が、アミノ酸：Ｉｌｅ、又はアミノ酸：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ（それぞれ、場合により１個以上の（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又は１個以上のハロゲン原子で置換されていてもよい）の１つから誘導される残基、特にＩｌｅ又はＰｈｅ（場合により１個以上の（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又は１個以上のハロゲン原子で置換されていてもよい）から誘導される残基である、式（Ｉ）の化合物である。
【００１７】
式（Ｉ）において、Ｘは、好ましくは（Ｃ1-5）アルコキシ、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1-5）アルキル又はＮ（Ｃ1-5−アルキル）2であり、更に好ましいのは、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1-3）アルキル及びＮ（Ｃ1-5−アルキル）2である。
【００１８】
Ｒ2は、好ましくはアミノ酸：Ｇｌｙ又はＩｌｅから誘導される残基である。
【００１９】
Ｒ3及びＲ4は、好ましくは相互に独立に、Ｈ、（Ｃ1-5）アルキル又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し（ただし、Ｒ3及びＲ4は、両方とも（Ｃ1-5）アルコキシではない）、更に好ましいのは、Ｈ、（Ｃ1-3）アルキル又は（Ｃ1-3）アルコキシである。
【００２０】
Ｒ5は、好ましくはＨ、（Ｃ1-5）アルキル又は（Ｃ1-5）アルコキシを表し、特に好ましいのは、Ｈ、（Ｃ1-3）アルキル又は（Ｃ1-3）アルコキシである。Ｒ0は、好ましくはシンナモイル基である。
【００２１】
式（Ｉ）の特に好ましい化合物では、Ｒ0は、好ましくはシンナモイル基であり、Ｒ1は、Ｐｈｅ（場合により１個以上の（Ｃ1-5）アルコキシ基、（Ｃ1-5）アルキル基又は１個以上のハロゲン原子で置換されている）から誘導されるか、又はアミノ酸：Ｉｌｅから誘導される残基であり、Ｒ2は、アミノ酸：Ｇｌｙ又はＩｌｅから誘導される残基であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、水素原子を表し、Ｘは、ＮＨ2、ＮＨ−（Ｃ1-3）アルキル又はＮ（Ｃ1-3−アルキル）2である。
【００２２】
最も好ましい式（Ｉ）の化合物は、シンナモイル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−プロリンアミド、シンナモイル−イソロイシル−フェニルアラニル−Ｌ−プロリンエチルアミド、シンナモイル−イソロイシル−イソロイシル−プロリンアミド、又は薬学的に許容しうるこれらの塩である。
【００２３】
アミノ酸に関して使用した略語（フェニルアラニンはＰｈｅであるなど、更には部分的にはフェニルアラニンにはＦのような１文字コードを以下に使用した）は、当業者には既知である（例えば、BeyerとWalter, Lehrbuch der Organischen Chemie, 第21版, S. Hirzel Verlag Stuttgart 1988を参照のこと）。よって、Ｐｈｅは、フェニルアラニンを意味し、Ｇｌｙはグリシンを意味するなどである。「アミノ酸：Ｐｈｅから誘導される残基」という表現は、よってベンジル（−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5）基を意味する。したがって、「アミノ酸：Ｇｌｙから誘導される残基」は、水素原子を意味し、「アミノ酸：Ａｌａから誘導される残基」は、メチル基を意味するなどである。
【００２４】
本発明により使用されるトリペプチド誘導体の合成は、特に制限がなく、既知の方法、好ましくは、各アミノ酸又はその誘導体のＬ−又はＤ立体配置が維持される、ペプチド化学の立体特異的製造法により行うことができる。特に適切なものは、EP 0,316,218 B1に開示される合成法である。
【００２５】
本発明により使用される式（Ｉ）の化合物は、親油性物質であり、そして経腸的投与に、また適切な処方にすれば非経口投与に適している。
【００２６】
１日に体重１キログラム当たり１〜５mg、好ましくは１日に７５〜３７５mgの用量での投与が、通常有効である。神経再生作用を達成するために、数日間にわたる投与（例えば、少なくとも４又は５日間）が一般に好ましい。
【００２７】
本発明により使用されるトリペプチド誘導体は、非常に低い毒性を示す。マウスでは、アーウィン（Irwin）試験により１０００mg/kg（経口投与）以下の用量を使用するとき、致死作用や痙攣惹起作用は観察されなかった。
【００２８】
本トリペプチド誘導体は、種々の方法、例えば、非経口（静脈内、筋肉内、皮下）、呼吸器管経由（バッカル、舌下、鼻内、気管支内）、経皮経路（経皮（percutane））及び経腸経路（経口）での投与に適した、医薬組成物の製造に使用することができる。
【００２９】
本発明の医薬組成物は、更に薬学的に許容しうる賦形剤、薬学的に許容しうる希釈剤又は補助剤を含む。その処方には、例えば、「レミントンの製剤科学（Remington's Pharmaceutical Sciences）」, 第20版, Williams & Wilkins, PA, USAのような、標準法を利用することができる。
【００３０】
投与剤形は、投与経路に応じて選択され、特に錠剤、カプセル剤、粉剤及び液剤を含む。
【００３１】
経口投与には、好ましくは錠剤及びカプセル剤が使用されるが、これらは、適切な結合剤（例えば、ゼラチン又はポリビニルピロリドン）、適切な充填剤（例えば、乳糖又はデンプン）、適切な滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）、及び場合により更に別の添加剤を含む。好ましいのは、投与単位当たり（例えば、１錠又は１カプセル当たり）７５〜２２５mg、更に好ましくは１００〜２００mgのトリペプチド誘導体を含む処方である。
【００３２】
経口投与に特に好ましい処方は、シンナモイル−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＮＨ2  １００mg、更には微結晶性セルロース、トウモロコシデンプン、ポビドン（Povidon）２５、クロスポビドン（Crospovidon）、マクロゴール（Macrogol）４０００、二酸化チタン（Ｅ１７１）、及び酸化第二鉄（Ｅ１７２）を含むコーティング錠である。
【００３３】
非経口投与には、滅菌エタノール含有水溶液が好ましい。適切な滅菌水溶液又は生理食塩水は、１０％v/vエタノールを含んでよい。このような溶液１０mlの容量を使用して、注射用の適切な医療装置中で、凍結乾燥シンナモイル−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＰｒｏＮＨ2  １００mgを溶解する。
【００３４】
特に脊髄損傷及び末梢神経の機械的傷害の処置には、本発明により使用される化合物が固定化された材料の移植が、誘導される神経再生を保証するのに適切な方法である。広く変化に富んだ材料へのペプチドの固定化の種々の方法が知られている（参考として、US 6,156,572を参照のこと）。本発明では、よって式（Ｉ）の化合物を、ヒドロゲル、好ましくは（アガロース、アルギナート又はキトサンのような）多糖類ヒドロゲル、又はポリ（ラクチド）、ポリエチレンオキシド、及びヒアルロナートのような、生体適合性及びできれば生分解性物質に固定化することが特に好ましい。これらの材料へのペプチドの固定化方法は、当業者には知られており、そしてＥＤＣ活性化又は二官能性イミダゾールカップリング剤（例えば、１，１’−カルボニルジイミダゾール）の使用のような、カルボジイミド活性化のようなアミド結合を形成するためのヒドロキシル基の典型的な活性化工程を含む。本発明により使用されるトリペプチド誘導体は、好ましくはＲ基（好ましくはシンナモイル基である）で固定化される。適切な固定化反応は、シンナモイル基と固定化マトリックス上のアルケニル基との光化学反応を含む。特に有用な固定化マトリックスは、US 6,156,572に開示されている。マトリックスとして使用される多糖類は、光化学カップリングが可能なシンナモイル基のようなアルケニル基を用いて誘導体化してもよい。
【００３５】
本発明により使用されるトリペプチド誘導体の神経再生作用は、特に非経口又は経腸的に投与された場合に、驚くべきものがある。これらの物質の向知性作用は、EP 0,316,218 B1から知られているが、これらの物質が投与中に一時的な向知性作用を示すだけでなく、永続的な神経再生を示すという知見は、予測できなかった。
【００３６】
本発明により使用されるトリペプチド誘導体の神経再生特性は、神経突起成長測定法において証明されよう。この測定法を用いて、本トリペプチド誘導体の投与により、神経突起の形成の有意な増加が起こることを証明できた。
【００３７】
実験
神経細胞の発芽は、樹状突起の長さにより測定される。本発明では、本発明により使用される物質の発芽に及ぼす影響がインビボ測定法で試験される。
【００３８】
ラット１０匹の海馬の隔壁を破壊した（Haggら; Exp. Neurol., 101, 303-312を参照のこと）。２１日後、海馬の損傷は、挙動試験により確認すると明白であったが、ラットをそれぞれ５匹の２つの群に分割した。本発明により使用される物質（シンナモイル−ＧＦＰＮＨ2）を１日に体重１kg当たり１０mgを、ラット５匹の試験群に少なくとも１５日間投与した。
【００３９】
投与後、ラットを屠殺し、コリン作動性神経末端をＣＡＴ（コリン−アセチル−トランスフェラーゼ）免疫蛍光測定法により蛍光顕微鏡下で観察した。こうして樹状突起の長さを測定した。
【００４０】
対照群のラットでは、２μm以下の樹状突起長の変化を観察した。これに反して、本発明により使用される物質の投与によって、試験群では８〜１０μmの樹状突起長の増加が起こった。よって、シンナモイル−ＧＦＰＮＨ2は、樹状突起の成長をもたらす成長因子である。
【国際公開パンフレット】
2004526701.tif 000007
2004526701.tif 000008
2004526701.tif 000009
2004526701.tif 000010
2004526701.tif 000011
2004526701.tif 000012
2004526701.tif 000013
2004526701.tif 000014
2004526701.tif 000015
2004526701.tif 000016
2004526701.tif 000017
2004526701.tif 000018
2004526701.tif 000019
【国際調査報告】
2004526701.tif 000020
2004526701.tif 000021
2004526701.tif 000022
2004526701.tif 000023
2004526701.tif 000024