(57)【要約】Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５がここで定義したものである式（Ｉ）を有するセリンプロテアーゼのインヒビターが提供される。特に、該化合物は、第ＶＩＩａ因子、組織因子／第Ｘａ因子複合体、トロンビン、トリプシン、プラスミン及びカリクレインに結合し、抗凝血活性を有している。該化合物を含有する医薬組成物は静脈及び／又は動脈の血栓の形成をインビボで阻害するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（Ｉ）：
2004509104.tif 000042
［上式中、
Ｘは、Ｏ、ＣＲ６Ｒ６’、ＮＲ６又はＳであり、ここでＲ６とＲ６’は独立してＨ又はアルキルであり；
Ｒ１は、Ｈ、−ＯＲ７、アミノ酸又は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７とＲ７’は独立してＨ又は炭化水素鎖、炭素環、複素環、炭素環置換炭化水素鎖又は複素環置換炭化水素鎖であって、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシ、アリールもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；あるいはＲ７とＲ７’は共同して他の複素環又は炭素環に縮合していてもよい複素環を形成し、ここで該他の複素環及び炭素環はヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ又は炭化水素鎖、炭素環又は炭素環置換炭化水素鎖であって、ヒドロキシル、オキソ、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；ここで該炭化水素鎖にはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が介在していてもよく；
Ｒ３はＨ又は保護基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン及びアシルアミノからなる群から選択され；
Ｒ５はＨであるか又はＲ４とＲ５が共同してヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン又はアシルアミノで置換されていてもよい５員又は６員の炭素環又複素環を形成し；
ｎは０又は１である］
の化合物、及びそれらの塩、溶媒和化合物及び水和物。
【請求項２】
ＸがＯである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＣＨ２である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がアミノ酸又は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７とＲ７’は独立してＨ又は炭化水素鎖、炭素環、複素環、炭素環置換炭化水素鎖又は複素環置換炭化水素鎖であって、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシ、アリールもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；あるいはＲ７とＲ７’は共同して他の複素環又は炭素環に縮合していてもよい複素環を形成し、ここで該他の複素環及び炭素環はヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＮＲ７Ｒ７’であり、Ｒ７はヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、アルキル、アルコキシ、ハロ置換アルキルで置換されていてもよいアリール又はアラルキルであり；Ｒ７’はＨ又はアルキルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＮＲ７Ｒ７’であり、Ｒ７はアミジン又はアルコキシで置換されたフェニル又はベンジルであり；Ｒ７’はＨ又はメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がＮＲ７Ｒ７’であり、Ｒ７とＲ７’は共同して他の複素環又は炭素環に縮合していてもよい複素環を形成し、ここで該他の複素環及び炭素環はヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよい、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ７がベンジル、ｐ−アミジニルフェニル、ｐ−メトキシベンジル又はｐ−メチルベンジルであり、Ｒ７’はＨである、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ７とＲ７’が共同してベンゼン環に縮合したピペリジン環を形成し、該縮合ベンゼン環はアルコキシで置換されていてもよい、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
上記縮合ベンゼン環の両方のβ炭素位置がメトキシで置換されている、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、シクロアルキルアルキル又はアラルキルで、アルキル、アミノ、アミジン、グアニジン又はニトロで置換されていてもよいものである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２がＨ、アルキル、アリール、アラルキル又はシクロアルキルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がプロピル、フェニルエチル、シクロヘキシル、ｏ−ニトロベンジル又はｍ−メチルベンジルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３がＨである請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ｎが１であり、Ｒ４がＨ、ヒドロキシル、アミノ又はアルカノイルアミノある、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ｎが１であり、Ｒ４とＲ５が共にＨである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ４とＲ５が共同してベンゼン環を形成している、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
タンパク質リガンドに対するセリンプロテアーゼの結合を阻害する方法であって、上記セリンプロテアーゼを請求項１に記載の化合物と接触させることを含んでなる方法。
【請求項１９】
哺乳動物におけるセリンプロテアーゼにより媒介される疾患又は症状を処置する方法において、有効量の請求項１に記載の化合物を上記哺乳動物に投与することを含んでなる方法。
【請求項２０】
哺乳動物における静脈又は動脈血栓形成を阻害する方法において、有効量の請求項１に記載の化合物を上記哺乳動物に投与することを含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、組織因子（ＴＦ）／第ＶＩＩａ因子、第Ｘａ因子、トロンビン及び／又はカリクレインのようなセリンプロテアーゼのインヒビターである新規化合物、並びにセリンプロテアーゼを抑制しそれによって媒介される疾患を治療するのに有用な、これら化合物を含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
（発明の背景）
正常な止血は凝固開始、形成及び溶解の過程の複雑なバランスの結果による。血球、特定の血漿タンパク質及び血管表面の間の複雑な相互作用は血液の流動性を維持するが、傷害の場合は血液凝固が体液を封じ込めるのに極めて重要であり、ホスト防御機構の重要な要素である。多くの重要な疾患状態は血管中における異常な血栓形成（血栓症）に関連している。例えば、動脈脈管構造では、形成されたアテローム斑（プラーク）の損傷による異常な血栓形成が急性心筋梗塞及び不安定狭心症の主要な原因である。静脈脈管構造では、特に腹部及び下半身の領域の、手術を受けた多くの患者が、血流を減少させる血栓形成を経験し、肺塞栓症に至るおそれがある。静脈及び動脈系の双方において播種性血管内凝固障害は敗血性ショック、ある種のウイルス感染、及び癌の場合によく起こり、急速で広範な血栓形成と器官不全にしばしば至る。
【０００３】
凝固（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）及び凝血（ｃｌｏｔｔｉｎｇ）（血栓形成）にはトロンビンの生成に至る過程における多数のチモーゲンの連続的活性化が関与しており、そのトロンビンが原因で、フィブリノーゲンが不透性の架橋したフイブリン血餅へ転換する。トロンビンの生成は、集中的に研究され、広く特徴付けがなされてきた血液凝固カスケードの結果である。例えば、Ｌａｗｓｏｎ， Ｊ．Ｈ．等（１９９４） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６９：２３３５７を参照のこと。このカスケードの凝固反応は開始、増幅及び伝播段階を含む。また、カスケードは外因系経路と内因系経路に分けられている。内因系経路では第ＸＩＩ、ＸＩ、及びＩＸ因子が関与し、第ＩＸａ因子のそのコファクター第ＶＩＩＩａ因子との複合体が形成されるに至る。この複合体は第Ｘ因子を第Ｘａ因子に転換する。第Ｘａ因子は、そのコファクター第Ｖａ因子と複合体を形成する酵素であり、速やかにプロトロンビンをトロンビンに転換する。そしてトロンビンがフィブリノーゲンをフィブリン単量体に転換し、これが重合して血栓を形成する。外因系経路には第ＶＩＩａ因子と組織因子が関与し、これらが複合体（ＴＦ／第ＶＩＩａ因子）を形成し、第Ｘ因子を第Ｘａ因子に転換する。内因系経路におけるように、第Ｘａ因子がプロトロンビンをトロンビンに転換する。
【０００４】
トロンビン（第ＩＩａ因子）は、上でみたように、フィブリノーゲンをフィブリンに転換することによって凝固カスケードにおいて中心的な位置を占めている。従って、Ｎ−アリールスルフィン化フェニルアラニンアミド類のように、その活性を抑制するためにトロンビンに結合する化合物を開発することにかなりの合成努力が向けられている。合成のトロンビンインヒビターとして調製された更なる化合物はＵＳ５６５６６００；ＵＳ５６５６６４５；ＵＳ５６７０４７９；ＵＳ５６４６１６５；ＵＳ５６５８９３９；ＵＳ５６５８９３０及びＷＯ９７／３００７３に開示されている。多くのトロンビンインヒビターは、医薬用ヒル（Ｈｉｒｕｄｏ ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）によりつくられるタンパク質であるヒルジンの構造を模倣して生成されており、ヒルジンはトロンビンに結合して凝固を抑制する。Ｓｔｕｂｂｓ及びＢｏｄｅ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９４， ４：８２３−８３２。更なる合成トロンビンインヒビターは、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９９５−１９９７， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡに報告されている。
【０００５】
ＴＦ／第ＶＩＩａ因子は、第Ｘ因子及び／又は第ＩＸ因子を活性化することによって血液凝固に関与するセリンプロテアーゼ複合体である。第ＶＩＩａ因子は、肝臓で合成され血液中に分泌されて単鎖グリコペプチドとして循環する第ＶＩＩ因子というその前駆体から製造される。第ＶＩＩ因子のｃＤＮＡ配列は特徴付けられている（Ｈａｇｅｎ等， １９８６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， ８３：２４１２−２４１６）。ＴＦ／第ＶＩＩａ因子の様々な天然及び合成のインヒビターが知られており、心筋梗塞を治療するために使用されるＵＳ５５８９１７３に開示されているもののような、種々の有効性と選択性を有している。組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ；Ｂｒｏｚｅ， １９９５， Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．， ７４：９０）及びネマトーダ抗凝固ペプチドｃ２（ＮＡＰｃ２；Ｓｔａｎｓｓｅｎｓ等， １９９６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， ９３：２１４９）はＴＦ／第ＶＩＩａ因子複合体との第４級抑制複合体の生成前に第Ｘａ因子に結合する。小タンパク質の直接のインヒビター（Ｄｅｎｎｉｓ等， １９９４， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ３５：２２１３７）及びＴＦ／第ＶＩＩａ因子の不活性形態もまた知られている（Ｋｉｒｃｈｈｏｆｅｒ等， １９９５， Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．， １５：１０９８； Ｊａｎｇ等， １９９５， Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ， ９２：３０４１）。また、結合親和性を保持しているがコファクター活性を減少させた変異体ＴＦの合成ペプチド及び可溶型が調製されている（Ｒｏｅｎｎｉｎｇ等， １９９６， Ｔｈｒｏｍｂ． Ｒｅｓ．， ８２：７３；Ｋｅｌｌｅｙ等， １９９７， Ｂｌｏｏｄ， ８９：３２１９）。ＵＳ５６７９６３９はセリンプロテアーゼ活性を抑制するポリペプチドと抗体を記載している。ＵＳ５５８０５６０は改善された半減期を持つ変異体第ＶＩＩａ因子を記載している。ＵＳ５５０４０６７及びＵＳ５５０４０６４は出血の治療のための切断型ＴＦを記載している。クニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）型ドメイン−組織因子融合タンパク質がまた二機能性抗凝固剤であることが示されている（Ｌｅｅ等， １９９７， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ３６：５６０７−５６１１）。ＴＦ／第ＶＩＩａ因子複合体は外科手術の際の出血と血管内血栓症の防止の分離に基づくインヒビターの開発のための魅力ある標的であることが示されている（Ｈａｒｋｅｒ等， １９９５， Ｔｈｒｏｍｂ． Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．， ７４：４６４）。
【０００６】
第Ｘａ因子はまた内因系及び外因系凝固経路の双方の産物であるので血栓形成に中心的なものである。ビスアミジン化合物（Ｋａｔａｋｕｒａ， Ｓ． （１９９３） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， １９７：９６５）、アルギニンの構造に基づく化合物（ＷＯ９３／１５７５６；ＷＯ９４／１３６９３）並びにフェニル及びナフチルスルホンアミド類（ＷＯ９６／１００２２；ＷＯ９６／１６９４０；ＷＯ９６／４０６７９）のような第Ｘａ因子のインヒビターが合成されている。
【０００７】
経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）と再疎通術が閉塞した血管を治療するために好まれている処置である。しかし、これらの処置に続く動脈血栓症はなお心不全の主要な原因となっている。最も広く使用されている抗凝血剤であるヘパリンを含む抗凝血剤は急性動脈血栓症又は再血栓形成（ｒｅｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）の治療と予防に完全に有効であるか安全であるかは示されていない。従って、凝固カスケードにおける酵素の効果的なインヒビターであってカスケード中の選択された酵素に対して改善された阻害活性及び／又は選択性を示す化合物に対する必要性は残ったままである。
【０００８】
（発明の要約）
本発明の一側面では、次の式（Ｉ）：
2004509104.tif 000002
［上式中、
Ｘは、Ｏ、ＣＲ６Ｒ６’、ＮＲ６又はＳであり、ここでＲ６とＲ６’は独立してＨ又はアルキルであり；
Ｒ１は、Ｈ、−ＯＲ７、アミノ酸又は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７とＲ７’は独立してＨ又は炭化水素鎖、炭素環、複素環、炭素環置換炭化水素鎖又は複素環置換炭化水素鎖であって、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシ、アリールもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；あるいはＲ７とＲ７’は共同して他の複素環又は炭素環に縮合していてもよい複素環を形成し、ここで該他の複素環及び炭素環はヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ又は炭化水素鎖、炭素環又は炭素環置換炭化水素鎖であって、ヒドロキシル、オキソ、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；ここで該炭化水素鎖にはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が介在していてもよく；
Ｒ３はＨ又は保護基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン及びアシルアミノからなる群から選択され；
Ｒ５はＨであるか又はＲ４とＲ５が共同してヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン又はアシルアミノで置換されていてもよい５員又は６員の炭素環又は複素環を形成し；
ｎは０又は１である］
の新規化合物、及びそれらの塩、溶媒和化合物及び水和物が提供される。
【０００９】
本発明の他の側面では、本発明の化合物と医薬的に許容可能な担体を含有する医薬組成物が提供される。
また本発明の他の側面では、哺乳動物におけるセリンプロテアーゼにより媒介される疾患又は症状を処置する方法において、有効量の本発明の化合物を上記哺乳動物に投与することを含んでなる方法が提供される。
【００１０】
（本発明の詳細な記載）
本発明は、次の式（Ｉ）：
2004509104.tif 000003
［上式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はここで定義されるものである］
の新規化合物を提供する。
【００１１】
「アミノ酸」という用語は、天然に生じるか天然に生じるものではないα−（アルファ）、β−（ベータ）、Ｄ−及びＬ−アミノ酸残基を意味する。好適なアミノ酸残基は疎水性であり、例えばアラニン、β−アラニン、フェニルアラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンである。
「炭化水素鎖」という用語は、飽和、不飽和、直鎖状又は分枝状の炭素鎖、すなわちアルキル、アルケニル及びアルキニルを意味する。好適な炭化水素鎖は１−１２の炭素原子、より好ましくは１−６、最も好ましくは１−４の炭素原子を有するもの、すなわち、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びアリルである。
「炭素環」という用語は、飽和、不飽和もしくは部分的に不飽和で芳香環系を含む、４−１６員の単環、二環又は三環炭素環又は環系を意味する。好適な炭素環には、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル及びナフチルが含まれる。
【００１２】
「複素環」という用語は、少なくとも一の環原子がヘテロ原子（すなわちＮ、Ｏ及びＳ、並びにＳＯ又はＳＯ２）である５−１６員を有する単環、二環又は三環系を意味する。該環系は飽和、不飽和又は部分的に不飽和であり、芳香族でもよい。好適な複素環には、ピペリジン、ピペラジン、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、モルホリン、ピラン、ピロール、フラン、チオフェン（チエニル）、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、ジチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ジオキサゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、テトラゾール、トリアゾール、チアトリアゾール、オキサトリアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、プリン及びそのベンゾ縮合誘導体が含まれる。
【００１３】
Ｘは、Ｏ、ＣＲ６Ｒ６’、ＮＲ６又はＳであり、ここでＲ６とＲ６’は独立してＨ又はアルキルである。特定の実施態様では、ＸはＯである。他の特定の実施態様では、ＸはＣＲ６Ｒ６’であり、Ｒ６とＲ６’が共にＨである。
Ｒ１は、Ｈ、−ＯＲ７、アミノ酸又は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７とＲ７’は独立してＨ又は炭化水素鎖、炭素環、複素環、炭素環置換炭化水素鎖又は複素環置換炭化水素鎖であって、一又は複数のヒドロキシル、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、シアノ、アミノ（すなわち、ＮＨ２又は第２級又は第３級アミン）、ニトロ、アミジン（−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２）、グアニジン（−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２）、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシ、アリールもしくはカルボキシルで置換されていてもよいものである。「カルボキシル」は、ここでは、フリーの酸−ＣＯＯＨ並びにそのエステル、例えばアルキルエステルを意味する。「アルコキシ」とは、ここでは、飽和基、すなわちＯ−アルキルと、不飽和基、すなわちＯ−アルケニル及びＯ−アルキニルを含むことを意味する。「アリール」とは、ここでは、芳香族炭素環又は環系、例えばベンゼン／フェニル、ナフチル、フェナントレニル等々並びにビフェニルであることを意味する。特定の実施態様では、Ｒ１は、−ＯＲ７で、Ｒ７が炭化水素鎖、例えばアルケニル、すなわちアリルであるものである。他の実施態様では、Ｒ１は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７は一又は複数のヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、アミジン、グアニジン、シアノ、アルキル、アルコキシ、ハロ置換アルキルで置換されていてもよいアリール又はアラルキルであり；Ｒ７’はＨ又はアルキルである。好適な実施態様では、Ｒ１は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７はアミジン又はアルコキシで置換されたフェニル又はベンジルであり；Ｒ７’はＨ又はメチルである。特に好適な実施態様では、Ｒ７はベンジル、ｐ−アミジニルフェニル、ｐ−メトキシベンジル又はｐ−メチルベンジルであり、Ｒ７’はＨである。
【００１４】
他の実施態様では、Ｒ１は−ＮＲ７Ｒ７’であり、ここでＲ７とＲ７’は共同して他の複素環又は炭素環に縮合していてもよい複素環を形成し、ここで該他の複素環及び炭素環は一又は複数のヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシもしくはカルボキシルで置換されていてもよい。特定の実施態様では、Ｒ７とＲ７’は共同してベンゼン環に縮合したピペリジン環を形成し、該縮合ベンゼン環は一又は複数のアルコキシで置換されていてもよい。好ましくは、縮合ベンゼン環の両方のβ炭素位置がメトキシで置換されている。
【００１５】
Ｒ２は、Ｈ又は炭化水素鎖、炭素環又は炭素環置換炭化水素鎖であって、一又は複数のヒドロキシル、オキソ（＝Ｏ）、ハロゲン（好ましくはＦ又はＣｌ）、シアノ、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン、アルキル、ハロ置換アルキル、アルコキシ（好ましくはメトキシ）もしくはカルボキシルで置換されていてもよいものであり；ここで該炭化水素鎖にはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２が介在していてもよい。「介在する」とは、ここでは、炭化水素鎖内の一又は複数の炭素原子が上記ヘテロ原子によって置き換えられることを意味する。炭化水素鎖に二以上のヘテロ原子が介在する場合、好ましくはヘテロ原子は隣接しない。Ｒ２において、ヘテロ原子は、炭化水素鎖が垂下する環窒素原子に隣接している。好適な実施態様では、Ｒ２はＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、シクロアルキルアルキル又はアラルキルで、一又は複数のアルキル、アミノ、アミジン、グアニジン又はニトロで置換されていてもよいものである。より好適な実施態様では、Ｒ２はＨ、アルキル、アリール、アラルキル又はシクロアルキルであり、最も好ましくはプロピル、フェニルエチル、シクロヘキシル、ｏ−ニトロベンジル又はｍ−メチルベンジルである。
Ｒ３はＨ又は保護基である。好ましくはＲ３はＨである。
【００１６】
「ｎ」がゼロ（０）の場合、Ｒ４は存在せず、Ｘがその位置でベンズアミジン環に結合している。ｎが１の場合、Ｒ４は存在し、Ｈ、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン及びアシルアミノからなる群から選択される。「アシルアミノ」とは、ここでは、カルボキサミド基−ＮＨＣ（Ｏ）−炭化水素であることを意味し、ここで炭化水素は先に定義した通りであり、好ましくはアルキルである。好ましくはＲ４はＨ又はアミノ、最も好ましくはＨである。
Ｒ５はＨであるか又はＲ４とＲ５が共同して一又は複数のヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、ニトロ、アミジン、グアニジン又はアシルアミノで置換されていてもよい５員又は６員の炭素環又は複素環を形成する。他の特定の実施態様では、Ｒ５はＨである。他の特定の実施態様では、Ｒ４とＲ５は、Ｒ４とＲ５が垂下するベンズアミジン環に縮合したベンゼン環を形成する。
【００１７】
本発明の好ましい化合物には：
2004509104.tif 000004
2004509104.tif 000005
2004509104.tif 000006
2004509104.tif 000007
2004509104.tif 000008
2004509104.tif 000009
2004509104.tif 000010
のもの、及びそれらの塩、溶媒和化合物及び水和物が含まれる。
【００１８】
本発明の化合物は不斉中心を有しており、よって幾何及び立体異性体として存在することが理解される。このような異性体の全てが考慮され、純粋な異性体形態であってもこのような異性体の混合物並びにラセミ体であっても、本発明の範囲に入る。立体異性化合物はクロマトグラフィー等の当該分野において確立された技術、すなわちキラルＨＰＬＣ、又は結晶化法により分離できる。
【００１９】
「医薬的に許容可能な」塩には、酸及び塩基付加塩の双方が含まれる。医薬的に許容可能な酸付加塩とは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸、及び脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族、複素環、カルボン酸及びスルホン酸クラスの有機酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グルコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸（ｅｍｂｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等から選択される有機酸で形成される、フリーの塩基の性質及び生物学的な効能を保持し、生物学的等の点で望ましくないものではない塩を意味する。
【００２０】
医薬的に許容可能な塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩等の無機塩基から誘導されたものが含まれる。特に好ましくは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウムの塩である。医薬的に許容可能な無毒性の有機塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、天然に生じた置換アミンを含む置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン（ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂等の塩が含まれる。特に好ましい無毒性の有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
【００２１】
本発明の化合物は、商業的に入手可能な出発物質及び試薬からか、商業的に入手可能な出発物質から調製されうる出発物質から、確立された有機合成法に従い調製することができる。多くの標準的な化学技術及び手順が、Ｍａｒｃｈ， Ｊ．， ”Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ” ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９７；及びＣｏｌｌｍａｎ， Ｊ．， ”Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ” Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｍｉｌｌ Ｖａｌｌｅｙ， １９８７；及びＬａｒｏｃｋ， Ｒ．， ”Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ” Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８９に記載されている。化合物上に存在する特定の置換基に応じて、ここに記載した工程に加えて、適切な保護及び脱保護手順が必要となることが理解される。Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， 第２版， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， １９９１には多くの保護基が、詳細な保護及び脱保護手順と併せて、記載されている。例えば、適切なアミノ保護基には、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、フルオレニル−メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２−トリメチルシリル−エチオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、１−メチル−１−（４−ビフェニルイル）エトキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、及びベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）が含まれる。カルボキシル基は、フルオレニルメチル基として、又はアルキルエステル、すなわちメチル又はエチル、あるいはアルケニルエステル、例えばアリルとして、保護されうる。ヒドロキシル基はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル及びトリメトキシトリチル基で保護されうる。
【００２２】
ＸがＯである特定の実施態様では、本発明の化合物はスキーム１に従い調製されうる。
2004509104.tif 000011
2004509104.tif 000012
スキーム１において、市販のＮ−保護ヒドロキシプロリン（つまり、Ｂｏｃ又はＴｅｏｃ保護されたもの）（ｉ）が、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３）及びＤＥＡＤと、ついでＴｉ（ＩＶ）イソプロポキシドの存在下でアリルアルコールと反応させられることによって、アリルエステル（ｉｉｉ）に転換される。ついでアリルエステル（ｉｉｉ）は、光延反応によってＰＰｈ３及びＤＥＡＤの存在下でＮ−保護メタ−又はパラ−ヒドロキシベンズアミジン（つまり、Ｂｏｃ−保護されたもの）とカップリングされる。クロロホルムの酢酸（つまり２／５％）及びｎ−メチルモルホリン（つまり５％）の溶液中でＰｄテトラキス（ＰＰｈ３）を用いてアリル基が除去されて、フリーのカルボン酸（ｖｉ）が得られ、これがアミンＨＮＲ７Ｒ７’、アミノ酸又はアルコールＨＯ−Ｒ７と反応させられて（ｖｉｉ）を生じる。アミンＨＮＲ７Ｒ７’及びアミノ酸カップリングのためには、カルボキシル酸（ｖｉ）が標準的なアミド生成法に従って例えばＨＢＴＵ及びＨＯＢｔで最初に活性化される。本発明の化合物のＲ１が−ＮＲ６−フェニル（置換されていてもよい）である特定の実施態様では、カルボン酸はＮＣＳ及びトリフェニルホスフィンで活性化され、アニリンが付加される。プロリン部分のＮ−保護基をついで（ｖｉｉ）から除去し、得られた化合物（ｖｉｉｉ）を場合によってはアルキル化、アシル化又はスルホニル化して化合物（ｉｘ）を得る。保護基がＴｅｏｃ（トリメチルシリルエトキシカルボニル）である場合、脱保護はテトラヒドロフラン（ｔｈｆ）に入ったｔｂａｆ（つまり、約０．２４Ｍ）で処理することにより達成される。中間体（ｖｉｉｉ）のアルキル化は、様々なアルデヒド類、触媒及び適切な還元剤を使用する標準的な還元的アミノ化によって達成されるか、又はハロゲン化アルキル及び標準的な非求核性塩基で処理することによるＳＮ２型置換によって達成され得る。中間体（ｖｉｉｉ）のアシル化は、所望のＲ２カルボン酸を活性化させ（ｖｉｉｉ）のフリーなアミンと反応させることによる標準的なアミド結合形成法によって達成される。あるいは、（ｖｉｉｉ）のアミンはＲ２の様々な酸塩化物及びヒューニッヒ（Ｈｕｎｉｇ）塩基のような標準的な非求核性塩基で処理することによりアシル化されうる。そのスルホニル化は、中間体（ｖｉｉｉ）のフリーなアミンをＲ２の様々な塩化スルホニルとヒューニッヒ塩基のような非求核性塩基と共に反応させることにより達成される。
（ｉｘ）のアミジン保護基が続いて除去されて、ＸがＯである本発明の式（Ｉ）の最終化合物が得られる。
【００２３】
ＸがＮＨである他の特定の実施態様では、本発明の化合物はスキーム２に従い調製されうる。
2004509104.tif 000013
2004509104.tif 000014
スキーム２において、出発試薬シアノアニリン（ｉ）が、ＨＢＴＵ及びＨＯＢｔで活性化されたトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と反応させられて中間体（ｉｉ）が得られ、これがＮ−保護ヒドロキシプロリンのアリルエステル（ｉｉｉ）とカップリングされて中間体（ｉｖ）が得られる。アリル基はフリーのカルボン酸に転換され、ついでアミンＨＮＲ７Ｒ７’、アミノ酸又はアルコールＨＯ−Ｒ７と反応させられ、プロリン上のＮ−保護基が除去され、場合によってはスキーム１に対して記載したようにしてアルキル化、アシル化又はスルホニル化される。トリフルオロアセチル基はｔｈｆ／Ｈ２Ｏ中で水酸化リチウムと（ｖｉｉｉ）を反応させることによって除去され、（ｉｘ）が得られる。ニトリル中間体（ｉｘ）はヒドロキシルアミン塩酸塩及びＴＥＡと反応させることによってヒドロキシアミジン（ｘ）に転換され、続いて水素及びラネーニッケル又はパラジウムのような金属水素化触媒で処理することによりアミジン（ｘｉ）に還元される。
【００２４】
ＸがＣＨ２である他の特定の実施態様では、本発明の化合物はスキーム３に従い調製されうる。
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2004509104.tif 000016
スキーム３において、出発シアノベンジルブロミド化合物（ｉ）が、ピリジン中でＰＰｈ３と反応させられてホスホニウム塩（ｉｉ）に転換され、これが次にケト−プロリン中間体（ｉｉｉ）とヴィッティッヒ（Ｗｉｔｔｉｇ）オレフィン生成反応を受けて中間体（ｉｖ）が得られる。中間体（ｉｉｉ）は、オキサロクロライド及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下でスウェーン（Ｓｗｅｒｎ）酸化を受けるＮ−保護プロリンエステル、例えばＮ−Ｔｅｏｃ保護プロリンメチルエステルから調製される。オレフィン中間体（ｉｖ）はＰｄ触媒とＨ２で還元されて（ｖ）が得られる。エステル基はフリーのカルボン酸に転換され、ついでアミンＨＮＲ７Ｒ７’、アミノ酸又はアルコールＨＯ−Ｒ７と反応させられ、プロリン上のＮ−保護基が除去され、場合によってはスキーム１に対して記載したようにしてアルキル化、アシル化又はスルホニル化される。ニトリル中間体（ｉｘ）はヒドロキシルアミン塩酸塩及びＴＥＡと反応させることによってヒドロキシアミジン（ｘ）に転換され、続いて水素及びラネーニッケル又はパラジウムのような金属水素化触媒で処理することによりアミジン（ｘｉ）に還元される。
【００２５】
本発明の一側面では、タンパク質リガンドに対するセリンプロテアーゼ（例えば、第ＶＩＩａ因子、ＴＦ／第Ｘａ因子複合体、トロンビン、トリプシン、プラスミン及びカリクレイン）の結合を阻害する方法であって、上記セリンプロテアーゼを式（Ｉ）の化合物と接触させることを含んでなる方法が提供される。本方法は溶液ベース又は細胞ベースのアッセイとしてインビボ又はエキソビボで実施することができ、そこで、本発明の化合物はプロテアーゼの推定又は既知のリガンドの存在下で、セリンプロテアーゼに導入される。本発明の化合物は、プロテアーゼへのリガンドの結合又はその低減の検出が容易になるように標識され、例えば同位体を用いて放射標識され、又はＦＩＴＣのようなフルオロフォアで標識される。よって本発明の化合物は、診断及びスクリーニングアッセイに有用である。
【００２６】
本発明の化合物は、セリンプロテアーゼ活性によって媒介される疾患又は症状を治療的及び／又は予防的に処置するのに有用である。従って、本発明の一側面では、哺乳動物におけるセリンプロテアーゼにより媒介される疾患又は症状を処置する方法であって、有効量の本発明の化合物を上記哺乳動物に投与することを含んでなる方法が提供される。「有効量」とは、投与することで、セリンプロテアーゼの活性を低減することができる化合物の量；又は投与することで、血液凝固又は血栓形成を防止し、阻害し又は低減するのに必要とされる化合物の量；又はセリンプロテアーゼにより媒介される疾患又は病状に関連した徴候の重症度を緩和又は低減することができる量を意味する。本発明の化合物はまた凝血を防止するために血液サンプル又は保存物に対する添加剤として使用することもできる。従って、哺乳動物の血液（つまり、ヒトの血液）の凝固を阻害する方法において、本発明の化合物を上記血液に導入することを含んでなる方法もまた提供される。
【００２７】
投与される化合物の実際の量と投与経路は、特定の疾患又は病状並びに他の要因、例えば大きさ、年齢、性別及び処置される個人の種族的出身に依存し、常套的な分析により決定される。一般に、静脈内投与量は一日当たり約０．０１−１０００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）、好ましくは０．１から２０ｍｇ／ｋｇ及び０．３から１５ｍｇ／ｋｇの範囲となる。投与は、数日、数週又は数年の間、一日当たり１回又は複数回としうるか、あるいは数週間又は数年の間、毎週数回としうる。他の経路で投与される化合物の量は、投与される特定の化合物の血漿バイオアベイラビリティを考慮して、記載した静脈内投与量と比較して、血漿中に同様の量の化合物をもたらす量である。
【００２８】
本発明の方法において、本化合物は、経口的（口腔内、舌下、吸入を含む）、経鼻的、経腸的、経膣的、静脈内（動脈内を含む）、真皮下、皮下、筋肉内及び局所的に投与されうる。化合物は、製剤化技術において常套的なように、例えば適切な担体、希釈剤、増粘剤、アジュバント等々と共に、投与に適切な組成物に製剤化される。従って、本発明の他の側面は、式（Ｉ）の化合物と医薬的に許容可能な担体、賦形剤又はアジュバントを含有する医薬組成物を提供する。
【００２９】
また本発明の組成物は、更なる活性成分、特に更なる抗凝血剤（例えばアスピリン、ワルファリン、ヘパリン）及び／又は血栓溶解剤（例えばストレプトキナーゼ、ｔＰＡ、ＴＮＫａｓｅＴＭ）をまた含有してもよい。投与形態には、溶液、パウダー、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、座薬、局所用軟膏及びクリーム、及び吸入用エアゾールが含まれる。非腸管外投与用の製剤には、バッファー、希釈剤、及び他の適切な添加剤を含みうる滅菌水溶液が含まれる。本発明の化合物と有害な反応をしない非腸管外投与に適した医薬的に許容可能な有機又は無機の担体物質を使用することができる。適切な医薬的に許容可能な担体には、限定されるものではないが、水、食塩水、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が含まれる。製剤は、滅菌され、所望されるならば、本発明の化合物と有害な反応をしない助剤、例えば滑沢剤、保存料、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、バッファー、着色用フレーバー及び／又は芳香物質等と混合することもできる。水性懸濁液は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／又はデキストランを含む、懸濁液の濃度を増加させる物質を含んでもよい。場合によっては、懸濁液は更に安定剤を含有してもよい。
【００３０】
好ましい実施態様では、本発明の化合物は経口送達によって投与される。経口投与用組成物には、パウダー又は顆粒、水性又は非水性媒体の溶液又は懸濁液、カプセル、袋（サシェ）、トローチ、錠剤又はＳＥＣ（ｓｏｆｔ ｅｌａｓｔｉｃ ｃａｐｓｕｌｅｓ（柔軟な弾性カプセル）又はキャプレット）が含まれる。増粘剤、香料添加剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、担体物質又はバインダーを、このような製剤に望ましくは添加してもよい。このような製剤は、その粘膜に暴露するための消化管に化合物を送達させるために使用されうる。従って、製剤は、胃の極度のｐＨから化合物を保護し、又は経時的に化合物を放出し、特定の粘膜部位へのその送達を最適化するのに有効な物質からなり得る。耐酸性の錠剤、カプセル及びキャプレットのための腸溶コーティングは当該分野において知られており、典型的にはアセテート、フタレート、プロピレングリコール及びソルビタンモノレアートが含まれる。
【００３１】
食餌性送達のための製剤を生産する様々な方法が当該分野においてよく知られている。一般的には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８版， Ｇｅｎｎａｒｏ編， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ， １９９０を参照のこと。本発明の製剤は、公知の方法で、不活性で無毒性の医薬的に適切な賦形剤又は溶媒を使用し、常套的な製剤、例えば錠剤、コーティング錠剤、丸薬、顆粒、エアゾール、シロップ、エマルション、懸濁液及び溶液に転換することができる。治療的に活性な化合物は、それぞれの場合、全混合物の重量に対して約０．５から約９９重量％の濃度、すなわち所望する用量範囲を達成するのに十分な量で存在すべきである。製剤は、適切ならば乳化剤及び／又は分散剤を使用して、例えば溶媒及び／又は賦形剤で活性化合物を薄めることにより調製され、例えば水が希釈剤として使用される場合では、適切ならば有機溶媒を補助溶媒として使用することができる。
【００３２】
また組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；フィラー（例えば、ラクトース、マイクロクリスタリンセルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；分解剤（例えば、デンプン又はグリコール酸デンプンナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を用いて製剤化されてもよい。錠剤は当該分野においてよく知られている方法によりコーティングしてもよい。また製剤は、適切な香料添加剤、着色剤及び／又は甘味料を更に含有していてもよい。
【００３３】
経口投与に適切な本発明の製剤は、それぞれ予め決定された量の活性成分を含有する個別単位として、例えばカプセル、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔ）又は錠剤；パウダー又は顆粒；水性液体又は非水性液体の溶液又は懸濁液；又は水中油型エマルション又は油中水型エマルションとして提供されてもよい。錠剤は、場合によっては一又は複数の副成分と共に、圧密化又は成型により作製され得る。圧密化錠剤は、適切な機械において、流動性形態の活性成分、例えばパウダー又は顆粒を圧密化し、場合によってはバインダー、滑沢剤、不活性希釈剤、保存料、界面活性剤又は分散剤と混合して、調製されうる。成型錠剤は、適切な機械において、不活性希釈剤で湿らされたパウダー化合物の混合物を成型することにより作製されうる。錠剤は、コーティングされても割線を入れてもよく、中の活性成分がゆっくりと又は制御されて放出されるように製剤され得る。
【００３４】
実施例１　ベンズアミジン化合物の合成
工程１
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１０ｇ（８４ｍｍｏｌ）の３−ヒドロキシベンゾニトリルと１７．２ｇ（２５２ｍｍｏｌ）のイミダゾールを３００ｍｌのｄｍｆに溶解させた。この溶液に、３８．０ｇ（２５２ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（ｔｂｄｍｓ−Ｃｌ）を加え、反応物を室温で１２時間、撹拌した。ジメチルホルムアミドを真空濃縮により除去し、多量の酢酸エチルに再溶解した。ついで、有機層を水で２回洗浄し、塩水で２回洗浄した。ついで有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ真空濃縮した。ついで粗混合物をエーテル溶剤系を用いてフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１８．６ｇ（９５％の収率）の（ｉｉ）を生じた。
【００３５】
工程２
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１２ｇ（５１．２ｍｍｏｌ）の（ｉｉ）を１５０ｍｌのエタノールに溶解させた。この溶液に、１８．０ｇ（２５５ｍｍｏｌ）のヒドロキシルアミン塩酸塩と４５．０ｍｌ（２５５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加し、反応物を一晩６０℃で撹拌した。反応物を真空濃縮し、酢酸エチルに再溶解させ、水と塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ真空濃縮して、１２．０ｇ（８８％の収率）の粗物質を得た。
【００３６】
工程３
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１２．０ｇ（４２ｍｍｏｌ）の粗物質（ｉｉｉ）を２００ｍｌのエタノールに溶解させた。この溶液に、３．６ｍｌ（６０ｍｍｏｌ）の酢酸と６．０ｍｌの無水酢酸を添加した。ついで２．０ｇの１０％パラジウムカーボンを反応物に添加した。次に、反応物を水素下に配し、室温で一晩撹拌した。反応物をセライトによって濾過し、真空濃縮し、ベンゼンで２回共沸させて、１１．７ｇ（９０％の収率）の（ｉｖ）を得た。
【００３７】
工程４
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１０．０ｇ（３．７ｍｍｏｌ）のアルゴゲル（ＡｒｇｏＧｅｌ）ワング（Ｗａｎｇ）樹脂を８０ｍｌのジクロロメタン中に懸濁させた。４．０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のクロロギ酸ニトロフェニルを樹脂に添加した後、２．２ｍｌ（２０ｍｍｏｌ）のｎ−メチルモルホリンを添加した。樹脂懸濁液を室温で３０分間撹拌し、続いて濾過し、ジクロロメタンで３回洗浄して樹脂（ｖ）を得た。
【００３８】
工程５
2004509104.tif 000021
ついで樹脂（ｖ）を８０ｍｌのアセトニトリルに懸濁させ、３．１０ｇ（１０ｍｍｏｌ）の（ｉｖ）を添加した後、５．８ｍｌ（２０ｍｍｏｌ）の２−ｔｅｒｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジエメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリンを加えた。樹脂を室温で１時間撹拌した。懸濁液を濾過し、樹脂をアセトニトリルで２回、メタノールで２回、ジクロロメタンに入れた２０％酢酸で２回、ジクロロメタンで２回、メタノールで２回洗浄して、樹脂（ｖｉ）を得た。
【００３９】
工程６
2004509104.tif 000022
樹脂（ｖｉ）をｔｈｆに入れた０．２５Ｍのｔｂａｆ溶液８０ｍｌ中に３０分間懸濁させた。ついで、懸濁液を濾過し、テトラヒドロフランで３回、ジクロロメタンに入れた２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ジクロロメタンで２回洗浄して、樹脂（ｖｉｉ）を得た。
【００４０】
工程７
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１０．０ｇ（４３．２ｍｍｏｌ）のＮ−Ｂｏｃ−ｔｒａｎｓ−Ｌ−ヒドロキシプロリンを４００ｍｌのテトラヒドロフランに溶解させた。１４．７ｇ（５６．２ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを添加し、反応物を０℃まで冷却し、８．９ｍｌ（５６．２ｍｍｏｌ）のＤＥＡＤを添加漏斗を使用して５分かけて滴下して加えた。０℃で３０分間放置し、ついで真空濃縮によりｔｈｆを除去した。エーテルに再希釈し、４℃で一晩保存し、トリフェニルホスフィン酸化物を副産物として再結晶させて除去した。再結晶物を濾過し結晶をエーテルで２回洗浄した。濾液が曇るようになるまでヘキサンを加え、４℃で一晩保存して生成物を再結晶させた。濾過によって結晶を収集し、冷ヘキサンを用いて結晶を２回洗浄した。これにより６．４ｇ（７０％の収率）の（ｖｉｉｉ）が得られた。
【００４１】
工程８
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６．４ｇ（３０ｍｍｏｌ）の（ｖｉｉｉ）を１００ｍｌのアリルアルコールに溶解させ、反応物を０℃まで冷却した。１４４ｍｇ（６．０ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウムを添加し、氷浴を取り除いて反応物を室温まで温めた。室温に達したところで、３．６ｍｌ（６０ｍｍｏｌ）の酢酸を添加することによって反応物を急冷した。ついで、反応物を９００ｍｌの酢酸エチルで希釈し、水で２回、塩水で２回、洗浄した。ついで有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空濃縮した。ついで粗混合物を、１：１エーテル／酢酸エチルを使用するシリカプラグによって精製して、６．５ｇ（２４ｍｍｏｌ、８０％の収率）の（ｉｘ）を油として得た。
【００４２】
工程９
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４．０ｇ（１５．３ｍｍｏｌ）の（ｉｘ）を８０ｍｌのｔｈｆとｄｃｍの１：１混合物に溶解させた。この溶液に、１０．０ｇ（３．５ｍｍｏｌ）の樹脂（ｖｉ）を添加し、反応物を氷浴で０℃まで冷却した。４．０ｇ（１５．３ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを添加した後、２．４ｍｌ（１５．３ｍｍｏｌ）のジエチルアジドジカルボキシラートを滴下して加えた。ついで反応物を室温まで温め、一晩撹拌した。この後に濾過を行った。ついで、樹脂をテトラヒドロフランで２回、ジクロロメタン中に入れた２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ジクロロメタンで２回、洗浄して、樹脂（ｘ）を得た。
【００４３】
工程１０
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１１．０ｇ（３．５ｍｍｏｌ）の樹脂（ｘ）を、ジクロロメタン中に５％酢酸と２．５％ｎ−メチルアニリンを入れたもの８０ｍｌに懸濁させた。ついで３．２ｇ（２．８ｍｍｏｌ）のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を添加し、反応懸濁物を３０分間撹拌した。濾過の後、樹脂を、ジクロロメタン中２０％のジイソプロピルエチルアミン（ｄｉｐｅａ）で２回、ｄｃｍで２回、ｄｃｍ中２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ｄｃｍで２回、洗浄して、樹脂（ｘｉ）を得た。
【００４４】
工程１１及び１２
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樹脂（１１）への標準的なパラレルアミン付加は次の通りである；１００ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）の樹脂（１１）を、磁気撹拌棒を備えたＱｕｅｓｔ ＲＶに充填した。ジメチルアセトアミド（ｄｍａ）中のＨＢＴＵ及びＨＯＢｔの０．６Ｍ原液２．０ｍｌを樹脂に添加し、懸濁液を１０分間撹拌した。この後に、ｄｍａ中ｄｉｐｅａの０．６Ｍ原液２．０ｍｌを添加した。ｄｉｐｅａの添加後５分で、１．２ｍｍｏｌの選択されたアミンを添加し、反応物を３０分撹拌した。ついで樹脂の水を切りｄｍａで２回、メタノールで２回、ジクロロメタンで２回、洗浄した。
【００４５】
樹脂（ｘｉ）への標準的なパラレルアニリン付加は次の通りである；１００ｍｇの樹脂（ｘｉｉ）をＱｕｅｓｔ ＲＶに充填した。ｄｃｍに入れたトリフェニルホスフィンの０．６Ｍ原液２．０ｍｌを添加し、反応物をＱｕｅｓｔ冷却器を使用して０℃まで冷却した。この後に、アセトニトリルに入れたＮ−クロロスクシンイミドの０．６Ｍ原液２．０ｍｌを添加し、反応物を０℃で１５分撹拌した。ついで反応物の水を切り、冷却を維持しながらジクロロメタンで３回洗浄した。ついで、アセトニトリルに入った選択されたアニリンの０．３Ｍ原液３．０ｍｌを添加し、ついで反応物を、Ｑｕｅｓｔ冷却器を外して放置して室温まで温めた。ついで反応物を室温で１時間撹拌した。水切り後、樹脂をメタノールで３回、ｄｃｍ中の２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ｄｃｍで２回、洗浄した。
【００４６】
工程１３
2004509104.tif 000028
（ｘｉｉ）タイプの樹脂の化合物の開裂及びＮ−Ｂｏｃ開裂を、３．０ｍｌの線形のトリフルオロ酢酸中で樹脂をインキュベーションすることにより実施した。ｔｆａをシンチレーションバイアル中に水切りし、３．０ｍｌのトリフルオロ酢酸で１回洗浄した。ついでサンプルを濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、（ｘｉｉｉ）クラスの化合物を得た。典型的な精製収率は３．０から５．０ｍｇの範囲であった。
【００４７】
工程１４
2004509104.tif 000029
１５．４ｇ（１１７．４ｍｍｏｌ）のｔｒａｎｓ−Ｌ−ヒドロキシプロリンと１６．２１ｇ（１５３ｍｍｏｌ）の炭酸ナトリウムを２５０ｍｌの水に溶解させた。４３．３ｇ（１５３ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニル炭酸２−（トリメチルシリル）エチルを、１０分かけて上述の水溶液中に滴下させた。反応物を一晩室温で撹拌した。ついで、反応物を真空濃縮し、多量の酢酸エチル及び１．０Ｍクエン酸で再希釈した。有機物を収集し、水性物を酢酸エチルで２回抽出した。有機物を組み合わせ、水で２回、塩水で２回洗浄した。ついで有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空濃縮した。ついで、粗混合物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、３２．３ｇ（６０％収率）の（ｘｉｖ）を得た。
【００４８】
工程１５
2004509104.tif 000030
９．０ｇ（３２．８ｍｍｏｌ）の（ｘｉｖ）を３４０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解させ、０℃まで冷却した。ついで、１１．２ｇ（４２．６ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを添加した後、５分かけて６．７ｍｌ（４２．６ｍｍｏｌ）のＤＥＡＤを滴下して加えた。反応物を０℃で３０分間撹拌した後、真空濃縮した。反応物をエーテルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで２回、水で２回、塩水で２回、洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、１：１エーテル／ヘキサンを使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製して、６．７ｇ（８０％収率）の（ｘｖ）を得た。
【００４９】
工程１６
2004509104.tif 000031
６．０ｇ（２２．６ｍｍｏｌ）の（ｘｖ）を１００ｍｌのアリルアルコールに溶解させ、この溶液に３．０ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）のチタンイソプロポキシドを添加した。反応物を６０℃まで加熱し一晩撹拌した。反応物を９００ｍｌの酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで２回、水で２回、塩水で２回、洗浄した。ついで有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ真空濃縮した。ついで粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、６．０ｇ（８５％収率）の（ｘｖｉ）を得た。
【００５０】
工程１７
2004509104.tif 000032
４．６ｇ（１４．６ｍｍｏｌ）の（ｘｖｉ）を４５ｍｌの１：１ｔｈｆ／ｄｃｍに溶解させ、この溶液に６．０ｇ（２．２ｍｍｏｌ）の樹脂（ｖｉ）を添加した。ついで懸濁液を０℃まで冷却した。２．４ｍｌ（１５．０ｍｍｏｌ）のＤＥＡＤを０℃にて懸濁液に加えた後、４．０ｇ（１４．６ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを添加した。ついで反応物を放置して室温まで温め一晩撹拌した。樹脂の水を切り、ｔｈｆで２回、ｄｃｍ中の２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ｄｃｍで２回、洗浄して、樹脂（ｘｖｉｉ）を得た。
【００５１】
工程１８及び１９
2004509104.tif 000033
2004509104.tif 000034
アリル脱保護及び引き続いてのカルボン酸部分へのアミン及びアニリンの付加は、樹脂タイプ（ｘｉｘ）を生成するための工程１０−１２に記載した手順を用いて実施した。
【００５２】
工程２０
2004509104.tif 000035
ついで１００ｍｇの（ｘｉｘ）タイプの樹脂を２．０ｍｌのｔｈｆに懸濁させ、この懸濁液に、ｔｈｆ中１．０Ｍのｔｂａｆを１．０ｍｌ添加した。反応物を１時間撹拌した後、水切りを行った。ついで樹脂をｔｈｆで３回、ｄｃｍ中の２０％酢酸で３回、メタノールで３回、ｄｃｍで３回、洗浄して、（ｘｘ）タイプの樹脂を生成した。
【００５３】
工程２１
2004509104.tif 000036
ついで（ｘｘ）タイプの樹脂を次の手順に従ってアシル化、スルホニル化、アルキル化した：１）アシル化：別個の２０ｍｌのシンチレーションバイアル中に、ジメチルアセトアミドに入れた選択されたカルボン酸、ＨＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ｄｉｐｅａの３．０Ｍ溶液３．０ｍｌを調製し、振盪器で１０分撹拌した。ついで、これらの反応混液を、Ｑｕｅｓｔ ＲＶに充填した樹脂（Ｂ）タイプ１００ｍｇに直接加えた。ついで反応物を３０分撹拌し、水切りをし、ｄｍａ、メタノール及びジクロロメタンで３回洗浄した。２）スルホニル化：１００ｍｇの（Ｂ）タイプの樹脂をＱｕｅｓｔ ＲＶに充填し、樹脂を３．０ｍｌのｔｈｆに懸濁させた。懸濁液に１．０ｍｍｏｌの選択された塩化スルホニルと１．０ｍｍｏｌのｄｉｐｅａを添加した。反応物を３０分撹拌し、水切りし、ｄｍａで３回、メタノールで３回、ｄｃｍで３回洗浄した。３）アルキル化：Ｑｕｅｓｔ ＲＶに充填した（Ｂ）タイプの樹脂１００ｍｇに、ｄｍｆ中１％酢酸の３．０ｍｌに入れた１．０ｍｍｏｌの選択されたアルデヒドを添加した。反応物を３０分撹拌した後、シアノボロ水素化ナトリウム１．３ｍｍｏｌを粉末として添加した。反応物を更に２時間撹拌した後、水切りを行った。ついで、樹脂をメタノールで３回、ｄｃｍ中２０％酢酸で２回、メタノールで２回、ｄｃｍで２回洗浄して、（ｘｘｉ）クラスの樹脂を得た。
【００５４】
工程２２
2004509104.tif 000037
ついで（ｘｘｉ）タイプの樹脂を、３．０ｍｌの線形ｔｆａで処理することによって開裂させた。ｔｆａ開裂混液をシンチレーションバイアル中に収集し、樹脂を３．０ｍｌ部のｔｆａですすいだ。ついでサンプルを真空濃縮し、逆相ＨＰＬＣ精製に供した。
【００５５】
実施例２　組織因子／第ＶＩＩａ因子アンタゴニストアッセイ
この手順は本発明のサンプル化合物に対する阻害定数（Ｋｉ）を決定するために使用される。
材料
アッセイバッファー：１００ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．８、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＰＥＧ−８０００、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−８０、５ｍＭのＣａＣｌ２
血液凝固因子：組換えヒト第ＶＩＩａ因子（ＮＢ＃２５９４２−１６）
コファクター：可溶型組織因子（１−２１９）
基質：Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍ−ｔＰＡ（ベーリンガー・マンハイム、カタログ＃１０９３ ０３７）。Ｈ２Ｏ中２０ｍＭで再構成。使用前にＣａＣｌ２を有するアッセイバッファーで４ｍＭに希釈。
サンプル：（ＣａＣｌ２を欠く）アッセイバッファーで３％ＤＭＳＯにサンプルを希釈。
【００５６】
手順
１．ＣａＣｌ２を有するアッセイバッファー中、２μｇ／ｍＬ（９０ｎＭ）の組織因子と１．５μｇ／ｍＬ（３０ｎＭ）の第ＶＩＩａ因子の溶液を調製。
２．室温で１５分間インキュベート。
３．各ウェルに５０μＬのサンプルを添加。
４．各ウェルに５０μＬの組織因子／第ＶＩＩａ因子溶液を添加。
５．穏やかに撹拌して室温で１５分間インキュベート。
６．各ウェルに５０μＬの基質を添加。
７．２０−２５秒、プレートを撹拌。
８．室温で全体で５分間１０秒ごとに４０５ｎＭの吸光度をモニター。
９．１０ポイントにわたってＶｍａｘを算定。
【００５７】
実施例３　第Ｘａ因子、トロンビン、及び血漿カリクレインのアッセイ
これらの手順は本発明のサンプル化合物に対する阻害定数（Ｋｉ）を決定するために使用される。
材料
アッセイバッファー：１００ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．８、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＰＥＧ−８０００、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−８０
血液凝固因子：ヒト第Ｘａ因子、トロンビン、又は血漿カリクレイン（Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。アッセイバッファーで０．４５μｇ／ｍＬ（９．８ｎＭ）まで希釈。
基質：Ｓ−２２２２、Ｓ２３６６又はＳ２３０２　−（以下を参照−Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ Ｉｎｃ，）。Ｈ２Ｏ中５ｍＭで再構成。使用前にアッセイバッファーで１．５ｍＭに希釈。
サンプル：アッセイバッファーで３％ＤＭＳＯにサンプルを希釈。
【００５８】
手順
１．各ウェルに５０μＬのサンプルを添加。
２．各ウェルに５０μＬの適切に希釈した血液凝固因子を添加。
３．穏やかに撹拌して室温で５分間インキュベート。
４．各ウェルに５０μＬの適切に希釈した基質を添加。
５．２０−２５秒、プレートを撹拌。
６．室温で全体で５分間１０秒ごとに４０５ｎＭの吸光度をモニター。
７．１０ポイントにわたってＶｍａｘを算定。
【００５９】
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【００６０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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