(57)【要約】リポソーム封入ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤製剤が提供される。リポソームは遊離薬剤と比較して抗腫瘍剤として改善された薬物動態および増強した効能を有している。前記製剤は、少なくともホスファチジルコリン、コレステロール、およびベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのホスファチジルコリン、コレステロールおよびベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤を含んでいるリポソーム。
【請求項２】
請求項１に記載のリポソームであって、前記ホスファチジルコリンが、ジステアロイルホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、水素化卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジエライドイルホスファチジルコリン、およびジミリストイルホスファチジルコリンからなる群から選択されるリポソーム。
【請求項３】
請求項２に記載のリポソームであって、前記ホスファチジルコリンが、水素化大豆ホスファチジルコリンであるリポソーム。
【請求項４】
請求項２に記載のリポソームであって、前記ホスファチジルコリンが、大豆ホスファチジルコリンであるリポソーム。
【請求項５】
請求項２に記載のリポソームであって、前記ホスファチジルコリンが、ジオレオイルホスファチジルコリンであるリポソーム。
【請求項６】
請求項２に記載のリポソームであって、前記ホスファチジルコリンが、ジエライドイルホスファチジルコリンであるリポソーム。
【請求項７】
請求項２に記載のリポソームであって、前記リポソームが、ホスファチジルグリセロールを更に含むリポソーム。
【請求項８】
請求項３に記載のリポソームであって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項９】
請求項４に記載のリポソームであって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項１０】
請求項５に記載のリポソームであって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項１１】
請求項６に記載のリポソームであって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項１２】
請求項７に記載のリポソームであって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項１３】
請求項１２に記載のリポソームであって、前記水素化大豆ホスファチジルコリン、コレステロールおよびホスファチジルグリセロールが、約２： １： ０．１のモル比であるリポソーム。
【請求項１４】
請求項８に記載のリポソームであって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するコレステロール　モル比が、約５： １ から ２： １．５であるリポソーム。
【請求項１５】
請求項１４に記載のリポソームであって、前記モル比が、約２： １であるリポソーム。
【請求項１６】
請求項１４に記載のリポソームであって、前記モル比が、約４： １であるリポソーム。
【請求項１７】
請求項１５に記載のリポソームであって、前記リポソームが、ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満であるリポソーム。
【請求項１８】
請求項１７に記載のリポソームであって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約５： １ から ７５： １であるリポソーム。
【請求項１９】
請求項９に記載のリポソームであって、前記モル比が、約２： １であるリポソーム。
【請求項２０】
請求項１０に記載のリポソームであって、前記モル比が、約２： １であるリポソーム。
【請求項２１】
請求項１１に記載のリポソームであって、前記モル比が、約２： １であるリポソーム。
【請求項２２】
請求項１７に記載のリポソームであって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約８： １ から ２０： １であるリポソーム。
【請求項２３】
リポソーム内に封入されたベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（ＢＴＳＩ ）を含むリポソームであって、該リポソームは水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）およびコレステロールから構成され、且つＨＳＰＣ：コレステロールが約２： １のモル比であり、且つ前記ＨＳＰＣ： ＢＴＳＩ　モル比が約８： １から２０： １であり、且つ前記リポソームが１００ｎｍ未満のサイズを有するユニラメラであるリポソーム。
【請求項２４】
請求項２３に記載のリポソームであって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３であるリポソーム。
【請求項２５】
請求項１に記載の組成物であって、
ａ） ホスファチジルコリンおよびコレステロールで構成される脂質フィルムまたは粉を形成することと、
ｂ） ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（ＢＴＳＩ ）を含有している水性溶液で前記脂質フィルムまたは粉を水和することと、
ｃ） ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満であるリポソームが得られるエネルギーを適用することと、
ｄ）非封入ＢＴＳＩを排除し、ＢＴＳＩを含有するリポソームを得るために水性溶液に対してクロス濾過することと、
を含むプロセスにより生産される組成物。
【請求項２６】
請求項２５に記載の組成物であって、前記ホスファチジルコリンが、ジステアロイルホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、水素化卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジエライドイルホスファチジルコリン、およびジミリストイルホスファチジルコリンからなる群から選択される組成物。
【請求項２７】
請求項２６に記載の組成物であって、前記ホスファチジルコリンが、水素化大豆ホスファチジルコリンである組成物。
【請求項２８】
請求項２６に記載の組成物であって、前記ホスファチジルコリンが、大豆ホスファチジルコリンである組成物。
【請求項２９】
請求項２６に記載の組成物であって、前記ホスファチジルコリンが、ジオレオイルホスファチジルコリンである組成物。
【請求項３０】
請求項２６に記載の組成物であって、前記ホスファチジルコリンが、ジエライドイルホスファチジルコリンである組成物。
【請求項３１】
請求項２６に記載の組成物であって、前記リポソームが、ホスファチジルグリセロールを更に含む組成物。
【請求項３２】
請求項２５に記載の組成物であって、前記エネルギーが、ホモジナイザーにより適用される組成物。
【請求項３３】
請求項２７に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である組成物。
【請求項３４】
請求項２８に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である組成物。
【請求項３５】
請求項２９に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である組成物。
【請求項３６】
請求項３０に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である組成物。
【請求項３７】
請求項３１に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である組成物。
【請求項３８】
請求項２７に記載の組成物であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するコレステロール　モル比が、約５： １ から ２： １．５である組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の組成物であって、前記モル比が、約２： １である組成物。
【請求項４０】
請求項３８に記載の組成物であって、前記モル比が、約４： １である組成物。
【請求項４１】
請求項３９に記載の組成物であって、前記リポソームが、ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満である組成物。
【請求項４２】
請求項４１に記載の組成物であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約 ５： １ から ７５： １である組成物。
【請求項４３】
請求項４２に記載の組成物であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約８： １ から ２０： １である組成物。
【請求項４４】
請求項２５に記載の組成物であって、前記ＢＴＳＩがＧＷ１８４３であり、且つ前記ホスファチジルコリンが水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）であり、且つ前記ＨＳＰＣ：コレステロールが約２： １ のモル比であり、且つ前記ＨＳＰＣ： ＢＴＳＩモル比が８： １ から ２０： １である組成物。
【請求項４５】
ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（ＢＴＳＩ）を含んでいるリポソームを作成するための方法であって、前記方法は：
ａ） ホスファチジルコリンおよびコレステロールから構成される脂質フィルムまたは粉を形成することと、
ｂ） ＢＴＳＩを含有している水性溶液で前記脂質フィルムまたは粉を水和することと、
ｃ） ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満であるリポソームが得られるエネルギーを適用することと、
ｄ） 非封入ＢＴＳＩを排除し、ＢＴＳＩを含有するリポソームを得るために水性溶液に対してクロス濾過することと、
を含む方法。
【請求項４６】
請求項４５に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジステアロイルホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、水素化卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジエライドイルホスファチジルコリン、およびジミリストイルホスファチジルコリンからなる群から選択される方法。
【請求項４７】
請求項４６に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、水素化大豆ホスファチジルコリンである方法。
【請求項４８】
請求項４６に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、大豆ホスファチジルコリンである方法。
【請求項４９】
請求項４６に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジオレオイルホスファチジルコリンである方法。
【請求項５０】
請求項４６に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジエライドイルホスファチジルコリンである方法。
【請求項５１】
請求項４６に記載の方法であって、前記リポソームが、ホスファチジルグリセロールを更に含む方法。
【請求項５２】
請求項４５に記載の方法であって、前記エネルギーがホモジナイザーにより適用される方法。
【請求項５３】
請求項４７に記載の方法であって、前記 ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項５４】
請求項４８に記載の方法であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項５５】
請求項４９に記載の方法であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項５６】
請求項５０に記載の方法であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項５７】
請求項５１に記載の方法であって、前記ＢＴＳＩが、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項５８】
請求項４７に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するコレステロール　モル比が、約５： １ から ２： １．５である方法。
【請求項５９】
請求項５８に記載の方法であって、前記モル比が、約２： １である方法。
【請求項６０】
請求項５８に記載の方法であって、前記モル比が、約４： １である方法。
【請求項６１】
請求項５９に記載の方法であって、前記リポソームが、ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満である方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約５： １ から ７５： １である方法。
【請求項６３】
請求項６２に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約８： １ から ２０： １である方法。
【請求項６４】
請求項４５に記載の方法であって、前記ＢＴＳＩがＧＷ１８４３であり、且つ前記ホスファチジルコリンが水素化大豆ホスファチジルコリン （ＨＳＰＣ）であり、且つ前記ＨＳＰＣ：コレステロールが約２：１のモル比であり、且つ前記ＨＳＰＣ： ＢＴＳＩ　モル比が８： １ から ２０： １である方法。
【請求項６５】
腫瘍の成長を阻害する方法であって、腫瘍に対する請求項１に記載の組成物の治療的もしくは効果的な量の投与を含む方法。
【請求項６６】
請求項６５に記載の方法であって、前記腫瘍が、薬剤耐性もしくは薬剤感受性である方法。
【請求項６７】
請求項６５に記載の方法であって、前記腫瘍が、卵巣、肺、結腸直腸、胸部、頭部および頸部、前立腺、子宮、神経グリア芽細胞腫、および肉腫からなる群から選択される癌に由来するものである方法。
【請求項６８】
請求項６７に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジステアロイルホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、水素化卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジエライドイルホスファチジルコリン、およびジミリストイルホスファチジルコリンからなる群から選択される方法。
【請求項６９】
請求項６８に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、水素化大豆ホスファチジルコリンである方法。
【請求項７０】
請求項６８に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、大豆ホスファチジルコリンである方法。
【請求項７１】
請求項６８に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジオレオイルホスファチジルコリンである方法。
【請求項７２】
請求項６８に記載の方法であって、前記ホスファチジルコリンが、ジエライドイルホスファチジルコリンである方法。
【請求項７３】
請求項６８に記載の方法であって、前記リポソームが、ホスファチジルグリセロールを更に含む方法。
【請求項７４】
請求項６９に記載の方法であって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項７５】
請求項７０に記載の方法であって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項７６】
請求項７１に記載の方法であって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項７７】
請求項７２に記載の方法であって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項７８】
請求項７３に記載の方法であって、前記ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤が、ＧＷ１８４３である方法。
【請求項７９】
請求項７８に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリン、コレステロールおよびホスファチジルグリセロールが、約２： １： ０．１のモル比である方法。
【請求項８０】
請求項７４に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するコレステロール　モル比が、約５： １ から ２： １．５である方法。
【請求項８１】
請求項８０に記載の方法であって、前記モル比が、約２： １ である方法。
【請求項８２】
請求項８０に記載の方法であって、前記モル比が、約４： １ である方法。
【請求項８３】
請求項８１に記載の方法であって、前記リポソームが、ユニラメラであり、且つ１００ｎｍ未満である方法。
【請求項８４】
請求項８３に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３モル比が、約５： １ から ７５： １である方法。
【請求項８５】
請求項７５に記載の方法であって、前記モル比が、約２： １ である方法。
【請求項８６】
請求項７６に記載の方法であって、前記モル比が、約２： １ である方法。
【請求項８７】
請求項７７に記載の方法であって、前記モル比が、約２： １ である方法。
【請求項８８】
請求項８３に記載の方法であって、前記水素化大豆ホスファチジルコリンに対するＧＷ１８４３　モル比が、約８： １ から ２０： １である方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】
本発明は、ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（ｂｅｎｚｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）に関する。更に、本発明は、かかる製剤の製造方法および使用方法に関する。
【０００２】
【発明の背景】
リポソームは、水に分散させた際に閉鎖した液体充填球体を形成するリン脂質から作成（部分的に）される微視的ベシクルである。ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤として既知の化合物類は、抗腫瘍活性を有することが知られている（米国５，６６３，３７７）。ベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤を含有するリポソーム製剤が本明細書に記載される。
【０００３】
【発明の概要】
本発明は、少なくとも１つのホスファチジルコリン、コレステロール、およびベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤を含むリポソーム製剤を提供する。
【０００４】
【発明の詳細な記述】
リポソーム中に封入されたベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（ＢＴＳＩ） を含む製剤が、それらを製造する方法と共に提供される。前記製剤は、抗腫瘍もしくは抗ウイルス剤としての使用を含む薬学的な使用を有するものである。加えて、遊離薬剤と比較して、前記リポソームは、抗腫瘍剤として改善された薬物動態および増強した効能を有している。前記製剤は、少なくとも１つのホスファチジルコリン、コレステロール、およびＢＴＳＩから構成されるリポソームを含む。
【０００５】
本発明のベンゾキナゾリン　チミジル酸シンターゼ阻害剤（本発明の化合物として本明細書中で参照される）は、米国特許Ｎｏ．５，６６３，３３７（１９９７年９月２日）に記載されており、前記出願はその内容の全体が参照により本願明細書中に援用される（特に第１欄第３７行から第６欄第４５行までの該当部位が包括的に本願明細書中に援用される）。
【０００６】
したがって、本発明は式（Ｉ）の化合物またはそれらの塩を提供する、
【化１】
2004503491.tif 000002
式中、点線は単結合もしくは二重結合を表し、
Ｒ１はＣ１−４アルキルもしくはアミノであり、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−５アルカノイルもしくはベンジル基で任意に置換される；
Ｒ２， Ｒ３， Ｒ４およびＲ５は、同一もしくは異なっており、且つ、夫々は水素、フェニル、ハロ、ニトロ、
Ｓ（Ｏ）ｎ Ｒ８基（ここで、ｎは整数０，１もしくは２であり、且つＲ８はハロまたはＣ１−４アルキルもしくはＮＲ９ Ｒ１０基であり、ここでＲ９およびＲ１０双方は水素である）、
ＮＲ１１ Ｒ１２基（ここで、Ｒ１１およびＲ１２は同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素もしくはＣ１−４アルキルである）、
ＯＲ１３基（ここで、Ｒ１３は水素、もしくは任意にハロで置換されたＣ１−４アルキルである）、
ＯＲ１４もしくはＮＲ１４Ｒ１５基で任意に置換されたＣ１−４脂肪族基（ここで、Ｒ１４およびＲ１５は同一もしくは異なるものであり、且つ夫々は水素もしくはＣ１−４アルキルである）
から選択され、
或いは、Ｒ２からＲ５のうちの２つは、ベンゾ基を形成するため共に連結される、
或いは、Ｒ２からＲ５のうちの１つは、−Ｘ−Ｙ−Ｒ１６基であり、ここでＸ はＣＨ２， ＮＲ１７， ＣＯ もしくは Ｓ （Ｏ）ｍ であり、且つ ｍは０，１もしくは２であり、且つ Ｒ１７は水素もしくはＣ１−４脂肪族基であり、且つＹ はＣＨ２， ＮＲ１７’， Ｏ， もしくはＳ （Ｏ）ｍ’であり、ここでｍ’は ０，１ もしくは ２ 且つＲ１７’ は水素もしくはＣ１−４脂肪族基であり（但し、夫々がＣＨ２である時のみＸ および Ｙ は同一である）、または、−Ｘ−Ｙ−は−０−基、−ＮＲ１７−、−ＣＨ＝ＣＨ−もしくは−Ｎ＝Ｎ−であり、ここで Ｒ１７ は上記に定義したとおりであり、Ｒ１６ はＣ１−４脂肪族基または ５−もしくは６−員芳香族環（ｍｅｍｂｅｒｅｄ ａｒｏｍａｔｉｃ ｒｉｎｇ）であり、Ｙに結合した炭素から離間した少なくとも１つの炭素原子の位置においてＲ１８ で任意に置換され、前記５−もしくは ６−員環は更にハロ原子で任意に置換されており； 且つＲ１８はハロ、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、ニトリル、ハロで任意に置換されるＣ１−４アルキルであり、ハロまたはＣＯＲ１９基であり、ここでＲ１９はヒドロキシ、１もしくは２のカルボキシル基で任意に置換されるＣ１−４アルコキシもしくはＣ１−６ アルキル、またはそのＣ１‐１２エステルであり、または、Ｒ１９はＮＲ２０ Ｒ２１基であり、ここでＲ２０およびＲ２１は同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素、または任意にヒドロキシで置換されたＣ１−４アルキルであり、または、Ｒ１９はアミノ酸基もしくはそのエステルであり（ここでアミノ酸基の最初の窒素原子は、前記５−もしくは ６−員芳香族環に連結されて、更に１つの５−もしくは６−員複素環（ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｎｇ）を形成してもよい）、またはＲ１９は前記５−もしくは ６−員芳香族環に連結されて更なる１つの５−もしくは ６−員環を形成するＣ２−３アルキレン基であり；
Ｒ６およびＲ７は同一もしくは異なるものであり、且つ夫々はヒドロキシもしくはＣ１−４アルコキシで任意に置換されるＣ１−４アルキルであるか、または共にベンゾ基を形成する；
但し、Ｒ２からＲ７の少なくとも１つは水素以外であり、またＲ１がヒドロキシもしくはメチルである場合、Ｒ４はメトキシではない。
【０００７】
「ハロ」の用語は、フルオロ、ブロモ、クロロおよびヨードを意味する。
「Ｃ１−４脂肪族基」の用語は、Ｃ１−４アルキル、アルケニル、またはアルキニル基を意味する。
「アミノ酸基」の用語は、天然に存在するアミノ酸を意味する。
好適なアミノ酸基には、グリシン、グルタミン酸、およびポリグルタミン酸基が含まれる。
前記アミノ酸基が前記５−もしくは６−員芳香族環に連結される場合、これはＣＯＲ１９が結合した炭素に隣接する芳香族環の炭素原子を介したものである。
好ましくは、前記点線は二重結合である。
【０００８】
芳香環Ｒ１６の適切な置換基は、ハロ、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−４アルコキシを含み、夫々１から５のハロ原子で任意に置換される。最も適切にはフルオロ、クロロ、メチル、トリフルオロメチルおよびメトキシ、並びに好ましくはフルオロから選択される１または２つの置換基が存在するか、或いは、前記芳香族環上には如何なる置換基も存在しない。好適な一態様において、−Ｘ−Ｙ−Ｒ１６は、
【化２】
2004503491.tif 000003
基であり、式中Ｒ１８は、上記定義した通りであり、好ましくは上記定義したＣＯＲ１９基であり、且つＲ２２は水素もしくはフルオロである。
更なる好適な一態様において、Ｘ−Ｙ−Ｒ１６は一つの基であり、
【化３】
2004503491.tif 000004
式中Ｈ２ＮＲ１９ａは、グルタミンもしくはポリグリタミン酸基であり、且つＺはＣＨ２、ＳもしくはＯである。
【０００９】
適切には、Ｒ１は１もしくは２つのメチルもしくはエチル基で任意に置換されたアミノ基であるか、またはＲ１はメチルもしくはエチル基である。好ましくはＲ１は、アミノもしくはメチル基である。
【００１０】
適切には、Ｒ２からＲ５のうち多くとも３つのみ、好ましくは多くとも２つのみが水素以外であり、且つ夫々は水素；ハロ；ヒドロキシ；ニトロ；ヒドロキシもしくはＣ１−２アルコキシで任意に置換されるＣ１−３アルキル；Ｃ１−３アルコキシ；１もしくは２つのメチルもしくはエチル基で任意に置換されるアミノ；またはＳ （Ｏ）ｎ Ｒ２３（ここでｎは０、１もしくは２である）基から独立に選択され、且つＲ２３は、１もしくは２つのメチルもしくはエチル基で任意に置換されるＣ１−４アルキル基もしくはアミノ基であり、またはＲ２からＲ５のうちの１つは−Ｘ−Ｙ−Ｒ２４であり、ここでＲ２４は、
【化４】
2004503491.tif 000005
基であり、式中Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ２２およびＺは、上記で定義した通りである。好適な一態様において、Ｒ１８は、ニトロもしくは
【化５】
2004503491.tif 000006
基であり、式中Ｒ２５、Ｒ２６およびＲ２７は、同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素もしくはＣ１−４アルキル基であり、且つｔは０から６の整数である。好ましくはＲ２５、Ｒ２６およびＲ２７は水素であり、且つｔは０である。好ましくはＺは、ＣＨ２もしくはＳである。
【００１１】
好ましくはＲ２からＲ５のうちの１つは、上記定義したとおり−Ｘ−Ｙ−Ｒ２４基である。好ましくはＲ３は、−Ｘ−Ｙ−Ｒ２４基である。
【００１２】
適切には、Ｒ６およびＲ７は同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素、メチル、エチルまたはメチルであり、ブロモ、ヒドロキシもしくはメトキシで置換される。好ましくはＲ７は水素であり、且つＲ６はメチルである。
【００１３】
好ましくは−Ｘ−Ｙ−は、−ＳＯ２−ＮＲ１７−または ＣＨ２ＮＲ１７であり、ここでＲ１７は上記定義の通りである。
【００１４】
適切には、Ｒ１７は、水素またはＣ１−４アルキルもしくはアルケニル基であり、好ましくはＲ１７は水素もしくはメチルである。
【００１５】
本発明の化合物の１つのグループは、式（Ｉａ）の化合物またはその塩であり、
【化６】
2004503491.tif 000007
式中で点線は単もしくは二重結合を表し、Ｒ１ａはＣ１−４アルキルまたはアミノであり、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−５アルカノイルもしくはベンジル基で任意に置換される；
Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａは、同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素、ハロ、ニトロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ８ａ基（ここでｎは０、１もしくは２の整数であり、且つＲ８ａはハロまたはＣ１−４アルキルもしくはアミノ基である）； ＮＲ１１ａＲ１２ａ基（ここでＲ１１ａおよびＲ１２ａは、同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素もしくはＣ１−４アルキルである）、
ＯＲ１３ａ基〔ここでＲ１３ａは水素、またはハロで任意に置換されるＣ１−４アルキル、ＯＲ１４ａ 基で任意に置換されるＣ１−４脂肪族基、またはＮＲ１４ａＲ１５ａ（ここでＲ１４ａおよびＲ１５ａは、同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素もしくはＣ１−４アルキルである）〕から選択され、或いはＲ２ａからＲ５ａのうちの１つは、−Ｘ−Ｙ−Ｒ１６ａ基〔ここで、ＸはＣＨ２、ＮＲ１７ａ、ＣＯもしくはＳ（Ｏ）ｍ であり、ｍは０、１もしくは２であり、Ｒ１７ａは水素もしくはＣ１−４脂肪族基であり、ＹはＣＨ２，ＮＲ１７’ａ， Ｏ， もしくは Ｓ （Ｏ）ｍ’であり、ｍ’は０、１もしくは２であり、Ｒ １７’ａは水素もしくはＣ１−４脂肪族基である（但し、ＸおよびＹは夫々ＣＨ２である場合のみ同一である）か、または−Ｘ−Ｙ−は、−ＮＲ１７ａ（Ｒ１７ａは上記定義のとおり）、−ＣＨ＝ＣＮ−もしくは−Ｎ＝Ｎ−基である〕であり、Ｒ１６ａはＣ１−４脂肪族基またはＹに連結された炭素から離間した少なくとも１つの炭素原子の位置でＲ１８ａ基により任意に置換される５−もしくは６−員芳香族環であり、Ｒ１８ａはニトロ、ニトリル、ハロにより任意に置換されるＣ１−４アルキル、ハロもしくはＣＯＲ１９ａ基（ここでＲ１９ａは、１もしくは２つのカルボキシル基もしくはＣ１−４ アルコキシにより任意に置換されるＣ１−６脂肪族基である）、ＣＯＮＲ２０ａＲ２１ａ基（ここで、Ｒ２０ａおよびＲ２１ａは同一もしくは異なっており、且つそれぞれは水素もしくはＣ１−４アルキルである）であり、またはＲ１９ａはグルタミン酸基もしくはポリグルタミン酸基またはそれらのエステルであり、ここで前記グルタミン酸基もしくはポリグルタミン酸基の最初の窒素原子は、５−もしくは６−員芳香族環に連結されて更なる５−もしくは６−員複素環を形成してももよい；Ｒ６ａ および Ｒ７ａは同一もしくは異なっており、且つ夫々はヒドロキシにより任意に置換されるＣ１−４アルキル、もしくはＣ１−４アルコキシであるか、または共にベンゾ基を形成する。但し、Ｒ２ａからＲ７ａのうちの少なくとも１つは水素以外であり、且つＲ１ａがヒドロキシもしくはメチルである場合、Ｒ４ａはメトキシではない。
【００１６】
本発明の化合物の更なるグループは、式（ＩＩ）の化合物もしくはその塩であり、
【化７】
2004503491.tif 000008
式中でＲ１， Ｒ６， Ｒ７および点線は上記で定義した通りであり、Ｒ２８からＲ３１は同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素、ハロ、ニトロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ８基、ＮＲ１１Ｒ１２基、ＯＲ１３基、またはＯＲ１４ もしくは ＮＲ１４Ｒ１５基で任意に置換されるＣ１−４脂肪族基であり、ここでＲ８， Ｒ１１， Ｒ１２， Ｒ１３， Ｒ１４ および Ｒ１５は上記で定義した通りである。但し、Ｒ２８ から Ｒ３１は全てが水素ではなく、またＲ１はヒドロキシもしくはメチルである場合にＲ３０はメトキシではない。
【００１７】
本発明の化合物の好適なグループは、式（ＩＩＩ）の化合物：もしくはその塩であり、
【化８】
2004503491.tif 000009
式中Ｒ１， Ｒ６ および Ｒ７は上記で定義した通りであり、且つＲ３２ から Ｒ３５は同一もしくは異なっており、且つ１つはＸ−Ｙ−Ｒ１６基であり、且つ他は同一もしくは異なっており、且つ夫々は水素、ハロ、ニトロ、Ｓ（Ｏ）ｎＲ８基、ＮＲ１１Ｒ１２基、ＯＲ１３基、またはＯＲ１４ もしくは ＮＲ１４Ｒ１５基で任意に置換されるＣ１−４脂肪族基であり、ここでＸ， Ｙ， Ｒ８， Ｒ１１， Ｒ１２， Ｒ１３， Ｒ１４， Ｒ１５ および Ｒ１６は上記で定義したとおりである。
【００１８】
本発明の化合物の更に好適なグループは、式（ＩＶ）の化合物であり：
【化９】
2004503491.tif 000010
式中Ｒ１， Ｒ６， Ｒ７ および Ｒ３２ から Ｒ３５は、上記で定義した通りである。
好ましくはＲ３３は、上記で定義したとおりＸ−Ｙ−Ｒ１６基である。
【００１９】
式（Ｉ）の好適な化合物は：
３−アミノ−９−ブロモベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
３−アミノ−９−エチニルベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
Ｎ−（４−（（３−アミノ−１， ２，５，６−テトラヒドロ−１−オキソベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−９−イル） スルホンアミド） ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２，５，６−テトラヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−９−イル）− スルホンアミド） ベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ−（４−（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ［ｆ］キナゾリン−９−イル）スルホンアミド） ベンゾイル）− Ｌ−グルタミン酸
Ｎ− （４−（（（１， ２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ）−２−フルオロベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
Ｎ− （４ （（（１， ２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ） ベンゾイル）− Ｌ−グルタミン酸
（Ｓ）−２−（５−（（（１， ２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ−１− オキソ−２−イソインドリニル） グルタル酸
９− （（４−アセチルアニリノ） メチル）−３−メチルベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
３−メチル０９０ （ （４−ニトロアニリノ） メチル） ベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
Ｎ−（４−（（（３−アミノ−１，２−ジヒドロ−１−オキソベンゾ［ｆ］キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ） ベンゾイル）− Ｌ−グルタミン酸
３−アミノ−９− （ （４−ニトロアニリノ） メチル） ベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
９− （ （４−アセチルアニリノ） メチル）−３−アミノベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−１ （２Ｈ）−オン
（ＲＳ）−２−（２−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ［ｆ］キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ） フェニル）−２−オキソエチル） グルタル酸
エチル−４−（４−（（（１， ２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ） フェニル）−４−オキソブチラート
４−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ［ｆ］キナゾリン−９−イル）メチル） アミノ） フェニル）−４−オキソ酪酸
Ｎ− （４−（（（１， ２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ ［ｆ］ キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ）−２−フルオロベンゾイル） グリシン
エチル Ｎ−（４−（（（１，２−ジヒドロ−３−メチル−１−オキソベンゾ［ｆ］キナゾリン−９−イル） メチル） アミノ）−２−フルオロベンゾイル） グリシナートを含む。
【００２０】
式（Ｉ）の特定の化合物は、不斉炭素原子を包含しており、それゆえ光学異性体として存在できる。個々の異性体およびこれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。
【００２１】
本発明の化合物の塩は、アミノ基に由来する酸付加塩、或いは式（Ｉ）の化合物（例えばこれがカルボキシ基で置換された場合）に由来する陰イオン種および陽イオンを含んでもよい。双方のタイプの塩において、治療的活性は、本明細書中で定義された本発明の化合物に由来する部分（ｔｈｅ ｍｏｉｅｔｙ）に備わっており、他の成分の同一性は、たとえそれが治療的および予防的な目的であってもそれほど重要ではなく、それは好ましくは患者に対して薬学的に許容されるものである。薬学的に許容される酸付加塩の例には、塩酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ）、臭化水素酸（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ）、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、メタ燐酸（ｍｅｔａｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、硝酸および硫酸などの鉱酸（ｍｉｎｅｒａｌ ａｃｉｄｓ）、並びに、酒石酸（ｔａｒｔａｒｉｃ）， 酢酸（ａｃｅｔｉｃ），トリフルオロ酢酸 （ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ）， クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ）， リンゴ酸（ｍａｌｉｃ）， 乳酸（ｌａｃｔｉｃ）， フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ）， 安息香酸（ｂｅｎｚｏｉｃ）， グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｌｉｃ）， グルコン酸（ｇｌｕｃｏｎｉｃ）， コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ） およびメタンスルホン酸 （ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｐｈｏｎｉｃ）などの有機酸、並びに、例えばｐ−トルエンスルホン酸などのアリルスルホン酸に由来するものが含まれる。式（Ｉ）の化合物に由来する陰イオン種および陽イオンを含む塩の例は、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナトリウムおよびカリウム塩など）、アルカリ土類塩（マグネシウムおよびカルシウム塩など）、並びに有機塩基と共に形成された塩〔例えば、モノ−、ジ−もしくはトリ−（低級アルキル）またはトリエタノールアミンおよびジエチルアミノ−エチルアミンなどの（低級アルカノール）アミンに由来するアミノ塩〕、並びに複素環アミン（ピペリジン、ピリジン、ピペラジンおよびモルホリンなど）との塩を含む。許容されない塩と一緒の薬学的に許容される塩は、本発明の化合物の分離および／または精製において有用性を有し、並びに当該技術分野において公知の技術により薬学的に許容される塩に変換可能であることにおいて、薬学的に許容されない塩も有用である。
【００２２】
カルボキシル基を包含する式（Ｉ）の化合物から形成される式（Ｉ）の化合物のエステルは、ペアレント酸（ｔｈｅ ｐａｒｅｎｔ ａｃｉｄ）の調製において、しばしば有用な中間体である。
【００２３】
本発明の特に好適な一化合物は、下記の式の化合物、ＧＷ１８４３ （本明細書中で、ＧＷ１８４３Ｕ８９ もしくは １８４３Ｕ８９とも呼称される）である：
【化１０】
2004503491.tif 000011
本明細書で使用されるＧＷ１８４３のリポソーム製剤は、ＮＸ１８４３と呼称される。
【００２４】
本明細書において使用される「リポソーム」の用語は、例えば米国特許第４，７５３，７８８号（その内容は引用により本願明細書中に援用される）に記載されるようなユニラメラ・ベシクル（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）もしくはマルチラメラ・ベシクル（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を意味する。
【００２５】
また、「ユニラメラ・リポソーム」（「シングル・ラメラ・ベシクル」とも呼称される）は、単一閉鎖水性コンパートメント（ａ ｓｉｎｇｌｅ ｃｌｏｓｅｄ ａｑｕｅｏｕｓ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）を規定する１つの脂質二重層膜から構成される球体状のベシクルである。前記二重層膜は、脂質の二重層〔内層および外層（リーフレット）〕から構成される。脂質分子の前記外層は、それらの親水性の頭部部分を外部の水性環境に向け、且つそれらの疎水性尾部を前記リポソームの内部に向け下方を指して配置されている。脂質の前記内層は、前記外層の直下に備わっており、脂質はそれらの頭部を前記リポソームの水性内部に面し、且つそれらの尾部を脂質の前記外層の尾部に向け配置されている。
【００２６】
「マルチラメラ・リポソーム」（「マルチラメラ・ベシクル」もしくは「マルチプル・ラメラ・ベシクル」とも呼称される）は、１以上の脂質二重層膜から構成されており、その膜は１以上の閉鎖水性コンパートメントを規定する。前記膜は、同心円状に配置されるので、異なる膜は水性コンパートメントによってタマネギのように分離される。
【００２７】
本願で使用される「封入（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）」および「捕獲（ｅｎｔｒａｐｐｅｄ）」の用語は、リポソーム内への（もしくはリポソームとの）前記ＢＴＳＩの導入（もしくは相互作用）を言及する。ＢＴＳＩは、前記リポソームの内部水性空間に存在してもよく、膜二重層の内部もしくは外部リーフレットに存在してもよく、部分的に前記二重層の外部リーフレットに埋没し、且つ前記リポソームに対し部分的に外部に位置してもよく、または前記リポソームの表面と相互作用してもよく（例えば、静電相互作用により）、或いはそれらの組み合わせであってもよい。
【００２８】
本明細書中で使用される「賦形剤」の用語は、薬剤生産物の安定性を促進できる物質もしくは物質群を言及しており、ｐＨの安定性、リポソームのコロイド特性の安定性、および薬剤物質およびリン脂質の化学的安定性を含むが、それらに限定されない。賦形剤の例は、クロライド、アセテート、ラクトビオネートおよびフマレートなどの１価陰イオン、アスパルテート、スクシネートおよびサルフェートなどの２価陰イオン、およびシトレートおよびホスフェートなどの３価イオンの酸、ナトリウムもしくはアンモニウムの形態を含むが、それらに限定されない。
【００２９】
「リン脂質」は、リポソームを形成し得るリン脂質の何れか１つまたはリン脂質の組み合わせを言及する。ホスファチジルコリン（ＰＣ）（卵、ダイズもしくは他の植物供給源から得られたもの、または部分的もしくは全体として合成によるもの、或いは様々な脂質鎖長および不飽和度のものを含んでいる）は、本発明における使用に適切である。ジステアロイルホスファチジルコリン （ＤＳＰＣ、ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）， 水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ、ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｓｏｙ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ），大豆ホスファチジルコリン（ｓｏｙ ＰＣ）， 卵ホスファチジルコリン（ｅｇｇ ＰＣ）， ジオレオイルホスファチジルコリン （ＤＯＰＣ、ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）， 水素化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ、ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｅｇｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ）， ジエライドイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ、ｄｉｅｌａｉｄｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ）， ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ、ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ） およびジミリストイルホスファチジルコリン （ＤＭＰＣ、ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）を含むがこれらに限定されることがないホスファチジルコリンの合成、半合成および天然産物は、本発明に用いられる適切なホスファチジルコリンである。これらリン脂質の全ては、商業的に入手可能である。好適なＰＣは、ＨＳＰＣおよびＤＳＰＣであり；最も好適なものはＨＳＰＣである。
【００３０】
更に、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）およびホスファチジン酸（ＰＡ）も、本発明に用いられる適切なリン脂質であって、ジミリストイルホスファチジルグリセロール （ＤＭＰＧ、ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ）， ジラウリルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ、ｄｉｌａｕｒｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ）， ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ、ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ）， ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ、ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ）、ジミリストイルホスファチジン酸 （ＤＭＰＡ、ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ ａｃｉｄ）， ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ、ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ ａｃｉｄ ）， ジラウリルホスファチジン酸（ＤＬＰＡ、ｄｉｌａｕｒｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ ａｃｉｄ ）， および ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ、ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ ａｃｉｄ ）を含むが、これらに限定されない。製剤に使用される場合、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）が好適な負荷電脂質である。ＤＳＰＧなどの負荷電脂質が前記製剤に含まれる場合、総脂質の２０％未満のモル量であることが好ましく、より好ましくは５％未満である。他の適切なリン脂質は、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、およびラウリル（ｌａｕｒｉｃ）、ミリスチン（ｍｙｒｉｓｔｉｃ）、ステアリンおよびパルミチン酸鎖を包含しているホスファチジン酸を含む。更に、リン脂質を含有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の導入も、本発明により意図される。
【００３１】
本願明細書において、使用される「非経口」という用語は、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＳｕｂＱ）もしくは腹腔内（ＩＰ）投与を言及している。
【００３２】
任意の効果的なリン脂質：ＢＴＳＩ比が、本発明により意図される。好適なリン脂質：ＢＳＴＩモル比は、５：１から７５：１であり、より好ましくは８：１から２０：１である。好適なリポソーム製剤は、リン脂質：コレステロール　モル比が５：１から２：１．５の範囲を越えるものを含む。最も好適なリポソーム製剤は、２：１　ＰＣ：コレステロールである。好適な態様において、前記リポソームは、１００ｎｍ未満の中央サイズを有するユニラメラ・ベシクルであって、ここの前記リン脂質は、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）であり、２：１モル比のコレステロールを含み、前記ＢＴＳＩはＧＷ１８４３である。
【００３３】
一般的に、本発明において具現化される前記製剤を調製するプロセスは、前記リポソームが形成される溶液の調製で開始される。例えば、これはホスファチジルコリンおよびコレステロールの量を計量し、有機溶媒（好ましくはクロロホルム、または溶媒の混合物、好ましくはクロロホルムおよびメタノール）にそれらを溶解することにより完了する。フィルムもしくは粉などの固体脂質相（ａ ｓｏｌｉｄ ｌｉｐｉｄ ｐｈａｓｅ）を形成するために、例えばロータリーエバポレーター、スプレードライヤーまたは他の手段で前記溶液を蒸発させる。好適な乾燥法はスプレードライヤーを用いる方法である。そして前記フィルムもしくは粉は、リポソーム分散液を形成するため賦形剤と共に（もしくは賦形剤なしで）活性薬剤を含有する水性溶液で水和される。薬剤溶液のｐＨ調整に使用される酸もしくは塩基以外は如何なる賦形剤も使用しないことが好ましい。薬剤溶液に分散させる前記脂質フィルムまたは粉は、使用したリン脂質により約２５℃から約７０℃の温度に熱せられる。
【００３４】
マルチラメラ・リポソームは、前記分散液の撹拌により形成され、好ましくは振盪（ｓｈａｋｉｎｇ）もしくは混合（ｍｉｘｉｎｇ）を介して形成される。ユニラメラ・ベシクルは、脂質固体相（ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ）の水性分散液に対するエネルギー（例えば剪断力またはキャビテーション）の適用により形成され、例えば超音波処理或いは微小液体器具（ａ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｉｎｇ ａｐｐａｒａｔｕｓ）、または噴出器具（ａｎ ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ａｐｐａｒａｔｕｓ）、またはホモジナイザもしくはフレンチプレスの使用により形成される。リポソームは、注入、凍結融解、脂質から界面活性溶液の透析除去の何れか、またはリポソームを調製する他の既知の方法を使用して調製することもできる。前記リポソームのサイズは、エネルギーの適用の持続時間を含む様々な既知の技術を使用して制御できる。好ましくは、ホモジナイズ器具は、ＨＳＰＣ： Ｃｈｏｌ製剤に対して、３，０００ から ２０，０００ ｐｓｉ， 好ましくは１０，０００ から １４，０００ ｐｓｉの圧力、且つおよそ脂質の凝集遷移温度（ｔｈｅ ａｇｇｒｅｇａｔｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）である温度（好ましくは５５℃を越える）において、１００ナノメーター未満の直径を有するユニラメラ・ベシクルを形成するために用いられる。
【００３５】
捕獲されなかった賦形剤および／または薬剤は、水性溶液に対する透析、分子サイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０レジン）もしくは限外濾過（クロス濾過としても知られる）（５０，０００−３００，０００ 分子量排除）のうちの何れかを使用した緩衝液交換により前記リポソーム分散液から除去される。
【００３６】
リポソームの治療使用は、遊離形態において通常毒性のある薬剤のデリバリーを含むことができる。毒性のある薬剤は、リポソーム形態において毒性が生じる感受性組織から離され、彼らの治療効果を発揮できる選択された領域を標的とし得る。リポソームはまた治療上長期間にわたり薬剤をゆっくり放出するために使用することもでき、これにより増強した薬物動態プロファイルを介して薬剤投与の頻度を減少させる。加えて、リポソームは、静脈内デリバリーの目的で疎水性薬剤の水性分散を形成する方法を提供できる。
【００３７】
リポソームのデリバリーの経路は、体内のそれらの分布に影響し得る。
【００３８】
リポソームの受動デリバリーは、例えば非経口などの様々な投与経路の使用を含むが、動脈内注射、吸入噴霧剤、経口活性製剤、経皮的イオン泳動もしくは座薬などの他の効果的な投与形態も想定される。各々の経路は、リポソームの局在における差異を生じる。
【００３９】
本発明は、腫瘍（好ましくは哺乳類における）に対して治療的もしくは効果的な量のリポソーム　ＢＴＳＩをデリバリーすることにより、腫瘍（薬剤耐性および薬剤感受性）の成長を阻害する方法をも提供する。前記製剤の個々の投与の最適量および間隔（ｓｐａｃｉｎｇ）は、治療された状態、投与の形態、経路および部位、並びに治療された特定の患者の素質および程度により決定される、かかる最適な値は通常の技術により決定できる。治療の最適な投与方針（即ち、規定の日数における投与用量数／日）は、治療決定試験における従来の投与方針を用いて当業者が確認できることを当業者は理解するであろう。
【００４０】
全ての癌に関連する腫瘍の成長の阻害が、本発明により意図され、これらには多剤耐性の癌が含まれる。記載のリポソーム製剤が阻害において特に有用であろう癌は、結腸直腸、卵巣、肺、胸部（乳房）、頭部および頸部、前立腺、子宮、グリア芽細胞腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、および肉腫である。加えて、本願明細書中に記載され、本願の特許請求の範囲に記載される前記製剤は、
１）卵巣癌を治療するためのタキソール（ｔａｘｏｌ、　パクリタキセル　ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）およびプラチナ複合体（ｐｌａｔｉｎｕｍ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）、　 ２）結腸直腸癌を治療するための５ＦＵおよびリューコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）もしくはレバミソール（ ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、　 ３）肺を治療するためのシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）およびエトポシド（ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、
４）トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン（ ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、および ＮＸ２１１などのトポＩ（ｔｏｐｏ　Ｉ）阻害剤、並びに、
５）ドクソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）もしくはドキシル（ｄｏｘｉｌ）などのアンスラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）を含むが、これらに限定されることのない他の抗癌治療との組み合わせにおいて、使用することが意図される。
【００４１】
本発明は、以下に記載される実施例を参照することでより完全に理解されるだろう。これらの実施例は本発明の例証を目的とするものであり、本発明を限定するものではない。実施例１は、ＧＷ１８４３のリポソーム製剤を記載する。実施例２は、４つのリポソーム製剤の単回用量の薬物動態を記載する。実施例３は、遊離ＧＷ１８４３と、ＧＷ１８４３のリポソーム製剤の間の血漿薬物動態パラメータの比較を記載する。実施例４は、ＮＸ１８４３製剤単剤の二つの別のロットの比較を記載する。実施例５は、異なるリポソーム製剤の比較および血漿薬物動態における動物体重の効果の決定を記載する。実施例６は、単回静脈内大量瞬時投与（ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｂｏｌｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）後の血漿薬物動態を記載する。実施例７は、ＴＳ 阻害剤 ＧＷ１８４３ およびリポソーム製剤　ＮＸ １８４３における前臨床試験を記載する。
【００４２】
【実施例】
［実施例１］
《ＧＷ１８４３のリポソーム製剤》
本願明細書中で使用されたリン脂質およびコレステロールは、乾燥粉末としてＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｎｉｐｐｏｎ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ， Ｌｉｐｏｉｄ， もしくは Ｓｙｇｅｎａから入手し、それらを更なる精製を行わずに使用した。全ての他の化学薬品は、試薬グレードであり、更なる精製を行わずに使用した。
【００４３】
ＧＷ１８４３のリポソーム調製は、リポソームの内部空間における前記薬剤の封入からなる。最初に、脂質フィルムもしくはスプレーで乾燥させた水素化大豆ホスファチジルコリンおよびコレステロールを含有する粉が調製された。２： １モル比でＨＳＰＣ： Ｃｈｏｌがスプレー乾燥法を使用して調製された。脂質を、２０％　Ｗ／Ｗにまでクロロホルム中に溶解した。そして有機溶媒溶液中の脂質成分を、７２〜７８℃の間の窒素ガスを用いて粉にまで乾燥させた。４：１モル比でのＨＳＰＣ： Ｃｈｏｌは、フィルム法を使用して調製された。脂質フィルムを調製するため、クロロホルムおよびメタノール（１ ： １容量比）の溶媒混合物（２７３ ｍｇ／ｍｌ）が、脂質成分を溶解するために使用された。そして前記溶媒を、６５℃の温度の恒温槽中で前記溶液を熱している間に前記溶液に窒素ガスを流すことにより除去した。各々の脂質粉もしくはフィルムを、水性溶液中で１００−２００ ｍｇ／ｍｌの最終産物における脂質濃度で水和した。前記水性溶液は、ｐＨ範囲７〜９において、リン酸緩衝液（溶液ｐＨを緩衝するために使用した）の存在もしくは非存在下で２０−２２５ ｍｇ／ｍｌの濃度の活性薬剤を含有している溶液である。サンプルＮＡ−１０２２−６３Ａ、ＮＡ−１０２２−５９Ａ、ＧＣ１００７−２７およびＧＣ−１０２０−３６を、１５０ｍＭのリン酸緩衝液を使用して調製した。他のサンプルは、リン酸緩衝液なしで調製された。（ＡＴ−１０８４−９５Ｂ）を前記リン脂質の相転移温度を越える温度で酢酸とインキュベーションした。この処理は、最終産物で観察される低いｐＨを生じるであろう（表１Ａ）。
【００４４】
ＨＳＰＣ：コレステロール　モル比は、４：１から２：１の間にあった。そして小さいユニラメラ・リポソーム〔＜ １００ ｎｍ，　 ＭｉｃｒｏＴｒａｃ Ｕｌｔｒａｆｉｎｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用した中央粒径（ｍｅｄｉａｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ）〕が、プローブソニケーションを用いて、脂質相転移（〜５５℃）を越える温度でこれら混合物から形成された。前記リポソームの水性コアにおいて捕獲されなかった薬剤および／または賦形剤は、一般的には分子サイズ排除カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０ レジン）を用いた水もしくは９％スクロースへの緩衝液変更により、リポソーム分散液から除去された。捕獲されなかった薬剤および／または賦形剤のリポソームからの分離に続いて、溶出液として水を使用する製剤に対してはスクロースを添加した。
【００４５】
セルロース　アセテートもしくはポリエーテル　スルフォン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ ｓｕｌｆｏｎｅ）の何れかから構成される０．２２ミクロンフィルターを介して周囲温度でサンプルを濾過した。特性評価の結果を下記の表１Ａに示した。
【００４６】
他の製剤は、ＨＳＰＣ以外のリン脂質を用いて調製された（表１Ｂ）。また、負荷電ホスファチジルコリン（ＤＳＰＧ）も、一製剤において使用された（表１Ｂ）。ＡＬ１２３０−０５８， ＡＬ１２３０−０５２， ＡＬ１２３０−０４８， および ＡＬ１２３０−０５５の脂質フィルムが、１００ ｍｇ／ｍｌ　クロロホルムおよびメタノールで上記記載のとおりに調製された。スプレーで乾燥させたＡＬ１２３０−０４１の粉を、上記記載のとおり調製した。各々の脂質フィルムもしくは粉を、１００ｍｇ／ｍＬ， ｐＨ ７．５の薬剤溶液中で水和した。混合後、小さなユニラメラ・ベシクルを形成するために、水和させた脂質を〜６５ ℃および〜１３， ０００ ｐｓｉの圧力でホモジナイザー（Ｐａｎｄａ ｍａｄｅ ｂｙ Ｎｉｒｏ） を使用してホモジナイズした。ホモジナイズ後、封入されなかった薬剤を除去するために、前記リポソームを注射用の水に対してクロス濾過（ｃｒｏｓｓ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）した。クロス濾過の終了時に、スクロースを約９％の濃度で原体に添加した。リポソーム溶液を０．２μｍ　ポリエーテル　スルホン（ＰＥＳ）フィルターを介して濾過した。それらの製剤の試験結果を、表１Ｂに示す。
【００４７】
ＨＳＰＣ： Ｃｈｏｌ （モル比２：１）製剤のための、付加的な製剤をスクロース、ホスフェート、サイトレート、およびスクシナートなどの異なる賦形剤を使用して調製した。ＨＳＰＣ： Ｃｈｏｌ （２：１　モル比）のスプレー乾燥粉を１００ ｍｇ／ｍｌ， ｐＨ ７．５の薬剤溶液中で水和した。混合後、小さいユニラメラ・ベシクルを形成するために、水和した脂質を６５℃および１３，０００ ｐｓｉの圧力でホモジナイザー（Ｐａｎｄａ ｍａｄｅ ｂｙ Ｎｉｒｏ）を使用してホモジナイズした。ホモジナイズ後、封入されなかった薬剤を除去するために、リポソームを注射用の水に対してクロス濾過した。クロス濾過の終了時に、スクロースを約９％の濃度で原体に添加した。付加的な緩衝賦形剤（ｂｕｆｆｅｒ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）を所望の濃度まで添加（表１Ｃ）し、溶液のｐＨを調整した。リポソーム溶液を０．２μｍ　ポリエーテル　スルホン（ＰＥＳ）フィルターを介して濾過した。それらの製剤の試験結果のいくつかを表１Ｃに示す。前記製剤の安定性データを表１Ｄに挙げる。前記製剤は、２〜８℃で少なくとも１ヶ月安定である。
【００４８】
［実施例２］
《４つのリポソーム製剤の単回用量薬物動態》
単回静脈内大量瞬時投与後のラットにおいて、遊離ＧＷ１８４３および４つの異なるＧＷ１８４３のリポソーム製剤（表１Ａを参照 ； ＧＣ−１００７−２７， ＧＣ−１０２０−３６， ＮＡ−１０２２−６３Ａ， およびＮＡ １０２２−５９Ａ）の血漿薬物動態を比較する。前記リポソーム製剤は、リポソームをロードするために使用されたｐＨにおいて差があった。ＮＸ１８４３ロット番号 ＧＣ−１００７−２７、ＧＣ−１０２０−３６、ＮＡ−１０２２−６３ＡおよびＮＡ １０２２−５９Ａは、それぞれｐＨ ７．０，７．４，７．３ および ７．５でロードされた。
【００４９】
＜材料および方法＞
合計１５のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを本試験に使用した。各ラットは、約２５０グラムと計量された。３個体の動物を各グループ（全体で５つのグループ）に割り当てた。イソフルレン（ｉｓｏｆｌｕｒｅｎｅ）麻酔下で個々の動物を計量し、そして尾静脈に静脈内大量瞬時投与により１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投薬した。ＥＤＴＡ血液サンプルを、イソフルレン麻酔下の間に表２に示したタイムポイントで採取し、そして即座に血漿へと処理した。血漿を分析に供するまで−２０℃で保存した。
【００５０】
血漿・サンプルを、調製して未確認（ｎｏｎｖａｌｉｄａｔｅｄ）ＨＰＬＣアッセイ用いてＧＷ１８４３を分析した。血漿蛋白質のメタノール沈殿の後、可溶性ＧＷ１８４３をＣ−１８逆相カラムクロマトグラフィーで分離した。アイソクラチックな方法で分離を達成した。ランニング緩衝液は、８０％のアセトニトリルおよび２０％の１００ｍＭ酢酸アンモニウムｐＨ ＝ ５．３から構成されたものであった。ＧＷ１８４３濃度に対するピーク下面積を、標準曲線を作成するために使用した。
【００５１】
薬物動態パラメータを非コンパートメント分析（ｎｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ） （ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ バージョン １．５）で決定した。各々のグループの薬物動態パラメータを、時間値に対する平均濃度を使用して決定した。以下のパラメータを計算した：　最大血漿濃度（Ｃｍａｘ、Ｍａｘｉｍｕｍ ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ）； 血漿濃度に対して無限時間まで外挿した時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ、ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｖｅｒｓｕｓ ｔｉｍｅ ｃｕｒｖｅ ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｉｎｇ ｔｏ ｉｎｆｉｎｉｔｅ ｔｉｍｅ ）または血漿濃度に対して最終タイムポイントまで外挿した時間曲線下の面積 （ＡＵＣｌａｓｔ）； 排除半減期（Ｅｌｉｍ． Ｔｌ／２、　ｅｌｉｍａｔｉｏｎ ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ ） ； 平均滞留時間（ＭＲＴ、　ｍｅａｎ ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ ｔｉｍｅ ） 血漿・クリアランス（Ｃｌ、　ｐｌａｓｍａ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ） および定常状態分布容積（Ｖｓｓ、　ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｔ ｓｔｅａｄｙ ｓｔａｔｅ ）。
【００５２】
＜結果＞
各々の用量群に対する血漿濃度を表２に要約する。計算した薬物動態パラメータを表３に示す。
【００５３】
《非コンパートメント分析》
非コンパートメント分析では、基礎をなす薬物動態モデルについて如何なる仮定もとらなかった。血漿中の最大達成濃度 （Ｃｍａｘ）の推定値は、リポソーム製剤に対して１５．５ から ２４．８μｇ／ｍＬの範囲、および遊離薬剤に対して １．３ μｇ／ｍＬの範囲であった。４つ全てのリポソーム製剤の推定される排除半減期 （Ｅｌｉｍ． ｔ１／２）は、遊離薬剤に対するものより顕著に大きいものだった。前記リポソーム製剤の排除半減期は、全て約１８．５時間であり、一方、遊離薬剤は約０．５時間の排除半減期を示した。
【００５４】
リポソーム製剤において、血漿濃度に対する時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ）は、２６６，７４０ から ４６２，９２０ （ｈ ｘ ｎｇ／ｍＬ）の範囲であった、一方で遊離薬剤がちょうど２６３ （ｈ ｘ ｎｇ／ｍＬ）であったことと比較される。この後者の結果は、血漿・クリアランスに反映されており、血漿・クリアランスは前記リポソーム製剤に対し２．１６ から ３．７５ ｍＬ／ｈの範囲、遊離薬剤に対しては３，８０５ ｍＬ／ｈの範囲であった。
【００５５】
最後に、前記リポソーム製剤に対する定常状態分布容積（Ｖｓｓ）は、ラットの予想された血漿容量（３１．２ ｍＬ／ｋｇ） （３）の２から３倍の範囲であったが、一方で遊離薬剤は前記リポソーム製剤より１８から３０倍にわたるより大きな容量を有していた。
【００５６】
［実施例３］
《遊離ＧＷ１８４３とＧＷ１８４３リポソーム製剤の間の血漿薬物動態パラメータの比較》
＜材料および方法＞
ＧＷ１８４３ （Ｍ．Ｗ． ５００．５１ ｇ／ｍｏｌ）は、グラクソ　ウエルカム社（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ， Ｉｎｃ．）から入手し、そして水溶状（ａｎ ａｑｕｅｏｕｓ）に懸濁した。簡潔に説明すると、６１６．７４ミリグラムのＧＷ１８４３を、１．４ｍＬの２Ｎ　ＮａＯＨに懸濁した。溶解するまで上記の溶液を混合した。上記の溶解した溶液に、３０ｍＬ塩類溶液を添加した。ｐＨを２ Ｎ　ＨＣｌで７．１５に調整した。最後に、前記溶液を塩類溶液で４６．５４５ ｍＬにした。名目上の濃度は、１３．２５ｍｇ／ｍＬであった。４．３４ｘ１０４ｃｍ−１ Ｍ−１の吸光係数に基づいて、２６６ｎｍでの０．１Ｎ水酸化ナトリウム中のＵＶ吸光度により濃度を決定した。紫外分光法による濃度は、１３．９７ｍｇ／ｍＬであった（期待値より５．４％差があった）。分光法により決定された値を、ＨＰＬＣアッセイの標準値として利用した。ＮＸ１８４３ロットＳＭＣ−９９１−９６（表１Ａを参照のこと）は、精度管理溶液（ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を作成するために使用された。
【００５７】
３４３．９１から４２０．１９グラムと計量された雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、本試験に使用した。本試験の生体実験フェーズ（ｉｎ−ｌｉｆｅ ｐｈａｓｅ）は、動物の福祉および保護のためのガイドライン（実験動物の保護および使用のためのＮＲＣ 発行ガイド、１９９６）に従ってコロラド州のボールダー（Ｂｏｕｌｄｅｒ Ｃｏｌｏｒａｄｏ）で実施された。ＩＡＣＵＣ条約議定書番号Ｎ９８０１０号。動物は、治療前および治療期間、食物および水を自由に摂取させた。
【００５８】
ＮＸ１８４３で治療した個々の動物を計量し、イソフルラン麻酔下で尾静脈へ静脈内大量瞬時投与により１ ｍｇ／ｋｇ体重の用量を投与した。
【００５９】
動物がイソフルラン麻酔下の間、一連のＥＤＴＡ−血液サンプル（０．５ ｍＬ）を、ＧＷ１８４３群への投与後の５，１５，３０ および ４５ 分， 並びに１，１．５ および ２時間で採取した。ＮＸ１８４３群に対し、一連のＥＤＴＡ−血液サンプル（０．５ ｍＬ）を、投与後の１０，３０ および ９０ 分、並びに ４，８，２４，３２，４８，７２ および９６時間で採取した。前記ＥＤＴＡ−血液サンプルを即座に血漿へと調製し、血漿・サンプルを分析に供するまで−２０℃で保存した。
【００６０】
アイソクラティック逆相高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）処理を、ラットＥＤＴＡ−血漿の総ＧＷ１８４３濃度の迅速分析に使用した。血漿蛋白質のメタノール沈殿（血漿１部に対し、メタノール２部）に続いて、前記蛋白質を１４，０００ ｘ ｇでの１０分間の遠心分離により除去した。ガードカラムで改造したＺＯＲＢＡＸ ＥｃｌｉｐｓｅＴＭ ＸＢＤ−Ｃ１８ カラム （３ｍｍ ｘ １５ ｃｍ）を、可溶性ＧＷ１８４３（注射液容積２０μＬ）を分離するために使用した。ＨＰＬＣ緩衝液は、８０％の１００ｍＭ　酢酸アンモニウムｐＨ ５．３、および２０％のアセトニトリルから構成され、そして流速は０．４ｍＬ／分であった。トータルランタイムは７分であった、ＧＷ１８４３は２６４ｎｍでの紫外吸光度によって検出および定量された。標準曲線は、遊離ＧＷ１８４３をスパイクされたラットＥＤＴＡ−血漿から構成されており、一方、精度管理サンプルはＮＸ１８４３をスパイクされたラットＥＤＴＡ−血漿から構成されていた。標準曲線の範囲は、０．１から３０．０μｇ／ｍＬであった。
【００６１】
ＧＷ１８４３ もしくはリポソーム 封入ＧＷ１８４３のＩ．Ｖ．投与後に総ＧＷ１８４３の薬物動態パラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ （バージョン １．５）を用いた非コンパートメント法により評価した。ｌｏｇ／リニア　トラポゾイド規則（ｔｒａｐａｚｏｉｄａｌ ｒｕｌｅ）を使用した。非コンパートメント分析において、遊離ＧＷ１８４３に対する排除フェーズの推定に３つ全てのタイムポイントを利用し、一方でＮＸ１８４３の排除半減期を推定するために最後の５タイムポイントを利用した。Ｃｍａｘ値は、ゼロ時間への外挿により推定された。薬物動態パラメータは、本試験の各々の動物に対して決定された。各々のグループにおいて得られた値から、各々のパラメータの平均およびＳＤが決定された。推定されるパラメータは下記のものを含む：
2004503491.tif 000012
投与後のＧＷ１８４３の観察されたクリアランス（ＣＬ）は、下記のように計算された：
ＣＬ ＝ Ｄｏｓｅｉｖ／ＡＵＣ
治療群の比較を、同一実験において得られたデータの独立ｔ−検定により実行した。＜０．０５のｐ−値が有意であると認められた。検定をＧｒａｐｈＰａｄ Ｉｎｓｔａｔバージョン１．０（ＧｒａｐｈＰａｄ ソフトウェア）を使用して実行した。
【００６２】
＜結果＞
《ＧＷ１８４３およびリポソーム封入ＧＷ１８４３（ＮＸ１８４３）の非コンパートメント分析》
ＧＷ１８４３用量群の総血漿濃度を表４に要約し、一方、リポソーム封入 ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３ ； ＳＭＣ−９９１−９６）用量群の対応する総血漿濃度を表５に要約する。ＧＷ１８４３ およびＮＸ１８４３のいくつかの計算された薬物動態パラメータの推定値を、それぞれ表６および表７に示す。
【００６３】
ＧＷ１８４３用量群の薬物動態値は、３つ全ての測定されたＧＷ１８４３血漿濃度から推定された終端半減期（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）に基づいている。これは恐らく半減期の過小評価と、それゆえにＡＵＣの若干の過小評価とを生じる。
【００６４】
しかしながら、かかるアプローチは、この用量レベルでの限定的なデータからの評価においては必然的なものである。
【００６５】
図１は、２つの用量群の時間曲線に対するログ（ｌｏｇ）濃度を示す。
ＮＸ１８４３を投与された動物の血漿における最大達成濃度（Ｃｍａｘ）の推定値は、総ＧＷ１８４３の２２．１から２８．７μｇ／ｍＬの範囲にわたった。これらの値は、遊離ＧＷ１８４３ （範囲 １．６２ から １．９９ μｇ／ｍＬ）で観察されたものより顕著に大きいものであった。前記リポソーム製剤の推定された（平均±ＳＤ）終端の半減期（Ｅｌｉｍ． ｔ１／２）は、１６．６±０．８６時間であった、一方で遊離薬剤は０．１４２±０．００７ 時間の排除半減期を示した。前記リポソーム製剤のＧＷ１８４３血漿濃度に対する時間曲線下の面積 ［ＡＵＣ （０−ｉｎｆ）］ は、５２４±５５．９ ｈｒ． μｇ／ｍＬ であった、この値は遊離薬剤に対する値である０．２７±０．０２８ ｈｒ． μｇ／ｍＬと比較された。後者の結果は、血漿・クリアランスに反映しており、該クリアランスは前記リポソーム製剤で１．９３±０．２０６ ｍＬ／ｈｒ、および遊離薬剤で３，７４０±４５６ ｍＬ／ｈｒであった。最後に、前記リポソーム製剤の定常状態分布容積（Ｖｓｓ）は、ラットの予想された血漿容量（３１．２ ｍＬ／ｋｇ） （３）の２倍未満であったが、一方で遊離薬剤は前記リポソーム製剤より１４．６倍のオーダーに分布するより大きな容量を有していた。
【００６６】
ＧＷ１８４３のリポソーム封入は、遊離薬剤と比較して総血漿への出現において、約１，９４０倍の増加を呈した。この値は、１，０００ から １，７６０倍の増加が観察された実施例２で得られた値に近似している。
【００６７】
全般的に、本実施例で観察されたＮＸ１８４３の薬物動態パラメータは、実施例２で観察されたものに類似していた。
【００６８】
本実施例におけるＮＸ１８４３製剤に対して決定された１８．０時間の平均終端半減期は、実施例２で試験した４つのＮＸ１８４３製剤に対して得られた任意の終端半減期（１７．７ から ２０．２時間の範囲）から顕著に異なるものではなかった。
【００６９】
［実施例４］
《単一ＮＸ１８４３製剤の２つの独立ロットの比較》
ＮＸ１８４３ ロット番号 ＳＭＣ−９９１−９６ および ＳＭＣ−１０９２−０９ （表１Ａを参照）を使用した。
【００７０】
２０７．１６から２１９．２７グラムと計量された雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、本試験に使用した。本試験の生体実験フェーズは、動物の福祉および保護のためのガイドライン（実験動物の保護および使用のためのＮＲＣ 発行ガイド、１９９６）に従ってコロラド州のボールダー（Ｂｏｕｌｄｅｒ Ｃｏｌｏｒａｄｏ）で実施された。ＩＡＣＵＣ条約議定書番号Ｎ９８０１０号。動物は、治療前および治療期間、食物および水を自由に摂取させた。
【００７１】
個々の動物は、イソフルラン麻酔下の間、体重を計量され、尾静脈に静脈内大量瞬時投与により１ ｍｇ／ｋｇ体重の用量を投与された。
【００７２】
イソフルラン麻酔下の間、一連のＥＤＴＡ−血液サンプル（０．５ ｍＬ）を、投与後の１０，３０ および ９０分， 並びに４，８，２４，３２，４８，７２ および ９６時間（公称時間 ｎｏｍｉｎａｌ ｔｉｍｅｓ）で採取した。ＥＤＴＡ−血液サンプルを、即座に血漿に調製し、分析に供するまで−２０℃で保存した。
【００７３】
血漿中のＧＷ１８４３の総濃度を、実施例３のように決定した。
【００７４】
リポソーム封入ＧＷ１８４３の静脈内投与後に総ＧＷ１８４３に対する薬物動態パラメータを実施例３に記載のとおりに評価した。
【００７５】
治療群の比較を、データの独立ｔ−検定により実行した。ボンフェロニ補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）が利用される複数比較が実行された場合を除き、＜ ０．０５のｐ−値が有意であると考えられた。検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｉｎｓｔａｔバージョン１．０（ＧｒａｐｈＰａｄ ソフトウエア）を使用して実行された。
【００７６】
＜結果＞
リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）　ロットＳＭＣ−１０９２−０９用量群の血漿濃度を表８に要約する、一方、ＮＸ１８４３ ロットＳＭＣ−９９１−９６用量群に対応する血漿濃度を表９に要約する。ＮＸ１８４３　ロットＳＭＣ−１０９２−０９ および ＮＸ１８４３　ロットＳＭＣ−９９１−９６に対するいくつかの計算された薬物動態パラメータの推定値を、それぞれ表１０および表１１に示す。
【００７７】
ＮＸ１８４３ ロットＳＭＣ−１０９２−０９を投与された動物の血漿における最大達成濃度（Ｃｍａｘ）の推定値は、総ＧＷ１８４３ （平均＝１９．１ μｇ／ｍＬ）にうちの１６．９ から ２３．１ μｇ／ｍＬの範囲であった。ＮＸ１８４３ ロットＳＭＣ−９９１−９６を投与された動物の血漿における前記Ｃｍａｘの推定値は、総ＧＷ１８４３ （平均＝１６．８ μｇ／ｍＬ）のうちの１５．０ から １８．４ μｇ／ｍＬの範囲であった。各々の群に対する平均Ｃｍａｘ値において、観察された差は、有意な差 （ｐ＝０．２１６１）ではなかった。ロットＳＭＣ−１０９２−０９およびロットＳＭＣ−９９１−９６に対して得られた推定された（平均±ＳＤ）終端の半減期（Ｅｌｉｍ． ｔ１／２）は、それぞれ１２．２±０．０６ ｈｒおよび １１．７±０．９６ ｈｒであった。２つのロットに対して得られた半減期において観察された差は、有意な差 （ｐ＝０．３３８６）ではなかった。同様に、ロットＳＭＣ−１０９２−０９ （７０．８ ｍＬ／ｋｇ） およびロットＳＭＣ−１０９２−９９１−９６ （６５．８ ｍＬ／ｋｇ）のＶｓｓの平均に対して観察された差は、有意（ｐ＝０．２７８４）ではなかった。最後に、２ロット［ＳＭＣ−１０９２−０９ に対して２７６ ±２１．９ μｇ． ｈｒ／ｍＬ および ＳＭＣ−９９１−９６に対して２９３±５３．８ μｇ． ｈｒ／ｍＬ　（ｐ＝０．５７９７）］のＡＵＣ （０−ｉｎｆ）間、または、２ロット［ＳＭＣ１０９２−０９に対して３．６５±０．２８ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ　および ＳＭＣ−９９１−９６に対して３．５０±０．５９ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ　（ｐ＝０．６６２３）］ のクリアランス間で観察された差は、有意ではなかった。
【００７８】
本実施例のロットＳＭＣ−９９１−９６に対して得られたいくつかの薬物動態パラメータは、実施例３において、この同一ロットに対して得られたものとは有意な差が認められた。双方の実施例は、同一の用量、投与経路およびラット系統を使用した（実施例３を参照）。両側、独立ｔ−検定を、５つの異なる薬物動態パラメータの統計学的な有意差を検定するために使用した。５つの比較が実行されたので、ｐ ＜ ０． ０１の値が有意差に必要であるようにボンフェロニ補正を行った。
【００７９】
平均において観察された差は、検定された５つ全てのパラメータに対して統計学的に有意であった。統計学的に有意な差は、血漿・クリアランス （ｐ＝０．００２４）， 定常状態分布容積 （ｐ＝０．００２７）， 血漿終端半減期 （ｐ＝０．０００３）， Ｃｍａｘ （ｐ＝０．００２２） および ＡＵＣ （０−ｉｎｆ） （ｐ＝０．００１０）に対して観察された。
【００８０】
本実施例のＡＵＣ （０−ｉｎｆ）は、実施例３で達成されたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）の５５％であった。最初の２４時間のＡＵＣ ［ＡＵＣ （０−２４）］ の実験は、本実施例におけるロットＳＭＣ−９９１−９６（２０６±２９．４ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）が、実施例３における同一ロットで達成されたＡＵＣ （０− ２４）（３２０±２７．５ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）の単に６４％であったことを示している。このデータは、血漿暴露における差の大部分が最初の２４時間に観察されたことを示していた。しかしながら、実施例３においてＡＵＣ （０−２４） はＡＵＣ （０−ｉｎｆ）の６１％であった、一方、本試験でそれは７０％であった。この結果は、本試験で認められた速い終端フェーズも全般的な血漿暴露の減少化に役割を演じていることを示唆している。
【００８１】
如何なる統計学的に有意な薬物動態上の差も、ロットＳＭＣ−１０９２−０９ および ＳＭＣ−９９１−９６の間で観察されなかった。
【００８２】
統計学的に有意な薬物動態上の差は、ロットＳＭＣ−９９１−９６に対する本実施例および実施例３の結果の間に観察された。
【００８３】
本実施例および実施例３の間の動物体重における差が、ロットＳＭＣ−９９１−９６に対する試験間で観察された薬物動態上の差に寄与したようである。
【００８４】
［実施例５］
《異なるリポソーム製剤の比較および血漿薬物動態における動物重量の影響の決定》
＜材料および方法＞
ＮＸ１８４３ ロット番号ＳＭＣ−１０９２−０９， ＡＴ−１０８４−９７Ｂ， ＡＴ−１０８４−９１Ｂ および ＡＴ−１０８４−８８Ｂを使用した。
【００８５】
２０７．７８ から ２２８．７６グラムと計量された雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、全てのロットを評価するために使用した。加えて、４０３．１２ から ４１８．２８グラムと計量された大きな雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、大きなラットにおいてロットＡＴ−１０８４−９１Ｂを評価するために使用した。本試験の生体実験フェーズは、動物の福祉および保護のためのガイドライン（実験動物の保護および使用のためのＮＲＣ 発行ガイド、１９９６）に従ってコロラド州のボールダー（Ｂｏｕｌｄｅｒ Ｃｏｌｏｒａｄｏ）で実施された。ＩＡＣＵＣ条約議定書番号Ｎ９８０１０号。動物は、治療前および治療期間、食物および水を自由に摂取させた。
【００８６】
個々の動物は、体重を計量され、尾静脈に静脈内大量瞬時投与により１ ｍｇ／ｋｇ体重の用量を投与された。
【００８７】
一連のＥＤＴＡ−血液サンプル（０．５ ｍＬ）を、投与後の１０，３０ および ９０分， 並びに４，８，２４，３２，４８，７２ および ９６時間に採取した。ＥＤＴＡ−血液サンプルを、即座に血漿に調製し、分析に供するまで−２０℃で保存した。血漿サンプルは、イソフルラン麻酔下で採取した。
【００８８】
血漿中のＧＷ１８４３の総濃度を、実施例３のように決定した。
【００８９】
ＧＷ１８４３もしくはリポソーム封入ＧＷ１８４３の静脈内投与後に総ＧＷ１８４３に対する薬物動態パラメータを実施例３に記載のとおりに評価した。
【００９０】
統計学的な検定を、独立のデータに対する一方向ＡＮＯＶＡ（ｏｎｅ ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）により実行した。＜ ０．０５のｐ−値が有意と考えられた。検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｉｎｓｔａｔバージョン１．０（ＧｒａｐｈＰａｄ ソフトウエア）を使用して実行された。
【００９１】
＜結果＞
動物を５群のうちの１群に割り当てる（各々の群において、ｎ＝４）。Ａ〜Ｄ群は、２２３グラムの平均重量を有する動物から構成され、一方でＥ群は４０９グラムの平均重量を有する動物から構成されていた。各々の群の動物は、１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量のリポソーム封入ＧＷ１８３４３製剤を投与された。Ａ群は、ロットＡＴ−１０８４−９７Ｂ〔塩基性内部ｐＨ（ａ ｂａｓｉｃ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｐＨ）を含む製剤〕を投与された。Ｂ、ＣおよびＥ群は、それぞれ標準ＮＸ１８４３製剤を投与された。Ｂ群は、ロットＳＭＣ−１０９２−０９からの被験物質（ｔｅｓｔ ａｒｔｉｃｌｅ）を投与され、一方、ＣおよびＥ群は、ロットＡＴ−１０８４−９１Ｂからの被験物質を投与された。Ｄ群の動物は、ＡＴ−１０８４−８８Ｂ〔高脂質薬剤比（ａ ｈｉｇｈ ｌｉｐｉｄ ｔｏ ｄｒｕｇ ｒａｔｉｏ）からなるロット〕を投与された。各々の用量群における各々の動物に対する総血漿ＧＷ１８４３濃度を表１２〜１６に示す。いくつかの計算された薬物動態パラメータ（各々の用量群における各々の動物に対する非コンパートメント分析により決定された）の推定値を、表１７〜２１に示す。５つ全ての群のクリアランス ［用量 （μｇ／ｋｇ）／ＡＵＣ （０− ｉｎｆ） （μｇ． ｈｒ／ｍＬ））において、一方向のＡＮＯＶＡを実行した。この検定は、各群間で有意な差を示した（ｐ ＜ ０．０００１）。７つの後検定（ｐｏｓｔ ｔｅｓｔｓ）を実行した（ＡおよびＢ、ＡおよびＣ、ＢおよびＣ、ＢおよびＤ、ＢおよびＥ、ＣおよびＤ、並びにＣおよびＥ群の間で）、それらの結果は以下で議論される。
【００９２】
《同一ＮＸ１８４３製剤の２つの独立ロットの薬物動態パラメータの試験内分析（Ｉｎｔｒａ−Ｓｔｕｄｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ）》
ＮＸ１８４３の同一標準リポソーム製剤の２つの独立のロットを、同等サイズ（〜２２０グラム）のラットを使用して比較した。Ｂ群の動物はロットＳＭＣ−１０９２−０９を投与され、一方、Ｃ群の動物はロットＡＴ−１０８４−９１Ｂを投与された。Ｂ群で得られた血漿終端半減期（１０．６±１．１０ｈｒ）は、Ｃ群で得られた前記終端半減期（１１．７±０．５３５ ｈｒ）と明らかに異なるものではなかった。Ｂ群に対して得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）（２５３±２８．４ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）はＣ群に対して得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）（３４７±５１．２ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）より低いようであったが、クリアランスに対する一方向ＡＮＯＶＡ分析後の後検定は、Ｂ群とＣ群の間に如何なる統計学的な有意差も示さなかった（ｐ＝０．０６０６）。
【００９３】
この血漿・クリアランス結果も「境界的有意ｍａｒｇｉｎａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ」とみなされるが、ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）の同一リポソーム封入製剤の独立ロットの類似する試験内比較は明確な結果を示した（実施例４）。本試験において、一群の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは１ ｍｇ／ｋｇのロットＳＭＣ−１０９２−０９を投与され、一方で他群の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは１ ｍｇ／ｋｇのロットＳＭＣ−９９１−９６を投与された。本試験は、血漿・クリアランス（ｐ＝０．６６２３）を含む分析された任意の血漿薬物動態パラメータにおいて、前記２群の間に統計学的に有意差を示さなかった。
【００９４】
表２２は、ＮＸ１８４３の標準製剤の３つの独立ロットに対する２つの試験から得られた総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータを要約する表である（実施例４および５）。このデータの全ては、被験物質の１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の同等の重量の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから決定されたものである。全体としてデータに照らしてみて、総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータにおける如何なるロット間の差も、同一リポソーム製剤の異なるロット間で観察されなかった。
【００９５】
《同等の体重のラットにおけるＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）の標準リポソーム製剤の同一ロットによる２試験から得られた薬物動態パラメータの試験間分析》
本実施例において、ラット（Ｂ群）はロットＳＭＣ−１０９２−０９の１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量を投与された。実施例４において、同様の体重のラット群もロットＳＭＣ−１０９２−０９の１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量を投与された。本実施例および実施例４（試験　Ｒ９９０１９８−１３８Ｅ）において、本ロットの被験物質を投与されたラットに対して得られた総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータを表２２に示す。試験間で如何なる明白な差も検出できない。本実施例のＢ群に対して得られた血漿終端半減期（試験 Ｒ２０００００７−１３８Ｅ） （１０．６±１．１０ ｈｒ） は、実施例４におけるＳＭＣ−１０９２−０９群に対して得られた前記終端半減期（試験 Ｒ９９０１９８−１３８Ｅ） （１２．２±０．０６ ｈｒ）と明白に異なるものではなかった。同様に、本実施例のＢ群に対して得られた血漿・クリアランス （３．９９±０．４１７ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）は、実施例４のＳＭＣ−１０９２−０９群に対して得られた血漿・クリアランス（試験 Ｒ９９０１９８−１３８Ｅ） （３．６５±０．２８３ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）と明白に異なったものではなかった。
【００９６】
《高内部ｐＨおよび高脂質薬剤比製剤》
２つの別のリポソームＧＷ１８４３製剤の薬物動態プロファイルを約２２０グラムの動物において試験した。Ａ群は、高内部ｐＨを含有する製剤を投与され、一方でＤ群は、増大した脂質薬剤比（ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｉｐｉｄ ｔｏ ｄｒｕｇ ｒａｔｉｏ）を含有する製剤を投与された。比較のため、ＢおよびＣ群もまた〜２２０グラムの動物から構成され、ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）の標準リポソーム製剤の２つの独立ロットを投与された。
【００９７】
高内部ｐＨ群と標準製剤を投与された２群に対して観察された血漿薬物動態パラメータの間に如何なる明白な差もなかった。注目すべきことは、Ａ群の終端半減期 （９．８３±０．２１５ ｈｒ）が、Ｂ群 （１０．６±１．１０ ｈｒ）もしくはＣ群（１１．７±０．５３５ ｈｒ）に対して観察された終端半減期と明白に異なっていなかったことである。同様に、Ａ群に対して得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）（２８３±２３．７ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）は、Ｂ群（２５３±２８．４ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）とＣ群（３４７±５１．２ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）に対して得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）の間であった。クリアランスに対する一方向ＡＮＯＶＡ分析後の後検定は、Ａ群（３．５６±０．２９５ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）およびＢ群（３．５０±０．５８９ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）の間、或いは、Ａ群　およびＣ群（２．９４±０．４８９ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）の間のクリアランスにおいて、如何なる統計学的に有意な差も示さなかった。
【００９８】
高脂質薬剤比群（Ｄ群）で観察された血漿薬物動態パラメータと、標準製剤を投与された２群（ＢおよびＣ群）との間に明白な差が存在した。注目すべきことは、Ｄ群に対する終端半減期（１１．７±１．８８ ｈｒ）が、Ｂ群（１０．６±１．１０ ｈｒ）もしくはＣ群（１１．７±０．５３５ ｈｒ）に対して観察された終端半減期とは明白な差がなかったことである。しかしながら、Ｄ群（１６９±２８．８ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）に対し得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）は、Ｂ群（２５３±２８．４ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）もしくはＣ群（３４７±５１．２ μｇ． ｈｒ／ｍＬ）に対して得られたＡＵＣ （０−ｉｎｆ）より小さいようであった。クリアランスに対する一方向ＡＮＯＶＡ分析後の後検定は、Ｄ群およびＢ群（ｐ＝０．００３８）の間、並びに、Ｄ群およびＣ群（ｐ＝０．０００５）の間に統計学的に有意な差を示した。
【００９９】
《大ラットと小ラットにおけるＮＸ１８４３薬物動態》
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける上述の薬物動態試験の実験（実施例２、３、および実施例４）は、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）の１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３血漿・クリアランス（ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）が、動物重量と共に変化し得ることを示した。この仮説を検証するため、本試験において雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの２群に同一ロットのＮＸ１８４３の１ ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量を投与した（ＣおよびＥ群）。動物重量は各群間で異なっており、従ってＣ群の体重は平均２２６グラム、一方Ｅ群では平均４０９グラムであった。算出された薬物動態パラメータの検定は、根拠のある差（ｐｒｏｂａｂｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ）を示した。例えば、Ｅ群の動物の血漿終端半減期は、Ｃ群の動物（１１．７±０．５３５ ｈｒ）より長かった（１４．０±２．０３ ｈｒ）。同様に、Ｅ群の動物のＣｍａｘは、Ｃ群の動物（２０．４±１．２３ μｇ／ｍＬ）より大きかった（２５．２±１．３３ μｇ／ｍＬ）。また、これらの差はＣ群とＥ群の間のＡＵＣ （０−ｉｎｆ）における差に反映される。Ｅ群の動物は、５４９±５８．０ μｇ． ｈｒ／ｍＬのＡＵＣ （０−ｉｎｆ）を有し、一方Ｃ群の動物は３４７±５１．２ μｇ． ｈｒ／ｍＬのＡＵＣ （０−ｉｎｆ）を有した。しかしながら、Ｃ群とＥ群の間のクリアランスにおける一方向ＡＮＯＶＡ分析は、「境界的有意」な結果（ｐ＝０．０５２２）のみを示した。しかし、上述の実施例 （試験番号 Ｒ９９０１６４−１３８Ｅ および Ｒ９９０１９８−１３８Ｅ）の結果と組み合わせた場合、大動物と小動物の間の差は明瞭となる。表２３は、大ラットおよび小ラット双方で試験したＮＸ１８４３の同一製剤の２つの独立ロットから得られた血漿薬物動態パラメータの組み合わせの結果を示している。大動物における２つの実験は、類似するクリアランス値、１．９３±０．２０７ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ および １．８４±０．１９１ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇを示した。しかしながら、小動物においては２つの独立した実験から高クリアランス値が得られた（３．５０±０．５８９ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ および ２．９４±０．４８９ ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）。従って、組み合わせのデータから、クリアランスに対する値は、μｇ／ｋｇを基礎に決定される場合とは異なることは明らかである。しかしながら、もしクリアランスが総用量 （ｍＬ／ｈｒ） を使用して決定されれば、得られたクリアランス値は大動物および小動物に対し類似するものである。表２３に示される総用量法（ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｄｏｓｅ ｍｅｔｈｏｄ）によるクリアランス値の再計算は、約２２０グラムの動物から構成される２つの試験に対して０．７３ｍＬ／ｈｒおよび０．６５ ｍＬ／ｈｒを提示し、約４００グラムの動物から構成される２つの試験に対して０．７５ ｍＬ／ｈｒ および ０．７４ ｍＬ／ｈｒを提示する。
【０１００】
同等サイズの動物において、如何なる統計学的に有意な差も、本実施例と実施例４において得られたリポソーム封入ＧＷ１８４３製剤 （ロット ＳＭＣ−１０９２−０９）の血漿・クリアランス（ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）の間で観察されなかった。
【０１０１】
同等サイズの動物において、血漿・クリアランス（ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ）における如何なる統計学的に有意な差も、同一リポソーム封入ＧＷ１８４３ 製剤（ＮＸ１８４３）の２つの独立ロット（ＳＭＣ−１０９２−０９ および ＡＴ−１０８４−９１Ｂ）間で観察されなかった。
【０１０２】
標準製剤に対する血漿・クリアランス（ｍＬ／ｈｒ． ｋｇ） の差は、動物体重に基づいて観察される。この結論は、本実施例の大動物と小動物におけるロットＡＴ−１０８４−９１Ｂの比較、並びに本実施例および実施例４の小動物におけるロットＳＭＣ−１０９２−０９の比較、並びに実施例４の小動物および実施例３の大動物におけるロットＳＭＣ−９９６−９１の比較に基づいている。従って、実施例４において提出されるＰＫ差を説明する仮説が証明された。
【０１０３】
血漿・クリアランスは、［総用量 （μｇ）／ＡＵＣ （０−ｉｎｆ） （μｇ． ｈｒ／ｍＬ）］ ＝ ｍＬ／ｈｒとして計算される場合、大ラットおよび小ラット間で一定のようである。
【０１０４】
同等サイズの動物において、高脂質薬剤比製剤（ロット ＡＴ１０８４−８８Ｂ）は、標準製剤（ロット ＳＭＣ１０９２−０９ および ＡＴ−１０８４−９１Ｂ）または高内部ｐＨ製剤（ロット ＡＴ−１０８４−９７Ｂ）よりも速く排除されるが、遊離ＧＷ１８４３に比べると顕著により緩慢に血漿から排除される（実施例２および３）。
【０１０５】
同等のサイズの動物において、高内部ｐＨ製剤 （ロット ＡＴ−１０８４−９７Ｂ）は、標準製剤（ロットＳＭＣ−１０９２−０９ および ＡＴ−１０８４−９１Ｂ）に類似した血漿・クリアランス値を有していた。従って、本製剤も遊離ＧＷ１８４３に比べ顕著により緩慢に血漿から排除された（実施例２および３）。
【０１０６】
［実施例６］
《単回静脈内大量瞬時投与後の血漿薬物動態》
本実施例の目的は、リポソーム封入ＧＷ１８４３の別製剤の分析に拡大するためであった。ここでは、４： １　ＨＳＰＣ対コレステロール　モル比からなる製剤が試験された。他の製剤は、２： １モル比からなるものであった。コレステロールは、リポソーム構造を安定化することが知られている、それ故にコレステロール比に対して増大したＨＳＰＣが血漿・クリアランスを増大させることが期待される。
【０１０７】
＜結果＞
ＮＸ１８４３　ロット番号ＡＴ−１１０５−３２（表１Ａ）が使用された。
２４４．５７ から ２５７．１９グラムと計量された雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットが本試験に使用された。本試験の生体実験フェーズは、動物の福祉および保護のためのガイドライン（実験動物の保護および使用のためのＮＲＣ 発行ガイド、１９９６）に従ってコロラド州のボールダー（Ｂｏｕｌｄｅｒ Ｃｏｌｏｒａｄｏ）で実施された。動物は、試験前および試験期間、食物および水を自由に摂取させた。
【０１０８】
個々の動物は、体重を計量され、尾静脈に静脈内大量瞬時投与により１ ｍｇ／ｋｇ体重の用量を投与された。
【０１０９】
ＥＤＴＡ−血液サンプル（０．５ ｍＬ）を、投与後の１０，３０ および ９０分， 並びに４，８，２４，３２，４８，および ７２ 時間に採取した。動物が麻酔下（イソフルラン）にある間にサンプルを採取し、そしてＥＤＴＡ−血液サンプルを即座に血漿に処理し、血漿・サンプルを分析に供するまで−２０℃で保存した。
【０１１０】
血漿中のＧＷ１８４３の総濃度を実施例３の通りに決定した。
リポソーム封入ＧＷ１８４３のｉ． ｖ投与後に総ＧＷ１８４３に対する薬物動態パラメータを実施例３に記載のように評価した。
【０１１１】
治療群の比較を、同一の実験において得られたデータの独立ｔ−検定により実行した。＜ ０．０５のｐ−値が有意であると考えられた。検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｉｎｓｔａｔバージョン１．０（ＧｒａｐｈＰａｄ ソフトウエア）を使用して実行された。
【０１１２】
＜結果＞
各々の動物に対する総ＧＷ１８４３血漿濃度を表２４に要約する。リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）　４： １　ＨＳＰＣ対コレステロール　モル比製剤に対するいくつかの計算された薬物動態パラメータの推定値を表２５に示す。
【０１１３】
血漿における総ＧＷ１８４３の最大達成濃度（Ｃｍａｘ）の推定値は、１４．４ μｇ／ｍＬ （ラット＃２） から １７．２ μｇ／ｍＬ （ラット＃３）の範囲であった。４つ全ての動物に対する平均Ｃｍａｘは、１５．８ μｇ／ｍＬであった。推定（平均±ＳＤ）される終端の半減期（Ｅｌｉｍ． ｔ１／２）は、９．９２±１．９８時間であり、まさに標準リポソーム封入ＧＷ１８４３製剤に対して観察された範囲内であった。総ＧＷ１８４３血漿濃度に対する時間曲線下の面積 ［ＡＵＣ （０−ｉｎｆ）］は、２１３±２２．８ ｈｒ． μｇ／ｍＬであった。この曲線下面積は、標準リポソーム製剤に対して観察されたものより幾分小さいものである（２５１ から ３４２ ｈｒ． μｇ／ｍＬ）。これは、４： １　ＨＳＰＣ対コレステロール製剤に対して得られた血漿・クリアランス値に反映している（４．７４±０．４７２ ｍＬ／ （ｈｒ． ｋｇ））。ほぼ同等なサイズの動物（実施例４および５）での４実験における標準製剤の３つの異なるロットに対して得られた平均クリアランス値の範囲は、３．５０ から ３．９９ ｍＬ／ （ｈｒ． ｋｇ）であった。
【０１１４】
上述の試験は、血漿・クリアランス〔ｍＬ／ （ｈｒ． ｋｇ）に準拠する〕が動物の体重の増加と共に減少することを示した（実施例５）。本試験における動物の平均重量は２５０グラムであり、一方、標準リポソーム封入ＧＷ１８４３製剤の比較試験は、平均２２０グラム（４つの試験の動物の平均重量範囲は２１５ から ２２４グラムであった）と計量されたラットで実行された。従って、本試験において、約２２０グラムの重量を有する動物の使用は、観察された差を増大したであろう。
【０１１５】
４： １　脂質対コレステロール比からなるＮＸ１８４３製剤（ロット ＡＴ−１１０５−３２）は、標準リポソーム製剤より若干速く血漿から排除された。ロットＡＴ−１１０５−３２のクリアランスは、４．７４±０．４７２ ｍＬ／ （ｈｒ． ｋｇ）であった。ほぼ同等なサイズの動物による４実験（実施例４および５）において、標準製剤の３つの異なるロットに対して得られた平均クリアランス値の範囲は、３．５０ から ３．９９ ｍＬ／（ｈｒ． ｋｇ）であった。この製剤（ロット ＡＴ−１１０５−３２） は、遊離ＧＷ１８４３（実施例２および３を参照）と比較して顕著により緩慢に血漿から排除された。
【０１１６】
［実施例７］
《ＴＳ阻害剤ＧＷ１８４３Ｕ８９およびリポソーム製剤ＮＸ １８４３における前臨床試験》
＜方法＞
雌Ｎｕ／Ｎｕマウス （１８−２４ｇ， １０−１４ 週齢）を、Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙから入手し、マイクロアイソレータ濾過ラック（ｍｉｃｒｏｉｓｏｌａｔｏｒ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｒａｃｋｓ）内で飼育し、適宜濾過した酸性水および滅菌固形飼料で維持した。ヒト結腸腫瘍異種移植モデル （ＨＣＴ−８， チミジン　キナーゼ （ＴＫ）−／−）をヨーチェフ　Ｍ．ラスタム博士 （Ｄｒ． Ｙｏｕｃｅｆ Ｍ． Ｒｕｓｔｕｍ、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ， Ｂｕｆｆａｌｏ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）より入手し、チミジル酸シンターゼ阻害剤を評価する有用なモデルとしてイン　ハウスで樹立した。動物は、腫瘍細胞移植の１週間前に彼らの新規な生育環境に順応させた。腫瘍は、マウスの腋窩部脇側上の単一の皮下部位に、収穫された腫瘍細胞を注射することにより樹立された。前記腫瘍を約２００＋／−５０ｍｍ３のサイズになるまで成長させた。そして前記動物を体重によって、分別し、４つの動物／ケージにグループ分けした、そして永続的な個体識別のために尾に刺青を施した。各々８匹の腫瘍保持マウス（ｔｕｍｏｒ−ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ）からなるグループに、尾静脈を介してＩＶ大量瞬時注射により週用量（ｗｅｅｋｌｙ ｄｏｓｅｓ）の実験薬剤を投与した。腫瘍容積は、式、（Ｌ ｘ Ｗ２／２）および体重を使用して、直角にあてたノギス測定により決定され、毎週二回測定された。データは、体重における％変化　対　時間（日数）、および％腫瘍容積増大　対　日数としてプロットされた。
【０１１７】
実験結果から抗腫瘍活性を計算する方法は、下記に記載される：
実験データを評価するために通常使用される阻害および後退（Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）の計算：
％ Ｔ／Ｃ＝１００ｘ１−（Ｔ／Ｃ）
Ｔ ＝ 治療群の切除サイズ（ｃｕｔｏｆｆ　ｓｉｚｅ）（２グラム）に達するまでに要した（平均） 時間日数
Ｃ ＝コントロール群の切除サイズ（２グラム）に達するまでに要した（平均） 時間日数
１０％未満の％ Ｔ／Ｃ値は、顕著な活性を示す値である；および
２０％　＜ もしくは ＝である％ Ｔ／Ｃ値は中程度の活性を示す値である。
【０１１８】
％ 腫瘍成長阻害
％ ＴＧＩ＝ １００ （Ｗｃ−Ｗｔ）／Ｗｃ＝ １００ （１− Ｗｔ ／ Ｗｃ）
Ｗｃは、時間Ｘでのコントロール群の平均腫瘍重量である
Ｗｔは、時間Ｘでの治療群の平均腫瘍重量である
もし群間の開始時の腫瘍サイズが大きいならば、コントロールおよび治療群の腫瘍成長における相対的な差（ＲＷ）が最初の差を修正するために使用される。
【０１１９】
ＲＷ ＝ Ｗｉ／Ｗｏ， ここで Ｗｉ は時間Ｘでの平均腫瘍重量、およびＷｏ は初期平均腫瘍重量。
【０１２０】
％ 後退 ＝ １００ （Ｗｏ−Ｗｉ）／Ｗｏ ； ここで Ｗｏ は治療開始時の治療群の平均腫瘍重量、およびＷｉ ＝ 治療後のいくつかの時間Ｘでのその群の平均腫瘍重量。多くの場合、前記時間Ｘ＝治療の最終用量投与後２４−４８ ｈｒ。
【０１２１】
実験結果を評価するために使用した成長遅延測定：
ｓｃ成長腫瘍に対する腫瘍細胞殺傷計算：
ｌｏｇ１０ 細胞殺傷 （全体） ＝ ［Ｔ−Ｃ 値（日） ／（３． ３２）（Ｔｄ）
ここでＴ−Ｃ ＝定義した終了ポイントに至るまでの治療およびコントロールの腫瘍間の時間差日数（ｔｉｍｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｄａｙｓ）であり；Ｔｄは指数成長（１００−８００ ｍｇの範囲）しているコントロール腫瘍のログ−リニア成長プロットからの最適直線からの腫瘍容積倍化時間日数である。ネットｌｏｇ１０腫瘍細胞殺傷に対するＴ−Ｃ値の換算は、Ｔ−Ｃ値の治療期間の存続期間の引き算により算出され、そして３．３２ Ｘ Ｔｄで割り算される。
【０１２２】
ＨＣＴ−８（ＴＫ−／−異種移植モデル）
最初の実験（ＮＭＸ−４２７と指定）は、２つの異なる用量レベル（５０ および １００ｍｇ／ｋｇ／日 ｘ １７ 日）でＧＷ１８４３Ｕ８９の効果を試験した。コントロール群は、ビヒクル単独を投与された。実験は２つの用量群間で軽微な差を示し、そして双方の薬剤群はコントロールと顕著に異なっており、５０ および １００ｍｇ／ｋｇ群に対しそれぞれ３．０ および ３．３のログ細胞殺傷値を有していた。２つの持続性治癒（ｄｕｒａｂｌｅ ｃｕｒｅｓ）（前記用量群の各々のうち１つ）が存在し、５７日での実験の終了時まで存続した。全体の体重損失により測定された副作用毒性は、双方の薬剤治療群で最低であり、コントロール群で最大であった。これは腫瘍誘導性の悪液質（活発に成長する若干の腫瘍により誘導される効果）に影響を及ぼすかもしれない。
【０１２３】
第二の異種移植試験は、２５ および ５０ｍｇ／ｋｇを毎日投与される遊離薬剤と、７．５ｍｇ／ｋｇを隔日投与されるリポソーム製剤化されたＧＷ１８４３Ｕ８９ （表 １Ａ ； ＮＡ−１０２２−５９Ａ）の抗腫瘍効果を比較した。前記量のリポソーム薬剤は、１４日間の投与（７用量）のみ許容されていた。投与された遊離薬剤の総量は、３５０ｍｇ／ｋｇ および ７００ｍｇ／ｋｇであり、一方ＮＸ１８４３群における投与された総薬剤は５２．５ｍｇ／ｋｇであった。表２６は、リポソーム薬剤が前記遊離薬剤に比べより効果的なものであったことを明確に示した結果を要約しており、より少ない頻度のスケジュールにおいて、より少ない総薬剤投与を必要とするものであった。前記リポソーム薬剤の効果は遊離薬剤に対して優れた有効性を示し、８３％の後退および４．６ログ細胞殺傷を有するものであった。これと比較して２５ および ５０ｍｇ／ｋｇ遊離薬剤群は、如何なる腫瘍後退も生じず、且つログ細胞殺傷値がそれぞれ１．５ および ３．５であった。図２は、腫瘍成長カーブを示しており、遊離薬剤群での用量応答効果、およびＮＸ １８４３群でのより遅延した腫瘍成長を示している。体重における前記薬剤の相対効果を図３に示す。全ての薬剤群における体重損失は、一時的、且つ可逆的なものであり、１０％を越えることはなかった。
【０１２４】
用量スケジュール試験は、ＮＸ１８４３ （表 １Ａ ； ＳＭＣ−９９１−９６）で実行され、ＨＣＴ−８腫瘍保持ヌードマウスは下記の用量およびスケジュールでＮＸ１８４３をｉｖ投与された：即ち、２５ｍｇ／ｋｇ； デリバリー量（ｑｕａｎｔｉｔｙ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ） １，８ ； １５ｍｇ／ｋｇ ； ＱＤ （１，３，５） ｘ ２ ； ７．５ｍｇ／ｋｇ ； ＱＤ （１−５） ｘ ２である。それらの用量群に加えて、遊離薬剤が１−５日に１００ｍｇ／ｋｇで投与され、そして第二週においても反復された。また、この実験に含まれるものは下記のもの：即ち、１および８日に１００ｍｇ／ｋｇで投与される５−フルオロウラシル（５ＦＵ；　５−ｆｌｕｏｒｏｕｒｃｉｌ）；　１および８日に６ｍｇ／ｋｇで投与されるカンプトセチン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）・アナログ （ＮＸ２１１）のリポソーム製剤；　１および８日にそれぞれ６ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで投与されるＮＸ２１１ ＋ ５ＦＵ；　１，８日での６ｍｇ／ｋｇのＮＸ２１１　＋　１−５ 日での１００ｍｇ／ｋｇの遊離ＧＷ１８４３ ｘ ２ ；　および１，８日での６ｍｇ／ｋｇ および ２５ｍｇ／ｋｇのＮＸ２１１ ＋ ＮＸ１８４３である。結果を表２７に示す。ＮＸ１８４３用量群の３群全ては、３．９〜４．２の範囲のログ細胞殺傷（ＬＣＫ）値を呈し、各群において１／８の持続性治癒を呈する同等の有効性を示した。ＮＸ ２１１をＮＸ １８４３もしくはＧＷ １８４３の何れかと組み合わせた場合、全般的な腫瘍効果は類似するものであり、３．４のＬＣＫ値を有していた。しかしながら、ＮＸ ２１１ ＋ ＮＸ １８４３の組み合わせで２／８の存続性治癒が生じた。５−ＦＵ単独、ＮＸ ２１１単独、およびＧＷ１８４３単独の用量群の全ては、それぞれ１．５，１．９， および ２．４のＬＣＫ値を有し、腫瘍成長の阻害において低効果であった。効果が最低な用量群は、５−ＦＵ単独、ＮＸ ２１１ 単独、および ５−ＦＵ ＋ ＮＸ ２１１の組み合わせであった。遊離ＧＷ １８４３用量群は、腫瘍成長を限定することにおいて若干好ましいが、腫瘍後退および腫瘍成長の全般的阻害において最大の効果を示したのは、５／３２の持続性治癒を呈したＮＸ １８４３用量群であった。体重損失は、一時的、且つ可逆的なものであり、２０％を越えることはなかった。しかしながら、ＮＸ ２１１ および ５−ＦＵを含有する薬剤群は、最大の体重損失を示した。
【０１２５】
ＮＸ１８４３で行われた別の実験は用量応答試験であって、ここでＨＣＴ−８腫瘍保持マウスが２５，２０，１５，１０，５ ｍｇ／ｋｇの用量でＮＸ１８４３を１ および ８日にｉｖ．投与された。初期の腫瘍収縮は、成長が９２−９９％阻害された他の４群と比較して、腫瘍成長が８０％阻害された最低値を除き全ての用量群で類似していた。任意の用量群において、体重に目に見える如何なる効果もなく、７／３２の治癒が生じた。図４および表２８に認められるように、用量依存的な腫瘍応答は明白であった。
【０１２６】
ＮＸ １８４３リポソーム製剤のいくつかのバリエーションが生産され、有効性に顕著な差異が認められるかを査定するためにＨＣＴ−８異種移植モデル中で試験した。前記バリエーションは、４： １から ２： １のＨＳＰＣ： コレステロールの範囲、ｐＨ ５−９の相対内部酸性度（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ａｃｉｄｉｔｙ）の範囲を含むものであった。
結果を表２９に示す。
【０１２７】
抗腫瘍効果における如何なる有意な差も、ＨＣＴ−８異種移植モデルにおいてＮＸ １８４３の異なる製剤を比較した際には認められなかったことを本試験は示した。試験した異なる製剤間の薬物動態的な差も、軽微なものであり、且つ有意な差ではなかった。
【０１２８】
ＮＸ １８４３を、ＳＣＩＤマウスにおけるモルト４白血病モデルで更に試験した。このモデルにおいて、疾病率および死亡率が終了ポイントで測定された。全身腫瘍組織量（Ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ）は、１ ｘ １０７腫瘍細胞をｉＶ．で移植し、４日間待つことにより確立され、そして治療を開始した。治療群は、２５ｍｇ／ｋｇ のＮＸ １８４３　＋／−　チミジン　ホスホリラーゼ（Ｔｐａｓｅ；　ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ ）からなるものであった。Ｔｐａｓｅ治療は、マウスの循環チミジンレベルをヒトのレベル（５０〜１ＯＯｎＭ）まで低下させる。コントロール群はＤ５Ｗのみを投与された。結果は、図５に示され、ＮＸ １８４３がＴｐａｓｅ治療にかかわりなく生存を増加させることを示した。
【０１２９】
本願の特許請求の範囲に記載される本発明は、特定の例証された態様に関して記載された。しかしながら、本発明は前記例証された態様に限定されるものではなく、上述の明細書に記載された本発明の範囲内において、多くの変更が可能であることを当業者は認識するであろう。本発明は、本願の特許請求の範囲により定義された本発明の範囲内に含まれる別形態、修正形態、および均等形態を含むものである。
【０１３０】
表１Ａ．　異なるＨＳＰＣ：Ｃｈｏｌモル比、並びに水和時の薬剤分離の異なるｐＨおよび濃度で調製されたＧＷ１８４３のリポソーム製剤。
【０１３１】
【表１Ａ】
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表１Ｂ．　付加的なＧＷ１８４３ リポソーム製剤。
【０１３２】
【表１Ｂ】
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表１Ｃ．　異なる賦形剤を含有するリポソーム製剤。
【０１３３】
【表１Ｃ】
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表１Ｄ．　異なる賦形剤を含有しているリポソーム製剤の中央粒径安定性（２−８℃）。
【０１３４】
【表１Ｄ】
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表２．　ラットにおける単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３血漿濃度。
【表２】
2004503491.tif 000017
表３．　ラットにおける単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３の非コンパートメント分析による薬物動態パラメータ。
【表３】
2004503491.tif 000018
表４．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、遊離ＧＷ１８４３の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３血漿濃度。
【表４】
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表５．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３； ＳＭＣ９９１−９６）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表５】
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表６．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、遊離ＧＷ１８４３ の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３の血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表６】
2004503491.tif 000021
表７．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３； ＳＭＣ９９１−９６）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３の血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表７】
2004503491.tif 000022
表８．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）ロット ＳＭＣ−１０９２−０９の１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表８】
2004503491.tif 000023
表９．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）ロット ＳＭＣ−９９１−９６の１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表９】
2004503491.tif 000024
表１０．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）ロット ＳＭＣ−１０９２−０９の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３の血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表１０】
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表１１．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）ロット ＳＭＣ−９９１−９６の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後のＧＷ１８４３の血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表１１】
2004503491.tif 000026
表１２．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ａ群）における、高内部ｐＨを有するリポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロット ＡＴ−１０８４−９７Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表１２】
2004503491.tif 000027
表１３．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｂ群）における、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３） の標準製剤（ロット ＳＭＣ−１０９２−０９）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表１３】
2004503491.tif 000028
表１４．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃ群）における、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）（ロット ＡＴ−１０８４−９１Ｂ）の標準製剤の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表１４】
2004503491.tif 000029
表１５．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｄ群）における、高脂質：薬剤比　リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＡＴ−１０８４−８８Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表１５】
2004503491.tif 000030
表１６．　大きな雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｅ群）における、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）（ロットＡＴ１０８４−９１Ｂ）製剤の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表１６】
2004503491.tif 000031
表１７．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ａ群）における、高内部ｐＨを有するリポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＡＴ１０８４−９７Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３に対しての血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表１７】
2004503491.tif 000032
表１８．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｂ群）における、標準リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＳＭＣ−１０９２−０９）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３に対しての血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表１８】
2004503491.tif 000033
表１９．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃ群）における、標準リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＡＴ−１０８４−９１Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３に対しての血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表１９】
2004503491.tif 000034
表２０．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｄ群）における、高脂質：薬剤比リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＡＴ−１０８４−８８Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３に対しての血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表２０】
2004503491.tif 000035
表２１．　０．４ｋｇ雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｅ群）における、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤（ロットＡＴ−１０８４−９１Ｂ）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３に対しての血漿薬物動態パラメータ（非コンパートメント分析）。
【表２１】
2004503491.tif 000036
表２２．　２２０グラム雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後に得られた総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータの概略表。
【表２２】
2004503491.tif 000037
表２３．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの小（２２０グラム）対　大（４００ｇ）における、標準リポソーム封入ＧＷ１８４３ （ＮＸ１８４３）製剤の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後に得られた総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータの概略表。
【表２３】
2004503491.tif 000038
表２４．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （４： １ ＨＳＰＣ対コレステロール　モル比）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後の総ＧＷ１８４３血漿濃度。
【表２４】
2004503491.tif 000039
表２５．　雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける、リポソーム封入ＧＷ１８４３ （４： １ ＨＳＰＣ対コレステロール　モル比）の単回１ｍｇ／ｋｇ 静脈内大量瞬時用量投与後に非コンパートメント分析により得られた総ＧＷ１８４３血漿薬物動態パラメータ。
【表２５】
2004503491.tif 000040
表２６．　遊離薬剤とＮＸ １８４３を比較した結果の概要。
【表２６】
2004503491.tif 000041
表２７．　５−ＦＵ、ＮＸ２１１およびＧＷ１８４３の併用に対する腫瘍応答を比較したＮＸ１８４３用量−スケジュールの概要。
【表２７】
2004503491.tif 000042
表２８．　ＮＸ １８４３を有する用量応答実験の概要。
【表２８】
2004503491.tif 000043
表２９．　抗腫瘍効果の結果、ＨＣＴ−８ 異種移植モデルにおける１０ｍｇ／ｋｇ， ＱＤ １，８用量で投与されたＮＸ １８４３製剤の比較。
【表２９】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、リポソーム封入されたＧＷ１８４３（ＮＸ１８４３）または遊離 ＧＷ１８４３のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄ラットにおける静脈内投与後の時間曲線（平均±ＳＤ）に対するｌｏｇ総血漿ＧＷ１８４３濃度を表す。ＮＸ１８４３データは、２フェーズ指数方程式に適合させた。
【図２】
図２は、ＨＣＴ−８処理された腫瘍の腫瘍成長曲線を表す。
【図３】
図３は、ヌードマウスの体重においてのＮＸ１８４３およびＧＷ１８４３の効果を表す。
【図４】
図４は、腫瘍成長および体重においてのＮＸ１８４３の用量応答効果を表す。
【図５】
図５は、モルト４（ｍｏｌｔ４）白血病モデルにおけるＮＸ１８４３の有効性を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004503491.tif 000135
【国際調査報告】
2004503491.tif 000136
2004503491.tif 000137