(57)【要約】酸α−グリコシダーゼを投与することによるＩＩ型糖原病を治療するための方法が開示され、またＩＩ型糖原病の治療における使用のための組成物が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト酸α− グリコシダーゼの治療有効量を規則的な間隔で個体に投与することを含む、個体におけるＩＩ型糖原病の治療方法。
【請求項２】
ヒト酸α− グリコシダーゼの治療有効量を規則的な間隔で個体に投与することを含む、個体におけるＩＩ型糖原病に関連する心筋症の治療方法。
【請求項３】
ＩＩ型糖原病が、幼児ＩＩ型糖原病、若年性ＩＩ型糖原病、または成人発症ＩＩ型糖原病である、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
ヒト酸α− グリコシダーゼの治療有効量が個体の体重の１キログラム当たり約１５ｍｇ未満の酸α− グリコシダーゼである、請求項１または２記載の方法。
【請求項５】
ヒト酸α− グリコシダーゼが組換えヒト酸α− グリコシダーゼおよび／または組換えヒト酸α− グリコシダーゼの前駆体である、請求項１または２記載の方法。
【請求項６】
組換えヒト酸α− グリコシダーゼがチャイニーズハムスター卵巣細胞において産生される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
規則的な間隔が、毎月、月に２回、毎週、週に２回または毎日である、請求項１または２記載の方法。
【請求項８】
ヒト酸α− グリコシダーゼが、静脈内、筋肉内、髄腔内および脳室内からなる群より選ばれた経路によって投与される、請求項１または２記載の方法。
【請求項９】
ヒト酸α− グリコシダーゼが、免疫抑制剤の投与に組み合わせて、または引き続いて投与される、請求項１または２記載の方法。
【請求項１０】
ＩＩ型糖原病の治療用組成物の投与のための指示書を含むラベルを有する容器内にヒト酸α− グリコシダーゼを含有してなる医薬組成物。
【請求項１１】
個体におけるＩＩ型糖原病の治療のための医薬の製造のための治療有効量のヒト酸α− グリコシダーゼの使用。
【請求項１２】
個体におけるＩＩ型糖原病に関連する心筋症の治療のための医薬の製造のための治療有効量のヒト酸α− グリコシダーゼの使用。
【請求項１３】
ヒト酸α− グリコシダーゼの治療有効量が、個体の体重の１キログラム当たり約１５ｍｇ未満の酸α− グリコシダーゼである、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１４】
ヒト酸α− グリコシダーゼが、組換えヒト酸α− グリコシダーゼおよび／または組換えヒト酸α− グリコシダーゼの前駆体である、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１５】
組換えヒト酸α− グリコシダーゼがチャイニーズハムスター卵巣細胞において産生される、請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
医薬が、毎月、月に２回、毎週、週に２回または毎日の規則的な間隔で投与されるように調製される、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１７】
医薬が、静脈内、筋肉内、髄腔内および脳室内からなる群より選ばれた経路で投与されるように調製される、請求項１１または請求項１２記載の使用。
【請求項１８】
医薬が免疫抑制剤をさらに含んでなる、請求項１１または１２記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０００年７月１８日に出願された米国仮出願第６０／２１９，２３７号の利益を主張する。その出願の全体の教示が参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
発明の背景
ＩＩ型糖原病（ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅＩＩ）（ＧＳＤ−ＩＩ）（ポーンプ病または酸マルターゼ欠損症としても公知）は、酸α− グリコシダーゼ（ＧＡＡ ）、グリコーゲン分解リソソーム酵素の欠損により引き起こされる胎児遺伝性筋障害である（Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒｎ， Ｒ．， 「Ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ ＩＩ： ａｃｉｄα−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ （ａｃｉｄ ｍａｌｔａｓｅ） ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ」、Ｓｃｒｉｖｅｒ， Ｃ．Ｒ． ら、（編） Ｔｈｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ，第７版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９５， ｐｐ． ２４４３−２４６４）。前記欠損は、身体のほとんど全ての組織においてリリソームグリコーゲン蓄積をもたらし、心筋および骨格筋は最も重篤に影響する。ＧＳＤ−ＩＩの全ての型の組み合わせの発生率は、１：４０，０００であると見積もられており、前記疾患は民族的偏好を伴わず全ての群で発症する（Ｍａｒｔｉｎｉｕｋ， Ｆ． ら、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ． ７９：６９−７２ （１９９８）； Ａｕｓｅｍｓ， Ｍ．Ｇ．Ｅ．Ｍ． ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ． ７：７１３−７１６ （１９９９） ）。
【０００３】
臨床的に、ＧＳＤ−ＩＩは、発症年齢、関わる器官および臨床重篤度により異なり、一般にＧＡＡ 活性の残余量に相関する一連の表現型を含む。その最も重篤な症状（幼児ＧＳＤ−ＩＩ、またはポーンプ病、ここで正常なＧＡＡ 活性の１％未満を示す）において、幼児は、心筋および骨格筋における大量のグリコーゲン蓄積に続く肥大性心筋症、全身的な筋肉の弱さならびに緊張低下を発症する（総説については、Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒｎ、前出を参照）。前記疾患は、迅速に進行し、１年齢で通常生じる心不全による死を伴う。前記疾患の若年性（正常なＧＡＡ 活性の１〜１０％）および成人発症（正常なＧＡＡ 活性の１０〜４０％）形態は、重篤な心臓への関与を伴わないこと、より遅い年齢での開始、およびより緩徐な進行により特徴づけられるが、最終的な呼吸器または手足の筋肉への関与は、発症個体について有意な罹患率および死亡率を生じる。
【０００４】
薬物治療ストラテジー、食事操作、および骨髄移植が、有意な成功を収めることなく、ＧＳＤ−ＩＩの治療手段として使用されている（Ｈｕｇ， Ｇ． ら、Ｂｉｒｔｈ Ｄｅｆｅｃｔｓ Ｏｒｇ． Ｓｅｒ． ９：１６０−１８３ （１９６７）； Ｓｌｏｎｉｍ， Ａ．Ｅ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３３：３４ （１９８３）； Ｗａｔｓｏｎ， Ｊ．Ｇ．ら、Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３１４：３８５ （１９８６） ）。酵素補充での早期の試みもまた成功しなかった（Ｈｕｇ， Ｇ． およびＳｃｈｕｂｅｒｔ， Ｗ．Ｋ．， Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ． ４６：１０７３ （１９６７）； ｄｅ Ｂａｒｓｙ， Ｔ． ら、Ｂｉｒｔｈ Ｄｅｆｅｃｔｓ Ｏｒｉｇ．Ａｒｔ．Ｓｅｒ． ９：８４−１９０ （１９７３）； Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｊ．Ｃ． およびＭｕｒｒａｙ， Ａ．Ｋ．， 「Ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｐｏｍｐｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｉｔｈ ａｎ ａｌｐｈａ ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｌｅｘ」、Ｄｅｓｎｉｃｋ， Ｒ．Ｊ． （編）、Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ：２， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ １９８０；ｐｐ．４１５−４２３） ）。ＧＳＤ−ＩＩの効果的な治療が必要とされている。
【０００５】
発明の要旨
本発明は、酸α− グリコシダーゼの治療有効量（例えば、体重の１ｋｇ当たり約１５ｍｇ未満の酵素、好ましくは体重の１ｋｇ当たり約１〜１０ｍｇの酵素、より好ましくは体重の１ｋｇ当たり約１０酵素または体重の１ｋｇ当たり約５ｍｇ酵素）を規則的な間隔（例えば、毎月、月に２回、毎週、週に２回、毎日）で個体に投与することによる個体におけるＩＩ型糖原病（幼児、若年または成人− 発症）の治療方法に関する。酸α− グリコシダーゼは、ヒト酸α− グリコシダーゼ、好ましくは組換えヒト酸α− グリコシダーゼ、より好ましくはヒト酸α− グリコシダーゼの前駆体形態、およびさらにより好ましくはチャイニーズハムスター卵巣細胞において産生されるヒト酸α− グリコシダーゼの前駆体形態である。酸α− グリコシダーゼは、周期的（例えば、毎月、月に２回、毎週、週に２回、毎日）に投与される。好ましい態様では、酸α− グリコシダーゼは、静脈内；筋肉内；髄腔内；または脳室内に投与される。
【０００６】
本発明の方法は、ＩＩ型糖原病を有する個体を治療するための最初の有効な手段を提供する。
【０００７】
発明の詳細な説明
本発明は、酵素、酸α− グリコシダーゼ（ＧＡＡ ）を個体に投与することによる、個体におけるＩＩ型糖原病（ＧＳＤ−ＩＩ）の治療方法、ならびにＩＩ型糖原病の治療のための医薬の製造における酵素、ＧＡＡ の使用に関する。本明細書に記載されるように、出願人は、規則基礎により幼児にＧＡＡ を投与することによりＧＳＤ−ＩＩを患う幼児を首尾良く治療した；前記幼児は、心臓状態、肺機能、および神経発生の改善、ならびに組織におけるグリコーゲンレベルの減少を示した。
【０００８】
これらの知見の結果として、幼児、若年および成人− 発症ＧＳＤＩＩ を含むＧＳＤ−ＩＩを治療することが初めてここで可能となった。本明細書中に記載される結果は、最も重篤な形態のＧＳＤ−ＩＩ（幼児ＧＳＤ−ＩＩ）を有する個体を考察するが、この方法は、若年または成人発症ＧＳＤ−ＩＩを発症した個体において等しく有効であり、実際、若年性または成人発症ＧＳＤ−ＩＩを有する個体が、より高いレベルの残余ＧＡＡ 活性（それぞれ、１〜１０％、または１０〜４０％）を有し、それゆえ投与されるＧＡＡ により免疫学的寛容であるようである場合（例えば、それらは一般に、内因性ＧＡＡ に対して交差反応性免疫反応性物質（ＣＲＩＭ）− 陽性であり、その結果、それらの免疫系は「外来」タンパク質としてＧＡＡ を認識せず、それらは抗ＧＡＡ 抗体を発生しない）、より効果的でさえありうると予想される。かかる個体における増強された効力は、ＣＲＩＭ− 陰性患者１および２（抗ＧＡＡ 抗体を発生した）において見られた変化しやすい課程とは対照的に、ＣＲＩＭ− 陽性であり、抗−ＧＡＡ抗体を発生せず、発育上の重大時点の正常な進行を示した患者３において見られ得る。
【０００９】
本明細書中で使用される用語「治療する」および「治療」は、疾患に関連する１つまたはそれより多くの症状の改善、疾患の１つまたはそれより多くの症状の発症の防止または遅延、および／または疾患の１つまたはそれより多くの症状の重篤度または頻度の低減をいう。例えば、治療は、心臓の状態の改善（例えば、拡張終期および／または収縮終期の容積の増大、あるいはＧＳＤ−ＩＩにおいて典型的に見出される進行性心筋症の減少、改善または防止）または肺機能の改善（例えば、ベースライン容量に対する泣き叫ぶ肺活量、および／または泣いている間の酸素不飽和化の規準化）；神経発生および／または運動スキル（ｍｏｔｏｒ ｓｋｉｌｌ ）における改善（例えば、ＡＩＭＳスコアにおける増大）；疾患に罹った個体の組織におけるグリコーゲンレベルの減少；またはこれらの効果の任意の組み合わせをいい得る。１つの好ましい態様では、治療は、心臓の状態の改善、特にＧＳＤ−ＩＩ関連心筋症の減少または防止を含む。本明細書中で使用される用語「改善」、「増大」、または「減少」は、本明細書中に記載される治療の開始の前の同じ個体における測定値、または本明細書中に記載される治療の非存在下での対照個体（または複数の対照個体）における測定値等のベースライン測定値と比べた値を示す。対照個体は、治療対象の個体と同じ形態のＧＳＤ−ＩＩ（幼児、若年または成人発症のいずれか）に罹った個体であり、治療対象の個体とおおよそ等しい年齢である（治療個体および対照個体における疾患の段階が比較可能であることを確実にするために）。
【００１０】
治療対象の個体は、ＧＳＤ−ＩＩ（すなわち、幼児ＧＳＤ−ＩＩ、若年性ＧＳＤ−ＩＩ、または成人発症ＧＳＤ−ＩＩのいずれか）を有する個体（胎児、子供、青年、または成人のヒト）である。個体は、残余のＧＡＡ 活性を有するか、または測定可能な活性を有さない。例えば、ＧＳＤ−ＩＩを有する個体は、正常なＧＡＡ 活性の約１％未満（幼児ＧＳＤ−ＩＩ）であるＧＡＡ 活性、正常なＧＡＡ 活性の約１〜１０％（若年ＧＳＤ−ＩＩ）であるＧＡＡ 活性、または正常なＧＡＡ 活性の１０〜４０％（成人ＧＳＤ−ＩＩ）であるＧＡＡ 活性を有しうる。個体は、内因性ＧＡＡ に対してＣＲＩＭ− 陽性またはＣＲＩＭ− 陰性でありうる。好ましい態様では、個体は、内因性ＧＡＡ に対してＣＲＩＭ− 陽性である。別の好ましい態様では、個体は、疾患を最近診断した個体である。初期治療（診断後、可能な限りすぐに開始する治療）は、疾患の影響を最小化し、治療の利益を最大化するために重要である。
【００１１】
本発明の方法において、ヒト酸α− グリコシダーゼ（ＧＡＡ ）は個体に投与される。ＧＡＡ は、投与される場合、疾患を発症した組織（例えば、心臓、筋肉）等の組織を標的化する形態である。１つの好ましい態様では、ヒトＧＡＡ は、ＧＡＡ の効率的なレセプター媒介性取り込みを可能にするモチーフを含むようなその前駆体形態で投与される。あるいは、ＧＡＡ の効率的な取り込みを可能にするモチーフを含むように修飾されたヒトＧＡＡ の成熟形態が投与されうる。特に好ましい態様では、ＧＡＡ は、組換えヒトＧＡＡ の前駆体形態である。
【００１２】
ＧＡＡ は種々の供給源から得られうる。特に好ましい態様では、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ ）細胞培養で産生された組換えヒト酸α− グリコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ ）が使用される（例えば、Ｆｕｌｌｅｒ，Ｍ． ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２３４：９０３−９０９ （１９９５）；Ｖａｎ Ｈｏｖｅ， Ｊ．Ｌ．Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：６５−７０ （１９９６）を参照のこと；これらの参考文献の全教示が参考として本明細書中に援用される）。ＣＨＯ 細胞におけるＧＡＡ の産生は、所望の組織（心臓および筋肉）におけるＧＡＡ の有意かつ効率的な取り込みを可能にするグリコシル化を有する産物を生じるようである；グリコシル化がトランスジェニックマウスおよびウサギのミルクにおいて産生されるＧＡＡ のグルコシル化とは異なることが仮定される（例えば、Ｂｉｊｖｏｅｔ，Ａ．Ｇ．Ａ．ら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ． ７：１８１５−１８２４ （１９９８）； Ｂｉｊｖｏｅｔ，Ａ．Ｇ．Ａ．ら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ． ８：２１４５−２１５３ （１９９９） を参照のこと）。
【００１３】
ＧＡＡ は、約１．０−３．５ μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の範囲、好ましくは約２〜３．５ μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の範囲において比酵素活性を有する。１つの好ましい態様では、ＧＡＡ は、少なくとも約１．０ μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の比酵素活性；より好ましくは、少なくとも約２．０ μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の比酵素活性；さらにより好ましくは、少なくとも約２．５ μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の比酵素活性；なおより好ましくは、少なくとも約２．７５μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の比酵素活性を有する。
【００１４】
ＧＡＡ は、本明細書中に記載されるように、単独で、またはＧＡＡ を含む組成物または医薬（例えば、疾患の治療のための医薬の製造における）で投与されうる。組成物は、生理学的に許容されるキャリアまたは賦形剤とともに製剤化されて医薬組成物が調製されうる。キャリアおよび組成物は無菌でありうる。製剤は、投与の様式に適合しなければならない。
【００１５】
適切な薬学的に許容されうるキャリアとしては、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアガム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロースまたはデンプン等の炭水化物、マンニトール、スクロース等の糖、ブドウ糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘稠性パラフィン、芳香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等、ならびにその組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。医薬調製物は、所望であれば、活性化合物と有害に反応しない補助薬剤、例えば、潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝液、着色剤、香味料および／または芳香族物質等を混合することができる。好ましい態様では、静脈内投与に適切な水溶性キャリアが使用される。
【００１６】
組成物または医薬は、所望であれば、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤も含みうる。組成物は、液体溶液、懸濁物、エマルジョン、タブレット、ピル、カプセル、持続放出製剤、または粉体でありうる。組成物はまた、伝統的な結合材およびトリグリセリド等のキャリアを有する坐薬として製剤化されうる。経口製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的なキャリアを含みうる。
【００１７】
組成物または医薬は、ヒトへの投与に適した医薬組成物として日常的な手順に従って製剤化されうる。例えば、好ましい態様では、代表的な静脈内投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要であれば、組成物はまた、注射の部位の痛みを和らげるために可溶性薬剤および局所麻酔薬を含みうる。一般に、成分は、別々にまたは例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたは匂い袋（ｓａｃｈｅｔｔｅ）等の密閉にして測定される容器中に凍結乾燥粉体または水非含有濃縮物として単位投薬形態で一緒に混合されるかのいずれかで供給される。組成物が注射で投与される場合、無菌医薬グレード水、生理食塩水またはブドウ糖／水を含有する注入ボトルに分配されうる。組成物が注射で投与される場合、注射のための無菌水または生理食塩水のアンプルは、投与の前に成分が混合されうるように提供されうる。
【００１８】
ＧＡＡ は、中性または塩の形態として製剤化されうる。薬学的に許容されうる塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等に由来する遊離アミノ基を用いて形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等に由来するもの等の遊離カルボキシル基を用いて形成されるものが挙げられる。
【００１９】
ＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物もしくは医薬）は、適切な経路で投与される。１つの態様では、ＧＡＡ は静脈内投与される。他の態様では、ＧＡＡ は、心臓または筋肉（例えば、筋肉内）等の標的組織または神経系（例えば、脳への直接注射；脳室内；髄腔内）への直接投与により投与される。所望であれば、１つより多くの経路が同時に使用されうる。
【００２０】
ＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物または医薬）は、単独、あるいは抗ヒスタミン（例えば、ジフェンヒドラミン）もしくは免疫抑制剤または抗ＧＡＡ 抗体を中和する他の免疫療法剤等の他の薬剤と組み合わせて投与されうる。用語「組み合わせて」は、薬剤がＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物）とおおよそ同時に投与されることを示す。例えば、薬剤は、ＧＡＡ を含む組成物に混合され、それによりＧＡＡ と同時に投与されうる；あるいは、薬剤は混合することなく同時に投与される（例えば、ＧＡＡ がまた投与される静脈ラインでの薬物の「ピギーバック（ｐｉｇｇｙｂａｃｋｉｎｇ）」送達、または逆も同様）。別の例では、薬物は、 ＧＡＡの投与の短い時間フレーム内（例えば、２４時間内）に別々に投与されうる（例えば、混ぜないで）。１つの好ましい態様では、個体が内因性ＧＡＡ についてＣＲＩＭ陰性である場合、ＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物）は、抗ＧＡＡ 抗体の量を減少するように、または抗ＧＡＡ 抗体の産生を防止するように設計された免疫抑制療法または免疫治療法と組み合わせて投与される。例えば、血友病患者において使用されるのと類似したプロトコル（Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ． ３１８：９４７−５０ （１９８８）））が抗ＧＡＡ 抗体を減少するために使用される。かかる療法はまた、内因性ＧＡＡ に対してＣＲＩＭ陽性であるが、抗ＧＡＡ 抗体を有するか、または有する危険性がある個体において使用されうる。特に好ましい態様では免疫抑制療法または免疫治療法は、抗ＧＡＡ 抗体の産生の可能性を最小化するためにＧＡＡ の最初の投与の前に始められる。
【００２１】
ＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物もしくは医薬）は、治療有効量（すなわち、規則的間隔で投与される場合、上記のように、疾患に関連する症状を軽減し、疾患の発症を防止もしくは遅延し、および／または疾患の症状の重篤度もしくは頻度を低減することにもより、疾患を治療するのに十分である投薬量）で投与される。疾患の治療において治療的に有効である量は、疾患の影響の特性および程度に依存し、標準的な臨床技術により決定されうる。さらに、インビトロまたはインビボアッセイは、任意に、最適な用量範囲を同定することを補助するために使用されうる。使用される正確な用量はまた、投与の経路、疾患の重篤さに依存し、担当医の判断および各患者の状況により決定されるべきである。効果的な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から推定されうる。好ましい態様では、治療有効量は、約１５ｍｇ酵素／ 個体のｋｇ体重未満、好ましくは約１〜１０ｍｇ酵素／ｋｇ 体重の範囲、さらにより好ましくは約１０ｍｇ酵素／ｋｇ 体重または約５ｍｇ酵素／ｋｇ 体重である。特定の個体に関する有効用量は、個体の必要性に応じて、時間経過とともに変化（例えば、増大または減少）しうる。例えば、物理的疾病もしくはストレスのときには、または抗ＧＡＡ 抗体が存在するかもしくは増大する場合、または疾患症状が悪化した場合、量は増大されうる。
【００２２】
ＧＡＡ （またはＧＡＡ を含む組成物もしくは医薬）の治療有効量は、疾患の影響の特性および程度、および進行基礎に応じて、規則的な間隔で投与される。本明細書中で使用される「規則的な間隔」での投与は、治療有効量が周期的（一回の用量とは区別されるように）に投与されることを示す。間隔は標準的な臨床技術により決定されうる。好ましい態様では、ＧＡＡ は、毎月、月に２回；毎週；週に２回；または毎日投与される。単独の個体に関する投与間隔は、固定された間隔を必要とはしないが、個体の必要性に応じて時間経過にともなって変化しうる。例えば、物理的疾病またはストレスのときには、抗ＧＡＡ 抗体が存在するようになるかもしくは増大する場合、または疾患症状が悪化する場合、投薬間の間隔は減少されうる。
【００２３】
１つの好ましい態様では、１０ｍｇの酵素／ｋｇ 体重の治療有効量が毎週投与される。別の好ましい態様では、５ｍｇの酵素／ｋｇ 体重の治療有効量が週に２回投与される。
【００２４】
本発明はさらに、本明細書中に記載される方法などによるＩＩ型糖原病の治療用組成物の投与のための使用説明書を含むラベルを有する容器（例えば、バイアル、ボトル、静脈投与のためのバッグ、シリンジなど）中に、本明細書中に記載されるように、ヒト酸α−グルコシダーゼを含む医薬組成物に関する。
【００２５】
本発明はさらに、以下の実施例によってさらに、かつより詳細に記載される。
【００２６】
実施例：組換えヒト酸α−グルコシダーゼの使用の第Ｉ ／ＩＩ相試験
材料および方法
患者：包含基準は、ＧＡＡ 活性が事実上ない（皮膚線維芽細胞および／または筋肉生検において正常の１％未満）幼児性ＧＳＤ −ＩＩに罹患している幼児ならびに１歳未満の幼児であった。排除基準としては、ベースラインでの重篤な心肺機能不全および／または生存を減少するような他の医学状態を挙げた。診断後の疾患の限られた生存期待に起因して、プラセボ対照を使用しなかった。歴史的な対照データは、事実上全ての患者が１歳前に死亡することを示した（表１）。
【００２７】
【表１】
2004503598.tif 000002
【００２８】
幼児性ＧＳＤ −ＩＩに罹患している３人の幼児（皮膚線維芽細胞および／または筋肉生検において正常の１％未満まで減少した酸α−グルコシダーゼ活性によって証明される）を、本研究に登録した。タンパク質レベルにおいて、患者１および２の両者は、検出可能なＧＡＡ タンパク質を有していなかったが、患者３は免疫ブロット分析によって検出すると、ＧＡＡ タンパク質のレベルが減少していた。治療の開始前のベースライン臨床データを、表２にまとめる。
【００２９】
【表２】
2004503598.tif 000003
【００３０】
患者１は、２ヶ月齢で鼡径ヘルニアの人工外科的修復中に心停止を示した。彼が４ヶ月齢時の次の評価は、３週齢の運動発達と等価であると評価される運動発達年齢を伴う重篤な低血圧の兆候を示した。彼はまた、重篤な心筋症および左肺の部分的無気肺を生じる左主気管支の圧迫に伴う重篤な心臓肥大、および摂食困難および成長不全を有していた。患者２および３は、出生前にポーンプ病と診断された；重要なことに、それぞれは、幼児性ＧＳＤ −ＩＩに典型的に寄与する症状で死亡した兄弟姉妹を以前に有していた。両患者は、運動遅延の兆候を有していた；さらに患者２は、摂食困難、成長不全および重篤な心筋症を有していた。
【００３１】
基本設計：本研究を、第Ｉ ／ＩＩ相、オープンラベル、単一用量、幼児性ポーンプ病に罹患する３人の患者における週２回投与のｒｈＧＡＡ の安全性および有効性研究として設計した。本研究は、倫理調査委員会によって承認され、そして親の十分な説明に基づく同意を得た。
【００３２】
本研究は、初期スクリーニング相、１３週治療相、および追跡治療相からなった。スクリーニング相中、患者の初期臨床状態を評価し；さらに、ＧＡＡ およびグリコーゲンレベルを骨格筋生検サンプルにおいて測定した。治療相中、患者は、週２回ｒｈＧＡＡ の静脈注入（５ｍｇ／ｋｇ）を受けた。患者を、酵素注入に対する任意の有害反応について、およびｒｈＧＡＡ 投与が幼児性ＧＳＤ −ＩＩの臨床的進行上有する任意の影響について綿密にモニターした。一般的な臨床評価としては、慣用的な物理的試験、完全な尿で補った分析、血液分析、および臨床的化学分析（電解質、グルコース、クレアチニン、ＢＵＮ 、ＣＯ２ 、タンパク質、アルブミン、ＡＬＴ 、ＡＳＴ 、ビリルビン、アルカリホスファターゼ、ＣＫおよびアイソザイム、尿酸）が挙げられる。徹底的な神経学的評価および運動機能評価としては、手動筋肉強度試験、デンバー発達試験、およびＡＩＭＳ（Ａｌｂｅｒｔａ Ｉｎｆａｎｔ Ｍｏｔｏｒ Ｓｃａｌｅ；Ｐｉｐｅｒ， Ｍ．Ｃ． およびＤａｒｒａｈ， Ｊ．， Ｍｏｔｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｉｎｆａｎｔ， ＷＢ Ｓａｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， １９９４ を参照のこと）が挙げられる。二次元、Ｍ −モードおよびドップラー心エコー検査を使用して、左心室質量、壁厚みならびに収縮期機能および拡張期機能を評価した。さらに、種々の肺機能（泣いているときの肺活量、トレンド（ｔｒｅｎｄ ）パルスオキシメトリーおよび一回呼吸後（ｅｎｄ ｔｉｄａｌ ）二酸化炭素測定、および陰性吸入力操作（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｎｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｆｏｒｃｅ ｍａｎｅｕｖｅｒ ））を、研究を通してモニターした。１３週治療相のまとめとして、前治療生検の反対の外大腿（ｃｏｎｔｒａ−ｌａｔｅｒａｌ ｔｈｉｇｈ）四頭筋から得た筋肉生検のＧＡＡ 活性、グリコーゲンレベルおよび組織病理学を測定した。この筋肉生検をｒｈＧＡＡ 注入後３日目に採取した。
【００３３】
酵素供給源：ｒｈＧＡＡ 分泌ＣＨＯ 細胞の培養培地から精製したｒｈＧＡＡ （Ｖａｎ Ｈｏｖｅ， Ｊ．Ｌ．Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９３：６５−７０（１９９６） ）を、ＧＭＰ −グレード滅菌および無色溶液として提供した（Ｓｙｎｐａｃ（Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）， Ｉｎｃ．， （９９ Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｄｒｉｖｅ， Ｓｕｉｔｅ ＮＷ２０， Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ， Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ ２７７０９）製）。ｒｈＧＡＡ を、２．７７〜３．０２μｍｏｌ／分／ｍｇ タンパク質の特異的酵素活性を有する１１０ｋＤ 前駆体タンパク質として最初に精製した。
【００３４】
抗ｒｈＧＡＡ 抗体に対するＥＬＩＳＡ ：抗ｒｈＧＡＡ 抗体に対するＥＬＩＳＡ は、Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．（Ｓａｉｎｔ−Ｌａｕｒｅｎｔ， Ｑｕｅｂｅｃ）によって実施される標準的なサンドイッチアッセイであった。簡単には、マイクロタイタープレートを２．０ μｇ／ｍｌのｒｈＧＡＡ を用いて一晩コーティングし、次いでウシＩｇＧ を用いてブロックした。患者血清（１ ：１００ に希釈し、次いで１ ：２ で連続して希釈する）を、プレート上でｒｈＧＡＡ と反応させた。結合抗体の量を、ホースラディシュペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ヒト二次抗体およびテトラメチルベンジジン基質を用いて、４５０ｎｍ での吸光度を測定することによって検出した。陽性サンプルを、陰性カットオフよりも高い吸光度を有するとして規定した。これは、正常なヒト血清陰性対照のＡ４５０値の２倍として規定した。力価を、陰性カットオフ値より上のＡ４５０読み取り値をさらに有する血清の希釈として規定した。
【００３５】
ＧＡＡ 活性、グリコーゲン含有量およびウエスタンブロット分析：ＧＡＡ 活性を、以前に記載（Ｒｅｕｓｅｒ， Ａ．Ｊ．Ｊ．ら、Ａｍ， Ｊ． Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． ３０：１３２−１４３（１９７８） ）されたようにｐＨ４．３ での４−メチル− アンベリフェリル（ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ）− α−Ｄ− グルコシド切断の測定によって評価した。初期標準として、酸− β− ガラクトシダーゼ活性を、基質として４−メチル− アンベリフェリル（ｕｍｂｉｌｌｌｉｆｅｒｙｌ ）誘導体を用いて同様にアッセイした（Ｗｅｎｇｅｒ， Ｄ．Ａ．およびＷｉｌｌｉａｍｓ， Ｃ．， 「Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ 」， Ｈｏｍｍｅｓ， Ｆ．Ａ．（編）， Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｈｕｍａｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｇｅｎｅｔｉｃｓ： ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ， Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１， ｐｐ．５８７−６１７）。グリコーゲン含有量を、Ａ． ｎｉｇｅｒアミログルコシダーゼを用いた組織抽出物の処理およびグルコース放出の測定によって測定した（Ｖａｎ Ｈｏｖｅ， Ｊ．Ｌ．Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ， Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９３：６５−７０（１９９６） ）。ウエスタンブロット分析を、精製胎盤ＧＡＡ に対してウサギにおいて惹起した抗体を用いて実施した（Ｖａｎ Ｈｏｖｅ， Ｊ．Ｌ．Ｋ．ら、前出）。
【００３６】
組織学：筋肉の１検体を、トラガカントゴムを有するチャック上にマウントし、液体窒素で冷却したイソペンテン中で急速冷凍した。５ ミクロンの切片を得、ヘマトキシリンおよびエオシン、修飾ゴモリトリクローム、ＡＴＰａｓｅ（ｐＨ４．３５および９．４ ）、ニコチンアミドデヒドロゲナーゼテトラゾリウム（ｔｅｔｒａｚｏｌｉｎｍ ）ブルーレダクターゼ、ならびにホスホリラーゼで染色した。第二検体をインサイチュでクランプして、２．５％グルタルアルデヒド中に置いた。この組織を、グリコーゲンの損失を防ぐため、一括して（ｅｎ ｂｌｏｃ ）染色せずに酢酸ウラニルで処理した。やや薄い（ｓｅｍｉｔｈｉｎ）切片（０．５ ミクロン）を、トルイジンブルーで染色して、薄い切片を酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で染色して、電子顕微鏡検査のために銅のグリッド上にマウントした。
【００３７】
結果
治療に対する患者の反応：幼児性ポーンプ病に罹患している３人の患者は、２１〜２５ヶ月間、週２回、ｒｈＧＡＡ の静脈注入を受けた。重篤なアレルギー反応は、酵素治療中に生じなかった。しかし、軽い発熱および被刺激性の増加を伴う皮膚発疹の３つのエピソードが、２人の患者において生じた（患者１は２つのエピソード、患者２は１つのエピソード）。これらの症状は、ジフェニルヒドラミンの静脈投与後に直ちに回復した。皮膚発疹の第二エピソード後、患者１に、さらなるエピソードを防ぐため、全ての引き続くｒｈＧＡＡ 注入の直前に経口用ジフェニルヒドラミンで前投与した。患者２に、さらなるエピソードを防ぐため、全ての引き続く注入の直前に経口用ジフェニルヒドラミンで同様に前投与した。全ての治療患者において、複数の血液学的パラメータ、肝機能、腎機能、および尿検査は全て、治療期間を通して正常な範囲であった。
【００３８】
ＩｇＧ クラスの抗ｒｈＧＡＡ 抗体を、酵素治療の開始後３週間ほどで患者１および２において検出した（図１Ａ〜１Ｃ）。抗ｒｈＧＡＡ 抗体力価は、患者１において１６週で１ ：１６００まで（図１Ａ）、患者２において１１〜１９週間で１ ：６４００〜１ ：１２，８００までに増加した（図１Ｂ）。抗ｒｈＧＡＡ 抗体力価が増加する場合、本発明者らは、臨床的な改善（治療中の初期に示される−以下参照）はもはや進展していないと言及した。面倒な影響も抗ｒｈＧＡＡ 抗体のいずれも、患者３においては検出されなかった（図１Ｃ）。
【００３９】
心臓状態：
酵素治療の開始前、患者１および２は、左心室（ＬＶ）質量の増加、心室壁の同心性肥厚および心室腔のサイズの減少に関連する重篤な肥大性心筋症、を有していた（図２Ｂ、患者２における腔は、収縮期の終わりにほとんど閉塞されている）。これらの特性全ては、幼児型ポーンプ病に罹患している未治療患者に典型的に見られる。さらに、患者２は、超動的短縮を反映した増加したＬＶ駆出画分（短縮画分、８４％ ）を有することを示した。しかし、患者は、心室流出路の閉塞の兆候を全く有していなかった。患者において評価したｒｈＧＡＡ の最初の３ヶ月間の縦断心エコーデータを、図２Ａ〜２Ｃに示す。治療期間中、患者１および２の両者において、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積（２Ｄ測定）は、治療相中に測定した値と比較して連続的に増加し、治療の３ヶ月終了までにほぼ２ 〜３ 倍まで増加した（それぞれ、図２Ａおよび２Ｂ）。類似の増加を、Ｍ モード分析によって示した（データは示さない）。二次元ＬＶ質量測定（図２Ｄ〜２Ｆ）は、ＬＶ容積が増加するように初めは増加したが、次いで治療中に着実に、治療前ＬＶ質量値未満まで減少した（治療前レベルベースラインの６０〜７０％ まで減少）。質量の初期増加は、ＬＶ壁厚みにおける変化ではなく、ＬＶ容積における増加にほとんど起因するようであった。心臓パラメータにおけるこれら全般的な改善を、最後の追跡評価を通して維持したが、患者１は、ウイルス性肺炎によってＬＶ質量がさらに増加して、心機能に障害が生じた１０日間、集中的な毎日の酵素注入を必要とした。一方、両患者における心室機能は、正常であり、かつ最終追跡で正常なままであった。従って、治療されていない幼児性ポーンプ病に通常示される進行性心臓病的状態を明らかに防いだ。
【００４０】
患者３は、６４ｇ／β２ （正常な上限は６５）のＬｖ質量を有していたが、他の点では治療開始時で正常なベースライン心臓評価であり、治療後７ ヶ月まで正常（現在３３ ｇ／ β２ のＬＶ質量）でありつづけた。
【００４１】
肺機能：治療の初期２ヶ月において、肺機能の改善が、ベースライン肺活量を超えての泣いているときの肺活量増加（患者１および２において、それぞれ２８％ および７０％ より大きな改善）ならびに泣いている間のＯ ２ 脱飽和の正常化（最大に泣いている間、患者１において７０％ のＯ ２ 飽和および患者２において８１％ ）によって明白であった。呼吸筋強度の減少もまた、−４５ｃｍＨ２ Ｏ の陰性吸入力操作（ＮＩＦＭ）によって、治療前の患者１において証明した。治療によって、ＮＩＦＭは−５５ ｃｍＨ ２ Ｏ まで増加した。しかし、両患者の肺機能において示された初期改善は、次の２ 〜３ ヶ月にわたってプラトーであり、その後抗ｒｈＧＡＡ 抗体の上昇に伴って衰えた。次いで両患者は、呼吸不全に陥ったウイルス性肺炎のエピソード後、人工呼吸器依存となった。
【００４２】
患者３は、治療初期では正常な肺機能を有しており、最終追跡で正常な肺機能試験を示すまで続いた。
【００４３】
神経発達および運動評価：Ａｌｂｅｒｔａ Ｉｎｆａｎｔ Ｍｏｔｏｒ Ｓｃａｌｅ（ＡＩＭＳ）を使用して、幼児において運動発達を評価した。３ 人の患者全てに対するＡＩＭＳスコアは、年齢に対して５ パーセンタイルより下で開始した（図１Ａ〜１Ｃ）。患者１は、５ パーセンタイルより下を維持したが、治療１３週での減退が始まる前は範囲内の増加を示した（図１Ａ）。患者２は、５ 週で２５パーセンタイルまで上昇し、スキルが増加しているにも関わらず７週後、結局５ パーセンタイルより下まで後退し、次いで１３週と１７週との間で急速な減少およびスキルの損失を示した（図１Ｂ）。臨床的な減少の始まりは再び、抗ｒｈＧＡＡ 抗体の上昇を伴った（図１Ａ、１Ｂ）。
【００４４】
同時に投与された神経学的評価およびデンバー発達評価は、患者１において、進行性のはなはだしい運動遅延を伴うがプラトーおよび次の後退が明らかになる１０週までに改善するはなはだしい運動遅延を有する、正常な個人社会（ｐｅｒｓｏｎａｌ−ｓｏｃｉａｌ ）領域、言語領域、および良好な運動発達領域を示した。重要なことに、はなはだしい運動スキルは、１０週まで有意な進行を示しているが、決して正常に達していない。患者２は、後退が生じる１４〜１６週まで、良好な運動領域、個人社会領域、および言語領域における正常な発達スキルの達成を伴うだけの、はなはだしい運動範囲（ｍｏｔｏｒ ｓｐｈｅｒｅ）における中程度の発達遅延を示した。現今、両患者は、年齢に対して正常な個人社会発達を有するが、他全ての領域においては遅延している。
【００４５】
患者３は、ＡＩＭＳスコアの安定した増加を示し、治療１１週までに１０パーセンタイル以上に上昇し、２０週までに２５パーセンタイルより上に上昇し（図１Ｃ）、そして最終追跡では９０パーセンタイルより上に上昇した。９ヶ月齢で、彼は自主的に座りつづけ、移動のために相互にはい、そして手で掴むことで立ちつづけた。著しく、彼は１２ヶ月齢までに自主的に歩き、１４ヶ月齢までに手を使わずにしゃがみ、立つことができた。現今、彼はまた、全ての領域において歳相応の正常な神経学的評価およびデンバー発達評価である。
【００４６】
筋肉ＧＡＡ 活性およびグリコーゲン含有量：筋肉生検を、ｒｈＧＡＡ 治療の開始２ヶ月前の診断と同時になされた生検を有する患者１を除いてｒｈＧＡＡ 治療の開始１週間前にベースラインで実施した。ｒｈＧＡＡ 治療４ヵ月後、筋肉生検を、酵素注入３ 日後に反対の外側四頭筋から得た（谷（ｔｒｏｕｇｈ）レベル）。ｒｈＧＡＡ 治療で、ＧＡＡ 活性は、患者１および２の両者においてベースライン治療前レベルより２ 〜３ 倍以上増加し、患者３においては１８倍増加した（表３）。
【００４７】
【表３】
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【００４８】
ＧＡＡ 活性の絶対レベルは、正常筋肉に見られるＧＡＡ 活性の８％に近づいた。患者１および２において筋肉グリコーゲン含有量には目に見えるほどの変化はなかったが、グリコーゲンレベルは、患者３において正常な範囲内まで減少した。
【００４９】
組織学：全ての患者の治療前生検は、冷凍切片において筋線維の著しい空胞化を示した。やや薄い切片の評価は、線維がグリコーゲンたまり（ｌａｋｅ）の形成を伴ったグリコーゲンによって膨脹していることを示した。いくつかの線維においては、残りの膜のかすかな輪郭を認め得た。電子顕微鏡検査により、膨脹したリソソームおよび細胞質中で溶解してなくなった（ｌｙｉｎｇ ｆｒｅｅ）リソソームの両方においてグリコーゲンの存在を確認した。患者３からの生検は、他の２人の患者よりもリソソーム内にグリコーゲンが残留した（データは示さない）。
【００５０】
患者１および２の治療後４ヶ月の生検は、グリコーゲン蓄積の点で治療前生検と類似していた。しかし、患者３の治療後生検は、可視（ｖｉｓｉｂｌｅ ）グリコーゲンにおいて著しい減少があり、そしてほとんどの筋線維において本質的に正常な組織学であった。電子顕微鏡検査により、多くの残留膨脹リソソームにおいてグリコーゲンが枯渇していることを示した。いくつかのグリコーゲンたまりおよびグリコーゲンリッチリソソームが残っていた。
【００５１】
ウエスタンブロット分析
抗ｒｈＧＡＡ 抗体が患者１および２において発達するが患者３においては発達しない理由を研究するため、本発明者らは、各患者由来の線維芽細胞において発現された（しかし、非機能的）ＧＡＡ タンパク質の検出に特異的なウエスタンブロット分析を実施した。ＧＡＡ タンパク質は、患者１および２の線維芽細胞において検出されず、一方、ＧＡＡ タンパク質の容易に検出可能な前駆体（１１０ｋＤ ）形態を患者３において見出した。これらのパターンは、幼児性ＧＳＤ−ＩＩに罹患している他の患者において以前に見られていた（Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｌｏｅｇ， Ａ．Ｔ． ら、Ａｍ． Ｊ． Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ． ４４：７８７−７９３（１９８９） ）。予期される正常な線維芽細胞は、主として９５ｋＤおよび７６ｋＤのＧＡＡ タンパク質を有する。
【００５２】
さらなる研究
さらに３ 人の患者を、さらなる研究に登録した。３ 人全てがＣＲＩＭ陽性である。３ 〜６ 週間の治療（１０ｍｇ／ｋｇ 体重、ｒｈＧＡＡ の毎週静脈注入）後、心機能、筋強度、および運動発達の改善が見られた。
【００５３】
本明細書中に引用される全ての広報の教示は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【００５４】
本発明は、詳細に示され、その好ましい実施形態を参照して記載されるが、形態および詳細における種々の変更が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱せずになされ得ることが当業者によって理解される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１Ａ〜１Ｃは、酵素補充療法を与えた幼児ポーンプ病を有する３名の患者（患者１、図１Ａ；患者２、図１Ｂ；患者３、図１Ｃ）におけるＡｌｂｅｒｔａ Ｉｎｆａｎｔ Ｍｏｔｏｒ Ｓｃａｌｅ（ＡＩＭＳ）（黒菱形）、および組換えヒト酸α− グリコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ ）に対する抗体の力価（白菱形）により評価される運動発達における長期的なデータ（最初の１６ヶ月齢）を示す一連のグラフ図である。矢印は、酵素治療が開始されたときを示す。正常患者におけるＡＩＭＳスコアは、年齢に対して点線の曲線でプロットしている（下から上へ５、１０、２５、５０、７５および９５パーセンタイル）。
【図２】図２Ａ〜２Ｆは、酵素補充療法を与えた３名の幼児ポーンプ病患者（患者１、図２Ａおよび２Ｄ；患者２、図２Ｂおよび２Ｅ；患者３、図２Ｃおよび２Ｆ）における左心房容積（図２Ａ〜２Ｃ）および質量（図２Ｄ〜２Ｆ）の長期二次元心エコー測定を示す一連のグラフ図である。０週は、酵素治療の開始時の測定値を示す。白菱形、拡張終期容積測定値；黒菱形、収縮終期容積測定値。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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