(57)【要約】本発明は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される微生物に対する使用のための抗菌組成物を提供し、この組成物は、式Ｉを有する環式化合物、またはその誘導体を含み、ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、ＨまたはＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す。
2004509634.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される微生物に対する使用のための抗菌組成物であって、該組成物は、式Ｉを有する環式化合物、
【化１】
2004509634.tif 000026
またはその誘導体を含み、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す、抗菌組成物。
【請求項２】
物質中の微生物の増殖を防止および／もしくは阻害するための、ならびに／または物質中の微生物を死滅させるためのプロセスであって、該プロセスは、式Ｉを有する環式化合物、
【化２】
2004509634.tif 000027
またはその誘導体と該物質を接触させる工程を包含し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしく
は＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表し；
ここで、該微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される、プロセス。
【請求項３】
式Ｉを有する化合物、
【化３】
2004509634.tif 000028
またはその誘導体の、物質中の微生物の増殖を防止および／もしくは阻害するための、ならびに／または物質中の微生物を死滅させるための使用であって、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表し；
ここで、該微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される、使用。
【請求項４】
前記物質が食品または飼料である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の発明。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、式Ｉを有する化合物またはその誘導体であり、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏより選択され；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す、発明。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、式ＩＩを有する化合物、
【化４】
2004509634.tif 000029
またはその誘導体であり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、前記請求項で定義したとおりである、発明。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、式ＩＩＩを有する化合物、
【化５】
2004509634.tif 000030
またはその誘導体であり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、前記請求項で定義したとおりである、発明。
【請求項８】
前記化合物が、アスコピロンＰ、アスコピロンＭ、アスコピロンＴ、アスコピロンＴ１、アスコピロンＴ２、アスコピロンＴ３、およびそれらの混合物より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の発明。
【請求項９】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、式ＩＶの化合物、
【化６】
2004509634.tif 000031
またはその誘導体であり、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表し；
ここで、Ｒ６およびＲ７は、各々独立して、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す、発明。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、式Ｖの化合物、
【化７】
2004509634.tif 000032
またはその誘導体であり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、請求項９で定義したとおりである、発明。
【請求項１１】
式Ｉの化合物の誘導体がエステルである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の発明。
【請求項１２】
請求項１１に記載の発明であって、前記エステルが、前記環式化合物の−ＯＨ置換基から形成され、そして該エステルが、式−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３（式中、ｎおよびｐは各々独立して１〜２４である）エステルである、発明。
【請求項１３】
請求項９〜１２のいずれか１項に記載の発明であって、前記環式化合物が、以下：
【化８】
2004509634.tif 000033
の１つ以上より選択される、発明。
【請求項１４】
Ｒ３がＣＨ２ＯＨ基であるかまたはＣＨ２ＯＨ基を含む、請求項１〜１３に記載の発明。
【請求項１５】
前記環式化合物が５員環または６員環を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の発明。
【請求項１６】
前記式Ｉを有する環式化合物は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｉｎｎｏｃｕａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ｖａｒ．ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｉｌｉｉより選択される微生物に対して抗菌効果を有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の発明。
【請求項１７】
前記式Ｉを有する化合物は、抗酸化剤、保存料、および／またはキレート剤のうちの１つまたは複数と組み合わせて使用される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗菌剤に関する。より詳細には、本発明は一連のアンヒドロフルクトース誘導体の抗菌活性に関する。
【０００２】
様々な原因からの食物の劣化が文献に見られ、１つの原因に由来する劣化の１つの側面または別の側面を阻害する個々の化学物質が公知である。切断したての植物片の劣化、および色または風味の減少は、酸化、酵素、微生物、および金属イオンにより引き起こされることが知られている。例えば、酸味料は比較的低いｐＨ環境を維持することにより微生物分解を阻止することが公知であるが、その有効性は一時的にすぎない。
【０００３】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａは、２０００種を超える異なる株が存在し、ヒトの食中毒のより大きな原因の１つである。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａは、棹型のグラム陰性Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅの一属で、腸に生息して胃腸炎およびチフスのような感染症を引き起こす。侵襲性の場合、それらは腸チフスを引き起こし得る（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉにより引き起こされるチフス、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｐａｒａｔｙｐｈｉにより引き起こされるパラチフス熱）。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａの他の株は、食中毒（通常、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｐａｎａｍａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓであり、後者は家禽の汚染に対しても悪名高い）、および時として非腸管組織において敗血症を伴う。
【０００４】
ＳａｌｍｏｎｅｌｌａはｐＨ値が４．５より低いと増殖できないことは当該技術分野で周知である。結果として、高付加価値食品および非発酵肉製品などの穏やかな酸性製品は特にＳａｌｍｏｎｅｌｌａによる攻撃の影響を受けやすい。
【０００５】
肉製品に関して、亜硝酸塩が保存料としてしばしば使用される。しかしながら、亜硝酸塩の添加は、毒物学的理由から制限されている（ニトロソアミン形成に伴う危険性と合わせて、その急性毒性による）。結果として、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａは、１，０００ｐｐｍを超える濃度の亜硝酸塩でのみ阻害されるが、これは法定限度を遙かに超える。
【０００６】
その代わりに、亜硝酸塩とソルビン酸との組み合わせがＳａｌｍｏｎｅｌｌａに対する有効性を増加させ得ることが示されている［Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｂｙ　Ｓｏｄｉｕｍ　Ｎｉｔｒｉｔｅ　ａｎｄ　Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　Ｓｏｒｂａｔｅ　ｉｎ　Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，４７，１９８２，ｐ．１６１５　ｆｆ］。阻害は、２６００ｐｐｍのソルビン酸と組み合わせた５０ｐｐｍを超える濃度の亜硝酸塩で観測された。
【０００７】
バクテリオシン（ナイシン）のような他の薬剤は、食物中のＳａｌｍｏｎｅｌｌａを阻害し得ないが、一方で安息香酸は酸性製品においてのみ阻害効果が観測され得ることから適切ではない。異なる香辛料からの油抽出物のような植物性成分（または「天然物質」）の阻害効果もまた試験されたが、これもまたＳａｌｍｏｎｅｌｌａへの阻害効果を達成するために必要な濃度があまりに高いので、食物に対する知覚上の影響が強すぎた。
【０００８】
このように、今日まで、一方では化学物質が毒物学的観点から安全でなければならず、もう一方でそれらが製品に知覚上（ｓｅｎｓｏｒｉｃａｌｌｙ）の影響をあたえてはならないという理由から、化学物質の使用は厳しく制限されてきた。
【０００９】
本発明は、従来技術の化学物質に伴う問題を緩和し、アンヒドロフルクトース誘導体に基づく新規抗菌組成物を提供することを狙いとする。より詳細には、本発明は、食品／飼料における使用に適している抗菌剤を提供することを狙いとする。
【００１０】
第１の局面において、本発明は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される微生物に対する使用のための抗菌組成物を提供し、この組成物は、式Ｉを有する環式化合物、
【００１１】
【化９】
2004509634.tif 000003
またはその誘導体を含み、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す。
【００１２】
第２の局面において、本発明は、物質中の微生物の増殖を防止および／もしくは阻害するための、ならびに／または物質中の微生物を死滅させるためのプロセスを提供し、このプロセスは、式Ｉを有する環式化合物、
【００１３】
【化１０】
2004509634.tif 000004
またはその誘導体と該物質を接触させる工程を包含し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表し；
ここで、該微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される。
【００１４】
第３の局面において、本発明は、式Ｉを有する化合物、
【００１５】
【化１１】
2004509634.tif 000005
またはその誘導体の、物質中の微生物の増殖を防止および／もしくは阻害するための、ならびに／または物質中の微生物を死滅させるための使用に関連し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’より選択され、ここで、Ｒ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ’’であり、そしてＲ’’は、Ｃ１〜１０アルキルであり；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表し；
ここで、該微生物が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓより選択される。
【００１６】
好ましくは、物質とは食品または飼料である。したがって、好適な局面において、本発明は、食品および／または飼料における使用に適した、食中毒を阻害し、その中に含まれている細菌を無毒化するための抗菌物質に関する。
【００１７】
定義として、用語「抗菌薬」は、微生物を死滅させるか、あるいは微生物の増殖または繁殖を防止または阻害する物質を意味する。抗菌薬は、一般に効果のある微生物の型に応じて分類される。例えば、抗菌物質は細菌に対して効果があり、抗真菌性物質は酵母を含む真菌に対して効果があり、抗ウイルス性物質はウイルスに対して効果がある。特定の抗菌薬は、例えば抗生物質投薬療法などで体内に使用され得るが、一方で防腐剤のような他の抗菌薬は外部使用のみである。
【００１８】
好ましい局面において、本発明の環式化合物は、式Ｉを有する化合物、またはその誘導体であり、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、−ＯＨ、＝Ｏより選択され；
ここで、Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
ここで、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏより選択されるか、または該環式化合物の環上の隣接する原子との結合を表す。
【００１９】
より好適な局面において、本発明の環式化合物は、以下の式ＩＩを有する化合物：
【００２０】
【化１２】
2004509634.tif 000006
、またはその誘導体であり、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、上で定義したとおりである。
【００２１】
さらに好ましい局面において、本発明の環式化合物は、以下の式ＩＩＩを有する化合物：
【００２２】
【化１３】
2004509634.tif 000007
、またはその誘導体であり、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、上で定義したとおりである。
【００２３】
本発明の１つの好ましい局面において、この一般式の基Ｒ４およびＲ５は、独立して、ヒドロカルビル基であり得る。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒドロカルビル基」は、少なくともＣとＨとを含む基を意味し、必要に応じて、１つまたはそれ以上の他の適した置換基を含み得る。そのような置換基の例として、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ヒドロキシ、カルボキシル、エポキシ、アクリル、炭化水素、Ｎ−アシル、または環式基などが挙げられ得る。置換基が環式基であり得ることに加えて、置換基の組合せで環式基を形成し得る。ヒドロカルビル基が１個より多いＣを含む場合、それらの炭素は必ずしも互いに連結していることを必要としない。例えば、少なくとも２個の炭素は適した元素または基を介して連結してもよい。このように、ヒドロカルビル基はヘテロ原子を含み得る。適したヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、硫黄、窒素、および酸素を含む。
【００２５】
この一般式の基Ｒ４およびＲ５は、独立して、アルキル、アルケニル、シクロアルキルおよびアリールから選択され得るか、または一緒になって、アルキレンを表し得る。
【００２６】
本発明の特に好ましい局面において、式Ｉの化合物の誘導体は、エステルである。用語「エステル」は、モノエステル、ジエステル、トリエステル、およびポリエステルを含む。
【００２７】
好ましくは、式Ｉの化合物の誘導体は、エステル結合がＲ３置換基の−ＯＨ基から形成される、エステルである。この局面において、好ましくは、誘導体化されたＲ３置換基は、式−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３の基であり、ここで、ｎおよびｐは、互いに独立して、１〜２４、好ましくは１〜２０、好ましくは１〜１０、好ましくは１〜５、または好ましくは、１、２、もしくは３である。なおさらに好ましい実施形態において、誘導体化されたＲ３置換基は、式−ＣＨ２−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３の基であり、ここで、ｐは、１〜２４、好ましくは１〜２０、またはｐは１〜１０、またはｐは１〜５であり、そしてｎ＝１、２、または３である。
【００２８】
好ましくは、式Ｉの化合物の誘導体は、Ｒ１置換基および／またはＲ２置換基が−ＯＨ基であり、そしてＲ１置換基および／またはＲ２置換基の−ＯＨ基からエステル結合が形成されている、エステルである。この局面において、好ましくは、誘導体化されたＲ１置換基および／またはＲ２置換基は、式−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３の基であり、ここで、ｎおよびｐは、互いに独立して、１〜２４、好ましくは１〜２０、好ましくは１〜１０、好ましくは１〜５、または好ましくは１、２、もしくは３である。なおさらに好ましい実施形態において、誘導体化されたＲ１置換基および／またはＲ２置換基は、式−ＣＨ２−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３の基であり、ここで、ｐは、１〜２４、好ましくは１〜２０、またはｐは１〜１０、またはｐは１〜５であり、そしてｎ＝１、２、もしくは３である。
【００２９】
好ましくは、式Ｉの化合物の誘導体は、Ｒ１置換基および／またはＲ２置換基が−ＯＨ基であり、そしてＲ１置換基および／またはＲ２置換基の−ＯＨ基からエステル結合が形成されている、エステルである。この局面において、好ましくは、誘導体化されたＲ１置換基および／またはＲ２置換基は、式−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐＣＨ３の基であり、ここで、ｐは、１〜２４、好ましくは１〜２０、好ましくは１〜１０、好ましくは１〜５、または好ましくは１、２、もしくは３である。
【００３０】
式Ｉの化合物の好ましい局面において、式Ｉの化合物は、Ｒ１置換基が−ＯＨ基であり、そしてエステル結合が、Ｒ４置換基の−ＯＨ基およびＲ３置換基の−ＯＨ基から形成されている、ジエステルである。
【００３１】
非常に好ましい局面において、式Ｉの化合物の誘導体は以下の式の化合物である：
【００３２】
【化１４】
2004509634.tif 000008
この化合物（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−１，５−アンヒドロ−４−デオキシ−Ｄ−グリセロ−ヘキサ−３−エノピラノース−２−ウロース）は、Ａｎｄｅｒｓｅｎら（１９９８）、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　１，５−ａｎｈｙｄｒｏ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｓｅ：Ｘ−ｒａｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ　ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ　ｄｉｍｅｒｉｃ　ｆｏｒｍｓ、Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．１７：１０２７−１０３５の教示に従って調製され得る。
【００３３】
式Ｉの化合物の誘導体がエステルである本発明の局面が特に好ましい。なぜなら、その化合物は親油性であり得、そして／または疎水性と親水性との両方を有し得るからである。その化合物が疎水性と親水性との両方を有している場合、その化合物は乳濁液の水／油界面に容易に存在する。
【００３４】
乳濁液の水／油界面に化合物が存在することは、化合物が乳化剤として作用することを可能にし得る。したがって、本発明は二重機能効果を有する化合物をさらに提供し得る。この化合物は、抗菌薬としてかつ乳化剤としての両方で作用し得る。
【００３５】
本発明の特に好ましい局面において、環式化合物は、アスコピロン（Ａｓｃｏｐｙｒｏｎｅ）Ｐ、アスコピロンＭ、アスコピロンＴ、アスコピロンＴ１、アスコピロンＴ２、およびアスコピロンＴ３、ならびにそれらの混合物から選択され、これらの構造は、以下に示される。
【００３６】
【化１５】
2004509634.tif 000009
アスコピロンは公知の化合物である。１９７８年および１９８１年に、米国の科学者のグループが、モンタナのＷｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで、アスコピロンＰを有機合成の出発物質として使用する目的で、アミロペクチン、アミロース、およびセルロースの熱分解によりアスコピロンＰを調製した。［Ｓｈａｆｉｚａｄｅｈ，Ｆ．，Ｆｕｒｎｅａｕｘ　Ｒ．Ｈ．，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｔ．Ｔ．，およびＣｏｃｈｒａｎ，Ｔ．Ｇ．，１，５−Ａｎｈｙｄｒｏ−４−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−ｈｅｘ−１−ｅｎ−３−ｕｌｏｓｅ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｐｙｒｏｌｙｓｉｓ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．６７（１９７８）：４３３−４４７、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｔ．Ｔ．，Ｓｔｅｎｋｍａｐ，Ｒ．Ｅ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ｌ．Ｈ．，Ｃｏｃｈｒａｎ，Ｔ．Ｔ．，Ｓｈａｆｉｚａｄｅｈ，Ｆ．，およびＦｕｒｎｅａｕｘ　Ｒ．Ｈ．，Ｔｈｅ　ｃｒｙｓｔａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　１，５−ａｎｈｙｄｒｏ−４−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−ｈｅｘ−１−ｅｎ−３−ｕｌｏｓｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．９０（１９８１）：３１９−３２５］。彼らは、アスコピロンＰを、例えば、１Ｈおよび１３Ｃ　ＮＭＲ、ならびにＩＲ分光分析法により特性決定した。アスコピロンＰの３次元構造が提供された。熱分解により得られるアスコピロンＰの収率は、３％より少なく、複雑な分離法を用いなければならなかった。
【００３７】
アルプスで収集された、ほとんど研究されていない真菌のある種のなかにアスコピロンＰが天然に存在することが教示されている［Ｍ．−Ａ．Ｂａｕｔｅ，Ｇ．Ｄｅｆｆｉｅｕｘ，Ｊ．Ｖｅｒｃａｕｔｅｒｅｎ，Ｒ．Ｂａｕｔｅ，およびＢａｄｏｃ　Ａ．，Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｅｇｒａｄｉｎｇ　１，４−α−ｇｌｕｃａｎｓ　ｔｏ　Ａｓｃｏｐｙｒｏｎｅｓ　Ｐ　ａｎｄ　Ｔ　ｉｎ　Ｐｅｚｉｚａｌｅｓ　ａｄ　Ｔｕｂｅｒａｌｅｓ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３（１９９３）：４１−４５］。真菌のなかにアスコピロンＰが存在することは、アスコピロンＰが抗生物質として作用するだろうという仮説を直ちに促進した。しかしながら、アスコピロンＰは公開された試験において抗生物質として満足に機能しなかった。
【００３８】
本発明の化合物の多くは、１，５−アンヒドロフルクトースから誘導され得る。１，５−アンヒドロフルクトースは、細菌、紅藻、真菌、および哺乳動物に見られるモノケト糖である。紅藻および真菌において、１，５−アンヒドロフルクトースは、α−１，４−グルカンリアーゼ［ＥＣ４．２．２．１３］の作用により、それぞれ紅藻デンプンおよびグリコーゲンから生成される。
【００３９】
本発明の化合物が１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースから調製される場合、好ましくは、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースは英国特許出願公開第２２９６７１７号に従って調製される。言い換えると、好ましくは、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースは、α−１，４−グルカンリアーゼを実質的に純粋な形態で使用することを特徴とする、α−１，４−グルカンを酵素α−１，４−グルカンリアーゼで処理する工程を含む方法により調製される。
【００４０】
アスコピロンＰおよびアスコピロンＴは、アルミノチャワンタケ（Ｐｌｉｃａｒｉａ　ｌｅｉｏｃａｒｐａ）およびヒメウロコベニチャワンタケ（Ａｎｔｈｒａｃｏｂｉａ　ｍｅｌａｌｏｍａ）などのチャワンタケ目（Ｐｅｚｉｚａｌｅｓ）、および黒トリュフ（Ｔｕｂｅｒ　ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）のような塊菌目（Ｔｕｂｅｒａｌｅｓ）の真菌から調製された無細胞抽出物を使用して、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースから酵素調製され得る。アスコピロンＴ１は、アスコピロンＴの二水和型であり、一方アスコピロンＴ２およびＴ３は、アスコピロンＴの一水和型互変異性体である。
【００４１】
アスコピロンＭは、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ　ｖｕｌｇａｒｉｓなどのアミガサタケ真菌類（ｆｕｎｇｉ　Ｍｏｒｅｌｓ）、シャクマアミガサタケ（Ｇｙｒｏｍｉｔｒｅｓ）、チャワンタケ（Ｐｅｚｉｚａ　ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）などのチャワンタケ属（ｐｅｚｉｚｅｓ）から単離したＥＤＴＡ感受性デヒドラターゼにより、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースから調製され得る。
【００４２】
アスコピロンＭ、ＰおよびＴはまた、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースを穏やかな条件下アルカリで処理することにより化学的に生成され得る。［いくつかの五炭糖および１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースの分解における研究、デンプン分解酵素ａ−１，４−グルカンリアーゼの生成物（Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｍｅ　ｐｅｎｔｏｓｅｓ　ａｎｄ　ｏｆ　１，５−ａｎｈｙｄｒｏ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｓｅ，ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔａｒｃｈ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ　ａ−１，４−ｇｌｕｃａｎ　ｌｙａｓｅ）；Ｔｈｅｓｉｓ，Ａｈｍａｄ，Ｔ．，Ｔｈｅ　Ｓｗｅｄｉｓｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｗｅｄｅｎ，１９９５］。
【００４３】
化学的手段で本発明の化合物を調製する場合、これは以下の方法のうちの１つによって調製され得る：
（１）アスコピロンＰは、高温、例えば７０℃で、１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースを非水性酸で処理することにより生成され得る。
【００４４】
（２）アスコピロン（例えば、アスコピロンＰ、アスコピロンＴおよびアスコピロンＭ）は、Ａｈｍａｄ，Ｔ．、１９９５に従って、アルカリ処理により１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースから生成され得る。
【００４５】
生成した全てのアスコピロンの構造は、ＮＭＲ法により確認された。
【００４６】
好ましくは、本発明の化合物は、Ｍ．−Ａ．Ｂａｕｔｅら、［Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３（１９９３）：４１−４５］に開示されるような酵素的手段により調製される。例えば、アスコピロン（例えば、アスコピロンＰ、アスコピロンＴおよびアスコピロンＭ）は、Ｍ．−Ａ．Ｂａｕｔｅらに開示されるような酵素的手段を使用して１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースから生成され得る。
【００４７】
別の好ましい局面において、本発明の環式化合物は以下の式ＩＶ：
【００４８】
【化１６】
2004509634.tif 000010
、またはその誘導体であり、
Ｒ１およびＲ２は、独立して−ＯＨ、＝Ｏ、およびＯＲ’（ここでＲ’は、Ｈまたは−ＣＯＲ”であり、そしてＲ”は、Ｃ１〜１０アルキルである）から選択され；
Ｒ３は、−ＯＨ基を含む置換基であり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、ヒドロカルビル基、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏから選択されるか、またはこの環式化合物の環上の隣接原子との結合を表し；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨもしくは＝Ｏから選択されるか、またはこの環式化合物の環上の隣接原子との結合を表す。
【００４９】
より好ましい局面において、本発明の環式化合物は、以下の式Ｖ：
【００５０】
【化１７】
2004509634.tif 000011
、またはその誘導体であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、上で定義したとおりである。
【００５１】
なおより好ましくは、本発明の環式化合物は、以下のうちの１つ以上から選択される：
【００５２】
【化１８】
2004509634.tif 000012
本発明の特に好ましい局面において、Ｒ３は、ＣＨ２ＯＨ基であるかまたはこの基を含む。
【００５３】
好ましくは、本発明の環式化合物は五員または六員環を含む。
【００５４】
本発明の特に好ましい実施形態において、式Ｉを有する環式化合物は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｉｎｎｏｃｕａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ｖａｒ．ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅ、Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓおよびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｉｌｉｉから選択される微生物に対して抗菌効果を有する。
【００５５】
本発明の環式化合物は、単独で、または他の成分、例えば保存料、１つまたはそれ以上のキレート剤（例えば、ＥＤＴＡナトリウム塩、ポリリン酸塩、またはクエン酸塩）および／または１つまたはそれ以上の抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸塩、イソアスコルビン酸塩、アスコルビン酸塩パルミチン酸塩、ＢＨＡまたはＢＨＴ）と組み合わせて使用され得る。
【００５６】
試験は、ＡＰＰが、２４℃の水中で２週間安定であるが、２ヵ月後に完全に消失することを示す。ＡＰＰは、ｐＨ１．５〜５．５において安定であり、そしてｐＨを増加させるとさほど安定ではないことが報告されている。ｐＨ１１〜１２．５において、ＡＰＰは、５時間の半減期を有する。大部分の食物は酸性または中性であるので、安定性は、ＡＰＰを、本明細書中で上に列挙されるような抗酸化剤と組み合わせて使用することによって、改善され得る。
【００５７】
１つの好ましい実施形態において、化合物は、１つ以上の保存料と組み合わせて使用される。定義として、最も広義において、用語「保存料」は、微生物の増殖を阻害するか、または微生物を死滅させる全ての物質を包含することを意図する。より狭義において、保存料は０．５％またはそれより低い濃度で使用されることが一般に理解される。保存料としての使用が許可されている食品添加物は、１９９５年２月２０日のＥｕｒｏｐｅａｎ　Ｐａｒｌｉａｍｅｎｔ　ａｎｄ　ＣｏｕｎｃｉｌのＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ　Ｎｏ．９５／２／ＥＧに列挙されており、これは着色料および甘味料以外の食品添加物に関するものである。
【００５８】
本発明の化合物と組合せて使用するのに適している、ＥＵにおいて許可されている代表的な食品保存料は、ソルビン酸、安息香酸、ＰＨＢエステル（ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル）、および二酸化硫黄が挙げられる。これらの保存料の作用様式は、これらの効果範囲と合わせて以下に示す。
【００５９】
（ソルビン酸（Ｅ２００〜２０３））
作用様式：微生物の細胞中の異なる酵素を阻害する。
効果範囲：主に酵母およびカビならびにカタラーゼ陽性菌に対する。
カタラーゼ陰性菌ならびに乳酸菌およびクロストリジウム属（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）は阻害されない。
有効濃度：５００〜３０００ｐｐｍ。
食物中の最大許容量：ジャガイモ生地、プロセスチーズ、袋詰めのパン、高級ベーカリー製品、乳化ソースなどにおいて、２０００ｐｐｍまで。
【００６０】
（安息香酸（Ｅ２１０〜２１３））
作用様式：細胞膜を透過する酸素交換を阻害し、酵素構造に影響を与える。
効果範囲：ｐＨ約４．５までの酸性製品に限る。酵母およびカビを阻害し、細菌の限定された阻害をする（乳酸菌およびクロストリジウム属の阻害は、まったくまたはほとんどない）。
食物中の最大許容量：アスピック、果物調製物、マーマレードなどにおいて、５００ｐｐｍ。
【００６１】
（ＰＨＢエステル（ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル）（Ｅ２１４〜２１９））
作用様式：界面活性により細菌膜に損傷を与え、タンパク質変性により原形質に有害である。
効果範囲：３．０〜８．０の間のｐＨ範囲で、主に酵母および真菌、またグラム陽性菌も阻害する。
有効濃度：約０．０８％を超える濃度で検知される影響。
【００６２】
（二酸化硫黄（Ｅ２２０〜２２４；Ｅ２２６〜２２７））
作用様式：かなりの範囲までｐＨに依存し、実質これは酸性値のｐＨ（＜４、０）においてのみ有効である。非常に複雑な機構である。
効果範囲：主に抗菌性、とりわけグラム陰性好気性菌に対して。
有効濃度：好気性グラム陰性菌の阻害に対して２５０〜５００ｐｐｍ、グラム陽性菌、酵母、およびカビに対して８００〜２０００ｐｐｍ。
食物製品中の最大許容量：ドライフルーツ、家庭調製ワイン用の濃縮ブドウジュースにおいて最大２０００ｐｐｍ、いくつかの場合において最大２０〜３０ｐｐｍの量のみが許容される。
【００６３】
より特定の用途のため、本発明の化合物はまた、以下の保存料と組み合わせて使用され得る。すなわち、ビフェニル、ジフェニル、オルトフェニルフェノール、チアベンダゾール、ナイシン、ナタマイシン、ヘキサメチレンテトラミン、ジメチルジカルボネート、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、亜硝酸塩、プロピオン酸およびプロピオン酸塩、ならびにリゾチームである。これらの保存料の作用様式を、その効果範囲および特定の用途とあわせて以下に列挙する。
【００６４】
（ビフェニル、ジフェニル（Ｅ２３０））
効果範囲：カビの阻害。
果物の処理のための物質：柑橘果物の表面処理。
最大許容量：７０ｐｐｍ
（オルトフェニルフェノール（Ｅ２３１／Ｅ２３２））
Ｅ２３０と同様に、柑橘果物の表面処理として果物の処理に限る。
【００６５】
（チアベンダゾール（Ｅ２３３））
柑橘果物およびバナナの表面処理。
【００６６】
（ナイシン（ｎｉｓｉｎ）（Ｅ２３４））
作用様式：膜機能の妨害。
効果範囲：グラム陽性菌。グラム陰性菌には効果無し。
食物製品中の最大許容量（ＥＵ）：セモリナプディングおよび同様の製品において３ｐｐｍ、熟成チーズおよびプロセスチーズにおいて１２．５ｐｐｍ（＝１２．５ＩＵ／ｇ）、濃縮クリームにおいて１０ｐｐｍ、マスカルポーネにおいて１０ｐｐｍ。
【００６７】
（ナタマイシン（ピマリシン）（Ｅ２３５）
作用様式：細胞膜を特異的に攻撃し、ここで、一般に、ステリン（ｓｔｅｒｉｎｅ）との相互作用が生じて、これが膜の透過性を高める。
効果範囲：カビおよび酵母。細菌に対しては効果無し。通常の用量範囲は、約５０ｍｇ／ｌ以下。最大濃度は、最大５ｍｍの貫入で表面上１ｍｇ／ｄｍ２。
用途：ハード、セミハード、およびセミソフトチーズ、ならびに乾燥薫製ソーセージの表面処理。
【００６８】
（ヘキサメチレンテトラミン（Ｅ２３９））
ヘキサメチレンテトラミンは、水溶液中アンモニアをホルムアルデヒドに加えることにより形成される。微生物への効果は、ホルムアルデヒドによる。
プロヴォローネチーズにのみ許容される（２５ｐｐｍの残留量）。
【００６９】
（ジメチルジカルボネート（Ｅ２４２））
ノンアルコール飲料、ノンアルコールワイン、および液体濃縮物にのみ許容される。
【００７０】
（ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム（Ｅ２８４／Ｅ２８５））
キャビアにのみ許容される。
【００７１】
（亜硝酸塩（Ｅ２４９およびＥ２５０））
肉製品（「赤色製品」）の処理のための保存加工用亜硝酸塩（ｎｉｔｒｉｔｅ　ｃｕｒｉｎｇ　ｓａｌｔ）の形態において許容される。加熱処理されない保存加工および乾燥された肉製品のため、および他の保存加工された肉製品のために、ガイドラインとして１５０ｐｐｍの添加が決められている。この濃度は保存料効果を示さない。これは主にその技術的な性質（色、風味の形成）のため、ならびにその抗酸化効果のために添加される。
【００７２】
（プロピオン酸およびプロピオン酸塩（Ｅ２８０、Ｅ２８１、Ｅ２８２、およびＥ２８３））
作用様式：ソルビン酸と同様、ｐＨ＜４．５が最適である。
細胞中の蓄積が酵素の阻害をもたらす。
阻害の範囲：カビはｐＨ５．５で１２５〜１２５００ｐｐｍの濃度で阻害される。細菌の阻害のためには、より高い濃度が必要である（＞１６０００ｐｐｍ）。
適用：切断されて袋詰めされたパン。
最大許容量：３０００ｐｐｍ。
【００７３】
（リゾチーム（Ｅ１１０５））
完熟チーズのみ許容される。
最大許容量：充分量。
【００７４】
本出願人による本発明の化合物の阻害効果の研究は、培地（Ｅｌｌｉｋｅｒブロス）中、ほぼ中性のｐＨ（ｐＨ６．８）で試験され、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌の両方に対して効果が見られた。上記で記載した保存料の多くが主に低いｐＨで阻害効果を示しているので、本発明の化合物の使用は明らかに適用の潜在的範囲を拡張する。
【００７５】
原則として、化学的保存のための物質の使用は以下の要因に依存する：
（ａ）毒物学的に無害
・急性、準慢性、および長期間に適用された場合の、物質の効果。
・急性毒性（ＬＤ５０）、動態（ｃｉｎｅｔｉｃｓ）および代謝、薬理学的効果、遺伝毒性などの試験。
【００７６】
（ｂ）技術的／食品化学的側面：
・水での溶解性：増殖は水相中で進行するので、保存料は水溶性でなければならない
・食品成分との反応、風味を損なう問題（感覚的な容認）
・食品成分への支障（例えば、硫酸によるビタミンＢ１の破壊）。
【００７７】
食物および飼料製品における化学物質の抗菌有効性は、このように様々な異なる要因により決定される。数ある中で、微生物の個体群の構成、食品の構成（成分、ｐＨ、水分活性、含塩量など）、包装、時間−温度−条件などが、抗菌剤の阻害活性に影響する重要な要因である。
【００７８】
本発明は、ここで添付の図面を例示の目的のみに、そしてこれを参照して記載される。
【００７９】
（実施例）
（１．予備調査：グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌の阻害）
抗細菌活性を、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍおよびＬｉｓｔｅｒｉａ　ｉｎｎｏｃｕａを使用して調査した。
【００８０】
細菌増殖を、Ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍについて３７℃で２４時間、そしてＬｉｓｔｅｒｉａ　ｉｎｎｏｃｕａについて２０時間、両方を、１０ｅ３ｃｆｕ／ｍｌまたは１０ｅ５ｃｆｕ／ｍｌ（１０３コロニー形成単位／ｍｌまたは１０５コロニー形成単位／ｍｌ）の播種サイズで実施した。
【００８１】
両方の場合において、ＡＰＰは、十分な阻害効果を示した。
【００８２】
（Ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）
１０ｅ３および１０ｅ５でのＳ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍについて、完全な阻害を、２０００μｇ／ｍｌおよび４０００μｇ／ｍｌで観察した（図１および２を参照のこと）。中間的な阻害を５００μｇ／ｍｌで、強力な阻害を１０００μｇ／ｍｌで観察した。
【００８３】
（Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ）
１０ｅ３でのＬ．ｉｎｎｏｃｕａについて、ほぼ完全な阻害を２０００μｇ／ｍｌで、中間的な阻害を１０００μｇ／ｍｌで、そしてわずかな阻害を５００μｇ／ｍｌで観察した。１０ｅ５では、中間的な阻害を２０００μｇ／ｍｌで、わずかな阻害を１０００μｇ／ｍｌで観察し、５００μｇ／ｍｌではほとんど阻害しなかった。
【００８４】
上記の試験を全て、高播種レベルでの細菌について最適な増殖条件下で実施した。食餌において、これらの細菌についての増殖条件は好都合ではなく、播種レベルは低い。従って、これらの増殖を阻害するために、より低い用量を必要とする。換言すると、本発明の化合物のより低い濃度が、食物を毒する微生物または食物を害する微生物を十分に阻害するために、食品に必要である。
【００８５】
上記の結果は、グラム陰性細菌のＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ型（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）およびグラム陽性細菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｉｎｎｏｃｕａ）の両方をＡＰＰが阻害することを明確に示す。
【００８６】
研究室媒体および広範な食物系におけるａｓｃｏｐｙｒｏｎｅ　Ｐ（ＡＰＰ）の抗細菌性効果を調査するために、さらなる試験を、実施した。
【００８７】
（２．材料および方法）
（２．１　試験系統）
全ての微生物を、−８０℃での貯蔵から取り出した。ほとんどの微生物を、一晩のブロス培養からの生長細胞懸濁物として試験した。Ｂａｃｉｌｌｕｓ種およびＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種を、以前に調製しそして４℃で保存した内生胞子懸濁物として試験した。
【００８８】
ブロス培養およびバイオスクリーニング（Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ）試験について、ほとんどの細菌を、Ｂｒａｉｎ　Ｈｅａｒｔ　Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＨＩ，Ｏｘｏｉｄ（ｐＨ７．４））中で増殖させた。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅ　Ａ１０を、ｄｅ　Ｍａｎ，Ｒｏｇｏｓａ，Ｓｈａｒｐｅ培地（ＭＲＳ，Ｏｘｏｉｄ）中で増殖させた。酵母を、Ｓａｂｏｕｒａｕｄ液体培地（ＳＬＭ，Ｏｘｏｉｄ）中で増殖させた。ほとんどの細菌を、３０℃で培養した。乳酸菌を、豊富なＣＯ２雰囲気下の培地上で増殖させた。Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種を、Ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＲＣＭ）中にて３７℃で嫌気的に増殖させた。Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ、真菌および酵母を、２５℃で増殖させた。真菌を、Ｍａｌｔ　Ｅｘｔｒａｃｔ　Ａｇａｒ（ＭＥＡ，Ｏｘｏｉｄ）上で培養した。
【００８９】
（２．２　ＡＳＣＯＰＹＲＯＮＥ　Ｐ（ＡＰＰ）サンプル）
サンプルＥ００２０１２は粉末であり、脱イオン水中に溶解した。これを濾過せずに試験し、そしてミニウェル核酸試験、初期バイオスクリーニング試験（ｒｕｎ）（ＢＳ１２１１２００；ＢＳ１３１２００）およびミニシーダル（ｃｉｄａｌ）実験に使用した。このサンプルの濃度は、４９．３ｍｇ／ｍｌであった。さらなるＡＰＰサンプルを、以下のように調製した：３．８４ｇのバッチ番号ＡＰＰ２００１０２１３（５×４ｍｌ容量）を、１６９ｍｇ　ＡＰＰ／ｍｌの濃度に作製し、そして５．５ｇのバッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５（４×１０ｍｌ容量）を、１３８ｍｇ　ＡＰＰ／ｍｌの濃度に作製した。全てのサンプルを、使用するまで−２０℃で維持した。ストック溶液を、脱イオン水中で作製し、そして濾過滅菌した。これらのサンプルを、バイオスクリーニング試験ＢＳ０１０４１１およびＢＳ０１０４２０にて使用した。ＡＰＰ２００１０２１３を、以下の試験に使用した：８℃での鶏肉スープ（ＴＣＳ０１０４１２；ＴＣＳ０１０４３０）生肉（ＴＲＭ０１０５２１）。ＡＰＰ２００１０２１５を、バイオスクリーニング試験ＢＳ０１０５１０、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感受性試験および以下の試験において使用した：８℃での鶏肉スープ（ＴＣＳ０１０５２１）；２５℃でのリンゴジュース（ＴＡＪ０１０５３０）；乳（ＴＭＢＧ０１０６０５）、ソーセージ肉スラリー試験（ＴＣＭ０１０６０５）；さらなる生肉試験（ＴＲＭ０１０６２０）および調理した牛肉および鶏肉のスラリー試験（ＴＣＭ０１０６１９；ＴＣＣ０１０７０４）。
【００９０】
（２．３インビトロ増殖阻害試験方法の試験）
（２．３．１　ウェル拡散試験）
種々の試験微生物を播種した１０ｍｌアガープレートを、２０μｌの胞子懸濁物または一晩のブロスのいずれかの播種を使用して調製した。これは、約１０５〜１０６ｃｆｕ／ｍｌの播種レベルを与えた。プレートをセットした後、小ウェルを切断し、２０μｌのＡＰＰサンプルをロードした。プレートを、適切な温度で一晩インキュベートし、そして１〜２日後（微生物増殖が完全に可視化し得た後）に阻害の区域を試験した。
【００９１】
（２．３．２　バイオスクリーニング試験）
自動化Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｒｅａｄｅｒ　Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ　Ｃを使用して、ＡＰＰの存在下および非存在下にてこれらの系統の増殖曲線を測定した。Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ　Ｃは、２００ウェルの蜂巣マイクロタイタープレートでの垂直方向の同時光度測定によって濁度の発生（すなわち、増殖）を動力学的に測定する。この系は、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ　Ｃ分析機（これは、ＰＣ（ソフトウェア（ＢｉｏＬｉｎｋ　ｖ　５．３０））を組み込まれたインキュベーターおよび測定ユニットである）、プリンターおよび「Ｈｏｎｅｙｃｏｍｂ　２」キュベットマルチウェルプレートからなる。増殖曲線データを、ＢｉｏＬｉｎｋソフトウェアで分析し得るか、またはＥｘｃｅｌのようなプログラムに書き出し得る。
【００９２】
ブロス培養培地を、２７０μｌ容量で指向されたこれらのウェルに分配した。次いで、濾過滅菌したＡＰＰストック溶液の連続希釈物を、適切に同一のウェルに分配した。これらのウェルを、３０μｌの適切に希釈した一晩のブロス培養物または胞子懸濁物とインキュベートし、約１０３ｃｆｕ／ｍｌの最終播種レベルを得た。これらの試験物を、３０℃で２４時間または２５℃で７２時間のいずれかで（調査する微生物に依存して）、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ　Ｃ中にてインキュベートし、トレイを振盪した後２０分毎に読んだ。インキュベーション期間が終了した後、データを、分析のためにＥｘｃｅｌに書き出した。
【００９３】
（２．３．３　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種に対する感受性試験）
ＡＰＰ２１５のストック溶液（０．５％、１％および２％）を調製し、そして濾過滅菌した。調理した肉培地（ＣＭＭ，Ｏｘｏｉｄ）を、個々の試験管に１ｇの培地を分配し、次いで８．９ｍｌの水を補充することによって調製した。オートクレーブした後、１００μｌのＡＰＰストック溶液を添加して、最終濃度０ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍおよび２０００ｐｐｍのＡＰＰを得た．試験物を１００μｌのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ胞子とインキュベートして、約１０３ｃｆｕ／ｍｌの播種レベルを得た。これらの試験管を、３ｍｌの２％アガーで重層して、嫌気性を維持した。これらの試験物を、３７℃でインキュベートし、そして増殖の徴候（濁度、気体発生）について毎日試験した。
【００９４】
（２．４　インビトロシーダル実験）
１００μｌのＳＤＷ（滅菌脱イオン水）またはＡＰＰサンプルＥ００２０１２を、８９０μｌの１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ　７）に添加した。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　Ｓ２３の一晩の培養物１０μｌを、この試験物に添加し、これを、周囲温度で２時間インキュベートした。この時間の後、この細菌を、生存数で計数した。ＡＰＰサンプルの濃度は、２４．７μｇ／ｍｌであった。
【００９５】
（２．５　インビボ（食品）増殖阻害試験）
（２．５．１　鶏肉スープにおける食品試験）
地方のスーパーマーケットブランドの鶏肉スープのクリームを、モデル食品系として使用した。６００ｇパックを、地方のスーパーマーケットより購入した。これは、保存期間の短い、冷えた収納庫に保存された「新鮮な自家製型」のスープであった。これを選んだのは、肉、乳製品および野菜を含む広範な食品成分を含む、豊富な栄養性の食品系だからである。
【００９６】
成分は以下のように表記された：鶏肉ストック（水、カモ脂、鶏肉、塩、香味料、酵母抽出物、ブタゼラチン、グルコースシロップ、野菜濃縮物、乳タンパク質、糖、マルトデキストリン、植物性油、クエン酸、乳糖、鶏脂）、乳、鶏肉（９％）、クリーム（８％）、タマネギ、ジャガイモ、植物性油、改変トウモロコシ澱粉、小麦粉、レモンジュース、塩、白胡椒（ｐＨ５．９１２）。タンパク質：３．３％；炭水化物：４．７％；脂肪：７．２％；線維：０．２％；塩：０．１％。
【００９７】
試験物について、スープを２：１で水と混合し（サンプリングおよび混合を容易にするため）、そして１２１℃で１５分間オートクレーブすることにより滅菌した。各実験について、スープのｐＨを記録した；これは、ｐＨ５．７９〜５．８８の間であった。
【００９８】
ＴＣＳ０１０４１２／８（８℃でインキュベートした）について、ＡＰＰバッチ番号ＡＰＰ２００１０２１３（濃度１６９ｍｇ　ＡＰＰ／ｍｌ）を使用して、０ｐｐｍ、２０００ｐｐｍまたは４０００ｐｐｍのＡＰＰを含む試験物を調製した。５μｇの濾過滅菌したＡＰＰストック溶液を、９４ｇのスープに添加し、混合し、次いで、１ｍｌの希釈播種物懸濁物（適切な細胞または胞子）を添加して、１０３ｃｆｕ／ｇの試験播種レベルを得た。スープ混合物を、激しく振盪して、ＡＰＰおよび微生物の均一な分布を確実にした。これらの試験物を、生存数によって試験し、次いで、８℃でインキュベートし、週に２回を基本に試験した。
【００９９】
ＴＣＳ０１０４３０／２０（２０℃でインキュベートした）について、サンプルを、適切な濾過滅菌したＡＰＰストック溶液１ｇを添加した１８．８ｇ量および適切に希釈した０．２ｍｌ播種物に調製した。ＡＰＰおよび微生物の均一な分布を確実にするために、再度、十分注意した。この試験を、生存数によって一日１回を基本にサンプリングした。
【０１００】
ＴＣＳ０１０５２１／８（８℃でインキュベートした）について、サンプルを、２７．８ｇ量に調製した。１．５ｇのＡＰＰストック溶液を添加し、この試験物を、０．３ｍｌの適切に希釈した細胞懸濁物または胞子懸濁物とインキュベートして、約１０３ｃｆｕ／ｇの最終播種物を得た。ＡＰＰを、０ｐｐｍ、５００ｐｐｍおよび１０００ｐｐｍで試験し、そしてバッチ番号ＡＰＰ２００１０２１３を（１６９ｍｇ／ｍｌで）使用した。これらの試験物を、生存数によってサンプリングし、次いで、８℃でインキュベートし、週に２回を基本に試験した。
【０１０１】
（２．５．２　リンゴジュースでの試験（ＴＡＪ０１０５３０／２５））
８．９ｍｌのリンゴジュースサンプル（ｐＨ３．４２）を調製し、そしてオートクレーブした。バッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５を（１３８ｍｇ／ｍｌで）使用して、このジュースに１ｍｌ添加して０ｐｐｍ、１０００ｐｐｍおよび２０００ｐｐｍ　ＡＰＰに達するように濾過滅菌したストック溶液を調製した。試験物を、１００μｌの適切に希釈した、酵母培養物または以前に調製したＢｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ胞子の子嚢胞子懸濁物の一晩のＳＬＭブロスで播種した。これらの試験物を、２５℃でインキュベートし、そして増殖の徴候（例えば、濁度、菌糸体発生）について毎日試験した。
【０１０２】
（２．５．３　乳での試験（ＴＭＧＢ０１０６０５））
０．５％のグルコースおよび指示薬ブロモクレゾールパープル（０．０１％）を含む、ＵＨＴ乳のサンプル８．９ｍｌを調製し、オートクレーブによって滅菌した。ＡＰＰ添加前のｐＨは、ｐＨ６．６５であった。ＡＰＰバッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５（１３８ｍｇ／ｍｌ）の適切なストック溶液を調製し、濾過滅菌した。各々１ｍｌを乳に添加して、０ｐｐｍ、１０００ｐｐｍおよび２０００ｐｐｍ　ＡＰＰを含む試験物を調製した。次いで、試験物を、１００μｌの希釈した一晩のブロス培養物または胞子懸濁物とインキュベートして、約１０３ｃｆｕ／ｇの最終播種レベルを得た。これらおよび播種されていない試験物を、２０℃および８℃でインキュベートし、播種されていないコントロールと比べた可視的変化について毎日試験した。
【０１０３】
（２．５．４　調理したソーセージ肉スラリーでの試験（ＴＳＭ０１０６０５））
５００ｇのボローニャソーセージ肉混合物を、５００ｇのＢｒａｉｎ　Ｈｅａｒｔ　Ｉｎｆｕｓｉｏｎブロス（ＢＨＩＢ）と混合して、均一なスラリーを作製した。ボローニャソーセージ肉混合物は、以下（ｇ／ｋｇ）を含む：赤身牛肉３２０；赤身ブタ肉２０２；ラード２５０；水４０；グルコース５；澱粉１５５；スパイス混合物３．７５；グルタミン酸ナトリウム０．５；エリソルビン酸ナトリウム０．５４５；二リン酸ナトリウム３；ＮａＣｌ２０；亜硝酸ナトリウム０．１５。肉スラリーの２００ｇのサンプルを、オートクレーブした。この肉はまだ温かいが、完全に再混合した。肉が冷えたら、これを、２ｍｌの１０５ｃｆｕ／ｍｌの胞子懸濁物または細胞懸濁物で播種し、再度混合した。各々の播種肉サンプルを、３×５０ｇサンプルに分配し、そして１ｍｌのＳＤＷ、または２．５％もしくは５％　ＡＰＰ溶液（バッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５）のいずれかを添加して、０ｐｐｍ、５００ｐｐｍおよび１０００ｐｐｍ　ＡＰＰを含む肉サンプルを調製した。この肉サンプルを再度完全に振盪して、均一な混合を確実にし、最初の生存数を得、サンプルを８℃でインキュベートした。サンプルを週に二度の間隔で得た。ソーセージ肉スラリーのｐＨは、６．２であった。
【０１０４】
（２．５．５．調理したミンチ状牛肉スラリーでの試験［ＴＣＭ０１０６１９］）
１ｋｇのミンチ状牛肉（地元の食肉店から購入した）を、１リットルのＢＨＩと混合した。この食肉スラリーの２００ｇ部分を、オートクレーブにかけた。この食肉を冷却して、ｐＨを記録し（ｐＨ６．２４）、各ポットに、２．０ｍｌの１０５芽胞または細胞を接種し、この食肉を徹底的に再度混合した。各接種した２００ｇのポットを、３×５０ｇの部分に分けた。各ポットに１ｍｌのＳＤＷ、５％または１０％のＡＰＰ（バッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５）を添加し、食肉を再び徹底的に混合した。最初の生菌数計測を行い、食肉を８℃でインキュベートし、１週間に２回サンプリングした。調理したミンチ状牛肉スラリーのｐＨは、６．２４であった。
【０１０５】
（２．５．６．調理したミンチ状鶏肉スラリー［ＴＣＣ０１０７０４］）
１ｋｇのミンチ状鶏肉（主に脂肪のない肉）を、地元の食肉店から購入した。これを、１リットルのＢＨＩと混合し、混合し、オートクレーブにかける前に１００ｇのサンプルとして分けた。まだ温かいうちに、食肉を再度徹底的に混合した。調理したときに、食肉に、１ｍｌの１０５芽胞または細胞（一晩培養したブロスから）を接種し、再度混合した。次いで、サンプルを、３×２５ｇの部分に分け、これに、０．５ｍｌの濾過滅菌したＡＰＰ２００１０２１５（５％または１０％のストック溶液として）または水を添加した。最初の生菌数計測を行い、次いで、サンプルを、８℃でインキュベートし、１週間に２回試験した。鶏肉スラリーのｐＨは、６．４２であった。
【０１０６】
（２．５．７．生肉での未接種試験［ＴＲＭ０１０５２１］）
３００ｇの生のミンチ状牛肉を、地元の食肉店から購入した。ＡＰＰ２００１２１３の２％（２０，０００ｐｐｍ）ストック溶液または水のいずれか１０ｇを添加し、食肉を徹底的に混合した。最初の計測を行い、次いで、食肉を８℃でインキュベートし、３日間連続でサンプリングした。生肉のｐＨは、５．３であった。
【０１０７】
（２．５．８．生肉での接種試験［ＴＲＭ０１０６２０］）
新鮮なステーキ用牛肉を、地元の食肉店から購入し、清潔な機械でミンチ状にした。生肉（約ｐＨ６．２）を８×９０サンプルにわけ、１０３ｃｆｕ／ｍｌの試験生物を接種した。この食肉を、ストマッカー（ｓｔｏｍａｃｈｅｒ）を用いて徹底的に混合した。１０ｇのＳＤＷまたは２％のＡＰＰ（バッチ番号ＡＰＰ２００１０２１５）を添加し、この食肉を、再び徹底的に混合した。最初の生菌数計測を行い、この食肉を、８℃でインキュベートし、非選択寒天（ＭＰＣＡ）および選択寒天：ＳａｌｍｏｎｅｌｌａについてはＸＬＤ；Ｏｘｆｏｒｄ選択寒天（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；およびＳＴＡＡ寒天（Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ）を用いて、翌日サンプリングした。生肉のｐＨは、ｐＨ５．３であった。
【０１０８】
（３．結果）
（３．１．インビトロ増殖阻害結果）
（３．１．１．ウェル拡散の結果）
試験溶液の濃度（試験時には未知）は、４９．３ｍｇ／ｍｌ（４．９％）であった。試験した全ての株は、このレベルに感受性であった。これらの株は、以下を含んでいた：Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　２０４；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ　Ｃａｍｐｄｅｎ；Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　Ｓ２３；Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ；Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅ　Ａ１０；Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ　ＣＲＡ７８８３；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　３２７；Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ　ＣＲＡ６４１３；Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＡＴＣＣ　９７６３。
【０１０９】
（３．１．２．バイオスクリーン試験の結果：細菌および酵母のインビトロ感受性）
バイオスクリーン試験の結果を、表１〜４および図３〜７にまとめる。バイオスクリーンランＢＳ０１０５１０は、一晩の雷雨が原因の停電により中断された。
【０１１０】
（３．１．３．ＡＰＰに対するＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種の選択性）
調理した肉培地中、３７℃で嫌気的に増殖させた４つのＣｌ．ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ株（株１．２２１；Ｃａｍｐｄｅｎ；ＡＢＣ２０；４．４４０）および１つの株Ｃｌ．ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｉｃｕｍ　２７５３に対しては、試験した最高レベル（２０００ｐｐｍ　ＡＰＰ２００１０２１５）でも増殖阻害は観察されなかった。
【０１１１】
（３．２．インビトロ殺菌試験の結果）
２４．７μｇ／ｍｌのＡＰＰを含む緩衝液中、周囲温度で２時間インキュベートした後、Ｌｉｓｔｅｒｉａ数は、一定のままであった（表５）。
【０１１２】
（３．３．インビボ（食品）増殖阻害試験の結果）
（３．３．１．鶏肉スープ試行の結果）
８℃［ＴＣＳ０１０４１２、ＴＣＳ０１０５２１］および２０℃［ＴＣＳ０１０４３０］でインキュベートした鶏肉スープ実験の結果を、表６〜８および図８〜１１に示す。ＡＰＰは、製品の色に影響しなかった。
【０１１３】
（３．３．２．周囲温度［ＴＡＪ０１０５３０］でインキュベートしたりんごジュースでの試行の結果）
１０００ｐｐｍおよび２０００ｐｐｍのＡＰＰにより、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｉｌｉｉ　ＣＲＡ２２９の増殖が３〜４日間制御された。２０００ｐｐｍにより、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＡＴＣＣ９７６３の増殖が１日間制御された。Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　４５８；Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ　ｕｖａｒｕｍ　ＣＢＳ５０７４；Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ　ｖａｒ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ　ＣＢＳ８１６１；ならびに熱耐性真菌であるＢｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ　ｆｕｌｖａ　０４００２１およびＢ．ｎｉｖｅａ　１６３６４２に対しては、１０００ｐｐｍまたは２０００ｐｐｍのＡＰＰでは、増殖阻害が達成されなかった。
【０１１４】
（３．３．３．　８℃および２０℃でインキュベートした牛乳試行での結果［ＴＭＧＢ０１０６０５］）
２０℃での結果は、以下のとおりであった：
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｂｒ．ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ、Ｌｂ．ｓａｋｅに関しては、２０００ｐｐｍで制御は認められなかった。
【０１１５】
Ｐｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓに関しては、２０００ｐｐｍで２〜３日間の制御
Ｂ．ｃｅｒｅｕｓに関しては、１０００ｐｐｍで４日間、２０００ｐｐｍで６日間の制御。
【０１１６】
８℃での結果は、以下のとおりであった：
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｂ．ｓａｋｅ、Ｂ．ｃｅｒｅｕｓに関しては、２０００ｐｐｍで制御が認められなかった
Ｂｒ．ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａに関しては、２０００ｐｐｍで１日間の制御
Ｐｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓに関しては、２０００ｐｐｍで７日間を超える制御。
【０１１７】
（３．３．４．　８℃での、調理したソーセージ肉スラリーでの試行の結果［ＴＳＭ０１０６０５］（ｐＨ６．２））
結果を、表９にまとめる。
【０１１８】
（３．３．５．調理したミンチ状牛肉スラリーでの試行の結果［ＴＣＭ０１０６１９］）
増殖曲線のグラフを図１２に示し、表１０にまとめる。
【０１１９】
（３．３．６．　８℃での、調理したミンチ状鶏肉スラリーでの試行の結果［ＴＣＣ０１０７０４］）
増殖曲線を図１３に示し、表１１にまとめる。
【０１２０】
（３．３．７．　８℃での生肉での未接種試行の結果［ＴＲＭ０１０５２１］（ｐＨ５．３１））
結果を表１２に示す：数は、コントロールおよびＡＰＰサンプルにおいて同一であった。食肉の色に対するＡＰＰのネガティブな影響は認められなかった。
【０１２１】
（３．３．８．　８℃での、生肉での接種試行の結果［ＴＲＭ０１０６２０］）
あらゆる用心をしたにも拘らず、食肉のＴＡＶＣは高かった；１０６ｃｆｕ／ｇから試行の終わりまでには＞１０７ｃｆｕ／ｇに上昇。ＡＰＰの有意な効果は認められなかった。食肉の色に対するネガティブな影響は認められなかった。
【０１２２】
（４．０　結論）
上記試験の結果を、表１３にまとめる。これらの試験は、２０００ｐｐｍのＡＰＰが、以下の微生物に対して有効であることを示す：Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｐｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｌｂ　ｓａｋｅ、Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｂｒ．ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ、Ｚ．ｂａｉｌｉｉおよびＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ。
【０１２３】
認められた阻害活性は、おそらく静菌性であるが、さらなる防腐剤の障害の存在下では（特に、低温）、おそらく経時的に殺菌的効果が達成される。いくつかの細菌に対しては、ＡＰＰの効力は実験的培地と比較して、食品システムにおいてより良好であった。このことは、おそらく生物が、食品中ではあまり十分に増殖できないからである。ＡＰＰの効力は、食品の化学的組成が異なることに起因して、異なる食品で変化し得る。例えば、ＡＰＰは、鶏肉スープより、ソーセージ食肉モデルであまり有効でなかった。
【０１２４】
（５．０．表にまとめたデータ）
【０１２５】
【表１】
2004509634.tif 000013
【０１２６】
【表２】
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【０１２７】
【表３】
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【０１２８】
【表４】
2004509634.tif 000016
【０１２９】
【表５】
2004509634.tif 000017
【０１３０】
【表６】
2004509634.tif 000018
【０１３１】
【表７】
2004509634.tif 000019
【０１３２】
【表８】
2004509634.tif 000020
【０１３３】
【表９】
2004509634.tif 000021
【０１３４】
【表１０】
2004509634.tif 000022
【０１３５】
【表１１】
2004509634.tif 000023
【０１３６】
【表１２】
2004509634.tif 000024
【０１３７】
【表１３】
2004509634.tif 000025
本発明の記載された方法およびシステムの種々の改変およびバリエーションは、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく当業者に明らかである。本発明を行うために記載された様式の改変は、関連技術分野の当業者に明らかであり、従って、これらの改変は、上記の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ＤＳＭＺ５５４（１０ｅ３　ｃｆｕ／ｍｌ）に対するＡｓｃｏｐｙｒｏｎｅ　Ｐ（ＡＰＰ）の抗細菌活性を示す。
【図２】
図２は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ＤＳＭＺ５５４（１０ｅ５　ｃｆｕ／ｍｌ）に対するＡｓｃｏｐｙｒｏｎｅ　Ｐ（ＡＰＰ）の抗細菌活性を示す。
【図３】
図３は、３０℃で２４時間にわたるＳ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　Ｓ２９に対するＡＰＰの効果を示す。
【図４】
図４は、７２時間にわたるＢｒ．ｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ　ＣＲＡ７８８３の増殖に対するＡＰＰの効果を示す。
【図５】
図５は、３０℃で２４時間にわたるＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　２７２の増殖に対するＡＰＰの効果を示す。
【図６】
図６は、３０℃で２４時間にわたるＢ．ｃｅｒｅｕｓ　２０４の増殖に対するＡＰＰの効果を示す。
【図７】
図７は、３０℃で２４時間にわたるＰｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　３７５６の増殖に対するＡＰＰの効果を示す。
【図８】
図８は、８℃（検出限界１０２ｃｆｕ／ｇ）で６０日間にわたる鶏肉スープ中のＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　２７２に対するＡＰＰの効果を示す。
【図９】
図９は、８℃（検出限界１０２ｃｆｕ／ｇ）で４９日間にわたる鶏肉スープ中のＰｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　３７５６に対するＡＰＰの効果を示す。
【図１０】
図１０は、８℃、検出限界１０２ｃｆｕ／ｍｌで鶏肉スープ中のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　Ｓ２９に対するＡＰＰの効果を示す。試験を、４９日目で終了した。
【図１１】
図１１は、８℃、検出限界１０２ｃｆｕ／ｍｌで鶏肉スープ中のＢ．ｃｅｒｅｕｓ　２０４　胞子に対するＡＰＰの効果を示す。試験を、４９日目で終了した。
【図１２】
図１２は、８℃で、調理した細かく刻んだ牛肉スラリー系でのＳ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　Ｓ２９に対するＡＰＰの効果を示す。
【図１３】
図１３は、８℃で、細かく刻んだ鶏肉スラリーでのＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　Ｓ２９に対するＡＰＰの効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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