(57)【要約】プレバイオティック食品、食品添加物または食品サプリメントとしてのα−ラクトアルブミンおよびα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物の使用、ならびにすぐに摂取できる食品のプレバイオティック活性を改善する方法およびα−ラクトアルブミンを含んでなるかかるすぐに摂取できる食品が記載される。さらに、α−ラクトアルブミンを活性化合物として含んでなる胃腸炎の治療のための医薬組成物が記載される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレバイオティック食品、食品材料、食品添加物または食品サプリメントとしてのα−ラクトアルブミンの使用。
【請求項２】
プレバイオティック食品、食品材料、食品添加物または食品サプリメントとしてのα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物の使用。
【請求項３】
α−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物中のα−ラクトアルブミン含量が少なくとも６０ｗ／ｗ％である請求項２記載の使用。
【請求項４】
すぐに摂取できる食品の製造の間に、該すぐに摂取できる形態の食品中のα−ラクトアルブミン含量が少なくとも０．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５−１．５ｗ／ｗ％、より好ましくは約１ｗ／ｗ％となるような量でα−ラクトアルブミンを添加する工程を含むことを特徴とするすぐに摂取できる食品のプレバイオティック活性を改善する方法。
【請求項５】
すぐに摂取できる形態の食品が、α−ラクトアルブミン：カゼイン比が少なくとも０．１、好ましくは０．１−０．６、より好ましくは０．２−０．４でカゼインを含む乳製品である請求項４記載の方法。
【請求項６】
すぐに摂取できる形態の食品が、好ましくは、ミルク、発酵乳製品、デザート、インスタント飲料、チーズおよびチーズ製品から選択され、好ましくはミルクおよび発酵乳製品、好ましくはヨーグルトまたはヨーグルト製品から選択される乳製品である請求項４または５記載の方法。
【請求項７】
α−ラクトアルブミンの少なくとも一部がα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物として添加される請求項４〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
α−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物中のα−ラクトアルブミン含量が少なくとも６０ｗ／ｗ％である請求項４〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
食品製造の間に、さらに、食品等級の鉄化合物を添加する工程を含むことを特徴とする請求項４〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも０．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５−１．５ｗ／ｗ％、より好ましくは約１ｗ／ｗ％のα−ラクトアルブミンを含むすぐに摂取できる食品。
【請求項１１】
食品が、α−ラクトアルブミン：カゼイン比が少なくとも０．１、好ましくは０．１−０．６、より好ましくは０．２−０．４でカゼインを含む乳製品である請求項１０記載のすぐに摂取できる食品。
【請求項１２】
好ましくはミルク、発酵乳製品、デザート、インスタント飲料、チーズおよびチーズ製品から選択され、好ましくはミルクおよび発酵乳製品、好ましくはヨーグルトまたはヨーグルト製品から選択される請求項１０または１１記載のすぐに摂取できる食品。
【請求項１３】
食品等級の鉄化合物を含む請求項１０〜１２のいずれか１項記載のすぐに摂取できる食品。
【請求項１４】
胃腸炎の治療のための医薬の製造における活性化合物としてのα−ラクトアルブミンの使用。
【請求項１５】
動物の胃腸管における乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬の製造における活性化合物としてのα−ラクトアルブミンの使用。
【請求項１６】
医薬中のα−ラクトアルブミン含量が０．２ｗ／ｗ％以上、好ましくは０．４ｗ／ｗ％以上、最も好ましくは０．６ｗ／ｗ％以上である請求項１４または１５記載の使用。
【請求項１７】
さらに鉄化合物を含む請求項１４〜１６のいずれか１項記載の使用。
【請求項１８】
活性成分として０．２ｗ／ｗ％以上、好ましくは０．４ｗ／ｗ％以上、最も好ましくは０．６ｗ／ｗ％以上のα−ラクトアルブミンを含む、特に胃腸炎の治療または動物の胃腸管における乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬組成物。
【請求項１９】
活性成分としてα−ラクトアルブミンおよび鉄化合物を含む、特に胃腸炎の治療または動物の胃腸管における乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、α−ラクトアルブミンおよびα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物のプレバイオティック食品、食品添加物または食品サプリメントとしての使用、および食品のプレバイオティック活性を改善する方法ならびに改善されたプレバイオティック活性を有するすぐに摂取できる（ready-to-consume）食品およびα−ラクトアルブミンを活性成分として含む医薬組成物に関する。
【０００２】
食品工業において、通常は主に乳酸桿菌およびビフィズス菌などの乳酸産生菌からなる有益な腸内細菌集団を改善することにより、消費者に健康上の利益を与えうる食品に対する要望がある。
かかる製品を生産するための２つのアプローチが当該分野で知られている。直接的アプローチは、食品中、通常は発酵乳製品、例えばヨーグルト中に、生きている微生物の調製品を提供することである。食品中に存在するかかる有益な微生物は、「プロバイオティクス（probiotics）」としても知られている。プロバイオティクスを含む栄養調製品は、例えば、ＥＰ−Ａ−９０４７８４およびＷＯ−Ａ−９９／０２１７０に記載されている。プロバイオティクスに生じる問題の１つは、その実体部分が、かかる細菌の標的場所である結腸上流の胃腸管の通過に耐えられないことである。
【０００３】
上記の問題は、食品サプリメントを食品に添加する、いわゆる間接的アプローチによって回避される。該食品サプリメントは、胃腸管、特に結腸に常在する上記の有益な微生物の増殖を支持および刺激する。これらの食品添加物は「プレバイオティクス（prebiotics）」として知られている。幅広い範囲のプレバイオティック特性を有する消化不可能な炭水化物が記載されている。例えば、フルクト−オリゴ糖のナチュラルデザートクリームにおけるプレバイオティックとしての使用がＥＰ−Ａ−９７０ ６１８に記載され；プレバイオティックとしてのＤ−タガトースの使用がＷＯ−Ａ−９ ９４３ ２１７から知られており；食物調製品におけるプレバイオティックとしてのイヌリンがＷＯ−Ａ−９ ９０７ ２３９に記載され；プレバイオティックとしてのβ−グルカンおよび誘導化合物がＷＯ−Ａ−９ ８２６ ７８７に記載されている。さらに、プレバイオティックとしてのフルクタンがＵＳ−５，８４０，３６１から知られている。
【０００４】
この度、驚くべきことに、上記炭水化物の他に、例えば牛乳中に生じる蛋白である、蛋白α−ラクトアルブミンが有意なプレバイオティック効果を示すことが見出された。ホエーが結腸中のビフィズス菌の増殖を刺激できることは知られているが（例えば、B.A. Whartonら、Lactoferrin: Structure and Function, T.W.Hutchnesら（編）、Plenum Press, New York, USA 1994; S.E. Balmerら、Arch, Dis. Child. 1989: 1678-1684; B.Kleessenら、Acta Peadiatr. 1995; 84: 1347-1356）、そのプレバイオティック効果はホエー蛋白グリコマクロペプチド（ＧＭＰ）、チーズ製造工程におけるミルクのカード化においてレンネットによって形成されるカゼインフラグメントに帰すものであった。今回、α−ラクトアルブミンおよびα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物がホエー全体と比べてプレバイオティック特性を改善することが見出された。したがって、本発明は、α−ラクトアルブミンの新規な用途、およびα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物のプレバイオティック食品、食品材料、食品添加物および食品サプリメントとしての使用に関する。
【０００５】
α−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物を使用するとき、α−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物中のα−ラクトアルブミン含量は、好ましくは、少なくとも６０ｗ／ｗ％である。例えば、α−ラクトアルブミン含量が２０％未満のホエー蛋白濃縮物を食品、特に乳製品に添加する場合、該乳製品中で所望のα−ラクトアルブミンレベルを得るためには、比較的大量のホエー蛋白濃縮物を添加しなければならない。あまりに大量の蛋白を食品に添加することによって起こり得る負の官能的影響を回避するために、少なくとも６０ｗ／ｗ％にてα−ラクトアルブミンを含む蛋白濃縮物を使用することが好ましい。かかる濃縮物を用いると、いずれの負の官能的影響を伴うことなく、すぐに摂取できる乳製品、例えばヨーグルト中３０ｗ／ｗ％（全蛋白に基づく）のα−ラクトアルブミン含量を得ることができる。
【０００６】
第２の態様において、本発明は、すぐに摂取できる食品の製造の間に、該すぐに摂取できる形態の食品中のα−ラクトアルブミン含量が少なくとも０．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５−１．５ｗ／ｗ％、より好ましくは約１ｗ／ｗ％になるような量でα−ラクトアルブミンを添加する工程を含むことを特徴とする、すぐに摂取できる食品のプレバイオティック活性を改善する方法に関する。「約」なる語は、０．１％、好ましくは０．０５ｗ／ｗ％の偏差を許容する。
【０００７】
「すぐに摂取できる形態の食品」、「すぐに摂取できる食品」および「消費者食品」なる語は、その組成を実質的に変える必要が無く、直接摂取するのに適当な食品として理解されるべきである。しかしながら、すぐに摂取できる食品は、摂取する前に、該食品を例えば、ホイップ（例えば、クリームの場合）または冷凍（例えば、アイスクリーム製品の場合）または解凍（例えば、冷凍食品）することによって、加工処理（その組成を実質的に改変することなく）してもよい。
【０００８】
工業的食品基礎材料、例えば、ホエー蛋白、またはα−ラクトアルブミン含量が豊富であってもよいホエー蛋白濃縮物はそれ自体、摂取できないが、多くの食品の調製品、例えば、乳幼児用調乳およびアイスクリーム組成物中において使用される。したがって、かかる食品基礎材料は、「すぐに摂取できる」食品とはみなされない。「ホエー蛋白濃縮物」なる語は当該分野で既知である；例えば、Walstraら、1999, Dairy technology, ISBN 0-8247-0228-Xを参照のこと。本明細書において「αＷＰＣ」とも称されるかかる豊富な濃縮物は、ＥＰ−Ｂ−０ ６０４ ６８４から知られている。αＷＰＣのα−ラクトアルブミン含量は、調製品により、２０−８０ｗ／ｗ％の間を変化しうるが、通常のＷＰＣのα−ラクトアルブミン含量は約１２−１８ｗ／ｗ％である。この点において、ＥＰ−Ａ−０ ４４３ ７６３、ＷＯ−Ａ−０１／０５２４３、ＵＳ−Ａ−４ ４８５ ０４０、ＵＳ−Ａ−５ ５０３ ８６４およびＦＲ−Ａ−２ ６６９ ８１０もまた参照される。例えば、これらの参考文献から、乳幼児調乳中にαＷＰＣを配合することが知られている。
【０００９】
本発明によると、事実上のいずれかのすぐに摂取できる食品のプレバイオティック活性を改善することができ；当業者は、本発明の方法にしたがって製造できる適当なすぐに摂取できる食品を理解するであろう。例示的なすぐに摂取できる食品は、例えば、乳製品、飲料、スープ、ソース、シロップ、キャンディーバー、栄養バー、臨床的および／または健康食品、スポーツ食品（例えば、タブレット、カプセルの形態）および加工肉、鳥肉または魚製品（例えば、ソーセージ）、ならびにすぐに摂取できる食事、例えば、電子レンジで加熱可能な予め調理した食事である。
【００１０】
「改善されたプレバイオティック活性」なる語は、製造工程の間にα−ラクトアルブミンを添加しない同じ食品と比べた場合、本発明の方法にしたがって製造された食品のプレバイオティック活性の改善として理解されるべきである。このように、プレバイオティック活性を、最初はプレバイオティック活性を有さなかった食品に与えることができ、または、ある程度のプレバイオティック活性を有する食品のプレバイオティック活性をさらに増加させることができる。
【００１１】
α−ラクトアルブミンは、食品の製造の間のいずれか適当な加工処理工程において添加でき；当業者は、α−ラクトアルブミンを添加することのできる製造プロセスの段階の適当な工程を理解するであろう。また、α−ラクトアルブミンは、食品製造プロセスの最終工程として添加することができる。α−ラクトアルブミンは精製形態で、例えば、ホエー蛋白濃縮物、好ましくは、α−ラクトアルブミン含量を高くしたホエー蛋白濃縮物として添加することができる。α−ラクトアルブミンは適当には、例えば、液体形態、例えば、溶液または懸濁液として、または粉末形態で添加することができる。本発明によると、α−ラクトアルブミンは、例えば、インスタント飲料の調製のために水または別の飲料に溶解すべき乾燥粉末処方中に配合することができる。
【００１２】
α−ラクトアルブミンを含む多くのすぐに摂取できる食品が当該分野で知られている。例えば、牛乳およびヨーグルトは約０．１ｗ／ｗ％のα−ラクトアルブミンを含み；乳幼児用調乳は約０．１−０．３ｗ／ｗ％のα−ラクトアルブミンを含む。該α−ラクトアルブミンレベルは、通常、αＷＰＣを乳幼児用調乳に配合することによって達成されるが、本当の母乳を模倣する適当と考えられる濃度まで溶かしたとき、該処方は、本発明の方法にしたがって得られるような高いα−ラクトアルブミン含量を有さない。
今回、上記の方法が、付加的なα−ラクトアルブミンを含まない対応食品と比べて、改善された有益なプレバイオティック活性を有する食品をもたらすことが見出された。
【００１３】
好ましい具体例において、すぐに摂取できる形態の食品は、α−ラクトアルブミン：カゼイン比が少なくとも０．１、好ましくは０．１−０．６、より好ましくは０．２−０．４であるカゼインを含む乳製品である。これは、重量に基づき、該食品がα−ラクトアルブミン含量の多くて１０倍のカゼイン含量を有することを意味する。乳製品は、通常、カゼインとα−ラクトアルブミンの両方を含む。しかしながら、乳製品中のα−ラクトアルブミン：カゼイン比は、０．０７以下である。したがって、本発明の方法によって製造される少なくとも０．１のα−ラクトアルブミン：カゼイン比を有する乳製品は、α−ラクトアルブミンを豊富に含む。乳製品中のα−ラクトアルブミンレベルの上昇のため、該乳製品は有意な改善されたプレバイオティック効果を示す。
【００１４】
好ましくは、α−ラクトアルブミン：カゼイン比は０．１−０．６である。０．６を越えると、乳製品の官能性があまり好ましくなくなる可能性がある。最も好ましくは、該重量比は０．２−０．４であり；これらの範囲内で、乳製品の官能品質を干渉することなく、有意なプレバイオティック効果を得ることができる。
【００１５】
本発明によると、α−ラクトアルブミンをいずれのすぐに摂取できる食品に配合してもよいが、乳製品、特にミルクおよびヨーグルトが好ましい。「乳製品」なる語を用いる場合、ミルクから得られる全てのすぐに摂取できる製品、例えば、ミルク、チーズ、ヨーグルト、クリームなどが意味される。工業的食品基礎材料、例えば、カゼインおよびホエー蛋白濃縮物はそれ自体、消費者製品とみなされない。すぐに摂取できる乳製品は、好ましくは、ミルク、発酵乳製品、例えばヨーグルト、インスタント飲料、デザート、チーズおよびチーズ製品から選択され、最も好ましくは、ミルクおよび発酵乳製品、例えば、ヨーグルト、フレッシュチーズ、ソフトカードチーズ、ケフィール、バターミルクから選択され、非常に有利な具体例において、乳製品はヨーグルトまたはヨーグルト製品、例えば、ＡＢＴ−型のマイルドヨーグルトである。
【００１６】
本発明の方法の好ましい具体例において、上記に説明した理由のため、α−ラクトアルブミンの好ましくは全てではなく、少なくとも一部をα−ラクトアルブミンを豊富に含むホエー蛋白濃縮物（αＷＰＣ）として添加する。αＷＰＣは、上記に説明したように、食品における有意な官能的結果を回避するために、好ましくは、少なくとも６０ｗ／ｗ％のα−ラクトアルブミン含量を有する。
【００１７】
魅力的な具体例において、本発明の方法は、さらに、該食品の製造の間に、食品等級の鉄化合物を添加する工程を含む。当業者は、食品に配合するのに適当な食品等級の鉄化合物を理解するであろう。当業者は、さらに、食品中に配合するために、かかる鉄化合物の適した量を見出すことができるであろう。出典明示により本明細書の一部とされるWhartonら、上掲を参照のこと。すなわち、α−ラクトアルブミンと食品等級で生物学的適合性の鉄化合物の存在との組み合わせが、かかる化合物の不在下のα−ラクトアルブミンと比べて、プレバイオティック活性について相乗効果を有することが見出された。
【００１８】
本発明は、また、少なくとも０．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５−１．５ｗ／ｗ％、より好ましくは約１ｗ／ｗ％にてα−ラクトアルブミンを含むすぐに摂取できる食品に関する。好ましい具体例において、該食品は、α−ラクトアルブミン：カゼイン比が少なくとも０．１、好ましくは０．１−０．６、より好ましくは０．２−０．４であるα−ラクトアルブミンを豊富に含むカゼインを含む乳製品である。好ましくは、すぐに摂取できる食品は、好ましくはミルク、発酵乳製品、デザート、インスタント飲料、チーズおよびチーズ製品から選択される、好ましくはミルクおよび発酵乳製品から選択される乳製品であり；非常に特別な具体例において、該乳製品はヨーグルトである。また別の具体例において、すぐに摂取できる食品は、食品等級の鉄化合物を含む。
【００１９】
好ましくは、本発明の食品の蛋白部分は、１０−４０、好ましくは２０−３５、最も好ましくは２５−３０ｗ／ｗ％のα−ラクトアルブミンを含む。
【００２０】
さらに、本発明は、胃腸炎の治療および動物、好ましくはヒトを包含する哺乳動物の胃腸管における乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬の製造における活性化合物としてのα−ラクトアルブミンの使用に関する。本明細書において、「胃腸炎」なる語は、胃炎および腸炎の両方ならびに急性および慢性の両形態の同時性胃炎および腸炎を包含する。α−ラクトアルブミンはプレバイオティック剤として活性であることが示されたので、該化合物は、腸疾患、特に胃腸炎に対する医薬組成物および動物の胃腸管における乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬組成物における配合に非常に適当である。該医薬組成物のために、錠剤、シロップ、坐剤などのいずれか適当な投与形態を選択することができる。医薬組成物の調製の場合、α−ラクトアルブミンをいずれかの適当な担体、希釈剤、賦形剤または当該分野で既知のいずれか他の適当な添加剤と組み合わせることができる。その高いトリプトファン含量のために、崩壊した睡眠リズムに対して使用できる概日リズムを調節するための医薬におけるα−ラクトアルブミンの使用がＦＲ−Ａ−２ ７５４ １８１に記載されていることに留意すべきである。
【００２１】
好ましくは、医薬中のα−ラクトアルブミン含量は０．２ｗ／ｗ％以上、好ましくは０．４ｗ／ｗ％以上、最も好ましくは０．６ｗ／ｗ％以上である。
本発明は、また、活性成分として０．２ｗ／ｗ％以上、好ましくは０．４ｗ／ｗ％以上、最も好ましくは０．６ｗ／ｗ％以上のα−ラクトアルブミンを含む、特に胃腸炎の治療または動物の胃腸管において乳酸産生微生物の在菌数を増やすための医薬組成物に関する。好ましくは、該医薬組成物は、α−ラクトアルブミンと鉄化合物の両方を活性成分として含む。考えられる目的を考慮して、当業者は、適した鉄化合物ならびに医薬組成物中に配合すべきかかる鉄化合物の量を選択することができるであろう。
【００２２】
本発明は、ここに、さらに下記の実施例および図面によって論じられる。
【実施例】
【００２３】
実施例１
ラット糞中の乳酸桿菌総数に対するα−ラクトアルブミンの影響
６週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラット、ＳＰＦ（特異的病原体を有さない）を表１に示すようにグループに分けた。動物には、ＡＩＮ９３にしたがう１０％蛋白、２０％脂質（５０％パーム油、５０％コーン油）、６３％グルコース、２％セルロースおよび５％のビタミンおよびミネラル混合物を含有する食餌を与えた。水は無制限に供給した。
【００２４】
【表１】
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＊    ＷＰＣ８０（Esprion 580, DMV International, The Netherlands）。該製品は約１２％のα−ラクトアルブミン／蛋白を含有する。
＊＊  α−ラクトアルブミンを豊富に含むＷＰＣ８０（６０％α−ラクトアルブミン／蛋白）
「カゼイン」食餌（Ａ）において、蛋白源は１００％カゼインであった。
「ＷＰＣ」食餌（Ｂ）において、蛋白は５０％カゼインおよび５０％ＷＰＣにより構成された。
αＷＰＣ食餌（Ｃ）において、蛋白は５０％カゼインおよび５０％α−ＷＰＣより構成された。
【００２５】
１４日後、乳酸桿菌（ＬＡＢ）の量を糞中にて測定した。乳酸桿菌の総量は、新鮮な糞の希釈物をＭＲＳプレート上に塗布することによって決定される（J.C. de Manら、Appl. Bact. 1960; 23: 130-135参照, E. Merck Nederland B.V., Amsterdam, The Netherlandsから購入される）。乳酸桿菌叢の組成は、ＭＲＳプレート上のコロニーの代表試料をＲＡＰＤ−ＰＣＲにより分析し、次いで１６Ｓ ＲＮＡ配列分析によって決定した（H.J.M. Harmsenら、J. Pediatr. Gastroenterol, Nutr. 2000; 30: 61-67）。
結果を表２および図１に示す。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
表２および図１に示されるように、ラット糞中の乳酸桿菌数は、αＷＰＣ食餌を与えたとき、カゼインまたはＷＰＣ食餌と比べて有意に増加した。α−ラクトアルブミンは、重要な硫黄含有アミノ酸であるシステインを多量に含有する。いずれの説明にとらわれることなく、αＷＰＣのプレバイオティック効果は、下記の態様のうち１以上に起因し得る。
・タウリンはシステインの分解産物であり、グリシンと同様に、胆汁酸抱合の基質である。グリシン抱合型胆汁酸は、タウリン抱合型胆汁酸より容易に脱抱合される。脱抱合型胆汁酸は乳酸菌にとって毒性であるので、食餌中のより多量のシステインがより多くのタウリン抱合型胆汁酸をもたらすことができ、そのことが乳酸菌集団に好ましい。
・ムチンは、腸上皮細胞によって分泌される硫黄含有物質である。ムチンがもはや腸上皮に接着しない場合、それらは腸管腔における乳酸菌に対する基質である。この理由で、食餌中のより多量のシステインがムチン産生の増加を導くことができ、そのことが乳酸菌の増殖に好ましい。
・システインおよびシステインから生成されるグルタチオンは、強力な還元剤である。還元性環境は、乳酸菌の生存を促進する。
【００２８】
実施例２
ラットの盲腸および結腸中の乳酸稈菌数に対する食餌中の蛋白の影響
該実験は実験１と同様に行われた。ラットを殺し、盲腸を採取した。１０または２０％蛋白を含有する食餌を用いた。２０％蛋白を含有する食餌はヒトの西欧食に非常に似ている。この場合、食餌中のグルコースの一部を余分な蛋白に置き換えた。より初期の実験において、有意な効果を見出す機会を増やすために、１０％蛋白を含有する下限近くの食餌だけを使用した。
１４日の摂食期間後、ラットを殺し、盲腸および結腸内容物を採取した。生理的塩類溶液中の盲腸および結腸内容物の連続１０倍希釈物をＭＲＳプレート上に塗布して、乳酸桿菌総数を測定した。
結果を表３および図２Ａおよび２Ｂに示す。乳酸桿菌数は、カゼインまたはＷＰＣと比べてαＷＰＣを含有する食餌をラットに与えた場合、有意により高い。乳酸桿菌数は、カゼインまたはＷＰＣの代わりにαＷＰＣを用いた場合、盲腸および結腸の両方において、ならびに１０％および２０％蛋白グループの両方において有意により高い。
【００２９】
【表３】
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【００３０】
実施例３
盲腸中の乳酸桿菌集団の総数および組成に対するラット食餌中の蛋白の影響
実験１において使用したのと同じラットを用いて盲腸中の乳酸桿菌の総数を測定し、乳酸桿菌叢の組成を分析した。実験の最後に、ラットを殺し、盲腸を採取した。盲腸内容物を連続１０倍希釈段階により生理的塩類溶液中に希釈した。希釈物をＭＲＳプレート上に塗布した。乳酸桿菌叢の組成は、ＭＲＳプレート上のコロニーの代表試料をＲＡＰＤ−ＰＣＲにより分析し、次いで１６Ｓ ＲＮＡ配列分析によって測定した。
結果を表４および図３に示す。表４および図３に示されるように、ラット盲腸中の乳酸桿菌数は、カゼインまたはＷＰＣ食餌と比べてαＷＰＣ食餌を用いた場合、有意により高い。さらに、乳酸桿菌叢はより多様であり、それは一般に有益であると認めらる。αＷＰＣはラクトバチラス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）およびラクトバチラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）の増殖を促進する。
【００３１】
【表４】
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【００３２】
実施例４
糞抽出物中の乳酸桿菌の増殖
水中における１０％（ｗ／ｗ）糞抽出物中の乳酸桿菌の増殖をモニターした。該抽出物に、実験３で得られたコロニーから単離したエル・アシドフィルスまたはエル・ロイテリを接種した。これを行うことにより、発明者らは、ラットから単離し、１６Ｓ ＲＮＡ分析により特徴付けられたラクトバチラス種を使用した。乳酸桿菌を接種した抽出物を嫌気性条件下、３７℃でインキュベートした。連続１０倍希釈物をＭＲＳプレート上に塗布することによって増殖をモニターした。
結果を図４ａおよび４ｂに示す。図４ａは、αＷＰＣまたはカゼイン食餌を消費しているラット由来の糞抽出物がラクトバチラス・アシドフィルスの増殖を同程度まで支持することを示す。しかしながら、ラクトバチラス・ロイテリは、カゼインと比べてαＷＰＣを消費しているラット由来の糞抽出物によって、大いに刺激される。硫黄含有アミノ酸が豊富な食餌（例えば、αＷＰＣ食餌）は、上記に説明したように、乳酸桿菌の増殖を刺激することが予測される。糞抽出物中における増殖の場合、乳酸桿菌増殖に対する増加したムチン分泌の正の影響が、最も深部に達すると考えられる。ムチンは、乳酸桿菌の増殖を支持し、糞中において検出することができる。見出された結果は、αＷＰＣはエル・ロイテリおよびエル・アシドフィルスを刺激することが見出された実験３の結果とも一致した。
【００３３】
実施例５
サルモネラに対する耐性に対するαＷＰＣの影響
６週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラット、ＳＰＦを表５に示すようにグループに分けた。
【００３４】
【表５】
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【００３５】
ラットに、表５に示すように蛋白源の異なる半合成食餌を与えた。１４日後、動物に、５ｘ１０６ＣＦＵ サルモネラ・エンテリティジス（Salmonella enteritidis）を含有する生理的塩類溶液中懸濁液１ｍｌを経口投与した。感染過程の後、新鮮な糞の希釈物をサルモネラ種の選択的培地であるＲａｍｂａｃｈ寒天プレート上に塗布した（A. Rambach, Appl. Environm. Microbiol., 1990; 56: 301-303参照、E. Merck Nederland B.V., Amsterdam, The Netherlandsから購入される）。
結果を図５に示す。該図は、食餌中のαＷＰＣを用いることが、サルモネラの有意により迅速な洗浄を導くことを示す。サルモネラの高速洗浄は、疾患からの迅速な回復を意味する。換言すると、サルモネラがもはや排出されることのないとき、感染が終わる。上記に示したように、α−ラクトアルブミンが豊富な（故に、システインが豊富な）食餌は、胃腸管における乳酸菌（ＬＡＢ）数の増加を導くであろう。強力なＬＡＢ集団は、接着部位および栄養分の競合ならびにｐＨの低下のために、例えば、サルモネラに対する増加したコロニー形成耐性を導くであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、ラット糞中の乳酸桿菌数に対するα−ラクトアルブミンの存在の影響を示す。
【図２】図２は、ラット盲腸および結腸中の乳酸桿菌数に対するカゼイン、ＷＰＣおよびα−ラクトアルブミンの影響を示す。
【図３】図３は、ラット盲腸および結腸中の乳酸桿菌数に対するカゼイン、ＷＰＣおよびα−ラクトアルブミンの影響を示す。
【図４】図４は、異なる蛋白調製物を含有する食餌を与えられたラット由来の糞抽出物中の乳酸稈菌の増殖を示す。
【図５】図５は、サルモネラ・エンテリティジス（Salmonella enteritidis）の排出物に対するラット食餌中のα−ラクトアルブミン含有の影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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