(57)【要約】属、種、品種及び／又は地理的産地に関して生物学的材料の由来を決定する方法に関する。この方法の場合には、羽、羽毛、鱗片、毛髪又は角質からの線維性構造物を、この構造タンパク質を予め可溶化することなしに酵素を用いて特異的に直接分解させて分解ペプチドのプールにする。この場合に、アミノ酸に対する全加水分解は行わず、さらに特別な分析物も調査しない。線維性構造タンパク質からの分解ペプチドの得られたプールを、さらに分離技術又は単離技術を行わずに、有利にＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ−質量分析にかけ、得られた質量分析図を標準質量分析図と比較する。適当な特異的質量ピークが、羽、羽毛、鱗片、角質及び／又は毛髪の異種の混合物の定量化のために用いられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的材料の属、種、品種及び／又は地理的産地を、鱗片、毛髪、羽、羽毛及び／又は角質に基づいて定性的及び／又は定量的に決定する方法において、
ａ）  鱗片、毛髪、羽、羽毛及び／又は角質又はそれらの一部を化学的又は生物学的接触反応により分解断片又は前記分解断片の誘導体の形に変換し、
ｂ）  この分解断片又は前記分解断片の誘導体を質量分析により個々に又はグループで分析し、
ｃ）  個々の分析シグナル又はシグナルのグループに関して、標準試料と比較することにより定性的及び／又は定量的に属、種、品種及び／又は地理的産地を決定することを特徴とする、生物学的試料の属、種、品種及び／又は地理的産地を、鱗片、毛髪、羽、羽毛及び／又は角質に基づいて定性的及び／又は定量的に決定する方法。
【請求項２】
工程ａ）  においてジスルフィド架橋を分解する還元性又は酸化性の試薬を添加する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程ａ）において硫黄架橋を還元する又は酸化する試薬を使用し、この試薬はチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホンアミド、ペルオキシド、金属触媒、ホスフィン、ホスフィット、ホスフェート、ハロゲン化物、オキシラン、アルキン、オレフィン、アミド、アミン、カルボン酸、カルボン酸エステル、アルコール、アルデヒド又はケトンの物質クラスからなる１つ又は複数の官能性グループを有する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
工程ａ）において生体高分子に対して化学的加水分解試薬を使用する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項５】
工程ａ）の反応を、加水分解により分解する酵素、特にトリプシン、キモトリプシン、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ（Ｖ８−プロテアーゼ）、エンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃ、エンドプロテイナーゼＡｒｇ−Ｃ、エンドプロテイナーゼＡｓｐ−Ｎ、トロンビン、パパイン、ペプシン、プラスミン又はこれらの酵素の混合物を用いて実施する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項６】
生体触媒として、細菌、菌類、植物細胞、動物細胞又はヒト細胞または組織又はこれらの組み合わせ、もしくは酵素、抗体、タンパク質、リボエンザイム、ペプチド又はその他の生体触媒ならびにこれらの組み合わせを使用する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
生成された分解断片の特異的検出システムとして、質量分析によるイオン化法、特にＡＰＣＩ(atmospheric pressure chemical ionization)、ＣＩ(chemical ionization), ＥＩ(electron ionization)、ＥＳＩ(electrospray ionization)、ＦＡＢ(fast atom bombardment)、ＦＤ(field desorption)、ＦＩ(field ionization)、ＬＩＬＢＩＤ(laser induced liquid beam ionization desorption)、ＬＳＩＭＳ(liquid secondary ion mass spectrometry)、ＭＡＬＤＩ(matrix assisted laser desorption ionization)、ＰＢ(particle beam)、ＰＤ(plasma desorption)、ＳＩＭＳ(secondary ion mass spectrometry)又はＴＳＰ(thermospray)又はこれらのイオン化法の組み合わせを使用する、請求項２から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
生成された分解断片を液体クロマトグラフィー、特にＬＣ（liquid chromatography）、ＭＰＬＣ（middle pressure liquid chromatography）、ＨＰＬＣ（high performance liquid chromatography）で分離し、検出する、請求項２から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
生成された分解断片をキャピラリー電気泳動法で分離し、その後に検出する、請求項２から８までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
一連の試料の処理をロボットで及び／又は複合−加熱−冷却装置を使用して実施する、請求項２から９までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
１種又は数種の微量滴定プレートから１つ又は複数のロボットにより試料を１つ又は複数の分析装置へ移送する、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
生物学的材料、特に構造形成タンパク質又はその誘導体を含有する生物学的材料の由来を同定するための、請求項１から１２までのいずれか１項記載の方法の使用。
【請求項１３】
得られた分解パターンを適当な基準試料を用いて相応する属、種又は品種に分類する、請求項１６記載の使用。
【請求項１４】
得られた分解パターンを定量的に評価する、請求項１６記載の使用。
【請求項１５】
異なる生物学的材料を混合した形の含有物を決定する、請求項１６記載の使用。
【請求項１６】
品質保証、真贋調査、司法的及び医学的調査の範囲内で動物試料の由来を特性決定する、請求項１２から１５までのいずれか１項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生物学的材料の属、種、品種及び／又は地理的産地を、鱗片、毛髪、羽、羽毛及び／又は角質に基づいて定性的及び／又は定量的に決定する方法並びに前記方法の使用に関する。
【０００２】
生物学的試料において属、種、品種及び／又は地理的産地を決定するために、今まで多様な方法が適用されていた。巨視的及び微視的な視覚上の調査を挙げることができ、その際、生物学的試料において調査された特徴の多様な過渡的形態に基づき正確な分類が困難なことが多く、高度な経験が必要とされる（"Determination of Feather and Down Species"（羽及び羽毛の種の決定）, Proposed IDFB Method-1 May 1999, IDFB Handbook, 添付の写しを参照）。特にこの方法は、調査すべき特徴を確認できない試料の場合に機能しない。
【０００３】
別の判別方法はタンパク質化学法の適用であり、この場合、種の特定は今までは変性条件下又は非変性条件下で全タンパク質試料の電気泳動による分離（"Nachweis der Tierart bei nativem Muskelfleisch in Polyacrylamid-Gelen mit Hilfe der Standard-Elektrophorese (PAGE)"（標準電気泳動（ＰＡＧＥ））を用いてポリアクリルアミドゲル中で天然の筋肉で動物種を検出）, Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG, Methode 06.00-27, Dezember 1988, Herausgeber und Redaktion : bgw, Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaermedizin, Band I/3, Lebensmittel (L), Teil 2, Beuth Verlag GmbH, Berlin, Koeln, Wien, Zuerich）により行われるか、又は等電点分画電気泳動法（"Nachweis der Tierart bei Milch, Milchprodukten und Kaese mit Hilfe der isoelektrischen Fokussierung (PAGIF)"（等電点電気泳動（ＰＡＧＩＦ）を用いて乳、乳製品及びチーズで動物種を検出）, Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG, Methode 01.00-39, Januar 1995, Herausgeber und Redaktion : bgw, Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaermedizin, Band 1/3, Lebensmittel (L), Teil 1 a, Beuth Verlag GmbH, Berlin, Koeln, Wien, Zuerich ;"Nachweis von Kuhmilchkasein in Kaese aus Schaf-, Ziegen-oder Bueffelmilch oder aus Gemischen von Schaf-, Ziegen-oder Bueffelmilch"（羊−、山羊−又は水牛の乳からなるか又は羊−、山羊−又は水牛の乳の混合物からなるチーズ中の牛乳カゼインの検出）, Referenzmethode, Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG, Methode 03.52-1 (EG), September 1997, Herausgeber und Redaktion : bgvv, Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaermedizin, Band I/lb, Lebensmittel (L), Teil 1 b, Beuth Verlag GmbH, Berlin, Koeln, Wien, Zuerich）により行われるこれらの方法の適用のためには比較的多量の出発量の溶解したタンパク質が必要である。
【０００４】
酵素抗体法による検出も同様に動物種の決定のために使用することができる（"Immunoenzymatischer Nachweis der Tierart bei erhitztem Fleisch-und Fleischerzeugnissen ; ELISA-Verfahren im Mikrotitertestsystem"（加熱した肉及び肉製品における動物種の免疫酵素検出；微量滴定システムでのＥＬＩＳＡ法）, Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG, Methode 06.00-47, November 1999, Herausgeber und Redaktion : bgw, Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaermedizin, Band 1/1 c, Lebensmittel (L), Teil 1 c, Beuth Verlag GmbH, Berlin, Koeln, Wien, Zuerich）。この場合、異なる動物種の場合にこの感度が著しく変動する。
【０００５】
タンパク質に関連しない方法はキャピラリーガスクロマトグラフィーであり、これは誘導化された脂肪酸の分離のために使用される（"Nachweis von rohem und erhitztem Rind-und Schweinefleisch in Fleisch und Fleischerzeugnissen, Screening-Verfahren"（肉及び肉製品中の生及び加熱した牛肉及び豚肉の検出、スクリーニング法）, Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG, Methode 01.00-39, Januar 1995, Herausgeber und Redaktion : bgw, Bundesinstitut fuer gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinaermedizin, Band 1/3, Lebensmittel (L), Teil 2, Beuth Verlag GmbH, Berlin, Koeln, Wien, Zuerich）。この方法は、脂肪酸を含まない試料に関しては適用できない。
【０００６】
同様に核酸に基づく方法も適用され、この場合、特にポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の適用が挙げられ、この反応の場合に種に特異的な核酸配列を直接検出するか又は偏在する配列を増幅し、その後に種に特異的な配列の差異に関して制限消化により調査する。しかしながらこの方法は必然的に増幅可能な核酸の存在に拘束されてしまう（"Genetisches Analyseverfahren zur Abstammungsueberpruefung biologischer Materialien durch Verwendung artspezifischer Primer"（種特異的プライマーを使用することによる生物学的材料の由来調査のための遺伝子工学的分析法）, DE 198 42 991 A1）。
【０００７】
DE 197 13 194 A1からは、質量分析に基づくそれぞれの物質の複雑なガス、臭い、芳香パターンを認識するための方法及び装置が公知であり、基準に属する一連の試料、例えば食品の、時間を節約して比較する質量分析による評価を可能にする。
【０００８】
従って、本発明の課題は、適切な費用で、多様な種類の生物学的材料の混合物の種の決定及び定量分析を行うことができる、生物学的材料の属、種、品種及び／又は地理的産地を定性的及び／又は定量的に決定する方法を提供することである。
【０００９】
前記の課題は、本発明の場合に請求項１から１１までの対象により解決される。
【００１０】
本発明による方法の利点は主に、この方法が
１．  形態的特徴とは完全に無関係であり、
２．  最少の試料量（例えば２０μｇの試料量から）で確実な証明が可能であり
３．  ほとんど不溶性のタンパク質を有する試料を使用することができ、
４．  免疫学的相互作用を必要とせず、
５．  脂肪酸を含まない試料を使用することができ、
６．  核酸を含まない試料を使用することができ、かつ
７．  高い処理量（１日当たり数百の試料）を達成可能である
ことを達成することにある。
【００１１】
本発明による方法の使用は請求項１２〜１６に記載されている。
【００１２】
本発明による手法の場合に、簡潔に要約すると、羽、羽毛、鱗片、毛髪又は角質からの線維性構造物からこの構造物を予め溶解させずにタンパク質を酵素−特異的に分解して分解ペプチドのプールにする。この場合に、アミノ酸に対する全加水分解も行われず、特別な分析物も調査されない。線維性構造−タンパク質から得られた分解ペプチドのプールを、さらに分離又は単離技術なしで、有利にＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ−質量分析にかけ、得られた質量分析結果を基準−質量分析データで標準化する。適当な特異的な質量ピークを羽、羽毛、鱗片、角質及び／又は毛髪の異種混合物の定量化のために用いる。
【００１３】
後続する電気泳動もしくは等電点電気泳動による分離のために難溶性タンパク質の可溶化を目的とする電気泳動法又は等電点電気泳動法の試料準備とは反対に、本発明の場合には、後続する分離のためにタンパク質をタンパク質プールに可溶化する技術は使用されない。さらに、特異的なタンパク質の濃縮もしくは単離も行わず、基準配列と引き続き比較するために、アミノ酸配列分析を目的とした個々の単離されたタンパク質の分離も行わない。本発明による手法は基準パターンとタンパク質バンドパターンの比較は行わない。
【００１４】
本発明による手法の場合に、特別な分析物、たいていは無機毒物（例えばヒ素）又は有機薬物（例えばコカイン）を調査するために、調査する分析物を取り囲む毛髪のタンパク質−マトリックスを溶解させる微量分析法とは反対に、非特異的加水分解を行わず、存在するケラチン構造体は全加水分解も行わず、特異的分析物を調査しない。
【００１５】
DE 197 13 194 A1のように引き続くクロマトグラフィーならびに基準曲線との曲線の比較を行うために、生物学的マトリックスから非特異的抽出物を製造するのとは反対に、本発明は、線維性構造物を特定の分解位置で特異的に酵素を用いて分解する。この場合、分解断片のサイズ、数及び配列は線維性タンパク質の当初のアミノ酸配列に直接影響され、この当初の配列から分解断片が生じる。しかしながら、このアミノ酸配列は遺伝学的に決定され、従って種特異性であるため、少なくとも分解ペプチドの一部も種特異性である。本発明の手法は、二次物質代謝、年齢、環境、気候等に応じて極めて異なることがある生物学的マトリックスから非特異的抽出物を調製する方法とは異なる。
【００１６】
本発明による手法を次に実施例を用いて詳細に記載する。
【００１７】
この生物学的材料を第１段階で処理し、その際に、存在するジスルフィド架橋を有利に化学的に処理し、有利に酸化又は還元により、特に有利に還元により、さらに特に有利にβ−メルカプトエタノールにより還元分解することにより処理する。前記の処理に引き続き、特異的分解を行い、その際に、タンパク質を有利に化学的又は酵素的に処理し、有利に酵素的に処理し、特に有利に加水分解酵素により処理し、さらに有利にトリプシン、キモトリプシン、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ（Ｖ８−プロテアーゼ）、エンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃ、エンドプロテイナーゼＡｒｇ−Ｃ、エンドプロテイナーゼＡｓｐ−Ｎ、トロンビン、パパイン、ペプシン、プラスミン又はこれらの酵素の混合物で処理する。
【００１８】
生じた分解生成物を分析する、有利にＨＰＬＣ（high performance liquid chromatography）、キャピラリー電気泳動及び質量特異的分析法により、特に有利にＡＰＣＩ(atmospheric pressure chemical ionization), ＣＩ(chemical ionization), ＥＩ(electron ionization), ＥＳＩ(electrospray ionization), ＦＡＢ(fast atom bombardment), ＦＤ(field desorption), ＦＩ(field ionization), ＬＩＬＢＩＤ(laser induced liquid beam ionization desorption), ＬＳＩＭＳ(liquid secondary ion mass spectrometry), ＭＡＬＤＩ(matrix assisted laser desorption ionization), ＰＢ(particle beam), ＰＤ(plasma desorption), ＳＩＭＳ(secondary ion mass spectrometry)又はＴＳＰ(thermospray)により、さらに特に有利にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ(matrix assisted laser desorption ionizationtime-of-flight-mass-spectrometry)により分析する。
【００１９】
測定後に、スペクトル分析図及びピーク表を出力する。個々のデータを区別するために、それぞれ２つの種類の一方にだけ出現する質量ピーク、１つの種の調査した全ての試料中に検出できる質量ピーク及び質量アイソトープが他の分解断片の質量アイソトープと重なる質量ピークを使用する。それぞれの最大の質量ピークの間隔は、この場合に有利に＞５Ｄａ、特に有利に８Ｄａである。試料は少なくとも３つの特異的ピークにおいて他の種と異なる場合に正確に分類されたと見なされる。
【００２０】
標準試料として、ハンドピックした羽毛を使用し、この羽毛はBrinkhaus社（D-48231 Warendorf在）のこのために動員された専門家により提供された。
【００２１】
実施例１
それぞれ１０匹のカモとガチョウとの正確に分類された羽毛を使用した基準データの作成
２５ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３（Merck Darmstadt）の、５体積％のβ−メルカプトエタノール（Merck Darmstadt）を有する溶液１００μｌをそれぞれ２０個の１．５ｍｌエッペンドルフ型セーフロック−反応容器中にピペットで入れた。容器ごとに、カモ又はガチョウの羽毛を細長い平滑なピンセットを用いて移し、その際に、羽毛が液体によく濡れるように注意した。
【００２２】
この容器を閉鎖し、適当なホルダ中で２０分間沸騰水浴中でインキュベートした。その後に、容器を水浴から取り出し、氷で冷却した。容器ごとに２５ＭＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３とトリプシン（比活性１６４５Ｕ／ｍｇ、Merck Darmstadt）５ｍｇ／ｍｌからなる溶液１００μｌをピペットで添加した。水浴中で３７℃で２時間インキュベートを行った。各バッチから１０μｌを取り出し、それぞれ飽和α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（Sigma, Muenchen）の３０％のアセトニトリル（Merck, Darmstadt）、１％のトリフルオロ酢酸（Fluka, Seelze）中の溶液９０μｌと（渦流で）混合した。この溶液１μｌをＭＡＬＤＩ−ＦｏＦ−ターゲットプレート上に載せ、室温で蒸発させた（完全に乾燥）。
【００２３】
生じた加水分解生成物を、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ−質量分析器（Typ Reflex III, der Fa. Bruker, Bremen）で手動で測定した。
【００２４】
パルス時間３ｎｓのＸ＝３３７ｎｍの波長のパルス窒素レーザーを、マトリックス−試料−コクリスタル（Matrix-Proben-Cokristallen）の脱離及びイオン化のために使用した。１０００〜２２００Ｄａの質量範囲において、パルスイオン抽出を用いて測定し、レフレクトロン−モード（Reflektron-Modus）で正に帯電したイオンが検出された。印加電圧はターゲットプレートに関して２０ＫＶであり、第１の抽出プレートに関して２０ＫＶもしくは１６．４ＫＶであった。基本プレートは無電圧であり、レンズ電圧は９．６ＫＶであり、２３ＫＶのレフレクトロン電圧を印加した。７５〜６０％のレーザー減衰での１００つのスペクトルを合計し、検出された分解生成物の質量を質量−校正標準（ACTH-Clip (18-39, human)、アンギオテンシン２、ソマトスタチン及びサブスタンスＰ（全てSigma, Muenchen））を用いて測定した。
【００２５】
図１は１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全ての測定された質量ピークを示すガチョウの羽毛の質量分析データを表す。
【００２６】
第１表中では、１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全ての測定された質量ピークが列挙されていて、この相対強度は最大の質量ピークの２％よりも大きい。
【００２７】
第１表：  図１についてのピークレポート（ガチョウ）
【００２８】
【表１】
2004532414.tif 000002
【００２９】
【表２】
2004532414.tif 000003
【００３０】
図２は１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全てを包括した質量ピークを有するカモの羽毛の質量分析データを表す。第２表中では、１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全ての測定された質量ピークが列挙されていて、この相対強度は最大の質量ピークの７％よりも大きい。
第２表：  図２についてのピークレポート（カモ）
【００３１】
【表３】
2004532414.tif 000004
【００３２】
【表４】
2004532414.tif 000005
【００３３】
第１表及び第２表中には、ガチョウ−カモ−羽毛の混合物中のガチョウの羽毛を同定するのに適しているそれぞれの質量ピークがマークされている。
【００３４】
個々のデータを区別するために、双方の種の一方の場合にだけ出現しかつ一方の種の調査した全ての試料において検出された質量ピークだけを使用した。試料は少なくとも３つの特異的ピークにおいて他の種と異なる場合に正確に分類されたと見なされる。
【００３５】
実施例２
羽毛からなる未知の試料混合物の分析
未知のできる限り均質な試料混合物から、ピンセットで試料クラスターを取り出し、精密秤（Sartorius, Goettingen, Typ BP 221 S）を用いて少なくとも１１０ｍｇの試料重量になるまで秤量した。取り出しは、試料材料のサイズ、形態、色を観察せずに偶発的に行った。こうして得られた試料から、羽毛ならびに存在する分解断片を尖ったピンセットで取り出し、個々に超精密秤（Sartorius, Typ SC 2,秤量範囲は０．１μｇまで）で秤量した。試料に関する重量を記録し、単離された構造物を通し番号をつけた０．２ｍｌのＰＣＲ−容器（Achterstrips）中に移し、この容器内には２５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３のβ−メルカプトエタノール５体積％の溶液それぞれ５０μｌを予めピペットで入れてある。この場合に試料が十分に濡れることに留意する。このストリップ容器を閉鎖し、９９．９℃に予め加熱したＰＣＲ−サイクラー（Biometra, Goettingen, Uno-Thermoblock, 96 wells）中に入れた（加熱装置は１０８℃に予め加熱）。このサイクラーは、２０分後に温度を４℃に低下させ（維持期間）、８通路ピペットを用いてＣａｐ５０あたり、トリプシン（比活性１６４５Ｕ／ｍｇ）５ｍｇ／ｍｌを有する２５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３  ５０μｌをピペットで添加した。このストリップを新たに閉鎖し、サイクラーを３７℃に加熱し、かつ２時間後に自動的に４℃に冷却した（維持期間）。この反応の経過の後に、８通路ピペットを用いてそれぞれ反応混合物５μｌを取り出し、別のストリップの容器中へ移し、この中にＣａｐあたり３０％のアセトニトリル、１％のトリフルオロ酢酸中の飽和α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸４５μｌをピペットで予め添加していた。これらの試料をピペットにより混合した。その後、同じピペットでキャリアプレート上に直接塗布した。
【００３６】
パルス時間３ｎｓのＸ＝３３７ｎｍの波長のパルス窒素レーザーを、マトリックス−試料−コクリスタル（Matrix-Proben-Cokristallen）の脱離及びイオン化のために使用した。１０００〜２２００Ｄａの質量範囲において、パルスイオン抽出を用いて測定し、レフレクトロン−モード（Reflektron-Modus）で正に帯電したイオンが検出された。印加電圧はターゲットプレートに関して２０ＫＶであり、第１の抽出プレートに関して２０ＫＶもしくは１６．４ＫＶであった。基本プレートは無電圧であり、レンズ電圧は９．６ＫＶであり、２３ＫＶのレフレクトロン電圧を印加した。４よりも良好な信号雑音比、１００よりも良好なノイズレンジ及び１４００よりも良好なピーク解像度を有する１００のスペクトルごとに自動的に合計し、検出された分解生成物の質量を質量−校正標準を用いて測定した。
【００３７】
１００の試料の測定を、自動実行モードで自動的に行った。
【００３８】
図３はまず未知の羽毛の質量分析データを示す。第３表において、１０００〜２２００Ｄａの範囲内の最大質量ピークの相対強度の＞６％の質量ピークを列挙した。この表中では特徴的な同定ピークを太字で記載した。このピークの同定は実施例１に記載されている。
第３表：  未知の試料の図３についてのピークレポート
【００３９】
【表５】
2004532414.tif 000006
【００４０】
【表６】
2004532414.tif 000007
【００４１】
第４表中には公知のガチョウもしくはカモの羽毛の検出された特徴的ピークが示されている。未知の試料中にガチョウに対して特徴的である全ての質量ピークが見られ、カモに特異的な質量ピークは検出されなかった。この未知の羽毛は第４表で検出したもしくは検出されない質量ピークに基づき明らかにガチョウの羽毛であると同定された。
【００４２】
第４表：  分類表  カモ／ガチョウ
【００４３】
【表７】
2004532414.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全ての測定された質量ピークを示すガチョウの羽毛の質量分析データ
【図２】１０００〜２２００Ｄａの範囲内の全てを包括した質量ピークを有するカモの羽毛の質量分析データ
【図３】未知の羽毛の質量分析データ
【図１】
2004532414.tif 000009
【図２】
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【図３】
2004532414.tif 000011
【国際公開パンフレット】
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2004532414.tif 000013
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004532414.tif 000031
【国際調査報告】
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2004532414.tif 000033
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