(57)【要約】擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない酵素ブロックト脱エステルペクチン、および同ペクチンを製造する方法。単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチン。単離メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンを用いて粒子を懸濁させる方法。単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンを含む組成物および安定化水性系。【特許請求の範囲】
【請求項１】
擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２】
多価イオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項３】
前記多価イオンが、アルミニウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの１つから選ばれる、請求項２に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項４】
前記多価イオンがカルシウムイオンであり、カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項５】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項４に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項６】
水溶液中の相分離の量が多くて約１０％である、請求項１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項７】
水溶液中の相分離の量が多くて約５％である、請求項６に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項８】
水溶液中の相分離の量が多くて約３％である、請求項７に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項９】
約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１０】
約５５〜５９％のエステル化度を有する、請求項９に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１１】
約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する、請求項９に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１２】
約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約８〜１５％のエステル化Δ度を有する、請求項１１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１３】
単離高メトキシルペクチンを酵素で処理することにより調製される、請求項１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１４】
前記酵素が、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１５】
前記酵素がパパインである、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１６】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１７】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、約５５〜５９％のエステル化度を有する、請求項１６に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１８】
前記単離高メトキシルペクチンが約６０％よりも大きいエステル化度を有する、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項１９】
前記単離高メトキシルペクチンが約６７％よりも大きいエステル化度を有する、請求項１８に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２０】
前記単離高メトキシルペクチンが水性形もしくは粉末形である、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２１】
前記単離高メトキシルペクチンが、柑橘類の皮、リンゴジュース、りんごサイダー、りんごポマード、さとうだいこん、ひまわりの穂先、野菜、あるいはりんご、さとうだいこん、ひまわりおよび柑橘類の少なくとも１つから選ばれる植物からの廃棄物の少なくとも１つから得られる、請求項１３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２２】
前記単離高メトキシルペクチンが、ライム、レモン、グレープフルーツ、タンジェリンおよびオレンジの少なくとも１つから得られる、請求項２１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２３】
前記単離高メトキシルペクチンを酵素で処理することにより調製され、前記酵素が、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される、請求項９に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２４】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項２３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチン。
【請求項２５】
少なくとも１つの単離高メトキシルペクチンを少なくとも１つの脱エステル酵素で処理することを含む酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法であって、前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さないことを特徴とする前記方法。
【請求項２６】
多価イオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項２７】
前記多価イオンが、アルミニウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの１つから選ばれる、請求項２６に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項２８】
前記多価イオンがカルシウムイオンであり、カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項２７に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項２９】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項２８に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３０】
水溶液中の相分離の量が多くて約１０％である、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３１】
水溶液中の相分離の量が多くて約５％である、請求項３０に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３２】
水溶液中の相分離の量が多くて約３％である、請求項３１に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３３】
前記酵素が、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３４】
前記酵素がパパインである、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３５】
前記単離高メトキシルペクチンが、柑橘類の皮、リンゴジュース、リンゴサイダー、りんごポマード、さとうだいこん、ひまわりの穂先、野菜、あるいはりんご、さとうだいこん、ひまわりおよび柑橘類の少なくとも１つから選ばれる植物からの廃棄物の少なくとも１つから得られる、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３６】
前記単離高メトキシルペクチンが、ライム、レモン、グレープフルーツ、タンジェリンおよびオレンジの少なくとも１つから得られる、請求項３５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３７】
前記単離高メトキシルペクチンが水性形もしくは粉末形である、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３８】
前記単離高メトキシルペクチンが約６０％よりも大きいエステル化度を有する、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項３９】
前記単離高メトキシルペクチンが約６７％よりも大きいエステル化度を有する、請求項３８に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４０】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、酵素ブロックト脱エステルペクチンのエステル化度が約４５〜６５％である、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４１】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、酵素ブロックト脱エステルペクチンのエステル化度が約５５〜５９％である、請求項４０に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４２】
前記単離高メトキシルペクチンが、柑橘類の皮、リンゴジュース、りんごサイダー、りんごポマード、さとうだいこん、ひまわりの穂先、野菜、あるいはりんご、さとうだいこん、ひまわりおよび柑橘類の少なくとも１つから選ばれる植物からの廃棄物の少なくとも１つから得られる、請求項２５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４３】
前記単離高メトキシルペクチンが、ライム、レモン、グレープフルーツ、タンジェリンおよびオレンジの少なくとも１つから得られる、請求項４２に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４４】
前記単離高メトキシルペクチンが水性形もしくは粉末形である、請求項４３に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４５】
酵素ブロックト脱エステルペクチンが約２００ｃＰよりも大きい感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する、請求項４４に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４６】
酵素ブロックト脱エステルペクチンが約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約８〜１５％のエステル化Δ度を有する、請求項４５に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４７】
酵素ブロックト脱エステルペクチンが約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項４６に記載の酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造する方法。
【請求項４８】
酵素で脱エステルされた酵素ブロックト脱エステルペクチンを酸性液体系に添加することを含み、前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない、不溶性成分を酸性液体系に懸濁する方法。
【請求項４９】
多価イオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記多価イオンが、アルミニウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの１つから選ばれる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記多価イオンがカルシウムイオンであり、カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
水溶液中の相分離の量が多くて約１０％である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
水溶液中の相分離の量が多くて約５％である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
水溶液中の相分離の量が多くて約３％である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５７】
さらにカルシウムイオンを前記酸性液体系に添加することを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
カルシウムイオンの量が、約５０〜約１，０００ｐｐｍである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００１〜約０．２である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００５〜約０．０１である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．０２〜約０．０６である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記酸性液体系が蛋白質を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
前記蛋白質が、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６６】
さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を前記酸性液体系に添加することを含み、前記食物製品が果物および野菜の少なくとも１つを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
前記酸性液体系がカルシウムイオンを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項６８】
カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
カルシウムイオンの量が約５０〜約１０００ｐｐｍである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００５〜約０．０１である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．０２〜約０．０６である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記酸性液体系が蛋白質を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記酸性液体系が蛋白質を含み、前記蛋白質が、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を前記酸性液体系に添加することを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
前記食物製品が果物および野菜の少なくとも１つを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記酵素脱エステルペクチンの量が、前記最終酸性液体系中約０．０１〜約３．０乾量％である、請求項４８に記載の方法。
【請求項７８】
前記酵素脱エステルペクチンの量が、前記最終酸性液体系中約０．０５〜約０．６乾量％である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記酵素脱エステルペクチンの量が、前記最終酸性液体系中約０．１５〜約０．３５乾量％である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記酸性液体系のｐＨが約２．０〜約５である、請求項４８に記載の方法。
【請求項８１】
前記酸性液体系のｐＨが約２．５〜約４．５である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記酸性液体系のｐＨが約３〜約４である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項８４】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製され、前記酵素が、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される、請求項４８に記載の方法。
【請求項８５】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製され、前記酵素がパパインである、請求項４８に記載の方法。
【請求項８６】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項８７】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが約５５〜５９％のエステル化度を有する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
（ａ）擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない少なくとも１つの酵素ブロックト脱エステルペクチン；および（ｂ）少なくとも１つの酸性液体溶液を含む安定化酸性液体系。
【請求項８９】
多価イオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９０】
前記多価イオンが、アルミニウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの１つから選ばれる、請求項８９に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９１】
前記多価イオンがカルシウムイオンであり、カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項９０に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９２】
カルシウムイオンの量が約２００〜約６００ｐｐｍである、請求項９１に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９３】
水溶液中の相分離の量が多くて約１０％である、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９４】
水溶液中の相分離の量が多くて約５％である、請求項９３に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９５】
水溶液中の相分離の量が多くて約３％である、請求項９４に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９６】
さらにカルシウムイオンを前記酸性液体溶液に添加することを含む、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９７】
カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項９６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９８】
カルシウムイオンの量が、約５０〜約６００ｐｐｍである、請求項９７に記載の安定化酸性液体系。
【請求項９９】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００１〜約０．２である、請求項９６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１００】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００５〜約０．０１である、請求項９６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０１】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．０２〜約０．０６である、請求項１００に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０２】
前記酸性液体溶液が蛋白質を含む、請求項９６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０３】
前記蛋白質が、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つである、請求項１０２に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０４】
さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を前記酸性液体溶液に添加することを含む、請求項９６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０５】
前記食物製品が果物および野菜の少なくとも１つを含む、請求項１０４に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０６】
前記酸性液体溶液がカルシウムイオンを含む、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０７】
カルシウムイオンの量が約１０〜約２，０００ｐｐｍである、請求項１０６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０８】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００１〜約０．２である、請求項１０７に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１０９】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．００５〜約０．０１である、請求項１０６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１０】
前記酵素脱エステルペクチンと前記カルシウムイオンとの重量比が約０．０２〜約０．０６である、請求項１０９に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１１】
カルシウムイオンの量が約５０〜約１，０００ｐｐｍである、請求項１１０に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１２】
前記酸性液体溶液が蛋白質を含み、前記蛋白質が、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つである、請求項１０６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１３】
さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を前記酸性液体溶液に添加することを含む、請求項１０６に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１４】
前記食物製品が果物および野菜の少なくとも１つを含む、請求項１１３に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１５】
前記酵素脱エステルペクチンの量が、前記最終酸性液体溶液中約０．０１〜約３．０乾量％である、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１６】
前記酵素脱エステルペクチンの量が、前記最終酸性液体溶液中約０．０５〜約０．６乾量％である、請求項１１５に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１７】
前記酸性液体溶液のｐＨが約２．５〜約５である、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１８】
約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１１９】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが単離高メトキシルペクチンを酵素で処理することにより調製され、前記酵素が、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１２０】
前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製され、前記酵素がパパインである、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【請求項１２１】
前記単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、前記酵素ブロックト脱エステルペクチンが約４５〜６５％のエステル化度を有する、請求項８８に記載の安定化酸性液体系。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、本明細書に”Ｌｏｗ Ｍｅｔｈｏｘｙｌ Ｐｅｃｔｉｎｓ， Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ， ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅ”と題する米国出願第０９／５６９，８８８号の内容すべてを取り込み、かつ２０００年１０月１０日に出願された米国出願第０９／６８４，９６８号にも関連する。
【０００２】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は、擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない酵素ブロックト脱エステルペクチン、および同ペクチンを製造する方法に向けられる。特に、本発明は、単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンに向けられる。本発明は、また単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンを用いる粒子を懸濁する方法にも向けられる。さらに、本発明は、単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンを含む安定化水性系に関する。
【０００３】
２．発明の背景および関連技術
パルプ、精油などの不溶性成分を含む飲料が直面する問題は、不溶性成分が、例えば、沈降もしくはクリーミングにより、分離する傾向である。
懸濁液に不溶性成分を保持するために、キサンタンを果物飲料に添加して飲料の粘度を上げたり、あるいは飲料のレオロジーを変えたりしてきた。キサンタンは、低濃度でも水溶液に添加されると、チキソトロピーのしるしなしで低濃度で非常に強い擬似塑性および粘塑性を示す。しかし、キサンタンは、飲料にマイナスの官能的知覚（望ましくない口当たり）を付加する。したがって、望ましくない口当たりなしでキサンタンの望ましい特性を有する懸濁助剤を与える必要がある。
【０００４】
アルギネートおよびペクチンはマイナスの口当たりを付加しないので、飲料に用いられて粘度を上げてきた。しかし、この用途に有用なアルギネートおよびペクチンは、長期貯蔵の間にシネレシスを受ける傾向がある。減少したシネレシス性を有する懸濁助剤としてペクチンを用いる試みがなされてきたが、成功していない。
【０００５】
ペクチンは、植物細胞中に普通保護の形で見出される構造多糖である。ペクチンの主鎖は、少数の１，２結合∝−Ｌ−ラムノースユニットで中断される∝−１−４結合ガラクツロン酸残基を含む。ガラクツロン酸残基のカルボキシル基のいくつかは、典型的にはメチル基によりエステル化されている。残りの残基は遊離カルボキシル基として存在する。カルボキシル基のエステル化は、ガラクツロン酸残基の重合後植物組織中で起こる。しかし、カルボキシル基のすべてがエステル化するのは極めてまれである。通常、エステル化度は、有効カルボキシル基の０〜９０％に変化する。
【０００６】
「エステル化度」という語は、ペクチンのポリガラクツロン酸鎖に含まれる遊離カルボン酸基がエステル化された（例えば、メチル化により）、あるいは他の方法で非酸性にされた（例えば、アミド化により）程度を意味すると意図される。
【０００７】
ペクチンは低メトキシルペクチン（ＬＭＰ）もしくは高メトキシルペクチン（ＨＭＰ）のいずれかとして入手可能である。本明細書で定義される低メトキシルペクチンは、約４５％未満のエステル化度（ＤＥ）を有し、かつカルシウムなどの陽イオンに高反応性である。本明細書で定義される高メトキシルペクチンは、約４５％よりも大きいＤＥを有し、かつ典型的にカルシウムなどの多価陽イオンに低反応性である。
【０００８】
ペクチンの構造、特にエステル化度は、その物理的および／または化学的性質の多くを指令する。例えば、カルシウム陽イオンの存在により起こるゲル化は、特にエステル化度に依存する。ゲル化は、連続三次元ゲル化マトリックスを生成させる多くのペクチン鎖の遊離カルボキシル基との架橋結合錯化合物を生成するカルシウムイオンから生じると信じられている。
【０００９】
ペクチンは、初めに抽出されたときに、約７０〜７５％の比較的高いエステル化度を有する。そのようなペクチンは、ジャムおよびゼリーでの使用に理想的である。しかし、他の用途は異なるゲル化特性を有するペクチンの調製を必要とする。これは、ペクチンを改変してエステル化度を減少させることにより達成できる。これを達成するための１つの一般的な方法は、酸水解である。代替的方法は、低温でのアルカリ、アンモニア、もしくはペクチンメチルエステラーゼの使用に向けられる。
【００１０】
脱エステルの間、ペクチン上のエステル基を無作為もしくはブロック様に除去できる。エステル基をペクチン鎖の２つ以上の上にあるガラクツロン酸残基から非逐次的に除去したときに、それらは「無作為」に脱エステルされたと称される。エステル基を非還元末端で、もしくは遊離カルボキシル基の隣で単鎖メカニズムにより逐次的に除去したとき、未エステル化ガラクツロン酸ユニットのブロックが創造されるので、それらは「ブロック様」に脱エステルされたと称される。逐次的もしくはブロック様除去エステルは、典型的にペクチンメチルエステラーゼにより達成される。ブロック様脱エステルにより生成する未エステル化ガラクツロン酸ユニットは、カルシウムなどの多価陽イオンに高反応性である。そのような未エステル化ガラクツロン酸のブロックを有するペクチンは、「カルシウム感受性」と言われる。
【００１１】
ペクチンのメチル分を植物組織に存在する植物ペクチンエステラーゼにより性質を改変することは周知である。普通ペクチンメチルエステラーゼ（ＰＭＥｓ）と呼ばれるこれらの植物エステラーゼの多くは、少なくとも２つの隣接する遊離カルボン酸基の隣にあるエステル化カルボキシル基を脱メチル化する。脱メチル化は、この方法でブロック生成を進める。例えば、植物組織からの未精製プロテアーゼパパインおよびブロメラインも、ブロック様にペクチンを脱メチル化する汚染物としてペクチンメチルエステラーゼを含むことも既知である。
【００１２】
小程度で、未エステル化ガラクツロン酸ユニットのこれらのブロックが、初めに単離されたときに市販の高ＤＥペクチンに自然に生じる。市販の、およそ６８〜７４％の典型的なエステル化度を有するペクチンでは、遊離カルボキシルブロックの長さは分子ごとに変化し得、それぞれのペクチン分子は典型的に異なる長さのいくつかのブロックを含む。例えば、ポリマー鎖に沿った遊離カルボキシル基の分布が、ペクチンが酸化乳飲料の安定剤としての使用に適するかどうか決定するために重要であることは既知である。ペクチンが、ブロック脱エステル領域が生じるペクチン分子の特定の箇所でカゼイン粒子の表面に吸着することによりカゼイン粒子の懸濁液を安定化できる、と提唱されてきた。カゼイン粒子表面の有意な比率の完全な安定化を得ることは、ペクチンが受け持つべきである。にもかかわらず、カゼイン安定化は別として、これらのペクチンは、典型的な飲料用途でパルプもしくは他の材料の安定化に限られた実用性を見出している。
【００１３】
無作為に脱エステルされたペクチンも、液体食物および飲料中の粒子安定化での使用についてテストされてきた。低メトキシルペクチンに無作為に還元された市販のペクチンも、カルシウムなどの多価陽イオンと反応性となり得る。カルシウムは、これらの型のペクチンを包含する食物ゲル用途の多価陽イオンのもっとも一般的な源である。ゲル化は、ホモガラクツロン酸ユニット間の分子間接続区画の形成による。結合の静電性質のために、ペクチンゲルは、カルシウムイオンを隣接するペクチン分子に結合するカルボキシル基の環境を変性できる状態に非常に感受性である。ペクチンのゲル生成能力はＤＥを低下すると増大し、多くの遊離カルボキシル基を有する低メトキシルペクチンは、低カルシウムレベルに非常に感受性である。ペクチン主鎖に沿った遊離カルボキシル基の数が増大すると、カルシウムに対する感度が増大する。しかし、低ＤＥペクチンのカルシウムに対する増大する感度に関連する典型的な問題は、ペクチンがゲル化してシネレシスを示す増大した傾向である。これらの型の無作為に脱エステルされたペクチンにおけるゲル収縮およびシネレシスの性質は、液体食物および飲料中の粒子の安定化に適さない。
【００１４】
ペクチンを懸濁助剤として用いる他の試みが、当業界でなされてきた。例えば、Ｂａｒｅｙによる米国特許第５，８６６，１９０号は、ペクチンおよびアルギネートを含む不溶性成分を含む非乳飲料を安定化するための組成物を開示している。Ｂａｒｅｙのペクチンは、アミド化もしくは非アミド化ＨＭＰｓおよびＬＭＰｓであり得る。しかし、これらの組成物は、この用途に望ましくないシネレシスを示す。また、ペクチン／アルギネート混合物が遊離カルシウムイオンの不在下で水性媒体に溶解すること、もしくはカルシウム錯生成剤を用いることは、必須である。錯生成剤をペクチン／アルギネート溶液もしくは果汁に添加する。
【００１５】
ＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎからのＷＯ９７／０３５７４は、酸性環境で組換え体ＤＮＡ技術により調製された高エステルペクチンで蛋白質を安定化する方法に関する。Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの高エステルペクチンは、約７０〜８０％のエステル化度を有する。しかし、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの高エステルペクチンは、低濃度で水溶液に擬似塑性ではなく、懸濁助剤としては限られた価値を有する。
【００１６】
上記のことをかんがみて、水性食物、化粧品および医薬製品における使用で剪断減粘挙動を有するペクチン懸濁助剤に対する既存の要求がある。
【００１７】
また、ペクチンが粒子懸濁助剤としての使用で剪断減粘挙動（擬似塑性）および許容できる口当たりを有する安定した水性系を生ずるための既存要求がある。擬似塑性は、水溶液中の粒子の安定化にもっとも望ましいレオロジー挙動である。水溶液は、それが剪断速度増加で低下する粘度を示すなら、擬似塑性であると特徴づけられる。「安定した水性系」とは、ゲル生成なしで、もしくは相分離およびシネレシスなしで安定した粘度を維持できる水性系をいう。「安定した粘度」もしくは「安定度」とは、懸濁液中の不溶性成分の維持および初めに生成した懸濁液の均質性をいう。レオロジー的には、水性系の擬似塑性は、少なくとも１〜１２ヶ月以上の期間安定している。
【００１８】
さらに、５００ｍＭなど、比較的高レベルのカルシウムの存在下ですら貯蔵でシネレシスを受けたり、分離ゲル相を生成したりしないペクチンに対する既存の要求がある。
発明の要旨
上記のことをかんがみて、本発明の１つの側面は、擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的にゲル収縮を示さない酵素ブロックト脱エステルペクチン、および同ペクチンを製造する方法に向けられる。特に、本発明は、単離高メトキシルペクチンを酵素で脱エステルすることにより調製される酵素ブロックト脱エステルペクチンに向けられる。
【００１９】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは約４５〜６５％、より好ましくは約５５〜５９％のエステル化度を有する。
【００２０】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％、より好ましくは約８〜１５％のエステル化Δ度を有する。
【００２１】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは単離高メトキシルペクチンを酵素で処理することにより調製される。酵素は、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出され、好ましくはパパインである。
【００２２】
酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、約４５〜６５％のエステル化度を有し、より好ましくは単離高メトキシルペクチンのエステル化度が約６８〜７２％であるときに、約５５〜５９％のエステル化度を有する。単離高メトキシルペクチンは、好ましくは約６０％よりも大きい、より好ましくは約６７％よりも大きいエステル化度を有する。単離高メトキシルペクチンは、好ましくは水性形もしくは粉末形である。
【００２３】
単離高メトキシルペクチンは、好ましくは、柑橘類の皮、リンゴジュース、リンゴサイダー、りんごポマード、さとうだいこん、ひまわりの穂先、野菜、あるいはりんご、さとうだいこん、ひまわりおよび柑橘類の少なくとも１つから、より好ましくはライム、レモン、グレープフルーツ、タンジェリンおよびオレンジの少なくとも１つから選ばれる植物からの廃棄物の少なくとも１つから得られる。
【００２４】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは単離高メトキシルペクチンを酵素で処理することにより調製され、酵素は、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される。
【００２５】
さらに、本発明は、また酵素ブロックト脱エステルペクチンを酸性液体系に添加することを含む不溶性粒子を懸濁する方法にも向けられる。酵素ブロックト脱エステルペクチンは、好ましくは約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム率、および約５〜２５％のエステル化Δ度を有する。
【００２６】
本発明の粒子を懸濁する方法は、カルシウムイオンを酸性液体系に添加することを含む。カルシウムイオンの量は、好ましくは約１０〜約２０００ｐｐｍ、より好ましくは約５０〜約１０００ｐｐｍ、もっとも好ましくは約２００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍである。
【００２７】
酸性液体系は、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つから選ばれる蛋白質を含み得る。
【００２８】
本発明の不溶性成分を懸濁する方法は、さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を酸性液体系に添加することも含み得る。
【００２９】
さらに、本発明は、（ａ）擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない少なくとも１つの酵素ブロックト脱エステルペクチン；および（ｂ）少なくとも１つの酸性液体溶液を含む安定化水性系に関する。安定化系は、さらにカルシウムイオンを酸性液体溶液に添加することも含み得る。カルシウムイオンの量は、好ましくは約１０〜約２０００ｐｐｍ、より好ましくは約５０〜約６００ｐｐｍである。
【００３０】
安定化系の酸性液体溶液は、しょう油、ホエーおよびカゼインの少なくとも１つから選ばれる蛋白質を含む。酸性液体溶液は、さらに食物、化粧品もしくは医薬製品を含み得る。食物製品は、果物および野菜のすくなくとも１つを含む。酸性液体溶液は、カルシウムイオンも含み得る。
【００３１】
したがって、（１）剪断減粘性を有し；（２）許容できる口当たりを有する剪断減粘性を有し；（３）比較的高レベルのカルシウムの存在下で貯蔵でシネレシスを受けたり、分離ゲル相を生成したりしない；そして（４）長期貯蔵の間にレオロジーにおける最小限の変化；（５）低使用レベルで有効である酸性液体系で不溶性成分懸濁に使用するペクチンを提供できることが望ましい。
発明の詳細な説明
本発明は、低使用レベルで擬似塑性を示し、かつ少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液に実質的に相分離を示さない酵素ブロックト脱エステルペクチンに向けられる。
【００３２】
擬似可塑性は、水溶液中の粒子の安定化にもっとも望ましいレオロジー挙動である。水溶液は、それが剪断速度増加で低下する粘度を示すなら、擬似塑性であると特徴づけられる。これはまた「剪断減粘」とも称される。この挙動は、溶液中の長鎖分子のからみ合いにより生じる網状構造の形成によると思われる。ペクチンの擬似塑性挙動は、溶液中のペクチン分子の相対的サイズに密に関連する。高分子量ペクチンは、低ペクチン濃度でこの挙動を示す。増大する見掛分子サイズへの１つのアプローチは、酸脱エステルによりカルシウム反応性部位を高メトキシルペクチン分子に導入すること、およびカルシウムをペクチン分子間で架橋結合を形成する溶液に添加することである。しかし、これはゲル粒子形成およびシネレシスに至り、かつこれらのペクチンは、カルシウムが存在するとき溶液中に典型的にチキソトロープ挙動を示す。
【００３３】
本発明のカルシウム反応性ペクチンは、ゲル収縮もしくはシネレシスなしで非常に低いペクチン濃度で擬似塑性挙動という特異な性質を有し、かつ非チキソトロープである。さらに、これらの特性は、酸性条件下室温での貯蔵で維持される。
【００３４】
「相分離」とは、しばしば透明な境界線を有する、粒子の懸濁床上の透明な液体の生成をいう。相分離は、本発明のペクチンを含む水性系に関する粒子沈降をもいう。激しい相分離は。両側および底で粒子床を囲む透明な液体により特徴づけられる。相分離には、それらに限定はされないが、粒子沈降および／またはゲル収縮が含まれ得る。「シネレシス」は、しばしば流体ゲルではなく固定ゲルに関して用いられるが、基本的にはゲル収縮と同じ別の語であり、相分離の別の表示である。相分離を決定するテストは、「粒子沈降の決定」と題する下記実施例の項で記載されるが、それは粒子沈降の相分離を決定するために用いられる。
【００３５】
「実質的に相分離がない」とは、本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンを含む陽イオン水溶液中１０％未満の相分離をいう。本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンの相分離は、好ましくは多くて約１０％、より好ましくは多くて約７％、さらに好ましくは約５％、もっとも好ましくは約３％である。
【００３６】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、またカルシウムイオンもしくは他の多価陽イオンと反応したときに水溶液中に非チキソトロープである。すなわち、本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、剪断応力が除去されたときに水溶液が粘度を再建もしくは非常に速やかに回復するのを助ける。剪断応力が加えられた後の粘度再建は、剪断応力が導入される前の粘度の価と基本的に同一である。
【００３７】
さらに、本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは少なくとも１つの多価陽イオンを含む水溶液中に実質的に相分離を示さないが、多価陽イオンと反応して、低ペクチン濃度で擬似塑性のためのからみ合いを助ける大きい見掛分子サイズの分子を形成する。多価陽イオンの例には、好ましくは、それらに限定はされないが、アルミニウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンが含まれ、より好ましくはカルシウムイオンおよびマグネシウムイオンであり、もっとも好ましくはカルシウムイオンである。
【００３８】
水溶液に存在する多価陽イオンの量は、好ましくは約１０〜約２，０００ｐｐｍ、より好ましくは約５０〜約１，０００ｐｐｍである。
【００３９】
水溶液に存在するカルシウムイオンの量は、好ましくは約１０〜約２，０００ｐｐｍ、より好ましくは約５０〜約１，０００ｐｐｍ、もっとも好ましくは約２００〜約６００ｐｐｍである。
【００４０】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、約２００センチポアズ（ｃＰ）よりも大きいカルシウム感度（ＣＳ）もしくは２０よりも大きいカルシウム率（ＣＦ）、および約５〜２５％のエステル化Δ度（ΔＤＥ）を有する。より好ましくは、酵素ブロックト脱エステルペクチンは、約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム感受ペクチン率、および約７〜２５％のエステル化Δ度を有する。もっとも好ましくは、酵素ブロックト脱エステルペクチンは、約２００ｃＰよりも大きいカルシウム感度もしくは２０よりも大きいカルシウム感受ペクチン率、および約８〜１５％のエステル化Δ度を有する。
【００４１】
「カルシウム感度（ＣＳ）」とは、適切な条件下ペクチン製品の溶液の粘度増大に関連するペクチン製品の性質をいう。「カルシウム率（ＣＦ）」とは、カルシウム感度比をいう。ＣＳおよびＣＦの決定方法は、下記実施例の項で分析手順に記載される。
【００４２】
前述のように、「エステル化度」という語は、ペクチンのポリガラクツロン酸鎖に含まれる遊離カルボン酸基がエステル化された（例えば、メチル化により）、あるいは他の方法で非酸性にされた（例えば、アミド化により）程度を意味すると意図される。「エステル化Δ度（ΔＤＥ）」とは、酵素脱エステル後のペクチンと比較して酵素脱エステル前のペクチン間のＤＥにおける相違をいう。ＤＥおよびΔＤＥの決定方法を参照されたい。
【００４３】
本発明の１つの実施態様において、本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンは、少なくとも１つの酵素で高メトキシルペクチン出発材料から調製される。酵素は、ペクチンの精製の際存在してもよいが、他の実施態様には、固定化酵素の除去、不活性化もしくは使用が含まれる。もっとも好ましい実施態様は、アルコール中への沈殿前の酵素不活性化が含まれる。
【００４４】
「ペクチン出発材料」とは、植物材料からのペクチン分離により得られるペクチン製品を意味すると意図される。ペクチン出発材料は、好ましくは柑橘類の皮、リンゴジュース、りんごサイダー、りんごポマード、さとうだいこん、ひまわりの穂先、野菜、あるいはりんご、さとうだいこん、ひまわりおよび柑橘類などなどの植物、より好ましくはりんご、さとうだいこんおよび柑橘類植物、もっとも好ましくはライム、レモン、グレープフルーツおよびオレンジなどの柑橘類植物からの廃棄物から得られる。
【００４５】
ペクチン出発材料は、例えば、精製前は酸性ペクチンであり得、あるいは酸性ペクチン溶液をアルコールで処理した後に得られる湿潤ペクチンケーキであり得る。さらに、ペクチン出発材料は、例えば、沈殿からのペクチンケーキ中の乾燥もしくは部分乾燥ペクチンであり得、あるいは通常ペクチンメーカー製造の乾燥微粉砕ペクチン粉末でもあり得る。
【００４６】
前述のように、本発明による方法は、ペクチン出発材料を少なくとも１つの酵素で脱エステルして酵素ブロックト脱エステルペクチンを製造することを含む。本発明のペクチン出発材料は、好ましくは約６０％よりも大きい、より好ましくは約６５％よりも大きい、もっとも好ましくは約６７％よりも大きいエステル化度を有する。
【００４７】
本発明の１つの実施態様において、単離高メトキシルペクチンのエステル化度が好ましくは約６８〜７２％であるなら、酵素ブロックト脱エステルペクチンのエステル化度は、好ましくは約４５〜６５％、より好ましくは約５０〜６２％、もっとも好ましくは約５５〜５９％である。
【００４８】
本発明の別の実施態様において、高ＤＥペクチン出発材料のエステル化度は、好ましくは酵素ブロックト脱エステルペクチンよりも約５〜２５％高く、より好ましくは酵素ブロックト脱エステルペクチンよりも約５〜１５％高く、もっとも好ましくは酵素ブロックト脱エステルペクチンよりも約８〜１５％高い。
【００４９】
ついで、前述のように調製された単離高メトキシルペクチンを、酵素を生じることができる植物材料もしくは有機体から単離されたペクチンメチルエステラーゼなどのペクチン脱エステル酵素を用いてほどよく制御される脱エステル処理に供する。例には、それらに限定はされないが、パパイン、フィシンもしくはブロメラインなどのペクチンメチルエステラーゼを含む粗酵素が含まれる。これらのペクチンメチルエステラーゼ酵素はペクチンを脱エステルして、遊離カルボキシル基のブロックを生成する。
【００５０】
１つの実施態様において、単離高メトキシルペクチンの１〜２％水溶液を、ペクチンの完全な溶解を保証するために適切な熱および攪拌を用いて乾燥高ＤＥペクチンから調製する。ついで、十分な塩化ナトリウムを沈殿物に添加して、ペクチン溶液調製に用いられる水の原容量に基づいて１％ｗ／ｖ濃度の塩化ナトリウムを得る。塩化ナトリウムは、ペクチン脱エステル酵素の活性を高めることが既知である。ついで、この溶液の温度を、用いられる脱エステル酵素の最適温度に応じて２０〜５０℃に調整する。ついで、溶液のｐＨを、０．５Ｍ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を用いて約５〜８に調整する。最後に、ペクチン脱エステル酵素の適量を、制御された脱エステルを成就するために前述の方法により製造されたこれらのいずれかなど、ペクチン溶液に添加する。
【００５１】
本発明において、ペクチン上のエステル基は、好ましくは脱エステル酵素により、逐次的に除去される。脱エステル酵素もしくはペクチンメチルエステラーゼは、遊離カルボキシル基および遊離メタノールを生むためにペクチンを脱エステルするペクチン酵素である。好ましい実施態様における脱エステル酵素は、ブロック様に（逐次的に）ペクチンを脱エステルする。「ブロック様」もしくは「逐次的」脱エステルは、脱エステル酵素が非還元末端で、もしくは遊離カルボキシル基の隣でペクチンを攻撃し、ついで単鎖メカニズムによりペクチン分子に沿って進むときに起こり、それにより未エステル化ガラクツロン酸ユニットのブロックを創造する。
【００５２】
ペクチンメチルエステラーゼは、それらに限定はされないが、りんご、アプリコット、アボカド、バナナ、ベリー、いちじく、ライム、グレープフルーツ、マンダリン、チェリー、赤すぐり、ぶどう、マンゴー、パパイヤ、とけいそうの実、桃、西洋なし、プラム、そら豆、にんじん、カリフラワー、きゅうり、リーキ、たまねぎ、えんどう、じゃがいも、はつかだいこんおよびトマトの少なくとも１つから選ばれる植物組織から抽出される。酵素は、また異なる源からの２つ以上のペクチンメチルエステラーゼの混合物でもよいし、あるいはペクチンに作用する他の酵素を含んでもよい。
【００５３】
１つの好ましい実施態様において、酵素はパパイヤから抽出される。より好ましくは、酵素はパパインである。もっとも好ましくは、酵素は、ノースカロライナ州２８２２４、シャーロット、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ．製造のＣｏｌｉｐｕｌｉｎ（登録商標）Ｌｉｑｕｉｄ製品コード５０４５である。
【００５４】
反応溶液のｐＨは、０．５ＭのＮａＯＨの連続添加により約７に維持される。溶液によるＮａＯＨの捕捉は、脱エステル反応の進行を監視するために用いられる。いったん脱エステルが本発明によるペクチンを製造するために必要な程度まで進むと、反応を、溶液のｐＨを４以下に低下するための酸添加により停止させる。ついで、反応混合物をおよそ７５℃で１５分間加熱して、混合物の冷却により酵素を脱活性化する。ついで、酵素処理ペクチンを、等容量の６０〜８０％ＩＰＡを添加することにより溶液から回収できる。不溶性ペクチンを集め、加圧し、追加量のＩＰＡで洗浄し、最後に３０〜５０重量％の乾燥物質に加圧する。
【００５５】
酵素ブロックト脱エステルペクチンを、さらに乾燥させ、小粒子に微粉砕できる。ペクチンの乾燥は、当業界の技術により（例えば、大気もしくは減圧炉）、約５０％未満、好ましくは約２５％未満の湿分に達成できる。乾燥温度は、ペクチンが、例えば、色、分子量などの特性を失い始める温度よりも低く維持すべきである。当業界のいずれかの微粉砕技術を用いてペクチン製品を所望の粒度に微粉砕できる。最終製品が、約１２重量％以下の湿分を有する乾燥粉末形であることが、もっとも好ましい。「乾燥粉末形」とは、製品が実質的なケーキングなしで注入できることを意味すると意図される。好ましい最終製品は、使用容易性のために粉末形である。
【００５６】
本発明の脱エステルペクチンを製造する方法は、連続プロセスもしくは単一バッチ、好ましくは連続プロセスによりなされる。本発明によれば、酵素ブロックト脱エステルペクチンを、不溶性成分を酸性液体系に懸濁するプロセスに用いることができる。プロセスには、逐次的パターンで酸性液体系に脱エステルされた脱エステルペクチンを添加することが含まれる。
【００５７】
「不溶性成分」とは、沈降、クリーミングもしくは脱安定化メカニズムなど他のことにより溶液中１つ以上の箇所で相分離する傾向を有するパルプ、精油、天然もしくは他の着色剤、ミネラル、植物性薬品、および医薬品などの不溶性粒子をいう。本発明に関連する相分離のテストを、粒子沈降の相分離のテストである「粒子沈降の決定」と題する下記実施例の項で記載される。
【００５８】
本明細書における「酸性液体系もしくは酸性水性系」とは、適切な濃度の多価陽イオンを含むか、もしくは多価陽イオンを添加できる液体形の酸性食物、化粧品および医薬製品をいう。液体食物の例には、それらに限定はされないが、好ましくは果物、野菜もしくはこれらの混合物を含む飲料、スープ、サラダドレッシングおよびソースが含まれる。酸性飲料は、無炭酸もしくは炭酸、未稀釈もしくは稀釈、甘味料添加もしくは無添加、塩分添加もしくは未添加、アルコール含有もしくは非含有、あるいはこれらの組合せであり得る。
【００５９】
液体酸性化粧品の例には、これらに限定はされないが、香水、日焼ローション、日除けローション、ボディーローション、消臭剤、発汗抑制剤、コンディショナーおよびシャンプーが含まれる。液体酸性医薬品の例には、これらに限定はされないが、せき止めシロップ、液体形の頭痛薬、液体形の充血緩和剤および液体形の炎症抑制薬が含まれる。
【００６０】
本発明の方法における酸性液体形のｐＨは、約２．０〜約５、好ましくは約２．５〜約４．５、より好ましくは約３〜約４である。
【００６１】
酸性液体形は、約０．１〜約５０重量％、好ましくは約１〜約３０重量％、より好ましくは約５〜約２０重量％の固形分を有する。
【００６２】
本発明の１つの実施態様において、酸性液体系は、約０．１〜約５０重量％の固形分、約０〜約５容量％のアルコール分、約０〜３％の塩（ＮａＣｌ）分および約０．１〜約１５％の砂糖分を有しうる飲料である。
【００６３】
本発明の方法における酵素ブロックト脱エステルペクチン対酸性液体系の重量比は、約０．０００１〜約０．０３、好ましくは約０．０００５〜約０．００６、より好ましくは約０．００１５〜約０．０３５であり得る。
【００６４】
酸性液体系中の酵素ブロックト脱エステルペクチンの全量は、約０．１５〜約０．３５乾量％、好ましくは約０．０５〜約０．６乾量％、より好ましくは約０．１〜約０．３乾量％であり得る。
【００６５】
水性系は、カルシウムイオンもしくは他の多価陽イオンも含まなければならず、かくてカルシウムイオンの添加は、カルシウムがカルシウム強化剤などの他の成分からすでに存在しているのでなければ、任意ではない。
【００６６】
カルシウムイオンは、本発明に記載のペクチンと反応して、低濃度で擬似塑性であって、非チキソトロープであって、かつ安定性である非常に低いが安定した粘度の弱ゲル網状構造を生成する。さらに、このカルシウム−ペクチン溶液は、シネレシスの徴候を示さない。これらの特性は、栄養の目的でカルシウム含有の飲料および医薬製品を強化しようとしているメーカーにとって特別な価値がある。約１０００ｐｐｍのカルシウムレベル（すなわち、酸性液体食物１グラムにつきミクログラムのカルシウムイオン）は、粒子を安定化する能力に逆効果を与えることなく達成できる。１２流体オンス飲料へのこのレベルのカルシウム添加は、ＦＤＡ（食物医薬品庁）の推奨する成人のカルシウムとして有意な量のＲＤＡ（推奨一日割当量）を示す。
【００６７】
カルシウムイオンが酸性液体系に与える「安定した粘度」もしくは「安定度」とは、懸濁液中の不溶性成分の維持および初めに生成した懸濁液の均質性をいう。安定度は、また酸性液体系のレオロジーが少なくとも１〜１２ヶ月以上の期間安定していることも意味する。
【００６８】
本発明の方法に用いられるカルシウムイオンは、固体塩の形もしくは溶液であり得る。カルシウム塩の例には、それらに限定はされないが、塩化カルシウム、酢酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マロン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムが含まれ、好ましくは塩酸カルシウム、酢酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マロン酸カルシウムおよびグルコン酸カルシウムであり、より好ましくはクエン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マロン酸カルシウムおよびグルコン酸カルシウムである。
【００６９】
系におけるカルシウムイオンの量は、約０．００１〜約０．２％（１０〜２０００ｐｐｍ）、好ましくは約０．００５〜約０．１％（５０〜１０００ｐｐｍ）、より好ましくは約０．０２〜約０．０６％（２００〜６００ｐｐｍ）であり得る。
【００７０】
本発明のカルシウムイオン対酵素ブロックト脱エステルペクチンの重量比は、約０．００１〜約１０、好ましくは約０．０１〜約１．０、より好ましくは約０．０３〜約０．３０であり得る。
【００７１】
本発明の方法における酵素ブロックト脱エステルペクチン酸性液体系対食物、化粧品もしくは医薬製品の重量比は、約０．０００１〜約０．０３、好ましくは約０．０００５〜約０．００６、より好ましくは約０．００１５〜約０．０３５であり得る。
【００７２】
本発明の酵素ブロックト脱エステルペクチンが酸性液体に添加されると、それは長期貯蔵の間レオロジーにおいて最小限の変化を与える。さらに、本発明のペクチンは、許容できる口当たりを有する剪断減粘性を有する。本発明の脱エステルペクチンは、比較的高レベルのカルシウムの存在下貯蔵でシネレシス（ゲル収縮形成）を受けたり、分離ゲル相を生成したりしない。
【００７３】
本発明の系における酵素ブロックト脱エステルペクチンの量は、約０．０１〜約３乾量％、好ましくは約０．０５〜約０．６乾量％、より好ましくは約０．１〜約０．４乾量％である。
【００７４】
本発明の酸性液体の例には、それらに限定はされないが、エタノールと水、グリセロールと水、およびプロピレングリコールと水が含まれる。また本発明によれば、酵素ブロックト脱エステルペクチンを安定化酸性液体系に用いることができる。本発明の安定化酸性液体系は、酵素ブロックト脱エステルペクチンおよび酸性水溶液を含む。
【００７５】
本明細書における「酸性液体」とは、水性形である酸性食物、化粧品および医薬製品をいう。液体食物の例には、それらに限定はされないが、好ましくは果物、野菜もしくはこれらの混合物を含む飲料、スープ、サラダドレッシングおよびソースが含まれる。酸性飲料は、無炭酸もしくは炭酸、未稀釈もしくは稀釈、甘味料添加もしくは無添加、塩分添加もしくは未添加、アルコール含有もしくは非含有、あるいはこれらの組合せであり得る。
【００７６】
液体酸性化粧品の例には、これらに限定はされないが、香水、日焼ローション、日除けローション、ボディーローション、消臭剤、発汗抑制剤、コンディショナーおよびシャンプーが含まれる。液体酸性医薬品の例には、これらに限定はされないが、せき止めシロップ、液体形の頭痛薬、液体形の充血緩和剤および液体形の炎症抑制薬が含まれる。
【００７７】
本発明の酸性水溶液のｐＨは、約２．０〜約５、好ましくは約２．５〜約４．５、より好ましくは約３〜約４である。
【００７８】
酸性水溶液は、約０．１〜約５０容量％、好ましくは約１〜約３０容量％、より好ましくは約４〜約１８容量％の含有率を有する。
【００７９】
安定化酸性液体系における酸性水溶液は、約２．５〜約５、好ましくは約２．８〜約４．５、より好ましくは約３〜約５である。
【００８０】
さらに、系は、食物、化粧品もしくは医薬製品を含み得る。代替的に、系は、さらに（１）カルシウムイオンおよび（２）食物、化粧品もしくは医薬製品を含み得る。
【００８１】
安定化酸性液体系中の酵素ブロックト脱エステルペクチンとカルシウムイオンとの重量比は、約０．００１〜約０．２、好ましくは約０．００５〜約０．０１、より好ましくは約０．０２〜約０．０６である。
【００８２】
さらなる詳細な説明なしで、当業者は、前記記載を用いて、本発明を最大限に利用できると信じられる。
【００８３】
したがって、下記好ましい実施態様は、単なる説明であり、開示の残りをいかなる方法によっても限定しないと解釈すべきである。
実施例
下に与えられる実施例１〜６は、当業界で既知の脱エステルペクチンと本発明の脱エステルペクチンとの異なる物理的性質、および同ペクチンの調製および使用方法を説明する。また下で説明されているのは、脱エステルペクチンの物理的性質を決定する分析手順である。
分析手順
カルシウム感度測定法
カルシウム感度は、好ましくはガムを有する溶液中でペクチンのカルシウム感度（ＣＳ）を測定することにより計算できる。特に、カルシウム塩およびペクチンを、カルシウムイオンとペクチンの強いゲル化がない低ｐＨで混合する。ついで、ペクチンとカルシウムイオン間の反応を、酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液の添加により開始する。この計算に用いられる装置は、以下のとおりである：（１）プレート電磁攪拌機（ＩＫＡ ＭＡＧ ＥＯＡ ９）；（２）電磁攪拌機（ＪＫ ＩＫＡ−Ｃｏｍｂｉｍａｇ ＲＥＯ）；（３）５０ｘ１１０ｍｍ粘度グラス（Ｈｏｌｍ ＆ Ｈａｌｂｙ）；（４）２５ｍｌディスペンサー；（５）５ｍｌ自動ピペット；（６）ブルックフィールド粘度計ＬＶＴ；（７）ｐＨメーター；（８）工業天秤；（９）分析天秤；（１０）４２ｍｍＴＲＩＫＡマグネット；および（１１）冷却浴（２５℃でサーモスタット制御）。
【００８４】
この計算に用いられる試薬は、（１）１．０００Ｍ ＨＣｌ；（２）ｐＨ４．７５で１Ｍアセテート緩衝液（６８．０４ｇ／ｌの５００ｍＭ ＣＨ３ＣＯＯＮａおよび３Ｈ２Ｏ、ならびに２８．６ｍｌ／ｌの５００ｍＭ ＣＨ３ＣＯＯＨ（１００％））；および（３）２５０ｍＭ塩化カルシウム（３６．７５５０ｇ／ｌのＣａＣｌ２および２Ｈ２Ｏ）。１．０ｕＳ／ｃｍ以下の導電率を有するイオン交換水を、全溶液に用いなければならない。ペクチン溶液は、２．４ｇの純ガム（０．６％ゾル）を有する４００ｇペクチン溶液を含む。テスト試料が１００％ガム（純ガム）でないときは、試料を下記公式を用いて修正する（Ａ＝試料のガム％）：
（０．６ｘ４００）／Ａ＝４００ｇ溶液用Ａ％ガムを有するｇ試料。
【００８５】
カルシウム感度を計算する手順は、下記のとおりである：（１）調整した砂糖パーセンテージを有するペクチンを小数第３位まで量り分ける；（２）ペクチンを高剪断ミキサー中の２４０ｍｌ沸騰イオン交換水に分散させる；（３）溶液をマグネット付き風袋を計ったビーカーに注入する；（４）追加の４００ｍｌイオン交換水をミキサーに注入し、溶液に添加する；（５）ペクチン溶液を約２５℃まで冷却する；（６）ペクチン溶液を１Ｍ ＨＣｌで１．５のｐＨに調整する；（７）溶液を４００ｇに量る；（８）粘度グラス中で１４５ｇ±１ｇペクチン溶液を量り分ける；（９）ＴＲＩＫＡマグネットをグラスに入れる；（１０）工程（１）でプレート電磁攪拌機で攪拌しながら、５ｍｌの２５０ｍＭ Ｃａ＋＋溶液をペクチン溶液に添加する、２分間攪拌；（１１）電磁攪拌機（ＪＫ ＩＫＡ−Ｃｏｍｂｉｍａｇ ＲＥＯ）で攪拌しながら、２５ｍｌの１Ｍアセテート緩衝液をディスペンサーでグラスに添加する（ｐＨは約４．２）；（１２）工程（１）に記載されるように追加の２分間攪拌する；（１３）マグネットを取り出し、溶液を翌日まで２５℃で放置させる；そして（１４）カルシウム感度をｃＰ粘度としてブルックフィールドＬＶＴ粘度計で６０ｒｐｍ／２５℃で測定する（サーモスタット制御水浴を用いる）。
【００８６】
エステル化度決定法
ペクチンのエステル化度を下に示されるようにして決定できる。ペクチン試料５ｇを０．１ｍｇごく近くまで量り、適切なビーカーに移す。５ｍｌの３７％発煙塩酸と１００ｍｌの６０％ＩＰＡとの混合物と１０分間攪拌する。取り付けたガラスフィルターチューブ（３０〜６０ｍｌ容量）に移し、発煙ＨＣｌ−６０％ＩＰＡ混合物１５ｍｌずつで６回洗浄し、続いて、ろ液に塩化物がなくなるまで６０％ＩＰＡにより洗浄する。最後に、２０ｍｌの１００ＩＰＡで洗浄し、炉中１０５℃で２．５時間乾燥させ、デシケーター中で冷却し、試料を量る。乾燥試料の全正味重量の厳密に１／１０（元の未洗浄試料の０．５ｇを示す）を２５０ｍｌ円錐フラスコに移し、試料を２ｍｌのＩＰＡで加湿する。新たに沸騰させ冷却させた蒸留水１００ｍｌをストッパーに添加し、完全な溶液が生成するまで時折渦巻を起こさせる。フェノールフタレインを５滴添加し、０．１Ｎ水酸化ナトリウムで滴定し、結果を初期滴定量（Ｖ１）として記録する。
【００８７】
２０ｍｌの０．５Ｎ水酸化ナトリウムをストッペーに添加し、激しく振とうし、１５分間放置させる。厳密に２０ｍｌの０．５Ｎ塩酸を添加し、ピンク色が消えるまで振とうする。フェノールフタレインを３滴添加した後、０．１Ｎ水酸化ナトリウムで淡いピンク色に滴定すると、それは激しい振とう後も持続する；この値を鹸化滴定量（Ｖ２）として記録する。
【００８８】
円錐フラスコの内容物をケルダールトラップおよび水冷冷却器付きの５００ｍｌ蒸留フラスコに定量的に移し、その送出チューブは、受フラスコ中の１５０ｍｌの無二酸化炭素水と２０ｍｌの０．１Ｎ塩酸との混合物の表面下にまで延びる。蒸留フラスコに２０ｍｌの１−イン−１０水酸化ナトリウム溶液を添加し、接続部を密封し、ついで過剰な発泡を避けるために慎重に加熱を始める。８０〜１２０ｍｌの蒸留物が集められるまで加熱を続ける。２、３滴のメチルレッドを受フラスコに添加し、０．１Ｎ水酸化ナトリウムで過剰酸を滴定し、要求された容積（ｍｌ）を“Ｓ”として記録する。２０ｍｌの０．１Ｎ塩酸で空試験を実施し、要求された容積（ｍｌ）を“Ｂ”として記録する。アミド滴定量（Ｂ−Ｓ）をＶ３として記録する。
【００８９】
エステル化度（全カルボキシル基の％として）を下記公式により計算する：
2004503666.tif 000002
カルシウム感度Δおよぼカルシウム率（ＣＦ）の決定法
ペクチン試料のカルシウム感度（ΔＣＳ）における変化を下記のようにして決定できる。
【００９０】
ペクチン水溶液を蒸留水中で調製し、そのｐＨを１Ｍ ＨＣｌで１．５に調整する。用いられる濃度は０．６０％前後とすべきである。このペクチン溶液を１４５ｇずつ粘度グラス中に量る。２５０ｍＭ塩化カルシウムを含む溶液５ｍｌを１４５ｇのペクチン溶液に添加し、８．３ｍＭカルシウムの最終濃度を与える。電磁攪拌機で十分攪拌しながら、１Ｍのアセテートイオンを含むｐＨ４．７５のアセテート緩衝液２５ｍｌをペクチン溶液に添加してｐＨを４．２にもっていく。
【００９１】
マグネットを取り出し、グラスを翌日まで室温（２５℃）で放置し、ついで粘度をブルックフィールド粘度計で２５℃で測定する。
【００９２】
本方法は、最大１００の粘度を有するペクチン試料に最適であるが、２００までの粘度のブルックフィールドユニットを良好な再現性で測定できる。高粘度を有するペクチン試料はゲル化する傾向があり、再現性の低い結果をもたらす。しかし、本方法は、試料の相対的なカルシウム感度の公正な表示を与える。
【００９３】
同ペクチン試料の粘度を塩化カルシウムの添加なしで測定し、蒸留水で稀釈するときは、ペクチンのΔＣＳ値を無カルシウム溶液の測定粘度値をカルシウム含有溶液の測定粘度値から引いて計算する。ＣＦは、無カルシウム溶液の測定粘度値をカルシウム含有溶液の粘度値に割って計算する。
【００９４】
粒子沈降の決定
粒子沈降は、テストペクチンが添加される不溶性粒子を含む市販のジュース箱入り飲料の試料を、１６ｍｍの外径（ＯＤ）を有する１５カン高スクリュー蓋締めチューブに入れることにより評価する。そのような飲料には、Ｆｒｕｔｏｐｉａ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ Ｐａｓｓｉｏｎ、Ｌｉｂｂｙ Ｊｕｉｃｙ Ｊｕｉｃｅ、Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｏｒａｎｇｅ Ｊｕｉｃｅ、Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｒｕｂｙ Ｒｅｄ Ｇｒａｐｅｆｒｕｉｔ Ｊｕｉｃｅ、Ｓｎａｐｐｌｅ Ｉｓｌａｎｄ ＣｏｃｋｔａｉｌおよびＴｒｏｐｉｃａｎａ Ｔｗｉｓｔｅｒが含まれる。
【００９５】
テストペクチンの溶液（２％ｗ／ｗ）を調製し、飲料に添加して０．１重量％の最終濃度を達成する。チューブを３℃で冷蔵して４週間放置する。その時点で、粒子懸濁液上の透明な液体塔の高さを測定する。パーセント沈降を、透明層の高さ（Ｈｃ）をチューブ中の液体の全高（ＨＴ）で割って下記のように計算する：
2004503666.tif 000003
ペクチン製造の実施例
下に与える実施例１および２は、本発明の既知の脱エステルペクチンの調製を説明する。
実施例１
６０％ＤＥブロック脱エステルペクチンの製造
ブロック脱エステルペクチン（ＢＤペクチン）を、未濃縮速ゲル化ペクチンジュースから製造する。
【００９６】
未濃縮速ゲル化ペクチンジュースを、下記のようにして製造できる：
１０ｋｇの乾燥レモンピール（Ａｒｇｅｎｔｉｎａ）を５００リットル（有効容量）攪拌タンク反応器に添加する。０．８リットルの硝酸（６２重量％のＨＮＯ３、米国コネチカット州０６８５６、ノルウォーク、Ｏｌｉｎ Ｃｏｒｐ．， Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｇｒｏｕｐ）をさらに反応器に添加して、０．９〜１．２のｐＨに達する。ペクチンを、混合物をわずかな攪拌により３時間で７０℃に加熱することによりレモンピールから抽出する。ついで、抽出混合物を、真空ろ過を用いてろ過し、Ｃｅｌｉｔｅ（Ｃｅｌｉｔｅ Ｃｏｒｐ．、米国カリフォルニア州９３４３８、ｃ／． Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ Ｉｎｃ． Ｌｏｍｐｏｃ）を用いて、真空磨きろ過が続く。ろ過物をワイプドフィルム蒸発器を用いて蒸発させ、溶液中のペクチン濃度をおよそ１．６％ｗ／ｗに増大させる。透明ろ過物のｐＨを、炭酸ナトリウム溶液（Ｎａ２ＣＯ３、米国ウィスコンシン州５３２０１ １１７８、ミルウォーキー、ＣＥＲＡＣ， Ｉｎｃ．）の添加により４．０に調整する。
【００９７】
この時点で速ゲル化ペクチン出発材料のＤＥは、およそ７３％である。温度を４５℃に調整し、ｐＨをＮＨ３で５．５に調整する。ペクチンメチルエステラーゼ（ノースカロライナ州２８２２４、シャーロット、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ．製造のＣｏｌｌｕｐｕｌｉｎ（登録商標）Ｌｉｑｕｉｄ製品コード５０４５）を含む酵素をジュースに添加する。ｐＨを２％ＮＨ３での滴定により一定に保つ。
【００９８】
酵素を、ｐＨをＨＮＯ３で２．５に下げることにより活性化し、温度を８０℃に調整して１０分間保持する。冷却後、ジュースを８０％２−プロパノールに１：３で沈殿させ、６０％２−プロパノールで洗浄する。ブロック脱エステル（ＢＤ）ペクチンを８０／２０ＩＰＡ／水に沈殿させ、加圧して過剰ＩＰＡ水を除去し、乾燥させる。
【００９９】
ペクチンの分析は下記のとおりである：％ＤＥ＝５９．８％；ＧＡ＝８４．９；ＭＷ＝８７０００
実施例２
本発明の６０％ＤＥブロック脱エステルペクチンの製造
本発明のＢＤペクチンを製造する方法は、酵素工程をペクチンジュース蒸発後かつＩＰＡによる沈殿に先立って付け加えることを除いて、実施例１の手順に見られるものと同じである。酵素工程は、攪拌バイオ反応器段階のペクチンプロセスへの付加を必要とする。バイオ反応器段階において、ペクチンジュースの温度を３０℃以下に冷却して、中性化に続くペクチン崩壊を最小限にする。次に、ペクチンジュースを、攪拌しながら重炭酸ナトリウムで５〜７のｐＨ値に調整する。ついで、ペクチンエステラーゼを添加してペクチンを脱エステルする。そのｐＨを、水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウムもしくは水酸化アンモニウムなどの塩基の添加により、脱エステルの間数時間維持する。反応の終わりで、混合物を４未満のｐＨに調整し、少なくとも８５℃に加熱して酵素を活性化する。ついで、ペクチン溶液を沈殿に通常用いられる温度に冷却する。ブロック脱エステル（ＢＤ）ペクチンを８０／２０ＩＰＡ／水に沈殿させ、加圧して過剰ＩＰＡ水を除去し、乾燥させる。
【０１００】
下に与える実施例３〜６は、本発明の脱エステルペクチンが酸性水溶液中不溶性成分の懸濁を与えることを説明する。
実施例３
５５％ＤＥブロック脱エステルペクチンの製造
５０ｇのＢＢ Ｒａｐｉｄ Ｓｅｔ Ｐｅｃｔｉｎ７０．５％ＤＥ（デンマーク、ＤＫ−４６２３、Ｌｉｌｌｅ Ｓｋｅｎｓｖｅｄ，Ｈｅｌｃｕｌｅｓ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ｐｅｃｔｉｎ製造）を５リットルの脱イオン水に７５〜８０℃で溶解し、ペクチンが完全に溶解するまで攪拌することにより１％ペクチン溶液を調製する。５０ｇの塩化アンモニウムをペクチン溶液に添加し、溶液を３０〜４０℃に冷却する。ｐＨを稀釈水酸化ナトリウム水溶液で７．０に調整する。２．５ｍｌのペクチンメチルエステラーゼ（ノースカロライナ州２８２２４、シャーロット、Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ．製造のＣｏｌｌｕｐｕｌｉｎ（登録商標）Ｌｉｑｕｉｄ製品コード５０４５）を溶液に添加する。溶液を１Ｎ水酸化アンモニウムで滴定し、ｐＨを、ペクチンのＤＥが５５％に達するまで、６．８〜７．２に維持する。１Ｎ水酸化アンモニウムの使用量は、３５．３ｍｌだった。溶液のｐＨを稀釈ＨＣｌでｐＨ４に調整し、溶液を８５℃に２〜５分間加熱して酵素を活性化させる。ペクチン溶液を室温に冷却し、８０／２０ＩＰＡ／水で沈殿させる。ペクチンを、細かいナイロンメッシュクロスに通してろ過することにより集め、材料を加圧して過剰ＩＰＡ／水を除去する。ブロック脱エステル（ＢＤ）ペクチンをフード中で２〜３時間予備乾燥させ、ついで真空炉中で１６〜２０時間、５０℃で真空下乾燥させる。乾燥ＢＤペクチンを、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｈｉｇｈ Ｓｐｅｅｄ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｇｒｉｎｄｅｒ型２Ｍ−１上で１ｍｍ細孔サイズスクリーンを通して微粉砕する。
【０１０１】
下に与える実施例４〜７は、本発明の脱エステルペクチンが酸性水溶液中不溶性成分の懸濁を与えることを説明する。
実施例４
オレンジジュース飲料のパルプ懸濁
４７３ｍｌのオレンジジュース、フロリダ州３４２０６、Ｔｒｏｐｉｃａｎａ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．製造のＴｒｏｐｉｃａｎａ Ｐｕｒｅ Ｐｒｅｍｉｕｍ Ｏｒａｎｇｅ Ｊｕｉｃｅを、１リットルビーカーにデカントする。ついで、４７．３ｍｌの１．５％ペクチン溶液（前記実施例２で調製されるような）を、急速攪拌機上で５分間攪拌しながらオレンジ飲料に添加する。
【０１０２】
１．１３５ｇのクエン酸カルシウム粉末（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｉｎｃ．製造のクエン酸カルシウムテトラハイドレートＣＡ１４２食物級）を、混合しながら徐々にオレンジ飲料に添加する。混合をさらに１０分間続け、ｐＨを測定する。
【０１０３】
処理飲料を８５℃で１５分間低温殺菌する。ホット飲料を元のボトルに注ぎ戻し、蓋締めをする。処理ボトルを室温に冷却し、ボトルを数回ひっくり返すことにより混合する。
【０１０４】
試料を、パルプ沈降の１ヶ月間観察し、ペクチン添加なしで調製した対照試料と比較する。２週間後、本発明のペクチンを有する試料は、有意な沈降が起こらなければ安定化されていると決定される。
実施例５
レモネードジュース飲料におけるパルプ懸濁
この実験に必要な材料は、以下のとおりである：実施例２で調製されるようなＢＤペクチンの１．５％溶液４７．３ｍｌ；マサチューセッツ州０２３４９、レイクビルミドルモア、Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｃｒａｎｂｅｒｒｙ Ｉｎｃ製造のＯｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｐｉｎｋ Ｌｅｍｏｎａｄｅ１６オンスボトル；クエン酸カルシウム（粉末形で）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｉｎｃ．製造のクエン酸カルシウムテトラハイドレートＣＡ１４２食物級）；７０℃水浴；および急速攪拌機。
【０１０５】
Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｐｉｎｋレモネードのボトルを１リットルビーカーに注入する。４７．３ｍｌの１．５％ペクチン溶液をレモネードに添加して、急速攪拌機で５分間混合する。ついで１．１３５３ｇのクエン酸カルシウムをレモネードに添加し、さらに１０分間混合する。処理レモネードを８５℃で１５分間低温殺菌し、元のボトルに戻す。沈降を未処理対照と比較する。
【０１０６】
結果は、ペクチン／カルシウム処理試料が室温で６ヶ月の貯蔵後ですら沈降しないことを示す（室温もしくは４℃で２４時間未満で沈降した未処理Ｏｃｅａｎ Ｓｐｒａｙ Ｐｉｎｋレモネードと比較して）。
実施例６
ペクチンを有する３０％および１００％オレンジジュースでの粒子沈降速度
この実施例に必要な材料は、以下のとおりである：１つの１６オンスカン（３５５ｍｌ）のＴｒｏｐｉｃａｎａ， Ｓｅａｓｏｎ’ｓ Ｂｅｓｔ、無パルプ冷凍オレンジジュース濃縮物（フロリダ州３４２０６、ブラデントン、Ｔｒｏｐｉｃａｎａ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．製造）；実施例２で調製されるようなＢＤペクチン（６０％ＤＥ）；５００ｍｌのストッパー付きパイレックス（登録商標）メスシリンダー；９０℃水浴；ｐＨメーター；および１０％砂糖水。
【０１０７】
この実施例で用いられる成分の量は、下記表１に与えられる：
【０１０８】
【表１】
2004503666.tif 000004
ペクチン溶液の測定量を適宜の容器に添加する。ジュース濃縮物と砂糖水および／または脱イオン水をペクチン溶液に添加する。混合物を、初めにペクチン溶液を容器の両側および底からスクラップすることによりゴムスパチュラで混合し、ついで混合物を、中位の速度で５分間急速攪拌により攪拌する。０．２％クエン酸カルシウムを、中位の速度でさらに１０分間攪拌しながら、混合物に添加する。
【０１０９】
ジュースを５０％クエン酸でｐＨ３．６に滴定する。ついで、低温殺菌を８５℃で５分間実施する。ホットジュースを５００ｍｌシリンダーに５００ｍｌマークまで注入し、シリンダーをただちにストッパーで蓋締めしてジュースを無菌に保つ。翌日、ジュースを、シリンダーを徐々にひっくり返すことにより混合する。
【０１１０】
結果は、３０％および１００％ジュースの両方においてパルプ粒子の沈降速度がペクチン無添加対照と比較して処理試料では６０倍も遅いことを示す。
実施例７
栄養飲料におけるミネラル懸濁
この実験に用いられる栄養飲料は、Ｕｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔである（フロリダ州３３４０２、ウエストパームビーチ、Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ Ｆｏｏｄｓ Ｃｏ．製造）。ＢＤペクチンをＳｌｉｍ Ｆａｓｔに添加し、ペクチン無添加の対照と比較する。試料を、ミネラル懸濁安定度を決定するに十分な時間検査する。これは、温処理と冷処理により実施される。
【０１１１】
温処理とは、７０〜８０℃でペクチンをホットＳｌｉｍ Ｆａｓｔに添加することをいう。冷処理とは、周囲温度でペクチンをＳｌｉｍ Ｆａｓｔに添加することをいう。
【０１１２】
Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔの４つの試料をこの実験に用いる。温処理には２つの試料（試料１および２）が含まれる。試料１は、Ｕｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ飲料である（フロリダ州３３４０２、ウエストパームビーチ、Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ Ｆｏｏｄｓ Ｃｏ．製造）。試料２は、Ｕｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ飲料および本発明のブロックト脱エステル（ＢＤ）ペクチンである（実施例２で調製されるような）。
【０１１３】
冷処理には２つの試料（試料３および４）が含まれる。試料３は、Ｕｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ飲料である（フロリダ州３３４０２、ウエストパームビーチ、Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ Ｆｏｏｄｓ Ｃｏ．製造）。試料４は、Ｕｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ飲料および本発明のＢＤペクチンである（実施例２で調製されるような）。
【０１１４】
この実験を実施する手順は、以下のとおりである：１．５％ＢＤペクチン溶液を、７０〜７５℃でペクチンを脱イオン水に溶解することにより調製する。Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｍｉｘｅｒで５，０００ｒｐｍで混合しながら、ペクチン溶液１部およびＵｌｔｒａ Ｓｌｉｍ Ｆａｓｔ飲料９部を注入し、０．１５％の最終ペクチン濃度を作る。混合物のｐＨをｐＨ３で阻止する。ついで、対照を、脱イオン水１部および栄養飲料９部で調製する。ペクチン安定剤のミネラル懸濁安定度を、十分な時間対照試料と比較する。
【０１１５】
本発明のペクチンを有する温および冷処理ならびに４８時間後の対照試料の結果を、下記表２に示す。
【０１１６】
【表２】
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前記実施例を、前記実施例で用いられるものの代わりに本発明に総称的かつ具体的に記載される構成成分および／または操作条件を用いることにより同類の成功をもって繰り返すことができる。前記記載から、当業者は、本発明の基本的な特徴を容易に確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明の種々な変化および改変を実施して種々な用途および条件に適合できる。
【０１１７】
２０００年６月９日に出願された米国出願第０９／５８９，８８７号は、本出願はその国際出願であるが、その内容すべてが本明細書に取り込まれる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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