(57)【要約】本発明は、アレルギーの診断の際の実際の感作物質の特定における精度改善のための、血清学的検定における単離アレルゲン成分の使用に関する。本発明によって、原因物質の回避のために適切な測定が可能になるばかりでなく、アレルギー疾患の治療の適切な選択も可能になる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
交差反応性蛋白質またはエピトープを含む様々な考えられるアレルゲン源の中から実際の感作アレルゲン源を改善された精度で血清学的に特定するための、限られた交差反応性または非交差反応性の純アレルゲン成分の使用。
【請求項２】
前記実際のアレルゲン感作物質から誘導された抽出物、蛋白質またはペプチドに関わる疾患の治療を選択するための請求項１に記載の使用。
【請求項３】
アレルゲン成分が、植物種の花粉から誘導される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
植物種が雑草種である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
雑草種が、ヨモギ、ブタクサまたはヒカゲミズ種である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
雑草種が、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
アレルゲン成分が、Ｐａｒ  ｊ  １またはＰａｒ  ｊ  ２である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
アレルゲン成分が、合成、組換または天然のものである、上記いずれかの請求項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギーの診断の際の感作アレルゲン源の特定における精度改善のための、血清学的検定における単離アレルゲン成分の使用に関する。本発明によって、原因物質の回避のために適切な測定が可能になるばかりでなく、アレルギー疾患の治療の適切な選択も可能になる。
【背景技術】
【０００２】
西側世界の人口の約２０％は、Ｉ型アレルギー（環境に存在するある状況では有害な分子構造、すなわちアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の形成に関わる過敏症）に罹っている。Ｉ型アレルギーの症状（アレルギー性鼻炎、結膜炎、アレルギー性喘息）は、組織反応を発生させるヒスタミンおよびロイコトリエンなどの生物学的媒介物質の放出を誘発するアレルゲン分子によって特異的ＩｇＥ抗体と結合した細胞とエフェクターの架橋によって、主に生じる。
【０００３】
アレルギーの診断には、感作物質源を特定するための測定が含まれる。このために一般的に実践されることは、典型的には組織反応のための皮膚および掠痕へのインビボ抗原投与、または特異的ＩｇＥ抗体の測定による血清検査、いずれかのためにアレルゲン源の抽出物を使用することである。後者の方式では、血液サンプルからの血清を用いて、患者を不快なアレルゲンにさらすことなく、あらゆる数の疑わしいアレルゲンに対して定量的で客観的な試験が行われる。しかし、粗アレルゲン抽出物を用いる診断法の特定精度は、アレルゲンを生産する、近い関連のおよび遠い関連の種における分子構造の間に存在する広範なパターンの血清学的関係によって防害される。
【０００４】
従って、特定のアレルゲン源への感作よって、患者がいまだかつて接触したことがない一定範囲の他のアレルゲン性物質に対する血清反応陽性が導かれることがある。こうした血清学的交差反応性は、臨床的に関連している（すなわち、アレルギー症状を誘発することができる）こともあるし、そうでないこともあり、また、こうした血清学敵交差反応性が作用して、アレルゲンの回避に関する意義のある助言の根拠となる、特に、免疫療法用のアレルゲン抽出物の選択の根拠となる不快なアレルゲンの特定を混乱させうる。
【０００５】
ブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ｓｐｐ．）、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）およびヒカゲミズ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｓｐｐ．）などの顕著な例を含む、雑草の花粉は、世界中で重要なアレルゲン源となっている。いずれかの特定の雑草種の花粉中に存在するアレルゲンの一部（全てではないが）は、他の種の構造的に類似した相同体によって代理され、従って、ある程度の血清学的交差反応性を示す。それ故、個々のアレルゲンにおける免疫学的応答によって生じた抗体特異性の構成によっては、一つの雑草種に対する感作により他の種に対する血清試験陽性が導かれることがある。血清試験は、そうした明らかな多重感作の場合には、実際の感作物質の特定に関して曖昧な結果を生じる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、全アレルゲン抽出物を用いて、感作の原因であるアレルゲンを曖昧でなく決定すること、選択的免疫療法での最適な選択を確保することは、多くの場合、困難であるか、不可能である。一次感作物質または実際の感作物質を正確に反映する、免疫療法のための適切なアレルゲン源の選択は、治療有効性、急性副作用および誘発されるさらなる感作の危険性、ならびにコスト節約および治療を受ける患者にかかる不便の面で、非常に望ましい。
【０００７】
欧州特許第０７０７０６５号は、組換えヒカゲミズ蛋白質およびアレルゲン性であると特定された誘導ペプチドを記載している。欧州特許第０７０７０６５号では、これらのペプチドをヒカゲミズ花粉誘発アレルギーの治療と診断の両方に使用することについて考察している。しかし、真性ヒカゲミズ花粉感作と交差反応によって媒介されたヒカゲミズ花粉抽出物に対する血清反応陽性とを区別するために試薬としてこれらの蛋白質／ペプチドを利用することは、実証も、議論もされていない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明によると、異なる雑草花粉アレルギー間の厳格な分別が初めて可能となり、その結果、選択的免疫療法の正確な選択ための基準が有意に改善される。
【０００９】
本発明は、粗アレルゲン抽出物を用いて可能であるレベルより高い精度で、様々な考えられるアレルゲン源の中で感作アレルゲン源を血清学的に判定するための、限られた交差反応性の単離アレルゲン成分の新規使用を提供する。本発明によって、Ｉ型アレルギーなどのアレルゲンに関わる疾患の選択的治療のためのアレルゲン抽出物の選択における精度向上が可能になる。この治療は、免疫療法または薬物療法を含む。
【００１０】
従って、本発明は、交差反応性蛋白質またはエピトープを含む様々な考えられるアレルゲン源の中で実際の感作アレルゲン源を改善された精度で血清学的に特定するための、限られた交差反応性または非交差反応性の純アレルゲン成分の使用を提供する。本発明の使用は、例えば、前記実際のアレルゲン感作物質から誘導された抽出物、蛋白質またはペプチドに関わる疾患の治療の選択に価値がある。
【００１１】
アレルゲン成分は、植物種、好ましくは、ヨモギ、ブタクサまたはヒカゲミズなどの雑草種の花粉から誘導される。
【００１２】
好ましい種は、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ、特に、アレルゲン成分がＰａｒ  ｊ  １またはＰａｒ  ｊ  ２（１、２）であるＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａである。これらの成分を生じるために用いられる方法は、本発明にはさほど重要ではなく、合成のものであってもよいし、組換えのものであってもよいし、または天然のものであってもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
（発明の詳細な説明）
ここで、よい例となるアレルゲン成分、すなわち、Ｐａｒ  ｊ  ２に関連して、本発明を説明することとする。
【００１４】
本発明は、組換えＰａｒ  ｊ  ２（主Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ花粉アレルゲン）を診断ツールとして用いて、ヒカゲミズに一次感作したアレルギー患者を特定することができるかどうかを調査した。本発明者らは、免疫ブロット法ならびにＣＡＰ  ＲＡＳＴ測定によって、オーストリア（ｎ＝４２）、スカンジナビア（ｎ＝８）、米国（ｎ＝１８）およびイタリア（ｎ＝３７）からの全ヒカゲミズ抽出物、ブタクサ花粉抽出物、ヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物およびｒＰａｒ  ｊ  ２に反応性の患者のＩｇＥ反応性を分析した。スカンジナビア、米国およびオーストリアのほぼすべての患者が、ブタクサ、ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に対するＩｇＥ抗体を有することがわかった。スカンジナビアおよび米国からの血清はｒＰａｒ  ｊ  ２と反応せず、オーストリアの血清も４つしかｒＰａｒ  ｊ  ２と反応しなかったが、地中海の患者の８０％が、ｒＰａｒ  ｊ  ２と反応した。従って、ｒＰａｒ  ｊ  ２をマーカーアレルゲンとして用いて、ヒカゲミズ花粉に一次感作した、地中海感作プロフィールを有するアレルギー患者を特定することができる。従って、ｒＰａｒ  ｊ  ２は、雑草花粉アレルギー患者の特定の免疫療法に適する雑草花粉アレルゲン抽出物を選択するために有用な診断ツールでありうる。
【００１５】
材料および方法
患者の血清
オーストリア（ｎ＝４２）、スカンジナビア（ｎ＝８）、米国（ｎ＝１８）および地中海（ｎ＝３７）からの雑草花粉アレルギー患者を皮膚反応性および免疫ブロット法によって特性付けした。ブタクサ、ヨモギ、ヒカゲミズ花粉抽出物およびｒＰａｒ  ｊ  ２に特異的な血清ＩｇＥ  Ａｂｓの存在は、ＲＡＳＴ（放射線アレルギー吸収試験）分析（Ｐａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって確認した。
【００１６】
アレルゲン抽出物、ウエスタンブロット法
ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）およびヒカゲミズ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）からの花粉は、Ａｌｌｅｒｇｏｎ  ＡＢ（Ｖａｌｉｎｇｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手し、使用するまで４℃で保管した。
【００１７】
花粉２グラムを室温で２時間、蒸留水５０ｍｌに抽出した。次に、蛋白質抽出物を４℃で３０分間、３０，０００ｇで遠心分離した。上清を冷凍し、凍結乾燥して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクマシーブルー染色法（Ｂｒａｄｆｏｒｄら、１９７６年）により蛋白質量および蛋白質の質を調査した。同等の量の各抽出物（２２０μｇ／ｃｍ）を１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し（Ｆｌｉｎｇら、１９８６年）、ニトロセルロースにブロッティングした（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ，Ｄａｓｓｅｌ，ドイツ）（Ｔｏｗｂｉｎら、１９７９）。
【００１８】
ｒＰａｒ  ｊ  ２の生産
Ｐａｒ  ｊ  ２蛋白質を、Ｄｕｒｏら（２）により説明されているｃＤＮＡからのＥ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１中で発現させ、ｐＥＴ−２３ａ発現ベクターにおいてクローニングした。培地と一晩培養したものとを１：５００でインキュベートし、対数期中間点まで３０℃で初期増殖させた。次に、インキュベーション温度を４５分間４２℃に上昇させ、その後、回収前に４時間３０℃にした。＋４℃で１０分間、１００００ｇでの遠心分離によって細胞を回収し、細胞のグラム（最新の重量）あたり５ｍｌのバッファＡ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）２０ｍＭ、ＮａＣｌ  ０．５Ｍ、イミダゾール５ｍＭ）に再び浮遊させた。この再び浮遊させた細胞を氷上で保持しながら音波処理によって破砕し、その後、遠心分離して、固形物を除去した。上清は、ＩＭＡＣのために、５ｍｌのＮｉ＋を充填したＨｉＴｒａｐ  Ｃｈｅｌａｔｉｎｇカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）に装填した。イミダゾール２０ｍＭを含有する１０容量のバッファＡでカラムを洗浄し、バッファＡ中２０ｍＭから５００ｍＭの傾斜のイミダゾールで溶離を行った。純粋なｒＰａｒ  ｊ  ２蛋白質を含有する画分を集め、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いてＮａＣｌ  ０．１５Ｍにバッファを交換した。ｍｇ／ｍｌあたり０．２４の算定吸収係数を用いて、２８０ｎｍにおける吸収からｒＰａｒ  ｊ  ２の濃度を決定した。蛋白質は、アリコートに分け、使用するまで−２０℃で保管した。
【００１９】
Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＣＡＰ  Ｓｙｓｔｅｍを用いるｒＰａｒ  ｊ  ２によるＩｇＥ−結合の分析
ｒＰａｒ  ｊ  ２によるインビトロＩｇＥ抗体結合をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＣＡＰ  Ｓｙｓｔｅｍ（臨床用のアレルギー診断用免疫検定システム）で試験した。実験的免疫ＣＡＰ試験は、適正な線形測定範囲と通常の切捨て値より下の負の血清のための背景とが得られるように選択された濃度での活性セルロースへの精製アレルゲンの共有結合イムノビリゼーションによって準備した。血清試験は、免疫検定システムの製造業者（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の推奨に従って行った。検定の質を証明する統計パラメータは、システムのソフトウエアを用いて計算した。
【００２０】
免疫ブロット法
オーストリアから２０人、イタリアから３２人の雑草花粉アレルギー患者および（対照のために）アトピー性でない人１人のものを、バッファＡ（リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）５０ｍＭ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０．５％（重量／容積）、Ｔｗｅｅｎ  ２０  ０．５％（容積／容積）、ＮａＮ３  ０．０５％）で１：１０に希釈した。血清をニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。結合したＩｇＥを１２５Ｊ−標識抗ヒトＩｇＥ抗体（Ｖａｌｅｎｔａら、１９９２）で検出し、ＫＯＤＡＫ  Ｘ−ＯＭＡＴフィルムおよび増感紙（Ｋｏｄａｋ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ドイツ）を用いるオートラジオグラフ法によって視覚化した。
【００２１】
ＩｇＥ阻害実験
ＩｇＥ免疫ブロット阻害実験によって、ヨモギおよびヒカゲミズ抽出物中の交差反応性アレルゲン／エピトープの存在を調査した。オーストリア集団からのヨモギアレルギー患者６人のものを１／１０に希釈し、一晩、４℃で、ヨモギ抽出物１００μｇ／ｍｌ、ヒカゲミズ抽出物１００μｇ／ｍｌ、ｒＰｈｌ  ｐ  ７  １０μｇ／ｍｌ、Ｂｅｔ  ｖ  ２  １０μｇ／ｍｌおよび対照のためにＢＳＡ  １０μｇ／ｍｌを予備吸着させた。その後、予備吸着させた血清を、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ抽出物に暴露した。結合したＩｇＥを１２５Ｊ−標識抗ヒトＩｇＥ抗体（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）で検出した。
【００２２】
皮膚プリック試験
告知に基づく同意を得た後、雑草花粉アレルギー患者１０人および対照のためにアレルギーでない人１人の前腕で、皮膚プリック試験を行った。数滴のブタクサ花粉抽出物、ヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ヒスタミン（１μｇ／ｍｌ）および塩化ナトリウム溶液（Ｓｏｌｕｐｒｉｃｋ；ＡＬＫ，Ｈｏｒｓｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）を記載されている（Ｖｒｔａｌａら、１９９７）ように滅菌ランセット（ＡＬＫ）でプリックした。写真による試験およびボールペンで囲んだ膨疹領域からスコッチテープで紙に移す試験の後、皮膚の反応を２０分記録した。表５に示す膨疹平均径は、次のとおり決定した：Ｄｍ＝（Ｄ１＋Ｄ２）／２。Ｄ１およびＤ２は、それぞれ、膨疹反応の最大縦径および最大横径（単位：ｍｍ）を表す。
【００２３】
表１から４．異なる雑草花粉アレルギー集団からの血清における、ＣＡＰ  ＲＡＳＴ測定による、ブタクサ、ヨモギ、ヒカゲミズおよびｒＰａｒ  ｊ  ２に対するＩｇＥ抗体の検出。
【００２４】
ＣＡＰ  ＲＡＳＴ測定は、スカンジナビア、米国およびオーストリアからのほぼすべての雑草花粉アレルギー患者が、ヒカゲミズ花粉抽出物に対するＩｇＥ抗体を有することを示している。スカンジナビアおよび米国からの血清は、ｒＰａｒ  ｊ  ２と反応せず、オーストリア人の血清も４つ（９．５％）しかｒＰａｒ  ｊ  ２と反応しなかった。対照的に、地中海人の血清の８１％は、ＩｇＥ抗ｒＰａｒ  ｊ  ２を有した。
【００２５】
【表１】
2004523741.tif 000002
【００２６】
【表２】
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【００２７】
【表３】
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【００２８】
【表４】
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【００２９】
【表５】
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【００３０】
【表６】
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【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】ブロッティングしたヒカゲミズ抽出物に対するオーストリア人と地中海人の血清の異なるＩｇＥ反応性プロフィール。ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギ（Ａ、Ｃ）およびヒカゲミズ（Ｂ、Ｄ）花粉抽出物に対するオーストリア（Ａ、Ｂ；ｎ＝２１）およびイタリア（Ｃ、Ｄ；ｎ＝３３）からの雑草花粉アレルギー患者の血清ＩｇＥ反応性を試験した。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者２０人のうち１６人が、ブロッティングされたヒカゲミズ花粉抽出物とは異なる分子量の蛋白質に対してＩｇＥ反応性を示した（Ｂ）。対照的に、地中海集団は、異なる反応性プロフィールを示す。ほとんどの患者が、１０ｋＤａでのＰａｒ  ｊ  ２に反応する。
【図１Ｂ】ブロッティングしたヒカゲミズ抽出物に対するオーストリア人と地中海人の血清の異なるＩｇＥ反応性プロフィール。ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギ（Ａ、Ｃ）およびヒカゲミズ（Ｂ、Ｄ）花粉抽出物に対するオーストリア（Ａ、Ｂ；ｎ＝２１）およびイタリア（Ｃ、Ｄ；ｎ＝３３）からの雑草花粉アレルギー患者の血清ＩｇＥ反応性を試験した。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者２０人のうち１６人が、ブロッティングされたヒカゲミズ花粉抽出物とは異なる分子量の蛋白質に対してＩｇＥ反応性を示した（Ｂ）。対照的に、地中海集団は、異なる反応性プロフィールを示す。ほとんどの患者が、１０ｋＤａでのＰａｒ  ｊ  ２に反応する。
【図１Ｃ】ブロッティングしたヒカゲミズ抽出物に対するオーストリア人と地中海人の血清の異なるＩｇＥ反応性プロフィール。ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギ（Ａ、Ｃ）およびヒカゲミズ（Ｂ、Ｄ）花粉抽出物に対するオーストリア（Ａ、Ｂ；ｎ＝２１）およびイタリア（Ｃ、Ｄ；ｎ＝３３）からの雑草花粉アレルギー患者の血清ＩｇＥ反応性を試験した。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者２０人のうち１６人が、ブロッティングされたヒカゲミズ花粉抽出物とは異なる分子量の蛋白質に対してＩｇＥ反応性を示した（Ｂ）。対照的に、地中海集団は、異なる反応性プロフィールを示す。ほとんどの患者が、１０ｋＤａでのＰａｒ  ｊ  ２に反応する。
【図１Ｄ】ブロッティングしたヒカゲミズ抽出物に対するオーストリア人と地中海人の血清の異なるＩｇＥ反応性プロフィール。ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギ（Ａ、Ｃ）およびヒカゲミズ（Ｂ、Ｄ）花粉抽出物に対するオーストリア（Ａ、Ｂ；ｎ＝２１）およびイタリア（Ｃ、Ｄ；ｎ＝３３）からの雑草花粉アレルギー患者の血清ＩｇＥ反応性を試験した。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者２０人のうち１６人が、ブロッティングされたヒカゲミズ花粉抽出物とは異なる分子量の蛋白質に対してＩｇＥ反応性を示した（Ｂ）。対照的に、地中海集団は、異なる反応性プロフィールを示す。ほとんどの患者が、１０ｋＤａでのＰａｒ  ｊ  ２に反応する。
【図２Ａ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。
【図２Ｂ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。。
【図２Ｃ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。
【図２Ｄ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。
【図２Ｅ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。
【図２Ｆ】ＩｇＥ阻害実験。オーストリア人の雑草花粉アレルギー患者からの６つの血清（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）をヨモギ花粉抽出物、ヒカゲミズ花粉抽出物、ｒＰｈｌ  ｐ  ７、ｒＢｅｔ  ｖ  ２またはＢＳＡのいずれかとともに事前インキュベートし、その後、ニトロセルロースにブロッティングしたヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物に暴露した。ヨモギおよびヒカゲミズ花粉抽出物は、高分子量（２５ｋＤａから１００ｋＤａ）の交差反応性アレルゲン、プロフィリンおよび二つのＥＦ−ｈａｎｄアレルゲンを含有する。
【図３】ヒカゲミズ花粉の祖抽出物およびアレルゲン成分ｒＰａｒ  ｊ  ２に結合している血清ＩｇＥ抗体の定量分析。図は、表１から３に詳細を記載するＩｇＥ抗体濃度に基づく。３つのグループの人（Ａ＝オーストリア人、スカンジナビア人およびアメリカ人、Ｂ＝地中海人、ならびにＣ＝これらすべて併せたもの）について、Ｐａｒ  ｊ  ２に対する血清ＩｇＥを測定した。結果は、ｒＰａｒ  ｊ  ２に対する感作はヒカゲミズが発生する地域出身の患者集団において優勢であること、およびヒカゲミズの自然分布領域外に住む集団では、この蛋白質に対する感作が実質的にないことを示している。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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2004523741.tif 000021
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【国際調査報告】
2004523741.tif 000040
2004523741.tif 000041
2004523741.tif 000042