(57)【要約】本発明は前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制するための製剤組成物及び方法を提供する。一実施態様では製剤組成物はヒトｒＨｕＰＳＰ９４、その抗原部分及びその機能的等価ポリペプチドを含有する。他実施態様では、製剤組成物はヒトｒＨｕＰＳＰ９４、その抗原部分及びその機能的等価ポリペプチドと抗がん剤の混合物を含有し、たとえば前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、前立腺肥大（ＢＨＰ）、もしくは胃腸がんなどの患者に然るべき剤型、用量及び用法で投与されよう。前記混合物中の抗がん剤はマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチド。
【請求項２】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制しうる、次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項３】
腫瘍の増殖を抑制しうる、次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項４】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチドの、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の抑制を目的とした使用。
【請求項５】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチドの、腫瘍の成長抑制を目的とした使用。
【請求項６】
用量範囲を約１０μｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日とする、請求項４又は５に記載のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４の使用。
【請求項７】
用量範囲を約５００ｐｇ／ｋｇ／日〜約１ｍｇ／ｋｇ／日とする、請求項４又は５に記載のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４の使用。
【請求項８】
用量範囲を約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日とする、請求項４又は５に記載のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４の使用。
【請求項９】
用量範囲を約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約５００ｎｇ／ｋｇ／日とする、請求項４又は５に記載のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４の使用。
【請求項１０】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド及びそれらの混合物からなる群より選択されるポリペプチドの、用量範囲を約１００ｎｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日とする、請求項４又は５に記載の使用。
【請求項１１】
ポリペプチドが抗がん剤と併用される請求項４又は５に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１２】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項１１に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１３】
ポリペプチドが製薬上許容しうる担体と併用される請求項４又は５に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１４】
ポリペプチドが製薬上許容しうる担体と併用される請求項１１に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１５】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項４又は５に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１６】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項１１に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項１３に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１８】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項１４に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１９】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の抑制を目的とした、次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体の使用： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項２０】
腫瘍の成長抑制を目的とした、次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体の使用： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項２１】
ポリペプチド類似体が抗がん剤と併用される請求項１９又は２０に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２２】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項２１に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２３】
ポリペプチド類似体が製薬上許容しうる担体と併用される請求項１９又は２０に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２４】
ポリペプチド類似体が製薬上許容しうる担体と併用される請求項２１に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２５】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項１９又は２０に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２６】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項２１に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２７】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項２３に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２８】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項２４に記載のポリペプチド類似体の使用。
【請求項２９】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物からなる群より選択されるポリペプチドを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項３０】
腫瘍患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物からなる群より選択されるポリペプチドを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項３１】
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を約１０μｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で投与する請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を約２５ｐｇ／ｋｇ／日〜約１ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で投与する請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３３】
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日の用量範囲で投与する請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３４】
ポリペプチドがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド及びそれらの混合物からなる群より選択され、約１００ｎｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で使用される請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドが抗がん剤と併用される請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３６】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ポリペプチドが製薬上許容しうる担体と併用される請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３８】
ポリペプチドが製薬上許容しうる担体と併用される請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項４０】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
ポリペプチドが該ポリペプチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４４】
腫瘍患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４５】
ベクターが抗がん剤と併用される請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４６】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ベクターが該ベクターの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４８】
ベクターが該ベクターの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項５０】
腫瘍患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法。
【請求項５１】
ポリヌクレオチドが抗がん剤と併用される請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ポリヌクレオチドが該ポリヌクレオチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５４】
ポリヌクレオチドが該ポリヌクレオチドの連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者を治療する方法であって、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制しうる次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体を含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項５６】
腫瘍患者を治療する方法であって、腫瘍の成長を抑制しうる次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体を含有する製剤組成物を該患者に投与するステップを含む方法： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。
【請求項５７】
ポリペプチド類似体が抗がん剤と併用される請求項５５又は５６に記載の方法。
【請求項５８】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ポリペプチド類似体が製薬上許容しうる担体と併用される請求項５５又は５６に記載の方法。
【請求項６０】
ポリペプチド類似体が製薬上許容しうる担体と併用される請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項５５又は５６に記載の方法。
【請求項６２】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
ポリペプチド類似体が該ポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための、次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチド、及び
ｂ）抗がん剤。
【請求項６６】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための、次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチド、及び
ｂ）製薬上許容しうる担体。
【請求項６７】
次の成分を含有する製剤組成物：
ａ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択される、治療有効量のポリペプチド、及び
ｂ）治療有効量の抗がん剤。
【請求項６８】
次の成分を含有する製剤組成物：
ａ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）及びそれらの混合物（類）からなる群より選択される、治療有効量のポリペプチド、及び
ｂ）製薬上許容しうる担体。
【請求項６９】
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の用量範囲を約１０μｇ／ｋｇ ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日とする請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７０】
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の用量範囲を約５００ｐｇ ／ｋｇ／日〜約１ｍｇ／ｋｇ／日とする請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７１】
ｒＨｕＰＳＰ９４の用量範囲を約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日とする請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７２】
ｒＨｕＰＳＰ９４の用量範囲を約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約５００ｎｇ／ ｋｇ／日とする請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７３】
ポリペプチドがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド及びそれらの混合物類からなる群より選択され、その用量範囲を約１００ｎｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日とする、請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７４】
抗がん剤をさらに含有する請求項６５〜６８のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７５】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項６５、６７又は７４に記載の製剤組成物。
【請求項７６】
製剤組成物の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段をさらに含有する請求項６５〜６８又は７４のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項７７】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物。
【請求項７８】
患者の腫瘍の成長を抑制するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物。
【請求項７９】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物。
【請求項８０】
患者の腫瘍の成長を抑制するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含有する製剤組成物。
【請求項８１】
抗がん剤をさらに含有する請求項７７〜８０のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項８２】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項８１に記載の製剤組成物。
【請求項８３】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための、次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにその混合物（類）、及び
ｂ）抗がん剤。
【請求項８４】
前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制するための、次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）次のポリペプチド類似体群より選択されるポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにその混合物（類）、及び
ｂ）製薬上許容しうる担体。
【請求項８５】
次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）次のポリペプチド類似体群より選択される、治療有効量のポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにその混合物（類）、及び
ｂ）治療有効量の抗がん剤。
【請求項８６】
次の成分を含有する製剤組成物：
ａ）次のポリペプチド類似体群より選択される、治療有効量のポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにその混合物（類）、及び
ｂ）製薬上許容しうる担体。
【請求項８７】
抗がん剤をさらに含有する請求項８４又は８６に記載の製剤組成物。
【請求項８８】
抗がん剤がマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体及びそれらの混合物からなる群より選択される請求項８３、８５又は８７に記載の製剤組成物。
【請求項８９】
製剤組成物の連続投与の実施を目的にリポソームと多糖類からなる群より選択される徐放性手段と併用される請求項８３〜８６又は８７のうち１項に記載の製剤組成物。
【請求項９０】
高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者を治療する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドと製薬上許容しうる担体とを含有する然るべき剤型の製剤組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項９１】
高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者を治療する方法であって、次の成分を含む然るべき剤型の製剤組成物をヒト用量投与するステップを含む方法：
次の群より選択されるポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物、及び
製薬上許容しうる担体。
【請求項９２】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド及びその混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチドの、高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者の治療への使用。
【請求項９３】
次の群より選択されるポリペプチド類似体の、高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者の治療への使用： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２Ｃ Ｘ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物。
【請求項９４】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド及びその混合物（類）からなる群より選択されるポリペプチドの、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、前立腺肥大（ＢＨＰ）、もしくは高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の治療薬の製造への使用。
【請求項９５】
次の群より選択されるポリペプチド類似体の、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、前立腺肥大（ＢＨＰ）、もしくは高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の治療薬の製造への使用： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２Ｃ Ｘ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は前立腺がん、胃がん、乳がん子宮内膜及び卵巣がんなどのがんに由来する腫瘍、並びに前立腺肥大（ＢＰＨ）を対象とする腫瘍抑制剤としての製剤（すなわち製剤組成物）に関連する。
【０００２】
発明の背景
哺乳類のオスに特有の前立腺は数種の精液及び血液成分並びに数種の調節ペプチドを産生する。前立腺は間質細胞と上皮細胞を含み上皮細胞群は柱状分泌細胞と基底非分泌細胞からなる。これらの基底細胞や間質細胞の増殖は一般的な前立腺疾患の一種である前立腺肥大（ＢＰＨ）を引き起こす。もう１つの一般的な前立腺疾患は前立腺の腺がん（ＣａＰ）である。これは致命的な病態生理の前立腺がんとして最も一般的であり、また前立腺周辺領域の上皮細胞の悪性転換を伴う。前立腺がんと前立腺肥大は２大前立腺疾患であり、高齢男性で発生率が高い。５５歳以上の男性では約４人に１人が何らかの前立腺疾患にかかっている。米国では前立腺がんは高齢男性のがん関連死因の第２位となっており、毎年約９６，０００人の罹患が診断され約２６，０００人の死亡が報告されている。
【０００３】
多様な前立腺疾患の病因の理解を目的に実施された正常、良性及びがん性病変前立腺で合成、分泌される種々の物質に関する研究から、そうした物質のなかには前立腺疾患の診断で免疫化学的腫瘍マーカーとして使用できるものもあると判明している。正常な前立腺で分泌される主要なタンパク質又はポリペプチドは（１）前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、（２）前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び（３）９４個のアミノ酸からなる前立腺分泌タンパク質（ＰＳＰ９４）の３種類であり、最後のＰＳＰ９４は別名、前立腺インヒビンペプチド（ＰＩＰ）、ヒト精漿インヒビン（ＨＳＰＩ）、又はβ−ミクロセミノプロテイン（β−ＭＳＰ）であるが、以下名称をＰＳＰ９４に統一する。
【０００４】
ＰＳＰ９４はシステインに富む単純な、非グリコシル化タンパク質であり、前述の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）と共にヒト精液中の３大タンパク質の１つである。ＰＳＰ９４は分子量が１０．７ｋＤａであり、完全なアミノ酸配列が既に決定されている（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。ＰＳＰ９４に対応するｃＤＮＡ及び遺伝子の単離と解析も既に行われている（Ｕｌｖｓｂａｃｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．， １６４：１３１０， １９８９； Ｇｒｅｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．， １６７：１１８４， １９９０）。ＰＳＰ９４は多様な分泌上皮細胞に存在するものの（Ｗｅｉｂｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．， １３７：５９３， １９９０） 、主に前立腺上皮細胞に局在することが免疫化学的及びｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション手法により既に証明されている。ＰＳＰ９４が前立腺の腺がん細胞株ＬＮＣａｐ中で発現することも証明されている（Ｙａｎｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ．， １６０：２２４０， １９９８）。また、腫瘍細胞の増殖に対する外来性ＰＳＰ９４の抑制効果がｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏの両方で観測されているが（Ｇａｒｄｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ２２：２２５， １９９３； Ｌｏｋｅｓｈｗａｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５３：４８５５， １９９３）、これはＰＳＰ９４が腫瘍細胞上のコグネイト受容体との相互作用を介して前立腺がんの抑制物質となりうることを示唆する。
【０００５】
天然ＰＳＰ９４はホルモン療法抵抗性の前立腺がん（及び潜在的に他の前立腺適応症）の治療にモダリティーを有することが既に解明されている。
【０００６】
代謝及び免疫組織化学研究によれば、前立腺はＰＳＰ９４の主要産生源である。ＰＳＰ９４はｉｎ ｖｉｔｒｏでもオス生体ラットのｉｎ ｖｉｖｏでも血中卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）のフィードバック制御に関与し、その分泌を抑制する働きをする。ＰＳＰ９４は前立腺だけでなく下垂体にも作用する。いずれもＰＳＰ９４受容体部位をもつためである。ＰＳＰ９４はラット前立腺のＦＳＨ様ペプチドの合成／分泌におそらく影響を及ぼすだけでなく、下垂体でのＦＳＨ生合成及び放出を抑制することも既に解明されている。これらの研究成果はＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍抑制効果が血中ＦＳＨ濃度の低下に起因する可能性があることを示唆する。
【０００７】
ＰＳＡとＰＡＰはともに前立腺疾患診断用の腫瘍マーカーとして研究されてきたが、前立腺肥大（ＢＰＨ）ではどちらも高レベルを示すため、いずれも特異的ではなく、効用が限られる。
【０００８】
最近、ＢＰＨ又はＣａＰ患者の血中ＰＳＰ９４濃度は正常値を著しく上回ることが証明された。血中ＳＰＳ９４濃度は正常男性では最大でも約４０ｎｇ／ｍｌであるが、ＢＰＨ又はＣａＰ患者では３００〜４００ｎｇ／ｍｌの範囲である。正常前立腺被検者とＢＰＨ又はＣａＰ患者のＰＳＰ９４濃度にはある程度の重なりが見られるため、血中濃度それ自体はほとんど価値がない。
【０００９】
前立腺がん治療は内分泌療法（ａｎｄｒｏｇｅｎ ａｂｌａｔｉｏｎ）が主である。当初ほとんどの患者はこの処置に応答するものの、その効果は時間と共に薄れていく。それはおそらく、アンドロゲン依存性細胞とアンドロゲン非依存性細胞の異種混合個体群が存在し、その中のアンドロゲン不感性細胞が除去されずに増殖し続けるためであろう。
【００１０】
現在、死因の上位を占めるがんとして他に、女性の乳がん、及び胃腸管のがんがある。そうしたがんの処置には目下、種々の制がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン及びダウノマイシンなどが使用されている。そうした治療処置の難点は、制がん剤を効果的な処置に必要とされる用量範囲で投与した場合の副作用の問題である。
【００１１】
従って、前立腺がん、乳がん及び胃腸がんの細胞及び腫瘍の増殖・成長を抑える一段と有効な手段であって、アンドロゲン感性細胞とアンドロゲン不感性細胞の両方に対して効果的に使用しうるような手段を見つけ出すのが有利であろう。
【００１２】
本発明者は以前の研究（米国特許第５，４２８，０１１号）で、がん性の前立腺、胃腸管及び乳腫瘍のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ抑制を目的とした天然ヒト精漿ＰＳＰ９４製剤（すなわち製剤組成物）を提供した。該製剤は天然ヒト精漿ＰＳＰ９４を含み、然るべき剤型、用量及び用法で前立腺がん患者に投与することが可能であった。別の実施態様では、該製剤は天然ヒト精漿ＰＳＰ９４と抗がん剤の混合物を含み、然るべき剤型、用量及び用法で、たとえば胃腸管がん患者に投与することが可能であった。
【００１３】
ヒト精液由来ＰＳＰ９４は病原体［たとえばＨＩＶ、肝炎（Ａ型、Ｂ型又はＣ型）及び他ウイルス及び／又はプリオンなど］による汚染という大きな危険をはらむ。たとえ厳しい薬剤処理を採用するとしても、そうした病原体の完全な排除は保証できない。加えて、ヒト精液は供給量が限られるため、ＰＳＰ９４の量産はきわめて困難である。従ってＰＳＰ９４はヒト由来はもとより異種由来であっても規制当局、市場の双方にとって受け入れがきわめて困難であろう。
【００１４】
従って、ＰＳＰ９４生産に組換え技術が応用できれば、組換えＰＳＰ９４なら病原体の排除も量産も可能なので、著しい前進となろう。さらに、単一ロットに由来する均質で、バッチ間変動のない目的物が得られよう。
【００１５】
発明の要約
本発明は第１態様では次のポリペプチド及びポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体に関連する： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のポリペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体。上記ポリペプチド類似体は腫瘍の成長を抑制しうる可能性が、又はもっと厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制しうる。
【００１６】
本発明は第２態様では、腫瘍又はより厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の抑制を目的とした、次のポリペプチド及びポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体の使用に関連する： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２Ｃ Ｘ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）。
【００１７】
本発明の第２態様の一実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物と併用されよう。
本発明の第２態様の別の実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は製薬上許容しうる担体と併用されよう。
【００１８】
本発明の第２態様の更なる実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は、該ポリペプチド又はポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的に徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類と併用されよう。
【００１９】
本発明の第２態様のその他の実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は、抗がん剤及び製薬上許容しうる担体と、抗がん剤及び徐放性手段と、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段と、又は抗がん剤、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段と併用されよう。抗がん剤、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段の若干の例は本書で示すとおりである。
【００２０】
本発明は第３態様では腫瘍患者又はより厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＰＨ）の患者を治療する方法に関連し、該方法は該患者に次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体を含む製剤組成物を投与するステップを含む： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２Ｃ Ｘ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物。上記ポリペプチド類似体は腫瘍の成長を抑制しうる可能性が、又はもっと厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制しうる可能性がある。
【００２１】
前述のような治療方法はたとえば前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長抑制（たとえば鈍化、鎮静、減衰、制止）などをもたらす可能性がある。前述の方法は、たとえば本発明のポリペプチド、ポリペプチド類似体又はそれらの混合物を含む製剤組成物を患者に投与することによって行われよう。
【００２２】
本発明の第３態様の一実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物と併用されよう。
【００２３】
本発明の第３態様の別の実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は製薬上許容しうる担体と併用されよう。
本発明の第３態様の更なる実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は、該ポリペプチド又はポリペプチド類似体の連続投与の実施を目的に徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類と併用されよう。
【００２４】
本発明の第３態様のその他の実施態様では、ポリペプチド又はポリペプチド類似体は、抗がん剤及び製薬上許容しうる担体と、抗がん剤及び徐放性手段と、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段と、又は抗がん剤、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段と併用されよう。抗がん剤、製薬上許容しうる担体及び徐放性手段の若干の例は本書で示すとおりである。
【００２５】
本発明は第４態様では腫瘍患者又はより厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＰＨ）の患者を治療する方法に関連し、該方法は該患者に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含む製剤組成物、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含む製剤組成物を投与するステップを含む。
【００２６】
本発明の第４態様の一実施態様では、ベクター又はポリヌクレオチドは抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物と併用されよう。
【００２７】
本発明の第４態様の別の実施態様では、ベクター又はポリヌクレオチドはその連続投与の実施を目的に徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類と併用されよう。
【００２８】
本発明の第４態様の更なる実施態様では、ベクター又はポリヌクレオチドは抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物と、また該ベクター又はポリヌクレオチドの連続投与の実施を目的に徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類と併用されよう。
【００２９】
本発明は第５実施態様では腫瘍又はより厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の抑制を目的とした、次の成分を含む製剤組成物に関連する：
【００３０】
ａ） 次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）、及び
【００３１】
ｂ） 抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体、及びそれらの混合物。
【００３２】
本発明の第５態様の一実施態様では、製剤組成物は該組成物の連続投与の実施を目的とした徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類をさらに含む。
【００３３】
本発明は第６実施態様では腫瘍又はより厳密には前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の抑制を目的とした、次の成分を含む製剤組成物に関連する：
【００３４】
ａ） 次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２Ｃ Ｘ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）、及び
【００３５】
ｂ） 製薬上許容しうる担体。
【００３６】
本発明の第６態様の一実施態様では、製剤組成物は該組成物の連続投与の実施を目的とした徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類をさらに含む。
【００３７】
本発明の第６態様の第２実施態様では、製剤組成物は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体、及びそれらの混合物をさらに含む。
【００３８】
本発明の第６態様の第３実施態様では、製剤組成物は、徐放性手段と抗がん剤とをさらに含もう。徐放性手段の例は本書で示すとおりである。
【００３９】
本発明は第７態様では次の成分を含む製剤組成物に関連する：
【００４０】
ａ）次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択される、治療有効量のポリペプチド又はポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）、及び
【００４１】
ｂ） 治療有効量の抗がん剤、たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体、及びそれらの混合物。
【００４２】
本発明の第７態様の一実施態様では、製剤組成物は該組成物の連続投与の実施を目的とした徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類をさらに含む。
【００４３】
本発明は第８態様では次の成分を含む製剤組成物に関連する：
【００４４】
ａ）次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択される、治療有効量のポリペプチド又はポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）、及び
【００４５】
ｂ） 製薬上許容しうる担体。
【００４６】
本発明の第８態様の一実施態様では、製剤組成物は該組成物の連続投与の実施を目的とした徐放性手段たとえばリポソーム及び多糖類をさらに含む。
【００４７】
本発明の第８態様の第２実施態様では、製剤組成物は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール、タキソール誘導体、及びそれらの混合物をさらに含む。
【００４８】
本発明の第８態様の第３実施態様では、製剤組成物は、徐放性手段と抗がん剤とをさらに含もう。徐放性手段の例は本書で示すとおりである。
【００４９】
本発明は第９態様では、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）の患者の腫瘍の成長を抑制（鈍化、鎮静、減衰、制止）するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含む組成物、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含む組成物に関連する。
【００５０】
本発明の第９態様の一実施態様では、製剤組成物は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物をさらに含む。
【００５１】
本発明は第１０態様では、患者の腫瘍の成長を抑制するための製剤組成物であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のヌクレオチド配列を収めたベクターと製薬上許容しうる担体とを含む組成物、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜２８５以上の隣接残基を有するポリヌクレオチド及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９の１０〜５０以上の隣接残基を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチドと製薬上許容しうる担体とを含む組成物に関連する。
【００５２】
本発明の第１０態様の一実施態様では製剤組成物は抗がん剤たとえばマイトマイシン、イダルビシン、シスプラチン、５−フルオロ−ウラシル、メトトレキサート、アドリアマイシン、ダウノマイシン、タキソール（すなわちパクリタキセル）、タキソール誘導体（ドセタキセル、タキサンなど）、及びそれらの混合物をさらに含む。
【００５３】
本発明は第１１態様では、高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者を治療する方法であって、次の成分を含む然るべき剤型の製剤組成物をヒト用量投与するステップを含む方法に関連する：
【００５４】
次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物、及び
【００５５】
製薬上許容しうる担体。
【００５６】
本発明は第１２態様では、高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の患者の治療への、次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体の使用に関連する：
【００５７】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物（類）。
【００５８】
本発明は第１３態様では、前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがん、前立腺肥大（ＢＨＰ）、もしくは高ＦＳＨレベルを特徴とする疾患の治療薬の製造への、次のポリペプチド又はポリペプチド類似体からなる群より選択されるポリペプチド又はポリペプチド類似体の使用に関連する：
【００５９】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のｒＨｕＰＳＰ９４； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の５以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の２以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列Ｘ１ＷＱＸ２ＤＸ１ＣＸ１Ｘ２ ＣＸ２ＣＸ３Ｘ１Ｘ２からなるポリペプチド類似体−ただしＸ１はグルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）のいずれかであり、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）である； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのアミノ基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８からなる群より選択される； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含み、かつそのカルボキシル基末端に１以上の追加アミノ酸を有するポリペプチド類似体−ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む該ポリペプチド類似体はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０〜ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８からなる群より選択される； ２〜５０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； ２〜１０単位のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含むポリペプチド類似体； グルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）又はチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択される２〜１４アミノ酸単位の配列からなるポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列と５０％以上の同一性を有するアミノ酸配列のポリペプチド類似体； 並びにそれらの混合物。
【００６０】
本発明では、ｒＨｕＰＳＰ９４は約１０μｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で、約５００ｐｇ／ｋｇ／日〜約１ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で、約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日の用量範囲で、又は約５ｎｇ／ｋｇ／日〜約５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量範囲で使用してもよい。
本発明では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド、及びそれらの混合物は約１００ｎｇ／ｋｇ／日〜約４ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で使用してもよい。
【００６１】
本発明では、抗がん剤はポリペプチド又はポリペプチド類似体と混合しても混合しなくてもよいし、異なる経路で、又は異なる投与計画に沿って（たとえば時間又は日をずらして）別個に投与してもよい。
【００６２】
本発明では、組成物の投与は筋肉内（ＩＭ）、皮下（ＳＣ）、皮内（ＩＤ）、静脈内（ＩＶ）又は腹腔内（ＩＰ）注射による投与、又は任意好適の手段による口腔及び鼻腔粘膜を含む粘膜からの投与など、任意好適の経路によって行ってもよい。
【００６３】
本発明では、組成物は胃腸管がんの治療に使用してもよい。
【００６４】
本発明のタンパク質又はポリペプチドが公知の方法でつくれることは技術上周知である。本発明のポリペプチドはたとえば細菌細胞の抽出物から、又は組換え手法の使用により、製造してもよい。本発明のポリペプチドはたとえばｒＨｕＰＳＰ９４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）の全部又は一部をコードするＤＮＡ配列を収めた好適な発現媒体による宿主細胞の形質転換（トランスフェクション、形質導入又は感染）により産生させてもよい。好適な発現媒体の例はプラスミド、ウイルス粒子、人工染色体及びファージなどである。宿主細胞ゲノムには発現媒体の全部又は一部を組み込んでもよい。場合によっては、誘導的発現ベクターを使用するのが望ましい。
【００６５】
組換えタンパク質の産生には多種多様な発現系のうち任意のものを使用してよい。使用宿主細胞の選択は本発明には重要でない。本発明のポリペプチドの産生に使用する宿主は原核宿主（Ｅ． ｃｏｌｉ又はＢ． ｓｕｂｔｉｌｉｓなど）でも真核宿主［酵母たとえばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ又はＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ； 哺乳類細胞たとえばサルＣＯＳ細胞、マウス３Ｔ３細胞（Ｔｏｄａｒｏ ＧＪ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｈ．， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １７：２９９−３１３， １９６３）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（Ｐｕｃｋ ＴＴ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １０８：９４５−９５６， １９５８）、ＢＨＫ、ヒト腎２９３細胞（ＡＴＣＣ： ＣＲＬ−１５７３）又はヒトＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ： ＣＣＬ−２）； 又は昆虫細胞］でもよい。
【００６６】
Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ （Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ） などのような酵母細胞発現系では、本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を好適な発現ベクターたとえばｐＰＩＣ９ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ） などにクローニングしてもよい。本発明のポリペプチドの全部又は一部をコードするＤＮＡ配列をＰ． ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主細胞に導入すると、たとえばＡＯＸ１遺伝子座で組換えが起ころう。そうした組換えは本発明の多様なポリペプチドに対応するＤＮＡ配列をＡＯＸ１遺伝子プロモーターの支配下に置くことになろう。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ配列）がうまく組み込まれれば、該ポリペプチドは宿主細胞の増殖培地に添加されたメタノールによる調節及び／又は誘導を受けて発現することになろう（Ｂｕｃｋｈｏｌｚ， Ｒ．Ｇ． ａｎｄ Ｇｌｅｅｓｏｎ， Ｍ．Ａ．Ｇ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ９：１０６７−１０７２， １９９１； Ｃｒｅｇｇ， Ｊ．Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １１：９０５−９１０， １９９３； Ｓｔｒｅｅｋｒｉｓｈｎａ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂａｓｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．， ２８：２６５−２７８， １９８８； Ｗｅｇｎｅｒ， Ｇ．Ｈ．， ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗ， ８７：２７９−２８４， １９９０）。
【００６７】
哺乳類宿主細胞には多数のウイルス発現系が使用できよう。たとえばアデノウイルスを本発明のポリペプチドの発現ベクターとして使用する場合には、核酸配列をアデノウイルス転写／翻訳調節複合体［たとえば後期プロモーター及びトリパータイト・リーダー配列］に連結してもよい。このキメラ遺伝子はたとえばｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ組換えによりアデノウイルスゲノムへと挿入されよう。ウイルスゲノムの非必須領域（領域Ｅ１又はＥ３など）へのこうした挿入により、感染宿主中で生存し本発明のポリペプチドを発現することができる組換えウイルスが得られる結果となろう。
【００６８】
本発明のタンパク質及びポリペプチドはまた、植物細胞に産生させてもよい。植物細胞中での本発明のポリペプチドの発現にはカリフラワーモザイクウイルス及びタバコモザイクウイルスのような発現ベクターやプラスミド発現ベクター（Ｔｉプラスミドなど）を使用してもよい。そうした細胞は広範囲の供給元（たとえばｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， Ｒｏｃｋｌａｎｄ， Ｍｄ．）から入手可能である。形質転換又はトランスフェクション方法及び発現ベクターはもちろん使用宿主細胞に応じて選択する。
【００６９】
昆虫細胞には、夜蛾科Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で増殖するＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）などの発現系を外来遺伝子発現用ベクターとして使用してもよい。たとえば本発明のポリペプチドの全部又は一部をコードするＤＮＡ配列を、ＡｃＮＰＶウイルスの非必須領域（ポリヘドリン遺伝子など）中にクローニングしてＡｃＮＰＶプロモーターの支配下においてもよい。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子（すなわちＤＮＡ配列）が首尾よく挿入されれば、ポリヘドリン遺伝子が不活化され非包埋組換えウイルス（すなわちポリヘドリン遺伝子がコードするタンパク質性封入体を欠くウイルス）が産生される結果となろう。これらの組換えウイルスは挿入遺伝子が発現する場となるＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞への感染に使用されよう。
【００７０】
さらに、宿主細胞は挿入配列の発現を調整する能力、又は遺伝子産物を所望・特有の仕方で修飾又はプロセッシングする能力に注目して選択してもよい。産物タンパク質のそうした修飾（グリコシル化など）及びプロセッシング（切断など）はタンパク質の機能にとって重要であろう。種々の宿主細胞はタンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセッシング及び修飾のための特徴的、特異的な機構を有する。もちろん、発現した異種タンパク質の所望の修飾及びプロセッシングを確実なものにするという見地から細胞株又は宿主系を選択してもよい。こうした目的のためには、一次転写産物の適正なプロセッシング、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞が使用されよう。そうした哺乳類宿主細胞の非限定的な例はＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３及び３Ｔ３などである。
【００７１】
別の方法として、安定的にトランスフェクションした哺乳類細胞株に本発明のポリペプチドを産生させてもよい。哺乳類細胞株の安定的トランスフェクションに好適な多数のベクターだけでなく、そうした細胞株を構築する方法も公開されている。一例として、ｒＨｕＰＳＰ９４タンパク質をコードするｃＤＮＡを、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子を含む発現ベクター中にクローニングしてもよい。該プラスミドの、従って本発明のポリペプチドに対応するＤＮＡ配列の、宿主細胞染色体への組込みは、細胞培地へのメトトレキサートの添加により選別されよう。こうした選別法はほとんどの細胞型で可能であろう。
【００７２】
前述のような好適な発現媒体に挿入されたＤＮＡ配列の効率的な翻訳には、特有の開始シグナルもまた必要となる場合があろう。そうしたシグナルはＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含むであろう。たとえば本発明のポリペプチドをコードする遺伝子又はｃＤＮＡが独自の開始コドン及び隣接配列をもたないときは、追加の翻訳調節配列が必要となろう。たとえば外来翻訳調節シグナルが、おそらくＡＴＧ開始コドンを含めて必要となろう。技術上周知のように、所望のポリペプチドの適正な翻訳が確実に行われるようにするには、開始コドンがポリペプチド配列のリーディングフレーム内に収まっていなければならない。外来の翻訳調節シグナル及び開始コドンは天然、合成を含めて由来が多様であろう。発現効率は然るべき転写エンハンサーエレメントや転写ターミネーターを含めることで増進されよう。
【００７３】
当然、本発明のポリペプチド及び断片には、その生物活性に悪影響が及ばない限り多数の修飾が加わってもよい。本発明のポリペプチドはたとえば、翻訳後プロセッシングなどのような天然過程による修飾又は技術上周知の化学修飾手法による修飾を受けたアミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。修飾はポリペプチド骨格、アミノ酸側鎖及びアミノ基又はカルボキシル基末端などを含むポリペプチドのどこにでも起こりうる。当然、任意のポリペプチドのいくつかの部位に同タイプの修飾が同じ又は異なる度合いで存在することもあろう。また、任意のポリペプチドが多タイプの修飾を含むこともあろう。ポリペプチドはユビキチン化の結果として枝分れしてもよいし、また枝分れの有無を問わず環状でもよい。環状、枝分れ及び枝分れ環状ポリペプチドは天然の翻訳後修飾過程の結果でもよいし、合成の結果でもよい。修飾の非限定的な例はアセチル化、アシル化、アセトアミドメチル（Ａｃｍ）基の付加、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンとの共有結合、ヘム部分との共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル、共有架橋結合の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸塩の形成、ホルミル化、γカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などのようなｔＲＮＡ介在型のタンパク質へのアミノ酸付加、及びユビキチン化などである（Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， ２ｎｄ Ｅｄ．， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３を参照）。
【００７４】
他タイプのポリペプチド修飾はたとえばポリペプチド配列中のアミノ酸の挿入（すなわち追加）、欠失及び置換（すなわち置き換え）などを包含しようが、それらはポリペプチドの生物活性を実質的に変えない限り、保存的修飾でも非保存的修飾でもよい（たとえばＤ−アミノ酸、デスアミノ酸など）。本発明のポリペプチドはたとえば生物活性を有する変異体、変種、断片、キメラ及び類似体を包含する。断片は１以上のアミノ酸を欠落させたアミノ酸配列を包摂するが、該欠落はタンパク質のアミノ基末端（Ｎ末端）、カルボキシル基末端（Ｃ末端）又は内側のいずれに由来してもよい。類似体は１以上のアミノ酸の挿入又は置換を伴う。変種、変異体、断片、キメラ及び類似体は本発明のポリペプチドの生物学的性質すなわち前立腺がん、胃がん、乳がん、子宮内膜又は卵巣がん等の上皮分泌組織のがんの成長もしくは前立腺肥大（ＢＨＰ）を抑制する性質をもつであろう。
【００７５】
置換はたとえば保存的（すなわちある残基が同じアミノ酸グループ内の別の残基で置き換わるような）置換でもよい。周知のように天然アミノ酸は酸性、塩基性、中性・極性又は中性・非極性に下位分類される。さらに、３種の天然（遺伝子コード化）アミノ酸は芳香族である。注目に値することには、本発明の配列決定済みポリペプチドとそれとは異なる遺伝子コード化ポリペプチドでは同じグループ内のアミノ酸間に置換が見られる。従って場合により塩基性アミノ酸のＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互換可能であり、酸性アミノ酸のＡｓｐとＧｌｕは互換可能であり、中性・極性アミノ酸のＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ及びＡｓｎは互換可能であり、非極性脂肪族アミノ酸のＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ及びＬｅｕは互換可能であり（ただし、サイズ上の理由からＧｌｙとＡｌａの関係がより深く、またＶａｌ、Ｉｌｅ及びＬｅｕの関係がより深い）、また芳香族アミノ酸のＰｈｅ、Ｔｒｐ及びＴｙｒは互換可能である。
【００７６】
さらに、合成ポリペプチドの場合には非天然アミノ酸で置換してもよい。置換残基の例は式ＮＨ２（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ （式中ｎは２〜６である）で示されるωアミノ酸などである。これらはサルコシン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン及びノルロイシンと同様に中性・非極性アミノ酸である。フェニルグリシンはＴｒｐ、Ｔｙｒ又はＰｈｅに置き換われるし、シトルリン及びメチオニンスルホキシドは中性・非極性であり、システイン酸は酸性、オルニチンは塩基性である。ヒドロキシプロリンはプロリンに置き換われるが、コンホメーション付与特性は維持される。
【００７７】
技術上周知のように、変異体又は変種は置換的突然変異誘発で生成させうるし、本発明のポリペプチドの生物活性を維持しうる。これらの変異体はタンパク質分子中の少なくとも１個のアミノ酸残基を除去し、その代わりに別のアミノ酸残基を挿入してある。置換的突然変異誘発の関心部位の非限定的な例は、活性部位又は免疫部位として識別される部位であろう。他の関心部位は、様々な種に由来する特定の残基が同一であるような部位であろう。これらの位置は生物活性にとって重要であろう。「保存的置換」とされる置換の例を表１に示す。こうした置換が所望の変化をもたらさないときは、表１で「例示的置換」と命名している、又はアミノ酸の種類に関連して本書でさらに説明している他タイプの置換を導入し、産物をスクリーニングする。
【００７８】
場合によっては、アミノ酸の置換、挿入又は欠失によりポリペプチドの生物活性を変更することが重要かもしれない。たとえばあるポリペプチドの修飾は該ポリペプチドの生物活性を増進する結果となり、その毒性を変化させ、生体利用率又は安定性を変化させる結果となり、又はその免疫活性又は免疫学的自己同一性を変化させるかもしれない。機能又は免疫学的自己同一性の実質的変更は、次のものを維持するうえでの効果が著しく異なる置換を選択することにより実現される： （ａ）置換領域のポリペプチド骨格の、たとえばシート又はヘリカルコンフォメーションとしての構造、（ｂ）標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩高さ。天然残基は側鎖の共通特性に基づきいくつかのグループに分けられる：
【００７９】
（１） 疎水性： ノルロイシン、メチオニン（Ｍｅｔ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）
（２） 中性・親水性： システイン（Ｃｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）
（３） 酸性： アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）
（４） 塩基性： アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）
（５） 残基が分子鎖配向に影響： グリシン（Ｇｌｙ）、プロリン（ｐｒｏ）、及び
（６） 芳香族： トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）。
【００８０】
非保存的置換は以上のうちの一グループの成員と他グループの成員との交換を伴う。
【００８１】
【表１】
2004510833.tif 000002
【００８２】
次にＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）のアミノ酸置換による類似体を例示する。
【００８３】
【化１】
2004510833.tif 000003
【００８４】
たとえばＸ１はグルタミン酸（すなわちグルタミン酸塩）（Ｇｌｎ）、アスパラギン酸（アスパラギン酸塩）（Ａｓｐ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）とし、Ｘ２はトレオニン（Ｔｈｒ）又はセリン（Ｓｅｒ）とし、またＸ３はチロシン（Ｔｙｒ）又はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）とすることができよう。
【００８５】
アミノ酸配列の挿入（たとえば追加）には、アミノ基及び／又はカルボキシル基末端の、長さが１残基〜ポリペプチド（１００残基以上）にわたる融合、及び単数又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入などがある。他の挿入型変種の例はタンパク質のＮ−又はＣ−末端の、同種又は異種ポリペプチドとの融合によるキメラなどである。キメラ型のポリペプチド（すなわちキメラ、ポリペプチド類似体）は本発明のポリペプチド配列と同種又は異種配列との融合体を包含する。該同種又は異種配列は、本発明のポリペプチドとキメラを形成したときに１以上の生物又は免疫特性を保持するような配列を包摂する。以下、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）と融合体を形成する同種配列を１）〜７９）として例示する。こうした同種配列はＰＣＫ３１４５の場合と同様、ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に由来する。
【００８６】
【化２】
2004510833.tif 000004
【化３】
2004510833.tif 000005
【化４】
2004510833.tif 000006
【化５】
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【化６】
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【化７】
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【００８７】
同種融合で生成される他タイプのキメラは本発明のポリペプチドの２回以上の反復により形成される新ポリペプチドなどである。反復単位数はたとえば２〜５０単位（すなわち反復配列）であろう。反復単位数が５０を超える新ポリペプチドが有用な場合もあろう。ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）の反復により形成される新ポリペプチドの例を８０）〜８２）として示す。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の反復単位は様々な長さのリンカー又はアダプターで隔てられる場合もあろう。
【００８８】
【化８】
2004510833.tif 000010
【００８９】
異種融合は本発明のポリペプチドと異種ポリペプチドの融合による新ポリペプチドの生成などである。そうした新ポリペプチドの非限定的な例は細菌ポリペプチド（βラクタマーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、又はＥ． ｃｏｌｉのｔｒｐ遺伝子座によりコードされる酵素など）、酵母タンパク質、ウイルスタンパク質、ファージタンパク質、ウシ血清アルブミン、化学走性ポリペプチド、免疫グロブリン定常領域（又は他の免疫グロブリン領域）、アルブミン又はフェリチンなどである。
【００９０】
他タイプのポリペプチド修飾にはアミノ酸配列の欠失（たとえば欠落）などがある。欠失は一般に約１〜３０残基、より好ましくは約１〜１０残基、通常約１〜５残基にわたる。
【００９１】
本発明のポリペプチド又は本発明のポリペプチドとのキメラタンパク質をコードする核酸で（すなわち本発明のポリペプチドに対応するＤＮＡ配列を収めたベクターで）形質転換又はトランスフェクトした宿主細胞もまた本発明に包含される。本発明の生物学的特性を１以上有するポリペプチドの類似体、変異体、変種、断片又はキメラを産生する宿主細胞はどれも本発明に包含される。そうした宿主細胞の例は細菌、酵母、植物、昆虫又は哺乳類などの細胞である。さらに、本発明のポリペプチドは形質転換動物に産生させてもよい。形質転換（又はトランスフェクト）した宿主細胞及び動物は、当業者にごく普通に利用可能な資材及び方法を用いて獲得されよう。
【００９２】
用語の意味
分子生物学一般
特に明記しない限り、本発明で使用する組換えＤＮＡ手法は技術上周知の標準手法である。そうした手法の例は種々の文献たとえばＪ． Ｐｅｒｂａｌ， Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ （１９８４）； Ｊ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８９）； Ｔ．Ａ． Ｂｒｏｗｎ （ｅｄ．）， Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｖｏｌｓ． １ ａｎｄ ２， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ （１９９１）； Ｄ．Ｍ． Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ （ｅｄｓ．）， ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｖｏｌｓ． １−４， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ （１９９５ ａｎｄ １９９６）； 及びＦ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｅｎｅ Ｐｕｂ． Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ （１９８８， 今日までの諸々の改訂版を含む）で説明されている。
【００９３】
「ポリヌクレオチド」は一般に任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドをいい、非修飾ＲＮＡ又はＤＮＡでも修飾ＲＮＡ又はＤＮＡでもよい。「ポリヌクレオチド」の非限定的な例は一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖部分と二本鎖部分の混合体のＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、一本鎖部分と二本鎖部分の混合体のＲＮＡ、及び一本鎖の、より一般的には二本鎖の、又は一本鎖部分と二本鎖部分の混合体のＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子である。さらに「ポリヌクレオチド」はＲＮＡかＤＮＡを、又はＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖部分をもいう。用語「ポリヌクレオチド」はまた、１以上の修飾塩基を含むＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定化等を目的に修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡをも包含する。「修飾」塩基はたとえばトリチル化塩基、及びイノシンなどのような異常塩基を含む。ＤＮＡとＲＮＡにはこれまで多様な修飾がなされてきた。従って「ポリヌクレオチド」は、ウイルスや細胞に特有の化学形態のＤＮＡやＲＮＡだけでなく、一般に天然に見られるポリヌクレオチドの化学的酵素的及び代謝的修飾形態をも包含する。「ポリヌクレオチド」は線状及び環状分子を非限定的に包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、しばしばオリゴヌクレオチドとも呼ばれる比較的短いポリヌクレオチドをも包摂する。
【００９４】
「ポリペプチド」はペプチド結合又は修飾ペプチド結合（すなわちペプチドイソスター）により互いに結合された２以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質をいう。「ポリペプチド」は、一般にペプチド、オリゴペプチド又はオリゴマーと呼ばれる短鎖と一般にタンパク質と呼ばれる長鎖の両方をさす。前述のように、ポリペプチドは遺伝子にコードされたアミノ酸２０種以外のアミノ酸を含んでもよい。
【００９５】
「ポリペプチド類似体」は本書では、任意のポリペプチドの変異体、変種、キメラ、融合体、欠失、追加及び他の任意タイプの修飾に関連する。
「同種」配列は本書では、ｒＨｕＰＳＰ９４ ＤＮＡ配列又はポリペプチドに由来するヌクレオチド又はアミノ酸配列に関連する。
「異種」配列は本書では、異種ポリペプチドのＤＮＡ配列又はアミノ酸配列に関連し、ＰＳＰ９４配列以外の配列を含む。
【００９６】
「腫瘍」は本書では、充実性又は非充実性腫瘍、転移又は非転移腫瘍であって、種々の組織に由来する腫瘍たとえば肝臓、肺、脳、リンパ節、骨髄、副腎、乳房、結腸、膵臓、前立腺、胃、又は生殖路（子宮頸管、卵巣、子宮内膜など）に由来する腫瘍に関連する。また「腫瘍」は本書では、悪性、両性を問わず諸々の新生細胞の成長及び増殖、並びに諸々の前がん及びがん細胞・組織に関連する。
【００９７】
「多糖」は本書では、２以上の糖単位からなる物質をいい、キトサン、ペクチン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーガム、イヌリン、アミロース、及びローカストビーンガムなどを含む。
【００９８】
「ベクター」は本書では、その中に外来ＤＮＡ又はＲＮＡ断片を挿入し宿主細胞中で増殖させるようにした、外来ＤＮＡ又はＲＮＡ分子の発現又は増幅を目的とする自己複製ＤＮＡ又はＲＮＡ分子をいう。「ベクター」の非限定的な例は、ある生物から他の生物へとＤＮＡ配列を移すために使用することができるプラスミド（たとえば線状又は環状プラスミド）である。
【００９９】
「徐放性のカプセル封入手段」は、製剤組成物の調製に際して徐放性を実現するために使用される多糖、生体適合性高分子、他の高分子基剤、カプセル、マイクロカプセル、マイクロ粒子、ボーラス剤、浸透圧ポンプ、拡散装置、リポソーム、リポスフィア、ドライパウダー、又は経皮送達システムなどをいう。哺乳類に投与するとｉｎ ｓｉｔｕで固体又はゲルとなる液体類もまた本発明の徐放性組成物の例である。さらに、「徐放性のカプセル封入手段」又は「徐放性手段」は薬剤の制御放出を実現するうえで有用な生分解性ポリマー類たとえばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロックコポリマーを包含する。
【０１００】
「製剤組成物」は本書では、製薬上許容しうる希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、佐剤及び／又は担体と混ぜた治療有効量の薬剤をいう。「治療有効量」は本書では、任意の状態及び／又は投薬計画に応じた治療効果をもたらす量をいう。そうした組成物は液剤、もしくは凍結乾燥した又は他の方法で乾燥した製剤であり、種々の緩衝剤（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩など）濃度、ｐＨ及びイオン強度の希釈剤、表面への吸収を防ぐための添加剤たとえばアルブミン又はゼラチン、洗剤（Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８、胆汁酸塩など）、可溶化剤（グリセロール、ポリエチレングリセロールなど）、抗酸化剤（アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウムなど）、保存剤（チメロサール、ベンジルアルコール、パラベンなど）、増量剤又は等張化剤（ラクトース、マンニトールなど）； ポリマー（ポリエチレングリコールなど）のタンパク質への共有結合； 金属イオンとの錯化； 又はポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなどのようなポリマー化合物の微粒子体の内部又は表面への、もしくはリポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層又は多層膜小胞、ゴースト赤血球又はスフェロプラストの表面への、タンパク質の組込みを含む。そうした構成はその物理的状態、可溶性、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出率、ｉｎ ｖｉｖｏクリアランス率に影響を及ぼそう。徐放性組成物の例には親油性デポ（脂肪酸、ワックス、油など）製剤が含まれる。また本発明には、ポリマー（ポロキサマー又はポロキサミンなど）で被覆した微粒子製剤も包摂される。本発明の組成物は他の実施態様では非経口、肺、鼻腔、口腔など多様な投入経路に合わせた微粒子状の保護層、プロテアーゼインヒビター又は透過促進剤を組み込む。一実施態様では製剤組成物の投与を非経口、傍がん（ｐａｒａｃａｎｃｅｒａｌｌｙ）、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋内、腫瘍内的に行う。
【０１０１】
さらに、「製薬上許容しうる担体」又は「医薬品担体」は技術上周知であり、０．０１〜０．１Ｍの、好ましくは０．０５Ｍのリン酸緩衝液又は０．８％生理食塩水などを非限定的に含む。また、そうした製薬上許容しうる担体は水性又は非水性の溶液、エマルション及び懸濁液でもよい。非水性担体の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油たとえばオリーブ油、及び注射用有機エステルたとえばオレイン酸エチルなどである。水性担体の例は水、アルコール性／水性溶液、エマルション又は懸濁液などである。非経口用担体の例は塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖リンガー液、ブドウ糖＋塩化ナトリウム、乳酸リンガー液又は不揮発性油などである。靜注用担体の例は脱水及び栄養補給液、ブドウ糖リンガー液などのような電解質補給液、その他などである。保存剤等の添加剤たとえば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどを使用してもよい。
【０１０２】
変異体、変種及び類似体タンパク質
変異体ポリペプチドは、アミノ酸残基の欠失（欠落など）、挿入（付加など）又は置換である突然変異を１以上有するであろう。変異体は天然体（天然源に由来する精製又は単離体）でも、（たとえばコード配列ＤＮＡに対する部位指定突然変異誘発による、又は化学合成など他の合成方法による）合成体でもよい。従って、本発明のポリペプチドが天然体又は（組換えＤＮＡ手法による）組換え体のいずれでもよいのは自明である。
【０１０３】
これらの本発明ポリペプチドとの同一性が、技術上周知の方法［たとえばＳｍｉｔｈ， Ｔ．Ｆ． ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ｍ．Ｓ． （１９８１） Ａｄ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ．， ２：４８２−４８９又はＮｅｅｄｌｅｍａｎ， Ｓ．Ｂ． ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ， Ｃ．Ｄ． （１９７０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ４８：４４３−４５３に記載の方法］で求めたときに、５０％以上であるタンパク質は、また本発明のタンパク質との同一性が７０％又は８０％以上、好ましくは９０％以上であるタンパク質も同様に、本発明に包含される。この同一性は一般に、５個以上の、好ましくは２０個以上の隣接アミノ酸からなる領域にまたがろう。
【０１０４】
「変種」は本書では、ポリヌクレオチド又はポリペプチドであって、それぞれ基準ポリヌクレオチド又はポリペプチドとは異なるが本質的な性質は残しているものをいう。ポリヌクレオチドの一般的な変種は、基準となる別のポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なる。変種のヌクレオチド配列に見られる変化は、基準ポリヌクレオチドがコードするポリペプチドのアミノ酸配列を変化させても変化させなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、基準配列がコードするポリペプチドにアミノ酸の置換、追加、欠失、融合及び欠落をもたらす結果となってもよい。ポリペプチドの一般的な変種は基準となる別のポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に差異が小さいため、基準ポリペプチドと変種の配列は全体として酷似しており、また同一である領域も多い。変種と基準ポリペプチドはアミノ酸配列が１個又は複数個、置換、追加、欠失、又はそれらの組み合せによって異なってもよい。置換又は挿入アミノ酸残基は遺伝子によってコードされる場合も、コードされない場合もあろう。変種ポリヌクレオチド又はポリペプチドは天然型変種たとえば対立遺伝子由来の変種でも、非天然型の変種でもよい。ポリヌクレオチド又はポリペプチドの非天然型変種は突然変異誘発法により、又は直接合成法により、生み出すことができる。
【０１０５】
アミノ酸配列の変種はＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、又は所望ポリペプチドの直接合成により、つくることができる。そうした変種の例はアミノ酸配列中の残基の欠失、挿入又は置換などである。最終産物のタンパク質が所望の性質をもつ限りで、欠失、挿入及び置換を組み合せてもよい。アミノ酸配列の変化は翻訳後過程の変化、たとえばグリコシル化部位の数又は位置の変化、膜アンカー特性の変化、天然タンパク質の膜貫通配列の挿入、欠失又はその他の操作による細胞内位置の変化、又はタンパク質分解切断の受けやすさの調節などをもたらしてもよい。
【０１０６】
ある「範囲」又は「群」の物質（アミノ酸など）、置換基、その他について、もしくは他タイプの特定の性質（温度、圧力、化学構造、時間など）について言及がある場合、本発明はその中に含まれる諸々の個別成員及び「下位範囲」又は「下位群」に関連し、またそれらを明示に包摂するものとする。従って、任意の明示の範囲又は群はある範囲又は群の諸々の成員並びにその中に包摂される諸々の下位範囲又は下位群を明示するための省略法として理解されるものとする。また下位範囲又は下位群についても同様である。従って、たとえば
【０１０７】
−大気圧を超える圧力に関しては、これは大気圧を超える諸々の個別圧力状態並びに下位範囲を、たとえば２ｐｓｉｇ、５ｐｓｉｇ、２０ｐｓｉｇ、３５．５ｐｓｉｇ、５〜８ｐｓｉｇ、５〜３５ｐｓｉｇ、１０〜２５ｐｓｉｇ、２０〜４０ｐｓｉｇ、３５〜５０ｐｓｉｇ、２〜１００ｐｓｉｇ等々を明示に包摂するものとする；
【０１０８】
−１００℃を超える温度に関しては、これは１００℃を超える諸々の個別温度状態並びに下位範囲を、たとえば１０１℃、１０５℃以上、１１０℃以上、１１５℃以上、１１０〜１３５℃、１１５〜１３５℃、１０２〜１５０℃、２１０℃以下等々を明示に包摂するものとする；
【０１０９】
−１００℃を下回る温度に関しては、これは１００℃を下回る諸々の個別温度状態並びに下位範囲を、たとえば１５℃以上、１５〜４０℃、６５〜９５℃、９５℃以下等々を明示に包摂するものとする；
【０１１０】
−滞留又は反応時間に関して、１分以上の時間は１分以上の諸々の個別時間並びにその下位範囲を、たとえば１分、３〜１５分、１分〜２０時間、１〜３時間、１６時間、３〜２０時間等々を明示に包摂するものとする。
【０１１１】
−ポリペプチドに関して、特定配列の２個以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえばアミノ酸１と２からなるポリペプチド類似体、アミノ酸２と３からなるポリペプチド類似体、アミノ酸３と４からなるポリペプチド類似体、アミノ酸６と７からなるポリペプチド類似体、アミノ酸９と１０からなるポリペプチド類似体、アミノ酸３６と３７からなるポリペプチド類似体、アミノ酸９３と９４からなるポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１２】
−ポリペプチドに関して、特定配列の５個以上の隣接アミノ酸からなるポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえばアミノ酸１〜５からなるポリペプチド類似体、アミノ酸２〜６からなるポリペプチド類似体、アミノ酸３〜７からなるポリペプチド類似体、アミノ酸６〜１０からなるポリペプチド類似体、アミノ酸９〜１３からなるポリペプチド類似体、アミノ酸３６〜４０からなるポリペプチド類似体、アミノ酸９０〜９４からなるポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１３】
−ポリペプチドに関して、特定の配列を含みそのアミノ基末端に１個以上のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえばアミノ基末端に１個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に２個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に３個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に１０個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に１８個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に４０個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、アミノ基末端に２００個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１４】
−ポリペプチドに関して、特定の配列を含みそのカルボキシル基末端に１個以上のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえばカルボキシル基末端に１個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、カルボキシル基末端に２個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、カルボキシル基末端に５個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、カルボキシル基末端に２０個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、カルボキシル基末端に５３個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体、カルボキシル基末端に３００個のアミノ酸が付加されたポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１５】
−ポリペプチドに関して、特定配列２〜５０単位からなるポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえば該特定配列２単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列３単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列６単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列１３単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列３５単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列５０単位からなるポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１６】
−ポリペプチドに関して、特定配列２〜１０単位からなるポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえば該特定配列２単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列３単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列４単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列５単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列６単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列７単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列８単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列９単位からなるポリペプチド類似体、該特定配列１０単位からなるポリペプチド類似体を明示に包摂するものとする。
【０１１７】
−ポリペプチドに関して、２〜１４アミノ酸単位の配列からなり、該アミノ酸単位がグルタミン酸（Ｇｌｕ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）及びチロシン（Ｔｙｒ）からなるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸単位群より選択されるポリペプチド類似体は諸々の個別の可能性を、たとえばアミノ酸が順にＧｌｕ、Ｔｒｐである２アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順にＴｒｐ、Ｇｌｕである２アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順にＴｒｐ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順にＴｒｐ、Ｔｒｐ、Ｔｒｐである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順にＧｌｕ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＴｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＴｈｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎである３アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＧｌｕ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ａｓｎである４アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＧｌｕ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｔｒｐである４アミノ酸単位のポリペプチド類似体；アミノ酸が順序と無関係にＣｙｓ、Ｃｙｓ、Ｃｙｓ、Ｃｙｓである４アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓである１４アミノ酸単位のポリペプチド類似体；アミノ酸が順序と無関係にＡｓｐ、Ａｓｐ、Ａｓｐ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｃｙｓ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓである１４アミノ酸単位のポリペプチド類似体； アミノ酸が順序と無関係にＴｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒである１４アミノ酸単位のポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１８】
−ポリペプチドに関して、特定アミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体は（１００％を除く）諸々の個別の可能性を、たとえば該特定アミノ酸配列との同一性が９０％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９１％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９３％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９７％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９９％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１１９】
−ポリペプチドに関して、特定アミノ酸配列との同一性が７０％以上であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体は（１００％を除く）諸々の個別の可能性を、たとえば該特定アミノ酸配列との同一性が７０％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が７１％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が７３％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が８８％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９７％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９９％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１２０】
−ポリペプチドに関して、特定アミノ酸配列との同一性が５０％以上であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体は（１００％を除く）諸々の個別の可能性を、たとえば該特定アミノ酸配列との同一性が５０％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が５１％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が５４％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が６６％であるポアミノ酸配列のリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が７０％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が７９％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が８２％であるアミノ酸配列のポリペプチド類似体、該特定アミノ酸配列との同一性が９９％であるポリアミノ酸配列のペプチド類似体等々を明示に包摂するものとする。
【０１２１】
また、他のパラメーターたとえば圧力、濃度、元素などに関しても同様とする。
【０１２２】
「ｇ」又は「ｇｍ」はグラム重量単位であり、「℃」は摂氏温度単位であり、また「ｐｓｉｇ」は「ポンド／平方インチゲージ」である。
【０１２３】
発明の詳細な説明
酵母菌で発現させた組換えヒトＰＳＰ９４ （ｒＨｕＰＳＰ９４）は非グリコシル化体であり、１０個のシステイン残基をもつ。分子量はｒＨｕＰＳＰ９４が１１．５ｋＤａ、その天然体が１０．７ｋＤａと判明している。
【０１２４】
病変前立腺から分泌される天然ＰＳＰ９４と比較した場合のｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の腫瘍抑制物質としての効果を調べるために種々の実験研究を行った。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のデカペプチド、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のポリペプチド（ポリペプチド７〜２１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のポリペプチド（ＰＣＫ３１４５）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチド（ポリペプチド７６〜９４）の腫瘍抑制物質としての効果を調べる研究も行った。本発明のポリペプチド類の腫瘍抑制活性は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏの両方で前立腺がん（ＣａＰ）の成長を抑制又は阻害する能力という点から評価した。以下、それらの結果をまとめる。
【０１２５】
研究はＰＣ−３ヒト前立腺がん細胞株を用いて行ったが、それはヌードマウスへの異種移植片としｉｎ ｖｉｖｏでも、また細胞株としてｉｎ ｖｉｔｒｏでも維持することができる。さらに、ＣａＰ研究用の卓越した動物モデルであるラットＤｕｎｎｉｎｇ ＭＡＴ−ＬｙＬｕ前立腺腫瘍も使用した。該Ｄｕｎｎｉｎｇ腫瘍は急成長、低分化度の移植可能な腫瘍であり、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎラット中にｉｎ ｖｉｖｏで維持することも細胞株としてｉｎ ｖｉｔｒｏで維持することもできる。
【０１２６】
以下の実施例は限定ではなく例示が目的である。
実施例１
ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）とポリペプチド類（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の調製
ｒＨｕＰＳＰ９４のクローニング、発現、それに続く精製及び解析を次の要領で実施した。
材料
使用材料とその入手先は次のとおりである： ＤＥＡＥ−セルロース（ＤＥ５２）−Ｗｈａｔｍａｎ （Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ， Ｎｅｗ−Ｊｅｒｓｅｙ）； 透析膜とエレクトロケミルミネセンス（ＥＣＬ）検出キット−Ｂｉｏｌｙｎｘ Ｃａｎａｄａ （Ｐｉｅｒｃｅ Ｉｎｃ．）；　 広域分子量マーカーとフローアダプター付きＥｃｏｎｏ−ｐａｃｋカラムは−Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｓ Ｌｔｄ． （Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）；ペリコン装置−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ （Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）； Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ−ＩＣＮ； ＭＥＳ ［（２−［Ｎ−モルホリノ］エタンスルホン酸）水和物］−Ｓｉｇｍａ； ブタ抗ウサギＩｇＧアルカリ性ホスファターゼ複合体−ＤＡＫＯ （Ｄｅｎｍａｒｋ）； Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ発現キットのバージョンＧ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ （Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）； 非放射性Ｈｉｇｈ Ｐｒｉｍｅ ＤＩＧ （登録商標）ラベリングキット−Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ （Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， Ｉｎｄｉａｎａ）； ＭＴＳ ［３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩］試験用のＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ細胞増殖試験キット−Ｐｒｏｍｅｇａ （Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）； ＭＲＸマイクロタイタープレートリーダー−Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ （Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ）； ＰＳＰ９４に対するウサギポリクローナル抗血清−故Ｄｒ． Ａ． Ｓｈｅｔｈからの寄贈； すべてのプライマー−Ｐｒｏｃｙｏｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ． （Ｌｏｎｄｏｎ， Ｏｎｔａｒｉｏ， Ｃａｎａｄａ） が合成。
【０１２７】
細胞株と細胞培養
Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主株ＧＳ１１５ （ｈｉｓ４） と諸々のＰｉｃｈｉａ関連産物はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した。ＰＣ−３ （ＡＴＣＣ−＃ ＣＲＬ １４３５）細胞株はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ （ＡＴＣＣ）から入手し、ＯＰＴＩ ＭＥＭ （最小必須培地）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）中で維持した。細胞培養産物はすべてＧＩＢＣＯ ＢＲＬから入手した。
【０１２８】
クローニング
然るべきプライマーの使用によるリーダー配列欠失ヒトＰＳＰ９４の増幅に、２０アミノ酸リーダー配列を含むＰＳＰ９４ ｃＤＮＡを収めたＴＡクローニングベクター（ｐＣＲ ＴＭ ２．１） （Ｂａｉｊａｌ−Ｇｕｐｔａ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．， １６５：４２５−４３３， ２０００）を使用した。ＰＣＲ用プライマーはどちらかの末端にＥｃｏＲＩ制限部位を含むよう設計した。使用５’プライマーは５’−ＧＧＧ ＡＡＧ ＡＡＴ ＴＣＴ ＣＡＴ ＧＣＴ ＡＴＴ ＴＣＡ ＴＡ−３’ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７） であり、３’プライマーは５’−ＴＧＧ ＡＴＡ ＴＣＴ ＧＣＡ ＧＡＡ ＴＴＣ ＧＧＣ−３’ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）であった。前記５’プライマー配列の下線部はＰＳＰ９４の（セリン残基の）＋１開始部位である。
【０１２９】
ＰＣＲサイクルの内訳は９４℃、１２分間の１サイクル； ９４℃で１分間、５５℃で１分間、７２℃で１分間の２５サイクル； 最終ステップとなる７２℃、１０分間の１サイクルであった。産物のＰＣＲ増幅はＢＭ Ｅｘｐａｎｄ（登録商標）ハイフィデリティーＰＣＲシステムを使用して行った。産物を１．５％アガロースゲルで電気泳動し、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｅｐｈａｇｌａｓｓキット（Ｂａｎｄｐｒｅｐ）を用いて然るべきＰＣＲ産物を単離した。ＰＳＰ９４インサートをｐＰＩＣ９ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。ＥｃｏＲＩ酵素を使用して該プラスミドとＰＣＲ産物の両方を消化し（もってＰＳＰ９４シグナル配列を除去し）、次いでライゲーションとＤＨ５α細胞の使用による形質転換とを行った。単離クローンをアンピシリン耐性によって選別し、またインサートは制限地図の作成により同定した。該コンストラクトの配列を決定して（Ｒｏｂｅｒｔ’ｓ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｌｏｎｄｏｎ， Ｏｎｔａｒｉｏ）、正しい配列と適正な方向及び読み枠とを備えたＰＳＰ９４インサートを同定した。
【０１３０】
ｒＨｕＰＳＰ９４発現クローンのスクリーニング
Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓの形質転換には、ＧＳ１１５及びＫＭ７１酵母株を使用してスフェロプラスト法をメーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の説明書に従って実施した。ＰＳＰ９４インサートを含む又は欠くプラスミドｐＰＩＣ９を、ＳａｌＩ制限酵素により線状化した。ヒスチジン産生能があり、従って無ヒスチジン培地でも生存していた形質転換コロニーをスクリーニング、選別した。ＧＳ１１５形質転換体はすべてＭｕｔ＋として記録し、またＫＭ７１はすべてＭｕｔｓとして記録した。こうしてｒＨｕＰＳＰ９４を最高レベルで発現するＧＳ１１５クローンを多数スクリーニングした。
【０１３１】
約１００個のクローンを選別して２ｍｌの倍地中で、６００ｎｍの光学密度（ＯＤ６００）が約６に達するまで増殖させた。全ＤＮＡを単離して迅速ドットブロット分析にかけてから、高ｒＨｕＰＳＰ９４発現クローンに対応する可能性のある多重組込みをサザンブロット法で検出するようにした。各培養試料２００μｌを変性処理し、ドットブロット装置に配した正荷電ナイロンメンブランフィルターに（２組ずつ）ブロットした。次いでフィルターを風乾した。フィルターを２枚のＷｈａｔｍａｎ ３ＭＭ紙の間に挟み５０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２．５％ βメルカプトエタノール（ＢＭＥ）を含む溶液ｐＨ ９に１５分間浸し、次に１ｍｇ／ｍｌ Ｚｙｍｏｌｙａｓｅ １００Ｔと３７℃で２４時間インキュベートし、０．１Ｎ ＮａＯＨ、１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ ７中で５分間、及び２ ｘ生理食塩水−クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中で５分間２回、それぞれインキュベートした。最後に、フィルターを８０℃で４５分間乾熱処理してから、紫外線（ＵＶ）を１５分間照射した。ヒトＰＳＰ９４ ｃＤＮＡプローブを非放射性Ｈｉｇｈ Ｐｒｉｍｅ ＤＩＧ （登録商標）標識キット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で標識し、ハイブリダイゼーションに使用した。ジゴキシゲニン標識ｃＤＮＡプローブ（２５ｎｇ／μｌ）とのハイブリダイゼーションはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）緩衝液［ＳＤＳ ７％（ｗ／ｖ）、ホルムアミド５０％（ｖ／ｖ）、５ ｘ ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ ７．０、Ｎ−ラウロイルサルコシン０．１％（ｗ／ｖ）］中４２℃で２日間行い、ブロッキング試薬のＣＳＰＤ（登録商標）２％（ｗ／ｖ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）をケミルミネセンス基質として使用した。ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）標識手順はすべてメーカーの説明書に従った。検出はＨｙｐｅｒ ｆｉｌｍ−ＥＣＬ用品（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．， Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｔｓ．， Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を使用して行った。
どのフラスコ振とう培養にも最高シグナル強度のクローンを使用した。
【０１３２】
フラスコ振とう培養でのタンパク質発現の最適化
ＰＳＰ９４コンストラクトを含むクローンから該タンパク質を高レベルで発現するものを選別した。コロニーを２５ｍｌの基本最小増殖（ＢＭＧ）培地中で、ＯＤ６００が２〜６になるまで増殖させた。このクローンを、１リットルのＢＭＧ培地を入れたバッフル付三角フラスコ中で、ＯＤ６００が約２．０〜６．０に達するまでさらに増幅させた。培養液を２５００ ｘ ｇで１５分間遠心にかけ、ペレットを回収した。細胞ペレットを基本最小培地（ＢＭＭ）に接種し誘導期（すなわちｒＨｕＰＳＰ９４の発現誘導）を実現した。増殖はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの推奨に従いバッフル付フラスコ中で６日間行った。ＢＭＭ添加量は回収ペレットのサイズに応じて異なった。培地リットルあたり５ｍｌの１００％メタノールを加えた。これを毎日ほぼ同じ時間に実施し、最終メタノール濃度が０．１％になるようにした。ＰＳＰ９４インサートを欠くプラスミドは陰性対照（ネガティブ・コントロール）とした。
【０１３３】
細胞倍地中で分泌されたｒＨｕＰＳＰ９４の最適回収時期を決めるために、誘導初日から開始し６日間にわたり２４時間ごとに培養液を分取した。ｒＨｕＰＳＰ９４タンパク質の発現レベルはＯＤ６００の計測により、またＣｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅで染色した１５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）か又はポリクローナルＰＳＰ９４抗体使用のウェスタンブロット分析により、求めた。
【０１３４】
サンプル調製
誘導後（たとえば９６時間後）に最高レベルのｒＨｕＰＳＰ９４発現を示したクローンの培養上清を２５００ ｘ ｇ、２０分間の遠心で回収した。上清を０．８μｍフィルターでろ過し、ペリコン装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して約１０倍に濃縮した。ろ過処理後の上清は３．５ｋＤａ分子量カットオフ膜を使用し０．０５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ ８．０を外液として透析した。透析処理後の上清を分取してＳＤＳ−ＰＡＧＥとウェスタンブロット法で分析し、残りの上清を更なる精製に回した。
【０１３５】
発酵のための培養条件
発酵はＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ（ＮＲＣ） （Ｏｔｔａｗａ， Ｏｎｔａｒｉｏ， Ｃａｎａｄａ）で、メーカー説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って行った。たとえば発酵手順はタネ菌液６２５ｍｌを２．５リットルの培地に接種することで開始した。増殖期はＢＭＧ培地で約２日間、ＯＤ６００が約０．５に達するまで続けた。誘導期はメーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）説明書に従いメタノール（１００％）の添加で開始させた。９５時間後（すなわち６７時間にわたるメタノール誘導後）、培養液を回収した。培養液の最終容量は約１３．５リットルであった。
【０１３６】
発酵培養液からのサンプル調製
大きな細胞塊を遠心で除去した。回収した無細胞培地（９リットル）を０．２μｍろ過装置（ペリコン）でさらに除濁した。分泌ｒＨｕＰＳＰ９４を含む残りの８．５リットルについてタンパク質の発現を検査し、タンパク質の更なる単離、精製に備えてマイナス２０℃で保存した。
【０１３７】
タンパク質の定量
フラスコ振とう培養と発酵過程に由来する培養上清中の分泌ｒＨｕＰＳＰ９４タンパク質量は、既知量の純粋な凍結乾燥ＰＳＰ９４をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけて得られた検量線のバンド強度との比較によるサンプル・バンド強度の推定値から求めた。各精製段階の当初ｒＨｕＰＳＰ９４推定量は２８０ｎｍでのＯＤによって求めた。最終精製段階での全タンパク質量の定量はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を基準とするＢＣＡ （ビシンコニン酸）法で行った。
【０１３８】
凍結乾燥
精製ｒＨｕＰＳＰ９４のサンプルは３ｋＤａ分子量カットオフ膜により脱イオン水を外液として透析した後、凍結乾燥した。
【０１３９】
ＳＤＡ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、分離用ゲルのアクリルアミド最終濃度を１５％、濃縮用ゲルのアクリルアミド最終濃度を５％として実行した。ゲルは０．１％のＳＤＳを含み、電気泳動は還元条件下で行った。タンパク質分子量の推定には広域分子量マーカーを使用した。タンパク質の染色にはＣｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ−２５０を用いた。
【０１４０】
ウェスタンブロット法
免疫ブロット法では、Ｍｉｎｉ Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｃｅｌｌ （Ｂｉｏ Ｒａｄ）にＨｉ−Ｂｏｎｄ Ｃ Ｓｕｐｅｒメンブラン（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、８５ｍｍろ紙を使用した。タンパク質サンプル（０．４μｇ）を前述の要領でＳＤＳ−ＰＡＧＥに添加し、分離した。転写用緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭグリシン、ｐＨ ８．３及び２０％メタノール）と２００ミリアンペア（ｍＡｍｐ）にセットした転写用装置を用いて、タンパク質をメンブランフィルターに４℃で２時間転写した。フィルターを一晩、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ： ５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ７．５） ＋ ２％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳（スキムミルク）中、室温（ＲＴ）でのインキュベーションによりブロッキングした。０．０２％ （ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ ２０添加ＴＢＳ（この緩衝液はＴＴＢＳという）でフィルターを３回洗った。次いでフィルターをＲＴで２時間、２％スキムミルク添加ＴＴＢＳで希釈（１：２０００希釈）した抗ＰＳＰ９４抗体とインキュベートした。フィルターをＴＴＢＳで５分間ずつ２回洗い、ＴＴＢＳで希釈（１：５０００希釈）した二次抗体（すなわちブタ抗ウサギ抗体ＨＲＰ複合体）とＲＴでインキュベートした。フィルターを０．０２％ ＴＴＢＳで５分間ずつ２回洗った。ＥＣＬ検出システムを使用してメーカーの説明書に従いＳｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅによりブロットを発現させ、Ｈｙｐｅｒｆｉｌｍ ＥＣＬ （Ａｍｅｒｓｈａｍ ＬＳ）に５〜２０秒間焼き付けた。分子量の推定には染色済み分子量マーカーを用いた。
【０１４１】
ＤＥ５２カラムクロマトグラフィーによるｒＨｕＰＳＰ９４精製
発酵培養液からＰ． ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞を除去した後、上清を約１０倍に濃縮し、透析処理し、陰イオン交換クロマトグラフィーにかけた。層容量が約４０ｍｌのＤＥ５２カラム［内径（ｉｄ）２．５ｃｍ×高さ（ｈ）８ｃｍ］を０．０５ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ８．０ （平衡化緩衝液）で平衡化した。１５〜２０ｍｇのｒＨｕＰＳＰ９４タンパク質を含むサンプル（２４ｍｌ）をＤＥ５２カラムに１ｍｌ／分の送液量で添加した。
【０１４２】
２８０ｎｍ吸光度をモニターしながら４０〜５０ｍｌの平衡化緩衝液でカラムを洗い、カラムから不純物を除去した。次いで１００〜１５０ ｍｌの０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ６．５を洗浄液のｐＨが約６．５になるまでカラムに加えた。カラムを１００〜１５０ｍｌの０．０５Ｍ ＭＥＳ−酢酸緩衝液でさらに洗い、２８０ｎｍの吸光度がゼロに迫るようにした。最後に０．０５Ｍ ＭＥＳ−酢酸緩衝液、ｐＨ ５．０でｒＨｕＰＳＰ９４をカラムから溶出した。ピーク画分の特性を２８０ｎｍ吸光度により解明し、次いで前述の要領でＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット分析を行った。２８０ｎｍ吸光度の値が高い（０．５〜１．８）画分をプールし、水又はＰＢＳを外液として透析しマイナス２０℃での保存及び／又は凍結乾燥に回した。
【０１４３】
アミノ酸組成
ＤＥ５２で精製したフラスコ振とう培養液及び発酵培養液のアミノ酸組成を分析した。Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ Ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｒ−ＡｎａｌｙｓｉｓシステムとＳｐｅｒｉ−５ ＰＴＣ Ｃ−１８ ５μカラム及びＯＤ２５４でのＵＶ検出を分析に使用した。
【０１４４】
質量分析
ＰＳＰ９４由来のポリペプチド類を合成し、それらが要求規格に適合することを確認し、また質量分析法で分析した。ポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）及びポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の質量分析結果はそれぞれ図１、２及び３のとおりである。
【０１４５】
ポリペプチド・サンプルは窒素レーザーの３３７ｎｍ光を用いるＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ （Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ， ＭＡ） Ｖｏｙａｇｅｒ−ＤＥ ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計で分析した。各分析では約１２〜５０回の測定を平均した。
フラスコ振とう培養液と発酵培養液に由来する精製サンプルは窒素レーザー３３７ｎｍ光使用のＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ （Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ， ＭＡ） Ｖｏｙａｇｅｒ−ＤＥ ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計で分析した。各分析では約５０回の計測を平均した。天然ＰＳＰ９４由来のサンプルも比較のために同様の条件下で分析した。
【０１４６】
実施例２
ＰＣ−３細胞に対するｒＨｕＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果（ＭＴＳ試験）
ｒＨｕＰＳＰ９４の生物活性を、ヒト前立腺がん細胞ＰＣ−３に対する増殖阻害効果によって評価した。生細胞のミトコンドリア活性を主に計測するＭＴＳ／ＰＭＳ（フェナジンメトサルフェート）キットにより、ＰＣ−３細胞の細胞増殖をモニターした。生細胞のミトコンドリア酵素類はＭＴＳ／ＰＭＳ色素を代謝させ、褐色沈殿物を形成するが、該沈殿物は分光光度計で４９０ｎｍの吸光により光学密度（ＯＤ）として計測しうるので、そのＯＤ値を求めればそれに比例する生細胞数も判明する、というのがこの方法の基本原理である。加えて細胞の形態学的状態もモニターした。細胞の形態学的状態はその健康状態を示唆しよう。たとえば生細胞は粘着質で伸び広がって見えようが、死細胞は培地中に懸濁し、また丸くなって粒状に見えよう。
【０１４７】
ＰＣ−３細胞に対するｒＨｕＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果に関するＭＴＳ試験結果をまとめると表２のようになる。実験に使用したＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ， Ｌｏｔ ＡＴ０６）は継代数が７０以下（ｎ≧７０）であった。Ｃｏｓｔａｒ ９６穴細胞培養平底プレートに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１μＭ ＦｅＳＯ４を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地を加え、そこに細胞をまいた。ペプチドを同じ培地で希釈した。細胞を本発明のポリペプチドに、培地を代えずに７２時間連続して接触させた。２倍に濃縮した天然ＰＳＰ９４又はｒＨｕＰＳＰ９４をウェルに直接加えてから元の濃度へと希釈して、細胞の操作を最小限に抑え剥離を防ぐようにした。
【０１４８】
ＰＣ−３細胞に対するｒＨｕＰＳＰ９４の増殖阻害効果を評価すると、細胞数（すなわち生存率）が８０μｇ／ｍｌ及び１２０μｇ／ｍｌのｒＨｕＰＳＰ９４濃度でそれぞれ３７％〜５７％の範囲で大幅に低減することが判明した。この効果は４回中３回の実験で観測された（表２）。トリパンブルー分染法によれば８０μｇ／ｍｌでの細胞生存率は６２％であった。
【０１４９】
【表２】
2004510833.tif 000011
【０１５０】
実施例３
ＰＣ−３細胞に対するｒＨｕＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果（［３Ｈ］−チミジン取り込み試験）
ｒＨｕＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖阻害効果を［３Ｈ］−チミジン取り込み試験で評価した。［３Ｈ］−チミジン取り込み試験は活発に増殖する細胞の細胞ＤＮＡに［３Ｈ］−チミジンが取り込まれる現象を利用する。ＭＴＳ試験では処理後の生細胞数を定量するのに対して、この試験では細胞の増殖性指数を計測する。Ｃｏｓｔａｒ ９６穴細胞培養平底プレートに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１μＭ ＦｅＳＯ４を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地を加え、そこに細胞をまいた。ＰＣ−３細胞を種々の濃度のｒＨｕＰＳＰ９４に７２時間接触させたが、培養最後の１６時間中に、細胞に１μＣｉの［３Ｈ］−チミジンを添加した。プレートの各ウェル内の放射能をβカウンターで計数し、総カウント数／分（ｃｐｍ）として表す。ＰＣ−３細胞に対するｒＨｕＰＳＰ９４のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果に関する［３Ｈ］−チミジン取り込み試験の結果は表３のとおりであり、非処理細胞（その［３Ｈ］−チミジンの取り込み値を１００％とする）の放射能計測値に対する処理細胞の放射能計測値の百分率で表わしている。
【０１５１】
試験結果によれば、濃度８０μｇ／ｍｌのｒＨｕＰＳＰ９４で７２時間処理後の［３Ｈ］−チミジン取り込み細胞の百分率は非処理対照と比較して６５％低下した。［３Ｈ］−チミジン取り込みの６５％低下という結果は細胞増殖の６５％低下を示唆することにもなろう。
【０１５２】
［３Ｈ］−チミジン取り込み試験とＭＴＳ試験を比較して、双方の相対的な感受性を評価するようにした。ＭＴＳ試験用に追加のプレートを別に用意し、［３Ｈ］−チミジン取り込み試験に使用したものと同じロット（すなわちバッチ）のｒＨｕＰＳＰ９４で並行処理した。ＭＴＳ試験の結果によれば濃度８０μｇ／ｍｌのｒＨｕＰＳＰ９４で処理した後の細胞生存率は３５％低下したが、それは細胞増殖の６５％低下を測定することができた［３Ｈ］−チミジン取り込み試験のほうがＭＴＳよりも感受性が高いことを示唆するであろう。
【０１５３】
【表３】
2004510833.tif 000012
【０１５４】
実施例４
ＰＣ−３細胞に対するデカペプチド及び他ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ効果
本書で既に明らかにされたように合成デカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３）は天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４） （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）と生物活性がよく似ているので、ＰＣ−３細胞に対するその効果をクローン原性（コロニー形成）試験で調べた。Ｃｏｓｔａｒ ９６穴細胞培養平底プレートに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１μＭ ＦｅＳＯ４を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地を加え、そこに細胞をまいた。種々の濃度のデカペプチドの存在下で増殖させたＰＣ−３細胞について９日間培養後に、クローン原性を評価した（図４ａ）。同じ条件による並行実験を種々の濃度のｎＰＳＰ９４で行った（図４ｂ）。他にもクローン原性の評価実験をデカペプチド（図５ａ）又はｎＰＳＰ９４ （図５ｂ）を対象に１０日間の培養及び２１日間の培養で実施した（図６ａ： デカペプチド及び図６ｂ： ｎＰＳＰ９４）。
【０１５５】
図４〜６を参照すると、デカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）とｎＰＳＰ９４はＰＣ−３細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究で似たような阻害作用を示した。濃度１μｇ／ｍｌのデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を接種した細胞ではコロニー数が４０％減少する結果となった。濃度１０μｇ／ｍｌのデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）では最高６０％のコロニー数減少が観測された。
【０１５６】
実施例５
ＤＮＡ断片化の検出
ＤＮＡ断片化は細胞アポトーシスの結果として起こるが、ＤＮＡを１．２％アガロースゲル電気泳動にかけてＤＮＡラダーとして視覚化することができる。ＰＣ−３細胞を種々の濃度のポリペプチド類と７２時間接触させた後、ＤＮＡラダー検出（アポトーシス検出）試験を実施した。この実験に使用したポリペプチドはポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）及びポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）である。ＤＮＡを単離し１．２％アガロースゲル電気泳動にかけて視覚化すると、試験したどのポリペプチドもアポトーシスに特有のＤＮＡラダー化を誘発することが明らかとなった。ラダー化はＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）処理後に特に明白であった（図７）。図７に示したゲルのレーン１は基準のλＨｉｎｄＩＩＩ 消化である。レーン２はドキソルビシン処理細胞で得られたＤＮＡラダーである。レーン３は４０μｇのｎＰＳＰ９４で処理した細胞で得られたＤＮＡラダーである。レーン４は２０μｇのｎＰＳＰ９４で処理した細胞で得られたＤＮＡラダーである。レーン５は２２．５μＭのＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）で処理した細胞で得られたＤＮＡラダーである。レーン６は４５μＭのＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）で処理した細胞で得られたＤＮＡラダーである。
【０１５７】
実施例６
ＥＬＩＳＡ ｐｌｕｓ法によるアポトーシス検出
３種類のポリペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）と陽性対照（ポジティブ・コントロール）としてのｎＰＳＰ９４をＥＬＩＳＡ ｐｌｕｓ法で試験し、アポトーシスによる細胞死の検出を試みた。ＥＬＩＳＡ ｐｌｕｓ法は簡単に言えば、２種類の抗体すなわちＤＮＡとヒストンに対する抗体を用いて、細胞溶解物の細胞質画分中に存在するモノ−及びオリゴ−ヌクレオソームを検出することができるサンドウィッチ酵素イムノアッセイである。アポトーシス型細胞死は、二本鎖ＤＮＡを最も手近なヌクレオソーム間リンカー領域で切断してモノ−及びオリゴ−ヌクレオソームを生成させる内在エンドヌクレアーゼの（たとえばカルシウム及びマグネシウム依存性）活性化を特徴とする。アポトーシス細胞の細胞質中にモノ−及びオリゴ−ヌクレオソームが集積するのは、ＤＮＡの分解が原形質膜破壊の数時間前に起こるためである。
【０１５８】
Ｃｏｓｔａｒ ９６穴細胞培養平底プレートに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１μＭ ＦｅＳＯ４を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地を加え、そこに４０００個の細胞をまいた。ＰＣ−３細胞を種々の濃度（２２．５ μＭ〜９０μＭ）のポリペプチドで７２時間処理した。アポトーシス検出試験はＡｐｏｔＴａｇキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いてメーカーの説明書に従って行った。
【０１５９】
図８に示す試験結果は、いずれのポリペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）でもアポトーシス型細胞死が用量に依存して増加することを示している。濃度９０μＭではポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）が最も有効であった（図８）。
【０１６０】
実施例７
ＰＳＰ９４ポリペプチドによる細胞増殖阻害（図９〜１１）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチドの生物活性を、ヒト前立腺がん細胞ＰＣ−３に対する増殖阻害効果により評価した。この実験には対照としてｎＰＳＰ９４、ｒＨｕＰＳＰ９４、ポリペプチド２２〜３６及びＰＢ１１１ポリペプチド（スクランブルド・ポリペプチド）も含めた。細胞増殖試験はＭＴＳ／ＰＭＳキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＰＣ−３細胞と正常線維芽細胞（対照として使用）を対象に行った。Ｃｏｓｔａｒ ９６穴細胞培養平底プレートに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１μＭ ＦｅＳＯ４を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地を加え、そこに４０００個（図９及び１０）又は３０００個（図１１）の細胞をまいた。さらに、細胞の形態学的状態もモニターした。
【０１６１】
これらの実験の結果は図９〜１１のとおりである。線維芽細胞を種々の濃度のポリペプチド（１０〜９０μＭ）で７２時間処理しても、増殖阻害効果はまったく観測されなかった（図９）。しかし、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のポリペプチドでは、またポリペプチドＰＣＫ３１４５　（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）ではさらに一段と、著しい増殖阻害が観測された（図１０）。ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で増殖させたＰＣ−３細胞を対象に種々の濃度のＰＣＫ３１４５とポリペプチド２２〜３６を使用してもう１つの実験を行った。図９〜１１では処理細胞の増殖阻害率を非処理対照細胞（細胞生存率１００％）との比較で評価している。
【０１６２】
実施例８及び９
ｉｎ ｖｉｖｏ実験（図１２及び１３）
次の要領で研究ＭＬＬ−１及びＭＬＬ−２を実施した： ０日目にオスのＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットに１頭あたり５×１０５個のＭＡＴ−ＬｙＬｕ細胞を皮下注射した。これらの細胞は１０％ （ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清添加ＲＰＭＩ培地で増殖させたＭＡＴ−ＬｙＬｕ細胞株の対数増殖期培養液に由来した。細胞は培養フラスコからトリプシン処理により回収し、１２００ ｒｐｍで遠心にかけ、ハンクス液（ＨＢＳＳ）で３回洗った。次いで細胞を数え濃度を５×１０６個／ｍｌ−ＨＢＳＳへと調整した。５×１０５個の細胞を含む腫瘍細胞接種液０．１ｍｌを各ラットの脇腹に皮下注射した。腫瘍細胞移植（すなわっち接種）３日後から１３日目まで毎日、動物を所望ポリペプチドの皮下注射により処理した。
【０１６３】
図１２に掲げた実験結果からヌードマウス移植ＭＡＴ−ＬｙＬｕ （ＭＬＬ）腫瘍に対するｒＨｕＰＳＰ９４の抗腫瘍効果が確認される（プロトコールはＳ． Ｇａｒｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ２２：２２５−２３３， １９９３に依拠）。
研究ＭＬＬ−１ （図１２）では腫瘍移植ヌードマウスを群分けし群ごとに種々の量のｒＨｕＰＳＰ９４又は対照試薬を投与した。群分けの内訳は次のとおりであり、各群は８頭のマウスからなった。
【０１６４】
群１： 陰性対照−ＰＢＳを皮下注射（ｓ．ｃ．）
群２： 陽性対照−５ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを単一ボーラスで３日目に静脈内注射（ｉ．ｖ．）
群３： ｒＨｕＰＳＰ９４、１μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
群４： ｒＨｕＰＳＰ９４、１０μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
群５： ｒＨｕＰＳＰ９４、１００μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
【０１６５】
接種を図解すると次のようになる［腫瘍細胞移植（Ｔ．Ｃ．Ｉ．）、処理（Ｔｘ）、計測（Ｍ）、日目（Ｄ）］：
【化９】
2004510833.tif 000013
【０１６６】
図１３に掲げた実験結果から重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ （ＭＬＬ）腫瘍に対するｒＨｕＰＳＰ９４の抗腫瘍効果が確認される（プロトコールはＳ． Ｇａｒｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ２２：２２５−２３３， １９９３に依拠）。
【０１６７】
研究ＭＬＬ−２ （図１３）では腫瘍移植ＳＣＩＤマウスを群分けし群ごとに種々の量のｒＨｕＰＳＰ９４又は対照試薬を投与した。群分けの内訳は次のとおりであり、各群は８頭のマウスからなった。
【０１６８】
群１： 陰性対照−ＰＢＳを皮下注射（ｓ．ｃ．）
群２： 陽性対照−５ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを単一ボーラスで３日目に静脈内注射（ｉ．ｖ．）
群３： ｒＨｕＰＳＰ９４、１μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
群４： ｒＨｕＰＳＰ９４、１０μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
群５： ｒＨｕＰＳＰ９４、１００μｇ／ｋｇ／日（ｓ．ｃ．）
【０１６９】
接種を図解すると次のようになる［腫瘍細胞移植（Ｔ．Ｃ．Ｉ．）、処理（Ｔｘ）、計測（Ｍ）、日目（Ｄ）］：
【化１０】
2004510833.tif 000014
【０１７０】
両研究の結果によればヌードマウスとＳＣＩＤマウスでは腫瘍のサイズと成長に差があった。ＳＣＩＤマウスのほうが腫瘍は小さく、その成長も遅い。これはこのマウス系統には腫瘍の成長を抑制する何らかの特定の因子が存在するためかもしれない。ドキソルビシン（陽性対照）を注射したマウスで有意の腫瘍減少という結果も得られた。たとえばドキソルビシンを注射したヌードマウス（研究ＭＬＬ−１）の腫瘍重量の減少は４８％ （ｐ＝０．００６）であった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。ドキソルビシン投与ＳＣＩＤマウス（研究ＭＬＬ−２）の腫瘍重量の減少は８２％ （ｐ＝０．００２）であった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。１μｇ／ｋｇ／日のｒＨｕＰＳＰ９４で処理したマウスでも有意の腫瘍減少という結果が得られた。たとえば１μｇ／ｋｇ／日のｒＨｕＰＳＰ９４で処理したヌードマウス（研究ＭＬＬ−１）の腫瘍重量の減少は２６％ （ｐ＝０．０４２）であった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。１μｇ／ｋｇ／日のｒＨｕＰＳＰ９４で処理したＳＣＩＤマウス（研究ＭＬＬ−２）の腫瘍重量の減少は６５％ （ｐ＝０．０１０）であった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。
【０１７１】
実施例１０
ＰＣ−３細胞株の使用によるｉｎ ｖｉｖｏ実験（図１４）
ＰＣ−３ヒト前立腺腫瘍をＡＴＣＣから入手した（ＡＴＣＣ １４３５）。ＰＣ−３細胞を１０％ （ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清添加ＲＰＭＩ培地で増殖させ、対数増殖期にトリプシン処理により回収した。細胞を１２００ ｒｐｍで遠心にかけ、ハンクス液（ＨＢＳＳ）で３回洗った。次いで細胞を数え濃度を１×１０７個／ｍｌ−ＨＢＳＳへと調整した。１×１０６個の細胞を含む腫瘍細胞接種液０．１ｍｌを各ヌードマウス（系統：Ｎｕ／Ｎｕ、ＢＡＬＢ／ｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）の両脇腹に皮下注射した。腫瘍の成長を１８日間モニターした。ひとたび腫瘍の成長が確立した（腫瘍容量が５０ｍｍ３に達した）ら、ｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）による処理を開始し、表４に示す処理群の割り振りに基づき皮下注射を毎日１４日間にわたり実行した。
【０１７２】
【表４】
2004510833.tif 000015
【０１７３】
実験結果（図１４）によれば、１μｇ／ｋｇ−体重／日の投与レベルでｒＨｕＰＳＰ９４により処理したマウス群では腫瘍の成長が鈍化した。これは、最高の基準として使用される化学療法薬であるドキソルビシン（投与レベル５ｍｇ／ｋｇ／日）で観測される鈍化に匹敵した。
【０１７４】
実施例１１
ＰＣ−３細胞株の使用によるｉｎ ｖｉｖｏ実験（図１５〜１７）
ＡＴＣＣから入手したＰＣ−３ヒト前立腺腫瘍（ＡＴＣＣ １４３５）をヌードマウスに両側移植し、腫瘍の成長を１８日間モニターした。ＰＣ−３細胞はマウスの両脇腹に１回皮下注射した。ひとたび腫瘍の成長が確立した（腫瘍容量が０．２５〜０．５０ｃｍ３に達した）ら、デカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、天然ＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）及び対照スクランブルド・ポリペプチドＰＢ１１１による処理を開始し、表５に示す処理群の無作為割り振りに基づき皮下注射を毎日１４日間にわたり実行した。
【０１７５】
【表５】
2004510833.tif 000016
【０１７６】
図１５はデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）で処理した腫瘍移植ヌードマウスと非処理対照に関する結果の比較である。図１６はスクランブルド・ポリペプチドＰＢ１１１で処理した腫瘍移植ヌードマウスと非処理対照に関する結果の比較である。図１７は天然ＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）で処理した腫瘍移植ヌードマウスと非処理対照に関する結果の比較である。実験結果（図１５〜１７）によれば、１０μｇ／ｋｇ−体重／日の投与レベルでデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）により処理したマウスでは腫瘍成長の有意の（ｐ＜０．０５）鈍化が見られた。
【０１７７】
実施例１２
ポリペプチドの調製
ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）を含むＰＳＰ９４由来ポリペプチド類をＦＭＯＣ及びＢＯＣ固相ポリペプチド合成法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， Ｂ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２３２：３４１−３４７， １９８６）により合成した。ポリペプチドを同定するために質量スペクトル分析を行った。窒素レーザーの３３７ｎｍ光を用いるＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｔｅｍｓ （Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ， ＭＡ） Ｖｏｙａｇｅｒ−ＤＥ ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計でポリペプチド・サンプルを分析した。各分析では約５０回の測定を平均した。天然ＰＳＰ９４由来のサンプルも比較のために同様の条件下で分析した。ポリペプチドの計量にはＭｅｔｔｌｅｒ ＡＥ １６３微量天秤を使用した。計測は０．１ｍｇ単位で行った。ポリペプチドは１０ｍＭ ＰＢＳ（ｐＨ ７．３）で還元し最終濃度を１ｍｇ／ｍｌ及び５ｍｇ／ｍｌとした。ポリペプチドは比較的よく溶けたが、０．２μｍシリンジフィルターでろ過滅菌した。２ｍｌ／試験管のアリコートとしマイナス８０℃で保存した。
【０１７８】
ｐＨの差が変動因子とはならないようにするため、ポリペプチドのｐＨを還元後に計測した。各溶液について３つの濃度すなわちニート、１００μｇ／ｍｌ及び１２．５μｇ／ｍｌでｐＨ値をとった。ｐＨ範囲は約７．０〜７．５であったが、このｐＨ範囲内では細胞の生存率がきわめて高いため、これは試験結果に有意の差をもたらさなかった。濃度をモル値に変えるために、近似量の１ｍｇ／ｍｌストックをＰＢＳ （ｐＨ ７．３）で希釈した。ストックはいずれも４５０μＭのポリペプチド溶液を含むように調製した。ポリペプチドの新鮮ストックを還元するときはＰＢＳ （ｐＨ７．３）で直接還元した。
当初のスクリーニングとＰＣ−３細胞に対するポリペプチドの増殖阻害活性の確認の後、優良製造規範（ＧＭＰ）グレードのポリペプチドを試験した。このポリペプチドを計量し、ＰＢＳに溶解し、２ｍｇ／ｍｌストック液を調製し、０．２μｍシリンジフィルターで滅菌ろ過し、マイナス８０℃で保存した。
【０１７９】
実施例１３
ＰＣ−３細胞に対するＰＣＫ３１４５のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果（ＭＴＳ試験）（図１８〜２１）
実施例１２の要領で調製したＰＣＫ３１４５を、腫瘍成長阻害物質の最有力候補として評価した。
ＭＴＳ／ＰＭＳキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＰＣＫ３１４５の生物活性をヒト前立腺がん細胞株ＰＣ−３に対する増殖阻害効果の点から評価した。これは生細胞のミトコンドリア活性を計測する試験法である。生細胞のミトコンドリア酵素類はＭＴＳ／ＰＭＳ色素を代謝させ褐色沈殿物を形成するが、該沈殿物は分光光度計で４９０ｎｍの吸光により光学密度（ＯＤ）として計測しうるので、そのＯＤ値を求めればそれに比例する生細胞数も判明する、というのがこの方法の基本原理である。
【０１８０】
加えて、細胞の目視観察も行い、細胞増殖状態の指標ともなりうる細胞の形態学的変化もモニターした。ＭＴＳ試験では次の条件を採用した： ＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ， Ｌｏｔ ＡＴ０６）、継代数ｎ≧７０； 細胞株を無血清ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地及びＢＳＡ （５０μｇ／ｍｌ）とＦｅＳＯ４ （０．１μＭ）を含むサプリメント添加ＲＰＭＩ培地で増殖するよう順応させ、培地を代えずに（すなわち２倍に濃縮したＰＣＫ３１４５をウェルに直接添加し、それを１：２希釈して元の濃度に戻すことにより細胞の操作を最小限に抑え剥離を防ぐようにして）７２時間連続ＰＣＫ３１４５に接触させる。図１８に示すように、サプリメント添加培地で増殖させたＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ）に対するＰＣＫ３１４５の効果を次の濃度で評価した： １２．５、２５、５０、１００、２００、３００及び４００ μｇ／ｍｌ。ＭＴＳ試験は５回反復したが、ＰＣ−３細胞の増殖に対する濃度依存性の阻害効果が一貫して再現され、最高ＰＣＫ３１４５濃度の４００μｇ／ｍｌでの細胞増殖阻害は約４０％であった。
【０１８１】
ＧＭＰグレードのポリペプチドを使用して、ＭＴＳ試験を反復し再現性とＰＣ−３細胞に対する細胞傷害性を確認するようにした。並行して、ＰＣ−３細胞を基準陽性対照としての天然ＰＳＰ９４で処理する試験及び無処理の試験（陰性対照すなわち対照）も実施した。図１９は、４０００個の細胞をまいてＰＣＫ３１４５ （ＧＭＰグレード）に４８時間接触させたＭＴＳ試験の結果である。５００μｇ／ｍｌ濃度のＰＣＫ３１４５で処理した後では３０％の増殖阻害効果が認められた。接触時間を７２時間にするとこの効果は約４０％に増大した（図２０）。反復試験では５００μｇ／ｍｌ濃度の該ポリペプチドに４８時間接触させても２０％の増殖阻害効果にとどまったが、７２時間の接触後ではそれが３０％に増大した（図２１）。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖状態を反映した試験ごとの変動にもかかわらず、ポリペプチドＰＣＫ３１４５は有意の細胞増殖阻害を示した。
【０１８２】
実施例１４
ＰＣ−３細胞に対するＰＣＫ３１４５の効果−［３Ｈ］−チミジン取り込み試験（図２２〜２４）
［３Ｈ］−チミジン取り込み試験は活発に増殖する細胞の細胞ＤＮＡに［３Ｈ］−チミジンが取り込まれる現象を利用する。ＭＴＳ試験では処理後の生細胞数を定量するのに対して、この試験では細胞の増殖性指数を計測する。ＰＣＫ３１４５とＰＳＰ９４のアミノ基及びカルボキシル基末端に由来する他の２合成ポリペプチド（それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、それに天然ＰＳＰ９４に匹敵する生物活性を有することを既に示したデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）について、ＰＣ−３細胞を対象とする［３Ｈ］−チミジン取り込み試験でその抗増殖効果を評価した。ＧＭＰグレードのＰＣＫ３１４５で２件の別個の実験を行った。
【０１８３】
図２２と２３に示すように、ポリペプチドＰＣＫ３１４５は［３Ｈ］−チミジン取り込み率として表わされる有意の増殖阻害活性を示した。第１実験では２００μｇ／ｍｌのＰＣＫ３１４５濃度で４０％近い［３Ｈ］−チミジン取り込みの低下が観測された。第２実験では濃度を２倍に高めた（すなわち４００μｇ／ｍｌ） ＰＣＫ３１４５の使用にもかかわらず、２５％の阻害が観測されたにすぎない。試験ごとの変動はあるものの、ＰＣ−３細胞に対するＧＭＰグレード品の総合的な増殖阻害効果は顕著であった。基準陽性対照として使用した天然ＰＳＰ９４によるＰＣ−３細胞の処理では有意の濃度依存性の細胞増殖阻害効果が認められ、［３Ｈ］−チミジン取り込み量は７２時間接触後でほぼ５０％低下した（図２４）。
【０１８４】
実施例１５
ＰＣ−３細胞に対するＰＣＫ３１４５のｉｎ ｖｉｔｒｏ効果（アポトーシス検出、図２５）
濃度５００μｇ／ｍｌのＰＣＫ３１４５に７２時間接触させた後のＰＣ−３細胞のアポトーシスをサプリメント添加培地中でＤＮＡ断片化検出法により評価した。基準陽性対照としてドキソルビシンを使用した。非処理細胞とＰＣＫ３１４５処理細胞を回収しＤＮＡを単離した。単離ＤＮＡを臭化エチジウム（ＥｔＢｒ）添加１．２％アガロースゲル上で電気泳動にかけた。図２５に示すように、ポリペプチドＰＣＫ３１４５によるＰＣ−３細胞の処理はＤＮＡの断片化を招き、断片化ＤＮＡに特有のラダー形成によりそれが裏付けられた。図２５に示したゲルのレーン１はＤＮＡマーカー（２００ｂｐのＤＮＡラダー）である。レーン２は対照の非処理ＰＣ−３細胞である。レーン３は濃度２μｇ／ｍｌのドキソルビシンで処理した細胞で観測されたＤＮＡラダー化である。レーン４はＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）で処理した細胞で観測されたＤＮＡラダー化である。
【０１８５】
実施例１６
ヒトＰＣ−３前立腺がん細胞株を使用したｉｎ ｖｉｖｏ実験（図２６〜２７）
実験研究ＰＣ３−６とＰＣ３−１２ （図２６〜２７）は連続した群試験であり、その目的はヒトＰＣ−３前立腺がんのヌードマウス異種移植モデルでＰＣＫ３１４５のｉｎ ｖｉｖｏ活性を評価し、また投与量、経路及び計画と抗腫瘍効果パラメーター（容量）との関係を解明することである。
【０１８６】
対数増殖期の半ばに回収したＰＣ−３細胞５×１０６個／マウスをマウスの背中に皮下注射で接種した。この接種液から成長した腫瘍を移植後（ｐ．ｔ．ｉ．）約３２〜３５日目に、腫瘍容量が２００〜３００ｍｍ３に達した時点で摘出した。壊死組織を除去し、生存腫瘍塊を小片（約１〜３ｍｍ３）に切り刻んでマウスの両脇腹に皮下注射で移植した。種々の濃度のＰＣＫ３１４５による処理を腫瘍移植後（ｐ．ｔ．ｉ．）３日目に開始し、２１日間続行した。皮下注射は腫瘍成長部位の下から行った。腹腔内注射は腹部から行った。静脈内注射は尾部支脈から行った。実験は最終処理の２４時間後に終了した。腫瘍の計測は、腫瘍移植後（ｐ．ｔ．ｉ．） １１、１４、１６、１８、２０、２２及び２４日目に行った。腫瘍容量の計算は公式（ａ×ｂ２×０．５）に従った（ただしａは長径であり、ｂはそれと直交する短径である）。
【０１８７】
研究ＰＣ３−６では、ＰＣ−３移植ヌードマウスにおける皮下注射ＰＣＫ３１４５の腫瘍増殖抑制効果が明らかである。マウスを群分けし各群に種々の量のＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又は対照試薬を投与した。実験に使用したマウス群の内訳は表６のとおりである。各群は１０頭のマウスからなった。ドキソルビシンは腫瘍移植後（ｐ．ｔ．ｉ） ３日目と１１日目に単一ボーラス静脈内注射で投与した。
【０１８８】
【表６】
2004510833.tif 000017
【０１８９】
この研究の結果（図２６）によれば、ＰＣＫ３１４５、１０μｇ／ｋｇ／日による処理後のＰＣ−３細胞増殖に有意の鈍化が見られるのは明らかである。この抗腫瘍効果は対照ＰＢＳ処理群と比較した場合の、腫瘍移植後１１、１４、１６、１８、２１及び２４日目に観測された統計的に有意の腫瘍成長率低下からも裏付けられた（ｐ値はそれぞれ０．００１〜０．００２であり、カットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。強力な化学療法薬であるドキソルビシンは基準対照として使用したが、有意性の高い抗腫瘍治療効果を示した。観測抗腫瘍効果の統計的有意性はデータのＡＮＯＶＡ（分散分析）、ダネット検定、クラスカル−ワリス検定及びダン検定でも確認された。
【０１９０】
研究ＰＣ３−１２では、ＰＣ−３移植ヌードマウスにおける皮下注射ＰＣＫ３１４５の腫瘍成長抑制効果が明らかである。マウスを群分けし各群に種々の量のＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又は対照試薬を投与した。実験に使用したマウス群の内訳は表７のとおりである。各群は９頭のマウスからなった。
【０１９１】
【表７】
2004510833.tif 000018
【０１９２】
実験結果（図２７）によれば、ＰＣＫ３１４５の１００μｇ／ｋｇ／日静脈内注射で処理した後のＰＣ−３細胞の増殖にかなりの鈍化が見られるのは明らかである。この抗腫瘍効果はステューデントｔ検定で比較すると腫瘍移植後１３、１７及び２０日目に統計的に有意であった（各時点のｐ値はそれぞれ０．００５、０．０２５及び０．０１１であり、カットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。ＰＣＫ３１４５の他の投与レベル（１０、５００及び１０００μｇ／ｋｇ／日）の静脈内注射で処理した後には有意の抗腫瘍効果が観測されなかった。しかし、５００及び１０００μｇ／ｋｇ／日のＰＣＫ３１４５投与による処理後には有意性への傾向が観測された。ＰＣＫ３１４５の１００及び１０００μｇ／ｋｇ／日腹腔内注射によるマウスの処理では似たような腫瘍抑制傾向が見られたが、最高投与レベルの１０００μｇ／ｋｇ／日では腫瘍移植後１３日目に観測された差異の統計的有意性は低かった（ｐ＝０．０５６）（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）（図２７）。
【０１９３】
ヒトＰＣ−３腫瘍細胞のヌードマウス異種移植モデルによる実験で得られた結果は、少なくとも採用した試験条件（試験したＰＣＫ３１４５投与レベル： １０μｇ／ｋｇ／日及び１００μｇ／ｋｇ／日）ではマウスの腫瘍部位から離れた部位（すなわち首筋）へのＰＣＫ３１４５の皮下注射が有効ではない可能性があり、従って抗腫瘍効果をもたらす見込みが薄いことを示唆した。皮下注射部位としての首筋は治療薬投与ではなく免疫応答誘発にとっての最適の部位であって、抗腫瘍効果の評価ではこの部位の選択は次善の選択であると見られる。
【０１９４】
実施例１７
ＤｕｎｎｉｎｇラットＭＡＴ−ＬｙＬｕ前立腺がん細胞株を使用したｉｎ ｖｉｖｏ実験（図２８〜３０）
Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎラットに移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ （ＭＬＬ）腫瘍に対するＰＣＫ３１４５の抗腫瘍効果の確認を行った（プロトコールはＳ． Ｇａｒｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ２２：２２５−２３３， １９９３に依拠）。ＭＡＴ−ＬｙＬｕ腫瘍細胞を培養フラスコから対数増殖期の半ばにトリプシン処理により回収し、１２００ ｒｐｍで遠心にかけ、ハンクス液（ＨＢＳＳ）で３回洗った。次いで細胞を数え濃度を５×１０６個／ｍｌ−ＨＢＳＳへと調整した。５×１０５個の細胞を含む腫瘍細胞接種液０．１ｍｌを各ラットの脇腹に皮下注射した。腫瘍移植後（ｐ．ｔ．ｉ）３日目に、種々の濃度のＰＣＫ３１４５の局所（すなわち背部の腫瘍移植部位のすぐ下の剃毛部）皮下注射による処理を開始し、１６日間にわたり毎日実行した。実験は最終処理の２４時間後に終了した。腫瘍の計測は７、９、１１、１４、１６及び１８日目に行った。腫瘍容量の計算は公式（ａ×ｂ２×０．５）に従った（ただしａは長径であり、ｂはそれと直交する短径である）。１９日目に個別ラットの腫瘍を摘出し計量した。
【０１９５】
研究ＭＬＬ−５では、ＭＡＴ−ＬｙＬｕ移植ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットにおけるＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）の、ポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）及びポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）との比較で見た腫瘍増殖抑制効果が明らかである。ラットを群分けし各群に種々の量のＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又は対照試薬を皮下注射で投与した。実験に使用したラット群の内訳は表８のとおりである。各群は８頭のラットからなった。
【０１９６】
【表８】
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【０１９７】
研究結果（図２８）によれば、ＰＣＫ３１４５の１０μｇ／ｋｇ／日投与後のかなりの抗腫瘍効果が明らかである。この抗腫瘍効果は対照ＰＢＳ処理群と比較した場合の腫瘍移植後１１、１３、１６及び１８日目の有意の腫瘍容量減少からも裏付けられた（ｐ値はそれぞれ０．００６、０．００００１、０．００２及び０．００４であり、カットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。ＰＣＫ３１４５の１μｇ／ｋｇ／日投与後は有意の効果が検出されなかった。興味深いことにアミノ基末端ポリペプチド７〜２１もまたＰＣ−３ヌードマウス異種移植モデルの場合と同様に同等の抗腫瘍効果を示したが、それは活性部位がＰＳＰ９４タンパク質のＮ末端基領域と中央領域に重なっているという可能性を示唆する。これはポリペプチド７〜２１で処理したラットで１３、１６及び１８日目に観測された有意の腫瘍容量減少により裏付けられた（ｐ値はそれぞれ０．０５、０．００００５及び０．０１であり、カットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。
【０１９８】
研究ＭＬＬ−６では、ＭＡＴ−ＬｙＬｕ移植ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットにおけるＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）の腫瘍増殖抑制効果が明らかである。ラットを群分けし各群に種々の量のＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又は対照試薬を皮下注射で投与した。実験に使用したラット群の内訳は表９のとおりである。各群は８頭のラットからなった。ドキソルビシンはｐ．ｔ．ｉ． ３日目に単一ボーラスとして静脈内注射で投与した。
【０１９９】
【表９】
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【０２００】
その研究結果（図２９と３０）によれば、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）を１０及び１００μｇ／ｋｇ／日投与した後の投与量依存性の有意の抗腫瘍効果は明らかである。この抗腫瘍効果は腫瘍移植後１４、１６及び１８日目の、特に１００μｇ／ｋｇ／日ＰＣＫ３１４５による処理後の有意の腫瘍容量減少（対照比で３１％）からも裏付けられた（図２９）。陰性対照（すなわちスクランブルド・ポリペプチドＰＢ１１１）処理群と対比した有意水準はｐ＝０．０００００６２できわめて高かった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。スクランブルド・ポリペプチドによる投与レベル１００μｇ／ｋｇ／日での処理後にも中程度（対照ＰＢＳ処理群と対比した有意水準がｐ＝０．０３で、ぎりぎりの統計的有意性）の成長抑制が観測された（図２９） （ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。ドキソルビシン処理は８０％余りの腫瘍容量の減少をもたらし、高い有意性を示した。ＰＣＫ３１４５の投与レベル１００μｇ／ｋｇ／日でのこうした抗腫瘍効果は腫瘍重量データの分析からも確認された。図３０ （腫瘍重量データ）に示すように、ｐ．ｔ．ｉ． ８日目に腫瘍重量の有意（ｐ＝０．０００３）の減少が観測された（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。これは対照群（５６．６ｇ）とＰＣＫ３１４５ （１００μｇ／ｋｇ／日）処理群（３７．２ｇ）の間の２０グラムの差を表わし、腫瘍重量の３４％の減少に相当した。この腫瘍重量差もまた、同じ投与レベル（１００μｇ／ｋｇ／日）での対照スクランブルド・ポリペプチド処理ラットの腫瘍重量と比較すると統計的に有意（ｐ＝０．００３）であった（ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。スクランブルド・ポリペプチド腫瘍重量と対照ＰＢＳ処理腫瘍重量との差は統計的に有意でなかった（ｐ＝０．０６） （ｐ値はカットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）。
【０２０１】
実施例１８
ＰＣＫ３１４５＋タキソテール併用治療の効果
併用治療の腫瘍抑制効果を検定するために、予めＰＣ−３腫瘍細胞を接種しておいたヌードマウスにＰＣＫ３１４５とタキソテール（すなわちドセタキセル）を同時投与した。マウスは群分けして、各群にＰＣＫ３１４５を単独で、又はタキソテールと組み合せて（別個の経路で）、又は対照試薬（すなわちＰＢＳ）を投与するようにした。この実験では比較的大きな全身腫瘍組織量に対して併用治療を適用した。腫瘍を、ＰＣＫ３１４５治療が通常は無効となるような５０〜６０ｍｍ３サイズまで成長させた。ＰＣＫ３１４５は５０〜６０ｍｍ３サイズの皮下腫瘍が明白になった１日目から２８日間にわたり隔日で皮下注射した。タキソテールは皮下腫瘍が明白になった後の４日目と１１日目に部分最適量の２ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射した。この実験に使用したマウス群の内訳は表１１のとおりである。各群は１１頭のマウスからなった。
【０２０２】
【表１０】
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【０２０３】
実験結果（図３１）によれば、ＰＣＫ３１４５とタキソテールの併用治療後の有意の（かなりの）腫瘍抑制効果が明らかである。この効果は腫瘍細胞接種後の１９日目と２２日目にステューデントのｔ検定で比較すると統計的に有意であり（ｐ値はそれぞれ０．０２及び０．０４７であり、カットオフ限界をｐ＜０．０５とし、対応のないステューデントのｔ検定により求めた）、またタキソテールだけを２ｍｇ／ｋｇ（部分最適量）の同じ投与レベルで投与した場合よりも顕著であった。
【０２０４】
本明細書で引用した諸々の刊行物及び特許出願は、たとえ各個別刊行物又は特許出願について明示かつ個別にその旨が表示されていなくても、本書に採用される。任意の刊行物の引用は本出願日前にそれが公開されていたという事実の反映であって、本発明がそうした刊行物に対して優先権を主張する資格を欠くことを認めるという意味ではない。
以上、本発明についての理解を深めるために例証や実施例をもって詳しく説明したが、当業者には本発明の教示に照らして、請求項の本質又は範囲から逸脱することなくある種の変更や修正を加えうることは自明であろう。
【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【化１５】
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【化１６】
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【化１７】
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【化１８】
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【化１９】
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【化２０】
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【化２１】
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【化２２】
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【化２３】
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【化２４】
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【化２５】
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【化２６】
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【化２７】
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【化２８】
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【化２９】
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【化３０】
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【化３１】
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【化３２】
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【化３３】
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【化３４】
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【化３５】
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【化３６】
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【化３７】
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【化３８】
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【化３９】
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【化４０】
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【化４１】
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【化４２】
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【化４３】
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【化４４】
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【化４５】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
図１はポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の質量スペクトルである。
【図２】
図２はポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）の質量スペクトルである。
【図３】
図３はポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）の質量スペクトルである。
【図４ａ】
図４ａは培養９日後のＰＣ−３細胞に対するデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図４ｂ】
図４ｂは培養９日後のＰＣ−３細胞に対する天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図５ａ】
図５ａは培養２１日後のＰＣ−３細胞に対するデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図５ｂ】
図５ｂは培養２１日後のＰＣ−３細胞に対する天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図６ａ】
図６ａは培養１０日後のＰＣ−３細胞に対するデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図６ｂ】
図６ｂは培養１０日後のＰＣ−３細胞に対する天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図７】
図７はポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）でＰＣ−３細胞を処理した後のＤＮＡ断片化を示すゲル電気泳動パターンである。
【図８】
図８は、種々の濃度のポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）又は天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）によりＰＣ−３細胞をポリペプチド処理した後の、ＥＬＩＳＡ ｐｌｕｓキットによるアポトーシス検出の結果を示すグラフである。
【図９】
図９は、種々の濃度の天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）もしくは種々の濃度のｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）又はポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）に７２時間接触させた後の線維芽細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖を示すグラフである。
【図１０】
図１０はポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）及びポリペプチド６１〜７５の、ＰＣ−３細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖に対する７２時間後の効果を示すグラフである。
【図１１】
図１１はポリペプチド２２〜３６及びポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）の、ＰＣ−３細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖に対する７２時間後の効果を示すグラフである。
【図１２】
図１２はヌードマウスに移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ （ＭＬＬ）腫瘍に対するｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の抗腫瘍効果の確認に関する研究Ｎｏ． ＭＬＬ−１の結果を示すグラフである。
【図１３】
図１３はヌードマウスに移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ （ＭＬＬ）腫瘍に対するｒＨｕＰＳＰ９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の抗腫瘍効果の確認に関する研究Ｎｏ． ＭＬＬ−２の結果を示すグラフである。
【図１４】
図１４はｒＨｕＰＳＰ９４で処理したヌードマウスの腫瘍容量（腫瘍の成長鈍化）を示すグラフである。
【図１５】
図１５はデカペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３） で処理したヌードマウスの腫瘍容量（腫瘍の成長鈍化）を示すグラフである。
【図１６】
図１６は対照スクランブルド・ポリペプチド（ＰＢ１１１）で処理したマウスの腫瘍容量（腫瘍の成長鈍化）を示すグラフである。
【図１７】
図１７は天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）で処理したマウスの腫瘍容量（腫瘍の成長鈍化）を示すグラフである。
【図１８】
図１８は、ＭＴＳ ［３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩］試験で計測した、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５）のＰＣ−３細胞に対する７２時間処理後のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図１９】
図１９はＭＴＳ試験で計測した、天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）及びＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）（ＧＭＰ―優良製造規範―グレード）のＰＣ−３細胞に対する４８時間処理後のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２０】
図２０はＭＴＳ試験で計測した、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）（ＧＭＰグレード）のＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ）に対する７２時間処理後のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２１】
図２１はＭＴＳ試験で計測した、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）（ＧＭＰグレード）のＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ）に対する４８時間又は７２時間処理後のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２２】
図２２は［３Ｈ］−チミジン取り込み試験で計測した、デカペプチド（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：３）、ポリペプチド７〜２１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）のＰＣ−３細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２３】
図２３は［３Ｈ］−チミジン取り込み試験で計測した、デカペプチド（ＳＥＱＩＤ ＮＯ：３）、ポリペプチド７〜２１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）のＰＣ−３細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２４】
図２４は［３Ｈ］−チミジン取り込み試験で計測した、ＰＣ−３細胞に対する７２時間処理後の天然ＰＳＰ９４ （ｎＰＳＰ９４）のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２５】
図２５はポリペプチドＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はドキソルビシンでＰＣ−３細胞を処理した後のＤＮＡ断片化を示すゲル電気泳動パターンである。
【図２６】
図２６はヌードマウスに異種移植したヒトＰＣ−３腫瘍に対するＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）（０．１μｇ／ｋｇ／日及び１０μｇ／ｋｇ／日）のｉｎ ｖｉｖｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２７】
図２７はヌードマウスに異種移植したヒトＰＣ−３腫瘍に対するＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）（１０μｇ／ｋｇ／日〜１０００ μｇ／ｋｇ／日、静脈内又は腹腔内投与）のｉｎ ｖｉｖｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２８】
図２８はＤｕｎｎｉｎｇ ＭＡＴ−ＬｙＬｕ腫瘍を移植したＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットに対するポリペプチド７〜２１ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、ＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はポリペプチド７６〜９４ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）（用量１μｇ／ｋｇ／日又は１０μｇ／ｋｇ／日）のｉｎ ｖｉｖｏ阻害活性を示すグラフである。
【図２９】
図２９はＤｕｎｎｉｎｇ ＭＡＴ−ＬｙＬｕ腫瘍を移植したＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットに対するＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はスクランブルド・ポリペプチド（用量１０μｇ／ｋｇ／日又は１００μｇ／ｋｇ／日）のｉｎ ｖｉｖｏ阻害活性を示すグラフである。
【図３０】
図３０はＤｕｎｎｉｎｇ ＭＡＴ−ＬｙＬｕ腫瘍を移植したＣｏｐｅｎｈａｇｅｎラットをＰＣＫ３１４５ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）又はスクランブルドポリペプチドで処置（用量１０μｇ／ｋｇ／日又は１００μｇ／ｋｇ／日）した後１８日目の腫瘍重量を示すグラフである。
【図３１】
図３１はＰＣ−３腫瘍細胞を移植したヌードマウスに対するＰＣＫ３１４５とタキソテール（すなわちドセタキセル）の併用治療の腫瘍増殖抑制効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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