(57)【要約】本発明は騒音性聴力損失の防止における周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカー、特にラモトリジンの使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
騒音性聴力損失を防止するための薬剤の製造における周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーもしくはその医薬上許容される酸付加塩の使用。
【請求項２】
周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーがラモトリジンもしくはその医薬上許容される酸付加塩である請求項１記載の使用。
【請求項３】
騒音性聴力損失に苦しんでいる、もしくはその影響を受けやすい患者において前記障害を防止するための方法であって、当該患者に治療有効量の周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーもしくはその医薬上許容される酸付加塩を投与することを含む方法。
【請求項４】
周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーがラモトリジンもしくはその医薬上許容される酸付加塩である請求項３記載の方法。
【請求項５】
騒音性聴力損失の防止において使用するための、１またはそれ以上の許容される担体もしくは希釈剤と一緒に周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーもしくはその医薬上許容される酸付加塩を含む、医薬処方。
【請求項６】
周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーがラモトリジンもしくはその医薬上許容される酸付加塩である請求項５記載の医薬処方。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、周波数依存性電位活性化（ｖｏｌｔａｇｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ）ナトリウムチャネルブロッカーの新規使用に関する。特に、本発明は３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンおよびその医薬上許容される酸付加塩の新規使用に関する。
【０００２】
（従来技術）
周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカー活性を示す化合物には欧州特許出願第００２１１２１号明細書、国際特許出願第９７／０９３１７号明細書、国際特許出願第９８／３８１７４号明細書、国際特許出願第９９／３２４６２号明細書および国際特許出願第００／１２４８８号明細書に記載されている化合物が含まれる。
Ｓｉｍｐｓｏｎら，Ｔｈｅ　Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｍｏｔｒｉｇｉｎｅ，　ａｎ　Ａｎｔｉｅｐｌｉｌｅｐｔｉｃ　Ｄｒｕｇ，ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｉｎｎｉｔｕｓ（耳鳴りの治療における抗癲癇薬であるラモトリジンの評価），Ａｍ　Ｊ　Ｏｔｏｌ　１９９９；２０：第６２７〜６３１頁は、耳鳴りの治療においてラモトリジンが有用である可能性を示唆している。
【０００３】
ＮＩＨＬ（騒音性聴力損失）は、被曝集団において３０〜５０％の罹患率を示す最も頻回に発生する職業病である。現時点でＮＩＨＬを防止するために有効な唯一の方法は、対象がイヤプロテクターのような何らかの形状の物理的遮蔽具を装着することである。しかしイヤプロテクターは対象が騒音に曝される可能性があることを意識しているときにしか有用ではなく、例えば戦場状態におけるような一部の状況では、騒音への暴露は突然かつ予想外な可能性がある。さらに、イヤプロテクターの使用はその全範囲に渡って対象の聴力に影響を及ぼし、しばしば例えば会話のような静かな雑音も聞こえなくさせる。特に、正常な聴覚機能には影響を及ぼさない急性もしくは慢性騒音性聴力損失の結果として発生する難聴から耳を保護する必要がある。
【０００４】
（発明の開示）
この度、意外にも、周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカー、特に３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンおよびその医薬上許容される酸付加塩が騒音性聴力損失（ＮＩＨＬ）の防止において有効であることが見出された。
従って、本発明は騒音性聴力損失（ＮＩＨＬ）を防止するための薬剤の製造における周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーもしくはその医薬上許容される酸付加塩の使用を提供する。
【０００５】
本明細書中、以下、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンをラモトリジン（ｌａｍｏｔｒｉｇｉｎｅ）と称する。
本明細書中、騒音性聴力損失（ＮＩＨＬ）の防止に関連して使用する「防止」なる語は聴力損失の進行を防止する、または改善することを意味する。
本明細書中で使用する騒音性聴力損失（ＮＩＨＬ）なる語は、聴覚系の過剰刺激の結果として生じる聴力における感度および分解能の損失が顕著である聴覚性能の損失を示すことを意図とする。特に、「ＮＩＨＬ」なる語は騒音刺激への持続性もしくは急性暴露の結果として蝸牛神経の損傷から発生した聴覚性能における損失を意味することを意図とする。
【０００６】
電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーは、ナトリウムチャネルが開いているときのナトリウム電流の流量を減少させるような方法で電位活性化ナトリウムチャネルと相互作用することによって機能すると考えられている。ここで電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーと関連して使用する「周波数依存性」なる語は、ナトリウムチャネルとの相互作用がチャネルが開いてその後に不活化する速度に依存する化合物に及ぶことを意図とする。従って周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーの作用はそれに伴ってナトリウムチャネルが開いて不活化する周波数に依存して変動するであろう。
【０００７】
電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーの周波数依存性を測定するには、そのブロッカーの存在下および不在下で、ナトリウムチャネルをある範囲の周波数で繰返し活性化する必要がある。これは、全細胞電位固定（ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌｌ　ｖｏｌｔａｇｅ−ｃｌａｍｐ）法を使用してナトリウム電流を導出するために脱分極パルスを適用し、電位活性化ナトリウムチャネルを含有する細胞型から、例えば、組換えヒト脳ＩＩＡ型ナトリウムチャネルを発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞から得ることができる。脱分極の周波数が増加するにつれて遮断の程度、即ち周波数依存性が増大する。これとは逆に、非周波数依存性ブロッカーは適用された完全周波数範囲に対して同一レベルの遮断を生じさせる。周波数依存性の測定法に関するより詳細な説明については、Ｒａｇｓｄａｌｅ　ＤＳ，Ｓｃｈｅｕｅｒ　Ｔ，Ｃａｔｔｅｒａｌｌ　ＷＡ，Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ａｎｄ　ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　ＩＩＡ　Ｎａ＋　ｃｈａｎｎｅｌｓ，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ａ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ，ｂｙ　ｌｏｃａｌ　ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ，ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ，ａｎｄ　ａｎｔｉｃｏｎｖｕｌｓａｎｔ　ｄｒｕｇｓ（局所麻酔薬、抗不整脈薬および抗痙攣薬による哺乳類細胞系において発現したＩＩＡ型ナトリウムチャネルの周波数依存性および電位依存性の阻害），Ｍｏｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　１９９１　Ｎｏｖ；４０（５）：７５６−６５．を参照。
【０００８】
周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーの適当な例には、欧州特許出願第００２１１２１号明細書、国際特許出願第９７／０９３１７号明細書、国際特許出願第９８／３８１７４号明細書、国際特許出願第９９／３２４６２号明細書および国際特許出願第００／１２４８８号明細書（これらすべてを出典明示により本明細書の一部とする）に記載されているものが含まれる。欧州特許第００２１１２１号明細書に記載されている適当な化合物はラモトリジンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。国際特許出願第９７／０９３１７号明細書に記載されている適当な化合物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。国際特許出願第９８／３８１７４号明細書に記載されている適当な化合物は、３−（２，３，５−トリクロロ−フェニル）−ピラジン−２，６−ジアミンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。国際特許出願第９９／３２４６２号明細書に記載されている適当な化合物は、５−アミノ−６［２，３，５−トリクロロフェニル］−１，２，４−トリアジンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。国際特許出願第００／１２４８８号明細書に記載されている適当な化合物は、２，６−ジアミノ−５−カルボキサミド−３−（２，３，５−トリクロロフェニル）ピラジンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。好ましい周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーはラモトリジンおよびその医薬上許容される酸付加塩である。
【０００９】
適当な医薬上許容される酸付加塩には有機塩および無機塩の両方を用いて形成されたものが含まれる。このような塩の例には、塩酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、琥珀酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、オキサロ酢酸およびイセチオン酸が含まれる。
下記に記載する実施例で報告するように、周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーであるラモトリジンの急性騒音暴露に対する耳保護作用をモルモットモデルにおいて測定した。
【００１０】
蝸牛自発的な騒音シグナルの分析により測定されるように、ラモトリジンの、蝸牛神経の正常なグロス自発的活性に対する効果がないのと同時に８−３０ｋＨｚにわたって蝸牛の正常な感度に対する効果がないのは、正常な聴覚機能に対して識別可能な効果がないことを明らかにするものである。
実験結果はさらに、騒音への急性暴露によって惹起される閾値（検出可能な最小電気生理学的応答を生成するために必要とされた音響レベル）上昇は、騒音暴露の前にラモトリジンを投与した場合には改善できることを証明している。さらにその上、これらの結果は騒音暴露前のラモトリジンの投与が蝸牛神経において促進される活動の総量を減らす可能性があることを確証している。適切にも、蝸牛神経において促進される活動の総量は３０％を超えるまで、好ましくは５０％を超えるまで減少させられる。
【００１１】
理論に束縛されるつもりはないが、ラモトリジンは周波数依存方法で開放状態にあるチャネル数を減少させることによって蝸牛神経における電位活性化ナトリウムチャネルで機能すると考えられている。ラモトリジンはこれらのチャネルの不活性化状態を安定化かつ延長させることによってこれを達成すると考えられる。これは蝸牛神経繊維の過剰刺激を減少させるので、これらの神経繊維への興奮毒性損傷を防止または改善する。
従って、本発明はさらに騒音性聴力損失に苦しんでいる、もしくはその影響を受けやすい患者において前記障害を防止するための方法を提供するが、その方法は患者に対する治療有効量の周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーもしくはその医薬上許容される酸付加塩の投与を含む。
【００１２】
本発明で使用するための化合物は、遊離塩基として計算した場合に０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ体重／日、適当には０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ（体重）／日およびより特別には１〜１０ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の用量で投与することができる。成人のための用量範囲は、遊離塩基として計算した場合に、例えば３５〜１２００ｍｇ／日、好ましくは１０〜５００ｍｇ／日または２０〜２００ｍｇ／日のように一般に８〜２０００ｍｇ／日である。成人のラモトリジンの特に適当な用量範囲は１００〜４００ｍｇ／日である。
これらの化合物を未加工薬品として投与することが可能ではあるが、医薬処方として提供することが好ましい。本発明の処方は、１またはそれ以上のそのために許容される担体もしくは希釈剤および所望によりその他の治療成分と一緒に、ラモトリジンなどの周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーおよびその医薬上許容される酸付加塩を含む。担体は、処方の他の成分と適合するという意味において「許容され」なければならず、その被投与者にとって有害であってはならない。
【００１３】
処方には、経口投与、非経口（例えば注射もしくはデポ剤錠による皮下、皮内、髄腔内、例えばデポ剤剤および静注を含む筋肉内）投与、直腸投与および局所（皮膚、口腔内および舌下を含む）投与および蝸牛内灌流／注入のために適当な調製物が含まれるが、最も適当な投与形路は例えば被投与者の状態に左右される可能性がある。処方は、好都合にも単位剤形で提供することができ、製薬の分野において公知のいずれかの方法で調製することができる。すべての方法には、化合物（有効成分）を１またはそれ以上の副成分を構成する担体と結合する工程が含まれる。一般に、処方は有効成分を液状担体もしくは細かく粉砕した固形担体と一様かつ密接に結合する工程、およびその後必要であればその生成物を所望の調製物へ成形する工程によって調製される。
【００１４】
経口投与のために適した本発明の処方は、所定量の有効成分を各々が含有している例えばカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤のような別個の単位；散剤もしくは顆粒剤；水性液もしくは非水性液中の溶液または懸濁液；または水中油型液体乳剤もしくは油中水型液体乳剤として提供できる。有効成分はさらにまたボーラス、舐剤もしくはペースト剤として提供することもできる。
錠剤は、所望により１またはそれ以上の副成分と一緒に圧縮もしくは成形によって製造することができる。圧縮錠は適当な機械内で例えば散剤もしくは顆粒剤のような易流動形にある有効成分を所望により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、潤滑性の界面活性剤もしくは分散剤と混合して圧縮することによって調製できる。成形錠剤は、不活性液状希釈剤で湿らせた粉末化した化合物の混合物を適当な機械で成形することによって作製できる。錠剤は、所望によりコーティングもしくは刻印することができ、さらにその中の有効成分の緩徐もしくは制御された放出を提供できるように調製することができる。
【００１５】
非経口投与のための処方には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および調製物を所定の被投与者の血液と等張性にさせる溶質を含有することのできる水性および非水性滅菌注射用液；並びに懸濁剤および増粘剤を含むことのできる水性および非水性滅菌懸濁液が含まれる。これらの処方は、例えば密封されたアンプルおよびバイアルのような１回用量もしくは複数回用量容器で提供することができ、使用直前に例えば注射用水のような滅菌液状担体の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。すぐに使用できる注射用液および懸濁液は上記で説明した種類の滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製することができる。
【００１６】
直腸投与用の処方は、例えばカカオ脂、硬質脂肪もしくはポリエチレングリコールのような通例の担体を含む坐剤として提供できる。
例えば口腔内もしくは舌下のように口腔において局所適用するための調製物には例えば蔗糖およびアカシアもしくはトラガカントのような風味を付けた基剤中に有効成分を備えるトローチ剤、および例えばゼラチンおよびグリセリンまたは蔗糖およびアカシアのような基剤中に有効成分を備える香錠が含まれる。
【００１７】
本発明の化合物は、さらにまたデポ調製物として調製することもできる。このような長時間作用性処方は埋め込み（例えば皮下もしくは筋肉内）または筋肉内注射によって投与することができる。従って、例えば本発明の化合物は適当な高分子もしくは疎水性物質（例えば許容される油中の乳濁剤のようなもしくはイオン交換樹脂、または例えばやや溶けにくい塩としてのようなやや溶けにくい誘導体として）を用いて調製することができる。
特に上記の成分に加えて、処方には問題の処方の型に関して当分野において従来型である他の物質を含むことができ、例えば経口投与のために適当な調製物は着香剤を含むことができる。
【００１８】
化合物は、例えば他の周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーのような他の治療剤と組み合わせて使用することができる。化合物を他の治療剤と組み合わせて使用する場合は、化合物はいずれかの好都合な経路によって連続的もしくは同時のいずれかで投与することができる。従って本発明は、また別の態様では、騒音性聴力損失を防止するためのまた別の治療薬とともに周波数依存性電位活性化ナトリウムチャネルブロッカーまたはその医薬上許容される誘導体を備える組み合わせを提供する。
上記に挙げた組み合わせは、好都合にも医薬処方の形状で使用するために提供することができる、従って医薬上許容される担体もしくは賦形剤と一緒に上記で定義したような組み合わせを備える医薬処方は本発明のまた別の態様を備える。このような組み合わせの個別コンポーネントは、別個の、または結合された医薬処方で連続的もしくは同時のいずれかで投与することができる。
【００１９】
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンは国際特許出願第９７／０９３１７号明細書に記載されている実施例に従って調製することができる。３−（２，３，５−トリクロロ−フェニル）−ピラジン−２，６−ジアミンは国際特許出願第９８／３８１７４号明細書に記載されている方法に従って調製することができるが、特に実施例１を参照。５−アミノ−６［２，３，５−トリクロロフェニル］−１，２，４−トリアジンは国際特許出願第９９／３２４６２号明細書に記載されている方法に従って調製することができるが、特に実施例を参照。２，６−ジアミノ−５−カルボキサミド−３−（２，３，５−トリクロロフェニル）ピラジンは国際特許出願第００／１２４８８号明細書に記載されている方法に従って調製することができるが、特に実施例１を参照。
【００２０】
ラモトリジンは、式（Ｉ）：
【化１】
2004510737.tif 000002
の化合物を環化し、所望により、このようにして入手したラモトリジンを医薬上許容される酸付加塩に変換する工程を含む方法によって調製することができる。
【００２１】
環化は、典型的には例えば水酸化カリウムのような強塩基の存在下で例えばメタノールもしくはエタノールのような好ましくはＣ１−４アルカノールのようなアルカノール中での環流下で式（Ｉ）の化合物を加熱することによって実施される。
この方法は、例えば欧州特許出願第００２１１２１号明細書の実施例１に記載されている通りに実施することができる。ラモトリジンを酸付加塩へ変換するその後の任意の工程は、例えば周囲温度で適当な酸を用いた処理による従来型方法によって実施する。イセチオン酸を含む塩は、例えば欧州特許出願第０２４７８９２号明細書の中の特に実施例３に記載されている通りに調製できる。式（Ｉ）の開始化合物は米国特許第３６３７６８８号明細書に記載されている方法によって調製できる。
【００２２】
本発明を下記の実施例でさらに詳細に説明する。
（生物学的実施例）
実験の目的
これらの試験の目的は、ラモトリジン（ＬＴＧ）がモルモットモデルにおける急性騒音暴露に対して何らかの耳保護作用を有しているかどうかを確立することであった。
【００２３】
ＬＴＧ用量レベルの正当性理由
ラットにおけるデータは、最大上電気ショック（ＭＥＳ）モデルにおいて有効経口用量（ＥＤ５０）が６．８ｍｇ／ｋｇであることを証明している。このデータおよびモルモットにおける薬物動態データ（Ｐａｒｓｏｎｓら，１９９５）に基づいて、イリゲーション用の滅菌水中に溶解させた単回経口用量２０ｍｇ／ｋｇ（４ｍｇ／ｍＬ）を投与した。全溶液は投与当日に新しく調製し、投与間隔中には光線から保護して２〜８℃で保存した。
【００２４】
外科的処置
０．５ｍＬ／ｋｇのメデトミジンの筋肉内注射、およびその後の約１０分後の６ｍＬ／ｋｇのフェンタニルの腹腔内注射を使用して鎮静を達成した（手術のために十分な鎮静を測定するために足の反射消失を使用した）。実験中には必要に応じて両剤の追加用量を投与した。
実験期間中は、動物は専用のパースペックス（ｐｅｒｓｐｅｘ）製チャンバー内に腹臥位（左耳を上向きに）で配置した。中心部体温は３７℃±１℃に維持し、血液酸素付加量および心拍数を測定するために非侵襲性パルスオキシメーターを前足の上に配置した。各実験を通してどちらもモルモットの正常限界内に維持された。
【００２５】
導出電極と薬物デリバリーカテーテルの組み合わせは外科用顕微鏡を用いて骨胞を通して正円窓窩内へ配置した。体液が中耳腔内へ流入するのを防止するためにドリルホールの周囲に糸芯を配置した。その後引き続いての電気生理学的記録のために蝸牛信号を増幅（×　１００　０００）させて帯域フィルター（０．１ＫＨｚ−５ＫＨｚ）を通過させた。本実験では、感染症または異常な発達の証拠を有する動物は使用しなかった。
【００２６】
聴覚評価
ラモトリジン（ＬＴＧ）の潜在的な耳保護作用を調査するために下記の２種の聴覚記録法を使用した：
ｉ）　蝸牛神経活動の総集合自発活動（ＥＳＡＣ）に対する記録システム
蝸牛神経（ＣＮ）繊維の総集合自発活動（ＥＳＡＣ）の測定は、蝸牛によって発生させられた時間信号上に高速フーリエ変換（ＦＦＴ）を実施することによって実行した。これは増幅器からＰＣへ搬送された。その後μＶ　ｒｍｓ２／Ｈｚとして明示されるＣＮ活性の平均スペクトルを入手するために出力スペクトルが平均化された。ＥＳＡＣスペクトル間の出力における相違はｄＢで計算されたが［ｄＢ＝１０　ｌｏｇ（Ｐ１／Ｐ２）］、式中Ｐ１は前処理ＦＦＴであり、Ｐ２は所定の周波数範囲に渡る後処理ＦＦＴである。
ｉｉ）　複合活動電位（ＣＡＰ）に対する記録システム
蝸牛神経複合活動電位（ＣＡＰ）は個別音響刺激に反応して生成させた。これを使用して、ＣＡＰ潜伏期間（ミリ秒）および振幅（μボルト）における変化を測定することによって聴覚閾値における対照および処理関連変化の両方を測定した。
【００２７】
５ミリ秒間の音の「ピッ」という刺激はコンピューターで８、１６、２４および３０ＫＨｚで発生させられ、減衰器へ搬送された（１ｄＢの分解能）。この「ピッ」という音はその後、蝸牛管へ結合された耳鏡の内側へ配置された音響励振装置として機能するブリュエル・ケアー（Ｂｒｕｅｌ　ａｎｄ　Ｋｊａｅｒ）社製４１９２（マイクロホン）へ搬送された。ＣＡＰの平均化は×５０〜１００回の間で実施し、ＣＡＰ閾値は記録された時間信号の目視検査により測定した。精度は、約１μＶのＣＡＰ検出基準を使用すると典型的には１〜３ｄＢであった。
【００２８】
実施例１
ラモトリジン（ＬＴＧ）についての血漿および外リンパの検定
ＬＴＧの耳保護特性を確立するために、モルモット外リンパおよび血漿内へのＬＴＧの透過を確立するために薬物動態評価試験を設計した。計１７匹の健常成熟雄性アルビノモルモットを使用した。血漿および外リンパサンプルは各測定時点に３匹の動物から採取した：投与１、２、５、１０および１５時間後。比較のために２匹の未処理対照動物もまたサンプル採取した。
【００２９】
実施例１の実験設計
血漿についてのヘパリン加血液サンプル（１０ｍＬまで）は心臓穿刺または頸静脈を通しての瀉血のどちらかで採取し、後の分析のために冷凍保存（−２０℃）した。末梢血サンプルを採取した後、動物に過量の麻酔薬を投与し、断頭した。骨胞を切除し、全組織および体液を除去するために完全に洗浄した。その後ガラス製マイクロピペットを使用して正円窓膜に穿刺し、静かに吸引することにより約６μＬの外リンパを採取し、後の分析のために冷凍保存（−２０℃）した。血漿および外リンパ両方におけるＬＴＧの濃度は紫外線（ＵＶ）検出を伴う高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用するタンパク質沈殿抽出法を使用して測定した。ＬＴＧ保持時間は５．４分間であり、ピーク面積を使用して定量を実施した。
【００３０】
実施例１の結果
ラモトリジン（ＬＴＧ）は血漿中および外リンパ中の両方で検出され、良好な全身性暴露および内耳内への透過を示していた（図１）。本試験で使用した測定時点に基づくと、外リンパ中で検出されたＬＴＧの濃度は血漿中で所見された濃度の約２倍、観察された平均最高濃度（Ｃｍａｘ）は６．１４μｇ／ｍＬ、最高濃度のおおよその平均時間（Ｔｍａｘ）は２時間であった（血漿中平均Ｃｍａｘは３．５９μｇ／ｍＬ、Ｔｍａｘは１時間であった）。これらの結果は、標的臓器（蝸牛）によるＬＴＧの優先的取り込みを証明している。血漿中および外リンパ中平均ＬＴＧ濃度は１５時間のサンプリング期間後に相当に高いままであり（各々１および３．２μｇ／ｍＬ）、これは類似する消失速度を示していた。
【００３１】
実施例２
正常聴覚機能にラモトリジン（ＬＴＧ）が及ぼす作用
実施例２の実験設計
ＬＴＧが正常聴覚機能に及ぼす作用を測定するために、計２０匹の健常成熟雄性アルビノモルモットを２群に分けた：対照群（ｎ＝９）および手術の約２時間前に２０ｍｇ／ｋｇ　ＬＴＧ（ｎ＝１１）を投与した処理群。
８、１６、２４および３０ＫＨｚでのＣＡＰ閾値は手術直後および約１５分後に再び測定した。
【００３２】
実施例２の結果
図２は測定した４種の周波数（８、１６、２４および３０ＫＨｚ）でのＣＡＰ閾値変化にＬＴＧが及ぼす作用を示している。試験した４種の周波数のいずれにおいても対照群とＬＴＧ処理動物群との間で統計的有意差は所見されなかった。
【００３３】
実施例３
急性騒音暴露後のラモトリジン（ＬＴＧ）による耳の保護
実施例３の実験設計
総計１４匹の健常成熟雄性アルビノモルモットを各同数の２群に分けた：対照群（騒音単独）および２０ｍｇ／ｋｇ　ＬＴＧ処理群（騒音暴露の約２時間前に投与）。
ＣＡＰ閾値およびＥＳＡＣは手術直後および約１５分後に再びに測定した。その後動物はフィルター濾過した（５〜２０ＫＨｚ）自由音場騒音（約１１０ｄＢ　ＳＰＬ）に１５分間暴露させ、その間に５分間隔でＥＳＡＣ測定を実施した。騒音後ＣＡＰ閾値およびＥＳＡＣ測定を行い、その後に動物を屠殺した。
【００３４】
実験３の結果
図３は、ＬＴＧが測定した４種の周波数（８、１６、２４および３０ＫＨｚ）でのＣＡＰ閾値変化に及ぼした作用を示している。閾値変化プロット図の外観はフィルター濾過された騒音刺激のスペクトル強度の差を反映している（最高騒音刺激強度は８ＫＨｚ〜１６ＫＨｚに向けて発生された）。全例において平均閾値はＬＴＧ処理動物群における方が高く、８ＫＨｚで統計的有意差に達した（ｐ＜０．０５）。
【００３５】
図４は、騒音暴露前、中および後のＥＳＡＣにＬＴＧが及ぼす作用を示している（ＥＳＡＣ測定のためにＬＴＧ処理動物６匹だけを使用した）。騒音対照群と比較して、約２ｄＢの出力スペクトルにおける統計的有意な減少（Ｐ＜０．０００１）は騒音暴露中に２０ｍｇ／ｋｇ　ＬＴＧ群で認められた。この統計的有意な減少は騒音暴露後期間中に持続した（Ｐ＜０．０００１）。騒音暴露前にこれら２群間で統計的有意差は認められなかった。
【００３６】
（参考文献）
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Ｐａｒｓｏｎｓ　Ｄ．Ｎ．，Ｄｉｃｋｉｎｓ，Ｍ　ａｎｄ　Ｍｏｒｌｅｙ　Ｔ．（１９９５），Ｌａｍｏｔｒｉｇｉｎｅ：Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｄｒｕｇｓ，Ｆｏｕｒｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ（抗癲癇薬であるラモトリジン：吸収、分布および排泄。第４版），Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ．
【００３７】
実施例の医薬組成物
実施例４：　ラモトリジン医薬組成
経口投与用のラモトリジン錠剤は下記の成分を用いて調製することができる：
ラモトリジン　１５０ｍｇ
乳糖　２００ｍｇ
コーンスターチ　５０ｍｇ
ポリビニルピロリドン　４ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム　４ｍｇ
有効成分を乳糖およびスターチと混合し、ポリビニルピロリドン水溶液を用いて粒状化する。生じた顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと混合し、圧縮して平均重量４０８ｍｇの錠剤にする。
【００３８】
明細書およびクレームから構成される本特許出願は、あらゆる後の出願に対し優先権への基礎として使用できる。当該の後の出願のクレームはここに記載したいかなる特徴または特徴の組み合わせに向けることができる。これらは生成物、組成物、プロセスもしくは使用クレームの形状を取ることができ、さらに例として、制約を持たず、記載の１項以上のクレームを含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】血漿中および外リンパ中での３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンの薬物動態プロフィールを示す。
【図２】聴覚刺激の不在下で３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンが蝸牛神経の化合物活動電位閾値変動へ及ぼす作用を示す。
【図３】離散的音響刺激（１１０ｄＢ　ＳＰＬ）に反応して３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンが蝸牛神経の化合物活動電位閾値変動へ及ぼす作用を示す。
【図４】騒音暴露（１１０ｄＢ　ｓｐｌ）の前、中および後に３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンが蝸牛神経繊維の総集合自発活動へ及ぼす作用を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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