(57)【要約】フェルーラ・アサフォエジダ（Ｆｅｒｕｌａ ａｓａｆｏｅｄｉｄａ Ｌ．）の低級アルコール−可溶性抽出物またはガルバニック酸、カラタビシノール、ウンベリプレニン、ファーネシフェロールＢ、またはファーネシフェロールＣを初めとする前記抽出物から分離した化合物を含む医薬組成物は有効な抗癌活性を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗癌活性を有するアギのアルコール−可溶性抽出物。
【請求項２】
前記アギが、フェルーラ・アサフォエジダ（Ｆｅｒｕｌａ ａｓｓａｆｏｅｄｉｄａ Ｌ．）、フェルーラ・コノカウラ（Ｆｅｒｕｌａ ｃｏｎｏｃａｕｌａ Ｅｕｇ）、フェルーラ・ナルテックス（Ｆｅｒｕｌａ ｎａｒｔｈｅｘ Ｂｏｉｓｓｉｅｒ）、フェルーラ・フォエチダ（Ｆｅｒｕｌａ ｆｏｅｔｉｄａ Ｒｅｇｅｌ）、フェルーラ・ボレアリス（Ｆｅｒｕｌａ ｂｏｒｅａｌｉｓ Ｋ）、フェルーラ・フカネシス（Ｆｅｒｕｌａ ｆｕｇｋａｎｅｓｉｓ Ｋ．Ｍ． Ｓｈｅｎ）、フェルーラ・シンキアンゲンシス（Ｆｅｒｕｌａ ｓｉｎｋｉａｎｇｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｍ．Ｓｈｅｎ）、およびフェルーラ・リギダ（Ｆｅｒｕｌａ ｒｉｇｉｄａ Ｗ）からなる群から選ばれる植物から由来するものであることを特徴とする請求項１記載のアルコール−可溶性抽出物。
【請求項３】
前記アギが、フェルーラ・アサフォエジダ（Ｆｅｒｕｌａ ａｓｓａｆｏｅｔｉｄａ Ｌ．）から由来するものであることを特徴とする請求項１記載のアルコール−可溶性抽出物。
【請求項４】
前記アルコールが、メタノール、エタノールおよびブタノールからなる群から選ばれるものであることを特徴とする請求項１記載のアルコール−可溶性抽出物。
【請求項５】
前記アルコールがメタノールである請求項３記載のアルコール−可溶性抽出物。
【請求項６】
請求項１、２または３のアルコール−可溶性抽出物および薬剤学的に許容可能な担体を含む、癌の予防または治療用の医薬組成物。
【請求項７】
前記アルコールがメタノールである請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
ガルバニック酸、カラタビシノール、ウンベリプレニン、ファーネシフェロールＢ、ファーネシフェロールＣおよびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなる群から選ばれる少なくとも一つの成分、および薬剤学的に許容可能な担体を含む癌疾患の予防または治療用の医薬組成物。
【請求項９】
前記癌が肺癌、卵巣癌、黒色腫または結腸癌である請求項６、７または８の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、アギ（阿魏， Ｆｅｒｕｌａｅ Ｒｅｓｉｎａ）から分離した少なくとも一つのセスキテルペン（ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅ）化合物を含む抗癌剤組成物に関する。
【０００２】
背景技術
培養された癌細胞株を用いた試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）細胞増殖阻害試験を行うことにより、植物および微生物の抽出物から分離した化合物を選別する方式はタキソール（ｔａｘｏｌ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）およびカンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）のような抗癌薬物の開発においてある程度成功を遂げた。
【０００３】
一方、東洋医学で用いられるアギ（Ｆｅｒｕｌａｅ Ｒｅｓｉｎａ）は、中国および中央アジアで自生するフェルーラ・アサフォエジダ（Ｆｅｒｕｌａ ａｓａｆｏｅｄｉｄａ Ｌ．）およびセリ科（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）の同属植物の根および根茎から得た樹脂状の滲出物を乾燥したものをいう（Ｃｈｕｎｇ， Ｂ． Ｓ． ｅｔ ａｌ．， （１９９８） ＤＯＨＡＥＨＹＡＮＧＹＡＫＤＡＩＳＡＪＥＯＮ （ｐｌａｎｔ ｐａｒｔ）、Ｙｏｕｎｇｒｉｍ Ｐｒｅｓｓ， ｐｐ４２２−４２３）。この滲出物は、気管支炎、喘息および百日咳を治療するために用いられており（Ｔｅｔｓｕｏ， Ａ．， （１９８５） ＣＨＵＮＧＹＡＫＤＡＩＳＡＪＥＯＮ， Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｐｒｅｓｓ， Ｖｏｌ． １， ｐ２）；フェルーラ・アサフォエジダから分離したガルバニック酸（ｇａｌｂａｎｉｃ ａｃｉｄ）とそのナトリウム塩は赤血球および血小板の凝集反応を抑制すると知られており（Ｍａｎｓｕｒｏｖ Ｍ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， （１９９０）Ｆａｒｍａｋｏｌ Ｔｏｋｓｉｋｏｌ， ５３， ｐ５１； Ｍａｎｓｕｒｏｖ Ｍ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｆａｒｍａｋｏｌ Ｔｏｋｓｉｋｏｌ ５１， ｐ４７）、また、四塩化メタンの注射によって引起こされた肝毒性を解消するのに効果的であると知られている（Ｓｙｒｏｖ Ｖ． Ｎ． ｅｔ ａｌ．， （１９９０） Ｆａｒｍａｋｏｌ． Ｔｏｋｓｉｋｏｌ．， ５３， ｐ４１）。
【０００４】
本発明者らは、高い効能を有する新しい抗癌剤を開発するために努力し、アギから分離したガルバニック酸とその他セスキテルペン化合物がヒトの癌細胞株の増殖に対して強力な阻害活性を示すことを発見した。
【０００５】
発明の開示
したがって、本発明の目的は、アギから由来する強力な抗癌剤を提供することである。
【０００６】
本発明の他の目的は、前記抗癌剤を含む、癌の予防または治療のための医薬組成物を提供することである。
【０００７】
本発明のまた他の目的は、ガルバニック酸、カラタビシノール、ウンベリプレニン、ファーネシフェロールＢ、ファーネシフェロールＣおよびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなる群から選ばれる少なくとも一つの成分、および薬剤学的に許容可能な担体を含む、癌疾患の予防または治療用の医薬組成物を提供することである。
【０００８】
本発明の一実施態様によって、アギを低級アルコールで処理して得られたアルコール−可溶性抽出物が提供される。
【０００９】
本発明の他の実施態様によって、前記抽出物から分離したガルバニック酸、カラタビシノール、ウンベリプレニン、ファーネシフェロールＢ、ファーネシフェロールＣおよびこれらの薬剤学的に許容可能な塩が提供される。
【００１０】
発明を実施するための最良の形態
本発明のアルコール−可溶性抽出物は、フェルーラ・アサフォエチダ（Ｆｅｒｕｌａ ａｓｓａｆｏｅｔｉｄａ Ｌ．）またはフェルーラ・コノカウラ（Ｆｅｒｕｌａ ｃｏｎｏｃａｕｌａ Ｅｕｇ）、フェルーラ・ナルテックス（Ｆｅｒｕｌａ ｎａｒｔｈｅｘ Ｂｏｉｓｓｉｅｒ）、フェルーラ・フォエチダ（Ｆｅｒｕｌａ ｆｏｅｔｉｄａ Ｒｅｇｅｌ）、フェルーラ・ボレアリス（Ｆｅｒｕｌａ ｂｏｒｅａｌｉｓ Ｋ）、フェルーラ・フカネシス（Ｆｅｒｕｌａ ｆｕｋａｎｅｓｉｓ Ｋ．Ｍ． Ｓｈｅｎ）、フェルーラ・シンキアンゲンシス（Ｆｅｒｕｌａ ｓｉｎｋｉａｎｇｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｍ． Ｓｈｅｎ）、およびフェルーラ・リギダ（Ｆｅｒｕｌａ ｒｉｇｉｄａ Ｗ）のような同属植物から通常の方法に従って製造できる。
【００１１】
たとえば、フェルーラ・アサフォエジダから得たアギ（樹脂）を薄く切って日陰で乾燥する。その後、適当量の低級アルコール、たとえば、メタノール、エタノールまたはブタノール、好ましくは、１００％メタノールを、乾燥した切片に加え、混合物を３０〜１００、好ましくは、４０〜８０℃範囲の温度で３０分〜４８時間、好ましくは、１〜５時間環流−抽出する。抽出物を濾過し、減圧濃縮してアルコール−可溶性抽出物を得る。
【００１２】
ガルバニック酸（ｇａｌｂａｎｉｃ ａｃｉｄ）、カラタビシノール（ｋａｒａｔａｖｉｃｉｎｏｌ）、ウンベリプレニン（ｕｍｂｅｌｌｉｐｒｅｎｉｎ）、ファーネシフェロールＢ（ｆａｒｎｅｓｉｆｅｒｏｌ Ｂ）、ファーネシフェロールＣのようなセスキテルペン類を前記アルコール−可溶性抽出物から分離できる。クロロホルム、ジクロロメタンおよび酢酸エチルのような適切な有機溶媒、好ましくは、ジクロロメタンを用いた溶媒分画法を行うことにより、活性分画、好ましくは、ジクロロメタン可溶性分画が得られる。次いで、ヒト癌細胞株に対して阻害活性を示す分画を各々適当な溶媒混合液、好ましくは、５０：１〜１００：１（ｖ／ｖ）の混合比率を有するジクロロメタン−メタノール混合液を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって反復的に分画することにより、ガルバニック酸、カラタビシノール、ウンベリプレニン、ファーネシフェロールＢおよびファーネシフェロールＣを得、これらの構造は、下記式（１）、（２）、（３）、（４）および（５）の構造式によって各々示される。
【００１３】
【化１】
2004510823.tif 000002
【００１４】
各々の化合物は、Ａ５４９（ヒト肺癌細胞株）、ＳＫ−ＯＶ−３（ヒト卵巣癌細胞株）、ＳＫ−ＭＥＬ−２（ヒト黒色腫細胞株）、ＸＦ４９８（ヒトＣＮＳ癌細胞株）およびＨＣＴ−１５（ヒト結腸癌細胞株）などの人体起源癌細胞株を阻害すると明らかになったので、癌疾患の予防および治療のために効果的であることと期待される。
【００１５】
前記各化合物の薬剤学的に許容可能な塩は、アルカリ金属、たとえば、ナトリウムおよびカリウム、アルカリ土類金属、たとえば、マグネシウムおよびカルシウム、またはアンモニアまたは有機塩基、たとえば、ＴＥＡ、ピリジンおよびピコリンの塩であってもよい。
【００１６】
本発明の医薬剤形は、通常の方法のうちいずれかに従って製造することができる。剤形の製造において、活性成分を担体とともに混合または希釈するか、カプセル、におい袋（ｓａｃｈｅｔ）またはその他容器形態の担体に封入することが好ましい。担体が希釈剤として働く場合には、活性成分に対するビヒクル、賦形剤または媒質として作用する固体、半固体または液状物質であり得る。したがって、剤形は、錠剤、丸剤、粉末、におい袋、エリキシル、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エーロゾル、軟質または硬質ゼラチンカプセル、滅菌注射溶液、滅菌包装粉末などの形態であり得る。
【００１７】
適切な担体、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、スターチ、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラル油などを挙げることができる。剤形は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができる。本発明の組成物は、哺乳動物に投与された後、活性成分の迅速、遅速または遅延放出を提供するために当業界で公知の方法を用いて剤形化することができる。
【００１８】
さらに、本発明の医薬組成物は、経口、経皮、皮下、静脈または筋肉内投与を含む種々の経路を通じて投与され得る。ヒトの場合、アギから分離した前述の化合物の通常の１日投与量は０．００１〜１ｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０．０１〜０．１ｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１回または数回に分けて投与し得る。しかし、活性成分の実際投与量は治療する疾患、選択された投与経路、患者の年齢、性別および体重、および患者の症状を含む色々な関連因子を考慮して決定され、したがって、前記投与量は本発明の範囲を制限しない。
【００１９】
（実施例）
下記参考例、実施例および試験例は本発明をさらに詳細に説明するためのものであり、本発明の範囲を制限しない。
【００２０】
参考例：ヒト癌細胞株の増殖に対する阻害試験
Ａ５４９（ヒト肺癌細胞株）、ＳＫ−ＯＶ−３（ヒト卵巣癌細胞株）、ＳＫ−ＭＥＬ−２（ヒト黒色腫細胞株）、ＸＦ４９８（ヒトＣＮＳ癌細胞株）およびＨＣＴ−１５（ヒト結腸癌細胞株）を米国ＮＣＩから購入して継代培養した。癌細胞増殖阻害効果は次のようにスケハン（Ｓｋｅｈａｎ， Ｐ．）らによって記述されたＳＲＢ（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ）方法によって測定した（Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃ． Ｉｎｓｔ．， ８２， ｐ１１０７， １９９０）。
【００２１】
１）継代中の各々の癌細胞株をトリプシン−ＣＤＴＡ溶液で処理して培養容器の表面から収集し、稀釈し、９６−ウェル平底マイクロプレート（Ｆａｌｃｏｎ Ｃｏ．）の各ウェルに５ｘ１０３（Ａ５４９，ＨＣＴ−１５）、１ｘ１０４（ＳＫ−ＭＥＬ−２，ＸＦ４９８）または２ｘ１０４（ＳＫ−ＯＶ−３）細胞／ウェルの量で加えた後、ＣＯ２培養器で培養して細胞がウェルの底面に付着（ａｎｃｈｏｒ）するようにした。その後、吸入器でプレートから培養培地を除去し、予定量の試験資料（試験溶液）を培養培地に溶解した溶液を各ウェルに加え、混合物を４８時間さらに培養した。
【００２２】
２）その後、プレートから培養培地を吸入によって除去し、１０％ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）溶液を各ウェル当り１０μｌずつ加えた。プレートを室温で１時間放置して細胞を固定した後、蒸留水で数回洗浄して余分のＴＣＡを完全に除去し、乾燥した。
【００２３】
３）各ウェルをＳＲＢ染色溶液１００μｌ（１％酢酸中の０．４％スルフォーホダミン）で３０分間処理し、１％酢酸で数回洗浄して残留染色溶液を除去した後室温で乾燥した。
【００２４】
４）各ウェルに１０ｍＭトリスマ塩基１００μｌ（Ｔｒｉｓｍａ ｂａｓｅ）溶液（非緩衝）を加えた後、プレートをタイタープレート振盪機（ｔｉｔｅｒ ｐｌａｔｅ ｓｈａｋｅｒ）で１０分間振盪して細胞から染色溶液を溶出させ、マイクロプレートリーダー（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ）で５２０ｎｍにおける吸光度（ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）を測定した。
【００２５】
５）試験溶液で処理した細胞株の癌細胞増殖率（％ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ、すなわち、抗癌活性の逆）を下記数式によって算出したが、式中のＣは試験溶液の代わりに培養培地で処理した対照群の細胞数、Ｔｚは０時間での細胞数であり、Ｔは測定値に基づいて計算した、試験溶液で処理した細胞の数である。数式（１）はＴｚ＞Ｔの場合に用い、数式（２）はＴｚ＜Ｔの場合に用いた。
数式（１）＝ ［（Ｔ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００
数式（２）＝ ［（Ｔ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００
【００２６】
６）癌細胞増殖阻害の５０％阻害を達成するために必要な試料の量（ＥＤ５０）は様々な試料濃度で測定した細胞増殖率からＬＯＴＵＳプログラムのデータ回帰（ｄａｔａ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を用いて計算した。
【００２７】
実施例：フェルーラ・アサフォエジダから化合物１〜５の分離
フェルーラ・アサフォエジダの乾燥アギ（１．２ｋｇ）をメタノール２０ｌで３時間ずつ３回繰り返して環流抽出した後冷却した。抽出物を濾過し、減圧濃縮してメタノール可溶性粗抽出物（４６０ｇ）を得た。
【００２８】
粗抽出物を適当量の蒸留水に分散した後、ｎ−ヘキサン、ジクロロメタンおよびｎ−ブタノールで連続的に溶媒分画してｎ−ヘキサン可溶性分画（５６ｇ）、ジクロロメタン可溶性分画（２９０ｇ）およびｎ−ブタノール可溶性分画（５０ｇ）を得た。ジクロロメタン可溶性分画５ｇをジクロロメタン１００ｍｌにさらに溶かし、溶出液としてジクロロメタン、ジクロロメタン−メタノール混合液およびメタノールを連続的に用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ， Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ ６０， ７０−２３０ ｍｅｓｈ， ３００ｇ，３．０ ｘ ８０ｃｍ）を行って次のような４つの分画を得た：ジクロロメタン２ｌで溶出された分画１（４８０ｍｇ）；ジクロロメタンとメタノールの１００：１混合液２ｌで溶出された分画２（２，０５０ｍｇ）；ジクロロメタンとメタノールの５０：１混合液２ｌで溶出された分画３（５７０ｍｇ）；およびジクロロメタンとメタノールの１０：１混合液２ｌで溶出された分画４（９８０ｍｇ）。前記各分画のヒト癌細胞株の増殖阻害活性を参考例に記述された方法で測定した。分画２と３が各々約８μｇ／ｍｌと９μｇ／ｍｌのＥＤ５０値を示し、非常に高い活性を示した。
【００２９】
最も活性の高い成分を得るために分画２と３で各々様々な比率のｎ−ヘキサン−酢酸エチル混合液を用いるカラムクロマトグラフィー分画法を反復的に行って最終的に分画２から２つの成分、すなわち、無色針状結晶状（ｍｐ６１℃，Ｃ２４Ｈ３０Ｏ３，Ｍ．Ｗ．３６６）のウンベリプレニン（３）７０ｍｇおよび無色針状結晶状｛ｍｐ１１２℃、［α］Ｄ＋１０（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ４，Ｍ．Ｗ．３８２｝のファーネシフェロールＢ（４）１２０ｍｇを得、分画３から３つの成分、すなわち、無色針状結晶状｛ｍｐ８７〜８９℃，［α］Ｄ−２０（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ５，Ｍ．Ｗ．３９８｝のガルバニック酸（１）５００ｍｇ、無色結晶状｛ｍｐ５０℃，［α］Ｄ−４（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３２Ｏ５，Ｍ．Ｗ．４００｝のカラタビシノール（２）　５０ｍｇ、および無色針状結晶状｛ｍｐ８２℃，［α］Ｄ−３６（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ４，Ｍ．Ｗ．３８２｝のファーネシフェロールＣ（５）４００ｍｇを得た。
【００３０】
試験例：化合物１〜５のヒト癌細胞株増殖阻害効果
フェルーラ・アサフォエジダから得られたメタノール抽出物および化合物１〜５のＡ５４９細胞株を初め、５種のヒト癌細胞株の各々に対する増殖阻害効果を参考例に記載された方法に従って検定した。その結果を表１に示し、対照薬物としてシスプラチンを用いた。
【００３１】
【表１】
2004510823.tif 000003
【００３２】
前記表１から分かるように、化合物１〜５は各種の癌細胞株に対して優れた阻害活性を示し、そのうち化合物５が最も優れた効果を示した。
【００３３】
産業上の利用可能性
シスプラチンは肝毒性および腎臓毒性などの深刻な毒性問題を有すると知られている。一方、アギは毒性のない薬草であって、長い間用いられてきたので、アギから分離した本発明の化合物は副作用がないと期待される。
【００３４】
本発明を具体的な実施態様と関連させて記述したが、添付した特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内で、当該分野の熟練者が本発明を多様に変形および変化させ得ると理解されなければならない。
【国際公開パンフレット】
2004510823.tif 000004
2004510823.tif 000005
2004510823.tif 000006
2004510823.tif 000007
2004510823.tif 000008
2004510823.tif 000009
2004510823.tif 000010
2004510823.tif 000011
2004510823.tif 000012
2004510823.tif 000013
2004510823.tif 000014
2004510823.tif 000015
2004510823.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成14年12月9日(2002.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
最も活性の高い成分を得るために分画２と３で各々様々な比率のｎ−ヘキサン−酢酸エチル混合液を用いるカラムクロマトグラフィー分画法を反復的に行って最終的に分画２から２つの成分、すなわち、無色針状結晶状（ｍｐ６１℃，Ｃ２４Ｈ３０Ｏ３，Ｍ．Ｗ．３６６）のウンベリプレニン（化合物３）７０ｍｇおよび無色針状結晶状（ｍｐ１１２℃、［α］Ｄ＋１０（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ４，Ｍ．Ｗ．３８２）のファーネシフェロールＢ（化合物４）１２０ｍｇを得、分画３から３つの成分、すなわち、無色針状結晶状（ｍｐ８７〜８９℃，［α］Ｄ−２０（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ５，Ｍ．Ｗ．３９８）のガルバニック酸（化合物１）５００ｍｇ、無色結晶状（ｍｐ５０℃，［α］Ｄ−４（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３２Ｏ５，Ｍ．Ｗ．４００）のカラタビシノール（化合物２）　５０ｍｇ、および無色針状結晶状（ｍｐ８２℃，［α］Ｄ−３６（ｃ，ＣＨＣｌ３中で１．０）、Ｃ２４Ｈ３０Ｏ４，Ｍ．Ｗ．３８２）のファーネシフェロールＣ（化合物５）４００ｍｇを得た。


【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
試験例：化合物１〜５のヒト癌細胞株増殖阻害効果
実施例で製造された、フェルーラ・アサフォエジダのメタノール抽出物およびそれから分離した化合物１〜５のＡ５４９細胞株を初め、５種のヒト癌細胞株の各々に対する増殖阻害効果を参考例に記載された方法に従って検定した。その結果を表１に示し、対照薬物としてシスプラチンを用いた。


【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
【表１】
2004510823.tif 000017
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
前記表１から分かるように、化合物１〜５は各種の癌細胞株に対して優れた阻害活性を示し、そのうち化合物５（ファーネシフェロールＣ）が最も優れた効果を示した。




【国際調査報告】
2004510823.tif 000018
2004510823.tif 000019