(57)【要約】新規なＣ−４置換オールトランスレチノイン酸アナログが合成され、種々の癌および皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置するために使用される。これらの新規なＣ−４置換オールトランスレチノイン酸アナログは、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）　４−ヒドロキシラーゼ活性を阻害し、それによって、ＡＴＲＡの代謝を阻害する。これらの新規なＣ−４置換ＡＴＲＡアナログもまた、ＡＴＲＡ模倣活性を有する。Ｃ−４にある置換基は、アゾール基、硫黄、酸素、窒素、ピリジル基、アセチレン（ａｃｅｔｙｌｉｎｉｃ）基、シクロプロピルアミン基、エステル基、オキシム基、シアノ基、オキシラン（ｏｘｉｒｏｎｅ）基およびアジリジン基を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2004509073.tif 000010
を有する化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩であって、
ここで、Ｒ１は、硫黄含有基、酸素含有基、窒素含有基、アセチレン基、エステル基、オキシムおよびアジリジンからなる群から選択され；そして
Ｒ２は、ヒドロキシル、アミノフェノール、−ＯＲ３およびアゾール基からなる群から選択され、ここで、Ｒ３は、アルキル、アリールおよび複素環式基からなる群から選択される、化合物。
【請求項２】
Ｒ２はヒドロキシルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２は−ＯＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、チオールおよびアルキルチオールからなる群から選択される硫黄含有基であるか、またはＲ１は、４位の炭素と共にチイランを形成する硫黄含有基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１は、−ＯＲ４基であって、ここで、Ｒ４は、水素またはアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、シクロプロピルエーテルまたは４位の炭素と共にオキシラン基を形成する酸素含有基である、化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、窒素含有基であって、該窒素含有基は、式−ＮＲ５Ｒ６基を有し、ここで、Ｒ５およびＲ６は、独立して水素およびアルキル基からなる群から選択されるか、あるいはＲ５およびＲ６は、共に環を形成し得る、化合物。
【請求項８】
Ｒ５およびＲ６は、イミダゾリル環またはトリアゾール環を形成する、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、窒素含有基であって、該窒素含有基は、シアノ、アミノ、アジド、シクロプロピルアミノからなる群から選択されるか、またはＲ１は、４位の炭素と共にアジリジン基またはオキシム基を形成する窒素含有基である、化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、窒素含有基であって、該窒素含有基は、ピリジル基からなる群から選択される、化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ１は、窒素含有基であって、該窒素含有基は、アリル性アゾールからなる群から選択される、化合物。
【請求項１２】
Ｒ１は、メチレンアゾリルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物であって、該化合物は、式（ＩＩ）
【化２】
2004509073.tif 000011
またはそれらの薬学的に受容可能な塩である、化合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物を合成する方法であって、該方法は以下の工程：
（±）−４−ヒドロキシメチルレチノエートとカルボニルジイミダゾールとを、ＣＨ３ＣＮ中室温で接触させて（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチルレチノエートを得る工程；および
（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチルレチノエートを還流メタノール性ＫＯＨ中で加水分解して（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）レチノイン酸を得る工程、
を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物であって、該化合物は、式（ＩＩＩ）
【化３】
2004509073.tif 000012
またはそれらの薬学的に受容可能な塩である、化合物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物を合成する方法であって、該方法は以下の工程：
（±）−４−ヒドロキシメチルレチノエートとカルボニルジトリアゾールとを、ＣＨ３ＣＮ中室温で接触させて（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエートを得る工程；および
（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエートを還流メタノール性ＫＯＨ中で加水分解して（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸を得る工程、
を包含する、方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物であって、該化合物は、式（ＩＶ）
【化４】
2004509073.tif 000013
またはそれらの薬学的に受容可能な塩である、化合物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物を合成する方法であって、該方法は以下の工程：
（±）−４−ヒドロキシメチルレチノエートとカルボニルジトリアゾールとを、ＣＨ３ＣＮ中室温で接触させて（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエートを得る工程；および
（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエートを還流メタノール性ＫＯＨ中で加水分解して（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸を得る工程、
を包含する、方法。
【請求項１９】
癌を有する動物を処置する方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの化合物を治療的に有効量投与する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、前記動物は、前立腺、乳房、卵巣、肺、黒色腫、白血病およびリンパ腫からなる群から選択される癌を有する、方法。
【請求項２１】
皮膚科学的状態を有する動物を処置する方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの化合物を治療的に有効量投与する工程を包含する、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記動物は、高齢、しわ、および皮膚光損傷からなる群から選択される皮膚科学的状態を有する、方法。
【請求項２３】
皮膚科学的疾患を有する動物を処置する方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの化合物を治療的に有効量投与する工程、を包含する方法。
【請求項２４】
前記動物は、乾癬および挫瘡からなる群から選択される皮膚科学的疾患を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
動物中のオールトランスレチノイン酸の４−ヒドロキシラーゼを阻害するための方法であって、請求項１に記載の少なくとも１つの化合物を有効量投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
前記動物が哺乳動物である、請求項１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記動物がヒトである、請求項１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５に記載の方法。
【請求項２８】
化合物（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）レチノイン酸またはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の薬学的組成物であって、希釈剤、キャリア、溶媒、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、およびコーティング剤からなる群から選択される薬学的に受容可能な不活性成分をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項３０】
前記組成物は、経口投与のために処方される、請求項２８または２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
前記組成物は、非経口投与のために処方される、請求項２８または２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
前記組成物は、注射可能な投与のために処方される、請求項２８または２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
化合物（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸またはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、薬学的に受容可能な組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の薬学的組成物であって、希釈剤、キャリア、溶媒、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、およびコーティング剤からなる群から選択される薬学的に受容可能な不活性成分をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項３５】
前記組成物は、経口投与のために処方される、請求項３３または３４に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記組成物は、非経口投与のために処方される、請求項３３または３４に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記組成物は、注射可能な投与のために処方される、請求項３３または３４に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
化合物（±）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸またはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、薬学的組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の薬学的組成物であって、希釈剤、キャリア、溶媒、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、およびコーティング剤からなる群から選択される薬学的に受容可能な不活性成分をさらに含む、薬学的組成物。
【請求項４０】
前記組成物は、経口投与のために処方される、請求項３８または３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記組成物は、非経口投与のために処方される、請求項３８または３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記組成物は、注射可能な投与のために処方される、請求項３８または３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
請求項１に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項４４】
オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）をさらに含む、請求項２８、３３、３８または４３に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願は、２０００年７月１１日付けで出願された仮米国特許出願番号６０／２１７，４６５号からの優先権を主張する。
【０００２】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、Ｃ−４に置換基を有する新規レチノイン酸アナログに関する。さらに詳細には、本発明は、新規なＣ−４置換オールトランスレチノイン酸アナログの合成法ならびにこれらの新規化合物を癌および皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態のための治療用薬剤として使用する方法に関する。本発明はまた、これらの新規なＣ−４置換オールトランスレチノイン酸アナログを含む薬学的組成物に関する。
【０００３】
（関連技術の説明）
オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）は、生物学的に最も活性なビタミンＡ代謝産物であり、細胞分化および上皮組織の増殖において主要な役割を果たす。分化剤（例えば、ＡＴＲＡ）は、細胞をその細胞の正常な表現系へと変更し、それによって悪性障害の進化を完全に止め得るかまたは抑制し得るか、あるいは癌の侵襲を防ぎ得る（Ｈｉｌｌ　ＤＬおよびＧｒｕｂｂｓ　ＣＪ、Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｎｕｔｒ　１２：１６１〜１８１、１９９２；Ｈｏｎｇ　ＷＫおよびＩｔｒｉ　Ｌ、Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ、Ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢおよびＧｏｏｄｍａｎ　ＤＳ（編集）、ｐｐ５９７〜６３０、Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９９４）。しかし、レチノイン酸の治療効果は、チトクロムＰ−４５０依存型酵素による迅速なインビボでの異化によって徐々に損なわれる（Ｍｕｉｎｄｉ　Ｊ、Ｆｒａｎｋｅｌ　ＳＲ、Ｍｉｌｌｅｒ　ＷＨ　Ｊｒ、Ｊａｋｕｂｏｗｓｋｉ　Ａ、Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ　ＤＡ、Ｙｏｕｎｇ　ＣＷ、Ｄｍｉｔｒｏｖｓｋｙ　ＥおよびＷａｒｒｅｌｌ　ＲＰ　Ｊｒ、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｃａｕｓｅｓ　ａ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｄｒｕｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｒｅｌａｐｓｅ　ａｎｄ　ｒｅｔｅｎｏｉｄ　“ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ”ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｐｒｏｍｙｌｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ、Ｂｌｏｏｄ　７９：２９９〜３０３、１９９２；Ｓｍｉｔｈ　ＭＡ、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　ＤＲ、Ｃｈｅｓｏｎ　ＢＤおよびＦｒｉｅｄｍａｎ　ＭＡ、Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏｌ　１０：８３９〜８６４、１９９２；Ｗａｒｒｅｌｌ　ＲＰ　Ｊｒ．、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ、Ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ，　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　ｏｎｃｏｌｏｇｙ；ＤｅＶｉｔａ　Ｊｒ、Ｈｅｌｌｍａｎ　ＳおよびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ　ＳＡ（編集）、第Ｉ巻、ｐｐ４８３〜４９０、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９７；Ｋｉｚａｋｉら、１９９６）。
【０００４】
さらに、ＡＴＲＡは、多くの皮膚科学的疾患に対して治療効果を有することが公知である。さらに、ＡＴＲＡの素早い異化は、処置のための化合物の有用性を制限する（Ｃｕｎｌｉｆｆｅ、１９８６；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ　ＣＥＭ、Ｆｉｓｃｈｅｒ　ＧＪ、Ｆｉｎｋｅｌ　ＬＪ、Ｖｏｏｒｈｅｅｓ　ＪＪ、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｓｋｉｎ　ｒｅｐａｉｒ、ＢＲ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１２７（Ｓｕｐｐｌｌ）：２１〜２４、１９９２）。
【０００５】
ＡＴＲＡは、いくつかの経路を通じて代謝され得る。生理学的に最も顕著な経路は、シクロヘキセニル環の４位でのヒドロキシル化で開始し、４−ヒドロキシ−ＡＴＲＡの形成を導き、４−オキソ−ＡＴＲＡを経て、さらに極性の代謝産物へと変換される（Ｆｒｏｌｉｋ　ＣＡ、Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢ、Ｔａｖｅｌａ　ＴＥ、Ｒｏｌｌｅｒ　ＰＰ、Ｎｅｗｔｏｎ　ＤＬおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　４−ｈｙｄｒｏｘｙ−ａｎｄ　４−ｏｘｏ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ，　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｔｒａｃｈｅａ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１８：２０９２〜２０９７、１９７９；Ｆｒｏｌｉｋ　ＣＡ、Ｒｏｌｌｅｒ　ＰＰ、Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ａｎｄ　１３−ｃｉｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈａｍｓｔｅｒｓ、Ｊ　Ｂｉｏｌ　ｃｈｅｍ　２５５：８０５７〜８０６２、１９８０；Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢ、Ｎｉｃｈｏｌｓ　ＭＤ、Ｎｅｗｔｏｎ　ＤＬおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２５４：６２９６〜６３０２、１９７９；Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢ、Ｌａｍｂ　ＬＣおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｈａｍｓｔｅｒ　ｌｉｖｅｒ　ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ：ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　４−ｈｙｄｒｏｘｙ−　ｔｏ　４−ｋｅｔｏ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　１９９：３７４〜３８３、１９８０；Ｖａｎ　Ｗａｕｗｅ　Ｊ、Ｃｏｅｎｅ　Ｍ−Ｃ、Ｃｏｏｌｓ　Ｗ、Ｇｏｏｓｅｎｓ　Ｊ、Ｌａｕｗｅｒｓ　Ｗ、Ｌｅ　Ｊｅｕｎｅ　Ｌ、ｖａｎ　Ｈｏｖｅ　Ｃおよびｖａｎ　Ｎｙｅｎ　Ｇ、Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ−ｆｕｍａｒａｔｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　４−ｋｅｔｏ−ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　４７：７３７〜７４１ｊ、１９９４；Ｎａｐｏｌｉ　ＪＬ、Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、ＦＡＳＥＢ　Ｊ　１０：９９３〜１００１、１９９６）。第１異化段階および第３異化段階は、チトクロムＰ４５０依存型酵素錯体によって触媒される（Ｆｒｏｌｉｋ　ＣＡ、Ｒｏｌｌｅｒ　ＰＰ、Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−　ａｎｄ　１３−ｃｉｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈａｍｓｔｅｒｓ、Ｊ　Ｂｉｏｌ　ｃｈｅｍ　２５５：８０５７〜８０６２、１９８０；Ｌｅｏ　ＭＡ、Ｌｉｄａ　ＳおよびＬｉｅｂｅｒ　ＣＳ、Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｂｙ　ａ　ｓｙｓｔｅｍ　ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０、Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　２４３：３０５〜３１２、１９８４；Ｖａｎ　Ｈｅｕｓｄｅｎ　Ｊ、Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｒａｍａｃｋｅｒｓ　ＦＣＳ、Ｋｒｅｋｅｌｓ　ＭＤＷＧ、Ｄｉｌｌｅｎ　Ｌ、Ｂｏｒｇｅｒｓ　ＭおよびＳｍｅｔｓ　Ｇ、Ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＣＦ−７　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　７７：２６〜３２，１９９８ａ；Ｖａｎ　Ｈｅｕｓｄｅｎ　Ｊ、Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｒａｍａｃｋｅｒｓ　ＦＣＳ、Ｋｒｅｋｅｌｓ　ＭＤＷＧ、Ｄｉｌｌｅｎ　Ｌ、Ｂｏｒｇｅｒｓ　ＭおよびＳｍｅｔｓ　Ｇ、Ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＣＦ−７　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　７７：１２２９〜１２３５，１９９８ｂ）。この酵素の正確な性質は、解明されるべきであるが、チトクロムＰ４５０酵素（ＣＹＰ２６と命名された）は、特異的なＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ活性を有しており、この酵素はまた、ゼブラフィッシュ、マウスおよびヒトから最近になってクローン化されたＡＴＲＡによって迅速に誘導される（総説に関しては、Ｈａｑｕｅ　Ｍ、Ａｎｄｒｅｏｌａ　Ｆ、ＤｅＬｕｃａ　ＬＭ、Ｔｈｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０　ｆａｍｉｌｙ，ＣＹＰ２６，ｗｉｔｈ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｔｏｗａｒｄｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ，Ｎｕｔｒｉ　Ｒｅｖ　５６：８４〜８５，１９９９；Ｓｏｎｎｅｖｅｌｄ　ＥおよびＶａｎｄｅｒ　Ｓａｇｇ　ＰＴ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ、Ｉｎｔｅｒ．Ｊ　Ｖｉｔ　Ｎｕｔｒ　Ｒｅｓ　６８：４０４〜４１０、１９９８を参照のこと）。
【０００６】
最初に、４−ヒドロキシラーゼ活性は、主として肝臓にあると考えられていた（Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢ、Ｌａｍｂ　ＬＣおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｈａｍｓｔｅｒ　ｌｉｖｅｒ　ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ：ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　４−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｔｏ　４−ｋｅｔｏ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　１９９：３７４〜３８３、１９８０）が、現在、皮膚および腫瘍細胞および腫瘍組織中に存在することが示されている（Ｖａｎｄｅｎ　Ｂｏｓｓｃｈｅ　Ｈ、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎｓ　Ｇ、Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０、Ｉｎ　Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ：１０　Ｙｅａｒｓ　Ｏｎ．Ｓａｕｒａｔ　ＪＨ（編）、ｐｐ７９〜８８、Ｋａｒｇｅｒ：Ｂａｓｅｌ、１９９０；Ｖａｒａｎｉ　Ｊ、Ｇｅｎｄｉｍｅｎｉｃｏ　ＧＡ、Ｈｈａｈ　Ｂ、Ｇｉｂｂｓ　Ｄ、Ｃａｐｅｔｏｌａ　ＲＪ、Ｍｅｚｉｃｋ　ＪＡおよびＶｏｏｒｈｅｓｓ　ＪＪ、Ａ　ｄｉｒｅｃｔ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ　ｏｎ　ｓｋｉｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ、Ｓｋｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　４：２５４〜２６１、１９９１；Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｖａｎ　Ｄｕｎ　Ｊ、Ｄｉｌｌｅｎ　Ａ、Ｃｏｅｎｅ　Ｍ．−Ｃ、Ｃｏｏｌｓ　ＷおよびＤｅ　Ｃｏｓｔｅｒ　Ｒ、Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｉａｒｏｚｏｌｅ，　ａ　ｎｅｗ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｎ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｏｎ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ＭＣＦ−７　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　５２：２８４１〜２８４６、１９９２；Ｋｒｅｋｅｌｓ　ＭＤＷＧ、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ　Ｊ、Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｂ、Ｖａｎ　Ｇｉｎｃｋｅｌ　Ｒ、Ｖａｎ　Ｈｏｖｅ　Ｃ、Ｃｏｅｎｅ　Ｍ．−ＣおよびＷｏｕｔｅｒ　Ｗ、Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｒａｔ　Ｄｕｎｎｉｎｇ　Ｒ　３３２７Ｇ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｔｕｍｏｒｓ、Ｐｒｏｓｔａｔｅ　２９：３６〜４１、１９９６）。
【０００７】
原則として、４−ヒドロキシラーゼのインヒビターは、ＡＴＲＡの内在レベルを増加させ（「ＡＴＲＡ擬態」として作用する）、いくらかのＡＴＲＡ耐性を克服する。種々のチトクロムＰ４５０酵素を阻害する多くのアゾール化合物はまた、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼのインヒビターであることが示されている（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ＪＢおよびＮａｐｏｌｉ　ＪＬ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｒｅｔｉｎｏｌ　ｄｕｒｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆ９　ｅｍｂｒｙｏｎａｌ　ｃｅｌｌｓ、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８２：４６５８〜４６６２、１９８５；Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ＪＢおよびＮａｐｏｌｉ　ＪＬ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｂｙ　ｉｍｉｄａｚｏｌｅ　ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ　ｉｎ　Ｆ９　ｅｍｂｒｏｙｎａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　３６：１３８６〜１３８８、１９８７；Ｎａｐｏｌｉ　ＪＬ、Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、ＦＡＳＥＢ　Ｊ　１０：９９３〜１００１、１９９６；Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＡＢ、Ｎｉｃｈｏｌｓ　ＭＤ、Ｎｅｗｔｏｎ　ＤＬおよびＳｐｏｒｎ　ＭＢ、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２５４：６２９６〜６３０２、１９７９；Ｖａｎｄｅｎ　Ｂｏｓｓｃｈｅ　Ｈ、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎｓ　ＧおよびＪａｎｓｓｅｎ　ＰＡＪ、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ−Ｐ−４５０−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｒａｔ　ｓｋｉｎ　ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｂｙ　ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ、Ｓｋｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　１：１７６〜１８５、１９８８；Ｖａｎ　Ｗａｕｗｅ　ＪＰ、Ｃｏｅｎｅ　ＭＣ、Ｇｏｏｓｓｅｎｓ　Ｊ、Ｖａｎ　Ｎｉｊｅｎ　Ｇ、Ｃｏｏｌｓ　Ｗ、Ｌａｕｗｅｒｓ　Ｗ、Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ、Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｅｘｐ　Ｔｈｅｒ、２４５：７１８〜７２２、１９８８；Ｆｒｅｙｎｅ　Ｅ、Ｒａｅｙｍａｅｋｅｒｓ　Ａ、Ｖｅｎｅｔ　Ｍ、Ｓａｎｚ　Ｇ、Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｄｅ　Ｃｏｓｔｅｒ　ＲおよびＶａｎ　Ｗａｕｗｅ　Ｊ、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＬｉａｚａｌＴＭ，ａ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　（ＲＡＭＢＡ）　ｗｉｔｈ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｏｎｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ　８：２６７〜２７２，１９９８）。レチノイン酸代謝遮断剤（ＲＡＭＢＡ）の発見によって、癌の処置においてＲＡＭＢＡを使用することは興味深いことである（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊｒ．、Ｗ．Ｈ．、Ｔｈｅ　Ｅｍｅｒｇｉｎｇ　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　Ｂｌｏｃｋｉｎｇ　Ａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ、８３、１４７１〜１４８２、１９９８）。レチノイン酸代謝のインヒビターは、レチノイン酸代謝遮断剤または「ＲＡＭＢＡ」として公知である。
【０００８】
リアロゾールフマレート（ＬＩＡＺＡＬＴＭ）、（１Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール誘導体は、臨床の実施において、最初の新規な生成ＲＡＭＢＡの１つである。リアロゾールフマレートは、すぐに、前立腺癌の処置に関して認められ得る（Ｗａｘｍａｎ　Ｊ．Ｒｏｙｌａｎｃｅ　Ｒ．、Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ：Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｓｔａｔｅ　Ｃａｎｃｅｒ？　Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、３４、４３７、１９９８；およびＤｅｂｒｕｙｎｅ、Ｆ．Ｊ．Ｍ．ら、Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ−Ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｆｏｒ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｐｒｏｓｔａｔｅ　Ｃａｎｃｅｒ：Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａ　Ｌａｒｇｅ　Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　Ｔｒｉａｌ　ｖｅｒｓｕｓ　Ｃｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ、Ｕｒｏｌｏｇｙ、５２、７２〜８１、１９９８を参照のこと）。
【０００９】
リアゾロールの薬物動力学の研究は、リアゾロールが、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害することを明らかにした（Ｄｅ　Ｃｏｓｔｅｒ　Ｒ、Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｖａｎ　Ｇｉｎｃｋｅｌ　Ｒ、Ｅｎｄ　Ｄ、Ｋｒｅｋｅｌｓ　Ｍ、Ｃｏｅｎｅ　Ｍ．−ＣおよびＢｏｗｄｅｎ　Ｃ、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉａｒｏｚｏｌｅ（Ｒ７５２５１）：ａｎ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ　ａｇｅｎｔ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｒｅａｋｄｏｗｎ、Ｊ　Ｓｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｍｏｌｅｃ　Ｂｉｏｌ　４３：１９７〜２０１、１９９２）。しかし、前立腺癌におけるリアロゾールに関するＩＩＩ期試行データのＦＤＡの再調査は、陰性であった。臨床的効力は見られたけれども、活性／毒性比は、不十分であるとみなされた。そのために、Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ　ＮＶ（ｌｉａｒｏｚｏｌｅの製造業者）は、リアロゾールの臨床開発を中断した（Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ　（２０００）Ｐｅｒｓｏｎａｌ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ；Ｎｊａｒ　ＶＣＯおよびＢｒｏｄｉｅ　ＡＭＨ、Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０　ｅｎｚｙｍｅｓ：Ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｐｒｏｓｔａｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｙ、Ｉ　Ｄｒｕｇｓ　１：４９５〜５０６、１９９９ｃ）。高い毒性の理由は、リアロゾールがＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼのみをミクロモル濃度で阻害し、さらにこのレベルで、このリアロゾールはまた、他のチトクロムＰ４５０酵素に対して有害な制御活性を示すためであったと思われる（Ｂｒｕｙｎｓｅｅｌｓら、１９９０）。前立腺癌の処置におけるリアロゾールの有害な副作用は、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ酵素の選択性および／または強力な阻害が不足していることによって、引き起こされ得る。
【００１０】
リアロゾールの前立腺癌に対する治療的利点が副作用のために制限されるため、ナノモル濃度でＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害し、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼに関して、リアロゾールよりも大きな特異性を有する化合物を入手することが有用である。このような化合物は、リアロゾールの有害な副作用を避け得、よりよく耐性であり得る。このような化合物はまた、他の型の癌の処置および種々の皮膚科学的状態の処置に有用であり得る。
【００１１】
従って、本発明は、癌および皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態の処置に関する問題を、オールトランスレチノイン酸の異化を遮断する新規化合物を用いて克服する手助けをする。これらの新規化合物は、レチノイン酸代謝および患者に対するより低い毒性に関与する酵素に対するより高い特異性を有する。ＡＴＲＡ異化の選択的で強力な阻害化合物は、この化合物をナノモル濃度用いて、ＡＴＲＡ（内在性ＡＴＲＡまたはＡＴＲＡ模倣化合物のいずれか）の所望のレベルまで効果的に調節を行う。より高いレベルのＡＴＲＡで、患者は、予後および結果を改良した。
【００１２】
本発明における新規化合物は、Ｃ−４に置換基を有するＡＴＲＡアナログである。
【００１３】
（本発明の簡単な要旨）
本発明は、式（Ｉ）
【００１４】
【化５】
2004509073.tif 000002
を有する新規化合物である。
式（Ｉ）において、Ｒ１は、アゾール、硫黄、酸素、窒素、ピリジル、アセチレン基（ａｃｅｔｙｌｉｎｉｃ）、シクロプロピルアミン、エステル、オキシム、シアノ、オキシランまたはアジリジンである；そして、Ｒ２は、ヒドロキシル、アミノフェノール、エステル、またはアゾールである。
【００１５】
Ｒ１は、硫黄含有基であり得る。このような硫黄含有基の例としては、チイラン、チオールおよびアルキルチオール誘導体が挙げられる。このようなアルキルチオール誘導体の例としては、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルチオールが挙げられる。
【００１６】
Ｒ１は、酸素含有基であり得る。酸素含有基の例としては、−ＯＲ４が挙げられ、Ｒ４は、水素またはアルキル基（好ましくは、１〜１０炭素アルキル、さらに好ましくはメチルまたはエチル）、シクロプロピルエーテルまたは４位の炭素とともにオキシラン基を形成する酸素含有基である。
【００１７】
Ｒ１は、窒素含有基であり得る。このような窒素含有基の例としては、式−ＮＲ５Ｒ６が挙げられ、ここでＲ５およびＲ６は、水素およびアルキル基（好ましくは１〜１０炭素アルキル、さらに好ましくはメチルまたはエチル）からなる群から独立して選択されるか、あるいはＲ５およびＲ６は、一緒に環を形成し得る。好ましくは、Ｒ５およびＲ６によって形成される環は、イミダゾリル環またはトリアゾール環である。
【００１８】
好ましいアゾール置換基の例としては、イミダゾールおよびトリアゾールが挙げられる。さらに好ましくは、アゾール置換基としては、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルおよび４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルが挙げられる。
【００１９】
Ｒ１は、シアノ、アミノ、アジド、シクロプロピルアミノであり得るか、またはＲ１は、４位の炭素と共にアジリジン基またはオキシム基を形成する窒素含有基である。
【００２０】
Ｒ１はまた、ピリジル基またはアリル性アゾール基、好ましくはメチレンアゾリル基であり得る。
【００２１】
エステルのＲ１に関する定義は、エステル部分を含む置換基を含み、このエステル部分は、エステル部分を介して連結される置換基を含む。
【００２２】
Ｒ２は、好ましくは、ヒドロキシル基、アミノフェノール基、−ＯＲ３基およびアゾール基からなる群から選択され得、ここで、Ｒ３は、アルキル、アリールおよび複素環式基からなる群から選択され、さらに好ましくは、ヒドロキシルまたは−ＯＣＨ３（メトキシ）である。
【００２３】
上述の定義された置換基に関する上記のアルキル置換基としては、置換アルキル基および非置換アルキル基、分枝鎖および直鎖およびシクロアルキル基（例えば、シクロプロピル）が挙げられる。
【００２４】
用語「アリール」は、フェニル環またはナフチル環を含む。
【００２５】
用語「複素環式基」は、非置換または置換の安定な３〜７員単環式複素環式環または７〜１０員二環式複素環式環を含み、これらの複素環式環は、炭素原子と、窒素、酸素または硫黄からなる群から選択される１〜３つのヘテロ原子と、からなる複素環式環であり、ここで、窒素へテロ原子および硫黄ヘテロ原子は、必要に応じて酸化され得、そして窒素へテロ原子は、必要に応じて四級化され、上に定義された複素環式環のいずれかが、ベンゼン環に対して縮合されている二環式の基を含む。複素環式環は、任意のヘテロ原子または炭素原子で連結されて、安定な構造を与え得る。複素環式環は、飽和または不飽和であり得る。
【００２６】
複素環式基の例としては、以下が挙げられる：ピペリジニル、ピペラジニル、アゼピニル、ピロリル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、チアジアゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾアゾリル、フリル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンゾチエニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラヒドロキノリニル、およびテトラヒドロイソキノリニル。
【００２７】
本発明の１つの目的は、新規Ｃ−４置換レチノイン酸アナログを合成することである。
【００２８】
本発明のさらなる目的は、合成されたＣ−４レチノイン酸アナログが、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害することである。用語「阻害する」および「阻害」は、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼの完全な阻害および不完全な阻害を含む。
【００２９】
本発明の別の目的は、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害するために新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログを使用することである。
【００３０】
本発明の別の目的は、新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログのみを使用するか、またはレチノイン酸を含む他の化合物と組み合わせて使用して、癌を処置することである。本発明の別の目的は、新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログのみを使用するかまたは他の化合物を組み合わせて使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。
【００３１】
本発明の別の目的は、新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログのみを使用するかまたはレチノイン酸を含む他の化合物と組み合わせて使用して、皮膚科学的疾患または皮膚科学的状態を処置することである。本発明の別の目的は、新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログのみを使用するかまたは他の化合物と組み合わせて使用して、挫瘡、乾癬、しわ、光損傷した皮膚、および他の皮膚科学的状態および皮膚科学的疾患を処置することである。
【００３２】
本発明の１つの目的は、Ｃ−４でアゾール置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを合成することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でアゾール置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でアゾール置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でアゾール置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でアゾール置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、乾癬、および挫瘡から光創傷した皮膚、しわまでの範囲の皮膚科学的状態を処置することである。
【００３３】
本発明の１つの目的は、Ｃ−４で硫黄置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを合成することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で硫黄置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で硫黄置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で硫黄置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で硫黄置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、乾癬、および挫瘡から光創傷した皮膚、しわまでの範囲の皮膚科学的状態を処置することである。
【００３４】
本発明の１つの目的は、Ｃ−４で酸素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを合成することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で酸素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で酸素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で酸素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で酸素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、乾癬、および挫瘡から光創傷した皮膚、しわまでの範囲の皮膚科学的状態を処置することである。
【００３５】
本発明の１つの目的は、Ｃ−４で窒素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを合成することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で窒素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で窒素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で窒素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４で窒素置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、乾癬、および挫瘡から光創傷した皮膚、しわまでの範囲の皮膚科学的状態を処置することである。
【００３６】
本発明の１つの目的は、Ｃ−４でピリジル基置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを合成することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でピリジル基置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でピリジル基置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、黒色腫、白血病、リンパ腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌または他の型の癌を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でピリジル基置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、皮膚科学的疾患および皮膚科学的状態を処置することである。本発明のさらなる目的は、Ｃ−４でピリジル基置換されたオールトランスレチノイン酸アナログを使用して、乾癬、および挫瘡から光創傷した皮膚、しわまでの範囲の皮膚科学的状態を処置することである。
【００３７】
哺乳動物およびヒトを含む動物が処置され得る。
【００３８】
好ましくは、新規なＣ−４置換ＡＴＲＡアナログと組み合わせて使用される他の化合物は、ＡＴＲＡである。
【００３９】
（発明の詳細な説明）
オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）は、周知であり、特性決定された化合物である。その異化経路は、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを含む。ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼの鉄オキセン（ｏｘｅｎｅ）種（ＦｅＶ＝Ｏ）は、分子状酸素を活性化させ、次いで、ＡＴＲＡを分解する。ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼのＦｅＶ＝Ｏ基は、ＡＴＲＡのＣ−４が活性化された酸素の結合距離内にあるようにＡＴＲＡのＣ−４に近づく。ＡＴＲＡのＣ−４での適切な基の置換は、ＡＴＲＡアナログを生成し、このＡＴＲＡアナログは、酵素のレチノイド結合部位と反応し、かつヘム鉄とそして／または高い特異性を有するタンパク質残基と相互作用する。適切な基の置換は、ナノモル範囲でＫｉ値を有する新規化合物の阻害の影響を増大させ得る。
【００４０】
アゾール、硫黄、酸素、または窒素でのＣ−４置換基を有するＡＴＲＡアナログで、４−ヒドロキシラーゼ酵素の活性部位結合に続いて、非共有電子対が補欠ヘム鉄に配位し、酵素の阻害を引き起こす。ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ活性の遮断は、ＡＴＲＡの量を増やす。
【００４１】
本発明において、用語「新規化合物」または「Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログ」は、Ｃ−４で水素およびまたヒドロキシルを置換した種々の部分を有するＡＴＲＡアナログ、またはＣ−１５のヒドロキシルを置換した種々の部分を有するＡＴＲＡアナログをいう。新規化合物またはＣ−４置換ＡＴＲＡアナログの化学構造は、以下のＳｃｈｅｍｅＩ中に示され、ここで、Ｒ１は、アゾール、硫黄、酸素、窒素、ピリジル、アセチレン（ａｃｅｔｙｌｉｎｉｃ）、シクロプロピルアミン、エステル、オキシム、シアノ、オキシラン、またはアジリジンであり；そしてＲ２は、ヒドロキシル、アミノフェノール、エステル、またはアゾールである。
【００４２】
【化６】
2004509073.tif 000003
化合物は、薬学的組成物において使用され得る。この薬学的組成物は、経口投与、非経口（ｐａｒｅｎｔｒａｌ）投与または注射可能な投与のために処方され得る。
【００４３】
本発明の組成物の作製において、新規化合物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合され得、賦形剤によって希釈され得、あるいはキャリア内にカプセル化され得る。キャリアは、カプセル、サシェ剤、紙または他の容器の形態であり得る。賦形剤が希釈剤として供される場合、この賦形剤は、固体、半固体、または液体材料であり得、新規化合物に対して、小胞、キャリア、または媒体として作用する。従って、組成物は、錠剤、丸薬、散剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル、懸濁剤、エマルジョン、溶液、シロップ、軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセル、および他の経口的に摂取可能な処方物であり得る。
【００４４】
薬学的組成物は、溶液、懸濁剤、錠剤、カプセルなどの形態であり得、当該分野で周知の方法によって調製される。このような組成物の投与は、熟練者の必要に依存して、経口、注射可能な経路および／または非経口経路によってであり得る。新規化合物は、経鼻または経口吸入、経口摂取、注射（筋内、静脈内、および腹腔内）、経皮、または投与の他の形態によって投与され得る。
【００４５】
適切な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。処方物は、さらに、滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存剤（例えば、メチルヒドロキシベンゾエートおよびプロピルヒドロキシベンゾエート）、甘味剤；および矯味矯臭剤を含み得る。本発明の組成物はまた、当該分野で公知の手順を使用して患者に投与した後、新規化合物の急速放出、持続性放出または遅延性放出を与えるように処方され得る。
【００４６】
用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、不活性とみなされ、かつ薬学分野で典型的に利用されて特定の活性化合物を含む投薬形態を処方するのに利用される、特定の投薬形態中のこれらの成分をいう。これは、特定の薬学的生成物を処方するのに使用される固体、液体および気体を含み得るが、限定されない。キャリアの例としては、希釈剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、結合剤または錠剤崩壊剤、カプセル化材料、浸透向上剤、溶媒、緩和剤（ｅｍｏｌｉｅｎｔ）、増粘剤、分散剤、持続性放出形態（例えば、マトリックス）、経皮送達成分、緩衝剤、安定化剤などが挙げられる。これらの用語の各々は、当業者によって理解される。
【００４７】
本発明において使用されるエアロゾル処方物としては、典型的には、噴霧剤（例えば、フッ素化アルカン）、界面活性剤、および共溶媒が挙げられ、アルミニウムまたは他の従来のエアロゾル容器に充填され、次いで、適切な計量バルブによって閉じられ、そして噴霧剤を用いて加圧され、計量された用量の吸入器を生成する。エアロゾル調製は、典型的に、経鼻吸入または経口吸入に適しており、圧縮ガス（典型的には圧縮空気）と組み合わせて、粉末または溶液形態であり得る。さらに、エアロゾルは、局所的に有用であり得る。
【００４８】
一般的に、処置方法に使用される新規化合物の量は、動物における所望の治療結果を効果的に達成する量である。必然的に、種々の新規化合物の投薬量は、親化合物、インビボでの加水分解速度などに依存していくらか変動する。当業者は、臨床経験および処置適用に基づいて選択される新規化合物の最適な投薬量を決定し得る。好ましくは、新規化合物の量は、０．１〜１００ｍｇ／体重（ｋｇ）であり、さらに好ましくは、５〜４０ｍｇ／ｋｇである。
【００４９】
適切な固体キャリアは、公知であり、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトースなどである。これらのキャリアは、典型的には、経口錠剤およびカプセル中で使用される。
【００５０】
経口液体のための適切なキャリアとしては、例えば、水、エタノール、プロピレングリコールおよびその他が挙げられる。
【００５１】
本明細書中で有用な局所的調製物としては、クリーム、軟膏、溶液、懸濁液などが挙げられる。これらは、１日に１度、適切な場合、１日に３〜４回まで、患部領域に局所的に適切な投薬量を適用し得るように処方され得る。局所的スプレーは、同様に本明細書中に含まれ得る。
【００５２】
選択される特定の化合物に依存して、経皮送達は、選択肢であり得、いくつかの状況において、好ましい薬物を比較的安定な状態で送達する。経皮送達は、典型的には、アルコール性の小胞、必要に応じて、浸透向上剤（例えば、界面活性剤および他の任意成分）を用いた、溶液中の化合物の使用を含む。マトリックスおよび蓄積型経皮送達系は、適切な経皮系の一例である。経皮送達は、その投薬形態が、患者に対して全身用量の薬物を送達するという点において、従来の局所的処置と異なる。
【００５３】
新規化合物はまた、当該分野で公知の方法を介して、薬学的に受容可能な塩もしくは薬学的に受容可能な溶媒和物または他の物理学的形態（例えば、一例として多形体があるが、限定されない）へと変換され得る。
【００５４】
（新規化合物の合成のための一般的な方法）
融点（ｍｐ）を、Ｆｉｓｃｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓ融点装置を用いて決定し、再修正は行わない。プロトン磁気共鳴スペクトル（１Ｈ　ＮＭＲ）は、Ｍａｃ　ＮＭＲ　５．３　３００ＭＨｚ分光計（内部標準はＭｅ４Ｓｉ（＝０））を用いてＣＤＣｌ３中で記録し、高分解能マススペクトル（ＨＲＭＳ）は、Ｋｒａｔｏｓ　Ａｓｐｅｃｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓの装置で、ＥＩモードで決定する。元素分析を、Ｃｈｅｍｉｓａｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ．，Ｇｕｅｌｐｈ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａで行う。ＴＬＣは、Ａｎａｌｔｅｃｈから購入したシリカゲルＧＨＬＦプレコートプレート（２５０ミクロン）で行い、一方、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）は、Ｓｔｉｌｌの方法に従って、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋグレード９３８５、２３０〜４００メッシュ、６０Å）で行う（Ｓｔｉｌｌ，Ｗ．Ｃ．；Ｋａｈｎ，Ｍ．；Ｍｉｔｒａ，Ａ．、Ｒａｐｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｍｏｄｅｒａｔｅ　Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、４３、２９２３〜２９２５、１９７８）。「石油エーテル（Ｐｅｔ．ｅｔｈｅｒ）」は、ｂｐ４０〜６０℃の軽油をいう。［１１，１２−３Ｈ］オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ、５１．８（Ｃｉ／ｍｍｏｌ））は、Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．から購入し、一方、標識されていないＡＴＲＡは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから購入する。リアゾロールフマレートは、Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ，Ｂｅｅｒｓｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍから得る。（±）−４−ヒドロキシ−ＡＴＲＡおよび４−オキソ−ＡＴＲＡを、周知の技術を用いて調製する（Ｓａｍｏｋｙｓｚｙｎ，Ｖ．Ｍ．；Ｇａｌｌ，Ｗ．Ｅ．；Ｚａｗａｄａ，Ｇ．；Ｆｒｅｙａｌｄｅｎｈｏｖｅｎ，Ｍ．Ａ．；Ｃｈｅｎ，Ｇ．；Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，Ｐ．Ｉ．；Ｔｅｐｈｌｙ，Ｔ．Ｒ．；Ｒａｄｏｍｉｎｓｋａ−Ｐａｎｄｙａ，Ａ．４−Ｈｙｄｒｏｘｙｒｅｔｉｎｏｉｃ　Ａｃｉｄ，ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｆｏｒ　Ｈｕｍａｎ　Ｌｉｖｅｒ　Ｍｃｒｏｓｏｍａｌ　ＵＤＰ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ｓ）　ａｎｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＵＧＴ２Ｂ７．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００、２７５、６９０８〜６９１４）。
【００５５】
（Ｃ−４でアゾール置換されたＡＴＲＡアナログ）
Ｃ−４でアゾール置換されたＡＴＲＡアナログの合成経路は、図１に示される。合成の出発点は、ＡＴＲＡ（１）である。メチルレチノエート（２）は、周知の技術を用いて、ＡＴＲＡ（１）とトリメチルシリルジアゾメタン（ＴＭＳＣＨＮ２）との反応によって定量的な収率で容易に調製される（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｎ．；Ａｏｙｏｍａ，Ｔ．；Ｓｈｉｏｉｒｉ，Ｔ．、Ｎｅｗ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｙｌ　Ｅｓｔｅｒｓ　ｗｉｔｈ　Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｄｉａｚｏｍｅｔｈａｎｅ（ＴＭＳＣＨＮ２）　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｇａｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆａｔｔｙ　Ａｃｉｄｓ、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、２９．１４７５〜１４７８、１９８１）。次いで、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）に溶解したメチルレチノエート（２）（１．０４ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を、過剰の活性化ＭｎＯ２（２０ｇ、ｅｘ　Ｆｌｕｋａ）で処理し、そして反応混合物を室温で４８時間攪拌する。ＭｎＯ２を、濾過によって除去し、濾液を濃縮して橙色の粘稠油を得、これをＦＣＣ［ｐｅｔ．ｅｔｈｅｒ／ＥｔＯＡｃ（８：１）］で精製して出発物質（２．２ｇ）および４−オキソ−オールトランス−メチルレチノエート（３）（０．６５ｇ、６０％）を粘稠油として得る。４−オキソ−オールトランス−メチルレチノエート（３）を、室温でｐｅｔ．ｅｔｈｅｒから結晶化させる（ｍｐ９４〜９５℃）。１Ｈ　ＮＭＲ　δ１．１９（６Ｈ，ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．８６（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０４（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３７（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），５．８２（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．３０（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．９８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１１−Ｈ）。ＨＲＭＳは、Ｃ２１Ｈ２８Ｏ３　計算値３２８．２０３８、実測値３２８．２０３０であった。
【００５６】
次の段階は、（±）−４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）の合成である。攪拌した４−オキソ−オールトランス−メチルレチノエート（３）（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、室温でＮａＢＨ４（５３ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を添加する。３０分後、反応をＨ２Ｏでクエンチして、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して黄色の半固体を得、この半固体をヘキサンで洗浄（ｔｉｔｕｒａｔｉｏｎ）した後、結晶化して、（±）−４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）を黄色結晶として得る（４５２ｍｇ、９１％）。ｍｐ１０２〜１０４℃。ｌＨ　ＮＭＲ　δ１．０２，１．０５（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．８４（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．００（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３６（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），３．７２，（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），４．００（１Ｈ，ｂｒｓ，４−Ｈ），５．７９（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．２０（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．９９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１１−Ｈ）。Ｃ２１Ｈ３０Ｏ３に関する分析：計算値Ｃ，７６．３１；Ｈ，９．１６。実測値Ｃ，７６．３９；Ｈ，９．１０。ＨＲＭＳ　Ｃ２１Ｈ３０Ｏ３　計算値３３０．２１９５、実測値３３０．２１９１。
【００５７】
次の段階は、（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−メチルレチノエート（５）の合成である。４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）（３００ｍｇ、０．９０９０ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、１９５ｍｇ、１．２０２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ３ＣＮ（５．０ｍＬ）溶液を、室温で１０分攪拌する。反応混合物を水（２０ｍＬ）で希釈し、１０％　ＭｅＯＨのＣＨ３Ｃｌ溶液で抽出する（１０ｍＬ×３）。抽出物を合わせて、ブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、エバポレートすると粘稠黄色油（３５０ｍｇ）が得られる。これをＦＣＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ３Ｎ（７：３：０．３）］によって精製して（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−メチルレチノエート（５）を、黄色半固体として得る（３１１ｍｇ、９０％）：１Ｈ　ＮＭＲ　δ１．０９および１．１２（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｈおよび１７−Ｈ），１．６０（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０２（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３６（３Ｈ，３，２０−Ｍｅ），３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），４．５３（１Ｈ，ｓ，４−Ｈ），５．８０（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．２５（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．９１（１Ｈ，ｓ，４１−Ｈ），６．９８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，１１−Ｈ），７．０７（１Ｈ，ｓ，５１−Ｈ），７．５０（１Ｈ，ｓ，２１−Ｈ）．ＨＲＭＳ　Ｃ２４Ｈ３２Ｏ２Ｎ２　計算値３８０．５３３１　実測値３８０．５３３４。
【００５８】
次の段階は、（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）レチノイン酸（６）（これはまた、「ＶＮ／１４−１ＲＡ」ともいう）の合成を含む。（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−メチルレチノエート（５）（２７０ｍｇ、０．７０７７ｍｍｏｌ）を、水およびＭｅＯＨの１：９混合物中の１Ｍ　ＫＯＨ　１２ｍＬに溶解した溶液を、ＭｅＯＨ（１４ｍＬ）で希釈し、その後Ｎ２下で２時間還流する。反応混合物を約１０ｍＬに濃縮し、冷水（２５ｍＬ）で希釈して６ＮのＨＣｌ数滴で酸性にする。得られる黄色沈殿物を濾過し、洗浄し、乾燥して純粋な（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）レチノイン酸（６）を黄色固体として得る（２２５ｍｇ、８６．６％）：ｍｐ１２８〜１３０℃、１Ｈ　ＮＭＲ　δ１．１３（６Ｈ，ｓ，１６−Ｈおよび１７−Ｈ），１．６７（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０２（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３２（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），４．８４（１Ｈ，ｓ，４−Ｈ），５．８５（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．２１（３Ｈ，ｓ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，８−Ｈ），７．００（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，１１−Ｈ），７．１６（１Ｈ，ｓ，４１−Ｈ），７．２６（１Ｈ，ｓ，５１−Ｈ），７．４６（１Ｈ，ｓ，２１−Ｈ），８．７５（１Ｈ，ｂｒｓ，−ＣＯＯＨ）。Ｃ２３Ｈ３０Ｏ２Ｎ２に関する計算値：Ｃ，７５．３８；Ｈ，８．２５；Ｎ，７．６４。実測値：Ｃ，７５．７２；Ｈ，８．６５；Ｎ，７．６７。ＨＲＭＳ　Ｃ２３Ｈ３０Ｏ２Ｎ２　計算値３６６．３０６１　実測値３６６．３０５６。
【００５９】
Ｃ−４でトリアゾール基を合成するために、代替経路に従う。（±）−４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）から開始して、（±）−４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）（２７０ｍｇ、０．８１８２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ１−カルボニルジ（１，２，４−トリアゾール）（ＣＤＴ）（１８７．１ｍｇ、１．１３４０ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ３ＣＮ（４．５ｍＬ）溶液を室温で１０分攪拌する。反応混合物を、水（２０ｍＬ）で希釈して、（±）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−メチルレチノエート（５）について上述されたように処理して、黄色固体（３１０ｍｇ）を得る。ＴＬＣ分析［ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ（２０：１）］によって、２つの化合物の存在が明らかであり、これらの化合物はいずれも（±）−４−ヒドロキシ−オールトランス−メチルレチノエート（４）より極性である。この粗生成物を、ＦＣＣに供し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ（３５：１）で溶出して、（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエート（７）（１７７ｍｇ、５７％）を得る：ｍｐ１０５〜１０８℃；１Ｈ　ＮＭＲ　δ１．１０および１．１３（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．６３（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０２（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３６（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），４．８２（１Ｈ，ｓ，４−Ｈ），５．８０（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．３０（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．９９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１１−Ｈ），７．９９（１Ｈ，ｓ，３１−Ｈ），８．０２（１Ｈ，ｓ，５１−Ｈ）。分析　計算値Ｃ２３Ｈ３１Ｏ２Ｎ３：Ｃ，７２．４１；Ｈ，８．１９；Ｎ，１１．０１。実測値Ｃ，７２．４５；Ｈ，８．１５；Ｎ，１０．９７。ＨＲＭＳ　Ｃ２３Ｈ３１Ｏ２Ｎ３　計算値３８１．５２０８　実測値３８１．５２１１。
【００６０】
ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ（２０：１）を用いてさらに溶出して、（±）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエート（８）（８９ｍｇ、２８．５％）を得る：ｍｐ６２〜６５℃；１Ｈ−ＮＭＲ　δ１．１０および１．１３（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．６４（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０２（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３６（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），４．６４（１Ｈ，ｓ，４Ｈ），５．８１（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．２５（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），６．９８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１１−Ｈ），８．１５（２Ｈ，ｓ，３１−Ｈおよび５１−Ｈ）。分析　Ｃ２３Ｈ３１Ｏ２Ｎ３に関する計算値：Ｃ，７２．４１；Ｈ，８．１９；Ｎ，１１．０１。実測値Ｃ，７２．５５；Ｈ，８．１０；Ｎ，１１．００．ＨＲＭＳ　Ｃ２３Ｈ３１Ｏ２Ｎ３　計算値３８１．５２０８　実測値３８１．５２１３。
【００６１】
（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸（９）（これはまた、「ＶＮ／１６−１ＲＡ」ともいう）を合成するために、（±）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエート（７）（２８５ｍｇ、０．７４７０ｍｍｏｌ）を使用する以外は、ＶＮ／１４−１ＲＡに関する合成を記載する方法（上述）を使用し、ＶＮ／１６−１ＲＡ（２４７ｍｇ、９０％）を得る：ｍｐ９５〜９７℃；１Ｈ−ＮＭＲ　δ１．１０および１．１３（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．６５（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０３（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３６（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），４．８６（１Ｈ，ｓ，４−Ｈ），５．８４（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．３２（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），７．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１１−Ｈ），８．１０（１Ｈ，ｓ，３１−Ｈ），８．３１（１Ｈ，ｓ，５１−Ｈ）。分析　Ｃ２２Ｈ２９Ｏ２Ｎ３に関する計算値：Ｃ，７１．９０；Ｈ，７．９５；Ｎ，１１．４３。実測値Ｃ，７１．７０；Ｈ，８．１１；Ｎ，１１．５５。ＨＲＭＳ　Ｃ２２Ｈ２９Ｏ２Ｎ３　計算値３６７．４９３８　実測値３６７．４９３５。
【００６２】
（±）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）レチノイン酸（１０）（これはまた、「ＶＮ／１７−１ＲＡ」ともいう）を合成するために、（±）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルレチノエート（８）（１３４ｍｇ、０．３５１２ｍｍｏｌ）を使用する以外は、ＶＮ／１４−１ＲＡに関する合成を記載する方法（上述）を使用し、ＶＮ／１７−１ＲＡ（１１０ｍｇ、８５％）を得る：ｍｐ１０５〜１０８℃；１Ｈ−ＮＭＲ　δ１．１１および１．１４（６Ｈ，２ｓ，１６−Ｍｅおよび１７−Ｍｅ），１．６５（３Ｈ，ｓ，１８−Ｍｅ），２．０３（３Ｈ，ｓ，１９−Ｍｅ），２．３７（３Ｈ，ｓ，２０−Ｍｅ），４．７８（１Ｈ，ｓ，４−Ｈ），５．８５（１Ｈ，ｓ，１４−Ｈ），６．１９（４Ｈ，ｍ，７−Ｈ，８−Ｈ，１０−Ｈおよび１２−Ｈ），７．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，１１−Ｈ），８．４６（２Ｈ，ｓ，３１−Ｈおよび５１−Ｈ）。分析　Ｃ２２Ｈ２９Ｏ２Ｎ３に関する計算値：Ｃ，７１．９０；Ｈ，７．９５；Ｎ，１１．４３。実測値Ｃ，７１．９０；Ｈ，７．７９；Ｎ，１１．３０。ＨＲＭＳ　Ｃ２２Ｈ２９Ｏ２Ｎ３計算値３６７．４９３８　実測値３６７．４９３９。
【００６３】
（Ｃ−４で硫黄置換されたＡＴＲＡアナログ）
図２は、Ｃ−４で硫黄置換されたＡＴＲＡアナログの合成に関する模式的な経路を示す。Ｃ−４で硫黄置換されたＡＴＲＡアナログとしては、４−チイラン誘導体（１２）、４−チオール誘導体（１４）、および４−アルキルチオ誘導体（１５）が挙げられる。メチルレチノエート（２）は、４−オキソメチルレチノエート（３）を介して４−オキシラン（１１）へと変換される。４−オキシラン（１１）を、ピクリン酸中でトリメチルスルホニウムヨージド（ＴＰＩ）を用いて処理した後に加水分解して４−チイラン（１２）を得る。４−チオール（１４）は、４−メシレート（１３）をジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理することによって調製される。４−チオール（１４）を種々のアルキルハライドを用いて処理して、所望の４−アルキル誘導体（１５）を得る。
【００６４】
（Ｃ−４で酸素置換されたＡＴＲＡアナログ）
図３は、Ｃ−４で酸素置換されたＡＴＲＡアナログの合成経路を示す。４−オキシラン（１６）は、図３に示されるように、４−オキソ化合物（３）をＴＭＳＩで処理した後、メタノール性ＫＯＨ中で加水分解することによって合成される。
【００６５】
（Ｃ−４で窒素置換されたＡＴＲＡアナログ）
図４は、Ｃ−４で窒素置換されたＡＴＲＡアナログ（例えば４−オキシム（１７）、４−アジド（１８）、４−シアノ（１９）、４−アミノ（２０）、４−アジリジン（２１）、および４−アリル性アゾール（２２））の合成経路を示す。４−オキソメチルレチノエート（３）を塩酸ヒドロキシルアミンを用いて処理した後、加水分解して４−オキシム（１７）を得る。４−メシレート（１３）をＮａＮ３またはＮａＣＮのいずれかを用いて処理した後、加水分解して４−アジド（１８）および４−シアノ（１９）をそれぞれ得る。４−シアノ（１９）をＮａＢＨ４還元して４−アミン（２０）を得る。４−オキシラン（１１）を、ＮａＮ３、ＬａＨ、メタノール性ＫＯＨの順に反応させて４−アリル性アゾール（２２）を得る。
【００６６】
（Ｃ−４ピリジルＡＴＲＡアナログ）
Ｃ−４に種々のピリジル基を導入すると、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼの強力なインヒビターを生じる。これらのＣ−４置換ピリジルＡＴＲＡアナログは、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼの活性部位と相互作用する。これらのＣ−４置換ピリジルＡＴＲＡアナログの合成経路は、図５に示される。従って、４−オキソメチルレチノエート（２）は、ヒドラゾン（２３）を介して鍵中間体ビニルヨージド（２４）に変換される。パラジウム触媒による、２４と異なるジエチル（ピリジル）ボラート試薬とのクロスカップリング反応で、所望のＣ−４置換ピリジルＡＴＲＡアナログ（２５、２６および２７）を得る。
【００６７】
（Ｃ−４アルキル化剤ＡＴＲＡアナログ）
Ｃ−４アルキル化剤ＡＴＲＡアナログは、ＡＴＲＡの基質アナログである機構依存型インヒビターである。これらのＣ−４置換ＡＴＲＡアナログは、潜在的な求電子基を含み、この基は、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼによって活性化され、その結果、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼの活性部位の共有結合的な修飾のために、付加逆な酵素不活性化が起こる。図６は、機構依存型インヒビターであるＣ−４置換ＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路を示す。アルキル化剤は、Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログ：アセチレンＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、およびシクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）である。アセチレンＡＴＲＡ（３０）は、酸素挿入をおこして高い反応性のオキシラン種を生じ、これは、α−ケトカルベン互変異生体を介して補欠ヘムに共有結合する。同様に、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）およびシクロプロピルエーテル−ＡＴＲＡ（３５）は、各々ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害した後、酵素によって１電子酸化される。
【００６８】
確立された手順に従って（Ｓｃｈｏｗ　ＳＲ、Ｂｌｏｏｍ　ＪＤ、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　ＡＳ、Ｗｉｎｚｅｎｂｅｒｇ　ＫＮおよびＳｍｉｔｈ　ＩＩＩ　ＡＢ（１９８６）Ｍｉｌｂｅｍｙｃｉｎ−Ａｖｅｍｉｃｔｉｃ　ｓｔｕｄｉｅｓ．５．Ｔｏｔａｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｍｉｌｂｅｍｙｃｉｎ　３　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｃ（１２）　ｅｐｉｍｅｒｓ．、Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ　１０８：２６６２〜２６７４．）、２−アルキル−１，３−オキサゾリジン（２−ａｌｋｙｌ−１，３−ｏｘａｚｏｌｉｄｉｅ）（２８）として４−ケト−ＡＴＲＡのカルボン酸部分を保護し、その後リチウムアセチリドを用いて処理することによって（Ｍａｕｖａｉｓ　Ａ、Ｂｕｒｇｅｒ　Ａ、Ｒｏｕｓｓｅｌ　ＰＪ、Ｈｅｔｒｕ　ＣおよびＬｕｕ　Ｂ（１９９４）Ａｃｅｔｙｌｅｎｉｃ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｃ−２２　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ　ｏｆ　ｅｃｄｙｓｏｎｅ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．、Ｂｉｏｏｒｇ　Ｃｈｅｍ　２２：３６〜５０）、４−ヒドロキシ，４−トリメチルシリルアセチレン（２９）を得る。後者を、ＨＣｌ中、ＳｎＣｌ２を用いて還元して、アセチレンＡＴＲＡ（３０）を得る（図６）。
【００６９】
シクロプロピル化合物はまた、図６に示されるように、２−アルキル−１，３−オキサゾリジン（２−ａｌｋｙｌ−１，３−ｏｘａｚｏｌｉｄｉｅ）（２８）から合成され得る。２−アルキル−１，３−オキサゾリジン（２−ａｌｋｙｌ−１，３−ｏｘａｚｏｌｉｄｉｅ）（２８）とシクロプロピルアミンを縮合した後、得られるイミンをＮａＢＨ４を用いて還元することによって、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）を得る。シクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）を、ビニル化およびその後のシクロプロパン化によって調製する。
【００７０】
（ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ阻害）
Ｃ−４置換されたＡＴＲＡアナログは、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを阻害する。アッセイの２つの型は、この阻害効果を示す。一方のアッセイは、ハムスターの肝臓ミクロソームを使用する。アッセイの他方の型は、ｈＰ４５０ＲＡＩ（ヒトＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ）を用いてトランスフェクトされたＣＯＳ−１細胞、を使用する。２つの型のアッセイを用いる理由は、ハムスターの肝臓ミクロソームは、いくつかの異なるチトクロムＰ４５０酵素を有し、かつ新規化合物が、ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを特異的に阻害することがわかる必要があるからである。
【００７１】
（ハムスターの肝臓ミクロソームアッセイ法）
洗浄したハムスターの肝臓ミクロソームを、以下のように調製した：肝臓を屠殺した動物から取り外し、氷で冷やした０．９％ＮａＣｌ溶液でリンスし、３倍量の体積の０．２５Ｍスクロース−０．０５ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）をブレンダーを用いてホモジェナイズする。ミクロソームを、周知の技術を用いて分画遠沈法によって単離する（１０，０００×ｇ、２０分；１００，０００×ｇ、６０分；４℃）（Ｖａｎ　Ｗａｕｗｅ，Ｊ．；Ｖａｎ　Ｎｙｅｎ，Ｇ．；Ｃｏｅｎｅ，Ｍ−Ｃ．；Ｓｔｏｐｐｉｅ，Ｐ．；Ｃｏｌｓ，Ｗ．；Ｇｏｏｓｓｅｎｓ，Ｊ，Ｂｏｒｇｈｇｒａｅｆ，Ｐ．；Ｊａｎｓｓｅｎ，ＰＡＪ，Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ，ａｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｅｘｅｒｔｓ　Ｒｅｔｉｎｏｉｄ−Ｍｉｍｅｔｉｃ　Ｅｆｆｅｃｔｓ，Ｉｎ　Ｖｉｖｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｔ．Ｔｈｅｒ．２６１、７７３〜７７９、１９９２）。ミクロソームを、１ｍｌアリコート中でＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）に懸濁し、必要になるまで−７０℃で保存する。
【００７２】
標準的な反応混合物（全量４００μｌ）は、アッセイ緩衝液、１４０μｌ；ミクロソーム、１００μｌ（５００ｍｇタンパク質）；ＮＡＤＰＨ、１００μｌ（２０ｎＭ）；およびＤＭＳＯ中に溶解したＣ−４置換ＡＴＲＡアナログ、４０μｌから構成される。３７℃での３分間のプレインキュベーションの後、２０μｌの［１１，１２−３Ｈ］−ＡＴＲＡ（２０μＣｉ／ｍｌ）を添加することによって反応を開始する。インキュベーションは、酸素下、３７℃の温水浴中で振盪しながら３０分間行う。０．１ｍｌのギ酸を用いて酸性化することによって反応を停止し、サンプルを、０．０５％のブチル化ヒドロキシアニソールを含むＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）で抽出する（×２）。有機抽出物を合わせて減圧下でエバポレートし、ＨＰＬＣの移動相２００μｌに溶解する。液体シンチレーション分光計によってトリチウム含量に関してアリコートを分析する。たいてい、添加した放射能の＞９５％が回収される。サンプルのほとんど（１５０μｌ）を、１０（ｍＣ１８　Ｂｏｎｄａｐａｃｋカラム（３．９×３００ｍｍ）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で分析し、多重線形勾配溶媒システムを用いて溶出する：ｉ、１０ｍＭ酢酸アンモニウム（１００（０％））を含むＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ−ＨＣＯＯＨ（６０：４０：０．０５）、およびｉｉ、ＭｅＯＨ（０（１００％））、２ｍｌ／ｍｉｎ。放射能を、オンライン放射能検出器（ｏｎ−ｌｉｎｅ　ｒａｄｉｏ−ｄｅｔｅｃｔｏｒ）によって測定する。ＡＴＲＡ、４−ヒドロキシ−ＡＴＲＡおよび４−オキソ−ＡＴＲＡのＲＩＳを、別個のキュベット中、３５０ｎｍでＵＶ吸光度によって決定する。典型的には、［１１，１２−３Ｈ］ＡＴＲＡの８０±５％が代謝産物によって変換される。
【００７３】
Ｃ−４置換されたＡＴＲＡアナログを、２つの濃度、５００ｎＭおよび１０００ｎＭで試験する。ＩＣ５０およびＫｉ値を決定する。
【００７４】
（ｈＰ４５０ＲＡＩトランスフェクト化ＣＯＳ−１細胞方法）
ｈＰ４５０ＲＡＩ発現ベクターを、標準的なプロトコルに従って、ＣＯＳ−１へとトランスフェクトし、アッセイを標準的なプロトコルを用いて行う（Ｗｈｉｔｅ　ＪＡ、Ｇｕｏ　Ｙ−Ｄ、Ｂａｅｔｚ　Ｋ、Ｂｅｃｋｅｔｔ−Ｊｏｎｅｓ　Ｂ、Ｂｏｎａｓｏｒｏ　Ｊ．Ｈｓｕ　ＫＥ、Ｄｉｌｗｏｒｔｈ　ＦＪ、Ｊｏｎｅｓ　ＧおよびＰｅｔｋｏｖｉｃｈ　Ｍ、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　４−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２７１：２９９２２〜２９９２７　１９９６；Ｗｈｉｔｅ　ＪＡ、Ｂｅｃｋｅｔｔ−Ｊｏｎｅｓ　Ｂ、Ｇｕｏ　Ｙ−Ｄ、Ｄｉｌｗｏｒｔｈ　ＦＪ、Ｂｏｎａｓｏｒｏ　Ｊ．Ｊｏｎｅｓ　ＧおよびＰｅｔｋｏｖｉｃｈ　Ｍ、Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ−ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅｓ　（ｈＰ４５０ＲＡＩ）　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｓ　Ｐ４５０（ＣＹＰ２６）、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２７２：１８５３８〜１８５４１、１９９７）。手短に言うと、ＣＯＳ−１細胞を、ｐＴＬＩ中または空のコントロールｐＴＬＩ中で、１ｇのフェリドキシンおよびフェリドキシンレダクターゼ発現ベクターと共に３ｇのｈＰ４５０ＲＡＩを用いてトランスフェクトする。トランスフェクトされた細胞由来の培地を５７５ｐＭ［１１，１２−３Ｈ］ＡＴＲＡで２４時間インキュベートし、０．１％の酢酸を用いて酸性化することで反応を停止する。［１１，１２−３Ｈ］ＡＴＲＡの極性の代謝産物への代謝を、上述のように定量し、新規化合物を、その阻害効力に関して評価する。
【００７５】
（ＶＮ／１４−１ＲＡ、ＶＮ／１６−１ＲＡ、ＶＮ／１６−１ＲＡのメチルエステル、ＶＮ／１７−１ＲＡ）
上述のようなハムスターの肝臓ミクロソームを用いた［１１，１２−３Ｈ］ＡＴＲＡのインキュベーションは、４−ヒドロキシ−ＡＴＲＡおよび４−オキソ−ＡＴＲＡを含む極性の代謝産物の形成を生じる（図７Ａを参照のこと）。しかし、ＶＮ／１４−１ＲＡ（１μＭ）は、ＡＴＲＡが極性の代謝産物へとミクロソーム変換することを有意に抑制した（図７Ｂを参照のこと）。ＶＮ／１４−１ＲＡは、ＡＴＲＡのチトクロムＰ４５０依存型代謝を阻害する。
【００７６】
ＶＮ／１４−１ＲＡ、ＶＮ／１６−１ＲＡ、ＶＮ／１６−１ＲＡのメチルエステル、ＶＮ／１７−１ＲＡ、リアロゾール、およびケトコナゾール（ｋｅｔｏ）のＩＣ５０値は、以下の表１に示され、このＩＣ５０は、これら４つのＣ−４置換アゾールＡＴＲＡアナログが、ハムスターの肝臓ミクロソームのＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ酵素の優れたインヒビターであることを示す。これらの新規なＣ−４置換アゾールＡＴＲＡアナログは、リアロゾールまたはケトコナゾールのどちらよりもさらに強力である。１００ｎＭのＩＣ５０値を有するＶＮ／１４−１ＲＡは、リアロゾール（ＩＣ５０＝６０００ｎＭ）よりも６０倍強力である。
【００７７】
【表１】
2004509073.tif 000004
（アセチレン性（Ａｃｅｔｙｌｉｎｉｃ）ＡＴＲＡ、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ、およびシクロプロピルエーテルＡＴＲＡの酵素不活化活性）
アセチレン性ＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、およびシクロプロピルエーテル−ＡＴＲＡ（３５）は、これらの作用機構として酵素の不活性化を引き起こす。これら３つの新規化合物は、酵素の活性部位との相互作用および不可逆的にかまたは非常にきつくかのいずれかで酵素に結合する形態へのその変換のために、非常に特異的である。これら３つの新規化合物は、新しい酵素が合成されるまで、持続的に酵素を阻害する。従って、これら３つの新規化合物は、より持続性の効果およびより少ない副作用を有する。酵素の不活化を決定するために、ハムスターの肝臓ミクロソームを、アセチレン性ＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、またはシクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）を用いて、５、１０、１５、２０、または６０分間、上述のようにプレインキュベートする。次いで、結合していないアセチレン性ＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、またはシクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）を、木炭処理によって除去する。次いで、酵素活性を上述のように測定し、不活化反応のＫｉ値を計算する。前処理した酵素調製物を高濃度の基質と共にインキュベートすることによって、阻害の不可逆特性が実証される。なぜならば、アセチレン（ａｃｅｔｙｌｉｎｉｃ）ＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、またはシクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）が酵素にきつく結合していない場合および結合が可逆的な場合、過剰量の基質を用いてインヒビターを置換することが可能であるからである。さらに、阻害の不可逆性を示すために、前処理した酵素調製物を種々の時間で透析して、アセチレン性ＡＴＲＡ（３０）、シクロプロピルアミンＡＴＲＡ（３２）、またはシクロプロピルエーテルＡＴＲＡ（３５）を除去する。これらの化合物は、酵素からゆっくりと解離し得、次いで標準的な酵素活性評価を行う。
【００７８】
（ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６Ａ１）に対する高い特異性）　新規なＣ−４置換ＡＴＲＡアナログのＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼに対する高い特異性は、アロマターゼ、ＣＹＰ１７、およびハムスターの肝臓ミクロソーム調製物中に見出される他のチトクロムＰ４５０の阻害に関する試験によって実証される。チトクロムＰ４５０酵素（ＡＴＲＡ　４−ヒドロキシラーゼ以外）の阻害が不足していることを示すために、周知の技術を用いて、アンチピリン（チトクロムＰ４５０の周知のプローブ基質）がノルアンチピリン、および４−ヒドロキシアンチピリンおよび３−ヒドロキシメチルアンチピリンへ変換するのを測定する（Ｅｎｇｌｅ　Ｇ、Ｈｏｆｍａｎｎ　Ｕ、Ｈｅｉｄｅｍａｎｎ　Ｈ、Ｃｏｓｍｅ　Ｊ、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ　Ｍ、Ａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ　ａｓ　ａ　ｐｒｏｂｅ　ｆｏｒ　ｈｕｍａｎ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｄｒｕｇ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｃａｔａｌｙｚｉｎｇ　４−ｈｙｄｒｏｘｙａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ，３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ，ａｎｄ　ｎｏｒａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｃｌｉｎ　Ｐｈａｒｍ　Ｔｈｅｒａ　５９：６１３〜６２３、１９９６）。アロマターゼ阻害が不足していることを示すために、周知の技術を用いて、［１β−３Ｈ］アンドロステンジオンがエストロンおよびエストラジオールに変換するのを測定する（Ｂｒｏｄｉｅら、Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｎ　ａｒｏｍａｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，４−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−３，１７−ｄｉｏｎｅ，ｏｎｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ｉｎ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、Ｊｕｎ；１００（６）：１６８４〜９５、１９７７）。ＣＹＰ１７阻害が不足していることを示すために、周知の技術を用いて、［２１−３Ｈ］１７α−ヒドロキシプレグネノロンを、デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールへと変換することを測定する（Ｎｊａｒ　ＶＣＯ、Ｋａｔｏ　Ｋ、Ｎｎａｎｅ　ＩＰ、Ｇｒｉｇｏｒｙｅｖ　ＤＮ、Ｌｏｎｇ　ＢＪおよびＢｒｏｄｉｅ　ＡＭＨ、Ｎｏｖｅｌ　１７−Ａｚｏｌｙｌ　Ｓｔｅｒｏｉｄｓ；Ｐｏｔｅｎｔ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　１７−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ−Ｃ−１７，２０−Ｌｙａｓｅ（Ｐ４５０１７）：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｒｏｓｔａｔｅ　Ｃａｎｃｅｒ、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　４１：９０２〜９１２、１９９８）。
【００７９】
（ＡＴＲＡのインビボでの代謝の阻害）
新規化合物が、外因的に投与されたＡＲＴＡの生物学的半減期を増加させ、かつＡＴＲＡの内在性血漿レベルを向上させることを示すために、周知の手順を用いて、この新規化合物の外因的に投与されたＡＴＲＡの血漿除去に対する効果、そしてまたレチノイドの内在的レベルに対する効果を決定する（Ｖａｎ　Ｗａｕｗｅら、１９９０）。２００〜２２０ｇの重さのラットを、新規化合物［例えば、ポリエチレングリコール２００（ＰＥＧ２００）中で調製される５、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇ］またはビヒクル（ＰＥＧ２００）で体重１００ｇあたり０．５ｍｌの体積で経口処置する。１時間後、動物をジエチルエーテルで麻酔し、ＡＴＲＡ（０．１ｍｇ／ｋｇ）を静脈に注射する。注射後の指定した時間（例えば、１０、２０、３０、６０、９０、１８０、または２１０分）に、ラットを断頭によって屠殺し、ヘパリン（５００Ｕ／ｍｌ）で体内の血液を収集する。遠心分離（１０００×ｇ、１５分）後、血漿画分を回収し、すぐに処理する。抽出物を上述の条件を用いてＨＰＬＣに供し、溶離液を３５０ｎｍでのＵＶ吸収検出によってモニターし、そして、ピーク面積積分によってＡＴＲＡを定量する。
【００８０】
ＡＴＲＡの内在性血漿レベルに対する効果を評価するために設計された実験のために、ラットを、新規化合物［例えば、ポリエチレングリコール２００（ＰＥＧ２００）中で調製される５、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇ］またはビヒクル（ＰＥＧ２００）で体重１００ｇあたり０．５ｍｌの体積で経口処置する。動物を、種々の時間（例えば、１時間間隔、６時間まで）で屠殺する。血漿を収集し、処理して、ＡＴＲＡのレベルをＨＰＬＣによって決定する。
【００８１】
（レチノイドレセプター結合）
新規化合物がレチノイド関連アナログであるため、これらはレチノイドレセプターにインビボで結合し、従って、治療的潜在性を増加させる。ＡＴＲＡと同様に、これらの新規化合物は、レチノイン酸レセプター（ＲＡＲ、α、β、およびγ）のリガンドとして作用するが、レチノイドＸレセプター（ＲＸＲ、α、β、およびγ）のリガンドとしては作用しない。これらの新規Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログが、ＲＡＲのリガンドであってＲＸＲのリガンドでないことを示すために、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現される組換えＲＡＲタンパク質および組変えＲＸＲタンパク質を含む周知のアッセイ系を使用する（Ｎｅｒｖｉ　Ｃ、Ｇｒｉｐｐｏ　ＪＦ、Ｓｈｅｒｍａｎ　ＭＩ、Ｇｅｏｒｇｅ　ＭＤ、Ｊｅｔｔｅｎ　ＡＭ、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｈｕｍａｎ　ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ−６０　ｃｅｌｌｓ、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８６：５８５４〜５８５８、１９８９）。インヒビターに関する解離定数を、十分に記載された木炭吸収法によって決定する（Ｙａｎｇ　Ｎ、Ｓｃｈｕｌｅ　Ｒ、Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆ　ＤＪ、Ｅｖａｎｓ　ＲＭ、Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８８：３５５９〜３６６３、１９９１）。手短に言うと、ジメチルスルホキシドでの新規化合物の連続希釈物（１０−１１〜１０−５Ｍ）、各々１００μＬを使用する。粗細胞質ゾル抽出物１２ｍｇを、ｐＥＴ１５ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）／ｈＲＡＲ−α、ｈＲＡＲ−β、ｈＲＡＲ−γから調製し、この調製されたタンパク質は、各データ点で使用する。全ての反応を、最終の体積が１ｍＬで、結合緩衝液（６０ｍＭのＮａイミダゾール、５００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．９）中、４℃で１４〜１６時間行う。結合していない［３Ｈ］ＡＴＲＡを、４℃で１５分にわたって等しい寸法のデキストランで処理された木炭を、０．５ｍＬ加えることによって除去する（最終濃度３％［ｗｔ／ｖｏｌ］）。遠心分離後、０．５ｍｌの上清を液体シンチレーション計数に供する。１００倍過剰の非標識リガンドの存在下での結合を非特異的結合として定義し、一方、全体の結合から非特異的結合を引いたものを特異的結合と定義する。ＩＣ５０値は、対数プロットから得られる。
【００８２】
（インビトロでの前立腺癌増殖の阻害）
新規なＣ−４置換ＡＴＲＡアナログは、インビトロで前立腺癌の増殖を阻害する。２種の前立腺癌細胞株、ＬＮＣａＰ細胞およびＰＣ−３細胞に対して実験を行う。ＬＮＣａＰ細胞は、アンドロゲン依存性細胞培養物である。ＰＣ−３細胞は、アンドロゲン非依存性細胞培養物である。
【００８３】
（方法）
実験開始３日前に、ＬＮＣａＰ細胞を、ＡＴＲＡが存在しない培地へと移す。培地は、５％のＦＢＳおよび１％のＰ／Ｓを補充したフェノールレッドの存在しないＩＭＥＭからなる。次いで、細胞を、２４ウェル培養プレートの同じ培地１ｍｌ中へとプレートする（１ウェルあたり１５０００細胞）。２４時間の付着期間後、ビヒクル（エタノール）またはＡＴＲＡ（１０−５Ｍ）単独または新規化合物と組み合わせたＡＴＲＡをある濃度範囲で３つのウェルに添加する。培地／処理は、３日ごとに変える。処置の９日後、トリプシン（ｔｙｐｓｉｎ）／ＥＤＴＡを用いて、細胞をウェルから取り外し、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンターでカウントする。周知の方法を用いて（Ｗｏｕｔｅｒｓ　Ｗ、Ｖａｎ　Ｄｕｎ　Ｊ、Ｄｉｌｌｅｎ　Ａ、Ｃｏｅｎｅ　Ｍ．−Ｃ、Ｃｏｏｌｓ　ＷおよびＤｅ　Ｃｏｓｔｅｒ　Ｒ、Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｉａｒｏｚｏｌｅ，ａ　ｎｅｗ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｎ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｏｎ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ＭＣＦ−７　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　５２：２８４１〜２８４６、１９９２）、ＡＴＲＡを用いて増殖したＬＮＣａＰ細胞に対する新規化合物の阻害効果を決定する。
【００８４】
この方法をまた、ＰＣ−３細胞を用いて繰り返す。
【００８５】
（ＶＮ／１４−１ＲＡ、ＶＮ／１６−１ＲＡ、ＶＮ／１７−１ＲＡ）
図８は、ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１４−１ＲＡのＬＮＣａＰ細胞に対する阻害効果を示す。
【００８６】
【表２】
2004509073.tif 000005
ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１４−１ＲＡの全ての投薬は、薬物なしまたはＡＴＲＡ単独よりもＬＡＣａＰ細胞の増殖を阻害する。２つのより高い濃度のＶＮ／１４−１ＲＡ（１０−５Ｍおよび１０−６Ｍ）は、細胞の数が増加するのを防ぐ。
【００８７】
図９は、ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１６−１ＲＡのＬＮＣａＰ細胞に対する阻害効果を示す。
【００８８】
【表３】
2004509073.tif 000006
ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１６−１ＲＡの全ての投薬は、薬物なしまたはＡＴＲＡ単独よりもＬＡＣａＰ細胞の増殖を阻害する。最も高い濃度のＶＮ／１６−１ＲＡ（１０−５Ｍ）は、細胞の数の増加を停止する。
【００８９】
図１０は、ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１７−１ＲＡのＬＮＣａＰ細胞に対する阻害効果を示す。
【００９０】
【表４】
2004509073.tif 000007
ＡＴＲＡと組み合わせたＶＮ／１７−１ＲＡの全ての投薬は、薬物なしまたはＡＴＲＡ単独よりもＬＡＣａＰ細胞の増殖を阻害する。全ての濃度のＶＮ／１７−１ＲＡは、効果的に細胞の数の増加を防ぐ。
【００９１】
比較として、図１１は、ＡＴＲＡと組み合わせたリアロゾールのＬＮＣａＰに対する阻害効果を示す。
【００９２】
【表５】
2004509073.tif 000008
リアロゾールもまた、ＡＴＲＡと組み合わせた場合に、薬剤なしまたはＡＴＲＡ単独よりもＬＡＣａＰ細胞の増殖を阻害する。最も高い濃度のリアロゾール（１０−５Ｍ）のみが細胞の数の増加を防ぐ。
【００９３】
（前立腺癌および乳癌のインビボでの阻害）
前立腺癌に対する新規化合物の抗増殖効果は、ＬＮＣａＰ細胞またはＰＣ−３細胞を移植したＳＣＩＤマウスに新規化合物を投与することによって示される。これらのＬＮＣａＰ細胞およびＰＣ−３細胞は、ＳＣＩＤマウス中で腫瘍へと発達する。増殖シミュレーションの機構が異なるが、臨床的な前立腺癌の性質の多くを共に示すので、このモデルは、ヒトにおける効力の指標を提供する。さらに、新規化合物の乳癌に対する抗増殖効果は、ＳＣＩＤマウス中で腫瘍へと発達するＭＣＦ−７Ｃａ細胞を移植したＳＣＩＤマウスに対して新規化合物を投与することによって示され得る。
【００９４】
（方法）
ＬＮＣａＰ細胞を、上述のように培養する。密集する前の細胞をＤＰＢＳへと掻きとり、計数して、Ｍａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁する（３×１０７細胞／ｍＬ）。４〜６週齢の雄ＳＣＩＤマウスを、ＮＣＩ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤから得る。それぞれのマウスを０．１ｍＬの細胞懸濁液で皮下２箇所に播種する。増殖速度を、周知の技術を用いてカリパスを用いて腫瘍の体積から決定する（Ｙｕｅ　Ｗ、Ｗａｎｇ　Ｊ、Ｓａｖｉｎｏｖ　Ａ、Ｂｒｏｄｉｅ　Ａ、Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｒｏｍａｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｍａｍｍａｒｙ　ｔｕｍｏｒｓ　ｉｎ　ａ　ｎｕｄｅ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、Ｊｕｌ　１５；５５（１４）：３０７３〜７（１９９５）。腫瘍の体積を、以下の式に従って計算する：Ｖ＝４／３×π×ｒ１２×ｒ２（ｒｌ＜ｒ２）。腫瘍を、細胞播種後４〜５週間増殖させ得る。次いで、マウスを、去勢、あるいはビヒクル、リアロゾール（比較として）、またはＣ−４置換ＡＴＲＡアナログ（各新規化合物のＩＣ５０値および／またはＫｉ値に基づいて種々の濃度で、ｍｇ／ｋｇ／日）の１つでの処置についてグループ分けする（１グループあたり６マウス）、。Ｃ−４置換ＡＴＲＡアナログの投与経路としては、皮下、筋内、腹腔内、および経口が挙げられる。腫瘍を、処置の４〜５週の間毎週測定し、腫瘍の体積を計算する。血液は、最後の注射の１時間後に剖検して安楽死させた動物から収集する。腫瘍を切除し、計量して、必要になるまで−８０℃で保存する。ＳＣＩＤマウス中のＬＮＣａＰ腫瘍における抗腫瘍効力に関して化合物を評価するための標準的な周知の試験は、以下に記載される：Ｇｒｉｇｏｒｙｅｖ　Ｄ　Ｎ、Ｋａｔｏ　Ｋ、Ｎｊａｒ　ＶＣＯ、Ｌｏｎｇ　ＢＪ、Ｌｉｎｇ　Ｙ、Ｗａｎｇ　Ｘ、Ｍｏｈｌｅｒ　ＪおよびＢｒｏｄｉｅ　ＡＭＨ、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０ｃ１７　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　Ｅ．Ｃｏｌｉ　ａｓ　ａ　ｆｉｒｓｔ−ｓｔｅｐ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　１７−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ−Ｃ１７，２０−Ｌｙａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　２６７：３１９〜３３０、１９９９ａ、およびＧｒｉｇｏｌｙｅｖ　ＤＮ、Ｌｏｎｇ　ＢＪ、Ｎｊａｒ　ＶＣＯ、Ｌｉｕ　Ｙ、Ｎｎａｎｅ　ＩＰおよびＢｒｏｄｉｅ　ＡＭＨ、Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｎｅｗ　１７−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ／Ｃ１７，２０−Ｌｙａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｎ　ＬＮＣａＰ　Ｐｒｏｓｔａｔｅ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ　Ｇｒｏｗｔｈ，Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　Ｉｎ　Ｖｉｖｏ．Ｂｒ　ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃａｎｃｅｒ　８１：６２２〜６３０、１９９９ｂ。
【００９５】
ＰＣ−３腫瘍に関して、同じ方法を利用する。
【００９６】
ＭＣＦ−７Ｃａ腫瘍に関して、ＳＣＩＤマウスが雌であって、卵巣切除を受け、アンドロステンジオンを接種（０．１ｍｇ／日）していることを除いて同様の方法を利用する。
【００９７】
（ＶＮ／１４−１ＲＡ）
図１２に示されるように、１０ｍｇ／ｋｇのＶＮ／１４−１ＲＡがＭＣＦ−７ＣＡ腫瘍を有するマウスに投与される場合、腫瘍は、コントロールグループ中の腫瘍と同じ速さでにサイズが増大しない。２８日後、１０ｍｇ／ｋｇのＶＮ／１４−１ＲＡを与えられたグループは、腫瘍の増殖が遅く、コントロールグループの腫瘍の半分のサイズである。
【００９８】
【表６】
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米国仮特許出願番号６０／２１７，４６５号は、参考として本明細書中に援用される。
【００９９】
一方、本発明は、詳細に記載され、それらの特定の実施形態に対する参考と共に記載されるが、種々の変更および改変は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本明細書中に作製され得ることは、当業者に明らかである。熟練者は、本明細書中に引用されている実施例は、例示しているのみであり、限定を意味しないことをさらに理解する。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１。Ｃ−４でアゾール置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。ＴＭＳＣＨＮ２は、トリメチルシリルジアゾメタンの略語であり；ＣＤＩは、カルボニルジイミダゾールの略語であり；そしてＣＤＴは、カルボニルジトリアゾールの略語である。
【図２】
図２。Ｃ−４で硫黄置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。ＴＭＳＩは、トリメチルスルホニウムヨージドの略語であり、ＴＰＳは、トリフェニルホスフィンスルフィドの略語であり、そしてＤＤＴは、ジチオールスレイトールの略語である。
【図３】
図３。Ｃ−４で酸素置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。
【図４】
図４。Ｃ−４で窒素置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。
【図５】
図５。Ｃ−４でピリジル置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。
【図６】
図６。機構に基づくインヒビターであるＣ−４で置換されたＡＴＲＡアナログの模式的な合成経路。
【図７】
図７。ＶＮ／１４−１ＲＡは、ハムスターの肝臓ミクロソームにおいてＡＴＲＡ代謝を阻害する。図７Ａは、ＶＮ／１４−１ＲＡを有さない。図７Ｂは、１μＭのＶＮ／１４−１ＲＡを有する。
【図８】
図８。ＶＮ／１４−１ＲＡおよびＡＴＲＡは、ＬＮＣａＰ細胞の増殖を阻害する。
【図９】
図９。ＶＮ／１６−１ＲＡおよびＡＴＲＡは、ＬＮＣａＰ細胞の増殖を阻害する。
【図１０】
図１０。ＶＮ／１７−１ＲＡおよびＡＴＲＡは、ＬＮＣａＰ細胞の増殖を阻害する。
【図１１】
図１１。リアロゾールおよびＡＴＲＡは、ＬＮＣａＰ細胞の増殖を阻害する。
【図１２】
図１２。ＶＮ／１４−１ＲＡは、ヌードマウスのＭＣＦ−７Ｃａ腫瘍の増殖を阻害する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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