(57)【要約】ある種の塩をアジュバントとして含む非経口ワクチン製剤及びアジュバント組成物が開示される。そのような非経口ワクチン製剤は、本ワクチン製剤又はアジュバント組成物の投与による免疫応答を患者に生じさせるために使用される。またコレラの塩の非経口ワクチン製剤及びアジュバント組成物中アジュバントとしての使用、および、それらの塩を含むワクチンアジュバントも開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つの免疫原性物質を含み、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩をアジュバントとして含む非経口ワクチン製剤であって、前記塩がリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウムまたは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンと一緒のゲル状水酸化カルシウムではない、前記非経口ワクチン製剤。
【請求項２】
アジュバントが無機塩から選ばれる、請求項１に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項３】
アジュバントが有機塩から選ばれる、請求項１に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項４】
アジュバントが、オキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸で形成される塩、またはそれらの水和物から選ばれる、請求項１または２に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項５】
アジュバントが、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、Ｚｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる、請求項１または２または４に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項６】
アジュバントが、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、およびジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる、請求項１〜２および４〜５のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項７】
アジュバントが、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウム、から選ばれる請求項１〜２および４〜６のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項８】
アジュバントが、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれる、請求項１〜２、４〜７のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項９】
更に追加のアジュバントを含む請求項１〜８のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１０】
追加のアジュバントが、Ｑｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡ、リン酸カルシウムおよびアルミニウム塩から選ばれる、請求項９に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１１】
更に製薬的に許容できる賦形剤および／または担体を含む請求項１〜１０のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１２】
更に希釈剤、バッファー、懸濁剤、可溶化剤、ｐＨ調整剤、分散剤および／または着色愛を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１３】
静脈内投与、筋肉内投与、関節内投与、皮下投与、経皮投与、上皮投与、腹腔内投与用の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１４】
アジュバントの陽イオンが約０．０００４〜約１２０Ｍ、例えば、約０．００４〜約１２Ｍの量で存在する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１５】
アジュバントの陽イオンが約０．００８〜約６Ｍの量で存在する、請求項１４に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１６】
アジュバントが水酸化マグネシウムである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１７】
アジュバントが炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１８】
アジュバントが二酸化チタンである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項１９】
アジュバントが、水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物の組み合わせ、または、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、または炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項２０】
Ｑｕｉｌ ＡやＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧ Ａ、リン酸カルシウムおよびアルミニウム塩から選ばれる追加のアジュバントを更に含む、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤。
【請求項２１】
Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩を含む、非経口用のアジュバント組成物であって、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない、前記組成物。
【請求項２２】
塩が無機塩から選ばれる請求項２１に記載のアジュバント組成物。
【請求項２３】
塩が有機塩から選ばれる請求項２１に記載のアジュバント組成物。
【請求項２４】
塩が、オキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ばれる、請求項２１〜２２のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項２５】
塩がＭｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸、との間で形成される塩またはそれらの水和物から選ばれる、請求項２１〜２２および２４のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項２６】
、塩が、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる、請求項２１〜２２および２４〜２５のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項２７】
塩が水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウム、から選ばれる、請求項２１〜２２および２４〜２６のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項２８】
塩が水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれる、請求項２１〜２２、および２４〜２７のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項２９】
更に、追加のアジュバントを含む、請求項２１〜２８記載のアジュバント組成物。
【請求項３０】
追加のアジュバントがＱｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡ、リン酸カルシウム、およびアルミニウム塩から選ばれる、請求項２９に記載のアジュバント組成物。
【請求項３１】
更に製薬的に許容できる賦形剤および／または担体を含む、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３２】
希釈剤、バッファー、懸濁剤、可溶化剤、ｐＨ調製剤、分散剤、および／または着色剤を更に含む、請求項２１〜３１のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３３】
塩の陽イオンが約０．０００４〜約１２０Ｍ、例えば、約０．００４〜約１２Ｍの量で存在する、請求項２１〜３２のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３４】
塩の陽イオンが約０．００８〜約６Ｍの量で存在する、請求項３３に記載のアジュバント組成物。
【請求項３５】
塩が水酸化マグネシウムである、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３６】
塩が炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物である、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３７】
塩が二酸化チタンである、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３８】
塩が水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、または炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンとの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせである、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項３９】
Ｑｕｉｌ ＡやＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧ Ａ、リン酸カルシウムおよびアルミニウム塩から選ばれる追加のアジュバントを含む、請求項３５〜３８のいずれか１項に記載のアジュバント組成物。
【請求項４０】
Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩を含むアジュバントであって、前記塩がリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない、前記アジュバント。
【請求項４１】
塩が無機塩から選ばれる、請求項４０に記載のアジュバント。
【請求項４２】
塩が有機塩から選ばれる、請求項４０に記載のアジュバント。
【請求項４３】
塩が、オキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ばれる、請求項４０または４１に記載のアジュバント。
【請求項４４】
塩が、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸、との間で形成される塩、またはそれらの水和物、から選ばれる、請求項４０または４１または４３に記載のアジュバント。
【請求項４５】
塩が、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる、請求項４０〜４１および４３〜４４のいずれか１項に記載のアジュバント。
【請求項４６】
塩が、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウム、から選ばれる請求項４０〜４１および４３〜４５のいずれか１項に記載のアジュバント。
【請求項４７】
塩が水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれるか、または、塩が水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせから選ばれる、請求項４０〜４１および４３〜４６のいずれか１項に記載のアジュバント。
【請求項４８】
請求項４０〜４７のいずれか１項に記載のアジュバント、または請求項２１〜３９のいずれか１項に記載のアジュバント組成物の、非経口ワクチン製剤の成分としての使用。
【請求項４９】
Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、または、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、またはそれらの水和物の、非経口投与用ワクチン製剤中のアジュバントとしての使用であって、前記塩がリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない、前記使用。
【請求項５０】
Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成され塩、および、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、またはそれらの水和物の、アジュバント組成物中のアジュバントとしての使用であって、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない、前記使用。
【請求項５１】
塩が無機塩から選ばれる、請求項４９または５０に記載の使用。
【請求項５２】
塩が有機塩から選ばれる、請求項４９または５０に記載の使用。
【請求項５３】
塩が、オキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ばれる、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５４】
塩が、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸、との間で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる、請求項４９〜５１および５３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５５】
塩が、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される、請求項４９〜５１および５３〜５４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５６】
塩が、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウムから選ばれる、請求項４９〜５１および５３〜５５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５７】
塩が、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれるか、または、塩が水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせから選ばれる、請求項４９〜５１および５３〜５６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５８】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤を患者に投与することを含む、患者に免疫応答を生じさせる方法。
【請求項５９】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の非経口ワクチン製剤を投与することを含む、ヒトを含む脊椎動物のワクチン接種または治療。
【請求項６０】
Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素から形成される、またはＴｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素から形成される、乾燥形態の塩または予め形成させたゲル形態の塩に液体を加えてアジュバント組成物を得ること、および、前記アジュバント組成物を１以上の免疫原性物質および場合により製薬的に許容できる担体および／または賦形剤と混合してそれにより非経口ワクチン製剤を得ること、を含む請求項１〜２０のいずれか１項記載の非経口ワクチン製剤の調製方法であって、前記塩がリン酸カルシウムでなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない、前記方法。
【請求項６１】
請求項６０に記載の方法によって得られる非経口ワクチン製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ある種の塩をアジュバントとして含む非経口ワクチン製剤およびアジュバント組成物の分野に関する。このような新規な非経口ワクチン製剤は、このワクチン製剤の投与に伴う免疫応答をヒトのような脊椎動物を含む患者に生じさせるために使用される。本発明はさらに、非経口ワクチン製剤中のアジュバントとしてのこれらの塩の使用、およびそのような塩を含むワクチンアジュバントに関する。
【０００２】
発明の背景
免疫学的アジュバントとは、抗原と共に投与された場合に、その抗原に対する応答を増強する能力を有する物質である。ワクチン製剤中の成分として使用された場合に、アジュバントは、ワクチン接種された患者の免疫応答を増強し、それによってワクチン成分量を低減させ、または所望の免疫応答を誘導するために必要な投与回数を減らすという点でワクチンの抗原性を改善するものである。
誘導されたエフェクター免疫応答は、液性、すなわち抗体応答であることも、または、細胞性、すなわち、細胞障害性Ｔ−細胞応答であることもあり、エフェクター応答はその両方の混合であることもある。細胞性免疫応答も液性免疫応答もどちらもＴヘルパーリンパ細胞の助けを必要とする。炎症を引き起こす、または催炎症性サイトカインを誘導するアジュバントは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２およびＩＦＮγの産生を含む１型Ｔヘルパー応答（Ｔｈ１）を誘導するであろう。これらのサイトカインは、細胞障害性Ｔリンパ細胞（ＣＴＬ）応答、好中球炎症および、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３のようなＴｈ１抗体応答の誘導を支援する。非炎症性のアジュバントは、サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０の産生を含む２型ヘルパー応答をより誘導しやすい。これらのサイトカインはＴｈ１応答をダウンレギュレーションし、ＩｇＥおよびＩｇＧ４のようなＴｈ２抗体、および、好酸球増加のようなある種の細胞性応答の誘導を促進する。
【０００３】
アジュバントは長年免疫学及びワクチン技術の分野で応用されてきたが、その作用の根底にある作用機序は完全には分かっていない。このことは新規なアジュバント候補を同定するための研究において明らかな複雑さをもたらす。
いくつかの物質がそのアジュバント特性に関して研究されており、現在も研究されている。いくつかの例として、アルミニウム塩、ＰＬＧ（ポリアクチドコグリコリド）、ＭＦ５９（水中のスクアレンエマルジョン）のような水中油エマルジョン、Ｑｕｉｌ Ａ、Ｑｓ−２１およびＩＳＣＯＭが挙げられる。しかしながら、テストされたアジュバントの多くは、いくつかの欠点を有しており、それにはいくつかの抗原と一緒の場合には効果がないこと、接触過敏症、皮下小結節および肉芽腫性炎が含まれる。他のものは、なお臨床試験において重要な評価を待っているところである。
このように、ヒトのワクチンに使用できる、改良された、またはより安全なアジュバントに対する需要が依然として存在する。
【０００４】
発明の概要
驚くべきことに、ある種の塩が非経口投与用のワクチン製剤のアジュバントとして特に適していることが見いだされた。そのような塩は、さらにアジュバント組成物の成分として特に適している。
従って、本発明は、少なくとも一つの免疫原性物質を含み、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩をアジュバントとして含む非経口ワクチン製剤であって、前記塩がリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウムまたは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンと一緒のゲル状水酸化カルシウムではない、前記非経口ワクチン製剤に関する。
【０００５】
本発明は、さらに、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩を含むアジュバント組成物であって、前記塩がリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウムまたは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンと一緒のゲル状水酸化カルシウムではない、前記アジュバント組成物に関する。
本発明はまた、そのような塩を含むアジュバントに関する。
【０００６】
さらなる側面において、本発明は、非経口投与用のワクチン製剤の成分としての本アジュバントおよび本アジュバント組成物の使用、非経口投与用ワクチン製剤中のアジュバントとしてのそのような塩の使用、およびそのような塩のアジュバント組成物の成分としての使用に関する。
本発明はまた、ワクチン製剤を非経口経路によって投与することを含む、免疫応答を生じさせる方法に関する。
本発明はまた、本発明のワクチン製剤を投与することによってワクチン接種または治療を可能とする。
さらに、本発明は、本発明のアジュバント組成物および非経口ワクチン製剤を調製するための方法に関する。
【０００７】
発明の詳細な記載
上述したように、アジュバントの作用機序は完全には分かっていない。しかしながら、アジュバントがその効果を発揮する一般的な理論的原理は存在する。すなわち、
（１）アジュバントは抗原の貯蔵庫を作りだし、長時間にわたる遅延した緩効性放出を生じさせ、それにより追加ワクチン接種の必要性を低減するのかもしれず、
（２）アジュバントは抗原提示細胞（ＡＰＣ）による抗原取り込みを増強し、抗原を細胞内抗原プロセッシング経路に接近し易くするのかもしれず、
（３）アジュバントは催炎性、すなわち、マクロファージ、単球および他の免疫系の細胞を誘引し活性化する、またはサイトカイン産生を刺激するのかもしれない。
【０００８】
さらに、アジュバント活性に関係するいくつかの他の因子が抗原の免疫原性を促進すると考えられている。それらには以下が含まれる。
（１）抗原粒子のレンダリング、たとえば、アルミニウム塩、
（２）ポリマーまたは抗原の重合化、
（３）抗原の緩効性放出、たとえば、エマルジョンまたはミクロカプセル化、
（４）バクテリアおよびバクテリアの産物、たとえばＣＦＡ、
（５）他の化学アジュバント、たとえばｐｏｌｙ−Ｉ：Ｃ、硫酸デキストランおよびイヌリン、
（６）サイトカイン、および、
（７）抗原のＡＰＣへの標的化。
【０００９】
多数のアジュバント（たとえば、アルミニウム塩、ＰＬＧ、ＩＳＣＯＭ、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）、ＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）、Ｑｕｉｌ Ａ、およびＱｓ−２１）は実験的および獣医学的に使用されてきたが、アルミニウム塩（水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム）が現在ヒトに日常的に使用されている唯一のアジュバントである。
アルミニウムを基礎とするワクチンは、最も一般的には、予め形成させたリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムゲルを抗原と混合し、抗原をゲルに吸着させることによって製造されている。アルミニウム塩はいくつかのメカニズムによってアジュバントとしてその効果を示すと考えられている。アルミニウム塩は注射部位において抗原の貯蔵庫を形成し、免疫系の種々の細胞を誘引し、局所的炎症事象をもたらすと考えられている。アルミニウム塩は抗原提示細胞にもっともよく取り込まれるようである。１０μｍまたはそれより小さな大きさの粒子は抗原提示細胞に効果的に取り込まれる。アルミニウムゲルの粒子サイズは０．５〜１０μｍであり、このことはもっともらしい（参考文献６を参照せよ）。
【００１０】
アルミニウム塩は比較的安価であり製造が容易であり、それに加えて安全性およびアジュバント活性について優秀な実績があるが、アルミニウム化合物の使用と結びついたある種の問題が存在する。これらには、実験動物およびヒトのいずれにおいても、紅斑、接触過敏症、皮下小結節、肉芽腫性炎のような局所反応、特異的かつ全体的ＩｇＥ抗体応答（アレルギーのようにある種の病理的状態における不要な抗体）が含まれる。加えて、アルミニウム塩はある種の抗原と一緒の場合にアジュバントとして効果がないことが報告されている（Ｇｕｐｔａら、参考文献１参照）。困惑させる観察がさらに報告されている。いくつかの研究においてアルミニウムが中枢神経系の実験的変性疾患を生じさせ得ることが示唆されている（Ｒａｏら、参考文献２参照）。今なお、アルツハイマー疾患のようなヒトの神経変性性疾患の発症とアルミニウム含有ワクチンの使用とを関連づける臨床的証拠は存在しないものの、この関連性が想定され、広く議論されている（Ｓａｖｏｒｙら、参考文献３）。このことはヒトにアルミニウム含有アジュバントを継続的に使用することについて幾分かの不安を生じさせ、従ってアルミニウムフリーアジュバントの代替え物の探索が求められている。
【００１１】
また、水酸化アルミニウムと組み合わせた水酸化マグネシウムの使用も研究されている。水酸化マグネシウム単独では低い吸収活性しか有しないが、アジュバントとしての水酸化アルミニウムの活性を増強することができる（Ｓｔａｓら、参考文献８参照）。
原子量４、分子量９の最も軽い金属であるベリリウムは抗原として機能することが知られており、更に、ＩＦＮ−γの産生を促進し、ＩＬ−１２の特性を増強するアジュバントとして働くことが可溶性リーシュマニア抗原で免疫したリーシュマニア感受性マウスに関する研究で示されている。ベリリウムがＩＬ−１２と協同する能力を有することはアジュバントの開発において重要な要素であろう。従って、ベリリウムはワクチンアジュバントとして開発のための将来性があると提唱されてきた（Ｌｅｅら、参考文献７）。
【００１２】
このように、多数のアジュバント候補が提案されてきた。しかしながら、それらの有望な新規なアジュバント候補は、前臨床試験でテストしたときにアジュバントのために望まれる１以上の特徴を欠いていたため、開発段階を通過することができなかった（参考文献４）。多くのアジュバント候補は許容できないレベルの毒性を示し、従って慢性ウイルス感染、癌またはＨＩＶ治療のような、高レベルの局所的または全身性副作用がより受け入れ易い、極めて重篤な状態に用途が限定されている。候補のいくつかは製造コストが高すぎたり、製造及び精製が実行するには複雑すぎることが分かった。さらに、ヒト用の優れたアジュバントは長期、好ましくは１年にわたる物理化学的安定性を示さなければならず、いくつかのアジュバント候補は限られた保存期間しか有しないことが分かっている。
【００１３】
ＰＬＧポリマーは最初、生分解性手術用縫合糸、および種々のホルモン用の徐放性製剤（ｄｅｐｏｔ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）用として開発された。ＰＬＧの特徴（生分解性、証明されているヒトにおける安全性、および製造が比較的容易であること）によりＰＬＧは明らかなワクチンデリバリー候補となっている。このシステムは、抗原、および必要であれば他の成分を１〜１００μｍ微小球体に封入することに基づいている。粒子が分解すると抗原が放出される。放出のキネティクスはポリマーの組成を変えることによって調整することができる。より小さな微小球体（≦１０  μｍ）は抗原提示細胞によって取り込まれ、従って抗原を免疫適格組織へ標的化されるであろう。このＰＬＧ技術の主たる欠点は製造工程に必要とされる過酷な物理的および化学的条件であり、そのためこの技術はある種の不安定な抗原には利用価値が低いものになっている。ＰＬＧの良好な安全性プロファイルは確立されているが、ＰＬＧワクチンのアジュバント活性はなお臨床試験における決定的評価が待たれる（Ｎｅｗｍａｎ、参考文献４参照）。
【００１４】
ＭＦ５９のような水中油エマルジョン（水中のスクアレンエマルジョン）は油性エマルジョン中では水よりも液性であり、従って注射部位における抗原貯蔵を形成することは意図されていない。むしろ、水中油エマルジョンは、抗原提示細胞に液滴が取り込まれたときにそのアジュバント効果を現すと考えられている（Ｏ’Ｈａｇａｎら、参考文献５）。エマルジョンが調製され、続いて抗原が添加され、そのようにしてこの技術は壊れやすく不安定な抗原に適したものとなり、または抗原の３次元構造の維持が必要な目的に適したものとなる（Ｎｅｗｍａｎ、参考文献４）。ＭＦ５９ワクチンの効能は、報告によれば多数の動物においてアルミニウム塩製剤としてデリバリーされたワクチンよりも５０倍に達するほど高い（Ｏ’Ｈａｇａｎら、参考文献５）。報告によればＭＦ５９アジュバントは、細胞性免疫よりも抗体応答を誘導し、従って、抗体応答を誘導又は増強することを目的としたワクチンに使用するためにより適している（Ｎｅｗｍａｎ、参考文献４参照）。
【００１５】
Ｑｕｉｌ Ａ、Ｑｓ−２１およびＩＳＣＯＭのような他のアジュバント系は、天然産物、すなわちサポニン（ステロールおよびトリテルペノイドグリコシド、キラヤ（Ｑｕｉｌａｊａ ｓａｐｏｎｉａｒｉａ）の樹皮由来）に基づいている。Ｑｕｉｌ Ａは２０種以上のキラヤサポニンの粗調製物であり、現在、獣医学ワクチン技術に使用されている。しかしながら、この製品の不均質性および毒性のために、Ｑｕｉｌ Ａはヒトワクチン用には適していない。このことは、Ｑｕｉｌ Ａ中の個々のサポニンの更なる精製につながる。実験的ワクチン研究及び毒物学的研究により、Ｑｓ−２１はヒトワクチン用途に最も適したサポニンであることが明らかにされた（Ｎｅｗｍａｎ、参考文献４）。Ｑｕｉｌ ＡもＱｓ−２１もいずれも実験動物において抗原応答のみならず細胞性免疫応答も誘導することができる。Ｑｓ−２１は現在臨床試験においてテストされている。ＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）は、コレステロール、サポニンおよびリン脂質から構成される球状の中空粒子である。動物におけるワクチン研究により、ＩＳＣＯＭ製剤を使用した場合には、同様の免疫応答を誘導するためにより少ない用量のサポニンしか必要とされないことが示された。しかしながら、ＩＳＣＯＭは製造が複雑であり、Ｑｓ−２１に比較した利点はなお議論されている（Ｎｅｗｍａｎ、参考文献４）。
【００１６】
上記から明らかなように、適切なアジュバント、特にヒト用途に適したアジュバントに対する需要が存在する。理想的なアジュバント候補が最も好ましく示すべきいくつかの鍵となる特徴がある。すなわち、以下の通りである。
（１）安全性
アジュバントは好ましくは十分に非毒性かつ生分解性でなければならず、好ましくは局所的および全身的反応の誘導が最小限でなければならない。
（２）効能
アジュバントは好ましくは抗原の量および／または長期に持続する免疫応答（抗体応答にしろ細胞性応答にしろ）を誘導するために必要な適用回数を低減させることができなければならない。
（３）安定性
アジュバントは、好ましくは長期間、好ましくは１年以上にわたって、４℃または室温にて安定でなければならない。また製造工程は抗原に対して有害な効果を持ってはならない。
（４）製造及びコスト
ワクチン製造の費用を膨大に増加させないように、アジュバントは好ましくは製造が容易で、製造は安価にできる必要がある。
【００１７】
本発明は上記基準のいくつか、または全部を満たすアジュバントを提供する。驚くべきことに、ある種の塩が非経口ワクチン製剤においてアジュバントとして作用し得ることが明らかになった。
従って、第１の特徴において、本発明は、少なくとも１つの免疫原性物質を含み、周期律表の第２族元素と形成される塩および周期律表の第４族元素と形成される塩、および、それらの塩の水和物、から選ばれる少なくとも一つの塩を含む非経口ワクチン製剤に関する。但し、前記塩はリン酸カルシウムでないことを条件とする。
アジュバント塩の利点は多数ある。驚くべきことに、これらの塩は、非経口ワクチン製剤中に含まれていると、多くの場合に免疫応答を誘導するために必要な免疫原性物質の量を低下させ得ることが示され、アジュバントとして作用することが見いだされた。さらに、これらの塩のアジュバント活性は、慣用的に使用されるアジュバントに比較して、ある場合には早期に開始される免疫応答および／または長期持続性の免疫応答を誘導し得る。従って、免疫の所望のレベルを達成し、維持するための追加免疫の回数が減るであろう。さらに、研究により、本明細書に記載した塩を非経口投与用ワクチン製剤用に使用することは、ある場合には、免疫応答の規模を増大させ、従来使用されてきた水酸化アルミニウムの場合に見られるよりも大きな程度にまで増大させることが示された。
【００１８】
これは、アジュバント塩は、免疫原性物質の貯蔵庫を形成し、それよって免疫原物質の徐放性で長時間作用性の放出を長期にわたって生じさせることによってアジュバントとしての効果を現すからであろう。一方、この塩は抗原提示細胞による免疫原物質の取り込みを促進することもできるであろう。しかしながら、上記は仮説であって、限定的効果を有するものでないことを強調しておく。
この塩は、多数の物理的−化学的特性を有することによって特徴づけることができる。これらの特性はアジュバントとして高い程度で機能するか低い程度で機能するかという塩の能力に影響を与えると考えられている。例えば、溶解度定数、格子エネルギー、結合の性質（イオン結合に対して共有結合）、ｐＨ、酸化状態、粒子サイズおよび免疫原性物質の吸着能が全て関与する。実施例中に列挙した化合物は低い溶解度と高い格子エネルギーを有する。さらに、実施例のワクチン製剤はわずかにアルカリ性である。このように、特徴のいくつかはアジュバント活性との関連で重要である。しかしながら、上述したことは仮説であり、本発明の範囲に何ら限定的効果を及ぼさないことは言うまでもない。
上述の定義の範囲内にある塩は既知の化学的化合物であり、いくつかは現在獣医薬用またはヒト用医薬用の緩下剤、制酸剤として、または化粧品用途に応用されている（以下の表中の齢参照）。どの塩もこれまでに単独のアジュバントとして非経口ワクチン製剤に使用されていない。
【００１９】
【表１】
2004515468.tif 000002
１水への溶解度、製造業者による。
２推奨される最大容量（ｇ／ｋｇ体重）
ｈ  ヒト用の使用認可
ｖ  獣医薬用使用認可
【００２０】
本明細書において、用語「アジュバント」は免疫学的アジュバントをいう。この用語により、免疫原性物質に対する免疫系の応答を増強することのできる化合物が意味される。用語「免疫原性」とは、単独で、またはアジュバントと共に対象に投与されたときに、その対象に免疫応答を誘導する物質又は活性成分の性質をいう。用語「免疫応答」とは、特異的な液性免疫応答（すなわち抗体）および細胞性免疫応答、血清学的および分泌性の、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥおよび全てのイソタイプ、アロタイプおよびそれらのサブクラスに属する抗体を含む。この用語は更に、他の血清または組織成分を含むべく意図されている。細胞性応答には１型および２型Ｔヘルパーリンパ細胞、細胞障害性Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。
【００２１】
ワクチン接種／免疫化の概念は免疫系の２つの基本的な特徴、すなわち特異性とメモリーに基づいている。最初のワクチン接種／免疫化は、対象が攻撃される抗原に向けられた特異的な応答を開始させるであろう。さらに、メモリーＢおよびＴリンパ細胞の集団が誘導されるであろう。抗原またはその抗原が由来する病原体に再度曝露されると、免疫系が起動されて、より迅速に且つより激しく応答するであろう。そのようにして、ワクチン接種／免疫された個体は病原体に対する免疫学的防御が付与される。
ワクチン製剤中に１以上の免疫原性物質を使用することは本発明の範囲内である。ワクチンが１以上の免疫原性物質を含む事例は、いわゆるコンビネーションワクチンである。
【００２２】
免疫原性物質の例として、抗原、アレルゲン、変性アレルゲン、ペプチド、タンパク質、ハプテン、炭水化物、ペプチド核酸（ＰＮＡ、一種の合成遺伝子模倣物）、およびウイルス性またはバクテリア性物質およびそれらの類似物または誘導体がある。この文脈において、用語「類似物または誘導体」は免疫原性物質の修飾形態を含む。修飾は化学的修飾または合成的修飾、例えば、ＰＥＧ化（ＰＥＧ＝ポリエチレングリコール）、ビオチン化、脱アミノ、マレイン化（ｍａｌｅｉｎａｔｉｏｎ）、１以上のアミノ酸の置換、架橋、グリコシル化、または他の組換え技術若しくは合成技術によって行うことができる。この用語はまた天然に生じる変異、イソ型およびレトロインバース類似物も含むべく意図されている。
特に、そのような免疫原性物質は、天然タンパク質、組換え若しくは修飾タンパク質、またはそれらの断片、抗原、アレルゲン、変性アレルゲン、ぺプチド、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）のような適切な担体に結合したハプテン、または、破傷風トキソイド、炭水化物、場合により不活性化または弱毒化したバクテリア若しくはウイルスおよびその構成部分、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＰＮＡ、寄生虫又はレトロウイルス、寄生虫性物質、マイコプラズマ、または、毒素であってよい。そのような毒素は、例えば、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、コレラ毒素ＡおよびＢサブユニット、ルベラ、ラブドウイルス（狂犬病）、ミオキソウイルス（ｍｉｏｘｏｖｉｒｕｓｅｓ）、パラインフルエンザウイルスのようなパラミオキウイルス（Ｐａｒａｍｙｏｘｙｖｉｒｕｓｅｓ）、おたふく風邪およびはしか、ポリオウイルス、コクスサッキーウイルス、エコウイルスおよびリノウイルスのようなピコルナウイルス、レオウイルス、天然痘ウイルスのようなポックスウイルス、ワクシニアウイルスおよび牛痘ウイルス、ポリオーマウイルス、パピローマウイルスおよびＳＶ４０のようなパポバウイルス、アデノウイルス、単核症ウイルスのようなＥＢＶウイルス、ＨＰＶ  Ｂ１９のようなパルボウイルス、単純ヘルペスウイルスおよび帯状ヘルペスウイルス（水痘ウイルス）のようなヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、黄熱病ウイルスやデング熱ウイルスのようなアルボウイルス、ＨＩＶのようなレトロウイルス、Ａ型、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルスのような肝炎ウイルス、Ｂ型インフルエンザ菌、結核菌、ウシ結核菌、Ｍ．アフリカヌム、Ｍ．ミクロティ、トリ型結核菌、Ｍ．イントラセルラレ、Ｍ．カンサシィ、Ｍ．ゴルドネ、パラ結核菌、Ｍ．レプラムリウムのようなマイコバクテリア、Ｂ．ブルグドルフェリ、特に協狭義および広義のＢ．ブルグドルフェリ、Ｂ．ガリニィ、Ｂ．アフゼリィ、Ｂ．デュットニおよび回帰熱ボレリアのようなボレリア属種、ボルデテラ・ペルツッシス（百日ぜき菌）、ネズミチフス菌および腸チフス菌のようなサルモネラ属種、梅毒トレポネーマのようなトレポネーマ属種、レプトスピラ属種、カンピロバクター・ジェジュニのようなカンピロバクター属種、Ｈ．ピロリのようなヘリコバクター属種、シュードモナス属種、レジオネラ属種、Ｎ．ゴノロエアおよびＮ．メニギチディスのようなナイセリア属種、Ｃ．トラコマティス、Ｃ．ニューモニアおよびＣ．シッタエのようなクラミジア属種、エンテロバクター属種、クレブシエラ属種、エルシニア属種、ビブリオ・コレラのようなビブリオ属種、ガードネレラ属種、リケッチア属種、Ｃ．ディフィシレ、Ｃ．ボツリヌムおよびＣ．テタニのような、クロストリジウム属種、ラクトバチルス属種、リステリア属種、およびＭ．ニュモニア、Ｍ．ホミニスのようなマイコプラズマ属種、プラスモジウム・ファルシパルム、および熱帯リーシュマニア、クラドスポリウム、アルテルナリア、アルペリギルス、ベシディオミシート、カンジダ・アルビカンスおよびペニシリンのような糸状菌及び真菌、グルタルアルデヒトまたはＰＥＧで修飾されたアレルゲン複合体のような変性アレルゲンに由来する毒素であって���い。
【００２３】
コンビネーションワクチンに使用する免疫原性物質の例は、ジフテリア−破傷風−百日咳−ポリオ、はしか−お多福風邪−風疹、およびＡ型およびＢ型肝炎と関連した免疫原性物質である。
本発明の非経口ワクチンに使用されるアレルゲンの非限定的例には、例えば樹木、イネ科植物（ｇｒａｓｓ）、草本（ｈｅｒｂ）、真菌、イエダニ、貯蔵庫ダニ（ｓｔｏｒａｇｅ ｍｉｔｅｓ）、ゴキブリおよび動物の毛、羽およびふけ起源の吸入アレルゲンが含まれる。樹木、イネ科植物および草本由来の重要な花粉アレルゲンは、例えば、カバノキ（Ｂｅｔｕｌａ）、ハンノキ（Ａｌｎｕｓ）、ハシバミ（Ｃｏｒｙｌｕｓ）、シデ（Ｃａｒｐｉｎｕｓ）およびオリーブ（Ｏｌｅａ）を含む分類学上のブナ目（Ｆａｇａｌｅｓ）、オレアレス目（Ｏｌｅａｌｅｓ）および、例えばロリウム属、フレウム属（Ｐｈｌｅｕｍ）、ポア属、シノドン属（Ｃｙｎｏｄｏｎ）、ダクチリス属（Ｄａｃｔｙｌｉｓ）およびセカレ属（Ｓｅｃａｌｅ）の植物を含む分類学上のポアレス目（Ｐｏａｌｅｓ）、例えばアンブロシア属（Ａｍｂｒｏｓｉａ）およびアルテミシア属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ）を含む、アステラレス目（Ａｓｔｅｒａｌｅｓ）およびウルティカレス（Ｕｒｔｉｃａｌｅｓ）に由来するものである。真菌由来の重要な吸入アレルゲンは、例えば、アルテルナリア属およびクラドスポリウム属由来のものである。他の重要な吸入アレルゲンは、デルマトファゴイデス属（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ）のイエダニ、レピドグリフィスデストラクター属の貯蔵庫ダニ由来のアレルゲン、ゴキブリ由来のアレルゲンおよびネコ、イヌ、ウマ、ウシのような哺乳動物およびトリ由来のアレルゲンである。さらに、使用するアレルゲンは、ミツバチ、スズメバチおよびアリを含む膜翅目由来のアレルゲンのように、刺すまたは噛みつく昆虫に由来するアレルゲンのような毒物アレルゲンに由来しても良い。
【００２４】
ここで、用語「〜に由来する」には、天然に生じる物質およびそのイソ型を含む。さらに、この物質は組換え技術によって調製されても合成技術によって調製されても良い。具体的なアレルゲン成分は当業者に知られており、例えば以下を含む：ブナ目（Ｆａｇａｌｅｓ）のＢｅｔ ｖ １（Ｂ．ベルコサ（ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、カバノキ）、Ａｌｎ ｇ １（アルヌス・グルチノーサ（Ａｌｎｕｓ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ）、ハンノキ）Ｃｏｒ ａ １（コリルス・アベラナ（Ｃｏｒｙｌｕｓ ａｖｅｌａｎａ）、ハシバミ）、およびＣａｒ ｂ １（カルピヌス・ベツルス（Ｃａｒｐｉｎｕｓ ｂｅｔｕｌｕｓ）、シデ）。
【００２５】
その他のものとしては、Ｃｒｙ ｊ １（ピナレス（Ｐｉｎａｌｅｓ））、Ａｍｂ ａ １および２、Ａｒｔ ｖ １（アステラレス（Ａｓｔｅｒａｌｅｓ））、Ｐａｒ ｊ １（ウルティカレス））、Ｏｌｅ ｅ １（オレアレス（Ｏｌｅａｌｅｓ））、Ａｖｅ ｅ １、Ｃｙｎ ｄ １、Ｄａｃ ｇ １、Ｆｅｓ ｐ １、Ｈｏｌ ｌ １、Ｌｏｌ ｐ １および５、Ｐａｓ ｎ １、Ｐｈｌ ｐ １および５、Ｐｏａ ｐ １、２および５、Ｓｅｃ ｃ １および５、およびＳｏｒ ｈ １（種々のイネ科植物花粉）、Ａｌｔ ａ １およびＣｌａ ｈ １（真菌）、Ｄｅｒ ｆ １および２、Ｄｅｒ ｐ １および２（イエダニ、それぞれ、Ｄ．ファリナエ（Ｄ． ｆａｒｉｎａｅ）およびＤ．プテロニッシヌス（Ｄ． ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ））、Ｌｅｐ ｄ １、Ｂｌａ ｇ １および２、Ｐｅｒ ａ １（それぞれ、ゴキブリ、ブラテラ・ゲルマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、およびペリプラネタ・アメリカーナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ａｍｅｒｉｃａｎａ））、Ｆｅｌ ｄ １（ネコ）、Ｃａｎ ｆ １（イヌ）、Ｅｑｕ ｃ １、２および３（ウマ）、Ａｐｉｓ ｍ １および２（ミツバチ）、Ｖｅｓ ｇ １、２および５、Ｐｏｌ ａ １、２および５（全てスズメバチ）およびＳｏｌ ｉ １、２、３および４（フシアリ）である。
【００２６】
上述したように非経口的使用のためのワクチン製剤にアジュバントとして使用する塩は、周期律表の第２族または第４族元素と形成される塩、すなわち、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｂａ、Ｒａ、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆまたはＲｆと形成されるような塩である。ここで、塩は陽イオン部分と陰イオン部分とからなっていることは言うまでもない。第２族または第４族元素は陽イオン部分を構成する。使用される塩は、いわゆる複塩であってよい。塩の水和物、たとえば、１−、２−、３−、４−および５−水和物もまた本発明の範囲内である。２−または３−カチオン（たとえば三カルシウム）もまた、本発明の範囲内である。２−または３−アニオン（たとえば、二リン酸）もまた本発明の範囲内である。
塩は有機塩でも無機塩でもよい。
塩が有機塩である場合、陰イオン部分の例は酢酸、シュウ酸、クエン酸、および酒石酸である。
本発明に使用する塩は好ましくは無機塩である。
【００２７】
一つの実施態様において、本発明による非経口的ワクチン製剤は、アジュバントが、オキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、およびケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる製剤であるが、上記の条件を考慮する。
別の態様において、非経口ワクチン製剤は、アジュバントが、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシドヒドロキシド、および／または炭酸、との間に形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる塩である製剤である。
特定の実施態様において、本発明の非経口ワクチン製剤は、アジュバントが、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、およびジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシドおよび／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる製剤である。
【００２８】
好ましい実施態様において、本発明の非経口ワクチン製剤は、アジュバントが水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウムから選ばれる製剤である。
本発明の非経口ワクチン製剤は、好ましくは、アジュバントが水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンから選ばれる製剤である。
【００２９】
一つの実施態様において、アジュバントは低溶解度および／または高格子エネルギーを有する１以上の塩を含むように選ばれる。
ある場合には、本発明による非経口ワクチン製剤は、追加的なアジュバントをさらに含んでいてもよい。そのような追加的アジュバントは慣用的に使用されるアジュバントから選ばれる。そのような追加的アジュバントの例には、Ｑｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９のような水中油エマルジョン、ＭＰＬ、ＰＬＧ，ＰＬＧＡ、アルミニウム塩、リン酸カルシウム、ＩＦＡ（フロイントの不完全アジュバント）およびＣＦＡ（フロイントの完全アジュバント）のような油中水エマルジョン、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２およびＩＮＦγのようなインターロイキン、Ａｄｊｕ−ＰｈｏｓＲ、グルカン、抗原配合物、コレラホロトキシン、リポソーム、ＤＤＥ、ＤＨＥＡ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＯＣ／アラム複合体、ＩＳＣＯＭＲ、ムラミルジペプチド、モノホスホリル脂質Ａ、ムラミルトリペプチド、およびホスファチジルエタノールアミンが含まれる（“ワクチン設計。サブユニットおよびアジュバントアプローチ”、第７章、参考文献６を参照せよ。）。好ましい実施態様では、追加的アジュバントはＱｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡ、リン酸カルシウムおよびアルミニウム塩から選ばれる。
【００３０】
さらに、本発明の非経口ワクチン製剤は適切には一以上の製薬的に許容できる賦形剤および担体を含んでいてよい。そのような例は、希釈剤、バッファー、懸濁剤、湿潤剤、可溶化剤、ｐＨ調整剤、分散剤、保存剤および／または着色剤である。
本発明のワクチン製剤は非経口経路で投与される。非経口経路には、静脈内投与、筋肉内投与、関節内投与、皮下投与、皮内投与、上皮／経皮投与、不腔内投与が含まれる。
アジュバント塩の陽イオンは好ましくはワクチン中で約０．０００４〜約１２０Ｍの量、例えば、約０．００４〜約１２Ｍ、好ましくは約０．００８〜約６Ｍの量で存在する。
追加的アジュバントの量は、問題としているアジュバントおよび免疫原性物質に依存し、最適化すべき問題であろう。しかしながら、当業者はそのような追加的アジュバントの量をどのように最適化するかを製剤中に含まれる他の成分を考慮して容易に知るであろう。
【００３１】
本非経口ワクチン製剤の一つの実施態様においてアジュバントは水酸化マグネシウムである。本非経口ワクチン製剤の他の実施態様において、アジュバントは炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物である。本非経口ワクチン製剤の第３の態様において、アジュバントは二酸化チタンである。本非経口ワクチン製剤の第４の態様において、アジュバントは水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物の組み合わせ、または、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、または炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせである。本非経口ワクチン製剤の第５の態様において、アジュバントは水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンの組み合わせである。そのような非経口ワクチン製剤は適切には追加的アジュバントを含んでいてもよい。そのような追加的アジュバントは上述したものから選ばれる。しかし、追加的アジュバントは好ましくはＱｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧ Ａ、リン酸カルシウム、およびアルミニウム塩から選ばれる。
【００３２】
さらに、アジュバントまたはアジュバントの組み合わせの選択に依存して、早期の応答開始、延長された持続時間、増強された効能、Ｔｈ１、Ｔｈ２および細胞障害性応答のような、組み合わされた特徴を有するワクチン製剤を製造することも可能であろう。従って、ワクチンのタイプに依存して異なるアジュバント構成を使用することが有利であろう。例えば、早期応答開始を生じさせるアジュバントは初期ワクチン接種に使用することができ、増強された効能を提供するアジュバントは追加免疫に使用することができる。この目的のために、本明細書に記載したアジュバントの組み合わせは非常に適しているであろう。
【００３３】
追加的アジュバントを含めることにより、さらなる特異的な又は増強された特性を有するワクチン製剤を調製することができることがある。例えば、ＭＰＬの添加は主としてＴｈ１型免疫応答を誘導する製剤を生じさせることができ、一方、サポニンの添加はＴｈ１型免疫応答および細胞障害性応答を誘導する製剤を生じさせることができる。さらに、本発明の非経口ワクチン製剤中の、１以上のアジュバント塩および１以上の追加的アジュバントの組み合わせは、有利なアジュバント効果の組み合わせを可能とし、Ｔｈ１、Ｔｈ２および／または細胞障害性応答を調節することを可能にすることができる。
他の特徴において、本発明は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩を含む、非経口用のアジュバント組成物に関する。但し、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではないことを条件とする。
【００３４】
この塩は有機塩でも無機塩でもよいが（上記参照）、本発明のアジュバント組成物においては、前記塩は無機塩から選ばれることが好ましい。
好ましい実施態様において、本アジュバント組成物において、前記塩はオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ぶことができるが、上記条件が考慮される。
上述したように複塩もまた本発明の一部である。２つ、若しくは３つの陽イオンまたは陰イオンを含む塩もまた本発明の一部である。
【００３５】
特に、本アジュバント組成物においては、塩は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸、との間で形成される塩およびそれらの水和物から選ばれ、上記条件が考慮される。
特に、本アジュバント組成物において、塩は、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物から選ぶことができる。
特定の実施態様では、本アジュバント組成物において、前記塩は水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウムから選ばれる。
【００３６】
好ましくは、本アジュバント組成物は、塩が水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれる前記組成物である。
ある場合には、本アジュバント組成物に追加のアジュバントを含めることが有利なことがある。従って、一つの実施態様において、本発明のアジュバント組成物は更に追加のアジュバントを含む。追加のアジュバントは、上述したものから適切に選ぶことができる。好ましい実施態様において、追加のアジュバントはＱｕｉｌ ＡおよびＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧ Ａ、リン酸カルシウム、およびアルミニウム塩から選ばれる。
本発明のアジュバント組成物は更に製薬的に許容できる賦形剤および／または担体を含んでいても良い。
さらに、本アジュバント組成物は希釈剤、バッファー、懸濁剤、可溶化剤、ｐＨ調製剤、分散剤、および／または着色剤を含んでいても良い。
【００３７】
粉末またはゲル又は懸濁物として得ることのできる本発明のアジュバント組成物において、塩の陽イオンは約０．０００４〜約１２０Ｍ、例えば、約０．００４〜約１２Ｍ、好ましくは約０．００８〜約６Ｍの量で存在することができる。
本アジュバント組成物の一態様において、塩は水酸化マグネシウムである。本アジュバント組成物の別の実施態様において、塩は炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物である。本アジュバント組成物の第３の実施態様において、塩は二酸化チタンである。本アジュバント組成物の第４の実施態様において、塩は水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、または炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンとの組み合わせである。本アジュバント組成物の第５の態様において、塩は水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせである。そのようなアジュバント組成物は適切には追加のアジュバントを含んでいてよい。そのような追加のアジュバントは適切には上述したものから選ばれる。好ましい実施態様において、追加のアジュバントはＱｕｉｌ ＡやＱｓ−２１のようなサポニン、ＭＦ５９、ＭＰＬ、ＰＬＧ、ＰＬＧ Ａ、リン酸カルシウムおよびアルミニウム塩から選ばれる。
別の実施態様において、塩は、低溶解度および／または高い格子エネルギーを有するように選ばれる。
【００３８】
第３の特徴により、本発明は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、およびそれらの水和物、から選ばれる１以上の塩を含むアジュバントに関する。但し、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではないことを条件とする。
本発明のアジュバントは有機塩および／または無機塩を含んでも良い。
本発明の好ましい態様において、塩は無機塩から選ばれる。
本発明のアジュバントにおいて、適切には塩はオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ぶことができるが、上記条件が考慮される。
特に、本アジュバントにおいて、塩は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩およびそれらの水和物から選ばれる。
特に興味深いアジュバントは、塩が、マグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物から選ばれるアジュバントである。
【００３９】
本発明のアジュバントの一実施態様において、塩は、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、酸化ベリリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸二カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、二酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸二マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、二酸化ジルコニウム、水酸化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウムから選ばれる。
【００４０】
好ましい実施態様では、本アジュバントにおいて、塩は水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれるか、又は、塩は水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせから選ばれる。
【００４１】
第４の特徴により、本発明は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、または、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、またはそれらの水和物の、非経口投与用ワクチン製剤中のアジュバントとしての使用（但し、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない。）、または、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素と形成される塩、または、Ｔｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素と形成される塩、またはそれらの水和物の、アジュバント組成物中のアジュバントとしての使用（但し、前記塩はリン酸カルシウムではなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではない。）に関する。
【００４２】
これらの塩の別々の使用、または組み合わせた使用は本発明の範囲内である。複塩の使用も本発明の範囲内であり、２−および３−カチオンまたはアニオン塩の使用も本発明の範囲内である。
塩は有機塩でも無機塩でも良いが、好ましくは無機塩から選ばれる塩が使用される。
特に、使用される前記塩はオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、炭酸、リン酸、ピロリン酸、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、および／またはケイ酸と形成される塩、およびそれらの水和物から選ぶことができる。
一つの実施態様において、使用される上記の塩は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｂａ、Ｔｉ、またはＺｒとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸、との間で形成される塩またはそれらの水和物から選ばれる。
【００４３】
別の実施態様において、使用される塩はマグネシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、カルシウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、バリウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、チタンとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間、ジルコニウムとオキシド、ペルオキシド、ヒドロキシド、および／または炭酸との間で形成される塩、およびそれらの水和物から選ばれる
特定の実施態様において、使用される塩は、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、二酸化チタン、炭酸カルシウム、水酸化バリウム、過酸化バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム、硫酸カルシウム、ケイ酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、過酸化カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム、硫酸カルシウム２水和物、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、二硫酸チタン、硫酸ジルコニウム、過酸化ストロンチウム、および炭酸ストロンチウムから選ばれる。
【００４４】
現在の最も好ましい実施態様において、使用される塩は、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、および二酸化チタンから選ばれるか、または、水酸化マグネシウムと炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物との組み合わせ、水酸化マグネシウムと二酸化チタンの組み合わせ、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物と二酸化チタンの組み合わせ、または、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物および二酸化チタンの組み合わせから選ばれる。
第５の特徴により、本発明は、患者に免疫応答を引き起こす方法に関し、前記方法は、患者に本発明の非経口ワクチン製剤を投与することを含む。
第６の特徴により、本発明はヒトを含む脊椎動物のワクチン接種または治療を可能とし、それには患者に本発明のワクチン製剤を投与することが含まれる。
【００４５】
上述したように、本発明の非経口ワクチン製剤は少なくとも一つの免疫原性物質を含む。従って、２、３、４、５、６、あるいはそれ以上の免疫原性物質が考慮されており、ある場合にはそれが有利であると考えられる。免疫原性物質の量は、問題としている免疫原性物質または免疫原性物質の組み合わせに依存する。しかしながら、免疫応答を誘導するために必要な免疫原性物質の量は、ある場合には、本アジュバント塩の有利な効果によって低減されることが予期される。従って、それぞれの免疫原性物質の量は、典型的には０．０００１〜１０００００μｇ／用量、例えば、０．０１〜１００００μｇ／用量、０．１〜１０００μｇ／用量、または１〜１００μｇ／用量であろう。
【００４６】
本発明のワクチン製剤の投与は単一回投与でも複数回投与でも良い。ある場合には、ただ１回の投与で充分かもしれない。一般には、１日、１週間、２週間、１尽きまたは数ヶ月等の間隔で複数回投与が必要である。例えば、単一用量が１回投与されてもよく、単一用量が初回免疫として与えられ、続いて１回以上の追加ワクチン接種が行われてもよく、あるいは、例えば週に４用量まで連続的なワクチン接種を行い、つづいて１月間ワクチン接種をせず、続いて週に４用量投与（必要により免疫原の量を増加させる）までの接種を行う等、であってもよい。場合により、異なるワクチン接種には異なるアジュバントまたはアジュバントの組み合わせを使用することができる。これらは全て例示であり、最適なワクチン接種計画は問題としている免疫原物質及びいくつかのその他の要因に依存する。当業者はどのように最適化するかを容易に理解するであろう。
【００４７】
本発明のアジュバント組成物は、液体（場合によりバッファー、他の塩、溶媒または賦形剤を含む）を乾燥形態の塩に添加する、あるいは、液体（場合によりバッファー、他の塩、賦形剤を含む）を予め形成させて平衡化しておいた本アジュバント塩のゲルに添加して、アジュバント塩の懸濁液またはゲルを形成させることにより調製することができる。本アジュバント組成物は、次に、所望の免疫原性物質と本アジュバント組成物とを混合し、必要であれば、平衡化してからフィリングすることにより、所望の免疫原性物質を含むワクチン製剤に処方することができる。本アジュバント組成物および免疫原性物質は、より濃縮された形態で混合することもでき、それにより後に希釈することもできる。
【００４８】
従って、第７の特徴により、本発明は、本発明の非経口ワクチン製剤を調製する方法に関し、前記方法は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＢａおよびＲａから選ばれる周期律表の第２族元素から形成される、またはＴｉ、Ｚｒ、ＨｆおよびＲｆから選ばれる周期律表の第４族元素から形成される、乾燥形態の塩または予め形成させたゲル形態の塩に液体を加えることを含み、但し、前記塩はリン酸カルシウムでなく、水酸化アルミニウム若しくは酸化アルミニウムと一緒の水酸化マグネシウムではなく、水酸化亜鉛、レシチンおよびポリアルファオレフィンとゲル中で組み合わされた水酸化カルシウムではなく、それによってアジュバント組成物を得、前記アジュバント組成物を１以上の免疫原性物質と、および場合により製薬的に許容できる担体および／または賦形剤と混合し、それによって非経口ワクチン製剤を得ることを含む。
【００４９】
第８の特徴により、本発明は上述した方法によって得られる非経口ワクチン製剤に関する。
本発明のアジュバント組成物およびワクチン製剤の混合及び保存のための容器はガラスまたは種々のポリマー材料で作られていて良い。選ばれる容器は保存された製品を吸収するものであってはならない。この容器は、適切には単一用量または複数用量のためのアンプルまたはキャップ付きバイアルであってよい。
本発明は以下の非限定的実施例によりさらに説明される。
【００５０】
（実施例）
以下に、実施例１および２の実験を行うための手順及びプロトコルを一般的に記載する。
免疫原性物質：
３．０ｍｇタンパク質／ｍｌを含む破傷風トキソイド（ＴＴ）（Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ社、ＤＫ−２３００ コペンハーゲン、デンマークより入手）。用量当たり３０μｇ、１０μｇまたは１μｇのＴＴ（それぞれ、３００μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌ）を含み、アジュバントとして水酸化アルミニウムを含むワクチン製剤、および、アジュバントして水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、または二酸化チタンを含む本発明のワクチン製剤、およびアジュバントを含まないワクチン製剤（「無アジュバント」と記載）（全て用量当たり１μｇのＴＴを含む（１０μｇ／ｍｌ））。
【００５１】
アジュバント：
以下に示したモル濃度はワクチン製剤の最終濃度である：
水酸化アルミニウム、Ａｌ（ＯＨ）３ ０．０４５−０．０５Ｍ Ａｌ３＋ （１．２５ｍｇ Ａｌ３＋／ｍｌ）。Ａｌ ｈｉｄｒｏｇｅｌ ０．３％Ｒ（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ、ＤＫ−２９５０ ベドベック，デンマーク）から調製。
水酸化マグネシウム、Ｍｇ（ＯＨ）２ ０．０５Ｍ Ｍｇ２＋。Ｍｇ（ＯＨ）２ゲル（Ｒｅｈｅｉｓ、ＵＳＡ）から調製。
炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、（ＭｇＣＯ３）４Ｍｇ（ＯＨ）２５Ｈ２Ｏ、０．０５Ｍ Ｍｇ２＋。炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物（Ｓｉｇｍａ）から調製。
二酸化チタン、ＴｉＯ２、０．０５Ｍ Ｔｉ４＋。二酸化チタン色素（Ｋｅｍｉｒａ、フィンランド）から調製。
【００５２】
ワクチン製剤の調製：
ワクチン製剤は以下のように調製した：
ＴＴを最終ワクチン製剤中の濃度の１０倍に溶解又は希釈した。アジュバントを、カチオンについて最終ワクチン製剤中の濃度の５倍に溶解又は希釈した。１容量のＴＴ溶液を２容量のアジュバントと緩やかに混合し、４℃にて一晩撹拌放置した。翌日、７容量のＣｏｃａ ０．０バッファー（０．２５％炭酸水素ナトリウムおよび０．５％塩化ナトリウム）をゆっくり添加した。無アジュバントワクチンは、上述したように調製したが、アジュバントをＣｏｃａ ０．０バッファーと置換する改変を行った。
【００５３】
免疫：
各ワクチン製剤について、６〜８週齢の８匹のメスＢＡＬＢ／Ｃａマウスからなるグループに対して鼠蹊部皮下免疫を第０日および１４日に行った。各免疫感作は１００μｌのワクチンからなる。
第０日から始めて血液サンプルを７日おきに眼窩後方静脈から採取した。この血液サンプルから血清を分離し、分析するまで−２０℃に保存した。
【００５４】
血清サンプルの分析：
直接酵素結合免疫吸着アッセイにより、ＩｇＧクラスのＴＴ特異的抗体を測定することによりＴＴ特異的免疫応答の存在に関して血清サンプルを分析した。簡単に言うと、免疫吸着プレート（Ｎｕｎｃ ＭａｘｉｓｏｒｐＲ、Ｎｕｎｃ、デンマーク）をよく知られた方法でＴＴで被覆し、フリーの結合部位はウシ血清アルブミンでブロッキングした。次に、免疫したマウス由来の血清サンプルの連続希釈列を、免疫非感作ＢＡＬＢ／Ｃａマウス由来の陰性対照血清プールの連続希釈列と共にプレートに添加した。モノクローナルＴＴ特異的抗体（Ｓｔａｔｅｎｓ Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ、コペンハーゲン、デンマーク）を連続希釈列として加えたが、これは陽性対照として機能すると同時に力価を測定するための内部標準としても機能する。全てのサンプルは二つ組で添加した。
マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーハーバー、ＭＥ、ＵＳＡから入手）に対するビオチン化ポリクローナル抗血清、続いてストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ結合体（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ、グロストラプ、デンマークから入手）とインキュベーションすることによって、結合した抗体を検出した。ウェルあたり１００μｌの市販のＴＭＢ基質（Ｋｅｍ−Ｅｎ−Ｔｅｃｈ、デンマーク）でプレートを２０分間発色させ、反応を等容量の１Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停止させた。
生じた発色反応を４５０ｎｍにおける吸収として測定した。
【００５５】
データ分析：
個々のマウスについて、および各グループの幾何平均について４５０ｎｍにおける吸収を血清の希釈に対してプロットした。
各血清サンプルにおけるＴＴ特異的抗体応答の強度を、ＴＴ特異的モノクローナル抗体の３０００倍希釈で得られる吸収シグナルの５０％と等しい吸収シグナルを与える血清希釈として決定される力価として測定した。応答しなかったマウス、すなわち、その応答が免疫未感作対照マウスの血清プールにおいて見られた反応と区別がつかなかったマウスは力価１０とした。応答したが、力価を決定するために必要な程度を下回る応答しか示さなかったマウスは力価１００とした。
【００５６】
実施例１
水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかをアジュバントとして含む本発明のワクチン製剤による１度の免疫感作
ワクチンは上述したように調製し、マウスを第０日に上述したように１回免疫した。第７日に血液を採取し、上述したように血清を調製して分析した。
図１において、結果は個々のマウスの力価および各グループの平均力価として示されている。与えたアジュバントは各グループの下に示してある。括弧内の数は与えた免疫原（ＴＴ）の量（μｇ）を示している。
図１から分かるように、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかをアジュバントとして含むワクチン製剤は、アジュバントとしてＡｌ（ＯＨ）３を含むワクチン製剤よりもＴＴ特異的抗体の誘導に関してより強力であった。Ａｌ（ＯＨ）３含有ワクチン製剤を用いたＴＴ特異的抗体の誘導は、アジュバントとして水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかを含むワクチン製剤の１０〜３０倍の免疫原（ＴＴ）を必要とした。このように、本実験は、本発明のアジュバントが非経口ワクチン製剤に含まれる場合には、１回の免疫感作による免疫応答を誘導するために必要な抗原の量が低減されることを明瞭に示している。
【００５７】
実施例２
水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかをアジュバントとして含む本発明のワクチン製剤による複数回免疫感作
ワクチン製剤を上述したように調製し、第０日および第１４日に１μｇのＴＴで上述したようにマウスを免疫した。第０日から４２日まで、７日ごとに血液を採取し、上述したように血清を調製して分析した。
結果は、グループ全体の幾何平均力価として、第７日および２８日について、図２Ａおよび２Ｂに示した。使用したアジュバントは各グループの下に示した。図２Ａから分かるように、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかをアジュバントとして含むワクチン製剤は，アジュバントとしてＡｌ（ＯＨ）３を含むワクチン製剤よりも早期に開始される特異的免疫応答を誘導する。更に、図２Ｂから分かるように、第１４日おける第２のワクチン接種後に、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム５水和物、または二酸化チタンのいずれかをアジュバントとして含むワクチン製剤は、アジュバントとしてＡｌ（ＯＨ）３を含むワクチン製剤によって誘導されるのと類似した規模で特異的免疫応答を誘導する。
このように、本アジュバント塩が非経口ワクチン製剤中に含まれる場合は、持続的で特異的な免疫応答が誘導される。更に、早期の開始が観察され、免疫応答の規模はアジュバントとしてＡｌ（ＯＨ）３を含むワクチン製剤で見られる規模に匹敵する。
【００５８】
参考文献
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明の非経口ワクチン製剤による実施例１で得られた結果を示す。アジュバントとして水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、または二酸化チタンを使用した。免疫原性物質としては破傷風トキソイドを使用した。結果をアジュバントとして水酸化アルミニウムを含む、またはアジュバントを含まない、免疫原性物質として破傷風トキソイドを含むワクチン製剤と比較した。
【図２Ａ】図２Ａおよび２Ｂは、本発明の非経口ワクチン製剤による実施例２で得られた結果を示す。アジュバントとして水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、または二酸化チタンを使用した。免疫原性物質としては破傷風トキソイドを使用した。結果をアジュバントとして水酸化アルミニウムを含む、またはアジュバントを含まず、免疫原性物質として破傷風トキソイドを含むワクチン製剤と比較した。
【図２Ｂ】図２Ａおよび２Ｂは、本発明の非経口ワクチン製剤による実施例２で得られた結果を示す。アジュバントとして水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウムヒドロキシド５水和物、または二酸化チタンを使用した。免疫原性物質としては破傷風トキソイドを使用した。結果をアジュバントとして水酸化アルミニウムを含む、またはアジュバントを含まず、免疫原性物質として破傷風トキソイドを含むワクチン製剤と比較した。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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