(57)【要約】本発明はヘリコバクター  ピロリの生育を阻害するキムチ乳酸菌及びこれを含有する食品に関し、特にヘリコバクター  ピロリの胃腸管への付着を抑制して生育を阻害するキムチ乳酸菌を含有する胃腸管保護高機能性食品に関する。本発明のキムチ乳酸菌は胃粘膜組織に棲息するヘリコバクター  ピロリの胃腸への付着を阻害し生育を抑制してヘリコバクター  ピロリの撲滅及び再感染の防御に非常に効果的である。また、前記キムチ乳酸菌を含有する胃腸管保護高機能性食品はヘリコバクター  ピロリによる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害することを特徴とするキムチ乳酸菌。
【請求項２】
前記キムチ乳酸菌は、製造開始後９０日まで１〜４０℃で熟成したキムチ、またはそのｐＨが約３．０になる時期まで進行させたキムチから分離されたものであることを特徴とする、請求項１に記載のキムチ乳酸菌。
【請求項３】
前記キムチ乳酸菌がロイコノストックｓｐ.またはラクトバチルスｓｐ.であることを特徴とする、請求項１に記載のキムチ乳酸菌。
【請求項４】
前記キムチ乳酸菌がロイコノストックｓｐ.ＥＵＧ４４２７（ＫＣＣＭ−１０２７４）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６０１７（ＫＣＣＭ−１０２７３）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０６６（ＫＣＣＭ−１０２７０）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０４８（ＫＣＣＭ−１０２７１）及びラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６４０４（ＫＣＣＭ−１０２７２）からなる群から選択される１種以上であることを特徴とする、請求項１または２に記載のキムチ乳酸菌。
【請求項５】
請求項１乃至４のうちのいずれか一項記載のキムチ乳酸菌を含有するヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用機能性食品。
【請求項６】
請求項１乃至４のうちのいずれか一項記載のキムチ乳酸菌を含有する胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用胃腸管保護高機能性キムチ。
【請求項７】
請求項１乃至４のうちのいずれか一項のキムチ乳酸菌を含有するヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
（ａ）発明の分野
本発明はヘリコバクター  ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｏｒ  ｐｙｌｏｒｉ）の生育を阻害するキムチ乳酸菌及びこれを含有する胃腸管保護高機能性食品に関し、更に詳しくはヘリコバクター  ピロリの胃腸管の胃粘膜組織への付着を阻害し、生育を抑制し、それによって胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的であるキムチ乳酸菌を含有する高機能性食品に関する。
【０００２】
（ｂ）関連技術の記述
胃腸管疾患は全世界的に最も多く発生する疾病の一つであって、その治療のために用いられる医薬品が単一品目として最も大きな市場を形成している（抗潰瘍剤：１５８億ドル(１９９９)）。
【０００３】
１９８３年微生物学者であるマーシャル（Ｍａｒｃｈａｌｌ）とワレン（Ｗａｒｒｅｎ）は最初にＢ型胃炎患者の胃粘膜生検組織から魚鱗癬細菌を発見して、前記細菌を培養してカンピローバクター属（ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｇｅｎｕｓ）と関連した新たな種であることを発見して以来、ヘリコバクター  ピロリと胃炎及び消化性潰瘍などの上部胃腸管疾患との相互関係の研究が活発に行われてきた。ヘリコバクター  ピロリはグラム陰性の桿菌であって、薄い膜で囲まれた鞭毛を有しており、多量のウレアーゼ（ｕｒｅａｓｅ）を分泌し、糞便−口腔経路を通じて伝播すると知られており、１９９４年には世界保健機構（ＷＨＯ）によって確実な発癌物質であることが確認されたので世界的な注目を引き寄せている。
【０００４】
ヘリコバクター  ピロリの発病機構は、食物と共に胃の内腔に入った細菌が強い運動性を有する鞭毛を利用して胃粘膜を貫通し、多量のウレアーゼを分泌し胃粘膜のｐＨをアルカリ性に変化させることによって起こることが知られている。ヘリコバクター  ピロリは胃上皮細胞層の上部と胃粘膜細胞間の領域に棲息し、次々に胃酸の産生を誘発するガストリンの異常な分泌を引き起こし、炎症と潰瘍を引き起こす。従って、ヘリコバクター  ピロリが胃腺癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）の重要な因子であることを証明する最近の報告によって、世界保健機構はヘリコバクター  ピロリを第１群発ガン物質として指定した。
【０００５】
ヘリコバクター  ピロリによる感染は韓国を含む開発途上国で特に流行していると報告されており、Ｐａｅｋ等の報告によると、韓国の人口の約８０％以上がヘリコバクター  ピロリに感染していると推定される（Ｐａｅｋ  Ｓｅｕｎｇｃｈｕｌ等、大韓微生物学会誌、２５：４５−５２、１９９０）。したがって、ヘリコバクター  ピロリの感染に対する治療及び予防方法の開発が急務である。
【０００６】
抗生物質を用いた化学療法は、微生物感染によって引き起こされる疾病に対する現在最もありふれた治療法である。この方法は短期的には効果的でありえるが、微生物の抗生物質抵抗性株の出現という問題点がある。
【０００７】
さらに、ヘリコバクター  ピロリに対する抗菌療法としてＲａｕｗｓ等は抗菌性ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ）製剤とアモキシリン（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）の３種を投与して治療成果をあげた（Ｒａｕｗｓ  ＥＡＪ，  Ｌａｎｇｅｎｂｅｒｇ  Ｗ，  Ｈｏｕｔｈｏｆｆ  ＪＨ，  Ｚａｎｅｎ  ＨＣ  ａｎｄ  Ｔｙｔｇａｔ  ＧＨＪ，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，  ９４：３３〜４０、１９８８）。Ｂｏｒｏｄｙ等はビスマス製剤とテトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、メトロニダゾールを消化性潰瘍患者に投与して約８０％の治療成果を発表し（Ｂｏｒｏｄｙ  Ｔ，  Ｌｅｎｎｅ  ｊ  ａｎｅ  Ｍｏｏｒｅ−Ｊｏｎｅｓ  Ｄ，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、９８：Ａ２４、１９９０）、結果として、ヘリコバクター  ピロリ感染症の治療にこれら３種の抗菌物質の投与が最も一般的に用いられている。しかし、抗菌療法の持続的な使用により、下痢、逆流性食道炎、腸内正常菌抑制、耐性菌株出現などの様々な副作用が発生すると報告されている。
【０００８】
最近、物質を発酵させる乳酸菌の機能が、胃腸管疾患の予防と治療に対し関心が高まっており、特にヒト病原菌の生育を阻害できるプロバイオチックラクトバチルス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に対する多くの研究が進められている。これら乳酸菌は発酵産物であって、乳酸、酢酸及び過酸化水素だけでなく、バクテリオシンと関連する抗菌物質を生産する。Ｍａｒｉｅ−Ｈｅｌｅｎ  Ｃｏｃｏｎｉｅｒ等は生体外でヘリコバクター  ピロリに対する抗菌物質を生産するヒトのラクトバチルスアシドフィルスＬＢ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｔｒａｉｎ  ＬＢ）を培養してこの培養液の上澄液が生体外でヒトの胃腸の細胞に対するヘリコバクター  ピロリの付着を阻害し、ウレアーゼの活性を抑制し、マウスにおけるヘリコバクター  フェリス（Ｈ．ｆｅｌｉｓ）感染を阻害することを確認した（Ｍａｒｉｅ−Ｈｅｌｅｎ  Ｃｏｃｏｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｎｖｉｒｏｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，  Ｎｏｖ．  ４５７３〜４５８０、１９９８）。
【０００９】
さらに、Ｙｕｊｉ  Ａｉｄａ  Ｍ．Ｔ．等はラクトバチルスサリバリウス（Ｌ. salivarius）の口腔投与を通じて無菌のマウス（ｍｕｒｉｎｅ）におけるヘリコバクター  ピロリの感染が阻害されることを確認し、米国特許第５，５７８，３９２号はラクトバチルスジョンソニ（Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が胃腸の細胞に対するヘリコバクター  ピロリの付着を阻害する機能について記載している。
【００１０】
さらに、Ｃａｎｄｕｃｃｉ等はラベプラゾル（ｒａｂｅｐｒａｚｏｌ）、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、アモキシリンを使用した抗菌療法と並行してヒトのラクトバチルスアシドフィルス培養液の不活性製剤を処方することによってヘリコバクター  ピロリの撲滅率を増大させる結果を得た（Ｃａｎｄｕｃｃｉ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ，１４：１６２５〜１６２９、２０００）。
【００１１】
また、大韓民国出願番号第１９９９−００４０３８７号にはヘリコバクター  ピロリに対する抗体と共にヘリコバクター  ピロリに対して抑制能を示すラクトコッカスｓｐ．ＨＹ４９、ラクトバチルスカセイＨＹ２７８２、ビフィドバクテリウムロンガムＨＹ８００１などを含有した食品について記載している。
【００１２】
したがって、ヘリコバクター  ピロリの胃腸管への付着を抑制してその生育を阻害できる物質及び方法が必要であり、前記物質を含む食品及び薬剤に対する研究が必要である。
【００１３】
発明の概要
したがって、本発明の目的はヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害し、韓国の主要乳酸菌供給源であるキムチから分離され、当該伝統食品に有益な機能性を付加できる胃腸管保護高機能性キムチ乳酸菌を提供することである。
【００１４】
本発明のさらなる目的はヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的な前記キムチ乳酸菌を含む胃腸管保護高機能性食品を提供することである。
【００１５】
本発明のさらなる目的はヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的な前記キムチ乳酸菌を含む胃腸管保護高機能性キムチを提供することである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は前記キムチ乳酸菌を含有してヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用薬剤を提供することを目的とする。
【００１７】
これらの目的を達成するために本発明は、ヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害するキムチ乳酸菌を提供する。
【００１８】
また、本発明はヘリコバクター  ピロリの生育を抑制し、胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的なキムチ乳酸菌を含有する胃腸管保護高機能性食品を提供する。
【００１９】
また、本発明はヘリコバクター  ピロリの生育を抑制し、胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的なキムチ乳酸菌を含有する胃腸管保護高機能性キムチを提供する。
【００２０】
また、本発明はヘリコバクター  ピロリの生育を抑制するキムチ乳酸菌を含有する胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用薬剤を提供する。
【００２１】
詳細な説明と好ましい態様
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２２】
キムチはキャベツ、大根などのキムチ成分とキムチに含まれる多様な乳酸菌のために抗突然変異効果と抗癌効果などを含む種々有用な機能を保有していると知られている。キムチ発酵に関与する微生物としてはラクトバチルスプランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルスブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ペジオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）などがあり、発酵段階によって全ミクロフローラ（ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）を形成する菌の種類と構成比率が変わる。
【００２３】
本発明者らは前記のような事実に基づいてヘリコバクター  ピロリの生育を抑制するキムチ乳酸菌に対する研究を遂行中に、キムチ発酵過程に関与する微生物の中でヘリコバクター  ピロリの生育を抑制し、同時にヘリコバクター  ピロリの胃腸管壁への付着を阻害するキムチ乳酸菌が存在することを確認し、本発明を完成した。
【００２４】
本発明はヘリコバクター  ピロリの生育を抑制し、胃腸管への付着を阻害するキムチ乳酸菌を提供する。
【００２５】
前記キムチ乳酸菌は通常の方法で製造したキムチを１〜４０℃で９０日まで、またはそのｐＨが約３．０になるまで発酵させる間に分離され同定されるのが好ましい。更に好ましくは、それらは、キムチを１〜２５℃では９０日間熟成させ、または３０〜４０℃で３０日間熟成させる間に分離される。
【００２６】
前記乳酸菌は通常の方法で製造したキムチから採取した試料をＭＲＳ寒天培地上で培養してヘリコバクター  ピロリの生育を抑制する５８８種のキムチ乳酸菌を選抜し、そこからヘリコバクター  ピロリの胃腸管の付着を阻害するキムチ乳酸菌を順次に選抜する段階を経て分離されたものである。
【００２７】
したがって、前記キムチ乳酸菌はキムチ発酵過程で生成される乳酸菌の中でロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）ｓｐ.、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐ.であるのが好ましく、更に好ましくはロイコノストックｓｐ.ＥＵＧ４４２７（ＫＣＣＭ−１０２７４）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６０１７（ＫＣＣＭ−１０２７３）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０６６（ＫＣＣＭ−１０２７０）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＦ４０４８（ＫＣＣＭ−１０２７１）及びラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６４０４（ＫＣＣＭ−１０２７２）からなる群から１種以上選択されたものである。
【００２８】
キムチから分離された前記ロイコノストックｓｐ.またはラクトバチルスｓｐ.は胃粘膜組織に棲息するヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害し、それと共にヘリコバクター  ピロリの撲滅及び再感染防御に非常に効果的である。
【００２９】
また、前記乳酸菌はヒトの腸内または牛乳の発酵製品から由来したものではなく、韓国人の主要乳酸菌供給源であるキムチから選択される機能性乳酸菌である。その機能は、伝統食品であるキムチや他の食品に細菌を添加することによって供給され得るので機能性乳酸菌の供給源を多様化することができる。従って、本発明は、胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的なキムチ由来のロイコノストックｓｐ.、またはラクトバチルスｓｐ.キムチ乳酸菌を含有して胃腸保護高機能性食品を提供することにある。
【００３０】
ヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害する前記キムチ乳酸菌含有する機能性食品は培養液のように開始剤となり得る、又はそれは、飲料、発酵乳、豆腐、味噌、清麹醤、ゼリーなどの食品に添加される凍結乾燥乳酸菌粉末となり得る。そして、乳酸菌の機能を阻害しない限りこれら製剤には限定はなく、他の一般に用いられている食品添加物を栄養成分の必要量、消費者の嗜好などによって添加することができる。
【００３１】
また、本発明はヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に効果的であるキムチ由来の前記ロイコノストックｓｐ.、またはラクトバチルスｓｐ.を含む胃腸管保護高機能性キムチを提供する。
【００３２】
ヘリコバクター  ピロリの生育を抑制して胃腸管への付着を阻害するキムチ乳酸菌を含有する前記キムチは、キムチ調味料に開始剤としてキムチ乳酸菌の培養液、または凍結乾燥した乳酸菌粉末を加えて製造することができ、品質維持のためには凍結乾燥した乳酸菌粉末を加えるのが好ましい。
【００３３】
キムチ乳酸菌を含む胃腸管保護高機能性キムチのための温度、ｐＨ、製造方法などの製造条件は、乳酸菌の機能を阻害しないならば特に限定されず、栄養成分の必要量、消費者の嗜好などによって通常用いられる食品添加物を添加することができる。
【００３４】
また、本発明はキムチ由来のロイコノストックｓｐ.、またはラクトバチルスｓｐ.を含む、ヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療用薬剤を提供する。前記薬剤はゲル剤、懸濁剤、噴霧剤、錠剤、または液剤として調製できる。
【００３５】
本発明は、以下の実施例に関してより詳細に説明される。しかし、これらは本発明を説明するものであり、本発明がそれらに限定されるものではない。
【００３６】
[実施例]
実施例１：ヘリコバクター  ピロリの生育を抑制するキムチ乳酸菌の分離
生体外でキムチ乳酸菌からヘリコバクター  ピロリの生育を阻害する乳酸菌を選抜するために、キムチ乳酸菌を分離し、そこからヘリコバクター  ピロリを抑制する乳酸菌を分離した。
【００３７】
（キムチ乳酸菌の分離）
通常の方法でキムチを製造して１℃、４℃、８℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃及び４０℃で保管しながら９０日間、またはｐＨが３．０になる時期まで（１〜２５℃：９０日間熟成、３０〜４０℃：３０日間熟成）、毎２４時間または４８時間毎に試料を採取した。前記キムチから採取した試料をＭＲＳ寒天培地で３７℃、７２時間培養した。
【００３８】
（ヘリコバクター  ピロリ生育抑制乳酸菌の分離）
馬血清（ｈｏｒｓｅ  ｓｅｒｕｍ）１０％を含有したブルセラ寒天培地（ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｇａｒ）にヘリコバクター  ピロリ懸濁液を塗抹して５分間乾燥した後、ここに前記ＭＲＳ寒天培地で培養した乳酸菌集落約４８，０００個を楊枝で突つくような方法（ｔｏｏｔｈ−ｐｉｃｋｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）で移して１０％のＣＯ２分圧下で３７℃、７２時間培養した後、透明環を形成する乳酸菌集落５８８個を選抜した。
【００３９】
実施例２：ヘリコバクター  ピロリの細胞系への付着を阻害する乳酸菌の探索
（１次選抜）
前記実施例１で選抜された生体外でヘリコバクター  ピロリの生育を抑制するキムチ乳酸菌５８８種に対して、胃ガン種細胞であるＫａｔｏＩＩＩへのヘリコバクター  ピロリの付着阻害活性を調査して、そのような能力を保有した乳酸菌を選抜した。
【００４０】
前記ヘリコバクター  ピロリ＃２６６９５は胃炎と消化性潰瘍がある韓国人の胃から分離され、慶尚大学校医科大学（Ｋｙｕｎｇｓａｎｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ）から分譲を受け、胃ガン細胞であるヒトＫａｔｏＩＩＩは韓国細胞株銀行（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｂａｎｋ）から分譲を受けた。
【００４１】
主として、細胞に付着したヘリコバクター  ピロリの菌数を、ヘリコバクター  ピロリの数を測定する指標であるウレアーゼ反応溶液の６２５ｎｍにおける吸光度によって測定し、付着したヘリコバクター  ピロリの数を１０６以下に減少させた乳酸菌を選抜した結果、下記表１に示すように全７０種が選抜された（Ａ６２５値が１．７以下であれば、ヘリコバクター  ピロリの数が１０６以下として計算される）。
【表１】
2004524859.tif 000002
【００４２】
（２次選抜）
１次的に選抜された７０種の菌株に対して再現性試験（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ）を行うと同時にヘリコバクター  ピロリの付着阻害能が高い菌株を選抜した。付着ヘリコバクター  ピロリ菌数が約１０５以下まで減少させる乳酸菌３５個を選抜してこれを下記表２に示した。
【表２】
2004524859.tif 000003
【００４３】
（３次選抜）
前記２次的に選抜された３５種の乳酸菌に対して２次再現性試験を行ない選抜された２２個の菌株を下記表３に示した。
【表３】
2004524859.tif 000004
【００４４】
実施例３：菌株の同定
前記実施例１及び２の方法で選抜された２２個の乳酸菌菌株をＢＩＯＬＯＧ  ｋｉｔとＢｅｒｇｅｙ’ｓ  ｍａｎｕａｌにより同定した結果を下記表４に示した。
【表４】
2004524859.tif 000005
【００４５】
表４に示すように、ＢＩＯＬＯＧ  ｓｙｓｔｅｍにより同定された１種のロイコノストックｓｐ.菌株とＢｅｒｇｅｙ´ｓ  ｍａｎｎａｌの同定法により同定された２１種のラクトバチルスｓｐ.菌株がヘリコバクター  ピロリの細胞への付着を阻害する特性を有していた。
【００４６】
（４次選抜）
３次選抜された２２個の菌株に対して３次再現性試験を実施して阻害能が高い菌株９個を選抜した。この段階では阻害能が高い順に選抜するのでなく、菌の形態によって区分して選抜しており、その結果を下記表５に示した。
【表５】
2004524859.tif 000006
【００４７】
（最終選抜）
選抜された前記９個の乳酸菌菌株に対して４次再現性試験を行い各菌の形態に対し１菌株を選抜して最終的に下記表６に示すように５個の菌株を選抜した。
【表６】
2004524859.tif 000007
【００４８】
前記表６に示した最終５個の菌株に対して、ロイコノストックｓｐ.菌株はロイコノストックｓｐ.ＥＵＧ４４２７（ＫＣＣＭ−１０２７４）と命名し、ラクトバチルスｓｐ.４種の菌株は各々ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６０１７（ＫＣＣＭ−１０２７３）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０６６（ＫＣＣＭ−１０２７０）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０４８（ＫＣＣＭ−１０２７１）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６４０４（ＫＣＣＭ−１０２７２）と命名した。
【００４９】
前記５個の菌株は前述の名称で２００１年５月１６日韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ）に寄託した。
【００５０】
実施例４：キムチ乳酸菌培養液のヘリコバクター  ピロリ生育阻害
前記実施例３で選抜されたロイコノストックｓｐ.ＥＵＧ４４２７（ＫＣＣＭ−１０２７４）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６０１７（ＫＣＣＭ−１０２７３）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０６６（ＫＣＣＭ−１０２７０）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０４８（ＫＣＣＭ−１０２７１）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６４０４（ＫＣＣＭ−１０２７２）を各々ＭＲＳ液体培地で３７℃、４８時間培養した後、遠心分離して上清を得た。
【００５１】
馬血清１０％が添加されたブルセラ（ｂｒｕｃｅｌｌａ）寒天培地２５ｍＬで寒天平板を作った後乾燥し、ここにヘリコバクター  ピロリの懸濁液０．５ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／ＭＩ）を塗抹して５分間乾燥した。
【００５２】
殺菌されたコルクボーラー（ｃｏｒｋ  ｂｏｒｅｒ）で培地に孔をあけて各菌株の遠心分離した上清１００μl入れた後、二酸化炭素１０％分圧下で３７℃、７２時間培養して生成された透明環の大きさを測定した。対照としては上清の代わりにＭＲＳ液体培地を用いた。生体外で乳酸菌によるヘリコバクター  ピロリの生育を阻害する結果は表７に示した。
【表７】
2004524859.tif 000008
【００５３】
表７に示すように、実施例３で分離した５種のキムチ乳酸菌の上清を培養した結果、生成された透明環の半径が２．５〜４．５ｍｍで、本発明のキムチ乳酸菌が優れたヘリコバクター  ピロリ生育阻害能を有していることが分かった。
【００５４】
実施例５：ヘリコバクター  ピロリの胃ガン細胞への付着阻害
ヒト胃ガン種細胞であるＫａｔｏ  ＩＩＩをＦＢＳが１０％含まれているＲＰＭＩ１６４０培地で３７℃、二酸化炭素１０％下で培養した。ヘリコバクター  ピロリは馬血清１０％が含まれているブルセラ寒天培地で３７℃、二酸化炭素１０％下で４８時間培養した後、コロニーを集めて食塩水に懸濁し、１×１０６のＫａｔｏ  ＩＩＩ懸濁液０．５ｍＬと乳酸菌培養液０．２５ｍＬをゆっくり振動させて３７℃で３０分間反応させた。対照は培養液の代わりにＭＲＳ液体培地を用いた。
ここにヘリコバクター  ピロリの懸濁液０．２５ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）を添加して再び９０分間反応させた後、食塩水で各回１，０００ｒｐｍ、５分の条件で３回洗浄した。ウレアーゼ試験によりＫａｔｏ  ＩＩＩに付着したヘリコバクター  ピロリの数を測定した。
【００５５】
ウレアーゼは尿素（ｕｒｅａ）を分解してアンモニアを生成し、生成されたアンモニアをフェノール／ニトロプルシド（ｐｈｅｎｏｌ／ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）とアルカリ性次亜塩素酸エステル（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ）を利用して定量した。もしウレアーゼが存在すれば反応液は無色から薄い青色に変わり、ウレアーゼの活性は６２５ｎｍで吸光度を測定することによって決定する。ウレアーゼの活性を通じてヘリコバクター  ピロリの数を計算し、この試験の標準曲線はヘリコバクター  ピロリの数が１０４〜１０７の時に直線区間を示した。
【００５６】
実施例３において選抜した５種の各キムチ乳酸菌に対し、ヘリコバクター  ピロリのヒト胃ガン細胞に対する付着阻害能を表８に示した。
【表８】
2004524859.tif 000009
【００５７】
表８から、実施例３において選抜した５種のキムチ乳酸菌はヒト胃ガン細胞であるＫａｔｏ  ＩＩＩに付着したヘリコバクター  ピロリの菌数が非常に少ないことを確認し、本発明に従ってキムチから分離した５種の乳酸菌がヘリコバクター  ピロリの胃腸管への付着を抑制することが分かった。
【００５８】
実施例６：胃腸管保護高機能性キムチの製造
実施例３において選抜したロイコノストックｓｐ.ＥＵＧ４４２７（ＫＣＣＭ−１０２７４）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６０１７（ＫＣＣM-１０２７３）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０６６（ＫＣＣＭ−１０２７０）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ４０４８（ＫＣＣＭ−１０２７１）、ラクトバチルスｓｐ.ＥＵＧ６４０４（ＫＣＣＭ−１０２７２）を凍結乾燥して粉末状態に作った後、１種以上の菌株を混合してキムチｋｇ当り１０６〜１０１１、好ましくは１０１０個の菌をキムチ調味料に混合して通常のキムチ製造方法で胃腸管保護高機能性キムチを製造した。
【００５９】
本発明のキムチ乳酸菌は胃粘膜組織に棲息するヘリコバクター  ピロリの胃腸管への付着を阻害し生育を抑制してヘリコバクター  ピロリの撲滅及び再感染防御に非常に効果的である。加えて、前記キムチ乳酸菌を含有する胃腸管保護高機能性キムチはヘリコバクター  ピロリによって引き起こされる胃炎、消化性潰瘍及び十二指腸潰瘍の予防及び治療に非常に効果的である。
【００６０】
加えて、乳酸菌はヒトの腸内または牛乳の発酵製品から由来したものではなく、望ましい機能を有する乳酸菌は韓国人の主要乳酸菌供給源であるキムチから選抜したものである。よって、他の食材と同様に伝統食品であるキムチに機能性を付加することができるので、機能性乳酸菌の供給源を多様化することができる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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