(57)【要約】本発明は、その構造が、薬剤としての治療的、診断的および工業的使用の目的のために解明された、ヒト血液から誘導される新規なペプチド、ｈＢＤ−５（ヒトβ−デフェンシン−５）、ｈＢＤ−６、ｈＢＤ−７、ｈＢＤ−８、ｈＢＤ−１０、ｈＢＤ−１１、ｈＢＤ−１２、ｈＢＤ−１３、ｈＢＤ−１４、ｈＢＤ−１５、ｈＢＤ−１６、ｈＢＤ−１７、ｈＢＤ−１８、ｈＢＤ−１９、ｈＢＤ−２０、ｈＢＤ−２２、ｈＢＤ−２３、ｈＢＤ−２４、ｈＢＤ−２５、ｈＢＤ−２６、ｈＢＤ−２７、ｈＢＤ−２８、ｈＢＤ−２９、ｈＢＤ−３０、ｈＢＤ−３１およびｈＢＤ−３２およびそれらの誘導体に関する。そのペプチドは、生物工学的組換え法によって、化学合成ならびに対応する前駆タンパク質からのタンパク質分解によって作製することができる。
2004504017.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のアミノ酸配列：
【化１】
2004504017.tif 000015
（式中、ＺＮは、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基であり、Ｚｃは、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基であり；
Ｘ＝任意のアミノ酸；
Ｘｍ＝３〜６個の任意のアミノ酸；
Ｘｎ＝２〜３個のアミノ酸；
Ｘｏ＝５〜９個のアミノ酸；
Ｘｐ＝４〜６個のアミノ酸；
Ｘ１＝Ｇ、ＡまたはＰ；
Ｘ２＝Ｒ、Ｋ、Ｗ、ＱまたはＡ；
Ｘ３＝ＥまたはＨ）を有するペプチド。
【請求項２】
以下のアミノ酸配列：
【化２】
2004504017.tif 000016
（式中、ＺＮ２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＩＮＴＬＱＫＹＹおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＲＫＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
以下のアミノ酸配列：
【化３】
2004504017.tif 000017
（式中、ＺＮ３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＥＬＤＲＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＲＫＷＤＥＳＬＬＮＲＴＫＰおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
以下のアミノ酸配列：
【化４】
2004504017.tif 000018
（式中、ＺＮ４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＶＶＤおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＨを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
以下のアミノ酸配列：
【化５】
2004504017.tif 000019
（式中、ＺＮ５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＡＶＣＥＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＱＲＩおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】
以下のアミノ酸配列：
【化６】
2004504017.tif 000020
（式中、ＺＮ７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＮＴＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＳＮＴＤＥＥＧＫＥＫＰＥＭＤおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】
以下のアミノ酸配列：
【化７】
2004504017.tif 000021
（式中、ＺＮ８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＫＦＫＥＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＰＬＧＨＱＰＲＩＥＳＴおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】
以下のアミノ酸配列：
【化８】
2004504017.tif 000022
（式中、ＺＮ９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＮＡＦＦＤＥＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＴＩＱＰおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】
以下のアミノ酸配列：
【化９】
2004504017.tif 000023
（式中、ＺＮ１０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＤＬＧＰＶＥＧＨおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＴＷＷＩＬおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１０】
以下のアミノ酸配列：
【化１０】
2004504017.tif 000024
（式中、ＺＮ１１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＶＭＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＤＰＫＹＶＰＶＫＰＫＬおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
以下のアミノ酸配列：
【化１１】
2004504017.tif 000025
（式中、ＺＮ１２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＩＥＴおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＰＫＤＱＰＨＬＰＱＨＩＫＮおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１２】
以下のアミノ酸配列：
【化１２】
2004504017.tif 000026
（式中、ＺＮ１３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＴＥＱＬＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＮＩＫＥＬＥＡおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１３】
以下のアミノ酸配列：
【化１３】
2004504017.tif 000027
（式中、ＺＮ１４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＴＰＧＧＴＱＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＫＰＫＹＱＰＫＥＲＷＷＰＦおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１４】
以下のアミノ酸配列：
【化１４】
2004504017.tif 000028
（式中、ＺＮ１５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＰＡＹＳＧＥＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＰＳＮＥＤＨＲＲＶおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１５】
以下のアミノ酸配列：
【化１５】
2004504017.tif 000029
（式中、ＺＮ１６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＦＩＧＬＲＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＧＰＫＶＶＫＬＩＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１６】
以下のアミノ酸配列：
【化１６】
2004504017.tif 000030
（式中、ＺＮ１７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＥを表し、ＺＣ１７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＳＲおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１７】
以下のアミノ酸配列：
【化１７】
2004504017.tif 000031
（式中、ＺＮ１９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＨＩＬＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ１９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＱＳＹＭＲおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１８】
以下のアミノ酸配列：
【化１８】
2004504017.tif 000032
（式中、ＺＮ２０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＫＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＳＹＡＬＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１９】
以下のアミノ酸配列：
【化１９】
2004504017.tif 000033
（式中、ＺＮ２１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＰＷＮＰおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＬＳＶＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２０】
以下のアミノ酸配列：
【化２０】
2004504017.tif 000034
（式中、ＺＮ２２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＱＫＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＰＳＮＴＤＳおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２１】
以下のアミノ酸配列：
【化２１】
2004504017.tif 000035
（式中、ＺＮ２３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＷＩＲＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＫＥＫＤＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２２】
以下のアミノ酸配列：
【化２２】
2004504017.tif 000036
（式中、ＺＮ２４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＱＳＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＥを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２３】
以下のアミノ酸配列：
【化２３】
2004504017.tif 000037
（式中、ＺＮ２５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＳＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＳＹＳＦＬＰＫを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２４】
以下のアミノ酸配列：
【化２４】
2004504017.tif 000038
（式中、ＺＮ２６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＦＥＰＱＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＳＩＩＳＨＥＹを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２５】
以下のアミノ酸配列：
【化２５】
2004504017.tif 000039
（式中、ＺＮ２７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＡＮＤＥＥＥＫを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２６】
以下のアミノ酸配列：
【化２６】
2004504017.tif 000040
（式中、ＺＮ２８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＷＹＶＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＡＤＲを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２７】
以下のアミノ酸配列：
【化２７】
2004504017.tif 000041
（式中、ＺＮ２９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＥＴおよびそのＮ末端が切断された断片を表し、ＺＣ２９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫを表す）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２８】
前記ペプチドが、環状、アミド化、アセチル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化および酸化誘導体、ならびに上記のアミノ酸配列から誘導され、かつ同様の生物活性を有するペプチド断片である、請求項１から２７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２９】
請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体および断片の作製方法であって、それらが、原核性もしくは真核性発現によって作製され、精製されることを特徴とする方法。
【請求項３０】
前記ペプチドが、それ自体公知の通常のクロマトグラフ法によって、公知の方法でヒト血液から単離されることを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記デフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体が、化学的な固相および液相ペプチド合成の通常の方法によって、請求項１から２８の少なくとも一項に記載の指定の配列に含まれる保護アミノ酸から作製され、デブロックされ、それ自体公知の方法によって精製されることを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
通常の助剤および添加剤に加えて、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種を、活性成分として含有する薬剤。
【請求項３３】
器官の細菌コロニー形成から起こる疾患を治療するための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項３４】
ヒト生体、特に胃腸管、呼吸器経路および尿生殖器を含む生体の疾患を治療するための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項３５】
ヒト生体、特に外皮およびその付属器の腺を含む生体の疾患を治療するための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項３６】
特にデフェンシンペプチドに対して形成される抗体によって、デフェンシンペプチドが過剰に産生されるか、または欠乏している場合に、全身性疾患を治療するための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用、あるいは補充療法のための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドの使用。
【請求項３７】
請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用であって、治療に適切な形態でそれらを使用することによって、請求項３３から３６に記載の疾患に一部関連する慢性疾患を治療するための使用。
【請求項３８】
請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用であって、かかる疾患の集中治療における治療に適切な形態でそれらを使用することによって、請求項３３から３７に記載の急性疾患を治療するための使用。
【請求項３９】
受胎障害の治療に、特に卵母細胞に関連する精子侵入の障害および着床障害、ならびに男性生殖器における成熟障害を含む疾患を治療するための、かつ避妊薬としての、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項４０】
請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種に対する特異的抗体を作製し、免疫学的方法によって、請求項１から２８のいずれか一項に記載のデフェンシンペプチドの１種または複数種の血中濃度を測定することによる、疾患、特に請求項３３から３９に記載の疾患を診断するための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項４１】
異なる生薬の剤形で、特に生理食塩水に溶解する無菌アンプル中のマンニトールで溶解される凍結乾燥形態、かつ／あるいは繰り返しの個々の注入および／または永続的な注入用の注入溶液の形態での、請求項１に記載のデフェンシンペプチドの１種または複数種を１治療単位当たり３００マイクログラム〜３００ミリグラムの量での、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種の使用。
【請求項４２】
上皮組織および器官における、請求項３３から３９のいずれか一項に記載の兆候の局所的および全身的遺伝子治療のための、請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドから誘導される遺伝子プローブおよび遺伝子の使用。
【請求項４３】
請求項１から２８の少なくとも一項に記載のデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体または断片の１種または複数種をコードする核酸配列。
【請求項４４】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−５をコードする、以下の配列：
【化２８】
2004504017.tif 000042
を有する核酸配列。
【請求項４５】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−６をコードする、以下の配列：
【化２９】
2004504017.tif 000043
を有する核酸配列。
【請求項４６】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−７をコードする、以下の配列：
【化３０】
2004504017.tif 000044
を有する核酸配列。
【請求項４７】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−８をコードする、以下の配列：
【化３１】
2004504017.tif 000045
を有する核酸配列。
【請求項４８】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１０をコードする、以下の配列：
【化３２】
2004504017.tif 000046
を有する核酸配列。
【請求項４９】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１１をコードする、以下の配列：
【化３３】
2004504017.tif 000047
を有する核酸配列。
【請求項５０】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１２をコードする、以下の配列：
【化３４】
2004504017.tif 000048
を有する核酸配列。
【請求項５１】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１３をコードする、以下の配列：
【化３５】
2004504017.tif 000049
を有する核酸配列。
【請求項５２】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１４をコードする、以下の配列：
【化３６】
2004504017.tif 000050
を有する核酸配列。
【請求項５３】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１５をコードする、以下の配列：
【化３７】
2004504017.tif 000051
を有する核酸配列。
【請求項５４】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１６をコードする、以下の配列：
【化３８】
2004504017.tif 000052
を有する核酸配列。
【請求項５５】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１７をコードする、以下の配列：
【化３９】
2004504017.tif 000053
を有する核酸配列。
【請求項５６】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１８をコードする、以下の配列：
【化４０】
2004504017.tif 000054
を有する核酸配列。
【請求項５７】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−１９をコードする、以下の配列：
【化４１】
2004504017.tif 000055
を有する核酸配列。
【請求項５８】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２０をコードする、以下の配列：
【化４２】
2004504017.tif 000056
を有する核酸配列。
【請求項５９】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２２をコードする、以下の配列：
【化４３】
2004504017.tif 000057
を有する核酸配列。
【請求項６０】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２３をコードする、以下の配列：
【化４４】
2004504017.tif 000058
を有する核酸配列。
【請求項６１】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２４をコードする、以下の配列：
【化４５】
2004504017.tif 000059
を有する核酸配列。
【請求項６２】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２５をコードする、以下の配列：
【化４６】
2004504017.tif 000060
を有する核酸配列。
【請求項６３】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２６をコードする、以下の配列：
【化４７】
2004504017.tif 000061
を有する核酸配列。
【請求項６４】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２７をコードする、以下の配列：
【化４８】
2004504017.tif 000062
を有する核酸配列。
【請求項６５】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２８をコードする、以下の配列：
【化４９】
2004504017.tif 000063
を有する核酸配列。
【請求項６６】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−２９をコードする、以下の配列：
【化５０】
2004504017.tif 000064
を有する核酸配列。
【請求項６７】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−３０をコードする、以下の配列：
【化５１】
2004504017.tif 000065
を有する核酸配列。
【請求項６８】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−３１をコードする、以下の配列：
【化５２】
2004504017.tif 000066
を有する核酸配列。
【請求項６９】
デフェンシンペプチドｈＢＤ−３２をコードする、以下の配列：
【化５３】
2004504017.tif 000067
を有する核酸配列。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ヒト・デフェンシン型のペプチド、炎症性疾患において細菌の侵入を防ぐ能力を有する、ヒトおよび動物の体液から純粋な形でまたは一部精製された形でかかるペプチドを回収する方法、かかるペプチドをコードする核酸、かかるペプチドを含有する薬剤、および様々な疾患を治療するための、かかるペプチドの使用に関する。
【０００２】
これらのペプチドは、特にヒトおよび動物血液由来の血液濾過液または血液透析液から回収することができる。これらの物質は、ヒト・デフェンシンとして分類されており、（１）薬剤としての医学的および工業的使用、および（２）疾患の分析のために使用することができる。
【０００３】
略名：ｈＢＤ−５（ヒトβ−デフェンシン−５）、ｈＢＤ−６、ｈＢＤ−７、ｈＢＤ−８、ｈＢＤ−１０、ｈＢＤ−１１、ｈＢＤ−１２、ｈＢＤ−１３、ｈＢＤ−１４、ｈＢＤ−１５、ｈＢＤ−１６、ｈＢＤ−１７、ｈＢＤ−１８、ｈＢＤ−１９、ｈＢＤ−２０、ｈＢＤ−２２、ｈＢＤ−２３、ｈＢＤ−２４、ｈＢＤ−２５、ｈＢＤ−２６、ｈＢＤ−２７、ｈＢＤ−２８、ｈＢＤ−２９、ｈＢＤ−３０、ｈＢＤ−３１およびｈＢＤ−３２を有する、その物質は最初に、血液透析装置で限外濾過した後に、腎疾患患者の血液濾過液から得られ、抗菌抑制試験によって機能的に特徴づけられた。デフェンシンペプチドを調製するために、血液濾過液からタンパク質を回収するために以前に発明された、特許取得済みの方法を改良した。分子量２０ｋＤを有し、静静脈（ｖｅｎｏ−ｖｅｎｏｕｓ）シャントまたは動静脈（ａｒｔｅｒｉｏ−ｖｅｎｏｕｓ）シャントの連結を用いて濾過除去される、この方法で得られた分子から、ヒト・デフェニンシンペプチドを含有するペプチド画分が機能試験によって認められることができる。従来から知られている方法を、未精製ペプチド抽出物を回収するために使用した。そのペプチド抽出物に対して、レーラー（Ｌｅｈｒｅｒ）の放射拡散試験を適用すると、この物質の影響下で培養液中の細菌の成長が強く抑制されるという点で、強い効果が認められた。
【０００４】
さらに、異なる均質なタンパク質を最後に同定し、それらの構造を解明することができるまで、これらの生物活性を更なる精製プロセスで濃縮することが可能であることが証明された。有利なことに、経済的に利用できる物質として使用するには、従来から価値が無いと考えられていた血液濾過液から、これらの物質を精製することができる。本発明によるペプチドは、化学合成によって、および遺伝子工学生成によって得ることが可能であり、特に、胃腸、呼吸器および尿生殖器管ならびに他の器官の診断をするための特徴的診断症状として利用することができる。
【０００５】
本発明は、以下のアミノ酸配列：
【化５４】
2004504017.tif 000003
（式中、ＺＮは、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基であり、Ｚｃは、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基であり；
Ｘ＝任意のアミノ酸；
Ｘｍ＝３〜６個の任意のアミノ酸；
Ｘｎ＝２〜３個のアミノ酸；
Ｘｏ＝５〜９個のアミノ酸；
Ｘｐ＝４〜６個のアミノ酸；
Ｘ１＝Ｇ、ＡまたはＰ；
Ｘ２＝Ｒ、Ｋ、Ｗ、ＱまたはＡ；
Ｘ３＝ＥまたはＨ）を有するペプチドに関する。
【０００６】
以下の配列：
【化５５】
2004504017.tif 000004
【０００７】
【化５６】
2004504017.tif 000005
【０００８】
【化５７】
2004504017.tif 000006
（式中、ＺＮ２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＩＮＴＬＱＫＹＹおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＲＫＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＥＬＤＲＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＲＫＷＤＥＳＬＬＮＲＴＫＰおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＶＶＤおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＨを表し；
ＺＮ５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＡＶＣＥＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＱＲＩおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＮＴＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＳＮＴＤＥＥＧＫＥＫＰＥＭＤおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＫＦＫＥＩおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＰＬＧＨＱＰＲＩＥＳＴおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＮＡＦＦＤＥＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＴＩＱＰおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＤＬＧＰＶＥＧＨおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＴＷＷＩＬおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＶＭＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＤＰＫＹＶＰＶＫＰＫＬおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＲＩＥＴおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＰＫＤＱＰＨＬＰＱＨＩＫＮおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＴＥＱＬＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＮＩＫＥＬＥＡおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＴＰＧＧＴＱＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＫＰＫＹＱＰＫＥＲＷＷＰＦおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＰＡＹＳＧＥＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＰＳＮＥＤＨＲＲＶおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＦＩＧＬＲＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＧＰＫＶＶＫＬＩＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＥを表し；
ＺＣ１７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＳＲおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ１９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＨＩＬＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ１９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＱＳＹＭＲおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ２０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＥＦＫＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２０は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＳＹＡＬＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ２１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＰＷＮＰおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２１は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＬＳＶＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ２２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＱＫＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２２は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＰＳＮＴＤＳおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ２３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＷＩＲＲおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２３は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＫＥＫＤＫおよびそのＣ末端が切断された断片を表し；
ＺＮ２４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＱＳＳおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２４は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＥを表し；
ＺＮ２５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＧＳＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２５は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＳＹＳＦＬＰＫを表し；
ＺＮ２６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＦＥＰＱＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２６は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＳＩＩＳＨＥＹを表し；
ＺＮ２７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２７は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＡＮＤＥＥＥＫを表し；
ＺＮ２８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＷＹＶＫＫおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２８は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＶＰＡＤＲを表し；
ＺＮ２９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＩＥＴおよびそのＮ末端が切断された断片を表し；
ＺＣ２９は、３０個までのアミノ酸のアミノ酸残基またはペプチド残基、特にペプチド残基ＬＫを表す）を有するペプチド、および
それらの環状、アミド化、アセチル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化および酸化誘導体、ならびに上記のアミノ酸配列から誘導されたペプチド断片が特に好ましい。
【０００９】
上述の新規なデフェンシンペプチドに対して、以下のコーディング核酸配列（ｃＤＮＡ）が発見され、本発明は、それにもまた関するものである：
【化５８】
2004504017.tif 000007
【００１０】
【化５９】
2004504017.tif 000008
【００１１】
【化６０】
2004504017.tif 000009
【００１２】
【化６１】
2004504017.tif 000010
【００１３】
【化６２】
2004504017.tif 000011
【００１４】
【化６３】
2004504017.tif 000012
【００１５】
新規なデフェンシンペプチドｈＢＤ−５、ｈＢＤ−６、ｈＢＤ−７、ｈＢＤ−８、ｈＢＤ−１０、ｈＢＤ−１１、ｈＢＤ−１２およびｈＢＤ−１３の遺伝子は、対応するコーディングヌクレオチド配列を分析することによって、第８染色体上で発見され、本発明による新規なデフェンシンペプチドｈＢＤ−１４、ｈＢＤ−１５、ｈＢＤ−１６、ｈＢＤ−１７、ｈＢＤ−１８、ｈＢＤ−１９、ｈＢＤ−２０、ｈＢＤ−２２、ｈＢＤ−２３、ｈＢＤ−２４、ｈＢＤ−２５、ｈＢＤ−２６、ｈＢＤ−２７、ｈＢＤ−２８、ｈＢＤ−２９、ｈＢＤ−３０、ｈＢＤ−３１およびｈＢＤ−３２は驚くべきことに、第２０染色体に割り当てることができた。
【００１６】
したがって、本発明の他の目的は、天然物質の生物活性および治療活性を有する容易に入手できる薬剤として、それらをそれぞれ使用することができるという点で特徴づけられる、新規なペプチドｈＢＤ−５〜ｈＢＤ−３２を提供することである。
【００１７】
本発明はさらに、本発明によるペプチドの作製方法、および様々な治療および診断指標の薬剤としての本発明によるペプチドの使用を提供する。この目的のために、高純度物質として、または特定の使用に十分な場合には一部精製されたペプチド混合物の範囲内で、または本発明による高純度デフェンシンペプチドの数種類の混合物として、デフェンシンペプチドを使用することができる。
【００１８】
本発明によるペプチドは、器官の細菌のコロニー形成から起こる疾患の治療に用いることができる。
【００１９】
本発明によるペプチドはさらに、ヒト生体、特に胃腸管、呼吸器経路および尿生殖器を含む生体の疾患の治療に用いることができる。
【００２０】
本発明の他の実施形態では、本発明によるペプチドを、ヒト生体、特に外皮およびその付属器の腺を含む生体の疾患の治療に用いることができる。
【００２１】
本発明によるペプチドは、特にデフェンシンペプチドに対して形成される抗体によって、デフェンシンペプチドが過剰に産生されるか、または欠乏している場合に、全身性疾患の治療に、あるいは補充療法における用途に用いることもできる。
【００２２】
本発明の他の実施形態では、本発明によるペプチドを、治療に対して適切な形態でそれらを使用することによって、既に述べた疾患に一部関連する、慢性疾患の治療に使用することができる。
【００２３】
本発明によるペプチドはさらに、急性期の疾患の治療に用いることができる。
【００２４】
本発明によるペプチドは、受胎障害の治療に、特に卵母細胞に関連する精子侵入の障害および着床障害、ならびに男性生殖器における成熟障害を含む疾患に、かつ避妊薬として、利用することができる。
【００２５】
本発明によるペプチドは、例えば本発明によるペプチドの１種もしくは複数種またはそれらの誘導体または断片に対する抗体を作製し、本発明によるペプチドの１種または複数種の血中濃度を免疫学的方法により測定することによって、既に上述の疾患の診断に利用することができる。
【００２６】
本発明はさらに、本発明による新規なデフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体を調製する様々な方法であって、原核性もしくは真核性発現によって作製され、クロマトグラフィーによって精製されることを特徴とする方法；デフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体を、公知の手法でクロマトグラフ法によって、ヒト血液から単離することによって作製する他の方法；最後に、示した配列に含まれる保護アミノ酸から、固相および液相合成の通常の方法によって、これらのデフェンシンペプチドを作製し、それをデブロッキングし、通常のクロマトグラフ法で精製することによって、デフェンシンペプチドまたはそれらの誘導体を作製する方法；に関する。
【００２７】
デフェンシンペプチドは、化学合成され、薬剤として配合される。通常のベクターを用いた遺伝子工学による作製もまた、確立されている。このルートで、（１）原核生物および（２）真核生物の両方において、新規なデフェンシンペプチドを作製する。この目的に対して、分泌または直接細胞質発現に用いられる、様々な発現ベクターが日常的に入手可能である。
【００２８】
その医薬製剤は、本発明による新規なデフェンシンペプチドの１種または複数種、あるいはかかるペプチドの生理学的に許容可能な塩を含有する。新規なデフェンシンペプチドの１種または複数種を含有する薬剤の形状および組成は、投与経路に依存する。新規なデフェンシンペプチドの１種または複数種を含有する薬剤は、非経口的に、鼻腔内に、経口的に、かつ吸入によって、投与することが可能である。新規なデフェンシンペプチドの１種または複数種を含有するこれらの薬剤は、溶液として、または使用直前に溶解する凍結乾燥物として、注入調製物（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）で包装することが好ましい。その医薬製剤は、充填に必要とされ、薬剤の溶解性もしくは無菌性を付与するか、あるいは体内への取り込み効率を高める助剤を含有することも可能である。
【００２９】
本発明によるデフェンシンペプチドの投与すべき１日量は、兆候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）および特定の誘導体の使用に応じて異なる。静脈／動脈注射に関しては、１００〜１２００単位（μｇ）／日の範囲内であり、毎日の皮下注射の場合、３００〜２４００単位（μｇ）／日が好ましい。
【００３０】
本発明による新規なデフェンシンペプチドの生物活性の決定は、国際的に使用されている、抗生物質の参照試料に対する測定に基づく。
【００３１】
本発明による新規なデフェンシンペプチドｈＢＤ−５、ｈＢＤ−６、ｈＢＤ−７、ｈＢＤ−８、ｈＢＤ−１０、ｈＢＤ−１１、ｈＢＤ−１２、ｈＢＤ−１３、ｈＢＤ−１４、ｈＢＤ−１５、ｈＢＤ−１６、ｈＢＤ−１７、ｈＢＤ−１８、ｈＢＤ−１９、ｈＢＤ−２０、ｈＢＤ−２２、ｈＢＤ−２３、ｈＢＤ−２４、ｈＢＤ−２５、ｈＢＤ−２６、ｈＢＤ−２７、ｈＢＤ−２８、ｈＢＤ−２９、ｈＢＤ−３０、ｈＢＤ−３１およびｈＢＤ−３２は、優れた生物学的有効性を有し、一方では、永続的な治療でさえ免疫応答を引き起こさないことから、特に感染症の長期治療に適していることによっても特徴づけられる。
【００３２】
本発明によるデフェンシンペプチドの生物活性のために、本発明による製剤はさらに、多くの上皮器官の感染症を治療するための作用薬として用いることが可能であることが示されている。
【００３３】
その活性を決定するために、実例として、ペプチドｈＢＤ１０、ｈＢＤ１７およびｈＢＤ１９をそれらの抗菌効果について試験した。放射拡散（ｒａｄｉａｌ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）アッセイにおいて、表１に示す活性は、異なる菌株に対するペプチドについて測定することができた。その表において、（＋）は、抑制のハローが形成したことを意味し、（−）は、抑制のハローが形成しなかったことを意味する。
【００３４】
【表１】
2004504017.tif 000013
【００３５】
抗菌活性をさらに厳密に決定するために、上述のデフェンシンの最小阻止濃度（ＭＩＣ）を標準法によって決定した。その結果を表２に示す。ＭＩＣ値は、濃度［μｇ／ｍｌ］に相当する（ｎｄ＝測定されず）。
【００３６】
【表２】
2004504017.tif 000014
【００３７】
さらに、ｈＢＤ１６について、構造分析を行った。図１には、溶液中で発見されるｈＢＤ１６のＮＭＲ構造を示す。
【００３８】
システインＣｙｓ６、１５、２９および３５の空間位置は、これらの位置の架橋が必ずしも、活性の減少をもたらす構造の変化を意味するものではないことを示している。このことは、２つの架橋パターンを比較することによって示すことができる（図２）。
【図面の簡単な説明】
【図１】溶液中で発見されるｈＢＤ１６のＮＭＲ構造を示す。
【図２】ｈＢＤ１６のＮＭＲ構造の２つの架橋パターンの比較。
【図１】
2004504017.tif 000068
【図２】
2004504017.tif 000069
【国際公開パンフレット】
2004504017.tif 000070
2004504017.tif 000071
2004504017.tif 000072
2004504017.tif 000073
2004504017.tif 000074
2004504017.tif 000075
2004504017.tif 000076
2004504017.tif 000077
2004504017.tif 000078
2004504017.tif 000079
2004504017.tif 000080
2004504017.tif 000081
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2004504017.tif 000083
2004504017.tif 000084
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2004504017.tif 000107
2004504017.tif 000108
2004504017.tif 000109
2004504017.tif 000110
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004504017.tif 000111
2004504017.tif 000112
【国際調査報告】
2004504017.tif 000113
2004504017.tif 000114
2004504017.tif 000115
2004504017.tif 000116
2004504017.tif 000117
2004504017.tif 000118
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