(57)【要約】本発明は、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〔ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される単糖を表し、この単糖は場合により還元型にあり、および／または特にメチルもしくはアセチル基のようなアルキルもしくはアシル基により置換されており、ｎは０または１を表す〕で示される多糖構造を含む化合物の、非生物的ストレスに対する植物の馴化、開花の制御、結実の制御および病原体に対する防御反応の誘導のための使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、この糖は場合により還元型にあり、および／または置換、特にメチルもしくはアセチル基のようなアルキルもしくはアシル基により置換されており、そしてｎは、０または１を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、場合により、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３もしくはＸ４のか、または場合によりＸ５、Ｘ６もしくはＸ７の、少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す〕
で示されるオシド構造を含む化合物、
あるいは上記に定義された化合物から、特に１以上の上記に挙げられた糖の修飾または置換により誘導された化合物
の使用であって、該化合物およびそれらの誘導体は次の性質、すなわち
−　グルタチオンレダクターゼを刺激し、
−　および／または植物中のホスホリパーゼＤを刺激し、
−　および／またはグリコシルヒドロラーゼを刺激する
性質を有し、
該化合物の上記に挙げられた性質に結びついた使用、すなわち
−　寒冷に対する、または干ばつ、湿度もしくは塩度のような水分ストレスに対する馴化のような、非生物的ストレスに対する植物の馴化、
−　開花の制御、
−　結実の制御、
−　細菌、ウイルス、真菌のような病原体に対する防御反応の誘導
の範囲内の使用。
【請求項２】
糖が、αまたはβ型にあり、場合によりピラノースまたはフラノース型にあり、かつ１→２、１→３、１→４または１→６型の結合により相互接続されている化合物の、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
（ここで、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す）
で示される化合物の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
−　式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
（ここで、
・Ｘ１は、フコースを表し、
・Ｘ２は、ガラクトースを表し、
・Ｘ３は、キシロースまたはグルコースを表し、
・Ｘ４は、グルコースのような糖により場合により置換されたグルコースを表し、
・Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４の各々は、αまたはβ型の、（Ｌ）または（Ｄ）グリコシル残基であり、ｎは、０または１を表し、
・そしてｎは、０または１を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により特にメチル基のようなアルキル基により置換されている）
で示される化合物、
例えば、
式：
【化１】
2004509906.tif 000008
（ＦＧとも称される）
で示される化合物
（上記の化合物の式中において、ｎ＝０であるときの位置Ｘ３におけるもしくは位置Ｘ４におけるオシド残基、または位置Ｘ４における置換しているオシド残基は、場合により還元型にある）、
−　あるいは、式：
【化２】
2004509906.tif 000009
で示される化合物
（ここで、Ｆｕｃはフコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、Ａｒａはアラビノースを表し、そしてＸｙｌはキシロースを表す）
の、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、
Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す〕
で示される化合物の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項６】
式
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５は、キシロースを表し、Ｘ６は、ガラクトースを表し、Ｘ７は、フコースを表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されている〕
で示される化合物の、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
式：
【化３】
2004509906.tif 000010
2004509906.tif 000011
で示される化合物、またはＸＬ、ＸＬＧＧ、ＸＬＸＧ、ＬＳ、ＡＸＸＧと称される化合物
（上記の化合物の式中の位置Ｘ４におけるグルコース残基または化合物ＸＸＧにおける位置Ｘ３におけるグリコース残基は、場合により還元型にある）
の、請求項５または６に記載の使用。
【請求項８】
式
〔Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〕Ｎ
〔ここで、
−　ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表し、
−　Ｎは、約５０と約３００との間に含まれる、好ましくは約５０と約１００との間に含まれる整数を表し、
−　またはＮは、約２と約５０との間に含まれる、好ましくは約２と約２０との間に、特に５と１２との間に含まれる整数を表す〕
で示されるポリマーまたはオリゴマーの、請求項１または２に記載の使用。
【請求項９】
式：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〔ここで、ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す〕で示される化合物により表される少なくとも２個の単位の連続鎖であって、
該鎖の単位の少なくとも一つは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４に結合された糖またはオシド鎖の少なくとも一つが、該鎖のその他の単位の一つまたはそれ以上のＸ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４に結合された糖またはオシド鎖の一つと、それぞれ異なっているような
連続鎖の、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１０】
Ｎが１２以下、好ましくは５以下の整数を表す請求項８に記載の式：〔Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〕Ｎのポリマー、または単位の数が１２以下、好ましくは５以下の請求項９に記載のとおりの単位の鎖の、請求項８または９に記載の使用。
【請求項１１】
式：
【化４】
2004509906.tif 000012
で示される化合物（上記の化合物の式中の末端位置におけるグルコース残基は、場合により還元型であり、そしてαまたはβ型にある）、あるいはまた式：ＸＸＦＸＸＧ、ＸＬＦＧＸＸＸＧ、ＸＦＦＧＸＸＸＧ、ＸＸＦＧＡＸＸＧ、ＧＦＧＧＦＧで示される化合物の、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
−　植物から、特に種子、葉、根、果実から抽出により、特にリンゴ、ジャガイモの塊茎、エキナセア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）、またはトロパエオルム（Ｔｒｏｐａｅｏｌｕｍ）もしくはヒメナエア（Ｈｙｍｅｎａｅａ）の種子から、
−　植物細胞懸濁液から、特にカエデ属（Ａｃｅｒ）、バラ属（Ｒｏｓａ）、ハッカ属（Ｍｅｎｔｈａ）、タバコ属（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）、ハコヤナギ属（Ｐｏｐｕｌｕｓ）、ディオスコレア・デルトイデア（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｄｅｌｔｏｉｄｅａ）、ジギタリス・ラナタ（Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ ｌａｎａｔａ）またはエキナセア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）の植物細胞懸濁液から、特に細胞壁からの抽出により、または培地からの単離により、
−　レンティヌス・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ ｅｄｏｄｅｓ）、ガノデルマ・ルシデュム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）、スエヒロタケ菌〔シゾフィルム・コムネ（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ）〕、トラメテス・ヴェルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、イノノツス・オブリクウス（Ｉｎｏｎｏｔｕｓ ｏｂｌｉｑｕｕｓ）およびエノキタケ菌〔フラムリナ・ヴェルティペス（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）〕のような真菌から、特に菌糸体からの抽出により、または培地からの単離により、
−　ウルヴァ・ラクツカ（Ｕｌｖａ ｌａｃｔｕｃａ）またはウルヴァ・リギダ（Ｕｌｖａ ｒｉｇｉｄａ）のような海藻から
得られるとおりの、キシログルカンポリマーもしくはオリゴマーまたはそれらの誘導体の、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
＊化学的または化学酵素的合成により、特にエンドトランスグリコシル化により、
＊遺伝的に改変された細菌株の発酵により、
＊適切な酵素、例えば、
−　セルラーゼ、より詳しくは、トリコデルマ・ヴィリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）もしくはトリコデルマ・レエセイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）のエンド−β−Ｄ−１，４−グルカナーゼのようなトリコデルマのエンド−β−Ｄ−１，４−グルカナーゼ、またはアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）のエンド−β−Ｄ−１，４−グルカナーゼのようなアスペルギルスのエンド−β−Ｄ−１，４−グルカナーゼ、並びにイルペクス・ラクテウス（Ｉｒｐｅｘ ｌａｃｔｅｕｓ）のエキソセルラーゼのエンド−β−Ｄ−１，４−グルカナーゼ（これらの酵素は、抽出または組換え酵素である）、
−　β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｌ−フコシダーゼ、α−Ｌ−キシロシダーゼのようなグリコシダーゼ（これらの酵素は、抽出または組換え酵素である）
を用いての、キシログルカンを含有するポリマーまたは糖タンパク質のグリカン部分を成すグリカンの加水分解（該酵素処理は、得られたキシログルカンオリゴマーの数段階の精製、特にクロマトグラフィーによる精製を後続させる）により
得られるとおりの、キシログルカンオリゴマーまたは誘導体の、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
植物中のグルタチオンレダクターゼの刺激方法であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物での植物処理の段階、特に該化合物を含む組成物を用いての該植物が栽培される土壌の灌漑による、またはかかる組成物で種子を被覆することによる、または処理される植物についての現場におけるかかる組成物の葉面噴霧による植物処理の段階を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
寒冷に対する、または干ばつ、湿度もしくは塩度のような水分ストレスに対する馴化のような、非生物的ストレスに対する植物の馴化方法を実施するための、請求項１４に記載の方法の使用。
【請求項１６】
植物中のホスホリパーゼＤ産生の刺激方法であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物での植物処理の段階、特に該化合物を含む組成物を用いての該植物が栽培される土壌の灌漑による、またはかかる組成物で種子を被覆することによる、または処理される植物についての現場におけるかかる組成物の葉面噴霧による植物処理の段階を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
開花の制御方法、より詳しくは花成誘導、開花持続および落花の制御方法の実行のための、並びに／または植物の結実の制御方法、特に果実の成熟の誘発および持続、落葉および落果の制御方法の実行のための、請求項１６に記載の方法の使用。
【請求項１８】
植物中のグリコシルヒドロラーゼの産生の刺激方法であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物での植物処理の段階、特に該化合物を含む組成物を用いての該植物が栽培される土壌の灌漑による、またはかかる組成物で種子を被覆することによる、または処理される植物についての現場におけるかかる組成物の葉面噴霧による植物処理の段階を含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
細菌、ウイルス、真菌のような病原体に対する防御反応の誘導のための方法の実行のための、請求項１８に記載の方法の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の対象は、植物衛生分野および生物学的施肥分野におけるキシログルカンポリマーまたはオリゴマー、並びに誘導化合物の新規使用である。
【０００２】
果物および野菜の細胞壁は多糖により形成され、それらのうち主としてペクチン、セルロースおよびキシログルカンが該壁を適所に置くことに関与している（Ｌｅｖｙ Ｓ等， Ｐｌａｎｔ Ｊ．， １９９７， １１（３）： ３７３〜８６）。キシログルカンはまた、双子葉類の種子の内乳中に多量存在する。
【０００３】
キシログルカンは、その基原に応じて種々に置換された１，４−β−グルカンポリマーである。双子葉類において、１，４β−Ｄ−グルカン線状鎖の置換は、最も頻繁には、１，６α−Ｄ−キシロシル−または１，６α−Ｄ−キシロース−１，２β−Ｄ−ガラクトシル型分岐を伴い、そしてフコースが末端位置にてガラクトースと結合され得る（すなわち、１，６α−Ｄ−キシロース１，２β−Ｄ−ガラクトース１，２α−Ｌ−フコシル型側分岐）。双子葉類においては常に、フコース残基は内乳に不存在であり、そしてそれはたとえばあるナス科においては、α−Ｌ−アラビノース残基により置き換えられ得る。単子葉類のキシログルカンは、双子葉類のそれとは、キシロース、ガラクトース残基による比較的低い置換率、およびフコースの不存在により相違する。キシログルカンはセルロース微小繊維と共に橋構造を形成し、該橋構造は、野菜の細胞壁の構造を構成し、かつ該細胞壁の可撓性を保証する（Ｐａｕｌｙ Ｍ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ、Ｄａｒｖｉｌｌ Ａ、Ｙｏｒｋ ＷＳ（１９９９）， Ｐｌａｎｔ Ｊ， ２０（６）： ６２９〜３９）。
【０００４】
キシログルカンは、エンドキシログルカナーゼの基質（Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ， Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｏｅｓ（１９９７）１３， ２９８（４）： ２９９〜３１０）またはキシログルカンエンドトランスグリコシラーゼの基質（Ｓｔｅｅｌｅ ＮＭ、Ｆｒｙ ＳＣ， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ（１９９９）１５， ３４０， １， ２０７〜２１１）、すなわち、細胞伸長中、たとえば発芽、結実期間において、細胞壁の構造を改変することが可能であり、かつホルモン、特にオーキシン（Ｈｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ ＰＲおよびＦｒｙ Ｓ．（１９９３）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， １０３， ９８７〜９９２）およびギベレリン（Ｍａｃｌａｃｈｌａｎ ＧおよびＢｒａｄｙ Ｃ（１９９４）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １０５， ９６５〜９７４）に依存する酵素活性の基質である。
【０００５】
キシログルカン、特に九糖のＸＸＦＧ（Ｆｒｙ等（１９９３）， Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ， ８９， １〜３に記載されている）であるフコシル化オリゴマーは、その抗オーキシン効果について周知である（Ｍａｃ Ｄｏｕｇａｌｌ ＣＪおよびＦｒｙ ＳＣ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９， ８８３〜８８７）。逆に、オリゴマーＸＸＬＧおよびＸＬＬＧのような、フコースを有さないがしかしガラクトースを有するオリゴマーは、オーキシン効果を有する（Ｍｃ Ｄｏｕｇａｌｌ ＧＪおよびＦｒｙ ＳＣ（１９９０）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ９３， １０４２〜１０４８）。
【０００６】
更に、多数のシグナルが、活性化酸素種（「酸化バースト」とも称される）を発生させる。活性酸素種は、植物−病原体相互作用中放出されることについて周知である。様々な基原のオリゴ糖（ポリガラクツロン酸、キトサン、Ｏ−グリカン等）が、酸化バーストを発生させるそれらの能力について記されている（Ｌｏｗ ＰＳおよびＨｅｉｎｓｔｅｉｎ ＰＦ（１９８６）， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２４９， ４７２〜４７９； Ｒｏｇｅｒｓ ＫＲ．、Ａｌｂｅｒｔ ＦおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ ＡＪ（１９８８）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８６， ５４７〜５５３； Ａｐｏｓｔｏｌ Ｉ、Ｈｅｉｎｓｔｅｉｎ ＰＦおよびＬｏｗ ＰＳ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ９０， １０９〜１１６； Ｖｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａ Ｒ、Ｂｌｕｍｗａｌｄ ＥおよびＨｉｇｇｉｎｓ ＶＪ（１９９２）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．， １２０８〜１２１５； Ｂｏｌｗｅｌｌ ＧＰ、Ｂｕｔｔ ＶＳ、Ｄａｖｉｅｓ ＤＲおよびＺｉｍｍｅｒｌｉｎ Ａ．（１９９５）， Ｆｒｅｅ Ｒａｄ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ． ２３， ５１７〜５３２； Ｏｒｏｚｃｏ−Ｃａｒｄｅｎａｓ ＭおよびＲｙａｎ ＣＡ（１９９９）， ＰＮＡＳ， ２５， ９６， １１， ６５５３〜６５５； Ｎｉｔａ−Ｌａｚａｒ Ｍ、Ｉｗａｈａｒａ Ｓ、Ｔａｋｅｇａｗａ Ｋ、Ｌｉｅｎａｒｔ Ｙ（２０００）， Ｊ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ， １５６， ３０６〜３１１）。スーパーオキシドアニオンの放出についてオキシドレダクターゼＮＡＤ（Ｐ）Ｈ酵素（Ｖａｎ Ｇｅｓｔｅｌｅｎ ＰＶ、Ａｓａｒｄ Ａ、Ｃａｕｂｅｒｇｓ ＲＪ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １１５， ５４３〜５５０）が、そして過酸化物またはスーパーオキシドアニオンまたはＯＨラジカルの形成についてペルオキシダーゼ酵素が関与する（Ｂａｋｅｒ ＣＪおよびＯｒｌａｎｄｉ ＥＷ（１９９５）， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ， ３３， ２９９〜３２１； Ｃｈｅｎ ＳＸおよびＳｃｈｏｐｆｅｒ Ｐ（１９９９）， Ｅｕｒ Ｂｉｏｃｈ ２６０， ７２６〜７３５）。他のシグナル（サリチル酸、ジャスモネート、ｃＧＭＰ、ＮＯ等）もまた、バーストを発生させる（Ｃｈｅｎ Ｚ、Ｍａｌａｍｙ Ｊ、Ｈｅｎｎｉｎｇ Ｊ、Ｃｏｎｒａｔｈ Ｕ、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃａｓａｓ Ｐ、Ｓｉｌｖａ Ｈ、Ｒｉｃｉｇｌｉａｎｏ Ｊ、Ｋｌｅｓｓｉｇ ＤＦ（１９９５）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ９２， ４１３４〜４１３７； Ｖｏｒｏｓ Ｋ、Ｆｅｕｓｓｎｅｒ Ｉ、Ｋｕｈｎ Ｈ、Ｌｅｅ Ｊ、Ｇｒａｎｅｒ Ａ、Ｌｏｂｌｅｒ Ｍ、Ｐａｒｔｈｉｅｒ Ｂ、Ｗａｓｔｅｒｎａｃｋ Ｃ， Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９９８）１５， ２５１， ３６〜４４； Ｄｕｒｍｅｒ ＪおよびＫｌｅｓｓｉｇ Ｊ、Ｗｅｎｄｅｈｅｎｎｅ Ｄ、Ｋｌｅｓｓｉｇ ＤＦ（１９９８）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ９５， １０３２８〜１０３３３； Ｄｕｒｎｅｒ ＤおよびＫｌｅｓｓｉｇ ＤＦ（１９９９）， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２， ３６９〜３７４）。
【０００７】
極端な環境条件（干ばつ、寒冷、ＵＶ、塩度等）は、同じ効果を誘発する。
【０００８】
オキシダントストレスの調節においてのように、バーストの発生におけるＨ２Ｏ２の主要な役割は、次のことに基づいている。すなわち、
−　スーパーオキシドアニオンからの不均化によるその形成（Ｂｏｌｗｅｌｌ ＧＰ、Ｄａｖｉｅｓ ＤＲ、Ｇｅｒｒｉｓｈ Ｃ、Ａｕｈ ＣＫおよびＭｕｒｐｈｙ ＴＭ（１９９８）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １１６， １３７９〜１３８５）、
−　Ｃ１８脂肪酸代謝シーケンスにおけるその使用〔脂質の過酸化のため（Ｋｏｃｈ Ｅ、Ｍｅｉｅｒ ＢＭ、Ｅｉｂｅｎ Ｈ−Ｇ、Ｓｌｕｓａｒｅｎｋｏ Ａ（１９９２）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ９９， ５７１〜５７６）、またはオクタデカノイドおよびそれらの誘導体（メチル−ジャスモネートのようなそれらのあるものは、ホルモン機能を有する代謝物である）の合成のため〕、
−　ペルオキシダーゼおよびカタラーゼ酵素についての基質としてのその機能、すなわち、細胞にとっての毒性過酸化物の蓄積を制限する性質（Ｂａｋｅｒ ＣＪ、Ｈａｒｍｏｎ ＧＬ、Ｇｌａｚｅｎｅｒ ＪＡおよびＯｒｌａｎｄｉ ＥＷ（１９９５）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ， １０８， ３５３〜３５９）。
【０００９】
活性酸素種、特にスーパーオキシドアニオンは、種々の代謝経路を制御する。それらは、次のことに関与する。すなわち、
−　ポリアミンの生合成：　モノアミンは、ＮＨ３および過酸化物の生成を伴ってアルデヒドに酸化される。亜硝酸シンターゼによるＬ−アルギニンの酸化は、ポリアミン前駆体（Ｌ−シトルリン）の形成をもたらすことになる、
−　エチレンの合成、
−　ギベレリンの合成。２０種を超えるオキシダーゼが、ギベレリンの生合成の調節に関与する。
【００１０】
活性酸素種はシグナル伝達段階に関与し、何故ならそれらは受容体結合活性または伝達酵素活性と関連しているからである（Ｊａｂｓ Ｔ、Ｔｓｃｈｏｅｐｅ Ｍ、Ｃｏｌｌｉｎｇ Ｃ、Ｈａｈｌｂｒｏｃｋ ＫおよびＳｃｈｅｅｌ Ｄ（１９９７）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２９， ９４， ９， ４８００〜４８０５； Ｄｕｒｎｅｒ Ｊ、Ｗｅｎｄｅｈｅｎｎｅ Ｄ、Ｋｌｅｓｓｉｇ ＤＦ（１９９８）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ９５， １０３２８〜１０３３３）。
【００１１】
それらは、チオール基を用いての細胞レドックス電位の調節（ＧＳＳＧ−ＧＳＨ、シスチン−システイン転換等）に関与する。このようにして、それらは、種々の生物における、ある種の開花および結実期中に現れる老化過程を制御する。
【００１２】
酸化バーストはホルモン代謝を妨害し、これは、開花および結実段階を調節する〔特に、それらの誘発およびそれらの持続はホルモンバランス（たとえば、オーキシン／サイトカイニン比）によりプログラム化され、そして過酸化物を含めて活性酸素種はポリアミンの合成を制御する）ための最も効率的な可能性である。
【００１３】
キシログルカンポリマーおよびオリゴマー並びに後者から誘導された化合物がグルタチオンレダクターゼ酵素、植物中のホスホリパーゼＤ酵素並びにグリコシルヒドロラーゼに対して刺激効果を有するという事実の本発明者による解明から、本発明はもたらされることになる。
【００１４】
グルタチオンレダクターゼ酵素を刺激することにより、キシログルカンポリマーおよびオリゴマーは、活性酸素種の毒性効果を制限することによって、特に寒冷のような、いかなるオキシダントストレスに対しても馴化反応を誘発し（Ａｌｌｅｎ ＲＤ、Ｗｅｂｂ ＲＰ、Ｓｃｈａｋｅ ＩＴＳ（１９９７）， Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ， ２３（３）： ４７３〜４７９； Ｏ’ｋａｎｅ Ｄ、Ｇｉｌｌ Ｖ、Ｂｏｙｄ Ｐ、Ｂｕｒｄｏｎ Ｒ（１９９６）， Ｐｌａｎｔａ， １９８（３）： ３７１〜３７７）、またそれらは、同様にチオール依存性プロテアーゼ阻害物質誘導効果によって、しかし植物に有害な割合にて他の酵素系のカスケードを活性化することなしに、細胞のレドックス電位を調節し、これにより酵素またはチオール依存性タンパク質、特にホスホリパーゼＤ、チオール−プロテアーゼおよびチオール−プロテアーゼの阻害物質の活性を修飾する（Ｔａｈｅｒ ＭＭ、Ｍａｈｇｏｕｂ ＭＡ、Ａｂｄ−Ｅｌｆａｔｔａｈ（１９９８）， ＡＳ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ４６， ３， ６１９〜２８）。
【００１５】
ホスホリパーゼＤ活性を刺激することにより、キシログルカンポリマーおよびオリゴマーは、酵素の活性化がホスファチジン酸（アブシジン酸の効果を模する）の産生をもたらす程度に、アブシジン酸のホルモン効果を増幅する。このようにして、それらは、ギベレリン、エチレンまたはジャスモネートに対する拮抗作用を現し得る（Ｇｒｉｌｌ Ｅ．、Ｈｉｍｍｅｌｂａｃｈ Ａ．（１９９８）， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １， １， ５， ４１２〜４１８； Ｒｉｔｃｈｉｅ Ｓ、Ｇｉｌｒｏｙ Ｓ（１９９８）， Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ９５， ５， ３， ２６９７〜２７０２； Ｍｏｏｎｓ Ａ、Ｐｒｉｎｓｅｎ Ｅ、Ｂａｕｗ Ｇ、Ｖａｎ Ｍｏｎｔａｇｕ Ｍ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ９， １２， ２２４３〜５９）。
【００１６】
現時点において、化学肥料は別にして、野菜の発育の制御は、主として次のことに基づいている。すなわち、
−　微量元素、硝酸塩、リン酸塩およびカリウム化合物、ポリアミンまたはある種のホルモンにより富化された農業用組成物の使用、
−　土壌の質を改善して、野菜の生育を促進するまたは作物収率を増加する天然のまたは遺伝的に改変された微生物の使用；これらは、特に、リゾビウム・メリロティ（Ｒ． ｍｅｌｉｌｏｔｉ）およびダイズ根粒菌〔ブラディリゾビウム・ヤポニカム（Ｂ． ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）〕のようなリゾビウム科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａ）、バチルスおよびシュードモナスのような遊離窒素固定菌、並びにペニシリウムのような真菌である、
−　トランスジェニック植物（遺伝子導入植物）の開発。この技術は、法律上の問題および消費者側における強い反対にぶつかってきた。更に、それは、生物学的肥料部門において満足な使用をまだもたらしていない。
【００１７】
本発明の目的の一つは、植物衛生分野においておよび生物学的施肥分野において、より詳しくは植物における非生物的ストレスと闘うために、並びに開花および結実を制御するために用いられ得る新規組成物を提供することである。
【００１８】
本発明の対象は、式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、しかもこの糖は場合により還元型にあり、および／または置換、特にメチルもしくはアセチル基のようなアルキルもしくはアシル基により置換されており、そしてｎは、０または１を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、場合により、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド（ｏｓｉｄｉｑｕｅ）鎖により置換されており、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３もしくはＸ４のか、または場合によりＸ５、Ｘ６もしくはＸ７の、少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す〕
で示されるオシド構造を含む化合物、
あるいは上記に定義された化合物から誘導された、特に１以上の上記に挙げられた糖の修飾または置換により誘導された化合物
の使用であって、該化合物およびそれらの誘導体は次の性質、すなわち
−　グルタチオンレダクターゼを刺激し、そしてそれ故このようにして抗酸化防御反応（オキシダントストレス馴化反応とも称される）を誘導し、特に細胞レドックス電位を変化することにより、および／またはチオール依存性プロテアーゼ阻害物質の活性化により誘導し、
−　並びに／あるいは植物中のホスホリパーゼＤを刺激し、そしてそれ故このようにしてアブシジン酸のホルモン効果を増幅し、
−　並びに／あるいはグリコシルヒドロラーゼを刺激し、そしてそれ故このようにして病原体に対する防御反応（細胞壁の酵素的分解による微生物の溶解のメカニズムによる）を誘導し、および／または植物発育のある種の時期（発芽；受精；開花または結実中の細胞分化）を制御する
性質を有し、
該化合物の上記に挙げられた性質に結びついた使用、すなわち
−　寒冷に対する、または干ばつ、湿度もしくは塩度のような水分（ｈｙｄｒｉｃ）ストレスに対する馴化のような、非生物的ストレスに対する植物の馴化（Ｔａｏ ＤＬ、Ｏｑｕｉｓｔ Ｇ、Ｗｉｎｇｓｌｅ Ｇ（１９９８）， Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ３７， １， ３８〜４５； Ｇｕｅｔａ−Ｄａｈａｎ Ｙ、Ｙａｎｉｖ Ｚ、Ｚｉｌｉｎｓｋａ ＢＡ、Ｂｅｎ Ｈａｙｙｉｍ Ｇ（１９９７）， Ｐｌａｎｔａ， ２０３， ４， ４６０〜４６９）、
−　開花の制御、
−　結実の制御、
−　細菌、ウイルス、真菌のような病原体に対する防御反応の誘導
の範囲内の使用である。
【００１９】
開花の制御により、より詳しくは、開花（Ｗａｎｇ Ｍ、Ｈｏｅｋｓｔｒａ Ｓ、ｖａｎ Ｂｅｒｇｅｎ Ｓ、Ｌａｍｅｒｓ ＧＥ、Ｏｐｐｅｄｉｊｋ ＢＪ、Ｈｅｉｊｄｅｎ ＭＷ、ｏｆ Ｐｒｉｅｓｔｅｒ Ｗ、Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ ＲＡ（１９９９）， Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９， ３： ４８９〜５０１）、または花成誘導期もしくは落花期（Ｃｏｌａｓａｎｔｉ Ｊ， Ｓｕｎｄａｒｅｓａｎ Ｖ（２０００）， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ， ２５， ５， ２３６〜２４０）のような花芽の発達（Ｌｉｍ ＣＯ、Ｌｅｅ ＩＦ、Ｃｈｕｎｇ ＷＳ、Ｐａｒｋ ＳＨ、Ｈｗａｎｇ Ｉ、Ｃｈｏ ＭＪ（１９９６）， Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ， ３０， ２， ３７３〜３７９）のような、開花過程の重要な時期の制御が意味される。
【００２０】
結実の制御により、より詳しくは、成熟期の誘発および／または持続（Ｆａｎ Ｌ、Ｚｈｅｎｇ Ｓ、Ｗａｎｇ Ｘ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， ９， １２， ２１８３〜９； Ｒｙａｎ ＳＮ、Ｌａｉｎｇ ＷＡ、Ｍｃ Ｃａｎｕｓ ＭＴ（１９９８）， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ４９， ４， ９５７〜９６３）の制御、糖およびフェノールの蓄積に関しての細胞壁代謝（Ｆｉｌｌｉｏｎ Ｌ、Ａｇｅｏｒｇｅｓ Ａ、Ｐｉｃａｕｄ Ｓ、Ｃｏｕｔｏｓ−Ｔｈｅｖｅｎｏｔ Ｐ、Ｌｅｍｏｉｎｅ Ｒ、Ｒｏｍｉｅｕ Ｃ、Ｄｅｌｒｏｔ Ｓ（１９９９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １２０（４）： １０８３〜９４）の制御、並びに落葉および落果（Ｇｏｍｅｚ−Ｃａｄｅｎａｓ Ａ、Ｍｅｈｏｕａｃｈｉ Ｊ、Ｔａｄｅｏ ＦＲ、Ｐｒｉｍｏ−Ｍｉｌｌｏ Ｅ、Ｔａｌｏｎ Ｍ（２０００）， Ｐｌａｎｔａ， ２１０， ４， ６３６〜６４３）の制御が意味される。
【００２１】
病原体に対する防御反応の誘導は、ＰＲタンパク質、特に酵素１，３−β−Ｄ−グルカナーゼおよびエンドキチナーゼ（Ｍｕｎｃｈ−Ｇａｒｔｈｏｆｆ Ｓ、Ｎｅｕｈａｕｓ ＪＭ、Ｂｏｌｌｅｒ Ｔ、Ｋｅｍｍｅｒｌｉｎｇ Ｂ、Ｋｏｇｅｌ ＫＨ（１９９７）， Ｐｌａｎｔａ ２０１， ２， ２３５〜４４； Ｂｕｃｈｔｅｒ Ｒ、Ｓｔｒｏｍｂｅｒｇ Ａ、Ｓｃｈｍｅｌｚｅｒ Ｅ、Ｋｏｍｂｒｉｎｋ Ｅ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３５， ６， ７４９〜６１； Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＳＰ、Ｊａｃｏｂｓ ＡＫ、Ｄｒｙ ＩＢ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １１４， ３， ７７１〜８）の誘発に関して、植物発育に関与することも知られている。
【００２２】
代謝的および異化的改変（ある組織のこれらの変異は、分化または老化期が対象である）の制御は、酵素１，４−β−Ｄ−グルカナーゼおよびβ−Ｄ−キシロシダーゼの誘発（Ｔｒａｉｎｏｔｔｉ Ｌ、Ｓｐｏｌａｏｒｅ Ｓ、Ｆｅｒｒａｒｅｓｅ Ｌ、Ｃａｓａｄｏｒｏ Ｇ（１９９７）， Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３４（５）： ７９１〜８０２； Ｋａｌａｉｔｚｉｓ Ｐ、Ｈｏｎｇ ＳＢ、Ｓｏｌｏｍｏｓ Ｔ、Ｔｕｃｋｅｒ ＭＬ（１９９９）， Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ４０（８）， ９０５〜８）による。
【００２３】
本発明のより詳細な対象は、糖が、場合により還元型の、および／またはαもしくはβ型の、場合によりピラノースまたはフラノース形の（Ｌ）または（Ｄ）グリコシル残基であり、かつ１→２、１→３、１→４または１→６型の、より詳しくはガラクトースに対するフコースの結合の場合におけるα１→２型の、キシロースに対するガラクトースの結合の場合におけるβ１→２の、グルコースに対するグルコースの結合の場合におけるβ１→４の、またはグルコースに対するキシロースの結合の場合におけるα１→６の結合によって、相互接続されている、化合物の上記の使用である。
【００２４】
本発明の更により詳細な対象は、式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
（ここで、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す）
で示される化合物の上記の使用である。
【００２５】
それ故、本発明は、より詳しくは、上記の使用、すなわち、
式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
（ここで、
・Ｘ１は、フコースを表し、
・Ｘ２は、ガラクトースを表し、
・Ｘ３は、キシロースまたはグルコースを表し、
・Ｘ４は、グルコースのような糖により場合により置換されたグルコースを表し、
・Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４の各々は、αまたはβ型の、（Ｌ）または（Ｄ）グリコシル残基であり、そしてｎは、０または１を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により置換、特にメチル基のようなアルキル基により置換されている）
で示される化合物、例えば、
−　式：
α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）α−Ｄ−Ｘｙｌ、
α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ、または２′−フコシルラクトース（乳または尿からそれらを得る方法が、より詳しく、Ｃｈａｒｌｗｏｏｄ Ｊ、Ｔｏｌｓｏｎ Ｄ、Ｄｗｅｋ Ｍ、Ｃａｍｉｌｌｅｒｉ Ｐ（１９９９）， Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １０， ２７３， ２， ２６１〜７７に記載されている）、
メチル（α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ）またはメチル（α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）α−Ｄ−Ｘｙｌ）（それらを得る方法が、より詳しく、Ｌｏｐｅｚ Ｒ、Ｍｏｎｔｅｒｏ Ｅ、Ｓａｎｃｈｅｚ Ｆ、Ｃａｎａｄａ Ｊ、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍａｙｏｒａｌａｓ Ａ（１９９４）， Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ５９， ７０２７〜７０３２； Ｗａｔｔ ＤＫ、Ｂｒａｓｃｈ ＤＪ、Ｌａｒｓｅｎ ＤＳ、Ｍｅｌｔｏｎ ＬＤ、Ｓｉｍｐｓｏｎ Ｊ（２０００）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｏｅｓ， ５， ３２５（４）： ３００〜１２に記載されている）、
α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）α−Ｄ−Ｘｙｌ（１→６）β−Ｄ−Ｇｌｃ、
α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ（１→６）β−Ｄ−Ｇｌｃ、
α−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）α−Ｄ−Ｘｙｌ（１→６）β−Ｄ−Ｇｌｃ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ（ＦＧとも称され、Ｆｒｙ等（１９９３），Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，８９，１〜３に記載されている）（化学合成による製造方法が、Ｐａｖｌｏｖａ ＺＮ、Ａｓｈ ＡＯ、Ｖｎｕｃｈｋｏｖａ ＶＡ、Ｂａｂａｋｏｖ ＡＶ、Ｔｏｒｇｏｖ ＶＩ、Ｎｅｃｈａｅｖ ＯＡ、Ｕｓｏｖ ＡＩ、Ｓｈｉｂａｅｖ ＶＮ（１９９２）， Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ ８５， １３１〜１３４に記載され、そして加水分解およびクロマトグラフィーによる製造方法が、Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓｅｎ ＷＭＡ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ， ２９， １， ７５〜８５に記載されている）
で示される化合物
（上記の化合物の式中において、ｎ＝０であるときの位置Ｘ３におけるもしくは位置Ｘ４におけるオシド残基、または位置Ｘ４における置換しているオシド残基は、場合により還元型にある）、
−　あるいは、式
α−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ（１→６）β−Ｄ−Ｇｌｃ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ（ＬＧとも称される）
α−Ｄ−Ｘｙｌ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ
α−Ｄ−Ｘｙｌ（１→６）β−Ｄ−Ｇｌｃ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ（ＸＧとも称される）
β−Ｄ−Ｘｙｌ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ〔ウルヴァ・ラクツカ（Ｕｌｖａ ｌａｃｔｕｃａ）から単離される（Ｌａｈａｙｅ Ｍ、Ｊｅｇｏｕ Ｄ、Ｂｕｌｅｏｎ Ａ（１９９４）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２６２， １１５〜１２５）〕
α−Ｄ−Ｘｙｌ（１→２）β−Ｄ−Ｇｌｃ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃ
β−Ｌ−Ａｒａ（１→３）α−Ｌ−Ａｒａ（１→２）α−Ｄ−Ｘｙｌ〔化合物Ｔ（Ｙｏｒｋ ＷＳ、Ｋｕｍａｒ Ｋｏｌｌｉ ＶＳ、Ｏｒｌａｎｄｏ Ｒ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ、Ｄａｒｖｉｌｌ ＡＧ（１９９６）， Ｃａｂｏｈｙｄｒ Ｒｏｅｓ ２８５， ９９〜１２８）〕
【００２６】
【化５】
2004509906.tif 000002
【００２７】
（それらを得る方法が、より詳しくは、Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓｅｎ ＷＭＡ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ， ２９， １， ７５〜８５に記載されている）で示される化合物
（ここで、Ｆｕｃはフコースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、Ａｒａはアラビノースを表し、そしてＸｙｌはキシロースを表す）
の上記の使用に関する。
【００２８】
本発明はまた、式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、
Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す〕
で示される化合物の上記の使用に関する。
【００２９】
本発明のより詳細な対象は、式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ
〔ここで、
ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５はキシロースを表し、Ｘ６はガラクトースを表し、Ｘ７はフコースを表し、そしてｍは０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されている〕
で示される化合物の上記の使用である。
【００３０】
それ故、本発明は、より詳しくは、次の式
【００３１】
【化６】
2004509906.tif 000003
2004509906.tif 000004
【００３２】
で示される化合物、またはＸＬ、ＸＬＧＧ、ＸＬＸＧ、ＬＳ、ＡＸＸＧと称される化合物
〔それらを得る方法は、より詳しくは、Ｍｃ Ｄｏｕｇａｌｌ ＧＪ、Ｆｒｙ ＳＣ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９， ８８３〜８８７； Ｍｃ Ｄｏｕｇａｌｌ ＧＪ、Ｆｒｙ ＳＣ（１９９０）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ９３， １０４２〜１０４８； Ｋｏｎｉｓｈｉ Ｔ、Ｍｉｔｓｕｉｓｈｉ Ｙ、Ｋａｔｏ Ｙ（１９９８）， Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ６２， １２， ２４２１〜２４２４； Ｒｅｎａｒｄ ＣＭＧＣ、Ｌｏｍａｘ ＪＡ、Ｂｏｏｎ Ｊ Ｊ（１９９２）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２３２， ３０３〜３２０（ＸＸＦＧ、ＸＸＸＧ、ＸＬＧＧオリゴマーの製造用）；Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓｅｎ ＷＭＡ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２９， １， ７５〜８５（ＸＧ、ＸＸＧ、ＦＧ、ＸＬＸＧオリゴマーの製造用）；Ｓｐｒｏｎｋ ＢＡ、Ｒａｄｅｍａｋｅｒ ＧＪ、Ｈａｖｅｒｋａｍｐ Ｊ、Ｔｈｏｍａｓ−Ｏａｔｅｓ ＪＥ、Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧ、Ｋａｍｅｒｌｉｎｇ ＪＰ、Ｖｌｉｅｇｅｎｔｈａｒｔ ＪＦ（１９９７）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３０５， ２， ２３３〜２４２（ＧＦＧ、ＧＦＧＧＦの製造用）；並びにＨａｎｔｕｓ Ｓ、Ｐａｕｌｙ Ｍ、Ｄａｒｖｉｌｌ ＡＧ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ、Ｙｏｒｋ ＷＳ（１９９７）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２８， ３０４， １， １１〜２０（Ｌ−ＦｕｃがＬ−Ｇａｌにより置き換えられている九糖の製造用）に記載されている〕の上記の使用に関し、上記の化合物の式中の位置Ｘ４におけるグルコース残基、またはＸＸＧ化合物における位置Ｘ３におけるグルコース残基は、場合により還元型にある。
【００３３】
本発明の主題はまた、式：
〔Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〕Ｎ
〔ここで、
−　ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表し、
−　Ｎは、約５０と約３００との間に含まれる、好ましくは約５０と約１００との間に含まれる整数を表し、
−　あるいは、Ｎは、約２と約５０との間に含まれる、好ましくは約２と約２０との間に、特に５と１２との間に、含まれる整数を表す〕
のポリマーの上記の使用である。
【００３４】
本発明のより詳細な対象は、Ｎが１２以下、好ましくは５以下の整数を表す、上記に定義された式：〔Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ〕Ｎのポリマー（すなわち、重合度ＤＰが１２以下のポリマー）の上記の使用である。
【００３５】
本発明の対象はまた、式：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−（Ｘ４）ｎ（ここで、ｎは、０または１を表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、場合により還元型である、αまたはβ型のグルコースを表し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４の少なくとも一つは、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースもしくはアラビノースから選択される１以上の糖により、および／または式：Ｘ５−Ｘ６−（Ｘ７）ｍ（ここで、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、互いに独立して、グルコース、ガラクトース、キシロース、フコースまたはアラビノースから選択される糖を表し、そしてｍは、０または１を表す）で示される１以上のオシド鎖により置換されており、Ｘ５、Ｘ６またはＸ７の少なくとも一つはキシロースまたはフコースを表す）で示される化合物により表される少なくとも２個の単位の連続鎖であって、
該鎖の単位の少なくとも一つは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４に結合された糖またはオシド鎖の少なくとも一つがそれぞれ該鎖のその他の単位の一つまたはそれ以上のＸ１、Ｘ２、Ｘ３またはＸ４に結合された糖またはオシド鎖の一つと異なっているような連続鎖の上記の使用である。
【００３６】
本発明のより詳細な対象は、単位の数が１２以下、好ましくは５以下の、上記に定義されたとおりの単位の鎖の上記の使用である。
【００３７】
それ故、本発明は、より詳しくは、
式：
【００３８】
【化７】
2004509906.tif 000005
【００３９】
〔それらを得る方法は、より詳しくは、Ｓｉｍｓ ＩＭ、Ｍｕｎｒｏ ＳＬＡ、Ｃｕｒｒｉｅ Ｇ、Ｃｒａｉｋ Ｄ、Ｂａｓｉｃ Ａ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９３， １４７〜１７２（タバコにおけるキシロース構造）並びにＶｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｗｉｊｓｍａｎ ＡＪＭ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓｅｎ ＷＭＡ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２８８， ２１９〜２３２（ジャガイモにおけるアラビノース構造について）に記載されている〕
で示される化合物（上記の化合物の式中の末端位置におけるグルコース残基は、場合により還元型であり、そしてαまたはβ型にある）、
あるいはまた式：ＸＸＦＸＸＧ、ＸＬＦＧＸＸＸＧ〔上記に挙げられたＶｉｎｃｋｅｎ等（１９９６）〕、ＸＦＦＧＸＸＸＧ、ＸＸＦＧＡＸＸＧ〔Ｈｉｓａｍａｔｓｕ Ｍ、Ｙｏｒｋ Ｗ、Ｄａｒｖｉｌｌ Ａ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ（１９９２）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２２７， ４５〜７１〕、ＧＦＧＧＦＧ〔上記に挙げられたＳｐｒｏｎｋ ＢＡ等（１９９７）〕で示される化合物
の上記の使用に関する。
【００４０】
本発明はまた、
−　植物から、特に種子、葉、根、果実から抽出により、特に
・リンゴ〔マルス・マルス・エル，ロサセアエ（Ｍａｌｕｓ ｍａｌｕｓ Ｌ．， Ｒｏｓａｃｅａｅ）〕から、特にＲｅｎａｒｄ ＣＭＧＣ、Ｒｅｎａｒｄ Ｌｏｍａｘ ＪＡ、Ｂｏｏｎ Ｊ Ｊ（１９９２）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２３２， ３０３〜３２０； Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓｅｎ ＷＭＡ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２９， １， ７５〜８５； Ｓｐｒｏｎｋ ＢＡ、Ｒａｄｅｍａｋｅｒ ＧＪ、Ｈａｖｅｒｋａｍｐ Ｊ、Ｔｈｏｍａｓ−Ｏａｔｅｓ ＪＥ、Ｖｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧ、Ｋａｍｅｒｌｉｎｇ ＪＰ、Ｖｌｉｅｇｅｎｔｈａｒｔ ＪＦ（１９９７）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３０５， ２， ２３３〜２４２に記載された方法に従って、
・ジャガイモの塊茎から、特にＶｉｎｃｋｅｎ ＪＰ、Ｗｉｌｓｊｍａｎ ＡＪ、Ｂｅｌｄｍａｎ Ｇ、Ｎｉｅｓｓａｎ ＷＭ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １９， ２８８， ２１９〜２３２の方法に従って、
・エキナセア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）から、特に根または葉から、Ｗａｇｎｅｒ Ｈ、Ｊｕｒｃｉｃ Ｋ（１９９１）， Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ４１（１０）： １０７２〜６に記載された方法に従って、
・あるいはトロパエオルム・マジュス・エル（Ｔｒｏｐａｅｏｌｕｍ ｍａｊｕｓ Ｌ．）〔ＭｃＤｏｕｇａｌｌ ＧＪおよびＦｒｙ ＳＣ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９， ８８３〜８８７〕の、またはヒメナエア・コウルバリル・エル（Ｈｙｍｅｎａｅａ ｃｏｕｒｂａｒｉｌ Ｌ．）〔Ｂｕｃｋｅｒｉｄｇｅ ＭＳ， Ｃｒｏｍｂｉｅ ＨＪ、Ｍｅｎｄｅｓ ＣＪ、Ｒｅｉｄ ＪＳ、Ｇｉｄｌｅｙ ＭＪ、Ｖｉｅｉｒａ ＣＣ（１９９７）， Ｃａｂｏｈｙｄｒ Ｒｏｅｓ ５， ３０３， ２， ２３３〜７； Ｖａｒｇａｓ−Ｒｅｃｈｉａ Ｃ、Ｒｅｉｃｈｅｒ Ｆ、Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋｉ ＭＲ、Ｈｅｙｒａｕｄ Ａ、Ｄｒｉｇｕｅｚ Ｈ、Ｌｉｅｎａｒｔ Ｙ（１９９８）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， １１６， １０１３〜１０２１〕の種子から、
−　植物細胞懸濁液から、特にカエデ属（Ａｃｅｒ）、バラ属（Ｒｏｓａ）、ハッカ属（Ｍｅｎｔｈａ）、タバコ属（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）、ハコヤナギ属（Ｐｏｐｕｌｕｓ）、ディオスコレア・デルトイデア（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｄｅｌｔｏｉｄｅａ）、ジギタリス・ラナタ（Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ ｌａｎａｔａ）またはエキナセア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ）の植物細胞懸濁液から、特に細胞壁からの抽出により、または培地からの単離により、特に
・Ｈｉｓａｍａｔｓｕ Ｍ、Ｙｏｒｋ ＷＳ、Ｄａｒｖｉｌｌ ＡＧ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ（１９９２）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２７， ４５〜７１； Ｙｏｒｋ ＷＳ、Ｉｍａｌｌｏｍｅｎｉ Ｇ、Ｈｉｓａｍａｔｓｕ Ｍ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ、Ｄａｒｖｉｌｌ ＡＧ（１９９５）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １， ２６７， １， ７９〜１０４〔カエデ属（Ａｃｅｒ）に関して〕、
・ＭｃＤｏｕｇａｌｌ ＧＪおよびＦｒｙ ＳＣ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９， ８８３〜８８７並びにＭｃＤｏｕｇａｌｌ ＧＪおよびＦｒｙ ＳＣ（１９９１）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２１９， １２３〜１３２〔バラ属（Ｒｏｓａ）に関して〕、
・Ｍａｒｕｙａｍａ Ｋ、Ｇｏｔｏ Ｃ、Ｎｕｍａｔａ Ｍ、Ｓｕｚｕｋｉ Ｔ、Ｎａｋａｇａｗａ Ｙ、Ｈｏｓｈｉｎｏ Ｔ、Ｕｃｈｉｙａｍａ（１９９６）， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１（５）： １３０９〜１４〔ハッカ属（Ｍｅｎｔｈａ）に関して〕、
・Ｓｉｍｓ ＩＭ、Ｍｕｎｒｏ ＳＬ、Ｃｕｒｒｉｅ Ｇ、Ｃｒａｉｋ Ｄ、Ｂａｃｉｃ Ａ（１９９６）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｏｅｓ ３１； ２９３（２）： １４７〜７２〔タバコ属（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）に関して〕、
・Ｒｏｅｓｌｅｒ Ｊ、Ｓｔｅｉｎｍｕｌｌｅｒ Ｃ、Ｋｉｄｅｒｌｅｎ Ａ、Ｅｍｍｅｎｄｏｒｆｆｅｒ Ａ、Ｗａｇｎｅｒ Ｈ、Ｌｏｈｍａｎｎ−Ｍａｔｔｅｓ ＭＬＪ（１９９１）， Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ． １３（７）， ９３１〜４１〔エキナセアエ（Ｅｃｈｉｎａｃｅａｅ）に関して〕、
・Ｈａｙａｓｈｉ Ｔ、Ｔａｋａｄａ Ｔ（１９９４）， Ｂｉｏｓｃ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５８， ９， １７０７〜８〔ハコヤナギ属（Ｐｏｐｕｌｕｓ）に関して〕
に記載された方法に従って、
−　レンティヌス・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ ｅｄｏｄｅｓ）、ガノデルマ・ルシデュム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）、スエヒロタケ菌〔シゾフィルム・コムネ（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ）〕、トラメテス・ヴェルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、イノノツム・オブリクウス（Ｉｎｏｎｏｔｕｓ ｏｂｌｉｑｕｕｓ）およびエノキタケ菌〔フラムリナ・ヴェルティペス（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）〕のような真菌から、特に菌糸体からの抽出により、または培地からの単離により、特にＷａｓｓｅｒ ＳＰ、Ｗｅｉｓ ＡＬ（１９９９）， Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９（１）： ６５〜９６に記載された方法に従って、
−　ウルヴァ・ラクツカ（Ｕｌｖａ ｌａｃｔｕｃａ）またはウルヴァ・リギダ（Ｕｌｖａ ｒｉｇｉｄａ）のような海藻から、特にＲａｙ Ｂ、Ｍ Ｌａｈａｙｅ（１９９５）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２７４， ２５１〜２６１； Ｌａｈａｙｅ Ｍ、Ｊｅｇｏｕ Ｄ、Ｂｕｌｅｏｎ Ａ（１９９４）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２６４， １１５〜１２５に記載された方法に従って
得られるような、場合により他のグリカンに結合されている（または他のグリカンの組成の一部を形成する）上記に定義されたとおりのキシログルカンポリマーもしくはオリゴマーまたはそれらの誘導体の、特に、植物の細胞壁を構成するかまたは糖タンパク質のグリカン部分を成すポリマーの上記の使用に関する。
【００４１】
本発明の対象はまた、
＊化学的または化学酵素的合成により、特にＹｏｒｋ ＷＳ、Ｈａｗｋｉｎｓ Ｒ， Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（２０００）１０， ２， １９３〜２０１に記載された方法によるエンドトランスグリコシル化により、
＊遺伝的に改変されたまたは改変されていない細菌株の発酵により、
＊適切な酵素、例えば、
−　セルラーゼ、より詳しくは、トリコデルマ・ヴィリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）もしくはトリコデルマ・レエセイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）のエンド−β−１，４−グルカナーゼのようなトリコデルマのエンド−β−１，４−グルカナーゼ、またはアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）のエンド−β−１，４−グルカナーゼのようなアスペルギルスのエンド−β−１，４−グルカナーゼ、並びにイルペクス・ラクテウス（Ｉｒｐｅｘ ｌａｃｔｅｕｓ）のエキソセルラーゼのエンド−β−１，４−グルカナーゼ（これらの酵素は、特にＲｅｎａｒｄ ＣＭＧＣ、Ｓｅａｒｌｅ−ｃａｎ Ｌｅｅｗｅｎ ＭＪＦ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ、Ｔｈｉｂａｕｌｔ ＪＦ、Ｐｉｌｎｉｋ Ｗ（１９９１）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ １４， ２９５〜３１４； Ｒｅｎａｒｄ ＣＭＧＣ、Ｓｅａｒｌｅ−ｃａｎ Ｌｅｅｗｅｎ ＭＪＦ、Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＧＪ、Ｔｈｉｂａｕｌｔ ＪＦ、Ｐｉｌｎｉｋ Ｗ（１９９１）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ １５， １３〜３２に記載された抽出エンドグルカナーゼを用いる単離方法による、またはＡｍａｎｏ Ｙ、Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉ Ｍ、Ｎｉｓｉｚａｗａ Ｋ、Ｈｏｓｈｉｎｏ Ｅ、Ｋａｎｄａ Ｔ（１９９６），Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（東京）１２０（６）： １１２３〜９に記載された抽出セロビオヒドロラーゼを用いる単離方法による、あるいはＰａｕｌｙ Ｍ、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＬＮ、Ｋａｕｐｐｉｎｅｎ Ｓ、Ｋｏｆｏｄ ＬＶ、Ｙｏｒｋ ＷＳ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ、Ｄａｒｖｉｌｌ Ａ（１９９９）， Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ９（１）， ９３〜１００に記載された組換えエンドグルカナーゼを用いる、または特に組換え経路によって得られた生物のアスペルギルス・アクレアツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、テルモトガ・マリティマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ ｍａｒｉｔｉｍａ）およびテルモトガ・ネアポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）の、ＧＨ１２ファミリーの他のエンドグルカナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．４）（「ＩＵＢ−ＭＢ酵素命名法」による）を用いる方法による、抽出または組換え酵素である）、
−　β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｌ−フコシダーゼ、α−Ｌ−キシロシダーゼ、β−Ｄ−キシロシダーゼ、α−Ｄ−フコシダーゼのようなグリコシダーゼ〔これらの酵素は、特にＹｏｒｋ ＷＳ、Ｈａｒｖｅｙ ＬＫ、Ｇｕｉｌｌｅｎ Ｒ、Ａｌｂｅｒｈｅｉｍ Ｐ、Ｄａｒｖｉｌｌｅ Ａ（１９９３）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２４８， ２８５〜３０１に記載された方法による抽出または組換え酵素である〕
を用いての、キシログルカン（またはキシログルカンの構造単位）を含有するポリマーまたは糖タンパク質のグリカン部分を成すグリカンの加水分解（該酵素処理は、得られたキシログルカンオリゴマーの数段階の精製、特にＭｃ Ｄｏｕｇａｌｌ ＧＪ、Ｆｒｙ ＳＣ（１９９０）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ９３， １０４２〜１０４８； Ｈｉｓａｍａｔｓｕ Ｍ、Ｙｏｒｋ ＷＳ、Ｄａｒｖｉｌｌ ＡＧ、Ａｌｂｅｒｓｈｅｉｍ Ｐ（１９９２）， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２７， ４５〜７１に記載された方法によるクロマトグラフィーによる精製を後続させる）により、
得られるような、上記に定義されたとおりのキシログルカンオリゴマーまたは誘導体の上記の使用である。
【００４２】
本発明の対象はまた、植物中のグルタチオンレダクターゼの刺激方法であって、上記に定義された少なくとも１種の化合物での植物処理の段階、特に該化合物を含む組成物を用いての該植物が栽培される土壌の灌漑による、またはかかる組成物で種子を被覆することによる、または処理される植物についての現場におけるかかる組成物の葉面噴霧による植物処理の段階を含むことを特徴とする方法である。
【００４３】
本発明は、より詳しくは、寒冷に対する、または干ばつ、湿度もしくは塩度のような水分ストレスに対する馴化のような、非生物的ストレスに対する植物の馴化方法を実施するための、上記の方法の使用に関する。
【００４４】
本発明の対象はまた、植物中のホスホリパーゼＤの産生の刺激方法であって、特に上記に示された態様にての、上記に定義された少なくとも１種の化合物による植物処理の段階を含むことを特徴とする方法である。
【００４５】
本発明のより詳細な対象は、開花の制御方法、より詳しくは花成誘導、開花持続および落花の制御方法の実施のための、並びに／または植物の結実の制御方法、より詳しくは果実の成熟の誘発および持続、落葉および落果の制御方法の実施のための、上記の方法の使用である。
【００４６】
本発明の対象はまた、植物中のグリコシルヒドロラーゼの産生の刺激方法であって、特に上記に示された態様にての、上記に定義された少なくとも１種の化合物での植物処理の段階を含むことを特徴とする方法である。
【００４７】
本発明のより詳細な対象は、細菌、ウイルス、真菌のような病原体に対する防御反応の誘導、および／またはある種の植物発育の時期（発芽；受精；開花または結実中の細胞分化）の制御のための方法の実施のための、上記の方法の使用である。
【００４８】
有利には、上記に定義された少なくとも１種の化合物を含みかつ本発明の範囲内で用いられる上記の組成物は、他の農業用インプット（ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｐｕｔ）化合物と組み合わせてまたは組み合わせることなく、固体形態（特に、粉末、顆粒、ペレット）または液体形態（特に、水溶液）にて、農業用インプットとして提供される。
【００４９】
本発明の範囲内で処理されることの可能な植物のうち、蔓植物、果樹（特に、リンゴ、セイヨウナシ、クルミ）、穀類（特にイネ、オオムギ）、油を産する植物（特に、ダイズ、セイヨウアブラナ、ヒマワリ）、タンパク質性植物（特に、エンドウ）および市場園芸作物（特に、トマト）のような作物栽培学的に有用な植物が主として挙げられ得る。
【００５０】
本発明は、グルタチオンレダクターゼおよびホスホリパーゼＤの刺激に対する並びにこれらの酵素に結びついた他の系に対する、本発明による化合物の効果についての次の詳細な記載を用いて、更に説明される。
【００５１】
Ｉ）「酸化バースト」の誘出：　Ｈ２Ｏ２の発生
方法論
Ｖａｒｇａｓ−Ｒｅｃｈｉａ（１９９８）によるルブス・フルティコスス（Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ）プロトプラストの調製。該プロトプラストの収率は、用いられた細胞の初期数の７０〜８５％くらいであった。９０〜９５％くらいの、該プロトプラストの生存率が、エバンスブルー指示薬を用いて検査された。
【００５２】
Ａｐｏｓｔｏｌ等（１９８９）によるＨ２Ｏ２アッセイ。２μＭピラニン（λｅｘ４０５ｎｍ，λｅｍ５１２ｎｍ）、エリシター（０〜１００μＭ）すなわち２′−フコシルラクトース（化合物Ａ）、糖Ｘ４が還元型にあるフコシル化九糖の還元型に相当するキシログルカンＸＸＦＧｏｌ（化合物Ｂ）の存在下での、ミクロ平板ウェル中での１×１０６個のプロトプラストの種々の温度におけるインキュベーション。ピラニン蛍光の変動（ΔＦ５１２分−１）が、Ｈ２Ｏ２のアッセイを可能にする。結果を図１に示した。
【００５３】
実験データの評価：　反応速度を（ΔＦ５１２分−１）により与えた。試料ごとにおよび実験条件ごとに、少なくとも３つの反応速度論曲線をプロットした。グラフ上の一つの点は、少なくとも６つの反応速度論曲線から演繹された回帰曲線の傾斜に相当する。
【００５４】
結果
Ｈ２Ｏ２の発生：　誘出応答の検出および特性評価
酸化「バースト」を、２５℃におけるピラニンの「消光」に応じて評価した。１００％参照値は、対照（誘出されていないプロトプラスト懸濁液）における蛍光に相当する。
【００５５】
ａ）エリシター用量の効果（図１）
最適応答：
・化合物Ａについて１０ｎＭ（２２５％）
・化合物Ｂについて１５ｎＭ（１７５％）
オキシダントバーストを誘導するシグナルとしての２′−フコシルラクトースは、キシログルカンオリゴマーより効率的であった。一方、両製品についての最適用量は、非常に接近していた。
【００５６】
ｂ）過酸化物蓄積に対する温度の影響（図２Ａ、図２Ｂ）
シグナルの２′−フコシルラクトース（１０ｎＭの最適用量にて用いられる）により誘導される過酸化物蓄積は、低温において比較的低かった。
【００５７】
ＩＩ）「酸化バースト」の誘出：　スーパーオキシドアニオンの発生
方法論
Ｖａｒｇａｓ−Ｒｅｃｈｉａ（１９９８）によるルブス・フルティコスス（Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ）プロトプラストの調製。該プロトプラストの収率は、用いられた細胞の初期数の７０〜８５％くらいであった。９０〜９５％くらいの、該プロトプラストの生存率が、エバンスブルー指示薬を用いて検査された。
【００５８】
Ｃｙｔ ｃアッセイを、Ｎａｋａｎｉｓｈｉ等（１９９１）に従って、次の方法にて行った。Ｃｙｔ ｃ（１００μＭ）およびエリシター（０〜１００μＭ）すなわち２′−フコシルラクトース（化合物Ａ）、ＸＸＦＧｏｌ（化合物Ｂ）の存在下での、４×１０６個のプロトプラストの２５℃におけるインキュベーション。結果を図３に示した。
【００５９】
実験データの評価：　反応速度を（ΔＦ３４０分−１）により与えた。実験条件ごとに少なくとも３つの反応速度論曲線をプロットした。グラフ上の一つの点は、少なくとも６つの反応速度論曲線から演繹された回帰曲線の傾斜に相当する。
【００６０】
結果
シトクロムｃの還元：　誘出応答の検出および特性評価
誘出応答を、３４０ｎｍにおける吸光度の変化により測定されたシトクロムｃの還元に応じて評価した。１００％参照値は、対照（誘出されていないプロトプラスト懸濁液）の還元カウントに相当する。
【００６１】
図３は、応答が
化合物Ａ（２′−フコシルラクトース）について５０ｎＭ（２００％）
化合物Ｂ（ＸＸＦＧｏｌ）について１５ｎＭ（１５９％）
において最適であることを示した。
酸化「バースト」を誘導するシグナルとしての２′−フコシルラクトースは、キシログルカンオリゴマーより効率的であった（１０ｎＭにおいて１６０％の代わりに１８７％）。一方、２′−フコシルラクトースの最適用量は、キシログルカンオリゴマーについての１５ｎＭと比べて５０ｎＭであった。
【００６２】
ＩＩＩ）オキシダントストレスに対する馴化応答：　グルタチオンレダクターゼ活性の誘出
方法論
Ｖａｒｇａｓ−Ｒｅｃｈｉａ（１９９８）によるルブス・フルティコスス・エル（Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ Ｌ．）プロトプラストの調製。該プロトプラストの収率は、用いられた細胞の初期数の７０〜８５％くらいであった。９０〜９５％くらいの、該プロトプラストの生存率が、エバンスブルー指示薬を用いて検査された。
【００６３】
Ｊａｈｎｋｅ ＬＳ等（１９９１）によるグルタチオンレダクターゼ（ＧＲ）活性アッセイ：
ＧＳＳＧ（酸化型のグルタチオン）は、酵素のグルタチオンレダクターゼ（ＥＣ １．６．４．２）により、ＧＳＨ（還元型のグルタチオン）に還元される。この反応は、触媒回路（グルタチオン、グルタチオンレダクターゼ、ＮＡＤＰＨ）においてＮＡＤＰへのＮＡＤＰＨの酸化と共役している。グルタチオンレダクターゼ活性を、３４０ｎｍにおける吸光度減少を監視することにより行われる、媒質中におけるＮＡＤＰの形成を評価することにより測定した。
【００６４】
試験：　１ｍｌのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ４．８）中の４×１０６個のプロトプラストを、エリシター（０〜１００μＭ）すなわち２′−フコシルラクトース（化合物Ａ）、キシログルカンＸＸＦＧｏｌ（化合物Ｂ）の存在下で、１０℃、１５℃、２５℃にてインキュベートした。１０分間の相互作用後、酵素抽出物をＪａｈｎｋｅ等（１９９１）に従って調製し、１６．０００ｇの上澄み液のアリコート（１μｇのタンパク質と等価）を、グルタチオンレダクダーゼ活性アッセイ用のｐＨ７．８反応媒質（８０ｍＭのＫ２ＰＯ４、５００μＭのＧＳＳＧ、１５０μＭのＮＡＤＰＨ、２００μＭのＤＴＰＡ）中に導入した。Ｂｅｃｋｍａｎ ＤＵ ６４０分光光度計を用いて、Ａ３４０の記録が１分間行った。化合物Ａについての結果を図４に示した。
【００６５】
実験データの評価：　反応速度を、ΔＦ３４０分−１により与えた。実験条件ごとにおよび試料ごとに、少なくとも３つの反応速度論曲線をプロットした。グラフ上の一つの点は、少なくとも６つの反応速度論曲線から演繹された回帰曲線の傾斜値に相当する。
【００６６】
結果
エリシターの２′−フコシルラクトース（Ａ）によるグルタチオンレダクターゼ活性の誘導
誘出応答を３４０ｎｍにおけるＮＡＤＰの形成を測定することにより評価した。１００％参照値は、対照（誘出されていないプロトプラスト懸濁液）におけるＮＡＤＰ含有率に相当する。
【００６７】
図４は、用量依存性である誘出応答が
１０℃にて用いられる化合物Ａ（２′−フコシルラクトース）について２５ｎＭ（２，５００％）
１５℃にて用いられる化合物Ａ（２′−フコシルラクトース）について１００ｎＭ（７８０％）
において最適である一方、２５℃にて有意応答は得られなかったことを示している。更に、化合物Ｂ（ＸＸＦＧｏｌ）は、同様な結果（表記していない）を示した。
【００６８】
上記のパラグラフＩ〜ＩＩＩにおいて用いられた方法の書誌的参考文献：
Ｖａｒｇａｓ−Ｒｅｃｈｉａ， Ｃ．、Ｆ．Ｒｅｉｃｈｅｒ、Ｍ．Ｒｉｔａ Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋｉ、Ａ．Ｈｅｙｒａｕｄ、Ｈ．Ｄｒｉｇｕｅｚ、Ｙ．Ｌｉｅｎａｒｔ（１９９８）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ． １１６， １０１３〜１０２１。
Ａｐｏｓｔｏｌ， Ｉ．、Ｐ．Ｆ．Ｈｅｉｎｓｔｅｉｎ、Ｐ．Ｓ．Ｌｏｗ（１９８９）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ９０， １０９〜１１６。
Ｎａｋａｎｉｓｈｉ， Ｍ．、Ｈ．Ｔａｋｉｈａｒａ、Ｙ．Ｍｉｎｏｒｕ、Ｋ．Ｙａｇａｗａ（１９９１）， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２８２： ９１〜９４。
Ｊａｈｎｋｅ ＬＳ、Ｈｕｌｌ ＭＲ、Ｌｏｎｇ ＳＰ（１９９１）， Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ １４， ９７〜１０４．
【００６９】
ＩＶ）チオールプロテアーゼ阻害物質の誘導
方法論
野菜材料：　懸濁状態のアセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）細胞
試験：　アセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）の２×１０６個の細胞を、５０ｎＭの２′−フコシルラクトース（化合物Ａ）によりまたは５０ｎＭのメチルα−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ三糖（化合物Ｂ）（Ｌｏｐｅｚ等， １９９４に従って合成された）により、３０分間または４２時間誘出した。プロテアーゼの阻害物質（ＩＰ）を、誘出されたまたは誘出されていない細胞から出発して、Ｗａｌｋｅｒ−Ｓｉｍｍｏｎｓ（１９７７）のプロトコルに従って調製した。細胞の生存率が実験の全継続期間において８５％を超えていたことを確認した。
【００７０】
パパイン活性アッセイ：　反応媒質に、システイン−ＨＣｌ（５ｍＭ）、パパイン（ＥＣ ３．４．２２．２）（０．４８単位）、ｐ−ニトロアニリドＮ−α−ベンゾイル−Ｄ−Ｌ−アルギニン（ＢＡＰＮＡ）（０．２７ｍＭ）で富化された、ナトリウムホスフェートシトレート緩衝液（０．１Ｍ）ｐＨ６中のＩＰ抽出物のアリコート（１または２μｇのタンパク質に等価）を含有させた。活性アッセイは、４１０ｎｍにおける吸光度測定に基づく。反応速度をΔＡ４１０分−１により与えた。
【００７１】
実験データの評価：　所与の試料について、この試料から単離されたＩＰ阻害物質の活性を、プロテアーゼ反応速度論を展開する（可変量の阻害物質の存在下でまたは非存在下で、４１０ｎｍにて１０分間記録する）ことにより推定した。採用される実験条件（インキュベート時間、基質、酵素およびＩＰ抽出物の濃度）は、線形でかつ再現性のある反応速度論に通じるものである。初期反応速度は、曲線Ａ４１０＝ｆ（ｔ）の傾斜α（Ａ４１０分−１）であった。所与の試料について、少なくとも３つの曲線をプロットし、初期速度を線形回帰により演繹した。プロテアーゼ活性調節能を対照活性（ＩＰ阻害物質なしでのプロテアーゼ活性）に対する％として表した。
【００７２】
結果
エリシターの２′−フコシルラクトース（Ａ）またはメチルα−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ（化合物Ｂ）によるパパイン阻害物質の誘導
誘出応答を２′−フコシルラクトース（２Ａ）によりまたはメチルα−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ三糖（２Ｂ）により誘出された細胞から調製されたプロテアーゼ阻害物質の存在下で測定されたパパイン阻害に応じて評価した。結果を、対照活性（阻害物質なしで測定された、誘出されていない細胞におけるパパイン活性）に対する％として表した。
【００７３】
図５は、細胞の応答がエリシターのオリゴ糖との相互作用の時間と共に変動したことを示している。早期の反応（エリシターの使用の３０分後）において、２′−フコシルラクトースおよび三糖は、同じパパイン阻害物質潜在能力（チオールプロテアーゼ活性、すなわちＳＨ基依存性プロテアーゼ活性）を発現した。潜在性阻害物質であるが、比較的低い強度を有するものが、後期の反応（エリシターの使用の４２時間後）の範囲内で発現した。
【００７４】
方法論に関しての書誌的参考文献：
Ｗａｌｋｅｒ−Ｓｉｍｍｏｎｓ， Ｍ．およびＲｙａｎ， Ｃ．Ａ．（１９７７）， Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．， ５９， ４３７〜４３９。
Ｌｏｐｅｚ Ｒ．、Ｍｏｎｔｅｒｏ Ｅ．、Ｓａｎｃｈｅｚ Ｊ．、Ｃａｎａｄａ Ａ．、Ｆｅｒｎｎａｎｄｅｚ−Ｍａｙｏｒａｌａｓ Ａ． （１９９４）， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９， ７０２７〜７０３２。
【００７５】
Ｖ）ヒドロラーゼグリコシル活性の誘出
同定された誘出応答は、
−　グリコシダーゼ活性の誘導、すなわちａ）β−Ｄ−キシロシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．３７）応答、
−　グリカナーゼ活性の誘導、すなわちｂ）１，４β−Ｄ−グルカナーゼ（ＥＣ ３．２．１．４）、ｃ）１，３β−Ｄ−グルカナーゼ（ＥＣ ３．２．１．３９）およびｄ）エンドキチナーゼ（ＥＣ ３．２．１．１４）の応答
に関する。
【００７６】
方法論
野菜材料：　懸濁状態のアセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）細胞
試験：　２×１０６個のアセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）細胞を、２５ｍｌの培地（２，４−Ｄなしで）中で円形撹拌（８０ｒｐｍ）下で、５０ｎＭの２′−フコシルラクトース（化合物Ａ）もしくは５０ｎＭのメチルα−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ三糖（化合物Ｂ）（Ｌｏｐｅｚ等，１９９４に従って合成された）により、またはエフェクターすなわちシクロヘキシミド（１μＭ）、オカダ酸（５ｎＭ）、スタウロスポリン（５００ｎＭ）もしくはボログリシン（５００ｎＭ）の存在下でもしくは非存在下で可変時間（０〜４２時間）誘出した。誘出実験を細胞を氷中に入れることにより停止した。デカンテーション後に回収され、約１ｍｌの誘出緩衝液中に採取された細胞を特定タンパク質抽出の対象にした。
【００７７】
Ｄ−グリコシルヒドロラーゼ抽出。酵素抽出物を、誘出されたまたは誘出されていない細胞から調製した。細胞を、１ＭのＮａＣｌを含有するトリス−ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ７．２）中で、０℃にて、Ｖｉｂｒａｃｅｌｌ（登録商標）Ｂｉｏｂｌｏｃｋ音波処理器の最大パワーで、１分間３回、ホモジネートした。このホモジネートを４℃にて遠心分離し（１２，０００ｇ，１５分）、次いで透析し、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ（登録商標）ミリポア限外濾過ユニット（遮断閾１０ｋＤａ）にて濃縮した。蒸留水中に採取されたこれらの滞留物が粗製抽出物である。
【００７８】
ｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ−キシロピラノシド（ｐ−ＮＰＸ）基質（７．３μＭ）の存在下で、４０℃にて、可変時間（９０〜２１０分）、酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ，ｐＨ５）中での酵素抽出物（２〜４μｇのタンパク質）のインキュベーション後、ＬｅｅおよびＺｅｉｋｕｓ（１９９３）のプロトコルによるβ−Ｄ−キシロシダーゼ活性アッセイ。Ｎａ２ＣＯ３（０．１Ｍ）の添加後、放出された生成物を、４１０ｎｍにおける分光光度法によりアッセイした。
【００７９】
１，３β−Ｄ−グルカナーゼ活性アッセイ。これを、加水分解中放出された基質還元性単位（ラミナリンまたはラミナリンヘキサマー）の比色検定〔ＫｉｄｂｙおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９７３）のフェリシアン化物試験〕に基づいて行った。反応媒質に、１００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ，ｐＨ５．０）中の酵素抽出物（１μｇのタンパク質）、基質（５μＭの還元ラミナリンヘキサマー）を含有させた。４０℃における酵素反応を、可変時間（１〜３時間）にわたって発現させた。
【００８０】
１．４β−Ｄ−グルカナーゼ活性アッセイ。これを、加水分解中放出されたセロペンタオース基質還元性単位の比色検定〔ＫｉｄｂｙおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９７３）のフェリシアン化物試験〕に基づいて行った。反応媒質に、１００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ，ｐＨ５．０）中の酵素抽出物（１μｇのタンパク質）、還元セロペンタオース（４μＭ）を含有させた。４０℃における酵素反応を、可変時間（１〜３時間）にわたって発現させた。
【００８１】
エンドキチナーゼ活性アッセイ。これを、Ｓｏｍｏｇｙｉ（１９５２）による放出還元糖検定に基づいて行った。反応媒質に、１００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ，ｐＨ５．０）中の酵素抽出物（１μｇのタンパク質）、基質（２５μｇのキチン）を含有させた。４０℃における酵素反応を、可変時間（１〜５時間）にわたって発現させた。
【００８２】
実験データの評価：　試料ごとにおよび実験のセットごとに、少なくとも２回の反応速度論を行った。反応速度（たとえば、ΔＡ４１０分−１）を、４つの反応速度論曲線から線形回帰により得た。結果を、比率Ｒ（誘出された細胞における酵素活性／誘出されていない対照細胞における酵素活性）により表した。
【００８３】
結果：
ａ）β−Ｄ−キシロシダーゼ応答の誘導。早期のβ−Ｄ−キシロシダーゼ応答は一時的であった。それは１５分から最大となり（化合物ＡについてＲ＝９、化合物ＢについてＲ＝５）、１時間後に消失した（Ｒ＝１）。４２時間のエリシター処理時間について、有意応答は観測されなかった。
【００８４】
ｂ）１，４β−Ｄ−グルカナーゼ応答の誘導。早期応答は一時的であった（各エリシターＡまたはＢについて、２０分後５くらいのＲ）。４２時間のエリシター処理時間について、応答Ｒは４くらいであった。
【００８５】
ｃ）１，３β−Ｄ−グルカナーゼ応答の誘導。早期応答は一時的であった（各エリシターＡまたはＢについて、２０分後３くらいのＲ）。４２時間のエリシター処理時間について、非常に高い応答Ｒは１２くらいである。
【００８６】
ｄ）エンドキチナーゼ応答の誘導。早期応答は一時的であった（各エリシターＡまたはＢについて、約２５分後６くらいのＲ）。４２時間のエリシター処理について、酵素活性は検出されなかった。
【００８７】
タンパク質合成阻害物質（シクロヘキシミド）の存在下では、早期応答はすべて維持されたのに対して、後期応答は減少し、２（１，４β−Ｄ−グルカナーゼ活性について）または３（１，３β−Ｄ−グルカナーゼ活性について）くらいのＲの値であったことが示された。逆に、早期応答（１，３β−Ｄ−グルカナーゼ活性を除いて）はボログリシンまたはオカダ酸のような転写後エフェクターにより調節されたのに対して、後期応答は影響されなかった。
【００８８】
パラグラフＶにおいて挙げられた方法論に関しての書誌的参考文献：
Ｌｏｐｅｚ Ｒ．、Ｍｏｎｔｅｒｏ Ｅ、Ｓａｎｃｈｅｚ Ｆ、Ｃａｎａｄａ Ｊ、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍａｙｏｒａｌｅｓ Ａ（１９９４）， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ５９， ７０２７〜７０３２。
Ｌｅｅ Ｙ．ＥおよびＺｅｉｋｕｓ Ｊ．Ｇ．（１９９３）， Ｊ． Ｇｅｎ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １３９， １２３５〜１２４６。
Ｓｏｍｏｇｙｉ Ｍ．（１９５２）， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９５， １９〜２３。
Ｋｉｄｂｙ ＤＥおよびＤａｖｉｄｓｏｎ ＤＪ（１９７３）， Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ５５， ３２１〜３２５。
【００８９】
ＶＩ）ホスホリパーゼＤ活性の誘出
方法論
野菜材料：　懸濁状態のアセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）細胞
ホスホリパーゼＤ（ＥＣ ３．１．４．４）（Ｐｌａｓｅ Ｄ）活性：　これは、下記の図式による、Ｏ−Ｒ３基を放出するホスファチジルコリンホスファチドヒドロラーゼである。Ｏ−Ｒ３が標識される（たとえば、蛍光色素）程度まで、この基を定量化することは、Ｐｌａｓｅ Ｄ活性をアッセイすることと等価である。実験について、基質は、蛍光色素に結合されたホスファチジルコリン、すなわちニトロベンゾオキサジアゾールホスホエタノールアミン（ＮＢＤ−ＰＥ）製品を用いた。該蛍光色素の保留される励起および発光波長は、それぞれ４６０ｎｍおよび５３４ｎｍである。
【００９０】
【化８】
2004509906.tif 000006
【００９１】
Ｒ１：　ＣＨ３（ＣＨ２）１４
Ｒ２：　ＣＨ３（ＣＨ２）１４
Ｒ３：　−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２
【００９２】
原理：　Ｐｌａｓｅ Ｄ活性をアッセイすることは、分光蛍光計（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）でもって、反応媒質の５３４ｎｍにおける蛍光変動を推定することと等価である。
【００９３】
試験：　微量滴定平板ウェル中の反応媒質は、次のとおりであった。すなわち、１．３×１０７個のアセル・シュードプラタヌス・エル（Ａｃｅｒ ｐｓｅｕｄｏｐｌａｔａｎｕｓ Ｌ．）細胞を、ＮＢＤ−ＰＥ基質（４μＭ）の存在下で、エリシター（０〜１００ｎＭ）すなわち化合物Ａである２′−フコシルラクトース（ＦＬ）、化合物ＢであるＸＸＦＧｏｌの存在または非存在下で、メチルジャスモネートエフェクター（０〜５ｎＭ）の存在または非存在下で、ＣａＣｌ２（１μＭ）、ＡＴＰ（２μＭ）、オクチル−Ｄ−グルコシド（５０μＭ）、ＧＴＰ（６μＭ）で富化された５０ｍＭヘペス緩衝液ｐＨ６．８中でインキュベートした。Ｐｌａｓｅ Ｄ活性アッセイを、５３４ｎｍにおける蛍光を測定することにより行った。
【００９４】
実験データの評価：　各試料について、少なくとも３回の反応速度論を記録した。Ｐｌａｓｅ Ｄ活性を回帰曲線の傾斜により与えた。結果をΔＦ５３４分−１により表した。グラフ上の一つの点は、２つの異なる試料から生じた、少なくとも２つの反応速度論曲線の線形回帰処理に相当する。
【００９５】
結果：
エリシターの２′−フコシルラクトース（Ａ）によるまたはキシログルカンＸＸＦＧｏｌ（Ｂ）によるＰｌａｓｅ Ｄ活性の誘導。
Ｐｌａｓｅ Ｄ誘出応答を、５１２ｎｍにおける蛍光変動に応じて評価した。１００％参照値は、対照（誘出されていない細胞）における蛍光に相当する。
【００９６】
ａ）エリシター用量の影響。図６に、２′−フコシルラクトースおよびオリゴマーＸＸＦＧｏｌがＰｌａｓｅ Ｄ活性エリシターであることを示した。応答は非常に低いエリシター濃度において最適であり、すなわち、２′−フコシルラクトース（Ａ）について１ｎＭ（２４４％）、ＸＸＦＧｏｌ（Ｂ）について１．７ｎＭ（２３０％）であった。
【００９７】
ｂ）メチルジャスモネートの拮抗作用。図７に、メチルジャスモネート（０から５ｎＭ）と２′−フコシルラクトース（Ａ）（１ｎＭ）が拮抗的であること並びにこの応答が用量依存性であることを示した。
【００９８】
ＶＩＩ）蔓植物におけるキシログルカンまたは誘導体のエリシター潜在能力の調査：　耐寒冷性を誘導する効果
例１：　キシログルカンまたは誘導体のエリシター効果の同定
実験条件：
種々の蔓植物品種〔シェニン（Ｃｈｅｎｉｎ）、グロロー（Ｇｒｏｌｌｅａｕ）、カリグナン（Ｃａｒｉｇｎａｎ）、カベルネ・ソーヴィニヨン（Ｃａｂｅｒｎｅｔ ｓａｕｖｉｇｎｏｎ）、カベルネ・ソーヴィニヨン（Ｃａｂｅｒｎｅｔ Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ）、ピノノワール（Ｐｉｎｏｔ ｎｏｉｒ）、メルロー（Ｍｅｒｌｏｔ）、シャルドネ（Ｃｈａｒｄｏｎｎａｙ）、ガメ（Ｇａｍａｙ）等）〕に由来する植物体を調査のために用いた。５〜１０種の植物体を含む各試料を、芽の発達（ＢＢＣＨスケールに基づいて生長段階７から始まる）の終了時に、または花序の発達期（生長段階１２から始まる）中もしくは開花（段階１９から）の開始時に、溶解状態のエリシター（オリゴマーすなわちＸＸＦＧ、誘導体すなわち２′−フコシルラクトース）でもって、可変用量（０．０３ｍｇ／ｌ≦用量≦３．３ｍｇ／ｌ）にて、葉面噴霧で処理したが、植物体当たり２．５ｍｌの溶液の噴霧を手動噴霧器を用いて行った（＋／−１％のズレ）。
【００９９】
処理後、植物体を、可変継続期間および強度の寒冷ストレス（たとえば、−２℃から−５℃にて変動する温度、２４０分より短いかまたは等しい継続期間）に暴露した。
【０１００】
寒冷への暴露後、植物体を、１２時間の昼／夜交替がなされる、２０℃の気候室中に置いた。葉の外観を、寒冷からの除去後３時間、２４時間、４８時間、７２時間して観察した。寒冷の効果を、霜により誘導された葉の壊死を観察することにより評価し、植物体をそれらのその後の生育を監視するために数ヶ月間保管した。
【０１０１】
寒冷ストレス後３時間または２４時間または４８時間または７２時間して観察された葉の壊死の割合Ｐ（％）を算定し、結果を保護指数Ｉ＝（１００−Ｐ）％により表した。
【０１０２】
結果：　蔓植物品種シェニン（Ｃｈｅｎｉｎ）の植物体についての要約表。
水で処理された対照植物体（Ａ）および投与量ｄ、ｄ／１０、ｄ／５０、ｄ／１００（ｄ＝３．３ｍｇ／ｌ）におけるＸＸＦＧにより誘出された植物体に関する結果を、寒冷保護指数Ｉ＝（１００−Ｐ）％により表したが、Ｐはストレス後１２時間して観察された葉の壊死の割合（％）である。
【０１０３】
【表１】
2004509906.tif 000007
【０１０４】
３．３ｍｇ／ｌの用量におけるＸＸＦＧにより処理された植物体は、水で処理された対照の葉を破壊する寒冷ストレスレベルに耐えた。誘出された植物体の葉の色は、霜解け直後に暗緑色に変化する（水で処理された対照について観察されるような）代わりに正常のままであり、また１２時間後の壊死の徴候（水で処理された対照について観察されるような）は出現しなかった。寒冷ストレス後の誘出された植物体の生育が寒冷に暴露されていない対照植物体の生育と匹敵し得るので、エリシターの使用は植物体の生育を乱さないことが示された。
【０１０５】
該表はまた、１／１０、１／５０および１／１００に希釈されたエリシター溶液が蔓植物の耐寒冷性を誘導することが、時には比較的低い効率であるが、可能であることを示している。
【０１０６】
更に、
−　化合物２′−フコシルラクトースのようなキシログルカン誘導体の使用は、等しいまたはわずかに低い効率でもって、耐寒冷性誘導物質効果を再現することができ、
−　エリシターは、試験された蔓植物品種のすべてに対して活性であるが、しかし各蔓植物品種は特定の感受性を有し、たとえば蔓植物品種ピノノワール（Ｐｉｎｏｔ ｎｏｉｒ）およびシェニン（Ｃｈｅｎｉｎ）は、エリシター処理に対して高度に受容性である蔓植物品種であることが示された。
【０１０７】
例２：　耐霜性はエリシター用量に応じて変動する
シェニン（Ｃｈｅｎｉｎ）植物体を、可変投与量ｄ、ｄ／１０、ｄ／５０、ｄ／１００（ｄ＝３．３ｍｇ／ｌ）にて用いられるＸＸＦＧにより誘出した後、−３℃に可変時間（ａ：１６５分、ｂ：１９５分、ｃ：２１０分、ｄ：２２５分）暴露した。
【０１０８】
図８に、寒冷保護指数Ｉ＝（１００−Ｐ）％により表した得られた結果を示したが、ここでＰはストレス後２４時間して観察された葉の壊死の割合（％）である。
【０１０９】
誘出応答はエリシター用量に応じて変動し、所与の溶液の有効性は寒冷ストレスの強度に応じて異なった。
【０１１０】
応答曲線は、ストレスの強度に応じて２つのタイプの応答を明らかにした。すなわち、低ストレスに対しては、耐性刺激効果は、用量と共に増加して平坦域に達した（曲線ａおよびｂ）。逆に、高強度のストレスに対しては、最適応答用量が観察され、それを超えるとエリシター効果は減少した（曲線ｃおよびｄ）。２′−フコシルラクトースの使用は同様な応答曲線に通じることが示された。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１：エリシターＡ（２′−フコシルラクトース；正方形により印された曲線）またはＢ（キシログルカンＸＸＦＧｏｌ；円形により印された曲線）の使用により誘発されたＨ２Ｏ２の発生。反応速度すなわちΔＦ５１２分−１が、１５分間記録されたピラニンの「消光」に応じて評価された。エリシター濃度を横座標に示し、そして蛍光強度を縦座標に示した。
【図２】
図２：エリシターＡ（２′−フコシルラクトース；１０ｎＭ）の使用により誘発されたＨ２Ｏ２の発生。反応速度すなわちΔＦ５１２分−１が、２５℃、２０℃、１５℃、１０℃において２０分間記録されたピラニンの「消光」に応じて評価された。（Ａ）：反応速度論曲線。時間を横座標に示し、蛍光強度を縦座標に示した。各曲線は、所与の温度において得られた結果を図示する。（Ｂ）：温度に応じての最適応答の変動。温度を横座標に示し、２５℃におけるＨ２Ｏ２の産生を縦座標に示した。１００％は、２５℃におけるＨ２Ｏ２の最大産生に相当する。
【図３】
図３：エリシターＡ（２′−フコシルラクトース；正方形により印された曲線）またはＢ（キシログルカンＸＸＦＧｏｌ；菱形により印された曲線）の使用により誘発されたスーパーオキシドアニオンの発生。シトクロム還元速度はΔＡ３４０分−１に相当する。エリシター濃度を横座標に示し、還元シトクロムｃ含有率を縦座標に示した。
【図４】
図４：エリシターＡ（２′−フコシルラクトース）の使用により誘導されたグルタチオンレダクダーゼ活性の誘出。誘出反応速度すなわちΔＡ３４０分−１を、１０℃（正方形により印された曲線）、１５℃（菱形により印された曲線）および２５℃（円形により印された曲線）において測定した。
【図５】
図５：５０ｎＭにて用いられた２′−フコシルラクトースにより３０分間もしくは４２時間（２Ａ）、または５０ｎＭにて用いられたメチルα−Ｌ−Ｆｕｃ（１→２）β−Ｄ−Ｇａｌ（１→２）β−Ｄ−Ｘｙｌ三糖により３０分間もしくは４２時間（２Ｂ）誘出された細胞における、あるいは誘出されていない細胞（１）におけるパパイン阻害物質活性の評価。反応速度すなわちΔＡ４１０分−１を、阻害物質なしでのパパイン活性に対する％として表した。
【図６】
図６：エリシターＡ（２′−フコシルラクトース；正方形により印された曲線）またはＢ（キシログルカンＸＸＦＧｏｌ；菱形により印された曲線）の使用により誘発されたＰｌａｓｅ Ｄ活性の誘出。反応速度すなわちΔＦ５１２分−１を、対照（誘出されていない細胞）におけるＰｌａｓｅ Ｄ活性に対する％として表した。
【図７】
図７：メチルジャスモネートの存在下で、１ｎＭの最適濃度にて用いられたエリシターＡ（２′−フコシルラクトース）の使用により誘発されたＰｌａｓｅ Ｄ活性の誘出。反応速度すなわちΔＦ５１２分−１を、対照（誘出されていない細胞）におけるＰｌａｓｅ Ｄ活性に対する％として表した。
【図８】
図８：−３℃に、可変時間（ａ：１６５分、ｂ：１９５分、ｃ：２１０分、ｄ：２２５分）暴露される前に、可変用量すなわちｄ、ｄ／１０、ｄ／５０、ｄ／１００（ｄ＝３．３ｍｇ／ｌ）にて用いられたＸＸＦＧにより誘出されたシェニン（Ｃｈｅｎｉｎ）植物体についての寒冷に対する保護。得られた結果を寒冷保護指数Ｉ＝（１００−Ｐ）％により表したが、Ｐはストレス後２４時間して観察された葉の壊死の割合（％）である。
【図１】
2004509906.tif 000013
【図２】
2004509906.tif 000014
【図３】
2004509906.tif 000015
【図４】
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【図５】
2004509906.tif 000017
【図６】
2004509906.tif 000018
【図７】
2004509906.tif 000019
【図８】
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【国際公開パンフレット】
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2004509906.tif 000022
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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