(57)【要約】アポトーシス誘導蛋白質部分及び細胞標的化部分を含む融合蛋白質が開示される。プロテアーゼ部分及び細胞標的化部分を含む融合蛋白質が開示される。細胞の死を標的化及び誘導するための組成物及び方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＩＰ部分及びリガンド部分を含む融合蛋白質。
【請求項２】
ＡＩＰ部分がＷＮＶキャプシッド、ＨＩＶ  Ｖｐｒ、又はカスパーゼに由来する、請求項１記載の融合蛋白質。
【請求項３】
リガンドが天然リガンドである、請求項１記載の融合蛋白質。
【請求項４】
リガンドが共刺激性分子のリガンド、サイトカイン、ケモカイン及び成長因子からなる群から選択される天然リガンドである、請求項３記載の融合蛋白質。
【請求項５】
リガンドがＦｌｔ−３リガンド、ＩＬ−１５又はＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される天然リガンドである、請求項４記載の融合蛋白質。
【請求項６】
リガンドが抗体である、請求項１記載の融合蛋白質。
【請求項７】
リガンドが抗体断片である、請求項６記載の融合蛋白質。
【請求項８】
リガンドが共刺激性分子、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、成長因子受容体、癌遺伝子産物及び癌細胞マーカーに結合する抗体である、請求項１記載の融合蛋白質。
【請求項９】
リガンドがｅｒｂＢ２蛋白質、ＰＳＭＡ蛋白質及びＦｌｔ−３に結合する抗体である、請求項１記載の融合蛋白質。
【請求項１０】
請求項１記載の融合蛋白質に細胞を接触させることを含む、細胞の排除方法。
【請求項１１】
請求項１記載の融合蛋白質を個体に投与することを含む、個体内の細胞の排除方法。
【請求項１２】
プロテアーゼ部分及びリリガンド部分を含む融合蛋白質。
【請求項１３】
プロテアーゼ部分がＴＡＰ又はその断片である、請求項１２記載の融合蛋白質。
【請求項１４】
リガンドが天然リガンドである、請求項１２記載の融合蛋白質。
【請求項１５】
リガンドが共刺激性分子のリガンド、サイトカイン、ケモカイン及び成長因子からなる群から選択される天然リガンドである、請求項１４記載の融合蛋白質。
【請求項１６】
リガンドがＦｌｔ−３リガンド、ＩＬ−１５又はＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される天然リガンドである、請求項１５記載の融合蛋白質。
【請求項１７】
リガンドが抗体である、請求項１２記載の融合蛋白質。
【請求項１８】
リガンドが抗体断片である、請求項１７記載の融合蛋白質。
【請求項１９】
リガンドが共刺激性分子、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、成長因子受容体、癌遺伝子産物及び癌細胞マーカーに結合する抗体である、請求項１２記載の融合蛋白質。
【請求項２０】
リガンドがｅｒｂＢ２蛋白質、ＰＳＭＡ蛋白質及びＦｌｔ−３に結合する抗体である、請求項１２記載の融合蛋白質。
【請求項２１】
請求項１２記載の融合蛋白質に細胞を接触させることを含む、細胞の排除方法。
【請求項２２】
請求項１２記載の融合蛋白質を個体に投与することを含む、個体内の細胞の排除方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
発明は、アポトーシスにより誘導された細胞死に関して細胞を選択的に標的化するための組成物及び方法に関する。発明は、細胞死に関して細胞を選択的に標的化するための組成物及び方法に関する。
発明の背景
ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）のコア蛋白質は、それが存在する細胞内でアポトーシスを誘導できるものとして、最近同定された。この観察は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／３１３５５において記載されており、引用により本明細書に編入される。
【０００２】
同様に、ＨＩＶアクセサリー蛋白質Ｖｐｒは、細胞サイクルの停止及びアポトーシスの誘導が可能であるとして同定された。この観察は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／１００２８において記載されており、引用により本明細書に編入される。
【０００３】
これらの蛋白質に加えて、他の蛋白質、例えばカスパーゼが細胞内でアポトーシスを導入することが公知になった。
特定の細胞を排除する方法において有用な効果的な組成物へ、アポトーシス誘導性蛋白質の活性を取り込むことができる組成物及び方法に関する要求がまだある。
発明の概要
本発明は、アポトーシス誘導性蛋白質部分及び細胞標的化部分を含む融合蛋白質を提供する。
【０００４】
本発明は、細胞の死を標的化及び誘導するための組成物及び方法を提供する。本発明は、アポトーシス誘導性蛋白質部分及び細胞標的化部分を含む多量の融合蛋白質を細胞に接触させる工程を含む、細胞死誘導の方法に関する。上記融合蛋白質は、細胞死を誘導するのに有効な量にて投与される。
【０００５】
本発明は、プロテアーゼ部分及び細胞標的化部分を含む融合蛋白質を提供する。
本発明は、細胞死を標的化する組成物及び方法を提供する。本発明は、プロテアーゼ部分及び細胞標的化部分を含む多量の融合蛋白質を細胞に接触させる工程を含む、細胞死誘導の方法に関する。上記融合蛋白質は、細胞死を誘導するのに有効な量にて投与される。
好ましい態様の詳細な説明
本明細書にて使用される、用語「アポトーシス誘導性蛋白質」及び「ＡＩＰ」は、交換可能に使用されて、そのような細胞中に存在する場合に、細胞内でアポトーシスを誘導する蛋白質又はその断片を意味する。
【０００６】
本明細書にて使用される、用語「プロテアーゼ部分」は、プロテアーゼとして機能する能力を保持したか又は活性プロテアーゼに変換される、プロテアーゼ配列又はその断片の融合蛋白質の部分に言及することを意味する。
【０００７】
本明細書にて使用される、細胞死又はアポトーシスに関する用語「誘導する」及び「誘導性」は、細胞死を導く事象を開始する活性を意味し、細胞死に寄与するアポトーシス経路の一部である細胞事象を開始する活性を含む。
【０００８】
本明細書にて使用される、用語「アポトーシス」は、真核細胞の死の形成を意味し、ネクローシスとは異なり、細胞骨格の破壊、サイトプラズムの収縮及び凝集、細胞膜の外部表面上のホスファチジルセリンの発現及び小泡形成（blebbing）を意味し、細胞膜結合小胞又はアポトーシス性ボディー（apoptotic bodies）の形成をもたらす。アポトーシス性細胞死の総説に関しては、例えば、Ｕｔｚ  ＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．，７：５８９−６０２を参照。
【０００９】
この明細書及び特許請求の範囲において使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、他に明確に指図しない限り、複数表示を含む。即ち、例えば、「ａ  ｃｅｌｌ」に対する言及は、２つ又は複数の細胞の混合物を含む。
【００１０】
本明細書にて使用される、キャプシッド蛋白質又はその機能性断片に関する句「細胞死を誘導するのに有効な量」及び「細胞死を誘導するのに有効なレベル」は、細胞に接触するキャプシッド蛋白質又はその機能性断片の量、又は細胞内で発現されたキャプシッド蛋白質又はその機能性断片のレベルが、細胞を殺す事象を誘発するのに有効であることを意味する。
【００１１】
本明細書にて使用される、「注射可能な薬学組成物」は、滅菌されており、発熱物質を含まず、そしてあらゆる粒子を含まない、患者における使用のための薬学上受容可能な組成物を意味する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８thＥｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０及びＵ．Ｓ．Ｐ．を参照。
【００１２】
本明細書にて使用される、「薬学上受容可能な担体」は、組成物を受け取る個体に有害な効果をそれ自体が誘導しないあらゆる担体を含む。例えば、「薬学上受容可能な担体」は、レシピエントに有害な抗体の生産を誘導するべきでない。適切な「薬学上受容可能な担体」は、当業者には知られており、前記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅに記載されている。
本明細書にて使用される、「高増殖性細胞」は、不適切か又は異常な時間又は場所で生育、分割又は増殖している細胞を意味し、それらがＧ0期又は静止期であるべきときに、細胞サイクルに入った細胞を含む。例えば、腫瘍細胞は、「高増殖性細胞」の意味において包含される。「高増殖性細胞」に特徴付けされるか又は付随する疾患又は症状は、癌、自己免疫、非悪性成長及び乾癬を含む。
【００１３】
本明細書にて使用される、「治療する（treating）」は、高増殖性細胞により特徴付けされるか又は付随する疾患又は症状の改善及び／又は排除を含む。
本明細書にて使用される、「個体（individual）」は、発明の薬学組成物により治療され得るヒト及び非ヒト動物を意味する。
【００１４】
本明細書にて使用される、用語「投与する」は、限定ではないが、腫瘍内注射、経皮、非経口、皮下、筋肉内、経口及び局所送達を含む。
薬学組成物の投与に関して本明細書にて使用される、「腫瘍内注射」は、注射による腫瘍部位への薬学組成物の直接の導入を意味する。
【００１５】
本発明は、腫瘍由来の細胞内でのＷＮＶキャプシッド（Ｃｐ）蛋白質のアポトーシス誘導活性、ＨＩＶのアクセサリー蛋白質Ｖｐｒの類似の活性、ミトコンドリア蛋白質ＡＩＦのアポトーシス誘導活性、及びカスパーゼのような様々な他の内因性蛋白質の発見から生じる。細胞内のこれらＡＩＰｓの存在がアポトーシスの経路の誘導及び究極には細胞の死を導くことが発見された。ＡＩＰｓのアポトーシス誘導活性は、自己免疫疾患に関与する癌細胞及び免役細胞を含む、迅速に成長する細胞を殺す方法のにそれらを有用にさせる。
【００１６】
本発明のいくつかの側面によれば、破壊のために標的化される細胞種により発現される蛋白質のための特定のリガンドである標的化部分にリンクさせたＡＩＰ部分を含む融合蛋白質が提供される。上記リガンドは、天然のリガンド、細胞蛋白質に対して特異性をもって結合する抗体又はその断片又は別の種類の分子であってよい。
【００１７】
本発明のいくつかの側面によれば、破壊のために標的化される細胞種により発現される蛋白質のための特定のリガンドである標的化部分にリンクさせたプロテアーゼ部分を伴う融合蛋白質が提供される。上記リガンドは、天然のリガンド、細胞蛋白質に対して特異性をもって結合する抗体又はその断片又は別の種類の分子であってよい。プロテアーゼの例はＴＡＰである。
【００１８】
破壊のために標的化される細胞に依存して、上記融合蛋白質は様々な疾患を治療するのに有用である。例えば、上記リガンドが腫瘍細胞により発現される蛋白質を標的とするなら、融合蛋白質は、癌を治療するため及び腫瘍の付加を軽減するか又は排除するのに有用である。リガンドが特に免役細胞により発現される蛋白質を標的とするなら、融合蛋白質は自己免疫疾患を治療するために有用である。他の疾患は、細胞の選択的排除により同様に治療されてよい。
【００１９】
いくつかの態様において、リガンドは、標的の細胞蛋白質のための公知のリガンドであり得る。リガンドの例は、共刺激性（costimulatory）分子に特異的なリガンド、サイトカイン（サイトカイン受容体のためのリガンド）、成長因子（成長因子受容体のためのリガンド）及びケモカイン（ケモカイン受容体のためのリガンド）を含む。他のリガンドは抗体であり、組換え抗体、標的細胞蛋白質、例えばｅｒｂＢ２，ＰＳＭＡ，Ｆｌｔ−３，サイトカイン受容体、成長因子受容体及びケモカイン受容体に特異的に結合する抗体断片を含む。リガンドの例は、ＣＤ２８とＣＴＬＡ−４を含み、共にＣＤ８０の天然リガンドである。ＣＤ２８はＣＤ８６の天然リガンドでもある。ＣＤ４０の天然リガンドはＣＤ４０Ｌであり、ＩＣＯＳＬの天然リガンドはＩＣＯＳであり、ＩＣＡＭ−１の天然リガンドはＬＦＡ−３であり、４１ＢＢの天然リガンドは４１ＢＢＬであり、ＭＣＳＦＲの天然リガンドはＭＣＳＦであり、ＦＴ３の天然リガンドはＦＬ３Ｌであり、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３及びＣＣＲ５の天然リガンドはＭＣＰ−３及びＲＡＮＴＥＳである。ヒトの前炎症性サイトカインはＩＬ−１αを含み、ＩＬ−１受容体に結合し、そしてＴＮＦ−α及びＴＮＦ−βはＴＮＦ受容体に結合する。Ｔｈ１サイトカインはＩＬ−２，ＩＬ−１５及びＩＬ−１８を含み、そしてＴｈ２サイトカインはＩＬ−４，ＩＬ−５及びＩＬ−１０を含み、それら各々の受容体に結合する。ＧＭ−ＣＳＦは、発明により細胞を標的化するのに使用してよい別の因子である。
【００２０】
上記融合蛋白質は、ＡＩＰ部分とリガンド部分の間又はプロテアーゼ部分とリガンド部分の間のプロテアーゼ分割部位を含んでよい。そのような分割部位の例は、排除のために標的化された細胞の中に存在することが公知のプロテアーゼにより認識される分割部位である。
【００２１】
本発明の実施は、当業者の範囲内の、慣用の方法、分子生物学及び組換えＤＮＡ技術を用いる。そのような技術は文献において完全に説明される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，編纂、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２０００）；Ｇｌｏｖｅｒ，編纂、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｓ．Ｉ  ＆  ＩＩ；Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ＆  Ｋａｐｌａｎ，編纂、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｗｅｉｒ  ＆  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，編纂、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｓ．（１９８６）；Ｆｉｅｌｄｓ，Ｋｎｉｐｅ，＆  Ｈｏｗｌｅｙ，編纂、Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（第３版）Ｖｏｌｓ．Ｉ  ＆  ＩＩ  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｓ．（１９９６）；Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，編纂、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２０００）を参照されたく、各々は引用により編入される。
【００２２】
アポトーシスを誘導する蛋白質の機能性断片の同定は、着手すること及び達成することができ、日常的にはキャプシッド蛋白質である。同様に、リガンドの同定は日常的に達成できる。その活性を保持したＡＩＰ部分及びその活性を保持したリボソーム部分を含む融合蛋白質の構築が達成され得る。当業者は、融合蛋白質が細胞を標的化してアポトーシスを誘導するか否かを容易に決定できる。
【００２３】
発明の治療に関する側面は、アポトーシスにより誘導された死に関して細胞を選択的に標的化することにより、高増殖性細胞に関連する疾患、例えば、癌又は乾癬及び自己免役疾患を治療するための上記融合蛋白質の使用を含む。本発明は、そのような融合蛋白質を含む薬学組成物に関する。本発明の薬学組成物は、固形の腫瘍により特徴付けられる癌を治療するのに特に有用である。高増殖性細胞を刺激してアポトーシス性の死を被る可能性は、当該細胞の高増殖性を破壊するための手段を提供し、それにより、腫瘍を減少させる。細胞の不適切な増殖により特徴付けされる癌及び乾癬のような疾患においては、上記薬学組成物を使用することにより、アポトーシス性細胞死の誘導を通して高増殖を阻止して、それにより上記疾患の治療を実現させる。
【００２４】
ＷＮＶキャプシッド蛋白質、又はその機能性断片は、上記のように、容易に利用可能な出発物質を用いて日常の手段により生成してよい。ＷＮＶキャプシッド蛋白質をコードする核酸配列並びに当該蛋白質のアミノ酸配列は、よく知られている。多数のＷＮＶ単離物の全ゲノムがジェンバンクにおいて公表されており利用可能であり、単離物２７４１（受け入れ番号ＡＦ２０６５１８）、株ＮＹ９９−フラミンゴ３８２−９９（受け入れ番号ＡＦ１９６８３５）、及び受け入れ番号Ｍ１２２９４として同定された単離物を含み、各々は引用により本明細書に編入される。ＷＮＶゲノムに関する配列情報に関する様々な刊行物が存在し、それらの引用はジェンバンクにおける配列情報にリンクする。公的に利用可能な配列情報を含むこれらの引用の各々は、引用により、本明細書に編入される。
【００２５】
他のフラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）のウイルスからのキャプシッド蛋白質及び核酸に関する配列情報も、ジェンバンクに見いだすことができる。非限定例として、ジェンバンクに提供される株及び単離物の全ゲノム配列は、ＪＥＶ（受け入れ番号Ｍ１８３７０，Ｄ９０１９４，及びＤ９０１９５），ＳＬＥＶ（受け入れ番号Ｍ１６６１４），ＹＥＶ（受け入れ番号ＡＦ０９４６１２，Ｕ１７０６７，Ｕ１７０６６，Ｕ５４７９８，Ｕ２１０５５，Ｕ２１０５６，及びＸ０３７００），ＤＥＮＶ（受け入れ番号Ｍ２３０２７，Ｕ８８５３５，Ｕ８８５３６，及びＵ８８５３７），ＤＶＤＶ（受け入れ番号３１１８２），及びＨＣＶ（受け入れ番号ＡＦ２０７７３及びＡＦ２０７７４）を含み、各々は引用により本明細書に編入される。他のＡＩＰ配列、例えばＨＩＶのＶｐｒ及び様々なカスパーゼはよく知られている。Ｖｐｒのアミノ酸配列は、１９９３年１２月１５日に出願された米国連続番号０８／１６７，６０８に開示されており、引用により本明細書に編入される。細胞に特異的に相互作用して細胞サイクルを停止させる領域を同定するためのＶｐｒ蛋白質マッピング実験からのデータは、１９９７年８月１４日に出願された仮出願６０／０５５，７５４に記載されており、引用により本明細書に編入される。
【００２６】
当業者は、融合蛋白質を生成するために、市販の発現ベクター又は発現系を用いるか又はよく知られた方法と容易に利用可能な出発物質を用いてベクターを生産してよい。必須の調節配列、例えばプロモーター及びポリアデニル化シグナル及び好ましくはエンハンサーを含む発現系は、容易に利用可能であって、様々な宿主に関して当業界においてよく知られている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２０００）を参照。即ち、所望の蛋白質が、原核系及び真核系の両方にて製造できて、蛋白質の加工された形態のスペクトルをもたらす。
【００２７】
ほとんど共通に使用される原核系は相変わらず大腸菌であるが、他の系、例えばバチルスサチルス及びシュードモナスも有用である。原核系のための適切な調節配列は構成的プロモーター及び誘導可能なプロモーターの両方であり、限定ではないが、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター、ラムダファージＰ１プロモーターを含む。通常、外来蛋白質は、これらの宿主中で、融合蛋白質又は成熟蛋白質の何れかにて生産してよい。所望の配列が成熟蛋白質として生産される場合、生産された配列は必然的には有効に除去されないメチオニンが先頭にあってよい。従って、請求の範囲に記載されたペプチド及び蛋白質は、細菌中で生産される場合、Ｎ末端Ｍｅｔが先頭になってよい。さらに、構築物は、ペプチドのためのコーディング配列が、蛋白質の分泌をもたらす操作可能なシグナルペプチドが先行するような構築物を作成してよい。この様式にて原核宿主中で生産させる場合、シグナル配列は分泌に際して除去される。
【００２８】
様々な真核宿主も、組換え外来蛋白質の生産に今利用可能である。細菌におけるように、真核宿主は、所望の蛋白質を直接生産する発現系により形質転換してよいが、より一般的なシグナル配列を提供することにより、蛋白質の分泌をもたらす。真核系は、高等生物の蛋白質をコードするゲノミック配列内で生じるかもしれないイントロンを加工できるという付加的な利点を有する。真核系は、例えば、グリコシル化、カルボキシ末端のアミド化、特定のアミノ酸残基の酸化又は誘導化、コンフォメーションの変化等をもたらす様々なプロセシング機構も提供する。
【００２９】
一般的に使用される真核系は、限定ではないが、酵母細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、鳥類細胞、及び高等植物の細胞を含む。これらの宿主細胞種の各々における使用のために適合可能であって操作可能な適切なプロモーターが利用可能である。また、例えば、バキュロウイルスポリヘドロンプロモーターのような停止配列及びエンハンサーも利用可能である。上記のとおり、プロモーターは構成的又は誘導可能性のいずれかであり得る。例えば、哺乳類の系においては、マウスメタロチオネインプロモーターが重金属イオンの添加により誘導できる。
【００３０】
所望の宿主に適した発現系の構築のための事項は、当業界で知られている。蛋白質の組換え生産のためには、それをコードするＤＮＡを選択した発現ベクターに適切に連結して、のちに、外来遺伝子の発現が生じる条件下で後に培養及び保持される適合可能な宿主を形質転換するのに使用する。即ち、本発明の蛋白質は、細胞を溶解するか又は適切な当業界で知られた培養培地からの何れかにより、培養液から取り出される。
【００３１】
当業者は、よく知られた技術を用いて、そのような発現系を用いて生産された融合蛋白質を単離することができる。
組換え技術によりこれらの蛋白質を生産することに加えて、自動化されたアミノ酸合成機を用いて融合蛋白質を生産してもよい。本明細書に記載の蛋白質が合成により製造されるなら、上記遺伝子によりコードされないアミノ酸による置換も行ってよいことは、さらに注目されるべきである。別の残基は、例えば、式Ｈ２Ｎ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（式中、ｎは２−６）のアミノ酸を含む。これらは、ザルコシン（Ｓａｒ），ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡｌａ），ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧｌｙ），Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−ＭｅＩｌｅ），及びノルロイシン（Ｎｌｅｕ）のような、中性の、非極性アミノ酸である。フェニルグリシンは、例えば、芳香性の中性アミノ酸のＴｒｐ，Ｔｙｒ又はＰｈｅに置換することができ；シトルリン（Ｃｉｔ）及びメチオニンスルフォキシド（ＭＳＯ）は極性であるが中性であり、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）は中性の非極性であり、システイン酸（Ｃｙａ）は酸性であり、オルニチン（Ｏｒｎ）は塩基性である。プロリン残基のコンフォメーション授与特性は、これらのうちの一つ又は複数がヒドロキシルプロリン（Ｈｙｐ）により置換されるなら、得てよい。
自己免役疾患及び融合蛋白質と薬学上受容可能な担体又は希釈剤を含む高増殖性細胞により特徴付けされる疾患を治療するために使用される薬学組成物は、選択された投与様式に依存して選択された組成物を用いて当業者により製剤化されてよい。適切な薬学上の担体は、この分野の標準の参照テキストである前記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅに記載されている。
【００３２】
投与のあらゆる経路のための一般的な要求は、有効且つ容易な送達である。発明の一つの態様において、上記組成物は、注射により投与される。好ましい態様において、上記組成物は、腫瘍内注射により投与される。他の経路の投与は、限定ではないが、経皮（transdermal）、経皮膚（transcutaneous）、皮下、腹膜内、粘膜、又は一般的な持続性投与を含む。
【００３３】
非経口投与のためには、フラビウイルス科のキャプシッド蛋白質、又はそれらの機能性断片を、例えば、薬学上受容可能な非経口媒体と共に、溶液、懸濁液、エマルジョン又は凍結乾燥した粉末として製剤化することができる。そのような媒体の例は、水、塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンである。リポソーム及び非水性媒体、例えば固定化オイルも使用してよい。媒体又は凍結乾燥した粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マニトール）及び化学安定性（例えば、バッファー及び保存剤）を保持する付加物を含んでよい。上記製剤は、一般に使用される技術により滅菌される。例えば、注射による投与のために適した非経口組成物は、１．５重量％の活性成分及び０．９重量％の塩化ナトリウム溶液を溶解することにより調製される。
【００３４】
個々の要求は変わるかもしれないが、製剤の有効量に関する最適範囲の決定は、当業者の範囲内である。ヒトの用量は、動物の研究から容易に推定することもできる（Ｋａｔｏｃｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ，編纂、Ｍａｃｋ−Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０の中の２７章）。一般に、当業者により調節されうる、有効量の製剤を提供するのに必要な用量は、レシピエントの年齢、健康状態、物理的条件、体重、疾患又は異常の種類と程度、治療の頻度、併用する治療法の性質、必要なら、及び所望の効果の性質と範囲を含むいくつかの因子に依存して、変動する（Ｎｉｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版、Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，編纂、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９６中の第３章）。通常、融合蛋白質の毎日の用量は、体重キログラムあたり約１μｇから１００ミリグラムであり得る。普通は０．５から５０、好ましくは１から１０ミリグラム／キログラム／日を１日あたり１回から６回に分けて持続性の放出形態にすると、所望の結果を得るのに有効である。
【００３５】
本発明による薬学組成物は、単一用量又は複数用量として投与してよい。本発明の薬学組成物は、ここの治療剤としてか又は他の治療剤と組み合わせて投与してよい。本発明の治療は慣用の治療法と組み合わせてよく、連続か又は同時に施してよい。
【００３６】
融合蛋白質を含む薬学組成物は、活性剤がレシピエントの体の中で薬剤の作用部位を行き渡らせることができるあらゆる手段により投与してよい。経口により投与された場合には蛋白質が消化に供されるため、非経口投与、即ち、静脈内、皮下、筋肉内を通常は使用することにより、吸収を最適化する。さらに、本発明の薬学組成物は、高増殖性部位においてか又は近傍において注射してよい。例えば、投与は、固形の腫瘍の塊又はそれに直接隣接した組織内に直接注射してよい。治療される個体が乾癬を患うなら、融合蛋白質を薬学上受容可能な局所担体と共に製剤化してよく、製剤は、例えばクリーム、ローション又は軟膏として局所投与してよい。
実施例
受け入れ番号及び引用文献により同定される以下の配列は、引用により本明細書に編入される。
ウエストナイルウイルス  ＡＦ２０２５４１  株ＨＮＹ１９９９
ウエストナイルウイルス  ＮＣ  ００１５６３全ゲノム
【００３７】
ＨＩＶ  Ｖｐｒ
ＶＰＲ  ＡＪ４０４３２５  vpr，gag，pol，vif，vpu，env，及びnef
ＶＰＲ  ＡＦ３１６８６２  vif，vpr（カメルーンの単離物）
ＶＰＲ  ＡＦ３２５７６３  vif，vpr（南アフリカの単離物）
【００３８】
ＡＩＦ
ＡＩＦ  ＸＭ  ０１０２４６  「プログラムされた細胞死８」又は「ＰＤＣＤＳ」とも呼ばれる
ＡＩＦ  ＮＭ  ００４２０８
【００３９】
ＴＡＰ
ＴＡＰ  ＡＦ００９５１０  タパシンとも呼ばれる
ＴＡＰ  ＡＦ３１４２２２  別なスプライシングを受ける
ＴＡＰ  ＡＢ０１０６３９  タパシン２
【００４０】
マクロファージコロニー刺激性因子
受け入れ番号ＡＡＡ５９５７２
Ｃｅｒｒｅｔｔｉ，Ｄ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（８），７６１−７７０（１９８８）
受け入れ番号ＡＡＢ５１２３５
Ｖｉｓｖａｄｅｒ，Ｊ．ａｎｄ  Ｖｅｒｍａ，Ｉ．Ｍ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９（３）１３３６−１３４１（１９８９）
受け入れ番号Ｐ０９６０３：Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５（４７９５）１５０４−１５０８（１９８７）
Ｃｅｒｒａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（８）７６１−７７０（１９８８）
Ｋａｗａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０（４７２３）２９１−２９６（１９８５）
【００４１】
ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体５
受け入れ番号４５０２６３９
Ｒａｐｏｒｔ，Ｃ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（２９），１７１６１−１７１６６（１９９６）
【００４２】
単球化学物質誘因性蛋白質（ＭＣＰ−３）
受け入れ番号ＣＡＡ５０４０７
Ｍｉｎｔｙ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．４（２），９９−１１０（１９９３）
受け入れ番号ＡＡＣ０３５３８
【００４３】
ｐＦＬＴ３
ｆｍｓ−関連性チロシンキナーゼ３
受け入れ番号４７５８３９６
Ｓｍａｌｌ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１，４５９−４６３（１９９４）
受け入れ番号Ｐ３６８８８
Ｓｍａｌｌ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１，４５９−４６３（１９９４）
【００４４】
ｐＦＫＴ３ＬＧ
ｆｍｓ−関連性チロシンキナーゼ３
受け入れ番号４５０３７５１
【００４５】
４−１ＢＢ
受け入れ番号ＡＡＡ５３１３３
Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（９），２２１９−２２２７（１９９４）
【００４６】
４−１ＢＢＬ
受け入れ番号Ｐ４１２７３
Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（９），２２１９−２２２７（１９９４）
【００４７】
ＲＡＮＴＥＳ
受け入れ番号ＢＡＡ７６９３９
Ｌｉｕ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（８），４５８１−４５８５（１９９９）
受け入れ番号１０６５０１８
受け入れ番号ＸＭ  ０１２６５６
受け入れ番号ＮＭ  ００２９８５
【００４８】
ＣＣＲ１／ＭＩＰ１Ｒ
Ｎｅｏｔｅ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７２（３）４１５−４２５（１９９３）
Ｇａｏ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７（５）１４２１−１４２７（１９９３）
Ｎｏｍｕｒａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５（１０）１２３９−１２４９（１９９３）
【００４９】
ＣＣＲ５
受け入れ番号Ｐ５６４９３
Ｋｕｈｍａｎｎ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１（１１）８６４２−８６５６（１９９７）
Ｍｕｒａｙａｍａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．
【００５０】
ＣＣＲ２
受け入れ番号Ｐ４１５９７
Ｃｈａｒｏ，Ｉ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，Ｕ．Ｓ．Ａ．９１（７）２７５２−２７５６（１９９４）
Ｙａｍａｇａｍｉ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０２（２）１１５６−１１６２（１９９４）
Ｗｏｎｇ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（２）１０３８−１０４５（１９９７）
【００５１】
ＣＣＲ３
受け入れ番号Ｐ５１６７７
Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（２８）１６４９１−１６４９４（１９９５）
Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０  ３０２３５（１９９５）
Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ，Ｂ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３（５）２３４９−２３５４（１９９６）
【００５２】
ＣＤ４０リガンド
受け入れ番号Ｐ２９９６５
Ｇｒａｆ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１２）３１９１−３１９４（１９９２）
Ｈｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｍｂｏ．Ｊ．１１（１２）４３１３−４３２１（１９９２）
Ｓｐｒｉｇｇｓ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７２  ２９１−３００（１９９３）
Ｓｐｒｉｇｇｓ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６（６）１５４３−１５５０（１９９２）
Ｇａｕｃｈａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｂｓ．Ｌｅｔｔ．３１５（３）２５９−２６６（１９９３）
【００５３】
ＣＤ８６
受け入れ番号５９０１９２０
Ａｚｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６６（６４５９）７６−７９（１９９３）
Ｒｅｅｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｍｍ．Ｇｅｎｏｍｅ  ８（８）５８１−５８２（１９９７）
【００５４】
ＣＤ８０
受け入れ番号４８８５１２３
Ｓｅｌｖａｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｓｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ  ３６（３）１７５−１８１（１９９２）
Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ７９（２）４８９−４９４（１９９２）
【００５５】
ＣＤ４０
受け入れ番号４５０７５８１
Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｍｂｏ．Ｊ．８（５）１４０３−１４１０（１９８９）
【００５６】
ＬＦＡ−３
受け入れ番号ＢＡＡ０５９２２
【００５７】
ＩＣＡＭ１
受け入れ番号ＡＡＢ５１１４５
【００５８】
ＣＤ２８
受け入れ番号５４５３６１１
Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５（１）３４４−３５２（１９９０）
【００５９】
ヒトＩＬ−１αのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｔｅｌｆｏｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９９５５−９９６３，Ｆｒｕｔａｎｉ，ｅｔ  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：３１６７−３１７９，Ｍａｒｃｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：６４１−６４７，及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ＰＯ１５８３にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６０】
ヒトＩＬ−２のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｈｏｌｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：１６３４−１６３８，Ｆｕｊｉｔａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７４３７−７４４１，Ｆｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：９３２３−９３３１，Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０２：３０５−３１０，Ｍａｅｄａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１５：１０４０−１０４７，Ｄｅｖｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：４３０７−４３２３及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ＰＯ１５８５にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６１】
ヒトＩＬ−４のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ａｒａｉ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：２７４−２８２，Ｏｔｓｕｋａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：３３３−３４４，Ｙｏｋｏｔａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：５８９４−５８９８，Ｎｏｍａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１９：６４０−６４６，Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：２０６１−２０６３及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ０５１１２（マウスのＩＬ−４の受け入れ番号コードはＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ０７７５０）にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６２】
ヒトＩＬ−５のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：６６２９−６６３３，Ｔａｎａｂｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：１６５８０−１６５８４，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７４：３４５−３５２，Ａｚｕｍａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９１４９−９１５８，Ｙｏｋｏｔａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７３８８−７３９２及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ０５１１３にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６３】
ヒトＩＬ−１０のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｖｉｅｒａ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１１７２−１１７６及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  Ｐ２２３０１にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６４】
ヒトＩＬ−１５のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６５−９６８及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  Ｕ０３０９９にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６５】
ヒトＩＬ−１８のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｕｓｈｉｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４２７４−４２７９及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  Ｄ４９９５０にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６６】
ヒトＴＮＦ−αのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｐｅｎｎｉｃａ，（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７２４−７２９及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  ＰＯ１３７５にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【００６７】
ヒトＴＮＦ−βのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は公知であり、Ｇｒａｙ，（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７２１−７２４及び受け入れコードＳｗｉｓｓｐｒｏｔ  Ｕ０３０９９にて公開されており、引用により本明細書に編入する。
【国際公開パンフレット】
2004535415.tif 000002
2004535415.tif 000003
2004535415.tif 000004
2004535415.tif 000005
2004535415.tif 000006
2004535415.tif 000007
2004535415.tif 000008
2004535415.tif 000009
2004535415.tif 000010
2004535415.tif 000011
2004535415.tif 000012
2004535415.tif 000013
2004535415.tif 000014
2004535415.tif 000015
2004535415.tif 000016
2004535415.tif 000017
2004535415.tif 000018
2004535415.tif 000019
2004535415.tif 000020
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004535415.tif 000021
【国際調査報告】
2004535415.tif 000022
2004535415.tif 000023
2004535415.tif 000024
2004535415.tif 000025