(57)【要約】本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体および関連分子に関する。本発明はまた、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントあるいは関連分子を含有する、異常なＢＬｙＳの発現またはＢＬｙＳの不適切な機能に関連する疾患または障害の検出または診断のための方法および組成物に関する。本発明はさらに、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する１以上の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体あるいは関連分子の有効量を動物に投与する工程を包含する、異常なＢＬｙＳの発現またはＢＬｙＳの不適切な機能に関連する疾患または障害の予防、処置または寛解のための方法および組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体であって、以下：
（ａ）配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；および
（ｂ）配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、
からなる群より選択される第二のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％同一な第一のアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項２】
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号２１２９〜３２２７のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＶＨドメインが、配列番号１〜１５６２のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、ＢＬｙＳの可溶形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合する、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
前記ＶＨドメインが、配列番号１〜４６および配列番号３２１〜３２９のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
前記ＶＨドメインが、配列番号２、９および３２７のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
前記ＶＨドメインが、配列番号８３４〜８７２のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項４に記載の抗体。
【請求項９】
前記ＶＨドメインが、配列番号１５６３〜１８８０のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項３に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、ＢＬｙＳの可溶形態に免疫特異的に結合する、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記ＶＨドメインが、配列番号１５６３〜１５６９のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項９に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ＶＨドメインが、配列番号１５７０〜１５９５のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項９に記載の抗体。
【請求項１３】
前記ＶＨドメインが、配列番号１８８１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項３に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
前記ＶＨドメインが、配列番号１８８１〜１８８５のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１６】
前記ＶＨドメインが、配列番号１８８６〜１９０８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１７】
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の抗体。
【請求項１８】
前記ＶＬドメインが、配列番号１〜１５６２のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、ＢＬｙＳの可溶形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合する、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記ＶＬドメインが、配列番号１〜４６および３２１〜３２９のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２１】
前記ＶＬドメインが、配列番号２、９および３２７のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
前記ＶＬドメインが、配列番号８３４〜８７２のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２３】
前記ＶＬドメインが、配列番号１５６３〜１８８０のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、ＢＬｙＳの可溶形態に免疫特異的に結合する、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
前記ＶＬドメインが、配列番号１５６３〜１５６９のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２６】
前記ＶＬドメインが、配列番号１５７０〜１５９５のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２７】
前記ＶＬドメインが、配列番号１８８１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する、請求項２７に記載の抗体。
【請求項２９】
前記ＶＬドメインが、配列番号１８８１〜１８８５のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３０】
前記ＶＬドメインが、配列番号１８８１〜１９０８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３１】
配列番号１〜２１２８のいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列に少なくとも９５％同一なアミノ酸配列もまた含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項３２】
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、同じｓｃＦｖ由来である、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
前記ｓｃＦｖが、配列番号２のｓｃＦｖである、請求項３２に記載の抗体。
【請求項３４】
前記ｓｃＦｖが、配列番号９のｓｃＦｖである、請求項３２に記載の抗体。
【請求項３５】
前記ｓｃＦｖが、配列番号３２７のｓｃＦｖである、請求項３２に記載の抗体。
【請求項３６】
前記第一のアミノ酸配列が、前記第二のアミノ酸配列と同一である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３７】
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなる、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
前記第二のアミノ酸配列が、配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列からなる、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３９】
配列番号１〜２１２８のｓｃＦｖのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列に１００％同一であるアミノ酸配列もまた含む、請求項３７に記載の抗体。
【請求項４０】
前記ｓｃＦｖが、配列番号２のｓｃＦｖである、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
前記ｓｃＦｖが、配列番号９のｓｃＦｖである、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４２】
前記ｓｃＦｖが、配列番号３２７のｓｃＦｖである、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４３】
前記ＢＬｙＳが、ＢＬｙＳホモ三量体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項４４】
前記ＢＬｙＳホモ三量体の個々のタンパク質成分が、成熟形態のＢＬｙＳからなる、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４５】
前記ＢＬｙＳが、ＢＬｙＳヘテロ三量体である、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４６】
前記ＢＬｙＳヘテロ三量体が、少なくとも１つのＢＬｙＳポリペプチドおよび少なくとも１つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
前記ＢＬｙＳポリペプチドがＢＬｙＳの成熟形態からなり、そして前記ＡＰＲＩＬポリペプチドがＡＰＲＩＬの成熟形態からなる、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、該抗体が、以下：
（ａ）全免疫グロブリン分子；
（ｂ）ｓｃＦｖ；
（ｃ）モノクローナル抗体；
（ｄ）ヒト抗体；
（ｅ）キメラ抗体；
（ｆ）ヒト化抗体；
（ｇ）Ｆａｂフラグメント；
（ｈ）Ｆａｂ’フラグメント；
（ｉ）Ｆ（ａｂ’）２；
（ｊ）Ｆｖ；および
（ｋ）ジスルフィド結合Ｆｖ、
からなる群より選択される、抗体。
【請求項４９】
請求項３または３７に記載の抗体であって、以下：
（ａ）ヒトＩｇＭ定常ドメイン；
（ｂ）ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；
（ｃ）ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；
（ｄ）ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；
（ｅ）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；および
（ｆ）ヒトＩｇＡ定常ドメイン、
からなる群より選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインもまた含む、抗体。
【請求項５０】
請求項１７または３８に記載の抗体であって、以下：
（ａ）ヒトＩｇκ定常ドメイン；
（ｂ）ヒトＩｇλ定常ドメイン、
からなる群より選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインもまた含む、抗体。
【請求項５１】
請求項１〜５０のいずれか１項に記載の抗体であって、以下：
（ａ）１０−７Ｍと１０−８Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）；
（ｂ）１０−８Ｍと１０−９Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）；
（ｃ）１０−９Ｍと１０−１０Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）；
（ｄ）１０−１０Ｍと１０−１１Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）；
（ｅ）１０−１１Ｍと１０−１２Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）；および
（ｆ）１０−１２Ｍと１０−１３Ｍとの間の解離定数（ＫＤ）、
からなる群より選択される解離定数（ＫＤ）を有する、抗体。
【請求項５２】
前記抗体が、検出可能な標識に結合体化される、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５３】
前記検出可能な標識が、放射性同位元素標識である、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５４】
前記放射性同位元素標識が、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである、請求項５３に記載の抗体。
【請求項５５】
前記検出可能な標識が、酵素、蛍光標識、発光標識または生物発光標識である、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５６】
前記抗体が、ビオチン化される、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５７】
前記抗体が、治療剤または細胞傷害性薬剤に結合体化される、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５８】
請求項５７に記載の抗体であって、前記治療剤または細胞傷害性薬剤が、以下：
（ａ）代謝拮抗物質；
（ｂ）アルキル化剤；
（ｃ）抗生物質；
（ｄ）増殖因子；
（ｅ）サイトカイン；
（ｆ）抗脈管形成剤；
（ｇ）抗有糸分裂剤；
（ｈ）アントラサイクリン；
（ｉ）毒素；および
（ｊ）アポトーシス剤、
からなる群より選択される、抗体。
【請求項５９】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６０】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントがそのレセプターに結合する能力を減少または消滅させる、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６１】
前記レセプターが、ＴＡＣＩである、請求項６０に記載の抗体。
【請求項６２】
前記レセプターが、ＢＣＭＡである、請求項６０に記載の抗体。
【請求項６３】
ＢｌｙＳまたはそのフラグメントがＢ細胞増殖を刺激する能力を減少または消滅させる、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６４】
ＢｌｙＳまたはそのフラグメントがＢ細胞による免疫グロブリン分泌を刺激する能力を減少または消滅させる、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６５】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６６】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントがそのレセプターに結合する能力を増大させる、請求項６５に記載の抗体。
【請求項６７】
前記レセプターが、ＴＡＣＩである、請求項６６に記載の抗体。
【請求項６８】
前記レセプターが、ＢＣＭＡである、請求項６６に記載の抗体。
【請求項６９】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントがＢ細胞増殖を刺激する能力を増加させる、請求項６５に記載の抗体。
【請求項７０】
ＢＬｙＳまたはそのフラグメントがＢ細胞による免疫グロブリン分泌を刺激する能力を増加させる、請求項６５に記載の抗体。
【請求項７１】
異種ポリペプチドに共有結合される、請求項１〜７０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７２】
前記異種ポリペプチドが、ヒト血清アルブミンである、請求項７１に記載の抗体。
【請求項７３】
薬学的に受容可能なキャリア中の、請求項１〜７２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７４】
請求項１〜７３のいずれか１項に記載の抗体を含む、キット。
【請求項７５】
請求項１〜７４のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離された核酸分子。
【請求項７６】
請求項７５に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
【請求項７７】
前記核酸分子によってコードされる抗体の発現を調節するヌクレオチド配列もまた含む、請求項７６に記載のベクター。
【請求項７８】
請求項７７に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項７９】
請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗体を発現するように操作された、細胞株。
【請求項８０】
請求項１〜７９のいずれか１項に記載の抗体と同じエピトープに結合する、抗体。
【請求項８１】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３９を有する細胞株によって産生される抗体の結合を競合的に阻害する、抗体。
【請求項８２】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４０を有する細胞株によって産生される抗体の結合を競合的に阻害する、抗体。
【請求項８３】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４３を有する細胞株によって産生される抗体の結合を競合的に阻害する、抗体。
【請求項８４】
第二の抗体であって、以下：
（ａ）５０％〜６０％；
（ｂ）６０％〜７０％；
（ｃ）７０％〜８０％；
（ｄ）８０％〜９０％；および
（ｅ）９０％〜１００％、
からなる群より選択されるパーセンテージ範囲内の増加によって、請求項１〜８３のいずれか１項に記載の抗体の結合を減少させる、第二の抗体。
【請求項８５】
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体であって、該抗体は、配列番号１〜２１２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むｓｃＦｖのＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、ＶＨドメインのアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項８６】
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体であって、該抗体は、配列番号１〜２１２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ由来のＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、ＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項８７】
ＢＬｙＳタンパク質の異常な発現を検出するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）請求項１〜８６のいずれか１項に記載の１以上の抗体を使用して、個体の第一の生物学的サンプル中のＢＬｙＳ発現レベルをアッセイする工程；および
（ｂ）生物学的サンプル中のアッセイされたＢＬｙＳ発現レベルを、標準的なＢＬｙＳ発現レベルまたは第二の正常な生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルと比較する工程、を包含し、ここで、
（ｃ）標準的なＢＬｙＳ発現レベルまたは第二の正常な生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルと比較される、アッセイされた第一の生物学的サンプル中のＢＬｙＳ発現レベルの増大または減少が、異常な発現を示す、方法。
【請求項８８】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を診断するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する、請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の標識された抗体の有効量を被験体に投与する工程；
（ｂ）請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の標識された抗体が、該被験体のＢＬｙＳが発現される部位で優先的に濃縮することを可能にするために、投与後のある時間間隔の間、待機する工程；
（ｃ）バックグラウンドのレベルを決定する工程；および
（ｄ）該被験体において、請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の標識された抗体を検出する工程であって、その結果、バックグラウンドを上回るレベルの標識された抗体の検出は、該被験体がＢＬｙＳの異常な発現に関連する特定の疾患または障害を有することを示す、工程、
を包含する、方法。
【請求項８９】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を、処置、予防または寛解する方法であって、請求項７３に記載の薬学的組成物を、該疾患または障害を処置、予防または寛解するための有効量で、それを必要とする動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９０】
前記疾患または障害が、癌である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記疾患または障害が、免疫系の疾患または障害である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫系の疾患または障害が、自己免疫疾患または障害である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
請求項９２に記載の方法であって、ここで、前記免疫系の疾患または障害が、以下：
（ａ）全身性エリテマトーデス、および
（ｂ）慢性関節リウマチ、
からなる群より選択される自己免疫疾患または障害である、方法。
【請求項９４】
前記免疫系の疾患または障害が、免疫不全である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９５】
前記免疫系の疾患または障害が、以下：
（ａ）分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）；および
（ｂ）ＡＩＤＳ、
からなる群より選択される免疫不全である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記免疫系の疾患または障害が、癌である、請求項９１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（導入）
本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体および関連分子に関する。本発明はまた、異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現またはＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター（ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントもしくは改変体あるいは関連分子を含む）の不適切な機能に関連した疾患または障害を検出、診断、または予後するための方法および組成物に関する。本発明はさらに、異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現、または不適切なＢＬｙＳ機能もしくはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を予防、処置または軽減するための方法および組成物に関連し、この方法は、動物（好ましくは、ヒト）にＢＬｙＳに免疫特異的に結合する有効量の１つ以上の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体あるいは関連分子を投与する工程を包含する。
【０００２】
（発明の背景）
Ｂリンパ球刺激物質（ＢＬｙＳ）は、インビボおよびインビトロの両方で、Ｂ細胞増殖および分化を誘導する腫瘍壊死因子（「ＴＮＦ」）スーパーファミリーのメンバーである（Ｍｏｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２８５：２６０−２６３（１９９９））。ＢＬｙＳは、その単球特異的遺伝子およびタンパク質発現パターンならびにその特異的レセプター分布およびＢリンパ球に対する生物学的活性によって、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＣＤ４０Ｌ、またはＣＤ２７Ｌ（ＣＤ７０）のような他のＢ細胞増殖因子およびＢ細胞分化因子と識別可能である。ＢＬｙＳ発現は、ナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞上では検出されず、骨髄起源の細胞に制限される。休止単球上のＢＬｙＳ発現は、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）によって上方制御される。ＢＬｙＳをコードする遺伝子は、染色体１３ｑ３４にマッピングされている。
【０００３】
ＢＬｙＳは、２８５アミノ酸のＩＩ型膜結合ポリペプチドおよび可溶性の１５２アミノ酸ポリペプチドとして発現される（Ｍｏｏｒｅら、１９９９、前出）。ＢＬｙＳの膜結合形態は、アミノ酸残基４７とアミノ酸残基７３との間に推定膜貫通スパニングドメインを有する。ＢＬｙＳの可溶性形態のＮＨ２末端は、ＢＬｙＳの膜結合形態のＡｌａ１３４で開始する。可溶性組換えＢＬｙＳは、マウス脾臓Ｂ細胞のインビトロ増殖を誘導し、そしてこれらの細胞上の細胞表面レセプターに結合することが示されている（Ｍｏｏｒｅら、１９９９、前出）。マウスへの可溶性ＢＬｙＳの投与は、ＣＤ４５ＲｄｕｌｌＢ細胞、Ｌｙ６Ｄｂｒｉｇｈｔ（ＴｈＢとしても知られている）Ｂ細胞の比率の増加および血清ＩｇＭおよびＩｇＡレベルの増加を生じることが示されている（Ｍｏｏｒｅら、１９９９、前出）。従って、ＢＬｙＳは、レセプター分布および生物学的活性の両方において、Ｂ細胞向性を示す。
【０００４】
その発現パターンおよび生物学的活性に基づいて、ＢＬｙＳは、Ｂ細胞と単球またはこれらの分化した子孫との間のシグナル交換に関与していることが示唆されている。ＢＬｙＳレセプターおよびリガンドの制限された発現パターンは、ＢＬｙＳが、Ｔ細胞依存抗原活性化におけるＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの調節因子に類似した様式で、Ｔ細胞独立応答の調節因子として機能し得ることを示唆する。このように、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体および関連分子は、例えば、自己免疫、新生物、または免疫不全症候群に関連するＢ細胞障害の処置における医学的有用性を見出し得る。
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはそれからなる分子を含む）を含む。詳細には、本発明は、ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／もしくは３２２９）またはヒト単球上で発現されるＢＬｙＳ；マウスＢＬｙＳ（配列番号３２３０および／もしくは３２３１）またはマウス単球上で発現されるＢＬｙＳ；ラットＢＬｙＳ（配列番号３２３２、３２３３、３２３４および／もしくは３２３５または膜結合形態（例えば、ラット単球の表面上の））；あるいはサルＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２３６および／もしくは３２３７のサルＢＬｙＳポリペプチド、サル単球上で発現されるサルＢＬｙＳ、もしくはＢＬｙＳの可溶性形態）、好ましくはヒトＢＬｙＳ、のポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはそれからなる分子を含む）を含む。本発明はまた、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現、または不適切なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を検出、診断または予後するための方法および組成物を包含し、この方法は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはそれからなる分子を含む）の使用を含むかあるいはこれからなる。本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を用いて検出、診断、または予後され得る疾患および障害としては、免疫障害（例えば、狼瘡、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、筋無力症、橋本病、および免疫不全症候群）、炎症障害（例えば、喘息、アレルギー障害、および慢性関節リウマチ）、感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、および増殖性障害（例えば、白血病、癌、およびリンパ腫）が挙げられるがこれらに限定されない。本発明はさらに、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現、または不適切な機能のＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプターに関連する疾患または障害を予防、処置または軽減するための方法および組成物を包含し、この方法は、上記動物にＢＬｙＳに免疫特異的に結合する有効量の１つ以上の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を投与する工程を包含するかまたはこれからなる。本発明の有効量の抗体を投与することによって予防、処置、または軽減され得る疾患および障害としては、免疫障害（例えば、狼瘡、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、筋無力症、橋本病、および免疫不全症候群）、炎症障害（例えば、喘息、アレルギー障害、および慢性関節リウマチ）、感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、および増殖性障害（例えば、白血病、癌、およびリンパ腫）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０００６】
ファージディスプレイ技術を使用して、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する単鎖抗体分子（「ｓｃＦｖ」）（可溶性ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するｓｃＦｖ、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖ、およびＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖを含む）を同定した。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖ（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらのｓｃＦｖをコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【０００７】
詳細には、本発明は、以下の表１において参照されるような、配列番号１〜２１２８、好ましくは配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５、および１８８６〜１９０８、そして最も好ましくは配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９、および１８８１〜１８８５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなるｓｃＦｖに関連する。特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖに関連し、このｓｃＦｖは、以下の表１に参照されるような、配列番号１５６３〜１５６９、好ましくは配列番号１５７０〜１５９５、そして最も好ましくは配列番号１５６３〜１５６９のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなる。他の実施形態において、本発明はまた、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖに関し、このｓｃＦｖは、以下の表１において参照されるような、配列番号１８８１〜２１２８、好ましくは配列番号１８８６〜１９０８、そして最も好ましくは１８８１〜１８８５のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらからなる。本発明はさらに、ＢＬｙＳの膜結合形態および可溶性形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖに関連し、このｓｃＦｖは、以下の表１において参照されるような、配列番号１〜１５６２、好ましくは８３４〜８７２、そして最も好ましくは配列番号１〜４６および３２１〜３２９のアミノ酸配列を含むかまたはこれらからなる。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖ（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらのｓｃＦｖをコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【０００８】
本発明は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、以下の表１において参照される可変重（「ＶＨ」）ドメインのいずれか１つ、または表１において参照される可変軽（「ＶＬ」）ドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照されるような、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはそれからなる分子を含む）は、以下の表１において参照されるような、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれらからなる。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖ（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらの抗体をコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【０００９】
本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、以下の表１において参照されるＶＨドメインのいずれか１つ、または表１において参照されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１に参照されるのと同じｓｃＦｖに含まれるＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１において開示されるような、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８のｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよび配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８のｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含むかあるいはこれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、以下の表１において開示されるような、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８の単一のｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むかあるいはこれらからなる。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらの抗体（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらの抗体をコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【００１０】
本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、表１において参照されるＶＨ相補性決定領域（「ＣＤＲ」）（すなわち、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、またはＶＨ　ＣＤＲ３）のいずれか１つ、２つ、３つまたはそれ以上のアミノ酸配列、および／または表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ（すなわち、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、またはＶＬ　ＣＤＲ３）のいずれか１つ、２つ、３つまたはそれ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれらからなる。１つの実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ１のいずれか１つおよび／または表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ１のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。別の実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ２のいずれか１つおよび／または表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ２のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つおよび／または表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらの抗体（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらの抗体をコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【００１１】
別の実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合し、そして表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ１のいずれか１つ、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ２のいずれか１つ、および／または表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。別の実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ１のいずれか１つ、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ２のいずれか１つ、または表１において参照されるようなＶＬ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかあるいはこれからなる。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１において参照される同じｓｃＦｖに対応する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上のＣＤＲを含むかあるいはこれらからなり、より好ましくは、ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が同じｓｃＦｖに対応するか、またはＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が同じｓｃＦｖに対応し、そして最も好ましくは全ての６つのＣＤＲが表１において参照される同じｓｃＦｖに対応する。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらの抗体（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらの抗体をコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【００１２】
本発明はまた、ＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５からなるポリペプチドまたは単球の表面上で発現されるＢＬｙＳポリペプチド）の可溶性形態に免疫特異的に結合する；ＢＬｙＳ（配列番号３２２８のアミノ酸１〜２８５からなるポリペプチド）の膜結合形態に免疫特異的に結合する；および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合する、抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはそれからなる分子を含む）を提供する。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合し、そしてＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する１つ以上のｓｃＦｖに対応する、ＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬドメイン、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、および／またはＶＬ　ＣＤＲ３を含むかあるいはこれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合し、そしてＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する１つ以上のｓｃＦｖに対応する、ＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬドメイン、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、および／またはＶＬ　ＣＤＲ３を含むかあるいはこれらからなる。なお別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合し、そしてＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する１つ以上のｓｃＦｖに対応する、ＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬドメイン、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、および／またはＶＬ　ＣＤＲ３を含むかあるいはこれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１に開示される同じｓｃＦｖに対応するＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むかあるいはこれらからなり、この抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合する。これらの抗体をコードする核酸分子はまた、本発明によって包含される。ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、および／またはＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するこれらの抗体（例えば、表１において参照されるアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲを含む）のフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらの抗体をコードする核酸分子および／または分子と同様に、本発明によって包含される。
【００１３】
本明細書中に開示されたアミノ酸配列のＶＨドメインは、抗体の抗原結合部位を示すＶＨ／ＶＬ対形成を提供するために、本明細書中に開示されたアミノ酸配列のＶＬドメイン（または他のＶＬドメイン）と組み合わせられ得る。同様に、本明細書中に開示されたアミノ酸配列のＶＬドメインは、本明細書中に開示されたアミノ酸配列のＶＨドメイン（または他のＶＨドメイン）と組み合わせられ得る。さらに、本明細書中に開示された１つ以上のＣＤＲは、ＶＨドメインまたはＶＬドメインから取られ得、そして下に議論するように、適切な枠組みに組み込まれ得る。
【００１４】
本発明は、本明細書中に記載されるＶＨドメイン、ＶＬドメインおよび／またはＣＤＲを含むかあるいはこれらからなる抗体（抗体フラグメントまたはその改変体（誘導体を含む）を含むかあるいはそれからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、ＢＬｙＳ（例えば、可溶性ＢＬｙＳおよび膜結合ＢＬｙＳ）に免疫特異的に結合し、そして当該分野で公知の方法（例えば、下に議論されるような免疫アッセイのような）を使用して、ＢＬｙＳに対する免疫特異的結合について慣用的にアッセイされ得る。本発明の抗体および抗体フラグメントまたは改変体（誘導体を含む）は、例えば、１つ以上のアミノ酸配列変更（アミノ酸残基の付加、欠失、置換および／または挿入）を含み得る。これらの変更は、１つ以上の枠組み領域および／または１つ以上のＣＤＲにおいてなされ得る。本発明の抗体（抗体フラグメントおよびその改変体ならびに誘導体を含む）は、当該分野で公知の方法によって慣用的に作製され得る。ＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、およびＶＬ　ＣＤＲのいずれかのフラグメントまたは改変体（これらの配列は、本明細書中に詳細に開示される）を含むかあるいはこれからなる分子は、本発明に従って使用され得る。これらの抗体および分子（フラグメント、改変体および誘導体を含む）をコードする核酸はまた、本発明によって包含される。
【００１５】
本発明はまた、抗体（抗体フラグメントまたは改変体を含むかあるいはこれらからなる分子を含む）のパネルを提供し、ここで、パネルメンバーは、本発明の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上の異なる抗体（例えば、抗体全体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、およびｓｃＦｖ）に対応する。本発明はさらに、抗体の混合物を提供し、ここで、この混合物は、本発明の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上の異なる抗体（例えば、抗体全体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、およびｓｃＦｖ）に対応する。本発明はまた、本発明の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上の異なる抗体（それらの抗体フラグメントまたは改変体を含むかあるいはこれらからなる分子を含む）を含むかあるいはこれらからなる組成物を提供する。本発明の組成物は、１つ以上の抗体またはこれらのフラグメントもしくは改変体の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上のアミノ酸配列を含み得るかあるいはこれらからなり得る。あるいは、本発明の組成物は、本発明の１つ以上の抗体をコードする核酸分子を含み得るかあるいはこれらからなり得る。
【００１６】
本発明はまた、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）および異種ペプチド（すなわち、抗体または抗体ドメインに関連していないポリペプチド）を含む融合タンパク質を提供する。これらの融合タンパク質をコードする核酸分子はまた、本発明によって包含される。本発明の組成物は、本発明の融合タンパク質の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上を含み得るかまたはこれらからなり得る。あるいは、本発明の組成物は、本発明の融合タンパク質の１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個以上をコードする核酸を含み得るかまたはこれらからなり得る。
【００１７】
本発明はまた、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子（例えば、ｓｃＦｖ）を含む）をコードする核酸分子（一般には単離された核酸分子）を提供する。本発明はまた、本発明の核酸分子およびその子孫で形質転換された宿主細胞を提供する。本発明はまた、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を生成するための方法を提供する。本発明はさらに、核酸分子から本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を発現するための方法を提供する。本発明のこれらおよび他の局面は、さらに以下に詳細に記載される。
【００１８】
本発明はまた、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現または不適切なＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を検出、診断および／または予後するための方法および組成物を包含し、この方法は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）を使用する工程を包含する。本発明の抗体を用いて検出、診断、または予後され得る疾患および障害としては、免疫障害（例えば、狼瘡、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、筋無力症、橋本病、および免疫不全症候群）、炎症障害（例えば、喘息、アレルギー障害、および慢性関節リウマチ）、感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、および増殖性障害（例えば、白血病、癌、およびリンパ腫）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１９】
特定の実施形態において、本発明は、高ガンマグロブリン血（例えば、ＡＩＤＳ、自己免疫疾患、およびいくつかの免疫不全）に関係する疾患または障害を検出、診断および／または予後するための方法および組成物を包含する。他の特定の実施形態において、本発明は、低ガンマグロブリン血（例えば、免疫不全）に関係する疾患または障害を検出、診断および／または予後するための方法および組成物を包含する。
【００２０】
本発明はさらに、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける異常なＢＬｙＳもしくはＢＬｙＳレセプター発現または不適切なＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を予防、処置または軽減するための方法および組成物を包含し、この方法は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する１つ以上の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいはこれからなる分子を含む）の有効量を上記動物に投与する工程を包含する。本発明の有効量の１つ以上の抗体または分子を投与することによって予防、処置、または阻害され得る疾患および障害としては、免疫障害（例えば、狼瘡、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、筋無力症、橋本病、および免疫不全症候群）、炎症障害（例えば、喘息、アレルギー障害、および慢性関節リウマチ）、感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、および増殖性障害（例えば、白血病、癌、およびリンパ腫）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２１】
特定の実施形態において、本発明は、高ガンマグロブリン血症（例えば、ＡＩＤＳ、自己免疫疾患、およびいくつかの免疫不全症候群）と関連する疾患または障害を、予防、処置または改善するための方法および組成物（例えば、アンタゴニスト抗ＢＬｙＳ抗体）を含む。他の特定の実施形態において、本発明は、低ガンマグロブリン血症（例えば、免疫不全症候群）と関連する疾患または障害を、予防、処置または改善するための方法および組成物（例えば、アゴニスト抗ＢＬｙＳ抗体）を含む。
【００２２】
本発明の抗体を用いて検出、診断、予測、またはモニターされ得る自己免疫障害、自己免疫疾患または自己免疫障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性新生児血小板減少、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、グルテン感受性腸症、アレルギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（例えば、ＩｇＡ　ネフロパシー）、多発性硬化症、神経炎、ブドウ膜炎眼結膜炎（Ｕｖｅｉｔｉｓ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、多発性内分泌腺症、紫斑（例えば、Ｈｅｎｌｏｃｈ−Ｓｃｏｅｎｌｅｉｎ紫斑）、ライター病、スティッフマン症候群、自己免疫肺炎症、心筋炎、ＩｇＡ　糸球体腎炎、デンスデポジット病、リウマチ性心疾患、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、および自己免疫炎症性の眼、自己免疫甲状腺炎、甲状腺機能低下症（すなわち、橋本甲状腺炎、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｈｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、円板状狼瘡、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、レセプター自己免疫（例えば、（ａ）グレーヴズ病、（ｂ）重症筋無力症、および（ｃ）インスリン耐性など）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、抗コラーゲン抗体を伴なう強皮症（ｓｃｈｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、混合結合組織病、多発性筋炎／皮膚筋炎、悪性貧血、特発性アディソン病、不妊症、糸球体腎炎（例えば、原発性糸球体腎炎およびＩｇＡ　ネフロパシー）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、糖尿病、およびアドレナリン作動性薬剤耐性（喘息または嚢胞性線維症を伴なうアドレナリン作動性薬剤耐性を含む）、慢性活性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、他の内分泌腺欠損、白斑、脈管炎、ｐｏｓｔ−ＭＩ、心臓切開症候群、じんま疹、アトピー性皮膚炎、喘息、炎症性ミオパシー、および他の炎症、肉芽腫性障害、変性障害、および萎縮性障害）。
【００２３】
本発明の抗体を用いて検出、診断、予知、またはモニターされ得る免疫不全としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）−Ｘ連鎖、ＳＣＩＤ−常染色体、アデノシンデアミナーゼ欠損症（ＡＤＡ欠損症）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）、ブルトン病、先天性無ガンマグロブリン血症、Ｘ連鎖乳児無ガンマグロブリン血症、後天性無ガンマグロブリン血症、成体発症無ガンマグロブリン血症、遅発性無ガンマグロブリン血症、異常ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、新生児期の一過性低ガンマグロブリン血症、特定されない低ガンマグロブリン血症、無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）（後天性）、ヴィスコット−オールドリッチ症候群（ＷＡＳ）、過剰ＩｇＭを伴なうＸ−連鎖免疫不全、過剰ＩｇＭを伴なう非Ｘ連鎖免疫欠損、選択的ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラス欠損（ＩｇＡ欠損を伴なうまたは伴なわない）、正常なＩｇまたは上昇したＩｇを伴なう抗体欠損、胸腺腫を伴なう免疫不全、Ｉｇ重鎖欠損、κ鎖欠損、Ｂ細胞リンパ増殖性（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）障害（ＢＬＰＤ）、選択的ＩｇＭ免疫不全、劣性無ガンマグロブリン血症（Ｓｗｉｓｓ型）、網様発育不全、新生児好中球減少症、重症先天性白血球減少症、胸腺リンパ形成不全症−免疫不全と関連する発育不全または形成異常、毛細血管拡張性運動失調、短い四肢の小人症、Ｘ連鎖リンパ増殖性症候群（ＸＬＰ）、ネゼロフ症候群−Ｉｇに関連する複合型免疫欠損、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ欠乏（ＰＮＰ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠損（不全リンパ球症候群）および重症複合型免疫欠損。
【００２４】
（定義）
用語「抗体」は、本明細書中に使用される場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）をいう。従って、用語「抗体」は、抗体分子全体のみではなく、抗体フラグメントならびに抗体の改変体（誘導体を含む）および抗体フラグメントもまた含む。本願において用語「抗体」によって記載される分子の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｖ、およびＶＬドメインもしくはＶＨドメインのいずれかを含むかあるいはこれらからなるフラグメント。用語「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、本明細書中に使用される場合、抗体のＶＨドメインに連結した抗体のＶＬドメインを含むポリペプチドをいう。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、他の抗原との交差反応性を有し得る。好ましくは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、他の抗原と交差反応しない。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、例えば、免疫アッセイまたは当業者に公知の他の技術（例えば、以下の実施例に記載される免疫アッセイ）によって同定され得る。
【００２５】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、抗イデオタイプ抗体（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗イデオタイプ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメント。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００２６】
好ましくは、本発明の抗体は、表１に参照されるもののうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ　ＣＤＲ、あるいはこれらのフラグメントまたは改変体を含むか、あるいはこれらからなる。
【００２７】
「ＢＬｙＳの可溶性形態に結合する」本発明の抗体は、ＢＬｙＳタンパク質の１５２アミノ酸の可溶性形態（配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５）に結合する抗体である。本発明の特定の実施形態において、「ＢＬｙＳの可溶性形態に結合する」本発明の抗体はまた、ＢＬｙＳの膜結合形態または膜会合形態に結合しない。ＢＬｙＳの可溶性形態に対する結合を測定するアッセイとしては、実施例８および９に記載されるようなレセプター結合阻害アッセイまたは溶液からの可溶性ＢＬｙＳの捕獲が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
「ＢＬｙＳの膜結合形態に結合する」本発明の抗体は、膜会合（切断されていない）ＢＬｙＳタンパク質に結合する抗体である。本発明の特定の実施形態において、「ＢＬｙＳの膜結合形態に結合する」本発明の抗体はまた、ＢＬｙＳの可溶性形態に結合しない。ＥＬＩＳＡにおけるＨＩＳタグ化ＢＬｙＳへの結合（本明細書中に記載されるような）は、抗体がＢＬｙＳの膜結合形態に結合することの指標であるが、ＢＬｙＳの膜結合形態に対する特異性の証拠として依存されるべきではない。膜結合ＢＬｙＳに対する抗体の特異性の証拠として依存され得るアッセイとしては、実施例２に記載されるようなＢＬｙＳを発現する原形質膜への結合が挙げられるが、これに限定されない。「ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方に結合する」本発明の抗体は、ＢＬｙＳの膜結合形態および可溶性形態の両方に結合する抗体である。
【００２９】
用語「改変体」は、本明細書中に使用される場合、ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメントと類似または同一の機能を保有するポリペプチドをいうが、このポリペプチドは、必ずしもＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメントと類似または同一のアミノ酸配列を含む必要も、ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメントと類似または同一の構造を保有する必要もない。類似のアミノ酸を有する改変体とは、以下のうちの少なくとも１つの満たすポリペプチドをいう：（ａ）本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメント（表１に参照されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬＣＤＲを含む）のアミノ酸配列に対して、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなる、ポリペプチド；（ｂ）その相補配列が、本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド（例えば、配列番号３２２８）、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメント（表１に参照されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬＣＤＲを含む）をコードするヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、少なくとも５アミノ酸残基、少なくとも１０アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、少なくとも３０アミノ酸残基、少なくとも４０アミノ酸残基、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ酸残基、少なくとも７０アミノ酸残基、少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１２５アミノ酸残基、または少なくとも１５０アミノ酸残基のポリペプチド；ならびに（ｃ）本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメント（表１に参照されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、ＶＨＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬＣＤＲを含む）をコードするヌクレオチド配列に、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド。本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメントに類似の構造を有するポリペプチドは、本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメント、抗ＢＬｙＳ抗体もしくはその抗体フラグメントの類似した二次構造、三次構造、または四次構造を有するポリペプチドをいう。ポリペプチドの構造は、当業者に公知の方法によって決定され得、これには、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、および結晶学的電子顕微鏡が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
２つのアミノ酸配列間、または２つの核酸配列間の同一性パーセントを決定するために、配列を最適の比較成果のために整列する（例えば、第２のアミノ酸配列または核酸配列との最適なアライメントのために、第１のアミノ酸配列または核酸配列の配列中に、ギャップが導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドが、比較される。第１配列における位置が、第２配列の対応する位置において同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有される場合、これらの分子は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一な位置の数の関数である（すなわち、同一性（％）＝同一な重なり合う位置の数／位置の総数×１００（％））。１つの実施形態において、２つの配列は、同じ長さである。
【００３１】
２つの配列間の同一性パーセントの決定は、当業者に公知の数理的アルゴリズムを用いて達成され得る。２つの配列を比較するための数理的アルゴリズムの例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ　Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　９０：５８７３−５８７７（１９９３）のように改変された、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ　Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：２２６４−２２６８（１９９０）のアルゴリズムである。Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）のＢＬＡＳＴｎ　プログラムおよびＢＬＡＳＴｘプログラムは、このようなアルゴリズムの組込んでいる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＢＬＡＳＴｎプログラム（スコア＝１００、ワードレングス＝１２）を用いて実行され、本発明の核酸分子に相同性のヌクレオチド配列を獲得し得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＢＬＡＳＴｘプログラム（スコア＝５０、ワードレングス＝３）を用いて実行され、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸を獲得し得る。比較目的でギャップの入ったアライメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７）に記載されるように使用し得る。あるいは、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の遠位関係を検出する反復検索を実行し得る（同書）。ＢＬＡＳＴプログラム、Ｇａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴプログラム、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、代表的なプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴｘおよびＢＬＡＳＴｎ）のデフォルト値を使用し得る。（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと）。
【００３２】
配列比較のために使用される数理的アルゴリズムの別の例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）は、このようなアルゴリズムを組込んでいる。当該分野で公知の配列解析のための他のアルゴリズムとしては、ＴｏｒｅｌｌｉｓおよびＲｏｂｏｔｔｉ、Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１０：３−５（１９９４）に記載されるようなＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ；ならびにＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：２４４４−８（１９８８）に記載されるＦＡＳＴＡが挙げられる。ＦＡＳＴＡにおいて、ｋｔｕｐは、検索の検出感度および速度を設定するコントロールオプションである。
【００３３】
用語「誘導体」は、本明細書中に使用される場合、アミノ酸残基の置換、欠失または付加の導入によって変更された、ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体のアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなる改変体ポリペプチドをいう。用語「誘導体」はまた、本明細書中に使用される場合、例えば、ポリペプチドへのいずれかの型の分子の共有結合によって改変された、ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体をいう。例えば、ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳ抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドもしくは他の分子への連結などによって、改変され得るが、これらに限定されない。ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳ抗体の誘導体は、当業者に公知の技術を用いる化学改変（特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などが挙げられるが、これらに限定されない）によって改変され得る。ＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳ抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。ポリペプチド誘導体は、本明細書中に記載されるＢＬｙＳポリペプチド、ＢＬｙＳフラグメントまたはＢＬｙＳ抗体と類似または同一の機能を保有する。
【００３４】
用語「エピトープ」は、本明細書中に使用される場合、動物（好ましくは哺乳動物）において抗原性活性または免疫原性活性を有するＢＬｙＳの部分をいう。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を誘発するＢＬｙＳの部分である。抗原性活性を有するエピトープは、当該分野で公知の任意の方法によって決定されるように（例えば、本明細書中に記載される免疫アッセイによって決定されるように）抗体が免疫特異的に結合するＢＬｙＳの部分である。抗原性エピトープは、免疫原性である必要はない。
【００３５】
用語「フラグメント」は、本明細書中に使用される場合、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗ＢＬｙＳ抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらからなる分子（例えば、ｓｃＦｖ）を含む）のアミノ酸配列のうちの、少なくとも５アミノ酸残基、少なくとも１０アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、少なくとも３０アミノ酸残基、少なくとも３５アミノ酸残基、少なくとも４０アミノ酸残基、少なくとも４５アミノ酸残基、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ酸残基、少なくとも７０アミノ酸残基、少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１２５アミノ酸残基、少なくとも１５０アミノ酸残基、少なくとも１７５アミノ酸残基、少なくとも２００アミノ酸残基、または少なくとも２５０アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドをいう。
【００３６】
用語「融合タンパク質」は、本明細書中に使用される場合、本発明の抗ＢＬｙＳ抗体のアミノ酸配列および異種ポリペプチド（すなわち、抗体または抗体ドメインに無関係のポリペプチド）のアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなる、ポリペプチドをいう。
【００３７】
用語「宿主細胞」は、本明細書中に使用される場合、核酸分子でトランスフェクトされた特定の目的の細胞およびこのような細胞の子孫もしくは潜在的な子孫をいう。子孫は、続く世代で生じ得る変異もしくは環境の影響または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組込みに起因して、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でないかもしれない。
【００３８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのフラグメントもしくは改変体に免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいは抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を包含する。特に、本発明は、表１において言及されるような、配列番号１〜配列番号２１２８のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗体（例えば、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供する。特に、本発明は、以下のポリペプチド、ポリペプチドフラグメントもしくは改変体、またはエピトープに免疫特異的に結合する抗体を包含する：ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／もしくは３２２９）またはヒト単球上に発現されたＢＬｙＳ；マウスＢＬｙＳ（配列番号３２３０および／もしくは３２３１）またはマウス単球上に発現されたＢＬｙＳ；ラットＢＬｙＳ（配列番号３２３２、配列番号３２３３、配列番号３２３４および／もしくは配列番号３２３５において与えられるような可溶性形態、または例えば、ラット単球上の膜結合形態のいずれか）；またはサルＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２３６および／もしくは配列番号３２３７のサルＢＬｙＳポリペプチド、サルＢＬｙＳの可溶性形態、またはサル単球上に発現されたＢＬｙＳ）（特異的抗体−抗原結合についてアッセイするための当該分野で公知の免疫アッセイによって決定した場合）。
【００３９】
配列番号３２２８に示したポリペプチド配列は、１９９６年１０月２２日にＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ　２０１１０−２２０９に寄託され、そしてＡＴＣＣ登録番号９７７６８が割り当てられたＨＮＥＤＵ１５クローンのｃＤＮＡを配列決定および翻訳することによって得られた。寄託されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　ＳＫ（−）プラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）に含まれる。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条項に拠って行われた。
【００４０】
配列番号３２２９に示されるポリペプチド配列は、１９９８年１２月１０日にＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、そしてＡＴＣＣ登録番号２０３５１８が割り当てられたＨＤＰＭＣ５２クローンのｃＤＮＡを配列決定および翻訳することによって得られた。寄託されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　ＳＫ（−）プラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）に含まれる。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条項に拠って行われた。
【００４１】
本発明の抗体によって結合されるＢＬｙＳポリペプチドは、モノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高次のマルチマー）であり得る。従って、本発明は、本発明のＢＬｙＳポリペプチドのモノマーおよびマルチマー、それらの調製ならびにそれらを含む組成物（好ましくは、薬学的組成物）を結合する抗体に関する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳのモノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマーを結合する。さらなる実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの少なくともダイマー、少なくともトリマーまたは少なくともテトラマーを結合する。
【００４２】
本発明の抗体によって結合されるマルチマーＢＬｙＳは、ホモマーまたはヘテロマーであり得る。ＢＬｙＳホモマーとは、ＢＬｙＳポリペプチド（本明細書中に記載されるような、ＢＬｙＳのフラグメント、改変体および融合タンパク質を含む）のみを含むマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドを含み得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳホモダイマー（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する２つのＢＬｙＳポリペプチドを含む）またはＢＬｙＳホモトリマー（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する３つのＢＬｙＳポリペプチドを含む）を結合する。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳのホモトリマーを結合する。さらなる実施形態では、本発明の抗体は、少なくともホモダイマー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモテトラマーである、ホモマー性ＢＬｙＳマルチマーを結合する。
【００４３】
ヘテロマー性ＢＬｙＳとは、本発明のＢＬｙＳポリペプチドに加えて異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプチド）を含むマルチマーをいう。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳのヘテロダイマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーを結合する。さらなる実施形態では、本発明の抗体は、少なくともヘテロダイマー、少なくともヘテロトリマーまたは少なくともヘテロテトラマーである、ヘテロマー性ＢＬｙＳマルチマーを結合する。高度に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドおよびＡＰＲＩＬポリペプチド（配列番号３２３９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０４６８８８；ＰＣＴ国際公開番号Ｗ０９７／３３９０２；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）またはそれらのフラグメントもしくは改変体の両方を含むヘテロトリマーを結合する。他の高度に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、１つのＢＬｙＳポリペプチド（フラグメントまたは改変体を含む）および２つのＡＰＲＩＬポリペプチド（フラグメントまたは改変体を含む）を含むヘテロトリマーを結合する。なお他の高度に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、２つのＢＬｙＳポリペプチド（フラグメントまたは改変体を含む）および１つのＡＰＲＩＬポリペプチド（フラグメントまたは改変体を含む）を含むヘテロトリマーを結合する。さらなる非排他的な実施形態では、本発明の抗体によって結合されるヘテロマーは、ＣＤ４０リガンドポリペプチド配列、またはその生物学的に活性なフラグメントもしくは改変体を含む。
【００４４】
特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ホモマー性（特に、ホモトリマー性）のＢＬｙＳポリペプチドを結合し、ここで、このマルチマーの個々のタンパク質成分は、ＢＬｙＳの成熟形態（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基１３４〜２８５もしくは配列番号３２２９のアミノ酸残基１３４〜２６６）またはそのフラグメントもしくは改変体からなる。他の特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヘテロマー性（特に、ヘテロトリマー性）のＢＬｙＳポリペプチド（例えば、２つのＢＬｙＳポリペプチドおよび１つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含むヘテロトリマーまたは１つのＢＬｙＳポリペプチドおよび２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含むヘテロトリマー）を結合し、そしてここで、ＢＬｙＳヘテロマーの個々のタンパク質成分は、いずれかのＢＬｙＳの成熟した細胞外可溶性部分（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基１３４〜２８５または配列番号３２２９のアミノ酸残基１３４〜２６６）またはそれらのフラグメントもしくは改変体、あるいはＡＰＲＩＬの成熟した細胞外可溶性部分（例えば、配列番号３２３９のアミノ酸残基１０５〜２５０）またはそのフラグメントもしくは改変体からなる。
【００４５】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳモノマー性タンパク質のコンホメーションエピトープを結合する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＬｙＳマルチマー性（特にトリマー性）タンパク質のコンホメーションエピトープを結合する。他の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、ＢＬｙＳがヘテロトリマー（例えば、ＡＰＲＩＬポリペプチド（例えば、配列番号３２３９）と）形成された場合またはＢＬｙＳと異種ポリペプチドとの間での融合タンパク質中に存在し得る、ＢＬｙＳと異種ポリペプチドとの並置から生じるコンホメーションエピトープを結合する。
【００４６】
本発明の抗体によって結合されるＢＬｙＳマルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合性結合の結果であり得、そして／または例えば、リポソーム形成によって間接的に連結され得る。従って、１つの実施形態では、ＢＬｙＳマルチマー（例えば、ホモダイマーまたはホモトリマー）は、本発明のポリペプチドが溶液中で互いに接触した場合に形成される。別の実施形態では、ＢＬｙＳヘテロマルチマー（例えば、ＢＬｙＳヘテロトリマーまたはＢＬｙＳヘテロテトラマー）は、本発明のポリペプチドが、本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質中に異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）と溶液中で接触した場合に形成される。他の実施形態では、ＢＬｙＳマルチマーは、本発明のＢＬｙＳポリペプチドとの、および／または本発明のＢＬｙＳポリペプチド間での共有結合性結合によって形成される。このような共有結合性結合は、このポリペプチド配列（例えば、配列番号３２２８または配列番号３２２９に記載されるポリペプチド配列）に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１つの例では、この共有結合性結合は、ネイティブな（すなわち、天然に存在する）ポリペプチド中で相互作用する、このポリペプチド配列内に位置するシステイン残基の間の架橋である。別の例では、この共有結合性結合は、化学的操作または組換え操作の結果である。あるいは、このような共有結合性結合は、ＢＬｙＳ融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列中に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１つの例では、共有結合性結合は、融合タンパク質中に含まれる異種配列の中に存在する（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。特定の例では、この共有結合性結合は、ＢＬｙＳ−Ｆｃ融合タンパク質中に含まれる異種配列の中に存在する。別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合性結合は、共有結合的に結合したマルチマーを形成し得る別のＴＮＦファミリーのリガンド／レセプターメンバー（例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｅｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）（例えば、その内容全体が本明細書中に参考として援用される、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５を参照のこと）由来の異種ポリペプチド配列の中に存在する。別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合性結合は、ＣＤ４０Ｌまたはその可溶性フラグメント由来の異種ポリペプチド配列の中に存在する。別の実施形態では、２以上のＢＬｙＳポリペプチドは、合成リンカー（例えば、ペプチド、糖質または可溶性ポリマーリンカー）を介して連結される。例としては、米国特許第５，０７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるペプチドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって隔てられた複数のＢＬｙＳポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて産生され得る。
【００４７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３２２８のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドもしくはＡＴＣＣ番号９７７６８に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるようなＢＬｙＳポリペプチド、または上記のポリペプチドの一部分（すなわち、フラグメント）を含むポリペプチドを免疫特異的に結合する。別の実施形態では、本発明は、配列番号３２２９のアミノ酸配列もしくはＡＴＣＣ番号２０３５１８に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有する単離されたＢＬｙＳポリペプチドを結合する抗体、または上記のポリペプチドの一部分（すなわち、フラグメント）を含むポリペプチドを結合する抗体を提供する。
【００４８】
本発明の抗体は、配列番号３２２８のアミノ酸配列、ＡＴＣＣ登録番号９７７６８を有するプラスミド中に含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、またはこの寄託されたクローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含むかあるいはこのアミノ酸配列からなるポリペプチドに免疫特異的に結合する。本発明の抗体はまた、配列番号３２２８のアミノ酸配列、ＡＴＣＣ登録番号９７７６８を有するプラスミド中に含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、またはこの寄託されたクローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列のフラグメントに結合する。
【００４９】
さらに、本発明の抗体は、配列番号３２２９のアミノ酸配列、ＡＴＣＣ登録番号２０３５１８を有するプラスミド中に含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、またはこの寄託されたクローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含むかあるいはこのアミノ酸配列からなるポリペプチドを結合する。本発明の抗体はまた、配列番号３２２９のアミノ酸配列、ＡＴＣＣ登録番号２０３５１８を有するプラスミド中に含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、またはこの寄託されたクローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列のフラグメントに結合する。
【００５０】
さらに、本発明の抗体は、配列番号３２３０〜配列番号３２３７に含まれるアミノ酸配列を含むかあるいはこのアミノ酸配列からなる、ポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントを結合する。
【００５１】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３２２８のアミノ酸配列、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、またはこの寄託されたクローンに含まれるヌクレオチド配列に（例えば、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含むかあるいはこのアミノ酸配列からなるポリペプチドを含むポリペプチドフラグメントを免疫特異的に結合する。タンパク質フラグメントは、「独立」していてもよく、またはこのフラグメントが（最も好ましくは単一の連続した領域として）一部もしくは一領域を形成する、より大きなポリペプチドに含まれてもよい。本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、配列番号３２２８のおよそのアミノ酸残基１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０および／または２５１〜２８５を含むかあるいはこれらのアミノ酸残基からなるフラグメントが挙げられる。さらに、ポリペプチドフラグメントは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１７５または２００アミノ酸長であり得る。
【００５２】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３２２８のアミノ酸残基１〜４６、３１〜４４、４７〜７２、７３〜２８５、７３〜８３、９４〜１０２、１４８〜１５２、１６６〜１８１、１８５〜２０９、２１０〜２２１、２２６〜２３７、２４４〜２４９、２５３〜２６５および／または２７７〜２８５を含むかあるいはこれらのアミノ酸残基からなるポリペプチドフラグメントを結合する。
【００５３】
配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチド配列に見出されない１９個のアミノ酸残基（すなわち、配列番号３２２９の配列のアミノ酸残基Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０）の挿入を含む、配列番号３２２８のＢＬｙＳポリペプチドの領域に標的化された変異が、ＢＬｙＳポリペプチドの観察された生物学的活性に影響を与え得ることが当業者によって認識される。より詳細には、変異について標的化され得る、ＢＬｙＳポリペプチド配列のこのような残基の部分的で非限定的でかつ非排他的なリストとしては、配列番号３２２８において示されるようなＢＬｙＳポリペプチド配列の以下のアミノ酸残基が挙げられる：Ｖ−１４２；Ｔ−１４３；Ｑ−１４４；Ｄ−１４５；Ｃ−１４６；Ｌ−１４７；Ｑ−１４８；Ｌ−１４９；Ｉ−１５０；Ａ−１５１；Ｄ−１５２；Ｓ−１５３；Ｅ−１５４；Ｔ−１５５；Ｐ−１５６；Ｔ−１５７；Ｉ−１５８；Ｑ−１５９；およびＫ−１６０。従って、特定の実施形態では、配列番号３２２８のＶ−１４２〜Ｋ−１６０の領域に１以上の変異を有するＢＬｙＳポリペプチドを結合する本発明の抗体が意図される。
【００５４】
ポリペプチドフラグメントは、「独立」していてもよく、またはこのフラグメントが（最も好ましくは単一の連続した領域として）一部もしくは一領域を形成する、より大きなポリペプチドに含まれてもよい。本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、配列番号３２２８に開示されるアミノ酸配列のおよそのアミノ酸残基１〜１５、１６〜３０、３１〜４６、４７〜５５、５６〜７２、７３〜１０４、１０５〜１６３、１６３〜１８８、１８６〜２１０および２１０〜２８４を含むかあるいはこれらのアミノ酸残基からなるフラグメントが挙げられる。本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドフラグメントのさらなる代表例としては、例えば、配列番号３２２９に開示されるアミノ酸配列のおよそのアミノ酸残基１〜１４３、１〜１５０、４７〜１４３、４７〜１５０、７３〜１４３、７３〜１５０、１００〜１５０、１４０〜１４５、１４２〜１４８、１４０〜１５０、１４０〜２００、１４０〜２２５および１４０〜２６６を含むかあるいはこれらのアミノ酸残基からなるフラグメントが挙げられる。さらに、本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドフラグメントは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１７５または２００アミノ酸長であり得る。この状況では、「およそ」は、特に記載された範囲、およびアミノ末端およびカルボキシ末端のいずれかまたは両方においていくつも（ｓｅｖｅｒａｌ）、いくつか（ａ　ｆｅｗ）、５、４、３、２または１のアミノ酸残基さらに大きいかまたは小さい範囲を意味する。
【００５５】
さらなる好ましい実施形態は、以下を含むかあるいは以下からなるポリペプチドフラグメントを結合する抗体を含む：ＢＬｙＳの推定細胞内ドメイン（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基１〜４６）、ＢＬｙＳの推定膜貫通ドメイン（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基４７〜７２）、ＢＬｙＳの推定細胞外ドメイン（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基７３〜２８５）、ＢＬｙＳの成熟可溶性細胞外ドメイン（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸残基１３４〜２８５）、ＢＬｙＳの推定ＴＮＦ保存ドメイン（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸１９１〜２８４）、およびＢＬｙＳの推定細胞外ドメインに融合された推定細胞内ドメイン（配列番号３２２８のアミノ酸残基７３〜２８５に融合されたアミノ酸残基１〜４６）を含むかまたはこれからなるポリペプチド。
【００５６】
なおさらなる好ましい実施形態は、以下を含むかあるいは以下からなるポリペプチドフラグメントを結合する抗体を含む：ＢＬｙＳの推定細胞内ドメイン（配列番号３２２９のアミノ酸残基１〜４６）、ＢＬｙＳの推定膜貫通ドメイン（配列番号３２２９のアミノ酸残基４７〜７２）、ＢＬｙＳの推定細胞外ドメイン（配列番号３２２９のアミノ酸残基７３〜２６６）、ＢＬｙＳの推定ＴＮＦ保存されたドメイン（配列番号３２２９のアミノ酸１７２〜２６５）、およびＢＬｙＳの推定細胞外ドメインに融合された推定細胞内ドメイン（配列番号３２２９のアミノ酸残基７３〜２６６に融合されたアミノ酸残基１〜４６）を含むかまたはこれからなるポリペプチド。
【００５７】
本発明の特定のさらなる実施形態は、配列番号３２２８および配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチドの推定βプリーツシート領域を含むかあるいはこの領域からなるポリペプチドフラグメントを結合する抗体を含む。ＢＬｙＳのβプリーツシートを含むポリペプチドフラグメントは、配列番号３２２８の以下のアミノ酸残基を含むかあるいは以下のアミノ酸残基からなる：Ｇｌｎ−１４４〜Ａｌａ−１５１、Ｐｈｅ−１７２〜Ｌｙｓ−１７３、Ａｌａ−１７７〜Ｇｌｕ−１７９、Ａｓｎ−１８３〜Ｉｌｅ−１８５、Ｇｌｙ−１９１〜Ｌｙｓ−２０４、Ｈｉｓ−２１０〜Ｖａｌ−２１９、Ｌｅｕ−２２６〜Ｐｒｏ−２３７、Ａｓｎ−２４２〜Ａｌａ−２５１、Ｇｌｙ−２５６〜Ｉｌｅ−２６３および／またはＶａｌ−２７６〜Ｌｅｕ２８４。別の非排他的な実施形態では、ＢＬｙＳのβプリーツシートを含むポリペプチドフラグメントは、配列番号３２２９の以下のアミノ酸残基を含むかあるいは以下のアミノ酸残基からなる：Ｐｈｅ−１５３〜Ｌｙｓ−１５４、Ａｌａ−１５８〜Ｇｌｕ−１６０、Ａｓｎ−１６４〜Ｉｌｅ−１６６、Ｇｌｙ１７２〜Ｌｙｓ−１８５、Ｈｉｓ−１９１〜Ｖａｌ−２００、Ｌｅｕ−２０７〜Ｐｒｏ−２１８、Ａｓｎ−２２３〜Ａｌａ−２３２、Ｇｌｙ−２３７〜Ｉｌｅ−２４４および／またはＶａｌ−２５７〜Ｌｅｕ−２６５。
【００５８】
本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドの部分的で非限定的でかつ例示的なリストとしては、本発明のアミノ酸配列の組合せを含むかあるいはこの組合せからなるポリペプチドが挙げられ、これとしては例えば、以下が挙げられる：配列番号３２２８の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］と融合した［Ｇｌｙ−１６１〜Ｇｌｎ−１９８］と融合した［Ｖａｌ−１９９〜Ａｌａ−２４８］と融合した［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］；または配列番号３２２８の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］と融合した［Ｇｌｙ−１６１〜Ｇｌｎ−１９８］と融合した［Ｖａｌ−１９９〜Ａｌａ−２４８］と融合した［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］；または配列番号３２２８の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］と融合した［Ｇｌｙ−１６１〜Ｇｌｎ−１９８］と融合した［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］。本発明の抗体によって結合され得るアミノ酸配列の他の組合せとしては、上記の順番以外の順番のポリペプチドフラグメント（例えば、配列番号３２２８の［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｖａｌ−１９９〜Ａｌａ−２４８］と融合した［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］と融合した［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］）が挙げられ得る。本発明の抗体によって結合され得るアミノ酸配列の他の組合せとしてはまた、本明細書中に記載された通りの異種ポリペプチドフラグメントおよび／または本発明の他のポリペプチドもしくはポリペプチドフラグメント（例えば、配列番号３２２８［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］と融合した［Ｇｌｙ−１６１〜Ｇｌｎ−１９８］と融合した［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］と融合したＦＬＡＧタグ；または配列番号３２２８の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した配列番号３２２８の［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した配列番号３２２９の［Ｇｌｕ−１３５〜Ａｓｎ−１６５］と融合した配列番号３２２８の［Ｖａｌ−１４２〜Ｌｙｓ−１６０］と融合した配列番号３２２８の［Ｇｌｙ−１６１〜Ｇｌｎ−１９８］と融合した配列番号３２２８の［Ｖａｌ−１９９〜Ａｌａ−２４８］と融合した配列番号３２２８の［Ｇｌｙ−２４９〜Ｌｅｕ−２８５］）が挙げられ得る。
【００５９】
本発明の抗体によって結合され得るポリペプチドの部分的で非限定的でかつ例示的なリストとしては、本発明のアミノ酸配列の組合せを含むかあるいはこの組合せからなるポリペプチドが挙げられ、これとしては例えば、以下が挙げられる：配列番号３２２９［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］と融合した［Ｖａｌ−１８０〜Ａｌａ−２２９］と融合した［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］；配列番号３２２９の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］と融合した［Ｖａｌ−１８０〜Ａｌａ−２２９］と融合した［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］；または配列番号３２２９の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］と融合した［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］。本発明の抗体によって結合され得るアミノ酸配列の他の組合せとしては、上記の順番以外の順番のポリペプチドフラグメント（例えば、配列番号３２２９の［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｖａｌ−１８０〜Ａｌａ−２２９］と融合した［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］と融合した［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］）が挙げられ得る。本発明の抗体によって結合され得るアミノ酸配列の他の組合せとしてはまた、本発明の抗体によって結合され得るアミノ酸配列の他の組合せとしてはまた、本明細書中に記載された通りの異種ポリペプチドフラグメントおよび／または本発明の他のポリペプチドもしくはポリペプチドフラグメント（例えば、配列番号３２２９の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］と融合した［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］と融合したＦＬＡＧタグ（配列番号３２３８）、または配列番号３２２９の［Ｍｅｔ−１〜Ｌｙｓ−１１３］と融合した配列番号３２２９の［Ｌｅｕ−１１４〜Ｔｈｒ−１４１］と融合した配列番号３２２９の［Ｇｌｕ−１３５〜Ａｓｎ−１６５］と融合した配列番号３２２９の［Ｇｌｙ−１４２〜Ｇｌｎ−１７９］と融合した配列番号３２２９の［Ｖａｌ−１８０〜Ａｌａ−２２９］と融合した配列番号３２２９の［Ｇｌｙ−２３０〜Ｌｅｕ−２６６］）が挙げられ得る。
【００６０】
本発明のさらなる実施形態は、本発明のポリペプチドの機能的領域（例えば、表９および表１０に示し、そして本明細書中に記載されるような、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα領域、β領域、ターン領域およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα領域、β領域およびコイル領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域および疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα両親媒性領域およびβ両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、Ｅｍｉｎｉの表面形成領域ならびに高い抗原性指数のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域）を含むかあるいはこれらの領域からなるＢＬｙＳポリペプチドフラグメントを結合する抗体を包含する。好ましい実施形態では、本発明の抗体によって結合されるポリペプチドフラグメントは、完全な（すなわち、全長の）ＢＬｙＳポリペプチド（例えば、配列番号３２２８および３２２９）の抗原性部分（すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメーターを用いて同定した場合に１．５以上の抗原性指数を有する４以上連続したアミノ酸を含む）である。
【００６１】
上記のような、配列番号３２２８のＢＬｙＳポリペプチドの構造的もしくは機能的寄与を示すデータ（表９）または配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチドの構造的もしくは機能的寄与を示すデータ（表１０）を、デフォルトパラメーターに設定したＤＮＡ＊ＳＴＡＲの種々のモジュールおよびアルゴリズムを用いて作成した。第Ｉ列は、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのαヘリックス領域分析の結果を表し；第ＩＩ列は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのαヘリックス領域分析の結果を表し；第ＩＩＩ列は、Ｇａｒｎｉｅｒ　Ｒｏｂｓｏｎのβシート領域分析の結果を表し；第ＩＶ列は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのβシート領域分析の結果を表し；第Ｖ列は、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのターン領域分析の結果を表し；第ＶＩ列は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのターン領域分析の結果を表し；第ＶＩＩ列は、Ｇａｒｎｉｅｒ　Ｒｏｂｓｏｎのコイル領域分析の結果を表し；第ＶＩＩＩ列は、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性プロットを表し；第ＩＸ列は、Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ疎水性プロットを表し；第Ｘ列は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα両親媒性領域分析の結果を表し；第ＸＩ列は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのβ両親媒性領域分析の結果を表し；第ＸＩＩ列は、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可塑性領域分析の結果を表し；第ＸＩＩＩ列は、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数スコアを表し；そして第ＸＩＶ列は、Ｅｍｉｎｉ表面確率プロットを表す。
【００６２】
好ましい実施形態では、表９および表１０の第ＶＩＩＩ列、第ＩＸ列、第ＸＩＩＩ列および第ＸＩＶ列に提示されるデータを用いて、配列番号３２２８のＢＬｙＳポリペプチド（表９）または配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチド（表１０）の、高い程度の抗原性可能性を示す領域を決定し得る。高抗原性領域は、抗原認識が、免疫応答の開始のプロセスにおいて起こり得る環境においてこのポリペプチドの表面上で露出されるようである、このポリペプチドの領域を表す値を選択することによって、第ＶＩＩＩ列、第ＩＸ列、第ＸＩＩＩ列および第ＸＩＶ列に提示されるデータから決定される。
【００６３】
表９および表１０に示される上記の好ましい領域としては、配列番号２に示されるアミノ酸配列の分析によって同定された上記の型の領域が挙げられるがこれらに限定されない。表９および表１０に示されるように、このような好ましい領域としては、以下が挙げられる：Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα領域、β領域、ターン領域およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα領域、β領域およびターン領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα両親媒性領域およびβ両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域、高い抗原性指数のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域、ならびにＥｍｉｎｉの表面形成領域。好ましくは、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドまたはＢＬｙＳポリペプチドフラグメント、ならびに、上記ならびに表９および表１０に示す同じまたは異なる領域の特徴のうちのいくつかの構造的特徴（例えば、いくつか（例えば、１、２、３または４）を組み合わせたＢＬｙＳ領域を含む改変体を結合する。
【００６４】
【表１】
2004509615.tif 000002
2004509615.tif 000003
2004509615.tif 000004
2004509615.tif 000005
2004509615.tif 000006
2004509615.tif 000007
【００６５】
【表２】
2004509615.tif 000008
2004509615.tif 000009
2004509615.tif 000010
2004509615.tif 000011
2004509615.tif 000012
2004509615.tif 000013
別の実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドのエピトープ保有部分を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供する。このポリペプチド部分のエピトープは、本発明のポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープであり得る。「免疫原性エピトープ」は、全タンパク質が免疫原である場合、抗体応答を顕在化させるタンパク質の部分として定義される。一方、抗体が結合し得るタンパク質分子領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。タンパク質の免疫原性エピトープの数は、一般的に抗原性エピトープの数より少ない。例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと。
【００６６】
抗原性エピトープを保有する（すなわち、抗体が結合し得るタンパク質分子の領域を含む）ポリペプチドの選択に関して、相対的にタンパク質配列の部分を模倣する短い合成ペプチドが、部分的に模倣されたタンパク質と反応する抗血清を慣用的に顕在化し得ることは、当該分野で周知である。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ、Ｊ．Ｇ．、Ｓｈｉｎｎｉｃｋ、Ｔ．Ｍ．、Ｇｒｅｅｎ、Ｎ．およびＬｅａｒｎｅｒ、Ｒ．Ａ．（１９８３）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｈａｔ　ｒｅａｃｔ　ｗｉｔｈ　ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｓｉｔｅｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２１９：６６０−６６６を参照のこと。タンパク質反応性血清を顕在化し得るペプチドは、タンパク質の一次配列において、しばしば現れ、１セットの単純な化学的ルールによって特徴付けられ得、そして、インタクトなタンパク質の主要抗原領域（すなわち、免疫原性エピトープ）またはアミノ末端もしくはカルボキシル末端のいずれにも拘束されない。従って、本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起するために有用である例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ　３７：７６７−７７８（１９８４）の７７７頁を参照のこと。
【００６７】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの免疫原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドを結合し、そして好ましくはＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に含まれる少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、そして最も好ましくは、約１５と約３０アミノ酸の間の配列を含む。免疫原性または抗原性エピトープを含む好ましいポリペプチドは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００アミノ酸残基長である。さらなる限定されない好ましい抗原性エピトープは、本明細書中に開示される抗原性エピトープ、およびその部分を含む。
【００６８】
ＢＬｙＳ特異的抗体を産生するために使用され得、そして本発明の抗体によって結合され得る抗原性ポリペプチドまたはペプチドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：配列番号３２２８の約Ｐｈｅ−１１５〜約Ｌｅｕ−１４７のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２８の約Ｉｌｅ−１５０〜約Ｔｙｒ−１６３のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２８の約Ｓｅｒ−１７１〜約Ｐｈｅ−１９４のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２８の約Ｇｌｕ−２２３〜約Ｔｙｒ−２４６のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチド；ならびに図１Ａおよび１Ｂ（配列番号３２２８）の約Ｓｅｒ−２７１〜約Ｐｈｅ−２７８のアミノ酸残基を含むか、あるいはそれらからなるポリペプチド。この文脈において、「約」は、アミノ末端およびカルボキシ末端のいずれかもしくは両方の末端において、特に記載された範囲、およびこれより数個の（少数の、５、４、３、２または１）アミノ酸残基だけ大きいかまたは小さい範囲を意味する。これらのポリペプチドフラグメントは、上の表９に開示されるようなＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性インデックスの解析によってＢＬｙＳポリペプチドの抗原性エピトープを保有するように決定されている。
【００６９】
ＢＬｙＳ特異的抗体を産生するために使用され得、そして本発明の抗体によって結合され得る抗原性ポリペプチドまたはペプチドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：配列番号３２２９の約Ｐｒｏ−３２〜約Ｌｅｕ−４７のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２９の約Ｇｌｕ−１１６〜約Ｓｅｒ−１４３のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２９の約Ｐｈｅ−１５３〜約Ｔｙｒ−１７３のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２９の約Ｐｒｏ−２１８〜約Ｔｙｒ−２２７のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２９の約Ａｌａ−２３２〜約Ｇｌｎ−２４１のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；配列番号３２２９の約Ｉｌｅ−２４４〜約Ａｌａ−２４９のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド；および配列番号３２２９の約Ｓｅｒ−２５２〜約Ｖａｌ−２５７のアミノ酸残基を含むか、またはそれらからなるポリペプチド。本文脈において、「約」は、アミノ末端およびカルボキシ末端のいずれかもしくは両方の末端において、特に記載された範囲、およびこれより数個の（少数の、５、４、３、２または１）アミノ酸残基だけ大きいかまたは小さい範囲を意味する。これらのポリペプチドフラグメントは、ＤＮＡ＊ＳＴＡＲコンピュータプログラムのＰｒｏｔｅａｎ成分によって生じた表１０に開示されるように（上に示されるように）Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性インデックスの解析によってＢＬｙＳポリペプチドの抗原性エピトープを保有するように決定されている。
【００７０】
ＢＬｙＳエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、任意の従来の方法によって生成され得る。例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、Ｒ．Ａ．（１９８５）Ｇｅｎｅｒａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓを参照のこと。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：５１３１−５１３５；この「Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＳＭＰＳ）」プロセスは、さらに米国特許第４、６３１、２１１号、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら（１９８６）に記載される。
【００７１】
本発明は、配列番号３２２８のアミノ酸配列を有するポリペプチドのエピトープ、またはＡＴＣＣ寄託番号９７７６８に含まれるポリヌクレオチド配列によってコードされるか、あるいはＡＴＣＣ寄託番号９７７６８に含まれるｃＤＮＡ配列に（例えば、本明細書中に記載されるハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド配列のエピトープを含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドを結合する抗体を含む。
【００７２】
本発明はまた、配列番号３２２９のアミノ酸配列を有するポリペプチドのエピトープ、またはＡＴＣＣ寄託番号２０３５１８に含まれるポリヌクレオチド配列によってコードされるか、あるいはＡＴＣＣ寄託番号２０３５１８に含まれるｃＤＮＡ配列に（例えば、本明細書中に記載されるハイブリダイゼーション条件下で）ハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド配列のエピトープを含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドを結合する抗体を含む。
【００７３】
本明細書中に使用される場合、用語「エピトープ」は、動物において、好ましくは哺乳動物において、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または免疫原性活性を有するポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、本発明は、エピトープを含むポリペプチドを結合する抗体を含む。「免疫原性エピトープ」とは、本明細書中で使用される場合、当該分野で公知の任意の方法によって決定されるような（例えば、下記に記載される抗体を産生するための方法による）、動物における抗体応答を惹起するタンパク質の一部として定義される（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。用語「抗原性エピトープ」とは、本明細書中で使用される場合、当該分野で周知の任意の方法（例えば、本明細書中に記載されるイムノアッセイによる）によって決定されるような、抗体がその抗原を免疫特異的に結合し得るタンパク質の一部として定義される。免疫特異的結合は、非特異的結合は除外するが、他の抗原との交差反応を除外する必要はない。抗原性エピトープは、免疫原性である必要はない。
【００７４】
エピトープとして機能するＢＬｙＳポリペプチドフラグメントは、任意の従来の方法によって生成され得る。任意の従来の方法によって産生され得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：５１３１−５１３５（１９８５）を参照のこと。これはさらに、米国特許第４，６３１，２１１号に記載される）。
【００７５】
本発明においては、本発明の抗体は、好ましくは、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、より好ましくは、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、そして最も好ましくは約１５アミノ酸と約３０アミノ酸との間の配列を含む抗原性エピトープを結合する。本発明の抗体によって結合され得る免疫原性エピトープまたは抗原性エピトープを含有する好ましいポリペプチドは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸残基の長さである。さらなる非排他的に好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で開示される抗原性エピトープおよびその一部を含む。抗原性エピトープは、例えば、エピトープを特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起するために有用である。好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で開示される抗原性エピトープ、およびこれらの免疫原性エピトープの２つ、３つ、４つ、５つ以上の任意の組み合わせを含む。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、標的分子として使用され得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ　３７：７６７−７７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２１９：６６０−６６６（１９８３）を参照のこと）。
【００７６】
同様に、免疫原性エピトープを使用して、例えば、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら（前出）；Ｗｉｌｓｏｎら（前出）；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピトープは、本明細書で開示された免疫原性エピトープ、ならびにこれらの免疫原性エピトープの２つ、３つ、４つ、５つ以上の任意の組み合わせを含む。ＢＬｙＳの１つ以上の免疫原性エピトープを含むポリペプチドは、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）とともに動物系（例えば、ウサギまたはマウス）に対する抗体応答を惹起するために提示され得るか、または、そのポリペプチドが十分に長い場合では（少なくとも約２５アミノ酸）、このポリペプチドはキャリアなしで提示され得る。しかし、８〜１０程度のわずかなアミノ酸を含む免疫原性エピトープは、変性されたポリペプチドの直鎖エピトープに（非常に少なくとも）結合し得る抗体を惹起するのに十分であることが示されている（例えば、ウエスタンブロッティングにおいて）。
【００７７】
本発明のエピトープ保有ＢＬｙＳポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導するために使用され得る。この方法としては、インビボ免疫、インビトロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら，前出；Ｗｉｌｓｏｎら，前出；およびＢｉｔｔｌｅら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと。インビボ免疫を使用する場合、動物を遊離ペプチドを用いて免疫し得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ｈｅｍａｃｙａｎｉｎ）（ＫＬＨ）または破傷風トキソイド）にペプチドを結合させることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペプチドは、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のようなリンカーを用いてキャリアに結合され得る。その一方、他のペプチドは、より一般的な結合剤（例えば、グルタルアルデヒド）を用いてキャリアに結合され得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチドまたはキャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、エマルジョン（約１００μｇのペプチドまたはキャリアタンパク質およびフロイントアジュバントまたは免疫応答を刺激すると知られる任意の他のアジュバントを含む）の腹腔内注射および／または皮内注射により免疫される。いくつかのブースター注射が、抗ペプチド抗体の有用な力価を提供するために、例えば、約２週間の間隔で、必要とされ得る。この力価は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチドを用いるＥＬＩＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中の抗ペプチド抗体の力価は、抗ペプチド抗体の選択（例えば、当該分野で周知の方法に従う固体支持体上のペプチドの吸着および選択された抗体の溶出による）により上昇し得る。
【００７８】
当業者に明らかなように、そして上記で考察されるように、本発明の抗体は、他のポリペプチド配列に融合された免疫原性エピトープまたは抗原性エピトープを含むポリペプチドを結合し得る。例えば、ＢＬｙＳポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の組み合わせおよびそれらの部分）、あるいはアルブミン（組換えヒトアルブミンまたはそのフラグメントもしくは改変体（例えば、１９９９年３月２日発行の米国特許第５，８７６，９６９号、欧州特許第０　４１３　６２２号、および１９９８年６月１６日発行の米国特許第５，７６６，８８３号（これらは、本明細書によってその全体において参考として援用される）を参照のこと）を含むが、限定はされない）と融合され得、キメラポリペプチドを生じる。このような融合タンパク質は、精製を容易にし得、そしてインビボでの半減期を増大させ得る。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質について示されている。例えば、ＥＰ　３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８８）を参照のこと。上皮の障壁を横切る抗原の免疫系への増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃフラグメントのようなＦｃＲｎ結合パートナーへ結合された抗原（例えば、インスリン）について実証されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４および同ＷＯ９９／０４８１３を参照のこと）。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合に起因するジスルフィド結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、モノマーポリペプチドまたはそれらのフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和においてより効率的であることが見出されている。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）を参照のこと。上記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（例えば、赤血球凝集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグ（ｆｌａｇ）タグ）として目的の遺伝子と組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。例えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載される系は、ヒト細胞株中で発現される未変性融合タンパク質の容易な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８８：８９７２−８９７）。この系において、目的の遺伝子は、ワクシニア組換えプラスミドへサブクローン化され、その結果、この遺伝子のオープンリーディングフレームが、６つのヒスチジン残基からなるアミノ末端タグへ翻訳時に融合される。このタグは、融合タンパク質についてのマトリクス結合ドメインとしての機能を果たす。組換えワクシニアウイルスを用いて感染された細胞からの抽出物は、Ｎｉ２＋ニトリロ酢酸−アガロースカラム上へロードされ、そしてヒスチジンタグ化タンパク質が、イミダゾール含有緩衝液を用いて選択的に溶出され得る。
【００７９】
別の実施形態において、本発明の抗体は、異種抗原（例えば、ポリペプチド、炭水化物、リン脂質、もしくは核酸）と融合されたＢＬｙＳポリペプチドおよび／またはそれらのエピトープ保有フラグメントを結合する。特異的な実施形態において、異種抗原は、免疫原である。
【００８０】
より特定の実施形態において、異種抗原は、ＨＩＶのｇｐ１２０タンパク質、またはそのフラグメントである。
【００８１】
別の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドおよび／または別のＴＮＦリガンドファミリーメンバーのポリペプチド配列と融合されたそれらのエピトープ保有フラグメント（または生物学的に活性なフラグメントもしくはそれらの改変体）を含む。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＣＤ４０Ｌポリペプチド配列と融合された本発明のＢＬｙＳポリペプチドを結合する。好ましい実施形態において、ＣＤ４０Ｌポリペプチド配列は、可溶性である。
【００８２】
別の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのランダム変異誘発によって、エラー傾向があるＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または組換え前の他の方法によって変異体ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。別の実施形態において、本発明の抗体は、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、セクション、パーツ、ドメイン、フラグメントなどで組換えられたＢＬｙＳの１つ以上の成分、モチーフ、セクション、パーツ、ドメイン、フラグメントなどを結合する。好ましい実施形態において、異種分子は、例えば、ＴＮＦ−α、リンホトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしてまた公知）、ＬＴ−β（複合ヘテロダイマーＬＴ−α２−βに見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際公開番号第ＷＯ９６／１４３２８号）、ＡＩＭ−Ｉ（国際公開番号第ＷＯ９７／３３８９９号）、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開番号第ＷＯ９７／３４９１１号）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン（ｅｎｄｏｋｉｎｅ）−α（国際公開番号第ＷＯ９８／０７８８０号）、ＯＰＧ、ＯＸ４０、および神経成長因子（ＮＧＦ）、ならびにＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０および４−ＩＢＢの可溶性形態、ＴＲ２（国際公開番号第ＷＯ９６／３４０９５号）、ＤＲ３（国際公開番号第ＷＯ９７／３３９０４号）、ＤＲ４（国際公開番号第ＷＯ９８／３２８５６号）、ＴＲ５（国際公開番号第ＷＯ９８／３０６９３号）、ＴＲ６（国際公開番号第ＷＯ９８／３０６９４号）、ＴＲ７（国際公開番号第ＷＯ９８／４１６２９号）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号第ＷＯ９８／５６８９２号）、ＴＲ１０（国際公開番号第ＷＯ９８／５４２０２号）、３１２Ｃ２（国際公開番号第ＷＯ９８／０６８４２号）、ＴＲ１２、ＣＡＤ、ならびにｖ−ＦＬＩＰである。さらなる実施形態において、異種分子は、ＴＮＦファミリーの任意のメンバーである。
【００８３】
別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、可溶性ＡＰＲＩＬポリペプチド（例えば、配列番号３２３９のアミノ酸残基１０５〜２５０）、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントもしくは改変体と融合される本発明のＢＬｙＳポリペプチド（それらの生物学的に活性なフラグメントまたは改変体を含む）を結合する。
【００８４】
ＢＬｙＳポリペプチドの特徴を改良または変更するために、タンパク質工学が利用され得る。当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術を使用して、新規変異体タンパク質、すなわち「単一のまたは複数のアミノ酸置換、欠失、付加または融合タンパク質を含むムテイン」を作製し得る。このように改変されたポリペプチドは、例えば、高められた活性または増加した安定性を示し得る。さらに、これらは、高い収率で精製され得、そして少なくとも特定の精製および貯蔵条件下で対応する天然のポリペプチドよりもよい可溶性を示し得る。例えば、多くのタンパク質について、分泌タンパク質の細胞外ドメインまたは成熟形態を含み、１つ以上のアミノ酸が生物学的機能の実質的な損失なしにＮ末端またはＣ末端から欠失され得ることは、当該分野で公知である。例えば、３、８、または２７アミノ末端アミノ酸がない場合でさえ、ヘパリン結合活性を有する改変ＫＧＦタンパク質が報告された（Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：２９８４−２９８８（１９９３））。従って、本発明の抗体は、タンパク質工学によって生成されたＢＬｙＳポリペプチド変異体または改変体を結合し得る。
【００８５】
本発明の場合、本発明のタンパク質は、ＴＮＦポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号３２２８の１９１位のＧｌｙ（Ｇ）残基までのＮ末端アミノ酸の欠失は、いくつかの生物学的活性（例えば、リンパ球（例えばＢ細胞）増殖、分化および／または活性化を刺激する能力、ならびに適切な標的細胞に対する細胞傷害性）を維持し得る。Ｇｌｙ（Ｇ）残基を含むＮ末端欠失をさらに有するポリペプチドは、生物学的活性を維持することは期待されない。これは、ＴＮＦ関連ポリペプチドにおけるこの残基が、生物学的活性に必要とされる保存ドメインの始まりだからである。しかし、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じる場合でさえ、他の機能的な活性は、まだ維持され得る。従って、短縮タンパク質が、このタンパク質の完全または細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する能力は、このタンパク質の完全または細胞外ドメインの主要ではない残基がＮ末端から除去される場合、一般的に維持される。完全タンパク質のＮ末端残基を欠失する特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を維持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法によって容易に決定され得る。
【００８６】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２８のＢＬｙＳのアミノ酸配列（１９１位のグリシン残基まで）（アミノ末端からＧｌｙ−１９１残基）のアミノ末端から１つ以上の残基を欠失したポリペプチドを結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８の残基ｎ１〜２８５のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供する。ここで、ｎ１は、配列番号３２２８中のアミノ酸配列のアミノ酸残基２〜１９０のアミノ酸位置の範囲の整数である。さらに詳細には、本発明は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供する：
【００８７】
【化１】
2004509615.tif 000014
。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性であるアミノ酸残基の連続配列を含むか、あるいはそれらからなるＢＬｙＳポリペプチドを結合する抗体に指向される。
【００８８】
さらに、本発明のＢＬｙＳポリペプチドの推定細胞外ドメインは、それ自体生物学的活性を惹起し得るので、このポリペプチドの推定細胞外領域（配列番号３２２８のＧｌｎ−７３〜Ｌｅｕ−２８５の全位置）からのＮ末端およびＣ末端アミノ酸の欠失は、いくつかの生物学的活性（例えば、リガンド結合、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）増殖、分化、および／または活性化の刺激、ならびに細胞複製の調節または標的細胞活性の調節）を維持し得る。しかし、ＢＬｙＳポリペプチドの推定細胞外ドメインのＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失がこのポリペプチドの１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じる場合でさえ、他の機能的な活性は、また維持され得る。従って、短縮ポリペプチドが、このポリペプチドの完全または成熟または細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／あるいは結合する能力は、このポリペプチドの完全または成熟または細胞外ドメインの主要ではない残基がＮ末端から除去される場合、一般的に維持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基を欠失する特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を維持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法によって容易に決定され得る。
【００８９】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳのアミノ酸配列（位置番号２８０のグリシン残基まで）のアミノ末端から１つ以上の残基を欠失したポリペプチドを結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８の残基ｎ２〜２８５のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供する。ここで、ｎ２は、配列番号３２２８中のアミノ酸残基７３〜２８０のアミノ酸位置の範囲の整数であり、そして、７３はＢＬｙＳポリペプチド（配列番号３２２８に開示される）の推定細胞外ドメインのＮ末端から最初の残基の位置である。より詳細には、特定の実施形態において、本発明は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供する：
【００９０】
【化２】
2004509615.tif 000015
2004509615.tif 000016
。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性であるアミノ酸残基の連続配列を含むか、あるいはそれらからなるＢＬｙＳポリペプチドを結合する抗体に関する。
【００９１】
本発明の大いに好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも８０％、８５％、９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。
【００９２】
本発明の好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。本発明のより好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。本発明のより好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９６％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。
【００９３】
さらに、本発明のより好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９７％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。さらに、本発明のより好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９８％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。さらに、本発明のより好ましい実施形態は、配列番号３２２８の１３４位〜２８５位のアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドに少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する抗体に関する。
【００９４】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの以下のＮ末端欠失ポリペプチドフラグメントの１つを含むか、またはそれらからなるポリペプチドを結合する：配列番号３２２８のアミノ酸残基Ａｌａ−７１〜Ｌｅｕ−２８５、アミノ酸残基Ａｌａ−８１〜Ｌｅｕ−２８５、アミノ酸残基Ａｌａ−１１２〜Ｌｅｕ−２８５、アミノ酸残基Ａｌａ−１３４〜Ｌｅｕ−２８５、アミノ酸残基Ｌｅｕ−１４７〜Ｌｅｕ−２８５、およびアミノ酸残基Ｇｌｙ−１６１〜Ｌｅｕ−２８５。
【００９５】
同様に、生物学的に機能的なＣ末端欠失ポリペプチドの多くの例は、公知である。例えば、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失させた後、１０倍までのより高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　７：１９９−２１６（１９８８））。本発明のタンパク質は、ＴＮＦポリペプチドファミリーのメンバーであるので、２８４位のロイシン残基までのＣ末端アミノ酸の欠失は、全ての生物学的活性ではないがほとんどの生物学的活性（例えば、リガンド結合、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）増殖、分化、および／または活性化を刺激する能力、ならびに細胞複製の調節）を維持すると予測される。約１０までのさらなるＣ末端残基の欠失（すなわち、２７４位のグリシン残基まで）を有するポリペプチドはまた、レセプター結合のようないくつかの活性を維持し得るが、このようなポリペプチドは、配列番号３２２８のＬｅｕ−２８４まで伸長する保存ＴＮＦドメインの部分を欠く。しかし、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失がこのタンパク質の１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じる場合でさえ、他の機能的な活性は、また維持され得る。従って、短縮タンパク質が、完全タンパク質または成熟タンパク質を認識する抗体を誘導および／または結合する能力は、この完全タンパク質または成熟タンパク質の主要ではない残基がＣ末端から除去される場合、一般的に維持される。完全タンパク質のＣ末端残基を欠失する特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を維持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の方法によって容易に決定され得る。
【００９６】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２８のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から、２７４位のグリシン残基（Ｇｌｙ−２７４）までの１つ以上の残基が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８のアミノ酸配列の残基１−ｍ１のアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドを結合する抗体を提供し、ここで、ｍ１は、配列番号３２２８におけるアミノ酸残基２７４〜２８４のアミノ酸位置の範囲の任意の整数である。より詳細には、本発明は、配列番号３２２８の残基１〜２７４、１〜２７５、１〜２７６、１〜２７７、１〜２７８、１〜２７９、１〜２８０、１〜２８１、１〜２８２、１〜２８３および１〜２８４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体を提供する。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【００９７】
アミノ末端およびカルボキシ末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失したＢＬｙＳポリペプチドを含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体がさらに提供され、これらは、配列番号３２２８の残基ｎ１−ｍｌを有するように一般に記載され得、ここで、ｎ１およびｍ１は、上記で規定した通りの整数である。ＡＴＣＣ受託番号９７７６８に含まれる寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる完全ＢＬｙＳアミノ酸配列の部分を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体もまた含まれ、ここで、この部分は、寄託されたプラスミドにおいてｃＤＮＡクローンによってコードされる完全アミノ酸配列のアミノ末端から１〜１９０アミノ酸、またはＣ末端から１〜１１アミノ酸を（あるいは、これらのＮ末端欠失およびＣ末端欠失の任意の組み合わせ）除外する。
【００９８】
同様に、ＢＬｙＳの予測される細胞外ドメインのＣ末端アミノ酸残基の、配列番号３２２８の７９位のロイシン残基までの欠失は、いくつかの生物学的活性（例えば、リガンド結合、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）の増殖、分化、および／または活性化の刺激、ならびに細胞複製の調節または標的細胞活性の調節）を保持し得る。配列番号３２２８のＬｅｕ−７９を含むさらなるＣ末端欠失を有するポリペプチドは、生物学的活性を保持するとは予期されない。
【００９９】
しかし、ポリペプチドのＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このポリペプチドの１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性は、依然として保持され得る。従って、ポリペプチドの完全形態、成熟形態または細胞外形態を認識する抗体を誘導および／または結合するこの短縮ポリペプチドの能力は、一般に、このポリペプチドの完全形態、成熟形態または細胞外形態の残基の大部分未満がＣ末端から除去される場合に、保持される。予測される細胞外ドメインのＣ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって、容易に決定され得る。
【０１００】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳポリペプチドの予測される細胞外ドメインのアミノ酸配列のカルボキシ末端から、配列番号３２２８の７９位のロイシン残基まで１つ以上の残基が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８におけるアミノ酸配列の残基７３−ｍ２のアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｍ２は、配列番号３２２８におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基７９〜２８５のアミノ酸位置の範囲の任意の整数であり、そして残基７８は、予測されるＢＬｙＳポリペプチド（配列番号３２２８に開示される）の細胞外ドメインのＣ末端での最初の残基の位置である。より詳細には、特定の実施形態において、本発明は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｑ−７３〜Ｌｅｕ−２８５；Ｑ−７３〜Ｌ−２８４；Ｑ−７３〜Ｋ−２８３；Ｑ−７３〜Ｌ−２８２；Ｑ−７３〜Ａ−２８１；Ｑ−７３〜Ｇ−２８０；Ｑ−７３〜Ｆ−２７９；Ｑ−７３〜Ｆ−２７８；Ｑ−７３〜Ｔ−２７７；Ｑ−７３〜Ｖ−２７６；Ｑ−７３〜Ｄ−２７５；Ｑ−７３〜Ｇ−２７４；Ｑ−７３〜Ｄ−２７３；Ｑ−７３〜Ｌ−２７２；Ｑ−７３〜Ｓ−２７１；Ｑ−７３〜Ｉ−２７０；Ｑ−７３〜Ｑ−２６９；Ｑ−７３〜Ａ−２６８；Ｑ−７３〜Ｎ−２６７；Ｑ−７３〜Ｅ−２６６；Ｑ−７３〜Ｒ−２６５；Ｑ−７３〜Ｐ−２６４；Ｑ−７３〜Ｉ−２６３；Ｑ−７３〜Ａ−２６２；Ｑ−７３〜Ｌ−２６１；Ｑ−７３〜Ｑ−２６０；Ｑ−７３〜Ｌ−２５９；Ｑ−７３〜Ｅ−２５８；Ｑ−７３〜Ｄ−２５７；Ｑ−７３〜Ｇ−２５６；Ｑ−７３〜Ｅ−２５５；Ｑ−７３〜Ｅ−２５４；Ｑ−７３〜Ｌ−２５３；Ｑ−７３〜Ｋ−２５２；Ｑ−７３〜Ａ−２５１；Ｑ−７３〜Ｉ−２５０；Ｑ−７３〜Ｇ−２４９；Ｑ−７３〜Ａ−２４８；Ｑ−７３〜Ｓ−２４７；Ｑ−７３〜Ｙ−２４６；Ｑ−７３〜Ｃ−２４５；Ｑ−７３〜Ｓ−２４４；Ｑ−７３〜Ｎ−２４３；Ｑ−７３〜Ｎ−２４２；Ｑ−７３〜Ｐ−２４１；Ｑ−７３〜Ｌ−２４０；Ｑ−７３〜Ｔ−２３９；Ｑ−７３〜Ｅ−２３８；Ｑ−７３〜Ｐ−２３７；Ｑ−７３〜Ｍ−２３６；Ｑ−７３〜Ｎ−２３５；Ｑ−７３〜Ｑ−２３４；Ｑ−７３〜Ｉ−２３３；Ｑ−７３〜Ｃ−２３２；Ｑ−７３〜Ｒ−２３１；Ｑ−７３〜Ｆ−２３０；Ｑ−７３〜Ｌ−２２９；Ｑ−７３〜Ｔ−２２８；Ｑ−７３〜Ｖ−２２７；Ｑ−７３〜Ｌ−２２６；Ｑ−７３〜Ｓ−２２５；Ｑ−７３〜Ｌ−２２４；Ｑ−７３〜Ｅ−２２３；Ｑ−７３〜Ｄ−２２２；Ｑ−７３〜Ｇ−２２１；Ｑ−７３〜Ｆ−２２０；Ｑ−７３〜Ｖ−２１９；Ｑ−７３〜Ｈ−２１８；Ｑ−７３〜Ｖ−２１７；Ｑ−７３〜Ｋ−２１６；Ｑ−７３〜Ｋ−２１５；Ｑ−７３〜Ｒ−２１４；Ｑ−７３〜Ｑ−２１３；Ｑ−７３〜Ｉ−２１２；Ｑ−７３〜Ｌ−２１１；Ｑ−７３〜Ｈ−２１０；Ｑ−７３〜Ｇ−２０９；Ｑ−７３〜Ｍ−２０８；Ｑ−７３〜Ａ−２０７；Ｑ−７３〜Ｙ−２０６；Ｑ−７３〜Ｔ−２０５；Ｑ−７３〜Ｋ−２０４；Ｑ−７３〜Ｄ−２０３；Ｑ−７３〜Ｔ−２０２；Ｑ−７３〜Ｙ−２０１；Ｑ−７３〜Ｌ−２００；Ｑ−７３〜Ｖ−１９９；Ｑ−７３〜Ｑ−１９８；Ｑ−７３〜Ｇ−１９７；Ｑ−７３〜Ｙ−１９６；Ｑ−７３〜Ｉ−１９５；Ｑ−７３〜Ｆ−１９４；Ｑ−７３〜Ｆ−１９３；Ｑ−７３〜Ｙ−１９２；Ｑ−７３〜Ｇ−１９１；Ｑ−７３〜Ｔ−１９０；Ｑ−７３〜Ｅ−１８９；Ｑ−７３〜Ｋ−１８８；Ｑ−７３〜Ｖ−１８７；Ｑ−７３〜Ｌ−１８６；Ｑ−７３〜Ｉ−１８５；Ｑ−７３〜Ｋ−１８４；Ｑ−７３〜Ｎ−１８３；Ｑ−７３〜Ｅ−１８２；Ｑ−７３〜Ｋ−１８１；Ｑ−７３〜Ｅ−１８０；Ｑ−７３〜Ｅ−１７９；Ｑ−７３〜Ｌ−１７８；Ｑ−７３〜Ａ−１７７；Ｑ−７３〜Ｓ−１７６；Ｑ−７３〜Ｇ−１７５；Ｑ−７３〜Ｒ−１７４；Ｑ−７３〜Ｋ−１７３；Ｑ−７３〜Ｆ−１７２；Ｑ−７３〜Ｓ−１７１；Ｑ−７３〜Ｌ−１７０；Ｑ−７３〜Ｌ−１６９；Ｑ−７３〜Ｗ−１６８；Ｑ−７３〜Ｐ−１６７；Ｑ−７３〜Ｖ−１６６；Ｑ−７３〜Ｆ−１６５；Ｑ−７３〜Ｔ−１６４；Ｑ−７３〜Ｙ−１６３；Ｑ−７３〜Ｓ−１６２；Ｑ−７３〜Ｇ−１６１；Ｑ−７３〜Ｋ−１６０；Ｑ−７３〜Ｑ−１５９；Ｑ−７３〜Ｉ−１５８；Ｑ−７３〜Ｔ−１５７；Ｑ−７３〜Ｐ−１５６；Ｑ−７３〜Ｔ−１５５；Ｑ−７３〜Ｅ−１５４；Ｑ−７３〜Ｓ−１５３；Ｑ−７３〜Ｄ−１５２；Ｑ−７３〜Ａ−１５１；Ｑ−７３〜Ｉ−１５０；Ｑ−７３〜Ｌ−１４９；Ｑ−７３〜Ｑ−１４８；Ｑ−７３〜Ｌ−１４７；Ｑ−７３〜Ｃ−１４６；Ｑ−７３〜Ｄ−１４５；Ｑ−７３〜Ｑ−１４４；Ｑ−７３〜Ｔ−１４３；Ｑ−７３〜Ｖ−１４２；Ｑ−７３〜Ｔ−１４１；Ｑ−７３〜Ｅ−１４０；Ｑ−７３〜Ｅ−１３９；Ｑ−７３〜Ｐ−１３８；Ｑ−７３〜Ｇ−１３７；Ｑ−７３〜Ｑ−１３６；Ｑ−７３〜Ｖ−１３５；Ｑ−７３〜Ａ−１３４；Ｑ−７３〜Ｒ−１３３；Ｑ−７３〜Ｋ−１３２；Ｑ−７３〜Ｎ−１３１；Ｑ−７３〜Ｒ−１３０；Ｑ−７３〜Ｓ−１２９；Ｑ−７３〜Ｎ−１２８；Ｑ−７３〜Ｑ−１２７；Ｑ−７３〜Ｓ−１２６；Ｑ−７３〜Ｓ−１２５；Ｑ−７３〜Ｎ−１２４；Ｑ−７３〜Ｇ−１２３；Ｑ−７３〜Ｅ−１２２；Ｑ−７３〜Ｇ−１２１；Ｑ−７３〜Ｐ−１２０；Ｑ−７３〜Ａ−１１９；Ｑ−７３〜Ｐ−１１８；Ｑ−７３〜Ｐ−１１７；Ｑ−７３〜Ｅ−１１６；Ｑ−７３〜Ｆ−１１５；Ｑ−７３〜Ｉ−１１４；Ｑ−７３〜Ｋ−１１３；Ｑ−７３〜Ｌ−１１２；Ｑ−７３〜Ｇ−ｌｌｌ；Ｑ−７３〜Ａ−１１０；Ｑ−７３〜Ｔ−１０９；Ｑ−７３〜Ｖ−１０８；Ｑ−７３〜Ａ−１０７；Ｑ−７３〜Ｐ−１０６；Ｑ−７３〜Ａ−１０５；Ｑ−７３〜Ｅ−１０４；Ｑ−７３〜Ｅ−１０３；Ｑ−７３〜Ｌ−１０２；Ｑ−７３〜Ｇ−１０１；Ｑ−７３〜Ａ−１００；Ｑ−７３〜Ｋ−９９；Ｑ−７３〜Ｐ−９８；Ｑ−７３〜Ａ−９７；Ｑ−７３〜Ｇ−９６；Ｑ−７３〜Ａ−９５；Ｑ−７３〜Ｇ−９４；Ｑ−７３〜Ａ−９３；Ｑ−７３〜Ｐ−９２；Ｑ−７３〜Ｌ−９１；Ｑ−７３〜Ｋ−９０；Ｑ−７３〜Ｅ−８９；Ｑ−７３〜Ａ−８８；Ｑ−７３〜Ｈ−８７；Ｑ−７３〜Ｈ−８６；Ｑ−７３〜Ｇ−８５；Ｑ−７３〜Ｑ−８４；Ｑ−７３〜Ｌ−８３；Ｑ−７３〜Ｅ−８２；Ｑ−７３〜Ａ−８１；Ｑ−７３〜Ｒ−８０；およびＱ−７３〜Ｌ−７９。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１０１】
本発明はまた、ＢＬｙＳの推定細胞外ドメインのアミノ末端およびカルボキシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供し、これらは、配列番号３２２８の残基ｎ２−ｍ２を有するように一般に記載され得、ここで、ｎ２およびｍ２は、上記で規定された通りの整数である。
【０１０２】
別の実施形態において、本発明の抗体は、ＡＴＣＣ受託番号９７７６８を有する寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミドによってコードされるＢＬｙＳアミノ酸配列の細胞外ドメインの部分を含むポリペプチドに結合し、ここで、この部分は、ＡＴＣＣ受託番号９７７６８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列の細胞外ドメインのアミノ末端から、１〜約２０６アミノ酸を除外するか、またはＡＴＣＣ受託番号９７７６８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸の細胞外ドメインのカルボキシ末端から、１〜約２０６アミノ酸を除外するか、あるいはＡＴＣＣ受託番号９７７６８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列の細胞外ドメイン全体の、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端欠失の任意の組み合わせを除外する。
【０１０３】
上記のように、ポリペプチドのＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このポリペプチドの１つ以上の機能的活性（例えば、生物学的活性）の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性または生物学的活性は、依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの全長形態または成熟形態、あるいは細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ＢＬｙＳムテインの能力は、一般に、このポリペプチドの全長または成熟また細胞外ドメインの残基の大部分未満がＮ末端から除去される場合、保持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。多くのＮ末端アミノ酸残基が欠失したＢＬｙＳムテインは、いくつかの機能的（例えば、生物学的または免疫原性）活性を保持し得るようである。実際に、６つほどの少ないＢＬｙＳアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば、免疫応答を惹起し得る。
【０１０４】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳの推定全長アミノ酸配列のアミノ末端から、配列番号３２２８に示される配列の２８０位のグリシン残基までの１つ以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８に示される配列の残基ｎ３−２８５のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｎ３は、配列番号３２２８におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２８０のアミノ酸位置の範囲の任意の整数である。
【０１０５】
より詳細には、本発明は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｄ−２〜Ｌ−２８５；Ｄ−３〜Ｌ−２８５；Ｓ−４〜Ｌ−２８５；Ｔ−５〜Ｌ−２８５；Ｅ−６〜Ｌ−２８５；Ｒ−７〜Ｌ−２８５；Ｅ−８〜Ｌ−２８５；Ｑ−９〜Ｌ−２８５；Ｓ−１０〜Ｌ−２８５；Ｒ−１１〜Ｌ−２８５；Ｌ−１２〜Ｌ−２８５；Ｔ−１３〜Ｌ−２８５；Ｓ−１４〜Ｌ−２８５；Ｃ−１５〜Ｌ−２８５；Ｌ−１６〜Ｌ−２８５；Ｋ−１７〜Ｌ−２８５；Ｋ−１８〜Ｌ−２８５；Ｒ−１９〜Ｌ−２８５；Ｅ−２０〜Ｌ−２８５；Ｅ−２１〜Ｌ−２８５；Ｍ−２２〜Ｌ−２８５；Ｋ−２３〜Ｌ−２８５；Ｌ−２４〜Ｌ−２８５；Ｋ−２５〜Ｌ−２８５；Ｅ−２６〜Ｌ−２８５；Ｃ−２７〜Ｌ−２８５；Ｖ−２８〜Ｌ−２８５；Ｓ−２９〜Ｌ−２８５；Ｉ−３０〜Ｌ−２８５；Ｌ−３１〜Ｌ−２８５；Ｐ−３２〜Ｌ−２８５；Ｒ−３３〜Ｌ−２８５；Ｋ−３４〜Ｌ−２８５；Ｅ−３５〜Ｌ−２８５；Ｓ−３６〜Ｌ−２８５；Ｐ−３７〜Ｌ−２８５；Ｓ−３８〜Ｌ−２８５；Ｖ−３９〜Ｌ−２８５；Ｒ−４０〜Ｌ−２８５；Ｓ−４１〜Ｌ−２８５；Ｓ−４２〜Ｌ−２８５；Ｋ−４３〜Ｌ−２８５；Ｄ−４４〜Ｌ−２８５；Ｇ−４５〜Ｌ−２８５；Ｋ−４６〜Ｌ−２８５；Ｌ−４７〜Ｌ−２８５；Ｌ−４８〜Ｌ−２８５；Ａ−４９〜Ｌ−２８５；Ａ−５０〜Ｌ−２８５；Ｔ−５１〜Ｌ−２８５；Ｌ−５２〜Ｌ−２８５；Ｌ−５３〜Ｌ−２８５；Ｌ−５４〜Ｌ−２８５；Ａ−５５〜Ｌ−２８５；Ｌ−５６〜Ｌ−２８５；Ｌ−５７〜Ｌ−２８５；Ｓ−５８〜Ｌ−２８５；Ｃ−５９〜Ｌ−２８５；Ｃ−６０〜Ｌ−２８５；Ｌ−６１〜Ｌ−２８５；Ｔ−６２〜Ｌ−２８５；Ｖ−６３〜Ｌ−２８５；Ｖ−６４〜Ｌ−２８５；Ｓ−６５〜Ｌ−２８５；Ｆ−６６〜Ｌ−２８５；Ｙ−６７〜Ｌ−２８５；Ｑ−６８〜Ｌ−２８５；Ｖ−６９〜Ｌ−２８５；Ａ−７０〜Ｌ−２８５；Ａ−７１〜Ｌ−２８５；Ｌ−７２〜Ｌ−２８５；Ｑ−７３〜Ｌ−２８５；Ｇ−７４〜Ｌ−２８５；Ｄ−７５〜Ｌ−２８５；Ｌ−７６〜Ｌ−２８５；Ａ−７７〜Ｌ−２８５；Ｓ−７８〜Ｌ−２８５；Ｌ−７９〜Ｌ−２８５；Ｒ−８０〜Ｌ−２８５；Ａ−８１〜Ｌ−２８５；Ｅ−８２〜Ｌ−２８５；Ｌ−８３〜Ｌ−２８５；Ｑ−８４〜Ｌ−２８５；Ｇ−８５〜Ｌ−２８５；Ｈ−８６〜Ｌ−２８５；Ｈ−８７〜Ｌ−２８５；Ａ−８８〜Ｌ−２８５；Ｅ−８９〜Ｌ−２８５；Ｋ−９０〜Ｌ−２８５；Ｌ−９１〜Ｌ−２８５；Ｐ−９２〜Ｌ−２８５；Ａ−９３〜Ｌ−２８５；Ｇ−９４〜Ｌ−２８５；Ａ−９５〜Ｌ−２８５；Ｇ−９６〜Ｌ−２８５；Ａ−９７〜Ｌ−２８５；Ｐ−９８〜Ｌ−２８５；Ｋ−９９〜Ｌ−２８５；Ａ−１００〜Ｌ−２８５；Ｇ−１０１〜Ｌ−２８５；Ｌ−１０２〜Ｌ−２８５；Ｅ−１０３〜Ｌ−２８５；Ｅ−１０４〜Ｌ−２８５；Ａ−１０５〜Ｌ−２８５；Ｐ−１０６〜Ｌ−２８５；Ａ−１０７〜Ｌ−２８５；Ｖ−１０８〜Ｌ−２８５；Ｔ−１０９〜Ｌ−２８５；Ａ−１１０〜Ｌ−２８５；Ｇ−ｌｌｌ〜Ｌ−２８５；Ｌ−１１２〜Ｌ−２８５；Ｋ−１１３〜Ｌ−２８５；Ｉ−１１４〜Ｌ−２８５；Ｆ−１１５〜Ｌ−２８５；Ｅ−１１６〜Ｌ−２８５；Ｐ−１１７〜Ｌ−２８５；Ｐ−１１８〜Ｌ−２８５；Ａ−１１９〜Ｌ−２８５；Ｐ−１２０〜Ｌ−２８５；Ｇ−１２１〜Ｌ−２８５；Ｅ−１２２〜Ｌ−２８５；Ｇ−１２３〜Ｌ−２８５；Ｎ−１２４〜Ｌ−２８５；Ｓ−１２５〜Ｌ−２８５；Ｓ−１２６〜Ｌ−２８５；Ｑ−１２７〜Ｌ−２８５；Ｎ−１２８〜Ｌ−２８５；Ｓ−１２９〜Ｌ−２８５；Ｒ−１３０〜Ｌ−２８５；Ｎ−１３１〜Ｌ−２８５；Ｋ−１３２〜Ｌ−２８５；Ｒ−１３３〜Ｌ−２８５；Ａ−１３４〜Ｌ−２８５；Ｖ−１３５〜Ｌ−２８５；Ｑ−１３６〜Ｌ−２８５；Ｇ−１３７〜Ｌ−２８５；Ｐ−１３８〜Ｌ−２８５；Ｅ−１３９〜Ｌ−２８５；Ｅ−１４０〜Ｌ−２８５；Ｔ−１４１〜Ｌ−２８５；Ｖ−１４２〜Ｌ−２８５；Ｔ−１４３〜Ｌ−２８５；Ｑ−１４４〜Ｌ−２８５；Ｄ−１４５〜Ｌ−２８５；Ｃ−１４６〜Ｌ−２８５；Ｌ−１４７〜Ｌ−２８５；Ｑ−１４８〜Ｌ−２８５；Ｌ−１４９〜Ｌ−２８５；Ｉ−１５０〜Ｌ−２８５；Ａ−１５１〜Ｌ−２８５；Ｄ−１５２〜Ｌ−２８５；Ｓ−１５３〜Ｌ−２８５；Ｅ−１５４〜Ｌ−２８５；Ｔ−１５５〜Ｌ−２８５；Ｐ−１５６〜Ｌ−２８５；Ｔ−１５７〜Ｌ−２８５；Ｉ−１５８〜Ｌ−２８５；Ｑ−１５９〜Ｌ−２８５；Ｋ−１６０〜Ｌ−２８５；Ｇ−１６１〜Ｌ−２８５；Ｓ−１６２〜Ｌ−２８５；Ｙ−１６３〜Ｌ−２８５；Ｔ−１６４〜Ｌ−２８５；Ｆ−１６５〜Ｌ−２８５；Ｖ−１６６〜Ｌ−２８５；Ｐ−１６７〜Ｌ−２８５；Ｗ−１６８〜Ｌ−２８５；Ｌ−１６９〜Ｌ−２８５；Ｌ−１７０〜Ｌ−２８５；Ｓ−１７１〜Ｌ−２８５；Ｆ−１７２〜Ｌ−２８５；Ｋ−１７３〜Ｌ−２８５；Ｒ−１７４〜Ｌ−２８５；Ｇ−１７５〜Ｌ−２８５；Ｓ−１７６〜Ｌ−２８５；Ａ−１７７〜Ｌ−２８５；Ｌ−１７８〜Ｌ−２８５；Ｅ−１７９〜Ｌ−２８５；Ｅ−１８０〜Ｌ−２８５；Ｋ−１８１〜Ｌ−２８５；Ｅ−１８２〜Ｌ−２８５；Ｎ−１８３〜Ｌ−２８５；Ｋ−１８４〜Ｌ−２８５；Ｉ−１８５〜Ｌ−２８５；Ｌ−１８６〜Ｌ−２８５；Ｖ−１８７〜Ｌ−２８５；Ｋ−１８８〜Ｌ−２８５；Ｅ−１８９〜Ｌ−２８５；Ｔ−１９０〜Ｌ−２８５；Ｇ−１９１〜Ｌ−２８５；Ｙ−１９２〜Ｌ−２８５；Ｆ−１９３〜Ｌ−２８５；Ｆ−１９４〜Ｌ−２８５；Ｉ−１９５〜Ｌ−２８５；Ｙ−１９６〜Ｌ−２８５；Ｇ−１９７〜Ｌ−２８５；Ｑ−１９８〜Ｌ−２８５；Ｖ−１９９〜Ｌ−２８５；Ｌ−２００〜Ｌ−２８５；Ｙ−２０１〜Ｌ−２８５；Ｔ−２０２〜Ｌ−２８５；Ｄ−２０３〜Ｌ−２８５；Ｋ−２０４〜Ｌ−２８５；Ｔ−２０５〜Ｌ−２８５；Ｙ−２０６〜Ｌ−２８５；Ａ−２０７〜Ｌ−２８５；Ｍ−２０８〜Ｌ−２８５；Ｇ−２０９〜Ｌ−２８５；Ｈ−２１０〜Ｌ−２８５；Ｌ−２１１〜Ｌ−２８５；Ｉ−２１２〜Ｌ−２８５；Ｑ−２１３〜Ｌ−２８５；Ｒ−２１４〜Ｌ−２８５；Ｋ−２１５〜Ｌ−２８５；Ｋ−２１６〜Ｌ−２８５；Ｖ−２１７〜Ｌ−２８５；Ｈ−２１８〜Ｌ−２８５；Ｖ−２１９〜Ｌ−２８５；Ｆ−２２０〜Ｌ−２８５；Ｇ−２２１〜Ｌ−２８５；Ｄ−２２２〜Ｌ−２８５；Ｅ−２２３〜Ｌ−２８５；Ｌ−２２４〜Ｌ−２８５；Ｓ−２２５〜Ｌ−２８５；Ｌ−２２６〜Ｌ−２８５；Ｖ−２２７〜Ｌ−２８５；Ｔ−２２８〜Ｌ−２８５；Ｌ−２２９〜Ｌ−２８５；Ｆ−２３０〜Ｌ−２８５；Ｒ−２３１〜Ｌ−２８５；Ｃ−２３２〜Ｌ−２８５；Ｉ−２３３〜Ｌ−２８５；Ｑ−２３４〜Ｌ−２８５；Ｎ−２３５〜Ｌ−２８５；Ｍ−２３６〜Ｌ−２８５；Ｐ−２３７〜Ｌ−２８５；Ｅ−２３８〜Ｌ−２８５；Ｔ−２３９〜Ｌ−２８５；Ｌ−２４０〜Ｌ−２８５；Ｐ−２４１〜Ｌ−２８５；Ｎ−２４２〜Ｌ−２８５；Ｎ−２４３〜Ｌ−２８５；Ｓ−２４４〜Ｌ−２８５；Ｃ−２４５〜Ｌ−２８５；Ｙ−２４６〜Ｌ−２８５；Ｓ−２４７〜Ｌ−２８５；Ａ−２４８〜Ｌ−２８５；Ｇ−２４９〜Ｌ−２８５；Ｉ−２５０〜Ｌ−２８５；Ａ−２５１〜Ｌ−２８５；Ｋ−２５２〜Ｌ−２８５；Ｌ−２５３〜Ｌ−２８５；Ｅ−２５４〜Ｌ−２８５；Ｅ−２５５〜Ｌ−２８５；Ｇ−２５６〜Ｌ−２８５；Ｄ−２５７〜Ｌ−２８５；Ｅ−２５８〜Ｌ−２８５；Ｌ−２５９〜Ｌ−２８５；Ｑ−２６０〜Ｌ−２８５；Ｌ−２６１〜Ｌ−２８５；Ａ−２６２〜Ｌ−２８５；Ｉ−２６３〜Ｌ−２８５；Ｐ−２６４〜Ｌ−２８５；Ｒ−２６５〜Ｌ−２８５；Ｅ−２６６〜Ｌ−２８５；Ｎ−２６７〜Ｌ−２８５；Ａ−２６８〜Ｌ−２８５；Ｑ−２６９〜Ｌ−２８５；Ｉ−２７０〜Ｌ−２８５；Ｓ−２７１〜Ｌ−２８５；Ｌ−２７２〜Ｌ−２８５；Ｄ−２７３〜Ｌ−２８５；Ｇ−２７４〜Ｌ−２８５；Ｄ−２７５〜Ｌ−２８５；Ｖ−２７６〜Ｌ−２８５；Ｔ−２７７〜Ｌ−２８５；Ｆ−２７８〜Ｌ−２８５；Ｆ−２７９〜Ｌ−２８５；およびＧ−２８０〜Ｌ−２８５。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１０６】
また上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このタンパク質の１つ以上の機能的活性（例えば、生物学的活性）の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性は依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの完全形態または成熟形態、あるいは細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ＢＬｙＳムテインの能力は、一般に、このポリペプチドの完全形態または成熟形態あるいは細胞外ドメインの残基の大部分未満がＣ末端から除去される場合、保持される。完全ポリペプチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。多くのＣ末端アミノ酸残基が欠失したＢＬｙＳムテインは、いくつかの機能的（例えば、生物学的または免疫原性）活性を保持し得るようである。実際に、６つほどの少ないＢＬｙＳアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば、免疫応答を惹起し得る。
【０１０７】
従って、本発明はさらに、別の実施形態において、配列番号３２２８において示されるＢＬｙＳのアミノ酸配列のカルボキシ末端から位置番号６のグルタミン酸残基までの１つ以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２８の残基１−ｍ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｍ３は、配列番号３２２８におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基６〜２８４のアミノ酸位置の範囲の整数である。
【０１０８】
より詳細には、本発明は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｍ−１〜Ｌ−２８４；Ｍ−１〜Ｋ−２８３；Ｍ−１〜Ｌ−２８２；Ｍ−１〜Ａ−２８１；Ｍ−１〜Ｇ−２８０；Ｍ−１〜Ｆ−２７９；Ｍ−１〜Ｆ−２７８；Ｍ−１〜Ｔ−２７７；Ｍ−１〜Ｖ−２７６；Ｍ−１〜Ｄ−２７５；Ｍ−１〜Ｇ−２７４；Ｍ−ｌ〜Ｄ−２７３；Ｍ−１〜Ｌ−２７２；Ｍ−１〜Ｓ−２７１；Ｍ−１〜Ｉ−２７０；Ｍ−１〜Ｑ−２６９；Ｍ−１〜Ａ−２６８；Ｍ−１〜Ｎ−２６７；Ｍ−１〜Ｅ−２６６；Ｍ−１〜Ｒ−２６５；Ｍ−１〜Ｐ−２６４；Ｍ−１〜Ｉ−２６３；Ｍ−１〜Ａ−２６２；Ｍ−１〜Ｌ−２６１；Ｍ−１〜Ｑ−２６０；Ｍ−１〜Ｌ−２５９；Ｍ−１〜Ｅ−２５８；Ｍ−１〜Ｄ−２５７；Ｍ−１〜Ｇ−２５６；Ｍ−１〜Ｅ−２５５；Ｍ−１〜Ｅ−２５４；Ｍ−１〜Ｌ−２５３；Ｍ−１〜Ｋ−２５２；Ｍ−１〜Ａ−２５１；Ｍ−１〜Ｉ−２５０；Ｍ−１〜Ｇ−２４９；Ｍ−１〜Ａ−２４８；Ｍ−１〜Ｓ−２４７；Ｍ−１〜Ｙ−２４６；Ｍ−１〜Ｃ−２４５；Ｍ−１〜Ｓ−２４４；Ｍ−１〜Ｎ−２４３；Ｍ−１〜Ｎ−２４２；Ｍ−１〜Ｐ−２４１；Ｍ−１〜Ｌ−２４０；Ｍ−１〜Ｔ−２３９；Ｍ−１〜Ｅ−２３８；Ｍ−１〜Ｐ−２３７；Ｍ−１〜Ｍ−２３６；Ｍ−１〜Ｎ−２３５；Ｍ−１〜Ｑ−２３４；Ｍ−１〜Ｉ−２３３；Ｍ−１〜Ｃ−２３２；Ｍ−１〜Ｒ−２３１；Ｍ−１〜Ｆ−２３０；Ｍ−１〜Ｌ−２２９；Ｍ−１〜Ｔ−２２８；Ｍ−１〜Ｖ−２２７；Ｍ−１〜Ｌ−２２６；Ｍ−１〜Ｓ−２２５；Ｍ−１〜Ｌ−２２４；Ｍ−１〜Ｅ−２２３；Ｍ−１〜Ｄ−２２２；Ｍ−１〜Ｇ−２２１；Ｍ−１〜Ｆ−２２０；Ｍ−１〜Ｖ−２１９；Ｍ−１〜Ｈ−２１８；Ｍ−１〜Ｖ−２１７；Ｍ−１〜Ｋ−２１６；Ｍ−１〜Ｋ−２１５；Ｍ−１〜Ｒ−２１４；Ｍ−ｌ〜Ｑ−２１３；Ｍ−１〜Ｉ−２１２；Ｍ−１〜Ｌ−２１１；Ｍ−１〜Ｈ−２１０；Ｍ−１〜Ｇ−２０９；Ｍ−１〜Ｍ−２０８；Ｍ−１〜Ａ−２０７；Ｍ−１〜Ｙ−２０６；Ｍ−１〜Ｔ−２０５；Ｍ−１〜Ｋ−２０４；Ｍ−１〜Ｄ−２０３；Ｍ−１〜Ｔ−２０２；Ｍ−１〜Ｙ−２０１；Ｍ−１〜Ｌ−２００；Ｍ−１〜Ｖ−１９９；Ｍ−１〜Ｑ−１９８；Ｍ−１〜Ｇ−１９７；Ｍ−１〜Ｙ−１９６；Ｍ−１〜Ｉ−１９５；Ｍ−１〜Ｆ−１９４；Ｍ−１〜Ｆ−１９３；Ｍ−１〜Ｙ−１９２；Ｍ−１〜Ｇ−１９１；Ｍ−１〜Ｔ−１９０；Ｍ−１〜Ｅ−１８９；Ｍ−１〜Ｋ−１８８；Ｍ−１〜Ｖ−１８７；Ｍ−１〜Ｌ−１８６；Ｍ−１〜Ｉ−１８５；Ｍ−１〜Ｋ−１８４；Ｍ−１〜Ｎ−１８３；Ｍ−１〜Ｅ−１８２；Ｍ−１〜Ｋ−１８１；Ｍ−１〜Ｅ−１８０；Ｍ−１〜Ｅ−１７９；Ｍ−１〜Ｌ−１７８；Ｍ−１〜Ａ−１７７；Ｍ−１〜Ｓ−１７６；Ｍ−１〜Ｇ−１７５；Ｍ−１〜Ｒ−１７４；Ｍ−１〜Ｋ−１７３；Ｍ−１〜Ｆ−１７２；Ｍ−１〜Ｓ−１７１；Ｍ−１〜Ｌ−１７０；Ｍ−１〜Ｌ−１６９；Ｍ−１〜Ｗ−１６８；Ｍ−１〜Ｐ−１６７；Ｍ−１〜Ｖ−１６６；Ｍ−１〜Ｆ−１６５；Ｍ−１〜Ｔ−１６４；Ｍ−１〜Ｙ−１６３；Ｍ−１〜Ｓ−１６２；Ｍ−１〜Ｇ−１６１；Ｍ−１〜Ｋ−１６０；Ｍ−１〜Ｑ−１５９；Ｍ−１〜Ｉ−１５８；Ｍ−１〜Ｔ−１５７；Ｍ−１〜Ｐ−１５６；Ｍ−１〜Ｔ−１５５；Ｍ−１〜Ｅ−１５４；Ｍ−１〜Ｓ−１５３；Ｍ−１〜Ｄ−１５２；Ｍ−１〜Ａ−１５１；Ｍ−１〜Ｉ−１５０；Ｍ−１〜Ｌ−１４９；Ｍ−１〜Ｑ−１４８；Ｍ−１〜Ｌ−１４７；Ｍ−１〜Ｃ−１４６；Ｍ−１〜Ｄ−１４５；Ｍ−１〜Ｑ−１４４；Ｍ−１〜Ｔ−１４３；Ｍ−１〜Ｖ−１４２；Ｍ−１〜Ｔ−１４１；Ｍ−１〜Ｅ−１４０；Ｍ−１〜Ｅ−１３９；Ｍ−１〜Ｐ−１３８；Ｍ−１〜Ｇ−１３７；Ｍ−１〜Ｑ−１３６；Ｍ−１〜Ｖ−１３５；Ｍ−１〜Ａ−１３４；Ｍ−１〜Ｒ−１３３；Ｍ−１〜Ｋ−１３２；Ｍ−１〜Ｎ−１３１；Ｍ−１〜Ｒ−１３０；Ｍ−１〜Ｓ−１２９；Ｍ−１〜Ｎ−１２８；Ｍ−１〜Ｑ−１２７；Ｍ−１〜Ｓ−１２６；Ｍ−１〜Ｓ−１２５；Ｍ−１〜Ｎ−１２４；Ｍ−１〜Ｇ−１２３；Ｍ−１〜Ｅ−１２２；Ｍ−１〜Ｇ−１２１；Ｍ−１〜Ｐ−１２０；Ｍ−１〜Ａ−１１９；Ｍ−１〜Ｐ−１１８；Ｍ−１〜Ｐ−１１７；Ｍ−１〜Ｅ−１１６；Ｍ−１〜Ｆ−１１５；Ｍ−１〜Ｉ−１１４；Ｍ−１〜Ｋ−１１３；Ｍ−１〜Ｌ−１１２；Ｍ−１〜Ｇ−ｌｌｌ；Ｍ−１〜Ａ−１１０；Ｍ−１〜Ｔ−１０９；Ｍ−１〜Ｖ−１０８；Ｍ−１〜Ａ−１０７；Ｍ−１〜Ｐ−１０６；Ｍ−１〜Ａ−１０５；Ｍ−１〜Ｅ−１０４；Ｍ−１〜Ｅ−１０３；Ｍ−１〜Ｌ−１０２；Ｍ−１〜Ｇ−１０１；Ｍ−１〜Ａ−１００；Ｍ−１〜Ｋ−９９；Ｍ−１〜Ｐ−９８；Ｍ−１〜Ａ−９７；Ｍ−１〜Ｇ−９６；Ｍ−１〜Ａ−９５；Ｍ−１〜Ｇ−９４；Ｍ−１〜Ａ−９３；Ｍ−１〜Ｐ−９２；Ｍ−１〜Ｌ−９１；Ｍ−１〜Ｋ−９０；Ｍ−１〜Ｅ−８９；Ｍ−１〜Ａ−８８；Ｍ−１〜Ｈ−８７；Ｍ−１〜Ｈ−８６；Ｍ−１〜Ｇ−８５；Ｍ−１〜Ｑ−８４；Ｍ−１〜Ｌ−８３；Ｍ−１〜Ｅ−８２；Ｍ−１〜Ａ−８１；Ｍ−１〜Ｒ−８０；Ｍ−１〜Ｌ−７９；Ｍ−１〜Ｓ−７８；Ｍ−１〜Ａ−７７；Ｍ−１〜Ｌ−７６；Ｍ−１〜Ｄ−７５；Ｍ−１〜Ｇ−７４；Ｍ−１〜Ｑ−７３；Ｍ−１〜Ｌ−７２；Ｍ−１〜Ａ−７１；Ｍ−１〜Ａ−７０；Ｍ−１〜Ｖ−６９；Ｍ−１〜Ｑ−６８；Ｍ−１〜Ｙ−６７；Ｍ−１〜Ｆ−６６；Ｍ−１〜Ｓ−６５；Ｍ−１〜Ｖ−６４；Ｍ−１〜Ｖ−６３；Ｍ−１〜Ｔ−６２；Ｍ−１〜Ｌ−６１；Ｍ−１〜Ｃ−６０；Ｍ−１〜Ｃ−５９；Ｍ−１〜Ｓ−５８；Ｍ−１〜Ｌ−５７；Ｍ−１〜Ｌ−５６；Ｍ−１〜Ａ−５５；Ｍ−１〜Ｌ−５４；Ｍ−１〜Ｌ−５３；Ｍ−１〜Ｌ−５２；Ｍ−１〜Ｔ−５１；Ｍ−１〜Ａ−５０；Ｍ−１〜Ａ−４９；Ｍ−１〜Ｌ−４８；Ｍ−１〜Ｌ−４７；Ｍ−１〜Ｋ−４６；Ｍ−１〜Ｇ−４５；Ｍ−１〜Ｄ−４４；Ｍ−１〜Ｋ−４３；Ｍ−１〜Ｓ−４２；Ｍ−１〜Ｓ−４１；Ｍ−１〜Ｒ−４０；Ｍ−１〜Ｖ−３９；Ｍ−１〜Ｓ−３８；Ｍ−１〜Ｐ−３７；Ｍ−１〜Ｓ−３６；Ｍ−１〜Ｅ−３５；Ｍ−１〜Ｋ−３４；Ｍ−１〜Ｒ−３３；Ｍ−１〜Ｐ−３２；Ｍ−１〜Ｌ−３１；Ｍ−１〜Ｉ−３０；Ｍ−１〜Ｓ−２９；Ｍ−１〜Ｖ−２８；Ｍ−１〜Ｃ−２７；Ｍ−１〜Ｅ−２６；Ｍ−１〜Ｋ−２５；Ｍ−１〜Ｌ−２４；Ｍ−１〜Ｋ−２３；Ｍ−１〜Ｍ−２２；Ｍ−１〜Ｅ−２１；Ｍ−１〜Ｅ−２０；Ｍ−１〜Ｒ−１９；Ｍ−１〜Ｋ−１８；Ｍ−１〜Ｋ−１７；Ｍ−１〜Ｌ−１６；Ｍ−１〜Ｃ−１５；Ｍ−１〜Ｓ−１４；Ｍ−１〜Ｔ−１３；Ｍ−１〜Ｌ−１２；Ｍ−１〜Ｒ−ｌｌ；Ｍ−１〜Ｓ−１０；Ｍ−１〜Ｑ−９；Ｍ−１〜Ｅ−８；Ｍ−１〜Ｒ−７；およびＭ−１〜Ｅ−６。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１０９】
本発明はまた、ＢＬｙＳポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供し、これらは、一般に配列番号３２２８の残基ｎ３−ｍ３を有するように記載され得、ここで、ｎ３およびｍ３は、上記で規定された通りの整数である。
【０１１０】
さらに、配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチドの推定細胞外ドメインが、それ自体機能的活性（例えば、生物学的活性）を誘発し得るので、配列番号３２２９の位置Ｇｌｎ−７３〜Ｌｅｕ−２６６でのポリペプチドの推定細胞外領域からのＮ末端およびＣ末端アミノ酸残基の欠失は、いくつかの機能的活性（例えば、リガンド結合、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）の増殖、分化、および／または活性化の刺激、細胞複製の調節、標的細胞活性および／または免疫原性の調節）を保持し得る。しかし、ＢＬｙＳポリペプチドの推定細胞外ドメインのＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このポリペプチドの１つ以上の機能的活性の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性は依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの完全または成熟または細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ポリペプチドの能力は、一般に、このポリペプチドの完全または成熟または細胞外ドメインの残基の大部分未満がＮ末端から除去される場合、保持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。
【０１１１】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２９に示されるＢＬｙＳのアミノ酸配列のアミノ末端から、位置番号２６１のグリシン残基までの１つ以上の残基が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２９の残基ｎ４−２６６のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｎ４は、配列番号３２２９におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基７３〜２６１のアミノ酸位置の範囲の整数であり、そして２６１は、予測される細胞外ドメインＢＬｙＳポリペプチド（配列番号３２２９に示される）のＮ末端からの最初の残基の位置である。
【０１１２】
より詳細には、特定の実施形態において、本発明は、配列番号３２２９の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｑ−７３〜Ｌ−２６６；Ｇ−７４〜Ｌ−２６６；Ｄ−７５〜Ｌ−２６６；Ｌ−７６〜Ｌ−２６６；Ａ−７７〜Ｌ−２６６；Ｓ−７８〜Ｌ−２６６；Ｌ−７９〜Ｌ−２６６；Ｒ−８０〜Ｌ−２６６；Ａ−８１〜Ｌ−２６６；Ｅ−８２〜Ｌ−２６６；Ｌ−８３〜Ｌ−２６６；Ｑ−８４〜Ｌ−２６６；Ｇ−８５〜Ｌ−２６６；Ｈ−８６〜Ｌ−２６６；Ｈ−８７〜Ｌ−２６６；Ａ−８８〜Ｌ−２６６；Ｅ−８９〜Ｌ−２６６；Ｋ−９０〜Ｌ−２６６；Ｌ−９１〜Ｌ−２６６；Ｐ−９２〜Ｌ−２６６；Ａ−９３〜Ｌ−２６６；Ｇ−９４〜Ｌ−２６６；Ａ−９５〜Ｌ−２６６；Ｇ−９６〜Ｌ−２６６；Ａ−９７〜Ｌ−２６６；Ｐ−９８〜Ｌ−２６６；Ｋ−９９〜Ｌ−２６６；Ａ−１００〜Ｌ−２６６；Ｇ−１０１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１０２〜Ｌ−２６６；Ｅ−１０３〜Ｌ−２６６；Ｅ−１０４〜Ｌ−２６６；Ａ−１０５〜Ｌ−２６６；Ｐ−１０６〜Ｌ−２６６；Ａ−１０７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１０８〜Ｌ−２６６；Ｔ−１０９〜Ｌ−２６６；Ａ−１１０〜Ｌ−２６６；Ｇ−１１１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１１２〜Ｌ−２６６；Ｋ−１１３〜Ｌ−２６６；Ｉ−１１４〜Ｌ−２６６；Ｆ−１１５〜Ｌ−２６６；Ｅ−１１６〜Ｌ−２６６；Ｐ−１１７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１１８〜Ｌ−２６６；Ａ−１１９〜Ｌ−２６６；Ｐ−１２０〜Ｌ−２６６；Ｇ−１２１〜Ｌ−２６６；Ｅ−１２２〜Ｌ−２６６；Ｇ−１２３〜Ｌ−２６６；Ｎ−１２４〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２５〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２６〜Ｌ−２６６；Ｑ−１２７〜Ｌ−２６６；Ｎ−１２８〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２９〜Ｌ−２６６；Ｒ−１３０〜Ｌ−２６６；Ｎ−１３１〜Ｌ−２６６；Ｋ−１３２〜Ｌ−２６６；Ｒ−１３３〜Ｌ−２６６；Ａ−１３４〜Ｌ−２６６；Ｖ−１３５〜Ｌ−２６６；Ｑ−１３６〜Ｌ−２６６；Ｇ−１３７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１３８〜Ｌ−２６６；Ｅ−１３９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１４０〜Ｌ−２６６；Ｔ−１４１〜Ｌ−２６６；Ｇ−１４２〜Ｌ−２６６；Ｓ−１４３〜Ｌ−２６６；Ｙ−１４４〜Ｌ−２６６；Ｔ−１４５〜Ｌ−２６６；Ｆ−１４６〜Ｌ−２６６；Ｖ−１４７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１４８〜Ｌ−２６６；Ｗ−１４９〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５０〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５１〜Ｌ−２６６；Ｓ−１５２〜Ｌ−２６６；Ｆ−１５３〜Ｌ−２６６；Ｋ−１５４〜Ｌ−２６６；Ｒ−１５５〜Ｌ−２６６；Ｇ−１５６〜Ｌ−２６６；Ｓ−１５７〜Ｌ−２６６；Ａ−１５８〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６０〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６１〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６２〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６３〜Ｌ−２６６；Ｎ−１６４〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６５〜Ｌ−２６６；Ｉ−１６６〜Ｌ−２６６；Ｌ−１６７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１６８〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１７０〜Ｌ−２６６；Ｔ−１７１〜Ｌ−２６６；Ｇ−１７２〜Ｌ−２６６；Ｙ−１７３〜Ｌ−２６６；Ｆ−１７４〜Ｌ−２６６；Ｆ−１７５〜Ｌ−２６６；Ｉ−１７６〜Ｌ−２６６；Ｙ−１７７〜Ｌ−２６６；Ｇ−１７８〜Ｌ−２６６；Ｑ−１７９〜Ｌ−２６６；Ｖ−１８０〜Ｌ−２６６；Ｌ−１８１〜Ｌ−２６６；Ｙ−１８２〜Ｌ−２６６；Ｔ−１８３〜Ｌ−２６６；Ｄ−１８４〜Ｌ−２６６；Ｋ−１８５〜Ｌ−２６６；Ｔ−１８６〜Ｌ−２６６；Ｙ−１８７〜Ｌ−２６６；Ａ−１８８〜Ｌ−２６６；Ｍ−１８９〜Ｌ−２６６；Ｇ−１９０〜Ｌ−２６６；Ｈ−１９１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１９２〜Ｌ−２６６；Ｉ−１９３〜Ｌ−２６６；Ｑ−１９４〜Ｌ−２６６；Ｒ−１９５〜Ｌ−２６６；Ｋ−１９６〜Ｌ−２６６；Ｋ−１９７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１９８〜Ｌ−２６６；Ｈ−１９９〜Ｌ−２６６；Ｖ−２００〜Ｌ−２６６；Ｆ−２０１〜Ｌ−２６６；Ｇ−２０２〜Ｌ−２６６；Ｄ−２０３〜Ｌ−２６６；Ｅ−２０４〜Ｌ−２６６；Ｌ−２０５〜Ｌ−２６６；Ｓ−２０６〜Ｌ−２６６；Ｌ−２０７〜Ｌ−２６６；Ｖ−２０８〜Ｌ−２６６；Ｔ−２０９〜Ｌ−２６６；Ｌ−２１０〜Ｌ−２６６；Ｆ−２１１〜Ｌ−２６６；Ｒ−２１２〜Ｌ−２６６；Ｃ−２１３〜Ｌ−２６６；Ｉ−２１４〜Ｌ−２６６；Ｑ−２１５〜Ｌ−２６６；Ｎ−２１６〜Ｌ−２６６；Ｍ−２１７〜Ｌ−２６６；Ｐ−２１８〜Ｌ−２６６；Ｅ−２１９〜Ｌ−２６６；Ｔ−２２０〜Ｌ−２６６；Ｌ−２２１〜Ｌ−２６６；Ｐ−２２２〜Ｌ−２６６；Ｎ−２２３〜Ｌ−２６６；Ｎ−２２４〜Ｌ−２６６；Ｓ−２２５〜Ｌ−２６６；Ｃ−２２６〜Ｌ−２６６；Ｙ−２２７〜Ｌ−２６６；Ｓ−２２８〜Ｌ−２６６；Ａ−２２９〜Ｌ−２６６；Ｇ−２３０〜Ｌ−２６６；Ｉ−２３１〜Ｌ−２６６；Ａ−２３２〜Ｌ−２６６；Ｋ−２３３〜Ｌ−２６６；Ｌ−２３４〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３５〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３６〜Ｌ−２６６；Ｇ−２３７〜Ｌ−２６６；Ｄ−２３８〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３９〜Ｌ−２６６；Ｌ−２４０〜Ｌ−２６６；Ｑ−２４１〜Ｌ−２６６；Ｌ−２４２〜Ｌ−２６６；Ａ−２４３〜Ｌ−２６６；Ｉ−２４４〜Ｌ−２６６；Ｐ−２４５〜Ｌ−２６６；Ｒ−２４６〜Ｌ−２６６；Ｅ−２４７〜Ｌ−２６６；Ｎ−２４８〜Ｌ−２６６；Ａ−２４９〜Ｌ−２６６；Ｑ−２５０〜Ｌ−２６６；Ｉ−２５１〜Ｌ−２６６；Ｓ−２５２〜Ｌ−２６６；Ｌ−２５３〜Ｌ−２６６；Ｄ−２５４〜Ｌ−２６６；Ｇ−２５５〜Ｌ−２６６；Ｄ−２５６〜Ｌ−２６６；Ｖ−２５７〜Ｌ−２６６；Ｔ−２５８〜Ｌ−２６６；Ｆ−２５９〜Ｌ−２６６；Ｆ−２６０〜Ｌ−２６６；およびＧ−２６１〜Ｌ−２６６。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１１３】
同様に、配列番号３２２９の７９位のロイシン残基までの、ＢＬｙＳの推定細胞外ドメインのＣ末端アミノ酸残基の欠失は、いくつかの機能的活性（例えば、リガンド結合、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）の増殖、分化、および／または活性を刺激する能力、細胞複製の調節、標的細胞活性および／または免疫原性の調節）を保持し得る。配列番号３２２９のＬｅｕ−７９を含むさらなるＣ末端欠失を有するポリペプチドは、生物学的活性を保有するとは予期されない。
【０１１４】
しかし、ポリペプチドのＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このポリペプチドの１つ以上の機能的活性（例えば、生物学的活性）を改変または損失するとしても、他の機能的活性は依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの完全形態、成熟形態または細胞外形態を認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ポリペプチドの能力は、一般に、このポリペプチドの完全形態、成熟形態または細胞外形態の残基の大部分未満がＣ末端から除去される場合、保持される。推定細胞外ドメインのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。
【０１１５】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２９に示されるＢＬｙＳの推定細胞外ドメインのアミノ酸配列のカルボキシ末端から、配列番号３２２９の７９位のロイシン残基まで１つ以上の残基が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２９のアミノ酸配列の残基７３−ｍ４のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｍ４は、配列番号３２２９におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基７９〜２６５のアミノ酸位置の範囲の任意の整数である。
【０１１６】
より詳細には、特定の実施形態において、本発明は、配列番号３２２９の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｑ−７３〜Ｌ−２６５；Ｑ−７３〜Ｋ−２６４；Ｑ−７３〜Ｌ−２６３；Ｑ−７３〜Ａ−２６２；Ｑ−７３〜Ｇ−２６１；Ｑ−７３〜Ｆ−２６０；Ｑ−７３〜Ｆ−２５９；Ｑ−７３〜Ｔ−２５８；Ｑ−７３〜Ｖ−２５７；Ｑ−７３〜Ｄ−２５６；Ｑ−７３〜Ｇ−２５５；Ｑ−７３〜Ｄ−２５４；Ｑ−７３〜Ｌ−２５３；Ｑ−７３〜Ｓ−２５２；Ｑ−７３〜Ｉ−２５１；Ｑ−７３〜Ｑ−２５０；Ｑ−７３〜Ａ−２４９；Ｑ−７３〜Ｎ−２４８；Ｑ−７３〜Ｅ−２４７；Ｑ−７３〜Ｒ−２４６；Ｑ−７３〜Ｐ−２４５；Ｑ−７３〜Ｉ−２４４；Ｑ−７３〜Ａ−２４３；Ｑ−７３〜Ｌ−２４２；Ｑ−７３〜Ｑ−２４１；Ｑ−７３〜Ｌ−２４０；Ｑ−７３〜Ｅ−２３９；Ｑ−７３〜Ｄ−２３８；Ｑ−７３〜Ｇ−２３７；Ｑ−７３〜Ｅ−２３６；Ｑ−７３〜Ｅ−２３５；Ｑ−７３〜Ｌ−２３４；Ｑ−７３〜Ｋ−２３３；Ｑ−７３〜Ａ−２３２；Ｑ−７３〜Ｉ−２３１；Ｑ−７３〜Ｇ−２３０；Ｑ−７３〜Ａ−２２９；Ｑ−７３〜Ｓ−２２８；Ｑ−７３〜Ｙ−２２７；Ｑ−７３〜Ｃ−２２６；Ｑ−７３〜Ｓ−２２５；Ｑ−７３〜Ｎ−２２４；Ｑ−７３〜Ｎ−２２３；Ｑ−７３〜Ｐ−２２２；Ｑ−７３〜Ｌ−２２１；Ｑ−７３〜Ｔ−２２０；Ｑ−７３〜Ｅ−２１９；Ｑ−７３〜Ｐ−２１８；Ｑ−７３〜Ｍ−２１７；Ｑ−７３〜Ｎ−２１６；Ｑ−７３〜Ｑ−２１５；Ｑ−７３〜Ｉ−２１４；Ｑ−７３〜Ｃ−２１３；Ｑ−７３〜Ｒ−２１２；Ｑ−７３〜Ｆ−２１１；Ｑ−７３〜Ｌ−２１０；Ｑ−７３〜Ｔ−２０９；Ｑ−７３〜Ｖ−２０８；Ｑ−７３〜Ｌ−２０７；Ｑ−７３〜Ｓ−２０６；Ｑ−７３〜Ｌ−２０５；Ｑ−７３〜Ｅ−２０４；Ｑ−７３〜Ｄ−２０３；Ｑ−７３〜Ｇ−２０２；Ｑ−７３〜Ｆ−２０１；Ｑ−７３〜Ｖ−２００；Ｑ−７３〜Ｈ−１９９；Ｑ−７３〜Ｖ−１９８；Ｑ−７３〜Ｋ−１９７；Ｑ−７３〜Ｋ−１９６；Ｑ−７３〜Ｒ−１９５；Ｑ−７３〜Ｑ−１９４；Ｑ−７３〜Ｉ−１９３；Ｑ−７３〜Ｌ−１９２；Ｑ−７３〜Ｈ−１９１；Ｑ−７３〜Ｇ−１９０；Ｑ−７３〜Ｑ−７３８９；Ｑ−７３〜Ａ−１８８；Ｑ−７３〜Ｙ−１８７；Ｑ−７３〜Ｔ−１８６；Ｑ−７３〜Ｋ−１８５；Ｑ−７３〜Ｄ−１８４；Ｑ−７３〜Ｔ−１８３；Ｑ−７３〜Ｙ−１８２；Ｑ−７３〜Ｌ−１８１；Ｑ−７３〜Ｖ−１８０；Ｑ−７３〜Ｑ−１７９；Ｑ−７３〜Ｇ−１７８；Ｑ−７３〜Ｙ−１７７；Ｑ−７３〜Ｉ−１７６；Ｑ−７３〜Ｆ−１７５；Ｑ−７３〜Ｆ−１７４；Ｑ−７３〜Ｙ−１７３；Ｑ−７３〜Ｇ−１７２；Ｑ−７３〜Ｔ−１７１；Ｑ−７３〜Ｅ−１７０；Ｑ−７３〜Ｋ−１６９；Ｑ−７３〜Ｖ−１６８；Ｑ−７３〜Ｌ−１６７；Ｑ−７３〜Ｉ−１６６；Ｑ−７３〜Ｋ−１６５；Ｑ−７３〜Ｎ−１６４；Ｑ−７３〜Ｅ−１６３；Ｑ−７３〜Ｋ−１６２；Ｑ−７３〜Ｅ−１６１；Ｑ−７３〜Ｅ−１６０；Ｑ−７３〜Ｌ−１５９；Ｑ−７３〜Ａ−１５８；Ｑ−７３〜Ｓ−１５７；Ｑ−７３〜Ｇ−１５６；Ｑ−７３〜Ｒ−１５５；Ｑ−７３〜Ｋ−１５４；Ｑ−７３〜Ｆ−１５３；Ｑ−７３〜Ｓ−１５２；Ｑ−７３〜Ｌ−１５１；Ｑ−７３〜Ｌ−１５０；Ｑ−７３〜Ｗ−１４９；Ｑ−７３〜Ｐ−１４８；Ｑ−７３〜Ｖ−１４７；Ｑ−７３〜Ｆ−１４６；Ｑ−７３〜Ｔ−１４５；Ｑ−７３〜Ｙ−１４４；Ｑ−７３〜Ｓ−１４３；Ｑ−７３〜Ｇ−１４２；Ｑ−７３〜Ｔ−１４１；Ｑ−７３〜Ｅ−１４０；Ｑ−７３〜Ｅ−１３９；Ｑ−７３〜Ｐ−１３８；Ｑ−７３〜Ｇ−１３７；Ｑ−７３〜Ｑ−１３６；Ｑ−７３〜Ｖ−１３５；Ｑ−７３〜Ａ−１３４；Ｑ−７３〜Ｒ−１３３；Ｑ−７３〜Ｋ−１３２；Ｑ−７３〜Ｎ−１３１；Ｑ−７３〜Ｒ−１３０；Ｑ−７３〜Ｓ−１２９；Ｑ−７３〜Ｎ−１２８；Ｑ−７３〜Ｑ−１２７；Ｑ−７３〜Ｓ−１２６；Ｑ−７３〜Ｓ−１２５；Ｑ−７３〜Ｎ−１２４；Ｑ−７３〜Ｇ−１２３；Ｑ−７３〜Ｅ−１２２；Ｑ−７３〜Ｇ−１２１；Ｑ−７３〜Ｐ−１２０；Ｑ−７３〜Ａ−１１９；Ｑ−７３〜Ｐ−１１８；Ｑ−７３〜Ｐ−１１７；Ｑ−７３〜Ｅ−１１６；Ｑ−７３〜Ｆ−１１５；Ｑ−７３〜Ｉ−１１４；Ｑ−７３〜Ｋ−１１３；Ｑ−７３〜Ｌ−１１２；Ｑ−７３〜Ｇ−１１１；Ｑ−７３〜Ａ−１１０；Ｑ−７３〜Ｔ−１０９；Ｑ−７３〜Ｖ−１０８；Ｑ−７３〜Ａ−１０７；Ｑ−７３〜Ｐ−１０６；Ｑ−７３〜Ａ−１０５；Ｑ−７３〜Ｅ−１０４；Ｑ−７３〜Ｅ−１０３；Ｑ−７３〜Ｌ−１０２；Ｑ−７３〜Ｇ−１０１；Ｑ−７３〜Ａ−１００；Ｑ−７３〜Ｋ−９９；Ｑ−７３〜Ｐ−９８；Ｑ−７３〜Ａ−９７；Ｑ−７３〜Ｇ−９６；Ｑ−７３〜Ａ−９５；Ｑ−７３〜Ｇ−９４；Ｑ−７３〜Ａ−９３；Ｑ−７３〜Ｐ−９２；Ｑ−７３〜Ｌ−９１；Ｑ−７３〜Ｋ−９０；Ｑ−７３〜Ｅ−８９；Ｑ−７３〜Ａ−８８；Ｑ−７３〜Ｈ−８７；Ｑ−７３〜Ｈ−８６；Ｑ−７３〜Ｇ−８５；Ｑ−７３〜Ｑ−８４；Ｑ−７３〜Ｌ−８３；Ｑ−７３〜Ｅ−８２；Ｑ−７３〜Ａ−８１；Ｑ−７３〜Ｒ−８０；Ｑ−７３〜Ｌ−７９；およびＱ−７３〜Ｓ−７８。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１１７】
本発明はまた、ＢＬｙＳの推定細胞外ドメインのアミノ末端およびカルボキシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失したポリペプチドを提供し、これらは、配列番号３２２９の残基ｎ４−ｍ４を有するように一般に記載され得、ここでｎ４およびｍ４は、上記で規定した通りの整数である。
【０１１８】
別の実施形態において、本発明の抗体は、ＡＴＣＣ受託番号２０３５１８を有する寄託物に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるＢＬｙＳアミノ酸配列の細胞外ドメインの部分を含むポリペプチドに結合し、ここで、この部分は、ＡＴＣＣ受託番号２０３５１８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列の細胞外ドメインのアミノ末端から、１〜約２６０アミノ酸を除外するか、またはＡＴＣＣ受託番号２０３５１８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸の細胞外ドメインのカルボキシ末端から、１〜約１８７アミノ酸を除外するか、あるいはＡＴＣＣ受託番号２０３５１８を有する寄託物中に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列の細胞外ドメイン全体の、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端欠失の任意の組み合わせを除外する。
【０１１９】
上記のように、ポリペプチドのＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このポリペプチドの１つ以上の機能的活性（例えば、生物学的活性）の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性または生物学的活性は、依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの全長形態または成熟形態、あるいは細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ＢＬｙＳポリペプチドの能力は、一般に、このポリペプチドの全長または成熟また細胞外ドメインの残基の大部分未満がＮ末端から除去される場合、保持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。多くのＮ末端アミノ酸残基が欠失したＢＬｙＳムテインは、機能的（例えば、免疫原性）活性を保持し得るようである。実際に、６つほどの少ないＢＬｙＳアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば、免疫応答を惹起し得る。
【０１２０】
従って、本発明はさらに、配列番号３２２９に示されるＢＬｙＳの推定全長アミノ酸配列のアミノ末端から、配列番号３２２９に示される配列の位置番号２６１のグリシン残基まで１つ以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２９に示される配列の残基ｎ５−２６６のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｎ５は、配列番号３２２９におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２６１のアミノ酸位置の範囲の整数である。
【０１２１】
より詳細には、本発明は、配列番号３２２９の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｄ−２〜Ｌ−２６６；Ｄ−３〜Ｌ−２６６；Ｓ−４〜Ｌ−２６６；Ｔ−５〜Ｌ−２６６；Ｅ−６〜Ｌ−２６６；Ｒ−７〜Ｌ−２６６；Ｅ−８〜Ｌ−２６６；Ｑ−９〜Ｌ−２６６；Ｓ−１０〜Ｌ−２６６；Ｒ−１１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１２〜Ｌ−２６６；Ｔ−１３〜Ｌ−２６６；Ｓ−１４〜Ｌ−２６６；Ｃ−１５〜Ｌ−２６６；Ｌ−１６〜Ｌ−２６６；Ｋ−１７〜Ｌ−２６６；Ｋ−１８〜Ｌ−２６６；Ｒ−１９〜Ｌ−２６６；Ｅ−２０〜Ｌ−２６６；Ｅ−２１〜Ｌ−２６６；Ｍ−２２〜Ｌ−２６６；Ｋ−２３〜Ｌ−２６６；Ｌ−２４〜Ｌ−２６６；Ｋ−２５〜Ｌ−２６６；Ｅ−２６〜Ｌ−２６６；Ｃ−２７〜Ｌ−２６６；Ｖ−２８〜Ｌ−２６６；Ｓ−２９〜Ｌ−２６６；Ｉ−３０〜Ｌ−２６６；Ｌ−３１〜Ｌ−２６６；Ｐ−３２〜Ｌ−２６６；Ｒ−３３〜Ｌ−２６６；Ｋ−３４〜Ｌ−２６６；Ｅ−３５〜Ｌ−２６６；Ｓ−３６〜Ｌ−２６６；Ｐ−３７〜Ｌ−２６６；Ｓ−３８〜Ｌ−２６６；Ｖ−３９〜Ｌ−２６６；Ｒ−４０〜Ｌ−２６６；Ｓ−４１〜Ｌ−２６６；Ｓ−４２〜Ｌ−２６６；Ｋ−４３〜Ｌ−２６６；Ｄ−４４〜Ｌ−２６６；Ｇ−４５〜Ｌ−２６６；Ｋ−４６〜Ｌ−２６６；Ｌ−４７〜Ｌ−２６６；Ｌ−４８〜Ｌ−２６６；Ａ−４９〜Ｌ−２６６；Ａ−５０〜Ｌ−２６６；Ｔ−５１〜Ｌ−２６６；Ｌ−５２〜Ｌ−２６６；Ｌ−５３〜Ｌ−２６６；Ｌ−５４〜Ｌ−２６６；Ａ−５５〜Ｌ−２６６；Ｌ−５６〜Ｌ−２６６；Ｌ−５７〜Ｌ−２６６；Ｓ−５８〜Ｌ−２６６；Ｃ−５９〜Ｌ−２６６；Ｃ−６０〜Ｌ−２６６；Ｌ−６１〜Ｌ−２６６；Ｔ−６２〜Ｌ−２６６；Ｖ−６３〜Ｌ−２６６；Ｖ−６４〜Ｌ−２６６；Ｓ−６５〜Ｌ−２６６；Ｆ−６６〜Ｌ−２６６；Ｙ−６７〜Ｌ−２６６；Ｑ−６８〜Ｌ−２６６；Ｖ−６９〜Ｌ−２６６；Ａ−７０〜Ｌ−２６６；Ａ−７１〜Ｌ−２６６；Ｌ−７２〜Ｌ−２６６；Ｑ−７３〜Ｌ−２６６；Ｇ−７４〜Ｌ−２６６；Ｄ−７５〜Ｌ−２６６；Ｌ−７６〜Ｌ−２６６；Ａ−７７〜Ｌ−２６６；Ｓ−７８〜Ｌ−２６６；Ｌ−７９〜Ｌ−２６６；Ｒ−８０〜Ｌ−２６６；Ａ−８１〜Ｌ−２６６；Ｅ−８２〜Ｌ−２６６；Ｌ−８３〜Ｌ−２６６；Ｑ−８４〜Ｌ−２６６；Ｇ−８５〜Ｌ−２６６；Ｈ−８６〜Ｌ−２６６；Ｈ−８７〜Ｌ−２６６；Ａ−８８〜Ｌ−２６６；Ｅ−８９〜Ｌ−２６６；Ｋ−９０〜Ｌ−２６６；Ｌ−９１〜Ｌ−２６６；Ｐ−９２〜Ｌ−２６６；Ａ−９３〜Ｌ−２６６；Ｇ−９４〜Ｌ−２６６；Ａ−９５〜Ｌ−２６６；Ｇ−９６〜Ｌ−２６６；Ａ−９７〜Ｌ−２６６；Ｐ−９８〜Ｌ−２６６；Ｋ−９９〜Ｌ−２６６；Ａ−１００〜Ｌ−２６６；Ｇ−１０１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１０２〜Ｌ−２６６；Ｅ−１０３〜Ｌ−２６６；Ｅ−１０４〜Ｌ−２６６；Ａ−１０５〜Ｌ−２６６；Ｐ−１０６〜Ｌ−２６６；Ａ−１０７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１０８〜Ｌ−２６６；Ｔ−１０９〜Ｌ−２６６；Ａ−１１０〜Ｌ−２６６；Ｇ−１１１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１１２〜Ｌ−２６６；Ｋ−１１３〜Ｌ−２６６；Ｉ−１１４〜Ｌ−２６６；Ｆ−１１５〜Ｌ−２６６；Ｅ−１１６〜Ｌ−２６６；Ｐ−１１７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１１８〜Ｌ−２６６；Ａ−１１９〜Ｌ−２６６；Ｐ−１２０〜Ｌ−２６６；Ｇ−１２１〜Ｌ−２６６；Ｅ−１２２〜Ｌ−２６６；Ｇ−１２３〜Ｌ−２６６；Ｎ−１２４〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２５〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２６〜Ｌ−２６６；Ｑ−１２７〜Ｌ−２６６；Ｎ−１２８〜Ｌ−２６６；Ｓ−１２９〜Ｌ−２６６；Ｒ−１３０〜Ｌ−２６６；Ｎ−１３１〜Ｌ−２６６；Ｋ−１３２〜Ｌ−２６６；Ｒ−１３３〜Ｌ−２６６；Ａ−１３４〜Ｌ−２６６；Ｖ−１３５〜Ｌ−２６６；Ｑ−１３６〜Ｌ−２６６；Ｇ−１３７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１３８〜Ｌ−２６６；Ｅ−１３９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１４０〜Ｌ−２６６；Ｔ−１４１〜Ｌ−２６６；Ｇ−１４２〜Ｌ−２６６；Ｓ−１４３〜Ｌ−２６６；Ｙ−１４４〜Ｌ−２６６；Ｔ−１４５〜Ｌ−２６６；Ｆ−１４６〜Ｌ−２６６；Ｖ−１４７〜Ｌ−２６６；Ｐ−１４８〜Ｌ−２６６；Ｗ−１４９〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５０〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５１〜Ｌ−２６６；Ｓ−１５２〜Ｌ−２６６；Ｆ−１５３〜Ｌ−２６６；Ｋ−１５４〜Ｌ−２６６；Ｒ−１５５〜Ｌ−２６６；Ｇ−１５６〜Ｌ−２６６；Ｓ−１５７〜Ｌ−２６６；Ａ−１５８〜Ｌ−２６６；Ｌ−１５９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６０〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６１〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６２〜Ｌ−２６６；Ｅ−１６３〜Ｌ−２６６；Ｎ−１６４〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６５〜Ｌ−２６６；Ｉ−１６６〜Ｌ−２６６；Ｌ−１６７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１６８〜Ｌ−２６６；Ｋ−１６９〜Ｌ−２６６；Ｅ−１７０〜Ｌ−２６６；Ｔ−１７１〜Ｌ−２６６；Ｇ−１７２〜Ｌ−２６６；Ｙ−１７３〜Ｌ−２６６；Ｆ−１７４〜Ｌ−２６６；Ｆ−１７５〜Ｌ−２６６；Ｉ−１７６〜Ｌ−２６６；Ｙ−１７７〜Ｌ−２６６；Ｇ−１７８〜Ｌ−２６６；Ｑ−１７９〜Ｌ−２６６；Ｖ−１８０〜Ｌ−２６６；Ｌ−１８１〜Ｌ−２６６；Ｙ−１８２〜Ｌ−２６６；Ｔ−１８３〜Ｌ−２６６；Ｄ−１８４〜Ｌ−２６６；Ｋ−１８５〜Ｌ−２６６；Ｔ−１８６〜Ｌ−２６６；Ｙ−１８７〜Ｌ−２６６；Ａ−１８８〜Ｌ−２６６；Ｍ−１８９〜Ｌ−２６６；Ｇ−１９０〜Ｌ−２６６；Ｈ−１９１〜Ｌ−２６６；Ｌ−１９２〜Ｌ−２６６；Ｉ−１９３〜Ｌ−２６６；Ｑ−１９４〜Ｌ−２６６；Ｒ−１９５〜Ｌ−２６６；Ｋ−１９６〜Ｌ−２６６；Ｋ−１９７〜Ｌ−２６６；Ｖ−１９８〜Ｌ−２６６；Ｈ−１９９〜Ｌ−２６６；Ｖ−２００〜Ｌ−２６６；Ｆ−２０１〜Ｌ−２６６；Ｇ−２０２〜Ｌ−２６６；Ｄ−２０３〜Ｌ−２６６；Ｅ−２０４〜Ｌ−２６６；Ｌ−２０５〜Ｌ−２６６；Ｓ−２０６〜Ｌ−２６６；Ｌ−２０７〜Ｌ−２６６；Ｖ−２０８〜Ｌ−２６６；Ｔ−２０９〜Ｌ−２６６；Ｌ−２１０〜Ｌ−２６６；Ｆ−２１１〜Ｌ−２６６；Ｒ−２１２〜Ｌ−２６６；Ｃ−２１３〜Ｌ−２６６；Ｉ−２１４〜Ｌ−２６６；Ｑ−２１５〜Ｌ−２６６；Ｎ−２１６〜Ｌ−２６６；Ｍ−２１７〜Ｌ−２６６；Ｐ−２１８〜Ｌ−２６６；Ｅ−２１９〜Ｌ−２６６；Ｔ−２２０〜Ｌ−２６６；Ｌ−２２１〜Ｌ−２６６；Ｐ−２２２〜Ｌ−２６６；Ｎ−２２３〜Ｌ−２６６；Ｎ−２２４〜Ｌ−２６６；Ｓ−２２５〜Ｌ−２６６；Ｃ−２２６〜Ｌ−２６６；Ｙ−２２７〜Ｌ−２６６；Ｓ−２２８〜Ｌ−２６６；Ａ−２２９〜Ｌ−２６６；Ｇ−２３０〜Ｌ−２６６；Ｉ−２３１〜Ｌ−２６６；Ａ−２３２〜Ｌ−２６６；Ｋ−２３３〜Ｌ−２６６；Ｌ−２３４〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３５〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３６〜Ｌ−２６６；Ｇ−２３７〜Ｌ−２６６；Ｄ−２３８〜Ｌ−２６６；Ｅ−２３９〜Ｌ−２６６；Ｌ−２４０〜Ｌ−２６６；Ｑ−２４１〜Ｌ−２６６；Ｌ−２４２〜Ｌ−２６６；Ａ−２４３〜Ｌ−２６６；Ｉ−２４４〜Ｌ−２６６；Ｐ−２４５〜Ｌ−２６６；Ｒ−２４６〜Ｌ−２６６；Ｅ−２４７〜Ｌ−２６６；Ｎ−２４８〜Ｌ−２６６；Ａ−２４９〜Ｌ−２６６；Ｑ−２５０〜Ｌ−２６６；Ｉ−２５１〜Ｌ−２６６；Ｓ−２５２〜Ｌ−２６６；Ｌ−２５３〜Ｌ−２６６；Ｄ−２５４〜Ｌ−２６６；Ｇ−２５５〜Ｌ−２６６；Ｄ−２５６〜Ｌ−２６６；Ｖ−２５７〜Ｌ−２６６；Ｔ−２５８〜Ｌ−２６６；Ｆ−２５９〜Ｌ−２６６；Ｆ−２６０〜Ｌ−２６６；およびＧ−２６１〜Ｌ−２６６。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１２２】
また上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、このタンパク質の１つ以上の機能的活性（例えば、生物学的活性）の改変または損失を生じるとしても、他の機能的活性は依然として保持され得る。従って、このポリペプチドの完全形態または成熟形態、あるいは細胞外ドメインを認識する抗体を誘導および／または結合する短縮ＢＬｙＳムテインの能力は、一般に、このポリペプチドの完全形態または成熟形態あるいは細胞外ドメインの残基の大部分未満がＣ末端から除去される場合、保持される。完全ポリペプチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の慣用的な方法によって容易に決定され得る。多くのＣ末端アミノ酸残基が欠失したＢＬｙＳムテインは、いくつかの機能的（例えば、免疫原性）活性を保持し得るようである。実際に、６つほどの少ないＢＬｙＳアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば、免疫応答を惹起し得る。
【０１２３】
従って、本発明はさらに、別の実施形態において、配列番号３２２９に示されるＢＬｙＳのアミノ酸配列のカルボキシ末端から、位置番号６のグルタミン酸残基まで１つ以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに結合する抗体を提供する。詳細には、本発明は、配列番号３２２９の残基１−ｍ５のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｍ５は、配列番号３２２９におけるアミノ酸配列のアミノ酸残基６〜２６５のアミノ酸位置の範囲の整数である。
【０１２４】
より詳細には、本発明は、配列番号３２２９の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ｍ−１〜Ｌ−２６５；Ｍ−１〜Ｋ−２６４；Ｍ−１〜Ｌ−２６３；Ｍ−１〜Ａ−２６２；Ｍ−１〜Ｇ−２６１；Ｍ−１〜Ｆ−２６０；Ｍ−１〜Ｆ−２５９；Ｍ−１〜Ｔ−２５８；Ｍ−１〜Ｖ−２５７；Ｍ−１〜Ｄ−２５６；Ｍ−１〜Ｇ−２５５；Ｍ−１〜Ｄ−２５４；Ｍ−１〜Ｌ−２５３；Ｍ−１〜Ｓ−２５２；Ｍ−１〜Ｉ−２５１；Ｍ−１〜Ｑ−２５０；Ｍ−１〜Ａ−２４９；Ｍ−１〜Ｎ−２４８；Ｍ−１〜Ｅ−２４７；Ｍ−１〜Ｒ−２４６；Ｍ−１〜Ｐ−２４５；Ｍ−１〜Ｉ−２４４；Ｍ−１〜Ａ−２４３；Ｍ−１〜Ｌ−２４２；Ｍ−１〜Ｑ−２４１；Ｍ−１〜Ｌ−２４０；Ｍ−１〜Ｅ−２３９；Ｍ−１〜Ｄ−２３８；Ｍ−１〜Ｇ−２３７；Ｍ−１〜Ｅ−２３６；Ｍ−１〜Ｅ−２３５；Ｍ−１〜Ｌ−２３４；Ｍ−１〜Ｋ−２３３；Ｍ−１〜Ａ−２３２；Ｍ−１〜Ｉ−２３１；Ｍ−１〜Ｇ−２３０；Ｍ−１〜Ａ−２２９；Ｍ−１〜Ｓ−２２８；Ｍ−１〜Ｙ−２２７；Ｍ−１〜Ｃ−２２６；Ｍ−１〜Ｓ−２２５；Ｍ−１〜Ｎ−２２４；Ｍ−１〜Ｎ−２２３；Ｍ−１〜Ｐ−２２２；Ｍ−１〜Ｌ−２２１；Ｍ−１〜Ｔ−２２０；Ｍ−１〜Ｅ−２１９；Ｍ−１〜Ｐ−２１８；Ｍ−１〜Ｍ−２１７；Ｍ−１〜Ｎ−２１６；Ｍ−１〜Ｑ−２１５；Ｍ−１〜Ｉ−２１４；Ｍ−１〜Ｃ−２１３；Ｍ−１〜Ｒ−２１２；Ｍ−１〜Ｆ−２１１；Ｍ−１〜Ｌ−２１０；Ｍ−１〜Ｔ−２０９；Ｍ−１〜Ｖ−２０８；Ｍ−１〜Ｌ−２０７；Ｍ−１〜Ｓ−２０６；Ｍ−１〜Ｌ−２０５；Ｍ−１〜Ｅ−２０４；Ｍ−１〜Ｄ−２０３；Ｍ−１〜Ｇ−２０２；Ｍ−１〜Ｆ−２０１；Ｍ−１〜Ｖ−２００；Ｍ−１〜Ｈ−１９９；Ｍ−１〜Ｖ−１９８；Ｍ−１〜Ｋ−１９７；Ｍ−１〜Ｋ−１９６；Ｍ−１〜Ｒ−１９５；Ｍ−１〜Ｑ−１９４；Ｍ−１〜Ｉ−１９３；Ｍ−１〜Ｌ−１９２；Ｍ−１〜Ｈ−１９１；Ｍ−１〜Ｇ−１９０；Ｍ−１〜Ｍ−１８９；Ｍ−１〜Ａ−１８８；Ｍ−１〜Ｙ−１８７；Ｍ−１〜Ｔ−１８６；Ｍ−１〜Ｋ−１８５；Ｍ−１〜Ｄ−１８４；Ｍ−１〜Ｔ−１８３；Ｍ−１〜Ｙ−１８２；Ｍ−１〜Ｌ−１８１；Ｍ−１〜Ｖ−１８０；Ｍ−１〜Ｑ−１７９；Ｍ−１〜Ｇ−１７８；Ｍ−１〜Ｙ−１７７；Ｍ−１〜Ｉ−１７６；Ｍ−１〜Ｆ−１７５；Ｍ−１〜Ｆ−１７４；Ｍ−１〜Ｙ−１７３；Ｍ−１〜Ｇ−１７２；Ｍ−１〜Ｔ−１７１；Ｍ−１〜Ｅ−１７０；Ｍ−１〜Ｋ−１６９；Ｍ−１〜Ｖ−１６８；Ｍ−１〜Ｌ−１６７；Ｍ−１〜Ｉ−１６６；Ｍ−１〜Ｋ−１６５；Ｍ−１〜Ｎ−１６４；Ｍ−１〜Ｅ−１６３；Ｍ−１〜Ｋ−１６２；Ｍ−１〜Ｅ−１６１；Ｍ−１〜Ｅ−１６０；Ｍ−１〜Ｌ−１５９；Ｍ−１〜Ａ−１５８；Ｍ−１〜Ｓ−１５７；Ｍ−１〜Ｇ−１５６；Ｍ−１〜Ｒ−１５５；Ｍ−１〜Ｋ−１５４；Ｍ−１〜Ｆ−１５３；Ｍ−１〜Ｓ−１５２；Ｍ−１〜Ｌ−１５１；Ｍ−１〜Ｌ−１５０；Ｍ−１〜Ｗ−１４９；Ｍ−１〜Ｐ−１４８；Ｍ−１〜Ｖ−１４７；Ｍ−１〜Ｆ−１４６；Ｍ−１〜Ｔ−１４５；Ｍ−１〜Ｙ−１４４；Ｍ−１〜Ｓ−１４３；Ｍ−１〜Ｇ−１４２；Ｍ−１〜Ｔ−１４１；Ｍ−１〜Ｅ−１４０；Ｍ−１〜Ｅ−１３９；Ｍ−１〜Ｐ−１３８；Ｍ−１〜Ｇ−１３７；Ｍ−１〜Ｑ−１３６；Ｍ−１〜Ｖ−１３５；Ｍ−ｌ〜Ａ−１３４；Ｍ−１〜Ｒ−１３３；Ｍ−１〜Ｋ−１３２；Ｍ−１〜Ｎ−１３１；Ｍ−１〜Ｒ−１３０；Ｍ−１〜Ｓ−１２９；Ｍ−１〜Ｎ−１２８；Ｍ−１〜Ｑ−１２７；Ｍ−１〜Ｓ−１２６；Ｍ−１〜Ｓ−１２５；Ｍ−１〜Ｎ−１２４；Ｍ−１〜Ｇ−１２３；Ｍ−１〜Ｅ−１２２；Ｍ−１〜Ｇ−１２１；Ｍ−１〜Ｐ−１２０；Ｍ−１〜Ａ−１１９；Ｍ−１〜Ｐ−１１８；Ｍ−１〜Ｐ−１１７；Ｍ−１〜Ｅ−１１６；Ｍ−１〜Ｆ−１１５；Ｍ−１〜Ｉ−１１４；Ｍ−１〜Ｋ−１１３；Ｍ−１〜Ｌ−１１２；Ｍ−１〜Ｇ−１１１；Ｍ−１〜Ａ−１１０；Ｍ−１〜Ｔ−１０９；Ｍ−１〜Ｖ−１０８；Ｍ−１〜Ａ−１０７；Ｍ−１〜Ｐ−１０６；Ｍ−１〜Ａ−１０５；Ｍ−１〜Ｅ−１０４；Ｍ−１〜Ｅ−１０３；Ｍ−１〜Ｌ−１０２；Ｍ−１〜Ｇ−１０１；Ｍ−１〜Ａ−１００；Ｍ−１〜Ｋ−９９；Ｍ−１〜Ｐ−９８；Ｍ−１〜Ａ−９７；Ｍ−１〜Ｇ−９６；Ｍ−１〜Ａ−９５；Ｍ−１〜Ｇ−９４；Ｍ−１〜Ａ−９３；Ｍ−１〜Ｐ−９２；Ｍ−１〜Ｌ−９１；Ｍ−１〜Ｋ−９０；Ｍ−１〜Ｅ−８９；Ｍ−１〜Ａ−８８；Ｍ−１〜Ｈ−８７；Ｍ−１〜Ｈ−８６；Ｍ−１〜Ｇ−８５；Ｍ−１〜Ｑ−８４；Ｍ−１〜Ｌ−８３；Ｍ−１〜Ｅ−８２；Ｍ−１〜Ａ−８１；Ｍ−１〜Ｒ−８０；Ｍ−１〜Ｌ−７９；Ｍ−１〜Ｓ−７８；Ｍ−１〜Ａ−７７；Ｍ−１〜Ｌ−７６；Ｍ−１〜Ｄ−７５；Ｍ−１〜Ｇ−７４；Ｍ−１〜Ｑ−７３；Ｍ−１〜Ｌ−７２；Ｍ−１〜Ａ−７１；Ｍ−ｌ〜Ａ−７０；Ｍ−１〜Ｖ−６９；Ｍ−１〜Ｑ−６８；Ｍ−１〜Ｙ−６７；Ｍ−１〜Ｆ−６６；Ｍ−１〜Ｓ−６５；Ｍ−１〜Ｖ−６４；Ｍ−１〜Ｖ−６３；Ｍ−１〜Ｔ−６２；Ｍ−１〜Ｌ−６１；Ｍ−１〜Ｃ−６０；Ｍ−１〜Ｃ−５９；Ｍ−１〜Ｓ−５８；Ｍ−１〜Ｌ−５７；Ｍ−１〜Ｌ−５６；Ｍ−１〜Ａ−５５；Ｍ−１〜Ｌ−５４；Ｍ−１〜Ｌ−５３；Ｍ−１〜Ｌ−５２；Ｍ−１〜Ｔ−５１；Ｍ−１〜Ａ−５０；Ｍ−１〜Ａ−４９；Ｍ−１〜Ｌ−４８；Ｍ−１〜Ｌ−４７；Ｍ−１〜Ｋ−４６；Ｍ−１〜Ｇ−４５；Ｍ−１〜Ｄ−４４；Ｍ−１〜Ｋ−４３；Ｍ−１〜Ｓ−４２；Ｍ−１〜Ｓ−４１；Ｍ−１〜Ｒ−４０；Ｍ−１〜Ｖ−３９；Ｍ−１〜Ｓ−３８；Ｍ−１〜Ｐ−３７；Ｍ−１〜Ｓ−３６；Ｍ−１〜Ｅ−３５；Ｍ−１〜Ｋ−３４；Ｍ−１〜Ｒ−３３；Ｍ−１〜Ｐ−３２；Ｍ−１〜Ｌ−３１；Ｍ−１〜Ｉ−３０；Ｍ−１〜Ｓ−２９；Ｍ−１〜Ｖ−２８；Ｍ−１〜Ｃ−２７；Ｍ−１〜Ｅ−２６；Ｍ−１〜Ｋ−２５；Ｍ−１〜Ｌ−２４；Ｍ−１〜Ｋ−２３；Ｍ−１〜Ｍ−２２；Ｍ−１〜Ｅ−２１；Ｍ−１〜Ｅ−２０；Ｍ−１〜Ｒ−１９；Ｍ−１〜Ｋ−１８；Ｍ−１〜Ｋ−１７；Ｍ−１〜Ｌ−１６；Ｍ−１〜Ｃ−１５；Ｍ−１〜Ｓ−１４；Ｍ−１〜Ｔ−１３；Ｍ−１〜Ｌ−１２；Ｍ−１〜Ｒ−１１；Ｍ−１〜Ｓ−１０；Ｍ−１〜Ｑ−９；Ｍ−１〜Ｅ−８；Ｍ−１〜Ｒ−７；およびＭ−１〜Ｅ−６。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１２５】
本発明はまた、ＢＬｙＳポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失したポリペプチドに結合する抗体を提供し、これらは、一般に配列番号３２２９の残基ｎ５−ｍ５を有するように記載され得、ここで、ｎ５およびｍ５は、上記で規定された通りの整数である。
【０１２６】
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号３２２８の残基１３４−ｍ６のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する抗体を提供し、ここで、ｍ６は、１４０〜２８５の整数であり、配列番号３２２８におけるアミノ酸配列の位置に対応する。例えば、本発明は、配列番号３２２８の以下の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドに結合する抗体を提供する：Ａ−１３４〜Ｌｅｕ−２８５；Ａ−１３４〜Ｌ−２８４；Ａ−１３４〜Ｋ−２８３；Ａ−１３４〜Ｌ−２８２；Ａ−１３４〜Ａ−２８１；Ａ−１３４〜Ｇ−２８０；Ａ−１３４〜Ｆ−２７９；Ａ−１３４〜Ｆ−２７８；Ａ−１３４〜Ｔ−２７７；Ａ−１３４〜Ｖ−２７６；Ａ−１３４〜Ｄ−２７５；Ａ−１３４〜Ｇ−２７４；Ａ−１３４〜Ｄ−２７３；Ａ−１３４〜Ｌ−２７２；Ａ−１３４〜Ｓ−２７１；Ａ−１３４〜Ｉ−２７０；Ａ−１３４〜Ｑ−２６９；Ａ−１３４〜Ａ−２６８；Ａ−１３４〜Ｎ−２６７；Ａ−１３４〜Ｅ−２６６；Ａ−１３４〜Ｒ−２６５；Ａ−１３４〜Ｐ−２６４；Ａ−１３４〜Ｉ−２６３；Ａ−１３４〜Ａ−２６２；Ａ−１３４〜Ｌ−２６１；Ａ−１３４〜Ｑ−２６０；Ａ−１３４〜Ｌ−２５９；Ａ−１３４〜Ｅ−２５８；Ａ−１３４〜Ｄ−２５７；Ａ−１３４〜Ｇ−２５６；Ａ−１３４〜Ｅ−２５５；Ａ−１３４〜Ｅ−２５４；Ａ−１３４〜Ｌ−２５３；Ａ−１３４〜Ｋ−２５２；Ａ−１３４〜Ａ−２５１；Ａ−１３４〜Ｉ−２５０；Ａ−１３４〜Ｇ−２４９；Ａ−１３４〜Ａ−２４８；Ａ−１３４〜Ｓ−２４７；Ａ−１３４〜Ｙ−２４６；Ａ−１３４〜Ｃ−２４５；Ａ−１３４〜Ｓ−２４４；Ａ−１３４〜Ｎ−２４３；Ａ−１３４〜Ｎ−２４２；Ａ−１３４〜Ｐ−２４１；Ａ−１３４〜Ｌ−２４０；Ａ−１３４〜Ｔ−２３９；Ａ−１３４〜Ｅ−２３８；Ａ−１３４〜Ｐ−２３７；Ａ−１３４〜Ｍ−２３６；Ａ−１３４〜Ｎ−２３５；Ａ−１３４〜Ｑ−２３４；Ａ−１３４〜Ｉ−２３３；Ａ−１３４〜Ｃ−２３２；Ａ−１３４〜Ｒ−２３１；Ａ−１３４〜Ｆ−２３０；Ａ−１３４〜Ｌ−２２９；Ａ−１３４〜Ｔ−２２８；Ａ−１３４〜Ｖ−２２７；Ａ−１３４〜Ｌ−２２６；Ａ−１３４〜Ｓ−２２５；Ａ−１３４〜Ｌ−２２４；Ａ−１３４〜Ｅ−２２３；Ａ−１３４〜Ｄ−２２２；Ａ−１３４〜Ｇ−２２１；Ａ−１３４〜Ｆ−２２０；Ａ−１３４〜Ｖ−２１９；Ａ−１３４〜Ｈ−２１８；Ａ−１３４〜Ｖ−２１７；Ａ−１３４〜Ｋ−２１６；Ａ−１３４〜Ｋ−２１５；Ａ−１３４〜Ｒ−２１４；Ａ−１３４〜Ｑ−２１３；Ａ−１３４〜Ｉ−２１２；Ａ−１３４〜Ｌ−２１１；Ａ−１３４〜Ｈ−２１０；Ａ−１３４〜Ｇ−２０９；Ａ−１３４〜Ｍ−２０８；Ａ−１３４〜Ａ−２０７；Ａ−１３４〜Ｙ−２０６；Ａ−１３４〜Ｔ−２０５；Ａ−１３４〜Ｋ−２０４；Ａ−１３４〜Ｄ−２０３；Ａ−１３４〜Ｔ−２０２；Ａ−１３４〜Ｙ−２０１；Ａ−１３４〜Ｌ−２００；Ａ−１３４〜Ｖ−１９９；Ａ−１３４〜Ｑ−１９８；Ａ−１３４〜Ｇ−１９７；Ａ−１３４〜Ｙ−１９６；Ａ−１３４〜Ｉ−１９５；Ａ−１３４〜Ｆ−１９４；Ａ−１３４〜Ｆ−１９３；Ａ−１３４〜Ｙ−１９２；Ａ−１３４〜Ｇ−１９１；Ａ−１３４〜Ｔ−１９０；Ａ−１３４〜Ｅ−１８９；Ａ−１３４〜Ｋ−１８８；Ａ−１３４〜Ｖ−１８７；Ａ−１３４〜Ｌ−１８６；Ａ−１３４〜Ｉ−１８５；Ａ−１３４〜Ｋ−１８４；Ａ−１３４〜Ｎ−１８３；Ａ−１３４〜Ｅ−１８２；Ａ−１３４〜Ｋ−１８１；Ａ−１３４〜Ｅ−１８０；Ａ−１３４〜Ｅ−１７９；Ａ−１３４〜Ｌ−１７８；Ａ−１３４〜Ａ−１７７；Ａ−１３４〜Ｓ−１７６；Ａ−１３４〜Ｇ−１７５；Ａ−１３４〜Ｒ−１７４；Ａ−１３４〜Ｋ−１７３；Ａ−１３４〜Ｆ−１７２；Ａ−１３４〜Ｓ−１７１；Ａ−１３４〜Ｌ−１７０；Ａ−１３４〜Ｌ−１６９；Ａ−１３４〜Ｗ−１６８；Ａ−１３４〜Ｐ−１６７；Ａ−１３４〜Ｖ−１６６；Ａ−１３４〜Ｆ−１６５；Ａ−１３４〜Ｔ−１６４；Ａ−１３４〜Ｙ−１６３；Ａ−１３４〜Ｓ−１６２；Ａ−１３４〜Ｇ−１６１；Ａ−１３４〜Ｋ−１６０；Ａ−１３４〜Ｑ−１５９；Ａ−１３４〜Ｉ−１５８；Ａ−１３４〜Ｔ−１５７；Ａ−１３４〜Ｐ−１５６；Ａ−１３４〜Ｔ−１５５；Ａ−１３４〜Ｅ−１５４；Ａ−１３４〜Ｓ−１５３；Ａ−１３４〜Ｄ−１５２；Ａ−１３４〜Ａ−１５１；Ａ−１３４〜Ｉ−１５０；Ａ−１３４〜Ｌ−１４９；Ａ−１３４〜Ｑ−１４８；Ａ−１３４〜Ｌ−１４７；Ａ−１３４〜Ｃ−１４６；Ａ−１３４〜Ｄ−１４５；Ａ−１３４〜Ｑ−１４４；Ａ−１３４〜Ｔ−１４３；Ａ−１３４〜Ｖ−１４２；Ａ−１３４〜Ｔ−１４１；およびＡ−１３４〜Ｅ−１４０。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１２７】
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２８の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドフラグメントを結合し得る：Ｍ−１〜Ｃ−１５；Ｄ−２〜Ｌ−１６；Ｄ−３〜Ｋ−１７；Ｓ−４〜Ｋ−１８；Ｔ−５〜Ｒ−１９；Ｅ−６〜Ｅ−２０；Ｒ−７〜Ｅ−２１；Ｅ−８〜Ｍ−２２；Ｑ−９〜Ｋ−２３；Ｓ−１０〜Ｌ−２４；Ｒ−１１〜Ｋ−２５；Ｌ−１２〜Ｅ−２６；Ｔ−１３〜Ｃ−２７；Ｓ−１４〜Ｖ−２８；Ｃ−１５〜Ｓ−２９；Ｌ−１６〜Ｉ−３０；Ｋ−１７〜Ｌ−３１；Ｋ−１８〜Ｐ−３２；Ｒ−１９〜Ｒ−３３；Ｅ−２０〜Ｋ−３４；Ｅ−２１〜Ｅ−３５；Ｍ−２２〜Ｓ−３６；Ｋ−２３〜Ｐ−３７；Ｌ−２４〜Ｓ−３８；Ｋ−２５〜Ｖ−３９；Ｅ−２６〜Ｒ−４０；Ｃ−２７〜Ｓ−４１；Ｖ−２８〜Ｓ−４２；Ｓ−２９〜Ｋ−４３；Ｉ−３０〜Ｄ−４４；Ｌ−３１〜Ｇ−４５；Ｐ−３２〜Ｋ−４６；Ｒ−３３〜Ｌ−４７；Ｋ−３４〜Ｌ−４８；Ｅ−３５〜Ａ−４９；Ｓ−３６〜Ａ−５０；Ｐ−３７〜Ｔ−５１；Ｓ−３８〜Ｌ−５２；Ｖ−３９〜Ｌ−５３；Ｒ−４０〜Ｌ−５４；Ｓ−４１〜Ａ−５５；Ｓ−４２〜Ｌ−５６；Ｋ−４３〜Ｌ−５７；Ｄ−４４〜Ｓ−５８；Ｇ−４５〜Ｃ−５９；Ｋ−４６〜Ｃ−６０；Ｌ−４７〜Ｌ−６１；Ｌ−４８〜Ｔ−６２；Ａ−４９〜Ｖ−６３；Ａ−５０〜Ｖ−６４；Ｔ−５１〜Ｓ−６５；Ｌ−５２〜Ｆ−６６；Ｌ−５３〜Ｙ−６７；Ｌ−５４〜Ｑ−６８；Ａ−５５〜Ｖ−６９；Ｌ−５６〜Ａ−７０；Ｌ−５７〜Ａ−７１；Ｓ−５８〜Ｌ−７２；Ｃ−５９〜Ｑ−７３；Ｃ−６０〜Ｇ−７４；Ｌ−６１〜Ｄ−７５；Ｔ−６２〜Ｌ−７６；Ｖ−６３〜Ａ−７７；Ｖ−６４〜Ｓ−７８；Ｓ−６５〜Ｌ−７９；Ｆ−６６〜Ｒ−８０；Ｙ−６７〜Ａ−８１；Ｑ−６８〜Ｅ−８２；Ｖ−６９〜Ｌ−８３；Ａ−７０〜Ｑ−８４；Ａ−７１〜Ｇ−８５；Ｌ−７２〜Ｈ−８６；Ｑ−７３〜Ｈ−８７；Ｇ−７４〜Ａ−８８；Ｄ−７５〜Ｅ−８９；Ｌ−７６〜Ｋ−９０；Ａ−７７〜Ｌ−９１；Ｓ−７８〜Ｐ−９２；Ｌ−７９〜Ａ−９３；Ｒ−８０〜Ｇ−９４；Ａ−８１〜Ａ−９５；Ｅ−８２〜Ｇ−９６；Ｌ−８３〜Ａ−９７；Ｑ−８４〜Ｐ−９８；Ｇ−８５〜Ｋ９９；Ｈ−８６〜Ａ−１００；Ｈ−８７〜Ｇ−１０１；Ａ−８８〜Ｌ−１０２；Ｅ−８９〜Ｅ−１０３；Ｋ−９０〜Ｅ−１０４；Ｌ−９１〜Ａ−１０５；Ｐ−９２〜Ｐ−１０６；Ａ−９３〜Ａ−１０７；Ｇ−９４〜Ｖ−１０８；Ａ−９５〜Ｔ−１０９；Ｇ−９６〜Ａ−１１０；Ａ９７〜Ｇ−１１１；Ｐ−９８〜Ｌ−１１２；Ｋ−９９〜Ｋ−１１３；Ａ−１００〜Ｉ−１１４；Ｇ−１０１〜Ｆ−１１５；Ｌ−１０２〜Ｅ−１１６；Ｅ−１０３〜Ｐ−１１７；Ｅ−１０４〜Ｐ−１１８；Ａ−１０５〜Ａ−１１９；Ｐ−１０６〜Ｐ−１２０；Ａ−１０７〜Ｇ−１２１；Ｖ−１０８〜Ｅ−１２２；Ｔ−１０９〜Ｇ−１２３；Ａ−１１０〜Ｎ−１２４；Ｇ−１１１〜Ｓ−１２５；Ｌ−１１２〜Ｓ−１２６；Ｋ−１１３〜Ｑ−１２７；Ｉ−１１４〜Ｎ−１２８；Ｆ−１１５〜Ｓ−１２９；Ｅ−１１６〜Ｒ−１３０；Ｐ−１１７〜Ｎ−１３１；Ｐ−１１８〜Ｋ−１３２；Ａ−１１９〜Ｒ−１３３；Ｐ−１２０〜Ａ−１３４；Ｇ−１２１〜Ｖ−１３５；Ｅ−１２２〜Ｑ−１３６；Ｇ−１２３〜Ｇ−１３７；Ｎ−１２４〜Ｐ−１３８；Ｓ−１２５〜Ｅ−１３９；Ｓ−１２６〜Ｅ−１４０；Ｑ−１２７〜Ｔ−１４１；Ｎ−１２８〜Ｖ−１４２；Ｓ−１２９〜Ｔ−１４３；Ｒ−１３０〜Ｑ−１４４；Ｎ−１３１〜Ｄ−１４５；Ｋ−１３２〜Ｃ−１４６；Ｒ−１３３〜Ｌ−１４７；Ａ−１３４〜Ｑ−１４８；Ｖ−１３５〜Ｌ−１４９；Ｑ−１３６〜Ｉ−１５０；Ｇ−１３７〜Ａ−１５１；Ｐ−１３８〜Ｄ−１５２；Ｅ−１３９〜Ｓ−１５３；Ｅ−１４０〜Ｅ−１５４；Ｔ−１４１〜Ｔ−１５５；Ｖ−１４２〜Ｐ−１５６；Ｔ−１４３〜Ｔ−１５７；Ｑ−１４４〜１−１５８；Ｄ−１４５〜Ｑ−１５９；Ｃ−１４６〜Ｋ−１６０；Ｌ−１４７〜Ｇ−１６１；Ｑ−１４８〜Ｓ−１６２；Ｌ−１４９〜Ｙ−１６３；Ｉ−１５０〜Ｔ−１６４；Ａ−１５１〜Ｆ−１６５；Ｄ−１５２〜Ｖ−１６６；Ｓ−１５３〜Ｐ−１６７；Ｅ−１５４〜Ｗ−１６８；Ｔ−１５５〜Ｌ−１６９；Ｐ−１５６〜Ｌ−１７０；Ｔ−１５７〜Ｓ−１７１；Ｉ−１５８〜Ｆ−１７２；Ｑ−１５９〜Ｋ−１７３；Ｋ−１６０〜Ｒ−１７４；Ｇ−１６１〜Ｇ−１７５；Ｓ−１６２〜Ｓ−１７６；Ｙ−１６３〜Ａ−１７７；Ｔ−１６４〜Ｌ−１７８；Ｆ−１６５〜Ｅ−１７９；Ｖ−１６６〜Ｅ−１８０；Ｐ−１６７〜Ｋ−１８１；Ｗ−１６８〜Ｅ−１８２；Ｌ−１６９〜Ｎ−１８３；Ｌ−１７０〜Ｋ−１８４；Ｓ−１７１〜Ｉ−１８５；Ｆ−１７２〜Ｌ−１８６；Ｋ−１７３〜Ｖ−１８７；Ｒ−１７４〜Ｋ−１８８；Ｇ−１７５〜Ｅ−１８９；Ｓ−１７６〜Ｔ−１９０；Ａ−１７７〜Ｇ−１９１；Ｌ−１７８〜Ｙ−１９２；Ｅ−１７９〜Ｆ−１９３；Ｅ−１８０〜Ｆ−１９４；Ｋ−１８１〜Ｉ−１９５；Ｅ−１８２〜Ｙ−１９６；Ｎ−１８３〜Ｇ−１９７；Ｋ−１８４〜Ｑ−１９８；Ｉ−１８５〜Ｖ−１９９；Ｌ−１８６〜Ｌ−２００；Ｖ−１８７〜Ｙ−２０１；Ｋ−１８８〜Ｔ−２０２；Ｅ−１８９〜Ｄ−２０３；Ｔ−１９０〜Ｋ−２０４；Ｇ−１９１〜Ｔ−２０５；Ｙ−１９２〜Ｙ−２０６；Ｆ−１９３〜Ａ−２０７；Ｆ−１９４〜Ｍ−２０８；Ｉ−１９５〜Ｇ−２０９；Ｙ−１９６〜Ｈ−２１０；Ｇ−１９７〜Ｌ−２１１；Ｑ−１９８〜Ｉ−２１２；Ｖ−１９９〜Ｑ−２１３；Ｌ−２００〜Ｒ−２１４；Ｙ−２０１〜Ｋ−２１５；Ｔ−２０２〜Ｋ−２１６；Ｄ−２０３〜Ｖ−２１７；Ｋ−２０４〜Ｈ−２１８；Ｔ−２０５〜Ｖ−２１９；Ｙ−２０６〜Ｆ−２２０；Ａ−２０７〜Ｇ−２２１；Ｍ−２０８〜Ｄ−２２２；Ｇ−２０９〜Ｅ−２２３；Ｈ−２１０〜Ｌ−２２４；Ｌ−２１１〜Ｓ−２２５；Ｉ−２１２〜Ｌ−２２６；Ｑ−２１３〜Ｖ−２２７；Ｒ−２１４〜Ｔ−２２８；Ｋ−２１５〜Ｌ−２２９；Ｋ−２１６〜Ｆ−２３０；Ｖ−２１７〜Ｒ−２３１；Ｈ−２１８〜Ｃ−２３２；Ｖ−２１９〜Ｉ−２３３；Ｆ−２２０〜Ｑ−２３４；Ｇ−２２１〜Ｎ−２３５；Ｄ−２２２〜Ｍ−２３６；Ｅ−２２３〜Ｐ−２３７；Ｌ−２２４〜Ｅ−２３８；Ｓ−２２５〜Ｔ−２３９；Ｌ−２２６〜Ｌ−２４０；Ｖ−２２７〜Ｐ−２４１；Ｔ−２２８〜Ｎ−２４２；Ｌ−２２９〜Ｎ−２４３；Ｆ−２３０〜Ｓ−２４４；Ｒ−２３１〜Ｃ−２４５；Ｃ−２３２〜Ｙ−２４６；Ｉ−２３３〜Ｓ−２４７；Ｑ−２３４〜Ａ−２４８；Ｎ−２３５〜Ｇ−２４９；Ｍ−２３６〜Ｉ−２５０；Ｐ−２３７〜Ａ−２５１；Ｅ−２３８〜Ｋ−２５２；Ｔ−２３９〜Ｌ−２５３；Ｌ−２４０〜Ｅ−２５４；Ｐ−２４１〜Ｅ−２５５；Ｎ−２４２〜Ｇ−２５６；Ｎ−２４３〜Ｄ−２５７；Ｓ−２４４〜Ｅ−２５８；Ｃ−２４５〜Ｌ−２５９；Ｙ−２４６〜Ｑ−２６０；Ｓ−２４７〜Ｌ−２６１；Ａ−２４８〜Ａ−２６２；Ｇ−２４９〜Ｉ−２６３；Ｉ−２５０〜Ｐ−２６４；Ａ−２５１〜Ｒ−２６５；Ｋ−２５２〜Ｅ−２６６；Ｌ−２５３〜Ｎ−２６７；Ｅ−２５４〜Ａ−２６８；Ｅ−２５５〜Ｑ−２６９；Ｇ−２５６〜Ｉ−２７０；Ｄ−２５７〜Ｓ−２７１；Ｅ−２５８〜Ｌ−２７２；Ｌ−２５９〜Ｄ−２７３；Ｑ−２６０〜Ｇ−２７４；Ｌ−２６１〜Ｄ−２７５；Ａ−２６２〜Ｖ−２７６；Ｉ−２６３〜Ｔ−２７７；Ｐ−２６４〜Ｆ−２７８；Ｒ−２６５〜Ｆ−２７９；Ｅ−２６６〜Ｇ−２８０；Ｎ−２６７〜Ａ−２８１；Ａ−２６８〜Ｌ−２８２；Ｑ−２６９〜Ｋ−２８３；Ｉ−２７０〜Ｌ−２８４；およびＳ−２７１〜Ｌ−２８５。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１２８】
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２９の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドフラグメントに結合し得る：Ｍ−１〜Ｃ−１５；Ｄ−２〜Ｌ−１６；Ｄ−３〜Ｋ−１７；Ｓ４〜Ｋ−１８；Ｔ−５〜Ｒ−１９；Ｅ−６〜Ｅ−２０；Ｒ−７〜Ｅ−２１；Ｅ−８〜Ｍ−２２；Ｑ−９〜Ｋ−２３；Ｓ−１０〜Ｌ−２４；Ｒ−１１〜Ｋ−２５；Ｌ−１２〜Ｅ−２６；Ｔ−１３〜Ｃ−２７；Ｓ−１４〜Ｖ−２８；Ｃ−１５〜Ｓ−２９；Ｌ−１６〜Ｉ−３０；Ｋ−１７〜Ｌ−３１；Ｋ−１８〜Ｐ−３２；Ｒ−１９〜Ｒ−３３；Ｅ−２０〜Ｋ−３４；Ｅ−２１〜Ｅ−３５；Ｍ−２２〜Ｓ−３６；Ｋ−２３〜Ｐ−３７；Ｌ−２４〜Ｓ−３８；Ｋ−２５〜Ｖ−３９；Ｅ−２６〜Ｒ−４０；Ｃ−２７〜Ｓ−４１；Ｖ−２８〜Ｓ−４２；Ｓ−２９〜Ｋ−４３；Ｉ−３０〜Ｄ−４４；Ｌ−３１〜Ｇ−４５；Ｐ−３２〜Ｋ−４６；Ｒ−３３〜Ｌ−４７；Ｋ−３４〜Ｌ−４８；Ｅ−３５〜Ａ−４９；Ｓ−３６〜Ａ−５０；Ｐ−３７〜Ｔ−５１；Ｓ−３８〜Ｌ−５２；Ｖ−３９〜Ｌ−５３；Ｒ−４０〜Ｌ−５４；Ｓ−４１〜Ａ−５５；Ｓ−４２〜Ｌ−５６；Ｋ−４３〜Ｌ−５７；Ｄ−４４〜Ｓ−５８；Ｇ−４５〜Ｃ−５９；Ｋ−４６〜Ｃ−６０；Ｌ−４７〜Ｌ−６１；Ｌ−４８〜Ｔ−６２；Ａ−４９〜Ｖ−６３；Ａ−５０〜Ｖ−６４；Ｔ−５１〜Ｓ−６５；Ｌ−５２〜Ｆ−６６；Ｌ−５３〜Ｙ−６７；Ｌ−５４〜Ｑ−６８；Ａ−５５〜Ｖ−６９；Ｌ−５６〜Ａ−７０；Ｌ−５７〜Ａ−７１；Ｓ−５８〜Ｌ−７２；Ｃ−５９〜Ｑ−７３；Ｃ−６０〜Ｇ−７４；Ｌ−６１〜Ｄ−７５；Ｔ−６２〜Ｌ−７６；Ｖ−６３〜Ａ−７７；Ｖ−６４〜Ｓ−７８；Ｓ−６５〜Ｌ−７９；Ｆ−６６〜Ｒ−８０；Ｙ−６７〜Ａ−８１；Ｑ−６８〜Ｅ−８２；Ｖ−６９〜Ｌ−８３；Ａ−７０〜Ｑ−８４；Ａ−７１〜Ｇ−８５；Ｌ−７２〜Ｈ−８６；Ｑ−７３〜Ｈ−８７；Ｇ−７４〜Ａ−８８；Ｄ−７５〜Ｅ−８９；Ｌ−７６〜Ｋ−９０；Ａ−７７〜Ｌ−９１；Ｓ−７８〜Ｐ−９２；Ｌ−７９〜Ａ−９３；Ｒ−８０〜Ｇ−９４；Ａ−８１〜Ａ−９５；Ｅ−８２〜Ｇ−９６；Ｌ−８３〜Ａ−９７；Ｑ−８４〜Ｐ−９８；Ｇ−８５〜Ｋ−９９；Ｈ−８６〜Ａ−１００；Ｈ−８７〜Ｇ−１０１；Ａ−８８〜Ｌ−１０２；Ｅ−８９〜Ｅ−１０３；Ｋ−９０〜Ｅ−１０４；Ｌ−９１〜Ａ−１０５；Ｐ−９２〜Ｐ−１０６；Ａ−９３〜Ａ−１０７；Ｇ−９４〜Ｖ−１０８；Ａ−９５〜Ｔ−１０９；Ｇ−９６〜Ａ−１１０；Ａ９７〜Ｇ−１１１；Ｐ−９８〜Ｌ−１１２；Ｋ−９９〜Ｋ−１１３；Ａ−１００〜Ｉ−１１４；Ｇ−１０１〜Ｆ−１１５；Ｌ−１０２〜Ｅ−１１６；Ｅ−１０３〜Ｐ−１１７；Ｅ−１０４〜Ｐ−１１８；Ａ−１０５〜Ａ−１１９；Ｐ−１０６〜Ｐ−１２０；Ａ−１０７〜Ｇ−１２１；Ｖ−１０８〜Ｅ−１２２；Ｔ−１０９〜Ｇ−１２３；Ａ−１１０〜Ｎ−１２４；Ｇ−１１１〜Ｓ−１２５；Ｌ−１１２〜Ｓ−１２６；Ｋ−１１３〜Ｑ−１２７；Ｉ−１１４〜Ｎ−１２８；Ｆ−１１５〜Ｓ−１２９；Ｅ−１１６〜Ｒ−１３０；Ｐ−１１７〜Ｎ−１３１；Ｐ−１１８〜Ｋ−１３２；Ａ−１１９〜Ｒ−１３３；Ｐ−１２０〜Ａ−１３４；Ｇ−１２１〜Ｖ−１３５；Ｅ−１２２〜Ｑ−１３６；Ｇ−１２３〜Ｇ−１３７；Ｎ−１２４〜Ｐ−１３８；Ｓ−１２５〜Ｅ−１３９；Ｓ−１２６〜Ｅ−１４０；Ｑ−１２７〜Ｔ−１４１；Ｎ−１２８〜Ｇ−１４２；Ｓ−１２９〜Ｓ−１４３；Ｒ−１３０〜Ｙ−１４４；Ｎ−１３１〜Ｔ−１４５；Ｋ−１３２〜Ｆ−１４６；Ｒ−１３３〜Ｖ−１４７；Ａ−１３４〜Ｐ−１４８；Ｖ−１３５〜Ｗ−１４９；Ｑ−１３６〜Ｌ−１５０；Ｇ−１３７〜Ｌ−１５１；Ｐ−１３８〜Ｓ−１５２；Ｅ−１３９〜Ｆ−１５３；Ｅ−１４０〜Ｋ−１５４；Ｔ−１４１〜Ｒ−１５５；Ｇ−１４２〜Ｇ−１５６；Ｓ−１４３〜Ｓ−１５７；Ｙ−１４４〜Ａ−１５８；Ｔ−１４５〜Ｌ−１５９；Ｆ−１４６〜Ｅ−１６０；Ｖ−１４７〜Ｅ−１６１；Ｐ−１４８〜Ｋ−１６２；Ｗ−１４９〜Ｅ−１６３；Ｌ−１５０〜Ｎ−１６４；Ｌ−１５１〜Ｋ−１６５；Ｓ−１５２〜Ｉ−１６６；Ｆ−１５３〜Ｌ−１６７；Ｋ−１５４〜Ｖ−１６８；Ｒ−１５５〜Ｋ−１６９；Ｇ−１５６〜Ｅ−１７０；Ｓ−１５７〜Ｔ−１７１；Ａ−１５８〜Ｇ−１７２；Ｌ−１５９〜Ｙ−１７３；Ｅ−１６０〜Ｆ−１７４；Ｅ−１６１〜Ｆ−１７５；Ｋ−１６２〜Ｉ−１７６；Ｅ−１６３〜Ｙ−１７７；Ｎ−１６４〜Ｇ−１７８；Ｋ−１６５〜Ｑ−１７９；Ｉ−１６６〜Ｖ−１８０；Ｌ−１６７〜Ｌ−１８１；Ｖ−１６８〜Ｙ−１８２；Ｋ−１６９〜Ｔ−１８３；Ｅ−１７０〜Ｄ−１８４；Ｔ−１７１〜Ｋ−１８５；Ｇ−１７２〜Ｔ−１８６；Ｙ−１７３〜Ｙ−１８７；Ｆ−１７４〜Ａ−１８８；Ｆ−１７５〜Ｍ−１８９；Ｉ−１７６〜Ｇ−１９０；Ｙ−１７７〜Ｈ−１９１；Ｇ−１７８〜Ｌ−１９２；Ｑ−１７９〜Ｉ−１９３；Ｖ−１８０〜Ｑ−１９４；Ｌ−１８１〜Ｒ−１９５；Ｙ−１８２〜Ｋ−１９６；Ｔ−１８３〜Ｋ−１９７；Ｄ−１８４〜Ｖ−１９８；Ｋ−１８５〜Ｈ−１９９；Ｔ−１８６〜Ｖ−２００；Ｙ−１８７〜Ｆ−２０１；Ａ−１８８〜Ｇ−２０２；Ｍ−１８９〜Ｄ−２０３；Ｇ−１９０〜Ｅ−２０４；Ｈ−１９１〜Ｌ−２０５；Ｌ−１９２〜Ｓ−２０６；Ｉ−１９３〜Ｌ−２０７；Ｑ−１９４〜Ｖ−２０８；Ｒ−１９５〜Ｔ−２０９；Ｋ−１９６〜Ｌ−２１０；Ｋ−１９７〜Ｆ−２１１；Ｖ−１９８〜Ｒ−２１２；Ｈ−１９９〜Ｃ−２１３；Ｖ−２００〜Ｉ−２１４；Ｆ−２０１〜Ｑ−２１５；Ｇ−２０２〜Ｎ−２１６；Ｄ−２０３〜Ｍ−２１７；Ｅ−２０４〜Ｐ−２１８；Ｌ−２０５〜Ｅ−２１９；Ｓ−２０６〜Ｔ−２２０；Ｌ−２０７〜Ｌ−２２１；Ｖ−２０８〜Ｐ−２２２；Ｔ−２０９〜Ｎ−２２３；Ｌ−２１０〜Ｎ−２２４；Ｆ−２１１〜Ｓ−２２５；Ｒ−２１２〜Ｃ−２２６；Ｃ−２１３〜Ｙ−２２７；Ｉ−２１４〜Ｓ−２２８；Ｑ−２１５〜Ａ−２２９；Ｎ−２１６〜Ｇ−２３０；Ｍ−２１７〜Ｉ−２３１；Ｐ−２１８〜Ａ−２３２；Ｅ−２１９〜Ｋ−２３３；Ｔ−２２０〜Ｌ−２３４；Ｌ−２２１〜Ｅ−２３５；Ｐ−２２２〜Ｅ−２３６；Ｎ−２２３〜Ｇ−２３７；Ｎ−２２４〜Ｄ−２３８；Ｓ−２２５〜Ｅ−２３９；Ｃ−２２６〜Ｌ−２４０；Ｙ−２２７〜Ｑ−２４１；Ｓ−２２８〜Ｌ−２４２；Ａ−２２９〜Ａ−２４３；Ｇ−２３０〜Ｉ−２４４；Ｉ−２３１〜Ｐ−２４５；Ａ−２３２〜Ｒ−２４６；Ｋ−２３３〜Ｅ−２４７；Ｌ−２３４〜Ｎ−２４８；Ｅ−２３５〜Ａ−２４９；Ｅ−２３６〜Ｑ−２５０；Ｇ−２３７〜Ｉ−２５１；Ｄ−２３８〜Ｓ−２５２；Ｅ−２３９〜Ｌ−２５３；Ｌ−２４０〜Ｄ−２５４；Ｑ−２４１〜Ｇ−２５５；Ｌ−２４２〜Ｄ−２５６；Ａ−２４３〜Ｖ−２５７；Ｉ−２４４〜Ｔ−２５８；Ｐ−２４５〜Ｆ−２５９；Ｒ−２４６〜Ｆ−２６０；Ｅ−２４７〜Ｇ−２６１；Ｎ−２４８〜Ａ−２６２；Ａ−２４９〜Ｌ−２６３；Ｑ−２５０〜Ｋ−２６４；Ｉ−２５１〜Ｌ−２６５；およびＳ−２５２〜Ｌ−２６６。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１２９】
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３８の以下の残基からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなるポリペプチドフラグメントに結合し得る：Ｍ−１〜Ｆ−１５；Ｄ−２〜Ｃ−１６；Ｅ−３〜Ｓ−１７；Ｓ−４〜Ｅ−１８；Ａ−５〜Ｋ−１９；Ｋ−６〜Ｇ−２０；Ｔ−７〜Ｅ−２１；Ｌ−８〜Ｄ−２２；Ｐ−９〜Ｍ−２３；Ｐ−１０〜Ｋ−２４；Ｐ−１１〜Ｖ−２５；Ｃ−１２〜Ｇ−２６；Ｌ−１３〜Ｙ−２７；Ｃ−１４〜Ｄ−２８；Ｆ−１５〜Ｐ−２９；Ｃ−１６〜Ｉ−３０；Ｓ−１７〜Ｔ−３１；Ｅ−１８〜Ｐ−３２；Ｋ−１９〜Ｑ−３３；Ｇ−２０〜Ｋ−３４；Ｅ−２１〜Ｅ−３５；Ｄ−２２〜Ｅ−３６；Ｍ−２３〜Ｇ−３７；Ｋ−２４〜Ａ−３８；Ｖ−２５〜Ｗ−３９；Ｇ−２６〜Ｆ−４０；Ｙ−２７〜Ｇ−４１；Ｄ−２８〜Ｉ−４２；Ｐ−２９〜Ｃ−４３；Ｉ−３０〜Ｒ−４４；Ｔ−３１〜Ｄ−４５；Ｐ−３２〜Ｇ−４６；Ｑ−３３〜Ｒ−４７；Ｋ−３４〜Ｌ−４８；Ｅ−３５〜Ｌ−４９；Ｅ−３６〜Ａ−５０；Ｇ−３７〜Ａ−５１；Ａ−３８〜Ｔ−５２；Ｗ−３９〜Ｌ−５３；Ｆ−４０〜Ｌ−５４；Ｇ−４１〜Ｌ−５５；Ｉ−４２〜Ａ−５６；Ｃ−４３〜Ｌ−５７；Ｒ−４４〜Ｌ−５８；Ｄ−４５〜Ｓ−５９；Ｇ−４６〜Ｓ−６０；Ｒ−４７〜Ｓ−６１；Ｌ−４８〜Ｆ−６２；Ｌ−４９〜Ｔ−６３；Ａ−５０〜Ａ−６４；Ａ−５１〜Ｍ−６５；Ｔ−５２〜Ｓ−６６；Ｌ−５３〜Ｌ−６７；Ｌ−５４〜Ｙ−６８；Ｌ−５５〜Ｑ−６９；Ａ−５６〜Ｌ−７０；Ｌ−５７〜Ａ−７１；Ｌ−５８〜Ａ−７２；Ｓ−５９〜Ｌ−７３；Ｓ−６０〜Ｑ−７４；Ｓ−６１〜Ａ−７５；Ｆ−６２〜Ｄ−７６；Ｔ−６３〜Ｌ−７７；Ａ−６４〜Ｍ−７８；Ｍ−６５〜Ｎ−７９；Ｓ−６６〜Ｌ−８０；Ｌ−６７〜Ｒ−８１；Ｙ−６８〜Ｍ−８２；Ｑ−６９〜Ｅ−８３；Ｌ−７０〜Ｌ−８４；Ａ−７１〜Ｑ−８５；Ａ−７２〜Ｓ−８６；Ｌ−７３〜Ｙ−８７；Ｑ−７４〜Ｒ−８８；Ａ−７５〜Ｇ−８９；Ｄ−７６〜Ｓ−９０；Ｌ−７７〜Ａ−９１；Ｍ−７８〜Ｔ−９２；Ｎ−７９〜Ｐ−９３；Ｌ−８０〜Ａ−９４；Ｒ−８１〜Ａ−９５；Ｍ−８２〜Ａ−９６；Ｅ−８３〜Ｇ−９７；Ｌ−８４〜Ａ−９８；Ｑ−８５〜Ｐ−９９；Ｓ−８６〜Ｅ−１００；Ｙ−８７〜Ｌ−１０１；Ｒ−８８〜Ｔ−１０２；Ｇ−８９〜Ａ−１０３；Ｓ−９０〜Ｇ−１０４；Ａ−９１〜Ｖ−１０５；Ｔ−９２〜Ｋ−１０６；Ｐ−９３〜Ｌ−１０７；Ａ−９４〜Ｌ−１０８；Ａ−９５〜Ｔ−１０９；Ａ−９６〜Ｐ−１１０；Ｇ−９７〜Ａ−１１１；Ａ−９８〜Ａ−１１２；Ｐ−９９〜Ｐ−１１３；Ｅ−１００〜Ｒ−１１４；Ｌ−１０１〜Ｐ−１１５；Ｔ−１０２〜Ｈ−１１６；Ａ−１０３〜Ｎ−１１７；Ｇ−１０４〜Ｓ−１１８；Ｖ−１０５〜Ｓ−１１９；Ｋ−１０６〜Ｒ−１２０；Ｌ−１０７〜Ｇ−１２１；Ｌ−１０８〜Ｈ−１２２；Ｔ−１０９〜Ｒ−１２３；Ｐ−１１０〜Ｎ−１２４；Ａ−１１１〜Ｒ−１２５；Ａ−１１２〜Ｒ−１２６；Ｐ−１１３〜Ａ−１２７；Ｒ−１１４〜Ｆ−１２８；Ｐ−１１５〜Ｑ−１２９；Ｈ−１１６〜Ｇ−１３０；Ｎ−１１７〜Ｐ−１３１；Ｓ−１１８〜Ｅ−１３２；Ｓ−１１９〜Ｅ−１３３；Ｒ−１２０〜Ｔ−１３４；Ｇ−１２１〜Ｅ−１３５；Ｈ−１２２〜Ｑ−１３６；Ｒ−１２３〜Ｄ−１３７；Ｎ−１２４〜Ｖ−１３８；Ｒ−１２５〜Ｄ−１３９；Ｒ−１２６〜Ｌ−１４０；Ａ−１２７〜Ｓ−１４１；Ｆ−１２８〜Ａ−１４２；Ｑ−１２９〜Ｐ−１４３；Ｇ−１３０〜Ｐ−１４４；Ｐ−１３１〜Ａ−１４５；Ｅ−１３２〜Ｐ−１４６；Ｅ−１３３〜Ｃ−１４７；Ｔ−１３４〜Ｌ−１４８；Ｅ−１３５〜Ｐ−１４９；Ｑ−１３６〜Ｇ−１５０；Ｄ−１３７〜Ｃ−１５１；Ｖ−１３８〜Ｒ−１５２；Ｄ−１３９〜Ｈ−１５３；Ｌ−１４０〜Ｓ−１５４；Ｓ−１４１〜Ｑ−１５５；Ａ−１４２〜Ｈ−１５６；Ｐ−１４３〜Ｄ−１５７；Ｐ−１４４〜Ｄ−１５８；Ａ−１４５〜Ｎ−１５９；Ｐ−１４６〜Ｇ−１６０；Ｃ−１４７〜Ｍ−１６１；Ｌ−１４８〜Ｎ−１６２；Ｐ−１４９〜Ｌ−１６３；Ｇ−１５０〜Ｒ−１６４；Ｃ−１５１〜Ｎ−１６５；Ｒ−１５２〜Ｉ−１６６；Ｈ−１５３〜Ｉ−１６７；Ｓ−１５４〜Ｑ−１６８；Ｑ−１５５〜Ｄ−１６９；Ｈ−１５６〜Ｃ−１７０；Ｄ−１５７〜Ｌ−１７１；Ｄ−１５８〜Ｑ−１７２；Ｎ−１５９〜Ｌ−１７３；Ｇ−１６０〜Ｉ−１７４；Ｍ−１６１〜Ａ−１７５；Ｎ−１６２〜Ｄ−１７６；Ｌ−１６３〜Ｓ−１７７；Ｒ−１６４〜Ｄ−１７８；Ｎ−１６５〜Ｔ−１７９；Ｉ−１６６〜Ｐ−１８０；Ｉ−１６７〜Ａ−１８１；Ｑ−１６８〜Ｌ−１８２；Ｄ−１６９〜Ｅ−１８３；Ｃ−１７０〜Ｅ−１８４；Ｌ−１７１〜Ｋ−１８５；Ｑ−１７２〜Ｅ−１８６；Ｌ−１７３〜Ｎ−１８７；Ｉ−１７４〜Ｋ−１８８；Ａ−１７５〜１−１８９；Ｄ−１７６〜Ｖ−１９０；Ｓ−１７７〜Ｖ−１９１；Ｄ−１７８〜Ｒ−１９２；Ｔ−１７９〜Ｑ−１９３；Ｐ−１８０〜Ｔ−１９４；Ａ−１８１〜Ｇ−１９５；Ｌ−１８２〜Ｙ−１９６；Ｅ−１８３〜Ｆ−１９７；Ｅ−１８４〜Ｆ−１９８；Ｋ−１８５〜１−１９９；Ｅ−１８６〜Ｙ−２００；Ｎ−１８７〜Ｓ−２０１；Ｋ−１８８〜Ｑ−２０２；Ｉ−１８９〜Ｖ−２０３；Ｖ−１９０〜Ｌ−２０４；Ｖ−１９１〜Ｙ−２０５；Ｒ−１９２〜Ｔ−２０６；Ｑ−１９３〜Ｄ−２０７；Ｔ−１９４〜Ｐ−２０８；Ｇ−１９５〜Ｉ−２０９；Ｙ−１９６〜Ｆ−２１０；Ｆ−１９７〜Ａ−２１１；Ｆ−１９８〜Ｍ−２１２；Ｉ−１９９〜Ｇ−２１３；Ｙ−２００〜Ｈ−２１４；Ｓ−２０１〜Ｖ−２１５；Ｑ−２０２〜Ｉ−２１６；Ｖ−２０３〜Ｑ−２１７；Ｌ−２０４〜Ｒ−２１８；Ｙ−２０５〜Ｋ−２１９；Ｔ−２０６〜Ｋ−２２０；Ｄ−２０７〜Ｖ−２２１；Ｐ−２０８〜Ｈ−２２２；Ｉ−２０９〜Ｖ−２２３；Ｆ−２１０〜Ｆ−２２４；Ａ−２１１〜Ｇ−２２５；Ｍ−２１２〜Ｄ−２２６；Ｇ−２１３〜Ｅ−２２７；Ｈ−２１４〜Ｌ−２２８；Ｖ−２１５〜Ｓ−２２９；Ｉ−２１６〜Ｌ−２３０；Ｑ−２１７〜Ｖ−２３１；Ｒ−２１８〜Ｔ−２３２；Ｋ−２１９〜Ｌ−２３３；Ｋ−２２０〜Ｆ−２３４；Ｖ−２２１〜Ｒ−２３５；Ｈ−２２２〜Ｃ−２３６；Ｖ−２２３〜Ｉ−２３７；Ｆ−２２４〜Ｑ−２３８；Ｇ−２２５〜Ｎ−２３９；Ｄ−２２６〜Ｍ−２４０；Ｅ−２２７〜Ｐ−２４１；Ｌ−２２８〜Ｋ−２４２；Ｓ−２２９〜Ｔ−２４３；Ｌ−２３０〜Ｌ−２４４；Ｖ−２３１〜Ｐ−２４５；Ｔ−２３２〜Ｎ−２４６；Ｌ−２３３〜Ｎ−２４７；Ｆ−２３４〜Ｓ−２４８；Ｒ−２３５〜Ｃ−２４９；Ｃ−２３６〜Ｙ−２５０；Ｉ−２３７〜Ｓ−２５１；Ｑ−２３８〜Ａ−２５２；Ｎ−２３９〜Ｇ−２５３；Ｍ−２４０〜Ｉ−２５４；Ｐ−２４１〜Ａ−２５５；Ｋ−２４２〜Ｒ−２５６；Ｔ−２４３〜Ｌ−２５７；Ｌ−２４４〜Ｅ−２５８；Ｐ−２４５〜Ｅ−２５９；Ｎ−２４６〜Ｇ−２６０；Ｎ−２４７〜Ｄ−２６１；Ｓ−２４８〜Ｅ−２６２；Ｃ−２４９〜Ｉ−２６３；Ｙ−２５０〜Ｑ−２６４；Ｓ−２５１〜Ｌ−２６５；Ａ−２５２〜Ａ−２６６；Ｇ−２５３〜Ｉ−２６７；Ｉ−２５４〜Ｐ−２６８；Ａ−２５５〜Ｒ−２６９；Ｒ−２５６〜Ｅ−２７０；Ｌ−２５７〜Ｎ−２７１；Ｅ−２５８〜Ａ−２７２；Ｅ−２５９〜Ｑ−２７３；Ｇ−２６０〜Ｉ−２７４；Ｄ−２６１〜Ｓ−２７５；Ｅ−２６２〜Ｒ−２７６；Ｉ−２６３〜Ｎ−２７７；Ｑ−２６４〜Ｇ−２７８；Ｌ−２６５〜Ｄ−２７９；Ａ−２６６〜Ｄ−２８０；Ｉ−２６７〜Ｔ−２８１；Ｐ−２６８〜Ｆ−２８２；Ｒ−２６９〜Ｆ−２８３；Ｅ−２７０〜Ｇ−２８４；Ｎ−２７１〜Ａ−２８５；Ａ−２７２〜Ｌ−２８６；Ｑ−２７３〜Ｋ−２８７；Ｉ−２７４〜Ｌ−２８８；およびＳ−２７５〜Ｌ−２８９。本発明はまた、上記のＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸残基の連続した配列を含むか、あるいはこれらからなるＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体に関する。
【０１３０】
ＢＬｙＳポリペプチドのいくつかのアミノ酸配列は、このポリペプチドの構造または機能への有意な影響なく改変され得ることが、当業者に認識される。配列におけるこのような差異が意図される場合、ポリペプチド上に活性を決定する重要な領域が存在することに留意すべきである。
【０１３１】
従って、本発明はさらに、ＢＬｙＳポリペプチドの機能的活性（例えば、生物学的活性）を示すか、またはＢＬｙＳポリペプチドの領域（例えば、本明細書中に記載のポリペプチドフラグメント）を含むＢＬｙＳポリペプチドの変形物に結合する抗体を含む。このような変異体は、活性に対してほとんど影響を有さないような、当該分野で公知の一般的規則に従って選択された欠失、挿入、反転、反復または型置換を含む。例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換を作製する方法に関するガイダンスは、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら，「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｍｅｓｓａｇｅ　ｉｎ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｔｏ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４７：１３０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは、変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究するために、２つの主なアプローチが存在することを示す。第１の方法は、進化のプロセスに依存し、このプロセスにおいて変異は、自然選択によって受け入れられるかまたは拒絶されるかのいずれかである。第２のアプローチは、クローニングした遺伝子の特定の位置にアミノ酸変化を導入するための遺伝子操作、および機能性を維持する配列を同定するための選択またはスクリーニングを使用する。
【０１３２】
著者らが述べるように、これらの研究によって、タンパク質がアミノ酸置換に驚くほど寛容であることが明らかになった。著者らはさらに、どのアミノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示す。例えば、最も埋もれているアミノ酸残基は、非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。他のこのような表現型としてサイレントな置換は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら（前出）、および本明細書の引用文献に記載されている。保存的置換として代表的にみられるのは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅのなかでの、一方の別のものによる置き換え；ヒドロキシル残基ＳｅｒおよびＴｈｒの交換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの交換；アミド残基のＡｓｎとＧｌｎの間の置換、塩基性残基のＬｙｓおよびＡｒｇの交換、ならびに芳香族残基のＰｈｅ、Ｔｙｒの間の置換である。
【０１３３】
従って、本発明の抗体は、配列番号３２２８のポリペプチドのフラグメント、誘導体、もしくはアナログ、または寄託されたｃＤＮＡプラスミドによってコードされるものに結合し得る。これらは例えば、以下である：（ｉ）ポリペプチドであって、１つ以上のアミノ酸残基が、保存的アミノ酸残基もしくは非保存的アミノ酸残基（好ましくは保存的アミノ酸残基）で置換されており、そしてこのように置換されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされたものであってもそうでなくてもよい、ポリペプチド、または（ｉｉ）ポリペプチドであって、１つ以上のアミノ酸残基が置換基を含む、ポリペプチド、または（ｉｉｉ）ポリペプチドであって、このポリペプチドの細胞外ドメインが、別の化合物（例えば、ポリぺプチドの半減期を増大させる化合物（例えば、ポリエチレングリコール）のような別の化合物と融合されている、ポリペプチド、または（ｉｖ）ポリペプチドであって、さらなるアミノ酸が、このポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、ＩｇＧ　Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダーもしくは分泌配列、またはこのポリペプチドの細胞外ドメインもしくはプロタンパク質配列の精製のために使用される配列）と融合されている、ポリペプチド。
【０１３４】
本発明の抗体は、配列番号３２２９のポリペプチドのフラグメント、誘導体、もしくはアナログ、または寄託されたｃＤＮＡプラスミドによってコードされるものに結合し得る。これらは例えば、以下である：（ｉ）ポリペプチドであって、１つ以上のアミノ酸残基が、保存的アミノ酸残基もしくは非保存的アミノ酸残基（好ましくは保存的アミノ酸残基）で置換されており、そしてこのように置換されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされたものであってもそうでなくてもよい、ポリペプチド、または（ｉｉ）ポリペプチドであって、１つ以上のアミノ酸残基が置換基を含む、ポリペプチド、または（ｉｉｉ）ポリペプチドであって、このポリペプチドの細胞外ドメインが、別の化合物（例えば、ポリぺプチドの半減期を増大させる化合物（例えば、ポリエチレングリコール）のような別の化合物と融合されている、ポリペプチド、または（ｉｖ）ポリペプチドであって、さらなるアミノ酸が、このポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、別のＴＮＦリガンドファミリーメンバー（例えば、ＣＤ４０リガンド）の可溶性の生物学的に活性なフラグメント、ＩｇＧ　Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダーもしくは分泌配列、またはこのポリペプチドの細胞外ドメインもしくはプロタンパク質配列の精製のために使用される配列）と融合されている、ポリペプチド。このようなフラグメント、誘導体、およびアナログは、本明細書中の教示から、当業者の範囲内であるとみなされる。
【０１３５】
従って、本発明の抗体は、天然の変異またはヒトの操作のいずれかに由来する、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含む、ＢＬｙＳポリペプチドに結合し得る。示されるように、変化は好ましくはわずかな性質の変化（例えば、タンパク質の折り畳みまたは活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換）である（表１３を参照のこと）。
【０１３６】
【表３】
2004509615.tif 000017
本発明の１つの実施形態において、本発明の抗体は、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むが、５０の保存的アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０の保存的アミノ酸置換を超えず、なおより好ましくは、３０の保存的アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは、２０の保存的アミノ酸置換を超えないアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列からなるポリペプチドに結合する。本発明の１つの実施形態において、本発明の抗体は、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１つの保存的アミノ酸置換を超えない保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有するＢＬｙＳポリペプチドのアミノ酸配列を含むか、あるいはこれからなるポリペプチドに結合する。
【０１３７】
例えば、ＢＬｙＳのアミノ酸レベルの部位指向性変化は、特定のアミノ酸の保存的置換によってなされ得る。本発明の抗体は、以下：Ｍ１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｄ２（以下で置換：Ｅ）；Ｄ３（以下で置換：Ｅ）；Ｓ４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ６（以下で置換：Ｄ）；Ｒ７（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ８（以下で置換：Ｄ）；Ｑ９（以下で置換：Ｎ）；Ｓ１０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ１１（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｌ１２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ１３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ１７（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｋ１８（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１９（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ２０（以下で置換：Ｄ）；Ｅ２１（以下で置換：Ｄ）；Ｍ２２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｋ２３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２５（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ２６（以下で置換：Ｄ）；Ｖ２８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｓ２９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ３０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ３１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ３３（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｋ３４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ３５（以下で置換：Ｄ）；Ｓ３６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ３８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ３９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｒ４０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｓ４１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ４２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ４３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｄ４４（以下で置換：Ｅ）；Ｇ４５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ４６（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ４７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ４８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ４９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ５０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ５１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ５５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ５８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ６１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ６２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ６３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｖ６４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｓ６５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ６６（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｙ６７（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｑ６８（以下で置換：Ｎ）；Ｖ６９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ａ７０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ７１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ７２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ７３（以下で置換：Ｎ）；Ｇ７４（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ７５（以下で置換：Ｅ）；Ｌ７６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ７７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ７８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ７９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ８０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ａ８１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ８２（以下で置換：Ｄ）；Ｌ８３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ８４（以下で置換：Ｎ）；Ｇ８５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｈ８６（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｈ８７（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ａ８８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ８９（以下で置換：Ｄ）；Ｋ９０（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ９１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９３（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ９４（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ９６（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ９９（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ａ１００（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１０１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１０２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１０３（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１０４（以下で置換：Ｄ）；Ａ１０５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１０７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１０８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ１０９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１１０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１１１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１１２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ１１３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｉ１１４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１１５（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｅ１１６（以下で置換：Ｄ）；Ａ１１９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１２１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１２２（以下で置換：Ｄ）；Ｇ１２３（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｎ１２４（以下で置換：Ｑ）；Ｓ１２５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１２６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１２７（以下で置換：Ｎ）；Ｎ１２８（以下で置換：Ｑ）；Ｓ１２９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ１３０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｎ１３１（以下で置換：Ｑ）；Ｋ１３２（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１３３（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ａ１３４（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１３５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｑ１３６（以下で置換：Ｎ）；Ｇ１３７（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１３９（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１４０（以下で置換：Ｄ）；Ｔ１４１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１４２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ１４３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１４４（以下で置換：Ｎ）；Ｄ１４５（以下で置換：Ｅ）；Ｌ１４７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１４８（以下で置換：Ｎ）；Ｌ１４９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ１５０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１５１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ１５２（以下で置換：Ｅ）；Ｓ１５３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１５４（以下で置換：Ｄ）；Ｔ１５５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ１５７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ１５８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１５９（以下で置換：Ｎ）；Ｋ１６０（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｇ１６１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１６２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１６３（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｔ１６４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１６５（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｖ１６６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｗ１６８（以下で置換：Ｆ、またはＹ）；Ｌ１６９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１７０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１７１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１７２（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｋ１７３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１７４（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｇ１７５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１７６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１７７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１７８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１７９（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１８０（以下で置換：Ｄ）；Ｋ１８１（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ１８２（以下で置換：Ｄ）；Ｎ１８３（以下で置換：Ｑ）；Ｋ１８４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｉ１８５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１８６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１８７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｋ１８８（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ１８９（以下で置換：Ｄ）；Ｔ１９０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１９１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１９２（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｆ１９３（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｆ１９４（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｉ１９５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１９６（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｇ１９７（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１９８（以下で置換：Ｎ）；Ｖ１９９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｌ２００（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ２０１（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｔ２０２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２０３（以下で置換：Ｅ）；Ｋ２０４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｔ２０５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ２０６（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ａ２０７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｍ２０８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｇ２０９（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｈ２１０（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｌ２１１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ２１２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２１３（以下で置換：Ｎ）；Ｒ２１４（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｋ２１５（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｋ２１６（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｖ２１７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｈ２１８（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｖ２１９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｆ２２０（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｇ２２１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２２２（以下で置換：Ｅ）；Ｅ２２３（以下で置換：Ｄ）；Ｌ２２４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ２２５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２２６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ２２７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ２２８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２２９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ２３０（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｒ２３１（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｉ２３３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２３４（以下で置換：Ｎ）；Ｎ２３５（以下で置換：Ｑ）；Ｍ２３６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｅ２３８（以下で置換：Ｄ）；Ｔ２３９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２４０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｎ２４２（以下で置換：Ｑ）；Ｎ２４３（以下で置換：Ｑ）；Ｓ２４４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ２４６（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｓ２４７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２４８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ２４９（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ２５０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２５１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２５２（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２５３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ２５４（以下で置換：Ｄ）；Ｅ２５５（以下で置換：Ｄ）；Ｇ２５６（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２５７（以下で置換：Ｅ）；Ｅ２５８（以下で置換：Ｄ）；Ｌ２５９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２６０（以下で置換：Ｎ）；Ｌ２６１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２６２（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ２６３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ２６５（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ２６６（以下で置換：Ｄ）；Ｎ２６７（以下で置換：Ｑ）；Ａ２６８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２６９（以下で置換：Ｎ）；Ｉ２７０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ２７１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２７２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２７３（以下で置換：Ｅ）；Ｇ２７４（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２７５（以下で置換：Ｅ）；Ｖ２７６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ２７７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ２７８（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｆ２７９（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｇ２８０（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２８１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２８２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２８３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２８４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；および／またはＬ２８５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）、を含む配列番号３２２８のポリペプチドの保存的置換変異を含むＢＬｙＳアミノ酸配列に結合し得る。
【０１３８】
別の実施形態において、ＢＬｙＳのアミノ酸レベルでの部位指向性変化は、特定のアミノ酸を、保存的置換基で置換することによってなされ得る。本発明の抗体は、以下：Ｍ１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｄ２（以下で置換：Ｅ）；Ｄ３（以下で置換：Ｅ）；Ｓ４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ６（以下で置換：Ｄ）；Ｒ７（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ８（以下で置換：Ｄ）；Ｑ９（以下で置換：Ｎ）；Ｓ１０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ１１（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｌ１２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ１３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ１７（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｋ１８（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１９（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ２０（以下で置換：Ｄ）；Ｅ２１（以下で置換：Ｄ）；Ｍ２２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｋ２３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２５（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ２６（以下で置換：Ｄ）；Ｖ２８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｓ２９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ３０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ３１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ３３（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｋ３４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ３５（以下で置換：Ｄ）；Ｓ３６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ３８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ３９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｒ４０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｓ４１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ４２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ４３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｄ４４（以下で置換：Ｅ）；Ｇ４５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ４６（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ４７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ４８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ４９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ５０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ５１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ５５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ５７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ５８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ６１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｔ６２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ６３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｖ６４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｓ６５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ６６（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｙ６７（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｑ６８（以下で置換：Ｎ）；Ｖ６９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ａ７０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ７１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ７２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ７３（以下で置換：Ｎ）；Ｇ７４（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ７５（以下で置換：Ｅ）；Ｌ７６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ７７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ７８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ７９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ８０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ａ８１（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ８２（以下で置換：Ｄ）；Ｌ８３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ８４（以下で置換：Ｎ）；Ｇ８５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｈ８６（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｈ８７（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ａ８８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ８９（以下で置換：Ｄ）；Ｋ９０（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ９１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９３（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ９４（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ９６（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ９７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ９９（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ａ１００（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１０１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１０２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１０３（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１０４（以下で置換：Ｄ）；Ａ１０５（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１０７（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１０８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ１０９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１１０（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１１１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１１２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ１１３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｉ１１４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１１５（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｅ１１６（以下で置換：Ｄ）；Ａ１１９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１２１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１２２（以下で置換：Ｄ）；Ｇ１２３（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｎ１２４（以下で置換：Ｑ）；Ｓ１２５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１２６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１２７（以下で置換：Ｎ）；Ｎ１２８（以下で置換：Ｑ）；Ｓ１２９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ１３０（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｎ１３１（以下で置換：Ｑ）；Ｋ１３２（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１３３（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ａ１３４（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１３５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｑ１３６（以下で置換：Ｎ）；Ｇ１３７（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１３９（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１４０（以下で置換：Ｄ）；Ｔ１４１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１４２（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１４３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１４４（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｔ１４５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１４６（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｖ１４７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｗ１４９（以下で置換：Ｆ、またはＹ）；Ｌ１５０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１５１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１５２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ１５３（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｋ１５４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｒ１５５（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｇ１５６（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ１５７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ１５８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１５９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ１６０（以下で置換：Ｄ）；Ｅ１６１（以下で置換：Ｄ）；Ｋ１６２（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ１６３（以下で置換：Ｄ）；Ｎ１６４（以下で置換：Ｑ）；Ｋ１６５（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｉ１６６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ１６７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ１６８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｋ１６９（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｅ１７０（以下で置換：Ｄ）；Ｔ１７１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ１７２（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１７３（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｆ１７４（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｆ１７５（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｉ１７６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１７７（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｇ１７８（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１７９（以下で置換：Ｎ）；Ｖ１８０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｌ１８１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１８２（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｔ１８３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ１８４（以下で置換：Ｅ）；Ｋ１８５（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｔ１８６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ１８７（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ａ１８８（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｍ１８９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｇ１９０（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｈ１９１（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｌ１９２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ１９３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ１９４（以下で置換：Ｎ）；Ｒ１９５（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｋ１９６（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｋ１９７（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｖ１９８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｈ１９９（以下で置換：Ｋ、またはＲ）；Ｖ２００（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｆ２０１（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｇ２０２（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２０３（以下で置換：Ｅ）；Ｅ２０４（以下で置換：Ｄ）；Ｌ２０５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ２０６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２０７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｖ２０８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ２０９（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２１０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ２１１（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｒ２１２（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｉ２１４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２１５（以下で置換：Ｎ）；Ｎ２１６（以下で置換：Ｑ）；Ｍ２１７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＶ）；Ｅ２１９（以下で置換：Ｄ）；Ｔ２２０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２２１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｎ２２３（以下で置換：Ｑ）；Ｎ２２４（以下で置換：Ｑ）；Ｓ２２５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｙ２２７（以下で置換：Ｆ、またはＷ）；Ｓ２２８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２２９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｇ２３０（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ２３１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２３２（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２３３（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２３４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｅ２３５（以下で置換：Ｄ）；Ｅ２３６（以下で置換：Ｄ）；Ｇ２３７（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２３８（以下で置換：Ｅ）；Ｅ２３９（以下で置換：Ｄ）；Ｌ２４０（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２４１（以下で置換：Ｎ）；Ｌ２４２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２４３（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｉ２４４（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｒ２４６（以下で置換：Ｈ、またはＫ）；Ｅ２４７（以下で置換：Ｄ）；Ｎ２４８（以下で置換：Ｑ）；Ａ２４９（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｑ２５０（以下で置換：Ｎ）；Ｉ２５１（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｓ２５２（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２５３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２５４（以下で置換：Ｅ）；Ｇ２５５（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｄ２５６（以下で置換：Ｅ）；Ｖ２５７（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、またはＭ）；Ｔ２５８（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｍ、またはＶ）；Ｆ２５９（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｆ２６０（以下で置換：Ｗ、またはＹ）；Ｇ２６１（以下で置換：Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ａ２６２（以下で置換：Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｌ２６３（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；Ｋ２６４（以下で置換：Ｈ、またはＲ）；Ｌ２６５（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）；および／またはＬ２６６（以下で置換：Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、またはＶ）：を含む配列番号３２２９のポリペプチドの保存的置換変異を含むＢＬｙＳアミノ酸配列に結合し得る。
【０１３９】
別の実施形態において、ＢＬｙＳのアミノ酸レベルの部位指向性変異は、特定のアミノ酸の保存的置換基での置換によってなされ得る。本発明の抗体は、配列番号３２３０〜３２３７のいずれか１つのポリペプチドの保存的置換変異を含むＢＬｙＳアミノ酸配列に結合し得る。
【０１４０】
機能的に必須のＢＬｙＳポリペプチドにおけるアミノ酸は、部位指向性変異誘発またはアラニンスキャンニング変異誘発のような、当該分野で公知の方法によって同定され得る（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４４：１０８１〜１０８５（１９８９））。後者の手順は、この分子のあらゆる残基に単一のアラニン変異を導入する。次いで、得られた変異分子を、例えば、増殖、分化、および／または活性化のような、リガンド結合、およびリンパ球（例えば、Ｂ細胞）を刺激する能力のような、機能的活性について試験する。従って、本発明の抗体は、機能に必須のＢＬｙＳポリペプチドにおけるアミノ酸に結合し得る。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、機能するのに必須であるＢｌｙＳポリペプチドにおけるアミノ酸に結合して、ＢＬｙＳポリペプチド機能を阻害する。他の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、機能に必須のＢｌｙＳポリペプチドにおけるアミノ酸に結合して、ＢｌｙＳポリペプチド機能を増強する。
【０１４１】
特別な目的は、荷電したアミノ酸を、他の荷電したアミノ酸または中性のアミノ酸で置換して、これによって低凝集性のような、非常に所望される改善された特徴を有するタンパク質を生成し得ることである。凝集は、活性を低下させ得るだけでなく、薬学的処方物を調製する場合にも問題であり得る。なぜなら凝集物は免疫原性であり得るからである（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１〜３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ　３６：８３８〜８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ｄｒｕｇ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　１０：３０７〜３７７（１９９３）。
【０１４２】
別の実施形態において、本発明は、配列番号３２２８に提供されるアミノ酸配列の非保存的置換を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する抗体を提供する。例えば、配列番号３２２８に提供されるＢＬｙＳタンパク質配列の非保存的置換としては、以下が挙げられる：Ｍ１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｌ１６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２１（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ２２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｖ２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｒ３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ３５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ３６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｓ３８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ３９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ４０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ４４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ４５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ４７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ５５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ５８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｃ６０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｌ６１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ６６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ６７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ６８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ７３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ７４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ７５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ７８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ８０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ８１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ８３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ８４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ８５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ８６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ８７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ８８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ９０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ９１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ９２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ９３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ９４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ９５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ９６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ９７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ９８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｋ９９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１００（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１０１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１０２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１０３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１０４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１０５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１０６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ１０７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１０８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１０９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１１６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｐ１１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ１１９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１２０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｇ１２１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１２２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１２３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１３５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１３６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１３８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｅ１３９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１４０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１４４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ１４５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ１４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｌ１４７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ１５２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１５４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１５５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１５６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｔ１５７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１５８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１６０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１６１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１６３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１６６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１６７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｗ１６８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１６９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１７０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１７１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１７２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１７３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１７４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１７５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１７６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１７７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１７８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１７９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１８０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１８２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１８３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１８５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１８６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１８７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１８９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１９０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１９１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１９２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１９３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１９４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１９５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１９６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１９７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１９８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１９９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２００（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ２０１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２０２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２０３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２０４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２０５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ２０６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２０７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ２０８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２０９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ２１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ２１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２１６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ２１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２１９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２２０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２２１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２２２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２２３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２２６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ２３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｉ２３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２３５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ２３６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｅ２３８（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２３９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２４０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｎ２４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２４４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２４５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｙ２４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２４７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２５２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２５４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２５５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２５６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２５７（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２５８（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２６０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２６１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２６３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｒ２６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２６６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２６７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２６８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２６９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２７０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２７１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２７２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２７３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２７４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２７５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２７６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２７７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２７８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２７９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２８０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２８１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２８２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２８３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２８４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；および／またはＬ２８５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ。
【０１４３】
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、１つより多いアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０および５０）が、上記のような置換アミノ酸（保存的または非保存的）で置換されている、ＢＬｙＳアミノ酸配列を含むか、あるいはこのような配列からなる、ＢＬｙＳポリペプチドに結合する。
【０１４４】
本発明の別の実施形態において、本発明の抗体は、以下：Ｍ１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｌ１６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２１（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ２２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｖ２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｒ３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ３５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ３６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｓ３８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ３９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ４０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ４４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ４５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ４７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ５５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ５７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ５８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｃ６０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｌ６１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ６６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ６７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ６８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ６９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ７３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ７４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ７５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ７７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ７８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ７９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ８０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ８１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ８３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ８４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ８５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ８６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ８７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ８８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ８９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ９０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ９１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ９２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ９３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ９４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ９５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ９６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ９７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ９８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｋ９９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１００（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１０１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１０２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１０３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１０４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１０５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１０６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ１０７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１０８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１０９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１１６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｐ１１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ａ１１９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１２０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｇ１２１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１２２（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１２３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１３５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１３６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１３８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｅ１３９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１４０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１４４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１４５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１４７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ１４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｗ１４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１５２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１５４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１５５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１５６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ１５７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１５８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１６０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１６１（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１６３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ１６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１６６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１６７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１６８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１６９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ１７０（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１７１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１７２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１７３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１７４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ１７５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１７６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１７７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１７８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１７９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１８０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１８１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１８２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１８３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ１８４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１８５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ１８６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｙ１８７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ａ１８８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ１８９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ１９０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ１９１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ１９２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ１９３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ１９４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ１９５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１９６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ１９７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ１９８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｈ１９９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２００（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２０１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２０２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２０３（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２０４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２０５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２０６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２０７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２０８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２０９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２１０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２１１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｒ２１２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２１３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｉ２１４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２１５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２１６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｍ２１７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２１８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｅ２１９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２２０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２２１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２２２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｎ２２３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２２４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２２５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｃ２２６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＰ）；Ｙ２２７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２２８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２２９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２３０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２３１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２３２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２３３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２３４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２３５（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２３６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２３７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２３８（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２３９（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２４０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２４１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２４２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２４３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２４４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｐ２４５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、またはＣ）；Ｒ２４６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｅ２４７（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｎ２４８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２４９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｑ２５０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｉ２５１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｓ２５２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２５３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２５４（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２５５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｄ２５６（以下で置換：Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｖ２５７（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｔ２５８（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２５９（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｆ２６０（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｐ、またはＣ）；Ｇ２６１（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ａ２６２（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２６３（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｋ２６４（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；Ｌ２６５（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）；および／またはＬ２６６（以下で置換：Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、またはＣ）：を含む、配列番号３２２９に提供される配列の非保存的置換を有するＢＬｙＳポリペプチドに結合する。
【０１４５】
別の実施形態において、ＢＬｙＳのアミノ酸レベルでの部位指向性変化は、非保存的置換による特定のアミノ酸の置換でなされ得る。本発明の抗体は、配列番号３２３０〜３２３７のいずれか１つのポリペプチドの非保存的置換変異を含むＢＬｙＳアミノ酸配列に結合し得る。
【０１４６】
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳアミノ酸配列を含むか、あるいはＢＬｙＳアミノ酸配列からなるＢＬｙＳポリペプチドを結合し、ここで、１より多いアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０および５０）は、上記のように置換されたアミノ酸と置換される（保存的または非保存的のいずれか）。
【０１４７】
アミノ酸の置換はまた、細胞表面レセプターへのリガンドの結合の選択性を改変し得る。例えば、Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ　３６１：２６６〜２６８（１９９３）は、ＴＮＦレセプターの２つの公知の型の１つのみに対するＴＮＦ−αの選択的結合を生じる特定の変異を記載している。ＢＬｙＳは、ＴＮＦポリペプチドファミリーのメンバーであるので、ＴＮＦ−αにおける変異に類似する変異は、ＢＬｙＳポリペプチドにおいて類似の効果を有するようである。
【０１４８】
リガンド−レセプター結合のために重要な部位もまた、結晶化、核磁気共鳴、または光親和性標識のような構造解析によって決定され得る（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ　Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【０１４９】
ＢＬｙＳは、ＴＮＦ関連タンパク質ファミリーのメンバーであるので、ＴＮＦ保存ドメイン（例えば、配列番号３２２８のＧｌｙ−１９１位からＬｅｕ−２８４位においてまたは配列番号３２２９のＧｌｙ−１７２位からＬｅｕ−２６５位において）におけるアミノ酸をコードする配列に起こり得る変異は、ＢＬｙＳポリペプチドまたはそのフラグメントあるいはその改変体の機能的な活性（例えば、生物学的活性）を完全に除去するよりもむしろ調節し得る。従って、本発明の抗体は、ＴＮＦ保存ドメインにおいて変異を有するＢＬｙＳポリペプチドを結合し得る。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＴＮＦ保存ドメインにおいて変異を有するＢＬｙＳポリペプチドを結合し得、そしてＢＬｙＳのアンタゴニストとして作用し得る。他の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＴＮＦ保存ドメインにおいて変異を有するＢＬｙＳポリペプチドを結合し得、そしてＢＬｙＳアゴニストとして作用し得る。
【０１５０】
当業者に公知の組換えＤＮＡ技術（例えば，ＤＮＡシャッフリング（上述）を参照のこと）を使用して、新規な変異タンパク質またはムテイン（単一または複数のアミノ酸置換、欠失、付加または融合タンパク質を含む）を作製し得る。このような改変されたポリペプチドは、例えば、増強された活性または増大された安定性を示し得る。さらに、これらは、より高い収率で精製され得、そして少なくとも特定の精製および保存状態下において対応する天然のポリペプチドよりもより良い安定性を示し得る。
【０１５１】
従って、本発明はまた、宿主細胞においてＢＬｙＳポリペプチド（例えば、発現、スケールアップなどにより適したＢＬｙＳポリペプチド）を生成するために１つ以上のアミノ酸残基が欠失、付加または置換されたＢＬｙＳ誘導体およびＢＬｙＳアナログを結合する抗体を含む。例えば、システイン残基は、ジスルフィド架橋を除去するために欠失され得るか、または別のアミノ酸残基で置換され得る；Ｎ結合型グリコシル化部位は、例えば、Ｎ結合部位を高グリコシル化する（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅ）ことが公知である酵母宿主から、より容易に回収および精製される均質な産物の発現を達成するために、改変または除去され得る。この目的のために、本発明のＢＬｙＳポリペプチドの任意の１以上のグリコシル化認識配列上の第１または第３のアミノ酸位置の一方あるいは両方での種々のアミノ酸置換、および／または任意の１以上のこのような認識配列の第２位でのアミノ酸欠失は、その改変トリペプチド配列でのＢＬｙＳポリペプチドのグリコシル化を妨げる（例えば、Ｍｉｙａｊｉｍｏら、ＥＭＢＯ　Ｊ　５（６）：１１９３−１１９７を参照のこと）。非限定的な例において、酵母Ｐｉｃｈｅａ　ｐａｓｔｏｒｉｓにおいて発現する場合、２４４位のセリンのアラニンへの変異は、単独かまたは位置２４２のアスパギンのグルタミンへの変異との組み合わせのいずれかにおいて、ＢＬｙＳの成熟可溶形態（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５）のグリコシル化を消滅させる。変異ＢＬｙＳポリペプチド（ここで、位置２４２のアスパラギンのみが、グルタミンに変異されている）はまた、Ｐｉｃｈｅａ　ｐａｓｔｏｒｉｓにおいて発現する場合、グリコシル化される。この変異において、グリコシル化現象は、セリン２４４におけるＯ結合化グルコシル化の活性化または非マスキングに起因し得る。グリコシル化を及ぼす類似の変異はまた、配列番号３２２９のＢＬｙＳポリペプチド（すなわち、配列番号３２２９のアスパラギン−２２３からグルタミンおよび／またはセリン−２２４からアラニン）において起こる。さらに、本発明のポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基（例えば、アルギニン残基およびリジン残基）は、欠失されるかまたは別の残基で置換されるかして、例えば、フリンまたはケシン（ｋｅｘｉｎ）のようなプロテアーゼによる所望でないプロセシングを除去する。このような変異の１つの可能性のある結果は、本発明のＢＬｙＳポリペプチドが、細胞表面を開裂および細胞表面から放出されないことである。従って、本発明の抗体は、１つ以上のアミノ酸残基が欠失、付加または置換されたＢＬｙＳ誘導体およびＢＬｙＳアナログを結合し得る。他の実施形態において、本発明の抗体は、細胞表面から開裂することができないＢＬｙＳ誘導体、改変体またはアナログを結合し得る。
【０１５２】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２８において示されるＢＬｙＳ配列のＬｙｓ−１３２および／またはＡｒｇ−１３３が、ＢＬｙＳを発現する細胞からのＢＬｙＳの可溶性形態の放出を防止または減少する別のアミノ酸残基に変異されるか、全て欠失された、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。さらに特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳ配列のＬｙｓ−１３２は、Ａｌａ−１３２に変異される。別の、非例示的な特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳ配列のＡｒｇ−１３３は、Ａｌａ−１３３に変異される。これらは、タンパク質を変異し、そして／または例えば、エキソビボ治療または遺伝子治療において使用されて、操作された細胞の表面に保持されるＢＬｙＳポリペプチドを発現する細胞を操作する。
【０１５３】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２８において示されるＢＬｙＳ配列のＣｙｓ−１４６は、発現系において発現される場合、例えば、変異ＢＬｙＳポリペプチドのオリゴマー形成の防止または減少を助ける別のアミノ酸残基に変異されるかまたは全て欠失された、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで、Ｃｙｓ−１４６は、セリンアミノ酸残基に置換される。
【０１５４】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳ配列のＣｙｓ−２３２は、発現系において発現される場合、別のアミノ酸残基に変異されるかまたは全て欠失されて、例えば、変異ＢＬｙＳポリペプチドのオリゴマー形成の防止または減少を助ける。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで、Ｃｙｓ−２３２は、セリンアミノ酸残基に置換される。これらのポリペプチドにコードされるポリペプチドもまた、本発明に含まれる。
【０１５５】
なお別の特定の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳ配列のＣｙｓ−２４５が、発現系において発現される場合、例えば、変異ＢＬｙＳポリペプチドのオリゴマー形成の防止または減少を助ける別のアミノ酸残基に変異されるかまたは全て欠失されたＢＬｙＳポリペプチドを結合する。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドを結合する。ここで、Ｃｙｓ−２４５は、セリンアミノ酸残基に置換される。これらのポリペプチドにコードされるポリペプチドもまた、本発明に含まれる。
【０１５６】
本発明のポリペプチドは、好ましくは単離された形態で提供され、そして好ましくは実質的に精製される。ＢＬｙＳポリペプチドの組換え的に生成されたバージョンは、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｎｅ　６７：３１−４０（１９８８）により記載される１工程方法によって、実質的に精製され得る。
【０１５７】
本発明の抗体は、寄託されたｃＤＮＡ（ＡＴＣＣ寄託番号９７７６８）によってコードされる完全なポリペプチドを含むＢＬｙＳポリペプチドを結合する。これは、寄託されたｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドの細胞内ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメイン、寄託されたｃＤＮＡによってコードされる成熟可溶性ポリペプチド、タンパク質の細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを差し引いた細胞外ドメイン、配列番号３２２８の完全なポリペプチド、配列番号３２２８（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５）の成熟可溶性ポリペプチド、配列番号３２２８の細胞外ドメイン、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを差し引いた配列番号３２２８のアミノ残基７３〜２８５、ならびに上記のこれらに少なくとも８０％、８５％、９０％類似性、さらに好ましくは、少なくとも９５％類似性およびなおさらに好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％類似性を有するポリペプチドを含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。
【０１５８】
本発明の抗体は、寄託されたｃＤＮＡによってコードされる完全なポリペプチドを含むＢＬｙＳポリペプチドを結合する。これは、寄託されたｃＤＮＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０３５１８）によってコードされるポリペプチドの細胞内ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメイン、寄託されたｃＤＮＡによってコードされる成熟可溶性ポリペプチド、タンパク質の細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを差し引いた細胞外ドメイン、配列番号３２２９の完全なポリペプチド、配列番号３２２９（例えば、配列番号３２２９のアミノ酸残基１３４〜２６６）の成熟可溶性ポリペプチド、配列番号３２２９の細胞外ドメイン、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを差し引いた配列番号３２２９のアミノ残基７３〜２６６、ならびに、上記のこれらに少なくとも８０％、８５％、９０％類似性、さらに好ましくは、少なくとも９５％類似性およびなおさらに好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％類似性を有するポリペプチドを含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。
【０１５９】
本発明のさらなる抗体は、寄託されたｃＤＮＡ（ＡＴＣＣ寄託番号９７７６８）にコードされるポリペプチドまたは配列番号３２２８のポリペプチドに少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一、さらに好ましくは、少なくとも９０％または９５％同一、なおさらに好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチドを含むポリペプチドを結合し、そしてまた、少なくとも３０アミノ酸およびさらに好ましくは、少なくとも５０アミノ酸を有するこのようなポリペプチドの部分を結合する抗体を含む。
【０１６０】
本発明のさらなる抗体は、寄託されたｃＤＮＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０３５１８）にコードされるポリペプチドまたは配列番号３２２９のポリヌクレオチドに少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一、さらに好ましくは、少なくとも９０％または９５％同一、なおさらに好ましくは、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチドを含むポリペプチドを結合し、そしてまた、少なくとも３０アミノ酸およびさらに好ましくは、少なくとも５０アミノ酸を有するこのようなポリペプチドの部分を結合する抗体を含む。これらのポリペプチドにコードされるポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０１６１】
２つのポリペプチド間の「類似性％」によって、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　８　ｆｏｒ　Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ
Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐａｒｋ，５７５　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｄｒｉｖｅ，　Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ　５３７１１）および類似性を決定するためのデフォルト設定を使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって生じる類似性スコアが意図される。Ｂｅｓｔｆｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ　２：４８２−４８９，１９８１）の局所同一性アルゴリズムを使用して、２つの配列間の類似性の最もよいセグメントを見出す。
【０１６２】
ＢＬｙＳポリペプチドの参照アミノ酸配列に少なくとも例えば、９５％「同一な」アミノ酸配列を有するポリペプチドによって、ポリペプチド配列が、ＢＬｙＳポリペプチドの参照アミノ酸の各１００個のアミノ酸あたり５個のアミノ酸改変までを含み得ることを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列は、参照配列に同一であることが意図される。言い換えれば、参照アミノ酸配列に少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを獲得するために、参照配列のアミノ酸残基の５％までが、欠失され得るかまたは別のアミノ酸に置換され得るか、あるいは参照配列中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸の数が、参照配列に挿入され得る。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ酸配列のアミノ末端またはカルボキシ末端あるいはこれらの末端化間（参照配列中の残基間または参照配列中の１つ以上の連続基における残基のいずれかに個々に分散された）のどこかにおいて起こり得る。
【０１６３】
実用的な様式において、任意の特定のポリペプチドは例えば、配列番号３２２８のアミノ酸配列、寄託されたｃＤＮＡクローンＨＮＥＤＵ１５（ＡＴＣＣ登録番号９７７６８）によってコードされるアミノ酸配列、またはそれらのフラグメントあるいは、例えば、配列番号３２２９のアミノ酸配列、寄託されたｃＤＮＡクローンＨＤＰＭＣ５２（ＡＴＣＣ登録番号２０３５１８）によってコードされるアミノ酸配列、またはそれらのフラグメントに少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　８　ｆｏｒ　Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐａｒｋ，５７５　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ
５３７１１）のような公知のコンピュータープログラムを使用して慣習的に決定され得る。特定の配列が、本発明に従う参照配列に、例えば、９５％同一であるかどうかを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔまたは他の任意の配列アライメントプログラムを使用する場合、パラメーターは、もちろん同一性のパーセントが、参照配列の全長にわたって計算され、そして参照配列におけるアミノ酸残基の総数の５％までの同一性におけるギャップが可能であるように設定される。
【０１６４】
特定の実施形態において、参照（問い合わせ）配列（本発明の配列）と対象配列（全体配列アライメントとしても称される）との間の同一性は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アライメントにおいて使用される好ましいパラメーターは、以下である：マトリクス＝ＰＡＭ０、ｋ−タプル＝２、ミスマッチペナルティー＝１、結合ペナルティー＝２０、ランダム化群長＝０、カットオフスコア＝１、ウインドウスコア＝配列長、ギャップペナルティー＝５、ギャップサイズペナルティー＝０．０５、ウインドウサイズ＝５００または対象アミノ酸配列に長さ（より短いほう）。本実施形態に従って、対象配列が、Ｎ末端欠失またはＣ末端欠失に起因する問い合わせ配列よりも短い場合（内部欠失のせいではない）、手動の訂正は、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体のパーセント同一性を計算する際、対象配列のＮ末端短縮またはＣ末端短縮を計上しないという事実を考慮れるような結果が作製される。問い合わせ配列に関連する、Ｎ末端およびＣ末端において短縮された対象配列は、同一性パーセントが、対応する対象の残基とマッチ／整列化しない対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配列の残基の数を問い合わせ配列の全体の塩基のパーセントとして、計算することによって訂正される。残基が、マッチ／整列化されるかどうかの決定は、ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントの結果によって決定される。次いで、この割合は、パーセント同一性から減算され、特定のパラメーターを使用して上のＦＡＳＴＤＢプログラムよって計算されて、最終パーセント同一性スコアに達する。この最終パーセント同一性スコアは、この実施形態の目的のために使用されるものである。対象配列のＮ末端およびＣ末端の残基のみ（これらは、問い合わせ配列とマッチ／整列化されない）は、パーセント同一性スコアの手動での調節の目的のために考えられている。これは、対象配列の最も遠いＮ末端残基およびＣ末端残基の外側の問い合わせ残基位置のみである。例えば、９０個のアミノ酸残基対象配列は、パーセント同一性を決定するために１００個の残基問い合わせ配列と整列化される。欠失は、対象配列のＮ末端でおこり、従って、ＦＡＳＴＤＢアライメントは、Ｎ末端の最初の１０残基のマッチ／アライメントを示さない。１０個の不対残基は、配列の１０％（問い合わせ配列中のマッチしないＮ末端およびＣ末端における残基の数／残基の総数）であるので、１０％は、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一性パーセントスコアから減算される。残りの９０個の残基が、完全にマッチする場合、最終パーセント同一性は、９０％である。別の例において、９０個の残基の対象配列は、１００個の残基の問い合わせ配列と比較される。問い合わせとマッチ／整列化されない対象配列のＮ末端またはＣ末端において残基がないので、この時の欠失は、内部欠失である。この場合において、ＦＡＳＴＤＢによって計算されたパーセント同一性は、手動で訂正されない。もう１度、ＦＡＳＴＤＢアライメント（これは、問い合わせ配列にマッチ／整列化されない）に表示されるように、対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側の残基位置のみは、手動で訂正される。手動以外の訂正が、本実施形態の目的のためになされる。
【０１６５】
（ＢＬｙＳポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体）
本発明はまた、ＢＬｙＳポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいは抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を含む。この抗体は、表１に言及されるｓｃＦＶの重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインの全てまたは一部を含むかあるいは表１に言及されるｓｃＦＶの重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインの全てまたは一部からなる。
【０１６６】
本発明はまたは、動物、好ましくは、哺乳動物および最も好ましくは、ヒトにおける異常なＢＬｙＳ発現またはＢＬｙＳレセプター発現あるいは不適切なＢＬｙＳ機能またはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を検出、診断および／または予測するための方法および／または組成物を含む。これは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいは抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を使用する工程を含む。本発明の抗体を用いて検出、診断または予測され得る疾患および障害は、以下に挙げられるがこれらに限定されない：免疫障害（例えば、狼瘡、リウマチ様動脈炎、多発性硬化症、重症筋無力症、橋本病および免疫不全症候群）、炎症性障害（例えば、ぜん息、アレルギー障害およびリウマチ様動脈炎）、感染疾患（例えば、ＡＩＤＳ）ならびに増殖障害（例えば、白血病、癌およびリンパ腫）。
【０１６７】
本発明は、動物、好ましくは、哺乳動物および最も好ましくは、ヒトにおける異常なＢＬｙＳ発現またはＢＬｙＳレセプター発現あるいは不適切なＢＬｙＳ機能またはＢＬｙＳレセプター機能に関連する疾患または障害を予防、処置および／または改善するための方法および組成物をさらに含む。これは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むかあるいは抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を使用する工程を含む。有効量の１つ以上の本発明の抗体または分子を投与することによって予防、処置または阻止され得る疾患および障害は、以下に挙げられるがこれらに限定されない：免疫障害（例えば、狼瘡、リウマチ様動脈炎、多発性硬化症、重症筋無力症、橋本病および免疫不全症候群）、炎症性障害（例えば、ぜん息、アレルギー障害およびリウマチ様動脈炎）、感染疾患（例えば、ＡＩＤＳ）ならびに増殖障害（例えば、白血病、癌およびリンパ腫）。
【０１６８】
（抗ＢＬｙＳ抗体）
本発明の抗体は、ファージディスプレイ技術を使用して部分的に発見された。ファージ粒子の表面に提示される単鎖抗体分子（「ｓｃＦｖ」）は、スクリーニングされて、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖを同定する。これらは、ＢＬｙＳの膜結合形態および可溶性形態を含む。本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合することが同定されたｓｃＦｖおよびその部分を含む。これは、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖ、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖおよびＢＬｙＳの可溶性形態と膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖを含む。特に、本発明は、表１に言及されるような、配列番号１〜２１２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１〜２１２８のアミノ酸配列からなるｓｃＦｖを含む。好ましくは、本発明のｓｃＦｖは、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５または１８８１〜１９０８のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。ｓｃＦｖは、可溶性ＢＬｙＳを結合するｓｃＦｖ（例えば、配列番号１５６３〜１８８０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５６３〜１８８０のアミノ酸配列からなるｓｃＦｖ）、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖ（例えば、配列番号１８８１〜２１２８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１８８１〜２１２８のアミノ酸配列からなるｓｃＦｖ）、およびＢＬｙＳの可溶形態と膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖ（例えば、配列番号１〜１５６２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１〜１５６２のアミノ酸配列からなるｓｃＦｖ）を含む。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体を含むか、あるいはＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体からなる分子はまた、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１６９】
本発明の１つの実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に言及されるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に言及されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。代替の実施形態において、本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に言及されるＶＨ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列および／または表１に言及されるＶＬ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。代替の実施形態において、本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する表１に言及されるｓｃＦｖの抗体フラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子はまた、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７０】
（表１は、明細書の一番後に見出され得る。）
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に言及される配列番号１５６３〜１８８０のアミノ酸配列を含むか、または表１に言及される配列番号１５６３〜１８８０のアミノ酸配列からなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号１５７０〜１５９５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５７０〜１５９５のアミノ酸配列からなる。なおさらに好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号１５６３〜１５６９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５６３〜１５６９のアミノ酸配列からなる。
【０１７１】
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に言及される配列番号１８８１〜２１２８のアミノ酸配列を含むか、または表１に言及される配列番号１８８１〜２１２８のアミノ酸配列からなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号１８８６〜１９０８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１８８６〜１９０８のアミノ酸配列からなる。なおさらに好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号１８８１〜１８８５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１８８１〜１８８５のアミノ酸配列からなる。
【０１７２】
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態と膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に言及される配列番号１〜１５６２のアミノ酸配列を含むか、または表１に言及される配列番号１〜１５６２のアミノ酸配列からなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態と膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号８３４〜８７２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８３４〜８７２のアミノ酸配列からなる。別の好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態と膜結合形態の両方に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、配列番号１〜４６または配列番号３２１〜３２９のアミノ酸配列のいずれか１つを含むか、または配列番号１〜４６または配列番号３２１〜３２９のアミノ酸配列からなる。ＢＬｙＳの可溶性形態および／またはＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する、ｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体を含むか、あるいはｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体からなる分子はまた、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７３】
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０のＶＨ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３にいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ＢＬｙＳ、好ましくは、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子は、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７４】
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶性形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３にいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ＢＬｙＳ、好ましくは、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子は、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７５】
本発明の別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド含む。別の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列および／または表１に開示されるような配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３にいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される同じｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。代替の実施形態において、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する本発明のｓｃＦｖは、表１に言及される異なるｓｃＦｖ由来のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ＢＬｙＳ、好ましくは、ＢＬｙＳの可溶化形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するこれらのｓｃＦｖのフラグメントまたは改変体あるいは分子を含むか、またはこれらからなる分子は、これらが、ｓｃＦｖ、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７６】
本発明は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、または抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を提供する。特に、本発明は、表１に言及されるようなｓｃＦｖに対応する抗体を提供し、このようなｓｃＦｖは、例えば、定常領域配列を含み、そして実施例２０（上述）においてさらに詳細に示されるような、免疫グロブリン分子の発現を指向するように操作される発現ベクターにｓｃＦｖのＶＨおよび／またはＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列を挿入することによって、免疫グロブリン分子に慣用的に「変換され」得る。
【０１７７】
１つの実施形態において、本発明は、抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、または抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を提供する。ここで、この抗体は、表１に言及される配列に含まれるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、または表１に言及される配列に含まれるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的な結合する抗体を提供する。ここで、この抗体は、表１において示されるＶＨ　ＣＤＲの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいは表１において示されるＶＨ　ＣＤＲの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳフラグメントに免疫特異的に結合する、これらの抗体、もしくは抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらの抗体、もしくは抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子はまた、これら抗体、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７８】
本発明の１つの実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、または抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）は、表１に言及される配列に含まれるＶＨ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、または表１に言及される配列に含まれるＶＨ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。特に本発明は、表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいは表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体を提供する。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいは表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいは表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。なお別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、表１に開示されるような配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１；配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２；および／あるいは表１に開示されるような配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれらからなる。好ましくは、本発明の抗体は、表１に開示されるような同じｓｃＦｖから由来するＶＨ　ＣＤＲを含むか、または表１に開示されるような同じｓｃＦｖから由来するＶＨ　ＣＤＲからなる。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらの抗体にフラグメントまたは改変体を含むか、あるいはＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらの抗体にフラグメントまたは改変体からなる分子はまた、これらの抗体、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１７９】
本発明は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、または抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）を提供する。特に、本発明は、抗体を提供する。ここで、この抗体は、表１に言及されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むか、または表１に言及されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬドメインからなる。本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的な結合する抗体を提供する。ここで、この抗体は、表１に言及される配列に含まれるＶＬ　ＣＤＲの１、２、３、またはそれ以上のいずれかのアミノ酸配列を有するＶＬ　ＣＤＲを含むか、またはこれらからなる。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する、これらの抗体のフラグメントまたは改変体を含むか、あるいは抗体のフラグメントまたは改変体からなる分子はまた、これら抗体、分子、フラグメントまたは改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１８０】
本発明の１つの実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、または抗体フラグメントまたはその改変体からなる分子を含む）は、表１に言及されるＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、または表１に言及されるＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる。特に、本発明は、表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＬ　ＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれらからなる、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体を提供する。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、表１に開示されるような配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＬ　ＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれらからなる。好ましい実施形態において、抗体は、表１に開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９または１８８１〜１８８５に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれらからなる。なお別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体は、表１に開示されるような配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１；表１に開示されるよう配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ２；および表１に開示されるよう配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５または１８８６〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むか、またはこれらからなる。好ましくは、本発明の抗体は、表１に開示されるような同じｓｃＦｖに由来するＶＬ　ＣＤＲを含むか、または表１に開示されるような同じｓｃＦｖに由来するＶＬ　ＣＤＲからなる。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらの抗体のフラグメントまたは改変体を含むか、あるいはＢＬｙＳに免疫特異的に結合するこれらの抗体のフラグメントまたは改変体からなる分子はまた、これら抗体、分子、フラグメントおよび／または改変体をコードする核酸分子である場合、本発明に含まれる。
【０１８１】
本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはこれらからなる分子を含む）を提供し、ここで、この抗体は、表１において参照されるｓｃＦｖのうちの１つのＶＬドメインまたは他のＶＬドメインと結合した、表１において参照されるｓｃＦｖのうちの１つのＶＨドメインを含むか、あるいはこれらからなる。本発明はさらに、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたはそれらの改変体を含むか、またはこれらからなる分子を含む）を提供し、ここで、この抗体は、表１において参照されるｓｃＦｖのうちの１つのＶＨドメインまたは他のＶＨドメインと結合した、表１において参照されるｓｃＦｖのうちの１つのＶＬドメインを含むか、あるいはこれらからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８を含むＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、および表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８を含むＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいはこれらからなる。さらに好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１において開示される同じｓｃＦｖ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むか、あるいはこれらからなる。これらの抗体のフラグメントもしくは改変体を含むかまたはこれらからなる分子（これは免疫特異的にＢＬｙＳに結合する）もまた、本発明に含まれ、これらの抗体、分子、フラグメントもしくは改変体をコードする核酸分子も同様に本発明に含まれる。
【０１８２】
本発明はまた、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントまたは改変体を含むか、またはこれらからなる分子を含む）を提供し、ここで、この抗体は、表１に参照されるように、１、２、３、またはそれ以上のＶＨ　ＣＤＲを含むかあるいはこれらからなり、そして１、２、３、またはそれ以上のＶＬ　ＣＤＲを含むかあるいはこれらからなる。詳細には、本発明は、ＢＬｙＳのポリペプチドまたはポリペプチドフラグメントに免疫特異的に結合する抗体を提供し、ここで、この抗体は、ＶＨ　ＣＤＲ１およびＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ１およびＶＬ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ１およびＶＬ　ＣＤＲ３、ＶＨ　ＣＤＲ２およびＶＬ　ＣＤＲ１、　ＶＨ　ＣＤＲ２およびＶＬ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ２およびＶＬ　ＣＤＲ３、ＶＨ　ＣＤＲ３およびＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ３およびＶＬ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３およびＶＬ　ＣＤＲ３、または表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲの任意の組み合わせを含むか、あるいはこれらからなる。好ましい実施形態において、１つ以上のこれらの組み合わせは、表１において開示されるように、同じｓｃＦｖ由来である。免疫特異的にＢＬｙＳに結合する、フラグメントまたはこれらの抗体の改変体を含むかまたはこれらからなる分子もまた、本発明に含まれ、これらの抗体、分子、フラグメントもしくは改変体をコードする核酸分子もまた本発明に含まれる。
【０１８３】
好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで、ＶＨ　ＣＤＲＸ　（ここで、　Ｘ＝１、２、または３）およびＶＬ　ＣＤＲＹ　（ここで、Ｙ＝１、２、または３）　は、同じ特異性を有するｓｃＦｖ由来である（すなわち、可溶性ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ由来、膜結合ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ由来、または可溶性で膜結合性の両方であるＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ由来）。免疫特異的にＢＬｙＳに結合する、これらの抗体のフラグメントまたは改変体を含むかあるいはこれらからなる分子もまた、本発明に含まれ、これらの抗体、分子、フラグメントまたは改変体をコードする核酸分子もまた本発明に含まれる。
【０１８４】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原を免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）をいう。このように、用語「抗体」は、抗体分子全体だけではなく、抗体フラグメント、ならびに抗体および抗体フラグメントの改変体（誘導体を含む）もまた含む。本発明の抗体としては、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖｓ（ｓｄＦｖｓ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）、および任意の上記抗体のエピトープ結合フラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはマン液グロブリン分子のサブクラスであり得る。本発明の抗体はまた、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８を含むアミノ酸配列の部分のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、あるいはこれらからなる分子を含む。好ましくは、本発明の抗体は、ＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、または表１において参照される配列において含まれるいずれか１つのＶＬ　ＣＤＲのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。本発明の抗体はまた、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する上記の抗体のフラグメントまたは改変体を含むかあるいはこれらからなる分子もまた含む。
【０１８５】
最も好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体全体または抗体フラグメントである。ヒトＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体フラグメントとしては、限定されないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、単鎖Ｆｖｓ　（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖｓ　（ｓｄＦｖｓ）、　ＶＬドメインまたはＶＨドメインのいずれかを含むかまたはこれらからなるフラグメント、および任意の上記のフラグメントと結合するエピトープが挙げられる。
【０１８６】
ＢＬｙＳ結合抗体フラグメント（一本鎖抗体を含む）は、可変領域を、単独であるいは以下：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの全体または部分との組み合わせで含み得るか、またはこれらからなり得る。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するポリペプチドを含むかまたはこれからなり、このポリペプチドは、表１において開示される１、２、３、４、５、６もしくはそれ以上のＣＤＲ、好ましくは、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５もしくは１８８１〜１９０８を含むＶＨ　ＣＤＲ３および／またはＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むかまたはこれらからなる。最も好ましくは、本発明の抗体は、表１において参照される、同じｓｃＦｖからの１、２、３、４、５、６、もしくはそれ以上のＣＤＲを含むか、またはこれらからなる。本発明の抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。最も好ましくは、この抗体はヒト抗体である。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、そしてヒト免疫グロブリンライブラリーから、およびヒト抗体を産生するように遺伝的に操作された外因性マウス（ｘｅｎｏｍｉｃｅ）または他の生物から単離された抗体を含む。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこのわずかな技術ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な議論については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０　５９８　８７７；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．　Ｒｅｖ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１３：６５−９３　（１９９５）を参照のこと（これらはその全体が本明細書中に参考として援用される）。ヒト抗体または「ヒト化」キメラモノクローナル抗体は、本明細書中に記載される技術またはそうでなければ当該分野で公知の技術を使用して産生され得る。例えば、キメラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である。総説については、その全体が本明細書中で参考として援用される以下の文献：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ　１７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ　１７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ　８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ　８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ　３１４：２６８（１９８５）を参照のこと。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｉｎｃ．　　（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ、ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ　（Ｓａｎ　Ｊｏｓｅ、ＣＡ）のような会社は、上記に類似した技術を使用して、選択した抗原を指向するヒト抗体を提供するために従事し得る。
【０１８７】
本発明の抗体は、一価、二価、三価または多価であり得る。例えば、一価ｓｃＦｖは、化学的にか、または別のタンパク質もしくは基質で会合することのいずれかによって、多量体化され得る。ヘキサヒスチジンタグまたはＦｌａｇタグに融合したｓｃＦｖは、Ｎｉ−ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してか、または抗Ｆｌａｇ抗体　（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｃ．）を使用して多量体化され得る。
【０１８８】
本発明の抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多価の多重特異的であり得る。多重特異的な抗体は、ＢＬｙＳポリペプチドもしくはそのフラグメントの異なるエピトープに対して特異的であり得るか、またはＢＬｙＳポリペプチドもしくはそのフラグメントおよび異種エピトープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持体物質）の両方に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ　９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ　９１／００３６０；ＷＯ　９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【０１８９】
本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むか、またはそれからなる分子を含む）は、マウスＢＬｙＳ（例えば、ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／もしくは３２２９）のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはヒト単球で発現されるＢＬｙＳ；マウスＢＬｙＳ（配列番号３２３０および／もしくは３２３１）またはマウス単球で発現されるＢＬｙＳ；ラットＢＬｙＳ　（配列番号３２３２、３２３３、３２３４および／もしくは３２３５において与えられる可溶性形態または膜会合形態（例えば、ラット単球の表面上）；あるいはサルＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２３６および／もしくは３２３７のサルＢＬｙＳポリペプチド（サルＢＬｙＳの可溶性形態、またはサル単球を発現するＢＬｙＳ））、好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。好ましくは、本発明の抗体は、ヒトおよびサルＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。また、好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。より好ましくは、本発明の抗体は、マウスＢＬｙＳが結合するよりも高い親和性で、ヒトＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０１９０】
本発明の抗体はまた、その交差反応性について記載または特定化され得る。本発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログまたはホモログを結合しない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチドに対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書中に記載される方法を用いて計算されるように）を有するポリペプチドを結合する抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＡＰＲＩＬ（配列番号３２３９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０４６８８８；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０；ＰＣＴ国際公開ＷＯ９７／３３９０２）と交差反応する。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ヒトタンパク質の、マウスホモログ、ラットホモログおよび／またはウサギホモログならびに対応するそれらのエピトープと交差反応する。本発明のポリペプチドに対して９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書中に記載される方法を用いて計算されるように）を有するポリペプチドを結合しない抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において、上記の交差反応性は、本明細書中に開示された、任意の単一特異的な抗原性または免疫原性ポリペプチド、あるいは２、３、４、５またはそれ以上の特異的抗原性および／または免疫原生ポリペプチドの組み合わせに関する。さらに、ハイブリダイゼーション条件下（本明細書中で記載されるような）で本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを結合する抗体が、本発明に含まれる。
【０１９１】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むか、またはそれからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そして他のいずれの抗原と交差反応しない。より好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてＴＲＡＩＬ、ＡＰＲＩＬ、Ｅｎｄｏｋｉｎｅ−α、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、Ｆａｓ−ＬまたはＬＩＧＨＴと交差反応しない。
【０１９２】
本発明はまた、核酸分子（一般に単離され、本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むか、またはそれからなる分子を含む）をコードする）を提供する。１つの実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含むかまたはこれからなる抗体をコードする。別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ１のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ１を含むかまたはそれらからなる抗体をコードする。別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ２のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ２を含むかまたはこれからなる抗体をコードする。さらに別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ３を含むかまたはこれからなる抗体をコードする。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてＶＨドメインおよび／もしくはＶＨ　ＣＤＲのフラグメントまたはそれらの改変体を含むかあるいはこれからなる抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０１９３】
別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むかまたはこれからなる抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）をコードする。別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ１のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ　ＣＤＲ１を含むかまたはこれからなる抗体をコードする。別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ２のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ　ＣＤＲ２を含むかまたはこれからなる抗体をコードする。さらに別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ　ＣＤＲ３を含むかまたはこれからなる抗体をコードする。免疫特異的にＢＬｙＳに結合し、そしてＶＬドメインおよび／もしくはＶＬＣＤＲのフラグメントまたは改変体を含むかあるいはこれらからなる抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０１９４】
別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および表１において参照されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むか、あるいはこれらからなる抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）をコードする。別の実施形態において、本発明の核酸分子は、表１において参照されるアミノ酸配列を有する、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＬ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ３、もしくはこれらの任意の組み合わせを含むかまたはこれらからなる抗体をコードする。ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてＶＬドメイン（ＶＬ　ａｎｄ／ｏｒ　ｄｏｍａｉｎｓ）および／またはＶＨＣＤＲおよび／またはＶＬＣＤＲを含むかあるいはこれらからなるフラグメントまたは改変体をコードする核酸もまた、本発明によって含まれる。
【０１９５】
本発明はまた、本明細書中に記載されるＶＨドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ、ＶＬドメイン、およびＶＬ　ＣＤＲの改変体（誘導体を含む）を含むか、またはこれらからなる抗体を提供し、この抗体は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。当該分野で公知の標準的な技術を使用して、本発明の分子をコードする核酸配列中に変異（例えば、アミノ酸置換を生じる部位指向的な変異およびＰＣＲ介在変異を含む）を誘導し得る。好ましくは、この改変体（誘導体を含む）は、好ましくは、この改変体（誘導体を含む）は、ＶＨドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬドメイン、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３の参照と比較して、５０アミノ酸未満の置換、４０アミノ酸未満の置換、３０アミノ酸未満の置換、２５アミノ酸未満の置換、２０アミノ酸未満の置換、１５アミノ酸未満の置換、１０アミノ酸未満の置換、５アミノ酸未満の置換、４アミノ酸未満の置換、３アミノ酸未満の置換、または２アミノ酸未満の置換をコードする。特定の実施形態において、この改変体は、ＶＨＣＤＲ３の置換をコードする。好ましい実施形態において、この改変体は、１つ以上の予期される非必須アミノ酸残基において、保存的アミノ酸置換を有する。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で規定されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝した側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。あるいは、変異は、コード配列（例えば、飽和変異）の全てまたは一部にそって、無作為に導入され得、そして生じた変異体は、生物学的活性についてスクリーニングされて、活性（例えば、ＢＬｙＳに結合する能力）を保持している変異体を同定され得る。変異形成に続いて、このコードタンパク質は、慣習的に発現され、そしてコードタンパク質の機能的活性および／または生物学的活性（例えば、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する能力）は、本明細書中に記載される技術を使用してか、または当該分野で公知の慣習的に改変された技術によって決定され得る。
【０１９６】
本発明の抗体は、例えば、任意の型の分子の抗体に対する共有結合によって改変された誘導体（すなわち、改変体）を含み、その結果、共有結合は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体の能力に影響を与えない。例えば、これは限定の目的ではないが、本発明の誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞のリガンドまたは他のタンパク質に対する連結などによって、改変された抗体を含む。多数の化学的改変のいずれも、公知の技術（特異的な化学的切断、アシル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成などが挙げられるが、これらに限定されない）によって実行され得る。さらに、この誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０１９７】
特定の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むか、またはそれからなる分子を含む）は、表１において参照されるＶＨドメインまたはＶＬドメインの１つをコードするヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下で（例えば、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中で、約４５℃で、フィルター結合ＤＮＡに対してハイブリダイゼーションし、その後０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で、約５０〜６５℃で１回以上洗浄する）、高度にストリンジェントな条件下で（例えば、６×ＳＳＣ中で、約４５℃で、フィルター結合核酸に対してハイブリダイゼーションし、その後０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中で、約６８℃で１回以上洗浄する）、または他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（これは当該分野で公知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第Ｉ巻、Ｇｒｅｅｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、６．３．１〜６．３．６および２．１０．３頁を参照のこと）、ハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲまたはＶＬ　ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下（例えば、上記のような条件下、または当該分野で公知であるストリンジェントな他のハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーション）でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下（例えば、上記のような条件下、または当該分野で公知であるストリンジェントな他のハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーション）でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０１９８】
別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）は、表１において参照されるＶＨドメインのいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲのいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＨ　ＣＤＲ３のいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０１９９】
別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むか、またはそれからなる分子を含む）は、表１において参照されるＶＬドメインのいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲのいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の抗体は、表１において参照されるＶＬ　ＣＤＲ３のいずれか１つに少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むか、またはこれからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０２００】
本発明の抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）はまた、ＢＬｙＳポリペプチドまたはＢＬｙＳポリペプチドのフラグメントもしくは改変体に対するその結合親和性（例えば、ＢＬｙＳの可溶性形態および／またはＢＬｙＳの膜結合形態に対する）について、記述されるかまたは特定化され得る。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×ｌ０−３Ｍ、ｌ０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、または１０−５Ｍ以下の解離定数すなわちＫＤで結合する。より好ましくは、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、または１０−８Ｍ以下の解離定数すなわちＫＤで結合する。さらにより好ましくは、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、５×ｌ０−９Ｍ、ｌ０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×−１３Ｍ、ｌ０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×ｌ０−１５Ｍ、もしくはｌ０−１５Ｍ以下の解離定数すなわちＫＤで結合する。本発明は、各々個体の列挙された値の間の範囲のいずれか１つの解離定数すなわちＫＤでＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体を含む。
【０２０１】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−２秒−１、１０−２秒−１、５×ｌ０−３秒−１またはｌ０−３秒−１以下のオフ速度（ｏｆｆ　ｒａｔｅ（ｋｏｆｆ））で結合する。より好ましくは、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−４秒−１、１０−４秒−１、５×１０−５秒−１、または１０−５秒−１、５×１０−６秒−１、１０−６秒−１、５×１０−７秒−１または１０−７秒−１以下のオフ速度（ｋｏｆｆ）で結合する。本発明は、各々個体の列挙された値の間の範囲のいずれか１つのオフ速度（ｋｏｆｆ）でＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体を含む。
【０２０２】
他の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、１０３Ｍ−１秒−１、５×１０３Ｍ−１秒−１、１０４Ｍ−１秒−１または５×１０４Ｍ−１秒−１以上のオン速度（ｏｎ　ｒａｔｅ　（ｋｏｎ））で結合する。より好ましくは、本発明の抗体は、ＢＬｙＳポリペプチド、またはそれらのフラグメントもしくは改変体に、１０５Ｍ−１秒−１、５×１０５　Ｍ−１秒−１、１０６Ｍ−１秒−１、もしくは５×１０６Ｍ−１秒−１または１０７Ｍ−１秒−１以上のオン速度（ｋｏｎ）で結合する。本発明は、各々個体の列挙された値の間の範囲のいずれか１つのオン速度（ｋｏｎ）でＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体を含む。
【０２０３】
本発明はまた、本明細書中に記載される１つ以上の抗体と同じ１つ以上の生物学的特徴を有する抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を含む。「生物学的特徴」によって、インビトロもしくはインビボにおける抗体の活性または特性（例えば、ＢＬｙＳ（例えば、ＢＬｙＳの可溶性形態、ＢＬｙＳの膜結合形態、ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態）、ならびに／または、ＢＬｙＳの抗原性領域および／もしくはエピトープ領域に結合する能力、実質的にＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター（例えば、ＴＡＣＩ−ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ５１７９０および／またはＢＣＭＡ−ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１１８３）の結合をブロックする能力、あるいはＢＬｙＳ介在生物学的活性（例えば、Ｂ細胞の増殖および免疫グロブリン産生の刺激）をブロックする能力）が意味される。必要に応じて、本発明の抗体は、本明細書中で特に言及された少なくとも１つの抗体と同じエピトープに結合する。このようなエピトープ結合は、当該分野で公知のアッセイを使用して慣習的に決定され得る。
【０２０４】
本発明はまた、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体（それらの抗体フラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、表１において参照されるｓｃＦｖの一部（すなわち、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、もしくはＶＬ　ＣＤＲ３）を含むかまたはそれからなり、より好ましくは、配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５、もしくは１８８６〜１９０８に含まれるアミノ酸配列を有し、そしてさらにより好ましくは、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９、または１８８１〜１８８５に含まれるアミノ酸配列またはそのフラグメントもしくは改変体を有する。「ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する」抗体によって、そのレセプター（例えば、ＴＡＣＩおよびＢＣＭＡ）に結合するＢＬｙＳの能力を減少または破壊して、Ｂ細胞の増殖を刺激し、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌を刺激し、および／またはＢＬｙＳレセプターシグナル伝達カスケードを刺激する抗体が意味される。１つの実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントを中和する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、もしくは１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３ドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。これらの抗体をコードする核酸もまた、本発明によって含まれる。
【０２０５】
本発明はまた、例えば、実施例２１および２２、上記に記載されるアッセイのような当該分野で公知の方法によって決定されるように、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を阻害（すなわち、減少または破壊）する抗体（抗体フラグメントもしくはそれらの改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、表１において参照される、配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５、または１８８６〜１９０８に含まれるアミノ酸配列を有するｓｃＦｖの一部（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、もしくはＶＬ　ＣＤＲ３）を含むかまたはそれからなり、そしてさらにより好ましくは、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９、もしくは１８８１〜１８８５に含まれるアミノ酸配列またはそのフラグメントもしくは改変体を有する。１つの実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を阻害する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、もしくは１８８１〜１９０８に含まれるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を阻害する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、もしくは１８８１〜１９０８に含まれるＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を阻害する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を阻害する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０２０６】
本発明はまた、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体（それらの抗体フラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、表１において参照される、配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５、または１８８６〜１９０８に含まれるアミノ酸配列を有するｓｃＦｖの一部（すなわち、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、もしくはＶＬ　ＣＤＲ３）を含むかまたはそれからなり、そして好ましくは、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９、または１８８１〜１８８５に含まれるアミノ酸配列、またはそのフラグメントもしくは改変体を有する。「ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する」抗体によって、そのレセプター（例えば、ＴＡＣＩまたはＢＣＭＡ）に結合するＢＬｙＳの能力を増加して、Ｂ細胞の増殖を刺激し、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌を刺激し、および／またはＢＬｙＳレセプターシグナル伝達カスケードを刺激する抗体が意味される。１つの実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、ＢＬｙＳまたはそのフラグメントの活性を増強する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０２０７】
本発明はまた、例えば、実施例２１および２２、上記に記載されるアッセイのような当該分野で公知の方法によって決定されるように、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を刺激する抗体（それらの抗体フラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を提供し、この抗体は、表１において参照される、配列番号８３４〜８７２、１５７０〜１５９５、もしくは１８８６〜１９０８に含まれるアミノ酸配列を有するｓｃＦｖの一部（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ　ＣＤＲ１、ＶＨ　ＣＤＲ２、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ１、ＶＬ　ＣＤＲ２、もしくはＶＬ　ＣＤＲ３）を含むかまたはそれからなり、そしてさらにより好ましくは、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５６９、または１８８１〜１８８５に含まれるアミノ酸配列またはそのフラグメントもしくは改変体を有する。１つの実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を刺激する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を刺激する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。好ましい実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を刺激する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、ＢＬｙＳ介在Ｂ細胞増殖を刺激する抗体は、表１において開示される配列番号１〜４６、３２１〜３２９、８３４〜８７２、１５６３〜１５９５、または１８８１〜１９０８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそのフラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明によって含まれる。
【０２０８】
本発明はまた、ＢＬｙＳ、および異種ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体（それらの抗体フラグメントもしくは改変体を含むか、またはそれらからなる分子を含む）を含むか、またはこれからなる融合タンパク質を提供する。好ましくは、抗体が融合されるこの異種ポリペプチドは、Ｂ細胞の機能のために有用であるか、またはＢ細胞に抗体を標的化するために有用である。代替的な好ましい実施形態において、抗体が融合される異種ポリペプチドは、単球細胞の機能のために有用であるか、または単球細胞に抗体を標的化するために有用である。別の実施形態において、抗体が融合される異種ポリペプチドは、アルブミン（組換えヒト血清アルブミンまたはそのフラグメントもしくは改変体（例えば、米国特許第５，８７６，９６９号、１９９９年３月２日発行、欧州特許第０　４１３　６２２号、および米国特許第５，７６６，８８３号、１９９８年６月１６日発行（これらはその全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと）が挙げられるが、これに限定されない）である。好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらのフラグメントもしくは改変体を含む）は、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、欧州特許第０　３２２　０９４号の図１および図２に示されるような、ヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５（これはその全体が本明細書中で参考として援用される））と融合される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらのフラグメントもしくは改変体を含む）は、ヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１〜ｘ（ここで、ｘは、１〜５８５の整数であり、このアルブミンフラグメントは、ヒト血清アルブミン活性を有する）を含むかまたはこれらからなるポリペプチドフラグメントと融合される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらのフラグメントもしくは改変体を含む）は、ヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１〜ｚ（米国特許５，７６６，８８３号（これはその全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、ここで、ｚは、３６９〜４１９の整数である）を含むかまたはこれらからなるポリペプチドフラグメントと融合される。本発明の抗体（それらのフラグメントもしくは改変体を含む）は、異種タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたはヒト血清アルブミンポリペプチド）のＮ末端またはＣ末端のいずれかと融合され得る。
【０２０９】
１つの実施形態において、本発明の融合タンパク質は、表１において言及されるＶＨドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列または表１において言及されるＶＬドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドあるいはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチドとを含むかあるいはそれらからなる。別の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、表１において言及されるＶＨ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上のアミノ酸配列または表１において言及されるＶＬ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つもしくはそれ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチド配列とを含むかあるいはそれらからなる。好ましい実施形態において、この融合タンパク質は、表１において言及されるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドあるいはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチド配列とを含むかまたはそれらからなり、この融合タンパク質は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。別の実施形態において、融合タンパク質は、表１において言及される少なくとも１つのＶＨドメインのアミノ酸配列と、表１において言及される少なくとも１つのＶＬドメインのアミノ酸配列を有するポリペプチドあるいはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチド配列とを含むかまたはそれらからなる。好ましくは、その融合タンパク質のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、表１において言及される同じｓｃＦｖに対応する。なお別の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、表１において言及されるＶＨ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列、および表１において言及されるＶＬ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドあるいはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチド配列とを含むかまたはそのポリペプチドからなる。好ましくは、そのＶＨ　ＣＤＲまたはＶＬ　ＣＤＲのいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上は、表１において言及される同じｓｃＦｖに対応する。これらの融合タンパク質をコードする核酸分子もまた、本発明により包含される。
【０２１０】
本発明はまた、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むかまたはそれからなる、分子を含む）、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体、ならびに可溶性形態のＢＬｙＳおよび膜結合形態のＢＬｙＳの両方に免疫特異的に結合する抗体も提供する。
【０２１１】
本発明の１つ実施形態において、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むかまたはそれからなる、分子を含む）は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体（誘導体を含む）を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。別の実施形態において、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。好ましい実施形態において、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３の任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨＣＤＲ３およびＶＬＣＤＲ３は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明により包含される。
【０２１２】
本発明の別の実施形態において、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むかまたはそれからなる、分子を含む）は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントまたは改変体（誘導体を含む）を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。別の実施形態において、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、もしくはそれ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。好ましい実施形態において、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨＣＤＲ３およびＶＬＣＤＲ３は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。これらの抗体をコードする核酸分子もまた、本発明により包含される。
【０２１３】
本発明の別の実施形態において、可溶性形態および膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むかまたはそれからなる、分子を含む）は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。別の実施形態において、可溶性形態および膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲのうちの任意の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨ　ＣＤＲおよびＶＬ　ＣＤＲのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。好ましい実施形態において、可溶性形態および膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体が提供され、その抗体は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列、および／または表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体を含むかあるいはそれらからなる。好ましくは、その抗体のＶＨＣＤＲ３およびＶＬＣＤＲ３は、表１にて開示される同じｓｃＦｖに対応する。
【０２１４】
本発明はまた、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体の混合物（ｓｃＦｖ、およびその抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を提供し、この混合物は、本発明の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上の抗体を有する。特に、本発明は、可溶性形態のＢＬｙＳ、膜結合形態のＢＬｙＳ、ならびに／または膜結合形態のＢＬｙＳおよび可溶性形態のＢＬｙＳの両方に免疫特異的に結合する、異なる抗体の混合物を提供する。特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する、少なくとも２個、好ましくは少なくとも４個、少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、または少なくとも２５個の異なる抗体の混合物を提供し、ここでその混合物のうちの少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも４個、少なくとも６個、または少なくとも１０個の抗体が、本発明の抗体である。特定の実施形態において、その混合物の各抗体は、本発明の抗体である。
【０２１５】
本発明はまた、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体（ｓｃＦｖ、およびその抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）の集団（ｐａｎｅｌ）を提供し、この集団は、本発明の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の異なる抗体を有する。特に、本発明は、可溶性形態のＢＬｙＳ、膜結合形態のＢＬｙＳ、ならびに／または膜結合形態のＢＬｙＳおよび可溶性形態のＢＬｙＳの両方に特異的に結合する、異なる抗体の集団を提供する。特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳについて異なる親和性を有する抗体、ＢＬｙＳについて異なる特異性を有する抗体、または異なる解離速度を有する抗体の集団を提供する。本発明は、少なくとも１０個の抗体、好ましくは少なくとも２５個の抗体、少なくとも５０個の抗体、少なくとも７５個の抗体、少なくとも１００個の抗体、少なくとも１２５個の抗体、少なくとも１５０個の抗体、少なくとも１７５個の抗体、少なくとも２００個の抗体、少なくとも２５０個の抗体、少なくとも３００個の抗体、少なくとも３５０個の抗体、少なくとも４００個の抗体、少なくとも４５０個の抗体、少なくとも５００個の抗体、少なくとも５５０個の抗体、少なくとも６００個の抗体、少なくとも６５０個の抗体、少なくとも７００個の抗体、少なくとも７５０個の抗体、少なくとも８００個の抗体、少なくとも８５０個の抗体、少なくとも９００個の抗体、少なくとも９５０個の抗体、または少なくとも１０００個の抗体の集団を提供する。抗体の集団は、例えば、ＥＬＩＳＡのようなアッセイのための９６ウェルプレートにて使用され得る。
【０２１６】
本発明はさらに、１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、およびその抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含むかまたはその抗体からなる、組成物を提供する。１つの実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２１７】
本発明はさらに、１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、およびその抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含む組成物を提供する。１つの実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２１８】
本発明はさらに、１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、およびその抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含む組成物を提供する。１つの実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＨ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２１９】
１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含む組成物を提供する本発明の他の実施形態が、以下に列挙される。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１５６３〜１８８０に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２２０】
１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含む組成物を提供する本発明の他の実施形態が、以下に列挙される。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１８８１〜２１２８に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２２１】
１つ以上の抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）を含む組成物を提供する本発明の他の実施形態が、以下に列挙される。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬドメインまたはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲ１またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲ２またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示される配列番号１〜１５６２に含まれるＶＬ　ＣＤＲ３またはその改変体のうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含む。
【０２２２】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、表１にて開示されるＶＨドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列またはその改変体、および表１にて開示されるＶＬドメインのうちの任意の１つ以上のアミノ酸配列またはその改変体を有する、ポリペプチドを含むかまたはそのポリペプチドからなる、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上の抗体を含み、そのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、同じ特異性を有するｓｃＦｖに由来する（すなわち、可溶性ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ（配列番号１５６３〜１８８０）に由来する）か、膜結合性ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ（配列番号１８８１〜２１２８）に由来するか、または可溶性ＢＬｙＳおよび膜結合性ＢＬｙＳの両方に結合するｓｃＦｖ（配列番号１〜１５６２）に由来する。好ましい実施形態において、本発明は、抗体を提供し、そのＶＨ　ＣＤＲＸ（ここで、Ｘ＝１、２、または３）およびＶＬ　ＣＤＲＹ（ここで、Ｙ＝１，２、または３）は、同じ特異性を有するｓｃＦｖに由来する（すなわち、可溶性ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ（配列番号１５６３〜１８８０）に由来するか、膜結合性ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖ（配列番号１８８１〜２１２８）に由来するか、または可溶性ＢＬｙＳおよび膜結合性ＢＬｙＳの両方に結合するｓｃＦｖ（配列番号１〜１５６２）に由来する。なお別の実施形態において、本発明の組成物は、１つ以上の融合タンパク質を含む。
【０２２３】
以下にさらに詳細に議論するように、本発明の組成物は、単独かまたは他の組成物と組み合わせるかのいずれかで使用され得る。この抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）はさらに、Ｎ末端またはＣ末端にて異種タンパク質と組換え的に融合され得るか、またはポリペプチドもしくは他の組成物と化学的に結合（共有結合による結合および非共有結合による結合を含む）される。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイで標識およびエフェクター分子（例えば、異種ポリペプチド、薬物、放射性核種または毒素）として有用な分子と組換え的に、融合され得るかまたは結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ　９２／０８４９５；同ＷＯ　９１／１４４３８；同ＷＯ　８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９９５号およびＥＰ３９６，３８７を参照のこと。
【０２２４】
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）は、例えば、以下のために使用され得るが、これらに限定されない：ＢＬｙＳを精製すること、およびＢＬｙＳを検出すること、ならびに本発明のポリペプチドを膜結合性ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターを発現する細胞に対して標的化すること（インビトロおよびインビボでの診断方法および治療方法の両方を含む）。例えば、抗体は、生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルを定性的に測定するための免疫アッセイおよび定量的に測定するための免疫アッセイにおける用途を有する。例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８）を参照のこと（これは、本明細書中にて全体が参考として援用される）。
【０２２５】
（抗体作製方法）
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および本発明の抗体フラグメントもしくは改変体を含むかまたはそれからなる他の分子を含む）は、抗体の合成のために当該分野で公知の任意の方法、特に化学合成、または好ましくは組換え発現技術によって、作製され得る。
【０２２６】
表１に開示される単鎖Ｆｖは、当該分野で公知のファージディスプレイ法を使用して生成された。さらに、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する他のｓｃＦｖが、当該分野で公知のファージディスプレイ法を使用して生成され得る。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインは、これらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面に提示される。特に、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、ヒトまたはマウスの、リンパ組織のｃＤＮＡライブラリー）または化学合成ｃＤＮＡライブラリーから増幅される。ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーで共に結合され、ファージミドベクター（例えば、ｐＣＡＮＴＡＢ６またはｐＣｏｍｂ　３　ＨＳＳ）中へクローン化される。このベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ中にエレクトロポレートされ、そしてこのＥ．ｃｏｌｉはヘルパーファージに感染させられる。これらの方法で使用されるファージは、代表的には、ｆｄおよびＭ１３を含む線状ファージであり、そしてＶＨドメインおよびＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたはファージ遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換え的に融合される。目的の抗原（すなわち、ＢＬｙＳまたはそのフラグメント）に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて（例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して）選択または同定される。本発明の抗体を作製するのに使用し得るファージディスプレイ法の例としては、以下に開示された方法が挙げられるが、これらに限定されない：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　１８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　１８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ　ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ　１８７　９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／Ｏ１　１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ　９０／０２８０９；ＰＣＴ公開ＷＯ　９１／１０７３７；ＰＣＴ公開ＷＯ　９２／０１０４７；ＰＣＴ公開ＷＯ　９２／１８６１９；ＰＣＴ公開ＷＯ　９３／１　１２３６；ＰＣＴ公開ＷＯ　９５／１５９８２；ＰＣＴ公開ＷＯ　９５／２０４０１；ＰＣＴ公開ＷＯ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３および５，９６９，１０８号；（これらの各々は、全体が参考として本明細書中で援用される）。
【０２２７】
上の参考文献に記載されたように、ファージ選択後、このファージ由来の抗体コード領域は、以下に記載されるように、単離され得、そして抗体（ヒト抗体を含む）全体または他の任意の所望される抗原結合フラグメントを生成するために使用され得、そして所望される任意の宿主（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、細菌を含む）の中で発現され得る。Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に生成するための技術はまた、以下に開示されるような当該分野で公知の方法を用いて使用され得る：ＰＣＴ公開ＷＯ　９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１２（６）：８６４−８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉら、ＡＪＲＩ　３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４０：１０４１−１０４３（１９８８）（上記の参考文献は、全体が参考として援用される）。
【０２２８】
抗体全体を生成するために、ＶＨヌクレオチド配列またはＶＬヌクレオチド配列と、制限部位と、これらの制限部位を保護するための隣接配列とを含む、ＰＣＲプライマーが、ｓｃＦｖクローン中のＶＨ配列またはＶＬ配列を増幅するために使用され得る。当業者に公知のクローニング技術を使用して、このＰＣＲ増幅されたＶＨドメインは、ＶＨ定常領域（例えば、ヒトγ４定常領域）を発現するベクター中にクローニングされ得、そしてこのＰＣＲ増幅されたＶＬドメインは、ＶＬ定常領域（例えば、ヒトκ定常領域またはヒトλ定常領域）発現するベクター中にクローニングされ得る。好ましくは、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを発現するベクターは、選択した発現系の中で重鎖および軽鎖の発現を指向するのに適切なプロモーター、分泌シグナル、免疫グロブリン可変ドメインのためのクローニング部位、免疫グロブリン定常ドメイン、およびネオマイシンのような選択マーカーを含む。ＶＨドメインおよびＶＬドメインはまた、必要な定常ドメインを発現する１つのベクター中にクローニングされ得る。次いで、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に公知の技術を使用して、全長抗体（例えば、ＩｇＧ）を発現する安定細胞株または一過性細胞株を生成するために、細胞株中に同時トランスフェクトされる。
【０２２９】
本発明のｓｃＦｖのＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む、抗体を発現する細胞株は、表２に列挙された日付に、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）に寄託され、そして表２にて同定されるＡＴＣＣ受託番号が与えられた。このＡＴＣＣは、１０８０１　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ　２０１１０−２２０９，ＵＳＡに位置する。このＡＴＣＣ寄託は、特許手続き上の微生物の寄託についての国際的承認に関するブタベスト条約の規約に準拠してなされた。
【０２３０】
【表４】
2004509615.tif 000018
従って、１つの実施形態において、本発明は、本発明のｓｃＦｖのＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体を提供する。
【０２３１】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＮＳＯ−Ｂ１１−１５によって発現される抗体である。
【０２３２】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＮＳＯ−抗ＢＬｙＳ−６Ｄ０８−１８によって発現される抗体である。
【０２３３】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＮＳＯ−抗ＢＬｙＳ−１１６Ａ０１−６０によって発現される抗体である。
【０２３４】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＩＯ２６Ｃ０４Ｋによって発現される抗体である。
【０２３５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＩＯ５０Ａ１２によって発現される抗体である。
【０２３６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、細胞株ＮＳＯ−Ｂ１１によって発現される抗体である。
【０２３７】
他の好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを競合的に阻害する抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）を含む抗体または改変体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を、競合阻害アッセイにおいて１％と１０％との間だけ減少させる抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体のＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を、競合阻害アッセイにおいて１％と１０％との間だけ減少させる抗体を提供する。
【０２３８】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも１０％から２０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２３９】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも２０％から３０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４０】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも３０％から４０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４１】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも４０％から５０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４２】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも５０％から６０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４３】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも６０％から７０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４４】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも７０％から８０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４５】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて少なくとも８０％から９０％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４６】
好ましい実施形態において、本発明は、表１に言及されるｓｃＦｖの、フラグメント（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、またはＶＬＣＤＲ３）または改変体を含む抗体がＢＬｙＳポリペプチドに結合することを、競合阻害アッセイにおいて９０％から１００％まで減少させる抗体を提供する。
【０２４７】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３８を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２４８】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３９を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２４９】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４０を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２５０】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４１を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２５１】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４２を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２５２】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４３を有する細胞株によって産生された抗体の、ＢＬｙＳポリペプチドに対する結合を競合的に阻害する抗体を提供する。
【０２５３】
ヒトにおける抗体のインビボでの使用およびインビトロでの検出アッセイを含む、いくつかの使用について、ヒト抗体またはキメラ抗体を使用することは好ましくあり得る。完全ヒト抗体が、ヒト患者の治療用途について特に望ましい。また、米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ　９８／４６６４５、同ＷＯ　９８／５０４３３、同ＷＯ　９８／２４８９３、同ＷＯ９８／１６６５４、同ＷＯ　９６／３４０９６、同ＷＯ　９６／３３７３５、および同ＷＯ　９１／１０７４１（これらの各々は、本明細書中で全体が参考として援用される）を参照のこと。特定の実施形態において、本発明の抗体は、本発明のヒトｓｃＦｖに対応する１つ以上のＶＨドメインおよびＶＬドメインおよび別の免疫グロブリン分子（好ましくはヒト免疫グロブリン分子）由来のフレームワーク領域を含む。特定の実施形態において、本発明の抗体は、本発明のヒトｓｃＦｖに対応する１つ以上のＣＤＲおよび別の免疫グロブリン分子（好ましくはヒト免疫グロブリン分子）由来のフレームワーク領域を含む。他の実施形態において、本発明の抗体は、表１に言及されたヒトｓｃＦｖまたはそれらのフラグメントもしくは改変体の１つ以上に対応する、１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはそれ以上のＶＬ　ＣＤＲもしくはＶＨ　ＣＤＲならびにヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域（および、必要に応じて　表１のｓｃＦｖ由来ではないＣＤＲ）を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、表１に言及される、同じｓｃＦｖもしくは異なるｓｃＦｖまたはそれらのフラグメントもしくは改変体に対応する、ＶＨ　ＣＤＲ３、ＶＬ　ＣＤＲ３、または両方と、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域とを含む。
【０２５４】
キメラ抗体は、その抗体の異なった部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子（例えば、ヒト抗体由来の可変領域および非ヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体の生成方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　１２５：１９１−２０２（１９８９）；米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号および同第４，８１６，３９７号（これらは、本明細書中で全体が参考として援用される）を参照のこと。ヒト種由来の１つ以上のＣＤＲおよび非ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域（例えば、イヌ免疫グロブリン分子またはネコ免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域）を含むキメラ抗体は、例えば、以下を含む当該分野で公知である種々の技術を使用して、作製され得る：ＣＤＲ−グラフティング（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ）（ＥＰ　２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ　９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ　５９２，１０６；ＥＰ　５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ　９１：９６９−９７３（１９９４）），およびチェーンシャッフリング（Ｃｈａｉｎ　ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）。好ましい実施形態において、キメラ抗体は、表１に言及されるＶＨ　ＣＤＲ３またはＶＬ　ＣＤＲ３のいずれか１つのアミノ酸配列、またはそれらの改変体を有するヒトＣＤＲ３と、表１で開示された対応するｓｃＦｖのフレームワークの領域とは異なる非ヒトフレームワーク領域またはヒトフレームワーク領域とを含む。しばしば、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変更するため、好ましくはこれを改善するために、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換は、当該分野で周知の方法（例えば、抗原結合にとって重要なフレームワーク残基を同定するためにＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用をモデリングすることおよび特定の位置の異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較）によって同定される（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３（１９８８）（これらは、本明細書中で全体が参考として援用される）を参照のこと）。
【０２５５】
さらに、本発明の抗体は、順次、当業者に周知の方法を使用して、ＢＬｙＳポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を作製するために使用され得る（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡＳＥＢ　Ｊ．７（５）：４３７−４４４（１９９３）；ならびにＮｉｓｓｉｎｏｆｆ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参照のこと）。例えば、ＢＬｙＳに結合し、（例えば、以下に開示されるような当該分野で周知のアッセイで決定されるように）ＢＬｙＳレセプターのＢＬｙＳの結合を競合的に阻害する、本発明の抗体は、抗イディオタイプ抗体を生成するために使用され得、この抗イディオタイプ抗体は、ＢＬｙＳリガンド／レセプター結合ドメインを「模倣」し、結果として、ＢＬｙＳレセプター（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、およびＴＲ２０）に結合し、そしてこのＢＬｙＳレセプターを中和する。このような中和抗イディオタイプ（抗体フラグメントまたは改変体（例えば、抗イディオタイプのＦａｂフラグメント）を含むか、またはこれらからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳを中和するための治療レジメンに使用され得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体は、ＢＬｙＳリガンド／レセプターに結合し、それによって、ＢＬｙＳ媒介性生物学的活性をブロックするために使用され得る。あるいは、ＢＬｙＳ結合ドメインを「模倣する」抗イディオタイプは、ＢＬｙＳレセプターに結合し得、そしてＢＬｙＳレセプター媒介性シグナル伝達を誘導し得る（例えば、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦ−ＡＴ）、核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）、および／またはＡＰ−１の活性化）。このようなアゴニスト抗イディオタイプ（これらの抗イディオタイプのアゴニストＦａｂフラグメントを含む）は、ＢＬｙＳレセプター媒介性シグナル伝達を誘導または増大するための治療レジメンに使用され得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体は、ＢＬｙＳリガンド／レセプターに結合し、そしてこれによって、ＢＬｙＳ媒介性生物学的活性（例えば、Ｂ細胞増殖および／または免疫グロブリン産生）を刺激するのに使用され得る。
【０２５６】
一旦、本発明の抗体分子（抗体フラグメントもしくはその改変体を含むかまたはそれからなる、分子を含む）が、キメラとして合成されるか、または組換え的に発現されると、これは、免疫グロブリン（またより一般的にはタンパク質分子）の精製についての当該分野で公知の任意の方法（例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー（特にプロテインＡ対して特異的な抗原についての親和性）、およびサイズ分画カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ））によってか、またはタンパク質を精製するための他の標準的な任意の技術で精製され得る。さらに、本発明の抗体は、本明細書で記載される異種ポリペプチド配列または、さもなければ、当該分野で公知である異種ポリペプチド配列に融合され得、精製を容易にし得る。
【０２５７】
（抗体をコードするポリヌクレオチド）
本発明はさらに、本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むかまたはこれらからなる分子を含む）をコードするヌクレオチド配列を含むかまたはこれからなるポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、高いストリンジェントな条件下あるいは中程度またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で（例えば、上記のような）、本発明の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体をコードするポリヌクレオチド配列を有する核酸の相補的なポリヌクレオチドに対してハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む。
【０２５８】
当該分野で公知の任意の方法によって、これらのポリヌクレオチドが得られ得、そしてこれらポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、決定され得る。ｓｃＦｖ抗体、ならびにそのＶＨドメイン、ＶＬドメインおよびＣＤＲのアミノ酸配列は既知であるので（表１に記載される）、これらの抗体をコードするヌクレオチド配列は、当該分野で周知の方法を使用して、決定され得る。すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンが、本発明の抗体をコードする核酸を生成するような様式で構築される。この抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから構築され得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１７：２４２（１９９４）に記載されるように）、これは、手短に言えば、抗体をコードする配列の部分を含むオーバーラップするヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによるこの連結されたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０２５９】
あるいは、抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むかまたはこれらからなる分子を含む）をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸から作製され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））を、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するために、その配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得られ得る。ＰＣＲによって作製された増幅された核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【０２６０】
一旦、抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むかまたはこれらからなる分子を含む）のヌクレオチド配列が決定されると、抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹおよびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製し得る。
【０２６１】
特定の実施形態では、表１を参照されるＶＨおよびＶＬドメイン、またはそれらのフラグメントもしくは改変体の１つ以上が、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術を使用して、フレームワーク領域内に挿入され得る。特定の実施形態において、表１に参照されるＣＤＲ、またはそれらのフラグメントもしくは改変体の１、２、３、４、５、６以上が、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術を使用して、フレームワーク領域内に挿入され得る。このフレームワーク領域は、天然に存在、または共通するフレームワーク領域であり得、そして好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレームワーク領域の一覧については、例えばＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９（１９９８）（この内容は、本明細書中でその全体が参考として援用される）を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組合せによって生成するポリヌクレオチドは、ＢＬｙＳに特異的に結合する抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むかまたはこれらからなる分子を含む）をコードする。好ましくは、上で考察したように、一つ以上のアミノ酸の置換を有する抗体の改変体または抗体フラグメントをコードするポリヌクレオチドが、フレームワーク領域内で起こり、そして好ましくは、このアミノ酸置換は、その抗原への抗体の結合を改善する。さらに、このような方法は、アミノ酸置換させるため、または鎖内ジスルフィド結合に関与している一つ以上の可変領域システイン残基を欠失させて、一つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠けた抗体分子または抗体フラグメントもしくは改変体を生成させるために、使用され得る。ポリペプチドに対する他の改変は、本発明に含まれ、そして当該分野の技術によって達成される。
【０２６２】
（抗体の組換え発現）
本発明の抗体（ｓｃＦｖおよびその抗体フラグメントまたは改変体（例えば、本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖またはそれらの一部、あるいは本発明の一本鎖抗体）を含むかまたはこれらからなる他の分子を含む組換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。本発明の抗体分子（例えば、抗体全体、抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはこれらの一部（好ましくは重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインを含む））（しかし、必ずしも含むわけではない）をコードするポリヌクレオチドが一旦得られれば、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。従って、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含むポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製するための方法は、本明細書中に記載される。当業者に周知の方法は、抗体コード配列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築するために使用され得る。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。従って、本発明は、プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体分子（例えば、抗体全体、抗体の重鎖または軽鎖、抗体の重鎖可変ドメインもしくは軽鎖可変ドメインまたはそれらの一部、あるいは重鎖ＣＤＲまたは軽鎖ＣＤＲ、単鎖Ｆｖ、またはそのフラグメントもしくは改変体）をコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ　８６／０５８０７号；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ　８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号（この内容は、本明細書中でその全体が参考として援用される）を参照のこと）、そして、この抗体の可変ドメインは、重鎖の全体、軽鎖の全体、または重鎖および軽鎖の両方の発現のためにこのようなベクター内にクローニングされ得る。
【０２６３】
発現ベクターは、従来の技術によって宿主細胞に移入され、次いでトランスフェクト細胞は、従来の技術によって本発明の抗体を産生するために培養される。従って、本発明は、異種のプロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体（例えば、抗体全体、その重鎖または軽鎖、もしくはそれらの一部、もしくは本発明の単鎖抗体、あるいはそれらのフラグメントまたは改変体）をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。抗体分子全体の発現のための好ましい実施形態では、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下記に詳細に記載したように、免疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞において同時発現され得る。
【０２６４】
種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子を発現し得る細胞を表わす。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベクター、プラスミドＤＮＡ発現ベクターまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用いて形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体をコードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植物細胞系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物のウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３細胞）。好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉのような細菌細胞、そしてより好ましくは、特に、組換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わされた、チャイニーズハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗体のための効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ　４５：１０１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　８：２（１９９０））。
【０２６５】
細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タンパク質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベクターには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配列がｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにインフレーム（ｉｎ　ｆｒａｍｅ）で個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ　Ｊ．２：１７９１（１９８３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ　Ｈｅｅｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９（１９８９））など。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させるために使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そして溶解した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および結合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製され得る。このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物は、ＧＳＴ部分から放出され得る。
【０２６６】
昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ　ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）は、異種遺伝子を発現するためのベクターとして使用され得る。このウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞において増殖する。抗体をコードする配列は、このウイルスの非必須の領域（例えばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。
【０２６７】
哺乳動物宿主細胞においては、多数のウイルスに基づく発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合においては、目的の抗体をコードする配列は、アデノウイルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロモーターおよび３つの部分に分かれるリーダー配列、に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換えによって、アデノウィルスゲノムに挿入され得る。ウイルスのゲノムの非必須領域（例えば、Ｅ１またはＥ３領域）における挿入は、生存可能で、感染した宿主において抗体分子を発現する能力のある組換えウイルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８１：３５５−３５９（１９８４）を参照のこと）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体をコードする配列の効率的な翻訳のために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入部分全体の翻訳を確実にするために、所望されるコード配列のリーディングフレーム（ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ）と相が同じでなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター、などの含有によって高められ得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。
【０２６８】
さらに、宿主細胞系統は、選択され得、これは挿入配列の発現を調節し、または、所望される特異的な様式で遺伝子産物を改変し、そしてプロセシングする。タンパク質産物のこのような改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（例えば切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の、翻訳後プロセシングおよび改変のための、特徴的で特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された外来タンパク質の正確な改変およびプロセシングを確実にするように選択され得る。この目的のために、遺伝子産物の、第一の転写、グリコシル化、およびリン酸化の正確なプロセシングのための細胞機構を有する、真核生物宿主細胞が、使用され得る。このような哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、そして特に、例えば、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、ならびに、例えば、ＣＲＬ７Ｏ３ＯおよびＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常な乳腺細胞株を含むが、これらに限定されない。
【０２６９】
組換えタンパク質の長期間の高収率産生、安定発現が好ましい。例えば、安定に抗体分子を発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用するよりも、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外来ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、１〜２日間富化培地で増殖させられ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミドにおける選択マーカーは、選択に対する耐性を与え、そして細胞が、プラスミドをその染色体内に安定に組み込み、そして増殖して、細胞増殖巣を形成し、これを今度はクローニングし得、細胞株に拡大され得ることを可能にする。この方法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために、有利に使用され得る。このような操作された細胞株は、直接的または間接的に抗体分子と相互作用する化合物のスクリーニングおよび評価において、特に有用であり得る。
【０２７０】
多数の選択系が使用され得、この選択系は、単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ　１１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　４８：２０２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら、Ｃｅｌｌ　２２：８１７（１９８０））の遺伝子を含むが限定されず、これらの遺伝子は、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞においてそれぞれ使用され得る。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子の選択の根拠として使用され得る：ｄｈｆｒ、これはメトトレキサートに対する耐性を与える（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７７：３５７（１９８０）；Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７８：１５２７（１９８１））；ｇｐｔ、これはミコフェノール酸に対する耐性を与える（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７８：２０７２（１９８１））；ｎｅｏ、これはアミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を与える（Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　１２：４８８−５０５；Ｗｕ　ａｎｄ　Ｗｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ　３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．　３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ　ａｎｄ　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；ＴＩＢ　ＴＥＣＨ　１１（５）：１５５−２１５）（Ｍａｙ、１９９３年）；ならびにｈｙｇｒｏ、これはハイグロマイシンに対する耐性を与える（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ　３０：１４７（１９８４））。組換えＤＮＡ技術の分野で周知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために、慣用的に適用され得、そしてこのような方法は、以下に記載されている：例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０）；ならびに１２章および１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．　１５０：１（１９８１）（これらはその全体が本明細書中に参考として援用される）。
【０２７１】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増大され得る（総説として、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｖｅｃｔｏｒｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｏｎｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９８７）を参照のこと）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが、増幅可能であると、宿主細胞の培養物に存在するインヒビターのレベルにおける増加は、マーカー遺伝子のコピーの数を増加する。増幅領域は抗体遺伝子と結合しているので、抗体の産生もまた増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７（１９８３））。
【０２７２】
宿主細胞は、本発明の二つの発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコードする第一のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第二のベクター）で、同時トランスフェクトされ得る。この二つのベクターは、重鎖および軽鎖のポリペプチドの等しい発現を可能にする、同一の選択マーカーを含み得る。あるいは、単一のベクターが使用され得、これは重鎖および軽鎖両方のポリペプチドをコードし、そして発現することができる。このような状況において、過剰の毒性の遊離重鎖を避けるために、重鎖の前に軽鎖が配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ　３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌｅｒ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　７７：２１９７（１９８０））。重鎖および軽鎖のためのコード配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。
【０２７３】
一旦本発明の抗体分子が、動物によって産生されるか、化学的に合成されるか、または組換えにより発現されると、当該分野で公知の、免疫グロブリン分子の精製のための任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー（特に、プロテインＡの後に特異的抗原に対するアフィニティーによる）、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質精製のための任意の他の標準的な技術によって、精製され得る。さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、本明細書中に記載されるかまたはそうでなければ当該分野において公知の、異種ポリペプチド配列に融合され得、精製を容易にする。
【０２７４】
（抗体の特徴付け）
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらからなる他の分子を含む）は、種々の方法で特徴付けされ得る。特に、本発明の抗体および関連分子は、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのフラグメント（例えば、ＢＬｙＳの可溶性形態または膜結合形態）に免疫特異的に結合する能力について、本明細書に記載される技術または当該分野で公知の慣用的な改変技術を使用して、アッセイされ得る。本発明の組成物によって免疫特異的に結合され得るＢＬｙＳまたはＢＬｙＳフラグメントとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／または３２２９）もしくはヒト単球上に発現されたＢＬｙＳ；マウスＢＬｙＳ（配列番号３２３０および／または３２３１）もしくはマウス単球上に発現されたＢＬｙＳ；ラットＢＬｙＳ（配列番号３２３２、３２３３、３２３４および／または３２３５に与えられるような可溶性形態または、例えば、ラット単球の表面上の膜会合形態のいずれか）；あるいはサルＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２３６および／または３２３７のサルＢＬｙＳポリペプチド、サルＢＬｙＳ可溶性形態、もしくはサル単球上に発現されたＢＬｙＳ）あるいはそれらのフラグメント。好ましくは、本発明の組成物は、ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／または３２２９）またはそのフラグメントに結合する。本発明の抗体がＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのフラグメントに免疫特異的に結合する能力についてのアッセイが、溶液において（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１３：４１２−４２１（１９９２））、ビーズ上で（例えば、Ｌａｍ、Ｎａｔｕｒｅ　３５４：８２−８４（１９９１））、チップ上で（例えば、Ｆｏｄｏｒ、Ｎａｔｕｒｅ　３６４：５５５−５５６（１９９３））、細菌上で（例えば、米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子上で（例えば、特許番号５，５７１，６９８；５，４０３，４８４；および５，２２３，４０９）、プラスミド上で（例えば、Ｃｕｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９：１８６５−１８６９（１９９２））、またはファージ上で（例えば、ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：３８６−３９０（１９９０）；Ｄｅｖｌｉｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：４０４−４０６（１９９０）；Ｃｗｉｒｌａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：６３７８−６３８２（１９９０）；ならびにＦｅｌｉｃｉ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０（１９９１））（これらの参考文献の各々は、その全体が、本明細書中に参考として援用される）、実施され得る。ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのグラグメントに免疫特異的に結合すると同定された抗体が、次いで、本明細書に記載されるかまたはそうでなければ当該分野で公知の技術を使用するかまたは慣用的に改変して、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのフラグメントについてのそれらの特異性および親和性についてアッセイされ得る。
【０２７５】
本発明の抗体を、当該分野で公知の任意の方法によって、ＢＬｙＳへの免疫特異的結合および他の抗原との交差反応性についてアッセイし得る。特に、抗体がＢＬｙＳの可溶性形態または膜結合形態に免疫特異的に結合する能力および特定の種（例えば、マウス、サルまたはヒト、好ましくはヒト）由来のＢＬｙＳに対する抗体、フラグメントまたは改変体の特異性を、本明細書中に記載されるかまたはそうでなければ当該分野で公知の技術を使用するまたは慣用的に改変して決定し得る。
【０２７６】
免疫特異的結合および交差反応性を分析するために用いられ得る免疫アッセイとしては、いくつかのものについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、およびプロテインＡ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、そして当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考として援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な免疫アッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすることが意図されない）。
【０２７７】
免疫沈降プロトコルは、一般に、タンパク質ホスファターゼインヒビターおよび／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％　ＮＰ−４０またはＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００、１％　デオキシコール酸ナトリウム、０．１％　ＳＤＳ、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ、０．０１Ｍ　リン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）、１％　Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で、細胞の集団を溶解する工程、目的の抗体を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間）４℃でインキュベートする工程、プロテインＡセファロースビーズおよび／またはプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に添加する工程、約１時間以上４℃でインキュベートする工程、溶解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およびＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズを再懸濁する工程を包含する。目的の抗体が特定の抗原を免疫沈降する能力は、例えば、ウエスタンブロット分析により、評価され得る。当業者は、抗体の抗原への結合を増加するように、そしてバックグラウンドを減少させるように改変され得るパラメータ（例えば、セファロースビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれいにする工程）に関して、認識し得る。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１０．１６．１を参照のこと。
【０２７８】
ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、ポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８％〜２０％　ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）中でのそのタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプルをそのポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロンのような膜に転写する工程、ブロッキング溶液（例えば、３％　ＢＳＡまたは脱脂粉乳を有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液（例えば、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ　２０）中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるいは放射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）に結合体化された二次抗体（一次抗体を認識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いて、その膜をブロックする工程、洗浄緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を包含する。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように、そしてバックグラウンドノイズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、認識し得る。ウエスタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。
【０２７９】
ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合体化された目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートする工程、およびその抗原の存在を検出する工程を包含する。ＥＬＩＳＡにおいて、目的の抗体は、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検出可能な化合物に結合体化された第二の抗体（目的の抗体を認識する）が、ウェルに添加され得る。さらに、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体がウェルにコーティングされ得る。この場合、検出可能な分子は、酵素基質例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合体化された抗体であり得る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように改変され得るパラメータ、および当該分野において公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関して、認識する。ＥＬＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１１．２．１を参照のこと。
【０２８０】
抗原に対する抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらからなる他の分子を含む）の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、漸増量の非標識抗原の存在下での、目的の抗体との標識抗原（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）のインキュベーション、および標識抗原に結合体化された抗体の検出を含む。ＢＬｙＳに対する本発明の抗体の親和性、および結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合はまた、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、ＢＬｙＳは、漸増量の非標識の第二の抗ＢＬｙＳ抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）に結合体化した目的の抗体とともにインキュベートされる。
【０２８１】
好ましい実施形態において、ＢＩＡｃｏｒｅ速度的分析を使用して、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳのフラグメントへの抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらからなる他の分子を含む）の結合オンおよびオフレートを決定する。ＢＩＡｃｏｒｅ速度論的分析は、以下の実施例６、１２、１７、および１８に詳細に記載されるように、それらの表面に固定された抗体を有するチップへのＢＬｙＳの結合およびこのチップからの脱離を分析する工程を包含する。
【０２８２】
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはこれらからなる他の分子を含む）はまた、当業者に公知の技術を使用して、ＢＬｙＳのＢＬｙＳレセプター（例えば、ＴＡＣｌおよびＢＣＭＡ）への結合を阻害、増加、または有意に変化させないそれらの能力についてアッセイされ得る。例えば、ＢＬｙＳについてのレセプターを発現する細胞（例えば、ＩＭ９、ＲＥＨ、ＡＲＨ−７７細胞、Ｎａｍａｌｗａ、およびＲＰＭＩ−８２２６　Ｂ細胞腫瘍株、ならびに抹消ＣＤ２０＋Ｂ細胞）が、抗体の存在下または非存在下でＢＬｙＳに接触され、そしてこれらの細胞へのＢＬｙＳの結合を阻害、増加、または有意に変更しない抗体の能力が測定され得る。細胞に対するＢＬｙＳ結合は、例えば、フローサイトメトリーまたはシンチレーションアッセイによって、測定され得る。ＢＬｙＳまたは抗体は、検出可能な化合物（放射性標識（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、および１２５Ｉ）または蛍光標識（例えば、フルオレセインイソシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒドおよびフルオレサミン）で標識されて、ＢＬｙＳとＢＬｙＳレセプターとの間および／またはＢＬｙＳと本発明の抗体との間の相互作用を検出し得る。あるいは、ＢＬｙＳレセプターへのＢＬｙＳ結合を阻害、増加または有意に変更しない本発明の抗体の能力が、無細胞アッセイにおいて決定され得る。例えば、ネイティブもしくは組換えＢｌｙＳ（例えば、これは、配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５のアミノ酸配列を有する）またはそのフラグメントは、抗体と接触され得、そしてＢＬｙＳレセプターへのＢＬｙＳ結合を阻害、増加または有意に変更しないこの抗体の能力が、決定され得る。好ましくは、この抗体は、固体支持体上に固定され、そしてＢＬｙＳまたはＢＬｙＳフラグメントが、検出可能な化合物によって標識される。あるいはＢＬｙＳまたはＢＬｙＳフラグメントが、固体支持体上に固定され、そしてこの抗体が、検出可能な化合物で標識される。ＢＬｙＳは、部分的にもしくは完全に精製され得るか（例えば、他のポリペプチドを部分的にまたは完全に含まない）または細胞溶解物の一部であり得る。さらに、このＢＬｙＳポリペプチドは、融合タンパク質であり得、この融合タンパク質は、ＢｌｙＳまたはその生物学的に活性な部分およびドメイン（例えば、免疫グロブリンＦｃまたはグルタチオニン−Ｓ−トランスフェラーゼ）を含む。例えば、ＴＡＣＩ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ５１７９０）のアミノ酸残基１〜１５４、またはＢＣＭＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１１８３）の１〜４８は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域に融合され得、そしてＢＬｙＳレセプターへのＢＬｙＳ結合を阻害、増加または有意に変更しない本発明の抗体の能力を決定するための無細胞アッセイにおいて使用され得る。あるいは、ＢＬｙＳは、当業者に周知の技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用してビオチン化され得る。
【０２８３】
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、あるいは抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、またはこれらからなる他の分子を含む）はまた、当業者に公知の技術を使用して、ＢｌｙＳ誘導Ｂ細胞増殖を、阻害、刺激、または有意に変更しないそれらの能力について、アッセイされ得る。例えば、Ｂ細胞増殖は、３Ｈ−チミジン組み込みアッセイおよびトリパンブルー細胞カウントを使用することによって、アッセイされ得る（例えば、Ｍｏｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２８５：２６０−２６３（１９９９）を参照のこと）。さらに、本発明の抗体、またはそのフラグメントもしくは改変体は、細胞シグナル伝達分子および転写因子（例えば、カルシウム調節因子およびシクロフィリンリガンド（「ＣＡＭＬ」）、カルシニュリン、活性化Ｔ細胞転写因子の核因子（「ＮＦ−ＡＴ」）、核因子−κＢ（「ＮＦ−κＢ」）、およびＡＰ−１）のＢＬｙＳ誘導活性化を、ブロックするか、刺激するか、または有意に変更しないそれらの能力について、当業者に公知の技術を使用して、アッセイされ得る（例えば、ｖｏｎ　ＢｕｌｏｗおよびＢｒａｍ，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２７８：１３８−１４１（１９９７）を参照のこと）。例えば、ＮＦ−ＡＴ活性は、電気移動度（ｅｌｅｃｔｒｏｍｏｂｉｌｉｔｙ）ゲルシフトアッセイによって、ＮＦ−ＡＴによって調節されることが知られているタンパク質の発現（例えば、ＩＬ−２発現）を検出することによって、レポーター遺伝子（例えば、検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼまたはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ））をコードする核酸に作動可能に連結されたＮＦ−ＡＴ調節エレメント）の誘導を検出することによって、または細胞性応答（例えば、細胞分化、または細胞増殖）を検出することによって、決定され得る。
【０２８４】
本発明の抗体、またはそのフラグメントもしくは改変体はまた、ＢＬｙＳ活性を、中和、増強、または有意に変更しないそれらの能力についてアッセイされ得る。例えば、抗体またはそのフラグメントもしくは改変体は、ＢＬｙＳについてのレセプターを発現する細胞へのＢＬｙＳの結合を阻害するそれらの能力について慣用的に試験され得る（以下の実施例３を参照のこと）。
【０２８５】
（可溶性ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体についての選択およびスクリーニング）
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、またはこれらからなる他の分子を含む）は、ＢＬｙＳの可溶形態に免疫特異的に結合するこれらの抗体を同定するための種々のアッセイにおいて、スクリーニングされ得る。１つの特定のアッセイにおいて、溶液中のＢＬｙＳのビオチン化可溶性形態に結合する抗体は、ストレプトアビジンがコーティングされた磁気ビーズ上に捕獲される。このアッセイは、比較的、ＢＬｙＳを中和および／または結合する本発明の抗体を同定するために適用され得る。さらに、抗体は、本明細書中に記載されるかまたはそうでなければ当該分野で公知の中和アッセイにおいてアッセイされ得る（以下の実施例３を参照のこと）。例えば、抗体は、可溶性ＢＬｙＳ（例えば、ビオチン化ＢＬｙＳ）がＩＭ９細胞に結合することを阻害するそれらの能力について試験され得る。このアッセイにおいて、標識された可溶性ＢＬｙＳ（例えば、ビオチン化ＢＬｙＳ）が、候補抗ＢＬｙＳ抗体とインキュベートされて、ＢＬｙＳ−抗ＢＬｙＳ抗体複合体の形成を可能にする。インキュベーションに続いて、ＢＬｙＳ−抗ＢＬｙＳ抗体サンプルのアリコートを、ＩＭ９細胞に添加される。可溶性ＢＬｙＳの結合は、当該分野で公知の技術を使用して決定され得る。例えば、ビオチン化ＢＬｙＳのＩＭ９細胞への結合は、ストレプトアビジン−δの添加に続いて、蛍光計（ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ）を使用して、検出され得る。ＢＬｙＳを中和する抗体によって結合されない場合、細胞に結合しないビオチン化ＢＬｙＳが、検出される。従って、（ＢＬｙＳが無関係の抗体とプレインキュベートされるかまたは全く細胞がない状態でプレインキュベートされたコントロールサンプルと比較して）ＩＭ−９細胞に結合するｂｉｏ−ＢＬｙＳの量を減少させる抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態に結合し、そしてこの可溶性形態を中和する抗体として同定される。別のアッセイにおいて、抗体は、可溶性ビオチン化ＢＬｙＳに結合するが、膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７細胞由来の膜上のＢＬｙＳ）には結合しない抗体について、ＥＬＩＳＡを使用してスクリーニングされる（以下の実施例２および９を参照のこと）。これらのアッセイにおいて、可溶性ＢＬｙＳ（例えば、ビオチン化ＢＬｙＳ）および膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７膜上）は、同じ抗体とともに別個のサンプル中でインキュベートされ、そして可溶性ＢＬｙＳ（ビオチン化ＢＬｙＳ）に結合するが、膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７細胞膜上）には結合しない抗体が、捕獲され、そして同定される。
【０２８６】
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、またはこれらからなる他の分子を含む）は、ＡＰＲＩＬ、エンドカイン−α、ＶＥＧＩ、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、Ｆａｓ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、およびＰＢＳと交差反応しない抗体を同定するために試験され得る（以下の実施例４を参照のこと）。抗体はまた、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用して、ＢｌｙＳについてのそれらの親和性について試験され得る（以下の実施例６、１２、１７および１８を参照のこと）。抗体はまた、当業者に公知の技術を使用して、ＢＬｙＳ誘導免疫グロブリン産生および／またはＢ細胞増殖を刺激するか、阻害するか、または変更しないそれらの能力について試験され得る。例えば、ヒトＢ細胞、ＢＬｙＳおよび抗体は、９６ウェルプレート中で一緒にインキュベートされ得、そして３Ｈ−チミジン取り込みが、シンチレーションカウンタを使用して測定され得る。
【０２８７】
（膜結合ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体についての選択およびスクリーニング）
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、またはこれらからなる他の分子を含む）は、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するこれらの抗体を同定するための種々のアッセイにおいて、スクリーニングされ得る。１つの特定のアッセイにおいて、Ｕ９３７膜上のＢＬｙＳまたは固定化ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳに結合する抗体が、捕獲される。ＢＬｙＳの膜結合形態に結合する抗体を試験するために有用であり得る、ＢＬｙＳを発現する他の細胞株としては、Ｋ−５６２、ＨＬ−６０およびＴＨＰ−１細胞が挙げられる。別のアッセイにおいて、抗体は、Ｕ９３７膜上のＢＬｙＳに結合するか、またはヒシチジンタグ化ＢＬｙＳに結合する抗体（または抗体フラグメントもしくは改変体）について、ＥＬＩＳＡを使用して、スクリーニングされる。このアッセイにおいて、抗体が、Ｕ９３７膜またはヒスチジンタグ化ＢＬｙＳでコートされた９６ウェルプレートに添加され、そしてＵ９３７膜またはヒスチジンタグ化ＢＬｙＳに結合する抗体または抗体フラグメントもしくは改変体が捕獲される。別のアッセイにおいて、抗体は、ビオチン化ＢＬｙＳ（可溶性ＢＬｙＳ）に結合しないが、膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７細胞由来の膜上のＢＬｙＳ）には結合する抗体（またはその抗体フラグメントもしくは改変体）について、ＥＬＩＳＡを使用してスクリーニングされる（以下の実施例２を参照のこと）。これらのアッセイにおいて、可溶性ＢＬｙＳ（例えば、ビオチン化ＢＬｙＳ）および膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７膜上）は、同じ抗体（または抗体フラグメントもしくは改変体）とともに別個のサンプル中でインキュベートされ、そして可溶性ＢＬｙＳ（ビオチン化ＢＬｙＳ）に結合しないが、膜結合ＢＬｙＳ（例えば、Ｕ９３７細胞膜上）には結合する抗体（または抗体フラグメントもしくは改変体）が、捕獲され、そして同定される。別のアッセイにおいて、抗体は、ヒシチジンタグ化ＢＬｙＳまたはＵ９３７由来の膜に結合する抗体（抗体フラグメントまたは改変体）のうちどれが、ＡＰＲＩＬ、エンドカイン−α、ＶＥＧＩ、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、Ｆａｓ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、およびＰＢＳと交差反応しないのかを、決定するために、ＥＬＩＳＡを使用してスクリーニングされる（以下の実施例４を参照のこと）。ＥＬＩＳＡはまた、ＴＮＦ−αの存在下で、ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳに結合するＵ９３７細胞由来の膜に結合する抗体（または抗体フラグメントもしくは改変体）のどれが、ＢＬｙＳに結合するのかを決定するために使用され得る（以下の実施例４を参照のこと）。ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントもしくは改変体がまた、ハイスループットＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用して、ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳについてのそれらの親和性について試験され得る（以下の実施例１４を参照のこと）。
【０２８８】
さらに、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの膜結合形態についてのそれらの特異性を決定するために、ＢＬｙＳの「非結合性」形態を発現するように操作された細胞に対してスクリーニングされ得る。この結果を達成し得るＢＬｙＳにおける変異としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：配列番号３２２８に示されるＢＬｙＳ配列のアミノ酸残基Ｌｙｓ−１３２および／またはＡｒｇ−１３３の変異または欠失。典型的な変異誘発は、残基Ｌｙｓ−１３２またはＡｒｇ−１３３の一方または両方のアラニン残基への変異を含む。そのようなＢＬｙＳの「非切断性」形態を発現する細胞は、ＢＬｙＳの膜結合形態に結合する抗体の能力をアッセイする際に使用するための著明な試薬を提供する。
【０２８９】
（可溶性ＢｌｙＳおよび膜結合ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体についての選択およびスクリーニング）
本発明の抗体（ｓｃＦｖ、および抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、またはこれらからなる他の分子を含む）は、ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するこれらの抗体または抗体フラグメントもしくは改変体を同定するための種々のアッセイにおいて、スクリーニングされ得る。１つの特定のアッセイにおいて、固定化ＢＬｙＳに結合する抗体が、捕獲される。別のアッセイにおいて、抗体は、上記のように、可溶性ＢＬｙＳ（例えば、可溶性ｂｉｏ−ＢＬｙＳ）のＩＭ−９細胞への結合を阻害する）これらの抗体（または抗体フラグメントもしくは改変体）について、ＥＬＩＳＡを使用して、スクリーニングされる。他のアッセイにおいて、抗体は、Ｕ９３７細胞由来の膜に結合するこれらの抗体について、ＥＬＩＳＡを使用して、スクリーニングされる。さらに、さらなるＥＬＩＳＡアッセイが、当該分野で公知の技術を使用して、どの抗体が、ＡＰＲＩＬ、エンドカイン−α、ＶＥＧＩ、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、Ｆａｓ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、およびＰＢＳと交差反応しないのかを決定するために、またはＴＮＦ−αの存在下で、ＢＬｙＳに結合する抗体を決定するために、実施され得る（以下の実施例４を参照のこと）。抗体は、本明細書中に記載されるかまたはそうでなければ当該分野で公知の技術を使用して、中和アッセイにおいてアッセイされ得る。ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合する抗体がまた、ハイスループットＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用して、ＢＬｙＳについてのそれらの親和性について試験され得る。
【０２９０】
（抗体結合体）
本発明は、融合タンパク質を作製するための、異種ポリペプチド（またはそれらの部分、好ましくは少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００個のアミノ酸のポリペプチド）に組換えで融合されたか、あるいは化学的に結合体化された抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいはそれらからなる、ｓｃＦｖおよび他の分子を含む）を含む。この融合は、必ずしも直接的である必要はないが、リンカー配列を介して起こり得る。例えば、本発明の抗体は、異種ポリペプチドを、インビトロまたはインビボのいずれかで、特定の細胞表面抗原（例えば、単球細胞株の細胞上の膜結合ＢＬｙＳ）または特定の細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞上に局在するＴＡＣＩおよび／またはＢＣＭＡ）に結合する細胞表面抗原に特異的な本発明の抗体に融合させるかまたは結合させることによって、異種ポリペプチドを特定の細胞型（例えば、単球細胞株およびＢ細胞の細胞）に標的化するために使用され得る。異種ポリペプチドに融合されたかまたは結合された抗体はまた、当該分野で公知の方法を使用してインビトロイムノアッセイおよび精製方法にて使用され得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、前出およびＰＣＴ公開ＷＯ　９３／２１２３２；ＥＰ　４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３９：９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌｉｅｓら、ＰＮＡＳ　８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）（これらは、それらの全体において参考として援用される）を参照のこと。
【０２９１】
１つの実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＨドメイン、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＨ　ＣＤＲ１、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＨ　ＣＤＲ２、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＨ　ＣＤＲ３（すなわち、配列番号２１２９〜３２２７）、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【０２９２】
別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＬドメイン、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＬ　ＣＤＲ１、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。なお別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＬ　ＣＤＲ２、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＬ　ＣＤＲ３、および異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【０２９３】
別の実施形態において、融合タンパク質は、表１に示されるＶＨドメインおよび表１に示される１以上のＶＬドメイン、ならびに異種ポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、本発明の融合タンパク質は、表１に示されるＶＨ　ＣＤＲのいずれか１つ、および表１に示されるＶＬ　ＣＤＲのいずれか１つ、ならびに異種ポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【０２９４】
本発明はさらに、抗体フラグメントに融合されたか、または結合された異種ポリペプチドを含むか、あるいはこれらからなる組成物を含む。例えば、異種ポリペプチドは、Ｆａｂフラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、またはその部分に融合され得るか、または結合され得る。ポリペプチドを抗体部分に融合する方法または結合する方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２，９４６号；ＥＰ　３０７，４３４；ＥＰ　３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ　９６／０４３８８；ＷＯ　９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８９；１１３３７−１１３４１（１９９２）（上記の参考文献は、それらの全体が参考として援用される）を参照のこと。
【０２９５】
本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術により作製され得る。ＤＮＡシャッフリングは、抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）の活性を調節するために使用され得、このような方法を使用して変化した活性を有する抗体（より高い親和性およびより低い解離速度を有する抗体）を作製し得る。一般には、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　２４（２）：３０８−１３（１９９８）（これらの特許および刊行物の各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドは、誤りがちな（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、無作為ヌクレオチド挿入、または組換え前の他の方法による無作為の変異誘発に供されることによって変化され得る。別の実施形態において、その一部が免疫特異的にＢＬｙＳに結合する抗体をコードするポリヌクレオチドの１以上の部分が、１以上の異種分子の１以上の成分、モチーフ、区画、一部分、ドメイン、フラグメントなどと組換えられ得る。
【０２９６】
さらに、本発明の抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）は、精製を容易にするペプチドのような、マーカー配列と融合され得る。好ましい実施形態において、このマーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．，９２５９　Ｅｔｏｎ　Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグのようなヘキサ−ヒスチジンペプチドであり、それらの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６：８２１−８２４（１９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する血球凝集素「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ　３７：７６７（１９８４））および「ｆｌａｇ」タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ、（配列番号３２３８）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ　Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９７】
本発明はさらに、診断剤、または治療剤に結合する抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）を含む。この抗体は、例えば、臨床試験の手順の一部（例えば、所定の治療レジメの有効性を決定するための）として、腫瘍の発生または進行をモニターするために診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能な物質にカップリングすることによって容易にされ得る。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽電子射出断層撮影法を使用する陽電子射出金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。検出可能な物質は、当該分野で公知の技術を使用して、直接的にか、または中間体（例えば、当該分野で公知のリンカー）を介して間接的にかのいずれかで、抗体にカップリングされ得るか、もしくは結合され得る。本発明に従う診断薬として使用するための抗体に結合され得る金属イオンとしては、例えば、米国特許第４，７４１，９００号を参照のこと。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ；適切な放射性物質の例としては、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｔｉｎが挙げられる。
【０２９８】
さらに本発明の抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）は、細胞毒（例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤）、治療剤または放射性金属イオン（例えば、２１３Ｂｉのようなα放射核）のような治療的な部分と結合され得る。特定の実施形態において、本発明の抗体は、放射性金属イオン（１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、１６６Ｈｏ、および１５３Ｓｍが挙げられるがこれらに限定されない）のポリペプチドへの結合に有用な単環式キレート剤に結合される。好ましい実施形態において、本発明の抗体に結合される単環式キレート剤に関連する放射性金属イオンは、１１１Ｉｎである。好ましい実施形態において、本発明の抗体に結合される単環式キレート剤に関連する放射性金属イオンは、９０Ｙである。特定の実施形態において、多環式キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。他の特定の実施形態において、ＤＯＴＡは、リンカー分子を介して本発明の抗体に結合される。ＤＡＴＡのポリペプチドへの結合に有用なリンカー分子の例は、当該分野で一般的に公知である。例えば、Ｄｅｎａｒｄｏら、Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．４（１０）：２４８３〜９０、１９９８；Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０（４）：５５３〜７、１９９９；ならびにＺｉｍｍｅｒｍａｎら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６（８）：９４３〜５０、１９９９（これらは、その全体が参考として本発明に援用される）。
【０２９９】
細胞毒または細胞毒性剤としては、細胞に有害な任意の薬物、低分子毒素のような分子、および酵素的に活性な細菌、真菌、植物、または動物由来の毒素が挙げられる。例としては、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ−１６）、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、およびプロマイシンならびにそれらのフラグメント、改変体もしくはホモログ挙げられるがこれらに限定されない。治療剤としては、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ）（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）、およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスフォラミド、トリエチレンチオホスフォラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチルオロメラミン、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、クロロゾトシン、ホテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、アクラシノマイシン、アザセリン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カリーチアルニシン、カラビシン、カルミノマイシン、カジノフィリン、クロモマイシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプロニグリン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート、フルダラビン、チアミプリン、アンシタビン、アザシタジン、６−アザウリジン、カルモフール、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、５−ＦＵ、カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリニック酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブレニック酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトレキサート、デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デルネコルシン、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプリニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｒｎ　ａｃｅｔａｔｅ）、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリニック酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫＯ、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾニック酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、トリアジコン、２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンデシン、デカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、タキソイド（例えば、パクリタキセル（「ＴＡＸＯＬ」、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）、ドキセタキセル（「ＴＡＸＯＴＥＲＥ」、Ｒｈ６ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ　Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）、ゲンシタビン、イホスファミド、ビノレルビン、ナベルビン、ノバントロン、テニポシド、アミノプテリン、キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）、イバンドロネート、ＣＰＴ−Ｉ　１、トポイソメラーゼ、インヒビターＲＦＳ　２０００、ジフルオロメチルオルニシン（ＤＭＦＯ）、レチノール酸、エスペラミシン、カペシタビンおよび上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エステロゲン剤、ならびに例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン、ならびに上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体のような抗アンドロゲンのような腫瘍に作用するホルモンを調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤もまた、本規定に含まれる。
【０３００】
当該分野で公知の技術が、本発明の抗体を標識するために適用され得る。このような技術として、二官能性結合剤（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４，５６０号；および同第５，８０８，００３号；これらの各々の内容は、その全体が参考として本明細書中で援用される）および直接的なカップリング反応（例えば、Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ　ａｎｄ　Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ−Ｔ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）の使用が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０１】
結合体である、本発明の抗体は、所定の生物学的応答を改変するように使用され得、治療剤または薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されるように解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。このようなタンパク質として、毒素（例えば、アブリン、リシンＡ、α毒素、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌体外毒素、またはジフテリア毒素、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、α−サルシン、およびコレラ毒素；腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経増殖因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲン活性化因子、アポトーシス因子（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ　Ｉ（国際公開番号ＷＯ９７／３３８９９を参照のこと）、ＡＩＭ　ＩＩ（国際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、Ｆａｓ　Ｌｉｇａｎｄ（Ｔａｋａｈａｓｉｈら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：１５６７〜１５７４（１９９４））、ＶＥＧＩ（国際公開番号ＷＯ９９／２３１０５））、血栓剤もしくは抗血管形成剤（例えば、アンギオスタチンまたはエンドスタチン）；または、生物学的応答改変剤（例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）もしくは他の増殖因子が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【０３０２】
本発明の抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）はまた、標的抗原のイムノアッセイまたは精製に特に有用な固体支持体に付着され得る。このような固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリビニルクロリドまたはポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０３】
治療部分を抗体に結合する技術は周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｆｏｒ　Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｏｆ　Ｄｒｕｇｓ　Ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ　Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｃａｒｒｉｅｒｓ　Ｏｆ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ　Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｎｄ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ　Ｆｕｔｕｒｅ　Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　Ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ｕｓｅ　Ｏｆ　Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｆｏｒ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、３０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　１９８５）およびＴｈｏｒｐｅら、「Ｔｈｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ａｎｄ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　Ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと。
【０３０４】
あるいは、本発明の抗体は２次抗体に結合され、米国特許第４，６７６，９８０号（これは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌによる記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得る。
【０３０５】
単独、あるいは細胞毒性因子および／またはサイトカインと組み合わせて投与される、抗体に結合する治療部分を有するかまたは有さない本発明の抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）が、治療薬として使用され得る。
【０３０６】
（エピトープマッピングのための抗体の使用）
本発明は、ＢＬｙＳのエピトープを同定するために使用され得る抗体（抗体フラグメントまたはこれらの改変体を含むか、あるいはこれらからなるｓｃＦｖおよび他の分子を含む）を提供する。特に、本発明の抗体を使用して、ヒトＢＬｙＳ（配列番号３２２８および／もしくは３２２９）またはヒト単球で発現されたＢＬｙＳ；マウスＢＬｙＳ（配列番号３２３０および／もしくは３２３１）またはマウス単球で発現されたＢＬｙＳ；ラットＢＬｙＳ（配列番号３２３２、３２３３、３２３４および／もしくは３２３５に示される可溶性形態、または膜結合形態（例えば、ラット単球の表面上）のいずれか）；あるいはサルＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２３６および／もしくは３２３７のサルＢＬｙＳポリペプチド、サルＢＬｙＳの可溶性形態、またはサル単球上で発現されるＢＬｙＳ）のエピトープを、本明細書中に記載の技術または当該分野で公知の他の技術を用いて、決定し得る。エピトープとして機能するフラグメントは、任意の従来的な手段によって、作製され得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：５１３１〜５１３５（１９８５）、米国特許第４，６３１，２１１号にさらに記載されるものを参照のこと）。
【０３０７】
（抗体の診断的使用）
ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の標識された抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいは、それらからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターの異常な発現および／または活性に関連する疾患および／もしくは障害を検出、診断、予後診断、あるいはモニターする診断的目的のために使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体由来の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、ＢＬｙＳの標準的なレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中の）と比較する工程を包含し、これによって標準的レベルのＢＬｙＳと比較されたＢＬｙＳのアッセイレベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
【０３０８】
「生物学的サンプル」によって、個体、体液、身体組織、身体細胞、細胞株、組織培養物、またはＢＬｙＳタンパク質もしくはｍＲＮＡを含み得る他の供給源から得られた任意の体液および／もしくは細胞が意図され得る。体液として、血清、血漿、尿、骨髄液、精液、唾液、および粘液が挙げられるが、これらに限定されない。組織サンプルは、体内の実質的に任意の組織から採取され得る。組織サンプルはまた、剖検材料から得られ得る。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分野で周知である。生物学的サンプルが、ｍＲＮＡである場合、組織生検が、好ましい供給源である。
【０３０９】
本発明はまた、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）可溶性ＢＬｙＳにのみ免疫特異的に結合するが、ＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター結合を阻害しない、１以上の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体を使用して、個体由来の生物学的サンプル中のＢＬｙＳレセプターの発現をアッセイする工程（このような抗体は、溶液由来のビオチン化されたＢＬｙＳを捕捉し得る（実施例８を参照のこと）が、ＢＬｙＳがＩＭ−９細胞に結合するのを阻害しない（実施例３を参照のこと）抗体であるが、これは例示のみを目的とし、限定することを意味しない）、ならびに（ｂ）ＢＬｙＳレセプターのレベルを、ＢＬｙＳレセプターの標準的なレベル（例えば、正常な組織または細胞サンプル中の）を比較する工程を包含し、これによって、ＢＬｙＳレセプターの標準的なレベルと比較したＢＬｙＳレセプターのアッセイされたレベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
【０３１０】
ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいは、それらからなる分子を含む）は、これらに関連する自己免疫障害および／または免疫不全、および／または疾患もしくは状態を検出、診断、予後診断、あるいはモニターする診断的目的のために使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体由来の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、ＢＬｙＳの標準的なレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中の）と比較する工程を包含し、これによって標準的レベルのＢＬｙＳと比較されたＢＬｙＳのアッセイレベルの増加または減少が、自己免疫障害もしくは疾患および／または免疫不全を示す。特定の実施形態において、ＢＬｙＳのアッセイされたレベルの増加は、自己免疫障害または疾患を示す。他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳのアッセイされたレベルの減少は、免疫不全を示す。
【０３１１】
ＢＬｙＳに特異的に結合するが、ＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター結合を阻害しない本発明の抗体（抗体フラグメントまたはその改変体を含むか、あるいは、それらからなる分子を含む）は、これらに関連する自己免疫障害および／または免疫不全、および／または疾患もしくは状態を検出、診断、予後診断、あるいはモニターする診断的目的のために使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体由来の生物学的サンプル中のＢＬｙＳレセプターの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳレセプターのレベルを、ＢＬｙＳレセプターの標準的なレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中の）と比較する工程を包含し、これによって標準的レベルのＢＬｙＳレセプターと比較されたＢＬｙＳのアッセイレベルの増加または減少が、自己免疫障害もしくは疾患および／または免疫不全を示す。特定の実施形態において、ＢＬｙＳレセプターのアッセイされたレベルの増加は、自己免疫障害または疾患を示す。他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳレセプターのアッセイされたレベルの減少は、免疫不全を示す。
【０３１２】
本発明の抗体を使用して検出、診断、予後診断、またはモニターされ得る自己免疫障害、疾患、もしくは状態として、以下が挙げられるが、これらに限定されない：自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性新生児血小板減少、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性好中球減少、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、グルテン感受性腸症、アレルギー性脳脊髄炎、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（例えば、ＩｇＡ腎症）、多発性硬化症、神経炎、ブドウ膜炎眼炎、多発性内分泌腺症、紫斑病（例えば、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病）、ライター病、スティッフマン症候群、自己免疫性肺性炎症（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、心筋炎、ＩｇＡ糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、リウマチ性心疾患、ギヤン−バレー症候群、真性糖尿病（例えば、Ｉ型真性糖尿病またはインスリン依存性糖尿病）、若年性糖尿病（ｊｕｖｅｎｉｌｅ　ｏｎｓｅｔ　ｄｉａｂｅｔｅｓ）、および自己免疫炎症性眼、自己免疫性甲状腺炎、甲状腺機能低下（すなわち、橋本甲状腺病、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、レセプター自己免疫（例えば、（ａ）グレーブス病、（ｂ）重症筋無力症、および（ｃ）インスリン耐性）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、抗コラーゲン抗体を伴なう強皮症、混合結合組織病、多発性筋炎／皮膚筋炎、悪性貧血（アディソン病）、突発性アディソン病、不妊症、糸球体腎炎（例えば、原発性糸球体腎炎およびＩｇＡ腎症）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、真性糖尿病、およびアドレナリン作動薬耐性（ぜん息または嚢胞性線維症を伴なうアドレナリン作動薬耐性を含む）、慢性活性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、他の内分泌腺不全、白斑、脈管炎、ＭＩ後（ｐｏｓｔ−ＭＩ）、心臓切開症候群、じんま疹、アトピー性皮膚炎、ぜん息、炎症性ミオパシー、および他の炎症性、肉芽腫性、変性性、および萎縮性障害ならびに他の障害（例えば、炎症性皮膚疾患（乾癬および．硬化症を含む））、炎症性腸疾患に関連する応答（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）、呼吸窮迫症候群（成人の呼吸窮迫症候群、ＡＲＤＳを含む）、髄膜炎、脳炎、大腸炎、アレルギー性状態（例えば、湿疹）ならびに他の状態（Ｔ細胞の浸潤および慢性的な炎症性応答を含む）、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全、レーノー症候群、ならびに結核、サルコイドーシス、肉芽腫症および白血球漏出、中枢神経系（ＣＮＳ）免疫性疾患、多発性期間損傷症候群、抗原−抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、ランバート−イートン筋無力症症候群、Ｂｅｈｅｅｔ病、巨細胞性動脈炎、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、または自己免疫性血小板減少などを含む疾患において代表的に見出される、サイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性および遅延性の過敏症に関連する免疫応答が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１３】
特定の実施形態において、本発明は、高ガンマグロブリン血症（例えば、ＡＩＤＳ、自己免疫疾患、およびいくつかの免疫不全）に関連する疾患または障害を検出、診断、および／もしくは予後診断するための方法ならびに組成物を含む。他の特定の実施形態において、本発明は、低ガンマグロブリン血症（例えば、免疫不全）に関連する疾患または障害を検出、診断および／または予後診断するための方法ならびに組成物を含む。
【０３１４】
本発明の抗体を使用して検出、診断、予後診断、またはモニターされ得る免疫不全として、重篤な複合型免疫欠損（ＳＣＩＤ）−Ｘ連鎖、ＳＣＩＤ−染色体、アデノシンデアミナーゼ欠損（ＡＤＡ欠損）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）、バートン病、Ｘ連鎖乳児無ガンマグロブリン血症、後天性無ガンマグロブリン血症、成人発症無ガンマグロブリン血症（ａｄｕｌｔ　ｏｎｓｅｔ　ａｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、後期発症性無ガンマグロブリン血症（ｌａｔｅ−ｏｎｓｅｔ　ａｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、異常ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、一過性乳児低ガンマグロブリン血症、非特異的低ガンマグロブリン血症、無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）（後天的）、ヴィスコット−オールドリッチ症候群（ＷＡＳ）、Ｘ連鎖過剰ＩｇＭ免疫欠損（Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗｉｔｈ　ｈｙｐｅｒ　ＩｇＭ）、非Ｘ連鎖過剰ＩｇＭ免疫欠損（ｎｏｎ　Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗｉｔｈ　ｈｙｐｅｒ　ＩｇＭ）、選択的ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラス欠損（ＩｇＡ欠損あり、またはなし）、正常なＩｇまたは上昇したＩｇを伴なう抗体欠損、胸腺腫を伴なう免疫欠損、Ｉｇ重鎖欠失、κ鎖欠損、Ｂ細胞リンパ増殖障害（ＢＬＰＤ）、選択的ＩｇＭ免疫欠損、劣性無ガンマグロブリン血症（スイス型）、網様発育不全、新生児好中球減少症、重篤な先天性白血球減少症、胸腺リンパ形成不全症−免疫不全を伴なう発育不全または形成異常、毛細血管拡張性運動失調、短四肢小人症（ｓｈｏｒｔ　ｌｉｍｂｅｄ　ｄｗａｒｆｉｓｍ）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＸＬＰ）、ネゼロフ症候群−Ｉｇを伴なう複合免疫不全、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ欠損（ＰＮＰ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠損（不全リンパ球症候群）、および重篤な複合型免疫不全が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１５】
可溶性ＢＬｙＳの上昇したレベルは、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者の血清中に観察された。１５０のＳＬＥ患者の血清と、３８のコントロール個体の血清の比較において、ほとんどのＳＬＥ患者が、５ｎｇ／ｍｌを超える血清ＢＬｙＳを有し、３０％を越えるＳＬＥ患者が、１０ｎｇ／ｍｌを超え、そしておおよそ１０％のＳＬＥ患者が２０ｎｇ／ｍｌを超えるＢＬｙＳレベルを有した。対照的に、ほとんどの正常コントロールは、５ｎｇ／ｍｌよりも小さいＢＬｙＳレベルを有し、そして１０％よりも少ない正常コントロールが、１０ｎｇ／ｍｌよりも高いレベルを有した。血漿中のＢＬｙＳタンパク質の上昇したレベルが、可溶性形態で存在し、そして抗ＩｇＭ処理したＢ細胞をインビトロで刺激する能力によってアッセイされるような生物学的活性を有する。１５ｎｇ／ｍｌを超える血清ＢＬｙＳを有するＳＬＥ患者はまた、正常コントロールおよび５ｎｇ／ｍｌ未満の血漿ＢＬｙＳを有するＳＬＥ患者の両方と比較して、上昇した抗ｄｓＤＮＡ抗体を有することが見出された（未公開データ）。
【０３１６】
さらに、抗核抗体についてポジティブ（ＡＮＡ＋）ではあるが、ＳＬＥの分類に関するＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）の正式な必要条件を満たさない患者の２つのサブグループの血清が、ＢＬｙＳレベルについて分析された。最初のサブグループの血清は、ＳＬＥの臨床的圧痕を示さない患者由来のＡＮＡ＋血清であった。このグループは、わずかに上昇したレベルのＢＬｙＳ（約９ｎｇ／ｍｌ　ＢＬｙＳ）のみを有した。しかし、第二のサブグループ（これはＳＬＥの臨床的圧痕を示す患者由来のＡＮＡ＋血清であった）は、有意に増加したＢＬｙＳレベル（約１５ｎｇ／ｍｌ）を有した。これらの結果は、上昇したレベルのＢＬｙＳが、ＡＣＲ判定基準を正式に満たすことに先行することを示唆する。ＡＣＲ判定基準は、Ｔａｎ，Ｅ．Ｍ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ　２５：１２７１〜１２７７（１９８２）に記載される。
【０３１７】
従って、特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、全身性エリテマトーデスまたはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、ＳＬＥを示す。
【０３１８】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、ＩｇＡ腎症またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、ＩｇＡ腎症を示す。
【０３１９】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、シェーグレン症候群またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、シェーグレン症候群を示す。
【０３２０】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、ＨＩＶ感染またはそれに関連する状態（例えば、ＡＩＤＳ）を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、ＨＩＶ感染を示す。
【０３２１】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、重症筋無力症またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、重症筋無力症を示す。
【０３２２】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を示す。
【０３２３】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、溶血性貧血またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、溶血性貧血を示す。
【０３２４】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、甲状腺炎またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、甲状腺炎を示す。
【０３２５】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、グッドパスチャー症候群またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、グッドパスチャー症候群を示す。
【０３２６】
他の特定の実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、多発性硬化症またはそれに関連する状態を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、多発性硬化症を示す。
【０３２７】
さらなる実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、慢性関節リウマチを検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中（例えば、血清および骨髄液）のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルのＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が、慢性関節リウマチを示す。
【０３２８】
さらなる実施形態において、ＢＬｙＳに特異的に結合する本発明の抗体は、慢免疫に基づくリウマチ学的疾患（例えば、ＳＬＥ、慢性関節リウマチ、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レーノー現象、食道運動障害、強指症および毛細血管拡張症によって特徴付けられる、強皮症の改変型）、セロネガティブ脊椎関節障害（Ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ　ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）（ＳｐＡ）、多発性筋炎／皮膚筋炎、顕微的多発性血管炎、Ｃ型肝炎関連関節炎、高橋関節炎、および未分化結合組織障害）を検出、診断、予後診断またはモニターするための診断的目的に使用され得る。本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現の検出を提供し、この検出は：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中（例えば、血清および骨髄液）のＢＬｙＳの発現をアッセイする工程；および（ｂ）このＢＬｙＳのレベルを、標準的なＢＬｙＳのレベル（例えば、正常な生物学的サンプル中）と比較する工程を包含し、これによって、標準レベルＢＬｙＳと比較して、アッセイされたＢＬｙＳのレベルの増加が免疫に基づくリウマチ学的疾患を示す。
【０３２９】
血清ＢＬｙＳレベルは、７１　ＳＬＥ患者のサンプルを使用して、ネフローゼの範囲のタンパク尿（２４時間の尿収集において３ｇｍのタンパク尿より多い）と逆の相関があることが観察された（ｐ＝０．０１９）。タンパク尿は、血清ＢＬｙＳ決定のための静脈切開から１ヶ月以内の７１　ＳＬＥ患者において決定した。血清ＢＬｙＳは、正常なコントロールについて５％〜９５％に基づいて、低位、正常、高位と分類された。ネフローゼの範囲タンパク尿は、血清ニュートロカイン−αレベルに逆に相関した。従って、特定の実施形態において、免疫に基づくリウマチ学的疾患（例えば、ＳＬＥ、慢性関節リウマチ、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レーノー現象、食道運動性障害、強指趾症および毛細血管拡張症によって特徴付けられる種々の強皮症）、血清陰性脊椎関節症（ＳｐＡ）、多発性筋炎／皮膚筋炎、顕微鏡的多発性血管炎、Ｃ型肝炎付随関節炎、高安動脈炎および未分化結合組織障害）と診断された個体における、（本発明の１つ以上の抗体を用いて決定された）ＢＬｙＳの血清レベルは、ネフローゼの範囲のタンパク尿のような疾患の特定の局面または症状の重症度を決定、診断、予後診断またはモニターするために使用され得る。
【０３３０】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＣＶＩＤに関連した状態（急性感染および再発性感染（例えば、肺炎、気管支炎、静脈洞炎、中耳炎、敗血症、髄膜炎、敗血症性関節炎および骨髄炎）、慢性肺疾患、自己免疫、慢性肉芽腫症、リンパ腫、癌（例えば、乳癌、胃癌、結腸癌、口癌、前立腺癌、肺癌、膣癌、卵巣癌、皮膚癌）、およびメラニン形成細胞（すなわち、黒色腫）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎および潰瘍性大腸炎）、吸収不良、ホジキン病ならびにヴァルデンストレームマクログロブリン血症、に関連した状態が挙げられるがこれらに限定されない）を診断、予後診断、処置または予防するために使用される。
【０３３１】
本発明は、以下の工程を包含する疾患または障害を診断または予後診断するための診断アッセイを提供する：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１つ以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルについてアッセイする工程；および（ｂ）例えば、疾患または障害を有さない患者由来の生物学的サンプル中の標準的なＢＬｙＳレベルとこのＢＬｙＳレベルを比較して、これによって、ＢＬｙＳの標準的なレベルと比較してアッセイしたＢＬｙＳレベルにおける増加または減少が、特定の疾患または障害を示す、工程。癌については、個体由来の生検組織における比較的高い量のＢＬｙＳの存在が、疾患の発生についての素因を示し得るか、または実際の臨床症状の現れる前に疾患を検出するための手段を提供し得る。この型のさらに最終的な診断は、健康の専門家がより早期の予防的な測定または積極的な処置をするのを可能にし得、それによって、癌の発生またはさらなる進行を予防する。
【０３３２】
特定の実施形態において、生物学的サンプル中の比較的高い量の膜結合ＢＬｙＳの存在は、単球細胞に関連する白血病またはリンパ腫（例えば、急性骨髄性白血病および／またはその重症度など）の指標である。
【０３３３】
他の特定の実施形態において、（可溶性ＢＬｙＳに結合するが、ＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター結合を阻害しない、本発明の抗体を使用して決定される）生物学的サンプル中の比較的高用量のＢＬｙＳレセプターの存在は、Ｂ細胞に関連した白血病またはリンパ腫（例えば、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫およびホジキン病）および／またはそれらの重症度の指標である。
【０３３４】
特定の実施形態において、本発明は、全身性エリテマトーデスを診断または予後診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、以下の工程を包含する：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１つ以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルについてアッセイする工程；および（ｂ）例えば、全身性エリテマトーデスを有さない患者由来の生物学的サンプル中の標準的なＢＬｙＳレベルとこのＢＬｙＳレベルを比較して、これによって、ＢＬｙＳの標準的なレベルと比較してアッセイしたＢＬｙＳレベルにおける増加が、全身性エリテマトーデスの指標である、工程。
【０３３５】
特定の実施形態において、本発明は、慢性関節リウマチを診断または予後診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、以下の工程を包含する：（ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１つ以上の抗体を使用して、個体の生物学的サンプル中のＢＬｙＳレベルについてアッセイする工程；および（ｂ）例えば、慢性関節リウマチを有さない患者由来の生物学的サンプル中の標準的なＢＬｙＳレベルとこのＢＬｙＳレベルを比較して、これによって、ＢＬｙＳの標準的なレベルと比較してアッセイしたＢＬｙＳレベルにおける増加または減少が、慢性関節リウマチの指標である、工程。
【０３３６】
本発明は、疾患または障害を診断または予後診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、以下の工程を包含する：（ａ）可溶性ＢＬｙＳのみに免疫特異的に結合するが、ＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター結合を中和しない、本発明の１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞中または組織サンプル中のＢＬｙＳレセプターのレベルについてアッセイする工程；ならびに（ｂ）例えば、疾患または障害を有さない患者由来の組織サンプル中の標準的なＢＬｙＳレセプターレベルとこのＢＬｙＳレセプターレベルを比較して、これによって、ＢＬｙＳレセプターの標準的なレベルと比較してアッセイしたＢＬｙＳレセプターレベルにおける増加または減少が、特定の疾患または障害の指標である、工程。癌については、個体由来の生検組織における比較的高い量のＢＬｙＳレセプターの存在が、疾患の発生についての素因が示し得るか、または実際の臨床症状の現れる前に疾患を検出するための手段を提供し得る。この型のさらに最終的な診断は、健康の専門家がより早期の予防的な測定または積極的な処置をするのを可能にし得、それによって、癌の発生またはさらなる進行を予防する。
【０３３７】
本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）を使用して、本明細書中に記載されるか、または当業者に公知のような古典的な免疫組織学的方法を使用して生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な、抗体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ））が挙げられる。適切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよび西洋わさびペルオキシダーゼ）；放射性同位体（例えば、ヨウ素（１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１５ｍＩｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）；タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｂ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、ならびに９７Ｒｕ）；発光標識（例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびローダミン）、ならびにビオチンが挙げられる。
【０３３８】
本発明の１つの局面は、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターの異常な発現と関連する疾患または障害の検出および診断である。１つの実施形態において、診断は、以下：ａ）ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の有効量の標識化抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）を被験体に（例えば、非経口的に、皮下に、または腹腔内に）投与する工程；ｂ）このＢＬｙＳが発現する被験体内の部位でこの標識化抗体が優先的に濃縮することを可能にするために（および結合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるために）投与後、時間間隔を待つ工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；およびｄ）この被験体中の標識化抗体を検出する工程、を包含し、その結果、このバックグラウンドレベルを越え、そして疾患または障害なしに人において観察されるレベルを越えるかまたは下回る標識化抗体またはそのフラグメントの検出は、この被験体がＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターの異常な発現と関連する特定の疾患または障害を有することを示す。バックグラウンドレベルは、特定の系について以前に決定された標準的な値と、検出された標識化分子の量を比較する工程を包含する種々の方法により決定され得る。
【０３３９】
被験体の大きさおよび使用される画像化システムが、診断の画像を作製するために必要である画像化部分の量を決定するということは、当該分野において理解される。放射性同位体部分の場合、ヒト被験体について、注入される放射能の量は、通常、約５〜２０ｍキュリーの範囲の９９Ｔｃである。次いで、標識化抗体は、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先的に蓄積する。インビボでの腫瘍の画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ　Ｉｍａｇｉｎｇ、第１３章：Ｔｈｅ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｉｎｃ．（１９８２）において、記載される。
【０３４０】
使用する標識の型および投与の様式を含む、いくつかの変動に依存して、標識化分子が被験体中の部位に優先的に濃縮することを可能にするため、および結合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の時間間隔は、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間である。別の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間である。
【０３４１】
１つの実施形態において、疾患または障害をモニターすることは、疾患または障害を診断するための方法を繰り返すことによって実施される（例えば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断から１年後、など）。
【０３４２】
標識化分子の存在は、インビボスキャニングについての当該分野で公知の方法を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存する。当業者は、特定の標識を決定するための適切な方法を決定することができる。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽子（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）放射断層撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診断法を含むが、これらに限定されない。
【０３４３】
特定の実施形態において、分子を放射性同位体で標識し、そして放射応答外科的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｓｕｒｇｉｃａｌ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を陽電子放射金属で標識し、そして陽電子放射断層撮影法を使用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。
【０３４４】
（免疫表現型分類（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ））
本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、ＢＬｙＳ発現またはＢＬｙＳレセプター発現によって、細胞株および生物学的サンプルの免疫表現型分類のために利用され得る。本発明の抗体、フラグメントまたは改変体を使用する種々の技術を用いて、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターを発現する細胞集団（すなわち、免疫細胞、特に、単球細胞またはＢ細胞）をスクリーニングし得、そしてそれらの技術には、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いる磁気分離、固体マトリクス（すなわち、プレート）に付着した抗体を用いる「パンニング」、ならびにフローサイトメトリー（例えば、米国特許第５，９８５，６６０号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，９６：７３７−４９（１９９９）を参照のこと）が挙げられる。
【０３４５】
これらの技術は、血液学的悪性腫瘍（すなわち、急性白血病患者における最少残留疾患（ｍｉｎｉｍａｌ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＲＤ））および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を予防するための移植術における「非自己」細胞と共に見出され得るような、細胞の特定集団のスクリーニングを可能にする。あるいは、これらの技術は、ヒト臍帯血において見出され得るような増殖および／または分化を受け得る、造血幹細胞および先祖細胞のスクリーニングを可能にする。
【０３４６】
１つの実施形態において、本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）を使用して、単球起源またはＢ細胞起源の細胞を同定する。
【０３４７】
（抗体の治療用途）
本発明はさらに、抗体ベースの治療に関し、この治療は、１つ以上の開示された疾患、障害、または状態を処置するために、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトの患者に、本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）を投与する工程を包含する。本発明の治療化合物としては、本発明の抗体ならびに本明細書中に記載されるような本発明の抗体（ならびに抗イディオタイプ抗体）をコードする核酸が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体は、ＢＬｙＳまたはＢＬｙＳレセプターの異常な発現および／または活性に関連した疾患、障害または状態（本明細書中に記載される任意の１つ以上の疾患、障害、または状態を含むがこれらに限定されない）を処置、改善または予防するために使用され得る。ＢＬｙＳの異常な発現および／もしくは活性、またはＢＬｙＳレセプターの異常な発現および／もしくは活性に関連した疾患、障害または状態の処置および／または予防は、それらの疾患、障害または状態に関連した症状を緩和する工程を含むが、これに限定されない。本発明の抗体は、当該分野で公知であるか、または本明細書中に記載されるように、薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
【０３４８】
ＢＬｙＳのアゴニストまたはアンタゴニスト、好ましくは、ＢＬｙＳ誘導シグナル形質導入として機能する、本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、ＢＬｙＳ発現、ＢＬｙＳ機能の欠失、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現、またはＢＬｙＳレセプター機能の欠失に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。例えば、ＢＬｙＳとそのレセプターとの間の相互作用を崩壊させる本発明の抗体は、異常なＢＬｙＳ発現、過剰なＢＬｙＳ機能、異常なＢＬｙＳレセプター発現、または過剰なＢＬｙＳレセプター機能に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。ＢＬｙＳがそのレセプターに結合するのを妨げないが、ＢＬｙＳ誘導シグナル形質導入を阻害またはダウンレギュレートする本発明の抗体は、ＢＬｙＳの異常な発現、過剰なＢＬｙＳ機能、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現または過剰なＢＬｙＳレセプター機能に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。詳細には、未結合ＢＬｙＳ、レセプター結合ＢＬｙＳ、または未結合ＢＬｙＳおよびレセプター結合ＢＬｙＳの両方を特異的に認識することによって、ＢＬｙＳ誘導シグナル形質導入を防止する本発明の抗体は、ＢＬｙＳの異常な発現、過剰なＢＬｙＳ機能、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現または過剰なＢＬｙＳレセプター機能に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。本発明の抗体がＢＬｙＳ誘導シグナル形質導入を阻害またはダウンレギュレートする能力は、本明細書中に記載される技術か、さもなければ当該分野で公知の技術によって決定され得る。例えば、ＢＬｙＳ誘導レセプター活性およびシグナル伝達分子の活性は、（例えば、本明細書中に記載されるように）免疫沈降後のウエスタンブロットによってレセプターまたはシグナル伝達分子のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／トレオニン）を検出することによって決定され得る。
【０３４９】
特定の実施形態において、本発明の抗体の非存在下でのＢＬｙＳ活性に対して、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％または少なくとも１０％ＢＬｙＳ活性を阻害またはダウンレギュレートする、本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、ＢＬｙＳの異常な発現、過剰なＢＬｙＳ機能、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現または過剰なＢＬｙＳレセプター機能に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。別の実施形態において、抗体、抗体フラグメントおよび／または抗体改変体の非存在下でのＢＬｙＳ活性に対して、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％または少なくとも１０％ＢＬｙＳ活性を阻害またはダウンレギュレートする、この抗体の組み合わせ、抗体フラグメントの組み合わせ、抗体改変体の組み合わせ、あるいは抗体、抗体フラグメントおよび／または抗体改変体の組み合わせは、ＢＬｙＳの異常な発現、過剰なＢＬｙＳ機能、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現または過剰なＢＬｙＳレセプター機能に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。
【０３５０】
さらに、ＢＬｙＳ誘導シグナル形質導入を活性化する本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、ＢＬｙＳ発現、ＢＬｙＳ機能の欠失、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現、またはＢＬｙＳレセプター機能欠失に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。これらの抗体は、例えば、ＢＬｙＳの多量体化および／またはレセプターの多量体化を誘導することによって、ＢＬｙＳ媒介レセプター活性の生物学的活性の全てまたはそれらのサブセットを増強または活性化し得る。本発明の抗体は、ＢＬｙＳと予め複合体化してか、または予め複合体化せずに投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗体の非存在下でのＢＬｙＳ活性に対して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％ＢＬｙＳ活性を増加させる本発明の抗体は、ＢＬｙＳの異常な発現、ＢＬｙＳ機能の欠失、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現、またはＢＬｙＳレセプター機能の欠失に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与され得る。別の実施形態において、この抗体または抗体フラグメントおよび／または抗体改変体の非存在下でのＢＬｙＳ活性に対して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％ＢＬｙＳ活性を増加させる、この抗体の組み合わせ、抗体フラグメントの組み合わせ、抗体改変体の組み合わせ、あるいは抗体、抗体フラグメントおよび／または抗体改変体の組み合わせは、ＢＬｙＳの異常な発現、ＢＬｙＳ機能の欠失、ＢＬｙＳレセプターの異常な発現またはＢＬｙＳレセプター機能の欠失に関連した疾患または障害を処置、予防または改善するために動物に投与される。
【０３５１】
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の１つ以上の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、治療剤として体内において局所的または全身的に使用され得る。本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）はまた、他のモノクローナル抗体もしくはキメラ抗体、またはリンホカインもしくは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ−７）（例えば、これは、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を増加するように作用する）と組み合わせて有益に用いられ得る。
【０３５２】
本発明の抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）は、単独でか、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、免疫療法、抗腫瘍剤、抗血管新生剤および抗炎症剤）と組み合わせて投与され得る。一般的に、患者と同じ種である種起源または種反応性（抗体の場合）の産物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態において、ヒト抗体、フラグメントまたは改変体（例えば、誘導体）、または核酸が、治療または予防のためにヒト患者に投与される。
【０３５３】
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する本発明の高親和性および／または強力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体（その抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子、を含む）、あるいは、ＢＬｙＳポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む）に対するイムノアッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体をコードするポリヌクレオチドを使用することが好ましい。このような抗体は、好ましくは、ＢＬｙＳおよび／またはＢＬｙＳフラグメントに対して親和力を有する。好ましい結合親和力としては、５×１０−２Ｍ以下、１０−２Ｍ以下、５×１０−３Ｍ以下、１０−３Ｍ以下、５×１０−４Ｍ以下、１０−４Ｍ以下、５×１０−５Ｍ以下または１０−５Ｍ以下の解離定数すなわちＫＤを有する結合親和力が挙げられる。より好ましくは、本発明の抗体は、５×１０−６Ｍ以下、１０−６Ｍ以下、５×１０−７Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、５×１０−８Ｍ以下または１０−８Ｍ以下の解離定数すなわちＫＤで、ＢＬｙＳポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体に結合する。なおより好ましくは、本発明の抗体は、５×１０−９Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、５×１０−１１Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、５×１０−１２Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下、５×１０−１３Ｍ以下、１０−１３Ｍ以下、５×１０−１４Ｍ以下、１０−１４Ｍ以下、５×１０−１５Ｍ以下または１０−１５Ｍ以下の解離定数すなわちＫｄで、ＢＬｙＳポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体に結合する。本発明は、個々に列挙された各値の間のいずれか１つの範囲内の解離定数すなわちＫｄで、ＢＬｙＳポリペプチドに結合する抗体を含む。
【０３５４】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳ活性を中和する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、Ｂ細胞増殖を阻害する。
【０３５５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらの抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳの可溶性形態の、ＢＬｙＳレセプターへの結合を阻害または減少する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態によって誘導されるＢ細胞増殖を阻害または減少する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの可溶性形態によって誘導される免疫グロブリンの産生を阻害または減少する。
【０３５６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらの抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子を含む）は、膜結合ＢＬｙＳのＢＬｙＳレセプターへの結合を阻害または減少し得る。別の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの膜結合形態によって誘導されるＢ細胞増殖を阻害または減少する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳの膜結合形態によって誘導される免疫グロブリンの産生を阻害または減少する。
【０３５７】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（それらの抗体フラグメントまたは改変体を含むか、あるいはそれらからなる分子を含む）は、ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態の両方のＢＬｙＳレセプターへの結合を阻害または減少する。別の実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳのいずれかまたは両方の形態によって誘導されるＢ細胞増殖を阻害または減少する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＢＬｙＳのいずれかまたは両方の形態によって誘導される免疫グロブリンの産生を阻害または減少する。
【０３５８】
１つの実施形態において、本発明は、本発明の抗体複合体を標的細胞（例えば、ＢＬｙＳの膜結合形態を発現する単球細胞、またはＢＬｙＳレセプターを発現するＢ細胞）に送達する方法を提供する。
【０３５９】
１つの実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸に会合する本発明の分子を投与することによって、本発明の抗体および抗体複合体の細胞への特異的な送達方法を提供する。１つの例としては、本発明は、標的細胞中に治療タンパク質を送達するための方法を提供する。別の例において、本発明は、単鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本鎖核酸（例えば、細胞のゲノムに組み込み得るか、またはエピソームにて複製し得、そして転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。
【０３６０】
別の実施形態において、本発明は、本発明の抗体または抗体複合体（例えば、ラジオアイソトープ、毒性または細胞障害性のプロドラッグと共役した抗体）を投与することによる、細胞の特異的破壊のための方法（例えば、腫瘍細胞の破壊）を提供する。特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合する、本発明の抗体または抗体複合体（例えば、ラジオアイソトープ、毒性または細胞障害性のプロドラッグと共役した抗体）を投与することによる、単球系統の細胞（例えば、白血病またはリンパ腫（例えば、急性骨髄性白血病）に関連する単球細胞）の特異的破壊のための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、可溶性ＢＬｙＳに結合するが、Ｂ細胞上のＢＬｙＳレセプターに対するＢＬｙＳの結合を阻害する、本発明の抗体または抗体複合体（例えば、ラジオアイソトープ、毒性または細胞障害性のプロドラッグと共役した抗体）を投与することによる、Ｂ細胞系統の細胞（例えば、白血病またはリンパ腫（例えば、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキン病）に関連するＢ細胞）の特異的破壊のための方法を提供する。
【０３６１】
別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体を含む）は、ＢＬｙＳの可溶性形態によって誘導されるＢ細胞増殖を促進または増強する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体を含む）は、ＡＰＲＩＬの膜形態または可溶性形態によって誘導されるＢ細胞増殖を促進または増強する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体を含む）は、ＢＬｙＳの可溶性形態によって誘導される免疫グロブリン産生を増加または増強する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体を含む）は、ＡＰＲＩＬの膜結合形態または可溶性形態によって誘導される免疫グロブリン産生を増加または増強する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体を含む）は、Ｔ細胞依存性免疫原に対する免疫グロブリン産生を増加または増強する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体を含む）は、Ｔ細胞依存性免疫原に対する免疫グロブリン産生を増加または増強する。
【０３６２】
別の実施形態において、本発明の治療学的組成物または薬学的組成物は、免疫障害を処置、予防または改善するために動物に投与される。免疫障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：自己免疫障害（例えば、関節炎、移植片拒絶、橋本甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、狼瘡、特発性血小板減少性紫斑病、全身性エリテマトーデスおよび多発性硬化症）、選択的ＩｇＡ欠損、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット‐オールドリッチ症候群、新生児好中球減少症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ　ｈｙｐｅｒ−ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、単球性類白血病反応、単球増加症（ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｏｓｉｓ）、単球減少症（ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、単球減少症（ｍｏｎｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、単球増加症（ｍｏｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）および移植片（ｇｒａｆｔ）または移植片（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）拒絶。
【０３６３】
本明細書中で議論されるように、本発明の抗体および抗体組成物は、哺乳動物（好ましくは、ヒト）において、種々の免疫関連障害および／またはこれらの障害に関連する状態を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る。多数の自己免疫障害が、免疫細胞による異物のように自己の不適性な認識から生じる。これらの不適性な認識は、宿主組織の破壊を導く免疫応答を生じる。従って、免疫応答（特に、Ｂ細胞の増殖および／または免疫グロブリンの産生）を阻害し得る本発明の抗体および抗体組成物の投与は、自己免疫障害を処置および／または予防する際に有効な治療法であり得る。従って、好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、自己免疫障害またはそれらの障害に関連する状態を処置、予防、改善、診断および／または予後診断するために使用される。
【０３６４】
本発明の治療学的組成物および薬学的組成物を用いて処置、予防、改善、診断および／または予後診断され得る自己免疫障害およびこれらの障害に関連する状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性新生児血小板減少、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫好中球減少症、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、グルテン感受性腸症（ｇｌｕｔｅｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈ）、アレルギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（例えば、ＩｇＡ腎症）、多発性硬化症、神経炎、ブドウ膜炎眼炎（Ｕｖｅｉｔｉｓ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、多発性内分泌腺症、紫斑病（例えば、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病）、ライター病、スティッフマン症候群、自己免疫性肺炎症、心筋炎、ＩｇＡ糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、リウマチ性心疾患、ギヤン‐バレー症候群、インスリン依存性真性糖尿病、および自己免疫性炎症性眼（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｙｅ）。
【０３６５】
本発明の治療学的組成物および薬学的組成物を用いて処置、予防、改善、診断および／または予後診断され得るさらなる自己免疫障害およびこれらの障害に関連する状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：自己免疫性甲状腺炎、甲状腺機能低下不全症（すなわち、橋本甲状腺炎）（例えば、細胞媒介性細胞障害および体液性甲状腺細胞障害によってしばしば特徴付けられる）、全身性エリテマトーデス（例えば、循環して、局所的に産生された免疫複合体によってしばしば特徴付けられる）、円板状狼瘡、グッドパスチャー症候群（例えば、抗基底膜抗体によってしばしば特徴付けられる）、天疱瘡（例えば、表皮棘状抗体によってしばしば特徴付けられる）、レセプター自己免疫（例えば、（ａ）グレーヴズ病（例えば、ＴＳＨレセプター抗体によってしばしば特徴付けられる）、（ｂ）重症筋無力症（例えば、アセチルコリンレセプター抗体によってしばしば特徴付けられる）および（ｃ）インスリン抵抗性（インスリンレセプター抗体によってしばしば特徴付けられる））、自己免疫性溶血性貧血（抗体感作ＲＢＣの食菌作用によってしばしば特徴付けられる）、自己免疫血小板減少性紫斑病（（抗体感作血小板の食菌作用によってしばしば特徴付けられる）。
【０３６６】
本発明の治療学的組成物および薬学的組成物を用いて処置、予防、改善、診断および／または予後診断され得るさらなる自己免疫障害およびこれらの障害に関連する状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：慢性関節リウマチ（例えば、関節における免疫複合体によってしばしば特徴付けられる）、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症（例えば、核小体および他の核抗体によってしばしば特徴付けられる）、混合結合組織病（例えば、可溶性核抗原（例えば、リボ核タンパク質）に対する抗体によってしばしば特徴付けられる）、多発性筋炎／皮膚筋炎（例えば、非ヒストンＡＮＡによってしばしば特徴付けられる）、悪性貧血（例えば、抗壁細胞、ミクロソーム、および内因子抗体によってしばしば特徴付けられる）、特発性アジソン病（例えば、体液性および細胞媒介性の副腎細胞傷害によってしばしば特徴付けられる）、不妊症（例えば、抗精子抗体によってしばしば特徴付けられる）、原発性糸球体腎炎およびＩｇＡ腎症のような糸球体腎炎（例えば、糸球体基底膜抗体または免疫複合体によってしばしば特徴付けられる）、水疱性類天疱瘡（例えば、基底膜におけるＩｇＧおよび補体によってしばしば特徴付けられる）、シューグレン症候群（例えば、多組織抗体および／または特定の非ヒストンＡＮＡ（ＳＳ−Ｂ）によってしばしば特徴付けられる）、糖尿病（例えば、細胞媒介性および体液性島細胞抗体によってしばしば特徴付けられる）、およびアドレナリン作用性薬物耐性（ぜん息または嚢胞性線維症を伴うアドレナリン作用性薬物耐性を含む）（例えば、β−アドレナリン作用性レセプター抗体によってしばしば特徴付けられる）、慢性活動性肝炎（例えば、平滑筋抗体によってしばしば特徴付けられる）、原発性胆汁性肝硬変（例えば、ミトコンドリア抗体によってしばしば特徴付けられる）、他の内分泌腺不全（例えば、いくつかの場合における特異的組織抗体によってしばしば特徴付けられる）、白斑（例えば、メラノサイト抗体によってしばしば特徴付けられる）、脈管炎（例えば、血管壁におけるＩｇおよび補体ならびに／または低い血清補体によってしばしば特徴付けられる）、ＭＩ後（例えば、心筋抗体によってしばしば特徴付けられる）、心臓切開症候群（例えば、心筋抗体によってしばしば特徴付けられる）、じんま疹（例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体によってしばしば特徴付けられる）、アトピー性皮膚炎（ＩｇＥに対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体によってしばしば特徴付けられる）、ぜん息（例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体によってしばしば特徴付けられる）、炎症性筋障害、ならびに多くの他の炎症性、肉芽腫性、変性および萎縮性障害。
【０３６７】
好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、以下の群のメンバーを処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る：原発性糸球体腎炎として自己免疫性溶血性貧血、ＩｇＡ糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、特発性血小板減少症、多発性硬化症、重症筋無力症、天疱瘡、多発性筋炎／皮膚筋炎、再発性多発性軟骨炎、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、脈管炎、および原発性胆汁性肝硬変。
【０３６８】
別の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、例えば、以下のような免疫ベースのリウマチ学的疾患を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る：ＳＬＥ、慢性関節リウマチ、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レーノー現象、食道運動性障害（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ　ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、強指趾症および毛細血管拡張症によって特徴付けられる種々の強皮症）、血清反応陰性脊椎関節症（ＳｐＡ）、多発性筋炎／皮膚筋炎、顕微鏡的多発性血管炎、Ｃ型肝炎付随性関節炎、高安動脈炎、および未分化結合組織細胞。
【０３６９】
特定の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、慢性関節リウマチおよび／またはそれに関連する状態を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る
例えば、本発明の抗体は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）の臨床的診断を有する患者を処置するために使用される。処置される患者は、好ましくは、Ｂ細胞悪性腫瘍を有さない。さらに、患者は、ＲＡを処置するために用いられる任意の１つ以上の薬剤（例えば、サリチラート；非ステロイド性抗炎症薬（例えば、インドメタシン、フェニルブタゾン、フェニル酢酸誘導体（例えば、イブプロフェンおよびフェノプロフェン）、酢酸ナフタリン（ナプロキセン）、ピロールアルカノール酸（ｐｙｒｒｏｌｅａｌｋａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ）、トメチン（ｔｏｍｅｔｉｎ）、インドール酢酸（スリンダク）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフェナム酸ナトリウム）、ピロキシカム、ゾメピラックおよびジフルニサル）；抗マラリア薬（例えば、クロロキン）；金塩；ペニシラミン；または、免疫抑制剤（例えば、このような薬物について公知の投薬量または減少した投薬量におけるメトトレキサートまたはコルチコステロイド）を用いて、必要に応じてさらに処置される。しかし、好ましくは、患者は、本発明の抗体を用いてのみ処置される。本発明の抗体は、下記のような投薬スケジュールに従って、ＲＡ患者に投与され、これは、当業者によって容易に決定され得る。一次応答は、パウルスの指標（Ｐａｕｌｕｓら、Ａｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ．　３３：４７７−４８４　（１９９０））（すなわち、患者および医師によって評価される、朝のこわばり、痛みの数および炎症性の関節の数、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、ならびに疾患によって決定される５ポイントスケールの疾患重症度のうちの少なくとも２ポイントの改良点）によって決定される。本発明の抗体の投与は、上記のように処置される患者におけるＲＡの少なくとも１つ以上の症状を軽減する。
【０３７０】
特定の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、狼瘡および／またはそれに関連する医学的状態を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る。本発明の抗体組成物および抗体組成物を用いて処置、予防、改善、診断または予後診断され得る狼瘡に関連する状態としては以下が挙げられるがこれらに限定されない：血液学的障害（例えば、溶血性貧血、白血球減少症、リンパ球減少症および血小板減少症）、免疫学的障害（例えば、抗ＤＮＡ抗体および抗Ｓｍ抗体）、発疹、羞明、口腔潰瘍、関節炎、発熱、疲労、体重減少、漿膜炎（例えば、胸膜炎）、腎臓障害（例えば、腎炎）、神経学的障害（例えば、発作、末梢ニューロパシー、ＣＮＳ関連障害）、胃腸管系障害、レーノー現象および心膜炎。好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、全身性エリテマトーデスに関連する腎臓障害を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る。最も好ましい実施形態において、本発明の治療組成物および薬学的組成物は、全身性エリテマトーデスに関連する腎炎を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用され得る。別の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物および薬学的組成物は、狼瘡または糸球体腎炎を処置、予防または改善するために動物に投与される。
【０３７１】
さらに特定の実施形態において、本発明の抗体は、溶血性貧血を処置、阻害、診断、予後診断または予防するために使用される。例えば、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（例えば、クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｉｎｅｍｉａ）またはクームス陽性貧血）と診断された患者は、本発明の抗体を用いて処置される。ＡＩＨＡは、患者の赤血球と反応する自己抗体に起因する後天性溶血性貧血である。処置される患者は、好ましくは、Ｂ細胞悪性腫瘍を有していない。さらに、補助治療剤（例えば、グルココルチコイド、プレドニゾン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ビンカラデン（ｖｉｎｃａ−ｌａｄｅｎ）、血小板またはダナゾール）が抗体治療と併用され得るが、好ましくは、患者は、治療経過全体にわたり単一因子として本発明の抗体で処置される。本発明の抗体は、前記のような投薬スケジュールに従って、溶血性貧血の患者に投与され、このスケジュールは、当業者によって容易に決定され得る。全応答速度は、標準的な化学パラメータによって決定されるような血球数における改良、輸血の必要性の減少、改良したヘモグロビンレベルおよび／または溶血現象の減少に基づいて決定される。本発明の抗体の投与は、上記のように処置される患者における任意の１つ以上の溶血性貧血の症状を改良する。例えば、上記のように処置される患者は、ヘモグロビンの増加および溶血の化学パラメータにおける改良を示すか、または血清乳酸デヒドロゲナーゼおよび／もしくはビリルビンによって測定されるように正常に戻る。
【０３７２】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物または薬学的組成物は、シェーグレン症候群および／またはそれに関連する医学的状態を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用される。
【０３７３】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療学的組成物または薬学的組成物は、ＨＩＶ感染および／またはそれに関連する医学的状態（例えば、ＡＩＤＳ）を処置、予防、改善、診断または予後診断するために使用される。
【０３７４】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、重症筋無力症および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３７５】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、ＩｇＡ腎症および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３７６】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、溶血性貧血および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３７７】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、甲状腺炎および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３７８】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、グッドパスチャー症候群および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３７９】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、多発性硬化症および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３８０】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３８１】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、多発性骨髄腫および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３８２】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、非ホジキンリンパ腫および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３８３】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の治療的および薬学的組成物を用いて、ホジキン病および／またはこれに関する医学的状態を処置、予防、回復、診断、または予後判断する。
【０３８４】
別の特定の好ましい実施形態において、本発明の抗体を用いて、成人免疫性血小板減少性紫斑病を処置、抑制、予後判断、診断、または予防する。成人免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）は、比較的まれな血液学的障害であって、免疫媒介性の血球減少症の大部分を占める。この疾患は代表的に、骨髄における正常に増加した巨核球の存在下での急性出血に関し得、重篤な血小板減少症を伴って存在する。ＩＴＰを患うほとんどの患者は、血小板膜表面上の標的抗原に対するＩｇＧ抗体を有し、これが、脾臓における血小板壊死を生じ、血小板の細網内皮細胞破壊を加速させる（Ｂｕｓｓｅｌｌ，Ｊ．Ｂ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ　Ａｍ．（４）：１７９（１９９０））。多くの治療的介入は、ＩＴＰの処置において有効であることが示されてきた。一般にステロイドは、考慮される最も重要な治療でありその後、ほとんどの患者は、免疫グロブリン静脈内投与法（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）（ＩＶＩＧ）、脾臓摘出、またはビンクリスチン、もしくは免疫抑制剤／細胞傷害因子を含む他の医学的治療法の候補となる。ＩＴＰを患う患者の８０％までは、最初にステロイド過程に応答するが、ほとんどが完全寛解および持続した寛解を示さない。脾臓摘出は、ステロイド不全についての標準的な第２の重要な療法として推奨され、やがて感染に対する免疫の減少を生じ得る症例の６０％近くにおいて、長期の寛解に導く。脾臓摘出は、実質的な罹患率（１５％）および死亡率（２％）に関連し得る主要な外科的処置である。ＩＶＩＧはまた、第２の重要な医学的療法として用いられるが、ＩＴＰを患う成人患者の小集団のみが寛解に達する。コルチコステロイド治療および／または脾臓摘出により生じる、関連する罹患率を伴わない、活性化Ｂ細胞による自己抗体の産生を阻害する治療の選択肢は、ＩＴＰを患う患者集団に対する重要な処置アプローチを提供する。ＩＴＰであると臨床診断された患者は、必要に応じてステロイド療法と組み合わして本発明の抗体（単数または複数）で処置される。処置された患者は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有しない。本発明の抗体は、下記のような投薬スケジュールに従って、ＲＡ患者に投与され、この投薬スケジュールは、当業者によって容易に決定され得る。全体の患者の応答率は、上記のように、処置後に２週間あけた２回の連続した機会において決定される血小板数に基づいて決定される。Ｇｅｏｒｇｅら「Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ　Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ　Ｐｕｒｐｕｒａ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｂｙ　Ｅｘｐｌｉｃｉｔ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ」，Ｂｌｏｏｄ　８８：３−４０（１９９６）（本明細書において参考として明確に援用される）を参照のこと。
【０３８５】
別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、ＩｇＥ媒介性のアレルギー反応またはヒスタミン媒介性のアレルギー反応を処置、予防、または寛解する。アレルギー反応の例は、以下を含むがこれらに限定されない：ぜん息、鼻炎、湿疹、慢性じんま疹、およびアトピー性皮膚炎。別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、アナフィラキシー、抗原分子に対する過敏症、または血液型不適合を処置、予防、または寛解する。別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、炎症または炎症性障害を処置、予防、または寛解、または調節する。本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて処置、予防、または寛解され得る慢性および急性の炎症性障害の例は、以下を含むが、これらに限定されない：慢性前立腺炎、肉芽腫性前立腺炎、およびマラコプラキア、感染に関する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血再灌流傷害、エンドトキシン致死、関節炎、補体媒介性超急性拒絶、腎炎、サイトカインまたはケモカイン誘導性肺傷害、クローン病、炎症性腸疾患、慢性および急性の炎症性肺疾患、細菌感染、乾癬、敗血症、大脳マラリア、関節炎、胃腸炎、ならびに糸球体腎炎。
【０３８６】
別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、虚血および動脈硬化症を処置、予防、または寛解する。このような障害の例は、再灌流障害（例えば、心臓および／または脳においての）および心肥大を含むがこれらに限定されない。
【０３８７】
本発明の治療組成物または薬学的組成物はまた、血液凝固を調節し、血液凝固障害（例えば、抗体媒介性血栓症（すなわち、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ））を処置または予防するため投与され得る。例えば、本発明の治療組成物または薬学的組成物はまた、抗カルジオリピン抗体の産生に関わる細胞の増殖および分化を阻害し得る。本発明のこれらの組成物を用いて、以下を含むがこれらに限定されない血栓症関連事象を処置、予防、寛解、診断、および／または予後判断し得る：発作（および反回性発作）、心臓発作、深在静脈血栓症、肺動脈塞栓症、心筋梗塞、冠状動脈疾患（例えば、抗体媒介性の冠状動脈疾患）、血栓症、心臓血管手術（例えば、冠状動脈バイパス移植）後の移植片再閉塞、再発性の胎児の損失（ｆｅｔａｌ　ｌｏｓｓ）、および再発性の心臓血管血栓塞栓事象。
【０３８８】
本発明の治療組成物または薬学的組成物はまた、器官拒絶または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）および／またはこれらに関する状態を処置、予防、または寛解するために投与され得る。器官拒絶は、免疫応答を介した宿主免疫細胞の移植組織片破壊により生じる。同様に、免疫応答はまた、ＧＶＤＨに関するが、この場合、外来性の移植免疫細胞が宿主組織を破壊する。免疫応答を阻害する本発明の抗体の投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤを予防するのに有用な治療であり得る。
【０３８９】
別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、増大したアポトーシスに関する疾患または障害（ＡＩＤＳ、神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変質）、脊髄形成異常症候群（例えば、再生不良性貧血）、虚血傷害（例えば、心筋梗塞、発作および再灌流傷害に起因するもの）、毒素誘導性肝疾患（例えば、アルコールに起因するもの）、敗血症性ショック、悪液質および食欲不振を含むが、これらに限定されない）を処置、予防、または寛解する。別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、骨髄不全（例えば、再生不良性貧血および脊髄形成異常症候群）を処置、予防、または寛解する。
【０３９０】
別の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、動物に投与されて、悪性腫瘍の増殖、進行および／または転移ならびに細胞生存の増加もしくはアポトーシスの阻害に関する増殖性障害を処置、予防、または寛解する。このような障害の例は、以下を含むがこれらに限定されない：白血病（例えば、急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病））、新形成、腫瘍（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頚部癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経鞘腫、突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）、Ｈ鎖病、転移、または制御不能な細胞増殖によって特徴付けられる任意の疾患もしくは障害を含むが、これらに限定されない。
【０３９１】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて、高ガンマグロブリン血症（ｈｐｅｒｇａｍｍａｇｌｏｕｌｉｎｅｍｉａ）によって特徴付けられる障害（例えば、ＡＩＤＳ、自己免疫疾患、およびいくつかの免疫不全）を処置または予防する。
【０３９２】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて、血清免疫グロブリン産生欠乏、反復感染、および／または免疫系不全によって特徴付けられる障害を処置または予防する。さらに、本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて以下を処置または予防し得る：関節の感染症、骨の感染症、皮膚の感染症および／または耳下腺の感染症、血液由来の感染症（例えば、敗血症、髄膜炎、敗血症性関節炎および／または骨髄炎）、自己免疫疾患（例えば、本明細書中で開示されるもの）、炎症性障害、および悪性疾患、および／もしくはこれらの感染症、疾患、障害および／または悪性疾患に関する任意の疾患または障害または状態（ＣＶＩＤ、他の初期の免疫不全、ＨＩＶ疾患、ＣＬＬ、再発性気管支炎、静脈洞炎、中耳炎、結膜炎、肺炎、肝炎、髄膜炎、帯状疱疹（例えば、重篤な帯状疱疹）、および／またはニューモシスティス（ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　ｃａｒｎｉｉ）を含むがこれらに限定されない）。
【０３９３】
本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて、以下に関する疾患または障害または状態の１つ以上を診断、予後判断、処置、または予防し得る：初期免疫不全（ｉｍｍｕｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ）、免疫媒介性血小板減少症、川崎症候群、骨髄移植（例えば、最近の成人または子供における骨髄移植）、慢性Ｂ細胞リンパ性白血病、ＨＩＶ感染症（例えば、成人または小児のＨＩＶ感染症）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、および輸血後の紫斑病。
【０３９４】
さらに、本発明の治療組成物または薬学的組成物を用いて、以下に関する疾患または障害または状態の１つ以上を診断、予後判断、処置、または予防し得る：ギヤン−バレー症候群、貧血（例えば、パルボウイルスＢ１９に関する貧血、感染（例えば、反復性感染）に対する高い危険にある安定な多発性骨髄腫を有する患者、自己免疫性溶血性貧血（例えば、温式抗体型（ｗａｒｍ−ｔｙｐｅ）自己免疫性溶血性貧血）、血小板減少症（例えば、新生児血小板減少症）、および免疫媒介性好中球減少症）、移植（例えば、ＣＭＶ陽性器官のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）陰性レシピエント）、低ガンマグロブリン血症（例えば、感染または罹患率に対する危険因子を伴う低ガンマグロブリン血症新生児）、てんかん（例えば、難治性てんかん）、全身性脈管炎症候群、重症筋無力症（例えば、重症筋無力症における代償不全）、皮膚筋炎、および多発性筋炎。
【０３９５】
本発明のさらなる好ましい実施形態は、以下の適用における本発明の治療組成物または薬学的組成物の使用を含むが、これらに限定されない：
免疫系をブーストして、１つ以上の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）の増大した量を産生し、より高い親和性抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）の産生を誘導し、そして／または免疫応答を増大するための、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ブタ、ミニブタ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ラクダ、ヤギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、およびヒト、最も好ましくはヒト）への投与。特定の非特定的な実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を投与して、免疫系をブーストして、ＩｇＧの増大した量を産生する。別の特定の非特定的な実施形態において、本発明の抗体を投与して、免疫系をブーストして、ＩｇＡの増大した量を産生する。別の特定の非特定的な実施形態において、本発明の抗体を投与して、免疫系をブーストして、ＩｇＭの増大した量を産生する。
【０３９６】
機能的な内因性抗体分子を産生し得ないか、またはさもなければ他の損なわれた内因性免疫系を有し得るが、別の動物由来の再構成された、または一部が再構成された免疫系によってヒト免疫グロブリン分子を産生し得る動物（上記に挙げたものおよびトランスジェニック動物もまた含むが、これらに限定されない）への投与（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９８／２４８９３，ＷＯ／９６３４０９６，ＷＯ／９６３３７３５，およびＷＯ／９１１０７４１を参照のこと）。
【０３９７】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、特定の抗原に対する免疫応答性を増大するワクチンアジュバントとして用いる。特定の実施形態において、ワクチンは、本明細書中に記載される抗体である。別の特定の実施形態において、ワクチンアジュバントは、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドである（例えば、抗体ポリヌクレオチド遺伝子のワクチンアジュバント）。本明細書中に記載されるように、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、当該分野で公知の技術（リポソーム送達、組換えベクター送達、裸の（ｎａｋｅｄ）ＤＮＡの注入、および遺伝子銃送達を含むがこれらに限定されない）を用いて投与され得る。
【０３９８】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、腫瘍特異的免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いる。
【０３９９】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、抗ウイルス免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いる。本発明の組成物をアジュバントとして用いて増大され得る抗ウイルス免疫応答は、本明細書中に記載されるかまたは当該分野で公知の疾患または症状に関するウイルスを含むがこれらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＩＤＳ、髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、および肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）からなる群から選択されるウイルス、疾患、または症状に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして使用される。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下：ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ＲＳウイルス、デング熱ウイルス、ロタウイルス、日本脳炎Ｂ型ウイルス、インフルエンザＡ型ウイルスおよびＢ型ウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、フニンウイルス、チクングニヤウイルス、リフトバレー熱ウイルス、単純疱疹ウイルス、ならびに黄熱病ウイルスからなる群から選択されるウイルス、疾患、または症状に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして使用される。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＨＩＶ　ｇｐ１２０抗原に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。
【０４００】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、抗細菌または抗真菌免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。本発明の組成物をアジュバントとして用いて増大され得る抗細菌または抗真菌免疫応答は、本明細書中に記載されるかまたは当該分野で公知の疾患または症状に関する細菌または真菌を含むがこれらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物は、破傷風、ジフテリア、ボツリスム、およびＢ型髄膜炎からなる群から選択される細菌または真菌、疾患、または症状に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下：コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ　ｃｈｏｌｅｒａｅ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｐｒａｅ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉ）、パラチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｂ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、赤痢菌属種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｓｐｐ．）、腸毒性大腸菌（Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、腸出血性大腸菌（Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、およびプラスモディウム属（マラリア）からなる群から選択される細菌または真菌、疾患、または症状に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。
【０４０１】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物は、抗寄生虫免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。本発明の組成物をアジュバントとして用いて増大され得る抗寄生虫免疫応答は、本明細書中に記載されるかまたは当該分野で公知の疾患または症状に関する寄生虫を含むがこれらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物は、寄生虫に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、プラスモディウム属（マラリア）に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして用いられる。
【０４０２】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、ワクチンアジュバントとして患者に投与され得る。さらなる特定の実施形態において、本発明の組成物はワクチンアジュバントとして、免疫不全に罹患した患者に投与され得る。さらなる特定の実施形態において、本発明の組成物はワクチンアジュバントとして、ＨＩＶに罹患した患者に投与され得る。
【０４０３】
特定の実施形態において、本発明の組成物を用いて、標準ワクチンおよび実験ワクチンに対する抗原特異的抗体応答を増大または亢進し得る。特定の実施形態において、本発明の組成物を用いて、標準ワクチンおよび実験ワクチンで処置された患者におけるセロコンバージョンを亢進し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物を用いて、標準ワクチンおよび実験ワクチンに対する応答における独特のエピトープを認識する抗体のレパートリーを増大し得る。
【０４０４】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチンおよび試験ワクチンに対する抗原特異的抗体応答を、ＢＬｙＳレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＢＬｙＳの結合を調節することによって、増大または亢進する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチンおよび実験ワクチンに対する抗原特異的抗体応答を、ＡＰＲＩＬレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＡＰＲＩＬの結合を調節することによって、増大または亢進する。
【０４０５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチンおよび実験ワクチンで処置された患者におけるセロコンバージョンを、ＢＬｙＳレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＢＬｙＳの結合を調節することによって、増大または亢進する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチンおよび試験ワクチンで処置された患者におけるセロコンバージョンを、ＡＰＲＩＬレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＡＰＲＩＬの結合を調節することによって、増大または亢進する。
【０４０６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチン接種および実験ワクチン接種に対する応答における独特のエピトープを認識する抗体のレパートリーを、ＢＬｙＳレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＢＬｙＳの結合を調節することによって、増大または亢進する。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体（抗体フラグメントおよび改変体、ならびに抗抗体抗体を含む）は、標準ワクチン接種および実験ワクチン接種に対する応答における独特のエピトープを認識する抗体のレパートリーを、ＡＰＲＩＬレセプター（例えば、ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩ）に対する可溶性形態ＡＰＲＩＬの結合を調節することによって、増大または亢進する。
【０４０７】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、病原体に対するＢ細胞応答性の刺激因子として用いる。
【０４０８】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、免疫抑制治療を受ける前の個体の免疫状態を上昇させる因子として用いる。
【０４０９】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、より高い親和性抗体を誘導するための因子として用いる。
【０４１０】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、血清免疫グロブリン濃度を増大するための因子として用いる。
【０４１１】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、免疫無防備状態の個体の回復を促進するための因子として用いる。
【０４１２】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、老齢集団における免疫応答性をブーストするための因子として用いる。
【０４１３】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、骨髄移植および／または他の移植（例えば、同種異系または異種の器官移植）前、最中、または後に、免疫系エンハンサーとして用いる。移植に関して、本発明の組成物は、移植前、移植と同時に、または移植後に投与され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物は、移植後に、Ｔ細胞集団の回復が始まる前に投与され得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、移植後に、Ｔ細胞集団の回復が始まった後であるが、Ｂ細胞集団の十分な回復前に最初に投与される。
【０４１４】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、Ｂ細胞免疫不全の個体（例えば、部分的または完全な脾摘出術を受けた個体）における免疫応答性をブーストするための因子として用いる。本発明の抗体および／または組成物を投与することによって寛解または処置され得るＢ細胞免疫不全は、以下を含むがこれらに限定されない：重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）（Ｘ連鎖）、ＳＣＩＤ（常染色体）、アデノシンデアミナーゼ欠損（ＡＤＡ欠損）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）、ブルートン（Ｂｒｕｔｏｎ）病、先天性無ガンマグロブリン血症、Ｘ連鎖小児性無ガンマグロブリン血症、後天性無ガンマグロブリン血症、成人発症性（ａｄｕｌｔ　ｏｎｓｅｔ）無ガンマグロブリン血症、遅発性無ガンマグロブリン血症、異常ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、一過性乳児低ガンマグロブリン血症、不特定（ｕｎｓｐｅｃｉｆｉｅｄ）低ガンマグロブリン血症、無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）（後天性）、ヴィスコット−オールドリッチ症候群（ＷＡＳ）、過剰ＩｇＭを伴うＸ連鎖免疫不全、過剰ＩｇＭを伴う非Ｘ連鎖免疫不全、選択的ＩｇＡ不全、ＩｇＧサブクラス不全（ＩｇＡ不全を伴うかまたは伴わない）、正常Ｉｇまたは増大したＩｇを伴う抗体不全、胸腺腫を伴う免疫不全、Ｉｇ重鎖欠損、κ鎖欠損、Ｂ細胞リンパ球増殖性障害（ＢＬＰＤ）、選択的ＩｇＭ免疫不全、劣性無ガンマグロブリン血症（スイス型）、細網発育不全（ｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ｄｙｓｇｅｎｅｓｉｓ）、新生児好中球減少、重篤な先天性白血球減少症、胸腺リンパ形成不全−免疫不全を伴う発育不全または形成異常、毛細血管拡張性運動失調、短肢小人症、Ｘ連鎖リンパ球増殖性症候群（ＸＬＰ）、ネゼロフ症候群−Ｉｇを伴う複合型免疫欠損、プリンヌクレオチドホスホリラーゼ欠損（ＰＮＰ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠損（不全リンパ球症候群）、および重症複合型免疫不全。
【０４１５】
特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、選択的ＩｇＡ免疫不全を処置または寛解するために投与される。
【０４１６】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、毛細血管拡張性運動失調を処置または寛解するために投与される。
【０４１７】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、分類不能型免疫不全を処置または寛解するために投与される。
【０４１８】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症を処置または寛解するために投与される。
【０４１９】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）を処置または寛解するために投与される。
【０４２０】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、ヴィスコット−オールドリッチ症候群を処置または寛解するために投与される。
【０４２１】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、過剰ＩｇＭを伴うＸ連鎖Ｉｇ不全を処置または寛解するために投与される。
【０４２２】
後天性のＢ細胞機能欠損を有する個体においての免疫反応性をブーストするための因子として。本発明の抗体および／または組成物を投与することによって寛解または処置され得るＢ細胞機能の後天性の欠損を生じる状態は、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、骨髄移植、およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない。
【０４２３】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、一過性の免疫不全を有する個体における免疫応答性をブーストするための因子として用いられる。本発明の抗体および／または組成物を投与することによって寛解または処置され得る一過性の免疫不全を生じる状態は、以下を含むがこれらに限定されない：ウイルス感染（例えば、インフルエンザ）からの回復、栄養失調に関する状態、感染性単核球症からの回復、またはストレスに関する状態、麻疹からの回復、輸血からの回復、手術からの回復。
【０４２４】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、単球、樹状細胞、Ｔ細胞、および／またはＢ細胞による抗原提示のレギュレーターとして用いる。１つの実施形態において、抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、インビトロまたはインビボでの抗原提示を亢進するか、抗原提示を拮抗する。さらに、関連した実施形態において、この抗原提示の亢進または阻害は、抗腫瘍処置または免疫系を調節するのに有用であり得る。
【０４２５】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、粘膜免疫応答のメディエーターとして用いる。単球上のＢＬｙＳの発現、Ｂ細胞上のＢＬｙＳレセプターの発現、およびＢＬｙＳに対するＢ細胞の応答性は、このモジュレーターが、Ｂ細胞と単球間またはこれらの分化した子孫間のシグナルの変換に関し得ることを示唆する。この活性は、いろんな点で、Ｂ細胞とＴ細胞間のＣＤ４０−ＣＤ１５４シグナル伝達に類似する。従って、本発明の抗ＢＬｙＳ抗体および組成物は、環境病原体に対するＴ細胞非依存性免疫応答のよいレギュレーターであり得る。特に、ヒトにおける粘膜部位に関連し、そして多くの先天免疫を担う非通常性のＢ細胞集団（ＣＤ５＋）は、本発明の抗体または組成物に対して反応し得、その結果、個体の免疫状態を亢進するか阻害する。
【０４２６】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、ＴＨ１細胞性応答とは対照的に、体液性応答（すなわち、ＴＨ２）の発生へと、個体の免疫系を指向する因子として用いる。
【０４２７】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、腫瘍増殖を誘導、そして腫瘍を抗新形成因子に対しより感受性にする手段として用いる。例えば、多発性骨髄腫は、ゆっくりと分裂する疾患であり、従って全ての抗新形成レジメンに対して実質的に不応性である。これらの細胞がより急な増殖を強いられる場合、これらの感受性のプロフィールは変化するようである。
【０４２８】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、細胞増殖の特異的アクチベーターまたはインヒビターが結合され得る単球細胞特異的結合タンパク質として用いる。この結果は、正常、疾患または新形成Ｂ細胞集団に対してこのようなアクチベーターまたはインヒビターの活性の焦点が当てられる。
【０４２９】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、細胞増殖の特異的アクチベーターまたはインヒビターが結合され得るＢ細胞特異的結合タンパク質として用いる。この結果は、正常、疾患または新形成Ｂ細胞集団に対してこのようなアクチベーターまたはインヒビターの活性の焦点が当てられる。
【０４３０】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、その特異性によって、単球細胞を検出する手段として用いる。この適用は，検出するための手段を供するために、タンパク質をビオチンまたは他の因子（例えば、本明細書中に記載されるようなもの）を用いて標識することを必要とし得る。
【０４３１】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、その特異性によって、Ｂ系列細胞を検出する手段として用いる。この適用は，検出するための手段を供するために、タンパク質をビオチンまたは他の因子（例えば、本明細書中に記載されるようなもの）を用いて標識することを必要とし得る。
【０４３２】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、ＡＩＤＳ、慢性リンパ球障害および／または分類不能型免疫不全のような症状におけるＢ細胞産性の刺激因子として用いる。
【０４３３】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、細胞型の異質性混合物由来の単球を単離するための機能を備えた、単球選択装置の一部として用いる。本発明の抗体は、固相支持体に結合され得、次いでこれに単球が特異的に結合する。結合しなかった細胞は洗い流され、引き続いて、結合した細胞が溶出される。この選別の非限定的な使用は、例えば、移植前に骨髄細胞または末梢血からの腫瘍細胞の一掃を可能にする。
【０４３４】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、細胞型の異質性混合物由来のＢ細胞を単離するための機能を備えた、Ｂ細胞選択装置の一部として用いる。可溶性ＢＬｙＳを結合する本発明の抗体（これは、ＢＬｙＳ／ＢＬｙＳレセプター相互作用を阻害しない）は、固体支持体に結合され得、次いでこれにＢ細胞が特異的に結合する。結合しなかった細胞は洗い流され、引き続いて、結合した細胞が溶出される。この選別の非限定的な使用は、例えば、移植前に骨髄細胞または末梢血からの腫瘍細胞の一掃を可能にする。
【０４３５】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、手術後のリンパ組織の発生および／または再生、外傷または遺伝的不全の治療に用いる。
【０４３６】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、例えば、ＳＣＩＤ患者の間で観察されるような免疫不全を生じる遺伝性疾患に対する、遺伝子ベースの治療に用いる。
【０４３７】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、ＢＬｙＳ媒介性応答を阻害または増大する抗体の産生のための抗原として用いる。
【０４３８】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、リーシュマニアのような、単球に影響を与える寄生虫性疾患に対して防戦するように単球／マクロファージを活性化する手段として用いる。
【０４３９】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、移植前の骨髄サンプルの前処理として用いる。このような処理は、Ｂ細胞提示を増大させ、従って再生を促進する。
【０４４０】
特定の実施形態において、本発明の治療組成物または薬学的組成物を、ＢＬｙＳおよび／またはＢＬｙＳレセプターによって誘導される分泌サイトカインを調節する手段として用いる。
【０４４１】
本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、インビトロまたはインビボにおけるＩｇＥ濃度を調節し得る。
【０４４２】
さらに、本発明の抗体ペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、ＩｇＥ媒介性アレルギー反応を処置、予防および／または診断し得る。このようなアレルギー反応は、喘息、鼻炎および湿疹を含むがこれらに限定されない。
【０４４３】
特定の実施形態において、本発明の抗体ペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、選択的ＩｇＡ欠損症を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４４】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、毛細血管拡張性運動失調を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４５】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、分類不能型免疫不全を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４６】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４７】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４８】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、ヴィスコット−オールドリッチ症候群を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４４９】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、高ＩｇＭを伴うＸ連鎖Ｉｇ不全を処置、予防、診断および／または寛解する。特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、高ＩｇＭを伴うＸ連鎖Ｉｇ不全を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４５０】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、以下を処置、予防、および／または診断する：慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、白血病、細網白血病（ｈｙｓｔｉｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ）、単球性白血病（例えば、急性単球性白血病）、白血病性細網症、Ｓｈｉｌｌｉｎｇ型単球性白血病および／または単球および／または単球細胞および／または組織に由来する他の白血病。
【０４５１】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、例えば、結核で見られるような単球性類白血病反応を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４５２】
別の特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを投与して、単球性白血球増加症、単球性白血球減少症、単球減少症および／または単球増加症を処置、予防、診断および／または寛解する。
【０４５３】
特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、単球性障害および／または疾患および／またはこれらに関する状態を処置、予防、検出および／または診断する。
【０４５４】
特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、原発性Ｂリンパ球性障害および／または疾患および／またはこれらに関する状態を処置、予防、検出および／または診断する。１つの実施形態において、このような原発性Ｂリンパ球性障害、疾患および／または状態は体液性免疫の完全または部分的損失によって、特徴付けられる。体液性免疫の完全または部分的損失によって特徴付けられ、本発明の組成物を用いて予防、処置、検出および／または診断し得る、原発性Ｂリンパ球性障害、疾患および／または状態は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）および選択的ＩｇＡ欠損症を含むが、これらに限定されない。
【０４５５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、１つ以上の任意の身体における種々の粘膜に関する疾患または障害の発症または状態を処置、予防および／または診断する。このような疾患または障害は、例えば以下を含むがこれらに限定されない：粘膜炎、粘膜破壊、粘液性結腸炎、皮膚粘膜リーシュマニア症（例えば、アメリカリーシュマニア症（Ａｍｅｒｉｃａｎ　ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ、ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）、鼻咽頭リーシュマニア症および新世界リーシュマニア症）、皮膚粘膜リンパ節症候群（例えば、川崎病）、小腸粘膜炎、粘液性類表皮癌、粘液類上皮腫、粘膜上皮形成異常、類粘液腺癌、ムコイド変性、ミクソイド変性（ｍｙｘｏｉｄ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、ｍｙｘｏｍａｔｏｕｓ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、粘液腫症、ムコイド中膜変性（例えば、嚢胞性中膜壊死）、ムコリピドーシス（例えば、ムコリピドーシスＩ、ムコリピドーシスＩＩ、ムコリピドーシスＩＩＩ、ムコリピドーシスＩＶを含む）、粘液溶解障害、粘液性膜性腸炎、小腸粘膜炎、ムコ多糖体症（例えば、Ｉ型ムコ多糖体沈着症（すなわちハーラー症候群）、ＩＳ型ムコ多糖体症（すなわちシャイエ症候群またはＶ型ムコ多糖体症）、ＩＩ型ムコ多糖体症（すなわちハンター症候群）、ＩＩＩ型ムコ多糖体症（すなわちサンフィリポ症候群）、ＩＶ型ムコ多糖体沈着症（すなわちモルキオ症候群）、ＶＩ型ムコ多糖体症（すなわちマロトー−ラミー症候群）、ＶＩＩ型ムコ多糖体症（すなわち、β−グリクロニダーゼ欠損に起因するムコ多糖体症）および粘液性スルファチドーシス）、ムコ多糖体尿、粘液膿性結膜炎、膿様粘液、ムコール菌症（すなわち接合真菌症）、粘膜病（すなわちウシのウイルス性下痢）、粘液性大腸結腸炎、（例えば、粘液性結腸炎（ｍｕｃｏｃｏｌｉｔｉｓ、　ｍｙｘｏｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ　ｃｏｌｉｔｉｓ））、およびムコビシドーシス（例えば、嚢胞性線維症、膵嚢胞性線維症、クラーク−ハッドフィールド症候群、膵線維嚢胞症、ムコビシドーシスおよび粘液過剰症）。非常に好ましい実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、特に化学療法に関する、粘膜炎を処置、予防および／または診断する。
【０４５６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、副鼻腔炎に影響する疾患もしくは障害、または副鼻腔炎に関連する状態を処置、予防および／あるいは診断するために使用される。
【０４５７】
本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドによって処置、予防および／または診断され得るさらなる状態、疾患または症状は、骨髄炎である。
【０４５８】
本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドによって処置、予防および／または診断され得るさらなる状態、疾患または症状は、心内膜炎である。
【０４５９】
上記の用途の全ては、獣医用医薬に適用され得る。
【０４６０】
本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、肺系（例えば、気管支）の疾患および障害（例えば、洞肺感染および気管支感染）、およびこのような疾患および障害に関連する状態、ならびに他の呼吸疾患および障害を処置、予防および／または診断するために使用され得る。特定の実施形態において、このような疾患および障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：気管支腺腫、気管支ぜん息、肺炎（例えば、気管支肺炎（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、気管支肺炎（ｂｒｏｎｃｈｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、および結核性気管支肺炎）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支ポリープ、気管支拡張症（例えば、乾性気管支拡張症、円柱状気管支拡張症、および嚢胞状気管支拡張症）、細気管支癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌａｒ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、細気管支癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、細気管支炎（例えば、滲出性細気管支炎、閉塞性線維性細気管支炎閉塞（ｏｂｌｉｔｅｒａｎｓ）、および増殖性細気管支炎）、細気管支癌、気管支炎性ぜん息、気管支炎（例えば、ぜん息性気管支炎、カステラーニ気管支炎、慢性気管支炎、クループ性気管支炎、線維素性気管支炎、出血性気管支炎、鳥類の伝染性気管支炎、閉塞性気管支炎、形成性気管支炎、偽膜性気管支炎、腐敗性気管支炎、および寄生虫性気管支炎）、気管支中心性肉芽腫症、気管支浮腫、気管食道瘻、気管支原生癌、気管支性嚢胞、気管支結石症、気管支軟化症、気管支真菌症（例えば、気管支肺アスペルギルス症）、気管支肺スピロヘータ症、出血性気管支炎、気管支漏、気管支痙攣、気管支出血、気管支狭窄、ビオー呼吸、気管支呼吸、クスマウル呼吸、クスマウル−キーン呼吸、呼吸性アシドーシス、呼吸性アルカローシス、新生児呼吸窮迫症候群、呼吸機能不全、上気道硬化症、ＲＳウイルスなど。
【０４６１】
特定の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置、予防および／または診断するために使用される。
【０４６２】
別の実施形態において、本発明の抗体ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、以下が挙げられるがこれらに限定されない、線維症および線維症に関連する状態を処置、予防および／または診断するために使用される：嚢胞性線維症（膵嚢胞性線維症、クラーク−ハッドフィールド症候群、膵線維嚢胞症、ムコビシドーシス、および粘液過剰症のような線維症を含む）、心内膜心筋線維症、特発性腹膜後線維症、軟膜線維症、縦隔線維症、結節性表皮下線維組織増殖症、中心静脈周囲線維化、筋周囲線維化、パイプ軸線維症、置換性線維形成、外膜下線維症、およびシンマーズ陶製パイプ柄線維症。
【０４６３】
別の実施形態において、本発明の治療的組成物または薬学的組成物は、感染性疾患を処置、予防または回復するために動物に投与される。感染性疾患としては、酵母感染、真菌感染、ウイルス感染および細菌感染に関連する疾患が挙げられる。本発明に従って処置または予防され得るウイルス感染を引き起こすウイルスとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：レトロウイルス（例えば、ヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）Ｉ型およびＩＩ型、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）Ｉ型およびＩＩ型、エプスタイン−バーウイルス、ＨＨＶ６−ＨＨＶ８、およびサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹ウイルス、ヒトＲＳウイルス、マンプス、および肺炎ウイルス）、アデノウイルス、ブンヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コルナウイルス（ｃｏｒｎａｖｉｒｕｓｅｓ）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、および日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルトポックスウイルス（例えば、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型およびＣ型）、パポバウイルス（例えば、乳頭腫ウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルスおよびＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）。細菌感染を引き起こす微生物病原体としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ　、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｔａｎｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｏｚａｅｎａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍｏｔｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ　ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ　ｔａｒｄａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｓｏｎｎｅｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｃａｒａｔｅｎｅｕｍ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｖｉｎｃｅｎｔｉｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ　ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ　ｉｃｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　ｃａｒｉｎｉｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ　ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ｓｕｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ　ｐｒｏｗａｚｅｋｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ　ｔｓｕｔｓｕｇｕｍｕｓｈｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ　ｓｐｐ．、およびＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ。
【０４６４】
（遺伝子治療）
特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、ＢＬｙＳおよび／またはそのレセプターの異常な発現および／または活性に関連した疾患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与される。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与により行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
【０４６５】
当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用され得る。例示的な方法が以下に記載される。
【０４６６】
遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　１２：４８８−５０５（１９９３）；ＷｕおよびＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ　３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２６０：９２６−９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ　１　ｌ（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【０４６７】
好ましい局面において、本発明の組成物は抗体をコードする核酸配列を含有するか、あるいはその配列からなり、上記核酸配列は、適切な宿主において、抗体、またはそのフラグメントもしくはキメラタンパク質、あるいはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部である。特に、このような核酸は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモーター（好ましくは、異種プロモーター）を有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコードする配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、従って抗体をコードする核酸の染色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ　３４２：４３５−４３８（１９８９））。特定の実施形態において、発現したｓｃＦｖは単鎖抗体であるか；あるいはこの核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはそのフラグメントもしくは改変体を含む。
【０４６８】
核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクターに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロで核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これらの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子治療としてそれぞれ公知である。
【０４６９】
特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部分として構築し、そしてそれを細胞内になるように投与することにより（例えば、欠損性または弱毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）を用いた感染により）、あるいは、裸のＤＮＡの直接注射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面のレセプターでコーティングするか、もしくは薬剤をトランスフェクトすることにより、あるいは、リポソーム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセル化により、あるいは、それらを核に入ることが公知であるペプチドと結合させて投与することにより、レセプター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンドと結合させて投与することにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）（レセプターを特異的に発現する細胞の型を標的にするために用いられ得る）などのいずれかにより達成され得る。別の実施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、ここで、リガンドはエンドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイルス性ペプチドを含み、核酸がリソソーム分解を回避するようにする。さらに別の実施形態において、核酸は、特定のレセプターを標的とすることにより、細胞特異的な取り込みおよび発現についてインビボで標的とされ得る（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０６１８０号；同第ＷＯ９２／２２６３５号；同第ＷＯ９２／２０３１６号；同第ＷＯ９３／１４１８８号；同第ＷＯ９３／２０２２１号。あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得、そして相同組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ　３４２：４３５−４３８（１９８９））。
【０４７０】
具体的な実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体をコードする核酸配列を含むウイルスベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍｉｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムの正確なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの正確な組込みのために必要な構成要素を含む。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は、一つ以上のベクター中にクローン化され、これは、患者内への遺伝子の送達を容易にする。レトロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ　６：２９１−３０２（１９９４）（これは、幹細胞を化学療法に対してより耐性にするために、ｍｄｒＩ遺伝子を造血性幹細胞に送達するための、レトロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下である。：Ｃｌｏｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９９４）；Ｋｉｅｉｎら，Ｂｌｏｏｄ　８３：１４６７−１４７３（１９９４）；ＳａｌｍｏｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　４：１２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌ．３：１１０−１１４（１９９３）。
【０４７１】
アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を起こす。アデノウイルスベースの送達系の他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞を感染することができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスベースの遺伝子治療の概説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　５：３−１０（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイルスベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５２：４３１−４３４（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ　６８：１４３−１５５（１９９２）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−２３４（１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎｇら，Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　２：７７５−７８３（１９９５）に見出され得る。好ましい実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
【０４７２】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用が提案されてきた（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
【０４７３】
遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入された遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選沢下に置かれる。次いで、それらの細胞は患者に送達される。
【０４７４】
この実施形態においては、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、核酸が細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法により実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野において多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎ，Ｐｈａｒｍａ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２ｍ（１９８５）を参照のこと）、そしてレシピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないならば、本発明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を提供するはずであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好ましくは、その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。
【０４７５】
得られた組換え細胞は、当該分野において公知の様々な方法により、患者へ送達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好ましくは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の状態などに依存し、当業者により決定され得る。
【０４７６】
遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の入手可能な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。
【０４７７】
好ましい実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、患者に対して自己である。
【０４７８】
遺伝子治療において組換え細胞が使用される実施形態において、抗体をコードする核酸配列またはそのフラグメントは、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるように細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボで投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞および／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号：ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ　７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ　Ｃｌｉｎｉｃ　Ｐｒｏｃ．６１：７７１（１９８６）を参照のこと）。
【０４７９】
具体的な実施形態において、遺伝子治療の目的で導入されるべき核酸は、コード領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の発現は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能である。
【０４８０】
（組成物の治療的有用性または予防的有用性の証明）
本発明の化合物は、好ましくは、インビトロで試験され、次いで、ヒトにおける使用の前に、所望の治療的活性または予防的活性についてインビボで試験される。例えば、本発明の特定の抗体または組成物の投与が示されるか否かを決定するために使用され得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養物アッセイが挙げられ、ここで患者の組織サンプルは培養物中で増殖され、本発明の抗体または組成物に暴露されるかまたはそうでなければこれを投与され、この組織サンプルに対する本発明のこのような抗体または組成物の効果が観察される。様々な特定の実施形態において、患者の障害に関与する細胞型の代表的な細胞を用いてインビトロアッセイを行い、本発明の抗体または組成物がこのような細胞型に対する所望の効果を有するか否かを決定し得る。好ましくは、本発明の抗体または組成物はまた、ヒトに投与する前に、インビトロアッセイおよび動物モデル系で試験される。
【０４８１】
治療において使用するための本発明の抗体または組成物は、適切な動物モデル系（ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サルおよびウサギが挙げられるが、これらに限定されない）において、それらの毒性について試験され得る。抗体または組成物の毒性のインビボ試験について、当該分野で公知の任意の動物モデル系が使用され得る。
【０４８２】
ウイルス感染の処置または予防における効力は、本発明の抗体または組成物の、ウイルスの複製を阻害する能力、伝染を阻害する能力、またはウイルス自体がその宿主中で確立するのを防止する能力、あるいは疾患の症状および進行を防止、回復または軽減する能力を決定することによって、証明され得る。例えば、本発明の抗体または組成物の投与後の、ウイルス負荷の減少、１つ以上の症状の回復、あるいは死亡率および／または罹患率の減少がある場合に、この治療は治療的であるとみなされる。
【０４８３】
本発明の抗体または組成物は、細胞、好ましくはヒト細胞を、本発明の抗体または組成物、あるいは抗体またはコントロール組成物と接触させ、本発明の抗体または組成物が１つ以上のサイトカインを誘導する能力を決定することによって、ＩＦＮ−γのようなサイトカインの発現を誘導する能力について試験され得る。当業者に公知の技術を使用して、サイトカインの発現レベルを測定し得る。例えば、サイトカインの発現レベルは、例えば、ＲＴ−ＰＣＲおよびノーザンブロッド分析によってサイトカインのＲＮＡレベルを分析することによって、および例えば、免疫沈降に続くウエスタンブロッド分析およびＥＬＩＳＡによりサイトカインのレベルを分析することによって測定され得る。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ＩＦＮ−γの発現を誘導するその能力について試験される。
【０４８４】
本発明の抗体または組成物は、免疫細胞、好ましくは、ヒト免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞）と、本発明の抗体もしくは組成物、またはコントロール化合物とを接触させ、本発明の抗体または組成物が免疫細胞の生物学的活性を調節（すなわち、増加または減少）する能力を決定することによって、免疫細胞の生物学的活性を調節する能力について試験され得る。免疫細胞の生物学的活性を調節する、本発明の抗体または組成物の能力は、抗原の発現を検出するか、免疫細胞の増殖（すなわち、Ｂ細胞増殖）を検出するか、シグナル伝達分子の活性化を検出するか、免疫細胞のエフェクター機能を検出するか、または免疫細胞の分化を検出することによって評価され得る。当業者に公知の技術は、これらの活性を測定するために使用され得る。例えば、細胞増殖は、３Ｈ−チミジン組込みアッセイおよびトリパンブルー細胞カウントによってアッセイされ得る。抗原の発現は、例えば、以下を含むがこれらに限定されないイムノアッセイによってアッセイされ得る：ウエスタンブロッドのような技術を使用する競合および非競合アッセイ系、免疫組織学的ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベント検定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、タンパク質ＡイムノアッセイおよびＦＡＳＣ分析。シグナル伝達分子の活性化は、例えば、キナーゼアッセイおよび電気泳動シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）によってアッセイされ得る。好ましい実施形態において、本発明の抗体または組成物が、Ｂ細胞増殖を誘導する能力が測定される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体または組成物が免疫グロブリンの発現を調節する能力が測定される。
【０４８５】
本発明の抗体または組成物は、インビトロ、エキソビボおよびインビボのアッセイにおいて、腫瘍形成を減少するその能力について試験され得る。本発明の抗体又は組成物はまた、インビトロおよびインビボアッセイにおいて、ウイルス複製を阻害する能力またはウイルス負荷を減少する能力について試験され得る。本発明の抗体または組成物はまた、当業者に公知のインビトロアッセイおよびインビボアッセイにおいて、細菌数を減少させる能力について試験され得る。本発明の抗体または組成物はまた、癌、免疫障害（例えば、炎症性疾患）、神経学的障害または感染性疾患に関連する１つ以上の症状を軽減する能力について試験され得る。本発明の抗体または組成物はまた、感染性疾患の時間経過を減少する能力について試験され得る。さらに、本発明の抗体または組成物は、癌、免疫障害または感染性疾患を含む疾患または障害に罹患している動物の生存期間を増加するそれらの能力について試験され得る。当業者に公知の技術を使用して、本発明の抗体または組成物のインビボにおける機能を分析し得る。
【０４８６】
（治療的／予防的組成物および投与）
本発明は、被験体への有効量の本発明の抗体（またはそのフラグメントもしくは改変体）または薬学的組成物、好ましくは本発明の抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい局面において、抗体またはそのフラグメントもしくは改変体は実質的に精製される（すなわち、その効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被験体は好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれらに限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そして最も好ましくはヒトである。
【０４８７】
化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合に使用され得る処方および投与方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で以下に記載されたものの中から選択され得る。
【０４８８】
様々な送達系が公知であり、そして本発明の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体を投与するために用いられ得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この抗体または抗体フラグメントの発現が可能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を包含し；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り付けられた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入することが望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化剤を用いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
【０４８９】
特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物を、処置の必要な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではないが、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯と組み合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
【０４９０】
別の実施形態において、組成物は、小胞、特に、リポソーム中へ送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：１５２７−１５３３（１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
【０４９１】
さらに別の実施形態において、組成物は制御された放出系中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇｅｒ，（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ　Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ　８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用いられ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ　Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）もまた参照のこと）。さらに別の実施形態において、制御された放出システムは、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。
【０４９２】
他の制御された放出システムは、Ｌａｎｇｅｒにより総説において議論される（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
【０４９３】
本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である、特定の実施形態において、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そしてそれが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクターの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプターもしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入ることが公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８８：１８６４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタンパク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細胞内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。
【０４９４】
本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の抗体またはそのフラグメント、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。特定の実施形態において、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにおける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。用語「キャリア」とは、治療剤とともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望されるならば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出処方物などの形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのようなキャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。このような組成物は、治療有効量の抗体またはそのフラグメントを、好ましくは精製された形態で、適切な量のキャリアとともに含んで、患者への適切な投与のための形態を提供する。処方物は、投与形態に適するべきである。
【０４９５】
好ましい実施形態において、組成物は、慣用手順に従って、ヒトへの静脈内投与のために採用された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混合してのどちらかで、例えば、一定量の活性薬剤を示すアンプルまたは小袋（ｓａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成物は、滅菌した薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得る。組成物が注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０４９６】
本発明の組成物は、中性のまたは塩の形態として処方され得る。薬学的に受容可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもののようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののようなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。
【０４９７】
本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性と関連する疾患または障害の処置、抑制および予防において効果的である本発明の組成物の量は、標準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイを、必要に応じて使用して、最適な投薬量の範囲を同定するのを助け得る。処方において使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤度に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から外插され得る。
【０４９８】
抗体に関して、患者に投与される投薬量は、代表的に、患者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および頻度の低い投与は、しばしば可能である。さらに、本発明の治療的組成物または薬学的組成物の投与の投薬量および頻度は、改変（例えば、脂溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ））による抗体の取り込みおよび組織浸透（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。
【０４９９】
本発明の抗体および抗体組成物は、単独で、または他のアジュバントと組み合わせて投与され得る。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ミョウバン、ミョウバンおよびデオキシコール酸（ＩｍｍｕｎｏＡｇ）、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｂｉｏｃｉｎｅ　Ｃｏｒｐ．）、ＱＳ２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、ＢＣＧ、およびＭＰＬ。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ミョウバンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＱＳ−２１と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得るさらなるアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：モノホスホリル脂質免疫調節剤、Ａｄｊｕ　Ｖａｘ　１００ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−１８、ＣＲＬ１００５、アルミニウム塩、ＭＦ−５９、およびＶｉｒｏｓｏｍａｌアジュバント技術。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得るワクチンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＭＭＲ（麻疹、流行性耳下腺炎，風疹）、ポリオ（ｐｏｌｉｏ）、水痘、破傷風／ジフテリア、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｂ型インフルエンザ、百日咳（ｗｈｏｏｐｉｎｇ　ｃｏｕｇｈ）、肺炎、インフルエンザ、ライム病、ロタウイルス、コレラ、黄熱病、日本脳炎、ポリオ（ｐｏｌｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、狂犬病、腸チフス、および百日咳（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対する防御に指向するワクチンならびに／またはＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭ。組み合わせは、例えば、混合物として同時に、別々であるが同時にもしくは並行して；または逐次的にかのいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が治療混合物としてともに投与される説明を含み、そして組み合わせた薬剤が、別々であるが同時に（例えば、同じ個体へ別々の静脈ラインを通じての場合）投与される手順もまた含む。「組み合わせ」投与は、第１に、続いて第２に与えられる化合物または薬剤のうちの１つを別々に投与することをさらに含む。
【０５００】
別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭと組合せて使用され、感染ならびに／あるいは感染に関連する任意の疾患、障害、および／または状態を処置、予防、および／または診断する。１つの実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭと組合せて使用されて、任意のグラム陽性菌感染ならびに／あるいはグラム陽性菌感染に関連する任意の疾患、障害、および／または状態を処置、予防、および／または診断する。別の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭと組合せて使用されて、感染ならびに／あるいはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属および／またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の１つ以上のメンバーに関連する任意の疾患、障害、および／または状態を処置、予防、および／または診断する。別の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭとの任意の組合せで使用されて、感染ならびに／あるいはＢ群連鎖球菌の１つ以上のメンバーに関連する任意の疾患、障害、および／または状態を、処置、予防、および／または診断する。別の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭと組合せて使用され、感染ならびに／あるいはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに関連する任意の疾患、障害、および／または状態を、処置、予防、および／または診断する。
【０５０１】
本発明の抗体および抗体組成物は、単独で、または他の治療的薬剤と組み合わせて投与され得る。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得る治療的薬剤としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：化学療法剤、抗生物質、抗ウイルス剤、ステロイド性および非ステロイド性の抗炎症剤、従来の免疫療法剤、ならびにサイトカイン。組み合わせは、例えば、混合物として同時に、別々であるが同時にもしくは並行して；または逐次的にかのいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が、治療混合物としてともに投与される説明を含み、そして組み合わせた薬剤が、別々であるが同時に（例えば、同じ個体へ別々の静脈ラインを通じての場合）投与される手順もまた含む。「組み合わせ」投与は、第１に、続いて第２に与えられる化合物または薬剤のうちの１つを別々に投与することをさらに含む。
【０５０２】
１つの実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＴＮＦファミリーの他のメンバーと組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得るＴＮＦ、ＴＮＦ関連、またはＴＮＦ様の分子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：可溶性形態のＴＮＦ−α、リンホトキシン−α、（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても公知）、ＬＴ−β（複合ヘテロトリマーＬＴ−α２−βにおいて見出された）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際公開番号ＷＯ９６／１４３２８）、ＴＲＡＩＬ、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）１１８５−１１９０（１９９８））、エンドカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／０７８８０）、ニューロカイン−α（国際公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、ＯＰＧ、ＯＸ４０、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ならびに可溶性形態のＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０および４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ９６／３４０９５）、ＤＲ３（国際公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号ＷＯ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ６（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ９８／４１６２９）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ９８／５６８９２）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ９８／０６８４２）、およびＴＲ１２、ならびに可溶性形態のＣＤ１５４、ＣＤ７０、およびＣＤ１５３。
【０５０３】
好ましい実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、可溶性形態のＣＤ４０（例えば、ＡＶＲＥＮＤＴＭ）、ＣＤ４０Ｌの生物学的に活性なフラグメント、改変体、もしくは誘導体、抗−ＣＤ４０Ｌ抗体（例えば、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体）、および／または抗−ＣＤ４０抗体（例えば、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体）と組合せて投与される。
【０５０４】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、単独でかまたは抗脈管形成薬剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る抗脈管形成薬剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アンジオスタチン（Ｅｎｔｒｅｍｅｄ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、トロポニン−１（Ｂｏｓｔｏｎ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、抗侵襲性因子、レチノイン酸およびその誘導体、パクリタキセル（タキソール）、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビター、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター、ＶＥＧＩ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２および種々の形態のより軽い「ｄ群」遷移金属。
【０５０５】
より軽い「ｄ群」遷移金属としては、例えばバナジウム、モリブデン、タングステン、チタン、ニオブおよびタンタル種が挙げられる。そのような遷移金属種は、遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体としては、オキソ遷移金属錯体が挙げられる。
【０５０６】
バナジウム錯体の代表的な例としては、バナデート錯体およびバナジル錯体のようなオキソバナジウム錯体が挙げられる。適切なバナデート錯体としては、例えばメタバナジン酸アンモニウム、メタバナジン酸ナトリウムおよびオルトバナジン酸ナトリウムのようなメタバナデート錯体およびオルトバナデート錯体が挙げられる。適切なバナジル錯体としては、例えばバナジルアセチルアセトネートおよび硫酸バナジル（硫酸バナジル一水和物および硫酸バナジル三水和物のような硫酸バナジル水和物を含む）が挙げられる。
【０５０７】
タングステン錯体およびモリブデン錯体の代表的な例としてはまた、オキソ錯体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体としては、タングステート錯体およびタングステンオキシド錯体が挙げられる。適切なタングステート錯体としては、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン酸ナトリウム二水和物およびタングステン酸が挙げられる。適切なタングステンオキシドとしては、タングステン（ＩＶ）オキシドおよびタングステン（ＶＩ）オキシドが挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体としては、モリブデート、モリブデンオキシドおよびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデート錯体としては、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナトリウムおよびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウムおよびその水和物が挙げられる。適切なモリブデンオキシドとしては、モリブデン（ＶＩ）オキシド、モリブデン（ＶＩ）オキシドおよびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデニル錯体としては、例えばモリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他の適切なタングステン錯体およびモリブデン錯体としては、例えばグリセロール、酒石酸および糖由来のヒドロキソ誘導体が挙げられる。
【０５０８】
広範な種々の他の抗脈管形成薬剤もまた、本発明の状況において利用され得る。代表的な例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血小板因子４；硫酸プロタミン；硫酸化キチン誘導体（ズワイガニ（ｑｕｅｅｎ　ｃｒａｂ）の殻から調製される）（Ｍｕｒａｔａら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．５１：２２〜２６、１９９１）；硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ステロイド（例えば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在によって、増強され得る）；スタウロスポリン；基質代謝の調節因子（例えば、プロリンアナログ、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チアプロリン、α，α−ジピリジル，アミノプロピオニトリルフマレートを含む）；４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；メトトレキサート；ミトザントロン；ヘパリン；インターフェロン；２マクログロブリン−血清；ＣｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７３２１〜１７３２６、１９９２）；キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ．２８６：４７５〜４８０、１９９２）；シクロデキストリンテトラデカサルフェート；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリン（Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５５〜５５７、１９９０）；チオリンゴ酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０〜１４４６、１９８７）；アンチコラゲナーゼ−血清；α２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２（４）：１６５９〜１６６４、１９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸（ｃｈｌｏｒｏａｎｔｈｒｏｎｉｌｉｃ　ａｃｉｄ）二ナトリウム、すなわち「ＣＣＡ」；Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ａｇｅｎｔｓ　Ａｃｔｉｏｎｓ　３６：３１２〜３１６、１９９２）；およびメタロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）。
【０５０９】
本発明の状況において同様に利用され得るさらなる抗脈管形成薬剤としては、サリドマイド（Ｃｅｌｇｅｎｅ，Ｗａｒｒｅｎ，ＮＪ）；血管拡張性ステロイド；ＡＧＭ−１４７０（Ｈ．ＢｒｅｍおよびＪ．Ｆｏｌｋｍａｎ　Ｊ　Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．２８：４４５−５１（１９９３））；インテグリンαｖβ３アンタゴニスト（Ｃ．Ｓｔｏｒｇａｒｄら，Ｊ　Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０３：４７−５４（１９９９））；カルボキシアミノイミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ）；カルボキシアミドトリアゾール（ＣＡＩ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；Ｃｏｎｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ　Ａ−４（ＣＡ４Ｐ）（ＯＸｉＧＥＮＥ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）；Ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ（Ｍａｇａｉｎｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ　Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）；ＴＮＰ−４７０，（Ｔａｐ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）；ＺＤ−０１０１　ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）；ＡＰＲＡ（ＣＴ２５８４）；Ｂｅｎｅｆｉｎ，Ｂｙｒｏｓｔａｔｉｎ−１（ＳＣ３３９５５５）；ＣＧＰ−４１２５１（ＰＫＣ　４１２）；ＣＭ１０１；Ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ（ＩＣＲＦ１８７）；ＤＭＸＡＡ；エンドスタチン；Ｆｌａｖｏｐｒｉｄｉｏｌ；Ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ；ＧＴＥ；ＩｍｍＴｈｅｒ；Ｉｒｅｓｓａ（ＺＤ１８３９）；Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ（ソマトスタチン）；Ｐａｎｒｅｔｉｎ；Ｐｅｎａｃｉｌｌａｍｉｎｅ；Ｐｈｏｔｏｐｏｉｎｔ；ＰＩ−８８；Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ（ＡＧ−３３４０）Ｐｕｒｌｙｔｉｎ；Ｓｕｒａｄｉｓｔａ（ＦＣＥ２６６４４）；タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ）；Ｔａｚａｒｏｔｅｎｅ；テトラチオモリブデート；Ｘｅｌｏｄａ（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；および５−フルオロウラシルが挙げられる。
【０５１０】
本発明の化合物と組み合わせて投与され得る抗脈管形成薬剤は、種々の機構を通じて作用し得、これらの機構としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：細胞外マトリックスのタンパク質分解の阻害、内皮細胞−細胞外マトリックス接着分子の機能のブロック、増殖因子のような脈管形成誘導因子の機能と拮抗すること、および増殖している内皮細胞において発現されるインテグリンレセプタ−の阻害。細胞外マトリックスタンパク質分解を妨害し、そして本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る抗脈管形成インヒビターの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＡＧ−３３４０（Ａｇｏｕｒｏｎ，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、ＢＡＹ−１２−９５６６（Ｂａｙｅｒ，Ｗｅｓｔ　Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）、ＢＭＳ−２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ　Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、ＣＧＳ−２７０３２Ａ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｅａｓｔ　Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪ）、Ｍａｒｉｍａｓｔａｔ（Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）およびＭｅｔａｓｔａｔ（Ａｅｔｅｒｎａ，Ｓｔ−Ｆｏｙ，Ｑｕｅｂｅｃ）。内皮細胞−細胞外マトリックス接着分子の機能をブロックすることにより作用し、そして本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る抗脈管形成インヒビターの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＥＭＤ−１２１９７４（Ｍｅｒｃｋ　ＫｃｇａＡ　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＶｉｔａｘｉｎ（Ｉｘｓｙｓ，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，ＣＡ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）。脈管形成誘導因子と直接拮抗するかまたはこの誘導因子を阻害することにより作用し、そして本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る抗脈管形成薬剤の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓ．Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＰＴＫ−７８７／ＺＫ−２２５８４６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＳＵ−１０１（Ｓｕｇｅｎ，Ｓ．Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＳＵ−５４１６（Ｓｕｇｅｎ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｕｐｊｏｈｎ，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）、およびＳＵ−６６６８（Ｓｕｇｅｎ）。他の抗脈管形成薬剤は、脈管形成を間接的に阻害するように作用する。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る脈管形成の間接的インヒビターの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＩＭ−８６２（Ｃｙｔｒａｎ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ＷＡ）、インターフェロン−α、ＩＬ−１２（Ｒｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪ）、およびペントサンポリスルフェ−ト（Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）。
【０５１１】
特定の実施形態において、抗脈管形成薬剤と組み合わせた本発明の抗体および抗体組成物の使用は、自己免疫疾患（例えば、本明細書中に記載の自己免疫疾患）の処置、予防、および／または回復のために企図される。
【０５１２】
特定の実施形態において、抗脈管形成薬剤と組み合わせた本発明の抗体および抗体組成物の使用は、関節炎の処置、予防、および／または回復のために企図される。さらに特定の実施形態において、抗脈管形成薬剤と組み合わせた本発明の抗体および抗体組成物の使用は、慢性関節リウマチの処置、予防、および／または回復のために企図される。
【０５１３】
別の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、抗凝固剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る抗凝固剤は、制限されないで、ヘパリン、ワルファリン、およびアスピリンを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ヘパリンおよび／またはワルファリンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ワルファリンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ワルファリンおよびアスピリンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ワルファリンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ヘパリンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、ヘパリンおよびアスピリンと組み合わせて投与される。
【０５１４】
別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗カルジオリピン抗体の産生を抑制する薬剤と組み合わせて投与される。特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、抗カルジオリピン抗体のリン脂質結合血漿タンパク質β２−糖タンパク質Ｉ（ｂ２ＧＰＩ）に結合する能力をブロックおよび／または低減する薬剤と組み合わせて投与される。
【０５１５】
特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および／またはプロテアーゼインヒビターと組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得るヌクレオシド逆転写酵素インヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＲＥＴＲＯＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ＡＺＴ）、ＶＩＤＥＸＴＭ（ジダノシン／ｄｄＩ）、ＨＩＶＩＤＴＭ（ザルシタビン／ｄｄＣ）、ＺＥＲＩＴＴＭ（スタブジン／ｄ４Ｔ）、ＥＰＩＶＩＲＴＭ（ラミブジン／３ＴＣ）、およびＣＯＭＢＩＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ラミブジン）。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＶＩＲＡＭＵＮＥＴＭ（ネビラピン）、ＲＥＳＣＲＩＰＴＯＲＴＭ（デラビルジン）、およびＳＵＳＴＩＶＡＴＭ（エファビレンズ）。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得るプロテアーゼインヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＲＩＸＩＶＡＮＴＭ（インディナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ））、ＮＯＲＶＩＲＴＭ（リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ））、ＩＮＶＩＲＡＳＥＴＭ（サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ））、およびＶＩＲＡＣＥＰＴＴＭ（ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ））。特定の実施形態において、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および／またはプロテアーゼインヒビターは、ＡＩＤＳを処置、予防、および／または診断するため、ならびに／あるいはＨＩＶ感染を予防もしくは処置、予防、および／または診断するために、本発明の抗体および抗体組成物との任意の組み合わせで使用され得る。
【０５１６】
他の実施形態では、本発明の抗体および抗体組成物は、抗日和見感染症薬剤と組み合わせて投与され得る。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る抗日和見感染症薬剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されないＴＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥＴＭ，ＤＡＰＳＯＮＥＴＭ，ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥＴＭ，ＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥＴＭ，ＩＳＯＮＩＡＺＩＤＴＭ，ＲＩＦＡＭＰＩＮＴＭ，ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥＴＭ，ＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬＴＭ，ＲＩＦＡＢＵＴＩＮＴＭ，ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭ，ＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭ，ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲＴＭ，ＦＯＳＣＡＲＮＥＴＴＭ，ＣＩＤＯＦＯＶＩＲＴＭ，ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ，ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ，ＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ，ＡＣＹＣＬＯＶＩＲＴＭ，ＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲＴＭ，ＰＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥＴＭ，ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭ，ＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭ（フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）／Ｇ−ＣＳＦ），およびＬＥＵＫＩＮＥＴＭ（サルグラモスチン（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）／ＧＭ−ＣＳＦ）。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　ｃａｒｉｎｉｉ肺炎感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＴＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥＴＭ、ＤＡＰＳＯＮＥＴＭ、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥＴＭ、および／またはＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｖｉｕｍ複合感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＩＳＯＮＩＡＺＩＤＴＭ、ＲＩＦＡＭＰＩＮＴＭ、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥＴＭ、および／またはＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＲＩＦＡＢＵＴＩＮＴＭ、ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭ、および／またはＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見サイトメガロウイルス感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲＴＭ、ＦＯＳＣＡＲＮＥＴＴＭ、および／またはＣＩＤＯＦＯＶＩＲＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見真菌感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、および／またはＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見単純ヘルペスウイルスＩ型および／またはＩＩ型感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲＴＭおよび／またはＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＰＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥＴＭおよび／またはＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭとの任意の組み合わせで使用される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、日和見細菌感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭおよび／またはＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭとの任意の組み合わせで使用される。
【０５１７】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗ウイルス薬剤との組み合わせで投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る抗ウイルス薬剤としては、アシクロビル、リバビリン、アマンタジン、およびレマンチジン（ｒｅｍａｎｔｉｄｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５１８】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗生物質と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る抗生物質としては、アモキシシリン、アミノ配糖体、β−ラクタム（グリコペプチド）、β−ラクタマーゼ、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、セファロスポリン、シプロフロキサシン、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、フルオロキノロン、マクロライド、メトロニダゾル、ペニシリン、キノロン、リファンピン、ストレプトマイシン、スルホンアミド、テトラサイクリン、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、およびバンコマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５１９】
本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得る従来の非特異的免疫抑制剤としては、ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、シクロホスファミドＩＶ、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−デオキシスペルグアリン（１５−ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、および応答Ｔ細胞の機能を抑制することによって作用する他の免疫抑制剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５２０】
特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、免疫抑制剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る免疫抑制剤調製物としては、ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥＴＭ（ＯＫＴ３）、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥＴＭ／ＮＥＯＲＡＬＴＭ／ＳＡＮＧＤＹＡＴＭ（シクロスポリン）、ＰＲＯＧＲＡＦＴＭ（タクロリムス）、ＣＥＬＬＣＥＰＴＴＭ（ミコフェノール酸塩）、アザチオプリン、グルコルチコステロイド類（ｇｌｕｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）、およびＲＡＰＡＭＵＮＥＴＭ（シロリムス）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、免疫抑制剤は、器官または骨髄の移植の拒絶を予防するために使用され得る。
【０５２１】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ステロイド治療と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と組み合わせて投与され得るステロイドとしては、経口コルチコステロイド、プレドニゾン、およびメチルプレドニゾロン（例えば、ＩＶメチルプレドニゾロン）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、プレドニゾンと組み合わせて投与される。さらなる特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、プレドニゾンおよび免疫抑制剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物ならびにプレドニゾンと共に投与され得る免疫抑制剤は、本明細書中に記載され、そしてこの免疫抑制剤としては、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびシクロホスファミドＩＶが挙げられるが、これらに限定されない。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、メチルプレドニゾロンと組み合わせて投与される。さらなる特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、メチルプレドニゾロンおよび免疫抑制剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物ならびにメチルプレドニゾロンと共に投与され得る免疫抑制剤は、本明細書中に記載され、そしてこの免疫抑制剤としては、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびシクロホスファミドＩＶが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５２２】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗マラリア剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る抗マラリア剤としては、ヒドロキシクロロキン、クロロキン、および／またはキナクリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５２３】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＮＳＡＩＤと組み合わせて投与される。
【０５２４】
非限定的な実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、以下の薬物の１、２、３、４、５、１０以上と組み合わせて投与され得る：ＮＲＤ−１０１（Ｈｏｅｃｈｓｔ　Ｍａｒｉｏｎ　Ｒｏｕｓｓｅｌ）、ジクロフェナク（Ｄｉｍｅｔｈａｉｄ）、オキサプロジンカリウム（ｏｘａｐｒｏｚｉｎ　ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）、メカセルミン（Ｃｈｉｒｏｎ）、Ｔ−６１４（Ｔｏｙａｍａ）、ペムトレキシド二ナトリウム（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ）（Ｅｌｉ　Ｌｉｌｌｙ）、アトレレウトン（ａｔｒｅｌｅｕｔｏｎ）（Ａｂｂｏｔｔ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）、エルテナック（ｅｌｔｅｎａｃ）（Ｂｙｋ　Ｇｕｌｄｅｎ）、カンパス（ｃａｍｐａｔｈ）、ＡＧＭ−１４７０（Ｔａｋｅｄａ）、ＣＤＰ−５７１（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ　Ｃｈｉｒｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＭ−１０１（ＣａｒｂｏＭｅｄ）、ＭＬ−３０００（Ｍｅｒｃｋｌｅ）、ＣＢ−２４３１（ＫＳ　Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）、ＣＢＦ−ＢＳ２（ＫＳ　Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）、ＩＬ−１Ｒａ遺伝子治療（ＩＬ−１Ｒａ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ）（Ｖａｌｅｎｔｉｓ）、ＪＴＥ−５２２（Ｊａｐａｎ　Ｔｏｂａｃｃｏ）、パクリタキセル（Ａｎｇｉｏｔｅｃｈ）、ＤＷ−１６６ＨＣ（Ｄｏｎｇ　Ｗｈａ）、ダルブフェロンメシレート（ｄａｒｂｕｆｅｌｏｎｅ　ｍｅｓｙｌａｔｅ）（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）、可溶性ＴＮＦレセプター１（ｓｙｎｅｒｇｅｎ；Ａｍｇｅｎ）、ＩＰＲ−６００１（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、トロカード（ｔｒｏｃａｄｅ）（Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ　Ｒｏｃｈｅ）、ＥＦ−５（Ｓｃｏｔｉａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＩＩＬ−２８４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＢＩＩＦ−１１４９（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、Ｌｅｕｋｏ　Ｖａｘ（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｃｓ）、ＭＫ−６６３（Ｍｅｒｃｋ）、ＳＴ−１４８２（Ｓｉｇｍａ−Ｔａｕ）、およびブチキソコートプロピオネート（ｂｕｔｉｘｏｃｏｒｔ　ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）（ＷａｒｎｅｒＬａｍｂｅｒｔ）。
【０５２５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、以下の薬物の１、２、３、４、５以上と組み合わせて投与される：メトトレキサート、スルファサラジン、アウロチオリンゴ酸ナトリウム、アウラノフィン（ａｕｒａｎｏｆｉｎ）、シクロスポリン、ペニシルアミン、アザチオプリン、抗マラリア薬（例えば、本明細書中で記載されるような）、シクロホスファミド、クロラムブシル、金、ＥＮＢＲＥＬＴＭ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、抗ＴＮＦ抗体、ＬＪＰ　３９４（Ｌａ　Ｊｏｌｌａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）およびプレドニゾロン。
【０５２６】
より好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗マラリア剤、メトトレキサート、抗ＴＮＦ抗体、ＥＮＢＲＥＬＴＭおよび／またはスルファサラジンと組み合わせて投与される。１つの実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、メトトレキサートと組み合わされて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗ＴＮＦ抗体と組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、メトトレキサートおよび抗ＴＮＦ抗体と組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、スルファサラジンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、メトトレキサート、抗ＴＮＦ抗体、およびスルファサラジンと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＥＮＢＲＥＬＴＭと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＥＮＢＲＥＬＴＭおよびメトトレキサートと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、メトトレキサートおよびスルファサラジンと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、メトトレキサートおよびスルファサラジンと組み合わせて投与される。他の実施形態において、１つ以上の抗マラリア剤は、上記の組み合わせのうちの１つと組み合わせられる。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン）、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、メトトレキサートおよびスルファサラジンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン）、スルファサラジン、抗ＴＮＦ抗体、およびメトトレキサートと組み合わせて投与される。
【０５２７】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、単独でかまたは１以上の静脈内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る静脈内免疫グロブリン調製物としては、ＧＡＭＭＡＲＴＭ、ＩＶＥＥＧＡＭＴＭ、ＳＡＮＤＯＧＬＯＢＵＬＩＮＴＭ、ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ　Ｓ／ＤＴＭおよびＧＡＭＩＭＵＮＥＴＭが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、移植治療（例えば、骨髄移植）において静脈内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。
【０５２８】
ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ４０Ｌの可溶性形態（例えば、ＡＶＲＥＮＤＴＭ）、ＣＤ４０Ｌの生物学的活性フラグメント、改変体、または誘導体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体（例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト抗体）、および／または抗ＣＤ４０抗体（例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト抗体）。
【０５２９】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、単独でかまたは抗炎症剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る抗炎症剤としては、グルココルチコイドおよび非ステロイド抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸誘導体、アリール酢酸誘導体、アリール酪酸誘導体、アリールカルボン酸、アリールプロピオン酸誘導体、ピラゾール類、ピラゾロン類、サリチル酸誘導体、チアジンカルボキサミド類、ｅ−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（ａｍｉｘｅｔｒｉｎｅ）、ベンダザック、ベンジダミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン、オキサセプロール、パラニリン（ｐａｒａｎｙｌｉｎｅ）、ペリソキサール、ピフォキシム、プロカゾン、プロキサゾール、およびテニダプが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５３０】
別の実施形態において、本発明の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る化学療法剤としては、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；抗代謝物（例えば、フルオロウラシル、５−ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンα−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、メルカプトプリン、および６−チオグアニン）；細胞傷害剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シス−プラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロールジホスフェート、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メファレン（ｍｅｐｈａｌｅｎ）、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイド類および組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）；ならびにその他（例えば、ジカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトーテン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５３１】
特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）と組み合わせて投与されるか、ＣＨＯＰの成分の任意の組み合わせで投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂと組み合わせて投与される。さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＲｉｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰと共に、またはＲｉｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰの成分の任意の組み合わせと共に投与される。
【０５３２】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得るサイトカインとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１５、抗−ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＮＦ−α、ＩＮＦ−β、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−α、およびＴＮＦ−β。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＢＬｙＳ（例えば、配列番号３２２８のアミノ酸１３４〜２８５）と共に投与される。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、以下に挙げられるが、これらに限定されない任意のインターロイキンと共に投与され得る：ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、およびＩＬ−２２。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＩＬ４およびＩＬ１０と組み合わせて投与される。
【０５３３】
１つの実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、１つ以上のケモカインと組み合わせて投与される。特定の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、以下からなる群より選択されるα（ＣｘＣ）ケモカイン：γ−インターフェロン誘導タンパク質−１０（γＩＰ−１０）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血小板第４因子（ＰＦ４）、好中球活性化因子（ＮＡＰ−２）、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γ、好中球活性化ペプチド（ＥＮＡ−７８）、顆粒球化学誘導タンパク質−２（ＧＣＰ−２）および間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１、すなわち前Ｂ細胞刺激因子（ＰＢＳＦ）（ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ））；および／または以下からなる群より選択されるβ（ＣＣ）：ＲＡＮＴＥＳ（活性化の際に調節され、正常なＴ発現され、そしてＴ分泌される）、マクロファージ炎症タンパク質−１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）、単球走化タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、単球走化タンパク質−２（ＭＣＰ−２）、単球走化タンパク質−３（ＭＣＰ−３）、単吸走化タンパク質−４（ＭＣＰ−４）、マクロファージ炎症タンパク質−１γ（ＭＩＰ−１γ）、マクロファージ炎症タンパク質−３α（ＭＩＰ−３α）、マクロファージ炎症タンパク質−３β（ＭＩＰ−３β）、マクロファージ炎症タンパク質−４（ＭＩＰ−４／ＤＣ−ＣＫ−１／ＰＡＲＣ）、エオタキシン（ｅｏｔａｘｉｎ）、ＥｘｏｄｕｓおよびＩ−３０９；および／またはγ（Ｃ）ケモカイン、リンホタクチン（ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ）と組み合わせて投与される。
【０５３４】
別の実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ケモカインβ−８、ケモカインβ−１、および／またはマクロファージ炎症性タンパク質−４と共に投与される。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ケモカインβ−８と共に投与される。
【０５３５】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、ＩＬ−４アンタゴニストと組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得るＩＬ−４アンタゴニストとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチド、可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチドの多量体形態；ＩＬ−４によって惹起される生物学的シグナルを伝達することなくＩＬ−４レセプターと結合する抗ＩＬ−４レセプター抗体、１種以上のＩＬ−４レセプターとＩＬ−４との結合をブロックする抗ＩＬ４抗体、およびＩＬ−４によって惹起される生物学的シグナルを伝達しないＩＬ−４レセプターと結合するＩＬ−４のムテイン。好ましくは、本方法に従って使用される抗体は、モノクローナル抗体（例えば、本明細書中に記載されるような抗体フラグメントを含む）である。
【０５３６】
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリぺプチド（および／またはそのアゴニストまたはアンタゴニスト）を他の提案されたかまたは従来の造血治療と組み合わせることを包含する。従って、例えば、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリぺプチド（および／またはそのアゴニストまたはアンタゴニスト）は、単独で赤血球生成刺激効果を示す化合物（例えば、エリスロポイエチン、テストステロン、前駆細胞刺激物質、インスリン様増殖因子、プロスタグランジン、セロトニン、環状ＡＭＰ、プロラクチン、およびトリヨードチロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｚｏｎｉｎｅ））と組合され得る。本発明の抗体および抗体組成物の一般的に再生不良性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、メテノロン（ｍｅｔｈｅｎｏｌｅｎｅ）、スタノゾロール、およびナンドロロン）；鉄欠乏性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、鉄調製物）；悪性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、ビタミンＢ１２および／または葉酸）；および溶血性貧血を処置するために使用される化合物（例えば、副腎皮質ステロイド類（例えば、コルチコイド））との組み合わせもまた含まれる。例えば、Ｒｅｓｅｇｏｔｔｉら，Ｐａｎｍｉｎｅｒｖａ　Ｍｅｄｉｃａ，２３：２４３−２４８（１９８１）；Ｋｕｒｔｚ，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，１４ａ：１０５−１０８（１９８２）；ＭｃＧｏｎｉｇｌｅら，Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ．，２５：４３７−４４４（１９８４）；およびＰａｖｌｏｖｉｃ−Ｋａｎｔｅｒａ，Ｅｘｐｔ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，８（補遺８）２８３−２９１（１９８０）（これらの各々の内容はその全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０５３７】
エリトロポエチンの効果を増強するか、またはエリトロポエチンと協同する化合物はまた、本明細書においてアジュバントとして有用であり、これらとしては、アドレナリン作用性アゴニスト、甲状腺ホルモン、アンドロゲン、肝エリトロポエチン因子、エリスロトロピン（ｅｒｙｔｈｒｏｔｒｏｐｉｎ）、およびエリスロゲニン（ｅｒｙｔｈｒｏｇｅｎｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｄｕｎｎ，「Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｃｏｎｃｅｐｔｓ　ｉｎ　Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ（Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９８３）；Ｋａｌｍａｎｉ，Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ．，２２：３８３−３９１（１９８２）；Ｓｈａｈｉｄｉ，Ｎｅｗ　Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２８９：７２−８０（１９７３）；Ｕｒａｂｅら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４９：１３１４−１３２５（１９７９）；Ｂｉｌｌａｔら，Ｅｘｐｔ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，１０：１３３−１４０（１９８２）；Ｎａｕｇｈｔｏｎら，Ａｃｔａ　Ｈａｅｍａｔ，６９：１７１−１７９（１９８３）；Ｃｏｇｎｏｔｅら、要約、３６４，　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　７ｔｈ　Ｉｎｔｌ．　Ｃｏｎｇ．　ｏｆ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（Ｑｕｅｂｅｃ　Ｃｉｔｙ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｊｕｌｙ　１−７，１９８４）；およびＲｏｔｈｍａｎら，１９８２，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．，２０：１０５−１０８（１９８２）を参照のこと。造血を刺激するための方法は、造血有効量の（すなわち、血球の形成をもたらす量）の、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリぺプチド（および／またはそのアゴニストもしくはアンタゴニスト）を含む薬学的組成物を患者に投与する工程を包含する。本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはポリぺプチドならびに／またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストは、任意の適切な技術（非経口、舌下、局所的、肺内および鼻腔内を含むがこれらに限定されず、これらの技術は、本明細書中でさらに議論される）により患者に投与される。この薬学的組成物は、必要に応じて、エリトロポエチン、テストステロン、前駆細胞刺激物質、インスリン様増殖因子、プロスタグランジン、セロトニン、環状ＡＭＰ、プロラクチン、トリヨードチロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｚｏｎｉｎｅ）、メテノロン（ｍｅｔｈｅｎｏｌｅｎｅ）、スタノゾロール、およびナンドロロン鉄調製物、ビタミンＢ１２、葉酸および／または副腎皮質ステロイドからなる群の１つ以上のメンバーを含む。
【０５３８】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物を造血増殖因子と組み合わせて投与する。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る造血増殖因子は、ＬＥＵＫＩＮＥＴＭ（ＳＡＲＧＲＡＭＯＳＴＩＭＴＭ）およびＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭ（ＦＩＬＧＲＡＳＴＩＭＴＭ）を含むが、これらに限定されない。
【０５３９】
さらなる実施形態において、本発明の抗体および抗体組成物は、線維芽細胞の増殖因子と組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物と共に投与され得る線維芽細胞の増殖因子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−１４およびＦＧＦ−１５。
【０５４０】
さらに、本発明の抗体および抗体組成物は、単独でか、または他の治療レジメン（放射線治療が挙げられるが、これらに限定されない）と組み合わせて投与され得る。このような組み合わせ治療は、連続的および／または同時的に施され得る。
【０５４１】
（キット）
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１以上の成分で満たした１以上の容器を含む、薬学的パックまたは薬学的キットも提供する。このような容器は、医薬品または生物学的産物の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められた形式の通知（この通知は、ヒトの投与のための製造、使用または販売の機関による認可を示す）に必要に応じて関連し得る。
【０５４２】
本発明は、上記の方法で使用され得るキットを提供する。１実施形態において、キットは、１以上の容器中に、本発明の抗体、好ましくは、精製された抗体を含む。代替の実施形態において、キットは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体フラグメントを含む。特定の実施形態において、本発明のキットは、コントロールとして、実質的に単離されたＢＬｙＳポリペプチドを含む。好ましくは、本発明のキットは、ＢＬｙＳと反応しないコントロール抗体をさらに含む。別の特定の実施形態において、本発明のキットは、ＢＬｙＳと抗体との結合を結合するための手段を含む（例えば、この抗体は、蛍光化合物、酵素の基質、放射性化合物もしくは発光性化合物のような検出可能な基質に結合体化され得るか、または第１抗体を認識する第２抗体は、検出可能な基質に結合体化され得る）。特定の実施形態において、このキットは、組換えにより産生されたＢＬｙＳまたは化学的に合成されたＢＬｙＳを含み得る。このキットで提供されるＢＬｙＳは、固体支持体に結合され得る。より詳細な実施形態において、上記のキットの検出手段は、ＢＬｙＳが結合する固体支持体を含む。このようなキットは、結合していないレポーター標識抗ヒト抗体を含み得る。この実施形態において、ＢＬｙＳと抗体との結合は、このレポーター標識抗体の結合によって検出され得る。
【０５４３】
さらなる実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含む血清をスクリーニングする際に使用するための診断キットを含む。診断キットは、ＢＬｙＳと特異的に免疫反応性である実質的に単離された抗体、およびこの抗体とＢＬｙＳとの結合を検出するための手段を含む。１実施形態において、この抗体は、固体支持体に結合される。特定の実施形態において、この抗体は、モノクローナル抗体であり得る。このキットの検出手段は、標識された第２モノクローナル抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識された競合抗原を含み得る。
【０５４４】
１つの診断構成において、試験血清を、本発明の方法によって得られる表面結合ＢＬｙＳを有する固相試薬と反応させる。ＢＬｙＳが特定の抗体と反応した後、結合していない血清成分を洗浄により除去し、レポーター標識抗ヒト抗体を添加し、結合していない抗ヒト抗体を洗浄により除去し、そしてこの固体支持体上の結合ＢＬｙＳ抗体の量に比例してレポーターが試薬と結合するように、この試薬をレポーター標識抗ヒト抗体と反応させる。代表的に、このレポーターは、適切な蛍光性基質、発光性基質、または比色（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）基質の存在下で固相をインキュベートすることによって検出される酵素である。
【０５４５】
上記アッセイでの固体表面試薬は、固体支持体材料（例えば、ポリマービーズ、ディップスティック，９６ウェルプレート、または濾過材料）にタンパク質材料を結合させるための公知の技術によって調製される。これらの結合方法は、一般に、この支持体へのタンパク質の非特異的吸着、または代表的に、遊離アミノ基を介した、固体支持体上の化学的反応基（例えば、活性化カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基）へのこのタンパク質の共有結合を含む。あるいは、ストレプトアビジンでコーティングされたプレートは、ビオチン化抗原との結合体化に使用され得る。
【０５４６】
従って、本発明は、この診断方法を実施するためのアッセイシステムまたはキットを提供する。このキットは、一般に、表面結合組換えＢＬｙＳを有する支持体、および表面結合抗ＢＬｙＳ抗体を検出するためのレポーター標識抗ヒト抗体を含む。
【０５４７】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【０５４８】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５９５、および１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有する単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【０５４９】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１５６３〜１８８０のうちの１つのアミノ酸配列を有する単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【０５５０】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１８８１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【０５５１】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜１５６２のうちの１つのアミノ酸配列を有する単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
【０５５２】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０５５３】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５９５、および１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含む。
【０５５４】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１８８１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳの膜結合形態と免疫特異的に結合する。
【０５５５】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１５６３〜１８８０のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳの可溶性形態と免疫特異的に結合する。
【０５５６】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳと免疫特異的に結合する。
【０５５７】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５９５、および１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含む。
【０５５８】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１８８１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳの膜結合形態と免疫特異的に結合する。
【０５５９】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１５６３〜１８８０のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳの可溶性形態と免疫特異的に結合する。
【０５６０】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳと免疫特異的に結合し、そして本発明はまた、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む。
【０５６１】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントを含み、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳと免疫特異的に結合し、そして本発明はまた、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含み、そしてこのＶＬドメインおよびＶＨドメインは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する同一のｓｃＦｖに由来する。
【０５６２】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を含む抗体またはそのフラグメントを包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０５６３】
特定の実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントは、免疫グロブリン分子全体である。
【０５６４】
特定の実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｆａｂフラグメントである。
【０５６５】
特定の実施形態において、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｆｖフラグメントである。
【０５６６】
特定の実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドに共有結合された、本発明の抗体またはそのフラグメントを含むキメラタンパク質を包含する。
【０５６７】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体あるいはそのフラグメントまたは改変体を含む組成物を包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む。
【０５６８】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体あるいはそのフラグメントまたは改変体を含む組成物を包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む。
【０５６９】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体あるいはそのフラグメントまたは改変体を含む組成物を包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含み、そしてここでそれぞれの型の抗体またはそのフラグメントが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＨドメインをさらに含む。
【０５７０】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体あるいはそのフラグメントまたは改変体を含む組成物を包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号３１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有する、ＶＨ　ＣＤＲ３を含む。
【０５７１】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体のパネルを包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む。
【０５７２】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体のパネルを包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む。
【０５７３】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の型の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体のパネルを包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含み、そしてここで抗体またはフラグメントの型のそれぞれが、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＨドメインをさらに含む。
【０５７４】
特定の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体のパネルを包含し、これら型のそれぞれは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてこの型の抗体またはそのフラグメントのそれぞれが、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有する、異なるｓｃＦＶ由来のＶＨ　ＣＤＲ３を含む。
【０５７５】
特定の実施形態において、本発明の抗体パネルの抗体またはそのフラグメントは、９６ウェルプレートの各ウェルに存在する。
【０５７６】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここでこの抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０５７７】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５９５、および１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０５７８】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、この抗体またはそのフラグメントは、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。
【０５７９】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１５６３〜１５６９のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、この抗体またはそのフラグメントは、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８０】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８１】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜４６、３２１〜３２９、１５６３〜１５９５、および１８８１〜１９０８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８２】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１８８１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、膜結合形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８３】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１５６３〜１８８０のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、可溶性形態のＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８４】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここでこの抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてまた、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８５】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここでこの抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合し、そしてまた、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含み、そしてここで、このＶＬドメインおよびこのＶＨドメインは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有する同じｓｃＦＶ由来である。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８６】
特定の実施形態において、本発明は、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨ　ＣＤＲ３を含む抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を包含し、ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する。本発明はまた、上記の単離された核酸分子を含むベクターを包含し、これは、上記核酸分子によってコードされる抗体またはそのフラグメントの発現を調節するヌクレオチド配列を含むベクターを含む。さらに、本発明はまた、異種プロモーターに作動可能に連結された上記核酸分子を含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）、ならびに上記ベクターを含む宿主細胞（哺乳動物宿主細胞を含む）を包含する。さらに、本発明はまた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法を提供し、これは、核酸分子が発現される条件下で上記宿主細胞を培養する工程を包含する。
【０５８７】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインのアミノ酸配列を含む。
【０５８８】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。
【０５８９】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列に高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインのアミノ酸配列を含む。
【０５９０】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列に高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。
【０５９１】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【０５９２】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列に高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【０５９３】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【０５９４】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供し、この抗体またはそのフラグメントは、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列に高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ　ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【０５９５】
特定の実施形態において、本発明は、ＢＬｙＳの異常な発現を検出するための方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する１つ以上の抗体またはそのフラグメントもしくは改変体を使用して、個体の細胞または組織サンプルにおけるＢＬｙＳ発現のレベルをアッセイする工程；および
細胞または組織サンプルにおいてアッセイされるＢＬｙＳのレベルを、ＢＬｙＳの標準レベルまたは異常なＢＬｙＳ発現を有さない個体由来の細胞または組織サンプルにおけるＢＬｙＳのレベルと比較する工程であって、ここで、ＢＬｙＳの標準的レベルと比較した、ＢＬｙＳのアッセイされたレベルまたは異常なＢＬｙＳ発現を有さない個体由来の細胞または組織におけるレベルにおける増加または減少は、異常な発現を示す、工程。
【０５９６】
特定の実施形態において、本発明は、異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を診断するための方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：
ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する、有効量の標識された抗体またはそのフラグメントを被験体に投与する工程；
ＢＬｙＳが発現される被験体の部位に、標識された抗体またはそのフラグメントが優先的に濃縮し得るように、投与に続いてある時間間隔を待つ工程；
バックグラウンドレベルを決定する工程；および
被験体中の標識された抗体またはそのフラグメントを検出する工程であって、その結果、バックグラウンドレベルより上の標識された抗体またはそのフラグメントの検出が、その被験体がＢＬｙＳの異常な発現に関連する特定の疾患または障害を有することを示す、工程。
【０５９７】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＨドメインを含む。
【０５９８】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦＶ由来のＶＬドメインを含む。
【０５９９】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を有するＶＨ　ＣＤＲ３を含む。
【０６００】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、診断剤に結合される。
【０６０１】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼである診断剤に結合される。
【０６０２】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオロセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンである診断剤に結合される。
【０６０３】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙまたは９９Ｔｃである診断剤に結合される。
【０６０４】
特定の実施形態において、すぐ上に記載された２つの方法において利用される抗体またはそのフラグメントは、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、またはエクオリンである診断剤に結合される。
【０６０５】
配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【０６０６】
配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメイン、そしてまた配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【０６０７】
配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【０６０８】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を処置、予防または回復させる方法であって、この方法は、その必要がある動物に、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメイン、そしてまた配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を、この疾患または障害を処置、予防または回復させるのに有効な量で投与する工程を包含する。この方法を使用して、感染性障害、癌、および／または自己免疫疾患（例えば、狼瘡または糸球体腎炎）を処置し得る。
【０６０９】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を処置、予防または回復させる方法であって、この方法は、その必要がある動物に、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメインを含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を、この疾患または障害を処置、予防または回復させるのに有効な量で投与する工程を包含する。この方法を使用して、感染性障害、癌、および／または自己免疫疾患（例えば、狼瘡または糸球体腎炎）を処置し得る。
【０６１０】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を処置、予防または回復させる方法であって、この方法は、その必要がある動物に、配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＬドメイン、そしてまた配列番号１〜２１２８のうちの１つのアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ由来のＶＨドメインを含む、少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を、この疾患または障害を処置、予防または回復させるのに有効な量で投与する工程を包含する。この方法を使用して、感染性障害、癌、および／または自己免疫疾患（例えば、狼瘡または糸球体腎炎）を処置し得る。
【０６１１】
異常なＢＬｙＳ発現または活性に関連する疾患または障害を処置、予防または回復させる方法であって、この方法は、その必要がある動物に、配列番号２１２９〜３２２７のうちの１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つの抗体またはそのフラグメント（ここで、この抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する）、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を、この疾患または障害を処置、予防または回復させるのに有効な量で投与する工程を包含する。この方法を使用して、感染性障害、癌、および／または自己免疫疾患（例えば、狼瘡または糸球体腎炎）を処置し得る。
【０６１２】
この方法を使用して、感染性障害、癌、および／または自己免疫疾患（例えば、狼瘡または糸球体腎炎）を処置し得る。
【０６１３】
（実施例）
（略語）
０．２Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．５ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．５Ｍスクロース（ＴＥＳ）
１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）
１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２％グルコースを補充した２ＴＹ（２ＴＹＡＧ）
１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを補充した２ＴＹ（２ＴＹＡＫ）
３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）
５０％阻害濃度（ＩＣ５０）
１８％Ｍａｒｖｅｌブロッキング溶液を含む６×ＰＢＳ（６×ＭＰＢＳ）
吸光度（Ａ）
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）
ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）
重鎖可変（ＶＨ）
ヘペス緩衝化生理食塩水（ＨＢＳ）
西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）
固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）
イソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）
軽鎖可変（ＶＬ）
感染多重度（ＭＯＩ）
Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（Ｈｅｐｅｓ）
ナノモル濃度（ｎＭ）
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）
３％Ｍａｒｖｅｌを含むＰＢＳ（ＭＰＢＳ）
リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）
リン酸緩衝化生理食塩水および０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）
ピコモル濃度（ｐＭ）
単鎖フラグメント可変（ｓｃＦｖ）
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）
腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β）
ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）
（定義：）
以下の節において、「固定化ＢＬｙＳ」とは、プラスチックアッセイプレート（例えば、９６ウェルプレート）上にコーティングされたＢＬｙＳまたはビオチン化ＢＬｙＳの可溶性形態をいうが、プラスチックアッセイプレート上にコーティングされたヒスチジンタグ化ＢＬｙＳをいわない；「ビオチン化ＢＬｙＳ」は、ＥＬＩＳＡプレートをコーティングするために使用された場合（この場合、これは「固定化ＢＬｙＳ」である）を除いて、ＢＬｙＳの可溶性形態である。ＢＬｙＳの膜結合形態としては、Ｕ９３７原形質膜およびＰ３８８原形質膜が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６１４】
（実施例１：可溶性ＢＬｙＳおよび膜結合ＢＬｙＳに免疫特異的に結合する抗体）
ファージライブラリーを、ＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するｓｃＦｖをディスプレイするファージを同定するためのアッセイにおいてスクリーニングした。固定化ＢＬｙＳに結合するｓｃＦｖをディスプレイするファージを、固定化ＢＬｙＳでのパニングおよび固定化ＢＬｙＳへの結合についてのＥＬＩＳＡによる評価の後に同定した。これらのアッセイのためにプレート上に固定されたＢＬｙＳを、Ｍｏｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２８５：２６０〜２６３（これは、その全体が本明細書によって参考として援用される）に記載されるように、バキュロウイルス発現構築物を感染させたＳｆ９細胞の上清から精製した。次いで、同定されたｓｃＦｖのそれぞれを、配列決定した。特定の配列を複数回単離し、従って、それぞれ独特の配列の１つのメンバーを含むパネル（パネル１）を作製し、さらにＢＬｙＳの可溶性形態および膜結合形態に免疫特異的に結合するそれらの能力についてさらに特徴付けた。
【０６１５】
これらのｓｃＦｖの誘導されたアミノ酸配列を上の表１に示す。ｓｃＦｖの個々のＶＨセグメントおよびＶＬセグメントを、Ｖ−ＢＡＳＥ（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ）における公知のヒト生殖系列の配列と整列させ、そして最も近い生殖系列を同定した。
【０６１６】
（実施例２：ＢＬｙＳおよび膜結合ＢＬｙＳに対するｓｃＦｖの特異性）
ＢＬｙＳと膜結合ＢＬｙＳとの両方に対するｓｃＦｖのそれぞれの特異性を、ファージＥＬＩＳＡによって決定した。ＢＬｙＳを、タンパク質の精製された可溶性形態としてまたはヒトマクロファージ様細胞株、Ｕ９３７由来の原形質膜調製物に存在する膜結合形態として、プラスチック上に固定した。
【０６１７】
（Ｕ９３７細胞の維持）
Ｕ９３７細胞は、その原形質膜上にＢＬｙＳを発現することが公知のヒト単球様組織球リンパ腫細胞株である。これらは、４ｍＭ　Ｌ−グルタミン、１０％ＦＣＳ、１０Ｕペニシリン、１００ｇ／ｍｌストレプトマイシン（全ての試薬がＳｉｇｍａ由来）を補充されたＲＰＭＩ−１６４０中で維持された。これらの細胞を凍結ストックから解凍し、そして原形質膜調製のために使用するか、または２日後（このとき、細胞密度が１×１０６／ｍｌに達する）、培養物中で１：５に分けるかのいずれかである。
【０６１８】
（Ｕ９３７原形質膜の調製）
原形質膜を調製するために、１×１０９　Ｕ９３７細胞を、ベンチトップ（ｂｅｎｃｈｔｏｐ）遠心分離器中、４℃で５分間１０００ｒｐｍでの遠心分離によって培養培地から収集した。細胞を４０ｍｌの１２ｍＭ　Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭスクロース中に再懸濁させ、そして氷上に配置した。次いで細胞を、１分間のバースト４回のために、携帯型電気ホモジナイザー（Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ　ＩＫＡ　Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）を使用して溶解させる。細胞溶解が生じたことをチェックするために、１０μｌの細胞溶解物を、１０μｌのＴｒｙｐａｎブルーに加え、そして細胞溶解物を顕微鏡下で調べた。溶解を確認した後、ホモジネートを２７０×ｇで、１０分間、４℃で遠心分離して、核画分をペレット化し、そして上清を保持した。上清を８０００×ｇで、１０分間、４℃で遠心分離して、ミトコンドリア画分およびリソソーム画分をペレット化し、そして上清を保持した。次いで、上清を１０００００×ｇで、６０分間、４℃で遠心分離して、原形質膜濃縮画分をペレット化した。上清を捨て、そして原形質膜ペレットを１ｍｌ　ＰＢＳ中に再懸濁化させ、そして−７０℃で保存した。原形質膜画分のタンパク質濃度を、タンパク質定量キット（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して決定した。代表的な収量は、５ｍｇと１０ｍｇとの間の原形質膜であった。
【０６１９】
（ファージＥＬＩＳＡ）
独特のｓｃＦｖのそれぞれの特異性を決定するために、ファージＥＬＩＳＡを、ヒトＢＬｙＳ、Ｕ９３７原形質膜、ＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）、ＢＳＡおよびコーティングされていないウェルに対するそれぞれのｓｃＦｖについて行った。パネル１由来の独特のｓｃＦｖのうちの１つを提示するファージミドを含む個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、１ウェル当たり１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含む９６ウェルプレートに播種した。プレートを振盪しながら４時間、３７℃でインキュベートした。Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージを、１０のＭＯＩまでそれぞれのウェルに加え、そしてプレートをさらに１時間、３７℃、インキュベートした。プレートをベンチトップ遠心分離器において２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、そして細胞ペレットを１００μｌの２ＴＹＡＫ中に再懸濁させ、そして振盪させながら、３０℃で一晩インキュベートした。次の日、プレートを２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、そしてそれぞれのウェル由来のファージ含有上清１００μｌを、注意深く新鮮な９６ウェルプレートに移した。２０μｌの６×ＭＰＢＳをそれぞれのウェルに加え、そしてＥＬＩＳＡの前にファージを予備的にブロックするために、室温で１時間インキュベートした。
【０６２０】
可撓性９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）を、ＰＢＳ中のヒトＢＬｙＳ（１μｇ／ｍｌ）、ＰＢＳ中のＵ９３７原形質膜（１０μｇ／ｍｌ）、ＰＢＳ中のＴＮＦα（１μｇ／ｍｌ）、ＰＢＳ中のＢＳＡ（１μｇ／ｍｌ）、またはＰＢＳとともに、４℃で一晩コーティングした。コーティング後、溶液をウェルから除き、そしてプレートをＭＰＢＳ中室温で、１時間ブロックした。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、次いで、５０μｌの予備的にブロックしたファージを各ウェルに加えた。プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで、ＰＢＳＴを３回換えて、続いてＰＢＳを３回換えて洗浄した。各ウェルに、ＭＰＢＳ中１〜５０００倍の希釈で、５０μｌの抗遺伝子ＶＩＩＩ−ＨＲＰ結合体（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を加え、そしてプレートを室温で１時間インキュベートした。各プレートを、ＰＢＳＴで３回洗浄し、続いてＰＢＳで３回洗浄した。次いで、３％ＭＰＢＳ中の１／５０で希釈した５０μｌのＨＲＰ標識抗マウスポリマー（ＤＡＫＯ　Ｅｎ　Ｖｉｓｉｏｎ）を加え、そして１時間室温でインキュベートした。次いで、各プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、続いてＰＢＳで３回洗浄した。次いで、５０μｌのＴＭＢ基質を各ウェルに加え、そして３０分間または色が発色するまで室温でインキュベートした。反応を２５μｌの０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４の添加によって停止した。生じたシグナルを、マイクロタイタープレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ３５５０）を使用して、４５０ｎｍ（Ａ４５０）での吸光度を読むことによって測定した。
【０６２１】
３つのクローン（Ｉ００６Ｅ０７、Ｉ００８Ｄ０５およびＩ０１６Ｆ０４）についての結果を、図１に示す。３つ全てのｓｃＦｖは、固定化ＢＬｙＳおよびＵ９３７原形質膜を認識するが、ＴＮＦα、ＢＳＡまたはコーティングされていないウェル（ＰＢＳのみ）を認識しない。これらの結果は、これらのｓｃＦｖが固定化ＢＬｙＳおよび膜結合ＢＬｙＳを特異的に認識することを示す。
【０６２２】
（実施例３：ファージｓｃＦｖによるインビトロレセプター結合アッセイにおける阻害）
パネル１における独特のファージｓｃＦｖの全てを、ＩＭ９細胞上のその同族のレセプターに結合する可溶性ＢＬｙＳを阻害するそれらの能力について評価した。
【０６２３】
（ＢＬｙＳのビオチン化）
１００μｇのヒトＢＬｙＳまたはマウスＢＬｙＳのいずれかを、スライド−ａ−ライザーカセット（ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒ　ｃａｓｓｅｔｔｅ）（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、５０ｍＭ重炭酸ナトリウム（炭酸水素ナトリウム）ｐＨ８．５に対して一晩透析した。次の日、ＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）を１３．３ｍｇ／ｍｌまでＤＭＳＯ中に溶解した。次いで、これを２０：１のビオチン：ＢＬｙＳのモル比でＢＬｙＳに加え、混合し、そして２時間、氷上でインキュベートした。次いで、ビオチン化ＢＬｙＳを、４℃で一晩スライド−ａ−ライザーカセットを使用して、滅菌ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）に戻して透析した。ビオチン化ＢＬｙＳの生物学的活性を、レセプター結合阻害アッセイを使用して確認した（以下を参照のこと）。
【０６２４】
（ＩＭ９細胞の維持）
ＩＭ９細胞は、ヒトＢリンパ細胞株である。これらは、４ｍＭ　Ｌ−グルタミン、１０％ＦＣＳ、１０Ｕペニシリン、１００ｇ／ｍｌストレプトマイシン（全ての試薬はＳｉｇｍａ由来）を補充したＲＰＭＩ−１６４０で維持した。細胞を凍結したストックから解凍し、そして５日後（このとき、これらは、４〜８×１０５／ｍｌの密度に達する）に、培養物中でアッセイに使用し得る。
【０６２５】
（レセプター結合阻害アッセイ）
パネル１由来の独特のｓｃＦｖのうちの１つを提示するファージミドを含む個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、１ウェル当たり１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含む９６ウェルのプレートに播種した。プレートを３７℃で４時間、振盪しながらインキュベートした。Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージを、１０のＭＯＩまでそれぞれのウェルに加え、そしてプレートをさらに１時間３７℃インキュベートした。プレートをベンチトップ遠心分離器において２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、そして細胞ペレットを１００μｌの２ＴＹＡＫ中に再懸濁させ、そして振盪しながら、３０℃で一晩インキュベートした。次の日、プレートを２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、そしてそれぞれのウェル由来のファージ含有上清１００μｌを、注意深く新鮮な９６ウェルプレートに移した。ファージを使用の前にＭＰＢＳで１／２に希釈した。
【０６２６】
平坦な底の９６ウェルのプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を、１時間室温で、１ウェル当たり１００μｌのＰＢＳ中のポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ）の１：１０希釈でコーティングした。次いで、プレートを水で２回洗浄し、空気乾燥し、そして４℃で一晩置いた。次いで、１００μｌのＩＭ９細胞（ＲＰＭＩ−１６４０培養培地中の１０６／ｍｌ）を、それぞれのウェルに加えた。次いで、プレートを３２００ｒｐｍで５分間遠心分離して細胞をペレット化した。培地を注意深く吸引し、そして２００μｌのＭＰＢＳを各ウェルに加えた。次いで、プレートを１時間室温でブロックさせた。
【０６２７】
別の９６ウェルプレートに、１０μｌのＭＰＢＳ中ビオチン化ＢＬｙＳ（１６２．５ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加して、２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度を与えた。５５μｌの各適切なファージ上清を各ウェルに添加し、そして各ウェルの最終容量は６５μｌであった。次いで、プレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０６２８】
ＩＭ９をコーティングしたプレートを、ＰＢＳ中で２回洗浄し、叩いて乾燥させ、そして即座に、５０μｌのファージ／ビオチン化ＢＬｙＳ混合物を添加し、そして室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回、およびＰＢＳで３回洗浄し、叩いて乾燥させ、そして５０μｌのストレプトアビジン−Ｄｅｌｆｉａ（Ｗａｌｌａｃ）を、各ウェルに、製造業者のアッセイ緩衝液中１：１０００の希釈で添加した。次いで、これらのプレートを室温で１時間インキュベートし、そしてＤｅｌｆｉａ洗浄溶液（Ｗａｌｌａｃ）で６回洗浄した。これらのプレートを叩いて乾燥させた後、１ウェルあたり１００μｌのＤｅｌｆｉａ強化溶液（Ｗａｌｌａｃ）を添加した。これらのプレートを穏やかに叩いて、ミセルの形成を促進し、室温で１０分間インキュベートし、そしてＷａｌｌａｃ　１４２０ワークステーションで６５２０ｍＭにおいて蛍光を読み取った。
【０６２９】
ビオチン化ＢＬｙＳの結合を阻害した３つのファージｓｃＦｖ（Ｉ００１Ｃ０９、Ｉ０１８Ｄ０７およびＩ０１６Ｈ０７）についての結果を、図２に示す。ビオチン化ＢＬｙＳの、そのレセプターに対する最大の結合（ｂｉｏ−ＢＬｙＳのみ）、ビオチン化ＢＬｙＳの非存在下でのバックグラウンドシグナル（ｂｉｏ−ＢＬｙＳなし）、および無関係な（すなわち、ＢＬｙＳを認識しない）ファージ抗体を用いた結果もまた示す。３つ全てのファージｓｃＦｖが、ビオチン化ＢＬｙＳの、ＩＭ９細胞上のそのレセプターへの結合を阻害し、これらのｓｃＦｖを、ＢＬｙＳの可溶性形態を結合するｓｃＦｖであると同定した。これらのｓｃＦｖはまた、Ｕ９３７膜に結合し、従って、これらはまた、ＢＬｙＳの膜結合形態をも結合する。
【０６３０】
パネル１からの、このアッセイにおいてファージ粒子として最も大きな阻害を示した４８個のｓｃＦｖを、さらなる研究のために選択した。これら４８個のｓｃＦｖを、表３に列挙する。
【０６３１】
【表５】
2004509615.tif 000019
（実施例４：抗ＢＬｙＳ抗体の特異性）
表３に列挙した４８個のｓｃＦｖの、ヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳに対する特異性を、ファージＥＬＩＳＡを使用して決定した。
【０６３２】
（ファージＥＬＩＳＡ）
これら４８個のｓｃＦｖの特異性を決定するために、ファージＥＬＩＳＡを、ヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳ、ならびに関連するヒト抗原および関連しないヒト抗原（Ｆａｓリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、およびＰＢＳ）のパネルに対して実施した。Ｆａｓリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦαおよびＴＮＦβ抗原を、Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮから入手した。ファージミドを含む個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、５ｍｌの２ＹＴＡＧに接種し、そして３７℃で４時間、振盪しながらインキュベートした。Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を、１０のＭＯＩまで各チューブに添加し、そして３７℃で１時間（最初の３０分間は静置して、そして後の３０分間は穏やかに振盪しながら）インキュベートした。細胞を、３，５００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってペレット化し、そして上清を廃棄した。細胞ペレットを、５ｍｌの２ＴＹＡＫに再懸濁させ、そして３０℃で一晩、振盪しながらインキュベートした。翌日、これらの細胞を３，５００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってペレット化した。ファージを含む上清（５ｍｌ）を新しいチューブに注意深く移し、１ｍｌの６ＭＰＢＳを添加し、そしてこのチューブを室温で１時間インキュベートして、ＥＬＩＳＡの前にファージを予めブロックした。
【０６３３】
全ての抗原を、１μｇ／ｍｌでコーティングした。ＥＬＩＳＡを、本質的に実施例２に記載のように実施した。これの唯一の例外は、この工程がＨＲＰ標識した抗マウスポリマーとのインキュベーションを含む場合に、マウスＢＬｙＳに結合したファージ抗体の検出を省略したことである。マウスＢＬｙＳへの結合を、実施例２の節においてと同様に、ＴＭＢを用いて検出した。
【０６３４】
４８個全てのｓｃＦｖは、固定されたヒトＢＬｙＳに対して特異的であり、そしてこれら４８個のｓｃＦｖのうちの４３個が、固定されたマウスＢＬｙＳと交差反応するが、試験された他のいずれの関連しない抗原または関連する抗原とも交差反応しない。Ｉ００８Ｃ０３、Ｉ００７Ｆ１１、Ｉ０３７Ｅ０７、Ｉ０３７Ｅ１２、およびＩ０１６Ｈ０７は、マウスＢＬｙＳを結合しなかった。２つのｓｃＦｖ（Ｉ０２２Ｄ０１およびＩ０３１Ｆ０２）についての結果を、図３に示す。これらのｓｃＦｖの両方は、ヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳを特異的に認識するが、試験された他のいずれの関連しない抗原または関連する抗原も認識しない。
【０６３５】
（実施例５：ＢＬｙＳの膜結合形態に対する特異性）
４８個のｓｃＦｖの、膜結合ＢＬｙＳに対する特異性を、実施例２に記載のファージＥＬＩＳＡによって決定した。ＢＬｙＳを、ヒトマクロファージ様細胞株（Ｕ９３７）由来の原形質膜調製物に存在する膜結合形態として、プラスチックに固定した。この細胞株は、ヒトＢＬｙＳの膜結合形態を発現することが公知である。
【０６３６】
この結合が膜結合ＢＬｙＳに特異的であることを実証するために、競合ＥＬＩＳＡを開発して、Ｕ９３７上の個々の抗体に対するＥＬＩＳＡシグナルがＢＬｙＳまたはＴＮＦαのいずれかとの予備インキュベーションによって競合され得るか否かを決定した。膜結合ＢＬｙＳをも認識する抗ＢＬｙＳ抗体は、遊離ＢＬｙＳでのシグナル減少を示すが遊離ＴＮＦαでのシグナル減少を示さないことが、予測される。
【０６３７】
（競合ＥＬＩＳＡ）
表３に列挙した４８個のｓｃＦｖの各々に対するファージミドを含む個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、５ｍｌの２ＹＴＡＧに接種し、そして３７℃で４時間、振盪しながらインキュベートした。Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を、１０のＭＯＩまで各チューブに添加し、そして３７℃で１時間（最初の３０分間は静置して、そして後の３０分間は穏やかに振盪しながら）インキュベートした。細胞を、３，５００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってペレット化し、そして上清を廃棄した。細胞ペレットを、５ｍｌの２ＴＹＡＫに再懸濁させ、そして３０℃で一晩、振盪しながらインキュベートした。翌日、これらの細胞を３，５００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってペレット化した。ファージを含む上清（５ｍｌ）を新しいチューブに注意深く移した。
【０６３８】
表３に列挙した４８個のｓｃＦｖの各々に対して、２アリコートの２０μｌ　６×ＭＰＢＳを、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）の別個のウェルにピペットで入れた。第１のアリコートに、０．５μｇ／ｍｌの最終濃度までＢＬｙＳを補充した。第２のアリコートに、０．５μｇ／ｍｌの最終濃度までＴＮＦ−αを補充した。各実験を、三連で実施した。次いで、１００μｌの各ファージ上清を各アリコートに添加し、そして上下にピペッティングして混合した。これらのファージ（±競合抗原）を、室温で１時間インキュベートした。
【０６３９】
可撓性の９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）を、５０μｌの１０μｇ／ｍｌ　Ｕ９３７原形質膜で４℃で一晩コーティングした。コーティングの後に、これらのプレートをＰＢＳで３回洗浄し、そして２００μｌのＭＰＢＳで室温で１時間ブロックした。これらのプレートをＰＢＳで３回洗浄し、そして５０μｌのファージ（±競合抗原）を各適切なウェルに添加した。これらのプレートを室温で１時間インキュベートし、次いでＰＢＳＴを３回交換して洗浄し、続いてＰＢＳを３回交換して洗浄した。各ウェルに、ＭＰＢＳ中１：５０００に希釈した５０μｌのマウス抗遺伝子ＶＩＩＩ−ＨＲＰ結合体（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を添加し、そしてこれらのプレートを室温で１時間インキュベートした。各プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、続いてＰＢＳで３回洗浄した。次いで、３％ＭＰＢＳ中１：５０に希釈した５０μｌのＨＲＰ標識した抗マウスポリマー（ＤＡＫＯ　Ｅｎ　Ｖｉｓｉｏｎ）を添加し、そして室温で１時間インキュベートした。次いで、各プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、続いてＰＢＳで３回洗浄した。次いで、５０μｌのＴＭＢ基質を各ウェルに添加し、そして室温で３０〜６０分間、または色が発生するまで、インキュベートした。２５μｌの０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４を添加することによって、この反応を停止させた。発生したシグナルを、マイクロタイタープレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　３５５０）を使用して４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ４５０）を読み取ることによって、測定した。
【０６４０】
４８個全てのｓｃＦｖが、Ｕ９３７原形質膜調製物に結合する。このシグナルは、ＢＬｙＳとのファージ抗体の予備インキュベーションによって競合され得るが、ＴＮｆ−αとの予備インキュベーションによっては競合されない。このことは、４８個のｓｃＦｖが、膜結合ＢＬｙＳおよび可溶性ＢＬｙＳを特異的に認識することを示す。代表的な結果は、ｓｃＦｖ　Ｉ０３１Ｆ０９、Ｉ０５０Ａ１２およびＩ０５１Ｃ０４によって例示され、そして図４に示される。３つ全てのｓｃＦｖは、Ｕ９３７原形質膜への結合を示す。この結合は、ＢＬｙＳと特異的に競合したが、ＴＮＦ−αとは競合せず、このことは、膜結合ＢＬｙＳの特異的認識を実証する。
【０６４１】
（実施例６：ｓｃＦｖオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）の決定）
全てのオフ速度の決定を、ＢＩＡｃｏｒｅ　２０００マシンで、ＢＩＡｃｏｒｅ　２０００　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して実施し、そしてＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　３．０ソフトウェアを使用して評価した。
【０６４２】
（低密度ＢＬｙＳ表面の調製）
５００ＲＵ表面を、精製したｓｃＦｖを用いる速度論的研究のために調製した。低密度ＢＬｙＳ表面（５００　ＲＵ　ＢＬｙＳ結合）を、フローセル２において、アミンをＣＭ５チップに結合させることによって、調製した。新たなＣＭ５チップを、ＢＩＡｃｏｒｅに挿入し、そしてセンサグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）を、５μｌ／分の低速でＨＢＳ緩衝液を用いて開始した。ＮＨＳカップリング溶液およびＥＤＣカップリング溶液（ＢＩＡｃｏｒｅ）を、製造業者の指示に従って混合し、そして３０μｌを、ＣＭ５表面の上に注射した。次いで、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）中１μｇ／ｍｌのＢＬｙＳを５０μｌ注射し、続いて３０μｌのエタノールアミン−ＨＣｌ溶液（ＢＩＡｃｏｒｅ）を注射した。次いで、流速を２０μｌ／分に調整し、そして１０μｌのＨＢＳ中４Ｍのグアニジン塩酸塩を、表面の上に注射した。この操作は、共有結合していないＢＬｙＳの表面を剥離させる。
【０６４３】
（低密度表面におけるｓｃＦｖのオフ速度の速度論の測定）
低密度のＢＬｙＳ表面を含むチップを、ＢＩＡｃｏｒｅに挿入した。精製したｓｃＦｖの希釈系列物を、ＨＢＳ中に、代表的に５０μｇ／ｍｌから二倍の希釈で１．５μｇ／ｍｌまで調製した。次いで、この希釈系列物を、以下のプログラムを使用して、低密度ＢＬｙＳ表面（およびブランクコントロール）の上に連続的に注射した：
【０６４４】
【表６】
2004509615.tif 000020
結合したｓｃＦｖを、１０μｌのＨＢＳ中４Ｍ のＧｕＨＣｌをｓｃＦｖサンプル間の表面の上に注射することによって、除去した。
【０６４５】
個々のｓｃＦｖに対する結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析し、抗体オフ速度を決定した。代表的なｓｃＦｖ抗体であるＩ００３Ｃ０２についての速度論的分析を、図５に示す。Ｉ００３Ｃ０２は、６×１０−３Ｓ−１のＫｏｆｆを有する。
【０６４６】
（実施例７：インビトロレセプター結合アッセイにおけるｓｃＦｖ抗体による阻害）
表３に列挙した４８個のｓｃＦｖを精製し、そしてＢＬｙＳの、ＩＭ９細胞上のそのレセプターへの結合を、ｓｃＦｖが阻害する能力を評価した。
【０６４７】
（ｓｃＦｖの精製）
抗ＢＬｙＳ　ｓｃＦｖの阻害の強さを決定するために、ｓｃＦｖを、まずＩＭＡＣによって調製した。２ＴＹＡＧ（５ｍｌ）を単一のコロニーに接種し、そして３０℃で一晩、振盪しながら増殖させた。次いで、この一晩の培養物を使用して、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび０．１％のグルコースを含む５００ｍｌの２ＴＹを接種し、そして３０℃で振盪しながら、１．０のＡ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧを１ｍＭまで添加し、そしてこの培養物を、３０℃でさらに３．５時間増殖させた。
【０６４８】
細胞を、５，０００ｒｐｍでの遠心分離によって収集し、そして１０ｍｌのＴＥＳに再懸濁させた。さらに１５ｍＬのＴＥＳの１：５希釈物（水中）を添加し、そしてこの細胞懸濁物を、回転ホイールで４℃で３０分間インキュベートした。これにより、浸透圧ショックが引き起こされ、そしてｓｃＦｖを含むペリプラズム抽出物が得られた。残りの細胞および破片を、９，０００ｒｐｍでの４℃、２０分間の遠心分離によってペレット化した。その上清を新たなチューブに移し、そして５０μｌの１Ｍ　ＭｇＣｌ２を添加した。次いで、２ｍｌのＮｉ−ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）（緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ８）、３００ｍＭ　ＮａＣｌ）で予め洗浄した）を、プロテアーゼインヒビター錠剤（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）と共に、このペリプラズム抽出物に添加した。この調製物を、回転させながら４℃で一晩インキュベートした。Ｎｉ−ＮＴＡを、２，０００ｒｐｍで５分間の遠心分離によってペレット化し、そしてその上清を吸引した。アガロースビーズを５０ｍｌの洗浄緩衝液で３回洗浄し、遠心分離して、各洗浄の間にアガロースを収集した。１０ｍｌの洗浄緩衝液を、最後の洗浄の後に添加し、そしてこのスラリーを、ポリプレップ（ｐｏｌｙｐｒｅｐ）カラム（ＢｉｏＲａｄ）に充填した。２ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭ　ＮａＰｉ（リン酸ナトリウム）（ｐＨ８）、３００ｍＭ 　ＮａＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール）を、この排出されたアガロースに添加し、そして溶出液を収集した。ＩＭＡＣにより精製したｓｃＦｖを、製造業者の指示に従ってＮａｐ５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用して、ＰＢＳ中に緩衝液交換した。Ａ２８０を読み取り、そしてタンパク質濃度を、１ｍｇ／ｍｌタンパク質＝Ａ２８０１．４のモル吸光係数を使用して決定した。精製したｓｃＦｖを、−７０℃で５００μｌのアリコートで貯蔵した。
【０６４９】
（レセプター結合阻害アッセイ）
平底の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を、１ウェルあたり１００μｌのポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ）のＰＢＳ中１：１０希釈物で、室温で１時間コーティングした。次いで、これらのプレートを水で２回洗浄し、風乾し、そして４℃で一晩静置した。次いで、１００ｍｌのＩＭ９細胞（ＲＰＭＩ−１６４０中１０６／ｍｌ）を各ウェルに添加した。次いで、プレートを３２００ｒｐｍで５分間遠心分離して、これらの細胞をペレット化させた。培地を注意深く吸引し、そして２００μｌのＭＰＢＳを各ウェルに添加した。次いで、これらのプレートを静置して、室温で１時間ブロックした。
【０６５０】
別の９６ウェルプレートに、ＭＰＢＳ中の滴定試験用ｓｃＦｖを、三連で、１０μｇ／ｍｌ〜０．００１μｇ／ｍｌの濃度範囲にわたって添加した。各ウェルにおける試験ｓｃＦｖの最終容量は、５５μｌであった。標識されていないＢＬｙＳとの競合もまた、アッセイごとにコントロールとして含めた。ＭＰＢＳ中の標識されていないＢＬｙＳを、代表的に、１μｇ／ｍｌ〜０．００１μｇ／ｍｌの濃度範囲にわたって三連で滴定した。１０μｌのＭＰＢＳ中のビオチン化ＢＬｙＳ（１６２．５ｎｇ／ｍｌにおいて）を各ウェルに添加して、２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度を与えた。次いで、プレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０６５１】
ＩＭ９でコーティングしたプレートを、ＰＢＳで２回洗浄し、叩いて乾燥させ、そして即座に、５０μｌのｓｃＦｖ／ビオチン化ＢＬｙＳ混合物を添加し、そして室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、そしてＰＢＳで３回洗浄し、叩いて乾燥させ、そして１ウェルあたり５０μｌのストレプトアビジン−Ｄｅｌｆｉａ（Ｗａｌｌａｃ）（製造業者のアッセイ緩衝液中１：１０００の希釈）を添加した。次いで、これらのプレートを室温で１時間インキュベートし、そしてＤｅｌｆｉａ洗浄溶液（Ｗａｌｌａｃ）で６回洗浄した。これらのプレートを叩いて乾燥させた後、１ウェルあたり１００μｌのＤｅｌｆｉａ強化溶液（Ｗａｌｌａｃ）を添加した。これらのプレートを穏やかに叩いて、ミセルの形成を促進し、室温で１０分間インキュベートし、そしてＷａｌｌａｃ　１４２０ワークステーションで６５２０ｍＭにおいて蛍光を読み取った。
【０６５２】
２つのｓｃＦｖ抗体（Ｉ００７Ｆ１１およびＩ０５０Ａ０７）に対する代表的な滴定曲線を、図６に示す。標識されていないＢＬｙＳは、そのレセプターへの結合に関して、０．８ｎＭのＩＣ５０値で競合した。Ｉ００７Ｆ１１およびＩ０５０Ａ０７に対するＩＣ５０値は、それぞれ７．９ｎＭおよび１７．１ｎＭである。このアッセイを三連で実施し、そして標準誤差バーを示す。ｓｃＦｖとして最大の阻害を示した９個のｓｃＦｖを、表４に列挙する。このデータはまた、これら９つのｓｃＦｖが、ＢＬｙＳの可溶性形態を認識することを確認する。
【０６５３】
【表７】
2004509615.tif 000021
（実施例８：ＢＬｙＳの可溶性形態を認識する抗体）
ファージのライブラリーをアッセイにおいてスクリーニングして、可溶性形態のＢＬｙＳには免疫特異的に結合するが膜結合形態のＢＬｙＳには免疫特異的に結合しないｓｃＦｖを提示するファージを同定した。
【０６５４】
ファージライブラリーを、ビオチン化ＢＬｙＳに結合する能力についてスクリーニングした。これらのファージをビオチン化ＢＬｙＳに曝露して、ある間隔の時間、ビオチン化ＢＬｙＳを結合させた。次いで、ファージに結合するｂｉｏ−ＢＬｙＳを、ストレプトアビジンでコーティングした磁気ビーズ上での捕捉によって単離した。
【０６５５】
次いで、上記スクリーニングにおいて同定されたファージ（溶液からのＢｉｏ−ＢＬｙＳの捕捉）を、これらが固定されたＢＬｙＳを結合する能力について、ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。次いで、固定されたＢＬｙＳを結合する、ファージによって発現されるｓｃＦｖをクローニングし、そして配列決定した。再度、いくつかの配列を複数回同定し、このようにして、次いで、独自のｓｃＦｖを発現する各ファージの例からなるパネル（パネル２）を、さらに特徴付けた。
【０６５６】
これらのｓｃＦｖの誘導されたアミノ酸配列を、上記表１に示す。ｓｃＦｖの個々のＶＨおよびＶＬセグメントを、Ｖ−ＢＡＳＥ（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ）において既知のヒト生殖細胞系列の配列と整列させ、そして最も近い生殖細胞系列を同定した。
【０６５７】
（実施例９：可溶性ＢＬｙＳに対する特異性）
ｓｃＦｖを、ファージのライブラリーから、ｓｃＦｖが可溶性形態のＢＬｙＳを結合する能力に基づいて単離した。簡単に言えば、ファージをビオチン化ＢＬｙＳと共に溶液中で予備インキュベートした。次いで、このビオチン化ＢＬｙＳに結合したファージを、ストレプトアビジンでコーティングした磁気ビーズを使用して単離した。
【０６５８】
ＢＬｙＳおよび膜結合形態のＢＬｙＳに対して独自のｓｃＦｖの各々の特異性を、ファージＥＬＩＳＡによって決定した。ＢＬｙＳを、精製した可溶性形態のタンパク質としてか、またはヒトマクロファージ様細胞株（Ｕ９３７）由来の原形質膜調製物に存在する膜結合形態として、プラスチックに固定した。Ｕ９３７細胞および原形質膜調製物の維持を、実施例２に詳述されるように実施した。
【０６５９】
（ファージＥＬＩＳＡ）
ｓｃＦｖの各々の特異性を決定するために、ファージＥＬＩＳＡを、ヒトＢＬｙＳ、Ｕ９３７原形質膜、ＴＮＦα、ＢＳＡおよびコートされていないウェルに対する各抗体について実施した。抗原コーティング条件は、ヒトＢＬｙＳを除いて実施例２において記載されたものである。ＢＬｙＳを、最初にビオチン化し（実施例３に記載のように）、そしてストレプトアビジンコーティングしたプレート（Ｒｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ，Ｐｉｅｒｃｅ）に、１μｇ／ｍｌで室温で３０分間コーティングした。次いで、これらのプレートを洗浄し、ブロックし、そしてファージＥＬＩＳＡを、実施例２に詳述するように実施した。
【０６６０】
ＢＬｙＳの可溶性形態を結合するが膜結合形態を結合しない、３つのクローン（Ｉ０７４Ｂ１２、Ｉ０７５Ｆ１２およびＩ０７５Ａ０２）についての結果を、図７に示す。コントロールとして、ＴＮＦαを認識するファージ抗体もまた、図７に示される。小さな非特異的バックグラウンドシグナルが、Ｕ９３７原形質膜上に存在し、これは、抗ＢＬｙＳ　ｓｃＦｖと抗ＴＮＦαコントロールとの両方において明らかである。３つ全ての抗ＢＬｙＳ　ｓｃＦｖは、ＢＬｙＳを認識するが、Ｕ９３７原形質膜、ＴＮＦα、ＢＳＡまたはコーティングされていないウェル（ＰＢＳのみ）を認識しない。このことは、ｓｃＦｖが、ＢＬｙＳの膜結合形態を結合しないことを示す。さらに、これらのｓｃＦｖが、可溶性のビオチン化ＢＬｙＳを結合するそれらの能力に基づいて単離されたという事実は、ｓｃＦｖが可溶性形態のＢＬｙＳを結合することを示す。これらのｓｃＦｖのＢＬｙＳに対する特異性のさらなる確認を、実施例１０に提供する。
【０６６１】
（実施例１０：インビトロレセプター結合アッセイにおけるファージｓｃＦｖによる阻害）
パネル２由来の独自のファージｓｃＦｖの全てを、ＢＬｙＳがＩＭ９細胞上のその同種のレセプターに結合することを阻害するこれらの能力について評価した。ＢＬｙＳのビオチン化、ＩＭ９細胞の維持およびレセプター結合阻害アッセイを、実施例３に記載のように実施した。
【０６６２】
２つのファージｓｃＦｖ（Ｉ００２５Ｂ０９およびＩ０２６Ｃ０４）についての結果を、図８に示す。ビオチン化ＢＬｙＳの、そのレセプターに対する最大の結合（ｂｉｏ−ＢＬｙＳのみ）、ビオチン化ＢＬｙＳの非存在下でのバックグラウンドシグナル（ｂｉｏ−ＢＬｙＳなし）、および関連しない（すなわち、ＢＬｙＳを認識しない）ファージ抗体を用いた結果もまた示す。両方のファージｓｃＦｖが、ビオチン化ＢＬｙＳがＩＭ９細胞上のそのレセプターに結合することを阻害した。パネル２由来の独自のｓｃＦｖのうちの３３個を、さらなる研究のために同定した。これら３３個のｓｃＦｖは、このアッセイにおいて、ファージ粒子として最大の阻害を示し、そして表５に列挙される。
【０６６３】
【表８】
2004509615.tif 000022
（実施例１１：抗ＢＬｙＳ　ｓｃＦｖの特異性）
３３個のｓｃＦｖ（表５に列挙される）の、固定されたヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳに対する特異性を、ファージＥＬＩＳＡを使用して決定した。
【０６６４】
（ファージＥＬＩＳＡ）
これら３３個のｓｃＦｖの特異性を決定するために、ファージＥＬＩＳＡを、実施例４に記載されるように、ヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳ、ならびに関連するヒト抗原のパネル（ＴＲＡＩＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）およびコーティングされていないウェル（ＰＢＳのみ）に対して実施した。
【０６６５】
２つのｓｃＦｖ（Ｉ０６７Ｆ０５およびＩ０７８Ｄ０２）についての代表的な結果を、図９に示す。ＴＮＦαを特異的に認識するコントロール抗体もまた示す。両方の抗ＢＬｙＳ　ｓｃＦｖは、固定されたヒトＢＬｙＳおよびマウスＢＬｙＳを特異的に認識するが、試験した他のいずれの抗原をも認識しない。
【０６６６】
３３個全てのｓｃＦｖは、ヒトＢＬｙＳに対して特異的である。１４／３３が、マウスＢＬｙＳと交差反応するが、試験された他のいずれの関連していないかまたは関連する抗原とも、交差反応しない。
【０６６７】
（実施例１２：ｓｃＦｖオフ速度の決定）
オフ速度の決定、低密度ＢＬｙＳ表面の調製および速度論的測定を、実施例６に詳述のように行った。
【０６６８】
個々のｓｃＦｖに対する結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析し、抗体オフ速度を決定した。代表的なｓｃＦｖ抗体であるＩ００２Ａ０１についての速度論的分析を、図１０に示す。Ｉ００２Ａ０１は、９×１０−４Ｓ−１のＫｏｆｆを有する。
【０６６９】
（実施例１３：インビトロレセプター結合アッセイにおけるｓｃＦｖ抗体による阻害）
表５に特定した３３個のｓｃＦｖを、精製したｓｃＦｖとして調製し、そしてＢＬｙＳの、ＩＭ９細胞上のそのレセプターへの結合を、ｓｃＦｖが阻害する能力について評価した。ｓｃＦｖを精製し、そして実施例６．１．８に記載のように、レセプター結合阻害アッセイにおいて分析した。
【０６７０】
２つのｓｃＦｖ抗体（Ｉ００６８Ｃ０６およびＩ０７４Ｂ１２）に対する代表的な滴定曲線を、図１１に示す。標識されていないＢＬｙＳは、そのレセプターへの結合に関して、０．６６ｎＭの阻害定数５０（ＩＣ５０）値で競合した。Ｉ００６８Ｃ０６およびＩ０７４Ｂ１２についてのＩＣ５０値は、それぞれ６１ｎＭおよび１３ｎＭである。このアッセイを三連で実施し、そして標準誤差バーを示す。ｓｃＦｖとして最大の阻害を示した７個のｓｃＦｖを、表６に列挙する。
【０６７１】
【表９】
2004509615.tif 000023
（実施例１４：膜結合ＢＬｙＳを認識するｓｃＦｖ）
ファージのライブラリーを、アッセイにおいてスクリーニングして、ＢＬｙＳの膜結合形態に免疫特異的に結合するが可溶性形態には免疫特異的に結合しないｓｃＦｖを提示するファージを同定した。
【０６７２】
出発点として、ｓｃＦｖ抗体を発現するファージのライブラリーを、固定したＨｉｓタグ化ＢＬｙＳにパニングした。次いで、パニングによって単離したファージを、ＨＩＳタグ化ＢＬｙＳに結合する能力についてスクリーニングした。ＨＩＳタグ化ＢＬｙＳを、ｐＱＥ９ベクター（Ｑｉａｇｅｎ　Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）をＥ．ｃｏｌｉにおいて使用して、配列番号３２２８のアミノ酸７１〜２８５を発現させ、そしてこの発現されたタンパク質を精製することによって得た。次いで、このスクリーニングによって同定されたこのファージクローンを配列決定した。配列決定の後に、ＨＩＳタグ化ＢＬｙＳを結合する独自のｓｃＦｖを各々が発現するファージのパネル（パネル３）を作製し、そしてさらに特徴付けた。
【０６７３】
パネル３由来の独自のｓｃＦｖの誘導されたアミノ酸配列を、上記表１に示す。ｓｃＦｖの個々のＶＨおよびＶＬセグメントを、Ｖ−ＢＡＳＥ（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ）において既知のヒト生殖細胞系列配列と整列させ、そして最も近い生殖細胞系列を同定した。
【０６７４】
（実施例１５：膜結合ＢＬｙＳの認識）
膜結合形態のＢＬｙＳと可溶性形態のＢＬｙＳとの両方に対する独自のｓｃＦｖの各々の特異性を、ファージＥＬＩＳＡによって決定した。
【０６７５】
ＢＬｙＳを、精製した可溶性形態のタンパク質としてプラスチック上に直接的にか、または実施例９においてと同様に、ビオチン化してストレプトアビジンプレート上にコーティングしたかのいずれかで、固定した。ＨＩＳタグ化ＢＬｙＳへの結合を、膜結合形態のＢＬｙＳを結合するｓｃＦｖに対する一次スクリーニングとして使用した（以下を参照のこと）。膜結合形態のＢＬｙＳを、原形質膜調製物として、ヒトマクロファージ様細胞株、Ｕ９３７、またはマウス細胞株Ｐ３８８から提供した。
【０６７６】
マウスモノクローナル抗体を、標準的な手順に従って、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳに対して惹起させた。これらのマウスモノクローナル抗体の特徴付けは、これらの抗体が、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳとＵ９３７細胞上の膜結合形態のＢＬｙＳとの両方を特異的に認識するが、可溶性ＢＬｙＳを認識しないことを明らかにした。従って、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳの特異的認識を、ファージおよびｓｃＦｖ抗体による膜結合形態のＢＬｙＳの認識に対する支持的な証拠として使用した。
【０６７７】
（ファージＥＬＩＳＡ）
ｓｃＦｖの各々の特異性を決定するために、ファージＥＬＩＳＡを、Ｈｉｓタグ化ヒトＢＬｙＳ、Ｕ９３７原形質膜、ＴＮＦα、ＢＳＡおよびコーティングされていないウェルに対する各抗体について実施した。抗原のコーティング条件は、ヒトＢＬｙＳを除いて、２に記載の通りであった。ＢＬｙＳを、最初にビオチン化し（実施例３に記載のように）、そしてストレプトアビジンコーティングしたプレート（Ｒｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ，Ｐｉｅｒｃｅ）に、１μｇ／ｍｌで室温で３０分間コーティングした。次いで、これらのプレートを洗浄し、ブロックし、そしてファージＥＬＩＳＡを、実施例２に詳述するように実施した。
【０６７８】
ＴＮＦαを認識する３つのクローン（Ｉ０７９Ｃ０１、Ｉ０８１Ｃ１０およびＩ０８２Ａ０２）ならびにコントロールファージ抗体についての結果を、図１２に示す。３つ全てのｓｃＦｖは、Ｕ９３７原形質膜（Ｕ９３７）およびＨｉｓタグ化ＢＬｙＳ（Ｈｉｓ−ＢＬｙＳ）を認識するが、ビオチン化ＢＬｙＳ（ｂｉｏ−ＢＬｙＳ）またはコーティングされていないウェル（ＰＢＳ）を認識しない。このことは、ｓｃＦｖが、膜結合形態のＢＬｙＳを認識することを示す。
【０６７９】
（実施例１６：膜結合ＢＬｙＳに対する特異性）
膜結合形態のＢＬｙＳのみに対するｓｃＦｖの特異性（可溶性形態に対しては特異的でない）を、競合ＥＬＩＳＡを使用して確認した。このアッセイは、試験ファージｓｃＦｖが、異なる形態の競合ＢＬｙＳの存在下で、Ｕ９３７原形質膜上の膜結合形態のＢＬｙＳに結合する能力を評価する。競合ＢＬｙＳは、Ｈｉｓタグ化形態のＢＬｙＳまたは可溶性ＢＬｙＳのいずれかであった。膜結合ＢＬｙＳに対して特異的なｓｃＦｖは、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳとの予備インキュベーションによって競合されるが、可溶性ＢＬｙＳとの予備インキュベーションによっては競合されないと予測される。
【０６８０】
Ｕ９３７細胞の維持および原形質膜の調製を、実施例２に詳述したように実施した。
【０６８１】
（競合ＥＬＩＳＡ）
Ｕ９３７原形質膜（１ウェルあたり５０μｌ）を、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌで、Ｆａｌｃｏｎ９６ウェルプレートに、４℃で一晩コーティングした。
【０６８２】
パネル３由来の独自のｓｃＦｖのうちの１つを提示するファージミドを含む、個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、５ｍｌの２ＴＹＡＧ培地を含む５０ｍｌチューブ（Ｆａｌｃｏｎ）内に接種した。チューブを３７℃で４時間、振盪しながらインキュベートした。Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージを、１０のＭＯＩまで各チューブに添加し、そしてこれらのチューブを、３７℃でさらに１時間インキュベートした。これらのチューブを卓上用遠心機で３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除去し、そして細胞ペレットを５ｍｌの２ＴＹＡＫ中に再懸濁させ、そして３０℃で一晩、振盪しながらインキュベートした。翌日、チューブを３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、そしてファージを含む上清を、新しいチューブに注意深く移した。
【０６８３】
各試験ファージ抗体について、２０μｌの１８％マーベル（ｍａｒｖｅｌ）／６×ＰＢＳの３つのアリコートを、９６ウェルプレートの別個のウェルに移した。第１のアリコートに、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳを、６０μｇ／ｍｌの最終濃度まで補充した。第２のアリコートに、可溶性ＢＬｙＳを、６０μｇ／ｍｌの最終濃度まで補充した。第３のアリコートには、いかなる競合抗原をも補充しなかった。次いで、１００μｌのファージ上清を各アリコートに添加し、そして室温で１時間静置して、ブロックした。
【０６８４】
抗原でコーティングしたプレートを、ＰＢＳで１回洗浄し、その後、２００μｌ／ウェルの３％マーベル／ＰＢＳを添加した。これらのプレートを３７℃で１時間静置してブロックし、次いで、ＰＢＳで１回洗浄した。５０μｌの予めブロックしたファージ（上記）の二連のサンプルを、これらの抗原でコーティングしたプレートに添加し、そして室温で１時間静置した。プレートを、ＰＢＳ／０．１％　Ｔｗｅｅｎ　２０で３回洗浄し、次いでＰＢＳで３回洗浄した。３％　Ｍａｒｖｅｌ／ＰＢＳ中１／５０００の、５０μｌ／ウェルのマウス抗Ｍ１３　ＨＲＰ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を添加し、そして室温で１時間静置した。プレートを、ＰＢＳ／０．１％　Ｔｗｅｅｎ　２０で３回洗浄し、次いでＰＢＳで３回洗浄した。３％マーベル／ＰＢＳ中１／５０の、５０μｌ／ウェルのＨＲＰ標識した抗マウスＥｎｖｉｓｉｏｎポリマー（ＤＡＫＯ）を添加し、そして室温で１時間静置した。プレートをＰＢＳ／０．１％　Ｔｗｅｅｎ　２０で３回洗浄し、次いでＰＢＳで３回洗浄した。次に、５０μｌ／ウェルのＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）を添加し、そしてプレートを３０〜６０分間静置して発生させた。十分な色が発生されたら、２５μｌ／ウェルの０．５Ｍ　Ｈ２ＳＯ４を添加して、反応を停止させた。これらのプレートを、４５０ｎｍで、マイクロタイタープレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　３５５０）で読み取った。
【０６８５】
ＴＮＦαを認識する３つのクローン（Ｉ０７９Ｂ０４、Ｉ０７９Ｆ０８およびＩ０８０Ｂ０１）、ならびにコントロールファージ抗体についての結果を、図１３に示す。３つ全てのｓｃＦｖが、Ｕ９３７原形質膜（Ｕ９３７）を認識する。この結合は、Ｈｉｓタグ化ＢＬｙＳ（ＨＩＳ−ＢＬｙＳ）の存在下ではバックグラウンドレベルまで競合される（すなわち、抗ＴＮＦαファージ抗体を用いて観察されるシグナルに匹敵する）が、ビオチン化ＢＬｙＳ（ｂｉｏ−ＢＬｙＳ）の存在下では、競合されない。このことは、ｓｃＦｖが、ＢＬｙＳの膜結合形態を特異的に認識するが、可溶性形態を特異的に認識しないことを確認する。
【０６８６】
（実施例１７：高親和性ｓｃＦｖを同定するための高スループットＢＩＡｃｏｒｅスクリーニング）
これは、試験サンプル（ｓｃＦｖ）が、個々の抗体発現クローンの１ｍｌのペリプラズム抽出物に由来する、９６ウェルのスクリーニングである。次いで、潜在的により高い親和性のｓｃＦｖが、ＢＩＡｃｏｒｅにおいてＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面に結合するＲＵのより大きな総数を与えるものとして、主として同定される。このランキングの方法は、各クローンからのおおよそ等収量のｓｃＦｖを仮定する。このことは常にそうであるわけではないので、高レベルのｓｃＦｖを単に発現するいくらかのｓｃＦｖもまた同定され得る。これらは、ｓｃＦｖのさらなる特徴付けによって、より高親和性のものと区別され得る（実施例１８を参照のこと）。
【０６８７】
（１ｍｌのＥ．ｃｏｌｉ培養物からのｓｃＦｖの調製）
パネル３由来の独自のｓｃＦｖの１つを提示するファージミドを含む、個々のＥ．ｃｏｌｉコロニーを、１ウェルあたり１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含む９６ウェルプレートに接種した。各プレートにおける８つのウェルを、陽性コントロールサンプルおよび陰性コントロールサンプルのために保存した。このプレートを、３０℃で１２０ｒｐｍで振盪しながら一晩増殖させた。
【０６８８】
翌日、１ｍｌの２ＴＹＡＧおよび３４５ｍＭ　スクロースを、オートクレーブした９６ディープウェルプレート（Ｂｅｃｋｍａｎ）の各ウェルに添加した。２０μｌの各一晩培養物を再懸濁し、そしてディープウェルプレートの適切なウェルに移した。このプレートを、２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃にて約３．５時間（またはＯＤ６００＝０．６まで）増殖させた。５０μｌの１Ｍ　ＩＰＴＧを５ｍｌ　２ＴＹに添加し、そしてこの１０μｌを各ウェルに添加した。このプレートを、２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃にて一晩増殖させた。
【０６８９】
プレートを、この手順の残りの間、４℃で維持した。一晩増殖させたプレート（上述）を、４℃にて１０分間３５００ｒｐｍで遠心分離し、細胞をペレットにした。上清をデカントし、そして各ペレットを、１００μｌ　ＴＥＳ（０．２Ｍ　ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．５ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．５Ｍ　スクロース）に再懸濁し、そして新しい９６ウェルプレートに移した。このプレートを氷上で３０分間インキュベートし、次いで４℃にて１０分間３５００ｒｐｍで遠心分離し、細胞の残骸をペレットにした。遠心分離の間、１５μｌの新たに作製したプロテアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ、１錠剤を溶解させた１．５ｍｌの水）を新たな９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。次いで遠心分離したプレート由来の上清を、このプロテアーゼインヒビターを含むプレートに移した。このプレートを４℃にて１０分間３５００ｒｐｍで遠心分離し、そして上清をさらなる９６ウェルプレートに移した。この工程を少なくとも１回以上、または遠心分離後のいかなる細胞の残骸の徴候も見られなくなるまで繰り返した。最後に、ＢＩＡｃｏｒｅ実行中のサンプルの蒸発を防ぐために、このプレートをホイールで覆った。
【０６９０】
（高密度ＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面の作製）
全てのＢＩＡｃｏｒｅ分析を、ＢＩＡｃｏｒｅ２０００コントロールソフトウェアを用いてＢＩＡｃｏｒｅ２０００で実施し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．０ソフトウェアを用いて評価した。高密度ＨｉｓタグＢＬｙＳ表面（１０００より多いＲＵ　ＨＩＳ−ＢＬｙＳ連結）を、ＣＭ５チップに連結したアミンにより、フローセル２中で調製した。新たなＣＭ５チップをＢＩＡｃｏｒｅに挿入し、そしてセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）を流速５μｌ／分にてＨＢＳ緩衝液を用いてフローセル２上で開始した。ＮＨＳおよびＥＤＣ溶液を１：１で混合し、ＣＭ５表面に３０μｌを注入した。５０μｌのＨＩＳ−ＢＬｙＳ（酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）中で１０μｇ／ｍｌにて）を注入し、そしてこの表面に連結させた。次いで、３０μｌのエタノールアミン−ＨＣｌ溶液を、遊離のＮＨＳエステルをブロックするために注入した。このチップを使用する前に、１０μｌの４Ｍ　塩酸グアニジン含有ＨＢＳをこの表面に注入し、非共有結合したＢＬｙＳの表面を剥ぎ取った。ブランク表面（ＨＩＳ−ＢＬｙＳのない表面）もまた、非特異的結合効果をＨＩＳ−ＢＬｙＳ結合曲線から減算し得るように、フローセル１上で調製した。
【０６９１】
代表的に、５０００ＲＵ　ＨｉｓタグＢＬｙＳ表面をこの方法で作製し、そしてＥ．ｃｏｌｉのペリプラズムから単離したｓｃＦｖの９６ウェル分析のために使用した。
【０６９２】
（ＢＩＡｃｏｒｅ分析）
ペリプラズムｓｃＦｖを含む９６ウェルプレートを、ＢＩＡｃｏｒｅ内に確保した。２ｍｌの４Ｍ　塩酸グアニジン含有ＨＢＳを、サンプル間のＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面の再生のためにＢＩＡｃｏｒｅ内のラックに置いた。センサーグラムを、流速２０μｌ／分にてフローセル１および２上で実行した。以下の方法を実行した：
ＭＡＩＮ
ＦＬＯＷＣＥＬＬ　１，２，３，４
ＬＯＯＰ　ｃｙｃｌｅ　ＳＴＥＰ
ＡＰＰＲＯＧ　ｉｎｊ　％ｐｏｓ
ＥＮＤＬＯＯＰ
ＡＰＰＥＮＤ　ＣＯＮＴＩＮＵＥ
ＥＮＤ
ＤＥＦＩＮＥ　ＬＯＯＰ　ｃｙｃｌｅ
ＬＰＡＲＡＭ％ｐｏｓ
ｒ１ａ１
ｒ１ｂ１
ｒ１ｃ１
ｒ１ｄ１
ｒ１ｅ１
ｒ１ｆ１ｅｔｃ（ａｌｌ　ｗｅｌｌｓ　ｌｉｓｔｅｄ　ｕｎｔｉｌ　ｒｌｈ１２）
ＥＮＤ
ＤＥＦＩＮＥ　ＡＰＲＯＧ　ｉｎｊ
ＰＡＲＡＭ％ｐｏｓ
ＦＬＯＷ２０
ＫＩＮＪＥＣＴ％ｐｏｓ　３５　３０！ｓｃｆｖ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ＱＵＩＣＫＩＮＪＥＣＴ　ｒ２ｆ３　１０　！ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ＥＸＴＲＡＣＬＥＡＮ
ＥＮＤ
。
【０６９３】
実行が終了した場合、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを用いて、フローセル１についてのセンサーグラムのデータを各サンプルについてのフローセル２のデータから減算した。主に表面から解離したｓｃＦｖとしての全体的なＲＵ変化により、これらのクローンを互いに比較した。さらにいくつかのｓｃＦｖが潜在的に遅いオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有することを同定した。８つのｓｃＦｖについての代表的なセンサーグラムの解離セクションの例を図１４に示す。ＢＬｙＳを認識しない抗ＴＮＦα抗体を、コントロールとして含めた。例示した８つのｓｃＦｖのうち、Ｉ０７９Ｆ０６を、この表面への相対的に高い数のＲＵの結合に起因して、さらなる研究のために同定した。
【０６９４】
ｓｃＦｖが１２００以上のＲＵ変化を実証するか否かを主に同定し、いくつかはまた、代表的なオフレートよりも潜在的に遅いオフレートを有することを同定した。合計２８クローンをこれらの評価基準において選択し、これらを表７に列挙する。
【０６９５】
（表７：ＢＩＡｃｏｒｅによる最も有意なＲＵ変化を実証する膜結合ＢＬｙＳに対する２８の抗体の同定）
【０６９６】
【表１０】
2004509615.tif 000024
（実施例１８：ｓｃＦｖ親和性決定）
２８のｓｃＦｖの親和性（ＫＤ）を、ＢＩＡｃｏｒｅを用いて決定した。
【０６９７】
（動態学研究のための低密度ＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面）
５００ＲＵ表面を、ＨＩＳ−ＢＬｙＳに結合している精製したｓｃＦｖの動態学研究のために使用した。これらの表面を調製する方法は、実施例１７に記載される方法と同一であった（少量のＨＩＳ−ＢＬｙＳのみを注入した）。
【０６９８】
（ｓｃＦｖ結合動態学の測定）
低密度ＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面を含むチップをＢＩＡｃｏｒｅに挿入した。２８の精製したｓｃＦｖ（実施例６において調製された通り）の各々についての希釈シリーズを、ＨＢＳ中で希釈した（代表的に、５０μｇ／ｍｌ　ｓｃＦｖを用いて開始し、そして１．５μｇ／ｍｌまで二倍希釈した）。次いでこの希釈シリーズを、以下のプログラムを用いて、ブランクコントロール（フローセル１）および低密度ＨＩＳ−ＢＬｙＳ表面（フローセル２）上に順次注入した：
ＭＡＩＮ
ＦＬＯＷＣＥＬＬ　１，２，３，４
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ１　ａｂ１
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ２　ａｂ２
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ３　ａｂ３
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ４　ａｂ４
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ５　ａｂ５
ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ　ｒ１ｄ６　ａｂ６
ＡＰＰＥＮＤ　ＣＯＮＴＩＮＵＥ
ＥＮＤ
ＤＥＦＩＮＥ　ＡＰＲＯＧ　ｇｅｎａｂ
ＰＡＲＡＭ％Ａｂｐｏｓ％ＡｂＩｄ
ＦＬＯＷ　２０
ＫＩＮＪＥＣＴ　％Ａｂｐｏｓ　２００　８０
ＩＮＪＥＣＴ　ｒ２ｆ３　１０
ＥＸＴＲＡＣＬＥＡＮ
ＥＮＤ
。
【０６９９】
結合したｓｃＦｖを、サンプル間の表面上に１０μｌの４Ｍ　塩酸グアニジン含有ＨＢＳを注入することにより除去した（上記プログラムにおける位置ｒ２ｆ３）。個々のｓｃＦｖについての結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを用いて分析し、抗体のオンレートおよびオフレートを決定した。
【０７００】
ｓｃＦｖ抗体Ｉ０８２Ｃ０３について作成された結合曲線の代表的な例を、図１５に示す。このクローンについてのオフレートを、２×１０−３ｓ−１と算出した。Ｉ０８２Ｃ０３の親和性を２０ｎＭと算出し、ｓｃＦｖの１００％活性とみなした。ｓｃＦｖとして最も高い親和性を有する５つのｓｃＦｖを表８に与える。
【０７０１】
（表８：ｓｃＦｖとして最も高い親和性を有する膜結合ＢＬｙＳに対する５つの抗体の同定）
【０７０２】
【表１１】
2004509615.tif 000025
（実施例１９：マウス膜結合ＢＬｙＳの認識）
マウス膜結合ＢＬｙＳもまた認識する表８に列挙した５つのｓｃＦｖの能力を、競合ＥＬＩＳＡを用いて決定した。このアッセイは、異なる形態の競合するヒトＢＬｙＳの存在下で、マウス細胞株Ｐ３８８原形質膜上のＢＬｙＳの膜結合形態に結合する試験ファージｓｃＦｖの能力を評価する。競合するＢＬｙＳは、Ｈｉｓタグ形態のＢＬｙＳとして存在するか、または可溶性ＢＬｙＳとして存在するかのいずれかであった。マウス膜結合ＢＬｙＳを認識するｓｃＦｖは、Ｐ３８８原形質膜に対して、ＨＩＳタグＢＬｙＳとのプレインキュベーション（可溶性ＢＬｙＳとのプレインキュベーションではない）により競合されるＥＬＩＳＡシグナルを与える。
【０７０３】
（Ｐ３８８．Ｄ１細胞の維持および原形質膜の調製）
Ｐ３８８．Ｄ１細胞は、マウス単球−マクロファージ様細胞株である。これらを、２ｍＭ　Ｌ−グルタミン、１０％　ＣＳ、１０Ｕ　ペニシリン、１００ｇ／ｍｌ　ストレプトマイシンを含むＬ−１５培地中で培養した（全ての試薬をＳｉｇｍａから得た）。細胞を、３〜４日毎に１：４で分割し、２〜８×１０５／ｍｌの細胞密度を維持した。細胞の新しいアリコートを６週間毎に液体窒素から解凍した。原形質膜画分を、実施例２に記載されるように調製した。
【０７０４】
（競合ＥＬＩＳＡ）
Ｐ３８８原形質膜（１ウェル当たり５０μｌ）を、Ｆａｌｃｏｎ９６ウェルプレート上に４℃にて一晩、ＰＢＳ中の１０μｇ／ｍｌでコーティングした。この方法は、それ以外本質的に実施例１６に記載される通りである。
【０７０５】
３つのクローン（Ｉ０７９Ｅ０２、Ｉ０８２Ｈ０８、およびＩ０９９Ｄ０３）についての結果を図１６に示す。３つのｓｃＦｖ全てが，Ｐ３８８原形質膜を認識する。この結合は、ＨＩＳタグＢＬｙＳ（ＨＩＳ−ＢＬｙＳ）の存在下で競合するが、ビオチン化ＢＬｙＳ（ｂｉｏ−ＢＬｙＳ）の存在下では競合しない。このことは、これらのｓｃＦｖがまた、マウスＢＬｙＳの膜結合形態を認識するが、可溶性形態を認識しないことを確証する。
【０７０６】
（実施例２０：ｓｃＦｖのＩｇＧ１フォーマットへの変換）
本発明者らがＩｇＧ分子への変換を望んだｓｃＦｖのＶＨドメインおよびＶＬドメインを、適切な重鎖（ヒトＩｇＧ１）または軽鎖（ヒトκまたはヒトλ）定常領域のヌクレオチド配列を含むベクター中にクローニングし、その結果適切な宿主細胞中にトランスフェクトした場合、完全な重鎖または軽鎖分子をこれらのベクターから発現させ得た。さらに、クローニングされた重鎖および軽鎖が両方とも１つの細胞株において発現する（１つのベクターからか、または２つのベクターからかのいずれか）場合、それらは組み立てられて、細胞培養培地に分泌される完全な機能性抗体分子となり得る。ｓｃＦｖを従来の抗体分子に変換するための方法は、当該分野で周知である。
【０７０７】
（抗ＢＬｙＳ抗体（ＩｇＧ１）を発現するＮＳ０細胞株の作製）
重鎖および軽鎖を含むプラスミドを、ＰｖｕＩ制限酵素を用いて、別々に直鎖状にした。この直鎖ＤＮＡを、フェノール−クロロホルム抽出、続くエタノール沈殿により精製し、次いでＨ２Ｏ中に再懸濁した。増殖培地由来のＮＳ０細胞（１０７）を１２．５μｇの直鎖状重鎖プラスミドＤＮＡおよび３７．５μｇの直鎖状軽鎖ＤＮＡを含むＰＢＳ中でエレクトロポレーションした（０．２５ｋＶおよび９７５μＦ）。この細胞を、２０ｍｌ　非選択培地（６ｍＭ　グルタミン、アミノ酸およびペニシリン／ストレプトマイシンを補充した１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ）中で洗浄し、次いで１２．５ｍｌ培地中でＴ７５ｃｍ２フラスコに移し、そして３７℃、５％ＣＯ２／空気にて一晩インキュベートした。トランスフェクションの次の日、細胞を、１ｍｇ／ｍｌ　ジェネティシンを含む選択培地に再懸濁し、そして２００μ／ウェルにて５×９６ウェルプレートに分配した。３７℃（５％ＣＯ２／空気）での１８日後、ＩｇＧを発現するコロニーを同定するために構築されたヒトＩｇＧを検出するＥＬＩＳＡにより、コロニー上清をスクリーニングした。およそ２０のポジティブクローンを展開し、そして無血清、選択培地中での増殖に適合させた。二連のＴ２５ｃｍ２フラスコを準備した。１つのフラスコからの細胞をストックとして凍結させ、そして第２のフラスコ中の細胞を飽和するまで増殖させた。飽和した培養物の生産性を、ＥＬＩＳＡにより評価した。次いで、最も生産性の高い細胞株を、大スケールの抗体産生のために選択した。
【０７０８】
上述の手順を、Ｉ００６Ｄ０８抗ＢＬｙＳ抗体構築について例示する。ＮＳ０細胞のエレクトロポレーションおよび選択後、各々単一のコロニーを含む９３のウェル由来の上清をＥＬＩＳＡによりスクリーニングし、構築されたＩｇＧ１抗体を検出した。２７の上清がＩｇＧを含むことを同定した。２４のポジティブウェル由来のコロニーを、２４ウェルプレート中の１ｍｌの選択培地に移し、２日間増殖させた。次いで、細胞の１ｍｌ培養物を、Ｔ２５ｃｍ２フラスコ中の還元型血清（０．５％　ＦＣＳ）を含む４ｍｌ選択培地に添加した。この培養物がコンフルーエンシー（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）に達した場合、１ｍｌの細胞を、Ｔ２５ｃｍ２フラスコ中の４ｍｌ選択性、無血清培地に希釈した。コンフルーエンシーにおいて、このサブカルチャーレジメンを再度繰り返した。最後に、０．１％　ＦＣＳを含む培養物由来の１ｍｌの細胞を、９ｍｌの無血清、選択培地を用いて希釈し、そして飽和培養物およびストック培養物を作るために２×Ｔ２５ｃｍ２に分割した。一旦培養物がコンフルーエントになったら、ストック培養物を凍結させ、そして液体窒素中で保存した。飽和培養物を、培養物の生存性が１０％未満になるまで増殖させた。最初に展開させた２４のコロニーのうちの２３のコロニーを、無血清培地中での培養に好適に適合させた。これらの無血清適合細胞株の生産性は、飽和した５ｍｌの無血清培地のＥＬＩＳＡ定量により、０．３〜１７μｇ／ｍｌの範囲であった。Ｉ００６Ｄ０８−３２細胞株は、１７μｇ／ｍｌを産生した。
【０７０９】
（大スケールＩｇＧ生成）
最も高い生産性の細胞株を凍結ストックから回復させ、次いで２リットルのローラーボトル中の選択性の無血清培地において４００ｍｌに展開した。細胞を３７℃で増殖させ、そして２、３日毎にヘッドスペースを５％ＣＯ２／空気で再平衡化させながら、４ｒｐｍで回転させた。最後に、この培養物を、選択性のない無血清培地（２リットルローラーボトル毎に４００ｍｌ）の添加によって、４リットル容量に展開した。次いでこの培養物を飽和するまで増殖させた。
【０７１０】
この手順をＩ００６Ｄ０８−３２細胞株からのＩ００６Ｄ０８抗体の産生により例示する。Ｉ００６Ｄ０８−３２の凍結ストックを、１ｍｇ／ｍｌジェネティシンを含む５ｍｌの無血清培地を含むＴ２５　ｃｍ２中に回復させ、そして５％　ＣＯ２／空気インキュベーター中で３７℃にて増殖させた。２日間の増殖後、この培養物を７．５ｍｌの新鮮な培地で希釈し、そしてＴ７５ｃｍ２フラスコに移した。インキュベーター中でのさらに３日後、細胞を１３０ｍｌ選択培地に移し、そして２リットルローラーボトルに移した。３日間の増殖後、細胞を５００ｍｌの選択培地で希釈し、そして２×２リットルローラーボトルに分割した。さらに２日間、１００ｍｌの新鮮な選択培地を、各ローラーに添加した。最後に、翌日、この培養物を、非選択培地を用いて総量４リットルに展開し、そして１０×２リットルローラーボトルに分割した。３日後、この培地に６ｍＭグルタミンを補充した。この細胞を、１７日間、最終的なサブカルチャーから４リットル容量に増殖させた。細胞を、生存性が０．２×１０６細胞／ｍｌ未満に下降する前に３×１０６細胞／ｍｌに増殖させた。この低生存度において、培養上清を収集した。ＥＬＩＳＡ分析は、この培養上清が３３μｇ／ｍｌのＩｇＧを含むことを示した。従って、４リットルの培養物は、１３２ｍｇ　ＩｇＧを含んだ。
【０７１１】
（ＩｇＧ精製）
発酵ブロスからのＩｇＧの精製を、抗体生成のために一般的に用いられる従来技術の組み合わせを用いて実施する。代表的に、精製スキームを開始する前に、培養収集物を浄化して細胞および細胞の残骸を除去する。このことは、通常、収集物の遠心分離または濾過を用いて達成される。浄化後、代表的に抗体を捕捉し、そしてＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅにおけるアフィニティークロマトグラフィーを用いて十分に精製する。この抗体を、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅに塩基性ｐＨで結合させ、そしてこのマトリクスの洗浄後、ｐＨの減少により溶出させる。次いで、抗体のさらなる精製を、ゲル濾過により達成する。抗体と異なる分子量を有する成分を除去する工程と同様、この工程もまた、所望の最終処方緩衝液への緩衝液の交換のために用いられ得る。
【０７１２】
（Ｉ００６Ｄ０８　ＩｇＧ１の精製）
収集物を０．５μｍフィルターおよび０．２２μｍフィルターを通じた連続濾過により浄化した。次いで、浄化した収集物を、ｐＨ８．０で平衡化した組換えＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅのカラムに適用し、そして平衡化緩衝液で洗浄した。Ｉ００６Ｄ０８抗体を、ｐＨ３．５の緩衝液の適用によりＰｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅから溶出した。次いで、回収した抗体含有溶出物を、ｐＨ８．０の緩衝液の添加によりｐＨ７．４に中和した。この中和した溶出物を、３０ｋＤａカットオフ膜を用いて限外濾過により濃縮した。次いで、濃縮物質を、移動相としてリン酸緩衝生理食塩水を用いてＳｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ３００ＨＲゲル濾過により精製した。次いで、ゲル濾過カラムからの最終的な単量体ＩｇＧ１画分を、３０ｋＤａカットオフ膜を用いた限外濾過により、所望の処方濃度に濃縮した。最終産物を、０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
【０７１３】
（実施例２１：３ＨｄＴ取り込みにより測定されるマウス脾細胞増殖の抗体中和）
抗体がＢＬｙＳ媒介Ｂ細胞増殖を阻害するか否かを決定するために、脾細胞増殖アッセイを実施した。簡単にいうと、２５ｇニードルおよび１０ｍｌの完全培地（１００Ｕ／ｍｌ　ペニシリン、１００μｇ／ｍｌ　ストレプトマイシン、４ｍＭ　グルタミン、５×１０−５Ｍ　β−メルカプトエタノールを含有する１０％　ＦＢＳを有するＲＰＭＩ　１６４０）を用いた完全培地による脾臓の洗い流しにより、マウス脾細胞を単離した。この細胞を、１００ミクロンナイロンフィルターを通して細胞塊を除去した。次いで、細胞懸濁物を、室温にて２５分間、４００×ｇでフィコールした（１つの１５ｍｌコニカルチューブ／脾臓；３ｍｌフィコール、１０ｍｌ細胞懸濁物／脾臓；Ｆｉｃｏｌ　１０８３（Ｓｉｇｍａ））。回収した細胞を、完全培地中で３回洗浄し、そして計数した。次いで、回収した細胞を３Ｘ濃度のＳＡＣ（３Ｘ＝ストックの１：３３，３３３希釈）（Ｓｔａｐｈ．ａｕｒｅｕｓ　Ｃｏｗａｎ株；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を含む完全培地中で、３×１０６／ｍｌの濃度に希釈した。
【０７１４】
各抗体について、３０μｇ／ｍｌ、３．０μｇ／ｍｌ、および０．３μｇ／ｍｌ濃度の抗体希釈物５０μｌを、９６ウェルプレートの個々のウェルに分割した（三連）。適切なポジティブコントロール（例えば、モノクローナル抗体１５Ｃ１０）もまた使用した。抗体を含まない培地（および必要な場合、（購入した）ヒトアイソタイプコントロール）を、ネガティブコントロールとして用いた。
【０７１５】
ＢＬｙＳタンパク質を、完全培地中で、３００ｎｇ／ｍｌ、９０ｎｇ／ｍｌ、および３０ｎｇ／ｍｌの濃度に希釈した。次いで、各ＢＬｙＳ希釈物の５０μｌを、プレート中の抗体希釈物シリーズに添加した。次いで、抗体およびＢＬｙＳ希釈物を含むプレートを、３７℃、５％　ＣＯ２で３０分間インキュベートし、その後、ＳＡＣを含む５０μｌの脾細胞懸濁物を、全てのウェルに添加した。次いで、プレートを７２時間（３７℃、５％　ＣＯ２）インキュベートした。
【０７１６】
７２時間後、各ウェルに、０．５μＣｉの３Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ；Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含む５０μｌの完全培地を補充し、そして細胞をさらに２０〜２４時間インキュベートした（３７℃、５％　ＣＯ２）。インキュベーション後、細胞を、Ｔｏｍｔｅｃ　Ｃｅｌｌ　Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いて収集し、そしてＴｏｐＣｏｕｎｔ　Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ　ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ）を用いて濾過物を計数した。
【０７１７】
（実施例２２：ＢＬｙＳアンタゴニスト分子のインビトロスクリーニングのためのヒトＢ細胞増殖アッセイ）
推定ＢＬｙＳアンタゴニストの効果を評価するためにバイオアッセイを、等量のＢＬｙＳ、応答細胞、および推定アンタゴニスト（これらの各々を３Ｘストック試薬として調製した）を混合することにより、９６ウェルフォーマットにおいて三連で実施した。
【０７１８】
Ｂリンパ球を、ＭＡＣＳ（抗ＣＤ３欠損）によりヒト扁桃から精製し、洗浄し、そして３×１０ｅ６細胞／ｍＬの濃度で完全培地（ＣＭ）（１００Ｕ／ｍｌ　ペニシリン、１００μｇ／ｍｌ　ストレプトマイシン、４ｍＭ　グルタミン、５×１０Ｅ−５Ｍ　β−メルカプトエタノールを含有する１０％　ＦＢＳを有するＲＰＭＩ　１６４０）中に再懸濁した。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ、Ｃｏｗａｎ　Ｉ（ＳＡＣ、ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ）を、３Ｘ濃度（３Ｘ＝ストックの１：３３，３３３希釈）で細胞に添加した。
【０７１９】
一方で、潜在的なアンタゴニストの８連続希釈（３倍）を、希釈されたアンタゴニストがアッセイにおいて試験されるための３Ｘ最終濃度で存在するように、ＣＭ中で調製した。抗体を、最終濃度の１０μｇ／ｍＬで開始し、そして約１．５ｎｇ／ｍＬまで減少させて慣用的に試験した。
【０７２０】
ヒトｒＢＬｙＳを、ＣＭ中で調製し、ＣＭ中で３Ｘ濃度（３Ｘ＝３００ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、および３ｎｇ／ｍＬ）にした。予期しない低親和性またはアンタゴニスト濃度に起因する偽ネガティブを回避するために、潜在的なインヒビターを、いくつかの濃度のＢＬｙＳで慣用的に試験した。
【０７２１】
５０μＬの希釈したアンタゴニストおよび５０μＬの希釈したＢＬｙＳを、推定アンタゴニスト希釈シリーズに添加した。
【０７２２】
次いで、細胞を、十分に加湿したチャンバー内で７２時間（３７℃、５％　ＣＯ２）インキュベートした。７２時間後、細胞に０．５μＣｉ／ウェル　３Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を補充し、そしてさらに２４時間インキュベートした。Ｔｏｍｔｅｃ　Ｃｅｌｌ　Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いてプレートを収集し、そして濾過物をＴｏｐＣｏｕｎｔ　Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ　ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ）中で計数した。
【０７２３】
本出願で引用される各文献（特許、特許出願、学術誌、要約、研究マニュアル、書籍、または他の開示を含む）の開示全体は、それらの全体が、本明細書中に参考として援用される。さらに、米国仮出願第６０／２１２，２１０号（２０００年６月１６日出願）；同第６０／２４０，８１６号（２０００年１０月１７日出願；同第６０／２７６，２４８号（２００１年３月１６日出願）；同第６０／２７７，３７９号（２００１年３月２１日出願）；および同第６０／２９３，４９９号（２００１年５月２５日出願）の明細書および配列表は全て、本明細書により、その全体において参考として援用される。
【０７２４】
（表１：ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するｓｃＦｖ）
【０７２５】
【表１２】
2004509615.tif 000026
2004509615.tif 000027
2004509615.tif 000028
2004509615.tif 000029
2004509615.tif 000030
2004509615.tif 000031
2004509615.tif 000032
2004509615.tif 000033
2004509615.tif 000034
2004509615.tif 000035
2004509615.tif 000036
2004509615.tif 000037
2004509615.tif 000038
2004509615.tif 000039
2004509615.tif 000040
2004509615.tif 000041
2004509615.tif 000042
2004509615.tif 000043
2004509615.tif 000044
2004509615.tif 000045
2004509615.tif 000046
2004509615.tif 000047
2004509615.tif 000048
2004509615.tif 000049
2004509615.tif 000050
2004509615.tif 000051
2004509615.tif 000052
2004509615.tif 000053
2004509615.tif 000054
2004509615.tif 000055
2004509615.tif 000056
2004509615.tif 000057
2004509615.tif 000058
2004509615.tif 000059
2004509615.tif 000060
2004509615.tif 000061
2004509615.tif 000062
2004509615.tif 000063
2004509615.tif 000064
2004509615.tif 000065
2004509615.tif 000066
2004509615.tif 000067
2004509615.tif 000068
2004509615.tif 000069
2004509615.tif 000070
2004509615.tif 000071
2004509615.tif 000072
2004509615.tif 000073
2004509615.tif 000074
2004509615.tif 000075
2004509615.tif 000076
2004509615.tif 000077
2004509615.tif 000078
2004509615.tif 000079
2004509615.tif 000080
2004509615.tif 000081
2004509615.tif 000082
2004509615.tif 000083
2004509615.tif 000084
2004509615.tif 000085
【０７２６】
【表１３】
2004509615.tif 000086
（ＡＴＣＣ受託番号９７７６８）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７２７】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７２８】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７２９】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７３０】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７３１】
（ＡＴＣＣ受託番号９７７６８）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７３２】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７３３】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７３４】
【表１４】
2004509615.tif 000087
（受託番号２０３５１８）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７３５】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７３６】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７３７】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７３８】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７３９】
（ＡＴＣＣ受託番号２０３５１８）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７４０】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７４１】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７４２】
【表１５】
2004509615.tif 000088
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３８）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７４３】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７４４】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７４５】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７４６】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７４７】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３８）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７４８】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７４９】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７５０】
【表１６】
2004509615.tif 000089
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３９）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７５１】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７５２】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７５３】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７５４】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７５５】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２３９）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７５６】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７５７】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７５８】
【表１７】
2004509615.tif 000090
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４０）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７５９】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７６０】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７６１】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７６２】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７６３】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４０）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７６４】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７６５】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７６６】
【表１８】
2004509615.tif 000091
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４１）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７６７】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７６８】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７６９】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７７０】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７７１】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４１）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７７２】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７７３】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７７４】
【表１９】
2004509615.tif 000092
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４２）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７７５】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７７６】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７７７】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７７８】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７７９】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４２）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８０】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８１】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７８２】
【表２０】
2004509615.tif 000093
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４３）
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料のサンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければならない。
【０７８３】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８４】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ　ａｄｄｒｅｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７８５】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｐａｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。
【０７８６】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。
【０７８７】
（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−３２４３）
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとする。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８８】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付されるかあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ　Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ　ＧｕｉｄｅのＶｏｌｕｍｅ　Ｉのａｎｎｅｘ　Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８９】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、Ｕ９３７膜に免疫特異的に結合するが、ＴＮＦαまたはＢＳＡとは、結合も交差反応もしない３つのｓｃＦｖ、Ｉ００６Ｅ０７、Ｉ００８Ｄ０５およびＩ０１６Ｆ０４についてのＥＬＩＳＡの結果である。
【図２】
図２は、３つのｓｃＦｖ、Ｉ０１６Ｈ０７、Ｉ００１Ｃ０９およびＩ０１８Ｄ０７についての、レセプター阻害アッセイにおける結果である。
【図３】
図３は、２つのｓｃＦｖ（Ｉ０２２Ｄ０１およびＩ０３１Ｆ０２）についてのＥＬＩＳＡの結果である。これは、ヒトＢＬｙＳに結合し、マウスＢＬｙＳと交差反応するが、ＴＮＦリガンドファミリーの他の抗原とは、結合も交差反応もしない能力を示す。
【図４】
図４は、ＢＬｙＳまたはＴＮＦαのいずれかが競合因子として用いられた場合にＵ９３７形質膜に結合する、３つのｓｃＦｖ（Ｉ０３１Ｆ０９、Ｉ０５０Ａ１２およびＩ０５１Ｃ０４）についてのＥＬＩＳＡの結果である。
【図５】
図５は、ｓｃＦｖ抗体Ｉ００３Ｃ０２の反応速度分析である。Ｉ００３Ｃ０２の段階希釈物（３ｎＭ〜８２５ｎＭまで）を示す。会合および解離曲線を、ＢＩＡｃｏｒｅ　２０００およびＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　３．０ソフトウェアを用いて作成した。
【図６】
図６は、２つのｓｃＦｖ抗体（Ｉ００７Ｆ１１およびＩ０５０Ａ０７）についての代表的な力価曲線を示す。非標識ＢＬｙＳはそのレセプターへの結合について０．８ｎＭのＩＣ５０値で競合した。Ｉ００７Ｆ１１およびＩ０５０Ａ０７のＩＣ５０値は、それぞれ７．９ｎＭおよび１７．１ｎＭである。このアッセイを、３連で行い、標準誤差のバーを示す。
【図７】
図７は、固定化ＢＬｙＳに免疫特異的に結合するが、Ｕ９３７形質膜にも、ＴＮＦαにも、ＢＳＡにも結合しない３つのｓｃＦｖクローン（Ｉ０７４Ｂ１２、Ｉ０７５Ｆ１２およびＩ０７５Ａ０２）についてのＥＬＩＳＡ結果である。コントロールとして、ＴＮＦαを認識するファージ抗体もまた、図７に示す。
【図８】
図８は、レセプター阻害アッセイにおける２つのｓｃＦｖ（Ｉ０２５Ｂ０９およびＩ０２６Ｃ０４）についての結果である。
【図９】
図９は、２つのｓｃＦｖクローン（Ｉ０６７Ｆ０５およびＩ０７８Ｄ０２）についてのＥＬＩＳＡ結果を示す。これは、固定化ヒトＢＬｙＳに結合し、固定化マウスＢＬｙＳと交差反応するが、ＴＮＦリガンドファミリーの他の抗原とは、結合も交差反応もしない能力を示す。
【図１０】
図１０は、ｓｃＦＶ抗体Ｉ００２Ａ０１の反応速度分析である。Ｉ００２Ａ０１の段階希釈物（３ｎＭから１６５０ｎＭまで）を示す。会合曲線および解離曲線を、ＢＩＡｃｏｒｅ　２０００およびＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　３．０ソフトウェアを用いて作成した。
【図１１】
図１１は、２つのｓｃＦｖ（Ｉ００６８Ｃ０６およびＩ０７４Ｂ１２）についての代表的な力価曲線を示す。非標識ＢＬｙＳは、そのレセプターへの結合について０．６６ｎＭの阻害定数５０（ＩＣ５０）値で競合した。Ｉ００６８Ｃ０６　およびＩ０７４Ｂ１２　ＩＣ５０値は、それぞれ、６１ｎＭおよび１３ｎＭである。このアッセイを３連で行い、標準誤差のバーを示す。
【図１２】
図１２は、３つのクローン（Ｉ０７９Ｃ０１、Ｉ０８１Ｃ１０およびＩ０８２Ａ０２）についてのＥＬＩＳＡの結果である。これは、ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳ、Ｕ９３７形質膜に結合するが、固定化ビオチン化ＢｙＬＳには結合しない能力を示す。
【図１３】
図１３は、ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳまたはビオチン化ＢＬｙＳのいずれかを競合因子として用いた場合に、Ｕ９３７形質膜に結合する、３つのｓｃＦｖ（Ｉ０７９Ｂ０４、Ｉ０７９Ｆ０８およびＩ０８０Ｂ０１）についてのＥＬＩＳＡの結果である。
【図１４】
図１４は、８つのｓｃＦｖについての代表的センサグラムの解離部分の例を示す。ＢＬｙＳを認識しない抗ＴＮＦα抗体をコントロールとして含めた。例示した８つのｓｃＦｖのうち、Ｉ０７９Ｆ０６を、表面への比較的多数のＲＵの結合に起因して、さらなる研究のために同定した。
【図１５】
図１５は、ｓｃＦｖ抗体Ｉ０８２Ｃ０３について作成した結合曲線の代表例を示す。このクローンのオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を、２×１０−３ｓ−１として計算した。Ｉ０８２Ｃ０３の親和性を、このｓｃＦｖの１００％活性を想定して、２０ｎＭとして計算した。
【図１６】
図１６は、ヒスチジンタグ化ＢＬｙＳまたはビオチン化ＢＬｙＳいずれかを競合因子として用いた場合に、Ｐ３８８形質膜に結合する３つのｓｃＦｖ（Ｉ０７９Ｂ０４、Ｉ０７９Ｆ０８およびＩ０８０Ｂ０１）についてのＥＬＩＳＡの結果である。
【図１】
2004509615.tif 000094
【図２】
2004509615.tif 000095
【図３】
2004509615.tif 000096
【図４】
2004509615.tif 000097
【図５】
2004509615.tif 000098
【図６】
2004509615.tif 000099
【図７】
2004509615.tif 000100
【図８】
2004509615.tif 000101
【図９】
2004509615.tif 000102
【図１０】
2004509615.tif 000103
【図１１】
2004509615.tif 000104
【図１２】
2004509615.tif 000105
【図１３】
2004509615.tif 000106
【図１４】
2004509615.tif 000107
【図１５】
2004509615.tif 000108
【図１６】
2004509615.tif 000109
【国際公開パンフレット】
2004509615.tif 000110
2004509615.tif 000111
2004509615.tif 000112
2004509615.tif 000113
2004509615.tif 000114
2004509615.tif 000115
2004509615.tif 000116
2004509615.tif 000117
2004509615.tif 000118
2004509615.tif 000119
2004509615.tif 000120
2004509615.tif 000121
2004509615.tif 000122
2004509615.tif 000123
2004509615.tif 000124
2004509615.tif 000125
2004509615.tif 000126
2004509615.tif 000127
2004509615.tif 000128
2004509615.tif 000129
2004509615.tif 000130
2004509615.tif 000131
2004509615.tif 000132
2004509615.tif 000133
2004509615.tif 000134
2004509615.tif 000135
2004509615.tif 000136
2004509615.tif 000137
2004509615.tif 000138
2004509615.tif 000139
2004509615.tif 000140
2004509615.tif 000141
2004509615.tif 000142
2004509615.tif 000143
2004509615.tif 000144
2004509615.tif 000145
2004509615.tif 000146
2004509615.tif 000147
2004509615.tif 000148
2004509615.tif 000149
2004509615.tif 000150
2004509615.tif 000151
2004509615.tif 000152
2004509615.tif 000153
2004509615.tif 000154
2004509615.tif 000155
2004509615.tif 000156
2004509615.tif 000157
2004509615.tif 000158
2004509615.tif 000159
2004509615.tif 000160
2004509615.tif 000161
2004509615.tif 000162
2004509615.tif 000163
2004509615.tif 000164
2004509615.tif 000165
2004509615.tif 000166
2004509615.tif 000167
2004509615.tif 000168
2004509615.tif 000169
2004509615.tif 000170
2004509615.tif 000171
2004509615.tif 000172
2004509615.tif 000173
2004509615.tif 000174
2004509615.tif 000175
2004509615.tif 000176
2004509615.tif 000177
2004509615.tif 000178
2004509615.tif 000179
2004509615.tif 000180
2004509615.tif 000181
2004509615.tif 000182
2004509615.tif 000183
2004509615.tif 000184
2004509615.tif 000185
2004509615.tif 000186
2004509615.tif 000187
2004509615.tif 000188
2004509615.tif 000189
2004509615.tif 000190
2004509615.tif 000191
2004509615.tif 000192
2004509615.tif 000193
2004509615.tif 000194
2004509615.tif 000195
2004509615.tif 000196
2004509615.tif 000197
2004509615.tif 000198
2004509615.tif 000199
2004509615.tif 000200
2004509615.tif 000201
2004509615.tif 000202
2004509615.tif 000203
2004509615.tif 000204
2004509615.tif 000205
2004509615.tif 000206
2004509615.tif 000207
2004509615.tif 000208
2004509615.tif 000209
2004509615.tif 000210
2004509615.tif 000211
2004509615.tif 000212
2004509615.tif 000213
2004509615.tif 000214
2004509615.tif 000215
2004509615.tif 000216
2004509615.tif 000217
2004509615.tif 000218
2004509615.tif 000219
2004509615.tif 000220
2004509615.tif 000221
2004509615.tif 000222
2004509615.tif 000223
2004509615.tif 000224
2004509615.tif 000225
2004509615.tif 000226
2004509615.tif 000227
2004509615.tif 000228
2004509615.tif 000229
2004509615.tif 000230
2004509615.tif 000231
2004509615.tif 000232
2004509615.tif 000233
2004509615.tif 000234
2004509615.tif 000235
2004509615.tif 000236
2004509615.tif 000237
2004509615.tif 000238
2004509615.tif 000239
2004509615.tif 000240
2004509615.tif 000241
2004509615.tif 000242
2004509615.tif 000243
2004509615.tif 000244
2004509615.tif 000245
2004509615.tif 000246
2004509615.tif 000247
2004509615.tif 000248
2004509615.tif 000249
2004509615.tif 000250
2004509615.tif 000251
2004509615.tif 000252
2004509615.tif 000253
2004509615.tif 000254
2004509615.tif 000255
2004509615.tif 000256
2004509615.tif 000257
2004509615.tif 000258
2004509615.tif 000259
2004509615.tif 000260
2004509615.tif 000261
2004509615.tif 000262
2004509615.tif 000263
2004509615.tif 000264
2004509615.tif 000265
2004509615.tif 000266
2004509615.tif 000267
2004509615.tif 000268
2004509615.tif 000269
2004509615.tif 000270
2004509615.tif 000271
2004509615.tif 000272
2004509615.tif 000273
2004509615.tif 000274
2004509615.tif 000275
2004509615.tif 000276
2004509615.tif 000277
2004509615.tif 000278
2004509615.tif 000279
2004509615.tif 000280
2004509615.tif 000281
2004509615.tif 000282
2004509615.tif 000283
2004509615.tif 000284
2004509615.tif 000285
2004509615.tif 000286
2004509615.tif 000287
2004509615.tif 000288
2004509615.tif 000289
2004509615.tif 000290
2004509615.tif 000291
2004509615.tif 000292
2004509615.tif 000293
2004509615.tif 000294
2004509615.tif 000295
2004509615.tif 000296
2004509615.tif 000297
2004509615.tif 000298
2004509615.tif 000299
2004509615.tif 000300
2004509615.tif 000301
2004509615.tif 000302
2004509615.tif 000303
2004509615.tif 000304
2004509615.tif 000305
2004509615.tif 000306
2004509615.tif 000307
2004509615.tif 000308
2004509615.tif 000309
2004509615.tif 000310
2004509615.tif 000311
2004509615.tif 000312
2004509615.tif 000313
2004509615.tif 000314
2004509615.tif 000315
2004509615.tif 000316
2004509615.tif 000317
2004509615.tif 000318
2004509615.tif 000319
2004509615.tif 000320
2004509615.tif 000321
2004509615.tif 000322
2004509615.tif 000323
2004509615.tif 000324
2004509615.tif 000325
2004509615.tif 000326
2004509615.tif 000327
2004509615.tif 000328
2004509615.tif 000329
2004509615.tif 000330
2004509615.tif 000331
2004509615.tif 000332
2004509615.tif 000333
2004509615.tif 000334
2004509615.tif 000335
2004509615.tif 000336
2004509615.tif 000337
2004509615.tif 000338
2004509615.tif 000339
2004509615.tif 000340
2004509615.tif 000341
2004509615.tif 000342
2004509615.tif 000343
2004509615.tif 000344
2004509615.tif 000345
2004509615.tif 000346
2004509615.tif 000347
2004509615.tif 000348
2004509615.tif 000349
2004509615.tif 000350
2004509615.tif 000351
2004509615.tif 000352
2004509615.tif 000353
2004509615.tif 000354
2004509615.tif 000355
2004509615.tif 000356
2004509615.tif 000357
2004509615.tif 000358
2004509615.tif 000359
2004509615.tif 000360
2004509615.tif 000361
2004509615.tif 000362
2004509615.tif 000363
2004509615.tif 000364
2004509615.tif 000365
2004509615.tif 000366
2004509615.tif 000367
2004509615.tif 000368
2004509615.tif 000369
2004509615.tif 000370
2004509615.tif 000371
2004509615.tif 000372
2004509615.tif 000373
2004509615.tif 000374
2004509615.tif 000375
2004509615.tif 000376
2004509615.tif 000377
2004509615.tif 000378
2004509615.tif 000379
2004509615.tif 000380
2004509615.tif 000381
2004509615.tif 000382
2004509615.tif 000383
2004509615.tif 000384
2004509615.tif 000385
2004509615.tif 000386
2004509615.tif 000387
2004509615.tif 000388
2004509615.tif 000389
2004509615.tif 000390
2004509615.tif 000391
2004509615.tif 000392
2004509615.tif 000393
2004509615.tif 000394
2004509615.tif 000395
2004509615.tif 000396
2004509615.tif 000397
2004509615.tif 000398
2004509615.tif 000399
2004509615.tif 000400
2004509615.tif 000401
2004509615.tif 000402
2004509615.tif 000403
2004509615.tif 000404
2004509615.tif 000405
2004509615.tif 000406
2004509615.tif 000407
2004509615.tif 000408
2004509615.tif 000409
2004509615.tif 000410
2004509615.tif 000411
2004509615.tif 000412
2004509615.tif 000413
2004509615.tif 000414
2004509615.tif 000415
2004509615.tif 000416
2004509615.tif 000417
2004509615.tif 000418
2004509615.tif 000419
2004509615.tif 000420
2004509615.tif 000421
2004509615.tif 000422
2004509615.tif 000423
2004509615.tif 000424
2004509615.tif 000425
2004509615.tif 000426
2004509615.tif 000427
2004509615.tif 000428
2004509615.tif 000429
2004509615.tif 000430
2004509615.tif 000431
2004509615.tif 000432
2004509615.tif 000433
2004509615.tif 000434
2004509615.tif 000435
2004509615.tif 000436
2004509615.tif 000437
2004509615.tif 000438
2004509615.tif 000439
2004509615.tif 000440
2004509615.tif 000441
2004509615.tif 000442
2004509615.tif 000443
2004509615.tif 000444
2004509615.tif 000445
2004509615.tif 000446
2004509615.tif 000447
2004509615.tif 000448
2004509615.tif 000449
2004509615.tif 000450
2004509615.tif 000451
2004509615.tif 000452
2004509615.tif 000453
2004509615.tif 000454
2004509615.tif 000455
2004509615.tif 000456
2004509615.tif 000457
2004509615.tif 000458
2004509615.tif 000459
2004509615.tif 000460
2004509615.tif 000461
2004509615.tif 000462
2004509615.tif 000463
2004509615.tif 000464
2004509615.tif 000465
2004509615.tif 000466
2004509615.tif 000467
2004509615.tif 000468
2004509615.tif 000469
2004509615.tif 000470
2004509615.tif 000471
2004509615.tif 000472
2004509615.tif 000473
2004509615.tif 000474
2004509615.tif 000475
2004509615.tif 000476
2004509615.tif 000477
2004509615.tif 000478
2004509615.tif 000479
2004509615.tif 000480
2004509615.tif 000481
2004509615.tif 000482
2004509615.tif 000483
2004509615.tif 000484
2004509615.tif 000485
2004509615.tif 000486
2004509615.tif 000487
2004509615.tif 000488
2004509615.tif 000489
2004509615.tif 000490
2004509615.tif 000491
2004509615.tif 000492
2004509615.tif 000493
2004509615.tif 000494
2004509615.tif 000495
2004509615.tif 000496
2004509615.tif 000497
2004509615.tif 000498
2004509615.tif 000499
2004509615.tif 000500
2004509615.tif 000501
2004509615.tif 000502
2004509615.tif 000503
2004509615.tif 000504
2004509615.tif 000505
2004509615.tif 000506
2004509615.tif 000507
2004509615.tif 000508
2004509615.tif 000509
2004509615.tif 000510
2004509615.tif 000511
2004509615.tif 000512
2004509615.tif 000513
2004509615.tif 000514
2004509615.tif 000515
2004509615.tif 000516
2004509615.tif 000517
2004509615.tif 000518
2004509615.tif 000519
2004509615.tif 000520
2004509615.tif 000521
2004509615.tif 000522
2004509615.tif 000523
2004509615.tif 000524
2004509615.tif 000525
2004509615.tif 000526
2004509615.tif 000527
2004509615.tif 000528
2004509615.tif 000529
2004509615.tif 000530
2004509615.tif 000531
2004509615.tif 000532
2004509615.tif 000533
2004509615.tif 000534
2004509615.tif 000535
2004509615.tif 000536
2004509615.tif 000537
2004509615.tif 000538
2004509615.tif 000539
2004509615.tif 000540
2004509615.tif 000541
2004509615.tif 000542
2004509615.tif 000543
2004509615.tif 000544
2004509615.tif 000545
2004509615.tif 000546
2004509615.tif 000547
2004509615.tif 000548
2004509615.tif 000549
2004509615.tif 000550
2004509615.tif 000551
2004509615.tif 000552
2004509615.tif 000553
2004509615.tif 000554
2004509615.tif 000555
2004509615.tif 000556
2004509615.tif 000557
2004509615.tif 000558
2004509615.tif 000559
2004509615.tif 000560
2004509615.tif 000561
2004509615.tif 000562
2004509615.tif 000563
2004509615.tif 000564
2004509615.tif 000565
2004509615.tif 000566
2004509615.tif 000567
2004509615.tif 000568
2004509615.tif 000569
2004509615.tif 000570
2004509615.tif 000571
2004509615.tif 000572
2004509615.tif 000573
2004509615.tif 000574
2004509615.tif 000575
2004509615.tif 000576
2004509615.tif 000577
2004509615.tif 000578
2004509615.tif 000579
2004509615.tif 000580
2004509615.tif 000581
2004509615.tif 000582
2004509615.tif 000583
2004509615.tif 000584
2004509615.tif 000585
2004509615.tif 000586
2004509615.tif 000587
2004509615.tif 000588
2004509615.tif 000589
2004509615.tif 000590
2004509615.tif 000591
2004509615.tif 000592
2004509615.tif 000593
2004509615.tif 000594
2004509615.tif 000595
2004509615.tif 000596
2004509615.tif 000597
2004509615.tif 000598
2004509615.tif 000599
2004509615.tif 000600
2004509615.tif 000601
2004509615.tif 000602
2004509615.tif 000603
2004509615.tif 000604
2004509615.tif 000605
2004509615.tif 000606
2004509615.tif 000607
2004509615.tif 000608
2004509615.tif 000609
2004509615.tif 000610
2004509615.tif 000611
2004509615.tif 000612
2004509615.tif 000613
2004509615.tif 000614
2004509615.tif 000615
2004509615.tif 000616
2004509615.tif 000617
2004509615.tif 000618
2004509615.tif 000619
2004509615.tif 000620
2004509615.tif 000621
2004509615.tif 000622
2004509615.tif 000623
2004509615.tif 000624
2004509615.tif 000625
2004509615.tif 000626
2004509615.tif 000627
2004509615.tif 000628
2004509615.tif 000629
2004509615.tif 000630
2004509615.tif 000631
2004509615.tif 000632
2004509615.tif 000633
2004509615.tif 000634
2004509615.tif 000635
2004509615.tif 000636
2004509615.tif 000637
2004509615.tif 000638
2004509615.tif 000639
2004509615.tif 000640
2004509615.tif 000641
2004509615.tif 000642
2004509615.tif 000643
2004509615.tif 000644
2004509615.tif 000645
2004509615.tif 000646
2004509615.tif 000647
2004509615.tif 000648
2004509615.tif 000649
2004509615.tif 000650
2004509615.tif 000651
2004509615.tif 000652
2004509615.tif 000653
2004509615.tif 000654
2004509615.tif 000655
2004509615.tif 000656
2004509615.tif 000657
2004509615.tif 000658
2004509615.tif 000659
2004509615.tif 000660
2004509615.tif 000661
2004509615.tif 000662
2004509615.tif 000663
2004509615.tif 000664
2004509615.tif 000665
2004509615.tif 000666
2004509615.tif 000667
2004509615.tif 000668
2004509615.tif 000669
2004509615.tif 000670
2004509615.tif 000671
2004509615.tif 000672
2004509615.tif 000673
2004509615.tif 000674
2004509615.tif 000675
2004509615.tif 000676
2004509615.tif 000677
2004509615.tif 000678
2004509615.tif 000679
2004509615.tif 000680
2004509615.tif 000681
2004509615.tif 000682
2004509615.tif 000683
2004509615.tif 000684
2004509615.tif 000685
2004509615.tif 000686
2004509615.tif 000687
2004509615.tif 000688
2004509615.tif 000689
2004509615.tif 000690
2004509615.tif 000691
2004509615.tif 000692
2004509615.tif 000693
2004509615.tif 000694
2004509615.tif 000695
2004509615.tif 000696
2004509615.tif 000697
2004509615.tif 000698
2004509615.tif 000699
2004509615.tif 000700
2004509615.tif 000701
2004509615.tif 000702
2004509615.tif 000703
2004509615.tif 000704
2004509615.tif 000705
2004509615.tif 000706
2004509615.tif 000707
2004509615.tif 000708
2004509615.tif 000709
2004509615.tif 000710
2004509615.tif 000711
2004509615.tif 000712
2004509615.tif 000713
2004509615.tif 000714
2004509615.tif 000715
2004509615.tif 000716
2004509615.tif 000717
2004509615.tif 000718
2004509615.tif 000719
2004509615.tif 000720
2004509615.tif 000721
2004509615.tif 000722
2004509615.tif 000723
2004509615.tif 000724
2004509615.tif 000725
2004509615.tif 000726
2004509615.tif 000727
2004509615.tif 000728
2004509615.tif 000729
2004509615.tif 000730
2004509615.tif 000731
2004509615.tif 000732
2004509615.tif 000733
2004509615.tif 000734
2004509615.tif 000735
2004509615.tif 000736
2004509615.tif 000737
2004509615.tif 000738
2004509615.tif 000739
2004509615.tif 000740
2004509615.tif 000741
2004509615.tif 000742
2004509615.tif 000743
2004509615.tif 000744
2004509615.tif 000745
2004509615.tif 000746
2004509615.tif 000747
2004509615.tif 000748
2004509615.tif 000749
2004509615.tif 000750
2004509615.tif 000751
2004509615.tif 000752
2004509615.tif 000753
2004509615.tif 000754
2004509615.tif 000755
2004509615.tif 000756
2004509615.tif 000757
2004509615.tif 000758
2004509615.tif 000759
2004509615.tif 000760
2004509615.tif 000761
2004509615.tif 000762
2004509615.tif 000763
2004509615.tif 000764
2004509615.tif 000765
2004509615.tif 000766
2004509615.tif 000767
2004509615.tif 000768
2004509615.tif 000769
2004509615.tif 000770
2004509615.tif 000771
2004509615.tif 000772
2004509615.tif 000773
2004509615.tif 000774
2004509615.tif 000775
2004509615.tif 000776
2004509615.tif 000777
2004509615.tif 000778
2004509615.tif 000779
2004509615.tif 000780
2004509615.tif 000781
2004509615.tif 000782
2004509615.tif 000783
2004509615.tif 000784
2004509615.tif 000785
2004509615.tif 000786
2004509615.tif 000787
2004509615.tif 000788
2004509615.tif 000789
2004509615.tif 000790
2004509615.tif 000791
2004509615.tif 000792
2004509615.tif 000793
2004509615.tif 000794
2004509615.tif 000795
2004509615.tif 000796
2004509615.tif 000797
2004509615.tif 000798
2004509615.tif 000799
2004509615.tif 000800
2004509615.tif 000801
2004509615.tif 000802
2004509615.tif 000803
2004509615.tif 000804
2004509615.tif 000805
2004509615.tif 000806
2004509615.tif 000807
2004509615.tif 000808
2004509615.tif 000809
2004509615.tif 000810
2004509615.tif 000811
2004509615.tif 000812
2004509615.tif 000813
2004509615.tif 000814
2004509615.tif 000815
2004509615.tif 000816
2004509615.tif 000817
2004509615.tif 000818
2004509615.tif 000819
2004509615.tif 000820
2004509615.tif 000821
2004509615.tif 000822
2004509615.tif 000823
2004509615.tif 000824
2004509615.tif 000825
2004509615.tif 000826
2004509615.tif 000827
2004509615.tif 000828
2004509615.tif 000829
2004509615.tif 000830
2004509615.tif 000831
2004509615.tif 000832
2004509615.tif 000833
2004509615.tif 000834
2004509615.tif 000835
2004509615.tif 000836
2004509615.tif 000837
2004509615.tif 000838
2004509615.tif 000839
2004509615.tif 000840
2004509615.tif 000841
2004509615.tif 000842
2004509615.tif 000843
2004509615.tif 000844
2004509615.tif 000845
2004509615.tif 000846
2004509615.tif 000847
2004509615.tif 000848
2004509615.tif 000849
2004509615.tif 000850
2004509615.tif 000851
2004509615.tif 000852
2004509615.tif 000853
2004509615.tif 000854
2004509615.tif 000855
2004509615.tif 000856
2004509615.tif 000857
2004509615.tif 000858
2004509615.tif 000859
2004509615.tif 000860
2004509615.tif 000861
2004509615.tif 000862
2004509615.tif 000863
2004509615.tif 000864
2004509615.tif 000865
2004509615.tif 000866
2004509615.tif 000867
2004509615.tif 000868
2004509615.tif 000869
2004509615.tif 000870
2004509615.tif 000871
2004509615.tif 000872
2004509615.tif 000873
2004509615.tif 000874
2004509615.tif 000875
2004509615.tif 000876
2004509615.tif 000877
2004509615.tif 000878
2004509615.tif 000879
2004509615.tif 000880
2004509615.tif 000881
2004509615.tif 000882
2004509615.tif 000883
2004509615.tif 000884
2004509615.tif 000885
2004509615.tif 000886
2004509615.tif 000887
2004509615.tif 000888
2004509615.tif 000889
2004509615.tif 000890
2004509615.tif 000891
2004509615.tif 000892
2004509615.tif 000893
2004509615.tif 000894
2004509615.tif 000895
2004509615.tif 000896
2004509615.tif 000897
2004509615.tif 000898
2004509615.tif 000899
2004509615.tif 000900
2004509615.tif 000901
2004509615.tif 000902
2004509615.tif 000903
2004509615.tif 000904
2004509615.tif 000905
2004509615.tif 000906
2004509615.tif 000907
2004509615.tif 000908
2004509615.tif 000909
2004509615.tif 000910
2004509615.tif 000911
2004509615.tif 000912
2004509615.tif 000913
2004509615.tif 000914
2004509615.tif 000915
2004509615.tif 000916
2004509615.tif 000917
2004509615.tif 000918
2004509615.tif 000919
2004509615.tif 000920
2004509615.tif 000921
2004509615.tif 000922
2004509615.tif 000923
2004509615.tif 000924
2004509615.tif 000925
2004509615.tif 000926
2004509615.tif 000927
2004509615.tif 000928
2004509615.tif 000929
2004509615.tif 000930
2004509615.tif 000931
2004509615.tif 000932
2004509615.tif 000933
2004509615.tif 000934
2004509615.tif 000935
2004509615.tif 000936
2004509615.tif 000937
2004509615.tif 000938
2004509615.tif 000939
2004509615.tif 000940
2004509615.tif 000941
2004509615.tif 000942
2004509615.tif 000943
2004509615.tif 000944
2004509615.tif 000945
2004509615.tif 000946
2004509615.tif 000947
2004509615.tif 000948
2004509615.tif 000949
2004509615.tif 000950
2004509615.tif 000951
2004509615.tif 000952
2004509615.tif 000953
2004509615.tif 000954
2004509615.tif 000955
2004509615.tif 000956
2004509615.tif 000957
2004509615.tif 000958
2004509615.tif 000959
2004509615.tif 000960
2004509615.tif 000961
2004509615.tif 000962
2004509615.tif 000963
2004509615.tif 000964
2004509615.tif 000965
2004509615.tif 000966
2004509615.tif 000967
2004509615.tif 000968
2004509615.tif 000969
2004509615.tif 000970
2004509615.tif 000971
2004509615.tif 000972
2004509615.tif 000973
2004509615.tif 000974
2004509615.tif 000975
2004509615.tif 000976
2004509615.tif 000977
2004509615.tif 000978
2004509615.tif 000979
2004509615.tif 000980
2004509615.tif 000981
2004509615.tif 000982
2004509615.tif 000983
2004509615.tif 000984
2004509615.tif 000985
2004509615.tif 000986
2004509615.tif 000987
2004509615.tif 000988
2004509615.tif 000989
2004509615.tif 000990
2004509615.tif 000991
2004509615.tif 000992
2004509615.tif 000993
2004509615.tif 000994
2004509615.tif 000995
2004509615.tif 000996
2004509615.tif 000997
2004509615.tif 000998
2004509615.tif 000999
2004509615.tif 001000
2004509615.tif 001001
2004509615.tif 001002
2004509615.tif 001003
2004509615.tif 001004
2004509615.tif 001005
2004509615.tif 001006
2004509615.tif 001007
2004509615.tif 001008
2004509615.tif 001009
2004509615.tif 001010
2004509615.tif 001011
2004509615.tif 001012
2004509615.tif 001013
2004509615.tif 001014
2004509615.tif 001015
2004509615.tif 001016
2004509615.tif 001017
2004509615.tif 001018
2004509615.tif 001019
2004509615.tif 001020
2004509615.tif 001021
2004509615.tif 001022
2004509615.tif 001023
2004509615.tif 001024
2004509615.tif 001025
2004509615.tif 001026
2004509615.tif 001027
2004509615.tif 001028
2004509615.tif 001029
2004509615.tif 001030
2004509615.tif 001031
2004509615.tif 001032
2004509615.tif 001033
2004509615.tif 001034
2004509615.tif 001035
2004509615.tif 001036
2004509615.tif 001037
2004509615.tif 001038
2004509615.tif 001039
2004509615.tif 001040
2004509615.tif 001041
2004509615.tif 001042
2004509615.tif 001043
2004509615.tif 001044
2004509615.tif 001045
2004509615.tif 001046
2004509615.tif 001047
2004509615.tif 001048
2004509615.tif 001049
2004509615.tif 001050
2004509615.tif 001051
2004509615.tif 001052
2004509615.tif 001053
2004509615.tif 001054
2004509615.tif 001055
2004509615.tif 001056
2004509615.tif 001057
2004509615.tif 001058
2004509615.tif 001059
2004509615.tif 001060
2004509615.tif 001061
2004509615.tif 001062
2004509615.tif 001063
2004509615.tif 001064
2004509615.tif 001065
2004509615.tif 001066
2004509615.tif 001067
2004509615.tif 001068
2004509615.tif 001069
2004509615.tif 001070
2004509615.tif 001071
2004509615.tif 001072
2004509615.tif 001073
2004509615.tif 001074
2004509615.tif 001075
2004509615.tif 001076
2004509615.tif 001077
2004509615.tif 001078
2004509615.tif 001079
2004509615.tif 001080
2004509615.tif 001081
2004509615.tif 001082
2004509615.tif 001083
2004509615.tif 001084
2004509615.tif 001085
2004509615.tif 001086
2004509615.tif 001087
2004509615.tif 001088
2004509615.tif 001089
2004509615.tif 001090
2004509615.tif 001091
2004509615.tif 001092
2004509615.tif 001093
2004509615.tif 001094
2004509615.tif 001095
2004509615.tif 001096
2004509615.tif 001097
2004509615.tif 001098
2004509615.tif 001099
2004509615.tif 001100
2004509615.tif 001101
2004509615.tif 001102
2004509615.tif 001103
2004509615.tif 001104
2004509615.tif 001105
2004509615.tif 001106
2004509615.tif 001107
2004509615.tif 001108
2004509615.tif 001109
2004509615.tif 001110
2004509615.tif 001111
2004509615.tif 001112
2004509615.tif 001113
2004509615.tif 001114
2004509615.tif 001115
2004509615.tif 001116
2004509615.tif 001117
2004509615.tif 001118
2004509615.tif 001119
2004509615.tif 001120
2004509615.tif 001121
2004509615.tif 001122
2004509615.tif 001123
2004509615.tif 001124
2004509615.tif 001125
2004509615.tif 001126
2004509615.tif 001127
2004509615.tif 001128
2004509615.tif 001129
2004509615.tif 001130
2004509615.tif 001131
2004509615.tif 001132
2004509615.tif 001133
2004509615.tif 001134
2004509615.tif 001135
2004509615.tif 001136
2004509615.tif 001137
2004509615.tif 001138
2004509615.tif 001139
2004509615.tif 001140
2004509615.tif 001141
2004509615.tif 001142
2004509615.tif 001143
2004509615.tif 001144
2004509615.tif 001145
2004509615.tif 001146
2004509615.tif 001147
2004509615.tif 001148
2004509615.tif 001149
2004509615.tif 001150
2004509615.tif 001151
2004509615.tif 001152
2004509615.tif 001153
2004509615.tif 001154
2004509615.tif 001155
2004509615.tif 001156
2004509615.tif 001157
2004509615.tif 001158
2004509615.tif 001159
2004509615.tif 001160
2004509615.tif 001161
2004509615.tif 001162
2004509615.tif 001163
2004509615.tif 001164
2004509615.tif 001165
2004509615.tif 001166
2004509615.tif 001167
2004509615.tif 001168
2004509615.tif 001169
2004509615.tif 001170
2004509615.tif 001171
2004509615.tif 001172
2004509615.tif 001173
2004509615.tif 001174
2004509615.tif 001175
2004509615.tif 001176
2004509615.tif 001177
2004509615.tif 001178
2004509615.tif 001179
2004509615.tif 001180
2004509615.tif 001181
2004509615.tif 001182
2004509615.tif 001183
2004509615.tif 001184
2004509615.tif 001185
2004509615.tif 001186
2004509615.tif 001187
2004509615.tif 001188
2004509615.tif 001189
2004509615.tif 001190
2004509615.tif 001191
2004509615.tif 001192
2004509615.tif 001193
2004509615.tif 001194
2004509615.tif 001195
2004509615.tif 001196
2004509615.tif 001197
2004509615.tif 001198
2004509615.tif 001199
2004509615.tif 001200
2004509615.tif 001201
2004509615.tif 001202
2004509615.tif 001203
2004509615.tif 001204
2004509615.tif 001205
2004509615.tif 001206
2004509615.tif 001207
2004509615.tif 001208
2004509615.tif 001209
2004509615.tif 001210
2004509615.tif 001211
2004509615.tif 001212
2004509615.tif 001213
2004509615.tif 001214
2004509615.tif 001215
2004509615.tif 001216
2004509615.tif 001217
2004509615.tif 001218
2004509615.tif 001219
2004509615.tif 001220
2004509615.tif 001221
2004509615.tif 001222
2004509615.tif 001223
2004509615.tif 001224
2004509615.tif 001225
2004509615.tif 001226
2004509615.tif 001227
2004509615.tif 001228
2004509615.tif 001229
2004509615.tif 001230
2004509615.tif 001231
2004509615.tif 001232
2004509615.tif 001233
2004509615.tif 001234
2004509615.tif 001235
2004509615.tif 001236
2004509615.tif 001237
2004509615.tif 001238
2004509615.tif 001239
2004509615.tif 001240
2004509615.tif 001241
2004509615.tif 001242
2004509615.tif 001243
2004509615.tif 001244
2004509615.tif 001245
2004509615.tif 001246
2004509615.tif 001247
2004509615.tif 001248
2004509615.tif 001249
2004509615.tif 001250
2004509615.tif 001251
2004509615.tif 001252
2004509615.tif 001253
2004509615.tif 001254
2004509615.tif 001255
2004509615.tif 001256
2004509615.tif 001257
2004509615.tif 001258
2004509615.tif 001259
2004509615.tif 001260
2004509615.tif 001261
2004509615.tif 001262
2004509615.tif 001263
2004509615.tif 001264
2004509615.tif 001265
2004509615.tif 001266
2004509615.tif 001267
2004509615.tif 001268
2004509615.tif 001269
2004509615.tif 001270
2004509615.tif 001271
2004509615.tif 001272
2004509615.tif 001273
2004509615.tif 001274
2004509615.tif 001275
2004509615.tif 001276
2004509615.tif 001277
2004509615.tif 001278
2004509615.tif 001279
2004509615.tif 001280
2004509615.tif 001281
2004509615.tif 001282
2004509615.tif 001283
2004509615.tif 001284
2004509615.tif 001285
2004509615.tif 001286
2004509615.tif 001287
2004509615.tif 001288
2004509615.tif 001289
2004509615.tif 001290
2004509615.tif 001291
2004509615.tif 001292
2004509615.tif 001293
2004509615.tif 001294
2004509615.tif 001295
2004509615.tif 001296
2004509615.tif 001297
2004509615.tif 001298
2004509615.tif 001299
2004509615.tif 001300
2004509615.tif 001301
2004509615.tif 001302
2004509615.tif 001303
2004509615.tif 001304
2004509615.tif 001305
2004509615.tif 001306
2004509615.tif 001307
2004509615.tif 001308
2004509615.tif 001309
2004509615.tif 001310
2004509615.tif 001311
2004509615.tif 001312
2004509615.tif 001313
2004509615.tif 001314
2004509615.tif 001315
2004509615.tif 001316
2004509615.tif 001317
2004509615.tif 001318
2004509615.tif 001319
2004509615.tif 001320
2004509615.tif 001321
2004509615.tif 001322
2004509615.tif 001323
2004509615.tif 001324
2004509615.tif 001325
2004509615.tif 001326
2004509615.tif 001327
2004509615.tif 001328
2004509615.tif 001329
2004509615.tif 001330
2004509615.tif 001331
2004509615.tif 001332
2004509615.tif 001333
2004509615.tif 001334
2004509615.tif 001335
2004509615.tif 001336
2004509615.tif 001337
2004509615.tif 001338
2004509615.tif 001339
2004509615.tif 001340
2004509615.tif 001341
2004509615.tif 001342
2004509615.tif 001343
2004509615.tif 001344
2004509615.tif 001345
2004509615.tif 001346
2004509615.tif 001347
2004509615.tif 001348
2004509615.tif 001349
2004509615.tif 001350
2004509615.tif 001351
2004509615.tif 001352
2004509615.tif 001353
2004509615.tif 001354
2004509615.tif 001355
2004509615.tif 001356
2004509615.tif 001357
2004509615.tif 001358
2004509615.tif 001359
2004509615.tif 001360
2004509615.tif 001361
2004509615.tif 001362
2004509615.tif 001363
2004509615.tif 001364
2004509615.tif 001365
2004509615.tif 001366
2004509615.tif 001367
2004509615.tif 001368
2004509615.tif 001369
2004509615.tif 001370
2004509615.tif 001371
2004509615.tif 001372
2004509615.tif 001373
2004509615.tif 001374
2004509615.tif 001375
2004509615.tif 001376
2004509615.tif 001377
2004509615.tif 001378
2004509615.tif 001379
2004509615.tif 001380
2004509615.tif 001381
2004509615.tif 001382
2004509615.tif 001383
2004509615.tif 001384
2004509615.tif 001385
2004509615.tif 001386
2004509615.tif 001387
2004509615.tif 001388
2004509615.tif 001389
2004509615.tif 001390
2004509615.tif 001391
2004509615.tif 001392
2004509615.tif 001393
2004509615.tif 001394
2004509615.tif 001395
2004509615.tif 001396
2004509615.tif 001397
2004509615.tif 001398
2004509615.tif 001399
2004509615.tif 001400
2004509615.tif 001401
2004509615.tif 001402
2004509615.tif 001403
2004509615.tif 001404
2004509615.tif 001405
2004509615.tif 001406
2004509615.tif 001407
2004509615.tif 001408
2004509615.tif 001409
2004509615.tif 001410
2004509615.tif 001411
2004509615.tif 001412
2004509615.tif 001413
2004509615.tif 001414
2004509615.tif 001415
2004509615.tif 001416
2004509615.tif 001417
2004509615.tif 001418
2004509615.tif 001419
2004509615.tif 001420
2004509615.tif 001421
2004509615.tif 001422
2004509615.tif 001423
2004509615.tif 001424
2004509615.tif 001425
2004509615.tif 001426
2004509615.tif 001427
2004509615.tif 001428
2004509615.tif 001429
2004509615.tif 001430
2004509615.tif 001431
2004509615.tif 001432
2004509615.tif 001433
2004509615.tif 001434
2004509615.tif 001435
2004509615.tif 001436
2004509615.tif 001437
2004509615.tif 001438
2004509615.tif 001439
2004509615.tif 001440
2004509615.tif 001441
2004509615.tif 001442
2004509615.tif 001443
2004509615.tif 001444
2004509615.tif 001445
2004509615.tif 001446
2004509615.tif 001447
2004509615.tif 001448
2004509615.tif 001449
2004509615.tif 001450
2004509615.tif 001451
2004509615.tif 001452
2004509615.tif 001453
2004509615.tif 001454
2004509615.tif 001455
2004509615.tif 001456
2004509615.tif 001457
2004509615.tif 001458
2004509615.tif 001459
2004509615.tif 001460
2004509615.tif 001461
2004509615.tif 001462
2004509615.tif 001463
2004509615.tif 001464
2004509615.tif 001465
2004509615.tif 001466
2004509615.tif 001467
2004509615.tif 001468
2004509615.tif 001469
2004509615.tif 001470
2004509615.tif 001471
2004509615.tif 001472
2004509615.tif 001473
2004509615.tif 001474
2004509615.tif 001475
2004509615.tif 001476
2004509615.tif 001477
2004509615.tif 001478
2004509615.tif 001479
2004509615.tif 001480
2004509615.tif 001481
2004509615.tif 001482
2004509615.tif 001483
2004509615.tif 001484
2004509615.tif 001485
2004509615.tif 001486
2004509615.tif 001487
2004509615.tif 001488
2004509615.tif 001489
2004509615.tif 001490
2004509615.tif 001491
2004509615.tif 001492
2004509615.tif 001493
2004509615.tif 001494
2004509615.tif 001495
2004509615.tif 001496
2004509615.tif 001497
2004509615.tif 001498
2004509615.tif 001499
2004509615.tif 001500
2004509615.tif 001501
2004509615.tif 001502
2004509615.tif 001503
2004509615.tif 001504
2004509615.tif 001505
2004509615.tif 001506
2004509615.tif 001507
2004509615.tif 001508
2004509615.tif 001509
2004509615.tif 001510
2004509615.tif 001511
2004509615.tif 001512
2004509615.tif 001513
2004509615.tif 001514
2004509615.tif 001515
2004509615.tif 001516
2004509615.tif 001517
2004509615.tif 001518
2004509615.tif 001519
2004509615.tif 001520
2004509615.tif 001521
2004509615.tif 001522
2004509615.tif 001523
2004509615.tif 001524
2004509615.tif 001525
2004509615.tif 001526
2004509615.tif 001527
2004509615.tif 001528
2004509615.tif 001529
2004509615.tif 001530
2004509615.tif 001531
2004509615.tif 001532
2004509615.tif 001533
2004509615.tif 001534
2004509615.tif 001535
2004509615.tif 001536
2004509615.tif 001537
2004509615.tif 001538
2004509615.tif 001539
2004509615.tif 001540
2004509615.tif 001541
2004509615.tif 001542
2004509615.tif 001543
2004509615.tif 001544
2004509615.tif 001545
2004509615.tif 001546
2004509615.tif 001547
2004509615.tif 001548
2004509615.tif 001549
2004509615.tif 001550
2004509615.tif 001551
2004509615.tif 001552
2004509615.tif 001553
2004509615.tif 001554
2004509615.tif 001555
2004509615.tif 001556
2004509615.tif 001557
2004509615.tif 001558
2004509615.tif 001559
2004509615.tif 001560
2004509615.tif 001561
2004509615.tif 001562
2004509615.tif 001563
2004509615.tif 001564
2004509615.tif 001565
2004509615.tif 001566
2004509615.tif 001567
2004509615.tif 001568
2004509615.tif 001569
2004509615.tif 001570
2004509615.tif 001571
2004509615.tif 001572
2004509615.tif 001573
2004509615.tif 001574
2004509615.tif 001575
2004509615.tif 001576
2004509615.tif 001577
2004509615.tif 001578
2004509615.tif 001579
2004509615.tif 001580
2004509615.tif 001581
2004509615.tif 001582
2004509615.tif 001583
2004509615.tif 001584
2004509615.tif 001585
2004509615.tif 001586
2004509615.tif 001587
2004509615.tif 001588
2004509615.tif 001589
2004509615.tif 001590
2004509615.tif 001591
2004509615.tif 001592
2004509615.tif 001593
2004509615.tif 001594
2004509615.tif 001595
2004509615.tif 001596
2004509615.tif 001597
2004509615.tif 001598
2004509615.tif 001599
2004509615.tif 001600
2004509615.tif 001601
2004509615.tif 001602
2004509615.tif 001603
2004509615.tif 001604
2004509615.tif 001605
2004509615.tif 001606
2004509615.tif 001607
2004509615.tif 001608
2004509615.tif 001609
2004509615.tif 001610
2004509615.tif 001611
2004509615.tif 001612
2004509615.tif 001613
2004509615.tif 001614
2004509615.tif 001615
2004509615.tif 001616
2004509615.tif 001617
2004509615.tif 001618
2004509615.tif 001619
2004509615.tif 001620
2004509615.tif 001621
2004509615.tif 001622