(57)【要約】本発明は、腫瘍細胞の成長を阻害し、それ故哺乳類における癌等の治療において有用な、高純度のインドロカルバゾールグリコシドを生成するための新規方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物Ｉ：
【化１】
2004519518.tif 000016
の結晶を高純度で調製するための方法であって、
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物Ｉを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内に保持する工程、および
（ｃ）化合物Ｉの結晶を単離する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物Ｉを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１０％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖであるように、および化合物Ｉの濃度が約１０ｍＬ／ｇから２０ｍＬ／ｇであるようにアルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度に調整する工程、
（ｄ）工程（ｃ）からの溶液にアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：アルコール）に希釈する工程、
（ｅ）化合物Ｉの結晶が形成してスラリーが生じるまで、工程（ｄ）からの溶液を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度でエージングさせる工程、および
（ｆ）化合物Ｉの結晶を単離する工程
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
中間体ＩＩ：
【化２】
2004519518.tif 000017
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して反応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒがベンジルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
高純度の化合物ＩＩＩ：
【化３】
2004519518.tif 000018
を調製するための方法であって、
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物ＩＩＩを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１０％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１０ｍＬ／ｇから２０ｍＬ／ｇであるように、アルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度に調整する工程、
（ｄ）溶液に結晶種を入れる工程、
（ｅ）溶液にアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：アルコール）に希釈する工程、
（ｆ）化合物ＩＩＩの結晶が形成してスラリーが生じるまで、工程（ｅ）からの溶液を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度でエージングする工程、および
（ｇ）化合物ＩＩＩの結晶を単離する工程
を含む方法。
【請求項６】
中間体ＩＩ：
【化４】
2004519518.tif 000019
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して反応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
工程（ａ）でのｐＨを約１．５から約３．５の範囲内のｐＨに調整し、工程（ｂ）の溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１５％ｗ／ｖから約２５％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１２ｍＬ／ｇから約１８ｍＬ／ｇであるように調整し、並びに工程（ｃ）で温度を約７０℃に調整する、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
工程（ａ）でのｐＨを約２．５に調整し、工程（ｂ）の溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約２０％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１５ｍＬ／ｇであるように調整し、工程（ｃ）での温度を約７０℃に調整する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
工程（ｆ）の後、工程（ｇ）で化合物ＩＩＩの結晶を単離する前に、水分含量を約１％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの範囲に低下させるようにスラリーを調整する工程をさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物ＩＩＩを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、低級アルキルアミン塩基を加えることによって調整して、約２．５のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がイソプロピルアルコール中約２０％ｗ／ｖであるように、および化合物Ｉの濃度が約１５ｍＬ／ｇであるようにイソプロピルアルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約７０℃の温度に調整する工程、
（ｄ）溶液に結晶種を入れる工程、
（ｅ）溶液にイソプロピルアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：イソプロピルアルコール）に希釈する工程、
（ｆ）化合物Ｉの結晶が形成されてスラリーが生じるまで、（ｅ）からの溶液を約７０℃の温度でエージングさせる工程、
（ｇ）水分含量が約３％ｗ／ｖになるようにスラリーを調整する工程、
（ｈ）スラリーを約７０℃でエージングさせた後、約２２℃に冷却する工程、および
（ｉ）化合物ＩＩＩの結晶を単離する工程
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
中間体ＩＩ：
【化５】
2004519518.tif 000020
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して、応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ａ）の低級アルキルアミンがトリエチルアミンである、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
本発明は、腫瘍細胞の成長を阻害し、それ故哺乳類における癌等の治療において有用な、高純度のインドロカルバゾールグリコシドを生成するための新規方法に関する。
【０００２】
癌化学療法の分野では、数多くの化合物が既に抗腫瘍薬として実際に使用されている。しかし、様々な腫瘍に対して作用するより有効な化合物の開発は依然として必要とされている（第４７回日本癌学会総会議事録ｐ．１２−１５（１９８８）参照）。この必要性がインドロカルバゾール誘導体の開発を導いた（米国特許４，４８７，９２５；４，５５２，８４２；４，７８５，０８５；５，５９１，８４２及び５，９２２，８６０；日本特許出願公告２０２７７／９１；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．４４，ｐ．７２３−７２８（１９９１）；ＷＯ９１／１８００３；ＷＯ９８／０７４３３；及びＥＰ０５４５１９５  Ａ１参照）。これらの化合物はトポイソメラーゼ阻害因子として作用し、それ故癌の治療において有用であることが示された（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３４（補遺）：Ｓ４１−Ｓ４５（１９９４））。
【０００３】
多くの癌を治療する上でこれらの化合物が成功を収めたことから、それらの合成のための改善した方法を開発する必要が生まれた。（Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０００、１０、４１９；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９７，５３、５９３７；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９７，５３，５８５；及びＳｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９７６，４１４参照）。これまでの既知の方法は、しかしながら、望ましくない溶媒や水銀または銀塩の使用、低い収率、そして面倒なまたは時間のかかる精製工程を必要とする不要な副産物の形成を含めて、数多くの問題を抱えている。
【０００４】
例えば、これまでに知られている高純度のインドロカルバゾールグリコシドＩＩＩの調製方法は、生成物が高い細胞傷害性を示すため、特に商業規模で実施するときには、炭素処理、クロマトグラフィー及び／または粗物質の再結晶化の組合せのような厄介で時間がかかり且つ危険な精製手順を必要とする。（Ｂｉｏｏｒｇ  ＆  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９９９、３３０７；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９７，５８５（純物質を得るために粗生成物の再溶解を必要とする、構造的に類似した化合物の合成が開示されている。）参照）。
【０００５】
【化６】
2004519518.tif 000002
【０００６】
本発明の目的は、それ故、これまでの既知の合成法における固有の問題を克服しながら、これらのインドロピロロカルバゾール誘導体の抗腫瘍性物質への新規製法、特にその後の製剤化において「そのまま」での使用を可能にする十分な純度の化合物を生成する方法を提供することである。
【０００７】
（発明の概要）
本発明は、腫瘍細胞増殖を阻害し、それ故哺乳類における癌等の治療において有用な、高純度の式Ｉのインドロカルバゾールグリコシドを生成するための新規方法に関する。
【０００８】
【化７】
2004519518.tif 000003
【０００９】
（発明の詳細な説明）
本発明の１つの実施形態は、式Ｉ：
【００１０】
【化８】
2004519518.tif 000004
の化合物を高純度で調製するための方法であって、
（ａ）アルコール、酸、水及び化合物Ｉを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内に保持する工程、および
（ｃ）化合物Ｉの結晶を単離する工程
を含む方法によって例示される。
【００１１】
本発明の第二の実施形態では、この方法は、
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物Ｉを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１０％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖであるように、および化合物Ｉの濃度が約１０ｍＬ／ｇから２０ｍＬ／ｇであるようにアルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度に調整する工程、
（ｄ）工程（ｃ）からの溶液にアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：アルコール）に希釈する工程、
（ｅ）化合物Ｉの結晶が形成されてスラリーが生じるまで、工程（ｄ）からの溶液を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度でエージングさせる工程、および
（ｆ）化合物Ｉの結晶を単離する工程、
を含む。
【００１２】
第二の実施形態のさらにもう１つの実施形態では、この方法は、中間体ＩＩ：
【００１３】
【化９】
2004519518.tif 000005
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して反応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む。
【００１４】
もう１つの代替的実施形態では、上述した方法においてＲはベンジルである。
【００１５】
本発明の第三の実施形態では、高純度の化合物ＩＩＩ：
【００１６】
【化１０】
2004519518.tif 000006
を調製するための方法は、
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物ＩＩＩを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、塩基を加えることによって調整して、約１．５から約６．５の範囲内のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１０％ｗ／ｖから約３０％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１０ｍＬ／ｇから２０ｍＬ／ｇであるようにアルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度に調整する工程、
（ｄ）溶液に結晶種を入れる工程、
（ｅ）溶液にアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：アルコール）に希釈する工程、
（ｆ）化合物ＩＩＩの結晶が形成されてスラリーが生じるまで、（ｅ）からの溶液を約５０℃から約１００℃の範囲内の温度でエージングさせる工程、および
（ｇ）化合物ＩＩＩの結晶を単離する工程
を含む。
【００１７】
第三の実施形態のもう１つのさらなる実施形態では、この方法は、中間体ＩＩ：
【００１８】
【化１１】
2004519518.tif 000007
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して反応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む。
【００１９】
さらなるもう１つの実施形態は、工程（ａ）でのｐＨを約１．５から約３．５の範囲内のｐＨに調整し、工程（ｂ）の溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約１５％ｗ／ｖから約２５％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１２ｍＬ／ｇから約１８ｍＬ／ｇであるように調整し、並びに工程（ｃ）で温度を約７０℃に調整する、直前に述べた方法である。
【００２０】
さらなる実施形態は、工程（ａ）でのｐＨを約２．５のｐＨに調製し、工程（ｂ）の溶液を、その溶液の水分含量がアルコール中約２０％ｗ／ｖであるように、および化合物ＩＩＩの濃度が約１５ｍＬ／ｇであるように調整し、並びに工程（ｃ）で温度を約７０℃に調整する、直前に述べた方法である。
【００２１】
工程（ｆ）の後、工程（ｇ）で化合物ＩＩＩの結晶を単離する前に、水分含量を約１％ｗ／ｖから約１０％ｗ／ｖの範囲に低下させるようにスラリーを調整する工程をさらに含む、上述した方法も本発明に包含される。
【００２２】
好ましい実施形態は、高純度の化合物ＩＩＩ：
【００２３】
【化１２】
2004519518.tif 000008
を調製するための方法であって、
（ａ）酸、アルコール、水及び化合物ＩＩＩを必須成分としてなる酸性混合物のｐＨを、低級アルキルアミン塩基を加えることによって調整して、約２．５のｐＨを有する溶液を調製する工程、
（ｂ）工程（ａ）からの溶液を、その溶液の水分含量がイソプロピルアルコール中約２０％ｗ／ｖであるように、および化合物Ｉの濃度が約１５ｍＬ／ｇであるようにイソプロピルアルコールで調整する工程、
（ｃ）工程（ｂ）からの溶液の温度を約７０℃の温度に調整する工程、
（ｄ）溶液に結晶種を入れる工程、
（ｅ）溶液にイソプロピルアルコールを加えて、溶液を約３：２（溶液：イソプロピルアルコール）に希釈する工程、
（ｆ）化合物Ｉの結晶が形成してスラリーが生じるまで、工程（ｅ）からの溶液を約７０℃の温度でエージングさせる工程、
（ｇ）水分含量が約３％ｗ／ｖになるようにスラリーを調整する工程、
（ｈ）スラリーを約７０℃でエージングさせた後、約２２℃に冷却する工程、および
（ｉ）化合物ＩＩＩの結晶を単離する工程
を含む方法である。
【００２４】
好ましい実施形態のもう１つのさらなる実施形態では、この方法は、中間体ＩＩ：
【００２５】
【化１３】
2004519518.tif 000009
［式中、Ｒは、独立して水素または置換もしくは非置換ベンジル保護基であり、但し、少なくとも１個のＲが置換または非置換ベンジル保護基である。］
を触媒の存在下での水素化によって脱保護して、反応混合物を生成し、次に反応混合物をろ過して工程（ａ）の混合物を得ることをさらに含む。
【００２６】
工程（ｃ）の低級アルキルアミンがトリエチルアミンである、直前に述べた方法も本発明の範囲内である。
【００２７】
本発明は、追加精製工程を必要とせずに反応媒質から直接結晶化することができる生成物が生じる。さらに、ここで特許請求の範囲に記載の方法は、溶解速度論によって示唆されるように、これまでの既知の方法の２−Ｄ針状結晶よりも安定な結晶幾何構造、３−Ｄ台形（ｔｒａｐｅｚｏｉｄ）を有する結晶を提供する。
【００２８】
化合物Ｉ及び化合物ＩＩＩは、参照してここに組み込まれる、１９９７年１月７日発行の米国特許５，５９１，８４２に述べられている手順に従って合成できる。ＷＯ９５／３０６８２及び米国特許５，５９１，８４２に述べられている工程によって得られる化合物ＩＩＩの粉末を本発明の方法によって結晶化させる。
【００２９】
本明細書において使用するとき、「高純度」とは、ＨＰＬＣによって測定したとき１％またはそれ以下の総不純物を伴って得られる生成物を意味する。
【００３０】
「酸性混合物」は、約７．０未満のｐＨを有する混合物を意味する。最も好ましくは、酸性混合物のｐＨは約２．５未満である。
【００３１】
本出願に関して、使用しうる酸の種類は、無水または水性のＨＦ、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、ＨＮＯ３、ＨＣｌＯ４、硫酸、リン酸、プロピオン酸、ＭｓＯＨ、ＴｓＯＨ、一リン酸塩、ニリン酸塩、混合リン酸塩、カルボン酸またはハロゲン化アンモニウムを含むが、これらに限定されない。混合リン酸塩は、Ｍ１Ｍ２ＨＰＯ４［式中、Ｍ１及びＭ２はＨ、Ｎａ、Ｋ、ＮＨ４、ナトリウムカリウム等から独立して選択される］として例示できる。より好ましくは、酸はＨＣｌから選択される。
【００３２】
ここで述べる水素化分解反応における触媒の選択は、当業者には容易に明白であろう。適当な触媒は、パラジウム−炭素、Ｐｄ（ＯＨ）２、ラネーニッケル、タングステン触媒、Ｒｈ／Ａｌ２Ｏ３等を含む。パラジウム−炭素のようなパラジウム触媒が好ましい。
【００３３】
「種晶の添加（ｓｅｅｄｉｎｇ）」とは、溶液から結晶が析出するのを促進触媒するために溶液に結晶（種結晶）を添加することを指す。種晶の添加は、固体乾燥形態の種結晶を加えることによって実施するか、または種結晶を液体中のスラリーの形態で加えてもよい。「種結晶」は、沈殿させるために添加する同じ化合物の結晶であるか、または異なる化合物の結晶であってもよい。本発明の場合には、同じ化合物のスラリーによる種晶の添加が好ましい。
【００３４】
「エージング」は、溶液を一定の温度と容量で一定の期間熟成させるように維持することを意味する。本発明において反応を熟成させる時間の長さは、特に異なる記載がない限り、決定的に重要ではなく、当業者は容易に認識することができる。
【００３５】
「ろ過」は、微粒子状の物質を除去するために溶液を何らかの濾過助剤に通過させることを意味する。濾過助剤の選択は決定的に重要ではなく、当業者は容易に選択することができる。ろ過は、セライト、ソルカフロック（ｓｏｌｋａ  ｆｌｏｃ）、砂、ガラスフリット、珪藻土等を通過させることによって実施しうる。
【００３６】
「アルコール」は、特徴的な活性基として少なくとも１個のヒドロキシ基を持つ、直鎖または分枝の、１から５個の炭素の有機化合物を意味することが意図されている。「アルコール」は、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール等々を含む。イソプロピルアルコールが好ましいアルコールである。
【００３７】
「置換ベンジル保護基」とは、ｐ−ＭｅＯ−ベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル（ハロはクロロ、ブロモ及びヨードを意味する）、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル等を含むが、これらに限定されない。さらなる適当な保護基は、Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．ＷｕｔｓとＴｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅによる「有機化学における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、第３版（１９９９）の中に認められる。
【００３８】
本発明は、ろ液のｐＨを特定範囲に調整する工程を含む。ｐＨは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、２，４，６−コリジン、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ジイソプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ＤＡＢＣＯ、Ｎ−アルキルモルホリン等のような何らかの適当な塩基で調製しうる。低級アルキルアミン塩基が好ましい。トリエチルアミンが最も好ましい。
【００３９】
「スラリー」は、液体中の固体または結晶の懸濁液を指す。固体は液体中に部分的に、不完全に、または完全に不溶であってもよい。
【００４０】
スキームの概要
スキームＡは、製剤化する前にさらなる精製工程の必要を取り除いて、高い収率と高い純度で生成物を提供する脱保護／結晶化プロトコールによって生物学的に活性なインドロカルバゾールグリコシド類を調製するための一般化されたアプローチを例示する。
【００４１】
【化１４】
2004519518.tif 000010
【００４２】
実施例
提供する実施例は本発明のさらなる理解を助けることを意図している。使用する個々の原料、種及び条件は、本発明をさらに例示することを意図しており、その妥当な範囲を限定することを意図しない。
【００４３】
実施例１
化合物１−１の生成のための方法は、参照してここに組み込まれる、ＷＯ９５／３０６８２（対応特許：米国特許５，８０４，５６４）に述べられている。
【００４４】
【化１５】
2004519518.tif 000011
５０Ｌのガラス容器中、化合物１−１（１．５５ｋｇ、１．４４ｍｏｌ）、トルエン（５．６Ｌ）及び４８％ＫＯＨ水溶液（４．１５ｋｇ）のニ相性混合物にエタノール（１４．０Ｌ）を室温で、内部温度を３０℃以下に維持しながら、３０分間にわたって滴下して加えた。生じた暗赤色混合物を２０℃から３０℃で１２時間攪拌し、その間に混合物は均一な赤色溶液になった。次に混合物を−５℃で１時間さらにエージングさせ、その後、内部温度を５℃以下に維持しながら、１０％クエン酸水溶液（２３．５ｋｇ）をゆっくり加えてｐＨ７．７からｐＨ８．０の混合物を形成した。生じた混合物を加温して２５℃から３０℃で７時間攪拌し、その期間中、さらなる１０％クエン酸水溶液（１．７７ｋｇ）を定期的に加えてｐＨを７．５から８．０に維持した。次に混合物をＭＴＢＥ（１５．５Ｌ）で抽出して、分離した有機層を３％ＮａＣｌ水溶液（２×３．１Ｌ）と２５％ＮａＣｌ水溶液（３．１Ｌ）で洗い、乾燥して（Ｎａ２ＳＯ４）、炭素（Ｄａｒｃｏ  Ｇ−６０、１５５ｇ、室温、１時間）で処理した。ろ過した溶液を真空中で６Ｌレベルに濃縮し、ＭｅＣＮフラッシュ（２×１５Ｌ）を実施して、その都度真空中で６Ｌバッチ容量に濃縮した（残留トルエン：９％）。次に混合物をＭｅＣＮで希釈して２３．３Ｌの溶液にし、ＭｅＯＨ（３．０Ｌ）を２２℃から２５℃で３０分間にわたってゆっくり加え、その後生成物（１−２）の結晶種を加えて結晶化を開始させた。生じた混合物をこの温度範囲で１時間さらにエージングさせ、次いでＭｅＯＨ（１７．６Ｌ）を１時間にわたって緩やかに加えた。生じた黄色懸濁液を２２℃から２５℃で１時間エージングさせ、その後０℃から５℃で３時間さらにエージングさせた。ろ過して結晶を分離し、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨの９：１（ｖ／ｖ）混合物（１５．５Ｌ）で洗って真空中で乾燥し、１−２を得た。
【００４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：１０．７９（１Ｈ，ｂｒ，ｓ，），９．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），７．２６（３２Ｈ，ｍ），６．１７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，３Ｈｚ），５．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），４．８９（１０Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），３．９６（６Ｈ，ｍ），３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）
【００４６】
実施例２
【００４７】
【化１６】
2004519518.tif 000012
５０Ｌガラス容器中、１，３−ジベンジルオキシ−２−プロパノール（化合物２−１、１．５０ｋｇ、５．５１ｍｏｌ）、２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシフリーラジカル（ＴＥＭＰＯ、８６．０ｇ、０．５５０ｍｏｌ）、ＭｅＣＮ（２０．６Ｌ）及び３％ＮａＨＣＯ３水溶液（１５．５ｋｇ、５．５１ｍｏｌ）の攪拌混合物に１２．１％ＮａＣｌＯ水溶液（４．０６ｋｇ、６．６１ｍｍｏｌ；使用前にＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を用いて滴定した）を０℃で、内部温度を０℃から５℃に維持しながら、１時間半にわたって滴下して加えた。生じた混合物を０℃から５℃でさらに１時間攪拌し、１０℃以下でＭＴＢＥ、メチルｔ−ブチルエーテル（４１Ｌ）で抽出した。分離した有機層を１０℃以下で１０％Ｎａ２ＳＯ３水溶液（５．０ｋｇ）で洗い、次に室温で５％ＮａＣｌ水溶液（３．０ｋｇ）と１％ＮａＣｌ水溶液（３．０ｋｇ）で洗った。その後淡赤色の有機層をＨＰＬＣによって検定し、所望するケトン（化合物２−２）を１．４８ｋｇ（５．４９ｍｏｌ）含有すると算定された。次に溶液を５０Ｌ容器に入れ、真空中（４０℃浴）で約８Ｌに濃縮し、ｎ−ヘプタン（２×７．５Ｌ）でフラッシュして、ヘプタン混合物（残留ＭＴＢＥ及びＭｅＣＮはそれぞれ０．００５％と０．９０％である）を生成し、次いでｎ−ヘプタンで希釈して３７．５Ｌのバッチ容量を形成した。次に混合物を７０℃に加温し、Ｂｏｃ−ＮＨＮＨ２（８０１ｇ、６．０６ｍｏｌ）とトルエン（１．５Ｌ）を加えた。生じた混合物を７０℃以上で３時間攪拌し、次いで６０℃に冷却した。生成物（化合物２−３）の結晶種を加え、生じた混合物を５９℃から６１℃で１時間エージングさせ、結晶化を開始させた。その後混合物を放置して室温に冷却し、一晩エージングさせた。結晶を２０℃でろ過して分離し、ｎ−ヘプタン（７．５Ｌ）で洗い、次いでｎ−ヘプタン／ｉ−ＰｒＯＨの７：３ｖ／ｖ混合物（４．５Ｌ）及びｎ−ヘプタン（４．５Ｌ）で洗って真空中で乾燥し、化合物２−３を無色の針状結晶として得た。
【００４８】
５０Ｌガラス容器中、ＮａＢＨ４（３６４ｇ、９．６２ｍｏｌ）及びＴＨＦ（７．２Ｌ）の攪拌懸濁液に化合物２−３（１．６４ｋｇ、４．２７ｍｏｌ）及びＴＨＦ（５．９Ｌ）の溶液を０℃で、内部温度を５℃以下に維持しながら、滴下して加えた。次に、内部温度を１０℃以下に維持しながら、生じた混合物にＢＦ３・ＯＥｔ２（９２０ｇ、６．４８ｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた無色の懸濁液を０℃から５℃で１時間攪拌し、その後６Ｎ  ＨＣｌ水溶液（４．２９ｋｇ、２３．５ｍｏｌ）を、内部温度を２０℃以下に維持しながら、１時間にわたって滴下して加えた（注意：激しいガス放出）。生じた無色の懸濁液を加温し、ガスの放出が止まるまで６０℃から６５℃で２時間攪拌した。内部温度を２０℃以下に維持しながら、脱気した２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１２．９Ｌ、２５．８ｍｏｌ）を３℃で混合物にゆっくりと加え、次いで生じた混合物を室温に加温して、脱気したＭＴＢＥ（４０Ｌ）を用いて抽出した。分離した有機層を脱気水（６．６Ｌ）、次いで脱気塩水（６．５Ｌ）及び脱気水（３．３Ｌ）で洗った。その後有機層を脱気したＭＴＢＥで希釈し、５７Ｌ溶液を形成して、生成物（化合物２−４）の結晶種を入れ、次いでシュウ酸（１７７ｇ、１．９７ｍｏｌ）の溶液及び脱気ＭＴＢＥ（１．９７Ｌ）を１５分間にわたって滴下して加え、生成物を結晶化した。生じた無色のスラリーを室温で一晩エージングさせ、ろ過して結晶を分離し、ＭＴＢＥ（１２．３Ｌ）で洗って真空中で乾燥し、化合物２−４（１．２５ｋｇ、８８％、ＨＰＬＣにより９９．９面積％）を無色の板状結晶として得た。
【００４９】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：７．４１−７．２６（ｍ，１０Ｈ），５．９１−５．６２（ｂｒ，ｍ，４Ｈ），４．５０（ｓ，４Ｈ），３．５６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，４Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ）．ｌ３Ｃ−ＮＭＲ（６８ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１６４．７，１３８．２，１２８．２，１２７．５，１２７．４，７２．３，６８．３，５９．８
【００５０】
実施例３
【００５１】
【化１７】
2004519518.tif 000013
２２Ｌの窒素パージした容器に、２２℃でＤＭＡ（８．３Ｌ）、化合物１−２（１．００ｋｇ、０．９４ｍｏｌ）及び化合物２−４（３５０ｇ、１．０６ｍｏｌ）を充填した。生じたスラリーを、攪拌しながら５分間／サイクルで容器に真空を適用し（４０から８０ｔｏｒｒ）、窒素を充填して脱気した（３サイクル）。内容物を６５℃で３０分間にわたって加熱し、その間に溶液は均一になった。トリエチルアミン（１４６ｍｌ、１．０５ｍｏｌ）を速やかに加え、溶液を６５℃で３時間エージングさせた。内容物を４５℃に冷却し、１０℃に保持し、脱気した（ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｓｐａｒｇｅｄ）ＭＴＢＥ（１７．０Ｌ）を含む円筒容器に移した。容器の内容物を再び１０℃に冷却し、窒素スパージした水（４．７Ｌ）を１０分間にわたって加え、内部温度を３０℃以下に保持した。２Ｍ塩酸（４４０ｍｌ）を２２℃でニ相性混合物に加えた。２２℃で１０分間攪拌した後、層を分離して有機層を水（３×３．８Ｌ）で洗った。有機層を真空中で５Ｌレベルに濃縮し（２０℃から２５℃）、何度もＴＨＦフラッシュを実施してＭＴＢＥを除去した。真空中で溶媒を除去して所望する化合物、３−１を得た。
【００５２】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：１０．６３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ．），９．２４（１Ｈ，ｂｒ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），９．１６（１Ｈ，ｂｒ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），７．５０−６．８４（４２Ｈ，ｍ），６．２０（２Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），５．３３（１Ｈ，ｂｒ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ），５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），５．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），４．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ），４．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ），４．６２−４．４８（４Ｈ，ｍ），４．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６Ｈｚ），４．０６−３．７７（７Ｈ，ｍ），３．７２（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ）．
ｌ３Ｃ−ＮＭＲ（６８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：１６８．８，１６８．７，１５９．４，１５９．３，１４３．２，１４２．９，１３８．０，１３７．９，１３７．６，１３６．９，１３６．８，１３６．６，１３６．０，１３０．２，１２８．７，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２７．６，１２７．５，１２７．４，１２７．３，１２６．９，１２６．６，１１９．４，１１９．１，１１８．０，１１６．９，１１６．７，１１６，１，１１０．４，９６．７，９６．３，８５．８，８４．７，８０．９，７７．４，７７．２，７６．０，７５．９，７５．４，７４．９，７３．９，７３．３，７３．２，７０．７，７０．４，６９．９，６９．８，６６．７，５８．７，４９，４，３０．９，２７．０
【００５３】
実施例４
注意：この反応の生成物である化合物４−１は細胞傷害性化合物である
【００５４】
【化１８】
2004519518.tif 000014
１０％パラジウム炭素（５０％含水、１１２ｇ）を５ガロンのオートクレーブに充填し、次いで１２−β−Ｄ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジルグルコピラノシル）−１２，１３−ジヒドロ−２，１０−ジベンジルオキシ−６−［［−（２−ベンジルオキシ−１−（ベンジルオキシメチル）エチル］アミノ］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（３−１）のＴＨＦ（テトラヒドロフラン）溶液（１７５ｇ／Ｌ溶液、６．４Ｌ、１．１２アッセイｋｇ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（７．９Ｌ）及び３Ｎ  ＨＣｌ（２２４ｍＬ）を加えた。内容物を急速攪拌しながら４０℃／４０ｐｓｉで４時間から１４時間水素化し、その期間中に理論量の１１０％の水素が吸収された。内容物を２５℃に冷却し、ソルカフロック床を通して反応混合物をろ過し、３／２のＩＰＡ／ＴＨＦ（１×３Ｌ）で洗浄した。ＩＰＡ中１Ｍトリエチルアミン（約６００ｍＬ）を用いて、ろ液のｐＨを２．５に調整し（範囲：１．５から６．５）、次いで水（４．０Ｌ）を加えた。バッチを大気圧で７．５Ｌレベルに濃縮した。４／１ＩＰＡ／水（６．５Ｌ）を供給しながら一定バッチ容量を保って蒸留を続けた。バッチ容量を７．５Ｌに維持しながら容器にＩＰＡ（約９Ｌ）を供給して水分含量を２０％（ｗ／ｖ）（範囲：１０％から３０％水分）に低下させた。内容物を７０℃に冷却し、種晶（５．０ｇ）をＩＰＡスラリー（５０ｍＬ）として加えた。バッチを７０℃に１時間保持したあと、９０分間にわたってＩＰＡ（５．０Ｌ）を加えた。バッチを７０℃で９時間から２４時間エージングさせ、その間に生成物のバルクが結晶化した。さらに、ＩＰＡ（１７Ｌ）を供給する一定容蒸留を実施し、水分含量を３％（ｗ／ｖ）（範囲：１から１０％水分）に低下させた。スラリーを７０℃で３時間から６時間エージングさせ、次いで２２℃に冷却し、１時間エージングさせた。スラリーをろ過し、濾過ケークをＩＰＡ（２．５Ｌ）、次いでメタノール（１．５Ｌ）で洗って、その後真空中３８℃で６時間乾燥し、生成物４−１を９９Ａ％以上の純度と８０％以上の収率で橙色固体として得た。
【００５５】
ＮＭＲデータ（結合定数（Ｊ）をヘルツで記載する）：
主な回転異性体に関するＮＭＲデータ
１Ｈ  ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）１１．２３（ｓ，１Ｈ），９．８０（ｓ，１Ｈ），９．７７（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），８．８２（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），７．２１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．８４（ｍ（オーバーラップ），２Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ  ８．０，１Ｈ），５．８８（ｔ，Ｊ＝３．６，１Ｈ），５．５７（ｄ，Ｊ＝２．４，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝４．４，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝４．４，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝４．４，１Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝５．６，２Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．２，１Ｈ），３．９５（ｍ（オーバーラップ），２Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，４．０，１Ｈ），３．５３（ｍ（オーバーラップ），６Ｈ）；
主な回転異性体に関するＮＭＲデータ
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００．６４  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）１６９．０３，１６８．９４，１５７．７９，１５７．６３，１４４．３８，１４３．１２，１２９．４６，１２７．９２，１２５．１９（２Ｃ），１１８．９１，１１７．５７，１１５．９４，１１４．３２，１１４．２３，１１３．９２，１１０．３０，１１０．２４，９７．５４，９７．４９，８４．４９，７８．３９，７６．７７，７２．８８，６７．５３，６２．５９，６０．４７（２Ｃ），５８．３３．２１
【００５６】
ＨＰＬＣ分析
2004519518.tif 000015
【国際公開パンフレット】
2004519518.tif 000021
2004519518.tif 000022
2004519518.tif 000023
2004519518.tif 000024
2004519518.tif 000025
2004519518.tif 000026
2004519518.tif 000027
2004519518.tif 000028
2004519518.tif 000029
2004519518.tif 000030
2004519518.tif 000031
2004519518.tif 000032
2004519518.tif 000033
2004519518.tif 000034
2004519518.tif 000035
2004519518.tif 000036
2004519518.tif 000037
2004519518.tif 000038
2004519518.tif 000039
2004519518.tif 000040
2004519518.tif 000041
2004519518.tif 000042
2004519518.tif 000043
2004519518.tif 000044
2004519518.tif 000045
【国際調査報告】
2004519518.tif 000046
2004519518.tif 000047
2004519518.tif 000048