(57)【要約】本発明は、新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログ、グルココルチコイド過剰に関連した疾患の予防及び／又は治療のための抗グルココルチコイド物質としてのそれらの使用に関する。特に、本発明は、クッシング症候群、医原性高コルチゾール症、又はうつ病の治療のための、式（Ｉ）｛式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そしてＲは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝で表される新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログの使用に関する。また、本発明は、新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログの製造方法に関する。
2004509132.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（ＩＩ）：
【化１】
2004509132.tif 000015
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される化合物。
【請求項２】
以下の式（ＩＩａ）
【化２】
2004509132.tif 000016
｛式中、
Ｘは、ＳＯ又はＳＯ２である。｝
で表される化合物。
【請求項３】
以下の式：
【化３】
2004509132.tif 000017
で表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下の式：
【化４】
2004509132.tif 000018
で表される、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
以下の式：
【化５】
2004509132.tif 000019
で表される、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
以下の式：
【化６】
2004509132.tif 000020
で表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
以下の式：
【化７】
2004509132.tif 000021
で表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
以下の式：
【化８】
2004509132.tif 000022
で表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
薬剤として使用するための、以下の式（ＩＩ）：
【化９】
2004509132.tif 000023
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される化合物。
【請求項１０】
グルココルチコイド過剰に関係する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における、以下の式（ＩＩ）：
【化１０】
2004509132.tif 000024
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳ０２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される化合物の使用。
【請求項１１】
グルココルチコイド過剰に関係する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における、以下の式（ＩＩａ）：
【化１１】
2004509132.tif 000025
｛式中、
Ｘは、ＳＯ、又はＳ０２である。｝
で表される化合物の使用。
【請求項１２】
前記疾患が、クッシング症候群である、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記疾患が、医原性高コルチゾール症である、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記疾患が、うつ病である、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１５】
免疫応答を調節するための薬剤の製造のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
免疫応答の抑制を必要とする疾患症状の治療のための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
正の免疫応答の増強を必要とする疾患症状の治療のための、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
少なくとも１の式（ＩＩ）で表される２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン・アナログ、及び１種類以上のその好適な担体を含む医薬組成物。
【請求項１９】
請求項３に記載の化合物の製造方法であって、以下のステップ：
ａ）　式（１６）の１９−アセチルスルファニルステロイドを用意し；
ｂ）　その３−ケト基を、好ましくはエチレングリコール基により保護し；
ｃ）　１９−アセチル基をチオール（チオエーテル）基に変換し；そして
ｅ）　ステップｃ）の化合物の加水分解を実施する、
を含む上記製造方法。
【請求項２０】
請求項４又は５に記載の化合物の製造方法であって、以下のステップ：
ａ）　請求項３に記載の化合物を用意し；
ｂ）　上記化合物を酸化、好ましくは一過硫酸カリウムによる酸化に供する、
を含む上記製造方法。
【請求項２１】
請求項６に記載の化合物の製造方法であって、以下のステップ：
ａ）　１７−アセチル−１０−ヒドロキシメチル−１３−メチル−１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンを用意し；
ｂ）　１９−ヒドロキシ基をチオアセトキシ基に変換し；
ｃ）　その３−ケト基を、好ましくはエチレングリコール基により保護し；
ｄ）　１９−チオアセトキシ基をチオール基に変換し；そして
ｆ）　ステップｄ）の化合物の加水分解を実施する、
を含む上記製造方法。
【請求項２２】
請求項７又は８に記載の化合物の製造方法であって、以下のステップ：
ａ）　請求項６に記載の化合物を用意し；
ｂ）　上記化合物を酸化、好ましくは一過硫酸カリウムによる酸化に供する、
を含む上記製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の分野：
本発明は、新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログ、グルココルチコイド過剰に関連した疾患の予防及び／又は治療のための抗グルココルチコイド物質としてのそれらの使用に関する。特に、本発明は、クッシング症候群、医原性高コルチゾール症、又はうつ病の治療のための新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログの使用に関する。また、本発明は、新規２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）アナログの製造方法に関する。
【０００２】
本発明の背景：
コルチコステロイドは、構造上コレステロールに関連するステロイドホルモンである。これらのホルモンは、副腎皮質で合成され、グルココルチコイド（例えば、コルチゾール）、電解質コルチコイド（例えば、アルドステロン）、並びにわずかなアンドロゲン及びエストロゲンを含んでいる。甲状腺のそれのような副腎の機能は、視床下部（ＨＰＴ）及び脳下垂体（ＰＩＴ）の制御下にある。コルチゾール（天然のグルココルチコイド）のレベルがセットポイント以下に下がった時、視床下部は、脳下垂体からの副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）放出を刺激するＣＲＨ（コルチコトロピン放出ホルモン）を放出する。ＡＣＴＨは、以下の
・コルチゾールの合成及び分泌（それは、アルドステロンの合成／分泌に対して最小限の影響しか与えない）、そして
・副腎の成長、
を刺激する刺激ホルモンである。コルチゾールがレベルが上昇した時、これは、ＣＲＨ及びＡＣＴＨの分泌を止める（図１を参照のこと）。
【０００３】
コルチゾールは、生合成及びグルコースの代謝に関連するその性質、並びに非特異的並びに特異的免疫性に関連する性質により特徴づけられる。グルコース代謝へのそれらの効果のために、コルチゾール並びに天然又は合成のそれらのアナログが、通常グルココルチコイドと名付けられる。それらは、グルココルチコイド・レセプター（ＧＲ）に結合する。
【０００４】
グルココルチコイド・レセプターは、リガンド活性化転写因子として機能する細胞内レセプターに密接に関連するタンパク質スーパーファミリーのメンバーである。このスーパーファミリーの他のメンバーは、電解質コルチコイド・レセプター（ＭＲ）及びプロゲステロン・レセプター（ＰＲ）である。ＭＲとＧＲは高いホモロジーを示し、それ故に、天然及び合成ステロイドでさえ、これらのレセプターの間に交差反応を示した。ＰＲに関して、その天然のリガンドであるプロゲステロンが同様にＭＲ及びＧＲと交差反応する。
【０００５】
クッシング症候群は、コルチゾールの副腎皮質からの分泌の増加の結果として生じる不調である。副腎皮質の機能亢進は、ＡＣＴＨに依存しているかもしれないし、又はＡＣＴＨ調節に非依存、例えば副腎皮質腺腫又は悪性腫瘍によるコルチゾールの産生であるかもしれない。外因性のコルチゾール又は関連する合成アナログの超生理学的な量の投与は、副腎皮質の機能を抑圧して、そしてＡＣＴＨ非依存性グルココルチコイド機能亢進に似た症状を呈する。副腎皮質のＡＣＴＨ依存性機能亢進は、脳下垂体によるＡＣＴＨの分泌過多、肺の小細胞癌（異所性ＡＣＴＨ症候群）のような非脳下垂体腫瘍によるＡＣＴＨの分泌、又は外因性ＡＣＴＨの投与によるかもしれない。「クッシング症候群」という用語は、原因にかかわらず起こるコルチゾール過剰によりもたらされる臨床像に適用される一方、脳下垂体のＡＣＴＨ過剰から起こっている副腎皮質の機能亢進は、しばしばクッシング病と呼ばれ、特定の生理学的な異常を示す。クッシング病の患者は、脳下垂体の好塩基性腺腫か色素嫌性腺腫を持っているかもしれない。微小腺腫は、通常ＣＴか、好ましくはガドリニウムにより増強させられた高解像度技術を用いたＭＲＩスキャンにより可視化されることができる。いくつかの微小腺腫は、これらの手法によってでさえ可視化することが困難である。いくつかの症例で、ＡＣＴＨ過剰産生の明らかな証拠にもかかわらず、脳下垂体で組織学的異常は見つからなかった。
【０００６】
原因にかかわらず（同様に医原性かもしれない）コルチゾール過剰から起こっている臨床像を意味するように本明細書中で意図されているクッシング症候群への言及は、ＡＣＴＨの注射薬又はコルチゾール、あるいはアレルギー性、喘息性、炎症性、又は免疫学的を含む様々なタイプの疾患で広く使用されるプレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、又はその他のもののような合成アナログの直接的な投与によるいずれかの医原性のものでもありうる。クッシング症候群は、副腎腫瘍のコルチコイドの分泌に加え、異所性ＡＣＴＨ産生、及びクッシング病を含んでいる。
【０００７】
臨床徴候は、膨れ上がった外観を持つ丸みのある「満月様」顔貌を含んでいる。目立った鎖骨上の及び背中の頸部の脂肪体（「バッファロー瘤」）を有する体幹性肥満症である；末梢の手足及び指は通常、非常にほっそりしている。筋肉消耗性であり、そして脱力感がある。皮膚は、薄く、そして創傷治癒に乏しく及び傷つきやすい萎縮性である。紫色の線条が、腹部に現われる。高血圧、腎臓結石、骨粗鬆症、グルコース不耐性、感染耐性の低下、及び精神障害であることが珍しくない。直線的な成長の停止が子供に独特である。女性は、通常月経不順を有する。コルチゾールに加えて、アンドロゲンの産生増加は、多毛症、側頭部のはげ、及び女性における他の男性化の徴候をもたらすかもしれない。
【０００８】
エストロゲン及びアンドロゲン・レセプターに関連する抗ホルモン薬剤の開発がうまくいっているが、選択的な抗コルチコイドの捜索は、より制限されている。
様々なレベルでステロイドホルモンの合成を抑制する既知の薬剤（すなわち、ステロイドホルモンの合成の様々な段階を触媒する酵素の阻害剤）がＪ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ｖｏｌ．５， ｐ．５０１ （１９７４）中で検討され、そして以下を含む：
ａ）　ジフェニルメタンの誘導体、例えば　アンフェノンＢ （ａｍｐｈｅｎｏｎ Ｂ）（１１−ベータ−、１７−及び２１−のヒドロキシラーゼの段階でのステロイドホルモンの合成を抑制する）；
ｂ）　ピリジンの誘導体（ＳＵ−ｃシリーズ）、例えばメチラポン（ｍｅｔｉｒａｐｏｎ）（１１−ベータのヒドロキシラーゼの段階での合成を抑制する）；
ｃ）　置換されたアルファ、アルファ−グルタルアミド、例えばアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｉｍｉｄｅ）（２０−アルファ−ヒドロキシラーゼとＣ２０、Ｃ２２−リアーゼの抑制によりコレステロールからプレグネノロンの合成を妨げる）；
ｄ）　ステロイド物質、例えばトリロスタン（３ベータ−置換されたステロイド−３ベータ−ヒドロキシ−５−アンドロステン−１７−オン）、３ベータ−デソキシステロイドヒドロゲナーゼ−５．４−イソメラーゼを抑制する（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ， ｖｏｌ．３２， ｐ．２５７）。
【０００９】
ｅ）　素速く解離する抗電解質コルチコイドとして使用されるスピロノラクトン・ファミリーのステロイド（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ７１（４） ｐ．１４３１−１４３５ （１９７４））。
ｆ）　腎臓（Ｚ． Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．， ４５ｂ， ｐ．７１１−７１５ （１９９０）、及び海馬Ｉ型 ＭＲ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ５９， ｐ．５１１−２１ （１９９６））について特異的な結合特性を示し、ＩＩ型ＧＲについては示さない抗電解質コルチコイドと説明される合成ステロイド、ＺＫ９１５８７。従って、両方のレセプター・システムを含んでいてる組織におけるＭＲの機能の調査の道具として都合よく役に立つかもしれない。
【００１０】
グルココルチコイドホルモンとホルモン・レセプターの相互作用を特異的に抑制する物質は以下のとおりである：
ａ）　ミフェプリストン（１１β，１７β）−１１−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１７−ヒドロキシ−１７−（１−プロピニル）エストラ−４，９−ジエン−３−オン、グルココルチコイドホルモンのレセプターに働きかけ、グルココルチコイド効果をもたらす機構を開始できない複合体を形成する（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｖｏｌ． ７６１， ｐ．５−２８ （１９９５））上記化合物は、コントラゲスチブ剤（ｃｏｎｔｒａｇｅｓｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（ＲＵ３８４８６又はＲＵ４８６）としても知られる。
【００１１】
ｂ）　非ステロイド系の物質（Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．， Ｖｏｌ．３１， ｐ．４８１−４９２ （１９８８）、例えば塩酸ドロタベリーナ（ｄｒｏｔａｖｅｒｉｎａ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）（イソキノリン−１−（３．４−ジエトキシベンジリデン）−６．７−ジエトキシ−１，２，３，４−テトラヒドリゾキノリンの誘導体）、又はアセチルサリチル酸（Ｍｏｓｋｏｖｓｋａｙａ Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ， １９９０， ”Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｅｆｆｅｃｔ” ｂｙ Ｖ．Ｐ．Ｇｏｌｉｋｏｖ）．
今まで、臨床条件で試みられた、抗グルココルチコイド物質に関する唯一の治療のための適用（例えば、ミフェプリストン）は、非脳下垂体性クッシング症候群の手術不可能な症例の治療である。ミフェプリストン （抗プロゲステロン物質及び抗グルココルチコイド物質の両方）の場合に、高い服用量（１日につき８００ ｍｇまで）が必要とされる。
【００１２】
活性を増加させ、そして交差感受性と好ましくない副作用を減少させるための戦略の系統的な適用の利用により、特に抗エストロゲン及び抗アンドロゲンの分野でより大きな効力及び選択性を有する新しい抗ホルモン物質の開発における目覚しい進展が報告された。
さらなる抗グルココルチコイド物質がＥＰ−９０３’１４６に開示されており、それは以下の式（Ｉ）：
【化１２】
2004509132.tif 000003
【００１３】
で表される２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（２１ＯＨ−６ＯＰ）を示す合成ステロイドに関する。２１ＯＨ−６ＯＰは、実質的に子宮ＰＲ又は腎臓ＭＲと交差反応しない選択的な抗グルココルチコイド物質であるとして開示されている。
【００１４】
本発明の説明：
新しい抗グルココルチコイド化合物を提供することが本発明の目的である。グルココルチコイド過剰に関係する疾患の新しい治療方法を提供することが本発明のさらなる目的である。
第１の側面において、本発明は、以下の式（ＩＩ）：
【化１３】
2004509132.tif 000004
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨである。｝
で表される化合物を提供する。
【００１５】
第２の側面において、本発明は、薬剤として使用するための以下の式（ＩＩ）：
【化１４】
2004509132.tif 000005
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される化合物を提供する。
【００１６】
第３の側面において、本発明は、グルココルチコイド過剰に関連した疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における以下の式（ＩＩ）：
【化１５】
2004509132.tif 000006
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される化合物の使用を提供する。
第４の側面において、本発明は、少なくとも１の２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン・アナログ、及び１以上のそれらの好適な担体を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
第５の側面において、本発明は、本発明の化合物の製造方法を提供する。
新しく見つかった化合物は、式（Ｉ）の２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン内のある６，１９−酸素架橋の代わりに、６，１９−スルファニル−、６，１９−スルホキシド−、及び６，１９−スルホン架橋を有する。よって、それらは、以下の：
【化１６】
2004509132.tif 000007
｛式中、
Ｘは、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、そして
Ｒは、Ｈ又はＯＨのいずれかである。｝
で表される、２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン（Ｉ）の硫黄アナログ（ＩＩ）に、そしてより特に、以下の式（ＩＩａ）：
【化１７】
2004509132.tif 000008
｛式中、
Ｘは、ＳＯ又はＳＯ２である。｝
で表される硫黄アナログに相当する。
【００１８】
より具体的には、本発明は、以下の３つの２１−デオキシ−、及び３つの２１−ヒドロキシ−６，１９−オキシドプロゲステロン・アナログに関する：
【化１８】
2004509132.tif 000009
本発明の化合物のさらなる利点は、それらの好都合な合成である。特に、酸化によるスルホキシド（４）及び（７）、及びスルホン（５）及び（８）への化合物（３）及び（６）のスルファニル架橋の変換は、実施されるのに非常に好都合である。さらに、スルホキシド及びスルホン架橋は、化合物の水への可溶性及び安定性を改善する。
【００１９】
本発明の抗グルココルチコイド物質は、グルココルチコイド過剰に関係している疾患の治療に好適である。特に、本発明の抗グルココルチコイド物質は、特に哺乳動物の体内のグルココルチコイド過剰に関係するクッシング症候群、医原性高コルチゾール症、及びうつ病の治療に役立つ。同様に、それらは、免疫応答の調節を要する不調の治療に有用である。
【００２０】
よって、本発明は、薬剤としての使用のために、式（ＩＩ）の２１−ヒドロキシ−６，１９−スルファニル、及びスルホキシ−、及びスルホニル−プロゲステロンを提供する。
グルココルチコイド過剰に関係する疾患の治療又は予防のための薬剤の製造における、式（ＩＩ）の２１−ヒドロキシ−６，１９−スルファニル、及びスルホキシ−、及びスルホニル−プロゲステロンの使用は、本発明のさらなるさらなる目的である。より好ましくは、式（ＩＩ）の化合物を、クッシング症候群、医原性高コルチゾール症、うつ病、又は免疫応答の調節の治療のための薬剤において使用する。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物は、１以上のそれらの好適な担体を伴い、通常のステロイド製剤に従って処方される。
本発明のさらなる側面は、式（ＩＩ）の新規２１−ヒドロキシ−６，１９−スルファニル、スルホキシ−、及びスルホニル−プロゲステロン（すなわち、化合物（３）〜（８））の合成方法である。
【００２２】
基本的に、式（３）による化合物の製造方法は、以下のステップ：
ａ）　式（１６）の１９−チオアセチルステロイドを用意し（スキーム３を参照のこと）；
ｂ）　その３−ケト基を、好ましくはエチレングリコール基により保護し；
ｃ）　１９−チオアセチル基をチオール基に変換し；そして
ｄ）　ステップｃ）の化合物の加水分解を実施する、
を含む（スキーム３を参照のこと）。
【００２３】
スルホキシ−及びスルホニル化合物（４）及び／又は（５）は、以下のステップ：
ａ）　式（３）の化合物を用意し（スキーム４を参照のこと）；
ｂ）　好ましくは、酸化剤、例えばオゾン又は一過硫酸カリウム（例えば、Ｏｘｏｎｅ（登録商標））を用いた酸化に上記化合物を晒す、
により一般に得られる。
【００２４】
低温（例えば、０℃）での一過硫酸カリウムを用いた処理が、スルホキシドを生じる一方、室温での処理は、スルホンを生じる。
式（６）による化合物の製造は、以下のステップ：
ａ）　式（１１）の１９−ヒドロキシプロゲステロンを用意し（スキーム１を参照のこと）；
ｂ）　１９−ヒドロキシ基をチオアセトキシ基に変換し；
ｃ）　その３−ケト基を、好ましくはエチレングリコール基により保護し；
ｄ）　１９−チオアセトキシ基をチオール基に変換し；そして
ｅ）　ステップｄ）の化合物の加水分解を実施する、
を含む（スキーム１を参照のこと）。
【００２５】
スルホキシ−及びスルホニル化合物（７）及び／又は（８）は、以下のステップ：
ａ）　式（６）の化合物を用意し；
ｂ）　好ましくは、酸化剤、例えば一過硫酸カリウム（例えば、Ｏｘｏｎｅ（登録商標））を用いた酸化に上記化合物を晒す、
により一般に得られる。
【００２６】
以下に、２１−デオキシ・アナログ（６）、（７）、及び（８）の好ましい製造方法を説明する。
以下はのものは、使用した略語の一覧である：
− ＮＢＡ ： Ｎ−ブロモアセトアミド、
− ＴＨＦ ： テトラヒドロフラン、
− ＶＦＣ ： 蒸気流クロマトグラフィー
− ＰＴＳＡ： パラトルエンスルホン酸
− ＲＴ　： 室温
【化１９】
2004509132.tif 000010
【００２７】
ステップ
ａ）　１． ＮＢＡ−ＨＣｌＯ４／ＴＨＦ−Ｅｔ２Ｏ　３０分、ＲＴ； ２．ジアセトキシヨードベンゼン、Ｉ２、ＣＨ２Ｃ１２、３００ Ｗタングステン・ランプ、２時間、ＲＴ； ３、ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ、３０分、ＲＴ； ４． ＰＣＣ、４Åモレキュラーシーブ、ＢａＣＯ３、ＣＨ２Ｃｌ２、ＲＴ。
ｂ）　Ｚｎ、ＡｃＯＨ、ｉ−ＰｒＯＨ、３時間、７０℃ （その後ＶＦＣ）；
ｃ）　１． トリフルオロメタンスルホン酸無水物、ピリジン、１時間、ＲＴ； ２． ＫＳＡｃ、アセトン（無水）、Ｎ２、一晩、ＲＴ、（その後ＶＦＣ）。
ｄ）　１． エチレングリコール、オルソギ酸エチル、ＰＴＳＡ、２時間、６０℃、Ｎ２； ２． Ｋ２ＣＯ３、ＭｅＯＨ、１時間、ＲＴ、Ｎ２。
ｅ）　Ｉ２、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、２時間、ＲＴ （その後ＶＦＣ）。
酢酸プレグネノロン（９）から始まり、ブロモエーテル（１０）を得、それをイソプロパノール中、Ｚｎ／ＡｃＯＨを用いて還元的に開裂させて１９−ヒドロキシプロゲステロン（１１）を得る。その１９−ヒドロキシ基をトリフレートに変換し、そしてチオ酢酸カリウムにより置き換えて（１２）を得る。６，１９架橋を形成するために、４，５二重結合を、３−エチレンケタールの形成により５，６位に移動させる。前記チオ酢酸を、好適な塩基を用いて加水分解して遊離の１９−チオール（１３）を得、この遊離の１９−チオール（１３）は、ジクロロメタン中、ヨウ素及びトリエチルアミンを用いて直ちに処理される。これは、中間体の分離なしに最終産物６，１９−スルファニル−プロゲステロン（６）に向かうカスケード反応を生じる（スキーム２を参照のこと）。酸化された誘導体（７）及び（８）の形成は、好ましくはメタノール水溶液中、一過硫酸カリウム、例えばＯｘｏｎｅ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓより提供）を用いた酸化により達成される。短い反応時間及び低温（０℃）がスルホキシド（７）（単一の立体異性体）を与える一方、室温での長い反応時間がスルホン（８）を与える。
【００２８】
Ｘ線構造解析（図１を参照のこと）が、化合物（６）及び酸素により架橋されたアナログ（式（Ｉ）の２１−デオキシ化合物）の両者のＸ線結晶構造の重ね合わせを示す。
スキーム２は、３−保護された１９−スルファニル−ステロイドの「１つの容器での」ヨード環化／脱保護／脱ハロゲン化水素反応、並びに可能性のある副作用を示す。所望の化合物（１８）を、クロマトグラフィー又は再結晶化により分離しうる。
【化２０】
2004509132.tif 000011
以下に、２１−ヒドロキシ・アナログ（３）、（４）、及び（５）の好ましい製造方法を説明する。
【００２９】
（Ｉ）に対応する硫黄アナログ、すなわち２１−ヒドロキシ−６，１９−スルファニルプロゲステロン（（３）；２１ＯＨ−６ＳＰ）は、酸化された誘導体（４）及び（５）と一緒に合成される。前記合成手順は、ブロモケトン（１４）から始まる（スキーム３を参照のこと）。化合物（１４）は、わずかな除去産物を含むが、化合物（１４）とその除去産物の両者が同じ反応条件下で１９−ヒドロキシ−デオキシコルチコステロンに変換されるのでこれは収率には影響しない。便宜上、ブロモケトン（１４）から始まっている開発した好ましい合成手順を示す。
【化２１】
2004509132.tif 000012
【００３０】
ステップ
ａ）　Ｚｎ−ＡｃＯＨ／ｉＰｒＯＨ、７０℃ （ＶＦＱ）；
ｂ）　１． （Ｆ３ＣＳＯ２）２Ｏ ／ｐｙ； ２． ＫＳＡｃ ／アセトン；
ｃ）　エチレングリコール（ＥｔＯ）３ＣＨ ／ＰＴＳＡ、（その後ＶＦＣ）。
ｄ）　ＫＯＨ／ＭｅＯＨ。
ｅ）　Ｉ２、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２ （その後ＶＦＣ）。
スキーム３のチオ酢酸の加水分解は、メタノール中、ＫＯＨ（炭酸カリウムに代えて）を用いた、２１−ヒドロキシ−２０−ケト−ステロイドに組み込まれているＣ−２１の脱アセチル化と同時に実行されるからである。一過硫酸カリウム、例えば：Ｏｘｏｎｅ（登録商標）を用いた直接的な（３）の酸化は、側鎖に影響することなく反応条件に依存してスルホキシド化合物（４）及びスルホン化合物（５）を生じる（スキーム４）。
【化２２】
2004509132.tif 000013
本発明を、以下の実施例を用いてここでさらに説明する：
【００３１】
実施例
材料及び方法
試薬：
概要．融点をフィッシャー−ジョン装置で測り、矯正していない。ＩＲスペクトルを、Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｍａｇｎａ ＩＲ ５５０ ＦＴ−ＩＲスペクトロメーターによりＫＢｒディスクを用いて薄膜に記録した。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、（内部標準としてＴＭＳを用いて）重水素クロロホルム中、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＣ−２００又はＡＭ−５００ ＮＭＲスペクトロメーターにより計測する。Ｊ値をＨｚで与える。スペクトルを、ＤＥＰＴ、ＣＯＳＹ４５、及びＨＥＴＣＯＳＹスペクトルの解析とプロゲステロンのそれとの比較により割り当てた。
【００３２】
電子衝撃質量スペクトル（ＥＩ）を、直接導入により７０ ｅＶでＶＧ Ｔｒｉｏ ２質量分析計で計測した。ＦＡＢ質量スペクトル及び電子衝撃高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）を、ＶＧ ＺＡＢ ＢＥＱＱ質量分析計で得る。使用した全ての溶媒が試薬等級である。溶媒を、真空下、約４５℃で留去する。亜鉛紛末を、１ＭのＨＣｌ中への懸濁し、水、無水エタノール、及びジエチルエーテルにより洗浄し、そして１２０℃で２時間乾燥させることにより活性化する。全ての化合物の均一性を、薄層クロマトグラフィーにより確認する。
【００３３】
以下の実施例１〜４において、化合物（１４ａ）は出発化合物であり、そして化合物（１４ｂ）、（１４ｃ）、及び（１４ｄ）は、化合物（１４）（５α−ブロモ−２１−アセチルオキシ−６，１９−オキシドプレグナン−３，２０−ジオン）の合成をもたらす中間化合物である。
実施例１
３β−ホルミルオキシ−２１−ａアセチルオキシ−５−プレグネン−２０−オン（１４ａ）
無水酢酸（１３．４ ｍｌ）を、０℃でギ酸（６．６ ｍｌ）に滴下にて添加し、この溶液を５０℃で１５分間加温し、そして０℃に急冷した。得られたアセトギ酸無水物溶液を、０℃で、ピリジン（２０．８ ｍｌ）中、２１−アセトキシプレグネノロン（市販品、８．０ ｇ）の撹拌された懸濁液に滴下にて添加し、撹拌をその温度で２時間続ける。前記反応液を、冷却した飽和重炭酸ナトリウム水性溶液に注ぎ、ろ過し、そしてその固体を飽和重炭酸ナトリウム水性溶液、水、及び１Ｎ ＨＣｌにより（中和するまで）洗浄し、ホルメートである表題の化合物を得た（８．０ ｇ）；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＳＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， １．０２ （３Ｈ， ｓ， １０−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ）， ２．５３ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １７．０ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １７．０ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）， ５．３２ （１Ｈ， ｍ， ３−Ｈ）， ５．３８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ３．０ Ｈｚ， ６−Ｈ）， ８．０２ （１Ｈ， ｓ， ＨＣＯＯ）。
【００３４】
実施例２
３β−ホルミルオキシ−５α−ブロモ−６β−ヒドロキシ−２１−アセチルオキシプレグナン−２０−オン（１４ｂ）
ホルメート（１４ａ）（８．０ ｇ）を、ジエチルエーテル（１００ ｍｌ）及びＴＨＦ（３７．２ ｍｌ）中に溶解し、１０℃に冷却する。１０〜１５℃で撹拌している−遮光された−溶液に、７．５％の過塩素酸（１１．８８ ｍｌ）を添加し、続いて８つの部分で２５分間にわたりＮ−ブロモアセトアミド（４．７５ ｇ）を添加する。撹拌を、２５℃で４５分間続け、そして完全に脱色するまで１０％のチオ硫酸ナトリウム水性溶液を添加することにより反応を止める。次に、反応混合物を、ジクロロメタン／メタノール１０：１で抽出し、そして有機層を、水により洗浄し、無水硫酸ナトリウムにより乾燥させて、そして溶媒を留去して、ブロモヒドリン（１４ｂ）（１０．４ ｇ、１Ｈ ＮＭＲにより測定されるとおり２０％の５α−ヒドロキシ−６β−ブロモ異性体を含んでいる）を得る。
【００３５】
実施例３
３β−ホルミルオキシ−５α−ブロモ−２１−アセチルオキシ−６，１９−オキシドプレグナン−２０−オン（１４ｃ）
２５℃の循環する水による外部冷却ジャケット及び撹拌機を備えた１リットルのガラス容器に含まれた新たに蒸留したジクロロメタン（７２３ ｍｌ）中、ブロモヒドリン化合物（１４ｂ）（１０．４ ｇ、２０％の５α−ヒドロキシ−６β−ブロモ異性体を含んでいる）の溶液を通して窒素を５分間バブリングする。ジアセトキシヨードベンゼン（スアレス試薬、７．６６ ｇ）及びヨウ素（５．４６ ｇ）を、撹拌しながら連続して添加する。容器を２つの３００ワット・タングステンランプ（各５０００ ｌｍ）に晒し、激しい撹拌を２５℃で１時間続ける。照射を止め、そして完全に脱色するまでチオ硫酸ナトリウムの飽和水性溶液を添加する。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムにより乾燥させて、溶媒を留去する。得られた固体をジクロロメタン（８ ｍｌ）で溶解し、ヘキサンで前もってフラッシュしたシリカゲル Ｇ−６０カラム（１２ ｃｍの直径×８ ｃｍの高さ）に適用する；ヘキサン−酢酸エチル９：１（１１００ ｍｌ）、８：２ （７００ ｍｌ）、７：３ （７００ ｍｌ）、及び６：４ （６００ ｍｌ）により（真空を出口に適用して）連続して溶出し、３１×１００ ｍｌの画分を得る。画分をＴＬＣにより分析し、そしてブロモエーテル（１４ｃ）を含んでいるそれらをプールし、乾燥するまで留去して（１４ｃ）（６．８ ｇ）を得る。１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ）， ２．５２ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．８ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．７３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ８．４ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．９４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ４．０８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ４．２ Ｈｚ， ６−Ｈ）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）， ５．３４ （１Ｈ， ｍ， ３−Ｈ）， ８．０２ （１Ｈ， ｓ， ＨＣＯＯ）。
【００３６】
実施例４
３β−ヒドロキシ−５α−ブロモ−２１−アセチルオキシ−６，１９−オキシドプレグナン−２０−オン（１４ｄ）
先に得られたブロモエーテル（１４ｃ）（６．８ ｇ）の撹拌した溶液を、ジクロロメタン（４５．７ ｍｌ）とメタノール（１５４．７ ｍｌ）中に溶解し、そして氷浴中で０℃に冷却し、そして水（１０．９ ｍｌ）、さらに濃ＨＣ１ （２３．０ ｍｌ）を添加する。０℃での激しい撹拌の約３０分後（ＴＬＣにより出発材料の消失が観察される）、この反応混合物を２０％の水酸化ナトリウム水性溶液により中和し、そしてジクロロメタンで抽出する。有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させ、そして溶媒を留去し、アルコール化合物（１４ｄ）（６．５ ｇ）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．６９ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ）， ２．５２ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．５ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．６２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ８．５ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．９２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ４．０７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， ６−Ｈ）， ４．１５ （１Ｈ， ｍ， ３−Ｈ）， ４．５１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １７．０ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １７．０ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）。
【００３７】
実施例５
５α−ブロモ−２１−アセチルオキシ−６，１９−オキシドプレグナン−３，２０−ジオン（１４）
無水ジクロロメタン （４８０ ｍｌ）中、塩化クロム酸ピリジウム（１２．１ ｇ）、炭酸バリウム（５．０ ｇ）、及び３Åモレキュラーシーブ（９．６０ ｇ）の懸濁液を、窒素下で約１０分間撹拌する。得られたオレンジ色のスラリーに、無水ジクロロメタン（３２４ ｍｌ）中の先に得られたブロモエーテル（１４ｄ）（６．５ ｇ）の溶液を添加し、そして出発材料（ＴＬＣ）が消えるまで、約９０分間撹拌を続ける。反応混合物を短いシリカゲルＧ ６０カラム（１２ ｃｍの直径×８ ｃｍの高さ）に透過させ、ジエチルエーテル（２×１５０ ｍｌ）及びヘキサン−酢酸エチル１：２（３×１５０ ｍｌ）により洗浄した。産物を含んでいる画分をプールし、乾燥するまで留去して、５．５ ｇのケトン（１４）を得る（約１０ ％のΔ４−３−ケトンを含む）；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ）， ２．５１ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．５ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ２．８５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．０ Ｈｚ， ４ａ−Ｈ）， ３．４０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．０ Ｈｚ， ４ｂ−Ｈ）， ３．９０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ９．０ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ４．０７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， ６−Ｈ）， ４．１５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １７．０ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝１７．０Ｈｚ，２１ｂ−Ｈ）。
【００３８】
実施例１〜５の合成手順に続いて、実施例１の出発化合物である２１−アセトキシプレグネノロンの代わりに酢酸プレグネノロンを使用することにより、（１４） 及び（１４ａ〜ｄ）に対応の２１−デオキシ誘導体を得る。
実施例６
１９−ヒドロキシ−２１−アセチルオキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン（１５）
７０℃で実施例５の５α−ブロモ−２１−アセチルオキシ−６，１９−オキシドプレグナン−３，２０−ジオン（１４）（２．５ ｇｒ、５．４ ｍｍｏｌ）を、プロパン−２−オール（２５７ ｍｌ）中に懸濁する。酢酸（１９．３ ｍｌ）及び活性化した亜鉛紛末（６．４ ｇ、ｍｍｏｌ）を添加する。この懸濁液を、撹拌して、７０〜７５℃で４ 時間加熱し、冷却し、ろ過し、濃縮し、そしてジクロロメタンにより抽出する。
溶出液としてヘキサン−酢酸エチルを用いたシリカゲルによるクロマトグラフィーで、１９−ヒドロキシ−２１−アセトキシプロゲステロン（１５）（１．１ ｇ、５３％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ） ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．８９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １０．８ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ４．０５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．８ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）， ５．９５ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）。
【００３９】
実施例７
３，３−エチレンジオキシ−１９−アセチルスルファニル−２１−アセチルオキシ−５−プレグネン−２０−オン（ｌ７）
冷ピリジン（６．４ ｍｌ）中、１９−ヒドロキシ−２１−アセトキシプロゲステロン（１５） （６２０ ｍｇ、１．６０ ｍｍｏｌ）溶液を、冷ピリジン（３．６ ｍｌ）中、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．７ ｍｌ、４．１６ ｍｍｏｌ）の撹拌している溶液に窒素下、滴下にて添加する。この溶液を、室温まで暖め、１時間後に冷ジクロロメタン（９８．０ ｍｌ）を添加する。この反応混合物を、１Ｍ冷硫酸、５％の重炭酸ナトリウム水性溶液、及び水により洗浄し、乾燥させ、乾くまで留去して、未精製の１９−トリフリルプロゲステロン−２１−アセテートを得る。次に、これ（７８０ ｍｇ、１．６０ ｍｍｏｌ）を、アセトン（４０．０ ｍｌ）中、チオ酢酸カリウム（７８０ ｍｇ、６．８３ ｍｍｏｌ）と混合し、そして窒素下、室温で２０時間撹拌する。この反応混合物を、ジクロロメタンにより希釈し、ろ過し、そして乾燥するまで留去して、未精製の１９−アセチルスルファニルステロイド（１６） （７１２ ｍｇ、１００ ％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７４ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ， ２１−ＣＨ３ＣＯ）， ２．３２ （３Ｈ， ｓ， １９−ＣＨ３ＣＯＳ）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．１８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．７ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．４７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．７ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．８ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）， ５．８７ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）。
【００４０】
エチレングリコール（０．５５ ｍｌ、９．９ ｍｍｏｌ）中、化合物（１６） （４６０ ｍｇ、１．０３ ｍｍｏｌ）の溶液に、オルトギ酸エチル（０．８０ ｍｌ、４．８ ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３９．０ ｍｇ、０．２０５ ｍｍｏｌ）を添加する。この混合物を窒素下、室温で２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水性溶液に注ぎ、そしてジクロロメタンにより抽出する。溶出液として酢酸エチル−ヘキサンを用いたシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーで化合物（１７） （２２０ ｍｇ、４６％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．３１ （３Ｈ， ｓ， １９−ＣＨ３ＣＯＳ）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．４ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．０３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １４．０ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．３６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９４ （４Ｈ， ｍ， ケタール）， ４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．７ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．７０． （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝１６．７ Ｈｚ、２１ｂ−Ｈ）， ５．５３（１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ ＝２．７ Ｈｚ、６−Ｈ）。
【００４１】
実施例８
２１−ヒドロキシ−６，１９−スルファニル−４−プレグネン−３，２０−ジオン（３）
チオアセテート（１７） （８８．０ ｍｇ、０．１９ ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（２．５ ｍｌ）中に溶解し、そしてこの混合物を、１５分間の無水窒素のバブリングにより酸素除去した。メタノール（０．１４ ｍｌ）中、ＫＯＨ（２０ ｍｇ、０．３８ ｍｍｏｌ）の溶液を、添加し、そして前記混合物を、室温で１５分間撹拌する。この反応混合物を、水で希釈した１Ｎ ＨＣｌにより中和し、濃縮し、ジクロロメタンにより抽出する。溶媒を留去して、１９−スルファニル誘導体（１８） （５５．０ ｍｇ、７７％）を得た。
【００４２】
０℃に冷却した無水ジクロロメタン（４０ ｍｌ）中、トリエチルアミン（０．０２２ ｍｌ、０．１６ ｍｍｏｌ）とヨウ素（７８．６ ｍｇ、０．３１ ｍｍｏｌ）の溶液に、チオール（１８） （５５ ｍｇ、０．１５ ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、そしてこの混合物を０℃で３０分間撹拌し、そして室温で２時間撹拌する。無色透明な混合物が得られるまで飽和チオ硫酸ナトリウム水性溶液を添加し、そしてこの反応混合物をジクロロメタンにより抽出する。溶媒を留去し、続いて溶出液として酢酸エチルを用いたシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーにより２１−ヒドロキシ−６，１９スルファニル−４−プレグネン−３，２０−ジオン（３．２３ ｍｇ、４４％）νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１ ３４６５， ２９３８， １７１２， １６７６， １０７０， ７３５；１Ｈ ＮＭＲ （５００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７６ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．４６ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ９．３ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ２．５７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １０．７，１９ａ−Ｈ）， ３．０４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １０．７，１９ｂ−Ｈ）， ３．９０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １．０ 及び １．５ Ｈｚ， Ｈ−６）， ４．１６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １１．０ Ｈｚ， ２１ａ−Ｈ）， ４．２２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １１．０ Ｈｚ， ２１ｂ−Ｈ）， ５．７９ （１Ｈ， ｓ， Ｈ−４）；１３Ｃ ＮＭＲ表９を参照のこと；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３６０（３２） ［Ｍ］＋， ３４４（１６）， ３２９（３４）， ３０１（１００）， １５３（５４）， ９１（４３）， ４３（９９）。
【００４３】
実施例９
２１−ヒドロキシ−６，１９−スルホキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン（４）
０℃でメタノール（４．３ ｍｌ）中、未精製化合物（３） （４７．５ ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２．８ ｍｌ）中、Ｏｘｏｎｅ（登録商標） （１２７．４ ｍｇ、０．４０ ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。室温で３０分間撹拌した後に、この混合物を、飽和重亜硫酸ナトリウム水性溶液により希釈し、濃縮し、そしてジクロロメタンにより抽出する。予備ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ ２０：１）により精製して、スルホキシド（４） （２４．０ ｍｇ、４８％）を得る；νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１ ３４５８， ２９３８， １７１９， １６６７， １０７７， １０４１；１Ｈ ＮＭＲ （５００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．６８ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．７２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ２０．０ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．８８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ２０．０ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．８３ （１Ｈ， ｂｔ， ６−Ｈ）， ４．１８ （２Ｈ， ｂｓ， ２１−Ｈ）， ６．０８ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲは表９を参照のこと；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３７６（１２） ［Ｍ］＋， ３５９（３８）， ３４５（６）， ３１３（６２）， １５９（３８）， ９１（５５）， ５５（１００）， ４１（９９）。
【００４４】
実施例１０
２１−ヒドロキシ−６，１９−スルホン−４−プレグネン−３，２０−ジオン（５）
０℃でメタノール（４．３ ｍｌ）中、未精製化合物（３） （４７．５ ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）の溶液に、水（４．３ ｍｌ）中、Ｏｘｏｎｅ（登録商標） （１９０．４ ｍｇ、０．６０ ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。室温で２４時間撹拌した後、この混合物を飽和重亜硫酸ナトリウム水性溶液により希釈し、濃縮し、そしてジクロロメタンにより抽出する。予備ＴＬＣ （ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ ２０：１）により精製して、スルホン（５） （２６．０ ｍｇ、５０ ％）を得る；νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１ ３４６５， ２９４５， １７１２， １６７６， １３０５， ７４２０；１Ｈ ＮＭＲ （５００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７５ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．４５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．５ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．９８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．５ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．８２ （１Ｈ， ｂｒ ｓ， ６−Ｈ）， ４．１９ （２Ｈ， ｂｓ， ２１−Ｈ）， ６．０９ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）； ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３９２（１） ［Ｍ］＋， ３６１（２９）， ３３３（１１）， ２６７（２３）， ２５３（１５）， ９１（４３）， ５５（７７）， ４３（１００）。
【００４５】
実施例１１
１９−ヒドロキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン（１１）
実施例１〜５により得られる２１−アセトキシ−６，１９−ブロモエーテル（１４）に相当する２１−デオキシ−６，１９−ブロモエーテル（１０） （２．０９ ｇ、４．９ ｍｍｏｌ）を、プロパン−２−オール（１７５ ｍｌ）中に懸濁し、そして酢酸（１５．６ ｍｌ）及び活性化亜鉛紛末（５．２ ｇ）を添加する。この懸濁液を、撹拌し、７０〜７５℃で４時間加熱し、冷却し、ろ過し、濃縮し、そしてジクロロメタンにより抽出する。溶出液としてヘキサン−酢酸エチルを用いたシリカゲルによるクロマトグラフィーで、１９−ヒドロキシプロゲステロン（１１） （０．９２ ｇ、５３ ％）を得る、ｍ．ｐ． １６５〜１６８℃ （メタノールから）； １Ｈ ＮＭＲは正式な標準と一致。
【００４６】
実施例１２
３，３−エチレンジオキシ−１９−アセチルスルファニル−５−プレグネン−２０−オン
冷ピリジン（５．２ ｍｌ）中、１９−ヒドロキシプロゲステロン（１１） （５２２ ｍｇ、１．５８ ｍｍｏｌ）の溶液を、冷ピリジン（３．６ ｍｌ）中、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．７ ｍｌ、４．１６ ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に窒素下、滴下にて添加する。この溶液を室温まで暖め、１時間後に冷ジクロロメタン（９５．０ ｍｌ）を添加する。この反応混合物を、１Ｍの冷硫酸、５％の重炭酸ナトリウム水性溶液、及び水で洗浄し、乾燥させて、乾くまで留去して、オレンジの固体として未精製のトリフル酸（６８０ ｍｇ、１００ ％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．６８ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１２ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ−１７）， ４．６８ （２Ｈ， ｑＡＢ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， １９−Ｈ）， ５．００（１Ｈ， ｓ， Ｈ−４）。
【００４７】
アセトン（３５．０ ｍｌ）中、未精製の１９−トリフリルプロゲステロン （６８０ ｍｇ、１．５８ ｍｍｏｌ）及びチオ酢酸カリウム（６８０ ｍｇ、６．０ ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下、室温で２０時間撹拌する。この反応混合物を、ジクロロメタンにより希釈し、ろ過し、そして乾燥するまで留去して、未精製の１９−アセチルスルファニルステロイド（１２） （６１４ ｍｇ、１００ ％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１２ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．３２ （３Ｈ， ｓ， １９−ＣＨ３ＣＯＳ）， ２．５５ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．７ Ｈｚ， Ｈ−１７）， ３．１９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．６ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．４９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．６ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ５．８８ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）；
エチレングリコール（０．８５ ｍｌ、１５．４ ｍｍｏｌ）中、１９−アセチルスルファニルステロイド化合物（１２） （６１４ｍｇ、１．５８ ｍｍｏｌ）の溶液に、オルトギ酸エチル（１．２６ ｍｌ、７．２ ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５２．０ ｍｇ、ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を窒素下、室温で２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水性溶液に注ぎ、そしてジクロロメタンにより抽出する。溶出液として酢酸エチル−ヘキサンを用いたシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーで、３，３−エチレンジオキシ−１９−アセチルスルファニル−５−プレグネン−２０−オン（２５６ ｍｇ、６３％）；ｍ．ｐ． １５１〜１５３℃ （ＥｔＡｃＯ−ヘキサンから）。（実測：Ｃ ６９．１， Ｈ ８．４％；Ｃ２５Ｈ３６Ｏ４Ｓは、Ｃ ６９．４１， Ｈ ８．３９％を要求する）；νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．６５ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， １．６２ （１Ｈ， ｍ， ７ａ−Ｈ）， ２．１１ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．３１ （３Ｈ， ｓ， １９−ＣＨ３ＣＯＳ）， ２．１０ （１Ｈ， ｍ， ７ａ−Ｈ）， ２．５３ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ８．８ Ｈｚ， Ｈ−１７）， ３．０３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １４．４ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．３７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １４．４ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．９４ （４Ｈ， ｍ， ケタール）， ５．５３ （１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ， ６−Ｈ）。
【００４８】
実施例１３
６，１９−スルファニル−４−プレグネン−２０−オン（６）
実施例１２の３，３−エチレンジオキシ−１９−アセチルスルファニル−５−プレグネン−２０−オン（６４ ｍｇ、０．１６ ｍｍｏｌ）を、メタノール（１．８ ｍｌ）中に溶解し、そしてこの混合物を、１５分間無水窒素をバブリングしてそれに通すことにより酸素除去する。メタノール（０．１０ ｍｌ）中、ＫＯＨ（１４．５ ｍｇ、０．２８ ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、そしてこの混合物を室温で１５分間撹拌する。次に、この反応混合物を、水により希釈した１Ｎ ＨＣｌによって中和し、濃縮して、ジクロロメタンにより抽出する。溶媒を留去して、１９−スルファニル誘導体（１３） （４５ ｍｇ、７７％）を得る；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， １．２５ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ４．７ 及び ８．５ Ｈｚ， １９−ＨＳ）， １．６３ （１Ｈ， ｍ， ７α−Ｈ）， ２．１２ （１Ｈ， ｍ， ７β−Ｈ）， ２．７７ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ２．５６ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １１．１ 及び ８．５，１９ａ−Ｈ）， ３．０７ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １１．１ 及び ４．７，１９ｂ−Ｈ）， ３．９４ （４Ｈ， ｍ， ケタール）， ５．６６ （１Ｈ， ｂｒｄ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ， Ｈ−６）；
０℃に冷却した無水ジクロロメタン（３２ ｍｌ）中、トリエチルアミン（０．０１８ ｍｌ、０．１３ ｍｍｏｌ）及びヨウ素（６３ ｍｇ、０．２５ ｍｍｏｌ）の溶液に、チオール（１３） （４５ ｍｇ、０．１２ ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、そして０℃で３０分間、次に室温で２時間撹拌する。無色透明の混合物が得られるまで、飽和チオ硫酸ナトリウム水性溶液を添加し、そしてこの反応混合物をジクロロメタンにより抽出する。溶媒を留去し、続いて溶出液として酢酸エチルを用いたシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーで６，１９−スルファニル−４−プレグネン−２０−オン（６） （１９ ｍｇ、４６％）を得る；ｍ．ｐ． （ＥｔＡｃＯ−ヘキサンから）１８３〜１８５℃；（実測：Ｃ ７３．２、Ｈ ８．４、Ｓ ９．４％；Ｃ２１Ｈ２８Ｏ２Ｓは、Ｃ ７３．２１、Ｈ ８．１９、Ｓ ９．３１を要求する）；νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１ ２９４５， １７１２， １６６７， １３６２， １１９１， ７４２；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７４ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， １．６２ （１Ｈ， ｍ， ７α−Ｈ）， １．９９ （１Ｈ， ｍ， ７β−Ｈ）， ２．１２ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ２．５７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．５Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．０５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．８９ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ２．２ 及び ３．６， ６−Ｈ）， ５．８０ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３４４（３） ［Ｍ］＋， ２５４（５）， １４９（５）， ８４（５０）， ４９（１００）。
【００４９】
実施例１４
６，１９−スルホキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン（７）
メタノール（１．９ ｍｌ）中、未精製の化合物（６） （２０．０ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、水（１．２６ ｍｌ）中、Ｏｘｏｎｅ（登録商標）（５６．９ ｍｇ、０．１８ ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。室温で３０分間撹拌した後、この混合物を飽和重亜硫酸ナトリウム水性溶液により希釈し、濃縮して、ジクロロメタンにより抽出する。予備ＴＬＣ （ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ ２０：１）により精製して、６，１９−スルホキシ−４−プレグネン−３，２０−ジオン（７、９．５ ｍｇ、４５％）を得る；νｍａｘ（ＫＢｒ）／ｃｍ−１ ２９３８， １７０５， １６６９， １３６２， １１７７， １０３５， ７３５；１Ｈ ＮＭＲ （２００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７０ （３Ｈ， ｓ， ＩＳ−ＣＨ３）， ２．１１ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ３．７５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ２４ Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．９８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ２４ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．８３ （１Ｈ， ｂｔ， Ｊ ＝ ２．２ 及び ３．６， ６−Ｈ）， ６．０７ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）； ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３６０ ［Ｍ］＋（１．３）， ３４５（１）， ３４４（３）， ３１２（１）， ２９７（６）， ２５５（５）， ４３（１００）。
【００５０】
実施例１５
６，１９−スルホン−４−プレグネン−３，２０−ジオン（８）
メタノール（１．９ ｍｌ）中、未精製の化合物（６） （２０．０ ｍｇ、０．０６ ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、水（３．０ ｍｌ）中、Ｏｘｏｎｅ（登録商標） （８７．９ ｍｇ、０．２７ ｍｍｏｌ）の溶液を添加する。室温で２４時間撹拌した後、この混合物を、飽和重亜硫酸ナトリウム水性溶液により希釈し、濃縮して、ジクロロメタンにより抽出する。予備ＴＬＣ （ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ ２０：１）により精製して、６，１９−スルホン−４−プレグネン−３，２０−ジオン（８、１０．０ ｍｇ、４４ ％）を得る；νｍａｘ（ＫＢｒ／ｃｍ−１） ２９４５， １６９７， １３１２， １１３４， ７３５；１Ｈ ＮＭＲ （５００．１３ ＭＨｚ） δＨ ０．７３ （３Ｈ， ｓ， １３−ＣＨ３）， ２．１２ （３Ｈ， ｓ， ２０−ＣＨ３）， ２．５０ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １７−Ｈ）， ２．９８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．３Ｈｚ， １９ａ−Ｈ）， ３．４６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １３．３ Ｈｚ， １９ｂ−Ｈ）， ３．８３ （１Ｈ， ｔ， Ｊ＝ ２．６， ６−Ｈ）， ６．０９ （１Ｈ， ｓ， ４−Ｈ）；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ３７６ ［Ｍ］＋（４）， ３５８（１）， ３４３（１）， ３４４（１）， ３２９（１）， ３１２（１３）， ２７９（１．５）。
【００５１】
生物学的アッセイ
Ｉ．抗免疫抑制活性
細胞アッセイ：ラット胸腺細胞のアポトーシス
ａ）　根拠：
細胞死の解析（インビトロ）：
グルココルチコイドは、胸腺細胞のアポトーシスを誘発することが示されている（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ． １８４ （５） ｐ．１６３１−８，１９９６ Ｎｏｖ １）。これに基づき、本発明の化合物の抗グルココルチコイド特性を、所定の試験化合物による処理後のラット胸腺細胞のアポトーシスの減少／増加を試験することにより決定する。従って、スルファニル・アナログ（３）、スルホキシ・アナログ（４）、及びスルホン・アナログ（５）のアポトーシスを妨げる能力を評価するために実験を実行し、２１ＯＨ−６ＯＰ （Ｉ）の活性と比較した。実験は、試験したアナログが１０−４Ｍで同等に有効であるか、又は２１ＯＨ−６ＯＰ （Ｉ）より活性であることを示した。
【００５２】
アポトーシスの調節を、フローサイトメトリーにより分析した。この方法は、サンプル中のアポトーシス細胞を蛍光定量的に定量することから成る。正常な生菌において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、細胞膜の細胞質表面に存在する。アポトーシスの誘導により、ほとんどの細胞タイプのリン脂質の組成の急速な変化が生じ、細胞表面へのＰＳの露見を生じる。外面化したＰＳのインビトロにおける検出を、抗凝血性アネキシンＶとの相互作用を通して実現する。カルシウムの存在により、ＰＳへのアネキシンＶの迅速で高い親和性の結合が生じる。細胞表面へのＰＳの転移は、核の崩壊、ＤＮＡ断片化、及び大部分のアポトーシス関連分子の出現に先行し、アネキシンＶの初期アポトーシス・マーカーの結合をもたらす。
【００５３】
使用したアッセイにおいて、アネキシンＶのフルオレセイン・イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）抱合体を使用し、フローサイトメトリーによるアポトーシスの検出を可能にする。膜が透過性になることは、ネクローシスにおいても観察されるので、同様にネクローシス細胞もアネキシンＶ−ＦＩＴＣを結合する。ヨウ化プロピジウムを生細胞及び初期アポトーシス細胞を区別するために使用し、その結果、後者はＦＩＴＣのみに標識される一方、後期アポトーシス細胞はＦＩＴＣ及びヨウ化プロピジウムにより標識される。
【００５４】
ｂ）　方法論：
Ｏｎｃｏｇｅｎ Ｒｅｓｅｒｃｈ ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ｃａｔ． Ｎｏ．ＰＦ０３２）製のアネキシンＶ−ＦＩＴＣアポトーシス検出キットを、製造業者により推薦されたＲＡＰＩＤプロトコールに従い使用した。手短に言えば、様々な化合物（以下を参照のこと）によるインキュベーションの後、細胞を２０００ ｒｐｍで５分間遠心分離し、その培地を回収し、そして細胞ペレットをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）により洗浄した：細胞を結合バッファー中に１×１０６細胞／ｍｌの密度で再懸濁した。結合試薬（１０ μｌ）及びアネキシンＶ／ＦＩＴＣ （１．２５ μｌ）を添加し、そして細胞を遮光した状態で室温で１５分間インキュベートした。細胞を、遠心分離し、そしてペレットに結合バッファー（０．５ ｍｌ）及びヨウ化プロピジウム（１０ μｌ）を添加した。サンプルを、Ｃｙｔｏｒｏｎ Ａｂｓｏｌｕｔｅ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ （Ｏｒｆｈｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ）のフローサイトメトリーにより分析した。データをＷｉｍｄｉ ２．７により解析した。
【００５５】
ｃ）　結果：
前述のプロトコールを、デキサメタゾン（アポトーシスを誘発する）１０−８Ｍのみ、及び前記試験化合物の存在下でインキュベートした胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを分析するために使用した。１０−６ＭでのＲＵ−４８６（１１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−１７−プロプ−１−イニル−１，２，６，７，８，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン）を、正の対照（基準物質）として使用した；試験化合物を、１０−５Ｍで試験した。デキサメタゾン、及び対応の試験化合物（３）、（５）、及び（８）の存在下、３７℃で４時間、胸腺細胞をインキュベートし、そして先に示したとおり処理した。
【００５６】
得られたサイトグラムを、図３ａ〜３ｆに示す、ここでＧＲ−ＦＬは、ＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬは、ヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味する。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の象限／右に現われる。ＰＳを晒しているが完全な細胞膜有する初期アポトーシス細胞は、下の左の象限に現れる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞は、上の右の象限に現われる。わずかなパーセンテージの正常な細胞死が生じもするが、この場合は何も観察されない。
以下の表１において、観察された全アポトーシス（初期アポトーシス＋後期アポトーシス）のパーセンテージを、各々の化合物について報告する。
【表１】
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【００５７】
ＩＩ．リポーター遺伝子の発現：（リポーター遺伝子アッセイ）：
Ｃｏｓ−１系におけるｐＭＭＴＶ （マウス乳癌ウイルス）Ｌｕｃ（ルシフェラーゼ）発現
リポーター遺伝子アッセイの概要は、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｖｏｌ．７ Ｎｏ．１０ （１９８９）で見られる。このアッセイは、試験化合物のグルコ／抗グルコ、及びプロゲスチン／抗プロゲスチン効果の間を区別するかもしれない。３７℃で５％のＣＯ２雰囲気中、１０％の牛胎仔血清（Ｂｉｏｓｅｒ）、３．７ ｇ／ｌの炭酸ナトリウム、及び１００ ＩＵのペニシリン Ｇ、１ＯＯ μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、０，２５ μｇのアンホテリシンＢを補った、８ｍｌのＤ−ＭＥＭ （ダルベッコ変法イーグル培地Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）により細胞を１００ ｍｍプレート上に培養した。細胞を、０．２５％のトリプシン、１ ｍＭ ＥＤＴＡにより処理し、そして６０ ｍｍプレートに５×１０５細胞／プレートの密度で蒔いた。Ｃｏｓ−１細胞を、グルココルチコイド・レセプターをコードする構築物、及びＭＭＴＶプロモーター下のルシフェラーゼ遺伝子を含む構築物により形質移入した。それぞれルシフェラーゼ及びグルココルチコイド・レセプターをコードしているｐＭＭＴＶ−Ｌｕｃ及びｐＲＳＶ−ＧＲベクターを３ ｐｍｏｌｅｓ含んでいる溶液に、２５ μｌの２Ｍ ＣａＣｌ２溶液を添加する、リン酸カルシウムによる沈殿により細胞を形質移入した。マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターは、グルココルチコイド・レセプター（ＧＲ）を介してグルココルチコイド・ホルモンにより誘発される（ＥＭＢＯ Ｊｕｎ １ ２０（１１） ｐ．２８０２−１１ （２００１））。ＰＲＳＶ−ｌａｃＺベクターを、形質移入の対照として使用した。
【００５８】
形質移入混合物を、等量の、ホスフェート含有形質移入バッファー２× ＢＢＳに滴下にて添加した。５００ μｌの混合物全体を、各々のプレートに添加し、そして１６時間インキュベートした。細胞を洗浄し、そして１０％の無ステロイド血清を含む培地中、デキサメタゾンにより３６時間処理した。インキュベート後に、細胞をＴＢＳにより２度洗浄した。３００ μｌの溶解バッファーを、各々のプレートに添加し、そして室温で１５分間インキュベートした。上清からルシフェラーゼ活性を測定した。ベータ−ガラクトシダーゼ活性を内部標準として使用した。一部の不明なものにおいてＰｒｏｍｅｇａキットを利用してルシフェラーゼ発現を、アッセイし、Ｊｕｎｉｏｒ照度計（ＥＧ＆Ｇ Ｂｅｒｔｈｏｌｄ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて計測した。
【００５９】
βガラクトシダーゼを、フェニルガラクトシドの加水分解により測定した。図４で示されるように、１０−６Ｍの濃度での試験化合物（４） （すなわち、２１ＯＨ−６，１９ ＳＰ）の使用は、ルシフェラーゼ／βガラクトシダーゼ比の約６５％の削減を与える。ＲＵ４８６を正の対照として使用した。この実験は、グルココルチコイド・レセプターにおいてのスルホキシド２１ＯＨ−ＳＯＰ（４）の抑制活性を確認する。デキサメタゾンの不存在下で使用されるとき、試験したステロイドのどれもが効果自体をを示さなかった、すなわち、それらは、前記実験条件下ではグルココルチコイド・レセプターのアゴニストでない。
【図面の簡単な説明】
【図１】
内因性コルチゾール産生に関連している経路を説明する。
【図２】
６，１９−オキシドプロゲステロン（Ｉ）（６ＯＰ）及び６，１９−スルファニル−プロゲステロン（６）のＸ線構造の最小二乗オーバーレイを示す。
【図３ａ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）のみにより胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図３ｂ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）＋２１ＯＨ−６ＯＰ（１０−５ Ｍ）（化合物（Ｉ））により胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図３ｃ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）＋２１ＯＨ−６ＳＯＰ（１０−５ Ｍ）（化合物（４））により胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図３ｄ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）＋ＲＵ−４８６（１０−６ Ｍ）により胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図３ｅ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）＋２１ＯＨ−６ＳＰ（１０−５ Ｍ）（化合物（３））により胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図３ｆ】
ＧＲ−ＦＬがＦＩＴＣからの蛍光を意味し、そしてＲＤ−ＦＬがとヨウ化プロピジウムからの蛍光を意味するサイトグラムを示す（データは、以下に記載の胸腺細胞アポトーシス・アッセイから得た）。アネキシン−ＦＩＴＣもヨウ化プロピジウムも結合してない生細胞は、下の右の象限に現われる。ネクローシス又は後期アポトーシス細胞が上の右の象限に現われる。
デキサメタゾン（１０−８ Ｍ）＋２１ＯＨ−６ＳＯ２Ｐ（１０−５ Ｍ）（化合物（５））により胸腺細胞において誘発された細胞アポトーシスを説明する。
【図４】
以下に記載のリポーター遺伝子アッセイの関し、基準物資（ＲＵ ４８６）に対する、終濃度１０−６ Ｍで使用した試験化合物（１）、（３）、（４）、及び（５）の活性を表わす。Ｄｅｘａは、デキサメタゾンを意味し、そしてＲＵ−４８６（１１−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−１７−プロプ−１−イニル−１，２，６，７，８，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン）を正の対照として用いた。縦座標がルシフェラーゼ単位／β−ガラクトシダーゼ単位に相当する。
【図１】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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