(57)【要約】本発明は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２として公知の分子に結合する可溶性タンパク質に関する。このタンパク質は、標的細胞に対するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の影響に拮抗し得る。このタンパク質をコードする核酸分子およびこのタンパク質の使用がまた、記載される。ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する可溶性タンパク質をコードする単離された核酸分子であって、該単離された核酸分子の相補的ヌクレオチド配列は、ストリンジェントな条件下で、配列番号５または配列番号１０にハイブリダイズする、単離された核酸分子。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する可溶性タンパク質をコードする単離された核酸分子であって、該単離された核酸分子の相補的ヌクレオチド配列は、ストリンジェントな条件下で、配列番号５または配列番号１０にハイブリダイズする、単離された核酸分子。
【請求項２】
前記単離された核酸分子が、タンパク質をコードし、該タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号６または配列番号１１に示される、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号５または配列番号１０に示される前記ヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
プロモーターに作動可能に連結された請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項５】
プロモーターに作動可能に連結された請求項２に記載の単離された核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項６】
プロモーターに作動可能に連結された請求項３に記載の単離された核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項７】
請求項１に記載の単離された核酸分子で形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項８】
請求項２に記載の単離された核酸分子で形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項９】
請求項３に記載の単離された核酸分子で形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項１０】
請求項４に記載の発現ベクターで形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項１１】
請求項５に記載の発現ベクターで形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項１２】
請求項６に記載の発現ベクターで形質転換または形質導入された、組換え細胞株または細胞系統。
【請求項１３】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する、単離された可溶性結合タンパク質であって、該タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定されるように、約２３〜約４０キロダルトンの分子量を有する、単離された可溶性結合タンパク質。
【請求項１４】
配列番号６または配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離された可溶性タンパク質。
【請求項１５】
細胞に対するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の影響を阻害するための方法であって、該方法は、該ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２を、該ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合し、かつ該ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に拮抗するに有効な量の、請求項１３に記載の可溶性タンパク質と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１６】
サンプル中にＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２が存在するか否かを決定するための方法であって、該方法は、該サンプルを請求項１３に記載のタンパク質と接触させる工程、および該サンプル中のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の決定として、該タンパク質のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２への結合を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１７】
可溶性のＩＬ−２２／ＩＬ−ＴＩＦ結合タンパク質を生成するための方法であって、該方法は、細胞を、請求項１に記載の単離された核酸分子で形質転換または形質導入する工程、このように形質転換または形質導入された細胞を培養して、該可溶性結合タンパク質を生成する工程、および該可溶性結合タンパク質を該細胞から単離する工程、を包含する、方法。
【請求項１８】
可溶性のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２結合タンパク質を生成するための方法であって、該方法は、細胞を、請求項４に記載の発現ベクターで形質転換または形質導入する工程、このように形質転換または形質導入された細胞を培養して、該可溶性結合タンパク質を生成する工程、および該可溶性結合タンパク質を該細胞から単離する工程、を包含する、方法。
【請求項１９】
検出可能な標識をさらに含む、請求項１３に記載の単離された可溶性結合タンパク質。
【請求項２０】
前記可溶性結合タンパク質が、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２のアンタゴニストである、請求項１３に記載の単離された可溶性結合タンパク質。
【請求項２１】
請求項１３に記載の結合タンパク質に特異的に結合する、単離された抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
請求項２２に記載のモノクローナル抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項２４】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する可溶性タンパク質の存在を決定するための方法であって、該方法は、サンプルを請求項２１に記載の抗体と接触させる工程、および該サンプル中の該可溶性結合タンパク質の存在の決定として、該抗体の該可溶性結合タンパク質への結合を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項２５】
前記抗体が、検出可能な標識で標識される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
サンプル中の、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２結合タンパク質のタンパク質アンタゴニストをコードする核酸分子の発現を決定するための方法であって、該方法は、該サンプルを、配列番号５または配列番号１０のヌクレオチド配列に対してストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドと接触させる工程を包含し、該オリゴヌクレオチドに対するハイブリダイゼーションが、該核酸分子の発現を示す、方法。
【請求項２７】
配列番号５または配列番号１０の１７〜１００連続ヌクレオチドからなる、単離されたオリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
請求項１７に記載の方法によって生成される、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する単離されたタンパク質。
【請求項２９】
請求項１８に記載の方法によって生成される、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する単離されたタンパク質。
【請求項３０】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の、結合パートナーに対する結合を阻害するための方法であって、該方法は、該結合を阻害するに十分な量の請求項１３に記載の単離された結合タンパク質を、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２およびこれに対する結合パートナーを含有するサンプルに添加する工程を包含する、方法、
【請求項３１】
インビトロで起こる、請求項１５に記載の方法。
【請求項３２】
前記可溶性結合タンパク質がＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２を結合する能力を試験または確認する工程をさらに包含する、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１３または請求項１４に記載の可溶性結合タンパク質に特異的な抗体分子を獲得する方法であって、該方法は、多様な結合特異性の抗体分子の集団またはパネルを、該可溶性結合タンパク質またはその抗原性フラグメントに接触させる工程、該タンパク質を結合する１以上の抗体分子を選択する工程、および該可溶性結合タンパク質に対する特異的結合について該抗体分子を試験する工程、を包含し、それによって、該可溶性結合タンパク質に特異的な抗体分子が獲得される、方法。
【請求項３４】
前記抗体分子を、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に対するＩＬ−２２ＢＰの結合を阻害する能力について試験する工程をさらに包含する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＩＬ−２２媒介性の疾患を処置するための医薬の製造における、請求項１３または請求項１４に記載の可溶性結合タンパク質の使用。
【請求項３６】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に対する、請求項１３または請求項１４に記載の可溶性結合タンパク質の結合を調節する因子についてのアッセイ方法であって、該方法は、以下：
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に対する該タンパク質の結合のインヒビターである試験物質の非存在下で、該タンパク質またはそのフラグメントが、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントに結合する条件下で、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはフラグメントを、請求項１３もしくは請求項１４に記載のタンパク質またはそれらのフラグメントおよび試験物質と接触させる工程、
ＩＬ２２−ＢＰポリペプチドまたはそのフラグメントの、該ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントへの結合を決定する工程、および
該結合を調節する因子を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項３７】
ＩＬ−２２媒介性の活性を調節する能力について、前記結合を調節する前記因子を試験する工程をさらに包含する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記結合を調節する前記因子が、少なくとも１つのさらなる成分を含有する組成物中に処方される、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＩＬ−２２媒介性の障害を処置するための医薬の製造において、前記結合を調節する前記因子の使用をさらに包含する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４０】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２および／またはＩＬ−２２結合タンパク質を、前記結合を調節する前記因子と接触させる工程をさらに包含する、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
インビトロで起こる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
個体に、結合を調節する前記因子を投与する工程を包含する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記結合を調節する前記因子が、抗体分子である、請求項３６〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記結合を調節する前記因子が、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２のペプチドフラグメントまたは請求項１３もしくは請求項１４に記載の可溶性結合タンパク質である、請求項３６〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００１年７月３０日に出願された米国特許出願第０９／９１９，１６２号、ならびに２０００年１１月３日に出願された仮出願第６０／２４５，４９５号、および２０００年９月２２日に出願された同第６０／２３４，５８３号（これらは、全て、その全体が参考として援用される）の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、新たに単離された核酸分子、タンパク質およびそれらの使用に関する。より具体的には、本発明は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２と称される分子、または本明細書中以降「ＩＬ−２２ＢＰ」もしくは「ＩＬ−２２結合タンパク質」と称される分子に結合する、可溶性タンパク質に関する。本発明のタンパク質は、ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合することによってＴＩＦ／ＩＬ−２２を阻害し、そして細胞に対するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の影響を阻害する。
【０００３】
（背景および先行技術）
ここ十数年間、免疫系およびその調節の大きく拡大した知識が、理解された。特定の目的領域は、免疫系を調節するタンパク質および糖タンパク質に関する調査の領域であった。これらの分子の最も知られたファミリーの１つは、サイトカインである。これらは、細胞の互いの「連絡」に関与する分子である。サイトカインファミリーの個々のメンバーは、広範な種々の病理学的状態（例えば、癌およびアレルギー）に関与することが見出されている。サイトカインは、時々、この状態の病理に関与するが、治療的に有用であることもまた公知である。
【０００４】
サイトカインの１つの型は、インターロイキンである。インターロイキンに関する文献は、膨大である。この領域における特許の網羅的な列挙では決してないが、例としては、Ｍｅｒｔｅｌｓｍａｎｎらに対する米国特許第４，７７８，８７９号；Ｓｔｅｒｎに対する米国特許第４，４９０，２８９号；Ｍａｒｋらに対する米国特許第４，５１８，５８４号；およびＭｉｙａｊｉらに対する米国特許第４，８５１，５１２号が挙げられ、これらの全てが、インターロイキン−２、すなわち「ＩＬ−２」に関する。インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）に関するさらなる特許（例えば、Ｃｏｓｍａｎに対する米国特許第４，８０８，６１１号）が、発行されている。これらの特許の開示の全ては、本明細書中で参考として援用される。異なるインターロイキンに関する、より最近の特許としては、米国特許第５，６９４，２３４号（ＩＬ−１３）；同第５，６５０，４９２号（ＩＬ−１２）；同第５，７００，６６４号、同第５，３７１，１９３号および同第５，２１５，８９５号（ＩＬ−１１）；同第５，７２８，３７７号、同第５，７１０，２５１号、同第５，３２８，９８９号（ＩＬ−１０）；同第５，５８０，７５３号、同第５，５８７，３０２号、同第５，１５７，１１２号、同第５，２０８，２１８号（ＩＬ−９）；同第５，１９４，３７５号、同第４，６９５，１９５号（ＩＬ−７）；同第５，７２３，１２０号、同第５，１７８，８５６号（ＩＬ−６）；ならびに同第５，０１７，６９１号（ＩＬ−４）が挙げられる。この特許文献をざっと再検討するだけでも、インターロイキンファミリーのメンバーの特性の多様性が示される。より大きいサイトカインファミリーが、さらなる多様性を示すことが予測できる。例えば、Ａｇｇａｒｗａｌら、編、Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｆｏｒ  Ｂａｓｉｃ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９２）、Ｐａｕｌ、編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）、７６３−８３６頁、「Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」および「Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｄｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」、ならびにＴｈｏｍｓｏｎ、編、「Ｔｈｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｈａｍｄｂｏｏｋ」（１９９８、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）を参照のこと。列挙された全ての参考文献は、参考として援用される。
【０００５】
種々のサイトカイン間の関係は、複雑である。本明細書中に引用される参考文献から理解されるように、特定のサイトカインのレベルが増加または減少する場合、これは、被験体によって生成される他の分子のレベルに、直接的にかまたは間接的にかのいずれかで影響し得る。中でも、影響を受ける分子は、他のサイトカインである。
【０００６】
以前には「Ｐ４０」と称されたリンフォカインＩＬ−９は、Ｔ４細胞株の永久的な抗原非依存的な増殖を持続する因子として元々同定された、Ｔ細胞由来の分子である。例えば、Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：６９３４（１９８８）、およびＶａｎ  Ｓｎｉｃｋら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：３６３（１９８９）（Ｓｉｍｐｓｏｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８３：７１５（１９８９）の開示がそうであるように、これらの開示は、参考として援用される）を参照のこと。
【０００７】
ＩＬ−９の活性は、制限Ｔ４細胞株上で最初に観察され、ＣＴＬまたは新たに単離されたＴ細胞上では、活性を示さなかった。例えば、Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅら、前出、およびＳｃｈｍｉｔｔら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２１６７（１９８９）を参照のこと。Ｈｕｌｔｎｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２１６７（１９８９）および米国特許第５，１６４，３１７号（これら両方の開示は、本明細書中で参考として援用される）に示されるように、活性のこの範囲は、ＩＬ−９およびＴ細胞増殖因子ＩＩＩ（「ＴＣＧＦ  ＩＩＩ」）と称される分子が、ＭＥＡ（肥満細胞増殖増強活性）（ＩＬ−３に対する骨髄由来の肥満細胞の増殖応答を増強する因子）と同一であることが実験によって示された場合、拡張された。ＩＬ−９のヒト形態が、巨核芽球白血病の増殖を刺激することもまた見出された。Ｙａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ  ７４：１８８０（１９８９）を参照のこと。ＩＬ−９に関する最近の研究は、ＩＬ−９がまた、赤血球コロニー形成を支持し（Ｄｏｎａｈｕｅら、Ｂｌｏｏｄ  ７５（１２）：２２７１−２２７５（６−１９９０））；骨髄の赤血球バースト形成の増殖を促進し（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｂｌｏｏｄ  ７６：３０６−３１１（１９９０）；そして成体および胎児起源のＢＦＵ−Ｅのクローン性の成熟を支持する（Ｈｏｌｂｒｏｏｋら、Ｂｌｏｏｄ  ７７（１０）：２１２９−２１３４（１９９１））ことを示した。ＩＬ−９の発現は、ホジキン病および未分化大細胞リンパ腫にも関連している（Ｍｅｒｚら、Ｂｌｏｏｄ  ７８（８）：１３１１−１３１７（１９９０））。気管支の反応性亢進の発症に感受性であるか、または耐性であるマウスの遺伝的分析は、ＩＬ−９遺伝子との関連性、ならびにこのモデルにおけるＩＬ−９生成と感受性との相関を明らかにした（Ｎｉｃｏｌａｉｄｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４、１３１７５−１３１８０、（１９９７））。ヒトの遺伝的研究はまた、ＩＬ−９遺伝子およびＩＬ−９Ｒすなわち「ＩＬ−９レセプター」遺伝子を、喘息治療のための候補として指摘した（Ｄｏｕｌｌら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１５３、１２８０−１２８４（１９９６）；Ｈｏｌｒｏｙｄら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５２、２３３−２３５（１９９８））。ＩＬ−９トランスジェニックマウスは、増大したＩＬ−９発現が、肺の肥満細胞症、過好酸球増加症、気管支反応性亢進（ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）および高レベルのＩｇＥを生じることの実証を可能にした（Ｔｅｍａｎｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８、１３０７−１３２０（１９９８）；Ｇｏｄｆｒａｉｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０、３９８９−３９９６（１９９８）；ＭｃＬａｎｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．１９：７１３−７２０（１９９９））。総合すると、これらの観察は、ＩＬ−９がこの疾患において主要な役割を果たすことを強力に示唆する。さらなる研究は、ＩＬ−９ならびに、喘息およびアレルギーにおけるこのサイトカインのムテインに関連した。例えば、ＰＣＴ出願ＵＳ９６／１２７５７（Ｌｅｖｉｔｔら）およびＰＣＴ  ＵＳ９７／２１９９２（Ｌｅｖｉｔｔら）（これらの両方は、参考として援用される）を参照のこと。
【０００８】
ＩＬ−９は、被験体において他の分子のレベルに影響することが公知である。Ｌｏｕａｈｅｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５０６１−５０７０（１９９５）、Ｄｅｍｏｕｌｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．１６：４７１０−４７１６（１９９６）（これらの両方は、参考として援用される）を参照のこと。影響された分子が、生物学的系において独自の機能を有することが認識される。例えば、Ｄｅｍｏｕｌｉｎらは、ＩＬ−９の既知の活性の多くが、ＳＴＡＴ転写因子の活性化によって媒介されることを示す。このように、その存在および／またはレベルが、他の分子（例えば、シグナル伝達分子およびサイトカイン）によって影響される分子を同定する試みに、興味が存在し続ける。
【０００９】
インターロイキンファミリーの新規メンバーは、例えば、米国特許出願第０９／４１９，５６８号（１９９９年１０月１８日に出願）（その全体が参考として援用される）に記載される。Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら「Ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｆａｃｔｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｓ  ａ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−１０１４９（２０００）（これもまた、参考として援用される）もまた参照のこと。Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：１８１４（２０００）およびＤｕｍｏｕｒｉｅｒら、Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １：４８８（２０００）（これらの両方は、参考として援用される）もまた参照のこと。米国特許出願第０９／６２６，６２７号（２０００年７月２７日に出願）（参考として援用される）もまた参照のこと。Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９７（１８）：１０１４４−１０１４９（２０００）はまた、この新規分子ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２が、インビトロおよびインビボで、肝臓細胞による急性期反応物産生を誘導することを示唆する。Ｘｉｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７：３１３３５−３１３３９（２０００）は、この分子が、ＩＬ−２２として改名されることを示唆した。Ｘｉｅらはまた、この分子に対するレセプターが、各々がこの分子に結合する２本の鎖からなることを教示する。これらの鎖は、「ＣＲＦ  ２−４」および「ＣＲＦ  ２−９」と称される。前者はまた、「ＩＬ−１０ＲＢ」と称される。なぜなら、これは、ＩＬ−１０のシグナル伝達に必要だからである。例えば、Ｋｏｔｅｎｋｏら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １６：５８９４（１９９７）を参照のこと。
【００１０】
第２の鎖であるＣＲＦ  ２−９は、もともと、オーファンレセプターであると考えられた。この鎖はまた、「ＺＣＹＴＯＲ  １１」としても公知であるが、Ｘｉｅら（前出）は、これを「ＩＬ−２２Ｒ」と改名されるべきであると提唱した。その構造に起因して、両方の鎖は、クラスＩＩサイトカインレセプターファミリー（Ｋｏｔｅｎｋｏら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：２５５７（２０００））に属すると考えられる。このクラスＩＩサイトカインレセプターファミリーは、既知の機能を有する８つのメンバー（すなわち、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ｗ、ＩＦＮ−ｔ）およびＩＩ型（ＩＦＮ−γ）インターフェロン、ＩＬ−１０Ｒ、組織因子、および上記に参照される２つの鎖についての２対の２つのレセプターサブユニット）からなる。「ＣＲＦ  ２−８」と称される少なくとも１つのオーファンレセプターもまた、このファミリーのメンバーである。これらのレセプターは、直列のフィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮＩＩＩ）ドメインを有するその細胞外ドメインによって関連付けられる。これらのタンパク質をコードする遺伝子のうちの４つ（すなわち、「ＩＦＮＡＲ１」、「ＩＦＮＡＲ２」、「ＩＩＬ１０Ｒ２」および「ＩＦＮＧＲ２」）は、ヒトの第２１染色体上に位置付けられる。ＩＦＮＧＲ１遺伝子およびＣＲＦ２−８遺伝子は、第６染色体上にマッピングされ、ＩＬ２２Ｒは、第１染色体上に位置付けられ、そしてＩＬ１０Ｒ１は、第１１染色体上にある。
【００１１】
これらの分子に関するさらなる研究は、例えば、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／１１４７９（公開番号ＷＯ  ００／６５０２７）および国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１１６４４（公開番号ＷＯ  ９９／６１６６７）において見出され得る。「ＺＣＹＴＯＲ１６」を記載する、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／３２７０３（公開番号ＷＯ／０１／４０４６７）もまた参照のこと。
【００１２】
ここで、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合しそしてＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）と称される別の分子をコードする、核酸分子が同定された。この核酸分子がコードするタンパク質は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２が標的細胞に対して有する効果を阻害するのに役立つ。さらに、この核酸分子の第２の型は、第１の型のスプライス改変体として同定された。この第２の分子は、さらなる９６ヌクレオチドを含み、そしてさらなる３２アミノ酸をコードする。
【００１３】
本発明のこれらの特徴および他の特徴は、以下に続く開示において理解される。
【００１４】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
（実施例１）
本実施例は、クラスＩＩサイトカインレセプターファミリーの潜在的な新規メンバーを同定するために実施された実験を記載する。インターフェロンに対するレセプターおよびＩＬ−１０に対するレセプターは、このファミリーのメンバーである。
【００１５】
ヒトＩＬ−１０Ｒの細胞外ドメインのアミノ酸配列を用いて、ＴＢＬＡＳＴＮソフトウェアを使用することにより、Ｓａｎｇｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｃ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｎｐｈ−Ｂｌａｓｔ＿ｓｅｒｖｅｒ；ｈｔｍｌ）のデータベースをスクリーニングした。
【００１６】
２つの短い相同性領域を、既知のＩＦＮＧＲ−１遺伝子由来の約４０キロベースである、染色体６ｑ２４由来のＢＡＣクローン（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＬ  ０５３３７）において同定した。
【００１７】
第１のフラグメントは、ＩＬ−１０Ｒの残基６３〜１１９と４０％のアミノ酸同一性を示し、一方で、３ｋｂ上流に位置付けられた他方は、残基２９〜４７と４７％の同一性を示した。
【００１８】
一旦、ＢＡＣ配列が同定されると、この配列をさらに、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／Ｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄ／Ｗｅｂａｐｐｐ／ｎｉｘ／（参考として援用される）で見出されるＮＩＸ分析プログラムを使用して、分析した。このソフトウェアは、約１６キロベースにわたって伸展する、５つのエキソンを含む遺伝子を予測した。この最後のエキソンは、いくつかのＥＳＴ配列に対応する。
【００１９】
（実施例２）
これらの実験は、上記の実施例１において同定された分子の組織分布パターンを決定するために設計された。
【００２０】
総ＲＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９３）（参考として援用される）に従い、グアニジウムイソチオシアネート溶解およびＣｓＣｌ勾配遠心分離を使用して、種々の器官から採取したサンプルより単離した。ＲＮＡサンプル（５μｇ）を、オリゴ（ｄＴ）プライマーで逆転写し、そして得られたｃＤＮＡを、ＰＣＲを介して増幅した。詳細には、５ｎｇの総ＲＮＡに対応するサンプルを、ａｇｇｇｔａｃａａｔ  ｔｔｃａｇｔｃｃｃｇ  ａ（センス、配列番号１）およびｃｇｇｃｇｔｃａｔｇ  ｃｔｃｃａｔｔｃｔｇ  ａ（アンチセンス、配列番号２）を使用して増幅した。アニーリング温度は、５５℃であった。得られたＰＣＲ産物を、エチジウムブロミドで染色された１％アガロースゲルにおいて分析した。
【００２１】
最も強い発現は、胸部組織において見出された。そして、明瞭なシグナルは、肺および腸管（すなわち、胃および結腸）においても検出された。皮膚組織、精巣組織、脳組織、心臓組織および胸腺組織もまた低レベルで陽性であり、そして試験されたすべてのサンプルにおいて陽性であるというわけではなかった。前立腺組織、膀胱組織、腎臓組織、卵巣組織、筋肉組織、骨髄組織、肝臓組織または子宮組織において検出可能な発現は存在しなかった。
【００２２】
これらの結果の注目すべき１つの特徴は、皮膚および肺のようないくつかの組織サンプルにおける第２バンドの同定であった。この第２バンドの重要性は、下記において考察される。
【００２３】
（実施例３）
これらの実験は、上記の材料について全長ｃＤＮＡを増幅する際の作業を記載する。
【００２４】
胸部組織のＲＮＡを、上記に記載のように調製し、そしてｔｇａａｃａｇｔｃａ  ｃａｃｔｃｇａｇａｃ  ｃａｔｇａｔｇｃ（センス；配列番号３）およびｃａｔｃｃｔｇｔｔｃ  ｔｃｇａｇｇａｇｃｔ  ｔｔａｇａ（アンチセンス；配列番号４）を用いて、上記に記載のようにＲＴ−ＰＣＲを介して増幅した。これらのプライマーは、下記のｐＣＥＰ４プラスミド中への直接的なクローニングを可能にするためにＸｈｏＩ部位を導入する変異を含む。約２７ｋｄの見積分子量を有する、２３０または２３１アミノ酸のタンパク質をコードする６９６ヌクレオチドのオープンリーディングフレームからなるｃＤＮＡ分子を同定した。この完全ヌクレオチド配列は２２７１ヌクレオチドを含み、ヌクレオチド１１３〜８０５または１１０〜８０５に「ＯＲＦ」を有する。このヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を、配列番号５および６に示す。互いに隣接する２つの潜在的な開始コドンが存在し、その結果、このタンパク質がＭｅｔまたはＭｅｔ  Ｍｅｔで開始し得ることに留意のこと。
【００２５】
推定タンパク質の分析によって、シグナルペプチドに適合し得るＮ末端での疎水性アミノ酸のストレッチが明らかとなった。ＩＬ−１０レセプターファミリーのメンバーの細胞外ドメインに対して、有意な相同性が存在した；しかし、この検討されている分子は、疎水性の膜貫通ドメインを欠失していた。このことは、この分子が、分泌タンパク質であることを示唆している。
【００２６】
この推定アミノ酸配列を他のタンパク質と整列した場合、ＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインとの３３％のアミノ酸同一性が見出され、同様に、オーファンレセプターＣＲＦ  ２−８との３４％のアミノ酸同一性が見出された。より低い配列同一性は、ＩＬ−１０Ｒ（２９％）、ＣＲＦ２−４／ＩＬ−１０Ｒβ（３０％）、組織因子（２６％）および４つのインターフェロンレセプター鎖（２３〜２５％）と見出された。このタンパク質の推定成熟形態は、４つのシステイン残基を含む。これらは、クラスＩＩサイトカインレセプターの大半のメンバーにおいて保存されている。さらに、本明細書中において提示される情報から推論されるように、この遺伝子の構造は５つのエキソンを含む構造であり、最初のエキソンがシグナルペプチドをコードし、そして後の４つのエキソンが成熟タンパク質をコードする。
【００２７】
（実施例４）
上記で明らかにされたデータは、目的の分子が、ＩＬ−２２Ｒの細胞外ドメインと最も高い相同性を有することを示した。従って、この分子が、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合するか否かを決定するために、実験を設計した。
【００２８】
一連のＩＬ−２２ＢＰ融合タンパク質を作製した。「ＩＬ−ＴＩＦＲ−Ｉｇ」と称される第１のものを、以下の変異アンチセンスプライマーｃｃａａｃｔｔｃｃａ  ｔｇａｔｃａａｔｇｇ  ａａｔｔｔｃｃａｃａ  ｃａｔｃｔｃｔ（配列番号７）を使用して、上記に参照されるＩＬ−２２ＢＰ分子の全長オープンリーディングフレームをまず増幅することによって生成した。
【００２９】
このプライマーは、ＯＲＦの停止コドンにＢｃｌＩ部位を導入するのに役立つ。さらに、マウスＩｇＧ３アイソタイプ重鎖のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む領域を、既知のＩｇＧ３抗ＴＮＰハイブリドーマＣ３１１０を使用して増幅した。以下のプライマーを使用した：ａａｇａｃｔｇａｇｔ  ｔｇａｔｃａａｇａｇ  ａａｔｃｇａｇｃｃｔ  ａｇａ（センス、配列番号８）およびａａｔｇｔｃｔａｇａ  ｔｇｃｔｇｔｔｃｔｃ  ａｔｔｔａｃｃ（アンチセンス、配列番号９）。これらのプライマーはまた、クローニングのためのＢｅｌＩ部位およびＸｂａＩ部位を含む。
【００３０】
増幅後、両方のＰＣＲ産物を消化し、そして上記に記載のように、ＣＭＶプロモーターの制御下においてｐＣＥＰ４プラスミドにクローニングした。
【００３１】
クローンを、標準的な方法を使用して、配列決定した。次いで、これらを使用して、また上記に記載されたようにＨＥＫ２９３細胞に一過的にトランスフェクトした。簡潔には、細胞を、トランスフェクションの１日前に６ウェルプレートに３×１０５細胞／ウェルで播種した。２μｇのプラスミドＤＮＡを用いて、標準的なリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）方法論を使用した。トランスフェクション後、細胞を、１．５ｍｌの通常の培地中において３日間インキュベートした。
【００３２】
同様の様式で、ＩＬ−２２Ｒ−Ｉｇとして知られる、ＩＬ−２２ＲおよびＩｇＧ３  Ｆｃフラグメントの融合タンパク質を生成した。これらの２つの融合タンパク質を、以前に作製されたコントロール融合タンパク質（すなわち、ＩＬ−９−Ｉｇ）と一緒に使用した。
【００３３】
次いで、３０ｍｍ  ＮａＣｌを含む２０ｍｍのＴｒｉｓ．Ｇｌｙｃｉｎｅ緩衝液（ｐＨ９．２）中で、４℃において一晩、０．０８３ｍｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２または０．２ｍｇ／μｌのウシ血清アルブミンのいずれかでポリスチレンプレートをコーティングすることによってアッセイを実施した。ＰＢＳ緩衝液およびＴｗｅｅｎ  ２０（１０−４）中での洗浄後、プレートを、ＰＢＳおよび１％ＢＳＡで２時間ブロックし、次いで、一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の５０μｌの上清を添加した。次いで、プレートを、３７℃で２時間インキュベートした。ペルオキシダーゼに結合したマウス抗Ｉｇポリクローナル抗体を用いて、結合したあらゆる融合タンパク質を検出した。検出を、ペルオキシダーゼ基質「ＴＭＢ」、すなわち（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を使用して実施し、そして２０μｌのＨ２ＳＯ４によって停止した。
【００３４】
この結果により、ＩＬ−２２ＢＰ−ＩｇおよびＩＬ−２２Ｒ−Ｉｇは両方とも、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合するが、ウシ血清アルブミンには結合しないことが示された。偽性トランスフェクト細胞の上清またはＩＬ−９−Ｉｇは、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に検出可能に結合しなかった。
【００３５】
（実施例５）
これらの実験は、本発明のタンパク質がＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性をブロックし得るか否かを評価するために設計された研究を記載する。
【００３６】
このことを試験するために、上記に参照される、細胞株Ｈ４ＩＩＥおよびＨＴ−２９を使用した。Ｈ４ＩＩＥは、ＳＴＡＴ転写因子の活性化および急性期反応物の産生によって、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に応答することが公知である。ＨＴ−２９細胞株は、ＳＴＡＴ−３活性化を示す。ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２によるＳＴＡＴ活性化は、５つのＳＴＡＴ結合部位および最少ＴＫプロモーターを含むルシフェラーゼリポーター構築物の使用を介して、両方の細胞株において測定され得る。Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：１０１４４（２０００）（参考として援用される）を参照のこと。
【００３７】
構築物「ｐＧＲＲ５」を使用した。この構築物は、ｔｋプロモーターの制御下にあるルシフェラーゼ遺伝子の上流に、ＦｃγＲ１遺伝子のＳＴＡＴ結合部位を５コピー含む。内部コントロールとして、ベクターｐＲＬ−ＴＫを使用した。この構築物は、ｔｋプロモーターの制御下において、レニラのルシフェラーゼ遺伝子を含む。
【００３８】
Ｈ４ＩＩＥ細胞およびＨＴ−２９細胞を、１５μｇのｐＧＲＲ５および１μｇのｐＲＬ−ＴＫでエレクトロポレーションし（２５０Ｖ，１９２Ω，１，２００μＦ）、次いで、４×１０５細胞／ウェルで播種した。ＲＡＷ２６４．７細胞を、同じようにトランスフェクトした。この唯一の差異は、使用した抵抗である（７４Ω）。この細胞株を使用して、ＩＬ−１０に対するＩＬ−２２ＢＰ物質の効果を決定した。
【００３９】
次いで、トランスフェクトしたＨ４ＩＩＥ細胞またはＨＴ−２９細胞を、以下を用いて刺激した：種々の濃度の組換え生成ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２および５％上清（本明細書中に記載されるｃＤＮＡでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来）のプレインキュベート（１時間）された混合物、またはＩＬ−ＴＩＦおよび偽性トランスフェクト細胞由来の５％上清のプレインキュベートされた混合物。２時間後に、ルシフェラーゼ活性を、市販のアッセイを使用して、ペレット化した細胞もしくは溶解された細胞においてか、または直接的にプレーティングされた細胞のいずれかにおいて測定した。
【００４０】
この結果により、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２（４ｎｇ／ｍｌ）のＳＴＡＴ活性化活性は、上記に記載されたＩＬ−２２ＢＰタンパク質または融合タンパク質をコードする構築物によってトランスフェクトされた細胞由来の上清と合わされた場合に、完全にブロックされることが示された。これは、Ｈ４ＩＩＥ細胞およびＨＴ−２９細胞の両方について当てはまった。対照的に、ＩＬ−６をＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の代わりに使用した場合、全く効果はなかった。ＩＬ−１０活性もまた、ＩＬ−ＩＬ−２２ＢＰタンパク質または融合タンパク質とのプレインキュベーションによって影響を受けなかった。
【００４１】
（実施例６）
Ｎｏｖｉｃｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ４：６（１９９２）は、可溶性ＩＬ−６レセプターが、そのリガンドの閾値下濃度まで細胞の感受性を増加させ得ることを示した。従って、上記に提示された研究と並行して、Ｈ４ＩＩＥ細胞において、低濃度（２５ｎｇ／ｍｌ未満）および高濃度（５０〜２００ｎｇ／ｍｌ）のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２を試験する研究を実施した。低濃度では、ＳＴＡＴ活性化は、ＩＬ−２２ＢＰによって完全にブロックされるが、高濃度のＩＬ−ＴＩＦを使用した場合には、ＩＬ−２２ＢＰは、Ｈ４ＩＩＥ細胞においてＳＴＡＴ活性化をブロックできないことが見出された。ＩＬ−２２ＢＰの濃度の減少は、阻害効果の損失を導くが、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２についてのいかなる増強活性をも示さなかった。
【００４２】
（実施例７）
Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｂｏｔｒａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ  １７４：６７３（１９９１）は、ＩＬ−４レセプターの可溶性形態および膜貫通形態が類似した結合速度を有するが、可溶性形態はより高い解離速度を有することを示した。このことは、ＩＬ−４とＩＬ−４結合タンパク質（「ＩＬ−４ＢＰ」）とにより形成される複合体が、リガンドを一つの可溶性レセプターから解離させ、そして別の可溶性レセプターまたはそれがより緩徐に解離する膜レセプターへの結合のために利用可能とさせるように、一過的かつ可逆的でなければならないことを示す。本発明のタンパク質が同じ特性を示すか否か、従って、本発明のタンパク質がＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の作用を阻害するのではなく遅延させるか否かを決定するために実験を実施した。
【００４３】
ＨＴ−２９細胞におけるＳＴＡＴ活性化に対するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の効果は、４〜６時間後にそのピークに達し、そして２４時間目に劇的に減少するが、本発明のレセプターはこのアッセイ全体を通して同じ阻害効果を有することが見出された。このことは、これが、インビトロにおいてＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性を遅延させ得なかったことを示す。
【００４４】
（実施例８）
上記の実施例２は、いくつかの組織サンプルにおける第２バンドの同定に言及した。このバンドを切り出し、そして自動化された蛍光ベースのシステムおよび当該分野で認識される方法を使用して配列決定した。配列番号１０に示される配列は、さらなる９６ヌクレオチドを含み、推定タンパク質（配列番号１１）にさらなる３２アミノ酸を生じる。配列番号１０のＯＲＦは、ヌクレオチド１０９または１１２からヌクレオチド９００まで伸長する。配列番号１０および１１と同様に、２つの可能な開始コドンが存在する。
【００４５】
前述の実施例は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の可溶性レセプター様アンタゴニスト（例えば、配列番号５または１０に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列を有するもの）をコードする単離された核酸分子を含む、本発明の局面を開示する。遺伝暗号の縮重が、配列番号５または１０のヌクレオチド配列と同一ではないかもしれないが同じタンパク質をコードする核酸分子の調製を容易にすることが、当業者に理解される。当然のことながら、配列番号５または１０は、本発明の好ましい実施形態であるが、他の実施形態もまた本発明の一部である。ゲノムＤＮＡ、相補的ＤＮＡ、およびＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ）はすべて、本発明に含まれる。他の動物種（他の哺乳動物種を含む）由来の単離された核酸分子もまた、本発明の一部である。本発明の好ましい局面は、その相補体が、ストリンジェントな条件下で、配列番号５または１０にハイブリダイズする、単離された核酸分子である。本明細書中で使用される場合、「ストリンジェントな条件」は、例えば、緩衝液（３．５×ＳＳＣ）、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ウシ血清アルブミン、２５ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ  ７）、０．１％  ＳＤＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ中における６５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、室温での２×ＳＳＣ、次いで、例えば、約６５℃程度の高い温度での０．１×ＳＳＣ／０．２×ＳＤＳでの最後の洗浄をいう。よりストリンジェントな条件（例えば、０．１×ＳＳＣ）もまた使用され得る。これらの核酸分子は、配列番号６または１１に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質のようなタンパク質をコードする。本発明の可溶性レセプター様アンタゴニストは、グリコシル化されているかまたはグリコシル化されていない、硫酸化されているか硫酸化されていない形態などで見出され得る。配列番号５または１０によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列と、３０％以上、好ましくは４５％以上、より好ましくは５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上、そして最も好ましくは９５％以上のアミノ酸同一性を有するタンパク質をコードする単離された核酸分子もまた、本発明の一部である。
【００４６】
アミノ酸配列の同一性は、アルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用してか、またはそれ自体で、決定され得る。ＧＡＰは、一致の数を最大限にしかつギャップの数を最小限にする、２つの完全配列を整列するための、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズムを使用する。一般的には、デフォルトパラメーターを使用する（ギャップ生成ペナルティー＝１２およびギャップ伸長ペナルティー＝４）。ＧＡＰを使用することは好適であり得るが、他のアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ（これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０５−４１０の方法を使用する）、ＦＡＳＴＡ（これは、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８５：２４４４−２４４８の方法を使用する）またはＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１４７  ：１９５−１９７））が、一般的にデフォルトパラメーターを使用して用いられ得る。
【００４７】
また、ＤＮＡの発現を容易にするように、プロモーターに作動可能に連結された本発明の核酸分子を含む発現ベクターも本発明の一部である。このようなベクターを調製することは、当業者の技術の範囲内である。
【００４８】
ベクターおよび核酸分子自体を使用して、単離された組換え細胞のような組換え細胞（これらは、真核生物性または原核生物性である）を調製し得、ここでは、発現ベクターまたは核酸分子自体のいずれかが、それらの細胞内に取り込まれている。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、Ｓｆ９細胞などはすべて、本発明のこの局面に従って使用され得る細胞型の例である。
【００４９】
一般的に、本発明に従うポリペプチドまたはそのフラグメントを生成するために使用される核酸分子は、単離物として、単離および／または精製された形態において、あるいは、おそらく発現のための１つ以上の調節配列を除いて、それが天然において関連付けられる物質を含まないか実質的に含まずに（例えば、ヒトゲノムにおいてその遺伝子に隣接する核酸分子を含まないか実質的に含まずに）、提供される。核酸分子は、全体的または部分的に合成であってもよく、そしてゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡを含んでもよい。
【００５０】
本発明のペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸分子は、本明細書中に含まれる情報および参考文献、ならびに当該分野で公知の技術（例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，第三版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００１、およびＡｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９２、またはこれらの後の版）を使用して、当業者によって容易に調製され得る。
【００５１】
本発明の核酸分子を発現させるために、これは、その発現を制御する核酸分子に作動可能に連結された１つ以上の制御配列を有するベクターに組込まれ得る。ベクターは、選択されても構築されてもよい。これらは、適切な調節配列（プロモーター配列、ターミネーターフラグメント、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および他の適切な配列（例えば、ポリペプチドまたはペプチドが融合物として産生されるヌクレオチド配列および／または宿主細胞中で産生されるポリペプチドもしくはペプチドがその細胞から分泌されるための分泌シグナルをコードする核酸）を含む）を含み得る。ベクターは、適切なプラスミド、ウイルス（例えば、ファージ）、またはファージミドであり得る。次いで、コードされる生成物は、ベクターを、このベクターが機能する宿主細胞中に形質転換し、生成物が産生されるよう宿主細胞を培養し、そして宿主細胞またはその周囲の培地から生成物を回収することにより獲得され得る。
【００５２】
さらなる局面により、本発明の核酸分子を宿主細胞に導入する工程を包含する方法が提供される。この導入は、（特に、インビトロ導入に関して）一般的に「形質転換」または「トランスフェクション」と称され得（しかし、これらに限定されない）、任意の利用可能な技術を使用し得る。真核生物細胞に関して、適切な技術として、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイスルまたは他のウイルス（例えば、ワクシニア、または昆虫細胞のためには、バキュロウイルス）を用いる形質導入が挙げられ得る。細菌細胞に関して、適切な技術として、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを用いるトランスフェクションが挙げられ得る。代替として、この核酸の直接注入が用いられ得る。当該分野で周知のように、マーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子または抗生物質感受性遺伝子）は、目的の核酸を含むクローンを同定するのに用いられ得る。
【００５３】
この導入に続いて、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞（この宿主細胞は、実際に形質転換された細胞を含み得るが、これらの細胞は、形質転換細胞の子孫である可能性が高い）を培養することによって、核酸分子を発現させるかまたはその発現を可能にし得、その結果、コードされる生成物が生成される。発現される生成物が適切なシグナルリーダーペプチドに連結されている場合、この生成物は、細胞から培養培地中に分泌され得る。発現による生成後、生成物は、状況に応じて、宿主細胞および／または培養培地から単離および／または精製され得、その後、所望されるように（例えば、本明細書に開示されるアッセイまたは試験において）使用され得る。
【００５４】
発現はまた、インビトロ系（例えば、網状赤血球溶解物）において実施され得ることにも注目されたい。
【００５５】
本明細書中で同定されるポリペプチドまたはペプチドの生成後、このポリペプチドまたはペプチドは、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合する能力について、および／またはＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合を調節する能力について試験され得る。
【００５６】
本発明のさらなる局面により、本明細書中に開示されるポリペプチドまたはペプチドをコードする異種核酸分子を含む宿主細胞が提供される。本発明の核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組込まれ得る。組み込みは、標準的な技術に従い、ゲノムとの組換えを推進する配列を含有することにより推進され得る。この核酸は、細胞内の染色体外ベクター上に存在し得えるか、またはそうでなければ、細胞に対して同定可能に異種的または外来的であり得る。
【００５７】
上記の核酸分子によりコードされるタンパク質（好ましくは、単離形態のタンパク質）は、本発明の別の特徴である。「タンパク質」は、核酸分子の発現の直接の生成物、そのグリコシル化形態、ペプチドシグナル切断後の分子の形態（例えば、このタンパク質の成熟形態および／またはプロセシングされた形態）、およびマルチマー形態（例えば、ダイマー、トリマーなど）を意味する。少なくとも１つの本発明のタンパク質分子、および少なくとも１つの、異なるタンパク質分子を含むマルチマー（例えば、ダイマー）もまた、本発明の一部である。これらのマルチマーは、ホモマーまたはヘテロマー（例えば、異なる可溶性レセプター、膜貫通レセプターなどの中の少なくとも１つの分子を含むヘテロマー形態）であり得る。このようなマルチマーは、単一の特異的なリガンドにのみ結合し得る。ＩＬ−２２ＢＰおよびリガンドの複合体もまた本発明の一部であり、これは膜貫通レセプターにおいて、ヘテロマーサイトカインとして作用する。このような構造は、例えば、ＩＬ−１２の構造と類似する。配列番号６または１１に示される配列からなるタンパク質もまた、本発明の特徴である。保存的アミノ酸置換のみを有する配列番号６または１１の配列に実質的に同一なタンパク質もまた、本発明の特徴として包含される。前出のタンパク質の全てまたは一部が、いくつかの様式で、例えば、「融合パートナー」（少なくとも１つのさらなるタンパク質またはペプチド、あるいはアミノ酸配列）に連結された構築物（例えば、融合タンパク質）もまた、本発明の特徴として包含される。この「融合パートナー」は、例えば、直接的にかまたは間接的にかのいずれかで認識可能なシグナルを提供する分子であり得る（例えば、ＦＬＡＧペプチド、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、Ｆｃ免疫グロブリン、蛍光タンパク質（例えば、「ＧＦＰ」（緑色蛍光タンパク質））など）。他の標識（例えば、放射標識）、粒子、他の酵素、金属（例えば、金ゾル）もまた使用され得る。これらの融合パートナーは、好ましくは、そのタンパク質のＮ末端および／またはＣ末端で、前出の分子に連結される；しかし、アミノ酸に分子を連結するための公知の多くの技術が存在することが理解されるべきであり、そしてこれらの方法のいずれかおよび全ては、本発明の一部をなす構築物を生成し得る。
【００５８】
本発明の個々のタンパク質分子は、好ましくは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定される場合、約２３〜約４０キロダルトンの分子量を有する。マルチマー形態において、複合体の分子量は当然変化するが、その複合体に含まれる個々の分子は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定される場合、各々約２３〜４０キロダルトンの分子量を有する。これらの分子量は、モノマータンパク質に対して言及されることが理解されるべきである。グリコシル化モノマーは、より高い分子量（例えば、少なくとも約４０〜５０キロダルトンまで）を有する。
【００５９】
このタンパク質は、好ましくは、少なくとも約１８０アミノ酸でありかつ約３００以下のアミノ酸からなる。より好ましくは、このタンパク質は、約２３０〜２７５アミノ酸、より好ましくは２３０〜２６８アミノ酸、最も好ましくは２３１〜２６３アミノ酸からなる。好ましくは、このアミノ酸配列は、配列番号６または１１によりコードされるアミノ酸配列の全てまたは一部からなるか、あるいはこれらを含む。このような結合タンパク質は、例えば、本発明に従う１つ以上の核酸分子または発現ベクターによる宿主細胞の形質転換、この形質転換体の培養、次いで得られる組換え結合タンパク質の単離を通じて生成され得る。
【００６０】
上記の核酸分子によりコードされるタンパク質およびペプチドは本発明の特徴であり、そして標準的なプロトコルに従い抗体を生成するために使用され得ることが当業者に理解される。このような抗体（モノクローナル形態およびポリクローナル形態）は、本発明のさらなる特徴を構成し、この抗体のフラグメント、キメラ形態、ヒト化形態、組換え形態、この抗体を産生するハイブリドーマ細胞株なども同様である。
【００６１】
ＩＬ−２２ＢＰに対する抗体分子、特にＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２への結合に関与する領域もまた、本発明のさらなる局面により提供される。このような抗体分子は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合を阻害するために有用であり、ＩＬ−２２ＢＰを精製するためにも有用である。
【００６２】
抗体分子は、当該分野で標準的な技術を用いて獲得され得る。抗体を生成する方法は、関連のポリペプチドまたはそのペプチドフラグメントで哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、またはサル）を免疫する工程を包含する。抗体分子は、当該分野で公知の任意の種々の技術を用いて、免疫した動物から獲得され得、そして好ましくは目的の抗原への抗体結合を用いてスクリーニングされ得る。例えば、ウェスタンブロット技術または免疫沈降技術が用いられ得る（Ａｒｍｉｔａｇｅら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：８０〜８２）。抗体および／または抗体産生細胞の動物からの単離は、その動物を屠殺する工程により達成され得る。
【００６３】
ペプチドまたはポリペプチドによる動物の免疫の代替として、またはその補足として、抗体分子は、例えば、表面上に機能性免疫グロブリン結合ドメインを提示するλバクテリオファージまたは糸状バクテリオファージを用いて、発現された免疫グロブリン可変ドメインの組換え産生ライブラリーから獲得され得る；例えば、ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと。
【００６４】
本発明に従って有用な抗体分子は、多くの方法で改変され得る。実際、用語「抗体分子」は、抗原に結合し得る抗体フラグメントおよび誘導体を含むように解釈されるべきである。抗原または他の結合パートナーに結合し得る抗体フラグメントの例は、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、Ｃ１ドメイン、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント；ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体の単一のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント；単離されたＣＤＲ領域およびＦ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである。単鎖Ｆｖフラグメントもまた含まれる。
【００６５】
所望の結合特性を有する抗体を産生し得るハイブリドーマは、本発明の範囲内であり、抗体（抗体フラグメントを含む）をコードする核酸分子を含み、そしてそれらを発現し得る宿主細胞（真核生物細胞または原核生物細胞）も同様である。本発明はまた、抗体分子の産生方法であって、抗体が産生される（好ましくは、分泌される）条件下でこの抗体を産生し得る細胞を培養する工程を包含する方法を提供する。このような方法は、一般的に、細胞または培養培地からの抗体分子の単離または精製を含む。
【００６６】
サンプルに対する抗体分子の反応性は、任意の適切な手段により決定され得る。個々のレポーター分子によるタグ付加は、１つの可能性である。このレポーター分子は、検出可能であり、そして好ましくは測定可能なシグナルを、直接的にかまたは間接的に生成し得る。レポーター分子の連結は、直接的であっても間接的であってもよく、共有結合（例えば、ペプチド結合を通じて）であっても非共有結合であってもよい。ペプチド結合を通じた連結は、抗体およびレポーター分子をコードする遺伝子融合物の組換え発現の結果であり得る。結合を決定する様式は、本発明の特徴ではなく、当業者は、彼らの嗜好および一般的な知識に従い適切な様式を選択し得る。
【００６７】
抗体分子はまた、本発明のポリペプチド鎖またはペプチドフラグメントを、例えば、コード核酸からの発現によるポリペプチドの産生の後に精製および／または単離するのに用いられ得る。抗体分子は、関連する生物学的機能または活性を阻害する観点で、ポリペプチドまたは他の分子の結合を破壊する治療的関係（予防を含み得る）において有用であり得る。
【００６８】
本発明のタンパク質分子のアミノ酸配列の全てまたは一部を含む免疫原（好ましくは、完全フロイントアジュバントまたは不完全フロイントアジュバントのようなアジュバントと組み合された免疫原）もまた、本発明の特徴である。抗体分子を獲得するために有用なＩＬ−２２ＢＰの免疫原性フラグメントまたは抗原性フラグメントは、ＩＬ−２２ＢＰの１つ以上のエピトープを含み得るか、またはこれらからなり得る。直鎖状エピトープは、一般的に、５〜８アミノ酸長であり、そしてＩＬ−２２ＢＰの１つ以上のエピトープまたは抗原決定基からなるかまたはそれらを含むペプチドは、本発明のさらなる局面として提供される。タンパク質配列の部分は、他の分子（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン）に連結され、それらにより大きな免疫原性を付与し得る。
【００６９】
ポリペプチドの「フラグメント」は、一般的に、少なくとも約５連続するアミノ酸、しばしば少なくとも約７連続するアミノ酸、代表的には少なくとも約９連続するアミノ酸、より好ましくは少なくとも約１３連続するアミノ酸、そしてより好ましくは少なくとも約２０〜３０またはそれ以上連続するアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチを意味する。ペプチドフラグメントは、５、６、７、８、９もしくは１０、５〜１０、５〜２０、１０〜２０、１０〜３０、２０〜３０、２０〜４０、３０〜４０、または４０未満のアミノ酸長であり得る。
【００７０】
記載されるように、ペプチドは、コード核酸からの発現により組換え生成され得る。ペプチドはまた、化学合成により全体的または部分的に生成され得る。これらは、十分に確立された標準の液体、または好ましくは、固相ペプチド合成法に従い容易に調製され得る。これらの一般的な説明は、広く入手可能である（例えば、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ（１９８４）、Ｍ．ＢｏｄａｎｚｓｋｙおよびＡ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ、Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；ならびにＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３０Ａ  Ｕｓｅｒｓ  Ｍａｎｕａｌ、ＡＢＩ  Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを参照のこと）。また、これらは、液相法によるか、または固相、液相、および溶液化学の任意の組み合わせにより（例えば、それぞれのペプチド部分を最初に完成させ、次いで、所望および適切な場合、存在する任意の保護基の除去後に、それぞれの炭酸もしくは硫酸またはそれらの反応性誘導体の反応により残基Ｘを導入することにより）、溶液中で調製され得る。
【００７１】
本発明のさらなる局面により、ＩＬ−２２ＢＰに対する抗体（好ましくは、ＩＬ−２２ＢＰに特異的な抗体）を獲得する方法が提供される。この方法は、種々の結合特性の抗体分子の集団またはパネルをＩＬ−２２ＢＰポリペプチドまたはその抗原性フラグメントもしくは免疫原性フラグメントに接触させる工程、およびこのポリペプチドまたはそのフラグメントに結合する１つ以上の抗体分子を選択する工程を包含する。好ましくは、このポリペプチドまたはそのフラグメントに結合する抗体分子は、例えば、無関係の抗原のパネルに対する結合を試験することにより（例えば、当該分野で標準的なＥＬＩＳＡによって）、このポリペプチドまたはそのフラグメントに対する結合特異性について試験される。好ましくは、ＩＬ−２２ＢＰに特異的な抗体分子が同定される。
【００７２】
抗体分子の集団は、例えば、ファージディスプレイライブラリーとして提供され得、そしてそれらのポリペプチドまたはフラグメントとインビトロで接触される。当業者に利用可能な種々の選択肢の中の別の選択肢は、免疫応答を惹起するために哺乳動物にペプチドまたはポリペプチドを投与することである。抗体分子および／または抗体分子を産生する細胞は、動物またはその血清から採取または収集され得、そして所望の特性について試験され得る。
【００７３】
一旦獲得されると、抗体分子は、少なくとも１つのさらなる成分（例えば、薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア）を含む組成物に処方され得、そして所望されるように使用され得る。
【００７４】
記載されるように、抗体分子は、例えば、本発明のタンパク質が存在するか否かを決定するために使用され得る。これは、本発明のさらなる特徴であり、本明細書の他の箇所で説明される。
【００７５】
実施例において、本発明の核酸分子は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性をブロックするタンパク質をコードすることが示される。従って、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の活性を阻害またはブロックするのに十分な量の本発明のタンパク質をサンプルと接触させることにより、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性（例えば、ＳＴＡＴ転写因子の活性化および急性期反応物産生）を阻害する方法は、本発明のさらなる特徴である。
【００７６】
これらの分子はまた、被験体（例えば、リンパ腫、免疫系障害（例えば、アレルギー、後天性免疫不全症候群、自己免疫糖尿病、甲状腺炎、または米国特許第５，８３０，４５４号；同第５，８２４，５５１号、および係属中の出願番号０８／９２５、３４８（１９９７年９月８日出願、現在、特許査定を受けている）（これら全ては参考として援用される）に記載される他の状態のいずれかに罹患した被験体））に投与される場合、ＩＬ−９アゴニストまたはアンタゴニストの効果を試験するために使用され得る。この分子はまた、これらおよび他の状態におけるＩＬ−９の役割を調節するために使用され得る。詳しく述べると、ＩＬ−９はＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２を誘導し、そして本発明のタンパク質はＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の活性をブロックするので、本発明のタンパク質は、ＩＬ−９活性のモジュレーターとして有用である。従って、例えば、過剰なＩＬ−９活性が関係する状況（喘息、アレルギー、およびリンパ腫を含む）において、内因性のＩＬ−９の活性を決定する方法は、本発明のさらなる局面である。本発明のレセプター様アンタゴニストを用いてＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２またはＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性をブロックまたは阻害することにより、ＩＬ−９活性もまたブロックまたは阻害され得る。本発明のタンパク質またはペプチドを使用することにより処置され得る状態の例は、アレルギー、喘息、リンパ腫などである。ＩＬ−９活性を調節する能力は、前出のような状態およびアポトーシスのような状態（ＢＣＬ−３の核発現に関与する状態であるコルチソル誘導性アポトーシスを含む）において重要である。なぜなら、ＩＬ−９は、このような発現などを誘導することが知られているからである。
【００７７】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２型分子は、これらの分子が活性である組織型の再生を促進するか、または分化を阻害するかのいずれかであり得る。ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２分子は、種々の癌および正常な細胞株（すなわち、血管間膜細胞および神経細胞、ならびに黒色腫およびヘパトーム細胞）を標的化する。例えば、米国特許出願０９／６２６，６１７（２０００年７月２７日出願、参考として援用される）を参照のこと。従って、その処置を必要とする患者の処置方法は、本発明の別の特徴である。この方法において、本発明のタンパク質は、例えば、新生物組織（例えば、黒色種またはヘパトーム）中でＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の活性を阻害するために使用される。
【００７８】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２が炎症応答を調節し得ることは、当業者に明らかである。この調節の好ましい局面は、本発明のレセプター様アンタゴニストを投与することによる、肝臓のような器官による急性期応答の調節である。例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（第４版）（参考として援用される）を参照のこと。Ｊａｎｅｗａｙは、種々のサイトカイン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、およびＴＮＦ−α）が肝細胞を活性化し、急性期タンパク質（例えば、ｃ−反応性タンパク質）、およびマンナン結合レクチン、ならびに前出の文献の実施例に記載されるものを合成することを説明する。
【００７９】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２は、急性期タンパク質の活性化において役割を有する。一定量の本発明のレセプター様アンタゴニストを組織サンプルまたはそれを必要とする患者に投与することにより、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２により刺激される、急性期タンパク質の産生を減少させる方法は、本発明の別の局面である。ここで、この一定量は、急性期タンパク質の産生または活性を減少させるのに十分な量である。
【００８０】
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２活性を調節するためにこのレセプター様アンタゴニストを投与することにより、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の活性を調節する方法もまた、本発明の一部である。
【００８１】
記載されるように、レセプターへのリガンドの結合を阻害するＩＬ−２２ＢＰフラグメントは、抗体分子および、例えば、本明細書に開示される本発明のアッセイを用いて同定された低分子または他の因子と同様に用いられ得る。従って、治療関係、予防関係、または診断関係においてＩＬ−２２ＢＰを使用する本発明の局面の開示は、任意の１つ以上のＩＬ−２２ＢＰフラグメント、ＩＬ−２２ＢＰに結合する（好ましくはＩＬ−２２ＢＰに特異的な）抗体分子、特にＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合に影響を及ぼす抗体分子、および本発明のアッセイを用いて同定された、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合を調節し得る因子を使用する本発明の類似の局面の開示として考慮されるべきである。
【００８２】
タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体分子、低分子または他の物質のいずれも、治療目的（例えば、本明細書中で同定される状態の処置において）に使用される。さらなる種々の局面において、本発明は、薬学的組成物、医薬、薬物、またはこのような目的のための他の組成物、１つ以上のこのような物質を含む組成物、医学的処置の方法におけるこのような物質の使用、患者へのこのような物質の投与を包含する方法（例えば、医学的状態の処置（予防処置を含み得る））、このような目的（例えば、医学的状態の処置）のための投与のための組成物、医薬または薬物の製造におけるこのような物質の使用、ならびに薬学的に受容可能な賦形剤、ビヒクルまたはキャリア、および必要に応じて他の成分とこのような物質を混合する工程を包含する薬学的組成物を製造する方法を、さらに提供する。
【００８３】
本発明の医学的処置の方法においてどのような物質が使用されても、投与は、好ましくは、「予防有効量」または「治療有効量」（状況に応じて、予防は治療と考えられ得る）であり、これは、個体に対する利益を示すのに十分である。実際に投与される量、ならびに投与の速度およびタイムコースは、処置されているものの性質および重篤度に依存する。処置の処方（例えば、投薬量などの決定）は、一般の開業医および他の医師の責任のうちにある。
【００８４】
本発明に従う薬学的組成物および本発明に従う使用は、活性成分に加えて、以下を含み得る：薬学的に受容可能な賦形剤、キャリア、緩衝液、安定剤または当業者に周知の他の物質。このような物質は、非毒性であるべきであり、そして活性成分の効力を干渉するべきではない。このキャリアまたは他の物質の正確な性質は、投与経路に依存し、これは経口投与であるか、または注射（例えば、皮膚、皮下、静脈内）による投与である。
【００８５】
経口投与のための薬学的組成物は、錠剤、カプセル、粉末または液体の形態であり得る。錠剤としては、ゼラチンのような固体キャリアまたはアジュバントが挙げられ得る。液体薬学的組成物としては、一般的に、水、石油、動物油または植物油、鉱油あるいは合成油のような液体キャリアが挙げられる。生理食塩水、デキストランまたは他の糖類の溶液あるいはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）が、含まれ得る。
【００８６】
静脈内注射、皮膚注射または皮下注射、あるいは苦痛な部位への注射のために、この活性成分は、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得、これは、発熱物質を含まず、そして適切なｐＨ、等張性および安定性を有する。当業者は、例えば、Ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，  Ｌａｃｔａｔｅｄ  Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎのような等張性ビヒクルを用いて、適切な溶液を調製することは十分に可能である。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤および／または他の添加物が、必要に応じて含まれ得る。
【００８７】
上記の技術およびプロトコルの例示は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０において見出され得る。
【００８８】
このような物質の直接的な投与の代わりに、これらは、細胞内に導入されたコード核酸（例えば、体内に投与されたウイルスベクターまたは「裸の」ＤＮＡ）からの発現により、標的細胞において生成され得る。従って、物質（例えば、ＩＬ−２２ＢＰとＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２との相互作用を調節、例えば、干渉し得るペプチド）をコードする核酸は、例えば、障害の予防目的または治癒（全体または部分的）目的を有する個体の処置における遺伝子治療方法に用いられ得る。
【００８９】
本発明のポリペプチドまたはペプチドは、インビボでのＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２とＩＬ２２ＢＰとの間の会合または相互作用に影響を与えることにより、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の機能を調節する因子および物質の評価において用いられ得る。このようなアッセイに用いられ得る形態は、以下に詳細に記載され、そして試験物質の存在または非存在下での成分間の結合を決定する工程および／あるいは生物学的または細胞の機能または活性を調節するための試験物質の能力を決定する工程を包含し得る。ここで、ＩＬ−２２ＢＰのＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２への結合が役割を果たしている。成分間の結合の決定およびこのような結合に対する試験物質の影響を決定することを含むアッセイ方法は、全長の野生型ポリペプチド鎖を必ず利用する必要がない。例えば、ＩＬ−２２に結合する能力を保持しているＩＬ−２２ＢＰのフラグメントが使用され得、逆もまた同様である。実際、以下にさらに議論されるように、それらのポリペプチドのフラグメントは、推定インヒビターのカテゴリーに存在し、ポリペプチド間の結合と干渉するために使用され得る。
【００９０】
本発明に従うポリペプチドおよびそのフラグメントを使用するアッセイは、任意の種々の形態をとり得る。
【００９１】
本発明の１つのさらなる局面は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合するＩＬ−２２ＢＰの関連領域またはＩＬ−２２ＢＰに結合するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の関連領域と相互作用し得る物質についてのアッセイ方法を提供する。この場合、この方法は以下：
（ａ）ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合するＩＬ−２２ＢＰポリペプチドまたはそのフラグメント；あるいはＩＬ−２２ＢＰに結合するＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントと、試験化合物とを接触させる工程；
ならびに
（ｂ）上記ポリペプチドまたはそのフラグメントと試験化合物との間の相互作用または結合を決定する工程、
を包含する。
【００９２】
このポリペプチドの関連部分と相互作用するかまたは結合することが見出された試験化合物は、例えば、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２とＩＬ−２２ＢＰとの間の結合の妨害または干渉を調節する能力、あるいはＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２によって媒介される活性を調節する能力について試験され得る。
【００９３】
さらなる局面において、本発明は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２のＩＬ−２２ＢＰへの結合を調節する因子についてのアッセイ方法を提供し、この方法は、以下：
ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に対するＩＬ−２２ＢＰの結合のインヒビターである試験物質の非存在下で、このＩＬ−２２ＢＰポリペプチドまたはそのフラグメントが、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントに結合する条件下で、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはフラグメントを、ＩＬ−２２ＢＰポリペプチドまたはフラグメントおよび試験化合物と接触させる工程、ならびに
ＩＬ２２−ＢＰポリペプチドまたはそのフラグメントの、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２ポリペプチドまたはそのフラグメントへの結合を決定する工程を包含する。
【００９４】
結合の調節は、ＩＬ−２２ＢＰのＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２への結合を調節する因子として、試験物質を同定する。
【００９５】
本発明に従うさらなる局面において、本発明のＩＬ−２２ＢＰの生物学的活性を調節する因子についてのアッセイ方法が提供され、この方法は、以下：
試験条件下で、ＩＬ−２２ＢＰポリペプチドを提供する工程、および
試験物質の存在または非存在下において、ＩＬ−２２ＢＰを決定する工程、を包含する。
【００９６】
本発明の異なるアッセイにおいて、試験化合物または物質の存在下で、成分の相互作用および／または結合および／または活性は、試験化合物の非存在下で比較可能な反応培地および条件における相互作用および／または結合および／または活性と比較され得る。相互作用および／または活性を調節することが可能な試験化合物が、同定され得る。当業者は、アッセイ方法を実行する場合、実施するために適切な実験コントロールを十分に知っている。
【００９７】
スクリーニングされ得る化合物は、薬物スクリーニングプログラムにおいて使用される天然に存在する化学的化合物または合成化合物であり得る。植物、微生物または他の生物の抽出物もまた、使用され、これは、いくつかの特徴付けられた化合物または特徴付けられていない化合物を含む。
【００９８】
コンビナトリアルライブラリー技術はまた、潜在的な多くの異なる物質を、相互作用を調節する能力について試験する効率的な方法を提供する。このようなライブラリーおよびその使用は、とりわけ天然産物、低分子およびペプチドの全ての様式について当該分野で公知である。
【００９９】
ペプチドライブラリーの使用は、特定の環境において好ましいものであり得る。ポリペプチド鎖のペプチドフラグメントによって阻害される本発明のレセプターのポリペプチド鎖間の結合能力は、すでに記載されている。このようなペプチドフラグメントは、例えば、１０〜４０アミノ酸（例えば、約１０アミノ酸、約２０アミノ酸、約３０アミノ酸、もしくは約４０アミノ酸、または約１０〜２０アミノ酸、２０〜３０アミノ酸もしくは３０〜４０アミノ酸）から構成され得る。これらは、利用可能な技術を用いて、組換え的、化学的または合成的に合成され得る。
【０１００】
本発明に従う任意のアッセイ方法において、本発明のアッセイに添加され得る試験物質または化合物の量は、通常、使用される化合物の型に依存する試行錯誤により決定され得る。影響の弱い分子でさえ、さらなる調査および開発のための有用なリード化合物であり得る。
【０１０１】
スクリーニングまたはアッセイ方法は、試験化合物および／または混合物もしくは抽出物由来の所望の物質を精製する工程ならびに／あるいは単離する工程、すなわち、混合物または抽出物の少なくとも１つの要素（例えば、試験物質と天然に関連する成分）の含有量を減ずる工程を包含する。このスクリーニング方法またはアッセイ方法は、本発明のポリペプチドまたはペプチドに結合する試験混合物または抽出物の１つ以上の画分の能力を決定する工程、あるいはＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に結合するかもしくは活性に影響を与える試験混合物または抽出物の１つ以上の画分の能力を決定する工程を包含する。
【０１０２】
精製および／または単離は、当業者に公知の任意の方法（例えば、抗体分子を用いる）を使用し得る。
【０１０３】
本発明のポリペプチド鎖およびレセプターの精製における使用に加えて、抗体分子は、レセプター機能の潜在的なモジュレーターのさらなるクラスを示す。
【０１０４】
本発明のアッセイ方法において試験されている試験化合物の性質とは関係なく、物質間（例えば、ＩＬ−２２ＢＰポリペプチドとＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２との）の相互作用または結合は、当該分野において利用可能な任意の多くの技術により、定性的または定量的に決定され得る。これらには、ラジオイムノアッセイ、共免疫沈降、シンチレーション近似アッセイ（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  ａｓｓａｙ）およびＥＬＩＳＡ法が挙げられる。
【０１０５】
１つの成分の他の成分への結合は、検出可能な標識でいずれか１つを標識する工程およびそれを固体支持体上に固定され得る他の成分と接触させる工程によって研究され得る。特にペプチジル物質にとって適切な検出可能な標識としては、３５Ｓ−メチオニンが挙げられ、これは、組換え産生されたペプチドおよびポリペプチドに組み込まれ得る。組換え的に生成されたペプチドおよびポリペプチドはまた、抗体で標識され得るエピトープを含む融合タンパク質として発現され得る。
【０１０６】
固体支持体上に固定されるポリペプチドまたはペプチドは、固体支持体に結合されるポリペプチドに対する抗体を用いるか、または本質的に公知である他の技術によって固定化され得る。好ましいインビトロでの相互作用は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を含む融合タンパク質を利用し得る。これは、グルタチオンアガロースビーズ上に固定され得る。上記の型のインビトロアッセイフォーマットにおいて、試験モジュレーターは、固定化されたＧＳＴ融合ペプチド（例えば、ＧＳＴとＩＬ−２２ＢＰまたはそのフラグメントとの固定化された融合ペプチド）に結合する標識されたペプチドまたはポリペプチド（例えば、標識されたＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２）の量を減少させるその能力を決定することによってアッセイされ得る。これは、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によりグルタチオン−アガロースビーズを分画することによって決定され得る。あるいは、このビーズは、結合していないペプチドまたはポリペプチドを除去するためにリンスされ得、そして結合されているペプチドまたはポリペプチドの量は、例えば、適切なシンチレーションカウンターにおいて標識の存在量を計算することにより決定され得る。
【０１０７】
２つの成分の結合または相互作用はまた、ツーハイブリッドアッセイを用いて決定され得る。
【０１０８】
例えば、本発明のＩＬ−２２ＢＰポリペプチドは、酵母転写因子ＧＡＬ４のようなＤＮＡ結合ドメインに融合され得る。ＧＡＬ４転写因子は、２つの機能ドメインを含む。これらのドメインは、ＤＮＡ結合ドメイン（ＧＡＬ４ＤＢＤ）およびＧＡＬ４転写活性化ドメイン（ＧＡＬ４ＴＡＤ）である。これらのドメインのうちの１つについてのアッセイの第一のポリペプチド成分と、それぞれの対応物についてのアッセイの第二のポリペプチド成分とを融合することによって、機能的なＧＡＬ４転写因子は、２つのポリペプチドが相互作用する場合にのみ、元に戻される。従って、これらのポリペプチドの相互作用は、上記のレポーター遺伝子の転写を活性化する能力のあるＧＬＡ４  ＤＮＡ結合部位に連結されるレポーター遺伝子の使用により測定され得る。
【０１０９】
このツーハイブリッドアッセイフォーマットは、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３４０：２４５−２４６に記載されている。これは、哺乳動物細胞および酵母の両方において用いられ得る。ＤＮＡ結合ドメインおよび転写活性化ドメインの他の組み合わせが、当該分野で利用可能であり、そして例えば、ＬｅｘＡ  ＤＮＡ結合ドメインおよびＶＰ６０転写活性化ドメインが好ましい。
【０１１０】
本発明の任意のスクリーニング方法またはアッセイ方法の任意の正確なフォーマットは、慣用的な技術および知識によって当業者により改変され得る。当業者は、適切なコントロール実験を実施する必要性を十分に理解する。
【０１１１】
本発明に従うアッセイ方法の実施後、関連する相互作用を調節するか、または関連する生物学的機能または活性に影響する能力についてポジティブな化合物、物質または分子が単離および／または製造および／または使用され得る。適切な因子の同定に引き続き、それはさらに調査され得、そして関連する相互作用を調節するか、または関連する生物学的機能に影響するその能力を消滅されることなしに、１つ以上の特性を変更するために改変されるか、あるいは誘導され得る。例えば、単鎖Ｆｖ抗体分子は、抗体の定常領域（例えば、ＩｇＧ抗体）を含む抗体全体に再構築され得る。任意のペプチジル分子が、１つ以上のアミノ酸の添加、置換、挿入または欠失、あるいは付加部分またはタンパク質ドメインの結合によって改変され得る。活性な因子はインシリコでの分子モデリングに供され得、そして最初に同定された因子の１つ以上の模倣物が作製され得る。
【０１１２】
さらに、本発明の活性因子は、医薬、薬学的組成物または薬物のような組成物の製造および／または調製における使用（すなわち、製造または処方）がなされ得る。これらは、議論されるように個体に投与され得る。
【０１１３】
本発明のレセプターのポリペプチド鎖間の結合、またはこのようなレセプターのリガンドに対する結合に影響する能力を有することが見出された化合物は、ペプチド、抗体、低分子または他の物質であっても、多くの関連において、治療的可能性および他の可能性を有する。治療処置のために、このような化合物は、任意の他の活性物質と組み合わせて使用され得る。
【０１１４】
一般に、本発明に従って同定され、そして引き続いて使用されるこのような物質は、単離形態および／または精製形態で（すなわち、実質的に純粋）提供される。この物質は、少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９８％の活性成分を示す組成物中に存在する場合、この形態に含まれ得る。しかし、このような組成物は、不活性キャリア材料または他の薬学的かつ生理学的に受容可能な賦形剤を含み得る。従って、組成物は、本発明を使用して得られた活性成分および不活性キャリアから構成され得る。さらに、本発明に従う組成物は、開示されるようなモジュレーター化合物に加えて、１以上の他の治療用途を有する分子を含み得る。
【０１１５】
組織または細胞サンプル中の本発明のレセプター様アンタゴニストの存在を決定するための方法がまた、本発明の一部であり、この方法は、このサンプルをこのレセプター様アンタゴニストに特異的な抗体と接触させる工程、およびこれらの間の結合を決定する工程を包含する。抗体とその抗原との結合を決定するための方法は、当業者に周知であり、ここで詳述する必要はない。
【０１１６】
本発明のレセプター様結合タンパク質はまた、サンプル中のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の存在を決定するために使用され得、これは、例えば、このレセプター様結合タンパク質を標識する工程、次いでこのサンプルをこのレセプター様アンタゴニストと接触させる工程、およびこれらの間の結合を決定する工程により、ここで、この結合は、ＩＬ−ＴＩＦの存在を示す。あるいは、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に応答する細胞株を、サンプルの２つのアリコート（１つは、レセプター様結合タンパク質を含み、１つはレセプター様結合タンパク質を含まない）に対して処理し、次いで、これら２つのアリコートに対して応答性の細胞の応答を測定および比較することによって、このサンプル中のＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の存在を決定し得、ここで、２つのアリコートに対する応答の差異は、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２の存在を示す。あるいは、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に応答性の細胞を、このようなアッセイにおいて使用し得る。詳述すると、ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２に対するいくつかの型の応答（例えば、ＳＴＡＴ活性化または急性期反応物産生の増大）を示す細胞を使用して、サンプル中のＩＬ−２２ＢＰの存在および／または量についてスクリーニングし得る。例えば、細胞が、問題のサンプルにおいてＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２と共にインキュベートされることを想定すると、任意の観察される応答の変化（例えば、ＳＴＡＴ活性化または急性期反応物産生の減少）は、このサンプル中のＩＬ−２２ＢＰを示す。
【０１１７】
本明細書中に記載される可溶性ＩＬ−ＴＩＦ／ＩＬ−２２結合タンパク質は、さらに、インビボで生成される可溶性サイトカインレセプター例である。例えば、Ｒｏｓｅ−Ｊｏｈｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．３００：２８１（１９９４）；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｂｏｔｒａｎら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６３：２６９（１９９６）；Ｈｅａｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ  ８７：８４５（１９９６）を参照のこと。可溶性サイトカインレセプターは、遊離または未結合のサイトカイン分子に対する結合について、細胞表面レセプターと競合する。ＩＬ−６Ｒ以外は、この結合は、サイトカインが細胞膜に到達し、そしてシグナルを生じることを妨げる。この結合は、一般には可逆的であり、膜レセプターからのサイトカインの一時的な隔離を生じる。可溶性サイトカインレセプターはまた、その安定性を調節するか、タンパク質溶解性分解を減少させるか、またはクリアランスを減少させることによってサイトカインの活性を増強する。このような機能（すなわち、サイトカインがインビボで有する機能）は、傍分泌活性に関連するアンタゴニスト活性を用いて、サイトカインの全体的効果を増強する補助をするようである。
【０１１８】
本発明の他の特徴は、当業者に明らかであり、さらに考察する必要はない。
【０１１９】
使用された用語および表現は、説明の用語として使用され、限定のためではない。そしてこのような用語および表現の使用において、示され、そして記載される特徴またはその一部の任意の等価物を排除することを意図しない。種々の改変が、本発明の範囲内で可能であることが認識される。
【国際公開パンフレット】
2004526413.tif 000002
2004526413.tif 000003
2004526413.tif 000004
2004526413.tif 000005
2004526413.tif 000006
2004526413.tif 000007
2004526413.tif 000008
2004526413.tif 000009
2004526413.tif 000010
2004526413.tif 000011
2004526413.tif 000012
2004526413.tif 000013
2004526413.tif 000014
2004526413.tif 000015
2004526413.tif 000016
2004526413.tif 000017
2004526413.tif 000018
2004526413.tif 000019
2004526413.tif 000020
2004526413.tif 000021
2004526413.tif 000022
2004526413.tif 000023
2004526413.tif 000024
2004526413.tif 000025
2004526413.tif 000026
2004526413.tif 000027
2004526413.tif 000028
2004526413.tif 000029
2004526413.tif 000030
2004526413.tif 000031
2004526413.tif 000032
2004526413.tif 000033
2004526413.tif 000034
2004526413.tif 000035
2004526413.tif 000036
2004526413.tif 000037
2004526413.tif 000038
2004526413.tif 000039
2004526413.tif 000040
2004526413.tif 000041
2004526413.tif 000042
2004526413.tif 000043
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004526413.tif 000044
【国際調査報告】
2004526413.tif 000045
2004526413.tif 000046
2004526413.tif 000047
2004526413.tif 000048
2004526413.tif 000049
2004526413.tif 000050