(57)【要約】本発明は、Aが(II)であり；Xが、存在しないか、-C1〜C6アルキル-、または-C3〜C6シクロアルキル-であり；Yが、(i) C(O)-O-R1(式中、R1は、水素、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、へテロ環、アリール、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、ハロゲンで置換されたC1〜C6アルコキシ、またはハロゲンで置換されたC1〜C6アルキルチオである)、(ii) C(O)-S-R1(式中、R1は前記に定義した通り)、(iii) C(O)-OCH2-OC(O)R2(式中、R2は、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、C1〜C6アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、へテロ環またはアリールである)、(iv) C(S)-O-R1(式中、R1は前記に定義した通り)、および(v) C(S)-S-R1(式中、R1は前記に定義した通り)からなる群より選択され；Bが、-αAbu-、-Val-、-Thr-または-Nva-であり；Uが、-(D)Ala-、-(D)Ser-、-[O-(2-ヒドロキシエチル)(D)Ser]-、-[O-アシル(D)Ser]-または-[O-(2-アシルオキシエチル)(D)Ser]-である、式(I)の新規半合成シクロスポリン類似体に関する。
2004526719.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式により示されるシクロスポリンまたはその薬学的に許容される塩：
【化１】
2004526719.tif 000008
式中、
Aが、
【化２】
2004526719.tif 000009
であり；
Xが、存在しないか、-C1〜C6アルキル-、または-C3〜C6シクロアルキル-であり；
Yが
(i) C(O)-O-R1、ここでR1は、水素、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、へテロ環、アリール、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、ハロゲンで置換されたC1〜C6アルコキシ、またはハロゲンで置換されたC1〜C6アルキルチオであり、
(ii) C(O)-S-R1、ここでR1は前記に定義した通りであり、
(iii) C(O)-OCH2-OC(O)R2、ここでR2は、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、C1〜C6アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、へテロ環またはアリールであり、
(iv) C(S)-O-R1、ここでR1は前記に定義した通りであり、および
(v) C(S)-S-R1、ここでR1は前記に定義した通りである
からなる群より選択され；
Bが、-αAbu-、-Val-、-Thr-または-Nva-であり；
Uが、-(D)Ala-、-(D)Ser-、-[O-(2-ヒドロキシエチル)(D)Ser]-、-[O-アシル(D)Ser]-または-[O-(2-アシルオキシエチル)(D)Ser]-である。
【請求項２】
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-である、請求項1記載のシクロスポリン。
【請求項３】
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、且つYが、
C(O)-O-R1、ここでR1は水素、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、へテロ環、アリール、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6-アルキルチオ、ハロゲンで置換されたC1〜C6アルコキシ、またはハロゲンで置換されたC1〜C6アルキルチオであり；
C(O)-S-R1、ここでR1は前記に定義した通りであり；
C(O)-OCH2-OC(O)R2、ここでR2は、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、C1〜C6アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、へテロ環またはアリールである
からなる群より選択される、請求項1記載のシクロスポリン。
【請求項４】
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOHである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOEtである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CH2CH3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Phである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Fである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCHF2である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCF3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CF3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Clである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH2CH2OCH3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがC(O)SCH2Phである、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが-CH2CH2CH2-であり、YがCOOCH3である、式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOFmocである、式(I)の化合物
からなる群より選択される、請求項1記載のシクロスポリン。
【請求項５】
式1(式中、Aは-MeBmt-であり、BおよびUは請求項1に定義した通りである)の化合物を、式CH2=CH-X-Y(式中、XおよびYは請求項1に定義した通りである)により示されるオレフィンと、触媒と共に、リチウム塩の存在下、有機溶媒中で反応させる段階を含む、請求項1記載の式Iにより示されるシクロスポリン化合物の調製方法。
【請求項６】
触媒が、グラッブのルテニウムアルキリデン触媒、ノーラン触媒、ベンジリデン触媒、またはモリブデン触媒である、請求項5記載の方法。
【請求項７】
反応が室温から約100℃で1日〜7日間実施される、請求項5記載の方法。
【請求項８】
請求項1記載のシクロスポリン化合物をその薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、局所投与用の薬学的組成物。
【請求項９】
被験者に治療有効量の請求項1記載のシクロスポリン化合物を局所投与することを含む、治療の必要な被験者の炎症性気道疾患または閉塞性気道疾患を治療する方法。
【請求項１０】
局所投与段階が吸入によるものである、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
気道疾患が、喘息、アレルギー性鼻炎、気管支炎、COPD、慢性気管支炎、または嚢胞性線維症である、請求項9記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、気流閉塞を特徴とする喘息および他の疾患を治療するための、新規半合成シクロスポリン類似体、それらを含む医薬品および薬学的組成物としての使用、並びに、その製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
呼吸器疾患は世界的な問題であり、世界中の何百万人もの小児および大人共にこれらの病気に罹患している。これらの疾患には、喘息、COPDおよび嚢胞性線維症、並びに慢性副鼻腔炎が含まれており、これらの疾患により生活の質は低下し、罹患者の日々の日課の遂行能力は損なわれ、場合によっては死亡する。
【０００３】
喘息は、気管支が起炎し、その結果閉塞した、原因不明の疾患である。この狭窄は、気管支平滑筋収縮、粘膜浮腫、炎症性細胞浸潤、ならびに、粘液、細胞および細胞片による管腔の部分的または全体的な閉鎖の組合せから生じる。気管支閉塞は、部分的または全体的に可逆性であり、この重要な特徴により、喘息は慢性気管支炎とは区別される。喘息は、世界中における罹患率が5％から8％である、極めて一般的な疾患である。先進国では、喘息は最も一般的な慢性病であり、理由は不明であるが、この疾患は増加中である。現在では、喘息は、多くの細胞、特に肥満細胞、好酸球およびTリンパ球に起因する、慢性的な気道の炎症性疾患であることが容認されている。感受性個体では、この炎症により、通常、広範であるが変動性の大きい気道閉塞を伴う症状が引き起こされる。こうした気道閉塞は自然発生的にまたは治療により可逆性であることが多く、こうした気道閉塞に伴って種々の刺激に対する気道応答性は増加する。
【０００４】
現在の喘息治療用の薬物は、副腎皮質ステロイド、βアゴニスト、NSAID、ロイコトリエンアンタゴニスト、キサンチン、および抗コリン作動薬である。
【０００５】
この疾病は、軽度で偶発的な気管支攣縮(気管支拡張剤を時折使用することで容易に制御できる)から、時に、高用量の経口副腎皮質ステロイドによる治療に耐性である非常に重度な難治性喘息までの幅広い臨床域を有する。ステロイド耐性は、喘息罹患者の5％未満に生じる。しかし、重度の慢性疾患に罹患したこうした患者は、副腎皮質ステロイドに依存している場合があり、その疾患は非常に重度であることが多く、よって、完全な可逆性を示すのは困難または不可能であり得る。
【０００６】
慢性閉塞性気道疾患、慢性閉塞性肺症および「喫煙者胸部」は全て、現在COPDとして知られる症状を説明するために使用されている。COPDは、進行的で不可逆的な気道閉塞を特徴とする。呼吸不全または心肺不全から死に至る場合もある。COPDは、慢性気管支炎および肺気腫という2つのサブセットからなる。実際に、これらの2つの各病状の気道閉塞に対する寄与を明確にするのは非常に困難であり、このため、これらの表示は非特定的用語であるCOPDに置き換えられた。COPDの病態は完全に解明されていないが、特徴には、粘液分泌腺肥大、炎症(リンパ球による浸潤を含む)および杯状細胞過形成が含まれる。
【０００７】
COPDの治療は、気管支拡張剤、抗生物質の断続的投与、および、患者によっては、吸入および／または経口副腎皮質ステロイドからなる。後者は、COPDにおける肺機能低下を低減するとされている。
【０００８】
嚢胞性線維症は遺伝性の病状である。過剰な粘着性粘液が産生される。これにより、胸部感染の再発および進行的な気管支拡張症が生じる。嚢胞性線維症罹患者の約50％に、気管支応答性亢進が生じ、アトピー発生率が高くなっている。広範囲な気道狭窄および喘鳴が生じる。大半の嚢胞性線維症罹患者は気管支拡張剤を服用し；吸入用副腎皮質ステロイドを服用する罹患者もいる。少なくとも1つの研究により、経口副腎皮質ステロイドの利点が報告されている。
【０００９】
副腎皮質ステロイドは、1950年代に導入されて以来、慢性呼吸器疾患治療における主軸である。今日、経口用副腎皮質ステロイドは、主として、吸入用副腎皮質ステロイドに置き換えられているが、重度の喘息には依然として経口による薬物療法が必要である。吸入用副腎皮質ステロイドは、大半の患者において比較的安全で極めて効果的であり、何百万人の喘息罹患者の生活の質を向上してきた。しかし、重度の喘息罹患者には、経口による副腎皮質ステロイド療法が必要である。経口用副腎皮質ステロイドには、数日間以上服用した場合、多くの重度な副作用がある。これらには、小児における成長遅滞、重度な骨粗鬆症(特に高齢)、ストレスに対する下垂体・副腎軸の応答性低下、水分貯留、糖尿病および精神病促進が含まれる。
【００１０】
さらに、多数の患者が、明らかな副腎皮質ステロイド耐性または無応答を示す。吸入用または経口用ステロイドで成功裡に治療されたと判断された患者は、推定肺機能の60％で満足しなければならないことが多い。経口用副腎皮質ステロイド用量をさらに増量すれば、副作用が併発する危険性がある。
【００１１】
副腎皮質ステロイドは前記の理由から効果的であるが、理想的な薬物ではない。長年にわたり、医師は、時折、極めて重度の疾患に罹患した患者に、副腎皮質ステロイドの補助剤として、免疫抑制剤を使用してきた。免疫抑制薬の例には、アザチオプリン、メトトレキサート、マイコフェノール酸およびプロドラッグ、レフルナミド、シクロスポリンA、アスコマイシン、FK-506およびラパマイシンが含まれる。
【００１２】
喘息における慢性炎症は、気道中の炎症細胞および構造細胞から発散されるサイトカインネットワーク経由で媒介されるという証拠が増えてきている。喘息の特徴である顕著な好酸球性炎症は、2型ヘルパーT(Th2)様リンパ球由来のサイトカインにより編成されるようであり、このことは、シクロスポリンAなどの免疫抑制剤が、喘息制御に有益であり得ることを示唆する。
【００１３】
シクロスポリンは、薬理活性、特に、免疫抑制活性、抗炎症活性または駆虫活性を一般に有する、構造的に際立った環式のポリ-N-メチル化ウンデカペプチドのクラスを含む。単離された最初のシクロスポリンは、天然の真菌の代謝物であるシクロスポリン(Ciclosporin)あるいはシクロスポリンAとしても知られるシクロスポリン(Cyclosporin)であった。
【００１４】
【化１】
2004526719.tif 000003
【化２】
2004526719.tif 000004
【００１５】
シクロスポリン(Ciclosporin)が初めて発見されて以来、多種多様の天然シクロスポリンが単離および同定され、多くのさらに他の非天然のシクロスポリンが、全合成手段もしくは半合成手段により、または、改変された培養技術の応用により調製されている。従って、シクロスポリンにより含まれるクラスは現在かなり多く、例えば、天然のシクロスポリンA〜Z[Traberら；1、Helv.Chim.Acta、60、1247-1255(1977)；Traberら；2、Helv.Chim.Acta、65、1655-1667(1982)；Kobelら；Europ.J.Applied Microbiology and Biotechnology、14、273-240(1982)；およびvon Wartburgら；Progress in Allergy、38、28-45、1986)]、並びに、種々の非天然シクロスポリン誘導体および人工的もしくは合成的シクロスポリン誘導体および人工的もしくは合成的シクロスポリン(ジヒドロシクロスポリンを含む)[-MeBmt-残基は水素化により飽和している]；誘導体化シクロスポリン(例えば、-MeBmt-残基の3'-O-原子はアシル化されているか、または、その他の置換基が3位のサルコシル残基のα炭素原子に導入されている)；および、変異アミノ酸がペプチド配列内の特定の位置に、例えば、R.Wengerにより開発されたシクロスポリンを製造する全合成法を使用して取り込まれているシクロスポリン(例えば、Traberら、1；Traberら、2；およびKobelら、手順引用、米国特許第4,108,985号、第4,220,641号、第4,288,431号、第4,554,351号、第4,396,542号および第4,798,823号；欧州特許公開公報第34,567A号、第56,782A号、第300,784A号および第300,785号；国際公開公報第86/02080号および英国特許公開公報第2,206,119号および第2,207,678号；Wenger1、Transpl.Proc.、15補刊、1:2230(1993)；Wenger2、Angew.Chem.Int.Ed.24 77(1985)およびWenger3、Progress in the Chemistry of Organic Natural Products、50、123(1986)を参照されたい)が含まれる。
【００１６】
従って、シクロスポリンにより含まれるクラスは、現在では非常に広く、例えば、[Thr]2-、[Val]2-[Nva]2および[Nva]2―[Nva]5-シクロスポリン(Ciclosporin)(それぞれシクロスポリンC、D、GおよびMとしても知られる)、[3-O-アセチル-MeBmt]1-シクロスポリン(Ciclosporin)(ジヒドロ-シクロスポリンDとしても知られる)、[(D)Ser]8-シクロスポリン(Ciclosporin)、[Melle]11-シクロスポリン(Ciclosporin)、[(D)MeVal]11-シクロスポリン(Ciclosporin)(シクロスポリンHとしても知られる)、[MeAla]6-シクロスポリン(Ciclosporin)、[(D)Pro]3-シクロスポリン(Ciclosporin)などが含まれている。
【００１７】
シクロスポリンA(CsA)はCD4＋リンパ球に対して活性であり、それ故、喘息に有用であり得る。ステロイド耐性喘息患者に低用量の経口用CsAを試したところ、重度喘息患者において、経口用ステロイド投与時に症状制御を改善し得ることが示された。
【００１８】
喘息におけるCsAの作用機序への関心は高い。CsAは、サイトゾルにおいて偏在的なタンパク質であるシクロフィリンに結合し、この複合体はカルシニューリン(これはカルシウム依存的およびカルモジュリン依存的なセリントレオニンホスファターゼである)に結合する。このホスファターゼは、転写因子である活性化T細胞の核内因子(NF-AT)の細胞質部分が、核に移動するのに必要である。核に移動しその核部分に結合して活性転写因子となると、NF-ATは、AP-1と複合体を形成し、他の遺伝子(例えばIL-5)と共に、IL-2遺伝子の転写を調節する。CsAはNF-ATの細胞質画分が移動するのを防ぐために、IL-2の転写は減少する。CsAは、この転写機序により、CD4＋細胞において特異的阻害作用を示すが、肥満細胞および好酸球を含むその他の細胞に対しても、依然として明確になっていない機序により、阻害作用を示し得る。
【００１９】
近年、喘息におけるCsAの3つの対照試験が報告された[Alexander AG、Barnes NC、Kay AB、副腎皮質ステロイド依存的な慢性で重度の喘息におけるシクロスポリンの試験、Lancet 1992；339；324-328；Niwanowska E、Dworski R、Domala B、Pinis G、ステロイド依存的喘息のためのシクロスポリン、Allergy、1991；46：312-315；Lock SH、Kay AB、Barnes NC、副腎皮質ステロイド依存的喘息における副腎皮質ステロイド節約型薬剤としてのシクロスポリンAの二重盲検プラセボ対照研究、Am J Respir Crit Care Med 1996；153：509-14；Nizankowska E、Soja J、Pinis G、Bochenek G、Sladek K、Domagala Bら、ステロイド依存的気管支喘息のシクロスポリンによる処置、Eur Respir J 1995；8：1091-1099]。
【００２０】
5mg/kg/日のCsAにより、副腎皮質ステロイドの使用量を有意に(約60％)減少できた。全身CsAによる副作用は、拡張期血圧上昇および腎機能低下であった。その他の副作用には、肝機能不全、多毛症、振戦、歯肉過形成および錯感覚が含まれる。CsAの全身毒性のため、喘息、COPDおよびその他の関連肺症の治療においてその使用は限定される。
【００２１】
したがって、呼吸器疾患の主療法または補助療法としてのCsAの潜在的有用性は保持しつつ、CsAの全身毒性は軽減または消失した、CsA誘導体を得ることが望まれる。
【発明の開示】
【００２２】
発明の概要
本発明は、新規シクロスポリン、その薬学的に許容される塩、それらを含む医薬品および薬学的組成物としての使用、並びに、その製造方法に関する。本発明の化合物は、自己免疫疾患の局所治療に、例えば肺症の治療に特に有用である。
【００２３】
より特定すると、本発明は、下記式(I)のシクロスポリンを提供する。
【化３】
2004526719.tif 000005
【００２４】
式(I)において、略称、例えば、-Ala-、-MeLeu-、-αAbu-などにより称されるアミノ酸残基は、慣行に従い、特記しない限り、L-立体配置を有すると理解する(例えば、-(D)Ala-は、D-立体配置を有する残基を示す)。「MeLeu」の場合のような「Me」が先に来る残基略称は、α-N-メチル化残基を示す。シクロスポリン分子の個々の残基は、当技術分野でそうであるように、時計周りに番号を付し、残基1に対応する-MeBmt-の残基で始める。同じ番号配列を、本明細書および特許請求の範囲全体に使用する。
【００２５】
式(I)において、Aが
【化４】
2004526719.tif 000006
により示され；
Xが、存在しないか、-C1〜C6アルキル-、または-C3〜C6シクロアルキル-であり；
Yが、
(i) C(O)-O-R1、ここでR1は、水素、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、へテロ環、アリール、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、ハロゲンで置換されたC1〜C6アルコキシ、またはハロゲンで置換されたC1〜C6アルキルチオであり、
(ii) C(O)-S-R1、ここでR1は前記に定義した通りであり；
(iii) C(O)-OCH2-OC(O)R2、ここでR2は、ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル；C1〜C6アルコキシ；C1〜C6アルキルチオ、へテロ環またはアリールであり、
(iv) C(S)-O-R1、ここでR1は、水素；ハロゲンで選択的に置換されたC1〜C6アルキル、へテロ環、アリール、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6アルキルチオ、ハロゲンで置換されたC1〜C6アルコキシ、またはハロゲンで置換されたC1〜C6アルキルチオであり、および
(v) C(S)-S-R1、ここでR1は前記に定義した通りである
からなる群より選択され；
Bが、-αAbu-、-Val-、-Thr-または-Nva-であり；
Uが、-(D)Ala-、-(D)Ser-、-[O-(2-ヒドロキシエチル)(D)Ser]-；-[O-アシル(D)Ser]-または-[O-(2-アシルオキシエチル)(D)Ser]-である。
【００２６】
従って、本発明は、気道閉塞および／または慢性副鼻腔炎を特徴とする疾患を、その他の薬物を併用または併用せずに治療するための製剤の製造におけるシクロスポリン類似体の使用を提供する。
【００２７】
発明の詳細な説明
本発明の第一の態様は、前記したような式Iにより示される化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００２８】
本発明の第二の態様は、前記したような式I(式中、Bは-αAbu-であり、Uは-(D)Ala-である)により示される化合物である。
【００２９】
本発明の第三の態様は、前記したような式I(式中、Bは-αAbu-であり、Uは-(D)Ala-であり、Xが存在せず)により示される化合物である。
【００３０】
本発明の代表的な化合物は、下記からなる群より選択された化合物を含むが、これらに限定されることはない：
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOHである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOEtである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CH2CH3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Phである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Fである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCHF2である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCF3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CF3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Clである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH2CH2OCH3である式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがC(=O)SCH2Phである式(I)の化合物；
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが-CH2CH2CH2-であり、YがCOOCH3である式(I)の化合物；
式(I)(式中、Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOFmocである式(I)の化合物。
【００３１】
従って、本発明のシクロスポリンは、抗炎症療法、免疫抑制療法または関連療法に応答性または必要である、疾患または病状の治療に有用であり、これには、眼、鼻腔路、頬側口腔、皮膚、結腸、または、特に気道もしくは肺のこのような疾患もしくは病状の治療のための局所投与が含まれる。特に、本発明のシクロスポリンでは、望ましくない全身性副作用(例えば腎毒性または一般的な全身性免疫抑制)が同時に回避または軽減された、局所的な抗炎症療法、免疫抑制療法または関連療法を行うことができる。
【００３２】
本発明のシクロスポリンは、気道または肺の疾患および病状、特に炎症性または閉塞性気道疾患の治療に特に有用である。それらは、炎症細胞(例えば好酸球および／または好中球)の蓄積を伴った炎症性細胞浸潤または他の炎症事象を伴うまたは特徴とする、気道もしくは肺の疾患または病状の治療に特に有用である。それらは特に喘息の治療に有用である。
【００３３】
本発明のシクロスポリンは、起因の種類に関係なく、内因性喘息および特に外因性喘息の両方を含む喘息の治療に有用である。それらは、アトピー性および非アトピー性喘息(アレルギー性喘息を含む)、気管支喘息、運動により誘発される喘息、職業性喘息、細菌感染後に誘発された喘息およびその他の非アレルギー性喘息の治療に有用である。喘息の治療は、「喘鳴乳児症候群」の治療、すなわち、喘鳴症状を特に夜中に示し、医学的関心の高い患者カテゴリーの確立された「喘鳴乳児」と診断されたかまたは診断可能であり、現在ではより正確には初発性または初期喘息として同定されている、例えば4歳未満から5歳の被験者の治療を包含すると理解される。本発明のシクロスポリンは、喘息状態がステロイド依存的またはステロイド耐性のいずれかである被験者の喘息の治療に特に有用である。
【００３４】
本発明のシクロスポリンはまた、気管支炎の治療に、または、気管支炎に伴う慢性または急性気道閉塞の治療に有用である。本発明のシクロスポリンは、例えば、急性気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、慢性気管支炎、クループ性気管支炎、結核様気管支炎などを含む、あらゆる種類または起因の気管支炎の治療に使用し得る。
【００３５】
本発明のシクロスポリンはさらに、例えば、アルミニウム肺症、炭肺、アスベスト症、ベリリウム中毒、石粉症、ダチョウ塵肺症、鉄沈着症、珪肺症、たばこ症、特に綿肺症を含む、あらゆる種類または起因の、塵肺症(慢性または急性の気道閉塞を頻繁に併発し、粉塵を繰り返し吸入することにより引き起こされる、一般的に職業性の肺炎症疾患)の治療に有用である。
【００３６】
本発明のシクロスポリンはまた、気道および／または肺に罹患すると、過好酸球増加症を含む、好酸球に関連した気道疾患(例えば肺組織における病的な好酸球浸潤を含む)、並びに、例えば、レフレル症候群の結果生じるまたはそれに併発した好酸球に関連した気道疾患、好酸球性肺炎、寄生虫(特に後生動物)感染(局所好酸球増加症を含む)、気管支肺アルペルギルス症、結節性多発性動脈炎(チャーグ・ストラウス症候群を含む)、好酸球性肉芽腫、および薬物反応により引き起こされる好酸球に関連した気道疾患の治療にも使用し得る。
【００３７】
気道および肺の疾患、特に喘息の治療に関連して前記したような「治療」という用語は、症候性様式および予防様式の両方、すなわち、例えば、急性炎症の即座の治療(症候性治療)、並びに、長期総体的症状の予防、寛解もしくは制限のための事前治療を包含すると理解される。従って、本明細書および特許請求の範囲でこのような疾患に関連して使用した「治療」という用語は、症候性治療および予防治療の両方、例えば、喘息の場合、急性炎症事象を寛解するための症候性治療および現在進行中の炎症状態を阻止しそれに伴う将来の気管支悪化を寛解するための予防治療を含むと解釈する。
【００３８】
本発明のシクロスポリンはまた、免疫抑制療法を必要とする気道または肺の任意の疾患または病状を治療するために、例えば、罹患した場合に肺の自己免疫疾患の治療のために(例えば、サルコイドーシス、肺胞炎、または慢性過敏間質性肺炎の治療に)、または例えば肺もしくは心臓肺移植後の、同種間肺移植の維持のために使用し得る。
【００３９】
前記の目的から、本発明のいくつかのシクロスポリンは、好ましくは、気道内に、例えば吸入により肺経路により局所投与する。本発明のシクロスポリンは、局所投与した場合には強力な効力を示すが、例えば経口投与後には全身作用がないか、または全身作用は比較的軽減されている。従って、本発明のシクロスポリンは、例えば吸入療法中の薬物の不注意な嚥下の結果生じる、望ましくない全身性副作用の回避された、気道または肺の疾患および病状治療の手段を提供する。(吸入投与を行うのに必要な操作の経過中に、投与した全薬物の90％以上が、不注意に、吸入ではなく嚥下される)。
【００４０】
局所的に活性、例えば吸入した場合には効力があるが全身的には不活性であるシクロスポリンの提供により、本発明において、例えば全身的な副作用の危険性、特に免疫抑制副作用の危険性のために、そうでなければシクロスポリン療法が除外されると思われる被験者に対してもシクロスポリン療法を利用できる。
【００４１】
本発明のシクロスポリンはまた、他の疾患または病状の治療に、特に、自己免疫成分または免疫成分を有する疾患または病状の治療に、局所療法を実践し得る疾患または病状の治療に、例えば、結膜炎、乾性角結膜炎、および春季結膜炎などの眼の疾患および病状の治療に、および角膜移植の維持に、アレルギー性鼻炎を含む鼻に罹患した疾患の治療に、乾癬、アトピー性皮膚炎、天疱瘡および接触性皮膚炎を含む皮膚の疾患および病状の治療に、並びに、大腸の疾患、例えばクローン病および潰瘍性大腸炎の治療に有用である。
【００４２】
定義
本明細書に使用される「C1〜C3-アルキル」および「C1〜C6-アルキル」という用語は、炭素原子数がそれぞれ1〜3または1〜6である、飽和した直鎖または分岐鎖の炭化水素基を意味する。C1〜C3-アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルが含まれ、C1〜C6-アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、tert-ブチル、ネオペンチルおよびn-ヘキシルが含まれるが、これらに限定されることはない。
【００４３】
本明細書に使用される「C1〜C6-アルコキシ」という用語は、酸素原子を介して親分子部分に付着した、前記に定義したようなC1〜C6-アルキル基を意味する。C1〜C6-アルコキシ基の例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、tert-ブトキシ、ネオペントキシおよびn-ヘキソキシが含まれるが、これらに限定されることはない。
【００４４】
本明細書に使用される「C1〜C6-アルキルチオ」という用語は、硫黄原子を介して親分子部分に付着した、前記に定義したようなC1〜C6-アルキル基を意味する。C1〜C6-アルキルチオの例には、チオメトキシ、チオエトキシ、チオプロポキシ、チオ-イソプロポキシ、n-チオブトキシ、tert-チオブトキシ、ネオチオペントキシ、およびn-チオ-ヘキソキシが含まれるが、これらに限定されることはない。
【００４５】
本明細書に使用される「アリール」という用語は、フェニル、1-または2-ナフチルなどを含むがこれらに限定されることはない、非置換または置換炭素環芳香族基を意味する。
【００４６】
本明細書に使用される「C3〜C6-シクロアルキル-」という用語は、それぞれ炭素数3〜6の炭素環基；例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルを意味する。
【００４７】
本明細書に使用される「C1〜C3-アルキル-C3〜C5-シクロアルキル」という用語は、C1〜C3アルキル基上の水素原子の置換によりC1〜C3アルキル基に付着した、前記に定義したような、C3〜C5-シクロアルキル基を意味する。
【００４８】
本明細書に使用される「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択された原子を意味する。
【００４９】
本明細書に使用される「へテロ環」という用語は、1つまたは複数の環を有する環式芳香族基を意味し、各々の環の環原子数は5〜10であり、その中の少なくとも1つの環原子はS、OおよびNから選択され；0、1または2個の環原子は、S、OおよびNから独立的に選択された他のヘテロ原子であり；残りの環原子は炭素であり、この基は、環原子のいずれかを介して残りの分子に連結している(例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニルなど)。
【００５０】
本明細書に使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などを併発することなく、ヒトおよび下等動物の組織と接触させて使用するのに適した、妥当な利点／リスク比に見合う、信頼できる医学的判断の範囲内にある塩を意味する。薬学的に許容される塩は当技術分野において公知である。例えば、S.M.Bergeらは、薬学的に許容される塩をJ.Pharmaceutical Sciences、66:1-19(1977)(参照として本明細書に組み入れられる)に詳細に記載している。塩は、インサイチューで、本発明の化合物の最終単離および最終精製中に、または独立して遊離塩基官能基を適切な有機酸と反応させることにより調製できる。薬学的に許容される無毒性の酸付加塩の例は、無機酸(例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸)または有機酸(例えば酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸)と共に形成されるか、あるいは、イオン交換法などの当技術分野において使用される他の方法を使用することにより形成された、アミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギニン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。他の薬学的に許容される塩には、適宜、無毒性アンモニウム、4級アンモニウム、および、対イオン(例えばハロゲン化物イオン、水酸化物イオン、カルボン酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、低級アルキルスルホン酸イオン、およびアリールスルホン酸イオン)を使用して形成されたアミンカチオンが含まれる。
【００５１】
略称
Sar：サルコシン
MeLeu：N-メチル-ロイシン
Val：バリン
Ala：アラニン
MeVal：N-メチルバリン
Et：エチル
Ph：フェニル
Fmoc：9-フルオレニルメトキシカルボニル-
MeBmt：N-メチル-ブテニル-トレオニン
Ser  セリン
Thr  トレオニン
αAbu  α-アミノ酪酸
Nva  ノルバリン
【００５２】
合成法
本発明の化合物および方法は、本発明の化合物を調製し得る方法を説明した以下の合成スキームによってより良く理解されると思われる。式I中のX、Y、BおよびU基は、前記に定義した通りである。Aは、以下の反応スキームに説明したような出発原料中の-MeBmt-である。
【化５】
2004526719.tif 000007
【００５３】
式Iの化合物を調製する本発明の方法は、式I(式中、Aは-MeBmt-である)の化合物(シクロスポリンA、商業的に入手可能な発酵産物)を、末端二重結合を有するオレフィンと、グラッブ(Grubb)のルテニウムアルキリデン触媒またはベンジリデン触媒[米国特許第6,111,121号；(b)総説：Synlett、1999、2、267；(c)総説：Ivin, K J；Mol, J. C. Olefin Metathesis and Metathesis Polymerization、第二版、アカデミックプレス、ニューヨーク、1997；(d)J. Org. Chem.、1999、64、4798-4816；(e)Angew. Chem.,Int. Ed. English、1997、36、2036-2056；(f)Tetrahedron 1998、54、4413-4450を参照されたい]またはノーラン(Nolan)ルテニウム触媒[(a)国際公開公報第00/15339号；(b)Org.Lett.、2000、2、1517-1519；(c)J.Org.Chem.、2000、65、2204-2207を参照されたい]またはモリブデン触媒[(a)J.Am.Chem.Soc.、1990、112、3875(b)J.Am.Chem.Soc.、1996、118、10926-10927を参照されたい]と共に、リチウム塩の存在下、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒中、室温から約100℃で1〜7日間反応させて、式Iの化合物を得る段階を含む。別の方法は、シクロスポリンAを、内部オレフィンを有する対称なマレイン酸誘導体と、グラッブのルテニウムアルキリデン触媒またはベンジリデン触媒またはノーランのルテニウム触媒またはモリブデン触媒と共に、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒中、室温から約100℃で1〜7日間反応させて、式Iの化合物を得る段階を含む。
【００５４】
薬学的組成物
本発明の薬学的組成物は、1つまたは複数の薬学的に許容される担体と共に製剤化された、治療有効量の本発明の化合物を含む。本明細書に使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、無毒性で不活性の固体状、半固体状、または液体状の増量剤、希釈剤、カプセル化材料またはあらゆるタイプの製剤化助剤を意味する。薬学的に許容される担体として機能できる材料の例には、糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えばトウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えばココアバターおよび坐剤用ろう；油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油；グリコール、例えばプロピレングリコール；エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；アガー；緩衝化剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張生理食塩水；リンガー液；エチルアルコール、リン酸緩衝溶液；無毒性で適合性の潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム；並びに、着色剤、遊離剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤がある。保存剤および抗酸化剤も、製剤者の判断に従って組成物に含めることができる。本発明の薬学的組成物は、ヒトおよびその他の動物に、経口、直腸、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、局所(散剤、軟膏、または滴剤により)、頬側に投与できるか、または経口用もしくは鼻腔用スプレーとして投与できる。
【００５５】
本発明の化合物の局所投与用または経皮投与用の剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、プラスター、パップ、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチが含まれる。活性成分を、無菌条件下で、薬学的に許容される担体および必要な場合には任意の必要な保存剤または緩衝剤と混合する。
【００５６】
軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、本発明の活性化合物の他に、賦形剤、例えば動物用および植物用脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはその混合物を含み得る。
【００５７】
粉末およびスプレーは、本発明の化合物の他に、賦形剤、例えばラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含むことができる。スプレーはさらに、慣用的な噴射剤、例えばクロロフルオロハイドロカーボンを含むことができる。
【００５８】
鼻腔内投与では、本発明のシクロスポリンは、点鼻器から液体形または粉末形で適切に投与される。眼への使用に適した形態は、ここでも当技術分野において公知であるような、ローション、チンキ、ゲル、軟膏および眼内挿入物を含む。直腸投与では、すなわち、結腸の局所療法では、本発明のシクロスポリンは、停留浣腸として使用するための、坐剤形または浣腸形、特に溶液形、例えば植物油または類似の油状系にて投与し得る。
【００５９】
安全性を、吸入経路により薬物を噴霧器形または乾燥粉末のいずれかとして送達することにより最大化することが明らかである。明らかに、喘息ならびに気道閉塞疾患および／または慢性副鼻腔炎のような他の疾患の治療において、全身投与経路より優れた吸入経路の大きな利点は、患者が、非常に少量の薬物に曝露され、該化合物が作用部位に直接送達されることである。
【００６０】
本発明のシクロスポリンは、好ましくは、所望の部位への局所投与に適した任意の剤形で使用する。従って、気道または肺の疾患の治療において、本発明のシクロスポリンは、肺経路を介して／適切なディスペンサー装置からの吸入により投与することができる。
【００６１】
この目的のために、本発明のシクロスポリンは、気道または肺に投与可能な任意の適切な微細分散形または微細に分散可能な形、例えば、微細に粉砕された乾燥粒子形または任意の適切な(すなわち肺投与可能な)固体状または液状担体媒体中の分散液または溶液として使用し得る。乾燥粒子形で投与するために、本発明のシクロスポリンは、例えば、そのまま、すなわち、添加材料を全く加えない微粉化形で、他の適切な微細に粉砕した不活性固体状担体または希釈剤(例えばグルコース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、リボース、マンノースまたはキシロース)で希釈したコーティングされた粒子形で、または微細に粉砕した固体の肺内投与について当技術分野において既知である任意の他の適切な形で使用することができる。
【００６２】
肺内投与は、乾燥形または液体形の薬物の吸入による送達に関して、当技術分野において既知であるような任意の適切なシステム、例えばアトマイザー、噴霧器、乾燥粉末吸入器または類似の装置などを使用して行ってもよい。好ましくは、定量送達装置、すなわち1回作動する毎に予め決められた量のシクロスポリンを送達できる装置を使用する。このような装置は当技術分野において公知である。
【００６３】
吸入投与に適した形の調製は、当技術分野において既知のその他の方法によっても行い得る。いくつかの抗生物質が、近年、局所吸入用途に、特に嚢胞性線維症用に開発されていることを注記し、それらはシュードモナス感染に対して効果があることが示された。種々の吸入剤が、例えば、DE1491707号、GB1,392,945号、GB1,457,351号、GB1,457,352号、NL147939号、DE1491715号、GB1,598,053号、EP5585号、EP41783号、EP45419号、EP360463号、およびFR2628638号に記載されている。DE1491715号は、特に、気管支疾患または肺疾患用の吸入療法に適していると言われている。
【００６４】
本発明の方法の実施に使用した本発明のシクロスポリンは、もちろん、治療部位、治療する具体的な病状、病状の重度、治療する被験者(例えば体重、年齢などの点で)並びに所望の効果に応じて変化する。一般に、気道または肺の疾患または病状の治療のために、例えば炎症性または閉塞性気道疾患(例えば喘息)の治療に使用するために、本発明のシクロスポリンは、適切には、気道または肺に、例えば吸入により、20mg/日〜400mg/日、好ましくは50mg/日または100mg/日〜300mg/日、例えば200mg/日〜300mg/日の用量で投与する。投与量は、各投与時に1回〜5回の一連の吹き付けにより定量送達システムから投与され、投与は1日1回から4回行う。従って、各投与時の用量は、便利には、約5mg〜100mg、より適切には12.5mgまたは25mg〜100mgであり、これは例えば1回の作動で1mg〜25mgのシクロスポリンを送達できる定量送達装置で投与される。
【００６５】
局所製剤の用量は、一般に、経口製剤に必要な用量の10分の1から100分の1である。
【００６６】
実施例
本発明の化合物の調製のために前記した手順は、以下の実施例と合わせればより良く理解されると思われる。この実施例は、本発明の範囲を単に説明するためのものであり、限定するためのものではない。開示した態様の種々の変化および改変は当業者には明らかであると思われ、このような変化および改変(化学構造、置換基、誘導体、中間体、シンターゼ、本発明の製剤および／または方法を含むがこれに限定されない)は、本発明の精神および添付の特許請求の範囲から逸脱することなく行うことができる。
【００６７】
実施例1：
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH3である、式(I)の化合物
方法A：アクリル酸メチル(0.037ml、0.42mmol)、臭化リチウム(0.014g、0.218mmol)および1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)イミダゾール-2-イリネン(トリシクロヘキシルホスフィン)ジクロロルテニウム(II)ベキシリデン(ノーラン触媒、0.0071g、0.008mol)を、シクロスポリンA(0.1g、0.084mmol)の塩化メチレン／テトラヒドロフラン(10：1、3ml)溶液に室温で加えた。反応混合物を40℃で加熱した。24時間後、10：1の塩化メチレン／テトラヒドロフラン(3ml)中のより多くのノーラン触媒(0.0071g、0.008mmol)およびアクリル酸メチル(0.037ml、0.42mmol)を、さらに24時間40℃で加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を予め詰めておいた固相抽出カートリッジを通してろ過し、その後、40：1から20：1(容量)の塩化メチレン／メタノールで溶出した。真空で溶媒を除去すると、褐色固体の標題化合物が得られた。
MS(ESI)m／z1245.78(M＋H)＋
【００６８】
方法B：マレイン酸メチル(0.037ml、0.42mmol)および1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)イミダゾール-2-イリネン(トリシクロヘキシルホスフィン)ジクロロルテニウム(II)ベキシリデン(ノーラン触媒、0.0071g、0.008mmol)を、シクロスポリンA(0.1g、0.084mmol)の塩化メチレン(3ml)溶液に室温で加えた。反応混合物を密閉したSchlenk反応容器中で24時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を予め詰めておいた固相抽出カートリッジを通してろ過し、その後、40：1から20：1(容量)の塩化メチレン／メタノールで溶出した。真空で溶媒を除去すると、褐色固体の標題化合物が得られた。
MS(ESI)m／z1245.78(M＋H)＋
【００６９】
実施例2
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOHである、式(I)の化合物
実施例2の標題化合物は、水性メタノール中水酸化ナトリウムと反応させた、実施例1の標題化合物から調製した。
MS(ESI)m／z1232.82(M＋H)＋
【００７０】
実施例3
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOEtである、式(I)の化合物
実施例3の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸エチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製した。
MS(ESI)m／z1245.78(M＋H)＋
【００７１】
実施例4
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOnBuである、式(I)の化合物
実施例4の標題化合物は、実施例1の方法Bに記載の手順に従って、シクロスポリンA、マレイン酸ブチルおよびノーラン触媒から調製した。
MS(ESI)m／z1289.78(M＋H)＋
【００７２】
実施例5
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CH2CH3である、式(I)の化合物
実施例5の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、n-プロピルアクリレート、ノーラン触媒およびLiBrから調製した。
MS(ESI)m／z1280.45(M＋H)＋
【００７３】
実施例6
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Phである、式(I)の化合物
実施例6の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸ベンジル、ノーラン触媒およびLiBrから調製した。
MS(ESI)m／z1322.86(M＋H)＋
【００７４】
実施例7
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Fである、式(I)の化合物
実施例7の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸フルオロメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
【００７５】
実施例8
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCHF2である、式(I)の化合物
実施例8の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸ジフルオロメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
【００７６】
実施例9
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCF3である、式(I)の化合物
実施例9の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸トリフルオロメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
【００７７】
実施例10
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2CF3である、式(I)の化合物
実施例10の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸トリフルオロメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
【００７８】
実施例11
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2Clである、式(I)の化合物
実施例11の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸クロロメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
【００７９】
実施例12
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH3である、式(I)の化合物
方法A  実施例12の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸メトキシメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
方法B  実施例12の標題化合物は、実施例2の標題化合物、トリエチルアミンおよびメトキシメチルクロリドから、DMF中、「有機合成の保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)」、第三版、T.W.GreeneおよびP.G.M.Wuts編、John Wiley & Sons社、1999)に記載の手順に従って調製する。
【００８０】
実施例13
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOCH2OCH2CH2OCH3である、式(I)の化合物
方法A  実施例13の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、アクリル酸メトキシエトキシメチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製する。
方法B  実施例13の標題化合物は、実施例2の標題化合物のカリウム塩、メトキシエトキシメチルクロリド、ヒューニッヒ塩基から、塩化メチレン中、引用した「有機合成の保護基」の手順に従って調製する。
【００８１】
実施例14
Bが-αABu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがC(=O)SCH2Phである、式(I)の化合物
実施例14の標題化合物は、実施例2の標題化合物、ベンジルメルカプタン、カルボジイミド、およびジメチルアミノピリジンから、塩化メチレン中、引用した「有機合成の保護基」の手順に従って調製する。
【００８２】
実施例15
Bが-αAbu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが-CH2CH2CH2-であり、YがCOOCH3である、式(I)の化合物
実施例15の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、5-ヘキセン酸メチル、ノーラン触媒およびLiBrから調製した。
MS(ESI)m／z1287.08(M＋H)＋
【００８３】
実施例16
Bが-αABu-であり、Uが-(D)Ala-であり、Xが存在せず、YがCOOFmocである、式(I)の化合物
実施例16の標題化合物は、実施例1の方法Aに記載の手順に従って、シクロスポリンA、Fmocアクリレート、ノーラン触媒およびLiBrから調製した。
MS(ESI)m／z1410.89(M＋H)＋
【００８４】
本発明のシクロスポリンは、強力な免疫抑制抗炎症活性を示す。特に、それらは、抗原により誘発される炎症細胞の浸潤、例えば気道への浸潤を阻止する。インビトロでのこの活性は、局所投与(例えば肺内経路を介する)後に明らかとなる。本発明のシクロスポリンのいくつかは、これに対し、全身投与した場合、例えば経口投与後には、インビボでの活性はかなり減少していることが判明した。
【００８５】
本発明のシクロスポリンの抗炎症特性は、標準的な試験モデルで、インビトロおよびインビボで、以下のようにして実証し得る。
【００８６】
実施例17
カルシニューリン阻害アッセイ法
シクロスポリンの免疫抑制活性は、シクロフィリン-シクロスポリン複合体による、酵素カルシニューリンのホスファターゼ活性の阻害により媒介される。従って、カルシニューリン阻害は、インビトロで、シクロスポリン類似体の活性の指標として広く使用されている。
【００８７】
化合物を、酵素阻害用のシクロフィリンAを補充した、Biomol(Plymouth Meeting、PA)により供給されたBiomol Greenカルシニューリンアッセイキットに基づいたアッセイ法で試験した。組換えヒトカルシニューリンの活性は、cAMP依存的プロテインキナーゼ断片を示すホスホペプチドからのホスフェートの遊離により決定した。ホスフェート遊離は、比色定量検出試薬のBiomol Greenを使用して決定した。
【００８８】
DMSO(2.4μl)中の化合物を、96ウェルマイクロプレートに加え、5μMのシクロフィリンおよび20単位のカルシニューリンを含む、50μlのアッセイ緩衝液(50mMトリス、pH7.5、0.1M塩化ナトリウム、6mM塩化マグネシウム、0.5mMジチオトレイトール、0.025％NP-40、0.5mM塩化カルシウム、0.25μMカルモジュリン)と混合した。37℃で15分間加温した後、酵素反応をホスホペプチド(7.5μl)の添加により開始し、最終濃度を94μMとした。37℃で60分後のホスフェート遊離を、Biomol Green(100μl)の添加および室温で15分後の620nmの吸光度の測定により決定した。
【００８９】
IC50値を、阻害剤濃度範囲20μM〜0.006μMの酵素活性の測定値から計算した。
【００９０】
実施例18
免疫抑制活性および用途
ネズミ混合リンパ球反応
雌(8〜10週齢)のBalb/cマウスの脾臓由来の約0.5×106個のリンパ球を、5日間、雌(8〜10週齢)CBAマウスの脾臓由来の約0.5×106個のリンパ球と共に、0.2mlの細胞増殖培地中でインキュベートする。試験物質を種々の濃度で培地に加える。活性は、放射標識チミジンの取り込みにより決定したような増殖関連DNA合成抑制能により評価する。
【００９１】
ミッシェル・ダットン(Mischell-Dutton)試験
OFIの雌マウスの脾臓由来の約107個のリンパ球を、3日間、約3×107個のヒツジ赤血球と共に培養する。試験物質を種々の濃度でインキューベート培地に加える。リンパ球を収集し、抗原としての新しいヒツジ赤血球と共に寒天上に播種する。感作リンパ球は、赤血球(補体の存在下で溶解してプラークを形成する)を覆膜する抗体を分泌する。活性を、プラーク形成細胞、すなわち抗体産物の数の減少により評価する。
【００９２】
アレルゲンにより誘発される肺好酸球増多症に対する影響(インビトロ)
雄ヒマラヤン斑点モルモット(300g、BRL)を、Al(OH)3(100mg)およびB型百日咳ワクチン(0.25ml)を含むオボアルブミン(OA)の生理食塩水(0.9％w/v)中懸濁液1mlを腹腔内注射することにより、OAに感作させる。経口研究では、手順を2週間後に1回繰り返し、動物を1週間後に使用する。吸入研究では、手順を3週間間隔をおいて2回繰り返し、動物を最後の注射の1週間後に使用する。
【００９３】
誘発は、曝露チャンバーへの放出のために噴霧化されている、OAの生理食塩水溶液を使用して行う。試験動物を、60分間、鼻のみからの吸入によりOAに曝露する。吸入研究では、OA溶液を、0.01％濃度で使用する。
【００９４】
試験物質を、(a)吸入および／または(b)経口投与する。経口研究では、試験物質を、オリーブオイル中で1日1回3日間、または、メチルセルロース中の粉末形で1回OA誘発前に経口投与する。3日後に、試験動物は、OA誘発の1.5時間前およびOA誘発の6時間後に試験物質を服用する。吸入研究では、試験物質をflow-past型の鼻のみの吸入チャンバー内に拘束された試験動物への投与のために微細化する。吸入による投与は、OA誘発の15分前に行う。
【００９５】
投与した試験物質の効力は、気管支肺胞洗浄(BAL)および細胞計測により決定する。この目的のために、動物をペントバルビタールNa(100mg/kg腹腔内)で屠殺し、気管を露出させ、カニューレを挿入する。その後、ウシ血清アルブミン(BSA、0.3％)、EDTA(10mM)およびHEPES(10mM)を含む、Ca2＋およびMg2＋非含有のハンク平衡塩溶液10mlアリコートを5回連続的に、肺に導入し、直ちに肺組織を穏やかに圧迫することにより吸引する。プールした溶離液中の全細胞数を、自動細胞計測器を使用して決定する。洗浄液を200gで10分間遠心分離にかけ、細胞ペレットを1mlの補充HBSSに再懸濁する。10μlのこの細胞懸濁液を190μlのTurk溶液(1：20)希釈液に加える。細胞数の差別化は、Diff-Quickにより染色されたスメアにより行われる。細胞を同定し、油浸漬(×1,000)下で計測する。1つのスメアあたり最小500個の細胞が計測され、各細胞タイプの全個体数を計算する。
【００９６】
本発明を種々の好ましい態様に関して記載したが、それに限定されるものではなく、むしろ当業者は、変形および改変を、本発明の精神および添付の特許請求の範囲内で行ない得ることを理解すると思われる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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