(57)【要約】アンギオテンシン変換酵素および中性エンドペプチダーゼのインヒビター（例えば、サムパトリラート）および有機酸のような少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサー（例えば、アスコルビン酸）を含む薬学的組成物。このような組成物は、全身性バイオアベイラビリティーを改善した。本発明に従って、高血圧および心不全を含む心臓血管障害の処置または予防のための方法が提供され、この方法は、このような処置又は予防が必要な被験体に薬学的有効量の本発明の製剤を投与する工程を包含する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンギオテンシン変換酵素、中性エンドペプチダーゼまたは両方の少なくとも１つのインヒビター、並びに有機酸、有機酸の薬学的に許容される塩、ラウリル硫酸ナトリウムおよびパルミトイルカルニチンより選択される少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーを包含する薬学的組成物であって、ここで、前記少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーの量が、患者への該組成物の投与の際に、前記少なくとも１つのインヒビターのバイオアベイラビリティーを高めるのに有効である、薬学的組成物。
【請求項２】
前記少なくとも１つのインヒビターがサムパトリラート、ファシドトリル（fasidotril）、オマパトリラート（omapatrilat）、エナラプリラート、またはそれらの混合物である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１つのインヒビターがサムパトリラートである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記バイオアベイラビリティーエンハンサーが、アスコルビン酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記バイオアベイラビリティーエンハンサーが、アスコルビン酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記バイオアベイラビリティーエンハンサーが、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、それらの生理学的に許容される塩、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記バイオアベイラビリティーエンハンサーが、アスコルビン酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、カプロン酸、カプリル酸、グリココール酸、コール酸、コール酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、パルミトイルカルニチン、またはそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーがアスコルビン酸である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーがアスコルビン酸である、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記組成物が少なくとも０．５重量％の前記少なくとも１つのインヒビターおよび少なくとも１重量％の前記少なくとも１つの有機酸を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記薬剤が約０．５重量％〜約５０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記薬剤が約１重量％〜約２５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの有機酸が約１重量％〜約７５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの有機酸が約５重量％〜約４０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記薬剤が約０．５重量％〜約５０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記薬剤が約１重量％〜約２５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの有機酸が約１重量％〜約７５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの有機酸が約５重量％〜約４０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記薬剤が約０．５重量％〜約５０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの有機酸が約１重量％〜約７５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記薬剤が約１重量％〜約２５重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの有機酸が約５重量％〜約４０重量％の量で前記組成物中に存在する、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
請求項１に記載の組成物の薬学的有効量を患者に投与することを包含する心臓血管障害に罹患する患者を処置するための方法。
【請求項２４】
粉末化混合物を得るために、アンギオテンシン変換酵素のインヒビターおよび中性エンドペプチダーゼのインヒビターからなる群より選択される粉末形態の薬剤を粉末形態の有機酸と混合すること、および（ａ）カプセル中に該粉末化混合物をカプセル化することまたは（ｂ）該粉末化混合物を錠剤に形成することのいずれかを包含する、薬学的製剤の製造方法。
【請求項２５】
高血圧および心不全を含む心臓血管障害を処置または予防するための、請求項１に記載の薬学的有効量の製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善された全身性バイオアベイラビリティーを有する、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）および／または中性エンドペプチターゼ（ＮＥＰ）のインヒビターを含む薬学的組成物に関する。より詳細には本発明は、バイオアベイラビリティーエンハンサーと組み合わせて、ＡＣＥおよび／またはＮＥＰインヒビターを含む薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
サムパトリラートは、鬱血性心不全の薬剤だけでなく抗高血圧剤としての潜在的用途（potential application）を有する、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）および中性エンドペプチターゼ（ＮＥＰ）の二重阻害剤（dual inhibitor）である。この独特の二重適用様式(dual modality)のため、サムパトリラートは、初回投与後の突然のおよび顕著な血圧低下を引き起こさない。さらに、サムパトリラートは、乾性咳などの一般的な副作用を引き起こす傾向が、非常に低い。しかしながら、サムパトリラートの経口バイオアベイラビリティーは、イヌでは５％およびヒトでは２％に過ぎないほど低いと報告されている。臨床薬物動態データは、一般的に低いが単回および複数投与後の持続的な血漿薬物暴露（plasma drug exposure）を示す。
【０００３】
結果として、薬物の増加した経口吸収を示し、それによりその治療有効性をタイムリーに改善するサムパトリラートまたは類似の薬剤を包含する薬学的製剤を提供する必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明の１つの局面に従って、アンギオテンシン変換酵素および/または中性エンドペプチダーゼの少なくとも１つのインヒビター並びに少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーを、前記少なくとも１つのインヒビターの経口生物吸収（oral bioabsorption）を高めるために有効な量で包含する薬学的組成物が提供される。
【０００５】
本発明の１つの局面に従って、アンギオテンシン変換酵素および/または中性エンドペプチダーゼの少なくとも１つのインヒビター並びに有効量の少なくとも１つのバイオアベイラビリティーエンハンサーを包含する薬学的組成物が提供され、ここで、バイオアベイラビリティーエンハンサーは有機酸である。
【０００６】
本発明に従って、高血圧および心不全を含む心臓血管障害の処置または予防のための方法が提供され、この方法は、このような処置又は予防が必要な被験体に薬学的有効量の本発明の製剤を投与することを包含する。
【０００７】
本発明に従って、高血圧及び心不全を含む心臓血管障害を処置又は予防するための、薬学的有効量の本発明の製剤の使用がさらに提供される。
【０００８】
本発明に従って、薬学的製剤の製造方法がまた提供され、この方法は、粉末化混合物を得るために、粉末形態の少なくとも１つの薬学的薬剤（ここで、前記薬剤は、アンギオテンシン変換酵素のインヒビターおよび/または中性エンドペプチダーゼのインヒビターである）を粉末形態の有機酸と混合すること、並びに（ａ）カプセル中に粉末化混合物をカプセル化することまたは（ｂ）前記粉末化混合物を錠剤に形成することのいずれかを包含する。
【０００９】
（発明の詳細な説明）
本発明に従う薬学的組成物/製剤は、サムパトリラート（ＡＣＥおよびＮＥＰの両方を阻害する薬剤）の場合のように、ＡＣＥインヒビター、ＮＥＰインヒビターなどの増強したバイオアベイラビリティーを示す。このような二重インヒビターが好ましい。
【００１０】
組成物中に含まれ得るアンギオテンシン変換酵素および/または中性エンドペプチダーゼの好適なインヒビターとしては、サムパトリラート(sampatrilat)、ファシドトリル（fasidotril）、オマパトリラート（omapatrilat）、エナラプリラート(enalaprilat)、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のさらなる実施形態に従って、アンギオテンシン変換酵素および/または中性エンドペプチダーゼのインヒビターはサムパトリラートである。
【００１１】
１つの実施形態に従って、本発明に従って使用されるバイオアベイラビリティーエンハンサーは、有機酸、有機酸の薬学的に許容される塩、ラウリル硫酸ナトリウム、パルミトイルカルンチン(palmitoyl carntine)、またはそれらの混合物である。これらのバイオアベイラビリティーエンハンサーおよびＡＣＥ／ＮＥＰインヒビターの製剤は、粉末化形態（例えば、錠剤または粉末充填カプセル）または液体形態（例えば、液体分散物で充填したカプセル）で使用され得る。
【００１２】
このようにして、薬学的組成物は、錠剤、ゲルカップ（gelcaps）、カプセル、カプレット(caplets)、顆粒（granules）、ロゼンジおよびバルク粉末のような固体形態を含む、薬剤およびバイオアベイラビリティーエンハンサーを経口投与するための種々の固体投薬形態で処方され得る。製剤は、種々の薬学的に許容される担体、希釈剤（例えば、スクロース、マンニトール、ラクトース、スターチ）および当該分野で公知の他の賦形剤(excipients)（懸濁剤、溶解剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、防腐剤、着色料、矯味矯臭剤（flavorants）、滑沢剤などを含むがこれらに限定されない）のような種々の他の慣用の薬学的賦形剤を含み得る。時間放出(time release)カプセル、錠剤およびゲルもまた、本発明の化合物を投与する際に有利である。
【００１３】
薬学的組成物はまた、水性および非水性の溶液、エマルジョン、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤を含む、本発明の化合物を経口投与するための種々の液体投薬形態で処方され得る。このような投薬形態はまた、水のような当該分野で公知の好適な不活性の希釈剤（diluents）、保存剤、湿潤剤、甘味料(sweeteners)、矯味矯臭剤(flavorants)のような当該分野で公知の適切な賦形剤、並びに本発明の化合物を乳化および/または懸濁するための薬剤を含み得る。
【００１４】
本発明の１つの実施形態に従って、バイオアベイラビリティーエンハンサーは、有機酸より選択される。例えば、有機酸は、モノカルボン酸（例えば、カプロン酸）またはポリカルボン酸（例えば、リンゴ酸のようなジカルボン酸またはクエン酸のようなトリカルボン酸）であり得る。本発明の実施形態に従って、バイオアベイラビリティーエンハンサーは、アスコルビン酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、カプロン酸、カプリル酸、グリココール酸、コール酸およびそれらの混合物からなる群より選択される。本発明の別の実施形態に従って、バイオアベイラビリティーエンハンサーは、アスコルビン酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸およびそれらの混合物からなる群より選択される。別の実施形態において、有機酸はアスコルビン酸である。
【００１５】
さらに、バイオアベイラビリティーエンハンサーは、有機酸の薬学的に許容される塩（例えば、コール酸ナトリウム）またはラウリル硫酸ナトリウムおよびパルミトイルカルニチンのような他の薬剤であり得る。
【００１６】
薬学的に許容される塩は、主要な化合物、有機酸、が例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびコリン塩を形成するのに適切な塩基と反応されるものを含む。当業者はさらに、アルカリおよびアルカリ土類金属塩が、種々の公知の方法を介して、本発明の有機酸を適切な塩基と反応させることによって調製されることを認識するであろう。
【００１７】
１つの実施形態において、本発明の製剤は、以前および以下の実施形態が独立してかまたは組み合わせて存在するものを含む。
【００１８】
本発明の１つの実施形態に従って、薬学的製剤は、少なくとも１つの有機酸および少なくとも１つの薬学的薬剤（ＡＣＥ／ＮＥＰインヒビター）を含み、ここで、薬学的薬剤は、少なくとも約０．５重量％（例えば、約０．５重量％〜約５０重量％、好ましくは約１重量％〜約２５重量％、特に約１．０重量％〜約１４重量％）の量で組成物中に存在する。この実施形態において、少なくとも１つの有機酸は、少なくとも約１．０重量％（例えば、約１重量％〜約７５重量％、特に約５重量％〜約４０重量％）の量で組成物中に存在する。
【００１９】
同様に該組成物は、湿潤剤、サーファクタント（例えば、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、ポリソルベート等）、コサーファクタント（例えば、セチルアルコール、グリセリルモノステアレート、カルボキシメチルセルロースナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、および塩化ラウリルジメチルベンジルアンモニウム）、濃稠化剤（例えば、二酸化珪素、グリセリルベヘネート等）、結合剤（例えば、α化デンプン、アルギン酸、およびエチルセルロース等）、崩壊剤（例えば、微結晶セルロース、ソディウムスターチグリコレート、およびクロスカルメロース（croscarmelose））、希釈剤（例えば、第二リン酸カルシウム(calcium phosphate dibasic)、ラクトース、マンニトールおよび粉末化セルロース等）、吸着剤（例えば、二酸化珪素、マルトデキストリン、顆粒化リン酸カルシウム等）、抗酸化剤（例えば、亜硫酸ナトリウム、ソディウムメタサルファイト(sodium metasulfite)、エチレンジアミン四酢酸等）、並びに滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）、グリダント、および固結防止剤(antiadherant)などの加工助剤を含むことができる。しかし、本発明は、上記の添加剤/賦形剤に限定されない。
【００２０】
本発明に従って、薬学的製剤は、高血圧および心不全を含む心臓血管障害の処置または予防において使用され得る。このように、好ましい実施形態に従って、本発明は、心臓血管障害（例えば、高血圧または心不全）に罹患する患者（特に哺乳動物（特にヒト））を処置する方法を包含し、この方法は、本発明の製剤の薬学的有効量を前記患者に投与する工程を包含する。
【００２１】
活性な薬学的薬剤の投与量は、他の考慮の中で、処置される特定の条件、症状の重篤度、投薬間隔の頻度、特定の薬剤およびその効力、毒物学プロフィール、並びに薬物動態プロフィールを含む種々の要素に依存する。代表的には、ＡＣＥ／ＮＥＰインヒビターは、このようなインヒビターについて慣用の投薬レベルで投与される。例えば、薬学的薬剤は、例えば、０．０１〜２０ｍｇ/ｋｇ/日、好ましくは０．１〜１５ｍｇ/ｋｇ/日、特に０．３５〜３ｍｇ/ｋｇ/日の投薬レベルでの経口投与によって、単回用量または複数用量で投与され得る。単位投薬形態は、例えば、０．５〜２００ｍｇの活性な化合物を含み得る。
【００２２】
本発明はここで、以下の非制限的な実施例によってさらに説明される。これらの実施例の開示を適用する際、本発明に従って開示された方法の他のそして異なる実施形態が、関連分野の当業者にこれらを疑いなく示唆することに明確に注意すべきである。
【００２３】
前述および以下の実施例において、全ての温度は、摂氏温度で補正されずに示され；他に示さない限り、全ての部および％は、重量による。
【００２４】
２００１年４月３０日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６０／２８７，５３５を含む、上および下に引用した全ての出願、特許および刊行物の全体の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【００２５】
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。以下の実施例において、材料および方法は、例示のみのためであり、制限することを意図しない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
実施例
実施例１
サムパトリラート製剤の調製
本実施例において、粉末充填カプセルを、全ての成分をメッシュ１８ふるいを通して篩過し、そして材料をＰＫ−Ｂｌｅｎｄｍａｓｔｅｒ中で１０分間（滑沢剤を含むことなく）ブレンドすることによって調製した。これに滑沢化工程が続き、ここで、ブレンドは、メッシュ２０ふるいを通過させ、滑沢剤を添加して３分間ブレンダー中で混合した。次いでこの材料を、ＰＤ−１０（Ｓｃｈａｅｆｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）半自動カプセル充填機を使用して、サイズ０ＥＬ硬カプセルにカプセル化した。この製剤はまた、ブレンドの直接圧縮によって錠剤の形態になり得る。
【００２７】
処方を以下の表１に示す。
【００２８】
【表１】
2004528345.tif 000003
【００２９】
１＝１カプセル当たりのｍｇでの組成
２＝重量％での組成
注意：
ＰＤ００５８−５４およびＰＤ００５８−８６は、製剤中にエンハンサーを含まない。これらの２つの製剤はコントロールとして機能する。
【００３０】
全ての溶解研究に、ヴァンケル溶解テスター（Van Kel Industries, Edison, N.J.）を使用した。該装置は、ＵＳＰ２３に従って較正された(calibrated)。０．１Ｎ塩酸（ｐＨ１．２）中における溶解を、３７℃の温度での溶解媒体９００ｍｌおよび攪拌速度５０ｒｐｍを用いる、パドル法（paddle method）（USP Apparatus II）を使用して試験した。特定の時点、すなわち１５、３０、４５、６０分における試料を取り出し、そして１０μｍフィルターを通して濾過した。濾過した試料は、分析までねじ蓋ガラス試験管に保存した。オートサンプラー（autosampler）、ポンプ及びＵＶ検出器から構成されるＨＰＬＣシステムを、試料分析に使用した。移動相としてｐＨ７．０リン酸バッファー：アセトニトリル（９２：８）の混合物を使用し、５０μｌ容量の試料をＨＰＬＣ  C１８カラムに直接注入した。該溶解データを以下の表２に示す。
【００３１】
【表２】
2004528345.tif 000004
【００３２】
*注意：データは、６連の平均溶解％±標準偏差を示す。
【００３３】
サムパトリラート検出に特異的な高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法を使用し、各１０カプセル（試料ＡからＪ）中のサムパトリラート量を測定することによって、含量均一性試験を実施した。次いで、１０カプセルの平均の相対標準偏差（ＲＳＤ）を、通過の際の％ＲＳＤ＜５．０の含量均一性の指標として採用する。含量均一性データは、以下の表３に示す。
【００３４】
【表３】
2004528345.tif 000005
【００３５】
１＝１カプセル当たりの重量（ｍｇ）
２＝１カプセル当たりの％ラベルクレーム
実施例２
サムパトリラート製剤の調製およびインビボ評価
１０ｍｇサムパトリラートを含む、粉末充填硬カプセル剤型として、試験された製剤をイヌに送達した。アスコルビン酸を含む１つの試験製剤（ＰＤ−００５８−８２）並びに参照/コントロール製剤（ＰＤ−００５８−８６）を、イヌ（ｎ＝６）においてインビボで試験した。研究は、２つの製剤間で、７日間の回復期間を有した。血漿サンプルを、カプセル剤型の経口投与後にイヌから採取した。イヌ血漿中のサムパトリラートの量を、サムパトリラート検出に特異的なＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー/質量スペクトル）方法論を使用して測定した。以下の表４は、調製した製剤の概要を提供する。詳細な手順の説明を以下に示す。
【００３６】
【表４】
2004528345.tif 000006
【００３７】
参照/コントロール製剤を、希釈剤/充填剤として第二リン酸カルシウム、結合剤としてα化デンプン、および滑沢剤としてステアリン酸マグネシウムを使用することによって調製した。予め秤量した量のサムパトリラート（１０８．４３ｍｇ）、第二リン酸カルシウム（３６３３．４９ｍｇ）、およびα化デンプン（５２５．５２ｍｇ）を粉砕し、そして乳鉢および乳棒を使用して混合した。次いで、ステアリン酸マグネシウム（４５．１２ｍｇ）を添加して、ブレンドを乳鉢および乳棒中での粉砕によって１／２分間滑沢化した。適切な量のこの粉末ブレンドを、手で充填することによって、サイズ００スウェーディッシュオレンジ硬カプセル中にカプセル化した。各カプセルの含有量は、３９７、４００，４０３，４０４，４１１，４０３，４０３および４０８ｍｇ（ＰＤ００５８−８６）であった。
【００３８】
試験製剤は、上記の参照/コントロール製剤と同様に調製した。１０４．０５ｍｇのサムパトリラート、３６９．８６ｍｇのアスコルビン酸、４８１２．６９ｍｇの第二リン酸カルシウム、および６４８．６０のα化デンプンからなるブレンドを、乳鉢及び乳棒中で成分を粉砕することによって調製した。次いで、ステアリン酸マグネシウム（６３．５９ｍｇ）を添加して、ブレンドを乳鉢及び乳棒中で粉砕することによって１／２分間滑沢化した。適切な量のこの粉末ブレンドを、手で充填することによって、サイズ００のスウェーディッシュオレンジ硬カプセル(Swedish orange hard gelatin capsules)中にカプセル化した。各カプセルの含有量は、５９９，６０４，６０６，６０５，６０９，６０２，６０６および６０４ｍｇ（ＰＤ００５８−８２）であった。
【００３９】
研究した２つの製剤についての平均プラズマ濃度対時間プロフィールを図１に示し、データを表５に要約する。コントロール、製剤についての平均Ｃmaxは、２５．３ｎｇ/ｍｌであり、試験製剤については３３．９ｎｇ/ｍｌであった。コントロール製剤についての平均ＡＵＣ0-24は、試験製剤の２０７．４ｎｇ/ｍｌ/時間に対して７６．８ｎｇ/ｍｌ/時間であった。
【００４０】
先の研究におけるイヌ科動物モデルから得られたサムパトリラート静脈注射データを使用し、２つの製剤について、サムパトリラートの絶対的経口バイオアベイラビリティーを算出した（表６）。アスコルビン酸を含む試験製剤は、コントロールと比較して、有意に（Ｐ＝０．００２）大きいバイオアベイラビリティーを生じた。この製剤は、コントロールと比較して、サムパトリラートの経口バイオアベイラビリティーにおいて約三倍の増加を生じた。結局、アスコルビン酸は、低い被験体間変動を維持するが、サムパトリラートの全身性吸収の程度を高める。
【００４１】
【表５】
2004528345.tif 000007
【００４２】
【表６】
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【００４３】
実施例３
サムパトリラート製剤のＣａｃｏ−２細胞株研究
ヒト結腸癌細胞株Ｃａｃｏ−２を、５％ＣＯ2および９５％湿度の雰囲気下で３７℃で１５０−Ｔフラスコ中で増殖した。細胞を、２０％熱不活化胎児ウシ血清（ＰＢＳ）、１％非必須アミノ酸、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ/ｍｌストレプトマイシン、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンで補充したＤｕｌｂｅｃｃｏ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で連続して培養した。８５％コンフルエンシーに達した際に、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＨＢＳＳ中０．２５％トリプシンおよび０．０２％ＥＤＴＡ）に暴露することによって収穫し、そしてポリカーボネート膜を有する１２ウェル組織培養Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレートにプレートした。１×１０5細胞/ｃｍ2の代表的な播種密度で、細胞は１９〜２１日の間で単層を形成した。培地を一週間に三回補充して、細胞を全ての輸送研究について２１日間培養した。
【００４４】
頂端側細胞（apical）緩衝液は、９３５ｍｌのハンクスの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）、２５ｍｌのＤ−グルコース一水和物（１Ｍ）、２０ｍｌのＭＥＳ生物学的緩衝液（１Ｍ）、１０ｍｌの塩化カルシウム（１２５ｍＭ）、および１０ｍｌの塩化マグネシウム（５０ｍＭ）から構成される。緩衝液のｐＨは、水酸化カリウムで６．５に調整した。
【００４５】
側底側細胞（basolateral）緩衝液は、９３５ｍｌのＨＢＳＳ、２５ｍｌのＤ−グルコース一水和物（１Ｍ）、２０ｍｌのＨＥＰＥＳ生物学的緩衝液（１Ｍ）、１０ｍｌの塩化カルシウム（１２５ｍＭ）、および１０ｍｌの塩化マグネシウム（５０ｍＭ）から構成される。緩衝液のｐＨは、水酸化カリウムで７．４に調整した。
【００４６】
次いで、種々の賦形剤を含むサムパトリラート製剤を、細胞ベースのモデルを横切る薬物の浸透を増加させる賦形剤の能力についてスクリーニングした。製剤を、緩衝液中のサムパトリラートの溶液中に適切な量の各賦形剤を混合することによって調製した。Ｃａｃｏ−２細胞単層を横切るサムパトリラート輸送を試験するために、浸透研究を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）の上の（ドナー）区画に添加されたハンクスの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中に１．５ｍｌのサムパトリラート製剤またはコントロールを配置することによって行った（ここで、試験サンプルは細胞の頂端側表面と接触している）。研究を、６ウェル組織培養プレート中で行った。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）を３０，６０，９０，および１２０分に新しいウェルに移し、合計二時間測定した。全ての研究を三連で行った。実験は、３７℃のＣＯ2インキュベーター中で行った。輸送を、下の（レシーバー）区画（これは、細胞の基底表面と接触している）からアリコートを採取することによって測定した。アリコートを各ウェルから取り出し、そしてサムパトリラートレベルを、ＵＶ検出を用いる高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した。
【００４７】
各研究の終わりに、マンニトール輸送研究を、細胞単層の完全性を確認するために行った。浸透性研究を、１０，２０，３０および６０分に行い、全ての実験を三連で行った。マンニトール輸送研究について、３μｌの14Ｃ−マンニトール（比放射能、５６ｍＣｉ／mmole）を各ウェルに添加し、そして細胞を３７℃でインキュベートした。１０，２０，３０および６０分において、１００μｌのアリコートを側底側細胞チャンバーから取り出し、そして２０ｍｌシンチレーションバイアルに配置した。次いで、１０ｍｌのシンチレーションカクテルを各試験溶液に添加し、放射能をＢｅｃｋｍａｎ  ＬＳ  ６５００  Ｍｕｌｔｉ−ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ中で測定した。
【００４８】
結果を増強比［これは、エンハンサーの存在下で浸透したサムパトリラートの量をコントロール（いずれのエンハンサー賦形剤も含まない、ハンクス緩衝液中の等しい効力のサムパトリラート製剤）で除したものに基づいて計算される］として示す。表７〜１０および図２〜５を参照のこと。
【００４９】
【表７】
2004528345.tif 000009
【００５０】
【表８】
2004528345.tif 000010
【００５１】
【表９】
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【００５２】
【表１０】
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【００５３】
実施例４
サムパトリラート製剤のさらなるＣａｃｏ−２細胞株研究
合計１４０の単一賦形剤またはその組み合わせを、実施例３で説明したものと同様にスクリーニングした。有意な増強を提供する賦形剤を表１１に列挙する。
【００５４】
【表１１】
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【００５５】
実施例５
サムパトリラート製剤のさらなるインビボ評価
インビトロ/インビボ相関（ＩＶＩＶＣ）を、インビボ評価についてのイヌモデルにおいて、インビトロで有意な浸透増強を示す賦形剤を試験することによって確立した。試験した製剤を、１０ｍｇサムパトリラートを含む粉末充填硬カプセル剤型として経口送達した。エンハンサーを含む３つの製剤およびコントロール製剤を試験した。第１の製剤は、充填剤/希釈剤として第二リン酸カルシウム、崩壊剤としてα化デンプン、滑沢剤としてステアリン酸マグネシウム、および吸収エンハンサーとしてアスコルビン酸からなる（ＰＤ００５８−７７）。第２の製剤は、エンハンサーに対する薬物の割合を除き、第１の製剤と組成が類似していて、ここで、アスコルビン酸の量は、７５％減少していた（ＰＤ００５８−８２）。これは、変更された薬物：エンハンサー比のバイオアベイラビリティーに対する効果を測定することが意図された。第３の製剤は、他の製剤と同じ充填剤/希釈剤、崩壊剤、および滑沢剤からなるが、使用された吸収エンハンサーは、パルミトイルカルニチンであった（ＰＤ００５８−８３）。コントロール製剤（ＰＤ００５８−８６）は、いずれの潜在的な吸収エンハンサーも含まないという事実を除き、試験製剤と全て同じ成分を含んだ。
【００５６】
表１２は、この研究において試験された全ての製剤の組成を提供する。各製剤について、全部で８のカプセルを処方し、そしてＴｈｅｒＩｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ（ここで、実験の各フェーズについて６匹のイヌを使用して研究を実施した）に提出した。
【００５７】
【表１２】
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【００５８】
１＝１カプセル当たりのｍｇでの組成
２＝重量％での組成
コントロール製剤は、１０８．４３ｍｇのサムパトリラート、３６３３．４９ｍｇの第二リン酸カルシウム、および５２５．５２ｍｇのα化デンプン、および４５．１２ｍｇのステアリン酸マグネシウムからなるブレンド使用することによって調製した。材料（ステアリン酸マグネシウムなし）を粉砕し、乳鉢及び乳棒を使用して混合した。次いで、ステアリン酸マグネシウムを添加して、ブレンドを乳鉢及び乳棒中で粉砕することによって滑沢化した。適切な量のこの粉末ブレンドを、手で充填することによって、サイズ００のスウェーディッシュオレンジ硬カプセル中にカプセル化した。各カプセルの充填量は、３９７，４００，４０３，４０４，４１１，４０３，４０２，および４０８ｍｇ（ＰＤ００５８−８６）であった。
【００５９】
製剤＃１を、１０７．４０ｍｇのサムパトリラート、１４９５．００ｍｇのアスコルビン酸、４０００．００ｍｇの第二リン酸カルシウム、４４６．６０ｍｇのα化デンプン、および５６．４０ｍｇのステアリン酸マグネシウムからなるブレンド使用して、コントロール製剤と同様に調製した。各カプセルの充填量は、５９９，６００，５９８，６０１，５９９，５９８，６０３，および５９８ｍｇであった（ＰＤ００５８−７７）。
【００６０】
製剤＃２もまた、コントロール製剤について概略されるのと同様に調製した。ブレンドは、１０４．０５ｍｇのサムパトリラート、３６９．８６ｍｇのアスコルビン酸、４８１２．６９ｍｇの第二リン酸カルシウム、６４８．６０ｍｇのα化デンプン、および６３．５９ｍｇのステアリン酸マグネシウムからなる。各カプセルの充填量は、５９９，６０４，６０６，６０５，６０９，６０２，６０６，および６０４ｍｇであった（ＰＤ００５８−８２）。
【００６１】
製剤＃１および＃２と同様に、製剤＃３もまた、コントロール製剤について概略されるように調製した。ブレンドは、１０９．６１ｍｇのサムパトリラート、９９９．４７ｍｇのパルミトイルカルニチン（ＤＬ）、４４２５．３３ｍｇの第二リン酸カルシウム、５２０．４６ｍｇのα化デンプン、および６３．１８ｍｇのステアリン酸マグネシウムからなる。各カプセルの充填量は、６０１，６０５，６１４，５９５，６１３，５９９，６１４，および５９７ｍｇであった（ＰＤ００５８−８３）。
【００６２】
研究した全ての製剤についての平均血漿濃度対時間プロフィールを図６に示す。表１３は、平均ＰＫパラメーターを列挙する。コントロール、製剤＃１、製剤＃２、および製剤＃３についての平均Ｃmaxは、それぞれ２５，１６，３４および１２８ｎｇ/ｍＬであった。コントロール、製剤＃１、製剤＃２、および製剤＃３についての平均ＡＵＣ0-24は、それぞれ７７，１０８，２０７および３５１であった。３つ全ての製剤は、コントロールと比較した際に、ＡＵＣ0-24を増加させる際に効果的であった。
【００６３】
【表１３】
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【００６４】
これらの結果により、Ｃａｃｏ−２細胞ベースのスクリーニングモデルとイヌにおけるサムパトリラートの全身性薬物吸収との間のインビトロ−インビボ相関関係の存在が確認される。インビボで試験された３つ全ての製剤が、コントロール製剤と比較した場合に増強されたサムパトリラート吸収を生じ、これにより、インビトロ/インビボ相関関係（ＩＶＩＶＣ）が達成された。
【００６５】
本発明の範囲内において、製剤のバリエーション（例えば、多粒子システム、多層化錠剤、改変放出システム、および浸透性制御システム）並びに種々の投与経路（例えば、頬側、鼻腔、直腸など）が使用され得ることが理解されるべきである。
【００６６】
しかし、本発明の範囲は、上記の特定の実施形態に限定されないことが理解されるべきである。本発明は、特に記載される場合以外も実施され得、依然として、添付の特許請求の範囲内である。
【００６７】
本発明の種々の特徴および付随する利点は、添付の図面と組み合わせて考慮される場合、同じものがよりよく理解されるので、より十分に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】図１は、実施例２において記載される製剤についてのサムパトリラート血漿濃度対時間のプロフィールを示す。
【図２】図２−５は、実施例３における製剤についてのＣａｃｏ−２モデルを通過するサムパトリラートの輸送増強を示す。
【図３】図２−５は、実施例３における製剤についてのＣａｃｏ−２モデルを通過するサムパトリラートの輸送増強を示す。
【図４】図２−５は、実施例３における製剤についてのＣａｃｏ−２モデルを通過するサムパトリラートの輸送増強を示す。
【図５】図２−５は、実施例３における製剤についてのＣａｃｏ−２モデルを通過するサムパトリラートの輸送増強を示す。
【図６】図６は、実施例６において記載される製剤についてのサムパトリラート血漿濃度対時間のプロフィールを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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