(57)【要約】動物飼料は、１種以上の蛋白質、抗体、治療剤またはその組合せを含む微生物バイオマスを含有するものであって、前記蛋白質および抗体が、バイオマスの微生物に対し非天然である。蛋白質は、治療用蛋白質、生物活性蛋白質または栄養性蛋白質であり得る。ワクチンは、動物を免疫するために細菌中で使用できる。あるいは、抗菌化合物を細菌中で使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種以上の蛋白質、抗体またはそれらの組合せを含む微生物バイオマスを含有する動物飼料であって、前記蛋白質および抗体が、バイオマスの微生物に対し非天然である動物飼料。
【請求項２】
前記微生物が酵母、菌類、細菌、藻類、またはそれらの組合せから選択される、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項３】
前記微生物が藻類である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項４】
前記微生物が酵母である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項５】
前記微生物が細菌である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項６】
前記微生物が菌類である、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項７】
前記微生物が、ペプチド類、蛋白質、または抗体を遺伝子組換えにより発現する、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項８】
前記微生物を、蛋白質または抗体を遺伝子組換えにより発現するウィルス類により感染させる、請求項１に記載の動物飼料。
【請求項９】
前記飼料が水産養殖に使用される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の動物飼料。
【請求項１０】
非天然の治療用蛋白質、生物活性蛋白質または栄養性蛋白質を発現する微生物を含む飼料を、動物に投与することを含む、動物に対する治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１１】
前記非ヒト動物が集約的農業の慣行に供される、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１２】
前記動物が水産養殖種である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１３】
前記微生物が藻類である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１４】
前記微生物が菌類である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１５】
前記微生物が細菌である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１６】
前記微生物が酵母である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１７】
前記治療用蛋白質が微生物により発現される組換え蛋白質である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１８】
前記微生物を、治療用蛋白質を遺伝子組換えにより発現する組換えウィルスにより感染させる、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項１９】
前記治療用蛋白質がｉｎ  ｖｉｔｒｏでビブリオ菌種の増殖または複製を阻害する蛋白質である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項２０】
前記治療用蛋白質がウィルスを阻害する蛋白質である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項２１】
前記治療用蛋白質が、小エビ中のタウラ症候群または白斑症候群ウィルス感染を阻害する蛋白質である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項２２】
前記治療用蛋白質が遺伝子組換えにより発現された抗体である、請求項１０に記載の治療用、生物活性または栄養性蛋白質を輸送する方法。
【請求項２３】
前記治療用蛋白質、生物活性蛋白質または栄養性蛋白質が、次に掲げたセクロピン類、ペナエイジン類、バクテネシン類、カリネクチン類、ミチシン類、タキプレシン類、クラバニン類、ミスグリン類、プレウロシジン類、パラシン類、ヒストン類、酸性蛋白質類およびリゾチーム類から選択される、請求項１０〜２２のいずれか一項に記載する方法。
【請求項２４】
前記動物が非ヒトである、請求項１０〜２２のいずれか一項に記載する方法。
【請求項２５】
ワクチンを含むプロバイオティック菌。
【請求項２６】
動物にワクチンを輸送する方法であって、前記ワクチンを発現するプロバイオティック菌を用いる方法。
【請求項２７】
動物にワクチンを輸送する方法であって、腸内で増殖するワクチン発現細菌を用いる方法。
【請求項２８】
食餌に含まれワクチンを発現するプロバイオティック菌を動物に与えることによって、動物を免疫する方法。
【請求項２９】
抗菌化合物を輸送するプロバイオティック菌。
【請求項３０】
前記抗菌化合物を発現するプロバイオティック菌を用いることを含む、動物に抗菌化合物を輸送する方法。
【請求項３１】
腸内で増殖する抗菌発現細菌を用いることを含む、動物に抗菌化合物を輸送する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水産養殖または農業における飼料の成分として用いられ、かつ、外来性ペプチド、蛋白質、および／または抗体を含有する微生物細胞の使用に関するものであり、該使用は、その微生物細胞を消費する種に、ウィルス性または細菌性病原体に対する抵抗性または免疫性を与え、あるいは健康と機能の改善をもたらす。前記微生物細胞は、酵母、菌類、細菌、または藻類でありうる。蛋白質および／または抗体は、微生物自体を直接遺伝的に修飾することによって、または目的蛋白質を発現するように改変されたウィルスを微生物に感染させることによって微生物細胞内に発現させることができる。
【背景技術】
【０００２】
ある種の植物性産物が、治療的価値のある蛋白質および／または抗体を発現する特定の遺伝的修飾を用いて生産されてきた。コーネルのボイス・トンプソン（Ｂｏｙｃｅ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）研究所のグループは、ウィルスのコート蛋白質をバナナとジャガイモにクローン化し、これが摂取されると、経口的にワクチンを輸送するのと等しくなるようにした。この概念は、まだ微生物には拡張されていない。
【０００３】
メリステム（Ｍｅｒｉｓｔｅｍ）社、ラージスケール・バイオロジー（Ｌａｒｇｅ  Ｓｃａｌｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）社およびプロディジーン（Ｐｒｏｄｉｇｅｎｅ）社などいくつかの植物バイオテク企業があり、現在、抗体を含むある種のヒト治療用蛋白質を、植物中で発現させている。
【０００４】
細菌、酵母、菌類を含む組換え微生物が、ヒト治療用蛋白質を産生するために使用されてきた。しかしながら、このような組換え微生物は、生物体全体の摂取が組入れられる農業目的には使用されていなかった。植物と微生物の双方の場合において、組換え生物は、工場として使用されているだけであり、治療用蛋白質はその後単離、精製されてから使用されている。
【０００５】
治療的価値のある蛋白質および／または抗体を含有するある種の植物産物は、目的の蛋白質を発現するウィルスを植物に感染させることにより、生産されてきた。ラージスケール・バイオロジー社は、この技術を保護する一連の特許を所有しているが、これらの特許には、微生物におけるこの技術の使用は開示おらず、もちろん藻類における使用も開示していない。
【０００６】
抗生物質の投与は、水産養殖の場では日常的に使用されている。典型的には、純粋または半純粋の抗生物質を直接水系カラムに添加するが、クルードな醗酵ブロスや細胞を含むクルードな製品は、いかなる種類の治療用デリバリーシステムにも使用されていなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
リジンなどのアミノ酸の生産には、典型的には、当該アミノ酸を過剰生産し、醗酵培地に排泄する、遺伝的に修飾された微生物が用いられる。このような醗酵の廃液は、アミノ酸を含有するバイオマスを含むと考えられ、廃液産物は、低分子の栄養性アミノ酸のクルードな輸送形態として使用できると思われる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、物質（飼料）の組成物と、生物活性ペプチドまたは蛋白質の治療的用量の輸送を目的としたこの飼料の使用とを提供する。
【０００９】
一実施形態において、本発明は、１以上の蛋白質、抗体、またはそれらの組合せを含む微生物バイオマスを含有する水産養殖飼料であって、それらの蛋白質および抗体が、バイオマスの微生物に対し非天然である水産養殖飼料を提供する。好ましくは、前記微生物は、酵母、菌類、細菌、藻類またはそれらの組合せから選択される。前記微生物は、蛋白質または抗体を組換え的に発現させるように設計してもよく、または前記微生物に、組換え蛋白質または抗体を発現するウィルス類またはプラスミド類を感染させてもよい。
【００１０】
他の実施形態において、本発明は、非天然の治療用蛋白質を発現する微生物を含む飼料を動物に投与することを含む、治療用蛋白質を動物に輸送する方法を提供する。本方法は、特に集約農業の実施に供される非ヒト動物、または水産養殖の魚または貝に好適である。好ましい微生物は藻類である。好ましい態様においては、治療用蛋白質が微生物により発現される組換え蛋白質であるか、または微生物に組換えウィルスを感染させて、組換え型の治療用蛋白質または生物活性蛋白質を発現させる。好ましい治療用蛋白質としては、インビトロでビブリオ菌種の増殖または複製を阻害する蛋白質、または小エビ中のタウラ（Ｔａｕｒａ）症候群ウィルス（ＴＳＶ）または白斑症候群ウィルス（ＷＳＳＶ）感染を阻害する蛋白質、または組換え発現抗体が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
微小藻類（単細胞藻類すなわち植物プランクトン）は、地球上で最も広範囲の微生物界をなしているが、最も理解が進んでいない。陸生動物に対する植物と同様に、微小藻類は、水生食物連鎖において全ての植物栄養の天然栄養母体および主要源となっている。水生食物連鎖における最初のリンクとして、微小藻類は、単なるＤＨＡやＡＲＡよりもはるかに多くの植物栄養源である。微小藻類はまた、８０，０００種を超える多様な種を含む膨大な遺伝子資源となっている。酵母、菌類および細菌はまた、魚、甲殻類および軟体動物の直接食物連鎖中にも存在する。しかしながら、水産養殖飼料用に開発されているのは、これらの微生物のほんの僅かな種、恐らく１０種未満である。これらのわずかな種は、主に歴史的理由と養殖の容易さのために用いられてきた。栄養的または治療の補助として優れているという科学的証拠に基いて選択されてきたのではない。
【００１２】
海洋環境は魚や貝を攻撃する細菌類およびウィルス類に満ちており、そのため、極めて急速に集約養殖場を荒廃させる。細菌類およびウィルス類は、単細胞微小藻類をも攻撃することがあるため、これらの生物は、このような攻撃から自身を防御するために生物学的機構を進化させた。このような機構は、細菌増殖またはウィルスの付着を阻害する化合物の分泌を伴うと考えられる。このような化合物は、「プレバイオティクス」と呼ばれ、クランベリージュースがヒトにおいて膀胱感染を防止できる方法と同様の作用を有している。栄養的、治療的または保護的作用が、ヨーグルト中の乳酸菌などのような、生きている生物体全体によって輸送される場合、このような産物は「プロバイオティクス」と言われ、前記生物は「プロビオント（ｐｒｏｂｉｏｎｔｓ）」である。本発明の目的においては、どちらの作用タイプともプロバイオティックと呼ばれる。
【００１３】
幾つかの藻類種は抗生物質としての活性を示す。この活性は、細胞膜または細胞壁を構成するある種の生物活性を有する要素、即ち細胞増殖を阻害する試験で陽性を示す蛋白質または炭水化物（プレバイオティクスまたは本明細書中ではプロバイオティクス）によるものと考えられる。抗生物質を有する藻類のスクリーニングには、抗生剤を識別するために用いられる任意の標準的スクリーニング法を用いることができ、標的病原性微生物（例えば、ビブリオ菌種）の菌叢上で、対象藻類の培養ブロス中に浸漬させたフィルタデスクをインキュベートすることが挙げられる。本発明は、生簀中である一定の「病原性微生物」の増殖を制御するプロバイオティック方式での、これらの「友好的藻類」の使用を考慮している。しかしながら、本発明の主要態様は、選択された生物活性蛋白質を輸送するための組換え微生物またはウィルス感染微生物の使用に関する。前記組換え微生物またはウィルス感染微生物は、それらの活性を確認するために、標準的抗生物質スクリーニングアッセイにより抗生作用について試験できる。
【００１４】
歴史的には、病原菌を除去または減少させるために生簀の生態環境を改造する目的で、細菌だけが、プロバイオティック方式で使用されてきた。細菌のプロバイオティックアプローチに伴う課題は、既存の微生物学的生態環境が、比較的小数の代替細菌の導入によって調節することの困難な大量の緩衝物となっていることであり、今日まで大きな成果は得られていない。さらに、たとえ新たに導入された細菌が繁殖したとしても、生簀中の細菌濃度の大きな増加により酸素濃度が低下し、魚または小エビに有害となる可能性がある。光合成微小藻類を使用すれば、実際に酸素濃度を増加させるため、この問題が克服される。微小藻類は、以前はプロバイオティックとして考えられていなかった。広範囲の藻類培養採集物のスクリーニングにおけるこれまでの経験により、抗菌力または静菌力を示す多数の藻類種が示されてきた。これらの活性の幾つかは、抗ビブリオ菌活性と考えられる。このような種は、栄養性および抗菌性双方の能力を輸送する、高価値性に富んだ飼料の候補になると思われる。本発明は、これらの細菌、菌類またはウィルス病原体を制御するために、現在、水系に毒性試薬および抗生物質の大量投与を無制御に実施していることから生じる切迫した生態環境災害に対する解決策となり得る疾病制御法を提供する。
【００１５】
今日、小エビ水産養殖における大きな疾病制御問題の１つは、ある一定のウィルス（例えば、白斑症候群ウィルスおよびタウラ症候群ウィルス）による感染である。現在の抗生物質またはプロバイオティック方法はいずれも、この事態に役に立たず、また小エビは、魚と同様の方法ではワクチン接種接種できない。小エビが有しているのは、発達不全の免疫系のみなので、特にウィルス攻撃による荒廃に対し感受性が強い。本発明は、抗白斑抗体を直接小エビに輸送するベクターとして微小藻類を利用する生物学的制御法を用いて、この問題に対する解決策を提供する。これらの「デザイナー飼料」は、通常の食餌成分であるが、抗体の治療投与量を、直接小エビの消化管に輸送するために修飾される。この方法は、抗体が宿主生物の外側に留まり、単に消化管壁を通しての侵入を防止することから「受動性免疫」として知られている。本発明は、抗体をウィルスに輸送するために、形質転換藻類、酵母、菌類または細菌の利用を想定している。本発明に想定されたこのようなプロバイオティクスは、所望の効果を発生させるために目標生物中で複製される必要はない。また、微生物自体を、目的の抗体を産生するように設計されたウィルスと共に感染させてもよい。他に、微生物源は、小エビ、他の貝類、魚類または他の動物を免疫化するために、ウィルスの一部（例えば、一または複数のコート蛋白質）またはそのフラグメントを輸送することもできる。
【００１６】
白斑症候群ウィルスまたはタウラ症候群ウィルスなどの所望の標的物に対する抗体は、通常の免疫およびハイブリドーマを産生するモノクローナル抗体の選択により、またはイムノグロブリン遺伝子や遺伝子フラグメントのウィルス或いは細菌発現ライブラリをスクリーニングすることにより調製できる。「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、コリガン（Ｃｏｌｉｇａｎ）ら編集、ワイリー・インターサイエンス（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９１年、および定期増刊を参照されたい。選択された抗体の結合部位をコード化する核酸配列は、標準的方法を用いてクローン化でき（「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、オースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）ら編集、ワイリー・インターサイエンス（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、１９８７年、および定期増刊を参照）、また、抗体は、組換え微生物（藻類を含む、例えば米国特許第６，０２７，９００号）から発現でき、または所望の微生物に感染するウィルス類にクローン化できる。
【００１７】
微生物増殖を阻害する多数の殺菌性および静菌性ペプチド類があり、セクロピン類（ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ）、ペナエイジン類（ｐｅｎａｅｉｄｉｎｓ）、バクテネシン類（ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎｓ）、カリネクチン類（ｃａｌｌｉｎｅｃｔｉｎｓ）、ミチシン類（ｍｙｔｉｃｉｎｓ）、タキプレシン類（ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎｓ）、クラバニン類（ｃｌａｖａｎｉｎｓ）、ミスグリン類（ｍｉｓｇｕｒｉｎｓ）、プレウロシジン類（ｐｌｅｕｒｏｃｉｄｉｎｓ）、パラシン類（ｐａｒａｓｉｎｓ）、ヒストン類、酸性蛋白質類およびリゾチーム類が挙げられるが、これらに限定されない。これらのペプチド類は、上記のとおり組換え法を用いて藻類、酵母、菌類または細菌などの微生物バイオマスに発現でき、したがって、侵入抵抗性を運ぶ飼料成分として提供できる。
【００１８】
ここに考慮された本発明を以下の実施例に記載するが、その有用性は提供された実施例に限定するものではない。
【実施例】
【００１９】
（実施例1）
疾病制御を提供する飼料に有用な微生物源の選択
藻類の培養後、微小藻類バイオマスサンプル、水性抽出物、有機抽出物および増殖培地からの抽出物を、濃縮し、ろ紙ディスク上にスポットした。次に無菌的方法を用いて、これらのディスクを、グラム陰性菌、グラム陽性菌、抗生物質耐性菌、酵母、または菌類を含み、かつこれらに限定されない選択された生物の菌叢が上塗りされた寒天プレート上に置いた。被験生物の菌叢の増殖を可能にする適切な時間の長さでインキュベートした後、サンプルプレートを、ろ紙ディスクの周囲の透明帯（非増殖）について観察した。大きな透明帯は、強い抗菌活性を示し；小さな透明帯は、より弱い抗菌活性を示す。
（実施例２）
藻類飼料への抗体の組入れ
特定のウィルスまたは細菌病原体を選択し、本分野の専門家によく知られた方法を用いてモノクローナル抗体を調製するために用いた。この抗体または適切な抗体フラグメント（ＦａｂまたはＦｖ）をコードする遺伝子を単離し、適切なベクターで増幅した。遺伝子を、真核藻類または原核藻類（例えば、シネコキスチス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ））または酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ））または菌類（例えば、クサレケカビ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ））に好適な形質転換ベクターにスプライスする。前記形質転換ベクターは、抗体が微生物細胞バイオマス中に過剰発現されるように選択される。次にこのバイオマスを飼料添加物として用い、動物に直接抗体を付与し、受動性免疫を与える。
（実施例３）
微生物飼料における殺菌性蛋白質の発現
殺菌性蛋白質は、特定の用途にあわせて選択される。例えば、ペナエイジン（ｐｅｎａｅｉｄｉｎ）類の蛋白質は、小エビの病原体制御のために選択できる。ペナエイジン類は、甲殻類（例えば、ペナエイドシュリンプ（Ｐｅｎａｅｉｄ  ｓｈｒｉｍｐ））から単離された抗菌ペプチド類のメンバーである。抗菌ペプチド類は、昆虫および鋏角類にも存在し、セクロピン類（ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ）、ペナエイジン類（ｐｅｎａｅｉｄｉｎｓ）、バクテネシン類（ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎｓ）、カリネクチン類（ｃａｌｌｉｎｅｃｔｉｎｓ）、ミチシン類（ｍｙｔｉｃｉｎｓ）、タキプレシン類（ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎｓ）、クラバニン類（ｃｌａｖａｎｉｎｓ）、ミスグニン類（ｍｉｓｇｕｎｉｎｓ）、プレウロシジン類（ｐｌｅｕｒｏｃｉｄｉｎｓ）、パラシン類（ｐａｒａｓｉｎｓ）、ヒストン類、酸性蛋白質類およびリゾチーム類を挙げることができるが、これらに限定されない。選択された蛋白質またはペプチドの遺伝子は、起源、増幅源から単離されるか、または合成的に作製できる。次いで前記遺伝子を、真核藻類（例えば、キオレラ（Ｃｈｉｏｒｅｌｌａ））または原核藻類（例えば、シネコキスチス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ））または酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ））または菌類（例えば、クサレケカビ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）に好適な形質転換ベクターに組入れる。蛋白質が、微生物細胞バイオマス中に過剰発現されるように前記形質転換ベクターが選択される。次にこのバイオマスを、動物に直接抗菌蛋白質を与え、これによって特定の病原体に抵抗力を与えるような方法で飼料添加物として用いる。
（実施例４）
飼料を利用したワクチン接種
特定の病原体に特有な抗原が、動物と環境に必要とされるものとして選択される。例えば、ウィルスコート蛋白質またはその成分、または感染性細菌蛋白質またはその成分が選択される。前記蛋白質をコードする遺伝子が単離され、選択された微生物の使用に好適なベクター内に組込まれる。前記蛋白質が、微生物細胞バイオマス中に過剰発現されるように形質転換ベクターが選択される。次にこのバイオマスを飼料添加物として用いることによって、動物に直接ウィルス蛋白質または細菌蛋白質または菌類蛋白質を与え、その特定の病原体に対する免疫応答を刺激する。微生物成分は、消化管内に、またはそうでない場合は、空気または水との接触を通して動物体内に入ることができる。
（実施例５）
プロバイオティック飼料を利用したワクチン接種
乳酸菌、かん菌、ビフィズス菌などのプロバイオティック菌は、動物の消化管内で生きた生物として存在することにより有益な効果を与える。それら自体絶えず複製しており、腸内マイクロフローラの重要な部分となって、経口ワクチン類の優れた連続的輸送機構をなす。経口ワクチン類は、免疫原性組織（例えば、パイエル板）と相互作用し、免疫原性応答を刺激できる腸粘膜の部分に抗原を輸送しなければならない。特定の病原体に特有な抗原が、動物と環境に必要とされるものとして選択される。例えば、ウィルスコート蛋白質またはその成分、または感染細菌蛋白質またはその成分が選択される。前記蛋白質をコードする遺伝子が単離され、選択されたプロバイオティック微生物の使用に好適なベクター内に組込まれる。一般にプロバイオティックとして考慮されないが、腸内に生存している大腸菌群（例えば、大腸菌）のような他の腸管マイクロフローラ成分も、ｉｎ  ｓｉｔｕでワクチンを産生するベクターとして使用できる。
【００２０】
サケ感染膵壊死ウィルス（ＩＰＮＶ）から２種のウィルスコート蛋白質を単離し、当業界によく知られている分子生物学的手法を用いて乳酸菌における使用のために選択された形質変換ベクターに挿入する。次に、遊離蛋白質、排泄蛋白質および／またはウィルス様粒子（核酸のない組み立てウィルス）としてのウィルス抗原を発現する組換え乳酸菌細胞を、従来の醗酵法を用いて増殖させ、収穫し、サケ用飼料として使用できる形態に加工する。この形態としては、限定しないが、凍結乾燥、スプレー乾燥、流動床乾燥、マイクロカプセル化、押出し加工、または錠剤化が挙げられる。次に組換え乳酸菌を、飼料としてサケに与えることにより、価値あるプロバイオティック並びにワクチンの双方を輸送する。この場合、ワクチンは、組換え乳酸菌がその動物の腸管内に存在する限り絶えず産生される。
（実施例６）
プロバイオティック飼料を利用した活性ペプチド類または蛋白質の輸送
限定しないが、セクロピン類（ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ）、ペナエイジン類（ｐｅｎａｅｉｄｉｎｓ）、バクテネシン類（ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎｓ）、カリネクチン類（ｃａｌｌｉｎｅｃｔｉｎｓ）、ミチシン類（ｍｙｔｉｃｉｎｓ）、タキプレシン類（ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎｓ）、クラバニン類（ｃｌａｖａｎｉｎｓ）、ミスグリン類（ｍｉｓｇｕｒｉｎｓ）、プレウロシジン類（ｐｌｅｕｒｏｃｉｄｉｎｓ）またはパラシン類（ｐａｒａｓｉｎｓ）などの抗菌活性ペプチドの遺伝子、またはヒストン類、酸性蛋白質類またはリゾチーム類などの抗菌蛋白質の遺伝子を単離し、当業界によく知られている分子生物学的手法を用いて乳酸菌における使用のために選択された形質変換ベクターに挿入する。次に遊離ペプチド類または遊離蛋白質、排泄蛋白質を発現する組換え乳酸菌細胞を、従来の醗酵法を用いて増殖させ、収穫し、限定しないが、魚類、甲殻類、家畜などの動物用飼料として使用できる形態に加工する。この形態としては、限定しないが、凍結乾燥、スプレー乾燥、流動床乾燥、マイクロカプセル化、押出し加工、または錠剤化が挙げられる。次に組換え乳酸菌を、飼料として動物に与えることにより、価値あるプロバイオティック並びに抗菌化合物の双方を輸送する。この場合、抗菌化合物は、組換え乳酸菌がその動物の腸管内に存在する限り絶えず産生される。
【国際公開パンフレット】
2004532628.tif 000002
2004532628.tif 000003
2004532628.tif 000004
2004532628.tif 000005
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2004532628.tif 000017
2004532628.tif 000018
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004532628.tif 000019
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004532628.tif 000020
【国際調査報告】
2004532628.tif 000021
2004532628.tif 000022
2004532628.tif 000023
2004532628.tif 000024