(57)【要約】本発明は、ＡｐｏＥを増加する量のオーファン核内レセプターＦＸＲアクチベーターおよびＡｐｏＥを増加する量のオーファン核内レセプターＬＸＲαアクチベーターの組み合わせを使用することによって、哺乳動物の血漿および組織内のアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）を増加するための方法を提供する。哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための医薬の製造のための、ＡｐｏＥを増加する量のＦＸＲアクチベーターおよびＡｐｏＥを増加する量のＬＸＲαアクチベーターの組み合わせの使用がまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の血漿および組織内のアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）を増加するための方法であって、ＡｐｏＥを増加する量のオーファン核内レセプターＦＸＲアクチベーターおよびＡｐｏＥを増加する量のオーファン核内レセプターＬＸＲαアクチベーターの組み合わせを使用することによって増加する、方法。
【請求項２】
ＡｐｏＥを増加する量のＦＸＲアクチベーターを使用することによって、哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための方法。
【請求項３】
ＡｐｏＥを増加する量のＬＸＲαアクチベーターを使用することによって、哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための方法。
【請求項４】
哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための医薬の製造のための、ＡｐｏＥを増加する量のＦＸＲアクチベーターおよびＡｐｏＥを増加する量のＬＸＲαアクチベーターの組み合わせの使用。
【請求項５】
哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための医薬の製造のための、ＦＸＲアクチベーターの使用。
【請求項６】
哺乳動物の血漿および組織内のＡｐｏＥを増加するための医薬の製造のための、ＬＸＲαアクチベーターの使用。
【請求項７】
コレステロールホメオスタシスを調製するための医薬の製造のための、ＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーターの使用。
【請求項８】
ＦＸＲアクチベーターが、イソプレノイドまたは胆汁酸である、請求項１または２の方法、あるいは請求項４、５および７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
請求項８に記載の方法または使用であって、前記オーファン核内レセプターＦＸＲアクチベーターが、以下：
ファルネソール（トランス，トランス−ファルネソール；［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、
メチルファルネシルエーテル（メチル［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−イルエーテル）、
エチルファルネシルエーテル（エチル［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−イルエーテル）、
メチルファルネソエート（［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン酸メチルエステル）、
エチルファルネソエート（［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン酸エチルエステル）、
幼若ホルモンＩＩＩ（７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸メチルエステル）、
７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸エチルエステル、および
ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）、
から選択される、方法または使用。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法または使用であって、前記オーファン核内レセプターＦＸＲアクチベーターが、以下：
ファルネソール（トランス，トランス−ファルネソール；［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、
幼若ホルモンＩＩＩ（７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸メチルエステル）、および
ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）、
から選択される、方法または使用。
【請求項１１】
前記オーファン核内レセプターＬＸＲαアクチベーターがコレステロール誘導体である、請求項１または３に記載の方法、あるいは請求項６または７に記載の使用。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法または使用であって、前記コレステロール誘導体が、以下：
２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール（５−コレステン−３β，２２［Ｒ］−ジオール）、
２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、
２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、
５，６−２４−（Ｓ）ジエポキシコレステロール、および
７−ヒドロキシコレステロール、
から選択される、方法または使用。
【請求項１３】
前記オーファン核内レセプターＬＸＲαアクチベーターが２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール（５−コレステン−３β，２２［Ｒ］−ジオール）である、請求項１２に記載の方法または使用。
【請求項１４】
ａｐｏＥ増加活性を有し、そして請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの両方を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
薬学的に受容可能な賦形剤と一緒に、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１６】
治療における使用のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
血漿ＡｐｏＥおよび組織ＡｐｏＥを増加させることによる、アテローム性動脈硬化症の処置における使用のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
血漿ＡｐｏＥおよび組織ＡｐｏＥを増加させることによって、高密度コレステロールを上昇させるための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
血漿ＡｐｏＥおよび組織ＡｐｏＥを増加させることによる、黄斑変性症および色素性網膜炎の処置における使用のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
血漿ＡｐｏＥおよび組織ＡｐｏＥを増加させることによる、発作の処置における使用のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
血漿ＡｐｏＥおよび組織ＡｐｏＥを増加させることによる、糖尿病性ニューロパシーおよび多発性硬化症のような疾患において生じる変性性ニューロパシーの予防のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
ＡｐｏＥ２およびＡｐｏＥ３の血漿レベルおよび組織レベルを増加することによる、ＡｐｏＥ２および／またはＡｐｏＥ３についてヘテロ接合体またはホモ接合体である患者のアルツハイマー病または痴呆の処置における使用のための、請求項９、１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
インビトロアッセイおよびインビボ動物モデルの組み合わせを含む、ＡｐｏＥモジュレーターを同定するためのスクリーニング系であって、ＴＨＰ−１細胞株におけるＡｐｏＥの分泌を阻害するかまたは誘導する活性について、ＬＸＲα活性化活性またはＦＸＲ活性化活性を有する化合物を試験し、その後、血漿ＡｐｏＥに対するその調節効果を測定するためにラットにおいてインビボで該化合物を試験することによって特徴付けられる、スクリーニング系。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＡｐｏＥモジュレーターとしての治療的使用のための候補化合物を同定する方法であって、該方法が、ＦＸＲアクチベーター活性またはＬＸＲαアクチベーター活性を有する化合物を選択する工程、例えば、請求項２３に記載のスクリーニング系によって、ＡｐｏＥレベルを調節する能力を決定するためのアッセイに該化合物を供して、それによって候補化合物を同定する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、試験化合物がＦＸＲアクチベーター活性またはＬＸＲαアクチベーター活性を有するか否かを決定するためのアッセイに、該試験化合物を供する予備工程を包含する、方法。
【請求項２６】
請求項２４または２５に記載の方法であって、薬学的組成物を形成するために、候補化合物として同定された化合物を処方する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、それぞれ、オーファン核内レセプターＦＸＲのアクチベーター（例えば、ファルネソール、ケノデオキシコール酸）、およびオーファン核内レセプターＬＸＲαのアクチベーター（例えば、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール）、これらを含む薬学的組成物、ならびに血漿中および組織中のアポリポタンパク質Ｅを調節、特に、アポリポタンパク質Ｅを増大させるための治療におけるこの薬学的組成物の使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）は、いくつかの細胞型および組織（肝臓、腎臓、皮膚、脂肪組織、マクロファージおよび脳を含む）によって合成される多型性の多機能タンパク質である。ＡｐｏＥの広範な分布は、重要な細胞機能（例えば、細胞内コレステロール輸送、細胞間のコレステロール分布、および組織修復）の維持と関連する。ＡｐｏＥタンパク質のアミノ酸配列は、種間で十分に保存されている。ＡｐｏＥは、組織（例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢神経系（ＰＮＳ）ならびに動脈壁（細胞−細胞）または循環している血漿リポタンパク質を介した組織間（組織−組織））におけるコレステロールホメオスタシスの調節因子と考えられ得る。
【０００３】
リポタンパク質を含む血漿ＡｐｏＥの主要な役割は、末梢組織から肝臓へ脂質（コレステロール）を輸送すること、および逆コレステロール輸送系を介して過剰量のコレステロールを末梢組織から除去することである。この機構の崩壊は、末梢組織における過剰のコレステロール沈着を導く（例えば、動脈（動脈硬化（ａｒｔｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ））および皮膚（黄色腫および眼瞼黄板症））。ＡｐｏＥはまた、リンパ球増殖に直接的な効果を有し、従って免疫調節的な役割を有することが示されている。
【０００４】
脳は、肝臓の次に、ＡｐｏＥ合成の第２の主要な部位である。ＡｐｏＥは、脳組織によって合成される、唯一のリポタンパク質であり、脳において、ＡｐｏＥの重要な役割は、中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞間のコレステロール輸送である。例えば、マクロファージまたはマクロファージ誘導細胞のような細胞によるＡｐｏＥの局所的分泌は、過剰の組織コレステロールの取り込みに必須であるか、神経修復および再髄鞘形成のような特定の要求に対してコレステロールを提供する。
【０００５】
現在までに、インビトロおよびインビボにおいてＡｐｏＥ産生に影響を与える化合物は、徹底的に調査されてはいない。ホルモン様エストロゲンおよびコルチコイドのみが、種々の実験条件下でＡｐｏＥレベルを変更することが示されている；例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ　ＲＡＫ、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ　Ｎ、Ａｖｅｒｎａ　Ｍ、Ｌｉｎ　ＲＣ、Ｋｏｒａｃｈ　ＫＳ、Ｌｕｂａｈｎ　ＤＢ、Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄ　Ｇ「Ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ（ＡｐｏＥ）ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ＡｐｏＥ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ　ｐｏｏｌ　ｖｉａ　ｔｈｅ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｐａｔｈｗａｙ」Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９９７，２７２：３３３６０−３３３６６およびＳｔｏｎｅ　ＤＪ，Ｒｏｚｏｖｓｋｙ　Ｉ，Ｍｏｒｇａｎ　ＴＥ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ＣＰ，Ｈａｊｉａｎ　Ｈ，Ｆｉｎｃｈ　ＣＥ、「Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｇｌｉａ　ｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ＡｐｏＥ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ」Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９７，１４３：３１３−３１８を参照のこと。
【０００６】
（オーファン核内レセプターＦＸＲおよびＬＸＲ）
ステロイドホルモン（グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、エストロゲン、プロゲスチン、アンドロゲン、およびビタミンＤ）は、転写因子であるそれらの核内レセプターに結合し、それによって特定のタンパク質をコードする遺伝子の発現を調節し、そして重要な細胞活性を制御する；例えば、Ｍｅｉｅｒ，Ｃ．Ａ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　＆　Ｓｉｇｎａｌ　Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９７，１７，３１９−３３５を参照のこと。過去１０年間において、１００個より多くの哺乳動物遺伝子が、ステロイド核内レセプターのファミリーを拡大し、そしてリガンドが未知であるオーファン核内レセプターとして分類されている；例えば、Ｅｎｍａｒｋ，Ｅ．およびＧｕｓｔａｆｓｓｏｎ，Ｊ．Ａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　１９９６，１０，１２９３−１３０７を参照のこと。
【０００７】
ファルネソイドＸ活性化レセプター（ＦＸＲ；ＮＲ１Ｈ４）は、Ｆｏｒｍａｎら、Ｃｅｌｌ，１９９５，８１，６８７−６９３によって１９９５年に同定された。ＦＸＲは、レチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）とのヘテロ二量体として機能し、そして逆方向反復エレメント（ＩＲ−１）を介してＤＮＡに結合する。ＦＸＲは、もともと、イソプレノイド（例えば、ファルネソールおよび幼若ホルモンＩＩＩ）によって活性化されるとして記載された。より最近では、何人かの研究者らは、胆汁酸が生理学的リガンドであり、かつＦＸＲのアクチベーターであるとの結論に達した；例えば、Ｍａｋｉｓｈｉｍａ，Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９，２８４，１３６２−１３６５，Ｐａｒｋｓ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９，２８４，１３６５−１３６８，Ｗａｎｇ，Ｈ．Ｂ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　１９９９，３，５４３−５５３を参照のこと。
【０００８】
肝臓ＸレセプターがＷｉｌｌｙら、Ｇｅｎｅｓ　＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　１９９５，９，１０３３−１０４５によってオーファン核内レセプターとして同定され、そしてそのリガンド結合ドメインは、ＦＸＲと３７％の同一性を共有する。ＬＸＲのＤＮＡ結合配列は、４ヌクレオチド分離された直接反復（ＤＲ−４）であり、そしてＦＸＲのＤＮＡ結合配列（ＩＲ−１）とは異なる。２つの遺伝子がＬＸＲタンパク質をコードし（ＬＸＲα；ＮＲ１Ｈ３およびＬＸＲβ；ＮＲ１Ｈ２）、そして両方のレセプターが、種々のオキシステロール（最も強力なものは、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、および７−ヒドロキシコレステロールである）によって活性化される；例えば、Ｊａｎｏｗｓｋｙ　Ｂ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９９９，９６　２６６−２７１を参照のこと。従って、ＬＸＲαは、イソプレノイドおよびオキシステロールの両方のセンサーのようであるが、任意のこれらのレセプター（ＦＸＲおよびＬＸＲ）のアクチベーターおよびリガンドの正確な生理学的適用および薬理学的適用は、未だ確立されていない（Ｎｉｅｓｏｒ　Ｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　２０００（印刷中）。
【０００９】
（発明の要旨）
本出願人は、ＦＸＲの代表的なリガンドおよびアクチベーター（例えば、イソプレノイドファルネソール、胆汁酸誘導体化ケノデオキシコール酸）およびＬＸＲαの代表的なリガンドおよびアクチベーター（例えば、ヒドロキシステロール２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール）が、ＡｐｏＥ分泌の強力な誘導因子であり、そして血漿ＡｐｏＥおよび／または組織ＡｐｏＥの産生の増大を必要とする疾患の処置に有用であり得ることを発見した。
【００１０】
ＡｐｏＥ合成および分泌を調節する化合物は、以下のような疾患の処置における適用を有するはずである
−アテローム性動脈硬化症
−皮膚のような末梢組織における過剰量の脂質沈着（黄色腫）、
−発作
−記憶喪失
−視神経および網膜の病状（すなわち、黄斑変性、色素性網膜炎）、
−中枢神経系（脳組織）の外傷性傷害の修復、
−末梢神経系の外傷性傷害（すなわち、神経節圧迫または挫傷）の修復、
−加齢に起因する変性進行（すなわち、アルツハイマー病）の予防、
−糖尿病性神経障害および多発性硬化症のような疾患に生じる変性神経障害の予防、
−自己免疫疾患、および
−本来の免疫系の活性化。
【００１１】
（アテローム性動脈硬化症におけるＡｐｏＥ）
全リポタンパク質画分のうちの１成分として、ＡｐｏＥは、ａｐｏＢ、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および他の特定のレセプターのようにそのレセプターとの相互作用を媒介することによって、コレステロールホメオスタシスに重要な役割を果たす。心臓血管疾患におけるＡｐｏＥの重要な役割は、ＡｐｏＥノックアウトマウスモデルによって実証され、このＡｐｏＥノックアウトマウスは、ヒトアテローム性動脈硬化症に類似した病理学的特徴を有する高コレステロール血症およびアテローム性動脈硬化症を急速に発生する；例えば、：Ｐｌｕｍｐ　Ａ「Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ−ａ　ｄｅｃａｄｅ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ［総説］」Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　１９９７，２９：１９３−１９８を参照のこと。
【００１２】
機能的ＡｐｏＥタンパク質が存在しないヒトにおいて（ヒト改変体；例えば、：Ｒｉｃｈａｒｄ　Ｐ，Ｄｅｚｕｌｕｅｔａ　ＭＰ，Ｂｅｕｃｌｅｒ　Ｉ，Ｄｅｇｅｎｎｅｓ　ＪＬ，Ｃａｓｓａｉｇｎｅ　Ａ，Ｉｒｏｎ　Ａ「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｖａｒｉａｎｔ　（Ｅ（２）Ａｒｇ（１４２）−ＪＬｅｕ）　ｉｎ　ｔｙｐｅ　ＩＩＩ　ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ」Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．１９９５，１１２：１９−２８を参照のこと）、およびＡｐｏＥノックアウトマウスにおいて、コレステロールおよびトリグリセリドの血漿レベルは、異常に高く（低脂肪給餌でさえも）、アテローム性動脈硬化症を急速に発生した。動物モデルにおいて、これらの変化は、ＡｐｏＥの注入、ＡｐｏＥを産生するマクロファージの移植またはヒトＡｐｏＥ遺伝子のＡｐｏＥノックアウトマウスへの導入による遺伝子治療によって回避され、これは、ＡｐｏＥの直接的な有利な役割を実証する；例えば、Ｌｉｎｔｏｎ　ＭＦ，Ａｔｋｉｎｓｏｎ　ＪＢ，Ｆａｚｉｏ　Ｓ「Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ　ｂｙ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９５，２６７：１０３４−１０３７を参照のこと。
【００１３】
近年の研究は、漸増するコレステロール含量での給餌に対するＡｐｏＥノックアウトマウスの応答を調べ、ＡｐｏＥが給餌によるコレステロールの吸収低下および胆汁分泌の増大に重要な役割を果たすと結論づけた。例えば、Ｓｅｈａｙｅｋ　Ｅ，Ｓｈｅｆｅｒ　Ｓ，Ｎｇｕｙｅｎ　ＬＢ，Ｏｎｏ　ＪＧ，Ｍｅｒｋｅｌ　Ｍ　ａｎｄ　Ｂｒｅｓｌｏｗ　ＪＬ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｄｉｅｔａｒｙ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｉｌｉａｒｙ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ：Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｃ５７ＢＬ／６　ＡｐｏＥ　ｋｎｏｃｋ　ｏｕｔ　ｍｉｃｅ」Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　２０００，９７，３４３３−３４３７を参照のこと。この研究の結果は、さらに、漸増するＡｐｏＥが、給餌によるコレステロールの吸収を低下し、そして胆管コレステロール結石の形成を回避すると示唆するはずであることを示唆する。
【００１４】
（中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＡｐｏＥ）
ＡｐｏＥはまた、中枢神経系において重要な役割を果たす。ＡｐｏＥは、脳で合成され、星状細胞によって分泌され、ＡｐｏＥの主要な役割は、細胞間のコレステロール輸送である。ＡｐｏＥは、脂質を再分布させ、脳のコレステロールホメオスタシスに関与すると考えられる。
【００１５】
ＡｐｏＥは、アルツハイマー病に特徴的である神経病理学的な病変に関連し、その１つのアイソフォームであるＡｐｏＥ４は、この疾患の発症年齢と強く関連する（例えば：Ｐｏｉｒｉｅｒ　Ｊ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｉｎ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＣＮＳ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ｉｎ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ」［総説］Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ　１９９４，１７：５２５−５３０およびＲｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ　ＤＣ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ−ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｒｅｐａｉｒ　ａｎｄ　ａｓ　ａ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒ　ｆｏｒ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ」Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　１９９５，２５：２２３−２２９）を参照のこと）が、別のアイソフォームであるＡｐｏＥ３は、健常な微小管の維持を補助すると考えられている。アルツハイマー病を有する患者の脳において、ＡｐｏＥ　ｍＲＮＡおよび星状細胞数の両方における観察された増大は、増大したＡｐｏＥが、神経細胞内での損傷を修復するための星状細胞のはたらきを表すことを示唆する。
【００１６】
ＡｐｏＥ遺伝子（ＡｐｏＥノックアウトマウス）の非存在下において、記憶欠損、脳損傷の回復欠損およびアルツハイマー関連βアミロイド改変体ＡＰＰＶ７１７Ｆの沈着が示された；例えば、Ｏｉｔｚｌ　ＭＳ，Ｍｕｌｄｅｒ　Ｍ，Ｌｕｃａｓｓｅｎ　ＰＪ，Ｈａｖｅｋｅｓ　ＬＭ，Ｇｒｏｏｔｅｎｄｏｒｓｔ　Ｊ，Ｄｅｋｌｏｅｔ　ＥＲ「Ｓｅｖｅｒｅ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ｄｅｆｉｃｉｔｓ　ｉｎ　ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｋｎｏｃｋｏｕｔ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ａ　ｗａｔｅｒ　ｍａｚｅ　ｔａｓｋ」　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９７，７５２：１８９−１９６、およびＬａｓｋｏｗｉｔｚ　ＤＴ，Ｓｈｅｎｇ　ＨＸ，Ｂａｒｔ　ＲＤ，Ｊｏｙｎｅｒ　ＫＡ，Ｒｏｓｅｓ　ＡＤおよびＷａｒｎｅｒ　ＤＳ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ　ｈａｖｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｆｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ」Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｅｒｅｂｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｆｌｏｗ　ａｎｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　１９９７，１７：７５３−７５８、およびＷａｌｋｅｒ　ＬＣ，Ｐａｒｋｅｒ　ＣＡ，Ｌｉｐｉｎｓｋｉ　ＷＪ，Ｃａｌｌａｈａｎ　ＭＪ，Ｃａｒｒｏｌｌ　ＲＴ，Ｇａｎｄｙ　ＳＥ，Ｓｍｉｔｈ　ＪＤ，Ｊｕｃｋｅｒ　ＭおよびＢｉｓｇａｉｅｒ　ＣＬ「Ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｌｉｐｉｄ　ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｇｅｄ　Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ」，Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　１９９７，１５１：１３７１−１３７７を参照のこと。
【００１７】
従って、ＡｐｏＥのＥ２およびＥ３アイソフォームを有する患者において増加するＡｐｏＥの産生は、アルツハイマーまたは他の自発性もしくは外傷性の神経学的疾患の発生に対して有利な影響を有し得る。
【００１８】
（末梢神経系（ＰＮＳ）におけるＡｐｏＥ）
末梢神経系における神経再生におけるＡｐｏＥの重要な役割は、ＡｐｏＥ合成が、神経が損傷した場合に劇的に誘導されるという観察によって、証明される：例えば、Ｐｏｉｒｉｅｒ　Ｊ　１９９４「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｉｎ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＣＮＳ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ｉｎ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ」［総説］、Ｔｒｅａｄｓ　ｉｎ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ　１９９４，１７：５２５−５３０を参照のこと。ミエリン鞘（ｍｙｅｌｉｎ　ｓｈｅｅｔ）の維持および／または修復は、支持細胞（例えば、グリア細胞およびシュヴァン細胞）により分泌されるＡｐｏＥに関与する。ＡｐｏＥの合成および濃縮は、例えば、多発性硬化症における神経組織の変性疾患において異常に低いことが見出された：例えば、Ｇａｉｌｌａｒｄ　Ｏ，Ｇｅｒｖａｉｓ　Ａ，Ｍｅｉｌｌｅｔ　Ｄ，Ｄｅｌａｔｔｒｅ　Ｊ，Ｌｙｏｎｃａｅｎ　Ｏ，Ｓｃｈｕｌｌｅｒ　Ｅ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ」Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９９６，３３：２：１４８−１５０を参照のこと。ＡｐｏＥはまた、細胞骨格器および支持軸索の伸長を安定化し、従って発達および晩年に生じる神経系の損傷後の再構築に対して主な影響を有すると考えられる。
【００１９】
上記の証拠は、脂質（コレステロールおよびトリグリセリド）のホメオスタシス、ならびにまた神経組織のホメオスタシスおよび損傷からの回復におけるＡｐｏＥの有利な役割を証明した。従って、脂質障害（例えば、アテローム性動脈硬化症）または神経変性障害（例えば、アルツハイマー病または痴呆）および多発性硬化症を処置するために、血漿および組織（肝臓、脳、中枢神経系および末梢神経系）におけるＡｐｏＥを効果的に増加させる薬剤の開発のための原理が存在する。
【００２０】
（免疫系のモジュレーターとしてのＡｐｏＥ）
ＡｐｏＥは、リンパ球増殖に作用することによって、免疫系に影響する。さらに、ＡｐｏＥノックアウトマウスは、本来の免疫系を欠くために細菌感染に対して非常に感受性であり、このことは、ＡｐｏＥ産生の増加が免疫応答を回復させるにちがいないことを示唆している：例えば、Ｒｏｓｅｌａａｒ　ＳＥ，Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ　Ａ「Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ　ｈａｖｅ　ｉｍｐａｉｒｅｄ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ」Ｊ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ　１９９８，３９：１７４０−１７４３を参照のこと。
【００２１】
（ヒト疾患の処置におけるＡｐｏＥ誘発因子の潜在的な用途）
（ｉ）アテローム性動脈硬化症において（血漿ＨＤＬ　ＡｐｏＥの役割）
増加するＡｐｏＥ血漿レベルは、肝臓による取込みを増加させることによって、血漿アテローム発性リポタンパク質（ＶＬＤＬ、ＩＤＬおよびＬＤＬ）を減少させる。ＨＤＬにおけるＡｐｏＥの増加により、逆コレステロール輸送機構による負荷組織（アテローム硬化性動脈）からのコレステロールの除去は、増加する。
【００２２】
（ｉｉ）中枢神経系（ＣＮＳ）において
脳におけるＡｐｏＥの増加は、アルツハイマー病に関連する斑の沈着を防止し、そして機械的外傷または発作に起因する脳損傷の回復機構を増大させる。神経伸長シナプスの出芽の増加によって、全体的な脳活性（すなわち、記憶）が改善されるはずである。
【００２３】
（ｉｉｉ）末梢神経系（ＰＮＳ）において
ＡｐｏＥは、神経変性において重要な役割を果たし、そして外傷性神経（神経の切断、圧挫など）または変性性神経（多発性硬化症）におけるＡｐｏＥの増加は、治癒プロセスの速度を上げるか、または変性を防止する。
【００２４】
（ｉｖ）皮膚脂質代謝における障害に起因する皮膚疾患において
皮膚は、親油性バリアを構築し、そして脂質ホメオスタシスは、ケラチノサイトのような細胞において十分に制御される。コレステロール沈着（眼瞼黄板症および黄色腫）は、皮膚組織中のＡｐｏＥのレベルを増加させることによって防止される。
【００２５】
（ｖ）免疫系のモジュレーターとして
ＡｐｏＥは、リンパ球増殖に作用することによって、免疫系に影響する。さらに、ＡｐｏＥノックアウトマウスは、本来の免疫系を欠くために細菌感染に対して非常に感受性であり、このことは、ＡｐｏＥ産生の増加が免疫応答を回復させるにちがいないことを示唆している。
【００２６】
上記の理由のために、ＡｐｏＥ産生を増大させる化合物の開発は、多数の疾患状態を処置するために有用であり得る。今まで、ホルモンのみが、ＡｐｏＥの合成および分泌に影響を与えることが示されている。ＡｐｏＥ調節活性を有する新たな小分子の発見は、以下のような疾患の処置における用途を有する薬物の発見をもたらすはずである：
−アテローム性動脈硬化症
−皮膚のような末梢組織における過剰量の脂質沈着（黄色腫）、
−発作
−記憶喪失
−視神経および網膜の病状（すなわち、黄斑変性、色素性網膜炎）、
−中枢神経系（脳組織）の外傷性傷害の修復、
−末梢神経系の外傷性傷害（すなわち、神経節圧迫または挫傷）の修復、
−加齢に起因する変性進行（すなわち、アルツハイマー病）の予防、
−糖尿病性神経障害および多発性硬化症のような疾患に生じる変性神経障害の予防、
−自己免疫疾患、および
−本来の免疫系の活性化。
【００２７】
本出願人らはここで、特定のＦＸＲおよびＬＸＲαアクチベーターがＡｐｏＥ産生を増大することを見出した。さらに、出願人らは、インビボアッセイを含むスクリーニング系が、ＡｐｏＥモジュレーターの迅速な同定を可能にすることを見出した。このインビボアッセイは、ＴＨＰ−１細胞株におけるＡｐｏＥの分泌に対する、ＦＸＲおよびＬＸＲαアクチベーターの影響を試験する工程を包含する。
【００２８】
ＦＸＲのアクチベーターは、Ｆｏｒｍａｎら、Ｃｅｌｌ　１９９５，８１，６８４−６９３，Ｍａｋｉｓｈｉｍａ，Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９，２８４，１３６２−１３６５，Ｐａｒｋｓ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９，２８４，１３６５−１３６８およびＷａｎｇ，Ｈ．Ｂ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　１９９９，３，５４３−５５３により記載されるアッセイによって、同定され得る。
【００２９】
ＬＸＲαのアクチベーターは、Ｗｉｌｌｙら、Ｇｅｎｅｓ　＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　１９９５，９，１０３３−１０４５およびＪａｎｏｗｓｋｙ　Ｂ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９９９，９６，２６６−２７１により記載されるアッセイによって同定され得る。
【００３０】
本発明は、オーファン核内レセプターのＦＸＲ（例えば、ファルネソール）、ケノデオキシコール酸およびオーファン核内レセプターＬＸＲαのアクチベーター（例えば、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール）がＡｐｏＥモジュレーターであり、より詳細には、ＡｐｏＥ誘導因子であり、従って、アテローム硬化性の疾患または神経学的疾患（例えば、上記のような疾患）の処置のための薬剤として潜在的に有用であるという本発明者らによる知見に基づく。
【００３１】
従って、１つの局面において、本発明は、ＡｐｏＥ増加量のオーファン核内レセプターＦＸＲのアクチベーターと、ＡｐｏＥ増加量のオーファン核内レセプターＬＸＲαのアクチベーターとの組み合わせを使用することによって、哺乳動物の血漿および組織中のアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）を増加させるための方法を提供する。
【００３２】
別の局面において、本発明は、ＡｐｏＥ増加量のＦＸＲアクチベーターを使用することによって、哺乳動物の血漿および組織中のＡｐｏＥを増加するための方法を提供する。
【００３３】
さらなる局面において、本発明は、ＡｐｏＥ増加量のＬＸＲαアクチベーターを使用することによって哺乳動物の血漿および組織中のＡｐｏＥを増加させるための方法を提供する。
【００３４】
本発明はまた、哺乳動物の血漿および組織中のＡｐｏＥを増加させるための医薬の製造のための、ＡｐｏＥ増加量のＦＸＲアクチベーターとＡｐｏＥ増加量のＬＸＲαアクチベーターとの組み合わせの使用を提供する。
【００３５】
別の局面において、本発明は、哺乳動物の血漿および組織中のＡｐｏＥを増加させるための医薬の製造のための、ＦＸＲアクチベーターの使用を提供する。
【００３６】
さらに別の局面において、本発明は、哺乳動物の血漿および組織中のＡｐｏＥを増加させるための医薬の製造のための、ＬＸＲαアクチベーターの使用を提供する。
【００３７】
さらに、本発明はまた、医療における使用（例えば、治療における使用のため（例えば、本明細書中以前に定義され、そして添付の特許請求の範囲に記載される様な疾患および状態の処置または予防における使用のため））のための、上記のアクチベーター、ファルネソール、ケノデオキシコール酸および２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロールを提供する。本発明はまた、本明細書中以前に定義され、そして添付の特許請求の範囲に記載されるような疾患または状態の処置または予防のための医薬の製造のための、ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの使用を提供する。
【００３８】
本発明は、本明細書中以前に定義されるかまたは添付の特許請求の範囲に記載されるような疾患状態または状態の処置または予防の方法をさらに提供し、この方法は、これらを必要とする被験体（例えば、ヒトのような哺乳動物）に、治療的または生理学的に有効な（かつ好ましくは、非毒性）量のＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーターを投与する工程を包含する。上記の疾患状態または状態の処置のさらなる方法は、ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの相乗効果を使用して、有効量のＦＸＲアクチベーターと有効量のＬＸＲαアクチベーターとの組み合わせを被験体に投与する工程を包含する。
【００３９】
さらなる局面において、本発明は、ａｐｏＥ増加活性を有し、そしてＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの両方を含む、薬学的組成物を提供する。この組成物は、例えば、ＦＸＲアクチベーターとＬＸＲαアクチベーターとの混合物を含み得る。両方のアクチベーターを含む組成物のａｐｏＥ増加活性は、個々のアクチベーターのａｐｏＥ増加活性の合計よも大きなａｐｏＥ増加活性を有用に示し得、すなわち、相乗作用を示し得る。このような相乗作用を示す混合物、それらを含む組成物およびそれらの使用は、本発明のさらなる局面を形成する。
【００４０】
ファルネソイド（ｆａｒｎｅｓｏｉｄ）Ｘ活性化レセプター（ＦＸＲ；ＮＲ１Ｈ４）は、特定のイソプレノイドおよび特定の胆汁酸を含む、２つの異なる化学的クラス由来の天然化合物によって活性化される。
【００４１】
ＦＸＲアクチベーターであるイソプレノイドは、以下を含む：ファルネソール、ファルネザール（ｆａｒｎｅｓａｌ）、酢酸ファルネシル、ファルネン酸（ｆａｒｎｅｓｏｉｃ　ａｃｉｄ）、ならびにそのエステルおよび幼若ホルモンＩＩＩ。全てのファルネゾイドがＦＸＲアクチベーターであるわけではない：例えば、ゲラニルゲラニオールは、ＲＸＲを活性化しないことに着目することは、重要である。
【００４２】
大多数の胆汁酸は、ＦＸＲアクチベーターであり、ケノデオキシコール酸は、最も強力なアクチベーターの一つである。ＦＸＲアクチベーターではない胆汁酸化合物の例は、コール酸およびウルソデオキシコール酸である。
【００４３】
化合物がＦＸＲアクチベーターであるかどうかは、以下に記載されるアッセイにより決定され得る：Ｆｏｒｍａｎら、Ｃｅｌｌ　１９９５、８１、６８７〜６９３、Ｍａｋｉｓｈｉｍａ，Ｍ．ら　Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９、２８４、１３６２〜１３６５、Ｐａｒｋｓ，Ｄ．Ｊ．ら　Ｓｃｉｅｎｃｅ　１９９９、２８４、１３６５〜１３６８およびＷａｎｇ，Ｈ．Ｂ．ら　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　１９９９、３、５４３〜５５３。
【００４４】
現在、好ましいＦＸＲアクチベーターは、以下の通りである：
ファルネソール、（トランス、トランス−ファルネソール；［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、
メチルファルネシルエーテル、（メチル［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−イルエーテル）、
エチルファルネシルエーテル、（エチル［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−イルエーテル）、
メチルファルネソエート、（［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン酸メチルエステル）、
エチルファルネソエート、（［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン酸エチルエステル）、
幼若ホルモンＩＩＩ（７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸メチルエステル）、
７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸エチルエステル、および
ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）。
【００４５】
現在、最も好ましいＦＸＲアクチベーターは、以下である：
ファルネソール、（トランス、トランス−ファルネソール；［２Ｅ，６Ｅ］−３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−オール）、
幼若ホルモンＩＩＩ（７−メチル−９−（３，３−ジメチルオキシラニル）−３−メチル−２，６−ノナジエン酸メチルエステル）、および
ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）。
【００４６】
この肝臓Ｘαレセプター（ＬＸＲα、ＮＲ１Ｈ３）は、以下を含む特定のオキシステロールによって活性化される：２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、５，６−２４−（Ｓ）ジエポキシコレステロールおよび７−ヒドロキシコレステロール。オキシステロールは、全て、ＬＸＲαの強力なアクチベーターであるわけではなく、例えば、２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール（アクチベーター２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロールのエナンチオマー）は、ＬＸＲαの強力でないアクチベーターであることに着目することがさらに重要である。化合物がＬＸＲαアクチベーターであるかどうかは、以下に記載されるアッセイによって決定され得る：Ｗｉｌｌｙら　Ｇｅｎｅｓ　＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　１９９５，９，１０３３〜１０４５およびＪａｎｏｗｓｋｙ　Ｂ．Ａ．ら　Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９９９、９６、２６６〜２７１。
【００４７】
現在、好ましいＬＸＲαアクチベーターは、以下の通りである：
２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール（５−コレステン−３β，２２［Ｒ］−ジオール）、
２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、
２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、
５，６−２４−（Ｓ）ジエポキシコレステロール、および
７−ヒドロキシコレステロール。
【００４８】
現在、最も好ましいＬＸＲαアクチベーターは、以下の通りである：
２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール（５−コレステン−３β，２２［Ｒ］−ジオール）、
２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、および
２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール。
【００４９】
本発明は、ＦＸＲおよびＬＸＲαのリガンドおよびアクチベーターがＡｐｏＥ分泌の強力な誘導物質であり、そして上記の血漿および／または組織ＡｐｏＥの増加した産生を必要とする疾患の処置に有用であり得るという、本発明者らの発見から生じる。これらの化合物のＡｐｏＥ誘導活性を、インビトロモデル（ＡｐｏＥ産生細胞株、ＴＨＰ−１）において実証し、アクチベーターの各化学的クラスの代表的なメンバーを、特定の核内レセプターのアクチベーターでない、密接に関連する化合物と並行して試験した。この試験結果は、このアクチベーターが非誘導物質アナログよりも７倍強力にＡｐｏＥを誘導することを示し、これにより、ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの活性の効力および特異性を確立する。
【００５０】
さらなる局面において、本発明は、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）のレベルを増加するのに有用な候補化合物、ならびに哺乳動物の組織および血漿を同定するための方法を提供し；この方法は、ＦＸＲ核内レセプターアクチベーター活性を有する試験化合物を選択する工程、およびその後に、そのａｐｏＥ誘導効果を決定するために、この試験化合物をアッセイに供する工程を包含する。
【００５１】
別の局面において、本発明は、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）のレベルを増加するのに有用な候補化合物、ならびに哺乳動物の組織および血漿を同定するための方法を提供し；この方法は、ＬＸＲα核内レセプターアクチベーター活性を有する試験化合物を選択する工程、およびその後に、そのＡｐｏＥ誘導効果を決定するために、この試験化合物をアッセイに供する工程を包含する。
【００５２】
上記の方法の各々は、さらに、この化合物が、それぞれ、ＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーターであるかどうかを決定するために、試験化合物をアッセイに供する予備的な工程をさらに包含し得る。
【００５３】
上記の方法は、必要に応じて、医薬としての薬学的処方物のように、この方法によって同定された候補化合物を処方する工程を包含する。
【００５４】
上記の方法によって調製された医薬は、ａｐｏＥ調節化合物について、本明細書中に開示される治療目的のいずれかのために使用され得る。
【００５５】
本発明のＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーターは、種々の経路のいずれかによって投与され得る。従って、例えば、このアクチベーターは、経口的に、または他の粘膜表面を横切る送達（例えば、鼻、頬、気管支または直腸の粘膜を横切る送達）により、経皮的に、または注射（例えば、皮内、腹腔内、静脈内、または筋肉内への注射）により投与され得る。
【００５６】
これらの化合物が、経口投与を意図する場合、これらの化合物は、例えば、錠剤、カプセル、顆粒、丸剤、ロゼンジ、粉末、溶液、乳濁液、シロップ、懸濁液、または任意の他の経口投与のために適切な薬学的形態として処方され得る。経口投薬形態は、所望の場合、１以上の徐放コーティングでコーティングされ得、腸管の特定部位において、活性化合物が制御されること、または標的されることを可能にする。
【００５７】
錠剤および他の固体経口投薬形態または液体経口投薬形態は、ＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーター、および薬学的に受容可能な可溶化剤、希釈剤またはキャリアから（例えば、標準的様式で）調製され得る。可溶化剤、希釈剤またはキャリアの例としては、以下が挙げられる：糖（例えば、ラクトース、デンプン、セルロース、およびそれらの誘導体）、粉末状のトラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）、アルギン酸およびアルギネート、寒天、発熱物質を含まない水、等張性生理食塩水、リン酸緩衝液、および必要に応じて、他の薬学的賦形剤（例えば、崩壊剤、潤滑剤、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、矯味矯臭剤、および防腐剤）など。
【００５８】
カプセルは、硬質または軟質であり得、そして固体形態、液体形態または半固体形態の活性化合物を含み得る。代表的に、このようなカプセルは、ゼラチンまたは等価な物質から調製され、そしてコーティングされても、されなくてもよい。カプセルが胃を通過して、腸に達するまで、活性化合物の放出を遅らせることが所望される場合、十二指腸または回腸において見出されるｐＨで溶解するように適合させた、ｐＨ感受性コーティングを有するカプセルが、提供され得る。このようなコーティングの例は、Ｅｕｄｒａｇｉｔｓを含み、これらの使用は、周知である。
【００５９】
注入のための処方物は、通常、界面活性剤のような適切な可溶化剤から作製され、これらの界面活性剤はまた、化合物および賦形剤（例えば、緩衝剤）を含み、正確な生理学的なｐＨを有する等張液を提供し得る。この注入可能な溶液は、代表的に、発熱物質を含まず、そして単位用量の化合物を含む、密封されたバイアルまたはアンプルとして提供され得る。
【００６０】
本発明の単位用量形態の化合物は、代表的に、０．１重量％〜９９重量％の活性物質、より通常は、５重量％〜７５重量％の活性物質を含む。例によって、単位用量形態は、１ｍｇ〜１ｇの化合物、より通常は、１０ｍｇ〜５００ｍｇの化合物、例えば、５０ｍｇと４００ｍｇとの間の用量、そして代表的に、１００ｍｇ〜２００ｍｇの用量を含み得る。
【００６１】
本発明の化合物は、所望の治療効果を提供するのに有効な量で、投与される。所望の治療効果を提供するのに必要な濃度は、とりわけ、患者の疾患の正確な性質、大きさ、体重および年齢、ならびに疾患の重篤度によって変化する。
【００６２】
投薬される用量は、好ましくは、患者にとって非毒性であるが、特定の状況において、処置を受ける患者の重篤度により、毒性のいくらかの徴候を生じる量の化合物を投与する必要があり得る。
【００６３】
代表的に、本発明の化合物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、より好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、そして特に１ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与される。体重７０ｋｇの平均的なヒトに対して、本発明の化合物の代表的な１日用量は、７０ｍｇ〜７００ｍｇの範囲である。このような用量は、例えば、１日２回〜４回投与され得る。しかし、最終的には、投与される用量のサイズおよび投与の頻度は、その患者を処置する医師の裁量および判断にかかっている。
【００６４】
治療用途について、本発明の化合物は、一般的に、意図する投与経路および標準的な薬務に関して選択される薬学的キャリアとの混合により獲得される、標準的な薬学的組成物中で投与される。例えば、これらは、デンプンまたはラクトースのような賦形剤を含む錠剤の形態で、またはカプセル、胚珠（ｏｖｕｌｅ）、もしくはトローチ剤中で単独でかまたは賦形剤と組み合わせて、あるいは香味剤または着色剤を含むエリキシルまたは懸濁物の形態で経口投与され得る。これらは、非経口注射（例えば、静脈内注射、筋肉内注射、または皮下注射）され得る。非経口投与について、これらは、滅菌水溶液の形態で使用されるのが一番良い。この滅菌水溶液は、この溶液を血液と等張にする他の物質（例えば、十分な塩またはグルコース）を含み得る。投与形態および有効用量の選択は、特に、処置される状態に基づき変化する。投与様式および用量の選択は、当該分野の技術範囲内である。
【００６５】
ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターならびに経口的に与えられる場合に活性なそれらの薬学的に受容可能な塩は、液体（例えば、シロップ、懸濁物、またはエマルジョン）または固体（例えば、錠剤、カプセル、およびトローチ剤）として処方され得る。液体処方物は、一般的に、適切な液体キャリア（例えば、エタノール、グリセリン、非水性溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）、油、または懸濁剤、防腐剤、香味剤、もしくは着色剤を含む水）中のこの化合物または薬学的に受容可能な塩の懸濁物または溶液からなる。錠剤形態の組成物は、固体処方物を調製するために慣用的に使用されている、任意の適切な薬学的キャリアを用いて調製され得る。このようなキャリアの例として、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、およびセルロースが挙げられる。カプセル形態の組成物は、慣用的なカプセル化手順を用いて調製され得る。例えば、活性成分を含むペレットは、標準的なキャリアを用いて調製され得、次いで硬質ゼラチンカプセル中に充填され得る；あるいは、分散物または懸濁物は、任意の適切な薬学的キャリア（例えば、水性ガム、セルロース、ケイ酸塩、または油）を用いて調製され得、次いで、この分散物または懸濁物は、柔質ゼラチンカプセル中に充填され得る。
【００６６】
代表的な非経口組成物は、滅菌水性キャリアまたは非経口的に受容可能な油（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油、またはゴマ油）中のこの化合物または薬学的に受容可能な塩の溶液または懸濁物からなる。あるいは、この溶液は、凍結乾燥され得、次いで、投与直前に適切な溶媒を用いて再構成され得る。
【００６７】
代表的な坐薬処方物は、ＦＸＲアクチベーターもしくはＬＸＲαアクチベーターまたはこの方法で投与される場合に活性なそれらの薬学的に受容可能な塩を、結合剤および／または湿潤剤（例えば、ポリマーグリコール、ゼラチン、もしくはココアバターまたは他の低融点の植物蝋または植物性脂肪あるいは合成蝋または合成脂肪）と共に含む。
【００６８】
好ましくは、この組成物は、単位用量形態（例えば、錠剤またはカプセル）中に含まれる。
【００６９】
経口投与についての各々の用量単位は、好ましくは、１〜２５０ｍｇ（および非経口投与については、好ましくは、０．１〜２５ｍｇ）のＦＸＲアクチベーターもしくはＬＸＲαアクチベーターまたは遊離塩基として算出されるそれらの薬学的に受容可能な塩を含む。
【００７０】
本発明の薬学的に受容可能な化合物は、通常、１日用量レジメンで被験体に投与される。成人患者について、これは、例えば、１ｍｇと５００ｍｇとの間、好ましくは、１ｍｇと２５０ｍｇとの間の経口用量、あるいは０．１ｍｇと１００ｍｇとの間、好ましくは０．１ｍｇと２５ｍｇとの間の静脈内、皮下、もしくは筋肉内用量のＦＸＲアクチベーターもしくはＬＸＲαアクチベーターまたは遊離塩基として算出されるそれらの薬学的に受容可能な塩であり得る。この化合物は、１日に１〜４回投与される。
【００７１】
血漿および組織のＡｐｏＥレベルの増加から利益を享受する疾患状態として、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アテローム性動脈硬化症、神経変性障害（例えば、アルツハイマー病）、または痴呆。本発明の化合物は、ＡｐｏＥを調節するので、これらの状態のいずれかの処置において価値を有する。
【００７２】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
ここで、以下の実施例を参照することにより、本発明を説明する。しかし、本発明はこれらに限定されない。
【００７３】
（実施例１）
（Ａ．生物学的活性を決定する方法）
本発明のＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターは、インビトロでＡｐｏＥ産生を増加させる。これらの化合物の活性は、ＴＨＰ−１細胞株におけるＡｐｏＥの分泌に対するＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの効果の試験を含むインビトロアッセイにおいて決定され得る。本発明者らの実施した以前の研究は、ＡｐｏＥ分泌細胞株（ＴＨＰ−１細胞）によるＡｐｏＥの分泌を誘導する試験化合物は、インビボで、広範囲の種の動物に与える場合に血漿および組織のＡｐｏＥを増加させる活性を有することを示した。
【００７４】
（Ｂ．細胞培養）
ＴＨＰ１細胞株を、急性単球性白血病に患っている１歳男児の末梢血液から獲得した。これらの細胞は、表面免疫グロブリンおよび細胞質免疫ブロブリンを発現しなかった；これらは、食作用性であり、そしてマクロファージ様細胞に分化した。これらの細胞を、Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ、＃８８０８１２０１）から入手した。これらの細胞を、ＲＰＭＩ１６４０培養培地、２ｍＭ　グルタミン、２０μＭ　２−メルカプトエタノール中の非接着細胞として増殖させた。新鮮な培地を与え、２×１０５細胞／ｍｌと９×１０５細胞／ｍｌとの間の細胞密度を維持した。１週間に１度、７５ｃｍ２プレート中で２×１０６細胞を１０ｍｌの培地に接種することにより、新たな培養を開始した。このプレートを、５％　ＣＯ２環境下、３７℃で維持した。スクリーニングのために、細胞を、１ウェルあたり２×１０５細胞の密度で２４ウェルプレートに播種した。ホルボール−１２−ミリスタット−１３−アセテート（ＰＭＡ）を０Ｍおよび２．５ｎＭで添加し、接着性マクロファージ様細胞へのＴＨＰ１の分化を開始させた。賦形剤、参照化合物、および試験化合物を、１〜５０μＭで濃度を変化させて同時に添加し、７２時間インキュベートした。次いで、培養培地を回収し、３００ｇで５分間遠心分離し、任意の非結合細胞を除去し、そして分析前は−２０℃で保存した。
【００７５】
（Ｃ．ＥＬＩＳＡによるＡｐｏＥ決定）
９６ウェルマイクロタイタープレートを、５０ｍＭ炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）中でブタ皮膚由来の５％ゼラチン溶液と共に、２００μｌ／ウェルの濃度にて３７℃で２時間インキュベートすることによりコーティングした。このコーティング溶液を注意深く除去し、そして試験化合物を適切な希釈で添加した（１００μｌ／ウェル）。ヒトＡｐｏＥ標準（ＩＣＮ　ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓＩｎｃ，ＵＳＡ）の希釈物を、同時にアッセイした。試験化合物および抗体を、以下の緩衝溶液中で希釈した：ＰＢＳ、１％　ＢＳＡ、０．１％　Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４。試験化合物を３７℃で１時間インキュベートし、そしてウェルを２００μｌの緩衝溶液で３回洗浄した。１ウェル当たり１００μｌの１００００倍希釈した一次抗体（ヤギ抗ヒトＡｐｏＥ　ＩｇＧ）を、連続的に振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。３回目の洗浄後、１００μｌ／ウェルの５０００倍希釈した二次抗体（抗ヤギＩｇＧペルオキシダーゼ結合体）を、連続的に振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。ウェルを５回洗浄し、そして１００μｌ／ウェルの基質（オルト−フェニレンジアミンジヒドロクロリド）を、暗所で連続的に振盪しながら室温で適切な時間インキュベートした。５０μｌ／ウェルの３Ｍ硫酸を添加し、室温で１分間インキュベートすることにより、この反応を停止した。４９２ｎｍ　対　６２０ｎｍの吸光度を、マイクロプレートフォトメーターで読み取り、次いで、その結果をヒトＡｐｏＥ　ｎｇ等量に変換した。
【００７６】
（Ｄ．ファルネソール、ケノデオキシコール酸（Ｃｈｅｎｏｘｙｃｈｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、および２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロールのＡｐｏＥ誘導活性）
ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの代表例を、上記の条件においてＴＨＰ−１細胞によるＡｐｏＥの分泌を調節するそれらの能力について試験した。得られた結果を、表１、２、および３に報告する。各々の例において、ＦＸＲアクチベーターまたはＬＸＲαアクチベーターを、核内レセプターのアクチベーターでないかまたはずっと弱いアクチベーターである同じ化学クラスの近いアナログと同じ濃度で試験した。この実験設計を工夫し、ＦＸＲアクチベーターおよびＬＸＲαアクチベーターの効力および選択性を実証した。
【００７７】
従って、２つの異なる化学クラスのＦＸＲアクチベーターのＡｐｏＥ誘導効果を、表１および２に実証する。イソプレノイドクラスから選択されたＦＸＲアクチベーターの代表例であるファルネソールは、ＡｐｏＥ分泌を１２５％増加させ、不活性のイソプレノイドであるゲラニルゲラニオールは、ＡｐｏＥを３６％しか増加しない（表１）。同様に、十分に特徴付けられたＦＸＲのリガンドでありかつアクチベーターである胆汁酸誘導体ケノデオキシコール酸は、ＡｐｏＥ産生を１３８％増加させ、ＦＸＲを活性化しないこれに近いアナログ、コール酸は、ＴＨＰ−１細胞によるＡｐｏＥ分泌を変化させなかった（表２）。
【００７８】
ＡｐｏＥの誘導におけるオーファン核内レセプターＬＥＲαの直接的な関与は、アクチベーターエナンチオマーの２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロールが、ＡｐｏＥ分泌を２５０％増加させ、ずっと弱いエナンチオマーである２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロールが、同一濃度で不活性：＋２３％であったという事実により、明確に実証される（表３）。特に、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロールの効力が、注目されるべきである。なぜならば、ＡｐｏＥにおける有意な増加は、μＭ未満の濃度ですでに測定可能であるからである。
【００７９】
試験される全ての化合物は、Ａｌｄｒｉｃｈ（ファルネソール、＃２７，７５４−１）またはＳｉｇｍａ（ゲラニルゲラニオール、＃Ｇ３２７８、ケノデオキシコール酸、＃Ｃ９３７７、コール酸、＃Ｃ１１２９、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、＃Ｈ９３８４および２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、＃Ｈ５８８４）から市販されており、そこから購入した。
【００８０】
【表１】
2004505910.tif 000002
先の実施例は、単に本発明の例示であることを意図し、いかなるようにも本発明の範囲を制限することを意図しない。本発明のもとにある原理から逸脱することなく、実施例に対して、多くの改変および変更がなされ得、全てのこのような改変および変更は、本出願によって包含されることが意図されることは容易に明かである。
【国際公開パンフレット】
2004505910.tif 000003
2004505910.tif 000004
2004505910.tif 000005
2004505910.tif 000006
2004505910.tif 000007
2004505910.tif 000008
2004505910.tif 000009
2004505910.tif 000010
2004505910.tif 000011
2004505910.tif 000012
2004505910.tif 000013
2004505910.tif 000014
2004505910.tif 000015
2004505910.tif 000016
2004505910.tif 000017
2004505910.tif 000018
2004505910.tif 000019
2004505910.tif 000020
2004505910.tif 000021
2004505910.tif 000022
2004505910.tif 000023
2004505910.tif 000024
2004505910.tif 000025
2004505910.tif 000026
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004505910.tif 000027
【国際調査報告】
2004505910.tif 000028
2004505910.tif 000029
2004505910.tif 000030
2004505910.tif 000031
2004505910.tif 000032
2004505910.tif 000033