(57)【要約】本発明は、インドロカルバゾール化合物の新しい糖誘導体と、該誘導体のトポイソメラーゼ−Ｉ活性を示し、かつ腫瘍細胞の増殖を抑制するのに有用な医薬製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トポイソメラーゼＩおよび腫瘍細胞の増殖の抑制に用いる、式：
【化１】
2004524275.tif 000032
［式中、Ｒは水素、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２またはＣ１−７アルキル、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
ＱはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ５ａ；
Ｒ５およびＲ５ａはそれぞれ独立して、水素、
【化２】
2004524275.tif 000033
の式（Ａ），（Ｂ），（Ｃ）および（Ｄ）からなる群から選ばれ、但し、ＱがＮＲ５ａであれば、Ｒ５またはＲ５ａのいずれかは水素でなければならず；
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ９、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、ＳＲ９およびＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９、ＳＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、または
Ｒ１とＲ２は共に合して、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｏまたは−ＮＲ９Ｒ１０を形成、もしくは
Ｒ３とＲ４は共に合して、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｏまたは−ＮＲ９Ｒ１０を形成；
Ｗは水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ９、Ｎ−ＯＨ、ＯおよびＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立して、ＯＨもしくはＨであるか、または共に合して＝Ｏを形成；
Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキルおよびＣ３−７シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２およびＮ（Ｃ１−３アルキル）２からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、または
Ｒ９とＲ１０は、それらが結合する窒素原子と共に合して、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選ばれる同一もしくは異なるヘテロ原子の１もしくは２個を含有する非芳香族５〜８員複素環を形成；および
Ｘ１，Ｘ１’，Ｘ２およびＸ２’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、ＯＲ９、−ＣＦ３、アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルキル、ニトロ、ＮＲ９Ｒ１０、ＳＲ９およびＣ（Ｏ）ＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９、ＳＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよい］
で示される化合物、またはその医薬的に許容しうる塩もしくは溶媒化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、トポイソメラーゼ（ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ）−Ｉ活性を示しかつ腫瘍細胞の増殖を抑制するのに有用な、インドロカルバゾール化合物（ｉｎｄｏｌｏｃａｒｂａｚｏｌｅｓ）の糖誘導体に関する。
【０００２】
（背景技術）
トポイソメラーゼは、生体核酵素であって、ＤＮＡにおけるトポロジーのジレンマ、たとえば、標準的に複製、転写およびことによると他のＤＮＡプロセス中に起こる、オーバーウィンディング（ｏｖｅｒｗｉｎｄｉｎｇ）、アンダーウィンディング（ｕｎｄｅｒｗｉｎｄｉｎｇ）および連鎖を解決するように機能する。これらの酵素は、ＤＮＡを弛緩させるが、これは、他のＤＮＡストランドの通過用の一時的ゲートまたはピボットポイントとして作用する、酵素−ブリッジド（ｂｒｉｄｇｅｄ）・ストランド破断の形成による。トポイソメラーゼ−標的薬物は、このＤＮＡトポイソメラーゼの破損−再結合反応を干渉すると思われる。
【０００３】
トポイソメラーゼ−活性作用物質の存在下、“開裂性錯体”と呼ばれる頓挫反応中間体が蓄積して複製／転写を阻止し、これは結局、細胞死に導く。従って、トポイソメラーゼＩ−活性作用物質の開発は、癌処置のためクリニックで一般に用いられる多様な統制的療法に対し、新しいアプローチを付与する。
「Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ」（３４（増刊）、Ｓ４１−Ｓ４５、１９９４年）に、トポイソメラーゼＩ−活性化合物が論じられ、これらの化合物は有効な臨床的抗腫瘍剤であることが認められている。これらの臨床的候補化合物は構造上、アルカロイド・カンプトセシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）と関係がある。
【０００４】
インドロ［２，３−ａ］カルバゾール・アルカロイド化合物、たとえばレベッカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４４８７９２５および４５５２８４２）およびその水溶性の臨床的活性類縁体の、６−（２−ジエチルアミノエチル）レベッカマイシン（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４７８５０８５）は、ＤＮＡを標的にする有用な抗腫瘍剤である。さらに、フルオロインドロカルバゾール化合物がＷＯ９８／０７４３３において、トポイソメラーゼＩ抑制活性を持つ抗腫瘍性作用物質として作用することが開示されている。
【０００５】
レベッカマイシン種に関係するインドロ［２，３−ａ］カルバゾール誘導体が開示され［ＥＰ出願Ｎｏ．０５４５１９５Ｂ１および０６０２５９７Ａ２；「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」（５３、４９０−４９４、１９９３年）；「ｉｂｉｄ」（５５、１３１０−１３１５、１９９５年）］、かつクレームで抗腫瘍活性を示すことが記載されているが、これら誘導体の作用の主なメカニズムは、トポイソメラーゼＩ毒薬として作用するカンプトセシンと同じとは思われない。上記に関連する他のインドロカルバゾール化合物も開示され（ＷＯ９５／３０６８２）、かつクレームで抗腫瘍活性を示すことが記載されている。
【０００６】
Ｈｕｄｋｉｎｓらは、一連の縮合ピロロカルバゾール化合物を開示し（ＷＯ９６／１１９３３およびＵ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４７５１１０）、幾つかの化合物に対して、インビトロ生物学的活性、たとえばニューロン・コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）の抑制およびたん白キナーゼＣ（ＰＫＣ）抑制を報告している。Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４６８８４９に、有用な抗腫瘍剤としての特定フルオロレベッカマイシン類縁体、並びにサッカロスリックス・アエロコロニジーンズ（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ  ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）、好ましくはサッカロスリックス・アエロコロニジーンズＣ３８３８３−ＲＫ２（ＡＴＣＣ３９２４３）のレベッカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）−産生菌株のフルオロトリプトファン類縁体栄養補給による、上記類縁体の製造法が開示されている。
【０００７】
Ｇｌｉｃｋｓｍａｎらは、本発明の化合物とは構造が異なるインドロカルバゾール・アルカロイド化合物を開示（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４６８８７２）している。Ｋｏｊｉｒｉらは、無水糖インドロカルバゾール化合物に関係しないジサッカライド置換基を有するインドロピロロカルバゾール化合物を開示する（ＷＯ９６／０４２９３）。Ｗｅｉｎｒｅｂら（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，２１、３０９、１９８４年）およびＫｌｅｉｎｓｃｈｒｏｔｈら（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５０４３３３５）は、ブリッジするフラン成分をもつインドロピロロカルバゾール誘導体を開示し、ＭｃＣｏｍｂｉｅら（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，３、１５３７、１９９３年）は、より官能性の高いブリッジ・フランを報告している。同様に、Ｗｏｏｄらは（＋）−Ｋ２５２ａ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１７、１０４１３、１９９５年），関連した天然産生インドロカルバゾール・アルカロイドの総合成を報告し、ＰＫＣ抑制活性を証明した。
【０００８】
Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらは、彼らのスタウロスポリン（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）の最初の総合成の過程中（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１８、２８２５、１９９６年）、中間体Ｎ１２，Ｎ１３−ブリッジ・インドロピロロカルバゾールの合成を記載する。三原子ブリッジにより結合した窒素を持つインドロカルバゾール誘導体は、効力あるＰＫＣインヒビターであることが報告されている［Ｓ．Ｆ．Ｖｉｃｅらの「Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．」（４、１３３３、１９９４年）］。Ｃ１’，Ｃ５’−ブリッジまたはＣ１’，Ｃ３’−ブリッジ・グリコシドを持つ単純インドロカルバゾール誘導体の合成が、文献に報告されている［それぞれ、Ｂ．Ｍ．Ｓｔｏｌｚ、Ｊ．Ｌ．Ｗｏｏｄの「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．」（３６、８５４３、１９９５年）；Ｂ．Ｂ．Ｓｈａｎｋａｒ、Ｓ．Ｗ．ＭｃＣｏｍｂｉｅの「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．」（３５、３００５、１９９４年）］。
【０００９】
Ｐｒｕｄｈｏｍｍｅらは、レベッカマイシンから誘導され、炭水化物の２つのインドール窒素への結合を示す一連の抗腫瘍インドロカルバゾール化合物を開示し、その細胞毒性とそのトポイソメラーゼＩおよびＰＫＣ抑制活性がミリモル〜ミクロモル範囲にあることを報告した（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，６、１５９７、１９９８年）。しかして、トポイソメラーゼＩ活性の抑制に有用な、新規で効力ある細胞毒化合物の必要性がある。
【００１０】
（発明の概要）
すなわち、本発明の第１側面の最初の具体例によれば、トポイソメラーゼＩおよび腫瘍細胞の増殖の抑制に有用な、下記式（Ｉ）で示される化合物およびそれらの医薬的に許容しうる塩および溶媒化合物が提供される。
【化３】
2004524275.tif 000002
【００１１】
上記式中、Ｒは水素、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２またはＣ１−７アルキル、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
ＱはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ５ａ；
【００１２】
Ｒ５およびＲ５ａはそれぞれ独立して、水素、
【化４】
2004524275.tif 000003
の式（Ａ），（Ｂ），（Ｃ）および（Ｄ）からなる群から選ばれ、
【００１３】
但し、ＱがＮＲ５ａであれば、Ｒ５またはＲ５ａのいずれかは水素でなければならず；
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ９、Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、ＳＲ９およびＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９、ＳＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、または
Ｒ１とＲ２は共に合して、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｏまたは−ＮＲ９Ｒ１０を形成、もしくは
Ｒ３とＲ４は共に合して、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｏまたは−ＮＲ９Ｒ１０を形成；
【００１４】
Ｗは水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ９、Ｎ−ＯＨ、ＯおよびＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立して、ＯＨもしくはＨであるか、または共に合して＝Ｏを形成；
【００１５】
Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキルおよびＣ３−７シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２およびＮ（Ｃ１−３アルキル）２からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、または
Ｒ９とＲ１０は、それらが結合する窒素原子と共に合して、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選ばれる同一もしくは異なるヘテロ原子の１もしくは２個を含有する非芳香族５〜８員複素環を形成；および
【００１６】
Ｘ１，Ｘ１’，Ｘ２およびＸ２’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、ＯＲ９、−ＣＦ３、アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルキル、ニトロ、ＮＲ９Ｒ１０、ＳＲ９およびＣ（Ｏ）ＯＲ９からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＲ９、ＳＲ９およびＮＲ９Ｒ１０からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよい。
【００１７】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５ａがＨでない式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５ａが式（Ｃ）または（Ａ）である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が式（Ａ）である式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１８】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が式（Ｂ）である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が式（Ｃ）である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が式（Ｄ）である式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１９】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、ＱがＮＲ５ａおよＲ５ａがＨ；またはＱがＳである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、ＲがＨ、ＯＨまたはＮＨ２である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、ＲがＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２０】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ７およびＲ８が共に合して＝Ｏである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’およびＸ２がそれぞれＦ、およびＸ１およびＸ１’がそれぞれＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２がＦ、およびＸ２’、Ｘ１およびＸ１’がそれぞれＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２１】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’がＦ、およびＸ２、Ｘ１およびＸ１’がそれぞれＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’，Ｘ２，Ｘ１およびＸ１’がそれぞれＦである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’およびＸ２がそれぞれＨ、およびＸ１およびＸ１’がそれぞれＦである式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２２】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して、Ｈ、ＦおよびＯＲ９（ここで、Ｒ９はＨ）からなる群から選ばれる式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｗがフッ素である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が水素でないとき、Ｒ５をＮに付ける結合がβ表示にある式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２３】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５ａが水素でないとき、Ｒ５ａをＮに付ける結合がβ表示にある式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５が水素でないとき、Ｒ５をＮに付ける結合がα表示にある式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ５ａが水素でないとき、Ｒ５ａをＮに付ける結合がα表示にある式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２４】
本発明の第１側面の他の具体例は、上記第１側面の具体例の２つ以上を適当に組合せてなる式（Ｉ）の化合物を提供する。
本発明の第２側面の具体例は、哺乳動物宿主の腫瘍成長を抑制する方法を提供し、該抑制法は、本明細書で規定される本発明化合物の、腫瘍成長抑制量を上記宿主に投与することから成る。
【００２５】
本発明の第３側面の具体例は、哺乳動物宿主、特にヒト宿主の腫瘍成長を抑制する方法を提供し、該抑制法は、本明細書で規定される本発明化合物の医薬配合物（製剤）の、腫瘍成長抑制量を上記宿主に投与することから成る。
本発明の他の具体例および側面については、以下に記載の説明に従って明らかであろう。
【００２６】
発明の詳細
ここで、本発明の説明については、化学結合の法則や原理と一致させて解釈すべきである。別の具体例または側面から従属する１つの具体例または側面には、それが従属する具体例または側面とは異なる数値および条件を持つ変記号（ｖａｒｉａｂｌｅ）のみを記載するだろう。すなわち、たとえば、“ＷがＣである、本発明の第ｎ側面による式（Ｉ）の化合物”と解される具体例は、第ｎ側面に規定の数値を持つ残りの全ての変記号を含むと解釈すべきであり、さらに他の特別な指示がない限り、第ｎ側面における変記号のどれもこれもに関係する全ての条件を含むと解釈すべきである：変記号がゼロの数値を有すると規定されている場合、該変記号に付く結合は除去すべきことが理解される。たとえば、ｎ＝０およびＲ−Ｘ−Ｖｎ（ｎは０または１となりうる）の場合、記載の構造はＲ−ＸでＲ−Ｘ−でないことが理解される。
【００２７】
記号“Ｃ”の後の下付きの数字は、個々の基が含有できる炭素原子の数を規定する。たとえば、“Ｃ１−７アルキル”は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖飽和炭素鎖を意味し、たとえば、これらに制限されるものでなく、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−ヘプチルが挙げられる。語句“ハロゲン”としては、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが挙げられる。
【００２８】
なお、本発明は、他の特別な記載が明記されていない限り、可能性のある立体異性体、幾何異性体、ジアステレオマー、エナンチオマー、アノマーおよび光学異性体のいずれかおよび全てを包含することを理解すべきである。
本発明の化合物は、医薬的に許容しうる塩の形状で存在しうる。かかる塩としては、たとえば、塩酸および硫酸などの無機酸や、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、酒石酸およびマレイン酸などの有機酸との付加塩が挙げられる。
【００２９】
さらに、本発明化合物が酸性の基を含有する場合、該酸性基はたとえば、カリウム塩およびナトリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩およびカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；およびトリエチルアンモニウム塩およびアルギニン塩などの有機塩基との塩の形状で存在しうる。本発明化合物は、水和されてあるいはそうでなくてもよい。
【００３０】
本発明化合物は、錠剤、カプセル剤（これらは、それぞれ持続放出性（徐放性）もしくは時限放出性の配合を含む）、丸剤、粉剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップおよびエマルジョンといった経口投与剤形で投与することができる。また本発明化合物は、医薬分野の当業者にとって周知の投与剤形を用い、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内に投与されてもよい。
【００３１】
本発明化合物は単独投与できるが、一般には、選択投与方法や標準医薬実務に基づいて選ばれる医薬用担体と一緒に投与される。また本発明化合物は、適当な鼻腔内ビヒクルの局所使用による鼻腔内剤形で、または経皮パッチを用いる経皮ルートで投与することもできる。本発明化合物を経皮投与すると、投与生活規制を通じて投与量が連続するだろう。
【００３２】
本発明の１つの側面は、腫瘍を移植したあるいは癌形成を受けやすい哺乳動物に対する、本発明化合物またはその医薬的に許容しうる塩もしくは溶媒化合物の投与を必然的に伴なう。一般にかかる化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜ＭＴＤ（最大許容量）の用量範囲で投与される。本発明化合物の投与量並びに投与生活規制およびスケジュールについては、各ケースにおいて、信頼できる専門医師の判断を利用し、かつ受容者の年令、体重および状態、投与方法並びに癌疾患状態の種類および程度を考慮して、注意深く調整しなければならない。
【００３３】
本明細書で用いる語句“全身投与”とは、口腔舌下、バッカル、経鼻腔、経皮、直腸、筋肉内、静脈内、心室内、鞘内、および皮下経路を指称する。適正な臨床実務にしたがって、有害もしくは厄介な副作用のいずれも起こさずに、有効で有益な効きめをもたらす濃度レベルで本化合物を投与することが好ましい。
【００３４】
合成
本発明化合物の製造手順を、下記反応式Ｉ〜ＩＶに例示する。
反応式Ｉ
例１；
【化５】
2004524275.tif 000004
【００３５】
例２；
【化６】
2004524275.tif 000005
【００３６】
例３；
【化７】
2004524275.tif 000006
【００３７】
例４；
【化８】
2004524275.tif 000007
【００３８】
反応式ＩＩ
【化９】
2004524275.tif 000008
【００３９】
反応式ＩＩＩ
例１：
【化１０】
2004524275.tif 000009
例２：
【化１１】
2004524275.tif 000010
【００４０】
反応式ＩＶ
【化１２】
2004524275.tif 000011
本発明化合物およびその製造法については、以下に示す非制限的実施例によってより具体的に説明する。
【００４１】
中間体の合成
最終生成物の本発明化合物の製造に用いる、幾つかの中間体化合物、並びに他の通常の出発物質は一般に、文献公知であるか（ＷＯ９８０７４３３）、または商業上入手可能である。それにも拘らず、これら幾つかの化合物の代表的な合成法を以下に記載する。
【００４２】
上記反応式に記載の変記号は、式（Ｉ）の記載と同じ数値を有し、但し、○に等しい上記反応式のＶ、および式（Ｉ）に係るＲ７およびＲ８に等しい上記反応式のＷの場合を除く。ベンジル（Ｂｎ）保護基は、ヒドロキシル官能基を“保護する”特定の成分として例示しているが、ベンジル等の代わりに、当業者にとって周知の他の適当な保護基も使用しうる。かかる適当な保護基は、Ｇｒｅｅｎの「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨーク）に十分記載されている。
【００４３】
反応式Ｉ、ＩＩＩおよびＩＶの出発物質は、グリコシル化インドロピロロカルバゾール化合物であり、その製法はＷＯ９８０７４３３に記載されている。６’位の選択的誘導化は、式１５（Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨ）の化合物から直接達成しうるが、ここで、全ての糖ヒドロキシル基は未保護である。このような６’−ヒドロキシル基の適正な脱離可能基、たとえばメシレートまたはハライドへの化学選択的活性化は、たとえば当業者が使用するようなメタンスルホニルクロリド等などの適正な脱離可能基へのヒドロキシル基の活性化のための試薬を用い、トリエチルアミンやピリジンのような塩基の存在下で行なう。より特別な条件は、０℃におけるピリジンおよびメタンスルホニルクロリドである。
【００４４】
６’−メシレート、または３’−ヒドロキシル成分によるような他の脱離可能基の分子内求核置換は、トリエチルアミンまたはＨｕｎｉｇ塩基のような塩基によって触媒されるが、より特別にはフッ素イオン（たとえばテトラブチルアンモニウム・フルオライド）による。この反応の代表的な溶媒は、これらに限定されないが、０〜１５０℃、より特別には８５℃の温度のＤＭＳＯ、ＮＭＰ、ＴＨＦ、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンまたはＤＭＦである。求核性３’−ヒドロキシル基による６’−脱離可能基の分子内置換の生成物は、式（Ｉ）のインドロピロロカルバゾールの３’，６’−無水糖誘導体である。
【００４５】
式１５の化合物から式（Ｉ）の３’，６’−無水糖類縁体の合成の他の方法として、ミツノブ反応の典型的条件を採用するが、ここで、３’−ヒドロキシル基により分子内置換に対し６’−ヒドロキシル基を活性化するのに、トリフェニルホスフィン（ＴＰＰ）とジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）の組合せを用いる。この反応の代表的な溶媒は、これらに限定されないが、−１５〜＋８０℃の温度、より特別には室温のベンゼン、トルエン、ジオキサン、より特別にはＴＨＦまたはピリジンである。
【００４６】
また他の試薬および／またはＴＰＰとＤＩＡＤに類する組合せも使用でき、たとえばジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）とＴＰＰ、またはトリ（Ｏ）−トリルホスフィン、並びにＴＭＡＤとトリブチルホスフィンおよびひＡＤＤＰとトリメチルホスフィン、並びにこれらの組合せが挙げられる。また収率の改善やこの反応の速度促進に、４−ジメチルアミノピリジン（４−ＤＭＡＰ）やイミダゾールなどの添加成分も使用しうる。たとえば、より特別には、ＴＨＦなどの溶媒中、４−ジメチルアミノピリジン（４−ＤＭＡＰ）をＴＰＰやＤＩＡＤと組合せて使用する。
【００４７】
添加成分４−ＤＭＡＰの使用が好ましく、この変性（改質）の好ましい基質は、式２０（Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ）のグリコシル化インドロピロロカルバゾールであり、２’位のヒドロキシル成分は好ましくはベンジルエーテルとして保護される。このような基質において、６’−ヒドロキシル成分は、存在する唯一の他のヒドロキシル成分の、遊離３’−ヒドロキシル成分により分子内求核置換に対し活性化される。
【００４８】
式（Ｉ）の３’，６’−無水糖類縁体の合成の他の方法に、基質として式１６Ａまたは１６Ｂの６’−フルオロ糖類縁体を採用する。適当な条件、還流したエタノール中ヒドラジンまたは酢酸アンモニウムの条件下、６’−フッ素は３’−ヒドロキシル成分により分子内求核置換に対し脱離可能基として役立ちうるが、これにより式（Ｉ）の生成物が得られる。フッ素が脱離可能基として役立つ、これらの例は概して、当業者によって予期されないだろう。
【００４９】
イミド窒素をその遊離ＮＨ形状（その保護先駆物質から）またはそのＮ−Ｏ−ベンジル形状（同上から）に変換するのに代表的に用いられるような条件下の、３’，６’−無水糖成分の転位反応は、新しい転位を誘発するのにも役立って、式１７で示されるビシクロ［３．３．０］類縁体などのグリコシル化類縁体を生成することができる。溶媒としてエタノールが使用でき、反応温度として、これに限定されないが、溶媒の還流によって達する温度が含まれる。
【００５０】
式１８〜１９の３’，４’および２’，３’無水糖類縁体の合成は、その対応する３’，４’および２’，３’トランス−ジオール糖類縁体から進行する。式１８〜１９の化合物の脱水経由の合成法は、式（Ｉ）の３’，６’−無水糖類縁体の合成に採用する同様な条件（上記参照）を利用する。式１８および１９の化合物の合成の特別な方法は、ＴＰＰおよびＤＩＡＤ／ＴＨＦを用いるミツノブ反応であるが、式（Ｉ）の化合物の合成で上述した他の試薬組合せや溶媒も使用しうる。式１８〜１９の３’，４’−および２’，３’−無水糖類縁体の合成の特別な温度は、室温〜５０℃である。
【００５１】
無水反応の全ては、商業上入手しうる乾燥溶媒または新たに蒸留した溶媒を用い、窒素またはアルゴンの雰囲気下で行なう。融点は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点測定装置を用い、開毛管中で測定し、修正せず。カラムクロマトグラフィーはＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  シリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）を用い、溶離剤として指定の溶剤系を用いて行なう。薄層クロマトグラフィーは、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ  シリカゲル６０Ｆ２５４プレート（０．５ｍｍ）にて行なう。
【００５２】
ＨＰＬＣ純度測定は、ＳＰＤ−１０ＡＶ  ＵＶ−Ｖｉｓ検出器と、ＹＭＣ  Ｃｏｍｂｉｓｃｒｅｅｎ  ＯＤＳ−Ａ（４．６×５０ｍｍ）またはＨＰ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（４．６×７５０ｍｍ）カラムの１つを持つＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＳ；またはダイオード・アレイ検出器とＷａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）を持つＨＰ１０９０ＤＲ５を用いて行なう。赤外スペクトルは、薄手フィルムまたはＫＢｒペレットとしてＮｉｃｏｌｅｔ  Ｐｒｏｔｅｇｅ  ４６０ＦＴＩＲに記録する。
【００５３】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ−４００またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ−５００  ＮＭＲ分光計で記録し、化学シフトは内部標準として溶剤を用い、ｐｐｍ（またはδ）で表示する。カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で示し、多重線は以下の通りである：一重線（ｓ）、二重線（ｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、多重線（ｍ）、およびブロード（ｂｒ）。低分解（ｌｏｗ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）質量スペクトルは、陰イオンモードで作動するＦｉｎｎｉｇａｎ  Ｍａｔｔ  ＴＳＱ−７０００トリプル・ステージ四極子分光計（陽／陰ＥＳＩ）で測定する。
下記実施例の出発物質は、ＷＯ９８０７４３３の実施例１〜１０６に開示の方法で合成しうる。
【００５４】
実施例１：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化１３】
2004524275.tif 000012
【００５５】
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［６−Ｏ−（メチルスルホニル）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（８．０ｍｇ、０．０１３ミリモル）およびテトラブチルアンモニウムフルオライド・トリ水和物（３０ｍｇ、０．０９５ミリモル）の混合物に、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）を加える。得られる溶液を、活性化４Åシーブス粉末で処理し、Ｎ２下室温で４５分間磁気攪拌し、次いで８５℃で１８ｈ加熱する。
【００５６】
反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、水（７５ｍＬ×４）および塩水（７５ｍＬ）で洗い、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。減圧蒸発を行った後、シリカゲルにて２〜３％メタノール／塩化メチレンを用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製して、４．８ｍｇ（６９％）の純標記化合物を得る。
【００５７】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．８６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６、２．７Ｈｚ）、８．７５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．７、２．６Ｈｚ）、７．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１、４．４Ｈｚ）、７．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９、４．５Ｈｚ）、７．４８（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１、９．０、２．７Ｈｚ）、７．４４（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０、８．９、２．８Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１’Ｈ）、４．５８−４．５５（ｍ、２Ｈ、３’，６’Ｈ）、４．４５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２’Ｈ）、４．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、６”Ｈ）、４．１０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．９Ｈｚ、５’Ｈ）、４．０１−３．９９（ｄ、１Ｈ、４’Ｈ）
ＦＡＢ質量スペクトル，ｍ／ｅ５０６（Ｍ＋）
【００５８】
実施例２：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−α−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化１４】
2004524275.tif 000013
【００５９】
無水エタノール（１５０ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（６−フルオロ）−α−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−［４−（ｔ−ブチル）ベンジル］）−ジオンの攪拌溶液に、４．４５Ｍ−ＫＯＨ（５５ｍＬ）を加える。得られる赤血色溶液を、全てのエタノールが煮沸除去する加熱還流し、赤色固体がゴム状で析出する。反応液を室温まで冷却し、１Ｎ−ＨＣｌ（２５ｍＬ）で処理し、酢酸アンモニア固体（１００ｇ）を加える。
【００６０】
得られる懸濁液を１８ｈ加熱還流し、容量を約３分の２に濃縮する。得られる懸濁液を、酢酸エチルと濃ＨＣｌ間に分配する。有機層を水、重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗い、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。減圧蒸発後、シリカゲルにてアセトン／塩化メチレン勾配を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーに付して、標記化合物を得る。
【００６１】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．８６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６、２．７Ｈｚ）、８．７５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．７、２．６Ｈｚ）、７．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１、４．４Ｈｚ）、７．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９、４．５Ｈｚ）、７．４８（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１、９．０、２．７Ｈｚ）、７．４４（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０、８．９、２．８Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１’Ｈ）、４．５８−４．５５（ｍ、２Ｈ、３’，６’Ｈ）、４．４５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２’Ｈ）、４．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、６”Ｈ）、４．１０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．９Ｈｚ、５’Ｈ）、４．０１−３．９９（ｄ、１Ｈ、４’Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５０４（Ｍ−Ｈ）−
【００６２】
実施例３：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−ヒドロキシル）−ジオン
【化１５】
2004524275.tif 000014
【００６３】
メタノール中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−Ｏ−ベンジル）−ジオン（１０ｍｇ）の溶液に、酸化プラチナ（ＩＶ）を加える。得られる懸濁液をパール（Ｐａｒｒ）振とう機にて、７０ＰＳＩにて水素で１８ｈ処理する。触媒をセライト（ｃｅｌｉｔｅ）の小パッドで濾去し、溶媒を減圧除去する。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０にてメタノール溶離で精製して、７．１ｍｇの標記化合物を得る。
３００ＭＨｚ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−アセトン）：δ８．９０−８．７０（ｍ、２Ｈ）、７．９５−７．２０（ｍ、４Ｈ）、６．６２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、５．２０−４．０５（ｍ、６Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５２０（Ｍ−Ｈ）−
【００６４】
実施例４：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−アミノ）−ジオン
【化１６】
2004524275.tif 000015
【００６５】
無水エタノール（２５０ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（６−フルオロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−［４−（ｔ−ブチル）ベンジル］）−ジオン（１５０ｍｇ）の攪拌溶液に、４．４５Ｍ−ＫＯＨ（５０ｍＬ）を加える。得られる赤血色溶液を、全てのエタノールが煮沸除去するまで加熱還流し、赤色固体がゴム状で析出する。反応液を室温まで冷却し、濃ＨＣｌ（５１ｍＬ）で処理する。
【００６６】
ヒドラジン（７５ｇ）および追加のエタノール（２５０ｍＬ）を加え、反応液を５日間還流せしめる。反応液の容量を約２／３容量に濃縮し、室温まで冷却し、酢酸エチルと水間に分配する。有機層を水、重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗い、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。回転蒸発後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０にてメタノール中のクロマトグラフィーで精製して、標記化合物を得る。
【００６７】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．９０（ｄｄ、１Ｈ）、８．７９（ｄｄ、１Ｈ）、８．０５（ｄｄ、１Ｈ）、７．８１（ｄｄ、１Ｈ）、７．５３−７．４３（ｍ、２Ｈ）、６．６９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１’Ｈ）、５．０１（ｓ、ＯＨ）、５．０１−４．９３（ｄｄ、１Ｈ、４’Ｈ）、４．６０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、５’Ｈ）、４．５０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、３’Ｈ）、４．１７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、２’Ｈ）、３．９９−３．９５（ｍ、２Ｈ、６’Ｈ、６”Ｈ）
ＦＡＢ質量スペクトル，ｍ／ｅ５２０（Ｍ＋）
【００６８】
実施例５：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（２，６−ジヒドロキシ）−（４，８−ジオキサ）−ビシクロ［３．３．０］オクト−３−イル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−Ｏ−ベンジル）−ジオン
【化１７】
2004524275.tif 000016
【００６９】
無水エタノール（２８ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−［４−（ｔ−ブチル）ベンジル］）−ジオン（２２．５ｍｇ）の攪拌溶液に、４．４５Ｍ−ＫＯＨ（７ｍＬ）を加える。得られる赤血色溶液を、全てのエタノールが煮沸除去するまで加熱還流し、赤色固体がゴム状で析出する。反応液を室温まで冷却し、濃ＨＣｌ（３ｍＬ）で処理する。Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（１０ｇ）および別途エタノール（２０ｍＬ）を加え、反応液を一夜還流せしめる。
【００７０】
反応容量を約１／２容量に濃縮し、室温まで冷却し、酢酸エチルと水間に分配する。有機層を水および塩水で洗い、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。回転蒸発後、シリカゲルにて塩化メチレン／酢酸エチル勾配を用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製して、８．７ｍｇの標記化合物をオレンジ色固体で得る。
【００７１】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．６、９．５Ｈｚ、Ｈ−８）、８．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．６、９．７Ｈｚ、４Ｈ）、８．０６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．３、９．３Ｈｚ、１１Ｈ）、７．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．６、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４−７．３５（ｍ、７Ｈ）、６．７２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、５’ＯＨ）、６．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１’Ｈ）、５．６７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２’ＯＨ）、５．３２（ｓ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、４．９８（ｔ、１Ｈ、Ｊ３’，４’＝６．２Ｈｚ、Ｊ４’，５’＝６．２Ｈｚ、４’Ｈ）、４．６２（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ４’，５’＝６．２Ｈｚ、Ｊ５’，６’＝４．６Ｈｚ、Ｊ５’，ＯＨ＝４．０Ｈｚ、５’Ｈ）、４．５０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ２’，３’＝３．８Ｈｚ、Ｊ３’，４’＝６．２Ｈｚ、３’Ｈ）、４．１３（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ１’，２’＝８．０Ｈｚ、Ｊ２’，３’＝３．８Ｈｚ、Ｊ２’，ＯＨ＝５．６Ｈｚ、２’Ｈ）、３．９８（ｄ、２Ｈ、Ｊ５’，６’＝４．６Ｈｚ、Ｊ５’，６”＝０Ｈｚ、６’Ｈ、６”Ｈ）
ＦＡＢ質量スペクトル，ｍ／ｅ６１１（Ｍ＋）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ６１０（Ｍ−Ｈ）−
【００７２】
実施例６：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（２，６−ジヒドロキシ）−（４，８−ジオキサ）−ビシクロ［３．３．０］オクト−３−イル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−ヒドロキシル）−ジオン
【化１８】
2004524275.tif 000017
【００７３】
メタノール／酢酸エチル（１：１、３．５ｍＬ）中の実施例５の生成物（６．４ｍｇ）の溶液に、２０％水酸化パラジウム／Ｃと１０％パラジウム／Ｃを加える。得られる懸濁液をパール振とう機にて、７５ＰＳＩの水素で１８ｈ処理する。触媒を小パッドのセライトで濾去し、溶媒を減圧除去する。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０にてメタノール溶離で精製して、３．６ｍｇの標記化合物を得る。
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．７７（ｄｄ、１Ｈ）、８．５９（ｄｄ、１Ｈ）、７．９９（ｄｄ、１Ｈ）、７．７２（ｄｄ、１Ｈ）、７．４５−７．２５（ｍ、２Ｈ）、６．８７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．９３−４．８４（ｍ、１Ｈ）、４．５８−４．４３（ｍ、２Ｈ）、４．３４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．０８−３．８８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢ質量スペクトル，ｍ／ｅ５２１（Ｍ＋）
【００７４】
実施例７：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（２，３−アンヒドロ）−（４，６−ジフルオロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化１９】
2004524275.tif 000018
【００７５】
無水ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（４，６−ジフルオロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（２３．７ｍｇ、０．０４５ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（３６．６ｍｇ、０．１４０ミリモル）の攪拌溶液に、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（２７μＬ、０．１３７ミリモル）を加える。反応液を室温で１ｈ攪拌せしめ、次いで５０℃に３ｈ加温する。
【００７６】
別途トリフェニルホスフィン（３９ｍｇ、０．１４９ミリモル）およびジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（２９μＬ、０．１４８ミリモル）を加え、得られる赤色溶液を５０℃で一夜攪拌する。反応を水（１滴）で抑え、溶媒を減圧除去する。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０にて精製を行って、２．０ｍｇの標記化合物を得る。
【００７７】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ８．８８（ｄｄ、４Ｈ）、８．７７（ｄｄ、１Ｈ）、８．１６−８．０５（ｍ、１Ｈ）、７．８１−７．６９（ｍ、１Ｈ）、７．４３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、１’Ｈ）、５．１１（ｄｄ、２Ｈ、４’Ｈ、４”Ｈ）、４．７６（ｓ、１Ｈ、６”Ｈ）、４．６７（ｓ、１Ｈ、６’Ｈ）、４．５２−４．３６（ｍ、１Ｈ、５’Ｈ）、４．０６−３．９１（ｍ、２Ｈ、３’Ｈ、２’Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５０８（Ｍ−Ｈ）−
【００７８】
実施例８：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，４−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２０】
2004524275.tif 000019
【００７９】
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（２４０ｍｇ、０．４９５ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（２６３ｍｇ、１．００ミリモル）の攪拌溶液に、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（２００μＬ、１．０１ミリモル）を加える。
【００８０】
得られる赤色溶液を室温で２ｈ攪拌せしめた後、水（５滴）で反応を抑え、減圧下で蒸発乾固する。シリカゲルにてアセトン／ヘキサン勾配を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーに付した後、メタノール中のＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０精製を行って、４３．４ｍｇ（２３％）の標記化合物を得る。
【００８１】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１１．２２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．８５（ｄｄ、１Ｈ）、８．７６（ｄｄ、１Ｈ）、７．９７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．６５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．５８−７．３９（ｍ、２Ｈ）、６．２１（ｄ、１Ｈ、１’Ｈ）、５．８８（ｄ、１Ｈ、２’ＯＨ）、５．４０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、６’ＯＨ）、４．７１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、５’Ｈ）、４．１２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、２’Ｈ）、４．０１−３．８２（ｍ、２Ｈ、６’Ｈ、６”Ｈ）、３．７４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、４’Ｈ）、３．４４（ｄ、１Ｈ、３’Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５０４（Ｍ−Ｈ）−
【００８２】
実施例９：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（２−Ｏ−ベンジル）−（４−デオキシ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２１】
2004524275.tif 000020
【００８３】
無水酢酸／酢酸（２：１、４８ｍＬ）中の塩化亜鉛（６．５ｇ、４７．７ミリモル）の溶液を、無水酢酸／酢酸（２：１、１２０ｍＬ）中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［２，３，６−（Ｏ−ベンジル）−（４−デオキシ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−［４−（ｔ−ブチル）ベンジル］）−ジオン（５．０ｇ、５．４１ミリモル）の懸濁液に加える。反応混合物を６５℃に２２ｈ加熱し、室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈する。
【００８４】
有機層を水（２００ｍＬ×３）、重炭酸ナトリウム（２００ｍＬ×３）、水（２００ｍＬ×２）および塩水（２００ｍＬ×２）で洗い、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。減圧蒸発して粗生成物を得、ＷＯ９８０７４３３に記載の手順に従って脱ブロックを行って、１．３８ｇ（４３％）の標記化合物を得る。
【００８５】
３００ＭＨｚ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１１．７５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１１．２５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．８５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６、３．１Ｈｚ）、８．７７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．８、２．８Ｈｚ）、８．００（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６、４．４Ｈｚ）、７．７０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ８．８、４．６Ｈｚ）、７．５３−７．４３（ｍ、２Ｈ）、６．９０（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、６．７７（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．７、７．１Ｈｚ）、６．３７（ｄ、１Ｈ、９．１Ｈｚ）、６．１４（ｔ、１Ｈ）、６．０８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、５．２８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）、４．１８−３．６４（ｍ、５Ｈ）、３．２１−３．１７（ｍ、２Ｈ）、２．４２−２．２８（ｍ、１Ｈ）、２．０７−１．９８（ｍ、１Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５９６（Ｍ−Ｈ）−
【００８６】
実施例１０：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−（２−Ｏ−ベンジル）−（４−デオキシ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２２】
2004524275.tif 000021
【００８７】
無水ＴＨＦ（９５ｍＬ）中の実施例９の生成物（１．０３ｇ、１．７２ミリモル）、トリフェニルホスフィン（１．８２ｇ、６．９３ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン（５３９ｍｇ、４．４１ミリモル）の５〜１０℃溶液に、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（１．３７ｍＬ、６．９６ミリモル）を加える。得られる赤色溶液を室温で９０分間攪拌し、０℃に冷却し、水（３．５ｍＬ）で反応を抑え、溶媒を減圧除去する。
【００８８】
得られる残渣を無水エタノール（１００ｍＬ）より蒸発し、ＴＨＦと塩化メチレンの混合物に再溶解し、これを塩化メチレンに詰込んだフラッシュカラムに加える。カラムを、塩化メチレンから５％酢酸エチル／塩化メチレンの勾配で溶離して、６９３ｍｇ（６９％）の標記化合物を得る。
【００８９】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１１．２７（ｓ、１Ｈ）、８．９２−８．８４（ｍ、２Ｈ）、７．８４−７．７２（ｍ、２Ｈ）、７．５５−７．５０（ｄｄｄ、１Ｈ）、７．４５−７．３７（ｄｄｄ、１Ｈ）、６．８６（ｔ、１Ｈ）、６．６２（ｔ、２Ｈ）、６．４４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．３５Ｈｚ、１’Ｈ）、６．３４（ｄ、２Ｈ）、５．００（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、５’Ｈ）、４．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、３’Ｈ）、４．３３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．４Ｈｚ、２’−ＣＨ２Ｐｈ）、４．２１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、６’Ｈ）、４．１０−４．００（ｍ、２Ｈ、２’Ｈおよび２’−ＣＨ２Ｐｈ）、３．８１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、６”Ｈ）、３．３５−３．２５（ｍ、１Ｈ、４’Ｈ）、２．０８−１．９９（ｍ、１Ｈ、４”Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５７８（Ｍ−Ｈ）−
【００９０】
実施例１１：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ−４−デオキシ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２３】
2004524275.tif 000022
【００９１】
メタノール／ＴＨＦ（３：１、４００ｍＬ）中の実施例１０の生成物（７３３ｍｇ、１．２６ミリモル）の溶液に、３０％パラジウム／炭素（５１０ｍｇ）と２０％水酸化パラジウム／炭素（１．２５ｇ）を加える。得られる懸濁液を窒素、次いで水素でフラッシし、水素雰囲気下一夜攪拌する。反応液を小パッドのセイラトで濾過し、触媒をＴＨＦおよびメタノールで洗い、濾液を減圧蒸発する。
【００９２】
得られる残渣をシリカゲルにて蒸発し、これを１０％アセトン／塩化メチレンに詰込んだフラッシュカラムに加え、カラムを１０％アセトン／塩化メチレンから８０％アセトン／塩化メチレンの勾配で溶離する。さらにアセトン中、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０にて精製を行い、２９９ｍｇ（４９％）の標記化合物を得る。
【００９３】
５００ＭＨｚ  ＣＯＳＹ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１１．９９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１１．２６（ｓ、１Ｈ）、９．００−８．９６（ｄｄ、１Ｈ）、８．９０−８．８５（ｄｄ、１Ｈ）、７．９５−７．８２（ｍ、２Ｈ）、７．６２−７．４７（ｍ、２Ｈ）、６．３３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２０Ｈｚ、１’Ｈ）、５．７６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．１０Ｈｚ、２’ＯＨ）、４．９９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、５’Ｈ）、４．４０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．８０、３’Ｈ）、４．３６−４．３２（ｍ、１Ｈ、２’Ｈ）、４．２２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、６’Ｈ）、３．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、６”Ｈ）、３．２７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６５Ｈｚ、４’Ｈ）、２．０６−１．９９（ｍ、１Ｈ、４”Ｈ）
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ４８８（Ｍ−Ｈ）−
【００９４】
実施例１２：
２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２−［（３，４−アンヒドロ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２４】
2004524275.tif 000023
【００９５】
２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２−［β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（０．１５ｇ、０．２９ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（８３ｍｇ、０．３２ミリモル）の冷（０℃）溶液に窒素下、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（６４μＬ、０．３２ミリモル）を滴下する。混合物を室温まで徐々に加温し、１６ｈ攪拌し、酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗う。
【００９６】
乾燥および溶媒濃縮を行った後、残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルムで溶離）を行って精製し、２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２，１３−［１，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（８．７ｍｇ、１２％）を黄色固体で、また標記化合物（７５．７ｍｇ、５２％）も黄色固体（ｍ．ｐ．＞３００℃）で得る。
【００９７】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．２８（ｓ、１Ｈ）、１１．２０（ｓ、１Ｈ）、９．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．５、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、９．０４（ｄｄ、Ｊ＝７．２、５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２９−７．２１（ｍ、２Ｈ）、６．１８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．９０（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．４８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．７１−４．６９（ｍ、１Ｈ）、４．０８（ｍ、１Ｈ）、３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．８９−３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．７３（ｓ、１Ｈ）、３．４２（ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ、１Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−１）：３４５８、３３６８、２９２９、１７４７、１６９８，１６２４、１５７８、１４５２、１４０６、１３８５、１３３０、１２３２、１１７１、１１１５、１０６１、９１９、８３６、７６２
ＭＳ（−ＥＳＩ、Ｍ−Ｈ−），ｍ／ｚ５０４
【００９８】
実施例１３：
３，９−ジフルオロ−１３−（３，６−アンヒドロ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ，１３Ｈ−ベンゾ［β］チエニル［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２５】
2004524275.tif 000024
【００９９】
３，９−ジフルオロ−６−メチル−５Ｈ，１３Ｈ−ベンゾ［β］チエニル［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（２．０ｇ、５．１０ミリモル）、トリフェニルホスフィン（２．９４ｇ、１１．２１ミリモル）および６−フルオロ−２，３，４−トリベンジル−Ｄ−グルコピラノース（３．４６ｇ、７．６４ミリモル）の冷（０℃）懸濁液に窒素下、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（２．２ｍＬ、１１．２１ミリモル）を滴下する。混合物を室温まで徐々に加温し、ここで２ｈ攪拌してから、０℃に冷却し、さらに６−フルオロ−２，３，４−トリベンジル−Ｄ−グルコピラノース（１．７３ｇ、３．８２ミリモル）、トリフェニルホスフィン（１．４７ｇ、５．６１ミリモル）およびＤＩＡＤ（１．１ｍＬ、５．６１ミリモル）で処理する。
【０１００】
さらに室温で１ｈ攪拌後、混合物を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗う。乾燥および溶媒濃縮を行った後、残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン、次いで１５％、最後に酢酸エチル／テトラヒドロフラン／ヘキサン（１５：５：８０）による勾配溶離）で精製して、カップリングした生成物を黄色泡状物で得、これをそのまま用いる。
【０１０１】
基質を９５％エタノール（５０ｍＬ）に溶かし、２０％水酸化パラジウム／炭素（１．５ｇ）とシクロヘキセン（４０ｍＬ）を用い、トランスファー水素添加に付す。混合物を７ｈ還流してから、別途触媒（１．５ｇ）、シクロヘキセン（４０ｍＬ）およびエタノール（５０ｍＬ）を加える。さらに１６ｈの還流後、混合物をセライトで温濾過し、ＴＨＦおよびメタノールで洗う。濾液を減圧濃縮する。残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルムで溶離）で精製して、脱ベンジル化生成物を黄色固体で得、さらに用いる。
【０１０２】
無水エタノール（２ｍＬ）中の上記脱ベンジル化生成物の攪拌懸濁液に室温で、水酸化カリウム（５Ｍ、１０ｍＬ）を加える。混合物を室温で２ｈ攪拌してから、５０℃に加熱し、エタノールのほとんどを除去するため、空気でスパージする。０℃で１５分間冷却後、濃塩酸を、沈殿物が形成して残存するまで、少量づつ加える（ｐＨ＝１）。この懸濁液を室温で２４ｈ攪拌してから、酢酸エチルおよびテトラヒドロフランで希釈し、１Ｎ−ＨＣｌ、塩水で洗い、乾燥し、濃縮する。
【０１０３】
残渣に酢酸アンモニウム固体（１０ｇ）を加え、混合物を１２０℃で２ｈ溶融してから、室温まで冷却し、酢酸エチルおよびＴＨＦで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で、ｐＨ＝９になるまで洗う。酢酸のほとんどの反応を抑えるため、最初に炭酸ナトリウム固体を用いる。次いで有機層を分離し、塩水で洗い、乾燥し、濃縮する。
【０１０４】
残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム、次いで１５％、最後に２０％メタノール／クロロホルムによる勾配溶離）で精製して、分離できない三成分混合物を得、これをさらにＬＨ−２０クロマトグラフィー（メタノール、０．３ｍＬ／分、３６ｈ）で精製して、３，９−ジフルオロ−１３−（６−フルオロ−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ，１３Ｈ−ベンゾ［β］チエニル［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（２２６．１ｍｇ、８．２％、４ステップ）、３，９−ジフルオロ−６−メチル−１３−（６−フルオロ−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−５Ｈ，１３Ｈ−ベンゾ［β］チエニル［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（２０．１ｍｇ、０．７％、４ステップ）、および標記化合物（１０．１ｍｇ、０．４％、４ステップ）を黄色固体（ｍ．ｐ．＞３０５℃）で得る。
【０１０５】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．５０（ｂｒ  ｓ、０．７Ｈ）、９．５４（ｄ、Ｊ＝１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７５（ｄｄ、Ｊ＝９．７、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．４６（ｄｄ、Ｊ＝９．２、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１（ｄｄ、Ｊ＝８．７、５．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０−７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．６３（ｓ、１Ｈ）、４．４２−４．３９（ｍ、２Ｈ）、４．３１−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．３１−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．２０（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．１１（ｓ、１Ｈ）、−０．０８（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−１）：３３４１、３１８４、２９６１、１７５６、１６９９、１６２０、１６０４、１５７３、１４７６、１４５７、１４２４、１３２８、１２５９、１２００、１１６５、１１１５、１１０１、１０８１、１０６２、１０１９、９２０、８７８、８１０、７６２
ＭＳ（−ＥＳＩ、Ｍ−Ｈ−），ｍ／ｚ５２１，（＋ＥＳＩ、Ｍ＋Ｈ＋），ｍ／ｚ５２３
【０１０６】
実施例１４：
１２−（３，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化２６】
2004524275.tif 000025
【０１０７】
窒素下室温にて、２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２−［β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（１．０ｇ、１．９１ミリモル）を乾燥ピリジンに溶解し、火炎乾燥した４Åモレキュラーシーブス粉（０．６０ｇ）で処理する。混合物を−２０℃に１５分間冷却してから、メタンスルホニルクロリド（０．２６ｍＬ、３．３４ミリモル、１．７５当量）を加える。フラスコを密封し、減圧濃縮前に０℃で６ｈ貯蔵する。
【０１０８】
残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（テトラヒドロフラン／ジクロロメタン／メタノール＝６８：３０：２で溶離）で精製して、標記化合物並びに少量の密に間隔の（ｃｌｏｓｅｌｙ−ｓｐａｃｅｄ）他の副生物を含有する豊富な画分（２８０ｍｇ、２４％）を得、これをそのまま用いる。無水ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２−［６−Ｏ−（メチルスルホニル）−β−Ｄ−グルコピラシノル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（２００ｍｇ、０．３３ミリモル）の攪拌溶液に、フタルイミド・カリウム（０．４５ｇ、２．４３ミリモル）を一度に加えてから、混合物を１３０℃に３ｈ加熱し、周囲温度まで冷却し、一夜減圧濃縮する。
【０１０９】
次いで残渣を酢酸エチル（いくらかのテトラヒドロフランを添加）に溶かし、０．１Ｎ塩酸および塩水で洗う。乾燥および溶媒濃縮を行った後、残渣をシリカゲルにて、フラッシュクロマトグラフィー（７％メタノール／クロロホルムで溶離）で精製して、２，１０−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１２−［６−デオキシ−６−（フタルイミド）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン（４６ｍｇ、２１％）を黄色固体で、また標記化合物（２２ｍｇ、１３％、２ステップ）も黄色固体で得る。
【０１１０】
標記化合物の場合：ｍ．ｐ．＞３００℃
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．２１（ｓ、１Ｈ）、１１．１０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．７、５．９Ｈｚ、１Ｈ）、９．０５（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４７（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３１（ｄｔ、Ｊ＝９．０、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２４（ｄｔ、Ｊ＝９．２、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．３９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、５．８７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．６０（ｓ、２Ｈ）、４．４４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｍ、１Ｈ）、４．０７−４．０２（ｍ、２Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−１）：３４１４、１７４７、１７００、１６２３、１５８０、１４５２、１３８６、１３２７、１２３０、１１６７、１１１４、１０５５、１０２１、７６０
ＨＲＭＳ（−ＥＳＩ、Ｍ−Ｈ−）（Ｃ２６Ｈ１６Ｆ２Ｎ３Ｏ６として）：計算値５０５．１０８６、実測値５０４．１０２９
【０１１１】
実施例１５：
２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２−Ｏ−ベンジル−３，６−アンヒドロ−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化２７】
2004524275.tif 000026
【０１１２】
０．５ｍＬの乾燥ピリジン中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０１８ｇ、０．０２８ミリモル）の溶液に、０．１ｍＬの乾燥ピリジン中のトリフェニルホスフィン（０．０２２ｍｇ、０．０８４ミリモル）の溶液を加え、次いでＡｒ下室温にて、ジイソプロピル・アゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）（０．０１７ｍＬ、０．０８４ミリモル）を滴下する。
【０１１３】
得られる赤血色混合物をＡｒ下室温にて１６ｈ攪拌し、次いで水（０．１ｍＬ）を加えた後メタノール（０．１ｍＬ）を加えて反応を抑える。この混合物を減圧蒸発し、残渣を分取ｔｌｃ（４×２０×２０ｃｍプレート、０．５ｍｍ  ＳｉＯ２、ＣＨ２ＣＨ２／ＭｅＣＮ＝９：１）で精製して、標記化合物（０．００７ｇ、４１％）を明黄色固体で得る。
【０１１４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．８３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．０８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．１２（ｄｄ、Ｊ＝１１．０，８．６Ｈｚ、１Ｈ）、９．０２（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．７２（ｍ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、１Ｈ）、６．８３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７０（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．５９（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．２３（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｓ、１Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．３１（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．２９（ｄ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３（ｄ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．１０（ｄ、Ｊ＝１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．１０（ｄｄ、Ｊ＝１３．４、６．０Ｈｚ）
ＭＳ（ＥＳＩ−），ｍ／ｅ６１４（Ｍ−Ｈ）−
【０１１５】
実施例１６
２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（３，６−アンヒドロ−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化２８】
2004524275.tif 000027
【０１１６】
５ｍＬの新蒸留ＴＨＦ中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２−Ｏ−ベンジル−３，６−アンヒドロ−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０３４ｇ、０．０５５ミリモル）および２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．０４８ｇ）の混合物を、室温にて５日間水素添加する（バルーン圧）。得られる混合物をセライトパッドで濾過し、ケーキをＴＨＦ、次いでメタノールで洗う。濾液を蒸発し、残渣をクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０／メタノール）に付して、標記化合物（０．０１７ｇ、５９％）を黄色固体で得る。
【０１１７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１１．１５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．１７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．１９（ｄｄ、Ｊ＝１１．１、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．０９（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．８１（ｄｄ、Ｊ＝１１．６、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．２１（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．８９（ｓ、１Ｈ）、４．５７（ｍ、２Ｈ）、４．２７（ｄ、Ｊ＝９．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９（ｄ、Ｊ＝１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．０９（ｄｄ、Ｊ＝１３．１、６．０Ｈｚ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−），ｍ／ｅ５２４（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９９．０％（２７０ｎｍ）
【０１１８】
実施例１７：
２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（３，６−アンヒドロ−４−デオキシ−４，４−ジフルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化２９】
2004524275.tif 000028
【０１１９】
４ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（４−デオキシ−４，４−ジフルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０３５ｇ、０．０６０ミリモル）の溶液に、アルゴン下室温にて、トリフェニルホスフィン（０．０４８ｇ、０．１８ミリモル）およびＤＩＡＤ（０．０３５ｍＬ、０．１８ミリモル）を加える。
【０１２０】
得られる赤味がかったオレンジ色溶液を室温で１８ｈ攪拌し、次いでこれを酢酸エチルと水間に分配する。有機相を分離し、洗浄し（塩水）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発して黄色ゴム状物を得る。この残渣を分取ｔｌｃ（２０×２０ｃｍ×０．５ｍｍ  ＳｉＯ２、ＴＨＦ／ヘキサン＝１：１）で精製し、主画分を分取ｈｐｌｃで再精製して、標記化合物（０．００９ｇ、２９％）を黄色固体で得る。
【０１２１】
１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６、４００ＭＨｚ）：δ１０．６７（ｓ、１Ｈ）、９．８３（ｓ、１Ｈ）、８．８８（ｍ、１Ｈ）、８．７３（ｍ、１Ｈ）、７．５６（ｍ、２Ｈ）、６．４４（ｍ、１Ｈ）、４．９１（ｍ、２Ｈ）、４．４７（ｄ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２７（ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−），ｍ／ｅ５６０（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９１．１％（３２０ｎｍ）
【０１２２】
実施例１８：
３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［（３，６−アンヒドロ）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６Ｈ）−ジオン
【化３０】
2004524275.tif 000029
【０１２３】
５０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の３，９−ジフルオロ−１２，１３−ジヒドロ−１３−［β−Ｄ−グルコピラノシル］−５Ｈ−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７（６−Ｎ−（４−ｔ−ブチル）ベンジル）−ジオン（１．０１ｇ、１．５１ミリモル）の攪拌懸濁液に−５０℃にて、（ジエチルアミノ）硫黄トリフルオライド（１．０２ｍＬ、７．７２ミリモル）を加え、反応混合物を３．５時間攪拌し、その間に温度が＋１５℃に上昇する。混合物を−７８℃に冷却し、５ｍＬのＣＨ３ＯＨを加えて反応を抑え、１Ｎ−ＨＣｌに注ぐ。粗生成物を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧濃縮する。
【０１２４】
得られる粗生成物を１００ｍＬのエタノールに溶解し、１０ｍＬの３．８３Ｍ−水性ＫＯＨを加える。混合物をアルゴン下室温で１７時間攪拌した後、１０ｍＬの濃水性ＨＣｌを加え、さらに攪拌を３０分間続ける。これに１５０ｇのＮＨ４ＯＡｃと別途２００ｍＬのエタノールを加え、混合物を３日間加熱還流する。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注ぎ、酢酸エチルで抽出する。有機層を水および塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧濃縮する。
【０１２５】
シリカゲルにて１００％クロロホルムから４％メタノール／クロロホルムの勾配を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーに付した後、メタノール中Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０精製を行って、２２．０ｍｇの標記化合物を得る。
５００ＭＨｚ  １Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ１２．７６（ｂｓ、１Ｈ）、１１．１５（ｂｓ、１Ｈ）、８．９０（ｄｄ、Ｊ＝２．６、９．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．７５（ｄｄ、Ｊ＝２．６、９．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９５（ｍ、１Ｈ）、７．６７（ｍ、１Ｈ）、７．４４（ｍ、２Ｈ）、６．３２（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．３５（ｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｓ、１Ｈ）、４．６０（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｍ、２Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．２８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．１６（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）：３６１６、３４４４、３２４６、２９９５、１７４７、１６９８、１６１９、１５８７、１４８１、１３９５、１３２８、１２９０、１２４６、１１８９
ＥＳＩ（ＮＥＧ）質量スペクトル，ｍ／ｅ５０４（Ｍ−Ｈ−）
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，Ｍ＋Ｈ＋），ｍ／ｚ（実測値）＝５０６．１１６７６、ｍ／ｚ（計算値）＝５０６．１１６７４８
標記化合物は、上記反応系から単離した主要関連生成物の１つに相当する。
【０１２６】
生物学的活性
本発明化合物は、抗腫瘍特性を持つ有用な薬理学的作用物質である。トポイソメラーゼＩ活性特性を持つ化合物は、抗腫瘍剤として使用することができる。近年、多数の報告が文献に見かけられ、トポイソメラーゼＩ標的薬物の役割は、共有結合ＤＮＡ−トポイソメラーゼＩ複合体を安定させて、酵素−連鎖ＤＮＡ単一ストランド破断を生成することが示唆されている。
【０１２７】
薬理学的見地から、トポイソメラーゼＩを標的にする利点が存在し；第１に、増殖する細胞および静態の細胞両方における比較的高レベルのその出現は、その機能が細胞の成長速度と無関係であることを示唆し、そして第２に、トポイソメラーゼＩ活性作用物質は、ゆっくり増殖する腫瘍並びに急速に増殖する腫瘍に有効となりうる。結腸腫瘍からの細胞は、正常な粘膜細胞より高い細胞内レベルのトポイソメラーゼＩを含有することが認められており、このことは、選択的な細胞毒利点の可能性を示唆する。
【０１２８】
すなわち、本発明化合物による腫瘍細胞の増殖抑制は最初に、ヒト・トポイソメラーゼＩの有効な抑制によって証明した。また本発明の特定化合物、通常トポイソメラーゼＩアッセイで１０μＭ以下のＥＣ５０値を有する化合物について、ヒト／マウス腫瘍細胞増殖アッセイの抑制を試験した。
【０１２９】
トポイソメラーゼＩ活性（インビトロ）
トポイソメラーゼＩ活性を、下記の手順で測定する。ＤＮＡにおいて化合物−誘発の、トポイソメラーゼＩ−仲介単一ストランド破断を検定する手順は、本質的にＨｓｉａｎｇらの「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」（２６０、１４８７３−１４８７８、１９８５年）に記載されている。１００％ＤＭＳＯに１０μＭまたは１０ｍｇ／ｍｌ溶液で溶解したサンプルは、他に特別な記載がない限り、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝剤で希釈する。
【０１３０】
またマリン（ｍａｒｉｎｅ）バクテリオファージＰＭ２ＤＮＡ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）は、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝剤で０．０２μｇ／μｌ濃度に希釈する。希釈の異なる被評価化合物を、希釈ＤＮＡと混合し、該混合物を、２倍の反応緩衝剤中の精製したヒト・トポイソメラーゼＩ（Ｔｏｐｏｇｅｎ）の１０００ユニット（１ユニットの酵素活性は、１００ｎｇのスーパーコイル化ＤＮＡを３７℃で約３０分内で弛緩しうる量として規定する）のアリコートに加え、反応を開始する。
【０１３１】
化合物−ＤＮＡ−酵素混合物を、３７℃で３０分間培養してから、ドデシル硫酸ナトリウムおよびプロティナーゼＫ（Ｓｉｇｍａ）を含有する温ストップ緩衝剤で反応を停止する。これらの混合物をさらに３７℃で１０分間培養させ、この時、混合物をウォーターバスから取出し、クロロホルム／イソアミルアルコール（２４：１）混合物で抽出する。
【０１３２】
遠心分離を行ってから、水性相のアリコートを、０．５μｇ／ｍｌのエチジウムブロマイド含有のＴｒｉｓ−ボレート緩衝剤中の０．９％アガロース（ＳｅａＫｅｍ）ゲルのウェルに入れ、１５時間電気永動に付して、異なるトポロジー異性体とニックおよび破断したＤＮＡｓを分離する。水中でゲルのよごれを除いた後、ゲルをＵＶ照射にさらすことによって、エチジウムブロマイド染色ＤＮＡ反応産物を可視化する。
【０１３３】
照射したゲルの写真のネガを、濃度計でスキャンし、各サンプルの単一ストランドＤＮＡ破断形成のパーセントを得るために、ピーク下の面積を計算する。得られる用量−効果曲線のポイント間の補間によって、各化合物の中間有効濃度（ＥＣ５０）を得るが、これは、ＤＮＡにおいてトポイソメラーゼＩ−仲介単一ストランド破断を誘発する、化合物の効果の潜在力を規定する。
【０１３４】
本発明の選択化合物のトポイソメラーゼＩ活性を、下記表Ｉに示す。
表Ｉ：
【表１】
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【０１３５】
細胞に基づく細胞毒活性（インビトロ）
ネズミＰ３８８細胞系に対する増殖抑制活性を、以下の手順で測定する。
Ｓｃｕｄｉｅｒｏ  Ｄ．Ａ．、Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ  Ｒ．Ｈ．、Ｐａｕｌｌ  Ｋ．Ｄ．、Ｍｏｎｋｓ  Ａ．、Ｔｉｅｒｎｅｙ  Ｓ．、Ｎｏｆｚｉｇｅｒ  Ｔ．Ｈ．、Ｃｕｒｒｅｎｓ  Ｍ．Ｊ．、Ｓｅｎｉｆｆ  Ｄ．およびＢｏｙｄ  Ｍ．Ｒ．の文献に記載のＸＴＴ［２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−［（フェニルアミノ）カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウム・ヒドロキシド］アッセイによって、細胞毒性をＨＣＴ１１６ヒト結腸癌腫細胞で検定する。
【０１３６】
ヒトおよび他の腫瘍細胞系を用い、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」（４８、４８２７−４８３３、１９８８年）に記載の手順に従って、細胞成長および培養中の薬物感受性の可溶性テトラゾリウム／ホルマザン・アッセイの評価を行なう。細胞を９６ウェル・マイクロタイター平板にて、４０００細胞／ウェルで培養し、２４ｈ後に薬物を加え、連続して希釈する。細胞を３７℃で７２ｈ培養し、この時、メト硫酸フェナジン含有のテトラゾリウム染料，ＸＴＴを加える。
【０１３７】
生きている細胞中のデヒドロゲナーゼ酵素でＸＴＴを還元して、４５０ｎｍで光を吸収する形状とし、これを分光光度計で定量分析することができる。吸光度が増大すればするほど、生存細胞の数が増大する。結果をＩＣ５０で表示するが、これは、細胞増殖（すなわち、４５０ｎｍでの吸光度）を、未処理対照細胞のそれの５０％に抑制するのに必要な薬物濃度である。
【０１３８】
本発明の選択化合物の結果を下記表ＩＩに示す。
表ＩＩ：
【表２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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