(57)【要約】本発明は、エキシマレーザＰＲＫ、ＬＡＳＩＫ後の、角膜上皮下のもやを防止あるいは低減させるための方法を示す。この方法によれば、治療に効果的な量の１つあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータ（最も好ましいのはウロキナーゼ（ｕＰＡ）が、手術の日は約８回〜１２回、その後６日間〜１２日間は１日あたり４回〜８回、０．１〜２５００ＩＵ／ｍｌのレベルで、病んでいる目の表面に投与される。最も好ましい治療法の量は、約０．１〜１ＩＵ ｕＰＡ／ｍｌまたは１〜１０ＩＵ／ｍｌである。本発明に使用することができるプラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベータ、ストレプトキナーゼ、それらの変異体である。本発明はまた、手術後の角膜上皮下のもやを防止あるいは低減させるための１つかあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータ（最も好ましくはｕＰＡ）を含む局部的な眼病用の構成物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
角膜上皮下のもやを防止あるいは低減するために治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータを害された目の表面へ局所的に適用することからなり、前記プラスミノゲンアクチベータの適用が、手術の日に開始され、少なくとも手術後の初めの５日間は毎日適用されることを特徴とする、レーザ手術後の角膜上皮下のもやを防止あるいは低減する方法。
【請求項２】
前記レーザ手術が屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ； ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ）であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記レーザ手術がＬＡＳＩＫ（ｌａｓｅｒ ｉｎ ｓｉｔｕ ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ）であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
角膜上皮下のもやを防止あるいは低減するための治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータを害された目の表面へ局所的に適用することからなり、前記プラスミノゲンアクチベータの適用が、手術あるいは障害を受けた日に開始され、少なくとも手術あるいは傷害後の初めの５日間は毎日適用されることを特徴とする、目の手術、角膜の傷害、あるいは手術後のもやの発達に関連する目の病気の後の角膜上皮下のもやを防止あるいは低減する方法。
【請求項５】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼ、ウロキナーゼ変異体、プロウロキナーゼ、プロウロキナーゼ変異体、ストレプトキナーゼ、ストレプトキナーゼ変異体、組織プラスミノゲンアクチベータ、組織プラスミノゲンアクチベータ変異体からなるグループから選択されることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記プラスミノゲンアクチベータは、プロウロキナーゼであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記プラスミノゲンアクチベータは、組織プラスミノゲンアクチベータであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ストレプトキナーゼであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、０．１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータが、手術の日あるいは手術または傷害後の傷害が始まった直後に８回〜１２回、その後の６日〜１２日は１日につき４回〜８回、目の表面に局所的に適用されることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータが、手術の日あるいは手術または傷害後の初めの１２時間について１時間〜２時間ごとに、そしてその後６日間〜１０日間は２時間〜４時間ごと（１日あたり４回〜８回の適用）に、目の表面に局所的に適用されることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
生理学上適用できる担体の中に構成された治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータからなる、角膜上皮下のもやを防止あるいは低減するための局所的な眼病用の構成物。
【請求項１５】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼ、ウロキナーゼ変異体、プロウロキナーゼ、プロウロキナーゼ変異体、ストレプトキナーゼ、ストレプトキナーゼ変異体、組織プラスミノゲンアクチベータ、組織プラスミノゲンアクチベータ変異体からなるグループから選択されることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【請求項１６】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、０．１ＩＵ／ｍｌ〜１．０ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１４に記載の局所的な眼病用の構成物。
【請求項１７】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、１．０ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１４に記載の局所的な眼病用の構成物。
【請求項１８】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼであることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【請求項１９】
前記プラスミノゲンアクチベータは、プロウロキナーゼであることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【請求項２０】
前記プラスミノゲンアクチベータは、組織プラスミノゲンアクチベータであることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【請求項２１】
前記プラスミノゲンアクチベータは、ストレプトキナーゼであることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【請求項２２】
前記角膜上皮下のもやは、レーザ手術、目の手術あるいは角膜の傷害の結果であることを特徴とする、請求項１４に記載の局所的な眼病用の構成物。
【請求項２３】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１４に記載の局所的な眼病用の構成物。
【請求項２４】
治療上有効な量の前記プラスミノゲンアクチベータは、１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１または４のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記目の手術が、白内障の手術であることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項２６】
前記目の手術が、手術であることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項２７】
１つあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータが点眼薬の中に構成されていることを特徴とする、請求項１４に記載の構成物。
【発明の詳細な説明】
［発明の技術分野］
［関連出願の相互参照］
本出願は、仮アメリカ特許出願番号６０／２４０，２６４（出願日：２０００年１０月１３日）に対する優先権を主張するものである。
【０００１】
本発明は、特にＰＲＫ（ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ、屈折矯正角膜切除術）、ＬＡＳＩＫ（ｌａｓｅｒ ｉｎ ｓｉｔｕ ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ）などのレーザ視力矯正手術後、およびその他の角膜障害後の、角膜上皮下（ｃｏｒｎｅａｌ ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ）のもや（ｈａｚｅ）を防止あるいは低減するために用いられる調剤方法および生成物に関するものである。
【０００２】
［関連技術の説明］
レーザ屈折手術は、完全に健康な目に対してますます多く実施されており、有害な手術結果は病気の目の治療よりも受け入れられない。角膜の治療の異常によるレーザ屈折手術に伴う併発症は、中心視覚のもやを含む。
角膜は、目の屈折力における３分の２の役割を負っており、外科的手術の志願者はその屈折力の矯正を目当てとする。ＡｒＦエキシマレーザによって作られた傷の性質は、このようなレーザを上皮層を除去した後の角膜を直接に光学的に切除する（ｐｈｏｔｏａｂｌａｔｅ）ために使うという概念を提案した。その効果は、角膜表面の輪郭を再度描き、新しい前部の曲率半径を定義し、すなわちＰＲＫと呼ばれる技術であり、それによって角膜の光学的能力（ｏｐｔｉｃａｌ ｐｏｗｅｒ）を改める。その手術は、合理的に安全で、効果的で、予測可能な技術であり、穏やかな近視に矯正するための技術である。ＰＲＫや他の全てのレーザ手術の最も頻繁に報告されている併発症は、眩輝（ｇｌａｒｅ）や光輪（ｈａｌｏｅｓ）、夜視力（ｎｉｇｈｔ ｖｉｓｉｏｎ）の困難さや、対比感覚（ｃｏｎｔｒａｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の減少、眼内圧（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）の一時的な増加、軽い上皮下のもや、近視の逆行（ｍｙｏｐｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を含む。
［Ａｚａｒ ＤＴ，Ｓｔｅｉｎｅｒｔ ＲＦ，Ｓｔａｒｋ ＷＪ，ｅｄｓ． Ｅｘｃｉｍｅｒ Ｌａｓｅｒ Ｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｋｅｒａｔｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ光学療法の角膜切除術）．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；１９９７，１５７−１７３．中のＣｈａｎ ＴＫ，Ａｓｈｒａｆ ＭＦ，ＡｚａｒＤＴ． Ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（ＰＲＫ） ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）の成果および併発症）．
：Ｈａｄｄｅｎ ＯＢ，Ｒｉｎｇ ＣＰ，Ｍｏｒｒｉｓ ＡＴ，Ｅｌｄｅｒ ＭＪ．Ｖｉｓｕａｌ，ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ，ａｎｄ ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｔｅｃｔｏｍｙ ｆｏｒ ｍｙｏｐｉａ ｏｆ ６ ｔｏ １０ ｄｉｏｐｔｅｒｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｎｉｄｅｋ ｌａｓｅｒ（ニデックレーザを使用する６〜１０ジオプトリの近視に対する屈折矯正角膜切除術後の視覚的、屈折的および自覚的な結果）．Ｊ Ｃａｔａｔｒａｃｔ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｎｇ １９９８；２５：９３６−９４２］
レーザ屈折手術は、近視や他の屈折誤差（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒｓ）を矯正するために、エキシマレーザを使って目の角膜上で行われる。ＰＲＫでは、角膜上皮全体が取り除かれ、エキシマレーザがボーマン層（Ｂｏｗｍａｎ ｌａｙｅｒ）と前部の基質層（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｔｒｏｍａ）に適用される。おおよそ１０μｍの切除深さが、１ジオプトリの近視を矯正する。角膜を造り直す結果は、その視力を改める。あるいは、ＬＡＳＩＫでは、角膜中央の表面から薄いフラップ（ｆｌａｐ）を作りだすための吸引リング（ｓｕｃｔｉｏｎ ｒｉｎｇ）と微小角膜切開刀（ｍｉｃｒｏｋｅｒａｔｏｍｅ）を使う。基質の下の層（ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｓｔｒｏｍａｌ ｂｅｄ）は、エキシマレーザで治療され、フラップ（ｆｌａｐ）が再び位置決めされる。ＰＲＫおよびＬＡＳＩＫの大多数の場合、屈折の結果は意図した屈折の±０．５ジオプトリ以内である。普通は手術後２日〜３日以内で人間の角膜の再上皮化（ｒｅ−ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）が生じる。レーザ手術後の併発症は、傷を治す過程でのでこぼこのために、過度の近視の逆行と、角膜の透明度の妨害（もや、くもり、瘢痕）とを含む。ＬＡＳＩＫではフラップ（ｆｌａｐ）に関連する併発症も起こりうる。長期間における効力は、一般にはその２つの手段の間で同様である。レーザ屈折手術は、完全に健康な目に対して実施されるため、選択的であり、美容外科と似ている。健康な目における併発症は、病気の目にも増して受け入れられない。レーザ視力矯正手術の数は指数的に増加しつづけているため、処置の結果として幾らかの患者に現れる上皮下のもや、あるいはくもりなどの併発症を減らすさらに大きな必要性がある。
【０００３】
レーザ矯正手術後の角膜上皮下のもや、あるいは曇りは、前部の基質層板（ｓｔｒｏｍａｌ ｌａｍｅｌｌａｅ）組織が分裂させられた結果として生じる。角膜のもやは、手術後数週間〜数箇月まで明瞭ではない。その継続期間は、数週間〜数箇月にもなりうるし、いくつかの出来事が１年以上も長く続いて起こることもある。その激しさも軽いものから強いものまで有りうる。もやの有病率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）に関する報告には広い変動性があるが、今までのところは、手術後の角膜のもやを治療し、低減させるかあるいは防止するための有効な治療法は見つけられていない。
【０００４】
薬理学的に安全で、レーザ手術後および他の角膜障害の角膜のもやを防止あるいは低減することができる効果的な薬の大きな必要性がある。本発明は、そのような薬を開示し、そのような方法を提供するものである。
【０００５】
［発明の要約］
本発明の目的は、治療に有効な量の１つかあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータを、レーザ手術後に影響された目の表面に適用することにより、レーザ手術後の角膜上皮下のもやの防止あるいは軽減するための方法を提供することである。本発明の方法は、特にＰＲＫ（ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ、屈折矯正角膜切除術）およびＬＡＳＩＫ（ｌａｓｅｒ ｉｎ ｓｉｔｕ ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ）後のもやを防止するために考案された。しかしながら、この方法は、目の手術の間に角膜の光学的切除（ｐｈｏｔｏａｂｌａｔｉｏｎ）を含む、もやを引き起こすことが見込まれる全ての目の障害におけるもやを防止あるいは低減させる。本発明の方法に使用するためのプラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼ（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ；ｕＰＡ）、プロウロキナーゼ（ｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ）、組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）、およびそれらの変異体（ｍｕｔａｎｔｓ）である。最も好ましい具体例では、ウロキナーゼが単独で用いられる。
【０００６】
最も好ましい具体例において、治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータが、レーザ手術、その他の目の手術、もやの形成に関する目の障害や病気の直後から１２日間まで１日あたり数回、生理学的に目に対して受け入れることができる担体で、目の表面に適用される。１つの具体例として、治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータが、手術の当日あるいは傷害が始まった日に、手術または傷害後すぐに８回〜１２回、そして、次の６日間〜１２日間には１日につき４回〜８回、影響を受けた目の表面に局部的に適用される。最も好ましい具体例では、プラスミノゲンアクチベータ（最も好ましくはウロキナーゼ）が、手術あるいは傷害の直後から１日目がスタートし、１日につき約１２回（例えば、不眠の間１時間毎に）適用される。そして、手術後２日目〜７日目は、１日につき５回（２時間毎に）適用される。
【０００７】
本発明に用いるための、治療に有効なプラスミノゲンアクチベータの量は、約０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌであり、最も好ましくは０．１ＩＵ／ｍｌ〜１ＩＵ／ｍｌ、他の具体例においては１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌと１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌとが含まれる。
【０００８】
また、本発明は、レーザ手術後および他の眼科手術後の、あるいは目の傷害に起因する、角膜上皮下のもやを防止あるいは低減するために目に使われることに適し、生理学上適用できる担体を明確にされた、１つあるいはそれ以上の治療に有効な量のプラスミノゲンアクチベータの入っている局所的な眼病用の構成物を示す。本発明の構成物に使われるプラスミノゲンアクチベータは、好ましくはウロキナーゼであるが、プロウロキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベータ、ストレプトキナーゼ、およびそれらの変異体を含む。上記構成物における、治療に有効なプラスミノゲンアクチベータの量は、約０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌであり、最も好ましくは０．１ＩＵ／ｍｌ〜１ＩＵ／ｍｌ、他の好ましい具体例においては１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌと１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌとが含まれる。
【０００９】
［詳細な説明］
１．定義
癒着（ａｄｈｅｓｉｏｎｓ）は、ここでは、漿膜の表面に投げ出された繊維性の帯（ａ ｆｉｂｒｏｕｓ ｂａｎｄ）、滲出液または組織が、その箇所であるいは傷の反対の表面で結合する、つながる、あるいは付着することを意味する。角膜の癒着は目におけるもやとは異なる。
【００１０】
もや（ｈａｚｅ）は、ここでは、角膜上皮下のもやを意味する。そしてそれは、角膜の透明度を妨害し、視覚をかすませ、あるいは曇らせる。もやは、活性化された角膜実質細胞および害された細胞外基質によって分泌された非組織的なコラーゲン繊維の存在によって引き起こされる。もやが出現する時には、手術後数週間から数ヶ月、ふつうは初めの１ヶ月、強度な場合には３ヶ月〜６ヶ月で現れ、解消するまでに１年は存続しうる。
【００１１】
プラスミノゲンアクチベータは、ここでは、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベータ、ストレプトキナーゼ、およびこれらの全ての酵素の変異体である。
ウロキナーゼは、元々は人間を含む哺乳類や他の脊椎動物の尿の中で見つけられた酵素を意味し、ここでは、人間の腎臓の実質細胞によって作られた、プラスミノゲンアクチベータとしての機能を有するものである。ウロキナーゼは、治療において血栓溶解剤（線溶薬）として用いられる。ｕＰＡの商業生産物は、尿の調剤品の中で有力な高分子量（分子量（ＭＷ）＝５０，０００〜５４，０００）の形態と、長期期間の細胞培養から遊離させて形成された低分子量（ＭＷ＝３１，３００〜３３，０００）の形態とを含む。ｕＰＡは、シーエーエス登録（ＣＡＳ ｒｅｇｉｓｔｒｙ）＃９０３９−５３−６、およびメルクインデックス（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ）１００２４、およびエイナックス（ＥＩＮＡＣＳ）＃２３２−９１７−９と同一である。ｕＰＡは、免疫理論上、ｔＰＡとは区別される。
【００１２】
ここで使われる組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）は、黒色腫細胞の中で独自に発見された、広い種類の組織からの血管の内皮細胞の産物であるプラスミノゲンアクチベータを意味する。
【００１３】
ここで使われる国際単位（ＩＵ）は、色原体のペプチド基質Ｄ−ｖａｌｙｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｙｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｓ−２５５１）を用いたｕＰＡの製剤に関する第１回国際評価（イギリス・ロンドンの国立生物学制御研究所、コード６６／４６）（ｔｈｅ １ｓｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｕＰＡ（６６／４６，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）で標準化されたプラスミノゲンアクチベータ活動係数を意味する。
【００１４】
２．説明
本発明は、手術直後から、手術後の初めの１２日までの間、望ましくは点眼により、１つかあるいはそれ以上の治療上有効なプラスミノゲンアクチベータ（最も好ましくはウロキナーゼ）を角膜へ供給することによって、レーザ眼科手術（特に、ＰＲＫおよびＬＡＳＩＫ）後の角膜上皮下のもやを低減あるいは防止するための方法を提供するものである。７日間の治療が好適である。治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータは、約０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌである。最も好ましくは０．１ＩＵ／ｍｌ〜１ＩＵ／ｍｌであり、別の好ましい具体例では１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌと１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌを含んでいる。本発明はまた、レーザ手術および他の目の手術、あるいは目の傷害に起因する角膜上皮下のもやを防止あるいは低減するための、０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌの範囲の（最も好ましくは０．１ＩＵ／ｍｌ〜１ＩＵ／ｍｌであり、他の好ましい具体例は１ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌと１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌを含む）、治療上有効な量のプラスミノゲンアクチベータを含み、生理学上適用できる目に使うことに適した担体で構成された、局所的な眼病用の構成物を示す。本発明の方法と構成物で使うことができるプラスミノゲンアクチベータは、ウロキナーゼ、ウロキナーゼ変異体、プロウロキナーゼおよびプロウロキナーゼ変異体、組織プラスミノゲンアクチベータ、組織プラスミノゲンアクチベータ変異体、ストレプトキナーゼおよびストレプトキナーゼ変異体を含む。
【００１５】
エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）は、近視、遠視、乱視の矯正に用いられる。エキシマレーザは、分子結合を壊すために十分な光子エネルギーを与えることによって、光学的な切除による分解によって組織を取り除く。前部の表面を横切る組織の選択的な切除の結果、前部の角膜の曲率が変化する。手術前の屈折の誤差によって多少の変動はあるが、大多数の場合、屈折の結果は意図した屈折の±０．５ジオプトリ以内である。外科手術の結果は、傷の治癒における個体差および薬学的な干渉によって影響される。
【００１６】
ＰＲＫ併発症は、過度の近視の逆行、もや、そして局所的または拡散的に密集した傷跡を含む。
［Ｌｏｈｍａｌｍ ＣＰ， Ｇａｒｔｒｙ ＤＳ， Ｍｕｉｒ ＭＫ， Ｔｉｍｂｅｒｌａｋｅ ＧＴ， Ｆｉｔｚｋｅ ＦＷ， Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｊ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｈａｚｅ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｓｕｒｇｅｒｙ： ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（エキシマレーザ屈折手術後の角膜のもや：客観的な測定および機能の係り合い）．Ｅｕｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９１；１：１７３−１８０、Ｌｏｈｍａｎｎ ＣＰ， Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｊ．Ｐｌａｓｍｉｎ− ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術後のプラスミンアクチベータ阻害剤およびプラスミノゲンアクチベータ阻害剤：手術後の近視の逆行およびもやの予防における新しい概念）： ｎｅｗ ｃｏｎｃｅｐｔ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｍｙｏｐｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｈａｚｅ． Ｒｅｆｒａｃｔ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｓｕｒｇ．１９９３；９：３００−３０２．］
組織学的に、もやは、活性化された角膜実質細胞（ｋｅｒａｔｏｃｙｔｅｓ）および害された細胞外基質によって分泌された非組織的なコラーゲン線維の存在によって引き起こされる。もやが出現する時には、もやはＰＲＫ手術後数週間、ふつうは初めの１ヶ月、強度な場合には３ヶ月〜６ヶ月現れ、解消するまでに１年は存続しうる。ほとんどの場合、もやは６ヶ月後には結局なくなる。手術後、最も長い存続期間は、１２ヶ月以上である。レーザ手術後の人間の角膜の完全な再上皮化（ｒｅ−ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、ふつうは手術後２日〜４日で完成される。しかしながら、正常な上皮の厚さは、手術後６ヶ月までは観察されない。（例えば、Ｌｏｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．１９９１参照）もやの危険因子は、より高いレベルの近視の矯正、手術後のステロイド薬物治療の拒絶、ステロイドに引き起こされた眼内圧反応、コラーゲン血管病（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）およびその他の自己免疫疾患を含むと示唆されている。［Ａｚａｒ ＤＴ，Ｓｔｅｉｎｅｒｔ ＲＦ，Ｓｔａｒｋ ＷＪ，ｅｄｓ． Ｅｘｃｉｍｅｒ Ｌａｓｅｒ Ｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｋｅｒａｔｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ光学療法の角膜切除術）．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；１９９７，１５７−１７３．中のＣｈａｎ ＴＫ，Ａｓｈｒａｆ ＭＦ，ＡｚａｒＤＴ． Ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（ＰＲＫ） ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）の成果および併発症）．：Ｈａｄｄｅｎ ＯＢ，Ｒｉｎｇ ＣＰ，Ｍｏｒｒｉｓ ＡＴ，Ｅｌｄｅｒ ＭＪ．Ｖｉｓｕａｌ，ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ，ａｎｄ ｓｕｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｔｅｃｔｏｍｙ ｆｏｒ ｍｙｏｐｉａ ｏｆ ６ ｔｏ １０ ｄｉｏｐｔｅｒｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｎｉｄｅｋ ｌａｓｅｒ（ニデックレーザを使用する６〜１０ジオプトリの近視に対する屈折矯正角膜切除術後の視覚的、屈折的および自覚的な結果）．Ｊ Ｃａｔａｔｒａｃｔ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｎｇ １９９８；２５：９３６−９４２；Ａｚａｒ ＤＴ， ｅｄ．Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ（屈折手術）．Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ；Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ； １９９７：４１−６１．中の、Ａｚａｒ ＤＴ， Ｈａｈｎ ＴＷ， Ｋｈｏｕｒｙ， ＪＭ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｌａｓｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ（レーザ手術後の角膜の傷の治療）．：Ｃａｒｏｎｅｓ Ｆ，Ｆｉｏｒｅ Ｔ，Ｂｒａｎｃａｔｏ Ｒ．Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｖｓ． ａｌｃｏｈｏｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｒｅｍｏｖａｌ ｄｕｒｉｎｇ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（屈折矯正角膜切除術の間のアルコールに対する機械的な上皮の除去）．Ｊ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｒｇ １９９９；１５：５５６−５６２； ａｎｄ Ｓｉｇａｎｏｓ ＤＳ， Ｋａｔｓａｎｅｖａｋｉ ＶＪ， Ｐａｌｌｉｋａｒｉｓ ＩＧ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｈａｚｅ ａｎｄ ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ １ ｍｏｎｔｈ ａｆｔｅｒ ��ｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ ｆｏｒ ｍｙｏｐｉａ（近視に対する屈折矯正角膜切除術の１ヵ月後の上皮下のもやと屈折力の逆行との相関関係）．Ｊ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｒｇ １９９９；１５：３３８−３４２．］
文献によれば、ＬＡＳＩＫでは、約８．７％の人にさまざまな程度の手術後のもやが発生することが示されている。［Ｆａｒａｈ ＳＧ， Ａｚａｒ ＤＴ， Ｇｕｒｄａｌ Ｃ， Ｗｏｎｇ Ｊ． Ｌａｓｅｒ ｉｎ ｓｉｔｕ ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ：ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ａ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ（ＬＡＳＩＫ：発展する技術の文献調査）．Ｊ Ｃａｔａｒａｃｔ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｒｇ １９９８；２４：９８９−１ ００６．］ＰＲＫについては、８％の発生頻度で観察されている。［Ｃｓｕｔａｋ Ａ． Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ， Ｂｅｋｅｓｉ Ｌ， Ｈａｓｓａｎ Ｚ． Ｂｅｒｔａ Ａ． Ｓｉｌｖｅｒ ＤＭ． Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術後の涙中のプラスミノゲンアクチベータ活動係数）．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ２０００，４１：３ ７４３−３７４７．］もやの形成の頻度や激しさを低減することは、たとえそれが手術の事例の一部に過ぎないとしても、臨床上重要である。
【００１７】
傷の治療は、２つの主なシステム、すなわち活性剤および阻害剤によって制御されるシステムによって調節される。第１のシステムは、プラスミノゲンアクチベータ−プラスミンシステムであり、害を受けた細胞外基質の障害の抑制および除去を必要とする。第１のシステムには、ウロキナーゼおよび組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）の両方が含まれる。［ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ ＰＪ．Ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｕｒｇｅｒｙ： ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ｏｌｄ ｅｎｅｍｉｅｓ（エキシマレーザ角膜手術：新しい戦術および古い大敵）．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｎｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． １９９５；３６：４−８：Ｇａｓｔｅｒ ＲＮ，Ｂｉｎｄｅｒ ＰＳ，Ｃｏａｌｗｅｌｌ Ｋ，Ｂｅｒｎｓ Ｍ，ＭｃＣｏｒｄ ＲＣ，Ｂｕｒｓｔｅｉｎ ＮＬ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｓｕｒｆａｃｅ ａｂｌａｔｉｏｎ ｂｙ １９３ｍｍ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ（うさぎにおける１９３ｍｍエキシマレーザによる角膜表面の除去および傷の治癒）．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． １９８９；３０：９０−９８．］第２のシステムは、活性化された角膜実質細胞のシステムであり、新しいコラーゲンとグリコサミノグリカンのコラーゲン組織とを合成することによる損傷したコラーゲンの置き換えを必要とする。この工程は、再上皮化に関して非常に重要である。しかし、角膜実質細胞の合成活動の活性化は傷跡に帰着しうる。もし、増大するあるいは長引く活動でプラスミノゲンアクチベータが放出されるならば、頑固な上皮の欠陥を伴う潰瘍のメカニズムが起こされる。
［Ｂｅｒｍａｎ Ｍ，Ｌｅａｌｙ Ｒ，Ｇａｇｅ Ｊ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｌｒ−ｐｌａｓｍｉｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｕｌｃｅｒａｔｉｏｎ（角膜の潰瘍化におけるプラスミノゲンアクチベータ−プラスミンシステムの役割を立証する証拠）．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ． １９８０；１９：１２０４−１２２１：Ｂｅｒｍａｎ Ｍ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ． Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ（コラーゲンのレギュレーション、病気治療の考察）．Ｔｒａｎｓ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｓｏｃ ＵＫ． １９７８；９８：３９７−４０５：Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ，Ｂｅｒｔａ Ａ，Ｐｕｎｙｉｃｚｋｉ Ｍ．Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（前部層に炎症を持った患者および健康な人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータ活動係数とプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数）．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ． １９８９；１８３：３２３−３３１．］
ウロキナーゼ型のプラスミノゲンアクチベータ（ｕＰＡ）は、涙液の通常の成分として見つけられるセリンプロテアーゼであり、その発生源は結膜および角膜の上皮細胞であり、その濃度は角膜の生物化学的変換によって影響される。［Ｂａｒｌａｔｉ Ｓ，Ｍａｒｃｈｉｎａ Ｅ，Ｑｕａｒａｎｔａ ＣＡ，ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ， ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ（角膜の損傷および修復の目印としての涙中におけるフィブロネクチン、プラスミノゲンアクチベータおよびプラスミノゲンの分析）．Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ １９９０；５１：１−９．］組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）もまた、涙液の通常の成分であり、結膜細胞と、結膜の血管と、涙腺とで作られる。［Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ，Ｂｅｒｔａ Ａ，Ｐｕｎｙｉｃｚｋｉ Ｍ．Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｌａｓｉｎｉｎｏｇｅｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（前部層に炎症を持った患者および健康な人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータ活動係数とプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数）．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ． １９８９；１８３：３２３−３３１：Ｈａｙａｓｈｉ Ｋ，Ｓｕｅｉｓｈｉ Ｋ．Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｅａｒｓ（繊維素溶解活動係数および人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータの種類）．Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ １９８８；４６：１３１−１３７．］正常な角膜上皮細胞は、プラスミノゲンアクチベータを分泌しないが、角膜上皮に損傷があると、それが原因となって角膜実質細胞にｕＰＡを分泌する。ｕＰＡは、すでに基質に存在するプラスミノゲンをプラスミンに変える。変化におけるプラスミンは、：
（ａ）繊維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｂ ｃｅｌｌｓ）にフィードバックし、それらにプラスミノゲンアクチベータをより多く分泌させ、
（ｂ）潜在しているプロコラゲナーゼ（ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）をコラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）に活性化し、コラーゲン分子の低下を生じさせ、
（ｃ）細胞変化および治癒を促進する細胞外基質中のラミニン（ｌａｍｉｎｉｎ）およびフィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）を低下させる。
【００１８】
プラスミンは補体系（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ）から多形核（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ）の好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｓ）に対する走化性因子（ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ）を生成し、血管作用性のキニン（ｋｉｎｉｎｓ）の形成を引き起こし、その結果、角膜基質の中に抗プロテアーゼ血清（ａｎｔｉｐｒｏｔｅａｓｅ ｓｅｒｕｍ）の増加された参入を生じるかもしれないということが推測されてきた。
【００１９】
角膜に潰瘍ができている上皮、角膜実質細胞および多形核の好中球は、ｕＰＡを分泌する能力がある。潰瘍ができている角膜は、特に、目に対する穴型（ｐｕｎｃｔｕｒｅ−ｔｙｐｅ）やこすり型（ｓｃｒａｒｅ−ｔｙｐｅ）などの傷によって引き起こされる。それらはまた、ひどい細菌への感染の結果としても起こる。したがって、角膜のもやは潰瘍のできた目と混同されるべきではない。
【００２０】
ウロキナーゼは１９５０年代のはじめに人間の尿の中で発見され、ウロキナーゼあるいはウリナリープラスミノゲンアクチベータ（ｕｒｎａｒｙ Ｐｇ（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ） ａｃｔｉｖａｔｏｕ（ｕＰＡ））などと名づけられた。分子量の大きい形態のｕＰＡと低い形態のｕＰＡとが、どちらも商業的に入手できる。ウロキナーゼは、アボットラボラトリーズ社（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．）およびスターリンウィンスロープ社（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ Ｗｉｎｔｈｒｏｐ， Ｉｎｃ．）を含む、多くの供給業者や製造業者から、アボキナーゼ（ＡＢＢＯＫＩＮＡＳＥＴＭ （粉末、凍結乾燥された２５０，０００ＩＵ／ｖｉａｌｗ／２５ｍｇのマンニトール（ｍａｎｎｉｔｏｌ），２５０ｍｇの人間の蛋白質，５０ｍｇの塩化ナトリウム，瓶内で不定量の防腐剤） ）、ブレオキナーゼ（ＢＲＥＯＫＩＮＡＳＥＴＭ）、ウィンキナーゼ（ＷＩＮ−ＫｌＮＡＳＥＴＭ）、ウィン２２００５（ＷｌＮ−２２００５ＴＭ ）、アクトソルブ（ＡＣＴＯＳＯＬＶＴＭ）、ペルソルブ（ＰＥＲＳＯＬＶＴＭ）、プロチン（ＰＵＲＯＣＨＩＮＴＭ）、ウキダン（ＵＫＩＤＡＮＴＭ）、ウロナーゼ（ＵＲＯＮＡＳＥＴＭ）の商標名のものとして商業的に入手できる。尿製剤（ｕｒｉｎａｒｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）中のｕＰＡの有力な形態は分子量（ＭＷ）５０，０００であり、切り詰めた形態（分子量約３３，０００）は長期間培養された細胞から遊離させられる。肺と腎臓は、通常のｕＰＡの最も豊富な源泉である。分子量の低いｕＰＡ（分子量３３，０００）は、肺塞栓症、鋭敏な心筋梗塞、その他の血栓症の治療の中で臨床的に使われる。ｐｒｏＵＫ（プロウロキナーゼ）として知られるｕＰＡのチモーゲン（ｚｙｍｏｇｅｎ）は、組み換えたんぱく質（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）として利用することができ、血栓溶解の活性（ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を持つことが示されている。
【００２１】
免疫理論上、ｕＰＡは黒色腫細胞の中で独自に発見されたｔＰＡとは区別され、それ（ｔＰＡ）は６４，０００〜７０，０００の分子量を持っている。ｔＰＡは、広い種類の組織から得られる血管内皮細胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｌｉａｌ ｃｅｌｌ）の産物である。ｔＰＡの活動の様式は、凝血の表面と結合することである。ｔＰＡの親和力をプラスミノゲンに対して１０００倍近くまで増進させるフィブロネクチンの存在により、プラスミノゲンはｔＰＡと結合する。ｔＰＡによるプラスミンに対するプラスミノゲンの活性化は、凝血の形成および、さらに部分的な凝血の分解によって強められる。ｔＰＡは、抗血栓剤（ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）として治療に用いられる。
【００２２】
連鎖球菌フィブリノリシン（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｎ）とも名づけられているストレプトキナーゼ（ＳＫ；Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）は、別のプラスミノゲンアクチベータである。ＳＫは特殊な種類、すなわち単量体のたんぱく質（ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）であり、分子量は４７，０００である。ＳＫはそれ自身によって酵素の働きを持っていない。しかし、人間のプラスミノゲンと１：１で合成することにより、ＳＫは２つのプラスミン分子の第２のＰｇの分子を活性化するための活性領域をＰｇ部分に生み出す。ＳＫに合成されるプロスミノゲンの触媒反応の間、ＳＫは蛋白質分解の低下を受けて小さくなる（ＭＷ＝３６，０００）が、まだ活性な断片である。
【００２３】
いくつかの公表された研究は、プラスミノゲンアクチベータのレベルを、さまざまな形態の傷治療に関連付けてきた。［ＥＰ−Ａ−０ ２２７ ４００］は、手術後の主要な併発症である手術後の癒着形成を阻害する組織プラスミノゲンアクチベータを特徴的に扱っている。ｔＰＡを使うことは傷の治療自体とは関係しないことを明言している。癒着形成は体内（主として空洞内）で起こる過程であり、外傷自体の治療とは関係しない。［ＥＰ ０ ９４３ ３３２ Ａ１；癒着の治療と防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｏｎｓ）］は、プラスミノゲンアクチベータの合成あるいは分泌を増加させることが、癒着を防止することを明らかにした。
【００２４】
［ＥＰ−Ａ−０ ２６１ ５９９］は、心臓病発作患者の治療に推薦される、ｔＰＡを含む薬剤の局所適用のための構成物のいくつかのグループを示している。
【００２５】
ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プラスミノゲンアクチベータ（ｕＰＡ）、組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）などの血栓溶解剤の血管内投与を用いる外傷の薬学的治療法が報告されている。［Ｃｈｅｓｔｅｒ Ｊ，Ｄａｒｍａｎｄｙ Ｊ．Ａ．Ｉｎ： Ｌｅｇ ｕｌｃｅｒｓ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｕｅｎｔ（足の潰瘍の診断および治療）．Ｗｅｓｔｅｒｈｏｆ Ｗ，ｅｄ．Ａｍｓｔｅｒｄａｍ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ １９９３，ｐｐ．３１３−３２４］傷の治療における組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）の局所的使用は、「傷治癒を改善するためのプラスミノゲンアクチベータを含む製剤の使用」と題された２０００年３月７日のベルヘーゲン（Ｖｅｒｈｅｉｇｅｎ）の米国特許出願６，０３３，６６４および関連特許出願（米国）５，９２５，３５０の中で試験された。上記ベルヘーゲン（Ｖｅｒｈｅｉｇｅｎ）の特許の例は、もっぱら、ｔＰＡによる足の潰瘍（ｌｅｇ ｕｌｃｅｒｓ）の治療に限定されている。プラスミノゲンアクチベータの目に対する適用は、試験も言及もされておらず、組織プラスミノゲンアクチベータ（ｔＰＡ）のみが用いられていた。ベルヘーゲンは、ウロキナーゼを含むプラスミノゲンアクチベータの局所適用は、”持続性の、あるいは治療に対する抵抗力のある足の潰瘍、床ずれ、やけど、そして、外傷、微生物の感染、がん、その他多くの外皮と組織の多くの形態による治癒しないかあるいは治癒が遅い傷”の治療に効果的であることを、１節の１２行目〜１５行目で明らかにしている。したがって、ベルヘーゲンの傷の研究は、レーザ手術後あるいは他の角膜の傷害後の多くの週に続く角膜のもやとは、大きく異なっており、容易に区別することができる。
【００２６】
例えば、「潰瘍」は、ドルランドの医療辞書２６版（Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，２６ＴＨｅｄｉｔｉｏｎ）で、「炎症性の壊死の組織がはがれることによって作られた、組織あるいは器官の表面の局所欠損、あるいは腔窩」と定義されている。ベルヘーゲンによって研究された足の潰瘍は、ひどい炎症を引き起こされており（また、非常に血管新生（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ）された）、壊死細胞のかさぶたが作られている。対照的に、健康な角膜は適正な視覚を得るために透明でなければならず、そのため健康な角膜は血管新生されず、角膜の（血管新生を増加された）炎症はレーザ手術後の普通の併発症ではない。ドルランド（Ｄｏｒｌａｎｄ）での定義に合う潰瘍は目において発生しうるが、そのような潰瘍は角膜のレーザ手術後に予想される結果ではない。そして、もしそれらが発生しても、診察者はそれらを決してもやとは混同しないだろう。ＰＲＫは直径５ｍｍ〜６ｍｍの角膜の部分でレーザを用いて手術される、繊細な手術である。そして、角膜組織は手術前の厚さが約５００μｍで５ｍｍ〜６ｍｍの角膜全体のはしからはしまで、１０μｍ〜１００μｍの深さの組織が平坦にそして一様に取り除かれる。ＰＲＫ後の角膜の傷害は角膜の潰瘍としては分類されない。なぜなら、例えば、不規則なくぼみや、組織の抉り出されたクレーターが全くないからである。したがって、非常に血管新生された足の潰瘍の治療を促進するためにｔＰＡを使うというベルヘーゲンの教えは、レーザ手術後の何週間あるいは何ヶ月かにわたって角膜に発生しているもやを取り除くあるいは治療するためのプラスミゲン活性剤（ｔＰＡあるいはウロキナーゼ）の使い方を予言するものではない。
【００２７】
１９９２年にファイルされたカナダのシュラー（Ｓｃｈｕｌｅｒ）らによる申請２０９５２０７「炎症の治療へのプラスミノゲンアクチベータの阻害剤の使用（Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ）」は、「例えばレーザ治療後、そして通常の眼科手術後に、目の不透明さと目の炎症に対する」治療法として、プラスミノゲンアクチベータの阻害剤の使用を開示し、クレームしている。（シュラーらの前記申請の４ページの１５行目〜３２行目）Ｓｃｈｕｌｅｒらは、角膜に損傷を受けた後の、涙液でのプラスミン活動の増加を報告している（１ページ目の１５行目〜１８行目）。そして、Ｓｃｈｕｌｅｒらはプラスミンが一連のできごとを始めることで、コラーゲン分子が破壊されると推測している。特に、Ｓｃｈｕｌｅｒらは、プラスミノゲンアクチベータ阻害剤が新しい血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を阻害し、それによって炎症後の角膜の透明度を回復させることを発見した。（８ページ４行目〜１３行目）　他にも、プラスミンが内皮細胞の複製を装うので脈関形成（血管の増殖）を促進するかもしれないかもしれず、そのことは組織修繕に重要な要素を示しているかもしれないと推測されてきた。［Ｂａｒｌａｔｉ Ｓ，Ｍａｒｃｈｉｎａ Ｅ，Ｑｕａｒａｎｔａ ＣＡ，Ｖｉｇａｓｉｏ Ｆ，Ｓｅｍｅｒａｒｏ Ｆ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ（角膜の損傷および修復の目印としての涙中におけるフィブロネクチン、プラスミノゲンアクチベータおよびプラスミノゲンの分析）． Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． １９９０；５１：１−９．］プラスミン阻害剤は、プラスミン活動を増加されたある病気の治療に使われてきた。しかし、それらは、有害な影響があるので不利であった。（シュラーらの文献の１ページ、２３行目〜３５行目）また、プラスミン阻害剤、プラスミノゲンアクチベータ阻害剤およびさまざまなコルチコステロイドによるこれらの結合の組み合わせは、レーザ屈折手術の治療中のプラスミン活動により低下および組織削除を最小限にする手段として示唆された。［Ｌｏｈｍａｎｎ ＣＰ，Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｊ．Ｐｌａｓｍｉｎ− ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ： ｎｅｗ ｃｏｎｃｅｐｔ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｍｙｏｐｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｈａｚｅ（エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術後のプラスミンアクチベータ阻害剤およびプラスミノゲンアクチベータ阻害剤：手術後の近視の逆行およびもやの予防における新しい概念）．Ｒｅｆｒａｃｔ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｓｕｒｇ １９９３；９：３００−３０１．］
角膜に局所的に適用されるプラスミノゲンアクチベータは、非常に高いレベルでかなり長期間適用することが許容される。前述の研究では、うさぎの角膜が、５０００ＩＵ／ｍｌほどの高い濃度のウロキナーゼを含む溶液に試験管内で３時間さらされた。これらの実験は、５０００ＩＵ／ｍｌまでの濃度のウロキナーゼがうさぎの角膜内皮細胞にとって有毒ではなく、うさぎの角膜に意味のある腫大を引き起こさず、走査電子顕微鏡による詳しい調査では正常な内皮のモザイク模様を保つことを証明した。［Ｈｕｌｌ ＤＳ，Ｇｒｅｅｎ Ｋ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｏｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ（角膜内皮へのウロキナーゼの影響）．Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １９８０；９８：１２８５−１２８６．］
今、レーザ手術（特にＰＲＫ）後の１日〜５日の間の涙液中に低いレベルのｕＰＡが、人間とうさぎの両方で発見されたことは、手術後数週間あるいは数ヶ月後でもやが発達することと、矛盾なく関連する。このように、本発明は、治療上有効な１つあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータを、手術直後から手術後の初めの約１２日間、角膜に加えることにより、レーザ手術後のもやを低減あるいは防止するための方法を提供する。本発明はまた、レーザ手術後のもやを低減あるいは防止するための、治療上有効で、目に使われることに適し、生理学上適用できる担体の中に組織された１つあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータを含んでいる構成物を示す。本発明の方法で使われることができる方法と構成物は、最も好適にはウロキナーゼ、そしてまた、ウロキナーゼ変異体、プロウロキナーゼ、プロウロキナーゼ変異体、組織プラスミノゲンアクチベータ、組織プラスミノゲンアクチベータ変異体を含む。本発明の方法と構成物はまた、他の眼科手術あるいは目の病気あるいは傷の併発症としての結果のもやを低減あるいは防止するために使われることも意図されている。
【００２８】
以下で詳述する実施例１および実施例２は、人間およびうさぎのどちらにも、ＰＲＫ後の涙の中にｕＰＡ生産のパターンがあることを示している。人間の研究において、正常に治された患者ともやが発達した患者とは、ＰＲＫ後の涙中のｕＰＡレベルに異なるパターンが見られることにより区別される。全ての患者に対して手術後すぐに急激に滴下された涙中の平均ｕＰＡレベルは、患者にもやが発達していてもあるいは正常に治癒していても、全部で７７個の目に対してテストされた手術前の値と比較すると、正常に治癒した７１個の目では平均９０％の減少であり、もやが発達した６個の目では平均７７％の減少であった（実施例１における図１および図２）。正常に治癒された患者の目は、手術前のレベルと比較すると、手術後３日目に平均ｕＰＡレベルが著しく高められており（４１％の増加）、手術後５日目までに手術前のレベルに戻っている。手術後３ヶ月〜６ヶ月でもやが発生（グレード１〜２）した全てのケース（６ケース）［後述する、もやが併発したケース］で、正常な場合との顕著な相違は、手術後の３日間を通して平均の涙中のｕＰＡレベルが（手術前の平均の７６％に）抑えられたことである（図１および図２）。もやが併発された目のそれぞれについての平均ｕＰＡレベルは、正常な目において３日目までに４１％増加することと比較して、手術後５日目までに手術前の平均のレベルより１６％上昇している。２つのグループの平均ｕＰＡレベルは、手術後３日目に明瞭に分けられる。もやが発達している目のグループにおける平均ｕＰＡレベルは、正常なグループの平均よりも（統計的に十分に）低い（図２）。正常な目およびもやが併発された目の個々の平均ｕＰＡレベルの値は、実施例１における図１および表３に示されている。
【００２９】
もやが併発された目は、ＰＲＫ手術を受けた目の８％（６個／７７個）を占めた。もやは、「Ｈａｎｎａ ＫＤ，Ｐｏｕｌｉｑｕｅｎ ＹＭ，Ｓａｖｏｌｄｅｌｌｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ｍｏｎｋｅｙｓ １８ ｍｏｎｔｈｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術の１８ヶ月後の猿における角膜の傷の治癒）．ｒｅｆｒａｃｔ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｕｎｇ．１９９０；６：３４０−３４５」の中で述べられた基準を使用して決められた。正常なケースともやが発達したケースにおける平均ｕＰＡレベルは、異なる３つの測定機会、すなわち、手術前の日０と、１日目と、５日目とに部分的に一致する。ＰＲＫを受けていない対照用の目（ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｙｅｓ）は、５日間では感知されるほどのｕＰＡレベルの変化はなかった。この実験の結果は、継続する涙中のｕＰＡの抑制を、手術後３日間を通して手術前の平均レベルの約２５％のレベルにすることが将来のもやの発生と関連することを示している。
【００３０】
遡及的にもやが確認された６ケース中６ケースが、正常な場合と比較して、手術後３日目に有意に低いｕＰＡレベルを示した。そして、残りの目の７１ケース中７１ケースは、結果として起こるもやを示さなかった。ｕＰＡレベルをもやの予測の判定基準として用いることは、１．０の感度（もやの予測と実際にもやが発生したケースとの比）であり、１．０の特殊性（もやが発生しないことの予測と、実際にもやが起こらなかったケースの比）である。もし、手術後３日目の低いｕＰＡレベル（０．１ＩＵ／ｍｌ以下）が将来的に異常な治癒の傷（もや）が発達する目を識別する（予言する）ために用いられていたならば、６ケース中６ケースが妥当な予測を与えた。
【００３１】
ＰＲＫ後のもやは、両側であることも可能であるが、両側である必要はない。３人の患者は、１つのもやが発生した目と１つの正常な目とを持っていた。１人の患者は、２つのもやが発生した目を持っていた。そして１人の患者（サンプリングのために１つの目だけを引き受けた）は、もやの発生した目を１つ持っていた。ＰＲＫを受けていない反対側の「対照用の」目は、研究の間中、涙液とｕＰＡレベルは本質的に一定のままであったことが測定された。（図３）これは、ＰＲＫおよび涙のサンプリングが、反対側の処置されていない目における涙液あるいは繊維素溶解の働きに関して、付随的な影響がほとんどないことを暗示している。
【００３２】
両方の目ともＰＲＫを受け、１つの目だけにもやを併発した３つのケースでは、両方の目に対する手術前のｕＰＡの値が、正常なグループの平均ｕＰＡレベルよりも有意に低いことが観察された（表３）。その上、１つが正常で１つがもやを併発した目を持っているグループの３人の患者それぞれに関して、手術前のｕＰＡの値がもやが発生した目においていっそう低かった。しかしながら、正常な目ともやが併発した目に対するｕＰＡレベルの範囲は、手術前の測定値と部分的に一致する（図１参照）。それゆえ、正常なケースともやが併発したケースとは、手術前のｕＰＡレベルを基礎として区別することができない。
【００３３】
涙液は、角膜の傷の治癒の研究のための容易に入手可能な媒体である。角膜の再上皮化が進行する間の涙液中のｕＰＡレベルに関する研究が唯一報告されている。そして、それは前部の角膜切除後のうさぎについてなされている。［ｖａｎ Ｓｔｅｔｔｅｎ ＧＢ，Ｓａｌｏｎｅｎ ＥＭ，Ｖａｈｅｒｉ Ａ，ｅｔ ａｌ． Ｐｌａｓｍｉｎ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｆｔｅｒ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（前部の角膜切除後に角膜の傷が治癒する間の涙液中におけるプラスミンおよびプラスミノゲンアクチベータ活動係数）． Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． １９８９；８：１２９３−１２９８］ファン・ステーテン（ｖａｎ Ｓｔｅｔｔｅｎ ＧＢ）らは、前部の角膜切除後１日目（０日目＝手術の日）のウロキナーゼのレベルが、統計的に有意に低下することを観察した。２〜３日目までに、ｕＰＡレベルは正常に戻った。前部の角膜切除後のうさぎで観察された涙中のｕＰＡレベルのパターンは、ＰＲＫ後の人間の正常な目で観察されたパターンと質的に似ている。（角膜切除後のうさぎにもやが発生することが知られているが）ファン・ステーテンの研究における１１羽全てのウザギの目はもやなしで治された。そして、それらは２．０（±０．６）ＩＵ／ｍｌの手術前の平均ｕＰＡレベル（±平均標準誤差（±ＳＥＭ））を持っており、手術後１日目には０．３（±０．１）ＩＵ／ｍｌに下がり、２日後〜３日後には２．１（±０．３）ＩＵ／ｍｌに上がった。角膜切除後の正常に治癒された人間とうさぎとの涙中のｕＰＡ値の類似したパターンが、涙中のｕＰＡには、治癒と正常で健康的な角膜上皮の再形成とを結び付ける正常なパターンがあるという結論を強めている。
【００３４】
ファン・ステーテンらのうさぎの研究はまた、ｕＰＡレベルに加えて涙液流出率（ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｆｌｏｗ ｒａｔｅｓ）を計測した。涙液の流出は、前部の角膜切除後には、手術前と比較して２．３の比率で増加することが発見された。そのため、手術後のプラスミノゲンアクチベータのレベルの低下を、プラスミノゲンアクチベータの希釈として説明できるかもしれない。しかしながら、ｕＰＡのレベルは、２．３の希釈比で変化しておらず、手術後のプラスミノゲンアクチベータの降下は、手術前のレベルよりも６．７の比率以上である。したがって、希釈だけではプラスミノゲンアクチベータのレベルの降下を説明するために十分なメカニズムではない。本研究では、人間で測定された涙液の流出は、全てのサンプル時間を通して、全ての目において５μｌ／ｍｌ〜１５μｌ／ｍｌに留まった。このことは、以下の例において、ＰＲＫ後にｕＰＡのレベルが下げられることは、涙液の流出率とは関係しないことを示している。
【００３５】
ＰＲＫ後の角膜治癒の併発症の基礎となる正確なメカニズムは知られていないが、角膜の傷の治癒における個々の変化が、ＰＲＫ後の屈折の逆行およびもやの形成に重要な役割を演じることが、一般的に疑われている。［Ｍｏｌｌｅｒ−Ｐｅｄｅｒｓｏｎ Ｔ，Ｌｉ ＨＦ，Ｐｅｔｒｏｌｌ ＷＭ，Ｃａｖａｎａｇｈ ＨＤ，Ｊｅｓｔｅｒ ＪＶ．Ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｏｕｎｄ ｒｅｐａｉｒ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（屈折矯正角膜切除術後の傷の修復の共焦点顕微鏡特性）．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．１９９８；３９：４８７−５０１］実施例１で報告された研究は、人間においては、３日間以上に渡って涙中の低いｕＰＡレベルが維持されると、結果としてもやの発生を引き起こすことを示している。
【００３６】
実施例２は、ＰＲＫ後７日間のうさぎの涙中のｕＰＡ阻害が、全てのケースで手術後のもやの形成を引き起こしたことを示している。ＰＲＫ治療を受けた８羽のうさぎの両方の目において、；それぞれのうさぎの１つの目は、角膜の表面と涙中のｕＰＡを不活性化させるために、手術後の１日〜７日間、セリンプロテアーゼ阻害剤（ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ＳＰＩ）のアプロチニン（ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）で処置されている。アプロチニンは、ウロキナーゼを阻害するために特に有効である。ｕＰＡの測定は、いつも、ＳＰＩ処置される前の指示された日の朝に行われた。８つの対照用の目（ＳＰＩ無し）は、手術前の値（ｐ＜０．００１）よりも、１日目には有意に低いｕＰＡレベルを示し、２日目および３日目には有意に高い値のｕＰＡレベルを示す（図４および図５参照）。ｕＰＡレベルは、手術後４日目までに手術前に釣り合うレベルに戻る（図４および図５参照）。２１日間の研究を通して、ＳＰＩを施されていないそれぞれの目において、角膜は透明を保っていた。
【００３７】
ＳＰＩが施された反対側の８つの目は、最初は処置されていない目のようにふるまった。それらはまた、１日目に手術前の平衡なｕＰＡレベル（ｐ＜０．００１）よりも、有意に低い手術後のｕＰＡ値を示した。ｕＰＡのレベルは、ＰＲＫ後の初めの７日間、ＳＰＩによって故意におさえられた。これらのＳＰＩが施された８つの目全ては、非常に低いレベルのｕＰＡ（ゼロに接近する）を持っていた。そして、約２ヶ月後にすべて角膜のもやが発生した（図４および図６参照）。１９日後の目の２つのグループ間の、ｕＰＡの釣り合いの相違は有意ではない（Ｐ＝０．０６）。これらの結果は、ｕＰＡが手術前の平衡レベル以下に落ち、手術後２日目〜３日目までにゼロに近づき、ＰＲＫ後初めの１週間抑え続けられる時に、ＰＲＫ後のうさぎの目で手術後の角膜のもやが発生することを示している。人間とうさぎの研究は共に、ＰＲＫ後の少なくとも初めの３日間あるいは４日間、少なくとも手術前の平静な平均値あるいはそれ以上に涙中および角膜表面のｕＰＡレベルの維持することが、もやを防止して発生させないために必要であることを示している。
【００３８】
実施例３は、レーザ屈折手術後の、涙液中のｕＰＡとプラスミンとの測定によって、角膜の傷害と傷の治療との間のプラスミノゲンアクチベータ活動係数の詳細な変化を構成された、図７に示すような化学活動モデルを述べている。化学反応メカニズムと速度論とは、生物化学的過程と角膜治療に伴う材料とに適用される。ＰＲＫ後の人間とうさぎの涙中のｕＰＡ活動係数による比較がなされている。傷害の間、角膜上皮細胞は化学物質の高まり（ｓｕｒｇｅ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を放出する。反応速度式が、プラスミノゲンアクチベータがプラスミノゲンとすばやく反応してプラスミンを形成し、プラスミンアクチベータ阻害剤とすばやく反応してプラスミノゲンアクチベータのレベルを低下させるという、数学上の解をもたらす。これらの過程は、測定に矛盾せずに、十分にすばやく（数秒以内で）プラスミンを高いレベルに高めて、手術後の数分以内でプラスミノゲンアクチベータを測定時以前の手術前のレベルよりも低いレベルまで使い果たす。プラスミノゲンアクチベータの生成とプラスミノゲンアクチベータ阻害剤のレベルとの釣り合いは、次の数日間を通してプラスミノゲンアクチベータ活動係数の進行を決定する。それから、その方程式は手術前の平衡なレベルに戻る道筋を示す。角膜が傷ついた場合の涙中のプラスミノゲンアクチベータ活動係数のレベルは、傷害後のｕＰＡ活動のパターンを説明するこの化学活動メカニズムと矛盾しない。
【００３９】
角膜の傷害後の臨界期において、ＰＡ（プラスミノゲンアクチベータ）活動係数は、ＰＡの生成速度とＰＡの阻害の速度との割合によって支配される。図１および図２に示す人間の実験では、ＰＲＫ後の初めの３日間ずっとＰＡ活動係数が低いことが見つけられた場合では２、３ヶ月後にもやが発達した。図４および図６に示すように、ＰＲＫ後のうさぎの目にＰＡ阻害剤（セリンプロテイナーゼ阻害剤（ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ））を受けさせることはまた、２、３ヶ月後にもやを引き起こした。ＰＲＫ後の数日間〜１週間の自然な生理学上のＰＡ活動係数をまねるために十分なほど高い濃度の、治療上有効な基礎としてのＰＡの投与は、図１、図２、図３、図５に示すように、もやのない正常で健康的な傷の治癒へと導くための、正常な化学活動の平衡を確立し、維持することを予想させる。
【００４０】
本発明は、レーザ手術および他の目の手術、もやの形成に関連する傷害あるいは病気の後の、角膜上皮下のもやを防止あるいは低減する方法を提供する。１つかあるいはそれ以上のプラスミノゲンアクチベータ（好ましくはｕＰＡ）を含む局所的な目の調剤が、少なくとも手術、傷害あるいは病気を受けていない目の涙を示す正常な生物学的レベルのｕＰＡをまねるレベルで、手術あるいは傷害あるいは病気などの後のおかされた目に適用される。本方法に使うために、治療上有効なレベルのｕＰＡとして、約０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌが好まれる。最も好まれるのは、０．１ＩＵ／ｍｌ〜１．０ＩＵ／ｍｌであり、別の好まれる範囲は１．０ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌである。本発明の眼病用の構成物で使うことができるプラスミノゲンアクチベータの濃度は、同様に、約０．１ＩＵ／ｍｌ〜２，５００ＩＵ／ｍｌ、最も好ましくは０．１ＩＵ／ｍｌ〜１．０ＩＵ／ｍｌ、別の好まれる範囲は１．０ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌである。異常な状況、例えば、患者が手術後に、意味のある量の局部的なプラスミノゲンアクチベータを洗い流すほど涙を流したら、例えば１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌの、より高い濃度が必要とされるだろう。
【００４１】
１つの具体例として、本発明で使うためのプラスミノゲンアクチベータは、手術あるいは傷害を受けた直後から始まる手術あるいは傷害の日に、約８回〜１２回、そして、その後の６日間〜１２日間は１日につき４回〜８回、目の表面に局所的に適用される。好ましい具体例は、局所的な眼病用の構成物として形成された約０．１ＩＵ／ｍｌ〜１．０ＩＵ／ｍｌのプラスミノゲンアクチベータを持つ構成物が、目へのレーザ手術あるいは傷害の直後から始まる１日目には１日につき約１２回（例えば、起きている間１時間ごとに）、そして、手術後２日目〜７日目まで１日につき５回（２時間ごとに）適用される。プラスミノゲンアクチベータの投与の頻度と濃度とは、患者の履歴（ｐｔｉｅｎｔ’ｓ ｈｉｓｔｏｒｙ）によって変化させることができる。例えば、もしある患者が手術前の涙中で著しく低いプラスミノゲンアクチベータのレベルを有しているならば、その時の適用はより頻繁にする必要がある。別の例として、より高い場合には、例えば１．０ＩＵ／ｍｌ〜１０ＩＵ／ｍｌあるいは１０ＩＵ／ｍｌ〜１００ＩＵ／ｍｌが手術あるいは傷害後にもっと少ない頻度、例えば、手術の日の起きている間に１日につき９回、そして手術後２日目〜７日目に１日につき４回で適用される。試験管内では２，５００ＩＵ／ｍｌと同じぐらい高くても無害であることが示されているが、そのような高さは通常の使用では予見されない。しかし、涙の速度が普段から速い患者、あるいは頻繁な適用が実行できない患者には要求されるかもしれない。［Ｌｏｈｍａｎｎ ＣＰ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ＆ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ（屈折と角膜の手術）．ｖｏｌ．９，Ｊｕｌｙ／Ａｕｇｕｓｔ，１９９３，ｐａｇｅ３００−３０２］薬学的な調剤におけるｕＰＡの量は、患者が炎症、潰瘍、あるいはその他の有害反応を表すならば、減らされるかあるいは中断されるべきである。薬学的な構成物は、単独の薬剤としても適用できるし、他の有用な薬剤、例えば血管収縮薬や抗生物質などと組み合わせて適用することもできる。
【００４２】
本発明に従って使用できるプラスミノゲンアクチベータは、（プロ）ウロキナーゼ、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベータ、例えば組み換えＤＮＡ技術、糖鎖形成変形、ウロキナーゼの部分から構成されるか、あるいはウロキナーゼの部分を含むハイブリッドプロテインなどによって構成される、それらの変形あるいは変異体を含む。ｕＰＡは最も好ましいプラスミノゲンアクチベータであり、１つ以上のプラスミノゲンアクチベータを同時に適用することができ、あるいは構成物に含むことができる。好適には、哺乳類の器官のプラスミノゲンアクチベータが使用される。組織タイプのプラスミノゲンアクチベータは、培養された人間の細胞あるいは、当業者に知られている真核生物あるいは原核生物の表現システムの中で組み換えＤＮＡ技術を使用してより望ましいように生産された人間の組織から分離することができる。適切なｔＰＡタイプのプラスミノゲンアクチベータは、例えば、ＥＰＡ−０ ４００ ５４５、ＨＰ−Ａ−０ ２８９ ５０８、ＥＰ−Ａ−Ｏ ２２７ ４００、ＥＰ−Ａ−０ ４４０ ７０９およびＨＰＡＯ ２３１ ６２４に記述されている。
【００４３】
適切なｕＰＡあるいはｐｒｏ−ｕＰＡが、［Ｈｕｓｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ（生物学大辞典）．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２２０ （１９８３） ３１−３８：Ｓｔｕｍｐ ｅｔ ａｌ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｆｒｏｍ ｈｕｎｔａｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ（人間の細胞培養組織からの一鎖ウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータの精製および特性）．Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１ （１９８６） １２７４−１２７８：Ｗｉｎｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（大腸菌からの組み換えウロキナーゼの精製および特性記述）．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ３ （１９８５） ９９２−１０００：Ｗｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｘｏｎ ｏｆ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ（人間の血漿からのウロキナーゼの分離および特性）．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７ （１９８２）：ＷＰ−８１／０１４１７　ａｎｄ ＨＰ−Ａ−０ １３９ ４４７（）．］などに記述されている。
【００４４】
本発明の方法および構成物はまた、硝子体切除術、白内障手術、皮膜外の白内障抽出（ｅｘｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ ｃａｔａｒａｃｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）、水晶体手術、水晶体置換、水晶体移植、角膜移植術（ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｔｙ）および角膜移植手術（ｃｏｒｎｅａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ）のような正常な目の手術を例として含む、他の目の手術、あるいは目の病気または傷害の併発症として生じるもやを減少あるいは防止するために使われることを意図されている。さらに、結膜炎、角結膜炎、乾性角結膜炎、虹彩炎、虹彩毛様体炎、角膜炎、脈管炎および葡萄膜炎に伴うもやが含まれている。
【００４５】
本発明の構成物の中で単独あるいは組み合わせで使用される、傷を治療する調整器（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）は、ステロイド、細胞増殖因子、基底膜構成要素（ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）、酸化防止剤、コラーゲン構造の調整剤（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）、アルドースレダクターゼ阻害剤（ （ＡＲＩｓ）、非ステロイド性の抗炎症剤（ＮＳＡＩｓ）、免疫調整剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ）、抗アレルギー性物質、脂肪酸派生物（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）および抗生物質を含んでいる。
【００４６】
ステロイド、成長因子、基底膜構成要素、コラーゲン構造の調整剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ＮＳＡＩｓ、酸化防止剤、免疫調整剤、および抗アレルギー性物質（それらは傷修理に起因する角膜のもやに対して特に有効である）によって多様な成功の度合いで角膜のもやを防止できることが報告されている。成長因子、免疫調整剤、抗アレルギー性物質および基底膜構成要素は、繊維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）の基質（ｓｔｒｏｍａ）が不適当に活性化された場合、、特に有効である。成長因子、ステロイド、免疫調整剤、基底膜構成要素、および酸化防止剤は、コラーゲン原繊維が被害を受けたことによる角膜のもやの形成を緩和するのに特に有効である。アラキドン酸カスケード（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｃａｓｃａｄｅ）の成長因子および脂肪酸派生物は、被害を受けた繊維芽細胞あるいは死んでいる繊維芽細胞が存在する場合、特に有効である。また成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩ、抗アレルギー性物質、酸化防止剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、および抗生物質は、水腫に起因する角膜のもやを扱うのに特に有効である。［Ｃａｎａｄｉａｎ ｐａｔｅｎｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（カナダの特許申請）２，０９５，２０７， ｉｓｓｕｅｄ ｔｏ Ｓｃｈｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．］さらなる研究では、メタルオプロテイナーゼ（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）の合成阻害剤は、タイプＩＩＩコラーゲンの合成の制御により角膜のもやを低減することが報告されている。［Ｃｈａｎｇ ＪＨ，ＫｏｏｋＭＣ，Ｌｅｅ ＪＨ，Ｃｈｕｎｇ Ｈ，Ｗｅｅ ＷＲ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ ｏｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｈａｚｅ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ（うさぎにおけるエキシマレーザ屈折矯正角膜切除術後の角膜のもやに対するへのメタルオプロテイナーゼとシクロスポリン・エーとの合成阻害剤の影響）．Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ １９９８；６６：Ｍ９−３９６．］さらに、マイトマイシンＣ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ；抗腫瘍性と抗生物質の働きを持つアルキル化剤（ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ））が角膜実質細胞増殖を抑えることによりＰＲＫ後のもやを低減することが報告されている。［Ｘｕ Ｈ，Ｌｉｕ Ｓ，Ｘｉａ Ｘ，Ｈｕａｎｇ Ｐ，Ｗａｎｇ Ｐ，Ｗｕ Ｘ．Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ ｒｅｄｕｃｅｓ ｈａｚｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（マイトマイシン・シーがうさぎにおけるエキシマレーザ屈折矯正角膜切除術後の角膜のもやの形成を減少させる）．Ｊ Ｒｅｆｒａｃｔ Ｓｕｒｇ ２００１；１７：３４２−３４９］これらの合成物がプラスミノゲンアクチベータに邪魔をしない程度まで、それらは本発明の構成物に含まれてもよい。
【００４７】
本発明の構成物は、主要な活発な成分に加えて、さらに抗菌性防腐剤および張性剤のような様々な形の処方成分（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ）を含んでもよい。例えば、抗菌性防腐剤は、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン（ｍｅｔｈｙｌｐａｒａｂｅｎ）、プロピルパラベン（ｐｒｏｐｙｌｐａｒａｂｅｎ）、フェニルエチルアルコール、ＥＤＴＡ、ソルビン酸、ＰＯＬＹＱＵＡＤ、および当業者に一様に有名な他の薬品を含んでいる。そのような防腐剤は、使用された場合、約０．０００１重量％と約１．０重量％の間の量の中で典型的に使用される。張性を調節するために使用することができる適切な薬品あるいは構成物のオスモル濃度は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、ブドウ糖グリセリンおよびプロピレングリコールを含んでいる：。もし使用されれば、そのような薬品は、約０．１重量％と約１０．０重量％の間の量で使用される。しかしながら、本発明の好ましい構成物は、目（特に角膜）に悪影響を及ぼすか刺激すると知られている防腐剤あるいは張性薬品を含まない。
【００４８】
眼内圧の上昇は角膜の光学的な切除の間あるいは後に生じてもよい。眼内圧のコントロールは、角膜のもやを含む併発症なしで角膜を治すことを可能にするため、角膜の健康に寄与する。本発明の構成物に含むことができる眼内圧をコントロールするための添加物は、例えばラタノプロスト（ｌａｔａｎｏｐｒｏｓｔ）、アプラクロニダイン（ａｐｒａｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、眼球内血圧液圧減退剤（ｔｉｍｏｌｏｌ）、ベタックスオロール（ｂｅｔａｘｏｌｏｌ）、レボブナロール（ｌｅｖｏｂｕｎａｌｏｌ）、グリセリン、イソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ）、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、尿素、プラミノクロニダイン（ｐａｒａｍｉｎｏｃｌｏｎｉｄｉｎｅｓ）、エピネフリンおよび炭酸脱水酵素阻害剤のような降圧薬を含んでいる。その構成物は、約０．１重量％から約２．０重量％の間の濃度で、好ましくは０．５重量％ぐらいで、光学的な切除後の目に局所的に適用することができる。さらに、眼内圧をコントロールするために、例えば、カルバコール、ピロカルピン、フィゾスチグミン、エコチオフェート（ｅｃｈｏｔｈｉｏｐｈａｔｅ）、イソフルオルフェート（ｉｓｏｆｌｕｏｒｐｈａｔｅ）のような縮瞳薬を使用することができる。
【００４９】
湿潤剤は、角膜の光学的な切除の前、最中、後に使用されてもよく、本発明の構成物に自由に含まれてもよい。これらの添加物は、潤滑を提供し自然な涙生理学を維持することにより角膜の治癒を促進する。湿潤剤は、典型的にはハイドロキシルセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ハイドロキシープロピルセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ハイドロキシープロピルメチルセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、セルローズ・エステル、ポビドンあるいは他の適切な重合体組織を含む調剤を含むことができる。
【００５０】
ここに使用されるような上皮細胞の健康促進剤は、角膜の上皮細胞の健康に寄与すると知られている構成物である。これらの構成物の存在は、角膜の光学的な切除の前、最中および／または後で、完全な上皮の迅速な回復の促進による角膜のもやの防止および基質の浮腫の防止に寄与することができる。本発明の構成物の添加剤として最適に使用することができる上皮細胞の健康推進剤は、アスコルビン酸；レチノイン酸、レチノール、レチナールおよびレチノイル・ベータ−グルノロニド（ｒｅｔｉｎｏｙｌ．ｂｅｔａ．−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）のようなレチノイド（ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ）；バルバドスアロエ（ａｌｏｅ ｖｅｒａ）；コラゲナーゼ阻害剤；そしてエラスターゼ阻害剤を含む。
【００５１】
ｕＰＡは、点眼薬あるいは軟膏、軟膏クリーム、乳剤、懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）あるいは眼科の使用にふさわしいリポソーム調製で、角膜に局所的に適用することができる。プラスミノゲンアクチベータの水溶液は目への局所的適用のために好まれる。反応性物質の局所的適用にふさわしい構成物の多くの例が、当技術で知られている。好ましくは、そのような製薬の構成物は殺菌しているかまた無菌であり、チューブ、ボトルあるいは容易な局所的適用にふさわしい他の容器でパッケージされる。
【００５２】
前述の記述では、発明はその特定の実施例に関して記述された。しかしながら、発明のより広い精神および範囲から外れない、様々な変形および変更を本発明に行うことができることは明白である。以下に言及する非限定的な実施例中で、本発明の応用例をさらに詳細に記述する。
【００５３】
３．実施例１　エキシマレーザＰＲＫ後において角膜上皮が再形成する間の人間の涙液中におけるｕＰＡレベルの変化の定量化
材料と方法について：ＰＲＫ手術を受けた年齢１７歳〜５１歳（平均２７歳、標準偏差９歳）の４２人の患者（女性２６人、男性１６人）が、ヘルシンキ宣言に忠実にインフォームドコンセント（ｉｎｆｏｒｍｅｄ ｃｏｎｓｅｎｔ）を得た後に、本研究のために選ばれた。与えられた患者に対しては、手術の間隔を１週間〜２週間として、一回に一つの目に対してＰＲＫが行われた。片方の目のみのサンプリングを志願した７人の患者（女性３人、男性４人）を除いて、ＰＲＫを施した両方の目がサンプルされた。３分以内に１５μｌの涙を得られなかった患者は、議論から除外された。さらなるインフォームドコンセントが得られた２０人の患者における外科手術では、反対側の目が対照用の目（ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｙｅ）としてサンプルされた。これにより、７７個の目（右目４１個、左目３６個）と２０個の対照用の目とがサンプルとして与えられた。手術前の平均屈折誤差（ｍｅａｎ ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒ）は、−３．０ジオプトリ（標準偏差：３．０、範囲：５．０〜１０．０ジオプトリ）であった。１８個の目は手術前に乱視（平均−１．５、標準偏差０．６、範囲−１．０〜−２．７５シリンダ）を持っていた。１７人の患者は、以前にコンタクトレンズを使用していた（平均使用年数：４年、標準偏差：２年、範囲：１年〜９年）。
【００５４】
スクウィンドケラトムＩＩ型（Ｓｃｈｗｉｎｄ Ｋｅｒａｔｏｍ ＩＩ）ＡｒＦエキシマレーザ（１９３ｎｍ）を使用したＰＲＫ手術が、同じ外科医によって、デブリセン医科大学眼科学部生体レーザＬＬＣ（Ｖｉｔａｌ−Ｌａｓｅｒ ＬＬＣ， Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｄｅｂｒｅｃｅｎ）で行われた。上皮除去は、鈍い角膜ブレードナイフ（ｂｌｕｎｔ Ｋｅｒａｔｏｍｅ Ｂｌａｄｅ ｋｎｉｆｅ）で、球面補正のための６．０ｍｍ〜６．５ｍｍのホッファ冠状鋸（Ｈｏｆｆｅｒ ｔｒｅｆｉｎｅ）と、瞳孔上の中心に乱視の矯正のための７．５ｍｍ〜８．０ｍｍとによって上皮にマーキング後に行われる。上皮はボーマン層（Ｂｏｗｍａｎ’ｓ ｌａｙｅｒ）の表面を傷つけないように注意を払いながら、周辺部から中心へ穏やかに削り取られた。遺残上皮の残骸は、無菌のマイクロスポンジ（ｍｉｃｒｏｓｐｏｎｇｅ）で取り除かれた。上皮の麻酔は、０．４％のオキシブプロカイン塩酸塩（ｏｘｙｂｕｐｒｏｃａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）点眼薬によってなされた。乱視でない患者の切除領域（ａｂｌａｔｉｏｎ ｚｏｎｅ）の直径は６．１ｍｍ（標準偏差：０．２、範囲：６．０ｍｍ〜６．５ｍｍ）である。乱視の患者については、乱視切除マスク（ａｓｔｉｇｍａｔｉｃ ａｂｌａｔｉｏｎ ｍａｓｋ）の直径は７．５ｍｍ（標準偏差：０．６、範囲：６．０ｍｍ〜８．１ｍｍ）であり、球面切除マスク（ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ａｂｌａｔｉｏｎ ｍａｓｋ）は５．７ｍｍ（標準偏差：０．１、範囲：５．３ｍｍ〜６．０ｍｍ）であった。ＰＲＫ手術の平均切除深さは、４８μｍ（標準偏差：２２、範囲：１２μｍ〜１２０μｍ）であった。乱視のないサブグループの平均切除深さ（４７μｍ）は、乱視のあるサブグループの平均切除深さ（５０μｍ）と、統計的に有意なほどは異ならない（ｐ＞０．６６）。手術後の処置は、抗生物質点眼薬であるシロザン（登録商標；ＣＩＬＯＸＡＮＴＭ（Ａｌｃｏｎ））を、手術の日には１時間ごとに、次の５日間には１日につき５回、それぞれの患者に対して適用された。点眼は、涙のサンプルが希釈される可能性を避けるため、涙をサンプリングする少なくとも８時間前には行わなかった。
【００５５】
上記の５日の期間が過ぎた後、フルコン（登録商標；ＦＬＵＣＯＮＴＭ（Ａｌｃｏｎ））と、ティアーズ・ナチュラル（登録商標；ＴＥＡＲＳ　ＮＡＴＵＲＡＬＥＴＭ（Ａｌｃｏｎ））とが、最初の１ヶ月間１日につき５回与えられ、２ヶ月目には１日につき４回に、３ヶ月目には１日につき３回に減じられた。この期間、他の処置は用いられない。全ての患者は、ＰＲＫ手術の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後にフォローアップ診断を受けた。
【００５６】
ｕＰＡ分析のための涙のサンプルは、ＰＲＫ手術の直前および直後、手術後３日目および５日目に、ＰＲＫを行った目および反対側のそれが使われた目から得られた。サンプルは、細隙灯照明のもとで側方眼角（ｌａｔｅｒａｌ ｃａｎｔｈｕｓ）の、より低い涙メニスカス（より低いマージンで角膜前の涙液膜を水平に厚くなっている部分）からガラス毛細管（ｇｌａｓｓ ｃａｐｉｌｌａｒｉｅｓ）によって集められる涙から成る。［Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ，Ｂｅｒｔａ Ａ，Ｐｕｎｙｉｃｚｋｉ Ｍ．Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（前部層に炎症を持った患者および健康な人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータ活動係数とプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数）．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ． １９８９；１８３：３２３−３３１：ｖａｎ Ｈａｅｒｔｎｇｅｎ ＮＪ，Ｇｌａｓｉｕｓ Ｅ．Ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｏｍｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ， ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｔｗｏ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ（２つの収集方法による比較調査によって決定された涙液中のいくつかの酵素の起源）．Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． １９７６：２２：２６７−２７２］
結膜に触れないように注意が払われた。同じ収集方法が、本研究を通して使われる。サンプリング時の所要時間が記録され、分泌速度が、得られた涙の量をサンプル収集の時間で割ったμｌ／ｍｉｎで計算された。本研究で使われたサンプルは、ＰＲＫを行った目および反対側の対照用の目の両方について、５μｌ／ｍｉｎ〜１５μｌ／ｍｉｎの分泌速度を持っていた。サンプルは、その収集後すぐに８分間〜１０分間遠心分離（１８００ｒｐｍ）され、その上清が−８０℃で急速冷凍され、そして、測定のために１度だけ溶かされた。
【００５７】
サンプルの涙中のｕＰＡレベルが、人間のプラスミノゲンおよび特殊プラスミン（ｐｌａｓｍｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）の色原体のペプチド基質（Ｄ−ｖａｌｙｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｙｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｓ−２５５１））を用いた吸光光度法によって測定された。［ｓｈｉｍａｄａ Ｈ，Ｍｏｒｉ Ｔ，Ｔａｎａｋａ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｕｓｅ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓ−２５５１ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎ ｒａｔ ｏｖａｒｉｅｓ（ねずみの卵巣中におけるプラスミノゲンアクチベータの量定のための色原体基質Ｓ−２５５１の使用）．Ｔｈｒｏｍｂｏｓ Ｈａｅｍｏｓｔａｓ（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）．１９８１；４６：５０７−５１０］この分析は、主としてウロキナーゼのようなプラスミノゲンアクチベータに敏感である。［Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ，Ｂｅｒｔａ Ａ，Ｐｕｎｙａｉｃｚｋｉ Ｍ，Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（前部層に炎症を持った患者および健康な人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータ活動係数とプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数）．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ．１９８９；１８３：３２３−３３１．］プラスミノゲンとＳ−２２５１とは、スウェーデン・モルダルンのクロモジェニクス社（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、Ｍｏｌｎｄａｌ，Ｓｗｅｄｅｎ）から購入された。標準のウロキナーゼは、フランス・パリのコアイ社（Ｃｈｏａｙ、Ｐａｒｉｓ， Ｆｒａｎｃｅ）から購入された。この分析は、プラスミン活動係数を測定することに適しているが、プラスミノゲンを加えることにより、ｕＰＡレベルを決定するための試薬として用いられることも可能である。ｕＰＡレベルは、島田らによって述べられたものにトエザー（Ｔｏｅｚｓｅｒ）および共同研究者らによる改良を加えることにより測定された。［Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ， Ｂｅｒｔａ Ａ， Ｐｕｎｙｉｃｚｋｉ ｒＷ． Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｉｕｉｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｒｓｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（前部層に炎症を持った患者および健康な人間の涙中におけるプラスミノゲンアクチベータ活動係数とプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数）．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ． １９８９；１８３：３２３−３３１：Ｔｏｅｚｓｅｒ Ｊ，Ｂｅｒｔａ Ａ．Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ｔｅａｒｓ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｔｅａｒｓ（うさぎの涙中のウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータ、人間の涙との比較）．Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１９９０；５１：３��−３７３］５μｌの涙、あるいは標準のウロキナーゼ、あるいはプラスミンが、０．５ｍｍｏｌ／ｌの色原体基質Ｓ−２２５１および１μｍｏｌ／ｌの人間のプラスミノゲンが存在するマイクロチタープレートのウェルズ（ｗｅｌｌｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ ｐｌａｔｅｓ）の中で、ｐＨ７．４、温度３７℃の、０．０５のトリス緩衝液（ｔｒｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）１００μｌの中で培養される。４時間の培養後、８ｍｏｌ／ｌの酢酸５００μｌを加えることにより反応は終結する。その吸収（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）は、ラブシステムマルチスキャンＭＳ分光光度計（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ ＭＳ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）によって４０５ｎｍとる測定された。プラスミノゲン単独のアミドリティック活動係数（ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）は同様に計測されたが、プラスミノゲンは培養の混合物から除かれた。
【００５８】
プラスミノゲン有りと無しとで得られる値の間の吸収差は涙中のｕＰＡレベルによるものと見なされ、同時に、プラスミノゲン無しで得られる吸収率値がプラスミノゲン独自のアミドリティック活動係数とみなされた。異なる濃度のウロキナーゼ標準溶液による同じシステムで得られた吸収値に基づいて、校正曲線が生成された。測定されたサンプルのｕＰＡレベルは、この校正曲線によって計算され、ＩＵ／ｍｌウロキナーゼ等価値で表された。プラスミノゲン単独の活動係数は、涙サンプルのすべてにおいて無視できることが分かった。
【００５９】
もやの決定は、全ての患者に対してｕＰＡレベルの情報なしでなされた。したがって、もやの決定あるいはｕＰＡレベルともやの相関についての先入観は全くなかった。ハンナのもやの等級付けシステムが適用された。［Ｈａｎｎａ ＫＤ，ｐｏｕｌｉｑｕｅｎ ＹＭ，ｓａｖｏｌｄｅｌｌｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｉｎ ｍｏｎｋｅｙｓ １８ ｍｏｎｔｈｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｍｅｒ ｌａｓｅｒ ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ（エキシマレーザ屈折矯正角膜切除術の１８ヶ月後の猿における角膜の傷の治癒）．Ｒｅｆｒａｃｔ Ｃｏｔｍｅａｌ ｓｕｒｇ． １９９０；６：３４０−３４ｆ］
標準統計的処理が、異なるグループ（ペアを関連付ける手段としてのｔ−テスト）の間で患者の特性を比較するために使われた。ｕＰＡレベルが、等しい変化の平均値に対するｔ−テストを使って異なるグループの間で比較された。対照用の目による比較が対になるｔ−テストを使って行われた。０．０５未満の確率水準ｐを持つ相違は、有意であると考えられる。そして、ｐ＜０．００１は、非常に有意であると考えられる。
【００６０】
結果について：それぞれの目に対する涙のサンプリングをする５日間、どの目にも目立った臨床の特徴はなかった。しかしながら、ＰＲＫを受けた６個の目（５人の患者：女性４人、男性１人）には、３ヶ月〜６ヶ月の間で角膜上皮下のもや（グレード１〜２で）の形跡が、視力のわずかな減少を伴って軽く発生した。これら６つの目は、過去にさかのぼって「併発症」のケースと名称をつけた。そして、それは８％の発生頻度（７７ケース中６ケース）で現れた。残りのケースは視覚的な併発症を示さず、過去にさかのぼって「正常」なケースと明示された。患者のうち３人は１つの併発症を発症した目と、１つの正常な目を持っていた。；患者のうち１人は２つの併発症を発症した目を持っていた。；そして、併発症を発症した目をもつ患者のうち１人は、一つの目だけをサンプリングに提供していた。
【００６１】
正常なグループと、もやを併発したグループの、それぞれの目に対するｕＰＡの個々の値が図１に示されており、平均値が図２に示されている。２つのグループのプラスミノゲンアクチベータの活動係数は、手術後３日目に明確に分かれ、他の３回の計測時には部分的に一致する。図３は、ＰＲＫを受けなかった反対側の目すべてに対するプラスミノゲンアクチベータの活動係数の個々の値を示す。患者の特性は表１に提供される。
【００６２】
【表１】
2004510825.tif 000002
【００６３】
【表２】
2004510825.tif 000003
【００６４】
２つのグループの年齢、コンタクトレンズの着用期間、以前の屈折矯正、あるいは乱視の程度には統計的に意味のある相違はない。正常なケースともやを併発したケースとの平均ｕＰＡ値が表３で比較されている。ｕＰＡの測定に関して、正常な場合は、（１）ｕＰＡの平均値がＰＲＫ手術直後に手術前の平均レベルの約１１％まで低下する、（２）手術後３日目までに手術前のレベルより４１％高く増加する、（３）手術後５日目までに手術前のレベルの４％以内に戻る、というパターンを確立した。正常な患者の手術前の平均ｕＰＡレベルと、手術後５日目の値との間には、有意な差はなかった（ｐ＝０．１５）。しかしながら、手術直後と手術後３日目の平均ｕＰＡ値は、手術前と手術後５日目の平均ｕＰＡ値よりも、それぞれ有意に低く（ｐ＜０．００１）そして大きかった。もやを併発したケースには、全く異なったパターンが見受けられる。
【００６５】
表３について：正常なケースにおいて手術後３日目に手術前のレベルよりも急激な増加（４１％）が観測されるかわりに、もやが併発された６つのケースの手術後の期間においては、ＰＲＫ直後の平均ｕＰＡ値は手術前の平均値の僅か２３％に減少した。ＰＲＫ直後と手術後３日目の平均ｕＰＡ値とは、互いに有意な相違はなかった（ｐ＝０．８１）。そして、それぞれは手術前の平均ｕＰＡレベルよりも有意に低かった（ｐ＜０．００１）。もやが併発されたケースでは、５日目までに、平均ｕＰＡレベルが手術前の値よりも１６％高く増加した。さらに、平均ｕＰＡ値は、手術前の平均値と比較すると、手術後５日目に有意に増加した（ｐ＝０．０２）。これは、１日目〜３日目のｕＰＡの低レベルを補おうとしたことのリバウンド現象を表しているのかもしれない。これらの結果は、手術直後と少なくとも３日間を通してｕＰＡレベルが抑えられることと、もやが発生することとの、１００％の肯定的な相関を示している。
【００６６】
【表３】
2004510825.tif 000004
【００６７】
手術前の平均値は、もやが併発されたケースの方が、正常なｕＰＡ平均値に相当する値よりも有意に低い（ｐ＝０．０４）。しかしながら、手術前の平均は部分的に重なるために、手術前のｕＰＡレベルをもやが発生する患者を予見するために用いることはできない。手術後３日目の、もやが併発されたケースのｕＰＡ平均値対正常なケースは、非常に重要である（ｐ＜０．００１）。
【００６８】
反対の目に対するｕＰＡ平均値が表３に示されている。平均ｕＰＡレベル（正常なグループ：０．２９９±０．０８７ＩＵ／ｍｌ；もやが併発されたグループ：０．１９２±０．０２６ＩＵ／ｍｌ）は、５日間の測定期間を通して安定したままだった（図３）。正常なグループの５日間を通しての平均変化は０．０１９±０．０２３ＩＵ／ｍｌであり、もやが併発されたグループは０．０１１±０．００７ＩＵ／ｍｌであった。もやが併発されたケースの反対側の目の平均ｕＰＡレベルは、正常なケースの反対側の目のそれに相当する平均レベルよりも有意に低い（ｐ＜０．００１）。両方の反対側の目のグループにおけるｕＰＡレベルは、手術直後および３日後のＰＲＫが行われた目よりも、有意に異なる。
【００６９】
これらの研究の結果は、ＰＲＫ後の最初の３日間〜５日間に涙液中のｕＰＡレベルが（０．１ＩＵ／ｍｌ以下に、約０．１〜０．４５ＩＵ／ｍｌの手術前のレベル以下に）抑えられた患者全てに、手術後の６ヶ月間のある期間（）にもやが発生したことを示している。
【００７０】
４．実施例２　ＰＲＫ後のうさぎの涙におけるもやの形成をもたらすｕＰＡの抑制
８羽のうさぎそれぞれについて、両方の目にＰＲＫ手術が行われた。それぞれのうさぎの１つの目は、初めの７日間を通して、角膜の表面および涙中のｕＰＡを不活性にするためにセリンプロテアーゼ阻害剤（ＳＰＩ）が処置された。涙サンプル中のｕＰＡは、人間のプラスミノゲンおよび色原体のペプチド基板Ｓ−２２５１を使用して、分光測光法によって測定された。
【００７１】
材料と方法について：
８羽の正常で健康なニュージーランドうさぎ（３．０ｋｇ〜３．５ｋｇ）の１６個の目は、スクウィンドケラトムＩＩ型ＡｒＦ（Ｓｃｈｗｉｎｄ Ｋｅｒａｔｏｍ ＩＩ型ＡｒＦ）エキシマレーザ（１９３ｎｍ）を使い、同じ外科医により、デブリセン医科大学眼科学部生体レーザＬＬＣ（Ｖｉｔａｌ−Ｌａｓｅｒ ＬＬＣ， Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｄｅｂｒｅｃｅｎ）で、球面矯正のためにＰＲＫ手術を受けた。動物は、眼科と視覚研究における動物の使用に関するエーアールブイオー声明（ＡＲＶＯ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ）を遵守して取り扱われ、処置された。上皮除去は、６．０ｍｍ〜６．５ｍｍのホッファ冠状鋸（Ｈｏｆｆｅｒ ｔｒｅｆｉｎｅ）のマーキング後に、鈍い角膜ブレードナイフ（ｂｌｕｎｔ Ｋｅｒａｔｏｍｅ Ｂｌａｄｅ ｋｎｉｆｅ）で行われた。上皮は周辺部から中心へ穏やかに削り取られた。遺残上皮の残骸は、無菌のマイクロスポンジ（ｍｉｃｒｏｓｐｏｎｇｅ）で取り除かれた。
【００７２】
局部麻酔点眼薬（０．４％のオキシブプロカイン塩化塩（ｏｘｙｂｕｐｒｏｃａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ））が手術前に２回投与された。全身麻酔は、ケタミン−キシラジン（ｋｅｔａｍｉｎｅ−ｘｙｌａｚｉｎｅ）（比率２．２：１、１０ｍｇ／ｋｇ）の静脈注射によって行われた。ＰＲＫ手術は１日目の朝に行われた。手術後の治療は、抗生物質を含んだ点眼薬であるシロザン（登録商標；ＣＩＬＯＸＡＮＴＭ（Ａｌｃｏｎ））を、１日目には１２回（１時間ごとに）そしてその後５日間（手術後の２日目〜５日目および７日目）は１日につき５回（２時間ごとに）適用した。フルコン（登録商標；ＦＬＵＣＯＮＴＭ（Ａｌｃｏｎ））とティアーズナチュラル（登録商標；ＴＥＡＲＳ　ＮＡＴＵＲＡＬＥＴＭ（Ａｌｃｏｎ））とを、手術後の１ヶ月間は１日に５回（２時間ごと）与え、２ヶ月目には１日につき４回（３時間ごと）に減らし、３ヶ月目には１日につき３回（４時間ごと）に減らした。全てのうさぎは、ＰＲＫ手術の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後にフォローアップ診断を受けた。
【００７３】
さらに、それぞれのうさぎの左目は、１滴の１００００ＫＩＥ／ｍｌのセリンプロテアーゼ阻害剤（ＳＰＩ）、アプロチニン（Ｇｏｒｄｏｘ，Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｇｉｄｅｏｎ Ｒｔ． Ｂｕｄａｐｅｓｔ，）が１日目には１２回（１時間ごと）、さらにその後５日間（手術後２日目〜５日目および７日目）は５回（２時間ごとに）受けた。これは「ＳＰＩ有り」のグループと明示された。右側の目はＳＰＩの治療を受けなかった。そして、「ＳＰＩ無し」のグループとして明示された。７日目以降、両方の目に全く同じ処置がされた。それ以外の処置は６ヶ月間全く行わなかった。ＳＰＩは、ウロキナーゼ型のプラスミノゲンアクチベータとしてよく知られている親和性のアプロチニンと同様に、プラスミノゲンアクチベータ活動係数の有効な阻害剤である。［Ｌｏｔｔｅｎｂｅｒｇ Ｒ，Ｓｊａｋ−Ｓｈｉｅ Ｎ，Ｆａｚｌｅａｂａｓ ＡＴ，Ｒｏｂｅｒｔｓ ＲＭ．Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ（アプロチニンは組織タイプ−プラスミノゲンアクチベータではなくウロキナーゼを阻害する）． Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ １９８８；４９：５４９−５５６：Ｆｒｉｔｚ Ｈ， Ｗｕｎｄｅｒｅｒ Ｇ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ， ｔｈｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅ ｏｒｇａｎｓ（牛の臓器からのカリクレイン阻害剤である、アプロチニンの生化学的組成および適用法）．Ａｒｚｎｅｉｍ Ｆｏｒｓｃｈ １９８３；３３：４７９４９４．］
プラスミノゲンアクチベータ活動係数の分析のための涙のサンプルは、ＰＲＫ手術の前に（０日目）に獲得される。涙サンプルはＰＲＫ後（１日目）に数分以内で、点眼薬による治療より前に収集された。涙は、手術後２日目〜５日目、７日目は毎日、手術後３ヶ月間（９１日間）は４日おきに、ＳＰＩ治療がｕＰＡレベルを変化させないように、点眼薬による治療の前の午前中にサンプルされた。
【００７４】
涙のサンプルは、刺激のためのピロカルピン塩酸塩（５ｍｇ／ｋｇ）の注入後、ガラス毛細管を用いて採集された。涙はより低い涙メニスクスから得られ、結膜に触れないために注意した。同じ収集方法が研究の全体にわたって使用された。サンプリングの所要時間が記録され、分泌速度は得られた涙の体積をサンプル収集の時間で割ることにより、μｌ／ｍｉｎで計算された。本研究の中で使用されるサンプルは、１５μｌ／ｍｉｎ〜５０μｌ／ｍｉｎの分泌速度を持っていた。サンプルは、サンプル収集後すぐに８分間〜１０分間遠心分離（１８００ｒｐｍ）され、その上清が−８０℃で急速冷凍され、測定のために１度だけ溶かされた。
【００７５】
プラスミノゲンアクチベータ活動係数は、人間のプラスミノゲンおよびプラスミンに特有の色原体のペプチド基板（Ｄ−ｖａｌｙｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｙｌ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｓ−２５５１））を用いた分光側光方によって、涙サンプル中で測定された。この分析は、主としてウロキナーゼ型のプラスミノゲンアクチベータに敏感である。プラスミノゲンおよびＳ−２２５１はクロゲニクス社（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）から購入された。標準ウロキナーゼは、コアイ社（Ｃｈｏａｙ、Ｐａｒｉｓ， Ｆｒａｎｃｅ）から購入された。この分析はプラスミン活動係数を測定するのに適切であるが、試薬にプラスミノゲンを加えることによりプラスミノゲンアクチベータ活動係数を決定するために使用することができる。プラスミノゲンアクチベータ活動係数は、実施例１と同じように、島田および共同研究者によって記述された方法にトエザーおよび共同研究者の改良を加えた方法によって測定された。もやの決定は、どのウサギに対しても、プラスミノゲンアクチベータレベルについての情報なしでなされた。ハンナのもやの等級付けシステムが適用された。
【００７６】
標準統計的処理が、不等の変化を持つ平均値に対するｔ−テストおよび反対側の目に関する結果を比較するための対になったｔ−テストを使用して、異なるグループ内および異なるグループ間でプラスミノゲンアクチベータ活動係数を比較するために使用された。０．０５未満の確率水準ｐを持つ相違は、有意であると考えられる。そして、ｐ＜０．００１は、非常に有意であると考えられる。
【００７７】
結果について：図４および図５は、ＳＰＩ無しのうさぎの目に対する、ＰＲＫ後の初めの２１日間を通したｕＰＡレベルの時間経過を示している。表４は、初期の測定時期の間のプラスミノゲンアクチベータ活動係数の平均値、および１９日目〜９１日目の平均のｕＰＡ活動係数を示している。表４および図中では、「０日目」はＰＲＫ手術の前の日を表わし、「１日目」は手術の日であり、それ以降の日が続く。手術の前の日（０日目）の平均のプラスミノゲンアクチベータ活動係数値は、１９日目〜９１日目の平衡なプラスミノゲンアクチベータ活動係数値に対し有意には異ならない（ｐ＝０．１６）。平均ｕＰＡレベルは１日目には有意に（ｐ＜０．００１）低く（約６９％）、２日目および３日目には平衡な平均プラスミノゲンアクチベータ活動係数レベルより高かった（それぞれ、約７４％および２８％）。４日目のプラスミノゲンアクチベータ活動係数は、平衡レベルよりも有意に（ｐ＝０．０２）高かった（１０％）。しかし、５日目以降は平衡値と有意な相違はなかった。これらの目における角膜はその後の６ヶ月間を通じて透明なままだった。
【００７８】
【表４】
2004510825.tif 000005
【００７９】
図４および図６は最初の２１日間のＳＰＩ有りの反対側の目に関するプラスミノゲンアクチベータ活動係数を示している。さまざまな測定日に対する個々の平均プラスミノゲンアクチベータ活動係数レベルが、表４に示されている。ＳＰＩは、１日目〜７日目を通してのｕＰＡ活動係数の平均値を、０．１３（０．１５）ＩＵ／ｍｌに抑えた。手術前（０日目）の平均プラスミノゲンアクチベータ活動係数は、平衡プラスミノゲンアクチベータ活動係数レベル、すなわち１９日目〜９１日目を通しての平均値、２．８８（０．２２）ＩＵ／ｍｌよりも、有意には異ならない（ｐ＝０．１８）。１日目〜７日目（ＳＰＩ抑制の期間に相当する）にＳＰＩが施された目の平均ｕＰＡ活動係数は、有意に（ｐ＜０．００１）平衡プラスミノゲンアクチベータ活動係数レベル（９５％）よりも低かった。平均ｕＰＡレベルは、７日目〜１１日目まで低いままであり、１５日目までに単に手術前のレベルに戻った。これらのＳＰＩ処置された８個の目はすべて、２ヵ月後に角膜のもやが発生した。
【００８０】
手術前（０日目）の２つのグループ間の平均プラスミノゲンアクチベータ活動係数の差は有意ではなく（ｐ＝０．４６）、２つのグループに対する平衡な（１９日目〜９１日目の）平均プラスミノゲンアクチベータ活動係数は有意に異なっていた（ｐ＝０．０６）。
【００８１】
要約すれば、正常なうさぎの目（ＳＰＩ無し）に関しては、手術後（１日目）においてｕＰＡの低下があり、２日目には最初のプラスミノゲンアクチベータ活動係数を超えた高いレベルになり、それが数日間持続する。最終的に、最初のプラスミノゲンアクチベータ活動係数レベルに戻って１９日目〜９１日目まで持続される。図４および図５に見られる、ＳＰＩ無しのグループに対するこのプラスミノゲンアクチベータ活動係数レベルのパターンは、もやの発生なしで正常な傷の治療を経験した人間に見られたパターンに似ている。人間では、ＰＲＫ後のプラスミノゲンアクチベータ活動係数はゼロに近いレベルまで落ち、その後、３日目にそれから最初のレベルを上回り、手術後５日目までに最初のレベルに戻った。図４および図５のプラスミノゲンアクチベータ活動係数パターンはまた、前部の角膜切除後に正常に治癒したうさぎに関するファン・ステーテンによって報告されたそれと一致している。
【００８２】
対照的に、図４および図６に示されるＳＰＩ有りのグループのプラスミノゲンアクチベータ活動係数のパターンは、異常な傷の治癒を示し、もやが発生した人間に見られるパターンと類似するように、ＰＲＫ後に故意に低くされていた。人間の異常な治癒のケースでは、プラスミノゲンアクチベータ活動係数はＰＲＫ後にゼロ近くに落ちた。そして、手術後３日間を通して低いままであった。５日目までに、そのプラスミノゲンアクチベータ活動係数は最初のレベルを超えるか、元に戻った。ここで、図４および図６に示すように、プラスミノゲンアクチベータ活動係数レベルは、ＳＰＩ有りのグループのうさぎの目に７日間ずっとＳＰＩを使うことにより意識的に抑えられた。ｕＰＡレベルは１５日目までに手術前の正常なレベルに戻った。
【００８３】
これらの結果は、角膜のもやが最終的に発生することを防止するためには、うさぎにおいてはＰＲＫ後の初めの３日間〜４日間に、ｕＰＡが少なくとも自然な生理学のレベルに維持されるか、手術前のレベル以上に有意に上げられなければならないことを示している。１９日目〜９１日目に手術前の正常なｕＰＡレベルに戻ることは、手術後のもやを防止するために十分ではない。このように、もやを防止するためにｕＰＡレベルが上げなければならないとき、角膜の手術あるいは傷害に続く、かなり簡単で決定的な手段（ｗｉｎｄｏｗ）が存在する。
【００８４】
５．実施例３　プラスミノゲンアクチベータおよび角膜切除手術後の傷治療過程の化学反応モデル
生物化学的メカニズムについて：プラスミノゲンアクチベータ−プラスミン反応システムの化学反応システムの概要が、図７に示されている。いくつかの反応は終始活動的であると考えられるが（実線と矢印によって示されている）、他の反応は角膜が傷つけられたときにだけ起こる（破線によって示されている）。図７はまた、略した用語の定義のリストを含んでいる。相互依存の反応速度式（ｉｎｔｅｒｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒａｔｅ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ）およびそれらの知られている特性の概要は以下の通りである。
【００８５】
プラスミノゲンアクチベータの潜在している形式であるプロプラスミノゲンアクチベータ（ｐｒｏ−ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ；ｐｒｏ−ＰＡ）は、うさぎの角膜上皮細胞あるいは正常な角膜の培養組織の中にある。ｐｒｏ−ＰＡは、ここではプラスミノゲンアクチベータコンバータ（ＰＡＣ）として示されるコンバータ酵素によって活性型のプラスミノゲン（ＰＡ）に変換される。転換反応がに記述される。
【００８６】
【数１】
2004510825.tif 000006
【００８７】
全体的な順方向速度係数（ｆｏｒｗａｒｄ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）ｋＡを示し、中間の酵素基質錯体（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｅｎｚｙｍｅ−ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘ）は無視する。多くの異なる酵素は、ｐｒｏ−ＰＡをトリプシン、プラスミン、カリクレイン、エラスターゼおよびカテプシンＢを含む、その活性化された形式に変換することができる。
【００８８】
血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、リン酸化の道を示すことにより、角膜の上皮中に現れるウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータｍＲＮＡを生じる。ｐｒｏ−ＰＡの生産工程は、数式（２）で示されるｐｒｏ−ＰＡの源泉として蓄積する細胞内のｐｒｏ−ＰＡを生産するために、Ｒ１（ｔ）の速度で進むと仮定されている。
【００８９】
【数２】
2004510825.tif 000007
【００９０】
さらに、角膜上皮細胞が、Ｒ２（ｔ）と呼ばれる速度で、正常な環境の下のｐｒｏ−ＰＡを放出すると仮定されている。Ｒ１（ｔ）とＲ２（ｔ）とは、どちらも時間ｔの関数で書かれる。すなわち、速度は時間および環境により変化することができる。細胞に損傷がある場合、蓄積されたｐｒｏ−ＰＡを放出することと、細胞外の領域にｐｒｏ−ＰＡのインパルスを与えることとは同等であり、Ｒ２（ｔ）は非常に大きくなる。
【００９１】
プラスミノゲン（Ｐｇｎ）は血液中を循環しており、角膜中にある。それは浸透性であり、そのためにその源泉と平衡になると仮定される。放出平衡は数式（３）におけるＫ３の記号で明示される。
【００９２】
【数３】
2004510825.tif 000008
【００９３】
ここで興味深い主要な反応は、数式（４）に示されるように、ＰＡとＰｇｎとの間で、順方向速度ｋＭでの酵素過程によりプラスミン（Ｐｍｎ）をに形成する点にある。
【００９４】
【数４】
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【００９５】
ＰＡは、外傷後に結膜および角膜の上皮細胞から放たれるタイプ１あるいはタイプ２の阻害剤によって抑制されることができる。プラスミノゲンアクチベータ阻害剤（ＰＡＩ）は、数式（５）に与えられたｋＰＡの速度で、ＰＡと反応する。
【００９６】
【数５】
2004510825.tif 000010
【００９７】
Ｐｍｎは、コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンの分解、およびフィードバック相互作用などより多くのプラスミノゲンアクチベータを生成するための様々なプロセスに参加することができる。、また、Ｐｍｎは、α２−抗プラスミンのようなプラスミン阻害剤（ＰｍｎＩ）で抑制されることができる。このような分解およびフィードバック、抑制の過程は、ここでは相当速度定数ｋＸによってＸとして表される。ここで、Ｘは数式（６）に象徴的に示される任意の１つの過程である。
【００９８】
【数６】
2004510825.tif 000011
【００９９】
実験のプラスミノゲンアクチベータおよびプラスミンのレベルについて：ＰＲＫに関する人間およびうさぎのｕＰＡレベルは、手術の前、手術の後、およびそれ以降の治癒過程で測定された。測定された値は、図１、図２、図４および図５に示されている。ｕＰＡレベルの大きさは人間とウサギの間で同一ではない。しかし、ｕＰＡに関する時間課程は、図で見られるように、両方の種に対して質的に同じ傾向の結果になる。
【０１００】
手術前の平衡反応速度式について：角膜手術あるいは負傷の前には、ｐｒｏ−ＰＡ、ＰＡ、ＰｇｎおよびＰｍｎの分子に関係する平衡状況がある。細胞損傷がない状態で、数式（１）〜（６）の反応が生じて、反応速度式（７）〜（９）を生じさせる。
【０１０１】
【数７】
2004510825.tif 000012
【０１０２】
【数８】
2004510825.tif 000013
【０１０３】
【数９】
2004510825.tif 000014
【０１０４】
ここで、これらおよび以降の数式中の括弧は濃度を示す。主要な分子は、反応速度式の結果である数式（１０）〜数式（１５）に示されているような平衡な濃度値を取る。これらの数式は、異なる成分間の平衡について記述する。数式（１１）〜（１５）の中の各分子の平衡濃度は、ｐｒｏ−ＰＡ生成速度、Ｒ２（ｅｑ）および他の速度定数の比と示されるような濃度に依存する。
【０１０５】
【数１０】
2004510825.tif 000015
【０１０６】
【数１１】
2004510825.tif 000016
【０１０７】
【数１２】
2004510825.tif 000017
【０１０８】
【数１３】
2004510825.tif 000018
【０１０９】
【数１４】
2004510825.tif 000019
【０１１０】
【数１５】
2004510825.tif 000020
【０１１１】
角膜の損傷期間について：損傷が持続する間、角膜上皮細胞はｐｒｏ−ＰＡ、ＰＡＣ、ＰＡＩおよびＰｇｎを他のいくつかの酵素と同じように放出する。図７において、その損傷時の状況は、通常のｐｒｏ−ＰＡ、ＰＡＣ、ＰＡＩおよびＰｇｎの放出速度を迂回する破線で象徴的に示されている。これは、細胞外の周囲に、突然これらの化学薬品が流入するのに等しい。ｐｒｏ−ＰＡ、ＰＡＣ、ＰＡＩおよびＰｇｎの濃度は、それぞれ、［ｐｒｏ−ＰＡ］ｅｑ、［ＰＡＣ］ｅｑ、［ＰＡＩ］ｅｑおよび［Ｐｇｎ］から、［ｐｒｏ−ＰＡ］Ｄ、［ＰＡＣ］Ｄ、［ＰＡＩ］Ｄおよび［Ｐｇｎ］Ｄに、すぐに変えられる。その後、数式（１６）に示すように、ｐｒｏ−ＰＡは、時間ｔを通じた１桁の指数関数の濃度の減少に従う。
【０１１２】
【数１６】
2004510825.tif 000021
【０１１３】
これは、ｐｒｏ−ＰＡをＰＡに変換する。ＰＡの濃度は、ｐｒｏ−ＰＡが減少するにつれて増加する傾向にある。この傾向は、角膜の細胞損傷に付随するＰＡの増加についての直感的な概念に従う。しかしながら、同時にＰＡ濃度を減少させるさらに反応がある。すなわち、数式（１７）の中で示されるＰＡＩによる阻害剤反応である。
【０１１４】
【数１７】
2004510825.tif 000022
【０１１５】
この数式の右辺の最初の項は、ｐｒｏ−ＰＡを費やして引き出されたＰＡの増加を表わす。また、第２の項は阻害剤反応である。後の反応は１桁のＰＡ濃度であり、高いＰＡ濃度で加速される。ＰＡは、数式（１７）の中で表わされた、反対の傾向との平衡を保たなければならない。Ｐｍｎ濃度は、数式（１８）の右辺の最初の項の影響のために当初増加することにより、ＰＡとＰｇｎの濃度の最初の変化に応答する。
【０１１６】
【数１８】
2004510825.tif 000023
【０１１７】
数式１８の第２の項によって表されるいくつかの過程は、数式１８内および数式１７内の他の反応と比較すると遅いようである。特に、数式１７中の阻害反応と比較すると遅い。
【０１１８】
数式（１６）に示された指数関数的な減衰の時間構成を通して、ｐｒｏ−ＰＡレベルは濃度［ｐｒｏ−ＰＡ］Ｄから新しいレベル［ｐｒｏ−ＰＡ］Ａｆｔｅｒまで落ちる。ここで、数式（７）の支配的な項は、細胞内のｐｒｏ−ＰＡの生成に寄与する右辺の最初の項になる。ｐｒｏ−ＰＡの見かけの平衡値は、数式（１９）に示されるように、今再び、変更箇所を除いて数式（１３）の同様の式によって支配されるだろう。数式（１９）では、生成速度係数が、それ以前と異なり（Ｒ２（ｅｑ）≠Ｒ２（ａｆｔｅｒ））、細胞内の蓄積が使い尽くされたためにとても低くなっている。
【０１１９】
【数１９】
2004510825.tif 000024
【０１２０】
ＰＡＣ濃度が高いレベルにある場合、Ｒ２（ａｆｔｅｒ）と［ＰＡＣ］ａｆｔｅｒの両方は、ｐｒｏ−ＰＡレベル、［Ｐｒｏ−ＰＡ］ａｆｔｅｒを、前の平衡値［ｐｒｏ−ＰＡ］ｅｑ以下に低下させる傾向がある。ＰＡの濃度は、数式（２０）の阻害剤反応を含む新しい平衡値に調節される。
【０１２１】
【数２０】
2004510825.tif 000025
【０１２２】
ＰＡ濃度は、数式（１４）内のそれらの値とは異なるＲ２（ａｆｔｅｒ）および［ＰＡＩ］ａｆｔｅｒの量によって変更される。ＰＡＩ濃度が高いレベルにある場合、Ｒ２（ａｆｔｅｒ）および［ＰＡＩ］ａｆｔｅｒの両方は、ＰＡレベル（［ＰＡ］ａｆｔｅｒ）を以前の平衡値［ＰＡ］ｅｑ以下に低下させる傾向がある。低レベルの［ＰＡ］ａｆｔｅｒは、手術直後の人間およびうさぎの両方の測定結果と一致している。Ｐｍｎ濃度は、数式（１６）の指数関数的な減衰の時間間隔による数式（１８）の積分によって決定され、それによってＰｇｎの量は［ｐｒｏ−ＰＡ］Ｄレベルから生産されたＰＡの量と同等のＰｍｎに変換される。手術後の測定がその手術直後（数分以内）に行なわれてから、［ＰＡ］ａｆｔｅｒおよび［Ｐｍｎ］ａｆｔｅｒへの変換がその短い時間間隔（数分）以内で生じるため、数式（１６）内の指数関数的な減衰の速度はかなり速くなければならない（恐らく秒単位）。秒の時間単位でのｐｒｏ−ＰＡのＰＡへの転換（数式１６）は、清浄なシステムにおけるこの過程としての、以前の試験管内での反応速度測定結果と一致している。［Ｃａｍｉｏｌｏ ＳＭ，Ｔｈｏｒｓｅｎ Ｓ，Ａｓｔｒｕｐ Ｔ．Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ， ｕｒｏｌｉｎａｓｅ， ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｇｌｏｂｕｌｉｎ， ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎ（組織プラスミノゲンアクチベータ、ウロリナーゼ、人間のグロブリンによって活性化されたストレプトキナーゼ、およびプラスミンによる繊維素溶解およびフィブリノゲノリシス）．Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐｅｒ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ １９７１；１３８：２ ７７−２８０：Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｕ．Ｋｉｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ−ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ｔｏ ｐｌａｓｍｉｎ（ＮＨ２ターミナルグルタミン酸プラスミノゲンのプラスミンへの転換の触媒作用を及ぼされたウロキナーゼの活動研究）．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９７７；４８１：６３８−６４７：プラスミンへのＮＨ２末端のグルタミン酸プラスミノゲンのウロキナーゼに触媒作用を及ぼされた転換に関する活動的な研究。Ｗｏｈｌ ＲＣ，Ｓｕｍｍａｒｉａ Ｌ，Ａｒｚａｄｏｎ Ｌ，Ｒｏｂｂｉｎｓ ＫＣ．Ｓｔｅａｄｙ ｓｔａｔｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｂｏｖｉｎｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｓ ｂｙ ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｑｕｉｍｏｌａｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ（ストレプトキナーゼ、およびそれと人間のプラスミノゲンの様々な活性化された形態との等モルの錯体による、人間および牛のプラスミノゲンの活性化の定常状態速度）．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９７８；２５３：１４０２−１４０７：Ｃｏｌｌｅｎ Ｄ．Ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ（繊維素溶解の規則お��び制御について）．Ｔｈｒｏｍｂｏｓ Ｈａｅｍｏｓｔａｓ （Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）１９８０；４３：７７−８９．］
傷の治癒期間について：　その後、傷の治癒過程では、ｐｒｏ−ＰＡ生成レベルは、高められた放出速度Ｒ２（ｌａｔｅｒ）で高められたレベルＲ１（ｌａｔｅｒ）に増加すると仮定される。高められたｐｒｏ−ＰＡの生成速度は、ＰＡの濃度を、数式（２０）に示された値から高められたレベル［ＰＡ］ｌａｔｅｒに変換する。これは、人間とうさぎとの実験で観察されたｕＰＡの高いレベルと一致している。ＰＡＣおよびＰＡＩのレベルの変化とともに、これらのｕＰＡの変化は、この後期段階中のＰｍｎ濃度に影響を持つ。数式（１８）の要素の平衡は、この後期段階でＰｍｎ濃度の低下をもたらす。
【０１２３】
手術後の平衡期間について：最終的に（さらにその後）、ｐｒｏ−ＰＡ生成レベルは、結局、標準レベルＲ１（ｅｑ）および正常な放出速度Ｒ２（ｅｑ）に戻る。ＰＡＣおよびＰＡＩのレベルもまた正常に戻る。したがって、［ｐｒｏ−ＰＡ］ｅｑ、［ＰＡ］ｅｑおよび［Ｐｍｎ］ｅｑと明示された手術前のレベルへの復帰が再び実現される。これは人間で観察されたＰＡレベルと一致している。
【０１２４】
議論：プラスミノゲンアクチベータ−プラスミンのカスケード（ｃａｓｃａｄｅ）に含まれる分子の源は、角膜中の様々な細胞および組織である。サンプリング位置が涙液中であるけれども、化学の相互作用の位置もまた角膜内である。角膜から涙液までの大量輸送（ｍａｓｓ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）による分子の移動が速く、分子の濃度がその２つの間で平衡にある、と仮定されている。
【０１２５】
本研究に記述されたメカニズムは、角膜の傷害後のプラスミノゲンアクチベータ−プラスミンのカスケードの構成要素の既知の反応を含んでいる。その分析は、この複雑な生化学のシステムの理解への以下の定性的な方法を提供する。正常な環境の下では、平衡は、システムに関与する分子の集合の間で確立させられる。角膜の損傷（手術）が生じている場合、ｐｒｏ−ＰＡ、ＰＡＣ、ＰＡＩおよびＰｇｎは傷ついた角膜の上皮細胞から即座に放出される。これは、ｐｒｏ−ＰＡの活性なＰＡへの転換にはじまり、その後、Ｐｍｎを形成するためにＰＡがＰｇｎと反応することで、速い（秒単位の）カスケードを導く。さらに、ＰＡはＰＡＩの高いレベルにさらされる。手術後に（数分以内で）測定がなされる時間までに、ＰＡはＰＡＩによって低いレベルに減らされ、Ｐｍｎは高められる。ＰＡレベルは縮小されるが、ＰＡの生成あるいは放出は、使い尽くされたＰＡレベルを回復し、Ｐｍｎの継続的な需要を用立てるために高められるようになる。ＰＡの生成およびＰＡＩレベルの間の平衡は、次の数日間を通してＰＡ活動係数の課程を決定する。その後、細胞損傷が取り除かれる時（数日後に）、高められた生成のためにＰＡが高いレベルへの行過ぎがある。その後、５日目までに、平衡は回復される。
【０１２６】
正常に治癒された角膜で角膜に障害があるケースの涙中で測定されたＰＡ活動係数レベルは、図７に示された化学反応メカニズムと一致している。これは、傷害を受けた角膜上皮細胞から化学物質を迅速な排出と、迅速なカスケード反応とが、Ｐｍｎを形成すると仮定する。手術の数分後になされた測定は、角膜の傷害後のＰＡの予期された増加を観察するためには遅すぎる。ＰＡの速い減衰は、手術後数分以内にＰＡレベルを低くし、低いＰＡについての観察を生じさせる。したがって、化学反応メカニズムは、傷害後の正常なパターンのＰＡ活動係数に対する説明を提供する。
【０１２７】
先の詳述では、発明は特定の具体例に関して記述された。しかしながら、発明のより広い精神および理解から外れずに、様々な変更および変化が可能であることは明白である。したがって、上記記載と図面は制限的な意義ではなく、１つの実施例とみなされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
正常に治癒された目に対する個々の値の集団（７１／７７）と、もやが併発された場合に対する個々の値の集団（６／７１）との比較を示す、人間の目におけるＰＲＫ前および後の個々のｕＰＡ活動係数レベル。
【図２】
ＰＲＫ後の人間の涙中で観察された平均ｕＰＡ活動係数。：７１個の目は正常なｕＰＡパターンを有しており、全くもやがない。；６個の目は、ＰＲＫ後の３日間を通じて低いｕＰＡ活動係数レベルを有しており、全てもやが発達している。
【図３】
調査の間に手術を行われていない反対側の目（正常に治癒した目の反対側の目およびもやが発達した目の反対側の目において、ＰＲＫが行われる前および後）のそれぞれに対して人間の涙中の個々のｕＰＡ活動係数レベルが与えられている。
【図４】
処置されていない目（ＳＰＩ無し）と、処置された目（ＳＰＩ有り）に対する、ＰＲＫ後のうさぎの涙中で観察された平均ｕＰａ。８個のＳＰＩ無しの目は正常なｕＰＡ活動係数のパターンを有しており、もやはどれにも発達しなかった。８個のＳＰＩ有りの目は、ＰＲＫ後の７日間にＳＰＩ処置されることにより、ｕＰＡ活動係数レベルが抑えられている。そして、全て手術後のもやが発達した。
【図５】
ＰＲＫ後にセリンプロテアーゼ阻害剤で処置がされていない（ＳＰＩ無し）目に関する、うさぎの涙中の個々のｕＰＡ活動係数レベル。
【図６】
ＰＲＫ後の７日間、セリンプロテアーゼ阻害剤で処置された（ＳＰＩ有りの）目に関する、うさぎの涙中の個々のｕＰＡ活動係数レベル。
【図７】
主反応を濃い線で、通常の補助反応を薄い線で、そして、損傷のメカニズムを破線で示した、プラスミン反応システムへのプロスミノゲンアクチベータの概要図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004510825.tif 000102
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