(57)【要約】本発明は、HIV逆転写酵素阻害剤として有用な式(I)：【化１】2004532224.tif 000021で示される三環系化合物またはその立体異性体、立体異性体混合物、または医薬的に許容される塩、およびそれを含む医薬組成物および診断キット、ならびにそれを種々のウイルス感染の治療にまたはアッセイ標準品もしくは試薬として用いる方法に関する。
2004532224.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2004532224.tif 000019
で示される化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体混合物または医薬的に許容される塩
［式中、R1は0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキルの群から選ばれる；
R2は-(CH2)OCH(CH3)2である;
Xは、F、Cl、Br、I、およびCNから選ばれる;
Yは、F、Cl、Br、I、およびCNから選ばれる;
ZはNおよびN-オキシドから選ばれる。]。
【請求項２】
R1が0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキルの群から選ばれ、
R2が-(CH2)OCH(CH3)2であり、
XがF、Cl、Br、I、およびCNから選ばれ、
YがF、Cl、Br、およびIから選ばれ、
ZがNおよびN-オキシドから選ばれる請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1がCF3であり、
XがF、Cl、およびCNから選ばれ、
YがFおよびClから選ばれる請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
ZがNである請求項1-2記載の化合物。
【請求項５】
ZがN-オキシドである請求項1-2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
式(Ia)：
【化２】
2004532224.tif 000020
で示される請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
R1が0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキル群から選ばれ、
XがF、Cl、およびCNから選ばれ、
YがF、Cl、およびBrから選ばれる請求項1記載の化合物。
【請求項８】
R1がCH3CF2から選ばれる請求項7記載の化合物。
【請求項９】
以下から選ばれる式(I)の化合物である請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-1-オキシ-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;および
3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン。
【請求項１０】
以下から選ばれる式(I)の化合物である請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩：
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
(R)3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
(R)3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
(R)3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-1-オキシ-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
(R)3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;および
(R)3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン。
【請求項１１】
医薬的に許容される担体、および治療的有効量の請求項1-10記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項１２】
治療を要する宿主に治療的有効量の請求項1-10記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含むHIV感染の治療方法。
【請求項１３】
治療を要する宿主に、治療的有効量の
(a)請求項1-10記載の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤、HIVプロテアーゼ阻害剤、CCR-5阻害剤、および融合阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも1つの化合物
を組み合わせて投与することを含むHIV感染の治療方法。
【請求項１４】
逆転写酵素阻害剤が、AZT、ddC、ddI、d4T、3TC、デラビルジン、エファビレンズ、ネビラピン、Ro 18,893、トロビルジン、MKC-442、HBY 097、HBY1293、GW867、ACT、UC-781、UC-782、RD4-2025、MEN 10979、AG1549(S1153)、TMC-120、TMC-125、カラノリド(Calanolide)A、およびPMPAの群から選ばれ、
プロテアーゼ阻害剤が、サクイナビル、リトナビル、インディナビル、アムプレナビル、ネルフィナビル、パリナビル、BMS-232623、GS3333、KNI-413、KNI-272、LG-71350、CGP-61755、PD 173606、PD 177298、PD 178390、PD 178392、U-140690、ABT-378、DMP-450、AG-1776、VX-175、MK-944、およびVX-478の群から選ばれ、
CCR-5阻害剤がTAK-779(Takeda)、SC-351125(SCH-C、Schering)およびSCH-D(Schering)から選ばれ、
融合阻害剤がT-20およびT1249から選ばれる
請求項13記載の方法。
【請求項１５】
逆転写酵素阻害剤が、AZT、エファビレンズ、および3TCの群から選ばれ、プロテアーゼ阻害剤が、サクイナビル、リトナビル、ネルフィナビル、およびインディナビルの群から選ばれる請求項14記載の方法。
【請求項１６】
逆転写酵素阻害剤がAZTである請求項15記載の方法。
【請求項１７】
プロテアーゼ阻害剤がインディナビルである請求項16記載の方法。
【請求項１８】
1またはそれ以上の無菌容器中に、治療的有効量の
(a)請求項1-10記載の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤およびHIVプロテアーゼ阻害剤からなる群から選ばれる1またはそれ以上の化合物を含むHIV感染の治療に有用な医薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的には三環系化合物、およびHIV逆転写酵素阻害剤として有用な三環系化合物、それらを含む医薬組成物および診断キット、それらをウイルス感染の治療にもしくはアッセイ標準品もしくは試薬として使用する方法、および該三環系化合物を製造するための中間体および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
2つの異なるレトロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)1型(HIV-1)もしくは2型(HIV-2)は、免疫抑制疾患、後天性免疫不全症候群(AIDS)と病因的関連がある。HIV血清陽性の個体は、最初は無症状であるが、典型的にはAIDS関連症候群(ARC)、次いでAIDSを発現する。罹患個体は重度の免疫抑制を示し、衰弱しやすくなり、最終的に致死的日和見感染に罹りやすくなる。AIDS疾患は、HIV-1またはHIV-2ウイルスの複雑なウイルスライフサイクルの結果である。ビリオンのライフサイクルは、ビリオン保護被膜表面上の糖タンパク質がリンパ球細胞上のCD4糖タンパク質と結合することによりビリオン自身が宿主ヒトT-4リンパ球免疫細胞に付着することを含む。付着すると、ビリオンはその糖タンパク質被膜を脱ぎ捨て、宿主細胞の膜内に侵入し、そのRNAを脱殻する。ビリオン酵素の逆転写酵素はRNAの一本鎖DNAへの転写過程を指示する。ウイルスRNAは変性し、第2DNA鎖が作られる。その二本鎖DNAはヒト細胞遺伝子内に統合され、該遺伝子はウイルスの複製に使われる。
【０００３】
RNAポリメラーゼは、統合ウイルスDNAをウイルスmRNAに転写する。ウイルスRNAは前駆体gag-pol融合ポリタンパク質に翻訳される。次に、ポリタンパク質はHIVプロテアーゼ酵素により開裂し、成熟ウイルスタンパク質となる。すなわち、HIVプロテアーゼは、ウイルス粒子を完全な感染能力があるウイルスに成熟させる開裂事象のカスケードの調節を担っている。
【０００４】
ウイルスが感染し、免疫系T細胞を殺すので、典型的ヒト免疫系反応である侵入ビリオンの殺滅に大きな負担がかかる。さらに、新しいビリオン粒子の生成に用いられる酵素であるウイルス逆転写酵素は、あまり特異的ではなく、ウイルス保護被膜表面上の糖タンパク質の頻繁な変化をもたらす転写の間違いを生じる。この特異性不足は、ある糖タンパク質に対して特異的に生じた抗体が別のものに役立たず、ウイルスと戦うのに利用可能な抗体数を減少させるので免疫系の有効性を低下させる。ウイルスは免疫反応系が弱まり続ける間複製され続ける。ほとんどの場合、治療的介入なしでは、HIVは宿主の免疫系を衰弱させ、日和見感染を生じさせる。抗ウイルス剤、免疫調節物質またはその両方を投与しないと死を招くかもしれない。
【０００５】
HIVライフサイクルには抗ウイルス剤の可能な標的として確認されている少なくとも3つの重要なポイントがある：
(1)ビリオンのT-4リンパ球またはマクロファージ部位への最初の付着、
(2)ウイルスRNAのウイルスDNA(逆転写酵素、RT)への転写、および
(3)HIVプロテアーゼによるgag-polタンパク質のプロセシング。
【０００６】
第二の重要ポイントであるウイルスRNAのウイルスDNAへの転写プロセスにおけるウイルスの阻害は、AIDS治療に用いる多くの最新療法をもたらしてきた。ビリオンの遺伝子はRNA中にコードされており、宿主細胞はDNAのみを転写するので、ビリオンの複製をもたらすにはこの転写が生じる必要がある。逆転写酵素がウイルスDNAの形成を完結させるのを妨げる薬剤を導入することにより、HIV-1の複製を止めることができる。
【０００７】
ウイルスの複製に干渉する多くの化合物がAIDSを治療するために開発されてきた。例えば、ヌクレオシド類似体、例えば3'-アジド-3'-デオキシチミジン(AZT)、2',3'-ジデオキシシチジン(ddC)、2',3'-ジデオキシチミジネン(d4T)、2',3'-ジデオキシイノシン(ddI)、および2',3'-ジデオキシ-3'-チア-シチジン(3TC)は、ある症例で逆転写酵素(RT)段階におけるHIVの複製を停止させるのに比較的有効であることが示された。
【０００８】
活発な研究領域は、非ヌクレオシドHIV逆転写酵素阻害剤(NNRTI)の発見である。例えば、ある種のベンゾキサジノンおよびキナゾリノンがHIV逆転写酵素の阻害、HIV感染の予防もしくは治療、およびAIDSの治療に活性があることがわかっている。
【０００９】
米国特許5,874,430は、HIV治療用の非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤であるベンゾキサジノンを開示している。米国特許5,519,021は、式：
【化１】
2004532224.tif 000003
(ここでXはハロゲンであり、ZはOであってよい。)で示されるベンゾキサジノンである非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤を開示している。
【００１０】
EP 0,530,994およびWO 93/04047は、式(A)：
【化２】
2004532224.tif 000004
で示されるキナゾリノンであるHIV逆転写酵素阻害剤を開示している
［式中、Gは種々の基である。R3およびR4はHであってよい。ZはOで合ってよい。R2は、非置換アルキルアルキル、非置換アルケニル、非置換アルキニル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロ環、および所望により置換されたアリールであってよい。R1は置換アルキルを含む種々の基であってよい。］。
【００１１】
WO 95/12583は、式AのHIV逆転写酵素阻害剤についても記載している。この公開公報では、Gは種々の基であり、R3およびR4はHであってよく、ZはOであってよく、R2は置換アルケニルまたは置換アルキニルであり、R1は、シクロアルキル、アルキニル、アルケニル、またはシアノである。WO 95/13273は、WO 95/12583の化合物の1つ、(S)-(-)-6-クロロ-4-シクロプロピル-3,4-ジヒドロ-4((2-ピリジル)エチニル)-2(1H)-キナゾリノンの不斉合成を開示している。
【００１２】
上記のようなキナゾリノンの合成方法は、以下の参考文献に詳述されている：Houpisら、Tetr. Lett. 1994,35(37), 6811-6814; Tuckerら、J. Med. Chem. 1994, 37, 2437-2444；およびHuffmanら、J. Org. Chem. 1995, 60, 1590-1594。
【００１３】
DE 4,320,347は、式：
【化３】
2004532224.tif 000005
［式中、Rはフェニル、炭素環、またはヘテロ環である。]
で示されるキナゾリノンを開示している。
【００１４】
WO 01/29037は、式：
【化４】
2004532224.tif 000006
で示されるHIV逆転写酵素阻害剤である一連の三環系化合物を開示している。WO 01/29037に示す実施例は本発明の部分とは考えられない。
【００１５】
逆転写酵素阻害剤の今日の成功があっても、HIV患者は該阻害剤に耐性になりうることがわかってきた。すなわち、さらにHIV感染に有効なさらなる阻害剤を開発する必要性がある。
【００１６】
(発明の要約)
したがって、本発明は新規逆転写酵素阻害剤を提供する。
本発明は新規三環系化合物を提供する。
【００１７】
本発明は、治療を要する宿主に治療的有効量の少なくとも1つの本発明化合物(その医薬的に許容される塩を含む)を投与することを含むHIV感染の新規治療方法を提供する。
【００１８】
本発明は、治療を要する宿主に(a)本発明化合物の1つおよび(b)HIV逆転写酵素阻害剤およびHIVプロテアーゼ阻害剤からなる群から選ばれる1またはそれ以上の化合物の治療的に有効な組み合わせを投与することを含むHIV感染の新規治療方法を提供する。
【００１９】
本発明は、医薬的に許容される担体および治療的有効量の少なくとも1つの本発明化合物またはその医薬的に許容される塩を含む逆転写酵素阻害活性を有する医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明は治療に用いる新規三環系化合物を提供する。
さらに本発明は、HIV感染治療用の医薬を製造するための新規三環系化合物の使用を提供する。
【００２１】
下記詳細な説明で明らかになるであろうこれらおよび他の局面は、式(I)：
【化５】
2004532224.tif 000007
[式中、R1、R2、X、YおよびZは前記と同意義である。]
で示される化合物(そのあらゆる立体異性体、立体異性体混合物、複合体、プロドラッグ、または医薬的に許容される塩を含む)が有効な逆転写酵素阻害剤であるという本発明者らの発見により達成された。
【００２２】
(好ましい態様の詳細な説明)
［1］すなわち、第一の態様において、本発明は式(I)：
【化６】
2004532224.tif 000008
［式中、R1は0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキルの群から選ばれる；
R2は-(CH2)OCH(CH3)2である;
Xは、F、Cl、Br、I、およびCNから選ばれる;
Yは、F、Cl、Br、I、およびCNから選ばれる;
ZはNおよびN-オキシドから選ばれる。]
で示される化合物、またはその立体異性体もしくは立体異体混合物または医薬的に許容される塩を提供する。
【００２３】
［2］別の態様において、本発明は、
R1が0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキルの群から選ばれ；
R2が-(CH2)OCH(CH3)2であり、
XがF、Cl、Br、I、およびCNから選ばれ、
YがF、Cl、Br、およびIから選ばれ、
ZがNおよびN-オキシドから選ばれる、式(I)：
【化７】
2004532224.tif 000009
で示される化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体混合物、複合体、プロドラッグ、または医薬的に許容される塩を提供する。
【００２４】
［3］別の態様において、本発明は、
R1がCF3であり、
XがF、Cl、およびCNから選ばれ、
YがFおよびClから選ばれる
式(I)の化合物を提供する。
【００２５】
［4］別の態様において、本発明は、ZがNである式(I)の化合物を提供する。
【００２６】
［5］別の態様において、本発明は、ZがN-オキシドである式(I)の化合物を提供する。
【００２７】
［8］別の態様において、本発明は、
R1が0-7個のハロゲンで置換されたC1-3アルキル群から選ばれ、
XがF、Cl、およびCNから選ばれ、
YがF、Cl、およびBrから選ばれる式(I)の化合物を提供する。
【００２８】
［9］別の態様において、本発明は、R1がCH3CF2から選ばれる式(I)の化合物を提供する。
【００２９】
［6］別の態様において、本発明は、式(Ia)：
【化８】
2004532224.tif 000010
で示される式(Ia)の化合物を提供する。
【００３０】
［7］別の態様において、本発明は、
【化９】
2004532224.tif 000011
である式(Ib)の化合物を提供する。
【００３１】
本発明の別の態様は、XがFおよびClから選ばれる式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、XがCNである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、XがFである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、XがClである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、XがIである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、YがClである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、YがCNである式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、R1がCH3CF2である式(I)の化合物を含む。
本発明の別の態様は、式(I)の化合物を含む。
【００３２】
別の態様において、本発明は、以下から選ばれる式(I)の化合物を含む：
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-1-オキシ-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;および
3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン。
【００３３】
別の態様において、本発明は、以下から選ばれる式(I)の化合物を含む：
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
(R)3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド;
(R)3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
(R)3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-1-オキシ-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル;
(R)3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;
(R)3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド;
(R)7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;および
(R)3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン。
【００３４】
本発明は、医薬的に許容される担体、および治療的有効量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む新規医薬組成物も提供する。
【００３５】
本発明化合物を含む組成物および使用方法は、本発明化合物およびその立体異性体、その立体異性体混合物、その複合体、その結晶、そのプロドラッグ、およびその医薬的に許容される塩を含む組成物および使用方法を含む。
【００３６】
別の態様において、本発明は、治療を要する宿主に治療的有効量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含むHIV感染の新規治療方法を提供する。
【００３７】
別の態様において、本発明は、治療を要する宿主に、治療的有効量の
(a)式(I)の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤およびHIVプロテアーゼ阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも1つの化合物
を組み合わせて投与することを含むHIV感染の新規治療方法を提供する。
【００３８】
別の態様において、本発明は、治療を要する宿主に、治療的有効量の
(a)式(I)の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤、HIVプロテアーゼ阻害剤、CCR-5阻害剤、および融合阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも1つの化合物
を組み合わせて投与することを含むHIV感染の新規治療方法を提供する。
【００３９】
別の態様において、上記HIV感染の治療方法に有用な逆転写酵素阻害剤は、AZT、ddC、ddI、d4T、3TC、デラビルジン、エファビレンズ(efavirenz)、ネビラピン、Ro 18,893、トロビルジン、MKC-442、HBY 097、HBY1293、GW867、ACT、UC-781、UC-782、RD4-2025、MEN 10979、AG1549(S1153)、TMC-120、TMC-125、カラノリド(Calanolide)A、およびPMPAの群から選ばれる。上記HIV感染の治療方法に有用な好ましいプロテアーゼ阻害剤は、サクイナビル、リトナビル、インディナビル、アムプレナビル、ネルフィナビル、パリナビル、BMS-232623、GS3333、KNI-413、KNI-272、LG-71350、CGP-61755、PD 173606、PD 177298、PD 178390、PD 178392、U-140690、ABT-378、DMP-450、AG-1776、VX-175、MK-944、およびVX-478の群から選ばれ、CCR-5阻害剤はTAK-779(Takeda)、SC-351125(SCH-C、Schering)およびSCH-D(Schering)から選ばれ、融合阻害剤はT-20およびT1249から選ばれる。
【００４０】
別の態様において、逆転写酵素阻害剤は、AZT、エファビレンズ、および3TCの群から選ばれ、プロテアーゼ阻害剤は、サクイナビル、リトナビル、ネルフィナビル、およびインディナビルの群から選ばれる。
別の態様において、逆転写酵素阻害剤はAZTである。
別の態様において、プロテアーゼ阻害剤はインディナビルである。
【００４１】
別の態様において、本発明は、1またはそれ以上の無菌容器中に、治療的有効量の
(a)式(I)の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤およびHIVプロテアーゼ阻害剤からなる群から選ばれる1またはそれ以上の化合物を含むHIV感染の治療に有用な医薬キットを提供する。
【００４２】
別の態様において、本発明は治療に用いる新規三環系化合物を提供する。
別の態様において、本発明はHIV感染治療用の医薬を製造するための新規三環系化合物の使用を提供する。
【００４３】
本発明は、その精神または本質的特性から離れることなく他の特定の形に具体化することができよう。本発明は本明細書に記載の本発明の好ましい局面のすべての組み合わせも含む。本発明のあらゆるおよびすべての態様は本発明のさらなる態様を説明するためにあらゆる他の態様と併せて用いてよいと理解される。さらに、態様のあらゆる要素は、さらなる態様を説明するためにあらゆる態様からのあらゆるおよびすべての他の要素と組み合わせることが意図されている。
【００４４】
(定義)
本発明化合物は、不斉置換された炭素原子を含み、所望により活性形またはラセミ形で単離してよいことは理解されよう。例えばラセミ形の分割または合成により光学的に活性な出発物質から光学活性形を製造する方法は当該分野でよく知られている。特定の立体化学または異性体を特に示さない限り、構造のすべてのキラル形、ジアステレオマーおよびラセミ形、およびすべての幾何学異性体が意図される。
【００４５】
本発明は、本発明化合物に存在する原子のすべての同位元素を含むものとする。同位元素には原子番号が同じで質量番号が異なる原子を含む。限定されるものではないが一般例により、水素の同位元素はトリチウムと重水素を含む。炭素の同位元素はC-13とC-14を含む。
本明細書で用いている以下の用語および表現は示した意味を有する。
【００４６】
本明細書で用いている「アルキル」は、示した数の炭素原子を有する分岐鎖および直鎖の両飽和脂肪族炭化水素基を含むものとする。例として、用語「C1-10アルキル」または「C1-C10アルキル」は、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、およびC10アルキル基を含むものとする。「C1-4アルキル」は、C1、C2、C3、およびC4アルキル基を含むものとする。
【００４７】
アルキルの例には、限定されるものではないが、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、s-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、およびs-ペンチルが含まれる。「ハロアルキル」は、1またはそれ以上のハロゲンで置換された示した数の炭素原子を有する分岐鎖および直鎖の飽和脂肪族炭化水素基(例えば、-CVFw、ここで、v=1〜3、w=1〜(2v+1))を含むものとする。ハロアルキルの例には、限定されるものではないが、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、3,3,3-トリフルオロプロピル、ペンタフルオロエチル、およびペンタクロロエチルが含まれる。「アルコキシ」は、酸素架橋を介して結合した示した数の炭素原子を有する上記アルキル基を表す。C1-10アルコキシは、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、およびC10アルコキシ基を含むものとする。アルコキシの例は、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プロポキシ、n-ブトキシ、s-ブトキシ、t-ブトキシ、n-ペントキシ、およびs-ペントキシが含まれる。「シクロアルキル」は、飽和環基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、またはシクロペンチルを含むものとする。C3-7シクロアルキルは、C3、C4、C5、C6、およびC7シクロアルキル基を含むものとする。「アルケニル」は、鎖に沿ったあらゆる適切な位置で生じてよい直鎖または分岐鎖配置の炭化水素鎖および1またはそれ以上の不飽和炭素-炭素結合、例えばエテニル、プロペニルなどを含むものとする。C2-10アルケニルは、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、およびC10アルケニル基を含むものとする。「アルキニル」は、直鎖または分岐鎖配置の炭化水素鎖、および鎖のあらゆる適切な点に生じてよい1またはそれ以上の三重炭素-炭素結合を含むものとする(例えばエチニル、プロピニルなど)。C2-10アルキニルは、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、およびC1Oアルキニル基を含むものとする。
【００４８】
本明細書で用いている「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを表す。「対イオン」は、小さな負に荷電した種、例えば塩素、臭素、ヒドロキシド、アセテート、サルフェートなどを表すのに用いる。
【００４９】
本明細書で用いている、「HIV逆転写酵素阻害剤」は、HIV逆転写酵素(RT)のヌクレオシドおよび非ヌクレオシド阻害剤の両方を表すものとする。ヌクレオシドRT阻害剤は、限定されるものではないが、AZT、ddC、ddI、d4T、および3TCを含む。非ヌクレオシドRT阻害剤は、限定されるものではないが、デラビルジン(Pharmacia and Upjohn U90152S)、エファビレンズ(DuPont)、ネビラピン(Boehringer Ingelheim)、Ro 18,893(Roche)、トロビルジン(Lilly)、MKC-442(Triangle)、HBY 097(Hoechst)、HBY1293(Hoechst)、GW867(Glaxo Wellcome)、ACT(Korean Research Institute)、UC-781(Rega Institute)、UC-782(Rega Institute)、RD4-2025(Tosoh Co. Ltd.)、MEN 10979(Menarini Farmaceutici)、AG1549(S1153; Agouron)、TMC-120、TMC-125、およびCalanolide Aを含む。
【００５０】
本明細書で用いている「HIVプロテアーゼ阻害剤」は、HIVプロテアーゼを阻害する化合物を表すものとする。例には、限定されるものではないが、サクイナビル(Roche、Ro31-8959)、リトナビル(Abbott、ABT-538)、インディナビル(Merck、MK-639)、アムプレナビル(Vertex/Glaxo Wellcome)、ネルフィナビル(Agouron、AG-1343)、パリナビル(Boehringer Ingelheim)、BMS-232623(Bristol-Myers Squibb)、GS3333(Gilead Sciences)、KNI-413(Japan Energy)、KNI-272(Japan Energy)、LG-71350(LG Chemical)、CGP-61755(Ciba-Geigy)、PD 173606(Parke Davis)、PD 177298(Parke Davis)、PD 178390(Parke Davis)、PD 178392(Parke Davis)、U-140690(Pharmacia and Upjohn)、チプラナビル(Pharmacia and Upjohn、U-140690)、DMP-450(DuPont)、AG-1776、VX-175、MK-944、VX-478、およびABT-378が含まれる。さらなる例には、W093/07128、WO 94/19329、WO 94/22840、およびPCT出願番号US96/03426に開示の環状プロテアーゼ阻害剤が含まれる。
【００５１】
本明細書で用いている「X-オキシド」は、実施例2に示す化合物7に示すようにNが酸化されている化合物を表す。
【００５２】
本明細書で用いている「医薬的に許容される塩」は、親化合物がその酸性塩または塩基性塩を作ることにより修飾される開示した化合物の誘導体を表す。医薬的に許容される塩の例には、限定されるものではないが、アミンのような塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが含まれる。医薬的に許容される塩は、例えば無毒性無機酸または有機酸から形成された親化合物の常套的無毒性塩または第四級アンモニウム塩を含む。例えば、そのような常套的無毒性塩には、無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などから誘導されるもの、および有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などから製造される塩が含まれる。
【００５３】
本発明の医薬的に許容される塩は常套的な化学的方法により塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般的には、そのような塩は、これら化合物の遊離酸または塩基を、水もしくは有機溶媒、またはその2つの混合物中(一般には非水性媒質、例えばエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルが好ましい)の、化学量論的量の適切な塩基または酸と反応させることにより製造することができる。適切な塩の一覧は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17版, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418(この内容は本明細書の一部を構成する。)に記載されている。
【００５４】
本明細書において用語「医薬的に許容される」は、信頼できる医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に相応したものを超える毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症なしに、ヒトおよび動物の組織との接触に用いるのに適した化合物、物質、組成物、および/または剤形を表すのに用いる。
【００５５】
プロドラッグは医薬の多くの望ましい特性(例えば、可溶性、バイオアベイラビリティ、製造など)を増大させることが知られているので、本発明化合物はプロドラッグの形で供給することができよう。すなわち、本発明は、本発明化合物、それを供給する方法、およびそれを含む組成物に及ぶものとする。「プロドラッグ」は、哺乳動物対象に投与したときにin vivoで本発明の活性親薬剤を放出するあらゆる共有結合担体を含むものとする。本発明のプロドラッグは、修飾がルチーン操作またはin vivoで開裂して親化合物となるように化合物中に存在する官能基を修飾することにより製造する。プロドラッグは、ヒドロキシ、アミノ、またはスルフィドリル基が、本発明のプロドラッグを哺乳動物対象に投与した時に開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシル、遊離アミノ、または遊離スルフィドリル基を形成するあらゆる基と結合している本発明化合物を含む。プロドラッグの例には、限定されるものではないが本発明化合物中のアルコールおよびアミン官能基のアセテート、ホルメートおよびベンゾエート誘導体が含まれる。さらなるプロドラッグの例には、C1-6アルキルカルボニル、C1-6アルコキシ、C1-4アルコキシカルボニル、C6-10アリールオキシ、C6-10アリールオキシカルボニル、C6-10アリールメチルカルボニル、C1-4アルキルカルボニルオキシ C1-4アルコキシカルボニル、C6-10アリールカルボニルオキシ C1-4アルコキシカルボニル、C1-6アルキルアミノカルボニル、フェニルアミノカルボニル、およびフェニルC1-4アルコキシカルボニルがある。
【００５６】
「安定な化合物」および「安定な構造」は、反応混合物から有用な程度の純度での単離、および有効な療法剤への製剤化に耐えるように十分強い化合物を示すものとする。安定な化合物のみが本発明により予期される。
【００５７】
「治療的有効量の」は、宿主のHIV感染の症状を治療しまたはHIV感染を阻害するのに有効な、単独または他の活性成分と組み合わせた本発明化合物の量、または本発明化合物の組み合わせの量を含むものとする。化合物の組み合わせは好ましくは相乗的組み合わせである。例えばChou and Talalay, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55(1984)に記載の相乗性は、組み合わせて投与した時の化合物の効果(この場合はHIV複製の阻害)が単剤として単独に投与した時の化合物の相加効果より大きい時に生じる。一般に、相乗効果は化合物の最適下(suboptimal)濃度で最も明確に示される。相乗性は、個々の成分に比べて組み合わせの毒性の低下、抗ウイルス効果の増大またはいくつかの他の有益な効果について生じ得る。
【００５８】
本明細書で用いている「治療(処置)する」または「治療(処置)」は、哺乳動物、特にヒトの疾患状態の治療に及び、(a)哺乳動物、特に該疾患状態になる素因があるが、まだ罹患していると診断されていない哺乳動物に該疾患状態が生じるのを抑制すること、(b)疾患状態を阻害すること、すなわちその発現の停止、および/または(c)疾患状態の除去、すなわち疾患状態の緩解をもたらすことが含まれる。
【００５９】
合成
本発明化合物は、有機合成の当業者によく知られている多くの方法で製造することができる。本発明化合物は、合成有機化学の分野で知られた合成方法または当業者が認識しているようなそのバリエーションと共に、下記方法を用いて合成することができる。好ましい方法は、限定されるものではないが下記方法を含む。
【００６０】
下記一般条件の例外は明細書に記載している。反応は窒素雰囲気下、室温で行い、TLCでモニターし、ほとんどが最適化されなかった。一夜行う反応は適切な時間行った。試薬は入手したまま用いた。ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、およびアセトニトリルはモレキュラーシーブで乾燥した。エタノールおよびメタノールは無水であり、水は脱イオンした。融点はMel-Temp装置を用い開放キャピラリーチューブを用いて測定し、訂正しなかった。カラムクロマトグラフィはフラッシュシリカゲルを用いて行った。
【実施例】
【００６１】
実施例1
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン;(6)の製造
【化１０】
2004532224.tif 000012
【００６２】
化合物1は、米国特許出願09/691,249(2000年10月18日出願)(その中の合成方法は本明細書の一部を構成する)中の、下記の7-クロロ-5-トリフルオロメチルベンゾ[b][1,8]ナフチリジン、化合物8について記載したのと同じ方法を用いて製造した。
【００６３】
方法A；DMF(50mL)中の1(10.0g、37.6mmol)およびKCN(2.93g、45.1mmol)の混合物を4時間撹拌した。反応物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、飽和NaHCO3(3x35mL)および飽和NaCl(5mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、木炭で浄化し、次いで減圧下で蒸発させた。残渣をヘキサン/酢酸エチルでトリチュレートしてクリーム状白色粉末の2を得た、8.01g(73%)。
【００６４】
方法B;ジクロロメタン(150mL)中の2(11.7g、39.9mmol)の冷却(-50℃)混合物に、5分間毎に5mL増加させながら1N DIBAL-H(80mL、80mmol、CH2Cl2中)を加えた。冷反応を1N HCl(2mL、滴加)で減衰させ、次いで冷えている間にさらに1N HCl(30mL、速く撹拌)を加えて加水分解した。反応液を酢酸エチル(150mL)で希釈し、0.1N HC1(3 x 75mL)および飽和NaCl(15mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、次いで減圧下で蒸発させた。残渣をエーテル/ヘキサン中でトリチュレートしてクリーム状白色粉末の3を得た、8.01g(68%)。
【００６５】
方法C; トリイソプロピルオソホルメート(34mL、154mmol)中の3(4.57g、15.4mmol)およびモレキュラーシーブの混合物に、トシル酸水和物(8.80g、46.3mmol)を15分間毎に0.5g増加させながら加えた。反応液を酢酸エチル(100mL)で希釈し、10% NaCO3(3 x 30mL)および飽和NaCl(5mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、次いで減圧下で蒸発させた。残渣をエーテルでトリチュレートして黄褐色粉末の4を得た、4.71g(77%)。
【００６６】
方法D; 冷(0℃)TFA(40mL)中の4(4.12g、10.4mmol)の溶液に、ボラン-ジメチルスルフィド(5.82mL、62.2mmol)を滴加した(30分間毎に2mL)。反応液を減圧下で蒸発させてTFAをほぼ除去し、残渣をメタノール(40mL)中で4N HCl/ジオキサン(15.5mL、62.2mmol)と共に2時間撹拌した。反応液を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチル(50mL)に溶解し、飽和NaHCO3(3x25mL)および飽和NaCl(10mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、次いで減圧下で蒸発させた。残渣をエーテル/ヘキサン中でトリチュレートして黄褐色粉末の5を得た、3.21g(91%)。
【００６７】
方法E; イソプロパノール(35mL)中の5(3.21g、9.44mmol)およびNCS(1.32g、9.91mmol)の混合物を10分間還流した。反応液を酢酸エチル(40mL)で希釈し、1N HC1(2x25mL)、飽和NaHCO3(25mL)、および飽和NaCl(10mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、次いで減圧下で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィにかけて(ヘキサン/酢酸エチル、15%)淡黄色シロップ状の6を得、これを凝固させて結晶化した、2.26g(64%)(mp 96-97℃、MS 375)。
【００６８】
実施例2
3-クロロ-7-フルオロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド(7)の製造;
方法F; ジクロロメタン(30mL)中の6(2.26g、6.04mmol)およびmCPBA(1.66g、7.25mmol)の溶液を30分間撹拌した。反応を10% NaSO3で減衰させ、酢酸エチル(40mL)で希釈し、10% K2CO3(3x20mL)および飽和NaCl(10mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、次いで減圧下で蒸発させて褐色泡沫状物を得た。クロマトグラフィ(酢酸エチル/メタノール、2%)により無色フィルム状物を得た。該フィルムをエーテル/ヘキサンから結晶させて、クリーム状白色微晶質粉末の7を得た1.90g(81%)(mp 165-166℃、MS 391)。
【００６９】
実施例3
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(9)の製造;
【化１１】
2004532224.tif 000013
【００７０】
化合物9を、方法A-Eの上記方法を用い、7-クロロ-5-トリフルオロメチル-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン8から製造した(mp137-138℃、MS 392)。化合物8の合成方法は、米国特許出願09/691,249(2000年10月18日出願)(この合成方法は本明細書の一部を構成する。)に記載されている。
【００７１】
実施例4
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-トリフルオロメチル-5,10-ジヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン 1-オキシド(10)の製造; 上記のごとく方法Fを用いて9から製造した(mp 145-146℃、MS 392)。
活性単一エナンチオマーをキラルカラムを用いるキラルHPLC分離により単離し、(R)および(S)エナンチオマーを得た(＞99% EE)。
【００７２】
実施例5
3-クロロ-5-イソプロピルメチル-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル(12)の製造;
【化１２】
2004532224.tif 000014
【００７３】
ヨード化合物11a、7-ヨード-5-トリフルオロメチル-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジンを、ヨードアニリンで出発し、米国特許出願09/691,249(2000年10月18日出願)(この合成方法は本明細書の一部を構成する。)に記載の方法を用いて製造した。次に、化合物11bを上記の方法A、B、C、D、およびEを用いて製造する。
【００７４】
方法G: 無水トルエン(2.0mL)中の7-ヨード-9-トリフルオロメチル-9-イソプロポキシメチル-4-アザアクリジン11b(0.142g、0.295mmol)の溶液を脱気し、トリブチルスズシアニド(0.182g、0.6mmol)、次いでパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン(6.8mg、0.02mmol)で処理した。反応混合物で脱気し、125℃で撹拌した。反応は4時間後に終了していることがわかった。それを冷却し、酢酸エチルと水の間に分配した。有機層を塩水で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥した。これを濃縮し、クロマトグラフィにかけた(シリカゲル、20%酢酸エチル/ヘキサン)。生成物12をオフホワイト固体として得た(80mg、71%)。
【００７５】
実施例6
3-クロロ-5-イソプロポキシメチル-1-オキシ-5-トリフルオロメチル-4a,5,10,10a-テトラヒドロ-ベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-7-カルボニトリル(13)の製造; 上記のごとく方法Fを用いて12から製造し、標記化合物を得た(MS 398)。
【００７６】
実施例7
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(15)の製造:
【化１３】
2004532224.tif 000015
【００７７】
室温の、無水アセトニトリル(2mL)中の7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(14)(61mg、0.176mmol)の撹拌溶液にNBS(38mg、0.211mmol)を加えた。反応混合物を室温で1時間30分撹拌した。反応を1:1飽和水性NaHCO3/水(20mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(20%-30% EtOAc-ヘキサン)によりオフホワイト固体の15(73mg、97%の収率)を得た。 m.p. 76-77℃; 低解像度質量分析(ESI) m/z 426.2 [(M+H)+、C18H16BrF3N3Oに対する理論値: 426.05]。
【００７８】
実施例8
3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド(16)の製造:
室温の、無水ジクロロメタン(1mL)中の3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(15)(28mg、0.0657mmol)の撹拌溶液にMCPBA(77% max、22mg、0.0986mmol)を加えた。反応混合物を室温で2時間20分撹拌した。反応を1:1水性10% Na2S2O3/飽和水性NaHCO3(10mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(60%-80% EtOAc-ヘキサン)により緑色固体の16(28mg、96%の収率)を得た。 m.p. 226-227℃、低解像度質量分析(ESI)m/z 442.1 [(M+H)+、C18H16BrF3N3O2に対する理論値: 442.04]。
【００７９】
実施例9
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(17)の製造:
【化１４】
2004532224.tif 000016
【００８０】
無水DMF(2mL)中の、3-ブロモ-7-シアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(15)(73mg、0.171mmol)、Zn(CN)2(20mg、0.171mmol)、およびPd(PPh3)4(10mg、0.00855mmol)の脱気混合物を16時間30分100℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、2N NH4OH(20mL)で減衰させ、次いでEtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(20%-30% EtOAc-ヘキサン)により白色固体の17(38mg、60%の収率)を得た。m.p. 226-227℃。低解像度質量分析(ESI) m/z 371.2 [(M-H)-、C19H14F3N4Oに対する理論値: 371.11]。
【００８１】
実施例10
3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド(18)の製造:
室温の、無水ジクロロメタン(2mL)中の3,7-ジシアノ-5-トリフルオロメチル-5-イソプロポキシメチル-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(17)(38mg、0.102mmol)の撹拌溶液にMCPBA(77% max、34mg、0.153mmol)を加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応を1:1水性10% Na2S2O3/飽和水性NaHCO3(10mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(60% EtOAc-ヘキサン)によりオフホワイト固体の18(39mg、98%の収率)を得た。m.p.229-230℃； 低解像度質量分析(ESI)m/z 389.3 [(M+H)+、C18H16F3N4O2に対する理論値: 389.12]。
【００８２】
実施例11
3,7-ジクロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド(20)の製造:
【化１５】
2004532224.tif 000017
【００８３】
室温の、無水1:4 i-PrOH-MeCN(3mL)中の7-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド(19)(117mg、0.317mmol)の撹拌溶液に、NCS(52mg、0.380mmol)を加えた。反応混合物を3時間30分加熱還流した。反応を飽和水性NaHCO3(15mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(30%-40% EtOAc-ヘキサン)により黄色固体の20(54mg、42%の収率)を得た。m.p. 63-64℃；低解像度質量分析(ESI)m/z 403.2 [(M+H)+、C18H19C12F2N2O2に対する理論値: 403.08]。
【００８４】
実施例12
7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(22)の製造:
【化１６】
2004532224.tif 000018
【００８５】
無水NMP(20mL)中の、7-クロロ-5-イソプロポキシメチル-5(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(21)(2.501g、7.089mmol)、Zn(CN)2(849mg、7.089mmol)、Pd[P(t-Bu)3]2(1.479g、2.836mmol)、および亜鉛粉末(556mg、8.507mmol)の脱気混合物を22時間30分170℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、EtOAcで希釈し、Celiteパッドでろ過し、次いでEtOAcで洗浄した。濾液を2N NH4OH(120mL)および塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(30%-50% EtOAc-ヘキサン)により黄色固体の22(2.184g、90%の収率)を得た。 m.p. 134-135℃；  低解像度質量分析(ESI)m/z 344.3 [(M+H)+、C19H20F2N3Oに対する理論値: 344.16]。
【００８６】
3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(23)の製造:
室温の、無水1:4 i-PrOH-MeCN(35mL)中の7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(22)(2.184g、6.361mmol)の撹拌溶液にNCS(1.040g、7.633mmol)を加えた。反応混合物を2時間40分、加熱還流した。反応を飽和水性NaHCO3(100mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(20%-30% EtOAc-ヘキサン)により薄黄色固体の23(2.021g、84%の収率)を得た。m.p. 79-81℃；  低解像度質量分析(ESI)m/z 378.3 [(M+H)+、C19H19C1F2N3Oに対する理論値: 378.12]。
【００８７】
実施例13
3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン-1-N-オキシド(24)の製造:
0℃の、無水ジクロロメタン(52mL)中の3-クロロ-7-シアノ-5-イソプロポキシメチル-5-(1,1-ジフルオロエチル)-5,10-ジヒドロベンゾ[b][1,8]ナフチリジン(23)(1.969g、5.212mmol)の撹拌溶液に、MCPBA(77% max、1.752g、7.818mmol)を加えた。反応混合物を0℃で2時間30分撹拌した。反応を1:1水性10% Na2S2O3/飽和水性NaHCO3(100mL)で減衰させ、EtOAc(2X)で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、次いで減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(50%-70% EtOAc-ヘキサン)により黄色結晶の24(1.962g、96%の収率)を得た。 m.p. 175-176℃； 低解像度質量分析(ESI)m/z 394.4 [(M+H)+、C19H19ClF2N3O2に対する理論値: 394.12]。
【００８８】
有用性
本発明化合物は、逆転写酵素阻害剤活性およびHIV阻害効果を有する。式(I)の化合物はHIV逆転写酵素阻害活性を有するので、HIV感染および関連疾患治療用の抗ウイルス剤として有用である。式(I)の化合物は、HIV逆転写酵素阻害活性を有し、HIVの増殖阻害剤として有効である。本発明化合物の、ウイルス増殖もしくは感染性の阻害能は、ウイルス増殖もしくは感染性の標準的アッセイ、例えば下記アッセイを用いて証明される。
【００８９】
本発明の式(I)の化合物は、HIVを含むかまたはHIVに曝露していると思われるex vivo試料中のHIVを阻害するのにも有用である。すなわち、本発明化合物は、HIVを含むか、またはHIVを含むかもしくはそれに曝露していることが疑われる体液試料(例えば、血清または精液試料)中に存在するHIVを阻害するのに用いることができよう。
【００９０】
本発明が提供する化合物は、例えば医薬研究プログラムにおいてウイルス複製および/またはHIV逆転写酵素を阻害する物質の能力を測定するための試験またはアッセイに用いる標準もしくは基準化合物としても有用である。すなわち、本発明化合物は、そのようなアッセイにおいてコントロールもしくは基準化合物として、または品質コントロール標準として用いることができよう。本発明化合物は、そのような標準または基準化合物として用いるための市販キットまたは容器で提供することができよう。
【００９１】
本発明化合物はHIV逆転写酵素に対する特異性を有するので、本発明化合物はHIV逆転写酵素を検出するための診断アッセイに用いる診断試薬としても有用であろう。すなわち、本発明化合物によるアッセイ(例えば本明細書に記載のアッセイ)における該逆転写酵素活性の阻害は、HIV逆転写酵素およびHIVウイルスの存在を示すであろう。
【００９２】
本明細書で用いている「μg」はマイクログラムを示し、「mg」はミリグラムを示し、「g」はグラムを示し、「μL」はマイクロリッターを示し、「mL」はミリリッターを示し、「L」はリッターを示し、「nM」はナノモラーを示し、「μM」はマイクロモラーを示し、「mM」はミリモラーを示し、「M」はモラーを示し、「nm」はナノメーターを示す。「Sigma」はSigma-Aldrich Corp.(St. Louis、MO)を示す。
【００９３】
下記アッセイで試験した化合物はKiが≦10μMを示すとき活性とみなす。好ましい本発明化合物はKiが≦1μMである。より好ましい本発明化合物はKiが≦0.1μMである。さらにより好ましい本発明化合物はKiが≦0.01μMである。さらにより好ましい本発明化合物はKiが≦0.001μMである。
【００９４】
下記方法論を用いて本発明の多くの化合物はKiが≦10μMであることがわかり、本発明化合物の有効なHIV逆転写酵素阻害剤としての有用性が確認された。
【００９５】
HIV RNAアッセイ
DNAプラスミドおよびin vitroRNA転写：
PTZ 19R中にクローンしたBH10(bp 113-1816)のgagおよびpol両配列を含むプラスミドpDAB 72はErickson-Viitanenら、AIDS Research and Human Retroviruses 1989,5,577に従って製造した。プラスミドをBam HIで線状化し、次いでT7 RNAポリメラーゼを用いるRiboprobe GeminiシステムIIキット(Promega)を用いてin vitro RNA転写物を生成した。合成したRNAはRNアーゼ不含DNアーゼ(Promega)による処理、フェノール-クロロホルム抽出、およびエタノール沈殿により精製した。RNA転写物を水に溶解し、-70℃で保存した。RNA濃度はA260から測定した。
【００９６】
プローブ：
ビオチン化キャプチャープローブは、Applied Biosystems(Foster City, CA)DNA合成装置を用い、Cocuzza, Tet. Lett. 1989, 30, 6287のビオチン-ホスホラミダイト試薬を用いてオリゴヌクレオチドの5'末端にビオチンを付加することにより合成し、次いでHPLCで精製した。gagビオチン化キャプチャープローブ(WO 01/29037(公開日、2001年4月26日)に記載)はHXB2のヌクレオチド889-912に相補的であり、polキャプチャープローブ(WO 01/29037参照)は、HXB2のヌクレオチド2374-2395に相補的であった。レポータープローブとして用いるアルカリホスファターゼ結合オリゴヌクレオチドはSyngene(San Diego, CA.)で製造された。polレポータープローブ(WO 01/29037参照)は、HXB2のヌクレオチド2403-2425と相補的であった。gagレポータープローブ(WO 01/29037参照)はHXB2のヌクレオチド950-973と相補的であった。すべてのヌクレオチド位置は、Genetics Computer Group Sequence Analysis Software Package(Devereau Nucleic Acids Research 1984,12,387)でアクセスしたGenBank Genetic Sequence Data Bankの位置である。レポータープローブは2xSSC(0.3M NaCl、0.03Mクエン酸ナトリウム)、0.05M Tris pH 8.8、1mg/mL BSA中の0.5μM保存液として調製した。ビオチン化キャプチャープローブは水中の100μM保存液として調製した。
【００９７】
ストレプトアビジンコートプレート:
ストレプトアビジンコートプレートはDuPont Biotechnology Systems(Boston, MA)から得た。
【００９８】
細胞およびウイルス保存液：
MT-2およびMT-4細胞は、MT-2細胞には5%ウシ胎児血清(FCS)を、MT-4細胞には10% FCSを添加した2mM L-グルタミンおよび50μg/mLゲンタマイシン含有RPMI 1640(すべてGibco)中で維持した。HIV-1 RFは同じ培地中でMT-4細胞を用いて増殖させた。ウイルス保存液を、MT-4細胞の急性感染の約10日後に調製し、部分標本を-70℃で保存した。HIV-1(RF)保存液の感染力価はMT-2細胞を用いるプラークアッセイにより測定して1-3x107PFU(ブラーク形成単位)/mLであった(以下参照)。感染に用いるウイルス保存液の各部分標本は1回だけ解凍した。
【００９９】
抗ウイルス効果の評価のために感染させる細胞を感染前1日間二次培養した。感染日に、細胞をバルク感染についてはRPMI1640、5%FCSに5x105個/mLで、マイクロタイタープレートを用いる感染については5%FCS含有Dulbecco改良Eagle培地に2x106個/mLで再浮遊させた。ウイルスを加え、37℃で3日間培養を続けた。
【０１００】
HIV RNAアッセイ：
3Mまたは5M GED中の細胞溶解液または精製RNAを5M GEDおよびキャプチャープローブと混合した(最終グアニジニウムイシチオシアネート濃度は3Mで、最終ビオチンオリゴヌクレオチド濃度は30nM)。ハイブリダイゼーションは、密封U底96ウェル組織培養プレート(NuncまたはCostar)中で37℃で16-20時間行った。RNAハイブリダイゼーション反応液を脱イオン水で3倍に希釈し(最終グアニジニウムイシチオシアネート濃度は1M)、部分標本(150μL)をストレプトアビジンコートマイクロタイタープレートのウェルに移した。キャプチャープローブおよびキャプチャープローブ-RNAハイブリッドの固定化ストレプトアビジンとの結合を室温で2時間進行させ、次いでプレートをDuPont ELISAプレート洗浄用緩衝液(リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、0.05% Tween 20)で6回洗浄した。キャプチャープローブおよびハイブリダイズした標的RNAの固定化複合体とレポータープローブとの第二ハイブリダイゼーションは、洗浄ストレプトアビジンコーティングウェル中で、4 X SSC、0.66% Triton X 100、6.66%脱イオンホルムアミド、1mg/mL BSA、および5nMレポータープローブを含むハイブリダイゼーションカクテル120μLを加えることにより行った。37℃で1時間ハイブリダイゼーションした後、プレートを再度6回洗浄した。固定化アルカリホスファターゼ活性は、緩衝液(2.5MジエタノールアミンpH 8.9 (JBL Scientific)、10mM MgCl2、5mM酢酸亜鉛2水和物、および5mM N-ヒドロキシエチル-エチレン-ジアミン-3酢酸)中の0.2mM 4-メチルウンベリフェリルホスフェート(MUBP、JBL Scentific) 100μLを加えて検出した。プレートを37℃でインキュベーションした。450nMの蛍光を365nMで励起するマイクロプレート蛍光光度計(Dynateck)で測定した。
【０１０１】
HIV-1感染MT-2細胞を用いるマイクロプレートによる化合物評価:
評価すべき化合物をDMSOに溶解し、試験する最高濃度の二倍および最高DMSO濃度の2%に培養液で希釈した。さらに培養液で化合物の3倍連続希釈をU底マイクロタイタープレート(Nunc)中で直接行った。化合物を希釈後、MT-2細胞 (50μL)を最終濃度5x105/mL(1x105/ウェル)に加えた。細胞を化合物とCO2インキュベーター中、37℃で30分間インキュベーションした。抗ウイルス効果を評価するため、HIV-1(RF)ウイルス保存液(50μL)の適切な希釈物を細胞と被検化合物希釈物を含む培養ウェルに加えた。各ウェルの最終容量は200μLであった。8ウェル/プレートを、ウイルスの代わりに培地50μLを加えて非感染とし、8ウェルをいかなる抗ウイルス化合物も存在させずに感染させた。化合物の毒性を評価するため、対比プレートをウイルスを感染させずに培養した。
【０１０２】
37℃のCO2インキュベーター中の加湿チャンバー中で3日間培養後、HIV感染プレートから培地25μL/ウェル以外を除去した。ビオチン化キャプチャープローブを含む5M GED 37μLを各ウェル中の固定細胞および残る培地に加え、最終濃度を3M GEDおよび30nMキャプチャープローブとした。細胞溶解物中のHIV RNAとキャプチャープローブのハイブリダイゼーションは、同じマイクロプレートウェル中でプレートをプレートシーラー(Coster)で密封し、37℃のインキュベーター中で16-20時間インキュベーションすることにより行った。次に、蒸留水を各ウェルに加え、ハイブリダイゼーション反応液を3倍に希釈し、この希釈混合物150μLをストレプトアビジンコートマイクロタイタープレートに移した。HIV RNAを上記のごとく定量した。既知量のpDAB 72 in vitro RNA転写物を溶解非感染細胞に加えて作製した標準曲線を各マイクロタイタープレートに適用し、感染中に生じたウイルスRNAの量を測定した。
【０１０３】
化合物の抗ウイルス活性の評価に用いるウイルス接種物を標準化するため、2μg/mLのジデオキシシチジン(ddC)に対するIC90値(HIV RNAレベルを90%低下させるのに必要な化合物の濃度)を生じるウイルスの希釈物を選んだ。他の抗ウイルス化合物(ddCより有効性が高いものと低いもの両方)のIC90値はこの方法に従い、HIV-1(RF)の数種の保存液を用いて再現することができた。このウイルス濃度は、アッセイウェルあたり〜3x105PFU(MT-2細胞を用いるプラークアッセイで測定)に対応し、典型的にはあらゆるウイルス接種物を達成できる最大ウイルスRNAレベルの約75%をもたらす。HIV RNAアッセイについてはIC90値は、同じ培養プレート上の感染、非感染細胞からの正味の信号(8ウェルの平均)に対するRNAアッセイにおける正味の信号(感染細胞試料からの信号−非感染細胞試料からの信号)の低下パーセントから決定した。個々の感染およびRNAアッセイの妥当な能力は3つの基準に従って判断した。RNAアッセイにおいて、ウイルス感染が、2ngのpDAB 72 in vitro RNA転写物から生じる信号と等しいかそれより大きい信号を生じる必要があった。各アッセイで測定したddCに関するIC90は、0.1〜0.3μg/mLであるべきである。最終的に、有効な逆転写酵素阻害剤により生じるウイルスRNAのプラトーレベルは、阻害さていない感染で達成されるレベルの10%以下であるべきである。IC90が20μM以下を示した化合物を活性とみなした。
【０１０４】
抗ウイルス有効性試験については、ウェルの一列に2X濃縮化合物溶液を最初に加えた後のマイクロタイタープレート中のすべての操作はPerkin Elmer/Cetus ProPetteを用いて行った。
【０１０５】
タンパク質の結合および突然変異体の耐性
NNRTI化合物の臨床効果の潜在能力を特徴づけるため、NNRTIに対する既知の結合部位のアミノ酸変化を保持するHIVの突然変異体および野生型に対する抗ウイルス有効性の測定および抗ウイルス有効性に対する血漿タンパク質の影響を試験した。この試験戦略の原理は2つある。
【０１０６】
1.多くの薬剤は血漿タンパク質と広く結合する。ほとんどの薬剤のヒト血漿の主要成分、すなわちヒト血清アルブミン(HSA)またはα-1-酸糖タンパク質(AAG)に対する結合親和性は低いが、これら主要成分は血液中に高濃度に存在する。遊離または非結合薬剤のみが、感染細胞膜が標的部位と相互作用するのを妨げるのに利用可能である(すなわち、HIV-1逆転写酵素、HIV-1 RT)。したがって、組織培養における抗ウイルス有効性に対する添加したHSA+AAGの効果は、臨床環境における特定の化合物の有効性をより密接に反映する。感度のよいウイルスRNAに基づく検出方法で測定したウイルス複製の90%を阻害するのに必要な化合物の濃度をIC90で表す。次に、in vivo濃度(45mg/mL HSA、1mg/mL AAG)を反映するHSA+AAGの存在下またはレベル増加における被検化合物のみかけのIC90の増加倍数を計算する。増加倍数が低いと、より多くの化合物が標的部位との相互作用に利用可能であろう。
【０１０７】
2.感染個体における高率のウイルス複製およびウイルスRTの忠実度の低さの組み合わせは、感染個体におけるHIV種の擬似種または混合物の生成をもたらす。これらの種は多数の野生型種を含むであろうが、HIVの突然変異体および該突然変異体の割合はその相対的適応度および複製率を反映するであろう。ウイルスRTのアミノ酸配列の変化を有する突然変異体を含む突然変異体は感染個体の擬似種に予め存在するらしいので、臨床環境でみられる全体的有効性は野生型HIV-1だけでなく突然変異体も阻害する薬剤の能力を反映するであろう。すなわち、本発明者らは、知られた遺伝的背景を用いて、NNRTIの結合に関与すると考えられる位置にアミノ酸置換を有するHIV-1の突然変異体を構築し、被検化合物のこれら突然変異体ウイルスの複製を阻害する能力を測定した。感度のよいウイルスRNAに基づく検出方法で測定したウイルス複製を90%阻害するのに必要な化合物の濃度をIC90で表す。種々の突然変異体に対する高い活性を有する化合物を得ることが望ましい。
【０１０８】
該化合物のタンパク質結合も、タンパク質結合を測定するためだけに設計したアッセイを用いて測定した。本発明化合物のin vitroタンパク質結合を、プールヒト血清を用いる平衡透析により決定した。該化合物をヒト血清に最終濃度が10μMとなるよう加えた。次に、薬剤を加えた血清の部分標本を組み立てた平衡透析テフロンセルに入れ、リン酸カリウム緩衝液(0.133M、pH7.4)をセルの他の側に入れた。37℃でインキュベーションした後、血清および緩衝液試料を回収し、抽出し、化合物濃度を液体クロマトグラフィ質量分析により測定した。非結合薬剤のパーセントを緩衝液濃度を血清濃度で割り、次いで100をかけて計算した。
【０１０９】
本発明化合物は、十分にタンパク質結合のない分画、およびチンパンジーにおいてin vivoで臨床的関連のある突然変異体HIV-1ウイルスのIC90を超える薬物動態を有する。血漿IC90は、Corbettら、J. Med. Chem. (2000), 43, 2019-2030に記載のごとく計算することができよう(この内容は本明細書の一部を構成する)。
【０１１０】
本発明化合物の他の改良点は薬物動態特性の改良である。本発明化合物は、p.o.投与したチンパンジーの24時間血漿レベルの改善を示した。
【０１１１】
用量および製剤
本発明の抗ウイルス化合物は、哺乳動物の体内で活性薬剤と薬剤の作用部位、すなわち、ウイルスの逆転写酵素との接触をもたらすあらゆる方法によりウイルス感染の治療薬として投与することができる。それらは、個々の治療剤としてかまたは治療剤の組み合わせで医薬と共に用いるのに利用可能なあらゆる常套的方法により投与することができる。それらは単独で投与することができるが、好ましくは選んだ投与経路および標準的薬務に基づいて選ばれた医薬担体と共に投与するのが好ましい。
【０１１２】
もちろん投与する用量は、既知の因子、例えば、特定薬剤の薬力学的特性およびその投与方法および経路、レシピエントの年齢、健康、および体重、症状の性質と程度、併存治療の種類、治療頻度、および所望の効果に基づいて変化するであろう。活性成分の1日用量は約0.001〜約1000mg/kg体重と予想することができ、好ましい用量は約0.1〜約30mg/kgである。
【０１１３】
投与に適した組成物の剤形は単位あたり活性成分を約1mg〜約100mg含む。これら医薬組成物において、活性成分は、通常、組成物の総重量に基づいて約0.5-95重量%の量で存在するであろう。活性成分は、カプセル剤、錠剤、および粉末剤のような固体剤形、またはエリキシル剤、シロップ剤、およびサスペンジョン剤のような液体剤形で経口投与することができる。活性成分は、無菌液体剤形で非経口的に投与することもできる。
【０１１４】
ゼラチンカプセル剤は、活性成分と粉末担体、例えば乳糖、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などを含む。同様の希釈剤を圧縮錠剤を製造するのに用いることができる。錠剤およびカプセル剤は共に、幾時間にわたり医薬の持続放出をもたらす持続放出生成物として製造することができる。圧縮錠剤はあらゆる不快な味を覆い隠すために糖またはフィルムでコートするか、または消化管内で選択的に崩壊させるために腸溶コートすることができる。経口投与用の液体剤形は、患者の受け入れを増すために着色料および風味剤を含むことができる。
【０１１５】
一般的に、水、適切な油、生理食塩水、水性デキストロース(グルコース)、および関連糖溶液およびグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは非経口溶液剤用の適切な担体である。好ましくは非経口投与用の溶液剤は、活性成分、適切な安定化剤、および必要であれば緩衝物質を含む。抗酸化剤、例えば重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸(単独または組み合わせて)は適切な安定化化剤である。クエン酸およびその塩、およびナトリウムEDTAも用いられる。さらに、非経口溶液剤は、保存料、例えば塩化ベンザルコニウム、メチル-もしくはプロピル-パラベンおよびクロロブタノールを含むことができる。適切な医薬担体は、この分野の標準的参考書であるRemington's Pharmaceutical Sciences(上記)に記載されている。
【０１１６】
本発明化合物を投与するための有用な医薬剤形は以下のように説明することができる。
【０１１７】
カプセル剤
本発明のカプセル剤は、標準的ツーピース硬ゼラチンカプセルにそれぞれ粉末活性成分100mg、乳糖150mg、セルロース50mg、およびステアリン酸マグネシウム6mgを充填することにより製造することができる。
【０１１８】
軟ゼラチンカプセル剤
本発明の軟ゼラチンカプセル製剤は以下のごとく製造することができる。ダイズ油、綿実油、またはオリーブ油のような消化できる油中の活性成分の混合物を製造し、陽圧排出ポンプ(positive displacement pump)でゼラチン中に注射して活性成分100mgを含む軟ゼラチンカプセル剤を形成することができる。
【０１１９】
錠剤
本発明の錠剤は、通常の方法により用量単位が活性成分100mg、コロイド状二酸化ケイ素0.2mg、ステアリン酸マグネシウム5mg、微晶質セルロース275mg、デンプン11mg、および乳糖98.8mgとなるように製造することができる。味をよくし、または吸収を遅らせるために適切なコーティングを適用することができよう。
【０１２０】
サスペンジョン剤
水性サスペンジョン剤は、経口投与用に各5mLに細かく分配した活性成分25mg、ナトリウムカルボキシメチルセルロース200mg、安息香酸ナトリウム5mg、ソルビトール溶液、U.S.P. 1.0g、およびバニリン0.025mgを含むように製造することができる。
【０１２１】
注射剤
注射により投与するのに適した非経口製剤は、10容量%のプロピレングリコールおよび水中で1.5重量%の活性成分を撹拌することにより製造することができる。
【０１２２】
治療剤の組み合わせ投与
本発明は、必要とする宿主に、1またはそれ以上の無菌容器中に、治療的有効量の
(a)式(I)の化合物、および
(b)HIV逆転写酵素阻害剤およびHIVプロテアーゼ阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも1つの化合物
を組み合わせて投与することを含むHIV感染の治療方法を提供する。
【０１２３】
この組み合わせ方法の各治療剤成分(すなわち、上記成分(a)および(b))は、上記のようなあらゆる分離した剤形で独立して投与することができ、上記のごとく種々の方法で投与することができる。以下の説明において、成分(b)は先に記載の1またはそれ以上の物質を表すものと理解すべきである。成分(b)を含む各個々の治療剤は、上記のようなあらゆる分離した剤形で投与することができ、上記のごとく種々の方法で投与することができる。
【０１２４】
本発明の組み合わせ方法の成分(a)、および成分(b)を含むあらゆる1またはそれ以上の物質は、組み合わせ生成物として一緒に単一剤形(すなわち、一緒に混合して1つのカプセル剤、錠剤、粉末剤、または液剤などとする)に製剤化することができよう。成分(a)および(b)を一緒に単一剤形に製剤化しないときは、成分(a)を成分(b)と同時に、またはあらゆる順序で投与してよく、例えば、本発明の成分(a)を最初に投与し、次いで成分(b)を投与するか、またはそれらを逆の順序で投与してよい。もし成分(b)が2以上の物質、例えば1つがRT阻害剤で1つがプロテアーゼ阻害剤を含む場合は、これら物質は一緒にまたはあらゆる順序で投与してよい。同時に投与しない時は、成分(a)および(b)の投与を約1時間間隔以内に行うことが好ましい。好ましくは成分(a)および(b)の投与経路は経口である。本明細書で用いている用語経口剤、経口阻害剤、または経口化合物などは、成分(a)および成分(b)はともに同じ経路(すなわち例えばともに経口的に)または剤形で投与することが好ましいが、所望によりそれぞれ異なる経路もしくは剤形で投与してよい(例えば、該組み合わせ方法の1成分を経口投与し、別の成分を静脈内投与してよい。)
医療の当業者が認識するように、本発明の組み合わせ療法の用量は、種々の因子、例えば上記のような特定薬剤の薬力学的特性、その投与方法および経路、レシピエントの年齢、健康および体重、症状の性質と程度、同時治療の種類、治療頻度、および所望の効果に応じて変化してよい。
【０１２５】
本発明の組み合わせ方法の成分(a)および(b)の適切な用量は、本明細書の開示に基づいて医療の当業者により容易に確認できるであろう。一般的手引きとして、典型的には1日用量は各成分約100mg〜約1.5gであってよい。成分(b)が2以上を表す場合は、典型的な1日用量は成分(b)の物質ごとに約100mg〜約1.5gであってよい。一般的手引きとして、成分(a)および成分(b)の化合物は組み合わせて投与され、各成分の用量は、組み合わせの相乗効果を考慮して、それをHIV感染の治療にただ単剤として投与する時の成分の通常の用量に比べて約70-80%減らすことができよう。
【０１２６】
本発明の組み合わせ生成物は、活性成分は単一用量単位に組み合わされるが活性成分間の物理的接触が最小限になるように製剤化することができよう。接触を最小限にするには、例えば生成物を経口投与する場合、1つの活性成分を腸溶コーティングしてよい。活性成分の1つを腸溶コーティングすることにより、組み合わせた活性成分間の接触を最小限にすることができるだけでなく、これら化合物の1つが胃内で放出されず、腸で放出されるように消化管内でのこれら化合物の1つの放出を調節することができる。経口投与が望ましい本発明の別の態様は、活性成分の1つが、消化管全体で持続放出され、混合活性成分間の物理的接触を最小限にするのにも役立つ持続放出物質でコートされる組み合わせ生成物を提供する。さらに持続放出成分は、この成分の放出が腸のみで生じるようにさらに腸溶コーティングすることができる。さらに別のアプローチは、1成分を持続および/または腸(内)放出ポリマーでコートし、他の成分もさらに活性成分を分けるために低粘性グレードのヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは当該分野で知られた他の物質でコートする組み合わせ生成物の製剤化を含むであろう。ポリマーコーティングは、他の成分との相互作用に対するさらなるバリアーの形成に役立つ。コーティングまたはいくつかの他の物質を介して成分(a)と(b)の間の接触が防がれる各製剤では、成分(b)の個々の物質間の接触を防ぐこともできよう。
【０１２７】
1つの活性成分が腸溶コーティングされている本発明の組み合わせ生成物の剤形は、腸溶コーティングされた成分と他の活性成分を一緒に混合し、次いで圧縮して錠剤とするか、または腸溶コーティングされた成分を圧縮して1錠剤層とし、他の活性成分を圧縮してさらなる層とする錠剤の形であり得る。所望により、2つの層をさらに分けるため、プラセボ層が活性成分層の間にあるように1またはそれ以上のプラセボ層が存在してよい。さらに、本発明の剤形は、1活性成分を圧縮して錠剤とするカプセル剤の形か、または多数の微小錠剤、粒子、顆粒もしくはノンペリル(non-peril)(次いでこれらを腸溶コーティングする)の形であり得る。次いで、これら腸溶コーティングされた微小錠剤、粒子、顆粒もしくはノンペリルを他の活性成分の顆粒と共にカプセルに入れるか、または圧縮してカプセルとする。
【０１２８】
単一剤形で投与するか、または分離した形で同時にもしくは同じ方法により同時に投与する本発明の組み合わせ生成物の成分間の接触を最小限にするこれらおよび他の方法は、本明細書の開示に基づいて当業者に容易に明らかであろう。
【０１２９】
1またはそれ以上の無菌容器中に、成分(a)の化合物、および成分(b)の1またはそれ以上の化合物を含む医薬組成物の医薬的有効量を含むHIV感染の治療に有用な医薬キットも本発明の範囲内である。容器の滅菌は、当業者によく知られた常套的滅菌方法を用いて行うことができよう。成分(a)および成分(b)は同じ無菌容器中または別の無菌容器中に存在してよい。物質の無菌容器は、所望により分離した容器または1またはそれ以上の多部品容器を含んでよい。成分(a)および成分(b)は、上記のように分離するか、または物理的に混合して単一剤形または単位としてよい。当業者に容易に明らかであろうように、そのようなキットは、所望によりさらに1またはそれ以上の種々の常套的医薬キット成分、例えば1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、成分混合用のさらなるバイアルなどを含むことができよう。投与すべき成分の量を示す指示書(挿入物またはラベルのいずれかで)、投与のためのガイドライン、および/または成分を混合するためのガイドラインもキットに含むことができよう。
【０１３０】
当業者が認識するであろうように、本発明の多くの修飾およびバリエーションが上記開示に照らして可能である。したがって、添付の請求の範囲の範囲において本明細書に具体的に記載されている以外にも本発明を実施することができると理解すべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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