(57)【要約】（Ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体；及び（Ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を含んでなり、成分（Ａ）及び（Ｂ）のそれぞれが製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して製剤化される組合せ製品、並びに、抗凝固療法が必要とされる病態の処置におけるそのような組合せ製品の使用が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体；及び、
（Ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を含んでなり、成分（Ａ）及び（Ｂ）のそれぞれが製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して製剤化される、組合せ製品。
【請求項２】
メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体と、ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤を含む、請求項１に記載の組合せ製品。
【請求項３】
成分：
（ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤；及び、
（ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤を含んでなるパーツのキットを含み、成分（ａ）及び（ｂ）が他方と一緒の投与に適している形態でそれぞれ提供される、請求項１に記載の組合せ製品。
【請求項４】
成分（ａ）及び（ｂ）が、抗凝固療法が必要とされる病態の処置における連続、別々、及び／又は同時の使用に適している、請求項３に記載のパーツのキット。
【請求項５】
メラガトランの誘導体がメラガトランのプロドラッグである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組合せ製品。
【請求項６】
プロドラッグが式：
Ｒ１Ｏ２Ｃ−ＣＨ２−（Ｒ）Ｃｇｌ−Ａｚｅ−Ｐａｂ−ＯＨ
のものであり、ここでＲ１は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１−６アルキルを表し、ＯＨ基はＰａｂ中のアミジノ水素の１つに置き換わる、請求項５に記載の組合せ製品。
【請求項７】
Ｒ１が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、又はｔ−ブチルを表す、請求項６に記載の組合せ製品。
【請求項８】
ＶＩＩａ因子阻害剤の誘導体がその阻害剤のプロドラッグである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組合せ製品。
【請求項９】
請求項３〜８のいずれか１項に記載のパーツのキットを製造する方法であって、請求項３〜８のいずれか１項に記載の成分（ａ）を、請求項３〜８のいずれか１項に記載の成分（ｂ）と組合せることによりこの２つの成分を互いと一緒の投与に適合させることを含む、前記方法。
【請求項１０】
（Ｉ）請求項３〜８のいずれか１項に記載の成分（ａ）及び（ｂ）の１つを；
（ＩＩ）この２つの成分の他方と一緒にその成分を使用するための指示書とともに含んでなる、パーツのキット。
【請求項１１】
抗凝固療法が必要とされる病態の処置の方法であって、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組合せ製品、又は請求項１０に記載のパーツのキットを、そのような病態に罹患しているか又は罹患しやすい患者へ投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組合せ製品、又は請求項１０に記載されるパーツのキットの、抗凝固療法が必要とされる病態の処置若しくは予防への医薬品を製造するための使用。
【請求項１３】
メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体と、ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体の、抗凝固療法が必要とされる病態の処置若しくは予防への医薬品を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、医薬活性化合物の新規組合せ物に関する。
【０００２】
背景技術と先行技術
血液凝固は、止血（即ち、損傷血管からの血液損失の予防）と血栓（即ち、血塊の血管中での形成、血管閉塞をもたらすことがある）の両方に関わる重要なプロセスである。
【０００３】
凝固は、複雑な連続した酵素反応の結果である。
この連続した反応における最終工程の１つは、プロ酵素のプロトロンビンの、活性酵素のトロンビンへの変換である。
【０００４】
トロンビンは、凝固において中心的な役割を果たすことが知られている。それは血小板を活性化し、血小板凝集をもたらし、フィブリノゲンをフィブリンモノマーへ変換し、これが自発的にフィブリンポリマーへ重合化するとＸＩＩＩ因子を活性化し、次にはそれがこのポリマーを架橋結合して不溶性のフィブリンを形成させる。さらに、トロンビンはＶ因子とＶＩＩＩ因子を活性化し、プロトロンビンからのトロンビンの「ポジティブ・フィードバック」産生をもたらす。
【０００５】
国際特許出願ＷＯ９４／２９３３６は、一群のトロンビン阻害化合物を開示し、それにはメラガトランとしても知られている、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−（Ｒ）Ｃｇｌ−Ａｚｅ−Ｐａｂ−Ｈ（ここで、Ｃｇｌはシクロヘキシルグリシンを表し、ＡｚｅはＳ−アゼチジン−２−カルボン酸を表し、Ｐａｂ−Ｈは４−アミノメチルアミジノベンゼンを表す）が含まれる（ＷＯ９４／２９３３６の実施例１を参照のこと）。国際特許出願ＷＯ９７／２３４９９は、特にメラガトランのプロドラッグを開示する。
【０００６】
ＶＩＩ因子は、外因系を介した血液凝固カスケードを始動させる原因となる２つのタンパク質の（組織因子と並ぶ）１つである。血液凝固は、物理的には、組織因子／ＶＩＩａ因子複合体の形成ですぐに開始されると一般に受け入れられている。ひとたび形成されると、この複合体は、ＩＸ及びＸ因子を活性化することによって凝固を開始させる。
【０００７】
ある種の化合物はＶＩＩａ因子阻害特性を保有することが知られている。例えば、国際特許出願ＷＯ９６／２５４２７、ＷＯ９２／１５６８６、ＷＯ９２／０６７１１、ＷＯ９６／１２０２１、ＷＯ９８／５０４２０、ＷＯ９６／１２８００、ＷＯ９７／４７６５１、ＷＯ９９／０３４９８、ＷＯ９４／０７５２８、ＷＯ９６／２０６８９、ＷＯ９５／２３８６０、ＷＯ９７／４９６８４、ＷＯ９９／４１２７６、ＷＯ９９／４１２３１、ＷＯ９９／４８８７８、ＷＯ９９／５０２５４、ＷＯ９９／５０２５７、ＷＯ９９／５０２６３、ＷＯ９９／１２９３６、ＷＯ９９／１３０６３、ＷＯ９９／６７２１５、ＷＯ００／１５６５８、ＷＯ００／３０６４６、ＷＯ００／３５８５８、ＷＯ００／３５８８６、ＷＯ００／４０６０１、ＷＯ００／４１５３１、ＷＯ００／５１９８９、ＷＯ００／５８３４６、ＷＯ００／６６５４５、ＷＯ００／６９８２６、ＷＯ００／６９８３２、ＷＯ００／６９８３４、ＷＯ０１／１０８９２、ＷＯ９４／２７６３１、ＷＯ９５／１２６７４、ＷＯ９７／２０９３９、ＷＯ９７／４８６８７、ＷＯ９７／４８７０６、ＷＯ９８／０９９８７、ＷＯ９８／２２６１９、及びＷＯ９９／００３７１；米国特許第５，４３７，８６４号、５，８３３，９８２号、５，８３４，２４４号、５，８６３，８９３号、５，０２３，２３６号、６，０２０，３３１号、及び５，６３９，７３９号；ヨーロッパ特許出願ＥＰ　９２１　１１６、ＥＰ　９３１　７９３、ＥＰ　６６９　３１７、及びＥＰ　９８７　２７４；及びドイツ特許出願ＤＥ　１９８２９９６４、ＤＥ　１９８３４７５１、ＤＥ　１９８３５９５０、ＤＥ　１９８３９４９９、ＤＥ　１９８４５１５３、ＤＥ　１９９００３５５、及びＤＥ１９９００４７１号を参照のこと。
【０００８】
上記文書のなかで、メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体のＶＩＩａ因子阻害剤と一緒の投与を開示するか又は示唆するものは１つもない。我々は、ここに、驚くべきことに、まさにそのような組合せ物の投与が著しく相乗的な抗凝固効果を生じることを見出した。
【０００９】
発明の開示
本発明の第一の側面によれば、
（Ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体；及び、
（Ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を含んでなり、成分（Ａ）及び（Ｂ）のそれぞれが製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して製剤化される、組合せ製品が提供される。
【００１０】
本発明による組合せ製品は、メラガトラン（又はその誘導体）の、ＶＩＩａ阻害剤（又はその誘導体）と一緒の投与を提供し、従って、製剤の少なくとも１つがメラガトランを含み、少なくとも１つがＶＩＩａ因子阻害剤を含む別々の製剤（ｓｅｐａｒａｔｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）として提示され得るか、又は組合せた調製物として提示（即ち、製剤化）され得る（即ち、メラガトラン及びＶＩＩａ阻害剤を包含する単一製剤として提示され得る）。
【００１１】
従って、さらに：
（１）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体と、ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤（以下、この製剤を「組合せ調製物」と呼ぶ）；及び
（２）以下の成分：
（ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤；及び、
（ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤
を含んでなり、成分（ａ）及び（ｂ）は他方と一緒の投与に適している形態でそれぞれ提供される、パーツのキットが提供される。
【００１２】
本発明のさらなる側面によれば、上記に定義されるようなパーツのキットを製造する方法が提供され、前記方法は、上記に定義されるような成分（ａ）を、上記に定義されるような成分（ｂ）と組合せることによりこの２つの成分を互いと一緒の投与に適合させることを含む。
【００１３】
２つの成分を互いに「組合せる」ことには、パーツのキットの成分（ａ）及び（ｂ）が：
（ｉ）別々の製剤（即ち、互いに独立している）として提供されること（後に、併用療法において、互いと一緒の使用のために一緒にされる）；又は
（ｉｉ）併用療法において、互いと一緒に使用される「組合せパック」の別個の成分として包装され、提示されることが含まれる。
【００１４】
従って、さらに：
（Ｉ）本明細書に定義されるような成分（ａ）及び（ｂ）の１つを；
（ＩＩ）この２つの成分の他方と一緒にその成分を使用するための指示書とともに含んでなる、パーツのキットがさらに提供される。
【００１５】
本明細書に記載のパーツのキットは、反復投薬を提供するために、適正な量／用量のメラガトラン又はその誘導体を包含する１つ以上の製剤、及び／又は適正な量／用量のＶＩＩａ因子阻害剤又はその誘導体を包含する１つ以上の製剤を含む場合がある。（いずれかの活性化合物を含んでなる）１つ以上の製剤が存在する場合、そのような製剤は、メラガトラン（又は誘導体）若しくはＶＩＩａ因子阻害剤（又は誘導体）の用量、化学組成、及び／又は物理形態に関して、同じであるか、又は異なる場合がある。
【００１６】
本発明のさらなる側面は、抗凝固療法が必要とされる病態の処置の方法を提供し、これは、メラガトラン（又は製剤的に許容されるその誘導体）とＶＩＩａ因子阻害剤（又はその製剤的に許容される誘導体）を包含する医薬製剤を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して投与することを含む。
【００１７】
本発明のさらなる側面は、抗凝固療法が必要とされる（抗凝固が要求されることを意味する）病態の処置の方法を提供し、これは：
（ａ）メラガトラン又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤を；
（ｂ）ＶＩＩａ因子阻害剤又はその製剤的に許容される誘導体を製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して包含する医薬製剤と一緒に、そのような病態に罹患しているか又は罹患しやすい患者へ投与することを含む。
【００１８】
疑念の回避のために言えば、本明細書で使用されるように、「処置」という用語には、治療的、及び／又は予防的処置が含まれる。
本明細書に記載のパーツのキットに関して「〜と一緒の投与」には、メラガトラン（又はその誘導体）及びＶＩＩａ因子阻害剤（又はその誘導体）を含んでなるそれぞれの製剤が、急性又は慢性であり得る関連病態の処置の経過にわたり、連続して、別々に、及び／又は同時に投与されることが含まれる。
【００１９】
このように、本発明による組合せ製品に関して「〜と一緒の投与」という用語には、この組合せ製品（メラガトラン／誘導体とＶＩＩａ阻害剤／誘導体）の２つの成分が、（組合せ調製物の場合）一緒にか、又は（パーツのキットの場合）十分近い時間の間に（所望により反復的に）投与されることで、関連病態の処置の経過にわたり、メラガトラン／誘導体を含んでなる製剤、又はＶＩＩａ因子阻害剤／誘導体を含んでなる製剤のいずれか一方が、他方の成分がないまま単独で（所望により反復的に）同一の処置の経過にわたり投与されるよりも、患者へのより大きい有益効果を可能にすることが含まれる。組合せ物が特殊な病態に関して、そしてその処置の経過にわたりより大きな有益効果を提供するかどうかの決定は、処置又は予防される病態に依存するが、通常は当業者によって達成され得る。
【００２０】
さらに、本発明によるパーツのキットの文脈では、「〜と一緒」という用語には、２つの製剤の一方若しくは他方が、他方の成分の投与に先立って、又はその後で、及び／又はそれと同時に（所望により反復的に）投与され得ることが含まれる。この文脈で使用される場合、「同時に投与される」及び「〜と同じときに投与される」という用語には、メラガトラン（又はその誘導体）及びＶＩＩａ因子阻害剤（又はその誘導体）の個別用量が互いの４８時間以内（例えば、２４時間）に投与されることが含まれる。
【００２１】
メラガトラン及びＶＩＩａ因子阻害剤の「製剤的に許容される誘導体」には、塩（例、製剤的に許容される無毒の有機若しくは無機酸付加塩）と溶媒和物が含まれる。この用語には、メラガトラン、又はＶＩＩａ因子阻害剤と同一の生物学的機能及び／又は活性を有する誘導体が適宜含まれると理解されよう。さらに、本発明の目的では、この用語にはメラガトラン若しくはＶＩＩａ因子阻害剤のプロドラッグも含まれる。メラガトラン若しくはＶＩＩａ因子阻害剤の「プロドラッグ」には、経口若しくは非経口投与の後で、ｉｎ ｖｉｖｏ で代謝されてメラガトラン若しくは各ＶＩＩａ因子阻害剤を、実験的に検出可能な量で、そして前決定された時間以内に（例、６〜２４時間の投薬間隔（即ち、１日１〜４回）以内に）適宜形成する組成の物質が含まれる。疑念の回避のために言えば、「非経口」投与には、経口投与以外のあらゆる投与形態が含まれる。
【００２２】
言及され得るメラガトランのプロドラッグには、国際特許出願ＷＯ９７／２３４９９に開示されるものが含まれる。好ましいプロドラッグは、式：Ｒ１Ｏ２Ｃ−ＣＨ２−（Ｒ）Ｃｇｌ−Ａｚｅ−Ｐａｂ−ＯＨ（上記又はＷＯ９７／２３４９９の略号リストを参照のこと）のものであり、ここでＲ１は、直鎖若しくは分岐鎖のＣ１−６アルキル（例、Ｃ１−４アルキル、特にメチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、そして特別に、エチル）のような、Ｃ１−１０アルキル又はベンジルを表し、ＯＨ基は、Ｐａｂ中のアミジノ水素の１つに置き換わる。
【００２３】
本発明による組合せ製品に利用され得るＶＩＩａ因子阻害剤には、国際特許出願ＷＯ９６／２５４２７、ＷＯ９２／１５６８６、ＷＯ９２／０６７１１、ＷＯ９６／１２０２１、ＷＯ９８／５０４２０、ＷＯ９６／１２８００、ＷＯ９７／４７６５１、ＷＯ９９／０３４９８、ＷＯ９４／０７５２８、ＷＯ９６／２０６８９、ＷＯ９５／２３８６０、ＷＯ９７／４９６８４、ＷＯ９９／４１２７６、ＷＯ９９／４１２３１、ＷＯ９９／４８８７８、ＷＯ９９／５０２５４、ＷＯ９９／５０２５７、ＷＯ９９／５０２６３、ＷＯ９９／１２９３６、ＷＯ９９／１３０６３、ＷＯ９９／６７２１５、ＷＯ００／１５６５８、ＷＯ００／３０６４６、ＷＯ００／３５８５８、ＷＯ００／３５８８６、ＷＯ００／４０６０１、ＷＯ００／４１５３１、ＷＯ００／５１９８９、ＷＯ００／５８３４６、ＷＯ００／６６５４５、ＷＯ００／６９８２６、ＷＯ００／６９８３２、ＷＯ００／６９８３４、ＷＯ０１／１０８９２、ＷＯ９４／２７６３１、ＷＯ９５／１２６７４、ＷＯ９７／２０９３９、ＷＯ９７／４８６８７、ＷＯ９７／４８７０６、ＷＯ９８／０９９８７、ＷＯ９８／２２６１９、及びＷＯ９９／００３７１；米国特許第５，４３７，８６４号、５，８３３，９８２号、５，８３４，２４４号、５，８６３，８９３号、５，０２３，２３６号、６，０２０，３３１号、及び５，６３９，７３９号；ヨーロッパ特許出願ＥＰ　９２１　１１６、ＥＰ　９３１　７９３、ＥＰ　６６９　３１７、及びＥＰ　９８７　２７４；及びドイツ特許出願ＤＥ　１９８２９９６４、ＤＥ　１９８３４７５１、ＤＥ　１９８３５９５０、ＤＥ　１９８３９４９９、ＤＥ　１９８４５１５３、ＤＥ　１９９００３５５、及びＤＥ１９９００４７１号に記載されるものが含まれ、これら文書のすべてにおける特定及び一般の開示は参照により本明細書に組込まれる。
【００２４】
好ましいＶＩＩａ因子阻害剤には、国際特許出願ＷＯ９８／５０４２０、ＷＯ９７／４７６５１、ＷＯ９９／０３４９８、ＷＯ９６／２０６８９、ＷＯ００／１５６５８、ＷＯ００／３５８５８、ＷＯ００／３５８８６、ＷＯ００／４１５３１、ＷＯ００／５８３４６、ＷＯ００／６６５４５、ＷＯ００／６９８２６、ＷＯ００／６９８３２、ＷＯ００／６９８３４、ＷＯ９８／２２６１９と米国特許第５，６３９，７３９号に記載されるもの、特に、国際特許出願ＷＯ９２／１５６８６、ＷＯ９６／１２０２１、及びＷＯ９９／４１２３１とヨーロッパ特許出願ＥＰ　９８７　２７４及びＥＰ　９２１　１１６に記載されるもの（これら文書のすべてにおける特定及び一般の開示は参照により本明細書に組込まれる）、並びに以下に記載の方法に従って製造され得る、Ｎ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−｛４−［アミノ（イミノ）メチル］ベンジル｝−Ｌ−ロイシンアミドとその製剤的に許容される誘導体が含まれる。
【００２５】
「抗凝固療法が必要とされる病態」という用語には、当業者により、以下が含まれると理解される：
ヒトを含む動物の血液及び／又は組織における血栓症及び凝固能亢進の処置及び／又は予防。凝固能亢進が血栓−塞栓症をもたらす場合があることが知られている。言及され得る、凝固能亢進及び血栓−塞栓症に関連した病態には、Ｖ因子突然変異（Ｖ因子Ｌｅｉｄｅｎ）のような遺伝性若しくは獲得性の活性化プロテインＣ抵抗性、及び、抗トロンビンＩＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、又はヘパリン補因子ＩＩの遺伝性若しくは獲得性欠乏症が含まれる。凝固能亢進及び血栓−塞栓症に関連していることが知られている他の病態には、循環性の抗リン脂質抗体（ループス抗凝固薬）、ホモシステイン血症、ヘパリン誘導性血小板減少症、及びフィブリン溶解の障害、並びに凝固症候群（例、播種性血管内凝固（ＤＩＣ））及び（例えば、手術による）血管損傷全般が含まれる。
【００２６】
凝固能亢進の徴候がないまま望ましくない過剰なトロンビンが存在する病態、例えばアルツハイマー病のような神経退行疾患の処置。
言及され得る特有の病態には、静脈血栓症（例、ＤＶＴ）及び肺塞栓症、（例えば、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓症が基礎にある卒中、及び末梢動脈血栓症における）動脈血栓症、及び、通常、心房細動の間の心房に由来するか又は経壁的心筋梗塞後の左心室に由来する、又はうっ血性心不全により引き起こされる全身性塞栓症の治療的及び／又は予防的処置；血栓溶解、経皮経管的血管形成術（ＰＴＡ）、及び冠バイパス手術の後の再閉塞（即ち、血栓症）の予防；マイクロ手術と血管手術全般後の再血栓症の予防が含まれる。
【００２７】
さらなる適応症には、細菌、多数の外傷、中毒、又は他の機序により引き起こされる播種性血管内凝固の治療的及び／又は予防的処置；血管移植片、血管ステント、血管カテーテル、機械的及び生物学的な補綴弁や他の医療器具のように、血液が身体の中で異物表面と接触している場合の抗凝固療法；及び、心肺装置を使用する心臓血管手術の間や血液透析のように、血液が身体の外側で医療器具と接触している場合の抗凝固療法；特発性及び成人性呼吸窮迫症候群、放射線療法若しくは化学療法に後続する肺線維症、敗血症ショック、敗血症、炎症応答（限定されないが浮腫を含む）、冠状動脈疾患のような急性若しくは慢性のアテローム性動脈硬化症とアテローム性硬化巣の形成、脳動脈疾患、脳梗塞、脳塞栓症、末梢動脈疾患、虚血症、狭心症（不安定狭心症を含む）、再灌流損傷、経皮経管的血管形成術（ＰＴＡ）及び冠動脈バイパス手術後の再狭窄の治療的及び／又は予防的処置が含まれる。
【００２８】
好ましい病態には血栓症が含まれる。
本発明によれば、メラガトラン、ＶＩＩａ因子阻害剤、及びいずれかの誘導体は、メラガトラン及び／又はＶＩＩａ因子阻害剤を製剤的に許容される剤形に含んでなる医薬調製物の形態で、経口、静脈内、皮下、頬内、直腸内、皮内、経鼻、気管内、気管支内、局所的、他の非経口経路によるか、又は吸入により投与され得る。治療される障害及び患者、並びに投与の経路に依存して、組成物は、様々な用量で投与され得る。
【００２９】
好ましいデリバリーの形式は全身である。メラガトランとその誘導体では、好ましい投与の形式は非経口的、より好ましくは静脈内、そして特に皮下である。メラガトランのプロドラッグでは、好ましい投与の形式は経口である。
【００３０】
哺乳動物、特にヒトの治療的処置では、メラガトラン、ＶＩＩａ因子阻害剤、及びいずれもの誘導体は、意図される投与経路と標準的な製剤法を考慮して選択され得る、製剤的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合した医薬製剤として一般に投与され得る。
【００３１】
メラガトラン及びその（プロドラッグを含む）誘導体を投与する場合の使用に適した製剤は、例えば、特に国際特許出願ＷＯ９４／２９３３６、ＷＯ９６／１４０８４、ＷＯ９６／１６６７１、ＷＯ９７／２３４９９、ＷＯ９７／３９７７０、ＷＯ９７／４５１３８、ＷＯ９８／１６２５２、ＷＯ９９／２７９１２、ＷＯ９９／２７９１３、ＷＯ００／１２０４３、及びＷＯ００／１３６７１に記載のような文献に記載され、その文書の開示内容は参照により本明細書に組込まれる。
【００３２】
同様に、ＶＩＩａ因子阻害剤とその（プロドラッグを含む）誘導体を投与する場合の使用に適した製剤は、例えば、上記に示されるＶＩＩａ因子阻害剤に関連した先行技術の文献に記載されるように文献に記載され、その文書中の開示内容は参照により本明細書に組込まれる。他のやり方では、好適な製剤、特にメラガトラン／誘導体とＶＩＩａ因子阻害剤／誘導体の両方を含む組合せ調製物の製造は、当業者により、定常的な技術を使用して非独創的に実施され得る。
【００３３】
それぞれの製剤中のメラガトラン、ＶＩＩａ因子阻害剤、又は両者の誘導体の量は、病態の重症度や治療される患者、並びに利用される化合物に依存するが、当業者により非独創的に決定され得る。
【００３４】
哺乳動物、特にヒト患者の治療的及び／又は予防的処置におけるメラガトラン、ＶＩＩａ因子阻害剤、及び両者の誘導体に適した量は、医師又は他の専門家により定常的に決定され得て、上記に示されるメラガトラン（又はその（プロドラッグを含む）誘導体）とＶＩＩａ因子阻害剤に関連した先行技術の文書に論じられているそれぞれの量が含まれる。この文献の開示内容は参照により本明細書に組込まれる。
【００３５】
メラガトランの場合、哺乳動物、特にヒト患者の治療的及び／又は予防的処置における活性化合物、そのプロドラッグ及び誘導体に適した用量には、５μモル／Ｌまで、例えば、関連病態の処置の経過にわたり０．００１〜０．５μモル／Ｌの範囲にある平均血清濃度を与えるものが含まれる。従って、好適な用量は、メラガトランでは、「０．１ｍｇ、１日１回」〜「２５ｍｇ、１日３回」の範囲、及び／又は、「２４時間にわたり１００ｍｇまで非経口注入」であり、特に上記に記載のものを含むメラガトランのプロドラッグでは、「０．１ｍｇ、１日１回」〜「１００ｍｇ、１日３回」の範囲であり得る。
【００３６】
ＶＩＩａ因子阻害剤の場合、治療若しくは予防の目的に適した用量は、分割用量で必要とされるならば、例えば１０〜５００ｍｇが服用されるような範囲である。一般に、非経口ル−トが利用される場合はより低い用量が投与され、例えば、静脈内投与では、例えば１〜５０ｍｇの範囲の用量が一般に使用される。連続注入では、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／時間の用量が一般に使用される。
【００３７】
どんな場合でも、個々の患者に最も適している現実の投与量を決定し得るのは医師、又は熟練者であり、それは、処置されるべき病態、並びに、処置される特定の患者の年齢、体重、性別、及び応答により変化するものである。上記の投与量は平均的な症例の典型であり、当然ながら、より高いか又はより低い投与量の範囲が有利である個別の事例があり得て、それらも本発明の範囲内にある。
【００３８】
別々の製剤が投与される場合、メラガトラン（又はその誘導体）、及びＶＩＩａ因子阻害剤（又はその誘導体）を含んでなる製剤が投与される順序（即ち、連続、別々、及び／又は同時の投与のどれがどの時点でなされるのか）は、医師若しくは熟練者により決定され得る。例えば、この順序は、処置の経過若しくは期間のいつでも、現実的な理由のために特定の患者へある製剤を投与し得ないこと（例えば、その患者は意識がないので、メラガトラン若しくはＶＩＩａ因子阻害剤を含んでなる経口製剤を服用し得ないこと）といった、熟練者には明白である多くの要因に依存し得る。
【００３９】
本明細書に記載の方法は、抗凝固療法が必要とされる病態の処置において、そのような病態の処置のために先行技術で知られている同様の方法よりも、医師及び／又は患者にとってより簡便であり、より有効であり、より毒性が低く、より広い範囲の活性を有し、より強力であり、副作用をより生じないか、又は他の有用な薬理学的特性を有する可能性があるという点で、利点を有する可能性がある。
【００４０】
本発明を以下の実施例により例示するが、本発明はそれにより決して制限されるものではない。
【００４１】
【実施例】
実施例１
Ｎ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−｛４−［アミノ（イミノ）メチル］−ベンジル｝−Ｌ−ロイシンアミド
（ａ）Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の４−アミノメチルベンゾニトリル（１５．０ｇ，４１．０ミリモル）、ＤＭＡＰ（３７．０ｇ、３０３ミリモル）、及びＥＤＣ（１３．８ｇ，７２ミリモル）の氷浴上で撹拌された溶液へ２−ｔｅｒｔ−（Ｌ）−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタン酸（５．４ｇ）を加えた。氷浴を外した。２４時間後に水（５００ｍＬ）を加えた。生成物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で抽出した。有機相を１Ｍ　ＨＣｌ（２ｘ２５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）、１Ｍ　ＮａＨＣＯ３（２ｘ２５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）、及び塩水（２５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して１６．９２ｇの乾燥固形物を得た。収率７５％。
【００４２】
【化１】
2004503509.tif 000002
【００４３】
（ｂ）Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド
Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド（１６．９ｇ，４８．９ミリモル、上記の工程（ａ）を参照のこと）を含有する氷浴上の反応フラスコへ、ＨＣｌ−飽和ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）を１滴ずつ加えた。氷浴を外した。３０分後、この反応物を蒸発させて、副題生成物のＨＣｌ塩（１３．０ｇ，４６．１ミリモル）を得た。収率９４％。
【００４４】
【化２】
2004503509.tif 000003
【００４５】
（ｃ）Ｎ−｛［３−（メトキシカルボニル）ベンジル］スルホニル｝−Ｄ−バリル−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＮ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド（０．５６ｇ，２．０ミリモル、上記の工程（ｂ）を参照のこと）、ＤＭＡＰ（１．１ｇ，９ミリモル）、及びＥＤＣ（０．４２ｇ，２．２ミリモル）の氷浴上で撹拌された溶液へＮ−｛［３−（メトキシカルボニル）ベンジル］スルホニル｝−Ｄ−バリン（０．６０ｇ，１．８ミリモル）を加えた。氷浴を外し、２４時間後、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を１Ｍ　ＨＣｌ（２ｘ１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、１Ｍ　ＮａＨＣＯ３（２ｘ１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して０．７９ｇの副題化合物を乾燥固形物として得た。収率７１％。
【００４６】
【化３】
2004503509.tif 000004
【００４７】
（ｄ）Ｎ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド
ＴＨＦ中のＮ−｛［３−（メトキシカルボニル）ベンジル］スルホニル｝−Ｄ−バリル−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド（０．７６ｇ，１．３７ミリモル、上記の工程（ｃ）を参照のこと）の撹拌された溶液へ、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中の０．４Ｍ　水酸化リチウム溶液を１滴ずつ加えた。２時間後、この反応液のｐＨを１Ｍ　ＨＣｌで７へ調整した。この反応混合物を真空で蒸発乾固させた（１．０６ｇ）。ＬｉＣｌが混入したこの粗生成物を、さらに精製せずに次の工程に直接使用した。
【００４８】
【化４】
2004503509.tif 000005
【００４９】
（ｅ）Ｎ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−｛４−［（Ｚ）−アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル］ベンジル｝−Ｌ−ロイシンアミド
エタノール中のＮ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−（４−シアノベンジル）−Ｌ−ロイシンアミド（０．８９ｇ，粗製、上記の工程（ｄ）を参照のこと）の撹拌された溶液へ、窒素気体下で、トリエチルアミン（０．７４ｍＬ）と塩酸ヒドロキシルアミン（０．２２ｇ）を加えた。この反応混合物を還流まで加熱した。１８時間後、この反応混合物を真空下で濃縮乾固させた（０．７４ｇ）。この粗生成物をさらに精製せずに次の工程に使用した。
ＭＳ　ｍ／ｅ　５７６（Ｍ＋Ｈ）＋
（ｆ）Ｎ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−｛４−［アミノ（イミノ）メチル］−ベンジル｝−Ｌ−ロイシンアミド
酢酸（４０ｍＬ）中のＮ−［（３−カルボキシベンジル）スルホニル］−Ｄ−バリル−Ｎ１−｛４−［（Ｚ）−アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル］ベンジル｝−Ｌ−ロイシンアミド（０．７４ｇ，粗製、上記の工程（ｅ）を参照のこと）の撹拌された溶液へ１０％　Ｐｄ／Ｃ（０．１３ｇ）と無水酢酸（０．１３ｍＬ）を加えた。この反応は水素気体（５気圧）下で行った。３．５時間後、この反応混合物をセライトに通して濾過した。セライトを酢酸で洗浄し、合わせた濾液を真空で濃縮し、残渣をアセトニトリル／１Ｍ　ＮＨ４ＯＡｃから沈殿させ、濾過し、乾燥させて、０．３４ｇの表題生成物を得た。
【００５０】
【化５】
2004503509.tif 000006
【００５１】
略号
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン
ＥＤＣ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＭＳ＝質量分析法
実施例１の化合物を以下の試験法で試験した。
試験Ａ
ＶＩＩａ因子の発色ロボット法
発色基質のＳｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ　ＦＶＩＩａ、ＣＨ３ＳＯ２−Ｄ−ＣＨＡ−Ｂｕｔ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（ｐｅｆａｃｈｒｏｍｅ ５９７９、ペンタファーム、スイスより）をアメリカン・ジアグノスティカ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）社（グリニッジ、ＣＴ、アメリカ）から購入した。このアッセイ下の条件でのＫＭを別に決定した。組換えヒトＶＩＩａ因子（ｒＦＶＩＩａ、製品番号４０７）と非脂肪化（ｎｏｎ−ｌｉｐｉｄａｔｅｄ）組換えヒト組織因子（ｒＴＦ、製品番号４５００）をアメリカン・ジアグノスティカ社から購入した。ｒＦＶＩＩａのストック溶液（１．０８ｍｇのタンパク質を１ｍＬの水に溶かし、２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１００ｍＭ　ＮａＣｌ，ｐＨ７．４中で２１．６μＭとする）とｒＴＦのストック溶液（１ｍｇのタンパク質を１．５ｍＬの水に溶かし、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０），１５０ｍＭ　ＮａＣｌ，ＣＨＡＰＳ（３−（（３−クロルアミドプロピル）ジメチルアンモニオール）−１−プロパンスルホネート；１０ｍＭ中で１９μＭとする）、及び２００ｍＭ　マンニトールを０．５ｍＬ試薬管において−８０℃で保存した。８μＬの２１．６μＭ　ｒＦＶＩＩａと２２μＬの１９μＭ　ｒＴＦを、０．１％　ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を有する６ｍＬのアッセイ緩衝液へ加えることにより、２９ｎＭ　ｒＦＶＩＩａ及び６８ｎＭ　ＴＦの混合液を調製した。この混合液を室温で３０分インキュベートした。アッセイ緩衝液には、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓと１００ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％　ＢＳＡ、５ｍＭ　ＣａＣｌ２が含まれ、３７℃でＨＣｌを用いてｐＨ７．４へ調整した。９６穴マイクロタイタープレートにおいて化合物を１００％　ＤＭＳＯに溶かし、１０ｍＭの濃度とした。新たなプレートを用意し、ＤＭＳＯを用いて１：３の希釈工程を繰り返し、最終的に、カラム２〜カラム１１まで、１０種の濃度とした。最終アッセイでは、プレートの全ウェルから４μＬを測定プレートへ移し、ウェルあたり２．７％　ＤＭＳＯ／１５０μＬの最終アッセイ濃度とした。ＶＩＩａ因子ロボットアッセイは、１５０μＬの全アッセイ量において、ＲＯＳＹＳ　Ｐｌａｔｏ　３０００　ロボット用マイクロプレートプロセッサーにおいて実施した。カラム２〜１１中の４μＬの阻害剤へ、室温で１２２μＬのアッセイ緩衝液を加えてから、１２μＬのＦＶＩＩａ−ｒＴＦ作業溶液を全ウェルへ一度に分配し、最終的に１２μＬのＳｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ　ＦＶＩＩａ作業溶液を加えて混合し、０．２ｍＭの最終濃度とした。混合して３７℃で４０分のインキュベーションの後で、吸光度の差を４０５ｎｍで読み取った。各化合物のＩＣ５０値を以下の非線形回帰式により計算した：
ＡＩ／Ａ０＝１／（１＋（［Ｉ］／ＩＣ５０）Ｓ）
（ここで、ＡＩ＝阻害剤存在下での４０５ｎｍでの最終吸光度、Ａ０＝阻害剤不在下での４０５ｎｍでの最終吸光度、Ｓ＝用量滴定曲線の傾き、純粋な競合阻害剤では１の理論値となる）。次いで、Ｋｉ値を以下の関係から推定し得る：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋Ｓ／Ｋｍ）＝ＩＣ５０／１．３２
試験Ｂ
発色ロボットアッセイを用いたトロンビン阻害の決定
トロンビン阻害剤の効力を、発色基質法により、９６穴半量マイクロタイタープレート（コスター、ケンブリッジ、ＭＡ、アメリカ；カタログ番号３６９０）を使用して、Ｐｌａｔｏ　３３００　ロボット用マイクロプレートプロセッサー（Ｒｏｓｙｓ　ＡＧ，ＣＨ−８６３４　Ｈｏｍｂｒｅｃｈｔｉｋｏｎ，スイス）において測定した。ＤＭＳＯ（７２μＬ）中の試験物質のストック溶液、０．１〜１ミリモル／ＬをＤＭＳＯで１：３（２４＋４８μＬ）連続希釈して１０種の異なる濃度を得て、これをアッセイ中のサンプルとして分析した。２μＬの試験サンプルを１２４μＬのアッセイ緩衝液で希釈し、アッセイ緩衝液中の１２μＬの発色基質溶液（Ｓ−２３６６，クロモジェニクス、Ｍｏｌｎｄａｌ，スイス）と、最後にアッセイ緩衝液中の１２μＬのα−トロンビン溶液（ヒトα−トロンビン、シグマケミカル社、又はヘマトロジック・テクノロジーズ）を加え、このサンプルを混合した。最終アッセイ濃度は：試験物質　０．０００６８〜１３．３μモル／Ｌ、Ｓ−２３６６　０．３０ミリモル／Ｌ、α−トロンビン　０．０２０ＮＩＨＵ／ｍＬであった。３７℃で４０分のインキュベーションの間で吸光度が直線増加する部分を使用して、阻害剤がないブランクと比較した、試験サンプルの阻害率を計算した。トロンビン活性の５０％阻害を引き起こす阻害剤濃度に対応するＩＣ５０ロボット値を、対数濃度ｖｓ（対）阻害率（％）曲線から算出した。
【００５２】
試験Ｃ
プロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイ
以下の試薬を調製した：クエン酸塩を抗凝固剤として含有する凍結ヒト血漿プールのアリコートを、３７℃で急速に融かした。ＤＭＳＯ中の阻害剤の１０ｍＭストック溶液を、０．１％　ＢＳＡ含有生理食塩水で希釈し、最終的に１％のＤＭＳＯとした。用量応答滴定のために連続希釈を１：３の工程で行った。デイド・ベーリング社（マーブルグ、ドイツ）のＴｈｒｏｍｂｏｒｅｌ（登録商標）Ｓを、製造業者の指示書に従って、２５ｍＭ　ＭｇＣｌ２で１：１０に再構成した。ハインリッヒ・アメルング社（レマーゴ、ドイツ）のアメルングＫＣ１０マイクロ凝固計のカップにおいて、２．５μＬの阻害剤を２２．５μＬのヒト血漿と混合し、３７℃で１分間インキュベートした。予め３７℃に温めておいた５０μＬ　Ｔｈｒｏｍｂｏｒｅｌ　Ｓの追加により凝固を開始させた。各阻害剤濃度（［Ｉ］）につき、血塊形成への時間（ＣＴＩ）を同一２検体で決定した。阻害剤濃度に対して凝固時間の逆数をプロットすることによって、滴定曲線を作成した。ＩＣ５０値、凝固時間を２倍にする時間を以下の非線形回帰式により決定した：
ＣＴ０／ＣＴＩ＝１／（１＋（［Ｉ］／ＩＣ５０）Ｓ）
（ここで、ＣＴ０＝阻害剤を加えない凝固時間、ｓは傾きである）。
【００５３】
実施例１の表題化合物についての結果は：
試験Ａ−ＩＣ５０（ＶＩＩａ因子）＝６４ｎＭ
試験Ｂ−ＩＣ５０（トロンビン）＝６．２μＭ
試験Ｃ−ＩＣ５０（ＰＴ）＝３．８μＭ
であり、該化合物が選択的なＶＩＩａ因子阻害剤であることを示す。
【００５４】
実施例２
メラガトラン及びＶＩＩａ因子阻害剤の相乗効果
健常ボランティア、男性と女性からのヒト血液を、０．１３モル／Ｌの緩衝化クエン酸三ナトリウムの５ｍＬを含有する５０ｍＬのコニカル・プラスチック管に採取した。この血液をすぐに氷上で冷やし、２００ｘｇで２０分遠心分離させた。次いで、血小板がほとんどない血漿をそれぞれ１０ｍＬの分画へ分割し、メラガトラン（化合物Ａ）又は上記実施例１の化合物（化合物Ｂ）で「スパイク」して、ＡＰＴＴをそれぞれ約２０％、４０％、６０％、及び１００％だけ延長させる最終濃度にした。
【００５５】
ＡＰＴＴは以下のように決定した：予め加温した１００μＬのＡＰＴＴ試薬（Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）を、予め加温した１００μＬの血漿へ加え、３７℃で１８０秒インキュベートした。１００μＬのＣａＣｌ２（０．０２５モル／Ｌ）の追加により凝固を開始させた。ＣＲ−Ａ計算機、ＣＲ１０プリンター、及びＰＲ６０熱遮断器（アメルング社、レマーゴ、ドイツ）が連結したＫＣ１０凝固計で凝固時間を測定した。各凝固実験を同一２検体で実施し、平均凝固時間を使用した。
【００５６】
化合物Ａ及び化合物ＢのＡＰＴＴを４つの異なる濃度で試験し、その結果を表１に示す。ここで、Ｃｐ　ＡとＣｐ　Ｂは、それぞれ化合物ＡとＢの血漿濃度である。ＡＰＴＴ値を秒で表し、ベースライン値に対する延長の比率を括弧内に示す。
【００５７】
【表１】
2004503509.tif 000007
【００５８】
ＡＰＴＴは、両化合物について試験した濃度の範囲内では線形関数によく相関し、以下の式により記述され得る：
化合物Ａ：ｙ＝５２．９ｘ＋４３．３Ｒ２＝０．９８　　（式１）
化合物Ｂ：ｙ＝４．２ｘ＋３８．２Ｒ２＝１．００　　　（式２）
化合物Ａ及びＢの間にあり得る相乗効果を検証するために、以下のモデルを使用した。ＡＰＴＴの約２０％、４０％、及び６０％の延長を引き起こす化合物Ａ及びＢの濃度をはじめに決定した（表１）。次いで、等力濃度の化合物Ａ及びＢ（例えば、０．０８μモル／ＬのＡと１．５μモル／ＬのＢ）を混合し、その混合物のＡＰＴＴを上記のように決定した。この混合物のＡＰＴＴが等力濃度の化合物Ａそのものの「混合物」（即ち、ＡＰＴＴを２０％だけ延長させる濃度の化合物Ａ＋化合物Ａ（０．０８μモル／Ｌ＋０．０８μモル／Ｌ＝０．１６μモル／Ｌ）のＡＰＴＴより長ければ、相乗効果の証拠が得られる。しかしながら、２つの化合物間の真の相乗効果は、両化合物の用量応答曲線が知られていて、すべてのデータがＢｅｒｅｎｂａｕｍ式の代数モデルに適合しなければ、決して確定され得ない（Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９７７） を参照のこと）：
（混合物中のＣｐ　Ａ／Ａｅ）＋（混合物中のＣｐ　Ｂ／Ｂｅ）＜１
上記の式ではＣｐＡ及びＣｐＢは、それぞれ、化合物Ａ及びＢの混合物中の血漿濃度であり、ＡｅとＢｅは、その混合物と同じＡＰＴＴ結果を得るのに必要とされる化合物Ａ及びＢのそれぞれの濃度である。これらの濃度は、化合物Ａ及びＢの線形用量応答からそれぞれ計算され得る（式１及び２）。化合物Ａ単独、又は化合物Ｂとの組合せを用いた実験からのすべてのＡＰＴＴ結果を表２に要約する。
【００５９】
【表２】
2004503509.tif 000008
【００６０】
表２は、化合物Ａ単独、又は化合物Ｂとの様々な混合物のＡＰＴＴを示す。右端の２列はその混合物と同じＡＰＴＴ延長に達するために必要とされるＡ及びＢの濃度を示す。
【００６１】
表２からの結果をＢｅｒｅｎｂａｕｍの式へ適用すると、以下の分数が得られた：
Ａ（μモル／Ｌ）　　　　Ｂ（μモル／Ｌ）
混合物１：（０．０８／０．２１）＋（１．５／３．８７）＝０．３８＋０．３８＝０．７６
混合物２：（０．１８／０．５３）＋（３．２／７．９８）＝０．３４＋０．４０＝０．７４
混合物３：（０．２７／０．８３）＋（４．９／１１．８）＝０．３３＋０．４１＝０．７４
このように、Ｂｅｒｅｎｂａｕｍによる相乗の判定基準が満たされた。真の相乗効果が示された。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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2004503509.tif 000038
2004503509.tif 000039
2004503509.tif 000040