(57)【要約】本発明は、耐性がＭＲＰ１により部分的もしくは全体的にもたらされる耐性新生物を阻害するのに有用な、式Ｉ【化１】2004529919.tif 000011で示される化合物に関する。
2004529919.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2004529919.tif 000006
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒ1が（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2がＮＨＲ4、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環である、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
それを必要とする哺乳類に、有効量の、式Ｉ
【化２】
2004529919.tif 000007
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を投与することを含んでなる、哺乳類においてＭＲＰ１を阻害する方法。
【請求項５】
Ｒ1が（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
Ｒ2が、ＮＨＲ4、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
哺乳類がヒトである、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
それを必要とする哺乳類に、有効量の、式Ｉ
【化３】
2004529919.tif 000008
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、１またはそれ以上の有効量の腫瘍細胞崩壊剤と組み合わせて投与することを含んでなる、哺乳類において耐性新生物または耐性になりやすい新生物を阻害する方法。
【請求項９】
Ｒ1が（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ2が、ＮＨＲ4、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
腫瘍細胞崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、およびエトポシドから選択される、請求項８〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
新生物が、Wilmタイプ、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣、または甲状腺の新生物であるか、または新生物が、急性リンパ芽球性および骨髄芽球性白血病、神経芽細胞腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ肉腫、または気管支原性癌に関連している、請求項８〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
式Ｉ
【化４】
2004529919.tif 000009
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、そのための１またはそれ以上の薬学的な担体、希釈剤または賦形剤と組み合せて含んでなる医薬製剤。
【請求項１４】
（ａ）式Ｉ
【化５】
2004529919.tif 000010
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩;
（ｂ）１またはそれ以上の腫瘍細胞崩壊剤；および
（ｃ）そのための１またはそれ以上の薬学的な担体、希釈剤または賦形剤
を含んでなる医薬製剤。
【請求項１５】
腫瘍細胞崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、およびエトポシドから選択される、請求項１４記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
外科手術や放射線療法に加えて、化学療法は多くの癌に有効な治療法であり続けている。事実、種々のタイプの癌、例えばホジキン病、大細胞リンパ肉腫、急性リンパ球性白血病、精巣癌、および初期乳癌が、今や化学療法により治癒し得ると考えられている。卵巣癌、小細胞肺癌、および進行性乳癌のような他の癌はまだ治癒させることはできないが、併用化学療法に対して肯定的な効果がみられつつある。
【０００２】
癌治療（処置）において未解決の最も重要な問題の１つは薬剤耐性である。細胞は、単一の細胞毒性薬剤に対する耐性を選択した後、種々の構造および細胞標的を有するすべての範囲の薬剤、例えば、アルキル化剤、抗代謝産物、ホルモン、プラチナ含有薬剤、および天然生成物に対して交差耐性になることがある。この現象は、多剤耐性（ＭＤＲ）として知られている。ある種の細胞ではこの耐性は固有のものであるが、小細胞肺癌のような他の細胞では通常獲得するものである。
【０００３】
そのような耐性は多機能性であることが知られており、少なくとも２種類のタンパク質、１７０ｋＤａのＰ−糖タンパク質（ＭＤＲ１）、およびより最近同定された１９０ｋＤａの多剤耐性タンパク質（ＭＲＰ１）によりもたらされる。ＭＤＲ１およびＭＲＰ１はいずれも輸送タンパク質のＡＴＰ−結合カセットスーパーファミリーに属するが、それらは構造的に極めて異なる分子であり、アミノ酸相同性は１５％以下である。２つのタンパク質の構造が異なるにも関わらず、１９９４年まではＭＤＲ１およびＭＲＰ１細胞系の耐性パターンの一貫した相違は知られていなかった。しかしながら、ＭＲＰ１と特定の腫瘍細胞崩壊剤耐性に関連があることや関連がないことが知られている。Coleら、「Pharmacological Characterization of Multidrug Resistant MRP−transfected Human Tumor Cells」、Cancer Research, 54:5902−5910,1994参照。ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、およびエトポシドはＭＲＰ１の基質である。すなわち、ＭＲＰ１はこれら腫瘍細胞崩壊剤と結合し、該薬剤をその作用部位、核の外および細胞の外へ再分配させることができる。前述、およびMarquardt,D.およびCenter,M.S., Cancer Research, 52:3157,1992。
【０００４】
ドキソルビシン、ダウノルビシン、およびエピルビシンは、アントラサイクリンクラスの腫瘍細胞崩壊剤の一員である。それらはStreptomycesの種々の菌株からの単離物であり、核酸合成を阻害することにより作用する。これら薬剤は、骨、卵巣、膀胱、甲状腺、および特に乳房の新生物を治療するのに有用である。それらは急性リンパ芽球性および骨髄芽球性白血病、Ｗｉｌｍ腫瘍、神経芽細胞腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ肉腫、および気管支原性癌の治療にも有用である。
【０００５】
ビンカアルカロイドの腫瘍細胞崩壊剤の一員であるビンクリスチンは普通の顕花ハーブのツルニチニチ草（Vinca resea Linn）からの単離物である。ビンクリスチンの作用機序はまだ研究中であるが、紡錘体における微小管形成の阻害に関与している。ビンクリスチンは急性白血病、ホジキン病、非ホジキン悪性リンパ肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、およびＷｉｌｍ腫瘍の治療に有用である。
【０００６】
エピポドフィロトキシンの腫瘍細胞崩壊剤の一員であるエトポシドは、ポドフィロトキシンの半合成誘導体である。エトポシドはトポイソメラーゼインヒビターとして作用し、精巣および肺の新生物の治療に有用である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
細胞系がＭＤＲ１またはＭＲＰ１の機序を介して耐性を獲得するかどうかを確定するものは現在わかっていない。これらトランスポーターの組織特異性により、そして／またはある機序が優性であるかまたはその機序に限られる場合は、他のものよりそれが選択的なインヒビターであれば有用であろう。さらに、いずれかのタンパク質の基質である薬剤または複数の薬剤を投与する場合は、該タンパク質の選択的インヒビターである薬剤を同時に投与することが特に有利であろう。したがって、ＭＤＲ１またはＭＲＰ１の選択的インヒビターである化合物を提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
2004529919.tif 000003
［式中、
Ｒ1は、水素、場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル、（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2、（Ｃ1−Ｃ4アルキル）nＨ2、（ＣＨ2）nＮＨＣ（Ｏ）Ｒ3、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または場合により置換された複素環であり；
ｎは、０、１、または２であり；
ｐは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環、ＮＨＲ4、または（ＣＨ2）p−Ｏ−場合により置換された複素環であり；
Ｒ3は、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、場合により置換されたフェニル、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環であり；
Ｒ4は、（ＣＨ2）p−場合により置換されたフェニルまたは（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環;である］
で示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩に関する。
【０００９】
本発明はさらに、その処置を必要とする哺乳類に、有効量の式Ｉの化合物またはその製薬的に許容し得る塩を投与することを含む、ＭＰＲ１を阻害する方法に関する。
【００１０】
他の態様において、本発明は、哺乳動物の耐性新生物または耐性になりやすい新生物を阻害する方法であって、それを必要とする哺乳動物に対し、有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的塩もしくは溶媒和物を、有効量の腫瘍細胞崩壊剤と組み合わせて投与することを含む方法に関する。
【００１１】
本発明はさらに、ＭＰＲ１の阻害のための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はさらに、耐性新生物の阻害のための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的塩もしくは溶媒和物を、１またはそれ以上の腫瘍細胞崩壊剤、医薬担体、希釈剤、もしくは賦形剤とともに含む医薬製剤にも関する。
【００１３】
本発明は、選択した化合物、式（Ｉ）の化合物が多剤耐性タンパク質（ＭＲＰ１）の選択的インヒビターであり、従って、耐性新生物および耐性になりやすい新生物においてＭＤＲ１がもたらす多剤耐性（ＭＤＲ）を処置するのに有用である。
【００１４】
ＭＲＰ１に関連する用語「阻害する」、および「ＭＲＰ１を阻害する」は、腫瘍細胞崩壊剤を、作用部位、最も頻繁には新生物の核酸の外、および細胞の外に再分配するＭＲＰ１の能力を減弱させるか、その能力の発達を阻害するか、軽減するか、改善するか、停止させるか、抑制するか、遅らせるか、または逆転させることを表す。
【００１５】
本明細書で用いている用語「有効量の式（Ｉ）の化合物」は、ＭＲＰ１を阻害することができる本発明化合物の量を表す。用語「有効量の腫瘍細胞崩壊剤」は、耐性または耐性でない新生物を阻害することができる腫瘍細胞崩壊剤の量を表す。
【００１６】
用語「耐性新生物または耐性になりやすい新生物を阻害する」は、耐性新生物および／または耐性になりやすい新生物を殺すか、またはその発達を阻害するか、停止させるか、抑制するか、遅らせるか、もしくは逆転させ、または増殖を低下させることを表す。
【００１７】
用語「耐性新生物」は、耐性の一部または全てがＭＲＰ１によりもたらされる、化学療法に耐性の新生物を表す。そのような新生物には、限定されるものではないが、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣、および甲状腺の新生物が含まれ、限定されるものではないが、急性リンパ芽球性および骨髄芽球性白血病、Ｗｉｌｍ腫瘍、神経芽細胞腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ肉腫、および気管支原性癌といったより特定のタイプの癌も含まれる。
【００１８】
「耐性になりやすい」新生物は、耐性が固有のものでも現在存在するものでもないが、化学療法開始後にＭＲＰ１により耐性となり得る新生物である。すなわち、本発明の方法には、式（Ｉ）の化合物の予防的および治療的投与が含まれる。
【００１９】
用語「化学療法」は、少なくとも１種類の腫瘍細胞崩壊剤がＭＲＰ１の基質である１またはそれ以上の腫瘍細胞崩壊剤を用いることを表す。「ＭＲＰ１の基質」は、ＭＲＰ１と結合し、腫瘍細胞崩壊剤の作用部位（新生物の核）の外、および細胞の外に再分配され、治療効果が弱まる腫瘍細胞崩壊剤である。
【００２０】
用語「治療する」または「治療すること」は、多剤耐性腫瘍のＭＲＰ１誘導薬剤耐性の進行を予防し、妨げ、軽減し、改善し、停止させ、抑制し、遅らせ、もしくは逆転させ、またはその重症度を減少させることを含むその通常の意味を有する。
【００２１】
本明細書の一般式中の一般的な化学用語はその通常の意味を有する。例えば、「Ｃ1−Ｃ4アルキル」なる語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、シクロブチル、ｓ−ブチル、およびｔ−ブチルを意味する。「Ｃ1−Ｃ6アルキル」なる語には、１価の、直鎖の、分岐鎖の、または環状の、１〜６個の炭素原子を含む飽和炭化水素鎖を意味し、Ｃ1−Ｃ4アルキル基が含まれる。さらに、Ｃ1−Ｃ6アルキルには、シクロペンチル、ペンチル、ヘキシル、シクロヘキシルなどが含まれるがこれらに限られない。
【００２２】
「場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル」は、場合により１個のヒドロキシ基で置換されたＣ1−Ｃ4アルキルを意味する。
【００２３】
「Ｃ1−Ｃ4アルコキシ」および「Ｃ1−Ｃ6アルコキシ」は、式Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4アルキル）およびＯ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）で示される基をそれぞれ意味する。
【００２４】
「ハロ」または「ハライド」なる語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００２５】
「場合により置換されたフェニル」なる語は、場合により１〜３個の、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、ハロ、ベンジル、フェニル、トリフルオロメチル、またはオキソ基で置換されたフェニル環を意味する。
【００２６】
「複素環」なる語は、酸素、硫黄および窒素から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子をそれぞれ含む、合計５〜７個の原子の、１価の、飽和の、不飽和のまたは芳香族の単環または縮合環系意味する。
【００２７】
「場合により置換された複素環」なる語は、場合により、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、ハロ、ベンジル、フェニル、トリフルオロメチル、またはオキソ基で独立に置換された複素環を意味する。
【００２８】
「保護基」（Ｐｇ）なる語は、アミノ保護基またはヒドロキシ保護基を意味する。保護基の種類は、「Ｐｇ」基が窒素原子に結合しているのか（アミノ保護基）、または酸素原子に結合しているのか（ヒドロキシ保護基）かをみれば明らかであろう。
【００２９】
本明細書で用いている用語「アミノ保護基」は、化合物の他の官能基に反応を生じさせるが、アミノ官能性をブロックまたは保護するのに通常使用するアミノ基の置換基を表す。そのようなアミノ保護基の例には、ホルミル基、トリチル基、フタルイミド基、アセチル基、トリクロロアセチル基、クロロアセチル基、ブロモアセチル基、およびヨードアセチル基、ならびにベンジルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（「ＦＭＯＣ」）などのウレタンタイプの保護基、および同様のアミノ保護基が含まれる。用いるアミノ保護基の種類は、誘導体化アミノ基が分子の他の位置におけるその後の反応条件に対して安定であり、分子の残りの部分を崩壊させることなく適切な位置で除去することができる限り重要ではない。セファロスポリン、ペニシリン、およびペプチドの技術分野で用いられる同様のアミノ保護基も上記用語に包含される。上記用語で表される基のさらなる例は、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, New York, N.Y., １99１, 第7章に記載されている（以降、Greeneで表す）。好ましいアミノ保護基はｔ−ブチルオキシカルボニルである。
【００３０】
「ヒドロキシ保護基」なる語は、Greeneの第２章に記載したタイプの有機化学の分野の当業者に理解された基を表す。代表的なヒドロキシ保護基としては、例えば、メチルを含むエーテル基、および置換メチルエーテル基、例えば、メチルエーテル、メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、tert−ブチルチオメチルエーテル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、およびtert−ブトキシメチルエーテル；置換エチルエーテル基、例えばエトキシエチルエーテル、１−（２−クロロエトキシ）エチルエーテル、２,２,２−トリクロロエトキシメチルエーテル、および2−（トリメチルシリル）エチルエーテル；イソプロピルエーテル基；フェニルおよび置換フェニルエーテル基、例えばフェニルエーテル、ｐ−クロロフェニルエーテル、ｐ−メトキシフェニルエーテル、および２、４−ジニトロフェニルエーテル；ベンジルおよび置換ベンジルエーテル基、例えばベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、ｏ−ニトロベンジルエーテル、および２、６−ジクロロベンジルエーテル;およびアルキルシリルエーテル基、例えばトリメチルトリエチルおよびトリイソプロピルシリルエーテル、混合アルキルシリルエーテル基、例えばジメチルイソプロピルシリルエーテル、およびジエチルイソプロピルシリルエーテル;およびエステル保護基、例えばホルメートエステル、ベンジルホルメートエステル、モノ、ジ、およびトリクロロ酢酸エステル、フェノキシ酢酸エステル、およびｐ−クロロフェノキシ酢酸などが含まれる。用いるヒドロキシ保護基の種類は、誘導されるヒドロキシ基が中間分子の他の位置に以後の置換反応条件に安定であり、あらゆる他のヒドロキシ保護基を含む該分子の残りの部分を破壊することなく適切な時点で選択的に除去することができる限り重要ではない。
【００３１】
一般に、形容詞として用いるときの用語「薬学的（な）」は、生体に対して実質的に無毒性であることを意味する。例えば、本明細書で用いている用語「薬学的塩」は、生体に対して実質的に無毒性な式（Ｉ）の化合物の塩を表す。例えば、Berge,S.M, Bighley,L.D., およびMonkhouse,D.C., Pharmaceutical Salts, J.Pharm.Sci.,66:1, 1977参照。典型的な薬学的塩には、式（Ｉ）の化合物と、無機酸または有機酸または塩基との反応により製造される塩が含まれる。そのような塩は酸付加塩または塩基付加塩としてそれぞれ知られている。これら薬学的塩は、それらが誘導される化合物に比べて溶解特性が増していることが多く、液剤もしくはエマルジョン剤としてより製剤化しやすいことが多い。
【００３２】
用語「酸付加塩」は、式Ｉの化合物と無機酸または有機酸を反応させることにより製造される式Iの化合物の塩を表す。医薬的酸付加塩の例としては、例えばBerge, S.M、Bighley、L.D.,およびMonkhouse、D.C.、J.Phann.Sci.、66:1、1977参照。本発明の化合物は性質が塩基性であり得るので、あらゆる多くの無機酸や有機酸と反応して医薬的酸付加塩を形成する。
【００３３】
本発明の医薬的酸付加塩は、典型的には式Iの化合物と等モルまたは過剰量の酸と反応させることにより形成される。反応物は一般的に相互溶媒、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ベンゼンなど中で混合される。塩は通常、約１時間〜約１０日間以内に溶液から沈殿し、ろ過または他の通常の方法により単離することができる。
【００３４】
酸付加塩を形成するのに通常用いる酸には、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸など、および有機酸、例えばp−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、蓚酸、p−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などがある。すなわち、そのような医薬的に許容される塩の例には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、クロリド、ブロミド、ヨード、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオン酸塩、蓚酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸円、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１,４−ジオエート、ヘキシン−１,６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、１,５−ナフタレンジスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などがある。
【００３５】
「塩基付加塩」なる語は、式Iの化合物を無機塩基または有機塩基と反応させて製造される式Iの化合物の塩を表す。医薬的塩基付加塩の例は、例えば、Berge、S.M、Bighley、L.D.,およびMonkhouse、D.C.、J.Phann.Sci.、66:1、1977参照。本発明は、式Iの化合物の医薬的塩基付加塩も予期する。当業者は、式Iの化合物のいくつかは性質が酸性であり、あらゆる多くの無機塩基や有機塩基と反応して医薬的塩基付加塩を形成しうる。医薬的塩基付加塩の例には、式Iの化合物の、アンモニウム、リチウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、メチルアミノ、ジエチルアミノ、エチレンジアミノ、シクロヘキシルアミノ、およびエタノールアミノ塩などがある。
【００３６】
本発明の化合物のすべてが有用であるが、該化合物のあるものが特に興味深く、好ましい。下記リストに、好ましい化合物のいくつかの基を示す。リストの各々を他のリストと組み合わせて好ましい態様のさらなる群を作出してよいことは理解されよう。
ａ）Ｒ1が（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ2である；
ｂ）ｎが０である；
ｃ）Ｒ2が、ＮＨＲ4、（場合により置換されたＣ1−Ｃ4アルキル）−場合により置換されたフェニル、または（ＣＨ2）p−場合により置換された複素環である；
ｄ）ｐが３である；
ｅ）化合物が製薬的に許容し得る塩である；
ｆ）化合物が塩酸塩である；
ｇ）実施例の項に記載の化合物；
ｈ）哺乳類がヒトである方法；
ｉ）腫瘍細胞崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、およびエトポシドから選択される方法；
ｊ）新生物が、Wilmタイプ、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣、または甲状腺の新生物であるか、または新生物が、急性リンパ芽球性および骨髄芽球性白血病、神経芽細胞腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ肉腫、または気管支原性癌に関連する方法；
ｋ）腫瘍細胞崩壊剤が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ビンクリスチン、およびエトポシドから選択される製剤。
【００３７】
本発明化合物は種々の方法により製造することができ、そのいくつかを下記反応式に示す。式Iの化合物を精製するのに必要な工程の特定の順序は、合成する特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的不安定性に依存する。
【００３８】
式Ｉの化合物は、以下の反応式に説明するように式ＩＩの化合物から製造することができる（式中、Ｒ1は上記と同意義である）
反応式１
【化２】
2004529919.tif 000004
式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物を、適切な溶媒、好ましくはジメチルホルムアミドに溶解または懸濁し、次いでカリウムメトキシド、カリウムtert−ブトキシド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、炭酸カリウム、ナトリウムヘキサメチルジシラザン、およびカリウムヘキサメチルジシラザンを含む適切な塩基を加えることにより製造してよい。塩基は、典型的には１対１の比で使用する。但し、当業者が認識するであろうように、式ＩＩの化合物に対してわずかにモル過剰、通常約１．１〜約３倍モル過剰は許容される。
【００３９】
反応物は、典型的には約０℃〜約１００℃の温度で混合する。反応物は、好ましくは室温で混合し、得られた溶液は典型的には約５分間〜約１８時間、好ましくは約５分間〜約１時間混合する。
【００４０】
式Ｉの環化化合物に残存するあらゆる保護基をGreeneに記載のごとく除去して式Ｉのさらなる化合物を得てよい。好ましい保護基の選択およびそれらを除去するための方法は下記製造例および実施例にみることができよう。
【００４１】
Ｒ1が上記と同意義である、式ＩＩの化合物は反応式２にしたがって製造することができる。
反応式２
【化３】
2004529919.tif 000005
式Ｖの化合物は、当業者によく知られた方法により対応する酸ハロゲン化物に変換することができる。式ＩＩの化合物は、式Ｖの化合物の酸ハロゲン化物を適切な溶媒に溶解または懸濁し、次いで適切な溶媒中の式ＩＶの化合物を加えることにより製造することができる。トリエチルアミン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドおよびその混合物が好都合な溶媒である。このアミド形成反応は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で行うことも好ましい。式Ｖの化合物は、好ましくは対応するカルボン酸であり、式ＩＶの化合物に対して等モル量で用いるが、わずかに過剰（約０.０５〜約０.１５モル過剰）でも許容される。ＤＭＡＰは触媒のように用いられる。例えば、典型的には式ＩＶの化合物に対して約５モル％〜約１５モル％が用いられる。１０モル％が通常好ましい。
【００４２】
式ＩＶおよびＶの化合物は当分野で周知であり、市販されていなくても当該分野で普通に用いられる標準的方法により容易に合成される。
【００４３】
本発明のあらゆる塩の一部を形成する特定の対イオンは、全体として塩が薬理学的に許容される限り、そして対イオンが全体として塩に望ましくない特性をもたらさない限り重要ではないと認識すべきである。
【００４４】
反応式１〜２の反応を行うのに最適な時間は、通常のクロマトグラフィー技術により反応の進行をモニターすることにより決定することができる。さらに、例えば、アルゴンもしくは特に窒素のような不活性ガス雰囲気下で、本発明の反応を行うのが好ましい。一般に溶媒の選択は、用いる溶媒が進行中の反応に対して不活性であり、所望の反応が生じるように反応体が充分に可溶化される限り重要ではない。化合物は、好ましくは、次の反応でその化合物を用いる前に単離・精製する。いくつかの化合物は、その形成の間に反応溶液から結晶化し、次いでこれらの化合物を濾過により集めるか、または反応溶媒を、抽出、蒸発または傾斜によって除去することができる。中間体および式Ｉの最終生成物は、所望により、再結晶、またはシリカゲルまたはアルミナのような固体支持体を用いるクロマトグラフィーといった一般的技術によりさらに精製することができる。
【００４５】
当業者は、すべての置換基がすべての反応条件に適しているわけではないと認識するであろう。これらの化合物を、当業者に周知の方法により、合成の都合のよい時点で保護または修飾してよい。例えば、化合物ＩＶの置換基Ｒ1は、任意の都合のよい時点で式Ｉの化合物の合成中に脱離することのできる保護基であってよい。保護基は、当分野で周知の方法によって脱離することができ（例えば、Greene参照）、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3を標準的な化学的手法（Larock, Comprehensive Organic Transformations, pgs. 785−82０, １64０−１64１, １94１−１949, and １973−１976, VCH Publishers, New York, N.Y., １999；およびMarch J, Advanced Organic Chemistry, １985, 3rd edition, page 377−378））によって付加することができる。
【００４６】
以下の製造例および実施例は本発明の実施をよりよく説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。当業者は、本発明の精神と範囲を離れることなく種々の改変を行って良いと認識するであろう。本明細書に記載のすべての刊行物は、本発明の属する技術分野の熟練者の水準を示す。本製造例および実施例で用いている用語および略語は、特記しない限りその通常の意味を有する。例えば、「℃」、「Ｎ」、「ｍｍｏｌ」、「ｇ」、「ｍＬ」、「Ｍ」、「ＨＰＬＣ」、「ＩＲ」、「ＭＳ（ＦＤ）」、「ＭＳ（ＩＳ）」、「ＭＳ（ＦＩＡ）」、「ＭＳ（ＦＡＢ）」、「ＭＳ（ＥＩ）」、「ＵＶ」および「1ＨＮＭＲ」は、それぞれ、摂氏温度、規定（の）もしくは規定度、ミリモル（単数もしくは複数）、グラム（単数もしくは複数）、ミリリットル（単数もしくは複数）、モルもしくはモル濃度、高速液体クロマトグラフィー、赤外線分光法、フィールド・デソープション質量分析法、イオンスプレー質量分析法、フローインジェクション分析質量分析法、高速原子衝突質量分析法、電子衝撃質量分析法、紫外線分光法およびプロトン核磁気共鳴分光法を表す。なお、ＩＲスペクトルに示された最大吸収は、目的のものだけ示し、観察された最大吸収をすべて示しているわけではない。
【００４７】
製造例
製造例１
（６−{［３−（２−クロロ−６−フルオロフェニル）−５−メチル−イソキサゾール−４−カルボニル］−アミノ}−ピリジン−２−イル）−酢酸エチルエステル
ジクロロメタン（７ｍL）中の、エチル２−（２−アミノピリジン−６−イル）アセテート（調製については、Goto, Jiro；Sakane, Kazuo；Nakai, Yoshiharu；Teraji, Tsutomu；Kamiya, Takashi. J. Antibiot.（１984）, 37（5）, 532−45を参照） （０.６ｇ、３.３３ｍｍｏｌ）および３−（２−クロロ−６−フルオロ−フェニル）−５−メチル−イソキサゾール−４−カルボニルクロリド（０.６９４ｇ、２.５３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ3N（０.７ｍL、５.０６ｍｍｏｌ）を加え、一晩攪拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、洗浄し（Ｈ2Ｏ次いでブライン）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃグラジェント）により標題の化合物を得た（０.８１ｇ、７７％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）４１８.２［M+１］。
【００４８】
実施例
実施例１
［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸エチル エステル
ＤＭＦ（２０ｍL）中の、（６−{［３−（２−クロロ−６−フルオロフェニル）−５−メチル−イソキサゾール−４−カルボニル］−アミノ}−ピリジン−２−イル）−酢酸エチル エステル（０.５ｇ、１.２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ2下で粉末のＫ2ＣＯ3（０.６６１ｇ、４.８ｍｍｏｌ）を加え、一晩攪拌した。ＥｔＯＡｃで希釈し、洗浄し（Ｈ2Ｏ次いでブライン）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃグラジェント）により標題の化合物を得た（０.３７６ｇ、７９％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）３９８.１ ［M+１］。
【００４９】
実施例２
［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸
［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸エチルエステル（０.３５９ｇ、０.９ｍｍｏｌ）、MeOH（４.５ｍL）、ＴＨＦ（０.５ml）、および１NNaOH（１.８ｍL、１.８ｍｍｏｌ）を５０℃に２時間加熱した。化合物を室温に冷却し、Ｈ2Ｏで希釈し、pH３未満に酸性化した（濃HCl）。ＥtＯＡｃで２回抽出し、集めた抽出物を洗浄し（Ｈ2Ｏ次いでブライン）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、および濃縮して標題の化合物を得た（０.３３８ｇ、１００％）。この物質をさらに精製することなく用いた。質量スペクトル（FIA）（m/z）３７０.０［M+１］。
【００５０】
実施例３
２−［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３,４,５−トリメトキシフェニル）−アセトアミド
ＥＤＣＩ（０.０１６ｇ、０.０８ｍｍｏｌ）、３,４,５−トリメトキシアニリン（０.０１４ｇ、０.０７５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０.００１ｇ、０.０１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１.２５ｍL）およびＤＭＦ（０.５ｍL）中の［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸（０.０２ｇ、０.０５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。一晩攪拌した。ジクロロメタンで希釈し、洗浄し（１.０ＮＨＣｌ、Ｈ2Ｏ、ブライン）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、アセトン／ジクロロメタングラジェント）により標題の化合物を得た（０.０２４ｇ、９０％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）５３５.２［M+１］
【００５１】
実施例４
２−［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（２−メトキシ−５−ニトロフェニル）−アセトアミド
ジクロロメタン（４.５ｍL）およびＤＭＦ（０.７５ｍL）中で、［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸（０.０７５ｇ、０.２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０.０５５ｇ、０.３ｍｍｏｌ）、２−ニトロ−５−メトキシアニリン（０.０４４ｇ、０.２６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０.００５ｇ、０.０４ｍｍｏｌ）を、実施例３と同様に５時間反応させた。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、アセトン／ジクロロメタングラジェント）により標題の化合物を得た（０.０１２g、１２％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）５２０.２［M+１］
【００５２】
実施例５
２−［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−メトキシフェニル）−アセトアミド
ジクロロメタン（４.５ｍL）およびＤＭＦ（０.７５ｍL）中で、［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸（０.０７５ｇ、０.２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０.０５５ｇ、０.３ｍｍｏｌ）、３−メトキシアニリン（０.０３ｍL、０.２６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０.００５ｇ、０.０４ｍｍｏｌ）を実施例３と同様に５．５時間反応させた。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、アセトン／ジクロロメタングラジェント）により標題の化合物を得た（０.０５ｇ、５３％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）４７３.１［M−１］。
【００５３】
実施例６
２−［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３− ニトロフェニル）−アセトアミド
ジクロロメタン（４.５ｍL）およびＤＭＦ（０.７５ｍL）中で、［６−（９−クロロ−３−メチル−４−オキソ−５Ｈ−イソキサゾロ［４,３−c］キノリン−５−イル）−ピリジン−２−イル］−酢酸（０.０７５ｇ、０.２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０.０５５ｇ、０.３ｍｍｏｌ）、３−ニトロアニリン（０.０３６ｇ、０.２６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０.００５ｇ、０.０４ｍｍｏｌ）を、実施例３と同様に５．５時間反応させた。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、アセトン／ジクロロメタングラジェント）により標題の化合物を得た（０.０２４ｇ、２４％）。質量スペクトル（FIA）（m/z）４８８.１［M−１］。
【００５４】
本発明化合物はＭＲＰ１のインヒビターである。すなわち、本発明化合物は、ＭＲＰ１により部分的もしくは全体的にもたらされる腫瘍細胞崩壊剤（単数または複数）に対する固有の耐性および／または獲得耐性を有するあらゆる新生物を阻害するのに用いることができよう。換言すれば、そのような新生物を有効量の本発明化合物で処理することにより、新生物は、ＭＲＰ１により有効性が低下した化学療法に対し感受性が高まるであろう。
【００５５】
ビンクリスチン, エピルビシン, ダウノルビシン, ドキソルビシン, およびエトポキシドは、ＭＲＰ１の基質である腫瘍細胞崩壊剤の例である。Coleら、Pharmacological Characterization of Multidrug Resistant MRP−transfected Human Tumor Cells, Cancer Research, 54:59０2−59１０, １994参照。ＭＲＰ１は哺乳動物、特にヒトに遍在しているので（Nooter, K.ら、Expression of the Multidrug Resistance−Associated Protein （MRP） Gene in Human Cancers, Clin. Can. Res., １:１3０１−１3１０, （１995））、あらゆるそれら試薬を用いて新生物を阻害することを目的とする化学療法は、ＭＲＰ１により有効性が低下する可能性がある。すなわち、膀胱、骨、乳房、肺（小細胞）、精巣、および甲状腺の新生物、ならびに急性リンパ芽球性および骨髄芽球性白血病、Ｗｉｌｍ腫瘍、神経芽細胞腫、軟組織肉腫、ホジキンおよび非ホジキンリンパ肉腫、および気管支原性癌といったより特定のタイプの癌は、１またはそれ以上の上記腫瘍細胞崩壊剤と本発明化合物を併用することにより阻害することができよう。
【００５６】
本発明化合物の生物活性は、被検化合物のＭＲＰ１またはＭＤＲ１阻害活性を速やかかつ正確に測定する初期スクリーニングアッセイを用いて評価された。この逆転能を評価するのに有用なアッセイは当該分野でよく知られている。例えば、T. McGrathら, Biochemical Pharmacology, 38: 3611, 1989；D. Marquardt およびM.S. Center, Cancer Research, 52:3157, 1992；D. Marquardtら, Cancer Research, 50:1426, 1990；およびColeら, Cancer Research, 54:5902−5910, 1994参照。
【００５７】
ＭＲＰ１介在ドキソルビシン耐性およびＭＲＰ１介在ビンクリスチン耐性の逆転に関するアッセイ: ＨＬ６０/ＡＤＲ およびＨＬ６０/ＶＣＲは、高度に耐性の変異体が得られるまでドキソルビシンまたはビンクリスチンの濃度を増加させてＨＬ６０、ヒト球性骨髄芽細胞白血病細胞系を培養することにより、それぞれドキソルビシンおよびビンクリスチン耐性について選ばれた株化細胞系である。
【００５８】
ＨＬ６０/ＡＤＲおよびＨＬ６０/ＶＣＲ細胞を、１０%ウシ胎児血清（FBS） および25０μg/mlゲンタマイシン（商標）（Sigma）含有にRPMI 1640 （Gibco）中で増殖させた。細胞を回収し、アッセイ培地（培養液と同じ）で2回洗浄し、算定し、アッセイ培地で2 x 105細胞/mlに希釈した。細胞を50μLに等分し、96ウェル組織培養プレートのウェルに入れた。各96ウェルプレートの1列を陰性コントロールに用い、細胞を含まないアッセイ培地を入れた。
【００５９】
被検化合物および基準化合物を５ｍＭの濃度でジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解させた。試料をアッセイ培地で２０μMに希釈し、各被検化合物２５μLを６ウェルに加えた。アッセイ標準は４重で操作した。溶媒コントロールとして２５μLの０.４% DMSOを４ウェルに加えた。すべてのウェルに終量が１００μＬ/ウェルとなるようアッセイ培地を加えた。
【００６０】
プレートを、５%二酸化炭素雰囲気とした加湿インキュベーター中で、 ３７℃にて７２時間インキュベーションした。細胞の生存性と活力を、標準的条件下のテトラゾリウム塩の酸化により測定した。プレートを３７℃で３時間インキュベーションした。マイクロタイタープレートリーダーを用い４９０ nmで吸光度を測定した。
【００６１】
ＨＬ６０/ＡＤＲおよびＨＬ６０/ＶＣＲ細胞のドキソルビシンに対する耐性を逆転させる被検化合物の能力は、腫瘍細胞崩壊剤（ドキソルビシン）と被検化合物を含むウェルの吸光度を、被検化合物を含まず腫瘍細胞崩壊剤を含むウェルの吸光度と比較することにより決定した。コントロールを用いてバックグラウンドを除去し、結果が人為的にならないようにした。アッセイの結果は、細胞増殖の阻害パーセントで表した。試験した濃度の腫瘍細胞崩壊剤単独では、通常ＨＬ６０/ＡＤＲまたはＨＬ６０/ＶＣＲ細胞の増殖を阻害しない。
【００６２】
代表的な式（Ｉ）の化合物は、ＭＲＰ１多剤耐性の逆転に有意な効果を示した。腫瘍細胞崩壊剤単独とは逆に、多くの化合物は、腫瘍細胞崩壊剤と併用することによりきわめて有意な活性の増強を示した。さらに、試験した大多数の化合物は、ＨＬ６０/ＶＣＲ細胞系と比較してＨＬ６０/ＡＤＲ細胞系の有意な選択的阻害を示した。
【００６３】
本発明の方法を実施するにあたって腫瘍細胞崩壊剤を投与するときは、用いる腫瘍細胞崩壊剤の量は変更され得るでろう。実際に投与される腫瘍細胞崩壊剤の量は、処置する状態、選択した投与経路、実際に投与する腫瘍細胞崩壊剤、個々の患者（哺乳動物）の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む関連環境に照らして医師により決定されると理解すべきである。もちろん、投与される腫瘍細胞崩壊剤の量は、患者の担当医が決定し、きちんとモニターすべきである。腫瘍細胞崩壊剤（単数または複数）の使用を決定した後、医師が腫瘍細胞崩壊剤の投与量を決定するには、毎年更新されるThe Physician's Desk Reference（登録商標）（Medical Economics Company at Montvale, NJ ０7645−１742刊行）が有用な手段となる。
【００６４】
好ましい製剤、および該製剤を用いる本発明の方法は、腫瘍細胞崩壊剤を含まないものである。すなわち、本発明の化合物は腫瘍細胞崩壊剤と別に投与することが好ましい。本明細書に示す腫瘍細胞崩壊剤は市販されており、本発明の方法に適した予め製剤化された形で購入することができよう。
【００６５】
式（Ｉ）の化合物は、通常、医薬製剤の形で、単独もしくは所望により腫瘍細胞崩壊剤と組み合わせて投与される。これら製剤は、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および鼻内を含む種々の経路で投与することができる。そのような製剤は医薬の技術分野でよく知られた方法で製造され、少なくとも１つの式（Ｉ）の活性化合物を含む。
【００６６】
本発明には、活性成分として式（Ｉ）の化合物および所望により腫瘍細胞崩壊剤を医薬担体と共に含む医薬製剤を用いる方法も含まれる。本発明の製剤を製造するには、通常、活性成分を、賦形剤と混合するか、賦形剤で希釈するか、またはカプセル、サシェー、紙、もしくは他の容器の形であり得るような担体内に封入することができる。賦形剤を希釈剤として用いるときは、賦形剤は活性成分のビークル、担体もしくは媒質として働く個体物質、半固体物質、または液体物質であってよい。すなわち、製剤は、錠剤, 丸剤, 粉末剤, ローゼンジー剤, サシェー剤, カシェー剤, エリキシル剤, 懸濁剤, エマルジョン剤, 溶液剤,シロップ剤, エアゾル剤 （固体としてか、または液体媒質中）, 例えば１０重量%までの活性化合物を含む軟膏, 軟および硬ゼラチンカプセル, 坐剤, 無菌注射可能溶液剤、および無菌包装粉末剤の形をとり得る。
【００６７】
製剤を製造する際には、他の成分と混合する前に活性化合物を粉砕して適切な粒子サイズにする必要がある。活性化合物が実質的に不溶性である場合は、通常、活性化合物を粉砕し、2００メッシュ以下の粒子サイズとする。活性化合物が実質的に水溶性である場合は、通常、製剤中に実質的に均質に分布するように、粒子サイズを粉砕により調節する（例えば、約4０メッシュ）。
【００６８】
適切な賦形剤の例には、乳糖, デキストロース, ショ糖, ソルビトール, マンニトール,デンプン, アカシアゴム, リン酸カルシウム, アルギネート, トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶質セルロース, ポリビニルピロリドン, セルロース, 水, シロップ、およびメチルセルロースが含まれる。製剤は、さらにタルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油のような潤滑剤、保湿剤、乳化剤および懸濁化剤、メチル−およびプロピルヒドロキシベンゾエートのような保存料、甘味料、および香味料を含むことができる。本発明の製剤は、当該分野で知られた方法を用いて患者に投与した後に、急速にか、持続して、または遅れて放出されるように製剤化することができる。
【００６９】
本製剤は、各用量に各活性成分を約5〜約１００ mg、より通常は約１０〜約3０ mgを含む単位投与剤形に製剤化するのが好ましい。用語「単位投与剤形」は、各単位が所望の治療効果を生じるように予め計算され、予め決定された量の活性物質を適切な医薬的賦形剤と共に含む、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位用量として適した物理的に分離した単位を表す。
【００７０】
式（Ｉ）の化合物は広い用量範囲にわたり有効である。例えば、１日あたりの用量は、通常、約０.5〜約3０ mg/kg体重の範囲内であろう。成人を治療するには、単回もしくは分割用量で約l〜約１5 mg/kg/日の範囲であることが特に好ましい。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、治療すべき状態、選んだ投与経路、実際に投与される化合物、個々の患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む関連する環境に照らして医師により決定されるので、上記用量範囲は本発明の範囲を何ら限定するものではないことは理解されよう。場合により、上記範囲の下限以下の用量レベルが適切量を超えることがあり、他の場合には、かなり大用量をいかなる有害な副作用も生じることなく用いることができよう。ただし、そのような大用量はその日を通して投与するために最初、より小さな数用量に分割される。
【００７１】
錠剤のような固体の製剤を製造するには、主な活性成分を医薬的賦形剤と混合し、本発明化合物の均質な混合物を含む固体予備形成組成物を形成する。これら予備形成組成物を均質というときは、製剤を錠剤、丸剤、およびカプセル剤といった同等に有効な単位投与剤形に容易に再分割することができるように活性成分が製剤全体に均等に分散していることを意味する。次に、この固体予備製剤は、本発明の活性成分を０.１〜約5００ mg含む上記のタイプの単位投与剤形に再分割される。
【００７２】
本発明の錠剤または丸剤をコーティングするか、他の方法で構成することにより、作用の延長という利点を有する投与剤形を得ることができよう。例えば,錠剤または丸剤は、内部用量成分と外部用量成分（後者が前者を包む形になっている）を含むことができる。２成分は、胃での分解に耐える役割を果たし、内部成分が完全なままで十二指腸内に入るか、または遅れて放出されるように腸溶層により分離することができる。多くの高分子酸、および高分子酸とセラックニス、セチルアルコール、およびセルロースアセテートといった物質との混合物を含む種々の物質をそのような腸溶層またはコーティング剤として用いることができる。
【００７３】
液体の形の新規製剤は、経口的にか、注射により投与するために混合することができ、水性溶液剤、適切に香味付されたシロップ剤、水性または油状懸濁剤、および綿実油、ごま油、ココナッツ油、またはピーナッツ油のような食用油を用いる香味付けされたエマルジョン剤、およびエリキシル剤、ならびに同様の医薬的ビークルを含むことができよう。
【００７４】
吸入または吹送用製剤には、医薬的水性もしくは有機溶媒、またはその混合物中の溶液剤および懸濁剤、および粉末剤が含まれる。液体または固体製剤は、上記の適切な医薬的賦形剤を含んでいてよい。好ましくは、該製剤は、局所または全身効果を得るために経口または鼻呼吸器経路で投与される。好ましくは、医薬的溶媒中の組成物は、不活性ガスを用いて噴霧することができよう。噴霧溶液剤は、噴霧用具から直接吸気するか、または噴霧用具をフェイスマスク、テント、または間欠陽圧呼吸器に取り付けることができよう。溶液剤、懸濁剤、または粉末製剤は、好ましくは、適切な方法で製剤を供給する装置から経口または経鼻的に投与することができよう。
【００７５】
以下の製剤例は単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。「活性成分」とは、所望により１またはそれ以上の腫瘍細胞崩壊剤を含む、式Ｉの化合物またはその医薬的塩をいう。
【００７６】
本発明の方法において用いる別の好ましい製剤では、経皮供給用具（「パッチ」）を用いる。そのような経皮パッチを用い、調節された量の本発明化合物を連続的または非連続的に注入することができよう。薬剤を供給するための経皮パッチの構成および使用は、当該分野でよく知られている。例えば、米国特許第5,０23,252号, １99１年6月１１日発行）参照（この内容は本明細書の一部を構成する）。そのようなパッチは、薬剤を連続的にか、パルス的に、または必要に応じて供給するように構成することができよう。
【００７７】
しばしば、医薬製剤を直接または間接的に脳に導入することが望ましいか、必要であろう。直接法には、通常、宿主の心室系内に薬剤供給カテーテルを設置し、血液脳関門をバイパスすることが含まれる。体内の特定の解剖学的領域に生物学的因子を輸送するのに用いるそのような移植可能な供給システムは、米国特許第5,０１１,472号（１99１年4月3０日発行）に記載されている（この内容は本明細書の一部を構成する）。
【００７８】
間接法（一般的に好ましい）には、通常、親水性薬剤を脂溶性薬剤またはプロドラッグに変換することにより薬剤の潜在化（latentiation）をもたらすよう組成物を製剤化することが含まれる。潜在化は、一般に薬剤上に存在するヒドロキシ、カルボニル、サルフェート、および一級アミン基をブロックすることにより薬剤をより脂溶性にし、血液脳関門を通過して輸送されやすくすることにより達成される。あるいはまた、親水性薬剤の供給は、血液脳関門を一時的に開くことができる高張溶液剤の動脈内注入により増強することができよう。
【国際公開パンフレット】
2004529919.tif 000012
2004529919.tif 000013
2004529919.tif 000014
2004529919.tif 000015
2004529919.tif 000016
2004529919.tif 000017
2004529919.tif 000018
2004529919.tif 000019
2004529919.tif 000020
2004529919.tif 000021
2004529919.tif 000022
2004529919.tif 000023
2004529919.tif 000024
2004529919.tif 000025
2004529919.tif 000026
2004529919.tif 000027
2004529919.tif 000028
2004529919.tif 000029
2004529919.tif 000030
2004529919.tif 000031
2004529919.tif 000032
2004529919.tif 000033
2004529919.tif 000034
2004529919.tif 000035
2004529919.tif 000036
2004529919.tif 000037
2004529919.tif 000038
2004529919.tif 000039
2004529919.tif 000040
【国際調査報告】
2004529919.tif 000041
2004529919.tif 000042
2004529919.tif 000043