(57)【要約】有意な予備的インビボ活性、特に有意な経口インビボ活性を示すゲルダナマイシン誘導体、及び、癌の治療又は予防に十分な量のゲルダナマイシン誘導体を宿主に投与することを含む宿主の癌の治療又は予防方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造
【化１】
2004519514.tif 000009
〔式中、ｎ＝０又は１であり、かつ、ｎ＝１のとき、Ｒ１とＲ２の各々は水素であり、ｎ＝０のとき、Ｃ４とＣ５との間に二重結合が存在し；
Ｒ３は水素又はヒドロキシルであり；
Ｒ４は水素又はヒドロキシルであり；Ｒ３が水素のとき、Ｒ４はヒドロキシルであり、Ｒ３がヒドロキシルのとき、Ｒ４は水素であり；
Ｒ５は水素又は式
【化２】
2004519514.tif 000010
の基（式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８の各々は独立に、水素、ハロ、アジド、ニトロ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、シアノ、及びＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２の各々は独立に、水素及びＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から選択される）からなる群から選択される）である〕
を有するゲルダナマイシン誘導体、及びその塩。
【請求項２】
ｎ＝０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５が水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ゲルダナマイシンと比較して改善された水溶解性を有する、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物と医薬として許容できる担体とを含有する医薬組成物。
【請求項６】
宿主に投与するとき、前記化合物が、少なくとも約２０以上のＨＦＡスコアを与えるのに十分な量存在する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
請求項３に記載の化合物と医薬として許容できる担体とを含有する医薬組成物。
【請求項８】
宿主に投与するとき、前記化合物が、少なくとも約２０のＨＦＡスコアを与えるのに十分な量存在する、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
宿主の癌を治療又は予防するのに十分な量の請求項１に記載の化合物を宿主に投与することを含む、宿主の癌を治療又は予防する方法。
【請求項１０】
前記化合物を経口投与する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
宿主が哺乳動物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物がヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
宿主の癌を治療又は予防するのに十分な量の請求項３に記載の化合物を宿主に投与することを含む、宿主の癌を治療又は予防する方法。
【請求項１４】
前記化合物を経口投与する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
宿主が哺乳動物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願に対する相互参照）
本特許出願は、２００１年３月３０日出願の米国仮特許出願第６０／２８０，０７８号の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、より詳細には、新規ゲルダナマイシン誘導体、その医薬組成物、及び、癌の予防と治療のためのこのような誘導体の使用方法に関する。
【０００３】
（発明の背景）
レセプター型チロシンキナーゼのＥｒｂＢファミリーの一員であるＥｒｂＢ２遺伝子産物は、腫瘍細胞の悪性度に重要な役割を果たすと考えられている。ＥｒｂＢ２の過剰発現は細胞形質転換と腫瘍発生を引き起こすことが研究によって示されており、ＥｒｂＢ２は、ＥｒｂＢファミリーの他のメンバーによる癌細胞浸潤の誘導に必要であることがインビトロ実験で示されている。ベンゾキノンアンサマイシンであるゲルダナマイシンは、インビボで抗腫瘍活性を有し、ＥｒｂＢ２蛋白質レベルの急速な減少を引き起こすことが示されている。ゲルダナマイシンは、熱ショック蛋白質９０（Ｈｓｐ９０）とグルコース調節蛋白質９４（Ｇｒｐ９４）（これは小胞体に局在化している）とを含む特定のシャペロン蛋白質の特異的阻害剤である。ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０シャペロン蛋白質の阻害によりＥｒｂＢ２蛋白質に作用すると考えられている。Ｈｓｐ９０シャペロン蛋白質は、ＥｒｂＢ２蛋白質の適切な機能に必要であると考えられている。Ｈｓｐ９０はまた、腫瘍細胞増殖に関連することも示されている（Ｌ．  Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌら，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅａｔ  Ｓｈｏｃｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＨＳＰ−９０−ｐｐ６０ｖ−ｓｒｃ  Ｈｅｔｅｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａｎｓａｍｙｃｉｎｓ：  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，  ９１  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３２４−８３２８  （１９９４）；  Ｔ．  Ｗ．  Ｓｃｈｕｌｔｅら，  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ  Ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ａｎｄ  Ｓｈａｒｅｓ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ，  ３  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １００−１０８  （１９９８）；  Ｊ．  Ｌ．  Ｊｏｈｎｓｏｎら，  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｐ２３  ａｎｄ  Ｈｓｐ９０  Ｄｕｒｉｎｇ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  ９  Ｍｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ６７０−６７８  （１９９５）；  Ｗ．  Ｓｕｌｌｉｖａｎら，  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｗｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０，  ２７２  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ８００７−８０１２  （１９９７）参照）。
【０００４】
バイオアベイラビリティを増加させ、天然産物に付随する毒性を減少させる試みにおいて、ゲルダナマイシンのアナログが合成されている。より成功したアナログのうち、１７−アリルアミノゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）がある。これは現在、米国国立癌研究所でフェーズＩ臨床試験中である。１７位で置換された他の類似のゲルダナマイシン誘導体は、Ｒ．  Ｃ．  Ｓｃｈｎｕｒら，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐ１８５ｅｒＢ−２  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｂｙ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  Ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，  ３８  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３８０６−３８１２  （１９９５）に記載のものなどの、可能な癌治療として存在する。これらの化合物の多くは、インビトロで比較的有意な活性を示すが、予備的試験で十分なインビボ活性を殆どのものが示さない。従って、これらの化合物は、治療的処置の可能性のある手段として貧弱な候補物に相当する。更に、公知のゲルダナマイシン化合物又はその誘導体で、経口投与したとき、インビボ活性を示すものはない。
【０００５】
従って、他の有効な抗癌化合物及びこのような化合物の使用方法の必要性が依然として存在する。本発明は、このような必要性を満たすことを試みる。本発明の特定の利点、並びに更なる発明の特徴は、本明細書中に提供する発明の説明から明らかとなろう。
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、式（Ｉ）
【０００７】
【化３】
2004519514.tif 000002
【０００８】
〔式中、ｎ＝０又は１であり、かつ、ｎ＝１のとき、Ｒ１とＲ２の各々は水素であり、ｎ＝０のとき、Ｃ４とＣ５との間に二重結合が存在し；
Ｒ３は水素又はヒドロキシルであり；
Ｒ４は水素又はヒドロキシルであり；Ｒ３が水素のとき、Ｒ４はヒドロキシルであり、Ｒ３がヒドロキシルのとき、Ｒ４は水素であり；
Ｒ５は水素又は式（ＩＩ）
【０００９】
【化４】
2004519514.tif 000003
【００１０】
の基（式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８の各々は独立に、水素、ハロ、アジド、ニトロ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、シアノ、及びＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２の各々は独立に、水素及びＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から選択される）からなる群から選択される）である〕
の化合物、及びその塩を提供する。
【００１１】
本発明はまた、本発明の化合物と医薬として許容できる担体とを含有する医薬組成物を提供する。
【００１２】
宿主の癌の治療又は予防の方法も提供する。本方法は、宿主の癌の治療又は予防に十分な量の上記化合物を宿主に投与することを含み、それによって宿主の癌は治療又は予防される。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、式（Ｉ）
【００１４】
【化５】
2004519514.tif 000004
【００１５】
〔式中、ｎ＝０又は１である。ｎ＝１のとき、Ｒ１とＲ２の各々は水素であり、ｎ＝０のとき、Ｃ４とＣ５との間に二重結合が存在する。Ｒ３とＲ４は各々独立に水素又はヒドロキシルであり、Ｒ３が水素のとき、Ｒ４はヒドロキシルであり、Ｒ３がヒドロキシルのとき、Ｒ４は水素である。Ｒ５は水素又は式（ＩＩ）
【００１６】
【化６】
2004519514.tif 000005
【００１７】
の基（式中、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８の各々は独立に、水素、ハロ、アジド、ニトロ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、アリール、シアノ、及びＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２の各々は独立に、水素及びＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から選択される）からなる群から選択される）である〕
の化合物を提供する。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の塩を提供する。式（Ｉ）と（ＩＩＩ）のベンゾキノンアンサマイシン環上の番号１〜２１で示される位置は、炭素原子を示す。
【００１８】
本発明の好適な実施態様では、ｎ＝０で、二重結合がＣ４とＣ５との間に存在する。Ｒ５に関し、水素が特に好適である。従って、本発明の特に好適な化合物は、式（ＩＩＩ）
【００１９】
【化７】
2004519514.tif 000006
【００２０】
によって表される化合物（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）である。
【００２１】
本発明の化合物は塩の形態でありうる。それは、好ましくは医薬として許容できる塩である。適切な医薬として許容できる酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、硫酸などの鉱酸、及び、酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸などのアリールスルホン酸などの有機酸由来のものが挙げられる。
【００２２】
好ましくは、本発明の化合物は、ゲルダナマイシンと比較して改善された水溶解性を有し、及び／又は、ゲルダナマイシンと比較して改善された水溶解性を有する塩（例えば、酸塩）を形成する能力を有しつつ、インビトロ又はインビボの抗癌活性又は抗腫瘍活性を保持する。例えば、本発明の好適化合物は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌもしくは少なくとも約１ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約１．５ｍｇ／ｍｌ）、好ましくは、少なくとも約２ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌ）の水溶解性を有する。最適には、本発明の化合物は、少なくとも約３ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約３．５ｍｇ／ｍｌ）、もしくは、少なくとも約４ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約４．５ｍｇ／ｍｌ）さえもの水溶解性、もしくは、それより大きな水溶解性（例えば、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ）さえも有する。水溶解性は、当該分野で公知の標準的技術を用いて測定できる。本発明の化合物は好ましくは、改善された水溶解性を有するが、当該分野で公知の技術を本発明と共に用いて、これらの化合物の水溶解性を更に改善できる。例えば、化合物の水溶解性を最適化するために、化合物を含有する製剤のｐＨを調整できる。また、本発明の化合物を含有する製剤中に種々の添加剤を含ませることができる。有用な添加剤として、共溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）、界面活性剤、錯化剤、乳化剤、両親媒性化合物、リポソーム、マイクロ粒子、ナノ粒子が挙げられる。これらは、本発明の化合物の溶解性を改善しうる。
【００２３】
本発明の化合物は、類似の構造の化合物と比べて、有意なインビボ活性を有することが示された。インビボ活性は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって測定できる。適切な方法として、例えば、ホローファイバーアッセイ（ｈｏｌｌｏｗ  ｆｉｂｅｒ  ａｓｓａｙ；ＨＦＡ）及び／又は異種移植片試験が挙げられる。本発明と共に使用されるインビボ活性の好適な測定方法は、Ｍ．  Ｇ．  Ｈｏｌｌｉｎｇｓｈｅａｄら，  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｈｏｌｌｏｗ  Ｆｉｂｅｒｓ，  （５７）  ２  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  １３１−１４１  （１９９５）に記載されるようなホローファイバーアッセイである。典型的には、ホローファイバーアッセイは、中程度ないし顕著な抗癌活性を有する化合物の同定のための予備的スクリーニングとして使用される。一般的に、有意なポジティブの結果を示す化合物は、中程度ないし顕著な抗癌活性を有すると考えられる。ＨＦＡは、異種移植片試験などの他の試験方法と共に使用され、化合物のインビボ抗癌活性、従って特定の疾患の治療のためのそれらの適切性に関し更なる証拠を提供できる。
【００２４】
本発明の化合物は、宿主に投与されるとき、有意な経口インビボ活性を生じることも、予期に反して見出された。有意な経口インビボ活性とは、化合物が宿主に経口投与され、更なる試験を正当化するようにＨＦＡスコアを生じることができることを意味する。ゲルダナマイシン化合物又はそれらの誘導体のどの他のクラスもこのような有意な経口インビボ活性を示さなかったことに注意すべきである。従って、本発明の化合物は、化合物が有効に投与できるより非侵襲的な手段により、他の治療選択肢よりも好適であろう。
【００２５】
本発明はまた、本明細書記載の式（Ｉ）のゲルダナマイシン化合物を含有する医薬組成物を提供する。医薬組成物は更に、１より多い活性成分を含有しうる。例えば、医薬組成物は、１より多い本発明の化合物を含有しうるし、別の医薬として活性な試薬又は薬物などと組合せて本発明の化合物を含有しうる。
【００２６】
医薬組成物はまた、適切な担体を含有する。好ましくは、担体は医薬として許容できる担体である。医薬組成物に関し、担体は、医薬組成物を製造するのに通常使用されるもののいずれであってもよい。医薬として許容できる担体の選択は、溶解性や活性化合物（単数又は複数）との反応性の欠如などの物理化学的考慮や投与経路によってのみ制限される。下記の医薬組成物の他に、本発明の方法の化合物は、シクロデキストリン包接複合体などの包接複合体、又はリポソームとして製剤化できることを当業者は理解しよう。
【００２７】
本明細書記載の医薬として許容できる担体、例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、希釈剤は、当業者に周知であり、容易に入手できる。医薬として許容できる担体は、活性化合物（単数又は複数）に化学的に不活性なもの、及び、使用条件下、有害な副作用又は毒性を有さないものであることが好適である。
【００２８】
担体の選択は、部分的には、特定の化合物、並びに組成物を投与するのに使用される特定の方法によって決定されよう。従って、本発明の医薬組成物の種々の適切な製剤が存在する。経口、エアゾール、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、直腸、及び膣投与のための以下の製剤は例示であり、決して限定的なものではない。
【００２９】
注射製剤は、本発明の方法に従い好適な製剤の１つである。注射組成物の有効な医薬担体の必要条件は当業者に周知である（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ｊ．  Ｂ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ，  Ｂａｎｋｅｒ及びＣｈａｌｍｅｒｓ編，  ２３８−２５０頁  （１９８２），  並びに  ＡＳＨＰ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｄｒｕｇｓ，  Ｔｏｉｓｓｅｌ，  第４版，  ６２２−６３０頁  （１９８６）参照）。このような注射組成物は、静脈内投与されるか、又は癌治療の状況では、腫瘍内（腫瘍内部）に、もしくは腫瘍周辺（腫瘍の外側付近）に投与されるのが好適である。
【００３０】
局所製剤は、当業者に周知である。このような製剤は、本発明の状況では、皮膚への適用に特に適切である。
【００３１】
経口投与に適切な製剤は、（ａ）水、生理食塩水、又はオレンジジュースなどの希釈剤中に溶解した有効量の化合物などの液体溶剤；（ｂ）カプセル、サシェ、錠剤、ロゼンジ、及びトローチ（各々は、固体又は顆粒として、所定量の活性成分を含有する）；（ｃ）散剤；（ｄ）適切な液体中の懸濁剤；及び（ｅ）適切なエマルジョンからなりうる。液体製剤は、医薬として許容できる界面活性剤の添加のある場合とない場合のいずれでも、水やアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコール）などの希釈剤を含有しうる。カプセル形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、及び不活性フィラー（ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、コーンスターチなど）を含有する、通常の硬いもしくは軟らかい殻のゼラチンタイプでありうる。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶セルロース、アカシア、ゼラチン、グァーガム、コロイド性二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、並びに、他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、香料、及び薬理学的に適合性のある賦形剤の１つ以上を含有しうる。ロゼンジ形態は、フレーバー（通常、スクロース及びアカシアもしくはトラガカント）中に活性成分を含有しうるし、芳香製剤は、ゼラチンやグリセリンなどの不活性基剤、又はスクロースやアカシア中に活性成分を含有しうるし、エマルジョン、ゲルなどは、活性成分の他に、当該分野で公知のような賦形剤を含有しうる。
【００３２】
本発明の化合物は単独で、又は他の適切な成分と組合せて、吸入で投与するためのエアゾール製剤に製造できる。これらのエアゾール製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの加圧可能な高圧ガス中に入れることができる。それらはまた、ネブライザー又はアトマイザーといった非加圧製剤用の医薬として製剤化してもよい。このようなスプレー製剤はまた、粘膜にスプレーするために使用してもよい。
【００３３】
非経口投与に適切な製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、意図するレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有しうる、水性及び非水性の等張滅菌注射溶液、並びに、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、及び保存剤を含有しうる、水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。本発明の化合物は、医薬として許容できる界面活性剤（石鹸又は洗浄剤など）、懸濁剤（ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロースなど）、又は乳化剤及び他の医薬アジュバントの添加あり又はなしで、水、生理食塩水、デキストロースや関連する糖の水溶液、アルコール（エタノール、イソプロパノール、又はヘキサデシルアルコールなど）、グリコール（プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）、ジメチルスルホキシド、グリセロールケタール（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールなど）、エーテル（ポリ（エチレングリコール）４００など）、油、脂肪酸、脂肪酸エステルもしくはグリセリド、又はアセチル化脂肪酸グリセリドを含む滅菌液体又は液体混合物などの医薬担体中の生理学的に許容できる希釈剤中で投与できる。
【００３４】
非経口製剤で使用できる油として、石油、動物油、植物油、又は合成油が挙げられる。油の特定の例として、ピーナッツ、ダイズ、ゴマ、綿実、コーン、オリーブ、ワセリン、及び鉱物が挙げられる。非経口製剤での使用に適切な脂肪酸として、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。
【００３５】
非経口製剤での使用に適した石鹸として、脂肪アルカリ金属塩、アンモニウム塩、及びトリエタノールアミン塩が挙げられ、適切な洗浄剤として、（ａ）例えば、ジメチル  ジアルキル  アンモニウム  ハライド、及びアルキル  ピリジニウム  ハライドなどのカチオン性洗浄剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリール、及びオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリセリドスルフェート、及びスルホスクシネートなどのアニオン性洗浄剤、（ｃ）例えば、脂肪アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレン  コポリマーなどの非イオン性洗浄剤、（ｄ）例えば、アルキル−ｂ−アミノプロピオネート、及び２−アルキル−イミダゾリン４級アンモニウム塩などの両性洗浄剤、及び（ｅ）それらの混合物が挙げられる。
【００３６】
非経口製剤は典型的には、溶液中に活性成分を約０．５〜約２５重量％含有するであろう。保存剤や緩衝剤を使用してもよい。注射部位での刺激を最小化又は除去するために、このような組成物は、約１２〜約１７の親水性親油性バランス（ＨＬＢ）を有する１つ以上の非イオン性界面活性剤を含有してもよい。このような製剤中の界面活性剤の量は典型的には、約５〜約１５重量％の範囲であろう。適切な界面活性剤として、ソルビタン  モノオレエートなどのポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、及び、プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合によって形成される疎水性ベースとエチレンオキシドとの高分子量付加物が挙げられる。非経口製剤は、アンプルやバイアルなどの、単位投与又は多回投与の密封容器で供与でき、使用直前に注射用の滅菌液体賦形剤、例えば、水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存できる。即時調製注射溶液及び懸濁液は、上記種類の滅菌粉末、顆粒、錠剤から調製できる。
【００３７】
更に、本発明の化合物、又はそれらの化合物を含有する組成物は、乳化基剤や水溶性基剤などの種々の基剤と混合することによって、坐剤に製造することができる。膣投与に適した製剤は、活性成分の他に、適切であると当該分野で公知であるような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、又はスプレー製剤として供与できる。
【００３８】
上記のように、本明細書記載のものなどのゲルダナマイシン誘導体は、熱ショック蛋白質９０（Ｈｓｐ９０）並びにグルコース調節蛋白質９４（Ｇｒｐ９４）を含む特定のシャペロン蛋白質を阻害する。Ｈｓｐ９０は、適切なＥｒｂＢ２機能に必要であると示されている。更に、Ｈｓｐ９０は、腫瘍細胞増殖に関連すると示されており、ＥｒｂＢ２は、腫瘍細胞の悪性度に重要な役割を果たすと考えられている。この点に関し、本発明は更に、宿主の癌の治療又は予防の方法を提供する。本方法は、宿主の癌の治療又は予防に十分な量の本発明の化合物を宿主に投与することを含み、それによって宿主の癌は治療又は予防される。
【００３９】
本発明の化合物を用いる癌の治療方法は、１つ以上の他の抗癌化合物を、１つ以上の本発明の他の化合物と共に投与することによって改善できる。これら他の抗癌化合物としては、米国で承認された公知の抗癌化合物や将来承認されることになるであろうものが挙げられるが、それらに限定されない。例えば、Ｂｏｙｄ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｉ．  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （Ｊ．  Ｅ．  Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ編），  第２章，  Ｂ．  Ｃ．  Ｄｅｃｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  １９９３，１１−２２頁の表１及び表２参照。より詳細には、本発明に従い本明細書記載のゲルダナマイシン誘導体と共に好適に使用される抗癌化合物としては、一般的に固形腫瘍に対し、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ＶＰ−１６、ＶＷ−２６、シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、及びタキソール；脳又は腎臓の癌に対し、ＢＣＮＵ、ＣＣＮＵ、メチル−ＣＣＮＵ、ＤＴＩＣなどのアルキル化剤；及び、結腸癌に対し、５−ＦＵ、メトトレキセートなどの代謝拮抗剤が挙げられる。
【００４０】
本発明の化合物は望ましくは、ＥｒｂＢ２タンパク質の発現を減少又は除去するのに十分な量を、本発明の化合物の非存在下でＥｒｂＢ２を発現する細胞、又はこのような細胞を含む宿主に投与される。投与される本発明のゲルダナマイシン誘導体の量は、本発明のゲルダナマイシン誘導体の非存在下のＥｒｂＢ２発現と比較して少なくとも約２０％ないし完全に、ＥｒｂＢ２の発現を減少させるのに十分な量である。本発明のゲルダナマイシン誘導体の非存在下のＥｒｂＢ２発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％のＥｒｂＢ２の発現の減少がまた、宿主に利益があることは、当業者に理解されよう。
【００４１】
ＥｒｂＢ２の発現レベルの任意の適切な測定方法が、本発明と共に使用できる。適切な方法として、例えば、ディファレンシャルディスプレイ、遺伝子発現の連続解析（ＳＡＧＥ）、定量的逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＱＲＴ−ＰＣＲ）、サブトラクションクローニング、マクロアレイ、マイクロアレイ（例えば、ＤＮＡチップ）が挙げられる。ＥｒｂＢ２の発現レベルは、適切な投薬レジメンを決定するため、化合物の投与前に、並びに、化合物のバイオアベイラビリティやインビボ効力を決定するため、化合物の投与中及び投与後に測定できる。
【００４２】
本発明のゲルダナマイシン誘導体、及び本発明のゲルダナマイシン誘導体を含有する組成物を、哺乳動物などの動物、特にヒトへ投与する適切な方法が利用可能であることを、当業者は理解しよう。特定の化合物を投与するのに１より多い経路が使用できるが、特定の経路が、別の経路より、より即時の、そしてより有効な反応を提供しうる。従って、本明細書記載の方法は例示であり、決して限定的なものではない。
【００４３】
哺乳動物などの動物、特にヒトに投与する用量は、癌の予防、その発症の遅延、又はその進行の遅延（又は停止）に十分であるべきである。投与量は、使用する特定の化合物の強さ、並びに、動物の年齢、種別、状態、体重を含む種々の因子に依存するであろうことを、当業者は理解しよう。投与量の大きさはまた、投与の経路、タイミング、頻度、並びに、特定の化合物の投与に伴いうる任意の副作用や所望の生理学的効果の存在、性質、及び程度によって決定されよう。
【００４４】
適切な投与量及び投薬レジメンは、当業者公知の通常の範囲決定技術によって決定できる。一般的には、治療は小投与量で開始され、それは、化合物の最適投与量よりも小さい。その後、その状況下で最適な効果に到達するまで、投与量を小さな増分ずつ増加させる。本発明の方法は典型的には、体重１ｋｇ当り、１つ以上の上記化合物を約０．１〜約１００ｍｇ投与することを含むであろう。
【００４５】
（実施例）
以下の実施例は本発明を更に説明するが、勿論、本発明の範囲を限定するものと決して解釈されるべきではない。本発明の２つの化合物（即ち、化合物Ａ及びＢ）と１つの比較化合物（即ち、化合物Ｃ）は、下記のように調製した。次いで、これらの化合物の各々を、化合物が、更なる試験を正当化するのに十分なインビボ活性を生じたかどうかを決定するために、ホローファイバーアッセイで使用した。
【００４６】
化合物Ａ
１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシンの調製
乾燥塩化メチレン（３０ｍＬ）（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ＆  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ＢＨ５１６）中のゲルダナマイシン（１．５ｇ，  ２．６８ｍｍｏｌ）（ＮＣＩ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ３０５９−２５−１）とＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１．５ｍＬ，  １３．７ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ０４２１６ＡＬ）の混合物を室温で１時間撹拌し、次いで氷水（５０ｍＬ）に注いだ。有機層と水層が目に見えて分離した後、水層を塩化メチレン（２×１０ｍＬ）で抽出した。一緒にした塩化メチレン溶液を水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（Ｊ．  Ｔ．  Ｂａｋｅｒ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｅ０１０９８）で乾燥し、アスピレーターで蒸発させた。残った残渣を塩化メチレン中１０％メタノール（Ｃｈｅｍｐｕｒｅ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｍ１７８ＫＭＤＨ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３０ｇ）（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ３２５ＴＡ５０９６３４）で精製した。生成物含有分画を一緒にし、アスピレーターで濃縮した。次いで、残渣を熱塩化メチレン（３ｍＬ）に溶解し、室温に冷却し、ヘキサン（６０ｍＬ）（Ｃｈｅｍｐｕｒｅ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｍ１４８ＫＭＲＣ）で希釈した。次いで、この混合物を室温で３０分間撹拌した。紫色の粉末が形成され、濾取し、ヘキサン（２×１０ｍＬ）で洗浄し、５５℃／０．１ｍｍＨｇで６時間乾燥し、純目的化合物を得た。約１．５９ｇの１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（９６％）を単離し、実施例１で使用した。
【００４７】
化合物Ｂ
（１７−ジメトキシ−１７−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］ゲルダナマイシン塩酸塩の調製
乾燥塩化メチレン（３００ｍＬ）（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ４８８１ＫＶＪＰ）中のゲルダナマイシン（１５ｇ，  ２６．７５ｍｍｏｌ）（ＳＡＩＣ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ３１５５−２８−１）とＮ，Ｎ−ジメチル−エチレンジアミン（１５ｍＬ，  ３７．８３ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ＨＮ０４２１６ＡＬ）の混合物を室温で１時間撹拌し、次いで氷水（５００ｍＬ）に注いだ。有機層と水層が目に見えて分離した後、水層を塩化メチレン（２×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした塩化メチレン溶液を水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ＨＪ３０２）で乾燥し、ダイヤフラムポンプで蒸発させた。残った残渣（１６．５ｇ，  ２６．７５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１３０ｍＬ）に溶解した。ジオキサン（Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  １６６１９ＣＱ）中の溶解塩化水素（１．１ｅｑ，  ２９．４３ｍｍｏｌ）（Ｍａｔｈｅｓｏｎ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｔ４１０２４２）を溶液に加えると、即座に沈殿が生じた。３０分間撹拌後、固体を集め、塩化メチレン（５０ｍＬ）で濯ぎ、１８時間風乾し、粗塩酸塩（１７．２ｇ）を得た。水性アルコール（５０％ｖ／ｖ，  ２００ｍＬ）（Ａａｐｅｒ  Ａｌｃｏｈｏｌ，  Ｌｏｔ．  Ｎｏ．  ９７Ａ２８ＵＡＲＡＴ）中の粗生成物（１７．２ｇ）の溶液を加熱還流し、濾過し、３０分間放冷した。更に３０分間氷上で冷却後、固体を集め、冷無水アルコール（５０ｍＬ）で洗浄し、１時間風乾した。生成物を更に７０℃／０．１ｍｍＨｇで１７時間乾燥し、純目的化合物を得た。約１３．４ｇの１７−デメトキシ−１７−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］ゲルダナマイシン塩酸塩（８２％）を紫色の結晶性固体として単離し、実施例１と２で使用した。
【００４８】
化合物Ｃ
１７−ジメチルアミノプロピルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシンの調製
乾燥塩化メチレン（３０ｍＬ）（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ＆  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ＢＨ５１６）中のゲルダナマイシン（１．５ｇ，  ２．６８ｍｍｏｌ）（ＮＣＩ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ３０５９−２５−１）と３−ジメチルアミノプロピルアミン（１．５ｍＬ，  １１．９ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ０８１０３ＣＦ）の混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで氷水（５０ｍＬ）に注いだ。有機層と水層が目に見えて分離した後、水層を塩化メチレン（２×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした塩化メチレン溶液を水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（Ｊ．  Ｔ．  Ｂａｋｅｒ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｅ０１０９８）で乾燥し、アスピレーターで蒸発させた。残った残渣を塩化メチレン中１０％メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３０ｇ）で精製した。生成物含有分画を一緒にし、アスピレーターで濃縮した。次いで、残渣を熱塩化メチレン（３ｍＬ）に溶解し、室温に冷却し、ヘキサン（６０ｍＬ）（Ｃｈｅｍｐｕｒｅ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  Ｍ１４８ＫＭＲＣ）で希釈した。生じた混合物を室温で３０分間撹拌した。紫色の粉末が形成され、濾取し、ヘキサン（２×１０ｍＬ）で洗浄し、５５℃／０．１ｍｍＨｇで５時間乾燥し、純目的化合物を得た。約１．６４ｇの１７−ジメチルアミノプロピルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（９７％）を単離し、実施例１で使用した。
【００４９】
ＨＦＡ及びＭＴＴアッセイ
化合物Ａ〜Ｃを、インビボ活性に関しホローファイバーアッセイで試験した。ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ５２２、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５、ＳＷ−６２０、ＣＯＬＯ  ２０５、ＬＯＸ  ＩＭＶＩ、ＵＡＣＣ−６２、ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−５、Ｕ２５１及びＳＦ−２９５を含む１２種のヒト腫瘍細胞株の標準パネルに対し、各化合物を試験した。１０％ＦＢＳと２ｍＭグルタミンを含有するＲＰＭＩ−１６４０で細胞株を培養した。ホローファイバー調製の前日に、対数期増殖を維持するために、新鮮培地の補充を細胞に与えた。ファイバー調製のために、標準的トリプシン処理技術により細胞を採取し、所望の細胞密度で再懸濁した。１ｍｍポリビニリデンフルオライド（ＰＶＤＦ）ホローファイバー（ＭＷ排除：５００，０００Ｄａ）中に細胞懸濁液を流入し、次いで、２ｃｍ間隔で熱シールした。これらのシールから生じたサンプルを組織培養培地に入れ、移植前に、３７℃、５％ＣＯ２中２４〜４８時間インキュベートした。各実験につき合計３種の異なる腫瘍細胞株を調製し、各マウスは３つの腹腔内インプラント（各腫瘍細胞株１）と３つの皮下インプラント（各腫瘍細胞株１）を受けた。各マウスで合計４実験を行った（３細胞株／実験×４実験＝１２細胞株）。
【００５０】
移植の日、安定終点ＭＴＴアッセイによって生細胞量につき各腫瘍細胞株のサンプルを定量し、時間０の細胞量を知った。ＭＴＴアッセイでは、ＭＴＴ（１ｍｇ／ｍＬ）（Ｓｉｇｍａ）を含有する予め加温した（３７℃）完全培地３ｍＬを有する６ウエルプレート（１〜６ファイバー／ウエル）中で、ファイバーを５％ＣＯ２中３７℃で４時間インキュベートした。ＭＴＴ溶液を吸引し、ファイバーを２．５％硫酸プロタミンを含有する生理食塩水２ｍＬで、４℃、一晩洗浄した。２．５％硫酸プロタミンを含有する生理食塩水２ｍＬで、２回目の洗浄を行い、最低２時間、４℃にファイバーを維持した。次いで、硫酸プロタミンからファイバーを取り出し、個々にぬぐい、２４ウエルプレートに入れ（１ファイバー／ウエル）、半分に切断し、バイオセーフティフード中で一晩乾燥した。ホルマザンを抽出するために、ＤＭＳＯ（０．２５ｍＬ）を各ウエルに加え、室温で４時間プレートを回転した。抽出サンプルを９６ウエルプレートに移し、５４０ｎｍでＯＤを測定した。これらの分光学的測定から、試験化合物の細胞静止能力と殺細胞能力を評価した。
【００５１】
ホローファイバー移植後、表１と表２に記載の化合物のうちの１種で、ファイバー移植後３又は４日目に開始し、１日１回、合計４回投与を続けて、マウスを処理した。３匹のマウス／投与量／実験の２つの投与量レベルで、腹腔内注射（実施例１）又は経口投与（実施例２）のいずれかによって、各化合物を評価した。ビヒクル対照は、化合物希釈液のみを受ける６匹のマウスからなっていた。第４回目の化合物処理の翌日、マウスからファイバーを集め、安定終点ＭＴＴアッセイに供した。各サンプルの光学密度を、５４０ｎｍで分光学的に測定し、各処理群の平均を計算した。各処理群のパーセント正味細胞増殖を決定し、ビヒクル処理対照のパーセント正味細胞増殖と比較した。
【００５２】
以下の実施例の状況で、（１）４８の可能な試験組合せのうち１０で、正味細胞増殖の５０％以上の減少；（２）２４の遠部位組合せ（ＳＣスコア）のうちの最低４で、正味細胞増殖の５０％以上の減少；及び／又は（３）どちらかの移植部位で、１種以上の細胞株の殺細胞（実験開始時に存在するレベル未満の生細胞量の減少）を含む幾つかのホローファイバーアッセイ基準に基づき、更なる試験（例えば、時間／投与量暴露研究、予備的薬理学的研究、皮下異種移植片効力研究）のために、化合物を選択した。
【００５３】
評価を単純化するために、所定の化合物の活性の迅速な観察を可能とするポイントシステムを採用した。このために、生細胞量の５０％以上の減少を生じる各化合物投与量に、値２を割り当てた。腹腔内（ＩＰ）サンプルと皮下（ＳＣ）サンプルは別々に採点したので、基準（１）と（２）は独立に評価できた。
【００５４】
（実施例１）
本実施例は、類似の構造のゲルダナマイシン誘導体と比較しての本発明の化合物のインビボ活性を示す。
【００５５】
上述のようにして、ホローファイバーアッセイを化合物Ａ〜Ｃで行った。化合物ＡとＢは、生理食塩水及びツイーン８０（０．０５％）と混合し、それぞれ２種の投与量レベル、７５ｍｇ／ｋｇ／投与と５０ｍｇ／ｋｇ／投与を得た。化合物Ｃも、生理食塩水及びツイーン８０（０．０５％）と混合し、それぞれ２種の投与量レベル、２０ｍｇ／ｋｇ／投与と１３．４ｍｇ／ｋｇ／投与を得た。先の毒性研究から、最適投与量レベルを決定したので、使用した投与量は、毒性効果を誘導すること無しに宿主に投与できる上限範囲に相当する。３種の化合物全てを、腹腔内注射により、１日１回、４日間投与した。４日後、ホローファイバーをマウスから取り出し、上述のようなＭＴＴアッセイに供した。パーセント細胞増殖阻害を、［（１−（％処理正味増殖／％対照正味増殖））×１００］として計算し、表１に示すように、この計算に基づきＨＦＡスコアを各化合物に割り当てた。
【００５６】
【表１】
2004519514.tif 000007
【００５７】
結果によって示されるように、本発明の化合物（例えば、化合物ＡとＢ）各々は、本発明ではない化合物（例えば、化合物Ｃ）よりも、有意に高いＨＦＡスコアを生じ、従って、有意に大きいインビボ抗癌活性を生じる。
【００５８】
（実施例２）
本実施例は、本発明の化合物の経口インビボ活性を示す。
【００５９】
上述のようにして、ホローファイバーアッセイを本発明の化合物Ｂで行った。化合物Ｂは、水と混合し、それぞれ２種の投与量レベル、７５ｍｇ／ｋｇ／投与と５０ｍｇ／ｋｇ／投与を得た。次いで、化合物Ｂを、１日１回、４日間経口（ＰＯ）投与した。４日後、ホローファイバーをマウスから取り出し、上述のようなＭＴＴアッセイに供した。パーセント細胞増殖阻害を、［（１−（％処理正味増殖／％対照正味増殖））×１００］として計算し、表２に示すように、この計算に基づきＨＦＡスコアを各化合物に割り当てた。
【００６０】
【表２】
2004519514.tif 000008
【００６１】
上記結果に基づき、本発明の化合物Ｂは、経口投与により有意なインビボ抗癌活性を示した。
【００６２】
特許、特許出願、及び刊行物を含む本明細書に引用する文献の全ては、引用により、その全てが本明細書に含まれるものである。
【００６３】
好適な実施態様を強調して本発明を説明したが、好適な実施態様の変形も使用できる。また、本発明は、具体的に本明細書に記載した以外の方法で実施できることを意図している。従って、本発明は以下の特許請求の範囲によって定められる本発明の精神と範囲内に包含される全ての改変を含むものである。
【国際公開パンフレット】
2004519514.tif 000011
2004519514.tif 000012
2004519514.tif 000013
2004519514.tif 000014
2004519514.tif 000015
2004519514.tif 000016
2004519514.tif 000017
2004519514.tif 000018
2004519514.tif 000019
2004519514.tif 000020
2004519514.tif 000021
2004519514.tif 000022
2004519514.tif 000023
2004519514.tif 000024
2004519514.tif 000025
2004519514.tif 000026
2004519514.tif 000027
2004519514.tif 000028
2004519514.tif 000029
【国際調査報告】
2004519514.tif 000030
2004519514.tif 000031
2004519514.tif 000032
2004519514.tif 000033