(57)【要約】本発明は、薬剤をヒトの皮膚を通して投与するための効率的なデバイスに関する。特に本発明は、皮膚を通してワクチンを接種するためのデバイスを提供する。本発明は、皮膚を貫通する部分を有する薬剤送達デバイスを提供し、皮膚穿刺部材がリザーバー媒体でコーティングされている、薬剤含有固体リザーバー媒体を含んでなる。あるいはまた、皮膚穿刺部材が固体薬剤リザーバー媒体からなるものであってもよい。該薬剤送達デバイスは薬剤が皮膚の特定の層の中へ送達されるように調整されており、好ましい送達デバイスは薬剤を上皮もしくは真皮へ送達する皮膚穿刺部材を含んでなる。好ましいリザーバー媒体は糖類を含有し、特に、ガラス（非晶質の固体物質）を形成するラクトース、ラフィノース、トレハロースもしくはスクロースのような安定化用糖類を含む。さらに、皮膚の中へワクチンを投与するためのワクチン送達デバイス、それらの製造方法、および医薬分野におけるそれらの用途を提供する。
2004504120.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤を含有する固体の生分解性リザーバー媒体を含んでなる少なくとも１つの皮膚穿刺部材を有する、薬剤送達デバイス。
【請求項２】
薬剤を含有する固体の生分解性リザーバー媒体が、少なくとも１つの皮膚穿刺部材上においてその外側にコーティングされている、請求項１に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項３】
固体の生分解性リザーバー媒体が多価アルコールである、請求項１または２に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項４】
多価アルコールが安定化用の多価アルコールである、請求項３に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項５】
固体の生分解性リザーバー媒体が糖である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項６】
糖がラクトース、スクロース、ラフィノースまたはトレハロースから選択される、請求項５に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項７】
固体の生分解性リザーバー媒体がガラス状態を形成する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項８】
固体の生分解性リザーバー媒体が、その皮膚穿刺部材および固体の生分解性リザーバー媒体を皮膚内に挿入後５分以内に薬剤を放出する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項９】
皮膚穿刺部材が真皮へ薬剤を送達するような寸法である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１０】
皮膚穿刺部材が表皮へ薬剤を送達するような寸法である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１１】
皮膚穿刺部材がマイクロニードルまたはマイクロブレードである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１２】
薬剤がワクチンである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１３】
ワクチンが抗原を含有する、請求項１２に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１４】
ワクチンが抗原をコードした核酸を含有する、請求項１２に記載の薬剤送達デバイス。
【請求項１５】
薬剤およびリザーバー媒体の溶液を調製し、少なくとも１つの皮膚穿刺部材をこの溶液に浸し、その後乾燥させて該皮膚穿刺部材上に薬剤を含有する固体の生分解性リザーバー媒体を形成させることを含んでなる、薬剤送達デバイスの製造方法。
【請求項１６】
ワクチンを含有するガラス質の糖のリザーバー媒体でコーティングされたマイクロブレードもしくはマイクロニードルのアレイを含んでなる、ワクチン送達用皮膚パッチ。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、薬剤をヒトの皮膚を通して投与するための効率的なデバイスに関する。特に本発明は、皮膚を通してワクチンを投与するためのデバイスを提供する。本発明は、皮膚穿刺部を有する薬剤送達デバイスを提供し、皮膚穿刺部上にリザーバー媒体がコーティングされた薬剤含有固体リザーバー媒体を含んでなる。あるいはまた、皮膚穿刺部が固体薬剤リザーバー媒体からなるものであってもよい。本発明のデバイスは保存中安定であり、皮膚内に皮膚穿刺部が侵入した後にのみ、実質的に薬剤を放出する。好ましい１実施形態においては、角質層を貫通後に皮膚内へ直接薬剤を放出する、固体のリザーバー媒体で外側がコーティングされた、マイクロニードル（ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ）型のデバイスが提供される。該薬剤送達デバイスは薬剤が皮膚の特定の層の中へ送達されるように調整されており、好ましい送達デバイスは薬剤を上皮もしくは真皮へ送達する皮膚穿刺部を含んでなる。好ましいリザーバー媒体は糖類を含有し、特に、ガラス状態（非晶質の固体物質）を形成するラクトース、ラフィノース、トレハロースもしくはスクロースのような安定化用糖類を含む。さらに、皮膚の中へワクチンを投与するためののワクチン送達デバイス、それらの製造方法、および医薬分野におけるそれらの用途が本発明により提供される。
【０００２】
皮膚は、外的な薬物・要因に対し重要なバリアの役割を果たしている。ヒトの皮膚に関しまとめられた知見が、Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第２８版の中で提供されている。外部層から始まり内側へ、皮膚は、角質層を含む上皮、成長性（ｖｉａｂｌｅ）上皮、および上皮の下層にある真皮からなる。上皮は５層： 角質層、淡明層、顆粒層、有棘層および基底層からなる。上皮（５つの層をすべて含む）は皮膚の最も外側の無血管層であり、厚さが０．０７〜０．１２ｍｍ（７０〜１２０μｍ）である。上皮は、ケラチノサイト（ケラチンを生産する専門の、表皮細胞の９５％を構成する細胞）で占められる。その他５％の細胞はメラノサイトである。下層の真皮は通常、角質層表面の下０．３〜約３ｍｍの範囲内にあり、汗腺、毛包、神経終末および血管を含んでいる。
【０００３】
角質層は皮膚浸透性バリアを支配し、数ダースのケラチン化された上皮の層から構成される。この領域の死滅したもしくは死滅しかけたケラチノサイトの間の狭い隙間は、結晶性の脂質のマルチラメラ（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｅ）で満たされている。これらは、親水性分子による侵入に対する疎水性バリアを提供することにより、皮膚もしくは身体内部と周辺環境との隙間を効果的に密閉する。この角質層の厚さは３０〜７０μｍの範囲である。
【０００４】
ランゲルハンス細胞は、上皮の基底顆粒層（有棘層および顆粒層；Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、第３版、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｋｉｒｋ−Ｓｃｏｔｔ 編： Ｓａｕｎｄｅｒｓ （１９８３））の全体にわたって見られ、侵入生物に対する免疫系の初期防御において重要な役割を果たすと考えられている。したがって、皮膚のこの層は、あるタイプのワクチンのための適切なターゲット・ゾーンとなる。
【０００５】
皮膚の中へ、あるいは皮膚を通して薬剤を投与する従来の様式、最も一般的には皮下注射針と注射器による投与様式には、多大な不便が伴っている。このような不便としては、苦痛、薬物投与に対し熟練した専門技術者を必要とすること、さらには、血液に由来する疾病の感染リスクを伴う投与者に対する針刺し創傷の危険、などがある。したがって、皮膚内への、あるいは皮膚を通してのあらゆるタイプの薬剤投与方法の改善が必要とされている。
【０００６】
角質層を貫通して薬剤を投与することの問題を克服するため、様々なデザインの皮膚パッチを含む多くの代替的なアプローチが記載されている。物理的に角質層を貫通せずに皮膚を通して薬剤を送達する皮膚パッチの例には、ＷＯ ９８／２０７３４およびＷＯ ９９／４３３５０に記載されたものが含まれる。皮膚を物理的に突き刺さないその他のアプローチには電気的輸送や、また皮膚内へ電流を流すことで薬剤の通過が促進されるイオン導入型デバイスが含まれる。そのようなデバイスの多くは、例えば米国特許第６，０８３，１９０号； 同６．０５７，３７４号； 同５，９９５，８６９号； 同５，６２２，５３０号等の文献中に記載されている。上記のタイプの非貫通性パッチの潜在的な不便には、薬剤投与中に誘発される著しい過敏性および不快感、角質層を通過する抗原の取り込み量が非常に少ないことが含まれる。
【０００７】
皮膚の物理的開裂、もしくは貫通を含むその他のパッチが記載されている。薬剤を含む液体もしくは固体のリザーバーと金属製のマイクロブレード（ｍｉｃｒｏｂｌａｄｅ）パッチを含んでなるデバイスが記載されており、そのデバイスでは薬剤が上皮に侵入できる経路を作るために、マイクロブレードが角質層を物理的に切る。そのようなデバイスは、ＷＯ ９７／４８４４０、ＷＯ ９７／４８４４２、ＷＯ ９８／２８０３７、ＷＯ ９９／２９２９８、ＷＯ ９９／２９３６４、ＷＯ ９９／２９３６５、ＷＯ ００／０５３３９、ＷＯ ００／０５１６６およびＷＯ ００／１６８３３に記載されている。皮膚を突き刺すことを含むその他のデバイスには米国特許第５，２７９，５４４号、同５，２５０，０２３号および同３，９６４，４８２号に記載のものが含まれる。これらのタイプのデバイスが有する不便のうちのいくつかは、角質層を貫通するマイクロブレードの存在にもかかわらず、投与時間における薬剤の取り込み速度が一般的に遅いということから生じる。取り込み速度の遅さは、マイクロブレードが皮膚に接している長い「接種時間（ｄｗｅｌｌ ｔｉｍｅ）」をもたらす。従来の予防接種の目的に対し、約１５分から３０分よりも長い接種時間はあまり望ましくない。というのは、アナフィラキシーショックのような起こりうる副作用をチェックするため、ワクチン接種を受けた人を観察するために必要な時間が長くなるからである。さらに、上記記載の製品の多くは冷蔵状態で輸送および／または保存される必要がある。バイアル瓶と比べてこれらの製品は大きいので、エンドユーザーの冷蔵庫内に保存できる数量はより少なくなり、また物流はより複雑かつ高額になる。
【０００８】
剤形が粉末およびトロカールの形態であり、薬剤および安定化用多価アルコール（例えば糖類）を含有する固体の剤形が、ＷＯ ９６／０３９７８に記載されている。
【０００９】
本発明は、保存中安定で、皮膚内へ、あるいは皮膚を通して薬剤を効率的に投与・放出することができる、改善されたデバイスを提供する。本発明は、少なくとも１つの皮膚穿刺部材を有する薬剤送達デバイスの提供により達成され、その皮膚穿刺部材には送達しようとする薬剤を含有する生分解性のリザーバー媒体が装着され、この装着された皮膚穿刺部材（例えば針）は皮膚の角質層を貫通することができるよう十分に長くて鋭いものである。ひとたび薬剤送達デバイスが皮膚の表面へ適用され、コーティングを施された皮膚穿刺部材もしくはマイクロニードル（ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ）が角質層を貫通して孔をあけると、リザーバー媒体は生分解し、それにより角質層の下層にある皮膚の中へ薬剤を放出する。
【００１０】
本発明の好ましい１実施形態においては、少なくとも１つの皮膚穿刺部および薬剤含有固体リザーバー媒体を有し、皮膚穿刺部の外面上に該リザーバー媒体がコーティングされている送達デバイスが提供される。あるいはまた、皮膚穿刺部が、固体の薬剤リザーバー媒体から成るものであってもよい。
【００１１】
本発明のデバイスは、従来の針やデバイスにしばしば伴う危険および恐怖感のない、無痛の方法での短時間投与が望まれる患者への任意の薬剤を投与するために使用することができる。そのような薬剤の例には、インシュリンのように毎日投与される必要がある薬剤が含まれるが、その他にもまた、ワクチンもしくは遺伝的疾患治療用の遺伝子のように、さほど頻繁な投与が要求されない薬剤も含まれる。
【００１２】
ワクチン送達デバイスは、本発明の好ましい態様である。このような態様において送達される薬剤は、単一抗原もしくは複数の抗原であり、また微生物もしくはウイルス（生きているもの、弱毒化されたもの、もしくは死滅させたもの）、または遺伝子ベクターまたは核酸ベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス）、病原体由来の抗原（例えば、サブユニット、粒子、ウイルス様粒子、蛋白質、ペプチド、多糖もしくは核酸）を含んでいてもよく、あるいは癌ワクチンの場合の自己抗原またはアレルギーなど非感染性で癌でない、慢性の疾患に関連する自己抗原であってもよい。薬剤は抗原や核酸単独であっても、あるいは免疫応答を向上および／または指令するアジュバントまたはその他の刺激物質を含んでもよく、またさらに薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。ワクチンをコーティングしたデバイスは、予防的または治療的なワクチン接種のために、ならびに免疫応答を開始させるために、および／または増強させるために使用することができる。寛容を破壊することが必要とされる治療的ワクチン接種の場合には、ワクチンをコーティングしたパッチは、初回の追加免疫のような特定の処方計画の一部として使用することができる。本明細書中に記載されたデバイスの特定の実施形態はさらに、室温保存でき、したがって物流コストの縮小ができ、また冷蔵庫内の貴重なスペースをその他の製品のために開放できるという重要な長所を有する。
【００１３】
本発明の送達デバイスは、（親水性分子などの）浸透促進剤が存在しない状態での従来の非貫通性パッチの使用によっては容易に投与ができなかった、多種多様な薬剤に対して使用することができる。
【００１４】
本発明の好ましい送達デバイスを形成するためにリザーバー媒体でコーティングされ得る皮膚穿刺突出部は、角質層を貫通するのに十分に強い突出部を作製するために使用することができる目的に対し安全なほとんどあらゆる素材を用いて作製することができる。例えば突出部は医薬用グレードのステンレス鋼、金もしくはチタン、または人工器官において使用されているその他の金属、これらの金属の合金またはその他の金属の合金；セラミックス、半導体、シリコン、ポリマー、プラスチック、ガラスもしくは複合材を用いて作製することができる。
【００１５】
パッチは通常、マイクロニードルまたはマイクロブレードのような、複数の穿刺突出部を設ける背板（ｂａｃｋｉｎｇ ｐｌａｔｅ）を有する。穿刺突出部自体は多様な形状をとることができ、中実であることも中空であることもできる。またそのような突出物としては、中実の針（ニードル）や刃（ブレード）のような形状をとることができる（例えば、マイクロブレードの形状やデザインに関する記載は、ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ．， ２０００， ２， ２８９−３１３； Ｈｅｎｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９９８， ８７， ８， ９２２−９２５； Ｋａｕｓｈｉｋ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｅｓｔｈ． Ａｎａｌｇ．， ２００１， ９２， ５０２−５０４； ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃｅｅｄ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ．， ２６， （１９９９）， Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ， Ｉｎｃ．， １９２−１９３； ＷＯ ９９／６４５８０； ＷＯ ９７／４８４４０； ＷＯ ９７／４８４４２； ＷＯ ９８／２８０３７； ＷＯ ９９／２９３６４； ＷＯ ９９／２９３６５； 米国特許第５，８７９，３２６号等を参照されたい。これらに記載の全てのデザイン、およびマイクロブレードアレイの製造方法は、参照により本明細書に組み入れるものとする）。あるいはまた、穿刺突出部は、中央に穴が開いている中空の微小な針（すなわちマイクロニードル）の形状であることができる。この最後に挙げた実施形態においては、中央の穴が針を貫通して延びていて、マイクロニードル部材の両面を連通するチャネルを形成しているものであってもよい（ＥＰ ０ ７９６ １２８ Ｂ１）。中実のマイクロニードルおよびマイクロブレードが好ましい。
【００１６】
皮膚穿刺部材の長さは、典型的には１μｍ〜１ｍｍ、好ましくは５０μｍ〜６００μｍ、さらに好ましくは１００μｍ〜４００μｍである。皮膚穿刺部材の長さは、薬剤送達の標的として選択される部位（すなわち、好ましくは真皮、そして最も好ましくは表皮）に応じて選択することができる。本発明のデバイスの皮膚穿刺部材は、米国特許第５，８７９，３２６号、ＷＯ ９７／４８４４０、ＷＯ ９７／４８４４２、ＷＯ ９８／２８０３７、ＷＯ ９９／２９２９８、ＷＯ ９９／２９３６４、ＷＯ ９９／２９３６５、ＷＯ ９９／６４５８０、ＷＯ ００／０５３３９、ＷＯ ００／０５１６６、もしくはＷＯ ００／１６８３３； またはＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ．， ２０００， ２， ２８９−３１３； Ｈｅｎｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９９８， ８７， ８， ９２２−９２５； Ｋａｕｓｈｉｋ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｅｓｔｈ． Ａｎａｌｇ．， ２００１， ９２， ５０２−５０４； ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃｅｅｄ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ．， ２６， （１９９９）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ， Ｉｎｃ．， １９２−１９３．に記載された形態を取り、またそれらに記載された方法によって製造することができる。
【００１７】
本発明のデバイスを形成する、薬剤リザーバー媒体でコーティングされた最も好ましいマイクロブレード型のデバイスは、ＷＯ ９９／４８４４０、およびＨｅｎｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９９８， ８７， ８， ９２２−９２５に記載されており、これら文献はその全文を参照により本明細書に組み入れるものとする。
【００１８】
本発明のデバイスは、好ましくは複数の皮膚穿刺部材を有し、好ましくは１つのデバイスあたり１０００個まで、より好ましくは１つのデバイスあたり５００個までの皮膚穿刺部材を有する。
【００１９】
穿刺突出部が中実である場合、それは平面状であってもよいし（マイクロブレードと称する、図１を参照）、または円形もしくは多角形の断面（図５を参照）を有することもできる。突出部は直線的な、もしくは先細りの軸を有することができ、また平面状または円形または多角形の断面を有しても良い。例えばこのマイクロブレードは湾曲したブレード（図３参照）を有するものや、あるいはＶ字型の切断面を生じる溝型（図６参照）に形成されたものでもよい。またあるいは、突出部は図７に示すような５つの頂点をもつ星型のように、付着性および流体力学的効果を増強するために、より複雑な形状をとることができる。
【００２０】
皮膚穿刺部材は、背板と一体になったものであっても、あるいは背板に取り付けられたものであってもよい。突出部を背板に取り付ける場合、穿刺突出部をリザーバー媒体で形成することができる。そのようなデバイスは、薬剤を含有する溶融したリザーバー媒体を複数の細い先端に引き伸ばすかまたは押し出すことにより形成することができる。例えば、溶融したリザーバー媒体を多孔ヘッドを通して直接背板にキャストすることができ、その後熱い押出物が冷えて背板に固着する。押出物を引き戻すと、一連の先の尖った末端が形成される。
【００２１】
あらゆる穿刺突出部の形状における一般的特徴として、コーティング後のリザーバーの付着を向上させるために、突出部の表面はざらざらしたものでありうる。例えば表面は、粗い粒状や、さざ波状、もしくはうねのある状態であってもよい。さらに、中実のマイクロブレードは、リザーバーがそのブレードにより確実に固着するよう、リザーバーがその場所で乾燥して固着するような孔（図４参照）を有してもよい。非常に溶けやすく砕けやすい凍結乾燥組成物を含むある種の実施形態においては、砕けやすいリザーバーはそのような孔の内部に完全に保持されて、そのことによって皮膚穿孔時の破損から保護されるのが好ましい。
【００２２】
また別の実施形態においては、穿刺突出部は、基盤部材から分離することができる。例えば、穿刺突出部（または少なくともその先端部）それ自体がリザーバーである実施形態においては、皮膚侵入後に、穿刺突出部は基盤支持体から分離することにより、リザーバーを皮膚内に残したままでパッチを皮膚から取り除くことができる。背板からのリザーバーの分離は、物理的な剪断またはそのニードルの背板に隣接する部分の生分解により行うことができる。
【００２３】
この１実施形態は、比較的水に溶けにくい二糖類のリザーバー媒体（送達されるべき薬剤が分散している）から微小な突出部の先端部をキャスティングにより作製した後に、微小な突出部の残りの部分および背板を比較的水に溶け易い素材からキャスティングにより作製することであり得る。ひとたび皮膚に挿入されると、比較的容易に溶ける微小な突出部軸部は分解消失し、それによって皮膚内に先端部を残したままパッチが皮膚から取り除かれることを可能にする。皮膚内に残った先端部は、よりゆっくりと生分解されることにより、ゆっくりと薬剤を放出する。
【００２４】
したがって、本発明の好ましい１実施形態においては、薬剤もしくはワクチン送達のための皮膚パッチが提供され、該パッチは薬剤もしくはワクチンを含有する固体の生分解性リザーバー媒体でコーティングされたマイクロブレードもしくはマイクロニードルのアレイを含んでなる。
【００２５】
生分解性の薬剤リザーバーは、本発明のために必要とされる機能を満足するあらゆる媒体から作製することができる。該リザーバーは、リザーバーが長期保存中も物理的に安定で付着し続け、さらに、その投与手順中コーティングされた微小突出部が角質層を貫通する時に実質的に損傷せずに保持されるのに充分な程度に、微小突出部に付着することができる必要がある。リザーバーはさらに、リザーバー媒体の生分解中に皮膚内へ放出される、乾燥したもしくは部分的に乾燥した任意の形態で送達される薬剤の懸濁液もしくは溶液を保持する、または含有することもできる必要がある。
【００２６】
本発明において、リザーバー媒体の生分解とは、その媒体が非放出状態から放出状態に変化することにより薬剤が皮膚内へ入るように、リザーバー媒体の状態が変化することを意味する。この活性薬剤の放出には、水和、拡散、相転移、結晶化、溶解、酵素反応および／または化学反応などの１以上の物理的および／または化学的プロセスが含まれ得る。リザーバー媒体の選択に応じて、生分解は、水、体液、湿度、体温、酵素、触媒および／または反応物質などの１以上により誘発され得る。したがって、リザーバー媒体の変化は水和、ならびに皮膚の比較的高い湿度および温度に伴う加温により誘発され得る。そしてリザーバー媒体は、溶解および／または膨潤、および／または相変化（結晶質もしくは非晶質）により分解することができ、それによりリザーバー媒体は崩壊するか、あるいは媒体の浸透性をわずかに増加させたりする。
【００２７】
好ましくは媒体は、溶解して、代謝されるか、または体内から排出されるか、または排泄されるが、あるいはまた、リザーバーは、デバイスを取り除く際に皮膚から除去される皮膚穿刺部材に取り付けられた状態で維持されていてもよい。リザーバー媒体の溶解による薬剤の放出が好ましい。
【００２８】
好適なリザーバー媒体の例には、限定されるものではないが、糖類、多糖類、置換された多価アルコール（例えば疎水的誘導体化された炭水化物）などの多価アルコール類、アミノ酸、ポリヒドロキシ酸やポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）およびポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、あるいはポリラクチド−コ−グリコライドのような生分解性のポリマーもしくはコポリマーが含まれる。マイクロブレードのコーティングは非晶質または結晶の状態であることができ、また部分的に非晶質および部分的に結晶の状態で存在し得る。
【００２９】
特に好ましいリザーバー媒体は、保存期間中、送達すべき薬剤を安定化するものである。例えば、抗原または薬剤は、多価アルコールガラス中に溶解もしくは分散させ、または単に多価アルコールの中で乾燥させることにより長期保存期間中に渡り安定である （米国特許第５，０９８，８９３号、同６，０７１，４２８号； ＷＯ ９８／１６２０５； ＷＯ ９６／０５８０９； ＷＯ ９６／０３９７８； 米国特許第４，８９１，３１９号； 同５，６２１，０９４号； ＷＯ ９６／３３７４４）。このような多価アルコールは、好ましいリザーバー媒体を形成する。
【００３０】
好ましい多価アルコールは、単糖、二糖、三糖もしくはオリゴ糖類を含む糖類、およびそれらに相当する糖アルコールを含む。本発明で使用するのに好適な糖類は、当技術分野において周知であり、そのような糖類の例としては、トレハロース、スクロース、ラクトース、果糖、ガラクトース、マンノース、マルツロース、イソマルツロース、ラクチュロース、マルトース、またはブドウ糖や、マンニトール、ラクチトールおよびマルチトールなどの前述した糖の糖アルコールが含まれる。スクロース、ラクトース、ラフィノースおよびトレハロースが好ましい。
【００３１】
リザーバー媒体が乾燥時に非晶質のガラスを形成することが好ましい。このようなガラスリザーバーは任意のガラス転移温度を有し得るが、保存中に薬剤を安定化させ、皮膚へリザーバーを挿入した後に薬剤の迅速な放出を促進するようなガラス転移温度を有していることが好ましい。したがって、ガラス転移温度は３０〜４０℃を越える温度であるが、最も好ましくは体温付近の温度（例えば３７〜５０℃、限定されるものではない）である。
【００３２】
デバイスの皮膚穿刺部材を作製するために使用される好ましいリザーバー媒体は、短時間で薬剤を放出するものである。好ましいリザーバー媒体組成物は、皮膚の中へ挿入後５分以内、好ましくは２分以内、より好ましくは１分以内、そして最も好ましくは３０秒以内に、実質的にすべての薬剤を放出する。このような高速放出型のリザーバーは、例えば非晶質のガラスリザーバー（特に、低いガラス転移温度を有し、速い溶解／膨潤をおこすガラス質のリザーバー）を薄くコーティングすることにより達成できる。適切なガラス形成性糖類の選択、および／またはガラスの湿度および／またはイオン強度の増大によって低いガラス転移温度を達成できることは当業者にとっては明らかであろう。さらに、ガラスリザーバーの分解速度を速めるには、皮膚へ適用する前にまたは適用しながら該デバイスを温めてもよい。
【００３３】
組成物中に含むことができるその他の好適な賦形剤には、緩衝液、アミノ酸、加工中もしくは保存中のコーティングの相変化を抑制する相変化抑制剤「結晶毒（ｃｒｙｓｔａｌ ｐｏｉｓｏｎｅｒｓ）」、あるいは加工中もしくは保存中の有害な化学反応を防ぐ抑制剤、またはアミノ酸のようなメイラード反応抑制剤が含まれ得る。
【００３４】
したがって、本発明の好ましい実施形態においては、ワクチンを含有するガラス質の糖類リザーバー媒体でコーティングされた多数のマイクロブレードもしくはマイクロニードルのアレイを有する、ワクチン送達用の皮膚パッチが提供される。
【００３５】
リザーバー媒体は、好ましくは固体もしくは非常に粘度の高い溶液であり、それ自体は滑らかであっても、またはざらざらしたものであってもよい。例えば該媒体は、固体、結晶、非晶質／ガラス質、固溶体、固体懸濁液、多孔質、滑らかなもの、粗いもの、またはしわの寄ったものなどであり得る。
【００３６】
送達しようとする薬剤および生分解性のリザーバー媒体を含有する組成物は、好ましくは水溶液中で混合され、次いで微小突出物部材上で乾燥させるか、または該組成物を溶融して微小突出物部材に塗布することができる。皮膚穿刺部材をコーティングする好ましい方法は、ワクチン抗原および水溶性多価アルコール（例えばトレハロース）の水溶液の調製、次にその部材を該溶液に１回以上浸すことによるマイクロブレードのコーティング、さらに次に、大気温度で乾燥させるかまたは凍結乾燥して多孔性のコーティングを得る（必要なコーティングの厚さを得るためには一部もしくは全部の工程を繰り返す。図２のコーティングされたマイクロブレードの図を参照（点描された領域はリザーバー媒体であり、点線はリザーバー媒体がマイクロブレード部材の下面全体を覆い得ることを示す））。この方法では、水溶性の多価アルコールまたは糖類の初期溶液は、４０％ 糖類溶液の粘度同様に粘性が高いことが好ましい。
【００３７】
マイクロニードルが中空で中央に孔を有する（図５Ａ）か、マイクロブレードが湾曲しているかもしくはＶ字型断面を有する（図３および６）１実施形態においては、ひとたびそのブレードを液状の媒体に浸せば、該溶液はその孔部もしくは内部の空間を毛細管現象によって上昇して満たす（リザーバー媒体を充填した後の中央に孔を有するマイクロニードルについて図５Ｂを参照）。
【００３８】
あるいはまた、ごく微量なピコリットル量の溶液もしくは溶融した組成物を、バブルジェットプリンター技術において一般的に使用される技術を用いて個々のブレードの上に噴霧し、次いで乾燥させることができる。その他の別の方法としては、スプレードライ法やスプレー凍結乾燥法あるいは乾燥・粉砕法等の当技術分野で公知の技術を使用し、また比較的低いガラス転移温度（例えば３０℃）を達成するために湿度を調整することにより、糖類のような多価アルコールを含有する非晶質組成物の微小球もしくは微粒子または粉末を調製し、続いてスプレーもしくは浸漬により、該微小球もしくは微粒子または粉末と、それらのガラス転移温度以上の温度（例えば４５℃）に加熱された微小突出部材とを接触させる。すると、コーティングされた粒子は溶融して微小突出部材に付着する。さらに乾燥させるか、またはコーティングされたマイクロブレード部材を（残る湿気を除去するために）さらに乾燥させることにより、保存に適したリザーバー媒体のガラス転移温度が上昇する。
【００３９】
あるいはまた、マイクロニードル部材は凍結コーティング技術を使用してコーティングすることができる。例えば、マイクロニードル部材の温度を水の凝固点以下に下げ（例えば液体窒素に浸漬することによる）、次にリザーバー媒体および薬剤の水溶液を冷たいマイクロニードルの上に噴霧するか、またはマイクロブレードを薬剤溶液に浸漬することができる。この方法で、薬剤およびリザーバー媒体は、マイクロニードル部材の上に迅速に付着し、リザーバーコーティングを乾燥させるために、次に、凍結乾燥により昇華させるか、またはより高い温度で蒸発させることができる。
【００４０】
マイクロニードル部材をコーティングする別の方法には、マイクロニードルを水などの溶媒（良好な接触を確保するために界面活性剤を適宜含有させてもよい）に浸して、その後湿ったブレードを粉末形態のリザーバー媒体（該溶媒中に可溶である）中に入れ、次に乾燥させて溶媒を除去する方法がある。
【００４１】
本発明の好ましい１実施形態では、２２０ｎｍの孔を有する膜による滅菌濾過が可能な程十分な流動性を有するリザーバー形成用媒体の粘性溶液にてマイクロブレードをコーティングする方法が提供される。これにより、濾過可能な粘性の糖類溶液組成物中に抗原を含有するワクチン組成物が提供される。そのような濾過可能な粘性の糖類溶液の好ましい例としては、糖約２０〜約５０％（乾燥前の最終的なワクチン組成物の重量／体積）の溶液が挙げられる。より好ましくは、粘性の濾過可能な糖類溶液は糖が約３０〜約４５％の範囲であり、さらに最も好ましくは約４０％（糖類重量／乾燥前の最終的なワクチン組成物の体積）である。このような情況において、最も好ましい糖類溶液にはスクロース、ラフィノース、トレハロースまたはラクトースが含まれる。
【００４２】
マイクロブレードが投与のための一体化された孔部を有するような実施形態においては、図４に示されるもののような個々のブレードを含むマイクロブレードの連なり（弓のこ刃のような）を、パッチに組み立てる前にリザーバーで満たし、乾燥させることができる。多くのブレードの連なりから組み立てられたそのようなデバイスのひとつは、ＷＯ ９９／２９３６４に記載されている。あるいはまた、ＷＯ ９７／４８４４０に記載されたもののようなデバイスは一体化された孔部を有し、その孔部はブレードがまだ刻まれた基盤の平面内にある間に満たすことができ、次いでこのブレードを、その場所でリザーバー媒体と垂直に整列された状態へと型打ちすることができる。
【００４３】
これらの技術を使用して、各々の皮膚穿刺部材に比較的多量の薬剤を付けることができる。各穿刺部材には、好ましくは５００ｎｇまで、より好ましくは１μｇまで、さらに好ましくは５μｇまでの薬剤もしくは抗原を付着させる。
【００４４】
本発明のワクチン組成物は、ヒト病原体に対する免疫応答を誘発することができる抗原もしくは抗原組成物を含んでいることが好ましい。そのような抗原もしくは抗原組成物には、ＨＩＶ−１由来のもの（例えば、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０もしくはｇｐ１６０）、ヒトヘルペスウイルス由来のもの（例えば、ｇＤもしくはその類縁体）、またはＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７のような前初期蛋白質（Ｉｍｍｅｄｉａｔｅ Ｅａｒｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）、サイトメガロウイルス（特にヒト）由来のもの（例えば、ｇＢもしくはその類縁体）、ロタウイルス（生きた弱毒化ウイルスを含む）由来のもの、エプスタインバーウイルス由来のもの（例えば、ｇｐ３５０もしくはその類縁体）、水疱瘡ウイルス由来のもの（例えば、ｇｐＩ、ＩＩおよびＩＥ６３）、またはＢ型肝炎ウイルス由来のもの（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原もしくはその類縁体）、Ａ型肝炎ウイルス由来のもの、Ｃ型肝炎ウイルス由来のもの、およびＥ型肝炎ウイルス由来のものなどの肝炎ウイルス由来のもの、またはパラミクソウイルスなどその他のウイルス性病原体由来のもの（例えば、ＲＳウイルス由来のもの（例えば、ＦおよびＧ蛋白質もしくはその類縁体）、パラインフルエンザウイルス由来のもの、麻疹ウイルス由来のもの、おたふくかぜウイルス由来のもの、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８等）由来のもの、フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）由来のもの、または、インフルエンザウイルス（完全生存もしくは不活化ウイルス、分割したインフルエンザウイルス、卵もしくはＭＤＣＫ細胞もしくはＶｅｒｏ細胞において成長させたもの、または完全なインフルエンザウイルス体由来のもの（Ｒ．Ｇｌｕｃｋ， Ｖａｃｃｉｎｅ， １９９２， １０， ９１５−９２０に記載）、またはＨＡ、ＮＰ、ＮＡもしくはＭ蛋白質などの精製蛋白質もしくは組換え蛋白質もしくはそれらの混合物）由来のもの、またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐｐ．（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓを含む）のような細菌病原体由来のもの（例えば、莢膜多糖類、またそれらの接合体、トランスフェリン結合性蛋白質、ラクトフェリン結合性蛋白質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）； Ｓ． ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のもの（例えば、Ｍ蛋白質もしくはその断片、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポテイコイン酸）、Ｓ． ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来のもの、Ｓ． ｍｕｔａｎｓ由来のもの； Ｈ． ｄｕｃｒｅｙｉ由来のもの； Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｓｐｐ （Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとして知られるＭ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含む）由来のもの（例えば、高分子量および低分子量のアドヘシンおよびインベイシン）； Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐｐ（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓを含む）由来のもの（例えば、ペルタクチン、百日咳毒素およびそれらの類縁体、線維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、フィンブリエ（ｆｉｍｂｒｉａｅ））、Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来のものおよびＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ由来のもの； Ｍｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含む）由来の���の（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、８５Ｂもしくは８５Ｃ）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ由来のもの、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ由来のもの、Ｍ．ａｖｉｕｍ由来のもの、Ｍ． ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のもの、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ由来のもの； Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａを含む）由来のもの；腸管毒原性大腸菌由来のもの（例えば、コロニー形成因子、熱失活性毒素もしくはそれらの類縁体、または熱耐性の毒素もしくはそれらの類縁体）、腸内出血性大腸菌由来のもの、腸内病原性大腸菌由来のもの（例えば、志賀毒素様毒素もしくはそれらの類縁体）などのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｓｐｐ．由来のもの；Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐｐ（コレラ菌を含む）由来のもの（例えばコレラ毒素もしくはそれらの類縁体）； Ｓｈｉｆｅｌｌａ ｓｐｐ （Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ、Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉを含む）由来のもの； Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｐｐ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａを含む）由来のもの（例えばＹｏｐ蛋白質）、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ由来のもの、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のものを含む）； Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ 由来のもの（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ由来のもの（例えば毒素、アドヘシンおよびインベイシン）、およびＣ．ｃｏｌｉ由来のものを含む）； Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ （Ｓ．ｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓを含む）由来のもの； Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ （Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含む）由来のもの； Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ （Ｈ． ｐｙｌｏｒｉを含む）由来のもの（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞形成毒素）； Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ （Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む）由来のもの； Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ （Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、 Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含む）由来のもの； Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ （Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含む）由来のもの； Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ （Ｃ．ｔｅｔａｎｉを含む）由来のもの（例えば、破傷風毒素およびその類縁体）、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ由来のもの（例えば、ボツリヌス菌毒素およびその類縁体）、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来のもの（例えば、クロストリディウム毒素ＡもしくはＢおよびそれらの類縁体）を含む）； Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ （Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓを含む）由来のもの（例えば、ボツリヌス菌毒素およびその類縁体）； Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ （Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを含む）由来のもの（例えば、ジフテリア毒素その類縁体）； Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ （Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉを含む）由来のもの（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ由来のもの（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ由来のもの（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ由来のもの（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉを含む）； Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｓｐｐ 由来のもの（Ｅ．ｅｑｕｉ由来のもの��よびヒト顆粒球性エールリヒア症の媒介菌由来のものを含む）； Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｓｐｐ （Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉを含む）由来のもの； Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｓｐｐ （Ｃｈ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓを含む）由来のもの（例えばＭＯＭＰ、ヘパリン結合性蛋白質）、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のもの（例えばＭＯＭＰ、ヘパリン結合性蛋白質）、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ由来のものを含む）； Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｓｐｐ （Ｌ． ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓを含む）由来のもの； Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｓｐｐ （Ｔ． ｐａｌｌｉｄｕｍを含む）由来のもの（例えばまれな外膜蛋白質）、Ｔ． ｄｅｎｔｉｃｏｌａ由来のもの、Ｔ． ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ由来のものを含む）； あるいは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ （Ｐ． ｆａｌｃｉｐａｒｕｍを含む）のような寄生生物に由来するもの； Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ （Ｔ． ｇｏｎｄｉｉを含む）由来のもの（例えばＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）； Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ （Ｅ． ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含む）由来のもの； Ｂａｂｅｓｉａ ｓｐｐ （Ｂ． ｍｉｃｒｏｔｉを含む）由来のもの； Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｓｐｐ （Ｔ．ｃｒｕｚｉを含む）由来のもの； Ｇｉａｒｄｉａ ｓｐｐ （Ｇ． ｌａｍｂｌｉａを含む）由来のもの； Ｌｅｓｈｍａｎｉａ （Ｌ． ｍａｊｏｒを含む）由来のもの； Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐｐ （Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉを含む）由来のもの； Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ （Ｔ． ｖａｇｉｎａｌｉｓを含む）由来のもの； Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ ｓｐｐ （Ｓ． ｍａｎｓｏｎｉを含む）由来のもの、あるいはＣａｎｄｉｄａ ｓｐｐ （Ｃ． ａｌｂｉｃａｎｓを含む）のような酵母由来のもの； Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ （Ｃ． ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含む）由来のものが挙げられる。
【００４５】
好ましい細菌ワクチンは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ由来の抗原（例えば、莢膜多糖類およびそれらの接合体、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリシン、コリン結合性蛋白質）、および蛋白質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， １９８９， ６７， １００７； Ｒｕｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ， ２５， ３３７−３４２）、およびそれらを突然変異的に解毒化した類縁体を含んでなる。その他の好ましい細菌ワクチンは、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐｐ （Ｈ． ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型（例えばＰＲＰおよびその接合体）を含む）、非タイプ分類型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（例えば、ＯＭＰ２６、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、蛋白質Ｄ、およびリポタンパク質Ｄ、さらにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（米国特許第５，８４３，４６４号）もしくは多コピーの変異体またはそれらの融合蛋白質）由来の抗原を含んでなる。その他の好ましい細菌ワクチンは、Ｍｏｒｅｘｅｌｌａ Ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（その外膜小胞を含む、およびＯＭＰ１０６（ＷＯ９７／４１７３１））、ならびにＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ（その外膜小胞を含む、およびＮｓｐＡ（ＷＯ ９６／２９４１２））由来の抗原を含んでなる。
【００４６】
Ｂ型肝炎表面抗原の類縁体は、当技術分野において周知であり、特に、欧州特許出願ＥＰＡ−４１４ ３７４、 ＥＰＡ−０３０４ ５７８、およびＥＰ １９８−４７４に記載のＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２ Ｓ抗原を含む。好ましい１態様では、本発明のワクチン組成物はＨＩＶ−１抗原（ｇｐ１２０）、特にＣＨＯ細胞において発現されたＨＩＶ−１抗原（ｇｐ１２０）を含んでなる。さらなる実施形態において、本発明のワクチン組成物は上記に定義されるようなｇＤ２ｔを含んでなる。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態において、請求項に記載のアジュバントを含むワクチンは、陰部のいぼに関与すると考えられるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（例えば、ＨＰＶ ６、ＨＰＶ １１等）、および子宮頸癌に関与すると考えられるＨＰＶウイルス（例えば、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８等）由来の抗原を含んでなる。
【００４８】
特に好ましい形態の、陰部のいぼの予防用または治療用ワクチンは、Ｌ１粒子もしくはキャプソメア、さらにＨＰＶ ６およびＨＰＶ １１由来の蛋白質Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１およびＬ２から選択される１以上の抗原を含む融合蛋白質を含んでなる。
【００４９】
最も好ましい形態の融合蛋白質は、ＷＯ ９６／２６２７７に開示されているようなＬ２Ｅ７、およびＧＢ ９７１７９５３．５（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５２８５）に開示されているような蛋白質Ｄ（１／３）− Ｅ７である。
【００５０】
好ましいＨＰＶの子宮頸部感染もしくは癌の予防的もしくは治療的なワクチン組成物はＨＰＶ １６もしくは１８抗原を含み得る。例えばＬ１、Ｌ２抗原モノマー、あるいはウイルス様粒子（ＶＬＰ）のように共存するＬ１もしくはＬ２抗原、またはＶＬＰもしくはキャプソメアの構造において単独で示されるＬ１単独蛋白質がある。そのような抗原、ウイルス様粒子およびキャプソメアはそれ自身知られている。例えばＷＯ９４／００１５２、ＷＯ９４／２０１３７、ＷＯ９４／０５７９２およびＷＯ９３／０２１８４を参照されたい。
【００５１】
追加の初期蛋白質は、例えば好ましくはＥ７、Ｅ２もしくはＥ５のように、単独でもしくは融合蛋白質として含まれることができ、特にこの好ましい実施形態には、Ｌ１Ｅ７融合蛋白質（ＷＯ ９６／１１２７２）を含むＶＬＰが含まれる。
【００５２】
特に好ましいＨＰＶ １６抗原は、蛋白質Ｄ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄ）− Ｅ６もしくはＥ７（ＨＰＶ １６由来）融合蛋白質を形成するための、蛋白質Ｄキャリアーと融合した初期蛋白質Ｅ６もしくはＥ７、またはそれらの組合せを含んでなる。あるいはＥ６もしくはＥ７とＬ２との組合せ（ＷＯ ９６／２６２７７）を含んでなる。
【００５３】
あるいはまた、ＨＰＶ １６もしくは１８の初期蛋白質Ｅ６およびＥ７は、単一分子の形で、好ましくは蛋白質Ｄ−Ｅ６／Ｅ７融合蛋白質の形で示され得る。そのようなワクチンは任意に、ＨＰＶ １８由来のＥ６およびＥ７蛋白質のどちらか、もしくは両方を含むことができ、好ましくは蛋白質Ｄ−Ｅ６もしくは蛋白質Ｄ−Ｅ７プロテインＤの形で含むことができる。本発明のワクチンは、さらに、その他のＨＰＶ株、好ましくはＨＰＶ ６、１１、３１、３３あるいは４５株由来の抗原を付加的に含んでなることができる。
【００５４】
本発明のワクチンはさらに、マラリアを引き起こす寄生動物に由来した抗原を含んでなる。例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ由来の好ましい抗原はＲＴＳ、ＳおよびＴＲＡＰを含む。ＲＴＳは、Ｂ型肝炎の表面抗原のｐｒｅＳ２部分の４残基のアミノ酸を介して、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（Ｓ）と連結したＰ． ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周辺（ＣＳ）蛋白質のＣ−末端部分を実質的に全て含んでなるハイブリッド蛋白質である。その全構造は国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９２／０２５９１に開示され、英国特許出願Ｎｏ．９１２４３９０．７に由来する優先件を主張するＷＯ９３／１０１５２において公表されている。酵母において発現された時、ＲＴＳはリポタンパク質粒子として生産され、またそれが生産するＨＢＶ由来のＳ抗原と共発現される場合、ＲＴＳ、Ｓとして知られた混合粒子を生産する。ＴＲＡＰ抗原は、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ８９／００８９５に記載され、ＷＯ ９０／０１４９６により公表されている。本発明の好ましい実施形態は、そこで抗原調製物がＲＴＳ、ＳおよびＴＲＡＰ抗原の組合せを含んでなるマラリアワクチンである。多段式マラリアワクチンの構成要素の有望な候補であるその他のマラリア原虫抗原は、Ｐ． ｆａｃｉｐａｒｕｍ ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、セケストリン、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７／２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐにおけるそれらの類縁体がある。
【００５５】
本発明の組成物はさらに抗腫瘍抗原を含み、癌の免疫療法に有用となり得る。例えば、アジュバント製剤は、前立腺癌、乳癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎臓癌もしくは悪性黒色腫などに対する腫瘍拒絶抗原と併用して有効である。典型的な抗原は悪性黒色腫の治療に対するＭＡＧＥ １およびＭＡＧＥ ３、ＰＲＡＭＥ、ＢＡＧＥあるいはＧＡＧＥ（Ｒｏｂｂｉｎｓ ａｎｄ Ｋａｗａｋａｍｉ， １９９６， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ８， ｐｐｓ ６２８−６３６；Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （１９９７年公表）； Ｃｏｒｒｅａｌｅ ｅｔ ａｌ．， （１９９７）， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ８９， ｐ２９３）を含む。確かにこれらの抗原は、悪性黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌のような広範囲の腫瘍タイプにおいて発現される。その他の腫瘍特異的抗原は、本発明のアジュバント製剤を併用した使用に好適であり、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）もしくはＨｅｒ−２／ｎｅｕ、ＫＳＡ（ＧＡ７３３）、ＭＵＣ−１および腫瘍胚性抗原（ＣＥＡ）を含むが、それに限定されるものではない。したがって本発明の１つの態様においては、本発明によるアジュバント製剤および腫瘍拒絶抗原を含んでなるワクチンが提供される。
【００５６】
さらに上述の抗原は、多くの癌の治療もしくは免疫去勢における、全長よりなる性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、ＷＯ ９５／２０６００）、短い１０アミノ酸長のペプチドなどの自己ペプチドホルモンであり得る。
【００５７】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐ由来の抗原を含むワクチンを製剤化するために、本発明の組成物が使用されるであろうことが予測される。例えば、抗原には核酸、病原体由来抗原もしくは抗原調製物、組換え的に生産された蛋白質かペプチド、およびキメラ融合蛋白質を含む。特に抗原はＯｓｐＡである。ＯｓｐＡは、Ｌｉｐｏ−ＯｓｐＡと名付けられた宿主細胞（Ｅ．Ｃｏｌｉ）の脂質化されたすぐれた形態、もしくは脂質化されていない誘導体において完全な成熟蛋白質であり得る。そのような脂質化されていない誘導体には、インフルエンザウイルスの非構成蛋白質（ＮＳ１）の最初のＮ末端の８１アミノ酸を有する脂質化されていないＮＳ１−ＯｓｐＡ融合蛋白質、および完全長ＯｓｐＡ蛋白質を含み、そして他には、ＭＤＰ−ＯｓｐＡは３残基の付加的なＮ−末端アミノ酸を有するＯｓｐＡの脂質化されてない形態である。
【００５８】
本発明のワクチンはアレルギーの予防もしくは治療のために使用することができる。そのようなワクチンは特異的アレルゲン（例えばＤｅｒ ｐ１）および非特異的抗原（例えば、ヒト免疫グロブリンＥ由来のペプチドを挙げることができるが、ｓｔａｎｗｏｒｔｈデカペプチド（ＥＰ ０ ４７７ ２３１ Ｂ１）に限定されるものではない）を含んでなることができる。
【００５９】
多種多様な起源に由来する抗原を含むワクチンを製剤化するために、本発明の組成物が使用されるであろうことが予測される。例えば、抗原にはヒト、細菌、もしくはウイルス、核酸、病原体由来抗原もしくは抗原調製物、腫瘍由来抗原もしくは抗原調製物、ＧｎＲＨおよび免疫グロブリンＥペプチドを含む宿主由来抗原、組換え的に生産された蛋白質、もしくはペプチド、およびキメラ融合蛋白質を含むことができる。
【００６０】
さらに、本発明の組成物は、むき出しの形の核酸、もしくは投与後の皮膚細胞への核酸の取り込みを助けるためのアデノウイルスもしくはレトロウイルスのような適切なベクターに取り込ませた状態の核酸を含むことができる。この実施形態の適用は、ＤＮＡワクチンおよび遺伝子治療用の製品を含む。
【００６１】
プラスミドに基づく遺伝子の送達、特に免疫化もしくは遺伝子治療目的のものが知られている。例えば、マウス筋肉内への注射による裸のＤＮＡの投与はＷＯ９０／１１０９２の中で概説されている。ＪｏｈｎｓｔｏｎらによるＷＯ ９１／０７４８７には、任意の遺伝子をコードしたポリヌクレオチドでコーティングした微小突出物（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｓ）を使用して脊椎動物細胞へ遺伝子を送達し、微粒子が標的細胞に浸透することができるよう促す方法について記載されている。
【００６２】
ＤＮＡワクチンは通常、強力なウイルスプロモーターが挿入された細菌のプラスミドベクター、抗原ペプチドをコードする任意の遺伝子、および１つのポリアデニル化／転写の停止配列から構成される。任意の遺伝子は、全体の蛋白質、もしくは単純に、病原体、腫瘍あるいはその他の物質に関係し、それらに対し防御されることが意図された抗原ペプチド配列をコードすることができる。こうしたプラスミドは、例えばＥ． ｃｏｌｉのような細菌において増殖させることができ、次いで宿主に投与される前に単離され、意図した投与経路に依存した適切な媒体中に調製することができる。次なる投与でプラスミドは、コードされた蛋白質もしくはペプチドが生産される場所である宿主の細胞によって取り込まれる。プラスミドベクターは、哺乳類宿主中でのプラスミド複製を防ぎ、またその動物の染色体ＤＮＡ内に取り込まれることを防ぐために、真核細胞中で機能を示す複製オリジンを取り除いた状態で作製されることが好ましい。ＤＮＡ予防接種に関する情報は、Ｄｏｎｎｅｌｌｙらにより提供されている（”ＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｓ” Ａｎｎ． Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９７， １５：６１７−６４８、その開示は、参照によりその全文を本明細書に組み入れるものとする。
【００６３】
本発明の実施形態においては、「むき出しの」ＤＮＡとしてポリヌクレオチドが投与／送達される（例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１７４５−１７４９， １９９３、およびＣｏｈｅｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１６９１−１６９２， １９９３による記載）。むき出しのＤＮＡの取り込みは、細胞へ効率的に送達される金などの不活性な金属のビーズ、もしくは生分解性のビーズ上にＤＮＡをコーティングすることにより増加させることが可能である； あるいはリン酸カルシウムのような周知の形質導入促進剤の使用によって、増加させることが可能である。
【００６４】
ＤＮＡは、例えばリポソームのようなキャリアー、およびリザーバー媒体の中に捕捉されるあらゆるものと共に投与することができる。典型的に、そのようなリポソームはカチオン性であり、例えばイミダゾリウム誘導体（ＷＯ９５／１４３８０）、グアニジン誘導体（ＷＯ９５／１４３８１）、ホスファチジルコリン誘導体（ＷＯ９５／３５３０１）、ピペラジン誘導体（ＷＯ９５／１４６５１）およびビグアナイド誘導体である。
【００６５】
本発明のワクチンは、有利にはさらにアジュバントを含むことができる。本発明のワクチン用の好適なアジュバントは、免疫グロブリンＥペプチド免疫原に対する抗体応答を増強できるアジュバントを含んでなる。アジュバントは当技術分野において周知である（Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ−Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ， １９９５， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌｕｍｅ ６， Ｅｄｓ． Ｐｏｗｅｌｌ， Ｍ． Ｆ．， ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ， Ｍ． Ｊ．， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎ， ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘ）。本発明の、免疫原と共に使用するための好ましいアジュバントは、アルミニウムもしくはカルシウム塩類（水酸化物またはリン酸塩）を含む。
【００６６】
本発明の、免疫原と共に使用するための好ましいアジュバントには、アルミニウムあるいはカルシウム塩類（水酸化物またはリン酸塩）、水中油型エマルジョン（ＷＯ ９５／１７２１０、ＥＰ ０ ３９９ ８４３）、もしくはリポソームのような微粒子のキャリアー（ＷＯ ９６／３３７３９）が含まれる。南アメリカの樹木Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮由来のアジュバント活性を有する免疫学的に活性なサポニン分画（例えばＱｕｉｌ Ａ）は、特に好ましい。 Ｑｕｉｌ Ａの誘導体、例えばＱＳ２１ （Ｑｕｉｌ Ａ誘導体のＨＰＬＣによる精製画分）、およびその生産の方法が、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。ＱＳ２１（ＱＡ２１として知られている）の中で、ＱＡ１７のような他の画分も開示されている。３ Ｄｅ−Ｏアシル化されたモノホスホリル脂質ＡはＲｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ， Ｍｏｎｔａｎａ社により製造されている周知のアジュバントである。それはＧＢ ２１２２２０４Ｂの中で教示される方法により調製できる。３ Ｄｅ−Ｏアシル化されたモノホスホリル脂質Ａの好ましい形態は、直径０．２μｍ未満の小さな粒子サイズを有するエマルジョンの形態である（ＥＰ ０ ６８９ ４５４ Ｂ１）。
【００６７】
アジュバントはまた、Ｑｕｉｌ Ａのようなムラミルジペプチドおよびサポニン、３Ｄ−ＭＰＬ（３−Ｏ脱アシル化されたモノホスホリル脂質Ａ）のような細菌のリポ多糖類、もしくはＴＤＭを含むが、限定されるものではない。さらに典型的な代案として、蛋白質は、リポソームのような微粒子内、もしくは一般式（Ｉ） ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ａ−Ｒ（ここでｎは１〜５０であり、Ａは結合もしくは −Ｃ（Ｏ）−、ＲはＣ１−５０アルキルもしくはフェニルＣ１−５０アルキル （ＷＯ ９９／５２５４９）である）のポリオキシエチレンエーテルの非微粒子懸濁液もしくは水溶液中にカプセル化することができる。
【００６８】
特に好ましいアジュバントは、３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１（ＥＰ ０ ６７１ ９４８ Ｂ１）の組合せ、３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油型エマルジョン（ＷＯ ９５／１７２１０、ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５７１４）、３Ｄ−ＭＰＬをその他のキャリアーと共に製剤化したもの（ＥＰ ０ ６８９ ４５４ Ｂ１）、もしくはＱＳ２１をコレステロール含有リポソーム中で製剤化したもの（ＷＯ ９６／３３７３９）、あるいは免疫刺激性オリゴヌクレオチド（ＷＯ ９６／０２５５５）である。
【００６９】
好適な、薬学的に許容できる賦形剤の例には、水、リン酸緩衝化生理食塩水、等張の緩衝液を含む。
【００７０】
またポリオキシエチレンヒマシ油もしくはカプリル酸／カプリン酸グリセリドとポリオキシエチレンソルビタンモノエステルとの混合物および抗原を含んでなるアジュバント調製物は、粘膜への局所的投与後に全身性免疫応答を引き起こすことができる（ＷＯ ９４１７８２７）。この特許出願は、ＴＷＥＥＮ２０ＴＭ（ポリオキシエチレンソルビタンモノエステル）およびＩｍｗｉｔｏｒ７４２ＴＭ（カプリル酸／カプリン酸グリセリド）の組合せか、もしくはＴＷＥＥＮ２０ＴＭとポリオキシエチレンヒマシ油の組合せが、鼻腔内免疫化の後に全身性免疫応答を増強することができることを開示している。Ｎｏｖａｓｏｍｅｓ（米国特許第５，１４７，７２５）は、抗原を内包するポリオキシエチレンエーテルおよびコレステロールを含んでなる小薄膜（ｐａｕｃｉｌａｍｅｎａｒ）小胞の構造体であり、全身投与の後に抗原への免疫応答を補助することができる。
【００７１】
界面活性剤もまた、非イオン性界面活性剤小胞（一般にｎｅｏｓｏｍｅとして知られている、ＷＯ ９５／０９６５１）を形成するような方法により製剤化されている。
【００７２】
粘膜の免疫応答および全身性免疫応答の両方を増強することが知られているその他のアジュバントには、Ｖｉｖｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅおよびＥｓｃｈｅｒｉｃｉａ ｃｏｌｉ由来の細菌の腸毒素（すなわちそれぞれ、コレラ毒素（ＣＴ）、および熱失活性エンテロトキシン（ＬＴ））を含む。ＣＴおよびＬＴは、有毒なＡサブユニットを内部に抱え込んだβ−サブユニットの五環から成るヘテロダイマーである。それらの構造および生物学的活性はＣｌｅｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｆｉｎｋｌｅｓｔｅｉｎ， １９７９， Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２４：７６０−７６９； Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．， １９８０， Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２４： ９１−９７に開示されている。最近、ひとたび細胞から放出されるとＬＴの非毒性型を毒性型に「スイッチオンにする」ために必要な蛋白質分解部位を欠損した、非毒性のＬＴ誘導体が開発された。ＬＴ（ｍＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）と称する）のこの形態は、１９２番目の位置でアミノ酸アルギニンをグリシンに置換することにより蛋白質分解的な開裂を受けなくなり、強いアジュバント活性を保持しながら顕著に毒性が減少していることが示されている。ｍＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）は、したがって、蛋白質分解部位変異体と称される。ｍＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）の製造方法は特許出願ＷＯ ９６／０６６２７に開示されている。その他のＬＴの変異した形態には、ＬＴＡ配列の６９番目の位置におけるアラニンのグリシンへの置換を含むｍＬＴ（Ａ６９Ｇ）などの活性部位突然変異体が含まれる。粘膜のワクチンとしてのｍＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）の使用は、特許出願ＷＯ ９６／０６６２７に記載されている。そのようなアジュバントは、有利なことに、本発明の非イオン性界面活性剤と組み合わせることができる。
【００７３】
その他のアジュバントもしくは免疫刺激物質は、メチル化されていないＣｐＧジヌクレオチド（ＷＯ ９６／０２５５５に記載されている）を含むオリゴヌクレオチドアジュバント系を含む。特に好ましい免疫刺激物質はＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドであり、その組成物はより大型の動物における免疫応答の誘発および増強において強力である。好ましいオリゴヌクレオチドは以下の配列を有する：この配列は好ましくは全てのホスホロチオエート修飾されたヌクレオチド間の結合を含んでいる。
【００７４】
オリゴ １：ＴＣＣ ＡＴＧ ＡＣＧ ＴＴＣ ＣＴＧ ＡＣＧ ＴＴ（配列番号１）
オリゴ ２：ＴＣＴ ＣＣＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＣＧＣ ＣＡＴ（配列番号２）
オリゴ ３：ＡＣＣ ＧＡＴ ＧＡＣ ＧＴＣ ＧＣＣ ＧＧＴ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＣＣ ＡＣＧ（配列番号３）。
【００７５】
本発明において利用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当業者に知られた任意の方法（例えば、ＥＰ ４６８５２０記載の方法）を用いて合成することができる。便利なことに、そのようなオリゴヌクレオチドは自動合成機を利用して、合成することができる。
【００７６】
あるいはまた、ポリオキシエチレンエーテルもしくはエステルは、キトサンもしくは他のポリカチオン性のポリマー、ポリラクチドおよびポリラクチド−コ−グリコライド粒子、多糖もしくは化学的修飾多糖から構成される粒子、コレステロール非含有リポソームおよび脂質をベースとする粒子、水中油型エマルジョン（ＷＯ ９５／１７２１０）、グリセリンモノエステルから構成された粒子等から構成されるワクチン送達体と組合せることができる。
【００７７】
本発明の目的は、皮膚へ薬剤もしくはワクチンを迅速かつ高い投与効率で投与することである。これは、リザーバー媒体として高い可溶性を有する炭水化物類の使用を含んでなる多くの手段によって、および投与の間にマイクロニードル部材を撹拌させるおよび／または加温することによってさらに増強させることができる。
【００７８】
各ワクチン投与における蛋白質の量は、典型的なワクチン接種において、接種を受けた人に著しい負の副作用を引き起こすことなく免疫防御応答をもたらす量として選択されている。そのような量はどのような特異的免疫原を使用し、どのようにそれを示すかに依存して変化し得るであろう。一般的に、各投与量は１〜１０００μｇ、好ましくは１〜５００μｇ、より好ましくは１〜１００μｇの蛋白質を含んでなり、最も好ましくは１〜５０μｇの範囲である。特定のワクチンにとっての最適の量は、被験者における適切な免疫応答の観察を含む標準的な研究により確認することができる。初回のワクチン接種に続いて被験者は、適切に間隔を置いて１回もしくは数回のいくつかの追加免疫を受けることができるだろう。
【００７９】
本発明の組成物は、予防目的および治療目的のために使用することができる。したがって本発明は、感染症もしくは癌、あるいはアレルギー、または自己免疫疾患に罹患性を有する、もしくはそれらにかかった哺乳動物の治療方法を提供する。本発明のさらなる一態様においては、医学分野に使用するための、本明細書に記載のワクチンが提供される。ワクチン調製方法は、一般的にはＮｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｖｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐａｒｋ Ｐｒｅｓｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， Ｍａｒｙｌａｎｄ， Ｕ．Ｓ．Ａ １９７８に記載されている。
【００８０】
本発明の組成物は予防目的および治療目的の両方のために使用され得る。本発明のさらなる一態様においては、薬剤として使用するための、本明細書に記載のワクチンが提供される。
【００８１】
本発明は以下の実施例によりさらに説明されるが、これにより限定されるものではない。
【００８２】
【実施例】
実施例１　ワクチン用糖コーティングの組成物
Ｂ型肝炎ワクチンを調製し、金属針上にコーティングするに先立ち４種類の異なる糖類を用いて配合した。肝炎ワクチン（ＨｅｐＢ）は、組換えＢ型肝炎表面抗原粒子（Ｈａｒｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ， １９８３， Ｄｅｖｅｌｏｐ． Ｂｉｏｌ． Ｓｔａｎｄａｒｄ， ５４， １２５； Ｇｒｅｇｇ ｅｔ ａｌ， １９８７， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ５， ４７９； 欧州特許出願第０ ２６６ ８４６および０ ２９９ １０８に記載）である。簡潔に述べれば、金属針をＨｅｐＢと糖類の溶液中に浸し、次いで凍結乾燥した。針上へのＨｅｐＢのコーティングは、コーティングし乾燥した針をゲルに適用することにより確認した。
【００８３】
材料
ラクトース溶液　１５．７５％
スクロース溶液　１５．７５％
スクロースから調製した８０％スクロース水溶液
ラフィノース溶液　１５．７５％（Ｄ（＋）−ラフィノース５水和物、Ｆｌｕｋａ ４１１３０８／１ １２９００）
トレハロース溶液　１５．７５％
ＥＰＩ ２００１Ｂ６０ＣＢ０９６
ＨｅｐＢ、精製バルク品
針：ｎｏ．８針、品番１２１ ２９２（Ｐｒｙｍ社、５２２２０ Ｓｔｏｌｂｅｒｇ、ドイツ）
ゲル： Ｎｏｖｅｘプレキャストゲル　４〜２０％　トリス−グリシンゲル（１．０ｍｍ×　１５ウエル）
４種の異なる糖中での、１７８μｇ／ｍｌ Ｈｅｐ Ｂによる針のコーティングおよび凍結乾燥
１７８μｇ／ｍｌのＨｅｐ Ｂを３．１５％（ｗ／ｖ）の４種の異なる糖類の中で配合した。針は、凍結乾燥用ガラスバイアルに使用される通常のゴム栓の上に固定される。針は、液状のＨｅｐ Ｂ組成液の中に一度漬け込む（深さ２．５ｃｍ）により、コーティングされる。針およびゴム栓は通常の凍結乾燥ガラスバイアル中に置かれ、標準の凍結乾燥サイクルに供した。凍結乾燥後、ガラスバイアルに栓を完全に押し込んでバイアルを密閉した。それにより、コーティングされた針は、保存中密閉されたバイアルの中に保持される。
【００８４】
【表１】
2004504120.tif 000003
【００８５】
製剤化されたＨｅｐ Ｂ（凍結乾燥前）の分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ条件
各組成のサンプルはいかなる還元処理も行うことなくコントロールとしてゲル上にアプライされる。各溶液 （蛋白質として０．５μｇ）３μｌを４〜２０％ トリス−グリシンＮｏｖｅｘゲルにのせた。電気泳動後、銀染色を行う。結果を図８に示す。ゲルのレーンは次のものに相当する：
１．　分子量マーカー（Ｂｉｏｌａｂｓ社製）；
２．　精製バルクＨｅｐＢ；
３．　分子量マーカー（Ｂｉｏｌａｂｓ社製）；
４および５．　ラクトースでコーティングしたＨｅｐ Ｂ；
６および７　スクロースでコーティングしたＨｅｐ Ｂ；
８および９．　ラフィノ−スでコーティングしたＨｅｐ Ｂ；
１０および１１．　トレハロースでコーティングしたＨｅｐＢ。
【００８６】
コーティングされた針（凍結乾燥後）の分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ条件
各組成の乾燥させたコーティング針を、ゲルの内部に短時間（深さ２ｃｍ）挿入することで直接ゲルにアプライした。還元処理は行わない。電気泳動後、銀染色を行う。結果を図９に示す。ゲルのレーンは次のものに相当する：
１．　分子量マーカー（Ｂｉｏｌａｂｓ社製）；
２．　精製バルクＨｅｐＢ；
３， ４および５．　ラクトース組成による凍結乾燥針；
６， ７および８．　スクロース組成による凍結乾燥針；
９， １０および１１．　ラフィノ−ス組成による凍結乾燥針；
１２， １３および１４．　トレハロース組成による凍結乾燥針。
【００８７】
結果
針の上における液状の組成物（図２参照）と凍結乾燥された組成物（図３参照）で分解は見られない。液状および凍結乾燥されたサンプルは、共にゲル上で類似した泳動像を与える。ラクトース、スクロース、ラフィノースあるいはトレハロースで違いはない。各針の上に蛋白質が存在する。
【００８８】
実施例２　放出の動力学的テスト
実施例１に記載のコーティング針をゲルに挿入後、直ちに針を抜き取り、４〜２０％ トリス−グリシンＮｏｖｅｘゲルへ１分間アプライしたものと比較した。ここでも、電気泳動の後に銀染色を実施し、ＨｅｐＢ蛋白質を染色した。結果を図１０に示す。各レーンは次のものに相当する：
１． 挿入１分後に抜き取った、ラクトース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
２． 挿入後直ちに抜き取った、ラクトース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
３． 空のレーン；
４． 挿入１分後に抜き取った、スクロース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
５． 挿入後直ちに抜き取った、スクロース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
６． 空のレーン；
７． 挿入１分後に抜き取った、ラフィノース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
８． 挿入後直ちに抜き取った、ラフィノース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
９． 空のレーン；
１０． 挿入１分後に抜き取った、トレハロース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
１１． 挿入後直ちに抜き取った、トレハロース組成液におけるＨｅｐＢコーティング針；
１２， １３， １４． 空のレーン；
１５． 分子量マーカー（Ｂｉｏｌａｂｓ社製）。
【００８９】
実施例３　高濃度スクロース組成における４４４μｇ／ｍｌ ＨｅｐＢコーティング針の凍結乾燥
Ｈｅｐ Ｂ（８８８μｇ／ｍｌ）およびスクロース溶液（６０％ ｗ／ｖ）の出発溶液から、４４４μｇ／ｍｌ Ｈｅｐ Ｂ、４０％スクロース（ＰＢＳ溶液中）のコーティング調製物を得た。実施例１同様、針は、凍結乾燥に使用される通常のゴム栓の上に固定される。それらの針は、液状のＨｅｐ Ｂ組成液の中に一度もしくは５度漬け込む（深さ２．５ｃｍ）ことよりコーティングした（針は毎回のコーティング工程間で乾燥させた）。針およびゴム栓を通常の凍結乾燥ガラスバイアル中に入れ、標準の凍結乾燥サイクルに供した。凍結乾燥後、ガラスバイアルに栓を完全に押し込んでバイアルを閉めた。それにより、コーティングされた針は、保存中密閉されたバイアルの中に保持される。
【００９０】
【表２】
2004504120.tif 000004
【００９１】
コーティングされた針（凍結乾燥後）の分析およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ条件
各組成の乾燥させたコーティング針を、ゲル内部に短時間（深さ２ｃｍ）挿入することで直接ゲルにアプライした。還元処理は行わない。ゲルは４〜２０％ トリス−グリシンＮｏｖｅｘである。電気泳動後、銀染色を行う。５回浸した結果を、図１１に示す。各レーンは次のものに相当する：
１．　精製バルクＨｅｐＢ １μｇ；
２．　精製バルクＨｅｐＢ ０．５μｇ；
３．　精製バルクＨｅｐＢ ０．３μｇ；
４　精製バルクＨｅｐＢ ０．２μｇ；
５　精製バルクＨｅｐＢ ０．１μｇ；
６　精製バルクＨｅｐＢ ０．０５μｇ；
７　精製バルクＨｅｐＢ ０．０１μｇ；
８／９／１０／１１．　空のレーン；
１２／１３／１４／１５．　４０％スクロース組成液による５層のコーティング凍結乾燥針。
【００９２】
１回浸した結果を、図１２に示す。各レーンは次のものに相当する：
１．　精製バルクＨｅｐＢ １μｇ；
２．　精製バルクＨｅｐＢ ０．５μｇ；
３．　精製バルクＨｅｐＢ ０．３μｇ；
４　精製バルクＨｅｐＢ ０．２μｇ；
５　精製バルクＨｅｐＢ ０．１μｇ；
６　精製バルクＨｅｐＢ ０．０５μｇ；
７　精製バルクＨｅｐＢ ０．０１μｇ；
８／９／１０／１１．　空のレーン；
１２／１３／１４／１５．　４０％スクロース組成液による１層のコーティング凍結乾燥針。
【００９３】
このように、４４４μｇ／ｍｌのＨｅｐ Ｂ、および４０％溶液のスクロースを使用して、１本の針当たり１μｇ以上、および５回の浸漬操作後には約５μｇの量をコーティングすることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、マイクロニードル型パッチ部材の一部を示す図である。
【図２】
図２は、リザーバー媒体でコーティングされた、図１に記載したマイクロニードル型パッチ部材の一部の断面図である。
【図３】
図３は、湾曲したブレードを有するマイクロブレードを示す図である。
【図４】
図４は、ブレードへのリザーバーの固着を助けるための孔を有するマイクロブレードを示す図である。
【図５】
図５は、円形あるいは多角形の断面を有する微小突出部を示す図である。Ａは微小突出部を側面からの断面で示す図であり、Ｂはその内部にリザーバー媒体を固着させた状態を示す図である。点描を施した部分がリザーバー媒体を示す。
【図６】
図６は、Ｖ字型の切断面を生じる溝型の微小突出部を示す図である。
【図７】
図７は、５つの頂点をもつ星型のような複雑な形状を有する微小突出部を示す図である。
【図８】
図８は、各種の糖を含む組成液におけるＨｅｐ Ｂ（凍結乾燥前）のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図９】
図９は、各種の糖を含む組成液でコーティングされたＨｅｐ Ｂ（凍結乾燥後）のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図１０】
図１０は、コーティング針をゲルに挿入後、直ちに針を抜き取ったものと１分間アプライしたものとを比較して、薬剤放出の状態を試験したＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図１１】
図１１は、５回の浸漬処理によりコーティングされた針（凍結乾燥後）のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図１２】
図１２は、１回の浸漬処理によりコーティングされた針（凍結乾燥後）のＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果である。
【図１】
2004504120.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2004504120.tif 000011
【図８】
2004504120.tif 000012
【図９】
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【図１０】
2004504120.tif 000014
【図１１】
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【図１２】
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【国際公開パンフレット】
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2004504120.tif 000018
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【国際調査報告】
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2004504120.tif 000053
2004504120.tif 000054
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