(57)【要約】本発明は、新規の哺乳動物サイトカインポリペプチドを含む、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン；こうしたペプチドを作製する方法、それらを使用して多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化が関与する状態および疾患を治療する方法；並びに、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変させる化合物を同定する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４若しくは配列番号６のアミノ酸配列；
（ｃ）（ｂ）のいずれかのアミノ酸配列の断片であって、アミノ酸ＡないしＢの間で始まり、アミノ酸ＹないしＺの間で終わるアミノ酸配列を含んでなり（ここで、Ａ、Ｂ、Ｙ、およびＺについての数値の組は、配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝５１、Ｂ＝５４、Ｙ＝６６、およびＺ＝６８；配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝９６、Ｂ＝９８、Ｙ＝１０９、およびＺ＝１２１；配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝１２０、Ｂ＝１２５、Ｙ＝１４０、およびＺ＝１４４；並びに、配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝１５２、Ｂ＝１５５、Ｙ＝１６６、およびＺ＝１６８からなる群より選択される）；ここで、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、前記断片；
（ｄ）少なくとも２０の隣接するアミノ酸を含んでなり、そしてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、（ｂ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｅ）少なくとも３０の隣接するアミノ酸を含んでなり、そしてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、（ｂ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｆ）ヘリックスＡおよび／またはヘリックスＤアミノ酸配列を含んでなり、そしてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、（ｂ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；並びに
（ｇ）少なくとも３０のアミノ酸を含んでなり、そして（ｂ）−（ｆ）のいずれかのアミノ酸配列とアミノ酸同一性を共有するアミノ酸配列（ここで、アミノ酸パーセント同一性は、少なくとも９７．５％、少なくとも９９％、および少なくとも９９．５％からなる群より選択され；そして、ここで、前記アミノ酸配列からなるポリペプチドはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する）；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ポリペプチド。
【請求項２】
配列番号４のアミノ酸配列を含んでなる、請求項１のポリペプチド。
【請求項３】
配列番号６のアミノ酸配列を含んでなる、請求項１のポリペプチド。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれか１項のポリペプチドをコードする単離核酸。
【請求項５】
（ａ）配列番号１のヌクレオチド５８ないし６５７；
（ｂ）配列番号３のヌクレオチド１４１ないし７４０；
（ｃ）配列番号５のヌクレオチド１４１ないし７４０；並びに
（ｄ）（ａ）−（ｃ）の変異体
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項４の核酸。
【請求項６】
配列番号１、配列番号３、および配列番号５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項４の核酸。
【請求項７】
請求項４ないし６のいずれか１項の核酸に対応する、単離ゲノム核酸。
【請求項８】
請求項４ないし７のいずれか１項の核酸のヌクレオチド配列とヌクレオチド配列同一性を共有するヌクレオチド配列を含んでなり、ヌクレオチド配列パーセント同一性が、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、少なくとも９９％、および少なくとも９９．５％からなる群より選択される、単離核酸。
【請求項９】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有するポリペプチドをさらにコードする、請求項７または請求項８のいずれか１項の核酸。
【請求項１０】
請求項４ないし６または請求項９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの核酸を含んでなる発現ベクター。
【請求項１１】
請求項４ないし６または請求項９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの核酸を含んでなる組換え宿主細胞。
【請求項１２】
核酸が宿主細胞ゲノムへ組込まれている、請求項１１の組換え宿主細胞。
【請求項１３】
請求項４ないし６または請求項９のいずれか１項の核酸によりコードされるポリペプチドを産生する方法であって、前記ポリペプチドの発現を促進する条件の下で組換え宿主細胞を培養することを含んでなり、ここで組換え宿主細胞が、請求項４ないし６または請求項９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの核酸を含む、前記方法。
【請求項１４】
前記ポリペプチドを精製することをさらに含んでなる、請求項１３の方法。
【請求項１５】
請求項１３の方法により産生されるポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドへ結合する単離抗体。
【請求項１７】
モノクローナル抗体である、請求項１６の抗体。
【請求項１８】
ヒト抗体である、請求項１６の抗体。
【請求項１９】
ヒト化抗体である、請求項１６の抗体。
【請求項２０】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドの活性を阻害する、単離抗体。
【請求項２１】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドの阻害剤を設計する方法であって、こうしたポリペプチドの三次元構造を決定し、基質の可能な結合部位に関して三次元構造を解析し、予測される反応部位を取込む分子を合成し、そして分子のポリペプチド阻害活性を測定する工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２２】
（ａ）請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドと試験化合物を混合し；そして
（ｂ）試験化合物が前記ポリペプチドのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変するかどうかを決定する
ことを含んでなる、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変する化合物を同定する方法。
【請求項２３】
（ａ）請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチド、および前記ポリペプチドの結合パートナーと試験化合物を混合し；そして
（ｂ）試験化合物が前記ポリペプチドの結合活性を阻害するかどうかを決定する
ことを含んでなる、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの結合活性を阻害する化合物を同定する方法。
【請求項２４】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドのアンタゴニストを提供することを含んでなる、乾癬を治療する方法。
【請求項２５】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドのアンタゴニストを提供することを含んでなる、腸上皮において上皮障壁機能を強める方法。
【請求項２６】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドのアンタゴニストを提供することを含んでなる、腸の炎症状態を治療する方法。
【請求項２７】
状態が、大腸炎、クローン病、および炎症性腸疾患からなる群より選択される、請求項２６の方法。
【請求項２７】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドを提供することを含んでなる、肺上皮において上皮障壁機能を強める方法。
【請求項２８】
請求項１ないし３または請求項１５のいずれか１項のポリペプチドを提供することを含んでなる、炎症性呼吸状態を治療する方法。
【請求項２９】
状態が、喘息およびアレルギーより選択される、請求項２８の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）に基づいて、米国仮特許出願第６０／２９０，２３９号（２００１年５月１０日提出）の優先権を主張し、前記出願はそのまま本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、このサイトカインポリペプチドファミリーの新規メンバーを含む、ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および−４と、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を作製して使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
サイトカインポリペプチド群は、分泌ポリペプチド群の関連したグループであり、４つのαヘリックスの「束ねられた（ｂｕｎｄｌｅｄ）」配置を特徴とする三次元構造を有する。この「４αヘリックスバンドル」（４ＡＨＢ）ポリペプチド群のファミリーメンバーには、造血増殖因子、インターフェロン、およびホルモンも含まれる。４ＡＨＢサイトカインポリペプチド群は、いずれも造血細胞または免疫細胞のような細胞の多能性幹細胞前駆体からの増殖または分化のいずれかを調節することに関与し、様々なサイトカインの組み合わせが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、赤血球、巨核球、肥満細胞、好酸球、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞、および破骨細胞のような様々な細胞型の形成に影響を及ぼす。しかしながら、これらサイトカインの亜群には、その受容体が様々な組織において広く発現されていて、造血若しくは免疫細胞系以外の細胞の生物学的活性にも影響を及ぼすものがある（ＮｉｃｏｌａおよびＨｉｌｔｏｎ，１９９９，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：１−６５）。
【０００４】
一般的に、しかし普遍的ではなく存在しているサイトカインファミリーのポリペプチド群の構造特性には、サイトカイン前駆体ポリペプチドの、細胞膜を通過する動き（分泌サイトカインを産生する）または細胞膜の位相的に外部の表面への動き（タンパク分解的に切断されて細胞から放出される、膜結合型のサイトカインを産生する）を指示するシグナル配列が含まれる。４ＡＨＢサイトカインファミリーのほとんどのメンバーはモノマー分子として活性であるが、機能性ホモ二量体を生じるか、または可溶型のサイトカイン受容体と相互作用してヘテロ二量体分子を生じるものもある（ＮｉｃｏｌａおよびＨｉｌｔｏｎ，１９９９，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：１−６５）。４ＡＨＢサイトカイン中のシステイン残基は、例えばレプチン／ＯＢの場合（Ｒｏｃｋら，１９９６，Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  ２８：６４９−６５２）、サイトカイン構造を安定化させる分子内ジスルフィド結合に、またはＭ−ＣＳＦにおけるように（Ｐａｎｄｉｔら，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５８：１３５８−１３６２）、多量体形成に関連した分子間ジスルフィド結合に関わることが見出されている。４ＡＨＢサイトカインの４つのαヘリックス、ヘリックスＡないしＤは、「アップ、アップ、ダウン、ダウン」立体配置において配置されている（Ｋａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７）。インターロイキン−６（ＩＬ−６）サイトカインのＡおよびＤヘリックスには、ＩＬ−６受容体α鎖との疎水性結合相互作用を生じるのに重要な疎水性残基が含まれることが見出されていて、これには受容体の鎖上の荷電残基と塩−架橋クラスターを生じると考えられる荷電残基が散在し、近傍の疎水性残基を水分子から遮蔽して、サイトカイン−受容体相互作用を安定化させる（Ｇｒｏｔｚｉｎｇｅｒら，１９９７，ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２７：９６−１０９）。４ＡＨＢサイトカインファミリーの造血細胞増殖因子であるトロンボポエチン（ＴＰＯ）のＡおよびＤヘリックスにおける機能性残基を同定する突然変異試験の結果（Ｊａｇｅｒｓｃｈｍｉｄｔら，１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３３３：７２９−７３４）は、このサイトカイン−受容体相互作用のモデルに一致している。
【０００５】
構造的に、４ＡＨＢサイトカインファミリーは、２つの群、つまりより短いコアαヘリックスと二本鎖βシート構造をヘリックス間ループ中に有する「短鎖」サイトカインと、より長いコアαヘリックスと、多くの場合、より短いαヘリックスをループ領域内に有する「長鎖」サイトカインへ分けることが可能である。４ＡＨＢサイトカインファミリーはまた、それらが相互作用する受容体複合体（群）の種類に基づいて細分してもよい。例えば４ＡＨＢサイトカインは、ＪＡＫの様々なメンバーや細胞内シグナル伝達分子のＳＴＡＴファミリーを介して調節シグナルを伝播するＩ型若しくはＩＩ型サイトカイン受容体へ結合可能であるか、またはそれらは、内在性チロシンキナーゼ活性のある受容体へ結合可能である（ＮｉｃｏｌａおよびＨｉｌｔｏｎ，１９９９，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：１−６５）；さらに、４ＡＨＢサイトカインの受容体には、単鎖受容体、ホモ二量体、他のサイトカインの受容体複合体にも存在する（「共有される」）場合があるα「サイトカイン結合」鎖およびβ「シグナル伝達」鎖のヘテロ二量体、並びに３以上の受容体鎖のある受容体複合体のように、多様な機能コンホメーションが観察される（Ｃｏｓｍａｎ，１９９３，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ５：９５−１０６）。
【０００６】
造血細胞および免疫細胞の分化におけるその役割のために、４ＡＨＢサイトカインポリペプチド群は、広範囲の生物学的プロセスと関連した病態および状態に関与する．例えば、４ＡＨＢサイトカインのエリスロポエチン（ＥＰＯ）とその受容体（ＪＡＫ２およびＳＴＡＴ５を含む経路を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインを有するホモ二量体）との相互作用により赤血球前駆体細胞の成体における増殖および分化が刺激されるので、ＥＰＯは貧血を治療するのに有用なのである。４ＡＨＢサイトカインのトロンボポエチン（ＴＰＯ）および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）も造血刺激活性を有する。４ＡＨＢサイトカインの他の生物学的効果には、神経細胞および角化細胞の発生の調節、全身代謝の調節（例えば、成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン（ＰＲＬ）、およびレプチン／ＯＢにより明示される効果）；感染または損傷への好炎症応答または自然免疫の刺激（例えば、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−６、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、および白血病阻害因子（ＬＩＦ））；抗ウイルス活性（インターフェロン−α、β、およびγのようなインターフェロン）；並びに、先天性免疫の刺激と、ヘルパーＴ細胞のＴｈ１細胞運命（ＩＬ−１２）若しくはＴｈ２細胞運命（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、およびＩＬ−１５）への分化の推進が含まれる（ＮｉｃｏｌａおよびＨｉｌｔｏｎ，１９９９，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２：１−６５）。
【０００７】
多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖または発生が関与する状態および疾患へのより有効な治療法を開発するためには、これまでに同定されていない４ＡＨＢサイトカインポリペプチドファミリーメンバーについての情報が必要とされる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
発明の概要
本発明は、新規ヒトサイトカインファミリーメンバー、ＩＭＸ１２９８４０−１、ＩＭＸ１２９８４０−２、ＩＭＸ１２９８４０−３、およびＩＭＸ１２９８４０−４の発見に基づく。
【０００９】
本発明は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４若しくは配列番号６のアミノ酸配列；
（ｃ）アミノ酸ＡないしＢの間で始まり、アミノ酸ＹないしＺの間で終わるアミノ酸配列（ここで、Ａ、Ｂ、Ｙ、およびＺについての数値の組は、配列番号２のＡ＝４４、Ｂ＝４７、Ｙ＝５９、およびＺ＝６１；配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝５１、Ｂ＝５４、Ｙ＝６６、およびＺ＝６８；配列番号２のＡ＝８９、Ｂ＝９１、Ｙ＝１０２、およびＺ＝１１２；配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝９６、Ｂ＝９８、Ｙ＝１０９、およびＺ＝１２１；配列番号２のＡ＝１１１、Ｂ＝１１６、Ｙ＝１３１、およびＺ＝１３５；配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝１２０、Ｂ＝１２５、Ｙ＝１４０、およびＺ＝１４４；配列番号２のＡ＝１４３、Ｂ＝１４６、Ｙ＝１５７、およびＺ＝１５９；並びに、配列番号４若しくは配列番号６のＡ＝１５２、Ｂ＝１５５、Ｙ＝１６６、およびＺ＝１６８からなる群より選択される）；
（ｄ）少なくとも２０の隣接するアミノ酸を含んでなる、（ａ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｅ）少なくとも３０の隣接するアミノ酸を含んでなる、（ａ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｆ）ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、（ａ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｇ）ヘリックスＡおよび／またはヘリックスＤアミノ酸配列を含んでなる、（ａ）−（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列の断片；
（ｈ）少なくとも２０のアミノ酸を含んでなり、そして（ａ）−（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列とアミノ酸同一性を共有するアミノ酸配列（ここで、アミノ酸パーセント同一性は、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、少なくとも９９％、および少なくとも９９．５％からなる群より選択される）；
（ｉ）（ｈ）のアミノ酸配列であって、前記（ｈ）のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドが、（ａ）−（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドへも結合する抗体へ結合する、前記アミノ酸配列；並びに、
（ｊ）ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有する、（ｈ）または（ｉ）のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるか、本質的にそれからなるか、または、より好ましくはそれを含んでなる、単離ポリペプチドを提供する。
【００１０】
本発明の別の側面は、本発明のポリペプチドをコードする単離核酸であって、好ましい態様は、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド５８ないし６５７；
（ｂ）配列番号３のヌクレオチド１４１ないし７４０；
（ｃ）配列番号５のヌクレオチド１４１ないし７４０；並びに
（ｄ）（ａ）−（ｃ）の変異体
からなる群より選択されるヌクレオチド配列からなるか、または、より好ましくはそれを含んでなる、単離核酸である。
【００１１】
本発明の追加の好ましい態様は、配列番号１、配列番号３、および配列番号５からなる群より選択されるヌクレオチド配列からなるか、または、より好ましくはそれを含んでなる単離核酸である。
【００１２】
本発明はまた、本発明の核酸に対応する単離ゲノム核酸を提供する。
本発明の別の側面は、本発明のポリペプチド群をコードする単離核酸であり、そして、好ましくは少なくとも１５ヌクレオチドの長さを有し、本発明のポリペプチド群をコードする核酸へ中程度ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする単離核酸である。本発明の好ましい態様において、こうした核酸は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有するポリペプチドをコードするか、または本発明の核酸のヌクレオチド配列とヌクレオチド配列同一性を共有するヌクレオチド配列を含み、ここでヌクレオチド配列パーセント同一性は、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、少なくとも９９％、および少なくとも９９．５％からなる群より選択される。
【００１３】
本発明によりさらに提供されるのは、本発明の少なくとも１つの核酸を含んでなる発現ベクターおよび組換え宿主細胞と、前記核酸が宿主細胞ゲノムへ組込まれている、好ましい組換え宿主細胞である。
【００１４】
また提供されるのは、本発明の核酸によりコードされるポリペプチドを産生する方法であって、該方法は、前記ポリペプチドの発現を促進する条件の下で組換え宿主細胞を培養することを含んでなり、ここで該組換え宿主細胞は、本発明の少なくとも１つの核酸を含む。本発明により提供される好ましい方法は、前記ポリペプチドを精製することをさらに含む。本発明の別の側面において、前記方法により産生されるポリペプチドが提供される。
【００１５】
本発明のさらなる側面は、本発明のポリペプチド群へ結合する単離抗体、好ましくはモノクローナル抗体、また好ましくはヒト抗体またはヒト化抗体であって、そして好ましくは、ここで該抗体は前記ポリペプチド群の活性を阻害する。
【００１６】
さらに本発明は、本発明のポリペプチド群の阻害剤を設計する方法を提供し、該方法は、こうしたポリペプチドのいずれかの三次元構造を決定し、可能な基質の結合部位に関して三次元構造を解析し、予測される反応部位を取込む分子を合成し、そしてこの分子のポリペプチド阻害活性を測定する工程を含んでなる。
【００１７】
本発明のさらなる側面において、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変する化合物を同定する方法が提供され、該方法は、
（ａ）本発明のポリペプチドと試験化合物を混合し；そして
（ｂ）試験化合物が前記ポリペプチドのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変するかどうかを決定する
ことを含んでなる。
【００１８】
本発明の別の側面において、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の結合活性を阻害する化合物を同定する方法が提供され、該方法は、
（ａ）本発明のポリペプチド、および前記ポリペプチドの結合パートナーと試験化合物を混合し；そして
（ｂ）試験化合物が前記ポリペプチドの結合活性を阻害するかどうかを決定することを含んでなる。
【００１９】
好ましい態様において、結合パートナーは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである細胞表面受容体であり；より好ましくは、結合パートナーは、サイトカイン受容体ファミリーのメンバーである。
【００２０】
本発明はまた、本発明のポリペプチド群と前記ポリペプチド群のアゴニストからなる群より選択される少なくとも１つの化合物を提供することを含んでなる、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化を強める方法を提供し；該方法の好ましい態様は、患者における前記活性を、本発明の少なくとも１つのポリペプチドを投与することによって強めることをさらに含んでなる。
【００２１】
本発明によりさらに提供されるのは、本発明のポリペプチド群の少なくとも１つのアンタゴニストを提供することを含んでなる、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化を弱める方法であり；該方法の好ましい態様は、患者における前記活性を、本発明のポリペプチド群の少なくとも１つのアンタゴニストを投与することによって弱めることをさらに含んでなり、そしてさらに好ましい態様では、アンタゴニストが前記ポリペプチド群のいずれかの活性を阻害する抗体である。
【００２２】
本発明は、追加的に、サイトカイン−受容体担持細胞またはその発生的に方向づけられた子孫の数を、強められた細胞増殖および／または改変された細胞分化を介して増加させる方法を提供し、該方法は、本発明のポリペプチド群またはそのアゴニストと前記サイトカイン受容体担持細胞を接触させることを含んでなる。好ましい態様において、サイトカイン−受容体担持細胞は多能性細胞であり、さらに好ましい態様において、サイトカイン−受容体担持細胞は造血系の細胞である。
【００２３】
本発明の他の側面において、本発明の１以上のポリペプチド群またはそのアゴニストの治療有効量を患者へ投与することを含んでなる、サイトカイン−受容体担持細胞またはその発生的に方向づけられた子孫の血球減少症を治療する方法が提供される。好ましい態様において、患者はヒト患者であり；そして、さらに好ましい態様において、血球減少症は、造血細胞に影響を及ぼす疾患である。本発明のポリペプチド群の１以上のアンタゴニストの治療有効量を患者へ投与することを含んでなる、サイトカイン−受容体担持細胞またはその発生的に方向づけられた子孫の増殖低下を治療する方法も提供される。好ましい態様において、患者はヒト患者であり；そして、さらに好ましい態様において、増殖低下は癌性若しくは転移性の状態であり；そしてより好ましくは、増殖低下は、白血病のようなリンパ増殖である。
【００２４】
本発明の範囲内にまた含まれるのは、本発明の１以上のポリペプチド群またはそのアゴニストの治療有効量を患者へ投与することを含んでなる、強められたエフェクター機能を有する特定サブクラスの免疫細胞を増加させることによって、病原体および／または腫瘍に抗する免疫活性を強める方法である。好ましい態様において、患者はヒト患者であり；そして、さらに好ましい態様において、強められたエフェクター機能は、ウイルス被感染細胞または癌性細胞へ抗する強められた細胞溶解リンパ球機能である。
【００２５】
本発明によりさらに提供されるのは、本発明のポリペプチドの少なくとも１つのアンタゴニストを提供することを含んでなる、角化細胞または他の皮膚細胞の障害、例えば乾癬のような障害を治療する方法であり；該方法の態様では、本発明のポリペプチド群の少なくとも１つのアンタゴニストを投与することによって患者を治療することをさらに含んでなり、そしてさらなる態様では、アンタゴニストが前記ポリペプチド群のいずれかの活性を阻害する抗体である。
【００２６】
本発明の他の側面は、大腸炎、クローン病、または他の炎症性腸疾患のような障害を治療する方法、そして腸上皮において上皮障壁機能を強める方法であり、こうした方法は、本発明のポリペプチド群の少なくとも１つのアンタゴニストを提供することを含んでなり；該方法の態様では、本発明のポリペプチド群の少なくとも１つのアンタゴニストを投与することによって患者を治療することをさらに含んでなり、そしてさらなる態様では、アンタゴニストが前記ポリペプチド群のいずれかの活性を阻害する抗体である。
【００２７】
本発明によりまた提供されるのは、喘息、アレルギー、または他の炎症性呼吸系若しくは肺疾患のような障害を治療する方法、そして肺上皮において上皮障壁機能を強める方法であり、こうした方法は、本発明のポリペプチド群と前記ポリペプチドのアゴニストからなる群より選択される少なくとも１つの化合物を提供することを含んでなり；該方法の好ましい態様では、本発明の少なくとも１つのポリペプチドを投与することによって患者を治療することを含んでなる。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
発明の詳細な説明
ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン構造の他の４ＡＨＢサイトカインファミリーメンバーに対する類似性
我々は、ヒトの第１９染色体のほぼ１２０ｋｂ領域内に一緒に密集する、構造的に関連する４ＡＨＢサイトカインの群を同定し；これらのヒトサイトカインをＩＭＸ１２９８４０−１、ＩＭＸ１２９８４０−２、ＩＭＸ１２９８４０−３、およびＩＭＸ１２９８４０−４と命名した。ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、および−３サイトカインポリペプチドのアミノ酸配列を、配列番号２、４、および６にそれぞれ提供し、これらのＩＭＸ１２９８４０サイトカイン間のアミノ酸配列類似性を示す並列（アライメント）を以下の実施例１の表１に提示する。我々はまた、ＩＭＸ１２９８４０−４サイトカインポリペプチドの部分アミノ酸配列（配列番号８）；ヒトＩＭＸ１２９８４０−１に対応するマウスのポリペプチドの部分アミノ酸配列（配列番号１０）；および、ヒトＩＭＸ１２９８４０−２に対応するマウスのポリペプチドの完全なアミノ酸配列（配列番号１２）を同定した。
【００２９】
４ＡＨＢサイトカインポリペプチドファミリーのメンバーに共通した典型的な構造要素には、シグナル配列と４つの「コア」αヘリックスが含まれる。シグナル配列はまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのＮ末端に見出され、そして、ＮからＣの順序で、ヘリックスＡ、ループＡＢ、ヘリックスＢ、ループＢＣ、ヘリックスＣ、ループＣＤ、およびヘリックスＤがこれに続く。ＩＭＸ１２９８４０−１サイトカインポリペプチドは、配列番号２のほぼアミノ酸７ないしアミノ酸９の間で始まり、ほぼアミノ酸１９ないしアミノ酸２１の間まで伸びるシグナル配列を有し、このシグナルペプチド（配列番号２のアミノ酸１ないし１９、２０、または２１）の切断により産生される成熟ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０、２１、または２２から始まるアミノ酸配列を有すると予測される。同様に、マウスＩＭＸ１２９８４０−１サイトカインポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸１９の後で切断されるシグナル配列を有し、配列番号１０のアミノ酸２０に対応するＮ末端残基を有する成熟ポリペプチドを産生すると予測される。ＩＭＸ１２９８４０−２および−３サイトカインポリペプチドは、それぞれ配列番号４および６のほぼアミノ酸１３からアミノ酸２５まで伸びるシグナル配列を有し、シグナルペプチド（配列番号４および６のアミノ酸１ないし２５）の切断により産生される成熟ポリペプチドは、いずれの場合においても配列番号４および６のアミノ酸２６から始まるアミノ酸配列を有すると予測される。マウスＩＭＸ１２９８４０−２サイトカインポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸２８の後で切断されるシグナル配列を有し、配列番号１２のアミノ酸２９に対応するＮ末端残基を有する成熟ポリペプチドを産生すると予測される。
【００３０】
ヒトＩＭＸ１２９８４０−１、−２、および−３サイトカインポリペプチド配列（それぞれ、配列番号２、４、および６）とマウスＩＭＸ１２９８４０−２サイトカインポリペプチド（配列番号１２）における４つのαヘリックスの近似位置を以下の表に示す。これらへリックスのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド内の位置は、ＧｅｎＦｏｌｄプログラム（以下の実施例１においてより詳しく記載する）を使用することによって決定し、ＧＭ−ＣＳＦおよびヒツジインターフェロン−τのようなサイトカイン鋳型ポリペプチド構造の既知のαヘリックスに最も密接に適合するＩＭＸ１２９８４０−１中の領域、そしてＧＭ−ＣＳＦとＩＬ−３のある形態（プロテイン・データ・バンク、エントリー番号：１ｊｌｉ）に最も密接に適合するマウスＩＭＸ１２９８４０−２の領域を見出し、（以下の実施例１の表１に示すような）ＩＭＸ１２９８４０−１に対するアミノ酸配列類似性のその高い度合いに基づいて、ＩＭＸ１２９８４０−２および−３内の対応位置を予測した。ヘリックスＢおよびヘリックスＣの予測範囲間の重複は、あるＧｅｎＦｏｌｄ鋳型構造においては伸びたコンホメーションをとり、別の構造においてはらせん構造をとる、これらヘリックス間のループＢＣ領域から生ずるものであり、このループＢＣ領域が異なる４ＡＨＢサイトカインにおいて多様なコンホメーションをとり得る柔軟な領域であることに一致していることに注目されたい。故に、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、他のサイトカインポリペプチドに一致した全体構造を有する。
【００３１】
【表１】
2004535795.tif 000002
当業者は、上記に記載されるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの諸領域の境界が近似的なものであること、そして、こうしたドメインの正確な境界は、例えば（その目的のために利用可能なコンピュータ・プログラムを使用することによって予測可能である）シグナル配列の領域のように、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドファミリー内のメンバーごとに異なる場合があることも認識されよう。
【００３２】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の生物学的活性および機能
組織特異的ｃＤＮＡライブラリー由来のＰＣＲ増幅を実施して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのｃＤＮＡ配列を検出した。これらの実験の結果は、ＩＭＸ１２９８４０−１サイトカイン転写物が、限定しないが、成体の皮膚、肺、腎臓、膵臓、胸腺、および白血球細胞を含む、いくつかの種類の成人および胎児の細胞；胎児の肝臓、脳、および胸腺、並びに、ＣＸ−１結腸腺癌細胞に見出されることを示す。
【００３３】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群に関連した典型的な生物学的活性または機能は、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化の刺激である。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群はまた、肺および腸の上皮のような上皮における障壁機能の生成および／または維持に関連している。細胞増殖活性の刺激を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、受容体ポリペプチドへ結合する。この受容体結合活性は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のヘリックスＡおよびヘリックスＤを含んでなるドメインに関連している。したがって、受容体結合活性を必要とする使用に好ましいＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群には、ヘリックスＡおよびヘリックスＤを有し、細胞増殖活性の刺激を示すものが含まれる。さらに、好ましいＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群には、１以上のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の少なくとも１つのαヘリックス部分と、細胞増殖活性の刺激を有するこれらポリペプチド群のいずれかの断片を含んでなる、オリゴマーまたは融合ポリペプチドが含まれる。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の細胞増殖活性の受容体依存性の刺激は、例えば、受容体ポリペプチド鎖の発現を指示する核酸構築体でトランスフェクトしたＢＡＦ細胞を使用する細胞増殖アッセイにおいて決定可能である（例えば、Ｋａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７の図６を参照されたい）。あるいは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を用いた細胞の処置が細胞内シグナル伝達経路の活性化に及ぼす効果は、受容体ポリペプチド鎖、またはＪＡＫファミリーメンバーの標的のようなシグナル伝達経路キナーゼの他の標的のリン酸化を測定することによってアッセイ可能である（例えば、Ｋａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７の図２を参照されたい）。細胞増殖活性の刺激を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、好ましくは、Ｋａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７の図６Ａに測定されるようなＩＬ−６の細胞増殖活性の最大刺激の少なくとも１０％（より好ましくは、少なくとも２５％、そして最も好ましくは、少なくとも５０％）を有する。細胞内シグナル伝達活性の刺激を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、好ましくは、Ｋａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７の図２Ａに測定されるようなＩＬ−６の細胞内シグナル伝達経路成分リン酸化の最大活性の少なくとも１０％（より好ましくは、少なくとも２５％、そして最も好ましくは、少なくとも５０％）を有する。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とそのアゴニストまたはアンタゴニストが上皮障壁機能に及ぼす効果は、Ａｈｄｉｅｈら，２００１，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８１：Ｃ２０２９−２０３８に記載されるように、経上皮電気抵抗（ＴＥＲ）の測定によりアッセイ可能である。上皮障壁機能を修飾するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とアゴニストまたはアンタゴニストは、未処置上皮において測定されるＴＥＲの少なくとも１５％だけＴＥＲを増加させるかまたは減少させる。本明細書で使用される用語「ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性」には、以下のいずれか１以上が含まれる：細胞増殖活性および細胞内シグナル伝達経路成分リン酸化活性の刺激、上皮障壁機能の修飾、並びにＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群（例えば、ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および／または−４）のｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ活性。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドファミリーの個別メンバーと、これらポリペプチドの断片と他の誘導体がこれらの活性を示す度合いは、標準アッセイ法、特にＫａｌｌｅｎら，１９９９，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１１８５９−１１８６７に開示されるようなアッセイより決定可能である。本明細書では追加の例示アッセイを開示する；当業者は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーの生物学的活性を測定するために、他の同様な種類のアッセイが使用可能であることを理解されよう。
【００３４】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の生物学的活性の別の側面は、このポリペプチドファミリーのメンバーが、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである細胞表面受容体のような特定の結合パートナーへ、そしてより特別には、サイトカイン受容体ファミリーのメンバーへ結合する能力である。本明細書で使用される用語「結合パートナー」には、リガンド、受容体、基質、抗体、他のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、同一のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド（ホモタイピック相互作用または多量体の生成の場合）、および、結合パートナーの特定部分とＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの間の接触または近接によりＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドと相互作用する他のあらゆる分子が含まれる。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のヘリックスＡおよびヘリックスＤがこのサイトカイン−受容体相互作用に関与する場合があるので、これらヘリックス内の疎水性若しくは荷電性残基の突然変異は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の受容体ポリペプチドへの結合を改変させると予測され；そのような突然変異は、サイトカイン−受容体結合を壊す場合があるが、この相互作用の強度を高める場合もある。サイトカイン受容体複合体の１以上の成分へ結合することにより、または、ある成分へは結合するが他の成分へは結合しないことにより、改変されたＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドは、ネイティブなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド（群）による結合を妨げ、そのように優性ネガティブな形式で、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のサイトカイン受容体への結合により仲介される生物学的活性を阻害するように作用する場合がある（例えば、相互作用（Ｇｒｏｔｚｉｎｇｅｒら，１９９７，ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２７：９６−１０９）の表ＩおよびＩＩを参照にすること）。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とその結合パートナー間の結合を検出するかまたは測定するのに適したアッセイは当業者によく知られていて、本明細書に記載する。
【００３５】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化を共通の特徴として共有する疾患または状態、または、その病因において、そのような増殖および／または発生のプロセスにおける欠損に関与する。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドファミリーのメンバーとその基質、リガンド、受容体、結合パートナー、および／または他の相互作用ポリペプチドとの相互作用を遮断するかまたは阻害することは本発明の１つの側面であり、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性の阻害剤の使用により、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の過剰な増殖および／または分化が関与している疾患または状態を治療するかまたは寛解する方法を提供する。こうした阻害剤またはアンタゴニストの例を以下により詳しく記載する。多能性幹細胞前駆体由来の細胞の不十分な増殖および／または分化が関与している状態については、これらの状態を治療するかまたは寛解する方法は、単離ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、またはそれらの活性断片若しくは融合ポリペプチドを提供することによるか、あるいは内因性若しくは外因性のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を活性化する化合物（アゴニスト）を提供することによって、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の量または活性を強めることを含む。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のさらなる使用には、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖または分化が関与している状態および疾患用の診断試薬、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化の研究用の研究試薬、あるいはＩＭＸ１２９８４０サイトカイン受容体を発現する細胞へ治療薬剤を運搬するための担体／標的ポリペプチドとしての使用が含まれる。
【００３６】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドは、配列番号２、４、または６のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドへ十分な度合いのアミノ酸同一性または類似性を共有するポリペプチドであり、（Ａ）当業者により、特有の構造ドメインを共有する場合があるポリペプチドとして同定され、および／または（Ｂ）配列番号２、４、または６のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドと共通の生物学的活性を有し、および／または（Ｃ）他のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群へも特異的に結合する抗体へ結合する。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、天然に存在する供給源から単離することが可能であるか、または天然に存在するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と同一の構造を有するか、または天然に存在するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドとは異なる構造を有するように産生可能である。いずれかの種類の改変（例えば、限定されないが、アミノ酸の挿入、欠失、または置換；ポリペプチドのグリコシル化状態の変化；その三次元構造または自己会合状態を変化させるリフォールディングまたは異性化；ならびに、他のポリペプチドまたは分子とその会合への変化）によりどのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドから導かれるポリペプチドも、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群である。それ故に、本発明により提供されるポリペプチドには、本明細書に記載のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群に類似したアミノ酸配列を特徴とするポリペプチドが含まれるが、それへの修飾は、天然で提供されるか、または意図的に工学処理される。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と共通の生物学的活性を共有するポリペプチドは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を有するポリペプチドである。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群により示される生物学的活性の例には、限定なしに、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖および／または分化の刺激が含まれる。
【００３７】
本発明は、全長と成熟の両型のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を提供する。全長ポリペプチドは、最初に翻訳されるポリペプチドの完全な一次アミノ酸配列を有するものである。全長ポリペプチドのアミノ酸配列は、例えば、ｃＤＮＡ分子の完全なオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）の翻訳により得ることが可能である。選択的スプライシングによるかまたはいくつかの翻訳開始部位の使用により単一の遺伝子座からいくつかのｍＲＮＡ型が産生されるならば、いくつかの全長ポリペプチドがその座によりコードされることが可能である。ポリペプチドの「成熟型」は、シグナル配列の切断、またはプロドメインを除去するタンパク分解的切断のような翻訳後プロセシング工程を受けたポリペプチドを意味する。特定の全長ポリペプチドの多数の成熟型が、例えば、シグナル配列の多数の部位での切断によるか、またはそのポリペプチドを切断するプロテアーゼの差別的調節により産生可能である。こうしたポリペプチドの成熟型（単数又は複数）は、全長ポリペプチドをコードする核酸分子の、適切な哺乳動物細胞、または他の宿主細胞における発現により得ることが可能である。成熟型のポリペプチドの配列はまた、全長型のアミノ酸配列から、シグナル配列またはプロテアーゼ切断部位の同定により、決定可能であり得る。本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群にはまた、一部切除されているが生物学的に活性であるポリペプチドを生じることが可能である選択的ｍＲＮＡプロセシングのような転写後または翻訳後プロセシング事象から生じるもの、例えば、天然に存在するこのポリペプチドの可溶型も含まれる。さらに本発明内に含まれるのは、このポリペプチドからの１以上の末端アミノ酸（一般には、１−５の末端アミノ酸）のタンパク分解的除去による、異なる種類の宿主細胞における発現のときのＮまたはＣ末端の相違のような、タンパク分解に起因する変異である。
【００３８】
さらに本発明には、関連するネイティブなパターンのグリコシル化を有するかまたは有さないＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドが含まれる。酵母または哺乳動物の発現系（例、ＣＯＳ−１またはＣＨＯ細胞）で発現されるポリペプチドは、発現系の選択に依存して、分子量とグリコシル化パターンにおいて、ネイティブなポリペプチドに類似しているか、またはそれとは有意に異なる場合がある。大腸菌のような細菌の発現系における本発明のポリペプチドの発現は、非グリコシル化分子を提供する。さらに、ある一定の調製物は、いくつかの差別的にグリコシル化されたポリペプチドの種を含んでよい。グリコシル基は、慣用法、特にグリコペプチダーゼを利用する方法により除去することが可能である。一般に、本発明のグリコシル化ポリペプチドは、モル過剰のグリコペプチダーゼ（ベーリンガーマンハイム）とインキュベートすることが可能である。
【００３９】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とそれらをコードする核酸の種相同体も本発明により提供される。本明細書において使用される「種相同体」は、ある一定のポリペプチドまたは核酸とは起源の種が異なるが、当業者により決定されるように、その一定のポリペプチドまたは核酸に対して有意な配列類似性を有するポリペプチドまたは核酸のことである。種相同体は、本明細書に提供されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドから適切なプローブまたはプライマーを作製し、望ましい種からの適切な核酸供給源をスクリーニングすることによって、単離し、同定することが可能である。本発明にはまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とそれをコードする核酸の対立遺伝子変異体（ａｌｌｅｌｉｃ  ｖａｒｉａｎｔｓ）、即ち、アミノ酸またはヌクレオチドの配列における違いが遺伝多型性（ある集団内の個体間の対立遺伝子変異）に帰せられるようなポリペプチドおよび核酸の天然に存在する代替型も含まれる。
【００４０】
本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の断片が本発明に含まれ、それらは、直鎖であっても、または、例えばＳａｒａｇｏｖｉら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０，７７３−７７８（１９９２）とＭｃＤｏｗｅｌｌら，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，９２４５−９２５３（１９９２）に記載されるような既知の方法を使用して、環化してもよい。本発明のポリペプチドおよびポリペプチド断片とそれらをコードする核酸には、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または７０％、および最も好ましくは少なくとも８０％）であり、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドまたはそれらをコードする核酸と、少なくとも６０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、または少なくとも９９％、および、最も好ましくは少なくとも９９．５％）を有するアミノ酸またはヌクレオチド配列の長さを有するポリペプチドおよび核酸が含まれ、ここで、配列同一性は、重複部分と同一性を最大化する一方で、配列ギャップを最小化するように並列した場合のポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって決定される。さらに本発明に含まれるのは、好ましくは少なくとも８または少なくとも１０、または好ましくは少なくとも１５、またはより好ましくは少なくとも２０、なおより好ましくは少なくとも３０、または最も好ましくは少なくとも４０の隣接するアミノ酸を含んでなるセグメントを含有するかまたはコードする、ポリペプチドおよびポリペプチド断片とそれらをコードする核酸である。こうしたポリペプチドおよびポリペプチド断片はまた、いずれかのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのいずれかのそのようなセグメントと少なくとも７０％の配列同一性（より好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、または少なくとも９９％、および最も好ましくは少なくとも９９．５％）を共有するセグメントを含有することが可能であり、ここで、配列同一性は、重複部分と同一性を最大化する一方で、配列ギャップを最小化するように並列した場合のポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって決定される。２つのアミノ酸または２つの核酸配列のパーセント同一性は、目視検査と数学的計算により決定可能であるか、またはより好ましくは、この比較はコンピュータ・プログラムを使用して配列情報を比較することによってなされる。代表的な、好ましいコンピュータ・プログラムは、遺伝学コンピュータ・グループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マジソン）のウィスコンシン・パッケージ、バージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」である（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：３８７）。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメーターには：（１）ヌクレオチドについての（同一物について１、および非同一物について０の値を含む）一元（ｕｎａｒｙ）比較��トリックスのＧＣＧ実行と、ＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修「ポリペプチドの配列および構造のアトラス（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｅｑｕｅｎｃｅおよびＳｔｒｕｃｔｕｒｅ）」国立バイオ医学研究財団、３５３−３５８頁、１９７９により記載されるような、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：６７４５，１９８６の加重アミノ酸比較マトリックス；または他の比較可能な比較マトリックス；（２）アミノ酸配列の各ギャップについて３０のペナルティと各ギャップ中の各記号について追加の１のペナルティ；または、ヌクレオチド配列の各ギャップについて５０のペナルティと各ギャップ中の各記号について追加の３のペナルティ；（３）エンドギャップへのノーペナルティ；および（４）長いギャップへは最大ペナルティなし、が含まれる。当業者により使用される他の配列比較プログラムでは、例えば、国立医学ライブラリーのウェブサイト：ｗｂｌａｓｔ２．ｃｇｉ．により使用が利用可能なＢＬＡＳＴＩＮプログラム、バージョン２．０．９、またはＵＷ−ＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムが使用可能である。ＵＷ−ＢＬＡＳＴ２．０についての標準的なデフォルトパラメーターの設定は、以下のインターネットサイト：ｓａｐｉｅｎｓ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／ｂｌａｓｔ／♯Ｆｅａｔｕｒｅｓに記載されている。さらに、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸スコア付けマトリックスを使用し、使用可能である選択パラメーターは以下の通りである：（Ａ）低い組成複雑性を有するクエリー配列のセグメント（ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎのＳＥＧプログラム（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３）により決定される；ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ，１９９６「配列データベースにおける組成偏重領域の解析（Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｌｙ  ｂｉａｓｅｄ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ）」Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：５５４−７１も参照されたい）または、短周期性の内部リピートからなるセグメント（ＣｌａｖｅｒｉｅおよびＳｔａｔｅｓ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３）のＸＮＵプログラムにより決定される）をマスクするためのフィルターを含むこと、および（Ｂ）データベース配列に対する適合を報告するための統計学的有意性の閾値、またはＥ−スコア（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）の推計学的モデルにしたがって、単に偶然により見出される適合の期待確率；ある適合に起因する統計学的有意差がＥ−スコア閾値より大きい場合、この適合は報告されない）；好ましいＥ−スコア閾値の数値は０．５であるか、または好ましさが増える順に、０．２５、０．１、０．０５、０．０１、０．００１、０．０００１、１ｅ−５、１ｅ−１０、１ｅ−１５、１ｅ−２０、１ｅ−２５、１ｅ−３０、１ｅ−４０、１ｅ−５０、１ｅ−７５、または１ｅ−１００である。
【００４１】
本発明はまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の特定の断片またはドメインを含んでなるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の可溶型を提供する。可溶性ポリペプチドとは、それが発現される細胞から分泌されることが可能であるポリペプチドである。分泌される可溶性ポリペプチドは、望ましいポリペプチドを発現するインタクト細胞を、例えば遠心分離により培養培地から分離し、望ましいポリペプチドの存在についてその培地（上清）をアッセイすることによって同定可能である（および、非可溶性の膜結合性対照物から識別可能である）。望ましいポリペプチドが培地中に存在すれば、このポリペプチドが細胞から分泌され、したがってこのポリペプチドの可溶型であることが示される。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の可溶型の使用は、多くの応用に有利である。可溶性ポリペプチド群が細胞から分泌されるので、このポリペプチド群の組換え宿主細胞からの精製が促進される。さらに、可溶性ポリペプチド群は、非経口投与や多くの酵素法のために膜結合型より概して適している。
【００４２】
「本質的にアミノ酸配列からなる単離ポリペプチド」は、このポリペプチドが前記アミノ酸配列に加えて、このポリペプチドの片端または両端へ共有結合した追加の材料を有する場合があることを意味し、前記追加の材料は、好ましくは、このポリペプチドの片端、一端、または両端へ共有結合した１〜１０，０００の追加アミノ酸、およびより好ましくは、このポリペプチドの片端、一端、または両端へ共有結合した１〜１，０００の追加アミノ酸、そして最も好ましくは、このポリペプチドの片端、一端、または両端へ共有結合した１〜１００の追加アミノ酸である。好ましい態様において、このポリペプチドの片端、一端、または両端への追加アミノ酸の共有結合は、天然に存在せず、当該技術分野で開示されていない新規に組み合わされたアミノ酸配列を生じる。
【００４３】
本発明の別の側面において、好ましいポリペプチドは、ヘリックスＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤとヘリックス間ループＡＢ、ＢＣ、およびＣＤのような、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド構造の様々な組み合わせを含む。したがって、本発明のポリペプチド群とそれをコードする核酸には、ヘリックスＡの２以上のコピー、ヘリックスＤの２以上のコピー、またはそれぞれの少なくとも１つのコピーを含んでなるかまたはコードするものが含まれる。本発明のさらなる態様は、以下からなる単離ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドである：（ＮからＣの順に）ヘリックスＡから本質的になり、ヘリックスＢから本質的になるポリペプチドへ共有結合し、ヘリックスＣから本質的になるポリペプチドへ共有結合し、ヘリックスＤから本質的になるポリペプチドへ共有結合するポリペプチドであって、ここで、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのある一定のヘリックスから本質的になるポリペプチドには、天然に存在するかまたは修飾されたヘリックス間ループアミノ酸配列、例えば１以上のアミノ酸に保守的な置換がなされたヘリックス間ループ配列が含まれる場合がある。
【００４４】
ペプチドまたはＤＮＡ配列におけるさらなる修飾は、既知の技術を使用して当業者により行うことが可能である。ポリペプチド配列中での目的の修飾には、選択されたアミノ酸の改変、置換、置き換え、挿入、または欠失が含まれる場合がある。例えば、１以上のシステイン残基を欠失させるか、または別のアミノ酸で置き換えて、分子のコンホメーションを改変することが可能であり、これは、折り畳みまたは再生のときに不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防ぐことを伴う場合がある改変である。こうした改変、置換、置き換え、挿入、または欠失の技術は当業者によく知られている（例えば、米国特許第４，５１８，５８４号を参照されたい）。別の例として、ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位を、グリコシル化を排除するように修飾することが可能であり、哺乳動物および酵母の発現系において、炭水化物が低減した類似体の発現を可能にする。真核ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位は、アミノ酸の三つ組、Ａｓｎ−Ｘ−Ｙ（ここで、Ｘは、Ｐｒｏ以外の任意アミノ酸であり、Ｙは、ＳｅｒまたはＴｈｒである）を特徴とする。これらの三つ組をコードするヌクレオチド配列への適切な置換、追加、または欠失は、Ａｓｎ側鎖での炭水化物残基の結合の防止をもたらす。例えば、Ａｓｎを異なるアミノ酸に置き換えるように選択される、単一ヌクレオチドの改変は、Ｎ−グリコシル化部位を不活性化するのに十分である。あるいは、ＳｅｒまたはＴｈｒを、Ａｌａのような別のアミノ酸に置き換えてもよい。ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位を不活性化するための既知の方法には、米国特許第５，０７１，９７２号とＥＰ２７６，８４６号に記載されるものが含まれる。本発明の範囲内にある追加の変異体には、グリコシル基、脂質、リン酸、アセチル基、などのような他の化学部分との共有または集合コンジュゲートを形成することによって、その誘導体を創出するように修飾することが可能であるポリペプチドが含まれる。共有誘導体は、ポリペプチドのアミノ酸側鎖上の官能基へ、またはそのＮ末端またはＣ末端へ化学部分を連結させることによって製造することが可能である。（検出可能な）診断薬または療法剤をそれに付けて含んでなるコンジュゲートが本明細書で考慮される。好ましくは、こうした改変、置換、置き換え、挿入、または欠失は、ポリペプチドまたはその実質的な同等物の望ましい活性を保持する。１つの例は、ネイティブ型と本質的に同じ結合アフィニティーで結合する変異体である。結合アフィニティーは、例えば米国特許第５，５１２，４５７号に記載され、本明細書に説明されるような、慣用法により測定可能である。
【００４５】
他の誘導体には、組換え培養における合成によるＮ末端またはＣ末端融合のような、本発明のポリペプチドと他のポリペプチドとの共有または集合コンジュゲートが含まれる。融合ポリペプチドの例は、オリゴマーに関連して以下に論じる。さらに、融合ポリペプチドは、精製および同定を促進するために加えられるペプチドを含んでよい。こうしたペプチドには、例えば、米国特許第５，０１１，９１２号とＨｏｐｐら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，１９８８に記載される、ポリ−Ｈｉｓまたは抗原同定ペプチドが含まれる。１つのこうしたペプチドはＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドであり、これは、きわめて抗原性であり、特異モノクローナル抗体により可逆的に結合されるエピトープを提供し、発現される組換えポリペプチドの迅速なアッセイと容易な精製を可能にする。４Ｅ１１と命名されたマウスハイブリドーマは、米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるように、特定の二価金属カチオンの存在下で、ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドへ結合するモノクローナル抗体を産生する。４Ｅ１１ハイブリドーマ細胞系は、寄託番号ＨＢ９２５９の下でＡＴＣＣ（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション）に寄託されている。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドへ結合するモノクローナル抗体は、イーストマンコダック社、科学造影システム部門、コネティカット州ニューヘーヴンから入手可能である。
【００４６】
本発明に含まれるのは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを含有するオリゴマーまたは融合ポリペプチド群、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の１以上の断片、または、本明細書に開示するようなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の任意の誘導体または変異体である。特定の態様において、オリゴマーは可溶性のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を含む。オリゴマーは、二量体、三量体またはより高次のオリゴマーを含む、共有結合しているか、または非共有結合している多量体の型であり得る。本発明の１つの側面において、オリゴマーはポリペプチド成分の結合活性を維持し、二価、三価、などの結合部位をそれへ提供する。別の態様において、本発明は、ポリペプチドへ融合したペプチド部分間の共有または非共有性の相互作用を介して連結した多数のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を含んでなるオリゴマーへ向けられ、こうしたペプチドは、オリゴマー化を促進する特性を有する。ロイシンジッパーと抗体から誘導される特定のポリペプチドは、以下により詳しく記載されるように、それに付いたポリペプチドのオリゴマー化を促進することが可能であるペプチドの１つである。
【００４７】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の変異体が膜貫通ドメインを包含するように構築される態様において、それらはＩ型膜ポリペプチドを形成する。膜貫通ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、リガンドが知られている受容体ポリペプチドの細胞外ドメインと融合することが可能である。次いで、こうした融合ポリペプチド群は、この膜貫通ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドにより誘発される細胞内シグナル伝達経路を制御するように操作可能である。細胞膜を貫通するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群はまた、細胞表面受容体のアゴニストまたはアンタゴニスト、または細胞接着分子と融合して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの細胞内効果をさらに変調させることが可能である。本発明の別の側面においては、好ましいＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド断片と他の融合ポリペプチドドメインとの間に他のインターロイキンまたはサイトカインポリペプチドを位置づけてもよい。
【００４８】
免疫グロブリンをベースとするオリゴマー。本発明のポリペプチドまたはその断片は、ポリペプチド結合部位の結合価を増やすことを含む多くの目的のために、免疫グロブリンのような分子へ融合してよい。例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの断片は、直接的に、またはリンカー配列を介して、免疫グロブリンのＦｃ部分へ融合することが可能である。ポリペプチドの二価型では、こうした融合がＩｇＧ分子のＦｃ部分へなされる場合がある。他の免疫グロブリンのアイソタイプもこうした融合物を産生するために使用可能である。例えば、ポリペプチド−ＩｇＭ融合物ならば、本発明のポリペプチドの十価型を生成するだろう。本明細書で使用される用語「Ｆｃポリペプチド」には、Ｆｃ領域のＣＨドメインのいくらかまたは全部を含んでなる、抗体のＦｃ領域から構成される、ネイティブおよびムテイン型のポリペプチド群が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有する、こうしたポリペプチド群の一部切除型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｆｏｒｍ）も含まれる。好ましいＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体から誘導されるＦｃポリペプチドを含む。１つの選択として、免疫グロブリンから誘導されるポリペプチドを使用して、オリゴマーを調製する。抗体から誘導されたポリペプチドの（Ｆｃドメインを含む）様々な部分へ融合した特定の異種ポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチドの調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら，（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５，１９９１）；Ｂｙｒｎら，（Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６７７，１９９０）；および、ＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈおよびＡｒｕｆｆｏ（「免疫グロブリン融合ポリペプチドの構築（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）」Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中，補遺４、１０．１９．１−１０．１９．１１頁、１９９２）に記載されている。免疫グロブリンをベースとするオリゴマーの調製および使用の方法は当該技術分野で知られている。本発明の１つの態様は、本発明のポリペプチドを、抗体から誘導されるＦｃポリペプチドへ融合することによって創出される２つの融合ポリペプチドを含んでなる二量体へ向けられる。ポリペプチド／Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする融合遺伝子を適切な発現ベクターへ挿入する。組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞においてポリペプチド／Ｆｃ融合ポリペプチドが発現され、抗体分子のように組立てられ、そのときに、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分間で形成され、二価分子を産生する。ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１０１５１に記載される、１つの適切なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＮ末端ヒンジ領域からＦｃ領域のネイティブＣ末端へ伸びる単鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号とＢａｕｍら，（ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２，１９９４）に記載されるＦｃムテインである。このムテインのアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａへ変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕへ変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａへ変化していることを除けば、ＷＯ９３／１０１５１に示されるネイティブＦｃ配列のそれと同一である。このムテインは、Ｆｃ受容体への低下したアフィニティーを示す。Ｆｃ部分（およびそれから形成されるオリゴマー）を含んでなる、上記の融合ポリペプチドは、ポリペプチドＡまたはポリペプチドＧのカラムでのアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精製の利点を提供する。他の態様において、本発明のポリペプチド群を、抗体重鎖または軽鎖の可変部分に代用してもよい。抗体の重鎖と軽鎖の両方で融合ポリペプチドを作製すれば、４つものＩＭＸ１２９８４０サイトカイン細胞外領域をもつオリゴマーを形成することが可能である。
【００４９】
ペプチドリンカーをベースとするオリゴマー。あるいは、オリゴマーは、多くのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を含んでなり、ペプチドリンカー（スペーサーペプチド）を有するかまたは有さない融合ポリペプチドである。適切なペプチドリンカーには、米国特許第４，７５１，１８０号および４，９３５，２３３号に記載されるものがある。望ましいペプチドリンカーをコードするＤＮＡ配列を、適切な慣用的技術を使用して、本発明のＤＮＡ配列の間に、それと同じ読み枠で、挿入することが可能である。例えば、このリンカーをコードする化学合成されたオリゴヌクレオチドをこの配列の間に連結してもよい。特定の態様において、融合ポリペプチドは、ペプチドリンカーにより分離された、２〜４の可溶性ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を含む。適切なペプチドリンカー、他のポリペプチドとのその組み合わせ、およびその使用については当業者によりよく知られている。
【００５０】
ロイシンジッパー。本発明のオリゴマーを調製する別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、それが見出されるポリペプチドのオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、当初いくつかのＤＮＡ結合ポリペプチドにおいて同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１７５９，１９８８）、以来、多種多様な異なるポリペプチドに見出されてきた。既知のロイシンジッパーには、二量体化するかまたは三量体化する、天然に存在するペプチドとその誘導体がある。ジッパードメイン（本明細書では、オリゴマー化ドメイン、またはオリゴマー形成ドメインとも呼ばれる）は反復性の七個のリピートを含み、しばしば４または５のロイシン残基が他のアミノ酸で分散されている。ロイシンジッパーの使用とロイシンジッパーを使用するオリゴマーの調製は当該技術分野でよく知られている。
【００５１】
ポリペプチド活性を全部または一部保持することが期待されるので、スクリーニングまたは他の免疫学的方法に有用であり得る、ポリペプチドの配列の他の断片および誘導体も、本明細書の開示があれば、当業者により作製することが可能である。こうした修飾も本発明に含まれると考えられる。
【００５２】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸
本発明内に含まれるのは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸である。これらの核酸は、適切な供給源からのゲノムまたはｃＤＮＡ分子の単離を含む、いくつかの方法で同定可能である。本明細書に記載のアミノ酸配列に対応し、核酸の単離のためのプローブまたはプライマーとしてか、またはデータベース検索のクエリー配列として使用されるヌクレオチド配列は、このアミノ酸配列からの「逆翻訳」によるか、またはコードＤＮＡ配列が同定されたポリペプチドとのアミノ酸同一性領域の同定により得ることが可能である。周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を利用して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをコードするＤＮＡ配列、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド断片の望ましい組み合わせ、を単離して同定することが可能である。ＤＮＡ断片の組み合わせの望ましい末端を規定するオリゴヌクレオチドを、５’および３’プライマーとして利用する。このオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ断片の増幅された組み合わせの発現ベクターへの挿入を促進するために、制限エンドヌクレアーゼの認識部位を追加的に含有してよい。ＰＣＲ技術は、Ｓａｉｋｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：４８７（１９８８）；「組換えＤＮＡの方法論（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）」Ｗｕら，監修、アカデミックプレス社、サンディエゴ（１９８９），１８９−１９６頁；および「ＰＣＲプロトコル：方法および応用の手引き（ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」Ｉｎｎｉｓら，監修、アカデミックプレス社（１９９０）に記載されている。
【００５３】
本発明の核酸分子には、一本鎖と二本鎖の両型のＤＮＡおよびＲＮＡ、並びに対応する相補配列が含まれる。ＤＮＡには、例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、化学合成ＤＮＡ、ＰＣＲにより増幅されたＤＮＡ、およびそれらの組み合わせが含まれる。本発明の核酸分子には、全長の遺伝子またはｃＤＮＡ分子、並びにそれらの断片の組み合わせが含まれる。本発明の核酸は、ヒトの供給源から選好的に誘導されるが、本発明には、非ヒト種から誘導されるものも含まれる。
【００５４】
「単離核酸」は、天然存在供給源から単離される核酸の場合は、その核酸が単離された生物のゲノムに存在する隣接遺伝子配列から分離された核酸のことである。例えば、ＰＣＲ産物、ｃＤＮＡ分子、またはオリゴヌクレオチドのような、鋳型から酵素的にかまたは化学的に合成される核酸の場合、こうした方法から生じる核酸が単離核酸であると理解される。単離核酸分子は、分離した断片の型であるか、またはより大きな核酸構築体の成分としての核酸を意味する。１つの好ましい態様において、核酸には、混在する内因性の材料が実質的に存在しない。核酸分子は、好ましくは、少なくとも一回は実質的に純粋な型で単離され、（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，「分子クローニング；実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」第２版、コールドスプリングハーバーラボラトリー、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８９）に概説されるような）標準的な生化学の方法によりその成分ヌクレオチド配列の同定、操作、および回収を可能にする量または濃度のＤＮＡまたはＲＮＡから誘導されたものである。こうした配列は、好ましくは、真核遺伝子に典型的に存在している内部の非翻訳配列、またはイントロンにより中断されないオープンリーディングフレームの型で提供される、および／または構築される。非翻訳ＤＮＡの配列は、それがコード領域の操作または発現に干渉しない、オープンリーディングフレームから５’または３’に存在する場合がある。
【００５５】
「本質的にヌクレオチド配列からなる単離核酸」は、この核酸が前記ヌクレオチド配列に加えて、この核酸分子の片端または両端へ共有結合した追加の材料を有する場合があることを意味し、前記追加の材料は、好ましくは、この核酸分子の片端、一端、または両端へ共有結合した１〜１００，０００の追加ヌクレオチド、およびより好ましくは、この核酸分子の片端、一端、または両端へ共有結合した１〜１，０００の追加ヌクレオチド、そして最も好ましくは、この核酸分子の片端、一端、または両端へ共有結合した１０〜１００の追加ヌクレオチドである。好ましい態様において、この核酸分子の片端、一端、または両端への追加ヌクレオチドの共有結合は、天然に存在せず、当該技術分野で開示されていない新規に組み合わされたヌクレオチド配列を生じる。本質的に１つのヌクレオチド配列からなる単離核酸は、前記核酸配列を含んでなる発現ベクターまたは他の構築体であり得る。
【００５６】
本発明にはまた、中程度にストリンジェントな条件、およびより好ましくは高ストリンジェントな条件の下で、本明細書に記載のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸へハイブリダイズする核酸が含まれる。ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を及ぼす基本パラメーターと適切な条件を考案するための手引きについては、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，およびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８９，「分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー、９章および１１章；および「分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」１９９５，Ａｕｓｕｂｅｌら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、セクション２．１０および６．３−６．４）に示されていて、例えば、ＤＮＡの長さおよび／または塩基組成に基づいて、当業者により容易に決定可能である。中程度にストリンジェントな条件を達成する１つの方法は、５ｘＳＳＣ，０．５％  ＳＤＳ，１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する前洗浄溶液、約５０％のホルムアミド、６ｘＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液、および約５５℃のハイブリダイゼーション温度（または、約４２℃のハイブリダイゼーション温度を伴う、約５０％のホルムアミドを含有するものなどの、他の類似のハイブリダイゼーション溶液）、並びに約６０℃、０．５ｘＳＳＣ，０．１％  ＳＤＳ中の洗浄条件の使用を伴う。一般的に、高ストリンジェント条件は、上記のようなハイブリダイゼーション条件と定義されるが、およそ６８℃、０．２ｘＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳでの洗浄を伴うと定義される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄の緩衝液では、ＳＳＣ（１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）にＳＳＰＥ（１ｘＳＳＰＥは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、および１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ７．４である）を代用することが可能であり、洗浄は、ハイブリダイゼーションが完了した後で１５分間行う。当業者に知られていて、以下にさらに記載するように、ハイブリダイゼーション反応と二本鎖の安定性を支配する基本原理を適用することによって望ましい度合いのストリンジェンシーを達成するためには、洗浄温度と洗浄塩濃度を必要に応じて調整することが可能であると理解するべきである（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９を参照されたい）。核酸を未知配列の標的核酸へハイブリダイズさせる場合、ハイブリッドの長さは、ハイブリダイズする核酸のそれであると仮定される。既知配列の核酸をハイブリダイズさせる場合、ハイブリッドの長さは、核酸の配列を並列し、最適な配列相補性をもつ単数または複数の領域を同定することによって決定可能である。５０塩基対未満の長さであることが予測されるハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低くなければならず、Ｔｍは、以下の等式により決定される。長さ１８塩基対未満のハイブリッドに関して、Ｔ���（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基数）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基数）。１８塩基対を超える長さのハイブリッドに関しては、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（Ｇ＋Ｃ％）−（６００／Ｎ）であり、ここで、Ｎはハイブリッド中の塩基数であり、そして［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオン濃度である（１ｘＳＳＣの［Ｎａ＋］＝０．１６５Ｍ）。好ましくは、こうしたハイブリダイズする核酸は各々、少なくとも１５ヌクレオチド（または、より好ましくは、少なくとも１８ヌクレオチド、または少なくとも２０ヌクレオチド、または少なくとも２５ヌクレオチド、または少なくとも３０ヌクレオチド、または少なくとも４０ヌクレオチド、または最も好ましくは少なくとも５０ヌクレオチド）、またはそれがハイブリダイズする本発明の核酸の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％）である長さを有し、それがハイブリダイズする本発明の核酸と少なくとも６０％（より好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、または少なくとも９９％、そして最も好ましくは少なくとも９９．５％）の配列同一性を有し、ここで配列同一性は、上記により詳しく記載されるように、重複部分と同一性を最大化する一方、配列ギャップを最小化するように並列された、ハイブリダイズする核酸の配列を比較することによって決定される。
【００５７】
本発明はまた、本明細書に開示する核酸配列に対応する遺伝子も提供する。「対応する遺伝子」または「対応するゲノム核酸」は、転写されて、ｃＤＮＡ核酸配列が由来するｍＲＮＡを産生し、こうした遺伝子の調節された発現に必要なゲノムの隣接する領域を包含することが可能であるゲノムの領域である。したがって、対応する遺伝子には、限定されないが、コード配列、５’および３’非翻訳領域、選択的にスプライスされるエクソン、イントロン、プロモーター、エンハンサー、およびサイレンサー、またはサプレッサーの諸要素が含まれる場合がある。対応するゲノム核酸は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインコード配列の開始コドンに対応するゲノム配列の最初のヌクレオチドの上流に１００００塩基対（より好ましくは５０００塩基対、なおより好ましくは２５００塩基対、最も好ましくは１０００塩基対）のゲノム核酸配列を、そしてＩＭＸ１２９８４０サイトカインコード配列の終止コドンに対応するゲノム配列の最後のヌクレオチドの下流に１００００塩基対（より好ましくは５０００塩基対、なおより好ましくは２５００塩基対、最も好ましくは１０００塩基対）のゲノム核酸配列を包含する場合がある。対応する遺伝子またはゲノム核酸は、本明細書に開示する配列情報を使用して、既知の方法にしたがって単離することが可能である。こうした方法には、適切なゲノムライブラリー、または他のゲノム材料の供給源にある遺伝子を同定および／または増幅するために、開示される配列情報から、プローブまたはプライマーを調製することが含まれる。「単離遺伝子」または「単離ゲノム核酸」は、そのゲノム核酸が単離された生物のゲノムに存在する隣接ゲノム配列から分離されたゲノム核酸のことである。
【００５８】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を作製して精製する方法
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を作製する方法を以下に記載する。本発明のポリペプチド群および断片の発現、単離、および精製は、限定されないが以下の方法を含む、どの適切な技術によっても達成可能である。本発明の単離核酸は、ｐＤＣ４０９ベクター（Ｇｉｒｉら，１９９０，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１３：２８２１）または誘導ｐＤＣ４１２ベクター（Ｗｉｌｅｙら，１９９５，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３：６７３）のような発現制御配列へ機能可能であるように連結可能である。ｐＤＣ４００系列ベクターは、ＣＶ−１または２９３細胞のような一過性の哺乳動物発現系に有用である。あるいは、本発明の単離核酸は、ｐＤＣ３１２、ｐＤＣ３１６、またはｐＤＣ３１７ベクターのような発現ベクターへ連結可能である。ｐＤＣ３００系列ベクターは、いずれもＳＶ４０複製起点、ＣＭＶプロモーター、アデノウイルス三部分（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー、並びにＳＶ４０ポリＡおよび終止シグナルを含有し、ＣＨＯ細胞またはその誘導体のような、安定した哺乳動物の発現系に有用である。他の発現制御配列とクローニング技術も、ｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクター（Ｋａｕｆｍａｎら，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：４４８５−４４９０；およびＰｏｕｗｅｌｓら，１９８５，「クローニングベクター：実験マニュアル（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，エルセヴィエ、ニューヨーク）とＧＡＴＥＷＡＹベクター（ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ／Ｃｏｎｔｅｎｔ／Ｔｅｃｈ−Ｏｎｌｉｎｅ／ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＿ｂｉｏｌｏｇｙ／ｍａｎｕａｌｓ＿ｐｐｓ／１１７９７０１６．ｐｄｆ；ライフテクノロジーズ；メリーランド州ロックヴィル）のように、ポリペプチドを組換え的に産生するために使用可能である。ＧＡＴＥＷＡＹ系において、ａｔｔＢ配列が隣接した本発明の単離核酸は、ａｔｔＰ配列を含有するｐＤＯＮＲ２０１のようなＧＡＴＥＷＡＹベクターと、インテグラーゼ反応により組換えることが可能である。これにより、本発明の単離核酸を含有するＧＡＴＥＷＡＹ系にエントリーベクターが提供される。このエントリーベクターは、上記のｐＤＣ４００およびｐＤＣ３００系列のそれのような他の適切に調製される発現制御配列とさらに組換えることが可能である。多くの適切な発現制御配列が当該技術分野で知られている。組換えポリペプチドを発現させる一般的な方法も、Ｒ．Ｋａｕｆｍａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，５３７−５６６（１９９０）に記載されている。本明細書において使用される「機能可能であるように連結した」は、該核酸と発現制御配列が、本発明の核酸によりコードされるポリペプチドが（ポリメラーゼのような）適切な分子が存在する場合に発現されるようなやり方で、構築体、ベクター、または細胞の内部に位置していることを意味する。本発明の１つの態様としては、核酸および／または発現制御配列が、例えば形質転換またはトランスフェクション、または他の適切な方法により宿主細胞へ導入され、少なくとも１つの発現制御配列が、組換え宿主細胞またはその子孫において、本発明の核酸へ機能可能であるように連結される。本発明の別の態様���しては、少なくとも１つの発現制御配列が、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列へ機能可能であるように連結されるように、組換え宿主細胞のゲノムへ組込まれる。本発明のさらなる態様においては、少なくとも１つの発現制御配列が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは組換え宿主細胞のいずれかにおいて、転写因子のようなトランス作用因子の作用を介して本発明の核酸へ機能可能であるように連結される。
【００５９】
さらに、（ネイティブまたは異種の）適切なシグナルペプチドをコードする配列を発現ベクターへ組込んでよい。シグナルペプチドまたはリーダーの選択は、組換えポリペプチドを産生しようとする宿主細胞の種類などの要因に依存する場合がある。例示すると、哺乳動物宿主細胞において機能的である異種シグナルペプチドの例には、米国特許第４，９６５，１９５号に記載されるインターロイキン−７（ＩＬ−７）のシグナル配列；Ｃｏｓｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７６８（１９８４）に記載されるインターロイキン−２受容体のシグナル配列；ＥＰ３６７，５６６に記載されるインターロイキン−４受容体シグナルペプチド；米国特許第４，９６８，６０７号に記載されるＩ型ＩＬ−１受容体シグナルペプチド；並びに、ＥＰ４６０，８４６に記載されるＩＩ型ＩＬ−１受容体シグナルペプチドが含まれる。シグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡ配列を、そのシグナルペプチドを含んでなる融合ポリペプチドへそのＤＮＡがはじめに転写され、ｍＲＮＡが翻訳されるように、本発明の核酸配列へ正しいフレームで融合することが可能である。意図される宿主細胞中で機能的であるシグナルペプチドは、ポリペプチドの細胞膜への挿入を促進し、そして最も好ましくは、ポリペプチドの宿主細胞からの細胞外分泌を促進するものである。シグナルペプチドは、好ましくは、ポリペプチドの膜への挿入または細胞からの分泌と同時に、このポリペプチドから切断される。当業者はまた、シグナルペプチドが切断される位置がコンピュータ・プログラムにより予測されるものとは異なる場合があり、組換えポリペプチドを発現させるのに利用される宿主細胞の種類のような要因にしたがって変動する場合があることを理解されよう。ポリペプチド調製物には、このシグナルペプチドの１以上の部位での切断から生じる、様々なＮ末端アミノ酸を有するポリペプチド分子の混合物を含む場合がある。
【００６０】
哺乳動物細胞中へＤＮＡを導入するための確立された方法が記載されている（Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，「哺乳動物細胞の大量培養（Ｌａｒｇｅ  Ｓｃａｌｅ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ）」１９９０，１５−６９頁）。リポフェクタミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）脂質試薬（ギブコ／ＢＲＬ）またはリポフェクタミン−プラス（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ−Ｐｌｕｓ）脂質試薬のような、市販の試薬を使用する追加のプロトコルを使用して、細胞をトランスフェクトすることが可能である（Ｆｅｌｇｎｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７４１３−７４１７，１９８７）。さらに、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら，（「分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、第２版、１−３巻、コールドスプリングハーバー・ラボラトリー・プレス、１９８９）にあるような慣用法を使用して哺乳動物細胞をトランスフェクトするには、エレクトロポレーションが使用可能である。安定形質転換体の選択は、例えば、細胞傷害薬への抵抗性のような、当該技術分野で知られている方法を使用して行うことが可能である。Ｋａｕｆｍａｎら，Ｍｅｔｈ．ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５：４８７−５１１，１９９０は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）抵抗性のような、いくつかの選択計画を記載する。ＤＨＦＲ選択に適した株は、ＤＨＦＲが欠損している、ＣＨＯのＤＸ−Ｂ１１株である（ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０，１９８０）。ＤＨＦＲ  ｃＤＮＡを発現するプラスミドをＤＸ−Ｂ１１株へ導入することが可能であり、このプラスミドを含有する細胞だけが適正な選択培地中で増殖可能である。発現ベクターへ取込むことが可能である他の選択可能マーカーの例には、Ｇ４１８およびハイグロマイシンＢのような抗生物質への抵抗性を与えるｃＤＮＡが含まれる。これらの化合物への抵抗性に基づいて、このベクターを宿している細胞を選択することが可能である。
【００６１】
あるいは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子産物は、相同的組換え、または「遺伝子ターゲティング」技術により得ることが可能である。こうした技術は、目的の内因性核酸配列の発現を誘導するために、（ＣＭＶプロモーター、などのような）外因性転写制御要素をゲノム上の特定の前決定部位へ導入することを利用する（例えば、米国特許第５，２７２，０７１号を参照されたい）。宿主染色体またはゲノムへの組込みの位置は、遺伝子の既知の位置および配列を考慮すれば、当業者により容易に決定することが可能である。好ましい態様において、本発明はまた、増加した量の遺伝子産物を産生するために、並びに、その遺伝子配列そのものを宿主細胞から単離する必要がないままに、増幅可能遺伝子と組み合わせた外因性転写制御要素を導入することを考慮する。
【００６２】
いくつかの種類の細胞が、ポリペプチドの発現に適した宿主細胞として作用することが可能である。哺乳動物宿主細胞には、例えば、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７系（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら，Ｃｅｌｌ  ２３：１７５，１９８１）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または無血清培地中で増殖するＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯおよび関連細胞系のようなその誘導体（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら，１９９８，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１）、ヒーラ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞系、アフリカミドリザルの腎臓細胞系ＣＶ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）から誘導されたＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞系（ＭｃＭａｈａｎら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：２８２１，１９９１）、２９３、２９３ＥＢＮＡまたはＭＳＲ２９３のようなヒト胚性腎臓細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換された霊長類の細胞系、正常２倍体細胞、一次組織、一次外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、またはＪｕｒｋａｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養由来の細胞株が含まれる。場合により、様々なシグナル伝達またはレポーターアッセイにおいてポリペプチドを使用することが望ましいときは、例えばＨｅｐＧ２／３Ｂ、ＫＢ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、またはＳ４９のような哺乳動物細胞系がポリペプチドの発現のために使用可能である。あるいは、酵母のような低次真核生物や細菌のような原核生物においてポリペプチドを産生することが可能である。適切な酵母には、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、クロイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）株、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）または異種ポリペプチドを発現することが可能なあらゆる酵母株が含まれる。適切な細菌株には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ねずみチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または異種ポリペプチドを発現することが可能なあらゆる細菌株が含まれる。ポリペプチドが酵母または細菌でつくられる場合、機能的なポリペプチドを得るには、例えば、適切な部位のリン酸化またはグリコシル化により、そこで産生されるポリペプチドを修飾することが望ましい場合がある。こうした共有付加は、既知の化学的または酵素的方法を使用して達成可能である。ポリペプチドはまた、本発明の単離核酸を１以上の昆虫発現ベクター中の適切な制御配列へ機能可能であるように連結させ、昆虫発現系を利用することによって産生してもよい。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴからキット型（ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット）で市販されていて、こうした方法は、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，テキサス農業実験本部会報（Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）Ｎｏ．１５５５（１９８７）、および、ＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ，Ｂｉｏ／��ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：４７（１９８８）に記載されるように、当該技術分野でよく知られている。本明細書に開示する核酸構築体由来のＲＮＡを使用してポリペプチドを産生するために、無細胞翻訳系も利用可能である。好ましくは、少なくとも１つの発現制御配列へ機能可能であるように連結した、本発明の単離核酸を含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」である。
【００６３】
本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチドを発現させるのに適した培養条件の下で、形質転換された宿主細胞を培養することによって調製可能である。次いで、生じる発現ポリペプチドを、様々な塩を用いる選択沈殿法、ゲル濾過、およびイオン交換クロマトグラフィーのような、既知の精製法を使用して、こうした培養物から（即ち、培養培地または細胞抽出物から）精製することが可能である。ポリペプチドの精製にはまた、ポリペプチドへ結合する剤を含有するアフィニティーカラム、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（登録商標）、またはＣｉｂａｃｒｏｍブルー３ＧＡセファロース（登録商標）のようなアフィニティー樹脂上での１回以上のカラム工程；フェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルのような樹脂を使用する、疎水相互作用クロマトグラフィーを伴う１回以上の工程；あるいは１以上のＩＭＸ１２９８４０サイトカインエピトープへ特異的に結合する抗体を使用するイムノアフィニティークロマトグラフィーも含まれる場合がある。あるいは、本発明のポリペプチドはまた、精製を促進する形式で発現されることも可能である。例えば、それは、融合ポリペプチドとして発現可能であり、即ち、それは、マルトース結合ポリペプチド（ＭＢＰ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン（ＴＲＸ）、ポリＨｉｓペプチド、および／またはその断片と融合させてよい。こうした融合ポリペプチドの発現および精製のキットは、ニューイングランド・バイオラボ（マサチューセッツ州ベヴァリー）、ファルマシア（ニュージャージー州ピスカタウェイ）、およびＩｎ  Ｖｉｔｒｏｇｅｎからそれぞれ市販されている。ポリペプチドはまたエピトープのタグを付け、その後でこうしたエピトープへ向けられた特異抗体を使用して精製することが可能である。１つのこうしたエピトープ（ＦＬＡＧ（登録商標））は、コダック（コネティカット州ニューヘーヴン）から市販されている。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば、ペンダントメチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを利用する１回以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程が、ポリペプチドをさらに精製するために利用可能である。上記精製工程のいくつかまたは全部はまた、様々に組み合わせて利用され、実質的に均質な単離組換えポリペプチドを提供することが可能である。このように精製されたポリペプチドは、他の哺乳動物のポリペプチドから実質的にフリーであり、本発明にしたがって「単離ポリペプチド」と定義される；本発明のこうした単離ポリペプチドには、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、変異体、結合パートナー、などへ結合する単離抗体が含まれる。本発明のポリペプチドはまた、トランスジェニック動物の産物として、例えば、該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含有する体細胞または生殖細胞を特徴とする、トランスジェニックのウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジのミルクの成分としても発現される場合がある。
【００６４】
発現されるポリペプチド群をアフィニティー精製するには、本発明のポリペプチド群に対して生成されるモノクローナル抗体のような、本発明のポリペプチド結合ポリペプチドを含んでなるアフィニティーカラムを利用することも可能である。これらのポリペプチドは、慣用的技術を使用して、例えば高塩の溶出緩衝液中からより低塩の緩衝液を使用した透析によって、または利用するアフィニティーマトリックスに依存して、ｐＨまたは他の因子を変化させることによって、アフィニティーカラムから外すことが可能であるし、または、本発明から導かれるポリペプチドのようなアフィニティー部分の天然存在基質を使用して、競合的に外すことが可能である。本発明のこの側面において、本発明の抗ポリペプチド抗体のようなポリペプチド結合性ポリペプチド、または本発明のポリペプチドと相互作用することが可能な他のポリペプチドは、本発明のポリペプチド群をその表面上で発現させる細胞を同定するか、分離するか、または精製するのに適したカラムクロマトグラフィーマトリックスのような固相支持体または類似の基質へ結合させることが可能である。本発明のポリペプチド結合性ポリペプチドの固相接触表面への付着は、いかなる手段により達成してもよく、例えば、磁気微小球体をこれらのポリペプチド結合性ポリペプチドでコートして、磁場によりインキュベーション容器中に保持してもよい。細胞混合物の懸濁液を、こうしたポリペプチド結合性ポリペプチドをその上に有する固相と接触させる。本発明のポリペプチドをその表面上に有する細胞は、固定されたポリペプチド結合ポリペプチドへ結合し、次いで、未結合細胞は、洗い流される。このアフィニティー結合法は、こうしたポリペプチド発現細胞を溶液から精製する、スクリーニングする、または分離するのに有用である。陽性に選択された細胞を固相から遊離させる方法は当該技術分野で知られていて、例えば、酵素の使用が含まれる。こうした酵素は、好ましくは細胞に対して無毒性および非損傷性であり、そして好ましくは細胞表面結合パートナーを切断するように指示される。あるいは、本発明のポリペプチド発現細胞を含有することが疑われる細胞の混合物を、はじめに、ビオチン化した本発明のポリペプチド結合性ポリペプチドとインキュベートしてよい。次いで、生じた混合物をアビジンでコートしたビーズで充填したカラムに通すと、それにより、アビジンに対するビオチンの高いアフィニティーが、ポリペプチド結合性細胞のビーズへの結合を提供する。アビジンでコートしたビーズの使用は当該技術分野で知られている。Ｂｅｒｅｎｓｏｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０Ｄ：２３９（１９８６）を参照されたい。未結合材料の洗浄と結合した細胞の遊離は、慣用法を使用して行う。
【００６５】
本発明のポリペプチドはまた、既知の慣用的な化学合成によっても生成可能である。本発明のポリペプチドを合成法により構築する方法は、当業者に知られている。合成的に構築されたポリペプチド配列は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と一次、二次または三次構造、および／またはコンホメーション特性を共有することによって、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を含む生物学的特性をそれと共通して所持することが可能である。このように、それらは、天然の精製ポリペプチドの生物学的に活性であるかまたは免疫学的な置換体として、療法化合物のスクリーニングや抗体開発の免疫学的方法に利用可能である。
【００６６】
望ましい純度の度合いは、ポリペプチドの意図される使用に依存する。例えば、ポリペプチドがｉｎ  ｖｉｖｏで投与される場合には、比較的高い度合いの純度が望ましい。こうした場合、ポリペプチドは、他のポリペプチドに相当するポリペプチドのバンドがＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）による解析では検出不能であるように、精製される。関連分野の当業者には、差別的グリコシル化、差別的な翻訳後プロセシングなどにより、このポリペプチドに対応するいくつかのバンドがＳＤＳ−ＰＡＧＥにより視覚化される場合があることが理解されよう。最も好ましくは、本発明のポリペプチドは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析で単一のポリペプチドバンドにより示されるような、実質的な均質性にまで精製される。このポリペプチドバンドは、銀染色、クーマシーブルー染色によって、または（ポリペプチドが放射標識されている場合は）オートラジオグラフィーにより視覚化することが可能である。
【００６７】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のアンタゴニストおよびアゴニスト
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を中和するか、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子の発現（転写または翻訳のいずれか）を阻害するいかなる方法も、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の生物学的活性を抑制するために使用可能である。特定の態様において、種々のアンタゴニストが、少なくとも１つのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの細胞への結合を阻害し、それにより、これらＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の細胞への結合により誘導される生物学的活性を阻害する。本発明の特定の他の態様において、アンタゴニストを設計して、例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのｍＲＮＡ転写物の翻訳を阻害するかまたは妨げるための公知のアンチセンスまたはリボザイムアプローチ；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリー遺伝子の転写を阻害する三重らせんアプローチ；あるいは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子、またはそれらの内因性プロモーターまたはエンハンサー要素を不活性化するかまたは「ノックアウト」するための標的化相同的組換えを使用して、内因性ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子発現のレベルを抑制することが可能である。アンチセンス、リボザイム、ＲＮＡｉ法のための二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ、および三重らせんアンタゴニストといった核酸アンタゴニストの例を設計して、損なわれていないか、または適切な場合、突然変異体のＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子活性のいずれかを減ずるかまたは阻害することが可能である。こうした分子の産生および使用の技術は当業者によく知られている。
【００６８】
アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡ分子は、標的化ｍＲＮＡへハイブリダイズし、ポリペプチド翻訳を妨げることによってｍＲＮＡの翻訳を直接遮断するように作用する。アンチセンスアプローチは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのｍＲＮＡへ相補的であるオリゴヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）の設計を伴う。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的な標的遺伝子のｍＲＮＡ転写物へ結合し、翻訳を阻止する。絶対的な相補性は、好ましいものの、必須ではない。本明細書に言及されるような、核酸の一部へ「相補的な」配列は、核酸へハイブリダイズして安定的な二重らせん（または、適切ならば、三重らせん）を形成することが可能であるほどに十分な相補性を有する配列を意味する。二本鎖アンチセンス核酸の場合、このようにして二重らせんＤＮＡの一本鎖を試験することが可能であるか、または三重らせんの形成をアッセイすることが可能である。ハイブリダイズする能力は、相補性の度合いとアンチセンス核酸の長さの両方に依存する。好ましいオリゴヌクレオチドは、メッセージの５’末端、例えば、ＡＵＧ開始コドンまで、およびそれを含む５’非翻訳配列に相補的である。しかしながら、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子転写物の５’または３’の非翻訳、非コード領域、またはコード領域へ相補的なオリゴヌクレオチドも、内因性ＩＭＸ１２９８４０サイトカインｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用可能である。アンチセンス核酸は、少なくとも６つのヌクレオチドの長さであるべきであり、好ましくは、６〜約５０のヌクレオチドの長さに及ぶオリゴヌクレオチドである。特別の側面において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌクレオチド、または少なくとも５０ヌクレオチドである。該オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡ、またはそのキメラ混合物、またはその誘導体、または修飾されたバージョンであり、一本鎖または二本鎖であってよい。本発明のキメラオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、または混合したオリゴヌクレオチド／オリゴヌクレオシドは、いくつかの異なる種類であり得る。これらには、ヌクレオチドの「ギャップ」セグメントが連結ヌクレオシドの５’および３’「ウィング」セグメントの間に位置している第一の種類と、「ギャップ」セグメントがオリゴマー化合物の３’または５’末端のいずれか一方に位置している第二の「オープンエンド」種が含まれる（例えば、米国特許第５，９８５，６６４号を参照されたい）。第一の種類のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野では、「ギャップマー」またはギャップのあるオリゴヌクレオチドとしても知られている。第二の種類のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野では、「ヘミマー」または「ウィングマー」としても知られている。オリゴヌクレオチドは、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、などを向上させるために、例えば、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾することが可能である。オリゴヌクレオチドは、（例えば、宿主細胞受容体をｉｎ  ｖｉｖｏで標的にするための）ペプチド、または細胞膜を通過する輸送を促進する剤（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら，１９８���，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２；ＰＣＴ公報第ＷＯ８８／０９８１０号を参照されたい）、またはハイブリダイゼーション誘発切断剤、または挿入剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照されたい）のような、他の付随する基を含んでよい。アンチセンス分子は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン転写物をｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞へ搬送されるべきである。アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡを細胞へ搬送するいくつかの方法が開発されてきた；例えば、アンチセンス分子は、組織または細胞の誘導部位へ直接注射することが可能であるか、または望ましい細胞を標的にするように設計された修飾アンチセンス分子（例えば、標的細胞表面上で発現される受容体または抗原へ特異的に結合するペプチドまたは抗体へ連結したアンチセンス）を、全身的に投与することが可能である。しかしながら、内因性ｍＲＮＡの翻訳を抑制するほど十分なアンチセンスの細胞内濃度を達成することはしばしば困難である。それ故に、好ましいアプローチは、強いｐｏｌＩＩＩまたはｐｏｌＩＩプロモーターの制御下にアンチセンスオリゴヌクレオチドが置かれる組換えＤＮＡ構築体を活用する。こうした構築体を使用して患者の標的細胞をトランスフェクトすると、十分な量の一本鎖ＲＮＡの転写が生じ、これが内因性ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子転写物と相補的な塩基対を形成し、それによりＩＭＸ１２９８４０サイトカインのｍＲＮＡの翻訳を妨げる。例えば、あるベクターを、細胞により取込まれ、アンチセンスＲＮＡの転写を指示するようにｉｎ  ｖｉｖｏで導入することが可能である。こうしたベクターは、転写されて望ましいアンチセンスＲＮＡを産生することが可能である間は、エピソームで留まるか、または染色体に組込まれることが可能である。こうしたベクターは、当該技術分野で標準的な組換えＤＮＡ技術の方法により構築することが可能である。ベクターは、プラスミド、ウイルス、または当該技術分野で知られた他のものであってよく、哺乳動物細胞における複製および発現に使用される。
【００６９】
ＧＲＫ７  ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断するように設計されたリボザイム分子はまた、ＧＲＫ７  ｍＲＮＡの翻訳とＧＲＫ７ポリペプチドの発現を妨げるために使用可能である（例えば、ＰＣＴ国際公報ＷＯ９０／１１３６４と米国特許第５，８２４，５１９号を参照されたい）。本発明に使用可能であるリボザイムには、ヘアピンリボザイム（米国特許第６，２２１，６６１号）、ハンマーヘッドリボザイム（ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３４：５８５−５９１）、ＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ（国際特許出願第ＷＯ８８／０４３００号；ＢｅｅｎおよびＣｅｃｈ，１９８６，Ｃｅｌｌ，４７：２０７−２１６）が含まれる。アンチセンスアプローチと同じように、リボザイムは（安定性の向上、標的指向性、などのために）修飾されたオリゴヌクレオチドから構成される場合があり、そしてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞へ搬送されるべきである。好ましい搬送の方法は、強い構成的ｐｏｌＩＩＩまたはｐｏｌＩＩプロモーターの制御下でリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築体を使用することを伴う。そうすると、トランスフェクトされた細胞は、内因性ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのメッセージを壊し、翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムが産生する。リボザイムは、アンチセンス分子と違って触媒的なので、より低い細胞内濃度が効率のために必要とされる。
【００７０】
あるいは、標的遺伝子の調節領域（即ち、標的遺伝子のプロモーター、および／またはエンハンサー）に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列を標的にして、標的ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子の転写を妨げる三重らせん構造を形成させることによって、内因性ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子の発現を抑制することが可能である（一般的には、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．，６（６），５６９−５８４；Ｈｅｌｅｎｅら，１９９２，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ，１９９２，Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４（１２），８０７−８１５を参照されたい）。
【００７１】
本発明のアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡ、リボザイム、および三重らせんの分子は、ＤＮＡおよびＲＮＡの分子の合成について当該技術分野で知られているどの方法によっても調製することが可能である。これらには、例えば、固相ホスホロアミダイト化学合成のような、当該技術分野で公知のオリゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチドを化学合成する技術が含まれる。オリゴヌクレオチドは、例えば（バイオリサーチ、アプライド・バイオシステムズ、などから市販されているような）自動化ＤＮＡ合成機の使用により、当該技術分野で既知の標準法によって合成可能である。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎら，１９８８，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９の方法により合成可能である。メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御孔ガラスポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１）の使用により調製可能である。あるいは、ＲＮＡ分子は、アンチセンスＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ転写により生成可能である。こうしたＤＮＡ配列は、Ｔ７若しくはＳＰ６ポリメラーゼプロモーターのような適したＲＮＡポリメラーゼプロモーターを取込む多種多様なベクターへ取込むことが可能である。あるいは、使用されるプロモーターに依存して構成的にかまたは誘導的にアンチセンスＲＮＡを合成するアンチセンスｃＤＮＡ構築体を細胞系へ安定的に導入してよい。
【００７２】
内因性標的遺伝子発現はまた、標的化相同的組換えを使用して、標的遺伝子またはそのプロモーターを不活性化するかまたは「ノックアウト」することによって抑制することが可能である（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１７，２３０−２３４；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，１９８７，Ｃｅｌｌ  ５１，５０３−５１２；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ら，１９８９，Ｃｅｌｌ  ５，  ３１３−３２１を参照されたい）。例えば、内因性標的遺伝子（標的遺伝子のコード領域または調節領域のいずれか一方）へ相同なＤＮＡが隣接した突然変異体の非機能性標的遺伝子（または完全に無関係なＤＮＡ配列）を、選択可能マーカーおよび／または陰性選択可能マーカーを伴うかまたは伴わずに使用してよく、標的遺伝子をｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞をトランスフェクトすることが可能である。標的化相同的組換えを介したＤＮＡ構築体の挿入は、標的遺伝子の不活性化をもたらす。こうしたアプローチは、不活性標的遺伝子をもった動物の子孫を生成するためにＥＳ（胚性幹）細胞への修飾を使用することが可能である農業分野（例えば、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，１９８７とＴｈｏｍｐｓｏｎ，１９８９，同上、を参照されたい）、または、特定の標的遺伝子の発現を阻害するために、「ＲＮＡ干渉」（「ＲＮＡｉ」）技術（Ｇｒｉｓｈｏｋ，Ｔａｂａｔａ，およびＭｅｌｌｏ，２０００，「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおけるＲＮＡｉの遺伝のための遺伝要件（Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ  ｏｆ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）」Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７（５４６２）：２４９４−２４９７）またはトランス遺伝子の導入（Ｄｅｒｎｂｕｒｇら，２０００，「Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ生殖細胞系列におけるトランス遺伝子仲介性の同時抑制（Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ  ｇｅｒｍ  ｌｉｎｅ）」Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１４（１３）：１５７８−１５８３）が使用される、線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）のようなモデル生物に特に適している。しかしながら、組換えＤＮＡ構築体が、ウイルスベクターのような適切なベクターを使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏで要求される部位へ直接投与されるか、または標的化される場合は、このアプローチはヒトへの使用に適用可能である。
【００７３】
本明細書に開示する核酸配列に対応する遺伝子（群）の発現を、増強、抑制、または修飾した生物が提供される。遺伝子発現において望ましい変化は、遺伝子から転写されるｍＲＮＡへ結合する、および／またはそれを切断するアンチセンス核酸またはリボザイムの使用により達成可能である（ＡｌｂｅｒｔおよびＭｏｒｒｉｓ，１９９４，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１５（７）：２５０−２５４；Ｌａｖａｒｏｓｋｙら，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６２（１）：１１−２２；およびＨａｍｐｅｌ，１９９８，Ｐｒｏｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５８：１−３９）。本明細書に開示する核酸配列に対応する、好ましくは形質転換細胞やその子孫の内部に安定的に維持されている遺伝子構築体での細胞の形質転換により産生される遺伝子（群）の多数コピーを有するトランスジェニック動物が提供される。遺伝子発現レベルを増加するかまたは減少するか、または遺伝子発現の時間的または空間的パターンを変化させる修飾された遺伝制御領域を有するトランスジェニック動物も提供される（ヨーロッパ特許：第０  ６４９  ４６４Ｂ１号を参照されたい）。さらに、本明細書に開示する核酸配列に対応する遺伝子（群）が、外来性配列の対応する遺伝子（群）への挿入によるか、または対応する遺伝子（群）の全部または一部の欠失により、不完全または完全に不活性化された生物が提供される。不完全または完全な遺伝子の不活性化は、転移因子の挿入（好ましくは、不正確な切除が後続する）（Ｐｌａｓｔｅｒｋ，１９９２，Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  １４（９）：６２９−６３３；Ｚｗａａｌら，１９９３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０（１６）：７４３１−７４３５；Ｃｌａｒｋら，１９９４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１（２）：７１９−７２２）または相同的組換え（好ましくは、陽性／陰性遺伝子選択戦略により検出される）（Ｍａｎｓｏｕｒら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：３４８−３５２；米国特許第５，４６４，７６４号；５，４８７，９９２号；５，６２７，０５９号；５，６３１，１５３号；５，６１４，３９６号；５，６１６，４９１号；および５，６７９，５２３号）により達成可能である。遺伝子発現が改変したこれらの生物は、好ましくは真核生物であり、より好ましくは哺乳動物である。こうした生物は、対応する遺伝子（群）が関与する障害の研究への非ヒトモデルの開発と、対応する遺伝子（群）のポリペプチド産物（群）と相互作用する分子を同定するためのアッセイ系の開発に有用である。
【００７４】
本発明内にまた含まれるのは、コンホメーションが改変されたパートナー結合部位を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド変異体であって、（１）ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン変異体は依然としてそのパートナー（群）へ結合するが、特定された低分子が改変した結合部位へフィットし、その相互作用を遮断するか、または（２）特定された低分子が存在しなければ、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン変異体が、もはやそのパートナー（群）へ結合しない、前記変異体である（例えば、Ｂｉｓｈｏｐら，２０００，Ｎａｔｕｒｅ  ４０７：３９５−４０１を参照されたい）。そのように改変したＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸は、本明細書に記載の方法にしたがって生物へ導入可能であり、対応するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする内因性核酸配列に置き換わることが可能である。こうした方法は、特定のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのその結合パートナーとの相互作用が、低分子化合物の全身的または局所的な方法での生物への投与により調節されることを可能にする。
【００７５】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群そのものはまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの生物学的活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法で阻害することにも利用可能である。本発明内に含まれるのは、融合ポリペプチドの断片または成分として発現される場合に、ネイティブなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド機能の「優性ネガティブ」阻害剤として作用する、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の突然変異領域である。例えば、本発明の改変ポリペプチド領域は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の内因性結合パートナーへの結合を阻害するために使用可能である。こうした使用は、有効に、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの相互作用を遮断し、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの活性を阻害するだろう。さらに、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群へ結合する抗体は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性をしばしば阻害し、アンタゴニストとして作用する。例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の１以上のエピトープ、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の保存変異体のエピトープ、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのペプチド断片を特異的に認識する抗体は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を阻害するために本発明において使用可能である。こうした抗体には、限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）、ヒト化またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および、上記のいずれかのエピトープ結合断片が含まれる。あるいは、本発明の精製および修飾されたＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と、膜結合性でないＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナーとの相互作用を変調させるために投与可能である。こうしたアプローチは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインに影響される生物活性の修飾の代替法を可能にするだろう。
【００７６】
代わりの側面において、さらに本発明には、増加したＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性が有益である疾患の症状を治療するかまたは寛解するための、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性のアゴニストの使用が含まれる。好ましい側面において、本発明は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの核酸またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインのポリペプチドを含んでなる組成物を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞へ、ｅｘ  ｖｉｖｏで細胞へ、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞へ、および／または脊椎動物や哺乳動物のような多細胞生物へ投与することを伴う。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの好ましい療法型は、上記のような可溶型である。本発明のなお別の側面において、組成物は、疾患の治療のために宿主生物においてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを発現させるために、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインコード核酸を投与することを含む。この点で特に好ましいのは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチドの異常な（例えば、減少した）内因性活性に関連した機能不全の治療のためのヒト患者における発現である。さらに、本発明には、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの内因性活性を強めることが見出された化合物を細胞および／または生物へ投与することが含まれる。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの活性を強める化合物の一例は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群または結合パートナーへ結合し、構成的な細胞内シグナル伝達を引き起こす（または「リガンド模倣」）ことか、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性のネイティブ阻害剤の結合を防止することによってＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を強めうる、アゴニスト性抗体、好ましくはモノクローナル抗体である。
【００７７】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群への抗体
本発明のポリペプチドと免疫反応する抗体を本明細書に提供する。こうした抗体は、（非特異結合とは対照的に）抗体の抗原結合部位を介してポリペプチドへ特異的に結合する。本発明において、特異的に結合する抗体とは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、相同体、および変異体を特異的に認識し、それと結合するが、他の分子とは結合しないものである。１つの好ましい態様において、抗体は、本発明のポリペプチド群に特異的であって、他のポリペプチドとは交差反応しない。このように、上記に説明されるようなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、変異体、融合ポリペプチド、などは、それらと免疫反応性の抗体を産生する場合の「免疫原」として利用可能である。
【００７８】
より具体的には、ポリペプチド、断片、変異体、融合ポリペプチド、などは、抗体の形成を誘発する抗原決定基またはエピトープを含有する。これらの抗原決定基またはエピトープは、直鎖または配座的（断続的）のいずれかであり得る。直鎖エピトープがポリペプチドのアミノ酸の単一部分から構成されるのに対し、配座的または断続的エピトープは、ポリペプチド鎖の様々な領域に由来し、ポリペプチドの折り畳みと同時に近傍へ集められるアミノ酸部分からなる（ＪａｎｅｗａｙおよびＴｒａｖｅｒｓ，「免疫生物学（Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」３：９（ガーランド・パブリッシング社、第２版、１９９６）。折り畳まれたポリペプチドは複雑な表面を有するので、利用可能なエピトープの数は膨大である；しかしながら、ポリペプチドのコンホメーションと立体障害のために、実際にエピトープへ結合する抗体の数は利用可能なエピトープの数より少ない（ＪａｎｅｗａｙおよびＴｒａｖｅｒｓ，「免疫生物学（Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」２：１４（ガーランド・パブリッシング社、第２版、１９９６））。エピトープは、当該技術分野で知られている方法のいずれでも同定可能である。このように、本発明の１つの側面は、本発明のポリペプチドの抗原性エピトープに関する。こうしたエピトープは、以下により詳しく記載されるように、抗体、特にモノクローナル抗体を産生するのに有用である。さらに、本発明のポリペプチド由来のエピトープは、アッセイにおける研究試薬として、そして、ポリクローナル血清や培養ハイブリドーマ由来の上清のような物質から特異結合抗体を精製するために使用可能である。こうしたエピトープまたはその変異体は、固相合成、ポリペプチドの化学的または酵素的切断のような当該技術分野で公知の技術を使用するか、または組換えＤＮＡ技術を使用して産生可能である。
【００７９】
本発明のポリペプチド群のエピトープにより誘発可能である抗体については、エピトープが単離されても、ポリペプチドの一部として留まっていても、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体のいずれもが慣用的技術により調製可能である。例えば、「モノクローナル抗体、ハイブリドーマ：生物学的解析の新次元（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ）」（Ｋｅｎｎｅｔら，監修）プレナム・プレス、ニューヨーク（１９８０）；および、「抗体：実験マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ監修）、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８８）；ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，（米国特許第４，３７６，１１０号）；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１−３００５；Ｃｏｌｅら，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０）；および、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，１９８５，「モノクローナル抗体と癌治療（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ）」アラン・Ｒ．リス社、７７−９６頁）を参照されたい。本発明のポリペプチド群に特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系も本明細書で企図される。こうしたハイブリドーマは、慣用的技術により産生し、同定することが可能である。本発明のｍＡｂを産生するハイブリドーマは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで培養可能である。高力価のｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ産生は、今日好ましい産生の方法である。こうしたハイブリドーマ細胞系を産生する１つの方法は、動物をポリペプチドで免疫化し；免疫化した動物から脾臓細胞を採取し；前記脾臓細胞を骨髄腫細胞系へ融合させ、それによりハイブリドーマ細胞を生成し；そして、該ポリペプチドへ結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系を同定する、ことを含む。ファージ・ディスプレイまたはリボソーム・ディスプレイ法のような、当業者に知られた他の技術を使用して、特別のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドエピトープに特異的な抗体を産生することが可能である。
【００８０】
抗体の産生のために、様々な宿主動物を、以下の１以上を用いた注射で免疫化することが可能である：ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの断片、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの機能的均等物、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの突然変異体型。こうした宿主動物には、限定されないが、ウサギ、モルモット、マウス、およびラットが含まれる場合がある。免疫学的応答を高めるには、宿主の種に依存して、様々なアジュバントが使用可能であり、限定されないが、フロイント（完全および不完全）アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱質ゲル、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、スカシガイヘモシアニン、ジニトロフェノール、並びにＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）および坐瘡プロピオンバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）のような潜在的に有用なヒトアジュバントが含まれる。モノクローナル抗体は、慣用的技術により回収可能である。こうしたモノクローナル抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびそのいかなるサブクラスも含む、いかなる免疫グロブリンのクラスであってもよい。
【００８１】
さらに、適切な抗原特異性のあるマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的活性のあるヒト抗体分子由来の遺伝子とともにスプライシングすることによる「キメラ抗体」の産生（Ｔａｋｅｄａら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４５２−４５４；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，１９８４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６４３−６４６；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２６８−２７０）のために開発された技術も使用可能である。キメラ抗体は、ブタｍＡｂ由来の可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域を有するもののように、異なる動物種に異なる部分が由来する分子である。本発明のモノクローナル抗体にはまた、マウスモノクローナル抗体のヒト化型も含まれる。こうしたヒト化抗体は既知の技術により調製可能であり、抗体をヒトへ投与するときに、低減した免疫原性という利点を提供することが可能である。１つの態様において、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス抗体の可変領域（または、その抗原結合部位のみ）とヒト抗体に由来する定常領域を含む。あるいは、ヒト化抗体断片は、マウスモノクローナル抗体の抗原決定部位と、ヒト抗体に由来する（抗原決定部位を欠く）可変領域断片を含むことが可能である。キメラ抗体とさらに工学処理されるモノクローナル抗体の産生の方法には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，（Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３，１９８８），Ｌｉｕら，（ＰＮＡＳ  ８４：３４３９，１９８７），Ｌａｒｒｉｃｋら，（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４，１９８９）、並びにＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ（ＴＩＰＳ  １４：１３９，Ｃａｎ，１９９３）に記載されるものが含まれる。抗体をヒト化するのに有用な技術は、米国特許第６，０５４，２９７号にも論じられている。抗体をトランスジェニックに生成する方法は、ＧＢ２，２７２，４４０、米国特許第５，５６９，８２５号および５，５４５，８０６号と、その関連特許に見出すことが可能である。好ましくは、ヒトでの使用では、抗体はヒトであるかまたはヒト化されていて、こうしたヒトまたはヒト化抗体を創出する技術も周知であり、例えば、メダレクス（Ｍｅｄａｒｅｘ）社（ニュージャージー州プリンストン）とアブジェニクス（Ａｂｇｅｎｉｘ）社（カリフォルニア州フレモント）から市販されている。別の好ましい態様において、ヒトでの使用のための完全にヒトの抗体が、ヒト抗体可変ドメインのファージ・ディスプレイ・ライブラリーをスクリーニングすることによって産生される（Ｖａｕｇｈａｎら，１９９８，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（６）：５３５−５３９；および、米国特許第５，９６９，１０８号）。
【００８２】
特異エピトープを認識する抗原結合性抗体断片は、既知の技術により生成可能である。例えば、こうした断片には、限定されないが、抗体分子のペプシン消化により産生可能なＦ（ａｂ’）２断片と、このＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって産生可能であるＦａｂ断片が含まれる。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築し（Ｈｕｓｅら，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−１２８１）、望ましい特異性をもったモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ容易な同定を可能にしてもよい。単鎖抗体の産生について記載される技術（米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄら，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４６）を適用し、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子産物に対する単鎖抗体を産生することも可能である。単鎖抗体は、Ｆｖ領域の重鎖および軽鎖断片をアミノ酸架橋により連結し、単鎖ポリペプチドを生じることにより形成される。こうした単鎖抗体はまた、例えば、ＨＩＶ感染の遺伝子治療についてＭａｒａｓｃｏら，（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：２２３−２３８，１９９９）により記載されるように、細胞内で（即ち、「内体（ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ）」として）有用である場合がある。さらに、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドへの抗体はまた、当業者に公知の技術を使用して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを「模倣」し、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの結合パートナーへ結合することが可能である抗イディオタイプ抗体を生成するために利用可能である（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ，１９９３，ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４；およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【００８３】
本発明のポリペプチド群と免疫反応する抗体には、二重特異性抗体（即ち、第一の抗原結合ドメインにより本発明のポリペプチド群と免疫反応し、第二の抗原結合ドメインにより異なるポリペプチドとも免疫反応する抗体）が含まれる。多様な二重特異性抗体が調製され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方で有用であることがわかった（例えば、米国特許第５，８０７，７０６号；並びにＣａｏおよびＳｕｒｅｓｈ，１９９８，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ９：６３５−６４４を参照されたい）。二重特異性抗体を調製する数多くの方法が当該技術分野で知られていて、クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａｓ）（２つの異なるハイブリドーマを融合することによって形成される）のようなハイブリッド−ハイブリドーマや、トリオーマ（ハイブリドーマをリンパ球と融合することによって形成される）の使用が含まれる（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５４０；米国特許第４，４７４，８９３号；および米国特許第６，１０６，８３３号）。米国特許第６，０６０，２８５号は、少なくとも第一の特異性を有する抗体の軽鎖と重鎖の可変部分の遺伝子を、第二の特異性を有する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞へトランスフェクトする、二重特異性抗体の産生法を開示する。抗体断片の化学的カップリングも、２つの異なる抗原への特異性を有する抗原結合分子を調製するために使用されてきた（Ｂｒｅｎｎａｎら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３；Ｇｌｅｎｎｉｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８７，１３９：２３６７−２３７５；および、米国特許第６，０１０，９０２号）。二重特異性抗体はまた、組換え手段により、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，（Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３；１９９２）に記載されるように、（選好的にヘテロ二量体を形成する）ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパー部分を使用することによって、産生可能である。米国特許第５，５８２，９９６号は、二重特異性抗体の産生においてヘテロ二量体の形成を促進する（ロイシンジッパー部分や他の「鍵と鍵穴」相互活性ドメイン構造のような）相補的な相互活性ドメインの使用を開示する。米国特許第５，９５９，０８３号に記載されるように、抗体のＦ（ａｂ’）２断片の重鎖をコードするＤＮＡを、第二のＦ（ａｂ’）２分子（ＣＨ１ドメインがＣＨ３ドメインに置き換えられている）の重鎖をコードするＤＮＡか、抗体の単鎖Ｆｖ断片をコードするＤＮＡのいずれかと融合させることによって、四価の二重特異性分子を調製することが可能である。生じた融合遺伝子が、哺乳動物細胞において、対応する軽鎖の遺伝子とともに発現されると、選択された抗原への特異性を有する四価の二重特異性分子が生じる。二重特異性抗体はまた、米国特許第５，８０７，７０６の記載のように調製してもよい。一般に、この方法は、（小さなアミノ酸側鎖をより大きなアミノ酸側鎖に置き換えることによって構築される）突起部分を第一のポリペプチドの界面に導入し、（大きなアミノ酸側鎖をより小さなそれに置き換えることによって調製される）対応する空洞部分を第二のポリペプチド界面中に導入することを伴う。さらに、単鎖可変断片（ｓＦｖｓ）が、２つの可変ドメインを共有結合することによって調製されてきた；生じた抗体断片は、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーの長さに依存して、二量体または三量体を形成することが可能である（Ｋｏｒｔｔら，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０：４２３−４３３）。
【００８４】
こうした抗体が同定可能であるスクリーニング方法がよく知られていて、例えば、免疫アフィニティークロマトグラフィーを伴う場合がある。抗体について、アゴニスト性の（即ち、リガンド模倣的な）特性をスクリーニングすることが可能である。こうした抗体は、細胞表面のＩＭＸ１２９８４０サイトカインへ結合すると、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナーが細胞表面のＩＭＸ１２９８４０サイトカインへ結合する場合に誘導される生物学的効果に類似した生物学的効果（例えば、生物学的シグナルの伝達）を誘導する。アゴニスト性抗体は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン仲介性細胞刺激経路または細胞間情報伝達を誘導するために使用可能である。二重特異性抗体は、２つの個別アッセイか、または第一の抗原と第二の抗原（後者は検出可能部分へカップルしている）との架橋として二重特異性抗体が役立つアッセイを用いたスクリーニングにより同定可能である。本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群へ第一の抗原結合ドメインを介して結合する二重特異性抗体は、診断応用と、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖または発生が関与する状態および疾患を治療するのに有用であろう。
【００８５】
本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの結合パートナーへの結合を遮断することが可能である抗体は、こうした結合から生じるＩＭＸ１２９８４０サイトカイン仲介性の細胞間情報伝達または細胞刺激を阻害するために使用可能である。こうした遮断抗体は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナーを発現する特定の細胞へのＩＭＸ１２９８４０サイトカインの結合を阻害する能力について抗体を試験することのような、どの適切なアッセイ方法を使用しても同定可能である。あるいは、遮断抗体は、可溶性ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの標的細胞への結合から生じる生物学的効果を阻害する能力についてのアッセイにおいて同定可能である。抗体は、例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナー仲介性の細胞刺激経路を阻害する能力についてアッセイ可能である。こうした抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法で利用可能であるか、またはその抗体を生成する実体により仲介される生物学的活性を阻害するためにｉｎ  ｖｉｖｏで投与可能である。このようにして、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインの細胞表面結合パートナー受容体との相互作用により引き起こされるかまたは（直接的または間接的に）増悪される障害を治療することが可能である。療法は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナー仲介性の生物学的活性を阻害するのに有効な量で、遮断抗体を哺乳動物へｉｎ  ｖｉｖｏ投与することを伴う。一般に、モノクローナル抗体は、こうした療法での使用に好ましい。１つの態様において、抗原結合性抗体断片が利用される。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインに対して向けられる抗体と生理学的に許容される希釈剤、賦形剤、または担体を含んでなる組成物が本明細書に提供される。こうした組成物の適切な成分は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを含有する組成物について以下に記載される通りである。
【００８６】
また本明細書に提供されるのは、抗体へ付着した、検出可能（例、診断）であるか、または療法剤を含んでなるコンジュゲートである。こうした剤の例は上記に示される。該コンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法に使用を見出す。本発明の抗体はまた、本発明のポリペプチドまたは断片の存在をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで検出するアッセイにおいても使用可能である。抗体はまた、本発明のポリペプチドまたは断片を免疫アフィニティークロマトグラフィーにより精製する場合にも利用可能である。
【００８７】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と相互作用する化合物の合理的デザイン
合理的ドラッグデザインの目標は、目的の生物学的に活性なポリペプチドまたはそれらが相互作用する低分子、例えば、阻害剤、アゴニスト、アンタゴニスト、などの構造類似体を産生することである。これらの例のいずれもが該ポリペプチドのより活性であるかまたはより安定な型である薬物、またはポリペプチドの機能をｉｎ  ｖｉｖｏで高めるか、またはそれに干渉する薬物を形成するために使用可能である（Ｈｏｄｇｓｏｎ  Ｊ（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１９−２１）。１つのアプローチにおいて、目的のポリペプチド、またはポリペプチド−阻害剤複合体の三次元構造が、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、またはコンピュータ相同性モデリング、または最も典型的には、これらアプローチの組み合わせにより決定される。分子の構造を解明し、活性部位（群）を決定するには、ポリペプチドの形状と電荷の両方を確定しなければならない。稀であるが、ポリペプチドの構造に関する有用な情報が、相同ポリペプチドの構造に基づいたモデリングにより得られる場合がある。いずれの場合でも、類似のＩＭＸ１２９８４０サイトカイン様分子を設計すること、効率的な阻害剤を同定すること、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドへ結合する低分子を同定することのために、関連した構造情報が使用される。合理的ドラッグデザインの有用な例には、Ｂｒａｘｔｏｎ  ＳおよびＷｅｌｌｓ  ＪＡ（１９９２  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１：７７９６−７８０１）に示されるように活性または安定性を向上させたか、または、Ａｔｈａｕｄａ  ＳＢら（１９９３  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １１３：７４２−７４６）に示されるようにネイティブペプチドの阻害剤、アゴニスト、またはアンタゴニストとして作用する分子が含まれる。阻害剤設計と、阻害剤−ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド相互作用を研究する場合に役立つ分子モデリングソフトウェアシステムにおけるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド構造情報の使用も本発明に含まれる。本発明の特定の方法は、基質の可能な結合部位についてＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の三次元構造を解析し、予測される反応部位を取込む新規分子を合成し、そして、本明細書にさらに記載されるように該新規分子をアッセイする、ことを含む。
【００８８】
本明細書にさらに記載するような機能アッセイにより選択される標的特異抗体を単離し、次いで、その結晶構造を解読することも可能である。このアプローチは、原理的に、後続のドラッグデザインの基礎となることが可能なファーマコア（ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ）をもたらす。機能的な、薬理学的に活性な抗体への抗イディオタイプ抗体（抗ｉｄｓ）を生成することによってポリペプチド結晶学を完全に回避することが可能である。鏡像の鏡像として、抗ｉｄｓの結合部位は、元の抗原の類似体であると予測されるだろう。次いで、抗ｉｄを使用して、化学的または生物学的に産生したペプチドのバンクからペプチドを同定し、そして単離することが可能である。その後、単離ペプチドは、ファーマコアとして機能するだろう。
【００８９】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性のアッセイ
（ポリペプチド、ポリペプチド、断片、変異体、オリゴマー、および他の型を含む）本発明の精製ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、多様なアッセイにおいて有用である。例えば、本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカイン分子は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の結合パートナーを同定するために使用可能であり、これはまた、細胞間情報伝達、細胞刺激、または免疫細胞活性を変調させるために使用可能である。あるいは、それらは、細胞間情報伝達、細胞刺激経路、または免疫細胞活性を変調させる非結合パートナー分子または基質を同定するために使用可能である。
【００９０】
結合パートナーを同定するアッセイ。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーのポリペプチド群とその断片は、結合パートナーを同定するために使用可能である。例えば、それらは、慣用的な結合アッセイのような、いかなる適切なアッセイにおいても、候補結合パートナーへ結合する能力について試験することが可能である。例を挙げると、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドは、検出可能試薬（例、放射性核種、発色団、比色または蛍光反応を触媒する酵素、など）で標識してよい。標識されたポリペプチドを、候補結合パートナーを発現する細胞と接触させる。次いで、細胞を洗浄して未結合の標識ポリペプチドを除去し、そして標識の性質にしたがって選択される適切な技術により、細胞結合標識の存在を決定する。
【００９１】
結合アッセイ法の一例は以下の通りである。候補結合パートナーｃＤＮＡを含有する組換え発現ベクターを構築する。この組換え発現ベクターで、１０ｃｍ２ディッシュ中のＣＶ１−ＥＢＮＡ−１細胞をトランスフェクトする。ＣＶ−１／ＥＢＮＡ−１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４７８）は、ＣＭＶ極初期エンハンサー／プロモーターから発動されるＥＢＶ核抗原−１を構成的に発現する。ＣＶ１−ＥＢＮＡ−１は、ＭｃＭａｈａｎら，（ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：２８２１，１９９１）に記載されるように、アフリカミドリザルの腎臓細胞系ＣＶ−１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）に由来した。トランスフェクトされた細胞を２４時間培養してから、各ディッシュの細胞を２４穴プレートへ分ける。さらに４８時間培養した後で、トランスフェクトされた細胞（約４ｘ１０４細胞／ウェル）をＢＭ−ＮＦＤＭで洗浄する。これは、結合培地（ウシ血清アルブミン２５ｍｇ／ｍｌ，アジ化ナトリウム２ｍｇ／ｍｌ，２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ７．２を含有するＲＰＭＩ  １６４０）に、５０ｍｇ／ｍｌの無脂肪乾燥ミルクを加えたものである。次いで、この細胞を、例えば、上記のように作製した、様々な濃度の可溶性ポリペプチド／Ｆｃ融合ポリペプチドとともに３７℃で１時間インキュベートする。次いで、細胞を洗浄し、一定飽和濃度の１２５Ｉ−マウス抗ヒトＩｇＧとともに、結合培地において、穏やかに振り混ぜながら３７℃で１時間インキュベートする。しっかりと洗浄した後で、トリプシン処理により細胞を遊離させる。上記に利用されるマウス抗ヒトＩｇＧは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域に対して向けられていて、ジャクソン・イムノリサーチ・ラボラトリーズ社、ペンシルヴェニア州ウェストグローブから得ることが可能である。該抗体は、標準的なクロラミン−Ｔ法を使用して放射ヨード化される。該抗体は、細胞へ結合したいかなるポリペプチド／ＦｃポリペプチドのＦｃ部分へも結合するだろう。すべてのアッセイにおいて、Ｆｃ融合ポリペプチド／Ｆｃの非存在下、並びに、Ｆｃ融合ポリペプチドと２００倍モル濃度過剰の非標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体の存在下で、１２５Ｉ−抗体の非特異結合をアッセイする。細胞結合性１２５Ｉ−抗体をパッカード・オートガンマ（Ａｕｔｏｇａｍｍａ）カウンターで定量する。Ｍｉｃｒｏｖａｘコンピュータで作動するＲＳ／１（ＢＢＮソフトウェア、ボストン、ＭＡ）でアフィニティー計算値（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０，１９４９）を出す。結合はまた、シンチレーション近似アッセイ（Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄら，１９８５，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８２：８６７２−８６７６）、均一時間分割蛍光法（Ｐａｒｋら，１９９９，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２６９：９４−１０４）、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）法（Ｃｌｅｇｇ  ＲＭ，１９９５，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ６：１０３−１１０）、または、例えばバイオコアＡＢ（ウプサラ、スウェーデン）により供給されるようなバイオセンサーを使用して、結合したポリペプチドが潜在的な結合パートナーへ曝露される場合の表面プラスモン共鳴の変化を測定する方法のような、ハイスループットスクリーニング法によく適している方法を使用して、検出可能である。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群への結合についてアッセイすることが可能である化合物には、限定されないが、シグマ−アルドリッチ（ミズーリ州セントルイス）、Ａｒｑｕｌｅ（マサチューセッツ州ウォバーン）、Ｅｎｚｙｍｅｄ（アイオワ州アイオワシティ）、メイブリッジケミカル社（トレヴィレット、コーンウォール、イギリス）、ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓ（ワシントン州ボセル）、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ニュージャージー州プリンストン）、およびＴｒｅｇａ（カリフォルニア州サンディエゴ）のような企業から、多量のコンビナトリアルケミストリー化合物「ライブラリー」の一部としてよく市販されているような、低有機分子が含まれる。これらのアッセイを使用するスクリーニングに好ましい低有機分子は、通常１０Ｋ未満の分子量であり、細胞浸透を高める、分解に抵抗する、および／またはその生理学的半減期を延長させるといういくつかの物理化学的および薬理学的特性を所持することが可能である（Ｇｉｂｂｓ，Ｊ．，１９９４，「分子腫瘍学における製薬研究（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）」Ｃｅｌｌ  ７９（２）：１９３−１９８）。天然産物、無機化学品、および、タンパク質および毒素のような生物学的活性物質を含む化合物も、上記の方法を使用して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドへ結合する能力についてアッセイすることが可能である。
【００９２】
酵母２−ハイブリッドまたは「相互作用トラップ」アッセイ。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドは、（例えば、受容体−リガンド相互作用において）別のポリペプチドへ結合するか、または潜在的に結合するので、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをコードする核酸も、結合が起こる他のポリペプチドをコードする核酸を同定するか、または結合相互作用の阻害剤を同定するための（例えば、Ｇｙｕｒｉｓら，Ｃｅｌｌ  ７５：７９１−８０３（１９９３）に記載されるような）相互作用トラップアッセイに使用可能である。これらの結合相互作用に関与するポリペプチドはまた、結合相互作用のペプチドまたは低分子の阻害剤若しくはアゴニストをスクリーニングするために使用可能である。
【００９３】
競合結合アッセイ。別の種類の適切な結合アッセイは、競合結合アッセイである。例を挙げると、変異体の生物学的活性は、候補結合パートナーへの結合についてネイティブなポリペプチドと競合する変異体の能力をアッセイすることによって決定可能である。競合結合アッセイは、慣用的な方法論により実施可能である。競合結合アッセイに利用可能である試薬には、放射標識ＩＭＸ１２９８４０サイトカインと、細胞表面上で（内因性または組換え）ＩＭＸ１２９８４０サイトカインを発現するインタクト細胞が含まれる。例えば、放射標識可溶性ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン断片が、細胞表面受容体への結合について可溶性ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン変異体と競合するために使用可能である。インタクト細胞の代わりに、（固相上の）ポリペプチドＡまたはポリペプチドＧのＦｃ部分との相互作用を介して固相へ結合した可溶性結合パートナー／Ｆｃ融合ポリペプチドを代用してもよい。ポリペプチドＡおよびポリペプチドＧを含有するクロマトグラフィーカラムには、ファルマシア・バイオテク社、ニュージャージー州ピスカタウェイから供されるものが含まれる。
【００９４】
細胞増殖、細胞死、細胞分化、および細胞接着のアッセイ。本発明のポリペプチドは、サイトカイン、細胞増殖（誘導するかまたは阻害する）、または細胞分化（誘導するかまたは阻害する）の活性を示すことが可能であるか、またはある細胞集団では他のサイトカインの産生を誘導することが可能である。今日までに発見された多くのポリペプチド因子は、１以上の因子依存型細胞増殖アッセイにおいてこうした活性を示したので、このアッセイは、細胞刺激活性の簡便な確認法として役立つ。本発明のポリペプチドの活性は、限定せずに、３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ  Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅ、およびＣＭＫを含む細胞系についての、いくつかの定常因子依存型細胞増殖アッセイのいずれか１つにより裏付けられる。本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの活性は、とりわけ、以下の方法により測定可能である：
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖に関するアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（３．１−３．１９頁：マウスリンパ球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されるものが含まれる。
【００９５】
脾臓細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖に関するアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、ＫｒｕｉｓｂｅｅｋおよびＳｈｅｖａｃｈ，１９９４「ポリクローナルＴ細胞刺激（Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）」第１巻、３．１２．１−３．１２．１４頁；および「免疫学の最新プロトコル」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，１９９４「マウスおよびヒトのγ−インターフェロンの測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  γ）」第１巻、６．８．１−６．８．８頁に記載されるものが含まれる。
【００９６】
造血細胞およびリンパ生成細胞の増殖および分化に関するアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｂｏｔｔｏｍｌｙら，１９９１「ヒトおよびマウスのインターロイキン−２およびインターロイキン−４の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ４）」第１巻、６．３．１−６．３．１２頁；ｄｅＶｒｉｅｓら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．１９９１「マウスおよびヒトのインターロイキン−６の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６）」第１巻、６．６．１−６．６．５頁；Ｓｍｉｔｈら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｂｅｎｎｅｔｔら，１９９１「ヒトインターロイキン−１１の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １１）」第１巻、６．１５．１頁；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｃｉａｒｌｅｔｔａら，１９９１「マウスおよびヒトのヒトインターロイキン−９の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ９」第１巻、６．１３．１頁に記載されるものが含まれる。
【００９７】
抗原に対するＴ細胞クローン応答に関するアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞の効果を指示するだけでなくＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすポリペプチドを、増殖とサイトカイン産生を測定することによって同定するもの）には、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウスリンパ球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ；第６章、サイトカインとその細胞受容体；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されるものが含まれる。
【００９８】
胸腺細胞または脾臓細胞への細胞傷害性に関するアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウスリンパ球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、３．１−３．１９頁；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎｅｔら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４に記載されるものが含まれる。
【００９９】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングに関するアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を変調させ、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；および「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、ＭｏｎｄおよびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，１９９４「Ｂ細胞機能のアッセイ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗体産生（Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）」第１巻、３．８．１−３．８．１６頁、に記載されるものが含まれる。
【０１００】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）に関するアッセイ（とりわけ、Ｔｈ１およびＣＴＬの応答を主に産生するポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウスリンパ球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、３．１−３．１９；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００；１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１０１】
樹状細胞依存性アッセイ（とりわけ、ネイティブＴ細胞を活性化する樹状細胞により発現されるポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５４：５０７１−５０８９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されるものが含まれる。
【０１０２】
リンパ球生存／アポトーシスのアッセイ（特に、超抗原誘導後のアポトーシスを防止するポリペプチドとリンパ球のホメオスタシスを調節するポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈら，Ｃｅｌｌ  ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １：  ６３９−６４８，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１０３】
Ｔ細胞の拘束および発生の初期段階に影響を及ぼすポリペプチドに関するアッセイには、限定なしに、Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ  ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されるものが含まれる。
【０１０４】
胚性幹細胞分化に関するアッセイ（とりわけ、胚分化造血作用に影響を及ぼすポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５：１４１−１５１，１９９５；Ｋｅｌｌｅｒら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３：４７３−４８６，１９９３；ＭｃＣｌａｎａｈａｎら，Ｂｌｏｏｄ  ８１：２９０３−２９１５，１９９３に記載されるものが含まれる。
【０１０５】
幹細胞の生存および分化に関するアッセイ（とりわけ、リンパ−造血作用を調節するポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、「造血細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ）」Ｆｒｅｓｈｎｅｙら，監修、ウィリー−リス社、ニューヨーク州ニューヨーク中、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９９４「メチルセルロースコロニー形成アッセイ（Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ａｓｓａｙｓ）」２６５−２６８頁；Ｈｉｒａｙａｍａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５９０７−５９１１，１９９２；「造血細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ）」Ｆｒｅｓｈｎｅｙら，監修、ウィリー−リス社、ニューヨーク州ニューヨーク中、ＭｃＮｉｅｃｅおよびＢｒｉｄｄｅｌ，１９９４「高い増殖ポテンシャルを有する始原造血コロニー形成細胞（Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ｐｒｏｆｅｒａｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」２３−３９頁；Ｎｅｂｅｎら，Ｅｘｐｅｒｉｍａｎｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２２：３５３−３５９，１９９４；「造血細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ）」Ｆｒｅｓｈｎｅｙら，監修、ウィリー−リス社、ニューヨーク州ニューヨーク中、Ｐｌｏｅｍａｃｈｅｒ，１９９４「丸石領域形成細胞アッセイ（Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ  ａｒｅａ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ａｓｓａｙ）」１−２１頁；「造血細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ）」Ｆｒｅｓｈｎｅｙら，監修、ウィリー−リス社、ニューヨーク州ニューヨーク中、Ｓｐｏｏｎｃｅｒら，１９９４「ストローマ細胞存在下での長期骨髄培養（Ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ）」１６３−１７９頁；「造血細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ）」Ｆｒｅｓｈｎｅｙら，監修、ウィリー−リス社、ニューヨーク州ニューヨーク中、Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，１９９４「長期培養開始の細胞アッセイ（Ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ａｓｓａｙ）」１３９−１６２頁に記載されるものが含まれる。
【０１０６】
組織産生活性に関するアッセイには、限定なしに、国際特許公報第ＷＯ９５／１６０３５号（骨、軟骨、腱）；国際特許公報第ＷＯ９５／０５８４６号（神経、ニューロン）；国際特許公報第ＷＯ９１／０７４９１号（皮膚、内皮）に記載されるものが含まれる。創傷治癒に関するアッセイには、限定なしに、ＥａｇｌｓｔｅｉｎおよびＭｅｒｔｚ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ７１：３８２−８４により変更されるように、Ｗｉｎｔｅｒ，「表皮創傷治癒（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ）」７１−１１２頁（ＭａｉｂａｃｈおよびＲｏｖｅｅ，監修）、イヤーブック・メディカル・パブリッシャーズ社、シカゴに記載されるものが含まれる。
【０１０７】
細胞の運動および接着に関するアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第６．１２章、αおよびβ−サイトカインの測定、６．１２．１−６．１２．２８）；Ｔａｕｂら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１３７０−１３７６；Ｌｉｎｄら，ＡＰＭＩＳ  １０３：１４０−１４６，１９９５；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４４−１７４８；Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８６０−５８６７，１９９４；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：１７６２−１７６８に記載されるものが含まれる。
【０１０８】
受容体−リガンド活性のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第７．２８章、静的条件下での細胞接着の測定、７．２８．１−７．２８．２２）；Ｔａｋａｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：６８６４−６８６８，１９８７；Ｂｉｅｒｅｒら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８：１１４５−１１５６，１９８８；Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：１４９−１６０，１９８９；Ｓｔｏｌｔｅｎｂｏｒｇら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：５９−６８，１９９４；Ｓｔｉｔｔら，Ｃｅｌｌ  ８０：６６１−６７０，１９９５に記載されるものが含まれる。
【０１０９】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群および核酸の診断薬や他の使用
本発明により提供されるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸は、数多くの診断または他の有用な目的に使用可能である。本発明の核酸は、対応するポリペプチドが（構成的に、または組織の分化または発生、または病的状態の特殊な段階で）選好的に発現される組織のマーカーとして；サザンゲル上の分子量マーカーとして；染色体を同定するかまたは関連する遺伝子の位置をマップするための染色体マーカーまたは（標識化のときの）タグとして；患者の内因性ＤＮＡ配列と比較して、潜在的な遺伝障害を同定するために；ハイブリダイズさせることにより新規関連ポリヌクレオチドを発見するためのプローブとして；遺伝子フィンガープリンティングのためにＰＣＲプライマーを誘導するための情報供給源として；他の新規核酸を発見する方法において既知のポリヌクレオチドを「取り去る」ためのプローブとして；発現パターンの試験を含む、「遺伝子チップ」または他の支持体へ付着させるためのオリゴマーを選択して作製するために；ＤＮＡ免疫化技術を使用して抗ポリペプチド抗体を産生するために；抗ＤＮＡ抗体を産生させるかまたは他の免疫応答を誘発するための抗原として；並びに、遺伝子治療のために、組換えポリペプチドを解析、特性決定、または療法使用のために発現させるために使用可能である。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群と断片化ポリペプチド群の使用には、限定されないが、以下が含まれる：ポリペプチドを精製し、その活性を測定すること；搬送剤；療法および研究用の試薬；分子量および等電点電気泳動のマーカー；ペプチド断片化の対照物；未知のポリペプチドの同定；および、抗体の調製。これらの使用に適したいくつかまたはすべての核酸は、製品としての商品化のために試薬グレードまたはキット形式へ開発することが可能である。上記に列挙した使用を実施する方法は、当業者によく知られている。こうした方法を開示する参考文献には、限定なしに、「分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」第２版、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｅ．Ｆ．ＦｒｉｔｓｃｈおよびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ監修、１９８９）と「酵素学の方法：分子クローニング技術の手引き（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、アカデミックプレス、Ｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．およびＡ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ監修、１９８７が含まれる。
【０１１０】
プローブとプライマー。開示されるＩＭＸ１２９８４０サイトカイン核酸、およびその断片の組み合わせの使用の中に、プローブまたはプライマーとしての断片の使用がある。一般に、こうした断片は、少なくとも約１７の隣接するヌクレオチドのＤＮＡ配列を含む。他の態様において、ＤＮＡ断片は、少なくとも３０、または少なくとも６０の隣接するヌクレオチドのＤＮＡ配列を含む。ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を及ぼす基本パラメーターと適切な条件を設計するための手引きは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９に示され、上記に詳しく記載されている。遺伝暗号の知識を上記に示されるアミノ酸配列と組み合わせて使用すれば、縮重オリゴヌクレオチドの組を調製することが可能である。こうしたオリゴヌクレオチドは、例えばＤＮＡ断片を単離して増幅する、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）におけるプライマーとして有用である。特定の態様において、非ヒト遺伝子ライブラリーのプローブとして縮重プライマーを使用することが可能である。こうしたライブラリーには、限定されないが、ｃＤＮＡライブラリー、ゲノムライブラリー、およびエレクトロニックＥＳＴ（発現配列タグ）またはＤＮＡライブラリーさえも含まれるだろう。次いで、この方法により同定される相同配列は、非ヒトＩＭＸ１２９８４０サイトカイン相同体を同定するためのプローブとして使用されよう。
【０１１１】
染色体マッピング。当業者は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸と、これら核酸の開示される断片および組み合わせを使用し、既知の技術を使用して、これらの核酸がマップされるヒト染色体を同定することが可能である。有用な技術には、限定されないが、放射ハイブリッドマッピング（高解像度）、染色体スプレッドへのｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（中程度の解像度）、および個別のヒト染色体を含有するハイブリッド細胞系へのサザンブロットハイブリダイゼーション（低解像度）のような様々な公知技術におけるプローブとして、オリゴヌクレオチドを含む配列または部分を使用することが含まれる。例えば、染色体は放射ハイブリダイゼーションによりマップすることが可能である。あるいは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをコードする核酸に対応するゲノム配列が、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ）、Ｌｏｃｕｓｌｉｎｋ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ：８０／ＬｏｃｕｓＬｉｎｋ／）、Ｕｎｉｇｅｎｅ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＵｎｉＧｅｎｅ）、ＡｃｅＶｉｅｗ（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＡｃｅＶｉｅｗ）、Ｏｎｌｉｎｅ  Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ  Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍａｎ（ＯＭＩＭ）（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｏｍｉｍ）のような公用および専用のデータベースとＣｅｌｅｒａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ｃｅｌｅｒａ．ｃｏｍ）のような専用データベースにおける配列との比較によりマップされる。これらの利用可能なゲノム配列情報のコンピュータ解析は、ヒトＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする配列へ対応するヒトのゲノム配列の特定の染色体位置の同定と、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインゲノム配列と既知のヒト遺伝障害の遺伝マップ位置との間のユニークな遺伝子マッピング関係を提供することが可能である。
【０１１２】
診断薬と遺伝子治療。当業者は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードする核酸とこれら核酸の開示される断片および組み合わせを使用し、周知の技術を使用して、これらのポリペプチドに対応する遺伝子に関連した異常を解析することが可能である。このことにより、このマーカーが再配置されるかまたは欠失されている種々の状態を識別することが可能になる。さらに、本発明の核酸またはその断片は、位置不明の他の遺伝子をマップするための位置マーカーとして使用可能である。該ＤＮＡは、本発明の核酸に対応する遺伝子の欠損、または不十分な量により（直接的または間接的に）仲介されるあらゆる障害の治療法を開発するときにも使用可能である。ネイティブヌクレオチド配列の本明細書での開示により、欠陥遺伝子の検出と、正常遺伝子でのその置換が可能になる。欠陥遺伝子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断アッセイにおいて、この遺伝子の欠陥部分を宿していることが疑われる人物に由来する遺伝子の配列と本明細書に開示するネイティブヌクレオチド配列の比較により検出可能である。
【０１１３】
結合パートナーのスクリーニング方法。本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、結合パートナーをスクリーニングするかまたは同定する方法において試薬としてそれぞれ使用可能である。例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群は、固形支持体材料へ付けることが可能であり、アフィニティークロマトグラフィーに類似したやり方で、その結合パートナーへ結合してよい。特定の態様においては、慣用的な手順によりポリペプチドを固形支持体へ付ける。例えば、ポリペプチドのアミノ酸側鎖の官能基と反応する官能基を含有するクロマトグラフィーカラムが利用可能である（ファルマシア・バイオテク社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）。あるいは、（上記に論じたような）ポリペプチド／Ｆｃポリペプチドを、Ｆｃ部分との相互作用によりプロテインＡまたはプロテインＧ含有クロマトグラフィーカラムへ付ける。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群はまた、細胞表面上でＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合パートナーを発現する細胞を同定することに使用を見出す。精製したＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを、カラムクロマトグラフィーマトリックス、または類似の適切な基質のような固相へ結合させる。例えば、磁気微小球体をこのポリペプチドでコートして、磁場によりインキュベーション容器中に固定してよい。潜在的な結合パートナーを発現する細胞を含有する細胞混合物の懸濁液を、該ポリペプチドをその上に有する固相と接触させる。細胞表面上で結合パートナーを発現する細胞はこの固定化ポリペプチドへ結合し、未結合細胞は洗い流される。あるいは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを検出可能な部分へコンジュゲートさせ、次いで細胞とインキュベートして結合パートナーの発現を試験することが可能である。インキュベーションの後で、未結合の標識物質を除去し、検出可能部分の細胞上での存在または非存在を決定する。さらに他のやり方では、結合パートナーを発現することが疑われる細胞の混合物をビオチン化ポリペプチドとインキュベートする。インキュベーション時間は、典型的には、十分な結合を確実にするために、少なくとも１時間である。次いで、生じた混合物を、アビジンコート化ビーズで充填したカラムに通し、それにより、アビジンへのビオチンの高アフィニティーにより、望ましい細胞のビーズへの結合が提供される。アビジンコート化ビーズを使用する手順が知られている（Ｂｅｒｅｎｓｏｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０Ｄ：２３９，１９８６を参照されたい）。未結合材料を除去するための洗浄と結合した細胞の遊離は、慣用法を使用して実施する。ある場合には、結合パートナーをスクリーニングするかまたは同定するための上記方法はまた、こうした結合パートナー分子やそれらを発現する細胞を単離するかまたは精製するために使用可能であるかまたは修飾可能である。
【０１１４】
生物学的活性の測定。ポリペプチド群はまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン結合ポリペプチドの生物学的活性をその結合アフィニティーに関して測定することに使用を見出す。このように、該ポリペプチド群は、例えば、様々な条件下にあるポリペプチドの貯蔵寿命および安定性をモニターする「品質保証」試験の実施者により利用可能である。例えば、該ポリペプチド群は、異なる温度で保存されたか、または異なる細胞種において産生された結合パートナーポリペプチドの生物学的活性を測定する結合アフィニティー試験において利用可能である。該ポリペプチド群はまた、結合パートナーポリペプチドの修飾（例えば、化学修飾、一部切除、突然変異、など）の後で生物学的活性が保持されているかどうかを決定するために使用可能である。修飾されたポリペプチドの結合アフィニティーを非修飾結合ポリペプチドのそれと比較し、結合ポリペプチドの生物学的活性に対するその修飾の不都合な影響を検出する。このようにして、結合ポリペプチドの生物学的活性を確認することが可能であり、その後でそれを例えばリサーチ試験において使用する。
【０１１５】
担体および搬送剤。該ポリペプチド群はまた、それへ付けた剤を、同定された結合パートナーを担う細胞へ搬送するための担体としても使用を見出す。このように、該ポリペプチド群は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ法において、診断用剤または療法剤をこうした細胞へ（または、結合パートナーを細胞表面で発現することが見出された他の細胞種へ）搬送するために使用可能である。ポリペプチドへ付けることが可能である検出可能な剤（診断剤）および療法剤には、限定されないが、毒素、他の細胞傷害剤、薬物、放射性核種、発色団、比色または蛍光定量反応を触媒する酵素、などが含まれ、意図される適用にしたがって、特定の剤が選択される。毒素のなかには、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、緑膿菌の外毒素Ａ、リボソーム不活性化ポリペプチド、トリコテセンのようなマイコトキシン、並びにそれらの誘導体および断片（例、単鎖）がある。診断使用に適した放射性核種には、限定されないが、１２３Ｉ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、および７６Ｂｒが含まれる。療法使用に適した放射性核種の例は、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、７７Ｂｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、１０９Ｐｄ、６４Ｃｕ、および６７Ｃｕである。こうした剤は、いかなる適切な慣用法によってもポリペプチドへ付けてよい。ポリペプチドは、アミノ酸側鎖に官能基を含み、これが望ましい剤の官能基と反応し、例えば共有結合を形成することが可能である。あるいは、該ポリペプチドまたは剤を誘導して、望ましい反応性の官能基を生成するか付けることが可能である。この誘導化には、様々な分子をポリペプチドへ付けるために利用可能な二官能性カップリング試薬（ピアス・ケミカル・カンパニー、イリノイ州ロックフォード）の１つの付加を伴う場合がある。ポリペプチドを放射標識するいくつかの技術が知られている。適切な二官能性キレート剤を使用することによって、放射性核種金属をポリペプチドへ付けることが可能である。このようにして、ポリペプチドと適切な診断剤または療法剤を含んでなる（好ましくは、共有結合した）コンジュゲートを調製する。該コンジュゲートは、投与されるか、またはそれ以外には、特殊な応用に適した量で利用される。
【０１１６】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とそのアンタゴニストで疾患を治療すること
本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、変異体、アンタゴニスト、アゴニスト、抗体、および結合パートナーは、限定されないが、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の増殖または発生が関与する状態および疾患を含む、医学的状態および疾患を治療するのに有用である可能性がある。使用される療法分子（群）は、治療される状態の病因と関与する生物学的経路に依存し、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の変異体、断片、および結合パートナーは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドと類似しているかまたは異なる効果を及ぼす場合がある。例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の細胞増殖の刺激活性のアンタゴニストを、多能性幹細胞前駆体由来の細胞の過剰な増殖および／または分化が関与する状態の治療のために選択することが可能であるが、ある一定のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの特殊な断片も、その活性の有効な優性ネガティブアンタゴニストとして作用する場合がある。別の例として、インターフェロン−γのようなサイトカインは、肺上皮のような特定の細胞種において上皮障壁機能を高め、腸上皮のような他の細胞種においては上皮障壁機能を弱めることが知られている。それ故に、以下のパラグラフで「ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニスト」は、本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、変異体、アンタゴニスト、アゴニスト、抗体、並びに結合パートナー、などをすべて指し、当業者は、本明細書に記載の生物学および療法上の考察にしたがって、本発明の態様として提供されるものより特定の分子（群）を選択することが可能であると理解される。
【０１１７】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストは、炎症および／または過剰な細胞増殖が関与する障害の治療に有用である。クローン病および潰瘍性大腸炎を含む、胃腸系の特定状態がＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドまたはアンタゴニスト、または組み合わせ療法で治療可能である。アレルギー性鼻炎、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎、および喘息を含むアレルギーのようないくつかの肺障害も、開示されるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストおよび組み合わせ療法で治療可能である。皮膚または粘膜が関与する障害も開示されるサイトカインポリペプチド群またはアンタゴニスト、組成物または組み合わせ療法を使用して治療可能である。そのような障害には、炎症性皮膚疾患と、例えば乾癬のような過剰増殖性障害が含まれる。
【０１１８】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とそのアンタゴニストの投与
本発明は、医学的障害、そして特に、ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン仲介性障害に罹患している患者、好ましくは哺乳動物の患者、そして最も好ましくはヒト患者を治療するための化合物、組成物、および方法を提供する。こうしたＩＭＸ１２９８４０サイトカイン仲介性障害には、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインと結合パートナーとの結合により（直接的または間接的に）引き起こされるか、または増悪される状態が含まれる。本開示の目的では、用語「疾病（ｉｌｌｎｅｓｓ）」、「疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）」、「医学的状態（ｍｅｄｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」、「異常状態（ａｂｎｏｒｍａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」などは、用語「医学的障害（ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」と交換可能的に使用される。本明細書で使用される用語「治療する」、「治療すること」、および「治療」には、治癒的、防御的（例えば、予防的）、および対症的または寛解的な治療が含まれる。こうした療法的使用には、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのポリペプチド群および断片、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群をコードするＩＭＸ１２９８４０サイトカイン核酸、および／または抗体のようなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを、必要とする患者へ、周知の手段により投与することが可能である。本発明の組成物は、ネイティブポリペプチド、変異体、誘導体、オリゴマー、および生物学的に活性な断片のような、本明細書に記載されるいかなる型のポリペプチドを含有してよい。特定の態様において、組成物は、可溶性ポリペプチド、または可溶性ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを含んでなるオリゴマーを含む。
【０１１９】
治療有効量。本発明の治療または使用の方法を実施する場合、本発明の療法剤の治療有効量を、好ましくはＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチドの活性に関連した疾患を治療するかまたは寛解するために、治療すべき状態を有する患者へ投与する。「療法剤」には、限定なしに、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、および変異体；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群、断片、および変異体をコードする核酸；抗体のようなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のアゴニストまたはアンタゴニスト；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド結合パートナー；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群、断片、変異体、および結合パートナーから形成される複合体、などがいずれも含まれる。本明細書において使用される、用語「治療有効量」は、患者の有意義な利益、即ち、関連する医学的状態の治療、治癒、予防、または寛解、またはこうした状態の治療、治癒、予防、または寛解の率の増加を示すのに十分である医薬組成物または方法のそれぞれの療法剤または他の有効成分の全体量を意味する。単独で投与される、個別の療法剤または有効成分へ適用される場合、この用語は、その成分だけを指す。組み合わせへ適用される場合、この用語は、組み合わせても、連続的または同時に投与されても、治療効果をもたらす成分の組み合わせた量を指す。本明細書において使用される、療法剤の「治療有効量を投与する」という句は、障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、および好ましくは持続した改善を誘導するのに十分な量で、および時間の間、患者が前記療法剤で治療されることを意味する。改善が「持続している」とみなされるのは、１日以上、またはより好ましくは、１週間以上離れた少なくとも２つの機会で患者が改善を示す場合である。改善の度合いは、徴候または症状に基づいて決定され、決定には、「生活の質」質問表のような、患者へ渡される質問表を利用してもよい。患者の疾病の度合いを反映する様々な指標を、治療の量および時間が十分であるかどうかを決定するために評価することが可能である。選択される指標（群）のベースライン値を、療法剤の初回用量の投与に先立つ患者の検査により確定する。好ましくは、ベースライン検査は、初回用量を投与する約６０日以内に行う。療法剤が急性症状を治療するために投与される場合、初回用量は、損傷が起こってから現実に可能な限りすぐ投与される。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストのような療法剤を投与することによって改善が誘導されると、そのとき患者は、選択された指標（群）についてベースラインを上回る改善を顕示する。慢性状態を治療する場合、この改善の度合いは、少なくとも１ヶ月以上、例えば１、２、または３ヶ月、またはそれより長く、または際限ない期間にわたりこの医薬品を反復的に投与することによって得られる。損傷または他の急性状態を治療するには、１〜６週間の期間、または単回用量でさえしばしば十分である。患者の疾病の度合いが治療後に１以上の指標により改善されたように見えたとしても、同一レベルでかまたは低減された用量または頻度で、治療を際限なく継続してよい。治療は、いったん低減されるかまたは中止されても、症状が再び現れたならば、元のレベルで再開してよい。
【０１２０】
投薬。当業者は、治療される障害の本質および重症度、患者の体重、年齢、一般状態、および以前の疾病および／または治療、並びに投与経路のような要因に依存して、適切な投与量が変動することを認識されよう。予備用量は動物試験にしたがって決定可能であり、ヒト投与への投与量の尺度合わせは、標準投薬試験のような当該技術分野で受け入れられた方法にしたがって行われる。例えば、治療有効量は、はじめは細胞培養アッセイから推定可能である。投与量は化合物の比活性に依存し、定常的な実験法により容易に決定可能である。用量は、毒性を最小化する一方で、細胞培養において決定されるようなＩＣ５０（即ち、症状の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む、循環血漿濃度範囲を達成する動物モデルにおいて定式化することが可能である。こうした情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用可能である。最終的には、担当医が、それぞれの個別患者を治療するのに用いる本発明のポリペプチドの量を決定するものである。最初、担当医は、本発明のポリペプチドの低用量を投与し、患者の応答を観察する。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、本発明のポリペプチドのより高用量を投与することが可能であり、その時点で投与量はそれ以上増加されない。本発明の方法を実施するために使用される様々な医薬組成物は、ｋｇ体重あたり、約０．０１ｎｇ〜約１００ｍｇ（好ましくは約０．１ｎｇ〜約１０ｍｇ、より好ましくは約０．１マイクログラム〜約１ｍｇ）の本発明のポリペプチドを含有すると考慮される。本発明の１つの態様において、本明細書に開示する様々な医学的障害を治療するために、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを週に１回投与し、別の態様において、週に少なくとも２回投与し、そして別の態様において、週に少なくとも３回投与する。注射される場合、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストの成人用量での有効量は１〜２０ｍｇ／ｍ２の範囲であり、好ましくは、約５〜１２ｍｇ／ｍ２である。あるいは、均一量を投与してもよく、その量は５〜１００ｍｇ／用量の範囲に及ぶ場合がある。皮下注射により投与される均一量の代表的な用量範囲は、５〜２５ｍｇ／用量、２５〜５０ｍｇ／用量、および５０〜１００ｍｇ／用量である。本発明の１つの態様において、以下に記載される様々な適応症が、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを２５ｍｇ／用量で含有するか、またはあるいは５０ｍｇ／用量で含有する、注射に許容される調製物を投与することによって治療される。２５ｍｇまたは５０ｍｇの用量は、特に慢性状態では、反復的に投与してよい。注射以外の投与の経路が使用される場合、用量は、標準的な医療行為にしたがって、適正に調整される。多くの場合、約２５ｍｇ用量のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドまたはアンタゴニストを少なくとも３週の期間にわたり週に１〜３回、または約５０ｍｇ用量のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを少なくとも３週の期間にわたり週に１または２回注射することによって、患者の状態の改善が得られるだろうが、望ましい度合いの改善を誘導するにはより長い期間の治療が必要となる場合もある。治癒不能の慢性状態では、この治療方式を際限なく続けてもよく、患者の医師により必要とみなされた場合は、用量や頻度に対して調整がなされる。上記の用量は、１８歳以上の人である成人患者への例である。小児患者（４〜１７歳）では、適切な治療方式は、週１回以上の皮下注射により投与される、０．４ｍｇ／ｋｇ、最大用量２５ｍｇまでのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストの皮下注射を伴う。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドに対する抗体がＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドアンタゴニストとして使用される場合、好ましい用量範囲は０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。抗ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド抗体の別の好ましい用量範囲は、０．７５〜７．５ｍｇ／ｋｇ体重である。ヒト化抗体、即ち、抗体分子の抗原結合部分だけが非ヒト供給源に由来する抗体が好ましい。こうした抗体は、静脈内で注射または投与することが可能である。
【０１２１】
製剤。（限定なしに、組換えおよび非組換えの供給源を含む、どんな供給源にも由来する）本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの有効量を、生理学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤のような他の成分と組み合わせて含んでなる組成物を本明細書に提供する。用語「製剤的に許容される」は、有効成分（単数又は複数）の生物学的活性の有効性に干渉しない無毒性の材料を意味する。投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、制菌剤、および、製剤をレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することが可能である、水性および非水性の無菌注射溶液剤；並びに、懸濁剤または増粘剤を包含することが可能である水性および非水性の無菌懸濁液剤が含まれる。ポリペプチドは、製剤的に有用な組成物を調製するために使用される既知の方法にしたがって製剤化可能である。それらは、単一の活性材料としてかまたはある既定の適応症に適した他の既知の活性材料とともに、製剤的に許容される希釈剤（例、生理食塩水、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、およびリン酸緩衝化溶液）、保存剤（例、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、乳化剤、可溶化剤、アジュバント、および／または担体と混合して組み合わせてよい。医薬組成物に適した製剤には、「レミントン製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」１６版、１９８０、マック・パブリッシング・カンパニー、ペンシルヴェニア州イーストンに記載されるものが含まれる。さらに、こうした組成物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属イオンと複合可能であるか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル、デキストラン、などのような高分子化合物へ取込むことが可能であるか、またはリポソーム、ミクロエマルジョン、ミセル、単層または多層の小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロブラストへ取込むことが可能である。リポソーム製剤に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸、などが含まれる。こうしたリポソーム製剤の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示されるように、当該技術分野の技術レベル内にある。こうした組成物は、物理状態、溶解度、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、ｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼすので、担体の特徴が選択される投与経路に依存するように、意図される適用にしたがって選択される。本発明の１つの好ましい態様において、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の持続放出型が使用される。開示される方法での使用に適した持続放出型には、限定されないが、（局所適用ヒドロゲルを含む）こうしたポリマーと混合される（米国特許第６，０３６，９７８号に記載されるアルギン酸塩ミクロ粒子のような）遅溶解性の生体適合性ポリマーに被包化されるか、または生体適合性半浸透性インプラントに封入されるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドが含まれる。
【０１２２】
療法化合物の組み合わせ。本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドは、多量体（例、ヘテロ二量体またはホモ二量体）において、またはそれ自身か他のポリペプチドとの複合体において活性であり得る。結果として、本発明の医薬組成物は、本発明のポリペプチドをこうした多量体または複合体の型で含んでよい。本発明の医薬組成物は、ポリペプチドまたはペプチド抗原と本発明のポリペプチド（群）の複合体の型であってよい。さらに本発明には、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストと組み合わせて同一の患者へ投与される１以上の他の薬物と同時投与することが含まれ、それぞれの薬物はその医薬品に適した治療方式にしたがって投与される。「同時投与」には、組み合わせの成分を用いた同時または連続的な治療、並びに、薬物が改変されるか、または１つの成分が長期に投与され、他の成分が間欠的に投与される治療方式も含まれる。成分は、同一または別個の組成物において、および、同じかまたは異なる投与経路により投与可能である。本発明の医薬組成物と同時に投与することが可能である成分の例は、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＦＮ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびエリスロポエチンのような、サイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子、またはこれら因子のいずれかの阻害剤またはアンタゴニストである。さらに、医薬組成物は、ポリペプチドの活性を亢進させるか、または治療においてその活性または使用を補填する他の剤を含有してよい。こうした追加の因子および／または剤は、本発明のポリペプチドとの相乗効果をもたらすか、または副作用を最小化するために、医薬組成物に含めてよい。逆に、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化するために、本発明のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドまたはアンタゴニストを、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の製剤に含めてよい。同時に投与される薬物の追加の例には、限定されないが、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド、炎症性サイトカインのアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症剤、ペントキシフィリン、サリドマイド、並びに、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、レフルノミド、ミノサイクリン、ペニシラミン、スルファサラジン、および（経口金、金チオリンゴ酸ナトリウムおよびアウロチオグルコースのような）金化合物のような疾患改善抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）が含まれる。さらに、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストは、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドに対する抗体、またはネイティブなＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの競合阻害剤として作用するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド由来ペプチドを含む、第二のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド／アンタゴニストと組み合わせてよい。
【０１２３】
投与経路。核酸を含んでなる組成物を含む、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはそのアンタゴニストを療法的に投与するには、どの有効な投与経路を使用してもよい。非経口投与には、例えば、関節内、静脈内、筋肉内、病巣内、腹腔内、または皮下の経路を介した、ボーラス注射または連続注入による注射が含まれ、例えば疾患または損傷の部位での局所投与も含まれる。他の適切な投与の手段には、インプラントからの持続放出；エアゾール吸入および／または通気；点眼；膣または直腸の坐剤；頬内調製物；丸剤、シロップ剤、トローチ剤、アイスクリーム、またはチューイングガムを含む経口調製物；および、ローション剤、ゲル剤、スプレー剤、軟膏剤、または他の適切な技術のような局所調製物が含まれる。あるいは、ポリペプチド性のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを、このポリペプチドを発現する培養細胞を埋め込むことによって、例えばＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを発現する細胞を埋め込むことによって投与してもよい。また、細胞増殖を変調させるか、またはこうした細胞に対する望ましい効果またはそれにおける望ましい活性を産生するために、本発明のポリペプチドの存在下にｅｘ  ｖｉｖｏで細胞を培養してもよい。その後、処理した細胞を、治療目的のためにｉｎ  ｖｉｖｏで導入することが可能である。本発明のポリペプチドは、タンパク質トランスダクションの方法により投与してもよい。この方法では、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドを、限定されないが、ＴＡＴ、Ａｎｔｐ、またはＶＰ２２（Ｓｃｈｗａｒｚｅら，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０：２９０−２９５）のようなタンパク質−トランスダクションドメイン（ＰＴＤ）へ共有結合させる。次いで、細胞を含有する組織培養基へこのＰＴＤ連結ペプチドを加えることによって、該ペプチドを細胞へ形質導入することが可能である（Ｓｃｈｗａｒｚｅら，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１５６９；Ｌｉｎｄｇｒｅｎら，２０００，ＴｉＰＳ  ２１：９９；Ｄｅｒｏｓｓｉら，１９９８，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ８：８４；ＷＯ００／３４３０８；ＷＯ９９／２９７２１；およびＷＯ９９／１０３７６）。別の態様において、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストをコードするＤＮＡを用いたｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのトランスフェクションにより、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストを産生するように患者自身の細胞を誘導する。このＤＮＡは、例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストをコードする裸のＤＮＡまたはリポソーム被包化ＤＮＡを注射することによるか、または他のトランスフェクションの手段により、患者の細胞へ導入することが可能である。本発明の核酸はまた、細胞または生物への核酸（限定なしに、ウイルスベクターや裸のＤＮＡの型も含まれる）の導入について知られている他の方法により患者へ投与してもよい。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニストが１以上の他の生物学的に活性な化合物と組み合わせて投与される場���、これらは、同じかまたは異なる経路により投与してよく、同時に、個別に、または連続して投与してよい。
【０１２４】
経口投与。本発明のポリペプチドの治療有効量が経口投与される場合、本発明のポリペプチドは、錠剤、カプセル剤、散剤、溶液剤、またはエリキシル剤の型である。錠剤の型で投与される場合、本発明の医薬組成物は、ゼラチンのような固形担体か、またはアジュバントを追加的に含有してよい。錠剤、カプセル剤、および散剤は、約５〜９５％の本発明のポリペプチド、好ましくは約２５〜９０％の本発明のポリペプチドを含有する。液体の型で投与される場合、水、石油、落花生油、鉱油、ダイズ油、またはゴマ油のような動物または植物起源の油、あるいは合成油を加えてよい。医薬組成物の液体型は、さらに、生理食塩水溶液、デキストロース若しくは他の糖の溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコールのようなグリコールを含有してもよい。液体の型で投与される場合、医薬組成物は、重量約０．５〜９０％の本発明のポリペプチド、好ましくは約１〜５０％の本発明のポリペプチドを含有する。
【０１２５】
静脈内投与。本発明のポリペプチドの治療有効量が静脈内、皮膚、または皮下の注射により投与される場合、本発明のポリペプチドは、発熱物質フリーの、非経口的に許容される水溶液の型である。ｐＨ、等張性、安定性、などを当然考慮する、こうした非経口的に許容されるポリペプチド溶液の調製は、当該技術分野の技量内にある。静脈内、皮膚、または皮下注射に好ましい医薬組成物は、本発明のポリペプチドに加えて、塩化ナトリウム注射剤、リンゲル注射剤、デキストロース注射剤、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸リンゲル注射剤、または当該技術分野で知られている他の担体のような等張の担体を含有すべきである。本発明の医薬組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝剤、抗酸化剤、または当業者に知られている他の添加剤を含有してよい。本発明の医薬組成物を使用する静脈内療法の期間は、治療される疾患の重症度とそれぞれの個別患者の状態と潜在的な特異体質応答に依存して変動する。本発明のポリペプチドの各適用の期間は、連続的な静脈内投与の１２〜２４時間の範囲にあると考えられる。最終的には、本発明の医薬組成物を使用する静脈内療法の適切な期間については担当医が決定するものである。
【０１２６】
骨および組織への投与。骨、軟骨、腱、または靱帯の障害に有用である本発明の組成物では、療法には、該組成物を、局所に、全身に、または、局部にインプラントまたはデバイスとして投与することが含まれる。投与される場合、本発明に使用の治療組成物は、当然ながら、発熱物質フリーであり、生理学的に許容される型である。さらに、該組成物は、望ましくは、骨、軟骨、または組織損傷の部位への搬送のために粘稠な型で被包化または注射することが可能である。局所投与は、創傷治癒と組織修復に適している場合がある。上記のような組成物に随意に含めてよい、本発明のポリペプチド以外の治療的に有用な剤は、他のやり方でかまたは追加的に、本発明の方法において、組成物と同時にまたは連続的に投与してよい。好ましくは、骨および／または軟骨の形成では、ポリペプチド含有組成物を骨および／または軟骨損傷の部位へ搬送し、発達する骨および軟骨へある構造を提供することを可能にし、さらに最適には体内へ吸収されることを可能にするマトリックスが該組成物に含まれるだろう。こうしたマトリックスは、他の移植医療応用に今日使用されている材料から形成することが可能である。マトリックス材料の選択は、生体適合性、生物分解性、機械特性、美容的外観、および界面特性に基づく。組成物の特殊な適用により適正な製剤が明確化される。組成物の潜在的なマトリックスは、生物分解性で、化学的に明確化される硫酸カルシウム、リン酸三カルシウム、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、およびポリ無水物であり得る。他の潜在的な材料は、骨または皮膚のコラーゲンのように、生物分解性で、生物学的に十分明確化される。さらなるマトリックスは、純粋なポリペプチドまたは細胞外マトリックス成分から構成される。他の潜在的なマトリックスは、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミン酸塩、または他のセラミックスのように、非生物分解性で化学的に明確化される。マトリックスは、ポリ乳酸とヒドロキシアパタイト、またはコラーゲンとリン酸三カルシウムのように、上記の種類の材料のいかなる組み合わせから構成してもよい。バイオセラミックスは、カルシウム−アルミン酸塩−リン酸塩のように組成を改変することが可能であり、孔径、粒子サイズ、粒子形状、および生物分解性を改変するような加工処理が可能である。現今で好ましいのは、１５０〜８００ミクロンに及ぶ直径を有する空孔粒子の型の乳酸およびグリコール酸の５０：５０（モル重量）共重合体である。ある適用では、ポリペプチド組成物がマトリックスから解離することを防ぐために、カルボキシメチルセルロースまたは自己血塊のような封鎖剤を利用することが有用であろう。好ましい封鎖剤のファミリーは、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースを含む（ヒドロキシアルキルセルロースを含む）アルキルセルロースのようなセルロース性材料であり、最も好ましいのは、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）のカチオン塩である。他の好ましい封鎖剤には、ヒアルロン酸、アルギン酸ナトリウム、ポリ（エチレングリコール）、酸化ポリオキシエチレン、カルボキシビニルポリマー、およびポリ（ビニルアルコール）が含まれる。本発明において有用な封鎖剤の量は、全組成物重量に基づいて、０．５〜２０重量％、好ましくは１〜１０重量％であり、これは、ポリペプチドのポリマーマトリックスからの脱離を防ぎ、組成物の適切な処理を提供するのに必要な量を表すが、それは祖先細胞がマトリックスに浸潤することにより先祖細胞の骨形成活性を支援する機会をポリペプチドにもたらすことを妨げるほどではない。さらなる組成物において、本発明のポリペプチドは、骨および／または軟骨の欠損、創傷、または問題の組織の治療に有益な他の剤と組み合わせてよい。これらの剤には、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、並びにインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）のような様々な増殖因子が含まれる。現行では、治療組成物は、獣医学上の適用にも有用である。特に、ヒトに加えて、家畜動物とサラブレッドのウマが本発明のポリペプチドを用いた治療に望ましい患者である。組織再生に使用される医薬組成物を含有するポリペプチドの投与量方式は、ポリペプチドの作用を修飾する様々な要因、例えば形成されることが望まれる組織重量の量、傷害の部位、傷害組織の状態、創傷のサイズ、傷害組織の種類（例、骨）、患者の年齢、性別、および食事、感染症の重症度、投与の時間、および他の臨床要因を考慮して担当医が決定するものである。投与量は、復元において使用されるマトリックスの種類や医薬組成物中に含まれる他のポリペプチドに応じて変動する場合がある。例えば、ＩＧＦ−Ｉ（インスリン様増殖因子Ｉ）のような他の既知の増殖因子を最終組成物へ加えると、投与量にも影響する場合がある。進行は、組織／骨の成長および／または修復の定期的な評価により、例えば、Ｘ線、組織型計測決定、およびテトラサイクリン標識化によりモニター可能である。
【０１２７】
獣医学上の使用。ヒト患者に加えて、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とアンタゴニストは、ペット（イヌ、ネコ、トリ、霊長類、など）、家畜動物（ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、トリ、など）、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカイン仲介性の状態に罹患するあらゆる動物といった非ヒト動物の疾患状態の治療に有用である。こうした場合、動物の体重にしたがって適切な用量を決定することが可能である。例えば、０．２〜１ｍｇ／ｋｇの用量が使用可能である。あるいは、用量が動物の体表面積にしたがって決定され、例示的な用量は、０．１〜２０ｍｇ／ｍ２、またはより好ましくは、５〜１２ｍｇ／ｍ２に及ぶ。イヌまたはネコのような小動物では、適切な用量は０．４ｍｇ／ｋｇである。好ましい態様において、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群またはアンタゴニスト（好ましくは、患者と同じ種由来の遺伝子から構築される）は、動物の状態が改善されるまで、注射または他の適切な経路により週１回以上投与されるか、または、それは際限なく投与可能である。
【０１２８】
医薬品の製造。本発明はまた、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群、断片、および変異体；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群、断片、および変異体をコードする核酸；抗体のような、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のアゴニストまたはアンタゴニスト；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド結合パートナー；ＩＭＸ１２９８４０サイトカインファミリーポリペプチド群、断片、変異体、および結合パートナーから形成される複合体、などの、本明細書に開示するそれぞれの医学的障害の予防または療法的治療への医薬品の製造における使用に関する。
【実施例】
【０１２９】
実施例
以下の実施例は、特別の態様を例示することを意図し、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１３０】
実施例１
ヒトサイトカインファミリーの新規メンバーであるＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および−４の同定
Ｃｅｌｅｒａ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（メリーランド州ロックヴィル）から、ヒトゲノムによりコードされることがＧＥＮＳＣＡＮプログラム（Ｍｉｙａｊｉｍａら，２０００，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２７２：８０１−８０７）のような自動化アプローチを使用して予測されるアミノ酸配列の一覧を含有するデータ組を受け取った。これらのアミノ酸配列予測を、タンパク質データバンク（ＰＤＢ）（Ｂｅｒｍａｎら，２０００、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：２３５−２４２）の構造見本にクエリータンパク質配列をかぶせるタンパク質織り込み（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）プログラムである、ＧｅｎｅＦｏｌｄ（Ｔｒｉｐｏｓ社、ミズーリ州セントルイス；Ｊａｒｏｓｚｅｗｓｋｉら，１９９８，Ｐｒｏｔ  Ｓｃｉ  ７：１４３１−１４４０）を使用して解析した。上記のように、４αヘリックスバンドル（４ＡＨＢ）サイトカインファミリーのメンバーは、特定の三次元構造を特徴とし；この４らせん構造は、ＧｅｎｅＦｏｌｄのようなタンパク質織り込みアルゴリズムを使用することによって、その一次アミノ酸配列から予測可能である。ＧｅｎｅＦｏｌｄを使用してあるタンパク質ファミリーの新規メンバーを分類するには、この新規タンパク質配列をそのプログラムへ入力し、ＧｅｎｅＦｏｌｄデータベースに存在する既知のタンパク質構造（「鋳型構造」）にそれがどのくらいよく折り畳まれるかを反映する確率スコアを割り当てる。スコア付けのために、ＧｅｎｅＦｏｌｄは、一次アミノ酸配列類似性、残基の埋没パターン、局所相互作用、および二次構造比較に依拠する。ＧｅｎｅＦｏｌｄプログラムは、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、およびインターフェロン−α２（ＩＦＮ−α２）のようないくつかのヒトサイトカイン／増殖因子ポリペプチドの解明済みの構造を含む、タンパク質フォールドのデータベース中のあらゆる鋳型構造に、該アミノ酸配列を折り畳む（または織り込む）。それぞれの比較について、（ｉ）配列のみ；（ｉｉ）配列＋局所コンホメーション選好性＋埋没条件；および（ｉｉｉ）配列＋局所コンホメーション選好性＋埋没条件＋二次構造に基づいて、３つの異なるスコアを計算する。それぞれの事例において、このプログラムは最適の並列を決定し、この度合いの並列が偶然により生じた確率（Ｐ値）を計算し、Ｐ値の逆数をスコアとして報告する。したがって、これらのスコアは、新規タンパク質が様々な参照構造に適合する度合いを反映し、新規タンパク質を既知のタンパク質ファミリーのメンバーに帰属させるのに有用である。上記ヒトゲノムデータから予測されるポリペプチドの１つをＧｅｎｅＦｏｌｄプログラムへ織り込んだとき、このポリペプチドについて最高スコアを与える鋳型構造のいくつかはサイトカインまたは増殖因子の鋳型であったが、他のαヘリックス含有タンパク質への構造類似性も同定された。そこで、この予測されたポリペプチド配列を使用して、それをコードするヒトゲノム配列を同定し、これらの予測エクソンの解析によりＩＭＸ１２９８４０−１ポリペプチド配列を決定した。ＩＭＸ１２９８４０−１コード配列を含有するゲノムコンテ��グ、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＣ０１１４４５．６（「ＡＣ０１１４４５コンティグ」）を解析し、４ＡＨＢサイトカインについて３つの追加の潜在的なコード配列をその同一コンティグに同定し、ＩＭＸ１２９８４０−２、ＩＭＸ１２９８４０−３、およびＩＭＸ１２９８４０−４と名づけた。
【０１３１】
ＩＭＸ１２９８４０−１の予測エクソン配列を使用してオリゴヌクレオチドプライマーを設計し、配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをコードするＩＭＸ１２９８４０−１  ｃＤＮＡ分子（配列番号１）を単離した。配列番号１のヌクレオチド５８ないし６５７は配列番号２をコードし、ヌクレオチド６５８ないし６６０は終止コドンに対応し、ヌクレオチド７９６ないし８０１は、ヌクレオチド８１６（または８１７若しくは８１８）ないし８３８にあるポリ（Ａ）テールのポリアデニル化シグナルを表すと思われる。ＩＭＸ１２９８４０−２サイトカインコード配列（配列番号３のヌクレオチド１４１ないし７４０）は配列番号４として提示されるポリペプチド配列をコードし、ヌクレオチド７４１ないし７４３は終止コドンに対応する。ＩＭＸ１２９８４０−３サイトカインコード配列（配列番号５のヌクレオチド１４１ないし７４０）は配列番号６として提示されるポリペプチド配列をコードし、ヌクレオチド７４１ないし７４３は終止コドンに対応する。ＩＭＸ１２９８４０−３の予測エクソンおよびサイトカインポリペプチドの配列（配列番号５および６）は、ＩＭＸ１２９８４０−２のそれ（配列番号３および４）にきわめて類似しているが、同一ではなく、ＡＣ０１１４４５コンティグ上で互いのほぼ２５ｋｂ内に互いに反対の配向で位置し、進化的に最近の遺伝子重複イベントであることに一致する。ＡＣ０１１４４５コンティグはまた、第四の潜在的なサイトカインコード配列であるＩＭＸ１２９８４０−４を含有し、これはＩＭＸ１２９８４０−１、−２、および−３に有意に類似した一次アミノ酸配列の領域を有する。この明らかに重複した遺伝子のごく密集した配置は、きわめて類似したエクソン／イントロン立体配置を有し、ヒト第５染色体に一緒に密集している短鎖４ＡＨＢサイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、およびＩＬ−５のそれに非常に類似している。
【０１３２】
ＩＭＸ１２９８４０−１および−２の予測エクソンを全長ｃＤＮＡクローン（それぞれ、配列番号１および配列番号３）の単離により確定し、ＰＣＲ増幅実験により、ＩＭＸ１２９８４０−２および−３について予測されるものと一致する構造を有するｃＤＮＡが、精巣のような組織から作製したｃＤＮＡライブラリーに存在することを確かめた。さらに、ＩＭＸ１２９８４０−１、ＩＭＸ１２９８４０−２、およびＩＭＸ１２９８４０−４をコードするヒトゲノムの領域をマウス第７染色体のゲノム配列と比較し、予測されるＩＭＸ１２９８４０のエクソンおよびイントロン領域の進化保存の度合いを比較した。予測ＩＭＸ１２９８４０−１および−２のエクソンと該マウスゲノム配列との間にはかなりのレベルの種間配列保存が観察され、イントロン領域では有意により少ない類似性が観察され、予測エクソン配列がＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群をコードすることにおいて進化的に保存された機能を有することに一致していた。ヒトおよびマウスのゲノム配列の比較により、潜在的なＩＭＸ１２９８４０−４エクソンを含有する領域をＡＣ０１１４４５コンティグのほぼヌクレオチド１４５８０−１４８５０に同定した（以下の表を参照されたい）；この領域には、２０以上のアミノ酸（配列番号８として示す）をコードする潜在的なオープンフレーム（配列番号７として示す）が含まれる。配列番号７の２４７位から２５１位までの５ヌクレオチドストレッチを「ＣＡＡＧＧ」であると決定したが、この領域へ１つのヌクレオチドが挿入されれば、リーディングフレームとＩＭＸ１２９８４０−１、−２、および−３サイトカインポリペプチド群により類似している予測アミノ酸配列を生成することが注目される。
【０１３３】
ヒトＩＭＸ１２９８４０サイトカイン配列に対応するマウスのサイトカインコード配列およびポリペプチドを本明細書に示す：マウスＩＭＸ１２９８４０−１の部分コードおよびアミノ酸配列（それぞれ、配列番号９および１０）とマウスＩＭＸ１２９８４０−２の完全なコードおよびアミノ酸配列（それぞれ、配列番号１１および１２）。配列番号１１のヌクレオチド２９２ないし８９７は、配列番号１２として示されるマウスＩＭＸ１２９８４０−２サイトカインポリペプチド配列をコードし、配列番号１１のヌクレオチド８９８ないし９００は終止コドンに対応する。
【０１３４】
ヒトＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および−４サイトカインコード配列を公的に利用可能な仮のヒトゲノムＤＮＡ配列と比較し、以下の第１９染色体コンティグを、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインコード配列を含有するものとして同定した：ＡＣ０１１４４５．６（ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および４）とＡＣ０１８４７７．１２（ＩＭＸ１２９８４０−１および４）。ＡＣ０１１４４５．６コンティグにおいてＩＭＸ１２９８４０サイトカインコード配列を含有するエクソンの近似位置を、配列番号１、３、および５に関するその位置とともに、以下の表に示す；表中のＡＣ０１１４４５．６終点付近の括弧により明示されるように、５’および３’非翻訳領域が配列番号１、３、および５に対応する位置から先のコンティグ配列に沿ってさらに伸びる場合があることに注目されたい。ＩＭＸ１２９８４０−２の３’ＵＴＲ領域に対する有意な配列類似性に基づけば、ＩＭＸ１２９８４０−３には追加の３’ＵＴＲ配列が予測可能であることに注目されたい。このことは、ＩＭＸ１２９８４０−３がその３’ＵＴＲをコードするゲノム配列内に追加のイントロンを有する場合があること、そして、ヒトＧＭＣＳＦ、ＧＲＯα、ＩＬ−１β、およびＩＬ−３遺伝子の３’ＵＴＲ中に存在するのと同じように、これらサイトカイン遺伝子の３’ＵＴＲ中に、ｍＲＮＡの安定性および分解を調節する要素のような機能配列が存在する場合があることの両方を示唆する。また、ＩＭＸ１２９８４０−３に対して反対に配向したＡＣ０１１４４５コンティグのほぼヌクレオチド１３５２１２−１３８０２０には、ＩＭＸ１２９８４０−３コード領域の少なくとも一部の完全な重複が存在するが、この追加の、完全に重複した配列は、この領域において重なるコンティグの更新された組立てには存在せず（ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号：ＮＴ＿０１１２６０を参照されたい）ＡＣ０１１４４５コンティグ配列の組立ての人工産物であると考えられる。
【０１３５】
ヒトコンティグＡＣ０１１４４５．６およびｃＤＮＡ配列におけるＩＭＸ１２９８４０サイトカイン遺伝子エクソンの対応位置
【０１３６】
【表２】
2004535795.tif 000003
ヒトＩＭＸ１２９８４０サイトカインエクソンを含んでなるゲノム配列をヒト第１９染色体の１９ｑ１３．２領域へマップする。配列番号１、３、および５のようなヒトＩＭＸ１２９８４０核酸とその断片は、この染色体領域の細胞学的な同定と、この領域へ遺伝学的にマップされた以下の障害のようなヒトの遺伝障害のゲノムマッピングに有用である：視神経萎縮３型；進行性心ブロック１型；痙性対麻痺、遺伝子１２；および口顔裂溝、遺伝子３。マウスＩＭＸ１２９８４０−１、−２および−３ポリペプチドのマウスゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＣ０７３７６８．１コンティグに存在する。配列番号９の部分的なマウスＩＭＸ１２９８４０−１コード配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＣ０７３７６８．１のヌクレオチド１８６８８０ないし１８７０１１へ（逆の配向で）マップされる。マウスＩＭＸ１２９８４０−２ゲノムコード配列は、ヒトＩＭＸ１２９８４０−２のそれに類似した形式で、配列番号１１に対応する６つのエクソンにおいて組織化され、これらのエクソンは、ヌクレオチド１１２８７７から始まりヌクレオチド１１４８２２で終わるＡＣ０７３７６８．１の領域全体に分布している。マウスＩＭＸ１２９８４０−３をコードするように見える６つのエクソンは、ヌクレオチド２４０３０３から始まりヌクレオチド２４２２３６で終わるＡＣ０７３７６８．１の領域に逆の配向で存在する。
【０１３７】
ＩＭＸ１２９８４０−２および−３のポリペプチド群のようなポリペプチドアイソフォーム間の変異、および本明細書に開示するＩＭＸ１２９８４０サイトカイン配列の天然に存在するゲノム変異体を含む、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの追加の変異を提供する。そのような変異は、個別にかまたはどのように組み合わせても、または選択スプライス変異と組み合わせて、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのポリペプチド若しくは核酸へ組込んでよい。１例として、ＩＭＸ１２９８４０−２（配列番号４）のアミノ酸１０は、ＩＭＸ１２９８４０−３（配列番号６）のアミノ酸１０とは異なり、ここでは明らかに配列番号３の１６９位の「Ｔ」から配列番号５の同じ位置の「Ｃ」への（またはその逆の）単一変化によりＭｅｔ残基からＴｈｒ残基への変化が引き起こされた。こういった変異や他の変異を以下の表に列挙する：
【０１３８】
【表３】
2004535795.tif 000004
アミノ酸類似性スコア付けマトリックス＝ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップ創出ペナルティ＝８、およびギャップ延長ペナルティ＝２を有するＧＣＧ「十分（プレティ）」多重配列並列プログラムを使用して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群のアミノ酸配列（配列番号２、４、および６）を互いに比較した。これらの配列の並列が表１に示され、この並列中の３つのアミノ酸配列すべてで同一であるコンセンサス残基が含まれる。並列において大文字にした残基はコンセンサス残基に適合するものである。表１におけるアミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＸ１２９８４０−２および−３サイトカインアミノ酸配列（配列番号４および６）中の残基の位置に対応する。
【０１３９】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカインアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、および６）へのアミノ酸置換および他の改変（欠失、挿入、など）は、それが表に示すようなアミノ酸配列の大文字の残基への変化をもたらすならば、そして特にそれらの変化が類似の化学特性のアミノ酸を置換する（脂肪族残基−Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌのいずれか１つを別の脂肪族残基に置換することのような）のでも、その保存された位置で他のサイトカインポリペプチド中に存在する残基を置換するのでもない場合は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド活性を改変させるかまたは破壊する可能性がより高いと予測される。逆に、表１の他のサイトカインポリペプチド配列の１つからの並列中のその位置にある残基の置換をもたらす変化がＩＭＸ１２９８４０サイトカインアミノ酸配列に対してなされるならば、こうした改変が改変されたＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの機能に影響を及ぼす可能性はより低い。例えば、表１の４８位のコンセンサス残基はセリンであり、その位置で化学的に類似したスレオニンをセリンに置換することは、トリプトファンまたはチロシンなどの置換よりもポリペプチドの機能を改変させる可能性がより低い。本発明の態様には、改変されたアミノ酸配列を含んでなる、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群とＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群の断片が含まれる。改変されたＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド配列は、表１に示される１以上のサイトカインアミノ酸配列と、少なくとも３０％、またはより好ましくは少なくとも４０％、またはより好ましくは少なくとも５０％、またはより好ましくは少なくとも５５％、またはより好ましくは少なくとも６０％、またはより好ましくは少なくとも６５％、またはより好ましくは少なくとも７０％、またはより好ましくは少なくとも７５％、またはより好ましくは少なくとも８０％、またはより好ましくは少なくとも８５％、またはより好ましくは少なくとも９０％、またはより好ましくは少なくとも９５％、またはより好ましくは少なくとも９７．５％、またはより好ましくは少なくとも９９％、または最も好ましくは少なくとも９９．５％のアミノ酸同一性を有する。対立遺伝子変異体のような本発明によるＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド変異体、または意図的に工学処理された修飾を有するＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群を、さらに本明細書において記載されるようにＧｅｎＦｏｌｄを使用して解析すると、３つの種類のＧｅｎＦｏｌｄスコア付け法の１つで１０の高スコア鋳型構造の少なくとも１つは、サイトカインまたは増殖因子のポリペプチドとなる。高スコアサイトカインまたは増殖因子の鋳型構造についてのスコアは、ＧｅｎＦｏｌｄにより報告される３つの種類のスコア（配列のみ、配列＋局所コンホメーション選好性＋埋没条件、または配列＋局所コンホメーション選好性＋埋没条件＋二次構造）のいずれかを使用すれば、少なくとも２０、より好ましくは少なくとも３０、より好ましくは少なくとも４０、なおより好ましくは少なくとも５０、そして最も好ましくは少なくとも６０であろう。
【０１４０】
表１：ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、および−３サイトカインアミノ酸配列の並列
【０１４１】
【表４】
2004535795.tif 000005
実施例２
ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン発現のリアルタイム定量ＰＣＲによる解析
多様な組織供給源と多様な化合物で処理した細胞若しくは組織からＲＮＡサンプルを入手したが、これらのＲＮＡサンプルには、市販のＲＮＡ（アンビオン、テキサス州オースチン；クローンテク・ラボラトリーズ、カリフォルニア州パロアルト；および、ストラタジーン、カリフォルニア州ラジョラ）が含まれた。このＲＮＡサンプルをＤＮアーゼ（部品番号１９０６、アンビオン、テキサス州オースチン）で処理し、ランダムヘキサマーを使用する製造業者の教示にしたがって、Ｔａｑｍａｎ逆転写試薬（部品番号Ｎ８０８−０２３４、アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用してｃＤＮＡ分子の集団へ逆転写した。ｃＤＮＡ分子の各集団を、ウェルあたり５ｎｇまたは２０ｎｇのいずれかでマルチウェルプレートの特定ウェルへ入れ、同一３検体で操作した。同一の組織タイプおよび刺激条件を適用したが、異なるドナーから採取した場合にプール操作を使用した。サンプルのそれぞれのマルチウェルプレートに陰性対照ウェルを含めた。
【０１４２】
プライマー・エクスプレス・ソフトウェア（アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用して、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１（配列番号２）ポリペプチドをコードするｍＲＮＡとヒトＩＭＸ１２９８４０−２（配列番号４）ポリペプチドをコードするｍＲＮＡに相補的なプローブおよびオリゴヌクレオチドの組を設計して合成し、これらプローブ／プライマー組へのＰＣＲ条件を最適化して、ほぼサイクル２０とサイクル３６の間の熱サイクルごとにＰＣＲ産物の着実かつ対数的な増加を生じるようにした。使用した前向き（フォワード）ＩＭＸ１２９８４０−１プライマーは、５’ＡＧＧ  ＣＣＣ  ＴＧＴ  ＣＣＣ  ＣＡＣ  ＴＴＣ  ３’（配列番号１３）であり、使用した逆向き（リバース）ＩＭＸ１２９８４０−１プライマーは、５’ＧＡＧ  ＡＴＴ  ＴＧＡ  ＡＣＣ  ＴＧＣ  ＣＡＡ  ＴＧＴ  Ｇ  ３’（配列番号１４）であり、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１に使用した標識プローブは、５’ＣＣＣ  ＡＣＣ  ＡＣＡ  ＡＣＴ  ＧＧＧ  ＡＡＧ  ＧＧＣ  ＴＧ  ３’（配列番号１５）であった。使用した前向きＩＭＸ１２９８４０−２プライマーは、５’ＧＧＡ  ＧＣＴ  ＧＣＡ  ＧＧＣ  ＣＴＴ  ＴＡＡ  ＧＡ  ３’（配列番号１６）であり、使用した逆向きＩＭＸ１２９８４０−２プライマーは、５’ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＣＴＴ  ＧＣＡ  ＧＴＣ  ＣＴＴ  ３’（配列番号１７）であり、ヒトＩＭＸ１２９８４０−２に使用した標識プローブは、５’ＣＣＡ  ＡＡＧ  ＡＴＧ  ＣＣＴ  ＴＡＧ  ＡＡＧ  ＡＧＴ  ＣＧＣ  ＴＴＣ  ＴＧＣ  Ｔ  ３’（配列番号１８）であった。１８Ｓ  ＲＮＡと特定の「ハウスキーパー」タンパク質−β−アクチン、ＨＰＲＴ（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ）、ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）、ＰＫＧ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）、およびＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ）−をコードするｍＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチドプライマー組を合成し、これらのプライマー組についてもＰＣＲ条件を最適にした。ヒトＩＭＸ１２９８４０−１とβ−アクチンプローブ／プライマー組の両方か、またはヒトＩＭＸ１２９８４０−２とＧＡＰＤＨプローブ／プライマー組の両方を使用する多重ＴＡＱＭＡＮ  ＰＣＲ反応を、アプライド・バイオシステムズのＰｒｉｓｍ７７００配列検出システムで、ＴＡＱＭＡＮ普遍ＰＣＲマスターミックス（部品番号４３０４４３７、アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティ）入りの２５マイクロリットル量において設定した。配列検出ソフトウェア、バージョン１．７ａ（アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用してサイクル閾値（ＣＴ）を決定し、デルタＣＴを算出し、β−アクチンに対するＩＭＸ１２９８４０−１またはＧＡＰＤＨに対するＩＭＸ１２９８４０−２の相対発現比較のために、マイナスデルタＣＴに対しては２である、２Ｅ（−ｄＣＴ）へ変換した。
【０１４３】
β−アクチン発現に対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現とＧＡＰＤＨ発現に対するヒトＩＭＸ１２９８４０−２の発現を、様々な成体および胎児のＲＮＡサンプルにおいて分析した。この分析は、成体および胎児の脳、または成体の精巣のようなある種の成体および胎児の組織において、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１および−２のメッセージが検出可能であり、ハウスキーパーｍＲＮＡよりは豊富でないことを示した（以下を参照されたい）。０．００１４０６８３という比は、この成体の脳サンプルにおけるヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現がβ−アクチンのそれの約０．１４％であることを示す。以下の表において、「０．０」という比は、ＩＭＸ１２９８４０発現の平均ＣＴ値が、３６以下のＣＴ値で設定されている検出の判定基準を満たすには高すぎたことを示す。
【０１４４】
【表５】
2004535795.tif 000006
追加のＲＮＡサンプルにおけるヒトＩＭＸ１２９８４０−１および−２発現のハウスキーパー遺伝子発現に対する分析は、ビタミンＤの非存在下または存在下に７日間培養したヒト骨芽細胞（ＭＧ−６３）においてヒトＩＭＸ１２９８４０−１のいくらかの検出可能な発現があることを示した（以下を参照されたい）。非刺激、またはＬＰＳ  １マイクログラム／ｍｌで２時間処理、またはそれぞれ１００マイクログラム／ｍｌのＩＬ−１、ＩＬ−１８、およびＴＮＦで２４時間処理のいずれかの成体肝臓の肝細胞由来のＲＮＡサンプルを用いたリアルタイム定量ＰＣＲ実験において、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１および−２の発現を検出した。これらのリアルタイム定量ＰＣＲ実験の結果を以下の表に示す。これらのデータは、未処理およびサイトカイン処理肝細胞において、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１がβ−アクチン発現に対して低いレベルで発現されることを示す。ＩＬ−１、ＩＬ−１８、およびＴＮＦサイトカインでの処理は、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１発現のβ−アクチン発現に対するレベルを有意には変化させなかった。上記の肝細胞において、ＩＭＸ１２９８４０−２の発現は、ＧＡＰＤＨ発現に対して全般にややより高く、ＬＰＳでの処理、またはＩＬ−１、ＩＬ−１８、およびＴＮＦサイトカインの組み合わせでの処理は、ヒトＩＭＸ１２９８４０−２発現をわずかに（即ち、未処理細胞におけるそのレベルのほぼ８０％へ）低下させた。
【０１４５】
【表６】
2004535795.tif 000007
さらなるリアルタイム定量ＰＣＲ実験は、特定の細胞種において、インターフェロン−γ（ＩＦＮｇ）、他のサイトカイン、またはＵＶ照射での処理により、ハウスキーパー遺伝子発現に対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１および２の発現が有意に改変することを示した（以下の表を参照されたい）。β−アクチン発現に対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現については、以下の表中のデータに基づいて以下の観察をすることが可能である。調節Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の集団においてＩＭＸ１２９８４０−１発現を検出した。ある処理は、ＩＭＸ１２９８４０−１発現を低下させる傾向がある：末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の抗ＣＤ３抗体処理；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のＩＬ−１５およびおそらくはＩＬ−１２処理；皮膚角化細胞（ＨａＣａＴ）のＬＰＳでの処理；おそらくは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）およびＩＬ−４を含む混合物でのＢ細胞の処理；並びに、肺上皮腺腫細胞系Ｃａｌｕ３における、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の混合物での処理。興味深いことに、結腸上皮癌腫系のＴ８４をＩＬ−４およびＩＬ−１３で処理すると、Ｃａｌｕ３細胞における効果と反対の効果を及ぼし、Ｔ８４細胞において、これらのサイトカインは、β−アクチンに対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現を増加させる。β−アクチンに対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現を増加させる追加の処理には、ＨａＣａＴ細胞を紫外線照射（ＵＶ）で処理すること；Ｔ８４、ＨａＣａＴ、またはＣａｌｕ３細胞をＩＬ−１、ＴＮＦ、およびＩＬ−１８サイトカインの混合物で処理すること；そして最も衝撃的には、Ｔ８４、ＨａＣａＴ、またはＣａｌｕ３細胞をインターフェロン−γ（ＩＦＮｇ）で処理することが含まれる。Ｃａｌｕ３細胞において、ＩＦＮｇでの処理は、β−アクチンに対するヒトＩＭＸ１２９８４０−１の発現をほぼ４０倍増加させ、これらの処理細胞において、ヒトＩＭＸ１２９８４０−１がβ−アクチンハウスキーピング遺伝子のレベルのほとんど２倍で発現されるという結果をもたらす。Ｃａｌｕ３細胞をＩＬ−４／ＩＬ−１３の組み合わせで処理すると（上記のような）相対的なヒトＩＭＸ１２９８４０−１発現を低下させるが、これらの細胞をＩＦＮｇで処理すると、その相対発現が大きく増加する。ＩＬ−４／ＩＬ−１３およびＩＦＮｇのＣａｌｕ３細胞におけるこれらの効果は、肺上皮障壁機能を維持し、創傷を修復するＣａｌｕ３細胞の能力に対してＩＬ−４／ＩＬ−１３およびＩＦＮｇが及ぼす対照的な効果に一致している（Ａｈｄｉｅｈら，２００１，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８１：Ｃ２０２９−２０３８）。ＧＡＰＤＨに対するヒトＩＭＸ１２９８４０−２の発現も、Ｔ８４、ＨａＣａＴ、およびＣａｌｕ３細胞においてＩＦＮｇ処理により増加され、ＩＬ−１、ＴＮＦ、およびＩＬ−１８サイトカインの混合物での処理も、Ｃａｌｕ３細胞における相対的なヒトＩＭＸ１２９８４０−２発現を増加させた。ＩＦＮｇ処理に応答したこれら上皮細胞種におけるヒトＩＭＸ１２９８４０−１および−２発現の増加は、ＩＭＸ１２９８４０−１および−２サイトカインが、乾癬のようなＩＦＮｇにより影響される上皮細胞の機能および／または障害において、並びに肺および腸の上皮における障壁機能の調節においてある役割を担うことを示唆する。
【０１４６】
【表７】
2004535795.tif 000008
実施例３
本発明のポリペプチドへ結合するモノクローナル抗体
本実施例は、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群へ結合するモノクローナル抗体を調製する方法を例示する。米国特許第４，４１１，９９３号に記載されるような、他の慣用的技術を使用してもよい。こうした抗体を産生するのに利用可能である適切な免疫原には、限定されないが、精製ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド、その免疫原性断片、および高レベルのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドまたはその免疫原性断片を発現する細胞が含まれる。例えば、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３：１６５，１９９５においてＰａｒｄｏｌｌおよびＢｅｃｋｅｒｌｅｇにより概説されるように、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドをコードするＤＮＡも免疫原として使用可能である。アジュバント（完全または不完全フロイントアジュバント、ミョウバン、またはＲｉｂｉアジュバント  Ｒ７００（Ｒｉｂｉ，マサチューセッツ州ハミルトン）のような別のアジュバント）において乳化したＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド免疫原で齧歯動物（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウスまたはルイスラット）を免疫化し、１０〜１００マイクログラムに及ぶ量で皮下または腹腔内に注射する。ＤＮＡを皮内（Ｒａｚら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９５１９）または筋肉内（Ｗａｎｇら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：４１５６）に投与してよく、生理食塩水は、ＤＮＡをベースとする抗原に適した希釈液であることがわかっている。１０日〜３週間の後、免疫化した動物を追加の免疫原で追加免疫し、その後、１週ごと、２週ごと、または３週に１回の免疫化スケジュールで定期的に追加免疫する。
【０１４７】
後眼窩出血または尾先端切除により血清試料を定期的に採取し、ドットブロットアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定）、免疫沈降法、またはＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドのＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド結合パートナーへの結合の阻害のＦＡＣＳ分析のような他の適切なアッセイにより、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド特異抗体について試験する。適正な抗体力価の検出後、陽性動物に、生理食塩水中のＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドの静脈内注射を最後に１回与える。３〜４日後、動物を屠殺し、脾臓細胞を採取し、マウス骨髄腫細胞系、例えばＮＳ１、または好ましくはＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８０）へ融合させる。上記の細胞融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、これを、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害するＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン）選択培地において、多重マイクロタイタープレートでプレート培養する。
【０１４８】
ハイブリドーマ細胞は、Ｅｎｇｖａｌｌ  ら，（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．８：８７１，１９７１）および米国特許４，７０３，００４に開示される技術の適用により、精製ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドに対する反応性についてＥＬＩＳＡによりスクリーニングすることが可能である。好ましいスクリーニング技術は、Ｂｅｃｋｍａｎｎら，（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：４２１２，１９００）に記載される抗体捕捉技術である。陽性ハイブリドーマ細胞を同系の齧歯動物へ腹腔内注射して、高濃度の（例えば、１ミリグラム／ミリリットルより高い）抗ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドモノクローナル抗体を含有する腹水を産生することが可能である。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、様々な技術によりフラスコまたはローラーボトルにおいてｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖可能である。モノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿に続き、ゲル排除クロマトグラフィーにより精製可能である。あるいは、ポリペプチドＡまたはポリペプチドＧへの抗体の結合に基づいたアフィニティークロマトグラフィーも使用可能であり、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチドへの結合に基づいたアフィニティークロマトグラフィーも使用可能である。
【０１４９】
実施例４
ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン核酸発現のアンチセンス阻害
本発明にしたがって、配列番号１、３、５、７、９、および１１のヌクレオチド配列をオリゴヌクレオチドの設計用の塩基として使用して、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインをコードするｍＲＮＡ分子の様々な領域を標的にするようにオリゴヌクレオチドの系列を設計する。ＩＭＸ１２９８４０−１、−２、−３、および−４のすべてをコードするｍＲＮＡ分子、またはそのサブセットをコードするｍＲＮＡ分子へハイブリダイズする、縮重オリゴヌクレオチドのプールのようなオリゴヌクレオチド配列を選択することが可能であるが、ＩＭＸ１２９８４０−２およびＩＭＸ１２９８４０−３のコード配列間のきわめて高い類似性の度合いにより、一方のコード配列へ結合するが、他方へは結合しないオリゴヌクレオチドを設計することは困難であろう。このオリゴヌクレオチドは、ほぼ１０、１２、１５、１８、またはより好ましくは２０のヌクレオチド残基の長さであり、少なくとも３７℃である予測ハイブリダイゼーション温度を有するように選択する。好ましくは、該オリゴヌクレオチドは、そのｍＲＮＡ分子の５’領域の方へハイブリダイズするものもあれば、コード領域へハイブリダイズするものもあれば、さらにｍＲＮＡ分子の３’領域へハイブリダイズするものもあるように選択する。標的配列と最も安定したハイブリッド構造を形成するオリゴヌクレオチドを選択するために、ＧｒａｙおよびＣｌａｒｋ（米国特許第５，８５６，１０３号および６，１８３，９６６号）のような方法が使用可能であり、そのようなオリゴヌクレオチドはアンチセンス阻害剤としての使用に望ましい。
【０１５０】
該オリゴヌクレオチドは、全体がホスホロチオエート骨格（ヌクレオシド間連結）であるオリゴデオキシヌクレオチドであってよいか、または多様な異なる種類のヌクレオシド間連結を有してよい。一般に、多様な化学修飾オリゴヌクレオチドの調製、精製、および使用の方法が、米国特許第５，９４８，６８０号に記載されている。修飾オリゴヌクレオチドはまた、オリゴヌクレオチド合成に使用可能であり、例えば、ＭＭＩ連結オリゴヌクレオシドとも呼ばれるメチレンメチルイミノ連結オリゴヌクレオシド；ＭＤＨ連結オリゴヌクレオシドとも呼ばれるメチレン−ジメチルヒドラゾ連結オリゴヌクレオシド；アミド−３−連結オリゴヌクレオシドとも呼ばれるメチレン−カルボニルアミノ連結オリゴヌクレオシド；およびアミド−４−連結オリゴヌクレオシドとも呼ばれるメチレン−アミノカルボニル連結オリゴヌクレオシド、並びに、例えば、交替的なＭＭＩおよびＰ＝Ｏ、またはＰ＝Ｓ連結を有する混合骨格化合物は、米国特許第５，３７８，８２５号、５，３８６，０２３号、５，４８９，６７７号、５，６０２，２４０号、および５，６１０，２８９号に記載のように調製される。ホルムアセタールおよびチオホルムアセタール連結オリゴヌクレオチドも使用可能であり、米国特許第５，２６４，５６２号および５，２６４，５６４号に記載のように調製され；酸化エチレン連結オリゴヌクレオチドも使用可能であり、米国特許第５，２２３，６１８号に記載のように調製される。ペプチド核酸（ＰＮＡｓ）も上記のオリゴヌクレオチドと同じやり方で使用可能であり、「ペプチド核酸（ＰＮＡ）：合成、特性、および潜在応用」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，４，５−２３；および米国特許第５，５３９，０８２号、５，７００，９２２号、および５，７１９，２６２号にしたがって調製される。
【０１５１】
本発明のキメラオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、または混合オリゴヌクレオチド／オリゴヌクレオシドは、いくつかの異なる種類であり得る。これらには、連結ヌクレオシドの「ギャップ」セグメントが連結ヌクレオシドの５’および３’「ウィング」セグメントの間に位置している第一の種類と、「ギャップ」セグメントがオリゴマー化合物の３’または５’末端のいずれか一方に位置している第二の「オープンエンド」種が含まれる。第一の種類のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野では、「ギャップマー」またはギャップのあるオリゴヌクレオチドとしても知られている。第二の種類のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野では、「ヘミマー」または「ウィングマー」としても知られている。異なる種類のキメラオリゴヌクレオチドのいくつかの例が米国特許第５，９４８，６８０号に記載されている。１つの態様において、両側（５’および３’方向）に４−ヌクレオチド「ウィング」が隣接している、１０の２’−デオキシヌクレオチドからなる中央「ギャップ」領域から構成される、長さ１８ヌクレオチドのキメラオリゴヌクレオチド（「ギャップマー」）を利用する。このウィングは、２’−メトキシエチル（２’−ＭＯＥ）ヌクレオチドから構成される。ヌクレオシド間（骨格）連結はオリゴヌクレオチド全体でホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）である。２’−ＭＯＥウィング中のシチジン残基は、５−メチルシチジンである。他のキメラオリゴヌクレオチド、キメラオリゴヌクレオシド、および混合キメラオリゴヌクレオチド／オリゴヌクレオシドは、米国特許第５，６２３，０６５号にしたがって合成する。
【０１５２】
オリゴヌクレオチドは、標準９６ウェルフォーマットにおいて９６の配列を同時に組立てることが可能な自動合成機で固相Ｐ（ＩＩＩ）ホスホロアミダイト化学により合成する。各ウェル中のオリゴヌクレオチドの濃度は、サンプルの希釈とＵＶ吸収分光測定法により評価する。個々の産物の全長完全性をキャピラリー電気泳動法により評価し、塩基および骨格の組成は、エレクトロスプレー質量分析法を利用する化合物の質量分析により確定する。アンチセンス化合物の標的核酸発現に対する効果は、標的核酸が測定可能レベルで存在すれば、多様な細胞種のいずれでも試験可能である。このことは、例えば、ＰＣＲまたはノーザンブロット解析を使用して、定型的に決定可能である。細胞は、供給業者により推奨されるように、１０回までの継代の間、定型的に維持する。細胞が８０％〜９０％の集密度に達したときに、それをオリゴヌクレオチドで処理する。９６穴プレートにおいて増殖させる細胞では、２００マイクロリットルのＯＰＴＩ−ＭＥＭ−１血清低減培地（ギブコ  ＢＲＬ）で１回ウェルを洗浄してから、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（ギブコ  ＢＲＬ）３．７５μｇ／ｍＬと所望のオリゴヌクレオチドを１５０ｎＭの最終濃度で含有する１３０マイクロリットルのＯＰＴＩ−ＭＥＭ−１で処理する。４時間の処理の後で、培地を新鮮な培地に交換する。オリゴヌクレオチド処理から１６時間後に細胞を採取する。好ましくは、標的核酸の発現の最大度合いの阻害を産生するオリゴヌクレオチドを同定するためには、標的核酸分子の様々な部分へハイブリダイズする、いくつかの異なるオリゴヌクレオチドの効果を同時に試験するべきである。
【０１５３】
ＩＭＸ１２９８４０サイトカイン核酸発現のアンチセンス変調は、当該技術分野でよく知られる多様な方法でアッセイ可能である。例えば、ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのｍＲＮＡレベルは、例えばノーザンブロット解析、競合ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、またはリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）により測定可能である。リアルタイム定量ＰＣＲが、現下では好ましい。ＲＮＡ解析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて実行可能である。ＲＮＡ単離およびノーザンブロット解析の方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら，「分子生物学の最新プロトコル」第１巻、４．１．１−４．２．９および４．５．１−４．５．３頁、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、１９９６に教示される。リアルタイム定量（ＰＣＲ）は、ＰＥ−アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティから入手可能で、製造業者の指示書にしたがって使用される市販のＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００配列検出システムを使用して、簡便に達成可能である。それぞれのアッセイにおいて、未処置対照サンプルからのｍＲＮＡの系列希釈液を含有する並行反応の系列により標準曲線を作成し、これを使用して試験サンプルのアンチセンスオリゴヌクレオチド処理後の阻害率を定量する。他の定量ＰＣＲ解析の方法も当該技術分野で知られている。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインのタンパク質レベルは、免疫沈降法、ウェスタンブロット解析（免疫ブロッティング）、ＥＬＩＳＡ、または蛍光標示式細胞分取法（ＦＡＣＳ）のような、当該技術分野で公知の多様な方法で定量可能である。ＩＭＸ１２９８４０サイトカインポリペプチド群へ向けられる抗体は、本明細書に記載される慣用の抗体産生法により調製可能である。免疫沈降法、ウェスタンブロット（免疫ブロット）分析、および酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）は、当該技術分野の標準法である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら，．「分子生物学の最新プロトコル」第２巻、１０．１６．１−１０．１６．１１，１０．８．１−１０．８．２１，および１１．２．１−１１．２．２２頁、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、１９９１を参照されたい）。
【０１５４】
本明細書に引用されるすべての公表物と特許出願は、それぞれ個別の公表物または特許出願が具体的に、そして個別に援用されると明示されるように、本明細書に援用される。前述の発明を、理解を明確にする目的で、例示および実施例により、やや詳細に記載してきたが、本発明の解説に照らして、付随する請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、特定の変化および修飾を行うことが可能であることが、当業者には容易に明らかであろう。
【０１５５】
配列一覧表に示される配列
【０１５６】
【表８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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