(57)【要約】本発明は、アンドロポーズおよび／または生殖腺機能の低下を診断および評価するための方法、装置およびキットを提供する。この方法は、男性の流体サンプルを生物学的測定法で分析し、アンドロポーズの指標となる一つ以上の臨床マーカーの濃度を測定することを含む。本発明の方法は、簡単で、迅速かつ非侵襲性である。この方法によれば、患者本人が自宅に居ながら検査でき即座に結果を知ることができる。結果に基づいて、患者は初期治療およびアンドロポーズ諸症状および関連するいかなる臨床症状の緩和を導く、専門的な医療援助を求めることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の方法から成る、アンドロポーズの非侵襲性診断方法：
男性の流体サンプルを用いてアンドロポーズを示す濃度にある１以上の臨床マーカーの存在を生物学的測定法で分析する方法。
【請求項２】
前記生物学的測定法が免疫学的測定法である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫学的測定法が、標識された、臨床マーカー結合性化合物結合体と特異的に結合する抗体を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記臨床マーカー結合性化合物が、標識されたＦＳＨ結合性化合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記臨床マーカー結合性化合物がプロテインＡ、ＦＳＨアルファサブユニット抗体、ＦＳＨベータサブユニット抗体から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記標識された臨床マーカー結合性化合物が視覚的にアンドロポーズのレベルを検出できる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記流体サンプルが、尿、唾液、精液、汗、粘液、血液、血漿および血清から選択される、請求項１−６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記流体サンプルが尿である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記臨床マーカーが、ＦＳＨ、ＬＨ、アンドロゲン、アンドロゲン前駆体およびアンドロゲン代謝産物から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アンドロゲン前駆体が、プレグネノロン、プロゲステロン、１７−ヒドロキシプレグネノロン、１７−ヒドロキシプロゲステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）およびデルタ−４−アンドロステン３，１７−ジオンから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アンドロゲン代謝産物が、テストステロン代謝産物、ジヒドロテストステロン代謝産物、極性代謝産物、結合体およびエストラジオールから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
次のステップから成る、アンドロポーズの臨床マーカーを用いた男性のアンドロポーズ状態を決定するための非侵襲性診断法：
前記体液サンプルを、標識された、臨床マーカー結合性化合物が存在する第１領域支持体に注ぎ、前記体液サンプル中のあらゆる臨床マーカーが前記標識された臨床マーカー結合性化合物に結合して結合体を形成する；
前記第１領域に隣接し、前記形成された結合体を認識する抗体が位置する第２領域に体液サンプルを流入させる；
前記第２領域においてアンドロポーズ状態を示す前記結合体の存在または量を視覚的に検出する。
【請求項１３】
前記臨床マーカーが、ＦＳＨ、ＬＨ、アンドロゲン、アンドロゲン前駆体およびアンドロゲン代謝産物から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アンドロゲン前駆体が、プレグネノロン、プロゲステロン、１７−ヒドロキシプレグネノロン、１７−ヒドロキシプロゲステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）およびデルタ−４−アンドロステン３，１７−ジオンから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
アンドロゲン代謝産物が、テストステロン代謝産物、ジヒドロテストステロン代謝産物、極性代謝産物、結合体およびエストラジオールから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記マーカーがＦＳＨである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記流体サンプルが、尿、唾液、精液、汗、粘液、血液、血漿および血清から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記流体サンプルが尿である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
次のステップから成る、男性患者の更年期障害を予測するアンドロポーズ臨床マーカーの存在を検出する方法：
前記患者の体液サンプルを用いて生物学的測定法でアンドロポーズ臨床マーカーの存在を検出する。
前記サンプルのアンドロポーズ臨床マーカーを検出した場合には、該サンプルを、前記患者においてアンドロポーズの状態を示すものとして分類する。
【請求項２０】
前記生物学的測定法が免疫学的測定法である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫学的測定法が標識された臨床マーカー結合性化合物と特異的に結合する抗体を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記臨床マーカー結合性化合物が標識されたＦＳＨ結合結合性化合物である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記臨床マーカー結合性化合物がプロテインＡ、ＦＳＨアルファサブユニット抗体、ＦＳＨベータサブユニット抗体から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記標識臨床マーカー結合性化合物が視覚的にアンドロポーズのレベルを検出できる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記流体サンプルが、尿、唾液、精液、汗、粘液、血液、血漿および血清から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記流体サンプルが尿である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記臨床マーカーが、ＦＳＨ、ＬＨ、アンドロゲン、アンドロゲン前駆体およびアンドロゲン代謝産物から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
アンドロゲン前駆体が、プレグネノロン、プロゲステロン、１７−ヒドロキシプレグネノロン、１７−ヒドロキシプログステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）およびデルタアンドロステロン３，１７−ジオンから選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
アンドロゲン代謝産物が、テストステロン代謝産物、ジヒドロテストステロン代謝産物、極性代謝産物、結合体およびエストラジオールから選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
次の装置から成る、患者のアンドロポーズの状況を評価する装置：
−筺体；
−前記筺体内に配置され、男性被検者のサンプル中に存在しかつ第１領域に注入される男性更年期状態の臨床マーカーと結合可能な、標識された臨床マーカー結合化合物が位置する第１領域と、前記第１領域に隣接し該標識された臨床マーカー結合性化合物に結合された臨床マーカーを認識する抗体が位置する第２領域を有する支持体。
【請求項３１】
前記筺体が前記第２領域において第１および第２の露出孔を有する、請求項３０に記載の装置。
【請求項３２】
前記筺体がプラスティック材質である、請求項３１に記載の装置。
【請求項３３】
前記装置が第１領域の前記支持体上に吸収パッドをさらに含む、請求項３２に記載の装置。
【請求項３４】
前記装置が第２領域の前記支持体上に吸収パッドをさらに含む、請求項３３に記載の装置。
【請求項３５】
前記吸収パッドがセルロースエステルである、請求項３３または３４に記載の装置。
【請求項３６】
前記セルロースエステルがニトロセルロースである、請求項３５記載の装置。
【請求項３７】
前記標識された臨床マーカー結合性化合物が金コロイド−モノクローナル抗ベータＦＳＨ結合体である、請求項３０に記載の装置。
【請求項３８】
前記抗体がポリクローナル抗アルファＦＳＨ抗体である、請求項３７に記載の装置。
【請求項３９】
前記装置が前記支持体の前記第２領域にポリクローナル抗免疫グロブリンのコントロール領域をさらに含む、請求項３２に記載の装置。
【請求項４０】
次から成る、患者のアンドロポーズ状況を評価するための診断キット：
−標識された臨床マーカー結合化合物が位置する第１領域を有する支持体；
−前記第１領域に隣接し、前記標識された臨床マーカー結合化合物を認識する抗体が位置する第２領域。
−使用説明書。
【請求項４１】
前記標識された臨床マーカー結合性化合物が金コロイド−モノクローナル抗ベータＦＳＨ結合体である、請求項４０に記載のキット。
【請求項４２】
前記抗体がポリクローナル抗アルファＦＳＨ抗体である、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
前記装置が前記支持体の前記第２領域にポリクローナル抗免疫グロブリンのコントロール領域をさらに含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
前記キットが梱包して供与される、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
サンプルスポイトおよび／またはサンプル捕収剤をさらに含む、請求項４４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンドロポーズ又は男性更年期障害と一般に称される男性のアンドロゲン減退の診断方法に関し、特に、男性におけるアンドロポーズの状態および／または生殖腺の機能の低下を診断する方法、装置、検査キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
男性更年期障害とも称されるアンドロポーズは、成人男性の加齢によって一般に広く起こる男性ホルモンの減退と定義される。アンドロポーズの開始年齢は非常に予測不可能である。アンドロポーズはいかなる年齢でも起こり、４０歳前に発症することはまれであるが、１０年ごとに発症確率が増加する。アンドロゲンのホルモン産生能の低下にともなう男性生殖腺機能の減退は、長年にわたって徐々に進行する傾向がある。臨床像の結果から、エストロゲンの低下による卵巣機能の減退に由来する女性の更年期障害の進行過程に近似している。
【０００３】
アンドロポーズと女性更年期障害の双方において、性ホルモンの生物学的活性レベルの低下がこれら２つの臨床兆候と症状を生じさせる。生殖腺ホルモンレベルの低下は、性ホルモンの産生および分泌の低下による生殖腺機能の連続的減退の直接的な結果である。男性では、睾丸機能の低下はアンドロポーズのアンドロゲン（すなわちテストテロンおよびその前駆体および代謝産物）レベルの減退に関連付けられる。
【０００４】
男性のアンドロゲンレベルの減退は、疲労、気分や認識の変調（抑うつ、気分変動、過敏症）、筋肉の喪失促進、体重増加、体脂肪増加、関節損傷リスクの増加、骨粗鬆症、骨折、性欲減少、勃起障害及び血清脂質レベルの有害な変化に関連する。これらの臨床上の症状は、アンドロゲンレベルの正常な生理学的レベルへの成功裡な回復により、成功裡に治療又は改善することができる。更に、ホルモンレベルを回復することで、これらの状況に関連する病理学的疾患を効果的に緩和又は予防することが証明されている。
男性にとって更年期の臨床上の検出と治療を複雑にしているのは、以下の理由による。
−  予測不能な開始年齢（３０歳代又は４０歳代から１００歳代かそれを超えてまで開始する）；
−  症状は、しばしば極めてゆっくりと知らない間に、数年及びしばしば数十年にわたって進行していく；
−  アンドロポーズの症状は、加齢に通常関連している変化にしばしばよく似ている；
−  ストレスや多くの他の慢性病との共存症が、アンドロポーズを見落とす原因となる類似の症状を産み出す；
−  更年期障害による性的機能障害の困難を経験した大多数の男性は、恥ずかしさのあまり彼らの主治医に打ち明けたり相談したりしない；また、
−  一般的知識の不足は、この状況下にある大部分の男性が自分の症状に対して医学的治療を求めようとしないことにつながっている。そして、医学的治療が求められているときでさえ、この状況がたびたび診断せれずそして治療されない状態になっている。
【０００５】
開業医の焦点は、アンドロポーズの症状の治療であり、状況の早期診断ではなかった。アンドロゲン欠乏によって引き起こされた症状を緩和するためのアンドロポーズの治療には、アンドロゲンの投与が含まれる。例えば、プロビロン（登録商標）のようなテストステロン誘導体が経口投与される。アメリカ合衆国特許5,861,389号では、男性のアンドロゲン欠乏を治療するために、選択的アロマターゼ阻害薬の使用が開示されている。ＷＯ99/52533（1999年１０月２１日公開）では、男性のアンドロゲン欠乏の治療として、エチステロン又はエチステロン誘導体の使用が開示されている。
【０００６】
現在のところ、アンドロポーズ状態を測定するための単純、迅速、正確及び非侵襲性検査は存在しない。この状況が診断されずかつ治療されなければ発現する疾病率を軽減させるためのヘルスケアが決断できるように、このような検査が早期に望まれる。現状では、アンドロポーズ状態は侵襲性血液検査によって測定されており、ヘルスケア設備の中で医者によってのみ可能である。更に、この検査では、分析室で実行されるように結果を得るまで何日間かを要する。対照的に、女性の場合は更年期に関連する月経閉止により、更年期状態は容易に診断される。女性更年期を家庭内で診断するための臨床マーカーを検出する検査部品は既に開発されている（ＥＰ0736771）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の理由から、より多くの男性がこの深刻な医学的状況に対し適切かつより早期に治療を受けることができるように、症状を呈している男性に検査手順を提供することは非常に望まれるところであろう。症状を呈していない男性もアンドロポーズの検査を行うことができる。対費用効果的、非侵襲的及び個人的態様でアンドロポーズを診断する正確かつ迅速に選択された臨床マーカーを検出する利用可能な診断方法を有することは、有益なことである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によれば、アンドロポーズ及び／又は生殖腺機能低下を診断しかつ評価する方法を提供する。本発明の方法は、単純、迅速かつ非侵襲的である。該方法は、無洗浄でワンステップの方法であって、特別に設計された診断装置（カセット）又はストリップに適切な流体サンプルを注入すること以外に何も要求されない。
【０００９】
該方法は、患者が自宅において個人的に行うことができ、ほとんど即座に結果を得られる。研究室での分析は必要ない。該結果に基づいて、患者は早期治療及びアンドロポーズ症状や種々の関連する医学的状況の緩和に至る、専門的な医療援助を求めることができる。
【００１０】
本発明の一つの側面によれば、正確かつ迅速にアンドロポーズを診断する１つ以上の臨床マーカーを検出する診断方法、装置及びキットであって、侵襲性採血方法を要求することなく自宅で実行できる診断を提供し、また、男性患者にとっていかなる不快さもなく診断方法をたびたび繰り返す可能性をもたらす。該装置とキットはポータブルで、いかなる場所にも携帯しかつ使用でき、個人的使用に適している。
【００１１】
従って、本発明の該方法、装置及びキットは、短時間つまり数分で信頼できる結果をアンドロポーズの状況を示す結果と共に提供する。また、本発明の該診断方法は、安全かつ信頼性があるものである。
【００１２】
本発明の別の側面によれば、アンドロポーズを診断及び評価するための非侵襲性方法であって、該方法は、男性の流体サンプルについて生物学的検定を行うこと、そして、アンドロポーズを示す一定濃度におけるアンドロポーズの１つ以上の臨床マーカーの存在を測定することを含む。
【００１３】
本発明の別の側面に従えば、男性患者のサンプル中の臨床マーカーの総計を計量することを含む男性患者のアンドロポーズの診断を助ける方法であって、ここで、サンプル中の一定レベルの臨床マーカーが患者のアンドロポーズを示す。
【００１４】
本発明のさらに別の側面に従えば、体液サンプル中のアンドロポーズの１つ以上の臨床マーカーの存在を同定することを含む、男性被検者のアンドロポーズの非侵襲性検出の方法であって、該方法は、以下のステップを含む。
（ａ）サンプルをアンドロポーズの臨床マーカーに特異的な少なくとも１つの抗体に接触させる；
（ｂ）サンプル中の抗体と抗原が複合するに十分な時間だけサンプルと抗体混合物を培養する；
（ｃ）いずれかの複合体を検出する；そして、
（ｄ）いずれかの複合体を前記男性被検者のアンドロポーズの有無に相関させる。
【００１５】
本発明のさらに別の側面によれば、男性患者のアンドロポーズの前兆指標としてアンドロポーズ臨床マーカーの存在を検出する方法であって、該方法は以下を含む：
−前記患者の生物学的流体サンプル中のアンドロポーズ臨床マーカーの存在を検出するため生物学的検定を行う；そして、
−前記サンプル中の該アンドロポーズ臨床マーカーの検出に基づき、前記患者におけるアンドロポーズの状況を示す前記サンプルを陽性として分類する。
【００１６】
本発明のさらなる側面によれば、アンドロポーズの臨床マーカーの検出により、男性患者のアンドロポーズ状態を測定するための診断方法であって、該方法は以下の段階を含む：
−前記患者の生物学的流体サンプルを、標識された臨床マーカー結合性化合物が配置された支持体上の第１領域に注入する。ここで、前記生物学的流体サンプルに存在するいずれの臨床マーカーも、結合体を形成する前記標識された臨床マーカー結合性化合物に結合する；
−該生物学的流体サンプルを、前記第１領域に隣接し、前記形成された結合体を認識する抗体が配置された第２領域に流入させる；そして、
−前記第２領域中で形成された結合体の存在又は量を、アンドロポーズの状況を示す総計として視覚的に検出する。
【００１７】
本発明の一層さらなる側面に従えば、被検者のアンドロポーズ状態を評価する装置であって、該装置は以下を含む：
−筺体；
−前記筺体内に配置され、男性被検者のサンプル中に存在しかつ第１領域に注入されるアンドロポーズ状態の臨床マーカーと結合可能な、標識された臨床マーカー結合性化合物が位置する第１領域と、前記第１領域に隣接し該標識された臨床マーカー結合性化合物に結合された臨床マーカーを認識する抗体が位置する第２領域を有する支持体。
【００１８】
本発明の一層さらなる側面に従えば、被検者のアンドロポーズ状態を評価するための診断キットであって、該キットは以下を含む：
−標識された臨床マーカー結合性化合物が位置する第１領域を有する支持体；
−前記第１領域に隣接し、前記標識された臨床マーカー結合性化合物を認識する抗体が位置する第２領域。
−取扱説明書。
【００１９】
実施例において、該キットは患者による自宅使用のために商業的に製造され、また、包装、取扱説明書、生物学的流体サンプルの採取器及び／又は点滴器を追加的に含んでもよい。
【００２０】
本発明の方法やキットにおける有用な検出用マーカーは、ＦＳＨ、ＬＨ、アンドロゲン、アンドロゲン前駆体及びアンドロゲン代謝産物を含み、かつ、これらに限定されない。テストステロンの前駆体は、プレグネノロン、プロゲステロン、１７−ヒドロキシプレブネノロン、１７−ヒドロキシプロゲステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）及びデルタ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンを含む。テストステロンとジヒドロテストステロン代謝産物は、１７−ケトステロイド（アンドロステロン＆エチオコラノロン）、ジオール形状の極性代謝産物、トリオール及び結合体、同様にエストラジオールを含む。当該技術の専門家によって理解されるとおり、本発明の方法とキットは２つ以上の臨床マーカー−教えられただけの上に列挙又は臨床マーカーの組み合わせ−を含むように設計されてもよい。２つ以上の臨床マーカーが分解されるところでは、適切な数と型の抗体が支持体の第２領域に存在することとなる。あるいは、１つ以上の臨床マーカーが分解されるところでは、１つのマーカーとそれに対応する認識抗体とを含む分離された各ストリップが提供される。この仕方では、本発明のキットは複数の検査ストリップを含むこととなる。
【００２１】
本発明に用いられる好ましい生物学的体液は尿であるが、当該技術の専門家によって理解されるとおり、他の体液、例えば唾液、精液、汗、粘液、血液及び血漿であってもよい。被侵襲的方法によって容易に採取できる生物学的体液であることが好ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は、新規な方法、装置及び検査キットシステムであって、男性のアンドロポーズの状況及び／又は生殖腺機能低下を、迅速、信頼性よく、単純かつ非侵襲的仕方で診断及び評価するものである。アンドロポーズの状況は、症状が問題になるまで本人によってしばしば認識されることはない。従って、診断は、結果を得るまで何日間も要する侵襲的血液検査を用いて医者によって行われるに過ぎない。そして、状況は要求されるとおりの治療がなされるだけのことである。そこで、本発明は、患者が望む時はいつでも自宅又は他の適切な個人的場所で気楽に診断検査を行うことができるようにするものである。このような自宅検査は、状況及び関連する症状の早期治療につながるものである。
【００２３】
本発明の方法は、患者によって気持ちよく容易に実行することができ、彼らの器官系におけるある一定の臨床マーカー（又はそれらの混合物）のレベルを測定する非侵襲的診断方法である。該方法は、男性患者の生物学的流体サンプルを、標識された臨床マーカー結合性化合物が位置する第１領域を有する支持体へ注入することを含む。第１領域に隣接する支持体の第２領域には、結合された臨床マーカーが計量されることを認識する抗体群が位置する。臨床マーカーは患者のサンプル中に存在していなければならず、それは標識された臨床マーカー結合性化合物と結合し、結果的に標識された臨床マーカー結合性化合物複合体ないしは結合体となる。体液は、従って、複合体（又は結合体）が抗体と結合する第２領域へ支持体を経由して流入していく。標識されかつ複合された十分な量の臨床マーカーがサンプル中のアンドロポーズを示す濃度で検出されたならば、視覚的結果が容易に目に捉えることができる。第２領域は、検査が遊離している標識された臨床マーカーを生育的に検出しつつあることを示すため対照エリアをもってもよいし、又はもたなくともよい。
【００２４】
生物学的サンプルは、尿、血液、血漿、血清、唾液及びそれらの混合物から成る群より選択することができる。好ましくは、サンプルは朝起床した際に排泄する尿サンプル、以下“朝一番尿”という、である。高い濃度の尿は誤った陽性結果を生じ、過度に薄められた尿は誤った陰性結果を生じるので、このようなサンプルの使用は誤った結果の発生を防止することとなる。これら双方の結果は、器官系内ホルモンの実際量の不正確な反射に起因している。
【００２５】
アンドロポーズ又は生殖機能低下を示す、本発明における検出に有用な臨床マーカーは、テストステロン；テストステロン前駆体、例えばプレグネノロン、プロゲステロン、１７−ヒドロキシプレグネノロン、１７−ヒドロキシプロゲステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）及びデルタ−４−アンドロステン−３，１７−ジオン；テストステロンとジハイドロテストステロン代謝産物、例えば１７−ケトステロイド、アンドロステロン及びエチオコラノロン、ジオール形状の極性代謝産物、トリオール及び結合体、同様にエストラジオールを含む。血清及び他の体液中の全てのこれらマーカー化合物のレベルは、テストステロンの影響で変化する（特に、睾丸で直接合成される前駆体は最もテストステロンの影響を受ける）。
【００２６】
ステロイド性ホルモン（及びその前駆体と代謝産物）に加えて、本発明での使用に潜在的に有用なその他のマーカーは、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）、ＬＨ（黄体形成ホルモン）、及びＧｎＲＨ（ゴナドトロピン放出ホルモン）である。ＧｎＲＨは、視床下部で合成されるデカペプチドであり、ＦＳＨとＬＨの放出を刺激する下垂体前葉腺へ輸送される。ＦＳＨとＬＨは睾丸内でテストステロンと精液産生を刺激するポリペプチドホルモンである。テストステロンがＧｎＲＨ、ＦＳＨ及びＬＨの分泌を直接抑制する。その結果、テストステロンのレベルが減少すると、ＧｎＲＨ、ＦＳＨ及びＬＨの生殖腺分泌は上昇する。ＦＳＨはＬＨの１．５倍の寿命である血清を有しているため、その上昇はＬＨよりも一層劇的となる傾向がある。この理由により、上昇した血清ＦＳＨのレベルが女性更年期のための主な生物学的マーカーの一つとなり、そしてアンドロポーズにおいても同様に極めて信頼性高く上昇するのである。成人男性においては、ＧｎＲＨ、ＦＳＨとＬＨの分泌はすぐれて脈動的である。結果として生殖腺性ホルモンの産生もまた、一日を通じ極めて広い範囲で変動する。ホルモンが脈動的分泌（ＧｎＲＨ、ＦＳＨ、ＬＨ及びテストステロンのような）をした場合、１回の血清値は平均的血漿レベルを代表してはいない。そのような場合は、ランダムに採取した数サンプルのレベルを計量して平均化すること、又は、１回の測定用に２０〜３０分間の間隔で採取した３つ以上で割り切れる数の血漿のサンプルをプールすること、のいずれかが必要となる。この平均化の効果は、腎臓で産生された尿が患者が尿サンプルを提供するために排泄する前に膀胱中に集められ混ぜ合わさるという形で、自然に現れる。尿の排泄率計測はホルモン又はホルモン代謝産物は血漿レベル又は分泌率を変動させる単離された血漿レベルの計測超える一定の有利さを提案する。例えば、尿排泄は採取時間にわたる血漿レベルの平均を変動させる。この原則は、ＧｎＲＨ、ＦＳＨ、ＬＨ及びテストステロン（又はこれらの前駆体又は代謝産物）のための１回の尿テストが、１回の血清テストよりも平均血漿レベルを正確に代表することが極めて濃厚に窺えることを意味している。
【００２７】
サンプルが注入される支持体は、標識された臨床マーカー結合性化合物や結果として得られる複合体（結合された臨床マーカーとの複合体であり、結合体とも呼ばれる）を含む第１領域を支持するに適したいずれの支持体とすることができる。同様に、第２領域は例えばヒトＦＳＨのような臨床マーカーに対する抗体を含んでいる。適当な支持体の例は、セルロースエステルであり、特に好ましくはニトロセルロースである。知られているように、ニトロセルロースはセルロースの硝酸エステルに関連しており、ニトロセルロース単独又は硝酸と他の酸、特に１番から７番までの炭素原子を有する脂肪族カルボン酸好ましくは酢酸との混合エステルのことである。かかる固体の支持体は、硝酸単独又は硝酸と酢酸のような他の酸の混合物でエステル化されたセルロースで構成され、しばしばセルロースペーパーと呼ばれる。ニトロセルロースが支持体として好ましい材料ではあるが、知られるであろうように、臨床マーカー結合性化合物を適切な濃度で支持するに十分な表面積を有するその他の材料、これに限定されないが例えばナイロンも、固体の支持体の製造にあたって採用することができる。
【００２８】
好ましくは、吸収パッドは免疫指標複合体が発見される第１領域の支持体上に提供される。この吸収パッドは、尿のような生物学的流体サンプルを吸収する働きがあることにより、下にあるニトロセルロース製支持体をゆっくりと湿らせていく。生物学的流体サンプルは、そしてニトロセルロース製支持体に沿って毛細管現象により第２領域に移動する。このようにして、吸収パッドは結合体の貯水池として機能し、また十分な生物学的サンプルを保持して第１領域からサンプルがこぼれ出さないようにニトロセルロースを湿潤状態に保つ。第２領域の吸収パッドは、過剰な生物学的サンプルを吸収するため第２領域の下流側に提供されており、つまり余剰貯水池として機能する。本発明は、第１領域内の吸収パッドがなくとも、実行することができることもまた認められている。
【００２９】
支持体が防護形状で提供され、例えば、適切なタイプ例えばプラスチックのような材料で構成された不活性な防護カバーに入れられている。一つの実施態様として、支持体は第１及び第２領域を収容するカセット類似の構造になっており、各領域ともカセットの片面に小さな窓を通じてのみアクセスすることができる。この実施態様では、サンプルは第１及び第２領域に最小限のダメージの可能性でもって窓に注入することができる。このような中間的防護の提供は、患者の直接使用に特に適切かつ望まれるものである。
【００３０】
該支持体は、部分的に保護された形状で提供することも可能である。カード形状、検査ストリップ又はディップスティックであるようなシート形状でも提供できる。支持体の部分から生物学的体液を注入する。この形状もまた、患者の直接使用に適切なものである。
【００３１】
実施例は、例示の目的のために述べられているものであり、本発明の範囲の制限を意図するものではない。
【００３２】
この開示及び実施例において、言及されてはいるが明白には述べられていない化学、蛋白質とペプチドに係る生化学及び免疫学の方法は、科学文献に報告され、また、当該技術の専門家には周知のものである。
【実施例１】
【００３３】
−検査の実施−アンドロポーズ指標としてのＦＳＨを用いて
【００３４】
検査を行うため、好ましくは尿サンプルが正確な結果をもたらすことを目的に約１〜２ｍｌを支持体の第１領域に注入される。該サンプルは、点滴器を使用して該支持体に注入した場合は、３〜５滴のサンプルで十分である。１〜２ｍｌ（すなわち３〜５滴）以上の使用は、検査に対して逆の影響はないであろうが、しかし、防護カバー中にある中間体に注入されたとき、過剰なサンプルがカバーのエッジからこぼれるので、望ましくないであろう。これ以下の使用は、支持体を湿らせるには不十分なサンプルとなり得、よって診断結果が得られる第２領域に対しサンプルの継続的流れを妨げることになり、いかなる結果ももたらさないかもしれない。
【００３５】
尿サンプルが標識されたＦＳＨ結合性化合物を有する第１領域に注入される。一般的に、結合性化合物の量は、尿サンプル中の抗原の量よりもかなり多い。当業者は、第１領域において使用されるべき結合性化合物がいかほどか、容易に決定することができるであろう。ＦＳＨ結合性化合物は、反応の同定を可能にするが、この同定を行なうためにいずれのさらなる化合物又は反応物質をも必要としない、この分野において従来から行なわれているいずれの方法によっても標識することができる。このやり方で、該方法は単一の手順で行うことができ、また、患者による直接使用に特に適している。しかしもちろん、試験室の中で専門家によって使用することもできる。一つの例として、色度測定による同定が用いられる。コロイド金のような色度測定上の同定指標がこの型の同定には有用である。当該技術の専門家は、本発明での使用に適している色度測定指標の型を容易にわかるであろう。
【００３６】
臨床指標（結合体を形成する）を結合するためのＦＳＨ結合性化合物は、ＦＳＨによって形成された免疫複合物やそれらに対する抗体（ＦＳＨ免疫複合体）に結合できる化合物であればよい。適切なＦＳＨ結合性化合物の一例は、細菌性（ブドウ球菌性）のプロテインＡである。プロテインＡは、ＦＳＨ免疫複合体のフォーメーションに発生する抗ＦＳＨ構造への構造的変化に起因して、ＦＳＨ免疫複合体上の抗ＦＳＨに特異的に結合する。
【００３７】
ＦＳＨ結合性化合物は、別の局面で一層の化合物へのＦＳＨ結合を妨げたり強制したりしないＦＳＨに結合できるいずれの化合物からも選択できる。このように、ＦＳＨ結合性化合物は、非結合サブユニットをさらなる化合物に結合することから守るベータ又はアルファサブユニットのいずれかに対する抗体でよい。好ましくは、ＦＳＨ結合性化合物はＦＳＨベータサブユニットに対する抗体である。そのようなＦＳＨ結合性化合物の例としては、ＦＳＨベータサブユニットに対するモノクローナル抗体、またの名をモノクローナル抗ベータＦＳＨという。この場合、モノクローナル抗ベータＦＳＨは、さらなる結合から自由なＦＳＨアルファサブユニットから離れてＦＳＨベータサブユニットに結合する。モノクローナル抗ベータＦＳＨの使用は、ＦＳＨベータサブユニットに対し特異性を提供する。ベータサブユニットはＦＳＨに生物学的活性を与えるので、このことは重要である。最も好適な実施態様としては、モノクローナル抗ベータＦＳＨはモノクローナルマウス抗ヒトベータＦＳＨである。
【００３８】
支持体の第１領域は尿サンプルの注入に先だって、結合体を保持する。なぜなら、結合体は容易に注入された尿によって吸収されるからである。吸収パッドは結合体の貯水池として機能するため、また下にあるニトロセルロース製支持体を十分な尿で湿潤に維持するため、第１領域に用いられる。結合体は表面張力によってパッドに吸着され、注入された尿サンプルによって容易にピックアップされる。吸収パッドは適切な材料から構成することができ、当該技術の専門家によって知られているように、結合体を保持しかつ第１領域に戴置されている。
【００３９】
支持体の第２領域は第１領域に隣接して位置している。この領域は、ＦＳＨ又は抗ＦＳＨに対して固定された抗体を含んでいる。すなわち、ＦＳＨ単独を結合でき、ＦＳＨアルファ又はベータサブユニットのいずれかと結合できる。一般的に、過剰な抗体は第２領域内で使用かつ存在し、適切な量は当該技術の専門家によって測定可能である。好ましい実施態様としては、第２領域はＦＳＨアルファサブユニットに対する固定された抗体を含んでいる。第２領域での固定化に適合する抗体の例は、ＦＳＨアルファサブユニットに対するポリクローナル抗体、またの名をポリクローナル抗アルファＦＳＨという。ＦＳＨアルファサブユニットに対する抗体の使用は、アルファサブユニットが抗体に莫大な結合サイトを提供し、それによって１つ以上の抗体の結合を許容するため有利である。ポリクローナル抗体の使用は特異性が低くまたアルファサブユニットに適切な莫大なサイトで結合できるという有利さもある。これら両方の特徴は、本方法の感度を向上させている。最も好適な実施態様では、ポリクローナル抗アルファＦＳＨは、ポリクローナルヤギ抗ヒトアルファＦＳＨである。
【００４０】
抗ＦＳＨが、アンドロポーズを示す濃度においてＦＳＨを検出するのに十分な量で、第２領域に塗布されている。この濃度は個人差があるであろう。好ましくは、ほぼ少なくとも６〜１２ＩＵ／Ｌ（サンプルの国際単位／リットル）のＦＳＨ濃度がアンドロポーズを示すと考えられる。ＦＳＨのこの濃度を検出するに要求される抗ＦＳＨの量は、当該技術の専門家によって伝統的に使われている投薬反応分析により測定できる。他の有用な臨床指標の検出限界も同様にして測定できる。
【００４１】
実際においては、サンプルは第１領域に注入された後、結合体を形成する結合性化合物をピックアップし、毛細管現象により第２領域に移動する。サンプル内にＦＳＨが含まれているならば、それは免疫複合体を形成するため第２領域に結合されている抗ＦＳＨと結合する。結合体形成に使われたＦＳＨ結合性化合物に基づき、該結合体はＦＳＨ結合性化合物を経由して第２領域上に形成された抗ＦＳＨ／ＦＳＨ免疫複合体に連結するか、あるいは、第２領域に取り込まれた抗ＦＳＨに結合する前に既にＦＳＨに連結しているかのいずれかとなる。いずれにしろ、標識された結合体は第２領域内に保持され、それによって、ラベルの検出が可能となり、そしてサンプル中のＦＳＨが検出されることとなる。もしサンプル中にＦＳＨが存在しないならば、ＦＳＨ結合性化合物の結合はなく、標識された結合体は第２領域内に保持されることはない。もしサンプル中のＦＳＨが遮断レベルを下回るならば、ＦＳＨ結合性化合物の結合と標識された結合体の保持はあるものの、検出するには不十分となって陰性結果を示すこととなる。
【実施例２】
【００４２】
商品化キット
本発明の一つの具体例として、該方法は、図１Ａに示すような装置（以下カセットという）１０を用いて行われる。該カセットは、あらゆる標準的なカセット製造材料、例えばプラスチックなどから製造されている。該カセットは、吸収パッド１４を有する第１領域１２を収容しており、該吸収パッドには乾燥したコロイド金−モノクローナル抗−ベータＦＳＨ結合体が存在する。第１領域１２は、ニトロセルロースの膜１６上に戴置されている。該ニトロセルロースの膜１６は、該吸収パッド１４に隣接しかつポリクローナル抗−アルファＦＳＨで被覆された第２領域１８を形成するために延長されている。該カセットには２つの窓があり、“点滴ゾーン窓”２０と称する第１の窓が第１領域１２に位置している。これはサンプルを流し込む場所である。第２の窓は“結果窓”２２と称され、第２領域１８に位置している。該結果窓２２には、“Ｃ”というラベルが貼られたコントロールエリア２４と“Ｔ”というラベルが貼られたテストエリア２６がある。ニトロセルロース上のコントロールエリア２４には、ポリクローナル抗−免疫グロブリンが飽和されている。従って、過剰に存在し遊離した標識された抗−ベータＦＳＨは、使用されたサンプル内のＦＳＨの有無に関わらず、着色されたコントロールラインを生成するコントロールエリアにおいて抗−免疫グロブリンと結合する。このことは、ＦＳＨが含まれていないサンプルを使用した場合、標識された抗−ベータＦＳＨが遊離状態のままでいることから生じるものである。ＦＳＨが含まれているサンプルを使用した場合も、コントロールの存在を確実にするため過剰分が第１領域に使用されることとにより、遊離した抗−ベータＦＳＨが存在するからである。抗−免疫グロブリンＧの使用が好ましいが、抗−免疫グロブリンＡ、抗−免疫グロブリンＭ、抗−免疫グロブリンＤおよび抗−免疫グロブリンＥもコントロールラインにおいて使用することができる。（第２領域の）テストエリア２６はポリクローナル抗−アルファＦＳＨのみで被覆されており、使用サンプル中に少なくとも６〜１２ＩＵ／ＬのＦＳＨが存在すれば、目に見える着色線を生成するのみである。
【００４３】
当該技術の専門家によって歓迎されるであろうように、この方法は、本質的に半−定量的であり、少なくとも６〜１２ＩＵ／Ｌの如き特異的アンドロポーズ−表示ＦＳＨ濃度において、陽性結果（図２Ａ）が得られる。ＦＳＨ濃度がこれ以下であれば、陰性結果（図２Ｂ）を登録することとなる。
【００４４】
抗−ＦＳＨ濃度が高くなった場合に、当該方法をより一層定量的にするため、すなわち、ＦＳＨ濃度が少なくとも６〜１２ＩＵ／Ｌであるという簡便な表示ではなく、患者の流体サンプル中の正確なＦＳＨ濃度をさらに迅速に鑑定するため、複数のテストエリアを第２領域に組み込むことが可能である。
【００４５】
本発明のもう一つの局面としては、キットが有効にアンドロポーズの状態を診断するのに有用なキットが提供される。該キットは、結合体を含む第１領域を有する中間体を含む。該結合体は標識されたＦＳＨ−結合性化合物を含み、第２領域はヒトＦＳＨに対する抗体を含む。該中間体の第１及び第２領域は、第１領域から第２領域へサンプルの継続的流れを維持できるように隣接している。
【００４６】
本発明の一つの具体例として、詳細に上述したように、該キットは、第１及び第２領域を収容するカセット類似の構造（図１Ａ参照）を含む。保管中及び使用に先立ち該カセットの機能を維持するため、図１Ｂで示すように、金属箔で包装し好ましくは密閉する。第１及び第２領域の性質は、既に上述のとおりである。
【００４７】
利用者の利便性を高めるために、該キットには、取扱説明書、尿サンプルを採取する容器及び適当量のサンプルをカセット上の注入口すなわち“点滴ゾーン”に注入する点滴器のような手段を付加的に含めることができる。該キットは、適切に梱包され、要望に応じラベルが貼られている。該キットは、使い捨てである。
【００４８】
当該技術の専門家によって歓迎されるであろうように、本発明は、当該技術の専門家にとって明白であろう何通りもの方法で多様化され得るものであるし、この明細書及び特許請求の範囲の中に全ての明白な均等物及び類似物が含まれることを予定している。明細書は特許請求の範囲を解釈するガイドとしての役割を予定しており、それらを不必要に制限するためのものではない。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
本発明の実施態様を以下の図面に基づき述べる。
【図１】本発明の方法を行う一つの実施態様に用いることができるカセット（Ａ）と、使用のため配布される際の密閉状態（Ｂ）の該カセット
【図２】図１に示すタイプのカセットの結果窓であって、陽性結果（Ａ）及び陰性結果（Ｂ）を示す  図面は、説明の目的のみであり、本発明の範囲をここに述べられているように限定していると解釈してはならない。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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