(57)【要約】ＮＴＰを含有する生存組織における細胞死および／または組織壊死の防止、抑制および／または回復の方法であって、生存組織と、少なくとも神経スレッドプロテイン（ＮＴＰ）を認識するまたは結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片と接触させ、ここで抗体、抗体誘導体または抗体断片は、細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または緩解するために十分な量で存在する、前記方法が開示される。本方法はＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死の防止、抑制、軽減、調節および／または回復を必要としている状態を治療できる。
2004528367.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＴＰを含有する生存組織における細胞死および／または組織壊死を防止、調節、回復および／または抑制する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項２】
ＮＴＰを含有する生存組織における細胞死および／または組織壊死を防止、調節、回復および／または抑制する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体断片を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体断片が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項３】
ＮＴＰを含有する生存組織における細胞死および／または組織壊死を防止、調節、回復および／または抑制する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体誘導体を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体誘導体が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項４】
ＮＴＰの存在による細胞死および／または組織壊死により起こされる状態の治療方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項５】
ＮＴＰの存在による細胞死および／または組織壊死により起こされる状態を治療する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体断片を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体断片が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項６】
ＮＴＰの存在による細胞死および／または組織壊死により起こされる状態を治療する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体誘導体を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体誘導体が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項７】
ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により起こされる状態を治療するための組成物であって、ＮＴＰを結合する、抗体、抗体誘導体および抗体断片から成る群より選択される少なくとも一つのメンバー、並びに抗体または抗体断片が血液脳関門を越すことを可能にする成分、を含んでなる、前記組成物。
【請求項８】
ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織における細胞死および／または組織壊死を防止および／または抑制する方法であって、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織と、少なくともＮＴＰを認識する抗体、抗体誘導体または抗体断片を含有する組成物を接触させ、ここにおいて組成物はさらに抗体、抗体誘導体または抗体断片が血液脳関門を越すことを可能にする成分を含んでなる、前記方法。
【請求項９】
ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により起こされる状態を治療するための組成物であって、ＮＴＰを結合する抗体、抗体誘導体又は抗体断片、並びに抗体または抗体断片が血液脳関門を越すことを可能にする成分を含んでなる、前記組成物。
【請求項１０】
脳アミロイド症の治療方法であって、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織と少なくともＮＴＰを認識する抗体、抗体誘導体または抗体断片を含有する組成物を接触させ、ここで組成物はさらに抗体、抗体誘導体または抗体断片が血液脳関門を越すことを可能にする成分を含んでなる、前記方法。
【請求項１１】
ＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死による緑内障を治療する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する少なくとも一つの抗体、抗体誘導体または抗体断片を接触させ、ここでＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体、抗体誘導体または抗体断片が存在する、ことを含んでなる、前記方法。
【請求項１２】
ＮＴＰが、望まれないまたは有害な細胞または組織の除去または破壊の目的のために投与された部位でまたは近傍で、生存組織における細胞死および／または組織壊死を防止、変調、調節、回復および／または抑制する方法であって、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識する抗体、抗体誘導体及び抗体断片から成る群より選択された少なくとも一つのメンバーを接触させ、ここで、ＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、変調する、調節する、回復するおよび／または抑制するために十分な量で抗体、抗体誘導体または抗体断片が存在する、ことからなる、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景技術
１．発明の分野
本発明は細胞死を防止または抑制するための方法、並びに細胞死および組織壊死の防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）、抑制（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）および／または回復（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）を必要とする状態を治療する方法に関する。本発明は神経スレッドプロテイン（ｎｅｕｒａｌ  ｔｈｒｅａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＮＴＰ）へ結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片を、ＮＴＰが存在する結果として細胞死を起こしている哺乳動物へ投与することを含む。抗体、抗体誘導体または抗体断片は筋肉内、経口、静脈内、腹腔内、脳内（実質細胞内）、脳室内、腫瘍内、病巣内、皮内、クモ膜下、鼻孔内、眼内、動脈内、局所的、経皮、エアロゾル経由、注入、大量注射、移植装置、徐放性放出系などにより、単独でまたは担体と抱合させて投与可能である。あるいは、抗体、抗体誘導体または抗体断片は、抗体、抗体誘導体または抗体断片を発現する遺伝子または抗体産生を誘導するワクチンを投与することにより、あるいは、遺伝子修飾かまたは他の方法により抗体、抗体誘導体または抗体断片をインビボで発現する細胞、細菌またはウイルスを導入することにより、インビボで発現可能である。
【背景技術】
【０００２】
２．先行技術の記載
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶、行動、言語そして視空間技能における進行性障害により特徴付けられる複雑な神経変性性障害であり、最終的には死で終わる。易損性領域内の顕著な病理学には、細胞外β−アミロイド沈着、細胞内神経原線維濃縮体、シナプス損失、そして高度の神経細胞死が含まれる。アルツハイマー病の原因および治療に関するリサーチは研究者を多くの道へ導いた。疾患の病因においては、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の産生またはプロセッシングにおける変化を、相当な量の証拠が示唆した。しかし、集中的なリサーチは、ＡＤは多くの異なった、たぶん重複する病因による多因子性疾患であることを立証した。
【０００３】
このため、本分野の研究者は、脳内および神経細胞の異なった集団内両方における、構造欠陥、化学的変化および機能異常を研究するため、相当なリサーチと臨床検査を実施した。そのような検査（ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）および研究（ｓｔｕｄｙ）の深さは、以下の出版物に代表され、それらはこの領域における莫大な報告の一握りを代表しているにすぎない：アルツハイマー病の神経生物学（Ｄ．  ＤａｗｂａｒｎおよびＳ．  Ｊ．  Ａｌｌｅｎ監修），  Ｂｉｏｓ，  オックスフォード  １９９５；痴呆，  （Ｊ．  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ監修），  Ｆ．  Ａ．  Ｄａｖｉｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  フィラデルフィア，  １９９３；アルツハイマー病：  老年痴呆および関連障害  （Ｋａｔｚｍａｎ，  Ｒ，  および  Ｒ．  Ｌ．  Ｂｉｃｋ監修），  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク，  １９９４，  ページ４７−５１  ；アルツハイマー病および関連障害、病因論（ｅｔｉｏｌｏｇｙ）、病原論（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）および治療  （Ｉｑｂｏｌ，  Ｋ．ら監修），  Ｗｉｌｅｙ，  チチェスター，  １９９９；アルツハイマー病  ：  臨床および基礎研究の進歩（Ｃｏｒａｉｎ，  Ｂ，監修），  Ｗｉｌｅｙ，  ニューヨーク，  １９９３；アルツハイマー病  ：  臨床および治療展望  （Ｃｕｔｌｅｒ，  Ｎ．  Ｒ．ら監修），  Ｗｉｌｅｙ，  チチェスター，  １９９５；アルツハイマー病  ：  治療法  （Ｇｉａｃｏｂｉｎｉ，  Ｅ．，  Ｂｅｃｋｅｒ，  Ｒ．監修），  Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ，  ボストン，  １９９４；  Ｐａｙｋｅｌら，  Ａｒｃｈ．  Ｇｅｎ．  Ｐｓｙｃｈｉａｔ．，  ５１：  ３２５−３３２  （１９９４）；Ａｍａｄｕｃｃｉら，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ３６：  ９２２−９３１  （１９８６）；ＭｃＫｈａｎｎら，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３４：  ９３９−９４４  （１９８４），  Ｈｅｓｔｏｎら，  Ａｒｃｈ．  Ｇｅｎ．  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ３８：  １０８５−１０９０  （１９８１）  ；脳の加齢  （ＧｉｓｐｅｎおよびＴｒａｂｅｒ監修），  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  アムステルダム，  １９８３，  ページ  ２７５−２８２；  Ｈｅｙｍａｎら，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ  １５：３３５−３４１  （１９８４）；Ｂｒａｙｎｅ  Ｃ．およびＰ．  Ｃａｌｌｏｗａｙ，  Ｌａｎｃｅｔ  １：１２６５−１２６７  （１９８８）；Ｒｏｔｈら，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １４９：  ６９８−７０９  （１９８６）；英国医学研究審議会，ＮＲＣアルツハイマー病ワークショップ報告，ロンドン，英国，  １９８７；Ｍｏｒｒｉｓら，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４１：  ４６９−４７８  （１９９１）；およびこれらの出版物の各々に引用されている参照文献。
【０００４】
現在まで、アルツハイマー病は米国において三番目に費用のかかる疾患であり、毎年約１０００億ドルの社会費用がかかっている。それは老人集団において最も頻繁な病気の一つであり、そして社会の老齢化とともに、さらにより重大になるであろう。ＡＤに関する費用は、ナーシングホームケアのような直接的医療費用、家庭内デイケアのような直接的非医療費用、そして死亡した患者および介護者生産性のような間接的費用を含む。医療的治療および行動修正は、認識低下の速度を遅くすることにより、施設への収容を遅らせることにより、介護者勤務時間を減少させることにより、そして生活の質を改良することにより経済的利点を持つことが可能である。薬物経済学評価は、ナーシングホーム配置、認識および介護者時間に対する薬物療法および行動修正の効果に関して陽性の効果示した。
【０００５】
神経スレッドプロテイン（ＮＴＰ）は最近特徴付けられた脳タンパク質のファミリーである。このファミリーのひとつのメンバー、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは神経炎性新芽形成に関係した機能を有する、〜４１ｋＤの膜関連リンタンパク質である（ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００：  ３０９３−３１０４  （１９９７）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚ．  Ｒｅｐ．，  ２：  ３２７−３３２  （１９９９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ  ＳＭおよびＷａｎｄｓ  ＪＲ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  ３：  ３４５−３５３  （２００１））。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰをコードする遺伝子およびＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの予想されたタンパク質配列は同定および記載されている（ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００：  ３０９３−３１０４  （１９９７））。〜４１ｋＤ種に加え、神経スレッドプロテインの他の種（〜２６ｋＤ、〜２１ｋＤ、〜１７ｋＤおよび〜１５ｋＤ）が同定されており、そして神経外胚葉性腫瘍、星細胞腫およびグリア芽細胞腫、そして低酸素症、スキーマ（ｓｃｈｅｍａ）または脳梗塞による損傷に関連していた（Ｘｕら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ５３：  ３８２３−３８２９  （１９９３）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ５５（１０）：  １０３８−５０  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３８（１−２）：  ２６−３５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３５（２）：  １１８−２５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００  ：  ３０９３−３１０４  （１９９７）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚ．  Ｒｅｐ．，  ２  ：  ３２７−３３２  （１９９９））。
【０００６】
神経スレッドプロテインの種は、すべて「神経スレッドプロテイン遺伝子発現およびアルツハイマー病の検出」と題した米国特許第５，９４８，６３４；５，９４８，８８８；および５，８３０，６７０号、および「神経学的疾患または機能不全を検出する方法」と題した米国特許第６，０７１，７０５号に記載および特許請求されている。これらの特許の方法および明細書はその開示全体が本明細書に具体的に援用される。本明細書に記載するように、ＮＴＰは細胞死の間に上方制御され、そして産生される。それ故、死んだおよび死んでいる細胞は、ＮＴＰを過剰産生しているとして記載されており、そして従って、その存在は神経細胞の死およびアルツハイマー病（ＡＤ）の発症を示している。
【０００７】
神経スレッドプロテインの他の種が、ＡＤ７ｃ−ＮＴＰ遺伝子の他の産物（例えば、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータベース寄託番号ＸＰ＿０３２３０７  ＰＩＤ  ｇ１５９２８９７１に記載されているような１１２アミノ酸タンパク質）として、または神経スレッドプロテイン（ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータベース寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤ  ｇ１５９２８９７１に記載されているような１０６アミノ酸タンパク質、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータベース寄託番号ＸＰ＿０３９１０２  ＰＩＤ  ｇ１８５９９３３９に記載されているような別の１０６アミノ酸タンパク質およびＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータベース寄託番号ＡＡＨ０２５３４  ＰＩＤ  ｇ１２８０３４２１に記載されているような６１アミノ酸タンパク質）に類似しているとして、同定されている。
【０００８】
神経スレッドプロテインのＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ種と特にＡＤを結びつけさずにはおかない証拠が存在し、それはＡＤにおける細胞死の間に上方制御される。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ  ｍＲＮＡは対照と比較してＡＤ脳では上方制御され；脳およびＣＳＦにおけるＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質レベルは対照よりもＡＤでより高く；そして、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ免疫反応性が、ＡＤおよびダウン症候群脳中の老人斑において、神経原線維変化（ＮＦＴ）において、変性しているニューロン、ニューロパイルスレッドおよびジストロフィー性神経病性新芽において観察されている（Ｏｚｔｕｒｋら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ８６  ：  ４１９−４２３  （１９８９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ８６（３）：  １００４−１３  （１９９０）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｕｅｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １１３（２）：  １５２−６４  （１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ３２（６）：  ７３３−４２  （１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ，  ５５（１０）：  １０３８−５０  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３８（１−２）：  ２６−３５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３５（２）：  １１８−２５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００  ：  ３０９３−３１０４  （１９９７）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚ．．  Ｒｅｐ．，  ２  ：  ３２７−３３２  （１９９９））。免疫細胞化学は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質は、細胞内に、ニューロパイル内の微細突起内に局在しているが、ＡＤおよびダウン症候群脳の両方では細胞外にあることを示した。ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ３２（６）：  ７３３−４２  （１９９２）。二つの型の細胞がＮＴＰを含む：ニューロンおよびアストロサイト（上記文献）。発症したニューロンは、典型的には神経原線維変化を含む大きな錐体型であり、ＡＤ脳でよく知られている（上記文献）。
【０００９】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質の上昇したレベルは、ＡＤ患者のＣＳＦおよび尿の両方で見出され、この壊滅的な病気の生化学的マーカーとしてのその正確さを示している。（ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ  ７：  ９８９−９６  （２００２）；ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ３：  ３４５−３５３  （２００１）；Ｍｕｎｚａｒら，  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ４：  ６１−６５  （２００１）；Ｋａｈｌｅら，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５４：  １４９８−１５０４  （２０００）およびＡｖｅｒｂａｃｋ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５５：  １０６８  （２０００）；Ｍｕｎｚａｒら，  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ３：  １５５−１５９  （２０００）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２：  ３２７−３３２  （１９９９）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ａｎａｌ  １２：  ２８５−２８８  （１９９８）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ａｎａｌ  １２：  ２２３−２２６  （１９９８）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １９９８；  ４Ａ：  ２−６  （１９９８）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １００：  ３０９３−３１０４  （１９９７））。
【００１０】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子の過剰発現もまたアルツハイマー病における細胞死の過程に結びつけて考えられてきた（ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏ．ａｎｄ  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏ．，  ６０：１９５−２０７  （２００１）；ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５８：  ８４４−４９  （２００１））。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰはまたダウン症候群脳組織でも同定されている（Ｗａｎｄｓら．，国際特許公開第ＷＯ  ９０／０６９９３号；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  １３５：  １１８−２５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚ．，  Ｒｅｐ．，  ２：３２７−３３２  （１９９９））。ＡＤ７ｃ−ＮＴＰ遺伝子の過剰発現がまた緑内障とも関係しているかもしれないという、いくつかの証拠がある（Ｇｏｌｕｂｎｉｔｓｃｈａｊａ−Ｌａｂｕｄｏｖａら，  Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２１：  ８６７−７６  （２０００））。
【００１１】
本発明者は、その開示全体が本明細書に援用される、「神経スレッドプロテインを使用する腫瘍および関連状態を治療する方法」と題された、係属中の米国特許出願第＿＿＿＿号に開示されているように、放出されたＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質は細胞毒性であり、死にゆく細胞自体によって産生される上方制御されたＡＤ７Ｃ−ＮＴＰと比較して、組織中の他の細胞に至るまでの細胞死を起こすことが可能であることを最近発見した。従って、特にＡＤ脳において、神経スレッドプロテインに関連する細胞死および組織壊死を防止、抑制、変調または回復することが望ましいであろう。
【００１２】
本明細書を通し（関連技術の前述の説明を含む）、本明細書に記載したいずれかまたはすべての公的に入手可能な文書（いずれかまたはすべての米国特許を含む）は、その全体が本明細書において具体的に援用される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
発明の概要
ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および組織壊死を防止、抑制、変調および／または回復する方法を開発する必要がある。特に、脳において、ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および／または組織壊死を防止、抑制および／または回復可能な方法を開発する必要がある。また、生存細胞において、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を治療する方法も開発する必要がある。また、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織の細胞死および／または組織壊死を防止、抑制、および／または回復することにより脳アミロイド症を治療する方法も開発する必要がある。また、ヒトにおける良性または悪性腫瘍のような、有害なまたは望まれない組織または細胞要素を除去または破壊するために、投与されたＮＴＰにより引き起こされる生存組織の細胞死および組織壊死を調節、抑制、変調または回復する方法も開発する必要がある。
【００１４】
それ故、ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および／または組織壊死を防止、抑制および／または回復する方法を提供するのが本発明の一つの態様の特徴である。該方法は、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識するまたは結合する少なくとも一つの抗体を接触させることを含み、ここで、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または回復するために十分な量の抗体が存在する。
【００１５】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識するまたは結合する抗体断片を接触させることにより、ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および／または組織壊死を防止、抑制および／または回復する方法が提供される。抗体断片は、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または回復するために十分な量で存在する。
【００１６】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する生存組織とＮＴＰを認識するまたは結合する抗体誘導体を接触させることにより、ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制するおよび／または回復する方法を提供する。抗体誘導体は、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または回復するために十分な量で存在する。
【００１７】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織と、ＮＴＰを認識するまたは結合する少なくとも一つの抗体、抗体誘導体または抗体断片を含有する成分（ｓｏｍｐｏｎｅｎｔ）を接触させることにより、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織の細胞死および／または組織壊死を防止および／または抑制する方法を提供する。成分は血液−脳関門を通過可能である。
【００１８】
本発明の態様のさらに別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する生存組織と、ＮＴＰを認識または結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片を接触させることを含んでなる、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を治療する方法を提供する。抗体、抗体誘導体または抗体断片はＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または回復するために十分な量で存在する。この方法に従うと、ＮＴＰを認識または結合する抗体または抗体断片は、ＮＴＰの存在による細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を有する哺乳動物へ、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するおよび／または回復するために十分な量で投与する。
【００１９】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを認識するまたは結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片、並びに抗体または抗体断片が血液−脳関門を通過するのを可能にする成分を含んでなる、組成物を提供する。
【００２０】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する生存哺乳動物脳組織と、ＮＴＰを認識または結合する少なくとも一つの抗体、抗体誘導体または抗体断片を含有する成分を接触させることにより、脳アミロイド症を治療する方法を提供する。成分は、血液−脳関門を通過可能である。
【００２１】
本発明の態様の別の特徴に従うと、ＮＴＰを含有する組織と、ＮＴＰを認識するまたは結合する少なくとも一つの抗体、抗体誘導体または抗体断片を接触させることにより、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる緑内障を治療する方法を提供する。
【００２２】
本発明の態様のさらに別の特徴に従うと、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を治療する方法であって、そのような治療が必要な哺乳動物へ遺伝子を投与することを含み、ここで、当該遺伝子はＮＴＰを認識するまたは結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片を発現し、そしてここで、投与はＮＴＰを含有する生存組織と接触する抗体、抗体誘導体または抗体断片を生じる、前記方法を提供する。該遺伝子は、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制するおよび／または回復するのに十分な量で抗体、抗体誘導体または抗体断片が存在するような様式で投与する。
【００２３】
本発明の態様のさらなる別の特徴に従うと、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を治療する方法であって、そのような治療が必要な哺乳動物へワクチンを投与することを含み、ここで、当該ワクチンはＮＴＰを認識するまたは結合する抗体または抗体断片を発現するように、またはさもなくば産生するように哺乳動物を誘導し、そしてここで、投与はＮＴＰを含有する生存組織と接触する抗体または抗体断片を生じる、前記方法を提供する。該ワクチンは、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制するおよび／または回復するのに十分な量で抗体または抗体断片が存在するような様式で投与する。
【００２４】
本発明の態様のさらに別の特徴に従うと、ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により引き起こされる状態を治療する方法であって、インビボで抗体、抗体誘導体または抗体断片を発現可能な細胞、細菌またはウイルスを、そのような治療が必要な哺乳動物へ導入または投与、または移植することを含み、ここで当該細胞、細菌またはウイルスは、ＮＴＰを認識するまたは結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片を発現し、そしてここで、投与はＮＴＰを含有する生存組織と接触する抗体、抗体誘導体または抗体断片を生じる、前記方法を提供する。細胞、細菌またはウイルスは、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制するおよび／または回復するのに十分な量で抗体または抗体断片が存在するような様式で導入され、投与されまたは移植される。
【００２５】
本発明のこれらおよび他の特徴は、以下の詳細な説明を読むことにより当業者には容易に明らかになるであろう。しかしながら、本発明の精神および範囲内での種々の変更および修飾が、この説明から当業者には明らかになるであろうので、詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好適な態様を示しているとはいえ、例示のためにのみ与えられていることを理解しなければならない。特定しない限り、本明細書に引用された文書のそれぞれの内容は、全体が本明細書に援用される。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
発明の詳細な説明
本明細書の説明を通して、用語「ＮＴＰ」または「神経スレッドプロテイン」は神経スレッドプロテインおよび関連分子（膵臓スレッドプロテイン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｔｈｒｅａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を含む）およびこれらのタンパク質をコードする核酸配列を意味し、そして以下のタンパク質およびこれらのタンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む（これらに限定されるわけではない）：
（ａ）ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ
（ｂ）米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８，８８８、５，８３０，６７０および６，０７１，７０５号、並びにｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ５５（１０）：１０３８−５０  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３８（１−２）：２６−３５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．，  １３５（２）：１１８−２５  （１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００：３０９３−３１０４  （１９９７）およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｌｚ．．  Ｒｅｐ．，  ２：３２７−３３２  （１９９９）に記載されているような神経スレッドプロテインの〜４２、〜２６、〜２１、〜１７、〜１４および〜８ｋＤ種；
（ｃ）ＨＢ−１２５４６の寄託番号でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，マナサス，Ｖａに寄託されているモノクローナル抗体＃２、またはＨＢ−１２５４５の寄託番号でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，マナサス，Ｖａに寄託されているモノクローナル抗体＃５により特異的に認識されるタンパク質；
（ｄ）ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子によりコードされているタンパク質；
（ｅ）米国特許第５，８３０，６７０、５，９４８，６３４および５，９４８，８８８号の配列４０に記載されている、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４７，ＰＩＤ  ｇ１００４８５４０に挙げられている、１２２アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図５に図示されている；
（ｆ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＸＰ＿０３２３０７，ＰＩＤ  ｇ１４７２５１３２に挙げられている、１１２アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図６に図示されている；
（ｇ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤ  ｇ１５９２８９７１に挙げられている、１０６アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図７に図示されている；
（ｈ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＸＰ＿０３９１０２，  ＰＩＤ  ｇ１８５９９３３９に挙げられている、１０６アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図８に図示されている；
（ｉ）米国特許第５，８３０，６７０、５，９４８，６３４および５，９４８，８８８号の配列３０に記載されている、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ１３６１２，ＰＩＤ  ｇｌ００４８５３８に挙げられている、９８アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図９に図示されている；
（ｊ）米国特許第５，８３０，６７０、５，９４８，６３４および５，９４８，８８８号の配列４８に記載されている、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４８，ＰＩＤ  ｇ１００４８５４１に挙げられている、７５アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図１０に図示されている；
（ｋ）米国特許第５，８３０，６７０、５，９４８，６３４および５，９４８，８８８号の配列３６に記載されている、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４６，ＰＩＤ  ｇ１００４８５３９に挙げられている、６８アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図１１に図示されている；
（ｌ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＨ０２５３４，ＰＩＤ  ｇ１２８０３４２１に挙げられている、６１アミノ酸の神経スレッドプロテイン、そのアミノ酸配列は図１２に図示されている；
（ｍ）膵臓スレッドプロテイン
（ｎ）米国特許第６，０７１，７０５号に記載されている神経膵臓スレッドプロテイン（ｎＰＴＰ）；並びに
（ｏ）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている、ＨＢ９９３４、ＨＢ９９３５およびＨＢ９９３６から成る群からのハイブリドーマにより産生される抗体により特異的に認識されるタンパク質。
【００２７】
用語「ＮＴＰ」はまた、哺乳動物組織から誘導された、または組換え技術を使用して産生されたＮＴＰも含み、そしてＮＴＰの断片、変異体、誘導体および相同体を含む。
用語「ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ」は、ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  １００：３０９３−１０４  （１９９７）、米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８，８８８および５，８３０，６７０号の配列１２０および１２１、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータベース寄託番号ＡＦ０１０１４４に記載されている、〜４１ｋＤタンパク質およびそれをコードする遺伝子および核酸配列を意味する。
【００２８】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、ＮＴＰを結合可能なまたは認識可能な抗体を意味しており、実質的に均質集団であるモノクローナル抗体、および不均一集団であるポリクローナル抗体の両方を含む。ポリクローナル抗体は、抗原で免疫した動物の血清から誘導される。抗原に特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は当業者には既知の方法により得ることが可能である。例えば、その全体が本明細書に援用されるＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７  （１９７５）および米国特許第４，３７６，１１０号を参照されたい。そのような抗体とは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびそれらのいずれかのサブクラスであってもよい。
【００２９】
用語「抗体」は特に以下のものを含む（限定されるわけではない）：
１．以前に記載されているモノクローナル抗体Ｔｈ７、Ｔｈ９、Ｔｈ１０、Ｎ２Ｂ１０、Ｎ２Ｉ５、Ｎ２Ｊ１、Ｎ２Ｓ６、Ｎ２Ｔ８、Ｎ２Ｕ６、Ｎ３Ａ１３、Ｎ３Ｃ１１、Ｎ３Ｄ１２、Ｎ３Ｉ４およびＮ２−３６（Ｇｒｏｓｓら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ７６：２１１５−２１２６  （１９８５）；Ｏｚｔｕｒｋら．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：４１９−４２３  （１９８９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８６：１００４−１０１３  （１９９０）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．  １１３：１５２−１６４  （１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら．，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ３２：７３３−７４２  （１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ，  Ｓ．Ｍ．，ら．，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐｌ  Ｎｅｕｒｏｌ，  ５５：１０３８−１０５０  （１９９６）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ，  Ｓ．Ｍ．ら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２：  ３０９３−３１０４  （１９９７））。
【００３０】
２．ＨＢ９９３４、ＨＢ９９３５およびＨＢ９９３６から選択されるハイブリドーマにより産生される抗体。これらはすべてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている。
【００３１】
３．米国特許第５，８３０，６７０、，９４８，６３４および５，９４８，８８８号に記載されているような神経スレッドプロテインに対する抗体でｍＡｂ  Ｔｈ７、Ｔｈ９、Ｔｈ１０、Ｔｈ２９およびＴｈ３４、並びにｍＡｂ  ＃２および＃５を含む（限定されるわけではない）。
【００３２】
４．米国特許第６，０７１，７０５号に記載されているような膵臓スレッドプロテインの神経学的形に対する抗体で、それに記載されているｍＡｂ  ７、９および１０を含む（限定されるわけではない）。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」はまた、ＮＴＰに対する抗体の生物学的に活性な変異体、相同体、ペプチド模倣体、逆Ｄペプチドおよびエナンチオマーも含む。
構造的には、最も単純な抗体（ＩｇＧ）は、ジスルフィド結合により内部で結合された、４つのポリペプチド、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含んでなる。軽鎖はカッパ（κ）およびラムダ（λ）と称される２つの異なった形で存在する。各々の鎖は定常領域（Ｃ）および可変領域（Ｖ）を有する。各々の鎖は一連のドメインへ組織化されている。軽鎖は２つのドメインを有し、一つはＣ領域に対応し、および他方はＶ領域に対応している。重鎖は４つのドメインを持ち、一つはＶ領域に対応し、および３つのドメイン（１、２および３）はＣ領域に対応する。抗体は２つのアーム（ａｒｍ）を持ち（各々のアームはＦａｂ領域に存在する）、その各々はお互いに関連しているＶＬおよびＶＨ領域を有する。一つの抗体と別の抗体で異なるのはＶ領域のこの対（ＶＬおよびＶＨ）であり（アミノ酸配列変異のため）、そしてそれらは一緒になって抗原を認識する原因となっており、抗原結合部位（ＡＢＳ）を提供している。さらにより詳細には、各々のＶ領域は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）により分離された、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）から成り立っている。ＣＤＲは可変領域の最も可変性部分であり、そしてそれらは決定的な抗原結合機能を果たしている。ＣＤＲ領域は、組換え、突然変異および選択を含む複雑な過程を経た、多くの潜在的生殖系列配列に由来している。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語「抗体断片」はＮＴＰに対する抗体の生物学的に活性な断片を意味し、そして（ｉ）抗体のＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成るＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片；（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨドメインから成るｄａｂ断片（Ｗａｒｄ，  Ｅ．  Ｓ．ら，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４−５４６  （１９８９））；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）2断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含んでなる二価の断片；および（ｖｉｉ）単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ここで別々の遺伝子によりコードされているＦｖ断片の２つの断片は、組換え法により、単一タンパク質鎖としてそれらを作成することを可能にする合成リンカーにより連結されている（Ｂｉｒｄ，  Ｒ．  Ｅ．ら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３−４２６  （１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ，  Ｊ．  Ｓ．ら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９−５８８３  （１９８８）として知られている）。Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ｓｃＦｖおよび他のそのような断片は無傷の抗体のＦｃ断片を欠いており、循環系からより迅速に排除され、そして無傷の抗体よりも低い非特異的組織結合性を有することが可能である（Ｗａｈｌら，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ２４：３１６−３２５  （１９８３））。加えて、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ｓｃＦｖおよび他のそのような断片は、以下に説明するように、血液−脳関門の外部からの処置または関門−透過結合体との結合を必要とせず、血液−脳関門を通過するために十分小さいままであることが可能である。
【００３５】
本発明で有用なＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ｓｃＦｖおよび抗体の他の断片は、無傷の抗体を使用するのと同一の様式で、ＮＴＰを含有する生存細胞の細胞死および／または組織壊死を防止、抑制および／または回復するために使用することが可能である。そのような断片は典型的には、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）2断片を産生するため）のような酵素を使用するタンパク分解性切断により、あるいは組換え法（ｓｃＦｖ断片を産生するため）により産生する。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語「抗体断片」はまた、抗体断片の生物学的に活性な変異体、相同体、ペプチド模倣体、逆Ｄペプチドおよびエナンチオマーも含む。
用語「抗体誘導体」は、ＮＴＰに対する抗体および抗体断片の生物学的に活性な誘導体を意味し、そしてファージディスプレイ（ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ）技術または細菌または酵母細胞表面ディスプレイ技術の手段により産生された抗体および抗体断片の誘導体を含む。用語「抗体誘導体」はまた、ヒト化抗体および抗体断片を含み、並びに、さらに、生物学的に活性な抗体誘導体の生物学的に活性な変異体、相同体、ペプチド模倣体、逆Ｄペプチドおよびエナンチオマーも含む。
【００３７】
用語「生物学的に活性」は、ＮＴＰを認識するおよび／または結合する能力を有する抗体、抗体誘導体または抗体断片を意味し、ＮＴＰの存在により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する、抑制する、軽減する、調節するまたは回復するための能力を含んでいる（しかし限定されるわけではない）。
【００３８】
もし抗体が分子（例えば、ＮＴＰのようなタンパク質）と特異的に反応でき、それにより分子を抗体に結合するとしたら、抗体は分子を「結合する能力」を有する、「結合可能」である、「結合する」または「認識する」といわれる。用語「エピトープ」は、抗体により結合されていることが可能であり、またその抗体によって認識される、いずれかの分子の部分を示すことを意味する。エピトープ決定要因は通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面グループ化から成っており、特異的３次元構造特性並びに特異的荷電特性を有する。
【００３９】
「抗原」は、抗体により結合されることが可能な分子であり、さらに、抗原のエピトープへ結合可能な抗体を産生するように動物を誘導することが可能である。抗原は１つ、または１つより多くのエピトープを有していてもよい。上述した特異的反応とは、抗原が高度に選択的な様式で対応する抗体と反応するが、他の抗原により惹起されることができる多数の他の抗体とは反応しないであろうことを意味している。
【００４０】
用語「断片」は、ＮＴＰタンパク質の、または抗体、抗体断片または抗体誘導体のアミノ酸配列の連続的サブ配列から成るタンパク質またはポリペプチドを意味しており、そしてスプライス変異体および天然に存在するインビボプロテアーゼ活性により生じた断片のような、天然に存在する断片を含む。そのような断片は、アミノ末端、カルボキシ末端および／または内部で一部切除されている（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）（例えば、天然のスプライシングにより）。そのような断片はアミノ末端メチオニンを持つように、または無しで調製されてもよい。用語「断片」は、直接的にまたはリンカーを通して一緒に連結された、共通のまたは共通ではない近接アミノ酸配列を持つ、同一のＮＴＰタンパク質または抗体または抗体誘導体からの、複数の断片（同一でも異なっていようとも）を含む。
【００４１】
用語「変異体」は、ＮＴＰタンパク質または抗体、抗体誘導体または抗体断片のアミノ酸配列と比較して、一つまたはそれより多くのアミノ酸置換、欠失および／または挿入が存在するタンパク質またはポリペプチドを意味し、ＮＴＰタンパク質または抗体、抗体誘導体または抗体断片の天然に存在するアレル変異体（ａｌｌｅｌｉｃ  ｖａｒｉａｎｔ）または選択的スプライス変異体を含む。用語「変異体」は、類似のまたは相同のアミノ酸または似ていないアミノ酸による、ペプチド配列中の一つまたはそれより多くのアミノ酸の交換を含む。アミノ酸が類似または相同として分類できる多くの尺度が存在する。（Ｇｕｎｎａｒ  ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ，分子生物学における配列分析，  ｐ．  １２３−３９  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク，  ＮＹ  １９８７）。好ましい変異体は、アミノ酸位の一つまたはそれより多くにアラニン置換を含む。他の好ましい置換は、タンパク質の全体での正味の電荷、極性または疎水性にわずかな影響しか与えないか、または影響を与えない保存的置換を含む。保存的置換は以下の表Ｉに示されている。
【００４２】
【表Ｉ】
2004528367.tif 000003
【００４３】
表ＩＩはアミノ酸置換の別のスキームを並べている：
【表ＩＩ】
2004528367.tif 000004
【００４４】
他の変異体は、（ａ）例えば、シートまたはらせん状コンホメーションのような、置換領域中のポリペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさの維持、におけるそれらの効果が有意により異なっている残基を選択するような、より保存性の少ないアミノ酸置換から成ることができる。一般に、機能に対してより有意な効果を持つと期待される置換は以下のものである（ａ）グリシンおよび／またはプロリンが別のアミノ酸により置換されるか、または欠失または挿入される；（ｂ）例えば、セリルまたはスレオニルのような親水性残基が、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニルのような疎水性残基で置換される；（ｃ）システイン残基がいずれかの他の残基で置換される；（ｄ）例えば、リジル、アルギニルまたはヒスチジルのような電気的に陽性な側鎖を有する残基が、例えば、グルタミルまたはアスパルチルのような電気的に陰性の電荷を有する残基で置換される；あるいは（ｅ）例えば、フェニルアラニンのようなかさ高な（ｂｕｌｋｙ）側鎖を有する残基が、例えば、グリシンのようにそのような側鎖を有しない残基で置換される。他の変異体は、新規の糖鎖形成および／またはリン酸化部位を発生するように設計されたもの、または存在する糖鎖形成および／またはリン酸化部位を欠失するように設計されたものを含む。変異体は、糖鎖形成部位、タンパク分解性切断部位および／またはシステイン残基での、少なくとも一つのアミノ酸置換を含む。変異体はまた、リンカーペプチド上のＮＴＰまたは抗体アミノ酸配列の前か後ろに追加のアミノ酸残基を持つ、ＮＴＰタンパク質または抗体、抗体断片または抗体誘導体も含む。例えば、ジスルフィド結合の形成による抗体断片の環化を可能にするため、抗体断片のアミノおよびカルボキシ末端の両方に、システイン残基を追加することができる。
【００４５】
用語「誘導体」は、プロセシングおよび他の翻訳後修飾のような天然の過程によって、並びに、例えば、一つまたはそれより多くのポリエチレングリコール分子、糖、リン酸および／または他のそのような分子（ここで該分子は、野生型ＮＴＰタンパク質または抗体へ天然では結合されない）の付加による化学的修飾技術によって、化学的に修飾されている、化学的に修飾されたタンパク質またはポリペプチドを意味する。誘導体は塩を含む。そのような化学修飾は基本的教科書に詳しく、および研究書並びに多数の研究文献により詳細に記載されており、そしてそれらは当業者にはよく知られている。同じ型の修飾が、既定のタンパク質またはポリペプチド中のいくつかの部位で、同じまたは異なった程度で存在してもよいことが理解されるであろう。また、既定のタンパク質またはポリペプチドは多くの型の修飾を含んでいてもよい。修飾は、ペプチド主鎖、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端を含む、タンパク質またはポリペプチドのいずれの所で起こってもよい。修飾は、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨード化、メチル化、ミリストリイル化、酸化、タンパク分解性プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、糖鎖形成、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、水酸化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのトランスファー−ＲＮＡ仲介アミノ酸付加およびユビキチン化を含む。例えば、タンパク質−構造および分子特性，第２版，Ｔ．  Ｅ．  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ニューヨーク  （１９９３）およびタンパク質の翻訳後共有結合修飾，Ｂ．  Ｃ．  Ｊｏｈｎｓｏｎ監修，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク  （１９８３）中，Ｗｏｌｄ，  Ｆ．，「翻訳後タンパク質修飾：展望と期待」，ページ１−１２；Ｓｅｉｆｔｅｒら，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８２：６２６−６４６  （１９９０）およびＲａｔｔａｎら，  「タンパク質合成：翻訳後修飾およびエージング」，  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ６６３：  ４８−６２  （１９９２）を参照されたい。用語「誘導体」は、タンパク質またはポリペプチドの分岐、または分岐を伴ったまたは伴わない環化を生じる化学的修飾を含む。環状、分岐および分岐環状タンパク質またはポリペプチドは、翻訳後の天然過程で生じてもよいし、そして同様に、完全に合成法により作製されてもよい。
【００４６】
用語「相同体」は、場合により、２つのポリペプチドのアミノ酸位置類似性を比較するために一般に使用される標準法により決定されるように、ＮＴＰタンパク質、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰまたは抗体、抗体誘導体または抗体断片とそのアミノ酸配列が少なくとも７５パーセント同一であるタンパク質を意味する。２つのタンパク質間の類似性または同一性の程度は、計算分子生物学，Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．監修，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク，  １９８８；バイオ計算：インフォーマティックスおよびゲノムプロジェクト，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．監修，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク，  １９９３；配列データのコンピューター分析，第Ｉ部，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．監修，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ニュージャージー，  １９９４；分子生物学における配列分析，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７；配列分析プライマー，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．監修，  Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク，  １９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  Ｈ．およびＬｉｐｍａｎ，  Ｄ．，  ＳＩＡＭ，  Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，  ４８：  １０７３  （１９８８）に記載されている方法を含む（限定されるわけではない）、既知の方法により容易に計算できる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間にもっとも大きな一致を与えるように計画する。同一性および類似性を決定するための方法は公的に入手可能なコンピュータープログラムで体系化されている。
【００４７】
二つの配列間の同一性および類似性の決定において好ましいコンピュータープログラム法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．ら，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １２（１）：  ３８７  （１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．  Ｆ．ら，  Ｊ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５：  ４０３−４１０  （１９９０））を含む（限定されるわけではない）。ＢＬＡＳＴ  ＸプログラムはＮＣＢＩおよび他の出所から公的に入手可能である（ＢＬＡＳＴマニュアル，  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．ら，  ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  ベセスダ，  Ｍｄ．  ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．ら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５：  ４０３−４１０  （１９９０））。例としては、ＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，ウィスコンシン大学，マジソン，  Ｗｉｓ．）のようなコンピューターアルゴリズムを使用し、パーセント配列同一性が決定されるべき２つのタンパク質またはポリペプチドを、それらの各々のアミノ酸の最適な組み合わせのために整列させる（アルゴリズムにより決定されるような、「対応スパン（ｍａｔｃｈｅｄ  ｓｐａｎ）」）。ギャップオープニングペナルティー（ｇａｐ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｐｅｎａｌｔｙ）（これは３ｘ（倍）平均ダイヤゴナルとして計算される：「平均ダイヤゴナル」は使用されている比較マトリックスのダイヤゴナルの平均である；「ダイヤゴナル」は特定の比較マトリックスにより、各々の完全アミノ酸に割り当てられたスコアまたは数である）およびギャップエクステンションペナルティー（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）（これは通常、ギャップオープニングペナルティーの１／１０倍）、並びにＰＡＭ  ２５０またはＢＬＯＳＵＭ  ６２のような比較マトリックスをアルゴリズムと共に使用した。標準比較マトリックス（ＰＡＭ２５０比較マトリックスについてはＤａｙｈｏｆｆら：タンパク質配列および構造アトラス，第５巻，  補３  ［１９７８］を参照されたい；ＢＬＯＳＵＭ  ６２比較マトリックスについてはＨｅｎｉｋｏｆｆら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ８９：１０９１５−１０９１９  ［１９９２］を参照されたい）もまたアルゴリズムで使用することができる。次にパーセント同一性をアルゴリズムにより計算する。相同体は典型的には、ＮＴＰ、ＡＤ７ｃ−ＮＴＰ、抗体、抗体誘導体または抗体断片と比較して、１またはそれより多くのアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有するであろう。
【００４８】
用語「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」は、ペプチドまたはタンパク質の生物学的活性を模倣するが、化学的性質においてもはやペプチド性ではない、即ち、それらはもはや少しもペプチド結合（即ち、アミノ酸間のアミド結合）を含んでいない、生物学的に活性な化合物を意味する。本明細書では、偽ペプチドのようなもはや完全にペプチド性ではない分子、半ペプチドおよびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むより広い意味で用語ペプチド模倣体を含む。このより広い意味でのペプチド模倣体の例（ペプチドの一部が、ペプチド結合を欠く構造で置き換えられている）が以下に説明されている。完全にまたは部分的に非ペプチドであるにせよ、本発明に従ったペプチド模倣体は、ペプチド模倣体が基づいた抗体、抗体誘導体または抗体断片中の活性基の３次元配置と密接に似ている、反応性化学部分の空間的配置を提供する。この類似の活性部位幾何学の結果として、ペプチド模倣体は、該ペプチドの生物学的活性に類似している影響を生物学的システムに与える。
【００４９】
本発明のペプチド模倣体は、本明細書で説明した抗体、抗体誘導体または抗体断片と、３次元の形および生物学的活性の両方において、好ましくは実質的に同じである。ペプチド模倣体を作製するために本技術分野で知られているペプチドを構造的に修飾するための方法の例は、特にＮ末端で、活性に不利に影響せずにタンパク分解性分解に対する促進された安定性を導くことができる、Ｄ−アミノ酸残基構造へ導く主鎖キラル中心の反転を含む。例は論文、「トリチウム化Ｄ−ａｌａ1  −ペプチド  Ｔ結合」，Ｓｍｉｔｈ  Ｃ．  Ｓ．ら，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓ．，  １５，  ｐｐ．  ３７１−３７９  （１９８８）に与えられている。第二の方法は、ＮからＣ鎖間イミドおよびラクタムのような、安定性のために環状構造を変えることである（Ｅｄｅら，ＳｍｉｔｈおよびＲｉｖｉｅｒ  （監修）  「ペプチド：化学および生物学」中，  Ｅｓｃｏｍ，ライデン  （１９９１），  ｐｐ．  ２６８−２７０）。この例は、その開示全体が本明細書に特別に援用される米国特許第４，４５７，４８９号  （１９８５），  Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，  Ｇ．ら、に開示されているように、コンホメーション的に制限されているチモペンチン様化合物で与えられている。第三の方法は、タンパク分解性への抵抗性を与える偽ペプチドにより、抗体、抗体誘導体または抗体断片中のペプチド結合を置換することである。
【００５０】
一般的にペプチド構造および生物学的活性に影響しない、多数の偽ペプチド結合が記載されている。この方法の一つの例はレトロ−インバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）偽ペプチド結合へ置換することである（「チモペンチンの生物学的に活性なレトロインバーソ類似体」，Ｓｉｓｔｏ  Ａ．ら，  Ｒｉｖｉｅｒ，  Ｊ．  Ｅ．およびＭａｒｓｈａｌｌ，  Ｇ．  Ｒ．  （監修）  「ペプチド、化学、構造および生物学」中，  Ｅｓｃｏｍ，  ライデン  （１９９０），  ｐｐ．  ７２２−７７３およびＤａｌｐｏｚｚｏら  （１９９３），  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，  ４１：５６１−５６６、本明細書において援用される）。この修飾に従えば、ペプチドのアミノ酸配列は、一つまたはそれより多くのペプチド結合がレトロ−インバーソ偽ペプチド結合により置き換えられていることを除いて、上記抗体の配列と同一であることができる。好ましくは、最もＮ末端のペプチド結合が置換されている。なぜなら、そのような置換はＮ末端に作用するエキソペプチダーゼによるタンパク分解に対する抵抗性を与えるであろうからである。さらなる修飾もまた、アミノ酸の化学基を類似の構造を有する他の化学基で置き換えることにより行うことができる。酵素的切断に対する安定性を促進し、生物学的活性は損失させない、またはほんの僅かしか損失させない、別の適した偽ペプチド結合は、還元同配体（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｉｓｏｓｔｅｒｅ）偽ペプチド結合である（Ｃｏｕｄｅｒ，ら  （１９９３），  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，  ４１：１８１−１８４、全体が本明細書において援用される）。
【００５１】
それ故、これらのペプチドのアミノ酸配列は、一つまたはそれより多くのペプチド結合が同配体（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）偽ペプチド結合により置き換えられていることを除いて、抗体、抗体断片または抗体誘導体の配列と同一であることができる。好ましくは、最もＮ末端のペプチド結合を置換する。なぜなら、そのような置換はＮ末端に作用するエキソペプチダーゼによるタンパク分解に対する抵抗性を与えるであろうからである。一つまたはそれより多くの還元同配体偽ペプチド結合を有するペプチドの合成は本技術分野で既知である（Ｃｏｕｄｅｒら  （１９９３）、上記文献）。他の例は、ペプチド結合を置き換えるためのケトメチレンまたはメチルスルフィド結合の導入を含む。
【００５２】
ＮＴＰペプチドのペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）誘導体は、生物学的活性に重要な構造的決定基を保持しているが、しかもなおペプチド結合を除去しており、それによりタンパク分解に対する抵抗性を与えている、ペプチド模倣体の別のクラスを代表している（Ｓｉｍｏｎら，  １９９２，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８９：９３６７−９３７１、その全体が本明細書において援用される）。ペプトイドはＮ−置換グリシンのオリゴマーである。多数のＮ−アルキル基が記載されており、各々が天然のアミノ酸の側鎖に対応している（Ｓｉｍｏｎら  （１９９２）、上記文献）。抗体、抗体断片または抗体誘導体の、いくつか又はすべてのアミノ酸が置き換えられたアミノ酸に対応するＮ−置換グリシンで置き換えられている。
【００５３】
用語「逆Ｄペプチド」は、抗体、抗体断片または抗体誘導体のＬ−アミノ酸配列と比較して、逆の順序で配置されたＤ−アミノ酸から成る生物学的に活性なタンパク質またはペプチドを意味している。それ故、Ｌ−アミノ酸抗体、抗体断片または抗体誘導体のカルボキシ末端はＤ−アミノ酸ペプチドのアミノ末端になり、以下同じである。
【００５４】
用語「エナンチオマー」は、抗体、抗体断片または抗体誘導体のアミノ酸配列中の一つまたはそれより多くのＬ−アミノ酸残基が対応するＤ−アミノ酸残基で置き換えられている、生物学的に活性なタンパク質またはペプチドを意味している。
【００５５】
本記載を通し、用語「アミロイド症」および表現「脳アミロイド症」は、例えば、疾患のアルツハイマー群、即ち、アルツハイマー病（前老人性痴呆、老人性痴呆）；ダウン症候群に関連したアルツハイマー病；家族性アルツハイマー病；プレセニリン１，プレセニリン２およびその他のような突然変異による遺伝性アルツハイマー病；パーキンソン病、レーヴィ小体疾患および脳血管性疾患のような、他の中枢神経系に関連するアルツハイマー病； コンゴ親和性血管障害（アルツハイマー病に関連するまたは関連しない、家族性または家族性ではない）、並びに、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第６，００１，３３１号に開示されているような他の障害および疾患を含む、異常原線維（「アミロイド原線維」）および／または関連非原線維アミロイド前駆体または非前駆体分子の沈着、ならびに細胞外空間でのＮＴＰの存在により特徴付けられる多数の病理学的状態を示す。
【００５６】
本記載を通し、表現「アミロイド斑」および「アミロイド原線維」は、老人斑、神経炎斑、アミロイド斑、アミロイドスター（ａｍｙｌｏｉｄ  ｓｔａｒ）、アミロイドコア（ａｍｙｌｏｉｄ  ｃｏｒｅｓ）、原発疹、古典的斑、バーンアウト斑（ｂｕｒｎ  ｏｕｔ  ｐｌａｑｕｅ）、びまん性斑、シャドウ斑（ｓｈａｄｏｗ  ｐｌａｑｕｅ）、神経原線維濃縮体、アミロイド原線維、対らせんフィラメントなどを示す。本記載を通し、用語「哺乳動物」はすべての哺乳動物を示し、好ましくは、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、類人猿、サル、マウス、ラットおよびヒトを示し、最も好ましくはヒトを示す。
【００５７】
本発明は、ＮＴＰを含む生存細胞において、細胞死および／または組織壊死を防止するための方法に関している。ＮＴＰは昔から知られおよび文献に記載されてきたが、ＮＴＰがＮＴＰ産生細胞以外の細胞の、細胞死の原因であることは、これまで知られていなかった。いずれかの理論に縛られるのを意図するわけではないが、以前に報告されているように、生存組織中のＮＴＰの存在は、特定の神経細胞死の指標であるのみならず、ＮＴＰは他の生存組織細胞死を起こすので、その程度においてＮＴＰは有毒でもあると、本発明者は信じている。生存哺乳動物脳組織中に存在するＮＴＰはアルツハイマー病（ＡＤ）のマーカーであり、そしてＮＴＰはそれが存在する生存組織において細胞死および／または組織壊死を起こすことによりＡＤを悪化させると、発明者は信じている。従って、哺乳動物がＡＤで苦しめられるようになるにつれ、神経細胞死はＮＴＰを産生する遺伝子を上方制御し、それによりその場所でＮＴＰを産生すると信じられる。そのようにして産生されたＮＴＰは、次にその近傍において他の生存組織（例えば、他の神経細胞、グリア細胞その他）を破壊し、それにより疾患の進行を悪化させる。それ故、抗体、抗体誘導体または抗体断片でＮＴＰを中和することは、ＮＴＰを含有する、またはＮＴＰによる接触があった生存組織での細胞死および／または組織壊死を防止する、軽減する、調節するおよび／または回復することを助けるであろうと発明者は信じている。
【００５８】
ＮＴＰが存在する生存組織でＮＴＰが細胞死および／または組織壊死を起こす能力は、「神経スレッドプロテインを用いて腫瘍および関連状態を治療する方法」と題された係属中の米国特許出願第＿＿＿＿号に開示されているように、ヒトにおける良性または悪性腫瘍のような、有害なまたは望まれない組織または細胞要素を除去または破壊するため、ＮＴＰを有用にしうる。そのような目的のためのＮＴＰ投与により起こされる細胞死および／または組織壊死を変調する、調節する、防止するまたは抑制するために、特に周囲の組織における細胞死または組織壊死を避けるまたは軽減するために、有用であろうことを発明者は予期する。それ故、抗体、抗体誘導体または抗体断片によりＮＴＰを中和することは、ＮＴＰが投与された生存細胞内または近辺における、細胞死および／または組織壊死を変調する、調節する、防止するまたは抑制するのを助けるであろうと発明者は信じている。
【００５９】
ＮＴＰを組換え的にまたは別の様式で作成する方法は、例えば、その開示全体が本明細書で援用される米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８，８８８、５，８３０、６７０および６，０７１，７０５号に開示されている。ＡＤおよび他の関連する障害および疾患を診断できるように、ＮＴＰに対する抗体を上昇させることもまたこれらの文書に開示されている。本発明で有用な抗体、抗体断片または抗体誘導体のいずれかを作製またはスクリーニングするため、ＮＴＰ断片、相同体、誘導体および変異体、ならびに異なった起源からのＮＴＰ（例えば、天然の、膵臓の、精製された、合成された、またはインビトロでの異なった発現系からの、その他）を使用することができることは当業者には明らかになるであろう。
【００６０】
抗体、抗体断片または抗体誘導体を上昇またはスクリーニングするためのＮＴＰ断片の使用もまた、本発明の範囲に含む。目的に依存するが、大きな活性分子のより小さな活性断片を利用するのが普通である。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰおよび他の神経スレッドプロテインおよび膵臓スレッドプロテインのような、ＮＴＰファミリーの分子の使用もまた、本発明の範囲に含む。
【００６１】
本発明で有用なモノクローナル抗体、特にｍＡｂ  Ｔｈ７、Ｔｈ９、Ｔｈ１０およびＮ３１４は以前に記載されているように調製することができる（Ｇｒｏｓｓら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ７６：２１１５−２１２６  （１９８５）；Ｏｚｔｕｒｋら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：４１９−４２３  （１９８９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８６：１００４−１０１３  （１９９０）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．  １１３：１５２−１６４  （１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ３２：７３３−７４２  （１９９２）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ，  Ｓ．Ｍ．ら，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ５５：１０３８−１０５０  （１９９６））。Ｔｈ  モノクローナル抗体は、スレッドプロテインの精製膵臓形に対して発生させた（上記文献）。ＮＴＰ−特異的ポリクローナルおよびモノクローナル抗体もまた、組換え体宿主から単離された実質的に純粋なＮＴＰに対して発生させることができる（例えば、Ｃａｒｒｏｌｌら，  「β−ガラクトシダーゼ融合タンパク質の外来性セグメントに対するポリクローナル抗体の製造および精製」，ＤＮＡクローニング：実用的アプローチ，  第ＩＩＩ巻中，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  ワシントン，  Ｄ．Ｃ．，  ｐｐ．  ８９−１１１  （１９８７）；Ｍｏｌｅら，  「大腸菌で産生された融合タンパク質に対するモノクローナル抗体の製造」，  ＤＮＡクローニング：実用的アプローチ，  第ＩＩＩ巻中，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  ワシントン，  Ｄ．Ｃ．，  ｐｐ．  １１３−１１３９  （１９８７）を参照されたい）。あるいは、ＮＴＰ−特異的ポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、周知技術を使用して、脳組織および細胞株のような生物学的材料から単離された実質的に純粋なＮＴＰに対して発生させることができる。
【００６２】
例えば、ほぼ８、１４、１７、２１、２６および４２ｋＤａ分子量の種々のＮＴＰ分子に特異的なモノクローナル抗体は、ｃＤＮＡ（即ち、１−９ａ）、ゲノムクローン（Ｇ２−２  ＰａｔＩ）およびＡＤ−ＮＴＰ  ３−４  ｃＤＮＡから発現、単離および精製された、組換え体由来タンパク質から調製することができる。これらのＮＴＰ分子は、適切な発現ベクターに挿入および産生された、上記ｃＤＮＡおよびゲノムクローンから誘導できる。１−９ａ  ＮＴＰ  ｃＤＮＡおよびＰＴＰの５’末端中には、６０−７０％相同性の領域があるので、日常的な差異的スクリーニングを実行することにより、ＮＴＰ組換えタンパク質に特異的に結合するが、膵臓形には結合しないモノクローナル抗体を得ることができる（例えば、ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８６：  １００４−１０１３  （１９９０）を参照されたい）。ＮＴＰおよびＰＴＰのどちらもへも結合するモノクローナル抗体も存在するであろうが、種々の形のＮＴＰ分子間（例えば、８、１４、１７、２１、２６および４２ｋＤａ）には実質的な配列多様性が存在するので、およびエピトープは６−８ほどの少ないアミノ酸により定義することができるので、ＮＴＰ特異的モノクローナル抗体を発生させることも可能である。本発明において、ＮＴＰおよびＰＴＰのどちらもへも結合するモノクローナル抗体は、ＮＴＰを含む生存組織中で細胞死および／または組織壊死を抑制、防止および／または回復できる限り、本発明で使用できる。
【００６３】
抗体はまた、ゼノマウス（Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ）技術を使用してＡｂｇｅｎｉｘによって開発されたマウス（米国特許第６，１６２，９６３、６，１５０，５８４、６，１１４，５９８、６，０７５，１８１および５，９３９，５９８号）あるいはＭｅｄａｒｅｘにより開発されたＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ、Ｋｉｒｎ  ＴＣ  ＭｏｕｓｅまたはＫＭ−Ｍｏｕｓｅマウス（米国特許第６，３００，１２９、５，８７７，３９７、５，８７４，２９９、５，８１４，３１８、５，７８９，６５０、５，７７０，４２９、５，６６１，０１６、５，６３３，４２５、５，６２５，１２６、５，５６９，８２５および５，５４５，８０６号）のような、キメラまたはトランスジェニック動物を使用することにより調製できる。これらの特許の開示は、全体が本明細書において援用される。
【００６４】
抗体断片は、周知技術を用いて当業者によって調製することができる。抗体誘導体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーを作製するためのファージディスプレイ、細菌細胞表面ディスプレイまたは酵母細胞表面ディスプレイ技術を使用し、生物学的に活性な抗体、抗体断片または他の抗体誘導体から調製することができる。次いで、ＮＴＰを用いてそのようなライブラリーをスクリーニングし、生物学的に活性な抗体、抗体断片または他の抗体誘導体を同定することができる。
【００６５】
ファージミド（ｐｈａｇｅｍｉｄ）と称される、繊維状ファージディスプレイベクターの使用は、多様なおよび新規の免疫特異性を有する、モノクローナル抗体の大きなライブラリーの有効な調製によく知られている方法である。本技術は繊維状ファージ被覆タンパク質膜アンカードメインを、繊維状ファージ複製の組立の際の遺伝子産物および遺伝子を連結するための手段として使用し、コンビナトリアルライブラリーのクローニングおよび発現に使用されてきた（Ｋａｎｇら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  ８８：４３６３，  １９９１；Ｂａｒｂａｓら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  ８８：７９７８，  １９９１）。
【００６６】
ファージディスプレイにおいて、目的のタンパク質（この場合、抗体、抗体断片または抗体誘導体）はバクテリオファージ被覆タンパク質のポリペプチド融合物として発現され、そして「パニング（ｐａｎｎｉｎｇ）」と称される過程において、固定化あるいは可溶性ビオチニル化リガンド（この場合ＮＴＰ）への結合により続いてスクリーニングする。非特異的抗体を運んでいるファージは洗浄により除去でき、そして次いで結合ファージを大腸菌の感染により溶離および増幅する。ファージディスプレイは、肝炎Ｂ表面抗原；ポリサッカリド；インシュリン様成長因子、１，２−フェニルオキサゾール−５−オン、および４−ヒドロキシ−５−ヨード−３−ニトロ−フェナセチル−（ＮＩＰ）−カプロン酸を含む、多くの抗原に対して抗原を発生させるために成功裡に応用されてきた。
【００６７】
酵母および細菌細胞表面ディスプレイ技術は、抗体および抗体断片を含む、タンパク質の多様なアレーが表示され、そして次に、所望の親和性および特異性で抗原へ結合する能力のような好ましい特性を示すものをスクリーニングすることができる、別の方法である。（Ｂａｄｅｒら，ＥＴ、  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １５：  ５５３−５５７  （１９９７）；その開示全体が本明細書において援用される米国特許第６，３００，０６５号；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＪＡら，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：  ２７１３−２７１７  （１９９２）；Ｇｅｏｒｇｉｏｕ  Ｇら，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １５：  ２９−３４  （１９９７））。
【００６８】
ヒトではない哺乳動物を使用して産生されたモノクローナル抗体をヒト化する必要があろう。ヒトにおけるそのような非ヒト抗体のインビボでの使用は問題を生じさせる。外来性免疫グロブリンは、治療を妨害することができる（Ｒ．  Ａ．  Ｍｉｌｌｅｒら，  Ｂｌｏｏｄ  ６２  ９８８−９９５  （１９８３））またはアレルギー性または免疫複合体過敏性を起こす（Ｂ．  Ｒａｔｎｅｒ，アレルギー、アナフィラキシスおよび免疫療法，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，ボルチモア  （１９４３））、抗グロブリン応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答として知られている）を起こすことができる。
【００６９】
これらの問題を克服する一つの方法は、それらを修飾することにより結果的にそのような抗体をヒト化することである。ヒト化の二つの一般法が開発されている：（ｉ）ループ移植、ここでＣＤＲループを、非ヒト動物の配列に最も密接に似ていることが観察されている、ヒトＦｖフレームワーク上に直接移植する；および（ｉｉ）再表面化（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）、ここで表面上に最も露出されているＦｖフレームワーク残基をヒト対応物へ突然変異させる。Ｗｉｎｔｅｒおよび協力研究者（ＧＢ２１８８６３８Ｂ）は一つのそのような方法を開発した。抗原結合部位を含んでなる、マウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒトフレームワーク領域内へ挿入し、それにより本来のマウス抗体からＣＤＲ配列のみが由来する抗体を生成させる。ヘルセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）およびリチュキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）は、治療的使用に認可されたヒト化抗体の二つの成功例である。例えば、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第５，５６５，３３２号に開示されているように、ファージディスプレイのような技術を用いるコンビナトリアル法を用いてヒト化抗体および抗体断片を生成させることもできる。
【００７０】
組換えＮＴＰを標的としたクローン化コンジュゲート、または組換えＮＴＰを標的とした抗体様タンパク質のクローン化コンジュゲートの使用もまた、本発明の範囲に含まれる。ＮＴＰまたは関連分子を標的としたクローン化コンジュゲートの利点には、クローン化、コンジュゲート化分子の製造および標準化生産が含まれる。
【００７１】
そのような抗体、抗体断片または抗体誘導体を作製するおよび検出する方法は当業者にはよく知られており、以下により詳細に説明する。免疫学の一般原理を示している標準参照業績には、Ｋｌｅｉｎ  （免疫学：非自己区別の科学，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク  （１９８２））；Ｋｅｎｎｅｔｔら  （モノクローナル抗体およびハイブリドーマ：生物学的分析の新次元，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク  （１９８０））；Ｃａｍｐｂｅｌｌ  （「モノクローナル抗体技術」：生化学および分子生物学における実験室技術，  第１３巻  （Ｂｕｒｄｏｎ，  Ｒ．ら，監修）中，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  アムステルダム  （１９８４））；およびＥｉｓｅｎ  （微生物学，第３版  （Ｄａｖｉｓら，  Ｈａｒｐｅｒ  ＆  Ｒｏｗ，  フィラデルフィア  （１９８０）中）の業績が含まれる。
【００７２】
本発明で有用な抗体、抗体誘導体または抗体断片はまた、多様な標識成分または放射性成分へ結合できる。本発明のこの態様において、標識抗体が投与でき、生存組織でＮＴＰへ結合し、本技術分野で既知の多様な技術を使用して検出し、そして次にＮＴＰを中和するまたは殺すため、正確で制御された様式で多様な型の照射を用いることができ、それにより同じ効果を達成する。ＮＴＰ−抗体および断片を標識する多様な方法、ならびにそれらの検出は米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８，８８８、５，８３０，６７０および６，０７１，７０５号に開示されている。放射性標識抗体、抗体誘導体または抗体断片はまた、抗体コンジュゲートの放射性部分が、外からの照射を必要とせずにＮＴＰを中和するまたは殺すために働くことができる場合を除いては、上記のように使用できる。
【００７３】
抗体、抗体誘導体または抗体断片は、好ましくは、ＮＴＰを含有する生存組織と接触させる。ＮＴＰを含有する、またはいつかある時点でＮＴＰを含有するであろうかもしれない、いずれの生存組織も本発明に含まれる。好ましくは、組織は哺乳類組織から選択された組織である。
【００７４】
本発明の一つの態様は、ＮＴＰの存在に起因する生存組織の壊死により起こされる状態を治療する方法を含んでいる。これに関連して、ＮＴＰの存在に起因する生存組織の壊死および細胞死は、ＮＴＰを産生して死にかかっている細胞以外の細胞の細胞死および／または組織壊死を意味している。該方法において、ＮＴＰを結合するさもなくば認識する上記の抗体、抗体誘導体または抗体断片は、そのような状態を患っている哺乳動物へ、ＮＴＰの存在により起こされる生存組織壊死を防止するおよび／または抑制するのに十分な量および期間で投与する。
【００７５】
神経系障害または他の脳関連障害の治療は、動物または患者の神経系機能または機能障害に影響する薬剤の投与により達成できる。典型的には、そのような薬剤は、経口かまたは全身経路を経た、末梢適用により投与する。いくつかの薬剤は血液脳関門（ｂｂｂ）を通過できるが、他の薬剤は効果的にはまたは少しもｂｂｂを通過せず、脳内へ直接的に与えた場合にのみ有効である。本明細書において使用する場合、用語「血液脳関門」または「ｂｂｂ」は、ｂｂｂそのもの、ならびに血液脊髄関門を意味する。脳血管の内皮、基底膜および神経膠細胞から成る血液脳関門は、脳内への物質の透過を制限するように働く。時には、ｂｂｂの構造は二つの成分に副分割される：内皮またはキャピラリー関門および上衣関門。Ｂａｎｋｓ，  Ｗ．  Ａ．，  Ｋａｓｔｉｎ，  Ａ．  Ｊ．，  Ｂａｒｒｅｒａ，「中枢神経系への薬剤の搬送：ジレンマおよび戦略」，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ８：１３４５−１３５０  （１９９１）。
【００７６】
ｂｂｂを通る物質透過の性質はいまだに決定されていないが、サイトカイン、トランスフェリン、エンセファリンおよびエンドルフィンのような脳機能調整剤の多くは、血管から脳内へｂｂｂを通過できることが知られている。Ｒａｅｉｓｓｉ，  Ｓ．，  Ａｕｄｕｓ，  Ｊ．，  「デルタ睡眠誘導ペプチドに対する血液脳関門透過性のインビトロ特性付け」，Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈｙ．  ４１：８４８−８５２（１９８９）；Ｚｌｏｋｏｖｉｃｈ，  Ｂ．，  Ｓｕｓｉｅ，  Ｖ．  Ｔ．，  Ｄａｖｓｏｎ，  Ｈ．  Ｂｅｇｌｅｙ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｊａｎｋｏｖ，  Ｒ．  Ｍ．，  Ｍｉｔｒｉｖｉｃ，  Ｂ．  Ｍ．，  Ｌｉｐｏｖａｃ，  Ｍ．  Ｎ．，  「血管潅流モルモット脳の血液脳関門でのデルタ睡眠誘導ペプチド（ＤＳＩＰ）の飽和可能機構」，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １０：２４９−２５４（１９８９）；およびＺｌｏｋｏｖｉｃｈ，  Ｂ．，  「血液脳関門でのペプチド相互作用を研究するためのインビボアプローチ」，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌ．  １３：１８５−２０１（１９９０）。しかしながら、アデノシン、β−エンドルフィン、内因性ペプチドの合成類似体、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，  Ｒ．  Ａ．  Ｓｗａｎｎ，  Ｒ．  Ｗ．，  Ｌｉ，  Ｃ．  Ｈ．，  「β−エンドルフィン：ラットおよびウサギにおけるトリチウム標識ペプチド静脈内注射後の安定性、クリアランス挙動および中枢神経系内への侵入」，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４５８８−４５９１（１９８０）；Ｌｅｖｉｎ，  Ｅ．  Ｒ．，  Ｆｒａｎｋ，  Ｈ．  Ｊ．  Ｋ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｍ．  Ａ．，  Ｉｓｍａｉｌ，  Ｍ．，  Ｍｉｌｌｓ  Ｍ．，  「心房性ナトリウム利尿因子の血液脳関門透過についての研究」，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １４７：１２２６−１２３１（１９８７）；Ｓａｋａｎｅ，  Ｔ．，  Ｔａｎａｋａ，  Ｃ．，  Ｙａｍａｍｏｔｏ，  Ａ．，  Ｈａｓｈｉｄａ，  Ｍ．，  Ｓｅｓａｋｉ，  Ｈ．，  Ｕｅｄａ，  Ｈ．，  Ｔａｋａｇｉ，  Ｈ．，  「脳取り込みに対するポリソルベート８０の効果およびＤ−ｋｙｏｔｏの鎮痛効果」，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ５７：７７−８３（１９８９）、のような中枢神経系（またはＣＮＳ）に影響できる多くの物質、ならびに、いくつかの興奮性および抑制性アミノ酸および栄養因子は、ｂｂｂを通して僅かしかまたは全く透過しない。現在のところ、ｂｂｂを透過しない、またはｂｂｂ透過が僅かである薬剤は、直接ＣＮＳ注入または制御放出ポリマーの移植によってのみ与えることができる（例えば、米国特許第４，８８３，６６６号、Ｓａｂｅｌら、を参照されたい）。
【００７７】
伝統的薬剤療法のいくつかの制限を克服するための一つの方法は、ｂｂｂを通過する薬剤の相対量を増加させることである。与えられた薬剤または診断物質の末梢投与量を減少させる一方、ｂｂｂを通過する薬剤の量を増加させることができるとしたら、薬剤の末梢副作用もまたより軽く、一方同時に脳では所望の効果を維持していることが確信される。多くのアプローチがｂｂｂを通した薬剤透過を増加させるために有効であると記載している。
【００７８】
一つのアプローチはｂｂｂそれ自身の機能を変化させることであった。例えば、浸透圧剤は、末梢的に与えられた場合（静脈注射によるような）、ｂｂｂの開口を生じる。さらに、ＣＮＳに作用するいくつかの薬剤は、他の物質のｂｂｂ透過性を変化できる；例えば、コリン作動性アレコリンは、ｂｂｂを通した薬剤透過の変化を誘導することが報告されている。Ｓａｉｊａ，  Ａ．，  Ｐｒｉｎｃｉ，  Ｐ．，  Ｄｅ  Ｐａｓｑｕａｌｅ，  Ｒ．，  Ｃｏｓｔａ，  Ｇ．，  「ラットにおいてアレコリンは血管脳関門の透過性変化を誘導するが、ハロペリノールは誘導しない」，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａ．  ４２：１３５−１３８  （１９９０）。
【００７９】
ｂｂｂの透過性を変化させるために投与できる他の薬剤は、米国特許第５，０５９，４１５および５，１２４，１４６号（両方ともＥ．  Ａ．  Ｎｅｕｗｅｌｔに発行された）に開示されている。ブラジキニンはそのような効果を有する一つの特別な薬剤である。（Ｍａｌｆｒｏｙ−Ｃａｍｉｎｅに発行された米国特許第５，１１２，５９６号）。別の方法は、Ａ−７またはそのコンホメーション類似体のような透過剤ペプチドを投与することを含んでなる。（ＷＯ  ９２／１８５２９、Ｊ．  Ｗ．  Ｋｏｚａｒｉｃｈらの出願）。比較的に侵襲的な方法がＡ．  ＴｏｍａｓｚおよびＥ．  Ｔｕｏｍａｎｅｎにより提案されており（ＷＯ  ９１／１６０６４）、ｂｂｂを開くため、ストレプトコッカス  ニューモニエのような真性細菌の精製された細胞膜または細胞膜断片の非経口注射を行う。
【００８０】
Ｌ．  Ｌ．  Ｒｕｂｉｎらに発行された米国特許第５，２６０，２１０号は、一つの方法を開示しており、それによると、サイクリックＡＭＰ濃度を減少させるまたは干渉する、またはサイクリックＧＭＰ濃度を増加させる作用物質を投与することにより、血液脳関門の透過性が増加した。
【００８１】
別のアプローチは薬剤分子それ自身の修飾である。例えば、タンパク質のような巨大分子はｂｂｂを少しも通過することができないか、または、かろうじてまたはタンパク質の効力に不都合な強い影響を与える改変により通過することができる。例えば、巨大分子の活性部位（即ち、生物学的に望まれる出来事の引き金を引く分子の一部）を先ず単離し、そして次にこの活性部位のみを使用することができる。サイズはｂｂｂの透過を可能にする一つの因子であるので、より小さな分子は今やｂｂｂを通過でき、減じられたサイズが使用できる。それ故、これに関連して、抗体断片の使用が望ましい。ｂｂｂの通過を試みるための巨大分子の他の修飾は、タンパク質の糖化（それによりｂｂｂのその透過性を促進する）、またはプロドラッグの形成を含む。Ｊ．  Ｆ．  ＰｏｄｕｓｉｏおよびＧ．  Ｌ．  Ｃｕｒｒａｎに発行された米国特許第５，２６０，３０８号はタンパク質を糖化することを議論しており、一方、米国特許第４，９３３，３２４号およびＷＯ  ８９／０７９３８（両方ともＶ．  Ｅ．  Ｓｈａｓｈｏｕａの出願）は、プロドラッグの形成を開示している。これらのプロドラッグは脂肪酸担体およびそれ自身ではｂｂｂを通過することが不可能である神経活性薬剤から形成される。同様な系がＷＯ  ８９／０７９３８に開示されている。
【００８２】
さらに別のアプローチは神経組織内へ直接的にマトリックスシステムから活性成分を放出する、制御放出ポリマーの移植である。しかしながら、このアプローチは侵襲的であり、もし脳または脊髄内へ直接移植するならば外科的介入を必要とする（Ｓａｂｅｌら、米国特許第４，８８３，６６６号；およびＳａｂｅｌら、米国特許出願番号第０７／４０７，９３０号を参照されたい）。また、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第５，８００，３９０号に開示されているように、脳の内部へ直接的に組成物を投与することも知られている。これらの方法は、脳組織への直接的な固形製剤および半固形製剤の徐放性放出搬送を可能にする。
【００８３】
これらの制限を克服するため、リポソーム、赤血球ゴースト、抗体コンジュゲートおよびモノクローナル抗体コンジュゲートのような薬剤担体システムが使用される、別のアプローチが試みられた。標的化薬剤搬送における主たる問題の一つは、網内皮細胞系（ＲＥＳ）による、特に、肝臓および脾臓中のマクロファージによる、迅速なオプソニン作用および注射された担体の取り込みである。この障害は、リポソームの場合はホスファチジルイノシトール、モノシアロガングリオシドまたはスルホガラクトシルセラミドのような、いわゆる「ステルス（ｓｔｅａｌｔｈ）」脂質の取り込みにより部分的に克服することができる。
【００８４】
米国特許第５，１８２，１０７および５，１５４，９２４号（両方ともＰ．  Ｍ．  Ｆｒｉｄｅｎに発行）は、薬剤と抗体を結合する方法を教えており、ここで抗体はトランスフェリン受容体と反応性である。トランスフェリン受容体は脳毛細管内皮細胞上に位置しており、次にそれはｂｂｂを通って、神経成長因子のような薬剤を輸送できる。米国特許第５，００４，６９７号（Ｐａｒｄｒｉｄｇｅへ発行）は、特別の等電点を有する陽イオン化抗体を提供することにより、そのような抗体コンジュゲートを改良している（ＰａｒｄｒｉｄｇｅによるＷＯ  ８９／０１３４３もまた参照されたい）。
【００８５】
別のアプローチは、活性作用因子が結合されているキメラペプチドを作製することである（米国特許第４，８０１，５７５号、やはりＰａｒｄｒｉｄｇｅへ発行）。そのような系はさらにＰａｒｄｒｉｄｇｅおよびＳｃｈｉｍｍｅｌに発行された米国特許第４，９０２，５０５号でもさらに議論されており、そこでは、ヒストンのようなキメラペプチドはトランスサイトーシス（ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ）によりｂｂｂを通過可能である。
【００８６】
米国特許第５，１８７，１５８および５，０１７，５６６号（両方ともＮ．  Ｓ．  Ｂｏｄｏｒに発行）は、中心的に作用する薬剤が、ドーパミンのようなジヒドロピリジン反応−ピリジン塩酸化還元担体の還元、生物酸化可能リポイド性形と与えられる、脳特異的薬剤搬送法を開示している（やはりＢｏｄｏｒに発行された米国特許第４，８８０，８１６号もまた参照されたい）。
【００８７】
相当に侵襲的アプローチが遺伝子材料を脳へ搬送するためにとられる。これは、例えば、ｂｂｂを化学的に崩壊させ、次に、ｂｂｂを通過して遺伝子を搬送するためにウイルスを用いることにより行う。（Ｅ．  Ａ．  Ｎｅｕｗｅｌｔに発行された米国特許第４，８６６，０４２号を参照されたい）。ここで、矯正的遺伝子材料をウイルス内へ取り込ませ、そして次にウイルスを血流内へ注射する。
【００８８】
最後に、ｂｂｂを通過して薬剤を搬送するためのさらに別の担体系は、Ｆ．  Ｄ．  ＣｏｌｌｉｎｓおよびＲ．  Ｃ．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（ＷＯ  ９１／０４０１４）により開示されているような、リポソームの使用である。ここで、リポソームは、ｂｂｂを通過して特異的リガンドを輸送する、特異的内因性脳輸送系を標的にしている。
【００８９】
別の方法がＫｒｅｕｔｅｒらによる米国特許第６，１１７，４５４号に開示されている。Ｋｒｅｕｔｅｒの特許の主題は、ｂｂｂを通過する薬剤または診断薬の透過を促進させるため、広範囲の薬剤ための薬剤担体（または標的化分子）として、表面活性剤被覆ナノ粒子を使用する方法、組成物および薬剤標的化系を含む。
【００９０】
それ故前記技術は、ＡＤおよび脳中のＮＴＰの存在を検出するための多数の異なったアプローチ、ならびに、薬剤または他の治療剤がｂｂｂを横切ることを可能にすることにより、それらを脳へ接近可能にするための多数のアプローチを提案している。前記技術は、ＡＤ脳または他の組織中のＮＴＰにより起こされる細胞死および／または組織壊死を防止する重要性を認識していない。
【００９１】
当業者は、抗体を直接的に投与する代わりに、抗体が遺伝子発現（例えば、遺伝子治療）を通して、またはワクチンを通して哺乳動物により産生または発現可能なことを理解するであろう。当業者は、本明細書に提供されるガイドラインを使用し、抗体または抗体断片発現の誘導に有用な、適した遺伝子またはワクチンを作製、単離および精製することが可能である。
【００９２】
例えば遺伝子治療は、多様な哺乳動物疾患を治療するための、および特異的タンパク質または他の細胞産物の産生を促進するための方法として、広範囲の関心を引きつけてきた。遺伝子治療は一般的に、哺乳動物患者細胞内へ外因性遺伝子材料を導入することにより達成される。導入される遺伝子材料は、哺乳動物患者の異常（欠陥）遺伝子を置き換える（「遺伝子置き換え治療」）ために設計でき、またはいずれかの欠陥遺伝子の置き換えなしで、コードしたタンパク質または他の治療的産物の発現（「遺伝子増加」）のために設計できる。多くの先天性および後天性医学障害は、多様な遺伝子産物の不適切な産生により生じるので、遺伝子治療は、治療的産物をコードする外因性核酸の一過性または安定な発現を通し、これらの疾患を治療するための手段を提供する。
【００９３】
遺伝子治療は、哺乳動物患者内の標的細胞の直接的形質転換（インビボ遺伝子治療）、あるいは、インビトロでの細胞の形質転換、及び続く哺乳動物患者内への形質転換細胞の移植（インビトロ遺伝子治療）により達成できる。インビボ遺伝子治療は本発明の使用に特に好適である。体細胞の修復に加え、インビボ遺伝子治療はまた、（遺伝子治療が広い適用を有する領域である）全身性治療のためにも使用できることが一般的に知られている。全身的治療は、目的のＤＮＡでの標的細胞のトランスフェクション、その細胞中でのコードしているタンパク質の発現、そして形質転換細胞が次いで血液内へ製造したタンパク質を分泌する能力を含む。
【００９４】
機械的手段（例えば、標的細胞内への核酸の直接注射または粒子照射）、組換えウイルス、リポソームおよび受容体媒介エンドサイトーシス（ＲＭＥ）を含む、多様な方法がインビボでの形質転換を達成するために開発されきた（総説として、Ｃｈａｎｇら  １９９４  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  １０６：１０７６−８４；Ｍｏｒｓｙら  １９９３  ＪＡＭＡ  ２７０：２３３８−４５；およびＬｅｄｌｅｙ  １９９２  Ｊ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｎｕｔｒ．  １４：３２８−３７、を参照されたい）。
【００９５】
ＮＴＰを認識するまたはＮＴＰを結合する抗体または抗体断片のインビボ発現を誘導するために適した遺伝子およびワクチンを開発するおよび投与するのに適した方法は、例えば、米国特許第６，２１０，９１９および６，２２５，２９０号に開示されている。これら各々の開示は、その全体が本明細書において援用される。
【００９６】
ＮＴＰの存在に起因する細胞死および生存組織の壊死により起こされるいずれかの状態は、本発明に従って治療できる。好ましくは、該状態はＡＤ、卒中、脳腫瘍および他の脳疾患から、特に、神経変性性疾患（ＡＤ、ピック病、レーヴィ小体疾患、パーキンソン病その他）から選択される。
【００９７】
本発明の好ましい態様に従うと、該方法はＮＴＰを含有する生存組織と、ＮＴＰへ結合する少なくとも一つの抗体、抗体誘導体または抗体断片を、ＮＴＰの存在により起こされる細胞死および／または組織壊死を防止するために十分な量で接触させることを含む。ＮＴＰへ結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片を投与する方法は、筋肉内、経口、静脈内、髄膜内、鼻孔内、局所、経皮その他で抗体を投与することを含む。加えて、抗体、抗体誘導体または抗体断片は、前に説明したように、該タンパク質を発現する遺伝子の投与により、またはそのような産生を誘導するワクチンの投与により、インビボで発現または産生できる。さらに、抗体、抗体誘導体または抗体断片は、インビボで該タンパク質を発現する細胞、細菌またはウイルスの投与または導入により、インビボで発現または産生できる。
【００９８】
経口投与のための固体剤形は、カプセル、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含む。そのような固体剤形において、活性化合物は少なくとも一つの下記のものと混合させる：（ａ）クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムのような、一つまたはそれより多くの不活性賦形剤（または担体）；（ｂ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸のような、充填剤または増量剤；（ｃ）カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシアのような、結合剤；（ｄ）グリセロールのような、湿潤剤；（ｅ）寒天（ａｇａｒ−ａｇａｒ）、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種の複合ケイ酸および炭酸ナトリウムのような、崩壊剤；（ｆ）パラフィンのような、凝固遅延剤；（ｇ）４級アンモニウム化合物のような、吸収促進剤；（ｈ）アセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートのような、湿潤剤；（ｉ）カオリンおよびベネトナイトのような吸着剤；および（ｊ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物のような、滑沢剤。カプセル剤、錠剤、丸剤（ピル）に関し、用量型は緩衝剤も含んでよい。
【００９９】
経口投与のための液体剤形は、医薬として受容可能な乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。活性抗体化合物に加え、液体剤形は、水または他の溶剤、可溶化剤および乳化剤のような、本技術で普通に使用される不活性希釈剤を含んでいてもよい。乳化剤の例はエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、綿実油、ピーナツ油、トウモロコシ油、オリーブ油、ひまし油およびゴマ油のような油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、あるいはこれらの物質の混合物などである。そのような不活性希釈剤の他、組成物はまた、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味剤、芳香剤および香料剤も含むことができる。
【０１００】
ＮＴＰを認識または結合する抗体を投与する別の方法は、経真皮または経皮経路によるものである。そのような態様の一つの例は、パッチの使用である。特に、パッチは、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはＤＭＳＯと綿実油の混合物中、抗体の細かい懸濁液で調製でき、ＮＴＰ含有組織が存在する位置から離れて、哺乳動物の皮膚と接触させる。組成物は皮膚窩内部に存在することができる。他の溶剤および固形支持体を含む、他の媒質またはそれらの混合物も同様に働くであろう。パッチは、溶液または懸濁液の形で抗体または抗体断片を含むことができる。パッチは次に、例えば、縫合糸、クリップまたは他の保持装置を一緒に使って、皮膚の折り重ねおよび把握により形成された患者の皮膚窩内へ挿入することにより、患者の皮膚へ適用できる。この窩は、哺乳動物に干渉されることなく、皮膚との連続的接触が保証されるような様式で用いなければならない。皮膚窩を使用する他に、皮膚と接触しているパッチの安定した配置を確実にする、いかなる装置も使用できる。例えば、皮膚上の同じ場所にパッチを保持するために粘着性包帯を使用することができる。
【０１０１】
本発明の組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の組成物および投与方法に対し、望まれる組織壊死を抑制する治療応答を得るために有効である、抗体含有組成物を得るために変化させうる。それ故、選択された投与量レベルは、望まれる治療効果、投与経路、望まれる処置の持続および他の因子に依存している。
【０１０２】
ヒトを含む哺乳動物では、有効量は体表面面積に基づいて投与できる。種々の大きさの動物、種およびヒトに対する投与量の相互関係（ｍｇ／体表面のＭ2に基づいて）はＥ．  Ｊ．  Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｒｅｐ．，  ５０（４）：２１９  （１９６６）により記載されている。体表面面積は、個体の身長および体重から大まかに決定することができる（例えば、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ，  Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ａｒｄｓｌｅｙ，  Ｎ．Ｙ．  ｐｐ．  ５３７−５３８  （１９７０）を参照されたい）。
【０１０３】
受容体へ投与される、ＮＴＰへ結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片の総日用量は、単一または分割量であることができる。投与量単位組成物は、日用量を構成するために使用することができるように、そのようなそれらの約数のそのような量を含むことができる。しかしながら、いかなる特定の患者の、特定の投与量レベルも、体重、全身の健康、性、食事、投与の時間および経路、投与される薬剤の強さ、吸収および排出の速度、他の薬剤との組み合わせ、および治療されている特定の疾患の重度を含む多様な因子に依存するであろう。
【０１０４】
本発明の抗体含有組成物は、好ましくは、ＮＴＰを有する生存脳組織を治療するため、抗体が血液脳関門を越えることを可能にする成分を含む。上述の多様な成分のいずれかを、抗体が血液脳関門を越えることを可能にするために使用する。例えば、抗体のほんの小さな結合部分または断片（例えば、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ'）2部分）を使用することができ、そのため断片は十分に小さいので、血液脳関門を越える。この場合、追加の成分は必要とされないであろう。
【０１０５】
抗体、抗体誘導体または抗体断片は、米国特許第５，２６０，３０８号に開示されているように、ｂｂｂの透過性を促進するために糖化されていてもよいし、または米国特許第４，９３３，３２４号およびＷＯ  ８９／０７９３８に開示されているようにプロドラッグを形成していてもよい。これらのプロドラッグは好ましくは、脂肪酸担体およびそれ自身ではｂｂｂを通過することが不可能であり、ＮＴＰを結合またはさもなくば認識する抗体から形成されている。
【０１０６】
別のアプローチは、マトリックス系から神経組織内へ直接的に抗体、抗体誘導体または抗体断片を放出する制御放出ポリマーの移植である（Ｓａｂｅｌら、米国特許第４，８８３，６６６号；およびＳａｂｅｌら、米国特許出願番号第０７／４０７，９３０号を参照されたい）。それはまた、リポソーム、赤血球ゴースト、抗体結合体およびモノクローナル抗体結合体のような薬剤担体システムを使用することが可能である。本発明のこの態様に従うと、ホスファチジルイノシトール、モノシアロガングリオシドまたはスルホガラクトシルセラミドのような、いわゆる「ステルス」脂質が、前記の抗体および抗体結合体を含有するリポソームを形成させるために使用できる。
【０１０７】
ＮＴＰへ結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片は、米国特許第５，１８２，１０７および５，１５４，９２４号に開示されているように、トランスフェリン受容体に反応性である別の抗体と結合することができる。トランスフェリン受容体は脳毛細管内皮細胞上に位置しており、よってそれはｂｂｂを通って、神経成長因子のような薬剤、またはＮＴＰに対して上昇されたような他の抗体を輸送する。上で説明した抗体−抗体結合体はさらに、米国特許第５，００４，６９７号およびＷＯ  ８９／０１３４３に開示されているように、特別の等電点を有する陽イオン化抗体を提供することにより、さらに促進できる。
【０１０８】
本発明の別の態様は、米国特許第４，８０１，５７５号に開示されているように、抗体、抗体誘導体または抗体断片が結合されているキメラペプチドを作製することを含む。キメラペプチドは、好ましくはヒストンであり、米国特許第４，９０２，５０５号に開示されているように、トランスサイトーシスによりｂｂｂを通過することが可能である。本発明のさらなる態様は、米国特許第４，８８０，８１６、５，１８７，１５８および５，０７１，５６６号に開示されているように、ドーパミンのようなジヒドロピリジン反応−ピリジン塩酸化還元担体の還元、生物酸化可能リポイド性形と一緒になった抗体、抗体誘導体または抗体断片を提供することを含む。
【０１０９】
抗体、抗体誘導体または抗体断片を脳へ搬送するために別のアプローチもとることができる。これは、米国特許第４，８６６，０４２号に開示されているように、ｂｂｂを化学的に崩壊させ、次に、ウイルスを使用してｂｂｂを通過して抗体、抗体誘導体または抗体断片を搬送する。ここで、矯正的遺伝子材料をウイルス内へ取り込ませ、そして次にウイルスを血流内へ注射することが好ましい。ｂｂｂを通過して抗体、抗体誘導体または抗体断片を搬送するために使用できるさらに別の担体系は、Ｆ．  Ｄ．  ＣｏｌｌｉｎｓおよびＲ．  Ｃ．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（ＷＯ  ９１／０４０１４）により開示されているような、リポソームの使用である。ここで、リポソームは、好ましくは、ｂｂｂを通過して特異的リガンドを輸送する、特異的内因性脳輸送系を標的にしている。表面活性剤被覆ナノ粒子もまた、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第６，１１７，４５４号に開示されているように、ｂｂｂを通る透過を促進させるため、本発明の抗体、抗体誘導体または抗体断片に対する、薬剤担体（または標的化分子）として使用できる。
【０１１０】
別のアプローチは、ｂｂｂを通した抗体、誘導体または断片の輸送を可能にするため、抗体、抗体誘導体または抗体断片の血漿レベルを減少させるＬ−アミノ酸オキシダーゼを使用することである。そのようなアプローチは、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第５，６９５，７５１号により詳細に記載されている。
【０１１１】
本発明に従った別のアプローチは、抗体、誘導体または断片を含んでなる組成物を局所的に投与することである。組成物の脳の内部への投与に有用な装置は、例えば、その開示全体が本明細書において援用される米国特許第５，８００，３９０号に記載されている。徐放性放出、固形製剤および半固形製剤は脳へ直接的に投与できる。そのような投与は、ガイドの遠位末端が投与部位に位置するように、随意に頭に移植されるそのような脳内装置の針様部材を挿入することにより達成できる。
【０１１２】
ＮＴＰの存在に起因する細胞死および／または組織壊死により起こされる状態を患っている哺乳動物へ投与するための、本発明の好ましい組成物は、ＮＴＰを認識する抗体、抗体誘導体および／または抗体断片、並びに抗体、誘導体または断片がｂｂｂを通過することを可能にする成分を含む。本発明の他の好ましい組成物は、抗体、抗体誘導体および／または抗体断片を発現する遺伝子、並びに遺伝子がｂｂｂを通過することを可能にする成分を含む。本発明のさらに好ましい組成物は、抗体、抗体誘導体および／または抗体断片の発現を誘導するワクチン、並びにワクチンがｂｂｂを通過することを可能にする成分を含む。
【０１１３】
ＮＴＰを含有する生存組織と接触する抗体、抗体誘導体または抗体断片の量が、ＮＴＰにより起こされる細胞死および／または組織壊死を抑制する、防止するおよび／または回復するのに十分であることが、本発明で好ましい。具体的な量は、本明細書に提供されたガイドラインを使用して当業者が決定できる。抗体が存在せず、およびＮＴＰにより起こされる細胞死が抑制されない（ｕｎｃｈｅｃｋｅｄ）対照と比較した場合、５０％より多くまで細胞死または組織壊死を減少させるように、十分な抗体、抗体誘導体または抗体断片が投与されることが好ましい。より好ましくは、抗体が存在せず、およびＮＴＰにより起こされる細胞死または組織壊死が抑制されない対照と比較した場合、６０％より多くまで、さらにより好ましくは７０％より多くまで、そして最も好ましくは７５％より多くまで、細胞死または組織壊死を減少させるように、抗体、抗体誘導体または抗体断片が投与される。
【０１１４】
そのような量は、特定の型の組織、使用される抗体、抗体誘導体または抗体断片、ならびにＮＴＰの量に依存して不変であろう。前記の米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８，８８８、５，８３０，６７０および６，０７１，７０５号のいずれかに開示されている方法を使用し、存在するＮＴＰの相対量を見積もることができ、そして次に、前記の米国特許に開示されているもののような、種々の起源から得られた哺乳動物組織を使用して一連のインビトロ実験を実施し、組織中のＮＴＰ量を決定し、そして次に、必要な程度の細胞死または組織壊死防止（即ち、好ましくは、対照と比較した場合に６０％より多くまで）を得るのに必要とされる、ＮＴＰへ結合する抗体、抗体誘導体または抗体断片の必要量を決定する。当業者は、本技術分野で既知の技術を使用して、ならびに本明細書で提供されたガイドラインを使用して、過度の実験をせずに、これらの実験を実行可能である。
【０１１５】
ＮＴＰ含有組織を有する哺乳動物へ投与されるべき抗体、抗体誘導体または抗体断片の量は、次に、哺乳動物の体重、および組織への期待される搬送量に基づいて容易に決定できる。哺乳動物の脳組織へ搬送されると期待されるであろう抗体、抗体誘導体または抗体断片の量は、抗体、抗体誘導体または抗体断片をｂｂｂ通過可能にするために用いられる特定の機構に依存するであろう。抗体、誘導体または断片を発現する遺伝子の投与に対して、または抗体、誘導体または断片の発現または産生を誘導するワクチンの投与に対しても、同じことがあてはまる。重ねて、当業者は、全体が本明細書において援用される前記の特許に記載されている技術を使用して、および本明細書で提供されたガイドラインを使用して、哺乳動物へ投与される遺伝子、ワクチン、抗体、抗体誘導体または抗体断片の適切な用量を、過度の実験をせずに、決定することが可能である。
【０１１６】
以下の実験は本発明を例示するために提供される。しかしながら、本発明はこれらの実施例に記載されている特定の状態または細部に限定されるわけではなことを理解しなければならない。
【実施例】
【０１１７】
実施例１
この実施例はＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの存在による生存組織（インビボ）での細胞死を示している。
【０１１８】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは米国特許第５，９４８，６３４、５，９４８、８８８、５，８３０，６７０および６，０１７，７０５号のいずれか一つに概説されている方法に従って得た。
【０１１９】
８匹の正常ラットの皮膚および皮下（各々３つの異なった病巣）に、ステンレス鋼２６ゲージ針を通してプラスチック注射筒から搬送された、０．１−１．０μｇ／ｍＬの濃度の、精製組換えＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ食塩溶液を注射した。
【０１２０】
動物を２４時間観察し、２４時間で無痛的に殺した。２４の個々の浸潤病巣を切り出し、１０％ホルマリンに固定し、パラフィンに埋め込み、そして染色し、そして標準組織病理学的方法により試験した。
【０１２１】
対照ラットの同様の群には（１）ウシ血清アルブミン食塩溶液、（２）正常ヒト血清、および（３）生理食塩水を注射し、そして上記のように試験しおよび殺し、切り出された注射病巣を上記のように処理した。
【０１２２】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの注射はすべての例で、注射部位での組織の急性壊死を生み出した（図１−４）。図１−４は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの注射により誘導された組織病理学的病変を示している顕微写真である。壊死が、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰが注射された部位の筋肉組織、皮下結合組織および真皮で明らかである。２４時間で、細胞は蒼白、萎縮的、および壊死的に見え、そして炎症性細胞の浸潤がある。壊死は注射領域と相関しており、そして注射部位を越えて遠くへは拡がらないと思われる。
【０１２３】
対照は、壊死または細胞死の証拠を示さなかった。対照注射は、軽いから極微の急性炎症、および針からの局在性微少出血を示した。
実施例２
この実施例は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含む組織へ抗体を投与することによる、生存細胞（インビボ）の壊死の防止および／または抑制を示している。
【０１２４】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰに対する抗体は、ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ，  ＳＭら，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；  ５５：  １０３８−１０５０  （１９９６）に記載されているようなモノクローナル抗体Ｎ３１４から成っていた。
【０１２５】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは実施例１で上に記載したように得られた。
組換えＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ試料１００ｎｇ／ｍＬ−１０μｇ／ｍＬを、Ｎ３１４抗体と室温で５分から１時間インキュベートし、次に実施例１に記載したようにラット内へ注射した。
【０１２６】
動物を２４時間観察し、２４時間で無痛的に殺した。２４の個々の浸潤病巣を切り出し、１０％ホルマリンに固定し、パラフィンに埋め込み、そして染色し、そして標準組織病理学的方法により試験した。
【０１２７】
対照ラットの同様の群には（１）実施例１に記載したようにＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独、（２）ウシ血清アルブミン食塩溶液、（３）正常ヒト血清、および（４）生理食塩水を注射し、そして上記のように試験しおよび殺し、切り出された注射病巣を上記のように処理した。
【０１２８】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独の対照注射は、実施例１に記載し、および図１−４に示されたように、組織壊死を生み出した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、正常ヒト血清、および生理食塩水の対照注射はすべて、壊死または細胞死の証拠を示さなかった。上記対照注射は、軽いから極微の急性炎症、および針からの局在性微少出血を示した。
【０１２９】
Ｎ３１４抗体と一緒に注射したＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ試料は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独で注射した対照試料と比較した場合、組織壊死において９５％を超える減少を示した。たまに微結節形成を有する炎症性細胞病巣の局所的結節が存在したが、それは恐らく、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰおよびＮ３１４の凝集であるように思われる。総合的な組織損傷は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰでのみ注射された対照と比較した場合、Ｎ３１４抗体の投与により＞９５％まで減少した。
【０１３０】
本発明は特定の好ましい態様および実施例を参照して詳細に説明されてきたが、当業者は、本発明の精神および範囲から離れることなく、本発明に多様な修飾を行うことができることを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】図１はＮＴＰの注射により誘導された組織病理学的病変の顕微写真である。
【図２】図２はＮＴＰの注射により誘導された組織病理学的病変の顕微写真である。
【図３】図３はＮＴＰの注射により誘導された組織病理学的病変の顕微写真である。
【図４】図４はＮＴＰの注射により誘導された組織病理学的病変の顕微写真である。
【図５】図５は１２２アミノ酸神経スレッドプロテインの完全アミノ酸配列を示している（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列４０；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４７）。
【図６】図６は１１２アミノ酸神経スレッドプロテインの完全アミノ酸配列を示している（ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＸＰ＿０３２３０７）。
【図７】図７はＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤ  ｇ１５９２８９７１に挙げられている１０６アミノ酸神経スレッドプロテインを示している。
【図８】図８はＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＸＰ＿０３９１０２  ＰＩＤ  ｇ１８５９９３３９に挙げられている１０６アミノ酸神経スレッドプロテインを示している。
【図９】図９は９８アミノ酸神経スレッドプロテインの完全アミノ酸配列を示している（米国特許第５，８３０，６７０号からの配列３０；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ１３６１２）。
【図１０】図１０は７５アミノ酸神経スレッドプロテインの完全アミノ酸配列を示している（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列４８；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４８）。
【図１１】図１１は６８アミノ酸神経スレッドプロテインの完全アミノ酸配列を示している（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列３６；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＥ２５４４６）。
【図１２】図１２は６１アミノ酸神経スレッドプロテイン様タンパク質の完全アミノ酸配列を示している（ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−Ｐｒｏｔｅｉｎ寄託番号ＡＡＨ０２５３４）。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004528367.tif 000065
2004528367.tif 000066
【国際調査報告】
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2004528367.tif 000068
2004528367.tif 000069
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