(57)【要約】本発明は、ヒトウイルス感染およびそれに関連する症状の増悪の治療のためのＩＬ−８受容体アンタゴニストの新規使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト・ライノウイルス感染、他のエンテロウイルス感染、ヘルペスウイルス感染、コロナウイルス感染、インフルエンザウイルス感染、パラインフルエンザウイルス感染、ＲＳウイルス感染またはアデノウイルス感染により引き起こされる感冒の総体症状の治療を必要とするヒトにおけるかかる治療方法であって、該ヒトに有効量のＩＬ−８受容体アンタゴニストを投与することを含む方法。
【請求項２】
呼吸器ウイルス感染が喘息を増悪させる請求項１記載の方法。
【請求項３】
呼吸器ウイルス感染が慢性気管支炎を増悪させる請求項１記載の方法。
【請求項４】
呼吸器ウイルス感染が慢性閉塞性肺疾患を増悪させる請求項１記載の方法。
【請求項５】
呼吸ウイルス感染が中耳炎を増悪させる請求項１記載の方法。
【請求項６】
呼吸器ウイルス感染が副鼻腔炎を増悪させる請求項１記載の方法。
【請求項７】
呼吸器ウイルス感染が中耳炎、副鼻腔炎または肺炎のような二次細菌感染に関連している請求項１記載の方法。
【請求項８】
ＩＬ−８受容体アンタゴニストを第二の治療薬と共に投与する請求項１〜７いずれか１項記載の方法。
【請求項９】
第二の治療薬が抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、うっ血除去薬、ステロイド、抗生物質、および抗炎症薬からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項１０】
治療薬を経口投与、バッカル投与、局所（鼻腔内）投与、もしくは吸入（エアゾール）による投与、または局所投与および吸入による投与の両方により投与する請求項１〜９いずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
化合物を第二の治療薬と共に投与する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
第二の治療薬が抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、うっ血除去薬、ステロイド、抗生物質、および抗炎症薬からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ＩＬ−８受容体アンタゴニストが
米国特許第５８８６０４４号、第５７８０４８３号、第６００５００８号、第５９２９２５０号、第６０１５９０８号もしくは第５９１９７７６号；米国出願第０９／１１１６６３号、第０９／１２５２７９号、第０９／２４０３５４号、第０９／２０２５７０号、第０９／２０２５８６号、第０９／２０２５６９号、第０９／２０２５６８号、第０９／２３０１２０号、第０９／２３０２９０号、第０９／２３０９５２号、第０９／２３０９７７号、第０９／２３０９８１号、第０９／２３０９８０号、第０９／２４２１８７号、第０９／３４１３７８号、第０９／３４１３８２号、第０９／３４１２６２号、第０９／４６３６７３号、第０９／５０８０３９号もしくは第０９／４８６９８６号；ＷＯ ９９／６５３１０、ＷＯ ００／１２４８９、ＷＯ ００／０９５１１、ＷＯ ９９／４２４６４、ＷＯ ９９／４２４６３、ＷＯ ９９／４２４６１、ＷＯ ００／０５２１６、ＷＯ ９９／３６０６９、ＷＯ ９９／３６０７０もしくはＷＯ ００／０６５５７；ＰＣＴ／ＵＳ９９／２３７７６もしくはＰＣＴ／ＵＳ９９／２９９４０；または米国仮出願第６０／１３４７２８号、第６０／１３６６６６号、第６０／１３６６６５号、第６０／１３６７１７号、第６０／１３６６６７号、第６０／１３９６７５号、第６０／１３９６８０号、第６０／１３９６７８号、第６０／１３９６７３号、第６０／１４００２４号、第６０／１３９６７７号、第６０／１３９６７４号、第６０／１４００２５号、第６０／１４５７５６号、第６０／１６４３５０号、第６０／１８６２３９号、第６０／１８６１８３号、第６０／１８６１８２号、第６０／１８８４１０号、第６０／１８８２４３号、第６０／１８９１７６号、第６０／１８９１７５号、第６０／１８９８４８号、第６０／１９２１３２号もしくは第６０／１９６０２２号
に開示されている化合物から選択される請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ウイルス感染の治療におけるＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２およびＥＮＡ−７８モジュレーターの使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
最もよくある感冒の原因であるヒト・ライノウイルス（ＨＲＶ）は、喘息、慢性気管支炎、ＣＯＰＤ、中耳炎、および副鼻腔炎の増悪を包含する、より重大な後遺症とますます関連している。ウイルス検出の面で補助するためにＰＣＲを用いた、成人および青年期の人における最近の公表された研究により、喘息増悪の５０〜８０％までが上気道ウイルス感染に関連すること、および該ライノウイルスが最も一般的なかぜウイルスであることが示された。
【０００３】
ＨＲＶは、鼻の上皮細胞に感染する。最近の証明は、該ウイルスがまた気管支上皮に感染しうることを示唆している。感染後２４時間以内に風邪の前駆症状が現れ、２〜５日目にピークとなり、７〜１４日以内に消散する。しかしながら、個体によってはこの影響がさらに長引くことがある。該ウイルスを除去できるが一方、症状は続くことが多い。上気道上皮細胞の小さなフラクションだけが感染されているのは明白であり、上皮細胞損傷は最小であるので、症状は急性細胞障害作用よりも感染に対する宿主の応答に起因すると考えられる。ライノウイルスに感染した正常な個体では、キニン、ＩＬ−１、ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＩＬ−１１および好中球の鼻腔内レベルの増加が見られる。鼻分泌物中のＩＬ−８の濃度と局所ミエロペルオキシダーゼレベルおよび症状の重篤度との相関関係がいくつかの最近の研究において証明された。同様に、ＩＬ−１およびＩＬ−６の鼻腔内濃度は、症状の重篤度と相関関係にあった。実験的ライノウイルス感染は、また、即時および遅延相アレルギー反応を亢進させ、Ｔリンパ球および好酸球の下気道への浸潤を増大させる。アトピー患者および喘息患者において、これらの影響は、感染後２ヶ月間まで続く。ヒト気管支上皮細胞系がライノウイルス感染に応答してＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１およびＧＭ−ＣＳＦを産生することが示されている。したがって、ライノウイルス感染上皮細胞によるサイトカインの初期産生は、好中球、Ｔ細胞および活性好酸球の上気道および下気道への動員を誘発する原因となる。
【０００４】
加えて、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＩＬ−８は、また、感冒および関連後遺症を引き起こし得る他の呼吸器ウイルス（インフルエンザ、ＲＳウイルス）の感染に応答しても産生される。
【０００５】
インターロイキン−８（ＩＬ−８）に対しては、好中球誘引／活性化タンパク質−１（ＮＡＰ−１）、単球由来好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）、好中球活性化因子（ＮＡＦ）、およびＴ細胞リンパ球走化性因子などの、多くの異なる名称が使われている。インターロイキン−８は、好中球、好塩基球、およびＴ−細胞のサブセットに対する化学誘引物質である。これは、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはＬＰＳに曝露されたマクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞および上皮細胞を含むほとんどの有核細胞により、およびＬＰＳまたはＦＭＬＰのような走化性因子に曝露された場合には好中球自体により産生される。Ｍ． Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ８４， １０４５ （１９８９）；Ｊ． Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３９， ３４７４ （１９８７） および Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４４， ２２２３ （１９９０）；Ｓｔｒｉｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３， １４６７ （１９８９） および Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４， １０６２１ （１９８９）；Ｃａｓｓａｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８， ３２１６ （１９９２）。
【０００６】
ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２もまたケモカインファミリーに属する。ＩＬ−８と同様に、これらのケモカインもまた様々な名称で呼ばれてきた。例えば、ＧＲＯα、β、γは、各々、ＭＧＳＡα、βおよびγと称されてきた（黒色腫増殖刺激活性）。Ｒｉｃｈｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ １２９， ３７５ （１９８６） および Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８， ４５１ （１９９２） を参照のこと。ＣＸＣモチーフの直ぐ前にＥＬＲモチーフを有するα−ファミリーのケモカインは、全て、ＩＬ−８Ｂ受容体（ＣＸＣＲ２）に結合する。
【０００７】
ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、およびＥＮＡ−７８は、インビトロで多くの機能を刺激する。それらはすべて好中球に対する化学誘引性を有することが示されているが、ＩＬ−８およびＧＲＯαはＴ−リンパ球および好塩基球走化性を示した。加えて、ＩＬ−８は正常な個体由来およびアトピー性個体由来の両方の好塩基球からのヒスタミン放出を誘発しうる。ＧＲＯ−αおよびＩＬ−８はさらに、好中球からのリソソーム酵素放出および呼吸バーストを誘発しうる。ＩＬ−８はまた、新たにタンパク質を合成することなく、好中球上でのＭａｃ−１（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）の表面発現を増加させることが示されている。
【０００８】
インビトロで、 ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２は、７回膜貫通型Ｇ−タンパク質結合ファミリーの受容体と結合してそれを活性化することにより、特に、ＩＬ−８受容体、最も顕著には、ＩＬ−８β受容体（ＣＸＣＲ２）と結合することにより、好中球形状変化、走化性、顆粒放出および呼吸バーストを誘発する。Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６６， １４８３９ （１９９１）；および Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３， １２７８ （１９９１）。
【０００９】
２つの高親和性ヒトＩＬ−８受容体（７７％相同性）が特徴付けられている：ＩＬ−８ＲＡはＩＬ−８のみと高親和性をもって結合し、ＩＬ−８ＲＢはＩＬ−８に対して、ならびにＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２に対して高親和性を有する。Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．， 上掲；Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３， １２８０ （１９９１）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６７， １６２８３ （１９９２）；ＬａＲｏｓａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６７， ２５４０２ （１９９２）；および Ｇａｙｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８， ７２８３ （１９９３） を参照のこと。
【００１０】
ウイルス感染により生じる上皮細胞の生化学プロセスの妨害は、ＩＬ−８受容体アンタゴニストに対する実行可能な新しい治療標的である。本発明は、この治療標的の治療の新規発見に関する。
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、ケモカインがＩＬ−８ＡまたはＢ受容体と結合するものであるケモカイン媒介疾患の治療方法であって、有効量のＩＬ−８受容体アンタゴニストまたはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、ヒト・ライノウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、およびアデノウイルスを包含するがこれらに限定されないウイルス感染の、根底にある症状の予防および防止／その重篤度の軽減を包含する治療を必要とするヒトにおけるかかる治療のためのＩＬ−８受容体アンタゴニストの使用であって、かかるヒトに有効量のＩＬ−８受容体アンタゴニストを投与することを含む方法に関する。
【００１２】
（発明の詳細な説明）
ＩＬ−８および他のサイトカインは、広範囲に及ぶ種々の細胞および組織に影響を及ぼし、これらのサイトカインおよび他の白血球由来サイトカインは、多くのウイルス感染の症状を引き起こす重要かつ決定的な炎症メディエーターである。これらのサイトカインの阻害は、呼吸器ウイルス感染のこれらの症状の多くを制御、軽減および緩和するのに有益である。加えて、本発明は、ヒト・ライノウイルス、他のエンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルスまたはアデノウイルスにより引き起こされるヒトにおけるウイルス感染により引き起こされる症状の治療に関する。加えて、本発明は、喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、中耳炎、および副鼻腔炎のような根底にある慢性症状を増悪させる呼吸器ウイルス感染に関する。また、ここで治療される呼吸器ウイルス感染が中耳炎、副鼻腔炎または肺炎のような二次細菌感染に関連していることがあることに注目すべきである。
【００１３】
本発明は、ＩＬ−８受容体アンタゴニストが呼吸器ウイルス感染に関連する症状の治療、および、とりわけ、喘息および中耳炎、ＣＯＰＤ、副鼻腔炎、慢性気管支炎などを包含する根底にある症状の増悪の防止／その重篤度の軽減に有用であることを示す。
【００１４】
適当なＩＬ−８阻害剤は、当該技術分野によく知られており、ＩＬ−８阻害を測定するためのアッセイもまた容易に利用可能である。例えば、米国特許第５８８６０４４号、第５７８０４８３号、第６００５００８号、第５９２９２５０号、第６０１５９０８号もしくは第５９１９７７６号；米国出願第０９／１１１６６３号、第０９／１２５２７９号、第０９／２４０３５４号、第０９／２０２５７０号、第０９／２０２５８６号、第０９／２０２５６９号、第０９／２０２５６８号、第０９／２３０１２０号、第０９／２３０２９０号、第０９／２３０９５２号、第０９／２３０９７７号、第０９／２３０９８１号、第０９／２３０９８０号、第０９／２４２１８７号、第０９／３４１３７８号、第０９／３４１３８２号、第０９／３４１２６２号、第０９／４６３６７３号、第０９／５０８０３９号もしくは第０９／４８６９８６号；ＷＯ ９９／６５３１０、ＷＯ ００／１２４８９、ＷＯ ００／０９５１１、ＷＯ ９９／４２４６４、ＷＯ ９９／４２４６３、ＷＯ ９９／４２４６１、ＷＯ ００／０５２１６、ＷＯ ９９／３６０６９、ＷＯ ９９／３６０７０もしくはＷＯ ００／０６５５７；ＰＣＴ／ＵＳ９９／２３７７６もしくはＰＣＴ／ＵＳ９９／２９９４０；または米国仮出願第６０／１３４７２８号、第６０／１３６６６６号、第６０／１３６６６５号、第６０／１３６７１７号、第６０／１３６６６７号、第６０／１３９６７５号、第６０／１３９６８０号、第６０／１３９６７８号、第６０／１３９６７３号、第６０／１４００２４号、第６０／１３９６７７号、第６０／１３９６７４号、第６０／１４００２５号、第６０／１４５７５６号、第６０／１６４３５０号、第６０／１８６２３９号、第６０／１８６１８３号、第６０／１８６１８２号、第６０／１８８４１０号、第６０／１８８２４３号、第６０／１８９１７６号、第６０／１８９１７５号、第６０／１８９８４８号、第６０／１９２１３２号もしくは第６０／１９６０２２号を参照のこと。
【００１５】
ＩＬ−８受容体アンタゴニストは、また、第二の治療薬と共に投与できる。第二の治療薬は、リバビリン、アマンチジン（ａｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、リマンチジン（ｒｉｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、リレンザ（ｒｅｌｅｎｚａ）、タミフル（ｔａｍｉｆｌｕ）、ＢＴＡ １８８、ＲＷＪ−２７０２１０（ＢＣＸ−１８１２）、ｓＩＣＡＭ−１、ｔＩＣＡＭ４５３、プレコナリル（Ｐｌｅｃｏｎａｒｉｌ）またはＡＧ７０８８のような抗ウイルス剤であってよい；それは、また、ベナドリル、クロルフェニラミンおよびその塩、ブロムフェニラミンまたはその塩などの抗ヒスタミン剤；フェニルプロパノールアミンおよびその塩、プソイドエフェドリンまたはその塩などのうっ血除去薬；デキサメタゾン、プレドニゾン、またはプレドニゾロンなどのステロイド；キノロン、セファロスポリン、β−ラクタマーゼ阻害剤などの種々の抗生物質；ＣＳＡＩＤＳ、ＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２阻害剤、ＡＳＡ、またはインドメタシンなどの抗炎症薬であってもよい。
【００１６】
治療方法
当該ＩＬ−８受容体アンタゴニストまたはその医薬上許容される塩は、限定されないが単球および／またはマクロファージ、またはＩ型もしくはＩＩ型受容体とも称されるＩＬ−８ＡもしくはＢ受容体と結合する他のケモカインのような、哺乳動物の細胞による過剰または未調節のＩＬ−８サイトカイン産生により増悪するかまたは引き起こされるヒトまたは他の哺乳動物におけるウイルス感染の症状または後遺症の予防的または治療的処置用医薬の製造において使用することができる。
【００１７】
したがって、本発明は、ケモカインがＩＬ−８ＡまたはＢ受容体と結合するものであるウイルス感染の治療方法であって、有効量の当該阻害剤またはその医薬上許容される塩を投与することを含む方法を提供する。特に、ケモカインは、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２またはＥＮＡ−７８である。
【００１８】
治療において当該ＩＬ−８受容体アンタゴニストまたはその医薬上許容される塩を使用するためには、それは、通常、標準的な製薬プラクティスに従って医薬組成物に処方される。したがって、本発明は、また、有効な非毒性量の当該ＩＬ−８受容体アンタゴニストおよび医薬上許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００１９】
当該ＩＬ−８受容体アンタゴニスト、その医薬上許容される塩およびそれを配合する医薬組成物は、好都合には、薬物投与に慣用的に使用される経路のいずれか、例えば、経口投与、局所投与、バッカル投与、非経口投与または吸入による投与により投与できる。それらは、慣用的な方法に従って当該化合物を標準的な医薬担体と配合することにより調製される慣用的な投与剤形で投与できる。それらは、また、公知の第二の治療上活性な化合物と合わせて慣用的な投与剤形で投与できる。これらの方法は、所望の製剤に適当な、成分の混合、造粒および圧縮または溶解を含む。医薬上許容される担体または希釈剤の形態または特性は、配合されるべき活性成分の量、投与経路および他の周知の変数により決定される。担体（複数も可）は、処方物の他の成分と適合し、かつ、その受容者に有害ではないという意味で「許容」されなければならない。
【００２０】
使用される医薬担体は、例えば、固体または液体のいずれであってもよい。固体担体の例は、ラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸および同種のものである。液体担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、水および同種のものである。同様に、担体または希釈剤は、単独またはワックスと一緒にモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンのような当該技術分野でよく知られている時間遅延物質を含んでもよい。
【００２１】
広範囲に及ぶ種々の医薬剤形を使用することができる。かくして、固体担体を使用する場合、該製剤は、錠剤化できるか、散剤もしくはペレット剤の剤形でハードゼラチンカプセル中に入れることができるか、または、トローチ剤またはロゼンジ剤の剤形である。固体担体の量は、広範囲にわたる値をとるが、好ましくは、約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体を使用する場合、該製剤は、シロップ剤、乳剤、ソフトゼラチンカプセル剤、アンプル剤のような無菌注射用液剤または非水性液体懸濁剤の剤形である。
【００２２】
当該アンタゴニストは、局所投与、すなわち、非全身投与により投与できる。これは、表皮または口腔への当該化合物の外用、ならびにかかる化合物の耳、目および鼻への滴下を包含しており、その結果、当該化合物は、血流に有意に進入しない。これに対して、全身投与は、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与および筋肉内投与を表す。
【００２３】
局所投与に適した処方物としては、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤またはペースト剤のような皮膚を介する炎症部位への浸透に適した液体または半液体製剤、および耳または鼻への投与に適した滴剤、吸入に適した液剤または懸濁剤が挙げられる。活性成分は、局所投与については、処方物の０．００１％〜１０％ｗ／ｗ、例えば、１重量％〜２重量％を含むことができる。しかしながら、処方物の１０％ｗ／ｗまで含むことができるが、好ましくは、処方物の５％ｗ／ｗ未満、より好ましくは、０．１％〜１％ｗ／ｗを含む。
【００２４】
本発明によるローション剤としては、皮膚または目への適用に適したものが挙げられる。眼ローション剤は、殺菌剤を含有していてもよい無菌水性溶液を含むことができ、滴剤の調製方法と類似の方法により調製できる。皮膚への適用のためのローション剤またはリニメント剤は、また、アルコールまたはアセトンのような皮膚を速乾させ冷却させる薬剤、および／またはグリセロールまたはヒマシ油もしくは落花生油などの油のような保湿剤を包含してもよい。
【００２５】
本発明によるクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤は、外用のための活性成分の半固体処方物である。それらは、適当な機械により、微細または微粉砕形態の活性成分を単独でまたは水性または非水性流体中の溶液または懸濁液中で油脂性または非油脂性基剤と混練することにより調製できる。該基剤は、固形パラフィン、ソフトパラフィンもしくは流動パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石鹸のような炭化水素；漿剤；扁桃油、トウモロコシ油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油のような天然起源の油；羊毛脂もしくはその誘導体またはステアリン酸もしくはオレイン酸のような脂肪酸をプロピレングリコールまたはマクロゴールのようなアルコールと一緒に含んでもよい。該処方物は、ソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体の如き陰イオン性、陽イオン性または非イオン性界面活性剤のような適当な界面活性剤を配合してもよい。天然ガム、セルロース誘導体または珪酸性シリカの如き無機物質のような懸濁化剤、およびラノリンのような他の成分を含んでもよい。
【００２６】
本発明の滴剤は、無菌水性または油性溶液または懸濁液を含むことができ、殺菌剤および／または殺真菌剤および／または他の適当な保存剤の、好ましくは、界面活性剤を含む、適当な水溶液に活性成分を溶解することにより調製できる。次いで、得られた溶液を濾過により浄化し、適当な容器に移し、次いで、密封し、オートクレーブ処理するかまたは９８〜１００℃で半時間維持することにより滅菌することができる。別法としては、該溶液を濾過滅菌し、無菌技法により容器に移すことができる。滴剤に包含させるのに適当な殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝酸フェニル水銀または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油性溶液の調製に適した溶媒としては、グリセロール、希アルコールおよびプロピレングリコールが挙げられる。
【００２７】
当該アンタゴニストは、非経口投与、すなわち、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、鼻腔内投与、直腸内投与、膣内投与または腹腔内投与により投与できる。皮下および筋肉内の非経口投与剤形が一般的に好ましい。かかる投与に適当な投与剤形は、慣用技術により調製できる。当該アンタゴニストは、また、吸入により、すなわち、鼻腔内投与および経口吸入投与により投与できる。エアゾール処方物または定量型吸入器のようなかかる投与に適当な投与剤形は、慣用技術により調製できる。
【００２８】
当該アンタゴニストについて本明細書に開示した全ての使用方法について、１日経口投与計画は、好ましくは、全体重の１ｋｇ当たり約０．０１〜約８０ｍｇである。１日非経口投与計画は、全体重の１ｋｇ当たり約０．００１〜約８０ｍｇである。１日局所投与計画は、好ましくは、０．１ｍｇ〜１５０ｍｇであり、１日１〜４回、好ましくは、１日２回または３回投与される。１日吸入投与計画は、好ましくは、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。当該アンタゴニストまたはその医薬上許容される塩の最適な量および個々の投与間隔が治療される症状の性質および程度、投与剤形、投与経路および投与部位、ならびに治療される特定の患者により決定されること、およびかかる最適値が慣用技術により決定できることは当業者により認識されるであろう。最適な治療単位、すなわち、所定の日数の間、１日当たりに投与される当該化合物またはその医薬上許容される塩の投与回数は、慣用の治療単位決定試験を使用して当業者により確定され得ることも当業者により認識されるであろう。
【００２９】
ここで、単に例示的であり、本発明の範囲を限定しようとするものではない以下の生物学的実施例を引用して本発明を記載する。
【００３０】
生物学的実施例
本発明の化合物のＩＬ−８、およびＧＲＯ−αケモカイン阻害効果を以下のインビトロアッセイにより測定する：
【００３１】
受容体結合アッセイ
比活性が２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌである［１２５Ｉ］ＩＬ−８（ヒト組換体）をイリノイ州アーリントン・ハイツのアマシャム・コーポレイション（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｃｏｒｐ．）から入手する。ＧＲＯ−αをエヌイーエヌ−ニュー・イングランド・ニュークリア（ＮＥＮ−Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ）から入手する。他の薬品はすべて分析用である。すでに開示されているようにして（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９１， ２５３， １２７８）、高レベルの組換えヒトＩＬ−８αおよびβ型受容体を、個別に、チャイニーズハムスター卵巣細胞において発現させた。すでに開示されているプロトコル（Ｈａｏｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２４９， ｐｐ ２１９５−２２０５ （１９７４））に従って、チャイニーズハムスター卵巣膜をホモジナイズした。ただし、ホモジナイゼーション緩衝液を１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１ｍＭ ＰＭＳＦ（α−トルエンスルホニルフルオリド）、０．５ｍｇ／Ｌ ロイペプチン、ｐＨ７．５に変更する。膜タンパク質濃度を、標準としてウシ血清アルブミンを用いるピアス・カンパニー（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏ．）のミクロアッセイキットを用いて測定する。全てのアッセイは、９６−ウェルマイクロプレート様式で行う。各反応混合物は、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、２５ｍＭ Ｎａおよび０．０３％ ＣＨＡＰＳを含有する２０ｍＭ ビス−トリスプロパンおよび０．４ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）中１２５Ｉ ＩＬ−８（０．２５ｎＭ）または１２５Ｉ ＧＲＯ−αおよび０．５μｇ／ｍＬのＩＬ−８Ｒαまたは１．０μｇ／ｍＬのＩＬ−８Ｒβ膜を含有する。加えて、あらかじめＤＭＳＯに溶解させて最終濃度を０．０１ｎＭ〜１００ｕＭにした目的の薬物または化合物を添加する。アッセイを、１２５Ｉ−ＩＬ−８の添加により開始する。室温で１時間後、Ｔｏｍｔｅｃ ９６−ウェルハーベスターを用いて１％ポリエチレンイミン／０．５％ ＢＳＡでブロックしたガラス繊維フィルターマット上にプレートを収穫し、２５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、１ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０３％ ＣＨＡＰＳ（Ｈ７．４）で３回洗浄する。次いで、フィルターを乾燥させ、Ｂｅｔａｐｌａｔｅ液体シンチレーションカウンターで計数する。組換えＩＬ−８ＲαまたはＩ型受容体は、また、本明細書において非許容受容体とも称され、組換えＩＬ−８ＲβまたはＩＩ型受容体は許容受容体と称される。
【００３２】
走化性アッセイ
これらの化合物のインビトロ阻害特性は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． Ｉ， Ｓｕｐｐｌ １， Ｕｎｉｔ ６．１２．３．（その記載内容は、全体として出典明示により本明細書の一部とする）に記載されているようにして好中球走化性アッセイで測定する。好中球をＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ． Ｉ， Ｓｕｐｐｌ １ Ｕｎｉｔ ７．２３．１（その記載内容は、全体として出典明示により本明細書の一部とする）に記載されているようにしてヒト血液から単離する。化学誘引物質ＩＬ−８、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γおよびＮＡＰ−２を０．１〜１００ｎＭの濃度で４８マルチウェルチャンバー（メリーランド州キャビン・ジョンのニューロ・プローブ（Ｎｅｕｒｏ Ｐｒｏｂｅ））の下部チャンバーに入れる。２つのチャンバーは５ｕＭポリカーボネートフィルターで隔てられている。本発明の化合物を試験する場合、細胞を上部チャンバーに添加する直前に、該化合物を細胞と混合する（０．００１−１０００ｎＭ）。インキュベーションは、５％ＣＯ２を有する加湿インキュベータ中にて約３７℃で約４５〜９０分間行う。インキュベーション期間の最後に、ポリカーボネート膜を取り出し、最上部を洗浄し、次いで、該膜を、Ｄｉｆｆ Ｑｕｉｃｋ染色プロトコル（アメリカ合衆国イリノイ州マックゴー・パークのバクスター・プロダクツ（Ｂａｘｔｅｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ））を用いて染色する。ケモカインに対して走化性を示した細胞を顕微鏡を用いて目視により計数する。一般に、各サンプルについて４つのフィールドを計数し、これらの数を平均して、移動した細胞の平均数を求める。各サンプルを三重試験にて試験し、各化合物を少なくとも４回繰り返し試験する。特定の細胞（正の対照細胞）には化合物を添加せず、これらの細胞は細胞の最大走化性応答を示す。負の対照（刺激しない）が望ましい場合には、ケモカインを下部チャンバーに添加しない。正の対照と負の対照との差異は、細胞の走化性活性を表す。
【００３３】
エラスターゼ放出アッセイ：
本発明の化合物を、ヒト好中球からのエラスターゼ放出を防止する能力について試験する。Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ． Ｉ， Ｓｕｐｐｌ １ Ｕｎｉｔ ７．２３．１．に記載されているようにしてヒト血液から好中球を単離する。リンゲル溶液（ＮａＣｌ １１８、ＫＣｌ ４．５６、ＮａＨＣＯ３ ２５、ＫＨ２ＰＯ４ １．０３、グルコース １１．１、ＨＥＰＥＳ ５ｍＭ、ｐＨ７．４）中に懸濁したＰＭＮ ０．８８×１０６細胞を、５０ｕｌの容量で９６ウェルプレートの各ウェルに入れる。このプレートに、５０ｕｌの容量の試験化合物（０．００１−１０００ｎＭ）、５０ｕｌ（２０ｕｇ／ｍｌ）の容量のシトカラシンＢおよび５０ｕｌの容量のリンゲル緩衝液を添加する。これらの細胞を５分間加温（３７℃、５％ ＣＯ２、９５％ ＲＨ）した後、最終濃度０．０１−１０００ｎＭのＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγまたはＮＡＰ−２を添加した。該反応を４５分間進行させた後、９６ウェルプレートを遠心分離し（８００×ｇ、５分）、上清１００ｕｌを取り出した。この上清を第２の９６ウェルプレートに添加し、次いで、リン酸緩衝生理食塩水に溶解した人工エラスターゼ基質（ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＡＭＣ、カリフォルニア州ラ・ジョラのノヴァ・ビオケム（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ））を最終濃度６ｕｇ／ｍｌになるように添加する。直ちに、プレートを蛍光９６ウェルプレートリーダー（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ ２３５０、マサチューセッツ州ベッドフォードのミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））に入れ、データをＮａｋａｊｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５４ ４０２７ （１９７９） の方法に従って３分間隔で集めた。ＰＭＮから放出されたエラスターゼの量を、ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＡＭＣ分解速度を測定することにより計算した。
【００３４】
ライウイルス法：
細胞系およびライノウイルス血清型３９をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から購入した。クローンティクス・コーポレーション（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ）から購入したＢＥＧＭ（気管支上皮増殖培地）を使用して、ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞をＡＴＣＣにより提供された指示書に従って培養した。ウイルスの検出および滴定に使用されるＨＥＬＡ細胞培養物を、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭ ｌ−グルタミン、および１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ＭＥＭ）を含有するイーグル最小必須培地中に維持した。
【００３５】
これらの研究において、ヒト気管支上皮細胞のライノウイルスによるインビトロ感染についての上掲のＳｕｂａｕｓｔｅ ｅｔ ａｌ．により報告された方法の一部を変更した方法を使用した。ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞（２×１０５／ウェル）を、ライノウイルスによる感染前に２４時間、コラーゲン被覆ウェル中にて培養した。細胞培養物にライノウイルス血清型３９を添加し、３４℃で１時間インキュベートした後、接種材料を新鮮な培地と取り替え、培養物を３４℃でさらに７２時間インキュベートした。感染後７２時間目に集めた上清を、市販のキット（アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））を使用してＥＬＩＳＡによりサイトカインタンパク質濃度についてアッセイした。ＨＥＬＡ細胞培養物における微量滴定アッセイ（Ｓｕｂａｕｓｔｅ ｅｔ ａｌ．， 上掲 １９９５）を使用して培養上清からのウイルス収量もまた測定した。ＩＬ−８阻害剤で処理した培養物において、感染の３０分前に薬物を添加した。化合物の貯蔵液をＤＭＳＯ中にて調製し（１０ｍＭ薬物）、−２０℃で貯蔵した。
【００３６】
ＩＬ−８阻害の検出について、培養物を、増殖因子および活性化ＩＬ−８の内在レベルを減少させる添加剤を含有しない基本培地中でインキュベートした。ライノウイルスの添加後の様々な時点で上清を収穫し、濃縮した。濃縮物をＳｕｐｅｒｏｓｅ６カラムにて分別した。上清を、５，０００の分子量をカットオフするＡｍｉｃｏｎ濃縮器を使用して＞５０倍に濃縮した。Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６サイズ分別カラムにシンゲル（ｓｉｎｇｅｌ）インジェクション（０．５ｍｌ）を添加し、シンゲル流速０．２ｍｌ／分で溶離した。０．５ｍｌフラクションを集め、ＦＵＲＡ−２を添加した新しく単離したヒトＰＭＮ中にてＣａ２＋動員活性についてアッセイした。
【００３７】
結果：
ＲＶ感染ＢＥＡＳ−２Ｂヒト上皮細胞から産生されたケモカインの特徴付け
静止条件下で、ヒトＢＥＡＳ−２Ｂヒト上皮細胞は、少量の、少なくとも３つの公知のヒトケモカイン、Ｇｒｏα、ＩＬ−８およびＥＮＡ−７８を産生した。これらの細胞をライノウイルスで感染させると、３つのＥＬＲケモカインの産生は、静止状態の６．６〜２０倍増加する（表１）。
【００３８】
【表１】
2004509852.tif 000002
【００３９】
ＨＲＶ−３９感染上皮細胞上清をｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラムにてサイズ排除分別法に付した場合、ヒト好中球（図ＩＩＩ）またはＣＸＣＲ１もしくはＣＸＣＲ２受容体のいずれかでトランスフェクトされた細胞系を使用してアッセイすると、Ｃａ２＋動員活性の単一ピークが得られる。好中球におけるＣａ２＋の動員は、ケモカイン、ＩＬ−８、ＥＮＡ−７８およびＧｒｏαの溶出と同一のフラクション中にて生じる。
【００４０】
本発明者らがＥＬＩＳＡキットを持っていない他のケモカインがＨＲＶ−３９感染ＢＥＡＳ−２Ｂから産生されるかを判定するために、ＢＥＡＳ−２Ｂ上清を、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３およびＣＣＲ５を包含する種々のケモカイン受容体を発現する他の新しく単離したヒト末梢細胞に対してアッセイした。Ｆｕｒａ−２添加した好酸球または末梢血単核細胞（ＰＢＬ）を使用してＢＥＡＳ−２Ｂ上皮細胞由来の上記活性フラクションをＣａ２＋動員についてアッセイすると、Ｃａ２＋を動員したフラクションはなかった。このことは、ＩＬ−８、ＧｒｏαおよびＥＮＡ−７８を除くケモカインがＣａ２＋動員を促進するのに有意な濃度で存在していないことを示している。
【００４１】
他のＰＭＮ活性化ケモカインの可能性およびＩＬ−８がＣＸＣＲ２を介してＰＭＮを活性化する可能性について判定するために、本発明者らは、Ｆｕｒａ−２添加ＰＭＮにおいて、ＩＬ−８受容体アンタゴニストの、ｇｒｏβ、濃縮したＢＥＡＳ−２Ｂ上清、またはｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラム分取により得られる活性フラクションにより誘発されるＣａ２＋動員を阻害する能力を判定した。図Ｉに示されるように、化合物−Ｘ用量は、依存的かつ完全に、ＲＶ濃縮上清およびｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラムからのケモカインを含有するフラクションを１．７〜２ｎＭのＩＣ５０をもって阻害した。このＩＣ５０は、Ｇｒｏβ単独で得られたＩＣ５０（ＩＣ５０＝５ｎＭ）と類似しており、該濃縮物またはフラクションに含まれるＣａ２＋動員活性の全てがＣＸＣＲ２受容体を介して作動していることを示している。
【００４２】
ＲＶ上清が単にＣＸＣＲ２受容体を介してのみ作動するかを判定するために、本発明者らは、濃縮ＲＶ上清およびＧｒｏβにより誘発されるＣａ２＋動員を阻害する能力に対して多数の選択的ＣＸＣＲ２アンタゴニストの順位相関を判定した。ＣＸＣＲ２アンタゴニストとそれらのＲＶおよびＧｒｏｂにより誘発されるＣａ２＋動員を阻害する能力との多岐にわたるセットについての優れた順位相関があり、これはＲＶ上清Ｃａ２＋動員活性が単にＰＭＮ上のＣＸＣＲ２受容体を介してのみ作動することを示している。
【００４３】
ＰＭＮ走化性の阻害はまた、濃縮されたＲＶ試料および分別されたＲＶ試料の両方において測定された。図ＩＩに示すように、走化性は、特異的なＣＸＣＲ２アンタゴニストにより阻害された。
【００４４】
これらの結果は、ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞が、ＣＸＣＲ２受容体を介して作用し、選択的ＣＸＣＲ２アンタゴニストによりブロックされ得る種々のＥＬＲケモカインを産生することを立証している。ＩＬ−８は、上清中に存在しているが、ＣＸＣＲ２アンタゴニストにより完全にブロックされる。これは、Ｇｒｏαと比較して低いレベルにすることは起こりえない。
【００４５】
本明細書にて引用した特許および特許出願を包含するがこれらに限定されない全ての刊行物は、個々の刊行物が十分に開示されているかの如く具体的かつ個別的に出典明示により本明細書の一部とすることが明示されているかのように出典明示により本明細書の一部とする。
好ましい実施態様を包含する上記記載事項は本発明を十分に開示する。本明細書に具体的に開示した実施態様の変更および改良は特許請求の範囲の範囲内に含まれる。さらに推敲することなく、当業者は上記記載事項を用いて本発明を最大限に利用することができると考えられる。したがって、本明細書における実施例は単に例示的であって、如何なる場合も本発明の範囲を制限するものではないと考えられる。排他的性質および優先権を主張する本発明の実施態様は特許請求の範囲に定義するとおりである。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＣＸＣＲ２アンタゴニストＸによるヒト好中球におけるＲＶまたはＧｒｏ−ベータ誘発性カルシウム動員の阻害を示すグラフ。
【図２】ＣＸＣＲ２アンタゴニストＸによるヒト好中球のＲＶ誘発性走化性の阻害を示すグラフ。
【図３】好中球におけるＲＶ、ｇｒｏα、ｇｒｏβ、およびｇｒｏβ−Ｔ誘発性カルシウム動員を示すグラフ。
【図１】
2004509852.tif 000003
【図２】
2004509852.tif 000004
【図３】
2004509852.tif 000005
【国際公開パンフレット】
2004509852.tif 000006
2004509852.tif 000007
2004509852.tif 000008
2004509852.tif 000009
2004509852.tif 000010
2004509852.tif 000011
2004509852.tif 000012
2004509852.tif 000013
2004509852.tif 000014
2004509852.tif 000015
2004509852.tif 000016
2004509852.tif 000017
2004509852.tif 000018
2004509852.tif 000019
2004509852.tif 000020
2004509852.tif 000021
2004509852.tif 000022
2004509852.tif 000023
2004509852.tif 000024
2004509852.tif 000025
2004509852.tif 000026
【国際調査報告】
2004509852.tif 000027