(57)【要約】神経細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する少なくとも１つの化合物を、治療を必要とする被験体に投与することを含む、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するための組成物及び方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、神経細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法。
【請求項２】
圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法。
【請求項３】
緑内障治療のための方法において、眼の神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法。
【請求項４】
脳圧上昇の作用の治療のための方法において、脳の神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法。
【請求項５】
末梢神経損傷の治療方法において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法。
【請求項６】
圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するための組成物において、神経細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物。
【請求項７】
緑内障の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物。
【請求項８】
脳圧上昇の治療のための組成物において、脳の神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物。
【請求項９】
末梢神経損傷の治療のための組成物において、末梢神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つの化合物が、ガドリニウム（Ｇｄ３＋）、ランタニド；神経細胞上のＧｄ３＋のアゴニスト（例えば、競合的結合分析により同定可能）；アミロライド及びその類似体などのピラジン−カルボキサミド（ベルダマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、ネチルマイシン、アミカシン、リボスタマイシン、ジベカシン及びカナマイシン）などのアミノグリコシド抗生物質；キニジン、シパトリジン及びＮａチャネル遮断薬、Ｃａチャネル遮断薬又はＫチャネル遮断薬を含むその他の遮断薬；Ｃａイオン；陽子；アルミニウムイオン；ツボクラリン；ハロタン及びその他の吸入麻酔薬；キニーネ；インテグリン−ブロッキングペプチド及び抗体、シスプラチン；タランチュラ蜘蛛毒；コルヒチン及びビンブラスチンから選択される請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの化合物が、ガドリニウム（Ｇｄ３＋）、ランタノイド；神経細胞上のＧｄ３＋のアゴニスト（例えば、競合的結合分析により同定可能）；アミロライド及びその類似体などのピラジン−カルボキサミド；ベルダマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、ネチルマイシン、アミカシン、リボスタマイシン、ジベカシン及びカナマイシンなどのアミノグリコシド抗生物質；キニジン、シパトリジン及びＮａチャネル遮断薬、Ｃａチャネル遮断薬又はＫチャネル遮断薬を含むその他の遮断薬；Ｃａイオン；陽子；アルミニウムイオン；ツボクラリン；ハロタン及びその他の吸入麻酔薬；キニーネ；インテグリン−ブロッキングペプチド及び抗体、シスプラチン；タランチュラ蜘蛛毒；コルヒチン及びビンブラスチンから選択される請求項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞死から、特には圧力に関連するアポトーシス細胞死から神経組織を防護するための方法及び組成物に関する。さらなる態様において、本発明は、圧力上昇に関連する緑内障、脳圧上昇及び末梢神経損傷の治療のための方法及び組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
神経組織又は神経細胞死は、人間社会における大きな医学上の問題である。眼の神経細胞死は、失明を引き起こし得る。緑内障は、眼における神経細胞アポトーシス死（ｎｅｕｒａｌ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｄｅａｔｈ）の主因であり、成人失明の主因である。緑内障は、高齢者における視力喪失の第三位の主要原因であり、５０歳を超える人口の約３％が影響を受ける。
【０００３】
神経細胞死は、ある範囲のその他の医学的症状に関連する。これらの医学的症状は、水頭症（ｈｙｄｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）、及びその他の脳／頭蓋疾患又は損傷を含む。脳神経細胞死は、精神的欠陥、運動機能の低下等を生じ得る。
【０００４】
例えば脊椎、足及び手における外傷又は外科的合併症からの末梢神経損傷は、アポトーシス細胞死を引き起こし得る。脊柱では、脊椎骨が神経幹を圧して、神経細胞死を生じ得る。手首のような末梢組織における骨及び結合組織圧は、アポトーシス性神経細胞死と、その結果、感覚的及び／又は運動的動きの欠如を引き起こし得る。
【０００５】
形態学的には、アポトーシスは、細胞質及び核の進行性凝縮と、その後の断片化及び他の細胞による食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）とにより特徴付けられる（Ｍａｊｉｎｏ ａｎｄ Ｊｏｒｉｓ， Ａｍ． Ｐａｔｈｏｌ．， １４６， ｐｐ．３−１５ （１９９５））。
【０００６】
アポトーシスのいくつかの既知の阻害剤が存在するが、アポトーシス性神経細胞死の治療のための有効な治療薬はない。これは、関与する明確なメカニズムの理解の欠如を反映している。
【０００７】
緑内障に関して、現在、眼圧を低減するいくつかの医薬品（ａｇｅｎｔｓ）が存在し、複合的成功（ｍｉｘｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓ）を収めている。このような医薬品の作用のメカニズムは議論の的になっており、結論が出ていない。緑内障は、依然としてヒト社会における失明の主因の１つである（失明の症例の約１５％を占める）。
【０００８】
同様に、上記のような水頭症、脊髄圧縮及び末梢神経細胞圧などの広範囲の症状に関連するアポトーシス性神経細胞死は、依然として重大な問題であり、利用可能な有効な（非外科的）治療薬はない。
【０００９】
【発明の概要】
本発明の第１の態様では、圧力誘導性アポトーシス細胞死（ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ）から神経組織を防護する方法において、細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する（ｂｌｏｃｋ）少なくとも１つの化合物を細胞に接触させることを含む方法が提供される。
【００１０】
別の態様では、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、神経細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１１】
別の態様では、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（ｓｔｒｅｔｃｈ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈａｎｎｅｌｓ）（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１２】
本発明の別の態様では、緑内障の治療のための方法において、眼の神経細胞に及ぼす圧力の作用を遮断する有効量の組成物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様では、緑内障の治療のための方法において、眼の神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１４】
本発明の別の態様では、脳圧上昇の作用の治療のための方法において、脳の神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１５】
本発明の別の態様では、末梢神経損傷の治療のための方法において、末梢神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００１６】
本発明のさらなる態様では、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する有効量の少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００１７】
本発明のさらなる態様では、緑内障の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００１８】
本発明のさらなる態様では、脳圧上昇の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００１９】
本発明のさらなる態様では、末梢神経損傷の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００２０】
【発明の実施の態様】
本発明は、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するための方法及び組成物を提供する。本発明は、神経細胞に及ぼす圧力上昇がアポトーシス細胞死を誘導するという知見に基づいている。本発明はまた、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する化合物が、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経細胞を防護する、という予期せぬ知見にも基づいている。
【００２１】
神経細胞に及ぼす圧力の作用は、例えば、ミトコンドリア及びＴ小管などの細胞膜に関連するもの及び／又は細胞内膜に関連するものなど、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する化合物の使用により遮断され得る。
【００２２】
別の態様において、本発明は、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、前記神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法に関する。
【００２３】
ストレッチ活性化チャネルは、種々の著者等により記述されており、機械電気変換（ｍｅｃｈａｎｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）に関連するとみなすことができる（Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２７８ （２）， Ｈ５４８ （２０００）参照）。ストレッチ活性化チャネル（ＳＡＣｓ）は、心筋細胞（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ）を含む種々の細胞中で見出される（Ｈｕ ａｎｄ Ｓａｃｈｓ， Ｊ． Ｍｅｍｂｒ． Ｂｉｏｌ．， １５４， ｐｐ．２０５−２１６ （１９９６）参照）。ストレッチ活性化チャネルの例としては、二孔ドメインＫ＋チャネル（Ｋ２Ｐ）のファミリーからのストレッチ活性化チャネルが挙げられるが、そのうちの８つが齧歯類及びヒトにおいてクローニングされている。以下の４種類が存在する。
・ＴＷＩＫ−１及びＴＷＩＫ−２（弱内向き整流性Ｋ＋チャネルにおけるＰドメインのタンデム（Ｔａｎｄｅｍ ｏｆ Ｐ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ Ｗｅａｋ Ｉｎｗａｒｄ ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ Ｋ＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ））は、弱内向き整流器（ｗｅａｋ ｉｎｗａｒｄ ｒｅｃｔｉｆｉｅｒｓ）である；
・ＴＲＥＫ−１（ＴＷＩＫ関連Ｋ＋チャネル）及びＴＲＡＡＫ（ＴＷＩＫ関連アラキドン酸（ＡＡ）で活性化されるＫ＋チャネル；ＴＷＩＫ−ｒｅｌａｔｅｄ Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ Ａｃｉｄ （ＡＡ）−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ｋ＋ ｃｈａｎｎｅｌ）は、ポリ不飽和脂肪酸（ＦＡ）及びストレッチ活性化Ｋ＋チャネルである（Ｍｅａｄｏｗｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ８９２， ｐｐ．９４−１０１ （２００１）参照）；
・ＴＡＳＫ−１及びＴＡＳＫ−２（ＴＷＩＫ関連酸感受性Ｋ＋チャネル；ＴＷＩＫ−ｒｅｌａｔｅｄ Ａｃｉｄ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｋ＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ）は、酸感受性Ｋ＋チャネルである；
・ＫＣＮＫ６及びＫＣＮＫ７は、活性になるための相手をおそらくは必要とする無症候性サブユニットである。
（Ｍａｉｎｇｒｅｔ Ｆ．， Ｐａｔｅｌ Ａ．Ｊ．， Ｌｅｓａｇｅ Ｆ．， Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ Ｍ．， Ｈｏｎｏｒｅ Ｅ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７５， ｐｐ．１０１２８−１０１３３ （２０００）， ”Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ｏｐｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ−ｐｏｒｅ ｄｏｍａｉｎ ｍｅｃｈａｎｏ−ｇａｔｅｄ Ｋ（＋） ｃｈａｎｎｅｌｓ ＴＲＥＫ−１ ａｎｄ ＴＲＡＡＫ”参照）。
【００２４】
ＴＲＡＡＫは、中枢神経系、脊髄及び網膜に制限されると思われる。ＴＲＥＫ−１は遍在的（ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）であり、中枢神経系中で強く発現される。ＴＲＥＫ−１及びＴＲＡＡＫはともに、膜ストレッチ、細胞膨張及び／又は剪断応力（すべて圧力が作用する）により開かれる外向き整流性Ｋ＋チャネルである。大気圧で、基礎活性はごくわずかであり、チャネルは原形質膜（ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ）の凸状湾曲（ｃｏｎｖｅｘ ｃｕｒｖａｔｕｒｅ）により開かれる。機械ゲーティング（ｍｅｃｈａｎｏ−ｇａｔｉｎｇ）は細胞骨格の完全性を必要とせず、活性化力は、見かけ上は細胞膜二重層から直接来る。細胞骨格崩壊（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）は、膜ストレッチによる開放を増強するが、これは、これらのチャネルが細胞骨格により強直的に（ｔｏｎｉｃａｌｌｙ）抑制されることを示唆する。
【００２５】
ストレッチ活性化チャネルの遮断は、従来の生理学的技法により、例えば、単離細胞に縦方向ストレッチのような制御された歪みを施すことなど、圧力増大又は物理的ストレッチング誘導などに起因する膜ストレッチングに付された単離細胞からの電位固定記録法（ｖｏｌｔａｇｅ ｃｌａｍｐ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ）などにより、測定することができる。このような条件下で、ストレッチ活性化チャネルは、引出電流（ｅｌｉｃｉｔｅｄ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｃｕｒｒｅｎｔ）により測定できる。引出電流は、Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２７８ （２）， Ｈ５４８ （２０００）に記載されているような内向き陽イオン流を表し得る。ストレッチ活性化チャネルを遮断する作用物質は、引出電流を低減するか又はなくすよう、チャネルと結合するか又はそれに会合される。好ましくは、ストレッチ誘導性電流は、当該化合物により、例えば、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０％〜３０％、１０％〜２０％など１０％〜１００％の間で低減される。
【００２６】
別の態様では、本発明は、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護する方法において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む方法に関する。
【００２７】
本発明の別の態様では、緑内障の治療のための方法において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネル（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００２８】
本発明の別の態様では、脳圧上昇の治療のための方法において、脳神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００２９】
本発明の別の態様では、末梢神経損傷の治療のための方法において、末梢神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを（直接又は間接的に）又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物を、このような治療を必要とする被験体に投与することを含む方法が提供される。
【００３０】
本発明のさらなる態様では、圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するための組成物において神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００３１】
本発明のさらなる態様では、緑内障の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを（直接又は間接的に）遮断するか又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００３２】
本発明のさらなる態様では、脳圧上昇の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを（直接又は間接的に）遮断するか又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する少なくとも１つの化合物、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００３３】
本発明のさらなる態様では、末梢神経損傷の治療のための組成物において、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを（直接又は間接的に）遮断するか又はその他の圧力感受性細胞メカニズムを遮断する防護剤（ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を、所望により１つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と含む組成物が提供される。
【００３４】
神経細胞に及ぼす圧力のアポトーシス作用を遮断し、次にストレッチ活性化チャネルを遮断し得る化合物（Ｈａｍｉｌｌ Ｏ， ＭｃＢｒｉｄｅ ＤＷ， Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ １９９６； ４８：２３１−２５２参照）は、以下のものを含む：ガドリニウム（ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ）（Ｇｄ３＋）、ランタニド；神経細胞上のＧｄ３＋のアゴニスト（例えば、競合的結合分析（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ）により同定可能））；アミロライド及びその類似体などのピラジン−カルボキサミド（Ｋｌｅｙｍａｎ ａｎｄ Ｃｒａｇｏｅ， Ｊ． Ｍｅｍｂｒ． Ｂｉｏｌ．， １０５， ｐｐ．１−２１ （１９９８）及びＫｌｅｙｍａｎ ａｎｄ Ｃｒａｇｏｅ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．， １９１， ｐｐ．７３９−７５４ （１９９０）により記載されているような）；アミノグリコシド抗生物質（例えば、ベルダマイシン（ｖｅｒｄａｍｙｃｉｎ）、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ）、シソマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、ネチルマイシン（ｎｅｔｉｌｍｙｃｉｎ）、アミカシン、リボスタマイシン、ジベカシン、及びカナマイシン）；キニジン、シパトリジン（ｓｉｐａｔｒｉｇｉｎｅ）、及び例えば、Ｎａチャネル遮断薬、Ｃａチャネル遮断薬、Ｋチャネル遮断薬のようなその他の遮断薬（ｂｌｏｃｋｅｒ）；Ｃａイオン；陽子；アルミニウムイオン；ツボクラリン；ハロタン及びその他の吸入麻酔薬；キニーネ；インテグリン−ブロッキングペプチド及び抗体、シスプラチン；タランチュラ蜘蛛毒；コルヒチン及びビンブラスチン。少なくとも１つの活性化合物が、本発明の組成物及び方法に用いられる。例えば、２つ又はそれ以上の化合物が、組合せて用いられ得る。このような組合せは、相乗的相互作用を包含し得る。作用は、ストレッチ活性化チャネル（ＳＡＣ）で直接起こるか、又は細胞骨格、細胞外マトリックスへの、あるいは機械的感受性酵素（ホスホリパーゼＡ２及びホスホリパーゼＣ）への作用を介して間接的に起こり得る。これらのメカニズムの阻害剤も、本発明の範囲内である。
【００３５】
本発明は、上記の化合物に限定されず、神経細胞に及ぼす圧力のアポトーシス作用を遮断する如何なる化合物も包含する。適切な化合物は、例えば、細胞の物理的ストレッチングによるなどの大気圧下又は静水学的圧力下であろうと、圧下でアポトーシス防護活性を試験することにより容易に同定され得る。神経細胞が高圧、例えば、１００ｍｍＨｇに２時間以上付される場合、圧力誘導性アポトーシス細胞死が起こり、アポトーシス検定により確定され得る（Ａｇａｒ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ．， ６０， ｐｐ． ４９５−５０３ （２０００）参照）。このような細胞死を抑制する化合物が、本発明に用いられ得る。
【００３６】
同様に、神経細胞におけるストレッチ活性化チャネルを遮断する化合物は、上記のように高圧に付された単離神経細胞から、パッチクランプ記録法／電位固定記録法などの従来の生理学的技法により、容易に同定され得る（Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２７８ （２）， Ｈ５４８ （２０００））。引出電流を遮断する化合物は、本発明に用いられ得る。
【００３７】
本発明による組成物は、標準的な緩衝剤、賦形剤、担体、希釈剤等を用いて処方され得る。担体の例としては、水、生理食塩水、デキストロース、グリセリン又は等張性を付与するその他の作用物質を含有する等張溶液、低級アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、グリセリントリアセテート及びその他の脂肪酸グリセリドが挙げられる。用いられ得るその他の担体の例としては、クリーム形成剤、ゲル形成剤等、配合剤及びタブレット成形剤が挙げられる。賦形剤としては、緩衝剤、安定剤、エマルション形成剤、着色化合物、塩、アミノ酸、抗生物質及びその他の抗菌化合物、キレート化剤等が挙げられる。１つより多い賦形剤及び担体が用いられ得る。
【００３８】
圧力誘導性アポトーシス細胞死から神経組織を防護するために用いられる化合物の量は、眼、脳、又は、手、脚、足、指、口腔、鼻又は耳などの末梢組織における治療されるべき神経組織、送達方式（ｔｈｅ ｍａｎｎｅｒ ｏｆ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、治療される症状の重篤度、及び処方医の判断を含む様々な因子に依存している。例証として、本発明の化合物は、点眼薬、点耳薬、点鼻薬などの滴下・滴注のための溶液として、；注射用滅菌皮下液又は静脈内溶液として、錠剤、カプセル、座薬、糖衣丸の形態で、あるいは経皮組成物の形態で送達され得る。これらはすべて製薬分野で既知であり、例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａに記載されている。一般に、治療的に有効であるとみなされ得る活性物質の濃度は、例えば、０．１ｍ〜１００ｍ、５０ｍ〜１００ｍ、１００ｍ〜５００ｍ、５００ｍ〜１ｍＭ、あるいは１ｍＭ〜５００ｍＭなど、０．００１ｍ〜５００ｍＭのオーダーである。
【００３９】
緑内障の治療に関して、本発明の組成物は、点眼薬又は眼内注射などの手段により眼に、あるいは錠剤などの全身性薬剤として投与され得る。
【００４０】
本発明は、その態様のうちの１つにおいて、緑内障の治療に関して顕著な優位性を示す。今日までの緑内障病因の理論は、議論の的であり、結論が出ていない。眼内の圧力上昇は緑内障の特徴であるが、網膜神経節細胞死が媒介される経路、防止され得る方法は不明である。本発明者の研究は、圧力のみが、培養及びｉｎ ｖｉｖｏの両方において、神経細胞のアポトーシスに対する刺激であり得ることを示している。ストレッチ活性化チャネルを阻害することによるなどの、神経細胞に及ぼす圧力のアポトーシス作用を遮断することは、治療的結果を提供する。
【００４１】
緑内障治療用の組成物は、１日１回以上で、又は単一投与として毎日又は１日おきに、又は週をベースにして被験体に投与され得る。組成物は、１日基準で、一般的に１〜３回／日５〜８時間間隔で、緑内障の治療のために眼に投与されることが好ましい。
【００４２】
水頭症などに起因する脳血圧上昇の治療において、本発明の化合物は、血液−脳関門を通り抜けるよう、当該技術分野で既知の慣用的手段により処方され得る。このような組成物は、上記のように非経口的又は経口的に、例えば、カプセル、錠剤等の形態での経口投与、直腸又は膣投与、静脈内投与又は筋肉内投与により、投与され得る。
【００４３】
末梢神経における圧力誘導性アポトーシス性神経細胞死の治療において、本発明の化合物の投与は、治療されるニューロン／症状の部位に依存する。例として、脊柱における神経細胞圧増大は、経皮的活性組成物、筋肉内注射、腰椎内注射、静脈内投与、経口投与、直腸投与又は吸入投与により治療され得る。
【００４４】
【実施例】
実施例１
圧力誘導性一次網膜神経節細胞（Ｐｒｅｓｓｕｒｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｇａｎｇｌｉｏｎ Ｃｅｌｌ）（ＲＧＣ）アポトーシスは、ストレッチ活性化チャネルにより媒介されると本出願人は考えている。近年、ストレッチ活性化受容体が動物及びヒトＲＧＣで同定され、それらのアミノ酸配列が確定された。ＴＲＡＡＫは、膜ストレッチにより開放され、アラキドン酸により活性化される機械的ゲート化Ｋ＋チャネルである。本発明者等は、ＲＧＣ−５株中のＴＲＡＡＫの存在を確認し、アポトーシスのアラキドン酸誘導を示した。関連性を有する二次受容体は、ＴＲＥＫ−１である（以下参照）。
【００４５】
ＲＧＣ−５細胞株は、一次ラットＲＧＣ培養由来のベクター形質転換された神経株である。それは、Ｎ． Ａｇａｒｗａｌ教授（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｔｅｘａｓ， Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ）により開発され、形態学、細胞マーカー及びＰＣＲ分析により特徴づけられている。
【００４６】
この実験に用いられる圧力小室（ｃｈａｍｂｅｒ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ系は、Ａｇａｒ Ａ．， Ｙｉｐ Ｓ．Ｓ．， Ｈｉｌｌ Ｍ．Ａ．， Ｃｏｒｏｎｅｏ Ｍ．Ｔ．， Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．， ６０， ｐｐ．４９５−５０３ （２０００）， ”Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ”において既に記載したとおりである。この系は、周囲の静水力学的圧力の上昇に応答する神経アポトーシスを測定する。実験は、今日まで、ＲＧＣ−５ニューロンを含む種々のニューロンを、正常眼内圧（１５ｍｍＨｇ）、慢性緑内障（３０ｍｍＨｇ）及び急性緑内障（１００ｍｍＨｇ）に類似する圧力条件下に曝した。非加圧の対照と比較して、アポトーシス性ＲＧＣ−５ニューロンの比率増大は、これらすべての圧力レベルで見出された。さらに、この作用は、圧力増大に伴って増大する。
【００４７】
これらのストレッチ活性化チャネルは、二孔ドメインＫ＋チャネル（Ｋ２Ｐ）のファミリーからのストレッチ活性化チャネルであり、そのうちの８つが齧歯類及びヒトにおいてクローニングされている。以下の４種類がある。
・ＴＷＩＫ−１＆ＴＷＩＫ−２（弱内向き整流性Ｋ＋チャネルにおけるＰドメインのタンデム）は、弱内向き整流器である；
・ＴＲＥＫ−１（ＴＷＩＫ関連Ｋ＋チャネル）＆ＴＲＡＡＫ（ＴＷＩＫ関連アラキドン酸（ＡＡ）刺激性Ｋ＋チャネル）は、ポリ不飽和脂肪酸（ＦＡ）及びストレッチ活性化Ｋ＋チャネルである（Ｍｅａｄｏｗｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ８９２， ｐｐ．９４−１０１ （２００１）参照）；
・ＴＡＳＫ−１及びＴＡＳＫ−２（ＴＷＩＫ関連酸感受性Ｋ＋チャネル）は、酸感受性Ｋ＋チャネルである；
・ＫＣＮＫ６及びＫＣＮＫ７は、活性になるための相手をおそらくは必要とする無症候性サブユニットである
（Ｍａｉｎｇｒｅｔ Ｆ．， Ｐａｔｅｌ Ａ．Ｊ．， Ｌｅｓａｇｅ Ｆ．， Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ Ｍ．， Ｈｏｎｏｒｅ Ｅ．， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．， ２７５， ｐｐ．１０１２８−１０１３３ （２０００）， ”Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ｏｐｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ−ｐｏｒｅ ｄｏｍａｉｎ ｍｅｃｈａｎｏ−ｇａｔｅｄ Ｋ（＋） ｃｈａｎｎｅｌｓ ＴＲＥＫ−１ ａｎｄ ＴＲＡＡＫ”参照）。
【００４８】
ＴＲＡＡＫは、中枢神経系、脊髄及び網膜に制限されると思われる。ＴＲＥＫ−１は遍在的であり、中枢神経系中で強く発現される。ＴＲＥＫ−１及びＴＲＡＡＫはともに、膜ストレッチ、細胞膨張（ｃｅｌｌ ｓｗｅｌｌｉｎｇ）及び／又は剪断応力（すべて圧力が作用する）により開放される外向き整流器Ｋ＋チャネルである。大気圧で、基礎活性はごくわずかであり、チャネルは原形質膜の凸状湾曲により開放される。機械ゲーティングは細胞骨格の完全性を必要とせず、活性化力は、見かけ上は細胞膜二重層から直接来る。細胞骨格崩壊は膜ストレッチによる開放を増強するが、これは、これらのチャネルが細胞骨格により強直的に抑制されることを示唆する。
【００４９】
特異的抗体によるイムノローカライゼーション（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎ）は、これら２つのチャネルが異なる非細胞（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）位置を有することを示した−ＴＲＡＡＫは主に細胞体（ｓｏｍａ）中に存在し、軸索（ａｘｏｎｓ）及び樹状突起（ｄｅｎｄｒｉｔｅｓ）中には小程度にしか存在しないが、ＴＲＥＫは樹状突起中に濃縮される。したがって両チャネルは、緑内障における網膜神経節細胞圧力応答（ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）に関して関連がある。我々は、ヒト網膜及び我々の網膜細胞株ＲＧＣ−５の両方におけるＴＲＡＡＫの存在を、確認した。
【００５０】
この実施例において圧力小室から得られる最大値の半分の活性化に対する圧力は、ＴＲＥＫ−１に関しては３６ｍｍＨｇ及びＴＲＡＡＫに関しては４６ｍｍＨｇである。これは、３０ｍｍＨｇの眼内圧は、これ以上の圧力では網膜神経節細胞損傷が非常に起こりそうであると臨床的に認識されるために、特別重要である。低圧力にする治療は、通常は、眼圧が３０ｍｍＨｇ又はそれ以上である場合に開始される。手根管症候群（ｃａｒｐａｌ ｔｕｎｎｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を有する患者は、３２ｍｍＨｇの平均手根管圧（ｍｅａｎ ｃａｒｐａｌ ｃａｎａｌ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）（正常９．６ｍｍＨｇ）を有する、ということも近年示されている（Ｓｚａｂｏ Ｒ．， Ｃｈｉｄｇｅｙ Ｌ．Ｋ．， Ｊ． Ｈａｎｄ Ｓｕｒｇ． （Ａｍ）．， １４， ｐ６２４ （１９８９）参照）。したがって、ヒト神経組織は、約３０ｍｍＨｇの圧力に対して敏感であると思われる。
【００５１】
ＴＲＥＫ−１及びＴＲＡＡＫはともに、ＴＥＡ及び４−ＡＰに対して耐性であり、Ｂａ２＋に対してわずかに感受性である。高濃度では、ＴＲＥＫ−１はキニジンにより遮断され、吸入麻酔薬、ハロタン、クロロホルム、ジエチルエーテル及びイソフルランにより活性化される。両チャネルは、推定神経防護剤（ｐｕｔａｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）であるリルゾールにより活性化される。ＴＲＥＫ−１はプロテインキナーゼＣ及びＡの活性剤により抑制されるが、ＴＲＡＡＫはそうではない。ＴＲＥＫ−１は細胞内酸性化により開かれ、これは、チャネルが大気圧で開くよう、圧力活性化関係（ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ）を変化させる。ＴＲＥＫ−１及びＴＲＡＡＫの機械的活性化については、アラキドン酸（ＡＡ）、オレエート、リノレート、エイコサペンタエノエート、ドコサヘキサエノエート及び陰イオン性両親媒性トリニトロフェノールなどのポリ不飽和脂肪酸がよく似た作用をする。
【００５２】
このような受容体の薬物調整（ｐｈａｒｍａｃｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）の可能性を調べるために、本発明者等は、このバイオアッセイにおけるこのようなチャネルの遮断薬を試験する実験を実施した。ストレッチ活性化チャネルの遮断薬であるガドリニウム（Ｇｄ３＋）を実験的に用い、単離ラット肺における気道圧力誘導性透過性（ａｉｒｗａｙ ｐｒｅｓｓｕｒｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ）の副作用を遮断した（Ｐａｒｋｅｒ Ｊ．Ｃ．， Ｉｖｅｙ Ｃ．Ｌ．， Ｔｕｃｋｅｒ Ｊ．Ａ．， Ｊ． Ａｐｐｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．， ８４， ｐｐ．１１１３−１１１８ （１９９８）， ”Ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｈｉｇｈ ａｉｒｗａｙ ｐｒｅｓｓｕｒｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｒａｔ ｌｕｎｇｓ”参照）。我々は、網膜神経節細胞及び神経細胞における圧力誘導性アポトーシスを抑制するに際して使用した場合の驚くべき結果の報告をここに行う。
【００５３】
今日までに、我々は、アラキドン酸（１、１０、５０、１００μＭ／Ｌ、各濃度でｎ＝４）が、これらの及びその他の細胞株においてアポトーシスを誘導すること、及びこの作用もガドリニウムにより遮断されることも示した。
【００５４】
我々は、ガドリニウム（２０μＭ／Ｌ、ｎ＝８）を用い、その他の神経細胞系におけるのと同様にＲＧＣ−５細胞における圧力誘導性アポトーシスを抑制した。
【００５５】
一緒に得られたこれらのデータは、網膜神経節及び神経細胞の死に関するエフェクターメカニズム（ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）が、ストレッチ活性化チャネル、主にＴＲＡＡＫ及びＴＲＥＫ−１を包含し、これらのチャネルを遮断することが緑内障及び圧力誘導性神経損傷などの臨床症状における細胞死を抑制し得ることを示す。
【００５６】
実施例２　−ラットにおける緑内障モデル
慢性高眼圧（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）が誘導される近年確立されたラットモデルを含むヒト緑内障に関する多くの実験動物モデルが存在する（ＷｏｌｄｅＭｕｓｓｉｅ Ｅ．， Ｒｕｉｚ Ｇ．， Ｗｉｊｏｎｏ Ｍ．， Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｌ．Ａ．， ＩＯＶＳ，　４１， Ｓ８３０ （２０００）， ”Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ”）。このモデルにおいては、眼内圧は、上強膜及び四肢の血管（ｌｉｍｂａｌ ｖｅｓｓｅｌｓ）のレーザー光凝固により増大され（眼からの水性体液の流出を遅滞する）、圧力のレベルは、２〜３週間で２倍にまでなる。この圧力増大は、緑内障で起こるような網膜神経節細胞死をもたらし、３３±２．９％の網膜神経節細胞がこのモデルでは失われる。
【００５７】
このモデルは、試験において用いられる。実験動物の一群では、眼内圧が上げられ、動物は２つの処置群に分けられる。一方の群は、全身性ガドリニウムで処置され、他方の群はシパトリジンで処置される（下記参照）。未処置対照と比較した場合、圧力誘導性網膜神経節細胞損失の低減が観察され、本発明の処置が治療として有効であることを支持する。
【００５８】
実施例３　−ヒト試験
ヒトにおいては、急性緑内障は、通常は眼の排液角の閉鎖（虹彩が角を遮断する）によりもたらされる眼圧の突発的上昇が認められる症状である。網膜神経節細胞及び虹彩に対する損傷は、眼の大半のその他の組織への損傷に先行する。眼圧を下げるための処置にもかかわらず、顕著な、そしてしばしば重篤な網膜神経節細胞損傷が起こる。
【００５９】
急性緑内障患者における網膜神経節細胞損傷の重篤度を低減するために、ストレッチ活性化チャネルの遮断薬を用いて、比較試験を実施する。診断が下されたらすぐに、眼内圧を下げるための慣用的処置を全患者に施す。次に彼等を、対照群及びと実験群に無作為にふりわける。実験群は、脳卒中の治療において従来安全に用いられてきたＴＲＥＫ−１及びＴＲＡＡＫチャネルの有力な阻害剤であるシパトリジンで全身的又は局所的に（点眼薬（ｅｙｅｄｒｏｐ）により）処置する（Ｄａｗｓｏｎ Ｄ．Ａ．， Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ Ｇ．， Ｐａｌｍｅｒ Ａ．Ｍ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．， ８９２， ｐｐ．３４４−３５０ （２００１）， ”Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓｉｄｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｒｏｋｅ”参照）。シパトリジン処置群における網膜神経節細胞生存（及びしたがって視野）のより良好な結果が達成されるかもしれず、そうであれば圧力により誘導される他の形態の緑内障又は神経損傷における本発明の使用についての根拠を形成する。
【００６０】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、あるいは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」というその変形は、記述された１つの全体物又は工程あるいは全体物あるいは工程の群を含むことを意味すると理解されるべきであり、またいかなる他の全体物又は工程あるいは全体物又は工程の群も排除するものでないことを意味すると理解されるべきである。
【００６１】
本明細書中の如何なる先行技術に対する言及は、その先行技術がオーストラリアにおける共通の一般的知識の一部を構成するということの承認又はいかなる形態の示唆でもなく、またみなされるべきでもない。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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