(57)【要約】ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗作用が有益である疾患もしくは病状を治療または予防するための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物（式中のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、ＡｒおよびＸは明細書で定義したとおりである）、ならびにその製薬上許容される塩、およびそのエナンチオマーおよびラセミ体の使用が開示されている。一定の新規な式(Ｉａ)の化合物、ならびにその製薬上許容される塩、およびそのエナンチオマーおよびラセミ体が、それらの製造方法と一緒に開示されている。式(Ｉ)および(Ｉａ)の化合物はＣＸ3ＣＲ１受容体拮抗剤であり、従って神経変性障害、脱髄疾患および疼痛の治療または予防に特に有用である。
2004524351.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗作用が有益な疾患もしくは病状を治療または予防するための
医薬の製造における、式(Ｉ)
【化１】
2004524351.tif 000009
（式中、
Ｒ1は、水素、ＮＲ4Ｒ5、ＣＯＮＲ6Ｒ7、または場合によりＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル−ＯＲ8で置換された４〜７員の飽和モノアザ環式環を示し；
Ｒ2は、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７アルキルを示し；
Ｒ3は、水素、または場合によりＯＲ12もしくはＮＲ13Ｒ14で置換されたＣ１〜Ｃ７アルキルを示すか；
またはＲ2およびＲ3は一緒になって、基Ｒ2−Ｃ−Ｒ3が、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基を形成するように結合しており；
Ａｒは、場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メチリデンジオキシ、シアノ、ニトロ、−ＣＯ2Ｒ15もしくは−ＣＯＮＲ16Ｒ17から独立して選択される１個またはそれ以上の基で置換されたフェニルを示し；該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のフッ素原子で置換されており；
Ｘは、結合またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示す）
で表される化合物、またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の使用。
【請求項２】
疾患もしくは病状が神経変性障害、脱髄疾患または疼痛である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ1が水素を示し、そしてＸが結合を示す、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ3が水素を示す、請求項１〜３の何れか１項に記載の使用。
【請求項５】
Ｒ2がＣ３〜Ｃ７アルキルを示す、請求項１〜４の何れか１項に記載の使用。
【請求項６】
Ａｒが場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＣＯ2Ｒ15もしくは−ＣＯＮＲ16Ｒ17で置換されたフェニルを示す、請求項１〜５の何れか１項に記載の使用。
【請求項７】
請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の治療上有効量を、製薬上許容される助剤、希釈剤または担体との混合物として含む、神経変性障害、脱髄疾患もしくは疼痛の治療または予防に使用するための医薬処方物。
【請求項８】
式(Ｉａ)
【化２】
2004524351.tif 000010
（式中、
Ｒ1は、水素、ＮＲ4Ｒ5、ＣＯＮＲ6Ｒ7、または場合によりＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル−ＯＲ8で置換された４〜７員の飽和モノアザ環式環を示し；
Ｒ2は、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７アルキルを示し；
Ｒ3は、水素、または場合によりＯＲ12もしくはＮＲ13Ｒ14で置換されたＣ１〜Ｃ７アルキルを示すか；
またはＲ2およびＲ3は一緒になって、基Ｒ2-Ｃ-Ｒ3が、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７シクロアルキルを形成するように結合しており；
Ａｒは、場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メチレンジオキシ、シアノ、ニトロ、-ＣＯ2Ｒ15もしくは−ＣＯＮＲ16Ｒ17から独立して選択される１個またはそれ以上の基で置換されたフェニルを示し；該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のフッ素原子で置換されており；
Ｘは、結合またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し、
ただし、Ｒ1およびＲ3がそれぞれ水素を示し、そしてＲ2がイソブチルを示す場合には、Ａｒは非置換フェニルまたは２,３―ジフルオロフェニルを示さない）
で表される化合物、またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体。
【請求項９】
式(Ｉａ)の化合物が、
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-3-メチル-ブタン-1-オール；
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-ヘキサン-1-オール；
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-7-(1-ヒドロキシメチル-3-メチル-ブチルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ]-アセトアミド；
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ヨードフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,6-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-クロロ-2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-6-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモ-2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジクロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-4,5-メチレンジオキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシカルボニルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチル-2-ニトロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
N-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イル)-1-ヒドロキシメチル-シクロペンチルアミン；
(±)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-ヘキサン-1-オール
である、請求項８に記載の式(Ｉａ)の化合物、またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体。
【請求項１０】
（ａ）式(II)
【化３】
2004524351.tif 000011
（式中、Ｒ1、ＡｒおよびＸは請求項８で定義したとおりであり、そしてＬ1は脱離基を示す）で表される化合物を、式(III)
【化４】
2004524351.tif 000012
（式中、Ｒ2およびＲ3は請求項８で定義したとおりである）で表される化合物もしくはその塩と反応させるか、または
（ｂ）式(IV)
【化５】
2004524351.tif 000013
（式中、Ｒ2、Ｒ3およびＡｒは請求項８で定義したとおりであり、そしてＬ2は脱離基を示す）で表される化合物を、式(Ｖ)
【化６】
2004524351.tif 000014
（式中、Ｒ1およびＸは請求項８で定義したとおりである）で表される化合物もしくはその塩と反応させ、
そして必要に応じて、得られた式(Ｉａ)の化合物もしくはその別の塩を、その製薬上許容される塩に変換するか、または得られた式(Ｉａ)の化合物を、式(Ｉａ)の他の化合物に変換し、そして所望により、得られた式(Ｉａ)の化合物を、その光学異性体に変換することを含む、請求項８に記載の式(Ｉａ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗剤としてのチアゾロピリミジン誘導体の使用に関する。一定の新規なチアゾロピリミジン誘導体も、それらの製造方法、それらを含む組成物、および治療におけるそれらの使用と一緒に開示される。
【背景技術】
【０００２】
ケモカイン (chemokine) は、喘息およびアレルギー性疾患を含む種々の疾患および障害における免疫性および炎症性応答、ならびに慢性関節リウマチおよびアテローム性動脈硬化症のような自己免疫性病理において重要な役割を演じる。これらの分泌された小さな分子は、保存される四つのシステインモチーフを特徴とする８〜１４ｋＤａのタンパク質の拡大するスーパーファミリーである。ケモカインスーパーファミリーは、特徴的構造モチーフを示す二つの主要グループ、Ｃｙｓ−Ｘ−Ｃｙｓ（Ｃ−Ｘ−Ｃ）ファミリーおよびＣｙｓ−Ｃｙｓ（Ｃ−Ｃ）ファミリーに分類することができる。これらの二つのグループは、システイン残基のＮＨ-近接ペア間の単一アミノ酸挿入および配列類似性に基づいて
区別される。
【０００３】
Ｃ−Ｘ−Ｃケモカインは、幾つかの効力ある化学誘引物質、およびインターロイキン-８のような好中球の活性化剤（ＣＸＣＬ８）および好中球活性化ペプチド２（ＣＸＣＬ７）を包含する。
【０００４】
Ｃ−Ｃケモカインは、好中球以外の単球およびリンパ球の効力ある化学誘引物質を包含する。例としては、ヒト単球走化性タンパク質１〜３（ＣＣＬ２、ＣＣＬ７およびＣＣＬ８）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）、エオタキシン (eotaxin) （ＣＣＬ１１）ならびにマクロファージ炎症性タンパク質１αおよび１β（ＣＣＬ３およびＣＣＬ４）が挙げられる。
【０００５】
構造モチーフＣｙｓ−Ｘ3−Ｃｙｓ（Ｃ−Ｘ3−Ｃ）に基づく第三のケモカインファミリーもある。このＣ−Ｘ3−Ｃファミリーは、システイン残基のＮＨ−近接ペア間の三重アミノ酸挿入を有することに基づいて、Ｃ−Ｘ-ＣおよびＣ−Ｃファミリーから区別される。ＣＸ3ＣＬ１（フラクタルカイン (fractalkine) としても知られている）は、効力ある化学誘引物質であり、そして中枢神経系における小グリア細胞、ならびに単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびマスト細胞の活性化剤である。
【０００６】
研究は、ケモカインの作用がＧタンパク質に結合した受容体のサブファミリーによって仲介されることを示した。特に、ＣＸ3ＣＬ１の作用はＣＸ3ＣＬ１受容体によって仲介される。
【０００７】
WO 00/09511 は、Ｃ−Ｘ−ＣおよびＣ−Ｃケモカインファミリーに連結した受容体の拮抗剤として、特にＣＸＣＲ２受容体の拮抗剤として有用であるチアゾロピリミジン化合物を開示している。
【０００８】
本発明は、部分的には WO 00/09511 の一般的範囲内にあるが、予想外にもＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗剤として有用な特性を示す化合物のグループに関する。
【発明の開示】
【０００９】
本発明によれば、ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗作用が有益な疾患もしくは病状を治療または予防するための医薬の製造における、式(Ｉ)
【化７】
2004524351.tif 000003
【００１０】
（式中、
Ｒ1は、水素、ＮＲ4Ｒ5、ＣＯＮＲ6Ｒ7、または場合によりＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル−ＯＲ8で置換された４〜７員飽和モノアザ環式環を示し；
Ｒ2は、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７アルキルを示し；
Ｒ3は、水素、または場合によりＯＲ12もしくはＮＲ13Ｒ14で置換されたＣ１〜Ｃ７アルキルを示すか；
またはＲ2およびＲ3は一緒になって、基Ｒ2−Ｃ−Ｒ3が、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基を形成するように結合しており；
Ａｒは、場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メチレンジオキシ、シアノ、ニトロ、−ＣＯ2Ｒ15もしくは−ＣＯＮＲ16Ｒ17から独立して選択される１個またはそれ以上の基で置換されたフェニルを示し；該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のフッ素原子で置換されており；
Ｘは、結合またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示す）
で表される化合物、またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の使用が提供される。
【００１１】
一つの実施形態において、Ｒ2は、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７アルキルを示し；Ｒ3は、水素、または場合によりＯＲ12もしくはＮＲ13Ｒ14で置換されたＣ１〜Ｃ７アルキルを示し；そしてＡｒは、場合によりハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される１個またはそれ以上の基で置換されたフェニルを示す。
【００１２】
本発明のさらに詳細な態様は、神経変性障害、脱髄疾患もしくは疼痛を治療または予防するための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の使用を提供する。
【００１３】
また本発明によれば、ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗作用が有益な疾患もしくは病状を患っているかまたはその危険性のあるヒトに、式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の治療有効量を投与することを含む、上記の疾患もしくは病状を治療するかまたはその危険性を低減させる方法も提供される。
【００１４】
より詳細には、神経変性障害、脱髄疾患もしくは疼痛を患っているかまたはその危険性のあるヒトに、式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の治療有効量を投与することを含む、上記の疾患もしくは病状を治療するかまたはその危険性を低減させる方法も提供される。
【００１５】
別の態様において、本発明は、式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の治療上有効量を、製薬上許容される助剤、希釈剤または担体との混合物として含む、ＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗作用が有益な疾患もしくは病状の治療または予防に使用するための医薬処方物を提供する。
【００１６】
より詳細な別の態様において、本発明は、式(Ｉ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の治療上有効量を、製薬上許容される助剤、希釈剤または担体との混合物として含む、神経変性障害、脱髄疾患もしくは疼痛の治療または予防に使用するための医薬処方物を提供する。
【００１７】
一つの実施形態において、Ｒ1は水素を示し、そしてＸは結合を示す。
【００１８】
第二の実施形態において、Ｒ1はＣＯＮＲ4Ｒ5を示し、そしてＸはＣ１〜Ｃ６アルキルを示す。より好ましくは、Ｒ1はＣＯＮＨ2を示し、そしてＸはＣ１〜Ｃ６アルキルを示す。よりいっそう好ましくは、Ｒ1はＣＯＮＨ2を示し、そしてＸはＣＨ2を示す。
【００１９】
もう一つの実施形態において、Ｒ1は、場合によりＣ１〜Ｃ６アルキルで置換されたピペリジニルを示す。より好ましくは、Ｒ1は４−ピペリジニルを示す。よりいっそう好ましくは、Ｒ1は４−ピペリジニルを示し、そしてＸは結合を示す。
【００２０】
Ｒ2はＣ３〜Ｃ７アルキルを示すことが好ましい。
【００２１】
Ｒ3は水素またはＣ１〜Ｃ７アルキルを示すことが好ましい。より好ましくは、Ｒ3は水素を示す。
【００２２】
Ａｒがハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＣＯ2Ｒ15または−ＣＯＮＲ16Ｒ17で置換されたフェニル環を示す式(Ｉ)の化合物も好ましい。
【００２３】
別に指示しない場合、本明細書で「Ｃ１〜Ｃ７アルキル」と呼ばれる用語は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル基および／または３〜７個の炭素原子を有する環状アルキル基を示す。このような基の例は、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロペンチル、メチルシクロペンチル、シクロペンチルメチルおよびシクロヘキシルを包含する。
【００２４】
「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」および「Ｃ３〜Ｃ７アルキル」という用語は、同様に解釈すべきである。
【００２５】
別に指示しない場合、本明細書で「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」と呼ばれる用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルコキシ基を示す。このような基の例は、メトキシ、エトキシ、１−プロポキシ、２−プロポキシおよび tert−ブトキシを包含する。
【００２６】
別に指示しない場合、本明細書で「ハロゲン」と呼ばれる用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを示す。
【００２７】
４〜７員の飽和モノアザ環式環の例は、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンおよびパーヒドロアゼピンを包含する。
【００２８】
一定の式(Ｉ)の化合物は新規である。従って、本発明のもう一つの態様は、式(Ｉａ)
【化８】
2004524351.tif 000004
【００２９】
（式中、
Ｒ1は、水素、ＮＲ4Ｒ5、ＣＯＮＲ6Ｒ7、または場合によりＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ６アルキル−ＯＲ8で置換された４〜７員の飽和モノアザ環式環を示し；
Ｒ2は、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７アルキルを示し；
Ｒ3は、水素、または場合によりＯＲ12もしくはＮＲ13Ｒ14で置換されたＣ１〜Ｃ７アルキルを示すか；
またはＲ2およびＲ3は一緒になって、基Ｒ2-Ｃ-Ｒ3が、場合によりＯＲ9もしくはＮＲ10Ｒ11で置換されたＣ３〜Ｃ７シクロアルキルを形成するように結合しており；
Ａｒは、場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メチレンジオキシ、シアノ、ニトロ、−ＣＯ2Ｒ15もしくは−ＣＯＮＲ16Ｒ17から独立して選択される１個またはそれ以上の基で置換されたフェニルを示し；該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のフッ素原子で置換されており；
Ｘは、結合またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルを示し；
ただし、Ｒ1およびＲ3がそれぞれ水素を示し、そしてＲ2が イソ−ブチルを示す場合には、Ａｒは非置換フェニルまたは 2,3−ジフルオロフェニルを示さない）
で表される化合物、またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体を提供する。
【００３０】
式(Ｉａ)の個々の化合物は下記のものを包含する：
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-3-メチル-ブタン-1-オール；
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-ヘキサン-1-オール；
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-7-(1-ヒドロキシメチル-3-メチル-ブチルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ]-アセトアミド；
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ヨードフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,6-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-クロロ-2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-6-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモ-2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジクロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-4,5-メチレンジオキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシカルボニルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチル-2-ニトロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール；
N-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イル)-1-ヒドロキシメチル-シクロペンチルアミン；
(±)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-ヘキサン-1-オール；
およびその製薬上許容される塩、エナンチオマーまたはラセミ体。
【００３１】
本発明によれば、さらに、
（ａ）式(II)
【化９】
2004524351.tif 000005
（式中、Ｒ1、ＡｒおよびＸは式(Ｉａ)で定義したとおりであり、そしてＬ1は脱離基を示す）で表される化合物を、式(III)
【化１０】
2004524351.tif 000006
（式中、Ｒ2およびＲ3は式(Ｉａ)で定義したとおりである）で表される化合物もしくはその塩と反応させるか、または
【００３２】
（ｂ）式(IV)
【化１１】
2004524351.tif 000007
（式中、Ｒ2、Ｒ3およびＡｒは式(Ｉａ)で定義したとおりであり、そしてＬ2は脱離基を示す）で表される化合物を、式(Ｖ)
【化１２】
2004524351.tif 000008
（式中、Ｒ1およびＸは式(Ｉａ)で定義したとおりである）で表される化合物もしくはその塩と反応させ、
そして必要に応じて、得られた式(Ｉａ)の化合物もしくはその別の塩を、その製薬上許容される塩に変換するか、または得られた式(Ｉａ)の化合物を、他の式(Ｉａ)の化合物に変換し、そして所望により、得られた式(Ｉａ)の化合物を、その光学異性体に変換することを含む、式(Ｉａ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体の製造方法が提供される。
【００３３】
工程（ａ）および（ｂ）において、反応体(II)および(III)、または(IV)および(V)を、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはジクロロメタンのような適切な不活性有機溶剤中で一緒に結合させる。この反応は、場合により添加した塩基の存在下に行われる。この塩基は、トリエチルアミンのような有機塩基、または炭酸カリウムのような無機塩基であってよい。この反応は適切な温度、通常は室温と溶剤の沸点との間で行われるが、密閉反応容器を用いるならば、場合によってはより高い温度で行われる。この反応は一般的に約１時間〜１週間続けるか、または必要な生成物の形成が終結したことが分析により示されるまで続ける。好ましい脱離基Ｌ1およびＬ2はハロゲン、特にクロロまたはブロモである。
【００３４】
当業者には、上記の工程において、アミン、ヒドロキシルまたは他の可能な反応性基の保護が望ましいかまたは必要な場合があることが明らかであろう。適切な保護基、およびこのような基を導入および除去する方法の詳細は、Greene および Wuts による標準的テキスト “Protective Groups in Organic Synthesis", 第３版 (1999) を参照することによって見出すことができる。好ましい一態様においては、アミノ基は例えばｔ−ブチルカルバメートなどのカルバメート誘導体として保護される。
【００３５】
本発明は、塩の形態、特に酸付加塩の形態にある式(Ｉａ)の化合物を包含する。適切な塩は、有機酸および無機酸の両者で形成されるものを包含する。このような酸付加塩は通常は製薬上許容されるものであるが、製薬上許容されない酸の塩は問題の化合物の製造および精製において有用なことがある。従って好ましい塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸から形成されるものを包含する。
【００３６】
式(Ｉａ)の化合物の塩は、その遊離塩基または塩、エナンチオマーもしくはラセミ体を、１当量またはそれ以上の適切な酸と反応させることによって形成することができる。この反応は、塩が不溶性である溶剤または媒質、または塩が可溶性である溶剤中で、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフランもしくはジエチルエーテルまたは溶剤の混合物中で行うことができ、これらを真空中でまたは凍結乾燥により除去することができる。この反応は複分解法であってもよく、またはイオン交換樹脂上で行うことができる。
【００３７】
式(II)および(IV)の化合物は、WO 00/09511 から公知であるか、または当業者に容易に明らかな公知方法を用いて製造することができる。
【００３８】
式(III)および(Ｖ)の化合物は、市販されているか、または文献で公知であるか、または当業者に容易に明らかな公知方法を用いて製造することができる。
【００３９】
中間体化合物はそれ自体で、または保護された形態で用いることができる。保護基およびそれらの除去方法の詳細は、Greene および Wuts による標準的テキスト “Protective Groups in Organic Synthesis", 第３版 (1999) を参照することによって見出すことができる。
【００４０】
本発明の化合物およびその中間体は、それらの反応混合物から単離することができ、そして必要に応じて標準的技術を用いてさらに精製することができる。
【００４１】
式(Ｉａ)の化合物はエナンチオマー形態で存在することができる。従って、その全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体およびそれらの混合物は、本発明の範囲内に包含される。化合物のラセミ混合物を、従来の技術、例えば分別結晶化またはＨＰＬＣを用いて分離することによって、種々の光学異性体を単離することができる。別法として、光学活性出発材料を用いて、種々の光学異性体を直接に製造することができる。
【００４２】
中間体化合物はエナンチオマー形態で存在することもでき、そして精製したエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体または混合物として使用することができる。
【００４３】
式(Ｉａ)の化合物、ならびにそれらの製薬上許容される塩、エナンチオマーおよびラセミ体は、それらがＣＸ3ＣＲ１受容体の拮抗剤としての薬理学的活性を有するので、有用である。
【００４４】
式(Ｉ)および(Ｉａ)の化合物、ならびにそれらの製薬上許容される塩、エナンチオマーおよびラセミ体は、ＣＸ3ＣＲ１受容体における活性の調節が望ましい疾患もしくは病状の治療または予防に使用するために指示される。特に、これらの化合物は、ヒトを含む哺乳類の神経変性障害もしくは脱髄疾患の治療または予防に使用するために指示される。これらの化合物は、疼痛の治療に有用であることも示されている。
【００４５】
具体的に挙げることのできる病状は次のものである：神経変性疾患および痴呆障害、例えばアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症および他の運動ニューロン疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病および他のプリオン病、ＨＩＶ脳症、ハンチントン病、前頭側頭性痴呆、リューイ小体痴呆および血管性痴呆；多発性神経障害、例えばギラン-バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発性根神経障害、多病巣性運動神経異常症および神経叢障害；ＣＮＳ脱髄、例えば急性散在性／出血性脳脊髄炎および亜急性硬化性汎脳炎；神経筋肉性障害、例えば重症筋無力症およびランバート-イートン症候群；脊椎障害、例えば熱帯性痙性麻痺および硬直人間症候群；腫瘍随伴症候群、例えば小脳変性および脳脊髄炎；ＣＮＳ外傷；および偏頭痛。
【００４６】
予防は、問題の疾患もしくは病状に関する以前のエピソードを患ったヒト、またはそうでなければその危険性が高いと考えられるヒトの治療に特に適切であることが期待される。特定の疾患もしくは病状を発症する危険性のあるヒトは、一般的に、該疾患もしくは病状の家族的病歴を有するヒト、または遺伝子試験もしくはスクリーニングによって該疾患もしくは病状を特に発症しやすいことが確認されているヒトを包含する。
【００４７】
上記の治療的指示のために、投与される用量はもちろん、使用化合物、投与方式および所望の治療によって変化するであろう。しかしながら一般的に、化合物を１日当たり１ｍｇ〜２０００ｍｇの間の固体形態の用量で投与する場合に、満足すべき結果が得られる。
【００４８】
式(Ｉ)または (Ｉａ)の化合物、ならびにその製薬上許容される誘導体は、それら自体
で、または化合物もしくは誘導体が製薬上許容される助剤、希釈剤もしくは担体と混合されている適切な医薬組成物の形態で使用することができる。投与は、腸内（経口、舌下または直腸内を含む）、鼻内、静脈内、局所的または他の非経口的経路で行うことができるが、これらに限定されるものではない。好適な医薬処方物の選択および製造のための従来の手順は、例えば “Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988 に記載されている。医薬組成物は、好ましくは８０％未満、より好ましくは５０％未満の式(Ｉ)もしくは(Ｉａ)の化合物またはその製薬上許容される塩、エナンチオマーもしくはラセミ体を含有する。
上記の成分を混合することを含む、このような医薬組成物の製造方法も提供される。
【００４９】
〔実施例〕
本発明を下記の実施例により説明するが、決して限定されるものではない。
実施例において、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Varian Gemini 7 Tesla 300 MHz測定器または Bruker Avance 400 MHz測定器において、示した溶剤を用いて記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）からの下方および上方の場のｐｐｍで記載する。共鳴多重性は、一重線、二重線、三重線、多重線、広幅および見掛けを、それぞれｓ、ｄ、ｔ、ｍ、ｂｒおよびａｐｐで示す。質量分光測定（ＭＳ）スペクトルは、Finnigan SSQ7000 TSP もしくは Finnigan SSQ710 DI/EI 測定器または単一の４極質量分光計ZMD (Waters) において、ポジティブ方式で操作されるエレクトロスプレーイオン源を用いて記録した。イオンスプレー電圧は＋３ｋＶであり、そしてｍ／ｚ １００〜９００から０.８５秒のスキャン時間で質量分光計をスキャンニングした。ＬＣ−ＭＳは、Waters XterraTM MS C8 (2.5μm×30mm) カラム、Waters 996 フォトダイオードアレー検出器および Micromass ZMD を備えた Waters 2790 LC−装置を用いて得た。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイは、Zorbax SB-C8 (4.6mm×15cm) カラムを備えた Hewlett Packard 1100 Series HPLC 装置を用いて行った。分取用高速液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ ＨＰＬＣ）分離は、自動化 Gilson (model 170) において x-tera C18 (19mm×30cm) カラムを用いて行った。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル 60 (230−400 mesh ASTM, Merck) を用いて行い、そして薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＴＬＣプレコートプレート、シリカゲル 60 F254 (Merck) において行った。
【実施例１】
【００５０】
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-3-メチル-ブタン-1-オール
5-フェニルメチルチオ-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミン (WO 00/09511) (100 mg, 0.32 mmol) および DL-2-アミノ-3-メチル-1-ブタノール (253 μL, 2.3 mmol) を無水テトラヒドロフラン (4 mL) に懸濁させ、反応管の蓋をした。この溶液を１００℃で２４時間加熱し、次いで室温に冷却させた。溶剤を真空蒸発させ、粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤 − アンモニア：エタノール：ジクロロメタン、１：８：９１）にかけたのち、第二のクロマトグラフィー（勾配溶出剤 − アンモニア：酢酸エチル：ジクロロメタン、１：５９：４０〜１：９９：０）にかけ、２９ｍｇ（収率２４％）の表題の化合物を白色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ4-ＭｅＯＨ）δ 0.91 (d, 3H), 0.95 (d, 3H), 1.91-2.01 (m, 1H), 3.60-3.71 (m, 2H), 4.11-4.18 (m, 1H), 4.35 (d, 1H), 4.43 (d, 1H), 7.17-7.31 (m, 3H), 7.41 (br d, 2H);
ＭＳ ＤＩ／ＥＩ ｍ／ｚ（相対強度％）375 (M+, 81), 342 (20), 256 (12), 91 (100), 65 (12)。
【実施例２】
【００５１】
(±)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-ヘキサン-1-オール
5-フェニルメチルチオ-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミン (100 mg, 0.32 mmol)、DL-2-アミノ-1-ヘキサノール (295 μL, 2.3 mmol) および炭酸カリウム(124 mg, 0.90 mmol) を、実施例１と同様に２４時間加熱した。この溶液を濾過し、次いで溶剤を蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出剤 − アンモニア：酢酸エチル：ジクロロメタン、１：６９：３０〜１：９９：０）にかけ、２２ｍｇ（収率１７％）の表題の化合物を黄色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ4-ＭｅＯＨ）δ 0.88 (m, 3H), 1.22-1.42 (m, 4H), 1.44-1.59 (m, 1H), 1.60-1.72 (m, 1H), 3.52-3.63 (m 2H), 4.28-4.37 (m, 1H), 4.35 (d, 1H) とオーバーラップ, 4.45 (d, 1H), 7.15-7.36 (m, 3H), 7.41 (br d, 2H);
ＭＳ ＴＳＰ（＋ｖｅ）390 (M+1)。
【実施例３】
【００５２】
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-7-(1-ヒドロキシメチル-3-メチル-ブチルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ]-アセトアミド
（ａ）(R)-2-(5-フェニルメチルチオ-2-ブロモ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-4-メチル-ペンタン-1-オール
ブロモホルム (6 mL) および無水アセトニトリル (2.5 mL) 中の (R)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-4-メチル-ペンタン-1-オール (WO 00/09511) (131 mg, 0.34 mmol) の懸濁液に、亜硝酸イソアミル (158 μL, 1.2 mmol) を加えた。この混合物を窒素雰囲気中で６０℃で３０分間加熱し、次いで溶剤を蒸発させた。粗製の赤色固体をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤 − 酢酸エチル：ジクロロメタン、１０：９０）にかけ、生成物を５０℃で一夜真空乾燥し、６１ｍｇ（収率４０％）の表題の化合物を褐色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ6-ＤＭＳＯ）δ 0.83 (d, 3H), 0.87 (d, 3H), 1.34-1.51 (m, 2H), 1.53-1.65 (m, 1H), 3.38-3.47 (m, 2H), 4.29-4.44 (m, 1H), 4.35 (d, 1H) および 4.40 (d, 1H) とオーバーラップ, 4.78 (bs, 1H), 7.21-7.34 (m, 3H), 7.43 (br d, 2H), 8.05 (d 1H);
ＭＳ ＤＩ／ＥＩ ｍ／ｚ（相対強度％）452, 454 (M+, 36), 91 (100), 65 (12)。
【００５３】
（ｂ）(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-7-(1-ヒドロキシメチル-3-メチル-ブチルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ]-アセトアミド
段階（ａ）からの生成物 (20 mg, 44 μmol) およびグリシンアミド塩酸塩 (12.2 mg, 110 μmol) を無水アセトニトリル (3 mL) およびジクロロメタン (1 mL) に溶解した。
この溶液を窒素雰囲気中で室温で１８時間撹拌し、次いで３当量のトリエチルアミンを加えた。２４時間ののち、さらに１当量のトリエチルアミンを加え、温度を２４時間７５℃に高めた。この溶液を冷却し、溶剤を蒸発させた。粗製固体をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤 − アンモニア：酢酸エチル：エタノール、０.５：１０：８９.５）にかけた。４５℃で一夜真空乾燥したのち、６ｍｇ（収率４７％）の表題の化合物を白色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ4-ＭｅＯＨ）δ 0.90 (d, 3H), 0.93 (d, 3H), 1.40-1.48 (m, 1H), 1.49-1.58 (m, 1H), 1.62-1.74 (m, 1H), 3.49-3.61 (m 2H), 4.14 (s, 2H), 4.38 (d, 1H), 4.42-4.52 (m, 1H), 4.44 (d, 1H) とオーバーラップ, 7.17-7.31 (m, 3H), 7.41 (br d, 2H);
ＭＳ ＴＳＰ（＋ｖｅ）447 (M+1)。
【実施例４】
【００５４】
(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
（ａ）4-(5-フェニルメチルチオ-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル
5-フェニルメチルチオ-2-ブロモ-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン (WO 00/09511) (525 mg, 1.4 mmol)、4-アミノ-1-N-Boc-ピペリジン (339 mg, 1.7 mmol) およびトリエチルアミン (196 μL, 1.4 mmol) を、無水アセトニトリル (15 mL) に溶解し、この混合物を窒素中で３５℃で２４時間撹拌した。この混合物を濾過し、残留した固体をアセトニトリルで洗浄した。４８時間空気乾燥したのち、３９６ｍｇ（収率５７％）の表題の化合物を白色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ6-ＤＭＳＯ）δ 1.35-1.50 (m, 11H), 1.93-2.03 (m, 2H), 2.90-3.04 (m, 2H), 3.82-3.92 (m, 2H), 4.08 (br s, 1H), 4.42 (s 2H), 7.22-7.36 (m, 3H), 7.44 (br d, 2H), 9.36 (br s, 1H);
ＭＳ ＴＳＰ（＋ｖｅ）492 (M+1), 392 (M+1-Boc)。
【００５５】
（ｂ）(R)-4-[5-フェニルメチルチオ-7-(1-ヒドロキシメチル-3-メチル-ブチルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミノ]-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル
段階（ａ）からの生成物 (50 mg, 0.1 mmol) および D-ロイシノール (60 mg, 0.5 mmol) を無水テトラヒドロフラン (3 mL) に溶解した。この溶液を蓋をした反応管中で１００℃に７日間加熱した。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出剤 − アンモニア：酢酸エチル：クロロホルム、１：９：９０〜１：４９：５０）にかけた。生成物を室温で真空乾燥し、４４ｍｇ（収率７６％）の表題の化合物を白色固体として得た。
ＭＳ ＴＳＰ（＋ｖｅ）573 (M+1)。
【００５６】
（ｃ）(R)-2-[5-フェニルメチルチオ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
段階（ｂ）からの生成物 (40 mg, 70 μmol) を無水ジクロロメタン (2.5 mL) に溶解し、トリフルオロ酢酸 (269 μL, 3.5 mmol) を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌した。１Ｍ炭酸カリウム水溶液 (3.5 mL)、次いで０.１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液 (1 mL) を加え、生成物をジクロロメタンで２回抽出した。生成した沈殿を濾別し、ジクロロメタンで洗浄し、４０℃で一夜真空乾燥し、２４ｍｇ（収率７３％）の表題の化合物をオフホワイト色固体として得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ｄ4-ＭｅＯＨ）δ 0.90 (d, 3H), 0.93 (d, 3H), 1.38-1.57 (m, 4H), 1.62-1.75 (m, 1H), 2.05-2.14 (m, 2H), 2.73 (m, 2H), 3.06-3.14 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.84-3.96 (m, 1H), 4.38-4.50 (m, 1H), 4.28 (d, 1H) および 4.44 (d, 1H) とオーバーラップ, 7.17-7.31 (m, 3H), 7.40 (br d, 2H);
ＭＳ ＴＳＰ（＋ｖｅ）473 (M+1)。
【実施例５】
【００５７】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
（ａ）(R)-2-[2-アミノ-5-メルカプト-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
液体アンモニア (140 mL) を２５０ｍＬフラスコ中に凝縮させ（ドライアイス／アセトンで冷却）、(R)-2-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ)-4-メチル-ペンタン-1-オール (WO 00/09511) (2.77 g, 7.11 mmol) を３回に分けて加えた。この透明黄色溶液に、過剰の金属ナトリウムを少量ずつ青色が持続するまで加えた。青色が２５秒間残ったとき、固体ＮＨ4Ｃｌを加えて反応を停止した。ＮＨ3溶剤を除去し（Ｎ2）、残留物をＨ2Ｏ (約 70 mL) に溶解し、この混合物を濾過し、得られた透明溶液を希ＨＣｌでｐＨ約７に中和した。沈殿した固体を濾過し、Ｈ2ＯおよびＣＨ3ＣＮで洗浄し、４０℃で一夜真空乾燥し、１.９８ｇ（９３％）の淡黄色固体を得た。
ＭＳ 300 (M+1)。
【００５８】
（ｂ）(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
段階（ａ）の生成物 (20 mg, 67 μmol) をジメチルスルホキシド (450 μL) に懸濁させ、Hunig 塩基 (13 μL, 74 mmol) を加えた。この撹拌溶液に 2-フルオロベンジルブロミド (8.0 μL, 67 μmol) をすばやく加えた。反応物を６０分間撹拌して均質溶液を得た。この粗製溶液をアセトニトリルで１ｍＬに希釈し、勾配（４０〜７０％アセトニトリル）を用いて逆相カラム上のクロマトグラフィーにかけ、表題の化合物を白色固体として得た（１７ｍｇ、収率６１％）。
ＭＳ 408 (M+1)。
【００５９】
実施例６〜３８の化合物は、実施例５の一般的方法を用い、ただし２−フルオロベンジルブロミドを適切な置換ベンジルハライドで置き換えて製造した。
【実施例６】
【００６０】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１３ｍｇ、収率４８％）。ＭＳ 424 (M+1)。
【実施例７】
【００６１】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
オフホワイト色固体（１３０ｍｇ、収率４１％）。ＭＳ 468, 470 (M+1)。
【実施例８】
【００６２】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１９ｍｇ、収率６１％）。ＭＳ 468, 470 (M+1)。
【実施例９】
【００６３】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率５７％）。ＭＳ 468, 470 (M+1)。
【実施例１０】
【００６４】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ヨードフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１９ｍｇ、収率５５％）。ＭＳ 516 (M+1)。
【実施例１１】
【００６５】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１５ｍｇ、収率５１％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【実施例１２】
【００６６】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（２０ｍｇ、収率６９％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【実施例１３】
【００６７】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,6-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率４３％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【実施例１４】
【００６８】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,4-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１４ｍｇ、収率４８％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【実施例１５】
【００６９】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3,5-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１３ｍｇ、収率４６％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【実施例１６】
【００７０】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-クロロ-2-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率６０％）。ＭＳ 442 (M+1)。
【実施例１７】
【００７１】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-6-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率５６％）。ＭＳ 442 (M+1)。
【実施例１８】
【００７２】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-ブロモ-2-フルオロフェニルメチルチオ)−チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率５４％）。ＭＳ 486, 488 (M+1)。
【実施例１９】
【００７３】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-フルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（２０ｍｇ、収率６１％）。ＭＳ 486, 488 (M+1)。
【実施例２０】
【００７４】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジクロロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１４ｍｇ、収率４５％）。ＭＳ 458 (M+1)。
【実施例２１】
【００７５】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-クロロ-4,5-メチレンジオキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１４ｍｇ、収率４４％）。ＭＳ 468 (M+1)。
【実施例２２】
【００７６】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１５ｍｇ、収率５４％）。ＭＳ 420 (M+1)。
【実施例２３】
【００７７】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１６ｍｇ、収率５５％）。ＭＳ 420 (M+1)。
【実施例２４】
【００７８】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メトキシフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１３ｍｇ、収率４５％）。ＭＳ 420 (M+1)。
【実施例２５】
【００７９】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１１ｍｇ、収率４０％）。ＭＳ 422 (M+1)。
【実施例２６】
【００８０】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-フルオロ-3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１６ｍｇ、収率４９％）。ＭＳ 476 (M+1)。
【実施例２７】
【００８１】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-ブロモ-5-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１４ｍｇ、収率４３％）。ＭＳ 482, 484 (M+1)。
【実施例２８】
【００８２】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メトキシカルボニルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１３ｍｇ、収率４４％）。ＭＳ 448 (M+1)。
【実施例２９】
【００８３】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１５ｍｇ、収率５８％）。ＭＳ 458 (M+1)。
【実施例３０】
【００８４】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１７ｍｇ、収率５６％）。ＭＳ 458 (M+1)。
【実施例３１】
【００８５】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１６ｍｇ、収率５７％）。ＭＳ 415 (M+1)。
【実施例３２】
【００８６】
(R)-2-[2-アミノ-5-(4-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１４ｍｇ、収率５２％）。ＭＳ 404 (M+1)。
【実施例３３】
【００８７】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１５ｍｇ、収率５４％）。ＭＳ 404 (M+1)。
【実施例３４】
【００８８】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１６ｍｇ、収率５８％）。ＭＳ 415 (M+1)。
【実施例３５】
【００８９】
(R)-2-[2-アミノ-5-(2-メチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１６ｍｇ、収率５９％）。ＭＳ 404 (M+1)。
【実施例３６】
【００９０】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-トリフルオロメチルフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
白色固体（１８ｍｇ、収率５８％）。ＭＳ 458 (M+1)。
【実施例３７】
【００９１】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-シアノフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
実施例５、段階（ａ）からの３０ｍｇの生成物を出発材料として用いた。
白色固体（２４ｍｇ、収率５７％）。ＭＳ 415 (M+1)。
【実施例３８】
【００９２】
(R)-2-[2-アミノ-5-(3-メチル-2-ニトロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-4-メチル-ペンタン-1-オール
淡黄色固体（１０ｍｇ、収率３２％）。ＭＳ 449 (M+1)。
【実施例３９】
【００９３】
N-(2-アミノ-5-フェニルメチルチオ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イル)-1-ヒドロキシメチル-シクロペンチルアミン
実施例１の手順に従って、5-フェニルメチルチオ-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジ
ン-2-イルアミンおよびシクロロイシノールから製造した。
黄色固体（９７ｍｇ、収率３９％）。ＭＳ 388 (M+1)。
【実施例４０】
【００９４】
(±)-2-[2-アミノ-5-(2,3-ジフルオロフェニルメチルチオ)-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-7-イルアミノ]-ヘキサン-1-オール
実施例１の手順に従って、5-(2,3-ジフルオロフェニルメチルチオ)-7-クロロ-チアゾロ[4,5-d]ピリミジン-2-イルアミン (WO 00/09511) および DL-2-アミノ-1-ヘキサノールから、トリエチルアミン（１当量）を加えて製造した。
白色固体（６０ｍｇ、収率１６％）。ＭＳ 426 (M+1)。
【００９５】
スクリーニング
本発明に係る化合物の薬理学的活性を下記のスクリーニングで試験した。
材料：組み換えヒトフラクタルカイン (fractalkine)（ｈＣＸ3ＣＬ１）を Pepro Tech Inc., UK から購入した。校正した日付で２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌの比放射能を有する組み換え［125Ｉ]−フラクタルカイン（ヒト）、および１２５０Ｃｉ／ｍｍｏｌの比放射能を有する［35Ｓ]−ＧＴＰγＳを、NEN (登録商標) Life Science Products, Inc., UK から購入した。コムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズを Amersham, UK から購入した。Ultima-Gold 液体シンチレーションカクテルをPackard Company, US から購入した。他の全ての化学薬品は分析用であった。
【００９６】
マウスフラクタルカイン受容体（ｍＣＸ3ＣＲ１）の発現：ヒトおよびラットＣＸ3ＣＲ１配列に基づくプローブをデザインし、そして Life Technologies SuperScriptTM マウス脳ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために利用した。ｃＤＮＡライブラリーから単離したクローンは完全コード配列であり、そして刊行されたｍＣＸ3ＣＲ１配列 (AC AF074912) と一致することが確認されている。コード配列全体を哺乳類発現ベクターｐＧＥＮ ＩＲＥＳ-ｎｅｏ (ASTRAZENECA) にサブクロ−ン化した。QIAGEN Plasmid Midi Kit を用いてプラスミドＤＮＡを調製し、そしてリン酸カルシウム沈殿プロトコール (Chen および Okayama, 1987, Mol. Cell. Biol. 7, 2745-2752) を用いてヒト胚腎（ＨＥＫ）２９３細胞にトランスフェクトした。ジェネティシン (geneticin) (G418, １mg／ml) 選択を用いて安定なクローンを産生した。１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、ｐＨ７.４、５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）および０.１ｍｇ／ｍｌのバシトラシン（プロテアーゼ阻害剤）を含む緩衝液中に細胞を収集し、そして３００ｘｇで１０分間遠心した。次いで細胞ペレットを収集緩衝液に再懸濁させ、プールし、そして Dounce ホモジナイザーを用いて均質化した。細胞膜を４８０００ｘｇで１０分間遠心し、次いで Ultra-Turrax T8 (IKA Labortechnik, Germany) を用いて収集緩衝液に再懸濁させた。タンパク質濃度を Harrington (1990, Anal. Biochem. 186, 285-287) によって記載されたようにマイクロタイタープレートで決定した。膜アリコートを −７０℃で貯蔵した。受容体発現を、全細胞を用いて［125Ｉ]-フラクタルカイン結合で確認した。
【００９７】
ＳＰＡ−リガンド結合アッセイ：競争結合アッセイを、白色透明底９６ウェルアイソプレート (Wallac, Finland) において全体積１００μl／ウェルで行った。各ウェルは、アッセイ緩衝液［５０ｍＭのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ、ｐＨ７.４、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、１ｍＭのＥＤＴＡ、０.５％(w/v)のゼラチン］中に１００ｐＭの［125Ｉ]-フラクタルカイン、５０ｐＭの受容体濃度と等価量の膜および０.７５０ｍｇのＳＰＡ-ビーズを含んでいた。試験化合物をＤＭＳＯに予め溶解し、そして１０％(v/v)のＤＭＳＯの最終濃度に達するまで加えた。膜を加えてアッセイを開始させ、そして室温で２時間インキュベートした。アッセイプレートを Microbeta Trilux 1450 (Wallac) で計数した。
【００９８】
ＧＴＰγＳ結合アッセイ：フラクタルカインは、ｍＣＸ3ＣＲ１を発現するＨＥＫ２９
３細胞膜中のＧ-タンパク質への［35Ｓ]−ＧＴＰγＳの結合を刺激する。試験化合物がフラクタルカイン誘導［35Ｓ]−ＧＴＰγＳ結合を阻害する能力を、ｍＣＸ3ＣＲ１／ＨＥＫ２９３膜（２０μg／２５０μl全体積）を用いて研究した。５０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、ｐＨ７.４、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、０.１％(w/v)のゼラチンおよび３μＭのＧＤＰを含むアッセイ緩衝液中で反応を行った。化合物および膜を３０℃で２０分間予備インキュベートしたのち、３００ｐＭのフラクタルカインを加えた。さらに３０分間インキュベートしたのち、０.１５〜０.２０ｎＭの［35Ｓ]-ＧＴＰγＳを加え、インキュベーションを３０分間続けた。Brandel 細胞収集装置 (Biomedical R&D Laboratories, Maryland, US) を用いてＧＦ／Ｂフィルター (Whatman Int. Ltd, UK) ですばやく濾過することにより、反応を終結させた。５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７.４および５ｍＭのＭｇＣｌ2を含む氷冷緩衝液でフィルターを４回洗浄した。シンチレーション液 (Packard Ultima-Gold, ４ml) を加え、Packard 2900TR 液体シンチレーション分析計を用いて放射能を測定した。
【００９９】
結果：ＳＰＡ-リガンド結合アッセイで試験したところ、実施例１〜４０の化合物は１０μＭ未満のＫi値を与え、これらの化合物が有用な治療活性を示すと期待されることを示した。
【国際公開パンフレット】
2004524351.tif 000015
2004524351.tif 000016
2004524351.tif 000017
2004524351.tif 000018
2004524351.tif 000019
2004524351.tif 000020
2004524351.tif 000021
2004524351.tif 000022
2004524351.tif 000023
2004524351.tif 000024
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2004524351.tif 000049
2004524351.tif 000050
2004524351.tif 000051
2004524351.tif 000052
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004524351.tif 000053
【国際調査報告】
2004524351.tif 000054
2004524351.tif 000055