(57)【要約】ＵＶ光線への曝露前に上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）の抑制剤を用いてヒトの皮膚を事前に処置することで、曝露後にマトリックスメタロプロテイナーゼ量が増えることなどから分かる皮膚の光老化を予防する。このような抑制剤は天然のものであると好ましく、その一例としてゲニステインがあげられる。このような目的で用いられる組成物はＥＧＦ−Ｒ抑制剤ならびにレチノイドなどの他のＭＭＰ抑制剤を含むものであると好ましい。【選択図】図５
2004504276.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの皮膚がＵＶ光線に曝露されることで誘発される皮膚の光老化を防止するための組成物の使用であって、太陽からのＵＶ光線に曝露されやすいヒトに投与または自己投与される、ＥＧＦ−Ｒタンパク質チロシンキナーゼ抑制剤を含むことを特徴とする使用。
【請求項２】
請求項１に記載の使用において、皮膚科学的に適した担体に前記抑制剤を添加し、投与を局所的に行うことを特徴とする使用。
【請求項３】
請求項２に記載の使用において、前記投与をＵＶ光線への曝露前に行うことを特徴とする使用。
【請求項４】
請求項３に記載の使用において、前記投与を曝露の少なくとも６時間前に行うことを特徴とする使用。
【請求項５】
請求項１に記載の使用において、チロシンキナーゼ抑制剤が、イソフラボンと、スラミンナトリウム（および関連の誘導体）と、ハービマイシンＡと、ラベンダスチンＡと、エルブスタチンと、ベンジリデンマロノニトリルと、臭素化キナゾリンと、チルホスチンと、フェニルアミノピリジンと、ピラゾロピリミジンと、ピロロピリミジンと、チオインドールと、ジアニリノフタルイミドと、アントラキノンと、これらの混合物と、からなる群から選択されていることを特徴とする使用。
【請求項６】
請求項４に記載の使用において、前記組成物がレチノイドをさらに含むことを特徴とする使用。
【請求項７】
請求項５に記載の使用において、前記イソフラボンがゲニステインまたはケルセチンであることを特徴とする使用。
【請求項８】
皮膚がＵＶ光線に曝露されることによるヒトの皮膚でのＭＭＰの誘導を防止するための組成物であって、皮膚科学的に適した担体に添加されるＥＧＦ−Ｒタンパク質チロシンキナーゼ抑制剤を含むことを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の組成物において、レチノイドと、Ｐ−４５０抑制剤と、抗酸化剤と、ＵＶサンスクリーン製剤と、これらの相互適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）混合物と、からなる群から選択される少なくとも１種の追加の化合物をさらに含むことを特徴とする組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物において、ＵＶＡ遮蔽剤およびＵＶＢ遮蔽剤と、レチノイドとＰ−４５０抑制剤と抗酸化剤とと、これらの相互適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）混合物とからなる群から選択される少なくとも１種の追加の化合物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組成物において、前記追加の化合物がレチノイドであることを特徴とする組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の組成物において、前記レチノイドがレチノールであることを特徴とする組成物。
【請求項１３】
皮膚がＵＶ光線に曝露されることによるヒトの皮膚でのＭＭＰの誘導を防止するための組成物において、皮膚科学的に適した担体に添加されるＥＧＦ−Ｒタンパク質チロシンキナーゼ抑制剤およびレチノイドを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物において、前記レチノイドがレチノールまたはレチノイン酸であることを特徴とする組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の組成物において、前記ＥＧＦ−Ｒ抑制剤がイソフラボンであることを特徴とする組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物において、前記イソフラボンがゲニステインであることを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
１．技術分野
本発明は、ヒトの皮膚の光老化、特に紫外線による光老化、とりわけ日光による光老化の予防および治療に、チロシンキナーゼ抑制剤、特に上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）抑制剤を使用するための新規な方法に関する。
【０００２】
２．従来技術の説明
本願発明者らの先の特許である米国特許第５，８３７，２２４号および同第６，１３０，２５４号明細書（当該特許の開示内容を本願明細書に援用する）には、特に太陽からのＵＶ光線によるヒトの皮膚の光老化について説明されている。同特許明細書に記載したように、ＵＶ光線には、さまざまな作用の中でもとりわけコラーゲン分解酵素を増加させる作用がある。このような酵素の一種にマトリックスメタロプロテイナーゼと呼ばれる類のものがあり、ＭＭＰと略される。皮膚にＭＭＰが生じるのは、ストレス活性化経路（ＳＡＰ）とマイトジェン活性化経路（ＭＡＰ）の双方におけるＵＶ惹起信号伝達と考えられているものが原因である。これらの経路は転写因子ＡＰ−１を活性化し、これがＵＶに曝露された皮膚でのＭＭＰの産生量を増加させる。本願発明者らの先の特許では、ＵＶ曝露前にヒトの皮膚にレチノイドを適用することで、以後のＭＭＰによるコラーゲン分解が抑えられる点について教示している。
【０００３】
１９９８年２月２８日に出願した本願発明者らによる係属中の出願第２８，４３５号には、ヒトの皮膚の老徴について記載してある。生涯を通じて基本的には日光のあたらない皮膚（腰または臀部の皮膚など）にもかかわらず、一般にＵＶ光線曝露による影響を受ける皮膚（顔面および額の皮膚など）と同じ病因がいくつか認められる。すなわち、コラーゲン合成の低下調節ならびにＭＭＰ活性の増加調節が認められるのである。高齢者の皮膚では、日光から保護した皮膚を毎日ＵＶ光線に曝露したのとほぼ同じようにＡＰ−１レベルが上方制御される。本願発明者らによる係属中の出願では、日光から保護したヒトの皮膚にレチノイドを適用すると、ＭＭＰレベルが低下すると同時にコラーゲンの合成が亢進し、皮膚が正常化されることを教示している。
【０００４】
１９９９年４月２日に出願した本願発明者らによる係属中の特許出願第２８５，８６０号には、ＵＶ照射によって引き起こされたヒトにおけるコラーゲン生合成の低下について説明されている。同特許出願明細書に記載したように、ヒトの皮膚へのＵＶ照射は真皮マトリックスでコラーゲン分解酵素（ＭＭＰ）を増加させるのみならず、コラーゲンの生合成も抑制する。このため、ＵＶ照射が原因でコラーゲンの構造が劣化するだけでなく、コラーゲンの再構築も妨げられてしまう。
【０００５】
哺乳動物細胞での重要な機能（細胞成長、細胞死、炎症など）の調節にはタンパク質チロシンキナーゼが関与している。タンパク質チロシンキナーゼには、受容体タンパク質チロシンキナーゼと非受容体タンパク質チロシンキナーゼの２種類がある。細胞表面にある多くの成長因子受容体にはタンパク質チロシンキナーゼの固有活性があるため、細胞表面の対応する受容体に結合すると、成長因子はタンパク質チロシンキナーゼの細胞内活性を刺激する。この固有活性化によって、一般に細胞の成長と生存につながる信号の形質導入カスケード（成長因子から想定される作用など）が開始される。
【０００６】
癌研究の分野では、タンパク質チロシンキナーゼ抑制剤について多くの研究活動が行われてきた。抑制剤化合物はチロシンキナーゼなどのタンパク質キナーゼの活性を抑制し、キナーゼに対して可逆的または不可逆的に作用してその作用を妨害することができる。上皮成長因子受容体ファミリ（ＥＧＦ−ＲまたはＥｒｂＢなど）、血小板由来成長因子受容体ファミリ（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子受容体ファミリ（ＦＧＦ−Ｒ）には、チロシンキナーゼの固有活性がある。これらの成長因子受容体が誤って調節されると、細胞の増殖が制御されなくなって腫瘍の増殖および／または転移につながることから、これらの成長因子受容体は癌の病態生理において重要なものであると考えられている。以下の特許のなかには、明細書に記載の抑制剤を乾癬などの皮膚の異常増殖疾患に有用であるとして開示しているものがある。タンパク質チロシンキナーゼ抑制剤について開示しているさまざまな特許として、米国特許第５，８４０，８８３号、同第５，９３５，９９３号、同第５，８９１，９１７号、同第５，７７３，４５９号、同第５，７１０，１７３号、同第５，６８６，４５７号、同第５，６５６，６５５号、同第５，６５０，４１５号、同第５，９２９，０８１号、同第５，７６０，０４１号、同第５，８８６，０２０号、同第５，８８０，１４１号、同第５，８８０，１３０号、同第５，８６９，４８５号、同第５，８４０，８８０号、同第５，８３４，５０４号、同第５，７６３，４７０号、同第５，３７４，６５２号、同第５，３０２，６０６号、同第５，１０８，９２１号、同第５，１９６，４４６号、同第５，９１４，３４３号、同第５，９１１，９９５号明細書があげられる（これらの特許明細書の開示内容を本願明細書に援用する）。また、次に挙げる抄録に他のタンパク質チロシンキナーゼ抑制剤についての記載がある。Ｔ．Ｏｈｍｏｒｉら、「Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｔｒｅｓｓｅｓ ｃａｎ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ＥＦＧＲ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（細胞ストレスによってＥＦＧＲキナーゼ抑制剤に対するヒト癌腫細胞の感受性が調節される場合がある）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４０、１９９９年３月；Ｈ．Ｍｅｔｔら、「ＣＧＰ ５９３２６， ａ ｐｏｔｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ （ＰＴＫ） ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｈｉｃｈ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂｌｏｃｋｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＥＧＦＲ） ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ（腫瘍細胞を発現している上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の成長を選択的に遮断する強力なタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）抑制剤であるＣＧＰ　５９３２６）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ｅ．Ｓｕａｒｅｚら、「Ｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ＧＭ３（ガングリオシドＧＭ３により上皮成長因子の脱リン酸反応が調節される）」、Ｐｒ��ｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ｇ．Ｊ．Ｋｅｌｌｏｆｆら、「Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｓ（潜在的な癌化学予防剤としての上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤）」、Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ、Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、５、６５７〜６６６、１９９６年８月；Ｊ．Ｄ．Ｍｏｙｅｒら、「Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ Ａｒｒｅｓｔ ｂｙ ＣＰ−３５８，７７４， ａｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ（上皮成長因子受容体チロシンキナーゼの抑制剤であるＣＰ−３５８，７７４によるアポトーシスの誘導と細胞周期の停止）」、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５７、４８３８〜４８４８、１９９７年１１月１日；Ｍ．Ｎ．Ｌａｎｇｏら、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ−α／ＥＧＦＲ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ＲＡＲ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｔｉｎｏｉｄ （ＬＧＤ １５５０）（新規なＲＡＲ選択性レチノイド（ＬＧＤ　１５５０）によるＴＧＦ−α／ＥＧＦＲ自己分泌信号伝達の調節）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４０、１９９９年３月；Ｄ．Ｗ．Ｆｒｙら、「Ｓｐｅｃｉｆｉｃ， ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＥＧＦＲ） ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ（チロシンキナーゼの上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリの特異的かつ不可逆的な抑制剤）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ｊ．Ｍ．Ｎｅｌｓｏｎら、「Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｖｅｒｓｕｓ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｐｙｒｉｄｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＥＧＦＲ） ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ（チロシンキナーゼの上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリの強力かつ特異的な抑制剤である置換キナゾリンおよびピリドピリミジン系列に対する不可逆的抑制と可逆的抑制とのｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける比較）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ａ．Ｊ．Ｋｒａｋｅｒら、「Ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃ−ｓｒｃ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ （ＴＫ） ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（選択的ｃ−ｓｒｃチロシンキナーゼ（ＴＫ）抑制剤のｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍活性）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４０、１９９９年３月；Ｓ．���ｏｃｋｅｒｉｌｌら、「Ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｉｎｄａｚｏｌｙｌａｍｉｎｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｐｙｒｉｄｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃｌａｓｓ−１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｐｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ（クラス１の受容体であるチロプシン（ｔｙｒｐｓｉｎｅ）キナーゼの抑制剤としてのインダゾリルアミノキナゾリンおよびピリドピリミジンの設計）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４０、１９９９年３月；Ｐ．Ｗ．Ｖｉｎｃｅｎｔ、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ ｋｎｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ， ＰＤ １６９４１４（新規なＥＧＦ受容体ファミリキナーゼ抑制剤であるＰＤ　１６９４１４のｉｎ　ｖｉｖｏ活性のキャラクタリゼーション）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ｓ．Ｊ．Ｐａｔｍｏｒｅら、「Ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＰＤ １６８３９３（ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼの不可逆的抑制剤であるＰＤ　１６８３９３のｉｎ　ｖｉｖｏ評価）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月；Ｌ．Ｊ．ＭｃＣａｗｌｅｙら、「Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｃｔｉｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡＰＫ ａｎｄ ＮＪＫ／ＳＡＰＫ ｆｏｒ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ９２ ｋＤａ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ（受容体チロシンキナーゼでは９２ｋＤａのゼラチナーゼの移行および誘導にＭＡＰＫおよびＮＪＫ／ＳＡＰＫの活性化が持続する必要がある）」、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、３９、１９９８年３月（ＭＥＫ−１抑制剤ＰＤ９８０５９関連）（これらの文献の開示内容を本願明細書に援用する）。
【０００７】
ＡＧ−４９４（チロシンキナーゼ抑制剤のチルホスチンファミリのメンバー）、ＡＧ−８２５（５−［（ベンズチアゾール−２−イル）チオメチル］−４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジリデンシアノ−アセトアミド）、ＡＧ−１４７８（４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）、ＥＩ−１４６（エルブスタチン類縁体）、２，５−ジヒドロキシケイ皮酸メチル、ＨＤＢＡ（２−ヒドロキシ−５−（２，５−ジヒドロキシベンジルアミノ）−２−ヒドロキシ安息香酸；Ｏｎｏｄａら、Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、５２：１２５２、１９８９）、ラベンダスチンＡ、ＲＧ−１３０２２（ＥＧＦ受容体を抑制する非フェノール系チルホスチン類縁体）、ＲＧ−１４６２０（ＥＧＦ受容体に対する選択性を持ち、長時間作用性である非フェノール系チルホスチン類縁体）、チルホスチン　２３（ＲＧ−５０８１０）、チルホスチン　２５（［（３，４，５−トリヒドロキシフェニル）−メチレン］−プロパンジニトリル、Ｇａｚｉｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３２：２３４４、１９８９；ＲＧ−５０８７５としても知られている）、チルホスチン　４６、チルホスチン　４７（ＲＧ−５０８６４、ＡＧ−２１３）、チルホスチン　５１およびチルホスチン　１をはじめとするさまざまなＥＧＦ−Ｒ抑制剤。タンパク質チロシンキナーゼの抑制剤のなかには、低濃度で特異的な抑制剤でありながら、高めの濃度でも他のタンパク質チロシンキナーゼを抑制できるものもある。
【０００８】
Ｓ．Ｂ．ＮｏｏｎｂｅｒｇおよびＣ．Ｃ．Ｂｅｎｚが手がけた総論（「Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｕｂｆａｍｉｌｙ−Ｒｏｌｅ ａｓ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ（上皮成長因子受容体サブファミリを標的とするチロシンキナーゼ抑制剤−抗癌剤としての役割）」、Ｄｒｕｇｓ、２０００年４月：５９（４））（この文献の開示内容を本願明細書に援用する）には、抗体、免疫毒素結合体、リガンド結合細胞障害性薬剤、小分子キナーゼ抑制剤をはじめとする、ＥＧＦ受容体のキナーゼ活性を抑制するためのさまざまな方法が記載されている。
【０００９】
発明の開示
上記の観点から、ヒトの皮膚でのＵＶによるＭＭＰの誘導を抑制する追加の化合物を同定すると有益であるように思われる。特に局所的に投与できる化合物を同定すると有益であるように思われる。
【００１０】
したがって、一態様において、本発明は、ＵＶ曝露前に、ＥＧＦ−Ｒの抑制剤を皮膚に適用することで、ヒトの皮膚の光老化を抑制するための方法を提供するものである。ゲニステイン（ダイズイソフラボン）などの天然化合物が好ましい。
【００１１】
もうひとつの態様において、本発明は、ＵＶＡ遮蔽剤とＵＶＢ遮蔽剤との組み合わせと、ＥＧＦ−Ｒ抑制剤と、好ましくは、レチノイド、直接作用型ＭＭＰ抑制剤（Ｇａｌａｒｄｉｎなど）および／またはシトクロムＰ−４５０によるレチノイドの分解を抑制する化合物などの別のＭＭＰ抑制剤とを含む、ヒトの皮膚の光老化を抑制するための組成物を提供するものである。
【００１２】
発明の説明
本発明は、ＭＭＰの形成を抑制するための組成物および方法を提供するものである。この組成物および方法は、ＵＶ照射されたヒトの皮膚での上記の有害な影響を担う成長因子受容体経路を抑制することで機能すると考えられる。
【００１３】
本願発明者らは、ＵＶ光線が、ヒトの皮膚においてさまざまな経路の中でも特に上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を活性化することを見出した。ＥＧＦの受容体すなわちＥＧＦ−Ｒは、ＥｒｂＢとしても知られているもので、ＥｒｂＢ受容体ファミリの一種である。ＥＧＦ−Ｒが活性化されると、そのＰＴＫ固有活性が活性化されてＭＭＰの増加調節につながる。
【００１４】
特定の作用理論に拘泥するつもりはないが、本願発明者らは、ヒトの皮膚では受容体による複数の経路がＵＶ照射によって活性化され、ＭＭＰの増加につながるか否かは主にＥＧＦ−Ｒの活性化に左右されることを自らが発見したと考えている。すなわち、ＵＶによってＥＧＦ−Ｒの活性化が進み、これがヒトの皮膚でＭＭＰの誘導につながる他の経路の活性化に必要なのである。したがって、特定のＥＧＦ−Ｒ　ＰＴＫ抑制剤を用いてＥＧＦ−ＲのＵＶ活性化を遮蔽することで、ＵＶによるＭＭＰの誘導を遮断することができる。突き詰めると、本願発明者らは、ＥＧＦ−ＲのＰＴＫ抑制剤を投与することでヒトの皮膚での（コラーゲンの分解による）ＵＶ誘発光老化を防止できることを発見した。図１の漫画図に示されるように、太陽からのＵＶ光線はサイトカイン受容体と成長因子受容体の両方を活性化する。それぞれの受容体は、自己の信号伝達経路によって、ｃＪＵＮタンパク質とｃＦＯＳタンパク質とのヘテロダイマーである活性化タンパク質−１（ＡＰ−１）を生成する。ヒトの皮膚では、ｃＦＯＳの濃度は基本的に一定のままである（Ｇ．Ｊ．ＦｉｓｈｅｒおよびＪ．Ｊ．Ｖｏｏｒｈｅｅｓ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ ａｎｄ ｉｔｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｂｙ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ（光老化とレチノイン酸によるその予防の分子機構）」、ＪＩＤ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｐｒｏｃ．、第３巻、Ｎｏ．１、第６１〜６８頁（１９９８年８月）参照）；皮膚のＵＶ曝露時に変動するのはｃＪＵＮの濃度なのである。この変動によってＡＰ−１受容体要素（ＲＥ）が活性化され、ＭＭＰの増加とこれに伴うコラーゲン生合成の減少を引き起こす。ヒトの皮膚中に存在するＲＯＳ（反応性酸素種）（太陽輻射によって誘導されるものなど）が、この２つの経路を活性化するのである。本発明は、成長因子受容体経路を抑制することでＥＧＦ−Ｒの機能を抑制することを主体としたものであるが、受容体経路を両方とも抑制することがヒトの皮膚の光老化を抑制する上で有益であろうことは図１から明らかなはずである。事実、本願発明者らが得た成果から、直接的なＥＧＦ−Ｒ抑制剤がいずれも実際にこれらの経路を両方とも抑制していることが分かるのである。
【００１５】
特にＵＶ照射されたヒトの皮膚でＭＭＰが誘導される際の信号伝達あるいはＭＭＰの形成につながる別の信号伝達に一体どの因子が必要なのかを判定するために、さまざまな試験を実施した。
【００１６】
実験
上述したように、ＥＧＦ−Ｒ分子は、その構造の一部として活性化可能なタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を含む。そこで、ＵＶに照らされることでＥＧＦ−Ｒ　ＰＴＫが活性化され、ＰＤ　１５３０３５がこの活性化を抑制することを実証するための実験を行った。ＰＤ　１５３０３５は、（ミズーリ州ボールウィンのＴＯＣＲＩＳから市販されている）ＥＧＦ−Ｒ抑制剤であり、パーク・デービス（１９９４，Ａｎｎ　Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）が開発した臭素化キナゾリンである。ＥＧＦ、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＵＶ光線のうちのいずれか１つで処理した細胞培養と未処理の細胞培養とを試験したのであるが、この処理についてはＰＤ　１５３０３５での前処理の前後のいずれかで行った。上記の処理の後、ＥＧＦ−Ｒ抗体を用いて細胞抽出物の免疫沈降を行い、続いて抗体を用いて細胞抽出物を試験し、ＥＧＦ−Ｒのチロシンキナーゼ部分が活性化されているか否かを判断した。受容体そのものについてもＥＧＦ−Ｒタンパク質の試験を行い、これが実際に存在していることを確認した（すなわち、リン酸化されたものとリン酸化されていないものの両方について、含まれるチロシンキナーゼの総量を測定する実験での対照群）。結果をみると、基本的に一定量のＥＧＦ−Ｒタンパク質が一貫して認められることから、すべての細胞抽出物にこの受容体が存在していることが裏付けられた。未処理（ＵＮＴＲ）細胞の場合と比較した際には、ＥＧＦ、ＵＶ、ＩＬ−１およびＴＮＦによってＥＧＦ−Ｒが活性化されているように見えた。しかしながら、被曝用の各作用物質に加えてＰＤ　１５３０３５でも細胞を処理すると、ＥＧＦ−Ｒでリン酸化されるチロシンキナーゼの量は基本的に未処理細胞の場合と同じであった。以上のことからＰＤ　１５３０３５がＥＧＦ−Ｒのチロシンキナーゼ機能のリン酸化（活性化）を抑制しているのは明らかである。
【００１７】
ＭＭＰはＩＬ−１でも誘導できるが、その受容体はＥＧＦ−Ｒのようなタンパク質チロシンキナーゼ活性を持たないため、キナーゼを補充することで活性化が可能であった。ＩＬ−１Ｒ（ＩＬ−１受容体）と結合し、この受容体によって活性化されてｃ−ＪＵＮキナーゼならびにＭＭＰの誘導、ひいてはコラーゲンの分解につながる経路を活性化するタンパク質チロシンキナーゼ（酵素）のひとつに、ＩＲＡＫ（ＩＬ−１受容体活性化キナーゼ）がある。培養中の未処理細胞ならびにＰＤ　１５３０３５で処理した培養中の細胞では、ＩＲＡＫ活性は最低基線量であった。これとは対照的に、ＵＶを照射してＩＬ−１で処理し、さらにＥＧＦでも処理した細胞では、ＩＲＡＫ活性が基線レベルよりもかなり高いことが明らかになった。ＰＤ　１５３０３５で処理し、続いてＵＶまたはＥＧＦに曝露した細胞では、ＰＤ　１５３０３５での前処理を施していない細胞よりもリン酸化ＩＲＡＫ量が明らかに少なかった。しかしながら、ＰＤ　１５３０３５で処理してＩＬ−１に曝露した細胞ではリン酸化ＩＲＡＫの減少が認められなかった。このように、ＵＶ、ＩＬ−１、ＥＧＦはいずれもＩＲＡＫのリン酸化を誘起し、ＰＤ　１５３０３５を用いて前処理を行うとＵＶまたはＥＧＦでの攻撃でＩＲＡＫのリン酸化が抑制されるが、ＩＬ−１で攻撃しても抑制は起こらない。これは予想外の結果である。ＥＧＦ−Ｒタンパク質チロシンキナーゼ抑制剤を使用すればＵＶ照射によるＥＧＦ−Ｒの活性化を抑制できるであろうことは想定していたが、ＵＶ照射によるＩＬ−１Ｒの活性化を抑制することは想定外であった。特定の作用理論に拘泥するつもりはないが、ＥＧＦ−Ｒ経路の活性化がＩＬ−１経路の活性化を引き起こす生化学的信号伝達（クロストーク）がＥＧＦ−Ｒ経路とＩＬ−１Ｒ経路との間に存在しているのではないかと思われる。したがって、この所見に狂いがないとすると、本願発明者らによる発明をさらにＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ抑制剤を用いて両方の経路からＵＶによって誘導されるＭＭＰを抑制するためのものであると解釈することができる。
【００１８】
また、本願発明者らは、ＵＶ光線への曝露後のヒト培養ケラチノサイトのｃ−ＪＵＮキナーゼ活性についても試験した。このとき、ＰＤ　１５３０３５すなわちＥＧＦ−Ｒを特異的に抑制する化合物で一部の細胞を前処理しておいた。これらの細胞でのＧＳＴ−ｃ−ｊｕｎのリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−ｊｕｎタンパク質）を試験した。このリン酸化はｃ−ＪＵＮキナーゼによって触媒されるものである。未処理細胞（ＵＮＴＲ）とＵＶに未曝露であるがＰＤ　１５３０３５での処理は行った細胞では、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＴ−ｃ−ｊｕｎタンパク質が基線量であった。ＵＶ光線に曝露したがＰＤ　１５３０３５での処理は行っていない細胞では、基線量を上回るかなりの量のｐｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＴ−ｃ−ｊｕｎが認められた。しかしながら、ＰＤ　１５３０３５で処理した後にＵＶ光線に曝露した細胞では、（ＰＤ　１５３０３５での処理の如何に関わらず）ｐｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＴ−ｃ−ｊｕｎタンパク質レベルが未処理細胞で見られた基線レベルに匹敵していた。これらの結果から、ＥＧＦ−ＲをＰＤ　１５３０３５で抑制すると、このようにしなければＭＭＰの誘導とコラーゲン合成の抑制につながるであろうｃ−ＪＵＮキナーゼのＵＶによる活性化が抑制されることが分かる。
【００１９】
ＰＤ　１５３０３５だけでなく、他の類の化合物も適している可能性があり、特に分子量が約４００未満の化合物が、クリーム、スプレーまたは美容的かつ皮膚科学的に許容可能な他の好適な製剤の形で経皮的に投与できるであろうと思われる。このような化合物（ＮｏｏｎｂｅｒｇおよびＢｅｎｚによる上述した文献に記載されているように）としては、ゲニステイン（４’，５，７−トリヒドロキシイソフラボン）、スラミンナトリウム（および関連の誘導体）、ハービマイシンＡ、ケルセチン、ラベンダスチンＡ、エルブスタチン、ベンジリデンマロノニトリル（チロシンリン酸化抑制剤についてはチルホスチンと呼ばれる）、臭素化キナゾリン（ＰＤ−１６０６７８およびＰＤ−１６８３８３など）、フェニルアミノ−およびピラゾロピリミジンおよびピロロピリミジン化合物（ＳＴＩ−５７１およびＰＫＩ−１６６など）、チオインドール、ジアニリノフタルイミド、アントラキノン、ＳＵ−５４１６およびＳＵ−６６６８、これらの誘導体があげられる。本願明細書にて説明する手法を利用して、特定の化合物でｉｎ　ｖｉｔｒｏ（生体外）における成果が認められるか否かを判断することができる。
【００２０】
上述した５，８３７，２２４号および６，１３０，２５４号の特許ならびに２８，４３５号の出願（これらの特許および出願の開示内容を本願明細書に援用する）に記載されている手法を利用してｉｎ　ｖｉｖｏ（生体内）での実験を行い、ヒトの皮膚における化合物の実効率を判断することができる。
【００２１】
人間のボランティア（いずれも事前にインフォームドコンセントを得ている）の協力を得て、彼らの皮膚をＵＶ光線に曝露する前にＥＧＦ−Ｒ　ＰＴＫ抑制剤で皮膚を事前に処置することで何らかの影響があるとすれば一体どのような影響があるのかを判断した。本願発明者らが標準的に使うビヒクル（７０：３０のエタノールおよびプロピレングリコール）または５％ゲニステイン（重量比）のＤＭＳＯ溶液のいずれかを用いて、ボランティアの腰または臀部の皮膚部分を事前に処置した。試験対象となる溶液をボランティアの腰または臀部の皮膚に（あるいは両方の溶液を使用した場合は隣り合った部分に）塗り、該当する部分に２４時間密封包帯をした。その後、該当する部分の生検を行うか、２ＭＥＤのＵＶ光線に曝露した上で曝露後に生検を行った。ＵＶ光源にはＵＶＢ蛍光ランプのモデルＦ３６Ｔ１２（可視光線および近赤外線の波長を２６％除いたもの）にＫｏｄａｃｅｌ　ＴＡ４０１／４０７フィルタ（ニューヨーク州ロチェスターのコダック社から入手可能）をかけたものを用いた。光源から１７インチ（約４３．２ｃｍ）離れた位置で２９０〜８００ｎｍの照射強度を１．４９×１０−３ｗ／ｃｍ２とした。これらの実験はＵＶＢ光源を用いて行ったが、ＵＶＡ光がＥＧＦ受容体を活性化する限り、本願明細書に開示する成果ならびに処置方法が上記のＵＶＢ光源の場合と同じように機能するであろうと思われる。
【００２２】
図２は、ボランティアの皮膚でＪＮＫ活性化の変動を試験して得られた結果を示している。図１に示すように、ＵＶ光線およびＲＯＳによってサイトカイン受容体経路が活性化され、これによってＪＮＫを介してＡＰ−１が生成され、太陽による早期老化が引き起こされる。ボランティアの皮膚に２４時間密封包帯をした後、生検を行い、他の部分を２ＭＥＤのＵＶ光線に曝露した後、その約４時間後に生検を行った。図２に示す結果から、ＵＶ光線ではＪＮＫの活性化が大幅に亢進したが、５％ゲニステインは活性化されるＪＮＫの量を大幅に減少させたことが分かる。また、これらの結果から、ゲニステイン溶液は皮膚に浸透できたことも分かる。したがって、外用ゲニステインはサイトカイン経路による光老化を抑制するための有効な組成物なのである。
【００２３】
図３は、ボランティアの皮膚でＵＶ光線によって誘導されるｃＪＵＮタンパク質の量の変動を試験して得られた結果を示している。ｃＪＵＮタンパク質についてＵＶ光線への曝露８時間後に生検を行ったこと以外は上述した手順と同じ手順を繰り返した。同図に示されるように、ゲニステイン溶液を局所塗布することで、ビヒクルで処置した皮膚と比べてＵＶ曝露後の皮膚のｃＪＵＮタンパク質量の増加が大幅に抑制された。図中の挿入図は、ゲニステインで処置した皮膚とビヒクルで処置した皮膚におけるｃＪＵＮタンパク質量を示すウェスタンブロットである。
【００２４】
図４は、ボランティアの皮膚でＵＶ光線によって誘導されるＭＭＰ−１　ｍＲＮＡの量の変動を試験して得られた結果を示している。ＭＭＰ−１　ｍＲＮＡについてＵＶ光線への曝露２４時間後に生検を行ったこと以外は上述した手順と同じ手順を繰り返した。同図に示されるように、ビヒクルで処置した皮膚ではソーラーシミュレータによって誘導されるＭＭＰ−１　ｍＲＮＡの増大が、ゲニステイン溶液を局所塗布することで大幅に抑制された。（挿入部分はＭＭＰ−１　ｍＲＮＡおよびレポーター遺伝子３６Ｂ４のノーザンブロットを示している。）このように、ゲニステインを局所投与すると直接ＭＭＰ−１を生成させる信号伝達が抑えられるという下向させる効果（ｅｆｆｅｃｔｓ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）がある。
【００２５】
すぐ上で説明した実施例（その結果を図２〜図４に示す）から、ゲニステインのような化合物に、ＭＭＰの増加調節につながるＵＶ誘導サイトカインの信号伝達を抑制する機能があることが立証される。図５は、ボランティアの皮膚でＵＶ光線への曝露後にリン酸化されたＥＧＦ−Ｒの量を試験して得られた結果を示している。上述したように、ＥＧＦ−Ｒはリン酸化によって活性化されるものである。防止はできないにしてもＥＧＦ−Ｒのリン酸化を抑えることでその活性が低下し、これに伴ってＵＶ光線曝露後のＭＭＰが増加する。まず、２４時間の密封包帯後、ボランティアの皮膚の生検試験をおこない、ビヒクル単独またはゲニステイン溶液単独でＥＧＦ−Ｒのリン酸化が誘導されるか否かを判定する。図５の柱状グラフにおける左側の２本の棒は、ゲニステイン溶液がＥＧＦ−Ｒのリン酸化を誘導しなかったことを示している。この同じ治験の一部として、ボランティアの皮膚を２ＭＥＤのＵＶ光線に曝露し、曝露の三十分（３０ｍｉｎ．）後に再度彼らの皮膚を生検試験した。図５の右側の部分に示されるように、ゲニステインで処置した皮膚では、ビヒクルで処置した皮膚に見られるＥＧＦ−Ｒのリン酸化が有意に少ないことが認められた。このように、ゲニステインを局所適用することで、皮膚がＵＶ光線に曝露された後に皮膚の光老化につながる成長因子受容体経路が抑制されるのである。
【００２６】
ＥＧＦ−Ｒ　ＰＴＫ抑制剤はＭＭＰの上方制御とコラーゲン生合成の抑制を引き起こす経路においてかなり早期に機能すると考えられるが、特に、レチノイド、直接作用型ＭＭＰ抑制剤をはじめとする他のＭＭＰ抑制剤、Ｐ−４５０抑制剤（皮膚でレチノイン酸受容体を分解する酵素を抑制する）、「抗酸化剤」（これもＭＭＰの上方制御を抑制するように見える）、サンスクリーン製剤などと上記の化合物とを併用すると、これらのタイプの組み合わせで用いると化合物の用量を少なくしても同じように有効となり得るという意味で他にもいくつか利点が得られる場合がある。
【００２７】
ゲニステインならびにそのβ−グルコシド配糖体であるゲニスチンは、豆乳、ｔｏｆｕ（豆腐）、ｍｉｓｏ（味噌）、ｎａｔｔｏ（納豆）および醤油に含まれている。他の天然ＥＧＦＲ活性化抑制剤ならびにその誘導体としては、スタウロスポリン、アエロプリシニン（Ｋ．Ｈｉｎｔｅｒｄｉｎｇら、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｅｒｏｐｌｙｓｉｎｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ： ａ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（エロプリシニン類縁体の合成と生物学的評価：新規な類の受容体チロシンキナーゼ抑制剤）」、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ　１９９８年８月；６（８）：１１５３〜６２；Ｈ．Ｗａｌｄｍａｎｎら、「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅｓ ｂｙ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ Ａｅｒｏｐｌｙｓｉｎｉｎ（エロプリシニンの合成類縁体による受容体チロシンキナーゼの選択的抑制）」、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．　１９９７、３６、Ｎｏ．１３〜１４、１５４１〜１５４２）、ラベンダスチンＡ（Ｍ．Ｓ．Ｓｙｍｔｈら、「Ｎｏｎ−ａｍｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎ Ａ ａｓ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（タンパク質チロシンキナーゼ抑制剤としてのラベンダスチンＡの非アミン系類縁体）」、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ　１９９３年１０月１日；３６（２０）：３０１０〜４）、ピセアタンノール（３，４，３’，５’−テトラヒドロキシトランススチルベン、植物の二次天然産物；Ｎ．Ｃ．Ｍｉｓｈｒａら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ， ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ， ｏｎ ａｓｅｘｕａｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（タンパク質チロシンキナーゼ抑制剤であるピセアタンノールが熱帯熱マラリア原虫の無性生殖による成熟に対しておよぼす抑制作用）」、Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ　１９９９年４月；３７（４）：４１８〜２０；　Ｋ．Ｔｈａｋｋａｒ、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅｄ ｓｔｉｌｂｅｎｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ（ピセアタンノールのポリ水酸化スチルベン類縁体の合成およびタンパク質チロシンキナーゼ抑制活性）」、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ　１９９３年１０月１日；３６（２０）：２９５０〜５）、ヒメニアルジシン（ＳＫ＆Ｆ　１０８７５２）およびハービマイシン（Ａ．Ｍ．Ｂａｄｇｅｒら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｏｖｉｎｅ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ／ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ， ｈｙｍｅｎｉａｌｄｉｓｉｎｅ（天然産物であるヒメニアルジシンによる、ウシ関節軟骨／軟骨細胞培養におけるインターロイキン−１誘導プロテオグリカン分解および一酸化窒素生成の抑制）」、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ　１９９９年８月；２９０（２）：５８７〜９３）、ケンフェロールおよびケルセチン（ならびにケンフェロールグリコシドケンフェロール−Ｏ−３−αラムノピラノシドおよびケンフェロール−Ｏ３−α−アラビノピラノシド、Ｍ．Ａｂｏｕ−Ｓｈｏｅｒら、「Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａ ｈｅｎｒｙｉ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｓｏｕｒｃｅｓ ａｓ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（タンパク質チロシンキナーゼ抑制剤としてのＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａ ｈｅｎｒｙｉおよび他の起源から得られるフラボノイド）」、Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ　１９９３年６月；５６（６）：９６７〜９；Ｍ．Ｃｕｓｈｍａｎら、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ａｎａｌｏｇｕｅｓ（フラボノイド類縁体の合成とタンパク質チロシンキナーゼ抑制活性）」、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ　１９９１年２月；３４（２）：７９８〜８０６）、エルブスタチンおよびチルホスチン（Ｍ．Ｔｒｅｕｎｅｒら、「Ｌｉｍｉｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｅｒｂｓｔａｔｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｆｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（合成エルブスタチン誘導体の持つ、チロシンキナーゼおよび細胞増殖抑制に対する限られた選択性）」、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｉｎｔ　１９９２年３月；２６（４）：６１７〜２５など）があげられる。
【００２８】
特定の化合物がＥＧＦＲの活性化を抑制する機能について判断するための本願発明者らのスクリーニング方法は、ＥＧＦなどのＥＧＦＲの活性化を誘導することが分かっているアゴニストを用いて攻撃したヒトの細胞（「Ｒｅｔｉｎｏｉｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｒｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＧＦ−ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｓｋｉｎ（ヒトのケラチノサイトおよび皮膚におけるヘパリン結合ＥＧＦ様成長因子遺伝子発現のレチノイドでの調節）」、Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９９８：７：３９１〜３９７にてＳ．Ｗ．ＳｔｏｌｌおよびＪ．Ｔ．Ｅｌｄｅｒが説明しているヒトの皮膚器官培養物など）であると好ましい培養細胞または器官培養物を利用するものである。必須ではないが、（図５に示す実験の場合に行ったように）試験対象のアゴニスト化合物をウェスタンブロットとも併用し、ＥＧＦＲの総量が変化せずに活性化された／リン酸化されたＥＧＦＲの量だけが増えることを確認できるようにすると望ましい。培養細胞または器官培養を所望のアゴニスト化合物に曝露し、続いて試験対象の抑制剤化合物を加え、最後に（ウェスタンブロットなどで）細胞を検査してＥＧＦＲの活性化の度合いを判断する。
【００２９】
治療で使用する抑制剤の量は、ＥＧＦＲに対する抑制剤の選択性、可逆的抑制剤であるか不可逆的抑制剤であるかの違い、抑制剤が皮膚に浸透する機能（組成物に浸透促進剤を含むようにしてもよい）、抑制剤の安定性、抑制剤の代謝などによって決まる。通常、０．１重量％から１０重量％、より好ましくは約５重量％の可逆的抑制剤組成物を用いる。不可逆的抑制剤であれば、これよりも少ない量で用いる。可逆的抑制剤と不可逆的抑制剤とを組み合わせたものを用いることもできる。
【００３０】
レチノイドとは、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＡアルデヒド（レチナール）、ビタミンＡ酸（レチノイン酸（ＲＡ））、全トランス型レチノイン酸、９−シス型レチノイン酸および１３−シス型レチノイン酸を含む）、エトレチナート、さらには欧州特許出願公開第０　３７９　３６７号（Ａ２）、米国特許第４，８８７，８０５号および米国特許第４，８８８，３４２号明細書（これらの特許明細書の開示内容を本願明細書に援用する）に記載されているような他の化合物の天然および合成の類縁体の総称である。ｉｎ　ｖｉｖｏにてレチノイド活性を呈する限り、さまざまな合成レチノイドおよびレチノイド活性を持つ化合物が本発明において有用であると思われる。このような化合物は、米国特許第５，５１４，８２５号、同第５，６９８，７００号、同第５，６９６，１６２号、同第５，６８８，９５７号、同第５，６７７，４５１号、同第５，６７７，３２３号、同第５，６７７，３２０号、同第５，６７５，０３３号、同第５，６７５，０２４号、同第５，６７２，７１０号、同第５，６８８，１７５号、同第５，６６３，３６７号、同第５，６６３，３５７号、同第５，６６３，３４７号、同第５，６４８，５１４号、同第５，６４８，５０３号、同第５，６１８，９４３号、同第５，６１８，９３１号、同第５，６１８，８３６号、同第５，６０５，９１５号、同第５，６０２，１３０号など、書類上Ａｌｌｅｒｇａｎ　Ｉｎｃ．に譲渡された多くの特許に記載されている。レチノイド活性を持つと記載されているさらに他の化合物が、米国特許第５，６４８，５６３号、同第５，６４８，３８５号、同第５，６１８，８３９号、同第５，５５９，２４８号、同第５，６１６，７１２号、同第５，６１６，５９７号、同第５，６０２，１３５号、同第５，５９９，８１９号、同第５，５５６，９９６号、同第５，５３４，５１６号、同第５，５１６，９０４号、同第５，４９８，７５５号、同第５，４７０，９９９号、同第５，４６８，８７９号、同第５，４５５，２６５号、同第５，４５１，６０５号、同第５，３４３，１７３号、同第５，４２６，１１８号、同第５，４１４，００７号、同第５，４０７，９３７号、同第５，３９９，５８６号、同第５，３９９，５６１号、同第５，３９１，７５３号明細書などの他の米国特許明細書に記載されており、これらの特許明細書のすべての開示内容を本願明細書に援用する。
【００３１】
ＭＭＰは、ＢＢ２２８４（Ｇｅａｒｉｎｇ，Ａ．Ｊ．Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９４）３７０：５５５〜５５７に記載）、ＧＩ１２９４７１（ＭｃＧｅｅｈａｎ　Ｇ．Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９４）３７０：５５８〜５６１に記載）およびＴＩＭＰ（ゼラチナーゼおよびストロメライシンをはじめとする脊椎動物のコラゲナーゼおよび他のメタロプロテイナーゼを抑制する、メタロプロテアーゼの組織抑制剤）によっても抑制される。本発明で有用なさらに他の化合物として、Ｇａｌａｒｄｉｎ、Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ、Ｍａｒｉｍａｓｔａｔなどの抑制剤ならびに（さまざまな病因の中でもとりわけ皮膚潰瘍や皮膚癌、表皮水疱症の治療時にＭＭＰを抑制する上で有用であるとして）欧州特許出願公開第０　５５８　６３５号（Ａ１）および同第０　５５８　６４８号（Ａ１）に開示されている抑制剤をはじめとする、ヒドロキサム酸塩およびヒドロキシ尿素誘導体などのＭＭＰの直接抑制剤があげられる。レチノイドについては、Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ，Ｌ．Ａ．（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｋｉｎ、第２版（ニューヨーク：オックスフォード大学出版局、１９９１）、第１７章）に、転写制御を意味するであろうＴＩＭＰ　ｍＲＮＡの定常状態レベルの上昇を引き起こすとの報告がある。ただし、本願発明者らの発見に立脚すると、本願発明者らはこれがｉｎ　ｖｉｖｏでのヒトの皮膚にはあてはまらないことを見出したのである。
【００３２】
レチノイン酸を代謝するシトクロムＰ−４５０酵素を抑制する薬剤であればいずれも本発明を実施するにあたって役立つ可能性がある。皮膚では、レチノイドが活性形態としてレチノイン酸（ＲＡ）に変換される。続いて水酸化によってレチノイン酸（ＲＡ）が代謝されて不活性化し、（ＲＡ　４−ヒドロキシラーゼを介して）４−ヒドロキシ−ＲＡになり、これがシトクロムＰ−４５０依存性モノオキシゲナーゼ系が媒介する作用で酸化されて４−オキソ−ＲＡになる（Ｓ．Ｋａｎｇら、「Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ａｕｇｍｅｎｔｓ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｒｅｔｉｎｏｌ Ｉｎ Ｖｉｖｏ（リアロゾールがヒト上皮レチノイン酸４−ヒドロキシラーゼ活性を抑制し、レチノイン酸およびレチノールに対するｉｎ　ｖｉｖｏでのヒトの皮膚応答を特異的に増大）」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０７：１８３〜１８７（１９９６年８月）；Ｅ．Ａ．Ｄｕｅｌｌら、「Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ−４５０−ｄｅｒｉｖｅｄ ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｆｔｅｒ Ｔｏｐｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｔｏ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ（レチノイン酸受容体による転写をｉｎ　ｖｉｔｒｏにて刺激するのに必要な濃度と比較した、レチノイン酸をｉｎ　ｖｉｖｏにて局所適用した後のレチノイン酸およびシトクロムＰ−４５０誘導４−ヒドロキシレチノイン酸のヒトでの皮膚レベル）」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｓｋｉｎ Ｒｅｔｉｎｏｉｄ Ｌｅｖｅｌｓ ａｎｄ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｇｅｎｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ、９０：１２６９〜１２７４（１９９２年１０月）；Ｅ．Ａ．Ｄｅｕｌｌら、「Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｉｓｏｍｅｒｓ Ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｅａｃｈ Ｉｎｄｕｃｅ ａ ４−Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ Ｔｈａｔ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ Ｏｎｌｙ Ｔｒａｎｓ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ（ｉｎ　ｖｉｖｏにてヒトの皮膚に適用されるレチノイン酸異性体はいずれも、トランス型レチノイン酸のみを不活性化する４−ヒドロキシラーゼを誘導する）」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０６：３１６〜３２０（１９９６年２月）；これらの文献の開示内容を本願明細書に援用する）。このように、全トランス型ＲＡの排泄代謝に干渉する化合物すなわち、９−シス型ＲＡおよび１３−シス型ＲＡなどの局所適用されたレチノイドの活性代謝産物は、皮膚におけるＲＡの量を有益な形で増加させることになる。したがって、皮膚において天然（全トランス型）ＲＡの分解を防止すればその濃度を効果的に高めることができ、本願明細書に記載したような恩恵が得られるのである。皮膚科学的に許容可能であり、かつ���Ｐ−４５０によるＲＡの分解に対して抑制作用を持つまたは抑制作用を持つ可能性がある化合物の例として、たとえば、ケトコナゾール（米国特許第４，１４４，３４６号および同第４，２２３，０３６号）、フルコナゾール（米国特許第４，４０４，２１６号）、イトラコナゾール（米国特許第４，２６７，１７９号）、リアロゾール、イルテマゾール（ｉｒｔｅｍａｚｏｌｅ）などをはじめとするアゾール、特にトリアゾールがあげられる。これらの化合物の関連化合物で同じく有用となり得るものに、フルシトシンなどのジアジンがある。また、このようなシトクロムＰ−４５０抑制剤を量を減らしたレチノイドと併用する方法も有益であろう。Ｐ−４５０抑制剤はレチノイドの代謝排泄を抑えるため、同じ結果を達成するのに必要なレチノイドの量は少なくてすむ。さらに、特定の化合物がＲＡの分解を抑制するか否かを判断するには、この化合物を適用し、被検化合物を局所適用することでＲＡレベルが上昇しているのであれば同じようにレベルが上がるＣＲＡＢＰ（細胞内レチノイン酸結合タンパク質）の変化を調べる試験を行う分析法を利用すればよい。
【００３３】
局所的に塗布可能であって、かつ特許請求の範囲に記載の発明を実施する上で有用なさらに他のＭＭＰ抑制剤として、ミノサイクリン、ロリテラサイクリン（ｒｏｌｉｔｅｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、クロルテトラサイクリン、メタサイクリン、オキシテトラサイクリン、ドキシサイクリン、デメクロサイクリンなどのテトラサイクリンおよびその誘導体、さらには上記化合物のさまざまな塩があげられる。アレルギー反応または感作反応を生じる可能性があるため、テトラサイクリンの局所投与時にはこのような有害反応の有無を慎重に監視しなければならない。
【００３４】
ＭＭＰ抑制剤には、（各特許明細書の開示内容を本願明細書に援用する、米国特許第５６３７７０３号、米国特許第５６６５３６７号およびフランス特許出願公開第２，６７１，７２４号明細書に記載されているような）ゲニステインおよびケルセチンおよび関連化合物ならびに、ＮＡＣ（Ｎ−アセチルシステイン）、緑茶エキスなどの他の抗酸化剤も含まれる。ＮＡＣはグルタチオンという強力な抗酸化剤の前駆体であるが、グルタチオンよりもヒトの皮膚に対する浸透性がかなり高いため、局所に塗布される組成物にはＮＡＣの方が適している。ＭＡＰキナーゼカスケードなどによってＭＭＰの誘発を開始させたり引き起こしたりする遊離基および反応性酸素種を消滅させるか、そうでなければ減少させるよう機能する限り、抗酸化剤もＭＭＰ抑制剤とみなすことができる。抗酸化剤としては、（上述したような）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）などのグルタチオンおよびその前駆体、さらに広義にはＮ−ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯシステイン（式中、ｎは０から８までの整数、より好ましくは４以下の整数である）、さらには米国特許第５，２９６，５００号（その開示内容を本願明細書に援用する）に記載されているような関連化合物ならびにその誘導体があげられる。また、抗酸化剤としては、（ｉ）β−カロテンおよびその誘導体、他のカロテノイドおよびビタミンＥならびに関連のトコフェロールなどの脂溶性化合物、（ｉｉ）ビタミンＣ、グルタチオン、ＮＡＣなどの水溶性化合物、（ｉｉｉ）他の化合物（顔料の一種でトマトレッドが得られるものやジャガイモに含まれるリポ酸など）もあげられる。
【００３５】
塗料および染料の業界では、車両、住宅および衣服の顔料または色素の劣化を防ぐためのさまざまなＵＶ遮蔽剤が周知である。ヒトの皮膚で使用するのに特に好ましいＵＶＡ１／２遮蔽剤に、ＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）１７８９およびＰＡＲＳＯＬ（Ｒ）ＭＣＸ（シェリング・プラウ）ならびに、このＵＶＡ遮蔽剤の調製について記載した米国特許第４，３８７，０８９号に言及されているものがある。本願発明者らは、真のＵＶＡ遮蔽剤はｃＪＵＮ　ｍＲＮＡおよびコラゲナーゼならびにゼラチナーゼの誘発を抑制することを見出した。最も好ましくは、ＵＶ遮蔽剤は約３２０ｎｍ未満と約３８０から３９０ｎｍの両方の放射を遮蔽するものとする。また、２０００年７月６日にファイルされた本願発明者らによる係属中の出願第６０／２１６２４４号ならびに上述した米国特許第６，１３０，２５４号（これらの公報の開示内容を本願明細書に援用する）に、他のサンスクリーン組成物が記載されている。
【００３６】
当業者には、さまざまな変更、修正および追加が明らかであろう。このような本発明の趣旨の範囲に包含される事項は、添付の特許請求の範囲に記載の内容に付随するものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】太陽からのＵＶ光線によってヒトの皮膚で光老化を生じ得る２つの経路の説明に供せられる図である。
【図２】被験者の皮膚をゲニステイン溶液で事前に処置し、皮膚をＵＶ光線に曝露した後に予想されるＪＮＫ活性化の亢進に対する影響を判定する形で行った、ＵＶ光線への曝露後に生検を行ったボランティアの皮膚のｉｎ　ｖｉｖｏ試験結果を示す図である。
【図３】被験者の皮膚をゲニステイン溶液で事前に処置し、皮膚をＵＶ光線に曝露した後に予想されるｃＪＵＮタンパク質の増大に対する影響を判定する形で行った、ＵＶ光線への曝露後に生検を行ったボランティアの皮膚のｉｎ　ｖｉｖｏ試験結果を示す図である。
【図４】被験者の皮膚をゲニステイン溶液で事前に処置し、皮膚をＵＶ光線に曝露した後に予想されるＭＭＰ−１　ｍＲＮＡの増大に対する影響を判定する形で行った、ＵＶ光線への曝露後に生検を行ったボランティアの皮膚のｉｎ　ｖｉｖｏ試験結果を示す図である。
【図５】被験者の皮膚をゲニステイン溶液で事前に処置し、皮膚をＵＶ光線に曝露した後に予想されるＥＧＦ−Ｒリン酸化の亢進に対する影響を判定する形で行った、ＵＶ光線への曝露後に生検を行ったボランティアの皮膚のｉｎ　ｖｉｖｏ試験結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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