(57)【要約】本発明のペルフルオロ有機化合物（ＰＦＯＣ）の乳濁液の乳濁液はガス輸送特性を持ち、血管注射の為に用いられ、且つ少量選択されている３つ以上のＰＦＯＣ添加物に加えて、生物から容易に除去できるペルフルオロカーボン、及び生物から除去が難しいペルフルオロ第３アミンを含んで成る。前記添加物は構造、並びに物理及び化学的特性に関して主たる成分に近く、そして徐々に変化する特性を有するＰＦＯＣの範囲を生む。前記乳濁液は又ペルフルオロアルカンの添加物を微量に含んで成る。成分は、ＰＦＯＣ乳濁液の低い粘性に加えて、乳濁液の保存の間及び血流中での安定性を決めるで、製剤の高い酸素容量を担い、且つ組織への酸素の供給を向上する。乳濁液を生産する為に、安定化剤は７５℃に迄加熱した。全成分をＣＯ２ で飽和し、そしてＣＯ２ を注入した時にホモジネーションを行った。よってペルオキシドの発生及び反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｃｉｔｙ ）を最小限にした。
2004504344.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医療目的の為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液であって、急速に除去可能なペルフルオロカーボン及びペルフルオロ化した第３アミン、安定化剤、生理学的に許容できる水性塩類溶液をエネルギー代謝の基質と共に含んで成り、更にそれは、物理化学的な特性例えば、ヘキサン中に溶解する臨界温度が主となるペルフルオロ有機化合物に近い３つ以上の急速に除去可能なペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０及び３つ以上の徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−１３ の混合物並びにＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物少量を含んで成り、急速に除去可能なペルフルオロカーボンの混合物の含有率は主となるペルフルオロカーボン含有率の１５％を超えず、徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンの含有率は、主となるペルフルオロ化した第３アミンの含有率の５０％を超えず、そしてＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物の含有率は、０．１容量％を超えないことを特徴とした乳濁液。
【請求項２】
ペルフルオロデカリンのシス及びトランス形態にある異性体の混合物を、主となる急速除去可能なペルフルオロカーボンとして用いることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項３】
ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチルシクロヘキシル）−ピペリジンの異性体の混合物を主となる徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンとして用いていることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項４】
急速に除去可能なペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０の混合物が、ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソデカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの混合物を含んで成ることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項５】
徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−１３ の混合物が、シス及びトランス形態のペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（メチルシクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの混合物を含んで成ることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項６】
急速に除去可能なＰＦＯＣと徐々に除去可能なＰＦＯＣの割合が、２：１又は３：１であることを特徴とした、請求項１〜５のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項７】
６，０００〜１０，０００Ｄａの分子量のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンの共重合体を安定化剤として用いていることを特徴とした、請求項１〜５のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項８】
安定化剤の含有率が２〜４％であることを特徴とした、請求項１又は７記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項９】
生理学的に許容できる水性塩類溶液が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２ 、ＮａＨＣＯ３ 、ＮａＨ２ ＰＯ４ 及びＤ−グルコースを含んで成ることを特徴とした、請求項１〜８のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項１０】
好適な改良型を特徴とし、それが、
−　主となる急速に除去可能なペルフルオロカーボンをペルフルオロデカリンのシス及びトランス異性体の混合物の形態において６容量％；
−　ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、トランス−ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソ−デカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、シス−ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの混合物を含んで成る急速に除去可能なペルフルオロカーボンの混合物を、０．７容量％；
−　主となる徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンを、ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチル−シクロヘキシル）−ピペリジンの異性体の混合物の形態において、２．３容量％；
−　ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミンのシス−及びトランス−異性体、ペルフルオロメチルプロピル−（メチル−シクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの異性体の混合物を含んで成るペルフルオロ化した第３アミンの混合物を、総量１．０容量％；
−　Ｈ−ペルフルオロアルカンの含有率が０．０２容量％；
−　ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンブロックの共重合体中の比が４：１であり分子量は８，０００Ｄａ
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項１１】
血液の交換及び／又は器官の灌流の為に用いる場合、前記水性塩類溶液が、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、及び１１ｍＭのＤ−グルコースを含むことを特徴とした、請求項１〜７のいずれか１項記載の乳濁液。
【請求項１２】
心臓マヒの為に用いる場合、前記水性塩類溶液が、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、１１ｍＭのＤ−グルコース、５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのナトリウムβ−オキシブチレート、５ｍＭのコハク酸ナトリウム、５ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、５ｍＭのタウリンを含むことを特徴とした、請求項１〜８のいずれか１項記載の乳濁液。
【請求項１３】
医療目的の為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の調製の為の方法であって、液体状のペルフルオロ有機化合物の混合物を安定化剤の水性溶液を通過させることによって非熱分解（ａｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）無菌成分を混合し、そしてその後生じたプロ乳濁液の２回路高圧ホモジナイザー中での多重ホモジナイゼーションを含んで成り、
−　混合する前に、液体状のペルフルオロ有機化合物及び安定化剤の水性容液の混合物をＣＯ２ ガスで飽和し、そして安定化剤の水性溶液を７５℃を超さないように加熱し、
−　前記液体状のペルフルオロ有機化合物の混合物をＣＯ２ ガスの環境中で２回以上噴流において、冷却した安定化剤の溶液に供給し、
−　プロ乳濁液を、３００〜４５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第１回路を通過させると同時に激しく撹拌し、
−　乳濁液を４００〜６００ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第２回路において多重ホモジネートに掛け、
−　プロ乳濁液を調製し且つその後のホモジナイズをＣＯ２ ガスの環境中で行う方法
を特徴とした、方法。
【請求項１４】
好適な改良型において、安定化剤の溶液を１２時間に渡り７０℃の温度で加熱することを特徴とした、請求項１３記載の乳濁液の調製の為の方法。
【請求項１５】
前記プロ乳濁液をホモジナイザーの第１回路を３〜４回通過させ、そして当該乳濁液を第２回路を４〜５回通過させていることを特徴とした、請求項１１記載の乳濁液の調製の為の方法。
【請求項１６】
血管の空気及び脂肪塞栓症を治療する為の、ペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【請求項１７】
四肢の閉塞性血管傷害（ｏｂｌｉｔｅｒａｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｕｒｅｓ ）を治療する為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【請求項１８】
毒性傷害を治療及び予防する為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は医療産業の分野に関連し、そして詳細には、失血を補う時の静脈内投与及び低酸素又は心筋の損傷に伴う様々な疾患を治療する為、並びに又造影剤及び灌流剤としてのガス輸送特性（ｇａｓ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ）を有するペルフルオロ有機化合物（ＰＦＯＣ）の乳濁液の薬用形態の調製の為の方法に関連する。
【０００２】
技術の説明
ガス輸送ＰＦＯＣ乳濁液の利用の可能性の範囲は広がりつつあるが、一方で、これら製剤の用途は以下の観点において今尚制限されている。
【０００３】
・酸素の供給が十分に有効ではない。詳しくは、その理由は、全血と比べてＰＦＯＣの酸素容量が不十分だからである。これで、ガス輸送成分の濃度を例えば、最大で６５容量％増やすＰＦＯＣ乳濁液の開発がなされている〔欧州特許第０３０７０８７Ｂ１、刊行日１９９４年６月８日〕。しかし、乳濁液中のＰＦＯＣ濃度の増加は必ず調製品の粘度の増加が伴う。結果として、高い絶対酸素容量にもかかわらず、高濃度のＰＦＯＣを有する乳濁液は、組織に対する十分に効果的な酸素供給を担わない。その理由は、絶対酸素容量／粘度比により決定される動的酸素容量が低いからだ。調製品の粘度が高い時、分時拍出量の増加及び血液の流動学的な特性の上昇を誘導する心血管系の補償反応は大血管の十分な灌流も循環も司さどれず、そして結果的に、組織への酸素の供給が妨害される。
【０００４】
・ＰＦＯＣ乳濁液の反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｃｉｔｙ ）は比較的高い。
第１に、反応原性は、ＰＦＯＣ粒子の吸着層を形成する安定化剤中のペルオキシド基の形成に関連する〔Ｌ．Ｅ．ＭｃＣｏｙ， Ｃ．Ａ．Ｂｅｒｋｅｎ， Ｔ．Ｈ．Ｇｏｏｄｉｎ， Ｍ．Ｊ．Ｂａｒｎｈａｎｔ， Ｓｃａｎｎｅｒ． Ｅｌｅｃｔｒｏｎ． Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ， １９８４， Ｖ． Ｉ．， ｐ３１１ 〕。そして第２に、生物の免疫系により外来の物質として認識される、乳濁液中の大粒子の存在に関連する〔Ｓ．Ｉ．Ｖｏｒｏｂ’ｅｖ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｕｄｙ ｏｆ ｓｏｍｅ ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ”， ｉｎ ： Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｉｎｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ （Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃ）， Ｐｕｓｈｃｈｉｎｏ， １９９５， ｐｐ． ３３−４１ （ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ） 〕。
【０００５】
・乳濁液の毒性の現われる可能性は、生物学的構造体に対するガス輸送血液の代替物の生産の為に伝統的に用いられている生物より急速な除去が可能な脂肪親和性ペルフルオロカーボンの作用によって、そして血流中での乳濁液の粒子の凝集及び粗大化（ｃｏａｒｓｉｎｇ）によって生じる。急速に除去可能なペルフルオロカーボンは容易に酵素系及び生物膜と相互に反応し、血液の成分及びタンパク質を形成する。そして多くの研究から分かるように、ヒトと比較できる、低い血流速を持つ大型実験動物の過敏性反応（ａｎａｐｈｉｌａｃｔｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ）を誘導し、そして（５０〜８０日）死亡を遅延した（Ａ．Ｎ．Ｓｋｌｉｆａｓ、Ｖ．Ｖ．Ｏｂｒａｚｔｓｏｖ、Ｋ．Ｎ．Ｍａｋａｒｏｖ、Ｄ．Ｇ．Ｓｈｅｋｈｔｍａｎ、Ｎ．Ｉ．Ｋｕｋｕｓｈｋｉｎ、“Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｄｅｃａｌｉｎ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｒａｂｂｉｔｓ”、ｉｎ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｒｔｉｃｌｅｓ ： “Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ。Ｎｅｗ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ”。Ｐｕｓｈｃｈｉｎｏ、１９９３、ｐｐ． １２９−１３５ （ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ） 〕。
【０００６】
・ＰＦＯＣ乳濁液の製剤の高価格は、個別のＰＦＯＣを調製する必然性及びそれらの、混合物からの精製に対する高い要求に関連しており、これらが、その使用者へのアクセスを難しくする。
【０００７】
２成分ＰＦＯＣ乳濁液が公知である。（例えば、ＵＳＳＲ特許第７９７５４号、ｐｕｂｌ． ｉｎ Ｂｕｌｌ．“Ｏｔｋｒｙｔｉｙａ， Ｉｚｏｂｒｅｔｅｎｉｙａ， ．．．”， Ｎｏ． ２， １５．０１．１９８１， ｏｒ ＲＦ特許第２０８８２１７号、ｐｕｂｌ． ｉｎ Ｂｕｌｌ．“Ｉｚｏｂｒｅｔｅｎｉｙａ．．．（Ｚａｙａｖｋｉ．．．，）”， Ｎｏ． ２４， ２７．０８．１９９７を参照のこと）ここにおいて、急速に除去可能なペルフルオロカーボンに加えて、毒性をより低くする為の、徐々に除去可能な物質が含まれている。例えば、ペルフルオロ化した第３アミンであり、発現された脂質親和性特性を示し且ついかなる方法によっても生物学的な物体と反応しない。例えば乳濁液の組成物中での存在及び徐々に除去可能なペルフルオロトリブチルアミン（このペルフルオロトリブチルアミンは各動物の寿命に比例した期間に渡り、様々な器官のマクロファージ中に保持される（故に医療目的に用いられていない））の器官内の長期の蓄積は病理学的な変化をもたらさないことも分かっている。これは３０年を超える、毒性及び発癌の可能性を発見することが狙いの研究並びに他の比較的徐々に除去可能なペルフルオロ有機化合物を含む、ペルフルオロ有機化合物の乳濁液の、臨床における１６年の実験により確められている。〔Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｏｒｇａｎｓ． １９８８， ｖｏｌ． １６， Ｎｏ．１−３， Ｓｐｅｃｉａｌ Ｉｓｓｕｅ ｆｒｏｍ ＩＩＩ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ“Ｂｌｏｏｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｓ”； Ａ．Ｍ．Ｇｏｌｕｂｅｖ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ａｎｄ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ｂｌｏｏｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ．／ Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｎｅｗ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）． Ｐｕｓｈｃｈｉｎｏ ： ＯＮＴＩ ｏｆ Ｐｕｓｈｃｈｉｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ． Ｒｕｓｓｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９９３， ｐｐ． ８８−９３ （ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ） 〕。
【０００８】
ロシア特許第２０８８２１７号による２成分ＰＦＯＣ乳濁液は、請求した乳濁液に、その処法に関して最も近い。それは、急速に除去できる脂質親和性のペルフルオロカーボンペルフルオロデカリン（ＰＦＤ）か又はペルフルオロオクチルブロミドと徐々に除去できる脂質非親和性のペルフルオロ化した第３アミン、ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−ピペリジン（ＰＦＭＣＰ）との４０−５０容量％〜１−１０容量％の割合の混合物を含んで成り、そしてリン脂質によって安定化されている。安定化するリン脂質の量は２〜６％である。係る乳濁液の静脈内投与により、６０日の観察の間、１００％のウサギが生存した。しかし、この乳濁液は高い粘性（１４〜１６ｃＰ）を有し、上記のように、製剤の高い絶対酸素容量にもかかわらず、動的酸素容量の急激な減少につながり且つ十分な酸素の供給を担わない。
【０００９】
更に、脂質親和性のＰＦＤ及び脂質非親和性ＰＦＭＣＰのように物理的に特性がはっきりと異なるＰＦＯＣの利用は、乳濁液粒子内部のフルオロカーボン相の集合につながり、これは安定化剤の選択の複雑にし、そして乳濁液の安定性を与える。結果として、保存の間及び乳濁液が血流に入った時に乳濁液の分散度が変わる。
【００１０】
最後に、この発明において、各々高度に精製されたペルフルオロデカリン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−ピペリジンを用いて前記乳濁液が調製された。これは、既に示したように、ＰＦＯＣ乳濁液をかなり一層高価にする。
【００１１】
ＰＦＯＣは、請求されたものに組成及び成分比において近い〔ロシア特許第２０７００３３、Ｂｕｌｌで刊行した。“Ｉｚｂｒｅｔｅ−ｎｉｙａ．．．（Ｚａｙｖｋｉ，．．．）”Ｎｏ．３４， ２７．０８． ９７．を参照のこと〕。この乳濁液は、ペルフルオロカーボンをそれぞれ、シス及びトランス異性体の形態のペルフルオロデカリン及びペルフルオロ化した第３アミン、ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−ピペリジンにおいて、それぞれより低い濃度、７容量％及び３．５容量％で含んでいる。そして分子量６，０００〜８，０００ダルトン（Ｄａ）を有するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンの共重合体により平均の乳濁液粒子の大きさ０．０８〜０．１μｍで安定化されている。絶対酸素容量が比較的小さい値（７６０ｍｍＨｇのＯ２ 分圧で７容量％の酸素）を有するこの成分は、その小さな粘度（３．５ｃＰ）により、公知のＰＦＯＣ乳濁液（前記ロシア特許に関する明細書中の表１を参照のこと）に比べてより高い動的酸素容量を確実にする。即ち組織に対するより良い酸素の供給を確実にする。ＰＦＯＣ製剤における、徐々に除去可能なＰＦＭＣＰの高い比率（ＰＦＭＣＰ／ＰＦＤ比＝１：２）及び大きさに関連する粒子の高度な単分散性により、この乳濁液は大型動物に対する毒性はない。しかしながら、ロシア特許第２０７００３３号に係る乳濁液は多くの不利な点がないわけではない。即ち、乳濁液の製造の過程及び保存の間においての安定化剤中のペルオキシド化合物の形成による比較的高い反応原性；物理化学的な特性において大幅に異なる２つのＰＦＯＣが当該乳濁液の組成物において用いられることによる、当該乳濁液が血流に入った時、及び高分子のデキストランと接触する時の乳濁液の繰り返しの凍結及び解凍による不十分な安定性；並びに高度に精製したＰＦＤ及びＰＦＭＣＰの利点による高価格の製剤。
【００１２】
医療目的のＰＦＯＣ乳濁液の調製の為の方法が当業界で周知であり、ここにおいて、反応原性に関する方法は、乳濁液粒子の平均の大きさを下げること及び単分散性を増加することが提案されている（ロシア特許第２０７００３３号に関する明細書を参照のこと）。これらの特性は２つの液体形態のＰＦＯＣの混合物を安定化剤の水性溶液に滴下し加えることによって、ＰＦＯＣと安定化剤との、プロ乳濁液（ｐｒｏ−ｅｍｕｌｓｉｏｎ）の調製の段階における、巨視的な界面の発生、接触時間及び面積の増加を妨害することによって保証されている。サブミクロン乳濁液は、２回路ホモジナイズ系においてホモジナイザーの回路中での１２回再循環の方法において調製されている。引用した発明の明細書によると、ホモジナイザーの第１及び第２回路が交互に用いられており、ホモジナイズの過程は故に減速している。その理由は、第２回路から第１回路への再送は、第１回路のチャンバー及び管の壁上で必ず形成され残るＰＦＯＣの粗いプロ乳濁液粒子及びＰＦＯＣの滴にさえもつながり、そのような粒子や液滴が既に微細に分離された微細な分散乳濁液に入り込むからある。更に一層、既に述べたように、乳濁液の製剤を評価をする時にこの方法はペルオキシド化合物の形成を妨げない。
【００１３】
発明の開示
ＰＦＯＣ乳濁液であって、代用血液として用いる時の製剤の反応原性及び大型動物及びヒトに対するその毒性の減少、高い酸素容量、繰り返しの凍結−解凍及び高分子のデキストランとの接触に対する高い安定性を確かにする、ＰＦＯＣ乳濁液の係る組成物を供することが本発明の目的である。
【００１４】
本発明の他の目的は、系の高い単分散性を保持しそして所定の小さな粒子を処方する一方、乳濁液を調製する間及びその保存の間においてペルオキシド化合物の形成を阻害する適切なプロ乳濁液及びサブミクロン乳濁液の調製の為の方法を開発することである。
【００１５】
本発明の他の目的は、ＰＦＯＣ乳濁液の調製の方法を簡素化及び加速化する為に資本投入を削減することである。これは薬品の産業規模での製造に関して必須である。
【００１６】
本発明の第一の目的は、医療目的の為の公知のＰＦＯＣ乳濁液によって達成されている。その（ＰＦＯＣ乳濁液）は急速に除去可能なペルフルオロカーボン及び徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミン、安定化剤及びエネルギー代謝の基質を伴う生理学的に許容できる水性塩類溶液を含んで成り、本発明に係り、更に主となるペルフルオロ有機化合物と物理化学的特性、例えばヘキサン中に溶解する臨界温度、が近い。３つ以上の、急速に除去可能なペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０のシス及びトランス異性体及び３つ以上の、徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−Ｃ１３との混合物を含んで成る。そしてＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物少量を含む。急速に除去可能なペルフルオロカーボンの混合物の含有率は主となるペルフルオロカーボンの含有率の１５％を超えず；徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンの混合物の含有率は主となるペルフルオロ化した第３アミンの含有率の５０％を超えず；そしてＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物は０．１容量％を超えることはない。急速に除去可能なペルフルオロカーボン、ペルフルオロデカリンか又はペルフルオロオクチル・ブロミドのシストランス異性体の混合物を用い、そして徐々に除去可能なＰＦＯＣとして、ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチルシクロヘキシル）−ピペリジンを用いている。安定化剤としては、分子量６，０００〜１０，０００Ｄａのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンの共重合体を用いている。
【００１７】
ペルフルオロカーボン及びペルフルオロ化した第３アミンの比は２：１か又は３：１である。
【００１８】
好ましい実施態様において乳濁液は、６容量％の量で、ペルフルオロデカリンのシス及びトランス異性体の形態において主となる急速に除去可能なペルフルオロカーボン、並びに総量０．７容量％で、ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、トランス−ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソデカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、シス−ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの混合物を含んで成る急速に除去可能なペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０の混合物；２．３容量％の量で、主となる徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミン、ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチルシクロヘキシル）−ピペリジンの異性体の混合物の形態において、並びに総量１．０容量％で、ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミンのシス−及びトランス異性体、ペルフルオロメチルプロピル−（メチルシクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの異性体の混合物を含んで成る徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−Ｃ１３の混合物；そして又０．０２容量％の量で、Ｈ−ペルフルオロアルカンの混合物、を含んで成る。
【００１９】
好適な実施態様において、急速に除去可能なＰＦＯＣと徐々に除去可能なＰＦＯＣの比は２：１である。分子量８，０００Ｄａのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンの共重合体の含有率は４％であり、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンブロックの共重合体中の比は４：１である。
【００２０】
ＰＦＯＣ乳濁液を代用血しょう及び器官の灌流用に用いる時、生理学的に許容できる水性塩類溶液は、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 及び１１ｍＭのＤ−グルコースを含んで成る。
【００２１】
乳濁液を薬理的アイス・チップ心停止（ｐｈａｒｍａｃｏ−ｉｃｅ−ｃｈｉｐ ｃａｒｄｉｏｐｌｅｇｉａ）により血流から遮断した心臓の、抗−乏血保護（ａｎｔｉ−ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）に用いた時、水性の塩類溶液は１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭ　ＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、及び１１ｍＭのＤ−グルコース、５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのナトリウムβ−オキシブチレート、５ｍＭのコハク酸ナトリウム、５ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、５ｍＭのタウリンを含む。
【００２２】
ペルフルオロカーボン及びペルフルオロ化した第３アミンの係る含有率及び組成物は、それ自体（単離した培養リンパ系細胞による試験において）か又は（小ネズミ及びげっ歯類による試験において）乳濁液の製剤においていかなる毒性を実際には示さない精製不十分な（ｕｎｄａｒｅｆｉｎｅｄ ）ＰＦＣ及びＰＦＭＣＰの組成物に対応し、他のＰＦＯＣの混合物を含まない高度に精製されたＰＦＤ及びＰＦＭＣＰと各々が類似である（表１及び表２）。これは、主たるＰＦＯＣの毒性がそれらの形態によるものではなく、フルオロ化が不十分な（ｕｎｄｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ）した混合物の存在に由来することにより説明されるべきだ。もし後者が不在であるならば、次いで、毒性の原因の次の因子は、水性の相中のフッ素の濃度、安定化剤のデタージェント特性、乳濁液中でのペルオキシドの出現及び粗い又は容易に合体する粒子の存在である。大型動物、例えばウサギの死は例えば、下記のとおり、ロシア特許第２０８８２１７号の明細書の表３に示されているデータより、極端に急激に除去可能な高脂質親和性のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の組成物の利用により生じうる一方で、脂質非親和性の、即ち徐々に除去できるＰＦＭＣＰ成分の導入は毒性の低減につながり、その結果として、ＰＦＯＣ乳濁液２０ｍｌ／ｋｇ体重の投与の後６０日間のウサギの生存率は１００％に達する。このパラメーターの観点によるＰＦＯＣ乳濁液の比較（表２）で、我々により特許されている組成物は望ましい投与量の２０倍もの投与の後でさえもウサギの死を生じないことを示している。それより更に、特許化されている組成物が、（ウサギの１００％の死亡が確かである）ＰＦＤからのみ製造された乳濁液を投与する、前、同時にか又は一週間以上後に投与されたとしても、全ての動物は生存する（表２）。
【００２３】
乳濁液の製剤中に存在する不純なＰＦＯＣは、主となるＰＦＯＣの構造に近い構造を有しており且つ次第に脂質親和性−脂質非親和特性を変化する多くのＰＦＯＣを構築する（図１、表３）。これは、一層均一な集合しないフルオロカーボン相の乳濁液粒子内での形成、乳濁液粒子の安定性の増加、粒子の粗化を担う分子内蒸留現象の低下、粒子が血流に入った時及び繰り返しによる凍結及びデキストラン性の高分子浸透剤との接触による時のそれらの凝集を阻害するのに役立つ（表４）。
【００２４】
顕著な脂質非親和特性を有する一連のＰＦＯＣのフルオロカーボン層における存在、詳細には、フルオロカーボンの相の表層へと移動されたペルフルオロ化した第３アミンの存在は、安定化剤、即ちポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体とのより良い相互作用、及び吸着層の内部にそれを保持することに寄与する。乳濁液の粒子の表層より密になり、レオロジー学的な特性の向上の獲得がもたらされる。即ち、より低い粘度及び同じ値の絶対酸素容量でのより高い動的酸素容量並びにｉｎ　ｖｉｔｒｏ及び血流中での安定性の増加（表４）がもたらされる。これは乳濁液の循環の時間の増加を示す（表５）。
【００２５】
公の刊行物源において、次第に脂質親和性〜脂質親和性のものへと変わる特性を有する一連の化合物を構築する物理化学的パラメーターにおいて異なる複数のＰＦＯＣ混合物を構築体中に含んで成るＰＦＯＣ乳濁液を発見できうる記載はない。
【００２６】
公開されたドイツ連邦共和国出願第４３２５１００Ａ１号において、１〜５％の量でＨ−ペルフルオロアルカンの混合物を含むＰＦＯＣ乳濁液が記載されている。前記出願の著者は、これで乳濁液の酸素輸送特性を改善可能且つＰＦＯＣ精製の為の支出を減らすことによりその価格をより低くすることが可能と考えている。しかしながら、我々により行われた解析では、１重量％（０．５容量％）より高い含有率のＨ−ペルフルオロアルカンのは乳濁液の調製品中での毒性の、単離した培養細胞及び完全な生物の両方に対する発現につながりうることが示されている。
【００２７】
ＰＦＯＣの組成は特定の安定化剤の選択を決定づける。
【００２８】
急速に除去可能なＰＦＯＣの乳濁液の調製用に現在、生物由来の高価なリン脂質が使用されている。それは脂質親和性のＰＦＯＣに高する高い親和性を有し且つペルオキシドの酸化を防ぐ為の抗酸化添加剤が必要となる。脂質親和性−脂質非親和性の特性が比較的近い２つのＰＦＯＣ（ペルフルオロデリカン及びペルフルオロトリプロピルアミン）より２成分組成物を調製する場合、リン脂質とポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体との混合物が用いられている〔Ｇｒｅｅｎ Ｃｒｏｓ Ｃｏｒｐ に属するソ連特許第７９７５４６号〕。合成の安価なポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体は、脂質非親和性のＰＦＯＣを含む乳濁液の安定化用に使用されている。係る安定化剤、例えば、動物の有機的組織体から除去可能ではないそれ故に実験的な薬理学及び生理学においてのみ用いられるペルフルオロブチルアミン、又はＰＦＭＣＰ並びに、成功の程が低く、ＰＦＤとＰＦＭＣＰとの混合物とが挙げられる。本発明において提供されたＰＦＯＣ組成物は、次第に変わりつつある脂質親和性−脂質非親和性の特性を有する複数のＰＦＯＣの混合物からなり、本質的に乳濁液をより安価にし、且つ製剤中へと更に抗酸化物質を導入せずとも、乳濁液の製造及び保存の間にヒドロキシペルオキシドの発生の危険性を最小化するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体により、乳状形態において十分に安定化されてもいる。
【００２９】
本発明の第２の目的はＰＦＯＣ乳濁液の調製の為の公知の方法において達成されている。その方法は、液体状のＰＦＯＣを安定化剤の水性溶液を通過させることによって発熱物質をとり除いた成分を混合し、そして２回路高圧ホモジナイザーにおいて生じた混合物の多重のホモジナイズをすることを含んで成る。本発明に係り、成分を混合する前、液体状のＰＦＯＣの混合物及び安定化剤の水性溶液をＣＯ２ ガスで飽和し、その後安定化剤の水性溶液を７５℃を超えない程度に加熱し、次いで液体状のＰＦＯＣの混合物を、数回噴流により、激しい撹拌をし且つＣＯ２ ガスを供給しながら安定化剤の水性溶液中に導入する。同時に生じる粗く分散したプロ乳濁液を数回ホモジナイザーの第１回路を通過させる。この後、微細に砕かれたプロ乳濁液を、ホモジナイザーの第２回路において、所要の分散度が得られる迄、ＣＯ２ ガスを与えながらホモジナイズする。そして、水性の塩類を添加する。得られた医療形態を容器に分注する。
【００３０】
ＣＯ２ ガスで混合する組成物を飽和させることで、乳濁液を製造する間、ペルオキシド化合物の形成を最小にする条件を与えることが可能である。ペルオキシド化合物の存在、並びに粗い粒子の存在は乳濁液の反応原性の発生をもたらす（表５）。実験条件下で、反応原性の存在は、乳濁液、１０ｍｌ／体重ｋｇの投与の後、ウサギの末梢血中の好中球の量の減少から判断された。反応原性の程度は定量的に神経弛緩指数（ｎｅｕｒｏｌｅｐｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ）の値から計算された。即ち、３単位を超えた神経弛緩指数の増加は乳濁液の反応原性の顕著な表れである〔Ｍ．Ｖ．Ｂｅｒｋｏｓ、Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ。Ａｂｓｔｒａｃｔ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ’ｓ Ｔｈｅｓｉｓ， Ｌｅｎｉｎｇｒａｄ， １９９１〕。
【００３１】
安定化剤（プロキサノール）（ｐｒｏｘａｎｏｌ）の水性溶液を暖めることで、安定化剤の性質を付与し且つその分子量分布及び表層活性特性を変化させる溶媒を通過させずとも、当該溶液の脱ピロゲン化を可能にする。所定の温度値からのずれは、安定化剤の表層活性特性を与える、か又はヒドロキシペルオキシドの量を増加させる。
【００３２】
激しい撹拌を伴いながら、液体状のＰＦＯＣを安定化剤の水溶性の溶液中に噴流様に導入し且つ生じる混合物を同時に高圧ホモジナイザーを通過させることは、プロ乳濁液の調製の方法の加速化に役立つ。ＰＦＯＣの供給、撹拌及びホモジナイザーにより混合物が通過する速度は、巨視的ＰＦＯＣ／水の境界の形成を妨害する方法において調節されている。これは、単一分散性の乳濁液を獲得する為の必要条件である。
【００３３】
２つのホモジナイザーの回路を連続的に用いることによって、再循環サイクルの数は試作品と比較して、１２〜９減った。
【００３４】
従って、本発明の方法は、ペルオキシド化合物の形成を最小化し、一方で０．０５〜０．１μｍの水準での乳濁液の高い単一分散性を維持しながら、多数の乳濁液を得ることを可能にする（表６）。
【００３５】
それぞれ高度に精製したＰＦＯＣの代わりに、精製したペルフルオロカーボン及びペルフルオロ化した第３アミンの混合物の利用、並びにより単純且つ一層急速な技術は、本発明の第三の目的即ち、乳濁液を製造する為の支出を削減すること及び２〜５倍以上調製品の価格を下げること、同時に乳濁液の安定性の増加且つ粘性学的な特性を向上すること、の達成の可能性を担う。故に、産業的な製造及び医療の実際におけるＰＦＯＣ乳濁液のより広い利用の為に、考察を開示している。
【００３６】
本発明の要諦を図１により明らかにしている。ここにおいて、２成分ＰＦＯＣ−ヘキサン系の温度−組成物相の線図は異なる種類のＰＦＯＣについて示されている。例えば特許化されているＰＦＯＣ乳濁液製剤中へ入るＰＦＯＣである。
【００３７】
ＰＦＭＣＰ混合物に関する範囲を「ａ」で示している。ＰＦＤに関する範囲を「ｂ」で示し、矢印「ｃ」は、脂質非親和性の徐々に除去可能なＰＦＯＣの範囲の方向を示し、そして矢印「ｄ」は、脂質非親和性の急速に除去できるＰＦＯＣの範囲の方向を示している。
【００３８】
ＰＦＭＣＰ混合物及びＰＦＤ混合物は、相線図及びヘキサン中での分散における臨界温度に関して中間的な位置を占めるようだ。従って、乳濁液の粒子において、ＰＦＯＣの組成物は、次第に特性を変える物質の混合物であり、これは乳濁液の粒子の均一性及び安定性を乱す、個々の集合の形成を伴わない、十分な相互分散値を裏づける。
【００３９】
特許化されている方法の要諦を図２に図示している。ここにおいて、第１回路Ａ及び第２回路Ｂを有するホモジナイザーの概略を示している。第１回路Ａは、高速撹拌機２、高圧チャンバー３、切替弁４を伴う温度調節反応槽（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｅｄ ｒｅａｃｔｏｒ）１を含んで成る。第２回路Ｂは、高速撹拌機６、高圧チャンバー７、流出切換弁８及び受入れ容器（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）９を含んで成る。
【００４０】
以下の方法において、ＰＦＯＣ乳濁液を調製する方法が行われる。ホモジナイザーの第１回路の温度調節反応槽１をＣＯ２ ガスで飽和した安定化剤の水性の溶液で満たし、そして７５℃より高くならずに１２〜１４時間加熱した。次いで安定化剤の溶液を冷却し、そしてＣＯ２ ガスで飽和した安定な脱ピロゲン化したＰＦＯＣの混合物を前記溶液に、高速撹拌機２を動かして、噴流様に添加した。生じる粗いプロ乳濁液を数回、反応槽内へＣＯ２ ガスを一定に供給しながら３００〜４００ｋｇ／ｃｍ２ の圧力で第一の高圧チャンバー３を通過させた。次いでプロ乳濁液の流れを、弁４により、ホモジナイザーの第２回路の温度調節反応槽５へ向け、そして反応槽内にＣＯ２ ガスを４００〜５００ｋｇ／ｃｍ２ の圧力で、所定の大きさの粒子が得られる迄通過させた。ホモジナイズの方法を槽の一定の冷却及び両反応槽内へのＣＯ２ ガスの供給により行う。その後無菌アピロジェニック（ａｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）水性塩類溶液（ＡＳＳ）を、撹拌機６を動かし、反応槽５に供給し、そしてその後前記溶液をＰＦＯＣ混合物と共に均一に撹拌し、生じるＰＦＯＣ乳濁液の医療形態を弁８により分散させながら受入れ容器９中へ向かわせた。
【００４１】
ペルフルオロ有機化合物の乳濁液は、起源が異なる貧血、出血、外傷、熱傷、心臓及び脳の心臓性ショック、虚血性傷害、頭部の傷害、冠動脈及び脳血流の混乱を治療する為、移植目的の器官の保護心臓の修復手術中、心筋の灌流及び灌流不用の抗乏血保護、化学及び放射線治療を行う時の四肢の局所灌流において人工循環装置において用いる為の高度に有効な灌流媒体として、血管の疾患のＸ線、超音波及びＮＭＲ診断の造影剤として、免疫系に作用する為並びに又灌流する器官で行う薬理学的、生理学的及び生物物理学的調査における手段として、用いることが知られている。
【００４２】
上に引用した用途に加えて我々により得られた乳濁液を空気及び脂肪塞栓症、肢の塞栓性血管病を治療する為、脂質親和性の毒性化合物による中毒症の場合の解毒の為、そして様々な生体異物により生じる毒性傷害の予防法の為に利用することが提案されている。
【００４３】
発明の詳細な説明
本発明は、以下に示され且つその実施態様においてのみ詳細に本発明の実行の可能性を意図している例によって説明されている。
【００４４】
実施例１
ＰＦＯＣ乳濁液組成物の好ましい改良型の調製
【００４５】
温度制御した反応槽１に、１０％の分子量８，０００Ｄａの安定化剤の無菌水性溶液１．８ｌを充填し、ＣＯ２ ガスで飽和し、７０℃で１２時間に渡り加熱し、そして安定化剤の溶液を冷却した後、高速撹拌機２を動かしＣＯ２ ガスで飽和した無菌のアピロゲニック（ａｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）ＰＦＯＣの混合物２００ｍｌを反応槽中に２つの噴流中において供給した。混合物は２：１の割合で急速に除去可能なペルフルオロカーボン及び徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミン、即ち６．０容量％の量のペルフルオロデカリンを、ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、トランス−ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソデカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、シス−ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの総０．７容量％の混合物と、２．３容量％のペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−ピペリジンを、ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロ−メチルブチル−シクロヘキシル−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミンのシス及びトランス異性体、ペルフルオロメチルプロピル−（メチル−シクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの異性体の総１．０容量％の混合物と、そして又０．０２容量％のＨ−ペルフルオロアルカンを含んで成る。形成される粗いプロ乳濁液を、３５０ｋｇ／ｃｍ２ の高圧で、ホモジナイザーの第１回路の高圧チャンバー３を４回通過させ、次いで４５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第２回路の高圧チャンバー７を５回通過させる。１８〜２２℃の温度及び一定のＣＯ２ ガスの供給を伴った。ホモジナイザーの第２回路の反応槽５において、得られたサブミクロン粒子を濃縮した水性塩類製剤と混合した。従って、完成した乳濁液の医療形態は１０容量％のＰＦＯＣ、４％の安定化剤、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 及び１１ｍＭのＤ−グルコースを含有した。完成した包装製剤は、浸透圧２８０ｍＯｃｍ、粘度２．５ｃＰ、ｐＨ７．３、遊離フッ化物イオン濃度５・１０−６Ｍ、及び５０μｍのペルオキシド化合物で血しょうと等浸透圧の組成物である。乳濁液粒子の平均の大きさは０．０７μｍ、０．２〜０．３μｍの混合物粒子はコンピューター電子顕微鏡によるコントロールにおいて１％に満たない。マウスに関して、腹腔内投与におけるＬＤ５０値は１６０ｍｌ／ｋｇであった。２０ｍｌの１週間間隔での５回の静脈投与後のウサギの生存率は、観察の３月後１００％であった。凍結形態における乳濁液の保存の後及びその５回の凍血−解凍の後、乳濁液の粒子の大きさは０．１１μｍ（表４）であった。
【００４６】
実施例２
急速に除去可能なＰＦＯＣ及び徐々に除去可能なＰＦＯＣの比は３：１、組成物中の量で急速に除去可能なペルフルオロカーボンのペルフルオロデカリン６．４％及びペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、トランス−ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソデカリンの混合物１．１％、並びに組成物中の量で徐々に除去可能なＰＦＯＣの１．８％のペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−ピペリジン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチル−シクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチル−プロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミンのシス及びトランス異性体の混合物０．７％、そして又Ｈ−ペルフルオロアルカン０．０１％の他は、実施例１に記載したように乳濁液を調製した。プロ乳濁液を、４５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力で、ホモジナイザーの第１回路の高圧チャンバー３を３回通過させ、乳濁液を５５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第２回路の高圧チャンバー７を５回通過させた。１８〜２２℃の温度且つ一定のＣＯ２ ガスの供給を伴った。得たＰＦＯＣ乳濁液の粒子の平均の大きさは０．０７μｍ、０．２〜０．３μｍの直径の粒子は０．９％であった。マウスに関して、ＬＤ５０値は１５０ｍｇ／ｋｇ体重であった。アピロニックＰＦＯＣ乳濁液を７５ｍＭのペルオキシド化合物の濃度で得た。ＰＦＯＣ乳濁液２０ｍｌ／ｋｇの静脈投与後のウサギの生存率は、観察の９０日間１００％であった。
【００４７】
乳濁液をイヌにおける５５％の血液の欠失の交換及びラットにおける６５％の血液の置換に用いた。動物の生存率は１００％であった。
【００４８】
実施例３
ＰＦＯＣ乳濁液を実施例２に記載のように調製し、そしてノルモサーマル（ｎｏｒｍｏｔｈｅｒｍａｌ）灌流における再循環域において、イヌの腎臓の保存用の灌流組成物として用いた。灌流圧の増強前（組織の浮腫の進行前）の腎臓の保存の時間は３６時間であった。灌流の間、乳濁液を９時間ごとに補充した。受容者のイヌへの、灌流される腎臓の移植において、血流が回復したすぐ後に移植体は尿の排泄を開始した。
【００４９】
実施例４
平均分子量６，０００Ｄａのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体を安定化剤として用いた他は、乳濁液を実施例１に記載したように調製した。５００ｋｇ／ｃｍ２ の圧力で、ホモジナイザーの第１回路のチャンバー３にて、ＰＦＯＣプロ乳濁液を微細に砕いた。乳濁液をホモジナイザーの第２回路のチャンバー７で５５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力で微細に砕いた。完成した医療形態のＰＦＯＣ乳濁液の水性塩類製剤は、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、及び１１ｍＭのＤ−グルコース、５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのナトリウムβ−オキシブチレート、５ｍＭのコハク酸ナトリウム、５ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、５ｍＭのタウリンを含んで成った。得たＰＦＯＣ乳濁液の粒子の平均の直径は０．０６μｍ、０．２〜０．３μｍの直径の粒子の比率は１．１％であった。マウスに関してＬＤ５０は１３０ｍｌ／ｋｇ体重であった。ペルオキシド化合物の濃度は１００μＭであった。乳濁液を医薬アイスチップ（ｐｈａｒａｍｃｏ−ｉｃｅ−ｃｈｉｐ ）心臓マヒ用に用いた。イヌの心臓を一台の心臓−肺装置で単離し、そして１６℃に冷却したＰＦＯＣ乳濁液中で３０分に渡り灌流した。次いで心臓を灌流系から断ち、そして６℃で４時間に渡りＰＦＯＣ乳濁液中に浸した。その後、前記心臓をＰＦＯＣ乳濁液で満たした灌流系に接続し且つ１６℃で１５分に渡り灌流した。この後、心臓を受容者の大腿部の血管につないだ。更なる電気刺激を伴わずとも、４／６のケースで、心臓の電気的及び収縮作用が、移植により回復した。２つのケースでは電気刺激器の最初の放電後（回復した）。全ての患者において心不全の症状は観察されなかった。
【００５０】
実施例５
電気及び脂肪血管塞栓症を治療する方法。空気及び脂肪塞栓症を、ウサギに対して水中１０〜３００ｍｍの粒子のトウモロコシ油の粗く分散した乳濁液１０ｍｌを微細な気泡と共に静脈中に投与することによって実験において誘導した。実験を３〜３．５ｋｇの体重の２２匹の動物に対して行った。実施例２に記載の手順に従い調製したＰＦＯＣ乳濁液を、意識を失った２０分後静脈内か又は呼吸の調子の乱れもしくは呼吸器の停止の３〜４分後にウサギに投与した。脂肪及び空気塞栓症の治療は、乳濁液粒子の極端に大きな吸着表層、粒子の吸着層及び水相における界面活性剤の相対的な可剰、高度に分散した粒子の部分的に閉塞した血管を通過しそして乳濁化を誘導するか、脂肪空気の滴の大きさ及び吸着の減少を、有利に用いることに基づいており、その結果、血管の開通及び代謝の量が回復する。ＰＦＯＣ乳濁液の治療効果は、動物を動物の脳中での血流の障害による呼吸器の停止によりもたらされる昏睡及び臨床死の状態から外すことにより証明されている。ＰＦＯＣ乳濁液の全量（１０〜１５ｍｌ／ｋｇ体重）を使い切る前に、ウサギは意識をとり戻し、眼を開き、乳頭の反射が回復した。呼吸の障害後のＰＦＯＣ乳濁液の投与は数分間の動物の呼吸の回復に貢献し且つ呼吸器の停止及び肺の人工通気の為の装置に動物を連結する場合の独立した呼吸の回復を確かにした。
【００５１】
実施例６
四肢の閉塞性血管傷害を治療する方法。ウサギに高濃度のコレステロールを伴う産物を濃縮した物質を過剰に与えることによって閉塞性アルテローム性動脈硬化症をウサギにおいてモデル化した。四肢の血流の流動学的な特性を超音波ドップラー検査によって特定し、後肢の大腿部及び下腿の組織における酸素分圧（ｐＯ２ ）の動力学を非侵襲性のセンサーにより特定した。治療効果を比較することに関して、流動学的に活性のある製剤として周知のレオポリグルシナム（ｒｈｅｏｐｏｌｙｇｌｕｃｉｎｕｍ）の静脈内投与を用いた。レオポリグルシナム（５ｍｇ／ｋｇ重量）は血流性を約１０±３％向上し且つ平均約６±２％　Ｏ２ 分圧を増加した。レオポリグルシナムの投与後と同様ＰＦＯＣ乳濁液の５ｍｌ／ｋｇ体重の静脈内投与の後、血流の向上も又見られ、しかし、この場合組織のｐＯ２ 分圧の値は約２５±５％（ｐ＜０．０２）増加した。
【００５２】
実施例７
脂質親和性の化合物により生じた毒性傷害を治療する方法。実施例１に記載のように調製したＰＦＯＣ乳濁液を、血液中に入っている脂質親和性の化合物、例えばエタノールを吸着する手段として用いた。故にこれら脂質親和性の化合物の作用濃度は下がり且つその組織中への侵入も減った。致死量の３３％水性エタノールを経口で、２５０〜２９０ｇの体重のラット１０匹に４ｇメタノール／ｋｇ体重の量で投与した。８匹の動物が死亡した。致死量のエタノールの投与の後に、第２群の１０匹のラットに、ＰＦＯＣ乳濁液を５ｍｌ／ｋｇ体重の量で静脈内に投与した。１匹のラットのみが死亡した。
【００５３】
実施例８
毒性傷害を予防する方法
Ａ）実施例１に記載のように調製したＰＦＯＣ乳濁液を、肝臓におけるＰＦＯＣ蓄積の後の早期の段階において、その代謝産物は出発物質よりも高い毒性を有する異種の生体異物の傷害性作用を減らす為に肝臓のモノオキシゲナーゼ系の作用を阻害する手段として用いた。ラットによる実験において、エーテル麻酔薬の毒性の影響を減らす為に、肝臓の解毒作用の阻害を、エーテル麻酔薬の６時間前にＰＦＯＣ乳濁液の静脈投与により誘導した。エチルエーテル代謝の阻害でエーテル自身よりも一層有毒であるエーテルのヒドロキシル化産物の形成の速度が減少した。ＰＦＯＣ乳濁液で前処理をしなかったラットにおいては、１日の間で２倍のエーテル麻酔の過剰投与により、３〜４日の間に肝臓の組織において、顕著な脂肪の浸潤及びジストロフィーの分散が生じた。もし前記動物に、最初のエーテル注射の６時間前に５〜７ｍｌ／ｋｇ体重で静脈内にＰＦＯＣ乳濁液を投与したならば、次いでその後のエーテル麻酔薬の２倍の過剰投与では、組織の脂肪の浸潤の進行がなく、肝臓の非有為な分散の変化のみを生じただろう。
【００５４】
Ｂ）実施例１に記載のように調製したＰＦＯＣ乳濁液を、肝臓におけるＰＦＯＣ蓄積の後の後期の段階において、その代謝産物は出発物質よりも高い毒性を有する異種の生体異物の傷害性作用を減らす為に肝臓のモノオキシゲナーゼ系の作用を阻害する手段として用いた。ラットによる実験において、エーテル麻酔薬の毒性を減らす為に、肝臓の組織中でクロロホルムの代謝を加速することが必要だった。この目的の為に、クロロホルム麻酔薬の過剰投与により至る呼吸障害を行う４日前に、５匹のラットに実施例１に記載したように調製した、７ｍｌのＰＦＯＣ乳濁液を静脈内に投与した。クロロホルム麻酔薬の１日前に、肝臓の状態をヘキサンによる睡眠の継続時間と対照にして調べた。この継続時間は１．５〜３分に減少、即ち、１８〜２０分間続く、何もしていない動物におけるヘキサン睡眠と比べて５〜７倍減少した。これは以前にＶ．Ｖ． Ｏｂｒａｚｔｓｏｖらにより示されたように、肝細胞において、フェノバルビタール（Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ）型のシトクロームＰ−４５０の２〜３倍の増加の結果である。〔Ｏｂｒａｚｔｓｏｖ Ｖ．， Ｓｋｌｉｆａｓ Ａ．， Ｍａｅｖｓｋｉｉ Ｅ．， Ｓｈｅｋｈｔｍａｎ Ｄ．， Ｋｕｋｕｓｈｋｉｎ Ｎ． Ｉｓ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ−４５０ ａ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｄｅｃａｌｉｎ ｅｍｕｌｓｉｏｎ？ ／／ Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ−４５０ ： Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ． １９９２， ＩＮＣＯ−ＴＮＣ， Ｍｏｓｃｏｗ， ５９７−６００〕ＰＦＯＣ乳濁液で処理しなかった動物の肝臓は、クロロホルム麻酔薬の過剰投与の後、破壊の兆候を示し、細胞及びミトコンドリアが膨張し、脂肪の浸潤が明らかになった。クロロホルム麻酔薬の過剰投与の４日前にＰＦＯＣ乳濁液を投与した動物においては、多量のクロロホルムにもかかわらず有為な肝臓における、破壊及び脂肪の浸潤は観察されなかった。肝臓の増加した解毒作用の継続時間はＰＦＯＣ乳濁液の静脈内投与後の、肝臓細胞により蓄積された急速に除去可能なＰＦＯＣが半分除去される時期とほとんど一致する。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
【表２】
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【００５７】
【表３】
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【００５８】
【表４】
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【００５９】
【表５】
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【００６０】
【表６】
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【表７】
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【００６１】
産業上の利用性
本発明に係る、ペルフルオロ有機化合物の乳濁液は血液の欠失を回復する為の静脈内投与用、低酸素又は心筋症による傷害に伴う様々な疾患を治療する為、そして又対照及び灌流培地としても用いるのを意図している。
【図面の簡単な説明】
【図１】２成分ＰＦＯＣ−ヘキサン系の温度−組成物相の線図である。ここにおいて、温度（℃）をＹ軸に、そして２成分系におけるＰＦＯＣの割合（相対単位）をＸ軸にプロットした。
【図２】本発明に係る、ＰＦＯＣ乳濁液の医薬形態を調製する為の装置の図である。
【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年2月8日(2002.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医療目的の為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液であって、急速に除去可能なペルフルオロカーボン及びペルフルオロ化した第３アミン、安定化剤、生理学的に許容できる水性塩類溶液をエネルギー代謝の基質と共に含んで成り、更にそれは、物理化学的な特性例えば、ヘキサン中に溶解する臨界温度が主となるペルフルオロ有機化合物に近い３つ以上の急速に除去可能なペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０及び３つ以上の徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−１３ の混合物並びにＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物少量を含んで成り、急速に除去可能なペルフルオロカーボンの混合物の含有率は主となるペルフルオロカーボン含有率の１５％を超えず、徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンの含有率は、主となるペルフルオロ化した第３アミンの含有率の５０％を超えず、そしてＨ−ペルフルオロアルカン類の混合物の含有率は、０．１容量％を超えないことを特徴とした乳濁液。
【請求項２】
ペルフルオロデカリンのシス及びトランス形態にある異性体の混合物を、主となる急速除去可能なペルフルオロカーボンとして用いることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項３】
ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチルシクロヘキシル）−ピペリジンの異性体の混合物を主となる徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンとして用いていることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項４】
急速に除去できるペルフルオロカーボンＣ７ −Ｃ１０の混合物が、ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソデカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの混合物を含んで成ることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項５】
徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンＣ１１−１３ の混合物が、シス及びトランス形態のペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（メチルシクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの混合物を含んで成ることを特徴とした、請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項６】
急速除去可能なＰＦＯＣと徐々に除去可能なＰＦＯＣの割合が、２：１又は３：１であることを特徴とした、請求項１〜５のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項７】
６，０００〜１０，０００Ｄａの分子量のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンの共重合体を安定化剤として用いていることを特徴とした、請求項１〜５のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項８】
安定化剤の含有率が２〜４％であることを特徴とした、請求項１又は７記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項９】
生理学的に許容できる水性塩類溶液が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２ 、ＮａＨＣＯ３ 、ＮａＨ２ ＰＯ４ 及びＤ−グルコースを含んで成ることを特徴とした、請求項１〜８のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項１０】
好適な改良型を特徴とし、それが、
−　主となる急速に除去可能なペルフルオロカーボンを、ペルフルオロデカリンのシス及びトランス異性体の混合物の形態において６容量％；
−　ペルフルオロメチルインダン、ペルフルオロ−１−メチル−３−プロピルシクロヘキサン、トランス−ペルフルオロインダン、ペルフルオロ−４−オキソ−デカリン、ペルフルオロブチルシクロヘキサン、ペルフルオロプロピルシクロヘキサン、ペルフルオロエチルシクロヘキサン、ペルフルオロブチルシクロペンタン、シス−ペルフルオロ−１−メチル−２−エチルシクロヘキサンの混合物を含んで成る急速に除去可能なペルフルオロカーボンの混合物を、０．７容量％；
−　主となる徐々に除去可能なペルフルオロ化した第３アミンを、ペルフルオロ−Ｎ−４−（メチルシクロヘキシル）−ピペリジンの異性体の混合物の形態において、２．３容量％；
−　ペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−２−メチルピロリジン、ペルフルオロメチルブチル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミン、ペルフルオロメチルプロピル−（４−メチルシクロヘキシル）−アミンのシス−及びトランス−異性体、ペルフルオロメチルプロピル−（メチル−シクロペンチル）−アミン及びペルフルオロ−Ｎ−（４−メチルシクロヘキシル）−１−メチルピペリジンの異性体の混合物を含んで成るペルフルオロ化した第３アミンの混合物を、総量１．０容量％；
−　Ｈ−ペルフルオロアルカンの含有率が０．０２容量％；
−　ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンブロックの共重合体中の比が４：１であり分子量は８，０００Ｄａ
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項記載のＰＦＯＣ乳濁液。
【請求項１１】
血液の交換及び／又は器官の灌流の為に用いる場合、水性塩類溶液が、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、及び１１ｍＭのＤ−グルコースを含むことを特徴とした、請求項１〜７のいずれか１項記載の乳濁液。
【請求項１２】
心臓マヒの為に用いる場合、前記水性塩類溶液が、１０２ｍＭのＮａＣｌ、５．２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＭｇＣｌ２ 、７．７ｍＭのＮａＨＣＯ３ 、１．６５ｍＭのＮａＨ２ ＰＯ４ 、１１ｍＭのＤ−グルコース、５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのナトリウムβ−オキシブチレート、５ｍＭのコハク酸ナトリウム、５ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、５ｍＭのタウリンを含むことを特徴とした、請求項１〜８のいずれか１項記載の乳濁液。
【請求項１３】
医療目的の為のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の調製の為の方法であって、液体状のペルフルオロ有機化合物の混合物を安定化剤の水性溶液を通過させることによって非熱分解（ａｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）無菌成分を混合し、そしてその後生じたプロ乳濁液の２回路高圧ホモジナイザー中での多重ホモジナイゼーションを含んで成り、
−　混合する前に、液体状のペルフルオロ有機化合物及び安定化剤の水性容液の混合物をＣＯ２ ガスで飽和し、そして安定化剤の水性溶液を７５℃を超さないように加熱し、
−　前記液体状のペルフルオロ有機化合物の混合物をＣＯ２ ガスの環境中で２回以上噴流において、冷却した安定化剤の溶液に供給し、
−　プロ乳濁液を、３００〜４５０ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第１回路を通過させると同時に激しく撹拌し、
−　乳濁液を４００〜６００ｋｇ／ｃｍ２ の圧力でホモジナイザーの第２回路において多重ホモジナイズに掛け、
−　プロ乳濁液を調製し且つその後のホモジナイズをＣＯ２ ガスの環境中で行う方法
を特徴とした、方法。
【請求項１４】
好適な改良型において、安定化剤の溶液を１２時間に渡り７０℃の温度で加熱することを特徴とした、請求項１３記載の乳濁液の調製の為の方法。
【請求項１５】
前記プロ乳濁液をホモジナイザーの第１回路を３〜４回通過させ、そして当該乳濁液を第２回路を４〜５回通過させていることを特徴とした、請求項１１記載の乳濁液の調製の為の方法。
【請求項１６】
血流における空気及び脂肪塞栓症を解消する手段としての、請求項１記載のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【請求項１７】
四肢の閉塞性血管傷害（ｏｂｌｉｔｅｒａｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｕｒｅｓ ）を治療する為の請求項１記載のＰＦＯＣ乳濁液の利用。
【請求項１８】
血流において有毒な脂質親和性の生体異物の吸着剤としての請求項１記載のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【請求項１９】
生体異物及び乳濁液を投与する時間に依存する有毒な脂質親和性の生体異物の転換を調節する手段としての、請求項１記載のペルフルオロ有機化合物の乳濁液の利用。
【国際調査報告】
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2004504344.tif 000045
2004504344.tif 000046
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