(57)【要約】哺乳動物被験体組織中の炎症性細胞浸潤を治療するための組成物及び方法を提供する。本発明は、医薬適合性の担体と混合した治療有効量のＳＥＲＰ−１／免疫抑制薬の組み合わせをこのような治療を必要とする被験体に投与する工程を含む。本発明の組成物及び方法は、多数の炎症ベースの疾患及び損傷の治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を組織に送達させる工程を含む、そのような治療を必要とする哺乳動物被験体組織の炎症性細胞浸潤の治療方法。
【請求項２】
前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、静脈内、動脈内、関節内、皮下、腹膜内、脊髄内、直腸内、筋肉内注射、またはエーロゾル吸入で送達させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ）、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｒａｐｉｍｍｕｎｅ（登録商標）、ＦＫ５０１、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）、ＩＭＵＲＥＫ（登録商標）、ＳＰＡＮＩＤＩＮ（登録商標）、またはＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫抑制薬がシクロスポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントが第２４４位にシステイン以外のアミノ酸を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントが第３１９位にアルギニン以外のアミノ酸を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントが第３２０位にアスパラギン以外のアミノ酸を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を組織に送達させる工程を含む、治療を必要とする哺乳動物被験体の関節炎の治療法。
【請求項１０】
炎症性腸疾患部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、炎症性腸疾患の治療法。
【請求項１１】
包装材料、前記包装材料に含まれるＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を含み、前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬は関節炎の治療に有効であり、前記包装材料は前記ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を関節炎に使用することを示すラベルを含む、製造品。
【請求項１２】
全身性紅斑性狼瘡炎症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、全身性紅斑性狼瘡などの自己免疫症候群の治療法。
【請求項１３】
多発性硬化症炎症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、多発性硬化症の治療法。
【請求項１４】
喘息性炎症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、喘息の治療法。
【請求項１５】
虚血または再灌流障害性炎症部位を有する被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、虚血または再灌流障害性炎症の治療法。
【請求項１６】
脈管炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、脈管炎の治療法。
【請求項１７】
炎症性自己免疫筋炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、炎症性自己免疫筋炎の治療法。
【請求項１８】
炎症性自己免疫甲状腺炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、炎症性自己免疫甲状腺炎の治療法。
【請求項１９】
乾癬部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、乾癬の治療法。
【請求項２０】
全身性ショックを罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を元の外傷部位及び／または血管系及び離れた血管新生部位に投与する工程を含む、全身性ショックの治療法。
【請求項２１】
糸球体腎炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、糸球体腎炎の治療法。
【請求項２２】
炎症性尿細管疾患部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、炎症性細管疾患の治療法。
【請求項２３】
成人呼吸窮迫症候群を罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、成人呼吸窮迫症候群の治療法。
【請求項２４】
冠状動脈閉塞症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、冠状動脈閉塞症の治療法。
【請求項２５】
心律動異常を罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、心律動異常の治療法。
【請求項２６】
うっ血性心不全を罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、うっ血性心不全の治療法。
【請求項２７】
心筋症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、心筋症の治療法。
【請求項２８】
気管支炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、気管支炎の治療法。
【請求項２９】
急性アレルギー反応及び過敏症部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、急性アレルギー反応及び過敏症の治療法。
【請求項３０】
神経外傷部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、神経外傷の治療法。
【請求項３１】
心筋炎部位を有する哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、心筋炎の治療法。
【請求項３２】
インスリン依存性糖尿病を罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、インスリン依存性糖尿病の治療法。
【請求項３３】
脳卒中を罹患した哺乳動物被験体に治療有効量のＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を投与する工程を含む、脳卒中の治療法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳動物の多数の損傷及び疾患条件を伴う炎症及び免疫反応を治療するための免疫抑制薬と組み合わせたウイルスタンパク質ＳＥＲＰ−１、その類似体、及びそれらの生物学的に活性なフラグメントの使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、多数の損傷及び疾患状態を伴う炎症及び免疫反応の予防及び治療における免疫抑制薬と組み合わせたウイルスタンパク質ＳＥＲＰ−１、その類似体、及びそれらの生物学的に活性なフラグメントの使用に関する。
【０００３】
炎症は、損傷及び感染に対する身体の反応である。炎症に関連する以下の３つの主要な事象が存在する：（１）損傷または感染部位への血液供給量の増加、（２）内皮細胞の退縮によって可能な毛細血管透過性の増加、及び（３）毛細血管から周辺組織への白血球の移動（以後、細胞浸潤という）。Ｒｏｉｔｔら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｏｗｅｒ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９８９。毛細血管透過性の増加により、高分子が通常通過できない内皮を通過可能であり、それにより白血球などの可溶性免疫メディエーターを損傷または感染部位に到達可能である。白血球、主に、多形核好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｓ）（多形核白血球、好中球、ＰＭＳとしても既知）及びマクロファージは走化性として既知の過程によって損傷部位に移動する。炎症部位では、組織損傷及び補体活性化によりＣ５ａなどの走化性ペプチドが放出される（同上）。補体活性化生成物はまた、食細胞、肥満細胞、及び好塩基球の脱顆粒、平滑筋の収縮、及び血管透過性の増大を担う。Ｍｕｌｌｉｇａｎら、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８、１４７９から１４８５。
【０００４】
血流から炎症または免疫反応の血管外部位への白血球の浸透は複雑ではあるが共同作用する一連の事象を含む。感染または組織損傷の血管外部位では、白血球及び／または内皮細胞を活性化させてこれらの細胞方の一方または両方を接着させる細菌性エンドトキシン、活性化補体フラグメント、炎症性サイトカイン（インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）など）、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのシグナルを発生する。最初に、細胞は一過性の接着性を持ち（ローリングによって発現する）、その後このような細胞が確実に接着性を持つようになる（スティッキングによって発現する）。接着性白血球は、内皮細胞表面を通過し、内皮細胞間を血管外遊出し、内皮下基質から炎症または免疫反応部位に移動する。Ｈａｒｌａｎら、「接着−炎症性疾患でのその役割」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９９２。
【０００５】
血管壁から血管外組織への白血球の浸透が外来抗原及び生物に対する宿主防御に必要であるにもかかわらず、白血球内皮相互作用は、宿主にとってしばしば有害である。例えば、接着及び内皮通過移動過程の間、白血球は、内皮を直接損傷するか内皮機能障害を引き起こす酸化剤、プロテアーゼ、及びサイトカインを放出する。一旦血管外部位に浸透すると、移動した白血球は種々の炎症性メディエーターの放出によりさらに組織を損傷する。
【０００６】
さらに、毛細血管内腔内をスティッキングする１つの白血球またはより大きな血管内の白血球の凝集は、微小血管閉塞及び虚血の原因となる。白血球媒介血管及び組織損傷は、広範な種々の臨床障害（急性及び慢性形態の炎症ベースの関節炎、炎症性皮膚疾患、成人呼吸窮迫症候群、虚血−再灌流症候群（心筋梗塞など）、ショック、脳卒中、器官移植、挫傷、及び肢再移植など）の病因に関連している（同上）。
【０００７】
他の多くの重篤な臨床症状は、基礎をなすヒトの炎症過程を含む。例えば、多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系の炎症性疾患である。ＭＳでは、循環白血球が炎症性脳内皮に浸潤し、ミエリンを損傷し、神経伝導障害及び麻痺を引き起こす。Ｙｅｄｎｏｃｋら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ、３６６、６３から６６。全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、自己抗原指向性抗体によって損傷した組織の存在によって特徴付けられる自己免疫疾患である。種々の器官中の抗原に結合した自己抗体により、補体媒介及び炎症性細胞媒介組織損傷を引き起こす。Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｂｓ，Ａ．Ｎ．、１９９２、免疫学辞典、ｐｐ１４１４から１４１７。
【０００８】
再灌流損傷は、炎症系の活性化及び白血球−内皮細胞（ＥＣ）接着の増強に関する別の病態である。接着促進分子が白血球と内皮細胞との間の相互作用を促進し、急性炎症反応及びそれに付随する組織損傷で重要な役割を果たすことの多数の証明が存在する。例えば、ＩｇＧ免疫複合体の沈着及びコブラ毒因子（ＣＶＦ）のボーラスｉ．ｖ．注入、好中球活性化、及び有毒酸素代謝産物の生成によって発生する急性肺損傷を引き起こす。Ｍｕｌｌｉｇａｎら、１９９２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５０（６）、２４０１から２４０５。好中球（ＰＭＳ）はまた、骨格筋及び心筋、腎臓、ならびに他の組織の虚血／再灌流損傷を媒介することが既知である。Ｐｅｍｂｅｒｔｏｎら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５０、５１０４から５１１３。
【０００９】
炎症性細胞（特に、好酸球、好中球、及びＴリンパ球）による気道の浸潤は、アトピー性及びアレルギー性喘息の特徴である。Ｃｏｔｒａｎら、「Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａｓｉｓ　ｏｆ　Ｄｉｓｅａｓｅ（疾患の病理学的基礎）」、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９４。膵島ベータ細胞が破壊される膵臓の細胞浸潤は、インスリン依存性糖尿病に関連する基本的病因である。Ｂｕｒｋｌｙら、１９９４、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４３、５２９から５３４。その産物が組織を損傷させる炎症性細胞の活性化は、クローン病及び潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患の病理学の基礎をなす。Ｃｏｔｒａｎら、１９９４。好中球、好酸球、肥満細胞、リンパ球、及びマクロファージは、炎症応答の一因である。真皮の上皮上層中の好中球の微小膿瘍は、特徴的な表皮過形成／肥厚及び乾癬の落屑に付随する。
【００１０】
種々の抗炎症薬は、現在、基礎をなす炎症過程を含む病態の治療に利用可能である。しかし、その有効性は大きく異なり、臨床的需要を有意に満たしていない。これは、特に、利用可能な治療の有効性が制限されているか望ましくない副作用プロフィールを伴う上記疾患でも同様である。さらに、細胞浸潤（炎症に関連する組織損傷の基礎をなす主な原因）を直接阻害する利用可能な臨床薬はほとんどない。したがって、炎症性疾患、損傷、及びそれによるサイトカインネットワークの混乱に関連する細胞浸潤及びそれによる病態の予防及び改善のための安全且つ有効な臨床薬が必要である。
【００１１】
セリンプロテイナーゼ阻害剤（以後「セルピン」）は、関連タンパク質の上科を構成し、４つの異なる属由来のポックスウイルスによってコードされることが見出されている。粘液腫ウイルス（ＭＹＸ）は、ヨーロッパウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ　ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）における毒性全身性感染（粘液腫症）を引き起こすレポリポックスウイルスである。注目すべきことは、粘液腫症は、急速に伝播した感染、免疫抑制、及び二次的なグラム陰性感染の存在によって特徴付けられる。密接に関連したレポリポックスウイルス、ショープ線維腫ウイルス（ＳＦＶ）は、同一宿主における局所感染のみを引き起こす。ＳＦＶは、ＳＥＲＰ−１と呼ばれる対応する粘液腫ウイルスＯＲＦの断片化読み取り枠（ＯＲＦ）しか含まないという点で悪性粘液腫ウイルスと異なる。粘液腫ウイルスまたは関連悪性ウサギ線維腫（ＭＲＶ）のＳＥＲＰ−１　ＯＲＦの破壊により、Ｏ．ｃｕｎｉｃｕｌｕｓにおけるウイルス病原性が弱毒化される。Ｍａｃｅｎら、１９９３、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９５、３４８から３６３。したがって、ＳＥＲＰ−１は、一般に、その天然の宿主Ｏ．ｃｕｎｉｃｕｌｕｓにおけるレポリポックスウイルス感染に対する複雑な応答に関係していた。粘液腫ウイルス由来のＳＥＲＰ−１の不在によりウサギの免疫応答が明らかに増加するにもかかわらず、ＳＥＲＰ−１が悪性因子として作用する機構は不明である。
【００１２】
ＳＥＲＰ−１ポリペプチドは、ウサギのバルーン血管形成後の再狭窄を伴う内膜脂肪細胞増殖を減少させることが証明されている。Ｌｕｃａｓら、１９９４、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｕｐｐｌ．、１８Ａ、２８６；Ｌｉｕら、１９９３、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、８８、Ｉ−８１。
【００１３】
本発明により、ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬の組み合わせが、炎症性疾患及び障害における組織損傷を担う炎症性細胞による組織の浸潤を直接阻害することができることが発見された。
【００１４】
（発明の概要）
本発明によれば、意外にも、免疫抑制薬と組み合わせたタンパク質ＳＥＲＰ−１（悪性ウサギ線維腫（ＭＲＶ）及び粘液腫ウイルス（ＭＹＸ）によって産生されるセリンプロテアーゼ阻害剤）、その類似体、及びそれらの生物学的に活性なフラグメントは動物の損傷及び罹患組織における炎症性細胞の浸潤を予防及び減少させることが発見された。したがって、本発明は、被験体の罹患または損傷組織炎症性細胞浸潤及びそれに関連する生理学的症状の予防及び低減に有効である。
【００１５】
本発明は、炎症及び免疫反応を含む弛緩及び損傷の治療法を提供する。本発明によれば、免疫抑制薬と組み合わせたＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、一定期間炎症または免疫反応の治療に十分な条件下でこのような治療を必要とする被験体に投与する。
【００１６】
本発明の１つの実施形態は、炎症性慢性関節リウマチに関する炎症及び免疫反応の治療に関する。本発明の別の実施形態は、全身性紅斑性狼瘡に関する炎症及び免疫反応の治療に関する。別の態様は、多発性硬化症に関する炎症及び免疫反応の治療に関する。本発明のさらに別の実施形態は、喘息に関する炎症及び免疫反応の治療に関する。本発明のこれら全ての実施形態では、免疫抑制薬と組み合わせたＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、慢性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、多発性硬化症、及び喘息の治療に関する従来の方法と一致する様式（例えば、このような疾患を伴う炎症及び免疫反応を阻害または改善するための静脈内、関節内、腹膜内、動脈内、筋肉内、直腸内、皮下、またはエーロゾル吸入など）で送達させる。
【００１７】
本発明の他の実施形態は、冠状動脈閉塞症、心律動異常、うっ血性心不全、心筋症、気管支炎、急性アレルギー反応及び過敏症、神経外傷、炎症性腸疾患、乾癬、全身性ショック損傷、心筋炎、インシュリン依存性糖尿病、及び喘息などの損傷及び疾患に関する炎症及び免疫反応の治療に関する。本発明のこれらの実施形態では、免疫抑制薬と組み合わせたＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、関係する損傷または疾患の治療に関する従来の方法と一致する様式（例えば、このような疾患を伴う炎症及び免疫反応を阻害または改善するための静脈内、関節内、腹膜内、皮下、筋肉内、直腸内、局所、またはエーロゾル吸入など）で送達させる。
【００１８】
さらなる実施形態では、本発明は、包装材料、前記包装材料に含まれるＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を含み、前記医薬品は関節炎、炎症性腸疾患、全身性紅斑性狼瘡、及び多発性硬化症などの炎症性病態の治療に有効であり、前記包装材料は前記医薬品をこのような炎症性病態に使用できることを示すラベルを含む製造品に関する。
【００１９】
本発明のこれら及び他の目的は、所望の治療効果の達成に十分な量の免疫抑制薬と組み合わせたＳＥＲＰ−１、その類似体、及びそれらの生物学的に活性なフラグメントの投与によって達成される。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本発明によれば、意外にも、免疫抑制薬と組み合わせたタンパク質ＳＥＲＰ−１（悪性ウサギ線維腫ウイルス（ＭＲＶ）及び粘液腫ウイルス（ＭＹＸ）によって産生されるセリンプロテアーゼ阻害剤）、米国特許第５，６８６，４０９号の主題、及びその類似体、及びそれらの生物学的に活性なフラグメントがヒトを含む動物の損傷または罹患組織における炎症性細胞の浸潤の臨床的発現の治療に有用であることが発見された。本発明の目的のために、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「治療法（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」には、ヒトを含む動物の損傷及び罹患組織における炎症性細胞の浸潤の発症の予防、阻害、軽減及び／または生理学的効果の改善が含まれる。
【００２１】
より詳細には、本発明によれば、ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメント及び免疫抑制薬を、このような治療を必要とする被験体に一定期間、例えば慢性関節リウマチの治療に十分な条件下で同時投与する。ここで使用される、用語「被験体」は、本発明の組成物を投与することができる任意の哺乳動物患者を意味するために使用する。特に本発明の組成物及び方法を使用した治療を意図する被験体には、ヒト、非ヒト霊長類、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、家禽類、ハムスター、ラット及びマウス、ならびにこれらの宿主に由来するか供給源となる器官、組織、及び細胞が含まれる。本発明によって意図される免疫抑制薬には、特に、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ）（登録商標）、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｒａｐｉｍｍｕｎｅ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｈｏｍｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ＦＫ５０１（Ｆｕｊｉｓａｗａ）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｙｎｔｅｘ）、ＩＭＵＲＥＫ（登録商標）、ＳＰＡＮＩＤＩＮ（登録商標）、及びＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）が含まれるが、これらに限定されない。
【００２２】
したがって、本発明は、炎症性関節炎などの炎症性病態を含む種々の臨床病態の治療に有用である。臨床的に認識されている関節炎には多数の型が存在し、慢性関節リウマチが最も一般的である。しかし、慢性関節リウマチの病因に関する炎症経路もまた、他の型の関節炎（変形性関節炎、乾癬性関節炎、及び脊椎関節炎）の病因に関連するようであり、これは、これら全ての関節炎形態における滑液病理学は多くの症例で同一であるからである。
【００２３】
成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）もまた、本発明の組成物及び方法を使用して治療可能である。ＡＲＤＳは、毛細管透過性、間隙性及び肺胞内浮腫、フィブリン滲出、及びガラス様の形成によって特徴付けられる炎症性病態である。炎症性細胞及びメディエーター（白血球、サイトカイン、酸素ラジカル、補体、及びアラキドン酸代謝産物を含む）は毛細管内皮を損傷し、毛細管を通過して流動物及びタンパク質を漏出させる。
【００２４】
本発明はまた、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）に関連する炎症及び免疫反応の治療に有用である。ＳＬＥは、自己抗原指向性抗体による組織損傷の存在によって特徴付けられる古典的多系統性自己免疫疾患である。種々の器官中の抗原に結合する自己抗体により、補体媒介性及び炎症性細胞媒介性組織損傷が起こる。皮膚、結合組織、血管、及び関節は全てこの慢性疾患、疾患の緩和、及び疾患の再発で影響を受けるが、抗体媒介性糸球体腎炎による腎不全は、主な生命を脅かす合併症である。本発明は、強皮症などの他の自己免疫障害、種々の形態の脈管炎、炎症性自己免疫性筋炎、及び自己免疫性甲状腺炎の治療に有用である。
【００２５】
本発明の組成物及び方法はまた、多発性硬化症（ＭＳ）の治療に有効である。Ｍ．Ｓ．は、種々の脳部分での脱髄、神経伝導障害、及び最終的に麻痺を引き起こす循環白血球による血液脳関門の透過によって特徴付けられる。ミエリン塩基性タンパク質に反応性を示す一定のＴ細胞クローンが中枢神経系に局在し、炎症を開始する。
【００２６】
本発明の上記の実施形態では、ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、免疫抑制薬（例えば、シクロスポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ））と共に、例えば、慢性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、炎症性自己免疫性筋炎、及び多発性硬化症の治療に関連する従来の方法と一致する様式（例えば、このような疾患を伴う炎症及び免疫反応を予防するための静脈内、関節内、直腸内、腹膜内、筋肉内、皮下、またはエーロゾル吸入など）で送達させる。
【００２７】
本発明は、炎症過程を含む多数の他の臨床病態の治療に有用である。例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患は、その生成物が組織損傷を引き起こす炎症性細胞の活性化を含む胃腸管の自発的慢性炎症である。好中球、好酸球、肥満細胞、リンパ球、及びマクロファージは、炎症応答の一因である。体重増加、便の硬さ、及び盲腸のサイズは、ヒトを含む動物のＳＥＲＰ−１／免疫抑制薬治療効果の評価に使用できるパラメータである。他の症状のうち、表皮過形成／肥厚及び真皮の上皮上層中の好中球の微小膿瘍によって特徴付けられる乾癬もまた、本発明の組成物及び方法によって治療可能である。乾癬は、皮膚中の一連の抗原に対する自己免疫性炎症応答によって引き起こされると考えられる。自己Ｔ細胞応答の増加は、乾癬性病変由来の細胞で認められる。
【００２８】
本発明はまた、全身性ショック及びそれらを伴う多数の臨床病態の治療に直結する。全身性ショックは、しばしば重症失血、重症局所性細菌感染、虚血／再灌流外傷の合併症として発症し、集中治療室での主な死因である。敗血症性ショックのほとんどの症例は、グラム陰性バチルス属由来の内毒素（すなわち、細菌細胞壁リポ多糖類、またはＬＰＳ）またはグラム陽性球菌由来の毒素（すなわち、中毒性ショック毒素１）によって誘導される。血流へのＬＰＳの放出により、心筋機能障害、血管拡張、低血圧症、内皮損傷、白血球の接着及び凝集、播種性血管内凝固症候群、成人呼吸窮迫症候群（ＡＤＲＳ）、肝臓、腎臓、及び中枢神経系（ＣＮＳ）不全を引き起こす炎症性メディエーター（炎症性サイトカイン、血小板活性因子、補体、ロイコトリエン、酸素代謝産物など）が放出される。失血によるショックはまた、炎症性メディエーターの放出を含む。それぞれの場合、炎症応答は元の外傷部位で誘導されるが、血管系及び離れた血管新生部位でも誘導される。
【００２９】
心筋虚血は、一連の炎症事象を増強する心損傷をさらに促進する補体系の活性化を伴う。主要な血管床が一定期間酸素化（虚血）から剥奪され、その後正常な循環に戻された（再灌流）場合、生命を脅かす局所及び離れた組織損傷は、手術、外傷、及び脳卒中において起こる。再灌流損傷は、浮腫及び炎症細胞の浸潤を引き起こす血管透過によって特徴付けられる。好中球は、微小血管系または隣接組織を損傷する酸化剤の生成またはプロテアーゼの放出による再灌流損傷に有意に寄与する。補体及び炎症性細胞機構による細胞死及び組織損傷により、器官不全を引き起こすか器官機能が低下する。局所損傷によるメディエーターの活性化により、高度に血管新生した器官に離れた損傷を引き起こす。本発明の組成物及び方法は、虚血及び再灌流損傷の治療に有用である。
【００３０】
炎症応答損傷はまた、糸球体腎炎及び細管疾患で起こる。炎症性細胞（特に、マクロファージ）の浸潤は、組織学的に細胞過多及び糸球体での半月細胞の形成に伴う蛋白尿に関連する。長期にわたり、炎症性細胞の浸潤は、細胞外基質の蓄積ならびに硬化症及び腎機能の慢性的障害を伴う。本発明はまた、糸球体腎炎及び細管疾患の治療に有効である。
【００３１】
本発明の組成物及び方法から恩恵を受ける多数の疾患及び損傷病態（例えば、冠状動脈閉塞症、心律動異常、うっ血性心不全、心筋症、気管支炎、急性アレルギー反応及び過敏症、神経外傷、心筋炎、インシュリン依存性糖尿病、及び脳卒中など）が存在する。
【００３２】
本発明によれば、上記疾患及び障害病態を、免疫抑制薬と組み合わせたＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、関連損傷または疾患の治療に関連する従来の方法と一致する様式（例えば、このような損傷及び病態を伴う炎症及び免疫反応を予防するための静脈内、関節内、腹膜内、局所、直腸内、動脈内、筋肉内、皮下、またはエーロゾル吸入など）での投与によって治療する。
【００３３】
本発明によれば、ＳＥＲＰ−１タンパク質、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを最初に獲得し、米国特許第５，６８６，４０９号及び同第５，９３９，５２５号（その教示は、本明細書中で参考として援用される）の教示に従って精製する。
【００３４】
半純粋または好ましくはより高度に精製された状態への精製後、ＳＥＲＰ−１を、滅菌水及び生理食塩水または医薬適合性の担体と１ｐｇ／ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌとの間、好ましくは１ｐｇ／ｍｌと１μｇ／ｍｌとの間の範囲の濃度に混合することができる。あるいは、ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントを、凍結乾燥粉末として保存するか、凍結して保存し、その後滅菌、生理食塩水、または他の医薬適合性の担体で上記濃度に溶解することができる。
【００３５】
本発明のＳＥＲＰ−１を、好ましくは医薬組成物として治療有効量をヒト患者に投与することができる。所望の治療を達成するために、治療有効量のＳＥＲＰ−１のみ及び／または免疫抑制薬と共にＳＥＲＰ−１を投与する約１から約６０日前に治療有効量の免疫抑制薬を投与することができることが意図される。
【００３６】
用語「治療有効量」は、例えば、慢性関節リウマチの生理学的影響を有効に治療するために必要な用量を意味する。本発明の医薬組成物は、免疫抑制薬及び医薬適合性の担体と共に薬学的有効量のＳＥＲＰ−１タンパク質、それらの相同体、または類似体を含むか、ＳＥＲＰ−１タンパク質の生物学的に活性なフラグメント、それらの相同体、または類似体を含む。
【００３７】
本明細書中で使用される、「類似体」は、置換または変更（例えば、付加及び欠失）によってもタンパク質が部位（すなわち、局所的）または全身のいずれかに指向される炎症部位に送達された場合に抗炎症性を維持しているＳＥＲＰ−１タンパク質のアミノ酸配列の置換物または変更物を含むことを意味する。
【００３８】
本発明の目的のために、用語「類似体」には、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端融合物ならびに１種以上のアミノ酸の配列内挿入物などのＳＥＲＰ−１のアミノ酸挿入誘導体が含まれる。挿入アミノ酸配列変異型は、１種以上のアミノ酸残基がタンパク質中の規定の部位に導入されたものである。無作為挿入はまた、得られた産物の適切なスクリーニングを使用しても可能である。欠失変異型は、配列からの１種以上のアミノ酸の除去によって特徴付けられる。置換アミノ酸変異型は、配列中の少なくとも１つの残基が除去されてその場所に異なる残基が挿入されたものである。アミノ酸置換によってタンパク質が誘導化される場合、アミノ酸は、一般に、類似の物理化学的性質（疎水性、親水性、電気陰性度、側鎖のかさなど）を有する他のアミノ酸に置換される。保存的置換の例には、非極性（疎水性）残基（イソロイシン、バリン、ロイシン、またはメチオニンなど）の別の残基への置換が含まれる。同様に、本発明は、極性（親水性）残基の置換（アルギニンとリジンとの間の置換、グルタミンとアスパラギンとの間の置換、及びグリシンとセリンとの間の置換など）を意図する。さらに、塩基性残基（アルギニンまたはヒスチジンなど）の別の残基への置換または酸性残基（アスパラギン酸またはグルタミン酸など）の別の残基への置換もまた意図される。
【００３９】
本明細書中で使用される、用語「類似体」はまた、ＳＥＲＰ−１の相同体（すなわち、他のＳＥＲＰ−１由来または同一もしくは実質的に同一の抗炎症性を有する対応アミノ酸配列）を含む。本明細書中で使用される、用語「生物学的に活性なフラグメント」は、全長ＳＥＲＰ−１ポリペプチドを含まないが、部位（すなわち、局所）または全身のいずれかの炎症部位に送達した場合に全長ＳＥＲＰ−１ポリペプチドまたは類似体の抗炎症性を維持しているＳＥＲＰ−１またはＳＥＲＰ−１類似体のフラグメントをいう。
【００４０】
ＳＥＲＰ−１アミノ酸変異型を、固相ペプチド合成（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ合成）などの当該分野で既知のペプチド合成技術を使用するか、当該分野で既知の組換えＤＮＡ技術によって容易に作製することができる。ＤＮＡの所定の部位に置換変異体を作製する技術には、例えば、Ｍ１３変異誘発が含まれる。ＤＮＡ配列を置換、挿入、または欠失変異型を作製する操作は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ（分子クローニング：実験マニュアル）」、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹなどに都合よく記載されている。
【００４１】
本発明の目的のために、ＳＥＲＰ−１の類似体にはまた、ＳＥＲＰ−１に天然または人為的に関連する任意の単独または多数の成分（炭水化物、脂質、及び／または他のタンパク質様部分など）の置換、欠失、及び／または付加も含まれる。全てのこのような分子は、用語「ＳＥＲＰ−１類似体」に含まれる。
【００４２】
本発明の１つの実施形態では、調製したＳＥＲＰ−１タンパク質の非活性を増加させるために、第２４４位のシステイン残基を、別のアミノ酸残基（例えば、アラニン）に置換することができる。Ｃｙｓ２４４はジスルフィド結合を介したＳＥＲＰ−１二量体形成の推定部位であるので、このような置換によりＳＥＲＰ−１タンパク質は生物学的により活性になる。Ｃｙｓ２４４は、ＳＥＲＰ−１タンパク質の反応中心の非常に近くに存在するので、ＳＥＲＰ−１二量体は、不安定且つ不明瞭な反応中心を有し、それにより生物学的に不安定になると考えられる。Ｌｏｍａｓら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８（１）、５１６から５２１。第２４４位の変異により、組換えＤＮＡ手段によるＳＥＲＰ−１産生におけるＳＥＲＰ−１二量体の形成が防止される。単離タンパク質の比活性が増加し、それにより医薬調製物中に必要なタンパク質が減少するので、予備サンプル中のＳＥＲＰ−１二量体の存在の減少は有用である。セルピンのセリンプロテアーゼに対する阻害活性は、活性領域中のＰ１とＰ１’との間のセルピン切断後にセリンプロテアーゼからセルピンのゆるやかな解離を中心に展開すると考えられる。Ｕｐｔｏｎら、１９９０、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７９、６１８から６３１。アミノ酸配列Ａｒｇ／Ａｓｐは、推定ＳＥＲＰ−１　Ｐ１−Ｐ１’部位（アミノ酸残基第３１９位及び第３２０位）に存在し、これはセリンプロテアーゼによる推定切断部位である。これら２つのアミノ酸のいずれかまたは両方の置換により、本発明の実施に有用な種々の生物活性のＳＥＲＰ−１類似体が産生される。
【００４３】
医薬組成物の形成は、当該分野で一般に既知であり、「レミントンの薬学」、第１７版、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａを都合よく参考にすることができる。本発明の使用するためのＳＥＲＰ−１タンパク質、その類似体、またはフラグメントの処方物は製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用を防止しなければならない。微生物汚染の防止を、種々の抗生物質及び抗真菌薬の添加によって行うことができる。
【００４４】
注入に適切なＳＥＲＰ−１の医薬的形態には、滅菌水溶液または分散物及び滅菌注射用溶液または分散物の即時調合調製物用の滅菌粉末が含まれる。全ての場合、滅菌形態でなけらばならず、容易にシリンジで使用できる範囲の流動物でなければならない。典型的に担体には、緩衝化水溶液（すなわち、生体適合性緩衝液）、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、界面活性剤、または植物油が含まれる。任意の当該分野で認識されている技術（濾過または抗生物質及び抗真菌薬（パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、またはチメロサールなど）の添加を含むが、これらに限定されない）によって滅菌を行うことができる。さらに、糖または塩化ナトリウムなどの等張薬を、本発明の組成物に組み込むことができる。
【００４５】
本発明のＳＥＲＰ−１／免疫抑制薬を含む滅菌注射用溶液を、上記列挙の種々の生物を含む適切な溶媒への必要量のこれらの化合物の組み込み及び必要に応じてその後の滅菌、好ましくは濾過滅菌によって作製した。滅菌粉末を得るために、必要に応じて上記溶液を真空乾燥させるか、凍結乾燥させる。
【００４６】
したがって、ＳＥＲＰ−１タンパク質またはその類似体及びフラグメントを、便利且つ有効な投与のために適切な治療有効量の医薬適合性の担体と共に薬学的有効量で調合する。
【００４７】
本明細書中で使用される、用語「医薬適合性の担体及び／または希釈剤」には、有効成分（ＳＥＲＰ−１、ＳＥＲＰ−１類似体、及びそのフラグメント）と適合可能な任意及び全ての溶媒、分散媒、抗菌薬及び抗真菌薬、マイクロカプセル、リポソーム、カチオン性脂質担体、等張及び吸収徐放薬などが含まれる。薬学的に活性な物質用のこのような溶剤及び薬剤の使用は、当該分野で既知である。補助有効成分をまた組成物に組み込み、本発明の方法で使用できる。
【００４８】
当業者は、ヒトに適用する本発明の方法で使用すべきＳＥＲＰ−１／免疫抑制薬の正確な治療有効量を、年齢、体重、炎症性細胞による細胞浸潤の程度、及び患者の健康状態の個体差を考慮して同定することができる。本発明のＳＥＲＰ−１／免疫抑制薬調製物を注入用量あたり少なくとも約１ｐｇ／ｋｇから約５ｇ／ｋｇの量、より好ましくは用量あたり約５μｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量で投与することが好ましいと示すことができる。ＳＥＲＰ−１及び免疫抑制薬を連続投与することができることも意図される。この場合、ＳＥＲＰ−１を、注入用量あたり少なくとも約５μｇ／ｋｇから注入用量あたり約５ｇ／ｋｇの量、好ましくは注入用量あたり約５０μｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量で投与する。免疫抑制薬を、注入用量あたり少なくとも約１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量、好ましくは注入用量あたり約４ｍｇ／ｋｇの量で投与する。
【００４９】
投与が容易で投薬量が一定の投薬単位の親組成物の処方が特に有利である。本明細書中で使用される「投薬単位形態」は、治療すべき哺乳動物被験体用の単位投薬量として適切な物理的に個別の単位をいい、各単位は必要な薬学的担体と共同して所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性物質を含む。本発明の新規の投薬単位形態の仕様を、活性物質（例えば、ＳＥＲＰ−１タンパク質、シクロスポリンＡ（ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、ＦＫ５０１、Ｒａｐｉｍｍｕｎｅ（登録商標））の固有の特徴及び本明細書中に詳細に開示の移植拒絶治療用の活性物質などの調合分野に固有の制限によって予想するかこれらに直接依存する。
【００５０】
便利且つ有効な投与のために、上記開示の投薬単位形態中に適切な医薬適合性の担体と共に有効量の主成分を調合する。単位投薬形態は、例えば、約５μｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの範囲の量の主成分を含むことができる。免疫抑制薬（例えば、シクロスポリンＡ）または免疫抑制薬の組み合わせ（例えば、シクロスポリンＡ及びＦＫ５０１）は、単位投薬形態中に約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で含まれる。免疫抑制薬の組み合わせを使用する場合、このような薬剤の全単位投薬形態は、約１ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの範囲であることが意図される。補助有効成分を含む組成物の場合、成分の通常の用量及び投薬様式を参照して投薬量を決定する。
【００５１】
ＳＥＲＰ−１有効成分の封入に使用する包装材料は、ガラス、プラスチック、金属、または包装材料がその中に含まれるいかなる成分とも化学反応を起こさない限り任意の他の適切な不活性材料を含むことができる。
【００５２】
ＳＥＲＰ−１タンパク質、その類似体、またはフラグメントを、投薬処方物に適合する様式及び治療に有効な量で投与することができる。本発明の組成物を、治療を受ける疾患または損傷に依存し得る医学的に許容可能な任意の方法で投与することができる。可能な投与経路には、非経口経路（血管内、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、腫瘍内、腹膜内、脳室内、硬膜内など）による注射、経口、鼻腔内、眼内、直腸内、局所、または吸入が含まれる。組成物をまた、手術によって組織表面に直接適用することもできる。デポー注射または侵食移植片などの手段による徐放投与もまた特に本発明に含まれる。
【００５３】
本発明を、さらに、以下の特定の実施例によって例示するが、これらは本発明の範囲のいかなる制限も意図しない。
【００５４】
（実施例１）
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを使用したラットのコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）の治療
１２５から１５０ｇの２４匹のラット（Ｌｏｕｖａｉｎ）を、ＵＣＬＡ飼育施設に収容し、標準的な実験用飼料及び水を与えた。
【００５５】
関節炎の誘導：
ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）を、ニワトリの雛の胸骨部にある軟骨のペプシン処理によって調製するか、Ｇｅｎｚｙｍｅ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）から購入した。ラットをエーテルで麻酔し、背中の数箇所の部位への０．１Ｍ酢酸に溶解し、ＦＩＡ（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）で乳化した０．５ｍｇの天然ＣＩＩの真皮内注射によって免疫化した。コラーゲンでの免疫化から１０日間にわたって慢性関節リウマチの徴候及び症状を発症した（Ｏｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　Ｂｒａｈｎ、１９９６、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、２３、Ｓ４４−５６−６０（本明細書中で参考として援用される））。
【００５６】
ＣｓＡ投与／浸透圧ポンプ：
（４ｍｇ／ｋｇ／日；Ｓｃ）のシクロスポリンを、研究継続中浸透圧ポンプで投与した。
【００５７】
ＳＥＲＰ−１投与：
ＳＥＲＰ−１（０．５ｍｇ／ｋｇ）を、疾患発症（１０日目）から研究終了（２８日目）まで毎日静脈内注射によって投与した。
【００５８】
研究評価項目：
ＳＥＲＰ−１／ＣｓＡ治療及び非治療ラットの慢性関節炎の発症及び重症度を、多数の研究評価項目によって評価した。研究の実験期間中、各ラットの各下肢を毎日評価し、関節炎の重症度を腫脹及び関節周囲の紅斑レベルの増加に基づくスコア（０＝正常、４＝最大／後ろ足）の割り当てによって定量した。各ラットの関節炎重症度スコアを、疾患発症（１０日目）から研究終了まで毎日記録した（表１）。関節重症度は、コントロールと比較してＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療群で有意に低かった（ＡＵＣの比較に基づいてｐ＜０．００６；図２）。研究終了時点で、足関節の盲検ラジオグラフスコアリング（０＝正常、３＝最大／後ろ足）を行った。スコアリングの基準は、関節空間の縮小範囲、骨の破壊、骨膜の新規骨形成、及び柔組織腫脹であった（図３）。各ラットについての平均ラジオグラフスコアを、表１の最後の列に示す。ＳＥＲＰ−１治療群内の被験体は、コントロール群よりも関節侵食が有意に低かった（それぞれ４．２７±１．６８に対して２．５８±１．８８、ｐ＝０．０２）。
【００５９】
これらの結果は、関節炎動物モデルにおける精製ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの投与によりコントロールと比較して慢性炎症性細胞浸潤が有意に減少し、関節破壊のラジオグラフ重症度が有意に減少することを証明している。
【００６０】
【表１】
2004509171.tif 000002
2004509171.tif 000003
（実施例２）
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの冠状動脈閉塞に関連する炎症及び心不全に対する効果
心臓への血流の不足による冠状動脈閉塞、虚血、及びその結果として発症する心筋損傷及び壊死を、以下の手順によって雑種のイヌに誘導する。滅菌条件下で、雑種のイヌ（２８から３５ｋｇ）を、静脈内ペントバルビタール（３０から３５ｍｇ／ｋｇ）を使用して麻酔し、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／分の速度でのペントバルビタールの継続注入を使用して維持する。麻酔が誘導された時点で、スクシニルコリン（１ｍｇ／ｋｇ）もまた、静脈内投与する。次いで、動物を、カフ付きの気管内チューブを挿入し、温暖で加湿された大気及び酸素をＳｉｅｍｅｎｓ９００人工呼吸器などの人工呼吸器を使用して換気する。大腿線に挿入し、全身の血圧を継続的に表示する。動脈血サンプルを定期的に採取して、生理学的限度内にｐＨ、ｐＯ２、及びｐＣＯ２を維持する。加温及び加湿した通風大気、及び胸郭上に設置したヒートランプを使用して体温を３７℃に維持する。食道中央に設置したサーミスタを有するＹＳＩ　７３Ａ温度調節器（Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎｇｓ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎｇｓ、ＯＨ）を使用して温度をモニターする。心電図のリードを、継続的ＥＣＧモニタリングに適用する。１０日間及び４週間の梗塞部を、以下のように作製する。滅菌条件下での第４の肋間隙での限定した（４ｃｍ）の左開胸術によって心臓を露出させる。心膜を開いて近位左前下行枝（ＬＡＤ）を露出させ、その起点にできるだけ近位で切開し、鼻用オクルーダーを適用する。部分的閉塞を３０分間維持し、完全な閉塞を９０分間維持する。鼻用オクルーダーを除去し、再灌流させる。胸部チューブを挿入し、胸部を多層で閉じた。４から１０日間動物を回復させる。正常心臓と梗塞心臓との間の比較を正確に行うために、コントロールされるイヌ（ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注入を行うか注入しない群に分けた）を、見せかけのＬＡＤ閉塞に供してＬＡＤ閉塞に、手術、開胸術、心膜切開術、接着などの可能性のある二次的な不明確因子を消去する。
【００６１】
１０日後、３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、冠状動脈注入によって投与して、冠状動脈閉塞症を誘導したイヌの炎症及び心不全に対する効果をモニターする。類似の用量のＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、腹膜内（ｉ．ｐ）、皮下（ｓ．ｃ．）及び静脈内投与（ｉｖ）によって投与する。
【００６２】
２から６ヶ月にわたる選択した時間間隔での追跡によってイヌをモニターする。超音波心臓検査を使用して、左心室機能を評価する。日常的な心筋層のヘマトキシリン及びエオシン染色を使用して、心筋炎症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。
【００６３】
（実施例３）
誘導性心律動異常に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
動脈閉塞を誘導したイヌ（実施例５）を、６日間、３０日間、及び６０日間回復させ、その後心律動異常の誘導のために第２の手術に供する。第１の手術（実施例５）に類似のペントバルビタール麻酔後、第２の手術を開始する。実施例５に類似の血流力学的モニタリング及び静脈内注入を使用して、中線胸骨切開及び心膜クレードルを行う。陽極チタニウムメッシュ除細動パッチ電極（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃｓ　ＴＸ−７、４．５ｃｍ２に減少）を、右心房／上大動脈接合部に縫合しする。陰極除細動パッチ（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃｓ　ＴＸ−７、１５ｓｐ．ｃｍ．）を、左心室の頂端に縫合する。ＲＶ流出管領域中に第３のチタニウムメッシュ除細動パッチ（４．５ｃｍ２に減少）を貼ることによって介入ショックを行った。大動脈根の脂肪パッドを切開して除去し、４．０ｍｍ　Ａｇ／ＡｇＣｌ基準電極を、全てのＤＣ連結単極記録用の基準として使用するために動脈根に縫合する。電圧勾配磁場及び活性化の最初の全体的な心外膜マッピングのために、均一に配置され、且つ容易に再配置可能な三極ボタン電極を有する心外膜ジャケットを、心臓周囲に収める。初期活性化部位の確認のための全体的マッピング後、記録電極をより深く梗塞部及びより広い領域を含む初期活性化部位上に集中させる。先に記載した経壁及び中隔記録電極をまた、心臓全体の電圧勾配決定に使用することもできる。全ての電極を配置後、心臓を加温生理食塩水で湿らせた４×４スポンジで覆う。胸骨を接合し、プラスチックシート及び湿ったタオルで覆って、心臓を湿った一定温度の環境に維持する。梗塞領域の外側及び内側の６０Ｈｚの交流ならびに梗塞領域への急速な心室ペーシングによって心室細動を誘導する。
【００６４】
３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、動脈閉塞手術日またはその後の冠状動脈注入によって投与し、誘導の受動的性質の全体的変化及び致死性心室不整脈に対する効果をモニターする。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与に応答した心筋誘導の受動的性質の変化の経時変化を、顕微鏡的心内膜記録を使用して同定し、ＬＶ機能の低下及び心室不整脈の発症と相関させている。Ｗｉｋｏｗｓｋｉら、１９９３、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７２、４２４から４３９。
【００６５】
（実施例４）
うっ血性心不全及び心筋症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
うっ血性心不全及び心筋症を、以下のように雑種のイヌに誘導する。滅菌条件下で、雑種のイヌ（２８から３５ｋｇ）を、静脈内ペントバルビタール（３０から３５ｍｇ／ｋｇ）を使用して麻酔し、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／分の速度でのペントバルビタールの継続注入を使用して維持する。麻酔が誘導された時点で、スクシニルコリン（１ｍｇ／ｋｇ）もまた、静脈内投与する。心臓の右心室領域にペースメーカーを挿入し、１００から２８０／分の脈拍範囲の高速にセットする。１４から３０日後、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、冠状動脈注入、腹膜内（ｉ．ｐ）、皮下（ｓ．ｃ．）及び静脈内投与（ｉｖ）のいずれかによって投与する。イヌを、２から６ヶ月にわたる選択した時間間隔での追跡によって心筋炎症及び心不全に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。超音波心臓検査を使用して、左心室機能を評価する。日常的な心筋層のヘマトキシリン及びエオシン染色を使用して、心筋炎症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。心筋層の免疫組織学的染色を使用して、炎症性細胞による心筋炎症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。さらに、共焦点顕微鏡及び電子顕微鏡調査を行って、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療筋障害心臓及び正常心臓における細隙結合の空間的分布及び分子の特徴の相違をモニターする。
【００６６】
（実施例５）
動物の急性肺炎感作に関連する病態のＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療
８から１２週齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｉｌｅｙラットを、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療の２週間前に１ｍｇ卵白アルブミン（ＯＦ）グレードＶ及び２００ｍｇのＡｌ（ＯＨ）３の１ｍｌ生理食塩水（皮下投与）及びＩｇＥ抗体産生を増強するためのアジュバントとしての１ｍｌのＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓワクチン（２×１０９）バチルス（腹膜内投与）で感作する。したがって、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは感作され、これらを過活動性気道（喘息及び気管支炎など）に関連する病態に対するＳＥＲＰ−１の効果のモニタリングに使用する。
【００６７】
線虫（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）を感染させたＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用して、特にアレルギー及び過敏症などの肺系に関連する急性アレルギー反応に対するＳＥＲＰ−１の効果をモニターする。アレルゲン誘導性肺炎（局所性好中球増加症、好酸球増加症、ならびに肺胞マクロファージの漸増及び機能を含む）のモニタリングに有益なＮ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ感作ラットは、Ｒａｍａｓｗａｍｙら、１９９１、Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ、７７、３０２から３１２及びＭａｔｈｉｓｏｎら、１９９２、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１０６、２６３から２６６（本明細書中で参考として援用される）に詳述されている。
【００６８】
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与及び急性肺炎に対する効果
感作後（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓワクチンまたはＮ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを実験動物あたり３ｐｇから３μｇの全用量範囲にて選択した時間間隔でエーロゾル、皮下、腹膜内、または静脈内注入によって投与する。感作ラットにはまた、実験コントロールとして同体積の生理食塩水も投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療効果を、肺検体由来の組織の組織学的及び免疫組織学的分析によってモニターする。
【００６９】
肺胞マクロファージ機能に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターするために、感作ラット及びいくつかの場合上記のようにＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注入も受けた感作ラットを、以下の手順を用いてエーロゾルに曝露する。プレキシガラスボックス内に０．１から０．２ｍｌ／分が噴射される圧力の圧縮空気を使用したＲｏｘｏｎ　Ｍｅｄｉ−Ｔｅｃｈ　Ｌｔｅ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ、ＰＱ）のＷｒｉｇｈｔ噴霧器を使用してエーロゾルを得る。生理食塩水またはＯＡ（２％生理食塩水溶液）を５分間噴霧してラットを麻酔し、それによりエーロゾル形態でＡｇが送達される。
【００７０】
エーロゾルへの曝露後、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、実験動物あたり０．３ｐｇから３ｍｇの全用量範囲でのエーロゾル、皮下、腹膜内、または静脈内注入によって投与する。エーロゾル曝露ラットに、実験コントロールとして同量の生理食塩水も投与する。０、６、１０、３０、６０、及び９０日後、１９０から２５０ｇのラットを麻酔し、気管を露出させ、金属製気管カニューレを挿入し、３つの他の金属製チューブをロウ付けする。１つのチューブは、気道圧の測定のために圧力変換器（Ｖａｌｉｄｙｎｅ　ＭＰ４５　＋／−５０ｃｍＨ２Ｏなど）に接続する。「Ｙ」を形成する他の２つのチューブを、Ｈａｒｖａｒｄげっ歯類人工呼吸器などの人工呼吸器の吸気及び呼気経路に接続する。５０から６０呼吸／分の速度の８から１０ｍｌ／ｋｇの一回呼吸量を送達するように人工呼吸器をセットする。
【００７１】
実験準備後、各気管切開ラットを、３０×１５×１０ｃｍのプラスチック製の箱に入れ、気管を人工呼吸器及び気道圧変換器に接続する。人工呼吸器を作動させ、箱に蓋をする。気道圧及び箱の圧力を、コンピュータに送信し、Ｌｏｔｕｓ１、２、３に保存する。１０秒間測定し、その間に７から１０の１回呼吸量を回収した。箱圧力シグナルは、換気による体積の変化を示し、シグナルを区別して吸気及び呼気流速を得る。したがって、気道圧、１回呼吸量、及び１回呼吸流量についてのデータが得られるスプレッドシートが得られる。このデータから、呼吸器系の耐性及び動的コンプライアンス（または弾性）を計算し、それによりコントロール（生理食塩水を注入）及び実験（ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを注入）ラットの気管支収縮度の尺度が得られる。
【００７２】
ヒツジは、吸入したブタ回虫（Ａｓｃａｒｉｓ　ｓｕｕｍ）抗原に対して初期及び後期気管支反応を示すことが既知であるので、喘息及び気管支炎などの炎症病態に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果のモニタリングに有用である。Ａｂｒａｈａｍら、１９９３、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１２８、８３９から８４４及びＡｂｒａｈａｍら、１９９４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、９３、７７６から７８７（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。鼻腔通過の局所麻酔後、バルーンカテーテルを一方の外鼻孔を介して下の食道に通し、他の外鼻孔を介して動物にカフを取り付けた気管内チューブを挿入する。約１ｍｌの空気を充填した食道バルーンカテーテルで胸膜圧を測定する。気管の側面圧を、気管内チューブのチップに隣接するカテーテルを使用して測定し、胸膜及び気管カテーテルの両方をＶａｌｉｄｙｎｅ　ＭＰ４５、Ｎｏｒｔｈｒｉｄｇｅ、ＣＡなどの差圧変換器に接続する。２つの圧力の差として肺内外圧差を同定した。気管内チューブの近い方の末端の呼吸気流計（Ｆｌｅｉｓ、Ｄｙｎａ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｌｕｅ　Ｂｅｌｌ　ＰＡ）への接続によって測定する。肺内外圧差を中間の１回呼吸量での気流の変化で割った一時的変化として肺流量耐性を同定する。ｐＨ７．４の緩衝化生理食塩水のアリコートを用いたファイバー気管支鏡を使用して気管支肺胞洗浄を行う。
【００７３】
抗原（典型的には、Ｇｒｅｅｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｌｅｎｏｉｒ　ＮＣから入手可能なＡｓｃａｒｉｓ　ｓｕｕｍ抽出物）を、ソレノイドバルブ、圧縮空気の供給源、及び人工呼吸装置を含む計量システムに接続した従来の医療用噴霧器を介して導入する。
【００７４】
実験の数日前に特徴的な基準気道応答性及び気管支肺胞洗浄を行う。実験日に、気道応答性を再度測定し、その後約３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンまたは同体積の生理食塩水の静脈内注入により導入する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの投与後、気道応答性（特異的肺耐性、平均肺流量耐性など）を評価し、動物を抗原で攻撃誘発を行う。攻撃誘発後、気道応答性及び攻撃誘発後気管支肺胞洗浄を、抗原攻撃誘発後種々の時間で行う。コントロール及びポリペプチド試験から少なくとも３週間（ヒツジが過去の攻撃誘発からの回復に十分な期間）隔離する。別のプロトコールでは、抗原攻撃誘発後のＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与の効果をモニターする。
【００７５】
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの有効性を評価するために測定したインビトロパラメータには、上皮細胞、マクロファージ、リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、及び単球の洗浄液中の細胞分画が含まれる。
【００７６】
過活動気道（喘息など）に対するＳＥＲＰ−１の効果についてモルモットもモニターすることができる。例えば、Ｐｒｅｔｏｌａｎｉら、１９９４、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８０、７９５から８０５を参照のこと。雄ハートレーモルモット（Ｈａｒｔｌｅｙ　ｇｕｉｎｅａ　ｐｉｇｓ）を、エーロゾル化アルブミン（Ｍｉｌｅｓ、Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ、ＩＬ）によって感作する。４８時間後にこの手順を繰り返し、第１の吸入から、１４から１７日後に卵白アルブミンエーロゾル溶液によって動物を攻撃誘発に曝露する。上記のようにコントロール動物を感作し、１４から１７日後に生理食塩水に曝露する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、抗原攻撃誘発の１時間前よび４時間後に感作モルモットに投与する。
【００７７】
抗原誘導性気管支過活動及び細胞浸潤に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与効果を、多数の方法でアッセイする。肺膨張に対する気管支耐性の変化を、気管支と呼吸ポンプとの間に配置した圧力変換器によって測定し、ダイノグラフ（ｄｙｎｏｇｒａｐｈ）で継続的して記録する。気管支反応性を、メタコリン（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．）の反復投与によって試験する。コールターカウンターを使用した全白血球数及び染色後の示差数の計数のために動脈血のアリコートを採取する。気管支肺胞細胞を、注射した滅菌生理食塩水のアリコートを使用してその後の洗浄のために採取し、ポリエチレン気管支カニューレを介して戻す。洗浄液中の示差細胞数及び好酸球ペルオキシダーゼの測定も行う。事前にクロロホルム−アセトン中で固定した切開した肺組織について免疫組織化学研究を行う。切片を、Ｐｒｅｔｏｌａｎｉら、１９９４に記載の技術などの従来技術を使用したＴ細胞及び活性化好酸球に特異的な種々のモノクローナル抗体で染色する。
【００７８】
（実施例６）
神経外傷後の二次的免疫媒介性損傷のＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療
ルイスラットの胸郭脊髄の再発性損傷を、以前に記載の電気機械衝撃デバイスによって誘導する（Ｓｔｏｋｅｓら、１９９１、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ、９、１８７から１９５；Ｐｏｐｏｖｉｃｈら、１９９３、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ、１０、３７から４６；Ｐｏｐｏｖｉｃｈら、１９４、Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６３３、３４８から３５２）。簡単に述べれば、電気機械衝撃デバイスを使用して、げっ歯類の脊髄に小さな挫傷を作製する（持続時間は２５ミリ秒未満）。動物をケタミン（６０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）で日常的に麻酔し、脊髄レベルＴ８またはＴ９で一区画の椎弓切除を行う。元の脊髄表面から１．１ｍｍの脊髄の迅速な置換によって脊髄にデバイスを用いて挫傷を負わせ、置換及び力を継続して記録する。表面上の創傷を、多層で閉じ、損傷した動物を回復させる。
【００７９】
損傷ラットに静脈内経路（０．３ｐｇから３ｍｇの投薬量）及び脊髄内注射（０．３ｐｇから３ｍｇの投薬量）でＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与する。コントロール群の損傷ラットに、類似体積の生理食塩水を投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注入から１、６、１４、３０、６０、及び９０日後、ラットをフェノバルビタールナトリウム（１００ｍｇ／ｋｇ）によって屠殺する。進行性組織壊死に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療の効果を、ルイスラットの神経外傷に関連することが既知の組織学的、生化学的、免疫学的、及び挙動基準によってモニターする。例えば、外傷後に起こる多数の細胞死を媒介することが既知の中枢神経系由来の実質小神経膠細胞及び浸潤性反応性白血球を、以下のようにモニターする。
【００８０】
胸郭脊髄の損傷領域から切断したホルマリン固定切片に対して免疫組織化学的分析を行う。固定ウサギ脊髄から採取したパラフィン切片を種々の標準化細胞表面マーカー（特異的細胞サブタイプのＭＨＣマーカー、ＣＤマーカーなど）で免疫染色し、小神経膠細胞活性化の範囲及び脊髄損傷デバイスによって作製された挫傷領域中の脊髄実質への白血球の浸潤レベルを測定する。さらに、ＴＮＦ及びＩＬ１などの標準的な炎症性サイトカインの局所発現の評価を、ＲＴ−ＰＣＲ及びノーザンブロッティング分析によって行う。適切な排出リンパ系組織中でのリンパ球活性化を、リンパ球増殖アッセイ及び脊髄損傷活性化リンパ球の養子移入によって測定する。
【００８１】
（実施例７）
炎症性腸疾患及び乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
ヒトクラスＩ主要組織適合対立遺伝子ＨＬＡ−Ｂ２７を発現するトランスジェニックラット（Ｈａｍｍｅｒら、１９９０、Ｃｅｌｌ、６３、１０９９から１１１２）を使用して、炎症性腸疾患及び乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。事実上、全てのＨＬＡ−Ｂ２７ラットは１６週齢までに慢性胃腸炎を発症し、約７０％が関節炎を発症し、相当数が同時期に乾癬を発症する。さらに、ワタボウシタマリン（ＣＴＴ）をまた使用して、潰瘍性大腸炎及びクローン病に類似の自発性及び急性潰瘍に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果もモニターする。Ｐｏｄｏｌｓｋｙら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、９２、３７２を参照のこと。
【００８２】
ＨＬＡ−Ｂ２７ラット及びワタボウシタマリンに、以下の種々の経路（静脈内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、皮下（０．３ｐｇから３ｍｇ）、腹膜内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、関節内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、及び直腸内（０．３ｐｇから３ｍｇ））によってＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与する。１から３日後、炎症パラメータの分析のために組織サンプルを採取する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果の評価後、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注射数を必要に応じて至適化する。
【００８３】
ＨＬＡ−Ｂ２７マウス及びワタボウシタマリンの腸病理学を、顕微鏡で分類し、確立された炎症基準を使用して顕微鏡で分類する。乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果を、マウスにおける乾癬性病変の試験及び倍率の変化の観察、表皮の肥厚、過形成、及び関連炎症性細胞の（主にリンパ球）の染色によってモニターする。
【００８４】
Ｐｅｒｃｙら、１９９３、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１０４、３６９から３７６に記載のトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）またはＬｅＤｕｃら、１９９０、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、９８、９２９から９３５に記載の走化性ペプチド（ｆ−ｍｅｔ−ｌｅｕ−ｐｈｅ）の結腸投与によってウサギの炎症性腸疾患を誘導する。ニュージーランドホワイトウサギ（３から４ｋｇ）を、キシラジン及びケタミンの筋肉内投与によって麻酔する。フォーリーカテーテルを、結腸に約１５ｃｍ挿入し、３ｍｌの空気で膨張させ、静かに引き抜いて遠位糞便の筋肉クリアランスを誘導する。３から４ｍｌの１５０ｍｇ／ｍｌのＴＮＢＳの５０％メタノール溶液を含む透析バッグ（８から１０ｃｍ、ｎ．７、直径１０ｍｍ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）を遠位結腸に挿入し、所定の場所に１時間放置する。次いで、バッグを取り出し、動物を静脈内、腹膜内、筋肉内、皮下、または直腸送達ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン（３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇ）または生理食塩水コントロールで治療する。ＴＮＢＳ除去直後、ＴＮＢＳ除去から１時間後、ＴＮＢＳ除去から１日後、またはＴＮＢＳ除去から５日間毎日のいずれかで治療を行う。ＴＮＢＳ治療から５日後にペントバルビタール（６０ｍｇ／ｋｇ）で動物を安楽死させる。遠位の５ｃｍの結腸を、炎症性腸疾患について分析する。ヘマトキシリン及びエオシン染色結腸組織切片を、粘膜固有層、粘膜下組織、粘膜筋板、及び潰瘍化に関する粘液の出現、陰窩膿瘍、好中球凝集、及び固有筋層における炎症性浸潤の存在について評価する。大腸炎は、粘膜固有層中の急性及び慢性炎症性細胞ならびに急性上皮内炎症性細胞の存在と定義する。
【００８５】
（実施例８）
乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
薄片状皮膚（ｆｓｎ）変異を有するマウスにおける乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。乾癬性病変もまた、ｆｓｎ表現型の病理学的特徴が宿主胸腺由来免疫系から独立して持続することができるような正常な同腹子またはヌードマウスの皮膚移植片として維持することができる。Ｓｕｎｄｂｅｒｇら、１９４４、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１０２、７８１から７８８。
【００８６】
ｆｓｎ／ｆｓｎマウス、正常な同腹子、またはｆｓｎ／ｆｓｎマウス由来の皮膚移植片を有するヌードマウスに、以下の種々の経路（静脈内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、皮下（０．３ｐｇから３ｍｇ）、腹膜内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、及び関節内（０．３ｐｇから３ｍｇ））によってＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与する。０、６、１４、３０、６０、及び９０日後、炎症パラメータの分析のために組織サンプルを採取する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果の評価後、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注射数を必要に応じて増加させることができる。
【００８７】
乾癬に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果を、マウスにおける乾癬性病変の試験及び倍率の変化の観察、表皮の肥厚、過形成、及び関連炎症性細胞の（主にリンパ球）の染色によってモニターする。表皮過形成を、ＤＮＡ合成の増加として測定し、乾癬性病変細胞への３Ｈ−チミジン取り込みの増加の検出によって評価する。
【００８８】
ヒト乾癬性病変由来の抗原提示細胞による自己反応性Ｔ細胞活性化の測定を使用して、インビトロでのヒト乾癬細胞機能に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果もモニターする。表皮細胞懸濁液を、正常な個体及び乾癬個体の新鮮な皮膚生検から調製する。同一個体由来のＴ細胞を、同時に精製し、抗原提示細胞を含む表皮細胞を、同一個体由来の自己ＣＤ４陽性Ｔ細胞と共培養してＴ細胞活性化を開始させる。従来の方法（例えば、トリチウムチミジン取り込みの測定、ＩＬ−２、γインターフェロン、及びＩＬ−４などのリンホカインのｍＲＮＡの相対量の定量など）を使用して、自己反応性応答を評価する。
【００８９】
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの活性化Ｔ細胞または活性化した別の型のサイトカインにおける病変（または正常）皮膚中の種々の抗原提示細胞を減少させる能力を、細胞／Ｔ細胞培養へのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの直接添加により試験する。抗原提示細胞／Ｔ細胞共培養中でのトリチウムチミジン取り込み阻害は、自己反応性応答のＳＥＲＰ−１／シクロスポリン阻害を示す。これらのデータを、緩衝液、及び正常皮膚コントロールで得た結果と比較する。
【００９０】
（実施例９）
心筋炎に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
ルイスラットにおいて、Ｋｏｄｏｍａら、１９９４、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、７５（２）、２７８から２８４で以前に考察されている心臓ミオシン画分での免疫化によって自己免疫性心筋炎を誘導する。
【００９１】
免疫化ラットを、コントロールまたはＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療群に無作為に割り当てる。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注入物を、以下の種々の経路（静脈内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、皮下（０．３ｐｇから３ｍｇ）、腹膜内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、及び関節内（０．３ｐｇから３ｍｇ））によって投与する。動物を屠殺し、日常的な組織学的及び免疫学的分析のために心臓を取り出す。自己免疫性心筋炎に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリン調整効果を、非治療コントロール動物と比較したＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療動物由来の心臓のサイズの減少及び退色に注目することならびに非治療コントロール動物と比較したＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療動物由来の心臓の体重に対する心臓重量の比の減少に注目することによってモニターする。さらに、心筋の筋肉喪失及び置換性線維形成に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの改善効果もまた、放射性核種の評価及び心拍出量の熱希釈色素の評価ならびに日常的な血流力学的測定及び心筋重量によって測定する。
【００９２】
（実施例１０）
インスリン依存性糖尿病に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
糖尿病の徴候を示す非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウス由来の脾臓細胞を採取し、Ｂｕｒｋｌｙら、１９９４、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４３、５２９から５３４に記載のように非糖尿病マウス由来の脾臓細胞と並行して赤血球を枯渇させる。ＮＯＤマウス由来の脾臓細胞を、（ａ）ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンで予備治療するか、（ｂ）非特異的イソ型適合免疫グロブリンで予備治療するか、（ｃ）治療しない。次いで、非糖尿病マウスに脾臓細胞を静脈内注射する（０．２ｍｌＰＢＳ溶液中に２から３×１０７細胞）。コントロールは、緩衝化生理食塩水または非糖尿病マウス由来の脾臓細胞を投与した非糖尿病マウスを含む。
【００９３】
別の手順では、ＮＯＤマウス由来脾臓の予備治療で使用されるよりもむしろ脾臓細胞移入から０、６、１４、３０、６０、及び９０日後にＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン注入物を、以下の種々の経路（静脈内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、皮下（０．３ｐｇから３ｍｇ）、腹膜内（０．３ｐｇから３ｍｇ）、及び関節内（０．３ｐｇから３ｍｇ））によって投与する。糖尿病に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの改善効果を、尿及び血漿グルコースレベルについて日常的なアッセイによってモニターする。動物を屠殺し、パラフィン包埋切片標本のための膵臓を１０％ホルマリンＰＢＳに採取し、組織学のためにヘマトキシリン及びエオシン染色に供する。盲検で膵島を記録し、各動物あたり少なくとも２５個の膵島を試験する。インスリン炎の程度を、Ｂｕｒｋｌｙら、１９８７に記載のようにスコアリングする（グレード０、インスリン炎なし；グレードＩ、周囲にインスリン炎；グレードＩＩ、細胞浸潤病変が膵島領域の２５％未満を占める；グレードＩＩＩ、２５から５０％の浸潤；及びグレードＩＶ、５０％を超える浸潤）。非浸潤膵島（グレード０）、中程度に浸潤した膵島（グレード１からＩＩ）、重篤に浸潤した膵島（グレードＩＩＩからＩＶ）の比率を、各個体動物についてモニターした全膵島数に比例させて計算する。
【００９４】
（実施例１１）
脳卒中に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
中枢神経系虚血に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの調整効果を、アレチネズミ、ウサギ、またはラットを使用してモニターする。アレチネズミにおける１回または反復性膵島虚血は、以前にＷｉｓｈａｒｔら、１９９４、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ、５（１２）、１５４１から１５４４に記載されている。
【００９５】
異常な大動脈の一過性閉塞によって、ラットにおいて可逆性脊髄虚血を誘導する。ラットにおける不可逆性大脳虚血を、球体が脳血管系に導入されるように内頸動脈へのプラスチックミクロスフェア（５０ミクロン）の注射によって誘導する。Ｂｏｗｅｓら、１９９４、Ｓｔｒｏｋｅ、２５（１１）、２２５３から２２５７を参照のこと。
【００９６】
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、虚血開始後に３ｐｇから３ｍｇ／ｋｇ体重の投薬範囲の注入または３ｐｇから３ｍｇ／ｋｇ体重の投薬範囲での交換輸血のいずれかによって投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン治療動物及び非治療コントロール動物における水迷路試験における動作の相違によって可逆性虚血動物におけるＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果をモニターする。永久的麻痺に必要な不可逆性大脳虚血動物におけるＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果をモニターする。
【００９７】
Ｄａｖｉｓら、１９９４、Ａｃｔａ．Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒ．Ｓｕｐｐｌ．、６０、２８２から２８４に記載の大脳動脈の閉塞によってラットで局所虚血を開始させる。局所虚血の開始前に、ラットを、皮下、静脈内、動脈内、腹膜内、または脊髄液に０．３ｐｇから３００μｇの投薬量でＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与したＳＥＲＰ−１／シクロスポリン予備治療実験群または生理食塩水投与（または非予備治療）コントロール群に割り当てる。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン効果を、既知の法王を使用した脳浮腫の指標として梗塞体積の組織学的評価及び比重分析によってモニターする。
【００９８】
（実施例１２）
多発性硬化症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）は、ＭＳ様症候群であり、実験動物へのミエリン塩基性タンパク質に特異的なＣＤ−４陽性Ｔ細胞クローンの腹膜内注射によって誘導される。ミエリン塩基性タンパク質に反応性を示す注射Ｔ細胞は、中枢神経系に存在し、炎症を引き起こす。Ｂｅｎ−Ｎｕｎら、１９８１、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１、１９５から１９９；Ｈｉｃｋｅｙら、１９９１、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｃ．、２８、２５４から２６０（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。内因性単球及びリンパ球は、脳幹及び脊髄中の炎症血管に浸透する。
【００９９】
ＥＡＥを、８×１０６個の適切なＴ細胞クローンのルイスラットへの腹膜内注射によって誘導する。Ｔ細胞クローンの産生及び維持は、Ｂｅｎ−Ｎｕｎら、１９８１、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１、１９５から１９９に記載の通りである。典型的には、ラットは、４から５日以内に下肢及び尾に麻痺を発症させる。Ｙｅｄｎｏｃｋら、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ、３５６、６３から６６。簡単に述べれば、ルイスラットを生理食塩水中で乳化させたミエリン塩基性タンパク質及び完全フロイントアジュバントで免疫化する。約９日後、排出されたリンパ節を除去し、補足イーグル培地に再懸濁し、ミエリン塩基性タンパク質を添加したぺトリ皿中で培養する。次いで、リンパ芽球を分離し、フィコル（Ｆｉｃｏｌｌ）密度勾配において１工程で濃縮する。リンパ芽球画分を回収し、洗浄し、コンカナバリンＡ刺激脾臓細胞、ウマ血清、アミノ酸、ピルビン酸塩、２−メルカプトエタノール、及び抗生物質を補足したイーグル培地中で増殖させる。照射同系胸腺細胞及びミエリン塩基性タンパク質を含むマイクロタイターウェル中での限界希釈によってＴリンパ球を選択する。Ｂｅｎ−Ｎｕｎら、１９８１。
【０１００】
Ｍ．Ｓ．におけるＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの改善効果を、マウス肝炎ウイルス（ＪＨＭコロナウイルス）感染マウスでモニターすることができる。その後疾患が進行した幼いマウスに、ＪＨＭを大脳内注射する（Ｌｕｃａｓら、１９７９、Ｃｅｌｌ、１２、５５３から５６０；Ｒｏｂｂら、１９７９、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、９４、３５２から３７０）。Ｔ細胞クローンまたはＪＨＭ株感染前またはそれと同時にＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与する。以前にＹｅｄｎｏｃｋら、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ、３５６、６３から６６に記載の日常的ヘマトキシリン及びエオシン、免疫組織化学的染色、及びインビトロ接着アッセイを使用して、炎症に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの改善効果をモニターする。５日目のＥＡＥまたはＪＨＭ感染脳の切片を、白血球付着を支持する能力について試験する。Ｓｔａｍｐｅｒ　ａｎｄ　Ｗｏｏｄｒｕｆｆ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１４４、８２８から８３３、１９７６。約１０７細胞／ｍｌ−１の濃度の白血球（例えば、ヒト単球Ｕ９３７株）を、新たに切断した非固定ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン曝露（実験）または非曝露（コントロール）１０μｍＥＡＥラット脳切片上に重層する。付着白血球を脳組織切片よりも暗色に染色されることにより識別し、異なる焦平面に配置する。
【０１０１】
ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの細胞浸潤に対する改善効果を、実験及びコントロール治療から得た中枢神経系切片及びＹｅｄｎｏｃｋら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ、３５６、６３から６６（本明細書中で参考として援用される）の表１に列挙したものなどの種々の利用可能な抗体を使用して免疫組織化学的にモニターする。標識抗体技術は、Ｎａｉｓｈ　Ｓ．Ｊ．編、１９８９、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　Ｍｅｔｈｏｄｓ（免疫化学的染色法ハンドブック）」、Ｄａｋｏ　Ｃｏｒｐ．、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡに記載されている。例えば、実験及びコントロール切片を、モノクローナル抗体ＯＸ−１（全白血球上で発現するＣＤ４５）または循環単球を認識するモノクローナル抗体ＥＤ１で治療する。コントロールと実験切片との間の反応性白血球数及び単球数の相違に注目する。
【０１０２】
（実施例１３）
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
ＮＺＢ／ＮＺＷ　Ｆ１雑種及びＭＲＬ（ｌｐｒ／ｌｐｒ）マウスは、自発性ＳＬＥ様疾患を発症する２つのマウス系列である。ニュージーランドブラック／ホワイト交配の雌子孫は、重篤な免疫複合体腎炎（抗ＤＮＡ抗体）を発症し、出生後数ヶ月以内に重篤な全身性リンパ球機能障害を発症し、一般に９ヶ月前に死亡する。Ｈｏｗｉｅ　ａｎｄ　Ｈｅｌｙｅｒ、１９６８、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９、２１５（本明細書中で援用される）を参照のこと。
【０１０３】
同様に、ＭＲＬ（ｌｐｒ／ｌｐｒ）マウスは、末梢リンパ節の拡張及び肉眼的巨脾腫を含む大量リンパ増殖を伴う致死性免疫複合体糸球体腎炎を発症する。約１０から２０％のＭＲＬマウスもまた、死の前に進行性慢性関節リウマチ及び血管炎皮膚病変を発症する。例えば、Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｌｏｕｓ　ａｎｄ　Ｄｉｘｏｎ、１９８５、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３７、２６９から３９０（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。一般に、約１０週齢よりも若いマウスは疾患を発症せず、約１６週齢よりも老いたマウスは、疾患を発症する。
【０１０４】
出生直後から、両マウス系に、１ｎｇ／ｋｇから３ｐｇ／ｋｇの投薬量のＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを１週間から１ヶ月の間で時間間隔をずらして静脈内及び腹膜内経路で投与する。ＳＬＥに関連する免疫病理学の改善におけるＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果を、以下の標準化基準を使用して毎月モニターする：（ｉ）蛋白尿によって出現する腎機能、尿中の尿素レベル、糸球体濾過速度、及び被膜下腎出血、（ｉｉ）腎切片中の糸球体腎炎の病巣数（ｉｉｉ）涙液及び耳下腺のリンパ球浸潤、（ｉｖ）抗赤血球レベル、抗ＤＮＡレベル、及び抗核抗体レベル、（ｖ）ＩｇＭ抗γグロブリン血症レベル、（ｖｉ）胸腺機能（例えば、単離リンパ球からのＩＬ−２産生）、（ｖｉｉ）腎形態学（例えば、糸球体沈積物の拡大）、（ｖｉｉｉ）血漿ＴＮＦ／ＩＬ−６の増加及びコンカナバリンＡ誘導性及びＴ細胞による自発性サイトカイン分泌の増加。
【０１０５】
上記基準を、Ｍｏｒｒｏｗら、１９８７、「自己免疫性リウマチ病」、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂ．、Ｏｘｆｏｒｄ（本明細書中で参考として援用される）に記載のアッセイによって測定する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与により、必要に応じて複数回（毎週及び毎月）の注射に増加する。
【０１０６】
別のＳＬＥマウスモデルでは、出生時にマウスに半アレルギー性リンパ系細胞を注射する。注射したマウスは、ドナーＢ細胞が他宿主優先ＣＤ４＋Ｔ細胞によってポリクローナルで活性化されて自己抗原及び免疫複合体媒介性糸球体腎炎を発症する狼瘡様自己免疫諸侯群を発症する。Ｒａｍｏｓら、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８２、２８７から２９３（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与及び効果のモニタリングを、上記の通りである。
【０１０７】
（実施例１４）
肺損傷に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
急性肺損傷（例えば、ＡＲＤＳ）の動物モデルは、Ｄｏｅｒｓｈｕｋら、１９９０、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４４、２３２７から２３３３に記載されている。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの肺損傷に対する改善効果を、以下の様にモニターする。第１に、１から４ｋｇのニュージーランドホワイトウサギをケタミン（２５から４０ｍｇ／ｋｇ静脈内）及びマレイン酸アセプロマジン（２から３ｍｇ／ｋｇ）で麻酔する。気管切開後、細い柔軟なチューブを挿入し、蛍光顕微鏡を使用して気管支周囲を通過させる。ウサギを、３ｐｇから３ｍｇ／ｋｇ（または生理食塩水コントロール）の用量のＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを炎症刺激の滴注の２０分前または２０分後に血管内、腹膜内、皮下、吸入エーロゾルで投与する。以下の３つの刺激のうちの１つの気管支内注入によって肺炎を誘導する：Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ（０．１５ｍｌ／ｋｇ、７％コロイド状炭素を含む１ｍｌの生理食塩水あたり１０９個の生物）、塩酸（１０％モンステラルブルーを含む１ｍｌの生理食塩水あたり１０μｇ）、またはホルボールミリスチン酸エステル酢酸塩（モナステラルブルーを含む１ｋｇあたり２５μｇ）。次いで、チューブと除去し、切開部位を縫合する。炎症刺激滴注から２０分、１、２、４、６、及び１２時間後に、肺の取り出し、エオシン／ヘマトキシリンで染色した組織切片の調製、及び肺胞中のＰＭＮまたは赤血球（ＲＢＣ）浸潤に対するＰＭＮの形態測定によって肺炎をモニターする。麻酔（局所１％リドカインを含む５から１０ｍｇ／ｋｇのケタミン）の間カテーテルを除去する。動物をケージ中にて標準的条件下で維持し、体重、Ｈｃｔ、及び動脈血液ガスについて毎日モニターする。出血から５日後、過剰量のペントバルビタールで動物を安楽死させ、剖検を行った。ヘマトキシリン及びエオシンで染色した組織切片における損傷の肉眼的証拠について器官を試験する。肺を組織学的に分析し、細胞数及び白血球浸潤について気管支肺胞洗浄液を分析する。
【０１０８】
敗血症ショック及び内毒素ショックの動物モデルは、Ｈａｒｌａｎら、１９９２、Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．、７３（４）、１５１０から１５１６に記載されている。これらのモデルを使用して、３ｐｇから３００μｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、内毒素注入または虫垂切除の前及び／または後に動物に３日間毎日血管内、筋肉内、皮下、吸入用エーロゾル、または腹膜内投与によって投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンのショック予防効果を、上記方法を使用して、内毒素注入または虫垂切除から１から５日後の屠殺動物でモニターする。
【０１０９】
ラットの内毒素ショックによる肺損傷のさらなるモデルはＲａｂｉｎｏｖｉｃｉら、１９９２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４９、１７４４から１７５０に記載されており、ＳＥＲＰ−１／シクロスポリン投与及び肺及び器官損傷の分析を、このモデルで上記のように行う。
【０１１０】
（実施例１５）
虚血及び再灌流損傷に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
局所性虚血／再灌流損傷モデルは、Ｍｉｈｅｌｃｉｃら、１９９４、Ｂｌｏｏｄ、８４、２３２２から２３２８及びＫｅｌｌｙら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９１、８１２から８１６に記載されている。局所及び離れた虚血／再灌流損傷モデルは、Ｈｉｌｌら、１９９２、Ｊ．ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４９、１７２３から１７２８に記載されている。
【０１１１】
ニュージーランドホワイトウサギ（１．５から３ｋｇ）を、ケタミン及びキシラジンの静脈内投与によって麻酔する。末梢耳静脈にカニューレ挿入し、耳基底へのリドカイン注射によって局所神経ブロックを行った。次いで、この耳を、その基底で横に切開し、それにより中心動脈、中心静脈、及び支持軟骨のみが無傷のままである。耳の遠位セグメントに対する全ての神経を切断し、耳を完全に感覚消失させる。微小血管クリップを左耳の中心動脈上に配置して完全な虚血を得る。次いで、耳を縫合糸で再付着させ、微小血管クリップを創傷一面に使用する。６時間後、クリップの除去によって耳を再灌流する。再灌流時に、３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇの投薬量のＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、静脈内、腹膜内、皮下、または筋肉内のいずれかでボーラス注射する。手順の実行中、２３．５℃と２４℃の間の周囲温度を維持する。
【０１１２】
浮腫によって出現する損傷を、縫合ラインまで水を入れたビーカーへの耳の水没及び押しのけ容積の測定によって同定する。組織壊死を、全表面積に対する壊死領域の百分率として同定する。先入観のない観察者によってこれらの測定を行う。ウサギ耳由来の組織抽出物を使用したミエロペルオキシダーゼを使用して好中球浸潤を測定する。
【０１１３】
１．６から１．９ｋｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、手術の１２時間前から絶食させる。麻酔のためにペントバルビタールナトリウム（６５ｍｇ／ｋｇ）及び６ｍｌの０．９％　ＮａＣｌを投与し、腎動脈及び腎静脈を手術によって露出させ、微細動脈瘤クランプを使用して３０分間両側を閉塞させる。クランプで締め付けた腎血管の開放時に３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを静脈内、腹膜内、皮下、または筋肉内注射によって投与する。再灌流から０から７２時間後の範囲の測定点で、尾静脈血サンプルを採取し、尿素窒素（ＢＵＮ）、標準的なウレアーゼアッセイ／伝導アッセイ、及びピクリン酸反応を使用したクレアチニンについて分析する。損傷の組織化学的分析のために、０．５から７２時間の測定点でラットを屠殺し、腎組織をホルマリンで固定し、薄片にし、ヘマトキシリン及びエオシンで染色する。上皮壊死または壊死性破片を示す他の髄質中の尿細管の百分率を、盲検観察者によって定量する。再灌流から０．５から７２時間後の範囲の測定点で採取した腎組織に対してミエロペルオキシダーゼアッセイを行い、好中球浸潤を測定する。
【０１１４】
（実施例１６）
腎不全に対するＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの効果
ラットの抗糸球体基底膜抗体によって糸球体腎炎を誘導する。ＷＫＹラット（３００から３５０ｋｇ）を、ケタミン（２５から３０ｍｇ／ｋｇ）及びペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹膜内注射によって麻酔する。３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、静脈内、筋肉内、腹膜内、または皮下注射のいずれかによって投与する。ヒツジ抗ラット糸球体基底膜ＩｇＧまたはコントロールＩｇＧ（０から１０ｍｇ）を、静脈内注射する。次いで、抗ＧＢＭから１０日後までの間に２４時間間隔でラットを金属製ケージに入れて、蛋白尿を測定する。標準的なローリーアッセイを使用して、全尿中タンパク質を測定する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンの最初の投与に加えて、いくつかの動物には、３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを静脈内、筋肉内、腹膜内、または皮下注射によって毎日投与する。種々の時間で動物を屠殺し、腎臓を取り出し、固定し、薄片にする。ヘマトキシリン及びエオシン染色またはトルイジンブルー染色腎組織切片を、炎症性細胞浸潤、クレセント形成、細胞過多、及び硬化組織について分析する。抗フィブロネクチン及び抗テネイシン抗体での染色によって細胞外基質形成が検出された。
【０１１５】
抗胸腺細胞結成を使用したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの別の糸球体硬化症モデルは、Ｏｋｕｄａら、１９９０、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、８６、４５３から４６２に詳述されている。このモデルを使用して、３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを血清注入から７日まで静脈内、筋肉内、腹膜内、または皮下注射によって毎日投与する。血清注入後０から７日の腎組織の組織学的切片を、ヘマトキシリン及びエオシンまたは抗テネイシン抗体で染色して、肉眼的損傷、炎症性細胞浸潤、及び硬化症を同定する。
【０１１６】
（実施例１７）
全身性ショックに対するＳＥＲＰ−１の効果
１から１．５ｋｇのニュージーランドホワイトウサギを、ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）で麻酔する。滅菌条件下で、開放大腿アプローチの間１％リドカインを局所的に補充し、中心静脈カテーテル及びサーミスタを先端に取り付けた大動脈カテーテル（例えば、モデル９４−０１１、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｅｄｗａｒｄｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎｔａ　Ａｎａ、ＣＡ）を配置する。動脈血圧（ＢＰ）、中心静脈圧、及び中心温度が継続的にモニターされた。定期的な測定により、動脈血液ガス、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、白血球数（ＷＢＣ）、及び心拍出量／肺水コンピュータ（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｅｄｗａｒｄｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した相対熱希釈心拍出量（ＣＯ）が得られる。麻酔からの回復後、出血から３０分前及び／または３０分後に各動物を３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１または生理食塩水コントロールにて静脈内、筋肉内、皮下、または腹膜内で治療する。平均ＢＰを４５ｔｏｔｔ及びＣＯをベースラインの３０％に１時間維持するためにヘパリン処理（１０ｕ／ｍｌ）ポリプロピレンシリンジへの静脈カテーテルでの採血によって出血ショックを起こさせる。次いで、全体積の採血で動物を蘇生させ、乳酸加リンゲル液で滴定して正常ＣＯを回復させる。この蘇生を３時間継続し、その時、麻酔中（局所的に１％リドカインを含む５から１０ｍｇ／ｋｇケタミン）はカテーテルを取り出す。
【０１１７】
標準的条件下でケージに維持した動物の体重、Ｈｃｔ、及び動脈血液ガスを毎日モニターする。出血から５日後、動物を過剰用量のペントバルビタールで安楽死させ、剖検を行う。ヘマトキシリン及びエオシンで染色した組織切片における損傷の肉眼的証拠及び損傷の組織学的証拠について器官を試験する。
【０１１８】
敗血症ショック及び内毒素ショックの動物モデルは、Ｔｈｏｍａｓら、１９９２、Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．、７３（４）、１５１０から１５１６に記載されている。これらのモデルを使用して、３ｐｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇのＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを、内毒素注入または虫垂切除の前及び／または後に動物に３日間毎日静脈内、筋肉内、皮下、または腹膜内投与によって投与する。ＳＥＲＰ−１／シクロスポリンのショック予防効果を、内毒素注入または虫垂切除から１から５日後の屠殺動物でモニターする。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は偽薬を投与した動物と比較したＳＥＲＰ−１／シクロスポリンを投与した動物における慢性関節リウマチの重症度を示すグラフである。
【図２】
図２はＳＥＲＰ−１／シクロスポリンにより確立された慢性関節リウマチの重症度がコントロールと比較して有意に減少することを示す棒グラフである。
【図３】
図３はＳＥＲＰ−１／シクロスポリンにより関節破壊の評価項目がコントロールと比較して有意に減少することを示す棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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