(57)【要約】本発明は、治療を必要とする患者の気道へのエアロゾルの送達に有用な、生物学的に活性なタンパク質の安定な処方物であって、（ａ）約１０％〜約１００％Ｖ／Ｖの水および約０％〜約９０％Ｖ／Ｖの有機物の液体を含む担体液体、（ｂ）担体液体中に懸濁または溶解された生物学的に有効な量のタンパク質、および（ｃ）前記担体液体中に懸濁または溶解された安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤を含む。本発明の安定な処方物は、約０．１％〜約５．０％Ｗ／Ｖの医薬的に許容可能な付形剤を任意に含有してもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要とする患者の気道へのエアロゾルの送達に有用な生物学的に活性なタンパク質の安定な処方物であって：
（ａ）約１０％〜約１００％（Ｖ／Ｖ）の水、および約０％〜約９０％（Ｖ／Ｖ）の有機物の液体を含む担体液体；
（ｂ）担体液体中に懸濁または溶解した生物学的に有効な量のタンパク質；および、
（ｃ）前記担体液体中に懸濁または溶解した、安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤を含む処方物。
【請求項２】
前記処方物が、約０．１％〜約５．０％（Ｗ／Ｖ）の医薬的に許容可能な付形剤を含有する請求項１に記載の安定な懸濁物。
【請求項３】
前記生物学的に活性なタンパク質が、酵素、抗体、抗原、ホルモンおよびサイトカインを含む群より選ばれる請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項４】
前記治療的に活性なタンパク質がホルモンである請求項３に記載の安定な処方物。
【請求項５】
前記治療的に活性なタンパク質がインシュリンである請求項４に記載の安定な処方物。
【請求項６】
前記治療的に活性なタンパク質がサイトカインである請求項３に記載の安定な処方物。
【請求項７】
前記治療的に活性なタンパク質が第VIII因子である請求項６に記載の安定な処方物。
【請求項８】
前記担体液体が、約２０％〜約１００％（Ｖ／Ｖ）の水を含有する請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項９】
前記担体液体が、約５０％の水および約５０％の有機溶媒を含む請求項８に記載の安定な処方物。
【請求項１０】
前記有機物の液体が、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール、パーフルオロカーボン、グリセロール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールまたはこれらの組み合わせである請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項１１】
前記有機物の液体が、エタノール、グリセロール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールまたはこれらの組み合わせである請求項１０に記載の安定な処方物。
【請求項１２】
前記糖部分が、トレハロース、スクロース、グルコース、マルトースおよびガラクトースからなる群より選ばれる請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項１３】
前記タンパク質が前記担体液体中に懸濁される請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項１４】
懸濁物中の前記タンパク質の粒子の大きさが、約０．０１μｍ〜約１０．０μｍである請求項１３に記載の安定な処方物。
【請求項１５】
懸濁物中の前記タンパク質の粒子の大きさが、約５．０μｍ〜約１０．０μｍである請求項１４に記載の安定な処方物。
【請求項１６】
懸濁物中の前記タンパク質の粒子の大きさが、約０．０１μｍ〜約３．０μｍである請求項１５に記載の安定な処方物。
【請求項１７】
前記処方物が、約０．１％〜約５．０％の医薬的に許容可能な付形剤を含有する請求項２に記載の安定な処方物。
【請求項１８】
前記タンパク質が、前記担体液体中に溶解される請求項１に記載の安定な処方物。
【請求項１９】
前記処方物が、約０．１％〜約５．０％の医薬的に許容可能な付形剤を含有する請求項１８に記載の安定な処方物。
【請求項２０】
治療を必要とする患者の気道へのエアロゾルの送達に有用な生物学的に活性なタンパク質の安定な処方物であって：
（ａ）約２０％〜約３０％（Ｖ／Ｖ）の水、および約７０％〜約８０％（Ｖ／Ｖ）のエタノールである担体液体；
（ｂ）担体液体中に懸濁または溶解された生物学的に有効な量のタンパク質；
（ｃ）Ｃ８−トレハロース、Ｃ１６−トレハロース、Ｃ８−グリコピラノシドおよびＣ１２−グルコピラノシドからなる群より選ばれる安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤を含む処方物。
【請求項２１】
治療を必要とする患者の気道へのエアロゾルの送達に有用な生物学的に活性なタンパク質の安定な処方物であって：
（ａ）水性液体である担体液体；
（ｂ）前記担体液体中に懸濁または溶解された生物学的に有効な量のタンパク質；および
（ｃ）Ｃ８−トレハロース、Ｃ１６−トレハロース、Ｃ８−グリコピラノシドおよびＣ１２−グルコピラノシドからなる群より選ばれる安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤を含む処方物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２０００年１２月１日に出願された米国仮出願第 60/250,491 号（代理人整理番号第 22112(1)P 号）の利益を請求する。
【０００２】
（発明の背景）
本発明は一般的に、静電的または電気流体力学的なエアロゾル装置と相容れる溶媒系中における生体分子の安定化に関し、特に液体系中におけるインシュリンのような生物学的に活性なタンパク質の安定化に関する。
【０００３】
吸入エアロゾルによる治療剤の肺送達は、バイオテクノロジーおよび製薬産業において益々重要な領域となってきている。ある種の好ましい性質を有する吸入可能なエアロゾルを発生可能な静電的または電気流体力学的な装置は、水のような１種類以上の溶媒、アルコールのような有機溶媒、または水および少なくとも１種類の有機溶媒の混合物を有する液体処方物を頻繁に要求する。
【０００４】
有機溶媒は溶液中の生体分子の安定性を弱める傾向があるので、生物学的分子（「生体分子」）は、ある種の溶媒または溶媒系（例えば、水および有機溶媒の混合物）中で処方することがしばしば難しくなる。液体溶媒系中に溶解または懸濁された生体分子は、化学的または物理的分解を典型的に被り、これにより、保管寿命の僅かなまたは全くない処方物になってしまう。与えられた溶媒系中での生体分子の安定化は、それ故与えられた生体分子の活性を維持するのに必要である。静電的または電気流体力学的なエアロゾル装置と共に使用するための処方物においては、非イオン性安定化剤が、イオン性化合物より好ましい。
【０００５】
医薬的な適用において使用されるタンパク質については、与えられたタンパク質の生物学的な機能を減退させない加工および保存条件が達成されなければならない。本来の立体構造の消失を妨げるために、タンパク質は、化学的な分解（例えば脱アミド化）と非共有結合的な相互作用の崩壊によりもたらされる物理的な不安定性とから保護されなくてはならない。凝集（線維化）、沈殿、および吸着（特に疎水性表面において）は、このような崩壊の例である。
【０００６】
最も重要で普通に使用される治療用タンパク質の１つはインシュリンである。インシュリンは、多量体化し極小な凝集体を形成する傾向があり、これはある種の薬物送達系におけるインシュリンの送達を妨げる。この凝集したインシュリンは、要求される薬理学的特徴を持たないかもしれず、異常な免疫応答を誘導するかもしれない（Chawla et al., Diabetes 34: 420-425, 1985）。従って、インシュリンの生物学的活性の維持は、持ち運び可能な／移植可能な持続的点滴ポンプ、および制御された放出を行うポリマー製の装置および系のようなより伝統的なインシュリン投与にとっては必須である。更にインシュリン凝集は、生物学的潜在能力および送達経路の閉塞において重大な低下を引き起こし、これによって薬物送達系にとっての深刻な合併症を生じ、および血中グルコースレベルを制御する患者の能力を低下させてしまう（Sluzky et al., Biotechnology and Bioengineering 40: 895-903 (1992)）。従って、薬物送達系において利用される液体処方物中においてインシュリンおよび他の生体分子を安定化するための方法に対する要請がある。
【０００７】
ある種の生物学的分子のための安定化の方法論は、当業界で既知である。例えば、WO 98/29097 は、粘膜送達を通した生体有効性の上昇のための組成物を開示しており、これは生物活性物質と粉末化された形態の疎水的に誘導された炭水化物との混合物を包含する。同様に WO 99/33853 は誘導炭水化物を開示しており、これは様々な物質を形成することに使用でき、これには固体送達系が包含される。
【０００８】
Hooper らに対して発行された米国特許第 4,439,421 号(1984)は、乾燥形態の安定化されたγグロブリン濃縮物を開示しており、これは５および／または６炭糖の分岐および非分岐ポリマーを包含する多糖類を利用する。Magneson らに対して発行された米国特許第 5,547,873 号(1996)は、長期乾燥保存用タンパク質を安定化するための組成物を開示しており、これはガラス形成糖を包含している。
【０００９】
関連技術は、ある生体分子をある条件下で安定化することにおいて有効であるが、乾燥粉末または他の固体系を主として取り扱い、静電的および電気流体力学的な装置および系を包含する、液体主体エアロゾル系における使用に適した液体溶媒系中で生体分子を安定化するための方法または組成物を提供していない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の概要）
本発明は、治療を必要とする患者の気道（respiratory tract）へのエアロゾル送達に有用な生物学的に活性なタンパク質の安定な液体処方物であって、
（ａ）約１０％〜約１００％（Ｖ／Ｖ）の水、および約０％〜約９０％（Ｖ／Ｖ）の有機物の液体を含む担体液体；
（ｂ）前記担体液体中に懸濁または溶解された生物学的に有効な量のタンパク質；ならびに、
（ｃ）前記担体液体中に懸濁または溶解された安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤を含むものを指向したものである。
本発明の安定な液体処方物は、約０．１％〜約５．０％（Ｗ／Ｖ）の医薬的に許容可能な付形剤を任意に含有してもよい。
【００１１】
この発明の好ましい実施形態は、
（ａ）溶媒系中において生体分子の溶液または懸濁物を作る工程；
（ｂ）該溶液または懸濁物に安定化組成物を加える工程であって、ここで該安定化組成物は、糖部分に付いた少なくとも１つのアルキル鎖を持つ糖部分を含む工程；および任意で、
（ｃ）前記安定化組成物の安定化効果を促進するための前記溶液または懸濁物に付形剤を添加する工程
を包含する溶媒系中において生体分子を安定化するための方法を含む。
【発明の実施の最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
本発明は、治療を必要とする患者の気道へエアロゾル送達に有用な生物学的に活性なタンパク質の安定な処方物に関し、これは以下を含む：
（ａ）約１０％〜約１００％（Ｖ／Ｖ）の水、および約０％〜約９０％（Ｖ／Ｖ）の有機物の液体を含む担体液体；
（ｂ）担体液体中に懸濁または溶解された生物学的に有効な量のタンパク質；ならびに、
（ｃ）前記担体液体中に懸濁または溶解された安定化に有効な量の誘導炭水化物安定化剤。
本発明の安定な液体処方物は、約０．１％〜約５．０％（Ｗ／Ｖ）の医薬的に許容可能な付形剤を任意に含有してもよい。
【００１３】
本発明は、水、有機溶媒または水と有機溶媒との混合物であってもよい担体液体中でタンパク質を処方するための方法および組成物を提供する。明細書中で使用されるように、文言「タンパク質」は、タンパク質と同様に、ポリペプチドおよびペプチドを包含する。
【００１４】
本発明の液体処方物は、活性物質として安定化された生物学的に活性なタンパク質を含有する。これらの新規処方物は、拡張された期間に渡り安定であり、これだけで、エアロゾルの薬物送達装置と相容れる液体中でタンパク質を処方する他の方法よりも明確な利点を与える。
【００１５】
本発明の処方物中で有用な安定化剤は、明細書中にその開示が援用される WO 98/29097、WO 99/01463 および WO 99/33853 中に記載されているもののような誘導炭水化物である。本発明の処方物中で安定化剤として有用な例である誘導炭水化物の化学構造を以下に示す。
【００１６】
【化１】
2004526674.tif 000002
【００１７】
特定の誘導炭水化物安定化剤の選択は、安定化されるタンパク質の物理的および化学的性質、該タンパク質の濃度、および担体液体の組成物に依存するであろう。明細書中で使用されるように、語句「安定化に有効な量」は、制御された室温において、または冷蔵下において商業的に妥当な保管寿命を持つ医薬製品を生産するのに使用しなくてはならない誘導炭水化物の量を意味する。一般的に「商業的に妥当な」保管寿命は、少なくとも９ヶ月で、好ましくは１２ヶ月であろう。当業者によって認識されるであろうように、１２ヶ月より長い保管寿命が望まれるが、９ヶ月未満の保管寿命は、幾つかの環境下において許容可能であることがある。
【００１８】
一般に、本発明の液体処方物中で有用な誘導炭水化物安定化剤は、該安定化剤が担体液体に溶解しうるように選ばれるべきである。しかしながら、該誘導炭水化物は該担体液体中に懸濁されてもよく、良好な安定化をなお提供する。特定の安定化剤の選択は、安定化されるべきタンパク質の物理的および化学的特徴、ならびに安定化される液体処方物のために選択される特定の担体液体を考慮しながらなされるであろう。
【００１９】
明細書中で有用な誘導炭水化物の安定化化合物は、少なくとも１つの脂肪族炭化水素鎖（アルキルまたはアルケニル部分）を糖分子に加えることにより修飾された糖分子を包含する。本発明と相容れる該糖類は、単糖類および多糖類を包含する。本発明の様々な実施形態は、トレハロース、スクロース、グルコース、マルトース、およびガラクトースを糖部分として利用する。安定化化合物として使用される各糖は、１、２、３、４、５、または６位の炭素において前記糖部分に付けられた少なくとも１つのアルキルまたはアルケニル鎖を持つ。該脂肪族炭化水素鎖は、飽和または不飽和であり、また直鎖または分岐鎖でもよい約６〜１８の炭素原子を包含する。
【００２０】
以下の実施例１は、オクチル−（Ｃ８）トレハロースの調製物を記載しており、これは本発明の組成物中での使用に好ましい安定化剤である。実施例１に記載される方法は、Bottle および Jenkins、J. Chem. Soc. Chem. Commun. 385, 1984 の方法から改変されている。Ｃ８およびＣ１２グルコピラノシド、つまりｎ−ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシド（シグマＤ８０３５）およびｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（シグマＯ９８８２）は、シグマ−アルドリッチ社、セントルイス、ＭＯ、ＵＳＡから購入された。
【００２１】
（実施例１）
（オクチル−（Ｃ８）トレハロースの調製）
ピリジン中にトレハロース２水和物を溶解することによって（３ｍｌ中１ｇ）無水トレハロースを調製し、その後、大気圧下で蒸留することにより該溶媒を除去した。２０ｍｍＨｇにてＰ2Ｏ5からＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を蒸留することによって、無水ＤＭＦを調製した。該乾燥ＤＭＦは、アルゴン下においてモレキュラーシーブズ（３Ａ）を用いて保管した。乾燥管を用いてアルゴンガス下において、反応用フラスコに２４０ｍｌの乾燥ＤＭＦ中の１６ｇの無水トレハロースを加えた。該溶液を４２℃まで加熱し、１０分間攪拌または音波処理して該糖の溶解を促進させた。氷浴を使用して該フラスコを０℃まで冷却し、この後、アルゴン下において７．３６ｇのトリフェニルホスフィン（分子量２６２．３）、および３．２８ｇのカプリル酸（分子量１４４．２）を加えた。溶液が得られるまで、該混合物を該氷浴上にて磁気攪拌子で攪拌した。
【００２２】
この後、該溶液に５．６ｍｌ（５．７６ｇ）のジイソプロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ、分子量２０２．２、密度１．０２７）を、１５分の期間で滴下して加えた。該混合物を０℃に保ち、アルゴン下においてＤＩＡＤを添加しながら攪拌した。攪拌は無水アルゴン下において７２時間に渡り、室温にて続けられた。得られた生成物はカラムクロマトグラフィーを使用して精製され、ＮＭＲにより特徴付けされた。
【００２３】
実施例１の手順に従って、他の誘導炭水化物安定化剤を、適切な出発原料である脂肪酸の利用によって調製してもよい。選ばれた誘導炭水化物安定化剤の構造を以下に示す。
【００２４】
文言「安定な」または「安定性」は、本発明の液体処方物中におけるタンパク質の生物学的活性の保存を意味するのに使用される。
【００２５】
明細書中において使用される文言「懸濁物」は、その通常の意味を与えられ、担体液体中に懸濁されるタンパク質の粒子またはタンパク質の粒子の凝集体（アグリゲート）のことをいう。生物学的に活性なタンパク質が担体液体中に溶解される場合、懸濁物よりもむしろ溶液が形成される。
【００２６】
本発明の安定な処方物は、気道への治療用タンパク質の送達のためのエアロゾルの調製に有用である。文言「気道（respiratory tract）」は、中咽頭および喉頭を包含する上気道と、これに続き気管支および細気管支への分岐に及ぶ気管（trachea）を包含する下気道を包含する。上および下気道は、通動気道と呼ばれる。末端細気管支はそれから呼吸細気管支へと分かれ、これはそれから最終の呼吸領域である肺胞、即ち深部肺へと至る（Gonda, I., 「気道への治療用および診断用物質の送達のためのエアロゾル」, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 6: 273-313, (1990)）。通常、該深部肺即ち肺胞は、全身送達用の吸入治療用エアロゾルの主要な標的である。明細書中において使用されるように、文言「気道」は、鼻孔を経由した安定な処方物の投与を包含することを追加的に意図される。
【００２７】
文言「生物学的に活性なタンパク質」は、疾病または状態の処置のための活性な薬剤物質として患者へ投与されるタンパク質およびポリペプチドと、診断用および試薬目的で使用されるタンパク質およびポリペプチドとを包含する。酵素（例えばアスコルビン酸酸化酵素、過酸化酵素、カタラーゼ、グルコース酸化酵素、キモトリプシン、乳酸脱水素酵素およびグルコース−６−リン酸脱水素酵素）、抗体（例えば Herceptin(登録商標)(trastuzumab)、Orthoclone OKT(登録商標)3(muromonab-CD3)）、ホルモン（例えばインシュリンおよびヒト成長ホルモン（ＨＧＨ））、成長因子（例えば線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ヒト成長ホルモン放出因子（ＨＧＨＲＦ））、ならびにサイトカイン（例えば白血病阻害因子（ＬＩＦ）、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ），顆粒球巨大食細胞−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−９（ＩＬ−９）、オンコスタチン−Ｍ（ＯＳＭ））および第VIII因子のような、タンパク質およびポリペプチドが本発明の組成物中における使用に考えられる。
【００２８】
診断試験または in vitro アッセイにおいて使用される酵素および抗体に加えて、文言「生物学的に活性な」は、疾病または状態を処置するのに「医薬的に有効な量」で患者に投与されるタンパク質を包含する。当業者によって認識されるであろうように、「医薬的に有効な量」によって、治療されるべき疾病または状態への治療的に関連した効果を持つ医薬タンパク質の量が意味される。治療的に妥当な効果は、患者における疾病または状態の１つ以上の症状をある程度和らげ、あるいは該疾病または状態に関連または原因となっている１つ以上の生理学的または生化学的なパラメータを部分的または完全に正常に戻す。特定の活性なタンパク質の薬物の投与量の特別な詳細は、そのラベル、つまり米国食品医薬品局により証明されたパッケージ挿入物（21 CFR § 201.56 および 201.57 参照）中に見出されることがある。
【００２９】
当業者によって認識されるであろうように、本発明の安定なタンパク質の処方物は、「より少量」、つまり約０．０５％〜約５．０％Ｗ／Ｖ、好ましくは約０．０５％〜約１．０％の医薬的に許容可能な付形剤を任意に包含してもよい。医薬的に許容可能な付形剤は、ヒトにおける使用にとって安全であるとＦＤＡにより認められたものである。界面活性剤（例えばエトキシル化ドデシルアルコール）、抗酸化剤（例えばビタミンＥおよびアスコルビン酸）、抗微生物剤（例えばパラベン）および懸濁剤（例えばポビドン）のような添加物が、明細書中での使用のために考えられる。
【００３０】
いかなる特別な付形剤の選択も当業界で既知の範囲内であるが、理解されるであろうように、付形剤を加えるか否か、もしそうならばどれを加えるかについての決定は、生物学的に活性なタンパク質の特別な処方物中における付形剤の目的を考慮しながらなされるであろう。
【００３１】
医薬的に許容可能であるためには、本発明の安定な処方物中において使用されるいかなる処方物付形剤も、ヒトにおける使用にとって安全であるとＦＤＡによって認められるべきである。さらに付形剤は、本発明の処方物中のタンパク質の安定性、または静電的噴霧手段を使用する処方物の噴霧能力への効果を全く持たないか、または最小の効果しか持たないべきである。
【００３２】
一般的に、生物学的に活性なタンパク質が担体液体中に溶解されるよりむしろ懸濁される場合、該タンパク質粒子の粒子の大きさは、直径で約０．０１μｍ〜約１０．０μｍの範囲になるであろう。もしタンパク質の深部肺への送達がその目的ならば、該タンパク質の粒子の大きさは、好ましくは直径で約０．０１μｍ〜約５．０μｍ、より好ましくは直径で約０．０１μｍ〜約３．０μｍの範囲であるべきである。もし上気道へのタンパク質の送達がその目的ならば、該タンパク質の粒子の大きさは、直径で約５．０μｍ〜約１０．０μｍの範囲であってもよい。
【００３３】
もし生物学的に活性なタンパク質が担体液体中に溶解されるならば、静電的噴霧手段によって生成されるエアロゾル小滴の大きさは、直径で約１．０μｍ〜約１０．０μｍ、より好ましくは直径で約１．０μｍ〜約３．０μｍであるべきである。例えば、生物学的に活性なタンパク質の深部肺への送達には、直径で約１．０μｍ〜約５．０μｍのエアロゾル小滴が好ましい。
【００３４】
本発明の方法は、明細書中で請求される懸濁液を微粉砕物にするための分配装置を利用する。静電的手段（時に「電気流体力学的な」手段として言及される）によって液体小滴の細かく分けられた噴霧を生成する分配装置が知られている。電気流体力学的な（「ＥＨＤ」）噴霧器が、吸入による薬物の投与のための医療において特に有用である。例えば、米国特許第 6,105,877 号および米国特許第 6,068,199 号に記載されているもののような様々なＥＨＤの装置が当業界では既知である。
【００３５】
このようなＥＨＤの装置における小滴噴霧は、噴霧ヘッドまたは噴霧端に位置される液体に電場をかけることにより発生される。該電場のポテンシャルは、噴霧ヘッドから電荷を帯びた液体小滴の微粉砕物をもたらすのに充分高い。該小滴上の電荷は、相互の反発を介してそれらが凝集するのを妨げる。
【００３６】
患者によるエアロゾルの吸入の前に、制御された様式で電気流体力学的な微粉砕化装置によって生成されるエアロゾル小滴噴霧から、前記電荷を部分的にまたは全体的に取り除くことが通常必要である。
【００３７】
他の方法が使用されてもよいが、有効な微粉砕物の放電に使用される主要な方法は、鋭いかまたは尖った端を持ち、ＥＨＤの装置の噴霧ヘッドから下流に位置される放電電極を利用する。該放電電極は、微粉砕化された液体噴霧（エアロゾル）上と等しい大きさの反対電荷を持つ周辺の気体から、電荷を帯びたイオンの雲を生成する。使用において、該イオンの雲は引き寄せられて衝突し、これにより液体エアロゾル噴霧を中和する。
【００３８】
本発明のタンパク質／エタノール懸濁物は、当業者によって認められるであろうようなＥＨＤの装置と共に使用するのに特に適しているが、このような懸濁物は、ネブライザーのような他のエアロゾル発生装置を使用してもエアロゾル化可能である（肺への投薬系、および前もって決定された量の呼吸可能で治療的に活性な物質を患者へ供給するための方法を記載している WO 99/44664 参照）。
【００３９】
本発明の好ましい実施形態は、（ａ）溶媒系中において生体分子の溶液または懸濁物を作る工程、および（ｂ）該溶液または懸濁物に安定化組成物を加え、ここで該安定化組成物が、糖部分に付いた少なくとも１つのアルキル鎖を持つ糖部分を含む工程を包含する溶媒系中において生体分子を安定化するための方法を包含する。この好ましい方法は、前記安定化組成物の安定化効果を増進するために、前記溶液または懸濁物に補助物質を加える任意の段階を包含する。この補助物質は、金属イオン、フェノール、メチルパラベン、緩衝塩、界面活性剤およびポリマーからなる群より選ばれる。好ましい金属イオンは、カルシウムイオンまたは亜鉛イオンを包含する。
【００４０】
好ましい実施形態によれば、本発明と相容れる溶媒系は、水、有機溶媒ならびに水および有機溶媒の混合物を包含する。好ましい有機溶媒は、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール、パーフルオロカーボン、グリセロール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールを包含する。
【００４１】
本発明により考えられる溶媒系は、タンパク質の安定性に相反すると考えられる様々な界面も包含する。これらの界面は、空気−水界面、油−水界面、固体−水界面、水−有機界面、またはこのような界面の組み合わせを包含する。本発明の方法および組成物は、このような相反する環境に抗して、タンパク質または他の生物学的分子の安定性を促進する。
【００４２】
本発明の溶媒系中で生体分子の溶液または懸濁物を作る場合、該溶液または懸濁物のｐＨは、溶解または懸濁される生体分子の溶解性特性に基づいて調整されなくてはならない。このようにして、許容可能なｐＨの範囲は、溶媒系の選択によるのと共に、問題となっている生体分子によって決定される。
【００４３】
（実施例２）
ロシュ・バイオケミカル社から供給された凍結乾燥ヒトインシュリンを使用した。所望のｐＨを得るために、１００ｍｇのインシュリンをまず、適切な緩衝液、例えばｐＨ７．４の２．６６７ｍｌの１０ｍＭのＰＢＳ緩衝液（シグマから供給、Ｐ３８１３）に溶解し、３５６μｌのこの溶解したインシュリンを１５ｍｌのポリプロピレンのコニカルチューブ中へ分取し、これを後に２０ｍｇ／ｍｌの懸濁試料に使用した。１．５ｍｇ／ｍｌの濃度にてインシュリン懸濁試料を作るために、２６．６７μｌの溶解インシュリンを１５ｍｌのポリプロピレンのコニカルチューブ中へ分取した。該コニカルチューブはそれから細孔のあるパラフィルムで封じられ、−１５℃〜−２０℃にて終夜凍結された。翌日、該凍結インシュリン試料を、ストッパートレイ（Stoppering Tray）付きのベンチトップ（bench top）Labconco Freeze Dry System を使用して、細かくて自由に流動する粉末へと凍結乾燥した。この過程は、本実験の開始２、３日前に開始された。各液体インシュリン処方物を、２通りに調製した。該凍結乾燥インシュリン粉末を、６６７μｌの担体液体中に懸濁した。「０」日目の試料を直ちに９．３３ｍｌの０．１％ＴＦＡで希釈し、そうすれば、該インシュリン試料の最終濃度はＨＰＬＣの標準曲線内に適合するであろう。該希釈試料をその後、当業界で既知の標準技術を使用して逆相ＨＰＬＣ法により分析した。試料は、振とうしながらまたは振とうせずに３７℃に、振とうしながら４０℃に、および振とうせずに室温に維持された。Labline environmental incubator/shaker を、２２０ｒｐｍにて振とうしながら３７℃および４０℃にて使用した。次の時点に到達したら、該試料を９．３３ｍｌの０．１％ＴＦＡで再び希釈し、インシュリン活性について分析した。インシュリンを含有する全ての試料の調製において、沈殿の可能性のため、インシュリンのいかなる調製物をも、音波処理または激しい振とうに付さないように注意した。逆に加える方法を使用して、穏やかに混合した。保持された百分率の活性は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により決定された。
【００４４】
表１〜４に提示されたデータは、本発明の安定化されたタンパク質処方物の様々な態様を説明している。この様々な処方物において使用された生物学的に活性なタンパク質は、ヒトインシュリンであった。実施例２は、本発明の様々な液体処方物中での使用のためのインシュリンの調製を記載している。
【００４５】
表１〜４は、本発明の安定化組成物を利用することにより数日の期間に渡って保持されたインシュリン活性の百分率を反映しているＨＰＬＣのデータを提示している。振とうの動きは、疎水性表面との相互作用による溶液中のインシュリンの凝集を促進することに注意のこと。これらのデータは、様々な溶媒系中でのタンパク質の安定性促進における修飾トレハロースおよび修飾グルコースの効用を示す。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
【表２】
2004526674.tif 000004
【００４８】
【表３】
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【００４９】
【表４】
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【００５０】
表１中のデータは、特定の誘導炭水化物安定化剤の選択が、安定化される特定のタンパク質に、また、さらに表２、３および４中のデータにより例示されるように、本発明の安定化処方物中で利用される特定の担体液体に依存するであろうということを例示している。全体が水性の担体液体（１００％の水）中では、インシュリンにとっての好ましい安定化剤がＣ８−グルコースまたはＣ８−トレハロースであるが、エタノール／水（８０：２０）の担体液体中では、インシュリンにとっての好ましい安定化剤はＣ１２−グルコースである。
【００５１】
様々な好ましい実施形態が示され記載されているが、このような開示により本発明を限定する意図がないこと、しかしむしろ添付の請求項中で定義されるような本発明の精神および範囲内にある全ての修飾および他の構築物に及ぶことが意図されていることが理解されるであろう。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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