(57)【要約】本発明は、インテグリンαｖβ３のリガンドとして生物学的に活性な式（Ｉ）の新規の化合物に関し、ここで、式中、Ｘは、Ｈ、アシルまたは天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片を表し、Ｙは、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４６６〜６６０から選択されるペプチド断片を表し、Ｚは、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２または天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片を表し、Ａは、１〜１０個の炭素原子を有するアルキルを表し、アシルは、１〜１０個の炭素原子を有するアルカノイルを表し、１級アミノ基は、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい。さらに本発明は、これらの新規化合物の生理学的に許容される塩および溶媒和物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
Ｘ−Ｙ−Ｚ　　　Ｉ
［上式中、
Ｘは、Ｈ、アシル、または天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙは、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４６６〜６６０から選択されるペプチド断片であり、
Ｚは、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、または天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ａは、１〜１０個の炭素原子を有するアルキルであり、
アシルは、１〜１０個の炭素原子を有するアルカノイルであり、
１級アミノ基は、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい］。
およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項２】
Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項３】
Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項４】
Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８０〜５９８から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項５】
Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８９〜４９７および／または５７０〜５８５および／または５８８〜５９７から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項６】
Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８９〜４９７および／または５７０〜５８５および／または５８８〜５９７から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２またはＣｙｓであり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項７】
ａ）　Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、
ｂ）　Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ、
ｃ）　Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ
である、請求項１に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項８】
請求項１に記載の式Ｉの化合物およびその塩を調製する方法において、
加溶媒分解剤、還元剤または水素化分解剤を用いて処理することにより、その官能性誘導体のいずれかから、式Ｉの化合物を遊離し、および／または
式Ｉの塩基または酸を、その塩のいずれかに変えることを特徴とする方法。
【請求項９】
薬剤としての、請求項１から６に記載の式Ｉの化合物および請求項７に記載の化合物およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物。
【請求項１０】
インテグリン受容体αｖβ３の阻害剤としての、請求項９に記載の薬剤。
【請求項１１】
リガンドとαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦うための、請求項１０に記載の薬剤。
【請求項１２】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ−２）とαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦うための、請求項１１に記載の薬剤。
【請求項１３】
血栓症、心筋梗塞、冠動脈性心疾患、動脈硬化症、腫瘍、骨粗しょう症、線維症、炎症、感染症、乾癬と戦い、かつ創傷治癒過程に影響を及ぼすための、請求項１２に記載の薬剤。
【請求項１４】
請求項１０から１３のいずれか一項に記載の少なくとも１種の薬剤および、所望の場合には、賦形剤および／または補助剤および、所望の場合には他の活性成分を含有する製剤。
【請求項１５】
インテグリン受容体αｖβ３を阻害する薬剤を調製するための、請求項１から７に記載の化合物および／またはその生理学的に許容される塩の使用。
【請求項１６】
リガンドとαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦う薬剤を調製するための、請求項１から７に記載の化合物および／またはその生理学的に許容される塩の使用。
【請求項１７】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ−２）とαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦う薬剤を調製するための、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
血管形成により維持されるか、または伝播される病的過程と戦う薬剤を調製するための、請求項１６または１７に記載の使用。
【請求項１９】
血栓症、心筋梗塞、冠動脈性心疾患、動脈硬化症、腫瘍、骨粗しょう症、線維症、炎症、感染症、乾癬と戦い、かつ創傷治癒過程に影響を及ぼす薬剤を調製するための、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、式Ｉの新規な化合物
Ｘ−Ｙ−Ｚ　　　Ｉ
［上式中、
Ｘは、Ｈ、アシル、または天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙは、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４６６〜６６０から選択されるペプチド断片であり、
Ｚは、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、または天然に生じるアミノ酸からなるリストから選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ａは、１〜１０個の炭素原子を有するアルキルであり、
アシルは、１〜１０個の炭素原子を有するアルカノイルであり、
１級アミノ基は、慣用のアミノ保護基を備えていてもよい］。
およびその生理学的に許容される塩および溶媒和物に関する。
【０００２】
本発明は、価値の有る特性を有する新規の化合物、特に薬剤を調製するために使用することができる化合物を発見するという課題を有していた。
【０００３】
式Ｉの化合物およびその塩は、非常に価値の有る製剤学的特性を有し、よく許容される化合物であることが判明している。特にこれらは、インテグリン阻害剤として作用し、特に、αｖ−インテグリン受容体とリガンド、例えばＭＭＰ−２との相互作用を阻害する。
【０００４】
本発明による化合物は、配列ＲＧＤを含有せず、マトリックスメタロプロテイナーゼ２（ＭＭＰ−２）のＣ末端断片ＰＥＸから誘導されるリガンド、特に、インテグリンαｖβ３のリガンドである。
【０００５】
文献に、ＰＥＸとインテグリンαｖβ３との結合が開示されている。
【０００６】
ＭＭＰ−２は、マトリックス分解酵素であり、これは、侵襲プロセス、例えば腫瘍転移および血管形成での細胞移動を容易にする。
【０００７】
マトリックスメタロプロテイナーゼに関して、数多くの報告が存在する；例えば、Ｂｉｒｋｅｄａｈｌ−Ｈａｎｓｅｎ　Ｈ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｒａｌ　Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．４，１９７−２５０（１９９３）、Ｂｏｒｋａｋｏｔｉ　Ｎ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｃｏｖｅｒｙ　＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　２４４９−４６２（１９９９）、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ　Ｍ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９，２７３５−２７７６（１９９９）、Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ　Ｗ．Ｇ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０３，１２３７−１２４１（１９９９）、Ｓｉｌｅｔｔｉ　Ｓ．　＆　Ｃｈｅｒｅｓｈ　Ｄ．Ａ．Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ　＆　Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ　１３，２２６−２３８（１９９９）、Ｋｌｅｉｎｅｒ　Ｄ．Ｅ．　＆　Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ　Ｗ．Ｇ．ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９；４３　Ｓｕｐｐｌ：Ｓ４２−５１。
【０００８】
ＭＭＰは、不活性なプロ酵素（「潜在酵素（ｌａｔｅｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ）」、「チモーゲン」）として分泌され、酵素的に不活性なプロＭＭＰ−２も知られている：Ｗｏｅｓｓｎｅｒ　Ｊ．Ｆ．Ｊｒ．，ＦＡＳＥＢ．Ｊ．１９９１　Ｍａｙ；５（８）：２１４５−５４。
【０００９】
プロＭＭＰ−２をＭＭＰ−２にする様々なタイプの活性化が知られている（自触媒的、化学的および酵素的）。腫瘍細胞による活性化は、オステオポンチン、骨シアロタンパク質またはＲＧＤペプチドに助けられて行われる。ＭＭＰ−２のＣ末端の役割ならびにＭＴ１−ＭＭＰ、ＴＩＭＰ−２およびプロＭＭＰ−２の三量体錯体の形成は、次でも検討されている：Ｔｅｔｉ　Ａ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９８　Ｊｕｌ　３；７７（１）：８２−９３。
【００１０】
ＭＭＰは、少なくとも３つのメカニズムにより、腫瘍細胞侵襲および転移を容易にする。ＭＭＰは、ＥＣＭの分解により物的障壁を乗り越え、細胞はＥＣＭに接着しなければならないが、ＥＣＭへのこの結合は、再び解かれなければならないので、ＭＭＰは、細胞接着を調節し、さらにＭＭＰは、タンパク質の分解により、他の生物学的に活性なタンパク質断片を生成する。
【００１１】
抗体ＬＭ６０９によるαｖβ３の阻害は、ヒト横紋筋肉腫細胞によるプロＭＭＰ−２の活性化をもたらす：Ｋｕｂｏｔａ　Ｓ．ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９７　Ｊａｎ　６：７０（１）１０６−１１。
【００１２】
Ｓｅｆｔｏｒ　Ｒ．Ｅ．らがＣａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．（１９９３　Ｊｕｌ　１５；５３（１４）：３４１１−５）に記載したように、インテグリンの発現により、ＭＭＰ−２の発現および分泌および腫瘍細胞の侵襲特性が調節される。
【００１３】
ＭＭＰの関連性に関して、様々な論文が存在する。選択は、胚の発生での（Ｋｉｎｏｈ　Ｈ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１９９６　Ｍａｙ；１０９（Ｐｔ５）：９５３−９）；歯での（Ｈｅｉｋｉｎｈｅｉｍｏ　Ｋ．，Ｓａｌｏ　Ｔ．Ｊ．，Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．１９９５　Ｍａｙ；７４（５）：１２２６−３４）；そして、腎臓の発生での（Ｋａｎｗａｒ　Ｙ．Ｓ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９１　Ｄｅｃ；２７７（６Ｐｔ２）：Ｆ９３４−４７）、重要性を示している。
【００１４】
侵襲性細胞では、基層となる細胞外マトリックス（ＥＣＭ）との接触をもたらす移動フロントの「インベードポディア（ｉｎｖａｄｏｐｏｄｉａ）」および「ラメリポディア（ｌａｍｅｌｌｉｐｏｄｉａ）」が、ＭＴ１−ＭＭＰ、ＭＭＰ−２およびＴＩＭＰ−２の異なる発現および局在化を有する。インベードポディアでは、ＭＭＰ活性化がここで生じるので、プロＭＭＰ−２およびＭＴ１−ＭＭＰが、ＥＣＭの分解の原因となる。ラメリポディアは、同様の構造を有するが、これらは、細胞辺縁部のＴＩＭＰ−２のような循環阻害剤に容易にアクセスしうるので、ここではＥＣＭ分解は存在しない。ＴＩＭＰ−２は、ラメリポディアの所でＭＭＰ−２およびＭＴ１−ＭＭＰと共に同時局在化されるがインベードポディアの所ではないことが、Ｃｈｅｎ　Ｗ．Ｔ．ら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９９　Ｊｕｎ　３０；８７８：３６１−７１）により示されている。同様の知見が、Ｎａｋａｈａｒａ　Ｈ．ら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９９７　Ｊｕｌ　２２；９４（１５）：７９５９−６４）によって報告されている。
【００１５】
ＭＭＰ−２は、ヒトの正常および病的関節で生じ（Ｃｈｕｂｉｎｓｋａｙａ　Ｓ．らＬａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９９　Ｄｅｃ；７９（１２）：１６６９−７７）、さらにＫｏｎｔｔｉｎｅｎ　Ｙ．ら（Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．１９９９　Ｎｏｖ；５８（１１）：６９１−７）によって論じられているように、慢性関節リウマチ中の滑膜中で生じる。
【００１６】
子宮頚癌中の予後マーカーとしてのＭＭＰ−２の臨床関連性は、Ｄａｖｉｄｓｏｎ　Ｂら（Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１９９９　Ｊｕｎ；７３（３）：３７２−８２）によって証明されている。
【００１７】
ＭＭＰ−２およびその活性は、再狭窄での新内膜（ｎｅｏｉｎｔｉｍａ）形成で役割を有する：Ｗａｎｇ　Ｈ．；Ｋｅｉｓｅｒ　Ｊ．Ａ．，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｒｅｓ．１９９８　Ｊａｎ−Ｆｅｂ；３５（１）：４５−５４。ＭＭＰ−２は、神経膠腫細胞接着および移動を調節する：Ｄｅｒｙｕｇｉｎａ　Ｅ．Ｉ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１９９７　Ｏｃｔ；１１０（Ｐｔ１９）：２４７３−８２。
【００１８】
これらの化合物は、インテグリンαｖβ３およびαｖβ５の場合に、特に有効性を示す。化合物は、受容体αｖβ３の接着受容体アンタゴニストとして非常に有効である。
【００１９】
この作用は、例えば、Ｂ．ＤｉｅｆｅｎｂａｃｈらがＢｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓに，Ｅｄｓ．Ｋ．Ｔ．ＰｒｅｉｓｓｎｅｒらがＥｘｅｒｐｔａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｉｎｔｅｒｎｔｌ．Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　Ｓｅｒｉｅｓ　１０４２，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉ．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　１９９３，ｐ．１４９−１５６に記載したような方法によって証明することができる。
【００２０】
ビトロネクチン受容体αｖβ３への結合は、本発明によるいくつかのペプチドで実験的に証明されている。
【００２１】
Ｂ．Ｆｅｌｄｉｎｇ−ＨａｂｅｒｍａｎｎおよびＤ．Ａ．ＣｈｅｒｅｓｈはＣｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５，８６４（１９９３）で、様々な現象および徴候に関する、特に受容体αｖβ３との関連における接着受容体としてのインテグリンの重要性を記載している。
【００２２】
血管インテグリンと細胞外マトリックスタンパク質との相互作用に対する血管形成現象の依存性は、Ｐ．Ｃ．Ｂｒｏｏｋｓ、Ｒ．Ａ．ＣｌａｒｋおよびＤ．Ａ．ＣｈｅｒｅｓｈによりＳｃｉｅｎｃｅ　２６４，５６９−７１（１９９４）に記載されている。
【００２３】
環式ペプチドによるこの相互作用の阻害、したがって、血管形成血管細胞のアポトーシス（プログラム細胞死）の開始の可能性は、Ｐ．Ｃ．Ｂｒｏｏｋｓ、Ａ．Ｍ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、Ｍ．Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、Ｒ．Ａ．Ｒｅｉｓｆｅｌｄ、Ｔ．−Ｈｕ、Ｇ．ＫｌｉｅｒおよびＤ．Ａ．Ｃｈｅｒｅｓｈにより、Ｃｅｌｌ　７９，１１５７−６４（１９９４）に記載されている。
【００２４】
本発明による化合物も、生きている細胞が対応するマトリックスタンパク質に接着することを防ぎ、したがって腫瘍細胞がマトリックスタンパク質に接着することを防ぐことの実験的証明は、Ｆ．Ｍｉｔｊａｎｓら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　１０８，２８２５−２８３８（１９９５）の方法と同様に実施される細胞接着試験で得ることができる。
【００２５】
Ｐ．Ｃ．Ｂｒｏｏｋｓら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１８１５−１８２２（１９９５））は、ガンを撲滅するための、および腫瘍に惹起される血管形成疾患を治療するためのαｖβ３アンタゴニストを記載している。
【００２６】
したがって、本発明による式Ｉの化合物は、薬剤活性成分として、特に、腫瘍疾患、骨粗しょう症および他の溶骨性疾患を治療するために、さらに血管形成を抑制するために使用することができる。
【００２７】
例えば、フィブリノゲンとフィブリノゲン受容体（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）とのような、インテグリン受容体とリガンドとの相互作用をブロックする式Ｉの化合物は、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニストとして、転移による腫瘍細胞の伝播を防ぐ。このことは、次の観察により確認される。
【００２８】
局所腫瘍から血管系への腫瘍細胞の拡散は、腫瘍細胞と血小板との相互作用による微細凝集塊（微小血栓）の生成により生じる。腫瘍細胞は、微小凝集塊中での保護に遮られて、免疫系の細胞に認識されない。
【００２９】
微小凝集塊はそのまま、血管壁に固着して、その組織中への腫瘍細胞のさらなる侵入を容易にする。微小血栓の生成は、活性化された血小板上のフィブリノゲン受容体へのフィブリノゲン結合に促進されるので、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニストは、有効な転移阻害剤とみなすことができる。
【００３０】
血小板のフィブリノゲン受容体へのフィブリノゲン、フィブロネクチンおよびウィルブランド因子の結合の他に、式Ｉの化合物も、ビトロネクチン、コラーゲンおよびラミニンなどのさらなる接着タンパク質が、様々な細胞タイプの表面上の対応する受容体に結合することを阻害する。特に、これらは、血小板血栓の形成を防ぎ、したがって、血栓症、卒中、心筋梗塞、炎症および動脈硬化症を治療するために使用することができる。
【００３１】
化合物の特性は、ＥＰ−Ａ１−０４６２９６０号に記載されている方法により証明することができる。フィブリノゲン受容体へのフィブリノゲン結合の阻害は、ＥＰ−Ａ１−０３８１０３３号に示されている方法により証明することができる。
【００３２】
栓球凝集抑制作用は、インビトロで、Ｂｏｒｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ　４８３２，９２７−９２９，１９６２）により、証明することができる。本発明の化合物による骨吸収の阻害は、ＷＯ９５／３２７１０号と同様の破骨細胞性吸収により行われうる。
【００３３】
マトリックスメタロプロテイナーゼ２（ＭＭＰ−２、もしくはゼラチナーゼＡ、ＧｅｌＡ、７２ｋＤａＩＶ型コラゲナーゼ）は、亜鉛依存性エンドプロテアーゼファミリーの１員であり、これは、プロ酵素、潜伏ＭＭＰまたはチモーゲンとして分泌され、これにより、細胞外マトリックスタンパク質および他のタンパク質が分解されて、細胞移動および侵襲が容易になる。プロ酵素からの活性化と、ＴＩＭＰ−２などの内在性阻害剤または長期酵素的消化による不活性化とのバランスにより、ＭＭＰ−２の活性は調節される。ＭＭＰは、生理学的、さらに病理学的状況で、胚発生で、炎症、創傷治癒、腫瘍細胞侵襲および転移で、役割を有する。酵素ポケット、細胞レベルでの発現またはプロ酵素からの活性化の阻害剤は、ヒトおよび動物の診断および治療で使用することができる。
【００３４】
この酵素は、様々なタイプのコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチンおよびラミニンを分解する。コラーゲンとの結合は、３個の反復単位により生じ、これらは、ＩＩ型フィブロネクチンモジュールと同一で、活性部位付近の触媒ドメインに挿入されている。
【００３５】
ＭＭＰ−２のＣ末端は、文献中では「Ｃ末端領域」、ＣＴＤ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇら，Ｏｖｅｒａｌｌら）またはＰＥＸ（Ｃｈｅｒｅｓｈら）として知られている。
【００３６】
文献：
インテグリンアルファｖベータ３との相互作用による、侵襲性細胞表面へのマトリックスメタロプロテイナーゼＭＭＰ−２の局在化。
Ｂｒｏｏｋｓ　Ｐ．Ｃ．，；Ｓｔｒｏｍｂｌａｄ　Ｓ．；Ｓａｎｄｅｒｓ　Ｌ．Ｃ．；ｖｏｎ　Ｓｃｈａｌｓｃｈａ　Ｔ．Ｌ．；Ａｉｍｅｓ　Ｒ．Ｔ．；Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ　Ｗ．Ｇ．；Ｑｕｉｇｌｅｙ　Ｊ．Ｐ．；Ｃｈｅｒｅｓｈ　Ｄ．Ａ．，Ｃｅｌｌ．１９９６　Ｍａｙ　３１；８５（５）：６８３−９３。
【００３７】
ＰＥＸ、インテグリン結合活性を有する非触媒的メタロプロテイナーゼ断片による、血管形成の中断。Ｂｒｏｏｋｓ　Ｐ．Ｃ．；Ｓｉｌｌｅｔｔｉ　Ｓ．；ｖｏｎ　Ｓｃｈａｌｓｃｈａ　Ｔ．Ｌ．；Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ　Ｍ．；Ｃｈｅｒｅｓｈ　Ｄ．Ａ．，Ｃｅｌｌ．１９９８　Ｆｅｂ　６；９２（３）：３９１−４００。
【００３８】
米国特許４９２３８１８号に、Ｇｏｌｄｂｅｒｇは、プロＭＭＰ−２（７２ｋＤａ）のアミノ酸配列を記載しており、ＴＩＭＰ−２との錯体が、Ｇｏｌｄｂｅｒｇによって、ＥＰ４０４７５０号に記録されている。
【００３９】
可溶性プロＭＭＰ−２は、細胞表面に結合して、そこで、第１のステップでは、膜中に位置する酵素ＭＴ１−ＭＭＰにより、Ａｓｎ６６〜Ｌｅｕ６７位置のプロ断片のタンパク質分解により、続いてＡｓｎ１０９〜Ｔｙｒ１１０位置のＭＴ１−ＭＭＰ−非依存性自己消化により活性化される。プロＭＭＰ−２のＣ末端が失われていると、この活性化は不可能である。適切な結合パートナーは、ＭＴ１−ＭＭＰ、インテグリンαｖβ３およびフェチュインである。
【００４０】
ＷＯ９８／１２３０９号（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）は、ＴＩＭＰ−２へのＣＴＤ（ＰＥＸ）の結合配列を記載している。過剰のＴＩＭＰ−２（ＴＩＭＰ−１ではない）または組換えＣＴＤ（ＰＥＸ）を加えることにより、細胞表面のプロＭＭＰ−２の活性化が抑制されることが述べられている。
【００４１】
したがって、本発明は、インテグリン阻害剤として使用するための薬剤を調製するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物および／またはその生理学的に許容される塩に関する。特に本発明は、病的な血管形成疾患、腫瘍、骨粗しょう症、炎症および感染症と戦うための薬剤を調製するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物および／またはその許容される塩に関する。
【００４２】
式Ｉの化合物は、血栓症、心筋梗塞、動脈硬化、炎症、卒中、強心症、腫瘍疾患、骨粗しょう症などの溶骨性疾患、高カルシウム血症、例えば、炎症などの病理学的血管形成疾患、眼科疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、近視、眼ヒストプラスマ症、リウマチ性関節炎、変形性関節症、血管新生緑内障、潰瘍性大腸炎、クローン病、アテローム硬化症、乾癬、血管形成術後の再狭窄、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染を予防および／または治療するための、急性腎不全および創傷治癒で治癒プロセスを促進するためのヒトおよび動物用薬剤中の薬剤活性成分として使用することができる。
【００４３】
式Ｉの化合物は、生体材料、インプラント、カテーテルまたは心ペースメーカーを使用する処置で、抗菌物質として使用することもできる。これらは、殺菌作用を有する。抗菌活性の効力は、Ｐ．Ｖａｌｅｎｔｉｎ−ＷｅｉｇｕｎｄらがＩｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２８５１−２８５５，１９８８）に記載した方法により証明することができる。
【００４４】
本発明はさらに、これらの化合物の水和物および溶媒和物、例えばアルコラートに関する。
【００４５】
本発明はさらに、請求項１に記載の式Ｉの化合物およびその塩を調製する方法に関し、その際、これは、加溶媒分解剤、還元剤または水素化分解剤を用いる処理により、その官能性誘導体のいずれかから、式Ｉの化合物を遊離し、および／または式Ｉの塩基または酸を、その塩のいずれかに変えることを特徴とする。
【００４６】
式Ｉの化合物は、１個または複数のキラル中心を有し、したがって、複数の立体異性形で生じる。これらの形（例えば、ＤおよびＬ形）およびそれらの混合物（例えば、ＤＬ形）の全てが、式Ｉに含まれる。
【００４７】
本発明による化合物には、いわゆる「プロドラッグ誘導体」、即ち、例えばアルキルまたはアシル基、糖またはオリゴペプチドで変性されていて、生体内で迅速に分解されて、本発明による活性な化合物をもたらす式Ｉの化合物も含まれる。
【００４８】
前記および後記の略語は、次の意味を有する：
Ａｃ　　アセチル
ＢＯＣ　　ｔ−ブトキシカルボニル
ＣＢＺまたはＺ　　ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＣＩ　　ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ　　ジメチルホルムアミド
ＥＤＣＩ　　Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ’−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ　　エチル
Ｆｍｏｃ　　９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ　　１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍｅ　　メチル
Ｍｔｒ　　４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルスルホニル
ＨＯＮＳｕ　　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＯＢｕｔ　　ｔ−ブチルエステル
Ｏｃｔ　　オクタノニル
ＯＭｅ　　メチルエステル
ＯＥｔ　　エチルエステル
Ｐｂｆ　　２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
Ｐｍｃ　　２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
ＰＯＡ　　フェノキシアセチル
ＴＦＡ　　トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ　　トリチル（トリフェニルメチル）。
【００４９】
前記および後記のアミノ酸基の略語は、次の天然に生じるアミノ酸の基を示している：
Ａｌａ、Ａ　　アラニン
Ａｓｎ、Ｎ　　アスパラギン
Ａｓｐ、Ｄ　　アスパラギン酸
Ａｒｇ、Ｒ　　アルギニン
Ｃｙｓ、Ｃ　　システイン
Ｇｌｎ、Ｑ　　グルタミン
Ｇｌｕ、Ｅ　　グルタミン酸
Ｇｌｙ、Ｇ　　グリシン
Ｈｉｓ、Ｈ　　ヒスチジン
Ｉｌｅ、Ｉ　　イソロイシン
Ｌｅｕ、Ｌ　　ロイシン
Ｌｙｓ、Ｋ　　リシン
Ｍｅｔ、Ｍ　　メチオニン
Ｐｈｅ、Ｆ　　フェニルアラニン
Ｐｒｏ、Ｐ　　プロリン
Ｓｅｒ、Ｓ　　セリン
Ｔｈｒ、Ｔ　　トレオニン
Ｔｒｐ、Ｗ　　トリプトファン
Ｔｙｒ、Ｙ　　チロシン
Ｖａｌ、Ｖ　　バリン。
【００５０】
公開されているデータベースからのヒトのプロＭＭＰ−２（ＭＭＰ−２）の配列（例えば、ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈから得ることができる）は、次のようなものである：
【００５１】
【表１】
2004510710.tif 000002
【００５２】
文献中ではＰＥＸとしても知られているＣ末端、つまり４６６〜６６０位置からのヘモペキシン類似領域は、太字で示してある。本発明によるインテグリンαｖβ３結合ペプチド配列には、下線を付している。
【００５３】
本発明を通して、例えばＡのように、複数回現れる基は全て、同じか、異なってよい。即ち、相互に独立している。
【００５４】
Ａは、アルキルであり、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の炭素原子を有し、好ましくは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルまたはｔ−ブチル、さらにペンチル、１−、２−または３−メチルブチル、１，１−、１，２−または２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−、２−、３−または４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−または３，３−ジメチルブチル、１−または２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−または１，２，２−トリメチルプロピル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルまたはウンデシルである。Ａはさらに、ハロゲン置換されているアルキル、好ましくはＣＦ３である。
【００５５】
アシルは、１〜１０個の炭素原子を有するアルカノイル、好ましくは例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニルまたはブチリル、さらに例えば、ベンゾイルである。
【００５６】
アミノ保護基は好ましくは、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、フェニルアセチル、ベンゾイル、トリル、ＰＯＡ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、ＢＯＣ、２−ヨードエトキシカルボニル、ＣＢＺ（「カルボベンゾキシ」）、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、ＦＭＯＣ、Ｍｔｒまたはベンジルである。
【００５７】
したがって、本発明は特に、挙げられている基のうちの少なくとも１個が、前記の好ましい意味のいずれかを有する式Ｉの化合物に関する。化合物の好ましい群のいくつかを、次の亜式ＩａからＩｅで表すことができ、これらは、式Ｉに一致し、ここでより詳細に記載されていない基は、式Ｉに記載の意味を有するが、ただし、
ａ）では、Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
ｂ）では、Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
ｃ）では、Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８０〜５９８から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
ｄ）では、Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８９〜４９７および／または５７０〜５８５および／または５８８〜５９７から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
ｅ）では、Ｘが、Ｈ、アシル、またはヒトのプロＭＭＰ−２のペプチド配列から選択される１から２０個のアミノ酸を有するペプチド断片であり、
Ｙが、ヒトのプロＭＭＰ−２の配列範囲４８９〜４９７および／または５７０〜５８５および／または５８８〜５９７から選択されるペプチド断片であり、
Ｚが、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡ、ＮＡ２またはＣｙｓであり、
１級アミノ基が、慣用のアミノ保護基を備えていてもよく、ならびにその生理学的に許容される塩および溶媒和物である。
【００５８】
ＭＭＰ−２のＣ末端配列中のペプチドは、紙の上で、８個のアミノ酸をそれぞれの２個のアミノ酸重複と共に含む断片として、Ｆｍｏｃ法で合成されている。
【００５９】
合成の質を、ＳＬＴ　Ｔｅｃａｎからの螢光リーダーを用いて評価して、カップリングステップ後（大量の蛍光）および開裂ステップ後（蛍光なし）のＦｍｏｃシグナルの質を判定した。これらのペプチド付加紙を、蛍光標識インテグリンαｖβ３と共にインキュベーションし、洗浄し、ＳＬＴ　Ｔｅｃａｎからの螢光リーダーを使用して判定した。
【００６０】
正の「ＳＰＯＴ」のペプチド配列を、慣用の方法により樹脂上で、別の合成で調製し、同時に、Ｃ末端システインで標識した。精製され、単離されたシステインペプチドを、共有結合試験での抗ビオチン／ホスファターゼ反応を用いて、ビオチン化インテグリンαｖβ３の結合に関してチェックし、αｖβ３結合で、ＲＧＤ非依存性活性を確認した。
【００６１】
活性化合物のうちで、２個のペプチドが連続する配列に位置し、ＭＭＰ−２Ｃ末端の知られている放射線構造から誘導されるこの配列は、ＰＥＸの表面に位置している。
【００６２】
実施例により調製される本発明による化合物は、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ　９０５０　自動合成機中でポリスチレン上で先行技術に従って調製した。このプロセスは、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ　ｃａｔａｌｏｇｕｅの付録に見ることができるような教科書知識から、当技術分野の専門家には理解されるであろう。クロロトリチル（ｏ−Ｃｌ）アンカーを使用した。酸−不安定性側鎖保護を伴うＦｍｏｃ−保護されているアミノ酸をカップリングさせた。側鎖保護されている誘導体Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）、Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ａｒｇ（Ｐｍｃ）またはＡｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）およびＣｙｓ（Ｔｒｔ）を使用した。Ｆｍｏｃ基を脱離させた後に、ＴＦＡ／水（９８：２）を使用して、樹脂からペプチドを分離し、その際、側鎖の保護基も同時に、脱離させた。
【００６３】
さらに、式Ｉの化合物およびそれを調製するための出発原料を、文献（例えばＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ［Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ］（Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）などの標準的な著書）中に記載されているような、知られていて、前記の反応に適した反応条件下に的確で、それ自体知られている方法により調製する。この場合に、それ自体知られている変法を使用することもできるが、ここで詳述することはしない。
【００６４】
所望の場合には、出発原料をその場で生じさせて、反応混合物から単離することなく、そのままさらに、式Ｉの化合物に変えることもできる。
【００６５】
好ましくは、加溶媒分解剤または水素化分解剤で処理することにより、その官能性誘導体のいずれかから、式Ｉの化合物を遊離させることにより、式Ｉの化合物を得ることができる。
【００６６】
加溶媒分解または水素化分解のための好ましい出発原料は、式Ｉに一致するが、１個または複数の遊離アミノおよび／またはヒドロキシル基の代わりに、対応する保護されているアミノおよび／またはヒドロキシル基を含有するもの、好ましくは、Ｎ原子に結合しているＨ原子の代わりに、アミノ保護基を有するもの、特に、ＨＮ基の代わりに、Ｒ’−Ｎ基（ここで、Ｒ’は、アミノ保護基である）を有するものおよび／またはヒドロキシル基のＨ原子の代わりに、ヒドロキシル保護基を有するもの、例えば、式Ｉに一致するが、−ＣＯＯＨ基の代わりに、−ＣＯＯＲ”基（ここで、Ｒ”は、ヒドロキシル保護基である）を有するものである。
【００６７】
複数の同じか、または異なる保護されているアミノおよび／またはヒドロキシル基が、出発原料の分子中に存在してもよい。存在する保護基が相互に異なる場合には、それらを、多くの場合、別々に脱離させることができる。
【００６８】
「アミノ保護基」という用語は通常、知られており、化学反応からアミノ基を保護（またはブロック）するために適しているが、分子中の別の所で所望の化学反応を実施した後に容易に脱離させることができる基のことである。このような基の典型的なものは特に、非置換または置換されているアシル、アリール、アラルコキシメチルまたはアラルキル基である。アミノ保護基を、所望の反応（または反応シークエンス）の後に脱離させるので、そのタイプおよびサイズは、特に厳密ではない；しかしながら、１〜２０個、特に１〜８個の炭素原子を有するものが好ましい。「アシル基」という用語は、本プロセスとの関係においては、最も広い意味で解釈されるべきである。これには、脂肪族、芳香脂肪族、芳香族または複素環式カルボン酸またはスルホン酸から誘導されるアシル基、特にアルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルおよび、殊にアラルコキシカルボニル基が含まれる。このようなアシル基の例は、アセチル、プロピオニル、ブチリルなどのホルミルまたはアルカノイル；フェニルアセチルなどのアラルカノイル；ベンゾイルおよびトルイルなどのアロイル；ＰＯＡなどのアリールオキシアルカノイル；メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、ＢＯＣおよび２−ヨードエトキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル；ＣＢＺ（カルボベンズオキシ）、４−メトキシベンジルオキシカルボニルおよびＦＭＯＣなどのアラルコキシカルボニル；およびＭｔｒなどのアリールスルホニルである。好ましいアミノ保護基は、ＢＯＣおよびＭｔｒ、さらにＣＢＺ、Ｆｍｏｃ、ベンジル、ホルミルおよびアセチルである。
【００６９】
使用されている保護基に応じて、例えば強酸を使用して、好ましくはＴＦＡまたは過塩素酸を使用して、さらに、塩酸または硫酸などの他の強無機酸、トリクロロ酢酸などの強有機カルボン酸またはベンゼンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸を使用して、アミノ保護基を除去する。付加的に不活性な溶剤が存在してもよいが、常に必要というわけではない。適切な不活性溶剤は好ましくは、有機の、例えば酢酸などのカルボン酸、テトラヒドロフランまたはジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦなどのアミド、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、さらに、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのアルコールならびに水である。前記の溶剤の混合物も好適である。ＴＦＡを、好ましくは他の溶剤を添加することなく過剰に使用するか、過塩素酸を、好ましくは９：１の比の酢酸および７０％過塩素酸の混合物の形で使用する。脱離のための反応温度は有利には、０〜約５０℃、好ましくは１５から３０℃（室温）である。
【００７０】
ＢＯＣ、Ｏｂｕｔ、Ｐｍｃ、ＰｂｆおよびＭｔｒ基は例えば、好ましくはジクロロメタン中のＴＦＡを使用するか、ジオキサン中の約３から５ＮのＨＣｌを使用して、１５〜３０℃で脱離させることができ、ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中のジメチルアミン、ジエチルアミンまたはピペリジンなどの２級アミンの約５から５０％溶液を使用して、１５〜３０℃で脱離させることができる。
【００７１】
水素化分解により脱離させることができる保護基（例えば、ＣＢＺまたはベンジル）は、例えば、触媒（例えば、有利には炭素などの支持体上に担持されているパラジウムなどの貴金属触媒）の存在下に水素で処理することにより、脱離させることができる。この場合の適切な溶剤は、前記の溶剤、特に、例えばメタノールまたはエタノールなどのアルコールあるいはＤＭＦなどのアミドである。水素化分解を通常、約０から１００℃の温度および約１から２００バールの圧力、好ましくは２０〜３０℃および１〜１０バールで実施する。ＣＢＺ基の水素化分解は、例えば、２０〜３０℃で、メタノール中、５から１０％Ｐｄ／Ｃで、あるいはメタノール／ＤＭＦ中、Ｐｄ／Ｃで、ギ酸アンモニウム（水素の代わり）を使用しても、成功する。
【００７２】
適切な不活性溶剤の例は、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエンまたはキシレンのような炭化水素；トリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、テトラクロロメタン、クロロホルムまたはジクロロメタンなどの塩素化炭化水素；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔ−ブタノールなどのアルコール；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはジオキサンなどのエーテル；エチレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテルまたはエチレングリコールジメチルエーテル（ジグライム）などのグリコールエーテル；アセトンまたはブタノンなどのケトン；アセトアミド、ジメチルアセトアミドまたはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などのアミド；アセトニトリルなどのニトリル；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などのスルホキシド；二硫化炭素；ギ酸または酢酸などのカルボン酸；ニトロメタンまたはニトロベンゼンなどのニトロ化合物；酢酸エチルなどのエステル、水あるいはこれらの溶剤の混合物である。
【００７３】
式Ｉのエステルをけん化することも可能である。これは有利には、例えばメタノール中のＬｉＯＨ、ジオキサン／水中のＮａＯＨまたはＫＯＨを使用して、０から６０℃、好ましくは１０から４０℃の温度で、前記のように加溶媒分解または水素化分解することにより実施することができる。
【００７４】
前記のように加溶媒分解または水素化分解により保護基を除去するか、あるいは、加溶媒分解または水素化分解により慣用の保護基で保護されているアミノ基を遊離させることにより、慣用のアミノ保護基を水素に代えることもできる。
【００７５】
例えば、当量の塩基および酸を、エタノールなどの不活性溶剤中で反応させ、続いて蒸発させることにより、酸を使用して、式Ｉの塩基を、関連する酸付加塩に変えることもできる。この反応に適した酸は特に、生理学的に許容される塩をもたらすものである。したがって、無機酸、例えば硫酸、硝酸、塩酸または臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、オルトリン酸などのリン酸またはスルファミン酸、さらに有機酸、特に脂肪族、脂環式、芳香脂肪族、芳香族または複素環式モノまたはポリ塩基性カルボン酸、スルホン酸または硫酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタン−またはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンモノ−およびジスルホン酸およびラウリル硫酸を使用することができる。式Ｉの化合物を単離および／または精製するために、生理学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩を使用することもできる。
【００７６】
他方で、式Ｉの酸を、塩基との反応により、その生理的に許容される金属塩またはアンモニウム塩のいずれかに変えることもできる。この場合に可能な塩は特に、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウム塩、さらに置換されているアンモニウム塩、例えば、ジメチル−、ジエチル−またはジイソプロピルアンモニウム塩、モノエタノール−、ジエタノール−またはジイソプロピルアンモニウム塩、シクロヘキシル−またはジシクロヘキシルアンモニウム塩、ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、さらに例えば、アルギニンまたはリジンとの塩である。
【００７７】
式Ｉの化合物は、１個または複数のキラル中心を有し、したがって、ラセミ形または光学的に活性な形で存在しうる。それ自体知られている方法により、得られたラセミ化合物を機械的に、または化学的に、エナンチオマーに分離することができる。好ましくは、光学活性分割剤と反応させることにより、ラセミ混合物から、ジアステレオマーを生じさせる。適切な分割剤の例は、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸または様々な光学的に活性なβ−カンフルスルホン酸などのカンフルスルホン酸のＤおよびＬ形などの光学的に活性な酸である。光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填されているカラムを用いて、エナンチオマーを分離するのも、有利である；適切な溶離剤の例は、例えば容量比８２：１５：３のヘキサン／イソプロパノール／アセトニトリル混合物である。
【００７８】
勿論、前記の方法により、既に光学活性な出発原料を使用して、光学的に活性な式Ｉの化合物を得ることも可能である。
【００７９】
本発明は前記の化合物に関するだけではなく、本発明によるこれらの化合物の他に、本発明による化合物の主な薬理学的作用に所望のように影響し得る他の薬理学的に活性な成分または助剤を含有する混合物および製剤にも関する。これらは、治療剤、診断剤として、あるいは試薬として使用することができる。これらは、ヒトまたは動物に局所的または全身的に、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経皮、鼻、頬側またはイオン泳動で投与することができ、懸濁液、エマルジョンまたは溶液、リポソーム、軟膏、ペースト、生分解性ポリマーの形の、またはナノ粒子、錠剤、カプセルまたは丸薬、顆粒または粉末としての、吸入のためのエアロゾルとしての、鼻腔内滴剤またはスプレーとしての処方物を含む。新規の生成物と、手術、放射線照射、診断、放射線療法、光力学的療法および遺伝子療法などの他の技術との、および他の薬剤との組合せも可能である。このような薬剤は、例えば循環系、中枢神経系または腫瘍学の分野に由来してよい。これらは、血管形成阻害剤または細胞増殖抑制薬などの腫瘍薬、アルキル化薬、抗生物質、代謝拮抗薬、生物学的製剤および免疫調節剤、ホルモンおよびそのアンタゴニスト、マスタードガス誘導体、アルカロイドおよび他からなる群からの化学療法薬であってよく、これらの物質は低分子量および高分子量であってよい。これらは、脂質、炭水化物またはタンパク質であってもよい。サイトカイン、トキシン、融合タンパク質、モノクローナル抗体およびワクチンも含まれる。
【００８０】
したがって本発明は、薬剤、診断剤または試薬としての、その生理学的に許容される塩を含む前記および後記ならびに請求項で定義される式の化合物に関する。
【００８１】
特に、これらは、リガンド、例えばＭＭＰ−２とαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦うための薬剤である。
【００８２】
これらの薬剤は、血栓症、心筋梗塞、冠動脈性心疾患、動脈硬化症、腫瘍、骨粗しょう症、線維症、炎症、感染症、乾癬と戦うために、さらに創傷治癒プロセスに影響を及ぼすために適している。
【００８３】
さらに本発明は、少なくとも１種の式Ｉの薬剤および、所望の場合には賦形剤および／または補助剤を含有する対応する製剤に関する。
【００８４】
さらに本発明は、インテグリン受容体αｖβ３を阻害するための薬剤を調製するために、本発明による化合物および／またはその生理学的に許容される塩および／または溶媒和物を使用することに関する。
【００８５】
さらに本発明は、リガンド、例えばマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ−２）とαｖβ３インテグリン受容体との相互作用に基づく疾患と戦うための薬剤を調製するために、本発明による化合物および／またはその生理学的に許容される塩および／または溶媒和物を使用することに関する。
【００８６】
さらに本発明は、血管形成により維持または伝播される病的過程と戦うための薬剤を調製するために、本発明による化合物および／またはその生理学的に許容される塩および／または溶媒和物を使用することに関する。
【００８７】
さらに本発明は、血栓症、心筋梗塞、冠動脈性心疾患、動脈硬化症、腫瘍、骨粗しょう症、線維症、炎症、感染症、乾癬と戦うための、さらに創傷治癒過程に影響を及ぼすための薬剤を調製するために、本発明による化合物および／またはその生理学的に許容される塩および／または溶媒和物を使用することに関する。
【００８８】
本発明による薬剤またはこれを含有する製剤は、ヒトまたは動物用の薬剤中で使用することができる。適切な賦形剤は、経腸（例えば、経口）、腸管外または局所投与するために、あるいは吸入スプレーの形で投与するために適切で、新規の化合物と反応しない有機または無機物質、例えば、水、植物油、ベンジルアルコール、アルキレングリコール、ポリエチレングリコール、三酢酸グリセリン、ゼラチン、ラクトースまたはデンプンなどの炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルクおよびワセリンである。特に、経口投与では、錠剤、丸薬、コート錠、カプセル、粉末、顆粒剤、シロップ剤、液剤または滴剤が好適であり、直腸投与では、座薬が好適であり、腸管外投与では、溶液、好ましくは、油性または水性溶液、さらに懸濁液、エマルジョンまたはインプラントが好適であり、かつ局所投与では、軟膏、クリームまたは粉末が好適である。新規の化合物は、凍結乾燥することもでき、生じた凍結乾燥物は、例えば、注入製剤を製造するために使用する。前記の製剤は、殺菌することができおよび／または滑剤、防腐剤、安定剤および／または湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変えるための塩、緩衝物質、染料、着香剤および／または複数の他の活性成分、例えば１種または複数のビタミンなどの助剤を含有してもよい。
【００８９】
吸入スプレーとして投与するために、噴射剤ガスまたは噴射剤ガス混合物（例えば、ＣＯ２またはクロロフルオロカーボン）中に活性成分が溶解または懸濁しているスプレーを使用することができる。活性成分をここでは有利には、超微粉砕された形で使用し、その際、１種または複数の付加的な生理学的に許容される溶剤、例えばエタノールが存在してもよい。吸入溶液は、慣用の吸入器を用いて投与することができる。
【００９０】
本発明による物質は通常、他の知られている市販の製剤（例えば、ＵＳ−Ａ４４７２３０５号に記載）と同様に、好ましくは単位剤当たり約０．０５から５００ｍｇ、特に０．５から１００ｍｇの用量で投与することができる。１日用量は好ましくは、約０．０１から２０ｍｇ／体重ｋｇである。しかしながら、各患者での的確な用量は、幅広い要因、例えば使用される特定の化合物の効力、年齢、体重、健康の全身状態、性別、食事、投与の時間および方法、排泄速度、薬剤の組合せおよび治療される特定疾患の重度に左右される。非経口投与が好ましい。
【００９１】
前記および後記では、温度は全て、℃で表している。
【００９２】
ＨＰＬＣ分析（滞留時間Ｒｔ）を、次のシステムで実施した：
流速１ｍｌ／分および検出２１５ｎｍで、水中２−プロパノール０〜８０％（トリフルオロ酢酸０．３％含有）の５０分勾配を伴うカラム２５０×４ｍｍ　Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　１００ＲＰ　１８（Ｍｅｒｃｋ　ＫＧａＡ）。
【００９３】
質量分析（ＭＳ）：ＥＩ（電子衝撃イオン化）Ｍ＋
ＦＡＢ（高速原子衝撃）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９４】
実施例
本発明によるペプチドの調製および精製：
原則的に、調製および精製を、Ｈａｕｂｎｅｒら（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８，１９９６，１７７０３）によって記載されているように、市販の連続フローペプチド合成機を使用して、酸不安定樹脂上の酸不安定側鎖の保護を伴うＦｍｏｃ手順で実施する。
【００９５】
次の化合物が得られた：
【００９６】
【表２】
2004510710.tif 000003
【００９７】
記号は、次の意味を有する：
ＫＤＲＦＩＷＲＴＶＣ　　　ＭＭＰ−２（４８９〜４９７）−Ｃｙｓ
ＡＡＦＮＷＳＫＮＫＫＴＹＩＦＡＧＣ　ＭＭＰ−２（５７０〜５８５）−Ｃｙｓ
ＦＷＲＹＮＥＶＫＫＫＣ　　　ＭＭＰ−２（５８８〜５９７）−Ｃｙｓ。
【００９８】
さらに、次の化合物が得られた：
【００９９】
【表３】
2004510710.tif 000004
【０１００】
物質および方法の実施例
組換えＭＭＰ−２は、Ｃｈｅｍｉｃｏｎから入手できる。Ｆ．Ｃ．Ｍｉｔｊａｎｓら（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１０８，２８２５−２８３８（１９９５））によって記載されたような変更を伴うが、Ｓｍｉｔｈら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，１８７２６−１８７３１（１９８８））によって記載されたように、胎盤から、インテグリンαｖβ３を精製することができる。Ｒ．Ｊ．Ｍｅｈｔａら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３０，８６１−８６９（１９９８））によって記載されたように、可溶性αｖβ３をビオチンで標識して得ることができ、リガンド結合試験および競合アッセイの性能も記載されている；結合試験に関する他の参考文献は、Ｓ．ＫｒａｆｔらのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，１９７９−１９８５（１９９９）である。
【０１０１】
１．　共有結合されているペプチドに関する受容体結合試験は、Ｂ．ＤｉｅｆｅｎｂａｃｈらのＢｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；Ｋ．Ｔ．Ｐｒｅｉｓｓｎｅｒら編のＥｘｅｒｐｔａ　Ｍｅｄｉｃａ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　Ｓｅｒｉｅｓ　１０４２，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ　１９９３，ｐ．１４９−１５６と同様に実施することができる。
【０１０２】
セルロース結合ペプチドと直接的に相互作用する蛍光標識インテグリンαｖβ３を使用する受容体結合試験。評価は、蛍光の測定により実施した。
【０１０３】
別の変法では、微量定量プレート中で被覆されたＢＳＡを、スルホＳＭＰＢで活性化し、チオペプチドをこれに共有結合させた。ビオチン化αｖβ３結合受容体と共にインキュベーションした後に、アルカリホスファターゼ結合ヒツジ抗ビオチン抗体を使用し、ホスファターゼ基質で染色して結合受容体を検出した。
【０１０４】
【表４】
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【０１０５】
薬理学的データにより、受容体αｖβ３のリガンドとしての本発明による化合物の活性が確認される。
【０１０６】
２．　ＰＥＸペプチドとαｖβ３との結合は、ＲＧＤ非依存性結合である。このことは、１．と同様に実施されたもう１つの試験で証明された。
【０１０７】
受容体を、可溶性ペプチドシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ）と共に、またはこれを伴わずにインキュベーションした。シクロＲＧＤペプチド「シクロ−（ＲＧＤｆＫ（メルカプト−プロピオニル））」とαｖβ３との結合は、シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ）により阻害されたが、ＰＥＸペプチドＡＡＦＮＷＳＫＮＫＫＴＹＩＦＡＧＣの結合は、これとは独立していた。
【０１０８】
次の実施例は、製剤に関する。
【０１０９】
実施例Ａ：　注入バイアル
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ１００ｇおよびリン酸水素二ナトリウム５ｇの再蒸留水３ｌ中の溶液を、２Ｎの塩酸を使用してｐＨ６．５に調節し、無菌ろ過し、注入バイアルに移し、無菌条件下に凍結乾燥させ、無菌条件下にシールする。各注入バイアルは、活性成分５ｍｇを含有する。
【０１１０】
実施例Ｂ：　座薬
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ２０ｇと、大豆レシチン１００ｇおよびカカオ脂１４００ｇとの混合物を溶融し、金型に注ぎ、冷却する。各座薬は、活性成分２０ｍｇを含有する。
【０１１１】
実施例Ｃ：　溶液
再蒸留水９４０ｍｌ中で、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ１ｇ、ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ　９．３８ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ　２８．４８ｇおよび塩化ベンザルコニウム０．１ｇから、溶液を調製する。ｐＨを６．８に調節し、溶液を１ｌにし、放射線照射により殺菌する。この溶液は、点眼剤の形で使用することができる。
【０１１２】
実施例Ｄ：　軟膏
無菌条件下に、式Ｉの活性成分５００ｍｇを、ワセリン９９．５ｇと混合する。
【０１１３】
実施例Ｅ：　錠剤
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ１ｋｇ、ラクトース４ｋｇ、馬鈴薯デンプン１．２ｋｇ、タルク０．２ｋｇおよびステアリン酸マグネシウム０．１ｋｇからなる混合物を慣用の方法で圧縮して、各錠剤が活性成分１０ｍｇを含有する錠剤を得る。
【０１１４】
実施例Ｆ：　コート錠
錠剤を、実施例Ｅと同様に圧縮し、次いで、慣用の方法で、スクロース、馬鈴薯デンプン、タルク、トラガカントおよび着色剤からなる被覆剤で被覆する。
【０１１５】
実施例Ｇ：　カプセル
各カプセルが活性成分２０ｍｇを含有するように、Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ２ｋｇを慣用の方法で、ゼラチン硬カプセルに充填する。
【０１１６】
実施例Ｈ：　アンプル
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ１ｋｇの再蒸留水６０ｌ中の溶液を、無菌ろ過し、アンプルに移し、無菌条件下に凍結乾燥させ、無菌条件下にシールする。各アンプルは、活性成分１０ｍｇを含有する。
【０１１７】
実施例Ｉ：　吸入スプレー
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ１４ｇを、等張ＮａＣｌ溶液１０ｌに溶かし、溶液を、ポンプ機構を有する市販のスプレー容器に充填する。この溶液は、口腔または鼻にスプレーすることができる。１吹きのスプレー（約０．１ｍｌ）は、約０．１４ｍｇの用量に相当する。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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