(57)【要約】好ましい態様で、本発明は変形性関節症の処置のための関節内投与用のリポソーム送達系中にカプセル化されたグリコサミノグリカン類を含んでなる組成物および送達方法を特徴とする。より好ましい態様で、本発明は変形性関節症の処置のための関節内投与用のリポソーム送達系中にカプセル化されたヒアルロン酸を含んでなる組成物および送達方法を特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一部が少なくとも１種のリポソーム中にカプセル化されている少なくとも１種のグリコサミノグリカンを含んでなる関節炎にかかった関節の処置に有用な組成物。
【請求項２】
グリコサミノグリカンが硫酸コンドロイチン、硫酸ケラチン、ヘパリン、硫酸ヘパリンおよび硫酸デルマタンよりなる群から選択される、請求項１の組成物。
【請求項３】
グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である、請求項１の組成物。
【請求項４】
グリコサミノグリカンが５００ｋＤａより大きい分子量を有する、請求項１の組成物。
【請求項５】
グリコサミノグリカンの少なくとも１０容量％が少なくとも１種のリポソーム中にカプセル化される、請求項１の組成物。
【請求項６】
グリコサミノグリカンの濃度が１ｍｇ／ｍｌより大きい、請求項１の組成物。
【請求項７】
リポソームが二重層形成性燐脂質から製造される、請求項１の組成物。
【請求項８】
燐脂質がジパルミトイルホスファチジルコリンである、請求項８の組成物。
【請求項９】
変形性関節症の処置用の別の有効な剤をさらに含む、請求項１の組成物。
【請求項１０】
脂質濃度が１０ｍｇ／ｍｌより大きい、請求項１の組成物。
【請求項１１】
１種もしくはそれ以上のグリコサミノグリカンをカプセル化するリポソーム送達媒体。
【請求項１２】
構造が球形または棒状である、請求項１１のリポソーム送達媒体。
【請求項１３】
０．１μｍより大きい直径を有する請求項１１のリポソーム送達系。
【請求項１４】
ａ）請求項１の組成物を製造しそしてｂ）組成物を薬剤学的に適切な薬用量で投与する段階を含んでなる、関節炎にかかった関節の処置方法。
【請求項１５】
処置する症状が変形性関節症である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
投与方法が関節炎にかかった関節中への組成物の関節内注射による、請求項１４の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は広くは関節炎にかかった関節の処置のための組成物および処置方法に関する。
【０００２】
より特に、本発明は関節炎にかかった関節の処置に有用な少なくとも１種のリポソーム系によりカプセル化『（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）』された少なくとも１種のグリコサミノグリカンを含んでなる組成物および処置方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
グリコサミノグリカン類（ＧＡＧ類）は繰り返し多糖単位よりなる生体高分子であり、そして動物の細胞表面上並びに細胞外マトリックス中に存在する。ＧＡＧ類は繰り返し二糖単位を含有する長い枝分かれしていない多糖類である。二糖単位は２種の改質された糖類であるＮ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンのいずれかおよびウロン酸、例えばグルクロン酸塩またはイズロン酸塩、を含有する。ＧＡＧ類は溶液に高い粘度を与える長い構造を有する高度に負に荷電された分子である。ＧＡＧ類は主として細胞の表面上または細胞外マトリックス中に位置する。ＧＡＧ類の高い粘度と共に低い圧縮率が生じ、それがこれらの分子を関節内の潤滑流体にとって理想的なものにさせる。同時に、それらの剛性率が細胞に対して構造的一体性を与えそして細胞泳動を可能にする細胞間の通路を与える。普遍的に天然産出するＧＡＧ類は硫酸コンドロイチン、硫酸ケラタン、ヘパリン、硫酸ヘパリン、硫酸デルマタンおよびヒアルロン酸塩（一般にヒアルロン酸、ＨＡ、と称する）を包含するが、それらに限定されない。ＧＡＧ類は関節内で重要な役割を演じ、プロテオグリカン類を生成するために蛋白質と共有結合される時には滑液および関節軟骨の表面層の両者の成分である。ヒアルロン酸（ＨＡ）は全ての哺乳動物において種々の組織にそしてある種の細菌種に天然産出するＮ−アセチルグルコサミンおよびグルクロン酸分子の高分子量多糖である。ＨＡはＧＡＧ類の中で、それが硫酸エステルを含有せず且つプロテオグリカンとして蛋白質に共有結合されていることが見出されない点で、独特である。ＨＡ重合体は約１００，０００−１０，０００，０００の間の分子量を有する非常に大きなものであり、そして大量の水を置換しうる。ヒアルロン酸の化学構造は、
【０００４】
【化１】
2004535434.tif 000002
【０００５】
である。最高濃度は例えば滑膜および滑液のような結合組織中で見られる。ヒアルロン酸は高度に粘弾性である溶液を生成しそして線維芽細胞の血漿膜および他の細胞中で重合体の還元性端部に対する糖類の添加により合成されるが、非還元性端部は細胞周囲空間内に突出する。多糖は局所的に代謝されるかまたはリンパ液によりリンパ節もしくは全身的循環系に送られ、そこからそれは肝臓洞様毛細血管の内皮細胞により浄化される。全体的な交換割合は結合組織マトリクス成分に関しては驚くほど迅速である（ｔ１／２＝０．５〜数日間）。非炎症性である純粋な試料を製造するための方法は当該技術で既知である。例えば、欧州特許第０２３９３３５号（特許文献１参照）、米国特許第４８７９３７５号（特許文献２参照）、米国特許第４１４１９７３号（特許文献３参照）は、非炎症性であるとされるヒアルロン酸の高度に純粋な画分の製造方法を開示している。
【０００６】
ヒアルロン酸は、一部では、それが滑液のレオロジー性質（粘度および弾性）を与えるために、関節の恒常性に関して重要である。それは関節潤滑化に寄与し、関節表面を超える負荷伝達を緩衝し、関節組織に対して新たなＨＡ源を与え、そして滑液に対して抗炎症性を与える。変形性関節症では、滑液中のＨＡの分子量および濃度が減少しそしてこのことが滑液の有効に機能する能力を損なわせる。上記の所見が、膝の変形性関節症の処置用のヒアルロン酸の関節内注射による粘度補充を開発させた。この処置は異常な変形性関節症滑液の除去およびＨＡをベースにした生成物による交換を包含しており、ＨＡの分子量および濃度を有利な治療効果を与えうる正常水準に向かって回復させる。関節症状の処置のためのヒアルロン酸の使用を記載する科学文献は当該技術で既知であり、それらの例はアダムス（Ａｄａｍｓ）、１９９３、１９９６（非特許文献１参照）；アダムス（Ａｄａｍｓ）他、１９９５（非特許文献２参照）；ベーカー（Ｂａｋｅｒ）、１９９７（非特許文献３参照）；バラズス（Ｂａｌａｚｓ）、１９６８、１９８２（非特許文献４参照）；バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）、１９８５、１９８９，１９９３（非特許文献５参照）；バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびギッブス（Ｇｉｂｂｓ）、１９７０（非特許文献６参照）；バンド（Ｂａｎｄ）他、１９９５（非特許文献７参照）；デンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）、１９８２、１９９６（非特許文献８参照）；ディックソン（Ｄｉｃｋｓｏｎ）およびホスル（Ｈｏｓｌｅ）、１９９８（非特許文献９参照）；エステイ（Ｅｓｔｅｙ）、１９９８（非特許文献１０参照）；ギッブス（Ｇｉｂｂｓ）他、１９６８（非特許文献１１参照）；モーランド（Ｍｏｒｅｌａｎｄ）他、１９９３（非特許文献１２参照）；ペイロン（Ｐｅｙｒｏｎ）、１９９３ａ、１９９３ｂ、１９９９（非特許文献１３参照）；リデル（Ｒｙｄｅｌｌ）他、１９７０（非特許文献１４参照）；スケール（Ｓｃａｌｅ）他、１９９４（非特許文献１５参照）；ウェイス（Ｗｅｉｓｓ）他、１９８１（非特許文献１６参照）；並びにウェイス（Ｗｅｉｓｓ）およびバラズ（Ｂａｌａｚ）、１９８７（非特許文献１７参照）である。特許文献には、関節炎にかかった関節の処置用のヒアルロン酸調剤が記載されている。それらの例は米国特許第４８０１６１９号（特許文献４参照）中に記載されている米国特許第５９１４３２２号（特許文献５参照）である。
【０００７】
ＨＡの数種の調剤、例えばヒアルガン（Ｈｙａｌｇａｎ）（フィディアＳ．ｐ．Ａ（Ｆｉｄｉａ  Ｓ．ｐ．Ａ．））およびシンビスク（Ｓｙｎｖｉｓｃ）（バイオマトリックス・インコーポレーテッド（Ｂｉｏｍａｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．））、が疾病にかかった関節内への関節内注射により適用される処置剤として市販されている。そのような処置剤は、若く健康な関節内で見られるＨＡと化学的および機能的により近い例であるＨＡを用いて滑液を補充することにより、有意な疼痛緩和を与えることが見出された；例えばペイロン（Ｐｅｙｒｏｎ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）、１９７４（非特許文献１８参照）；アダムス（Ａｄａｍｓ）、１９９３（非特許文献１９参照）；アダムス（Ａｄａｍｓ）他、１９９５（非特許文献２０参照）；フスキッソン（Ｈｕｓｋｉｓｓｏｎ）およびドネリー（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ）、１９９９（非特許文献２１参照）；コッツ（Ｋｏｔｚ）およびコラルズ（Ｋｏｌａｒｚ）、１９９９（非特許文献２２参照）。
【０００８】
そのような処置剤の使用は早くは１９７４年［１］に報告されたが、作用の機構はほとんど理解されないままである。例えば粘度補充および潤滑化（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）、１９８４（非特許文献２３参照）；軟骨表面の保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｓｕｒｆａｃｅｓ）、バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）、１９８４（非特許文献２４参照）；並びに疼痛刺激メディエーター、例えばＩＬ−１α、の抑制（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ  ＩＬ−１α）、バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびダルジンキーウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）、１９７３（非特許文献２５参照）；フォレスター（Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）、１９８０（非特許文献２６参照）；ダルジンキーウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）、１９７１（非特許文献２７参照）のように関節内のＨＡの数種の役割が証明されているが、酵素破壊およびリンパ性クリアランスの過程により時間がたつとＨＡ分子が関節から除去されることも知られている［ＦＤＡＰＭＡ−ヒアルガン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙａｌｇａｎ）、１９９７（非特許文献２８参照）；ＦＤＡＰＭＡ−ヒラン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙｌａｎ）Ｇ−Ｆ２０、１９９７（非特許文献２９参照）；レビック（Ｌｅｖｉｃｋ）他、２０００（非特許文献３０参照）］。従って、そのような処置のより長期間の効果は限定される。関節内のＨＡの滞在時間を増加させる試みの大部分は架橋結合によるＨＡ分子の改質に焦点が当てられており（ＦＤＡＰＭＡ−ヒラン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙｌａｎ）Ｇ−Ｆ２、１９９７（非特許文献３１参照）［米国特許第５８２７９３７号（特許文献６参照）、国際公開ＷＯ９９／１０３８５（特許文献７参照）］、そしてこれはＨＡのクリアランスを遅らせるが追加の長期利点がそのような処置から誘導されることを示唆する証拠はほとんどなく、そして分子構造の変更およびある場合には化学的架橋結合剤の存在に関する関心は依然としてある。
【０００９】
脂質も関節滑液中に存在し、そしてある種の燐脂質（特にジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ））は軟骨表面の潤滑化に関係があり（ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ）、１９９５、２０００（非特許文献３２参照）；ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ）およびモンズ（Ｍｏｎｄｓ）、１９９８（非特許文献３３参照））、そして膝関節内への関節内注射により変形性関節症の疼痛を減ずることが示されている（ベッチオ（Ｖｅｃｃｈｉｏ）他、１９９９（非特許文献３４参照））。
【００１０】
リポソーム類は１９６５年にバンガーム（Ｂａｎｇｈａｍ）により最初に記載された（バンガーム（Ｂａｎｇｈａｍ）Ａ．Ｄ．、スタンディッシュ（Ｓｔａｎｄｉｓｈ）Ｍ．Ｍ．およびワトキンズ（Ｗａｔｋｉｎｓ）Ｊ．Ｃ．、１９６５、「膨潤した燐脂質の層を越える１価イオンの核酸（Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｉｖａｌｅｎｔ  Ｉｏｎｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｌａｍｅｌｌａｅ  ｏｆ  ｓｗｏｌｌｅｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１３：２３８−２５２（非特許文献３５参照））。リポソーム類は、寸法、二重層の数および芯の疎水性により分類される。一般的なリポソームは親水性芯を取り囲む脂質二重層から構成される。脂質二重層の脂質は共役基、例えば蛋白質、抗体重合体、およびカチオン性高分子電解質、をリポソームの表面上に有することができ、そして標的界面剤として作用するであろう。脂質小胞はしばしば、寸法および構造により三群、すなわち多層小胞類（ＭＬＶ類）、大単層小胞類（ＬＵＶ類）および小単層板小胞類（ＳＵＶ類）、並びに少数層小胞類（ＰＬＶ類）、に分類される。ＭＬＶ類は水層が散在している脂質二重層から形成される一連の実質的に球状の殻を有する玉葱状構造である。ＬＵＶ類は１μｍより大きい直径を有しそして大きな親水性の芯相を取り囲む単一の脂質二重層から形成される。ＳＵＶ類は構造はＬＵＶ類と同様であるが、それらの直径がＬＵＶより小さく、例えば１００ｎｍより小さい。ＰＬＶ類は二重層により取り囲まれる内部にある疎水性の芯を有する小胞である。例えば、カロウ（Ｃａｌｌｏｗ）およびマックグラス（ＭｃＧｒａｔｈ）、クリオバイオロジー（Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１９８５  ２２（３）、ｐ．２５１−２６７（非特許文献３６参照）を参照のこと。
【００１１】
リポソーム類は最初は生体膜を研究するためのモデルとして使用された。しかしながら、最近の１５年では、リポソーム送達系が生体組織内への薬品及び他の有益な剤の進歩した送達賦形剤として企画されてきた。例えば、グレトリアジス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）Ｇ．編集、１９８８、薬品担体としてのリポソーム類（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ）、ニューヨーク、ジョーン・ウィリー（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ）、ｐ．３−１８（非特許文献３７参照）を参照のこと。
【００１２】
伝統的に、薄膜方法がリポソーム類を製造するために使用されてきた。この方法では、混合容器（例えば丸底フラスコ）中で二重層形成性成分を揮発性有機溶媒（例えばクロロホルム、エーテル、エタノール、またはこれらの組み合わせ）と混合する。一般的な燐脂質小胞を形成するために使用される主として二重層を形成する成分は一般に天然燐脂質、例えばホスファチジルコリン、である。リポソームの生体流体中でのより大きい安定性を与えるためにコレステロールもしばしば含まれる。荷電された種、例えばホスファチジルセリン、を加えて凝集を防止することもでき、そして例えば天然酸性脂質および酸化防止剤のような他の成分を含むこともできる。
【００１３】
脂質−溶媒溶液を次に例えば蒸発（例えば回転蒸発器を用いる）により揮発性溶媒を除去するような特定の周囲条件（例えば、圧力および温度）下に入れて乾燥脂質膜を生成する。この膜を次に脂質小胞内に捕獲されるであろう緩衝液、塩類、および親水性化合物を包含する溶解した溶質を含有する水性媒体で水和する。使用する水和段階が、生成するリポソーム類のタイプ（例えば、生成する二重層の数、小胞寸法、および捕獲容量）に影響を与える。所望するなら、カプセル化されない薬品または活性剤を混合物から種々の技術、例えば遠心、透析または透析濾過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、により除去しそして回収することができる。
【００１４】
脂質およびＨＡの組み合わせは文献に多様に引用されてきた。国際公開ＷＯ−Ａ−９１／１２０２２６（特許文献８参照）はリューマチにかかった関節の処置用のＨＡおよび燐脂質の組み合わせを特許取得した。両者とも関節潤滑化を与えるＨＡおよびＤＰＰＣを組み合わせることにより改良された潤滑性を軟骨表面に与えうることが主張された。ＤＰＰＣリポソーム類およびＨＡの混合物が手術癒着を術後に除き、減ずることを示した。これらの両方の場合とも、脂質成分およびＨＡ成分が混合物中で組み合わされており、従ってＨＡ分子の滞在時間に対する影響は予期されなかった。
【００１５】
六角形構造を示すか［１８、１９］または二成分間の酸アミド結合を示す（アオキ（Ａｏｋｉ）他、Ａ１．、米国特許第５，４７０，５７８号、抗リューマチ組成物（Ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）（特許文献９参照））脂質とＧＡＧ類との間の化学的相互作用が記載されていた。
【００１６】
バットル（Ｂｕｔｔｌｅ）他、（国際公開ＷＯ００／７４６６２Ａ２）、関節炎処置（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）（特許文献１０参照）は、カテキン類が変形性関節症の処置において有効でありえたことを示し、そしてＨＡとのそれらの組み合わせを提案した。リポソーム送達賦形剤がそのような処置用に挙げられていたが、リポソーム類の直径は一般的に２００ｎｍより小さいがＨＡ分子の直径は典型的には２００−３００ｎｍであるためこれを行なう方法ははっきりしていない［６］。
【００１７】
上記の先行技術は生体内のＨＡの不充分な滞在時間の論点を提示していない。本発明は、ＧＡＧ分子をリポソーム内にカプセル化してこれらの分子を適切な期間にわたり放出させて長期効果のある処置を提供することにより、この論点を提示する。
【００１８】
従って、本発明の目的はリポソーム類およびＧＡＧ類の新規な組成物に向けられており、それらは具体的にはＧＡＧ分子をカプセル化するのに充分な寸法のリポソームを含む。
【特許文献１】
欧州特許第０２３９３３５号明細書
【特許文献２】
米国特許第４８７９３７５号明細書
【特許文献３】
米国特許第４１４１９７３号明細書
【特許文献４】
米国特許第４８０１６１９号明細書
【特許文献５】
米国特許第５９１４３２２号明細書
【特許文献６】
米国特許第５８２７９３７号明細書
【特許文献７】
国際公開ＷＯ９９／１０３８５パンフレット
【特許文献８】
国際公開ＷＯ−Ａ−９１／１２０２２６パンフレット
【特許文献９】
米国特許第５，４７０，５７８号明細書
【特許文献１０】
国際公開ＷＯ００／７４６６２Ａ２パンフレット
【非特許文献１】
アダムス（Ａｄａｍｓ）著、１９９３
【非特許文献２】
１９９６アダムス（Ａｄａｍｓ）他著、１９９５
【非特許文献３】
ベーカー（Ｂａｋｅｒ）著、１９９７
【非特許文献４】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）著、１９６８、１９８２
【非特許文献５】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）著、１９８５、１９８９，１９９３
【非特許文献６】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびギッブス（Ｇｉｂｂｓ）著、１９７０
【非特許文献７】
バンド（Ｂａｎｄ）他著、１９９５
【非特許文献８】
デンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）、１９８２、１９９６
【非特許文献９】
ディックソン（Ｄｉｃｋｓｏｎ）およびホスル（Ｈｏｓｌｅ）著、１９９８
【非特許文献１０】
エステイ（Ｅｓｔｅｙ）著、１９９８
【非特許文献１１】
ギッブス（Ｇｉｂｂｓ）他著、１９６８
【非特許文献１２】
モーランド（Ｍｏｒｅｌａｎｄ）他著、１９９３
【非特許文献１３】
ペイロン（Ｐｅｙｒｏｎ）著、１９９３ａ、１９９３ｂ、１９９９
【非特許文献１４】
リデル（Ｒｙｄｅｌｌ）他著、１９７０
【非特許文献１５】
スケール（Ｓｃａｌｅ）他著、１９９４
【非特許文献１６】
ウェイス（Ｗｅｉｓｓ）他著、１９８１
【非特許文献１７】
ウェイス（Ｗｅｉｓｓ）およびバラズ（Ｂａｌａｚ）著、１９８７
【非特許文献１８】
ペイロン（Ｐｅｙｒｏｎ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）著、１９７４
【非特許文献１９】
アダムス（Ａｄａｍｓ）著、１９９３
【非特許文献２０】
アダムス（Ａｄａｍｓ）他著、１９９５
【非特許文献２１】
フスキッソン（Ｈｕｓｋｉｓｓｏｎ）およびドネリー（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ）著、１９９９
【非特許文献２２】
コッツ（Ｋｏｔｚ）およびコラルズ（Ｋｏｌａｒｚ）著、１９９９
【非特許文献２３】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）著、粘度補充および潤滑化（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、１９８４
【非特許文献２４】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ）著、軟骨表面の保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｓｕｒｆａｃｅｓ）、１９８４
【非特許文献２５】
バラズス（Ｂａｌａｚｓ）およびダルジンキエウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）著、疼痛刺激メディエーター、例えばＩＬ−１α、の抑制（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ  ＩＬ−１α）、１９７３
【非特許文献２６】
フォレスター（Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）著、１９８０
【非特許文献２７】
ダルジンキエウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ）著、１９７１
【非特許文献２８】
ＦＤＡＰＭＡ−ヒアルガン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙａｌｇａｎ）、１９９７
【非特許文献２９】
ＦＤＡＰＭＡ−ヒラン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙｌａｎ）Ｇ−Ｆ２０、１９９７
【非特許文献３０】
レビック（Ｌｅｖｉｃｋ）他著、２０００
【非特許文献３１】
ＦＤＡＰＭＡ−ヒラン（ＦＤＡＰＭＡ−Ｈｙｌａｎ）Ｇ−Ｆ２、１９９７
【非特許文献３２】
ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ）著、１９９５、２０００
【非特許文献３３】
ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ）およびモンズ（Ｍｏｎｄｓ）著、１９９８
【非特許文献３４】
ベッチオ（Ｖｅｃｃｈｉｏ）他著、１９９９
【非特許文献３５】
バンガーム（Ｂａｎｇｈａｍ）Ａ．Ｄ．、スタンディッシュ（Ｓｔａｎｄｉｓｈ）Ｍ．Ｍ．およびワトキンズ（Ｗａｔｋｉｎｓ）Ｊ．Ｃ．著、「膨潤した燐脂質の層板を越える１価イオンの核酸（Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｉｖａｌｅｎｔ  Ｉｏｎｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｌａｍｅｌｌａｅ  ｏｆ  ｓｗｏｌｌｅｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６５、１３：２３８−２５２
【非特許文献３６】
カロウ（Ｃａｌｌｏｗ）およびマックグラス（ＭｃＧｒａｔｈ）、クリオバイオロジー（Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１９８５  ２２（３）、ｐ．２５１−２２６
【非特許文献３７】
グレトリアジス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）Ｇ．編集、薬品担体としてのリポソーム類（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ）、ニューヨーク、ジョーン・ウィリー（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ）、１９８８、ｐ．３−１８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
好ましい態様で、本発明は変形性関節症の処置のための関節内投与用のリポソーム送達系中にカプセル化されたグリコサミノグリカン類を含んでなる組成物および送達方法を特徴とする。
【００２０】
より好ましい態様で、本発明は変形性関節症の処置のための関節内投与用のリポソーム送達系中にカプセル化されたヒアルロン酸を含んでなる組成物および送達方法を特徴とする。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
当業者は、ここの記述に基づき、本発明をその最大限度まで利用しうることは確かである。以下の具体的な態様は単に説明用であり、開示の残部をいずれかの方法で限定しようとするものでない。断らない限り、ここで使用される全ての技術および科学用語は本発明が属する技術分野の通常の専門家により一般に理解されているものと同じ意味を有する。また、ここで挙げられた全ての文献、特許出願、特許、および他の参考文献は引用することにより本発明の内容となる。断らない限り、ここで使用される全ての技術および科学用語は本発明が属する技術分野の通常の専門家により一般に理解されているものと同じ意味を有する。また、本出願全体で挙げられた全ての文献、特許出願、特許、および他の参考文献は引用することにより明らかに本発明の内容となる。
【００２２】
グリコサミノグリカン類（ＧＡＧ類）は繰り返し多糖単位よりなる生体高分子であると定義され、そして動物の細胞表面上および細胞外マトリックス中に存在する。ＧＡＧ類は繰り返し二糖単位を含有する長い枝分かれしていない多糖類である。二糖単位は２種の改質糖類であるＮ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンのいずれかおよびウロン酸、例えばグルクロン酸塩またはイズロン酸塩、を含有する。ＧＡＧ類は、溶液に高い粘度を与える長い構造を有する高度に負に荷電された分子である。ＧＡＧ類は主として細胞の表面上または細胞外マトリックス中に位置する。ＧＡＧ類の高い粘度と共に低い圧縮率が生じ、それがこれらの分子を関節内の潤滑流体にとって理想的なものにさせる。同時に、それらの剛性率が細胞に対して構造的一体性を与えそして細胞泳動を可能にする細胞間の通路を与える。
【００２３】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は全ての哺乳動物において種々の組織および一部の細菌種に生来産出するＮ−アセチルグルコサミンおよびグルクロン酸分子の高分子量多糖であると定義される。本出願の目的のためには、ＨＡは誘導体、例えばヒアルロナンおよびＣＯＯ−基に結合されたＨ＋イオンを有するヒアルロン酸自体、並びに別の正イオン、例えばヒアルロン酸ナトリウムを生成するＮＡ＋がＨ＋イオンを置換するヒアルロン酸の塩類、も包含する。物理的または化学的に架橋結合されたヒアルロン酸および誘導体も定義に包含される。ＨＡはＧＡＧ類の中で、それが硫酸エステルを含有せず且つプロテオグリカンとして蛋白質に共有結合されていることが見出されない点で、独特である。ＨＡ重合体は約１００，０００−１０，０００，０００の間の分子量を有する非常に大きなものであり、そして大量の水を置換しうる。本発明の目的のためには、最も好ましい態様は０．５−１０Ｍｄａの分子量を有する架橋結合されないヒアルロン酸を包含する。
【００２４】
リポソーム類は、壁が水を有する脂質の層である小球であると定義される。それらが形成されるにつれて、リポソーム類は水および存在するいずれかの水溶性溶質を捕獲する。この捕獲能力のために、それらは薬品送達系として有用である。本発明の目的のためには、最も好ましい態様は多層小胞の使用を包含する。本発明の目的のためには、好ましい態様は天然産出燐脂質を包含しそして最も好ましい態様はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）を包含する。
【００２５】
関節内送達は、それにより処置剤が関節の滑液包の中に直接または間接的に送達される方法であると定義される。
【００２６】
リポソームにより意味されるものは、内部液体相を取り囲む少なくとも１つの脂質二重層（例えば、液体の芯を取り囲む脂質二重層またはそれと別の脂質二重層との間に分散された液相）を有する小胞である。リポソームは種々の構造、例えば以上で論じられた多層（ＭＬＶ類）、単層（ＬＵＶ類またはＳＵＶ類）、および少数層（ＰＬＶ類）、を有することができる。リポソーム類の生じた構造は、一部は、疎水性相を形成する材料の選択並びに製造パラメーター、例えば温度およびインキュベーション時間、に依存する。
本発明に従い製造されるリポソーム類は少なくとも１種の両親媒性二重層形成性物質を含んでなりそして有効な剤を含んでなることができる。有効な剤は脂質二重層またはリポソームの親水性もしくは親水性区画のいずれかの中に含有することができる。
【００２７】
両親媒性二重層形成性物質により意味されるものは、疎水性および親水性の両方の基を含んでなり且つ単独でまたは他の脂質と組み合わせてリポソームの二重層を形成しうる脂質である。脂質は、性質に関しては飽和もしくは不飽和でありそして構造に関しては分枝鎖状または線状である単一のまたは複数の親油性側鎖を有することができる。両親媒性二重層形成剤は燐脂質またはセラミドでありうる。
【００２８】
複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質は、２つもしくはそれ以上の親油性側鎖（例えば、極性頭基に結合されている）を有する両親媒性二重層形成性物質である。そのような脂質は性質に関しては非イオン性、カチオン性、アニオン性、双性イオン性でありうる。適する複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、２つの飽和もしくは不飽和の脂肪酸鎖（例えば、炭素数が約１０〜約３０の側鎖）を含有する二重層形成性カチオン性脂質、例えばメト硫酸ジ（ソイオイルエチル）ヒドロキシエチルモニウム（ＤＳＨＭ）、臭化Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、臭化１，２−ジミリスチルオキシプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、［Ｎ−（Ｎ，Ｎ´−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミノグリシルスペルミジン（ＤＯＧＳ）、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、トリフルオロ酢酸２，３−ジオレオイルオキシル−Ｎ［２（スペルミンカルボザミド−Ｏ−エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパンアミニウム（ＤＯＳＰＡ）、塩化Ｉ−［２−（オレオイルオキシ）−エチル］−２−オレイル−３−（２ヒドロキシエチル）イミダゾリニウム（ＤＯＴＩＭ）、１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチエルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジアシル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＴＡＰ）、１，２−ジアシル−３−ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＡＰ）、第四級アミン類の脂肪酸塩類、例えば塩化ジココジモニウム（クォーテルニウム（Ｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ）３４）、並びにアシル基の炭素数が約８〜約３０（例えば、約１０〜約３０）である第四級ジメチルジアシルアミン類、およびそれらの誘導体、例えばアンモニウム誘導体、すなわち塩化ジメチル二水素化獣脂アンモニウム（クォーテルニウム１８）、並びに塩化デシルジメチルオクチルアンモニウム（クォーテルニウム２４）、およびその誘導体を包含するが、それらに限定されない。他の適するカチオン性二重鎖脂質は下記の文献：ファスベンダー（Ｆａｓｂｅｎｄｅｒ）他、２６９、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｌ４５−Ｌ５１（１９９５）；ソロジン（Ｓｏｌｏｄｉｎ）他、３４、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１３５３７−１３５４４（１９５５）；フェルグナー（Ｆｅｌｇｎｅｒ）他、２６９、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２５５０−２５６１（１９９４）；スタマタトス（Ｓｔａｍａｔａｔｏｓ）他、２７、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、３９１７−３９２５（１９８８）；並びにレベンチス（Ｌｅｖｅｎｔｉｓ）およびシルビウス（Ｓｉｌｖｉｕｓ）、１０２３、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、１２４−１３２（１９９０）、並びにジョアンニ（Ｊｏｕａｎｉ）他、９、Ｊ．リポソーム・リサーチ（Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、９５−１１４（１９９９）にも記載されており、それらは全て引用することにより本発明の内容となる。
【００２９】
適する非イオン性の複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、グリセリルジエステル類およびアルコキシル化されたアミド類を包含するが、それらに限定されない。適するグリセリルジエステル類の例は炭素数が約１０〜約３０（例えば、約１２〜約２０）のグリセリルジエステル類、ジラウリン酸グリセリル（「ＧＤＬ」）、ジオレイン酸グリセリル、ジミリスチン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル（「ＧＤＳ」）、グリセリルセスイオレエート（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｓｅｓｕｉｏｌｅａｔｅ）、ステアリン酸乳酸グリセリル、並びにそれとジラウリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリルおよびジミリスチン酸グリセリルとの混合物、並びにそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００３０】
アニオン性の複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、ホスファチジン酸類、例えば１，２ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−燐酸ナトリウム塩（ＤＭＰＡ）、１，２ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−燐酸ナトリウム塩（ＤＰＰＡ）、１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−燐酸ナトリウム塩（ＤＳＰＡ）、および負に荷電された燐脂質、例えばジパルミトイルホスファチジルグリセロール、を包含するが、それらに限定されない。
【００３１】
小胞二重層中の複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質の量は、脂質二重層中の物質の合計重量を基準として、約０．００１％〜約９５％（例えば、約５％〜約６５％）の範囲でありうる。リポソーム中の成分の合計重量を基準とした複数親油性側鎖の両親媒性二重層形成性物質の量はリポソームのタイプ（例えば、単層または少数層リポソーム）に依存し、そして約０．００１％〜約９５％（例えば、約１〜約６５％）の範囲でありうる。
【００３２】
単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質は単一親油性側鎖（例えば極性頭基に結合されている）を含有する両親媒性二重層形成性物質である。単一鎖脂質は非イオン性、カチオン性、アニオン性または双性イオン性でありうる。
【００３３】
適する非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、グリセリルモノエステル類；ポリオキシエチレン頭基が約２〜約１００個の基を有し且つ脂肪酸尾基の炭素数が約１０〜約２６であるポリオキシエチレン脂肪エーテル類；アルコキシ基の炭素数が約１〜約２００であり且つ脂肪アルキル基の炭素数が約８〜約３０（例えば、約１０〜約２４）であるアルコキシル化されたアルコール類；アルコキシ基の炭素数が約１〜約２００であり且つ脂肪アルキル基の炭素数が約８〜約３０（例えば、約１０〜約２４）であるアルコキシル化されたアルキルフェノール類；ポリオールエステル類のポリオキシエチレン誘導体；アルコキシ基の炭素数が約１〜約２００であり且つ脂肪アルキル基の炭素数が約８〜約３０（例えば、約１０〜約２４）であるアルコキシル化された酸類；並びにアルコキシル化された酸類を包含するが、それらに限定されない。
【００３４】
適するグリセリルモノエステルである非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、炭素数が約１０〜約３０（例えば、約１２〜約２０）であるグリセリルモノエステル類、カプリン酸グリセリル、カプリル酸グリセリル、グリセリルココエート（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｃｏｃｏａｔｅ）、エルカ酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸グリセリル、イソステアリン酸グリセリル、グリセリルラノレート（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｌａｎｏｌａｔｅ）、ラウリン酸グリセリル、リノール酸グリセリル、ミリスチン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル、グリセリルＰＡＢＡ、パルミチン酸グリセリル、リシノール酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、およびチオグリコール酸グリセリル、並びにそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００３５】
適するポリオキシエチレン脂肪エーテルである非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンコレステロールエーテル、ラウリン酸ポリオキシエチレン、ジラウリン酸ポリオキシエチレン、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ジステアリン酸ポリオキシエチレン、例えば各々のエーテルが約３〜約１０個のオキシエチレン単位を有するポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテルおよびポリオキシエチレンラウリルエーエーテル、並びにそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００３６】
アルコキシ化されたアルコールである非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の適する例は、下記の式Ｉ：
Ｒ５−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＯＨ
式Ｉ
［式中、Ｒ５は炭素数が約１０〜約２４である枝分かれしていないアルキル基でありそしてｙは約４〜約１００（例えば、約１０〜約１００）の間の整数である］
に示される構造を有するものを包含するが、それらに限定されない。そのようなアルコキシル化されたアルコールの例は、Ｒ５がラウリル基であり且つｙが２３の平均値を有する種であり、それはＣＴＦＡ名称「ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）２３」として知られておりそしてデラウエア州ウィルミントンのユニゲマ・インコーポレーテッド（Ｕｎｉｇｅｍａ，Ｉｎｃ．）から商品名ブリジ（ＢＲＩＪ）３５（Ｒ）として入手できる。
【００３７】
アルコキシル化されたアルキルフェノール類である非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の適する例は、下記の式ＩＩ：
【００３８】
【化２】
2004535434.tif 000003
【００３９】
［式中、Ｒ６は炭素数が約１０〜約２４である枝分かれしていないアルキル基でありそしてｚは約７〜１２０（例えば、約１０〜約１００）の整数である］
に示される構造を有するものを包含するが、それらに限定されない。この種類の物質の例は、Ｒ６がノニル基であり且つｚが約１４の平均値を有する種である。この物質はＣＴＦＡ名称「ノンオキシノール−１４（ｎｏｎｏｘｙｎｏｌ−１４）」として知られておりそしてイリノイ州ノースフィールドのステパン・カンパニー（Ｓｔｅｐａｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ）から商品名マコン（ＭＡＫＯＮ）１４（Ｒ）として入手できる。
【００４０】
適するポリオールエステルのポリオキシエチレン誘導体である非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質は、ポリオールエステルのポリオキシエチレン誘導体が（１）（ａ）炭素数が約８〜約２２（例えば、約１０〜約１４）である脂肪酸並びに（ｂ）ソルビトール、ソルビタン、グルコース、α−メチルグルコシド、１個の分子当たり平均約１〜約３個のグルコース基を有するポリグルコース、グリセリン、およびペンタエリトリトールから選択されるポリオールから誘導され、（２）平均約１０〜約１２０個の（例えば約２０〜約８０個の）オキシエチレン単位を含有し、そして（３）ポリオールエステルのポリオキシエチレン誘導体１モル当たり平均約１〜約３個の脂肪酸基を有するものである。
【００４１】
ポリオールエステル類のポリオキシエチレン誘導体の例はＰＥＧ−８０ラウリン酸ソルビタンおよびポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）２０を包含するが、それらに限定されない。平均約８０モルのエチレンオキシドを有するエトキシル化されたラウリン酸のソルビタンモノエステルであるＰＥＧ−８０ラウリン酸ソルビタンはデラウエア州ウィルミントンのＩＣＩサーファクタンツ（ＩＣＩ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）から商品名アトラス（Ａｔｌａｓ）Ｇ−４２８０（Ｒ）として市販されている。約２０モルのエチレンオキシドと縮合されたソルビトールおよび無水ソルビトール類の混合物のラウリン酸モノエステルであるポリソルベート２０はデラウエア州ウィルミントンのＩＣＩサーファクタンツから商品名ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０（Ｒ）として市販されている。別の例示ポリオールエステルはステアリン酸ソルビタンであり、それはユニゲマ・インコーポレーテッドから商品名スパン（ＳＰＡＮ）６０（Ｒ）として入手できる。
【００４２】
アルコキシル化された非イオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の適する例は酸（例えば、脂肪酸）のポリアルキレングリコールとのエステル類を包含するが、それらに限定されない。この種類の例示物質はＣＴＦＡ名称ラウリン酸ＰＥＧ−８（Ｒ）を有する。
【００４３】
適するカチオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は、アシル基の炭素数が約８〜約３０（例えば、約１０〜約２４）である第四級トリメチルモノアシルアミン類、並びにそれらの誘導体、例えばアンモニウム誘導体、例えば塩化ステアルアミドプロピルジメチル（ミリスチルアセテート）アンモニウム（クォーテルニウム７０）、塩化トリエチル水素化獣脂アンモニウム（クォーテルニウム１６）、および塩化ベンズアルコニウム、並びにそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００４４】
適するアニオン性の単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の例は脂肪酸類、例えばオレイン酸、および負に荷電された単一鎖燐脂質、例えばホスファチジルセリンおよびホスファチジルグリセロール、を包含するが、それらに限定されない。
【００４５】
小胞二重層中の単一の親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の量は、脂質二重層中の物質の合計重量を基準として、約０．００１％〜約７０％（例えば、約１％〜約３０％）の範囲でありうる。リポソーム中の成分の合計重量を基準とした単一親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質の量はリポソームのタイプ（例えば、一層板または少数層板リポソーム）に依存し、そして約１％〜約９５％（例えば、約１〜約３０％）の範囲でありうる。
【００４６】
上記の単一および複数親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質は燐脂質であってもよく、それは性質に関して双性イオン性であってもよい。燐脂質の例は天然および合成燐脂質を包含するが、それらに限定されない。天然燐脂質の例は、卵ホスファチジルコリン、水素化された卵ホスファチジルコリン、大豆誘導された燐脂質、例えば大豆ホスファチジルコリン、植物源から誘導される燐脂質、スフィンゴミエリンを包含するが、それらに限定されない。合成燐脂質の例は、合成ホスファチジルコリン類、例えば１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）を包含するが、それらに限定されない。ホスファチジルエタノールアミン類は、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、負に荷電された親脂質、例えばジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、およびホスファチジルセリン（ＰＳ）、並びにそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００４７】
上記の単数および複数親油性鎖の両親媒性二重層形成性物質はセラミドでもありうる。例はＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−スフィノグシン（Ｃ２Ｃｅｒ）、Ｎ−オクタノイルＤ−エリスロ−スフィノグシン（Ｃ８Ｃｅｒ）、Ｎ−ミリストイルＤ−エリスロ−スフィノグシン（Ｃ１４Ｃｅｒ）、Ｎ−ステアロイルＤ−エリスロ−スフィノグシン（Ｃ１８Ｃｅｒ）、Ｎ−アラキドイルＤ−エリスロ−スフィノグシン（Ｃ２０Ｃｅｒ）を包含するが、それらに限定されない。
【００４８】
別の適する脂質は下記の文献にさらに記載されている：アバンチ・ポラー・リピズ・インコーポレーテッド（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．）、アラバスター（Ａｌａｂａｓｔｅｒ）、ＡＬ・インテリム・カタログ（ＡＬ  Ｉｎｔｅｒｉｍ  Ｃａｔａｌｏｇ）、１３−９２および１０５−１２７（１９９９）；ポリグリセロール、例えば米国特許第４，７７２，４７１号、仏国特許発明第１，４７７，０４８号および第２，０９１，５１６号に記載されているもの；アミドをベースとしたオリゴマー状カチオン性脂質、例えば米国特許第５，８７７，２２０号に記載されているもの；カチオン性脂質、例えば米国特許第５，９８０，９３５号、第５，８５１，５４８号、第５，８３０，４３０号および第５，７７７，１５３号に記載されているもの；ホスホン酸をベースとしたカチオン性脂質、例えば米国特許第５，９５８，９０１号に記載されているもの；第四級サイトフェクチン類（ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎｓ）、例えば米国特許第５，９９４，３１７号に記載されているもの；エーテル脂質、例えば米国特許第５，９８９，５８７号に記載されているもの；並びにポリエチレングリコール改質されたセラミド脂質、例えば米国特許第５，８２０，８７３号に記載されているもの。
【００４９】
ステロール類をリポソームの脂質二重層に加えることができる。二重層中の脂質の脂肪酸鎖に沿った硬いステロイドの存在がこれらの炭素鎖の動きの自由度を減少させて脂質二重層のより良好な包装をもたらす。適するステロール類の例は、コレステロール並びにその塩類およびエステル類、３−硫酸コレステロール、フィトコレステロール、ヒドロコルチゾン、アルファ−トコフェロール、ベータシトステロール、ビサボロール（ｂｉｓａｂｏｌｏｌ）およびその誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００５０】
小胞二重層中のステロールの量は、小胞二重層中の物質の合計重量を基準として、約０．００１％〜約９５％（例えば、約１％〜約６５％）の範囲でありうる。リポソーム中の成分の合計重量を基準としたステロールの量はリポソームのタイプ（例えば、単層または少数層リポソーム）に依存し、そして約０．００１％〜約９５％（例えば、約１〜約６５％）の範囲でありうる。
【００５１】
有効な剤を脂質二重層内に（例えば、それが親油性の剤である場合）またはリポソームの親水性成分内に（例えば、コア内の脂質二重層内の親水性領域内に）含有することができる。親水性成分は水および／または他の極性溶媒を含有することができる。極性溶媒の例は、グリコール類、例えばグリセリン、アルコール類（例えば、炭素数が約２〜約６のアルコール類）、プロピレングリコール、ソルビトール、オキシアルキレン重合体、例えばＰＥＧ４、およびそれらの誘導体を包含するが、それらに限定されない。
【００５２】
本発明のリポソーム類は薬剤中に含有することができる（例えば、製薬学的に相容性である担体と混和することができる）。生じた組成物は、治療用途のクリーム剤、軟膏剤、ローション剤、ゲル剤の形態をとることができる。
【００５３】
本発明のリポソーム調剤が、鎮痛薬、抗炎症剤、または軟骨保護剤を包含する変形性関節症処置用の他の有効な剤を含みうることも考えられる。そのような有効な剤の代表例は、非ステロイド系の抗炎症薬、ｐ３８キナーゼ抑制剤、ＴＮＦ−α抑制剤、コルチコステロイド類、関節もしくは滑液成分の破壊に関係する酵素の抑制剤、例えばヒアルロニダーゼ抑制剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ抑制剤、またはアグレカナーゼ抑制剤、細胞消滅抑制剤、例えばＥＰＯ、並びに軟骨強化因子、例えばＴＧＦ−ベータ、および骨形態発生蛋白質を包含するが、それらに限定されない。このように記載された追加の有効な剤はＧＡＧと共にカプセル化されてもよく、リポソームに結合されるがカプセル化されていなくてもよく、またはリポソーム二重層の外側の遊離型薬物として存在することもできる。
【００５４】
以下は本発明のリポソーム類の製造および試験の記述である。本発明の他のリポソーム類は同様な方法で当業者により製造することができる。以下で略述される調合方式の記述は単なる例と考えるべきであり、そしてリポソーム類中にＧＡＧ類をカプセル化する調剤の他の製造方法も有効であることを理解すべきである。そのような方法の例はベムリ（Ｖｅｍｕｒｉ）およびローデス（Ｒｈｏｄｅｓ）（１９９５）により詳細に記載されており、そしてＳＵＶと有効な剤を含有する水相との混合、その後のＭＬＶを生成するための親油化および再水和［例えば、キルビー（Ｋｉｒｂｙ）およびグレゴリアジス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）、１９８４］、逆相蒸発［ゾカ（Ｓｚｏｋａ）およびパパハジョポウロス（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）、１９７８］、高圧押し出し［ベムリ（Ｖｅｍｕｒｉ）他、１９９０］、リポソーム類の凍結−解凍［ピック（Ｐｉｃｋ），１９８１］および脱水／再水和［シュー（Ｓｈｅｗ）およびデアマー（Ｄｅａｍｅｒ）、１９８５］を包含するが、それらに限定されない。
【実施例１】
【００５５】
Ａ．ヒアルロン酸の製造
ＨＡはどの方法によっても製造することができる。しかしながら、好ましい方法は例えば国際公開ＷＯ８６／０４３５５に記載されているような細菌発酵方式によりＨＡを高純度で製造する方法であろう。
Ｂ．カプセル化されたヒアルロン酸を有するリポソーム類の製造
ヒアルロン酸を１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）リポソーム中に膜水和法により導入した。簡単に述べると、ＤＰＰＣ（４００ｍｇ）を４０ｍｌのエタノール中に溶解させた。ＤＰＰＣ／エタノール混合物を次に丸底フラスコ中に入れそして回転蒸発装置に連結し、そして次に丸底フラスコを水浴の中に沈めた（ブッチ・ラボルテクニクＡＧ（Ｂｕｃｈｉ  Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ  ＡＧ）、スイス）。５４ｒｐｍの回転速度で、混合物中のエタノールを真空によりゆっくり除去しそして生じた膜を真空下で１時間にわたり貯蔵した。薄い膜を次に４ｍｌの燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液で５５℃において水和した。脂質膜が水和された後に、４ｍｌの２０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸溶液を脂質／ＰＢＳ混合物に加え、そして次に１５秒間隔で５分間にわたり５５℃において撹拌した。製造したての小胞を試験前に周囲条件に平衡化させた。最終的リポソーム濃度は５０ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣおよび１０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸であった。
Ｃ．ブランクリポソーム類の製造
ＨＡを添加せずに同じ方法を用いてブランクリポソーム（ヒアルロン酸なし）を製造した。最終的リポソーム濃度は１００ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣであった。
Ｄ．カプセル化されなかったヒアルロン酸を有するリポソーム類の製造
ヒアルロン酸がカプセル化されていないリポソーム混合物を製造するために、４ｍｌの実施例２のブランクリポソームを４ｍｌの２０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸溶液と混合した。最終的リポソーム濃度は５０ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣおよび１０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸であった。
Ｅ．凍結割面顕微鏡法
組成物を引き続き凍結割面透過電子顕微鏡（ＦＦ−ＴＥＭ）を用いて試験した。各調剤のＦＦ−ＴＥＭ試料をパトリック・エヒリン（Ｐａｔｒｉｃｋ  Ｅｃｈｌｉｎ）により「低温顕微鏡法および分析（Ｌｏｗ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）」（１９９２）の５章に記載された技術に従い製造した。試料を薄い金属シートの間に設置しそして液体プロパンで−１９６℃に急速冷却した。試料を次に液体窒素下でバルザーズ（Ｂａｌｚｅｒｓ）ＢＡＦ−３０１高真空凍結−腐食装置（テクノ・トレード・インターナショナル（Ｔｅｃｈｎｏ  Ｔｒａｄｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、リヒテンシュタイン）の予め冷却された冷たい台に移した。試料を低温で破砕しそして−１５０℃で腐食して水の表面層を除去した。破砕面を４５°の角度で白金で影をつけて選択的な電子コントラストを作成した。炭素の薄い層を破砕表面全体に沈着させて連続的レプリカを作成した。レプリカを次にジェオール（ＪＥＯＬ）１００ＣＸ２電子顕微鏡（ジャパニーズ・エレクトロニック・オプチカル・ラボラトリーズ（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、日本）を用いて試験した。
【００５６】
ヒアルロン酸溶液は糸状構造の存在を示した。
【００５７】
実施例２のリポソーム類は二重層を有する完全な小胞の存在を示した。外側相内のヒアルロン酸に関する証拠はなかった。全てのヒアルロン酸がＤＰＰＣリポソーム内部にカプセル化されたようにみえた。
【００５８】
リポソーム混合物はＤＰＰＣリポソーム内部にカプセル化されないヒアルロン酸の存在を表すリポソーム構造および糸状構造を示した。
参考文献
下記の文献および特許は引用することにより本発明の内容となる。
アダムス（Ａｄａｍｓ），Ｍ．Ｅ．著、「変形性関節症の処置における架橋結合されたヒアルロナンであるヒランの使用の臨床試験の分析（Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｒｏｓｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，  Ｈｙｌａｎ，  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）」、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、１９９３、２０（Ｓｕｐｐｌ．３９）：１６−１８
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アダムス（Ａｄａｍｓ），Ｍ．Ｅ．著、「変形性関節症の処置における架橋結合されたヒアルロナンであるヒランの使用の臨床試験の分析（Ａｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，  Ｈｙｌａｎ，  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９３、２０（Ｓ３９）、１６−１８
アダムス（Ａｄａｍｓ），Ｍ．Ｅ．、アトキンゾン（Ａｔｋｉｎｓｏｎ），Ｍ．Ｈ．、ルッシエル（Ｌｕｓｓｉｅｒ），Ａ．Ｊ．、シュルツ（Ｓｃｈｕｌｚ），Ｊ．Ｉ．、シミノビッチ（Ｓｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ），Ｋ．Ａ．、ウェード（Ｗａｄｅ），Ｊ．Ｐ．およびズンメル（Ｚｕｍｍｅｒ），Ｍ．著、「膝の変形性関節症の処置におけるヒランＧ−Ｆ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（Ｒ））の役割：ヒランＧ−Ｆ２０単独、ヒランＧ−Ｆ２０と非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ類）およびＮＳＡＩＤＳ単独を比較するカナダ・マルチセンター試験（Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０  （Ｓｙｎｖｉｓｃ（Ｒ））  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｎｅｅ：  ａ  Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｔｒｉａｌ  Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０  Ａｌｏｎｅ，  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０  ｗｉｔｈ  Ｎｏｎ−Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ  （ＮＳＡＩＤｓ）  ａｎｄ  ＮＳＡＩＤＳ  Ａｌｏｎｅ）」、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ、、１９９５、３、２１３−２２６
フスキッソン（Ｈｕｓｋｉｓｓｏｎ），Ｅ．Ｃ．およびドネリー（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ），Ｓ．著、「膝の変形性関節症の処置におけるヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ    Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｎｅｅ）」、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９９、３８、６０２−６０７
コッツ（Ｋｏｔｚ），Ｒ．およびコラルズ（Ｋｏｌａｒｚ），Ｇ．著、「関節内ヒアルロン酸：繰り返し処置サイクルの効果の期間および結果（Ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ：  Ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｆｆｅｃｔ  ａｎｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  Ｒｅｐｅａｔｅｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｃｙｃｌｅｓ）」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ、１９９９、２８（１１）、５−７
バラズス（Ｂａｌａｚｓ），Ｅ．Ａ．およびデンリンガー（Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ），Ｊ．Ｌ．著、「ヒアルロン酸ナトリウムおよび関節機能（Ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」、Ｅｑ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．、１９８４、５、ｐ．２１７−２２８
バラズス（Ｂａｌａｚｓ），Ｅ．Ａ．およびダルジンキエウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ），Ｚ．著、クロネン（Ｋｕｌｏｎｅｎ），Ｅおよびピッカライネン（Ｐｉｋｋａｒａｉｎｅｎ），Ｊ．編集、「線維芽細胞の生物学（Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）」、ロンドン、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９７３、２３７−５２
フォレスター（Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ），Ｊ．Ｖ．およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ），Ｅ．Ａ．著、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９８０、４０、４３５−４６
ダルジンキエウィッチ（Ｄａｒｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）およびバラズス（Ｂａｌａｚｓ），Ｅ．Ａ．著、Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ、１９７１、６６、１１３−２３
ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９５００２７  ヒアルガン（ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９５００２７  Ｈｙａｌｇａｎ）、１９９７ａ
ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９４００１５  ヒアルガンＧ−Ｆ２０（ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９４００１５  ＨｙａｌｇａｎＧ−Ｆ２０）、１９９７ｂ
レビック（Ｌｅｖｉｃｋ）ＪＲ、スコット（Ｓｃｏｔｔ）Ｄ、コールマン（Ｃｏｌｅｍａｎ）ＰＪ、マソン（Ｍａｓｏｎ）ＲＭ著、「ウサギにおける滑膜を越える緩衝隙間流中のヒアルロナン連鎖長さの役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｃｈａｉｎ  ｌｅｎｇｔｈ  ｉｎ  ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｆｌｏｗ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｓｙｎｏｖｉｕｍ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ）」、Ｊ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２０００、５２６．２、ｐ４２５−４３４
ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ），Ｂ．Ａ．著、「生体内の境界潤滑化（Ｂｏｕｎｄａｒｙ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ）」、Ｐｒｏｃ  Ｉｎｓｔ  Ｍｅｃｈ  Ｅｎｇ［Ｈ］、２０００、２１４（１）、８３−９４
ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ），Ｂ．Ａ．著、「関節界面活性剤の顕著な抗磨耗性質（Ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ  ａｎｔｉ−ｗｅａｒ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｊｏｉｎｔ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１９９５、２３、１１２−１１５
ヒルズ（Ｈｉｌｌｓ）Ｂ．Ａ．およびモンズ（Ｍｏｎｄｓ），Ｍ．Ｋ．著、「関節内の負荷を帯びた境界潤滑剤の酵素同定（Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｏａｄ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｂｏｕｎｄａｒｙ  ｌｕｂｒｉｃａｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｊｏｉｎｔ）」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９８、３７、１３７−１４２
ベッチオ（Ｖｅｃｃｈｉｏ），Ｐ．、トーマス（Ｔｈｏｍａｓ），Ｒおよびヒルズ（Ｈｉｌｌｓ），Ｂ．Ａ．著、「変形性関節症のための界面活性剤処置（Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）」、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）、１９９９年１０月、３８（１０）、１０２０−１
モロオカ（Ｍｏｒｏ−ｏｋａ）Ｔ、ミウラ（Ｍｉｕｒａ）Ｈ、マワタリ（Ｍａｗａｔａｒｉ）Ｔ、カワノ（Ｋａｗａｎｏ）Ｔ、ナカニシ（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ）Ｙ、ヒガキ（Ｈｉｇａｋｉ）Ｈ、イワモト（Ｉｗａｍｏｔｏ）Ｙ著、「ヒアルロン酸および燐脂質の混合物がウサギの傷を受けた屈筋腱上の癒着生成を防止する（Ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｆｌｅｘｏｒ  ｔｅｎｄｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ）」、Ｊ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｓ、２０００、１８（５）、８３５−４０
パスクアリ−ロンチェッティ（Ｐａｓｑｕａｌｉ−Ｒｏｎｃｈｅｔｔ），Ｉ．他著、「ヒアルロナン−燐脂質相互作用（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｏｉｎｓ）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９７、１２０、１−１０
ゴーシュ（Ｇｈｏｓｈ），Ｐ．、フタジロク（Ｈｕｔａｄｉｌｏｋ），Ｎ．、アダム（Ａｄａｍ），Ｎ．およびレンチニ（Ｌｅｎｔｉｎｉ），Ａ．著、「ゲル透過クロマトグラフィー、多角レーザー光拡散光度法および１Ｈ−ＮＭＲ分光法により測定されたヒアルロナン（ヒアルロン酸）と燐脂質との相互作用（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  （ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）  ｗｉｔｈ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ａｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ｇｅｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ｍｕｌｔｉ−ａｎｇｌｅ  ｌａｓｅｒ−ｌｉｇｈｔ−ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  １Ｈ−ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．、１９９４、１６（５）、２３７−２４４
バンガーム（Ｂａｎｇｈａｍ）Ａ．Ｄ．、スタンディッシュ（Ｓｔａｎｄｉｓｈ）Ｍ．Ｍ．およびワトキンズ（Ｗａｔｋｉｎｓ）Ｊ．Ｃ．著、「膨潤した燐脂質の層板を越える１価イオンの核酸（Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｉｖａｌｅｎｔ  Ｉｏｎｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｌａｍｅｌｌａｅ  ｏｆ  ｓｗｏｌｌｅｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９４、１６（５）、２３７−２４４
カロウ（Ｃａｌｌｏｗ）およびマックグラス（ＭｃＧｒａｔｈ）、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９８５、２２（３）、ｐ．２５１−２６７
グレトリアジス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）Ｇ．編集、「薬品担体としてのリポソーム類（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ）」、ニューヨーク、ジョーン・ウィリー（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ）、１９８８、ｐ．３−１８
ファスベンダー（Ｆａｓｂｅｎｄｅｒ）他著、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、１９９５、２６９、Ｌ４５−Ｌ５１
ソロジン（Ｓｏｌｏｄｉｎ）他著、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９５、３４、１３５３７−１３５４４
フェルグナー（Ｆｅｌｇｎｅｒ）他著、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、１９９４、２６９、２５５０−２５６１
スタマタトス（Ｓｔａｍａｔａｔｏｓ）他著、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９８８、２７、３９１７−３９２５
レベンチス（Ｌｅｖｅｔｉｎｓ）およびシルビウス（Ｓｉｌｖｉｕｓ）、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、１９９０，１０２３、１２４−１３２
ジョウアンニ（Ｊｏｕａｎｉ）他著、Ｊ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９９、９，９５−１１４
ベムリ（Ｖｅｍｕｒｉ），Ｓおよびローデス（Ｒｈｏｄｅｓ），Ｃ．Ｔ．著、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ａｃｔａ  Ｈｅｌｖｅｔｉａｅ、１９９５、７０，９５−１１１
キルビー（Ｋｉｒｂｙ），Ｃ．Ｊ．およびグレゴリアジス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ），Ｇ．著、「穏やかな条件下での高いカプセル化効率が可能なリポソーム類の簡単な製造工程（Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｕｎｄｅｒ  ｍｉｌｄ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）」、Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、フロリダ州ボカ・ラトン、ＣＲＣ・プレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８４、１巻
ゾカ（Ｓｚｏｋａ）およびパパハジョポウロス（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９７８、７５、４１９４−８
ベムリ（Ｖｅｍｕｒｉ），Ｓ他著、Ｄｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．、１９９０、１６、２２４３−２２５６
ピック（Ｐｉｃｋ），Ｕ．Ｉ．、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、１９８１、２１２、１９８６−１９９９
シュー（Ｓｈｅｗ），Ｒ．Ｌ．およびデアマー（Ｄｅａｍｅｒ），Ｄ．、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、１９８５、８１６、１−８
【国際公開パンフレット】
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2004535434.tif 000031
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004535434.tif 000032
【国際調査報告】
2004535434.tif 000033
2004535434.tif 000034