(57)【要約】【解決手段】本発明は安息香酸誘導体及びその使用方法を提供する。本発明によれば、式Ｉに示す化合物、及び前記化合物の立体異性体、水和物、生理学的及び加水分解が可能な前記化合物のエステルが提供される。ここで、Ｒ１はＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−、Ｒ２はＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−、Ｒ３はＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−、Ｒ４はＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−、ＹはＯ又は−ＮＲ’、ここでＲ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ｎは０−８、Ｒ６は５から８員のラクトン又はラクタム環、Ｒ７はＨ，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−ＣＯＯ−、ここで前記ラクタム又はラクトン環は任意に一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を含み、又前記ラクタム又はラクトン環は任意に、一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル群又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル群で置換されている。本発明の前記化合物は、過度のサイトカイニン放出に関係する又は伴う病因を有する病気の治療又は予防に有用である。また前記化合物は、癌、炎症性疾患、及びｍＲＮＡ不安定シークエンスを有するｍＲＮＡの安定性の増加に関係する病気の治療にも使われる。本発明はさらに式Ｉに示す安息香酸誘導体の製造方法を提供する。
2004509167.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの構造を持つ化合物、又は前記化合物の立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステルであり、
【化１】
2004509167.tif 000024
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されていることを特徴とする化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物であって、ここで
前記Ｒ１＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ２＝Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ４＝Ｈ，メトキシ又はハロゲン；
Ｒ５＝Ｈ，ＯＨ，メトキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；
ＹはＯ；
Ｒ６は
【化２】
2004509167.tif 000025
ここで、ｍは０−４；
Ｒ７＝Ｈ，メチル，イソプロピルである事を特徴とする化合物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物であって、ここで、
前記Ｒ１が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ２がＨ；
Ｒ３が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ４が、Ｈ又はハロゲン；
Ｒ５が、−ＯＨ，ＭｅＯ−，ＭｅＣＯＯ−又はメチルである事を特徴とする化合物。
【請求項４】
請求項２記載の化合物であって、ここで、
前記Ｒ１がＨ又はＭｅＯ、Ｒ３がＨ，−ＯＨ又はＭｅＯ−、Ｒ４がＨ、及びＲ５がメトキシ又はメチルであることを特徴とする化合物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物であって、前記化合物が次の化合物群から選択されることを特徴とする化合物。
【化３】
2004509167.tif 000026
【請求項６】
請求項１記載の化合物であって、前記化合物が次の化合物群から選択されることを特徴とする化合物。
【化４】
2004509167.tif 000027
【請求項７】
請求項１記載の式Ｉの化合物、又は前記化合物の薬学的に可能で代謝的適応性のあるエステルあるいはアミド、又は前記化合物の薬学的に可能な塩の製造方法であって、下記（ａ）から（ｃ）のいずれかの工程を含み、
ａ）式（Ｉ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物と反応させる工程を含むか、
【化５】
2004509167.tif 000028
ここで、
Ｒ１は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ２は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ３は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ４は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｘは、ハロゲン；
【化６】
2004509167.tif 000029
ここで、ｎ’は１〜９で、ｍは０〜４、前記化合物（ＩＩＩ）は場合により、一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている、
あるいは、
ｂ）式（ＩＶ）の化合物を、式（ＩＩ）の化合物と、共沸蒸留で酸の存在下で反応させる工程を含むか、
【化７】
2004509167.tif 000030
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記の定義のとおりであり、
あるいは、
ｃ）式（ＩＶ）の化合物のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を、式（Ｖ）の化合物と反応させる工程を有し、
【化８】
2004509167.tif 000031
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記の定義の通りであり、
【化９】
2004509167.tif 000032
ここで、Ｘは、Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ又はＩ；
ｎ’は、１−９；
ｍは、０−４；
さらに、式（Ｖ）の前記化合物は場合により、一つ又はそれ以上の二重結合を有していてもよく、また場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている事を特徴とする化合物の製造方法。
【請求項８】
一つ又はそれ以上の請求項１〜６記載の前記化合物と、薬学的に可能な担体、希釈剤又は賦形剤を含む薬剤組成物。
【請求項９】
さらに、細胞静止薬又は細胞毒性剤を含む請求項８記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
さらに化学療法剤を含む請求項８記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
哺乳動物の治療用医薬品の製造時に、請求項１−６記載のいずれかを用いる前記化合物の使用法。
【請求項１２】
前記医薬品が癌及び／又は悪性疾患の治療に使われるものであることを特徴とする、請求項１１記載の化合物使用法。
【請求項１３】
一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの分解を、前記化合物が誘起することを特徴とする、請求項１１記載の化合物使用法。
【請求項１４】
一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの安定性増加に関連する病因を有する疾患又は医療状態の治療又は予防に、前記医薬品が使用されることを特徴とする、請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項１５】
過度のサイトカイン放出に関連する又は前記放出を有する病因の疾患又は医療状態の治療に、前記医薬品が使用されることを特徴とする、請求項１１記載の化合物使用法。
【請求項１６】
前記サイトカインがＩＬ−１βであることを特徴とする、請求項１５記載の化合物使用法。
【請求項１７】
リューマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病および喘息からなる群から、前記疾患又は医療状態が選択されることを特徴とする、請求項１５記載の化合物使用法。
【請求項１８】
前記医薬品が、炎症性の疾患または医療状態の治療に使用されることを特徴とする、請求項１１記載の化合物使用法。
【請求項１９】
一般的な腫瘍の増大及び／又は転移した癌腫の浸潤の治療又は予防の為に、あるいは多薬剤耐性を防ぐ又はなくす為に、前記医薬品が、腫瘍遺伝子媒介の癌及び悪性疾患の治療及び予防に使用されることを特徴とする、請求項１１記載の化合物使用法。
【請求項２０】
前記哺乳動物が人間であることを特徴とする、請求項１１−１９記載の化合物使用法。
【請求項２１】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、哺乳動物に投与する工程を有する、癌及び／又は悪性疾患の予防又は治療方法。
【請求項２２】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、哺乳動物に投与する工程を有し、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの安定性増加に関連する病因の疾患又は医療状態の予防法又は治療法。
【請求項２３】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量哺乳動物に投与する工程を有し、哺乳動物に於いて、ｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの分解を誘起する方法。
【請求項２４】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、病気又は治療上異常体質の哺乳動物に投与する工程を有し、サイトカイン、ケモカイン、キナーゼリン酸化酵素又はシクロオキシゲナーゼのような前炎症性因子の産出に関連する病因を持つ免疫病理学的異常を治療する又は予防する方法。
【請求項２５】
微生物感染、悪性疾患及び転移、喘息、冠状再狭窄、自己免疫病、肝硬変、内毒血症、再かん流損傷、および敗血症ショックからなる群から、前記免疫病理学的異常が選択されることを特徴とする、請求項２４記載の治療又は予防方法。
【請求項２６】
前記ｍＲＮＡが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＣＯＸＩＩ、又はｂｃｌ−２であることを特徴とする請求項２５記載の治療又は予防方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物が人間であることを特徴とする、請求項２１−２６のいずれかに記載の治療又は予防方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、生物学的に活性な安息香酸誘導体に関するものであり、また病気の治療及び予防にそれらを使用することに関する。
【０００２】
【従来の技術】
様々な安息香酸が治療に有用な活性を示すことが明らかにされている。例えば、日本特許公開公報６１−２２０４６号、６１−２２０４７号及び６１−７６４４０号には、以下の一般式で表される安息香酸誘導体が、それ以上繁殖できないような組織学的にも機能的にも成熟した細胞となるように、特に白血病細胞のような悪性細胞の分化を誘起させることができ、従ってそれらに薬学的価値があり、癌、リューマチ又は乾癬のような悪性の増殖性又は免疫性の病気の治療に有用であることが示されており、また日本特許公開公報６２−２１５５８１号には、関係する化合物が示されている。
【０００３】
【化１０】
2004509167.tif 000003
【０００４】
ここで、Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’４及びＲ’５は、全く同じあるいは異なり、それぞれ水素、中位又は低アルキルを表すが、但し全てが一斉に水素であってはならない。また、５又は６つの炭素原子を有するシクロアルキル環を形成する為に、隣接する２つの置換基が互いに結合してもよい。Ｒ’６は、ヒドロキシル、低アルコキシル、又は式ＮＲ’７Ｒ’８で示される低アルキルアミノを表す。ここで、Ｒ’７とＲ’８はそれぞれ水素又は低アルキルを表し、Ｘ’は次式の群を表す。
【０００５】
【化１１】
2004509167.tif 000004
【０００６】
また前記文献は、人間の急性骨髄性白血病細胞（ＨＬ−６０）の分化によるそれら化合物の活性及び活性の測定法について示している。
【０００７】
また米国特許Ｎｏ．Ｒｅ．３６，４７７は、特に白血病細胞のような腫瘍性細胞を分化する誘起剤として、あるいは乾癬又は免疫性、炎症性の病気の治療薬として作用する安息香酸誘導体を開示している。
【０００８】
米国特許Ｎｏ．５，８４９，７９６は、抗不整脈特性を示し、細胞のＮａ＋／Ｈ＋対向輸送の抑制剤として作用するオルト置換安息香酸誘導体を開示している。さらに、これらの化合物が、医薬品、特に細胞のＮａ＋／Ｈ＋対向輸送の抑制剤のような医薬品の製造の為の中間体として有用であることが示されている。
【０００９】
この背景情報は、出願人が本発明に関連がありそうだと思われる既知の情報を知らせる目的で提供されている。それらの許可を得る意図ではなく、又如何なる上記情報が本発明に対する先行技術を構成するものであると解釈されるべきではない。本明細書内で参照した文献は、それら出典について本出願中に編入されている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、安息香酸誘導体と、その使用方法を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明の一つの観点によれば、式（Ｉ）の化合物、又はその立体異性体、前記化合物の薬学的に可能な塩又は水和物、前記化合物の生理学的に可能で加水分解が可能なエステルが提供される。
【００１２】
【化１２】
2004509167.tif 000005
【００１３】
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている。
【００１４】
本発明の前記化合物は、リューマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病及び喘息など、特にＩＬ−１β放出のようなサイトカイニンの過度な放出に関係する又は伴う病因の病気の治療又は予防に有用である。ＥＰ０６０６０４４Ａの開示については、その出典を本出願に編入している。
【００１５】
本発明はまた、癌及び／又は悪性の病気治療の為の薬剤製造に使用する化合物を提供する。
【００１６】
さらに、本発明は、患者に効果的な量の安息香酸誘導体を投与する工程からなる、癌及び／又は悪性の病気の予防又は治療の方法を提供する。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本実施例で使用される用語及び略語は、特に明示しない限り通常の意味を有するものである。例えば、「℃」は摂氏を表し、「Ｎ」は「規定の」又は規定度を表し、「ｍｍｏｌ」はミリモル又は複数のミリモル、「ｇ」はグラム又は複数のグラム、「Ｍ」はモル又はモル濃度、「ｐ−」はパラ、「ＭＳ」は質量分析、「ＩＲ」は赤外分光、そして「ＮＭＲ」は核磁気共鳴分光を表す。
【００１８】
本発明は、式Ｉの化合物およびその立体異性体、前記化合物の薬学的に可能な塩又は水和物、前記化合物の生理学的に可能で加水分解が可能なエステルを提供する。
【００１９】
【化１３】
2004509167.tif 000006
【００２０】
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている。
【００２１】
ここで使用されるハロゲン又はハロは、特に明示しない限りＦ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉをさし、好ましくはＣｌである。
【００２２】
本発明の一具体例では、式（Ｉ）の化合物は、
Ｒ１＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ２＝Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ４＝Ｈ，メトキシ又はハロゲン；
Ｒ５＝Ｈ，ＯＨ，メトキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；
ＹはＯ；
Ｒ６は
【００２３】
【化１４】
2004509167.tif 000007
【００２４】
ここで、ｍは０−４；
Ｒ７＝Ｈ，メチル，イソプロピルであり、
前記化合物は、遊離した形態もしくは生理学的に可能でかつ加水分解するエステルの形態で提供される。
【００２５】
本発明の別の具体例では、式（Ｉ）の化合物は、
Ｒ１が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ２がＨ；
Ｒ３が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ４が、Ｈ又はハロゲン；
Ｒ５が、−ＯＨ，ＭｅＯ−，ＭｅＣＯＯ−又はメチルであり、
前記化合物は、遊離した形態もしくは生理学的に可能でかつ加水分解するエステルの形態で提供される。
【００２６】
他の本発明の具体例では、式（Ｉ）の化合物は、
Ｒ１が、Ｈ又はＭｅＯ、Ｒ３がＨ，−ＯＨ又はＭｅＯ−、Ｒ４がＨ、Ｒ５がメトキシ又はメチルであり、前記化合物は、遊離した形態もしくは生理学的に可能でかつ加水分解するエステルの形態で提供される。
【００２７】
本発明の化合物は、例えば以下の分子を含むが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
【化１５】
2004509167.tif 000008
【００２９】
他の本発明の具体例では、本発明の化合物は、例えば以下の分子を含むが、これらに限定されるものではない。
【００３０】
【化１６】
2004509167.tif 000009
【００３１】
上記に示したように、本発明は、式Ｉで定義される化合物の薬学的に可能な塩を含む。本発明の化合物は、十分な酸性、塩基性あるいは両性官能基を有することができ、従がって薬学的に可能な塩を形成する為に、多くの有機及び無機塩基、また無機及び有機酸と反応することができる。
【００３２】
本発明は、さらに、式Ｉの化合物の薬学的に可能な溶媒和物も包含する。式Ｉ化合物の多くは、水、メタノール、エタノール及びアセトニトリルのような溶媒と結合でき、対応して水和物、メタノレート、エタノレートおよびアセトニトリレートのような薬学的に可能な溶媒和物を形成する。
【００３３】
本発明の化合物は、非対称（キラル）中心を有してもよい。これらキラル中心を有する結果、本発明の前記化合物は、ジアステレオマーとジアステレオマーの混合物と同様に、ラセミ化合物、鏡像異性体の混合物および個々の鏡像異性体として生じる。全ての非対称形態、（立体特異的合成法によって、あるいは従来の方法による合成混合物の分離法によって製造された）個々の異性体、及びそれらの組み合わせは、本発明の概念の範囲内である。
【００３４】
接頭語「Ｒ」と「Ｓ」は、Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ法に従がって、キラル中心の絶対配置を表す為に、有機化学で通常使用されるように、ここにおいても用いられる。立体化学的な記述Ｒ（ｒｅｃｔｕｓ）は、最も順位の低い基の配置の反対側から見たときに、一番順位の高い基から２番目に順位の低い基への道筋が時計回りの関係にあるキラル中心の配置を表す。立体化学的な記述Ｓ（ｓｉｎｉｓｔｅｒ）は、最も順位の低い基の配置の反対側から見たときに、一番順位の高い基から２番目に順位の低い基への道筋が反時計回りの関係にあるキラル中心の配置を表す。基の順位については、Ｃａｈｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，７８，４１３−４４７，１９６６及びＰｒｅｌｏｇ，Ｖ．ａｎｄ　Ｈｅｌｍｃｈｅｎ，Ｇ．；Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．，２１，５６７−５８３，１９８２にて記述されている配列ルールを用いて決定される。
【００３５】
キラル中心の絶対的な配置を表すために使われるＲ，Ｓ法に加えて、本文書では、特にアミノ酸及びアミノ酸誘導体に関して、相対的な配置を示す為に、古いＤ−Ｌ法もまた用いられる。この方法では、化合物のフィッシャー投影を、主鎖の炭素１が上になるように置く。接頭語「Ｄ」は、異性体の官能（決定）基が、キラル中心に於いて、前記炭素原子の右側にある異性体の相対的配置を表す為に用いられ、接頭語「Ｌ」は、左側にある場合の異性体の相対的配置を表す為に用いられる。
【００３６】
本発明の化合物は、炭素−炭素二重結合を持ち、それゆえｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体を形成することができる。本発明は、前記異性体の混合物及び、個別に単離／精製された異性体の両方ともを想定している。
【００３７】
−ＯＨ置換を有する本発明で使用される安息香酸誘導体は、薬学的に可能で代謝的に適応性のあるエステルの形態で存在してもよく、そのような使用法は本発明の概念の範囲内に含まれる。薬学的に可能なエステルは、好ましくは、例えば加溶媒分解又は生理学的状況下で遊離誘導体に転換可能なｐｒｏｄｒｕｇエステル誘導体である。薬学的に可能な好ましい前記ｐｒｏｄｒｕｇエステル誘導体は、カルボキシル酸、炭酸モノエステル又はカルバミン酸から誘導されたものである。
【００３８】
式Ｉ化合物の製造方法
他の観点によれば、本発明は、式Ｉの化合物、および前記化合物の薬学的に可能で代謝的適応性のあるエステル又はアミド、あるいは前記化合物の薬学的に可能な塩の製造方法を提供し、その製造方法は、以下のａ）からｃ）のいずれかの工程を有する。
【００３９】
ａ）式（Ｉ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物と、塩基及び適当な溶媒の存在下または不在下で反応させる工程を有する。
【００４０】
【化１７】
2004509167.tif 000010
【００４１】
ここで、
Ｒ１は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ２は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ３は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ４は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｘは、ハロゲン；
【００４２】
【化１８】
2004509167.tif 000011
【００４３】
ここで、
ｎ’は１〜９で、
ｍは０〜４、
前記化合物（ＩＩＩ）は場合により、一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている。そのような溶媒としては、例えばジクロロメタン及びクロロホルムなどであるが、これらに限定されるものではない。
【００４４】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物を、有機又は無機酸の酸性ハロゲン化合物と、当業者に知られている適当な溶媒の存在下で反応させることによって製造される。
【００４５】
【化１９】
2004509167.tif 000012
【００４６】
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記に定義したとおりである。
上記酸性ハロゲン化物としては、例えば、塩化チオニル、三塩化リン、三臭化リン、五塩化リン及びオキサリル塩化物などであるが、これらに限定されるものではなく、また上記溶媒は、例えばＤＭＦ及びＴＨＦであるが、これらに限定されるものではない。
【００４７】
ｂ）式（ＩＶ）の化合物を式（ＩＩ）の化合物と、塩酸、硫酸、アリールスルホン酸のような酸の存在下で反応させる工程を有する。この反応は、ベンゼンのような溶媒を用い、共沸蒸留状況下で行うことができる。
【００４８】
あるいは、
ｃ）式（ＩＶ）の化合物のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を、式（Ｖ）の化合物と、極性非プロトン性溶媒の存在下で、又はクラウンエーテル触媒と共に反応させる工程を有する。そのような極性非プロトン性触媒は、例えば、アセトン、ＤＭＦ及びＤＭＳＯであるが、これらに限定されるものではない。
【００４９】
【化２０】
2004509167.tif 000013
【００５０】
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記の定義の通りであり、
【化２１】
2004509167.tif 000014
【００５１】
ここで、Ｘは、Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ又はＩ；
ｎ’は、１−９；
ｍは、０−４；
さらに、式（Ｖ）の前記化合物は場合により、一つ又はそれ以上の二重結合を有していてもよく、また場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている。
【００５２】
式（ＩＶ）の化合物は、市販されているものを入手するか、あるいは当業者に知られている標準的な方法を用いて製造することもできる。例えば、式（ＶＩ）の化合物を加水分解することによって製造される。
【００５３】
【化２２】
2004509167.tif 000015
【００５４】
ここで、
Ｒ１−Ｒ５は上記の定義の通りであり、
Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、アリール又はアリールアルキルである。
【００５５】
式（ＶＩ）の化合物は、塩酸又は硫酸のような酸の存在下で、あるいはアルカリ金属水酸化物のような塩基、例えば水酸化ナトリウムの存在下で、簡便に加水分解される。５０〜２００℃の温度範囲で、水のような水性溶媒の下、
前記加水分解が容易に行われた。式（ＶＩ）の化合物は、市販されているものを入手するか、あるいは当業者に知られている標準的な方法を用いて製造されてもよい。
【００５６】
式（ＩＩＩ）又は式（Ｖ）の前記化合物は、市販されているものを入手するか、あるいは当業者に知られている標準的な方法を用いて製造されてもよい。
【００５７】
安息香酸誘導体の活性
本発明の安息香酸誘導体は、以下に示す一つ又はそれ以上の様々な生化学的特性を示す。癌細胞の成長を抑制する能力；一つ又はそれ以上の抗腫瘍剤あるいは細胞毒性剤に対して、癌細胞の感受性を増加させる又は回復させる能力；ｍＲＮＡ分解を誘起する能力。
【００５８】
本発明の化合物は、それら活性の程度を明らかにする為、当業者によく知られている標準的な技術を用い、分析評価されることができる。試験方法の例を以下に述べるが、それらが本発明の概念を制限するものではない。
【００５９】
−抗癌活性−
以下に述べるように、本発明による安息香酸誘導体は、癌細胞の成長を抑制させることができる。本発明の化合物は、以下に述べるように実際に細胞内又は生体内での分析により、あるいは当業者であれば容易に理解できる条件下及び適切な細胞株を使った様々な分析により、抗がん剤としての前記化合物の活性について試験される。
【００６０】
本発明の化合物は、例えば以下に述べるような方法を含む従来の方法によって、その抗癌活性について分析される。
【００６１】
１．試験管内研究
細胞毒性は、微量培養テトラゾリウム分析（ＭＴＴ）のような付着細胞株の為の標準的な研究方法を用いて測定される。この分析法の詳細は、公表されている（Ａｌｌｅｙ，ＭＣ　ｅｔ　ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　４８：５８９−６０１，１９８８）。ＨＴ−２９結腸癌又はＬＸ−１肺がんのような、指数関数的に成長する腫瘍細胞の培養が、マイクロタイタープレート培養をする為に使われる。細胞は、９６ウェルプレート（１５０μｌの培地）で、１ウェル当たり３０００個の細胞が蒔かれ、３７℃で一晩成長される。１０−４Ｍから１０−１０Ｍまで１０倍ずつ異なる希釈度で、試験化合物が添加される。細胞はそれから７２時間培養される。各ウェル内の生存細胞の数を決定する為に、ＭＴＴ染料が添加される（塩類液中、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物溶液を５０μｌ又は３ｍｇ／ｍｌ溶液）。この混合物は、３７℃で５時間培養され、そしてそれから、各ウェルに、ｐＨ２で２５％ＳＤＳが５０μｌ添加される。一晩培養後、ＥＬＩＳＡ測定器で、５５０ｎｍで各ウェルの吸光度が測定される。式％Ｔ／Ｃ（生存細胞％ｔｒｅａｔｅｄ（処理後）／ｃｏｎｔｒｏｌ（対照））を使い、複製されたウェルのデータから、平均±標準偏差の値が算出される。５０％成長のＴ／Ｃを示す試験化合物の濃度は、ＩＣ５０値として明示される。
【００６２】
本発明の化合物の抗癌活性を評価する他の方法として、癌細胞の生存における試験化合物の効果を測定することも含む。指数関数的に増殖する癌細胞が、様々な濃度の前記試験化合物で治療される。この方法で用いられる細胞株の例としては、ＭＣＦ−７，ＭＤＡ−ＭＢ−２３１，ＨＣＴ１１６，ＫＢ３１，ＨＣＴ−１５，及びＤＵ１４５であり、これらはＡＴＣＣ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡから容易に入手できる。細胞はさらに２４時間、４８時間、９６時間培養され、Ｔ．Ｉｄｚｉｏｒｅｋら、Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｍｅｔｈ　１８５，２４９（１９９５）に記述されているＹＯＰＲＯ−１のような、生存細胞と非生存細胞とを識別する分子で染色される。生存率が、それから対照細胞と比較される。対照細胞との比較に於ける、治療処理された細胞の生存減少（図１で、生存減少率％の増加によって示される）は、抗癌活性を意味する。
【００６３】
本発明の化合物の抗癌活性を評価する別の方法として、細胞サイクル進行における前記化合物の効果をモニターする方法もある。指数関数的に成長する癌細胞が、様々な濃度の試験化合物によって治療処理される。細胞はさらに２４時間、４８時間及び９６時間培養された。細胞はそれから溶解され、Ｔ．Ｉｄｚｉｏｒｅｋら、Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｍｅｔｈ　１８５，２４９（１９９５）に記述されているＹＯＰＲＯ−１で、ｄｓＤＮＡが染色される。Ｖ．Ｌ．Ｓｉｎｇｅｒら，Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　２４９，２２８（１９９７）に記述されているように、蛍光測定が基本的に実施され、対照細胞とその値が比較される。未処理細胞との比較に於ける、処理済細胞の相対的な成長減少は、抗癌活性を示唆する（図２参照）。
【００６４】
癌細胞の成長における本発明の化合物の抑制効果を評価する方法の例として、細胞が、前記試験化合物で治療処理され、そして遺伝子発現レベルが未処理の細胞と比較して測定される。例えば、人間の乳がん細胞、ＭＣＦ−７が、０．１ｍＭの非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ−グルタミン及び１０％ＦＢＳｅを含むＭＥＭで、５％ＣＯ２、３７℃で培養される。Ｑｉａｇｅｎ　ＲＮｅａｓｙ　ＭｉｄｉＴＭキットを用い、製品説明書に従がって、総ＲＮＡが細胞から約５０％併合されて分離される。総ＲＮＡは、評価される安息香酸誘導体の存在下及び非存在下の両方で様々なタイミングで採取される。ｈＡＰＯ−２ｃ及びカスタムヒューマン（ｂｃｌｘ　Ｌ／Ｓ，ｐ５３，ＧＡＤＤ４５，ｃ−ｆｏｓ，ｂａｘ，ｂｃｌ−２，ｃ−ｍｙｃ，Ｌ３２及びＧＡＰＤＨ）テンプレート、Ｔ７ＲＮＡ　ポリメラーゼ及び［α−３２Ｐ］ＵＴＰを利用したＰｈａｒｍｉｎｇｅｎのＲｉｂｏＱｕａｎｔＴＭ　Ｍｕｌｔｉ−Ｐｒｏｂｅ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍを用いて（製品説明書に従がって）、ＲＮａｓｅプロテクション分析が行われる。発現レベルの定量が、Ｓｔｏｒｍ８６０ＴＭ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　Ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒを用い、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔＴＭソフトウェアで行われる。未処理細胞との比較に於ける、処理済み細胞での、例えばｂｃｌ−２のような腫瘍遺伝子の発現減少は、抗癌活性を示唆する。
【００６５】
２．生体内研究
本発明の化合物は、さらに、臨床学的利用性を示す生体内活性を調べる前臨床分析についても試験される。そのような分析は、この分野ではよく知られているように、好ましくは人間由来の腫瘍細胞が移植された（異種移植された）ヌードマウスを用いて行われる。異種移植されたマウスへの投与に伴う、試験化合物の抗腫瘍効果が評価される。
【００６６】
例えば、約５０ｍｇの大きさの腫瘍断片を使って、無胸腺ヌードマウスで成長された人間乳がん（ＭＸ−１）が新しい受領マウスに移植される。移植の日を０日目とする。６日から１０日後、１回に５−１０匹からなるマウスのグループ群に、静脈注射又は経口的に与えられる試験化合物で、マウスが治療処理される。化合物は、一日おき３週間投与される。
【００６７】
１週間に２回、腫瘍の直径と体重が測定される。腫瘍体積は、Ｖｅｒｎｉｅｒカリパスで測定された直径と、次式を用いて算出された。
【００６８】
（長さ×幅２）÷２＝腫瘍体積ｍｍ３
【００６９】
平均腫瘍体積が各処理グループ毎に算出され、未処理対照腫瘍に対する、各グループのＴ／Ｃ値が決定される。
【００７０】
薬物感受性の増加または回復
本発明によるある安息香酸誘導体は、一つもしくはそれ以上の抗腫瘍性／細胞毒性薬剤に対する、癌細胞の感受性を増加あるいは回復させることができる。試験管内における抗腫瘍性／細胞毒性薬剤物質に対する、癌細胞の感受性を回復させる候補化合物の性能を評価する為の、細胞に基づく適した分析法は以下のようなものがある。例えば人間の肺がんの小さな細胞からの癌細胞株（Ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ：ＣＣＬ）の、ダウノルビジン（ＤＲ）、ビンクリスチン（ＶＣ）、アドリアマイシン（ＡＭ）、エトポシド（ＥＴ）、テノポシド（ＴＥ）、コルヒチン（ＣＣ）及びタクソールからなる群から選択される一つあるいはそれ以上の癌治療薬物質（ＣＴＤＳ）に対する抵抗性が、Ｔｗｅｎｔｙｍａｎら，
Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５４，２５３（１９８６）に記述されている方法によって明らかにされている。
【００７１】
抵抗性副株（ＣＣＬ−Ｒ）の感受性は、ＣＴＤＳの連続投与の間の細胞成長の抑制を分析する事により、親感受性株（ＣＣＬ−Ｓ）と比較され、例えば、ＤＲ抵抗性株（ＣＣＬ−ＤＲＲ）の場合、成長培地に最初から含まれているＤＲの存在下で、ＣＣＬ−ＤＲＳ株とＣＣＬ−ＤＲＲ株の成長を比較することによって、分析される。この目的のため、電子細胞カウンターを用い、指数関数的に成長する段階の終了時に達する付近までカウントすることにより、細胞の分裂増殖が測定される。ＩＣ８０（非ＣＴＤＳ（例えばＤＲ）で治療処理された対照群の場合の２０％まで最終細胞数を減少させる為に必要とされる薬物（例えばＤＲ）濃度）が、親ＣＣＬ−Ｓ株の場合よりも８０倍以上、好ましくは１００倍以上大きいＣＣＬ−Ｒ株が選択される。
【００７２】
次に、安息香酸誘導体の存在下あるいは非存在下で、ＣＴＤＳ（例えばＤＲ）に対する選択されたＣＣＬ−Ｒ株の感受性が、上記に述べた分裂増殖測定のような細胞カウント法を用いて、分析される。この目的の為、様々な濃度のＣＴＤＳと試験安息香酸誘導体の両方が最初から存在する下で、細胞が培養される。スクリーニングの為、分裂増殖において大きな減少を引き起こさない濃度の内の後半の濃度が選択される。適切な濃度は、ＣＴＤＳは存在せず様々な濃度の安息香酸誘導体が存在する下で、ＣＣＬ−ＳとＣＣＬ−Ｒを培養することによって、決定される。安息香酸誘導体は、いつもの手順で、０．０１から５０μｇ／ｍｌの濃度で、特に０．１から１０．０μｇ／ｍｌで詳しく試験され、例えば、０．０１，０．０２，０．０５，０．１，０．２，０．５，１．０，２．０，５．０，１０．０及び５０μｇ／ｍｌの濃度で試験された。試験安息香酸誘導体の存在下で得られた場合（ＩＣ５０＋ＣＳ）と比較して、試験安息香酸誘導体の非存在下での場合（ＩＣ５０−ＣＳ）の５０％まで分裂増殖を抑制するために必要とされたＣＴＤＳ（例えばＤＲ）の割合が、安息香酸誘導体によって誘起されたＣＴＤＳに対するＣＣＬ−Ｒの増加感受性の基準とみなされる。使用されるＣＣＬ−Ｒの安定性は、前もって確立されている方法で、ＣＴＤＳに対するその感受性を交差チェックする事により保証される。
【００７３】
抗腫瘍性／細胞毒性の薬剤物質に対する、癌細胞の感受性の回復に於ける実用性を評価するための、生体内の方法を含む更なる方法については、本出願に参考文献として編入されている関連のある開示、ＥＰ０２９６１２２Ｂに記述されている。
【００７４】
ｍＲＮＡ分解の誘起
ＲＮＡの半減期の調整が遺伝子発現の正確な制御において重要な役割を果たしており、ｍＲＮＡ分解が高度に制御されたプロセスであることが、近年ますます明らかにされている。ＲＮＡ不安定性が、転写レートの変化に応じて、ｍＲＮＡ転写レベルを上下に急速に調節する働きをする。例えばｃ−ｍｙｃのような転写因子またはサイトカイニンのような宿主免疫応答に関与する遺伝子生成物など、多くの重大な細胞因子が、正常な機能を果たす為に、ほんの一時的に存在するためだけに必要とされる。これら因子のために暗号化するｍＲＮＡの一時的な安定化は、必要なときに所望の細胞因子を表現する為、これら伝達情報の蓄積と翻訳を可能にするが、一方、非安定下の正常な状態では、これらｍＲＮＡの急速な転換レートは、細胞因子の発現を効果的に制限し、又「スイッチオフ」する。しかし、ｍＲＮＡ安定化の制御異常は、例えば腫瘍因子あるいは不適切で組織を損傷させる炎症性の応答などの、好ましくない細胞変換を導く望まない細胞因子を作る。
【００７５】
ｍＲＮＡ安定性を制御するメカニズムについて解明されるにはまだ程遠い段階にあるが、シークエンス領域は、数多くのｍＲＮＡで決定されており、シークエンス領域を含むｍＲＮＡに不安定性を与えるようである。これらシークエンス領域は、ここでは「ｍＲＮＡ不安定シークエンス」として表記される。例えば、典型的なｍＲＮＡ不安定シークエンスは、ＡＲＥｓ（ＡＵ　ｒｉｃｈ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ：アデニンとウリジンの多い領域）であり、ＡＲＥｓは、例えばＩＬ−１βやＴＮＦαのような炎症性サイトカイニンをコード化する遺伝子や、前初期遺伝子を数多く含むある遺伝子の３’ＵＴＲ（ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ：非翻訳領域）に見られる。
【００７６】
ｍＲＮＡ不安定シークエンスは、ＵＴＲｓで決定されており、特に、サイトカイニン、ケモカイニン、核転写因子、前腫瘍遺伝子、前初期遺伝子、細胞サイクル調節遺伝子、アポトーシスに関与し調節する遺伝子、オキシゲナーゼなどの遺伝子を含み一時的に発現する数多くの遺伝子の３’ＵＴＲｓで決定されている。ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含む自然なＲＮＡシークエンスは、アデニレート／ウリジレート（ＡＵ）の多い領域、あるいはＡＲＥｓと表記される。ｍＲＮＡ不安定シークエンスを有する一時的に発現する遺伝子は、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ，ｃ−ｆｏｓ，ｃ−ｍｙｃ，ｃ−ｊｕｎ，ｋｒｏｘ−２０，ｎｕｒ−７７，ｚｉｆ２６８，ＩＮＦ−β，ｕＰＡ，ＩＬ−１，ＩＬ−３，ＴＮＦ−α，ＭＣＰ１，ｓｙｎ１，β２−ＡＲ，Ｅ−セレクチン，ＶＣＡＭ−１，ＩＣＡＭ−１，Ｐ−グリコプロテイン（ＭＤＲ），ＭＲＰｓ，Ｐγｈ１（ｐｆｍｄｒ），ＣＯＸＩＩ，メタロプロテナーゼ（ＭＭＰｓ），ｂｃｌ−２及びＭＩＰ−２αをコード化する遺伝子を含む。
【００７７】
以下の刊行物は、ｍＲＮＡ不安定シークエンス及びＡＲＥｓの広範囲にわたる討議、それらが含むシークエンスモチーフ、及び数多くのｍＲＮＡ不安定シークエンス及びそれらを含む遺伝子の位置決定と同様に、ｍＲＮＡ不安定化の為の（最低限の）シークエンス必要条件について記載されている。
Ｓｈａｗ＆Ｋａｍｅｎ，Ｃｅｌｌ．Ｖｏｌ．４６，６５９−６６７，Ａｕｇ．２９　１９８６（ＧＭ−ＣＳＦ）；
Ｓｈｙｕ　ｅｔ　ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，５：２２１−２３１（１９９１）（ｃ−ｆｏｓ）；
Ｓａｃｈｓ，Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．７４，４１３−４２１，Ａｕｇ．１３　１９９３（Ｒｅｖｉｅｗ．”Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　Ｄｅｇｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ”）；
Ｃｈｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｊａｎ．１９９４，ｐ４１６−４２６（ｃ−ｆｏｓ）；
Ａｋａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．８３，Ｎｏ．１１，（Ｊｕｎｅ１），１９９４：ｐｐ３１８２−３１８７（ＧＭ−ＣＳＦ　ｅｔｃ．）；
Ｎａｎｂｕ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｊｕｌｙ　１９９４，ｐ．４９２０−４９２０（Ｕｐａ）；
Ｓｔｏｅｃｋｌｉｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２６９，Ｎｏ．４６，Ｎｏｖ．１８　１９９４，ｐｐ２８５９１−２８５９７（ＩＬ−３）；
Ｌａｇｎａｄｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｄｅｃ．１９９４，ｐ．７９８４−７９９５（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｚｈａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ａｐｒ．１９９５，ｐ．２２３１−２２４４（ｙｅａｓｔ）；
Ｚｕｂｉａｇａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ａｐｒ．１９９５，ｐ．２２１９−２２３０（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｗｉｎｓｔａｌｌ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｊｕｌｙ　１９９５，ｐ．３７９６−３８０４（ｃ−ｆｏｓ，ＧＭ−ＣＳＦ）；
Ｃｈｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｏｃｔ．１９９５，ｐ．５７７７−５７８８（ｃ−ｆｏｓ，ＧＭ−ＣＳＦ）；
Ｃｈｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，ＴＩＢＳ　２０　Ｎｏｖ．１９９５，４６５−４７０（ｒｅｖｉｅｗ）；
Ｌｅｖｙ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７１，Ｎｏ．，Ｆｅｂ．２　１９９６，ｐｐ２７４６−２７５３（ＶＥＧＦ）；
Ｋａｓｔｅｌｉｃ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．１０（Ｏｃｔ．），１９９６：ｐｐ７５１−７６１；
Ｃｒａｗｆｏｒｄ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７２，Ｎｏ．３４，Ａｕｇ．１９９７，ｐｐ．２１１２０−２１１２７（ＴＮＦ−α）；
Ｘｕ　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ａｕｇ．１９９７，Ｖｏｌ．１８，Ｎｏ．８，ｐ．４６１１−４６２１（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｄａｎｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７３，Ｎｏ．６，Ｆｅｂ．６　１９８８，ｐｐ．３２３−３２２９（ｈｕｍａｎ　β２−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）；
Ｌｅｗｉｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７３，Ｎｏ．２２，Ｍａｙ２９　１９８８，ｐｐ．１３７８１−１３７８６（ＴＮＦ−α）
【００７８】
上記刊行物に記載されているように、しばしばｍＲＮＡ不安定シークエンスは、例えばＡＵＵＵＡ，ＵＡＵＵＵＡＵ，ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ），及びＡＵＵＵＡＵＵＵＡから選択される一つあるいはそれ以上のシークエンスモチーフの複製を含んでいる。そのようなシークエンスモチーフは、慨して、停止コドンとポリＡシグナルの間の遺伝子にあり、それは適切な隣接するシークエンスと関係しているかもしれないし、また例えば５’ＵＴＲに存在し、例えばコード化する領域に存在する不安定性モチーフ共に、他のシークエンスとの組み合わせで相互作用しているかもしれない。
【００７９】
ここに説明されるように、本発明の安息香酸誘導体は、ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含むｍＲＮＡの分解の誘導物質として作用することができる。ｍＲＮＡ分解の誘導物質として本発明で使用する化合物の活性については、例えば、ここに記述されるようなリポーター遺伝子分析法の手段によって、あるいは、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＣＡ９９／０１２３５により詳細が記載されているような方法によって、当業者にはよく知られている分析を用いて証明される。
【００８０】
ｍＲＮＡ分解を誘起する本発明の化合物の性能を決定する一つの方法は、次のｉ）とｉｉ）の二つの工程を有し、ｉ）本化合物の非存在下でも検出可能なシグナルを有するタンパク質を発現できるＤＮＡ発現システムと、本化合物を反応させる工程（但しここで前記ｍＲＮＡは、前記タンパク質をコード化し、又ｍＲＮＡ不安定シークエンスの少なくとも一つの複製を含む発現システムから転写されるものである。）と、ｉｉ）試験化合物の存在下で検出可能なシグナルを測定し、対照で得られた結果と比較する工程からなる。ｍＲＮＡ分解を誘起する複数の化合物を比較する為に、ある関連する方法を使用することもできる。この方法は、本化合物の非存在下でも検出可能なシグナルを有するタンパク質を発現できるＤＮＡ発現システムと、複数の化合物を別々に反応させる工程（但しここで前記ｍＲＮＡは、前記タンパク質をコード化し、又ｍＲＮＡ不安定シークエンスの少なくとも一つの複製を含む発現システムから転写されるものである）と、各試験化合物の存在下で検出可能なシグナルを測定し、得られたシグナルを比較する工程からなる。上記に記載された典型的な方法で使用されるＤＮＡ発現システムは、検出可能なシグナルを有するタンパク質の発現をコード化する遺伝子（但し、この遺伝子は、プロモーター及び／又はエンハーサー領域を含む適切な発現制御領域からなる５’及び３’ＵＴＲシークエンスと一緒にタンパク質のアミノ酸シークエンスをコード化するＤＮＡを含んでいる）と、ｍＲＮＡ不安定シークエンスの少なくとも一つの複製に対応している特徴的なＤＮＡを有する。上記方法で使用することのできる模範的なＤＮＡ発現システムは、好都合なことに適切に変換された細胞株の形態で、任意に安定的に変換された細胞株の形態での、細胞ベースの発現システムである。宿主細胞は、一般的には真核宿主細胞、特に哺乳類の宿主細胞のような動物の宿主細胞である。
【００８１】
宿主細胞は、不安定化が望まれるｍＲＮＡによってコード化されるタンパク質を発現する細胞と同じような一般的な細胞タイプであってもいい。従って、例えば、もしその分析が、サイトカイニンをコード化するｍＲＮＡを不安定化する性能を示す為の、本発明の化合物の評価に用いるものであるならば、使用される宿主細胞は、好ましくは、当のサイトカイニンを通常産出する細胞と同一もしくは同様の細胞タイプである細胞もしくは細胞株がよい。例えば、単核細胞又は単核細胞のような細胞株が、例えばＩＬ−１、ｓｓ、ｍＲＮＡのようなサイトカイニンを不安定化する化合物を分析する為の宿主細胞として使用されることができる。腫瘍遺伝子やｍＲＮＡ不安定分析に関係する他の癌遺伝子の為の好ましい細胞株は、例えば、結腸２０５、ＫＢ３１、ＫＢ８５１１、ＤＵ１４５、ＨＣＴ１１６、ＭＣ７、ＭＣＦ７／ＡＤＲ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５及びＭＤＡ−ＭＢ−４３５／ＴＯである。
【００８２】
検出可能な信号を有するタンパク質の発現をコード化する遺伝子は、それ自身が検出可能なシグナルを含むタンパク質をコード化するかもしれない。例えば、前記タンパク質は、蛍光緑タンパク質のような蛍光性タンパク質から構成される。
【００８３】
あるいは、前記タンパク質は、適切な基質又は検出可能なシグナルを与える他の基質と反応できるようなものである。好都合な事に、ｍＲＮＡによってコード化されるタンパク質は、エンザイム又はエンザイムの酵素活性断片である。適しているエンザイムの例は、西洋わさびペルオキシダ−ゼ（ＨＲＰ）、クロラムフェニコール　アセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、分泌性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）、β−ガラクトシダ−ゼ又はルシフェラーゼなどである。そのようなエンザイムを検出し定量する方法は、適した基質と計量法を用いるよく知られている方法である。適した検出可能なタンパク質及び測定手順として、ここに説明される方法が使えることが理解されるであろう。
【００８４】
ｍＲＮＡ分解を誘起する試験分子の性能を測定する他の方法は、当業者によく知られ、本発明の安息香酸誘導体の活性を測定する為にも使用することができる。
【００８５】
抗炎症性活性
ここに説明されるように、本発明の幾つかの安息香酸誘導体は抗炎症性活性を示し、例えば、サイトカイニン放出を抑制する特性、又はサイトカイニン活性の拮抗質として作用する特性によるものである。
【００８６】
１．試験管内研究
サイトカイニン放出を抑制する本発明の安息香酸誘導体の性能を測定する一つの典型的な方法は、試験化合物の存在下又は非存在下のいずれかでサイトカイニンを放出している細胞からのサイトカイニン放出をモニターすることによって実行される。当業者であれば他の刺激剤も本分析に使用できることは容易に理解されることであるが、リポ多糖類（ＬＰＳ）は、サイトカイニン放出を誘起するために使用できる刺激剤の一種である。試験化合物の存在下及び非存在下で、刺激剤による細胞の培養処理の後、適当な期間培養し、培地と細胞溶解産物が回収される。次に、各サンプルに存在するサイトカイニン（例えば、ＩＬ−１β（培地と溶解産物）、ＩＬ−６（培地）、ＴＮＦ−α（培地）及びＰＧＥ２（培地と溶解産物））の量を決定する為に、分離された培地と溶解産物を用いた分析が実施される。また前記化合物が細胞に対して無毒性であることを確認する為に、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性（培地と溶解産物）、及びＤＮＡ（溶解産物）についても分析される。ＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α分析は、市販されているＥＬＩＳＡキット（Ｃｉｓｔｒｏｎ）を用いて行われ、ＰＧＥ２は標準放射性免疫分析と、ＤＡＰＩ（４’，６’−ジアミジノ−２−フェニルインドール・２ＨＣＬ）を用いたＤＮＡ蛍光分析によって測定される。ただし、多くの分析法が当業者によく知られているように、この試験がサイトカイニン、ＬＤＨ放出、ＤＮＡを定量する為に使用される前記分析法に制限されるものではなく、またここに列挙した分析法が本発明の概念を制限するものではないことはいうまでもない。未処理細胞の培地と比較して、処理済細胞の培地におけるサイトカイニン量の減少は、サイトカイニン放出を抑制する本試験化合物の性能を示すものである。さらに、未処理細胞に対して処理済細胞においてもＬＤＨ放出に変化がないのであれば、前記化合物は無毒性であると考えられる。
【００８７】
サイトカイニン放出を抑制する本発明の安息香酸誘導体の性能を測定する他の典型的な方法は、試験化合物の存在下と非存在下での培養で刺激された細胞からのサイトカイニン放出を比較することによって実行される。そのような方法例では、単核細胞が得られ、様々な濃度の本試験化合物と共に組織培養皿で培養される［Ｓｃｈｎｙｄｅｒら、Ａｇｅｎｔｓ　＆　Ａｃｔｉｏｎｓ、３０、３５０−３６２（１９９０）］。４時間後、数回の洗浄により非接着リンパ球が取り去られる。新しい培地、試験化合物および例えばリポ多糖（ＬＰＳ）のような刺激剤が添加され、単核細胞がさらに一日培養される。
【００８８】
精製されたＩＬ−１、組換えヒトＩＬ−１−β（ｒｈＩＬ−１）、又は刺激されたヒト単核細胞、マウスマクロファージ、マウス細胞株Ｐ３８８Ｄ１から採取されたならし培地は、軟骨細胞の分泌パターンに特有な変化を引き起こす。特に、潜伏性金属プロテイナーゼが誘起され、一方プラスミノーゲン活性化因子の分泌は減少する。金属プロテイナーゼ又はストロメリシンの特性については、［Ｃｈｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０，１２３６７−１２３７６（１９８５）］に、プラスミノーゲンの活性化因子の特性については、［Ｓｃｈｎｙｄｅｒら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００，１５６−１６２（１９９２）］に、詳細が説明されている。この分析を実行するにあたり、貯められた培地が新しい培地で１：１０に希釈され、融合性ウサギ軟骨細胞に添加された。軟骨細胞培地の金属プロテイナーゼ活性が、２日後、当業者によく知られている標準的な方法を用いて分析される。金属プロテイナーゼ活性を測定する方法の一例は、本明細書の実施例６に示されている。サイトカイニン放出を減少させる特性を有する化合物は、未処理細胞の培地で貯められた軟骨細胞に較べて、処理済細胞の培地で貯められた軟骨細胞における金属プロテイナーゼ活性の誘起を減少させるであろう。
【００８９】
本発明の安息香酸誘導体の拮抗効果を測定する為、サイトカイニンに反応することが知られている培養細胞にサイトカイニンが添加され、本試験化合物の存在下及び非存在下でその反応がモニターされる。本明細書の実施例７に、軟骨細胞を用いたそのような試験の一例を示す。ここに説明されているように、軟骨細胞は、金属プロテイナーゼ活性に於ける増加によってＩＬ−１に反応するであろう。
試験化合物の非存在下での活性に較べて、試験化合物の存在下で金属プロテイナーゼ活性が減少するのであれば、試験化合物が拮抗効果を有することを示す。
【００９０】
２．生体内研究
炎症性反応の認識されている動物モデルの一つは、ラットにおけるＬＰＳに誘起される熱である。ラットにＬＰＳ懸濁液が注射される。注射後ある一定の時間後にラットの体温が測定され、次の一定時間後に試験化合物が投与される。３回目の一定時間後に再び体温が測定される。未処理対照群による体温上昇を１００％とし、処理済み群の体温上昇をこの値の％で表す。ＥＤ５０は、対照ラットを基に決定される５０％の体温上昇抑制を引き起こす服用量である。本発明の化合物は、この分析で、大体０．１〜１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を有する。
【００９１】
認識されている炎症性の動物性モデルに、カラゲナンに誘起されるラットの手足の浮腫がある。カラゲナン注射の１時間前にラットに試験化合物が投与される。カラゲナンは後ろ足１本の足底下に投与される。足の腫脹が測定される。対照の記録は注射後すぐになされ、腫脹が３時間後と５時間後に測定される。対照の数値を差し引いた後、３時間後と５時間後の平均値が算出され、治療された動物から得られた値が、未治療対照から得られた値の％で表記される。ＥＤ５０は、カラゲナンに誘起される腫脹の３時間後の５０％抑制を引き起こす服用量である。本発明の化合物は、この分析で、大体０．５〜１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を有する。
【００９２】
ここに述べられた試験方法が、本発明の化合物の活性を測定する為に使用できる標準的な試験の例であることは、当業者には容易に理解されるはずである。抗癌または抗腫瘍活性、薬剤感受性を増加させる又は回復する性能、ｍＲＮＡ分解を誘起する性能および抗炎症活性を測定する様々な試験方法がよく知られており、本発明の安息香酸誘導体の特性を示す為に使用することができる。
【００９３】
安息香酸誘導体の使用法
本発明の一実施例では、癌のような異常な細胞分裂増殖に関係する病状を有する患者の治療に、安息香酸誘導体が使用される。前記病状には、筋肉、骨又は連結組織、皮膚、脳、肺、生殖器、リンパ又は腎臓系、乳房又は血液細胞、肝臓、消化器官、すい臓及び甲状腺又は副腎腺などを制限なく含む様々な組織及び／又は器官の悪性細胞の異常な細胞分裂増殖が含まれる。これらの病状はまた、固体腫瘍、卵巣がん、乳がん、脳腫瘍、前立腺がん、結腸がん、胃がん、腎臓がん又は睾丸腫瘍、カポジ肉腫、胆管腫、絨毛腫、神経芽腫、ウィルムズ腫瘍、ホジキン病、メラノーマ、多発性骨髄腫、リンパ性白血病、及び急性・慢性顆粒球リンパ腫などの癌を含む。
【００９４】
本発明の他の実施例では、安息香酸誘導体がサイトカイニンの放出を抑制する為に、及び／あるいはサイトカイニンの機能性拮抗質として使用される。ある実施例では、安息香酸誘導体がＩＬ−１，ＩＬ−６，ＴＮＦ−αの放出を抑制する為に、および／あるいはＩＬ−１の機能性拮抗質として使用される。
【００９５】
関連する本発明の実施例は、例えば様々な炎症及びリューマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病及び喘息のような病気における、特にＩＬ−１β放出のようなサイトカイニンの過度な放出に関係する又はそれを伴う病因の病気の治療での安息香酸誘導体の使用を含む。
【００９６】
他の実施例では、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定シークエンスを含み、一般的に延長されるか又は不適切な発現において、例えばがん細胞成長又は好ましくない炎症性反応のような望まない作用を引き起こすｍＲＮＡの安定性を増加させるか延長することに関係する病因を一般的に有する病気及び病状の予防又は治療に、本発明の化合物が使用される。
【００９７】
上記に言及した、あるいは列挙した刊行物で説明されたｍＲＮＡ不安定シークエンスを含む幾つかの遺伝子に関連する病気及び病状との関係で、本発明の化合物が使用される。
【００９８】
本発明の使用により治療される又は防がれる病気及び病状の例には、ニューロン炎症、アルツハイマー病、心臓血管病は勿論、がん（例えば結腸、乳房、肺など）、急性及び慢性炎症、自己免疫病、呼吸性疾患、感染症および移植拒絶が含まれる。
【００９９】
関連する実施例に於いて、例えば、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定シークエンスを含み、一般的に延長されるか又は不適切な発現において、例えばがん細胞成長又は好ましくない炎症性反応のような望まない作用を引き起こすｍＲＮＡの安定性を増加させるか延長することに関係する病因を一般的に有する病気及び病状の予防又は治療に使われる薬剤としての利用に、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定シークエンスを含むｍＲＮＡの分解を誘起する本発明の化合物が用意される。
【０１００】
ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含むｍＲＮＡ分解の誘導物質としての活性という観点で、本発明の化合物は、ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含み、ガン又は悪性疾患の開始、進行、存続に関係するタンパク質をコード化する、ｍＲＮＡの不適切な増強及び発現に伴うガン及び悪性疾患の予防と治療に有用である。ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含むｍＲＮＡを伴うガン関連遺伝子の例には、例えばｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｆｏｓ、Ｓｐｌ、ｂｃｌ−２及び同様の遺伝子などの様々な腫瘍遺伝子と転写因子が含まれる。そのような腫瘍遺伝子の不適切で延長された発現は、結腸がん、乳がん、肺がん等のようなある形態のがんの開始に関係している。ｍＲＮＡ不安定シークエンスを含むｍＲＮＡを伴うがん関連遺伝子のさらなる例としては、例えばＮＮＰ−１、ＭＭＰ−２、コラゲナーゼなどのような、腫瘍の成長、転移、浸潤に必要な組織再編に関係する金属プロテイナーゼエンザイムの遺伝子、ｐ４５／ＳＫＩＰ２等のような細胞サイクル関連遺伝子、及び幾つかのがん細胞の内在性又は獲得された多剤耐性に関係している例えばｍｄｒ−１、ＭＲＰｓ等のような多剤耐性遺伝子である。
【０１０１】
本発明の化合物による治療は、結果として遺伝子発現の下方調節、スイッチオフとなる、前記のような遺伝子のｍＲＮＡの分解へと有利に導く。従って、例えば、一般的な腫瘍の成長、転移、浸潤を治療又は予防する為に、および多剤耐性を妨げる又はなくし、それによって従来の細胞毒、抗ガン剤を使ったガン及び腫瘍の治療を促進するために、本発明の化合物を腫瘍遺伝子介在のガン及び悪性疾患の治療及び予防に使うことができる。
【０１０２】
特質上、前記安息香酸誘導体が腫瘍及び他の悪性細胞の多剤耐性を妨げる、あるいはなくす為に使用される場合には、それらは細胞増殖抑制剤又は細胞毒剤と組み合わせて使用される。
【０１０３】
本発明による安息香酸誘導体は、単独であるいは他の薬学的効力のある化合物と共に使用することができ、例えば、ポリアミン合成のエンザイム抑制剤、タンパク質キナーゼＣの抑制剤、他のチロシンキナーゼの抑制剤、サイトカイニン、例えばＴＧＦ−βやＩＦＮ−βのような非成長調節剤、アロマターゼ抑制剤、抗エストロゲン及び／又は細胞増殖抑制剤と共に使用される。
【０１０４】
安息香酸誘導体から成る組成物
本発明の一具体例では、一つあるいはそれ以上の式Ｉの安息香酸誘導体と、一つあるいはそれ以上の無毒性で薬学的に可能な担体、及び／又は希釈剤、及び／又は補助剤、及び要望があれば他の活性成分とから成る組成物が用意される。上記に示したように、そのような組成物は、人間を含む哺乳動物における様々な病状の治療に使用される。
【０１０５】
本発明の化合物は、従来の方法によって投与され、特に鼻に、又は腸内に、好ましくは例えば錠剤やカプセルの形態で経口的に、あるいは例えば注射可能な溶液や懸濁液の形態で又は座薬の形態で非経口で投与される。一回の服用量は、例えば約２ｍｇから１ｇの本発明の化合物を含む。本発明はまた、薬学的に可能な希釈剤又は担体と結合している適量の本化合物を含む薬学的組成物を提供する。そのような組成物は、従来の方法で製造される。
【０１０６】
特に上記に示した病気の治療に使用され、活性成分としての本発明の化合物から成る適した薬学的組成物は、温血動物、特に人間に対して、鼻、頬、直腸又は特に口を経て腸内へ投与、及び静脈内、筋内又は皮下のような非経口での投与に適した組成物を含む。本組成物は、前記活性成分単独、あるいは好ましくは薬学的に可能な担体を共に含む。前記活性成分の服用量は、治療される病気、種、年齢、体重及び個々の病状、個々の薬物速度状況、及び投与方法に依存する。上記状況を考慮して、当業者であれば標準的な方法を用いて、服用量を容易に決定することができる。
【０１０７】
前記薬学的組成物は、約１％から９５％の活性成分を含み、１回の服用での投与形態では約２０％から９０％の活性成分を含み、１回の服用ではない投与形態では約５％から２０％の活性成分を含むことが好ましい。服用形態は、例えば、糖衣剤、錠剤、アンプル、バイアル、座薬又はカプセルなどである。他の投与形態としては、例えば軟膏、クリーム、ペースト、泡状、チンキ剤、口紅、ドロップ、スプレー、分散剤などがある。例として、活性成分を約０．０５ｇから約１．０ｇ含むカプセルがある。前記薬学的組成物は、それ自体知られている方法、例えば従来の混合、粒状、糖剤製造、溶解又は凍結乾燥の手段によって製造される。
【０１０８】
活性成分の溶液、及びその懸濁液又は分散剤、特に等浸透圧の水溶液、分散剤又は懸濁液が好ましく使用され、例えば、使用前に調製されるそのような溶液、懸濁液、分散剤の為の、活性成分単独又は例えばマンニトールのような担体を共に含む凍結乾燥された組成物の場合も可能である。
【０１０９】
前記薬学的組成物は殺菌消毒されることもでき、及び／又は次のような賦形剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、及び又は乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する為の塩及び又は緩衝剤を含んでもよく、それ自体知られている方法、例えば従来の溶解又は凍結乾燥の手段によって製造される。前記溶液又は懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストラン、ポリビニルピロリドン、又はゼラチンのような粘性増加物質を含んでいてもよい。
【０１１０】
オイル中懸濁液は、オイル成分として、注射目的に通例の植物オイル、合成オイル又は半合成オイルを含む。そのような例としては特に、酸性成分として炭素原子が８から２２個、特に１２から２２個の長鎖脂肪酸、例えばラウリン酸、トリデシリン酸、ミリスチン酸、ペンタデシリン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、又は相当する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸、又はリノレン酸を含む液体脂肪酸エステルが挙げられ、要望があればビタミンＥ、β−カロチン又は３，５−ジ−第３ブチル−４−ヒドロキシトルエンのような抗酸化剤が加えられていてもよい。それら脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を持つ一価又は多価アルコールで、例えば一価、二価、三価アルコールで、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール又はペンタノール、又はその異性体、特にグリコールとグリセロールである。従がって、次のような脂肪酸エステルの例が挙げられる：エチルオレイン酸塩、イソプロピルミリスチン酸塩、イソプロピルパルミチン酸塩、”Ｌａｂｒａｆｉｌ　Ｍ　２３７５”（ポリオキシエチレングリセロールトリオレイン酸塩、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ、パリ）、” Ｌａｂｒａｆｉｌ　Ｍ　１９４４ＣＳ”（アプリコット種子オイルのアルコーリシスによって製造された不飽和ポリグリコールグリセリドで、グリセリドとポリエチレングリコールエステルを含む；Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ、フランス）、”Ｌａｂｒａｓｏｌ”（ＴＣＭのアルコリーシスによって製造された飽和ポリグリコールグリセリドで、グリセリドとポリエチレングリコールエステルを含む；Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ、フランス）及び／又は”Ｍｉｇｌｙｏｌ　８１２”（Ｃ８からＣ１２の炭素鎖を持つ飽和脂肪酸のトリグリセリド、Ｈｕｌｓ　ＡＧ、ドイツ）、しかし特に、綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ひまし油、ゴマ油、大豆油、とりわけピーナッツ油のような植物油である。
【０１１１】
注射組成物は無菌下で従来の方法で製造され、また前記組成物を例えばアンプルや小瓶に導入し、その容器を密閉する為に、従来と同じ方法が適用される。
【０１１２】
経口投与の為の薬学的組成物は、例えば一つ又はそれ以上の固体担体と前記活性成分を結合することによって得られ、要望があれば結果として生ずる混合物を粒状化する工程、及び混合物又は微粒物を加工する工程、要望及び必要があれば、錠剤又は糖剤核を形成する為の付加的賦形剤を加える工程を加えてもよい。
【０１１３】
適した担体は、例えばラクトース、サッカロース、マンニトール又はソルビトールなどの糖質のような充填剤、セルロース調合剤、及び／又は例えばリン酸トリカルシウムやリン酸水素カルシウム等のリン酸カルシウム、及びコーン、麦、米又はイモでんぷん、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び又はポリビニルピロリドンなどのでんぷんのような結合剤、要望があれば上記のでんぷん、カルボキシメチルでんぷん、架橋ポリビニルピロリドン、又はアルギン酸、又はアルギン酸ナトリウムなどアルギン酸塩のような分解剤である。付加的賦形剤は、特に、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸、又はステアリン酸マグネシウムやステアリン酸カルシウムのようなステアリン酸塩、及び／又はポリエチレングリコール、又はその誘導体等の流動調節剤や潤滑剤である。
【０１１４】
糖剤核は任意に適切な腸内コーティングで準備されることができ、とりわけアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、又は適切な有機溶媒又は溶媒混合物中に溶解しているコーティング溶液、あるいは腸内コーティング製造の為のアセチルセルロースフタレート又はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートのような適したセルロース調合剤の溶液を含む濃縮された糖質溶液が用いられる。例えば確認目的の為に、あるいは活性成分の異なる服用量を示す為に、錠剤又は糖剤コーティングに着色料や色素が添加されてもよい。
【０１１５】
経口投与用薬学的組成物は、ゼラチンからなる乾燥充填カプセル、及びグリセロールやソルビトールのような可塑剤とゼラチンから成る密封されたソフトカプセルをも含む。前記乾燥充填カプセルは、例えば、コーンスターチのような充填剤、結合剤、及び／又はタルクやステアリン酸マグネシウムのような滑剤、および任意に安定化剤の混合物中に、微粒の形状で前記活性成分が含まれている。ソフトカプセルでは、脂肪油、パラフィンオイル又は液体ポリエチレングリコール、又はエチレングリコールやプロピレングリコールの脂肪酸エステルのような適切な液体賦形剤中に、前記活性成分が溶解若しくは懸濁されていることが好ましく、また例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類の清浄剤と安定化剤が添加されていてもよい。
【０１１６】
他の経口投与形態は、例えば、従来の方法で調製されたシロップであり、そのシロップは、例えば活性成分が懸濁された形態で、約５％から２０％の濃度、好ましくは約１０％、あるいは適量の一回の服用量を与える同様の濃度（適量とは例えば５ｍｌか１０ｍｌの量で投与される）で存在する。また、それらは、例えば乳剤中の、シェーク製造用粉末又は液体濃縮物もふさわしい。そのような濃縮物もまた、一回の服用量分ごとに包装されてもよい。
【０１１７】
適当な直腸投与薬学的組成物は、例えば前記活性成分と座薬主成分との組み合わせから成る座薬である。適当な座薬主成分は、例えば天然又は合成トリグリセライド、パラフィン系炭化水素、ポリエチレングリコール又は高級アルカノール等である。
【０１１８】
非経口投与には、特に水溶性の形態である活性成分の水溶液がふさわしく、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／又はデキストラン等の粘性増加物質と要望があれば安定化剤を含む水性注射懸濁物や水溶性塩の形態である。前記活性成分は、任意に賦形剤と共に、凍結乾燥体の形態であってもよく、非経口投与の前に、適当な溶媒の添加によって溶液に調製されることもできる。
【０１１９】
本発明で使用する前記化合物は、治療を必要とする温血動物、例えば人間に対して、好ましくは上記疾患に有効な量で、薬学的組成物の形態若しくはそのようなものとして、予防または治療上投与され、前記化合物は特に薬学的組成物の形態で使用される。そのような取り扱いでは、体重が約７０ｋｇの個体に、毎日約０．１ｇから約５ｇ、好ましくは約０．５ｇから約２ｇの化合物が投与される。
【０１２０】
本発明はまた、本発明の組成物が一つまたはそれ以上充填されている一つ又はそれ以上の容器から構成される薬学的パック又はキットも提供する。そのような容器は、調剤又は生物学的製品の製造、使用、販売を規制する政府機関によって規定された形態で、人間への投与の為の製造、使用、販売の前記機関による認可を反映する通達に従がって作られる。さらに、本発明の薬学的組成物は、他の治療用化合物と合同で使用されてもよい。
【０１２１】
ここに述べた発明をより理解する為に、以下に幾つかの例を示す。しかしそれらの例は、説明に役立つ目的のみに開示するものと理解されるべきである。従がって、いずれにせよ、それらが本発明の概念を制限するものではない。
【０１２２】
【実施例】
実施例１：式Ｄ化合物およびその誘導体の製造
【化２３】
2004509167.tif 000016
【０１２３】
化合物Ｂ
８００ｍｌのメタノールに４６．７ｇの化合物Ａ（次の文献の方法で合成された、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　１９８０，８１４）を溶かした溶液に、４００ｍｌの２Ｎ　ＮａＯＨが添加された。次にこの混合物は２４時間還流された。メタノールが蒸発し、残る水性液体がジエチルエーテルで抽出された。この水相は冷却され、濃ＨＣｌで酸性にされた。沈殿物がろ過され、水でよく洗浄され、真空下８０℃で乾燥されて、融点が１３８〜１４０℃のベージュ色の固形物３１．８ｇが得られた。
【０１２４】
化合物Ｄ
ＴＨＦ４２ｍｌに、１．５５ｇの化合物Ｂ（上記にて製造された）を溶かした溶液に、２０℃でシュウ酸塩化物が滴状添加された。この溶液は室温（ＲＴ）で２時間攪拌され、それから溶媒が回転蒸発器で除去された。残渣は４０ｍｌのメチレン塩化物と０．８ｍｌのピリジンに溶解された。１０ｍｌメチレン塩化物に１ｇの化合物Ｃ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ（３）１９８７，３６９の方法に従がって合成された）を溶かした溶液が、滴状添加された。この混合物はアルゴン下室温で１７時間攪拌され、それから飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出された。有機層が乾燥、蒸発されて、１．９７ｇの茶色油状物質が残り、ヘキサン：エチルアセテート＝２：１を溶媒とするシリカゲルカラムでこれを精製し、融点が７４〜７８℃の無色結晶の化合物Ｄ０．９ｇが得られた。
【０１２５】
Ｄ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：２．２８ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；３．８ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；４．５９ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ）；５．３２ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．２１ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．７−６．８５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．２３ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）；７．５１ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）
【０１２６】
実施例２：式Ｆ化合物及びその誘導体の製造
【化２４】
2004509167.tif 000017
【０１２７】
化合物Ｅ
３．６ｇの２−メトキシ安息香酸溶液に、２０℃で１０．１ｍｌのシュウ酸塩化物が滴状添加され、ＤＭＦ１滴も添加された。この溶液は室温で３時間攪拌された。淡黄色の溶液が蒸発され、１００ｍｌのジクロロメタンに再溶解された。この溶液に、２．５ｇの化合物Ｃ（上記にて製造された）を２５ｍｌのジクロロメタンに溶かした溶液が加えられた。この混合物は室温で２４時間攪拌され、次に水で洗浄され、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥され、蒸発されて、濃黄色油状物質が得られた。次にこれは、トルエン：酢酸エチル＝４：１を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィー処理され、融点が５３〜５８℃の無色結晶の化合物Ｅ３．６ｇが得られた。
【０１２８】
Ｅ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：３．９ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；４．６ｐｐｍ（ｄｑ，２Ｈ）；５．３５ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．２１ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．９−７．０５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．４−７．６ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．７８ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）
【０１２９】
化合物Ｆ
１００ｍｌのジクロロメタンに３．１ｇの化合物Ｅ（上記にて製造された）を溶かした溶液に、エチレン塩化物にＢＣｌ３を溶かした２．１ＭＢＣｌ３溶液１７．８ｍｌが０℃で添加された。この混合物は０℃で３０分攪拌され、次に氷水に注がれた。有機相が水で２回、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄され、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥され、蒸発された。残渣が、トルエン：酢酸エチル＝４：１を溶離液とするシリカゲルのクロマトグラフィー処理され、無色油状物質の化合物Ｆ２．１ｇが得られた。
【０１３０】
Ｆ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：４．６２ｐｐｍ（ｄｑ，２Ｈ）；５．３８ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．２７ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．８−７．０ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．４−７．６ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．７６ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；１０．４２ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）
【０１３１】
実施例３：式Ｈ化合物及びその誘導体の製造
【化２５】
2004509167.tif 000018
【０１３２】
化合物ＧとＨは、上記の方法を用いて製造された。
【０１３３】
Ｇ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：３．８５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；３．８８ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；４．５７ｐｐｍ（ｄｑ，２Ｈ）；５．３２ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．１９ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．４−６．５５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．５ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；７．８ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）
Ｈ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：３．８２ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；４．３９ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；５．３５ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．２３ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．３５−６．５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；７．５ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；７．６７ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；１０．６ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）
【０１３４】
実施例４：式Ｉ化合物及びその誘導体の製造
【化２６】
2004509167.tif 000019
【０１３５】
化合物Ｉは、上記の方法を用いて製造された。
【０１３６】
Ｉ：ＮＭＲ（ｉｎ　ＣＤＣｌ３）：２．５ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ）；４．５−４．８ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）；５．３８ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ）；６．２７ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；６．７ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；６．８３ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７．２９ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）；７．５ｐｐｍ（ｄｄ，１Ｈ）；１１．０ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）
【０１３７】
本発明の前記化合物は、幾つかの薬学的特性を有する。特に、それらは、以下に説明される試験管内及び体内試験方法で下記に示されるように、ＩＬ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの放出を抑制するだけでなく、ＩＬ−１の機能性拮抗体としても作用するサイトカイニン抑制効果を示す。
【０１３８】
実施例５：ＴＨＰ−１細胞からのサイトカイニン放出
ＴＨＰ−１細胞株は一般に入手可能で、Ｔｓｕｃｈｉｙａらによる［Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ２６　１７１−１７６（１９８０）］に記述されている。１００Ｕのγ−インターフェロン／０．９ｍｌＲＰＭＩ１６４０培地（２ｍＭのＬ−グルタミンと５％熱不活性化胎児ウシ血清を含む）と共に９００μｌのＴＨＰ−１細胞（０．５×１０６細胞）が、２４ウェル培養プレートにピペットで分注される。次に試験される本化合物１００μｌが添加される。５％ＣＯ２／９５％空気下３７℃で３時間培養後、５００μｇ／ｍｌのリポポリサッカリド１０μｌが添加され、培養が更に４０時間続けられる。適切な対照（刺激剤、溶媒の存在下及び非存在下で）もまた含まれる。培地はそれから取り除かれ、１０００ｇ１０分間の遠心分離により清澄される。ラバーポリスマンでこすることによってばらばらにされる細胞を溶解するために、０．０１％ジギトニン１．０ｍｌがウェルに添加され、４℃で１０分間放置される。次にジヒドロゲナーゼ乳酸塩測定が直ちに実施され、その試料は他の測定が行われるまで保存される。分析は、ＩＬ−１β（培地と溶解液）、ＩＬ−６（培地）、ＴＮＦ−α（培地）、ＰＧＥ２（培地と溶解液）、ジヒドロゲナーゼ乳酸塩（ＬＤＨ）（培地と溶解液）とＤＮＡ（溶解液）である。ＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α分析は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｃｉｓｔｒｏｎ）を用いて実行され、ＰＧＥ２は標準ＲＩＡとＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニリンドール・２ＨＣｌ）を用いたＤＮＡ蛍光分析を使用して測定される。この試験で、本発明の化合物は、約０．１から１０μＭの濃度で、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及びＰＧＥ２放出を抑制する。対照的に、ＤＮＡレベルは影響を受けず実質そのままであり、ＬＤＨ放出に変化がないことからこの化合物は無毒性である。
【０１３９】
実施例６：ヒト単球からのサイトカイニン放出
ヒト単球
単核細胞は健康なボランティアの血液から遠心分離後に得られ、様々な濃度の本試験化合物と共に組織培養皿上で培養される［Ｓｃｈｎｙｄｅｒら，Ａｇｅｎｔｓ＆Ａｃｔｉｏｎｓ，３０，３５０−３６２（１９９０）］。非付着リンパ球は、４時間後に数回の洗浄により除去される。新たな培地、試験化合物及び刺激剤としてのＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）が添加され、単球はさらに一日培養される。保存された培地は新たな培地で１：１０に希釈され、コンフルエントなウサギ軟骨細胞に加えられる。軟骨細胞培養液中の金属プロテイナーゼ活性が、さらに２日後に、以下に記載された方法で分析される。本発明の化合物は、この試験方法で、０．１から１０μＭオーダーの濃度で、モノカインの放出を抑制する。
【０１４０】
軟骨細胞試験によるＩＬ−１の測定
精製されたＩＬ−１、組換えヒトＩＬ−１−β（ｒｈＩＬ−１）又は刺激されたヒト単球から得られたならし培地、マウスマクロファージ又はマウス細胞株Ｐ３３８Ｄ１は、軟骨細胞の分泌パターンに特有の変化を引き起こす。特に、潜在性の金属プロテイナーゼが誘起され、一方でプラスミノーゲンアクチベーター分泌は減少する。金属プロテイナーゼやストロメリジンの特性は、［Ｃｈｉｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０，１２３６７−１２３７６（１９８５）］に詳細に記述され、プラスミノーゲンアクチベーターの特性は、［Ｓｃｈｎｙｄｅｒら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００，１５６−１６２（１９９２）］に記述されている。精製された或いは組換えＩＬ−１と、ヒト単球ＩＬ−１に対する抗体による中和を用いた服用量−反応曲線は、このシステムが特異的で感度のよいＩＬ−１の生物学的解析として使えることを示した。ウサギの関節の軟骨細胞による、潜在性金属プロテイナーゼの分泌の刺激は、比較的ＩＬ−１特異的で、ＩＬ−２，ＴＮＦ−α、組換えヒトインターフェロンα及びγ、フォルボールミリステートアセテート、コンカナバリンＡ、Ｅ型プロスタグランディン及びインドメタシンでは影響がなかった［ＳｃｈｎｙｄｅｒとＰａｙｎｅ，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２４（ｓｕｐｐｌ．１），１２８−１３２（１９８５）；Ｓｃｈｎｙｄｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８，４９６−５０３（１９８７）］。
【０１４１】
軟骨細胞は、［Ｅｖｅｑｕｏｚら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２１９，６６７−６７７（１９８４）］に記述されているような方法で、採取され培養された。手短に言えば、軟骨細胞は、約１．２ｋｇのメスのニュージーランド白ウサギの、末梢大腿骨の関節軟骨部分から、プロテイナーゼ処理により採取される。洗浄された細胞は、４８ウェル培養皿で、１％抗生物質、２ｍＭグルタミン及び１０％熱不活性化ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭで培養される。コンフルエントに達した後、細胞は、ＩＬ−１生物学的分析の為の試験培地の検体２０μｌと共に培養され、そしてＩｓｃｏｖｅ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ培地で３００μｌにされる。その上澄培養液は４８時間後に回収され、遠心分離され、生物学的分析の処理をされる。
【０１４２】
生物学的測定
金属プロテイナーゼが、パソコンに繋がれた９６ウェルプレートＴｗｉｎｒｅａｄｅｒ（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＡＧ）を用いて、運動速度的に測定される。
【０１４３】
脊椎動物のコラゲナーゼの合成基質、Ａｃ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＣ２Ｈ５が、金属プロテイナーゼの測定に使用される［ＷｅｉｎｇａｒｔｅｎとＦｅｄｅｒ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４７，４３７−４４０（１９８５）］。５０μｌの潜在性金属プロテイナーゼが、３７℃で３０分、５０μｌのトリプシン（２０ｍＭＣａＣｌ２を含み、ｐＨ６．８の５０ｍＭのＰＩＰＥＳ中にトリプシンが１２０μｇ／ｍｌ）で活性化された後、全セリンプロテイナーゼの活性は、１５０μｌの大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ；上記緩衝液中にＳＢＴＩが１６６μｇ／ｍｌ）の添加によって止められる。５０μｌずつ分注された活性化された金属プロテイナーゼは、その後、１００μｌの試薬（上記緩衝液中に、２．５ｍＭ　５，５’−ジチオ−ビス−２−ニトロ安息香酸、１００μｇ／ｍｌ　ＳＢＴＩ、２０ｍＭＣａＣｌ２）と混合され、全ての遊離ＳＨ−基と反応させる為に１０分間室温で放置される。その反応はそれから１００μｌの基質液（１００μｇ／ｍｌのＳＢＴＩを含む緩衝液中に１．２５ｍＭ）を添加することによって開始され、４１４ｎｍでの吸光度の変化が、１分間隔で１１回測定される。
【０１４４】
実施例７：機能性ＩＬ−１拮抗効果
上記実施例６に記述された試験方法が繰り返されるが、軟骨細胞の培養にヒト単球を添加する代わりに、ＩＬ−１そのもの（組換えヒトＩＬ−１，Ｓａｎｄｏｚ）が１ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。軟骨細胞培地中の金属プロテイナーゼ活性が、２日後に分析される。本発明の化合物は、１−１０μＭの濃度で、機能性ＩＬ−１拮抗剤として効力がある。
【０１４５】
実施例８：ＬＰＳ熱
ＬＰＳ懸濁液（Ｓｉｇｍａ，Ｎｏ．Ｌ−５８８６；１００μｇ／５ｍｌグルコース溶液／ｋｇ　ｓ．ｃ．）が、オスのＴｕｔｔｌｉｎｇｅｎ　ＳＤラット（体重１５０−１６０ｇ）に注射される。２時間後、体温が、ＥＬＬＡＢ遠隔温度計に接続された直腸プローブ体温計を用いて測定される。４時間後に、本試験化合物が投与される。２時間後（ＬＰＳ投与から６時間後）に、体温が再び測定される。未治療の対照における体温上昇分を１００％として、治療を受けた群の上昇分がこの値の％で表される。ＥＤ５０は対照ラットで測定された体温上昇を５０％抑制できる服用量である。本発明の化合物は、概して、この分析で、約０．１から約１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を有する。
【０１４６】
実施例９：ラットに於けるカラゲナンに誘起される脚の浮腫
５匹のオスのＯＦＡラット、体重１５０−１７０ｇが、各グループで使用される。本試験化合物は、含０．５％トラガカント生理食塩水に懸濁されて、カラゲナン注射の１時間前に、経口投与される。カラゲナン（生理食塩水に１％懸濁された液を０．１ｍｌ）が、足底下注射により、一方の後脚に投与される。脚の腫脹が、Ｋｅｍｐｅｒ　＆　Ａｍｅｌｍの消炎測定の手段によって測定される。対照の測定は、注射直後に行われ、３時間後と５時間後に腫脹が測定される。３時間後と５時間後の測定の平均値は、対照の値が差し引かれた後に得られ、そして治療群の動物から得られた平均値は、未治療群の対照から得られた平均値のパーセントで表示される。ＥＤ５０は、３時間後に、カラゲナンに誘起される腫脹を５０％抑制できる服用量である。本発明の化合物は、概して、この分析で、約０．５から約１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を有する。
【０１４７】
実施例１０：ｍＲＮＡを不安定化する化合物のレポーター遺伝子分析
ＴＨＰ−１細胞株、クローンＮｏ．６３（ｐＧＬ２−Ｎｅｏ３０を含む）とクローンＮｏ．５３（ｐＧＬ２−対照を含む）が成長され、分化され、正常なＴＨＰ−１細胞と同じくＩＦＮ−γとＬＰＳで刺激される（詳細はＷＯ　００／３９３１４を参照）。ＬＰＳの添加の１６時間後に化合物が投与され、細胞抽出液が８時間後又は指定時に採取される。ルシフェラーゼ活性が、１μＭの安息香酸誘導体により、平均で４０％まで抑制されたが、一方、対照クローンＮｏ．５３では、５μＭまでの安息香酸誘導体でも効果がなかった。
【０１４８】
【表１】
2004509167.tif 000020
【０１４９】
従って、本発明の化合物は、その病因がサイトカイニンの放出に関連のある病気や、それにより引き起こされる病気、特にＩＬ−１放出など、例えば、多様な炎症の状態や、リューマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病及び喘息のような病気の治療に必要とされる。
【０１５０】
上記に使用する為に、必要な服用量は、当然投与の方法や、治療される特異的な状態および期待される効果によって様々であろう。しかしながら一般的に、満足される結果は、動物の体重１ｋｇ当たり、約０．１から２０ｍｇの服用量で得られ、好ましくは０．５から５ｍｇ／ｋｇである。
【０１５１】
実施例１１：薬学的組成物の製造
１錠が例えば５０ｍｇの化合物又は薬学的に可能なその塩から構成される錠剤は、以下の方法で製造される。
【０１５２】
2004509167.tif 000021
【０１５３】
活性成分はラクトースと２９２ｇのポテトスターチに混合され、この混合物はゼラチンのエタノール溶液で湿らされ、ふるいをかけて粒状化される。乾燥後、残りのポテトスターチ、ステアリン酸マグネシウム、タルク及び二酸化ケイ素がそれに混合され、圧縮されて各錠剤の重量が１４５．０ｍｇ及び活性成分５０．０ｍｇから構成される錠剤を形成し、要望に応じて、服用量のよりよい改作として割るための刻み目をつけてもよい。
【０１５４】
実施例１２：薬学的組成物の製造
１錠が１００ｍｇの安息香酸誘導体又は薬学的に可能なその塩から構成される膜コートされた錠剤は、以下の方法で製造される。
【０１５５】
2004509167.tif 000022
【０１５６】
活性成分、ラクトース及び４０ｇのコーンスターチが混合され、１５ｇのコーンスターチと水から（加熱して）調製されたペーストでこの混合物は湿らされ、粒状化される。この粒状体は乾燥され、残りのコーンスターチ、タルク及びステアリン酸カルシウムが添加され、粒状体と混合される。この混合物は錠剤（重量：２８０ｍｇ）を形成する為に圧縮されて、次にメチレン塩化物に溶解されたセラクとヒドロキシメチルセルロースの溶液で膜コートされ、最終的に重さが２８３ｍｇの膜コートされた錠剤が得られる。
【０１５７】
実施例１３：薬学的組成物の製造
例えば安息香酸誘導体又は薬学的に可能なその塩などの１００ｍｇの活性成分から構成される硬ゼラチンカプセルは、例えば以下の方法で製造される。
【０１５８】
2004509167.tif 000023
【０１５９】
ラルリル硫酸ナトリウムが、凍結乾燥された活性成分に、０．２ｍｍメッシュサイズのふるいを通して添加される。このニ成分は十分に混合される。それから、まずラクトースが０．６ｍｍメッシュサイズのふるいを通して添加され、次に微晶質セルロースが０．９ｍｍメッシュサイズのふるいを通して添加される。この混合物はそれから１０分間再びよく混合される。最後にステアリン酸マグネシウムが０．８ｍｍメッシュサイズのふるいを通して添加される。さらに３分間混合後、サイズ０の硬ゼラチンカプセルに、結果的に生じた上記製剤が各３９０ｍｇ充填される。ソフトゼラチンカプセルも、同様の成分と方法を用いて製造される。
【０１６０】
実施例１４：癌細胞の細胞生存性に於ける効果
この実験で使用された細胞株（ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＨＣＴ１１６、ＫＢ３１、ＨＣＴ−１５及びＤＵ１４５）は、ＡＴＣＣ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から得られた。指数増殖している細胞は、本試験化合物の様々な濃度で処理された。細胞はさらに２４時間、４８時間及び９６時間培養された。そして細胞が、Ｔ．Ｉｄｚｉｏｒｅｋら，Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｍｅｔｈ　１８５，２４９（１９９５）に記述されているようにＹＯＰＲＯ−１により染色され、死にかけている、あるいは死滅した細胞の割合が決定された。
【０１６１】
実施例１５：癌細胞の細胞同期の進行に於ける効果
この実験で使用された細胞株（ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＨＣＴ１１６、ＫＢ３１、ＨＣＴ−１５及びＤＵ１４５）は、ＡＴＣＣ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から得られた。指数増殖している細胞は、本試験化合物の様々な濃度で処理された。細胞はさらに２４時間、４８時間及び９６時間培養された。細胞はそれから溶解され、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）が、Ｔ．Ｉｄｚｉｏｒｅｋら，Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｍｅｔｈ　１８５，２４９（１９９５）に記述されているようにＹＯＰＲＯ−１により染色された。蛍光測定は、本質的にＶ．Ｌ．Ｓｉｎｇｅｒら、Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　２４９，２２８（１９９７）に記載されているように実施され、対照細胞と値が比較された。
【０１６２】
実施例１６：インターロイキン−１β　ｍＲＮＡレベルに於ける効果
全細胞ＲＮＡが、Ｃｈｉｒｇｗｉｎら（４４）のグアジンイソチオシアネート法を用いて、ＴＨＰ−１細胞から分化開始後、異なった時間に抽出された。各ＲＮＡ検体２０μｇが変成されて、２．２Ｍホルムアルデヒドを含む１％アガロースゲルで分析された。このゲルはＨｙｂｏｎｄ−Ｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）にトランスファーされて、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ　Ｓｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ（１６００μＪ×１００）でＵＶ−クロスリンクされて、メチレンブルー染色により等量のＲＮＡが泳動されたか判定された。ブロットは、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）標識されたＤＮＡプローブでハイブリダイズされた。標識と検出は、ＤＩＧキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）により製品説明書に従がって実施された。ＤＮＡプローブは、ＲＴ−ＰＣＲ由来の目的の遺伝子の断片を、ｐＧｅｍＴ−ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）にサブクローニングすることによって得られた。ＲＴ−ＰＣＲ分析に於いて、全ＲＮＡの１μｇが、ＡＭＶ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ，Ｆｌｏｒｉｄａ）を用いて逆転写され、それからＰＣＲ法により増幅された。各ＰＣＲ反応はまたβ−アクチンのプライマーセットも内部対照として含んだ。予想されたＰＣＲ産物の値が、β−アクチンの定量と比較された。ＰＣＲ産物の大きさが、ＭｓｐＩによって切断されたｐＢＲ３２２スタンダード（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ）と比較された。ＰＣＲ産物は４％アガロースゲルで解析された。オリゴヌクレオチド５’と３’側のプライマーの塩基配列はそれぞれ以下の通りであった。
【０１６３】
β−アクチン５’側：ＡＴＧＧＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡＴＴＣＣＴＡ
β−アクチン３’側：ＡＧＡＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＧＡＴＡＧＣＡＣ
ＩＬ−１β５’側：ＧＡＣＡＣＡＴＧＧＧＡＴＡＡＣＧＡＧＧＣＴ
ＩＬ−１β３’側：ＡＣＧＣＡＧＧＡＣＡＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＣ
【０１６４】
本発明の化合物は、１０μＭの濃度で、インターロイキン−１βのｍＲＮＡレベルを７０％まで下げている。
【図面の簡単な説明】
【図１】
様々な濃度の安息香酸誘導体を用いた治療による癌の生存減少率を、対照細胞の生存率と比較した図である。
【図２】
様々な濃度の安息香酸誘導体を用いた治療による癌細胞の相対的な増殖を、対照細胞の増殖と比較した図である。
【図１】
2004509167.tif 000033
【図２】
2004509167.tif 000034
【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年4月23日(2002.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの構造を持つ化合物、又は前記化合物の立体異性体、
【化１】
2004509167.tif 000089
又は
前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステルであり、
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されており、
ただし、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ７＝Ｈで、ＹがＯで、ｎが０の場合、Ｒ６は
【化２】
2004509167.tif 000090
以外である
ことを特徴とする化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物であって、ここで
前記Ｒ１＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ２＝Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ，ＯＨ，ＭｅＣＯＯ−又はメトキシ；
Ｒ４＝Ｈ，メトキシ又はハロゲン；
Ｒ５＝Ｈ，ＯＨ，メトキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル；
ＹはＯ；
Ｒ６は
【化３】
2004509167.tif 000091
ここで、ｍは０−４；
Ｒ７＝Ｈ，メチル，イソプロピルである事を特徴とする化合物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物であって、ここで、
前記Ｒ１が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ２がＨ；
Ｒ３が、Ｈ，−ＯＨ，ＭｅＯ−又はＭｅＣＯＯ−；
Ｒ４が、Ｈ又はハロゲン；
Ｒ５が、−ＯＨ，ＭｅＯ−，ＭｅＣＯＯ−又はメチルである事を特徴とする化合物。
【請求項４】
請求項２記載の化合物であって、ここで、
前記Ｒ１がＨ又はＭｅＯ、Ｒ３がＨ，−ＯＨ又はＭｅＯ−、Ｒ４がＨ、及びＲ５がメトキシ又はメチルであることを特徴とする化合物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物であって、前記化合物が次の化合物群から選択されることを特徴とする化合物。
【化４】
2004509167.tif 000092
【請求項６】
請求項１記載の化合物であって、前記化合物が次の化合物群から選択されることを特徴とする化合物。
【化５】
2004509167.tif 000093
【請求項７】
請求項１記載の式Ｉの化合物、又は前記化合物の薬学的に可能で代謝的適応性のあるエステルあるいはアミド、又は前記化合物の薬学的に可能な塩の製造方法であって、下記（ａ）から（ｃ）のいずれかの工程を含み、
ａ）式（Ｉ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物と反応させる工程を含むか、
【化６】
2004509167.tif 000094
ここで、
Ｒ１は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ２は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ３は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｒ４は、Ｈ，ＯＨ，ハロゲン，（Ｃ１−Ｃ４）アルキル，（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル，（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−；
Ｘは、ハロゲン；
【化７】
2004509167.tif 000095
ここで、ｎ’は１〜９で、ｍは０〜４、前記化合物（ＩＩＩ）は場合により、一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている、
あるいは、
ｂ）式（ＩＶ）の化合物を、式（ＩＩ）の化合物と、共沸蒸留で酸の存在下で反応させる工程を含むか、
【化８】
2004509167.tif 000096
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記の定義のとおりであり、
あるいは、
ｃ）式（ＩＶ）の化合物のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を、式（Ｖ）の化合物と反応させる工程を有し、
【化９】
2004509167.tif 000097
ここで、Ｒ１−Ｒ５は上記の定義の通りであり、
【化１０】
2004509167.tif 000098
ここで、Ｘは、Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ又はＩ；
ｎ’は、１−９；
ｍは、０−４；
さらに、式（Ｖ）の前記化合物は場合により、一つ又はそれ以上の二重結合を有していてもよく、また場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている事を特徴とする化合物の製造方法。
【請求項８】
式Ｉの構造を持つ薬剤組成物、又はその立体異性体、
【化１１】
2004509167.tif 000099
又は
前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステルであり、
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている薬剤組成物。
【請求項９】
一つ又はそれ以上の請求項１〜６記載の前記化合物と、薬学的に可能な担体、希釈剤又は賦形剤を含む薬剤組成物。
【請求項１０】
さらに、細胞静止薬又は細胞毒性剤を含む請求項８又は請求項９記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
さらに化学療法剤を含む請求項８又は請求項９記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
式Ｉの構造を持つ化合物、又はその立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステル、の使用方法であり、
【化１２】
2004509167.tif 000100
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている方法。
【請求項１３】
哺乳動物の治療用医薬品の製造時に、請求項１−６記載のいずれかを用いる前記化合物の使用法。
【請求項１４】
前記医薬品が癌及び／又は悪性疾患の治療に使われるものであることを特徴とする、請求項１２又は請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項１５】
一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの分解を、前記化合物が誘起することを特徴とする、請求項１２又は請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項１６】
一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの安定性増加に関連する病因を有する疾患又は医療状態の治療又は予防に、前記医薬品が使用されることを特徴とする、請求項１５記載の化合物使用法。
【請求項１７】
過度のサイトカイン放出に関連する又は前記放出を有する病因の疾患又は医療状態の治療に、前記医薬品が使用されることを特徴とする、請求項１２又は請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項１８】
前記サイトカインがＩＬ−１βであることを特徴とする、請求項１７記載の化合物使用法。
【請求項１９】
リューマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病および喘息からなる群から、前記疾患又は医療状態が選択されることを特徴とする、請求項１７記載の化合物使用法。
【請求項２０】
前記医薬品が、炎症性の疾患または医療状態の治療に使用されることを特徴とする、請求項１２又は請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項２１】
一般的な腫瘍の増大及び／又は転移した癌腫の浸潤の治療又は予防の為に、あるいは多薬剤耐性を防ぐ又はなくす為に、前記医薬品が、腫瘍遺伝子媒介の癌及び悪性疾患の治療及び予防に使用されることを特徴とする、請求項１２又は請求項１３記載の化合物使用法。
【請求項２２】
前記哺乳動物が人間であることを特徴とする、請求項１２〜２１記載の化合物使用法。
【請求項２３】
式Ｉの構造を持つ化合物、又はその立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステル、を適量、哺乳動物に投与する工程を有する、癌及び／又は悪性疾患の予防又は治療方法であって、
【化１３】
2004509167.tif 000101
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている方法。
【請求項２４】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、哺乳動物に投与する工程を有する、癌及び／又は悪性疾患の予防又は治療方法。
【請求項２５】
式Ｉの構造を持つ化合物、又はその立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステル、を適量、哺乳動物に投与する工程を有し、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの安定性増加に関連する病因の疾患又は医療状態の予防法又は治療法であって、
【化１４】
2004509167.tif 000102
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている方法。
【請求項２６】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、哺乳動物に投与する工程を有し、一つ又はそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの安定性増加に関連する病因の疾患又は医療状態の予防法又は治療法。
【請求項２７】
式Ｉの構造を持つ化合物、又はその立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステル、を適量哺乳動物に投与する工程を有し、哺乳動物に於いて、ｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの分解を誘起する方法であって、
【化１５】
2004509167.tif 000103
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている方法。
【請求項２８】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量哺乳動物に投与する工程を有し、哺乳動物に於いて、ｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの分解を誘起する方法。
【請求項２９】
式Ｉの構造を持つ化合物、又はその立体異性体、又は前記化合物の薬学的に可能な塩あるいは水和物、又は前記化合物の生理学的に可能で加水分解するエステル、を適量、病気又は治療上異常体質の哺乳動物に投与する工程を有し、サイトカイン、ケモカイン、キナーゼリン酸化酵素又はシクロオキシゲナーゼのような前炎症性因子の産出に関連する病因を持つ免疫病理学的異常を治療する又は予防する方法であって、
【化１６】
2004509167.tif 000104
ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ＹはＯ又は−ＮＲ’で、Ｒ’はＨ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、
ｎは０から８であり、
Ｒ６は、５から８員のラクトン又はラクタム環であり、
Ｒ７は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ、フェニル又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−ＣＯＯ−であり、
ここで、前記ラクタム又はラクトン環は、場合により一つ又はそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を有し、前記ラクタム又はラクトン環は場合により一つ又はそれ以上の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基又は（Ｃ１−Ｃ４）アルケニル基で置換されている方法。
【請求項３０】
請求項１−６のいずれかに記載の前記化合物を適量、病気又は治療上異常体質の哺乳動物に投与する工程を有し、サイトカイン、ケモカイン、キナーゼリン酸化酵素又はシクロオキシゲナーゼのような前炎症性因子の産出に関連する病因を持つ免疫病理学的異常を治療する又は予防する方法。
【請求項３１】
微生物感染、悪性疾患及び転移、喘息、冠状再狭窄、自己免疫病、肝硬変、内毒血症、再かん流損傷、および敗血症ショックからなる群から、前記免疫病理学的異常が選択されることを特徴とする、請求項２９又は請求項３０記載の治療又は予防方法。
【請求項３２】
前記ｍＲＮＡが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＣＯＸＩＩ、又はｂｃｌ−２であることを特徴とする請求項３１記載の治療又は予防方法。
【請求項３３】
前記哺乳動物が人間であることを特徴とする、請求項２３〜請求項３２のいずれかに記載の治療又は予防方法。
【国際調査報告】
2004509167.tif 000105
2004509167.tif 000106
2004509167.tif 000107