(57)【要約】本発明は、処置の必要な被験体に、生物学的に活性な薬剤を中に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有してなる持続放出組成物の有効量、およびビスホスホネート（ここで、該ビスホスホネートが該持続放出組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在している）を投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ持続放出のための方法に関する。本発明の方法における使用に好適な医薬組成物もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置の必要な被験体に、生物学的に活性な薬剤を中に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有してなる徐放性組成物の有効量、および該徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート
を投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放のための方法。
【請求項２】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に同時に組み込まれている請求項１記載の方法。
【請求項３】
ビスホスホネート化合物が第二の生体適合性ポリマーに別個に組み込まれている請求項１記載の方法。
【請求項４】
第二の生体適合性ポリマーが徐放性組成物の生体適合性ポリマーと同じである請求項３記載の方法。
【請求項５】
第二の生体適合性ポリマーが徐放性組成物の生体適合性ポリマーとは異なる請求項４記載の方法。
【請求項６】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に内包されていないが徐放性組成物と混ざり合っている請求項１記載の方法。
【請求項７】
マイクロ粒子の生体適合、生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物（polyanydride）、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項１記載の方法。
【請求項８】
生体適合、生分解性ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項７記載の方法。
【請求項９】
ビスホスホネートがアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート（pamidonate）、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１記載の方法。
【請求項１０】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１記載の方法。
【請求項１１】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質、ペプチドまたは核酸である請求項１記載の方法。
【請求項１２】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１記載の方法。
【請求項１３】
タンパク質がエリスロポエチンである請求項１記載の方法。
【請求項１４】
ａ）有効量の生物学的に活性な薬剤を中に組み込んでいる生体適合性ポリマーを含んでなる徐放性組成物；および
ｂ）徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物
を含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に同時に組み込まれている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ビスホスホネート化合物が第二の生体適合性ポリマーに別個に組み込まれている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１７】
第二の生体適合性ポリマーが徐放性組成物の生体適合性ポリマーと同じである請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１８】
第二の生体適合性ポリマーが徐放性組成物の生体適合性ポリマーとは異なる請求項１６記載の意訳組成物。
【請求項１９】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に内包されていないが徐放性組成物と混ざり合っている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２０】
マイクロ粒子の生体適合、生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物（polyanydride）、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２１】
生体適合、生分解性ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ビスホスホネートがアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート（pamidonate）、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２３】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２４】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質、ペプチドまたは核酸である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２５】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
タンパク質がエリスロポエチンである請求項１４記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
多くの病気または症状には、予防または治療の最大効果を提供するため、一定レベルまたは持続レベルの医薬または生物学的に活性な薬剤の投与が必要とされる。これは、複数投薬養生法により、または持続様式で医薬を放出する系の使用により行なわれる。
【０００２】
医薬物のレベルを維持するための試みにとしては、医薬を含有するポリマーマトリックスなどの生分解性物質の使用が挙げられる。例えば、マイクロ粒子またはマイクロキャリア(microcarrier)の形態でのこれらのマトリックスの使用は、ポリマー固有の生分解性を利用することにより医薬の徐放性を提供する。持続レベルの医薬を提供できることにより、患者のコンプライアンスの向上をもたらす。
【０００３】
しかしながら、これらの徐放性デバイスは、最初の２４時間の間に活性物質の高度な放出を示すことがあり、しばしば、バーストと称される。ある場合においては、このバーストは、生物学的に活性な薬剤のレベルの望ましくない増加をもたらし得、その後、薬剤の放出が最小となり得る。さらに、これらの徐放性デバイス内および該デバイス周辺の医薬溶液の濃度が高いため、医薬は凝集し、それによりインビボ免疫原性が増加し、医薬の所望の放出プロフィールを妨害する。
【０００４】
したがって、例えば、薬剤のバーストの低減および／または、より長期間の放出などの改良された放出の提供により、徐放性組成物の放出プロフィールをさらにコントロールする必要性が存在する。
【０００５】
発明の概要
本発明は、ビスホスホネート化合物を同時投与すると、薬剤の放出期間が延びることなどにより、生体適合性ポリマーおよびその内部に組み込まれた生物学的に活性な薬剤を含有する徐放性組成物からの該生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールが変更され得る、という意外な知見に基づくものである。
【０００６】
したがって、本発明は、生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有する徐放性組成物の有効量、および徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに十分な量で存在するビスホスホネート化合物とを、処置が必要な被験体に投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放のための方法に関する。
【０００７】
一態様において、ビスホスホネート化合物は、生体適合性ポリマーおよびその内部に組み込まれた生物学的に活性な薬剤を含有する徐放性組成物内に一緒に組み込まれ得る。
【０００８】
別の態様において、ビスホスホネート化合物は、第２の生体適合性ポリマー内に別個に組み込まれている。この生体適合性ポリマーは、生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ第１の生体適合性ポリマーと同じであっても異なっていてもよい。
【０００９】
さらに別の態様において、ビスホスホネート化合物は、内包されていないが徐放性組成物と混じり合った状態で存在し得る。例えば、ビスホスホネートは、徐放性組成物を送達するのに使用されるビヒクルに可溶化され得る。あるいはまた、ビスホスホネート化合物は、適切なビヒクル中に懸濁された固体として存在し得る。さらに、ビスホスホネートは、徐放性組成物と混じり合った粉体として存在し得る。
【００１０】
本明細書に記載される本発明はまた、本発明での使用に適する医薬組成物に関する。一態様において、医薬組成物は、有効量の生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有する徐放性組成物とおよび徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに十分な量のビスホスホネート化合物を含有する。
【００１１】
一態様において、ビスホスホネート化合物は、生体適合性ポリマーおよびその内部に組み込まれた生物学的に活性な薬剤を含有する徐放性組成物内に一緒に組み込まれ得る。
【００１２】
別の態様において、医薬組成物は、有効量の生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ第１の生体適合性ポリマーと、第１のポリマーからの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更する量のビスホスホネートを内部に組み込んだ第２の生体適合性ポリマーとを含有する徐放性組成物を含有する。特定の態様では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは同じ種類のポリマーである。別の態様では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは異なる。
【００１３】
さらにまた別の態様において、ビスホスホネート化合物は、内包されていない状態で医薬組成物内に存在し得る。例えば、ビスホスホネートは、徐放性組成物と混合されている。一態様において、ビスホスホネート化合物は、医薬組成物を送達するのに使用されるビヒクルに可溶化され得る。あるいはまた、ビスホスホネート化合物は、医薬組成物の送達に有用な適切なビヒクル中に懸濁された固体として存在し得る。さらに、ビスホスホネートは、徐放性組成物と混じり合った粉体として存在し得る。
【００１４】
特定の理論に拘束されないが、少なくとも一部は、ビスホスホネートの効果は徐放性組成物の投与領域において生じ得る炎症性細胞反応の量の低下に関連し得ると考えられる。この反応は、臨床的には重要でないが、異物応答として充分に特徴付けられており、ほとんどの異物について現れ(realize)得る。
【００１５】
本発明はまた、ビスホスホネートの徐放のための組成物に関する。徐放性組成物は、治療有効量のビスホスホネートを内部に組み込んだ生体適合性ポリマーマトリックスを含有する。さらに、本発明は、生体適合性ポリマーとビスホスホネート化合物とを含有する徐放性組成物の治療有効量を、処置が必要な被験体に投与することを含む、ビスホスホネート化合物のインビボ徐放のための方法に関する。
【００１６】
特定の態様において、生体適合性ポリマーとビスホスホネートとを含有する徐放性組成物の投与は、関節部、例えば関節部の関節腔(space)に対するものであり得る。例えば、徐放性組成物は、膝、肩、足根関節、股関節部などの関節腔に投与され得る。
【００１７】
生体適合性ポリマーとビスホスホネート化合物とを含有する本発明の徐放性組成物は、骨吸収または関節炎症に関連する疾患の処置のために使用され得る。例えば、生体適合性ポリマーとその内部に組み込まれたビスホスホネート化合物とを有する徐放性組成物は、関節性リウマチ、骨粗鬆症またはパジェット病の処置薬としての使用に好適であり得る。
【００１８】
本発明の前記および他の目的、特徴および利点は、添付の図面に示されるような本発明の好ましい態様の以下のより具体的な記載から明らかとなろう。
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明の好ましい態様を以下に記載する。
【００２０】
本発明は、生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ生体適合性ポリマーと、徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに十分な量で存在するビスホスホネートとを含有する徐放性組成物の有効量を、処置が必要な被験体に投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放のための方法に関する。
【００２１】
一態様において、ビスホスホネート化合物は、生体適合性ポリマーおよびその内部に組み込まれた生物学的に活性な薬剤を含有する徐放性組成物内に一緒に組み込まれ得る。
【００２２】
別の態様において、ビスホスホネート化合物は、第２の生体適合性ポリマー内に別個に組み込まれている。この生体適合性ポリマーは生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ第１の生体適合性ポリマーと同じであっても異なっていてもよい。
【００２３】
さらに別の態様において、ビスホスホネート化合物は、内包されていないが徐放性組成物と混じり合った状態で存在し得る。例えば、ビスホスホネートは、徐放性組成物を送達するのに使用されるビヒクルに可溶化され得る。あるいはまた、ビスホスホネート化合物は、適切なビヒクル中に懸濁された固体として存在し得る。さらに、ビスホスホネートは、徐放性組成物と混じり合った粉体として存在し得る。
【００２４】
ビスホスホネートは、P-C-P型骨格を特徴とする一群の合成ピロリン酸塩である。ビスホスホネートは、骨吸収および異所性石灰化の強力インヒビターである。一般に、ビスホスホネートは式Ｉ：
【００２５】
【化１】
2004532218.tif 000002
式中、
Ｒ１は、独立して、Ｈ、アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘは、Ｈ、−ＯＲ１またはハロゲンであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、（ＣＨ２）ｎ、分枝鎖アルキレン、分枝鎖もしくは直鎖アルケニレンまたはアルキニレンであり；
ｎは、約０〜約１８の整数であり；
Ｙは、Ｈ、Ｒ１、ハロゲン、アミノ、シアノまたはアミド基である
で表され得る。
【００２６】
本明細書で使用される「アルキル」は、直鎖または分枝鎖の置換または非置換のＣ１〜Ｃ１８炭化水素基をいう。好適なアルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用される「ハロゲン」は、塩素、臭素、ヨウ素およびフッ素をいう。本明細書で使用される「アリール」という用語は、非置換および置換の芳香族炭化水素をいう。本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、アリール基の少なくとも１つの炭素がヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）で置換された非置換または置換のアリール基をいう。好適な置換基としては、例えば、ハロゲン、−ＯＨ、アルコキシ、アミノ、アミド、−ＳＨ、シアノ、−ＮＯ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＨ、−ＣＯＯＲ１が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】
以下に示すものなどのいくつかのジェミナルなビスホスホネートが、現在、中等度から重度のパジェット病および悪性新生物に関連する高カルシウム血症の処置、多発性骨髄腫に関連する骨溶解性骨病変の処置および骨粗鬆症の処置のために使用されている。
【００２８】
【化２】
2004532218.tif 000003
【００２９】
【化３】
2004532218.tif 000004
【００３０】
本発明での使用に好適なビスホスホネートは、Breuerらの米国特許第4,705,651号明細書、米国特許第4,327,039号明細書、米国特許第5,312,954号明細書および米国特許第5,196,409号明細書、Nugentの米国特許第5,412,141号明細書、Kieczykowskiらの米国特許第4,922,007号明細書および同第5,019,651号明細書、Benedictらの米国特許第5,583,122号明細書、Gasperらの米国特許第6,080,779号明細書、Bendermanらの米国特許第6,117,856号明細書、Foricherらの米国特許第6,162,929号明細書ならびにPapapoulosらの米国特許第5,885,473号明細書（これらのすべての全内容は参照により本明細書に取り込まれる）に記載のものが挙げられる。
【００３１】
本明細書で使用される「患者」という用語は、処置のレシピエントをいう。哺乳動物患者および非哺乳動物患者が含まれる。特定の態様では、患者は、ヒト、イヌ、マウス、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギなどの哺乳動物である。好ましい態様では、患者はヒトである。
【００３２】
本明細書で規定される用語「徐放性組成物」は、少なくとも１種の生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有する。好適な生体適合性ポリマーは、本明細書に記載のような、生分解性または非生分解性のポリマーあるいはそのブレンドまたはコポリマーのいずれかであり得る。
【００３３】
典型的には、徐放性組成物は、約0.01％（w/w）〜約50％（w/w）の生物学的に活性な薬剤（組成物の乾燥重量）を含有し得る。薬剤の使用量は、該薬剤の所望の効果、計画した放出レベル、および薬剤が放出される時間範囲に応じて変わる。薬剤負荷の好ましい範囲は、約0.1%(w/w）〜約30％（w/w）の薬剤である。薬剤負荷のより好ましい範囲は、約0.5％（w/w）〜約20％（w/w）の薬剤である。
【００３４】
本発明の徐放性組成物は、フィルム、ペレット、ロッド、フィラメント、シリダー、ディスク、ウェハースまたはマイクロ粒子などの多くの形状に成形され得る。マイクロ粒子が好ましい。本明細書で規定される「マイクロ粒子」は、約１ミリメートル未満の直径を有し、内部に生物学的に活性な薬剤が分散されたポリマー成分を含有する。マイクロ粒子は、球状、非球状または不規則の形状を有し得る。典型的には、マイクロ粒子は、注射に適したサイズであり得る。マイクロ粒子の好ましいサイズの範囲は、直径約１から１８０ミクロンである。
【００３５】
本明細書で規定されるように、生物学的に活性な薬剤の徐放は、徐放性組成物からの該薬剤の放出である。放出は、生物学的に活性な薬剤の溶液の直接投与後に治療的に有意な量の生物学的に活性な薬剤が利用可能であり得る期間よりも長い期間にわたって起こる。徐放は、２日より長い期間にわたって起こる生物学的に活性な薬剤の放出であることが好ましい。徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の徐放は、比較的一定または放出の速度を変動しながらの連続的放出または非連続的放出であり得る。放出の連続性および放出のレベルは、使用するポリマー組成物の種類（例えば、ポリマーのモノマー比、分子量、および種々の組み合わせ）、薬剤負荷量および／または所望の効果を生じるための賦形剤の選択に影響される。
【００３６】
本明細書において使用される用語「a」または「an」は１つ以上をいう。
【００３７】
本明細書において使用される「生体適合性ポリマーからの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに十分なビスホスホネート化合物」とは、徐放性組成物がビスホスホネート化合物を含まない場合に起こる生体適合性ポリマーからの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するビスホスホネート化合物の量を意味する。
【００３８】
本明細書で使用される「放出プロフィールを変更する」という用語は、治療量の生物学的に活性な薬剤が生体適合性ポリマーから放出される期間の延長をいう。徐放性組成物中にビスホスホネートが存在する場合、生物学的に活性な薬剤の初期放出が低下しうることも観察されている。
【００３９】
放出プロフィールの変更は、生物学的に活性な薬剤の存在に対する患者の血清適切な薬物動態モニタリングまたは患者に対する薬剤の治療効果をモニターするための患者の薬力学的モニタリングにより確認され得る。例えば、当該技術分野で周知の特異的抗体試験を用いて患者の血清中の特定の生物学的に活性な薬剤の濃度を測定することができる。かかる試験の一例はエリスロポエチンに関して本明細書に記載される。さらに、生物学的に活性な薬剤の治療効果は、生物学的に活性な薬剤の薬力学的効果をモニターすることにより測定することができる。例えば、本明細書に記載のような、エリスロポエチンの投与に応答した患者のヘマトクリットの測定である。薬力学的効果をモニターする方法は、広く利用可能な技術を用いて投与される生物学的に活性な薬剤に基づいて選択され得る。
【００４０】
本明細書で使用される「治療有効量」、「予防有効量」または「診断有効量」は、投与後に所望の生物学的応答を惹起するのに必要な徐放性組成物の量である。本発明のポリマーは生体適合性である。好適な生体適合性ポリマーは、本明細書に記載のような生分解性もしくは非生分解性のポリマーまたはそのブレンドもしくはコポリマーのいずれかであり得る。
【００４１】
適切な生体適合性ポリマーは、本明細書に記載のような生分解性もしくは非生分解性のポリマーまたはそのブレンドもしくはコポリマーのいずれかでありうる。ポリマーおよび該ポリマーのいかなる分解産物もレシピエントに対して非毒性であり、かつ注射部位での免疫学的反応のような、レシピエントの身体に対して有意に有害または不都合な影響をも有さない場合、ポリマーは生体適合性である。
【００４２】
本明細書中で規定される「生分解性」は、前記組成物がインビボで分解または侵食し、より小さな化学種を形成することを意味する。分解は、例えば、酵素的プロセス、化学的プロセスおよび物理学的プロセスにより生じ得る。適切な生体適合性、生分解性ポリマーとしては、例えば、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物（polyanydride）、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、コポリマーまたはポリエチレングリコールおよびポリオルトエステル、生分解性ポリウレタン、そのブレンド、ならびにそのコポリマーが挙げられる。
【００４３】
適切な生体適合性、非生分解性ポリマーとしては、ポリアクリレート、エチレン−酢酸ビニルのポリマーおよび他のアシル置換酢酸セルロースのポリマー、非分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル（polyvinyl flouride）、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、そのブレンド、およびそのコポリマーからなる群より選択される非生分解性ポリマーが挙げられる。
【００４４】
本発明に使用されるポリマーの許容され得る分子量は、所望のポリマー分解速度、機械強度等の物性、および溶剤中でのポリマーの溶解速度等の因子を考慮して当業者により決定されうる。典型的には、分子量の許容され得る範囲は、約2,000ダルトン〜約2,000,000ダルトンである。
【００４５】
特定の態様では、ポリマーは生分解性のポリマーまたはコポリマーである。より好ましい態様では、ポリマーはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（以下「PLG」）である。PLGは、例えば、約10：90、25：75、50：50、75：25または90：10のラクチド：グリコリド比および約5,000ダルトン〜約70,000ダルトンの分子量を有し得る。
【００４６】
本明細書で使用される「生物学的に活性な薬剤」という用語は、インビボで放出されると所望の生物学的活性、例えば、インビボの治療性、診断性および／または予防性を有する薬剤またはその薬学的に許容され得る塩である。該用語は、本明細書に記載のような安定化された生物学的に活性な薬剤を包含することが理解される。
【００４７】
好適な生物学的に活性な薬剤の例としては、免疫グロブリン、抗体、サイトカイン（例えば、リンホカイン、モノカイン、ケモカイン）、インターロイキン、インターフェロン、エリスロポエチン、ヌクレアーゼ、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子、インスリン、酵素（例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、プラスミノーゲンアクチベーターなど）、腫瘍サプレッサー、血液タンパク質、ホルモンおよびホルモンアナログ（例えば、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、および黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH））、ワクチン（例えば、腫瘍性抗原、細菌性抗原およびウイルス性抗原）、抗原、血液凝固因子などのタンパク質；成長因子；タンパク質インヒビター、タンパク質アンタゴニストおよびタンパク質アゴニストなどのペプチド；アンチセンス分子などの核酸；オリゴヌクレオチド；ならびにリボザイムが挙げられる。本発明での使用に好適な低分子量薬剤としては、塩酸ブレオマイシン、カルボプラチン、メトトレキサートおよびアドリアマイシンなどの抗腫瘍剤；ゲンタマイシン、塩酸テトラサイクリンおよびアンピシリンなどの抗生物質；解熱剤、鎮痛剤および抗炎症剤；塩酸エフェドリン、塩酸メチルエフェドリン、塩酸ノスカピンおよびリン酸コデインなどの鎮咳薬および去痰薬；塩酸クロルプロマジン、塩酸プロクロルペラジンおよび硫酸アトロピンなどの鎮静薬；塩化ツボクラリンなどの筋弛緩薬；フェニトインナトリウムおよびエトスクシミドなどの鎮痙薬；メトクロプラミドなどの抗潰瘍剤；クロミプラミンなどの抗欝薬；ジフェンヒドラミンなどの抗アレルギー剤；テオフィロールなどの強心薬；塩酸プロプラノロールなどの抗不整脈剤；塩酸ジルチアゼムおよび硫酸バメタンなどの血管拡張薬；ペントリニウムおよび塩酸エカラジンなどの低血圧性利尿薬(hypotensive diuretic)；メトホルミンなどの抗利尿薬；クエン酸ナトリウムおよびヘパリンナトリウムなどの抗凝固薬；トロンビン、メナジオン重亜硫酸ナトリウムおよびアセトメナフトンなどの止血剤；イソニアジドおよびエタンブトールなどの抗結核剤；プレドニゾロンリン酸ナトリウムおよびメチマゾールなどのホルモン；リスペリドンなどの抗精神病薬；ならびに塩酸ナロルフィンなどの麻薬性アンタゴニストが挙げられる。
【００４８】
一態様において、生物学的に活性な薬剤は安定化されている。生物学的に活性な薬剤は、分解、効力の喪失および／または生物学的活性の喪失（これらはすべて、内部に生物学的に活性な薬剤が分散された徐放性組成物の形成の際および／または生物学的に活性な薬剤のインビボ放出の前および該放出の際に起こり得る）に対して安定化され得る。一態様において、安定化は、生物学的に活性な薬剤の可溶性の低下をもたらし得、その結果、特に放出が徐放性組成物からである場合、生物学的に活性な薬剤の初期放出が低下する。また、生物学的に活性な薬剤の放出期間が延長され得る。
【００４９】
生物学的に活性な薬剤の安定化は、例えば、安定化剤または安定化剤の特定の組み合わせの使用により行なわれ得る。安定化剤は、混合物中に存在し得る。本明細書で使用される「安定化剤」という用語は、共有結合または非共有結合様式で生物学的に活性な薬剤と結合もしくは相互作用するか、または生物学的に活性な薬剤に含まれる任意の薬剤である。本発明での使用に好適な安定化剤は、米国特許第5,716,644号明細書、同第5,674,534号明細書、同第5,654,010号明細書、同第5,667,808号明細書、および同第5,711,968号明細書、ならびに1997年9月22日に出願されたBurkeらの米国特許同時継続出願第08/934,830号および1998年6月25日に出願されたBurkeの同第09/104,549号（これらの全教示は参照により本明細書に取り込まれる）に記載されている。
【００５０】
例えば、金属カチオンは、生物学的に活性な薬剤と複合体形成させることができ、または生物学的に活性な薬剤は、プロタミン、アルブミン、スペルミジンおよびスペルミンなどの多価カチオン性複合体形成剤と複合体形成させるか、もしくは「塩析」用塩と会合させることができる。また、生物学的に活性な薬剤の安定化を最適にするため、安定化剤および／または賦形剤の特定の組み合わせが必要であり得る。
【００５１】
好適な金属カチオンとしては、生物学的に活性な薬剤と複合体を形成することができる任意の金属カチオンが挙げられる。本明細書で規定される、金属カチオンで安定化された生物学的に活性な薬剤は、生物学的に活性な薬剤と、生物学的に活性な薬剤に対して有意に酸化性でない少なくとも１種の金属カチオンとを含有する。特定の態様では、金属カチオンは、例えば、+2以上の原子価を有する多価のものである。金属カチオンは生物学的に活性な薬剤と複合体を形成することが好ましい。
【００５２】
好適な安定化用金属カチオンとしては生体適合性金属カチオンが挙げられる。使用された量において金属カチオンがレシピエントに対して非毒性であり、かつ注射部位での有意な免疫学的反応のような、レシピエントの身体に対して有意に有害または不都合な影響をも有さない場合、金属カチオンは生体適合性である。生物学的に活性な薬剤を安定化するための金属カチオンの適性および必要な生物学的に活性な薬剤に対する金属カチオンの比は、粒径減少および／または内包の前後に、金属カチオンで安定化された生物学的に活性な薬剤の粒子に関してポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、逆相クロマトグラフィーおよびＨＰＬＣ分析などの安定性を示す種々の技術を用いることにより当業者によって決定され得る。生物学的に活性な薬剤に対する金属カチオンのモル比は、典型的には約1：2〜約100：1の間であり、好ましくは約2：1〜約12：1の間である。
【００５３】
安定化用金属カチオンの例としては、K+、Zn+2、Mg+2およびCa+2が挙げられるがこれらに限定されない。また、安定化用金属カチオンとして、Cu+2などの遷移金属のカチオンも挙げられる。金属カチオンの組み合わせも使用され得る。
【００５４】
また、生物学的に活性な薬剤は、少なくとも１種の多価カチオン性複合体形成剤により安定化され得る。好適な多価カチオン性複合体形成剤としては、プロタミン、スペルミン、スペルミジンおよびアルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。生物学的に活性な薬剤を安定化するための多価カチオン性複合体形成剤の適性は、金属カチオンでの安定化について上述した様式で当業者によって決定され得る。等しい重量比である多価カチオン性複合体形成剤と生物学的に活性な薬剤が好適である。
【００５５】
さらに、放出期間にわたって生物学的に活性な薬剤の効力を維持するため、およびポリマー分解を変更するため、賦形剤が添加され得る。賦形剤は、後に噴霧化される分散系に添加され得るか、または生物学的に活性な薬剤を粒子とする乾燥物質の微細化の前か後のいずれかにおいて細分化(fragmenting)に供される混合物に添加され得る。好適な賦形剤としては、例えば、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸、界面活性剤および増量剤が挙げられ、当業者に公知である。酸性または塩基性の賦形剤もまた好適である。賦形剤の使用量は、生物学的に活性な薬剤に対する重量基準での比に基づく。アミノ酸、脂肪酸およびスクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、デキストランおよびヘパリンなどの炭水化物では、生物学的に活性な薬剤に対する炭水化物の比は、典型的には、約1：10〜約20：1の間である。界面活性剤では、生物学的に活性な薬剤に対する界面活性剤の比は、典型的には、約1：1000〜約2：1の間である。増量剤は、典型的には、不活性物質を含有する。好適な増量剤は当業者に公知である。
【００５６】
また、賦形剤は、ポリマーマトリックス内に別個に分散された金属カチオン成分であり得る。この金属カチオン成分は、生物学的に活性な薬剤の放出を変更するために作用するが、生物学的に活性な薬剤とは複合体を形成しない。金属カチオン成分は、任意に、金属カチオンで安定化された生物学的に活性な薬剤に含有されるもの（もし存在するならば）と同じ種の金属カチオンを含み得、および／または１種以上の異なる種類の金属カチオンを含み得る。金属カチオン成分は、徐放性組成物のポリマーマトリクスからの生物学的に活性な薬剤の放出を変更するために作用し、該組成物中での生物学的に活性な薬剤の安定性を向上させ得る。放出の変更において使用される金属カチオン成分は、典型的には、少なくとも１種多価金属カチオンを含有する。放出を変更するのに好適な金属カチオン成分の例としては、例えば、Mg(OH)2、MgCO3(4MgCO3・Mg(OH)2・5H2Oなど) 、MgSO4、Zn(OAc)2、Mg(OAc)2、ZnCO3(3Zn(OH)2・2ZnCO3など)、ZnSO4、ZnCl2、MgCl2、CaCO3、Zn3(C6H5O7)2およびMg3(C6H5O7)2が挙げられる。ポリマーに対する金属カチオン成分の好適な重量比は、約1：99〜約1：2の間である。最適比は、用いるポリマーおよび金属カチオン成分に依存する。ポリマーマトリックスからの生物学的に活性な薬剤の放出を変更するための分散された金属カチオン成分を含有するポリマーマトリックスは、Bernsteinらの米国特許第5,656,297号明細書および1998年4月7日に出願された米国特許同時継続出願第09/056,566号（両者の教示は参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）にさらに記載されている。
【００５７】
本明細書に記載の本発明はまた、本発明において使用するのに好適な医薬組成物に関する。一態様において、医薬組成物は、有効量の生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ生体適合性ポリマーを含有する徐放性組成物、および徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに十分な量のビスホスホネート化合物を含有する。
【００５８】
一態様において、ビスホスホネート化合物は、生体適合性ポリマーおよびその内部に組み込まれた生物学的に活性な薬剤を含有する徐放性組成物内に一緒に組み込まれ得る。
【００５９】
別の態様において、医薬組成物は、有効量の生物学的に活性な薬剤を内部に組み込んだ第１の生体適合性ポリマーと、第１のポリマーからの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更する量のビスホスホネートを内部に組み込んだ第２の生体適合性ポリマーとを含有する徐放性組成物を含有する。特定の態様では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは同じ種類のポリマーである。別の態様では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは異なる。
【００６０】
さらに別の態様において、ビスホスホネート化合物は、内包されていない状態で医薬組成物中に存在し得る。例えば、ビスホスホネート化合物は、徐放性組成物と混じり合った状態であり得る。一態様において、ビスホスホネートは、医薬組成物を送達するのに使用されるビヒクルに可溶化され得る。あるいはまた、ビスホスホネート化合物は、医薬組成物を送達するのに有用な適切なビヒクル中に懸濁された固体として存在し得る。さらに、ビスホスホネートは、徐放性組成物と混じり合った粉体として存在し得る。
【００６１】
本発明はまた、ビスホスホネートの徐放のための組成物に関する。徐放性組成物は、治療有効量のビスホスホネートを内部に組み込んだ生体適合性ポリマーマトリックスを含有する。さらに、本発明は、生体適合性ポリマーとビスホスホネート化合物とを含有する徐放性組成物の治療有効量を、処置が必要な被験体に投与することを含む、ビスホスホネート化合物のインビボ徐放のための方法に関する。
【００６２】
特定の態様において、生体適合性ポリマーとビスホスホネートとを含有する徐放性組成物の投与は、関節部、例えば関節部の関節腔に対するものであり得る。例えば、徐放性組成物は、膝、肩、足根関節、股関節部などの関節腔に投与され得る。
【００６３】
生体適合性ポリマーとビスホスホネート化合物とを含有する本発明の徐放性組成物は、骨再吸収または関節炎症に関連する疾患の処置のために使用され得る。例えば、生体適合性ポリマーとその内部に組み込まれたビスホスホネート化合物とを有する徐放性組成物は、関節性リウマチ、骨粗鬆症またはパジェット病の処置薬としての使用に好適であり得る。
【００６４】
徐放性組成物（ポリマー／活性剤マトリックス）を作製し得るいくつかの方法が知られている。これらの方法の多くでは、内包される物質は、壁形成材料を含有する溶剤中に分散される。該方法の単一の段階において、溶剤はマイクロ粒子から除去され、その後、マイクロ粒子生成物が得られる。
【００６５】
生物学的に活性な薬剤の徐放のための組成物を形成するための方法は、Gombotzらに付与された米国特許第5,019,400号明細書およびHerbertらに付与された付与された米国特許第5,922,253号明細書（その教示は参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）に記載されている。
【００６６】
本方法では、生物学的に活性な薬剤、生体適合性ポリマーおよびポリマー溶剤を含有する混合物を処理し、少なくとも有意な部分がポリマー、ポリマー溶剤および活性剤を含む液滴を作製する。次いで、これらの液滴は適当な手段により凍結される。混合物を処理して液滴を形成するための手段の例としては、超音波ノズル、圧力ノズル、レイリージェットへの分散液の指向、または溶液から液滴を作製するための他の公知の手段によるものが挙げられる。
【００６７】
液滴を凍結させる適切な手段としては、液滴を、液体アルゴンまたは液体窒素等の液化ガス内に、またはその付近に指向し、次いで液体ガスから分離される凍結微小液滴を形成することを含む。次いで、凍結微小液滴は、エタノール、ヘキサン、ヘキサン混合エタノール、ヘプタン、ヘプタン混合エタノール、ペンタンまたはオイルなどの液体または固体の非溶剤に曝露される。
【００６８】
凍結微小液滴中の溶剤は、固体および／または液体として非溶剤中に抽出され、生体適合性ポリマーおよび生物学的に活性な薬剤を含有するポリマー／活性剤マトリックスを形成する。エタノールをヘキサン、ヘプタンまたはペンタンなどの他の非溶剤と混合すると、エタノール単独で達成されるよりも、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーなどのある種のポリマーからの溶媒抽出速度が増大し得る。
【００６９】
液滴のサイズを変更することにより、例えば、超音波ノズルの直径を変えることにより広範囲のサイズの徐放性組成物が作製され得る。徐放性組成物がマイクロ粒子形態であって、非常に大きなマイクロ粒子が所望される場合、マイクロ粒子は、例えば、シリンジにより直接低温液体中に押し出し成形される。ポリマー溶液の粘度の増大もまた、マイクロ粒子のサイズを増大し得る。本方法により作製され得るマイクロ粒子のサイズは、例えば、直径約1000を超えて約1マイクロメートルの範囲である。
【００７０】
生体適合性ポリマーおよび生物学的に活性な薬剤を含有する懸濁液から徐放性組成物を形成するさらに別の方法としては、鋳型内などでフィルムまたは形状を形成するフィルムキャスティングが挙げられる。例えば、懸濁液を鋳型に入れた後、次いで、一定の乾燥重量のフィルムまたは形状が得られるまで、ポリマー溶剤が当該技術分野で公知の手段により除去されるか、またはポリマー懸濁液の温度が低下させられる。
【００７１】
従来のマイクロカプセル化方法およびそれにより作製されるマイクロ粒子のさらなる例は、溶剤中に壁または殻形成性重合性物質を含む溶液を調製する米国特許第3,737,337号明細書（参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）に開示されている。溶剤は一部のみ水と混和性である。固体またはコア物質はポリマー含有混合物に溶解または分散され、その後、コア物質含有混合物は、マイクロ粒子から溶剤を除去するために有機溶剤に非混和性の水性液体中に分散される。
【００７２】
物質を含有するマイクロ粒子から溶剤を除去する方法の別の例は、米国特許第3,523,906号明細書（参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）に開示されている。この方法では、内包される物質は、水に非混和性の溶剤に重合性物質を含む溶液中で乳化され、次いで、エマルジョンは親水性コロイドを含有する水溶液中で乳化される。次いで、マイクロ粒子からの溶剤除去はエバポレーションにより行なわれ、生成物が得られる。
【００７３】
米国特許第3,691,090号明細書（参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）に示されているさらに別の方法では、有機溶剤は、好ましくは減圧下にて、水性媒体中にマイクロ粒子を含む分散液からエバポレートされる。
【００７４】
同様に、米国特許第3,891,570号明細書（参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）の開示は、多価アルコール媒体中にマイクロ粒子を含む分散液由来の溶剤は、熱の適用により、またはマイクロ粒子を減圧に供することにより、マイクロ粒子からエバポレートされる方法を示している。
【００７５】
溶剤除去方法の別の例は、米国特許第3,960,757号明細書（参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）に示されている。
【００７６】
Ticeらの米国特許第4,389,330号明細書には、（ａ）溶剤中に活性剤を溶解または分散させ、壁形成性物質を該溶媒に溶解する工程；（ｂ）活性剤および壁形成性物質を含有する溶剤を連続相処理用媒体内に分散する工程；（ｃ）工程（ｂ）の分散液から溶剤の一部をエバポレートし、それにより懸濁液中にて活性剤を含有するマイクロ粒子を形成する工程；および（ｄ）溶剤の残りをマイクロ粒子から抽出する工程を含む方法による、活性剤を含有するマイクロ粒子の調製が記載されている。
【００７７】
特定の理論に拘束されることなく、生物学的に活性な薬剤の放出は２つの異なる機構によって生じ得ると考えられる。１つめは、生物学的に活性な薬剤は、例えば、生物学的に活性な薬剤の溶解により、または徐放性組成物の調製の間にポリマー溶媒の除去により生じる空隙により、ポリマーマトリクス内に生じる水性のフィルチャンネルを介する拡散により放出され得る。第２の機構は、ポリマーの分解による、生物学的に活性な薬剤の放出である。分解の速度は、ポリマーの水和の速度に影響するポリマー特性を変化させることにより制御され得る。これらの特性としては、例えば、ポリマーを構成するラクチドおよびグリコリドなどの種々のモノマー比率；ラセミ混合体の代わりにモノマーのＬ−異性体の使用；およびポリマーの分子量が挙げられる。これらの特性は、ポリマーの水和の速度を制御する、親水性および結晶化度に影響し得る。
【００７８】
ポリマーの特性を変更することにより、生物学的に活性な薬剤放出への拡散および／またはポリマー分解の寄与が制御され得る。例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーのグリコリド含量を増大させること、およびポリマーの分子量を減少させることにより、ポリマーの加水分解を増強させることができ、従って、ポリマーエロージョンからの生物学的に活性な薬剤放出の速度が増大する。
【００７９】
本発明の組成物は、例えば、特定の薬剤での種々の医学的状態の処置のための既知のパラメーターに基づいて、抗原または不安定な薬剤の所望の用量を提供するために、注射、移植（例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、頭蓋内、および皮内）、粘膜への投与（例えば、鼻腔内、腟内、肺内、頬内または坐薬により）、またはインサイチュ送達（例えば、注腸またはエアロゾルスプレーによる）により、経口、または非経口的に、ヒト、または動物にインビボで投与することができる。
【００８０】
本発明は、その好ましい態様を参照して詳しく示され、記載されたが、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を逸脱することなく、その範囲内で、形態および詳細において種々の変更がなされ得ることは当業者にとって明らかである。
【実施例】
【００８１】
材料および方法
インビボ試験
雄性Sprague-Dawleyラット（体重350〜450グラム）（Charles River Laboratories, Inc.）を、少なくとも7日間の標準的な動物収容における順化後に下記の研究に使用した。動物を、徐放性組成物およびビスホスホネートの投与後0〜14日間毎日、シクロスポリン（Sandimmune, Sandoz; CS）5mg/kg ipで処置し、その後１週間に3回処置した。いくつかの例では、シクロスポリン処置を、初期0〜14日処置の間、少なくとも連続しない2日間省略した。EPO含有マイクロ粒子およびビスホスホネート化合物の投与を、以下に詳細に記載する。
【００８２】
EPO含有マイクロ粒子の調製
組み換えヒトエリスロポエチン（EPO）を含有するマイクロ粒子を、1998年2月10日にZaleらに発行された米国特許第5,716,644号（その全内容が参考として本明細書により援用される）に記載の手順に従って作製した。具体的には、EPO含有マイクロ粒子を、Cincinnati, OhioのAlkermes, Inc.からカタログ番号5050DL2Aで購入したポリマー（ラクチド／グリコリド比50：50のポリ（ラクチド−コ−グリコリド）10kDポリマー）を用いて調製した。ビスホスホネート（biosphosphonate）含有マイクロ粒子を、Cincinnati, OhioのAlkermes, Inc.からカタログ番号5050DL3Aでも入手可能なラクチド／グリコリド比50：50のポリ（ラクチド−コ−グリコリド）25kDポリマーを用いて調製した。EPOを、Johnson & Johnson, New Brunswick, New Jerseyから得、滅菌した後、マイクロ粒子中に安定化したEPOの総重量の約1.6％w/wのEPO負荷を用い、米国特許第5,716,644号に記載されるように内包した。
【００８３】
ビスホスホネート含有マイクロ粒子の調製
表示（indicated）ビスホスホネートのマイクロ粒子理論的負荷の最終重量の1％および2.5％w/wの両方を有するビスホスホネート含有マイクロ粒子を、ラクチド：グリコリド比50：50のポリ（ラクチド−コ−グリコリド）前記カタログ番号5050DL3を用いて調製した。
【００８４】
簡単には、ビスホスホネートは水に可溶性であるが、有機物には不溶性であり、このことにより相分離はビスホスホネート含有マイクロ粒子の調製に使用するのに適切な方法となる。まず212mgのポリ（D,L-ラクチド−コ−グリコリド）（カタログ番号5050DL3AとしてCincinnati, OhioのAlkermes, Inc.から入手可能な約25kDの分子量を有する）を量りとり、約5.9％W/Vの濃度で塩化メチレンに溶解した。375mgマンニトール中に90mgパミドロネート二ナトリウム（AREDIA 90（登録商標）として入手可能）を量りとり、約3gの水に溶解した。次いで、内包溶液をポリマー溶液に添加し、約1分間パルスを用いてプローブ音波処理し、極めて微細な油中水（W/O）エマルジョンを作製した。
【００８５】
得られたエマルジョンを350mLガラス反応器に充填した。撹拌速度を約1000RPMに設定した。コアセルベーション剤（Dow Corning 360 Fluid, 350 cs）を、蠕動ポンプによりゆっくりと撹拌W/Oエマルジョンに添加し、相分離を誘導した。１：１の液体：塩化メチレン比に達したときに、Dow Corning 360 Fluid添加を停止した。次いで、反応器の底コック栓を開けて、ヘプタンクエンチに初期マイクロ粒子を重力送りした。ヘプタンクエンチ中で約２時間撹拌後、硬化したマイクロ粒子を濾過により単離し、一晩周囲温度の減圧チャンバ内で乾燥させた。次いで、生成物を収集し、重量測定した。
【００８６】
実施例１
同時投与後のEPO含有マイクロからのEPO放出へのビスホスホネート含有マイクロ粒子の薬理学的効果
ビスホスホネート含有マイクロ粒子をインビボで雄性Sprague-Dawleyラットに同時投与した場合の、EPO含有マイクロ粒子からのEPO放出に対する薬物動態学（PK）／薬理学（PD）応答を測定した。
【００８７】
マイクロ粒子投与
動物を5％ハロタンで麻酔した。各動物を剃毛し、背中をアルコールでふき取った。マイクロ粒子を0.75mLビヒクル（3％カルボキシメチルセルロース、0.1％Tween20、0.9％NaCl、pH約6）を用いて再懸濁した。マイクロ粒子を、1mL注射器に取り付けた21ゲージ薄壁針を用いて肩甲骨間部位に注射した。動物に合計2.5mgの表示ビスホスホネートと組み合わせて合計10,000UのEPOを与えるように投薬した。必要なビスホスホネート含有粒子の量を、マイクロ粒子製剤中のビスホスホネートの理論負荷に基づいて決定した。例えば、100mgのビスホスホネート含有マイクロ粒子は、25mgの投与を生じる2.5％の理論負荷のビスホスホネートを有する。埋め込み後47日間動物を追跡した、ただし、Ｇ群（アレンドロネート）は57日間追跡した。マイクロ粒子を混合し、１回注射として投与した。
【００８８】
2.5％の理論負荷のビスホスホネートを有するビスホスホネート含有マイクロ粒子を以下のビスホスホネート化合物を用いて2.5％理論負荷を有するように上記のように調製した：パミドロネート（AREDIA（登録商標）、(3-アミノ-1-ヒドロキシプロピリデン)ビスホスホン酸（bispnosphonic acid））二ナトリウム塩）、エチドロネート（(1-ヒドロキシエチレデン)ビスホスホン酸）二ナトリウム塩、DIDRONEL（登録商標））、ティルドロネート（tiludronate）（[[(4-クロロフェニル)チオ]メチレン]ビスホスホン酸二ナトリウム塩、SKELID（登録商標））、リゼドロネート（risedronate）（[1-ヒドロキシ-2-(3-ピリジニル)エチリデン]ビスホスホン酸）一ナトリウム塩、ACTONEL（登録商標））、およびアレンドロネート（(4-アミノ-1-ヒドロキシブチリデン)ビスホスホン酸）一ナトリウム塩、FOSAMAX（登録商標））。さらに、ビスホスホネート化合物を中に組み込まないマイクロ粒子（プラセボ）を概略した方法に従って調製した。
【００８９】
サンプル収集時点（日）
ブリード前、1、2、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、42、47、50、54、および57
【００９０】
【表１】
2004532218.tif 000005
【００９１】
血清評価
血清サンプル（40μL）をマイクロ粒子投与に関して以下の日に尾静脈から収集した：ブリード前、1、2、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、42、47、50、54および57。凝固後、サンプルを遠心分離し、-70℃で凍結した。血清EPOレベルを、ELISA（R&D Systems, Minneapolis, Minnesotaカタログ番号DEPOO）により定量した。結果を図１にグラフで表した。
【００９２】
毛管を用いて8000rpmで5分間遠心分離した後、ヘマトクリットを手動で評価した（1群あたり4匹の動物）。ヘマトクリットを、マイクロ粒子投与に関して以下の間隔でも測定した：ブリード前、1、2、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、42、47、50、54、および57。結果を図２にグラフで表した。
【００９３】
動物を、異常行動のなんらかの徴候について定期的に観察した。注射部位を、硬化、湿潤または紅斑について定期的に観察した。部位を青白さ（blanching）に基づいて毎週観察した。各サンプル収集時点で体重を量り、記録した。
【００９４】
EPO血清レベルが一旦定量限界より下に低下したとき、実験を終了した。
【００９５】
結果
血清EPOレベルのELISA試験からの用量正規化データを図１に示す。データは、試験したビスホスホネート化合物それぞれが、EPO含有マイクロ粒子のみを受けた群と比較してEPO含有マイクロ粒子からのEPOの放出を向上させることを示す。しかし、アレンドロネートのみが、EPO含有マイクロ粒子と同時投与したプラセボマイクロ粒子を受けた群と比較してEPO含有マイクロ粒子からのEPO放出の期間に有意に影響を及ぼすことを示した。すなわち、Ｇ群の動物は、29日で測定可能なレベル（23.17±8.22）の血清EPOを有していた。これは、定量限界より下のプラセボ処置対照と比較してp＜0.01で有意であった。さらに、Ｂ群動物（Cmax：3989.56±883.47、p＜0.05）と比較して、Ｃ群動物（Cmax：2072.73±437.8）では破裂において有意な減少が見られた。パミドロネート処置（Ｃ群）は、検出可能なレベルのEPOの放出期間を増加したが、プラセボ処置群（Ｂ群）と有意には異ならなかった。
【００９６】
5つの処置群のうち4つにおけるヘマトクリットは、対照群ＡおよびＢよりも上に上昇した。さらに、ヘマトクリットが36日後の対照よりも有意に高く残存することをＧ群（アレンドロネート）について観察された（図２）。36日はEPOの血清レベルが陽性であった最後の日である。アレンドロネート処置群は、対照群ＡおよびＢについて測定した最後の日である47日まで高いヘマトクリットを示し、薬物動態学（PD）応答は薬力学（PK）応答以上に延びることを示した。さらに、26、33および36日の時点で、Ｃ群動物（パミドロネート処置）におけるヘマトクリットもまた、対照よりも有意に（p＜0.05）高かった。26日目以降、Ｇ群を除く全ての群のヘマトクリットは、ベースラインまたはベースライン付近に達した。すなわち、Ｇ群は、26〜47日の全ての時点で対照よりも有意に（p＜0.05）高いヘマトクリットを有しており、57日までベースラインに達しなかった。最後に、60％ヘマトクリットを比較すると、アレンドロネートは、EPOに対するPD応答をプラセボ対照群（Ｂ）における32日から49日に延ばした。これは、アレンドロネートを用いた17日間の増強である。
【００９７】
パミドロネート二ナトリウム（AREDIA（登録商標））含有マンニトールを1mgで調薬し、EPO含有マイクロ粒子と混合した。
【００９８】
パミドロネート含有ビヒクルを受けた群（Ｅ群）においても、放出期間の増加があった。Ｅ群はまた、他の群と比較して12日〜15日時点で放出の有意な上昇を示した。この上昇した放出は、調整放出が所望される臨床設定において有用であり得る。
【００９９】
パミドロネート含有ビヒクル（Ｅ群）の使用もまた、EPO PK/PDを向上させた。
【０１００】
実施例２
種々の用量でのアレンドロネート含有マイクロ粒子およびEPO含有マイクロ粒子の同時投与
本実施例は、アレンドロネート含有マイクロ粒子の種々の用量と同時投与した場合のEPO含有マイクロ粒子から放出されたEPOに対するPK/PD応答を比較するものである。
【０１０１】
材料および方法
EPO含有マイクロ粒子、アレンドロネート含有マイクロ粒子およびプラセボマイクロ粒子を、実施例１に記載のように調製した。アレンドロネート含有マイクロ粒子を、1.0％と2.5％の負荷（理論値）で調製した。マイクロ粒子投与、サンプル収集およびサンプル分析を実施例１に記載のようにし、表２にまとめる。サンプル収集時点は、ブリード前、1、2、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40であった。
【０１０２】
【表２】
2004532218.tif 000006
【０１０３】
結果：
血清ELISAデータは、1％および2.5％アレンドロネート内包ミクロスフェアを受けた動物において明らかな用量応答を示す。図３は、36日間にわたる研究の薬理学プロフィールを示す。EPO含有マイクロ粒子およびプラセボマイクロ粒子（ビスホスホネートなし）のみを100、50および25mg用量で受けたＩ、IIおよびIII群の動物における血清EPOレベルは、22日後測定不可能であった。合計用量1.0、0.5および0.25mgで1％アレンドロネート含有マイクロ粒子を受けたVIII、IXおよびX群は、29日まで減退した。しかし、合計2.5、1.25および0.625mgのアレンドロネートのために2.5％負荷アレンドロネート含有マイクロ粒子を受けたV、VIおよびVII群における血清EPOレベルは、少なくとも34日まで検出可能であった。
【０１０４】
表３に本研究のCmaxデータをまとめる。それぞれ合計2.5および1.25mgのために100または50mgの2.5％負荷アレンドロネート含有マイクロ粒子を受けたV群およびVI群のCmaxは、用量一致のプラセボ群IおよびIIよりも有意に低かった（p＜0.05）。Cmaxは、対応するプラセボ対照と比較してVII群では有意に抑制されなかった。VIおよびVII群の定常状態レベル（5日〜29日）は、その対照と比較して48〜132および56〜146に増加した（p＜0.05）。VIII、IXおよびX群（1％負荷マイクロ粒子）は、25および50mg用量で48〜84および56〜111の定常状態血清EPO増加を示したが、これらの差は、同用量のブランクマイクロ粒子でのプラセボ群と比較して統計学的に有意ではなかった。
【０１０５】
【表３】
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【０１０６】
図４Ａは、対応するプラセボ用量のマイクロ粒子を受けた群（図４Ｃ）と比較して、種々の用量の2.5％アレンドロネート含有マイクロ粒子およびEPO含有粒子を同時投与された全ての3つの群（V、VIおよびVII群）のラットにおいてヘマトクリット応答が向上することを示す。ヘマトクリット＞60％の期間は、全ての群において少なくとも6日増加した。40日での研究終了の結果、薬物動態学に対する完全な向上効果を測定することはできなかった。
【０１０７】
V、VIおよびVII群のヘマトクリットレベル（図４Ａ）は、40日で65％を超え、対照よりも有意に高かった（56％、P＜0.01）。図４Ｂは、EPO含有マイクロ粒子と同時投与されたそれぞれ100mg、50mgまたは25mgの1％アレンドロネート含有マイクロ粒子で処置したVIII、IXおよびX群のヘマトクリットレベルを示す。VIII、IXおよびX群の中でも、100mg用量（VIII群）のみが、EPO含有マイクロ粒子と同時投与された100mgのプラセボマイクロ粒子を受けた群のヘマトクリット値より40日で有意に高かった。
【０１０８】
図４Ｃは、EPO含有マイクロ粒子と同時投与されたプラセボマイクロ粒子の注射後に得られたヘマトクリット値を示す。図４Ａ〜４Ｃから、EPO含有マイクロ粒子と同時投与される場合、種々の用量の2.5％負荷アレンドロネート含有マイクロ粒子を受けた群、種々の用量の1.0％負荷アレンドロネート含有マイクロ粒子を受けた群および種々の用量のプラセボマイクロ粒子を受けた群の間に有意な差はないことを示した。
【０１０９】
IV、VおよびVI群（2.5％負荷アレンドロネート含有マイクロ粒子の同時投与）ならびにVIII群（100mg用量の1％アレンドロネート含有マイクロ粒子）は、40日で注射部位に明白な塊を有していた。この研究は、注射部位を回復させるためこの時点で終了した。しかし、プラセボ群では膨らんだ／炎症部位はなく、このことは、炎症がアレンドロネート群に限定されることを示している。より低用量のマイクロ粒子の場合、隆起のサイズもより小さく、２つの最も低用量のアレンドロネート（1％負荷、50および25mg用量）において、皮膚全体にわたって明白な塊はなかった。アレンドロネート群で見られた炎症は、アミンを含有するビスホスホネートで生じ得る急性期反応によるものと考えられる。
【０１１０】
実施例３
EPOと同時内包したパミドロネートの効果
材料および方法：
EPO含有マイクロ粒子を、50：50のラクチドグリコリド比を有する40kDポリマーポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマー（カタログ番号5050DL4A、Alkermes, Inc., Cinncinnati, Ohio）を用いて実施例１に記載のように調製した。さらに、1％および10％（理論値）の名目上の負荷で同時内包したパミドロネートを有するEPO含有マイクロ粒子（1.9％理論負荷）もまた、EPO単独について実施例１に記載されるように調製した。
【０１１１】
マイクロ粒子投与、サンプル収集およびサンプル分析を実施例１に記載のようにし、表４にまとめる。サンプル収集時点は、ブリード前、1、2、6、9、13、16、20、23、27、30、34、37、41、44、48日であった。
【０１１２】
【表４】
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【０１１３】
結果：
10,000mU/mL付近以上の初期ピークに続いて、全群の血清EPOレベルは、約100mU/mLで定常状態に到達する6日まで急に減少した（図５）。しかし、1％パミドロネートと同時内包したEPO含有マイクロ粒子で処置していた群における血清EPOレベルは、より速やかに減少し始め、その結果、レベルは16日までにアッセイ検出限界であった。EPOおよび10％パミドロネートを含有するマイクロ粒子での血清EPOレベルは対照を超えて上昇するが、レベルは23日後対照を超えて維持できなかった。9〜27日で比較した群の血清EPO定常状態レベルは、対照群と比較して10％パミドロネート含有マイクロ粒子を受けた群（表５）において有意な増加（p＜0.05）を示した。1％または10％含有パミドロネートマイクロ粒子はいずれも、有意にはEPO破裂を低下せず、対照動物よりも定常状態レベルのEPOを長く延ばさなかった。
【０１１４】
【表５】
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【０１１５】
ヘマトクリットを、X、YおよびZ群でEPOの薬理学効果の基準として評価した（図６）。1％ビスホスホネートを受けた群において、対照と比較して有意な効果は観察されなかった。EPO含有マイクロ粒子内に組み込まれた10％ビスホスホネートを受けた動物の場合、ヘマトクリットは、9〜37日の期間にわたって上方傾向を示した。ヘマトクリットにおける差は、13日および16日で対照とは統計的に異なる（p＜0.05）。これは、13〜20日に観察した10％ビスホスホネートを受けた群のPK値が向上したことと一致する。
【０１１６】
ビスホスホネート、パミドロネートは、10％の名目上負荷でProLeaseマイクロ粒子に同時内包した場合、EPOに対するPKおよびPD応答の両方を調節することができた。本実施例において、EPO応答の持続に増加は観察されなかった。しかし、パミドロネートは、約1週間、EPO循環血清レベルの上昇を生じた。この増加は、薬理学応答の向上にも反映されている。
【０１１７】
本発明をその好ましい態様を参照して具体的に示し記載したが、当業者は、添付の請求の範囲により包含される本発明の範囲を逸脱することなく本明細書において形態および詳細の種々の変更を行い得ることを理解するだろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１８】
【図１】図１は、EPOを含有し、かつビスホスホネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対する血清EPOレベル（mU/mL）のプロットの図である。
【図２】図２は、EPOを含有し、かつビスホスホネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対するヘマトクリットの％のプロットの図である。
【図３】図３は、EPOを含有し、かつアレンドロネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対する血清EPOレベル（mU/mL）のプロットの図である。
【図４Ａ】図４Ａは、EPOを含有し、かつアレンドロネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対するヘマトクリットの％のプロットの図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、EPOを含有し、かつアレンドロネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対するヘマトクリットの％のプロットの図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、EPOを含有し、かつアレンドロネートを含有する本発明のマイクロ粒子の投与後の日数に対するヘマトクリットの％のプロットの図である。
【図５】図５は、一緒に内包されたEPOとパミドロネート（1％および10％負荷）とを含有するマイクロ粒子の投与後の日数に対する血清EPOレベル（mU/mL）のプロットの図である。
【図６】図６は、一緒に内包されたEPOとパミドロネート（1％および10％負荷）とを含有するマイクロ粒子の投与後の日数に対するヘマトクリットの％のプロットの図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年2月13日(2003.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置の必要な被験体に、生物学的に活性なタンパク質、ペプチドまたは核酸を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含有してなる徐放性組成物の有効量、および該徐放性組成物からの該生物学的に活性なタンパク質、ペプチドまたは核酸の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物を投与することを含む、生物学的に活性なタンパク質、ペプチドまたは核酸から選択される生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放のための方法。
【請求項２】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に同時に組み込まれている請求項１記載の方法。
【請求項３】
処置の必要な被験体に、生物学的に活性な薬剤を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含有してなる徐放性組成物の有効量、および第二の生体適合ポリマーに別個に組み込まれ、かつ徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物を投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放の方法。
【請求項４】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーと同じである請求項３記載の方法。
【請求項５】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーとは異なる請求項３記載の方法。
【請求項６】
処置の必要な被験体に、生物学的に活性な薬剤を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含有してなる徐放性組成物の有効量、および該徐放性組成物に内包されていないが徐放性組成物と混ざり合っており、徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物を投与することを含む、生物学的に活性な薬剤のインビボ徐放の方法。
【請求項７】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項３記載の方法。
【請求項８】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項７記載の方法。
【請求項９】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項３記載の方法。
【請求項１０】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項３記載の方法。
【請求項１２】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１記載の方法。
【請求項１３】
タンパク質がエリトロポイエチンである請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ａ）生物学的に活性なタンパク質、ペプチドまたは核酸から選択される生物学的に活性な薬剤の有効量を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含んでなる徐放性組成物；および
ｂ）徐放性組成物からの生物学的に活性なタンパク質、ペプチドまたは核酸の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物
を含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に同時に組み込まれている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ａ）生物学的に活性な薬剤の有効量を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含んでなる徐放性組成物；および
ｂ）第二の生体適合ポリマーに別個に組み込まれ、かつ徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物
を含んでなる医薬組成物。
【請求項１７】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーと同じである請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１８】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーとは異なる請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ａ）生物学的に活性な薬剤の有効量を中に組み込んだ生体適合ポリマーを含有してなる徐放性組成物；および
ｂ）徐放性組成物に内包されていないが徐放性組成物と混ざり合っており、徐放性組成物からの生物学的に活性な薬剤の放出プロフィールを変更するのに充分な量で存在しているビスホスホネート化合物
を含んでなる医薬組成物。
【請求項２０】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンドおよびそのコポリマーから選択される、請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項２１】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項２３】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項２５】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
タンパク質がエリトロポイエチンである請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
ビスホスホネート化合物が第二の生体適合ポリマーに別個に組み込まれている請求項１記載の方法。
【請求項２８】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーと同じである請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーとは異なる請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に内包されていないが、徐放性組成物と混ざり合っている請求項１記載の方法。
【請求項３１】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンド、およびそのコポリマーから選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３２】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１記載の方法。
【請求項３４】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１記載の方法。
【請求項３５】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項１記載の方法。
【請求項３６】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項３記載の方法。
【請求項３７】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項３記載の方法。
【請求項３８】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンド、およびそのコポリマーから選択される、請求項６記載の方法。
【請求項３９】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項６記載の方法。
【請求項４１】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項６記載の方法。
【請求項４２】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項６記載の方法。
【請求項４３】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項６記載の方法。
【請求項４４】
ビスホスホネート化合物が第二の生体適合ポリマーに別個に組み込まれている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項４５】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーと同じである請求項４４記載の医薬組成物。
【請求項４６】
第二の生体適合ポリマーが徐放性組成物の生体適合ポリマーとは異なる請求項４４記載の医薬組成物。
【請求項４７】
ビスホスホネート化合物が徐放性組成物に内包されていないが、徐放性組成物と混ざり合っている請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項４８】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンド、およびそのコポリマーから選択される、請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項４９】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項４８記載の医薬組成物。
【請求項５０】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項５１】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項５２】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項５３】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項５４】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項５５】
徐放性組成物の生体適合ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルのコポリマー、ポリウレタン、そのブレンド、およびそのコポリマーから選択される、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項５６】
生体適合ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）である請求項５５記載の医薬組成物。
【請求項５７】
ビスホスホネート化合物がアレンドロネート、リゼンドロネート、パミドロネート、エチドロネート、ティルドロネートまたはその組み合わせである請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項５８】
徐放性組成物がマイクロ粒子の形態である請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項５９】
生物学的に活性な薬剤がタンパク質である請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項６０】
生物学的に活性な薬剤がペプチドである請求項１９記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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