(57)【要約】Ｒ１およびＲ２、ＸおよびＸ’が明細書中の記載と同意義である式（Ｉ）：【化１】2004524302.tif 000007で示される治療的に活性なチアゾール誘導体、その製造方法、治療における、特に形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）の過剰発現により特徴付けられる障害の治療または予防におけるその使用、およびかかる治療において用いるための医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004524302.tif 000004
［式中、
Ｒ１はＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択され；
Ｒ２はフェニル、フラニルまたはチオフェニルから選択され、これらの各々は、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基によりさらに置換されていてもよい］
で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１が、ピリジン環のＣ（３）またはＣ（６）位に位置し、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択される請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＨである請求項２記載の式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、ピリジル環のＣ（２）位に位置し、フェニルまたはチオフェニルを意味し、その各々が、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはＯＣＦ３から選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基により置換されていてもよい請求項１〜３いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、ピリジル環のＣ（２）位に位置し、さらにハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはＯＣＦ３から選択される置換基によりパラ位で置換されていてもよいフェニルを意味する前記請求項いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項６】
５−［２−（４−クロロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−フルオロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−エチルフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−エトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（２−チオフェン−３−イル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
から選択される請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
少なくとも１つの請求項１〜６いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物を、医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含んでなる医薬組成物。
【請求項８】
医薬として用いるための請求項１〜６いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項９】
ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療および／または予防のための医薬の製造における、請求項１〜６いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物の使用。
【請求項１０】
ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害を患っているヒトおよび動物対象の治療方法であって、該ヒトまたは動物対象に、有効量の請求項１〜６いずれか１項記載の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む方法。
【請求項１１】
式（Ｉ）：
【化２】
2004524302.tif 000005
［式中、
Ｒ１はＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択され；
Ｒ２はフェニル、フラニルまたはチオフェニルから選択され、それらの各々は、ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択される、１つまたはそれ以上の置換基によりさらに置換されていてもよい］
で示される化合物の製造方法であって：
ａ）適当なハロゲン化剤を式（Ｂ）：
【化３】
2004524302.tif 000006
［式中、Ｒ１およびＲ２は上記と同意義である］
で示される化合物に添加すること；および
（ｂ）続いて、チオ尿素を得られた反応混合物に添加すること、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は新規チアゾール誘導体、その製造法、治療、特に、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）の過剰発現により特徴付けられる障害の治療および予防におけるその使用に関する。
【０００２】
ＴＧＦ−βは、アクチビン／インヒビン、骨形成蛋白（ＢＭＰ）およびＴＧＦ−βを含むＴＧＦ−βスーパーファミリーに属している多機能サイトカインである。ＴＧＦ−βの３つのイソフォーム（ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３）が哺乳類において同定されており、これらの各々は、異なる染色体の別個の遺伝子によりコードされる（D.A. Lawrence, Eur. Cytokine. Netw., 1996, 7(3), 363）。ＴＧＦ−βは、細胞周期を調節し、増殖応答を制御し、または細胞接着、移動および細胞間伝達を媒介する細胞外マトリックス蛋白に関係している、遺伝子の発現を最終的に誘発する細胞内シグナリング経路を開始させる。ＴＧＦ−βは、細胞増殖および分化、細胞外マトリックス形成、造血および免疫調節のモジュレーションを含む多面的効果を有する（RobertsおよびSpoon, Handbook of Experimental Pharmacology, 1990, 95, 419-458）。
【０００３】
種々の細胞表面蛋白および受容体は、活性ＴＧＦ−βリガンドがその受容体に結合することにより開始されるシグナルを変換することが知られている。ＴＧＦ−βシグナリング経路が開始されることにより、ＴＧＦ−βリガンドはＩＩ型膜受容体の細胞外ドメインに結合する（Massague, Ann. Rev. Biochem., 1998, 67, 753.）。ついで、結合ＩＩ型受容体は、Ｉ型（Ａｌｋ５）受容体を、多重結合膜複合体に補充し、ついで、活性ＩＩ型受容体キナーゼは、Ｉ型受容体キナーゼをリン酸化し、活性化する。Ｉ型受容体キナーゼの機能は、受容体結合共転写因子、Ｓｍａｄ−２またはＳｍａｄ−３をリン酸化することであり、その結果これは細胞質中に放出され、Ｓｍａｄ−４に結合する。ＰＡＩ−１遺伝子は、上記した細胞経路の結果として、ＴＧＦ−βにより活性化される。
【０００４】
ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療および／または予防に対する一のアプローチは、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害することである。例えば、優勢ネガティブＴＧＦ−βＩＩ型受容体の過剰発現によるＴＧＦ−βＩＩ型受容体の阻害は、ラットモデルにおいて、肝臓線維症および機能不全を防止すること（Proc. Natl. Acad. Sci, 1999, 96(5), 2345)）および確定した肝臓線維症の進行を防止すること（Hepatology, 2000, 32, 247）が知られている。
【０００５】
ＴＧＦ−βの病的過剰発現は、重症の病原性症状の進行を最終的に誘発する多くの望ましくない効果に関連していることが知られている（G.C. Blobeら、N. Engl. J. Med., 2000, 1350）。特に、ＴＧＦ−βの病的過剰発現は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の過剰な蓄積、細胞増殖および免疫抑制を引き起こし得る。ＥＣＭの過剰蓄積は、線維症、例えば腫瘍線維症、放射線誘発線維症、肝臓、腎臓、肺、腸、心臓、膵臓、腹膜または他の臓器の線維症を誘発することが知られている。線維症は、肝硬変、特発性肺線維症、球体硬化症および肥厚性瘢痕を誘発し得る。
多くの他の病状は、ＴＧＦ−βにより制御される遺伝子の発現の変化に付随することが知られており、これらは癌の進行、骨機能異常および炎症性障害を含む。
【０００６】
ＴＧＦ−β細胞内経路を阻害することができる化合物の開発は、上記した症状の予防および／または治療に効果がある望ましい手段と思われる。ＴＧＦ−β細胞内経路および／またはＴＧＦ−βの発現を阻害することができる化合物は、線維症の症状の進行を誘発する徴候の障害の治療において用いることができる。例えば、本発明の化合物は、種々の肝臓関連症状、例えばＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、アルコール誘発肝炎、ヘモクロマトーシスおよび原発性胆汁性肝硬変症に関連する線維症の治療において有用であり得、または別に、種々の腎臓関連症状、例えば慢性腎疾患、急性腎疾患および腎臓病に関連する線維症の治療に有用であり得る。
【０００７】
本発明の化合物はチアゾール誘導体である。他のチアゾール化合物は、以前に、別の医薬用途において用いられることが記載されている。ＰＣＴ特許出願ＷＯ９６／０３３９２（Searle & Co）は、炎症および炎症関連障害の治療のための一連の置換チアゾール化合物を開示している。ＷＯ９３／１５０７１（SmithKline Beecham Intercredit N.V.）は、胃酸分泌阻害剤として用いることができる一連のチアゾリル−ピリジン誘導体を開示している。この型の化合物は、胃腸障害、例えば、胃潰瘍および十二指腸潰瘍、嚥下性肺炎およびゾリンジャー−エリソン症候群の治療に有用であり得る。米国特許第５，２３２，９２１号（Biziereら）は、ムスカリン性コリン受容体に対してアフィニティーを有する２−アルキルアミノチアゾールを開示している。上記した特許出願は本発明のチアゾール化合物を記載しているものではない。
【０００８】
ＰＣＴ特許出願ＷＯ００／１２９４７（Scios Inc.）には、キナーゼｐ３８−αおよび／またはＴＧＦ−βの活性の増大に付随する種々の障害を治療するための一連のキナゾリン誘導体の使用が記載されている。これに記載されている化合物は、両方の蛋白の活性を阻害することが示されており、したがって、ｐ３８−αおよびＴＧＦ−βの両方に対する活性の増大が必要とされる症状の治療に特に有用である。
【０００９】
この度、以下に記載するある種の置換チアゾール化合物が、ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療または予防に有用であることを見出した。特に、本発明の化合物は、Ｉ型ＴＧＦ−β（Ａｌｋ５）受容体レベルで作用するＴＧＦ−β阻害剤である。
【００１０】
本発明の一の態様により、式（Ｉ）：
【化１】
2004524302.tif 000002
［式中、
Ｒ１はＨ、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択され；
Ｒ２はフェニル、フラニルまたはチオフェニルから選択され、これらの各々は、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基により置換されていてもよい］
で示される化合物およびその塩ならびに溶媒和物（以下、「本発明の化合物」という）を提供する。
【００１１】
基または基の一部として、本明細書で用いられる「アルキル」なる用語は、特定の数の炭素原子を含有する、直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族炭化水素ラジカルを意味する。かかるアルキル基は、特に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルを含む。
【００１２】
基または基の一部として、「アルコキシ」なる用語は、アルキルエーテルラジカルを意味し、ここに、「アルキル」なる用語は上記と同意義である。かかるアルコキシ基は、特に、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシを含む。
【００１３】
また、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物の医薬上許容される塩を範囲に含む。式（Ｉ）で示される化合物の適当な医薬上許容される塩は、酸塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩およびテトラアルキルアンモニウム塩等、または適当な酸、例えば酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸およびコハク酸のような有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、メタンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸のような有機スルホン酸、および塩酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸等のような無機酸とのモノもしくはジ塩基塩を含む。
また、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物の溶媒和物、例えば水和物にも関する。
【００１４】
好ましくは、Ｒ１は、ピリジン環のＣ（３）またはＣ（６）位に位置し、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシから選択される。より好ましくは、Ｒ１はＨである。
好ましくは、Ｒ２は、ピリジニル環のＣ（２）位に位置し、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはＯＣＦ３から選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基によりさらに置換されていてもよいフェニルまたはチオフェニルを意味する。より好ましくは、Ｒ２はピリジニル環のＣ（２）位に位置し、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはＯＣＦ３から選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基により置換されていてもよいフェニルである。最も好ましくは、Ｒ２は、ピリジニル環のＣ（２）位に位置し、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはＯＣＦ３から選択される、１つまたはそれ以上の同じであっても異なっていてもよい置換基により置換されていてもよいフェニルである。
【００１５】
本発明は、上記したような好ましい基の組合せを有する化合物を含むことは理解できるだろう。
ＴＧＦ−βの過剰発現に特徴付けられる障害の治療または予防において有用な薬剤として特に対象となる式（Ｉ）で示される化合物は：
５−［２−（４−クロロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−フルオロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−エチルフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（４−エトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
５−［２−（チオフェン−３−イル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン；
およびその塩ならびに溶媒和物である。
【００１６】
式（Ｉ）で示されるある種の化合物は、立体異性体形態（例えば、これらは、１つまたはそれ以上の不斉炭素を含有しているか、またはｃｉｓ−ｔｒａｎｓ異性であってもよい）で存在できる。個々の立体異性体（エナンチオマーおよびジアステレオマー）およびそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。同様に、式（Ｉ）で示される化合物は、式で示したもの以外の互変異性体でも存在でき、これらも本発明の範囲内に含まれることは理解できるだろう。
【００１７】
本発明の化合物の塩は、式（Ｉ）で示される化合物中の窒素由来の酸付加塩を含んでいてもよい。治療的活性は、本明細書に記載のように本発明の化合物由来の基に存在し、治療的および予防的目的に関しては、好ましくは、患者に対して医薬上許容されるものであるが、他の化合物の同一性はあまり重要でない。医薬上許容される酸付加塩の例としては、鉱酸、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、硫酸、および有機酸、例えば、酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グルコール酸、グリコン酸、コハク酸およびメタンスルホン酸ならびにアリールスルホン酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸由来のものが挙げられる。
【００１８】
式（Ｉ）で示される化合物およびその塩ならびに溶媒和物は、本明細書に記載した方法により調製することができ、これは本発明のさらなる態様を構成する。本発明のさらなる態様において、式（Ｂ）で示される中間体化合物の製造方法を提供する。
【００１９】
式（Ｉ）で示される化合物は、有利には、下記スキーム１の一般方法に従って調製する：
【化２】
2004524302.tif 000003
【００２０】
略語表
ＥｔＯＨ  エタノール
ＫＨＭＤＳ  カリウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【００２１】
式（Ｉ）で示される４−キノリニル化合物を調製するための本発明の一般方法は：
（ｉ）適当な塩基、例えば、カリウムビス（トリメチルシリル）アミドまたはナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドを、式（Ａ）で示される置換ピリジンまたはキノリンに、好ましくは、０〜−７５℃で、より好ましくは−３０〜−６０℃で、最も好ましくは−５０℃で、適当な溶媒、例えばＴＨＦの存在下で添加すること；
（ｉｉ）適当なモノ置換ピリジルエステル、Ｒ１（Ｃ５Ｈ３Ｎ）ＣＯ２Ｅｔ（ここに、Ｒ１は上記と同意義である）を反応混合物に、好ましくは０〜−７５℃、より好ましくは−３０〜−６０℃で、最も好ましくは−５０℃で、適当な溶媒、例えばＴＨＦの存在下で添加すること；
（ｉｉｉ）得られたケトン（Ｂ）を、適当なハロゲン化剤、好ましくは臭素化剤、例えばＢｒ２または重合体支持ピリジニウムペルブロマイドで、好ましくは０〜７５℃、より好ましくは２０〜６０℃、最も好ましくは室温で、適当な溶媒、例えばＴＨＦの存在下でハロゲン化すること；および
（ｉｖ）適当な溶媒、例えばエタノール中で、チオ尿素を添加し、混合物を加熱還流すること、
を含む。
【００２２】
式（Ａ）で示される化合物は、当該分野で公知の方法（例えば、Osuchら、J. Org. Chem., 1957, 22, 939）と類似の方法により調製することができる。かかる調製方法の例としては下記の特定の実施例で提供する。
上記した工程（ｉｉ）に記載したようなモノ置換ピリジルエステル、Ｒ３（Ｃ５Ｈ３Ｎ）ＣＯ２Ｅｔ（ここに、Ｒ３は上記と同意義である）は当該分野で公知の方法と類似の方法で調製することができる。例えば、Ｒ３がＣ（６）−ＯＭｅである場合、Fingerら、J. Org. Chem., 1962, 27, 3965；Ｒ３がＣ（３）−ＯＭｅである場合、Dejardinら、Bull. Chim. Soc. Fr., 1979, 289；Ｒ３がＣ（５）−Ｂｒである場合、ChambersおよびMarfat, Synth. Commun., 1997, 27(3), 515；およびＲ３がＣ（４）−ＣＮである場合、HeinischおよびLotsch, Heterocycles, 1987, 26(3), 731。
【００２３】
本発明の化合物がＴＧＦ−β１型（Ａｌｋ５）受容体を阻害することによりＳｍａｄ−２またはＳｍａｄ−３蛋白のリン酸化を阻害することが見出された。
したがって、本発明の化合物は、本明細書に記載のアッセイにおいて試験され、ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療および予防において可能性ある治療的有用性があることが見出された。
かくして、ヒトまたは獣医学において、特に、ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療または予防において、医薬として用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩または溶媒和物を提供する。
【００２４】
本明細書において言及する治療は、予防ならびに確定した症状の治療を範囲に含むことは理解できるだろう。さらに、本明細書で言及するＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害の治療または予防は、線維症、特に肝臓および腎臓の線維症、癌の進行、骨機能異常および炎症性障害および瘢痕化のようなＴＧＦ−β関連疾患の治療または予防を含む。
本発明に従って治療され得る他の病的症状は、上記した序文で論じられている。本発明の化合物は、特に、線維症およびそれに関連する症状の治療に適している。
【００２５】
本発明の化合物は、肝臓疾患に対する例えば抗ウイルス剤のような他の治療剤、または腎臓疾患に対するＡＣＥ阻害剤またはアンギオテンシン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与することができる。
【００２６】
本発明の他の態様により、ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害、特に線維症の治療および／または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【００２７】
さらなる態様において、ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴付けられる障害、特に線維症を患っているヒトまたは動物の治療方法であって、該ヒトまたは動物対象に、有効量の式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とする方法を提供する。
【００２８】
本発明の化合物はいずれかの慣用的な方法で投与するために処方されてもよく、したがって、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を、１つまたはそれ以上の医薬上許容される希釈剤または担体と混合して含む、治療において用いるための医薬組成物も範囲に含む。
本発明は成分を混合して含む該医薬組成物の製造方法を提供する。
例えば、本発明の化合物は、経口、舌下、非経口、局所および直腸投与で処方することができる。
【００２９】
経口投与用の錠剤およびカプセルは、慣用的な賦形剤、例えば結合剤、例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、でんぷんの粘漿剤またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えば、ラクトース、微結晶セルロース、糖、とうもろこしでんぷん、リン酸カルシウムまたはソルビトール；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えば、ポテトスターチ、クロスカルメロースナトリウムまたはスターチグリコール酸ナトリウム；または湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムを含んでいてもよい。経口液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、乳液、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、または、使用前に水または他の適当なビヒクルで復元する乾燥生成物として調製することができる。かかる液体製剤は、慣用的な添加剤、例えば懸濁化剤、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは硬化食用油；乳濁化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレアートまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含んでいてもよい）、例えば、アーモンド油、ヤシ油、油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；または保存剤、例えば、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸を含んでいてもよい。また、製剤は、必要に応じて、緩衝塩、フレーバー、着色剤および／または甘味剤（例えば、マンニトール）を含んでいてもよい。
【００３０】
舌下投与に関しては、組成物は、慣用的な方法で、錠剤またはロゼンジの形態にすることができる。
また、化合物は、例えば、ココアバターまたは他のグリセライドのような慣用的な坐剤基剤を含有する坐剤として処方することもできる。
【００３１】
また、本発明の化合物は、ボーラス注射または持続性注射による非経口投与用に処方することができ、例えば、アンプル、バイアル、少量の注射または予備充填シリンジのような単位剤形、または、付加的な保存剤と一緒に複数回投与容器に調製することができる。組成物は、水性または非水性ビヒクル中の溶液、懸濁液またはエマルジョンの形態であってもよく、処方剤、例えば、酸化防止剤、緩衝剤、抗菌剤および／または毒性調節剤を含んでいてもよい。別法として、活性成分は、使用前に、適当なビヒクル、例えば滅菌発熱物質不含水で復元するための粉末の形態であってもよい。乾燥固体製剤は、滅菌粉末を、無菌状態で、別個の滅菌容器に充填することにより、または、滅菌溶液を、無菌状態で各々の容器に充填し、凍結乾燥することにより調製することができる。
【００３２】
本発明で用いる局所投与は、吸入による投与を含む。局所投与用の製剤の種々の型の例としては、軟膏、クリーム、ローション、粉末、ペッサリー、スプレー、エアロゾル、吸入で用いるためのカプセルもしくはカートリッジまたは滴剤（例えば、目または鼻の滴剤）が挙げられる。
【００３３】
例えば、軟膏およびクリームは、適当な増粘剤および／またはゲル化剤および／または溶媒を添加した水性または油性基剤と一緒に処方できる。かくして、かかる基剤は、例えば、水および／または液体パラフィンまたはラッカセイ油もしくはヒマシ油のような植物油のような油またはポリエチレングリコールのような溶媒を含む。用いることができる増粘剤は、ソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、微結晶ワックスおよびベースワックスを含む。
【００３４】
ローションは、水性または油性基剤と一緒に処方することができ、一般的には、１つまたはそれ以上の乳濁化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤または増粘剤も含むだろう。
外用粉末は、いずれの適当な粉末基剤、例えば、タルク、ラクトースまたはスターチの補助を用いて形成することができる。滴剤は、１つまたはそれ以上の分散剤、溶解剤または懸濁化剤も含む、水性または非水性基剤と一緒に処方することができる。
【００３５】
スプレー組成物は、例えば、適当な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当な気体を用いることで、加圧パックから供給される水溶液もしくは懸濁液またはエアロゾルとして処方することができる。
吸入で用いるためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、本発明の化合物および適当な粉末基剤、例えばラクトースまたはでんぷんの粉末混合物を含んで処方することができる。
【００３６】
本発明の化合物は、有利には、例えば、体重１ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍｇ、適当には、体重１ｋｇ当たり０．０５〜２５ｍｇの量で、１日１回またはそれ以上の回数で、経口投与することができる。もちろん的確な投与量は、患者の年齢および症状、選択される特定の投与経路に依存し、完全に投与する主治医の判断による。
【００３７】
以下の実施例は本発明を説明するものであって限定するものではない。
【００３８】
中間体
式（Ａ）で示される化合物
中間体Ａ１：２−（４−クロロフェニル）−４−メチル−ピリジン
２−ブロモ−４−メチルピリジン（ＡＬＤＲＩＣＨ、２．２９ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）をトルエン（３０ｍｌ）および塩化リチウム（３当量、１．６４ｇ）中に溶解し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５ｍｏｌ％、７３４ｍｇ）を、Ｎ２雰囲気下で加え、脱気した。混合物を氷浴で冷却し、炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、２当量）をゆっくりと加え、１０分間撹拌した。エタノール（２０ｍｌ）中の４−クロロフェニルボロン酸（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、２．５ｇ、１．２当量）の溶液を、ゆっくりと加え、撹拌し、室温に戻し、ついで、４時間加熱還流した。混合物を冷却し、相を分離して、水相をさらにトルエン（２×５０ｍｌ）で抽出した。合した有機相を１ＮのＨＣｌ（２×５０ｍｌ）で抽出した。これらの合した酸抽出物をトルエン（５０ｍｌ）で洗浄し、ついで、ｐＨ１４に１ＮのＮａＯＨで、冷却しながら塩基性化した。ついで、生成物をＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）中に抽出し、乾燥し、濾過し、濃縮して、標題化合物を黄色固体（２．６ｇ）として得た。
融点６３℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９５／５  Ｒｆ０．６４
ＧＣ−ＭＳ：２０３
【００３９】
中間体Ａ２：２−（４−メトキシフェニル）−４−メチル−ピリジン
中間体Ａ１と同様の方法で、４−クロロフェニルボロン酸の代わりに４−メトキシフェニルボロン酸（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、１５ｇ）を用いて、標題化合物を橙色油（１４．２ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８／２  Ｒｆ０．８５
ＭＳ（ＡＰＩ）：２００（ＭＨ＋）
【００４０】
中間体Ａ３：２−（４−フルオロフェニル）−４−メチル−ピリジン
中間体Ａ１と同様の方法で、４−クロロフェニルボロン酸の代わりに４−フルオロフェニルボロン酸（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、１１ｇ）を用いて、標題化合物を黄色油（６．５ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２  Ｒｆ０．２０
ＧＣ−ＭＳ：１８７
【００４１】
中間体Ａ４：２−（４−エチルフェニル）−４−メチル−ピリジン
中間体Ａ１と同様の方法で、４−クロロフェニルボロン酸の代わりに４−エチルフェニルボロン酸（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、４ｇ）を用いて、標題化合物を油（３．９ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９５／５  Ｒｆ０．５０
ＧＣ−ＭＳ：１９７
【００４２】
中間体Ａ５：２−（４−エトキシフェニル）−４−メチル−ピリジン
中間体Ａ１と同様の方法で、４−クロロフェニルボロン酸の代わりに４−エトキシフェニルボロン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、５ｇ）を用いて、標題化合物を油（４．３ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９５／５  Ｒｆ０．４４
ＧＣ−ＭＳ：２１３
【００４３】
式（Ｂ）で示される化合物
中間体Ｂ１：２−［２−（４−クロロ−フェニル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の中間体Ａ１（２−（４−クロロフェニル）−４−メチル−ピリジン、２．６ｇ）の溶液に、アルゴン雰囲気下、−５０℃で、トルエン（２０ｍｌ、１．１当量）中の０．５Ｍのビス−（トリメチルシリル）アミドカリウムの溶液を滴下した。溶液をこの温度で１時間撹拌し、ついで、乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中のピコリン酸エチル（２．２６ｇ）の溶液を加え、反応混合物を室温に加温し、ついで、５０℃に２時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体をヘキサンで沈殿させた。褐色固体を、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に加え、水相を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、標題化合物を暗赤色油（２．６ｇ）を得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８／２  Ｒｆ０．４２
ＭＳ（ＡＰＩ）：３０９（ＭＨ＋）
【００４４】
中間体Ｂ２：２−［２−（４−メトキシ−フェニル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
中間体Ｂ１と同様の方法で、中間体Ａ１の代わりに中間体Ａ２（５．０ｇ）を用いて、標題化合物を淡黄色固体（２．０ｇ）として得た。
ｍｐ８６℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７０／３０  Ｒｆ０．３７
ＭＳ（ＡＰＩ）：３０５（ＭＨ＋）
【００４５】
中間体Ｂ３：２−［２−（４−フルオロ−フェニル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
中間体Ｂ１と同様の方法で、中間体Ａ１の代わりに中間体Ａ３（６．５ｇ）を用いて、標題化合物を暗黄色油（３．１ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５／５  Ｒｆ０．３０
ＭＳ（ＡＰＩ）：２９３（ＭＨ＋）
【００４６】
中間体Ｂ４：２−［２−（４−エチルフェニル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
中間体Ｂ１と同様の方法で、中間体Ａ１の代わりに中間体Ａ４（３．９）を用いて、標題化合物を黄色油（１．２ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９５／５  Ｒｆ０．３２
ＧＣ−ＭＳ：３０２
【００４７】
中間体Ｂ５：２−［２−（４−エトキシフェニル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
中間体Ｂ１と同様の方法で、中間体Ａ１の代わりに中間体Ａ５（４．３ｇ）を用いて、標題化合物を油（１．２ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８／２  Ｒｆ０．２４
ＧＣ−ＭＳ：３１８
【００４８】
中間体Ｂ６：２−［２−（チオフェン−３−イル）−ピリジン−４−イル］−１−ピリジン−２−イル−エタノン
中間体Ｂ１と同様の方法で、中間体Ａ１の代わりに３−メチル−２−チオフェン−３−イル−ピリジン（ＨＦＲ、２ｇ）を用いて、標題化合物を油（０．７ｇ）として得た。
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０  Ｒｆ０．３８
ＭＳ（ＡＰＩ）：２８１（ＭＨ＋）
【００４９】
実施例
実施例１：５−［２−（４−クロロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の中間体Ｂ１（０．６２ｇ）の溶液に、重合体支持ピリジニウムペルヨウダイド（Ａｌｄｒｉｃｈ、１当量）を加え、懸濁液を５０分間撹拌した。樹脂を濾過により除去し、濾液をチオ尿素（１当量）に直接加え、樹脂を複数回エタノールで洗浄した。濾液を一晩加熱還流し、冷却し、濃縮した。残渣をＮａＯＨ水溶液で塩基性化し、ＣＨ２Ｃｌ２に抽出し、この相を水で洗浄した。有機相を乾燥し、濃縮し、エーテルでトリチュレートし、固体を得、ＥｔＯＨから再結晶して、標題化合物を灰白色結晶（１００ｍｇ）として得た。
融点２５６−２５７℃
ＴＬＣＳｉＯ２ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９８／２Ｒｆ０．６９
ＭＳ（ＡＰＩ）：３６５（ＭＨ＋）
【００５０】
実施例２：５−［２−（４−メトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
実施例１と同様の方法で中間体Ｂ２（１．０ｇ）を用いて、ＥｔＯＡｃから再結晶した後、標題化合物を灰白色固体（８５０ｍｇ）として得た。
融点２２２℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  トルエン／イソプロピルアミン  ９０／１０  Ｒｆ０．３１
ＭＳ（ＡＰＩ）：３６１（ＭＨ＋）
【００５１】
実施例３：５−［２−（４−フルオロフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
実施例１と同様の方法で中間体Ｂ３（０．９ｇ）を用いて、メタノールから再結晶した後、標題化合物を白色結晶（１５０ｍｇ）として得た。
融点２５０℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０／１０  Ｒｆ０．１５
ＭＳ（ＡＰＩ）：３４９（ＭＨ＋）
【００５２】
実施例４：５−［２−（４−エチルフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
実施例１と同様の方法で中間体Ｂ４（３６６ｍｇ）を用いて、エタノールから再結晶した後、標題化合物を白色結晶（１００ｍｇ）として得た。
融点２３８℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０／１０  Ｒｆ０．３４
ＭＳ（ＡＰＩ）：３５９（ＭＨ＋）
【００５３】
実施例５：５−［２−（４−エトキシフェニル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
実施例１と同様の方法で中間体Ｂ５（３８７ｍｇ）を用いて、エタノールから再結晶した後、標題化合物を白色結晶（１５０ｍｇ）として得た。
融点２４６℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９０／１０  Ｒｆ０．４
ＭＳ（ＡＰＩ）：３７５（ＭＨ＋）
【００５４】
実施例６：５−［２−（チオフェン−３−イル）ピリジン−４−イル］−４−ピリジン−２−イル−１，３−チアゾール−２−アミン
実施例１と同様の方法で中間体Ｂ６（０．６５ｇ）を用いて、エタノールから再結晶して、標題化合物を白色粉末（２００ｍｇ）として得た。
融点２４４℃
ＴＬＣ  ＳｉＯ２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９８／２Ｒｆ０．５
MS(API): 337(MH+)
【００５５】
生物学的データ
実施例１〜６の化合物を、インビトロで、下記の生物学的アッセイを用いて試験した。全ての化合物は、アッセイ１において、５μＭまたはそれ以下のＩＣ５０値、およびアッセイ２において、１μＭまたはそれ以下のＩＣ５０値を有した。
【００５６】
アッセイ
アッセイ１
ＴＧＦ−βシグナリングを阻害するための本発明の化合物の可能性は、例えば、以下のインビトロアッセイを用いて示すことができる。
アッセイは、ルシフェラーゼ（ホタル）受容体遺伝子に結合したＰＡＩ−１プロモーター（強力なＴＧＦ−β応答プロモーター）で安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞において行った。化合物をＴＧＦ−βに曝した細胞におけるルシフェラーゼ活性を阻害する能力で選択した。加えて、ＴＧＦ−β応答プロモーターにより操作されず、毒性対照として用いられる第２のルシフェラーゼ（レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ））遺伝子で細胞をトランスフェクトした。
（９６ウェル）マイクロプレートを、マルチドロップ装置を用いて、２００μｌの血清含有培地中、ウェルあたり３５０００細胞の濃度で、安定なトランスフェクト細胞系で播種する。これらのプレートを細胞インキュベータ中に置く。
１８〜２４時間後（２日目）、細胞インキュベーション処理を開始する。細胞をＴＧＦ−βおよび５０ｎＭ〜１０μＭ（１％のＤＭＳＯの最終濃度）の範囲の濃度で、候補化合物（ＴＧＦ−β阻害剤）と一緒にインキュベートする。試験に用いたＴＧＦ−β（ｒｈＴＧＦβ−１）の最終濃度は１ｎｇ／ｍＬである。細胞を、ＴＧＦ−βを添加する１５〜３０分前に候補化合物と共にインキュベートする。試験反応の最終値は１５０μｌである。各々のウェルは１つだけの候補化合物を含み、そのＰＡＩ−１プロモーターに対する効果を測定する。
カラム１１および１２は対照として用いる。カラム１１は８ウェルを含み、細胞をＴＧＦ−βの存在下、候補化合物無しでインキュベートする。カラム１１を、（阻害活性を定量するための）試験ウェルで測定した値と比較できる、「参考ＴＧＦ−β誘発ホタルルシフェラーゼ値」を測定するために用いる。ウェルＡ１２〜Ｄ１２において、細胞をＴＧＦ−β不含培地で増殖させる。これらの状況で得られたホタルルシフェラーゼ値は、「基礎ホタルルシフェラーゼ活性」の代表的なものである。ウェルＥ１２〜Ｈ１２において、細胞を、ＴＧＦ−βおよび５００μＭのＣＰＯ（シクロペンテノン、Ｓｉｇｍａ）、細胞毒性化合物の存在下でインキュベートする。減少したホタルおよびレニラルシフェラーゼ活性（カラム１１において得られたものの約５０％）により、毒性を明らかにする。
１２〜１８時間後（３日目)、ルシフェラーゼ定量化処理を開始する。以下の反応をDual Luciferaseアッセイキット（Promega）から得た試薬を用いて行う。細胞を洗浄し、10μｌの受動溶解緩衝液（passive lysis buffer）（Promega）で溶解させる。撹拌（１５〜３０分）に続いて、プレートのルシフェラーゼ活性を、デュアルインジェクター照度計（BMG lumistar）で読み取る。このために、５０μｌのルシフェラーゼアッセイ試薬および５０μｌの「Ｓｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ」緩衝液を、順次、両方のルシフェラーゼの活性を定量するために注入する。測定で得られたデータを、適当なソフトウェアを用いて、処理し、分析する。ウェルＡ１１〜Ｈ１１（カラム１１、ＴＧＦ−β 単独）で得られた平均ルシフェラーゼ活性値を１００％とみなし、ウェルＡ１２〜Ｄ１２（培地のみ中の細胞）で得られた値を基底レベル（０％）とする。試験した各々の化合物に関して、濃度応答曲線を、図解して測定できるＩＣ５０値で構成する。
【００５７】
アッセイ２
キナーゼＡｌｋ５受容体を阻害するための本発明の化合物の可能性は、例えば、以下のインビトロアッセイを用いて示すことができる。
Ａｌｋ５のキナーゼドメインを、バキュロウイルス／Ｓｆ９細胞系において、クローン化し、発現させた。蛋白（アミノ酸１６２〜５０３）を、Ｃ末端で６−Ｈｉｓタグ化した。Ｎｉ２＋カラムを用いて、アフィニティークロマトグラフィーにより精製した後、自己リン酸化を試験した。酵素を５０ｍＭ、ｐＨ７．４のトリス；１００ｍＭのＮａＣｌ；５ｍＭのＭｇＣｌ２；５ｍＭのＭｎＣｌ２；１０ｍＭのＤＴＴを含有する培地中でインキュベートした。酵素を化合物（試験において最終的に０．１％のＤＭＳＯ）で、３７℃で１０分間プレインキュベートした。反応を３μＭのＡＴＰ（０．５μＣｉガンマ−３３Ｐ−ＡＴＰ）を添加することにより開始させた。３７℃で１５分後、反応をＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液（５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．９、２．５％のグリセロール、１％のＳＤＳ、５％のβ−メルカプトエタノール）を添加することにより停止させた。試料を５分間９５℃で煮沸し、１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で泳動を行った。乾燥ゲルを、一晩、リン酸スクリーンに曝露した。Ａｌｋ５自動リン酸化をＳＴＯＲＭ（Molecular Dynamics）を用いて定量した。
【国際公開パンフレット】
2004524302.tif 000008
2004524302.tif 000009
2004524302.tif 000010
2004524302.tif 000011
2004524302.tif 000012
2004524302.tif 000013
2004524302.tif 000014
2004524302.tif 000015
2004524302.tif 000016
2004524302.tif 000017
2004524302.tif 000018
2004524302.tif 000019
2004524302.tif 000020
2004524302.tif 000021
2004524302.tif 000022
2004524302.tif 000023
2004524302.tif 000024
2004524302.tif 000025
2004524302.tif 000026
【国際調査報告】
2004524302.tif 000027
2004524302.tif 000028