(57)【要約】本発明は、ヒトを含む動物の関節のＭＲＩにより得られた画像診断を増強する方法を改良することを目的とし、この方法では、造影増強剤としてニトロキシド化合物を用いており、また、本発明のもう一つの目的は、骨関節炎，リューマチ様関節炎または身体変性疾患の症状を示す患者の関節軟骨を正確にＭＲ画像化する方法を提供することである。【解決手段】本発明は、骨関節炎またはリューマチ様関節炎などの変性関節疾患の症状を示す動物の関節のＭＲＩにより得られた画像診断を増強する方法において、前記方法には、前記関節のＭＲＩ走査の前またはその間に、走査によりつくられたＭＲ画像を増強するために毒性のない有効量の水溶性ニトロキシドを、薬理学的に受け入れる毒性のない注入できる媒体との混合物として動物の関節に注入する工程、および前記ニトロキシドが、生理的ｐＨで正に荷電しており、安定で且つ生物還元に対し抵抗性を有し、また、少なくとも６個の末端ニトロキシル置換基を含み、且つ化学式（Ｉ）の化合物であるニトロキシル官能基を有するデンドリマーであるという改良が含まれており：2004524259.tif 000012ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり：2004524259.tif 000013ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり、Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり、2004524259.tif 000014ここで、Ｒ’”は低級アルキルまたは（Ｃ）化学式ＩＶのグループであり：2004524259.tif 000015ここで、化学式（Ｉ），（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の各アルキレンは鎖に２−３個の炭素原子を有する２−６個の炭素原子からなる架橋２価アルキレン基であり、Ｒはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は６個以上であることに特徴を有する。
2004524259.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨関節炎またはリューマチ様関節炎などの変性関節疾患の症状を示す動物の関節のＭＲＩにより得られた画像診断を増強する方法において、
前記方法には、前記関節のＭＲＩ走査の前またはその間に、走査によりつくられたＭＲ画像を増強するために毒性のない有効量の水溶性ニトロキシドを、薬理学的に受け入れる毒性のない注入できる媒体との混合物として動物の関節に注入する工程、および前記ニトロキシドが少なくとも６個の末端ニトロキシル置換基を含むニトロキシル官能基を有するデンドリマーであるという改良が含まれている前記方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記デンドリマーが化学式（Ｉ）の化合物であり：
2004524259.tif 000008
ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり：
2004524259.tif 000009
ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり、Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり、
2004524259.tif 000010
ここで、Ｒ’”は低級アルキルまたは（Ｃ）化学式ＩＶのグループであり：
2004524259.tif 000011
ここで、化学式（Ｉ），（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の各アルキレンは鎖に２−３個の炭素原子を有する２−６個の炭素原子からなる架橋２価アルキレン基であり、Ｒはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は６個以上である前記方法。
【請求項２】
前記動物がヒトである請求項１の方法。
【請求項３】
前記ヒトが骨関節炎かリューマチ様関節炎の一つ以上の症状を示す請求項２の方法。
【請求項４】
前記関節がひざか肩の関節である請求項３の方法。
【請求項５】
Ｒ’がメチルでありＲ”がＨである請求項２の方法。
【請求項６】
Ｘが２価酸素原子である請求項２の方法。
【請求項７】
アルキレンがトリメチレンである請求項２の方法。
【請求項８】
化学式（Ｉ）のＲ基の２つ以上が化学式（ＩＶ）のグループである請求項２の方法。
【請求項９】
請求項８の方法において、化学式（Ｉ）のＲ基のすべてが、化学式（ＩＶ）の別のグループであり、化学式（ＩＶ）においてＲがニトロキシル基または化学式（ＩＶ）のグループである前記方法。
【請求項１０】
請求項９の方法において、化学式（Ｉ）自身、または、さらに、化学式（ＩＶ）のグループを持っている化学式（Ｉ）のＲ基の総数が９以上である前記方法。
【請求項１１】
請求項１０の方法において、化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である前記デンドリマーのＲ基の総数が８−６４であり、且つ末端基であるそのすべてがニトロキシル基である前記方法。
【請求項１２】
前記デンドリマーのニトロキシル基の総数が１２−４８である請求項１１の方法。
【請求項１３】
請求項１の方法において、前記動物は骨関節炎の症状を一つ以上示すヒトであり；前記デンドリマーはＲ’がメチル、Ｒ”がＨである化学式（Ｉ）の化合物であり；Ｘは化学式（ＩＩ）のニトロキシル基の２価酸素であり；アルキレンはトリメチレンであり；化学式（Ｉ）の少なくとも２つのＲ基は化学式（ＩＶ）のグループであり；そして化学式（Ｉ）自身、または、さらに、化学式（ＩＶ）のグループ持っている化学式（Ｉ）のＲ基の総数は少なくとも９で、その内少なくとも６個の末端Ｒ基は化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であり；そして末端ニトロキシル基の総数は８〜６４である前記方法。
【請求項１４】
化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であるＲ基の総数が１２−４８である請求項１３の方法。
【請求項１５】
ニトロキシル基の総数が１６−３２である請求項１３の方法。
【請求項１６】
前記関節がひざか肩の関節である請求項１３の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
この発明は、骨関節炎やリューマチ様関節炎などの変性関節疾患を診断する場合に磁気共鳴画像診断法（ＭＲＩ）用造影増強剤としてポリニトロシル官能基を有するデンドリマーの利用に関する。
【０００２】
正常な関節軟骨は痛みのない正常な関節機能の重要な要素である。病理学的には、骨関節症は、関節軟骨が次第に失われていくことにより特徴付けられる。最近、骨関節症の病因に関する理解が進んで、この疾患の初期の段階で治療を開始すれば、近い将来、関節軟骨に予め存在する異常を解消したり、または疾患の進行を防止することができる薬の開発が可能になるかもしれないと考えられている。その結果、軟骨の初期異常の存在を正確に検出し、且つ骨関節炎やリューマチ様関節炎の患者のこれらの異常の進行の状況を正確に検出する非侵襲性技法を求める非常に大きなニーズがある。現在まで、Ｘ線撮影法は、軟骨は直接画像診断することができないので、軟骨の疾患を正確に評価する能力に限界があった。早期疾患の感受性がある指示薬のない骨関節炎の患者や、疾患の進行について信頼できる尺度のない患者で、やがて、骨の異常（骨増殖体の形成など）が発現する。
【０００３】
したがって、過去数年にわたり、関節軟骨における異常を評価するＭＲＩなどの先端的な断面画像診断技法が大いに注目された。多数のＭＲＩシーケンスと技法が評価された。残念なことに、これらの研究からは一貫性のある結果はえられず、期待外れに終わっている。その結果、関節軟骨の正確なＭＲ画像診断に関する、一般的に受け入れられる”最高のシーケンスや技法”はない。この疾患の症状を示す患者の関節において骨関節炎の進行を評価するツールとしてＭＲＩに適合する方法を探求すると、論理的に考えられる造影増強剤は２つある。
【０００４】
高い緩和速度（約５，室温，１．５Ｔ）にかんがみて、論理的に考えられる第１の候補物質は、商業的に利用できるＭＲＩ造影剤ガドリニウム（Ｇｄ）−ＤＴＰＡである。しかし、この疾患の普通程度の症状を示す患者の骨関節炎の進行をＭＲＩにおいて評価するプロトコルにおいて、ガドリニウム（Ｇｄ）−ＤＴＰＡを関節内に注入すると、プロテオグリカンの状態と軟骨モルフォロジーの評価を改良することになる。これはＧｄ−ＤＴＰＡが関節においてプロテオグリカンと効果的に結合することができないためである。軟骨マトリックス内のプロテオグリカン分子は、負に荷電しており、且つ軟骨マトリックスの固定電荷密度（ＦＣＤ）の原因になっているので、それはプロテオグリカンのロスと関係があり且つＧｄ−ＤＴＰＡも負に荷電している。負に荷電した２つの分子は互いに反撥するので、造影剤としてＧｄ−ＤＴＰＡを使いたいと思うならば、代わりの方法を開発しなければならない。Ｂａｓｈｉｒらは、Ｍａｇｎ．Ｍｅｄ．３６：６６５−６７３，１９９６，Ｇｄ−ＤＴＰＡはローカルＦＣＤに逆比例して分配されることを証明した。負に荷電したプロテオグリカンはＧｄ−ＤＴＰＡと反撥するので、プロテオグリカン枯渇領域は、より正常な領域と比較した場合相対的な増強を立証する。Ｂａｓｈｉｒら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２０５：５５１−５５８，１９９７。しかし、この技法は、軟骨への造影剤の拡散が非常に遅い時に限定されている。造影剤を静脈注射して軟骨の増強をもっと速く行っても、軟骨全体が平衡状態になるにはなお約５時間を要する。さらに、この方法を用いると、異常な軟骨は明るく見え、一方、正常な軟骨は暗くみえて、正常な軟骨と軟骨の異常な表層部分への不完全な拡散の間で混乱に導く可能性がある。したがって、Ｇｄ−ＤＴＰＡは、ＭＲＩ造影増強剤として一般に効能が高いが、プロテオグリカンに関する特異性に欠けているために、この特異性の欠如が関節空間内とプロテオグリカンが存在する関節表面と平衡にあるＧｄ−ＤＴＰＡの濃度が高くなり、これが直ちに上で指摘したような商業的に魅力のない操作にするので、骨関節炎などの関節の変性疾患を診断するツールとしてはよくない。
【０００５】
関節に注射することが考えられるもう一つの種類のＭＲＩ造影増強剤は、ニトロキシド類である。しかし、一つの種類としてのニトロキシド類は、組織内で酵素により急速に還元されてＭＲ画像を増強しない生成物になり（Ｇｒｉｆｆｅｔｈら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．１９：５５３−５６２，１９８４）、Ｇｄ−ＤＴＰＡ同様に、関節における軟骨プロテオグリカンに関する特異性がないので、候補物質にならない。したがって、一つの種類としてのニトロキシド類は、このような疾患を有する患者の関節をＭＲＩにより関節変性疾患の進行を診断する場合に使用するのに適していない。
【０００６】
酵素還元に対するニトロキシド類の抵抗力が欠如するこの一般則の例外は、正に荷電したニトロキシド類で、これは私の先行特許である米国特許第５，１０４，６４１と５，２５６，３９７号の主題である。その上、これらのＭＲＩ造影増強剤は、ガドリニウムをベースにした造影剤やニトロキシド類とは対照的に、正に荷電しているので、これらは負に荷電したプロテオグリカンと結合することができ、したがって、関節変性疾患を診断する有用なツールになる可能性がある。
【０００７】
ＵＳ５，１０４，６４１および５，２５６，３９７には、変性関節疾患を診断するＭＲＩ造影増強剤として正に荷電したニトロキシド類の使用が詳細に記載されている。米国特許第５，２５６，３９７号およびＰｏｕら（Ｆｒｅｅ Ｒａｄ．Ｒｅｓ．２３：３５３−３６４，１９９５）において、発明者は正に荷電したニトロキシド類の一つである３−トリメチル−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル ヨーダイド（その合成はＵＳ５，２５６，３９７に記載されている）の生体内における顕著な安定性およびうさぎのひざの関節におけるその長寿命が記載されている。最近、発明者であるＢａｃｉｃら（Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．３７：７６４−７６８，１９９７）はうさぎの関節におけるプロテオグリカンに対する３−トリメチル−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル ヨーダイドの高い親和力を立証した。ここでは、負に荷電したＧｄ−ＤＴＰＡと異なり、正に荷電したニトロキシドである、３−トリメチル−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル ヨーダイドはプロテオグリカンに特異的に結合することができ、そしてパパイン（プロテオグリカンを分解するタンパク質分解酵素であり、したがって、骨関節炎に似ている）により生じたプロテオグリカンの分解の結果として、この正に荷電したニトロキシドはうさぎの関節におけるプロテオグリカンのロスの進行をフォローすることができる。
【０００８】
しかし、ＭＲＩ造影増強剤としてのこれらの正に荷電したニトロキシド類の効力は、ガドリニウム・ベースの造影剤に比べて非常に低い。何故ならば、Ｋｅｎｎａら（Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．５：５２５−５３６，１９８７）が報告したように、造影増強活性の尺度である緩和速度がニトロキシド類の場合は非常に低いからである（すなわち、Ｇｄ−ＤＴＰＡの４．９５ｍＭ−１／ｓｅｃに対してニトロキシド類では０．２ｍＭ−１／ｓｅｃに過ぎない）。したがって、後でＰｏｕら（Ｆｒｅｅ Ｒａｄ．Ｒｅｓ．２３：３５３−３６４，１９９５）およびＢａｃｉｃら（Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．３７：７６４−７６８，１９９７）が報告したように、受け入れられるレベルのＭＲＩ造影増強活性を達成するためには、非常に高い用量（３−トリメチル−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル ヨーダイドの１０ｍＭストック溶液の１ｍＬ）が必須である。このような高い用量は、臨床上不可能である。その上、たとえこの事実単独では関節変性疾患の進行を診断するために関節においてこれらの使用を排除できないとしても、画像造影増強剤の満足なレベルを達成するために必要な高い用量は、存在しないであろう。何故ならば、関節のスペースとプロテオグリカンが存在している関節の表面の間でこのような高い濃度のニトロキシドが平衡状態になり、関節の変性疾患の進行の診断を行うのに必要なプロテオグリカンへの結合の不可欠な選択性はこれらの荷電したニトロキシド類を用いて達成することはできないからである。したがって、関節を含めて、一般に、ＭＲＩ造影増強剤として有用である荷電したニトロキシド類でさえも、関節変性疾患で苦しんでいる患者の関節の変性の進行の診断に実際には全く役に立たない。何故ならば、この最終用途では、プロテオグリカンに選択的に結合するほど十分低い用量が必要であり、一方、ＭＲ画像は臨床上受け入れられるレベルへ高めるために増強する必要があるからである。
【０００９】
上で引用した私自身の先行特許のニトロキシド類の他に，先行技術で知られているその他のニトロキシド類がある。一つの種類は、複数の画像化置換基、たとえば、ガドリニウムやニトロキシル基を有するカリクサレン・コンジュゲート類で、これらはＭＲＩおよびＣＴ画像診断剤としてＵＳ５，６２２，６８７および５，８４６，５１５に記載されている。もう一つの種類は、Ａ．Ｗ．Ｂｏｓｍａｎらが、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １９９７，３０，３６０６−３６１１に記載したポリニトロキシル基を有するデンドリマーで、これらのＭＲＩ造影増強活性はこの文献には報告されていない。両開示化合物は、ニトロキシル基として、上で引用した私の２つの特許モノニトロキシド類とを同じ１−オキシ−２，２，５，５−テトラメチル−４−置換ピロリジン基を持っている。しかし、対応するモノニトロキシド類の場合（これらの低緩和速度により）にＭＲＩ造影増強剤の臨床上受け入れられるレベルを達成するために必要である、関節における高濃度で起きる選択性のロスのために、関節においてこの種のニトロキシルの濃度の増加がカリクサリンまたはデンドリマーにおけるこれら複数のニトロキシル基の存在により与えられたと期待され、官能基として、私の先行特許のモノニトロキシルについて報告された変性関節において達成されたＭＲＩ画像診断の選択性に同じ副作用があると予想される。
【００１０】
結果としては、酵素による還元に対する抵抗性、高い緩和速度値および関節に存在するプロテオグリカンへの結合に関する選択性というユニークな組み合わせを必要とする、患者の関節における骨関節炎の進行を診断する特異的目的についてツールとして、ニトロキシドもガドリニウム・ベースのＭＲＩ造影増強剤も、文献では、実用的な価値があるとは報告されていない。しかし、私は、驚いたことに、デンドリマーのニトロキシル置換基の数を増やすと、デンドリマーの緩和速度を増すだけでなく、酵素還元に対する抵抗性を保持しつつ、骨関節炎やリューマチ様関節炎などの関節変性疾患の自覚症状を示す患者の関節においてプロテオグリカンへの選択性が低下しないことを発見した。
【００１１】
発明の目的
したがって、この発明の目的は、ヒトを含む動物の関節のＭＲＩにより得られた画像診断を増強する方法を改良することであり、この方法では、造影増強剤としてニトロキシド化合物を用いている。もう一つの目的は、骨関節炎，リューマチ様関節炎または身体変性疾患の症状を示す患者の関節軟骨を正確にＭＲ画像化する方法を提供することである。その他の目的は、この発明に関連する分野の熟練者には明らかであろう。
【００１２】
発明の概要
一つの方法の態様では、この発明は関節の変性を生じる疾患の症状を示す動物の関節についてＭＲＩにより得られた画像を増強する方法に関する。この方法には、ヒトを含む動物の関節への、関節のＭＲＩ走査の前に、走査によりつくられたＭＲＩを増強し且つ関節におけるプロテオグリカンを目に見えるようにする、毒性のない注入可能な薬理学的に受け入れられる媒体との混合物として、末端基として、たとえば、化学式（Ｉ）の少なくとも６個のＰＲＯＸＹＬニトロキシル基を有する水溶性または水分散性ニトロキシル化デンドリマーの注入が含まれている。
2004524259.tif 000003
ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり（ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり）：
2004524259.tif 000004
Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり、
2004524259.tif 000005
ここで、Ｒ’”は低級アルキルまたは（Ｃ）化学式ＩＶのグループであり：
2004524259.tif 000006
ここで、化学式（Ｉ），（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の各アルキレンは鎖に２−３個の炭素原子を有する２−６個の炭素原子からなる架橋２価アルキレン基であり、そしてＲはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は６個以上である。
【００１３】
別の方法の態様では、この発明は、骨関節炎またはリューマチ様関節炎の症状を示すヒトの関節のＭＲＩにより得られた画像を増強する方法における改良に関する。この改良にはニトロキシドとして化学式（Ｉ）のポリニトロキシルデンドリマーを用いることが含まれており、この改良は、関節のＭＲＩ走査の前にの走査によりつくられたＭＲ画像を効果的に増強する量の毒性がなく且つ水溶性の有機ニトロキシドを毒性のない注入可能な薬理学的に受け入れられる媒体との混合物として関節に注入することによる改良である。
【００１４】
詳細な説明
上で述べたように、この発明の方法で用いたニトロキシル基を有するデンドリマーの一部は３−ＣＯ−”ＰＲＯＸＹＬ”ニトロキシル基、すなわち、２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシ、を有する周知の種類の末端基ポリ（プロピレン−イミン）（ＤＡＢ）のメンバーであり、すなわち、化学式ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒ−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）ｎ（Ｖ）であり、ここで”ｎ”は正の整数であり、その一部およびそれらの調製法はＸ．Ｗ．Ｂｏｓｍａｎらが上記文献（１９９７）に記載している。その開示は引用によりこの明細書に組み込まれている。先行技術のデンドリマーは、すべて、対称であり、これは”ｎ”が偶数であることを意味する。しかし、対応する非対称化学種は、たとえば、３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ基を有する反応物に関して等量より多い（官能基のないデンドリマー反応物の末端アミノ基に基づいて）前駆体を用いることによりつくることができる。３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ基を有する反応物は、官能基を有するデンドリマーをつくる際に生成し、官能基を有するデンドリマーでは末端基の一つ以上はアミノ基で、残りはＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ基である。その他普通の方法を用いると、多数の世代の対称および非対称、且つ十分におよび部分的に官能基のあるデンドリマーをつくることができる。
【００１５】
これらには機能性のないアミノ基があるので、この発明の方法で用いたニトロキシル基のあるデンドリマーは、”正に荷電している”、すなわち、ニトロキシル基のほかに、これらには生理的ｐＨにおいて正に荷電した複数のアミノ基がある。好適には、これらのｐｋａ値は７．４より大きい。これらは安定でもあり、これは周辺の無水の条件下で貯蔵された時受け入れ可能な半減期、たとえば、２年以上、好適には５年以上を持ち、水溶液中では少なくとも１時間、好適には２時間、最も好適には８時間安定である。
【００１６】
これらのデンドリマーは水溶性で、多数のニトロキシル基、たとえば、４８個以上を有する比較的高分子量のデンドリマーの場合、好適には少なくとも１００μＭ、または、たとえば、コロイド懸濁液として水に分散できる。これら比較的高分子量のデンドリマーの水溶性を高めたいならば、当業者には自明であるが、溶解性基、たとえば、４級アンモニウム基を望みの溶解度に到達するまで分子内に導入することができる。
【００１７】
この発明で用いたデンドリマーは、神経学的にも生理学的にも毒性がなく、投与した用量において生理学的にほぼ不活性である。これらは生物還元に対して抵抗性があり、半減期は好適には少なくとも２時間、より好適には少なくとも生体内で４時間である。
【００１８】
”低級アルキル”という用語は、１−８，好適には１−６、最も好適には１−４個の炭素を意味し、メチル，エチルおよびイソプロピルが好適であり、そしてメチルが最も好ましい。この明細書で用いている”アルキレン”という用語は全部で２−６個の炭素原子があり、その内の２または３個は鎖中にある２価架橋炭化水素基を意味している。例には、エチレン，トリメチレン，１，２−イソプロピレン，２，３−イソプロピレン，１，２−および２，３−ブチレンおよび２，３−アミレンがある。
【００１９】
化学式（Ｉ）のデンドリマーは例外的に緩和速度と還元に対する抵抗性がよく、これは表１のデンドリマーに関するデータから知ることができる。
表１：緩和速度（ｋ１，室温，１．５Ｔ）および
ニトロキシド還元速度（マイクロモル／分，室温）
2004524259.tif 000007
【００２０】
デンドリマー化合物５−９は化学式（Ｉ）の化合物であり、ここでアルキレン＝トリメチレン；Ｒ＝メチル；Ｒ＝Ｈ；Ｘ＝Ｏ、そして化合物１５において、Ｘ＝Ｈ，Ｈ，３つのＲｓは下記の通りである：
［５］（化学式ＩＩ）２，（化学式ＩＶ，各Ｒは化学式ＩＩである）
［６］（化学式ＩＩ）３
［７］（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）２，（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）
［８］（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）２，（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）
［９］（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）２，（化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＶであり、化学式ＩＶにおいて、各Ｒは化学式ＩＩである）
［１５］上の［５］を参照のこと、ここでＸ＝２個の水素。
【００２１】
この発明の方法で有用な化学式（Ｉ）のデンドリマーの例には、次のようなものがある：
ａ）アルキレンはトリメチレン，１−メチルエチレン，２−メチルエチレンまたは２，３−ブチレンであり、好適にはトリメチレンである。
ｂ）Ｘはグループａ）の化合物を含む、２価の酸素原子である。
ｃ）Ｘはグループａ）の化合物を含む、２個の水素原子である。
ｄ）Ｒ’はグループａ），ｂ）およびｃ）の化合物を含む、メチル，エチルまたはイソプロピルである。
ｅ）Ｒ”はグループａ），ｂ），ｃ）およびｄ）の化合物を含む、Ｈまたはメチルである。
ｆ）化学式（Ｉ）の２個および好適には３個すべてのＲ基が、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ）およびｅ）の化合物を含む、化学式ＩＶのグループである。
ｇ）末端基Ｒがすべて、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ）およびｆ）の化合物を含む、化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である。
ｈ）分子内のＲ基の総数が、少なくとも１６個，その内少なくとも８個は化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であり、たとえば、８−６４，好適には１２−４８、最も好適には１６−３２，たとえば、６，７，８，９，１０，１２，１４，１６，１８，２０，２２，２４，２６，２８，３０，３６，４８およびその他の６４までまたはそれ以上の奇数と偶数、そして最も好適には、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ），ｆ）およびｇ）の化合物を含む、６，１２，３６または４８個のニトロキシル基、並びに４，８，１６，３２または６４個のニトロキシル基を含む対称構造を有する化合物である。
ｉ）化学式（Ｉ）において、各アルキレンはトリメチレンであり且つ各Ｒ基は化学式（ＩＶ）のグループであり、そのグループにおいて各アルキレンはトリメチレンおよび各Ｒ基は、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ），ｆ），ｇ）およびｈ）の化合物を含む、上で規定された化学式（ＩＩ）または（ＩＶ）のグループである。
【００２２】
この発明の方法の好適な実施態様には、下記の内一つ以上も含まれている：
ａ）動物は、上のグループａ）−ｉ）のいずれかで規定されたデンドリマーを用いる方法を含む、ヒトである。
ｂ）上のグループａ）−ｉ）のいずれかで規定されたデンドリマーを用いる方法を含む、骨関節炎またはリューマチ様関節炎ｃ）の一つ以上の症状を示す、好適にはヒトである動物。
ｃ）とくに、上のグループａ）−ｉ）のいずれかで規定されたデンドリマーを用いる方法を含む、骨関節炎またはリューマチ様関節炎ｄ）を示す関節である動物、好適にはヒトの関節。
【００２３】
この明細書で用いている用語”関節”という用語には、手と足の指，足と手，手首とくるぶし，ひざとひじ，首，肩，背中，および尻の関節を含む医学用語としての関節が含まれている。ひざと肩のモルフォロジーを診断するためにこれらの関節は最も頻繁に調べられているので、これらの関節はこの発明の方法の好適な態様である。
【００２４】
”動物”という用語は、好適にはヒトを意味する。しかし、その他の動物、とくにほ乳類、およびイヌやネコなどの家庭で飼育する動物、および競走馬もこの用語に含まれる。
【００２５】
デンドリマーは、通常、毒性のない注入可能な薬理学的に受け入れられる無菌の水性媒体の溶液として注入される。このような水性媒体には、たとえば、蒸留水，生理食塩水またはＭＲＩを走査するために関節から抜き出した流体、または後の２つか前の２つの混合物がある。水性媒体には、関節に注入される溶液に通常存在するその他の成分、たとえば、局部麻酔剤，抗炎症剤（たとえば、コルチゾン），抗生物質，安定剤，懸濁剤，も含まれている。
【００２６】
溶液中のデンドリマーの濃度は、通常、約１０〜約５００マイクロモル、好適には約２０〜約２５０マイクロモル、より好適には約５０〜約１５０マイクロモル、たとえば、約１００マイクロモルである。
【００２７】
関節に注入されたデンドリマーの量は、関節空隙の容積、関節に注入された溶液中のデンドリマーの濃度およびデンドリマーの反射率により影響を受ける。一般的に言えば、１００マイクロモルの濃度では、１６個のニトロキシル基を含むデンドリマーを手の関節の一つに注入する場合の約０．１７ｍｇ／ｍＬという低い用量から、３２個のニトロキシル基を含むデンドリマーを肩に注入する約０．８９ｍｇ／ｍＬという高い用量までが用いられる。選択したデンドリマーの生体外の造影増強活性、および、たとえば、Ｇｄ−ＤＴＰＡを用いた関節において満足なＭＲＩ造影増強剤を得るために必要な用量を知っていれば、ＭＲＩに精通した熟練者は、その関節の走査におけるＭＲＩ造影増強剤の望ましい度合いを得るために最適用量を容易に予測することができる。
【００２８】
この発明の方法で用いたニトロキシル基を有するデンドリマーは、たとえば、Ａ．Ｗ．Ｂｏｓｍａｎらが、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ １９９７，３６０６−３６１１に記載し、後で実施例に例示する当該分野で周知の方法でつくることができる。
【００２９】
関節のＭＲ画像を得るために現在広く使われている普通のＭＲＩ走査技法を用いることができる。たとえば、Ｇ．ＤｉＣｈｉｎｏら，Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９８５ １５７：３７３−３７７；Ｆ．Ｈ．Ｐｏｒｔｕｇａｌ，Ｈｉｇｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｕｇｕｓｔ，１９８４，ｐｐ．６６−７３；およびＲ．Ｗ．Ｋａｔｚｂｅｒｇ，”Ｔｈｅ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄｉａ Ｍａｎｕａｌ”（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，メリーランド州ボルチモア，１９９２）を参照のこと。ＭＲ画像を増強するのに有効な毒性のない量が得られるが、その量未満では、軟骨マトリックス内でプロテオグリカン分子に対する引力について選択性が低下する。
【００３０】
この発明の方法と同等と考えられる方法は、ＭＲＩ造影増強剤としてこの発明で用いたデンドリマーの、とくに多数のニトロキシル置換基、たとえば、１６，３２，４８，６４またはそれ以上の数の置換基を含むデンドリマーの使用である。この方法では、造影増強剤は、ＵＳ５，１０４，６４１および５，２５６，３９７に記載されているように、関節内に直接ではなく血流に注入することにより走査する器官またはその他の組織に造影増強剤を送り届けることができる。デンドリマーに結合した多数のニトロキシル置換基により達成された非常に高い緩和速度とこのような多数のニトロキシル置換基を有するデンドリマーの血液中における生物還元に対する驚くほど高い抵抗性の両立は、これらのデンドリマーがこの目的を果たすことを可能にする。同等と考えられるもう一つの方法は、他の点では化学式（Ｉ）のデンドリマーに対応するデンドリマーを使用する方法である。このデンドリマーでは、（ａ）デンドリマーの一つ以上の世代における架橋基がその他の架橋基と異なっている；（ｂ）一つ以上のニトロキシル基が末端基としてよりもデンドリマー・コア構造内に配置されている；（ｃ）デンドリマーにはこの発明の方法で使用されたデンドリマーに存在する官能基に加えて一つ以上の非干渉性の官能基、たとえば、ヒドロキシ，アミノ，アルコキシ，ハロゲン，ニトロなどが含まれ、これらの官能基はニトロキシル基を有するデンドリマーの溶解度，緩和速度，および選択性に対して悪影響がない。
【００３１】
さらに念入りに仕上げることなく、当業者は、前述の説明を用いて、この発明の範囲全体を利用できると考えられている。したがって、次の好適な特異的実施態様は、単に例示したものであり、残りの開示をいかなる方法においても限定しないと解釈すべきものである。前述の実施例および後で述べる実施例において、すべての温度は摂氏度のままであり、とくに明記しない限り、すべての部と％は重量によるものである。この明細書で引用したすべての出願の開示全体、特許および刊行物は引用によりこの明細書に組み込まれている。
【００３２】
実施例
実施例１．デンドリマー含有ニトロキシド類の合成
３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロジニル）オキシルカルボニル］−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［３］。文献Ｅ．Ｇ．Ｒｏｚａｎｔｓｅｖ，Ｆｒｅｅ Ｎｉｔｒｏｘｙｌ Ｒａｄｉｃａｌｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ｐｐ．２０３−２０６（５００ｍｇ，２．６９ｍｍｏｌｅｓ）に記載された、ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解された３−カルボキシ−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［１］の溶液に、Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミド［２］（ウイスコンシン州ミルウォーキーのＡｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，３１０ｍｇ，２．９６ｍｍｏｌｅｓ）を加えた溶解後、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，６１０ｍｇ，２．９６ｍｍｏｌｅｓ）を加えた。この反応混合物を室温で２日間撹拌し、ろ過し、真空下で蒸発させた。残りのオイルを塩化メチレン中に取り出し、ろ過し、真空下で蒸発させ乾燥させた。次いで、残りの物質を熱シクロヘキサン（３回，１０ｍＬ）で洗浄した。残りのオイルをクロロホルム：ヘキサン（８０：２０）に溶解し、シリカゲル（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，２３０−４００メッシュ）を含むクロマトグラフィ・カラムに通し、残りの１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを除去した。クロロホルム：アセトン（９６：４）を用いて溶離を行い、溶媒を蒸発させると３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロジニル）オキシルカルボニル］−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［３］が黄色のオイルとして得られ、これは室温に放置すると固化した（ｒｅｆ．２）。ＦＴ−ＩＲ：（クロロホルム）１８１３，１７８７および１７４４（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１；ＥＰＲ：ＡＮ＝１４．５Ｇ。
【００３３】
ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）４［５］。３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロジニル）オキシルカルボニル］−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［３］（１．９ｇｍ，６．７ｍｍｏｌｅｓ）およびＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−４［４］（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，４８０ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌｅｓ）を塩化メチレン（５０ｍＬ）に溶解し、室温で５日間撹拌した。この点で、飽和食塩水（１０ｍＬ）を反応に加え、層を分離させ、有機層は無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。ろ過に続いて回転式蒸発機で乾燥させてオイルを得た。シリカゲル（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，２３０−４００メッシュ）とクロロホルム：アセトン（９６：４）を用いたカラム・クロマトグラフィによる精製により、反応混合物に加えた過剰の３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロジニル）オキシルカルボニル］−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［３］を分離した。クロロホルム：メタノール（５０：５０）に変更して、オイルとして、ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）４［５］を取得し、これは高真空下に置いて固化させた。ＥＰＲスペクトルは３つのラインが信号を有する幅広なスペクトルであった。Ａ．Ｗ．Ｂｏｓｍａｎ，Ｒ．Ａ．Ｊ．ＪａｎｓｅｎおよびＥ．Ｗ．ｅｉｊｅｒ。５世代のニトロキシル基を有するデンドリマー，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３０：３６０６−３６１１，１９９７。
【００３４】
ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−（ＮＨ−３−ＣＨ２−ＰＲＯＸＹＬ）４［１５］。文献、Ｐｏｕら，Ｆｒｅｅ Ｒａｄ．Ｒｅｓ．２３：３５３−３６４，１９９５（５００ｍｇ，２．９４ｍｍｏｌｅｓ）に記載された方法でつくられた３−カルボキシアルデヒド２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［１４］をＴＨＦ（７０ｍＬ）に溶解し、塩化メチレン（２０ｍＬ）に溶解したＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−４［４］（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，１８３ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌｅｓ）およびｓｏｄｉｕｍ ｔｒｉａｃｅｔｏｘｙｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ（４９２ｍｇ，２．３ｍｍｏｌｅｓ）を加えた。添加が完了したあと、３Ａ゜のモレキュラー・シーブをを加え、室温で５日間撹拌した。この点で、飽和食塩水（１０ｍＬ）を反応に加え、層を分離させ、有機層は無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。ろ過に続いて回転式蒸発機で乾燥させてオイルを得た。シリカゲル（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，２３０−４００メッシュ）とクロロホルム：アセトン（９６：４）を用いたカラム・クロマトグラフィによる精製により、反応混合物に加えた過剰の３−［（２，５−ジオキソ−１−ピロジニル）オキシルカルボニル］−２，２，５，５−テトラメチル−１−ピロジニルオキシル［３］を分離した。クロロホルム：メタノール（５０：５０）に変更して、オイルとして、ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）４［５］を取得し、これは高真空下に置いて固化させた。ＥＰＲスペクトルは３つのラインが信号を有する幅広なスペクトルであった。
【００３５】
ＤＡＢ−ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）ｎ の一般的調製方法
上で述べた一般的方法に続いて、その他のＰＲＯＸＹＬ官能基を有するデンドリマーを、調製し、次いでシリカゲル（Ａｉｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，２３０−４００メッシュ）と種々の溶媒系を用いたフラッシュ・クロマトグラフィにより精製した：すなわち、（ａ）ＴＲＥＮ−デンドリマー−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）３［６］トリス（２−アミノエチル）アミン，（Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，ペンシルバニア州ピッツバーグ）クロロホルム：メタノール（９５：５）；（ｂ）ＤＡＢ−デンドリマー−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）８［７］メタノール：水酸化アンモニウム（３０％）（９８：２）；（ｃ）ＤＡＢ−デンドリマー−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）８［７］メタノール：水酸化アンモニウム（３０％）（９９１）；（ｄ）ＤＡＢ−デンドリマー−（ＮＨ−３−ＣＯ−ＰＲＯＸＹＬ）８［７］メタノール：水酸化アンモニウム（３０％）（９９：１）。
【００３６】
実施例２．磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）を用いたニトロキシル含有デンドリマーを注入した関節の生体内薬物動態
関節炎と診断され両ひざの慢性的な厳しい痛みと炎症に対して医学的な処置を受けている老年男性（約６５−７５歳；７０−８０ｋｇ）の両ひざ関節に、３２個の末端ＰＲＯＸＹＬ−３−カルバミドニトロキシド基［９］を含む化学式（Ｉ）のデンドリマーの０．９％の生理食塩水としてのストック１００μＭ無菌溶液の０．５ｍＬを針（ゲージ２５）を用いて注入した。次いで、ＭＲ画像撮影装置（１．５テスラＭＲ装置，ＳＩＧＮＡ；Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミルウォーキー）に患者を配置し、普通の方法で両ひざ関節の走査を得る。約１ヶ月の周期で、この操作を繰り返す。この処置プロトコルに対する反応を評価するためにこのようにして得られたＭＲ画像を継続的に比較する。
【００３７】
閉経期周辺の女性について上の操作をフォローする。この女性の血液化学は、彼女が関節炎になるリスクが高いことを示している。骨密度を評価する前の対照として両股関節のＭＲＩ走査を初めてとると、骨密度の減少については全く心配がないことが分かった。定期的にこのプロセスを繰り返し、ＭＲＩ走査により骨密度が加速的に減少し始めていることが判明した場合はホルモン補充治療を開始する。
【００３８】
若年性関節リューマチの重篤なケースと診断されている若い成年（約２０−３０歳）について、一連の積極的な医学的治療プロトコルに対する患者の応答を診断するために疾患により最も重篤な影響を受けている患者の関節に注入することによりフォローする。
【００３９】
上の処置の各々をフォローするが、代わりに、１６個の末端ＰＲＯＸＹＬ−３−カルバミド−ニトロキシド基［８］を含む化学式（Ｉ）のデンドリマーを用いる。以下の説明は、ＭＲＩを用いたいろいろな方法におけるニトロキシル含有デンドリマーを注入した関節の生体内薬物動態を例示している。
【００４０】
肩の関節の一つに損傷のある慢性の痛みのある女性（約１６歳；４５−５５ｋｇ）の両方の肩の関節に、３２個の末端ＰＲＯＸＹＬ−３−カルバミドニトロキシド基［９］を含む化学式（Ｉ）のデンドリマーの０．９％の生理食塩水としてのストック１００μＭ無菌溶液の１ｍＬを針（ゲージ２５）を用いて注入した。次いで、ＭＲ画像撮影装置（１．５テスラＭＨ装置，ＳＩＧＮＡ；Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミルウォーキー）に患者を配置し、普通の方法で両ひざ関節の走査を得る。損傷のない関節に比べた損傷を受けた肩の関節の関節軟骨の状態は、各々の肩についてこのようにして得られたＭＲ画像で容易に識別でき、且つ治癒の進行をフォローするために用いることができる傷を比較する基準になる。
【００４１】
実施例３．デンドリマー含有ニトロキシド類の生体外安定性（ニトロキシド還元の速度）
ニトロキシドの生体外還元速度（表１）は、活性食細胞セルの生体外モデルとしてチオールの存在下におけるスーパーオキシドを用いて測定した。Ｇ．Ｍ．Ｒｏｓｅｎら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，９６９：２３６−２４１，１９８８；Ｇ．Ｍ．Ｒｏｓｅｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２６：６７５−６７８，１９７７；Ｓ．Ｐｏｕら，Ｆｒｅｅ Ｒａｄ．Ｒｅｓ．２３：３５３−３６４，１９９５；およびＥ．Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，８０２：９０−９８，１９８４。これらの測定の場合、ニトロキシド類［Ｓ．Ｐｏｕら，上記文献，およびＨ．Ｋｕｔｈａｎら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｊ．２０３：５５１−５５８，１９８２，］（５０マイクロモル）は、Ｃｈｅｌｅｘｅｄリン酸ナトリウム・バッファー（５０ｍＭ，ｐＨ７．４）中でキサンチン（４００マイクロモル）に対するキサンチン−オキシダーゼの作用により生じたスーパーオキシドの連続的な流の存在下でシステイン（２００マイクロモル）に加えられた。スーパーオキシドの生成速度は、２１ｍＭ−１ｃｍ−１のモル吸光度用いた５００ｎｍにおけるフェリサイトクロームｃの還元を抑制するスーパーオキシド・ジシヌターゼ（５０Ｕ／ｍＬ）をフォローすることにより推定した。Ｈ．Ｋｕｔｈａｎら，上記文献。ニトロキシドの還元速度は、時間の関数として低フィールドの変化（デンドリマー結合した各ニトロキシドの幅広になったＥＰＲスペクトル還元速度の測定にその他のピークを使用できないようにした）を観察することにより周辺温度のＥＰＲスペクトルによりモニターした。
【００４２】
実施例５．磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）を用いたニトロキシル含有デンドリマーを注入した関節の生体内薬物動態
ＭＲＩ実験に用いるうさぎ（２．８−３．５ｋｇ）は、筋肉内にケタミンとキシラジンを注射して鎮静化する。知覚麻痺は、必要によりｉ．ｖ．ｓｏｄｉｕｍ ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｒを用いて維持する。Ｘ線透視ガイダンスの下で、この麻酔したうさぎのひざの関節に針（ゲージ２５）および３２個のニトロキシル基を含有する化学式（Ｉ）のニトロキシル基含有デンドリマー［９］のストック溶液の１ｍＬを入れる。うさぎの注入された関節は、次いで、ＭＲ撮影装置に配置される。このデンドリマー［９］の同じストック溶液の同じ用量を含むプラスチック管をそのうさぎの隣に置き、観察されたＭＲＩ強度の変化が、装置の変動のためではなくニトロキシド［９］の関節からの拡散の薬理学的動態によることを立証するための基準として用いる。このうさぎの関節軟骨は、このようにして得られたＭＲ画像で容易に識別することができ、且つ人工的に導入された炎症の結果として変性した別の実験用ウサギの関節の対応する関節と比較するための基準になる。
【００４３】
前述の説明から、当業者はこの発明の本質的な特徴を確認することができ、且つこの発明の精神と範囲を逸脱することなく、この発明の種々の変化や修正を行い、それを種々の用途と条件に適合させることができる。
【００４４】
【図面の簡単な説明】
【図１】４個のニトロキシド基を含むＰＲＯＸＹＬ基を有するデンドリマーを製造する方法のフローシート。この発明の方法ではＸ＝Ｏを用いた。
【図２】４個のニトロキシド基を含むＰＲＯＸＹＬ基を有するデンドリマーを製造する方法のフローシート。この発明の方法ではＸ＝Ｈ，Ｈを用いた。
【図３】図１と２のデンドリマーの包括的化学式を示している。ここで、ｎは分子および３置換ＰＲＯＸＹＬモノマーにおけるニトロキシド基の数を示している。
【図１】
2004524259.tif 000016
【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成14年1月30日(2002.1.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨関節炎またはリューマチ様関節炎などの変性関節疾患の症状を示す動物の関節のＭＲＩにより得られた画像診断を増強する方法において、
前記方法には、前記関節のＭＲＩ走査の前またはその間に、走査によりつくられたＭＲ画像を増強するために毒性のない有効量の水溶性ニトロキシドを、薬理学的に受け入れる毒性のない注入できる媒体との混合物として動物の関節に注入する工程、および前記ニトロキシドが、生理的ｐＨで正に荷電しており、安定で且つ生物還元に対し抵抗性を有し、また、少なくとも６個の末端ニトロキシル置換基を含み、且つ化学式（Ｉ）の化合物であるニトロキシル官能基を有するデンドリマーであるという改良が含まれており：
2004524259.tif 000044
ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり：
2004524259.tif 000045
ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり、Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり、
2004524259.tif 000046
ここで、Ｒ’”は低級アルキルまたは（Ｃ）化学式ＩＶのグループであり：
2004524259.tif 000047
ここで、化学式（Ｉ），（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の各アルキレンは鎖に２−３個の炭素原子を有する２−６個の炭素原子からなる架橋２価アルキレン基であり、Ｒはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は６個以上である、前記方法。
【請求項２】
前記動物がヒトである請求項１の方法。
【請求項３】
前記ヒトが骨関節炎かリューマチ様関節炎の一つ以上の症状を示す請求項２の方法。
【請求項４】
前記関節がひざか肩の関節である請求項３の方法。
【請求項５】
Ｒ’がメチルでありＲ”がＨである請求項２の方法。
【請求項６】
Ｘが２価酸素原子である請求項２の方法。
【請求項７】
アルキレンがトリメチレンである請求項２の方法。
【請求項８】
化学式（Ｉ）のＲ基の２つ以上が化学式（ＩＶ）のグループである請求項２の方法。
【請求項９】
請求項８の方法において、化学式（Ｉ）のＲ基のすべてが、化学式（ＩＶ）の別のグループであり、化学式（ＩＶ）においてＲがニトロキシル基または化学式（ＩＶ）のグループである前記方法。
【請求項１０】
請求項９の方法において、化学式（Ｉ）自身、または、さらに、化学式（ＩＶ）のグループを持っている化学式（Ｉ）のＲ基の総数が９以上である前記方法。
【請求項１１】
請求項１０の方法において、化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である前記デンドリマーのＲ基の総数が８−６４であり、且つ末端基であるそのすべてがニトロキシル基である前記方法。
【請求項１２】
前記デンドリマーのニトロキシル基の総数が１２−４８である請求項１１の方法。
【請求項１３】
請求項１の方法において、前記動物は骨関節炎の症状を一つ以上示すヒトであり；前記デンドリマーはＲ’がメチル、ｎが０，１または２；そしてＲ”がＨである化学式（Ｉ）の化合物であり；Ｘは化学式（ＩＩ）のニトロキシル基の２価酸素原子であり；アルキレンはトリメチレンであり；化学式（Ｉ）の少なくとも２つのＲ基は化学式（ＩＶ）のグループであり；そして化学式（Ｉ）自身、または、さらに、化学式（ＩＶ）のグループを持っている化学式（Ｉ）のＲ基の総数は少なくとも９で、その内少なくとも６個の末端Ｒ基は化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であり；そして末端ニトロキシル基の総数は８〜６４である前記方法。
【請求項１４】
化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であるＲ基の総数が１２−４８である請求項１３の方法。
【請求項１５】
ニトロキシル基の総数が１６−３２である請求項１３の方法。
【請求項１６】
前記関節がひざか肩の関節である請求項１３の方法。
【請求項１７】
生理的ｐＨで正に荷電しており、安定で且つ生物還元に対して抵抗性を有し、また、１６−３２個の末端ニトロキシル置換基を含み、且つ化学式（Ｉ）の 化合物であるニトリキシル官能基を有するデンドリマーであり：
2004524259.tif 000048
ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり：
2004524259.tif 000049
ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり、ｎは０−６の整数であり、Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり：
2004524259.tif 000050
ここで、化学式（Ｉ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の各アルキレンは、鎖に２−３の炭素原子を有する２−６個の炭素原子の架橋２価アルキレン基であり、Ｒはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は１６−３２個である、化合物。
【請求項１８】
Ｒ’がメチル；ｎが０；およびＲ”がＨ；Ｘが２価の酸素原子；アルキレンがトリメチレン；化学式（Ｉ）のＲ基の少なくとも２つが化学式（ＩＶ）のグループ；そして、化学式（Ｉ）自身、または、さらに、化学式（ＩＶ）のグループを持っている化学式（Ｉ）のＲ基の総数は少なくても９であり、その内少なくとも６個の末端Ｒ基は化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であり；そして末端ニトロキシル基の総数は８−６４である、請求項１７の化合物。
【請求項１９】
ｎが０である、請求項１８の化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
発明の概要
一つの方法の態様では、この発明は関節の変性を生じる疾患の症状を示す動物の関節についてＭＲＩにより得られた画像を増強する方法に関する。この方法には、ヒトを含む動物の関節への、関節のＭＲＩ走査の前に、走査によりつくられたＭＲＩを増強し且つ関節におけるプロテオグリカンを目に見えるようにする、毒性のない注入可能な薬理学的に受け入れられる媒体との混合物として、末端基として、たとえば、化学式（Ｉ）の少なくとも６個のＰＲＯＸＹＬニトロキシル基を有する水溶性または水分散性ニトロキシル化デンドリマーの注入が含まれている。
2004524259.tif 000051
ここで、各Ｒはそれぞれ、（Ａ）化学式ＩＩのニトロキシル基であり（ここで、Ｘは酸素原子または２つの水素原子であり）：
2004524259.tif 000052
Ｒ’は低級アルキルであり、Ｒ”はＨまたは低級アルキル、ｎは０−６の整数、及びＸは１個の酸素原子または２個の水素原子、または（Ｂ）化学式ＩＩＩのグループであり、
2004524259.tif 000053
ここで、Ｒ’”は低級アルキルまたは（Ｃ）化学式ＩＶのグループであり：
2004524259.tif 000054
ここで、化学式（Ｉ），（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の各アルキレンは鎖に２−３個の炭素原子を有する２−６個の炭素原子からなる架橋２価アルキレン基であり、そしてＲはこの明細書で規定されており、ただし化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である分子のＲ基の総数は６個以上である。


【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
この発明の方法で有用な化学式（Ｉ）のデンドリマーの例には、次のようなものがある：
ａ）アルキレンはトリメチレン，１−メチルエチレン，２−メチルエチレンまたは２，３−ブチレンであり、好適にはトリメチレンである。
ｂ）Ｘはグループａ）の化合物を含む、２価の酸素原子である。
ｃ）Ｘはグループａ）の化合物を含む、２個の水素原子である。
ｄ）Ｒ’はグループａ），ｂ）およびｃ）の化合物を含む、メチル，エチルまたはイソプロピルである。
ｅ）Ｒ”はグループａ），ｂ），ｃ）およびｄ）の化合物を含む、Ｈまたはメチルである。
ｆ）化学式（Ｉ）の２個および好適には３個すべてのＲ基が、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ）およびｅ）の化合物を含む、化学式ＩＶのグループである。
ｇ）末端基Ｒがすべて、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ）およびｆ）の化合物を含む、化学式（ＩＩ）のニトロキシル基である。
ｈ）分子内のＲ基の総数が、少なくとも１６個，その内少なくとも８個は化学式（ＩＩ）のニトロキシル基であり、たとえば、８−６４，好適には１２−４８、最も好適には１６−３２，たとえば、６，７，８，９，１０，１２，１４，１６，１８，２０，２２，２４，２６，２８，３０，３６，４８およびその他の６４までまたはそれ以上の奇数と偶数、そして最も好適には、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ），ｆ）およびｇ）の化合物を含む、６，１２，３６または４８個のニトロキシル基、並びに４，８，１６，３２または６４個のニトロキシル基を含む対称構造を有する化合物である。
ｉ）化学式（Ｉ）において、各アルキレンはトリメチレンであり且つ各Ｒ基は化学式（ＩＶ）のグループであり、そのグループにおいて各アルキレンはトリメチレンおよび各Ｒ基は、グループａ），ｂ），ｃ），ｄ），ｅ），ｆ），ｇ）およびｈ）の化合物を含む、上で規定された化学式（ＩＩ）または（ＩＶ）のグループである。
ｊ）化学式（ＩＩ）において、ｎは０，１または２であり、グループａ）−ｉ）のそれぞれの化合物を含む。




【国際調査報告】
2004524259.tif 000055