(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）［式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアリールであり、Ｒ２は、Ｈ、アルキル、又はアリールであり、Ｒ３は、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアリールであり、Ｒ４’及びＲ４−Ｒ８は独立に、Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、又はＳＯ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアリールであり、Ｒ９は、Ｒ９ａ、Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、又はＳＯ２Ｒ９ａであり、Ｒ９ａは、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアリールである］を有する化合物を提供する。Ｒ９ａは、非置換でありうるか、若しくは１つ以上のオキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、ＯＳＯ２Ｒ９ｂ、ＮＨＲ９ｂ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ及びＮＨＳＯ２Ｒ９ｂ基で置換されうる。Ｒ９ｂは、Ｈ、アルキル、アルケニル、又はアリールである。Ｒ９ｂは、非置換でありうるか、若しくはオキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ及びＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｃなどの１つ以上の基で置換されうる。Ｒ９ｃは、Ｈ、又は、非置換の若しくは置換されたアルキル、アルケニル又はアリールである。本発明は更に、単独で、又は少なくとも１つの更なる活性薬剤と組合せて、本発明の少なくとも１つの化合物及び医薬として許容できる担体を含む組成物を提供する。本発明は更に、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態の治療方法及び癌の治療方法を提供する。【化１】2004504399.tif 000032
2004504399.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2004504399.tif 000023
又は
【化２】
2004504399.tif 000024
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ１は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１ａ、ＣＯ２Ｒ１ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａからなる群から選択され、Ｒ１ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ２は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ２は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ２ａ、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ２ａからなる群から選択され、Ｒ２ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ３は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ４’及びＲ４−Ｒ８は、同じか、若しくは異なって、各々が、Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、又はＳＯ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ１０は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１０ａ、ＣＯ２Ｒ１０ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１０ａからなる群から選択され、Ｒ１０ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ９は、Ｒ９ａ、Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、又はＳＯ２Ｒ９ａであり、Ｒ９ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ９ａは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、ＯＳＯ２Ｒ９ｂ、ＮＨＲ９ｂ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ及びＮＨＳＯ２Ｒ９ｂからなる群から選択され、Ｒ９ｂは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ９ｂは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ及びＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｃからなる群から選択され、Ｒ９ｃは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ１０ａ及びＲ９ｃは、非置換か、又は、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ（＝Ｏ）、チオ、シアノ及びニトロからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されている］
を有する実質的に精製された化合物、又は医薬として許容できるその塩。
【請求項２】
Ｒ１がＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１ａがＨ又はメチルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣＨＯＲ２ａＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２ａがＨである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３がメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４がＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１０がＨ又はメチルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４’及びＲ５−Ｒ８がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ９がＣ（Ｏ）Ｒ９ａであり、式
【化３】
2004504399.tif 000025
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
式（Ａ）の窒素原子のＲ９ｂ置換基が、式
【化４】
2004504399.tif 000026
を有する、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１がＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであり、Ｒ２がＣＨＯＲ２ａＣＨ３であり、Ｒ４がＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ９が、式
【化５】
2004504399.tif 000027
を有し、Ｒ９ｂ置換基の１つ以上がＨであり、末端Ｒ９ｃＯ（ＣＯ）エステル置換基のＲ９ｃ基がＨ又はメチルであり、その他のＲ９ｃ置換基がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
式
【化６】
2004504399.tif 000028
又は
【化７】
2004504399.tif 000029
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１が−ＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであり、Ｒ２がＣＨＯＲ２ａＣＨ３であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ１ａがＨ又はメチルであり、Ｒ２ａがＨである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ４がＨ又はＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０ａであり、Ｒ１０ａがＨ又はメチルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
式
【化８】
2004504399.tif 000030
又は
【化９】
2004504399.tif 000031
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ１は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１ａ、ＣＯ２Ｒ１ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａからなる群から選択され、Ｒ１ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ２は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ２は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ２ａ、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ２ａからなる群から選択され、Ｒ２ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ３は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ４−Ｒ８は、同じか、若しくは異なって、各々が、Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、又はＳＯ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ１０は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１０ａ、ＣＯ２Ｒ１０ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１０ａからなる群から選択され、Ｒ１０ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ９は、Ｒ９ａ、Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、又はＳＯ２Ｒ９ａであり、Ｒ９ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ９ａは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、ＯＳＯ２Ｒ９ｂ、ＮＨＲ９ｂ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ及びＮＨＳＯ２Ｒ９ｂからなる群から選択され、Ｒ９ｂは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールであり、Ｒ９ｂは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ及びＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｃからなる群から選択され、Ｒ９ｃは、Ｈ、直鎖若しくは分枝Ｃ１−３０飽和アルキル、直鎖若しくは分枝Ｃ２−３０不飽和アルキル、又は環骨格に６−１０炭素原子を含むアリールである；
Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ１０ａ及びＲ９ｃは、非置換か、又は、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ（＝Ｏ）、チオ、シアノ及びニトロからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されている］
を有する化合物、又は医薬として許容できるその塩
（但し、該化合物は、コンドロプシンＡ−Ｄ、及び７３−デオキシコンドロプシンＡからなる群から選択されない）。
【請求項１８】
請求項１−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物及び医薬として許容できる担体を含む組成物。
【請求項１９】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の少なくとも１つの更なる治療上活性な化合物の治療有効量を更に含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態について患者を治療的又は予防的に処置する方法であって、請求項１−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害量を患者に投与することを含む方法であって、該投与後すぐ患者が該状態に関し治療されることを含む、方法。
【請求項２１】
該状態が、骨粗鬆症、アルツハイマー症、緑内障、生殖力、異常尿酸性化、分解酵素の異常分泌、及び癌からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量が、細胞内オルガネラのオルガネラ内酸性化、尿酸性化、骨再吸収、生殖力、腫瘍細胞の薬剤耐性、腫瘍細胞増殖、細胞浸潤、血管新生、及び転移からなる群から選択される１つ以上の状態を阻害するのに有効である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の少なくとも１つの更なる治療上活性な化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量を投与することを更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
患者における癌の予防的又は治療的処置の方法であって、請求項１−１７のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物の抗癌有効量を患者に投与することを含む方法であって、該投与後すぐ患者が癌に関し治療される方法。
【請求項２５】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の少なくとも１つの更なる治療上活性な化合物の抗癌有効量を投与することを更に含む、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔発明の技術分野〕
本発明は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害大環状化合物、組成物、及びそれらの使用方法に関する。
【０００２】
〔発明の背景〕
液胞（又は液胞型又はＶ型）（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼは、「真核生物の一般的プロトンポンプ」として記載された（Ｆｉｎｂｏｕｒ及びＨａｒｒｉｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３２４，６９７−７１２（１９９７））。液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼは、身体の多くの組織や細胞に存在している。細胞内液胞（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性は、特定のオルガネラに存在し、その内部酸性度を維持する責を負う。この維持は、膜やオルガネラの蛋白質の選別；プロインシュリン変換；神経伝達物質取り込み；細胞分解プロセス；及び、レセプターサイクリング；などの種々の生理的機能に必須である。Ｍｅｌｌｍａｎら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５５，６６３−６９９（１９８６）；Ｆｏｒｇａｃ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖ．，６９，７６５−７９６（１９８９）；Ｓｔｅｖｅｎｓ及びＦｏｒｇａｃ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１３，７７９−８０８（１９９７）；Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７５（１９９１）参照。
【０００３】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性はまた、特殊化した形質膜内にも位置している。重要な例には、腎介在細胞、破骨細胞及び精子細胞の形質膜における液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性が挙げられる。Ｓｔｏｎｅ及びＸｉｅ，Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ．，３３，７６７−７７４（１９８８）；Ｖａａｎａｎｅｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．，１１１，１３０５−１３１１（１９９０）；Ｂｌａｉｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４５，８５５−８５７（１９８７）；Ｗａｎｇ及びＧｌｕｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５，２１９５７−２１９６５（１９９０）；Ｈａｌｌ及びＣｈａｍｂｅｒｓ，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，４５，１−９（１９９６）；Ｈａｌｌ及びＳｃｈａｕｅｂｌｉｎ，Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｍｉｎｅｒａｌ，２７，１５９−１６６（１９９４）；Ｄａｖｉｄ及びＢａｒｏｎ，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，４，７２５−７４０（１９９５）；Ｗａｓｓａｒｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５，５５３−５６０（１９８７）；Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７５（１９９１）参照。
【０００４】
多数の生理的機能の維持における液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性の重要性の故に、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを阻害する化合物は、種々の異なる状況下で有用な薬理的適用を有するであろう。Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７４（１９９１），及びＫｅｅｌｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８３４，６００−６０８（１９９７）による総説、及びそれらに含まれる参考文献を参照。例えば、所定の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤は、１つ以上の疾患状態又は生理機能（それらにおいて、酸性化、神経伝達物質の蓄積、レセプター代謝回転（ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｔｕｒｎｏｖｅｒ）、リソソーム蓄積などのオルガネラ内液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ−媒介プロセスを阻害することが望ましい）に対し有用性を有しうる。Ｍｅｌｌｍａｎら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５５，６６３−６９９（１９８６）；Ｆｏｒｇａｃ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖ．，６９，７６５−７９６（１９８９）；Ｓｔｅｖｅｎｓ及びＦｏｒｇａｃ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１３，７７９−８０８（１９９７）；Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７５（１９９１）参照。同様に、所定の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤は、１つ以上の疾患状態又は生理機能（それらにおいて、尿酸性化；骨再吸収；又は、生殖力に必要なアクロソームの酸分泌；などの形質膜液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ−媒介プロセスを修飾することが望ましい）に対し有用でありうる。Ｓｔｏｎｅ及びＸｉｅ，Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ．，３３，７６７−７７４（１９８８）；Ｖａａｎａｎｅｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１１，１３０５−１３１１（１９９０）；Ｂｌａｉｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４５，８５５−８５７（１９８７）；Ｗａｎｇ及びＧｌｕｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５，２１９５７−２１９６５（１９９０）；Ｈａｌｌ及びＣｈａｍｂｅｒｓ，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，４５，１−９（１９９６）；Ｈａｌｌ及びＳｃｈａｕｅｂｌｉｎ，Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｍｉｎｅｒａｌ，２７，１５９−１６６（１９９４）；Ｄａｖｉｄ及びＢａｒｏｎ，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，４，７２５−７４０（１９９５）；Ｗａｓｓａｒｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５，５５３−５６０（１９８７）；Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７５，（１９９１）参照。
【０００５】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを阻害する化合物はまた、癌治療に重要な有用性を有するだろう。例えば、細胞増殖、血管新生、腫瘍細胞浸潤、転移、及び薬剤耐性に関連するプロセスにおける液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの関与を示す文献上の証拠がある（例えば、Ａｋｉｆｕｓａら，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ．，２３８，８２−８９（１９９８）；Ａｌｔａｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８７，１５８３−１５９８（１９９８）；Ｇｅｒａｒｄら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，２０１，２１−３１（１９９８）；Ｉｓｈｉｉら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，４８，１２−２０（１９９５）；Ｍｏｒｉｙａｍａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１５，２１３−２１８（１９９４）；Ｏｈｋｕｍａら，Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．，２９Ａ，８６２−８６６（１９９３）；Ｐｅｒｏｎａら，Ｎａｔｕｒｅ，３３４，４３８−４４０（１９８８）；Ｍｏｎｔｃｏｕｒｒｉｅｒら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉ．，１０７，２３８１−２３９１（１９９４）；Ｍｏｎｔｃｏｕｒｒｉｅｒら，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｔｉｓ，１５，３８２−３９２（１９９７）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｇｕｉｌａｎら，Ａｎｎ．ＮＹ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６７１，４７８−４８０（１９９２）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｇｕｉｌａｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６５，Ｃ１０１５−Ｃ１０２９（１９９３）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｇｕｉｌａｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１７６，１９６−２０５（１９９８）；Ｎｉｓｈｉｈａｒａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２１２，２５５−２６２（１９９５）；Ｍａｎａｂｅら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１５７，４４５−４５２（１９９３）；Ｋｉｎｏｓｈｉｔａら，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．，３３７，２２１−２２５（１９９４）；Ｋｉｎｏｓｈｉｔａら，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．，３９８，６１−６６（１９９６）；Ｏｈｔａら，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７３，１５１１−１５１７（１９９６）；Ｏｈｔａら，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８５，３２４−３３０（１９９８）；Ｍａｒｑｕａｒｄｔら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，１０９８−１１０２（１９９１）；及びＢａｎｄｅｒｒａら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．，１２，７１１−７１５（１９９８）参照）。従って、これらの現象を阻害する化合物は、癌化学療法に有用だろう。
【０００６】
医薬品化学研究が立ち向かった多数の挑戦の中に、薬物治療に適用できる新規液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ−阻害リードを同定する挑戦がある。更に、癌化学療法において有用な新規リードの同定と開発は、依然として困難な問題である。新規抗癌剤及び液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤の同定に対する純合成的アプローチは、部分的には実験室合成に固有の技術的及び人的限界によって、典型的には不成功であった。生物的代謝物は、新規の構造的に多様な化学化合物の広大な源を提供するけれども、治療機会を探るのに利用できる薬剤、特に、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤、の数は比較的少ない。例えば、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを強力に、そして選択的に阻害する構造タイプは、今までは、バフィロマイシン（ｂａｆｉｌｏｍｙｃｉｎ）、コンカナマイシン（ｃｏｎｃａｎａｍｙｃｉｎ）、及びベンゾラクトン　エナミド（ｂｅｎｚｏｌａｃｔｏｎｅ　ｅｎａｍｉｄｅ）（サリチリハラミド（ｓａｌｉｃｙｌｉｈａｌａｍｉｄｅ）やロバタミド（ｌｏｂａｔａｍｉｄｅ）など）などの化合物に限定されてきた（Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２）参照）。
【０００７】
このように、新規液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤と抗癌化合物、医薬組成物、及びそれらの使用方法の必要性が依然としてある。本発明は、このような化合物、このような化合物を含む組成物、及び使用方法を提供する。本発明のこれらの、そして他の利点、並びに更なる本発明の特徴は、本明細書で提供する本発明の説明から明白だろう。
【０００８】
〔発明の簡単な要旨〕
本発明は、式
【０００９】
【化１０】
2004504399.tif 000003
【００１０】
又は
【００１１】
【化１１】
2004504399.tif 000004
【００１２】
を有する化合物を提供する。
【００１３】
置換基Ｒ１は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ１は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１ａ、ＣＯ２Ｒ１ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａからなる群から選択され、Ｒ１ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ２は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ２は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ２ａ、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ２ａからなる群から選択され、Ｒ２ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ３は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
【００１４】
置換基Ｒ４’及びＲ４−Ｒ８は、同じか、若しくは異なって、各々が、Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、又はＳＯ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ１０は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１０ａ、ＣＯ２Ｒ１０ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１０ａからなる群から選択され、Ｒ１０ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである；
置換基Ｒ９は、Ｒ９ａ、Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、又はＳＯ２Ｒ９ａであり、Ｒ９ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ９ａは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、ＯＳＯ２Ｒ９ｂ、ＮＨＲ９ｂ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ及びＮＨＳＯ２Ｒ９ｂからなる群から選択され、Ｒ９ｂは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ９ｂは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ及びＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｃからなる群から選択され、Ｒ９ｃは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ１０ａ及びＲ９ｃは、非置換でありうるか、又は、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ（＝Ｏ）、チオ、シアノ及びニトロからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されうる。本発明の化合物は、医薬として許容できる塩又はプロドラッグの形態でありうる。
【００１５】
本発明は更に、単独で、又は少なくとも１つの更なる治療薬剤と組合せて、本発明の少なくとも１つの化合物の治療有効量を含む組成物を提供する。治療有効量は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量及び／又は抗癌有効量でありうる。
本発明は更に、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態を予防的又は治療的に処置する方法、及び癌を予防的又は治療的に処置する方法を提供する。
本発明に従って使用される化合物は、単独で、又は本発明の化合物以外の少なくとも１つの更なる治療薬剤の治療有効量と組合せて投与されうる。
更なる治療薬剤には、例えば、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤及び抗癌化合物が挙げられる。
【００１６】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、式
【００１７】
【化１２】
2004504399.tif 000005
【００１８】
又は
【００１９】
【化１３】
2004504399.tif 000006
【００２０】
を有する化合物を提供する。
【００２１】
置換基Ｒ１は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ１は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１ａ、ＣＯ２Ｒ１ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１ａからなる群から選択され、Ｒ１ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ２は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ２は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ２ａ、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ２ａからなる群から選択され、Ｒ２ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ３は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
【００２２】
置換基Ｒ４’及びＲ４−Ｒ８は、同じか、若しくは異なって、各々が、Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、又はＳＯ２Ｒ１０であり、Ｒ１０は、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ１０は、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ１０ａ、ＣＯ２Ｒ１０ａ、及びＯＣ（Ｏ）Ｒ１０ａからなる群から選択され、Ｒ１０ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである；
置換基Ｒ９は、Ｒ９ａ、Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、又はＳＯ２Ｒ９ａであり、Ｒ９ａは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ９ａは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ、ＯＳＯ２Ｒ９ｂ、ＮＨＲ９ｂ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ及びＮＨＳＯ２Ｒ９ｂからなる群から選択され、Ｒ９ｂは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールであり、Ｒ９ｂは、非置換か、若しくは１つ以上の置換基で置換され、置換基は同じか、若しくは異なって、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲ９ｃ、ＣＯ２Ｒ９ｃ及びＯＣ（Ｏ）Ｒ９ｃからなる群から選択され、Ｒ９ｃは、Ｈ、直鎖若しくは分枝飽和アルキル、直鎖若しくは分枝不飽和アルキル、又はアリールである。
置換基Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ１０ａ及びＲ９ｃは、非置換でありうるか、又は、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、オキソ（＝Ｏ）、チオ、シアノ及びニトロからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されうる。本発明の化合物はまた、医薬として許容できる塩の形態でありうる。医薬として許容できる塩は、例えば、１つ以上の酸性置換基の塩（例えば、カルボン酸塩、スルホン酸塩など）及び１つ以上の塩基性置換基の塩（例えば、アミンの塩など）を含む。酸性置換基の適切な塩は、例えば、金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩など）及びアンモニウム塩（例えば、ＮＨ４＋塩、アルキルアンモニウム塩、４級アンモニウム塩など）を含む。塩基性置換基の適切な塩は、例えば、酸付加塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、カルボン酸塩（例えば、酢酸塩））、硫酸塩、スルホン酸塩（例えば、メシル酸塩）、リン酸塩、４級アンモニウム塩などを含む。
【００２３】
本発明の化合物がプロドラッグの形態でありうることが理解されよう。このようなプロドラッグは、当業者周知の試薬と合成変換を用いて調製できる。特定のプロドラッグの有効性は、当業者周知の１つ以上の分析方法（例えば、薬物動態、バイオアッセイ、インビボ効力研究など）を用いて決定できる。
【００２４】
Ｒ１のための好適な置換基は、式ＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａ（Ｒ１ａは本明細書で定義されるとおりである）の置換基を含む。Ｒ１がＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであるとき、Ｒ１ａは好ましくは、Ｈ、又は例えばメチルなどのアルキルであり、その場合、Ｒ１は、ＣＨＯＨＣＯ２Ｈ、ＣＨＯＨＣＯ２ＣＨ３、ＣＨ（ＯＣＨ３）ＣＯ２Ｈ及びＣＨ（ＯＣＨ３）ＣＯ２ＣＨ３を含む。
Ｒ２のための好適な置換基は、式ＣＨＯＲ２ａＣＨ３（Ｒ２ａは本明細書で定義されるとおりである）の置換基を含む。Ｒ２がＣＨＯＲ２ａＣＨ３であるとき、Ｒ２ａは好ましくはＨであり、その結果、Ｒ２はＣＨＯＨＣＨ３になる。
置換基Ｒ３は好ましくはアルキル置換基であり、最も好ましくはメチルである。
Ｒ４’とＲ４のための好適な置換基は、式Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０（Ｒ１０は本明細書で定義されるとおりである）の置換基を含む。Ｒ４’又はＲ４が式Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０であるとき、Ｒ１０は好ましくは、Ｈ、又は例えばメチルなどのアルキル置換基である。
好適な実施態様において、Ｒ１は、ＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであり、Ｒ２は、ＣＨＯＲ２ａＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０である（Ｒ１、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ４及びＲ１０は本明細書で定義されるとおりである）。
Ｒ５−Ｒ８は、本明細書記載の適切な置換基の任意の組み合わせでありうるが、Ｒ５−Ｒ８は、Ｈ又はＣ（Ｏ）Ｒ１０（Ｒ１０は本明細書で定義されるとおりである）であるのが好ましい。好適な実施態様では、Ｒ５−Ｒ８の全てはＨである。
【００２５】
好適なＲ９置換基は、式
【００２６】
【化１４】
2004504399.tif 000007
【００２７】
のＣ（Ｏ）Ｒ９ａ置換基（Ｒ９ｂは本明細書で定義されるとおりである）を含む。Ｒ９ｂは任意の適切な置換基でありうるが、Ｒ９ｂは好ましくは、Ｈ、又は式
【００２８】
【化１５】
2004504399.tif 000008
【００２９】
（Ｒ９ｃは本明細書で定義されるとおりである）の置換基である。Ｒ９ｂが式（Ｂ）であるとき、Ｒ９ｃは好ましくは、Ｈ又はメチルである。最も好ましくは、式（Ｂ）の末端置換基はＲ９ｃＯ２Ｃである（Ｒ９ｃはＨ又はメチルである）。
【００３０】
好適な実施態様では、Ｒ９はＣ（Ｏ）Ｒ９ａである（Ｒ９ａは、１つ以上のＯＲ９ｂ及びＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂ置換基で置換された不飽和アルキルである）。ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ９ｂのＲ９ｂ置換基は好ましくは、オキソ、ＯＲ９ｃ及びＣＯ２Ｒ９ｃからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換された不飽和アルキルである。特に好適な実施態様では、Ｒ９は、式
【００３１】
【化１６】
2004504399.tif 000009
【００３２】
であり、コンドロプシン（ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｎ）Ａ−Ｄにおける大環状アミノ置換基に構造的に対応している。Ｒ９が式（Ｃ）であるとき、Ｒ９ｂ置換基の１つ以上は好ましくはＨであり（例えば、ＯＲ９ｂ置換基の全てがヒドロキシルである）、末端Ｒ９ｃＯ２ＣエステルのＲ９ｃ置換基は好ましくは、水素又はメチルであり、その他のＲ９ｃ置換基は好ましくは水素である。
【００３３】
本発明の代表的な化合物は、式
【００３４】
【化１７】
2004504399.tif 000010
【００３５】
及び
【００３６】
【化１８】
2004504399.tif 000011
【００３７】
［式中、Ｒ１−Ｒ４、Ｒ９ｂ及びＲ９ｃは本明細書記載のとおりである］
の化合物を含む。本発明の化合物が式（Ｄ）又は（Ｅ）であるとき、Ｒ１はＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであり、Ｒ２はＣＨＯＲ２ａＣＨ３であり、Ｒ３はメチルである（Ｒ１ａはＨ又はメチルであり、Ｒ２ａはＨである）のが好ましい。より好適には、Ｒ１はＣＨＯＲ１ａＣＯ２Ｒ１ａであり、Ｒ２はＣＨＯＲ２ａＣＨ３であり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はＨ又はＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨＯＨＣＯ２Ｒ１０である（アルコール酸素上のＲ１ａ置換基はＨであり、カルボキシレート酸素上のＲ１ａはＨ又はメチルであり、Ｒ２ａはＨであり、Ｒ１０はＨ又はメチルである）。本発明の化合物が式（Ｄ）又は（Ｅ）であるとき、Ｒ９ｂは水素であり、Ｒ９ｃは水素又はメチルであるのが更に好ましい。
【００３８】
用語「飽和アルキル」は、１〜約３０の炭素原子、例えば、１〜約２０の炭素原子、１〜約１０の炭素原子、１〜約８の炭素原子、又は１〜約６の炭素原子を含みうる直鎖又は分枝鎖の飽和アルキルを意味する。飽和アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチル、ドデカニル、オクタデシルなどを含む。飽和アルキル置換基は、非置換でありうるし、又は、例えば、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル及びシアノからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されうる。
【００３９】
用語「不飽和アルキル」は、本明細書で定義する飽和アルキル（直鎖又は分枝鎖）で、その炭素−炭素単結合の１つ以上が、代わりに、多重結合、例えば、二重又は三重結合であるものを意味する。このように、不飽和アルキルは、アルケニル及びアルキニル置換基、並びに、二重及び三重結合の組合せを有する置換基を含む。
【００４０】
用語「アルケニル」は、１つ以上の二重結合を有する直鎖又は分枝鎖アルケニルを意味する。異なるように記載されていなければ、アルケニルは、２〜約３０の炭素原子、例えば、２〜約２０の炭素原子、２〜約１０の炭素原子、２〜約８の炭素原子、又は２〜約６の炭素原子を含みうる。アルケニルの例は、ビニル、アリル、１，４−ブタジエニル、イソプロペニル、本明細書記載の式（Ａ）−（Ｃ）の置換基などを含む。
【００４１】
用語「アルキニル」は、１つ以上の三重結合を有する直鎖又は分枝鎖アルキニル基を意味する。異なるように記載されていなければ、アルキニルは、２〜約３０の炭素原子、例えば、２〜約２０の炭素原子、２〜約１０の炭素原子、２〜約８の炭素原子、又は２〜約６の炭素原子を含みうる。アルキニルの例は、エチニル、プロピニル（プロパルギル）、ブチニルなどを含む。不飽和アルキル置換基は、非置換でありうるか、又は例えば、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、及びシアノからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されうる。
【００４２】
用語「アリール」は、当該分野で一般に理解されるように、芳香族炭素環式基を意味し、例えば、フェニルやナフチル環などの単環式及び多環式芳香族を含む。好ましくは、アリールは、例えば、フェニル、ナフチル、ビフェニルなどを含む１つ以上の６員環を含む。典型的には、アリールは、その環骨格に６個以上の炭素原子を含む（例えば、環骨格に６〜約１０炭素原子）。アリール置換基は、非置換でありうるか、又は例えば、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオ、アシル、アルキル、及びシアノからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されうる。
【００４３】
本発明の化合物は、当業者公知の方法によって、例えば、当該分野周知の慣用的合成変換を用いて、コンドロプシンＡ又はＢを構造的に修飾することによって、又は直接合成によって、得ることができる。１つ以上のヒドロキシル基は、例えば、直接酸化によってオキソ誘導体に変換できる。直接酸化は、例えば、Ｓｗｅｒｎ酸化などの任意の公知の方法を用いて、又は酸化クロム（例えば、三酸化クロム）、酸化マンガン（例えば、二酸化マンガン又は過マンガン酸塩）などの金属酸化剤との反応によって達成できる。１級アルコールは、例えば、Ｓｗｅｒｎ酸化によってアルデヒドに酸化することができるし、又は、例えば、本明細書記載のような金属酸化剤との反応によって、カルボン酸（例えば、ＣＯ２Ｈ）に酸化することができる。同様に、チオール（例えば、ＳＲ、ＳＨなど）は、適当な酸化剤との反応によって酸化された硫黄誘導体（例えば、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ３Ｈなど）に変換できる。
【００４４】
１つ以上のヒドロキシル基は、例えば、無水物（例えば、（Ｒ（ＣＯ））２Ｏ）又は酸クロリド（例えば、Ｒ（ＣＯ）Ｃｌ）などの適切なエステル化剤との反応によって、エステル（例えば、ＣＯ２Ｒ）に変換できる。１つ以上のヒドロキシル基は、例えば、スルホニル　クロリド（例えば、ＲＳＯ２Ｃｌ）などの適切なスルホン化剤との反応によってスルホネート（例えば、ＳＯ２Ｒ）に変換できる（Ｒは、例えば、本明細書記載の有機置換基を含む任意の適切な置換基である）。エステル誘導体はまた、例えば、１つ以上のカルボン酸置換基（例えば、ＣＯ２Ｈ）を、例えば、ジアゾアルカン（例えば、ジアゾメタン）、ヨウ化アルキル、又はヨウ化アリールなどのアルキル化剤と反応させることによって得ることができる。１つ以上のアミドは、１つ以上のカルボン酸をアミンと、適切なアミド形成条件下、反応させることによって得ることができる。適切なアミド形成条件は、例えば、カルボン酸の活性化（例えば、酸クロリドへの変換によって、又はカルボジイミド試薬との反応によって）、次いで、該活性種と適切なアミンとの連結を含む。
【００４５】
１つ以上のヒドロキシル基はまた、適切な活性化剤（例えば、ホスフィンなど）の存在下、例えば、Ｎ−ヨードスクシンイミド、Ｎ−ブロモスクシンイミド、Ｎ−クロロスクシンイミドなどのＮ−ハロスクシンイミドなどのハロゲン化剤を用いて、ハロゲン原子に変換できる。１つ以上のヒドロキシル基はまた、１つ以上のヒドロキシルを、適切な塩基の存在下、例えば、アルキル化剤と反応させることによってエーテルに変換できる。適切なアルキル化剤は、例えば、アルキル若しくはアリール　スルホネート、アルキル若しくはアリール　ハライドなどを含みうる。１つ以上の適切に活性化されたヒドロキシル、例えば、スルホネート　エステル、及び／又は１つ以上の適切に活性なハライドは、求核試薬による置換によって、対応するチオール、シアノ、ハロ、又はアミノ誘導体に変換できる。適切な求核試薬は、例えば、チオール、シアノ、ハライドイオン、アミン（例えば、ＮＨ２Ｒ９（Ｒ９は本明細書記載のとおりである）などを含みうる。
【００４６】
例えば、アミンなどの官能基は、当該分野公知の種々の方法によって得ることができる。アミンは、例えば、コンドロプシンＡ又はＢの１つ以上のアミドなどの１つ以上のアミドの加水分解によって得ることができる。アミンはまた、適切な条件下、例えば、還元的アミノ化条件下で、１つ以上の適切なオキソ基（例えば、アルデヒド又はケトン）を、１つ以上の適切なアミンと反応させることなどによって得ることができる。１つ以上のアミンは、今度は、例えば、アミド、スルホンアミドなどの多数の他の有用な誘導体に変換できる。
【００４７】
他の構造的修飾は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の１つ以上の化合物の構造中に、例えば、１つ以上のアミノ酸などの合成、半合成、又は天然の物質を組み込むことによって、達成できる。例えば、Ｒ１及び／又はＲ８の修飾は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の大環状環骨格中に異なるアミノ酸を組み込むことによって達成できる。このようなアミノ酸は、例えば、アスパラギン酸、フェニルアラニン、セリン、ロイシン、それらのアナログ、それらのホモログなどを含みうる。当該分野周知の慣用的化学を用いて、本明細書記載の変換以外の多数の他の合成変換が達成できることが理解されよう。例えば、式（ＩＩ）の化合物は、環拡大反応（例えば、式（Ｉ）の化合物のベースド−プロモーテッド（ｂａｓｅｄ−ｐｒｏｍｏｔｅｄ）再配置）を促進するのに適した条件下、式（Ｉ）の化合物を処理することなどによって、合成的に得ることができる。本明細書記載の特定の変換及び構造修飾は、決して限定的なものではなく、本発明の種々の化合物を調製するためのただの例示である。
【００４８】
驚くべきことに、そして予期外に、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物が抗癌活性を有すること、より一層驚くべきことに、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を有することを見出した。本発明の化合物は、天然源からの単離；周知の、そして容易に利用できる化学反応、試薬及び手順を用いる化学合成；半合成；などによって、当業者により得ることができる。式（Ｉ）及び（ＩＩ）の構造は更に、膨大な数の構造的に多様な、それなのに合成的にアクセスできる液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤及び抗癌化合物を製造するために使用できる実際的なテンプレートを提供する。
【００４９】
本発明の１つ以上の化合物は、組成物、例えば、医薬組成物に包含できる。その点に関し、本発明は更に、本発明の少なくとも１つの化合物及び医薬として許容できる担体を含む組成物を提供する。本発明の組成物は好ましくは、本発明の少なくとも１つの化合物の治療有効量を含む。治療有効量は、本発明の化合物又は組成物が投与される患者での治療的又は予防的応答を生み出す量を含みうる。治療有効量は、例えば、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量及び／又は抗癌有効量を含みうる。
【００５０】
本発明の組成物は更に、本発明の化合物以外の少なくとも１つの更なる化合物、例えば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の化合物、の治療有効量を含みうる。更なる化合物が本発明の組成物に含まれるとき、更なる化合物は液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物（例えば、コンカナマイシン若しくはバフィロマイシン、又はサリチリハラミド若しくはロバタミドなどのベンゾラクトン　エナミド）でありうる。本発明の化合物以外の１つ以上の更なる抗癌化合物も含まれうる。更なる化合物が、本発明の化合物以外の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤であるとき、好ましくは、それは、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量で組成物中に存在する。更なる化合物が、抗癌化合物であるとき、好ましくは、それは、抗癌有効量で本発明の組成物中に存在する。
【００５１】
本発明の組成物は、本発明の１つ以上の化合物を、適切な医薬として許容できる担体と組み合わせることによって製造でき、適切な製剤に処方できる。適切な製剤は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、注射剤、吸入剤、エアロゾル、及び投与のそれぞれの経路に関し当該分野周知の他の処方物などの、固体、半固体、液体、又は気体形態の製剤を含む。医薬投与形態において、本発明の化合物は、本明細書記載のように、単独で、又は、他の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物を含む他の医薬として活性な化合物との適切な連携、並びに組合せで使用できる。
【００５２】
任意の適切な担体が利用できる。適切な担体は、医薬的又は生理的に許容できる担体を含む。以下の方法及び担体は単に例示であり、決して限定的ではない。経口製剤の場合、本発明の化合物は、単独で、又は少なくとも１つの他の化合物の治療有効量と組合せて投与できる。活性成分は、所望ならば、錠剤、粉末、顆粒、カプセルなどを製造するために適切な添加剤と組み合わせることができる。
【００５３】
適切な添加剤は、例えば、乳糖、マンニトール、コーンスターチ、又はポテトスターチを含みうる。適切な添加剤はまた、結合剤、例えば、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチン；崩壊剤、例えば、コーンスターチ、ポテトスターチ、又はカルボキシメチルセルロース　ナトリウム；を、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤と共に含みうる。所望ならば、例えば、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、及び／又は矯味剤などの他の添加剤が、組成物中に含まれうる。
【００５４】
本発明に従って使用される化合物は、植物油、合成脂肪族系酸グリセリド、高級脂肪族系酸のエステル、又はプロピレングリコールなどの水性又は非水性溶媒中で（所望ならば、溶解剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤、及び保存剤などの通常の添加剤と共に）、溶解、懸濁、又は乳化によって注射用製剤に処方できる。本発明の化合物はまた、吸入により投与されるエアロゾル処方物に製造できる。このようなエアロゾル処方物は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの加圧された許容できる噴霧剤中に入れることができる。本発明の化合物は、乳化基剤又は水溶性基剤などの種々の基剤と混合することによって座薬に処方できる。座薬処方物は、直腸に投与でき、ココアバター、カルボワックス、ポリエチレングリコール（それらは、体温で溶融し、室温で固体である）などのビヒクルを含みうる。
【００５５】
シロップ、エリキシル及び懸濁剤などの経口又は直腸投与用単位投与形態が提供されうる（各投与単位、例えば、ティースプーン１杯、テーブルスプーン１杯、錠剤、又は座薬は、本発明の化合物を含む組成物の所定量を含む）。同様に、注射又は静脈投与用単位投与形態は、滅菌水、通常の生理食塩水、又は他の医薬として許容できる担体中の溶液としての組成物を含みうる。
【００５６】
本明細書で使用する用語「単位投与形態」は、ヒト及び動物の対象のための単位投与として適切な物理的に別個の単位を指す（各単位は、本発明の少なくとも１つの化合物（単独で、又は所望ならば、別の治療薬剤と組合せて）の所定量を含む）。単位投与は、当業者公知の方法によって、例えば、医薬として許容できる担体と組合せて所望の効果を産生させるのに十分な活性成分量を計算することによって、決定できる。本発明に従って使用できる単位投与形態の規格は、達成すべき特定の効果、及び個々の受容者において化合物と関連する特定の薬力学に依存している。
【００５７】
医薬として許容できる担体、例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、又は希釈剤は、当業者が入手しやすく、典型的には市販されている。当業者は、使用される組成物の正確な処方のための適切な投与方法を容易に決定できる。投与量の必要な調整は、治療される状態の性質又は重症度に対処する専門家によって容易になされうる。投与量の調整はまた、例えば、個々の患者の全体の身体的健康、性別、年齢、以前の病歴などの他の因子に基づいてなされうる。
【００５８】
本発明の化合物は、種々の治療的及び非治療的適用で用いることができる。本発明の１つ以上の化合物は、例えば、診断キット、バイオアッセイなどで対照として使用できる。好ましくは、本発明の方法は、例えば、癌の治療若しくは予防、又は液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態（例えば、異常状態又は疾患）の治療若しくは予防に対して、治療的に適用される。本発明の化合物は、単独で、又は、本発明の化合物以外の少なくとも１つの更なる化合物の治療有効量と組合せて、投与できる。
【００５９】
従って、本発明は更に、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態の治療的又は予防的処置の方法であって、本発明の少なくとも１つの化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害量を患者に投与することを含む方法を提供する。より詳細には、本発明は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって治療できる状態の治療的又は予防的処置の方法であって、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害量を投与することを含む方法を提供する。
【００６０】
多数の状態が、本発明の方法に基づき治療できる。本発明の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物及び組成物は、細胞内オルガネラのオルガネラ内酸性化；尿酸性化；骨再吸収；生殖力；血管新生；細胞浸潤（例えば、腫瘍細胞浸潤）；腫瘍細胞増殖及び転移；並びに腫瘍細胞における薬剤耐性の発生；を含むが、それらに限定されない生物現象を調節するために、医学的に使用できる。従って、本発明の化合物は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって制御できる疾患の治療に有用である。このような疾患は、例えば、骨粗鬆症（例えば、Ｋｅｅｌｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８３４，６００−６０８（１９９７）参照）、アルツハイマー病、緑内障、及び異常尿酸性化（例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，ＴＩＰＳ，１２，７１−７５（１９９１）参照）を含む。更に、本発明の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤は、酸が促進する細胞浸透機構を利用する疾患の治療又は予防に使用できる。例えば、本発明の化合物は、ウイルス（例えば、バキュロウイルス及びレトロウイルス）又は蛋白質毒素（例えば、ジフテリア毒素）の細胞内への侵入（例えば、Ｍｅｌｌｍａｎら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５５，６６３−６９９（１９８６）参照）を阻害するために、使用できる。本発明の化合物はまた、動物、例えば、ヒト（例えば、Ｗａｓｓａｒｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５，５５３−５６０（１９８７）参照）において生殖力を阻害するために、又は、腫瘍細胞の増殖、浸潤若しくは転移を阻害するために、又は、薬剤への耐性を発生させる癌細胞の能力を阻害することによって薬剤に対する癌の感受性を促進し、それによって癌の化学療法的処置を容易にし、及び／又は可能とする（例えば、Ｍａｒｑｕａｒｄｔ及びＣｅｎｔｅｒ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，１０９８−１１０２（１９９１）参照）ために、使用できる。
【００６１】
従って、上記のように、本発明の方法は、骨粗鬆症、アルツハイマー病、緑内障、生殖力、異常尿酸性化、分解酵素の異常分泌、及び癌からなる群から選択される状態の予防的又は治療的処置の方法を含む。本発明の方法によれば、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量を使用するのが好ましい。その点に関し、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量は、細胞内オルガネラのオルガネラ内酸性化、尿酸性化、骨再吸収、生殖力、腫瘍細胞の薬剤耐性、腫瘍細胞増殖、細胞浸潤、血管新生、及び転移からなる群から選択される１つ以上の状態を阻害するのに有効であることが好ましい。
【００６２】
本発明の方法は更に、本発明の化合物以外の少なくとも１つの更なる化合物、例えば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の化合物、の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量を投与することを含む。幾つかの例では、１つ以上の他の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤（例えば、コンカナマイシン及び／又はバフィロマイシン、及び／又はサリチリハラミド若しくはロバタミドなどのベンゾラクトン　エナミド）を、本発明の化合物と一緒に投与することによって、本発明の方法は、より有効にすることができる。本発明の１つ以上の化合物はまた、例えば、抗癌剤に対する癌細胞耐性の発生を阻害するために、本発明の化合物以外の該抗癌剤と組合せて共投与できる。
【００６３】
本発明の方法によれば、本発明の１つ以上の化合物は、例えば、経口投与、筋肉内投与、皮下、静脈内投与などを含む任意の適切な経路で投与できる。例えば、本発明の１つ以上の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤（又はその組成物）は、静脈内注射若しくは点滴に適した溶液、錠剤、カプセルなどとして、又は本明細書記載の任意の他の適切な組成物若しくは処方物中で投与できる。
【００６４】
本発明の組成物及び方法に従って利用される液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ「阻害有効量」は、個々の患者において活性化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ「阻害有効レベル」を達成するのに必要な投与量を含む。液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効量は、例えば、本発明の化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効血液レベル、組織レベル、及び／又は細胞内レベルを達成し、所望の医学治療を生じさせるために、個々の患者に投与するのに必要な量として定義されうる。
【００６５】
有効レベルが投与の好適な終点として使用されるとき、実際の投与量とスケジュールは、例えば、薬物動態、薬剤分布、代謝などの個人間の差異により変わりうる。本発明の１つ以上の化合物が、他の治療薬剤、例えば、１つ以上の更なる液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤、抗癌化合物、又はそれらの組合せと組合せて、使用されるとき、有効レベルはまた変わりうる。更に、有効レベルは、治療が所望される疾患により変わりうる。例えば、骨粗鬆症の治療のための有効レベルは、異常尿酸性化の治療、又は生殖力の阻害のために必要な有効レベルに対し変わりうる。
【００６６】
本発明の化合物の独特の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性は、当該分野公知の任意の適切な方法、例えば、アッセイ方法、を用いて測定できる。液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を測定する適切なアッセイ方法は、例えば、Ｃｈａｎら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１５７，３７５−３８０（１９８６）に記載されている。あるいは、本発明の化合物の独特の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性は、化学化合物の抗癌活性を正確に予測できる、ＮＣＩ６０細胞系列、ヒト腫瘍、疾患向けスクリーニングを用いて、示すことができる。意味深いことに、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングはまた、抗癌活性に限定されない、他のタイプの生物活性を予測するために使用できる強力なツールである。特に、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングは、抗腫瘍活性、並びに液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を正確に予測するために使用できる（Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２参照）。
【００６７】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性にかかわらず、本発明の化合物は、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングで示されるように、ヒト癌を含む多数の異なる癌細胞系列に対し抗癌活性を有する。本発明の代表的な化合物は、強力な抗腫瘍活性を有する（例えば、実施例３参照）。本発明に基づき使用される化合物が抗癌活性を有する程度まで、有効血液レベルは、抗癌活性に対応する有効な血液レベルに基づき、類推によって決定できる。上記のように、ＮＣＩ６０細胞系列ヒト腫瘍スクリーニングによって、多様なヒト癌を選択的に殺す、又はその増殖を選択的に阻害する化合物の能力が測定される。このスクリーニングを用いて、本発明の化合物は、現存の抗癌剤に非常に耐性な、又は完全に耐性である、特定のタイプのヒト固形腫瘍（例えば、非小細胞肺癌、腎癌及びメラノーマ）に対し非常に活性であることが示される。本発明の化合物は、多数の他のタイプのヒト固形腫瘍や白血病癌細胞に対し活性であることも示される。これらの観察によって、及び、腫瘍細胞反応プロフィールの他の詳細な解析によって、本発明の化合物が、例えば、ヒト固形腫瘍の治療のための治療薬として、かなりの有望性をもつ新規抗癌剤であることを示すことができる。
【００６８】
このように、本発明の化合物は、新規で、幅広く有効な抗癌剤であり、それは、ヒト白血病、リンパ腫、メラノーマ及び固形腫瘍を阻害又は破壊する。固形腫瘍は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、結腸癌、ＣＮＳ癌（例えば、脳癌）、メラノーマ、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、頭部及び首部癌、精巣癌、生殖系の癌、内分泌腺腫瘍、子宮癌、乳癌、肉腫、胃癌、肝癌、食道癌、膵臓癌などを含みうる。
【００６９】
新規クラスの抗癌剤の必要性は、依然として緊急な世界規模の優先事項であり、それは、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングの新規研究開発適用により、有効に取り扱われている。総説は、例えば、Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９（１９９５）；Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，３４３−３４９（１９９７）；並びにＧｒｅｖｅｒ及びＣｈａｂｎｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，５ｔｈ　Ｅｄ．（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．ら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，１９７７中，ｐｐ．３８５−３９４に見出されうる。ＮＣＩスクリーニングは、重要な新規クラスの抗癌剤の同定を支持する先例のない豊富な情報量を提供する。例えば、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら（１９９７），上記；Ｇｒｅｖｅｒ及びＣｈａｂｎｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，５ｔｈ　Ｅｄ．（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．ら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ　Ｒａｖｅｎ，１９７７中，ｐｐ．３８５−３９４；並びにＳａｕｓｖｉｌｌｅ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｇｕｉｄｅ：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｔｒｉａｌｓ，ａｎｄ　Ａｐｐｒｏｖａｌ（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．編），Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９９７中，ｐｐ．２１７−２２６参照。
【００７０】
従って、本発明は更に、癌の治療的又は予防的処置の方法であって、本発明の少なくとも１つの化合物の抗癌有効量を投与することを含む方法を提供する。抗癌有効量は、例えば、対象の患者において「有効レベル」を産生するのに有効な投与量を決定することによることを含む当該分野公知の方法によって決定できる。有効レベルは、例えば、スクリーニングアッセイで腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効なレベル（例えば、本明細書実施例３から１０−１１−１０−７Ｍ）として選択できる。同様に、有効レベルは、例えば、抗癌活性を臨床的に予測するアッセイでヒト癌の増殖を有効に阻害する治療薬濃度に対応する患者の血液又は組織レベルを基に決定できる。
【００７１】
更に、有効レベルは、患者血液中の癌の特定のマーカーが、癌を阻害する特定の化合物によって阻害される濃度に基づき決定できる。あるいは、有効レベルは、例えば、患者の癌の増殖を遅延若しくは停止させるのに有効な、患者の癌を退縮若しくは消失させるのに有効な、患者を特定の癌に無症候にするのに有効な、又は、癌患者の状態の主観的感覚を改善させるのに有効な濃度に基づき決定できる。次いで、抗癌有効レベルは、所望の医学治療を生じさせる液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害有効な血液、組織及び／又は細胞内レベルを達成するために臨床的に必要なレベルを近似するために（例えば、外挿によって）、又は決定でさえ、するために使用できる。液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を有効に阻害するのに臨床的に必要な治療有効量の決定は、本明細書で考察のように、有効レベルに影響を及ぼしうる他の変数の考慮を必要とすることが理解されよう。固定有効量が投与の好適な終点として用いられるとき、薬剤投与の実際の投与量及び投与スケジュールは、各患者に関し、例えば、薬物動態、薬物素因、代謝における患者間差異、他の薬剤を組合せて使用するかどうか、又は有効なレベルを生じさせる本明細書記載の他の因子を含む因子により異なりうる。
【００７２】
当業者は、個々の患者で所望の有効なレベルを達成するために、特定の処方物を投与する適当な投与量、スケジュール、又は方法を容易に決定できる。当業者はまた、本発明の化合物の有効レベルの適当な指標を容易に決定、使用できる。例えば、有効レベルは、適当な患者サンプル（例えば、血液及び／又は組織）の直接的分析（例えば、分析化学）又は間接的分析（例えば、臨床化学指標）によって決定できる。有効レベルはまた、例えば、尿酸性、骨密度の変化、眼圧減少などの直接的又は間接的観察によって、或いは癌患者の腫瘍増殖の縮小若しくは阻害（例えば、問題の化合物が抗癌活性を有するならば）によっても決定できる。その必要のある患者に活性化合物を投与するのに使用されるプロトコルを記載する、当該分野の多数の参考文献がある。例えば、患者に抗癌剤を投与するのに使用されるプロトコルは、“Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ”，Ｃｈａｂｎｅｒ及びＣｏｌｌｉｎｓ，Ｊ．Ｂ．編Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１９９０，特に２章（Ｊ．Ｂ．Ｃｏｌｌｉｎｓによる）に記載されている。Ｂｏｙｄ，ＷＯ９９／０５１３６も参照。
【００７３】
癌の予防的又は治療的処置の本発明の方法は更に、本発明の化合物以外の少なくとも１つの更なる化合物、例えば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物以外の化合物、の抗癌有効量を投与することを含む。例えば、本発明の１つ以上の化合物は、抗癌剤と共投与されうる。その場合に、有効レベルは望ましくは、抗癌剤に対する耐性を生じる癌の能力を阻害するのに必要なレベルである。適切な抗癌化合物は、例えば、米国で販売承認された公知の抗癌化合物の全て、及び、薬剤耐性が液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの阻害によって制御されうる、将来承認されるようになるであろう抗癌化合物を含む。
【００７４】
本発明の方法に従って、予防は、本明細書記載の阻害、例えば、癌細胞の成長若しくは増殖の阻害、又はＶ−ＡＴＰアーゼの阻害を含む。予防的に有効であるために、阻害は１００％阻害でありうるが、そうである必要はなく、臨床上所望の利益は、１００％未満の阻害で実現されうる。
【００７５】
抗腫瘍活性、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性及び他の生物活性の証明は、公知の活性を有する化合物によってＮＣＩスクリーニングで産生される活性パターンの相関に基づきうる。相関で比較される化合物は、ＮＣＩスクリーニングで相関に適した活性パターンを発揮するのに特に強力な抗癌活性を有する必要はない。興味深いことに、ＮＣＩスクリーニングで互いに相関させるために、化合物は、互いに構造的に類似している必要はない。２つの構造的に類似ではない化合物が、ＮＣＩスクリーニングで互いに強く相関するとしても、非癌適用を含む実際上任意の適用において、それらは、互いに同じ生物活性を有すると正確に予測できる。ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングに関する総説については、Ｂｏｙｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｂ．Ｃ．Ｄｅｃｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９９３中，ｐｐ．１１−２２；Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．　Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９（１９９５）；Ｇｒｅｖｅｒ及びＣｈａｂｎｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ　Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，５ｔｈ　Ｅｄ．（ＤｅＶｉｔａら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，１９７７中，ｐｐ．３８５−３９４；Ｐａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ（Ｆｏｙｅ編），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　Ｂｏｏｋｓ，１９９５中，ｐｐ．９−４５；並びにＷｅｉｎｓｔｅｉｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，３４３−３４９
（１９９７）参照。
【００７６】
ＮＣＩ６０細胞系列ヒト腫瘍スクリーニングでは、多様なヒト癌を選択的に殺す、又はその増殖を選択的に阻害する化合物の能力が測定される。一般的には、ＮＣＩスクリーニングでは、本発明の化合物は、特定のタイプのヒト固形腫瘍（例えば、非小細胞肺癌、腎癌、及びメラノーマ）及びそれらの耐性株に対し強力な活性を発揮する。これらの観察によって、及び、特徴的な腫瘍細胞反応プロフィールの他の詳細な解析によって、本発明の化合物が、独特の特徴的な生物活性プロフィールを有することが示されうる。
【００７７】
ＮＣＩ６０細胞系列ヒト腫瘍１次スクリーニングはまた、化合物の天然源を同定する手段を提供する。ＮＣＩスクリーニングは、ｔｈｅ　ＮＣＩ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ’ｓ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏｕｎｓｅｌｏｒｓ，それのＡｄ　Ｈｏｃ　Ｅｘｐｅｒｔ　Ｒｅｖｉｅｗ−Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ，ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ａｄｖｉｓｏｒｙ　Ｂｏａｒｄ，及びｔｈｅ　Ｐｒｅｓｉｄｅｎｔ’ｓ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐａｎｅｌを含む幾つかの国際的に構成され著名な外部の（非ＮＣＩ）諮問及び検討グループの指導、厳密な調査及び管理下に１９８５−１９９０の間に設計され、実行された（Ｂｏｙｄ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｇｕｉｄｅ：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｔｒｉａｌｓ，ａｎｄ　Ａｐｐｒｏｖａｌ（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．編）；Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．中，ｐｐ．２３−４２，１９９７参照）。ＮＣＩスクリーニングの開発の起動力は、世界中で市販の抗癌剤の大部分は、ヒト癌の大部分の形態に対し本質的に非活性又はほんの一過性の活性であるという国際的な認識であった。総説は、例えば、Ｂｏｙｄ，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　Ｕｐｄａｔｅｓ（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．，Ｊｒ．ら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１９８９中，ｐｐ．１１−２２；及びＢｏｙｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ，Ｊ．Ｅ．編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：ＢＣ　Ｄｅｃｋｅｒ，１９９３中，ｐｐ．１１２２に開示されている。このＮＣＩスクリーニングは、１９９０年以来のみ行われてきたが、ヒト癌患者での重要な新規抗癌剤の発見、開発及び臨床使用を既に導いている。例えば、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，３４３−３４９（１９９７）；Ｇｒｅｖｅｒ及びＣｈａｂｎｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，５ｔｈ　Ｅｄ．（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．ら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，１９７７中，ｐｐ．３８５−３９４；及びＳａｕｓｖｉｌｌｅ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｇｕｉｄｅ　：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｔｒｉａｌｓ，ａｎｄ　Ａｐｐｒｏｖａｌ（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．編），Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９９７中，ｐｐ．２１７−２２６参照。
【００７８】
ＮＣＩスクリーニングは、各細胞系列に対し増殖阻害又は細胞毒性の相対的程度を測定するために、規定範囲の濃度に渡って、化合物を試験する６０個の異なるヒト腫瘍細胞系列のパネルからなる。スクリーニングの設計及び操作は、試験される各化合物に関し、スクリーニングを含む個々の細胞系列の絶対的及び相対的感受性の両方が十分再現性で、細胞応答の特徴的なプロフィール即ち「フィンガープリント」が作り出されるようなものである。ＮＣＩスクリーニングで活性な化合物は、６０細胞系列パネルを含む多様な細胞系列に対し顕著な特異な腫瘍増殖阻害及び／又は細胞毒性効果を示す。最大感受性系列と最小感受性系列の間の差異的な応答の程度は典型的には、比較的小さくありえ（例えば、２−１０倍）、又は、場合によっては、３−４桁ほど大きくありうる。更に、細胞系列は、所定の化合物に対する応答において広く不均一でありえ、又は比較的均一でありえ、比較的数少ない系列だけが、平均よりずっと大きな、又はずっと小さな感受性を示しうる。細胞系列パネルの応答の差異的な大きさ、又はその反応の不均一性の程度に係わらず、その中に含まれる有用な情報にとって重要であるのは、応答「フィンガープリント」の再現性である。
【００７９】
スクリーニングアッセイの詳細な開示は、例えば、Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，７５７−７６６（１９９１）；Ｓｋｅｈａｎら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８２，１１０７−１１１２（１９９０）；並びにＢｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．　Ｒｅｓ．，３４，４８４−４８８（１９９５）に発表されている。ＮＣＩ６０細胞系列パネルを含む細胞系列のアイデンティティ、源、派生、形態、及び免疫細胞化学的特徴、並びに維持方法は、例えば、Ｂｏｙｄ，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　Ｕｐｄａｔｅｓ（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．，Ｊｒ．ら編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，１９８９中，ｐｐ．１−１２；Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．（１９９１），上記；Ｓｔｉｎｓｏｎら，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，１２，１０３４−１０３５（１９９２）；並びにＢｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ．Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９（１９９５）に詳細に記載されている。
【００８０】
スクリーニングアッセイにおいて、各薬剤は、パネルの全ての細胞系列に対し幅広い濃度範囲にわたって試験される。全ての系列は、０日に一連の標準９６ウェルマイクロタイタープレート上に播種し、次いで、試験化合物の非存在下２４時間のインキュベーションを行う。採用する播種密度は、特定の細胞系列とその増殖特性に依存する。使用する播種密度は、Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．（１９９１），上記；並びにＢｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．（１９９５），上記に発表されているとおりである。試験化合物は５つの１０倍希釈で評価する。試験化合物との４８時間インキュベーション後、細胞は、Ｓｋｅｈａｎら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．（１９９０），上記；Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．（１９９１），上記；及びＲｕｂｉｎｓｔｅｉｎら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８２，１１１３−１１１８（１９９０）に記載のような、スルホローダミンＢ（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ　Ｂ）手順によってアッセイする。光学密度は、自動プレートリーダーによって測定され、次いで、コンピュータによるデータ獲得、加工、保存、並びに表示及び解析のための利用が行われる。
【００８１】
化合物の各々の成功的試験によって、６０の用量反応曲線を産生し、それは、腫瘍タイプサブパネルを含む一連の複合物としてＮＣＩスクリーニングリポートに印刷される。品質制御基準の無い任意の個々の細胞系列のデータ、又はさもなければ、うまく試験されなかった細胞系列を欠いたデータは、更なる解析から除去され、スクリーニングリポートから削除される。
【００８２】
「増殖割合」（ＰＧ）という用語、＋５０、０、−５０応答参照ライン、計算された応答パラメーター、ＧＩ５０、ＴＧＩ、ＬＣ５０の意味、「平均−グラフ」の構築と使用、及びＣＯＭＰＡＲＥパターン認識アルゴリズムは、以下のように簡単に要約される。５０％増殖阻害パラメーター（ＧＩ５０）は、１００×（Ｔ−Ｔｏ）／（Ｃ−Ｔｏ）＝５０＝ＰＧである試験薬剤の濃度である。４８時間薬剤暴露後の試験ウェルの光学密度はＴである；時間ゼロの光学密度はＴ０である；対照光学密度はＣである。ＰＧは、＋１００〜−１００の値を持ちうるＴ／Ｃ様パラメーターである。ＧＩ５０は、効果の増殖阻害レベルとして見なしうるが、ＴＧＩは、「トータル増殖阻害」又は効果の細胞増殖抑制レベルを意味する。ＴＧＩは、１００×（Ｔ−Ｔｏ）／（Ｃ−Ｔ）＝０＝ＰＧである薬物濃度である。ＬＣ５０は、致死濃度、「正味細胞殺し」、又は細胞毒性パラメーターである。それは、１００×（Ｔ−Ｔｏ）／Ｔｏ＝−５０＝ＰＧである濃度である。対照光学密度は、ＬＣ５０の計算に使用されない。「増殖割合」（ＰＧ）用語、＋５０、０、−５０応答参照ライン、計算された応答パラメーター、ＧＩ５０、ＴＧＩ、ＬＣ５０、「平均−グラフ」の構築と使用、及びＣＯＭＰＡＲＥパターン認識アルゴリズムの詳細な説明に関しては、Ｂｏｙｄら，Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇｓ：Ｍｏｄｅｌｓ　ａｎｄ　Ｃｏｎｃｅｐｔｓ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（Ｖａｌｅｒｉｏｔｅ，Ｆ．Ａ．ら編），Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｋｌｕｗｅｒ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９２中，ｐｐ．１１−３４；Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．（１９９１），上記；並びにＢｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．（１９９５），上記を参照。
【００８３】
平均−グラフは、「デルタズ（ｄｅｌｔａｓ）」と命名され、ＮＣＩインビトロスクリーニングで各細胞系列に対して試験された所定の化合物のために得られたＧＩ５０、ＴＧＩ、又はＬＣ５０の１セットから作成される、ポジティブ値とネガティブ値をプロットすることによって作出されるパターンである。デルタズは、３段階計算によって、ＧＩ５０、ＴＧＩ、又はＬＣ５０データから作成される。例えば、所定の化合物に対しうまく試験した各細胞系列についてのＧＩ５０値は、そのｌｏｇ１０ＧＩ５０値に変換される。平均パネルｌｏｇ１０ＧＩ５０値は、個々のｌｏｇ１０ＧＩ５０値を平均することによって得られる。次いで、各ｌｏｇ１０ＧＩ５０値は、パネル平均から差し引かれ、対応するデルタ（ｄｅｌｔａ）が作出される。
【００８４】
平均−グラフを構築するために、デルタズは、計算された平均パネルＧＩ５０を表す垂線に関し水平にプロットされる。ネガティブデルタズは、平均参照ラインの右側にプロットされ、それによって、計算された平均よりもより感受性の細胞系列を比例的に表す。逆に、ポジティブデルタズは、参照ラインの左側にプロットされ、所定の薬剤に対し感受性のより少ない細胞系列を表す。このように、例えば、ＧＩ５０平均−グラフで垂直参照ラインの右側に３単位突出しているバーは、その細胞系列のＧＩ５０濃度が、パネル平均ＧＩ５０濃度より１０００倍小さいことを示す。ＴＧＩ及びＬＣ５０平均−グラフが同様に作製され説明される。
【００８５】
３つの更なる数が、３つそれぞれの平均−グラフの各々のベースで印刷される。これらの数は、ＭＧ−ＭＤ、デルタ（Ｄｅｌｔａ）（個々の細胞系列に関する「デルタ（ｄｅｌｔａ）」と混同しない）、及び範囲（Ｒａｎｇｅ）である。ＭＧ−ＭＤは、計算された平均パネルＧＩ５０、ＴＧＩ、又はＬＣ５０である。デルタ（Ｄｅｌｔａ）は、パネルの最感受性の系列のデルタ（ｄｅｌｔａ）が、その単位だけ、対応するＭＧ−ＭＤとは異なるｌｏｇ１０単位の数である。同様に、範囲は、パネルの最感受性の系列のデルタが、その単位だけ、最小の感受性の系列のデルタとは異なるｌｏｇ１０単位の数である。
【００８６】
ＣＯＭＰＡＲＥは、ＮＣＩスクリーニングで作出されるデータの評価と活用で使用されるコンピュータ化パターン認識アルゴリズムである。要するに、ＣＯＭＰＡＲＥは、同一の、又は異なる化合物で作出される平均−グラフプロフィールの類似性、又はその欠如の程度の決定及び表現の方法である。スクリーニングの開発の間のこのようなツールの作出の初期起動力は、ある時間にわたるスクリーニングの一貫性と再現性を標準化し、確立し、モニターする必要性であった。このことは、細胞系列の同じパネルに対し反復してスクリーニングするとき、同じ、又は非常に類似したプロフィールを作出することが期待される標準化合物の普通の試験によって達成される。
【００８７】
ＮＣＩスクリーニングは反復して較正される。スクリーニングを標準化する過程で、ＮＣＩは、参照化合物として、かなりの量の情報が、その前臨床及び／又は臨床抗癌性、並びに作用機構に関し利用できる約１７０の薬剤を選択した。これらの化合物は、市販の抗癌剤、研究中の抗癌剤、並びに、他の癌関連試験システムでの活性に基づき前臨床開発中であったか又は開発中である他の抗癌剤を含んでいた。これらのプロトタイプ「標準薬剤」の反復的、周期的なスクリーニング（「標準薬剤データベース」を形成する結果の累積的編集）は、依然としてスクリーニングの較正及び標準化の基礎のままである。
【００８８】
意義深いことに、ＮＣＩ標準薬剤データベースはまた、多数の有用な新規薬剤発見適用へのキーを提供する。例えば、選択された標準薬剤の特徴的な反応プロフィール「フィンガープリント」は、データベースに含まれている密接にマッチするプロフィールがあるかどうかを見るために、任意の他の利用できる平均−グラフデータベースを精査するための「シード」として使用されうる。同様に、任意の利用できる平均−グラフデータベースから選択されるプロフィールは、密接にマッチする標準薬剤プロフィールがあるかどうかを決定するために、「標準薬剤データベース」を精査するために使用できる。このような研究のために使用される更なるデータベースは、所望されるように構築又は定義されえ、比較的小さくありうるか（例えば、単一化合物又は選択された同種シリーズの化合物を含む）、又は非常に大きくありうる（例えば、現在まで、ＮＣＩスクリーニングで試験された全ての純粋化合物、混合物、フラクション、及び抽出物からの全体のデータベース）。
【００８９】
ＣＯＭＰＡＲＥによる最初のＮＣＩ研究は、マッチする平均−グラフパターンをもつ化合物はしばしば、関連する化学構造を有することを示した。しかし、この現象のより密接な試験は、無関係構造の特定の化合物は、マッチする平均−グラフパターンを有し、作用の同一の、又は関連の生化学的機構を共有することを明らかにした。例えば、Ｂｏｙｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ，Ｊ．Ｅ．編），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：ＢＣ　Ｄｅｃｋｅｒ，１９９３中，ｐｐ．１１−２２；及びＰａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ　Ｂｏｏｋｓ中，ｐｐ．９−４５（１９９５）；並びにそれらの中で引用されている参考文献参照。
【００９０】
ＣＯＭＰＡＲＥ解析は、ＧＩ５０、ＴＧＩ又はＬＣ５０のいずれかから計算される平均−グラフデルタズを用いて、行うことができる。所定のデータベースを精査するために、選択された特定の平均−グラフプロフィール即ち「シード」を使用するとき、各細胞系列の適当なデルタ値は、特定のデータベースセットで各平均−グラフエントリーのために、同一細胞系列の対応するデルタ値と比較される。いずれかのデルタ値がどれかの細胞系列について失われているならば（例えば、試験失敗又は品質制御欠失による）、その細胞系列は、その特定のシード／平均−グラフ及びデータベース／平均−グラフペアのための計算から完全に除外される。このように、特定のデータベースにおける各平均−グラフに関し、デルタ値のペアのセット（最大６０）が得られる。市販のＳＡＳ統計プログラムは、デルタ値ペアの各セットに関し、ピアソン・プロダクト・モーメント・相関係数（０．０−１．０）を計算するために使用される。次いで、特定のデータベースでの全ての化合物の平均−グラフは、シード平均−グラフへの類似性に関し、序列できる。ＮＣＩ「標準薬剤データベース」、並びに、ＣＯＭＰＡＲＥを含む種々のＮＣＩスクリーニングデータ表示及び解析ツールへのパブリックアクセスは、インターネット（ｈｔｔｐ：／／ｄｔｐ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じ、世界中の研究者に利用可能である。
【００９１】
ＣＯＭＰＡＲＥの通常の適用によって、標準薬剤データベースから選択されたプロトタイプシード化合物を用い、ＮＣＩは、開始から現在まで生じた全体の歴史的スクリーニングデータベースの進行中の監視を維持した。このようにして、公知の、又は推定された公知の作用機構を有する標準薬剤とマッチするスクリーニングフィンガープリントをもつ化合物が同定できる。ＮＣＩは、以前に未知の作用機構の化合物の、多数の異なる、問題の公知機構クラスへのデータベース分類と関連づけ、次いで、確認することができた。例えば、新たなメンバーが、チューブリン−相互作用抗有糸分裂剤、代謝拮抗剤、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ結合剤などの一般的機構カテゴリー内に分類された。見込みのあるこの種のデータベースから得られたこれらのそして多数の他の例は、例えば、Ｐａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，５２，３８９２−３９００（１９９２），及びその中で引用されている参考文献；並びにＰａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｂｏｏｋｓ，１９９５中，ｐｐ．９−４５，及びその中で引用されている参考文献で公表されている。
【００９２】
全く驚くべきことに、解析された平均−グラフ「フィンガープリント」の幾万の間で独特に、本発明のある代表的化合物の特徴的スクリーニング「フィンガープリント」が、プロトタイプの液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物、コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、サリチリハラミドＡ及びロバタミドＡ（それらの全ては、本発明の化合物と構造的に無関係である）のものと殆ど完全に相関することが見出された。本発明のある代表的化合物の相関は、非常に正確なので、偶然の一致の可能性は有効に除外される。実際、本発明の化合物は（ＮＣＩスクリーニングでのその平均グラフフィンガープリントは、コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、サリチリハラミドＡ及びロバタミドＡのものと非常に相関する）、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤である。特異的な液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼバイオアッセイによって、本発明の化合物（ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングでのそのフィンガープリントは、構造的に無関係であるが、公知の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤（例えば、Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２参照）コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、サリチリハラミドＡ及びロバタミドＡのものと相関する）は、予期されたように、強力な液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を有する。このように、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニング及び特異的液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼバイオアッセイは、本発明の１つ以上の化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を実証するために使用できる。
【００９３】
ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングによって作出されたその平均−グラフ「フィンガープリント」が互いに高度に相関する化合物は、たとえ、構造的に顕著に違うとしても、共通の分子標的又は生物的作用機構を共有すると予期できる。高度の相関は、例えば、ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数約０．８〜０．９以上によって確立できる。Ｂｏｙｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ，Ｊ．Ｅ．編）Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｂ．Ｃ．Ｄｅｃｋｅｒ，１９９３中，ｐｐ．１１−２２；Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．　Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９，１９９５；Ｐａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｂｏｏｋｓ，１９９５中，ｐｐ．９−４５参照。このように、コンカナマイシン、バフィロマイシン、サリチリハラミド及びロバタミド、並びに本発明の代表的化合物は、例えば、そのＮＣＩ６０細胞系列スクリーニング相関係数は互いに関し高いが、全て同一の分子標的、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼを共有することを示すことができる。この特徴の更なる説明は、実施例４で提供される。
【００９４】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤は、細胞内オルガネラの異なる種類若しくは場所、又は形質膜の異なる種類若しくは場所、又は細胞若しくは組織の異なる種類若しくは場所に存在する液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を阻害できることを当業者は理解しよう。所定の液胞型（Ｈ＋）阻害化合物は、細胞内オルガネラ、形質膜、細胞若しくは組織の１つ以上の種類又は場所で、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を優先的に阻害しうる。即ち、専門家は典型的には、所望の治療使用のためにある所定の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物を選択しよう。化合物選択は、化合物によって優先的に阻害される細胞内オルガネラ又は形質膜の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの特定の種類又は場所に基づきうる。実際、１つ以上の種類の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼの、別のものに対する優先的阻害に基づき、特定の適用のために、化合物が選択できることを示す明瞭な先例が文献にある。例えば、Ｇａｇｌｉａｒｄｉら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，１５６８−１５７３，（１９９８）は、ヒト腎皮質液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性と比較してヒト破骨細胞液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を選択的に阻害する化合物を同定した。従って、このような化合物は、骨粗鬆症を治療するのに特に有用であると期待される。
【００９５】
哺乳動物液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を阻害するのに加えて、本発明の化合物は、非哺乳動物液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を阻害するのに使用できる。例えば、公知の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤であるバフィロマイシンＡ１とコンカナマイシンＡは、真菌並びに哺乳動物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を強力に阻害し、これらの化合物は強力な抗真菌活性を有する。Ｂｏｗｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７９７２−７９７６（１９８８）；Ｄｒｏｅｓｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３２，３９０２−３９０６（１９９３）；Ｄｒｏｅｓｅ及びＡｌｔｅｎｄｏｒｆ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，２００，１−８（１９９７）を参照。
【００９６】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼが、腫瘍細胞の増殖、並びにその引き続く浸潤及び転移に重要な役割を果たすという証拠もある。Ｍｏｎｔｃｏｕｒｒｉｅｒら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｓｃｉ．，１０７，２３８１−２３９１（１９９４）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｇｕｉｌａｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６５，Ｃ１０１５−Ｃ１−２９（１９９３）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｚａｇｕｉｌａｎら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１７６，１９６−２０５（１９９８）；Ｎｉｓｈｉｈａｒａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２１２，２５５−２６２（１９９５）；Ｍａｎａｂｅら，Ｊ．Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１５７，４４５−４５２（１９９３）参照。更に、細胞内オルガネラの酸性化は、通常の抗癌剤の隔離（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）及び細胞流出に寄与しうる。Ｍａｒｑｕａｒｄｔ及びＣｅｎｔｅｒ，Ｊ　Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，１０９８−１１０２（１９９１）；Ｂｅｎｄｅｒｒａら，Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．，１２，７１１−７１５（１９９８）；Ｍａｒｉｙａｍａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１５，２１３−２１８（１９９４）参照。従って、本発明の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害化合物は、腫瘍細胞の増殖、並びにその引き続く浸潤及び転移を阻害するのに使用できる。更に、本発明の化合物は、通常の抗癌剤に対する腫瘍細胞の薬剤耐性を阻害するのに使用できる。
【００９７】
本発明により使用する特定の化合物又は組成物は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害の所望の種類若しくは部位に基づき、及び／又は薬理的、毒性的、医薬的、若しくは当業者周知の他の適切な考慮に基づき選択できる。種々の組織、細胞及び他の調製物における液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性に対する本発明の化合物及び組成物の阻害活性の特異的なバイオアッセイ、定量、及び比較の慣用的方法は、文献に十分に記載されている（例えば、Ｂｏｗｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７９７２−７９７６（１９８８）；Ｇａｇｌｉａｒｄｉら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，１８８３−１８９３（１９９８）；Ｇａｇｌｉａｒｄｉら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，１５６８−１５７３（１９９８）；及びその中で引用された参考文献参照）。
【００９８】
本発明の特定の化合物のＧＩ５０及びＴＧＩ平均−グラフスクリーニングプロフィールのＣＯＭＰＡＲＥ解析は、互いに関し高度の共通性を有することが一貫して示されることができるが（例えば、少なくとも０．６−０．８、又はそれ以上のＧＩ５０及びＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数）、如何なる公知の標準薬剤ともこのような相関を示さない。同様に、本発明の化合物を含むことを示すことができる天然生物の抽出物は典型的には、本発明の化合物に対し、同様に高いＧＩ５０及びＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ　ピアソン相関（例えば、典型的には、０．６−０．７又はそれ以上）をもったＧＩ５０及びＴＧＩ平均−グラフスクリーニングフィンガープリントを与える。このことから、本発明の化合物又はその前駆体を得ることができる生産的な源となる生物及びその抽出物を当業者が容易に同定することが可能となる。本発明の化合物の同定及び／又はキャラクタリゼーションは、実施例２に記載したような特定の特徴的なＮＭＲシグナルの存在によって更に容易になる。このような特徴的なＮＭＲシグナルによって、化合物を含む、天然生物の粗抽出物及びその部分精製分画、又は合成若しくは半合成反応生成物を含む、化合物混合物の同定と選択が更に確認できる。
【００９９】
本発明の特定の化合物は、海洋海綿の溶媒抽出物（例えば、Ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ属からの海綿種の水抽出物から）を含む天然源から容易に得ることができる。Ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ海綿の抽出物は、任意の適切な溶媒、例えば、有機溶媒、水、及びその混合物から調製できる。新鮮な海綿を使用できるが、より一般的には、採取後直ちに凍結し、次いで、直接使用するか、又は抽出前に凍結乾燥する。海洋海綿を、本発明の化合物を得る源として使用するとき、好ましくは、Ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ属からであるが、より好ましくはＣｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種であり、最も好ましくは、オーストラリア、Ｗｏｌｌｏｎｇｏｎｇの近く、Ｂａｓｓ　Ｉｓｌａｎｄ付近で採取したＣｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種である（実施例１参照）
【０１００】
本発明の化合物を含むＣｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種の特定の抽出物は、ＮＣＩ６０細胞ヒト腫瘍スクリーニングで産生される抗癌スクリーニングプロフィールに基づき、同定及び選択できる。本発明の化合物を含むこのような抽出物はまた、本発明の化合物によって共有されている構造成分モチーフ（（Ｉ）及び（ＩＩ））に特徴的なキーとなるプロトン及びカーボンＮＭＲシグナル（例えば、表１、２、及び５−８参照）に基づき、同定及び選択できる（また実施例１参照）。
【０１０１】
上記選択された抽出物から、本発明の化合物の単離・精製のために種々の方法が使用できる。単離・精製の各工程の間、上記の特徴的な抗癌スクリーニングプロフィール又は適切なバイオアッセイ、及び上記の特徴的なプロトンＮＭＲシグナルは、本発明の所望の化合物の単離を確保するために、中間体分画、並びに部分精製化合物及び精製化合物に関し得ることができる。
【０１０２】
天然源材料から本発明の特定の化合物又はその前駆体を得る好適な方法は、
（ａ）本発明の１つ以上の化合物又はその前駆体を含む海洋海綿（又は他の適切な天然源材料）の新鮮又は凍結サンプルを得る工程、
（ｂ）化合物又は前駆体を溶解する、水及び／又は１つ以上の有機溶媒、又はそれらの混合物でサンプルを抽出し、抽出物を作出する工程、
（ｃ）場合によっては、抽出物を溶媒（例えば、エタノールなどの非溶媒）で処理し、高分子量蛋白質及び硫酸化多糖類を沈殿させ、除去する工程、
（ｄ）場合によっては、抽出物を、有機溶媒と水性溶媒の間で分配し、所望の化合物又は前駆体を含む分配された有機溶媒抽出物又は水性溶媒抽出物を作出する工程、
（ｅ）分配された抽出物を、必要に応じ１回以上、例えば、吸着で、分配で、又は逆相で、又はサイズ排除マトリックスで、クロマトグラフィーを行い、１つ以上の分画を作出する工程、及び
（ｆ）１つ以上の分画から本発明の１つ以上の化合物又は１つ以上のその前駆体を単離する工程
を含む。
【０１０３】
工程（ｂ）で、溶媒は、適切な非極性有機溶媒又は適切な極性有機溶媒の混合物を含みうる。適切な非極性有機溶媒は、例えば、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＣｌ３、トルエン、ヘキサンなどを含む。適切な極性有機溶媒は、例えば、水、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、イソプロピルアルコール、アセトンなどを含む。
【０１０４】
工程（ｄ）で、適切な有機非極性溶媒は、ＣＨ２Ｃｌ２、ヘキサン、ＣＣｌ４、ＣＨＣｌ３、ＭｅＯｔＢｕ、酢酸エチルなどを含む。また、典型的な水性溶媒は、例えば、水とメタノールとの混合物を含みうる。この分配工程で場合によっては使用できる溶媒混合物の非限定例は、（１）ＣＨ２Ｃ１２及び１９：１Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ，（２）ヘキサン及び９：１ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ，（３）ＣＣｌ４及び８：２ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ，（４）ＣＨ２Ｃｌ２及び７：３ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ，並びに（５）ＥｔＯＡｃ及びＨ２Ｏを含む。
【０１０５】
工程（ｅ）で、クロマトグラフィーは好ましくは、カラムクロマトグラフィーである。カラムクロマトグラフィーを使用するとき、クロマトグラフィーマトリックスは好ましくは、吸着型、分配型、逆相型、サイズ排除型、又はそれらの適切な組合せである。好ましくは、単離すべき化合物が特に酸に安定でないときには、溶媒及び／又はマトリックスは酸性性質ではない。セファデックス（登録商標）ＬＨ−２０は、本発明の特定のタイプの化合物の単離に特に好適なマトリックスであるが、上記マトリックス型の３つを兼ね備え、温和な処理と良回収を特徴とする。単離工程（ｆ）は、例えば、溶媒を蒸発させることによって、逆相ＨＰＬＣを用いて更なる濃縮後場合によっては再結晶することによって、又は、当該分野公知の他の単離手順を使用することによって、行うことができる。
【０１０６】
好適な単離方法において、凍結Ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種海綿の選択サンプルを、ドライアイスで粉末にすり砕く。ドライアイスを昇華させ、蒸留Ｈ２Ｏを加え、融解材料を３℃で３時間撹拌し、次いで、遠心分離する。水性上清を凍結乾燥し、濃縮抽出物を、ワイドポア逆相Ｃ４媒体で分画する。ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（２：１）で溶出する分画を、ＭｅＯＨ（７：３）溶媒系を用いて、ＬＨ−２０カラムで更に分離する。このカラムからの初期溶出材料は、直線ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏグラジエントでの逆相Ｃ１８ＨＰＬＣによって最終的に精製し、溶媒除去後、本発明の実質的に精製された化合物を得る。本発明の代表的化合物の単離のより詳細な説明は、実施例１で与える。
【０１０７】
単離化合物の構造の最終的な証拠は、１次スペクトル解析（例えば、高分解能ＮＭＲ及び質量分析、赤外及びＵＶ分光法）、関連する文献上の先例とのスペクトル及び物理化学的性質の比較を含む方法の組合せによって、及びＸ線結晶解析によって、得ることができる。種々の構造的証拠は、本明細書実施例２に説明してある。
【０１０８】
〔実施例〕
以下の実施例は更に、本発明を説明するが、勿論、その範囲をいかなる方法でも限定するものとは解釈されるべきではない。
【０１０９】
実施例１
本実施例は、海洋海綿から本発明の代表的な化合物を得る手順を示す。本実施例は更に、コンドロプシンＡのメチル化アナログ（これも本発明の化合物である）への変換を示す。
本実施例で研究するために、ＮＣＩ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｍａｒｙｌａｎｄから選択されたＣｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種海綿の特定の抽出物は、コンカナマイシンＡのものと高度に相関した（ＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥピアソン相関係数約０．６−０．７以上）ＮＣＩ６０細胞スクリーニング平均−グラフ（ＴＧＩ）フィンガープリントを示した。抽出物はまた、代表的コンドロプシンの純粋サンプルに対応する化学シフト値（及び多重度）でのプロトン及びカーボンＮＭＲ共鳴を示した（例えば、表１及び２参照）。選択された抽出物は、オーストラリア、Ｗｏｌｌｏｎｇｏｎｇの沿岸から離れたＢａｓｓ　Ｉｓｌａｎｄの海岸から約１００Ｍで集めた、Ｃｈｏｎｄｒｏｐｓｉｓ種海綿からであった。抽出前にサンプルを凍結保存した。この特定の海綿コレクションの証拠標本（シリアル番号Ｑ６６Ｃ１００４としてコード化した）は、Ｓｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．Ｃａｎｔｒｅｌｌら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２２，８８２５−８８２９（２０００）に寄託してある。
【０１１０】
コンドロプシンＡ（図１Ａ、化合物（１））及びＢ（図１Ａ、化合物（２））は、以下のように単離した。凍結海綿サンプル（３５７ｇ、湿重量）をドライアイス中で微粉末まですり砕き、４℃のＨ２Ｏで抽出した。水抽出物を遠心分離で取り出し、次いで、凍結乾燥し、抽出物４４．０ｇを得た。水抽出物の５ｇアリコートを蒸留水５０ｍｌに溶解し、Ｃ４逆相媒体（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｗｉｄｅ−Ｐｏｒｅ（登録商標）Ｂｕｔｙｌ）６２ｇを含むクロマトグラフィーカラム（内径９ｃｍ）にかけた。増加濃度のＨ２Ｏ中メタノール（ＭｅＯＨ）を用いて、カラムを溶出した。ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（２：１）で溶出する分画を濃縮し、物質９０ｍｇを得、それを、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（７：３）で溶出するセファデックスＬＨ−２０カラム（２．５×９５ｃｍ）で更に分離した。ＬＨ−２０カラムからの初期溶出分画を濃縮し、残渣２９ｍｇを得、次いで、ＨＰＬＣのために、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（１：１）２ｍｌ中に溶解した。逆相ＨＰＬＣ分離（Ｄｙｎａｍａｘ　ＯＤＳ，１０×２５０ｍｍ，８μｍ；流速４ｍｌ／分）を、直線ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏグラジエント（６５：３５から８５：１５へ４０分間かけて）を用いて行い、（図１Ａ、化合物（１））２ｍｇと（図１Ａ、化合物（２））０．８ｍｇを得た。抽出物の残りも同様の方法で処理し、（１）１７ｍｇ（０．００５％湿重量）と（２）７ｍｇ（０．００２％湿重量）を得た。
【０１１１】
コンドロプシンＡ（１）の物理化学的及び分光分析的データは以下のようであった。無色粉末；［α］２７Ｄ＋７．１°（ｃ０．２８，ＭｅＯＨ）；ＵＶ［ＭｅＯＨ］λｍａｘ２２９（ε１５３７２），２５９（ε１６２２９）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（ＫＢｒ）３４１８，３２９８，１６８９，１６１０，１５３３，１２０７ｃｍ−１；１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲに関しては，表１参照；ＦＡＢＭＳ（陰イオン；グリセロールマトリックス）ｍ／ｚ１５８７．０［Ｍ−Ｈ］−，ＨＲＦＡＢＭＳ（陽イオン；マジックブレットマトリックス（ｍａｇｉｃ　ｂｕｌｌｅｔ　ｍａｔｒｉｘ）；ＣｓＩドープ）ｍ／ｚ１８５２．７３０５［Ｍ−Ｈ＋Ｃｓ２］＋，Ｃ８３Ｈ１３２Ｎ３Ｏ２２Ｃｓ２についての計算値１８５２．７２０８，Δ＋９．７ｍｍｕ。
【０１１２】
コンドロプシンＢ（２）の物理化学的及び分光分析的データは以下のようであった。無色粉末；［α］２７Ｄ＋３０．６°（ｃ０．３６，ＭｅＯＨ）；ＵＶ［ＭｅＯＨ］λｍａｘ２２７（ε１４７９２），２６０（ε１３１２４）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（ＫＢｒ）３４２２，２９５７，１６９５，１６３５，１２０７ｃｍ−１；１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲに関しては，表２参照；ＦＡＢＭＳ（陰イオン；グリセロールマトリックス）ｍ／ｚ１４７１．０［Ｍ−Ｈ］−，ＨＲＦＡＢＭＳ（陽イオン；マジックブレットマトリックス；ＣｓＩドープ）ｍ／ｚ１６０４．８１９９［Ｍ−Ｈ＋Ｃｓ２］＋，Ｃ７９Ｈ１１２９Ｎ３Ｏ２２Ｃｓについての計算値，１６０４．８１２２，Δ＋７．７ｍｍｕ。
【０１１３】
コンドロプシンＡ（１）のメチル化は以下のように行った。ＭｅＯＨ２．８ｍｌ中の（１）の５．５ｍｇ溶液を、ジエチルエーテル（３ｍｌ）中のＣＨ２Ｎ２溶液によって、室温で処理した。Ｎ２流下での溶媒の除去、及び（１）に関し上記したような残渣のＨＰＬＣ精製によって、メチル化誘導体（図１Ａ、化合物（３））３．５ｍｇを得た。
【０１１４】
（３）の物理化学的及び分光分析的データは以下のようであった。無色粉末；［α］２７Ｄ＋１４．７°（ｃ０．３４，ＭｅＯＨ）；ＵＶ［ＭｅＯＨ］νｍａｘ２２８（ε２０７６２），２６１（ε２０３１７）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（ＫＢｒ）３４２０，３３０４，１６８４，１５３４，１２０５，１１４０ｃｍ−１；ＨＲＦＡＢＭＳ（陽イオン；マジックブレットマトリックス；ＣｓＩドープ）ｍ／ｚ１７４８．８５２４［Ｍ＋Ｃｓ］＋，Ｃ８５Ｈｌ３７Ｎ３Ｏ２６ＣＳについての計算値，１７４８．８５４５，Δ−２．０ｍｍｕ；１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７）δＨ−２，５．１８（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３，８．１３（１Ｈ，ｂｒ　ｓ）；Ｈ−５，６．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ）；Ｈ−６，７．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０及び１５．０Ｈｚ）；Ｈ−７，６．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０及び１５．０Ｈｚ）；Ｈ−８，６．１０（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−９，２．３０（２Ｈ，ｍ）；Ｈ−１０，２．１６（２Ｈ，ｍ）；Ｈ−１１，５．６９（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１２，６．１６（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１３，６．１６（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１４，５．６９（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１５，２．０９（１Ｈ，ｍ）及び２．７４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１６，４．０１（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１７，１．２９（１Ｈ，ｍ）及び１．４７（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１８，１．８４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−１９，０．８０（１Ｈ，ｍ）及び１．５２（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２０，３．７０（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２１，１．２３（１Ｈ，ｍ）及び１．４８（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２２，４．２５（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２３，１．４３（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２４，３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ）；Ｈ−２６，５．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；Ｈ−２７，２．５３（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−２８，３．５７（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３０，５．２４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３１，２．０８（１Ｈ，ｍ）及び２．４３（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３２，４．９２（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３３，２．０８（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３４，５．０９（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３５，４．８０（１Ｈ，ｂｒ　ｓ）；Ｈ−３７，０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；Ｈ−３８，０．６３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）；Ｈ−３９，１．６０（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−４０，０．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）；Ｈ−４１，１．５６（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−４２，１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５）；Ｈ−４３，４．１６（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−４４，７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ）；Ｈ−４６，２．５４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−４７，３．５４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−４８，１．４８（２Ｈ，ｍ）；Ｈ−４９，１．２３（１Ｈ，ｍ）及び１．３４（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−５０，１．５５（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−５１，３．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）；Ｈ−５３，５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ）；Ｈ−５４，２．６８（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−５５，３．７９（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−５６，４．０７（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−５７，７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ）；Ｈ−５９，６．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ）；Ｈ−６０，６．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ）；Ｈ−６３，３．２０（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−６４，４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）；Ｈ−６７，３．７８（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−６８，１．��８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）；Ｈ−６９，１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；Ｈ−７０，０．９５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；Ｈ−７１，１．４８（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−７２，１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；Ｈ−７３，３．６０（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−７４，１．４７（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−７５，０．８６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；Ｈ−７６，０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；Ｈ−７７，１．２１（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−７８，１．２７（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−７９，０．７７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；Ｈ−８０，１．１１（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−８１，１．１８（３Ｈ，ｓ）；Ｈ−２’，４．５３（１Ｈ，ｍ）；Ｈ−３’，２．６８（１Ｈ，ｍ）及び２．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０及び１６．０Ｈｚ）；Ｃ−３６−ＯＣＨ３，３．７１（３Ｈ，ｓ）；Ｃ−６６−ＯＣＨ３，３．６３（３Ｈ，ｓ）；Ｃ−１’−ＯＣＨ３，３．６７（３Ｈ，ｓ）；１３Ｃ　ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７），化学シフト及び帰属は、ＨＳＱＣ及びＨＭＢＣ相関から推定した、δＣ−１，１７１．４；Ｃ−２，５５．９；Ｃ−４，１６７．４；Ｃ−５，１２４．４；Ｃ−６，１４０．７；Ｃ−７，１２９．５；Ｃ−８，１４１．７；Ｃ−９，３４．４；Ｃ−１０，３２．８；Ｃ−１１，１３０．１；Ｃ−１２，１３１．８；Ｃ−１３，１３２．３；Ｃ−１４，１３２．１；Ｃ−１５，３４．６；Ｃ−１６，７２．６；Ｃ−１７，３７．３；Ｃ−１８，２５．９；Ｃ−１９，４１．７；Ｃ−２０，６６．０；Ｃ−２１，４２．９；Ｃ−２２，６６．０；Ｃ−２３，４２．０；Ｃ−２４，８０．１；Ｃ−２５，１３７．７；Ｃ−２６，１３１．０；Ｃ−２７，３６．４；Ｃ−２８，８１．７；Ｃ−２９，１３８．８；Ｃ−３０，１２２．２；Ｃ−３１，３１．９；Ｃ−３２，７３．２；Ｃ−３３，３７．９；Ｃ−３４，７６．８；Ｃ−３５，７２．３；Ｃ−３６，１７１．０；Ｃ−３７，２２．８；Ｃ−３８，９．９；Ｃ−３９，１１．２；Ｃ−４０，１８．２；Ｃ−４１，１１．１；Ｃ−４２，９．８；Ｃ−４３，５３．６；Ｃ−４５，１７６．９；Ｃ−４６，４７．２；Ｃ−４７，７３．８；Ｃ−４８，３３．２；Ｃ−４９，２９．５；Ｃ−５０，３６．３；Ｃ−５１，８３．１；Ｃ−５２，１３７．１；Ｃ−５３，１２８．７；Ｃ−５４，３４．９；Ｃ−５５，７４．５；Ｃ−５６，５３．７；Ｃ−５８，１６５．９；Ｃ−５９，１２４．７；Ｃ−６０，１４６．６；Ｃ−６１，５１．３；Ｃ−６２，２１４．７；Ｃ−６３，４４．７；Ｃ−６４，７７．２；Ｃ−６５，４６．７；Ｃ−６６，１７８．０；Ｃ−６７，６８．８；Ｃ−６８，２１．５；Ｃ−６９，１５．６；Ｃ−７０，１６．０；Ｃ−７１，１１．９；Ｃ−７２，１８．１；Ｃ−７３，７５．７；Ｃ−７４，３１．５；Ｃ−７５，１９．６；Ｃ−７６，２０．２；Ｃ−７７，２３．８；Ｃ−７８，２３．９；Ｃ−７９，１５．４；Ｃ−８０，１７．７；Ｃ−８１，２５．３；Ｃ−１’，１７１．６；Ｃ−２’，６８．６；Ｃ−３’，４０．０；Ｃ−４’，１７２．７；Ｃ−３６−ＯＣＨ３，５２．５；Ｃ−６６−ＯＣＨ３，５１．７；Ｃ−１’−ＯＣＨ３，５１．８。
【０１１５】
Ｌ−リンゴ酸を以下のようにメチル化した。ＭｅＯＨ１ｍｌ中のＬ−リンゴ酸（１３５ｍｇ）溶液を、ＣＨ２Ｎ２１当量未満によって、室温で処理した。溶媒の除去後、粗反応生成物（１３９ｍｇ）をＭｅＯＨ４ｍｌに溶解し、ヘキサン−イソプロピルアルコール（９５：５）で溶出するシアノ結合相カラム（Ｄｙｎａｍａｘ　ＣＮ，１０×２５０ｍｍ，８μｍ；流速４ｍｌ／分；ＵＶ検出２１０ｎｍ）を用いるＨＰＬＣで分離した。Ｌ−リンゴ酸のＣ−１及びＣ−４モノメチルエステル誘導体は、予期したように、Ｃ−４誘導体に有利に約９：１比で得られた。
【０１１６】
リンゴ酸Ｃ−４モノメチルエステルの物理化学的及び分光分析的データは以下のようであった。ＧＣＭＳ（ＥＩ，陽イオン）ｍ／ｚ１４８．０３７０［Ｍ］＋，Ｃ５Ｈ８Ｏ５についての計算値，１４８．０３７２，Δ−０．１ｍｍｕ；１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７）ｄ２．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５及び１５．５Ｈｚ）；２．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０及び１５．５Ｈｚ）；３．６９（３Ｈ，ｓ）；４．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０及び７．５Ｈｚ）；１３Ｃ　ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７），ｄ１７４．２；１７２．３；６８．４；５２．０；３９．８。
【０１１７】
リンゴ酸Ｃ−１モノメチルエステルの物理化学的及び分光分析的データは以下のようであった。ＧＣＭＳ（ＥＩ，陽イオン）ｍ／ｚ１４８．０３７０［Ｍ］＋，Ｃ５Ｈ８Ｏ５についての計算値，１４８．０３７２，Δ−０．１ｍｍｕ；１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７）ｄ２．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０及び１５．５Ｈｚ）；２．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０及び１５．５Ｈｚ）；３．６５（３Ｈ，ｓ）；４．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０及び８．０Ｈｚ）；１３Ｃ　ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ７），ｄ１７５．１；１７１．６；６８．２；５１．７；３９．９。
【０１１８】
これらのデータを得るのに使用した一般的方法は以下のようであった。旋光度は、パーキン−エルマー２４１旋光計で記録した。ＵＶスペクトルは、ベックマンＤＵ−６４０分光光度計で記録した。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、パーキン−エルマースペクトラム２０００分光計で得た。高分解能マススペクトルは、ＪＯＥＬ　ＳＸ１０２分光計で測定した。１次元及び２次元１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルは、Ｎａｌｏｒａｃインバースディテクション及びブロードバンドプローブを備えたＶａｒｉａｎ　ＩＮＯＶＡ−５００分光計で記録した。ＨＰＬＣ分離は、Ｗａｔｅｒｓ　９９０フォトダイオードアレイ検出器を用いるＷａｔｅｒｓ　６００Ｅシステムで行った。
【０１１９】
実施例２
本実施例は、本発明の特定の化合物の構造的証拠を示す。
実施例１で得られ、分光分析的に特徴づけしたようなコンドロプシンＡ（１）は、以下のように確立したＣ８３Ｈ１３３Ｎ３Ｏ２６の分子式を有する無色粉末であった。（１）の陰イオンＦＡＢＭＳ分析は、［Ｍ−Ｈ］−に対応するｍ／ｚ１５８７．０で強い擬似分子イオンを示した。（１）のＣｓＩドープサンプルの次の陽イオンＨＲＦＡＢＭＳ分析は、２個のＣｓ原子を含む付加物［Ｍ−Ｈ＋Ｃｓ２］＋，ｍ／ｚ１８５２．７３０５（Ｃ８３Ｈｌ３２Ｎ３Ｏ２６Ｃｓ２についての計算値，１８５２．７２０８，Δ＋９．７ｍｍｕ）を検出した。２個のＣｓイオンの容易な取り込みは、（１）が２個のカルボン酸官能基を含むことを示唆した。ジアゾメタンによる（１）の処理によって、ビス−メチル化誘導体（３）（ＨＲＦＡＢＭＳ，ＣｓＩドープ，ｍ／ｚ１７４８．８５２４［Ｍ＋Ｃｓ］＋）が得られ、（１）における２個のカルボン酸基が確認された。ＨＲＦＡＢＭＳ測定に基づきＣ８３Ｈ１３３Ｎ３Ｏ２６と定められた（１）の分子式は、１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲデータ（表１）の詳細な解析と一致した。（１）中の比較的多数のプロトン及び炭素に係わらず、それが提供したＮＭＲスペクトルは一般的に良く分解され、構造情報は豊富であった。しかし、オーバーラップする共鳴のために起こる不明瞭性は、ＤＭＦ−ｄ７、ＤＭＳＯ−ｄ６、ＣＤ３ＯＨを含む異なる溶媒での完全なＮＭＲデータセットの解析を必要とした。ＮＭＲスペクトル解析は、１個の低磁場メチルエステル、３個の低磁場ビニルメチル、１１個の脂肪族メチルダブレット、及び４個のメチルシングレットを含む、（１）における１９個のメチル基を示した。１５個のオキシメチン基、８個のオレフィン、１個のケトン、及び８個のエステル、アミド、若しくはカルボン酸カルボニルも定められた。特に、ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＨＳＱＣ、及びＨＭＢＣパルスシークエンスからのデータに基づく、（１）の広範な２−Ｄ　ＮＭＲ解析によって、５個（ａ−ｅ）の構造フラグメントの解明ができた（図１Ａ）。ＤＭＦ−ｄ７におけるコンドロプシンＡ（１）の１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲデータを以下の表１に示す。
【０１２０】
【表１】
2004504399.tif 000012
2004504399.tif 000013
【０１２１】
ａ　ＤＥＰＴパルスシークエンスを用いて決定された多重度。
ｂ　Ｊ＝３．５及び８．５Ｈｚに関し最適化。１Ｈカラムでプロトン共鳴と相関した炭素。
ｃ　１Ｈカラムでプロトン共鳴と相関した炭素。
ｄ，ｅ，ｆ，ｇ　帰属は交換されうる。
【０１２２】
部分構造ａは、カルボン酸、エステルカルボニル、窒素置換メチン（δ５５．６，Ｃ−２）、及びオキシメチン基（δ７２．２，Ｃ−３５）からなる線状の４個の炭素のフラグメントとして確立された。Ｈ−２共鳴（δ５．１４）は、Ｈ−３５（δ４．８３）と、δ７．８５（Ｈ−３）で良く分解したアミドプロトンとの両方へのＣＯＳＹ相関を示した。δ１６７．４（Ｃ−４）でのＨ−２及びＨ−３からカルボニルへのＨＭＢＣ相関は、Ｎ−３でのアミド結合を介しサブ構造ｂへのａの結合を確認した。この点で、フラグメントａのどのカルボニルが遊離カルボン酸として存在し、どれが、エステル結合の部分であるかを区別するのは不可能であった。Ｈ−３、又はＣ−３５上のヒドロキシルプロトンからの３個の結合異核相関は、これらの２個のカルボニルの帰属を容易にしたかも知れないが、種々の異なるＮＭＲパラメーター及び実験条件が研究されたときでさえ、決定的なＨＭＢＣ相関は観察されなかった。同様に、診断的ＮＯＥ相互作用は観察されなかった。
【０１２３】
フラグメントｂの構造は、主にＣＯＳＹ及びＴＯＣＳＹ相関データから推定できた。２個のアリル性メチレンで分離された共役ジエンの２ペアを含むプロトンスピンシステムが明白であり、部分構造ａへのその近接性は、Ｈ−５（δ６．２９）及びＨ−６（δ７．１４）からＣ−４アミドカルボニルへのＨＭＢＣ相関によって定められた。１個のオキシメチン（δ４．０１，Ｈ−１６）がＣ−１５アリル性メチレンプロトンとカップルしている３置換テトラヒドロピラン環の存在をｂで確立することも可能であった。他の酸素化メチン（δ３．６９，Ｈ−２０）は、Ｃ−２１脂肪族メチレン基とカップルし、メチル基は、Ｃ−１８で置換された。Ｈ−２２（δ４．２６）への高度にオーバーラップしたＣ−１７、Ｃ−１９、Ｃ−２１メチレンプロトンを通してプロトンスピンの拡張は、ＨＭＢＣ及びＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹ相関の組合せによって助けられた（表１）。
【０１２４】
部分構造ｂの残りの帰属は、プロトンスピンシステムを確立するために、ＣＯＳＹ及びＴＯＣＳＹデータを、酸素化若しくは窒素置換の部位を確認するために、ＨＳＱＣ相関を、非プロトン化オレフィン炭素（Ｃ−２５及びＣ−２９）の場所を定めるために、ＨＭＢＣデータを用いた。Ｃ−４２メチルプロトンからＣ−３４へのＨＭＢＣ相関は、Ｃ−３３とＣ−３４の連結性を確立するのを助けた。隣接するカップリングがＨ−３３とＨ−３４の間で観察されなかったからである。コンドロプシンＡ（１）は、フラグメントａにおけるカルボニルとＣ−３４酸素置換基の間のエステル化から生じる大環状環を組み込んでいることを構造ａにおけるＨ−３４とカルボニル共鳴（δ１７２．６）の間のＨＭＢＣ相関は明らかにした。Ｈ−３４の低磁場化学シフト（δ５．２６）は、この位置におけるエステル結合の帰属を支持した。Ｃ−４３上の窒素原子の置換は、その１３Ｃ　ＮＭＲ化学シフト（δ５３．７）によって、及びＨ−４３（δ４．１５）とアミドＮＨ（δ７．５５，Ｈ−４４）の間のプロトン−プロトンカップリングによって、示された。Ｈ−４３とＨ−４４からＣ−４５カルボニル（δ１７６．８）へのＨＭＢＣ相関は、この位置におけるアミドの存在を確認した。このように、部分構造ｂは、フラグメントａ及びｃへのアミド結合によって結合し、それは、ａでのカルボニルへのエステル化を介し大環を形成した。
【０１２５】
部分構造ｃは、１個のオレフィン、１個の窒素置換基及び多数のメチルとヒドロキシル置換基を含む１５炭素の鎖から成っていた。ＣＯＳＹとＴＯＣＳＹからのデータは、ｃにおける２個の主要プロトンスピンシステムの連結性を確立した。隣接するＣ−４８、Ｃ−４９メチレンペアと関連するプロトン共鳴は、ＮＭＲスペクトルの重度にオーバーラップした領域にあり、解釈するのが困難であった。しかし、ＨＭＢＣ及びＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹ相関は、これらのメチレン基の位置を明瞭に定めた。Δ５２の位置は、Ｈ−５１からＣ−５２とＣ−５３オレフィン炭素へのＨＭＢＣ相関によって、及びＨ−５３とＨ−５４との間のカップリングによって、確立された。Ｃ−５６へ結合した窒素の存在は、１３Ｃ化学シフト（δ５３．６）、及びＨ−５６（δ４．０８）とアミドプロトンＨ−５７（δ７．５８）との間のカップリングによって明らかとなった。
【０１２６】
フラグメントｄは、α，β−不飽和アミド、ケトン、メチルエステル、及び２個のジェム（ｇｅｍ）ジメチル基を含むことを特徴的な１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲシグナルは示した。ｄの構造帰属は、プロトン−プロトンカップリングと異核相関データの解析によって容易になった。ｄは、不飽和アミド結合を介し構造ｃに結合していることをＨ−５６、Ｈ−５７、Ｈ−５９及びＨ−６０からＣ−５８カルボニル（δ１６５．９）へのＨＭＢＣ相関は確立した。Ｃ−６１でのジェムジメチル置換基の配置は、２個のメチル基とＣ−６０及びＣ−６２ケトン共鳴（δ２１４．７）との間のＨＭＢＣ相関から分かった。Ｈ−６３とＣ−７９メチルプロトンの両方からＣ−６２への更なるＨＭＢＣ相関は、Ｃ−６３メチンはまた、ケトンに対しαに位置することを確立した。第２のジェムジメチル基の位置は、Ｃ−８０とＣ−８１メチルプロトンからＣ−６４（δ７７．２）、Ｃ−６５（δ４６．７）、Ｃ−６６（δ１７８．０）へのＨＭＢＣ相関によって定まり、一方、メチルエステルは、シングレットメチルプロトン（δ３．６３）からＣ−６６エステルカルボニルへの相関によって定まった。
【０１２７】
メチレン、オキシメチン基、エステルカルボニル、及びカルボン酸部からなる、ほんの残りの未だ帰属されていないＮＭＲ共鳴は、リンゴ酸残基（サブ構造ｅ）に帰属された。しかし、ＨＭＢＣ又はＮＯＥ相関データに基づき、ｅ内でエステルとカルボン酸部の相対的位置を定めることは不可能であった。ｅの結合の配向は明瞭ではないままであったが、コンドロプシンＡ（１）内のその位置は明瞭に確立された。ｅにおけるＨ−３２（δ４．９０）とエステルカルボニル（δ１７２．８）との間のＨＭＢＣ相関は、リンゴ酸残基は、サブ構造ｂでＣ−３２酸素置換基へエステル化されていることを明らかにした。
【０１２８】
（１）におけるオレフィン結合の幾何は、プロトンカップリング定数解析と観察されたＮＯＥ相互作用の組合せに基づき、全てトランスと帰属された（図２）。それぞれ、１５．２，１５．０，１４．９，１４．９，及び１５．４ＨｚのＪ５，６，Ｊ７，８，Ｊｌｌ，１２，Ｊ１３，１４，及びＪ５９，６０隣接カップリング定数は、Ｚ二重結合を示していた。Δ２５のトランスコンフィギュレーションは、Ｈ−２６とＨ−２４との間で観察されたＮＯＥと、Ｃ−３９ビニルメチルプロトンとＨ−２７アリル性メチンプロトンとの間のＮＯＥによって確立された。Δ２９及びΔ５２二重結合に関するＮＯＥ相互作用の同様の解析（図２）もトランス幾何を明らかにした。（１）でのテトラヒドロピラン環置換基の相対的立体化学はまた、ＮＯＥデータから推定された。Ｈ−１５プロトン（δ２．７９）の１つは、Ｈ−１８とＨ−２０の両方と強いＮＯＥ相互作用を示した。このことは、Ｃ−１５、Ｈ−１８及びＨ−２０は全て、テトラヒドロピラン環に関し共通の１，３−ジアキシアル配向を共有することを示した。Ｈ−１８とＨ−２０との間の相関を含む、環置換基の間で検出された全ての他のＮＯＥ相互作用は、この帰属を支持した。
【０１２９】
最初に、コンドロプシンＡ（１）におけるサブ構造ａ及びｅにおけるエステルとカルボン酸官能基の相対位置を定める我々の努力は、決定的ではなかった。従って、ビスメチル化誘導体（３）のＮＭＲ共鳴の広範なスペクトルキャラクタリゼーションと完全な帰属が行われた。サブ構造ａ及びｅでのカルボニルの帰属に必要な特定のＨＭＢＣ相関は、（３）において未だ欠けているが、ＮＯＥデータは幾分助力となることが分かった。化合物（３）の１Ｈ　ＮＭＲスペクトルは、Ｃ−６６メチルエステル（δ３．６３）に加えて、２個の新たなＯ−メチルシングレット（δ３．７１及び３．６７）を提供した。δ３．７１でのメチル共鳴は、ａにおいてＨ−３５オキシメチンプロトンとの強いＮＯＥ相互作用を示し、このことは、この新たなＯ−Ｍｅ基はＣ−３６と結合していることを示した。従って、コンドロプシンＡ（１）において、Ｃ−３６は遊離カルボン酸として存在し、Ｃ−１は、Ｃ−３４上の酸素に結合したエステルカルボニルである。同様のＮＯＥ研究によっては、フラグメントｅにおけるカルボニル基を区別できなかった。
【０１３０】
サブ構造ｅの配向は、（１）でのこの残基のＮＭＲスペクトルデータを、Ｌ−リンゴ酸の合成モノメチルエステルからのスペクトルデータと比較することによって結局定められた。（１）のＮＭＲデータは、Ｃ−１誘導体よりも、Ｌ−リンゴ酸のＣ−４メチルエステル誘導体に有意により密接な一致を示した。特に、（１）におけるＨ−２’（δ４．５３）とＨ−３’（δ２．６０及び２．７６）の化学シフトは、Ｌ−リンゴ酸のＣ−４モノメチルエステル誘導体のオキシメチン（δ４．５２）とメチレン（δ２．６３及び２．７７）のそれと一致した。Ｃ−１メチルエステル誘導体のオキシメチンとメチレンプロトンに関し記録された共鳴は、それぞれ、δ４．４９、及びδ２．６５と２．８３であった。従って、リンゴ酸残基の結合は、（１）におけるように定められた。
【０１３１】
コンドロプシンＢ（２）の陰イオンＦＡＢＭＳ解析は、［Ｍ−Ｈ］−に対応するｍ／ｚ１４７１．０で擬似分子イオンを提供した。ＣｓＩドープサンプルの陽イオンＨＲＦＡＢＭＳは、Ｃ７９Ｈ１２９Ｎ３Ｏ２２Ｃｓに責を負う１個のＣｓ原子を含む付加物［Ｍ＋Ｃｓ］＋を示した（ｍ／ｚ１６０４．８１９９）。（２）の分子式はこのように、Ｃ４Ｈ４Ｏ４の欠如によってコンドロプシンＡ（１）のそれとは異なっていた。（２）のＮＭＲデータは、２，３の顕著な例外はあるが、（１）のそれと非常に類似していた。（１）のＨ−２’オキシメチンとＨ−３’メチレンプロトンに帰属された共鳴は、（２）の１Ｈ　ＮＭＲスペクトルでは非存在であった。更に、Ｈ−３２のシグナルは、（１）の対応するδ４．９０とは対照的に、（２）に関しδ３．５２の高磁場に出現した。（２）の１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルで、リンゴ酸残基のＣ−１’からＣ−４’までの以前に帰属されたシグナルはまた、失われていた。ＮＭＲスペクトルデータの独立した帰属及び完全な構造解明（表２）は、（１）でのＣ−３２でのリンゴ酸側鎖の欠如を除いて、コンドロプシンＢ（２）は（１）と同一であることを確認した。ＤＭＦ−ｄ７でのコンドロプシンＢ（２）の１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲデータは、以下の表２に示される。
【０１３２】
【表２】
2004504399.tif 000014
【０１３３】
ａ　ＤＥＰＴパルスシークエンスを用いて決定された多重度。
ｂ，ｃ　帰属は交換されうる。
【０１３４】
実施例３
本実施例は、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングを用いて、本発明の化合物の活性プロフィールを得る一般的手順を説明する。
本実施例で、コンドロプシンＡは以下のように試験した。該化合物は、Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９（１９９５）；並びにＭｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，７５７−７６６（１９９１）に詳細に記載されるように、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングで試験した。要約すると、該化合物のストック溶液を、所望の最終最高試験濃度の４００倍でジメチルスルホキシド中に最初に調製し、使用まで−７０℃で保存した。本実施例で研究した最終最高試験濃度は、１０−５〜１０−８Ｍで変わった。スクリーニング時点で、融解ストックのアリコートを、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む完全培地で希釈し、所望の最終最高試験濃度の２倍の濃度を得た。次いで、４つの更なる１０倍連続希釈を作製し、４−ｌｏｇ１０濃度範囲にまたがる、合計５濃度を得た。これらの中間希釈の１００μｌアリコートを適当なマイクロタイターウェルに直ちに加えた。各々のウェルは、培養培地１００μｌ中に適当な数とタイプの細胞を既に含んでおり、所望の５つの最終濃度が得られた。
【０１３５】
使用した６０細胞系列、及び、それぞれの播種密度は、Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９（１９９５）；並びにＭｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，７５７−７６６（１９９１）に記載されているとおりであった。化合物添加後、プレートを、５％ＣＯ２／空気雰囲気及び１００％湿度下、３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、粘着細胞（白血病を除いて全ての系列）を、冷トリクロロ酢酸（５０％ｗ／ｖを５０μｌ）の温和な添加によってｉｎ　ｓｉｔｕに固定し、４℃で６０分インキュベートした。上清を捨て、プレートを、脱イオン水で５回洗浄し、空気乾燥した。スルホローダミンＢ溶液（ＳＲＢ；１％酢酸中０．４％ｗ／ｖで１００μｌ）を各プレートに加え、次いで、室温で１０分更なるインキュベーションを行った。次いで、過剰の非結合色素を、１％酢酸によって５回洗浄することによって除去し、次いで、空気乾燥した。各ウェルの結合染色剤を、１０ｍＭ非緩衝化トリスベースを１００μｌ添加して溶解した。これを次いで、自動化プレートリーダーで光学密度（５１５ｎｍ）の測定を行った。懸濁細胞培養に関しては（白血病）、薬剤インキュベーション期間の終点で、８０％トリクロロ酢酸５０μｌの温和な添加によって、固定細胞をマイクロタイターウェルの底にｉｎ　ｓｉｔｕで固定したということを除いて、方法は同一であった。バックグラウンド光学密度の差し引き、薬剤ブランク補正、及び時間０（化合物を加える時点）での細胞密度の測定を可能とするために、適当な対照ウェルを、試験プレートフォーマットに含ませた（Ｍｏｎｋｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８３，７５７−７６６（１９９１））。
【０１３６】
ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングでの純粋コンドロプシンＡの４組の試験によって、図３Ａ及び３Ｂで例示されるＮＣＩ６０細胞スクリーニングにおける特徴的なＧＩ５０ベース及びＴＧＩベースの平均−グラフ「フィンガープリント」が得られた。それぞれのサブパネル及び細胞系列識別子と共に示した、以下の平均の、個々の負のｌｏｇ１０ＧＩ５０値は、コンドロプシンＡに関し記録された。（白血病）ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（８．２３），ＨＬ−６０−ＴＢ（８．４４），Ｋ−５６２（８．４９），ＭＯＬＴ−４（８．７４），ＲＰＭＩ−８２２６（８．４４），ＳＲ（９．８５）；（肺）Ａ５４９／ＡＴＣＣ（８．９２），ＥＫＶＸ（６．７４），ＨＯＰ−６２（６．００），ＨＯＰ−９２（７．５１），ＮＣＩ−Ｈ２２６（６．００），ＮＣＩ−Ｈ２３（６．２３），ＮＣＩ−Ｈ３２２Ｍ（６．００），ＮＣＩ−Ｈ４６０（６．４０），ＮＣＩ−Ｈ５２２（８．４４）；ＨＣＣ−２９９８（８．１７），ＨＣＴ−１１６（８．５２），ＨＣＴ−１５（８．６６），ＨＴ２９（８．４０），ＫＭ１２（８．１７），ＳＷ−６２０（８．３１）；（脳）ＳＦ−２６８（８．０１），ＳＦ−２９５（７．１２），ＳＦ−５３９（６．０５），ＳＮＢ−１９（６．００），ＳＮＢ−７５（６．００），Ｕ２５１（６．００）；（メラノーマ）ＬＯＸ−ＩＭＶＩ（８．８０），ＭＡＬＭＥ−３Ｍ（８．１５），Ｍ１４（８．４９），ＳＫ−ＭＥＬ−２（８　４８），ＳＫ−ＭＥＬ−２８（７．４８），ＳＫ−ＭＥＬ−５（８．２９），ＵＡＣＣ−２５７（７．７４），ＵＡＣＣ−６２（８．６０）；（卵巣）ＩＧＲＯＶ１（８．３２），ＯＶＣＡＲ−３（８．００），ＯＶＣＡＲ−４（７．４４），ＯＶＣＡＲ−５（６．８５），ＯＶＣＡＲ−８（８．２１），ＳＫ−ＯＶ−３（６．００）；（腎）７８６−０（８．５２），Ａ４９８（６．００），ＡＣＨＮ（８．２１），ＣＡＫＩ−１（８．３６），ＲＸＦ−３９３（６．５１），ＳＮ−１２Ｃ（７．７０），ＴＫ−１０（６．００），ＵＯ−３１（８．４２）；（前立腺）ＰＣ−３（７．８９），ＤＵ−１４５（６．００）；［乳］ＭＣＦ−７（７．５９），ＭＣＦ−７−ＡＤＲ−ＲＥＳ（７．３０），ＨＳ−５７８Ｔ（６．９６），ＭＤＡ−ＭＢ−４３５（８．２９），ＭＤＡ−Ｎ（８．１４），ＢＴ−５４９（７．１５），Ｔ−４７Ｄ（７．７４）。
【０１３７】
コンドロプシンＡは、本発明の化合物に特徴的なＮＣＩ６０細胞系列で著しいパターンの差異的な細胞毒性を与えるが（例えば、ピアソン相関係数は０．７−０．８以上）、如何なる公知の従来の抗癌剤クラスのそれとは似ていないことを、コンドロプシンＡのスクリーニングから得られた完全なデータセットのＧＩ５０及びＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ解析は明らかにした。コンドロプシンＡの平均グラフプロフィールのＣＯＭＰＡＲＥパターン−認識解析は、ＮＣＩ標準薬剤データベースに含まれる公知の抗癌化合物のプロフィールにいずれの有意な相関も明らかにしなかった。コンドロプシンＡの平均パネルＧＩ５０濃度は約２５ｎＭであり、ＮＣＩパネルを含む６０細胞系列間の差異的感受性の範囲は約１０３以上であった。
【０１３８】
実施例４
本実施例は、本発明の特定の化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を示す。
ＮＣＩ６０細胞系列インビトロスクリーニングを用い、所望の機構的プロトタイプ化合物の平均−グラフ「フィンガープリント」を得、次いで、ＣＯＭＰＡＲＥと呼ばれるコンピュターベースのサーチアルゴリズムを用い、構造的に無関係の化合物の平均−グラフ「フィンガープリント」のデータベースをサーチし、それによって、選択したプロトタイプ（即ち、「シード」）のフィンガープリントとは、区別できなくはないとしても、非常に類似したフィンガープリントの化合物を同定した。類似度は、ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数（それは、最小値０（相関無しを示す）から最大値１（完全な相関を示す）まで変わりうる）の計算によって決定される。異なる化合物の平均−グラフ「フィンガープリント」間の高いＣＯＭＰＡＲＥ相関（即ち、高度の類似性を示す）は、これらの化合物が、同一の、又は類似した分子標的に作用し、従って、本質的に同一の、又は類似した機構の生物活性を共有するということを示す。実際的な条件においては、約０．９以上のＣＯＭＰＡＲＥ相関係数は、スクリーニングプロセスの実験誤差の限界内では、比較される化合物の平均−グラフ「フィンガープリント」が、本質的に同一、又は区別できず、従って、これらの化合物が同一の分子標的に作用することを示す。ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニング、並びにＣＯＭＰＡＲＥの方法及び適用における適当な背景に関しては、Ｂｏｙｄ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｎｉｅｄｅｒｈｕｂｅｒ，Ｊ．Ｅ．編）中，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｂ．Ｃ．Ｄｅｃｋｅｒ，１９９３中，ｐｐ．１１−２２；Ｂｏｙｄ及びＰａｕｌｌ，Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，３４，９１−１０９，１９９５；Ｐａｕｌｌら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｂｏｏｋｓ，１９９５中，ｐｐ．１１−４５参照。
【０１３９】
本実施例の目的でＣＯＭＰＡＲＥ解析において使用するために、機構的プロトタイプ（即ち、「シード」）として、最も強力な公知の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤の１つであるロバタミドＡ（例えば、Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２参照）を選択した。他の公知の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害剤であるバフィロマイシンＡ１、コンカナマイシンＡ及びサリチリハラミドＡを、更なる「陽性対照」として使用するために選択した。コンカナマイシン及びバフィロマイシンに関する適切な背景に関しては、Ｂｏｗｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７９７２−７９７６（１９８８）；Ｄｒｏｅｓｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３２，３９０２−３９０６（１９９３）；Ｄｒｏｅｓｅ及びＡｌｔｅｎｄｏｒｆ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，２００，１−８（１９９７）参照。ロバタミドＡ及びサリチリハラミドＡに関する適切な背景に関しては、ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２参照。
【０１４０】
本実施例では、コンカナマイシンＡとバフィロマイシンＡ１の信頼でき、良くキャラクタライズされ、記載された参照サンプルは、市販の供給者（Ｋａｍｉｙａ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｔｕｋｗｉｌａ，ＷＡ）から得た。サリチリハラミドＡとロバタミドＡは、Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２によって記載されているように得た。
【０１４１】
上記「シード」化合物、その他の陽性対照化合物、及び試験化合物は各々、ＤＭＳＯ及び完全培地中に処方し、得られた組成物は、実施例３に記載したように、ＮＣＩ６０細胞系列試験手順に同時に供した。上限濃度１０−６Ｍ及び５つのｌｏｇ１０希釈を用いて、各化合物は４通りで試験した。各化合物についての結果のデータを用いて、対応する平均−グラフ「フィンガープリント」を構築し、ＣＯＭＰＡＲＥ相関解析を、更に下記に述べるように行った。
【０１４２】
機構的プロトタイプ（即ち、「シード」）化合物であるロバタミドＡの、ＧＩ５０、ＴＧＩ及びＬＣ５０平均−グラフ「フィンガープリント」はそれぞれ、Ｂｏｙｄ，ＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／０５５８２にすでに説明されていた。本実施例で使用し、ロバタミドＡ「シード」を用いてサーチしたデータベースは、上記化合物（即ち、選択された「シード」化合物、陽性対照及び試験化合物）の同時試験から得た平均−グラフ「フィンガープリント」に加えて、構造的に多様な純粋化合物の以前の試験からの８０００超の平均−グラフ「フィンガープリント」を含んでいた。データベースはまた、「シード」化合物、陽性対照、又は本発明の試験化合物に無関係な、あるいは、上記いずれかの化合物の任意の公知の成分を有するか又は任意の疑わしい成分を有する抽出物又は分画に無関係な、粗抽出物及びその部分精製分画から得られた平均−グラフ「フィンガープリント」を含んでいた。
【０１４３】
この実証に適切なものとして、ロバタミドＡの同時試験から得られるＴＧＩ平均−グラフを上記データベースに含まれるＴＧＩ平均−グラフに対しサーチするための「シード」として、そして、ＣＯＭＰＡＲＥ係数の計算の基礎として用いた。本研究で試験した各化合物のＧＩ５０平均−グラフは、平均パネルＧＩ５０値の計算のために用いた。
【０１４４】
表３は、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングにおける、ロバタミドＡ、コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、サリチリハラミドＡ及びコンドロプシンＡの試験からのＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数を要約する。平均−パネルＧＩ５０値も表３に示す。表３に示すＣＯＭＰＡＲＥ相関は、「シード」としてロバタミドＡのＴＧＩ平均−グラフを用いて行った。
【０１４５】
【表３】
2004504399.tif 000015
【０１４６】
シード化合物（ロバタミドＡ）の、それ自体との予期される完全相関（ＣＯＭＰＡＲＥ相関係数１．０）により示されるように、コンピュターベースのアルゴリズム解析は、この実験に関し適切に、そして正確に作動した。更に、その他の陽性対照化合物である、コンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、及びサリチリハラミドＡは、約０．９０以上のシード化合物との相関を示し、シードとは構造的に異なるけれども、それにも係わらず、同一の分子標的（即ち、この例では、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ）を共有する化合物を、この解析は正しく同定できることが確認された。最も顕著には、本実施例で、代表的化合物であるコンドロプシンＡを含む選択された試験化合物の全ては、「シード」に対し、少なくとも０．９２又はそれ以上のＣＯＭＰＡＲＥ相関係数を示し、従って、コンドロプシンＡを含む化合物の全ての分子標的は、同様に液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼであることが示された。本発明の化合物は、液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼに対し比較的に絶対的有効性の範囲を示しうる。
【０１４７】
実施例５
本実施例は、本発明の代表的化合物の液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ阻害活性を示す。
Ｂｏｗｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５，７９７２−７９７６，１９８８によって記載されたように、非哺乳動物又は哺乳動物（例えば、ウシクロマフィン顆粒）Ｖ−ＡＴＰアーゼを用い、本発明の代表的化合物に関し、Ｖ−ＡＴＰアーゼ阻害アッセイを行った。結果を表４に示す。
【０１４８】
【表４】
2004504399.tif 000016
【０１４９】
他の公知のクラスの阻害剤であるバフィロマイシン、コンカナマイシン、及びベンゾラクトン　エナミド（例えば、サリチリハラミドＡ）等と比較して、本発明の代表的化合物の特異性プロフィールの顕著な対照を、表４に示した結果は示している（Ｂｏｙｄら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．２９７：１１４−１２９）。即ち、本発明の化合物は、完全に新規なクラスのＶ−ＡＴＰアーゼ阻害剤に相当する。
【０１５０】
本発明の代表的な化合物のバフィロマイシン感受性液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性はまた、ヒト骨巨細胞腫細胞（ｈＯｃ）、ヒト腎皮質細胞（ｈＫ）、又はマクロファージ細胞（Ｊ７７４）からの部分精製膜ベシクル調製物を用いて測定できる。ベシクルは、Ｇａｇｌｉａｒｄｉら，Ｊ　Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，１５６８−１５７３（１９９８）；及びＧａｇｌｉａｒｄｉら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１，１８８３−１８９３（１９９８）に記載の方法の適当な適応によって調製できる。
【０１５１】
液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼアッセイは典型的には、Ｆ−及びＰ−ＡＴＰアーゼ阻害剤として、それぞれ、オリゴマイシン（５μｇ／ｍｌ）及びバナデート（１ｍＭ）の存在下に行う。比色法を用いて、残りのバフィロマイシン感受性液胞型（Ｈ＋）−ＡＴＰアーゼ活性を定量できる（Ｃｈａｎら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１５７，３７５−３８０（１９８６）参照）。このアッセイでは、インキュベーション３０分間、３７°でＡＴＰからの無機リン酸の遊離を測定する。反応は、ＭｇＳＯ４の添加（最終濃度５Ｍ）によって開始する。
【０１５２】
実施例６
本実施例は、本発明の代表的化合物を獲得する方法を示す。
オーストラリアで集めたＩｒｃｉｎｉａ　ｒａｍｏｓｅの水抽出物（２７．５ｇ）を、Ｃ４逆相媒体であるセファデックスＬＨ−２０、及びＣ１８ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ中、ＣＨ３ＣＮの４５−１００％グラジエントで溶出）で分画し、コンドロプシンＡ（図１Ａ，化合物（１））（１ｍｇ）及び７３−デオキシコンドロプシンＡ（５ｍｇ）（図１Ａ，化合物（４））を得た。７３−デオキシコンドロプシンＡは、白色粉末として得られた；［α］Ｄ＋２．０（ｃ０．３，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ（ｌｏｇ　ε）２１６（４．６２），２２６（４．６１），２６１（４．５６）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（フィルム）３５００−３２００，１６６０，１６２０，１５３２，１２０４，１１３８，９９８ｃｍ−１；１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲ，表５参照；ＨＲＦＡＢＭＳ（ＣｓＩドープ）観察［Ｍ＋Ｃｓ］＋，ｍ／ｚ１７０４．８３０８，Ｃ８３ＨＩ３３ＣｓＮ３０２５は１７０４．８２７９を必要とする。ＨＲＦＡＢＭＳは、Ｃ８３ＨＩ３３Ｎ３Ｏ２５として（４）の分子式を確立したが、それは、１個の酸素原子の欠如によってのみ（１）とは異なっていた。（４）の１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル（表５）は、（１）のものと実質的に重なりえた。２つの化合物間の唯一の有意なスペクトルの差異は、Ｃ−７３まわりの領域に生じていた。（１）のＣ−７３でのオキシメチンは、（４）ではメチレンで置換されているのは明白であった。Ｈ−５３（δ５．４２）及びＮＨ−５７（δ７．６２）からＣ−５５（δ７８．２）までで観察されたＨＭＢＣ相関によって、（４）におけるＣ−５５オキシメチン基の存在が確認され、一方、Ｈ−５５（δ３．３６）からＣ−７３（δ４０．３）までのＨＭＢＣ相関によって、新規メチレン基の位置が確立された。δ４０．３の炭素は２個の結合したプロトンを有することがＤＥＰＴ実験で確認され、Ｈ−５６（δ４．０７）からＨ２−７３プロトン（δ１．４６及び１．５４）の重度に重複した領域までのＣＯＳＹ相関は、Ｃ−７３でのメチレンの存在と一致した。ジアゾメタンによる（４）の処理により、ビスメチルエステル誘導体（ＭＮａ＋，ｍ／ｚ１６２２．９）（図１Ａ，化合物（５））が得られ、（４）を用いた２−Ｄ　ＮＭＲ実験の包括的セットからのデータによって、（１）と（４）との唯一の差異はＣ−７３のところであることが立証された。
【０１５３】
【表５】
2004504399.tif 000017
【０１５４】
ａ　５００ＭＨｚ及び１２５ＭＨｚでそれぞれ得られた１Ｈ及び１３Ｃスペクトル（ＤＭＦ−ｄ７）。
ｂ　ＤＥＰＴパルスシークエンスから推察された多重度。
【０１５５】
実施例７
本実施例は、本発明の代表的化合物の獲得方法を示す。
実施例６で記載したものと同様の方法で、Ｉｒｃｉｎｉａ種のフィリピン収集物の水抽出物（３７．５ｇ）を分画し、コンドロプシンＣ（図１Ａ，化合物（６））５ｍｇを、白色粉末として得た；［α］Ｄ＋２．７（ｃ０．３，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ（ｌｏｇ　ε）２２２（４．６６），２２８（４．６４），２６１（４．５８）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（フィルム）３５００−３２００，１７３０，１６９９，１６３０，１５４０，１２０８，１１９９，１０６８，１０２１，９５８ｃｍ−１；１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲ表６参照；ＨＲＦＡＢＭＳ（ＣｓＩドープ）観察［Ｍ＋Ｃｓ］＋，ｍ／ｚ１６４６．８１６５，Ｃ８１Ｈ１３１ＣｓＮ３Ｏ２３は１６４６．８２２４を必要とする。分子式Ｃ８１Ｈ１３１Ｎ３Ｏ２３が、ＨＲＦＡＢＭＳによって化合物（６）に関し確立された。他のコンドロプシンとのスペクトル比較を容易にするため、ＮＭＲデータセットをＤＭＦ−ｄ７とＣＤ３ＯＨで得た。これにより、コンドロプシンＣの１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲ共鳴の完全な帰属が可能となった（表６）。
【０１５６】
【表６】
2004504399.tif 000018
2004504399.tif 000019
【０１５７】
ａ　１Ｈ及び１３Ｃスペクトルは、それぞれ５００ＭＨｚ及び１２５ＭＨｚで得られた（ＣＤ３ＯＨ）。
ｂ　スペクトル比較を容易にするために、番号付けスキームは、（１）に関し最初に使用したものと同一であり、それ故、化合物（６）はＣ−６６を含まない。
ｃ　ＤＥＰＴパルスシークエンスから推察された多重度。
ｄ　ＤＭＦ−ｄ７でのみ観察された相関。
ｅ，ｆ　帰属は交換されうる。
【０１５８】
（６）の大環状環と非環式の両方の部分は、化合物（１）及び（４）に関し記録されたものと密接に対応するＮＭＲシグナルを有した。しかし、６の１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルは１個少ないカルボニル共鳴を有し、（１）と（４）で見られるＯＣＨ３基は（６）にはなかった。（６）のＣ−８０及びＣ−８１ジェムジメチル基は１対のダブレットとして出現し、各々はＣ−６５で新規なメチンプロトン（δ１．２７）とカップルしていた。ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣ相関により、この帰属が確認された。即ち、（１）及び（４）で非環式鎖の末端となるメチルエステル官能基を完全に欠いていた。（６）のＣ−７３近傍領域のスペクトルの特徴は、（４）で観察されたものと非常にマッチしていた。ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣ、ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣ実験からのデータにより、（４）で見られるように、Ｃ−７３におけるメチレン基の存在が明瞭に確立された。（６）の構造を支持する更なる証拠は、Ｈ−３４（δ５．０６）からＣ−１（δ１７２．７）までのＨＭＢＣ相関を含み、それにより、マクロライドの閉環は、Ｃ−３４酸素置換基によるエステル化により生じることが確認された。Ｈ−３２とＣ−４’エステルカルボニル間のＨＭＢＣ相関により、Ｃ−３２でのリンゴ酸残基の結合が確立された。ＮＯＥ及びカップリング定数解析は、（６）におけるオレフィン全部に関するトランス幾何と一致し、一方、一連の１，３−ジアキシアルＮＯＥ相互作用によって、テトラヒドロピラン環置換基の相対的立体化学が定められた。ジアゾメタンによる（６）の処理により、ビスメチルエステル誘導体（ＭＮａ＋，ｍ／ｚ１５６５．０）（図１Ａ，化合物（７））が生じた。
【０１５９】
実施例８
本実施例は、本発明の代表的化合物の獲得方法を示す。
実施例１に記載した凍結海綿材料のサンプルを、実施例１に記載した抽出及びクロマトグラフィー分離に供した。直線ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏグラジエントで溶出する繰返しＣ１８ＨＰＬＣにより、コンドロプシンＤ（図１Ａ，化合物（８））合計３．５ｍｇを得た。コンドロプシンＤの最終精製は、直線ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏグラジエント（３０分かけて４５：５５から１００：０へ）を用いてＣ１８逆相ＨＰＬＣ（Ｄｙｎａｍａｘ　ＯＤＳ，１０×２５０ｍｍ，８μｍ；流速３ｍＬ／分）によって達成された。コンドロプシンＤ合計３．５ｍｇ（０．００１％湿重量）は、白色ゴムとして得られた，［α］２７Ｄ−５．０°（ｃ０．０６，ＭｅＯＨ）；ＵＶ［ＭｅＯＨ］λｍａｘ（ｌｏｇ　ε）２２５（４．１８），２６２（４．０１）ｎｍ；ＩＲ　υｍａｘ（ＫＢｒ）３５００−３３００，１６８０，１６１０，１５３２，１２００，１１８０ｃｍ−１；１Ｈ及び１３Ｃ　ＮＭＲデータは表７参照；ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋ｍ／ｚ１６１０．９；ＨＲＦＡＢＭＳ　ＣｓＩドープサンプル，（Ｍ−Ｈ＋２Ｃｓ）＋ｍ／ｚ１８５２．７２８３，Ｃ８３Ｈｌ３２Ｎ３Ｏ２６Ｃｓ２についての計算値１７２０．８２３２。
【０１６０】
コンドロプシンＤの分子式は、ＨＲＦＡＢＭＳによってＣ８３Ｈ１３３Ｎ３Ｏ２６として確立され、それは、コンドロプシンＡと異性体であることを示した。コンドロプシンＤ及びＡに関し記録されたＩＲ及びＵＶスペクトルは、実質的に同一であった。コンドロプシンＤの１−Ｄ及び２−Ｄ　ＮＭＲデータの包括的セットを集め、解析した。コンドロプシンＤの１Ｈ及び１３Ｃ共鳴の完全な帰属は、表７に示されている（ＤＭＦ−ｄ７）。コンドロプシンＡとＤとの唯一の明白な構造的差異は、大環中のエステル結合の位置であった。コンドロプシンＡにおいて、Ｃ−１カルボニルとＣ−３４上の酸素との間にエステル結合が形成された。コンドロプシンＤにおけるＨ−３４共鳴は、δ３．６６に高磁場シフトしたが（コンドロプシンＡでのδ５．１１に対し）、それは、Ｃ−３４は、今やヒドロキシル基によって置換されていることを示唆した。更に、コンドロプシンＤのＨ−６７は、δ５．０３へ脱遮蔽され（コンドロプシンＡのδ３．７８に対し）、それは、この位置でのエステル結合と一致した。
【０１６１】
【表７】
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【０１６２】
ａ　ＤＥＰＴパルスシークエンスから推察される多重度。
ｂ　ビスメチルエステルで見られるＨＭＢＣ相関に基づく帰属。
ｃ，ｄ，ｅ　帰属は交換されうる。
【０１６３】
実施例９
本実施例は、本発明の代表的化合物の獲得方法を示し、このようにして得られた化合物の細胞毒性を示す。
ピリジン−ｄ５中のコンドロプシンＡの２．０ｍｇ溶液を室温に保ち、１Ｈ　ＮＭＲスペクトルを周期的に得た。１日以内に、新たな１Ｈ共鳴が観察され、これらのシグナルは、時間をかけて徐々に増大した。７日後、ピリジンを減圧除去し、残渣を、上述のように、ＨＰＬＣにより精製し、ＦＡＢＭＳ、ＨＰＬＣ保持時間、１Ｈ　ＮＭＲ及びＨＳＱＣデータによって、コンドロプシンＤと同一である化合物０．６ｍｇを得た。即ち、エステルがＯ−３４からＯ−６７に移動する、塩基触媒エステル転移反応を介し、コンドロプシンＤは、コンドロプシンＡから調製できる。コンドロプシンＡのジメチルエステル（図１Ａ，化合物（３））の、対応する塩基触媒エステル転移反応（それは、コンドロプシンＤのジメチルエステル（図１Ａ，化合物（９））を生成する）の生成物のスペクトル解析によって、コンドロプシンＤのキャラクタリゼーションは容易になった。コンドロプシンＤは、２日間のインビトロアッセイにおいてメラノーマ（ＬＯＸ）及び白血病（ＭＯＬＴ−４）ヒト腫瘍細胞系列に対し、細胞毒性活性について評価を行った。その手順は、Ｂｏｋｅｓｃｈら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，６２，６３３−６３５（１９９９）に記載されている。コンドロプシンＤは、ＬＯＸ及びＭＯＬＴ−４細胞系列に対し、それぞれ約１０ｎｇ／ｍＬ及び２５０ｎｇ／ｍＬのＩＣ５０を示した。
【０１６４】
実施例１０
本実施例は、本発明の代表的化合物の獲得方法を示す。
ＭｅＯＨ１．０ｍＬ中のコンドロプシンＤ０．２ｍｇの溶液を、室温で、ジエチルエーテル（３．０ｍＬ）中過剰のＣＨ２Ｎ２で処理した。Ｎ２流下、溶媒を除去し、残渣をＭｅＯＨに溶解し、Ｃ１８ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含むＨ２Ｏ中、４５−１００％ＣＨ３ＣＮの直線グラジエントで溶出）で精製し、メチル化誘導体（図１Ａ，化合物（９））０．１ｍｇを得た。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）データは表８参照；ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋ｍ／ｚ１６３８．９，Ｃ８５Ｈ１３７Ｎ３Ｏ２６Ｎａに適切。
【０１６５】
【表８】
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【０１６６】
ａ　プロトン化炭素のみが、ＨＳＱＣ実験から帰属できた。
【０１６７】
実施例１１
本実施例は、本発明の代表的化合物の獲得方法を示す。
ピリジン−ｄ５中のコンドロプシンＡジメチルエステル２．０ｍｇ溶液を、実施例９に記載のように処理し、コンドロプシンＤジメチルエステル０．８ｍｇを得た。ＦＡＢＭＳ、ＨＰＬＣ保持時間及び共注入、並びに１Ｈ　ＮＭＲデータは、実施例１０で得た生成物によって示されるものと同一であった。
【０１６８】
本明細書で引用した刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、各参考文献が引用により含まれるように個々に、及び具体的に示され、本明細書にその全体が記載されているかと同程度まで、引用により本明細書に含まれるものである。
【０１６９】
本発明の説明の文脈において（特に、以下のクレームの文脈において）、用語“ａ”及び“ａｎ”及び“ｔｈｅ”及び同様の指示語の使用は、本明細書で違うように記載されるか、又は文脈によって明確に矛盾しなければ、単数と複数の両方を包含するように解釈されるべきである。本明細書の値の範囲の列挙は、本明細書で違うように記載されていなければ、その範囲内の各々別々の値へ個々に言及することの略記方法として役立つことが単に意図され、各々別々の値は、それが本明細書に個々に記載されているかのように本明細書に含まれるものである。本明細書で記載される方法の全ては、本明細書で違うように記載されるか、又は文脈によって明確に矛盾しなければ、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書で提供される任意の、及び全ての例、又は例示的言葉（例えば、“などの”）の使用は、本発明をより良く明瞭にすることが単に意図され、違うようにクレームされていなければ、本発明の範囲を制限するものではない。本明細書の如何なる言葉も、本発明の実施に必須なクレームされていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。
【０１７０】
本発明を実施するのに本発明者らが知っている最良の形態を含む、本発明の好適な実施態様を本明細書で記載する。勿論、上記説明を読むと、それらの好適な実施態様の変形が当業者に明白となろう。本発明者らは、当業者が適宜このような変形を用いることを期待し、本発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載されたものとは異なるように実施されることを予期する。それ故、本発明は、適用法によって許されるように、本明細書に添えられたクレームに記載の主題の全ての改変物及び均等物を含むものである。更に、本明細書で違うように示されていないか、又は文脈によって違うように明瞭に矛盾しなければ、その全ての可能な変形中の上記要素の任意の組合わせは本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１Ａは、コンドロプシンＡ（１）、コンドロプシンＢ（２）、コンドロプシンＡのメチル化誘導体（３）、コンドロプシンＡのデオキシ誘導体（４）；デオキシコンドロプシンＡのメチル化誘導体（５）；コンドロプシンＣ（６）；及びコンドロプシンＣのメチル化誘導体（７）の構造を示す。
図１Ｂは、コンドロプシンＤ（８）及びそのメチル化アナログ（９）の構造を示す。
【図２】図２は、コンドロプシンＡにおけるキーＮＯＥＳＹ相関を示す。
【図３】図３Ａは、国立ガン研究所（ＮＣＩ）６０細胞系列スクリーニングにおけるコンドロプシンＡのＧＩ５０に基づく平均−グラフ「フィンガープリント」を示す。　図３Ｂは、ＮＣＩ６０細胞系列スクリーニングにおけるコンドロプシンＡのＴＧＩに基づく平均−グラフ「フィンガープリント」を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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