(57)【要約】本発明は、（ａ）性来的に表面荷電されるか、又は反対荷電される材料へのそのポテンシャル静電引力を生じ得る材料からなるコア、（ｂ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマーを含んでなる薄い包囲層のマトリックス、及び該コア粒子を不可逆的に且つ個々にコートする任意成分の超微粒子を含んでなる、安定なコーティングされた粒子に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コーティングされた粒子であって、（ａ）性来的に表面荷電されるか、又は反対荷電される材料へのそのポテンシャル静電引力を生じ得る材料からなるコア、（ｂ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマーを含んでなる薄い包囲層のマトリックス、及び任意成分として（ｃ）該コア粒子を不可逆的に且つ個々にコートする超微粒子を含んでなることにより特徴づけられる、コーティングされた粒子。
【請求項２】
該コア材料が多角体病ウイルスであることにより特徴づけられる、請求項１によるコーティングされた粒子。
【請求項３】
該多角体病ウイルスがバキュロウイルスであることにより特徴づけられる、請求項２によるコーティングされた粒子。
【請求項４】
該バキュロウイスルがバキュロウイルス・アンチカルシア（Ｂ．ａｎｔｉｃａｒｓｉａ）であることにより特徴づけられる、請求項３によるコーティングされた粒子。
【請求項５】
ポリスチレン硫酸ラテックスを１０２〜３×１０３のラテックス粒子／多角体状粒子の割合で含んでなる該薄い包囲層のマトリックスにより特徴づけられる、請求項３によるコーティングされた粒子。
【請求項６】
硫酸ポリスチレンラテックスを１０２〜３×１０３のラテックス粒子／多角体状粒子の割合で含んでなる該薄い包囲層のマトリックスにより特徴づけられる、請求項３によるコーティングされた粒子。
【請求項７】
コーティングされた粒子の製造方法であって、
ａ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマー、並びに場合により超微粒子を、適切な濃度で水中に懸濁する工程；
ｂ）工程ａ）の該水性懸濁液のｐＨ条件を４より低い値に調節する工程；
ｃ）性来的に表面荷電されるか、又は反対荷電された材料へのそのポテンシャル静電引力を生じ得る材料からなるコーティングされる粒子を適切な濃度で水中に懸濁し、そして、該得られた懸濁液のｐＨ条件を４よりも低い値に調節する工程；
ｄ）工程ｂ）の該懸濁液を工程ｃ）の該懸濁液に加え、そして、該得られた混合物を、該粒子の完全なコーティングを得るのに足りる時間緩やかに攪拌する工程；
ｅ）工程ｄ）の該懸濁液のｐＨを５〜７に調節して、該コーティングされた粒子のほぼ中性の懸濁液を得る工程；及び
ｆ）場合により、該水性懸濁液から不可逆的にコーティングされた粒子を回収する工程
を含んでなることにより特徴づけられる方法。
【請求項８】
工程ａ）に使用される該ポリマーとして、ポリスチレン硫酸ラテックスを含んでなることにより特徴づけられる、請求項７による方法。
【請求項９】
工程ｃ）のコーティングされる該粒子が多角体病ウイルス粒子であることにより特徴づけられる、請求項７による方法。
【請求項１０】
該多角体病ウイルスがバキュロウイルスであることにより特徴づけられる、請求項７による方法。
【請求項１１】
該バキュロウイルスがバキュロウイルス・アンチカルシアであることにより特徴づけられる、請求項１０による方法。
【請求項１２】
工程ｂ）及びｃ）の該懸濁液のｐＨが３．０に調節されることにより特徴づけられる、請求項７による方法。
【請求項１３】
１０２〜３×１０３のラテックス粒子／多角体状粒子の割合により特徴づけられる、請求項７による方法。
【請求項１４】
１０１１〜１０１２ラテックス粒子／ｍｌである該ポリマー濃度により特徴づけられる、請求項１３による方法。
【請求項１５】
該コア材料の濃度が１０８〜１０９ラテックス粒子／ｍｌであることにより特徴づけられる、請求項１３による方法。
【請求項１６】
固体形態中に、請求項２の多角体病ウイルス、及び適合性成分を含んでなることにより特徴づけられる農薬組成物。
【請求項１７】
該多角体病ウイルスがバキュロウイルスであることにより特徴づけられる、請求項１６による農薬組成物。
【請求項１８】
該バキュロウイルスがバキュロウイルス・アンチカルシアであることにより特徴づけられる、請求項１７による農薬組成物。
【請求項１９】
該固体形態が、錠剤、顆粒、又は乾燥粉末であることにより特徴づけられる、請求項１６による農薬組成物。
【請求項２０】
水性懸濁液形態中に、請求項２の多角体病ウイルス、及び適合性成分を含んでなることにより特徴づけられる農薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ウイルス；微生物；タンパク質；タンパク質凝集体；核酸；化学物質等のような固体状粒子をコアとして含有するコーティングされた材料の製造であって、前記コア材料の安定性及び／又は生物活性を高める目的で、性来的に荷電される表面を有するか又は反対荷電された材料へのそれらのポテンシャル静電引力を生じ得る固体状粒子を含有する材料の製造に関する。本発明のコーティングされた材料の具体例は、農薬として使用されるコーティングされたバキュロウイルスである。
【０００２】
【発明の背景】
化学物質、ウイルス、タンパク質、タンパク質凝集体、核酸等のような粒子の安定性及び／又は生物活性は、ｐＨ、太陽光等のような環境ファクターによりしばしば影響を受ける。コーティング法が、この問題を解決するのに提案されてきた。
カプセル封入は、ポリマー、生体高分子、ワックス、樹脂、又は金属物質の薄いフィルムをコア上へ堆積させてマイクロカプセルを生成させるコーティング法である。この種のコーティングは、診断薬、医薬、除草剤、農薬、殺虫剤等として有用な複合体生成物を得るために、壁膜によってコア材料をその周囲から保護するのに、そのコア材料（活性物質）が放出される時間、場所又は速度をコントロールするのに、又は前記コア材料をラベルするのにさえ使用される。
したがって、コーティングされた粒子は、テンプレートコアの特性とは有意に異なる特性をしばしば示すので、科学的及び技術的観点の双方から魅力的である。
【０００３】
最も一般的なカプセル封入法の一つは、“複合コアセルベーション”である。この方法では、互いに反対電荷を有するゼラチン及びアニオン性ポリマーのような２種のコロイド物質をコア含有懸濁液に加えて水性ゾルを形成し、次いで、その水性ゾルをｐＨ調節するか、又は油状コア材料の微小液滴粒子へコアセルベートの壁を形成するように他のやり方で処理する。更なる工程において、微小液滴粒子をゲル化し、そして、コアセルベートを硬化剤で固めてマイクロカプセルを形成する。ＵＳ ５，０２３，０２４は、この技術に基づく方法を記載しており、そこでは、架橋をゼラチンのポリマー分子間に生じさせてマイクロカプセルを硬化させる。この文献では、ゼラチンの混合物及び適するアニオン性ポリマーを温水で希釈した後、酢酸のような酸性水溶液の添加を行って、その系のｐＨを、ゼラチンの等電点又はそれを下回るまで、すなわち４．０〜５．０間で変動する値まで低下させて、ポリマーとゼラチンとの間で化学反応を起させることが言及される。この方法は、ｐＨ調節を、コアセルベートの壁に硬度を与えるのに使用するものである。
【０００４】
ＦＲ ２ ６７５ ３８９は、太陽光防護マイクロカプセルに関係するもので、これもコアセルベーションと呼ばれる物理化学現象を使用する。その方法は、（ｉ）ポリマーコロイド溶液及びカプセル封入される物質の分散液の調製、（ｉｉ）ｐＨ値を変動させることによる３相系の形成での分離相の調製（コアセルベーション）、そして、それゆえに（ｉｉｉ）その分散物質のカプセル封入を含んでなる。その方法に使用されるｐＨ値は、３〜７、好ましくは４〜５である。この方法では、ｐＨ調節は、分離相がコーティングされた粒子（コアセルベート）を回収することを可能にする。
【０００５】
ＥＰ ９７２５６３は、粒子を、反対荷電されたナノ粒子と高分子電解質との交互層でコーティングすることによりコーティングされたカプセル及び中空シェルを製造する方法を記載する。その多層フィルム構築のための推進力は、主として、堆積された荷電種間の静電引力及び複合体の形成に起因するとされている。その方法は、テンプレート粒子を、ナノ粒子とイオン的解離性の基を有する高分子電解質との交互のコーティングでコーティングすることを含んでなり、そのイオン的解離性基は、例えば（ｉ）ポリビニル若しくはポリスチレンリン酸、ポリビニル若しくはポリスチレン硫酸、ポリビニル若しくはポリスチレンスルホン酸、ポリビニル若しくはポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩のような多価酸、又は（ｉｉ）ポリアミン若しくはポリ（アンモニウム塩）のような多価塩基である。テンプレート粒子の例は、有機粒子、無機粒子、生物学的検体、又はそれらの組合せである。その水性分散液のｐＨは、各交互層中の分子、例えば高分子電解質分子及びナノ粒子中の分子が、各々に反対の総電荷を有するようなやり方で調節される。ＥＰ ９７２５６３では、中空シェルの形成は、透過性壁としてのシェルの使用に特別重要である態様を表すと強調されている。更に、そのシェルの透過特性は、コアを分解するための条件を選択することにより、例えば、か焼操作における温度及び加熱条件を選択することにより改変し得るとされる。その実施例は、交互ＳｉＯ２−ポリ（ジアリルジメチルアンモニウム塩化物）（ＰＤＡＤＭＡＣ）多層の調製に向けられており、そして、その吸着溶液がＮａＣｌを含有する場合にはより多くのＳｉＯ２が吸着されるという事実、及びそのＳｉＯ２粒子の等電点は３であるから、ＳｉＯ２はその吸着の条件（ｐＨ５〜６）で負に荷電するという事実に論及している。
【０００６】
ＵＳ ５，７９２，９０３は、キトサン、つまり生物適合性で且つ生分解性の天然ポリマーを放射性核種でラベルすることにより形成される放射性キトサン複合体、キトサン複合体を粒子にすることにより形成される放射性キトサンマクロ凝集体、並びに放射性キトサン複合体を製造するためのキット、それらの製造方法、及び体内放射性治療薬のためのそれらの使用に関する。クレーム１の体内放射性治療用組成物を製造する方法は、（ａ）核反応器内において水溶性で安定な放射性核化合物をニュートロンで照射して、その水溶性で安定な放射性核化合物を活性な放射性核化合物に変換し；（ｂ）その活性な放射性核化合物を水中に溶解させて溶液を形成し；（ｃ）キトサンを酸性溶液（ｐＨ２〜４）中に溶解させてキトサン溶液を形成し；そして（ｄ）その活性な放射性核種化合物溶液をそのキトサン溶液に加えて、体内放射性治療用組成物を形成することを含んでなる。したがって、その治療用組成物の製造は、ポリマー材料（キトサン）の溶解性、キトサンの良好な生物適合特性と生分解特性、及び、放射性核化合物とキトサンとの間に起こる結合反応に基づくものである。その溶液のｐＨがほぼ中性値（生理学的条件）に調節されると、放射性核化合物コーティングではなく、ゲル状放射性キトサン複合体マクロ凝集体形成が存在するだけであることが強調されなければならない。
【０００７】
ＵＳ ５，９６５，１２３は、紫外線への曝露後にそれらの元来の活性の有意な量が維持されるコーティングされた農薬物質に関する。その方法は、（ａ）ｐＨ依存性ポリマーの水性混合物を調製する工程；（ｂ）工程（ａ）の混合物のｐＨを塩基でｐＨ依存性ポリマーの可溶化ｐＨを超えるｐＨに調節することによりｐＨ依存性ポリマーを溶解させる工程；（ｃ）農薬物質、紫外線防護物質、必要であればスチルベン化合物、任意成分の崩壊物質、及び任意成分の滑剤を工程（ｂ）の溶液に加えてブレンドし、溶解したｐＨ依存性ポリマーを含有する均質懸濁液を生成する工程；（ｄ）工程（ｃ）の均質懸濁液を乾燥させる工程；そして、必要であれば（ｅ）工程（ｄ）の乾燥材料を粉砕する工程を含んでなる。農薬物質は、ウイルス病原体、細菌病原体、及び真菌病原体のような殺虫性病原体である。ウイルス病原体は、マイマイガ核多角体病ウイルス（ｇｙｐｓｙ ｍｏｔｈ ＮＰＶ）、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス、Ｄｏｕｇｌａｓ ｆｉｒ ｔｏｓｓｏｃｋ ｍｏｔｈ核多角体病ウイルス、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｐｉｎｅ ｓａｗ ｆｌｙ核多角体病ウイルス、及びＨｅｌｌｉｏｔｈｉｓ ｘｅａ核多角体病ウイルスである。ｐＨ依存性ポリマーは、メタクリル酸とメチルメタクリルのコポリマー、マレイン酸無水物とスチレンのコポリマーからなる群から選択される。クレーム２は、工程（ｂ）においてｐＨ調節が８．５〜１０でなされることを規定している。
【０００８】
Ｉｇｎｏｆｆｏら（Ｉｇｎｏｆｏ， Ｃ．Ｍ． ａｎｄ Ｂａｔｚｅｒ， Ｆ． １９７１．“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｕｎｌｉｇｈｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｎ ｉｎｓｅｃｔ ｖｉｒｕｓ”． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇ ６４： ８５０−８５３）も、人工及び自然太陽光への曝露により引き起こされるマイクロカプセル封入Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ核多角体病ウイルスの不活性化を研究した。著者らは、（１）ウイルス＋炭素；（２）ウイルス＋バッファローブラック（Ｂｕｆｆａｌｏ Ｂｌａｃｋ）＋オイル；及び（３）ウイルス＋アルミニウム粉末のマイクロカプセルを比較して、カプセル封入されたウイルス＋炭素が、ウイルス単独よりも３．６倍安定であり、且つウイルス＋ＵＶ防護物質の他の組合せよりも１．３〜２．２倍安定であることを結論づけた。
事実、畑地に適用されるウイルス性及び他の微生物性殺虫剤の太陽光ＵＶ（ＳＵＶ）不活性化は、多くの農業問題を解決することを目指した研究対象となっている。これらタイプの微生物性殺虫剤の安定性に影響を与える要因に関する研究例は、Ｉｇｎｏｆｆｏ，Ｃ．Ｍ． ａｎｄ Ｇａｒｃｉａ，Ｃ． １９９４．“Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｂｙ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｓｕｎｌｉｇｈｔ−ＵＶ”Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｔｏｒｎｏ１ｇｙ． ２３（４）： １０２５−１０２９； Ｔｅａｋｌｅ，Ｒ．Ｅ． １９９５．”Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｓ ｂｉｏｉｎｓｅｔｉｃｉｄｅｓ”． Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ−Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ． Ａｕｓｔｒａｌｉａ． ５（６）： ３４５−３４７；Ｉｇｎｏｆｆｏ，ＣＭ， Ｈｏｓｔｅｔｔｅｒ，Ｄ．Ｌ． ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｂ． １９７６．”Ｇｕｓｔａｔｏｒｙ ｓｔｉｍｕｌａｎｔ，ｓｕｎｌｉｇｈｔ ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ，ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ ｒｅｔａｒｄａｎｔ： Ｔｈｒｅｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ａ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ”． Ｊ． Ｅｃｏｎ． Ｅｎｔｏｍｏｌ． ６９（２）： ２０７−２１０； Ｉｇｎｏｆｆｏ，ＣＭ， Ｈｏｓｔｅｔｔｅｒ，Ｄ．Ｌ．， Ｓｉｋｏｒｏｗｓｋｉ，Ｐ．Ｐ．， Ｓｕｔｔｅｒ，Ｇ． ａｎｄ Ｂｒｏｏｋｓ，Ｗ．Ｍ． １９７７．”１ｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｅｎｔｏｒｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｖｉｒｕｓｅｓ， ａ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ， ｆｕｎｇｕｓ， ａｎｄ ｐｒｏｔｏｚｏａｎ ｂｙ ａｎ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｌｉｇｈｔ ｓｏｕｒｃｅ”． Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ． ６（３）： ４１１−４１５； Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｍ． １９８５．”Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ Ｂ ｖｉｔａｎ−ｆｉｎｓ ａｓ ＵＶ ｓｃｒｅｅｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｙｐｓｙ ｍｏｔｈ （Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ： Ｌｙｍａｎｔｒｉｉｄａｅ） ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ”． Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｔｏｒｎｏｌｏｇｙ． １４（６）： ７０５−７０８； Ｉｇｎｏｆｆｏ，Ｃ．Ｍ． ａｎｄ Ｇａｒｃｉａ，Ｃ． １９９５．”Ａｒｏｍａｔｉｃｌｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｓｕｎｌｉｇｈｔ−ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨｅｌｉｏｔｈｉｓｌＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ”． Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ． ２４（２）： ４８０−４８２； Ｉｇｎｏｆｆｏ，Ｃ．Ｍ． ａｎｄ Ｇａｒｃｉａ，Ｃ． １９９２．”Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｓｕｎｌｉｇｈｔ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ （Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ： Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ） ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ”． Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ． ２１（ｌ）： ２１０−２１３． Ｂｕｌｌ，Ｄ．Ｌ． １９７８．”Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ： ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄｊｕｖａｎｔｓ”． Ｍｉｓｅ．Ｐｕｂｌ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．Ｓｏｃ．Ａｍ． １０（５）： １１−２０である。
【０００９】
特に関心を引く研究は、ＳｈａｐｉｒｏとＡｒｇａｕｅｒにより行われた（Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｍ． ａｎｄ Ａｒｇａｕｅｒ，Ｒ． １９９５．“Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ， ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｏｐｔｉｃａｌ ｂｒｉｇｈｔｅｎｅｒ ａｓ ａ ｖｉｒａｌ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｙｐｓｙ ｍｏｔｈ （Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ： Ｌｙｍａｎｔｒｉｉｄａｅ） ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ”． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ． ８８（６）： １６０２−１６０６）。それら結果においては、ＬｄＮＰＶ（Ｌｙｍａｎｔｉａ ｄｉｓｐａｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ）及びｐＨ緩衝液（３．０〜１０．０で変動する）を使用する別研究において、ウイルス活性は、これらｐＨで影響されなかったとされている。
生物学的殺虫剤への破壊的紫外光効果についてもう一つの関心のある研究は、ＷＯ ８９／１５１８３により示される。この文献は、これら殺虫剤を、実質的コーティングを得るのに足りる量の耐久性のあるＴｉＯ２の粒子、つまり改変された形態のＴｉＯ２でコーティングする方法を記載する。好ましい態様において、中性ｐＨ（典型的には５．５〜８．０）で行われるバキュロウイルスの攪拌水性スラリーへの耐久性のあるＴｉＯ２の水性スラリーの添加、或いはそのＴｉＯ２スラリーへのそのウイルスの水性分散液の添加で、ＴｉＯ２とバキュロウイルスが共沈するとされる。しかし、この方法は、耐久性のあるコーティングを提供しない。
この種の挙動は、ＬｅｓｓａとＭｅｄｕｇｎｏによっても観察された（Ｌｅｓｓａ，Ｍ．Ｍ． ａｎｄ Ｍｅｄｕｇｎｏ，Ｃ．Ｃ． ２０００．“Ｈｅｔｅｒｏｆｌｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｄｉｎｅ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｌａｔｅｘ ａｎｄ Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ． ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｓｕｎｌｉｇｈｔ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｌｌｏｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２２５： ３１７−３２２）。その著者らは、その方法に使用される粒子（アミジンポリスチレンラテックスとバキュロウイルス）間の大きなゼータ電位にもかかわらず低い親和性の等温線が観察されること、及びその多角体表面上の露出領域を走査電子顕微鏡で観察できることを見出した。この意外な挙動は、ケイ素含有物又はタンパク質のような多くのコロイド系中に存在する水和力として同定される静電引力に打ち克つことができる特別な斥力の存在によるものであった。その結果、多角体表面を十分な被覆状態に維持して、太陽光に対する良好な物理的防壁を得ることはできなかった。
【００１０】
かくして、上記の研究は、コーティング法の満足のゆく結果を得ることが簡単ではないことを示す。これに対して、この成功には、耐久性があり且つ十分な被覆に到達すること及びその結果として市販配合物中に頻繁に使用される保護物質を排除するか又は少なくともその濃度を低下させる目的でコート材料とコア表面との間に相互作用を行わせる知識が要求される。事実、有効且つ安定にコーティングされた生成物、特に生物学的農薬を探求するにおいて、コーティング−テンプレート粒子の結合を増進させることが関連することは明白である。
【００１１】
【発明の要旨】
本発明の目的は、有効なコーティング−テンプレート粒子の結合に反作用する邪魔な力を最小化又は消失させる目的で、ＰＨ条件を変えてコーティングされる粒子の表面電荷を修飾することにより、増強された粒子コーティングを提供することである。
【００１２】
本発明の第１の態様は、（ａ）性来的に表面荷電されるか、又は反対荷電される材料へのそのポテンシャル静電引力を生じ得る材料からなるコア；及び（ｂ）そのコア粒子を不可逆的に且つ個々にコートする、ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマーを含んでなる薄い包囲層のマトリックス、並びに任意成分の超微粒子を含んでなる、安定なコーティングされた粒子に関する。
本発明の第２の態様は、（ａ）性来的に表面荷電されるバキュロウイルス・アンチカルシア（Ｂ．ａｎｔｉｃａｒｓｉａ）、及び多角体病ウイルスからなる群から選択されるウイルス粒子からなるコア、（ｂ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択される約５〜３０％のポリマーを含んでなる薄い包囲層のマトリックス、及びそのコア粒子を耐久性を持つように且つ個々にコートする任意成分の超微粒子を含んでなる耐久性のあるコーティングバキュロウイルス粒子に関する。
【００１３】
第３の態様は、コーティングされた粒子の製造方法であって、（ａ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマー、並びに場合により超微粒子を、水中に適切な濃度に懸濁する工程；（ｂ）工程（ａ）の水性懸濁液のｐＨ条件を４より低い値に調節する工程；（ｃ）コーティングされる粒子を水中に適切な濃度に懸濁し、そして、得られた懸濁液のｐＨ条件を４よりも低い値に調節する工程；（ｄ）工程（ｂ）の懸濁液を工程（ｃ）の懸濁液に加え、そして、得られた混合物を、コア粒子の完全なコーティングを得るのに足りる時間緩やかに攪拌する工程；（ｅ）工程（ｄ）の懸濁液のｐＨを５〜７に調節して、コーティングされた粒子の中性懸濁液を得る工程；及び（ｆ）場合により、その水性懸濁液から不可逆的にコーティングされた粒子を回収する工程を含んでなる製造方法である。
本発明の第４の態様は、上で記載された方法により得られる不可逆的にコーティングされたバキュロウイルス、特にバキュロウイルス・アンチカルシアを含有する組成物に関する。これら組成物の物理的形態は、顆粒、錠剤、乾燥粉末、又はそれらに類したものであることができる。
【００１４】
【発明の詳しい記載】
コーティングされた製品の工業用製造方法の多くは、反対荷電させられたコロイド粒子間の静電的相互作用に基づくものである。しかし、凝集体、複合体等のような物質の状態及び構造の最終的な物理化学的平衡状態は異なっており、関与する化学的、生化学的及び生物学的種の特性と特質、並びにそれら相互作用条件に左右される。
反対荷電させられたコロイド粒子及び高分子相互作用は、コアセルベーションとヘテロ凝集（ｈｅｔｅｒｏｆｌｏｃｕｌａｔｉｏｎ）のように異なるメカニズム下で起きる。そのような方法において、高分子は、凝集体のコアとして、コロイド粒子を一緒に保持又は維持するネットワークを頻繁に形成する。最終凝集体のサイズと濃度の関係は、大きな凝集体としての最終凝集体安定性又は粒子沈積への決定要因である。
【００１５】
コアセルベーションとヘテロ凝集との間の主たる相違は、個々の粒子をコートする方法に関係する。一方又は他方のメカニズムの支配は、関与する種の粒度及びコア−コーティング結合に対して邪魔する力の存在に特に左右される。ヘテロ凝集では個々の粒子のコーティングは好ましく、そして、コアセルベーションとは違って、粒子の幾何学的配置は、ヘテロ凝集プロセスでは維持される。
最も受け入れられているコロイド安定性の理論、つまりＤｅｒｙａｎｇｕｉｎ、Ｌａｎｄａｕ Ｖｅｒｗｅｙ及びＯｖｅｒｂｅｅｋ（ＤＬＶＯ）理論によれば、反対荷電された２つの粒子が与えられた媒体中において相互作用する場合、凝集が起こる。粒子のサイズと数との関係が妥当であるなら、完全にコーティングされた粒子を得ることができる。
【００１６】
コロイド粒子間の相互作用は、たびたびＤＬＶＯ理論により説明され、そこでは、引力性ファンデルワールスと斥力性２重層力が中心的な役割を果たす（Ｄｅｒｊａｇｕｉｎ，ＢＶ．ａｎｄ Ｌａｎｄａｕ，ＢＶ． １９４１． Ａｃｔａ Ｐｈｙｓ．Ｃｈｉｍ．ＬＴＲＳＳ． １４， ６３３）。この理論は、ヘテロ凝集の場合にまで拡張され（Ｄｅｒｊａｇｕｉｎ，ＢＮ．１９５４．Ｄｉｓｃｕｓｓ．Ｆａｒａｄｙ Ｓｏｃ． １８， ８５； Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，０．Ｆ． ａｎｄ Ｄｅ Ｂｒｕｙｒｔ，Ｐ．Ｌ． １９６３“Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｅ ｐａｒａｌｌｅｌ ｄｏｕｂｌｅ ｌａｙｅｒｓ”． ＭＩＴ Ｐｒｅｓｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ．ＭＡ．）、そして、実験的に試験されている（Ｉｓｌａｍ Ａ．Ｍ．， Ｃｈｏｗｄｈｒｙ，Ｂ．Ｚ． Ａｎｄ Ｓｎｏｗｄｅｎ，ＭＪ． １９９５．“Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｅ ｐａｒａｌｌｅｌ ｄｏｕｂｌｅ ｌａｙｅｒｓ”６２， １０９； Ｏｖｅｒｂｅｅｋ， Ｊ．Ｔｈ．Ｇ． １９９７．Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ． ５８，４０８）。しかしながら、多くのコロイド系は、他のタイプの相互作用を考慮しなければ深く理解できない。例えば、幾つかの生物学的表面と高分子は、高いイオン強度、つまり凝集が起きることがＤＬＶＯにより予想される状態でも水溶液中において分離されたままであることが良く知られている。
この挙動について可能な説明は、斥力の存在である。短い距離により分離される表面間に生じるそのような強い斥力は、面積力装置（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｆｏｒｃｅ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を使用して測定される（Ｐａｓｈｌｅｙ，Ｒ．Ｍ． ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌａｃｈｖｉｌｉ，Ｊ．Ｎ． １９８４ ． Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ． １０１， ５１１； Ｉｓｒａｅｌａｃｈｖｉｌｉ，Ｊ．Ｎ． １９８５．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ． ２５，７）。この力は水で湿潤している固体の低エネルギーにおいても生じるので、その斥力は、その表面から水和の水を除去するのに必要とされるエネルギーに帰することができる。これら非ＤＬＶＯ力は、構造力又は水和力として知られている。
【００１７】
本発明では、被覆プロセスは、テンプレートコアの望ましい特性を保持させつつ耐久性があり且つ十分な被覆を得る目的で、コーティング−テンプレート粒子の結合を増強するために行われ、結果的に、これら邪魔な力を最小化又は消失させる。ｐＨ条件を変えることによるコーティングされる粒子の表面電荷の修飾は、上記の力を中和することへの決定的要因である。特に多角体病ウイルスの場合、本法は、４を下回るまでｐＨを低下させることに基づくものであり、そこでは、その表面電荷が負から正に変化するので、邪魔な（主に水和）力が中和される。その多角体は疎水性を有しており、このことはＳｍａｌｌらにより最初に示された（Ｓｍａｌｌ，Ｄ．Ａ．， Ｍｏｏｒｅ，Ｎ．Ｆ． ａｎｄ Ｅｎｔｗｉｓｔｌｅ，Ｐ．Ｅ． １９８６． Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｔｏ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｓｕｒｆａｃｅｓ． Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ． ５２（ｌ）：２２０−２２３．）。その著者らは、疎水性相互作用とｐＨが反比例の関係にあること、すなわち、疎水性相互作用がｐＨを上昇させることにより低下するということも発見した
【００１８】
コーティングとコア粒子及び最終凝集体の間のサイズ及び濃度の関係も重要であるので、これらを考慮しなければならない。この発明は、テンプレート粒子よりも５〜１５倍小さい平均粒径を有する分子により構成される微細で均一な層によって個々にコーティングされた粒子を含有する小さなサイズの凝集体を提供する。そのコーティング材料の粒度は、約１０−３〜１μｍである。
そのコアテンプレートは、ウイルス；微生物；タンパク質；タンパク質凝集体；核酸；特定の構造及び形状、例えば、多角形、球形、棒形を有する化学物質であってＵＳ４８４４８９６等に言及されるもののような有機、無機、又は生物学的固体材料である。これらテンプレート粒子は、反対荷電させる材料へのそれらのポテンシャル静電引力を生じることができるか、又はその環境条件を修飾することにより変化されることができる性来の荷電表面を有する。
【００１９】
コーティングされた粒子を製造するための本発明の方法は、
（ａ）ポリビニル又はポリスチレンリン酸、ポリビニル又はポリスチレン硫酸、ポリビニル又はポリスチレンスルホン酸、ポリビニル又はポリスチレンホスホン酸、ポリアクリル酸、及びそれらのそれぞれの塩からなる群から選択されるポリマー、並びに場合により超微粒子を、水中に適切な濃度に懸濁する工程；
（ｂ）工程（ａ）の水性懸濁液のｐＨ条件を４より低い値に調節する工程；
（ｃ）コーティングされる粒子を適切な濃度まで水中に懸濁し、そして、得られた懸濁液のｐＨ条件を４よりも低い値に調節する工程；
（ｄ）工程（ｂ）の懸濁液を工程（ｃ）の懸濁液に加え、そして、得られた混合物を、その粒子の完全なコーティングを得るのに足りる時間緩やかに攪拌する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の懸濁液のｐＨを５〜７に調節して、そのコーティングされた粒子のほぼ中性の懸濁液を得る工程；及び
（ｆ）場合により、その水性懸濁液から不可逆的にコーティングされた粒子を回収する工程
を含んでなる。
【００２０】
本発明によれば、バキュロウイルスのコーティング（ＢＶ粒子サイズ約１．０μｍ）が適切な試薬濃度下で行われて、１０２〜３×１０３ラテックス粒子／多角体状粒子の割合を提供する。約１０８〜１０１２粒子／ｍｌを含有するＢＶの懸濁液と約１０１１〜１０１２粒子／ｍｌを含有するラテックス懸濁液が、上で言及されたラテックス／ウイルス割合を得るのに適切である。そのラテックス材料の粒度は１０−２〜１．０μｍである。既に言及したように、バキュロウイルスの増強されたコーティングは、水和力が中和されるところの４より低いｐＨ、好ましくはｐＨ３．０での、その表面電荷の負から正への変化に基づくものである。
そのコーティング層の任意成分として超微粒子を加えることの可能性に関して、それら超微粒子は、有機及び無機粒子、特にＳｉＯ２、ＴｉＯ２、カーボンブラック、又はそれらに類したもののような無機粒子からなる群から選択されることができる。バキュロウイルスコーティングの場合、蛍光増白剤をそのウイルスの生物活性を高めるのに使用することもできる（Ｓｈａｐｉｒｏ ＆ Ａｒｇａｕｅｒ， １９９５）。
コーティングされた粒子は、遠心分離、メンブラン法、乾燥法等のような公知の精製及び分離法を使用することにより回収されることができる。
【００２１】
本発明で達成されるコーティングされた粒子は、邪魔な力、例えば、水和力を中和することにより安定になされる上記微細で均一なコーティングによってそれらを取り巻く環境から守られるそれら粒子の安定性及び生物活性を有する。
本発明の最も好ましい態様は、バキュロウイルス・アンチカルシア（ＢＶ）の被覆に関する。そのバキュロウイルスは、多角体と呼ばれるタンパク質様構造中に格納された２本鎖ＤＮＡである。このウイルスは、幾つかの国における主要なダイズ食葉害虫の一つ、ハッショウマメ蛾の幼虫アンチカルシア・ゲマタリス（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ）の抑制に特異的な環境的に許容し得る殺虫剤である。しかし、紫外線太陽光は、その畑地内のウイルスの持続性に影響を与える主要な破壊要因である。したがって、太陽光に対する良好な物理的防壁が望ましい。そのような方法において、このウイルスの本発明による不可逆的コーティングは、この問題についての優れた解決を意味するもので、天候条件（雨、露等）の作用によりウイルスから頻繁に除去される市販配合物中の太陽光防護物質の量を抑えるか又は排除する。更に、それはアンチカルシア・ゲマタリスに対する有効な農薬を提供することの保証となる。
【００２２】
コーティングされた多角体病ウイルスは、水性懸濁液として畑地内に使用されることができる。最も好ましくは、その貯蔵安定性を最大化すること及びその取り扱いを容易にすることを狙って、コーティングされた多角体は、その懸濁液から回収されて乾燥され、乾燥粉末として使用されても錠剤化又は顆粒化された混合物として配合されてもよい固体材料が得られる。錠剤又は顆粒形態において、本発明のコーティングされた多角体病ウイルスは、シリカ、アタパルジャイト、カオリナイト、ベントナイト、モンモリロナイトのような公知材料と共に配合されることができる（Ｍｅｄｕｇｎｏ，Ｃ．Ｃ．， Ｆｅｒｒａｚ，Ｊ．Ｍ．Ｇ．， Ｍａｉａ，Ａ．ｄｅ ＦＩＸ ＆ Ｆｒｅｉｔａｓ，Ｃ．Ｃ．Ｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｗｅｔｔａｂｌｅ Ｐｏｗｄｅｒ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅａｒ Ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ Ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ （Ｌｅｐ．： Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ）． Ｐｅｓｔｉｃ．Ｓｃｉ． １９９７．５１， １５３−１５６を見よ）。
次の実施例は、本発明を更に説明する目的のために提供されるもので、本発明を限定するように使用されるものではない。
【００２３】
実施例１
バキュロウイルス・アンチガルシア（ＢＶ）の多角体粒子懸濁液を得る
人工餌上で２８℃で飼育されたｌｅｐｄｏｐｅｒａｎアンチカルシア・ゲンマタリスの５齢幼虫を１０７多角体／ｍｌの懸濁液で感染させた。感染の６〜１０日後、核多角体病の症候を現す幼虫を−１８℃で凍結させた。次いで、それら多角体は、ｖａｎ ｄｅｒ Ｇｅｅｓｔにより提案された方法（ｖａｎ ｄｅｒ Ｇｕｅｓｔ，　 Ｌ．Ｐ．Ｓ． Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｈｅｄｒａ． Ｊ． Ｉｎｖｅｒｔ． Ｐａｔｈｏｌ． １１：５０２．１９６８）の変法を使用して精製された。解凍した後、それら幼虫を粉末化し、合成織布を通じて篩いにかけ、そして、１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）中に１０ｇｄｍ２の濃度の固形物に希釈した。次いで、その懸濁液を５００ｘｇで遠心分離し、そして、その固形物を、蒸留脱イオン水中に再び懸濁させた。次いで、その操作を、高純度の多角体が光学顕微鏡により観察されるまで繰り返した。次いで、その濃縮された分散液を４℃で維持した。
コーティングされるバキュロウイルス（ＢＶ）の懸濁液は、その濃縮された懸濁液を１０８〜１０１２ＢＶ粒子／ｍｌの濃度に希釈することにより得た。
【００２４】
実施例２
硫酸ポリスチレンラテックス分散液を調製する
市販されている硫酸ポリスチレンラテックス原料溶液を適切な粒子濃度（１０１１〜１０１２ラテックス粒子／ｍｌ）に希釈した。その懸濁液のｐＨをＨＣｌ（分析グレード）で３．０の最終値に調節した。硫酸ポリスチレンラテックスの特性を表１に記載する。
【００２５】
【表１】
2004509169.tif 000002
【００２６】
実施例３
０．０８４μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックス粒子でのバキュロウイルスのコーティング
ヘテロ凝集は、実施例１により得られた１．１×１０１０粒子／ｍｌの濃度のバキュロウイルスの希釈された懸濁液と、実施例２において得られた硫酸ポリスチレンラテックス懸濁液（０．０８４μｍの粒度）とを混合することにより達成された。それら懸濁液は、ＢＶ粒子１つ当たり１２００ラテックス粒子の比率となり完全に微細で均質な被覆を得るまでの遠心管内における軽い攪拌下で、２５℃及びｐＨ３．０で混合させた。次いで、その混合物を１０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。ｐＨ３．０では、多角体状コア粒子は正に荷電させられ、そして、硫酸ポリスチレンラテックスは負の表面電荷を有する。ヘテロ凝集によるこのコーティング法の成功は、上清の濁度を測定することにより確認された。バキュロウイルスに結合していない粒子の数を４００ｎｍで上清へなされる濁度測定により決定し、そして、その吸光度値を、ｐＨ３．０で測定されたラテックス検量曲線のそれと比較した。
並行して、ヘテロ凝集のために使用されるのと同じ濃度の０．０８４μｍラテックス粒子の懸濁液を遠心分離し、そして、ラテックス沈降についての補正ファクターを決定し、これを上清中に残るフリーラテックス粒子の数の計算に採り入れた。
図１は、粒子の高い親和性を示す。加えられるラテックス粒子／多角体状粒子の割合は１０から１６００まで変動させた。このコーティング法に関与する化学反応の安定性を確認するために、遠心分離前に混合物試料のｐＨを０．２ｍｌのＮａＯＨ０．１Ｎを加えることにより中和し、吸光度を測定した。
２サイクルの遠心分離及び脱イオン水での洗浄の後、そのヘテロ凝集化材料を乾燥させ、そして、そのコーティング効力を走査電子顕微鏡ＬＥＯ ｅｓｔｅｒｅｏｓｃａｎ ４４０から得られる顕微鏡写真により記録した。図２は、本発明のコーティング法の良好な結果を示す。
【００２７】
実施例４
０．２４９μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックスでのバキュロウイルスコーティング
実施例３において記載されるようにしてヘテロ凝集が行われた。差異は、コーティング材料の粒度に関するものである。この実施例では、硫酸ポリスチレンラテックス粒子は０．２４９μｍの粒度を有している。この後、その混合物を２０００ｒｐｍで遠心分離した。
対照実験で、実施例３と同じ条件で測定される０．２４９μｍラテックス懸濁液の吸光度が、上の条件での遠心分離の後も変化しなかったこと、及び遠心分離されたバキュロウイルス懸濁液の上清についてゼロの吸光度を測定できることが示された。
図３の等温曲線は、高い親和性結果を示す。硫酸ポリスチレンラテックスの吸着は、加えられる粒子の増加する数に伴って向上する。ラテックス粒子／多角体状粒子の割合は５〜６００であった。
実施例３におけるように、遠心分離前に、混合物試料のｐＨを０．２ｍｌのＮａＯＨ０．１Ｎにより中和し、吸光度を測定した。中和の前と後のヘテロ凝集化試料に関する上清濁度測定から得られる結果が同一であることから、本発明のコーティングの安定性が証明される。図４は、これら結果を現す走査電子顕微鏡ＬＥＯ ｅｓｔｅｒｅｏｓｃａｎ ４４０から得られた顕微鏡写真を示す。
【００２８】
実施例５
本発明のコーティング粒子及び方法とアミジンポリスチレンラテックスの粒子を使用するコーティング粒子及び方法との比較
バキュロウイルスの精製したての調製物と、アミジン（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｃｏｒｐ．から購入された）で正に荷電させられた０．１２０μｍ及び０．１７２μｍのラテックス粒子の懸濁液とを１２００粒子／多角体の濃度で２５℃で緩やかな攪拌下で混合することによりヘテロ凝集が成し遂げられた。次いで、その混合物を２０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。この条件下において、ラテックスは沈殿しないので、ＢＶに結合していない粒子の数を濁度により決定することができる。それら結果は、０．１２０μｍと０．１７２μｍ粒子のそれぞれに６４と５６％のコーティングファクターを示し、それら粒子の低い親和性を証明した。
この実験は、吸着により決まるＢＶの表面電荷を中和するのに必要なラテックス粒子の数が、粒子のサイズに左右され、且つ生物学的表面に結合したままの粒子の数よりも大きいことを証明した。事実、これら結果は、上で言及したように、その系全体に亘り作用する特別な斥力（例えば、水和力）の存在によらなければ説明できない。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、０．０８４μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックス粒子でｐＨ３．０下でコーティングされたバキュロウイルス多角体の吸着等温図を示す。ｎａｄｓ／ｎＢＶは、バキュロウイルス多角体当たりの吸着させられた硫酸ポリスチレンラテックスの数である。Ｎｅｑ／ｍｌは、平衡状態における硫酸ポリスチレンラテックス粒子の数である。
【図２】
図２は、０．０８４μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックス粒子でコーティングされたバキュロウイルス多角体のＮａＯＨでの中和後の走査電子顕微鏡写真を表す。
【図３】
図３は、０．２４９μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックス粒子でｐＨ３．０でコーティングされたバキュロウイルス多角体の吸着等温図（Ａ）、及び中和後の吸着等温図（Ｂ）を示す。ｎａｄｓ／ｎＢＶは、バキュロウイルス多角体当たりの吸着させられた硫酸ポリスチレンラテックスの数である。Ｎｅｑ／ｍｌは、平衡状態における硫酸ポリスチレンラテックス粒子の数である。
【図４】
図４は、０．２４９μｍの粒度を有する硫酸ポリスチレンラテックス粒子でｐＨ３．０でコーティングされたバキュロウイルス多角体の走査電子顕微鏡写真を表す。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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