(57)【要約】微生物培養装置およびその使用法について記載する。特許請求された装置は、上面を有する基材と、該基材の上面に装着され、かつ非吸収性の培養面を含む台座と、この基材に取り付けられ、かつ底面を備える可撓性のカバーシートであって、該カバーシートが培養面を覆うように構成されたカバーシートと、培養面およびカバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地と、を含む。水性試料は、エンドユーザーによる装備の追加または操作なしに、該特許請求された装置によって拡散されかつ閉じ込められる。
2004515236.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上面を有する基材と、
前記基材の前記上面に装着され、かつ非吸収性の培養面を含む台座と、
前記基材に取り付けられ、かつ底面を備える可撓性のカバーシートと、
前記培養面および前記カバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地と、
を含む微生物培養装置。
【請求項２】
前記培地が、冷水可溶性ゲル化剤、１または複数種の栄養分、あるいはそれらの組合せを含む、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記基材が可撓性のシートである、請求項１に記載の装置。
【請求項４】
前記基材が剛性の基板である、請求項１に記載の装置。
【請求項５】
前記カバーシートが透明である、請求項１に記載の装置。
【請求項６】
前記台座が非吸収性材料を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項７】
前記台座が、
台座基部と、
前記培養面を含む非吸収性材料の層と、
を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項８】
前記基材および前記台座が透明である、請求項１に記載の装置。
【請求項９】
前記培地が菌類の増殖を促進させるように選択される、請求項１に記載の装置。
【請求項１０】
前記培地がカビの増殖を促進させるように選択される、請求項１に記載の装置。
【請求項１１】
前記培地が細菌の増殖を促進させるように選択される、請求項１に記載の装置。
【請求項１２】
前記ゲル化剤が、グアーガム、キサンタンガム、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム、アルギン、またはそれらの組合せである、請求項１に記載の装置。
【請求項１３】
指示薬をさらに含む、請求項１に記載の装置。
【請求項１４】
前記１または複数種の栄養分の少なくとも１種が脱水される、請求項２に記載の装置。
【請求項１５】
抗生物質をさらに含む、請求項１に記載の装置。
【請求項１６】
上面を有する基材と、
前記基材の前記上面に装着され、かつ非吸収性の培養面を含む台座と、
前記基材に取り付けられ、かつ底面を備える可撓性のカバーシートと、
前記培養面および前記カバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地と、
を含む微生物培養装置を提供する工程と、
前記培養面上に試料を置く工程と、
前記カバーシートで前記試料を覆う工程と、
前記装置をインキュベートする工程と、
を含む微生物の培養方法。
【請求項１７】
前記培地が、冷水可溶性ゲル化剤、１または複数種の栄養分、あるいはそれらの組合せを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
上面を有する基材と、
前記基材の前記上面に装着され、かつ非吸収性の培養面を含む台座と、
前記基材に取り付けられ、かつ底面を備える可撓性のカバーシートと、
前記培養面および前記カバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地と、
を含む微生物培養装置を提供する工程と、
前記培養面上に試料を置く工程と、
前記カバーシートで前記試料を覆う工程と、
前記装置をインキュベートする工程と、
前記微生物を検出する工程と、
を含む微生物の検出方法。
【請求項１９】
前記培地が、冷水可溶性ゲル化剤、１または複数種の栄養分、あるいはそれらの組合せを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
培地が指示薬をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、水性試料を拡散して指定された培養面を覆うように構成された微生物増殖装置を提供する。エンドユーザーは試料の追加の装備または操作もなしに均一に拡散した試料を得ることができる。
【０００２】
発明の背景
微生物を培養するための培地は通常、特定の微生物の増殖に必要な栄養分および他の成分を含有する水溶液中に凝固剤を分散させることによって調製される。寒天などの従来の凝固剤はエンドユーザーにとってはしばしば不便であることが多い。寒天培地は一般に大量に調製され、滅菌され、次いで沸騰水中でまたは流動蒸気にさらすことによって融解される。高温の寒天は約４５℃まで注意深く冷却した後、ペトリ皿に注ぐことができる。冷却された、だがまだ液化している培地を分割し、微生物試料を含有するペトリ皿に注ぎ、その試料と混合して、凝固させる。寒天が硬化した後、皿を所定の温度で所定の時間インキュベートする。インキュベート後、各皿中で増殖したコロニーの数と種類を目視検査によって計測する。この方法で水性試料中に存在する微生物またはコロニー形成単位の数と種類を決定することができる。
【０００３】
乾燥培地装置は、Ｈａｎｓｅｎに付与された「Ｄｒｙ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉａ」の名称の米国特許第４，５６５，７８３号（‘７８３号特許）中に開示されている。‘７８３号特許の装置は、接着剤コーティングを有する底面部材と、さらにその接着剤コーティングに均一に付着した冷水可溶性の粉末のコーティングと、を備える。粉末は、ゲル化剤などの１または複数種の成分、１または複数種の栄養分、あるいはそれらの混合物を含む。好ましい実施形態は、底面部材の少なくとも一部に剥離可能に接着したカバーシートをさらに含む。
【０００４】
‘７８３号特許中に開示された装置の欠点は、底面部材上に堆積した水性試料の分散を制御することができる手段がないことである。水性試料をそれ自体でそのまま拡散させる場合、結果として不規則な形状および寸法の接種物になる恐れがある。このようなむらは、例えばゲル化剤、栄養分、阻害剤、指示薬などの培地構成成分の最適とは程遠い濃度をもたらす恐れがある。水性試料はまた、底面部材の境界を越えて広がってしまうことによって、培養液をまき散らし、収拾のつかない状態を創り出し、場合によっては作業場を汚染する恐れもある。あるいは、試料の拡散を制限するために試料拘束装置を採用することができる。この目的に好適な装置の例は、一方の面にキャビティが露出した状態のブロックを備える。水性試料は‘７８３号特許中に開示された装置の底面部材に塗布され、カバーシートが試料の上に下ろされ、試料拘束用ブロックがキャビティ側を下にしてカバーシート上に置かれる。キャビティの壁は試料が拡散することを許容する限度を画定する。装置のゲル化剤がゲル化を始めた後、試料拘束用ブロックを取り除く。この方法は多数の試料を培養する場合、膨大な試料拘束用ブロックを供給するか、または各試料がゲル化を始めるのを待ってから次の培養に進まなければならないので厄介である。
【０００５】
‘７８３号特許はまた、基材の上面に取り付けられたスペーサを採用した装置の実施形態を開示している。スペーサは、その中央に刻み込まれた孔を有し、その孔は水和の後に培地を閉じ込めるように設計される所定のサイズ、形状、および容積のウェルを形成する。しかしながら、このような試料のウェルを有する装置を用いることには欠点がある。例えば試料の体積がウェルを完全に満たすには十分でないことがあり、その結果液状試料の表面と下がったカバーシートとの間に望ましくないエアスペースが存在することになる。あるいは、試料の体積が非常に大きくて液状試料面上にカバーシートを下ろしたとき試料がウェルから溢れ出る恐れもある。試料がウェルの上端に達する場合、試料はスペーサの上面と上部シートの間の狭い間隙を通ってスペーサの表面から溢れて流れ出すことになる。
【０００６】
Ｍａｃｈらに付与された「Ａｒｔｉｃｌｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ」の名称の米国特許第６，０２２，６８２号（‘６８２特許）は、耐熱ヌクレアーゼ陽性、すなわち試料中の潜在的な毒素原性ブドウ球菌の存在を検出または確認するために円板状の物品を使用することを教示している。この物品は、ブドウ球菌の特定の株の検出のための特定の化学組成物を含有する。この物品は、予備増殖したゲルを基板とする細菌培養液中のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）などの毒素原性ブドウ球菌の存在を検出するのに特に適している。しかしながら、‘６８２特許のこの物品は、乾燥培養装置の一体部分ではなくまたはそれに取り付けられてもおらず、液状の水性試料を収容するように設計されてもおらず、かつ使用中に乾燥培養装置から取外し可能でもない。
【０００７】
エンドユーザーの追加の労力または装備を必要とせずに、ａ）試料がこぼれないように液状試料の拡散を制限し、ｂ）結果として均一な形状およびサイズの拡散試料をもたらす微生物増殖装置が必要とされている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、エンドユーザーによる追加の手間または操作もなしに水性試料を均一に、実質的に均質に、かつこぼす危険性を減らして拡散させることを容易にする微生物増殖装置を提供する。
【０００９】
本明細書全体にわたっていくつかの箇所で、実施例のリストを通して指針が示される。各例において引用されたリストは代表的なグループとしての役割のみを果たし、限定的なリストと解釈されるべきではない。
【００１０】
本発明は、上面を有する基材と、基材の上面に装着され、非吸収性の培養面を含む台座と、基材に取り付けられ、底面を備える可撓性のカバーシートと、培養面およびカバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地とを含む微生物増殖装置を提供する。
【００１１】
別の態様において本発明はまた、実質的に均一なサイズおよび形状の拡散した試料の区域を得るために平板培養ののちエンドユーザーが水性試料を操作する必要のない微生物増殖方法を提供する。
【００１２】
本発明は、上面を有する基材と、基材の上面に装着され、かつ非吸収性培養面を備える台座と、基材に取り付けられ、かつ底面を備える柔軟なカバーシートと、培養面およびカバーシートの底面から選択される１または複数の面に堆積した培地とを含む微生物増殖用の装置を提供する工程と、培養面に試料を置く工程と、カバーシートで試料を覆う工程と、装置をインキュベートする工程と、を含む、微生物の培養方法を提供する。
【００１３】
さらに別の態様において本発明は、上記微生物の培養方法が、微生物を検出する工程をさらに含む微生物の検出方法を提供する。
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明は、水性試料を拡散して指定された培養面を覆うように構成された微生物増殖装置を提供する。エンドユーザーは、試料の追加の装備または操作もなしに均一に拡散された試料を得ることができる。
【００１５】
特許請求された装置１０を添付の図面に示す。図１および２に示す装置１０は、台座２４用の支持体として働く基材１２を備える。台座２４は基材１２の上面に装着（例えば接着）してもよく、または台座２４と基材１２を単一体として成形してもよい。台座は、水性試料を収容するための非吸収性培養面３０を有する。装置はまた、基材に取り付けられた可撓性のカバーシート２２を備え、カバーシートが培養面３０を覆うことができるように構成されている。冷水可溶性培地１６を培養面３０（図２に示す）、カバーシート２２の底面（図１に示す）、またはその両方に堆積する。培地１６は冷水可溶性であり、ゲル化剤１８、１または複数種の栄養分２０、あるいはそれらの任意の組合せを含む。培地１６は、細菌、菌類、カビ、または他の微生物の増殖を促進させるように選択される１または複数種の栄養分２０を含むことができる。培地１６は、試料中で増殖した微生物を検出する助けとなる１または複数種の指示薬をさらに含むことができる。培地１６は、１または複数種の細菌、菌類、カビ、または他の微生物の増殖を阻害するために選択される１または複数種の抗生物質をさらに含むことができる。
【００１６】
基材１２は可撓性でも剛性でもよい。一実施形態において基材１２は、ポリエステル、ポリプロピレン、またはポリスチレンなどの材料からなるフィルムを備える。基材１２用の別の好適な材料には紙または厚紙があり、それらは防水性塗料で処理されているか、または処理されていなくてもよい。より広義には基材は、培地３０上の微生物の増殖を妨げない任意の剛性または可撓性材料を含むことができる。基材１２は透明でも不透明でもよい。透明な基材１２および台座２４は、その基材および台座を通して微生物のコロニーを観察することを可能にする。
【００１７】
台座２４は基材１２の上面より上に隆起し、基材１２の上面に装着される。台座２４は基材１２と別個に成形し、次いで基材の上面に取り付けることができる。このような実施形態において台座２４および基材１２は、同一または異なる材料から形成してもよい。台座２４は、例えば接着剤または機械的手段によるなど任意の適切な手段によって基材１２に取り付けることができる。あるいは、台座２４および基材１２は、単一の連続体として成形することもできる。したがって本明細書で用いられる「基材の上面に装着された」とは台座２４が基材１２に取り付けられることを意味し、それらが単一の連続体として成形されるため台座２４が基材１２に取り付けられている実施形態と、接着剤などによって台座２４が基材１２に付着されているいくつかの実施形態と、が含まれる。台座は、図１に示す円板など任意の適切な形状であることができる。台座２４の形状がどのようなものでも培養面３０は基材１２の上面とほぼ同一平面であるべきである。
【００１８】
台座２４は、水性試料がその上に堆積する非吸収性培養面３０を備える。本明細書で用いられる「非吸収性」とは、培地１６で被覆される前の、そのようなコーティングが望ましい場合の培養面３０の性質を説明している。図３に示す一実施形態において台座２４は、培養面３０が台座２４の露出した上面であるように非吸収性材料を備える。図４に示す別の実施形態において台座２４は、基板層２８および非吸収性の最上層２６を備える。一実施形態において基板層２８はポリスチレン発泡体を含む。しかしながら基板層２８は、培養面３０上の微生物の増殖を妨げない限り、吸収性または非吸収性の、剛性または可撓性の任意の適切な支持材料から作製することができる。図４に示す実施形態において培養面３０は、非吸収性の層２６を備える。非吸収性の層２６は、水性試料を吸収せずかつ微生物の増殖を妨げない任意の適切な材料を含む。非吸収性の層２６にとって好適な材料にはポリエステル、ポリプロピレン、またはポリスチレンのフィルムがある。非吸収性の層２６に関する他の適切な実施形態は、これらに限定されないがポリエチレンフィルム、感圧接着剤、ワックスコーティング、金属箔などの防水コーティングを含む。
【００１９】
特許請求された装置は、この特許請求された装置が水性試料の拡散を自己制御するように水性試料を培養することを可能にする。水性試料を培養面３０上に堆積させた後、培養面３０の縁部まで試料を均一に拡散するために試料の更なる操作は必要とされない。適正な量の水性試料を培養面３０に置き、培養面３０を完全に覆うようにカバーシート２２を下げる。カバーシート２２が下がるにつれて水性試料は培養面３０全体にわたって広がる。水性試料の縁部が培養面３０の縁部に達すると、特許請求される本発明の台座２４の形態が試料の更なる拡散を防止する。このためカバーシート２２および台座２４は共同して働き、特許請求される本発明の利益をもたらす。第一にカバーシート２２を下げることにより水性試料を培養面３０全体にわたって拡散する。第二に台座が水性試料の拡散を培養面３０の縁部に制限する。また、エンドユーザーによる水性試料の装備の追加または操作なしに試料の拡散と封じ込めが達成される。
【００２０】
台座２４は、水性試料の拡散を制限するのに十分な任意の適切な高さであることができる。同様に台座２４の直径も所望の量の水性試料を拡散させるのに十分な任意の直径であることができる。当業者ならば一部を試料の粘度、試料の量、および培地の水和などの要因に基づいて台座２４の適正な高さと直径を選択することができるはずである。培養面３０に堆積させる水性試料の量は、培養面３０全体にわたって均一に拡散するのに適切な任意の量であることができる。一実施形態において水性試料は、約１ｍＬ〜約５ｍＬの量が用いられる。当業者ならば一部を試料の粘度、台座の直径、試料中の微生物の数、およびインキュベート後の培養物の所望のコロニー密度などの要因に基づいて適正な量を選択することができるはずである。選択した水性試料の量にもよるが、接種物は培養面の縁部の周辺全体に行き渡っても、また行き渡らなくてもよい。同様に接種物も培養面３０全体を覆っても、または覆わなくてもよい。
【００２１】
カバーシート２２は任意の取付け手段を受け入れることができるが、接着剤などによって基材１２に取り付けられる。一実施形態においてカバーシート２２はポリプロピレンフィルムを含む。しかしながら特定の用途にとって望ましい特性を有する他の材料を用いることもできる。カバーシート２２は培養面３０上で増殖している微生物のコロニーを観察し、計測することを可能にするために透明であってもよい。少なくとも水性試料と接触しているカバーシート２２は非吸収性であるべきである。一実施形態においてカバーシート２２全体を不水溶性材料で作ることができる。あるいは、カバーシート２２を水溶性材料から作製し、不水溶性コーティングを含むこともできる。不水溶性のコーティングはカバーシート２２の底面全体を覆ってもよく、培養面３０に堆積した水性試料と接触する可能性のあるカバーシートの底面の区域に限定してもよい。
【００２２】
カバーシート２２は微生物に対して実質的に不透過性であるべきであり、それによって脱水した培地が輸送、貯蔵、および特許請求される本発明の使用中に汚染される恐れを制限する。これはまた、培養面３０上で増殖する微生物によって装置１０を越えて環境が汚染されるのを制限するのに役立つ。カバーシート２２はまた、水蒸気に対して実質的に不透過性であるべきであり、それによってインキュベートの間、微生物の増殖の助けとなる環境をもたらす。カバーシート２２の材料は、特定の用途にとって望ましい特性をもたらすように選択することができる。様々な用途に適切な材料の例は、米国特許第４，５６５，７８３号（Ｈａｎｓｅｎ）中に開示されている。
【００２３】
培地１６を培養面３０、カバーシート２２の底面、またはその両方に付着させる。培地は冷水可溶性であり、ゲル化剤１８、１または複数種の栄養分２０、その両方、またはそれらの任意の組合せを含む。本明細書で用いられる冷水可溶性とは、室温近くの水中で溶液を形成することができる任意の材料が含まれることを意味する。
【００２４】
培地１６に用いられる好適なゲル化剤には、室温近くの水中でゲルを形成する天然または合成のゲル化剤が含まれる。有用なゲル化剤にはグアーガム、キサンタンガム、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム、アルギン、およびそれらの組合せがあるがこれらに限定されない。所定量の水または水性試料がゲル化剤１８と接触したときゲルが形成されるように、十分な量のゲル化剤１８を培養面３０、カバーシート２２の底面、またはその両方に付着させる。好適なゲル化剤の具体的な特性は、米国特許第４，５６５，７８３号（Ｈａｎｓｅｎ）中に開示されている。
【００２５】
培地１６に使用するのに適した栄養分には、微生物の増殖を促進させる任意の物質または物質の組合せが含まれる。このような物質には、炭水化物、糖、タンパク質、アミノ酸、酵素、脂質、核酸、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、塩、およびそれらの任意の組合せが含まれるがこれらに限定されない。特定の微生物の増殖を促進させるのに役立つ栄養分の組合せはよく知られており、当業者は任意の所望の微生物または微生物の組合せを増殖させるのに適した栄養分の組合せを選択することができる。
【００２６】
装置１０に使用される好適な指示薬には、ｐＨ指示薬、代謝指示薬、およびその任意の組合せがあるがこれらに限定されない。指示薬は、色の変化、蛍光、任意の他の検出可能な効果、またはそれらの任意の組合せを引き起こすことによって装置上の微生物の存在を指示することができる。
【００２７】
装置１０はまた、細菌、菌類、カビ、または他の微生物の１または複数種の増殖を阻害するために選択される１または複数種の抗生物質を含む。本明細書で用いられる抗生物質は、それが微生物を殺すか、または微生物の増殖を遅らせ、もしくは妨げる場合、微生物を阻害するという。１または複数種の抗生物質を培養面３０、カバーシート２２の底面、またはその両方に付着させる。特定の微生物に対する抗生物質の有効性はよく知られており、当業者は個々の試験にとって望ましい微生物の増殖を可能にしながら望ましくない微生物の増殖を抑制するように抗生物質を選択することができる。
【００２８】
培地１６、１または複数種の指示薬（存在するならば）、および１または複数種の抗生物質を任意の適切な手段によって装置１０の所望の面に付着させる。培地１６を所望の面に付着させるための適切な手段には、ブイヨンのコーティングおよび接着剤の使用があるがこれらに限定されない。ブイヨンのコーティングの場合は、培地１６、１または複数種の指示薬（存在するならば）、および１または複数種の抗生物質（存在するならば）を水と混ぜ、次いで被覆すべき面に堆積する。被覆したフィルムを加熱して水を蒸発させ、その面に付着した脱水した培地のコーティングを残す。あるいは、米国特許第４，５６５，７８３号（Ｈａｎｓｅｎ）中に開示されているような接着剤を使用することによって培地を所望の面に付着させることもできる。接着剤を用いる場合、培地１６、１または複数種の指示薬（存在するならば）、および１または複数種の抗生物質を接着剤の表面に付着させてもよく、接着剤中に取り込んでもよい。
【００２９】
図１は、培地１６が接着剤１４付きのカバーシート２２の底面に付着した特許請求される本発明の実施形態を示す。この実施形態において培地１６の少なくともいくらかは、培養面３０に堆積した水または水性試料と接触することができるカバーシート２２の底面の一部に配置すべきである。図２は、培地１６が接着剤１４の付いた培養面３０に付着した特許請求される本発明の実施形態を示す。
【００３０】
別の実施形態（図示せず）には、培地１６がゲル化剤１８あるいは１または複数種の栄養分２０のいずれかを含むが両方は含まないものが挙げられる。さらに別の実施形態には、カバーシート２２の底面、培養面３０、またはその両方に付着したゲル化剤１８を有し、カバーシート２２の底面、培養面３０、またはその両方に付着した１または複数種の栄養分２０を有するあらゆる他の組合せもある。ゲル化剤１８および１または複数種の栄養分２０は、同一または異なる別の面に付着してもよい。存在する場合どのような指示薬も、培地が付着する面とは関係なくいずれの面にも付着させることができる。同様に、存在する場合抗生物質は、培地が付着する面とは関係なくいずれの面にも付着させることができる。また２種類以上の栄養分を含む実施形態において各栄養分は、培地の他の栄養分または他の構成成分が付着する面とは関係なくいずれの表面にも付着させることができる。
【００３１】
実施例
以下の実施例は、特許請求される本発明の例示として提供され、特許請求される本発明の範囲を以下に開示する特定の実施例または実施形態に限定するものと解釈されるべきではない。別段の指定がない限りすべての部および百分率は重量単位である。
【００３２】
実施例１
高い試料収容面を有する検定装置
液状試料を収容し拡散させるための高いフィルム面を有する検定装置をこの実施例に記載するように組み立てた。この検定装置は、液状試験試料中の微生物を検出し、計測するために用いることが可能である。
【００３３】
バクト（Ｂａｃｔｏ）（登録商標）トリプチックダイズブイヨン（３０ｇ、メリーランド州スパークスのベクトン・ディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ））、グアービーンガム（３．３ｇ、スイスクロイツリンガーのローディア（Ｒｈｏｄｉａ，Ｋｒｅｕｚｌｉｎｇｅｒ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））、および水（３００ｍＬ）の混合物を０．１９ｍｍ厚ポリエステルフィルム（デラウェア州ウィルミントンのデュポン（Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ））上に湿れた状態で厚さ０．２５ｍｍ（乾燥皮膜重量２０ｇ／ｍ２）にコーティングし、得られたコーティングフィルムを１００℃で加熱して水を蒸発した。ポリエステルフィルムの非コーティング側を手でポリアクリラート感圧接着剤（ＰＳＡ）（スリーエム・グレード（３Ｍ  Ｇｒａｄｅ）４６７、ミネソタ州セント・ポールのスリーエム・カンパニー（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））のシートと貼り合わせ、続いて手で０．５１ｍｍ厚ポリスチレン発泡体（ケンタッキー州バーズタウンのオーエンズ・イリノイ（Ｏｗｅｎｓ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，Ｂａｒｄｓｔｏｗｎ，ＫＹ））と貼り合わせ、続いて手でポリアクリラートＰＳＡの別のシートと貼り合わせた。得られた積層体（コーティングされた、フィルム／ＰＳＡ／発泡体／ＰＳＡ）から円柱（直径５．１ｃｍ、高さ０．７９ｍｍ）を打ち抜き、次いで０．１９ｍｍ厚ポリエステルの長方形のシート（７．６ｃｍ×１０．２ｃｍ）に付着（ＰＳＡ側を下にして）させた。ペトリフィルム（Ｐｅｔｒｉｆｉｌｍ）（登録商標）好気性計測板（ミネソタ州セント・ポールのスリーエム・カンパニー（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））の上側フィルムを両面粘着テープの助けを借りてポリエステルシートの縁に付着させた（この上側フィルムは塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）指示薬を含有する接着剤およびグアーガムを振り撒いた接着剤で接着剤コーティングされたポリプロピレンフィルムである）。
【００３４】
この検定装置を以下のように評価した。上側フィルムを持ち上げ、栄養分をコーティングした円形フィルム表面の中央に無菌の標準法緩衝液の試料１．０ｍＬをピペットで分注した。次いで上側フィルムを試料の上に近づけた。液状試料は外部圧力なしにフィルム円の縁の方へ流れ、止まった。試料はいずれも円の縁を越えて流れ出さなかった。
【００３５】
実施例２
高い試料収容面を有する検定装置
液状試料を収容し拡散させるための高いフィルム面を有する検定装置を、ポリスチレン発泡体層を用いなかったことを除いて実施例１で記載したように組み立てた。したがって得られた装置は、実施例１の高さ約０．７９ｍｍの円柱とは異なり円柱は高さ約０．２０ｍｍであった。次いで実施例２の装置に実施例１で記載した緩衝液の液状試料１．０ｍＬを接種した。次いで上側フィルムを試料の上に近づけた。液状試料は外部圧力なしにフィルムの円の縁の方へ流れた。フィルムの円の一部で液は縁を越えて流れ出し、フィルムの円の周縁の外側に小さな「ノジュール」、すなわち液状試料の一部を形成した。
【００３６】
この実施例の結果、検定装置の円柱の高さは、試料が円柱の上面の縁を越えて流れ出すことなく液状試料を保持することになる高い収容面を有することが重要なパラメータであることを示唆している。
【００３７】
実施例３
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  Ａｕｒｅｕｓ）の検出および計数
液状試料を収容し拡散させるための高いフィルム面を有する検定装置を実施例１で記載したように組み立てた。次いで実施例１で記載したように装置に純粋培養エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）〔バターフィールド・リン酸緩衝液（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ）（ニュージャージー州ハミルトンのウェーバー・サイエンティフィック（Ｗｅｂｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＮＪ））で希釈したＡＴＣＣ１１２２９〕の液状試料１．０ｍＬを接種した。実施例１と同様に液状試料はフィルムの円の縁の方へ流れ、止まった。次いで接種された検出装置を３２℃で４８時間インキュベートした後、６６ｃｆｕ／ｍＬが計測された。
【００３８】
実施例４
乳試料中の微生物の検出および計数
液状試料を収容し拡散させるための高いフィルム面を有する検定装置を実施例１で記載したように組み立てた。次いで装置に脱脂乳の試料１．０ｍＬを実施例１で記載したように接種した。実施例１と同様に液状試料はフィルムの円の縁の方へ流れ、止まった。次いで接種された検出装置を３２℃で４８時間インキュベートした後、４４ｃｆｕ／ｍＬが計測された。
【００３９】
本発明の様々な修正形態および変更形態が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく当業者には明らかになるはずである。上記の実施例は本発明の特徴、利点、および他の細部の理解を助けるために提供され、また単なる例という目的で提示される。使用された具体的な成分および量ならびに他の条件および詳細が、本発明の範囲を不当に限定するように解釈されてはならないことは特に理解されるべきである。本発明の範囲は、本明細書で冒頭に示した特許請求の範囲によってのみ限定されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施形態の平面斜視図である。
【図２】本発明の第二の実施形態の平面斜視図である。
【図３】本発明の第三の実施形態の側面図である。
【図４】本発明の第四の実施形態の側面図である。
【国際公開パンフレット】
2004515236.tif 000003
2004515236.tif 000004
2004515236.tif 000005
2004515236.tif 000006
2004515236.tif 000007
2004515236.tif 000008
2004515236.tif 000009
2004515236.tif 000010
2004515236.tif 000011
2004515236.tif 000012
2004515236.tif 000013
2004515236.tif 000014
2004515236.tif 000015
2004515236.tif 000016
2004515236.tif 000017
2004515236.tif 000018
2004515236.tif 000019
2004515236.tif 000020
2004515236.tif 000021
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004515236.tif 000022
2004515236.tif 000023
【国際調査報告】
2004515236.tif 000024
2004515236.tif 000025