(57)【要約】本発明は、ルペオールを含有するルピン種子の莢からの抽出物、より詳細には、その重量含量が３０％超、好ましくは５０％超、より一層好都合には７０〜１００％の抽出物に関する。本発明はまた、該抽出物の取得方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルペオールを含有するルピン種子の莢からの抽出物。
【請求項２】
３０重量％超、好ましくは５０重量％超のルペオール含量を有することを特徴とする、請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
７０〜１００重量％のルペオール含量を有することを特徴とする、請求項１及び２のいずれか１項に記載の抽出物。
【請求項４】
ルピンが、ルピナス・アングスチフォリウス、ルピナス・アルブス、ルピナス・ルテウス、ルピナス・ムタビリス、ルピナス・グラエカス、ルピナス・ミクランサス・グス、ルピナス・ヒスパニカス、ルピナス・ピロサス、ルピナス・コセンチニイ、ルピナス・アトランチカス、ルピナス・プリンセイ、及びルピナス・ソマリエンシスからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抽出物。
【請求項５】
ルピンが、ルピナス・アルブス、好ましくはｐａｕｐｅｒ遺伝子を有する品種Ａｒｅｓであることを特徴とする、請求項４に記載の抽出物。
【請求項６】
先行する請求項のいずれか１項に記載の抽出物を取得する方法。
【請求項７】
少なくとも以下の一連の工程：
−ルピン莢をすり砕く、
−脂肪族アルカン、芳香族アルカン、脂肪族アルコール、及びそれらのハロ誘導体からなる群から選択される有機溶媒を用いて、すり砕かれたルピン莢に含まれる全脂質を抽出する、及び
−得られた脂質を精製し、ルペオールが豊富な抽出物を得る、
を含むことを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
有機溶媒がヘキサンであることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
得られた脂質の精製が、少なくとも以下の一連の工程：
−有機溶媒の真空蒸発によって、脂質を含有する反応媒体を濃縮し、０．１〜９０重量％、好都合には１０〜３０重量％、より一層好都合には２０重量％の脂質含量を得る、及び
−結晶化、
を含むことを特徴とする、請求項７及び８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
得られた脂質の精製が、少なくとも以下の一連の工程：
−溶媒の真空蒸発、次いで、脂肪族アルコールへの溶解、
−ケン化、
−冷却による結晶化、及び
−濾過及び／又は洗浄及び／又はスピンフィルター乾燥、
を含むことを特徴とする、請求項７及び８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
得られた脂質の精製が、少なくとも以下の一連の工程：
−溶媒の真空蒸発、次いで脂肪族アルコールへの溶解、
−ケン化、
−脂肪族アルカン及びそのハロ誘導体からなる群から選択される有機溶媒を用いた、ルピン莢のケン化不能物質の液−液抽出、及び
−洗浄によるケン化不能物質の精製、次いで、溶媒の真空蒸発及び乾燥、
を含むことを特徴とする、請求項７及び８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
液−液抽出工程の有機溶媒がジクロロエタンであることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１つ以上の最終再結晶工程も含むことを特徴とする、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ルペオール（ｌｕｐｅｏｌ）含有のルピン（ｌｕｐｉｎ）種子の莢からの抽出物、特にルペオールが豊富な抽出物に関する。本発明はまた、このような抽出物の取得方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ルピンは、非常に広範に存在する植物であって、欧州、アジア、北米、南米に見られる。この植物は、エンドウマメ、ソラマメ、ダイズ、サヤインゲンの近縁種である。ルピンの幾つかの種を、最も周知のものとして挙げることができる：ルピナス・アルブス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ａｌｂｕｓ）（ホワイトルピン）、ルピナス・アングスチフォリウス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ）（ブルールピン）、ルピナス・ルテウス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ）（イエロールピン）、ルピナス・ムタビリス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｍｕｔａｂｉｌｉｓ）（パールルピン）、ルピナス・グラカス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｇｒａｃｃｕｓ）、ルピナス・ミクランサス・グス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｍｉｃｒａｎｔｈｕｓ  Ｇｕｓｓ）、ルピナス・ヒスパニカス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｈｉｓｐａｎｉｃｕｓ）、ルピナス・ピロサス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｐｉｌｏｓｕｓ）、ルピナス・コセンチニイ（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｃｏｓｅｎｔｉｎｉｉ）、ルピナス・アトランチカス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ａｔｌａｎｔｉｃｕｓ）、ルピナス・プリンセイ（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｐｒｉｎｃｅｉ）、及びルピナス・ソマリエンシス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｓｏｍａｌｉｅｎｓｉｓ）。欧州で最も一般的な種の１つは、スイートホワイトルピン（ルピナス・アルブス）、特にｐａｕｐｅｒ遺伝子を呈する品種Ａｒｅｓである。
【０００３】
ルピン種子は通常、その高い蛋白質含量の故に、肥料として、また、ヒト及び動物の食料において使用されるが、ルピン種子の莢即ち皮は、産業では極めて稀にしか使用されてこなかった。それでも、これらはルペオールが豊富な天然源である。
【０００４】
ルペオール（１）は、トリテルペンファミリー、より詳細にはトリテルペン性アルコールのファミリーに属する。
【０００５】
【化１】
2004526779.tif 000002
【０００６】
ルペオールは、その多くの生物活性故に明確な有用性がある。それは特に、抗炎症性（Ｓｉｎｇｈ  Ｓ．ら，Ｆｉｌｏｔｅｒａｐｉａ，１９９７，６８，Ｎｏ．１，９）、鎮痛性（Ｄｅ  Ｍｉｒａｎｄａ  Ａ．Ｌ．ら，Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ，２０００，６６（３），２８４）、重金属に関する腎保護作用（Ｎａｇａｒａｊ  Ｍ．ら，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０００，２０（５），４１３）、抗ヒスタミン作用（Ｄｅ  Ｍｅｄｒａｎｏ  Ｖｉｌｌａｒ  Ｍ．Ｊ．ら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９７，１９，Ｎｏ．８，５１５）、抗有糸分裂活性（Ｚａｃｈａｒｉａｈ  Ｒ．ら，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９９４，５６，Ｎｏ．４，１２９）、抗ウイルス活性（Ｋａｈｌｏｓ  Ｋ．，Ｆｉｌｏｔｅｒａｐｉａ，１９９６，６７，Ｎｏ．４，３４４）について知られている。
【０００７】
ルペオールはまた、合成中間体として、特に植物ホルモンやステロイドアナログの調製のために、使用できる。
【０００８】
ルペオールは、アロエ・ベラ（Ａｌｏｅ  ｖｅｒａ）、又はクラタエバ・ヌルバラ（Ｃｒａｔａｅｖａ  ｎｕｒｖａｌａ）樹皮などの多くの植物に存在している。それは、「ブレスク（Ｂｒｅｓｋ）」などの種々の植物から、幾つかの場合に単離された。しかし、それは、ルピン莢からは決して抽出されなかった。ルペオール含有ルピン油は、特許ＦＲ２７６２５１２でルピン種子から抽出されたが、この場合、前もって皮をむかれ、従って莢が除去された種子に油は由来し、油に含まれるルペオールは、油の全組成に対し０．５重量％の最大含量を示した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ここで、ルピン莢は、ルペオールが豊富な可能性ある供給源であり、それは安くかつそのホモログの大部分よりもずっと容易に入手できるので、ルピン種子の莢からの抽出物、特にルペオールの豊富な抽出物を単離し、このような抽出物の取得方法を開発する必要性があった。一般的なルピン、特にホワイトルピン（ルピン・アルブス）は事実、より広範には存在していないルペオールを含有する植物（アロエ・ベラやクラタエバ・ヌルバラなど）とは異なり、現代農業技術により大規模で育てられる油と蛋白質を供給する植物である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、本発明の主題は、ルペオール含有のルピン種子の莢からの抽出物である。好都合には、本発明の抽出物は、３０重量％超、好ましくは５０重量％超のルペオール含量を有する。更に一層好都合には、本発明のルピン種子の莢からの抽出物は、７０〜１００％のルペオール含量を有する。
【００１１】
本発明の目的のために、用語「ルピン種子の莢」は、種子を囲む皮を意味することを意図する。莢は、乾燥種子の平均１５重量％を占める。
【００１２】
本発明の抽出物は、種子の機械的剥皮から得られるルピン種子の莢から調製される。
【００１３】
本発明の特別の実施態様では、ルピンは、ルピナス・アングスチフォリス、ルピナス・アルブス、ルピナス・ルテウス、ルピナス・ムタビリス、ルピナス・グラエカス（ｌｕｐｉｎｕｓ  ｇｒａｅｃｕｓ）、ルピナス・ミクランサス・グス、ルピナス・ヒスパニカス、ルピナス・ピロサス、ルピナス・コセンチニイ、ルピナス・アトランチカス、ルピナス・プリンセイ、及びルピナス・ソマリエンシスからなる群から選択される。本発明によれば、ルピンは好都合には、欧州型のルピナス・アルブス（スイートホワイトルピン）、好ましくは、ｐａｕｐｅｒ遺伝子を有する品種Ａｒｅｓである。
【００１４】
本発明の主題はまた、本発明によるルピン種子の莢からの抽出物の取得方法である。
【００１５】
好都合には、本発明の方法は、少なくとも以下の一連の工程を含む：
−ルピン莢をすり砕く、
−脂肪族アルカン、芳香族アルカン、脂肪族アルコール、及びそれらのハロ誘導体からなる群から選択される有機溶媒を用いて、すり砕かれたルピン莢に含まれる全脂質を抽出する、及び
−得られた脂質を精製し、ルペオールが豊富な抽出物を得る。
【００１６】
種子から単離された莢は、シリンダー・ミル又はハンマー・ミルを用いてすり砕かれる。本発明のルペオールが豊富な抽出物の取得方法は、有機溶媒を用いた、ルピン莢に含まれる脂質の抽出に基づく。好都合には、有機溶媒はヘキサンである。精製された莢は一般的に、莢の全重量に対し０．５〜５重量％の全脂質含量を有する。
【００１７】
本発明の目的のために、用語「ルペオールが豊富な」抽出物は、３０重量％超、好都合には５０重量％超、より一層好都合には７０〜１００重量％のルペオール含量を有する抽出物を意味することを意図している。
【００１８】
本発明のルペオールが豊富な抽出物を得るための得られた脂質の精製は、下記の方法Ａ、Ｂ、Ｃによって択一的に行われる。
【００１９】
本発明のある特定の実施態様（方法Ａ）では、ルピン莢から抽出された全脂質の精製は、少なくとも以下の一連の工程を含む：
−有機溶媒の真空蒸発によって、脂質を含有する反応媒体を濃縮し、０．１〜９０重量％、好都合には１０〜３０重量％、より一層好都合には２０重量％の脂質含量を得る、及び
−結晶化。
【００２０】
本発明によれば、このようにして、ルピン莢に存在する全脂質を抽出する工程の間に得られる有機溶液から直接結晶化することによってルペオールが豊富な抽出物を直接得ることが可能である。脂質含有反応媒体の濃縮後、次いで、溶液を冷却し、ルペオールの結晶化を開始する。次いで、得られたルペオールが豊富な抽出物は、１工程以上の再結晶、特にヘキサンからの再結晶によって精製できる。
【００２１】
本発明の別の実施態様（方法Ｂ）では、ルピン莢から抽出された全脂質の精製は、少なくとも以下の一連の工程を含む：
−溶媒の真空蒸発、次いで、脂肪族アルコールへの溶解、
−ケン化、
−冷却による結晶化、及び
−濾過及び／又は洗浄及び／又はスピンフィルター乾燥。
【００２２】
本発明によれば、脂肪族アルコールは好都合にはエタノールであり、ケン化工程で使用される溶媒は好都合にはアルコール性水酸化カリウムである。ケン化後、得られた水性アルコール性溶液を、冷却による分別結晶化に供する。濾過及び／又は洗浄及び／又はスピンフィルター乾燥後、得られた固体抽出物は、少なくとも３０重量％、好都合には少なくとも５０重量％、より一層好都合には少なくとも６０重量％のルペオール含量を有しうる。次いで、得られたルペオールが豊富な抽出物は、１工程以上の再結晶、特にヘキサンからの再結晶によって精製できる。
【００２３】
本発明の別の実施態様（方法Ｃ）では、ルピン莢から抽出された全脂質の精製は、少なくとも以下の一連の工程を含む：
−溶媒の真空蒸発、次いで脂肪族アルコールへの溶解、
−ケン化、
−脂肪族アルカン及びそのハロ誘導体からなる群から選択される有機溶媒を用いた、ルピン莢脂質のケン化不能物質の液−液抽出、及び
−洗浄によるケン化不能物質の精製（好ましくは、水によって）、次いで、溶媒の真空蒸発及び乾燥。
【００２４】
本発明によれば、このようにして、ルピン莢から抽出された全脂質を含有する反応媒体をケン化し、次いで、ルピン莢脂質のケン化不能画分を抽出することによって、ルペオールが豊富な抽出物を得ることが可能である。
【００２５】
本発明の目的のために、用語「ケン化不能」は、アルカリ塩基の持続作用後、水に不溶のままでありかつ有機溶媒で抽出できる脂肪物質の画分を意味することを意図する。
【００２６】
本発明によれば、液−液抽出は、脂肪族アルカンやそのハロ誘導体などの、ケン化不能物質に関し大きな親和性を有する溶媒の存在下、パルスカウンターフローカラムで行われる。好都合には、本発明によれば、液−液抽出工程の有機溶媒はジクロロエタンである。次いで、カラム出口での有機相を、水で洗浄し、次いで真空蒸発し、残渣を乾燥する。次いで、得られたルペオールが豊富な抽出物は、１工程以上の再結晶、特にヘキサンからの再結晶によって精製できる。
【００２７】
本発明の方法の全ての工程は当業者に周知である。
【００２８】
以下の実施例は限定することなく示されるものであり、本発明を説明する。
【実施例】
【００２９】
本発明の実施の例
使用した原料は、ｐａｕｐｅｒ遺伝子を有する品種Ａｒｅｓのスイートホワイトルピン由来の種子の莢からなる。ルピン莢の全脂質含量は、１．８重量％に等しい。
【００３０】
１．全脂質の抽出：ハンマー・ミルを用いて、ルピン莢７５ｋｇをプレグラインドする。次いで、得られたすり砕かれた材料を、ＧＵＥＤＵ撹拌フィルターにロードし、ヘキサンによる８回の連続洗浄を行う（１洗浄当り使用されるヘキサン９０リットル）。抽出温度は４５℃に固定する。各洗浄は以下を含む：新鮮溶媒をフィルターに導入し、１５分間懸濁液を撹拌し、最後に、１５分間濾過して、ミセル（ｍｉｓｃｅｌｌａ）を回収する。このプロセスの最後に、脱脂されたルピン莢に、真空下、温度５０℃の熱流を送風し、ケーキから残りのミセルを抽出する。最終的に、ミセル相をプールし、次いで、１２０℃で真空下の気流注入により真空蒸発させる。１５〜３０重量％、好ましくは２０重量％の全脂質含量を有するヘキサンベースの溶液Ａを得られるように、この操作を制御する。
【００３１】
２．ルペオール抽出：
２．１  方法Ａ：
全脂質の抽出の間に得られたヘキサンベースの溶液Ａを２０℃に冷却し、１２時間ゆっくりと撹拌する。次いで、それをブフナー漏斗で濾過し、ルペオールが豊富な結晶化抽出物を回収する。最終的に、この抽出物を冷ヘキサン（１５℃）で洗浄し、次いで、真空オーブン中６０℃で４８時間乾燥する。
得られた抽出物Ａは、７６％ルペオール含量の淡黄色粉末の形態である。ルペオール抽出の全収率は７２％である。
【００３２】
２．２  後に再結晶工程を行う方法Ａ
実施例１で得られた抽出物Ａ  ５００ｇを、ヘキサンからの再結晶によって精製する。つまり、固体抽出物をヘキサンに溶解する（１０重量％の溶液）。抽出物が完全に可溶化するまで、混合物を１５分間、還流で７０℃にする。次いで、温度を２０℃に戻し、ルペオールが完全に沈殿するまで、ゆっくりと撹拌しながら維持する。次いで、ルペオール沈殿を濾取し、冷ヘキサンで洗浄し、次いで、最終的に、真空オーブン中６０℃で４８時間乾燥する。
得られた抽出物Ｂは、９５％ルペオール含量の白色粉末の形態である。ルペオール抽出の全収率は６５％である。
【００３３】
２．３  方法Ｂ：
全脂質の抽出の間に得られたヘキサンベースの溶液Ａ  ２ｋｇを、２００ミリバールの真空下、１２０℃の熱流を注入することによって完全に蒸発させる。次いで、得られた固体を、エタノール９００ｍｌにとる。次いで、この新たなエタノール性溶液を、５０％アルコール性水酸化カリウム２４０ｇの存在下、撹拌したジャケット付きのリアクター中でケン化する。ケン化反応は、４時間還流、温度７０℃で行う。次いで、この石鹸溶液を温度２０℃に戻し、ルペオールが完全に沈殿するまで、２４時間、ゆっくりと撹拌しながら維持する。次いで、ルペオールの沈殿を濾取し、冷ヘキサンで洗浄し、次いで、最終的に、真空オーブン中６０℃で４８時間乾燥する。
得られた固体抽出物は、８４％ルペオール含量の白っぽい粉末の形態である。ルペオール抽出の全収率は９１％である。
【００３４】
２．４  方法Ｃ：
全脂質の抽出の間に得られたヘキサンベースの溶液Ａ  ２ｋｇを、２００ミリバールの真空下、１２０℃の熱流を注入することによって完全に蒸発させる。次いで、得られた固体を、エタノール９００ｍｌにとる。次いで、この新たなエタノール性溶液を、５０％アルコール性水酸化カリウム２４０ｇの存在下、撹拌したジャケット付きのリアクター中でケン化する。ケン化反応は、４時間還流、温度７０℃で行う。次いで、得られた石鹸溶液を、軟化水（５０／５０希釈（容積））で希釈する。次いで、この新たな水性アルコール性溶液をパルスカウンターフローカラムの底部に送る。カラムの頂部に関しては、ルペオール抽出溶媒として使用される１，２−ジクロロエタンを供給する。次いで、得られた有機相に、以下の通常の単一の精製操作を行う。
１）カウンターフローカラム中での水による洗浄
２）ロータリーエバポレータ中での真空蒸発
３）真空オーブン（７０℃、４８時間）中での残渣の乾燥
得られた抽出物Ｃは、８５％ルペオール含量の淡黄色粉末の形態である。ルペオール抽出の全収率は８７％である。
【００３５】
２．５  後に再結晶工程を行う方法Ｃ
実施例３で得られた抽出物Ｃ  ２００ｇを、ヘキサンからの再結晶によって精製しうる。つまり、固体抽出物をヘキサンに溶解する（１０％の溶液）。抽出物が完全に可溶化するまで、混合物を１５分間、還流で７０℃にする。次いで、温度を２０℃に戻し、ルペオールが完全に沈殿するまで、ゆっくりと撹拌しながら維持する。次いで、ルペオール沈殿を濾取し、冷ヘキサンで洗浄し、次いで、最終的に、真空オーブン中６０℃で４８時間乾燥する。
得られた抽出物Ｄは、９６．５％ルペオール含量の白色粉末の形態である。ルペオール抽出の全収率は７０％である。
【国際公開パンフレット】
2004526779.tif 000003
2004526779.tif 000004
2004526779.tif 000005
2004526779.tif 000006
2004526779.tif 000007
2004526779.tif 000008
2004526779.tif 000009
2004526779.tif 000010
2004526779.tif 000011
2004526779.tif 000012
2004526779.tif 000013
2004526779.tif 000014
【国際調査報告】
2004526779.tif 000015
2004526779.tif 000016
2004526779.tif 000017
2004526779.tif 000018
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