(57)【要約】ホルモン依存性腫瘍においてアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍組織にたいし活性を有さないか、アゴニスト活性を示す選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）、そしてまたＳＡＲＭを同定し、設計し、使用する方法を提供する【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要のある患者においてホルモン依存性の腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、該患者に選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターを有効量投与することを含み、該選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターは該ホルモン依存性の腫瘍においてアンタゴニスト活性を示し、アンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍組織に対し活性を示さないか又はアゴニスト活性を示す方法。
【請求項２】
腫瘍細胞が前立腺腫瘍細胞であり、該腫瘍細胞においてアンタゴニスト活性を示し、アンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍組織に対して活性を示さないかアゴニスト活性を示すことに加え、該選択的アンドロゲン受容体モジュレーターが更に正常な前立腺組織においてアゴニスト、アンタゴニスト活性を示しまたは活性を示さない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
選択的アンドロゲン受容体モジュレーターがアンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍細胞に対してアゴニスト活性を示す請求項１に記載の方法。
【請求項４】
選択的アンドロゲン受容体モジュレーターがアンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍細胞に対して活性を示さない請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該ホルモン依存性の腫瘍が前立腺癌である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
アンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍組織が、次の組織の１以上を含む請求項１に記載の方法：精嚢、雄及び雌の生殖器、皮膚、精巣、卵巣、軟骨、皮脂腺、毛胞、汗腺、筋肉、胃腸少胞性細胞、甲状腺少胞細胞、副腎皮質、肝臓、松果体、骨、基質細胞、腎臓細管、膀胱及び／又は脳皮質及び皮質下の領域。
【請求項７】
アンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍組織が、次の組織の１以上を含む請求項１に記載の方法：心筋、骨格筋及び／又は平滑筋。
【請求項８】
ホルモン依存性の腫瘍においてアンタゴニスト活性を示し、アンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍組織に対し活性を示さないか又はアゴニスト活性を示す選択的アンドロゲン受容体のモジュレーター。
【請求項９】
請求項８に記載の選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターの投与により治療できる状態を処置する方法であって、患者に選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターを有効量投与することを含み、該状態は以下から選択される方法：多毛症、アクネ、脂漏症、アルツハイマー病、アンドロゲン性脱毛症、性機能低下症、ハイパーピロシティ、良性前立腺肥大、前立腺の腺腫又は腫瘍形成、アンドロゲン受容体を有する良性又は悪性の腫瘍細胞の治療、膵臓癌、抗脈管形成としての使用のためのＶＥＧＦ発現のモジュレーション、骨粗鬆症、抑圧性精子発生、リビドー、悪液質、子宮内膜症、多のう胞卵巣症候群、食欲不振、アンドロゲン依存性の年齢関連病及び状態、オス月経閉止、オスホルモン置換、オス及びメス性機能不全、及び通院患者の筋萎縮防止。
【請求項１０】
請求項８に記載の選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターを同定する方法であって、ホルモン依存性の細胞系の成長を防止する試験化合物をスクリーニングし、そしてアンドロゲン受容体を有する非悪性の細胞系におけるアンドロゲン受容体活性について該試験化合物をスクリーニングすることを含み、ホルモン依存性の腫瘍細胞系の成長を防止しながら、非悪性の細胞系においてアンドロゲン受容体活性を示さないかアンドロゲン受容体活性の活性化を示す該試験化合物を該選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターとして同定する方法。
【請求項１１】
請求項８に記載の選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターを同定する方法であって、ホルモン依存性の腫瘍の成長を防止し、該ホルモン依存性の腫瘍を有する動物モデルにおいてアンドロゲン受容体を含む他の非悪性の組織におけるアンドロゲン受容体の活性化について試験化合物をスクリーニングすることを含み、ホルモン依存性の腫瘍の成長を防止しながら動物モデルの非悪性の組織においてアンドロゲン受容体活性を示さないかアンドロゲン受容体活性化を示す該試験化合物を該選択的アンドロゲン受容体のモジュレーターとして同定する方法。
【請求項１２】
表Ａの構造座標により定義される３次元結晶構造の分子又は分子複合体。
【請求項１３】
表ＡのＡＲ−ＬＢＤアミノ酸のＶ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７の構造座標により定義されるリガンド結合部位の全ての、又はいずれかの部分を含む分子若しくは分子複合体、又は該分子若しくは分子複合体の変異体又は同属体。
【請求項１４】
該変異体又は同類体は１．５Å以下の該ＡＲ−ＬＢＤアミノ酸の骨格原子からの根平均平方偏差を有するか、該ＡＲ−ＬＢＤアミノ酸と３０％の配列同一性を有する結合ポケットを含む請求項１３に記載の分子又は分子複合体。
【請求項１５】
表ＡのＡＲ−ＬＢＤアミノ酸Ｎ７０５、Ｗ７４１、Ｑ７１１、Ｒ７５２、Ｆ７６４、Ｔ８７７、Ｍ８９５及びＩ８９８の構造座標により定義されるリガンド結合部位のすべて又はいずれかの部分を含む分子又は分子複合体、又は該分子又は分子複合体の変異体又は同類体。
【請求項１６】
該変異体又は同類体は１．５Å以下の該ＡＲ−ＬＢＤアミノ酸の骨格原子からの根平均平方偏差を有するか、該ＡＲ−ＬＢＤアミノ酸と３０％の配列同一性を有する結合ポケットを含む請求項１５に記載の分子又は分子複合体。
【請求項１７】
機械読み取り可能なデータでコードされたデータ貯蔵材料を含む機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体であって、そのデータは表ＡのＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド若しくはリガンド複合体、又は該複合体の同属体の構造座標により定義され、該同属体は３．０Å以下の複合体の骨格原子からの根平均二乗偏差を有する骨格原子を含むデータ貯蔵媒体。
【請求項１８】
ＡＲ−ＬＢＤリガンド又はリガンド複合体が２．０Å以下のアミノ酸の骨格原子からの根平均二乗偏差を有する同類体である、請求項１７に記載の機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体。
【請求項１９】
表ＡによるＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドについての構造座標の少なくとも一部分のフーリエ変換を含む機械読み取り可能なデータの第１組を暗号化したデータ貯蔵材料を含む機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体であって、未知の構造の分子または分子複合体のＸ線回折パターンを含む第２組の機械読み取り可能なデータと組み合わせた場合、第２組の機械読み取り可能なデータ、第１組のデータおよび第２組のデータに対応する構造座標の少なくとも一部分を決定できる機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体。
【請求項２０】
リガンドの部分が、表ＡのＡＲ−ＬＢＤの残基Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７のいずれかの部分又はすべてとファンデルワールス接触又は水素結合接触しているＡＲモジュレーターについてのＡＲ−ＬＢＤの結合部位。
【請求項２１】
ＡＲ−ＬＢＤが表ＡのＡＲ−ＬＢＤの残基Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７にたいし２５％−９５％の同一性を同類体又は変異体である請求項２０に記載の結合部位。
【請求項２２】
アンドロゲン受容体の合成リガンドを設計するコンピューター的方法であって、
ａ．ＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド複合体を含む結晶化したタンパク質の３次元モデルを用いて、ＡＲ−ＬＢＤリガンドの少なくとも一つの最初の化学部分と相互作用するＡＲ−ＬＢＤの少なくとも一つの相互作用するアミノ酸を決定し；そして
ｂ．該化学部分の少なくとも一つの化学的修飾を選択して、該相互作用するアミノ酸及び該最初の化学部分間の相互作用に比べて該相互作用するアミノ酸及び該第二の化学部分間の相互作用を減少させ、又は増加させる構造を有する第二化学部分を作る；
ことを含む方法。
【請求項２３】
アンドロゲン受容体の活性をモヂュレートする化合物を同定する方法であって、その方法は
ａ．表Ａによる構造座標により定義されるＡＲ−ＬＢＤ中に空間的に適合する試験化合物をモデリングするか、ＡＲ−ＬＢＤ、変異体ＡＲ−ＬＢＤ、ＡＲ−ＬＢＤ同類体又はそれらの部分の三次元構造モデルを用い；
ｂ．該構造座標又は請求項２０に記載のリガンド結合部位を用いて、構造的及び化学的特徴を同定し；
ｃ．同定した構造的又は化学的特徴を用いてＳＡＲＭ候補として化合物を設計又は選択し；
ｄ．三次元構造モデル又はリガンド結合部位を用いてＳＡＲＭ候補として化合物を設計又は選択し；
ｅ．ＳＡＲＭ候補を合成し；
ｆ．試験化合物のＡＲ−ＬＢＤへの結合により特徴づけられる試験においてＳＡＲＭ候補をスクリーニングし；そして
ｇ．表ＡのＡＲ−ＬＢＤのＶ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７よりなる群から選択されるＡＲ−ＬＢＤから１以上のアミノ酸を修飾又は置換する；
工程のいずれかの組み合わせを含む方法。
【請求項２４】
選択的アンドロゲン受容体モジュレーター及び医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物であって、該選択的アンドロゲン受容体モジュレーターが請求項１０、１１、２２、又は２３に記載の方法にしたがって選択され又は設計される医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を示すがアンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍性組織に対しては活性を示さずより好ましくはアゴニスト活性を示す選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）が今同定された。本発明はアンドロゲン受容体ジュレーターの投与により治療できる状態の処置におけるこれらのＳＡＲＭの使用方法に関する。本発明はまたホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を示すがアンドロゲン受容体を有する他の非腫瘍性組織に対しては活性を示さずより好ましくはアゴニスト活性を示す新しいＳＡＲＭを設計し同定する方法にも関する。本発明はアンドロゲン受容体リガンド結合ドメイン又はリガンド結合ドメイン複合体の構造座標、及びアンドロゲン受容体をモジュレートする新しいＳＡＲＭを設計し及び選択するためのこれらの構造座標の使用方法にも関する
【０００２】
（背景技術）
アンドロゲン受容体（ＡＲ）はリガンド依存性転写因子のステロイド核受容体スーパーファミリーの一員であり、前立腺及び精嚢、雄及び雌の生殖器、皮膚、精巣、卵巣、軟骨、皮脂腺、毛胞、汗腺、心筋、骨格筋及び平滑筋、胃腸少胞性細胞、甲状腺少胞細胞、副腎皮質、肝臓、松果体、脊椎の運動ニューロン（Ｎｅｇｒｏ−Ｖｉａｒ， Ａ． ＪＣＥ＆Ｍ １９９９ ５４（１０）：３４５９−６２）を含む脳皮質及び皮質下の領域を含む生殖組織及び非生殖組織間に広く分布している。ステロイド受容体ファミリーの他のメンバーと同様に、ＡＲはＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）及びアンドロゲン結合部位を含む２６１残基のリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）（Ｍｗ＝３０２４５Ｄａ）を含む数個の機能ドメインを有し、アンドロゲン機能のスイッチングの原因となる。ヒト及びラットのアンドロゲン受容体のｃＤＮＡ及びアミノ酸配列は記載されている（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． １９８８ ８５：７２１１−７２１５）。
【０００３】
ＡＲは薬剤発見の多くの分野及び患者治療の重要な標的である。例えば腫瘍学では、アンドロゲン受容体機能の阻害剤（アンタゴニストまたは部分アンタゴニスト）はアンドロゲン依存性の前立腺癌の治療に有用であるが、ＡＲのアゴニスト又は部分アゴニストは乳癌の処置に有用である。代謝性及び内分泌性の病気の場合、例えば、アンドロゲン受容体機能のアゴニスト又は部分アゴニストはＡＩＤＳを含むが限定されないいくつかの病気状態における年齢に関連した病気及び悪液質の状態の処置に有用である。機能性ＡＲは様々な骨細胞で同定され、アンドロゲン投与は男性及び女性における骨格の発達及び維持に有益な影響を有する。
【０００４】
アンドロゲン治療の進歩は望ましいアンドロゲン活性を望ましくない又は用量制限の副作用から分離することができないため限定されている。しかしながら、望ましくない副作用を減じながらエストロゲン受容体標的化における大きい程度の組織選択的を有する選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の開発における最近の進歩は、ＳＡＲＭ，選択的アンドロゲン受容体モジュレーターの示唆をもたらした（Ｎｅｇｒｏ−Ｖｉａｒ， Ａ． ＪＣＥ＆Ｍ １９９９ ５４（１０）：３４５９−６２； Ｒｅｉｄ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ １９９９ １７：２７１−２８４）。
【０００５】
米国特許第６０１７９２４号は「シスートランス」又は「コトランスフェクション」試験に基くアンドロゲン受容体についての高親和力、高特異性アゴニスト、部分アゴニスト（すなわち部分的活性化剤及び／又は組織特異的アクチベータ）により特徴付けられる非ステロイド化合物を開示する。「シスートランス」又は「コトランスフェクション」試験によるアンドロゲン受容体についての親和力、高特異性アゴニスト、部分アゴニスト（部分的活性化剤及び／又は組織特異的アクチベータ）として特徴付けられる非ステロイド化合物はＷＯ０１／１６１０８、ＷＯ０１／１６１３３及びＷＯ０１／１６１３９にも記載されている。このコトランス試験（Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８ ２４０：８８９−９５）は天然のホルモンの作用を模倣するアゴニスト及び部分アゴニスト、又は阻害するアンタゴニストを同定し、応答性細胞内受容体タンパク質についてその活性を定量する方法を提供することを示唆する。
【０００６】
更にヒドロキシフルタミド、大部分の組織における公知のＡＲアンタゴニストは骨芽細胞によるＩＬ−６製造の影響に対して選択的ＡＲモジュレーター（ＳＡＲＭ）として作用することが示唆された（Ｈｏｆｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ． Ｒｅｓ． １９９９ １４：１３３０−１３３７）。
【０００７】
さらにヒドロキシフルタミド及びカソデックス（両方ともたいていの組織における完全なＡＲアンタゴニストとして知られている）はＤＨＴに似たＡＲ依存性の方法でＭＡＰキナーゼＥｒｋ−１及びＥｒｋ−２を活性化することがＡＲをトランスフェクトしたＰＣ３細胞で示された（Ｐｅｔｅｒｚｉｅｌ ｅｔ ａｌ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８， ６３２２−６３２９ （１９９９））。
【０００８】
化合物ＬＧＤ２２２６（非ステロイドＡＲアゴニスト）も骨粗鬆症、雄のホルモン置換、雄及び雌の性的不全及びカヘキシー等のアンドロゲンに関連する病気の処置における使用のための選択的アンドロゲンモジュレーターとして特性付けられている（ＳＣＲＩＰ−ＷＯＲＬＤ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＮＥＷ ＦＩＥＬＤ １２ Ｍａｙ ２０００； ＷＯ ０１／１６１０８； ＷＯ ０１／１６１３３； ＷＯ ０１／１６１３９）。
【０００９】
化合物ＬＧ１２０９０７（非ステロイドＡＲアンタゴニスト）はカソデックス等の他の治療的に用いられるＡＲアンタゴニストと比べて、視床下部及びリビドー（生殖割合）に及ぼすアンタゴニスト効果の減少を示すことがラットで示された。従ってＬＧ１２０９０７は前立腺癌の処置における選択的アンドロゲン受容体モジュレーターとして特徴付けられている（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｐｏｓｔｅｒ＃Ｐ３−１２６， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ８０ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ （１９９８）， Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ＃Ｓ３９−２ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ８０ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ （１９９８））
【００１０】
ＡＲ及びＥＲに及ぼすＤＨＴ及びＥ２等の性ステロイドホルモンのノジェノトロフィク効果を探る最近の報告は、両受容体は転写事象に非特異的に関与する機能を制御することを明らかに示す（Ｋｏｕｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ １０４， ７１９−７３０ （２００１））。ＥＲ及びＡＲの抗アポプトチック効果は転写に影響を及ぼさないリガンドにより誘導可能であることが示された。転写に影響を有するリガンドは抗アポプトチック効果を持ち得ないことも示されている・
【００１１】
アンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍組織でおこなわれるモジュレーションに比べアンドロゲン受容体を含む腫瘍で行われるモジュレーションの種類の相違を示すＳＡＲＭ（特に腫瘍におけるアンタゴニスト活性とアンドロゲン受容体を有する他の非悪性組織におけるアゴニスト活性）はいままで開示も示唆もされていない。本発明は、ホルモン依存性の腫瘍においてアンタゴニスト活性を示すがアンドロゲン受容体を有する他の組織にたいし活性を示さないか、又は好ましくはアゴニストかを示すＳＡＲＭ、及びそのようなＳＡＲＭを同定し、そして設計する方法を提供する。以下に記載するように、これらのＳＡＲＭは例えば、筋肉消耗／悪液質、リビドーの損失、骨粗鬆症、ガイネコマスチア等の副作用を軽減しながら腫瘍の成長を防止することによって患者における前立腺癌等のホルモン依存性腫瘍を処置するのに用いることができる。
【００１２】
（発明の開示）
本発明の目的はホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織にたいして活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を示すＳＡＲＭを同定する方法を提供することである。一態様においてホルモン依存性腫瘍におけるアンタゴニスト活性は、ホルモン依存性腫瘍細胞系においてインビトロ又はインビボのいずれかで、成長の阻害についてのスクリーニングにより確認される。この態様においてＳＡＲＭ候補の活性は正常な非腫瘍細胞系においても評価される。或いは、ホルモン依存性腫瘍を有する動物モデルを用いて、動物における腫瘍に対するＳＡＲＭ候補物のアンタゴニスト活性そしてまた非腫瘍組織におけるその活性を評価できる。
【００１３】
本発明の他の目的は、ＡＲ結晶構造及びエストラジオール、タモキシフェン、又はラロキシフェンとのエストロゲン受容体（ＥＲ）結晶構造についての情報を用いることによりホルモン依存性腫瘍においてアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織にたいして活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭを設計する方法を提供することである。
【００１４】
本発明の他の目的は、表Ａによるアンドロゲン受容体リガンド結合ドメイン（ＡＲ−ＬＢＤ）アミノ酸Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７の構造座標により定義されるリガンド結合部位のすべて、又はいずれかの部分を含む分子若しくは分子複合体、又はＳＡＲＭの同定に用いる、該分子若しくは分子複合体の変異体又は同類体を提供することである。
【００１５】
本発明の他の目的は機械読み取り可能なデータをコードしたデータ貯蔵材料を含む機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体を提供することであって、そのデータは表ＡのＡＲ−ＬＢＤリガンド若しくはリガンド複合体とＡＲ−ＬＢＤ、又は該複合体の同属体の構造座標により定義され、該同属体は３．０Å以下の複合体の骨格原子からの根平均二乗偏差を有する骨格原子を含む。
【００１６】
本発明の他の目的は、リガンドの部分が、表Ａの残基Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７のいずれかの部分又はすべてとファンデルワールス接触又は水素結合接触しているＡＲモジュレーターについてのＡＲ−ＬＢＤの結合部位を提供することである。好ましい態様では、その結合部位は表あのＡＲ−ＬＢＤの残基Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７に２５％−９５％の同一性を有する同類体又は変異体である。
【００１７】
本発明の他の目的は、ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織に対して活性を示めさないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭを提供すること、そしてまた少なくとも一つのそのようなＳＡＲＭ及び医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物を提供することである
【００１８】
本発明の他の目的は、腫瘍細胞を、ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織にたいして活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭと接触させることを含む、ホルモン依存性腫瘍細胞の成長を阻害する方法を提供することである。
【００１９】
特記しない限り、ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織にたいして活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭは、本発明のすべての態様において正常な前立腺組織に対しアゴニスト、アンタゴニスト活性を示すか活性を示さないことを意図する。
【００２０】
本発明の更なる目的はアンドロゲン受容体のモジュレーターの投与により治療できる状態を処置する方法であって、該状態は限定されるものではないが
多毛症、アクネ、脂漏症、アルツハイマー病、アンドロゲン性脱毛症、性機能低下症、ハイパーピロシティ、良性前立腺肥大、前立腺の腺腫又は腫瘍形成を含み、乳癌、脳癌、卵巣癌、膀胱癌、リンパ管癌、腎臓癌等のアンドロゲン受容体を含む良性及び悪性の腫瘍細胞の処置、抗脈管形成としての使用のためのＶＥＧＦ発現のモジュレーション、骨粗鬆症、抑圧性精子発生、リビドー、悪液質、子宮内膜症、多のう胞卵巣症候群、食欲不振等のアンドロゲン依存性の年齢関連病及び状態、オス月経閉止、オスホルモン置換、オス及びメス性機能不全、及び通院患者の筋萎縮防止を含む。ホルモン依存性腫瘍、特に早期前立腺癌の治療、およびホルモン依存性癌、特に前立腺癌の化学的予防のためのＳＡＲＭの使用が特に好ましい。
【００２１】
米国特許出願を含むがこれに限定されない本願明細書に引用したすべての文献は本明細書の一部を構成する
【００２２】
発明の詳細な説明
ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の（即ち１又はそれ以上の）非腫瘍性組織にたいして活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を示す選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）が今同定された。ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織に対して活性を示めさないＳＡＲＭを特異的アンドロゲン受容体モジュレーターとも呼ぶ。
【００２３】
本発明の目的のために、「非腫瘍」、「非癌」、又は「非悪性」のアンドロゲン受容体を含む組織とは、限定するものではないが、精嚢、雄及び雌の生殖器、皮膚、精巣、卵巣、軟骨、皮脂腺、毛胞、汗腺、筋肉、胃腸少胞性細胞、甲状腺少胞細胞、副腎皮質、肝臓、松果体、骨、基質細胞、腎臓細管、膀胱及び脊椎の運動ニューロンを含む脳皮質及び皮質下の領域を含むことを意味する。
【００２４】
特に示さない限り、ホルモン依存性腫瘍にアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍性組織に対して活性を示さないか、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭは本発明の全ての態様において正常な前立腺組織においてアゴニスト、アンタゴニスト又は活性を示さないことを意図する。
【００２５】
本明細書で用いる「活性なし、又はアゴニスト活性」という用語は、腹部前立腺、精嚢、レバトール・アニの重量および／または黄体化ホルモン血清レベルについて対照動物と比べてインビボで活性化効果（５％以上）を化合物を好ましくは示し、もっとも好ましくはウゴナダル温血オス動物、好ましくはヒトのオスに見られる平均正常骨密度、平均正常筋肉質量、平均正常生殖機能、および／または平均正常性欲を維持する活性を有する化合物を示す。ＳＡＲＭの「活性なし、又はアゴニスト活性」は、ホルモン依存性腫瘍に対しアンタゴニスト活性を示す同じ量又は量範囲で好ましくは示される。患者に投与する場合、ＳＡＲＭがホルモン依存性腫瘍に対してアンタゴニスト活性を示すが他の非腫瘍を含む組織に対して活性を示さず又はより好ましくはアゴニスト活性を示す、この量又は量の範囲は好ましい治療的に有用な範囲である。この開示を読んだ当業者によって理解されるように、本発明のＳＡＲＭは、好ましい治療的に有用な範囲外の量で用いた場合、ホルモン依存性腫瘍に対し同じアンタゴニスト示し、非腫瘍を含む組織にたいし化合物を示さないかアゴニスト活性を示し得るか、又は同じ特異性又は選択的を示さないかもしれない。例えば、本発明のＳＡＲＭは、好ましい治療的に有用な範囲を越える量用いた場合、非腫瘍を含む組織においていくぶんかのアンタゴニスト活性を示すかもしれない。
【００２６】
本発明はこれらの２つの活性を有するＳＡＲＭ、これらのＳＡＲＭを同定する方法、これらのＳＡＲＭを含む医薬組成物、及びアンドロゲン受容体が媒介する病気の治療におけるこれらのＳＡＲＭの使用方法に関する。
【００２７】
例えば本発明のＳＡＲＭは他の非腫瘍性（非癌性の又は非悪性を意味する）アンドロゲン受容体を含む組織において、アンドロゲン受容体活性を好ましくは活性化させながらホルモン依存性の腫瘍の成長を選択的に抑止するのに有用である。従って、本発明のＳＡＲＭは、他の非腫瘍性アンドロゲン受容体を含む組織においてアンドロゲン受容体活性の防止に伴う望ましくない副作用を軽減し又は無くしながら、前立腺、乳房、脳、皮膚、卵巣、膀胱、リンパ、肝臓及び腎臓癌、並びに膵臓癌などのアンドロゲン受容体を含む腫瘍を含むがこれらに限定されない腫瘍を処置するのに有用である。例えば前立腺癌の治療における現在の抗アンドロゲン療法について見られるジハイドロテストステロン（ＤＨＴ）等のアンドロゲンの正常な機能をアンタゴナイズすることから生ずる可能性のある望ましくない副作用は筋肉消耗／悪液質、リビドーの消耗、骨粗鬆症、女性化乳房を含むがこれらに限定されない。
【００２８】
そのようなＳＡＲＭの更なる好まし利用は化学予防の領域、特に前立腺癌に関する場合である。本発明のＳＡＲＭは転移の前立腺癌の再発を減少させるための「注意待機」の期間の間のラジカルプロステクトミー後に投与し得る。
【００２９】
更に、これらのＳＡＲＭは悪液質及び骨粗鬆症を含むがこれらに限定されないアンドロゲン依存性の年齢に関連した病気及び状態の治療に有効である。そのような薬剤は伝統的なアンドロゲンアゴニストについて見られる前立腺癌のリスクの増加をこうむらない経口的に生物的利用可能なアンドロゲン置換療法を提供する。
【００３０】
本発明のＳＡＲＭは、多毛症、アクネ、脂漏症、アルツハイマー病、アンドロゲン性脱毛症、性機能低下症、ハイパーピロシティ、良性前立腺肥大、前立腺の腺腫又は腫瘍形成、アンドロゲン受容体を有する良性又は悪性の腫瘍細胞の治療、膵臓癌、抗脈管形成としての使用のためのＶＥＧＦ発現のモジュレーション、骨粗鬆症、抑圧性精子発生、リビドー、悪液質、子宮内膜症、多のう胞卵巣症候群、食欲不振、アンドロゲン依存性の年齢関連病及び状態、オス月経閉止、オスホルモン置換、オス及びメス性機能不全、及び通院患者の筋萎縮防止等のアンドロゲン受容体モジュレーターの投与により救済可能な他の状態の処置にも有効であることが期待される。
【００３１】
ホルモン依存性腫瘍に対しアンタゴニスト活性を有するがアンドロゲン受容体を含む他の非腫瘍組織に対しては活性を有しない、又はより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭを同定する様々な方法を用いることができる。一態様において、ホルモン依存性の腫瘍におけるアンタゴニスト活性はホルモン依存性細胞系においてインビトロ又はインビボにおける増殖の防止につてのスクリーニングによって確かめられる。可能性のあるＳＡＲＭをスクリーニングするのに用いることができるホルモン依存性腫瘍細胞系の例は、限定するものではないがヒト乳癌細胞系ＭＤＡ　ＭＢ４５３，ヒト乳癌細胞系ＺＲ−７５−１，ムリン乳房系Ｓｈｉｎｏｇｉ、ラット前立腺アデノカルシノーマ系ＤｕｎｎｉｎｇＲ−３３２７，ヒト前立腺腫瘍細胞系ＭＤＡ　ＰＣａ　２ａ及びＰＣａ　２ｂ、ヒト前立腺細胞系ＬＮＣａＰ、ヒト前立腺腫瘍系ＣＷＲ２２、ヒト前立腺細胞系ＬｕＣａＰ３５及びＬｕＣａＰ２３．１２、ヒト前立腺細胞系ＬＡＰＣ−４及びＬＡＰＣ−９、ヒト前立腺癌細胞系ＰＣ−２９５，ヒト前立腺腫瘍系ＰＣ−３１０、ヒト骨肉腫細胞系ＭＧ−６３を含む。これらの実験ヒト及びムリン前立腺及び乳房細胞系及びそれらに由来する腫瘍モデル系は、前立腺癌等のヒトホルモン依存性腫瘍の薬理学の指標として当業者によりよく受容されている。ヒトの病気の状態に対するそのようなモデルの関係の例は限定されるものではないが以下の文献及びその中に含まれる引用文献に見出される。Ｊａｃｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０， ４１６−４２１（１９９９）； Ｙｅａｐ ｅｔ ａｌ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０， ３２８２−３２９１ （１９９９）， Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８， ５３４９−５３５５（１９９９）； Ｉｓａａｃｓ， Ｊ． Ｔ． Ｕｒｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ２， １１５−１１６（１９９６）； Ｂｅｎｔｅｉ ｅｔ ａｌ． Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． ３５， ６５５−６６２（１９９９）； Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３７， ５５９−５６７ （１９９０）； Ｐｅｅｈｌ， Ｄ． Ｍ．， Ｕｒｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ２， １００−１０２（１９９６）； Ｗｙｔｓｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｕｒｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ２， １２２−１２５ （１９９６）； Ｌｅｌａｎｄ， Ｗ． Ｋ．， Ｕｒｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ２， １２６−１２８（１９９６）； Ｂｕｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ４３， ６３−７０ （２０００）； Ｎａｖｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６， １１９０−１１９７ （２０００）； Ｅｔｒｅｂｙ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ４２， ９９−１０６（２０００）； Ｊｏｎｇｓｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６０， ７４１−７４８ （２０００）； Ｊｏｎｇｓｍａ ｅｔ ａｌ．， Ａｍｅｒ． Ｊ． Ｐａｔｈ． １５４， ５４３−５５１（１９９９）； Ｙｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５， ２１７１−２１７７ （１９９９）； Ｎａｖｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ３， ２４９３−２５００（１９９７）； Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉ��ｅ ３， ４０２−４０８ （１９９７）； Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８， ２７７７−２７８３ （１９９８）； Ｃｒａｆｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５９， ５０３０−５０３６ （１９９９）．
【００３２】
この態様において、ＳＡＲＭ候補物のアゴニスト又はアンタゴニスト活性は正常な非腫瘍細胞系でも測定される。この方法に有用な正常な非腫瘍細胞系の例は限定するものではないがプライマリーラット前立腺上皮及び基質細胞、ムリン筋肉細胞系Ｃ２Ｃ１２、プライマリーモルモット平滑筋細胞、未成熟（Ｉ−ＰＳＭＣ）及び成熟（Ａ−ＰＳＭＣ）ラットのペニスからのプライマリー平滑筋細胞、プライマリーラビット平滑筋細胞、前立腺平滑筋細胞系ＰＳ−１，前立腺平滑筋細胞系ＰＳＭＣ１、マウス骨細胞培養物、及び造骨細胞及びプライマリーラット精嚢系ＳＶＣ−１及びＳＣＶ−２を含む。そのような細胞系の例は以下の文献及びその中に含まれる引用文献に見出される。Ｎｅｍｅｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｎｄｒｏｌｏｇｙ， １９， ７１８−７２４ （１９９８）； Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ４１， ６９３−６９６（１９９２）； Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ ３０， １１７−１２９ （１９９７）； Ｒｉｃｃｉａｒｄｅｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．， １４０， ３７３−３８３ （１９９４）； Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｃａｄａｖｉｄ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ， ９０， ２１９−２２９（１９９３）； Ｓａｄｅｇｈｉ−Ｎｅｊａｄ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅ Ｒｅｓ． １０， １６５−１６９（１９９８）， Ｇｅｒｄｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３９， ３５６９−３５７７ （１９９８）； Ｓａｒａｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．， １８５， ４１６−４２４ （２０００）， Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４９１， ９１−９３ （２００１）； Ｔａｊａｎａ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ３， ６３７−６４４ （１９８４）．
【００３３】
或いは、ＳＡＲＭのアゴニスト及びアンタゴニスト効果は代用薬の終点が、限定されるものではないが、前立腺、精嚢、ｌｅｖｉｔｏｒ ａｎｉ筋、そしてまた血漿の黄体形成ホルモン（ＬＨ）レベルの測定による視床下部 軸を含む組織中で測定される一連のインビボラットモデルによる非腫瘍組織で測定される。いくつかの代用薬の終点のインビボアッセイを用いてＡＲ経路に及ぼす薬剤の効果を調べることができる。これらのアッセイは前立腺、精嚢、挙筋アニ筋肉、骨、リビドー、受胎力及び視床下部（血液ＬＨレベルの測定）等の正常なアンドロゲン依存性組織及び機能に及ぼす薬剤の影響を測定することを含む。これらのアッセイはヒトにおけるＡＲ経路に及ぼす薬剤の影響に対して直接の相関関係を有すると広く理解されている。そのような代用薬の終点インビボアッセイのいくつかの例は以下の文献及びその中に含まれる引用文献に見出される。Ａｓｈｂｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｐｐｌ． Ｔｏｘ．， ２０， ３５−４７（２０００），Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ． Ｔｏｘ． Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ５３， ２８９−２９６（２０００）； Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ４１， ６２３−６３９（１９９８）； Ｆｕｒｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｕｒｏｌ．， ２９， ８３−９５ （１９９６）， Ｂｒｏｕｌｉｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｏｎｅ ２０， ４７３−４７５（１９９７）； Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｏｓｔｅｒ＃Ｄ３−１２６， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ８０ｔｈ Ａｎｎｕａｌ ｍｅｅｔｉｎｇ （１９９８）； Ｈａｍｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ＃Ｓ３９−２， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ８０ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ （１９９８）； Ｍａｕｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， １１９， ６６９−６７４ （１９９３）； Ｒｉｓｅｋ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ＃Ｐ１−４９７， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ８３ｒｄ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ （２００１）．
【００３４】
ホルモン依存性腫瘍を有する動物モデルを用いて腫瘍に対するＳＡＲＭ候補物のアンタゴニスト活性、及び動物における正常な非腫瘍組織を含むＡＲに対するアゴニスト及びアンタゴニスト活性を評価できる。例えば、上の代用薬の終点インビボアッセイはＤｕｎｎｉｎｇＲ−３３２７等のアンドロゲン依存性ラット前立腺腫瘍を有するラットを用いて行うことができる。この方法では、ラットアンドロゲン依存性の前立腺腫瘍に及ぼすＳＡＲＭ調べられるが、同時に前立腺、精嚢、Ｌｅｖｉｔｏｒ　ａｎｉ筋等のＡＲを含む正常な組織に及ぼすさＲＭの影響、そして又血漿ＬＨレベルの測定による視床下部軸に及ぼす影響を同時に調べることができる。類似の方法で、ヒトアンドロゲン依存性前立腺腫瘍を有する免疫コンプロマイズヌードラットを使用することができる。ヒトアンドロゲン依存性前立腺腫瘍におよぼすＳＡＲＭの影響は、前立腺、精嚢、レバトール・アニ筋肉等の正常な組織に及ぼすＳＡＲＭの影響そしてまた血漿ＬＨレベルの測定による視床下部軸に及ぼす影響を同時にしらべながら測定できる。更にインビボラットアッセイを用いてリビドー及び生殖に及ぼすＳＡＲＭの影響を測定できる。
【００３５】
ホルモン誘導腫瘍でアンタゴニスト活性を有するが、他の非腫瘍組織において活性を有さないか、好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭは、ＡＲ結晶構造及びエストラジオール、タモキシフェン、又はラロキシフェンとのエストロゲン受容体（ＥＲ）結晶構造についての情報を用いて設計することもできる。アンドロゲン受容体リガンド結合ドメイン（ＡＲ−ＬＢＤ）の結晶構造は２．０Å分解能まで測定され、２０００年１０月１３日出願された米国特許出願第０９／６８７６０９号及び対応するＰＣＴ／ＵＳ００／２８４９５，Ｍａｔｉａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５， ２６１６４−２６１７１ （２０００） 及びＳａｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９８， ４９０４−４９０９ （２００１）に記載されており、これらは本明細書の一部を構成する。例えば、ＥＲの結晶構造はＷＯ９９／５０６５８に開示されており本明細書の一部を構成する。これらの結晶構造を用いて構造をベースにした、又は合理的なドラッグデザイン技術を用いて、本発明の阻害的及び刺激的ＳＡＲＭを含む化学物質を設計し、選択し及び合成することができる。
【００３６】
本発明により可能となる一つの特に有用なドラッグデザイン技術は反復ドラッグデザインである。反復ドラッグデザインはタンパク質／リガンド複合体の連続的セットの３次元構造を決定し評価することによりタンパク質と化合物間の結合を最適化する方法である。当業者は、天然のリガンド又は基質の対応する受容体又は酵素の結合ポケットとの結合が多くの生物学的メカニズムの基礎であることをこの開示により理解するであろう。本明細書で用いる「結合ポケット」という用語は他の化合物即ちリガンドとその形の結果として有利に結合する分子又は分子複合体の領域を言う。同様に多くの薬剤は受容体及び酵素の結合ポケットとの結合を介してその生物学的効果を発揮する。そのような結合は結合ポケット全て又はいずれかの部分について生じる。そのような結合の理解はそれらの標的受容体又は酵素とのより有利な結合を有する、したがって改良された生物学的効果を有する薬剤のデザインに導くのを助けるであろう。従ってこの情報は本発明のＳＡＲＭ候補物を設計するのに価値がある。
【００３７】
本明細書で用いる「結合」という用語は化合物又はその部分、即ちリガンド間の近接の状態を言う。その結合は非共有結合であってもよく（その並置状態は水素結合又はファンデルワールス力又は静電的相互作用によりエネルギー的に容易になる）、共有結合であってもよい。
【００３８】
反復ドラッグデザインにおいては、一連のタンパク質／リガンド複合体の結晶を得る。各複合体の三次元構造を次に解く。そのようなアプローチは各複合体のタンパク質及びリガンド間の結合への知見を提供する。これは、阻害活性を有する化合物を選択し、この新しいタンパク質／リガンド複合体の結晶を得、その複合体の三次元構造を解き、新しいタンパク質／リガンド複合体と前に解いたタンパク質／リガンド複合体間の結合を比較することにより達成される。化合物におけるいかなる変化がタンパク質／リガンド結合に影響するかを観察することによりこれらの結合を最適化できる。
【００３９】
ある場合には、反復ドラッグデザインは連続的なタンパク質／リガンド複合体を形成し、次に各新しい複合体を結晶化させることにより行われる。あるいはあらかじめ作ったタンパク質の結晶を阻害剤の存在下に浸漬し、それによってタンパク質／リガンド複合体を形成し、各個々のタンパク質／リガンド複合体を結晶化させる必要を不要にする。
【００４０】
本明細書で用いる「浸漬する」という用語は、結晶を問題の化合物を含む溶液に移す過程を言う。
【００４１】
本発明は、ＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド複合体及び／又はＥＲ−ＬＢＤ／ＥＲ−ＬＢＤリガンド複合体の結晶に基くアンドロゲン及び／又はエストロゲン受容体の三次元モデルを用いるコンピューター的方法をも提供する。一般に受容体リガンドを設計するコンピューター的方法は受容体リガンド結合ドメインのどのアミノ酸がリガンドの少なくとも一つの化学的部分と相互作用するかを決定する。次に、ＡＲ−ＬＢＤ又はＥＲ−ＬＢＤを含む結晶化したタンパク質の３次元モデルを用いて受容体ＬＢＤの結合部位にリガンドを入れる。結合部位におけるリガンドの方位を次に最適化し（ｖｉｄｅ ｉｎｆｒａ）、相互作用するアミノ酸と天然のホルモンの対応する化学的部分間の相互作用と比べて、受容体ＬＢＲからの相互作用するアミノ酸と第二の化学的部分間の相互作用を減少又は増加させるリガンド構造の第二の化学的部分を作るリガンドの化学的部分の少なくとも一つの化学修飾をデザインするのに用いる。
【００４２】
本発明のコンピューター的方法はそのような結晶及び三次元構造情報を用いてＳＡＲＭを設計し、アンドロゲン受容体のＬＢＤ及び／又はエストロゲン受容体のＬＢＤのコンフォメーション変化をモジュレートする合成のリガンドを作るためである。これらのコンピューター的方法はアンドロゲン受容体に対するＳＡＲＭを設計するのに特に有用であり、ＳＡＲＭは、天然に存在するリガンド又はアゴニスト等の天然に存在するリガンドを模倣する他のリガンドについて観察される活性化ドメインの正常な座標を妨げる、遺伝子発現の制御に及ぼす受容体の影響を変化させるリガンドが誘導する多くの分子事象のいずれか一つを妨げる伸長した部分を有する。アゴニスト又はアンタゴニストと複合化したＥＲ−ＬＢＤの構造及びＤＨＴ又は他のリガンド（２０００年１０月１３日出願したＵＳ特許出願Ｎｏ．０９／６８７６０９および対応するＰＣＴ／ＵＳ／２８４９５に記載、その全体および本願明細書に提供した表Ａは本明細書の一部を構成する）と結合したＡＲ−ＬＤＢの構造に基いて（Ｓｈｉａｕ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ １９９８ ９５：９２７−９３７； Ｐｉｋｅ ｅｔ ａｌ． ＥＭＢＯ Ｊ． １９９９ １８（１７）： ４６０８−４６１８）、化学化合物をいかに修飾し、それらが結合部位でＡＲ−ＬＢＤアミノ酸と特異的に相互作用するかを決定できる。特に、上の伸長した部分は、ＡＲ構造のヘリックス−１２に向き、タモキシフェンまたはラロキフェンと複合化したＥＲの構造に見られる様にこのヘリックスの位置に影響し、ＤＨＴ，またはＲ１８８１，より強力なアゴニストであるＤＨＴの合成アナログ（Ｍａｔｉａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５， ２６１６４−２６１７１（２０００）））と結合したＡＲの結晶構造、およびエストラヂオールと結合したＥＲの結晶構造に見られるヘリックス−１２の位置と異なる。ＡＲ−ＬＢＤ結合部位におけるリガンドに影響し得る、または接触し得るヘリックス−１２における残基は、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６およびＬ９０７を含む。本発明は表Ａに掲げた構造座標により定義される３次元結晶構造にも関する。本発明の結晶構造は表Ａに掲げた座標の、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９９％、最も好ましくはすべてを含む。より好ましくは、表ＡによるＡＲ−ＬＢＤアミノ酸Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６、及びＬ９０７の構造座標により定義されるリガンド結合部位の全てまたはいずれかの部分を含む分子または分子複合体、または該分子または分子複合体の変異体若しくは同族体が提供される。表ＡによるＡＲ−ＬＢＤアミノ酸Ｎ７０５、Ｗ７４１、Ｑ７１１、Ｒ７５２、Ｆ７６４、Ｔ８７７、Ｍ８９５およびＩ８９８の構造座標により定義されるリガンド結合部位の全てまたはいずれかの部分を含む分子または分子複合体、または該分子または分子複合体の変異体若しくは同族体が最も好ましい。
【００４３】
本明細書で用いる「複合体」又は「分子複合体」という用語は化学物質即ちリガンドと共有又は非共有結合しているＡＲ−ＬＢＤ又はＡＲ−ＬＢＤの変異体又は同族体を言う。
【００４４】
本発明の目的のために、「少なくとも部分」という用語はこれらの構造座標により定義されるリガンド結合部位のすべて又はいずれかの部分をいう。
【００４５】
本明細書で用いる「変異体又は同族体」という用語は、ＡＲ−ＬＢＤと類似の構造及び／又は配列を有する分子又は分子複合体をいう。「類似の構造」とは該ＡＲ−ＬＢＤアミノ酸の骨格原子から１．５Å以下の根平均二乗偏差を有する結合ポケットを有する変異体又は同族体を言う。「類似の配列」とはＡＲ−ＬＢＤと３０％、又はより好ましくは７５％の同一性を有する変異体又は同族体を言う。
【００４６】
用語「根平均二乗偏差」とは平均からの偏差の二乗の算術平均の平方根を言う。それは傾向又は目的からの偏差又は変化を表わす方法である。本発明の目的のために「根平均二乗偏差」は本明細書で記載する構造座標により定義される複合体のＡＲ部分の骨格の関係部分からタンパク質又はタンパク質複合体の骨格の変化を定義する。
【００４７】
タンパク質結晶の構造座標が一度決定されると、それらは他の結晶の構造を解くのに有用である。
【００４８】
従って本発明によれば、アンドロゲン受容体／リガンド複合体の構造座標及びその部分が機械読み取り可能な貯蔵媒体に貯えられる。そのようなデータは薬剤発見及びＸ線結晶解析又はタンパク質結晶等の様々な目的に用いられる。
【００４９】
従って本発明の一態様によれば、表Ａの構造座標をコード化したデータ貯蔵材料を含む機械読み取り可能な貯蔵媒体が提供される。一態様はＷＯ９８／１１１３４に開示されたＳｙｓｔｅｍ　１０を用い、その開示は本明細書の一部を構成する。
【００５０】
表Ａの構造座標を用いて他の結晶化した分子又は分子複合体についての構造情報を得るのを助けることができる。これは分子置換を含む多くの周知の技術のいずれかにより達成され得る。
【００５１】
表Ａの構造座標は、ＡＲに少なくともある構造的類似の特徴を有する分子又は分子複合体の三次元構造の少なくとも一部分を決定するのにも用いることができる。特に、他の結晶化した分子又は分子複合体についての構造的特徴が得られ得る。これは分子置換を含む多くの周知の技術のいずれかにより達成され得る。
【００５２】
従って他の態様で本発明は、分子置換を用いてその構造が知られていない結晶化した分子又は分子複合体についての構造情報を得る方法を提供し、その方法はａ）該結晶化した分子又は分子複合体からＸ線回折パターンを得；
ｂ）そのＸ線回折パターンに表Ａの構造座標の少なくとも一部分を適用してその構造が未知の分子又は分子複合体の三次元電子密度地図を作り；そして
ｃ）表Ａの構造座標のすべて又は部分を用いてＡＲ−ＬＢＤ又はいずれかの他の核
ホルモン受容体リガンド結合ドメインのホモロジーモデル得る；
という工程を含む。
【００５３】
好ましくは結晶化した分子又は分子複合体は本発明の結晶を溶液に浸漬することにより得られる。
【００５４】
分子置換を用いることによって、本発明により提供されるＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド複合体またはその構造が未知の分子複合体の構造座標のすべてまたは部分がそのような情報を始めから測定する試みよりより早くより有効に得られる。
【００５５】
分子置換は未知の構造について位相の正確な評価を提供する。位相は直接測定できない結晶構造を解くのに用いる式中の因子である。分子置換以外の方法によって位相の正確な値を得ることは、近似と精密化の反復のサイクルを必要とし、結晶構造を解くのを非常に妨げる時間を消費する過程である。しかしながら、少なくともホモロガスな部分を含むタンパク質の結晶構造が解かれた場合、公知の構造からの位相は未知の構造の位相の満足すべき見積もりを提供する。
【００５６】
従って、この方法は、未知の分子又は分子複合体の結晶の単位セル内部で表ＡによるＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド複合体の関係部分を、その構造が未知の分子又は分子複合体の結晶の観察されたＸ線回折パターンを最もよく説明するよう方位づけ、配置させることによってその構造座標が未知の分子又は分子複合体の予備的モデルを作ることを含む。位相は次にこのモデルから計算でき、観察されたＸ線回折パターン振幅と組み合わせ、その座標が未知の構造の電子密度地図をつくる。次にこれをいずれかの周知のモデル構築及び構造精密化技術に付し、未知の結晶化した分子又は分子複合体の最終的な正確な構造を得る［Ｅ． Ｌａｔｔｍａｎ， ”Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ”， ｉｎ Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ．， １１５， ｐｐ． ５５−７７（１９８５）； Ｍ． Ｇ． Ｒｏｓｓｍａｎｎ， ｅｄ．， ”Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄ”， Ｉｎｔ． Ｓｃｉ． Ｒｅｖ． Ｓｅｔ．， Ｎｏ． １３， Ｇｏｒｄｏｎ ＆ Ｂｒｅａｃｈ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７２）］。
【００５７】
いずれかの結晶化した分子又は分子複合体、又は変異体、同族体、又はＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドのいずれかの部分と十分に相同性のオーファン受容体のいずれかの部分の構造はこの方法によって解くことができる。上述のＡＲに加えて、活性化又は脱活性化リガンドが特性づけられ得ない多くの受容体も存在する。これらのタンパク質はＡＲに対する強い配列相同性により核ホルモン受容体として分類され、オルファン受容体として知られる。
【００５８】
構造座標は様々な化学物質と共複合体化するＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドの結晶の構造を解くのにも特に有用である。このアプローチはＡＲ阻害剤候補物の複合体との相互作用を含む化学物質間の相互作用についての最適部位の決定を可能にする。例えば、異なったタイプの溶媒に曝された結晶から集めた高分解能Ｘ線回折データが各タイプの溶媒分子が何処にあるか決定することを可能にする。これらの部位に堅く結合する少分子を次に設計し、合成し、そのＡＲ阻害活性について試験する。
【００５９】
上に挙げたすべての複合体は周知のＸ線回折技術を用いて研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ［Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， １９９２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ， Ｉｎｃ． により配布；例えば、Ｂｌｕｎｄｅｌｌ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ ｓｕｐｒａ； Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ｖｏｌ． １１４ ＆１１５， Ｈ． Ｗ． Ｗｙｃｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ． ａｄｓ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９８５）］等のコンピューターソフトウエアを用いて約０．２または以下のＲ値まで１．５−３オングストローム分解能Ｘ線データに対し精密化しうる。したがってこの情報を用いて公知のＡＲアゴニスト、部分アゴニスト、アンタゴニスト、部分アンタゴニストおよびＳＡＲＭＳを最適化し、より重要なことは新しいＡＲアゴニスト／アンタゴニストを設計し得る。
【００６０】
したがって、ＡＲ−ＬＢＤリガンドの部分が次の残基の少なくとも一つとファンデルワールス接触または水素結合接触しているＡＲ−ＬＢＤリガンドについてのＡＲ−ＬＢＤにおける結合部位に関する：表ＡのＡＲ−ＬＢＤのＶ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６またはＬ９０７。本発明の目的のために、ＡＲ−ＬＢＤ結合部位とは変異体または同属体も含むことを意味する。好ましい態様において変異体または同属体は表ＡのＡＲ−ＬＢＤ結合部位の残基Ｖ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６またはＬ９０７に対して少なくとも２５％の同一性、より好ましくは５０％の同一性、より好ましくは７５％の同一性、もっとも好ましくは９５％の同一性を有する。
【００６１】
本発明は機械読み取り可能なデータをコード化したデータ貯蔵材料を含む機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体にも関し、そのデータは表ＡによるＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドまたは該複合体の同属体の構造座標により定義され、概同族体は３．０Å以下の複合体の骨格原子からの根平均二乗偏差を有する骨格原子を含む。好ましくは本発明の機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体は、該分子または分子複合体、または該分子または分子複合体の同族体が表ＡのＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドについての構造座標のセットにより定義され、該同族体は２．０Å以下の該アミノのも骨格原子からの根平均二乗偏差を有する。好ましい態様では機械読み取り可能なデータ貯蔵媒体は表ＡのＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンドについての構造座標の少なくとも部分のフーリェ変換を含む機械読み取り可能なデータの第一のセットをコードしたデータ貯蔵材料を含み、第一の組のデータおよび第二の組のデータを用いる指令をプログラム化した機械を用いて未知の構造の分子または分子複合体のＸ線回折パターンを含む機械読み取り可能なデータの第二のセットと組み合わせた場合、機械読み取り可能なデータ、第一の組のデータおよび第二の組のデータに対応する構造座標の少なくとも部分を決定しうる。
【００６２】
本発明は、ＡＲ−ＬＢＤ／ＡＲ−ＬＢＤリガンド複合体の結晶に基づくアンドロゲン受容体の３次元モデルを用いるコンピューター的方法をも提供する。一般にアンドロゲン受容体リガンドを設計するコンピューター的方法は、ＡＲ−ＬＢＤのどのアミノ酸がリガンドの化学的部分（少なくとも一つの）と相互作用するかを決定する。結合したリガンドを有するＡＲ−ＬＢＤを含む結晶化したタンパク質の３次元モデルを用い、化学的部分の（少なくとも一つの）化学的修飾を選択し、相互作用するアミノ酸と天然のホルモンの対応する化学的部分の間の相互作用と比較して、相互作用するアミノ酸と第二の化学的部分の間の相互作用を減少させるかまたは増加させる構造を有する第二の化学的部分を作り出す。好ましい態様においてアンドロゲン受容体活性をモジュレートする化合物を同定する方法は次の工程のいずれかの組み合わせをふくむ：
Ａ．表Ａの構造座標により定義されるＡＲ−ＬＢＤに空間的に適合する試験化合物をモデリングするか、またはＡＲ−ＬＢＤ、変異体ＡＲ−ＬＢＤ、またはＡＲ−ＬＢＤ同族体またはその部分の三次元構造モデルを用いる；
Ｂ．ＡＲ−ＬＢＤ構造座標または本明細書に説明するリガンド結合部位を用いて構造的および化学的特徴を同定する；
Ｃ．　同定した構造的または化学的特徴を用いてＳＡＲＭ候補物として化合物を設計または選択する；
Ｄ．　 三次元構造モデルまたはリガンド結合部位を用いてＳＡＲＭ候補物として化合物を設計または選択する；
Ｅ．　 ＳＡＲＭ候補物を合成する；
Ｆ．　ＡＲ−ＬＢＤに対する試験化合物の結合によって特徴づけられる試験においてＳＡＲＭ候補物をスクリーニングする；
Ｇ．表ＡのＡＲ−ＬＢＤのＶ６８５、Ｌ７００、Ｌ７０１、Ｓ７０２、Ｓ７０３、Ｌ７０４、Ｎ７０５、Ｅ７０６、Ｌ７０７、Ｇ７０８、Ｅ７０９、Ｑ７１１、Ａ７３５、Ｉ７３７、Ｑ７３８、Ｙ７３９、Ｓ７４０、Ｗ７４１、Ｍ７４２、Ｇ７４３、Ｌ７４４、Ｍ７４５、Ｖ７４６、Ｆ７４７、Ａ７４８、Ｍ７４９、Ｇ７５０、Ｒ７５２、Ｙ７６３、Ｆ７６４、Ａ７６５、Ｌ７６８、Ｆ７７０、Ｍ７８０、Ｍ７８７、Ｉ８６９、Ｌ８７３、Ｈ８７４、Ｆ８７６、Ｔ８７７、Ｆ８７８、Ｍ８９４、Ｍ８９５、Ａ８９６、Ｅ８９７、Ｉ８９８、Ｉ８９９、Ｓ９００、Ｖ９０１、Ｑ９０２、Ｖ９０３、Ｐ９０４、Ｋ９０５、Ｉ９０６またはＬ９０７よりなる群から選択されるＡＲ−ＬＢＤからの一以上のアミノ酸残基を修飾または置換する。
【００６３】
本発明のコンピューター的方法は、そのような結晶および三次元構造情報を用いてアンドロゲン受容体のＬＢＤのコンホメーション変化をモジュレートする合成リガンドを作り出すアンドロゲン受容体合成リガンド設計方法である。これらのコンピューター的方法はアンドロゲン受容体に対するアゴニストまたは部分アゴニスト、アンタゴニストまたは部分アンタゴニストまたはＳＡＲＭを設計するのに特に有用であり、アゴニストまたは部分アゴニスト、アンタゴニストまたは部分アンタゴニストまたはＳＡＲＭは、天然に存在するリガンドまたはアゴニスト等の天然に存在するリガンドを模倣する他のリガンドについて観察される活性化ドメインの正常な対等関係を妨げるなど、遺伝子発現の制御におよぼす受容体の影響を変化させる、多くのリガンドにより誘導される分子事象のいいずれか一つを妨げる拡張された部分を有する。本明細書に記載のようにアンドロゲン受容体の合成リガンドは様々な医学的状態においてアンドロゲン受容体の活性をモジュレートするのに有用であろう。
【００６４】
重要なリガンド−受容体相互作用を安定化させまたは妨げるヘリックス−３またはヘリックス１１へむかう伸張された化学的部分を設計することも可能である（Ｈｕｍｍ ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍ． （Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）１９９０ ３２３：８３−８７； Ｐｏｕｊｏｌ， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２０００ ２７５（３１）：２４０２２−２４０３１）。ＤＨＴと複合化したＡＲ−ＬＢＤの構造はアンドロゲン（ＤＨＴ）の１７αヒドロキシル基がＡＲ−ＬＢＤのＴｈｒ８７７およびＡｓｎ７０５と重要な水素結合を形成することを示す（Ｓａｃｋ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． （ＵＳＡ） ９８（９）：４９０４−４９０９（２００１））。実験はＡｓｎ７０５がアラニン（Ｎ７０５Ａ）に変異した場合非ステロイド抗アンドロゲンは野生型のＡＲに比べ低いアンタゴニスト性を有することを示す。したがってＡｓｎ７０５は非ステロイド抗アンドロゲンのアンカリングおよびＡｓｎ７０５での化学的部分の設計に重要な役割を果たすことを示し、Ｔｈｒ８７７もＳＡＲＭの開発に用いることができる。本明細書で記載のようにアンドロゲン受容体の合成リガンドはホルモン誘発腫瘍においてアンドロゲン受容体活性を阻害し、他のアンドロゲン受容体を含む非腫瘍組織においてアンドロゲン受容体を活性化するのに有用であろう。
【００６５】
ＥＲ−ＬＢＤおよびＡＲ−ＬＢＤの３次元構造についての２次構造（ＳＳ）の位置は以下に示す。示したアミノ酸配列アラインメントはＡＲ−ＬＢＤおよびＥＲ−ＬＢＤの構造的重なりに基づいている。配列の番号付けはＡＲ−ＬＢＤについてである。Ｈ（またはＧ）は、特定のアミノ酸がヘリックス中にあることを示し、Ｅ（またはＢ）は特定のアミノ酸がβストランド中にあることを示す。ＡＲ−ＬＢＤはＩｌＥ６７２からＨｉｓ９１７を通って伸び（配列番号１）、ＥＲ−ＬＢＤはＳｅｒ３０５からＡｒｇ５４８を通って伸びる（配列番号２）。ヘリックスの番号付けは配列および構造定義の下に示す。
【化１】
2004509072.tif 000002
【００６６】
ＡＲおよびＥＲについて利用可能な結晶学的データを用い、本発明のＳＡＲＭの合理的な設計を可能にする様々なコンピュータープログラムが利用可能である。ＩＣＭ（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．７ ｏｒ ｈｉｇｈｅｒ； Ｍｏｌｓｏｆｔ ＬＬＣ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， ＣＡ）又はＳＹＢＹＬ（Ｔｒｉｐｏｓ Ｉｎｃ． Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）などのソフトウエアプログラムをＡＲまたはＥＲ結晶からの原子座標とともに用いて３次元モデルを作り、そして／またはリガンド結合に関与する構造を決定できる。ＩＮＳＩＧＨＴＩＩ（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）およびＧＲＡＳＰ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ）等の他の分子視覚化プログラムは更なる取り扱いおよび新規な構造を導入する能力を可能にする。更に、ＡＲ−ＬＢＤの配列およびＡＲ−ＬＢＤ構造をいれることができる多くのコンピューターモデリングシステムが利用できる。次にコンピューターシステムは、ＡＲモジュレーター候補物が結合する部位の構造的な詳細を作り、モジュレーター候補物の相補的構造の詳細を決定できる。これらのモデリングシステムにおける設計はＡＲ−ＬＢＤと物理的および構造的に結合できる化合物に一般に基いている。更に、化合物はＡＲ−ＬＢＤと結合することを可能にするコンフォメーションを推測できねばならない。あるモデリングシステムは、実際の合成および試験の前にＡＲモジュレーター候補物の阻害または結合効果の可能性を推定する。
【００６７】
化学物質またはその断片をそれらがＡＲおよびＥＲと結合する能力についてスクリーニングする方法もよく知られている。しばしばこれらの方法はコンピュータースクリーン上の活性部位の視覚的検査により開始する。次に選択された断片または化学物質をＡＲ−ＬＢＤまたはＥＲ−ＬＢＤと共に位置づける。ドッキングはソフトウエアを用い、グローバル最適化方法または分子ダイナミックおよびＣＨＡＲＭＭおよびＡＭＢＥＲ等の標準的な分子メカニック力場による最小化プロトコールによる受容体結合部位におけるリガンドの最適化により行われる。分子ドッキングおよび本発明において有用な化学的断片または化学物質の選択を助けるコンピュータープログラムの例は、限定するものではないが、ＧＲＩＤ （Ｇｏｏｄｆｏｒｄ，Ｐ．Ｊ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９８５ ２８：８４９−８５７ ）， ＡＵＴＯＤＯＣＫ （Ｇｏｏｄｓｅｌｌ， Ｄ．Ｓ． ａｎｄ Ｏｌｓｅｎ， Ａ． Ｊ． Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ， ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９９０ ８：１９５−２０２ ）、ＤＯＣＫ （Ｋｕｎｔｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９８２ １６１：２６９−２８８）およびＩＣＭ （Ｍｏｌｓｏｆｔ ＬＬＣ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ ＣＡ， ＩＣＭ ２．７ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ， Ａｂａｇａｎ ｅｔ ａｌ． １９９４ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２３５：９８３−１００２， Ｔｏｔｒｏｖ ｅｔ ａｌ． １９９７ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｓｕｐｐｌ． １：２１５−２２０）を含む。
【００６８】
好ましい化学物質または断片を選択すると、それらのお互いのおよびＡＲまたはＥＲに対する関係を視覚化することができ、物質または断片を単一のモジュレーター候補に組み立てることができる。個々の化学物質を組み立てるのに有用なプログラムは、限定するものではないがＣＡＶＥＡＴ （Ｂａｒｔｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｂｌｅｍｓ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｒｏｙａｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７８， １８２−１９６（１９８９））および３Ｄデータベースシステム（Ｍａｒｔｉｎ， Ｙ．Ｃ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９２ ３５：２１４５−２１５４）を含む。
【００６９】
或いは、化合物を空の活性部位または公知の阻害剤の場合により含むある部分を用いてｄｅ ｎｏｖｏで設計できる。このタイプの設計方法は限定されるものではないがＬＵＤＩ（Ｂｏｈｍ Ｈ−Ｊ， Ｊ． Ｃｏｍｐ． Ａｉｄ． Ｍｏｌｅｃ． Ｄｅｓｉｇｎ １９９２ ６：６１−７８）およびＬｅａｐＦｒｏｇ（Ｔｒｉｐｏｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ． ＭＯ）を含む。
【００７０】
受容体結合部位における設計されおよびドックされた化学物質を評価するため多数のプロトコールが開発されている。タンパク質結合部位における化学物質を評価するのに有用なプログラムは限定されるものではないがＤＯＣＫ（Ｋｕｎｔｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９８２ １６１：２６９−２８８， ＩＣＭ （Ｍｏｌｓｏｆｔ ＬＬＣ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ ＣＡ， Ｔｏｔｒｏｖ ｅｔ ａｌ． １９９７ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｓｕｐｐｌ． １：２１５−２２０， Ｓｃｈａｐｉｒａ ｅｔ ａｌ． ２０００ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９７（３）： １００８−１０１３）およびＳＹＢＹＬ（Ｔｒｉｐｏｓ Ｉｎｃ． Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ））を含む。
【００７１】
ひとたびコンピューターで設計されたリガンド（ＣＤＬ）が合成されると、本願明細書に記載されたような試験を用いてホルモン依存性腫瘍におけるアンタゴニストとしての活性を確立し、他の非悪性ＡＲを含む組織におけるその活性を評価する。ホルモン依存性腫瘍でアンタゴニストとして働き、他の非腫瘍ＡＲを含む組織では活性を示さないか、より好ましくは部分アゴニスト若しくはアゴニスト活性を示すＣＤＬは本発明によるＳＡＲＭである。そのような試験の後、ＬＢＤに結合したＣＤＬとのＬＢＤ結晶を作り出すことによりＣＤＬは更に精密化される。ＣＤＬの構造は３次元モデルについての確立された化学的修飾方法を用いて更に精密化でき、ＣＤＬの活性またはアフィニティを改良し、「スーパーＳＡＲＭ」（選択された組織においてアンタゴニスト活性を保持しながら優れたアゴニスト活性を有する化合物）のそれのような改良された性質を有する第二生成ＣＤＬを作ることができる。
【００７２】
本発明の特に好ましい態様では、次の活性レベルを有するＳＡＲＭを意図する。そのようなＳＡＲＭは本発明の方法および組成物で好ましく、次のセクション（ｉ）および／または（ｉｉ）に記載のアンタゴニスト活性レベルを示し、次のセクション（ｉｉｉ）および／または（ｉｖ）に記載の活性を示さないかまたはより好ましくはアゴニスト活性レベルを示す。
（ｉ）本発明のＳＡＲＭスクリーニングに関して上に記載し、実施例３、４、および６に記載のような前立腺腫瘍細胞系での活性を予言する少なくとも１つのホルモン依存性腫瘍細胞系、好ましくは前立腺腫瘍細胞系、または他のホルモン依存性腫瘍系の阻害についての、ＤＨＴについて得られた最大シグナル誘導に対し約１μＭ以下の、より好ましくは約０．５μＭ以下の、最も好ましくは０．１μＭ以下のＩＣ５０；そして／または
（ｉｉ）上に記載し、実施例１０、１１、１２または１３に記載のようなモデルにおけるホルモン依存性腫瘍成長の阻害；および好ましくは、
（ｉｉｉ）正常なＡＲ応答性組織において、ＤＨＴに比べて１μＭで少なくとも３０％の活性化、より好ましくは約０．５μＭ以下のＥＣ５０、最も好ましくは約０．１μＭ以下のＥＣ５０、
（ｉｖ）そして／または上に記載し、実施例８に記載の腹部前立腺、精嚢、レバトール・アニの重量、および／または黄体化ホルモン血清レベルに及ぼす、対照動物にくらべて、インビボで活性化効果の２０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上。
本発明の好ましいＳＡＲＭは、ウゴナダル温血オス哺乳動物、好ましくはヒトのオスに見られる平均の正常な骨密度、平均の正常な筋肉質量、平均の正常な生殖機能および平均の正常なリビドーを維持するようにも作用する。好ましい態様において、本発明のＳＡＲＭはホルモン依存性の腫瘍に対しアンタゴニスト活性を示し、同じ量または量の範囲で活性を示さないかまたはアゴニスト活性を示す。患者に投与した場合、この量または量の範囲は好ましい治療的に有用な範囲である。この開示を読む当業者により理解されるように、本発明のＳＡＲＭは、好ましい治療的に有用な範囲外の量でしようする場合、ホルモン依存性腫瘍に対し同じアンタゴニスト活性を示し、非腫瘍を含む組織にたいして活性を示さないか、またはアゴニストを示し、または同じ特異性または選択的を示さないかもしれない。例えば本発明のＳＡＲＭは、好ましい治療的有用範囲を超える量を使用した場合、非腫瘍含有組織においてあるアンタゴニスト活性を示すかも知れない。
【００７３】
本発明は選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）にも関し、ＳＡＲＭはホルモン誘導性腫瘍においてはアンタゴニストであり、他のＡＲを含む非腫瘍組織においては非活性、またはより好ましくはアゴニストである化合物を含む。好ましい態様においては、ＳＡＲＭは本明細書に記載するスクリーニングアッセイにより同定され、または本明細書に記載するコンピューター的方法に従って設計される。少分子である化合物、特にペプチド又はステロイド以外の化合物が好ましい。特定のケモタタイプへの限定なしに、次の式ＩａまたはＩｂから選択される化合物、特に実施例に記載したこれらの式の特定の化合物が本発明のＳＡＲＭとして好ましい。式Ｉａの化合物は、２０００年６月２８日に出願された米国仮特許出願６０／２１４３９２、２００１年４月１８日に出願された米国仮特許出願６０／２８４６１７、および２００１年６月２０日に出願されたＳａｌｖａｔｉ等による「核ホルモン受容体機能の縮合環モジュレーター」と題する米国特許出願（代理人ケース番号ＬＤ０１９１（ＮＰ）に更に（「式Ｉ」の化合物として）記載され；式Ｉｂの化合物は、２０００年９月１９日に出願された米国仮特許出願６０／２３３５１９、２００１年４月１８日に出願された米国仮特許出願６０／２８４７３０、および２００１年６月２０日に出願されたＳａｌｖａｔｉ等による「縮合ヘテロサイクルスクシンイミド化およびそのアナログ、核ホルモン受容体機能のモジュレーター」と題する米国特許出願（代理人ケース番号ＬＤ０１９２（ＮＰ））に更に（「式Ｉ」の化合物として）記載されている。それらのすべては本明細書の一部を構成する。式Ｉａの化合物は以下の通りである。
【化２】
2004509072.tif 000003
（式中、特記しない限り、記号は以下の意味を有し、独立に選択される：
Ｇは、アリールまたはヘテロシクロ（例えばヘテロアリール）基であり、該基は単環または多環であり、場合により１以上の位置で、好ましくは水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、アルキニル若しくは置換アルキニル、ハロ、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、アリール若しくは置換アリール、ヘテロシクロ若しくは置換ヘテロシクロ、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ヘテロシクロアルキル若しくは置換ヘテロシクロアルキル、ＣＮ，Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１Ｃ＝Ｓ，Ｒ１ＨＮＣ＝Ｏ、Ｒ１Ｒ２ＮＣ＝Ｏ、ＨＯＣＲ３Ｒ３’、ニトロ、Ｒ１ＯＣＨ２、Ｒ１Ｏ、ＮＨ２、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ１、Ｓ＝ＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯ２ＯＲ１、ＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’、（Ｒ１Ｏ）（Ｒ１’Ｏ）Ｐ＝Ｏ、（Ｒ１）（Ｒ１’）Ｐ＝Ｏ、または（Ｒ１’）（ＮＨＲ１）Ｐ＝Ｏで置換されている。
ＥはＣ＝Ｚ２、ＣＲ７Ｒ７’（例えばＣＨＲ７）、ＳＯ２、Ｐ＝ＯＲ２，またはＰ＝ＯＯＲ２である。
Ｚ１はＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ６である。
Ｚ２はＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ６である。
Ａ１はＣＲ７またはＮである。
Ａ２はＣＲ７またはＮである。
Ｙが結合でない場合は、ＹはＪ−Ｊ’−Ｊ’’であり、Ｊは（ＣＲ７Ｒ７’）ｎで、ｎは０−３であり、Ｊ’は結合、またはＯ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、ＮＲ６、Ｃ＝Ｏ、ＯＣ＝Ｏ、ＮＲ１Ｃ＝Ｏ、ＣＲ７Ｒ７’、Ｃ＝ＣＲ８ＣＲ８‘、Ｒ２Ｐ＝Ｏ，ＯＰＯＯＲ２，ＯＰＯ２，ＯＳＯ２，Ｃ＝Ｎ，ＮＨＮＨ，ＮＨＮＲ６，ＮＲ６ＮＨ，Ｎ＝Ｎ，シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクル、またはアリール若しくは置換アリールであり、Ｊ’‘は（ＣＲ７ＣＲ７’）ｎでｎ＝０−３である。
ＷはＣＲ７Ｒ７‘−ＣＲ７Ｒ７‘、ＣＲ８＝ＣＲ８’、ＣＲ７Ｒ７‘−Ｃ＝Ｏ、ＮＲ９−ＣＲ７Ｒ７‘、Ｎ＝ＣＲ８，Ｎ＝Ｎ、ＮＲ９−ＮＲ９’，シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクル、またはアリール若しくは置換アリールである。
Ｑはアルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロシクロアルキル、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、アルキニル若しくは置換アルキニル、アリール若しくは置換アリール、ヘテロサイクロ（例えばヘテロアリール）若しくは置換ヘテロサイクロ（例えば置換ヘテロアリール）、ハロ、ＣＮ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ４Ｃ＝Ｏ、Ｒ５Ｒ６ＮＣ＝Ｏ、ＨＯＣＲ７Ｒ７‘、ニトロ、Ｒ１ＯＣＨ２，Ｒ１Ｏ，ＮＨ２，Ｃ＝ＯＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、またはＮＲ４Ｒ５である。
Ｍは結合、Ｏ、ＣＲ７Ｒ７‘またはＮＲ１０で、Ｍ’は結合またはＮＲ１０である（但しＭまたはＭ‘の少なくとも一つは結合でなければならない）。
Ｌは結合、（ＣＲ７ＣＲ７‘），ＮＨ、ＮＲ５またはＮ（ＣＲ７ＣＲ７‘）ｎで、ｎ＝０−３である。
Ｒ１およびＲ１‘は各独立に、Ｈ、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキルである。
Ｒ２は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキルである。
Ｒ３およびＲ３‘は、各独立に水素、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ハロ、ＣＮ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシアミド、アルコキシ若しくは置換アルコキシ、アミノ、ＮＲ１Ｒ２，チオール、アルキルチオ若しくは置換アルキルチオである。
Ｒ４は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ５は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ６は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ＣＮ、ＯＨ。ＯＲ１、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ７およびＲ７‘は各独立に水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ハロ、ＣＮ、ＯＲ１、ニトロ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルアミド、アミノ、ＮＨＲ４，ＮＲ２Ｒ５，ＮＯＲ１，チオール、アルキルチオ若しくは置換アルキルチオ、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯＲ１，ＰＯ３Ｒ１Ｒ１’，Ｒ１Ｒ１‘ＮＣ＝Ｏ、Ｃ＝ＯＳＲ１，ＳＯ２Ｒ１，ＳＯ２ＯＲ１、またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’である。
Ｒ８およびＲ８‘は、各独立に、水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ハロ、ニトロ、ＣＮ、アミノ、ＯＲ１，ＮＨＲ４、ＮＲ２Ｒ５，ＮＯＲ１，アルキルチオまたは置換アルキルチオ、Ｃ＝ＯＳＲ１、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ，Ｒ１Ｃ＝Ｏ，Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ，Ｒ１Ｒ１’ＮＣ＝Ｏ，ＳＯ２ＯＲ１，Ｓ＝ＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１，ＰＯ３Ｒ１Ｒ１’またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ９およびＲ９‘は、各独立に、水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ＣＮ，ＯＨ、ＯＲ１、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ，ＳＯ２Ｒ１，ＳＯ２ＯＲ１，またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’である。
Ｒ１０は水素、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ＣＮ，ＯＨ、ＯＲ１、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１Ｒ１‘ＮＨＣ＝Ｏ，ＳＯ２Ｒ１，ＳＯ２ＯＲ１，またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’である。）
【００７４】
式ＩＢは次の通りである：
【化３】
2004509072.tif 000004
（式中、特記しない限り、記号は以下の意味を有し、独立に選択される：
Ｇは、アリールまたはヘテロシクロ（例えばヘテロアリール）基であり、該基は単環または多環であり、場合により１以上の位置で、好ましくは水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、アルキニル若しくは置換アルキニル、ハロ、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、アリール若しくは置換アリール、ヘテロシクロ若しくは置換ヘテロシクロ、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ヘテロシクロアルキル若しくは置換ヘテロシクロアルキル、ＣＮ，Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１Ｃ＝Ｓ，Ｒ１ＨＮＣ＝Ｏ、Ｒ１Ｒ２ＮＣ＝Ｏ、ＨＯＣＲ３Ｒ３’、ニトロ、Ｒ１ＯＣＨ２、Ｒ１Ｏ、ＮＨ２、ＮＲ４Ｒ５、ＳＲ１、Ｓ＝ＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯ２ＯＲ１、ＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’、（Ｒ１Ｏ）（Ｒ１’Ｏ）Ｐ＝Ｏ、オクソ、（Ｒ１）（Ｒ１’）Ｐ＝Ｏ、または（Ｒ１’）（ＮＨＲ１）Ｐ＝Ｏで置換されている。
Ｚ１はＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ６である。
Ｚ２はＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ６である。
Ａ１はＣＲ７またはＮである。
Ａ２はＣＲ７またはＮである。
Ｙが結合でない場合は、ＹはＪ−Ｊ’−Ｊ’’であり、Ｊは（ＣＲ７Ｒ７’）ｎで、ｎは０−３であり、Ｊ’は結合、またはＯ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、ＮＲ７、Ｃ＝Ｏ、ＯＣ＝Ｏ、ＮＲ１Ｃ＝Ｏ、ＣＲ７Ｒ７’、Ｃ＝ＣＲ８Ｒ８‘、Ｒ２Ｐ＝Ｏ，Ｒ２Ｐ＝Ｓ，Ｒ２ＯＰ＝Ｏ，Ｒ２ＮＨＰ＝Ｏ，ＯＰ＝ＯＯＲ２，ＯＰ＝ＯＮＨＲ２、ＯＰ＝ＯＲ２，ＯＳＯ２，Ｃ＝ＮＲ７，ＮＨＮＨ，ＮＨＮＲ６，ＮＲ６ＮＨ，Ｎ＝Ｎ，シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクル、またはアリール若しくは置換アリールであり、Ｊ’‘は（ＣＲ７ＣＲ７’）ｎでｎ＝０−３である。
ＷはＣＲ７Ｒ７‘−ＣＲ７Ｒ７‘、ＣＲ８＝ＣＲ８’、ＣＲ７Ｒ７‘−Ｃ＝Ｏ、ＮＲ９−ＣＲ７Ｒ７‘、Ｎ＝ＣＲ８，Ｎ＝Ｎ、ＮＲ９−ＮＲ９’，Ｓ−ＣＲ７Ｒ７’、ＳＯ−ＣＲ７Ｒ７‘、ＳＯ２−ＣＲ７Ｒ７’シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、またはアリール若しくは置換アリールである。但し、ＷがＮＲ９−ＣＲ７Ｒ７‘、Ｎ＝ＣＲ８，Ｎ＝Ｎ、ＮＲ９−ＮＲ９’，Ｓ−ＣＲ７Ｒ７’、ＳＯ−ＣＲ７Ｒ７‘、ＳＯ２−ＣＲ７Ｒ７’、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロでない場合、Ｊ’はＯ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨ、ＮＲ７、ＯＣ＝Ｏ、ＮＲ１Ｃ＝Ｏ、ＯＰ＝ＯＯＲ２，ＯＰ＝ＯＮＨＲ２、ＯＳＯ２，，ＮＨＮＨ，ＮＨＮＲ６，ＮＲ６ＮＨ，またはＮ＝Ｎでなければならない。
Ｑ１は水素アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、アルキニル若しくは置換アルキニル、アリール若しくは置換アリール、ヘテロサイクロ（例えばヘテロアリール）若しくは置換ヘテロサイクロ（例えば置換ヘテロアリール）、ハロ、ＣＮ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ４Ｃ＝Ｏ、Ｒ５Ｒ６ＮＣ＝Ｏ、ＨＯＣＲ７Ｒ７‘、ニトロ、Ｒ１ＯＣＨ２、Ｒ１Ｏ、ＮＨ２，Ｃ＝ＯＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、またはＮＲ４Ｒ５である。
Ｑ２は水素アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニル若しくは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、アルキニル若しくは置換アルキニル、アリール若しくは置換アリール、ヘテロサイクロ（例えばヘテロアリール）若しくは置換ヘテロサイクロ（例えば置換ヘテロアリール）、ハロ、ＣＮ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ４Ｃ＝Ｏ、Ｒ５Ｒ６ＮＣ＝Ｏ、ＨＯＣＲ７Ｒ７‘、ニトロ、Ｒ１ＯＣＨ２、Ｒ１Ｏ、ＮＨ２，Ｃ＝ＯＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、またはＮＲ４Ｒ５である。
Ｌは結合、（ＣＲ７ＣＲ７‘）ｎ，ＮＨ、ＮＲ５またはＮＲ５（ＣＲ７ＣＲ７‘）ｎで、ｎ＝０−３である。
Ｒ１およびＲ１‘は各独立に、Ｈ、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキルである。
Ｒ２は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキルである。
Ｒ３およびＲ３‘は、各独立に水素、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ハロ、ＣＮ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルアミド、アルコキシ若しくは置換アルコキシ、アミノ、ＮＲ１Ｒ２，チオール、アルキルチオ若しくは置換アルキルチオである。
Ｒ４は、水素、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ５は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ６は、アルキル若しくは置換アルキル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ＣＮ、ＯＨ、ＯＲ１，Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯ２ＯＲ１またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ７およびＲ７‘は各独立に水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ハロ、ＣＮ、ＯＲ１、ニトロ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルアミド、アミノ、ＮＨＲ４，ＮＲ２Ｒ５，ＮＯＲ１，チオール、アルキルチオ若しくは置換アルキルチオ、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ、ＳＯ２Ｒ１、ＳＯＲ１，ＰＯ３Ｒ１Ｒ１’，Ｒ１Ｒ１‘ＮＣ＝Ｏ、Ｃ＝ＯＳＲ１，ＳＯ２Ｒ１，ＳＯ２ＯＲ１、またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’である。またはＡ１またはＡ２は基Ｒ７を含み、Ｗは基Ｒ７を含み、Ａ１またはＡ２のＲ７基とＷはヘテロサイクル環を形成する；
Ｒ８およびＲ８‘は、各独立に、水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ニトロ、ＣＮ、ＯＲ１、アミノ、ＮＨＲ４、ＮＲ２Ｒ５，ＮＯＲ１，アルキルチオまたは置換アルキルチオ、Ｃ＝ＯＳＲ１、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ，Ｒ１Ｃ＝Ｏ，Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ，Ｒ１Ｒ１’ＮＣ＝Ｏ，ＳＯ２ＯＲ１，Ｓ＝ＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１，ＰＯ３Ｒ１Ｒ１’またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１‘である。
Ｒ９およびＲ９‘は、各独立に、水素、アルキル若しくは置換アルキル、アルケニル若しくは置換アルケニル、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル、シクロアルケニルまたは置換シクロアルケニル、ヘテロサイクロ若しくは置換ヘテロサイクロ、シクロアルキルアルキル若しくは置換シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル若しくは置換シクロアルケニルアルキル、ヘテロサイクロアルキル若しくは置換ヘテロサイクロアルキル、アリール若しくは置換アリール、アリールアルキル若しくは置換アリールアルキル、ＣＮ，ＯＨ、ＯＲ１、Ｒ１Ｃ＝Ｏ、Ｒ１ＯＣ＝Ｏ、Ｒ１ＮＨＣ＝Ｏ，ＳＯ２Ｒ１，ＳＯ２ＯＲ１，またはＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’である。）
【００７５】
本発明は更にホルモン誘導腫瘍の成長を抑制するためにＳＡＲＭを使用する方法に関する。ホルモン誘導腫瘍は、ホルモン誘導腫瘍ではアンタゴニスト活性を有するが他の非腫瘍ＡＲを含む組織では活性を有しないかまたはより好ましくはアゴニスト活性を有するＳＡＲＭの有効量を患者に投与することにより治療できる。「有効量」とは患者においてホルモン誘導腫瘍の成長を防止するＳＡＲＭの量または濃度を意味する。好ましい態様では「有効量」とは非腫瘍ＡＲを含む組織においてアゴニスト活性を誘導する量または濃度をもいう。そのような量または濃度は、例えば本明細書に記載した細胞をベースにしたアッセイまたは他の当業者に認識された手段によりルーチンに決定できる。
【００７６】
本発明のＳＡＲＭは単独でまたは放射線および／または療法剤等の一以上の活性な薬剤と同時にまたは順次に投与し得る。本発明の化合物と組み合わせて有用な抗癌剤および細胞毒性剤の例は、限定するものではないがナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、エチレンジアミン、トリアゼン等のアルキル化剤；フォレートアンタゴニスト、プリンアナログ、ピリミジンアナログ等の抗代謝剤；アンスラサイクリン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、およびプリカマイシン等の抗生物質；Ｌ−アスパラギナーゼ等の酵素、ファルネシルたんぱく質トランスフェラーゼ阻害剤、５αレダクターゼ阻害剤、１７βヒドロキシステロイドデハイドロゲナーゼタイプ３；グルココルチコイド、エストロゲン／抗エストロゲン、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチン、黄体化ホルモン−放出ホルモンアンタゴニスト、オクトレオタイド酢酸等のホルモン剤；エクテイナシジン若しくはそのアナログおよび誘導体等の微小管崩壊剤；タキサン、例えばパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）、そのアナログ、およびエポチロンＡ−Ｆ等のエポチロン等の微小管安定剤；ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、タキサン等の植物由来生成物；トポイソメラーゼ阻害剤、プレニルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤；およびヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトテイン、ヘキサメチルメラミン、シスプラチンおよびカルボプラチン等の白金配位複合体；生物学的応答改変剤、成長因子等の抗癌剤および細胞毒性剤として用いられる他の薬剤、免疫モジュレーターおよびモノクローナル抗体を含む。本発明の化合物は放射療法と組み合わせて用いても良い。
【００７７】
これらの種類の抗癌剤および細胞毒性剤の代表的な例は、限定するものではないがメクロレエタミン塩酸塩、シクロホスファアミド、クロラムブシル、メルファレン、イフォスファミド、ブサルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、チオテパ、ダカルバジン、メトトレキセート、チオグアニン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペンタスタチン、クラドリビン、シタラビン、フルオロウラシル、ドキソルビシン塩酸塩、ダウノルビシン、イダルビシン、ブレオマイシン硫酸塩、マイトマイシンＣ，アンチノマイシンＤ，サフラシン、サフラマイシン、キノカルシン、ジスコデルモリド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルバインタータレート、エトポシド、エトポシドリン酸塩、テニポシド、パクリタキセル、タモキシフェン、エストラムスチン、エストラムスチンリン酸塩ナトリウム、フルタミド、ブセレリン、ロイプロリド、プテリジン、ジイネス、レヴァミソール、アフラコン、インターフェロン、インターロイキン、アルデスロイキン、フィルグラスチン、サルグラモスチン、リツキシマブ、ＢＣＧ、トレチノイン、イリノテカン塩酸塩、ベータメソソン、ゲミシタビン塩酸塩、アルトレタミン、およびトポテカおよびそれらのいずれかのアナログまたは誘導体を含む。
【００７８】
これらの種類の好ましいメンバーは限定するものではないがパクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノロルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、マイトマイシンＣ、エクテイナシジン７４３、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、ジェムシタビン、サイトシンアラビノシド、ポドフィロトキシンまたはエトポシド、エトポシドリン酸塩またはテニポシド等のポドフィロトキシン誘導体、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、ビンデシン、およびロイロシンを含む。
【００７９】
抗癌剤および他の細胞毒性剤の例は以下のものを含む：ドイツ特許４１３８０４２．８；ＷＯ９７／１９０８６、ＷＯ９８／２２４６１，ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／３８１９２、ＷＯ９９／０１１２４、ＷＯ９９／０２２２４、ＷＯ９９／０２５１４、ＷＯ９９／０３８４８、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ９９／２７８９０、ＷＯ９９／２８３２４、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９９／５４３３０、ＷＯ９９／５４３１８、ＷＯ９９／５４３１９、ＷＯ９９／６５９１３、ＷＯ９９／６７２５２、ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ００／００４８５に見出されるエポチロン誘導体、ＷＯ９９／２４４１６（ＵＳ特許６０４０３２１も参照）に見出されるサイクリン依存性キナーゼ、ＷＯ９７／３０９９２およびＷＯ９８／５４９６６に見出されるプレニルプロテイン阻害剤；ＵＳ特許６０１１０２９に一般的におよび具体的に記載された薬剤（特に癌の治療においてＬＨＲＭモジュレーターまたは外科的な去勢とともにＡＲモジュレーター、ＥＲモジュレーター等の（いずれかのＮＨＲモジュレーター（本発明のそれを含むが限定されない）と共にＵＳ特許の化合物が使用できる）を含む。
【００８０】
本発明の組み合わせ物は上述の状態と関係する治療における投与において特別の有用性のために選ばれた他の治療剤と製剤化してもよいし、共投与もしうる。例えば、本発明の化合物を抗嘔吐剤、およびＨ１およびＨ２抗ヒスタミン等の吐き気、過敏（症）、および胃の痛みを防止する薬剤と共に製剤化してもよい。
【００８１】
本発明のＳＡＲ、は例えば経口的に投与された活性である、本明細書で開示された方法によりＳＡＲＭとして同定された化合物は液体、例えばシロップ、懸濁液、または乳濁液、錠剤、カプセル、ロゼンジとして製剤化できる。液体組成物は、適当な液体担体、例えばエタノール、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、油等非水溶媒、懸濁化剤、保存剤、界面活性剤、湿潤剤、香料、着色剤と共に化合物の懸濁液または溶液から一般になるであろう。或いは、液体製剤は再構成可能な粉末から製造できる。例えば活性化合物、懸濁化剤、シュクロース、および甘味料を含む粉末を水で再構成し、懸濁液を作る；シロップは活性成分、シュクロース、および甘味料を含む粉末から製造できる。錠剤の形の組成物は固体組成物を作るのにルーチンに用いられるもの等のいずれかの適当な医薬担体を用いて製造できる。そのような担体の例はステアリン酸マグネシウム、澱粉、ラクトース、シュクロース、微結晶セルロース、およびバインダー、例えばポリビニルピロリジンを含む。担体の部分として含まれるカラーフィルムコーチングおよびカラーを有する錠剤を提供することもできる。更に活性化合物を親水性または疎水性マトリックスを含む錠剤として放出調節形態で製剤化することができる。カプセルの形の組成物は例えば活性化合物および賦形剤を硬いゼラチンカプセルに導入すること等ルーチンのカプセル化方法を用いて製造できる。カプセル製造の他の例は例えば硬いゼラチンカプセルに活性化合物および高分子量ポリエチレングリコール化合物の半固体のマトリックスを充たす；またはソフトゼラチンカプセルにポリエチレングリコール中の活性化合物の溶液、または食用油例えば液体パラフィンまたは分別ココナツ油中も懸濁液を充たすことを含む。
【００８２】
本発明のＳＡＲＭ、非経口的に投与された場合活性である例えば本明細書に開示する方法による化合物は、例えば筋肉内または静脈投与のため等の非経口的な投与のいずれかの様式のため製剤化できる。筋肉内投与のための典型的組成物は、油例えばアラチス油またはゴマ油中の活性成分の懸濁液または溶液を含むであろう。静脈投与のための典型的組成物は、例えば活性成分、デキストローズ、塩化ナトリウム、共溶媒、例えばポリエチレングリコール、および場合によりキレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸、および抗酸化剤、例えばメタビサルファイトナトリウムを含む滅菌した等張性水溶液を含むであろう。
【００８３】
本発明のＳＡＲＭ、直腸投与で活性である例えば本明細書で開示された方法によりＳＡＲＭとして同定された化合物は、座剤として製剤化できる。典型的な座剤製剤は、ゼラチン、ココアバター、または　他の低融点植物性または合成のワックスまたは脂肪とともに活性成分を一般に含むであろう。
【００８４】
本発明のＳＡＲＭ、局所的投与で活性である例えば本明細書で開示された方法によりＳＡＲＭとして同定された化合物は、例えば経皮組成物として製剤化できる。そのような組成物は例えば、裏打ち、活性成分貯蔵部、調節膜、ライナ−、接触接着剤を含む。
【００８５】
ＳＡＲＭの典型的な１日用量はＳＡＲＭの活性、個々の必要、治療すべき状態および投与経路により変わる。例示的な適当な用量は、１日あたり０．００１−１０ｍｇ／ｋｇ体重の一般的範囲である。
【００８６】
次の実施例は本発明を更に説明するたね提供される。
【００８７】
【実施例】
実施例１：本発明のＳＡＲＭの例示
本発明のＳＡＲＭの例を表１に示す。次の化合物の絶対的配置は決定しなかった。命名の簡単のために、本明細書では化合物［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシルエチル）−７−メチル」−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルは「Ｒ」配置を有すると示し、化合物［３ａＳ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシルエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルは「Ｓ」配置を有すると示した。［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシルエチル）−７−メチル」−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルに由来するエナンチオマー的に純粋な化合物は本明細書では「Ｒ」配置を有すると示し、化合物［３ａＳ−（３ａα，４β， ７β， ７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシルエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルに由来するエナンチオマー的に純粋な化合物は本明細書では「Ｓ」配置を有すると示す。命名の簡単のために、化合物［３ａＳ−（３ａα，４β，５β、７β、７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシルエチル）−４−メチル」−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルは「Ｓ」配置を有すると示し、化合物［３ａＲ−（３ａα，４β，５β、７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシルエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルは「Ｒ」配置を有すると示した。化合物［３ａＳ−（３ａα，４β，５β、７β、７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシルエチル）−４−メチル」−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルに由来するエナチオマー的に純粋な生成物は「Ｓ」配置を有すると示し、化合物［３ａＲ−（３ａα，４β，５β、７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシルエチル）−４−メチル」−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリルに由来するエナチオマー的に純粋な生成物は「Ｒ」配置を有すると示した。［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａ　　　　　　α）］−４−［７−［２−［［（１，１―ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリルに由来するエナンチオマー的に純粋な生成物は「Ｒ」配置を有すると示し、［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［［（１��１―ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリルに由来するエナンチオマー的に純粋な生成物は「Ｓ」配置を有すると示す。
【００８８】
表１の化合物の保持時間を決定するために用いたクロマトグラフィー技術は以下のようである：ＬＣＭＳ＝ＹＭＣＳ５ＯＤＳカラム４．６ｘ５０ｍｍ、０．１％ＴＦＡを含む１０−９０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏで４分にわたって溶出する；４ｍＬ／分、２２０ｎｍでモニター；ＬＣ＝ＹＭＣＳ５ＯＤＳカラム４．６ｘ５０ｍｍ、０．２％リン酸を含む１０−９０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏで４分にわたって溶出する；４ｍＬ／分、２２０ｎｍでモニター；表１の化合物の分子質量は式ｍ／ｚによりＭＥ（ＥＳ）により測定した。
【表１】
2004509072.tif 000005
【表２】
2004509072.tif 000006
【表３】
2004509072.tif 000007
【表４】
2004509072.tif 000008
【表５】
2004509072.tif 000009
【表６】
2004509072.tif 000010
【表７】
2004509072.tif 000011
【表８】
2004509072.tif 000012
【表９】
2004509072.tif 000013
【表１０】
2004509072.tif 000014
【表１１】
2004509072.tif 000015
【００８９】
表１−表１１の化合物の名称
１．（αＲ）−α―メトキシベンゼン酢酸、２−［（３ａα，４β，７β，７ａα）―２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−イル］エチルエステル
２．４−フルオロ安息香酸、２−［（３ａα，４β，７β，７ａα）―２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−イル］エチルエステル
３．（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−７−［２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
４．（３ａα，４β，７β，７ａα）−ヘキサヒドロ−４−［２−（４−メトキシフェノキシ）エチル］−７−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
５．（３ａα，４β，７β，７ａα）−ヘキサヒドロ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−７−［２−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］エチル］−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
６．（３ａα，４β，７β，７ａα）−ヘキサヒドロ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−７−［２−４−（ニトロフェノキシフェノキシ）エチル−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
７．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］ヘキサヒドロ−７−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
８．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−７−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−イル］エトキシ］ベンゾニトリル
９．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−１，３−ヂオキソ−７−［２−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシエチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
１０．（３ａα，４β，７β、７ａα）−４−［２−（アセチルオキシ）エチル］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）ヘキサヒドロ−７−メチル−４、７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
１１．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−７−［２−［（７−メチル−１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イル）オキシ］エチル］−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドールー２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
１２．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イルオキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドールー２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
１３．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［（６−クロロ−１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドールー２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
１４．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−７−［２−［（６−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イルオキシ］エチル］−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
１５．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［２−（ベンゾイルオキシ）エチル］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）ヘキサヒドロ−７−メチル−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
１６．（３ａα，４β，７β，７ａα）−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）−４−［２−［（４−ニトロベンゾイル）オキシ］エチル］ヘキサヒドロ−７−メチル−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
１７．４−クロロ安息香酸、２−［（３ａα，４β，７β，７ａα）−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−イ］エチルエステル
１８．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−７−エチルオクタヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
１９．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［４−［２−（３−フルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２０．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−［２−（３−メトキシフェノキシ）エチル］−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２１．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［４−［２−４−シアノフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２２．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル、早期溶出鏡像異性体
２３． ［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（４−シアノフェノキシ）エチルオクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル−ナフタレンカルボニトリル
２４．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（４−クロロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２５．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（４−アセチルフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２６．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（３−シアノフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２７．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［（５，６，７，８、−テトラヒドロ−１−ナフタレニル）オキシ）エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル−１−ナフタレンカルボニトリル
２８．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［（５，６，７，８、−テトラヒドロ−５−オキソ−１−ナフタレニル）オキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
２９．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルオキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル−１−ナフタレンカルボニトリル
３０．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（５−クロロ−２−ピリジニル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
３１．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イルオキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
３２．［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル−７−（４−フルオロベンゾイル）テトラヒドロ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）ジオン
３３．［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−７−（４−ブチルベンゾイル）テトラヒドロ）−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）ジオン
３４． ［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−ヘキサヒドロ２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）カルボン酸、４−フルオロフェニルエステル
３５．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（７−クロロ−４−キノリル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル、トリフルオロ酢酸（１：１）
３６．（３ａα，４β，７β，７ａα）−ヘキサヒドロ−４，７−ジメチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン
３７．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（４−フルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
３８．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−７−［２−［（４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−７−イル）オキシ］エチル］−１，３−ヂオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
３９．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（３，５−ジメトキシフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ヂオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４０． ［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２（４−クロロ−３メチルフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ヂオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４１．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２（４−シアノ−２，３−ジフルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル−１−ナフタレンカルボニトリル
４２．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［７−［２（５−クロロ−１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４３．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）フェノキシエチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４４．［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−３−［２−［２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−６−ヒドロキシ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−イル］エトキシ］−５−イソオキサゾールカルボン酸、メチルエステル
４６．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］オキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４７．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−７−［２−［４−（１，２，３−チアジアゾール−５−イル）フェノキシ］エチル］−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４８．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−７−［２−［（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）オキシ］エチル］−１，３−ヂオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
４９．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（６−クロロ−２−メチル−４−ピリミジル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
５０．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］オキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
６０．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−Ｎ−［４−［２−［２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−７Ｈ−イソインドール−７−イル］エトキシ］フェニル］アセトアミド
６１．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（２，４−ジクロロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
６２．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェノキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
６３．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（５，７−ジクロロ−８−キノリル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル、トリフルオロ酢酸（１：１）
６４．［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（５−クロロ−１，２−ベンズイソオキサゾール−３−イル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
６５．（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−７−エチルオクタヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
６６．（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−４−エチルオクタヒドロ−５−ヒドロキシ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル
６７．［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［（５−クロロ−２−ピリジニル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
【００９０】
これらのＳＡＲＭのインビトロ活性をＭＤＡ ＭＢ−４５３乳がん系リポーターアッセイ、シオノギマウス乳がん系増殖アッセイおよびＣ２Ｃ１２筋肉細胞リポーターアッセイで調べた。ＤＨＴにより得た最大シグナルと比較した、ＩＣ５０（ＤＨＴ存在下、アンタゴニストモード）およびＥＣ５０（ＤＨＴ不存在下、アゴニストモード）を測定した。さらに、ＤＨＴに比べてセット薬剤濃度におけるリポーターアッセイについて活性化％（ＤＨＴ不存在）および阻害％（ＤＨＴ存在）を測定した。シオノギ増殖アッセイの場合、ＤＨＴに比べてセット薬剤濃度における増殖％（ＤＨＴ不存在）および阻害％（ＤＨＴ存在）を測定した。特記しない限り化合物はラセミ混合物として提供した。これらの活性レベルのある程度の相違が上表のすべての例示化合物は本発明によるＳＡＲＭプロフィールを示した。
【００９１】
具体的には、すべての例示ＳＡＲＭはＭＤＡ ＭＢ−４５３乳がん系レポーターアッセイにおいて０．８μＭ未満のＩＣ５０および５μＭ以上のＥＣ５０を示した。同様の結果が試験した多くのＳＡＲＭについての、シオノギマウス乳癌系増殖アッセイにおいて観察された。具体的には、いくつかの化合物は０．８μＭ未満のＩＣ５０および５μＭ以上のＥＣ５０を示した。対照的に、Ｃ２Ｃ１２筋肉細胞リポーターアッセイにおいては試験した多くの化合物が３μＭ以上のＩＣ５０を示し、試験した化合物の特に好ましいサブセットは０．８μＭ以下のＥＣ５０を示すか２５％以上のアゴニスト活性を示した。試験した表１の好ましい例示的なＳＡＲＭは、化合物３、７、１１、１３、１９、２３、２４、２５、３０、３１および６７を含む。
【００９２】
更に、表１のＳＡＲＭの効果を成熟ラット前立腺重量アッセイ（）において完全なＡＲアンタゴニストと比較した。腹部の前立腺（ＶＰ）、精液小嚢（ＳＶ）、ｌｅｖａｔｏｒ ａｎｉ（ＬＡ）および黄体化ホルモン（ＬＨ）血清レベルに及ぼす、完全なＡＲアンタゴニストとＳＡＲＭ化合物７、９、および３６の影響を比較するため、成熟したラット（ｎ＝５）に１４の連続した日の間経口的に投与し、器官重量および血清の分析を行なった。完全なＡＲアンタゴニストと比較して、特に化合物２ｅ（実施例２で製造）および顕著な阻害効果を示したＣａｓｏｄｅｘ（公知のＡＲアンタゴニスト）、ＳＡＲＭ化合物９および３６が最高用量（１００ｍｇ／ｋｇまたは「ｍｐｋ」）で中くらいの阻害効果をＶＰ、ＳＶおよびＬＡ重量に示した。中くらいの阻害効果のみを示す化合物７は（化合物９および３６）と対照的に逆の用量応答を示し、１００ｍｐｋでのＶＰ、ＳＶおよびＬＡ重量の阻害剤として弱かった。血清ＬＨレベルは無傷の対照と非常に似ており、ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ−ｐｉｔｕｉｔａｒｙにおいてこれらのＳＡＲＭの非常に弱い活性を示唆する。
【００９３】
本発明のＳＡＲＭ化合物７および９のインビボ活性も薬剤投与の予防スケジュールを用いてラットレバトールあに筋肉モデルで調べた（実施例８）。この動物モデルでは、性的に成熟した（６−８週齢）オスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを用いた。ラットを去勢し処置群に分け、手術の３日後に始めて、試験材料で処置した。化合物７および９の潜在的ＳＡＲＭの効果を、テストステロンプロピオネート（０．３ｍｇ／ｋｇ−３ｍｇ／ｋｇ）をこれらのＳＡＲＭに比較する用量−応答研究によりテストステロンと比較した。化合物９はレバトール・アニ筋肉および前立腺の両方で有効でなかった。
【００９４】
化合物７および９（それらはラセミである）を、ヌードマウス（ｎ＝８）におけるＣＷＲ−２２前立腺癌モデルにおいてＣａｓｏｄｅｘとも比較した。すべての３つの化合物を１４の連続した日の間径口的に投与した。化合物７および９の両方は７５ｍｐｋ用量の場合Ｃａｓｏｄｅｘ（１５０ｍｇ／ｋｇ）に類似の阻害を示した。次に化合物９の２つの鏡像異性体を化合物２５（表１に示す）およびその鏡像化合物２５’ （表１に示さず）に分離した。両化合物を未成熟湿前立腺重量アッセイでインビボで試験した。化合物２５は正常な組織で小さい活性しか示さなかったが、一方全アンタゴニストエナンチオマー化合物２５’は明瞭な活性および用量応答を示した。化合物２５の強い結合アフィニティおよびアンタゴニスト活性（ＭＤ４５３における）を考えればこれは予期されない。ＣＷＲ−２２ヒト前立腺異種移植片モデルにおける両化合物の試験は逆の活性プロフィールを示した。化合物２５は１９ｍｇ／ｋｇ用量でＣａｓｏｄｅｘ（１５０ｍｇ／ｋｇ）と同じくらい強力であるが、一方化合物２５’は試験した最大用量（７５ｍｐｋ）で顕著な活性を示さなかった。
【００９５】
得られたインビボデータはインビトロデータを反映し、化合物が２つのＡＲ依存性腫瘍細胞系に対してアンタゴニストであり、正常な筋肉細胞系に対してはアゴニストであることを示した。
【００９６】
実施例２：ＳＡＲＭｓの化学合成
本発明のＳＡＲＭｓの典型的な化学合成は次の実施例２ａ−２ｄ（ｉ）に含まれる。当業者達は本開示を読めば直ちに理解するであろうが本明細書に述べられた方法と異なる方法もまた典型的なＳＡＲＭｓの合成に用いることが出来る。
【００９７】
次の略語を本明細書で使用する：
ＤＢＵ＝１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデシ−７−エン
４−ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノ−ピリジン
ｅｅ＝鏡像体の過剰
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
Ｍｅ＝メチル
ＲＴ＝保持時間
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィ
ｐＴＳＡ＝パラ−トルエンスルホン酸
ｔ−Ｂｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル
ｐｈ＝フェニル
Ｐｄ／Ｃ＝活性炭上のパラジウム
Ｔｓ＝トシル
ＴＢＳ＝ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ｎ−Ｂｕ＝ｎ−ブチル
ｒｔ＝室温
ＬＣ＝液層クロマトグラフィー
Ｅｔ＝エチル
ＭＳ＝モレキュラーシーブ
ＭＳ（ＥＳ）＝電子線照射質量分析法
ＤＥＡＤ＝ジエチルアゾジカルボキシレート
ＷｓＤＣＣ＝水溶性ジカルボニルジイミド１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド
ＴＢＡＦ−テトラブチルアンモニウムフロリド
ＤＳＡＤ−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート
ＡＤＤＰ−１，１−［アゾジカルボキシル］ジピペリジン
【００９８】
実施例２ａ：［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−２−［４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ヘキサヒドロ−１，３−ジオキシ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ａ）の製造
【化４】
2004509072.tif 000016
【００９９】
トルエン（４ｍＬ）中に４−イソシアネート−２−（トリフルオロメチル）−ベンゾニトリル（１．１ｍｍｏｌ）を含む溶液に対し、活性化した４ÅＭＳ（０．３００ｇ）と共にトルエン（６ｍＬ）中に含まれる（１Ｓ−エクソ）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，６−カルボン酸，２−（１，１−ジメチルエチル）６−メチルエステル（２ａ（１））（０．２２０ｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で１０時間後、ＤＢＵ（０．１６６ｍＬ，１．１１ｍｍｏｌ）を加え、その反応を８１℃で２時間加熱した。その後その反応を２５℃に冷却し、１ＮＨＣｌ（５０ｍＬ）中に流し入れた。その溶液をその後塩化メチレンで抽出し（３×３０ｍＬ）、その合わせた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。得られた粗製物をアセトン／クロロホルム（０−２−４−８％アセトン）で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２ａ（０．１５５ｇ，４２％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４７３．０９［Ｍ＋Ｈ］＋．ＨＰＬＣＲＴ＝３．２８０分（１００％）（ＹＭＣ ８５ ＯＤＳカラム，４．６×５０ｍｍ；１０−９０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏグラジエント，＋０．１％ＴＦＡ；４ｍＬ／分，２２０ｎＭ検出）．ＨＰＬＣ ＲＴ＝３．１３３分（１００％）（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム，４．６×５０ｍｍ；１０−９０％　ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏグラジエント，＋０．１％ＴＦＡ；４ｍＬ／分，２２０ｎＭ検出）；白色泡状のものとして。
【０１００】
出発の化合物、２ａ（１）、は次の方法によって製造した：
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−４−ヒドロキシプロリン（１０．０ｇ，４３．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解し、０℃に冷却した。その後、ボラン／ＴＨＦ（１．０Ｍ溶液，８６．６ｍＬ）を１５分間に亘って加えた。その後、その反応を２５℃に暖め１６時間加熱還流した。その後、その反応フラスコを熱源からはずし無水メタノール（３５ｍＬ）をゆっくり加えた。２５℃へ冷却した後、その溶媒を真空中で除き生成する粗製ジオールの中間体が直接得られた。その粗製のジオール（１．８１ｇ，８．３４ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５０ｍＬ）中に溶解し、２，６−ルチジン（１．４６ｍＬ，１２．５１ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を７８℃に冷却した。ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート（１．９２ｍＬ，８．３４ｍｍｏｌ）をその後に加えた。２時間後、その混合物を１Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）中に注ぎ入れ、塩化メチレンで抽出（２×１００ｍＬ）し、その有機物を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。得られた粗製アルコールを、クロロホルム中のアセトン（０−５−１０％アセトン）で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、透明な油状のものとして（２Ｓ−トランス）−４−ヒドロキシ−２−［［［（１，１−ジメチレンエチル）ジメチルシリル］オキシ］メチル］−１−ピロリジンカルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ｄ（２））を得た：
【化５】
2004509072.tif 000017
【０１０１】
２ａ（２）（３．４１ｇ，１０．３ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（３０．０ｍＬ）に溶解し０℃に冷却した。その後Ｐ−トルエンスルフォニル塩化物（５．８９ｇ，３０．９ｍｍｏｌ）を１０分間に亘って少量づつ加えた。その後そのフラスコを４℃の冷蔵庫内に４８時間放置した。得られた溶液を１Ｎ ＨＣｌ（３００ｍＬ）中に注ぎ入れ、塩化メチレンで抽出し（３×２００ｍＬ）、その有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。粗製のトシレート中間体をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解し、それにＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）を加え、続いてｐＴＳＡ−Ｈ２Ｏ（１．０３ｍｍｏｌ）を加えた。その反応をＴＬＣで決定される如く完了させて、その混合物をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（１５０ｍＬ）中に注ぎ入れ塩化メチレンで抽出した（３×５０ｍＬ）。一緒にした有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥した。その粗製のアルコールをアセトン／クロロホルム（０−５−１０％アセトン）で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し透明な油状のものとして２．７１ｇ（２工程に対し７１％）の（２Ｓ−トランス）−２−ヒドロキシメチル−４−［［（４−メチルフェニル）スルフォニル］オキシ］−１−ピロリジンカルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ａ（３））を得た：
【化６】
2004509072.tif 000018
【０１０２】
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中に含まれる塩化オキサリルの溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中の２．０Ｍ溶液，２．８２ｍＬ）に対して−７８℃で無水ジメチルスルフォキシド（０．４６２ｍＬ、６．５１ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を１５分間放置した後、２ａ（３）（１．６１ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液をゆっくりと加えた。添加３０分後にトリエチルアミン（１．８１ｍＬ、１３．０２ｍｍｏｌ）を加え、その反応をゆっくりと０℃まで暖めた。その後反応物をＨ２Ｏ（２５ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で稀釈した。その後混合物を連続的に１Ｎ ＨＣｌ（１×１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（５０ｍＬ）および水（２×５０ｍＬ）で洗滌した。その有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で揮発性の有機物を除去した。粗製のアルデヒド中間体（１．６０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、ジエチルシアノホスホネート（９０％、０．９５ｍＬ、５．６４ｍｍｏｌ）を加え更にベンジルアミン（１．２３ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後にＴＬＣで観測される如くその反応を完了し、揮発性の有機物を真空中で除去した。粗製の反応混合物をアセトン／クロロホルム（０−２−３％アセトン）を用いて溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、白色固体として１．４８ｇ（７０％）の（２Ｓ−トランス）−２−［シアノ［（フェニルメチル）アミノ］メチル］−４−［［（４−メチルフェニル）−スルホニル］オキシ］−１−ピロリジンカルボン酸，１，１−ジメチルエステル（２ａ（４））を得た。２ａ（４）（下式の構造）はＮＭＲ分光学によってジアステレオマーのａ〜１：１混合物と決定された。
【化７】
2004509072.tif 000019
【０１０３】
２ａ（４）（１．４８ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５ｍＬ）中に溶解し、シイソプロピルエチルアミン（１．４５ｍＬ）を加えた。その混合物をシールした管の中で１８時間１００℃に加熱した。その後揮発物を真空中で除去し、得られた粗製の物質をアセトン／クロロホルム（０−２−３％アセトン）で溶出し、ＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、透明な油状のものとして（１Ｓ−エンド）−６−シアノ−５−（フェニルメチル）−２，５−ジアビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ａ（５Ａ））（０．５９１ｇ、６２％）および（１Ｓ−エキソ）−６−シアノ−５−（フェニルメチル）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ａ（５Ｂ））（０．３７０ｇ、３８％）の混合物を得た。これらの化合物に対する構造決定はＮＯＥ、ＣＯＥＳＹおよびＤＥＰＴ ＮＭＲの実験に従って実施した：
【化８】
2004509072.tif 000020
【０１０４】
（２ａ（５Ａ）（０．４００ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＯＭｅ（０．５Ｍ、１２．８ｍＬ）中に溶解し、６０℃に５時間加熱した。その反応を０℃に冷却し、３ＮＨＣｌ（４．０ｍＬ）をゆっくり加えた。０℃で２時間後その反応をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（５０ｍＬ）中に注入した。その混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出（３×５０ｍＬ）し、集めた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。粗製のエステルをクロロホルム／アセトン（０−２−４％アセトン）で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーにより粗製し、透明な油状のものとして０．３２０ｇ（０．９２ｍｍｏｌ、７２％）の（１Ｓ−エンド）−５−（フェニルメチル）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，６−カルボン酸，２−（１，１−ジメチルエチル）６−メチルエステル（２ａ（６Ａ））を得た：
【化９】
2004509072.tif 000021
【０１０５】
２ａ（５Ｂ）（０．４００ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）をＮａＯＭｅ（０．５Ｍ、１２．８ｍＬ）中に溶解し、６０℃で５時間加熱した。その反応を０℃に冷却し３ＮＨＣｌ（４．０ｍＬ）をゆっくり加えた。０℃で２時間後その反応をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（５０ｍＬ）中に注ぎ込んだ。その混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し（３×５０ｍＬ）、一緒にした有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。粗製のエステルをクロロホルム／アセトン（０−２−４％アセトン）で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、透明な油状のものとして０．２９０ｇ（０．８５ｍｍｏｌ、６６％）の（１Ｓ−エキソ）−５−フェニルメチル）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，６−カルボン酸，２−（１，１−ジメチルエチル）６−メチルエステル（２ａ（６Ｂ））を得た：
【化１０】
2004509072.tif 000022
【０１０６】
２ａ（６Ａ）（０．２８０ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を無水ＥｔＯＨ（１０．０ｍＬ）に溶解しＰｄ／Ｃ（１０％Ｐｄ、０．０８０ｇ）を加えた。バルーンによりＨ２の環境を作りその反応を２５℃で２０時間攪拌した。Ｐｄをセライトを通す濾過により除いた後、ＥｔＯＡｃですすいだ。揮発物を真空中で取り除き、粘稠な黄色の油状のものとして２ａ（１）（０．２０５ｇ、９９％）を得た。この化合物を精製することなしに得た。ＭＳ（ＥＳ）＝ｍ／ｚ２５７．１８［Ｍ＋Ｈ］＋．ＨＰＬＣ ＲＴ＝１．２２３分（９５％）（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ：１０−９０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏグラジエント、＋０．１％ＴＦＡ；４ｍＬ／分、２２０ｎＭ検出）：
【化１１】
2004509072.tif 000023
【０１０７】
実施例２ｂ：５Ｓ−（５α，８α，８ａ（α）］−４−（ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｂ）の製造
【化１２】
2004509072.tif 000024
２ａ（０．１１５ｇ、０．２６４ｍｍｏｌ）を無水塩化メチレン中に溶解し無水ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を２５℃で加えた。１時間後にその反応を真空中で濃縮し、得られた残渣を塩化メチレン中で溶解し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液中に注ぎ入れた。その後この溶液を塩化メチレンで抽出し（３×１０ｍＬ）、集めた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。これにより黄色固体として０．０８９ｇ（９７％）の遊離した２ｂを得た：ｍ／ｚ３５９．０９［Ｍ＋Ｎａ］＋。ＨＰＬＣ ＲＴ＝１．４７７分（１００％）（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ；１０−９０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏグラジエント、＋０．１％ＴＦＡ；４ｍＬ／分、２２０ｎＭ検出）。
【０１０８】
実施例２ｃ：［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−７−（４−フルオロベンゾイル）テトラヒドロ−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｃ）の製造
【化１３】
2004509072.tif 000025
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−テトラヒドロ−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２Ｃ（１））（０．０７７ｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２．０ｍＬ）およびＴＥＡ（０．１２７ｍＬ、０．９１２ｍｍｏｌ）中に溶解して４−ＤＭＡＰ（０．００１ｇ）を加えた。その反応を０℃に冷却し、４−フルオロベンゾイルクロリド（０．０４０ｍＬ、０．３４２ｍｍｏｌ）を加えた。その後その反応をゆっくり２５℃に暖めた。３時間後、その反応を塩化メチレン（５０ｍＬ）で稀釈した後、連続的に１Ｎ ＨＣｌおよびＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で洗滌した後無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。その粗製物をクロロホルム中の５％アセトンで溶出するシリカゲルの分取ＴＬＣによって精製し黄色固体として０．０２２ｇの２ｃを得た。ＨＰＬＣ：２．９６０分（保持時間）に於て１００％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、２２０ｎｍでモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４６１．０７［Ｍ＋Ｈ］＋。出発物質は次に記載する如く製造した。
【０１０９】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］ヘキサヒドロ−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ｃ（２））（０．１６０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５．０ｍＬ）中に溶解し、ＴＦＡ（１．５ｍＬ）を２５℃にて加えた。１．５時間後にその反応を真空中で濃縮し塩化メチレン中に溶解した。この溶液をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で洗滌した。水の層を塩化ナトリウム上で乾燥した。真空中での濃縮により黄色固体として０．１１５ｇの２ｃ（１）を得た。ＨＰＬＣ：１．７４７分（保持時間）に於て９３％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４分以上０．２％リン酸を含む１０−９０％のメタノール水溶液）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ３６９．０７［Ｍ＋ＭｅＯＨ］＋。
【０１１０】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］ヘキサヒドロ−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボン酸，１，１−ジメチルエチルエステル（２ｃ（２））
【化１４】
2004509072.tif 000026
２（ａ）（１）（０．２２０ｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）を、乾燥したトルエン（１０．０ｍＬ）中に新しく活性化した４Åモレキュラーシーブ（０．３００）を含む懸濁液に加えた。この混合物に対して４−ニトロナフタール−１−イソシアネート（０．２１４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で１４時間攪拌した後に、ＤＢＵ（０．１６６ｍＬ、１．１１ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を２時間８０℃で加熱した。２時間後、その反応を２５℃に冷却した後、１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）中に注ぎ入れた。この溶液を塩化メチレンで抽出し（３×３０ｍＬ）、集めた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。その粗製物をクロロホムル中の０−２−６％アセトンで溶出するシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、黄色の泡状のものとして０．２１１ｇの２ｃ（２）を得た。ＨＰＬＣ：３．１３０分（保持時間）に於て９５％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分維事象の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４３９．１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１１】
実施例２ｄ：［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）テトラヒドロ−７−（５−イソオキサゾリルカルボニル）−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｄＬｉＳｙｎ１），［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボン酸，４−フルオロフェニルエステル（２ｄＬｉＳｙｎ２），［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）テトラヒドロ−７−［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）スルホニル］−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｄＬｉｂＳｙｎ３）および［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボキシアミド（２ｄＬｉＳｙｎ４）の製造
【０１１２】
溶液相でのライブラリー合成
以下の方法は、液相ライブラリーフォーマットにおける本発明のＳＡＲＭｓ合成への一般的なアプローチである。このアプローチの組合せよって作られる個々の化合物に関するより詳細な記述は以下の通りである。２ｃ（１）（０．０５ｍｍｏｌ、先に記載した如く製造した）と類似した出発物質である一連の遊離アミンを粗いフリットと共にポリスチレンチューブ中でジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解した。その後Ｎ，Ｎ−（ジイソプロピル）アミノメチルポリスチレン（３．４９ｍｍｏｌ／ｇ、６０ｍｇ）を各反応容器に加えた後自動合成器により、ジクロロメタン０．５ｍＬ中にある望ましい酸クロリド、イソシアネート、クロロホルメートまたはスルフォニルクロリド（０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。その反応容器を２４時間２５℃で振盪した後トリス−（２−アミノエチル）アミンポリスチレンＨＬ（２００−４００メッシュ、３．３ｍｍｏｌ／ｇ、７５ｍｇ）を各反応容器に加え、再度その容器を２５℃で１８時間振盪した。各チューブからの液体を予めタールをつけた２．５ｍｌのＳＴＲチューブに流し出しその樹脂をジクロロメタンですすいだ（３×０．２５ｍＬ）。その後予めタールをぬったチューブを濃縮し、解析ＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳにより解析した。ＨＰＬＣ：（０．１％ＴＦＡを含み１０−９０％メタノール水溶液で４分以上溶出するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｐｒｉｍｅ ５μＣ−１８カラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）。
【０１１３】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）テトラヒドロ−７−（５−イソオキサゾリルカルボニル）−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオンイソオキサゾリルカルボニル）−５，８−メタンイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｄＬｉｂＳｙｎ１）
【０１１４】
【化１５】
2004509072.tif 000027
【０１１５】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−４−（ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−２（３Ｈ）−イル）−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｄ（１））（０．０３０ｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を粗いフリットと共にポリスチレンチューブ内でジクロロメタン（２．０ｍＬ）中に溶解した。その後Ｎ，Ｎ−（ジイソプロピル）アミノメチルポリスチレン（３．４９ｍｍｏｌ／ｇ、６５ｍｇ）を各反応容器に加えた後、イソオキサゾール酸クロリド（０．０２５ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。そのチューブを２５℃で２４時間振盪した後トリス−（２−アミノエチル）アミンポリスチレンＨＬ（２００−４００メッシュ、３．３ｍｍｏｌ／ｇ、７５ｍｇ）をその反応容器に加え、２５℃で１８時間再び振盪した。その液体を予めタールをぬった２．５ｍｌＳＴＲチューブ内に流し出しその樹脂をジクロロメタンですすいだ（３×０．２５ｍＬ）。真空内で濃縮し黄色固体として粗製の２ｄＬｉｂＳｙｎ１（０．０５８ｇ）を得た。精製を必要としなかつた。ＨＰＬＣ：２．２３７分（保持時間）にて１００％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおいてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４１４．１１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１６】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボン酸、４−フルオロフェニルエステル（２ｄＬｉｂＳｙｎ２）
【化１６】
2004509072.tif 000028
【０１１７】
２ｄ（１）（０．０３０ｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を粗いフリットと共にポリスチレンチューブ内でジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。その後、Ｎ，Ｎ−（ジイソプロピル）アミノメチルポリスチレン（３．４９ｍｍｏｌ／ｇ、６５ｍｇ）を各反応容器に加えた後４−フルオロフェニルクロロフォメート（０．０３３ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。そのチューブを２５℃で２４時間振盪した後、トリス−（２−アミノエチル）アミンポリスチレンＨＬ（２００−４００メッシュ、３．３ｍｍｏｌ／ｇ、７５ｍｇ）をその反応容器に加え、再び２５℃で１８時間振盪した。その液体を予めタールをぬった２．５ｍｌＳＴＲチューブ中に流し出し、その樹脂をジクロロメタンですすいだ（３×０．２５ｍＬ）。真空中で濃縮することにより粗製の２ｄＬｉｂＳｙｎ２（０．０５３ｇ）を黄色固体として得た。精製は必要でなかった。ＨＰＬＣ；２．９８７分（保持時間）で９３％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４５７．０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１８】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）テトラヒドロ−７−［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）スルフォニル］−５，８−メタノイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１，３（２Ｈ，５Ｈ）−ジオン（２ｄＬｉｂＳｙｎ３）
【化１７】
2004509072.tif 000029
【０１１９】
２ｄ（１）（０．０３０ｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を粗いフリットと共にポリスチレンチューブ中でジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。その後Ｎ，Ｎ−（ジイソプロピル）アミノメチルポリスチレン（３．４９ｍｍｏｌ／ｇ、６５ｍｇ）を各反応容器に加えた後イミダゾールスルフォニルクロリド（０．０３４ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。そのチューブを２５℃で２４時間振盪した後トリス−（２−アミノエチル）アミンポリスチレンＨＬ（２００−４００メッシュ、３．３ｍｍｏｌ／ｇ、７５ｍｇ）をその反応容器に加え再度２５℃で１８時間振盪した。その液体を予めタールをぬった２．５ｍｌＳＴＲチューブに流し出しその樹脂をジクロロメタンですすいだ（３×０．２５ｍＬ）。真空中で濃縮し、精製の２ｄＬｉｂＳｙｎ３（０．０４３ｇ）を黄色固体として得た。精製は必要としなかった。ＨＰＬＣ：１．６０３分（保持時間）で７０％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４６３．０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２０】
［５Ｓ−（５α，８α，８ａα）］−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−５，８−メタノイミダゾ［１．５−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−カルボキシアミド（２ｄＬｉＳｙｎ４）
【化１８】
2004509072.tif 000030
【０１２１】
２ｄ（１）（０．０３０ｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を粗いフリットと共にポリスチレンチューブ内でジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。その後Ｎ，Ｎ−（ジイソプロピル）アミノメチルポリスチレン（３．４９ｍｍｏｌ／ｇ、６５ｍｇ）を各反応容器に加えた後、４−フルオロフェニルイソシアネート（０．０２６ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。このチューブを２５℃で２４時間振盪した後、トリス−（２−アミノエチル）アミンポリスチレンＨＬ（２００−４００メッシュ、３．３ｍｍｏｌ／ｇ、７５ｍｇ）を各反応容器に加え、再度２５℃にて１８時間振盪した。その液体を予めタールをぬった２．５ｍｌＳＴＲチューブ内に流し出しその樹脂をジクロロメタンすすいだ（３×０．２５ｍＬ）。真空中で濃縮することにより粗製の２ｄＬｉｂＳｙｎ４（０．０５８ｇ）を黄色の固体として得た。精製は不要であった。ＨＰＬＣ：２．８９０分（保持時間）で１００％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ４５６．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２２】
実施例２ｅ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−（オクタヒドロ−４，７−ジメチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｅ）の製造
【化１９】
2004509072.tif 000031
【０１２３】
（３ａα，４β，７ａα）−ヘキサヒドロ−４，７−エポキシイソベンゾフラン−１，３−ジオン（２ｅ（１））
【化２０】
2004509072.tif 000032
新鮮な蒸留したフラン（１．６０ｍＬ、１５．３ｍｍｏｌ）をＣＨ２ＣＨ２（２．０ｍＬ）中に溶解し、無水マレイン酸（１．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を加え。その反応を２５℃で１６時間攪拌した後真空中で濃縮し黄色の固体を得た。この固体を酢酸エチル（３０ｍＬ）中に溶解しＰｄ／Ｃ（１０％Ｐｄ、０．２００ｇ）を加えた。その後バルーンにより水素を導入し２４時間反応を攪拌した。ＥｔＯＡｃによってすすぎながらセライトを通す濾過によりそのＰｄを除去した後、真空中の濃縮により白色の固体として２ｅ（１）（１．６９ｇ）を得た。２次元のＮＯＥ実験によって２ｅ（１）の構造的帰属が２ｅ（１）のものであることが確認された。
【０１２４】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−（オクタヒドロ−４，７−ジメチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｅ）
トルエン（５ｍＬ）中に２ｅ（１）（６４０ｍｇ、３．４４ｍｍｏｌ、１．０７当量）およびＴｓＯＨ（１０ｍｇ、触媒量）を含む溶液を密封したチューブ内で２日間加熱した。その反応混合物を室温に冷却した後、減圧下で濃縮した。５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により４００ｍｇ（１．１０ｍｍｏｌ、３４％）の２ｅを白色固体として得た。ＨＰＬＣ：３．０４分（保持時間）で９９％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおいてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３８２．２［Ｍ＋ＮＨ４］＋。
【０１２５】
実施例２ｆ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トルフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｆ）の製造
【化２１】
2004509072.tif 000033
ＤＥＡＤ（０．０６ｍＬ、０．３８０ｍｍｏｌ、１．５当量）を不活性な雰囲気下の室温にてＴＨＦ（１．３ｍＬ）中にトリフェニルホスフィン（１００ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ、１．５当量）を含む溶液に加えた。１０分間攪拌した後に４−フルオロフェノール（４３ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ、１．５当量）を一度に加えた。その反応混合物を５分間攪拌し（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｆ（１））（１００ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ、１当量）を加えて攪拌を３．５時間続けた。５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーその後の分取クロマトグラフィー［ＨＰＬＣ：１１．９３分（保持時間）（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム２０×１００ｍｍ、０．１％ＴＦＡを含み１０分以上の０−１００％のメタノール水溶液、２０ｍＬ／分、２２０ｎｍにてのモニタリング）］により固体として７２ｍｇ（５８％）の２ｆを得た。ＨＰＬＣ：３．７４分（保持時間）にて９９％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４分以上０．２％リン酸を含む１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）、ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４８７．１［ｍ−Ｈ］−。
【０１２６】
出発化合物、２ｆ（１）、は次の方法によって製造した：
ｎ−ＢｕＬｉ（８３ｍＬ、１３３．０ｍｍｏｌ、１．２当量、ヘキサン１．６Ｍ）を、不活性な雰囲気下の０℃にてＴＨＦ（８５ｍＬ）中に含まれる２−メチルフラン（１０ｍＬ、１１０．８ｍｍｏｌ、１当量）の攪拌している溶液に加えた。その反応混合物を室温で４時間攪拌した後０℃に冷却した。エチレンオキサイド（８．３ｍＬ、１６６．３ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下し、その反応混合物を一晩室温で暖めた。ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液でクエンチした後、その得られた層を分離し、水の層をＥｔ２Ｏで抽出した（２ｘ）。集めた有機層をＮａ２ＳＯ４の上で乾燥し、減圧下で濃縮した。大気圧下で蒸留（１７０−１８５℃）することにより１０．１３ｇ（８０．３ｍｍｏｌ、７２％）の５−メチル−２−フランエタノール（２ｆ（２））を明るい黄色の油状のものとして得た：
【化２２】
2004509072.tif 000034
【０１２７】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に含まれる２ｆ（２）（２５２ｍｇ、２ｍｍｏｌ、１当量）および４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−トリフルオロメチルベンゾニトリル（７９８ｍｇ、３ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を室温にて２日間攪拌した。その反応混合物を減圧下で濃縮した。６５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し２１７ｍｇの純粋な（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｆ（３Ａ））、７３ｍｇの純粋な（３ａα，４α，７α，７ａα）−４−［１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｆ（３Ｂ）および３１０ｍｇの２ｆ（３Ａ）並びに２ｆ（３Ｂ）の両者の混合物を得た。３画分すべてが白色固体として単離され全体の単離収率は６００ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ、７６．５％）であった。２ｆ（３Ａ）：ＨＰＬＣは２．５６分（保持時間）において９０％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４分以上０．２％のリン酸を含む１０−９０％メタノールの水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）。２ｆ（３Ｂ）：ＨＰＬＣは２．５６分（保持時間）において９０％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％のリン酸を含み４分以上の１０−９０％のメタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）。
【化２３】
2004509072.tif 000035
【０１２８】
ＥｔＯＨ（１２ｍＬ）中に２ｆ（３Ａ）（０．２ｇ、０．５１ｍｍｏｌ、１当量）および１０％Ｐｄ／Ｃ（４３ｍｇ、触媒）を含む溶液を水素雰囲気下の室温で２時間攪拌した。その反応混合物をセライトを通して濾過し、減圧下で濃縮し０．２ｇ（０．５１ｍｍｏｌ、１００％）の２ｆ（１）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ：２．５９分（保持時間）で９５％（０．１％ＴＦＡを含み１０−９０％のメタノール水溶液で４分以上溶出する４．６×５０ｍｍ ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９４．９７［Ｍ＋Ｈ］＋：
【化２４】
2004509072.tif 000036
【０１２９】
実施例２ｇ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−（２−ブロモエチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｇ）の製造
【化２５】
2004509072.tif 000037
ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中に２ｆ（１）（４９５ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、１当量）およびピリジン（０．１ｍｌ、１．２６ｍｍｏｌ、１当量）を含む溶液を０℃にてＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中にＰｈ３ＰＢｒ２（６３６ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、１．２当量を含む溶液に加えた。その反応混合物を室温にて３時間攪拌した後、その溶媒を減圧下で除去した。その得られた残渣をＥｔＯＡｃ−ヘキサン（６：４）の１０ｍｌ部で２回洗滌し集めた洗滌物を６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し３６０ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ、６７．７％）の２ｇを白色固体として得た。ＨＰＬＣ：３．５１分（保持時間）で９９％（ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４５６．７［Ｍ−Ｈ］−。
【０１３０】
実施例２ｈ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｈ）の製造
【化２６】
2004509072.tif 000038
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルエチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｈ（１）（０．０３１ｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．５ｍＬ）中に溶解し、プロピレンコンテナーに移し０℃に冷却した。その後ＨＦ・ピリジン（〜４７％ＨＦ、０．１ｍＬ）を加えた。１５分の後その反応をＬＣで定めるよう完了させ、冷却されたＮａＨＣＯ３水溶液中に注ぎ入れた。その混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×１０ｍＬ）。その集めた有機層を１ＮＨＣｌで洗滌し（１×２０ｍＬ）、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。２ｈを黄色の油状のものとして単離した。精製は不要であった。
【０１３１】
ＨＰＬＣ：２．５９分（保持時間）で９５％（０．１％ＴＦＡを含み１０−９０％メタノール水溶液で４分以上溶出する４．６×５０ｍｍのＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９４．９７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３２】
出発物質、２ｈ（１）、は次の方法により製造した。
【０１３３】
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中に５−メチル−２−フランメタノール２ｆ（２）（２．００ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）を含む溶液に対してイミダゾール（１．６２ｇ、２３．９ｍｍｏｌ）を加え、続いてｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．６３ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で２時間後その反応をジエチルエーテル（３００ｍＬ）に注ぎ水で（１×１００ｍＬ）、１Ｎ ＨＣｌ（１×１００ｍＬ）、氷（１×１００ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で洗滌し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥した。粗製の２−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−５−メチルフラン（２ｈ（２））をＬＣＭＳおよびＮＭＲで解析し、直接次の工程に用いるに十分な純粋であることを決定した。ＨＰＬＣ：４．３４７分（保持時間）で１００％（０．１％ＴＦＡを含み１０−９０％メタノール水溶液で４分以上溶出する４．６×５０ｍｍのＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）：
【化２７】
2004509072.tif 000039
【０１３４】
２ｈ（２）（４．０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）および無水マレイン酸（１．４２ｇ、１４．５１ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１０ｍＬ）中に溶解し、２５℃で６０時間攪拌した。その揮発性物質をその後真空下で除去し、得られた有機性のオイルを乾燥したエタノール（５０ｍＬ）に溶解しＰｄ／Ｃ（１０％Ｐｄ、１．００ｇ）を加えた。その後バルーンにより水素を導入した。３時間後、その反応をＥｔＯＡｃですすいだセライトを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗製の無水物をアセトン／クロロホルム（０−２−４％アセトン）で溶出するＳｉＯ２中での急速フラッシュクロマトグラフィーで精製し、３００ｇの出発化合物２−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−５−メチルフランに加えて１．３０ｇの（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］ヘキサヒドロ−７−メチル−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソベンゾフラン−１，３（２Ｈ）−ジオン（２ｈ（３））を透明な油状のものとして得た。プロトンＮＭＲ分光学によるキャラクタリゼーションではエクソ異性体のみを示した。１Ｈ ＮＭＲ、４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、３．８３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），１．７０−２．２５（６Ｈ，ｍ）、１．５５（３Ｈ，ｓ）、０．８２（９Ｈ，ｓ）、０．００（６Ｈ，ｓ）：
【化２８】
2004509072.tif 000040
【０１３５】
２ｈ（３））（０．２５０ｇ、０．８ｍｍｏｌ）および４−アミノ−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（０．１２４ｇ、０．６６８ｍｍｏｌ）を密封したチューブ中で乾燥したトルエン（２．０ｍＬ）中に懸濁させた。その後ＭｇＳＯ４（０．２００ｇ）およびトリエチルアミン（０．５ｍＬ）を加えそのチューブを密封し、１２５℃におけるオイルバス中に置いた。４０時間後、その反応を２５℃に冷却し濾過し真空下で濃縮した。その粗製物をＣＨ２Ｃｌ２で溶出するＳｉＯ２上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し０．１１１ｇの２ｈ（１）を黄色の固体として得た。ＨＰＬＣ：４．２０３分（保持時間）で９２％（０．１％のＴＦＡを含み４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出する４．６×５０ｍｍのＹＭＣ Ｓ５カラム、４ｍＬ／ｍｉｎ、２２０ｎｍでのモニタリング）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋：
【化２９】
2004509072.tif 000041
【０１３６】
実施例２ｉ：［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｉＡ）、急速溶出の対掌体および［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−１，３−ジオキソ−７−［２−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］エチル］−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｉＢ）、低速溶出鏡像体の製造
【化３０】
2004509072.tif 000042
【０１３７】
２ｆに対して記載したように合成されたラセミ化合物は、キラル正常層の液体クロマトグラフィーにより夫々の対蹠物中に分離された。ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤカラム（５０×５００ｍｍ）を使用し８５％ヘキサン／７．５％メタノール／７．５％エタノールを用い＠５０ｍＬ／ｍｉｎで溶出した。２２０ｎｍにてＵＶ検出法を用いた。急速に溶出するイソマー　イソマー２ｉＡ（保持時間＝５５．８６分）は解析のキラル正常相クロマトグラフィーにより９５．８％ｅｅ（［α］Ｄ２５＝−５３．０２°、ＣＨ２Ｃｌ２中Ｃ＝３．１３４）を有することが見出され、低速の溶出イソマー２ｉＢ（保持時間＝６２．８６分）は、８６％ｅｅ（［α］Ｄ２５＝＋４８．７４°、ＣＨ２Ｃｌ２中Ｃ＝２．２４２ｍｇ／ｃｃ）であった。
【０１３８】
実施例２ｊ：（αＲ）−α−メトキシベンゼン酢酸，２−［（３ａα，４β，７β，７ａα）−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−ｙ］エチルエステル（２ｊ）の製造
【化３１】
2004509072.tif 000043
【０１３９】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−インドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｊ（１））
【化３２】
2004509072.tif 000044
【０１４０】
ＡｃＯＨ（２３０ｍＬ）中に４−アミノ−１−ナフタレンカルボニトリル（１９．２ｇ、１１４ｍｍｏｌ）および無水マレイン酸（１４．０ｇ、１１３ｍｍｏｌ）を含む溶液を１１５℃で１２時間加熱した。室温に冷却後、その反応混合物を減圧下で濃縮した後ＣＨ２Ｃｌ２（２．５Ｌ）で稀釈した。その有機層をＨ２Ｏ（３Ｌ）で３回、Ｎａ２ＣＯ３（１Ｌ）の飽和水溶液で１回およびブライン（１Ｌ）で１回洗滌し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で〜２００ｍＬまで濃縮した。ＣＨＣｌ２で溶出するカチオン交換樹脂（６０ｇ、Ｕｎｉｔｅｄ　ＣｈｅｍｉｃａｌからのＣＵＢｘＢＭ６）上でのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により２５．０ｇ（８８％）の４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−１−イル）−１−ナフタレンカルボニトリルを黄色固体として得た。ＨＰＬＣ２．４８分で９６％（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｐｒｉｍｅ　Ｓ５−Ｃ１８カラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含み４分以上の１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ２４９．２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４１】
４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−１−イル）−１−ナフタレンカルボニトリル（１．００ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を密封したチューブ中でベンゼン（６．０ｍＬ）に懸濁し、２ｈ（２）（１．１１ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）を加えた。その反応を６０℃で１６時間加熱した後２５℃に冷却した。ベンゼンを真空下で除去し黄色の固体を得た。その固体を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％Ｐｄ、０．３００ｇ）を加えた。その後バルーンにより水素を導入した。４時間後にその反応を酢酸エチルですすいだセライトを通して濾過した。真空中の濃縮により淡い黄色の固体を得た。それをアセトン／クロロホルム（０％−１．５％−３％アセトン）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し２ｊ（１）（１．５３ｇ）を黄色の泡状のものとして得た。ＨＰＬＣ：４．１７３分（保持時間）で８６％（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出するＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）。
【０１４２】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｊ（２））
【化３３】
2004509072.tif 000045
【０１４３】
２ｊ（１）（１．３７ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８．０ｍＬ）中に溶解し、ポリプロピレンのビンに移し０℃に冷却した。その後ＨＦ・ピリジン（２．０ｍＬ）を加えた。２０分後、その反応を注意深く重炭酸ナトリウムの冷却した飽和溶液に注ぎ入れ塩化メチレンで抽出した（３×２０ｍＬ）。その後その有機物を１Ｎ ＮＣｌで洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。真空中で濃縮し、２ｊ（２）（０．９９ｇ）を黄色の泡状のものとして得たがそれらは更なる精製を行わなかった。ＨＰＬＣ：２．４４３および２．５９７（アトロプ異性体）分（保持時間）で９６％（０．２％のリン酸を含み４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出するＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ３９９．０２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１４４】
（αＲ）−α−メトキシベンゼン酢酸、２−［（３ａα，４β，７β，７ａα）−２−（４−シアノ−１−ナフタレニル）オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−４Ｈ−イソインドール−４−ｙ］エチルエステル（２ｊ）
【０１４５】
２ｊ（２）（０．２００ｇ、０．５７５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６．０ｍＬ）中にＷＳＤＣＣ（０．１３８ｇ、０．７１９ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−マンデリン酸（０．０９６ｇ、０．５７５ｍｍｏｌ）を含む溶液に加えた。その後、４−ＤＭＡＰ（０．００５ｇ）を加えその反応を２５℃で４時間攪拌した。その後、その混合物をジクロロメタンで稀釈し、１ＮＨＣｌで洗滌し（２×１０ｍＬ）、重炭酸ナトリウム（１０ｍＬ）で一度洗滌し無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。真空中で濃縮し、２ｊ（０．２２ｇ）を黄色の固体として得たが更なる精製は行わなかった。ＨＰＬＣ：３．２８３分（保持時間）で１００％（０．２％リン酸を含み、４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出するＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ５４７．２６［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１４６】
実施例２ｋ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２ｋ）の製造
【化３４】
2004509072.tif 000046
【０１４７】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−３ａ，４，７，７ａ−テトラヒドロ−７−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２ｋ（１））
【化３５】
2004509072.tif 000047
【０１４８】
ベンゼン（２ｍＬ）中に２ｈ（２）（４５５ｍｇ、１．８９４ｍｍｏｌ）および１−［４−ニトロナフタレン］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（２５４ｍｇ、０．９４７ｍｍｏｌ）を含む溶液を一晩６０℃で加熱した。１−［４−ニトロナフタレン］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンが２ｊ（１）で記述した如く製造された。その反応物を減圧下で濃縮し粗製の２ｈ（２）を褐色の固体として得たが、それらを更なる精製を行わずに次の工程に直接使用した。
【０１４９】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２ｋ）
【０１５０】
ＢＨ３・ＴＨＦ（０．９５ｍＬ、０．９５ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の１Ｍ溶液）を０℃にて粗製の２ｋ（１）（０．９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に加えた。２ｋ（１）が消費された後、その反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残渣をその後トルエン（２ｍＬ）に溶解しＭｅ３ＮＯ（７１ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を一晩加熱還流した。その後、その反応混合物を室温に冷却しＨ２Ｏを加えＥｔＯＡｃで抽出した（３ｘ）。一緒に有機の層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。７５％ＥｔＯＡｃ／３０％ヘキサンの混合物で溶出するＳｉＯ２上でのフラッシュクロマトグラフィーによる精製にて１３０．２ｍｇ（２６％）の２ｋを褐色の固体として得た。ＨＰＬＣ：３．９２分（保持時間）で９４％（０．２％のリン酸を含み、４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出するＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳカラム、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ５２７．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
実施例２１：（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２Ｉ）の製造
【化３６】
2004509072.tif 000048
【０１５２】
ＣＨ２ＣＮ（６ｍＬ）中に、ＴＢＡＦ（０．３ｍＬ、０．２９６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の１Ｍ溶液）およびＨＦ（０．３ｍＬ、Ｈ２Ｏ中５０％）を含む混合物を０℃にて２Ｋ（１０４ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に加えた。その反応物を室温にて一晩撹拌した。ＴＬＣにより明白な如く、出発物質が消費された後、ＥｔＯＡｃを加えその層を分離した。水の層ＥｔＯＡｃで抽出し（１回）、有機層を集めＨ２Ｏ（１回）およびブライン（１回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するＳｉＯ２上のフラッシュクロマトグラフィーによって６１．２ｍｇ（７５％）の２１を黄色の固体として得た。ＨＰＬＣ：２．４７分（保持時間）で９９％（０．２％のリン酸を含み４分以上１０−９０％のメタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ４１１．２［Ｍ−Ｈ］−。
【０１５３】
実施例２ｍ：（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−７−［２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−２−（４−ニトロ−１−ナフタレニル）−４，７−エポキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３−（２Ｈ）−ジオン（２ｍ）の製造
【化３７】
2004509072.tif 000049
【０１５４】
ＤＢＡＤ（３７．７ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ，１．５当量）をＰＰｈ３（４３ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液に加えた。１０分間撹拌した後、４−フルオロフェノール（１８．３ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、その反応混合物をさらに５分間撹拌した。２１（４５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加え、その混合物を一晩室温にて撹拌した。ＨＰＬＣによるとその粗製の反応混合物はほとんど出発のジオールを含むものであり、それ故、この混合物をＰＰｈ３（８６ｍｇ、３当量）、ＤＢＡＤ（７５．４ｍｇ、３当量）およびフェノール（３６．６ｍｇ、３当量）に先立つものとして予め形成されていた混合物にＴＨＦ（４ｍＬ）中で室温にて加えた。すべての２１が消費されるまで、それはＨＰＬＣで明らかになるのだが、撹拌を続けた。その反応を減圧下で濃縮した。分取クロマトグラフィー［１５．２分（保持時間）における分取クロマトグラフィー（ＹＭＣ　Ｓ％　ＯＤＳカラム２０カラム、２０×１００ｍｍ、０．１％ＴＦＡを含む１５分以上１０−９０％メタノール水溶液、２０ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）によって２５．０ｍｇ（４５％）の２ｍを明るい黄色固体として得た。ＨＰＬＣ：３．５３分（保持時間）で９９％（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％メタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５０５．２［Ｍ−Ｈ］−。
【０１５５】
ＤＢＡＤ（３７．７ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）をＰＰｈ３（４３ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液に加えた。１０分間撹拌した後、４−フルオロフェノール（１８．３ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をさらに５分間撹拌した。化合物２１（４５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加え、その混合物を一晩撹拌した。ＨＰＬＣによってその粗製反応混合物がほとんどの出発ジオール（化合物２１）を含むことを示していたのでもので、この混合物をＰＰｈ３（８６ｍｇ）、ＤＢＡＤ（７５．４ｍｇ）およびフェノール（３６．６ｍｇ）に先立つものとして予め形成されていた混合物にＴＨＦ（４ｍＬ）中で室温にて加えた。すべての２１が消費されるまで撹拌を続けた。その後、その反応を減圧下で濃縮した。分取クロマトグラフィー［１５．２分（保持時間）におけるＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ％　ＯＤＳカラム２０×１００ｍｍ、０．１％ＴＦＡを含む１５分以上１０−９０％メタノール水溶液、２０ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）］よる精製にて２５．０ｍｇ（４５％）の２ｍを明るい黄色の固体として得た。ＨＰＬＣ：３．５３分（保持時間）で９９％（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％メタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５０５．２［Ｍ−Ｈ］−。
【０１５６】
実施例２ｎ：［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｎＡ）＆［３ａＳ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−４−（２−ヒドロキシエチル）−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｎＢ）の製造
【化３８】
2004509072.tif 000050
【０１５７】
ラセミ体の２ｊ（２）を分取キラルＨＰＬＣ（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＡＤ　５×５０ｃｍカラム；５０ｍＬ／分でヘプタン（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）中２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ（１：１）で溶出、＠２２ｎｍ）によってその鏡像体の中に分離し、その急速溶出化合物２ｎＡ（Ｃｈｉｒａｌ　ＨＰＬＣ：１３．５４分；ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＡＤ　４．６×２５０ｍｍカラム；１ｍＬ／分でヘプタン中の２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ（１：１）で溶出）およびその低速溶出化合物２ｎＢ（Ｃｈｉｒａｌ　ＨＰＬＣ：１４．９９分；ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＡＤ　４．６×２５０ｍｍカラム；１ｍＬ／分でヘプタン中の２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ（１：１）で溶出）を得た。化合物２ｎＡおよび２ｎＢに対する絶対的なコンフォーメーションは確立されていない。学名命名法により単純化のため我々は化合物２ｎＡを「Ｒ」コンフィギュレーションを持つものとして、化合物２ｎＢを「Ｓ」コンフィギュレーションを持つものとして命名した。２ｎＡから誘導した鏡像的に純粋な生成物を「Ｒ」コンフィギュレーションを持つものとして命名し、２ｎＢから誘導した鏡像体的純粋な生成物を「Ｓ」コンフィギュレーションを持つものとして命名するであろう。
【０１５８】
実施例２ｏ：［３ａＲ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［４−［２−（３−フルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｏＡ）＆［３ａＳ−（３ａα，４β，７β，７ａα）］−４−［４−［２−（３−フルオロフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｏＢ）の製造
【０１５９】
トリフェニルホスフィン（０．０５２４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍＬ）溶液に対しＤＢＡＤ（０．０４６ｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、３−フルオロフェニル（０．０１８ｍＬ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間の添加の後、鏡像体的に純粋な２ｎＡ（０．０５０ｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）を加えた。２５℃で３時間後、その反応を真空下で濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ２０×１００ｍｍ、０．２％ＴＦＡを含み１５分以上１０−９０％メタノールの水溶液、２０ｍＬ／分、２２０ｎｍにおけるモニタリング）によって０．０３１ｇの２０ｏＡ化合物を白色の固体として得た。この方法を鏡像体的に純粋な化合物２ｎＢについて繰返し、２ｏＢを得た。２ｏＡ：ＨＰＬＣ：３．８０ｍｉｎ（保持時間）で１００％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含む４分以上１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ４７１．６５［Ｍ＋Ｈ］＋、［α］Ｄ２５＝−４７．３７１（ｃ＝４．４１２ｍｇ／ｃｃ、ＣＨ２Ｃｌ２）。２ｏＢ：ＨＰＬＣ：３８０分（保持時間）で１００％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％リン酸を含む４分以上１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ４７１．６５［Ｍ＋Ｈ］＋、［α］Ｄ２５＝＋２４．３（ｃ＝４．１６５ｍｇ／ｃｃ、ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０１６０】
実施例２ｐ：［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐＡ）＆［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐＢ）の製造
【化３９】
2004509072.tif 000051
【０１６１】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐ（１））
【化４０】
2004509072.tif 000052
４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−１−イル）−１−ナフタレンカルボニトリル（１８．３ｇ、６８．７ｍｍｏｌ）を２ｈ（２）（２６．６ｇ、１１０．６ｍｍｏｌ）のベンゼン（７５ｍＬ）溶液に加え一晩６０℃に加熱した。室温へ冷却した後、その反応混合物を減圧下で濃縮した。その残渣を０℃で１０分間撹拌しながらＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）で処理をした。得られた固体を濾過し、冷却したＭｅＯＨで洗浄し（２×１０ｍＬ）、２６．７ｇ（７９．５％）の２ｐ（１）を黄色の固体として得た。上記固体のＨＰＬＣ分析は９５％の純度を示していた（ＨＰＬＣ条件：２．４８分にて９５％（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−ｐｒｉｍｅ　Ｓ５−Ｃ１８カラム、４．６×５０ｍｍ、０．２％　Ｈ３ＰＯ４を用いて４分以上のグラジエントで１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍにて検出））。その濾液をその後減圧下で濃縮し、得られた固体を３％アセトン／ＣＨ２Ｃｌ３で溶出するクロマトグラフィーにかけ、さらに４．３６ｇの２ｐ（１）を得て最終収率は９２．５％であった。
【０１６２】
（３ａα，４β，５β，７ａα）−４−［７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐ（２））
【化４１】
2004509072.tif 000053
【０１６３】
２ｐ（１）（１０ｇ、２０．４６ｍｍｏｌ）およびＲｈＣｌ（ＰＰｈ３）３（０．９４７ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の混合物をあけ移しアルゴンで充填した（３Ｘ）。ＴＨＦ（２００ｍＬ）を加え一度すべての粒子を溶解し、カテコールボラン（４．４ｍＬ、４０．９３ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。ＨＰＬＣで決定されるが生成物形成が停止すると、この反応混合物を０℃に冷却し、リン酸塩の緩衝剤（３３０ｍＬ、ｐＨ７．２）でクエンチした後、ＥｔＯＨ（１３０ｍＬ）およびＨ２Ｏ２（３００ｍＬ、３０％水溶液）を加えた。ホウ酸塩が消費されると、その混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し（３Ｘ）、集めた有機層を１Ｎ　ＮａＯＨ、１０％ＮａＨＳＯ４水溶液（１：１、１Ｘ）およびブライン（１Ｘ）で洗浄した。一緒にした沈澱をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し（１Ｘ）、集めた有機の層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。２５分以上のグラジエント１０％対３０％アセトン／ＣＨＣｌ３で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製にて７．１ｇ（６８％）の２ｐ（２）を明るい黄色の固体として得た。ＨＰＬＣ条件：３．８２分で９８％（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−ｐｒｉｍｅ　Ｓ５−Ｃ１８カラム、４．６×５０ｍｍ、０．２％　Ｈ３ＰＯ４を用いて４分以上のグラジエントで１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍにて検出））。
【０１６４】
［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルエチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐ（３Ａ））および［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐ（３Ｂ））
【化４２】
2004509072.tif 000054
【０１６５】
ラセミ化合物２ｐ（２）をキラル正常相液体クロマトグラフィーにより各々の鏡像体中に分離した。９９分以上１３％ＥｔＯＨ／ヘキサンで溶出し、５０ｍＬ／分にて２２０ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｐａｋ　ＯＤカラム（５０×５００ｍｍ）を用いた。急速溶出イソマー２ｐ（３Ａ）は保持時間＝４５分および低速溶出イソマー２ｐ（３Ｂ）は保持時間＝６６分であった。
【０１６６】
［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ］−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐＡ）および［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｐＢ）
【０１６７】
２ｐ（３Ａ）（０．８４ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を２％　１２Ｎ　ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌し、減圧下で濃縮した。５−１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製で０．５７ｇ（８８％）の２ｐＡを得た。急速溶出イソマー（２ｐ（３Ａ））からの２ｐＡは解析キラル正常相クロマトグラフィーにより９９．７％ｅｅであることがわかった。ＨＰＬＣ条件：２．１７分で９９．７％（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ　ＯＪ　４４．６×２５０ｍｍ、１０ミクロン、４０℃、イソクラテイク８０％ヘプタン／２０％ＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ（１：１）、１．０ｍＬ／分、２８８ｎｍでの検出）。
【０１６８】
２ｐ（３Ｂ）（０．８６ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）を２％　１２Ｎ　ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌し、減圧下で濃縮した。５−１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製にて０．６０ｇ（９０％）の２ｐＢを得た。低速溶出イソマー（２ｐ（３Ｂ））からの２ｐＢは解析キラル正常相クロマトグラフィーにより８７．１％ｅｅであることがわかった。ＨＰＬＣ条件：１８．４分において８７．１％（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ　ＯＪ　４４．６×２５０ｍｍ、１０ミクロン、４０℃、イソクラテイク８０％ヘプタン／２０％ＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ（１：１）、１．０ｍＬ／分、２８８ｎｍでの検出）。
【０１６９】
化合物２ｐＡおよび２ｐＢに対する絶対的なコンフォメーションは決定されなかった。学名命名法でわかり易くするため、われわれは化合物２ｐＡを「Ｓ」コンフィギュレーションを有するものとして、化合物２ｐＢを「Ｒ」コンフィギュレーションを有するものと称した。化合物２ｐＡから誘導される鏡像的に純粋な生成物は「Ｓ」コンフィギュレーションを有するものと称するであろうし、化合物２ｐＢから誘導された鏡像的に純粋な生成物は「Ｒ」コンフィギュレーションを有するとして称するであろう。
【０１７０】
実施例２ｑ：［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｑＡ）および［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）］−４−［７−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｑＢ）の製造
【化４３】
2004509072.tif 000055
【０１７１】
ＤＢＡＤ（２６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．６５ｍＬ）中にＰＰｈ３（３０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を含む溶液に加えた。１０分間撹拌した後、４−シアノフェノール（１３．６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を加えその反応混合物をさらに５分間撹拌した。化合物２ｐＡ（３０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で１時間撹拌した。３０％アセトン／７０％ＣＨＣｌ３で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、２３．１ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ、６１．７％）の化合物２ｑＡを得た。ＨＰＬＣ条件：３．０６分で９５％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％Ｈ３ＰＯ４によるグラジエントで４分以上１０％−９０％のメタノール水溶液、２２０ｎｍでの検出）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ４９４．０９［Ｍ＋Ｈ］＋、［α］Ｄ＝５３．３０℃、ｃ＝４．５ｍｇ／ｃｃ、ＴＨＦ中、＠５８９ｎｍ）。
【０１７２】
ＤＢＡＤ（２６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＰＰｈ３（３０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．６５ｍＬ）溶液に加えた。１０分間撹拌した後、４−シアノフェノール（１３．６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をさらに５分間撹拌した。化合物２ｐＢ（３０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で１時間撹拌した。その反応を減圧下で濃縮した。３０％アセトン／７０％ＣＨＣｌ３で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２０．３ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ、５４．２％）の化合物２ｑＢを得た。ＨＰＬＣ条件：３．０７分で９０％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム４．６×５０ｍｍ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を用いるグラジエント４分以上１０％−９０％のメタノール水溶液、２２０ｎｍでの検出）。ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ４９４．０９［Ｍ＋Ｈ］＋。［α］Ｄ＝−４２．８７℃、ｃ＝６．６ｍｇ／ｃｃ、ＴＨＦ中、＠５８９ｎｍ）。
【０１７３】
実施例２ｒ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［（６−クロロ−１，２−ベンズイソクサゾル−３−イル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−７−メチル−１，３−デオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｒ）の製造
【化４４】
2004509072.tif 000056
【０１７４】
ＰＰｈ３（５２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の０．５ｍＬＴＨＦ溶液に対しＤＢＡＤ（４６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の一塊を加えた。得られた混合物を１０分間撹拌した後６−クロロ−３−ヒドロキシ−１，２−ベンズイソクサゾール（３４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間撹拌を続けた後、２ｊ（２）（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の０．５ｍＬＴＨＦ溶液をカニューラによって導入した。得られた混合物を２４時間雰囲気温度で撹拌し、濃縮し、分取逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　２０×１００ｍｍカラム、２０ｍＬ／分で１０分以上０．１％ＴＦＡを含む３０−１００％ＭｅＯＨの水溶液で溶出）により精製し白色固体を得た。集めた固体をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、５０ｍｇ（７１％）の２ｒを無色の油状のものとして得た。ＨＰＬＣ：３．８９分で２６％および４．０２分で７４％（アトロプ異性体の混合物、保持時間）（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ　Ｂａｌｌｉｓｔｉｃ、０．２％　Ｈ３ＰＯ４を含む４分以上１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５２８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７５】
実施例２ｓ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−４−メチル−７−［２−［（６−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）オキシ］エチル］−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｓ）の製造
【化４５】
2004509072.tif 000057
【０１７６】
２ｊ（２）（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のトルエン（１ｍＬ）溶液にＡＤＤＰ（５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、６−ニトロ−３−インダゾリノン（３６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびｎ−Ｂｕ３Ｐ（５０μＬ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を８０℃で２４時間加熱し、濃縮し、分取逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　２０×１００ｍｍカラム；２０ｍＬ／分で１０分以上０．１％ＴＦＡを含む３０−１００％ＭｅＯＨの水溶液で溶出）およびフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％アセトン、ＣＨＣｌ３中）の組合せによって精製し、１７ｍｇ（２５％）の２ｓを黄色固体として得た。ＨＰＬＣ：３．６０分で２４％および３．７４分で７６％（アトロプ異性体の混合物、保持時間）（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、Ｂａｌｌｉｓｔｉｃ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を含む４分以上１０−９０％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５３７．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７７】
実施例２ｔ：［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（１，２−ベンズイソクサゾル−３−イルオキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｔ）の製造
【化４６】
2004509072.tif 000058
【０１７８】
ＰＰｈ３（４７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＤＢＡＤ（４１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、３−ヒドロキシ−１，２−ベンズイソクサゾール（２４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）および化合物２ｐＡ（３５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を２ｒに対して、提供した方法に従って反応させた。精製は逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　２０×１００ｍｍカラム；０．１％ＴＦＡを含む３０−１００％ＭｅＯＨの水溶液で２０ｍＬ／分にて１０分以上溶出）で行い白色の固体を産出した。得られた固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して２９ｍｇ（６４％）の２ｔを無色の油状のものとして得た。ＨＰＬＣ：３．２９分で９６％（アトロム異性体の混合物、保持時間）（ＹＭＣ　Ｓ５　ＰＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、Ｂａｌｌｉｓｔｉｃ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を含み４分以上０−１００％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５１０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７９】
実施例２ｕ：［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（１，２−ベンズイソクサゾール−３−イルオキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｕ）の製造
【化４７】
2004509072.tif 000059
【０１８０】
ＰＰｈ３（４７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＤＢＡＤ（４１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、３−ヒドロキシ−１，２−ベンズイソクサゾール（２４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）および２ｐＢ（３５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を２ｒに対し提供した方法に従って反応させた。精製は逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　２０×１００ｍｍカラム；０．１％ＴＦＡを含む３０−１００％ＭｅＯＨの水溶液で２０ｍＬ／分にて１０分以上溶出）で行い白色固体を産出した。得られた固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して２３ｍｇ（５１％）の２ｕを無色の油状のものとして得た。ＨＰＬＣ：３．２９分で９５％（アトロプ異性体の混合物、保持時間）（ＹＭＣ　Ｓ５　ＰＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ　Ｂａｌｌｉｓｔｉｃ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を含み４分以上０−１００％メタノール水溶液、４ｍＬ／分、２２０ｎｍにてモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５１０．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８１】
実施例２ｖ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−７−エチルオクタヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｖ）の製造
【化４８】
2004509072.tif 000060
【０１８２】
２−エチル−５−（２−ヒドロキシエチル）フラン（２ｖ（１））
【化４９】
2004509072.tif 000061
【０１８３】
ｎ−ＢｕＬｉ（２．５Ｍヘキサン中、４．４ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を２−エチルフラン（１．０５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に−２５℃で加えた。その溶液を室温に暖め３時間撹拌した。−７８℃でエチレンオキサイド（０．７５ｍＬ）を加えた。その反応を−１５℃で０．５時間撹拌し、室温で一晩撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌの水溶液を加え、その混合物をエーテルで抽出した（３Ｘ）。集めた抽出物を水（１Ｘ）およびブライン（１Ｘ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。３０％ＥｔＯＡｃ／７０％ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによる精製で１．１２ｇ（８．０２ｍｍｏｌ、８０．２％）の２ｖ（１）を黄色の油状のものとして得た。
【０１８４】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−エチル−１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｖ（２））
【化５０】
2004509072.tif 000062
【０１８５】
２ｖ（１）（２８０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）および４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−１−イル）−１−ナフタレンカルボニトリル（４９６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）のベンゼン（２ｍＬ）溶液を６０℃で２時間撹拌した。その反応混合物を減圧下で濃縮した。黄色の固体２ｖ（２）は直接次の工程に供した。
【０１８６】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−エチルオクタヒドロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｖ（３））
【化５１】
2004509072.tif 000063
【０１８７】
ＥｔＯＡｃ（３６ｍＬ）中の２ｖ（２）（７６４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１１５ｍｇ、触媒）の混合物を水素雰囲気下の室温で２時間撹拌した。その反応混合物をセライトを通して濾過し、減圧下で濃縮し７７９ｍｇの粗製の２ｖ（３）を得た。この粗製生成物を７０％ＥｔＯＡｃ／３０％ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフトで精製し２３５ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ、３０．１％）の２ｖ（３）を得た。ＨＰＬＣ条件：２．８４分にて９９％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　４．６×５０ｍｍ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を用いるグラジエント４分以上１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍにて検出）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ３９１．１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８８】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−７−エチルオクタヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｖ）
【０１８９】
ＤＢＡＤ（４４．２ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）をＰＰｈ３（５０．４ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）の溶液に加えた。１０分間撹拌した後、４−シアノフェノール（２３ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をさらに５分間撹拌した。２ｖ（３）（５０ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）を加えてその混合物を室温で２時間撹拌した。その反応を減圧下で濃縮した。４０％ＥｔＯＡｃ／６０％ヘキサンで溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し４３ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ、６８．４％）の化合物２ｖを白色固体として得た。ＨＰＬＣ条件：３．６５分で９９％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　４．６×５０ｍｍ、０．２％Ｈ３ＰＯ４を用いたグラジエント４分以上１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍでの検出）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ４９２．１６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９０】
実施例２ｗ：［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（アセチルオキシ）エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｗＡ）および［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｗＢ）の製造
【化５２】
2004509072.tif 000064
【０１９１】
化合物２ｐＡおよび２ｐＢ（１．９０ｇ）のラセミ体混合物を２Ｌのフラスコ中の１００ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。無水ｔｅｒｔ−ブチル−メチルエーテル（９００ｍＬ）および酢酸ビニル（４０ｍＬ）を撹拌しながらそのフラスコに移し、リパーゼ（２０ｇ、タイプＩＩ、粗製、豚のパンクレアースからの；Ｓｉｇｗａ、Ｃａｔ＃Ｌ３１２６）を加えた。その反応混合物を室温で２１時間撹拌し、その時点で５ｇのリパーゼおよび２０ｍＬの酢酸ビニルを加えた。その反応を室温でさらに１９時間撹拌し、４℃で３６時間撹拌を行なわずに保った後、室温で２２時間撹拌した（望む％ｅｅがキラルＨＰＬＣによって明らかになるまで）。反応をモニターするために２００μＬのその混合物を中止し、遠心分離にかけた。表面に浮いているもの（１００μＬ）を窒素下で乾燥し、得られた残渣を１００μＬのＥｔＯＨ中に溶解しＨＰＬＣ解析にかけた：
１）逆相ＨＰＬＣ：カラム、ＹＭＣ−ＯＤＳ　ＡＱ　１５０×４．６；流速、１．２ｍＬ／分；
試料の大きさ、１０μＬ
溶媒Ａ：水中１ｍＭ　ＨＣｌ；溶媒Ｂ、ＭｅＣＮ；３００ｎｍにてモニター
2004509072.tif 000065
２）キラル−ＨＰＬＣ：カラム、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ　ＯＪ　４．６×２５０ｍｍ
移動相、ヘキサン／ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ（８：１：１）
流速、１ｍＬ／分；試料の大きさ、２０μＬ
２２０ｎｍおよび３００ｎｍの両方でのモニター
２５℃＆４０℃での実施
（反応混合物のｅｅ％決定のため）
【０１９２】
酵素を濾過により除去し、炉駅を真空下で濃縮した。得られた混合物をＣＨＣｌ３中に溶解し、シリカゲル（６３−２００ミクロン）に吸収させた。これらの固体をベッドの高さが５ｃｍであるシリカゲルを含むＶＬＣ漏斗（３ｃｍＩ．Ｄ．，ＶＬＣは底部に２４／４０ジョイントを有するガラス漏斗を用いる真空液体クロマトグラフィーである）に供し、工程のグラジエントを完成させた。グラジエントは最初の３画分においては１００％ＣＨＣｌ３であり、続いてＣＨＣｌ３−１％　ＭｅＯＨ（３画分）、ＣＨＣｌ３−２％　ＭｅＯＨ（３画分）、ＣＨＣｌ３−３％　ＭｅＯＨ（３画分）、ＣＨＣｌ３−４％　ＭｅＯＨ（３画分）および最終的にはＣＨＣｌ３−５％　ＭｅＯＨ（３画分）を用いた。画分の量はＣＨＣｌ３−３％　ＭｅＯＨに至るまでは１００ｍＬであり、その点からは２００ｍＬであった。２ｗＡは１００％ＣＨＣｌ３の最後の２画分においてとＣＨＣｌ３−２％　ＭｅＯＨの最初の画分までに溶出する。２ｗＢはＣＨＣｌ３−２％　ＭｅＯＨの２番目の画分で始まり溶出し、ＣＨＣｌ３−５％　ＭｅＯＨの初回の画分まで続く。粗製の２ｗＢは少量の着色不純物を含み、それはＳｅｐｈａｄｅｘカラム［ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（２：１）中で膨潤したＬＨ−２０、カラム（２．５ｃｍ内径＆９０ｃｍ長）］により除かれ６３２ｍｇの化合物２ｗＢを産出した。化合物２ｗＡ：ＨＰＬＣ条件：７．２分で９８％（方法１）、キラルＨＰＬＣ条件：２９．０分＠２５℃（方法２）。化合物２ｗＢ：ＨＰＬＣ条件：４．６分で９８％（方法１）、キラルＨＰＬＣ条件：２５．７分（＠２５℃）＆１９．８分（＠４０℃）で９６％ｅｅ（方法２）。
【０１９３】
実施例２ｘ：（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル＆（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−７−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｘＡ＆２ｘＢ）の製造
【化５３】
2004509072.tif 000066
【０１９４】
化合物２ｈ（２）（２．００ｇ、８．５０ｍｍｏｌ）および４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（１．５０ｇ、５．６０ｍｍｏｌ）をベンゼン中（５．０ｍＬ）で混合し、６０℃で１４時間加熱した後、２５℃に冷却した。その溶媒を１時間４０℃の真空下で除去し、粗製の物質を得て、それを０．５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２．０ｇの化合物２ｘＡおよび１．３ｇの化合物２ｘＢを共に明るい褐色の固体として得た。化合物２ｘＡ：ＨＰＬＣ：４．２００分で９５％（保持時間（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％メタノールの水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍ）、ＭＳ（ＥＳ）；ｍ／ｚ ５０７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９５】
実施例２ｙ：［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−［［（１，１−ジメチルシリル）オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル＆［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｙＡ＆２ｙＢ）の製造
【化５４】
2004509072.tif 000067
【０１９６】
化合物２ｘＡ（１．４０ｇ、２．７７ｍｍｏｌ）およびＰｈＣｌ（ＰＰｈ３）３（０．１２８ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をフラスコの中で混合した。その後フラスコをからにし、３回アルゴンを充填した後、シリンジによってＴＨＦ（３．０ｍＬ）を加えた。いったんすべての粒子を溶解し、カテコールボラン（０．５９ｍＬ、５．５４ｍｍｏｌ）を滴下した。その反応混合物をアルゴン下２５℃で３０分間撹拌した後０℃に冷却した。リン酸塩の緩衝液（ｐＨ＝７、２０ｍＬ）を加えた後、ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）、３０％Ｈ２Ｏ２／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）を加えた。その反応混合物を０℃で３時間撹拌した後、ジクロロメタンで抽出した（３×２５ｍＬ）。集めた有機層を１Ｎ　ＮａＯＨ（２５ｍＬ）、１０％Ｎａ２ＳＯ３（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。その後、粗製物を濃縮した後、２％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から１０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するＳｉＯ２のフラッシュクロマトグラフィーで精製し、０．６３ｇの化合物２ｙＡ＆２ｙＢのラセミ化合物を明るい黄色固体として得た。ＨＰＬＣ：３．８６７分（保持時間）で９９％（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％メタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５２５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９７】
化合物２ｙＡ＆２ｙＢのラセミ混合物を溶媒Ａ（ヘキサン）中の１３％溶媒Ｂ（ＥｔＯＨ）を用いて溶出するＣｈｉｒａｃｅｌ　ＯＤカラムを用い、流速が５０ｍＬ／分である正常相分取キラルＨＰＬＣによって分離した。化合物２ｙＡが３０分から３８分で溶出し、化合物２ｙＢは４４分から４９分で溶出した。鏡像体の過剰量はキラルＨＰＬＣで決定した。化合物２ｙＡ：＞９９％ｅｅ（１２．５７６分（保持時間）（イソクラティック８５％ヘプタン／１５％ＭｅＯＨ／エタノール（１：１）で溶出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ　ＯＪカラム４．６×２５０ｍｍ、１ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング、４０℃）。化合物２ｙＢ：９９％ｅｅ（１８．１３３分（保持時間）（イソクラティック８５％ヘプタン／１５％ＭｅＯＨ／エタノール（１：１）で溶出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ　ＯＪカラム４．６×２５０ｍｍ、１ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング、４０℃）。
【０１９８】
化合物２ｙＡ＆２ｙＢに対する絶対的なコンフィギュレーションは確立されなかった。学名命名法により単純化のため化合物２ｙＡは本明細書中で「Ｒ」コンフィギュレーションを持つものとして、また化合物２ｙＢは「Ｓ」コンフィギュレーションを持つものとして命名した。化合物２ｙＡから誘導された鏡像体的に純粋な生成物は本明細書中で「Ｒ」コンフィギュレーションを有するものとして、また化合物２ｙＢから誘導された鏡像体的に純粋な生成物は「Ｓ」コンフィギュレーションを有するものとして命名した。
【０１９９】
実施例２ｚ：［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル＆［３ａＳ−（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ｚＡ＆２ｚＢ）の製造
【化５５】
2004509072.tif 000068
【０２００】
化合物２ｙＡ（１８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を２％ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）中に溶解した。３０分後に、飽和したＮａＨＣＯ３を加え、その水の層をジクロロメタンで抽出し（２０ｍＬ×３）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥することにより１３５ｍｇの化合物２ｚＡを白色の固体として得た。ＨＰＬＣ：２．２５７分（保持時間）で９９％（０．２％リン酸を含み４分以上１０−９０％メタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ４１１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
上述の方法を化合物２ｙＢを用いて繰返し望んでいるジオール化合物２ｚＢを同じ収率で持って産出した。
【０２０２】
実施例２ａ（ｉ）：［３ａＲ−（３ａα，４β，５β，７ａα）−４−［７−［２−［５−クロロ−２−ピリジニル］オキシ］エチル］オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２ａ（ｉ））の製造
【化５６】
2004509072.tif 000069
【０２０３】
トリフェニルホスフィン（０．０２６ｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）およびＤＢＡＤ（０．０２３ｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．５ｍＬ）中で混合した。先の混合物を１５分間反応させた後、２−ヒドロキシ−６−クロロピリジン（０．０１６ｇ、０．１００ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を１０分間撹拌し、化合物２ｚＡ（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を２５℃で２時間撹拌し、その粗製物質を１０％アセトン／ＣＨＣｌ３で溶出する分取ＴＬＣで精製し、０．０１４ｇの化合物２ａ（ｉ）を明るい褐色の固体として得た。ＨＰＬＣ：３．３７０分（保持時間）で１００％（０．１％ＴＦＡを含み４分以上１０−９０％メタノール水溶液で溶出するＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳカラム、４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、２２０ｎｍでのモニタリング）、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５２２．０８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０４】
実施例２ｂ（ｉ）：（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［４−エチルオクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｂ（ｉ）ｃ）の製造
【化５７】
2004509072.tif 000070
【０２０５】
ｔｅｒｔ−ブチル［２−（５−エチル−フラン−２−イル）−エトキシ］−ジメチル−シラン（２ｂ（ｉ）Ａ）
【化５８】
2004509072.tif 000071
【０２０６】
イミダゾール（２５５ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）およびＴＢＳＣｌ（４１４ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を（２ｖ（１））（３５０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に加えた。その混合物を室温で１５時間撹拌した後、１００ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の補足的なＴＢＳＣｌを加え、その反応を完了させた。さらに１時間撹拌した後、その反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）、１Ｎ　ＨＣｌ（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮し、５０９ｍｇの化合物２ｂ（ｉ）Ａ（８０．３％）を黄色の油状のものとして得た。
【０２０７】
（３ａα，４β，７β，７ａα）−４−［４−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−４−エチル−１，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｂ（ｉ）Ｂ）
【化５９】
2004509072.tif 000072
【０２０８】
化合物２ｂ（ｉ）Ａ（５０９ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）および４−（２，５−ジヒドロ−２，５−ジオキソ−１Ｈ−１−イル）−１−ナフタレンカルボニトリル（４９８ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）のベンゼン（２ｍＬ）溶液を６０℃で１８時間加熱した。その反応混合物を減圧下で濃縮して９９２ｍｇ（９９％）の粗製化合物２ｂ（ｉ）Ｂを得たが、更なる精製を行うことなく次工程に直接使用した。
【０２０９】
（３ａα，４β，５β，７ａα）−４−［４−エチルオクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｂ（ｉ）ｃ）
【０２１０】
化合物２ｂ（ｉ）Ｂ（９９２ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）およびＲｈＣｌ２（ＰＰｈ３）３（１８３ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）をあけ、アルゴンを充填した（３Ｘ）。ＴＨＦ（２０ｍＬ）を加え、いったんすべての粒子を溶解させた後、カテコールボラン（０．４２ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。ＨＰＬＣで決定されるように生成物の形成が止まった時、その反応混合物を０℃に冷却し、リン酸塩の緩衝液（３４ｍＬ、ｐＨ＝７．２）でクエンチした後、ＥｔＯＨ（１９ｍＬ）およびＨ２Ｏ２（２．９ｍＬ、３０％水溶液）を加えた。２時間後追加のリン酸塩緩衝液（６．８ｍＬ、ｐＨ７．２）、ＥｔＯＨ（３．８ｍＬ）およびＨ２Ｏ２（０．６ｍＬ）を加えた。その反応混合物を室温で３時間撹拌した。いったんホウ酸塩中間体が消費されると、その混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）で抽出し、集めた有機層を１Ｎ　ＮａＯＨ、１０％ＮａＨＳＯ３の水溶液およびブラインで洗浄した。一緒にした有機層をＮａＳＯ４上で乾燥した。１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによる精製にて７５ｍｇ（９．３％）の化合物２ｂ（ｉ）Ｃを灰色の固体として得た。ＨＰＬＣ条件：２．４３分で９７％（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｐｒｉｍｅ　Ｓ５−Ｃ１８カラム、４．６×５０ｍｍ、０．２％　Ｈ３ＰＯ４を用いるグラジエントで４分以上１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍにおける検出）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ４０７．１８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１１】
実施例２ｃ（ｉ）：（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［７−［２−（４−シアノフェノキシ）エチル］−４−エチルオクタヒドロ−５−ヒドロキシ−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｃ（ｉ））の製造
【化６０】
2004509072.tif 000073
【０２１２】
ＤＢＡＤ（３９．６ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をＰＰｈ３（４５．１ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．８ｍＬ）溶液中に加えた。１０分撹拌した後、４−シアノフェノール（２０．５ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をさらに５分間撹拌した。化合物２ｂ（ｉ）Ｃ（２５．０ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温にて２時間撹拌した。その反応を減圧下で濃縮した。１０％アセトン／ＣＨＣｌ３で溶出する分取ＴＬＣによる精製にて１８．１ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ、５７．６％）の化合物２ｃ（ｉ）を得た。ＨＰＬＣ条件：３．１５分で９６％（ＹＭＣ　Ｓ５　ＯＤＳ　４．６×５０ｍｍ、０．２％　Ｈ３ＰＯ４を用いるグラジエント４分以上１０％−９０％メタノール水溶液、２２０ｎｍでの検出）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ ５０８．１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１３】
実施例２ｄ（ｉ）：（３ａα，４β，５β，７β，７ａα）−４−［オクタヒドロ−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチル−１，３−ジオキソ−４，７−エポキシ−２Ｈ−イソインドール−２−イル］−１−ナフタレンカルボニトリル（２ｄ（ｉ））の製造
【化６１】
2004509072.tif 000074
【０２１４】
化合物（２ｊ（１））および（２ｊ（２））をバイオ変換により化合物２ｄ（ｉ）に変換した。
【０２１５】
化合物２ｊ（１）の微生物ヒドロキシ化
工程１：反応
冷凍した１バイアル（約２ｍＬ）のストレプトマイセスグリセウスＡＴＣＣ１０１３７を１００ｍＬの変換中間体を含む５００ｍＬフラスコに加えた。変換中間体は次の如く調製した：２リットルのプラスチック製ビーカーに対し、２０ｇのデキストローズ、５．０ｇのイースト抽出物、５．０ｇの大豆粉末、５．０ｇの塩化ナトリウム、５．０ｇのリン酸カリウム、輝緑岩性の脱イオン化した１リットルの岩を加え、その混合物を室温で３−３０分間撹拌した。その後、混合物のｐＨを１Ｎ　ＨＣｌまたは１Ｎ　ＮａＯＨで７．０に調整した。得られた混合物を５００ｍＬのフラスコ（フラスコ毎に１００ｍＬ）に分配した。そのフラスコをバイオ／ラップで覆い、１５分間１２１℃でオートクレーブにかけ、使用する前に室温へ冷却した。
【０２１６】
その培養は３日間２８℃および２５０ｒｐｍでインキュベートした。１ｍＬの得られた培養１００ｍＬの転換中間体を含む５００ｍＬに加え、そのフラスコを２４時間２８℃および２５０ｒｐｍでインキュベートした。１０ｍＬの得られた培養を５０ｍＬのフラスコに移し、それに０．２ｍＬのエタノール中の１ｍｇの化合物２ｊ（１）を加えた。そのフラスコを２３時間２８℃および２５０ｒｐｍでインキュベートし、その反応培養をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物はＮ２下で乾燥し、その残渣を１ｍＬのＭｅＯＨに溶解した（反応抽出）。ＨＰＬＣ分析は反応培養中の化合物２ｊ（１）に対する化合物２ｄ（ｉ）のピーク領域比が約１．１／１であることを示した。
【０２１７】
工程２：生成物の分析
ＨＰＬＣ：その反応抽出物１０μＬをＨＰＬＣカラム（ＹＭＣ　ＯＤＳ−ＡＱ　Ｃ−１８カラム、１５０×６．０ｍｍ内径）中に注入した。そのカラムを１．２ｍＬ／分の流速で水／ＣＨ３ＣＮ中の１ｍＭ　ＨＣｌで溶出した：８分以上３０−６０％ＣＨ３ＣＮ、０．５分以上６０−８５％ＣＨ３ＣＮ、１分に対し８５％ＣＨ３ＣＮ、０．５分以上８５−３０％ＣＨ３ＣＮ。その溶離液を３００ｎｍでモニタした。約１対１の領域比を有する大きなピークが観測され、それは化合物２ｄ（ｉ）および（２ｊ（１））利練と同じＵＶスペクトルを有し、それぞれ本物の試料化合物２ｄ（ｉ）（４．５３分）および化合物（２ｊ（１））（７．２分）が有する保持時間と一致する４．５５分および７．２３分の保持時間を有していた。
【０２１８】
ＬＣ／ＭＳ
反応抽出物：２つの大きなＵＶピーク
ピーク１、Ｔｒ４．６８分：３９１［Ｍ＋Ｈ］＋、３４３、３１９、３０３、２８９
ピーク２、Ｔｒ５．３５分：３７５［Ｍ＋Ｈ］＋、３４５
【０２１９】
本物の試料
化合物２ｄ（ｉ）、Ｔｒ４．８２分：３９１［Ｍ＋Ｈ］＋、３４３、３１９、２８９
化合物（２ｊ（１））、Ｔｒ５．４８分：３７５［Ｍ＋Ｈ］＋、３４５
【０２２０】
この開示を読んだ当業者により理解されるように、本発明における使用のための更なるＳＡＲＭは本願明細書に記載の方法に従って同定できる。例えば、選択的アンドロゲン受容体モジュレーティング活性を有すると予想された化合物はヒト又はマウス乳癌細胞系等のホルモン依存性の腫瘍細胞系におけるアンタゴニスト活性についてスクリーニングし、筋肉、前立腺若しくは精嚢細胞系等の他の非腫瘍性のアンドロゲン受容体を含む細胞系においてアゴニスト活性を以下に記載のアッセイによりスクリーニングできる。
【０２２１】
実施例３
全体の細胞結合試験のために、１０％の炭素ストリップＣＡ−ＦＢＳ（）を補ったＲＰＭＩ１６４０またはＤＭＥＭを含む９６ウエルマイクロタイタープレート中のヒトＬＮＣａＰ細胞（Ｔ８７７Ａ変異体ＡＲ）またはＭＤＡ４５３（野性タイプＡＲ）を３７℃でインキュベートし、細胞中の受容体と複合化し得る内生のリガンドを除去した。４８時間後、トリチウムを入れたジハイドロテストステロン、［３Ｈ］−ＤＨＴについてのＫｄを決定するための飽和分析または［３Ｈ］−ＤＨＴと競合する試験化合物の能力を評価するための競合結合試験を行った。飽和分析の場合５００倍モル過剰の標識しないＤＨＴの不存在下（全結合）または存在下（非特異的結合）［３Ｈ］−ＤＨＴ（０．１ｎＭ−１６ｎＭの範囲の濃度）を含む培地（ＲＰＭＩ１６４０またはＤＭＥＭ−０．２％ＣＡ−ＦＢＳ）を細胞に加えた。３７℃で４時間後、それぞれの濃度の［３Ｈ］−ＤＨＴで全結合培地のアリコートを除去し、遊離の［３Ｈ］−ＤＨＴの量を調べた。残りの培地を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＵｎｉＦｉｌｔｅｒ　ＧＦ／Ｂプレート（Ｐａｃｋａｒｄ）上に収穫し、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴｏｐ−Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ）でカウントし、結合した［３Ｈ］−ＤＨＴ量を測定した。
【０２２２】
飽和分析のために、全結合と非特異的結合の差を特異的結合として定義した。特異的結合はＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により評価し、［３Ｈ］−ＤＨＴについてのＫｄを測定した。例えば、Ｊ． Ｌａｎｇｏｎ ａｎｄ Ｊ． Ｊ． Ｃｌａｐｐ 編 Ｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ， Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＵＳＡ Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｐｐ． ４５−９９ （１９８１）中のＤ． Ｒｏｄｂａｒｄ， Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｌｉｇａｎｄ ａｓｓａｙｓ： ａｎ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ ｇｕｉｄｅを参照。その開示は本明細書の一部を構成する。
【０２２３】
競合研究のために、１ｎＭの［３Ｈ］−ＤＨＴおよび１０−１０−１０−５Ｍの範囲の濃度の試験化合物を含む培地を細胞に加えた。各試料について２回試験した。３７℃で４時間後、細胞を洗浄し、集め、上記のようにカウントした。ある化合物について用量応答曲線の範囲の上に残る［３Ｈ］−ＤＨＴ（試験化合物の不存在下の対照の％）量としてデータをプロットした。競合するリガンドの非存在下で結合した［３Ｈ］−ＤＨＴの量の５０％を阻害した試験化合物の濃度をｌｏｇ−ｌｏｇｉｔ変換の後定量化した（ＩＣ５０）。ＩＣ５０値に対し、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆの式を適用することによりＫＩ値を決定した。
【数１】
2004509072.tif 000075
非特異的結合について補正後、ＩＣ５０値を測定した。ＩＣ５０は特異的結合を５０％減少させるのに必要な競合するリガンドの濃度として定義する。ＭＤＡ４５３およびＬＮＣａＰについての［３Ｈ］−ＤＨＴのＫｄはそれぞれ０．７および０．２ｎＭであった。
【０２２４】
実施例４：ヒト前立腺細胞増殖試験
ヒト前立腺癌細胞系の増殖におよぼす試験化合物の影響をも調べた。そのため、ＭＤＡ　ＰＣａ２ｂ細胞、去勢に失敗した患者からの転移に由来する細胞系を（）７２時間の間、試験化合物と共に、あるいは無しにインキュベートし、ＤＮＡに導入された［３Ｈ］チミジンの量を細胞数および、それゆえ増殖を評価する方法として定量した。ＭＤＡ　ＰＣａ２ｂ細胞系を１０％のＦＢＳを補ったＢＲＦＦ−ＨＰＣ１培地（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆａｃｕｌｔｙ ＆ Ｆａｃｉｌｉｔｙ Ｉｎｃ．， ＭＤ）に維持した。試験のために、細胞をＢｉｏｃｏａｔｅｄ９６ウエルマイクロプレートにプレートし、１０％ＦＢＳ（炭素ストリップ）／ＢＲＦＦ−ＢＭＺＥＲ（アンドロゲンなし）中で３７℃でインキュベートした。２４時間後、細胞を１ｎＭ　ＤＨＴの不存在下（ブランク）および存在下（対照）に１０−１０−１０−５Ｍの範囲の濃度の試験化合物（試料）で処理した。各試料で２回行った。化合物希釈はＢｉｏｍｅｋ２０００ラボラトリーワークステーションで行った。７２時間後、［３Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｃｈａｍ）の０．４４ｕＣｉをウエルあたり加え、２４時間インキュベートした後、トリプシン化し、細胞をＧＦ／Ｂフィルター上に収穫した。ミクロシントＰＳをフィルターに加えた後、Ｂｅｃｋｍａｎ−ＴｏｐＣｏｕｎｔでカウントした。
【０２２５】
阻害％は、阻害％＝１００Ｘ（１−［平均対照−平均ブランク／平均試料−平均ブランク］）として計算した。データをプロットし、［３Ｈ］チミジン導入の５０％阻害する化合物の濃度を定量化（ＩＣ５０）した。
【０２２６】
実施例５：Ｃ２Ｃ１２マウス筋原細胞トランスアクチベーション試験
２つの機能的トランスアクチベーション試験を開発して、ルシフィラーゼリポーターを用いる筋肉細胞バックグラウンドにおけるアンドロゲンアゴニストの有効性を評価した。第一の試験（ＡＲＴＡ　Ｓｔａｂｌｅ　１）は、完全長のラットアンドロゲン受容体を安定に発現するがエンハンサー／リポ−タ−の一時的なトランスフェクションを必要とする、細胞系、Ｓｔａｂｌｅ１（クローン＃７２）を用いる。この細胞系はＣ２Ｃ１２マウス筋原細胞に由来した。第二の試験（ＡＲＴＡ　Ｓｔａｂｌｅ　２）はｒＡＲおよびエンハンサー／ルシフェラーゼリポーターの両方を安定に発現するＳｔａｂｌｅ１に由来する細胞系、Ｓｔａｂｌｅ２（クローン＃１３３）を用いる。これらの試験および細胞系
【０２２７】
このシステムに用いるエンハンサー／リポーター構築物はｐＧＬ３／２ＸＤＲ−１／ルシフェラーゼである。２ＸＤＲ−１はＣＶ−１細胞， Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７２， ８２２７−８２３５ （１９９７）， においてＡＲ特異的応答因子であると報告されている。それはＡＲ／ＧＲコンセンサスエンハサー配列のランダム突然変異誘発により開発された。
【０２２８】
ＡＲＴＡ　Ｓｔａｂｌｅ　１試験のためにＳｔａｂｌｅ　１細胞は１０％炭素およびデキストラン処理ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｃａｔ Ｎｏ．： ＳＨ３００６８．０２）、５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１５６３０−０８０）、１Ｘ　ＭＥＭＮａ　ピルビン酸（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１１３６０−０７０）、０．５Ｘ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、および８００μｇ／ｍｌゲネチシン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１０１３１−０３５）を含む、フェノ−ルレッドなしの高グルコースＤＭＥＭで、６００細胞／ウエルで、９６ウエルフォーマットにプレートした。４８時間後、細胞をＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ　Ｐｌｕｓ試薬（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１０９６４−０１３）を用いてｐＧＬ３／２ＸＤＲ−１／ルシフェラーゼでトランスフェクトする。具体的には５ｎｇ／ウエルｐＧＬ３／２ＸＤＲ−１／ルシフェラーゼＤＮＡおよび５０ｎｇ／ウエルＳａｌｍｏｎ　Ｓｐｅｒｍ　ＤＮＡ（担体として）を５μｌ／ウエルＯｐｔｉＭＥＭｅｍ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：３１９８５−０７０）で希釈する。これに、０．５μｌ／ウエル　Ｐｌｕｓ試薬を加える。この混合物を１５分間室温でインキュベートする。別の容器で、０．３８５μｌ／ウエルＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ試薬を５μｌ／ウエルＯｐｔｉＭＥＭで希釈する。そのＤＮＡ混合物を次にＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ混合物と混合して、更に１５分間室温でインキュベートする。この時間の間に細胞から培地を除去し、ＯｐｔｉＭＥＭの６０μｌ／ウエルで置換する。これに、ＤＮＡ／ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥトランスフェクション混合物の１０μｌ／ウエルを添加する。細胞を４時間インキュベートする。インキュベーションの後、トランスフェクション混合物を細胞から除去し、１０％炭素およびデキストラン処理ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｃａｔ． Ｎｏ． ：ＳＨ３００６８．０２）、５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１５６３０−０８０）、１Ｘ　ＭＥＭＮａ　ピルビン酸（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１１３６０−０７０）、０．５Ｘ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、および８００μｇ／ｍｌのゲネチシン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１０１３１−０３５）を含む、フェノ−ルレッドなしの高グルコースＤＭＥＭ９０μｌで置換する。試験化合物、適当な薬剤希釈で１０μｌ／ウエルを次に各ウエルに置く。２４時間後、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試験システムを用い製造者の指示による活性を検出する（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｃａｔ． Ｎｏ． Ｅ２５２０）。
【０２２９】
ＡＲＴＡ　Ｓｔａｂｌｅ　２試験の場合、１０％炭素およびデキストラン処理ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｃａｔ． Ｎｏ． ：ＳＨ３００６８．０２）、５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１５６３０−０８０）、１Ｘ　ＭＥＭＮａ　ピルビン酸（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１１３６０−０７０）、０．５Ｘ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、８００μｇ／ｍｌのゲネチシン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１０１３１−０３５）および８００μｇ／ｍｌハイグロマイシンβ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， Ｃａｔ． Ｎｏ． ：１０６８７−０１０）を含む、フェノ−ルレッドなしの高グルコースＤＭＥＭで６０００細胞／ウエルで９６ウエルフォーマットでプレートする。４８時間後、細胞上の培地を９０除去し、９０μｌの新鮮なものと置きかえる。試験化合物、適当な薬剤希釈での１０μｌ／ウエルを次に各ウエルに置く。２４時間後、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試験システムを用い製造者の指示による活性を検出する（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｃａｔ． Ｎｏ．：Ｅ２５２０）。Ｊａｃｅｋ　Ｏｓｔｒｏｓｋｉ等による２００１年６月２０日に出願された”Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｄｒｏｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｓ”と題する米国特許出願（代理人ケース番号Ｄ０１７７）を参照。その特許出願は本明細書の一部を構成する。
【０２３０】
実施例６：ネズミ乳癌細胞増殖試験
ＡＲの機能をモジュレートする試験化合物の能力は、Ｓｈｉｏｎｏｇｉ腫瘍（Ｈｉｒａｏｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ４７， ６５６０−６５６４（１９８７））に由来するアンドロゲン応答性のネズミ乳癌細胞系を用いる増殖試験において該化合物を試験することにより測定できる。親のＳｈｉｏｎｏｇｉ系の安定なＡＲ依存性クローンは、Ｔｅｔｕｏ等（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５， １１６８−１１７５（１９６５））により初めて記載された一般的な方法下、腫瘍細胞を通すことにより確立された。上の方法から一つの安定な系、ＳＣ１１４が単離され、特性付けされ、実施例化合物の試験に用いられた。ＳＣ１１４細胞は試験化合物あり、または無しで７２時間インキュベートされ、ＤＮＡ中に導入された［３Ｈ］チミジンの量をサロゲートエンドポイントとして定量し、細胞の数、それゆえＳｕｚｕｋｉ等（Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３７， ５５９−５６７）に記載された増殖速度を評価した。ＳＣ１１４細胞系は１０−８Ｍテステステロンおよび２％ＤＣＣ処理ＦＣＳを含むＭＥＭ中で維持された。試験のために、細胞を維持培地中で９６ウエルマイクロプレートにプレートし、３７℃でインキュベートした。次の日、培地を、１０−８Ｍテストステロンを有する（アンタゴニストモード）および有さない（アゴニストモード）ストステロンおよび本発明の試験化合物を１０−１０−１０−５Ｍの範囲の濃度有する血清を含まない培地（０．１％ＢＳＡを含むＨａｍＦ−１２：ＭＥＭ（１：１，ｖ／ｖ））に変えた。各試料について２回おこなった。化合物希釈はＢｉｏｍｅｋ２０００ラボラトリーワークステーションでおこなった。７２時間後、［３−Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｃｈａｍ）の０．４４ｕＣｉをウエル当たりに加え、さらに２時間インキュベートした後、トシプシン化、細胞をＧＦ／Ｂフィルターに集めた。ミクロシントＰＳをフィルターに加えた後、Ｂｅｃｋｍａｎ−ＴｏｐＣｏｕｎｔでカウントした。
【０２３１】
アンタゴニストモードの場合、阻害％は、阻害％＝１００Ｘ（１−［平均試料−平均ブランク／平均対照−平均ブランク］）として計算した。データをプロットし、［３Ｈ］チミジン導入の５０％を阻害する化合物の濃度を定量化（ＩＣ５０）した。
【０２３２】
アゴニストモードの場合、対照％は天然のホルモンについて観察された最大効果に比較して試験化合物の効果として言い、
対照％＝１００Ｘ（平均試料−平均ブランク）／（平均対照−平均ブランク）として計算した。データをプロットし、［３Ｈ］チミジン導入の５０％を阻害する化合物の濃度を定量化（ＥＣ５０）した。
【０２３３】
実施例７：湿前立腺重量アッセイＡＲアンタゴニストアッセイ
ＡＲアンタゴニストとしての試験化合物の活性は未成熟ラットモデル、ある化合物の抗アンドロゲン活性の標準的な承認された試験で調査された（Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐｔ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．， ８３ １７５ （１９５３）； Ｗａｌｓｈ， Ｐ． Ｃ． ａｎｄ Ｇｉｔｔｅｓ， Ｒ． Ｆ．， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， ８６， ６２４（１９７０）； Ｆｕｒｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．， １１３， Ｒ７−９（１９８７））。この試験の基礎は前立腺および精嚢等のオスの性的付属器官が生殖機能に重要な役割を果たすという事実である。これらの腺は成長するよう刺激を受けて、血清テストステロン（Ｔ）の連続した存在により大きさおよび分泌機能を維持し、テストステロンは下垂体黄体形成ホルモン（ＬＨ）および小胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の調節下に精巣におけるＬｅｙｄｉｇ細胞により製造される主な血清アンドロゲン（＞９５％以上）である。テストステロンは５αリダクターゼにより前立腺内部でより活性な形ジハイドロテストステロン（ＤＨＴ）に変換される。アドレナールアンドロゲンも６５歳の老人の４０％に比べて、ラット前立腺で全ＤＨＴの約２０％を提供する（Ｌａｂｒｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｉｖｅｓｔ． Ｍｅｄ．，１６， ４７５−４９２（１９９３） ）。しかしながら、これは主な経路ではない。何故なら動物およびヒトの両方で去勢は相伴う副腎摘出なしに前立腺および精嚢のほとんど完全な退化に導く。従って通常の条件下でアドレナールは前立腺組織の顕著な成長を支持しない（Ｌｕｋｅ， Ｍ．Ｃ． ａｎｄ Ｃｏｆｆｅｙ， Ｄ． Ｓ． ”Ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ” ｅｄ ｂｙ Ｅ． Ｋｎｏｂｉｌ ａｎｄ Ｊ． Ｄ． Ｎｅｉｌ， １， １４３５−１４８７ （１９９４））。オスの性器官はアンドロゲン活性のモジュレーションにもっとも応答性の組織であるのでこのモデルを用いて未成熟去勢ラットの性付属器官のアンドロゲン依存性成長を測定する。
【０２３４】
オスの未成熟ラット（１９−２０日齢、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ， Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）をメトファン麻酔下に去勢した。手術の５日後にこれらの去勢したラット（６０−７０ｇ、２３−２５日齢）に３日間投薬した。動物は落花生油ビークル中のテストステロンプロピオネート（ＴＰ）１ｍｇ／ｋｇを皮下（ｓ．ｃ．）投与し、試験化合物（本発明の化合物）を８０％ＰＥＧ４００および２０％Ｔｗｅｅｎ８０（ＰＥＧＴＷ）の溶解／懸濁液中でギャベージ（）により経口的に投与した。動物は０．５ｍｌビークル／１００ｇ体重（ｖ／ｗ）で投与した。実験グループは以下のようである。
【０２３５】
１．対照ビークル
２．テストステロンプロピオネート（ＴＰ）（３ｍｇ／ラット／日、皮下）
３．ＴＰプラスＣａｓｏｄｅｘ（ＰＥＧＴＷ中ｐ．ｏ．投与、ＱＤ）、比較化合物として承認された抗アンドロゲン。
４．アンタゴニスト活性を評価するため、ＴＰ（ｓ．ｃ．群１２での投与のように）と共に試験化合物を用量範囲で投与した（ｐ．ｏ．ＰＥＧＴＷ中、ＱＤ）。
５．アゴニスト活性を評価するため、試験化合物のみを用量範囲で投与した（ｐ．ｏ．ＰＥＧＴＷ中、ＱＤ）
【０２３６】
３日の処理の終わりに動物を犠牲にし、腹部前立腺の重量を測定した。異なる実験からのデータを比較するため性器官の重量を１００ｇ体重あたりのｍｇとして最初に標準化し、ＴＰにより誘導された器官の重量の増加を最大増加（１００％）として考えた。ＡＮＯＶＡその後のワンテイルドＳｔｕｄｅｎｔまたはＦｉｓｃｈｅｒイクザクト試験を統計的解析に用いた
【０２３７】
性器官重量の確得および損失は細胞数（ＤＮＡ含量）および細胞質量（タンパク質含量）の変化を反映し、血清アンドロゲン濃度に依存する（Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ．， １４５， １８８−１９１（１９９１））。従って、器官湿重量の測定はアンドロゲンおよびアンドロゲンアンタゴニストの生活性を示すのに十分である。未成熟の去勢したラットにおいて、外因性のアンドロゲンの置換は用量依存的方法で精嚢（ＳＶ）および腹部前立腺（ＶＰ）を増加させる。
【０２３８】
器官重量の最大増加は３ｍｇ／ラット／日のテストステロン（Ｔ）または１ｍｇ／ラット／日のテストステロンプロピオネート（ＴＰ）の３日間投与の場合、４〜５倍であった。ＴおよびＴＰのＥＣ５０はそれぞれ約１ｍｇおよび０．０３ｍｇであった。ＶＰおよびＳＶの重量増加も血清ＴおよびＤＨＴ濃度の増加と相関した。Ｔの投与は、ＴＰより皮下注射２時間後のＴおよびＤＨＴの５倍高い血清濃度を示し、その後これらの高レベルは非常に急速に減少した、対照的にＴＰ処理動物におけるＴおよびＤＨＴの血清濃度は２４時間の間一貫しており、それ故ＴＰは遊離のＴより約１０−３０倍高い力価を示した。
【０２３９】
この未成熟去勢ラットモデルにおいて、公知のＡＲアンタゴニスト（Ｃａｓｏｄｅｘ）を０．１ｍｇのＴＰ（ＥＤ５０）と同時に投与し、ＶＰおよびＳＰのテストステロン媒介重量増加を用量依存的に阻害した。経口的にまたは皮下投与した場合アンタゴニスト効果は類似であった。本発明のＳＡＲＭは、ＶＰおよびＳＶの重量のテストステロン媒介増加を抑制することによりＡＲアンタゴニスト活性をも示した。
【０２４０】
実施例８：レバトール・アニおよび湿前立腺重量アッセイＡＲアゴニストアッセイ
ＡＲアゴニストとしての試験化合物の活性を未成熟のオスラットモデル、ある化合物に対する筋肉の同化効果および性器官の維持効果の承認された試験で調べた（Ｈｅｒｓｓｈｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐｔ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．， ８３， １７５（１９５３）； Ｂｅｙｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｍｅｄ． Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ａｓｓ．， ２３， ７０８（１９６８）； Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｇｏ Ｄａｉ． Ｙａｋ． Ｋｅｎ． Ｎｅｍ． １４， ８４（１９６６））。この試験の基礎は、動物および男子における筋肉組織および性的補助器官の維持及び成長についてのアンドロゲン剤のよく定義された作用にある。テストステロン（Ｔ）等のアンドロゲン性ステロイドは筋肉質量を維持するその能力についてよく特性付けられている。去勢後の動物またはヒトの外因性源のＴによる処置は筋肉の萎縮の逆戻りをもたらす。ラットのレバトール・アニ筋肉の筋萎縮に及ぼすＴの影響はよくキャラクタライズされている（Ｍａｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ａｎａｔ． １１９， ２６３ （１９６６）； Ｇｏｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｏｌｌ．−Ｓｏｃ． Ｉｔａｌ． Ｂｉｏｌ． Ｓｐｅｒ． ４２， １５９６（１９９６）； Ｇｏｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｏｌｌ．−Ｓｏｃ． Ｉｔａｌ． Ｂｉｏｌ． Ｓｐｅｒ． ４２， １６００（１９９６）； Ｂｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １５， ６１（１９７０））。実施例６に示すように、前立腺および精嚢等のオスノ性的補助器官の維持に及ぼすアンドロゲンの効果はよく記述されている。去勢は前立腺および精嚢の急速な退化および萎縮をもたらす。この効果はアンドロゲンの外来的添加により逆転することができる。レバトール・アニ筋肉およびオスの性的器官の両方はアンドロゲン剤の効果に最も応答性である組織であるので、このモデルを用いて、未成熟の去勢ラットにおけるレバトール・アニ筋肉および性的補助器官のアンドロゲン依存性逆転を測定する。
【０２４１】
性的に成熟したラット（２００−２５０ｇ，６−８週齢、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ， Ｈａｒｌａｎ）を飼育者（Ｔａｃｏｎｉｃ）から去勢して得た。そのラットをグループにわけ、次の一つで７〜１４日完毎日処置した。
１．対照ビークル
２．テストステロンプロピオネート（ＴＰ）（３ｍｇ／ラット／日、皮下）
３．ＴＰプラスＣａｓｏｄｅｘ（ＰＥＧＴＷ中ｐ．ｏ．投与、ＱＤ）、比較化合物として、承認された抗アンドロゲン。
４．アンタゴニスト活性を評価するため、ＴＰ（ｓ．ｃ．群２での投与のように）と共に試験化合物を用量範囲で投与した（ｐ．ｏ．ＰＥＧＴＷ中、ＱＤ）。
５．アゴニスト活性を評価するため、試験化合物のみを用量範囲で投与した（ｐ．ｏ．ＰＥＧＴＷ中、ＱＤ）
【０２４２】
７−１４日の処理の終わりに動物を２酸化炭素により犠牲にし、レバトール・アニ、精嚢、腹部前立腺の重量を測定した。異なる実験からのデータを比較するためレバトール・アニ筋肉、性器官の重量を１００ｇ体重あたりのｍｇとして最初に標準化し、ＴＰにより誘導された器官の重量の増加を最大増加（１００％）として考えた。スーパーアノバ（一因子）を統計的解析に用いた
【０２４３】
性器官重量の確得および損失は細胞数（ＤＮＡ含量）および細胞質量（タンパク質含量）の変化を反映し、血清アンドロゲン濃度に依存する（Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ．， １４５， １８８−１９１（１９９１））。従って、器官湿重量の測定はアンドロゲンおよびアンドロゲンアンタゴニストの生活性を示すのに十分である。未成熟の去勢したラットにおいて、外因性のアンドロゲンの置換は用量依存的方法でレバトール・アニ、精嚢（ＳＶ）および前立腺）を増加させる。
【０２４４】
器官重量の最大増加は３ｍｇ／ラット／日のテストステロン（Ｔ）または１ｍｇ／ラット／日のテストステロンプロピオネート（ＴＰ）の３日間投与の場合、４〜５倍である。ＴおよびＴＰのＥＣ５０はそれぞれ約１ｍｇおよび０．０３ｍｇであった。ＶＰおよびＳＶの重量増加も血清ＴおよびＤＨＴ濃度の増加と相関した。Ｔの投与は、ＴＰより皮下注射２時間後のＴおよびＤＨＴの５倍高い血清濃度を示し、その後これらの高レベルは非常に急速に減少した、対照的にＴＰ処理動物におけるＴおよびＤＨＴの血清濃度は２４時間の間一貫しており、それ故ＴＰは遊離Ｔより約１０−３０倍高い力価を示した。
【０２４５】
実施例９：成熟ラット前立腺重量アッセイ
試験化合物の活性を成熟のオスラットモデルも調べた。そのモデルは実施例７に記載したレバトール・アニおよび湿前立腺重量アッセイの変形である。実施例６および７のインビボ試験はある化合物について筋肉における同化効果および性器官における維持効果を決定するための認められた試験である（Ｈｅｒｓｓｈｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐｔ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．， ８３， １７５（１９５３）； Ｂｅｙｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｍｅｄ． Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ａｓｓ．， ２３， ７０８（１９６８）； Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｇｏ Ｄａｉ． Ｙａｋ． Ｋｅｎ． Ｎｅｍ． １４， ８４（１９６６））。この試験の基礎は、動物および男子における筋肉組織および性的補助器官の維持及び成長におけるアンドロゲン剤のよく定義された作用にある。
【０２４６】
前立腺および精嚢等のオスの性的補助器官は生殖機能において重要な役割をはたす。これらの腺は成長するよう刺激されて、血清テストステロンの持続した存在により大きさおよび分泌機能を維持する。テストステロンは下垂体黄体ホルモン（ＬＨ）および小胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の調節下精巣のＬｅｙｄｉｇ細胞のより製造される主要な血清アンドロゲン（＞９５％）である。テストステロンは５αリダクターゼにより前立腺内部でより活性な形、ジハイドロテストステロン（ＤＨＴ）に変換される。副腎アンドロゲンも、６５歳の老人における４０％と比べてラット前立腺における全ＤＨＴの約２０％を与える（Ｌａｂｒｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｍｅｄ．， ４５， ４７５−４９２（１９９３））。しかしがら、これは主要な経路ではない。何故なら動物およびヒトの両方で去勢は付随した副腎摘出なしに前立腺および精嚢のほとんど完全な退化をもたらすからである。従って、正常な条件下で副腎は前立腺組織の十分な成長を支持しない（Ｌｕｋｅ， Ｍ．Ｃ． ａｎｄ Ｃｏｆｆｅｙ， Ｄ． Ｓ． ”Ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ” ｅｄ ｂｙ Ｅ． Ｋｎｏｂｉｌ ａｎｄ Ｊ． Ｄ． Ｎｅｉｌ， １， １４３５−１４８７ （１９９４））。オスの性器官およびレバトール・アニはアンドロゲン活性アンドロゲン活性のモジュレーションに最も応答性の組織であるので、このモデルを用いて成熟ラットにおけるアンドロゲン受容体経路をモジュレーとする化合物の活性を測定する。
【０２４７】
前立腺、精嚢、および筋肉等の組織における細胞分裂促進と共に、テストステロンはそれ自体の生合成に対し負のレギュレーターとして働く。Ｌｅｙｄｉｇ細胞におけるテストステロン製造は下垂体腺から放出される循環するＬＨのレベルによって調節される。ＬＨレベル自体はハイポタルミック領域で製造されるＬＨＲＨのレベルにより調節される。血液中のテストステロンレベルはＬＨＲＨの分泌を阻害すよう作用し、その後ＬＨのレベルを、そして究極的には循環するテストステロンレベルを減少させる。ＬＨの血液レベルを、それらが試験化合物により影響されるので測定することによって、この内分泌サイクルのハイポタルミック軸での該化合物のアゴニストまたはアンタゴニスト活性のレベルを測定することが可能である。
【０２４８】
Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（４０−４２日齢、１８０−２２０ｇ）のマッチさせた組に８０％ＰＥＧ４００および２０％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＥＧＴＷ）の溶解／懸濁物中の試験化合物を胃管栄養（ｐ．ｏ．）により経口的に１４日間投与した。２つの対照グループ、１つは無傷のそして１つは去勢したものにＰＥＧＴＷビークルのみを経口的に投与した。動物は１００ｇの体重あたり０．５ｍｌのビークルで投与した。実験グループは以下のようである：
１．無傷のビークル（ｐ．ｏ．、ＰＥＧＴＷ、ＱＤ）
２．対照ビークル（ｐ．ｏ．、ＰＥＧＴＷ、ＱＤ）
３．ＰＥＧＴＷ、ＱＤ中のビアカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ、承認された抗アンドロゲン、比較化合物として）または試験化合物，ｐ．ｏ．（用量範囲で）
１４日の処理の終わりに動物を犠牲にし、レバトール・アニ、精嚢、腹部前立腺を外科的に除去し、重量を測定した。異なる実験からのデータを比較するため、器官重量を１００ｇ体重あたりのｍｇとして最初に標準化し、無傷のグループのそれぞれの器官の値のパーセントとして表わした。
【０２４９】
ラットの黄体形成ホルモン（ｒＬＨ）を、製造者の指示に従って、Ｂｉｏｔｒａｋ［１２５Ｉ］キット（）により定量的に測定した。その試験はＡｍｅｒｌｅｘ−Ｍビード／抗体懸濁に対する［１２５Ｉ］ｒＬＨの結合の血清中に存在するＬＨによる競合に基く。血清とのインキュベーションおよびその後の洗浄後に残る放射活性を標準曲線に外装して読みをｎｇ／ｍｌで得る。
【０２５０】
性器官およびレヴァトール・アニの重量の確得および損失は細胞数（ＤＮＡ含量）および細胞質量（タンパク質含量）の変化を反映し、血清アンドロゲン濃度に依存する（Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ．， １４５， １８８−１９１（１９９１））。従って、器官湿重量の測定はアンドロゲンおよびアンドロゲンアンタゴニストの生活性を示すのに十分である。成熟ラット試験において活性なアゴニスト剤は１以上のアンドロゲン応答性器官（レヴァトール・アニ、前立腺、精嚢）の重量に影響しないか、増加させ、ＬＨ分泌に影響しないか抑制効果を有するであろう。アンタゴニスト活性を有する化合物はアンドロゲン応答性器官（レヴァトール・アニ、前立腺、精嚢）の１以上の重量を減少させ、ＬＨ分泌に対する抑制効果の減少を有するであろう。
【０２５１】
実施例１０：ＭＤＡ　ＰＣａ２ｂ　ヒト前立腺ヒト前立腺ゼノグラフトアッセイ
インビボ抗癌試験のために、ＭＤＡ　ＰＣａ２ｂヒト前立腺腫瘍をＢａｌｂ／ｃ　ｎｕ／ｎｕヌードマウスで維持したドナーマウスから得た腫瘍断片を用いて、腫瘍を成熟したオスのヌードマウス（４−６週齢）中で皮下移植物として増殖させた。腫瘍パッセージは５−６週ごとに行った。
【０２５２】
抗腫瘍有効性の試みのために、意味のある応答を検出するのに必要な動物の必要な数を実験の始めにプールし、各々に１３−ゲージトロカールを用いて腫瘍断片（約５０ｍｇ）の皮下移植を与えた。腫瘍を約１００−２００ｍｇまで成長させ（その範囲外の腫瘍は除いた）、動物を様々な処置および対照群に平等に分配した。各動物の処置は個々の体重に基いた。処置動物を処置関連毒性／死亡数について毎日チェックした。各群の動物を処置の開始（Ｗｔ１）および最後の処置投与の後（Ｗｔ２）体重を測定した。体重の差（Ｗｔ２−Ｗｔ１）は処置関連毒性の尺度を提供する。
【０２５３】
腫瘍応答を予め定めた０．５ｇｍという「標的」の大きさに達するまで、１週に２度カリパーでの腫瘍の測定により決定した．腫瘍重量（ｍｇ）を式：
腫瘍重量＝（長さｘ幅２）÷２
から見積もった。
【０２５４】
腫瘍応答終点は処置腫瘍のメジアン腫瘍重量（Ｔ）の対照群のそれ（Ｃ）に対する比として定義した腫瘍成長阻害（Ｔ／Ｃ％）で表わした。
腫瘍細胞死を見積もるために、腫瘍体積を２倍にする時間を最初に式：
ＴＶＶＴ＝対照腫瘍が標的サイズに達するメジアン時間（日）−
対照腫瘍が標的サイズの半分に達するメジアン時間（日）
を用いて計算し、そして次にＬｏｇ細胞死を式：
Ｌｏｇ細胞死＝（Ｔ−Ｃ）÷（３．３２ｘＴＶＤＴ）
を用いて計算した。
データの統計的評価はＧｅｈａｎの一般化したＷｉｌｃｏｘｏｎ試験を用いて行った。
【０２５５】
実施例１１：ＣＷＲ２２ヒト前立腺ゼノグラフトアッセイ
インビボ抗癌試験をＢａｌｂ／ｃ　ｎｕ／ｎｕヌードマウスで維持したＣＷＲ２２ヒト前立腺腫瘍を用いて行った。ドナーマウスから得た腫瘍断片を用いて、腫瘍を成熟したオスのヌードマウス（４−６週齢）に皮下移植物として増殖させた。腫瘍パッセージ５−６週毎におこった。
【０２５６】
抗腫瘍有効性の試みのために、意味のある応答を検出するのに必要な動物の必要な数を実験の始めにプールし、各々に１３−ゲージトロカールを用いて腫瘍断片（約５０ｍｇ）の皮下移植を与えた。腫瘍を約１００−２００ｍｇまで成長させ（その範囲外の腫瘍は除いた）、動物を様々な処置および対照群に平等に分配した。各動物の処置は個々の体重に基いた。処置動物を処置関連毒性／死亡数について毎日チェックした。各群の動物を処置の開始（Ｗｔ１）および最後の処置投与の後（Ｗｔ２）体重を測定した。体重の差（Ｗｔ２−Ｗｔ１）は処置関連毒性の尺度を提供する。
【０２５７】
腫瘍応答を予め定めた０．５ｇｍという「標的」の大きさに達するまで、１週に２度カリパーでの腫瘍の測定により決定した．腫瘍重量（ｍｇ）を式：
腫瘍重量＝（長さｘ幅２）÷２
から見積もった。
【０２５８】
腫瘍応答終点は処置腫瘍のメジアン腫瘍重量（Ｔ）の対照群のそれ（Ｃ）に対する比として定義した腫瘍成長阻害（Ｔ／Ｃ％）で表わした。
腫瘍細胞死を見積もるために、腫瘍体積を２倍にする時間を最初に式：
ＴＶＤＴ＝対照腫瘍が標的サイズに達するメジアン時間（日）−
対照腫瘍が標的サイズの半分に達するメジアン時間（日）
を用いて計算し、そして次にＬｏｇ細胞死を式：
Ｌｏｇ細胞死＝（Ｔ−Ｃ）÷（３．３２ｘＴＶＤＴ）
を用いて計算した。
データの統計的評価はＧｅｈａｎの一般化したＷｉｌｃｏｘｏｎ試験を用いて行った。
【０２５９】
実施例１２：ダニングＲ３３２７Ｈラット前立腺腫瘍アッセイ
ダニングＲ３３２７Ｈラット前立腺腫瘍は前立腺の自発的に誘導された。よく分化したアンドロゲン応答性腺癌である（Ｓｍｏｌｅｖ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｐ． ６１， ２７３−２８７（１９７７））。Ｒ３３２７Ｈサブラインの成長を無傷のオスラットにおけるその高度にアンドロゲン依存性で再生可能な成長のため選ばれた。従ってこのモデルおよびこの腫瘍の他のサブラインは、フルタミドおよびバシルタミド／Ｃａｓｏｄｅｘ等の抗アンドロゲンのインビボ抗腫瘍活性を評価するために広く用いられている（Ｍａｕｃｈｅｒ Ａ．， ａｎｄ ｖｏｎ Ａｎｇｅｒｅｒ， Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １１９， ６６９−６７４（１９９３）， Ｆｕｒｒ Ｂ． Ｊ． Ａ， Ｅｕｒｏ ＵＲＬ． １８ （ｓｕｐｐｌ． ３） ２−９ （１９９０）， Ｓｈａｉｎ Ｓ． Ａ．． ａｎｄ Ｈｕｏｔ ＲＩ．， Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３１， ７１１−７１８（１９８８））。この試験のために、ダニング腫瘍片（約４ｘ４ｍｍ）を成熟したオスのコペンハーゲンラット（６−７週齢， Ｈａｒｌａｎ−Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＭＤ）のわき腹に皮下移植する。移植の約６週間後、測定可能な大きさ（約８０−１２０ｍｍ２）の腫瘍を有する動物を処理群（８−１０ラット／群）にランダムにわけ、処置を開始する。ラットの１群を去勢し、腫瘍成長の負の対照として用いる。動物を試験化合物、バシルタミド等の標準的な抗アンドロゲン、またはビークル（対照）で平均１０−１４週の間毎日処置する。試験化合物は１％カルボキシメチルセルロース、ＰＥＧ／ＣＭＣ中の（Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）１０％ポリエチレングリコールおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０のビークルに溶解する。典型的な実験は各標準または試験化合物について３つの増加する用量の３つの群を含む（３００−３ｍｇ／ｋｇ）。
【０２６０】
ビークル群対照群における腫瘍が１５００−２５００ｍｍ３の大きさに到達する。対照的に、去勢した動物群は典型的に観察の１４週にわたって腫瘍停止を示す。ビカルタミドまたはフルタミドの２０ｍｇ／ｋｇの経口処置動物は１４週の処置の後対照に比べて腫瘍体積の４０％減少を示すことが予期される。腫瘍の大きさはバーニアカリパー（Ｆｒｏｂｏｚ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により毎週測定し、長さおよび幅の垂直の測定を行う。腫瘍体積は式：長さｘ幅ｘ高さ＝体積を用いてｍｍ３で測定する。処置群と対照の間の統計的相異は、多重ＡＮＯＶＡ分析およびその後のワンテイルノンパラメトリックＳｔｕｄｅｎｔ　ｔ試験を用いて評価する。
【０２６１】
実施例１３：ダニングＲ３３２７Ｈラット前立腺腫瘍および湿前立腺重量アッセイ
実施例１１に記載したダニング腫瘍片（約４ｘ４ｍｍ）を成熟したオスのコペンハーゲンラット（６−７週齢， Ｈａｒｌａｎ−Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＭＤ）のわき腹に皮下移植する。移植の約６週間後、測定可能な大きさ（約８０−１２０ｍｍ２）の腫瘍を有する動物を処理群（８−１０ラット／群）にランダムにわけ、処置を開始する。ラットの１群を去勢し、腫瘍成長の負の対照として用いる。動物を試験化合物、バシルタミド等の標準的な抗アンドロゲン、またはビークル（対照）で平均１０−１４週の間毎日処置する。試験化合物は１％カルボキシメチルセルロース、ＰＥＧ／ＣＭＣ中の（）１０％ポリエチレングリコールおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０のビークルに溶解する。典型的な治療実験は各標準または試験化合物について３つの増加する用量の３つの群を含む（３００−３ｍｇ／ｋｇ）。
【０２６２】
ビークル群対照群における腫瘍は１５００−２５００ｍｍ３の大きさに到達する。対照的に、去勢した動物群は典型的に観察の１４週にわたって腫瘍停止を示す。ビカルタミドまたはフルタミドの２０ｍｇ／ｋｇの経口処置動物は１４週の処置の後、対照に比べて腫瘍体積の４０％減少を示すことが予期される。腫瘍の大きさはバーニアカリパー（Ｆｒｏｂｏｚ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により毎週測定し、長さおよび幅の垂直の測定を行う。腫瘍体積は式：長さｘ幅ｘ高さ＝体積を用いてｍｍ３で測定する。処置群と対照の間の統計的相異は、多重ＡＮＯＶＡ分析およびその後のワンテイルノンパラメトリックＳｔｕｄｅｎｔ　ｔ試験を用いて評価する。
【０２６３】
処理の終わりに動物を犠牲にし、レバトール・アニ、精嚢、腹部前立腺を外科的に除去し、重量を測定した。異なる実験からのデータを比較するため、器官重量を１００ｇ体重あたりのｍｇとして最初に標準化し、無傷のグループのそれぞれの器官の値のパーセントとして表わした。
【０２６４】
ラットの黄体形成ホルモン（ｒＬＨ）を、製造者の指示に従って、Ｂｉｏｔｒａｋ［１２５Ｉ］キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｋ）によりこれらの動物において定量的に測定した。その試験はＡｍｅｒｌｅｘ−Ｍビード／抗体懸濁に対する［１２５Ｉ］ｒＬＨ結合の血清中に存在するＬＨによる競合に基く。血清とのインキュベーションおよびその後の洗浄後に残る放射活性を標準曲線に外装して読みをｎｇ／ｍｌで得る。
【０２６５】
性器官およびレヴァトール・アニの重量の確得および損失は細胞数（ＤＮＡ含量）および細胞質量（タンパク質含量）の変化を反映し、血清アンドロゲン濃度に依存する（Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ．， １４５， １８８−１９１（１９９１））。従って、器官湿重量の測定はアンドロゲンおよびアンドロゲンアンタゴニストの生活性を示すのに十分である。このラットアッセイにおいて、活性なアゴニスト剤は１以上のアンドロゲン応答性器官（レヴァトール・アニ、前立腺、精嚢）の重量に影響しないか、増加させ、ＬＨ分泌に影響しないか抑制効果を減少させるであろう。アンタゴニスト活性を有する化合物は１以上のアンドロゲン応答性器官（レバトール・アニ、精嚢、腹部前立腺）の重量を減少させ、ＬＨ分泌に対して影響しないかまたは抑制効果の減少をもたらすであろう。
【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【表３４】
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【表３５】
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【表３６】
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【表３７】
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【表３８】
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【表３９】
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【表４０】
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【表４１】
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【表４２】
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【表４３】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【表４７】
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【国際公開パンフレット】
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2004509072.tif 000113
2004509072.tif 000114
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004509072.tif 000252
【国際調査報告】
2004509072.tif 000253
2004509072.tif 000254
2004509072.tif 000255
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