(57)【要約】本発明は、肥満抑制薬として使用するコバルト−ポルフィリン（Ｃｏ−Ｐ）錯体、およびそれらに関連した組成物および方法に関する。これらのＣｏ−Ｐ錯体は、コバルトメソポルフィリン（Ｃｏ−ＭＰ）およびコバルトプロトポルフィリン（Ｃｏ−ＰＰ）と比べて低いレドックス活性を示し、特に、注射部位の毒性に関して、Ｃｏ−Ｐの投与に伴う有害な影響（これは、酸化ストレスを伴う）を改善する。本発明のコバルト−ポルフィリンは、そのポルフィリン環が中心コバルトイオンを錯化（すなわち、キレート化）する四座配位子として作用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
2004523501.tif 000043
を有するコバルト−ポリフィリン錯体またはその塩であって、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３であり；
Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ５は、各場合において、同一であるかまたは異なり、そして別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子であるが；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリンのレドックス活性の５０％以下を有する、
コバルト−ポルフィリン錯体。
【請求項２】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項３】
Ａが、−ＯＣ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項４】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項５】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項６】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項７】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項８】
Ａが、−Ｏ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項９】
Ａが、−Ｓ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１０】
ｎが、２である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１１】
ｎが、３である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１２】
Ｒが、水素である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３】
Ｒが、低級アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４】
Ｒ５が、水素である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５】
Ｒ５が、アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１６】
Ｒ５が、低級アルキルである、請求項１５に記載の錯体。
【請求項１７】
Ｒ５が、置換アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１８】
Ｒ５が、アリールまたは置換アリールである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１９】
Ｒ５が、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項２０】
アリールアルキルが、ベンジルである、請求項１９に記載の錯体。
【請求項２１】
Ｒ３およびＲ４が、同一である、請求項１に記載の錯体。
【請求項２２】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項２０に記載の錯体。
【請求項２３】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項２０に記載の錯体。
【請求項２４】
Ｌ１またはＬ２の少なくとも１個が、存在する、請求項１に記載の錯体。
【請求項２５】
Ｌ１およびＬ２の両方が、存在する、請求項１に記載の錯体。
【請求項２６】
Ｌ１およびＬ２が、グリシネートである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２７】
Ｌ１およびＬ２が、イミダゾールである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２８】
Ｌ１およびＬ２が、ハロゲンである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２９】
Ｌ１およびＬ２が、一置換アミノまたは二置換アミノである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３０】
Ｌ１およびＬ２が、置換複素環または非置換複素環である、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３１】
薬学的に受容可能な担体と組み合わせた、請求項１に記載の化合物を含有する組成物。
【請求項３２】
肥満を治療する方法であって、該方法は、コバルト−ポルフィリン錯体および薬学的に受容可能な担体を含有する組成物の有効量を投与する工程を包含し、該コバルト−ポルフィリン錯体は、以下：
【化２】
2004523501.tif 000044
の構造を有し、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３であり；
Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ５は、各場合において、同一であるかまたは異なり、そして別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子であるが；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリンのレドックス活性の５０％以下を有する、
方法。
【請求項３３】
前記組成物が、注射により投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項３５】
Ａが、−ＯＣ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項３６】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項３７】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項３８】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項３９】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４０】
Ａが、−Ｏ−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４１】
Ａが、−Ｓ−である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４２】
ｎが、２である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４３】
ｎが、３である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４４】
Ｒが、水素である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４５】
Ｒが、低級アルキルである、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４６】
Ｒ５が、水素である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４７】
Ｒ５が、アルキルである、請求項３２に記載の錯体。
【請求項４８】
Ｒ５が、低級アルキルである、請求項４７に記載の錯体。
【請求項４９】
Ｒ５が、置換アルキルである、請求項３２に記載の錯体。
【請求項５０】
Ｒ５が、アリールまたは置換アリールである、請求項３２に記載の錯体。
【請求項５１】
Ｒ５が、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルである、請求項５０に記載の錯体。
【請求項５２】
アリールアルキルが、ベンジルである、請求項５１に記載の錯体。
【請求項５３】
Ｒ３およびＲ４が、同一である、請求項３２に記載の錯体。
【請求項５４】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項５３に記載の錯体。
【請求項５５】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項５３に記載の錯体。
【請求項５６】
Ｌ１またはＬ２の少なくとも１個が、存在する、請求項３２に記載の錯体。
【請求項５７】
Ｌ１およびＬ２の両方が、存在する、請求項３２に記載の錯体。
【請求項５８】
Ｌ１およびＬ２が、グリシネートである、請求項５７に記載の錯体。
【請求項５９】
Ｌ１およびＬ２が、イミダゾールである、請求項５７に記載の錯体。
【請求項６０】
Ｌ１およびＬ２が、ハロゲンである、請求項５７に記載の錯体。
【請求項６１】
Ｌ１およびＬ２が、一置換アミノまたは二置換アミノである、請求項５７に記載の錯体。
【請求項６２】
Ｌ１およびＬ２が、置換複素環または非置換複素環である、請求項５７に記載の錯体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、概して、肥満抑制薬として有用なコバルト−ポルフィリン錯体、ならびにそれに関連した化合物、組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
ポルフィンｉは、ポルフィリン類の親物質であり、ポルフィリン類は、全ての生物で見られる１群の化合物であり、動物および植物における呼吸色素の基礎である。ポルフィリン類は、ポルフィンのピロール環の水素原子を種々の側鎖で置換した種類の化合物を構成する。ポルフィリン類は、広範囲に研究されており、その多くは、Ｔｈｅ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ，Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９７８の表題の数巻より成る論文で、提示されている。
【０００３】
【化３】
2004523501.tif 000002
代表的なポルフィリンは、プロトポルフィリンＩＸ  ｉｉである。プロトポルフィリンＩＸは、ヘムの直接の前駆体であり、これは、プロトポルフィリンにより鉄をキレート化する際に形成される錯体である。鉄に加えて、プロトポルフィリンＩＸは、他の金属と容易にキレート化する。コバルトとキレート化したとき、得られる錯体は、コバルト−ポルフィリンｉｉｉ（その塩および／または配位子錯体を含めて）である。
【０００４】
【化４】
2004523501.tif 000003
プロトポルフィリンＩＸ  ｉｉの関連類似物は、メソポルフィリンｉｖであり、これは、２個のエチレン側鎖が完全に飽和されている点で、プロトポルフィリンとは異なる。コバルトにキレート化したとき、コバルトメソポルフィリンｖが生じる（その塩および／または配位子錯体を含めて）。
【０００５】
【化５】
2004523501.tif 000004
コバルトプロトポルフィリン（「Ｃｏ−ＰＰ」）は、ラット（Ｇａｌｂｒａｉｔｈ  ａｎｄ  Ｋａｐｐａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：７６５３〜７６５７，１９８９）、および他の動物（例えば、ラット、イヌおよびサル）において、食物摂取および体重を調節することが報告されている。Ｓｐｒａｇｕｅ  ＤａｗｌｅｙラットにおいてＣｏ−ＰＰを１回皮下注射すると、即座に、用量に依存した食物摂取の減少が起こる。この結果は、体重の持続的減少を伴い、これは、タンパク質含量を変えることなく、胴体脂肪含量の減少により特徴付けられる。脳室内投与により送達された少用量のＣｏ−ＰＰもまた、同じ効果を誘発することが発見されている。
【０００６】
Ｃｏ−ＰＰの調節効果はまた、著しい肥満になるように遺伝的に運命づけられた動物にも広げられている。それゆえ、ｆａ遺伝子のホモ接合性（ｆａ／ｆａ）により肥満にされたＺｕｃｋｅｒラットにＣｏ−ＰＰを皮下投与すると、長時間にわたって持続した体重の減少が起こる（Ｇａｌｂｒａｉｔｈ  ａｎｄ  Ｋａｐｐａｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４１：２９２〜２９８，１９９０）。Ｃｏ−ＰＰの効果は、甚大であり、ｆａ／ｆａ動物における遺伝子発現の表現型をヘテロ接合性の痩せた動物のものに類似した表現型に戻すことにより引き起こされると考えられている。コバルトメソポルフィリン（「Ｃｏ−ＭＰ」）は、同程度の生体プロフィールを有するのに対して、同じ効果は、無機コバルトまたは他の多数のポルフィリン金属キレートを投与しても、見られない。体重を調節するＣｏ−ＰＰの作用機構は、未知であるが、ラットにおける体重減少は、神経ペプチドＹ系に媒介されるのではないことが明らかとなっている（Ｃｈｏｉら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７２９：２２３〜２２７,１９９６；Ｔｕｒｎｅｒら、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ５６：１０００９−１０１４，１９９４）。
【０００７】
体重を調節するためにＣｏ−ＰＰおよび／またはＣｏ−ＭＰを投与することに欠点がない訳ではない。例えば、Ｃｏ−ＰＰを高用量で投与することには、酸化ストレスが伴う（Ｔｏｍａｒｏら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２８６：６１０〜６１７，１９９１を参照）。従って、Ｃｏ−ＰＰおよび／またはＣｏ−ＭＰに付随した有益な特性（例えば、体重を調節する能力）を有するが、その投与で現在遭遇している望ましくない副作用がない化合物が、当該技術分野で必要とされている。本発明は、これらの要求を満たし、また、他の関連した利点をもたらす。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
簡単に述べると、本発明は、コバルト−ポルフィリン（「Ｃｏ−Ｐ」）錯体（これは、肥満抑制薬として有用である）、ならびにそれに関連した組成物および方法に関する。本発明のコバルト−ポルフィリンは、そのポルフィリン環が中心コバルトイオンを錯化（すなわち、キレート化）する四座配位子として働くので、「錯体」と呼ばれる。本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、広範囲の治療用途にわたって活性を有し、これらには、肥満抑制薬としての用途が挙げられる（これに限定されない）。
【０００９】
さらに具体的には、本発明のコバルト−ポリフィリン（Ｃｏ−Ｐ）錯体（その塩を含めて）は、以下の構造（Ｉ）：
【００１０】
【化６】
2004523501.tif 000005
を有し、式中、
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３である；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３である；
Ｒ５は、各場合において、同一または異なり、別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキル、複素環、置換複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｅ）、複素環アルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｃｌｅａｌｋｙ）または置換複素環アルキルである；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子である；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリンのレドックス活性と比較して減少した活性を有する。
【００１１】
１実施態様では、減少したレドックス活性は、反応性酸素種（ＲＯＳ）調節剤と、そのＲ１位置および／またはＲ２位置で、Ｃｏ−Ｐを結合させることにより、達成される。代替実施態様では、減少したレドックス活性は、Ｃｏ−Ｐを適当なＬ１および／またはＬ２配位子と配位させることにより、与えられる。
【００１２】
上記構造（Ｉ）がコバルト（ＩＩ）およびコバルト（ＩＩＩ）の両方だけでなくそれらの任意の配位子錯体を含むと解釈されることは、当然理解できるはずである。例えば、ポルフィリン四座配位子でキレート化する場合、コバルトは、典型的には、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の酸化数を有し、すなわち、それぞれ、Ｃｏ＋２またはＣｏ＋３であり、また、４（平面四角形）または６（八面体）の配位数を有する。それゆえ、四面体形状のとき、このコバルトイオンには、２個のさらなる配位子（上記構造（Ｉ）では、Ｌ１およびＬ２として命名されている）が配位される。他方、四面体形状のとき、Ｌ１およびＬ２は、存在しない。この理由のために、Ｌ１およびＬ２は、上記構造（Ｉ）では「任意であり」、存在するとき、同一または異なり得る。
【００１３】
本発明のこれらの局面および他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すると、明らかとなる。その目的のために、本明細書中では、種々の参考文献が示されており、それらは、本発明のある局面をさらに詳細に記述し、また、各文献の内容は、その全体が本明細書中で参考として援用されている。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、一般に、コバルト−ポリフィリン（Ｃｏ−Ｐ）錯体、ならびにそれに関連した組成物および方法に関する。上で述べたように、本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、以下の構造（Ｉ）またはその塩を有する：
【００１５】
【化７】
2004523501.tif 000006
Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３である；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３である；
Ｒ５は、各場合において、同一または異なり、別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキル、複素環、置換複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｅ）、複素環アルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｃｌｅａｌｋｙｌ）または置換複素環アルキルである；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子である；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリン（Ｃｏ−ＭＰ）のレドックス活性と比較して減少したレドックス活性を有する。
【００１６】
本明細書中で使用する場合、上記の使用される用語は、以下の意味を有する：
「アルキル」とは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分枝で飽和または不飽和の環式または非環式の炭化水素であるのに対して、「低級アルキル」とは、同じ意味であるが、１〜６個の炭素原子しか有さない。代表的な飽和直鎖アルキルには、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどが挙げられ；飽和分枝アルキルには、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどが挙げられる。不飽和アルキルは、隣接炭素原子間にて、少なくとも１個の二重結合または三重結合を含有する（これはまた、それぞれ、「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれている）。代表的な直鎖および分枝アルケニルには、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどが挙げられ；代表的な直鎖および分枝アルキニルには、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどが挙げられる。代表的な飽和環状アルキルには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）ＣＨ２−などが挙げられ；不飽和環状アルキルには、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが挙げられる。シクロアルキルはまた、本明細書中では、「炭素環式」環系と呼ばれ、これには、８〜１４個の炭素原子を有する二環式および三環式の環系（例えば、１個またはそれ以上の芳香族（例えば、フェニル）に縮合したシクロアルキル（例えば、シクロペンタンまたはシクロヘキサン）または非芳香族（例えば、シクロヘキサン）炭素環式環）が挙げられる。
【００１７】
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００１８】
「オキソ」とは、カルボニル基（すなわち、「＝Ｏ」）を意味する。
【００１９】
「アリール」とは、芳香族炭素環式部分（例えば、フェニルまたはナフチル）を意味する。
【００２０】
「アリールアルキル」とは、少なくとも１個のアルキル水素原子をアリール部分（例えば、ベンジル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、−ＣＨ（フェニル）２など）で置換されたアルキルを意味する。
【００２１】
「ヘテロアリール」とは、５員〜１０員の芳香族複素環を意味し、これは、窒素、酸素およびイオウから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、そして少なくとも１個の炭素原子を含有する（単環式環系および二環式環系の両方を含めて）。代表的なヘテロアリールには、ピリジル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、ピロリル、インドリル、オキサゾリル、ベンズオキサゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニルおよびキナゾリニルがある。
【００２２】
「ヘテロアリールアルキル」とは、少なくとも１個のアルキル水素をヘテロアリール部分で置換されたアルキル（例えば、−ＣＨ２ピリジニル、−ＣＨ２ピリミジニルなど）を意味する。
【００２３】
「複素環」とは、５員〜７員の単環式または７員〜１０員の二環式の複素環を意味し、これは、飽和、不飽和または芳香族のいずれかであり、１〜４個のヘテロ原子（これは、別個に、窒素、酸素およびイオウから選択される）を含有し、ここで、その窒素ヘテロ原子およびイオウヘテロ原子は、必要に応じて、酸化され得、この窒素原子は、必要に応じて、四級化され得、これには、二環式の環（この環では、上記複素環のいずれかは、ベンゼン環に縮合される）が挙げられる。この複素環は、任意のヘテロ原子または炭素原子を介して結合され得る。複素環は、上で定義したヘテロアリールを含む。それゆえ、上で挙げたヘテロアリールに加えて、複素環には、また、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどが挙げられる。
【００２４】
「複素環アルキル」とは、少なくとも１個のアルキル水素原子を複素環で置換されたアルキル（例えば、−ＣＨ２モルホリニルなど）を意味する。
【００２５】
本明細書中で使用する「置換（された）」との用語は、少なくとも１個の水素原子が置換基で置き換えられた上記基（例えば、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよび複素環アルキル）のいずれかを意味する。オキソ置換基（「＝Ｏ」）の場合、２個の水素原子が置き換えられる。置換基には、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、置換アルキル（例えば、ハロアルキル、一置換または二置換アミノアルキル、アルキルオキシアルキルなど）、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環アルキル、置換複素環アルキル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、または式−Ｙ−Ｚ−Ｒａのラジカルであり、ここで、Ｙは、アルカンジイル、置換アルカンジイル、または直接結合であり、Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、Ｎ（Ｒｂ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、Ｎ（Ｒｂ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）−または直接結合であり、ここで、ＲａおよびＲｂは、同一または異なり、別個に、水素、アミノ、アルキル、置換アルキル（ハロゲン化アルキルを含む）、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環、置換複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｅａｌｋｙｌ）、複素環アルキルまたは置換複素環アルキル、または、ここで、ＲａおよびＲｂは、それらが結合する窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成する。
【００２６】
１実施態様では、Ｒ３およびＲ４の両方は、−ＣＨ＝ＣＨ２であり、そして本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、以下の構造（ＩＩ）を有する：
【００２７】
【化８】
2004523501.tif 000007
他の実施態様では、Ｒ３およびＲ４の両方は、−ＣＨ２ＣＨ３であり、そして本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、以下の構造（ＩＩＩ）を有する：
【００２８】
【化９】
2004523501.tif 000008
さらに他の実施態様では、Ｒ１およびＲ２は、両方共に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、そして本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、以下の構造（ＩＶ）を有する：
【００２９】
【化１０】
2004523501.tif 000009
さらに他の実施態様では、Ｒ１およびＲ２は、両方共に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そして本発明のＣｏ−Ｐ錯体は、それぞれ、以下の構造（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）または（ＸＩ）を有する：
【００３０】
【化１１】
2004523501.tif 000010
【００３１】
【化１２】
2004523501.tif 000011
本発明に関連して、上記構造（Ｉ）のＣｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＰＰおよび／またはＣｏ−ＭＰに付随した有益な特性（例えば、体重を調節する能力）の多くを保持するが、それを投与すると現在遭遇する望ましくない副作用の多くをなくすかおよび／または少なくすることが発見されている。以下の理論で限定するつもりはないものの、Ｃｏ−ＰＰおよび／またはＣｏ−ＭＰの投与は、注入部位での反応性酸素種（これらは、組織に対して有害な結果を生じる）（特に、過酸化水素）の著しい産生を誘発すると考えられている。例えば、このような反応性酸素種は、ＤＮＡ、タンパク質および膜成分に対する遊離ラジカル損傷を生じ、また、反応性酸素種の細胞内レベルが高まると、アポトーシス細胞死および壊死性細胞死に対する脆弱性が高まる。実際、高用量のＣｏ−ＰＰを投与すると、ヘムオキシゲナーゼが誘発され、このような誘発は、酸化ストレスに先行し、これは、減少したグルタチオンレベルの欠乏により、誘発される（Ｔｏｍａｏら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２８６：６１０〜６１７、１９９１）。
【００３２】
本発明を実施する際に、反応性酸素種の発生は、Ｃｏ−Ｐを反応性酸素種（ＲＯＳ）調節剤と結合することにより、および／またはＣｏ−Ｐを配位子と配位することにより、調節される。第一の場合、そのＲ１／Ｒ２部分の一方または両方は、ＲＯＳ調節剤として働く。リンカーＡを介した結合Ｒ５は、例えば、対応するカルボン酸（すなわち、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、そしてＲ５は、水素である）で開始するこの分野で公知の化学反応により、達成され得る。第二の場合、Ｃｏ−Ｐは、１個またはそれ以上の配位子Ｌ１およびＬ２で錯化される。この場合もやはり、このような錯体の形成は、当業者に公知であり、Ｌ１および／またはＬ２配位子を適切に選択し配位することにより、達成される。本明細書中で使用する「ＲＯＳ調節剤」とは、（リンカーＡを介して）Ｃｏ−Ｐに共有結合できる部分であって、Ｃｏ−ＰＰおよび／またはＣｏ−ＭＰを投与することにより通常誘導されるＲＯＳの発生を調節するように働く部分を意味する。このことに関して、「配位子」とは、供与できる少なくとも１個の電子対を有する任意の分子またはイオンを意味する。一般に、このような部分または配位子がＲＯＳの発生を調節する性能は、構造（Ｉ）のＣｏ−Ｐに結合したときにそれが実施例１５および／または１６で開示されたアッセイで反応性酸素種の発生を阻止する性能により、確認できる。
【００３３】
本発明の１実施態様では、このＲＯＳ調節剤は、以下で描写するように、構造（Ｉ）のリンカーＡを介してＣｏ−Ｐに結合したチオクト酸またはエブセレン（ｅｂｅｌｓｅｎ）である：
【００３４】
【化１３】
2004523501.tif 000012
チオクト酸は、ジヒドロチオクト酸で相互変換可能な環状ジスルフィドである。エブセレンは、セレノ有機化合物であり、これは、グルタチオンペルオキシダーゼ（チオール還元等価物を消費してヒドロペルオキシドの還元を触媒する酵素）に有効な模倣物である（Ｓｉｅｓ，Ｈ，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １４：３１３〜３２３，１９９３）。エブセレンの基質特異性は、過酸化水素から、より小さい有機ヒドロペルオキシド、膜結合リン脂質およびコレステロールヒドロペルオキシドまでの範囲である。チオクト酸およびエブセレンの両方は、ミトコンドリアピルビン酸塩ジヒドロゲナーゼおよびα−ケトグルタレートデヒドロゲナーゼ錯体の内因性補因子であり、グルタチオンおよびα−トコフェロールをそれらの還元状態で維持することを助け、そして固有の遊離ラジカルスカベンジャー特性を有する。
【００３５】
一般に、ＲＯＳ調節剤は、適切な共有結合の形成により、Ｃｏ−Ｐに結合され得る。例えば、もし、アミド結合を利用するなら、チオクト酸のカルボン酸は、周知の有機化学技術により、対応するアミドに変換され得るか、またはエブセレンのアミン置換誘導体が利用され得る。このアミンは、次いで、周知技術を再度使用して、Ｃｏ−ＰＰ（またはＣｏ−ＭＰ）のカルボン酸と反応されて、代表的な化合物（Ｖａ）および（Ｖｂ）を生じ得る。（注記：以下の構造（Ｖａ）および（Ｖｂ）では、任意の配位子Ｌ１およびＬ２は、描写されていない）：
【００３６】
【化１４】
2004523501.tif 000013
。
【００３７】
他の実施態様では、上記のように、ＲＯＳの発生は、Ｃｏ−Ｐを配位子と配位することにより、調節される。このような錯体の形成は、一般に、当業者に公知であり、Ｌ１および／またはＬ２を適切に選択し配位することにより、達成される。このことに関して、適切な配位子には、電子欠乏金属イオン（この場合、コバルト）に電子を供与できる任意の配位子が挙げられる。このような配位子は、内部配位圏の１位置を占めることができ、また、コバルトへの少なくとも１個の配位結合を形成でき、典型的には、ユニデンテート（ｕｎｉｄｅｎｔａｔｅ）配位子である。代表的な配位子には、ハロ（フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード）、シアノ、アミノ、一置換または二置換アミノ（ここで、その置換基は、ＲａおよびＲｂについて上で定義したとおりである）、アミノ酸（例えば、グリシネート）のアミノ基、および置換または非置換複素環（上で定義したように、１個またはそれ以上の窒素、酸素および／またはイオウヘテロ原子を含有し、これには、置換または非置換ヘテロアリール（例えば、ピペリジンおよびイミダゾール）が含まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
上で述べたように、構造（Ｉ）のＣｏ−Ｐ化合物は、コバルトメソポルフィリン（Ｃｏ−ＭＰ）と比べて、低いレドックス活性を有しなければならない。このような活性は、例えば、実施例１６で開示されたアッセイにより、容易に決定できる。そのアッセイでは、レドックス活性は、アスコルビン酸塩およびＴＭＰＤの存在下にてＣｏ−Ｐ試験化合物により触媒される酸素消費により、測定される。この同じアッセイはまた、Ｃｏ−ＭＰに対して実行され、その試験化合物がＣｏ−ＭＰと比べて低いレドックス活性を示すかどうかを決定するために、比較が行われる。
【００３９】
本発明の新規Ｃｏ−Ｐ錯体に関連して、構造（Ｉ）のＣｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＭＰと比べて、低いレドックス活性を有する。このような比較は、Ｃｏ−ＭＰのレドックス活性に対して１００％の値を割り当てることにより、行われる。本発明の新規Ｃｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＭＰのレドックス活性の５％（またはそれ以下）を有する。好ましくは、このＣｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＭＰのレドックス活性の４％（またはそれ以下）、さらに好ましくは、３％（またはそれ以下）、さらにより好ましくは、２％（またはそれ以下）、最も好ましくは、１％（またはそれ以下）を有する。さらに特定の好ましい実施態様では、本発明の新規Ｃｏ−Ｐ錯体のレドックス活性は、実施例１６で開示されたアッセイでは検出できない（すなわち、Ｃｏ−ＭＰの０％レドックス活性）。
【００４０】
本発明の方法（例えば、肥満を治療する方法）に関連して、構造（Ｉ）のＣｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＭＰのレドックス活性の５０％（またはそれ以下）を有する。好ましくは、このＣｏ−Ｐ錯体は、Ｃｏ−ＭＰのレドックス活性の２０％（またはそれ以下）、さらに好ましくは、１０％（またはそれ以下）、さらにより好ましくは、５％（またはそれ以下）、最も好ましくは、１％（またはそれ以下）を有する。さらに特定の好ましい実施態様では、本発明の方法で患者に投与されるＣｏ−Ｐ錯体のレドックス活性は、実施例１６で開示されたアッセイでは検出できない。
【００４１】
このようなレドックス活性の測定値は、実施例１８の表３で示されており、ここで、Ｃｏ−ＭＰに、１の値（すなわち、１００％）を割り当てた。その実施例では、Ｃｏ−ＰＰは、Ｃｏ−ＭＰよりも高いレドックス活性を有することが分かった（２．２倍高い）のに対して、表３で同定した代表的なＣｏ−Ｐ錯体は、全て、Ｃｏ−ＭＰと比べて、低いレドックス活性を有していた（一部は、検出できない活性を有していた）。
【００４２】
本発明のＣｏ−Ｐ錯体またはその薬学的に受容可能な塩は、治療有効量で、患者に投与される。治療有効量とは、所望の効果を達成するように計算した量である。投与経路が特定の治療と共に変わり得ることは、当業者に明らかである。投与経路は、侵襲的または非侵襲的のいずれかであり得る。非侵襲的投与経路には、経口、口内／舌下、直腸、経鼻、局所（経皮および眼を含めて）、膣内、膀胱内および肺内が挙げられる。侵襲的投与経路には、動脈内、静脈内、皮内、筋肉内、皮下、腹腔内、くも膜下腔内および眼内が挙げられる。典型的な実施態様では、投与は、注射による。
【００４３】
必要な投薬量は、特定の治療および投与経路と共に、変わり得る。一般に、Ｃｏ−Ｐ錯体の投薬量は、１日あたり、宿主動物の体重１ｋｇあたり、約１〜約５ミリグラムのこの化合物である；しばしば、それは、１日あたり、体重１ｋｇあたり、約１００μｇと約５ｍｇの間であるが、約５０ｍｇの化合物まで変わり得る。治療的投与は、一般に、医師の指導の下で実行され、製薬組成物は、薬学的に受容可能な担体中にて、ミトコンドリア保護剤を含有する。これらの担体は、当該技術分野で周知であり、典型的には、非毒性の塩および緩衝液を含有する。このような担体は、生理学的に緩衝化した生理食塩水、リン酸塩緩衝生理食塩水のような緩衝液、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、マンニトールまたはデキストラン）、アミノ酸（例えば、グリシン）、酸化防止剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバンドおよび防腐剤を含有し得る。受容可能な非毒性塩には、酸付加塩または金属錯体（例えば、亜鉛、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウムなどとの金属錯体）（これらは、本願の目的のために、付加塩と見なされる）が挙げられる。このような酸付加塩の例には、塩酸塩、臭化水素塩、硫酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などがある。もし、その活性成分が錠剤形状で投与されるなら、この錠剤は、結合剤（例えば、トラガカント、コーンスターチまたはゼラチン）；崩壊剤（例えば、アルギン酸）；および潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）を含有し得る。もし、液体形状での投与が望ましいなら、甘味料および／または香料が使用され得、等張性生理食塩水、リン酸緩衝溶液などの中での静脈内投与が行われ得る。
【００４４】
以下の実施例は、限定としてではなく例として提供されている。
【実施例】
【００４５】
（実施例１）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸの酸性エステル化）
【００４６】
【化１５】
2004523501.tif 000014
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（３２９．５ｍｇ，０.５００ｍｍｏｌ）を、無水アルコール（１０ｍＬ）でスラリー化した。この混合物を氷浴で冷却し、攪拌しつつ、約３０秒間にわたって、Ｈ２ＳＯ４（０．５００ｍｌ）を滴下した。反応フラスコにしっかりと栓をし、その混合物を、周囲温度で、一晩（約１６時間）攪拌した。この反応混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）と１．０Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）との間で分配し、その有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。回転蒸発により溶媒を除去して、深紅のガラス状物質を得た。溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１および８５／１５）を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、さらに精製した。適切な画分をプールし、そして蒸発させて、その推定塩化物塩として、所望のジエステルを得た。
【００４７】
各ビスグリシネート錯体への変換は、以下のようにして実行した。この推定塩化物塩を、１０ｍＭの濃度で、ＥｔＯＨに溶解した。この溶液に、ナトリウムグリシネートの含メタノール溶液（０．１０Ｍ、３．０当量）を加えた。１０分間攪拌した後、その反応溶液を乾燥状態まで蒸発させ、そしてジオキサン：Ｈ２Ｏ（２：３、２５ｍｌ）に再溶解し、凍結し、そして凍結乾燥して、綿毛状の赤色固形物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ分光法により、軸方向に配位したグリシネート配位子の存在および１当量に近い未配位ナトリウムグリシネートの存在が確認された。高解像度ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ分析により、未配位コバルトメソポルフィリンジエステルについて、組成データを得た。
【００４８】
上記手順により、以下の化合物を製造し特徴付けた：
（１−１）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジメチルエステル
【００４９】
【化１６】
2004523501.tif 000015
（１−２）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジブチルエステル
【００５０】
【化１７】
2004523501.tif 000016
（１−３）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジイソブチルエステル
【００５１】
【化１８】
2004523501.tif 000017
（１−４）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジイソアミルエステル
【００５２】
【化１９】
2004523501.tif 000018
（１−５）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジエチルエステル
【００５３】
【化２０】
2004523501.tif 000019
（１−６）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジイソプロピルエステル
【００５４】
【化２１】
2004523501.tif 000020
（実施例２）
（ＣＤＭＩで媒介したコバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジメチルエステルの形成）
【００５５】
【化２２】
2004523501.tif 000021
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（３２９．５ｍｇ，０.５００ｍｍｏｌ）を、その無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液の蒸発により、乾燥した。その残留物を無水ＤＭＦ（２５ｍｌ）に溶解した。カルボニルビス（２−メチルイミダゾール）（３８０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を一度に加え、フラスコに栓をし、その内容物を、周囲温度で、６０分間攪拌した。無水メタノール（０．４０５ｍｌ、１０．０ｍｍｏｌ）を加え、攪拌を３時間継続した。そのＤＭＦを回転蒸発により除去し、そのように形成された残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１および８５／１５）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、さらに精製した。適切な画分をプールし、そして蒸発させて、その推定塩化物塩として、所望のジメチルエステル３３２ｍｇを得た。
【００５６】
粗ビス（２−メチルイミダゾール）錯体をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）と６Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）との間で分配することにより、その軸方向含窒素配位子の除去を達成した。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして蒸発させて、推定非錯化ジメチルエステル１３９ｍｇを得た。
【００５７】
この物質をＥｔＯＨ（２０．２ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を、ナトリウムグリシネートの含メタノール溶液（０．１０Ｍ、６．１ｍｌ、３．０当量）で処理した。１０分間攪拌した後、その反応溶液を乾燥状態まで蒸発させ、そしてジオキサン：Ｈ２Ｏ（２：３、２５ｍｌ）に再溶解し、凍結し、そして凍結乾燥して、粉末赤色固形物２０３ｍｇ（４１％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲデータは、事実上、直接酸性エステル化によって調製した物質について得たデータと同じであり、軸方向に配位したグリシネート配位子の存在および１当量に近い未配位ナトリウムグリシネートの存在が確認された。
【００５８】
（実施例３）
（コバルト（ＩＩＩ）プロトポルフィリンＩＸの酸性エステル化）
【００５９】
【化２３】
2004523501.tif 000022
コバルト（ＩＩＩ）プロトポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（３２７．５ｍｇ，０.５００ｍｍｏｌ）を、無水アルコール（１０ｍＬ）でスラリー化した。この混合物をＥｔＯＨ／ドライアイス冷却浴で冷却し、攪拌しつつ、約３０秒間にわたって、Ｈ２ＳＯ４（０．５００ｍｌ）を滴下した。反応フラスコにしっかりと栓をし、その混合物を、−２０℃に保った冷蔵庫に入れた。反応の最初の１時間の間、出発物質の堆積を避けるために、このフラスコの内容物を定期的に振盪した。冷却状態で一晩（約１６時間）保持した後、この反応混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）と１．０Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）との間で分配した。その有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして回転蒸発により溶媒を除去した。その粗生成を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１および８５／１５）を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより、さらに精製した。適切な画分をプールし、そして蒸発させて、その推定塩化物塩として、所望のジメチルエステル２５７ｍｇを得た。
【００６０】
この物質をＥｔＯＨ（３７．６ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を、ナトリウムグリシネートの含メタノール溶液（０．１０Ｍ、１１．３ｍｌ、３．０当量）で処理した。１０分間攪拌した後、その反応溶液を乾燥状態まで蒸発させ、そしてジオキサン：Ｈ２Ｏ（２：３、２５ｍｌ）に再溶解し、凍結し、そして凍結乾燥して、粉末赤色固形物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ分光法により、軸方向に配位したグリシネート配位子の存在および１当量に近い未配位ナトリウムグリシネートの存在が確認された。高解像度ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ分析により、未配位コバルトプロトポルフィリンジメチルエステルについて、組成データを得た。
【００６１】
上記手順により、以下の化合物を製造し特徴付けた：
（３−１）コバルト（ＩＩＩ）プロトポルフィリンＩＸビスグリシネート一ナトリウム塩、ジメチルエステル
【００６２】
【化２４】
2004523501.tif 000023
（実施例４）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸのジベンジルアミドのＣＤＩで媒介した合成）
【００６３】
【化２５】
2004523501.tif 000024
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（３３．０ｍｇ、５０μｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（２．５ｍｌ）に溶解した。この深紅溶液に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（３２．４ｍｇ、２００μｍｏｌ）を加え、その反応混合物を、周囲温度で、３０分間攪拌した。この反応混合物にベンジルアミン（２７．３μｌ、２５０μｍｏｌ）を加え、湿気および光を排除しつつ、１６時間にわたって、攪拌を継続した。水（１００μｌ）を加えて、過剰の試薬を加水分解し、回転蒸発により、溶媒を除去した。得られた深紅残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９０／１０および８５／１５）の一部を使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、Ｃｏ−ＭＰ  ＩＸの対応するジアミドを溶出した。適切な画分をプールし、蒸発させ、そして乾燥して、深紅固形物を得た。その粗標的分子の１Ｈ−ＮＭＲ分析により、配位イミダゾールだけでなく遊離イミダゾールの存在が明らかとなった。過剰のイミダゾールを除去することを目的とした合成後工程では、この粗標的分子のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液を、１／２−飽和ＮａＣｌ（水溶液）：１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）（２１ｍｌ、２０：１）で洗浄した。その有機層をＮａ２ＳＯ４のパッドでゆっくりと濾過し、そして蒸発させて、赤色固形物として、ビスアミド誘導体を得た。１Ｈ−ＮＭＲ分光法により、軸方向配位イミダゾール配位子の存在を確認した。収率は、対応する塩化物塩の分子量に基づいている。高解像度ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ分析により、未配位コバルトメソポルフィリンジアミドについて、組成データを得た。
【００６４】
上記手順により、以下の化合物を製造し特徴付けた：
（４−１）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスイミダゾール、ジベンジルアミド
【００６５】
【化２６】
2004523501.tif 000025
（４−２）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスイミダゾール、ジ（４−メトキシベンジル）アミド
【００６６】
【化２７】
2004523501.tif 000026
（４−３）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスイミダゾール、ビス（３，４−ジメトキシベンジル）アミド
【００６７】
【化２８】
2004523501.tif 000027
（４−４）コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビスグリシネート、ジ−（Ｎ−イソプロピル）アミド
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（６５９ｍｇ，１.０ｍｍｏｌｅ）の無水ＤＭＦ（２５ｍｌ）溶液に、カルボニルジメチルイミダゾール（ＣＤＭＩ）（７６１ｍｇ、４．０ｍｍｏｌｅ）を加えた。この混合物を、室温で１時間攪拌したのに続いて、イソプロピルアミン（０．０４３ｍｌ、５．０ｍｍｏｌｅ）を加えた、その混合物を、室温で、１７時間攪拌した。この反応を、水（１．０ｍｌ）でクエンチした。真空下にて、溶媒を除去し、その残留物を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９０／１０）に次いでＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８５／１５）を使用するシリカゲルプラグで濾過して、赤色固形物として、コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸビス（メチルイミダゾール）、ジ−（Ｎ−イソプロピル）アミド（５１０ｍｇ）を得た。この赤色固形物をＤＣＭ（４０ｍｌ）に溶解し、６Ｎ  ＨＣｌ水溶液（２×４０ｍｌ）で洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾燥して、赤色固形物として、コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩、ジ−（Ｎ−イソプロピル）アミド（８０ｍｇ）を得た。この物質をエタノール（１１ｍｌ）に溶解し、そしてナトリウムグリシネートのメタノール溶液（０．１０Ｍ×３．２４ｍｌ）で３０分間処理した。真空下にて溶媒を除去し、その残留物を水／ジオキサン（２／３、１５ｍｌ）から凍結乾燥して、赤色粉末として、表題化合物（１１６ｍｇ）を得た。
【００６８】
【化２９】
2004523501.tif 000028
（実施例５）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジメチルエステル（５−１）の合成）
【００６９】
【化３０】
2004523501.tif 000029
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（０．２５ｇ，０.３７ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（６ｍｌ）、硫酸（１００μＬ）に溶解し、その均一混合物を、６０℃まで加熱した。７時間後、真空下にて、メタノールを除去し、その残留物を酢酸エチル（２０ｍｌ）で希釈した。その有機層を、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（５−１）は、赤色固形物（０．２６ｇ、収率９８％およびＬＣＭＳによる９０％より高い純度）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３６Ｈ４０ＣｌＣｏＮ４Ｏ４に対する計算値：６８６；実測値６５１［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００７０】
（実施例６）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジオール（６−１）の合成）
【００７１】
【化３１】
2004523501.tif 000030
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジメチルエステル塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（０．１５ｇ，０.２２ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下にて、無水ＴＨＦ（４ｍｌ）に溶解し、そして０℃まで冷却した。水素化リチウムアルミニウム（０．０１７ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加え、そして６０℃で加熱した。４時間後、この反応混合物を０℃まで冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、そして１５分間攪拌した。その固形物をセライトでの濾過により除去し、その残留物を酢酸エチルで洗浄した。その有機層を分離し、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（６−１）は、赤色固形物（０．１３ｇ、収率１００％およびＬＣＭＳによる８５％より高い純度）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３４Ｈ４０ＣｌＣｏＮ４Ｏ２に対する計算値：６３０；実測値５９５［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００７２】
（実施例７）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジアセテート（７−１）の合成）
【００７３】
【化３２】
2004523501.tif 000031
コバルトメソポルフィリンジオール（６−１）（０．０２５ｇ，０.０４ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下にて、無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に溶解し、０℃まで冷却し、ピリジン（５２μＬ、０．６３ｍｍｏｌ）および無水酢酸（３３μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、０℃で、３時間攪拌した。この反応を水（２０ｍｌ）でクエンチし、そしてＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、ブライン（２５ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、そして乾燥した。その粗生成物（７−１）は、赤色固形物（０．０２８ｇ、収率１００％およびＬＣＭＳによる９５％より高い純度）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３８Ｈ４４ＣｌＣｏＮ４Ｏ４に対する計算値：７１４；実測値６７９［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００７４】
（実施例８）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジベンジルエステル（８−１）の合成）
【００７５】
【化３３】
2004523501.tif 000032
水素化ナトリウム（０．００６ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２ｍｌ）懸濁液に、０℃で、アルゴン下にて、コバルトメソポルフィリンジオール（６−１）（０．０４ｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍｌ）溶液を滴下した。３０分後、臭化ベンジル（１５μＬ）の無水ＴＨＦ（０．５ｍｌ）溶液を加え、その混合物を、０℃で、２時間攪拌した。この反応を水（２０ｍｌ）でクエンチし、そして酢酸エチル（３０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、水（３０ｍｌ×１）、ブライン（３０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（８−１）は、赤色固形物（０．０５３ｇ）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ４８Ｈ５２ＣｌＣｏＮ４Ｏ２に対する計算値：８１０；実測値７７５［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００７６】
（実施例９）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジメシレート（９−１）の合成）
【００７７】
【化３４】
2004523501.tif 000033
コバルトメソポルフィリンジオール（６−１）（０．１５ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍｌ）溶液に、０℃で、アルゴン下にて、Ｅｔ３Ｎ（１９０μＬ、１．４３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．００３ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。ＭｓＣｌ（７４μＬ、０．９５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）溶液を、（１５分間にわたって非常にゆっくりと）加え、そして２時間攪拌した。この反応を水（２０ｍｌ）でクエンチし、そしてＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、そして飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍｌ×１）、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（３０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（９−１）は、赤色固形物（０．１８ｇ、収率９６％、ＬＣＭＳによる９５％より高い純度）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３８Ｈ４４ＣｌＣｏＮ４Ｏ４に対する計算値：７８６；実測値７５１［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００７８】
（実施例１０）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸジチオベンジルエーテル（１０−１）の合成）
【００７９】
【化３５】
2004523501.tif 000034
水素化ナトリウム（０．０１ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２ｍｌ）懸濁液に、０℃で、アルゴン下にて、ベンジルメルカプタン（３２μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍｌ）溶液をゆっくりと加えた。３０分後、コバルトメソポルフィリンジメシレート（９−１）（０．０５ｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（０．５ｍｌ）溶液をゆっくりと加え、その反応混合物を、０℃で、２時間攪拌した。この反応を水（２０ｍｌ）でクエンチし、そして酢酸エチル（３０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１０−１）は、赤色固形物（０．０５８ｇ、収率１１０％）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ４８Ｈ５２ＣｌＣｏＮ４Ｏ２に対する計算値：８４２；実測値８０７［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００８０】
（実施例１１）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ（１１−１）の合成）
【００８１】
【化３６】
2004523501.tif 000035
コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ塩化物塩（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）（０．０５ｇ，０.０７８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解し、そしてアルゴン雰囲気下にて、０℃まで冷却した。５分間にわたって、ＴＨＦ（１ｍｌ）中のフェニルリチウム（８７９μＬ、ヘキサン中の１．８Ｍ、１．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。２時間後、ＴＭＳＣｌ（４００μＬ、３ｍｍｏｌ）を急速に加え、さらに１時間攪拌して、室温まで暖めた。この混合物を１Ｎ  ＨＣｌ（３０ｍｌ）で希釈し、そして酢酸エチル（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１１−１）は、赤色固形物（０．０５８ｇ、収率９８％、ＬＣＭＳによる７５％より高い純度）として得た。
【００８２】
（実施例１２）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ（１２−１）および（１２−２）の合成）
【００８３】
【化３７】
2004523501.tif 000036
コバルトメソポルフィリンジメシレート（９−１）（０．０３ｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍｌ）溶液に、メチルアミンの溶液（３８０μＬ、メタノール中の２Ｍ、０．７６ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を、６０℃で、１２時間攪拌した。真空下にて溶媒を除去し、その残留物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）に溶解し、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１２−１）を、赤色固形物（０．０２３ｇ）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３６Ｈ４６ＣｌＣｏＮ６に対する計算値：６５６；実測値６２１［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００８４】
コバルトメソポルフィリン（１２−１）（０．０２５ｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、約５０％の純度）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）溶液に、０℃（０ｏＣ）で、アルゴン雰囲気下にて、Ｅｔ３Ｎ（７８μＬ、０．６１ｍｍｏｌ）および無水酢酸（３１μＬ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、０℃で、３時間攪拌し、そして水（２０ｍｌ）でクエンチし、そしてＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、ブライン（３０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１２−２）は、赤色固形物（０．０２３ｇ）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ４０Ｈ５２ＣｌＣｏＮ６Ｏ２に対する計算値：７４０；実測値７０５［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００８５】
（実施例１３）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ（１３−１）の合成）
【００８６】
【化３８】
2004523501.tif 000037
コバルトメソポルフィリンジメシレート（９−１）（０．０３ｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍｌ）溶液に、水酸化アンモニウム（９０μＬ、水中で３０％、０．７６ｍｍｏｌ）を加え、そして６０℃で、１２時間攪拌した。真空下にて溶媒を除去し、その残留物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）に溶解し、水（２０ｍｌ×１）、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１３−１）を、赤色固形物（０．０２３ｇ）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３４Ｈ４２ＣｌＣｏＮ６に対する計算値：６２８；実測値５９３［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００８７】
（実施例１４）
（コバルト（ＩＩＩ）メソポルフィリンＩＸ（１４−１）の合成）
【００８８】
【化３９】
2004523501.tif 000038
粗コバルトメソポルフィリン（１３−１）（０．０２０ｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、約１０％の純度）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）溶液に、０℃で、アルゴン雰囲気下にて、Ｅｔ３Ｎ（３３μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１３μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、３時間攪拌し、そして水（３０ｍｌ）でクエンチし、そしてＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）で希釈した。その有機層を分離し、ブライン（２０ｍｌ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮した。その粗生成物（１４−１）は、赤色固形物（０．０２０ｇ）として得た。ＬＣＭＳ。Ｃ３８Ｈ４６ＣｌＣｏＮ６Ｏ２に対する計算値：７１２；実測値６７７［Ｍ−Ｃｌ］＋。
【００８９】
（実施例１５）
（反応性酸素種（ＲＯＳ）の発生についての細胞アッセイ）
全ての細胞培養試薬を、３７℃で、約３０分間にわたって、水浴でインキュベートした。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽腫細胞を含有するほぼコンフルエントの組織培養フラスコからの既存の培地を、トラップした真空装置に装着された火炎滅菌ガラス移動ピペットを使用して、吸引した。無カルシウムＰＢＳ緩衝液を、組織培養フラスコにピペットで取った（７５ｃｍ２フラスコに２ｍｌ、１７５ｃｍ２フラスコに３ｍｌ）。このフラスコを僅かに傾けて、この緩衝液が細胞培養物を確実に覆うようにし、次いで、吸引により、この緩衝液を取り除いた。この組織培養フラスコに、トリプシン培地をピペットで取り（７５ｃｍ２フラスコに２ｍｌ、１７５ｃｍ２フラスコに３ｍｌ）、一様に広げて、トリプシンが確実に細胞培養物を覆うようにした。この細胞培養物を、室温で、４〜６分間にわたって、トリプシン培地でインキュベートした。このフラスコから細胞を遊離させた（ｒｅｌｅａｓｅ）後、そのフラスコを１隅に傾けた。このフラスコ内に存在する培地を使用して、１隅の方へと塊状細胞を集め、繰り返しピペットで取って、単一細胞懸濁液を得た。この細胞懸濁液を、ピペットを使って、１５ｍｌ円錐形遠心管に移し、次いで、この懸濁液に、１４ｍｌの全容量まで、細胞培養培地を加えた。１０μｌのアリコートを引き出し、血球計数器を使用して、これらの細胞を数えた。この懸濁液を、１０分間にわたって、２００×ｇで遠心分離し、その上澄み液を吸引で除き、その細胞ペレットを、細胞培養培地中にて、３．７５×１０５個の細胞／ｍｌで再懸濁した。１ウェルあたり２００μｌの細胞懸濁液を、９６個のウェルデッシュに等分して、１ウェルあたり７５，０００個の細胞の最終細胞数を得た。これらのプレートを、湿潤細胞インキュベータ中にて、３７℃および５％ＣＯ２にて、一晩インキュベートした。
【００９０】
１８ｇの針を使った吸引により、この培地を注意深くウェルから取り除いた。これらのウェルを、２００μｌの温ハンクス平衡生理食塩水（ＨＢＳＳ、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）で、１回、穏やかにリンスした。各ウェルに、３０μＭジクロロフルオレセイン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ）−ジアセテート（ＤＣＦＣ−ＤＡ）２００μｌを加え、これらの細胞を、湿潤細胞インキュベータ中にて、５％ＣＯ２下で、３７℃にて、１時間インキュベートした。針吸引により、過剰のＤＣＦＣ−ＤＡを除去し、各ウェルを、温ハンクス平衡生理食塩水（ＨＢＳＳ）２００μｌで、２回、穏やかにリンスした。
【００９１】
試験化合物（例えば、本発明のＣｏ−ＰＰ、Ｃｏ−ＭＰまたはＣｏ−Ｐ）およびＨ２Ｏ２スカベンジャー（例えば、エブセレン）のストック溶液を、典型的には、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド中で調製し、さらに、ＨＢＳＳを使用して、作用濃度まで希釈した。それらの有機溶媒の最終濃度を、細胞上にあるとき、０．１％またはそれ以下に保持した。このウェルに、８０μｌのＨＢＳＳを等分し、そしてＨＢＳＳ中の試験化合物溶液２０μｌにした。そのプレートを、０分時点の読み取り値について、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒモデル２３５０システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；励起波長：４８５ｎｍ；発光波長：５３０ｎｍ）で、直ちに読み取った。これらの細胞を、室温で、試験化合物を使って、３０分間インキュベートし、それに続いて、３０分間の読み取りを行った。各ウェルについて、３０分間にわたるＲＭＦの変化を計算した。このウェルの培地を針吸引で除去し、各ウェルに、３７％ホルムアルデヒド１５．６μｌを加えた。これらの細胞を２〜１０分間インキュベートし、そしてＨ２Ｏ（２００μｌ）で洗浄した。次いで、各ウェルに、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２の１０μｇ／ｍｌ水溶液１００μｌを添加し、そしてこのプレートを暗所で、１０分間保持した。このプレートを、次いで、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ（励起波長：３６０ｎｍ；発光波長：４６０ｎｍ）で読み取り、そのＨｏｅｃｈｓｔ蛍光値を使用して、ＤＣＦＣ−ＤＡ  ＲＭＦデータを正規化した。
【００９２】
図１で図示するように、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞においてＣｏ−ＰＰおよびＣｏ−ＭＰにより、反応性酸素種を誘発した。しかしながら、図２で図示するように、グルタチオンペルオキシダーゼ擬態物であるエベルセンを添加すると、Ｃｏ−ＰＰおよびＣｏ−ＭＰによりＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中で誘発される反応性酸素種が一掃される。本発明の代表的なＣｏ−Ｐ（すなわち、実施例４の化合物（４−２））の投与は、図３で図示するように、Ｃｏ−ＰＰと比べて、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中の反応性酸素種の発生を誘発しない。
【００９３】
（実施例１６）
（アスコルビン酸塩／ＴＭＰＤの存在下にてＣｏ−Ｐで触媒した酸素消費の測定）
溶媒としてエタノールを使用して、本発明のＣｏ−Ｐ（すなわち、試験化合物）の１０ｍＭストック溶液を調製した。ＫＣｌ培地は、１２５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．０）からなる。クラーク型酸素電極（Ｒａｎｋ  Ｂｒｏｔｈｅｒｓ  Ｌｔｄ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を使用して、酸素消費測定を実行し、これらの実験の過程にて、アッセイ溶液を磁気的に攪拌した。アッセイ溶液（２ｍＭのアスコルビン酸ナトリウムおよび４０μＭのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−１，４−テトラメチレンジアミン（ＴＭＰＤ）を補充したＫＣｌ培地）に、試験化合物のストック溶液（４０μＭの最終濃度）２μｌを加え、その酸素消費速度を２〜４分間追跡する。引き続いて、新たに製造したカタラーゼ溶液（ＫＣｌ培地中の１００ｍｇ／ｍｌ溶液）５μｌアリコートを加えて、この試験化合物のレドックスサイクリングによりＨ２Ｏ２が発生するかどうかを決定する。
【００９４】
図４および５は、それぞれ、酸素消費についての反応時間経過および提案された反応機構を図示する。酸素消費勾配から初期速度を計算し、溶媒制御速度を減算する。試験化合物の速度は、Ｃｏ−ＭＰの塩化物塩について得られた速度（１の相対速度を割り当てた）に正規化される。さらに具体的には、図４は、細胞なしのアスコルビン酸塩／ＴＭＰＤ系でのＣｏ−ＭＰで触媒したＯ２消費を示す。Ｃｏ−ＭＰの１０ｍＭストック溶液（４０μＭの最終濃度）のアリコートを、２ｍＭのアスコルビン酸塩および４０μＭのＴＭＰＤを含有するアッセイ緩衝液に加えた。Ｃｌａｒｋ酸素電極で検出されるように、キュベットでは、溶解したＯ２が直ちに枯渇した。ＣＮ−（コバルトイオンの強力な配位子）は、このレドックス反応を強力に阻害する。カタラーゼを加えると、アッセイ溶液中に存在しているＨ２Ｏ２がＯ２およびＨ２Ｏに変換される。図５は、Ｃｏ−ＭＰで触媒した酸素消費に可能な反応図式を図示しており、すなわち、Ｃｏ−ＭＰは、ＴＭＰＤによって、アスコルビン酸塩から電子を受容し、そして溶解したＯ２のＨ２Ｏ２への還元を実行する；ＣＮ−は、コバルトに対するＯ２と競争して、この還元反応を阻害する；カタラーゼの存在下にて、この反応で生成したＨ２Ｏ２は、Ｏ２およびＨ２Ｏに変換される。
【００９５】
図６を参照すると、本発明の代表的なＣｏ−Ｐ錯体である化合物（４−２）は、この細胞なしアスコルビン酸塩／ＴＭＰＤ系において、レドックスサイクルしない。この試験化合物のストック溶液は、１０ｍＭであった。これらのストック溶液のアリコートを、２ｍＭのアスコルビン酸塩および４０μＭのＴＭＰＤを含有するアッセイ緩衝液５００μｌに加えた。化合物（４−２）の添加は、何らＯ２消費が生じない。しかしながら、Ｃｏ−ＭＰを加えると、このアッセイ溶液中にて、強いＯ２消費を誘発する。
【００９６】
（実施例１７）
（Ｃｏ−ＰＰによる還元チトクロムＣの酸化）
チトクロムｃの溶液に過剰のアスコルビン酸を加え、その溶液を５〜１０分間静置することにより、還元チトクロムｃを調製した。この還元タンパク質をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ５０カラムで精製し、そして５５０ｎｍでの吸光度を測定することにより分光光度法により調査し、続いて、数粒の亜ジチオン酸塩を加えて、５５０ｎｍでの吸光度を再度測定した。完全に還元したチトクロムｃの吸光係数は、２９ｍＭ−１である。０、５、１０、２０および１００μＭのＣｏＰＰの存在下にて、３つの濃度（５．３μＭ、１０．５μＭおよび２６μＭ）での完全に還元したチトクロムｃの初期酸化速度を追跡した。アッセイは、アッセイ緩衝液（２０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ  ７．０、０．２ｍｇ／ｍｌのドデシル−β−マルトシド）１ｍｌ中で行い、所望濃度の還元チトクロムｃを加えることにより開始し、そして９０秒間にわたって、５５０ｎｍで、吸光度の変化をモニターした。完全に酸化した吸光度値は、数粒のフェリシアン化物をキュベットに加えることにより、決定した。図７は、Ｃｏ−ＰＰが還元チトクロムｃからの電子受容体として働くことを示している。生体系では、Ｃｏ−ＰＰは、電子を富電子供与体／還元体から分子酸素Ｏ２に移動して、反応性酸素種を発生し得、その生成は、細胞に対して毒性であり得、望ましくない副作用（例えば、酸化ストレス）を引き起こし得る。
【００９７】
（実施例１８）
（アスコルビン酸塩／ＴＭＰＤの存在下でＣｏ−Ｐにより触媒された酸素消費の測定）
上で開示した手順により、本発明の代表的なＣｏ−Ｐ化合物を調製し、そして実施例１６の手順によりアッセイして、アスコルビン酸塩／ＴＭＰＤの存在下で試験化合物により触媒した酸素消費を測定した。図７で示すように、Ｃｏ−ＰＰに対して強力な配位子（すなわち、イミダゾール）は、反応性酸素種の発生を阻止する。次いで、本発明の他の代表的なＣｏ−Ｐ化合物について、上記手順を繰り返したが、異なる配位子および／またはＲ基を使用した。これらの実験の結果を、以下の表１〜３で示す。
【００９８】
（表１：Ｃｏ−ＭＰの酸素消費に対する配位子の効果）
【００９９】
【表１】
2004523501.tif 000039
（表２：Ｃｏ−ＭＰの酸素消費に対する配位子およびＲ５部分の効果）
【０１００】
【表２】
2004523501.tif 000040
（表３：Ｃｏ−ＭＰの酸素消費に対する配位子、Ｒ５およびＡ部分の効果）
【０１０１】
【表３】
2004523501.tif 000041
（表４：Ｃｏ−ＭＰの酸素消費に対する配位子、Ｒ５、Ａおよびｎ部分の効果）
【０１０２】
【表４】
2004523501.tif 000042
（実施例１９）
（体重減少および外傷重症度アッセイ）
雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（約２００ｇ）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｃａｎａｄａ，Ｉｎｃ．から購入し、そしてｔｈｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｖｅｒｍｏｎｔに移送した。到着後、それらを別々のカゴに収容した。このカゴには、トウモロコシ穂軸が床敷してあり、また、自由に、水道水およびプリナラット固形飼料を利用できた。この動物設備を、午前６時に明かりをつけ午後６時に消す１２時間の明／暗サイクルで、７１°Ｆ±１°Ｆの温度で維持する。２日後（３日目）、全てのラットの背頸部を剃り、その背頸部の基準色写真を撮影した（この剃毛を容易にするために、軽いハロタン麻酔を使用した）。３日後（０日目）、媒体（すなわち、生理食塩水：ＰＥＧ４００：ＥｔＯＨ（５：４：１）、ｐＨ７．４）中に１２ｍＭの濃度で、実験化合物を生成した。動物の背頸部に、体重１００グラムあたり４００μｌの用量で、種々のストック溶液を皮下注射した。従って、典型的な注射用量は、動物１匹あたり、１〜１．５ｍｌの範囲である。高い容量を使用したことが原因で起こる注射化合物の流出をできるだけ少なくするために、改良Ｚ−トラック技術を使用して、動物を注射した。注射前に、各動物を秤量し、全ての注射は、約２時間で達成した。注射には、麻酔を使用しなかった。
【０１０３】
その後、動物を、Ｍｅｔｔｌｅｒ  ６秒統合バランスで毎日秤量し、そして水道水およびプリナラット固形飼料に自由にアクセスさせた。注射後の種々の間隔で、ラットの背頸部を、再度、写真撮影した。その写真の記録に加えて、第二の実験から、全てのラットを、背頸部における任意の外傷の重症度を毎日評価した。使用した尺度は、０（外傷なし）、５（皮膚の崩壊および浸出液の流出を伴う最悪の外傷）であった。中間の評点は、その外傷のサイズおよび重症度に基づいて、操作者が概算した。動物が５等級の外傷を有していた場合、このような外傷が現れた後すぐに、個々の動物を安楽死させるか、この実験を中止した。８日後、最後の写真を撮影し、全ての動物を安楽死させて、この実験を終了した。
【０１０４】
各群の体重の平均を計算して時間に対してプロットした（図９Ａ）。外傷重症度指数の数値平均（図９Ｂ）についても同様であった。図９Ａおよび９Ｂでは、Ｃ＝非傷害コントロール、Ｖ＝媒体注射コントロール、Ａ＝Ｃｏ−ＭＰ、Ｅ＝化合物（１−６）、そしてＦ＝化合物（４−４）である。この実験では、Ｃｏ−ＭＰは、最も大きい体重応答を生じたが、同様に、最も高い外傷重症度を示した。化合物（１−６）および（４−４）は、好ましい体重応答を示し、等級１の外傷重症度を超えなかった。
【０１０５】
上述のことから、本明細書において、例示の目的のために、本発明の特定の実施態様が記述されているものの、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、種々の改良がなされ得ることが理解される。従って、本発明は、添付の請求の範囲以外には、限定されない。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】図１は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞においてＣｏ−ＰＰおよびＣｏ−ＭＰにより誘発された反応性酸素種を図示している。
【図２】図２は、グルタチオンペルオキシダーゼ擬態物であるエブセレン（ｅｂｓｅｌｅｎ）を添加すると、Ｃｏ−ＰＰおよびＣｏ−ＭＰによりＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中で誘発された反応性酸素種が一掃されることを図示している。
【図３】図３は、本発明の代表的なＣｏ−Ｐ錯体がＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞内でＲＯＳ発生を誘発しないことを図示している。
【図４】図４は、細胞なしのアスコルベート／ＴＭＰＤ系でのＣｏ−ＭＰで触媒したＯ２消費を図示している。
【図５】Ｃｏ−ＭＰで触媒した酸素消費に可能な反応スキームを図示している。
【図６】図６は、本発明の代表的なＣｏ−Ｐ錯体が細胞なしアスコルベート／ＴＭＰＤ系においてレドックスサイクルしないことを図示している。
【図７】図７は、Ｃｏ−ＰＰによる還元されたチトクロムｃの酸化を図示している。
【図８】図８は、本発明の代表的な配位子であるイミダゾールが細胞なしアスコルベート／ＴＭＰＤ系においてレドックスサイクルしないことを図示している。
【図９Ａ】図９Ａは、Ｃｏ−ＭＰおよび非注射コントロールおよび媒体注射コントロールと比べた代表的なＣｏ−Ｐ錯体について、体重減少を図示している。
【図９Ｂ】図９Ｂは、Ｃｏ−ＭＰならびに非注射コントロールおよび賦形剤注射コントロールと比べた代表的なＣｏ−Ｐ錯体について、病巣重篤度を図示している。
【図１】
2004523501.tif 000045
【図２】
2004523501.tif 000046
【図３】
2004523501.tif 000047
【図４】
2004523501.tif 000048
【図５】
2004523501.tif 000049
【図６】
2004523501.tif 000050
【図７】
2004523501.tif 000051
【図８】
2004523501.tif 000052
【図９Ａ】
2004523501.tif 000053
【図９Ｂ】
2004523501.tif 000054
【国際公開パンフレット】
2004523501.tif 000055
2004523501.tif 000056
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2004523501.tif 000060
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2004523501.tif 000115
2004523501.tif 000116
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004523501.tif 000117
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004523501.tif 000118
2004523501.tif 000119
2004523501.tif 000120
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【手続補正書】
【提出日】平成15年8月8日(2003.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
2004523501.tif 000179
を有するコバルト−ポリフィリン錯体またはその塩であって、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３であり；
Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ５は、各々の場合、同一であるかまたは異なり、そして別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子であるが；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリンのレドックス活性の５０％以下を有する、
コバルト−ポルフィリン錯体。
【請求項２】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項３】
Ａが、−ＯＣ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項４】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項５】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項６】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項７】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項８】
Ａが、−Ｏ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項９】
Ａが、−Ｓ−である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１０】
ｎが、２である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１１】
ｎが、３である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１２】
Ｒが、水素である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３】
Ｒが、低級アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４】
Ｒ５が、水素である、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５】
Ｒ５が、アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１６】
Ｒ５が、低級アルキルである、請求項１５に記載の錯体。
【請求項１７】
Ｒ５が、置換アルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１８】
Ｒ５が、アリールまたは置換アリールである、請求項１に記載の錯体。
【請求項１９】
Ｒ５が、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルである、請求項１に記載の錯体。
【請求項２０】
アリールアルキルが、ベンジルである、請求項１９に記載の錯体。
【請求項２１】
Ｒ３およびＲ４が、同一である、請求項１に記載の錯体。
【請求項２２】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項２０に記載の錯体。
【請求項２３】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項２０に記載の錯体。
【請求項２４】
Ｌ１またはＬ２の少なくとも１個が、存在する、請求項１に記載の錯体。
【請求項２５】
Ｌ１およびＬ２の両方が、存在する、請求項１に記載の錯体。
【請求項２６】
Ｌ１およびＬ２が、グリシネートである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２７】
Ｌ１およびＬ２が、イミダゾールである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２８】
Ｌ１およびＬ２が、ハロゲンである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２９】
Ｌ１およびＬ２が、一置換アミノまたは二置換アミノである、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３０】
Ｌ１およびＬ２が、置換複素環または非置換複素環である、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３１】
薬学的に受容可能な担体と組み合わせた、請求項１に記載の化合物を含有する組成物。
【請求項３２】
肥満を治療する方法であって、該方法は、コバルト−ポルフィリン錯体および薬学的に受容可能な担体を含有する組成物の有効量を投与する工程を包含し、該コバルト−ポルフィリン錯体は、以下：
【化２】
2004523501.tif 000180
の構造を有し、ここで：
Ｒ１およびＲ２は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ５であり、ここで、Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−Ｓ−であり、そしてＲは、水素、アルキル、置換アルキル、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり、そしてｎは、２または３であり；
Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、そして別個に、−ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ５は、各々の場合において、同一であるかまたは異なり、そして別個に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルであり；そして
Ｌ１およびＬ２は、任意の配位子であるが；
但し、構造（Ｉ）の該コバルト−ポルフィリン錯体は、コバルトメソポルフィリンのレドックス活性の５０％以下を有する、
方法。
【請求項３３】
前記組成物が、注射により投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
Ａが、−ＯＣ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
Ａが、−Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
Ａが、−Ｎ（Ｒ）−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
Ａが、−Ｏ−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
Ａが、−Ｓ−である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４２】
ｎが、２である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４３】
ｎが、３である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４４】
Ｒが、水素である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４５】
Ｒが、低級アルキルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項４６】
Ｒ５が、水素である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ５が、アルキルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ５が、低級アルキルである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
Ｒ５が、置換アルキルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項５０】
Ｒ５が、アリールまたは置換アリールである、請求項３２に記載の方法。
【請求項５１】
Ｒ５が、アリールアルキルまたは置換アリールアルキルである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
アリールアルキルが、ベンジルである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ３およびＲ４が、同一である、請求項３２に記載の方法。
【請求項５４】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
Ｒ３およびＲ４が、−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
Ｌ１またはＬ２の少なくとも１個が、存在する、請求項３２に記載の方法。
【請求項５７】
Ｌ１およびＬ２の両方が、存在する、請求項３２に記載の方法。
【請求項５８】
Ｌ１およびＬ２が、グリシネートである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
Ｌ１およびＬ２が、イミダゾールである、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
Ｌ１およびＬ２が、ハロゲンである、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
Ｌ１およびＬ２が、一置換アミノまたは二置換アミノである、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
Ｌ１およびＬ２が、置換複素環または非置換複素環である、請求項５７に記載の方法。
【国際調査報告】
2004523501.tif 000181
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2004523501.tif 000183
2004523501.tif 000184
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