(57)【要約】本発明は、抗腫瘍活性を有するベンジルメチル及び／又はナフチルメチル二置換７，９−グアニニウムハライド、それらを含む医薬組成物並びにそれらの製造方法に関する。更に、これらの化合物は、癌の治療に於いて他の化学療法薬の効能を増強すると期待される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004528381.tif 000017
（式中、Ｘはハロゲンであり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換されていないフェニル；ハロゲン、置換されていないフェニル及びハロＣ１〜Ｃ６アルキルによって置換されたフェニルから選択された１個から３個の置換基によって置換されたフェニル；又はナフチルを表す）
の７，９−二置換グアニニウムハライド。
【請求項２】
Ｘがハロゲンであり、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、ハロゲン若しくは置換されていないフェニルによって置換されたフェニル又はナフチルを表す、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
２−アミノ−７，９−ビス（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物１）；
２−アミノ−７，９−ビス［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物２）；
２−アミノ−７，９−ビス｛［４’−（クロロメチル）［１，１’−ビフェニル］−４−イル］メチル｝−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物３）；
２−アミノ−７，９−ビス（３，４−ジクロロベンジル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物４）；
２−アミノ−７，９−ジベンジル−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物５）；
２−アミノ−９−［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−７−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物６）；及び
２−アミノ−７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−９−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物７）
からなる群から選択された化合物。
【請求項４】
テロメラーゼ酵素を有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）を有する化合物と接触させることを含む、テロメラーゼ酵素の阻害方法。
【請求項５】
哺乳動物に、治療的有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）を有する化合物を投与することを含む、テロメラーゼモジュレート疾患の治療方法。
【請求項６】
哺乳動物に、治療的有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）を有する化合物を投与することを含む、テロメラーゼ酵素活性によって仲介される、障害を受けた癌細胞成長に関連する癌疾患の治療方法。
【請求項７】
哺乳動物に、治療的有効量の請求項１に記載の式（Ｉ）を有する化合物を投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項８】
医薬適合性の担体及び／又は希釈剤並びに有効成分として、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物。
【請求項９】
式（ＩＩ）：
【化２】
2004528381.tif 000018
の化合物と、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2004528381.tif 000019
（式中、Ｘは適切な離脱基であり、Ｒ２は前記定義された通りである）
の化合物との、式（ＩＶ）：
【化４】
2004528381.tif 000020
（式中、Ｒ２は前記定義された通りである）
の化合物を得るための反応及び
式（ＩＶ）の化合物と、式（Ｖ）：
【化５】
2004528381.tif 000021
（式中、Ｘは適切な離脱基であり、Ｒ１＝Ｒ２であるか又はより好ましくは、Ｒ１は前記定義された通りでＲ２とは異なる）
の化合物との反応を含み、式（Ｉ）の化合物を得る、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法。
【請求項１０】
治療的有効量の式（Ｉ）の化合物及び少なくとも１種の他の抗癌剤を投薬することを含む、癌治療の治療的効果の改良方法。
【請求項１１】
癌治療に於ける同時的、分離的又は逐次的使用のための、式（Ｉ）の化合物及び１種又は２種以上の抗癌剤を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テロメラーゼ活性を阻害する化合物、これらの製造方法、薬物としてのこれらの使用及びこれらを含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、疾患の主要な原因の一つ及び西欧諸国における死因の第二位である。多くの癌患者が、なお、転移性疾患のために死亡している。悪性腫瘍の発症に関与する調節機構の知識及び理解が大きく進んでいるにも拘わらず、現在利用可能な治療（手術、放射並びに単独で又は組合せで使用される種々の細胞減少（ｃｙｔｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ）及びホルモンベース薬物を含む）は、患者に対して依然有効性が低く、毒性が高いものであり、吐き気及び嘔吐、頭髪の抜け、下痢、疲労及び潰瘍形成を含む過酷な副作用を引き起こす。これらの問題点は、新規で、更に有効な抗癌治療についての必要性を示す。
【０００３】
最近、正常な細胞が複製性老化、即ち、正常な細胞の加齢過程において備わっている増殖能力が失われる機序が理解されはじめ、これに関して、テロメラーゼは中心的役割を有すると思われる。
【０００４】
テロメラーゼは、殆どの真核生物に於いて反復ＤＮＡ配列から構成されている染色体末端即ちテロメア（特に、ヒトテロメアは、５’−ＴＴＡＧＧＧ反復配列により形成される）の完全複製及び維持を担うリボ核タンパク質酵素である。テロメラーゼは、染色体３’末端への短い配列反復の付加のために必要な酵素のＲＮＡ成分内に含有されている配列を鋳型として使用して、テロメアＤＮＡに結合する（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ、１９９２年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第６１巻、第１１３〜１２９頁参照）。殆どのヒト体細胞に於いて、テロメラーゼ活性は検出できず、テロメアは連続する細胞分裂と共に短くなる。実際に、活発に分裂する正常細胞は、細胞分裂の各周期の後で５０個から２００個の塩基対を失い、その結果テロメアが短縮される可能性がある。最近、繰り返し細胞分裂に亘るテロメアＤＮＡの累積損失が、細胞老化及び加齢の引き金として作用し得ること及びテロメラーゼの調節が重要な生物学的意義を有するとの仮説が立てられた（Ｈａｒｌｅｙ、１９９１年、Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第２５６巻、第２７１〜２８２頁参照）。実際に、テロメラーゼの不存在下で、テロメア短縮は、最終的に、種々の機構による細胞老化に至る。この現象は、細胞加齢の原因であると考えられ、「細胞分裂時計」と称される（Ｈｏｌｔら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１９９６年、第１５巻、第１７３４〜１７４１頁参照）。
【０００５】
テロメラーゼ活性は、不死化した細胞株及び８５％以上のヒト腫瘍内で復活し、そうしてテロメア長さを安定に維持する（Ｓｈａｙ，Ｊ．Ｗ．及びＢａｃｃｈｅｔｔｉ，Ｓ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１９９７年、第３３巻、第７８７〜７９１頁参照）。そうして、テロメラーゼ活性を有する癌細胞内、腫瘍表現型が、細胞周期若しくは細胞増殖の制御の損失又は他の遺伝的損傷に起因する場合、テロメアＤＮＡは細胞分裂の間に失われずにテロメアは維持され、それによって、癌細胞が不死状態になり、患者の末期的予後に至る。
【０００６】
テロメラーゼが阻害されることによって、腫瘍内のテロメア短縮及び続く老化表現型が現れ得る。（Ｆｅｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９５年、第２６９巻、第１２３６〜１２４１頁参照）。更に、最近、腫瘍細胞内で、ヒトＴＥＲＴ（テロメラーゼ逆転写酵素、酵素の触媒サブユニット）の触媒不活性形を発現することにより、テロメラーゼ活性を阻害した結果、テロメア短縮並びに細胞成長及びアポプトーシスの阻止ガ誘導されることが示された（Ｈａｈｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．、１９９９年、第５巻、第１１６４〜１１７０頁）。更に、酵素のＲＮＡ成分の鋳型領域に相補的なペプチド−核酸及び２’−Ｏ−ＭｅＲＮＡオリゴマーは、ある種の腫瘍細胞系内でテロメラーゼ活性の阻害、テロメア短縮及び細胞死を起こすと報告された（Ｈｅｒｂｅｒｔら、ＰＮＡＳ、１９９９年、第９６巻、第１４２７６−１４２８１頁；Ｓｈａｍｍａｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９９年、第１８巻、第６１９１−６２００頁）。これらのデータは、新規な抗癌剤の開発のための革新的で選択的で有用な方法として、テロメラーゼ活性の阻害を支持している。
【０００７】
従って、テロメラーゼ活性を阻害する化合物は、癌細胞がテロメラーゼ活性を発現し、他方、正常なヒト体細胞が、通常、生物学的関連レベル（即ち、多数の細胞分裂に亘ってテロメア長さを維持するために十分なレベル）でテロメラーゼ活性を発現しないとき、癌を治療するために使用することができる。また、腫瘍内のテロメアの長さは、非形質転換細胞に比較して短くなっており、治療法の可能性を与える（Ｎａｋａｍｕｒａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、第１５８巻、２０００年、第１７９〜１８４頁参照）。故に、テロメラーゼの活性を阻害し、癌の多くの種類の成長を妨害する分子を見出すことが求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、テロメラーゼ活性を有する様々なヒト腫瘍細胞系及び腫瘍によって代表されるような（殆どではないとしても）多くの悪性腫瘍に対する非常に一般的な治療方法を提供することによって、上記要求を満たす。本発明の化合物は、悪性細胞と正常細胞との相違を高度に識別する治療を提供し、分裂細胞を無差別に殺す薬物に頼っている殆どの現在の化学療法処方における有害な副作用の多くを回避する上で有効であるので、これらは、また、従来の化学療法抗癌剤と比較して、より大きい安全性及び毒性作用の欠落を示すと期待される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、テロメラーゼ阻害薬として活性である新規なプリン誘導体、治療薬、特に抗腫瘍薬としてのそれらの使用、それらの製造方法及びそれらを含有する医薬組成物に関する。本発明のこれら及び他の局面を、以下更に詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の目的は、式（Ｉ）：
【００１１】
【化１】
2004528381.tif 000002
（式中、Ｘはハロゲンであり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換されていないフェニル；ハロゲン、置換されていないフェニル及びハロＣ１〜Ｃ６アルキルによって置換されたフェニルから選択された１個から３個の置換基によって置換されたフェニル；又はナフチルを表す）
の７，９−二置換グアニニウムハライドである。
【００１２】
ここに記載した化合物には、複素環式環系の一部としてケトンカルボニル基が含有されている。このようなカルボニル基は、部分的に又は主として、存在するケトン基の「ケト」形として及び部分的に又は主として「エノール」形として存在していてよい。本発明の化合物は、「ケト」及び「エノール」互変異性体形の両方を含むように意味される。ここに記載された化合物には、１個又は２個以上の「イミン」又は「エナミン」基又はこれらの組合せが含有されている。このような基は、部分的に又は主として、存在する各基の「イミン」形として及び部分的に又は主として「エナミン」形として存在していてよい。該「イミン」又は「エナミン」基を有する本発明の化合物は、「イミン」及び「エナミン」互変異性体形の両方を含むように意味される。故に、本発明には、その範囲内に、下記の互変異性体式（Ｉａ）から（Ｉｄ）：
【００１３】
【化２】
2004528381.tif 000003
（式中、Ｒ１及びＲ２は前記定義された通りである）
によって表される、式（Ｉ）の化合物の全ての可能性のある互変異性体形が含まれる。従って、本発明によって提供される化学的化合物は、本発明の説明を通して、当業者によって認定された構造的証拠に基づいて、式（Ｉ）、（Ｉａ）から（Ｉｄ）の化合物のために与えられた化学的命名法に従って命名される。式（Ｉ）、（Ｉａ）から（Ｉｄ）の化合物は、本明細書に於いて、「本発明の化合物」、「発明の化合物」及び／又は「本発明の医薬組成物の活性基本物質」として定義される。
【００１４】
本発明には、また、その範囲内に、式（Ｉ）の化合物の医薬適合性の生物前駆体（他の場合に、プロドラッグとして知られている）、即ち、異なった上記式（Ｉ）を有するが、それにも拘わらずヒトに投薬した際に、直接的に又は間接的にインビボで式（Ｉ）の化合物に転化される化合物が含まれる。
【００１５】
本明細書で使用されるとき、用語「ハロゲン」又は「ハロ」によって、塩素、臭素、ヨウ素又はフッ素が意味され、好ましくは、これは塩素又はフッ素である。
【００１６】
Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、好ましくはＣ１〜Ｃ４アルキル、特にメチル又はエチルである。
【００１７】
本発明の好ましい化合物は、式中、Ｘがハロゲンであり、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立に、ハロゲン若しくは置換されていないフェニルによって置換されたフェニル又はナフチルを表す、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物である。
【００１８】
本発明の好ましい化合物の例は、下記の通りである。
【００１９】
２−アミノ−７，９−ビス（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物１）；
２−アミノ−７，９−ビス［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物２）；
２−アミノ−７，９−ビス｛［４’−（クロロメチル）［１，１’−ビフェニル］−４−イル］メチル｝−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物３）；
２−アミノ−７，９−ビス（３，４−ジクロロベンジル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物４）；
２−アミノ−７，９−ジベンジル−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物５）；
２−アミノ−９−［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−７−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物６）；及び
２−アミノ−７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−９−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物７）。
【００２０】
本発明の他の目的は、テロメラーゼ酵素の阻害方法であって、該酵素を、有効量の前記式（Ｉ）を有する化合物と接触させることを含む方法である。
【００２１】
本発明の別の目的は、テロメラーゼモジュレート疾患の治療方法であって、哺乳動物に、治療的有効量の前記式（Ｉ）を有する化合物を投薬することを含む方法である。
【００２２】
本発明の更に別の目的は、テロメラーゼ酵素活性によって仲介される、障害を受けた癌細胞成長に関連する癌疾患の治療方法であって、哺乳動物に、治療的有効量の前記式（Ｉ）を有する化合物を投薬することを含む方法である。
【００２３】
本発明の更に他の目的は、癌の治療方法であって、哺乳動物に、治療的有効量の前記式（Ｉ）を有する化合物を投薬することを含む方法である。
【００２４】
本発明の更に他の局面に従って、薬物の製造に於いて、前記式（Ｉ）を有する化合物を使用することを含む方法が提供される。特別の態様に於いて、この薬物は、増殖性障害（例えば、癌）を治療するためのものである。従って、本発明は、また、抗癌活性を有する薬物の製造で使用するための、前記式（Ｉ）を有する化合物を提供する。
【００２５】
本発明のなお別の目的は、医薬適合性の担体及び／又は希釈剤並びに活性基本物質として、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を提供することである。
【００２６】
本発明は、また、抗腫瘍剤として使用するための薬物の製造に於ける、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００２７】
本発明により、前記定義された通りの式（Ｉ）の７，９−二置換グアニニウムハライドの製造方法が提供される。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物は、
式（ＩＩ）：
【００２９】
【化３】
2004528381.tif 000004
の化合物と、式（ＩＩＩ）：
【００３０】
【化４】
2004528381.tif 000005
（式中、Ｘは適切な離脱基であり、Ｒ２は前記定義された通りである）
の化合物との、式（ＩＶ）：
【００３１】
【化５】
2004528381.tif 000006
（式中、Ｒ２は前記定義された通りである）
の化合物を得るための反応及び
式（ＩＶ）の化合物と、式（Ｖ）：
【００３２】
【化６】
2004528381.tif 000007
（式中、Ｘは適切な離脱基であり、Ｒ１＝Ｒ２であるか又は更に好ましくは、Ｒ１は前記定義された通りでＲ２とは異なる）
の化合物との反応を含み、そうして式（Ｉ）の化合物を得る方法によって製造することができる。
【００３３】
適切な離脱基は、例えば、ハロゲン、好ましくはＣｌ、Ｂｒ若しくはＩ；トシラート；メシラート；トリフルオロアセタート又はトリフラートである。
【００３４】
前記定義された通りの式（ＩＩ）の化合物と前記定義された通りの式（ＩＩＩ）の化合物との反応を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はＤＭＦ中で、約２０℃と約６０℃との間の温度で、約１時間から約６時間、例えば、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８６年、第４１８０頁又はＳｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍ．、１９９０年、第２４５９頁に記載されているようにして実施するとき、前記定義された通りの式（ＩＶ）の一置換誘導体を得ることができ、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物の対称的化合物（Ｒ１＝Ｒ２の場合）及び非対称的化合物（Ｒ１がＲ２とは異なる場合）の両方の製造で使用することができる。式（ＩＶ）の化合物と、式（Ｖ）の化合物との間の反応は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン又はトルエンなどのような適切な有機溶媒中で、約６０℃と約１２０℃との間の温度で、約１時間から約１５時間、例えば、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８０年、第３５７頁に報告されているような文献記載の方法に従って実施することができる。
【００３５】
この手順に従って製造される化合物の例は、化合物１、６及び７である。
【００３６】
式（ＩＶ）の化合物は、また、下記の互変異性体式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）及び（ＩＶｄ）：
【００３７】
【化７】
2004528381.tif 000008
（式中、Ｒ２は前記定義された通りである）
によって表すことができる。
【００３８】
式中、Ｒ１＝Ｒ２が前記定義された通りである式（Ｉ）の化合物は、また、前記定義された通りの式（ＩＩ）の化合物と、前記定義された通りの式（ＩＩＩ）の化合物との、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン又はトルエンなどのような適切な有機溶媒中で、約６０℃と約１２０℃との間の温度で、約１時間から約１５時間、例えば、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８０年、第３５７頁に報告されているような文献記載の方法に従った反応を含む方法によって製造することができる。
【００３９】
この手順に従って製造される化合物の例は、化合物１から５である。
【００４０】
式（ＩＩ）の化合物及び式（ＩＩＩ）の化合物は公知であるか又は公知の方法により製造することができる。例えば、天然生成物グアノシンである式（ＩＩ）の化合物及び式（ＩＩＩ）の化合物は、当技術分野で公知の方法に従って製造することができる。例えば、式（ＩＩＩ）の化合物は、市販されている対応するアルコールから出発して、当業者に公知である多くの方法でのハロゲン化反応により製造することができ又はその代わりに、例えば、対応する商業的エステルから標準的方法により製造することができる。
【００４１】
本発明の化合物は、種々の剤形で、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、液剤若しくは懸濁剤の剤形で経口的に、坐剤の剤形で直腸的に、非経口で、例えば、筋肉内に、静脈内に、皮内に若しくは皮下に又は局所的に投薬することができる。
【００４２】
用量は、例えば、使用される本発明の化合物、患者の年齢、体重、状態及び投薬経路に依存し、特定の用量処方は、個々の必要性及び前記の化合物を投薬する若しくはこの化合物の投薬を管理する人の専門的判定に基づいて、個別の患者に適合させることができる。
【００４３】
ヒトについて、開示された化合物による治療には、約０．００１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの、１種又は２種以上の本発明の化合物を含む薬物配合物の投薬が含まれる。好ましくは、用量は約０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇである。この用量は、例えば、患者の状態及び治療する疾患の種類に従って変化する。用量は、一度に投薬することができ又は時間の間隔を変化させて、多数の投薬すべきより小さい用量に分割することができる。
【００４４】
活性化合物として、式（Ｉ）の化合物又はその医薬適合性の塩を、医薬適合性の担体及び／又は希釈剤と一緒に含有する医薬組成物も、本発明の範囲内である。
【００４５】
これらの医薬組成物には、抗白血病及び／又は抗腫瘍活性を示すために治療的に有効である量の活性成分が含有されている。また、本発明による医薬組成物の一部として、医薬適合性の結合剤及び／又は添加物物質が含有されていてよい。この活性成分は、また、所望の作用を減じない及び／又は所望の作用を補足する、他の活性基本物質と混合することができる。
【００４６】
本発明の化合物を含有する医薬組成物は、通常、一般的な方法に従って製造され、薬物的に適した剤形で投薬することができる。
【００４７】
例えば、固体経口剤形には、活性化合物と一緒に、希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、トウモロコシデンプン又はジャガイモデンプン；滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム若しくはカルシウム及び／又はポリエチレングリコール；結合剤、例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース又はポリビニルピロリドン；分解剤、例えば、デンプン、アルギン酸、アルギン酸塩又はデンプングリコール酸ナトリウム；飽和剤；色素；甘味剤、例えば、スクロース又はサッカリン；矯味・矯臭剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ矯味・矯臭；レシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩のような湿潤剤並びに一般的に、薬物配合物中に使用される非毒性で薬理学的に不活性の物質が含有されていてよい。用量単位剤形がカプセル剤であるとき、これには、上記の種類の材料に加えて、例えば、脂肪油のような液体担体が含有されていてよい。
【００４８】
該薬物製剤は、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖コーティング又はフィルムコーティング方法の手段により、公知の方法で製造することができる。経口投薬のための液体分散剤は、例えば、シロップ剤、エマルジョン剤及び懸濁剤であってよい。シロップ剤には、担体として、例えば、サッカロース又はグリセリン及び／若しくはマンニトール及び／若しくはソルビトールを含むサッカロースが含有されていてよく、特に、糖尿病患者に投薬すべきシロップには、担体として、グルコースに代謝可能でない又は非常に少量のグルコースに代謝可能な製品、例えばソルビトールのみを含有させることができる。
【００４９】
懸濁剤及びエマルジョン剤には、担体として、例えば、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はポリビニルアルコールが含有されていてよい。筋肉内注射のための懸濁剤又は水剤には、活性化合物と一緒に、医薬適合性の担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えばプロピレングリコール及び所望により適切な量のリドカイン塩酸塩が含有されていてよい。
【００５０】
静脈内注射又は注入のための水剤には、担体として、例えば、滅菌水が含有されていてよく又は好ましくは、これらは滅菌水性等張食塩溶液の形であってよい。
【００５１】
非経口治療投薬のための水剤又は懸濁剤には、また、ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩のような緩衝剤及び塩化ナトリウム又はデキストロースのような張度の調節のための試薬が含有されていてよい。
【００５２】
非経口製剤は、ガラス又はプラスチックから製造された、アンプル、使い捨て注射器又は複投薬バイアル内に封入することができる。
【００５３】
坐剤には、活性化合物と一緒に、医薬適合性の担体、例えば、ココア脂、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤又はレシチンが含有されていてよい。
【００５４】
例えば、クリーム剤、ローション剤又はペースト剤のような局所適用のための組成物は、例えば、活性成分を一般的な油脂性又は乳化賦形剤と混合することによって製造することができる。
【００５５】
生物学的活性
本発明の化合物のテロメラーゼ活性をフラッシュプレート−ベースアッセイを使用して評価した。この方法は、用量依存性方式で、テロメラーゼ活性を阻害する化合物を、再現可能に同定するために感受性で、正確でかつ可能であると証明された。テロメラーゼに対する本発明の化合物の阻害濃度を決定するための他の方法を、本明細書に於ける開示に基づいて当業者に明らかであるように使用することができる。
【００５６】
簡単に言うと、このアッセイ混合物は、
−緩衝液中に希釈されたテロメラーゼ酵素（この組成は、アッセイの期間の間、酵素活性を安定に維持するように選択された）、
−ｄＮＴＰ、デオキシヌクレオチド５’−三リン酸、
−プライマーとしてのビオチニル化オリゴ、
−増加する濃度の試験化合物／ポジティブ対照
によって構成されている。
【００５７】
３７℃で２時間インキュベーションした後、添加したテロメア反復を、３’−標識化した短いオリゴヌクレオチドプローブを含有する溶液中でのハイブリッド形成により評価する。
【００５８】
次いで、ハイブリッド形成の程度を、反応混合物をストレプトアビジン被覆したフラッシュプレート（そこでビオチンとストレプトアビジンとの間の結合が起こる）中に移すことによって定量する。
【００５９】
テロメラーゼ活性は、測定された放射能に比例し、化合物の阻害活性は、シグマ・プロット（Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ）フィットプログラムを使用して、ＩＣ５０として評価される。
【００６０】
上記の方法により、本発明の化合物のＩＣ５０値を決定した。本発明の化合物の代表的選択物に関する結果を、下記の表１に示す。
【００６１】
【表１】
2004528381.tif 000009
【００６２】
表１に報告されたデータは、明らかに、テロメラーゼ阻害薬としての本発明による化合物の活性を示す。
【００６３】
従って、ヒト又は動物体を、薬物的に有効量の式（Ｉ）の化合物又はその塩を、それらに投薬することを含む方法によって治療することができる。それによって、ヒト又は動物の状態を改善することができる。
【００６４】
本発明の化合物は、単一薬物としてあるいは例えば、トポイソメラーゼ阻害薬、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、抗微小管薬、ホルモン剤、免疫薬、インターフェロン型薬、シクロオキシゲナーゼ阻害薬（例えば、ＣＯＸ−２阻害薬）、メタロマトリックスプロテアーゼ阻害薬、キナーゼ阻害薬、チロシンキナーゼ阻害薬、抗成長因子受容体薬、抗ＨＥＲ薬、抗ＥＧＦＲ薬、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬、ｒａｓ−ｒａｆ信号トランスダクション経路阻害薬、細胞周期阻害薬、チューブリン結合剤及び抗血管形成薬を含む、１種又は２種以上の抗癌剤との組合せで投薬することができる。
【００６５】
殆どの癌、例えば、癌腫、黒色腫、肉腫、リンパ腫及び白血病への相乗効果を得るために、および／又は薬物耐性細胞の発生を減少させるか若しくは除くために、および／又は各薬物の副作用を減少させるために薬物を組み合わせて投与する。
【００６６】
従って、本発明の更に別の局面は、本発明による化合物を、少なくとも１種の他の抗癌剤と共に投薬することを含む複合癌治療である。活性物質の組み合わせた使用によって、単一薬物を単独で使用するよりも改良された治療効果がもたらされる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物は、固定された薬物配合物中で少なくとも１種の他の抗癌剤と組み合わせることができ又は全ての所望の順序で少なくとも１種の他の抗癌剤と共に投薬することができる。
【００６８】
従って、本発明の更なる目的は、抗癌治療に於いて同時に、別々に又は逐次的に使用するための、本発明の式（Ｉ）の化合物と１種又は２種以上の抗癌剤とを含む製品又はキットである。
【００６９】
本発明の化合物と組み合わせるために適した抗癌剤には、これらに限定されないが、下記のものが含まれる。
【００７０】
例えば、エトポシド及びテニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）などのようなエピポドフィロトキシン（ｅｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）；例えばイリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ＳＮ−３８、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、９−アミノカンプトテシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン及び９−ニトロカンプトテシン（ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ））を含むカンプトテシン及びカンプトテシン誘導体を含む、トポイソメラーゼＩ型阻害薬；
例えば、メクロルエタミン、クロラムブシル  メルファラン、ウラシルマスタード及びエストラムスチンのようなナイトロジェンマスタード；例えば、ブスルファン、イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル；例えば、イホスファミド、シクロホスファミド、ペルホスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）及びトロホスファミド（ｔｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）のようなオキサザホスホリン（ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｒｉｎ）；例えば、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン及びシスプラチンのような白金誘導体；例えば、カルムスチン、ロムスチン及びストレプトゾシンのようなニトロソ尿素を含むアルキル化剤；
例えば、パクリタクセル及びドセタクセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）のようなタキサン（ｔａｘａｎｅ）；例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンオレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）及びビンデシンのようなビンカアルカロイド；例えば、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）アナログ、ジスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）アナログ及びエロイテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）アナログのような新規な抗微小管薬を含む抗有糸分裂薬；
例えば、６−メルカプトプリン、チオグアニン、アザチオプリン、アロプリノール、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、フルダラビン、ペントスタチン及び２−クロロアデノシンのようなプリン；例えば、５−ＦＵ、フルオロデオキシウリジン、フトラフール、５’−デオキシフルオロウリジン、ＵＦＴ、Ｓ−１及びカペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）のようなフルオロピリミジン；並びに例えば、デオキシシチジン、シトシンアラビノシド、５−アザシトシン、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）及び５−アザシトシンアラビノシドのようなピリミジンヌクレオシド；代謝拮抗薬（例えば、アンティフォレート様メトトレキサート、フルオロピリミジン様５−フルオロウラシル、プリン及びアデノシンアナログ、シトシンアラビノシド）を含む代謝拮抗薬；
抗エステロゲン薬（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）及びヨードキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ））、プロゲストゲン（例えば、メゲストロール及びアセテート）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、レトラゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、ボラゾール（ｂｏｒａｚｏｌｅ）及びエキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ））、抗プロゲストゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）及び酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン及びルプロリド（ｌｕｐｒｏｌｉｄｅ））並びにテストステロン  ５ａ−ジヒドロレダクターゼの阻害薬（例えば、フィナステリド）を含む、ホルモン、ホルモンアナログ及びホルモンアンタゴニスト；
例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトザントロンのようなアントラサイクリン及びアントラセンジオンを含む抗腫瘍抗生物質；
例えば、ＳＣＨ４４３４２、ＲＰＲ１１３２２８、ＢＺＡ５Ｂ及びＰＤ１６１９５６を含むファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬；
抗インバシン薬（例えば、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）及びウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤受容体機能の阻害薬などのような金属タンパク分解酵素阻害薬）；
成長因子抗体、成長因子受容体抗体、チロシンキナーゼ阻害薬及びセリン／トレオニンキナーゼ阻害薬を含む、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＦＧＦ、血小板由来成長因子及び肝細胞成長因子）機能の阻害薬；
例えば、リノミド（ｌｉｎｏｍｉｄｅ）、インテグリンａｖβ３機能の阻害薬、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＡＧＭ１４７０（ＴＮＰ−４７０）、フマジリン  真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｅｓ  ｆｒｅｓｅｎｉｕｓの天然に分泌される産生物の合成アナログ、血小板因子４（エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ））、サリドマイド、マリマスタット（ＢＢ−２５１６）及びバチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）（ＢＢ−９４）のような抗血管形成薬；
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害薬、好ましくは、例えば、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、パレコキシブ（ｐａｒｅｃｏｘｉｂ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、バレコキシブ（ｖａｌｅｃｏｘｉｂ）及びＪＴＥ５２２２のようなＣＯＸ−２阻害薬；並びに
例えば、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｙｒｉｄｏｌ）のような細胞周期阻害薬。
【００７１】
本発明の別の局面に於いて、癌の治療が必要な患者に、治療的に有効量の前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物及び治療的に有効量の少なくとも１種の他の抗癌剤を投薬することを含む、癌の治療方法が提供される。本発明の好ましい局面に於いて、前記定義された通りの式（Ｉ）の化合物と少なくとも１種の抗血管形成薬との組合せが意図される。
【００７２】
用語「悪性腫瘍」、「癌」、「腫瘍」及び「固体腫瘍癌」は、本明細書中で互換的に、一般的に単に「癌」と呼ばれている致命的疾患として当業者に公知である状態を指すために使用される。本明細書で使用されるとき、用語「癌」は、他の組織を冒し、破壊し、そして癌腫、肉腫、白血病及びリンパ腫のような全てのヒト癌を含む、異常細胞の過大で、制御されない成長によって特徴付けられる疾患を意味する。例えば、用語「癌」には、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、子宮癌、皮膚癌、腎臓癌、膵臓癌、卵巣癌、肝臓癌及び胃癌が含まれる。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、用語「化学療法薬」によって、疾患を治療するために使用される化学物質又は薬物が意味され、この用語は、主として癌の治療のために使用される、このような物質又は薬物に最もしばしば適用される。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」によって、このような用語が適用される疾患若しくは状態又はこのような疾患若しくは状態の一つ若しくは二つ以上の症状の進行を逆にすること、軽減すること、改善すること、制限すること、阻止すること又はこれらを予防することが意味される。本明細書で使用されるとき、用語「治療」は、「治療する」が直ぐ上で定義されるような、治療する行為を指す。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、用語「方法」によって、これらに限定されないが、化学、薬物学、生物学、生化学及び医学の技術分野の専門家に公知であるか又は専門家によって公知のやり方、手段、技術及び手順から容易に開発される、やり方、手段、技術及び手順を含む、所定の仕事を達成するためのこれらのやり方、手段、技術及び手順が意味される。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、用語「投与される」又は「投与する」は、標準的付与方法、例えば、連続注入及び静脈内、筋肉内及び皮下注射を含む非経口投与並びに経口投与が意味される。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、用語「モジュレートされた」には、支配された、制御された、引き起こされた、モジュレートされた及び誘発されたが含まれる。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、用語「哺乳動物」によって、乳腺から分泌されるミルクによってそれらの子を養い、通常多少毛によって覆われた皮膚を有しそしてヒトを含む、温血高等脊椎動物の種類の全てが意味される。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、用語「医薬適合性の担体」によって、生物に対して顕著な刺激を起こさず、そして投薬された化合物の生物学的活性及び特性を妨げない、担体又は希釈剤が意味される。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、用語「賦形剤」によって、化合物の投薬を更に容易にするために、医薬組成物に添加される不活性物質が意味される。
【００８１】
本明細書で使用されるとき、用語「疾患」によって、正常な身体機能を妨害する生物の機能的障害の種類又は例が意味される。
【００８２】
下記の実施例は、例示目的のみのために示され、前記の広い用語で記載された本発明の範囲を限定することを意図しない。
【実施例１】
【００８３】
化合物１
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１００ｍＬ）中の、グアノシン水和物（２．８３ｇ、１０ミリモル）及び２−ナフチルメチルブロミド（４．４１ｇ、２０ミリモル）の混合物を、９０℃で３時間攪拌する。減圧下で溶媒を蒸発させた後、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール１０：１）によって精製して、２−アミノ−７，９−ビス（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミドを白色固体として得る。収率：４０％。
【００８４】
【化８】
2004528381.tif 000010
類似の方法により、下記の化合物を製造した。
【００８５】
２−アミノ−７，９−ビス［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物２）。
【００８６】
【化９】
2004528381.tif 000011
２−アミノ−７，９−ビス｛［４’−（クロロメチル）［１，１’−ビフェニル］−４−イル］メチル｝−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物３）。
【００８７】
【化１０】
2004528381.tif 000012
２−アミノ−７，９−ビス（３，４−ジクロロベンジル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物４）。
【００８８】
【化１１】
2004528381.tif 000013
２−アミノ−７，９−ジベンジル−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物５）。
【００８９】
【化１２】
2004528381.tif 000014
【実施例２】
【００９０】
化合物１
無水ＤＭＳＯ（３ｍＬ）中のグアノシン水和物（５７０ｍｇ、２ミリモル）の溶液に、アルゴン下で２−ナフチルメチルブロミド（１．０７５ｇ、４．８ミリモル）を添加し、この反応混合物を室温で４時間攪拌する。濃ＨＣｌ水溶液（１．５ｍＬ）を添加し、この混合物を０．５時間攪拌し、次いでメタノール（２０ｍＬ）の中に注ぐ。この溶液を濃縮し、ジクロロメタン／メタノール２：１（５ｍＬ）に添加する。白色沈殿を濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。この方法で、７−（２−ナフチルメチル）グアニン塩酸塩（９０％収率）が得られ、第二工程のために使用する。７−（２−ナフチルメチル）グアニン塩酸塩（２００ｍｇ、０．６２ミリモル）及び２−ナフチルメチルブロミド（１４４ｍｇ、０．６５ミリモル）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１５ｍＬ）中に懸濁させ、この混合物を９０℃で３時間攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗製反応生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール１０：１）によって精製して、２−アミノ−７，９−ビス（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミドを白色固体として得る。収率：３５％。
【００９１】
類似の方法により、下記の化合物を製造した。
【００９２】
２−アミノ−７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−９−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物７）。
【００９３】
【化１３】
2004528381.tif 000015
【実施例３】
【００９４】
化合物６
７−（２−ナフチルメチル）グアニン塩酸塩（２００ｍｇ、０．６２ミリモル）及び（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチルクロリド（１３２ｍｇ、０．６５ミリモル）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１５ｍＬ）中に懸濁させ、この混合物を１２０℃で８時間攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗製反応生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール１０：１）によって精製して、２−アミノ−９−［（１，１’−ビフェニル）−４−イルメチル］−７−（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミドを白色固体（３１％収率）として得る。
【００９５】
【化１４】
2004528381.tif 000016
【実施例４】
【００９６】
５０ｍｇ／ｍＬの筋肉内注射
薬物注射可能組成物は、５０ｇの２−アミノ−７，９−ビス（２−ナフチルメチル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウムブロミド（化合物１）を、滅菌プロピレングリコール（１０００ｍＬ）中に溶解し、１ｍＬから５ｍＬアンプル中に封入することによって、製造することができる。
【国際公開パンフレット】
2004528381.tif 000022
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2004528381.tif 000024
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【国際調査報告】
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