(57)【要約】本発明は、特に医薬的に活性の化合物としての使用のための式Ｉのベンズスルホンアミド誘導体、及びそのようなベンズスルホンアミド誘導体を含む医薬製剤に関する。前記スルホンアミド誘導体は、ＪＮＫ経路の効果的なモジュレーターであり、それらはＪＮＫ２及び３の特に効果的且つ選択的インヒビターである。本発明はさらに、新規ベンズスルホンアミド誘導体類及びそれらの調製方法にも関する。適切な医薬剤である本発明の式Ｉの化合物類は、Ａｒ１が、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、Ｏ又はＳであり；Ｒ１は、水素又はＣ１−Ｃ６−アルキル基であり；Ｒ２は、水素、−ＣＯＯＲ３， −ＣＯＮＲ３Ｒ３’， ＯＨ， ＯＨ基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン、又はアンモニウム塩により置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基であり、；ｎは、０又は１、好ましくは１であるそれらである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ：
【化１】
2004523475.tif 000022
［式中、Ａｒ１は、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｒ１は、水素又はＣ１−Ｃ６−アルキル基であり；
Ｒ２は、水素、−ＣＯＯＲ３， −ＣＯＮＲ３Ｒ３’， ＯＨ， ＯＨ基により置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン、又はアンモニウム塩であり、ここでＲ３， Ｒ３’はＨ， Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ２−アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルから成る群から独立して選択された置換基であり；
ｎは、０又は１であり；
Ｙは、下記一般式：
【化２】
2004523475.tif 000023
（式中、Ｌ１及びＬ２は独立して、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、Ｃ４−Ｃ８−シクロアルキル（任意には、１〜３個のヘテロ原子を含み、そして任意には、アリール又はヘテロアリールにより融合される）から成る群からお互い選択され；又は
Ｌ１及びＬ２は独立して、アリール、ヘテロアリール、アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ３， −Ｃ（Ｏ）−Ｒ３， −Ｃ（Ｏ）−ＮＲ３’Ｒ３， −ＮＲ３’Ｒ３， −ＮＲ３’Ｃ（Ｏ）Ｒ３、−ＮＲ３’Ｃ（Ｏ）ＮＲ３’Ｒ３， −（ＳＯ）Ｒ３， −（ＳＯ２）Ｒ３， −ＮＳＯ２Ｒ３， −ＳＯ２ＮＲ３’Ｒ３から成る群から選択され、ここでＲ３， Ｒ３’は上記の通りであり；又は
Ｌ１及びＬ２は、一緒に取られる場合、４〜８員の飽和環状アルキル又はヘテロアルキル基を形成し；そして
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、スルホニル、オキソ（＝０）から成る群から選択され；そして
ｎ’は、０〜４の整数である）で表されるいずれかの環状アミンである］で表されるベンズスルホンアミド誘導体類、鏡像異性体、ジアステレオマーのような光学的活性形での、及びラセミ体の形でのその幾何学的異性体、及び医薬的に許容できるそれらの塩類。
【請求項２】
Ａｒ１が、フェニル、チエニル、フリル、ピペリジルから成る群から選択される請求項１記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項３】
Ａｒ１がフェニルである請求項１又は２記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項４】
Ａｒ１が、ハロゲノフェニル、ニトロフェニル、ヒドロキシフェニル、アルコキシフェニル、ピリジル、３，５−ジヒドロキシフェニル、チオキソ−ジヒドロピリジン又はその互変異性体、ピラゾールから選択され、そしてＸがＯであり、Ｒ１が水素であり、ｎが１である請求項１〜３のいずれか１項記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項５】
Ｙが、下記式：
【化３】
2004523475.tif 000024
［式中、（Ｒ６）ｎ’， Ｌ１及びＬ２は上記で定義される通りである］で表されるピペリジンである請求項１記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項６】
Ｒ６がＨであり、Ｌ２がＨであり、Ｌ１が、親油性鎖が結合されているイオン化できる成分である請求項５記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項７】
Ｌ１が−ＮＨＲ３であり、ここでＲ３は直鎖又は枝分かれ鎖のＣ４−Ｃ１２−アルキル、好ましくはシクロヘキシル基により任意に置換されたＣ６−Ｃ１０−アルキルであるか、又はＲ３はベンジル基である請求項５又は６記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項８】
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［３−（ヘキシルアミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
Ｎ−（４−｛［４−（ブチルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３−ピリジンカルボキサミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（３−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（３−｛［２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（ヘキシルアミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
Ｎ−｛３−［（４−アニリノ−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝−４−クロロベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（３−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−ヒドロキシニコチンアミド；
Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−ヒドロキシニコチンアミド；
２−ヒドロキシ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］ アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ニコチンアミド；
２−ヒドロキシ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ニコチンアミド；
から成る群から選択される請求項１〜７のいずれか１項記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項９】
薬剤として使用される請求項１〜８のいずれか１項記載のベンズスルホンアミド誘導体。
【請求項１０】
癲癇、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、網膜疾患、脊髄損傷、多発性硬化症、頭の外傷及び虚血から選択されたニュウロン疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、リウマチ様関節炎、ぜん息、敗血性ショック、移植性拒絶から選択された自己免疫疾患、乳−、結腸直腸−、膵臓、卵巣、前立腺、精巣、肝臓、腎臓、肺癌から選択された癌、発作、動脈硬化、心筋梗塞、心筋再灌流損傷を包含する心血管疾患、及び心臓、腎性、腎臓及び脳再灌流損傷、腎不全を包含する虚血性状態の処理のための薬剤の調製のためへの請求項１〜８のいずれか１項記載のベンズスルホンアミド誘導体の使用。
【請求項１１】
ＪＮＫ（Ｊｕｎ−キナーゼ）経路の調節のためへの請求項１０記載のベンズスルホンアミド誘導体の使用。
【請求項１２】
ＪＮＫの異常発現又は活性に関連する障害の処理の又は予防のためへの請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
ＪＮＫ２及び／又はＪＮＫ３の異常発現又は活性に関連する障害の処理又は予防のためへの請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか１項記載の少なくとも１つのベンズスルホンアミド誘導体、及び医薬的に許容できるそのキャリヤー、稀釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか１項記載のベンズスルホンアミド誘導体の調製方法であって、下記式（ＸＩＸ）：
【化４】
2004523475.tif 000025
［式中、Ａｒ１、Ｒ１、Ｒ２、及びｎは上記で定義された通りであり、そしてＹは、ピロリジン−３−オン又はピペリジン−４−オンである］で表されるスルホンアミドが、アミンＨ２Ｎ−Ｒ３（Ｒ３は、上記で定義された通りである）を用いて、還元性アミノ化にゆだねられる方法。
【請求項１６】
下記段階：
【化５】
2004523475.tif 000026
により行われる請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
下記段階：
【化６】
2004523475.tif 000027
により行われる請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
下記段階：
【化７】
2004523475.tif 000028
により行われる請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
下記式（ＸＩＸ）：
【化８】
2004523475.tif 000029
［式中、Ａｒ１は、アリール又はヘテロアリール基であり；
Ｒ１は、水素又はＣ１−Ｃ６−アルキル基であり；
Ｒ２は、水素、−ＣＯＯＲ３， −ＣＯＮＲ３Ｒ３’， ＯＨ， ＯＨ基により置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン、又はアンモニウム塩であり、
ｎは、０又は１であり；そして
Ｙは、ピロリジン−３−オン、又はピペリジン−４−オンである］で表されるスルホンアミド化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野：
本発明は、ベンズスルホンアミド類に関する。前記スルホンアミド誘導体は、医薬的に活性の化合物としての使用のために注目に値する。また、本発明は、そのようなスルホンアミド誘導体を含む医薬製剤にも関する。特に、本発明は、免疫系及びニューロン系の疾病の処理及び／又は予防において有用であるスルホンアミド誘導体に関する。特に、本発明のスルホンアミド誘導体は、それぞれＪＮＫ（Ｊｕｎ−キナーゼ）機能又は経路の実質的な調節、特に阻害活性を示す。
【０００２】
発明の背景：
アポプトシスは、細胞がプログラムされた細胞死の工程を受ける場合、細胞の膜及びオルガネラの複雑なゆがみを示す。前記工程の間、細胞は固有の自殺プログラムを活性化し、そして組織的にそれ自体を破壊する。次の一連の現像が観察され得る：
・細胞表面はブレブを形成し始め、そして前食作用シグナルを発現する。次に、完全なアポプトシス細胞は、急速且つ巧妙に食作用により処理される膜結合された小胞に断片化し、その結果、周囲組織に対して最少の損傷が存在する。
・次に、細胞はその隣接部分から分離する。
核はまた、それが遺伝子自殺をする場合、形態学的変化の特徴的パターンを受け、クロマチンが濃縮し、そして特に、ＤＮＡフラグメントに切断される。
【０００３】
ニューロン細胞の死は、神経系が正常に成長することを確保することにおいて重要な役割を演じる。成長するニューロンの死は、それらが刺激する細胞のサイズに依存すると思われ、すなわち少数のシナプスパートナーを有する細胞は、多数のシナプスを形成したそれらの細胞よりもたぶん、より死亡する。これは、成長する神経系において前−又は後シナプスニューロンの相対的数を平衡化する工程に影響を与えることができる。ニューロン細胞死はアポプトシスであると思われるが、成長する囓歯動物の脳におけるニューロンは決定的には、形態学及びＤＮＡフラグメント化により分類されるように、アポプトシスを受けることがつい最近、示されている。成長の間の細胞死は明らかに、病理学的工程ではないので、細胞は実際、存在するのを終えると思われる。
【０００４】
ニューロンの死は、外傷性神経損傷に続いて、又は神経変性疾病の間、アポプトシス又は壊死工程のいずれかにより生じる。複数の成分が、ニューロンのプログラムされた細胞死の駆動において役割を有するキープレイヤーとして出現する。中でも、ニューロンアポプトシスを導く成分は、ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）のサブファミリーであるＳＡＰＫ／ＪＮＫのメンバーである。
【０００５】
哺乳類細胞は、種々のミトゲン−活性化されたタンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）により介在されるシグナル化カスケードを活性化することによって、いくらかの細胞外刺激に対して応答する。上流の刺激に対するそれらの応答における差異にもかかわらず、ＭＡＰキナーゼキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫＫ又はＭＥＫＫ）、ＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫ又はＭＫＫ）及びＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）から成るＭＡＰキナーゼカスケードが類似する態様で組織化される。
【０００６】
ＭＡＰキナーゼは、“ストレス−活性化されたタンパク質キナーゼ”（ＳＡＰＫ）としても知られているｃ−Ｊｕｎ Ｎ −末端キナーゼ（ＪＮＫ）、並びに細胞外シグナル調節されたキナーゼ（ＥＲＫ）及びｐ３８ＭＡＰキナーゼを包含する広いファミリーのキナーゼである。それらの３種のＭＡＰキナーゼサブファミリーの個々は、外部刺激により誘発される情報を運ぶ、少なくとも３種の異なっているが、しかし同目的の経路に包含される。ＪＮＫシグナル化経路は、環境ストレス、例えば化学的毒素、放射線、低酸素及び浸透圧ショックへの細胞の暴露により、及び成長因子又は前炎症性サイトカイン、例えば腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）又はインターロイキンー１β（ＩＬ−１β）による細胞の処理により活性化される。
【０００７】
２種のＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＫＫ又はＭＡＰＫＫとして知られている）、すなわちＭＫＫ４（ＪＮＫＫ１としても知られている）及びＭＫＫ７（ＪＮＫＫ２としても知られている）は、サイトカイン及びストレスシグナルに応答して、酸素に対する活性化ループ上のＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒモチーフ内に位置する特定のトレオニン及びチロシン残基の二重リン酸化によりＪＮＫを活性化する。シグナル化カスケードにおけるさらなる上流においてさえ、ＭＫＫ４は、セリン及びトレオニン残基でのリン酸化を通して、ＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＥＫＫ１）によりそれ自体活性化されることが知られている。活性化されると、ＪＮＫは転写因子標的物のＮ−末端に結合し、そして転写活性化ドメインをリン酸化し、アポプトシス、炎症応答又は腫瘍形成工程を導くことができる、種々の遺伝子活性物の発現のアップ−レギュレーションをもたらす（１−５）。
【０００８】
ＭＡＰＫ（ミトゲン−活性化されたタンパク質キナーゼ）は、トレオニン及びチロシン残基に対する二重リン酸化により活性化されるセリン／トレオニンキナーゼである。哺乳類細胞においては、ＭＡＰＫに対して、細胞外刺激により生成される情報を運ぶ、少なくとも３種の異なっているが、しかし同目的の経路が存在する。前記経路は、ＥＲＫ（細胞外調節されたキナーゼ）、ＪＮＫ（ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ）及びｐ３８／ＣＳＢＰキナーゼの活性化を導くキナーゼカスケードから成る。ＪＮＫ及びｐ３８経路は、ストレス型分子外シグナルの供給に包含されるが、ＥＲＫ経路は主に、細胞核へのミトゲン／分化シグナルの形質導入を担当する。
【０００９】
ＳＡＫカスケードは、異なった外部刺激、例えばＵＶ照射、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、セラミド、細胞ストレス及び反応性酸素種によるＤＮＡ損傷により活性化され、そして明確な基質特性を有する、ミトゲンー活性化タンパク質キナーゼファミリーを示す。ＭＫＫ４／ＪＮＫ又はＭＫＫ３／ｐ３８によるシグナルトランスダクションは、下流のエフェクターの転写を開始するために、次にホモダイマー又はヘテロダイマーとして作用する、誘発性転写因子、ｃ−Ｊｕｎ及びＡＴＦ２のリン酸化をもたらす。
【００１０】
ｃ−Ｊｕｎは、炎症応答に関与する多くの遺伝子（例えば、マトリックスメタロテイナーゼ）の活性化のために必要とされるトランス活性化複合体ＡＰを生成するために、ＪＮＫは、いくつかの異なった刺激、例えばＵＶ光及びＴＮＦ−αが、タンパク質のＮ−末端における特定のセリン残基に対するｃ−Ｊｕｎのリン酸化を刺激することが見出された場合に発見された。
【００１１】
３種の異なったＪＮＫ酵素が、遺伝子ＪＮＫ１、ＪＮＫ２及びＪＮＫ３の生成物として同定されており、そしてＪＮＫの１０種の異なったイソフォームが同定されている（３，６，７）。  ＪＮＫ１及び−２は、ヒト組織において偏在して発現され、ところがＪＮＫ３は脳、心臓及び精巣において選択的に発現される（７，８，９，１０）。個々のイソフォームは、異なった親和性を有する基質に結合し、このことは、異なったＪＮＫイソフォームによるシグナル化経路のインビボでの基質特異的調節を示す。
【００１２】
Ｘｉｅ． Ｘなど， （Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １９９８， ６（８）； ９８３−９９１） の最近の公開においては、ストレス−活性化されたシグナルトランスダクション経路の活性化は、ラットＰＣ−１２及び上頸神経節（ＳＣＧ）交感神経ニューロン細胞におけるＮＧＦ除去により誘発されるニューロンアポプトシスのために必要とされることが示唆されている。特定のキナーゼ、すなわちＭＡＰキナーゼキナーゼ３（ＭＫＫ３）及びＭＡＰキナーゼキナーゼ４（ＭＫＫ４）、又はｃ−Ｊｕｎ（ＭＫＫ−４カスケードの一部）の阻害は、アポプトシスを阻害するために十分であり得る（また、Ｋｕｍａｇａｅ Ｙなど．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． Ｍｏｌ． Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．， １９９９， ６７（１）， １０−１７及びＹａｎｇ ＤＤ． など， Ｎａｔｕｒｅ， １９９７， ３８９ （６６５３）； ８６５−８７０を参照のこと）。
【００１３】
ＳＣＧニューロンにおけるＮＧＦ剥奪の数時間以内で、ｃ−Ｊｕｎは非常にリン酸化するように成り、そしてタンパク質レベルが上昇する。同様に、ＮＧＦを剥奪されたラットＰＣ−１２においては、ＪＮＫ及びｐ３８は、持効性活性化を受け、そしてＥＲＫは阻害される。このＪＮＫ３と一致するＫＯマウスは、海馬における毒性誘発されたアポプトシスに対して耐性であり、そしてより重要には、それらは、正常な動物に比較し、毒性促進性に応答して、非常に低められた癲癇性発作を示す（Ｎａｔｕｒｅ １９９７， ３８９， ８６５−８７０）。より最近には、ＪＮＫシグナル化経路は細胞増殖に包含され、そしてＴ−細胞活性化及び増殖により介在される自己免疫疾患において重要な役割を演じる（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， １９９８， ９， ５７５−５８５； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １９９９， ３， １１６−１２５）ことが報告されている。
【００１４】
純粋な（前駆体）ＣＤ４＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、Ｔ−細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を通して、抗原提供細胞（ＡＰＣ）上の特定ＭＨＣ−ペプチド複合体を認識する。ＴＣＴ−介在性シグナルの他に、同時刺激シグナルは、ＡＰＣ上のＢ７タンパク質と共に、Ｔ−細胞上で発現されるＣＤ２８の連結により、少なくとも部分的に供給される。それらの２種のシグナルの組合せは、Ｔ−細胞のクローン発現を誘発する。
４〜５日の増殖の後、ＣＤ４＋Ｔ細胞の前駆体は、免疫系の機能を介在する武装されたエフェクターＴｈ細胞に分化する。この分化工程の間、遺伝子発現の実質的なプログラミングが生じる。
【００１５】
２種のサブセットのエフェクターＴ細胞は、それらの明確なサイトカイン分泌パターン及びそれらの免疫−調節効果に基づいて定義され：Ｔｈ１細胞は、細胞−介在性炎症反応のために必要とされるＴＦＮγ及びＬＴ（ＴＮＦ−β）を生成し；Ｔｈ２細胞は、Ｂ細胞活性化及び分化を介在する、Ｉｌ−４， ＩＬ−５， ＩＬ−６， ＩＬ−１０及びＩＬ−１３を分泌する。それらの細胞は、免疫応答において中心的な役割を演じる。ＪＮＫ ＭＡＰキナーゼ経路は、抗原刺激に基づいて、Ｔｈ１エフェクター細胞において誘発されるが、しかしＴｈ２においては誘発されない。さらに、前駆体ＣＤ４＋細胞の、Ｔｈ２細胞ではなく、エフェクターＴ細胞への分化は、ＪＮＫ２−欠失マウスにおいては低められる。従って、最近、ＪＮＫキナーゼ経路が、ＪＮＫ２を通してのＴｈ１及びＴｈ２免疫応答の釣り合いにおいて重要な役割を演じることが、実現されている。
【００１６】
ＪＮＫ基質であることが知られているいくつかの転写因子は、Ｊｕｎタンパク質（ｃ−Ｊｕｎ， Ｊｕｎ Ｂ及びＪｕｎ Ｄ）、関連する転写因子ＡＴＦ２及びＡＴＦａ、Ｅｔｓ転写因子、例えばＥｌｋ−１及びＳａｐ−１、腫瘍サプレッサーｐ５３及び細胞死ドメインタンパク質（ＤＥＮＮ）である。
ＪＮＫ経路の活性化は、多くの疾病工程において提供されており、従って、薬剤発見のためにこの経路を標的化するための原理を提供する。さらに、分子遺伝子アプローチは、いくつかの疾病においてこの経路の病原性役割を確認している。
【００１７】
例えば、自己免疫及び炎症疾患は、免疫系の不適切な活性化に起因する。活性化された免疫細胞は、炎症分子、例えばサイトカイン、成長因子、細胞表面受容体、細胞付着分子、及び変性酵素をコードする多くの遺伝子を発現する。それらの遺伝子の多くは、転写因子ｃ−Ｊｕｎ及びＡＴＦ−２の転写の活性化を用いて、ＪＮＫ経路により調節されることが知られている。
細菌リポ多糖−刺激されたマクロファージにおけるＪＮＫ活性化の阻害は、キー前炎症サイトカイン、すなわちＴＮＦαの生成を効果的に調節する（１１）。
【００１８】
ＪＮＫ活性化の阻害は、リウマチ様関節炎における軟骨及び骨侵食、及び他の自己免疫疾患における組織化された組織破壊の増進を担当することが知られている、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）（１２）の誘発性発現を担当する転写因子活性化を低める。
ＪＮＫカスケートはまた、抗原刺激及びＣＤ２８受容体同時刺激により、Ｔ細胞において活性化され（１３）、そしてＩＬ−２プロモーターの生成を調節する（１４）。Ｔリンパ球の不適切な活性化は、多くの自己免疫疾患、例えば喘息、炎症性腸疾患及び多発性硬化症を開始し、そして永続せしめる。
【００１９】
アルツハイマー病から損傷を受けやすいニューロン、及び急性低酸素症を有する患者のＣＡ１ニューロン（１５）においては、ＪＮＫ３タンパク質が高く発現される。ＪＮＫ３遺伝子はまた、アルツハイマーの患者の脳の損傷された領域におい発現されることが見出された（１６）。さらに、ＪＮＫ３ ＫＯ１マウスからのニューロンは、野生型マウスからのニューロンに比較して、カイニン酸により誘発されたニューロン性アポプトシスに対して耐性になることが見出された（８）。
【００２０】
それらの発見に基づけば、ＪＮＫシグナル化経路及び特に、ＪＮＫ２及びＪＮＫ３のその経路は、アポプトシス−駆動の神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、癲癇及び発作、ハンチントン病、外傷性脳損傷、虚血性及び出血性発作に包含されると思われる。
心血管疾患、例えばアテローム硬化症及び再狭窄は、血管壁の成長の欠陥性調節に起因する。ＪＮＫ経路は、アテローム発生刺激により活性化され、そして前−アテローム硬化性遺伝子（１９）を誘発する血管細胞（１７， １８）における局部サイトカイン及び成長因子生成を調節する。
【００２１】
虚血のみ、又は心臓、肝臓、腎臓又は脳における再灌流と連結する虚血は、究極的には、うっ血性心不全、肝障害、腎不全又は大脳機能不全を導くことができる、細胞死及び瘢痕形成をもたらす。ＪＮＫ経路は、ＪＮＫ−応答遺伝子及び白血球−介在性組織損傷の活性を導く、心臓における虚血及び再灌流（２０）により活性化される。ＪＮＫ活性化はまた、虚血及び再灌流に続いて、腎臓（２１）又は肝臓（２２）においても観察される。ＪＮＫのダウンレギュレーションは、腎炎及び虚血性腎不全の間、腎機能及び長期結果を改良することがわかっている（２３）。
【００２２】
癌は、細胞の制御できない成長、増殖及び移動により特徴づけられる。初期肺癌においては、ｃ−Ｊｕｎの発現が変えられ、そして非−小細胞肺癌において成長因子シグナル化を介在することができる（２４）。ｃ−Ｊｕｎ生成及び活性の調節の他に、ＪＮＫ活性化は、ｐ５３のリン酸化を調節し、そして従って、細胞周期進行を調節することができる（２５）。さらに、ＨＴＬＶ−１（ヒトＴ細胞白血病ウィルスタイプ１）介在性腫瘍形成におけるＪＮＫ活性化の役割（２６）は、癌処理におけるＪＮＫインヒビターの可能性ある使用を示唆している（２７）。ＪＮＫ−相互作用−タンパク質−１（ＪＩＰ１）呼ばれる、天然に介在するＪＮＫ阻害タンパク質によるＪＮＫ活性化の選択的阻害は、細胞形質転換を阻止する（２８）。従って、ＪＮＫインヒビターは、形質転換及び腫瘍細胞増殖を阻止することができる。
【００２３】
ＪＮＫキナーゼ経路を阻害する目的に関しては、ＷＯ９８４９１８８号は、ヒトポリペプチド、すなわち生物学的生成物であり、そしてアポプトシス関連疾患を克服するためにまたアッセイされているＪＮＫ−相互作用タンパク質１（ＪＩＰ−１）の使用を教授する。
【００２４】
そのようなヒトポリペプチドはＪＮＫキナーゼ経路に対して阻害効果を有することが確かめられているが、次の広範囲の種々の欠点がそれらの使用に関連している：
・活性生−ペプチド又は生−タンパク質は、結果的に、時折り、得られる生成物をかなりの費用−強調的にするかなり包括的且つ高価な生合成によって、単に得られ、
・ペプチドは不良な膜侵入性を示すことが知られており、そして血液脳膜を通過することができず、
・ペプチドインヒビター又はアンタゴニストの使用に関する主要欠点は、腸分解に起因する低い経口生物利用能の問題である。従って、それらは非経口投与されるべきであり、そして最終的に、
・ペプチドインヒビター又はアンタゴニストが、排除されるべき物質を導入する場合、宿主本体により観察され、従って自己免疫応答を誘発する。
【００２５】
いくつかの広く拡散した疾病におけるＪＮＫ経路の高い関連性は、ＪＮＫのインヒビター、好ましくは選択的インヒビターを開発する必要性を強調する。
従って、種々の疾病、特にニューロン又は自己免疫系関連疾病、癌、虚血状態及び心血管疾患の処理のために適切である分子を供給することが、本発明の目的である。
ＪＮＫ経路を包含する疾病の処理方法において有用であるよう、ＪＮＫ（Ｊｕｎキナーゼ）経路を調節し、好ましくはダウンレギュレートし、又は阻害することができる化合物を供給することが特に本発明の目的である。
【００２６】
さらに、前記化合物を調製するための方法を提供することが本発明の目的である。疾病、特にＪＮＫ機能により介在されるそれらの疾病の処理のための新規カテゴリーの医薬製剤を供給することが、本発明のさらなる目的である。
最終的には、自己免疫及び／又はニューロン系の障害により引き起こされる疾病の処理及び／又は予防のための方法を提供することが、本発明の目的である。
【００２７】
発明の記載：
前記目的は、独立請求項に従って満たされている。好ましい態様は、そこに組み込まれる従属請求項内に記載されている。
次の文章は、本発明の化合物を構成し、そして本明細書及び請求項を通して均等に適用することを意図される種々の化学成分の定義を提供し、そして特にことわらない限り、広い定義を提供する。
“Ｃ１−Ｃ６−アルキル”とは、１〜６個の炭素原子を有する１価アルキル基を言及する。この用語は、基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル及び同様のものにより例示される。
【００２８】
“アリール”とは、単環（例えば、フェニル）又は複数の縮合された環（例えば、ナフチル）を有する、６〜１４個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環式基を言及する。好ましいアリールは、フェニル、ナフチル、フェナントレニル及び同様のものを包含する。
“Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール”とは、アリール置換基を有するＣ１−Ｃ６−アルキル基、例えばベンジル、フェネチル及び同様のものを言及する。
【００２９】
“ヘテロアリール”とは、単環式複素芳香族、又は二環式又は三環式の融合環複素芳香族基を言及する。複素芳香族基の特定の例は、任意に置換されたピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３−チアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、ベンゾフリル、［２，３−ジヒドロ］ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド［３，４−ｂ］ピリジル、ピリド［３，２−ｂ］ピリジル、ピリド［４，３−ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリル、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリル、ピリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、又はベンゾキノリルを包含する。
【００３０】
“Ｃ１−Ｃ６−アルキルへテロアリール”とは、ヘテロアリール置換基を有するＣ１−Ｃ６−アルキル基、例えば２−フリルメチル、２−チエニルメチル、２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル及び同様のものを言及する。
“アルケニル”とは、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、そしてアルケニル不飽和の少なくとも１又は２個の部位を有するアルケニル基を言及する。好ましいアルケニル基は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−２−プロペニル（アリル、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）及び同様のものを包含する。
【００３１】
“アルキニル”とは、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、そしてアルキル不飽和の少なくとも１〜２個の部位を有するアルキニル基を言及し、好ましいアルキニル基はエチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）及び同様のものを包含する。
“アシル”とは、基−Ｃ（Ｏ）Ｒを言及し、ここでＲはＣ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。
【００３２】
“アシルオキシ”とは、基−ＯＣ（Ｏ）Ｒを言及し、ここでＲはＣ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。
“アルコキシ”とは、基−Ｏ−Ｒを言及し、ここでＲはＣ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。好ましいアルコキシ基は、例によれば、メトキシ、フェノキシ及び同様のものを包含する。
【００３３】
“アルコキシカルボニル”とは、基−Ｃ（Ｏ）ＯＲを言及し、ここでＲはＣ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。
“アミノカルボニル”とは、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’を言及し、ここで個々のＲ， Ｒ’は独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。
“アシルアミノ”とは、基−ＮＲ（ＣＯ）Ｒ’を言及し、ここで個々のＲ， Ｒ’は独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。
“ハロゲン”とは、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード原子を言及する。
【００３４】
“スルホニル”とは、基−ＳＯ２−Ｒを言及し、ここでＲは、Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ハロゲンにより置換されたＣ１−Ｃ６−アルキル−ＳＯ２−ＣＦ３基、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール、又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールから選択される。
“スルホキシ”とは、基−Ｓ（Ｏ）−Ｒを言及し、ここでＲは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ハロゲンにより置換されたＣ１−Ｃ６−アルキル、例えば−ＳＯ−ＣＦ３基、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール、又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールから選択される。
“チオアルコキシ”とは、基−Ｓ−Ｒを言及し、ここでＲは、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール又はＣ１−Ｃ６−アルキルヘテロアリールを包含する。好ましいチオアルコキシ基は、チオメトキシ、チオエトキシ及び同様のものを包含する。
【００３５】
“置換された又は置換されていない”：特に個々の置換基の定義により制限されない限り、上記に示される基、例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール及びヘテロアリール、等の基は任意には、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアリール、Ｃ１−Ｃ６−アルキルへテロアリール、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、第一、第二又は第三アミノ基又は第四アンモニウム成分、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロ、スルホキシ、スルホニル、アルコキシ、チオアルコキシ、トリハロメチル及び同様のものから成る群から選択された１〜５個の置換基により置換され得る。他方では、前記置換基はまた、隣接する置換基が、特にビシナル官能置換基が包含される場合、環閉鎖を受ける情況を含んで成り、従って、例えばラクタム、ラクトン、環状無水物、またアセタール、チオアセタール、保護基を得るための努力において環閉鎖により形成されるアミナールを形成する。
【００３６】
“医薬的に許容できる塩又は複合体”とは、所望する生物学的活性を保持する、下記に定義される式Ｉの化合物の塩又は複合体を言及する。そのような塩の例は、無機酸（例えば、塩酸、臭酸、硫酸、リン酸、硝酸及び同様のもの）により形成される酸付加塩、及び有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、琥珀酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモール酸（ｐａｍｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸及びポリガラクツロン酸により形成される塩を包含するが、但しそれらだけには限定されない。
【００３７】
前記化合物はまた、式−ＮＲ， Ｒ’， Ｒ’’＋Ｚ−（式中、Ｒ， Ｒ’， Ｒ’’は独立して、水素、アルキル又はベンジルであり、そしてＺはカウンターイオン、例えばクロリド、ブロミド、ヨージド、−Ｏ−アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、又はカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タルトレート、アスコルベート、シンナモエート、マンデロエート及びジフェニルアセテート）である）で表される第四アンモニウム塩を特に包含する、当業者に知られている医薬的に許容できる第四塩として投与され得る。
【００３８】
“医薬的活性誘導体”とは、受容体への投与に基づいて、本明細書に開示される活性を、直接的に又は間接的に提供することができるいずれかの化合物を言及する。
“イオン化できる成分”とは、官能基を言及し、ここでその特徴的な電子分布が、イオン性又はイオン化された基、又は言いかえれば塩に転換されるその能力を前記成分に付与する。好ましいイオン化できる成分は、陽子化され、従って塩を生成するアミンのような塩基性基である。
“親油性鎖”とは、疎水性基、置換基又は化合物、特に脂質又は脂肪化合物又は成分に対して明白な誘引性を有する基を言及する。それらは特に、任意に置換されたＣ４−Ｃ１８−アルキル基を包含する。
【００３９】
“親水性基”とは、親水性又は極性基、置換基又は化合物、又は脂肪化合物又は成分に対して明白な誘引性を有する官能基を言及する。それらは、カルボキシレート、ヒドロキシド、スルフェート、又はスルホネート、又はアミン又はアンモニウム塩を包含する。
“鏡像異性体過剰率”（ｅｅ）とは、実質的に鏡像異性体合成、又は鏡像選択段階を含んで成る合成により得られる生成物を言及し、それによれば、少なくとも５２％のｅｅの程度での過剰の１つの鏡像異性体が得られる。鏡像異性体合成の不在下で、ＪｕｎＫインヒビターとしての活性を有するラセミ生成物が通常、得られる。
【００４０】
本発明の１つの観点は、下記式Ｉ：
【化９】
2004523475.tif 000002
【００４１】
で表される新規ベンズスルホンアミド誘導体である。そのような化合物は、ＪＮＫ、特にＪＮＫ２及び／又は３の作用の効果的調節、特にダウン−レギュレーション阻害により、適切な医薬的活性剤である。適切な医薬剤である本発明の式Ｉの化合物は、次のものであり、ここでＡｒ１は置換されているか又は置換されていないアリール又はヘテロアリール基であり、ＸはＯ又はＳ、好ましくはＯであり、Ｒ１は水素、又はＣ１−Ｃ６−アルキル基、好ましくはＨであり、  Ｒ２は、水素、−ＣＯＯＲ３， −ＣＯＮＲ３Ｒ３’， ＯＨ， ＯＨ基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン、又はアンモニウム塩により置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基であり、ｎは０又は１、好ましくは１である。
【００４２】
Ｙは、下記式：
【化１０】
2004523475.tif 000003
で表されるピペリジン又はピペラジン成分である。
【００４３】
前記ピペリジン又はピペラジン基においては、Ｌ１及びＬ２はお互い独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、Ｃ４−Ｃ８−シクロアルキル（任意には、１〜３個のヘテロ原子を含み、そして任意には、アリール又はヘテロアリールにより融合される）から成る群からお互い選択されるか；又はＬ１及びＬ２は独立して、アリール、ヘテロアリール、アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ３， −Ｃ（Ｏ）−Ｒ３， −Ｃ（Ｏ）−ＮＲ３’Ｒ３， −ＮＲ３’Ｒ３， −ＮＲ３’Ｃ（Ｏ）Ｒ３、−ＮＲ３’Ｃ（Ｏ）ＮＲ３’Ｒ３， −（ＳＯ）Ｒ３， −（ＳＯ２）Ｒ３， −ＮＳＯ２Ｒ３， −ＳＯ２ＮＲ３’Ｒ３から成る群から選択される。
【００４４】
Ｒ３， Ｒ３’はＨ， Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ２−アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルから成る群から独立して選択される。
他方では、Ｌ１及びＬ２は、一緒に取られる場合、４〜８員の飽和環状アルキル又はヘテロアルキル基を形成する。
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、スルホニル、オキソ（＝０）から成る群から選択される。ｎ’は０〜４の整数、好ましくは０である。
【００４５】
Ｙはまた、下記式：
【化１１】
2004523475.tif 000004
［式中、Ｌ１、Ｒ６及びｎ’は上記で定義された通りである］で表される、ピロリジン、アゼパン又は１，４−ジアゼパンでもあり得る。
【００４６】
上記に言及されたアリール又はヘテロアリール基のすべては、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、同様のトリハロメチル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、アシルオキシ、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、アミノ、アシルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシカルボニル、アリール、カルボキシル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニル、スルホキシ、Ｃ１−Ｃ６−チオアルコキシから選択された群から少なくとも１つにより任意に置換され得る。
本発明はまた、式Ｉの化合物の幾何学的異性体、光学的活性形、鏡像異性体、ジアステレオマー、並びに式Ｉのスルホンアミド誘導体のそれらのラセミ体及び医薬的に許容できる塩及び医薬的活性誘導体を包含する。
【００４７】
式Ｉにおける好ましいＡｒ１は、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、同様のトリハロメチル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、アミノ、アシルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシカルボニル、アリール、カルボキシル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、スルホニル、スルホキシ、アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ６−チオアルコキシにより任意に置換された、フェニル、チエニル、フリル、ピリジルから成る群から独立して選択される。最も好ましいＡｒ１は、置換されたフェニル、例えばクロロフェニル、例えば４−クロロフェニル、ニトロフェニル、ヒドロキシフェニル、アルコキシフェニル、ピリジル、３，４−ジヒドロキシフェニル、チオキソ−ジヒドロピリジン又はその互変異性体、ピラゾールである。
【００４８】
Ａｒ１は、４−クロロフェニル、ニトロフェニル、ヒドロキシフェニル、アルコキシフェニル、ピリジル、３，５−ジヒドロキシフェニル、チオキソ−ジヒドロピリジン又はその互変異性体、ピラゾール基から選択され、Ｘは好ましくはＯであり、Ｒ１は水素であり、ｎが１である。
本発明の特に好ましい態様は、スルホンアミド誘導体に関し、ここでＹは下記式：
【００４９】
【化１２】
2004523475.tif 000005
【００５０】
［式中、Ｒ６， ｎ’， Ｌ１及びＬ２は上記で定義された通りである］で表される、置換されているか又は置換されていないピペリジン残基である。
Ｒ６はＨであり、Ｌ２はＨであり、Ｌ１は親油性鎖が結合されているイオン化できる成分である。
親油性鎖が結合されるそのようなイオン化できる成分Ｌ１は、−ＮＨＲ３であり、ここでＲ３は、直鎖又は枝分かれ鎖のＣ４−Ｃ１２−アルキル、好ましくは、シクロヘキシル基により任意に置換されたＣ６−Ｃ１０−アルキルであるか、又はＲ３はベンジル基である。
【００５１】
他方では、Ｙは、下記式：
【化１３】
2004523475.tif 000006
【００５２】
であり、ここでＬ１は、上記に定義された通りであるが、しかし好ましくは、親油性鎖が結合されるイオン化できる成分である。そのようなイオン化できる成分は、親油性Ｃ１−Ｃ１２アルキル、好ましくはＣ４−Ｃ６アルキルにより置換されるアミノ基であり得るか、又は置換されているか又は置換されていないアリール基、好ましくは置換されたアリール基は、トリフルオロメチルスルホニルフェニルである。
【００５３】
Ｌ１内の上記に示されるイオン化できる成分は実際、親油性基であり、従って、式Ｉの分子に良好な溶解性を付与する。Ｌ１内のイオン化できる成分を通しての式の分子の溶解性の改良が、特に医薬化合物のために特に興味あることである。最も好ましいイオン化できる成分は、第二アミノ成分である。Ｊｕｎキナーゼの阻害に関する式Ｉの特に有能な化合物は、Ｌ１がまた、親油性成分を包含するそれらの化合物である。アミノ基のようなイオン化できる成分に結合されるＣ４−Ｃ６アルキル基が最も好ましい。そのような親油性基は、阻害される酵素の腔中に侵入すると思われる。
【００５４】
式Ｉの化合物の特定の例は、次のものを包含する：
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
【００５５】
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［３−（ヘキシルアミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
【００５６】
Ｎ−（４−｛［４−（ブチルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３−ピリジンカルボキサミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（３−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（３−｛［２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（ヘキシルアミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
【００５７】
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
Ｎ−｛３−［（４−アニリノ−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝−４−クロロベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（３−｛［４−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝フェニル）ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
【００５８】
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］フェニル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−｛３−［（３−｛［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］アミノ｝−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド；
Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−ヒドロキシニコチンアミド；
Ｎ−（３−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−２−ヒドロキシニコチンアミド；
２−ヒドロキシ−Ｎ−｛３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］ アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ニコチンアミド；
２−ヒドロキシ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ニコチンアミド。
【００５９】
式Ｉの化合物は、哺乳類、特にヒトの免疫系及びニューロン系の障害の処理への使用のために適切である。そのようなニューロン系障害は、例えばニューロン変性疾患、例えばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、網膜疾患、脊髄損傷、多発性硬化症、頭の外傷、癲癇及び発作、虚血及び出血性脳発作を包含する。免疫系疾患は、例えばぜん息、移植片拒絶、炎症工程、例えば炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、軟膏及び骨侵食障害、リウマチ様関節炎、敗血性ショックを包含する。
【００６０】
式Ｉの化合物はまた、癌、例えば乳、結腸直腸、膵臓、前立腺、精巣、卵巣、肺、肝臓、腎臓癌の処理への使用のためにも適切である。
もう１つの態様においては、式Ｉの化合物は、心血管疾患、例えばアテローム硬化症、再狭窄、発作、虚血症、例えば大脳虚血症、心筋梗塞の処理のために使用され得る。
もう１つの態様においては、式Ｉの化合物は、種々の虚血性状態、例えば心及び腎不全、肝障害及び脳再灌流損傷の処理のために使用され得る。
【００６１】
好ましくは、式Ｉの化合物は、単独で又は医薬組成物の形で、ＪＮＫ経路の調節のために、より特定には、ＪＮＫ、特にＪＮＫ２及び−３の発現又は活性に関連する疾病の処理又は予防のために有用である。前記調節は通常、好ましくはＪＮＫ経路、特にＪＮＫ２及び／又は−３の阻害を包含する。そのようなＪＮＫの異常発現又は活性は、多くの刺激（例えば、ストレス、敗血性ショック、酸化ストレス、サイトカイン）により誘発され、そして例えば制御されていないアポプトシス、炎症応答又は腫瘍遺伝子工程を導く工程カスケードを引き起こすことができる。
【００６２】
それらの現象は時折、上記疾病及び疾病状態を包含する種々の疾病に包含される。従って、本発明の化合物は、ＪＮＫ機能又はシグナル化経路を調節することによって、疾病の処理のために使用され得る。ＪＮＫ機能又は経路の調節は、その活性化を包含するが、しかし好ましくは、それは、ＪＮＫ経路、特にＪＮＫ１及び／又は−２及び／又はＪＮＫ３の阻害までのダウン−レギュレーションを包含する。本発明の化合物は、単独で、又は追加の医薬剤、例えば追加のＪＮＫモジュレーターと組合して使用され得る。
【００６３】
さらに、本発明のさらなる目的は、上記に記載される式Ｉの新規スルホンアミド誘導体を調製するための方法である。
本発明のベンズスルホンアミド誘導体は、次の一般的方法を用いて、容易に入手できる出発材料から調製され得る。
典型的な又は好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル数、溶媒、等）が与えられる場合、他の実験条件もまた、特にことわらない限り、使用され得ることが理解されるであろう。最適な反応条件は、使用される特定の反応体又は溶媒により変化するが、しかしそのような条件は、通常の最適化方法を用いて、当業者により決定され得る。
式Ｉの化合物は、下記スキーム１又は２に示されるアプローチにより得られる：
【００６４】
【化１４】
2004523475.tif 000007
【００６５】
上記において、Ａｒ１， Ｒ１， Ｒ２， Ｌ及びｎは上記で定義された通りであり、そしてＰは適切な保護基である（Ｒ１は好ましくは、水素、好ましくは保護基である）。
スキーム１に使用されるような式（Ｖ）の塩化スルホニルは、下記スキーム３に示される方法に従って調製され得る：
【００６６】
【化１５】
2004523475.tif 000008
【００６７】
上記において、Ａｒ１， Ｒ１， Ｒ１，Ｌ及びｎは上記で定義された通りである。
式ＩＩのアミンは、既知の化合物であるか、又は従来の方法により既知の化合物から調製され得る。出発材料としての好ましいアミンはアニリン及びベンゾメチルアミンである。
【００６８】
式ＩＩＩの塩化アシルはまた、市販されているか、又はこれまでに記載される化合物である。好ましい塩化アシルは、ハロゲンベンゾイルクロリド、例えば４−クロロベンゾイルクロリド、４−フルオロベンゾイルクロリド又はトリフルオロメチルベンゾイルクロリド、アルコキシベンゾイルクロリド、ピリジルカルボニルクロリド及び同様のものを包含する。ハロゲン化アシル（ＩＩＩ）はまた、無機酸ハロゲン化物、例えば塩化チオニル、三塩化リン又は塩化オキサリルと、その対応するカルボン酸とを、従来の条件下で反応せしめることによって調製される。一般的に、そのような反応は、約１〜５モル当量の無機アシルハロゲン化物又は塩化オキサリルを用いて、純粋な形で又は不活性溶媒、例えば四塩化炭素下で、約０℃〜約８０℃の温度で約１〜約４８時間、行われる。Ｎ， Ｎ−ジメチルホルムアミドのような触媒がまた、この反応において使用され得る。
【００６９】
ハロゲン化アシル（ＩＩＩ）がスキム３に示されるカップリング反応に使用される場合、それは典型的には、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下でアミン（ＩＩ）と反応せしめられる。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。他方では、過剰のアミン（ＩＩ）が、反応の間に生成される酸を除去するために使用され得る。
他方では、化合物（ＩＩＩ）のカルボン酸が、カップリング反応に使用され得る。カルボン酸及び誘導体（ＩＩＩ）は通常、市販されている試薬であるか、又は従来の方法により調製され得る。
【００７０】
アミン（ＩＩ）との式ＩＩＩ（すなわち、塩化アシル）のカルボン酸のカップリング反応は典型的には、いずれかの従来のカップリング試薬、例えばカルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド及び他の促進剤、例えばＮ， Ｎ−カルボニル−ジイミダゾール又はＰｙＢＯＰを用いて行われる。この反応は、カルボン酸及びアミンのカップリングを促進することが知れられている、良く知られている添加剤、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用いて、又はそれを用いないで行われ得る。
【００７１】
ハロゲン化アシル（ＩＩＩ）又はそのカルボン酸のいずれかを用いてのカップリング反応は好ましくは、約０℃〜約６℃の温度で、約１〜約２４時間、行われる。典型的には、反応は、カルボン酸又はその酸ハロゲン化合物に基づいて約１〜約５モル当量のアミンを用いて、不活性非プロトン性溶媒、例えばＮ， Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及び同様のものにおいて行われる。反応の完結に基づいて、カルボキサミド（ＩＶ）は、従来の方法、例えば沈殿、クロマトグラフィー、濾過、蒸留及び同様の方法により回収される。
【００７２】
式Ｉの最終生成物、特にスルホニルピペリジン又は−ピロリジン又は−アゼパンであるそれらの調製のために必要な式Ｖの塩化スルホニルは、カルボキサミド（ＩＶ）に対して適用される従来のスルホン化方法を用いて調製される。
【００７３】
この反応への使用のための好ましいスルホン化試薬は、クロロスルホン酸である。典型的には、スルホン化反応は、式（ＩＶ）のカルボキサミドを、約５〜約１０モル当量のスルホン化試薬により、不活性溶媒、例えばジクロロメタン下で、約−７０℃〜約５０℃の範囲の温度で処理することによって行われる。好ましくは、クロロスルホン酸の添加が−７０℃で行われ、そして中間体スルホン酸の形成が誘導される。２０℃への温度の上昇は、式Ｖの塩化スルホニルの形成を可能にする。
ＸがＳである式Ｉの化合物は、当業者に良く知られている標準の官能基間転換方法を通して、例えばＬａｗｅｓｓｏｎ’ｓ試薬又は他の試薬による処理により、その対応するアリールアミド（Ｘ＝０）、例えばベンズアミドから得られる（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， Ｂ．Ｓ．など．， Ｂｕｌｌ． Ｓｏｃ． Ｃｈｉｍ． Ｂｅｌｇ． １９７８， ８７， ２２３）。
【００７４】
式Ｉの化合物の調製のためのもう１つのアプローチは、上記スキーム２に示され、そして次の段階を包含する：
・式ＩＩの化合物のアミン官能基の保護；
・ベンゾ基のクロロスルホニル化、従って式ＶＩＩの化合物の生成；
・スルホンアミド官能基の形成（化合物ＩＸの生成）；
・化合物ＩＸ内の保護基Ｐの除去（保護解除）；
・化合物（Ｉ）を供給するための上記で生成される遊離アミンのアシル化。
それによれば、塩化スルホニル前駆体（ＶＩＩ）が次の段階により調製され得る：
【００７５】
【化１６】
2004523475.tif 000009
【００７６】
式ＩＩのアミンは、式ＶＩ［式中、Ｐは保護基を示す］で表される中間体を供給するために、アミン成分の適切な保護基により保護される。アミン官能基の多くの保護基Ｐ、及びそれらの導入及び除去は、Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｇ．Ｍ． Ｗｕｔｓ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９８， 及びそこに引用される引例に良く記載されている。酸及び塩基安定性であり、そしてさらに、遷移金属錯体、例えばパラジウム錯体、例えばアリルカルバメート基（Ａｌｌｏｃ）又はＮ， Ｎ’−ビスアリル基を用いることによって除去され得る保護基が好ましい。もう１つの好ましい保護基は、すべての範囲の実験条件下で安定するマレイミド基である。
【００７７】
前記基の導入は、その対応するビスアリルカルボネート無水物又はアリルブロミド、又は無水マレイン酸を、塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン及び同様のものの存在下で、非プロトン性溶媒、例えばＮ， Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及び同様のものにおいて、約０℃〜約８０℃の範囲の温度で反応することによって行われ得る。
【００７８】
次に、スキーム４における式ＶＩの化合物は、下記式ＶＩＩで表される塩化スルホニルの獲得を可能にする従来の非常に温和なスルホン化方法を用いてスルホン化される。典型的には、保護されたアミンＶＩは、不活性雰囲気下で塩基、例えばｎ−ブチルリチウム又はｔｅｒｔ−ブチルリチウムにより、極性溶媒、例えばテトラヒドロフラン、エーテル又はジオキサン下で、−７０℃〜０℃の範囲の温度で、１５分〜４時間、処理される。次に、そのようにして形成されたアニオンは、ＳＯ２Ｃｌ２又は最も好ましくはＳＯ２により−７０℃〜２０℃の範囲の温度で、５分〜１時間、反応混合物中にガスを泡立てることによって処理される。次に、得られるスルホネートは、０℃〜７０℃の範囲の温度でＮ−クロロスクシンイミドと接触せしめることによって、式ＶＩＩの塩化スルホニルに、現場転換される。
【００７９】
スキーム１及び２に続いて、式Ｉのスルホンアミド誘導体が、塩化スルホニルＶ又はＶＩＩと、環状又は二環式アミン（ＶＩＩＩ）、すなわち窒素を含むアルキルとを、上記定義に従って反応せしめることによって得られる。好ましい環状アミン（ＶＩＩＩ）は、下記一般式（ＶＩＩＩ’’）又は（ＶＩＩＩ’）又は（ＶＩＩＩ’’’）：
【００８０】
【化１７】
2004523475.tif 000010
【００８１】
［式中、（Ｒ６）ｎ’， Ｌ１及びＬ２は上記で定義された通りである］で表されるピロリジン、アゼパン又はピペリジン誘導体を包含する。
式ＶＩＩＩ’’’又はＶＩＩＩ’’又はＶＩＩＩ’で表されるアミンは、市販の化合物であるか、又は既知方法により調製され得る化合物のいずれかである。
【００８２】
式Ｉのスルホンアミドを供給するためにアミンＶＩＩＩによる塩化スルホニル（Ｖ）及び（ＶＩＩ）のカップリング反応は、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下で、塩化スルホニルと式ＶＩＩＩのアミンとを接触することによって行われる。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。反応は、好ましくは、溶媒、例えばＮ， Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリル下で、典型的には約０℃〜約１００℃の温度で行われる。
【００８３】
好ましい態様によれば、式Ｉのスルホンアミド誘導体は、塩化スルホニルＶ又はＶＩＩと、式ＶＩＩＩ’’’で表されるピペリジンとを反応せしめることによって調製される。
式ＶＩＩＩ’’’のピペリジンは、市販されているか、又は既知の方法によって調製され得る。当業者により知られているそのような従来の方法は、例によれば、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． １９７２， ６１， １３１６； Ｊ． Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ． Ｃｈｅｍ．， １９８６， ２３， ７３； Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， １９９６， ３７， １２９７； アメリカ特許第５１０６９８３号、ＷＯ／９１１３８７２号及びＷＯ／９６０６６０９号に記載される。
【００８４】
式Ｉのピペリジノスルホンアミドは、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下で、塩化スルホニル（Ｖ）及び／又は（ＶＩＩ）と式ＶＩＩＩ’’’のピペリジンとを接触することによって容易に調製される。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン及び同様のものを包含する。反応は好ましくは、溶媒、例えば、Ｎ， Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリル下で、約０℃〜約１００℃の温度で行われる。
【００８５】
式ＸＩＶ（Ｒ１は水素である）の特定のスルホンアミドは、反応の間に生成される酸を除去するために適切な塩基の存在下で、前記塩化スルホニルＶＩＩと式ＶＩＩＩのアミンとを接触することによって容易に調製される。適切な塩基は、例によれば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモリホリン及び同様のものを包含する。反応は好ましくは、溶媒、例えばＮ， Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、エタノール、アセトニトリル下で、約０℃〜約１００℃の温度で行われる。タイプＶＩＩの塩化スルホニルの使用は、下記一般式ＸＩＶ：
【００８６】
【化１８】
2004523475.tif 000011
【００８７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｙ及びｎは、上記で定義された通りである］で表されるアミンを得るために、当業者に良く知られている方法を用いて保護解除されるべきであるアミンを誘導する。
次に、タイプＸＩＶの誘導体が、一般式Ｉの化合物を誘導する上記の好ましい条件下での酸塩化物又はカルボン酸とアミンとの縮合によるアミドの調製のための記載される方法に従って、アシル化される。
【００８８】
Ｌ１が成分−ＮＨＲ３である式Ｉ（ＹがピペリジンＶＩＩＩ’’’である）のピペリジノスルホンアミドを調製するための特定の又は好ましいアプローチは、次の段階を包含し：
・シアノベンゼンスルホニルクロリド（ＸＶａ）と保護されたピペリジン−４−オンとの反応；
・アミン（ＸＶＩＩａ）へのニトリル（ＸＶＩａ）の還元；
・ベンズアミド（ＸＶＩＩＩａ）を生成するためへのアミン（ＸＶＩＩａ）のアシル化；
・ベンズアミド（ＸＶＩＩＩａ）のピペリジン−４−オン成分の保護解除；
・反応性ピペリジン−４−オンを有するスルホンアミド（ＸＩＸ）と第１アミンとの反応（還元性アミノ化）し、そして下記スキーム５に特定される：
【００８９】
【化１９】
2004523475.tif 000012
【００９０】
上記において、Ａｒ１、Ｒ３及びＲ２は上記で定義された通りである。
式Ｉ（ｎ＝０）のピペリジノスルホンアミドの調製に関しては、好ましい方法は下記スキーム６に示される：
【００９１】
【化２０】
2004523475.tif 000013
【００９２】
Ｌ１が成分−ＮＨＲ３である式Ｉ（Ｙは、ピロリジンＶＩＩＩ’’である）のピロリジノスルホンアミドを調製するための特定の及び好ましいアプローチは、下記スキーム７に示される：
【００９３】
【化２１】
2004523475.tif 000014
【００９４】
式Ｉ（ｎは０である）のピロリジノスルホンアミドの調製に関しては、スキーム７に示されるのと同じ経路が、シアノベンゼンスルホニルクロリドの代わりに、ニトロベンゼンスルホニルクロリドを用いることによって行われる。
【００９５】
中心のベンゼン基が親水性基（例えば、カルボキル基であるＲ２）により置換されている式Ｉのスルホンアミドを調製するための特定のアプローチは、下記段階を包含する：
・Ｒ１が保護基Ｐである塩化スルホニル（ＶＩＩ）を供給し；
・塩化スルホニル（ＶＩＩ）とアミン（ＶＩＩＩ）、例えば保護されたピペリジン−４−オンと反応せしめ、スルホンアミド（ＩＸ）を供給し：
・前記スルホンアミド（ＩＸ）をＡｒ２のメタレーションにゆだね、その対応する置換されたスルホンアミド（ＩＸａ）を生成し；
・前記スルホンアミド（ＩＸａ）の保護基Ｐを除去し、そしてスルホンアミドをアシル化し、式（ＩＸｂ）の化合物を生成し；
・前記スルホンアミド（ＩＸｂ）を保護解除し、そして式Ｉの化合物を得るために、その対応するケトンを還元的にアミノ化する。
【００９６】
前記アプローチは、スキーム８に特定される：
【化２２】
2004523475.tif 000015
【００９７】
上記に示される一般合成方法が式Ｉの化合物の獲得のために適用できない場合、当業者により知られている適切な調製方法が使用されるべきである。例えば、市販の４−シアノベンゼンスルホニルクロリド又は４−ニトロベンゼンスルホニルクロリドから出発し、そして当業者により知られている従来の方法を適用し、式Ｉのアリールスルホンアミド誘導体に達すべきである。
本発明のさらなる観点は、式（Ｉ）のスルホンアミドの調製のために特に有用である一般式（ＸＩＸ）を有するスルホンミド化合物である。
下記式（ＸＩＸ）：
【００９８】
【化２３】
2004523475.tif 000016
【００９９】
においては、Ａｒ１は、アリール又はヘテロアリール基であり；
Ｒ１は、水素又はＣ１−Ｃ６−アルキル基であり；
Ｒ２は、水素、−ＣＯＯＲ３， −ＣＯＮＲ３Ｒ３’， ＯＨ， ＯＨ基、ヒドラジドカルボニル基、スルフェート、スルホネート、アミン、又はアンモニウム塩により置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基であり、
ｎは、０又は１であり；そして
Ｙは、ピロリジン−３−オン、又はピペリジン−４−オンである。
【０１００】
本発明の最終観点は、ＪＮＫ機能又はシグナル化経路の調節のためへの式Ｉの化合物の使用、すなわちＪＮＫ経路の調節のための医薬組織物、及び式Ｉの活性化合物を含む精製の調製のためへの前記化合物の使用に関する。ＪＮＫ経路の前記調節は、種々の障害のための適切な処理アプローチとして見られる。医薬として使用される場合、本発明のスルホンアミド誘導体は典型的には、医薬組成物の形で投与される。従って、式Ｉの化合物、及び医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤又は賦形剤を含んで成る医薬組成物はまた、本発明の範囲内である。当業者は、医薬組成物を配合するために適切な種々のそのようなキャリヤー、希釈剤又は賦形剤化合物を知っている。また、本発明は、薬剤として使用するための化合物を供給する。特に、本発明は、哺乳類、特にヒトの免疫及びニューロン系の疾患の処理のためのＪＮＫ、特にＪＮＫ３のインヒビターとして使用するための式Ｉの化合物を、単独で又は他の薬剤と組合して提供する。
【０１０１】
本発明の化合物は、従来使用されるアジュバント、キャリヤー、希釈剤又は賦形剤と共に、医薬組成物及びその単位用量の形に配置され、そしてそのような形においては、経口使用のためには、固体、例えば錠剤又は充填されたカプセル、又は液体、例えば前記物質により充填された溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル又はカプセルとして、又は非経口（皮下使用を包含する）ための無菌注射用溶液の形で使用され得る。そのような医薬組成物及びその単位用量形は、追加の活性化合物又は成分を伴なって又はそれらを伴なわないで、従来の割合で成分を含んで成り、そしてそのような単位用量形は、使用される意図された毎日の用量範囲に比例し、いずれかの適切な有効量の活性成分を含むことができる。
【０１０２】
医薬として使用され得る場合、本発明のスルホンアミド誘導体は典型的には、医薬組成物の形で投与される。そのような組成物は、医薬業界において良く知られている態様で調製され得、そして少なくとも１つの活性化合物を含んで成る。一般的に、本発明の化合物は、医薬的に有効な量で投与される。実際に投与される化合物の量は、適切な環境、例えば処理される状態、投与の選択された経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重症度、及び同様のものを考慮して、医者により決定されるであろう。
【０１０３】
本発明の医薬組成物は、種々の経路、例えば経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内及び鼻腔内投与され得る。意図される供経路に依存して、化合物は好ましくは、注射用又は経口用組成物として配合される。経口投与のための組成物は、大量液体溶液又は懸濁液、又は大量粉末の形で取られ得る。しかしながら、より通常には、組成物は、正確な投与を促進するために単位用量形で提供される。用語“単位用量形”とは、ヒト対象及び他の哺乳類のために単位用量として適切な物理的に分離した単位を言及し、個々の単位は、適切な医薬賦形剤と共に、所望する治療効果を生成するために計算された、予定された量の活性材料を含む。
【０１０４】
典型的な単位用量形は、液体組成物の予備充填され、予備測定されたアンプル又は注射器、又は固体組成物の場合、ピル、錠剤、カプセル又は同様のものを包含する。そのような組成物においては、スルホンアミド化合物は通常、マイナーな成分であり（約０．１〜約５０重量％、又は好ましくは約１〜約４０重量％）、そして残りは所望する用量形の形成を助ける種々のビークル又はキャリヤー及び加工助剤である。
【０１０５】
経口投与のために適切な液体形は、緩衝液、懸濁及び分散剤、着色剤及び同様のものと共に、適切な水性又は非水性ビークルを含むことができる。固体形は、例えば、次の成分又は類似する性質の化合物のいずれかを含むことができる：結合剤、例えば微結晶性セルロース、トラガカントガム又はゼラチン；賦形剤、例えばスターチ又はラクトース、砕解剤、例えばアルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ又はトウモロコシスターチ；滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；グリダント（ｇｌｉｄａｎｔ）、例えばコロイド状二酸化珪素；甘味剤、例えばスクロース又はサッカリン；又は風味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバー。
【０１０６】
注射用組成物は典型的には、注射用無菌塩溶液又はリン酸緩衝溶液、又は当業者において知られている他の注射用キャリヤーに基づかれている。上記で言及されたように、そのような組成物における式Ｉｎｏスルホンアミド化合物は典型的には、時折、０．０５〜１０重量％の範囲のマイナーな成分であり、残りは注射用キャリヤー及び同様のものである。
【０１０７】
経口投与されるか又は注射用組成物のための上記に記載される成分は、単なる代表物である。さらなる材料、加工技法及び同様のものは、Ｐａｒｔ８ ｏｆ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８５， Ｍａｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ， 及びそこに引用される引例に示される。本発明の化合物はまた、持効性形で、又は持効性薬物供給システムから投与され得る。代表的な持効性材料の記載はまた、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおける組み込まれる材料に見出され得る。
次に、本発明は、いくつかの例により例示されるが、それらは、本発明の範囲を制限するものではない。
【０１０８】
実施例
例１：プロトコールＡ：
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド１の調製：
４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル１ａ：
Ｎ−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝−４−ピペリジン（２．００ｇ， ６．４９ｍモル）を、ＴＨＦ（７５ｍｌ）に溶解し、４−シアノベンゼンスルホニルクロリド（１．５７ｇ、７．７８ｍモル）及びピペリジン−ＰＳ（６．４９ｇ， ９，７３ｍモル）を添加し、そして混合物を室温で一晩、振盪した。過剰の塩化スルホニルを、アミノメチル−ＰＳ（５．９ｇ， ６．４９ｍモル）により、さらに４時間、振動することにより除去した。残留物を濾過し、ＴＨＦ（３×２５ｍｌ）により洗浄し、そして組合された濾液を蒸発乾燥し、９０％以上の純度（ＬＣ−ＭＳ）で、２．８ｇ（９１％）のスルホンアミド４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル１ａを得た。
【０１０９】
ピペリジン−ＰＳの調製：
クロロメチル−ＰＳ（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）を、１０体積の無水ＤＭＦに懸濁し、２．５当量のピペリジンを添加し、そして６５℃で１８時間、撹拌する。加熱から除き、そして室温で４時間、静置する。濾過し、そしてＤＭＦ， ＤＣＭ， ＤＭＦ， ＤＣＭ， ＭｅＯＨ， ＤＣＭ， ＭｅＯＨ， ＤＣＭ及び３×ＴＨＦにより樹脂を洗浄する。真空オーブン下で少なくとも４時間、樹脂を乾燥する。ＩＰＣ樹脂に閉じ込められる遊離ピペリジンの存在についてのクロラニル（ｃｈｌｏｒａｎｉｌ）試験を行う（結果は陰性であるべきであり−陽性の場合、クロラニル試験が陰性になるまで、洗浄サイクルを反復する。能力：１．５ｍモル／ｇ。
【０１１０】
１−｛［４−（アミノメチル）フェニル］スルホニル｝−Ｎ−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝−４−ピペリジン１ｂ：
４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル（５００ｍｇ、１．０５ｍモル）を、１，４−ジオキサン（２０ｍｌ）及び水（５ｍｌ）に溶解し、そして水酸化リチウム一水和物（１００ｍｇ、３．８１ｍモル）を添加し、反応フラスコを排気し、そして窒素によりパージし（３度）、木炭上、１０％パラジウム（１００ｍｇ、０．０９４ｍモル）及び水中、５０％懸濁液としてのＲａｎｅｙ−Ｎｉｃｋｅｌ（１００ｍｇ、０．８５ｍモル）を添加し、次に反応フラスコを排気し、そして水素によりパージした（３度）。
【０１１１】
混合物を、水素雰囲気下で（バルーン圧力）、２日間、室温で振動し、セライトを通して濾過し、そして１，４−ジオキサン／水（１：１、４０ｍｌ）により洗浄した。１，４−ジオキサンを真空下で除去し、水（３０ｍｌ）を残留物に添加し、そして得られるスラリーを、酢酸エチル（３×２５ｍｌ）により抽出した。組合された有機層を蒸発乾燥し、淡黄色の微晶性粉末としてアミン１−｛［４−（アミノメチル）フェニル］スルホニル｝−Ｎ−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝−４−ピペリジン１ｂ（４００ｍｇ、７９％）を９０％以上の純度（ＬＣ−ＭＳ）で得た。
【０１１２】
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド１：
１−｛［４−（アミノメチル）フェニル］スルホニル｝−Ｎ−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル｝−４−ピペリジン１ｂ（２００ｍｇ、０．４１９ｍモル）を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、ＤＣＭ（５ｍｌ）における溶液としてのピペリジン−ＰＳ（３００ｍｇ、０．４５ｍモル）及び４−クロロベンゾイルクロリド（７５ｍｇ、０．４２ｍモル）を添加し、そして混合物を室温で一晩、振盪した。過剰の塩化ベンゾイルを、２時間、振盪することによりアミノメチル−ＰＳ（５０ｍｇ、０．０５ｍモル）により除去し、ＤＣＭを真空下で除去し、そして得られる残留物を、ＤＣＭ中、１〜５％メタノールの溶媒グラジエントを用いて、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製した。Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ中、１％メタノール）、Ｒｆ＝０．６２（ＤＣＭ中、５％メタノール）を有する画分を集め、そして蒸発乾燥した。
【０１１３】
残留物をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解し、そしてエーテル（３ｍｌ）中、１ＮのＨＣｌを添加した。室温での１時間のエージングの後、沈殿物を濾過し、エーテルにより洗浄し、そして真空下で乾燥した。キャップドスルホンアミド４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］アニリノ｝−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド１の塩酸を、９５％以上の純度で白色粉末（１５０ｍｇ， ５８％）として単離した。
【０１１４】
Ｍ／Ｚ ＡＰＣＩ６１６．３ （Ｍ＋１）， ６１４．２（Ｍ−Ａ）：１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ９．３６ （ｔ， １Ｈ， Ｈ−Ｎ５， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ）， ７．９５ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２，３）， ７．７５−７．６４ （ｍ， ４Ｈ， Ｈ−Ｃ７，８，９，１０）， ７．５９ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ１，４）， ７．４９ （ｔ， １Ｈ， ８．２０ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ１８）， ７．２０−７．１０ （ｍ， ３Ｈ， Ｈ−Ｃ１７， １９， ２０）， ４．６２ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝５．９２ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ６）， ３．５７＊（ｄ， ２Ｈ， ２Ｊ＝１１．８４ Ｈｚ， Ｈｅｑ−Ｃ１１， １５）， ３．４２ （ｍ， ｂｒ， １Ｈ， Ｈ−Ｃ１３）， ２．５７＊（ｍ， ２Ｈ ｕｎｄｅｒ ＤＭＳＯ ｓｉｇｎａｌ， Ｈａｘ−Ｃ１２， １４）， １．９５＊（ｍ， ２Ｈ， Ｈａｘ−Ｃ１１，１５）， １．４４＊（ｍ， ２Ｈ， Ｈｅｑ−Ｃ１２， １４）， Ｈ−Ｎ１６交換された。
次の表は、言及される例のＨＰＬＣ及び質量分析データを提供する。
【０１１５】
【表１】
2004523475.tif 000017
【０１１６】
例７（プロトコールＢ；スキーム５及び６を参照のこと）；
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）−ベンズアミド（７）の調製：
Ｌ１についてのスキーム＝ｎ−ヘキシルの代わりにエチルフェニル：
４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）ベンゾニトリル７ａ：
１．４−ジオキサ−８−アザスピロ［４，５］デカン（２０．０ｇ、０．１４モル）、ＤＣＭ（３００ｍｌ）及び１Ｎの炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）を、フラスコに充填し、そして１０℃以下に冷却した。
【０１１７】
ＤＣＭ（１００ｍｌ）中、４−シアノベンゼンスルホニルクロリド（２６．８ｇ， ０．１３３モル）の溶液を、１０℃以下に温度を維持しながら滴下した（典型的には、４０〜５０分にわたって）。冷却を停止し、そして室温での撹拌を２時間、続けた。層を分離し、有機層を水（２×１００ｍｌ）により洗浄し、そして真空下で約１００ｍｌに濃縮した。ヘキサン（約３００ｍｌ）を添加し、結晶化を開始した。沈殿物を０℃〜５℃で１０〜３０分間、エージングし、濾過し、そしてヘキサン（２×１００ｍｌ）により洗浄し、３８．２ｇ（８８％）の４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）ベンゾニトリル７ａを、白色固形物として得た。
【０１１８】
［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）フェニル］メタンアミン７ｂ：
触媒（Ａｌｄｒｉｃｈパラジウム、水中、５０重量％懸濁液としての活性炭上、５重量％（乾量に基づく）（Ｄｅｇｕｓｓａ型Ｅ１０１ ＮＯ／Ｗ）；３．０ｇ， ０．７０ｍモル）を、フラスコに充填し、排気し、そして窒素により３度パージした。エタノール（４５０ｍｌ）中、ニトリル１ａ（１４．０ｇ， ４５．４ｍモル）の溶液及び濃縮された水酸化アンモニウム水溶液（３１重量％、４０ｍｌ， ６２０ｍモル）を添加した。フラスコを排気し、そして窒素により室温でバージし、次に排気し、そして水素により２度、満たした。反応を、バルーン圧力で水素下で室温で撹拌し、そして完結まで（１〜２日）、ＴＬＣ（ＤＣＭ中、５％メタノール）によりモニターした。
【０１１９】
完結の後、フラスコを排気し、そして窒素により３度パージし、触媒をガラス繊維フィルター紙を通して濾過し、そして温エタノール（３×１００ｍｌ）により洗浄した。反応を次の通りに作業した：濾液を蒸発乾燥し、そして残留物を、ＤＣＭ中、５〜５０％エタノールによるグラジエント溶出を用いて、シリカゲル（粗生成物に基づいて２５倍の重量のシリカ）上でのカラムクロマトグラフィーにより精製し、９０％の［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）フェニル］メタンアミン７ｂを得た。
【０１２０】
スルホニルフェニルベンズアミドが調製される場合、出発化合物４−シアノベンゼンスルホニルクロリドを、その対応するアニリン類似体を導くその対応する４−ニトロベンゼンスルホニルクロリドにより置換し（スキーム６を参照のこと）、反応時間は４〜５時間続いた。作業を次の通りに行った：濾液を真空下で約５０ｍｌに濃縮し、そして氷−アセトン浴において冷却し、結晶化を開始した（水の添加が、いくつかの場合、必要である）。沈殿物を１０〜１５分間エージングし、濾過し、そして氷冷却されたエタノール（２×３０ｍｌ）により洗浄した。収率＝６３〜９５％。
【０１２１】
４−クロロ−Ｎ−［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）ベンジル］ベンズアミド７ｃ：
［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニル）フェニル］メタンアミン７ｂ（３．００ｇ， １０．１ｍモル）を、ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解し、ピリジン（９７６μｌ、１２．１ｍモル）、４−クロロベンゾイルクロリド（１．４１ｍｌ、１１．１ｍモル）及びジメチルアミノピリジン（触媒量）を添加し、そして混合物を室温で一晩、撹拌した。
【０１２２】
過剰の塩化ベンゾイルを、アミノメチル−ＰＳ（２．０ｇ， ２．２ｍモル）により、２時間、振盪することにより除去した。樹脂を濾過し、そしてＤＣＭ（２０ｍｌ）により洗浄した。組合された濾液を、飽和水性クエン酸（２０ｍｌ）により洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして蒸発乾燥し、２．７ｇ（５９％）のスルホンアミド４−クロロ−Ｎ−［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］ デク−８−イルスルホニル）ベンジル］ベンズアミド７ｃを、９０％以上の純度（ＬＣ−ＭＳ）で得る。
【０１２３】
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−オキソ−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル７ｄ：
４−クロロ−Ｎ−［４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］ デク−８−イルスルホニル）ベンジル］ベンズアミド７ｃ（２．７ｇ ４．９９ｍモル）を６ＮのＨＣｌ（４０ｍｌ）に懸濁し、そして透明な溶液が得られるまで、ＴＨＦを添加した（約４０ｍｌ）。反応混合物を室温で一晩、そしてＴＨＦを真空下で除去した。得られる懸濁液を、冷水（４０ｍｌ）により希釈し、室温で１時間エージングし、そして濾過した。フィルター残留物を高い真空下で数時間、乾燥し、９０％以上の純度（ＬＣ−ＭＳ）で、無色の粉末として、２．０ｇ（８２％）のケトン４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−オキソ−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド７ｄを得た。
【０１２４】
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド７：
４−クロロ−Ｎ−｛４−［（４−オキソ−１−ピペリジニル）スルホニル］ベンジル｝ベンズアミド７ｄ（５００ｍｇ、１．２３ｍモル）を、ＴＨＦ／メタノール（１０ｍｌ／２０ｍｌ）に懸濁し、Ｎ−ヘキシルアミン（１４９ｍｇ、１．４８ｍｌモル）及びシアノ硼水素化物−ＩＲＡ４００（１．０ｇ、３．０ｍモル）を添加し、そして反応混合物を５０℃で一晩、撹拌した。過剰のアミンを、Ａｍｅｂａ−ＰＳ（４１５ｍｇ、０．５０ｍモル）により、２時間の振盪により除去した。樹脂を濾過し、溶媒を真空下で除去し、そして得られる残留物を、ＤＣＭ中、２．５％メタノール及びＤＣＭ中、５％メタノールの段階的グラジエントを用いて、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０１２５】
Ｒｆ＝０．２８（ＤＣＭ中、５％メタノール）を有する画分を集め、そして蒸発乾燥した（注意：１％までの濃ＮＨ３（１３．５Ｍ）を、材料の損失を低めるために、クロマトグラフィー処理の間、添加することができる）。残留物を、ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、そしてエーテル（３ｍｌ）中、１ＮのＨＣｌを添加した。室温で１時間のエージングの後、沈殿物を濾過し、そして真空下で乾燥した。スルホンアミド４−クロロ−Ｎ−（４−｛［４−（ヘキシルアミノ）−１−ピペリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド７の塩酸塩を、９５％以上の純度で、オフホワイト色の粉末（２６０ｍｇ， ３６％）として単離した：
【０１２６】
１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） （ＨＣＬ塩）δ９．３９ （ｔ， １Ｈ， Ｈ−Ｎ５， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ）， ８．９７ （ｍ， ｂｒ， ２Ｈ， Ｈ−Ｈ１６）， ７．９９ （ｄ， ２Ｈ９， ３Ｊ＝８．６５Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２，３）， ７．７５ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．２０Ｈｚ， Ｈ−Ｃ８．９）， ７．６１ （ｍ， ４Ｈ， Ｈ−Ｃｌ，４，７，１０）， ４．６１ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ， Ｈ−Ｃ６）， ３．７３＊（ｄ， ２Ｈ， ２Ｊ＝１１．８４Ｈｚ， Ｈｅｑ−Ｃ１１， １５）， ３．０７ （ｍ， ｂｒ， １Ｈ， Ｈ−Ｃ１３）， ２．８３ （ｍ， ｂｒ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ１７）， ２．２９＊（ｍ， ２Ｈ， Ｈａｘ−Ｃ１２，１４）， ２．１０＊（ｄ， ｂｒ， ２Ｈ， ２Ｊ＝１１．９０ Ｈｚ， Ｈａｘ−Ｃ１１，１５）， １．７１−１．５４＊（ｍ， ４Ｈ， Ｈｅｑ−Ｃ１２，１４ ａｎｄ Ｈ−Ｃ１８）， １．３６−１．２３ （ｍ， ６Ｈ， Ｈ−Ｃ１９，２０，２１）， ０．８９ （ｔ， ３Ｈ， ３Ｊ＝６．６０Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２２）
【０１２７】
１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） （遊離塩基） δ９．３０（ｔ， １Ｈ， Ｈ−Ｎ５， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ）， ７．９７ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝９．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２，３）， ７．７３ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝９．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ８，９）， ７．６１ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ１，４）， ７．５９ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ７，１０）， ４．６９ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ， Ｈ−Ｃ６）， ３．５１＊（ｄ， ２Ｈ， ２Ｊ＝１１．８４ Ｈｚ）， Ｈｅｑ−Ｃ１１，１５）， ２．５５−２．４０＊（ｍ， ５Ｈ， Ｈ−Ｃ１３， １７， Ｈａｘ−Ｃ１１，１５）， １．９３−１．８５＊（ｍ， ２Ｈ， Ｈａｘ−Ｃ１２，１４）， １．４６−１．２６＊（ｍ， １０Ｈ， Ｈｅｑ−Ｃ１２，１４及びＨ−Ｃ１８，１９，２９，２１）， ０．９４（ｔ， ３Ｈ， ３ Ｊ＝７．０６Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２２）。
【０１２８】
シアノ硼水素化物−ＩＲＡ４００の調製：
シアノ硼水素化ナトリウムの水溶液（８％重量／体積―わずかに濁っている）１００ｍｌを調製し、そして次に、ガラス漏斗上で１０ｇの湿潤塩化物形樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ４００）に通した。樹脂を、１体積のシアノ硼水素化物溶液により被覆し、撹拌し、そして次に、溶液を吸引下で除去し；その工程を約１０回、反復する。得られる樹脂を、過剰のシアノ硼水素化ナトリウムが除去されるまで（中性ｐＨまで）、蒸留水により十分に洗浄し、次に、ＨＰＬＣ品種のＴＨＦにより反復して洗浄することにより乾燥した。得られる平均能力は、２．５〜３．０ｍモル／ｇ乾燥樹脂であるべきである。
下記に列挙される化合物（列番号として示される）を、上記に示されるプロトコールに従って、及び応答する出発化合物を用いて、類似する手段により調製した。
【０１２９】
【表２】
2004523475.tif 000018
【０１３０】
【表３】
2004523475.tif 000019
【０１３１】
例２３（プロトコールＣ；スキーム７を参照のこと）：
４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルオニル｝ベンジル）ベンズアミド２３の調製：
４−［（３−ヒドロキシ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ａ：
４−ヒドロキシピロリジン（１２ｇ、０．１４モル）、ＤＣＭ（３００ｍｌ）及び１Ｎの炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）を、フラスコに充填し、そして１０℃以下に冷却した。ＤＣＭ（１００ｍｌ）中、４−シアノベンゼンスルホニルクロリド（２６．８ｇ， ０．１３３モル）の溶液を、１０℃以下に温度を維持しながら滴下した（典型的には、４０〜５０分にわたって）。冷却を停止し、そして室温での撹拌を２時間、続けた。層を分離し、有機層を水（２×１００ｍｌ）により洗浄し、そして真空下で約１００ｍｌに濃縮した。ヘキサン（約３００ｍｌ）を添加し、結晶化を開始した。沈殿物を０℃〜５℃で１０〜３０分間、エージングし、濾過し、そしてヘキサン（２×１００ｍｌ）により洗浄し、３０．３ｇ（８６％）のスルホンアミド４−［（ヒドロキシ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ａを、白色固形物として得た。
【０１３２】
４−［（３−オキソ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ｂ：
４−［（３−ヒドロキシ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ａ（１７．０ｇ， ６７．３ｍモル）を、ＤＣＭ（３００ｍｌ）に溶解し、そして室温でＰＳ−ＴＥＭＰＯ（能力：１．１７ｍモル／ｇ、４００ｍｇ、０．７４ｍモル）により処理した。次に、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｍｌ）を添加し、そして混合物を、１０℃に冷却しながら、激しく撹拌した。水性次亜塩酸素ナトリウム（７．０ｗｔ％のＮａＯＣｌ＊で滴定される；７７．６ｍｌ、９３．０ｇ、８７．５ｍモル）を、１０℃以下の温度を維持しながら、４０分間にわたって添加した。冷却を停止し、そして反応混合物を激しく撹拌した。
【０１３３】
２時間後のＴＬＣは、出発材料が存在しないことを示し、従って、撹拌を停止、そして層を分離した。水性層を、ＤＣＭ（２×３０ｍｌ）により抽出し、そして組合された有機層、飽和水性チオ硫酸ナトリウム（７５ｍｌ）、次に水（１５０ｍｌ）により洗浄した。それらの水性層の個々を、ＤＣＭ（３０ｍｌ）によりバック−抽出し、そして主要有機抽出物を組合し、次に、綿羊毛プラグを通して濾過し、そして蒸発乾燥し、１４．３ｇ（８５％）のケトン４−［（３−オキソ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ｂを得た。
【０１３４】
４−（１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−７−イルスルホニル）ベンゾニトリル２３ｃ：
４−［（３−オキソ−１−ピロリジニル）スルホニル］ベンゾニトリル２３ｂ（１１．６ｇ， ４６．３ｍモル）を、トルエン（１１０ｍｌ）に懸濁し、そして室温で撹拌した。エチレングリコール（６．２ｍｌ， ６．９ｇ， １１１ｍモル）及びパラ−トルエンスルホン酸一水和物（１００ｍｇ、０．５３ｍモル）を添加した。反応混合物を、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ条件下で加熱環流し、そして水収集及びＴＬＣ（ＤＣＭ中、５％メタノール）によりモニターした。
【０１３５】
反応の完結のために必要なら（典型的には、３時間以内）、ｐ−ＴＳＡの追加の部分を添加した。完結の後、反応混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５５ｍｌ）及び水（２×５５ｍｌ）により洗浄した。有機層を、綿羊毛を通して濾過し、そして次に、真空下で約５０ｍｌまで、又は沈殿が開始するまで、濃縮した。ヘキサン（１５０ｍｌ）を添加し、そしてその懸濁液を０〜５℃で１０〜２０分間、撹拌し、濾過し、そしてヘキサン（２×５０ｍｌ）により洗浄した。残留物を空気乾燥し、１３．０ｇ（９６％）のケタール４−（１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−７−イルスルホニル）ベンゾニトリル２３ｃを得た。
【０１３６】
４−（１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−７−イルスルホニル）ベンゾニトリル２３ｃを、例７ｂについて記載される方法に従って進行せしめ、最終的に、４−クロロ−Ｎ−（４−｛［３−（｛２−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝アミノ）−１−ピロリジニル］スルホニル｝ベンジル）ベンズアミド２３を誘導した。Ｍ／Ｚ ＡＰＣＩ５６６．０ （Ｍ＋１）， ５６４．２ （Ｍ−１）：  １Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） （ＨＣＬ塩）δ９．５７ （ｍ， ２Ｈ， Ｈ−Ｎ５）， ９．４２（ｔ， １Ｈ， Ｈ−Ｎ５， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ）， ７．９９ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２，３）， ７．８２ （ｄ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ８．９）， ７．７１−７．５９ （ｍ， ８Ｈ， Ｈ−Ｃ１，４，７，１０，１８，１９，２０，２１）， ４．６２ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝５．９２Ｈｚ， Ｈ−Ｃ６）， ３．７５ （ｍ， １Ｈ， Ｈ−Ｃ１２）， ３．５３−３．３３ （ｍ， ＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏシグナル下で２Ｈ， Ｈ−Ｃ１６）， ３．２７−３．０３ （ｍ， ６Ｈ， Ｈ−Ｃ１１，１４，１７）， ２．１７ （ｍ， １Ｈ， Ｈ２−Ｃ１３）， ２．０４ （ｍ， １Ｈ， Ｈｂ−Ｃ１３）．
【０１３７】
Ｄ２Ｏ−交換の後：
１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ７．９９ （ｄ， ２Ｈ， ３Ｊ＝８．６５ Ｈｚ， Ｈ−Ｃ２，３）， ７．８２ （ｄ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ８．９）， ７．７１−７．５９ （ｍ， ８Ｈ， Ｈ−Ｃ１，４，７，１０，１８，１９，２０，２１）， ４．５８ （ｓ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ６）， ３．７４ （ｍ， １Ｈ， Ｈ−Ｃ１２）， ３．４７−３．３３ （ｍ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ１６）， ３．３２−３．２３ （ｍ， １Ｈ， Ｈａ−Ｃ１４）， ３．２２−３．１４ （ｍ， ２Ｈ， Ｈ−Ｃ１１）， ３．１３−３．０４ （ｍ， １Ｈ， Ｈｂ−Ｃ１４）， ３．０３−２．９４ （ｍ， １Ｈ， Ｈ−Ｃ１７）， Ｈ−Ｃ１１，１４，１７）， ２．１７ （ｍ， １Ｈ， Ｈａ−Ｃ１３）， １．９４ （ｍ， １Ｈ， Ｈｂ−Ｃ１３）。
下記に列挙される化合物（列番号として示される）を、上記に示されるプロトコールに従って、及び応答する出発化合物を用いて、類似する手段により調製した。
【０１３８】
【表４】
2004523475.tif 000020
【０１３９】
例３２：医薬製剤の調製：
次の製剤の例は、本発明の代表的な医薬組成物を例示するが、それらは本発明を制限するものではない。
製剤１−錠剤：
式Ｉのスルホンアミド化合物を、乾燥ゼラチン結合剤と共に約１：２の重量比で、乾燥粉末として混合する。少量のステアリン酸マグネシウムを、滑剤として添加する。その混合物を、錠剤プレスにより、２４０〜２７０ｍｇの錠剤（錠剤当たり８０〜９０ｍｇの活性スルホンアミド化合物）に形成する。
【０１４０】
製剤２−カプセル：
式Ｉのスルホンアミド化合物を、スターチ希釈剤と共に約１：１の重量比で、乾燥粉末として混合する。その混合物を２５０ｍｇのカプセル中に満たす（カプセル当たり１２５ｍｇの活性スルホンアミド化合物）。
製剤３−液体：
式Ｉのスルホンアミド化合物（１２５０ｍｇ）、スクロース（１．７５ｇ）及びキサンガム（４ｍｇ）をブレンドし、Ｎｏ．１０メッシュのＵ．Ｓ． 篩を通し、そして次に、水中、微結晶セルロース及びナトリウムカルボキシルメチルセルロースの前もって調製された液体（１１：８９、５０ｍｇ）と共に混合した。安息香酸ナトリウム（１０ｍｇ）、風味剤及び着色剤を水により希釈し、そして撹拌しながら添加する。次に、十分な水を添加し、合計体積５ｍｌを生成する。
【０１４１】
製剤４−錠剤：
式Ｉのスルホンアミド化合物を、乾燥ゼラチン結合剤と共に約１：２重量比で、乾燥粉末として混合する。少量のステアリン酸マグネシウムを、滑剤として添加する。その混合物を、錠剤プレスにより、４５０〜９００ｍｇの錠剤（１５０〜３００ｍｇの活性スルホンアミド化合物）に形成する。
製剤５−注射：
式Ｉのスルホンアミド化合物を、緩衝された無菌塩溶液の注射用水性媒体において、約５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解する。
【０１４２】
例３３：生物学的アッセイ：
生物学的結果：
式Ｉで表される化合物の生物学的活性を、次のインビトロ及びインビボアッセイを用いて評価した。
ＪＮＫ２及び−３インビトロアッセイ：
ＪＮＫ２又はＪＮＫ３によるｃ−ｊｕｎのリン酸化は、下記プロトコールに従ってｃ−ｊｕｎ中への３３Ｐの組み込みをモニターすることによって追跡され得る。ＪＮＫを通してのｃ−ｊｕｎリン酸化に関しての式Ｉの化合物の阻害活性を、式Ｉの試験化合物の存在又は不在下でＪＮＫのリン酸化活性を計算することによって決定する。
【０１４３】
ＪＮＫ３及び／又は−２アッセイを、次の用に９６ウェルＭＴＴプレートにおいて行う：０．５μｇの組換え、予備活性化されたＧＳＴ−ＪＮＫ３又はＧＳＴ−ＪＮＫ２と、１μｇの組換え、ビオチニル化されたＧＳＴ−ｃ−Ｊｕｎ及び２μＭの３３γ−ＡＴＰ（２ｒＣｉ／μｌ）と共に、式Ｉの化合物の存在又は不在下で、及び５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０；１０ｍＭのＭｇＣｌ２；１ｍＭのジチオトレイトール及び１００μＭのＮａＶＯ４を含む反応体積５０μｌにおいてインキュベーションを行う。
【０１４４】
インキュベーションを、ＲＴで１２０分間、行い、そしてリン酸緩衝液中、２５０μｇのストレプタビジン被覆されたＳＰＡビーズ （Ａｍｅｒｓｈａｍ， Ｉｎｃ．）★、５ｍＭのＥＤＴＡ，０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００及び５０μＭのＡＴＰを含む溶液２００μｌの添加に基づいて停止する。ＲＴでの６０分間インキュベーションの後、ビーズを、１５００×ｇでの５分間の遠心分離により沈殿せしめ、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び５０μＭのＡＴＰを含むＰＢＳ２００μｌに再懸濁し、そして放射能を、上記のようにしてビーズを沈殿した後、シンチレーションβカウンターにおいて測定する。ビオチニル化されたＧＳＴ−１ＡＴＦ２又はビオチニル化されたミエリン塩基性タンパク質によりビオチニル化されたＧＳＴ−ｃ Ｊｕｎを置換することによって、このアッセイはまた、それぞれ、予備活性化されたｐ３８及びＥＲＫ ＭＡＰキナーゼの阻害を測定するために使用され得る。
【０１４５】
【表５】
2004523475.tif 000021
【０１４６】
ＪＮＫ２及び３に関して示される値は、ＩＣ５０（μＭ）、すなわちＪＮＫ３及びＪＮＫ２の５０％阻害を達成するために必要な量を言及する。
式Ｉの試験された化合物は、ＪＮＫ３に関して、０．４μＭ以下、より好ましくは０．２μＭに等しいか又はそれ以下の阻害性（ＩＣ５０）を示す。
式Ｉの試験された化合物は、ＪＮＫ２に関して、０．２μＭ以下、より好ましくは０．０２μＭに等しいか又はそれ以下の阻害性（ＩＣ５０）を示す。
【０１４７】
交感神経ニューロン培養物及び生存性アッセイ：
細胞死を誘発されているニューロン細胞の生存率を高める式Ｉの化合物の能力を、次のプロトコールを用いて評価した。
新生児ラット（ｐ４）の上頸神経節（ＳＣＧ）からの交感神経ニューロンを、ディスパーゼにより分離し、ラット尾コラーゲンにより被覆された４８ウェルＭＴＴプレートにおいて、１０４個の細胞／ｃｍ２の密度でプレートし、そして５％ラット血清、０．７５μｇ／ｍｌのＮＧＦ ７Ｓ （Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐ．， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）及び１０−５Ｍのアラビノシンを含むＬｅｉｂｏｗｉｔｚ培地において培養する。
【０１４８】
細胞死を、１０μｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐ．， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ） を含むが、しかしＮＧＦ又はアラビノシンを含まない、スルホンアミドインヒビターの存在又は不在下での培地に前記培養物を暴露することによって、プレートの４日後に誘発する。細胞死誘発の２４時間後、細胞生存率の決定を、０．５ｍｇ／ｍｌの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）下での３７℃で１時間の残基培養物のインキュベーションにより行う。ＭＴＴにおけるインキュベーションの後、細胞をＤＭＳＯに再懸濁し、９６ＭＴＴプレートに移し、そして細胞生存率を、５９０ｎｍでの光学密度を測定することによって評価する。
【０１４９】
種々の試験化合物に関するこのアッセイの結果は、式Ｉの化合物が細胞死からニューロンを救済することを示す（１０〜８０％ニューロン生存率）。
ＩＬ−２放出アッセイ：
ＩＬ−２の放出を阻害することによって炎症応答を調節する式Ｉの化合物の能力を、次のプロトコールを用いて評価した。ＪＮＫ経路活性化は、炎症サイトカイン、例えばＩＬ−２の生成を誘発する。ＪＮＫを、外部刺激、例えばＰＭＡ及びイノマイシンにより活性化することができ、そしてＩＬ−２生成を、ＩＬ−２ ＥＬＩＳＡ試験により測定することができる。次のプロトコールに従って本発明の化合物を伴って及びそれを伴なわないでの比較測定は、ストレス−介在性ＩＬ−２放出を妨げる化合物の能力を測定する。
【０１５０】
Ｊｕｒｋａｔ細胞、すなわちヒトＴ細胞白血病細胞系（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ＃ ＴＩＢ１５２）を、１０％の熱活性化されたウシ胎児血清（ＦＣＳ）、グルタミン及びＰｅｎｓｔｒｅｐにより補充されたＲＰＭＩ １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ， ＢＲＬ）において培養する。培地における細胞懸濁液を希釈し、２×１０６個の細胞／ｍｌにする。細胞を、異なった濃度の式Ｉの化合物（化合物の最終濃度、１０， ３， １， ０．３， ０．１μＭ）を含む９６−ウェルプレート上にプレートした（２×１０５個の細胞／ウェル）。この混合物を、湿潤されたＣＯ２雰囲気下で３７℃で３０分間インキュベートする。
【０１５１】
次に、細胞を、負の対照を除くすべてのウェルにおいて、１０μｌのＰＭＡ（ホルボールミリステート−１３ アセテート−１２）＋イノマイシン（０．１μＭ及び１μＭの最終濃度）により処理した。化合物を含まないウェルにおいては、１０μｌのＲＰＭＩ ２％ＤＭＳＯ（＝最終０．１％）を添加する。細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、そして次に、上清液を収穫し（同じ日に使用されなければ、−２０℃で凍結する）、その後、上清液に対するＩＬ−２ ＥＬＩＳＡ試験を行う。
【０１５２】
ＩＬ−２ ＥＬＩＳＡアッセイ：
試験化合物の存在又は不在下で、（ＰＭＡ＋イノマイシン）−刺激されたＪｕｒｋａｔ細胞による培地中へのＩＬ−２放出を、ＥＬＩＳＡによりアッセイすることができる。
モノクローナル抗−ヒトＩＬ−２抗体（ＭＡＢ６０２）（保護）、ビオチニル化された抗−ヒトＩＬ−２抗体（ＢＡＦ２０２）（検出）及びＦｒｏｍ Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからの組換えヒトＩＬ−２  （２０２−ＩＬ−０１０）（標準）を使用する。
【０１５３】
プレートの調製：
５μｇ／ｍｌでＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ０．０５％）において希釈された１００μｌの保護抗体を、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに移し、そして室温で一晩インキュベートする。個々のウェルを、吸引し、そして洗浄緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ０．０５％）により３度、洗浄する。最後の洗浄の後、プレートをダンピングする。
【０１５４】
アッセイ方法：
１．１００μｌのサンプル又は標準を、添加し（２０００， １０００， ５００， ２５０， １２５， ６２．５， ３１．２５ ｐｇ／ｍｌ）、そして室温で２時間インキュベートする。
２．３度の洗浄。
３．１００μｌの１２．５ｎｇ／ｍｌのビオチニル化された抗−ヒトＩＬ−２を添加し、そして室温で２時間インキュベートする。
４．３度の洗浄。
５．１：１０，０００での１００μｌのストレプタビジン−ＨＲＰ（Ｚｙｍｅｄ＃４３−４３２３）を添加し、そして室温で３０分間インキュベートする。
６．３度の洗浄。
７．１００μｌの基質溶液（クエン酸／Ｎａ２ＨＰＯ４（１：１）＋Ｈ２Ｏ２ １：２０００＋ＯＰＤ）を添加し、そして室温で２０〜３０分間インキュベートする。
８．５０μｌの停止溶液（２０％硫酸）を、個々のウェルに添加する。
９．光学密度を、５７０ｎｍでの補正を伴なって、４５０ｎｍに設定されたマイクロタイタープレートリーダーを用いて測定する。
【０１５５】
このアッセイの結果は、種々の試験化合物が、３μＭで３０％以上のＩＬ−２の生成を低めることを示す。
Ｃ−Ｊｕｎレポーターアッセイ：
ＭＡＰキナーゼシグナルトランスダクション経路における、ＪＮＫによる転写因子ｃ−ｊｕｎのリン酸化を、トランス−報告システム、例えば市販のＰａｔｈＤｅｔｅｃｔ（商標）（３２） を通して追跡することができる。次に、式Ｉの化合物によるリン酸化の阻害を評価することができる。
【０１５６】
トランス−報告システムは、ルシフェラーゼ活性を通して、融合トランス−活性化因子タンパク質の活性化状態の追跡を可能にする。トランス−活性化因子タンパク質は、酵母転写活性化因子により融合される興味ある（ｃ−ｊｕｎ）転写因子の活性化ドメイン、すなわちＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメイン（ａｂｄ）から成る。ＧＡＬ４ ｄｂｄは、既知の哺乳類転写因子がそれに結合できず、そして従って、アッセイのバックグラウンドノイズが非常に低い利点を有する。
現在の場合、ＧＡＬ４−ｃＪｕｎを構成的に発現するＨｅｌａルシフェラーゼレポーターｃ−Ｊｕｎ （ＨＬＲ−ｃ−Ｊｕｎ） 細胞系を使用した。
【０１５７】
ＭＥＫＫ−１遺伝子を挿入した。ＭＥＫＫ−１は、ＪＮＫの活性化を誘発するＭＡＰＫＫＫである。野生形ＭＥＫＫ−１の発現は、ＪＮＫ活性化のために十分である（３３）。ＪＮＫが活性化されると、それは、ダイマーを形成する融合トランス−活性化因子タンパク質（ＧＡＬ４ｄｂｄ−ｃＪＵＮ）のｃ−ｊｕｎドメインのリン酸化を誘発することができる。次に、ダイマーは、ルシフェラーゼ発現を活性化するレポーターのＧＡＬ４上流活性化配列（ＧＡＬ４ＵＡＳ）に結合することができる。
ルシフェラーゼ発現は、単純なアッセイ、例えばアッセイ、例えばＲｅｎｉｌｌａが“対照”レポーターとして使用されるＤｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（商標）Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ （３４） を用いて、発光により検出される。ＪＮＫの阻害は、ルシフェラーゼ発現の低下として観察され、そして発光の低下により検出される。
【０１５８】
細胞培養：
ＨＬＲ−ｃ−Ｊｕｎ細胞を、１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、Ｐ／Ｓ、ヒグロマイシンｂ（１００μｇ／ｍｌ）及びＧ４１８（２５０μｇ／ｍｌ）により補充されたＤＭＥＭ Ｈｉｇｈ Ｇｌｅにおいて培養する。
細胞培養調製：
細胞バンク：
細胞を、１０％ジメチルスルホキシドを含む培養培地における細胞懸濁液１．８ｍｌ体積として、液体窒素下で極低温管において凍結して貯蔵する。
【０１５９】
細胞培養物融解：
必要な場合、細胞の凍結されたバイアルを、水浴において３７℃で、半−完全な融解まで、軽くかきまぜることによって、すばやく融解する。次に、細胞懸濁液を、培養培地１０ｍｌに添加し、そして次に、１２００ｒｐｍで５分間、遠心分離する。上清液を除去し、そして細胞ペレットを培地において再構成する。フラスコを、５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃でインキュベートする。
【０１６０】
細胞継代：
細胞を、８０％の集密性単層が得られる場合、連続的に継代培養する。個々のフラスコ中の培地を除去し、そして単層を、１０〜１５ｍｌのリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）により洗浄する。
トリプシン−ＥＤＴＡ溶液を、細胞単層に添加し、３７℃でインキュベートし、そして細胞を取り除くために一定間隔で軽くたたく、細胞単層の完全な分離及び成分分離を、顕微鏡試験により確かめる。次に、細胞を、１０ｍｌの完全培地に再懸濁し、そして１２００ｒｐｍで５分間、遠心分離する。上清液を捨て、細胞を培養培地において再懸濁し、そして１７５ｃｍ２のフラスコにおいて１／５に希釈する。
【０１６１】
０日目の朝：
トランスフェクションのための細胞の調製：
ほぼ集密性の培養物の細胞を分離し、そして上記のようにして、トリプシンによる処理により成分分離する。細胞を培養培地に再懸濁し、そして計数する。細胞懸濁液を、培地により希釈し、約３．５×１０６個の細胞／ｍｌにし、そして細胞懸濁液１ｍｌを、培養培地９ｍｌを含む２個の１０ｃｍ培養皿上に置く。プレートを、空気中、５％ＣＯ２の湿潤された雰囲気下で３７℃でインキュベートする。
【０１６２】
０日目の夜：
トランスフェクション：
対照：０．２μｇのｐＴＫ Ｒｅｎｉｌｌａ， ５．８μｇのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ， ５００μｌのＯＰＴＩＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）、１８μｌのＦｕｇｅｎｅ６。
誘発された：０．１μｇのｐＭＥＫＫ１， ０．２μｇのｐＴＫ Ｒｅｎｉｌｌａ， ５．７μｇのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ， ５００μｌのＯＰＴＩＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）、１８μｌのＦｕｇｅｎｅ６、３０’ＲＴ。
トランスフェクション混合物を、プレートされた細胞に添加する。プレートを、空気中、５％ＣＯ２の湿潤された雰囲気下で３７℃で一晩、インキュベートする。
【０１６３】
１日目：
９６ウェルプレート（ウェル当たり１００μｌの培養培地）を調製する。
負の対照（ビークル）：２μｌのＤＭＳＯを、前記１００μｌの培地に添加する（三重反復）。式Ｉの化合物の原液（１００％ＤＭＳＯ中、３，１及び０．１ｍＭ）２μｌを、前記１００μｌの培地に添加する（三重反復）。トランスフェクトされた細胞を、トリプシン処理し、そして１２ｍｌの培養培地に再懸濁する。プレートを、空気中、５％ＣＯ２の湿潤された雰囲気下で３７℃で一晩、インキュベートする。
【０１６４】
２日目：
試験方法：Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（商標）Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（３４）。
培地を、プレートから除去し、そして細胞を１００μｌのＰＢＳにより２度洗浄する。溶菌試薬を適用する（Ｐａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ， ＰＬＢ）。個々の培養ウェル中に、５μｌの１×ＰＬＢを分配する。培養プレートを、揺動プラットフォーム又はオービタルシェーカー上に、軽く揺動かし又は振盪しながら配置し、１×ＰＬＢによる細胞単層の完全な適用範囲を確保する。培養物プレートを、室温で１５分間、揺動かす。２０μｌの溶解物を、白色不透明の９６ウェルプレートに移す。発光計読み取りを記録する。５０μｌのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ ＩＩを注入し、そして読み取りを、５及び１０分で記録する。５０μｌのＳｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔを、注入し、そして読み取りを、５及び１０分で記録する。次に、相対的発光を測定する：ＲＬＵルシフェラーゼ／ＲＬＵ Ｒｅｎｉｌｌａ。
【０１６５】
このアッセイの結果は、種々の試験化合物が１０μＭでＪＮＫの活性を２０％以上阻害することを示す。
ＬＰＳはマウスにおいて内毒素ショックを誘発した：
ＬＰＳ攻撃により誘発される炎症サイトカインのレベルを有意に低める式Ｉで記載されるＪＮＫインヒビターの能力を、次のプロトコールを用いて評価した：
内毒素は、グラム陰性細菌の外層膜のリポ多糖（ＬＰＳ）成分である。ＬＰＳに対する応答は、異なった細胞集団の活性化を包含し、そして腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）を包含する種々の炎症サイトカインの発現を導くことが示されている。ＬＰＳは、ＪＮＫを包含する種々のＭＡＰキナーゼ経路の活性化を刺激することが知られているので（３５）、ＪＮＫインヒビターの能力を、ＪＮＫシグナル化経路がＬＰＳ攻撃により切り替えられた後、試験することができる。
【０１６６】
式Ｉの化合物のＪＮＫインヒビターとして野活性を、次のプロトコールを用いて、ＬＰＳ攻撃の後、評価することができる。
ＬＰＳ（Ｓ． アボルタス（Ｓ． ａｂｏｒｔｕｓ）−Ｇａｌａｎｏｓ Ｌａｂ．）を、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに注射し（２００μｇ／ｋｇ， ｉ．ｖ．）、内毒素ショックを誘発する。式Ｉの化合物（０．１， １， １０ｍｇ／ｋｇ）又はＮａＣｌ（２００μＭ）を、ＬＰＳ攻撃の１５分前、静脈内注射する（１０ｍｌ／ｋｇ）。ヘパリン添加された血液を、ＬＰＳ攻撃の後、異なった時点で眼窩洞から得、そして血液を９，０００ｒｐｍで４℃で１０分間、遠心分離し、上清液を集める。マウスによるサイトカイン生成物、例えばＴＮＦα及びγの測定を、ＥＬＩＳＡキット、例えばＴＮＦαについてのＤｕｏｓｅｔ（商標）ＤＹ４１０及びＴＦＮγについてのＤＹ４８５により行う。（３６）に記載されるような他のＥＬＩＳＡアッセイを行うことができる。
【０１６７】
アレチネズミにおける全般的な虚血症：
発作の間、細胞死を保護する、式Ｉで記載されるＪＮＫインヒビターの能力を、次のプロトコールを用いて評価した：
アレチネズミの両側頸動脈閉塞は、急性虚血性発作の十分に記載されている動物モデルであり、そして比較的容易な手術技法を包含する。海馬におけるニューロン劣化は、数日間にわたって進行し、そしてしばしば、“遅延されたニューロン死”として言及される。さらに、組織学的に観察されるニューロン劣化は、明白であり、そして容易に安定化される（３７）。さらに、アレチネズミに見られる組織病理学は、心停止に続いてヒト脳の海馬ＣＡ１領域に観察されるその病理学的に類似する。行動性の観察、例えば記憶試験は、アレチネズミの場合、行われ得る。回収の程度の評価のためのこの種の試験は、他のモデルにおいては、例えば学習能力がより不良であるラットにおいては、容易に管理できない（３８）。
【０１６８】
式Ｉのニューロン保護効果を、アレチネズミの全般的虚血症モデル及び下記のようなプロトコールを用いて評価することができる：
−１−方法：
＊手術：
−イソフルラン（０．５〜４％）による麻酔。
−頸動脈（左及び右）を、組織から分離する。
−Ｂｕｌｌｄｏｙマイクロクランプを用いて、５分間の動脈の閉塞。
−クランプの除去（再灌流）。
−眼がさめるまで加熱ランプ下での動物の安定化。
−個々のおりにおける動物の安定化。
＊殺動物：
−虚血の７日後（断頭又はペントバルビタールの過剰投与）。
−脳のサンプリング。
＊組織学的パラメーター：
−イソペンタンにおける脳の凍結（−２０℃）。
−凍結−マイクロトームを用いての海馬のスライス（２０μｍ）。
−クレシルバイオレット方法による染色。
−改良されたＧｅｒｈａｒｄ ＆ Ｂｏａｓｔ評点による外傷（海馬のＣＡ１／ＣＡ２サブフィールドにおける）の評価。
【０１６９】
−２−処理：
−式Ｉの化合物又はビークルの投与：再灌流（麻酔の回復後５〜１０分）の後、１５分、２４時間、及び４８時間。
−標準プロトコール：５０匹の動物：８匹の５種のグループ（グループＡ：対照、グループＢ−Ｄ：３回の用量での試験物質及びグループＥ：参照化合物（オロト酸、３×３００ｍｇ／ｋｇ， ｉｐ））。
試験化合物は、誘発されたアレチネズミ虚血症の間、ニューロンアポプトシスからの相当の保護能力を示した。
【０１７０】
参考文献：
１． Ｄａｖｉｓ， Ｒｏｇｅｒ Ｊ．， Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ＪＮＫ Ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＭＡＰ Ｋｉｎａｓｅｓ． Ｃｅｌｌ， ２０００， １０３： ２３９−２５２．
２． Ｃｈｅｎ， Ｙｉ−Ｒｏｎｇ ａｎｄ Ｔａｎ， Ｔｓｅ−Ｈｕａ． Ｔｈｅ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ２０００， １６： ６５１−６６２
３． Ｉｐ， ＹＴ． Ａｎｄ Ｄａｖｉｓ ＲＪ， Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ （ＪＮＫ） ｆｒｏｍ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ （ＪＮＫ） ｆｒｏｍ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９８， １０：２０５−２１９．
４． Ｌｅｐｐａ， Ｓ． ａｎｄ Ｂｏｈｍａｎｎ Ｄ．， Ｄｉｖｅｒｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＪＮＫ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｃ−Ｊｕｎ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９９， １８（４５）： ６１５８−６１６２．
５． Ｍｉｎｄｅｎ， Ａ． ａｎｄ Ｋａｒｉｎ Ｍ．， Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｆ ｔｈｅ ＪＮＫ ｓｕｂｇｒｏｕｐ ｏｆ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９９７， １３３３： Ｆ８５−Ｆ１０４．
【０１７１】
６． Ｗｈｉｔｍａｒｓｈ， Ａ． Ｊ．， ａｎｄ Ｄａｖｉｓ． Ｒ．Ｊ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＡＰ−１： ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ ｓｉｇｎａｌ ｔａｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｊ． Ｍｏｌ， Ｍｅｄ． １９９６， ７７， ２３６０−２３７１．
７． Ｇｕｐｔａ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＪＮＫ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ． Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ， １９９６， １５８ （１１）： ２７６０−２７７０．
８． Ｄｅｒｅｋ Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ｔｈｅ Ｊｎｋ３ ｇｅｎｅ． Ｎａｔｕｒｅ １９９７， ３８９：８６５−８７６．
９． Ｍａｒｔｉｎ， Ｌｏｅｌ Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｔｈｅ ｐ４９３Ｆ１２ ＳＡＰ ｋｉｎａｓｅ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １９９６， ３５： ４７−５７．
１０． Ｋｕｍａｇａｅ， Ｙ． ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９， ６７： １０−１７
【０１７２】
１１． Ｄｕｍｉｔｒｕ， Ｃａｌｉｎ Ｄ． ｅｔ ａｌ． ＴＮＦ−ａｌｐｈａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ＬＰＳ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｖｉａ ａ Ｔｐ１２／ＥＲＫ−ｄｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ． Ｃｅｌｌ ２０００， １０３： １０７１−１０８３．
１２． Ｈａｎ， Ｚ． ｅｔ ａｌ．， Ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｍｅｔａｌｌｏｐｏｔｅｉｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ２００１， １０８ （１）： ７３−８１．
１３． Ｎｉｓｈｉｎａ， Ｈ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｐａｉｒｅｄ ＣＤ２８−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓ ｋｉｎａｓｅ ＳＡＰＫ／ＥＲＫＩ ｋｉｎａｓｅ （ＳＥＫＩ）／ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ ４ （ＭＫＫ４）−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９７， １８６ （６）： ９４１−９５３．
１４． Ｋｉｍｐｉａｋ， Ｓｔｅｐｈａｎ Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｊｕｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｃａｓｃａｄｅ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＣＤ２８ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＩＬ−２ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ． Ｐｒｏｏｆ ｏｆ ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＩＫＢ Ｋｉｎａｓｅ Ｃａｓｃａｄｅ， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １９９９， １６２： ３１７６−３１８７．
１５． Ｄｅ ｌａ Ｍｏｎｔｅ， Ｓ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｏｘｙｇｅｎ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｉｓ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｏ ｃａｕｓｅ ｓｏｍｅ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｔｙｐｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ＣＮＳ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｊ． Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓ． ２０００， ２ （３−４）： ２６１−２８１．
【０１７３】
１６． Ｚｈｕ， Ｘ， Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃ−Ｊｕｍ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｋｉｎａｓｅ／ｓｔｒｅｓｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｄｅｇｅｒａｔｉｎｇ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００１， ７６： ４３５−４４１．
１７． Ｆｏｒｃｅ， Ｔ． ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｒｅｓｓ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． １９９６， ７８： ９４７−９５３．
１８． Ｋｉｍ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎ Ｒａｔ ｂａｌｌｏｎ−ｉｎｊｕｒｅｄ ａｒｔｅｒｙ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １９９８， ９７−１７３１−１７３７．
１９． Ｘｕ， Ｑ． ｅｔ ａｌ．， Ａｃｕｔｅ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ａｖｔｉｖａｔｅｓ Ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎ Ａｒｔｅｒｉａｌ Ｗａｌｌ． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １９９６， ９７ （２）： ５０８−５１４．
２０． Ｂｏｇａｙｅｖｉｔｃｈ， Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｅｓｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｓｕｂｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ ｐｅｒｆｕｓｅｄ ｈｅａｒｔ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． １９９６， ７９： １６２−１７３．
【０１７４】
２１． Ｐｏｍｂｏ， ＣＭ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ｓｔｒｅｓｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ ａｒｅ ｍａｊｏｒ ｃ−Ｊｕｎ ａｍｉｎｏｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ２６９ （４２）： ２６５４６−２６５５１．
２２． Ｏｎｉｓｈｉ， Ｉ． ｅｔ ａｌ． Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９９７， ４２０： ２０１−２０４．
２３． Ｓａｆｉｒｓｔｅｉｎ， Ｒ．， Ｒｅｎａｌ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ Ａｄｖ． Ｒｅｎ． Ｒｅｐｌａｃｅ Ｔｈｅｒ． １９９７， ４ （２ Ｓｕｐｐｌ １）： ３８−４２．
２４． Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ， ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｃ−Ｊｕｎ ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ． Ｔｈｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９７， ２７２ （１５）： １０１１０−１０１１６．
２５． Ｈｕ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， ＪＮＫＩ， ＪＮＫ２ ａｎｄ ＪＮＫ３ ａｒｅ ｐ５３ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｅｒｉｎｅ ３４ ｋｉｎａｓｅｓ， Ｏｎｃｏ−ｇｅｎｅ １９９７， １５： ２２７７−２２８７．
【０１７５】
２６． Ｘｕ， Ｘ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＪＮＫ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＴＬＶ−１ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９６， １３： １３５−１４２．
２７． Ｃｈｅｎ ＹＲ ａｎｄ Ｔａｎ ＴＨ， Ｔｈｅ ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｏｎｃｏｌ． ２０００， １６ （４）： ６５１−６２．
２８． Ｈａｒｄｉｎｇ， Ｔ．Ｃ． ｅｔ ａｌ， Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＪＮＫ ｂｙ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＪＮＫ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ＪＩＰ−１ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００１， ２７６ （７）： ４５３１−４５３４．
２９． Ｇｅｎｎａｒｏ， Ａ．Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ． １８ｔｈ ｅｄ． Ｅａｓｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｙ． １９９５．
３０． Ｇｒｅｅ ＴＷ ａｎｄ Ｗｕｔｓ ＰＧ， １９９９， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ Ｅｄ．
【０１７６】
３１． Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ ＡＦ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｄｅｈｖｄｅｓ ａｎｄ ｋｅｔｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｓｏｄｉｕｍ ｔｒｉａｃｅｔｏｘｙｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｄｉｒｅｃｔ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ａｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９６， ６１， ３８４９−６２．
３２． Ｘｕ， Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｉｎ−ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｗｉｔｈ Ｐａｔｈｄｅｔｅｃｔ（商標）ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ２００１， １４ （１）： １７−１９．
３３． Ｘｕ． Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｒａｔ ＭＥＫ Ｋｉｎａｓｅ １ ｃＤＮＡ ｒｅｖｅａｌｓ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ １９５−Ｋｄａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａ ｌａｒｇｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｏｍａｉｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９９６， ９３： ５２９１−５２９５．
３４． アメリカ特許第５，７４４，３２０号；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ； Ａｐｒｉｌ ２８， １９９８．
３５． Ｇｕｈａ， Ｍ． ａｎｄ Ｍａｃｋｍａｎ， Ｎ．， ＬＰｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ， Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ２００１， １３： ８５−９４．
【０１７７】
３６． Ｆｏｍｓｇａａｒｄ， Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｎａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｆｒｏｍ ＬＰＳ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ， ＡＰＭＩＳ １９９０， ９８ （６）： ５２９−３４．
３７． Ｈｕｎｔｅｒ Ｊ．Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ： ｃａｎ ｔｈｅｙ ｐｒｅｄｉｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｄｒｕｇｓ？ ＴＩＰＳ １９９５， １６： １２３−１２８．
３８． Ｂｌｏｃｋ， Ｆ．， Ｇｌｏｂａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ Ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｄｅｆｉｃｉｔｓ， Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １９９５， ５８： ２７９−２９５．
３９． Ｇｅｒｈａｒｄ ＳＣ ａｎｄ Ｂｏａｓｔ ＣＡ， Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９８８， １０２： ３０１−３０３．
【国際公開パンフレット】
2004523475.tif 000030
2004523475.tif 000031
2004523475.tif 000032
2004523475.tif 000033
2004523475.tif 000034
2004523475.tif 000035
2004523475.tif 000036
2004523475.tif 000037
2004523475.tif 000038
2004523475.tif 000039
2004523475.tif 000040
2004523475.tif 000041
2004523475.tif 000042
2004523475.tif 000043
2004523475.tif 000044
2004523475.tif 000045
2004523475.tif 000046
2004523475.tif 000047
2004523475.tif 000048
2004523475.tif 000049
2004523475.tif 000050
2004523475.tif 000051
2004523475.tif 000052
2004523475.tif 000053
2004523475.tif 000054
2004523475.tif 000055
2004523475.tif 000056
2004523475.tif 000057
2004523475.tif 000058
2004523475.tif 000059
2004523475.tif 000060
2004523475.tif 000061
2004523475.tif 000062
2004523475.tif 000063
2004523475.tif 000064
2004523475.tif 000065
2004523475.tif 000066
2004523475.tif 000067
2004523475.tif 000068
2004523475.tif 000069
2004523475.tif 000070
2004523475.tif 000071
2004523475.tif 000072
2004523475.tif 000073
2004523475.tif 000074
2004523475.tif 000075
2004523475.tif 000076
2004523475.tif 000077
2004523475.tif 000078
2004523475.tif 000079
2004523475.tif 000080
2004523475.tif 000081
2004523475.tif 000082
2004523475.tif 000083
2004523475.tif 000084
2004523475.tif 000085
2004523475.tif 000086
2004523475.tif 000087
2004523475.tif 000088
2004523475.tif 000089
2004523475.tif 000090
2004523475.tif 000091
2004523475.tif 000092
2004523475.tif 000093
2004523475.tif 000094
2004523475.tif 000095
2004523475.tif 000096
【国際調査報告】
2004523475.tif 000097
2004523475.tif 000098
2004523475.tif 000099