(57)【要約】研究室の実験台の上面、床、および壁並びに核酸増幅反応が実施される研究室内の機器および装置の表面のような領域を含む種々の表面から、汚染する核酸を除去するのに有用である溶液を開示する。さらに、そのような表面から、効果的な核酸の除染および除去をもたらす方法およびキットを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面上の核酸を除去し、およびへリックスを不安定化するための溶液であって、界面活性剤および酸化剤から本質的になり、前記界面活性剤および酸化剤は、核酸を増幅不能にし、および前記表面から約５０％を上回る増幅検出可能な核酸を除去することを可能にするのに十分な量存在することを特徴とする溶液。
【請求項２】
前記界面活性剤が、洗剤であることを特徴とする請求項１に記載の溶液。
【請求項３】
前記洗剤が、アニオン洗剤、非イオン洗剤、両性洗剤および双性イオン性洗剤からなる群から選択されることを特徴とする請求項２に記載の溶液。
【請求項４】
前記洗剤が、アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アルコールスルフェート、ホスフェートおよびカーボネートから本質的になることを特徴とする請求項３に記載の溶液。
【請求項５】
界面活性剤の濃度が、約０．５％〜約５％であることを特徴とする請求項１に記載の溶液。
【請求項６】
界面活性剤の濃度が、約０．６％〜約１％であることを特徴とする請求項５に記載の溶液。
【請求項７】
前記酸化剤が、次亜ハロゲン酸または過酸化物であることを特徴とする請求項１に記載の溶液。
【請求項８】
前記次亜ハロゲン酸が、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸カルシウムおよび次亜塩素酸二塩基性マグネシウムからなる群から選択されることを特徴とする請求項７に記載の溶液。
【請求項９】
前記次亜ハロゲン酸は、次亜塩素酸ナトリウムであることを特徴とする請求項８に記載の溶液。
【請求項１０】
さらに緩衝液を含むことを特徴とする請求項１に記載の溶液。
【請求項１１】
界面活性剤から本質的になる第１の容器と、本質的に酸化剤からなる第２の容器とを含むことを特徴とするキット。
【請求項１２】
前記界面活性剤が、洗剤であることを特徴とする請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
前記洗剤が、アニオン洗剤、非イオン洗剤、両性洗剤および双性イオン性洗剤からなる群から選択されることを特徴とする請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記洗剤が、アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アルコールスルフェート、ホスフェートおよびカルボネートから本質的になることを特徴とする請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記酸化剤が、次亜ハロゲン酸または過酸化物であることを特徴とする請求項１１に記載のキット。
【請求項１６】
前記次亜ハロゲン酸が、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸カルシウムおよび次亜塩素酸二塩基性マグネシウムからなる群から選択されることを特徴とする請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
前記次亜ハロゲン酸は、次亜塩素酸ナトリウムであることを特徴とする請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
溶液と表面とを接触させる工程であって、前記溶液が、界面活性剤および酸化剤から本質的になる工程と、前記表面から前記溶液を除去する工程とを含むことを特徴とする予め増幅可能な核酸にさらされた表面を除染する方法。
【請求項１９】
前記界面活性剤が、洗剤であることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記洗剤が、アニオン洗剤、非イオン洗剤、両性洗剤および双性イオン性洗剤からなる群から選択されることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記洗剤が、アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アルコールスルフェート、ホスフェートおよびカーボネートから本質的になることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
界面活性剤の濃度が、約０．５％〜約５％であることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
界面活性剤の濃度が、約０．６％〜約１％であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記酸化剤が、次亜ハロゲン酸または過酸化物であることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記次亜ハロゲン酸が、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸カルシウムおよび次亜塩素酸二塩基性マグネシウムからなる群から選択されることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記次亜ハロゲン酸は、次亜塩素酸ナトリウムであることを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記表面を、前記溶液と少なくとも約３０秒間接触させることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記表面を、前記溶液と少なくとも約２分間接触させることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
次亜塩素酸ナトリウム、または漂白剤のような次亜ハロゲン酸などの酸化剤を含む溶液は、ストランド置換増幅法（Ｓｔｒａｎｄ  Ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＳＤＡ法）、ポリメラーゼ連鎖反応法（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ：ＰＣＲ法）（特許文献１および特許文献２）、リガーゼ連鎖反応法（Ｌｉｇａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ：ＬＣＲ）（特許文献３）、転写媒介性増幅法（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＴＭＡ法）、３ＳＲ、核酸配列ベース増幅法（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｂａｓｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＮＡＳＢＡ法）（特許文献４）、ローリングサークル増幅法（Ｒｏｌｌｉｎｇ  Ｃｉｒｃｌｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（特許文献５）およびその他のような既知の核酸増幅法による核酸分子を増幅不能にする。例えば核酸分子と次亜塩素酸ナトリウム溶液との接触は、核酸分子を塩素化してダブルヘリックス構造の永久的な不安定化を引き起こす。結果として生じる化学的に修飾された分子は、もはや酵素学的手段により複製することができず、したがって核酸分子は増幅不能になる（特許文献６）。
【０００２】
一般に、そのような次亜ハロゲン酸は、ハライドがＤＮＡ上のアミノ基に転移することによって核酸を不安定化し、酸化的ダメージを引き起こす（非特許文献１）。それ故に、例えば、次亜塩素酸ナトリウム溶液は、核酸増幅反応が実施される表面領域を、洗浄し、およびすすぐために、一般的に用いられる。そのような洗浄およびすすぎは、核酸除染手順と呼ばれる。一般に、そのような表面は、研究室の実験台の上面、床、および壁並びにそのような核酸増幅反応が実施される研究室内の機器および装置の表面を含む。
【０００３】
【特許文献１】
米国特許第４，６８３，１９５号明細書
【特許文献２】
米国特許第４，６８３，２０２号明細書
【特許文献３】
欧州特許第０，３２０，３０８号明細書
【特許文献４】
米国特許第５，４０９，８１８号明細書
【特許文献５】
米国特許第６，２８０，９４９号明細書
【特許文献６】
米国特許第５，６１２，２００号明細書
【特許文献７】
米国特許第４，１２３，３７７号明細書
【特許文献８】
米国特許第２，２２０，０９９号明細書
【特許文献９】
米国特許第２，４７７，３８３号明細書
【特許文献１０】
米国特許第３，１５９，５８１号明細書
【特許文献１１】
米国特許第３，２１３，０３０号明細書
【特許文献１２】
米国特許第３，４２２，０２１号明細書
【特許文献１３】
米国特許第３，４２２，１３７号明細書
【特許文献１４】
米国特許第３，４００，１７６号明細書
【特許文献１５】
米国特許第３，４００，１４８号明細書
【特許文献１６】
米国特許第４，０１９，９９８号明細書
【特許文献１７】
米国特許第４，０１９，９９９号明細書
【非特許文献１】
Ｓｈｉｓｈｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｄｏｘ  Ｒｅｐ（２０００）５（４）：２４３−７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、しばしば、そのような次亜塩素酸ナトリウムの洗浄およびすすぎは、全ての核酸分子を増幅不能にしないことも知られている。さらに、次亜塩素酸ナトリウム溶液での洗浄およびすすぎは、処理された表面から、増幅可能な核酸または増幅不能な核酸のいずれも除去しない。
【０００５】
したがって、当業界において認識されている、より効果的な核酸除染および除去の組成物および方法の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
当業界において認識される必要性に対処するために、本発明は、核酸酸化剤および界面活性剤の溶液を含む。この溶液の使用は、慣用の次亜塩素酸ナトリウム溶液よりも、より効果的に核酸除染および除去をもたらすことが見出されている。
【０００７】
１つの局面において、表面上の核酸を除去し、およびへリックスを不安定化するための溶液は、懸濁するための界面活性剤および酸化により核酸を不安定化するための酸化剤のブレンドを含むことにより、増幅不能なようにすると考えられる。適当な時間にわたってそのような溶液で処理された表面は、約５０％を上回る増幅検出可能な核酸が不安定化され、除去される。より好ましくは、少なくとも９０％の増幅検出可能な核酸が、不安定化され、および除去される。
【０００８】
もう１つの局面において、界面活性剤は、より高級の脂肪酸アルカリセッケン、およびアニオン洗剤、非イオン洗剤、両性洗剤および双性イオン性洗剤が形成されるような有機ビルダー塩を含んでも良い。関連する局面において、そのような洗剤は、アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アルコールスルフェート、ホスフェートおよびカーボネートを含んでも良い。酸化剤は、ＨＯＢｒ、ＨＯＩ、ＨＯＣｌおよび他の次亜ハロゲン酸を含むがこれらに制限されない。他の酸化剤は、Ｈ2Ｏ2およびペルオキシナイトライトのような過酸化物を含むがこれらに制限されない。
【０００９】
好ましい酸化剤は、次亜塩素酸塩である。次亜塩素酸塩は、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸リチウム、次亜塩素酸カルシウムおよび次亜塩素酸二塩基性マグネシウムを含むがこれらに制限されない。
【００１０】
界面活性剤対酸化剤の比率は、十分な酸化剤の利用可能性を維持し、少なくとも５０％の汚染核酸を酸化するようになり、したがって、増幅不能にするように変化することが可能である。好ましくは、５０％を上回る核酸が、増幅不能にされ、そして除去される。６０％、７０％、８０％を上回るか、または９０％を上回る核酸が、増幅不能にされ、そして除去されることが好ましい。
【００１１】
もう１つの局面において、溶液は、検出可能な核酸を除去し、核酸分子を十分に酸化して、除染された表面となるような時間にわたって表面にさらされる。
【００１２】
もう１つの局面において、本発明は、別個の成分として界面活性剤と、酸化剤とを含むキットを想定する。これらの別個の成分は、疑わしい表面に接触させる直前に混合され、結果として生じる溶液はこれらの表面を除染し、これらの表面を汚染する核酸は懸濁可能になり、そして酸化（例えば塩素化）によって増幅不能にされ、核酸は混合された成分との接触によって除去される。
【００１３】
溶液とそのような表面とを接触する工程を含む、表面を除染する方法も想定する。関連する局面において、核酸での汚染が疑わしい表面は、一定の時間にわたって溶液で処理されて、望ましくない核酸を懸濁し、酸化し、および不安定化する。そのような方法は、少なくとも３０秒間および対象となる組成物が表面上で乾燥するまでの間にわたって表面を接触する工程を含む。対象となる溶液は、約２０℃と約４０℃との間のような通常の周囲温度で用いることが見出されているが、より低い温度または高い温度で使用することもできる。
【発明の効果】
【００１４】
処理された表面は、続いて水（例えば脱イオン水だがこれに制限されない）によりすすがれて再水和され、そして溶液と核酸とを除去し、続いて前記接触された表面を拭き取り、そしてすすぐことにより、少なくとも５０％の汚染する核酸が酸化および除去され、好ましくは９０％を上回る汚染する核酸が、表面上から酸化されおよび除去される。
【００１５】
本発明に関連する、これらおよび他の利点および好ましい実施形態のより詳細な説明を、以下に記載する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本明細書において、術語「増幅不能な」およびその文法的な変形は、核酸が、酵素による手段によってもはや複製することができないことを意味する。
【００１７】
本明細書において、術語「溶液」または「非微粒子溶液」およびそれらの文法的な変形は、本質的に単一相の液体系を意味する。しかしながら、当業界においてよく知られているように、界面活性剤の飽和レベルでは、前記界面活性剤の微粒子の沈殿が生ずる場合がある。これらの状況下では、そのような飽和溶液、および特に流体相は、本発明の趣旨のために、非微粒子溶液とみなす。
【００１８】
本明細書において、術語「界面活性剤」または「表面活性化剤」は、水または水溶液に溶解または懸濁されたときに、表面張力を減少するいかなる化合物、または２つの液体の間もしくは液体と固体の間の界面張力を減少するいかなる化合物を意味する。関連する局面では、少なくとも３つのカテゴリーの表面活性化剤、即ち洗剤、湿潤剤および乳化剤がある。全て、同様の基礎化学的メカニズムを用いており、および例えば関与する表面の性質が異なる。
【００１９】
本明細書において、術語「核酸ハロゲン化剤」または「核酸酸化剤」およびそれらの文法的変形は、核酸をハロゲン化または酸化する成分、化合物、組成物などを意味し、そのようなハロゲン化または酸化は、ストランドの相補的な塩基対形成を妨害し、およびシングルストランドの核酸およびダブルストランドの核酸の増幅が生じることができないように、核酸の構造を変化させる。
【００２０】
本明細書において、術語「洗剤」およびその文法的変形は、通常、脂肪または脂肪酸において、アルカリの作用により作製される乳化剤または表面活性化剤であり、そのような酸のナトリウム塩またはカリウム塩から本質的になるものを意味する。関連した実施形態において、その術語は、任意の多数の合成水溶性または液体有機調剤であって、化学的にセッケンと異なるが、油を乳化することができ、懸濁液中で汚物を保持し、そして湿潤剤として作用するものを含んでもよい。
【００２１】
本明細書において、術語「へリックス不安定化」およびその文法的変形は、相補的な塩基対形成が界面活性剤／酸化剤溶液で処理された核酸ストランド間で維持することができないような、核酸のダブルへリックスにおける作用を意味する。
【００２２】
本明細書において、術語「増幅検出可能な」およびその文法的変形は、引き続いて行う核酸増幅で検出が可能な濃度での核酸の存在を意味する。
【００２３】
固形洗剤の量は、ｗ／ｖ、例えばミリリットルあたりのグラムまたはリットルあたりのグラムとして表される。液体洗剤の量は、ｖ／ｖ、例えばリットルあたりのミリリットルとして表される。
【００２４】
本発明は、物質の新規な組成物およびそのような物質の組成物を用いる核酸除染手順に関する。物質の組成物は、界面活性剤（例えば洗剤）および核酸酸化剤（例えば次亜ハロゲン酸）の組み合わせである。実質的にはいかなる界面活性剤も有用であるが、アニオン洗剤が好ましい。例えば、１つのそのようなアニオン洗剤は、ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）として知られる、直鎖アルキルアリールスルホン酸ナトリウム、アルコールスルフェート、ホスフェートおよびカーボネートからなる専売ブレンドである。ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）は、粉末洗剤として利用可能である。類似の洗剤である、ＬＩＱＵＩＮＯＸ（登録商標）もまた、本発明において有用である。
【００２５】
好ましい実施形態において、酸化剤は、次亜塩素酸塩であり、およびより好ましい実施形態において、次亜塩素酸塩は、次亜塩素酸ナトリウムである。
【００２６】
界面活性剤の濃度は、約０．１％と飽和状態との間である。好ましい量は、約０．２％〜約１０％である。適当な量は、約０．５％〜約５％である。好ましい範囲は、約０．６％〜約１％である。ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）が界面活性剤として用いられる場合は、ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）の最終濃度は、好ましくは約０．７５％ｗ／ｖである。
【００２７】
酸化剤の濃度は、約０．０１％と１０％との間である。好ましい範囲は、約０．０５〜約５％である。適当な量は、約０．１％〜約３％である。酸化剤が次亜塩素酸ナトリウムである場合において、次亜塩素酸塩の濃度は、約０．０１％と約５％との間であり、好ましくは約０．０５％〜約３％、および好ましくは、０．１％〜約２％の間である。関連する実施形態において、次亜塩素酸塩の最終濃度は１％である。
【００２８】
高級脂肪酸の水溶性塩、すなわち「セッケン」は、本明細書に開示される溶液のブレンドにおいて有用な界面活性剤である（特許文献７も参照のこと）。このクラスの界面活性剤は、通常、約８〜約２４炭素原子および好ましくは約１０〜約２０炭素原子を含む、より高級な脂肪酸のナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩およびアルカノールアンモニウム塩のようなアルカリ金属セッケンを含む。脂肪および油の直接のけん化によって、または遊離脂肪酸の中和によって、セッケンを作製することができる。特に有用なものは、ココナッツ油と獣脂から得られる脂肪酸の混合物のナトリウム塩またはカリウム塩、すなわち獣脂およびココナッツのナトリウムまたはカルシウムセッケンである。
【００２９】
別の種類のアニオン洗剤は、水溶性塩、特にそれらの分子構造において、約８〜約２２炭素原子を含むアルキル基、およびスルホン酸基または硫酸エステル基を有する有機硫酸を用いた反応の生成物のアルカリ金属塩、アンモニウム塩およびアルカノールアンモニウム塩を含む。（術語「アルキル」においては、アシル基のアルキル部分が含まれる。）本発明の溶液において用いることができるこの合成界面活性剤の群の例は、アルキル硫酸ナトリウムおよびアルキル硫酸カリウム、特に、獣脂またはココナッツ油のグリセリドを還元することにより生成される、より高級なアルコール（Ｃ8〜Ｃ18炭素原子）を硫酸化することにより得られるもの、Ｃ8〜Ｃ20パラフィンスルホン酸ナトリウムおよびカリウム、およびアルキル基が直鎖構造または分枝鎖構造において約９〜約１５炭素原子を含むアルキルベンゼンスルホン酸ナトリウムおよびカリウム、例えば、（特許文献８および特許文献９）に記載されるタイプ（参照により本明細書に組み込まれる）のものである。
【００３０】
他の本発明に有用なアニオン界面活性剤化合物は、アルキルグリセリルエーテルスルホン酸ナトリウム、特に獣脂およびココナッツ油由来のそれらのエーテルまたは高級アルコール、ココナッツ油脂肪酸モノグリセリドスルホン酸および硫酸ナトリウム、および分子あたり約１〜約１０ユニットのエチレンオキシドを含み、およびアルキル基が約８〜約１２原子を含むアルキルフェノールエチレンオキシドエーテルスルフェートのナトリウム塩またはカリウム塩を含む。
【００３１】
その他の本発明に有用なアニオン界面活性剤は、エステル基において約６〜約２０炭素原子を含むα位をスルホン化された脂肪酸エステルの水溶性塩、アルカン部分中に約２〜９炭素原子を含む２−アシルオキシ−アルカン−１−スルホン酸類、アルキル基中に約１０〜２０炭素原子および約１〜３０モルのエチレンオキシドを含むアルキルエーテルスルフェート、アルキル基中に約１０〜２０炭素原子および約１〜３０モルのエチレンオキシドを含むオレフィンスルホネートの水溶性塩、約１２〜２４炭素原子を含むオレフィンスルホネートの水溶性塩、およびアルキル基中に約１〜３炭素原子およびアルカン部分に約８〜２０炭素原子を含むβ−アルコキシアルカンスルホネートである。
【００３２】
本発明の好ましい水溶性アニオン有機界面活性剤は、アルキル基中に約１１〜１４炭素原子を含む直鎖アルキルベンゼンスルホネート、獣脂の範囲（ｔａｌｌｏｗ  ｒａｎｇｅ）のアルキルスルフェート、ココナッツの範囲（ｃｏｃｏｎｕｔ  ｒａｎｇｅ）のアルキルグリセリルスルホネートおよびアルキル部分が約１４〜１８炭素原子を含み、エトキシル化の平均程度が１と６との間を変動するアルキルエーテルスルフェートを含む。
【００３３】
本発明に用いるのに特に好ましいアニオン界面活性剤は、以下のものを含む。直鎖Ｃ10〜Ｃ12アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、Ｃ10〜Ｃ12アルキルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミン塩、獣脂アルキル硫酸ナトリウム、ココナッツアルキルグリセリルエーテルスルホン酸ナトリウム、および約３〜約１０モルのエチレンオキシドと獣脂アルコールとの硫酸化された縮合生成物のナトリウム塩。
【００３４】
前述のいずれのアニオン界面活性剤も、本発明において別々に、または混合物として用いることができることは認識されるべきである。本発明の洗剤組成物に用いられるアニオン界面活性剤の混合物は、硫酸化アルキルナトリウムおよびカリウムから得られ、特に、獣脂またはココナッツ油のグリセリドを還元することによって生成される高級アルコール（Ｃ8〜Ｃ18炭素原子）を硫酸化することによって得られるもの、Ｃ8〜Ｃ20のパラフィンスルホン酸ナトリウムおよびカリウム、アルキル基が直鎖または分枝鎖構造中に約９〜約１５炭素原子を含むアルキルベンゼンスルホン酸ナトリウムまたはカリウム、および約２〜約１０モルのエチレンオキシドと獣脂アルコールの硫酸化縮合生成物のナトリウム塩である。
【００３５】
非イオン界面活性剤は、Ｃ10〜Ｃ20脂肪族アルコールおよびＣ6〜Ｃ12アルキルフェノールの水溶性エトキシレートを含む。
【００３６】
本発明に有用な半極性界面活性剤は、約１０〜２８炭素原子の１つのアルキル部分と、１〜約３炭素原子からなる群から選択される２つの部分とを含む水溶性アミンオキシド；約１０〜２８炭素原子の１つのアルキル部分と約１〜３炭素原子を含むアルキル基およびヒドロキシアルキル基からなる群から選択される２つの部分とを含む水溶性ホスフィンオキシド；および約１０〜２８炭素原子の１つのアルキル部分と１〜３炭素原子のアルキルおよびヒドロキシアルキル部分からなる群から選択される部分とを含む水溶性スルホキシドを含む。
【００３７】
両性界面活性剤は、脂肪族第２級および第３級アミンの誘導体または複素環第２級および第３級アミンの脂肪族誘導体を含み、ここで脂肪族部分は直鎖または分枝鎖であり、および脂肪族置換基の１つが約８〜１８炭素原子を含み、および少なくとも１つの脂肪族置換基がアニオン水溶性基を含む。
【００３８】
双性イオン性界面活性剤は、脂肪族第４級アンモニウム、ホスホニウム、およびスルホニウム化合物の誘導体を含み、ここで脂肪族部分は直鎖または分枝鎖であり、脂肪族置換基の１つが約８〜１８炭素原子を含み、および１つはアニオン水溶性基を含む。
【００３９】
Ｔｗｅｅｎシリーズ、オクチルフェノールシリーズ（Ｔｒｉｔｏｎ）、タージトール（ｔｅｒｇｉｔｏｌ）洗剤（ＮＰシリーズ）、ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）スルフィドナトリウム（ＳＤＳ）、Ｂｒｉｊ洗剤、ニアプロフ（ｎｉａｐｒｏｆｆ）アニオン洗剤などの一般的な研究室の界面活性剤および洗剤を本発明の実施に用いることがさらに想定される。
【００４０】
本発明に有用なビルダーは、任意の従来の無機および有機水溶性ビルダー塩、並びに、種々の水に不溶性の、いわゆる「シードされた（ｓｅｅｄｅｄ）」ビルダーを含む。
【００４１】
本発明に有用な無機洗剤ビルダーは、例えば、ホスフェート、ピロホスフェート、オルトホスフェート、ポリホスフェート、ホスホネート、カーボネート、ビカーボネート、ボレート、およびシリケートを含む。無機ホスフェートビルダーの特定の例は、三リン酸、リン酸およびヘキサメタリン酸のナトリウムおよびカリウムを含む。ポリホスホネートは、特に、例えばエチレンジホスホン酸のナトリウムおよびカリウム塩、エタン１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸のナトリウムおよびカリウム塩およびエタン−１，１，２−トリホスホン酸のナトリウムおよびカリウム塩を含む。これらおよび他のリンビルダー化合物の例は、（特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、および特許文献１７）に開示されており、参照により本明細書に組み込まれるものとする。本発明では、トリポリリン酸ナトリウムが特に好ましく、水溶性無機ビルダーが特に好ましい。
【００４２】
さらに、リン非含有金属イオン封鎖剤は、本発明において洗浄性ビルダーとして用いられるために選択される。リン以外の無機ビルダー材料の特定の例は、水溶性無機カーボネート、ビカーボネート、ボレートおよびシリケート塩を含む。アルカリ金属、例えば、ナトリウムおよびカリウム、カーボネート、ビカーボネート、ボレート（Ｂｏｒａｘ）およびシリケートは、本発明において特に有用である。
【００４３】
水溶性有機ビルダーもまた、本発明において有用である。例えば、アルカリ金属、アンモニウムおよび置換アンモニウムポリアセテート、カルボキシレート、ポリカーボネート、スクシネート、およびポリヒドロキシスルホネートが本発明の組成物および方法において有用なビルダーである。ポリアセテートおよびポリカルボキシレートビルダー塩の特定の例は、エチレンジアミン四酢酸、ニトリロ三酢酸、オキシジコハク酸、メリト酸、ベンゼンポリカルボン酸およびクエン酸の、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウムおよび置換アンモニウム塩を含む。
【００４４】
本発明の他の好ましい非リンビルダー材料（有機および無機双方）は、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、オキシジコハク酸ナトリウム、メリト酸ナトリウム、ニトロ三酢酸ナトリウム、およびエチレンジアミン四酢酸ナトリウム、それらの混合物を含む。
【００４５】
好ましくは、ブレンドは、水性溶液中で溶媒和化されるが、他の溶媒は、本発明に有用であることが意図される。例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコールを用いることができる。そのような、非水溶媒は、単独溶媒として使うことができるか、または混和性の場合には、水と組み合わせることができる。対象となる組成物は、溶媒和を促進させ、酸性またはアルカリ性の低下した溶液を与えるために緩衝液を含むことができる。
【００４６】
また、対象となる組成物は核酸酸化剤を含む。その薬剤は、核酸を酸化し、そしてそれにより、正常な相補的な塩基対形成を妨害する。その薬剤は、核酸も変質させ、その結果その増幅が不可能になる。適当な酸化剤は、次亜ハロゲン酸を含むがそれらに制限されない。適当な次亜ハロゲン酸はＨＯＢｒ、ＨＯＩおよびＨＯＣｌを含む。他の薬剤は、Ｈ2Ｏ2およびペルオキシナイトライトのような過酸化物を含むがこれらに制限されない。
【００４７】
好ましい酸化剤は、次亜塩素酸塩である。
【００４８】
本発明のブレンドにおいて有用な次亜塩素酸塩（漂白剤）は、ナトリウム、リチウム、カルシウムおよび二塩基性マグネシウムを含む。次亜塩素酸ナトリウムが好ましい。
【００４９】
一定の酸化剤は、多くの界面活性剤がするように、アルカリ性の溶液をもたらす。従って、例えば、次亜塩素酸ナトリウムのような次亜ハロゲン酸は、ｐＨ７を十分に上回る溶液をもたらす。しかしながら、より高いｐＨ値も、核酸の安定性に強い影響を与えることができ、したがって有益である。
【００５０】
もう１つの実施形態において、界面活性剤および酸化剤の組み合わせは、少なくとも約３０秒内に、汚染している核酸の、５０％を越える核酸の不活性化および除去を生ずる。関連した実施形態において、接触時間は、汚染する核酸の９０％を上回る核酸を増幅不能にし、および除去するのに十分な時間である。
【００５１】
関連した局面において、表面を少なくとも約２分にわたって溶液と接触させた場合、約５０％を越える汚染している増幅検出可能な核酸が除去される。さらに、２分の接触時間は、約９５％の汚染している増幅検出可能な核酸を増幅不能にし、そして除去する。
【００５２】
界面活性剤／酸化剤溶液の使用は、除去された（および望ましくない）核酸分子を、事実上再堆積させない。よりとりわけ、除染手順の間に界面活性剤が用いられた場合は、標的分子並びにアンプリコンを含む核酸分子が表面から取り除かれ、可溶性にされ、そして再堆積されないと考えられている。核酸分子と酸化剤溶液の接触は、核酸分子を酸化し、ダブルへリックス構造の永久的な不安定化を引き起こし、そして核酸を増幅不能にする。可溶化された核酸は、酸化剤により接触可能である。結果として生じる化学的に修飾された分子は、酵素による手段によって、もはや複製することができず、したがって核酸分子は増幅不能になる。本発明の界面活性剤／酸化剤溶液は、核酸分子を増幅不能にするのみならず、表面から容易に除去可能にする。
【００５３】
本発明の界面活性剤／酸化剤溶液の使用には、そのような溶液の表面に対する適用が含まれる。好ましくは、表面を溶液で濡らす。その溶液は、一定の時間、例えば、少なくとも約３０秒、好ましくは約１分、およびより好ましくは表面上の対象となる溶液が乾燥する時間の間中、約２分を上回る時間にわたって表面上に残される。次に、その表面を、水、水／アルコール混合物などのような、任意選択的に緩衝液処理された水性液で拭き取り、核酸分子を除去する。表面は、水などの溶媒ですすがれ、そして残留するいかなる界面活性剤／酸化剤溶液および残留する核酸分子も除去されるべきである。
【００５４】
一般的に、２２〜２８℃、およびより一般的には２４〜２６℃の範囲内にある室温で、表面と溶液を接触させることができる。しかしながら、この溶液は、０℃から約９７〜９９℃に変動する温度で効果的である。最適な温度は、用いられる界面活性剤および酸化剤に依存して調整可能である。緩衝液および塩のような適当な添加剤を添加して、より暖かいまたは冷たい温度で溶液の使用を確実にすることができる。関連した実施形態において、汚染の除去に好ましい温度は、約１０℃と約４０℃との間である。
【００５５】
次亜塩素酸ナトリウム単独では、ＤＮＡを除去するのに約５０％の効果しかないという制限を有する。実験に基づく証拠は、ターゲット核酸分子で汚染された核酸増幅機器に対する慣用の次亜塩素酸ナトリウム溶液の適用は、そのような汚染を引き起こす核酸分子を完全に除去しなかったことを示す。しかしながら、本発明に従う洗剤（ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標））／次亜塩素酸ナトリウムの使用は、汚染を引き起こす核酸分子を、より高い程度まで排除した。対照として、漂白剤単独の使用の後、洗剤／漂白剤溶液を、同様の機器に添加した。同様に、核酸増幅反応が実施された研究室から環境に関するデータが生じ、このデータは、本発明に従う界面活性剤／酸化剤溶液の使用が、慣用の次亜塩素酸ナトリウム溶液の適用と比較して核酸汚染を低減させることを示した。
【００５６】
溶液は、使用前に、短時間で調製されることが好ましい。従って、種々のタイプの、適当な量の界面活性剤および酸化剤の、予め包装されたものが想定される。そのような予め包装されたものは、界面活性剤、酸化剤または双方の、溶液への溶解を容易にすることが可能であり、および溶解可能なビヒクルのような、溶液への成分の送達のためのビヒクルを含んでいても良い。また、本発明は、適用に先立って混合するための別個の容器中に適当な量の界面活性剤および酸化剤を含むキットを含む。
【００５７】
一実施形態において、キットは、混合されたときに、増幅反応の表面上にある汚染している核酸を除去し、そしてヘリックスを不安定化するための非微粒子溶液が生じるような濃度で、本質的に界面活性剤からなる別個の容器と、本質的に酸化剤からなる別個の容器とを含む。関連した実施形態において、表面が除染溶液と接触される場合、望ましくない核酸は、酸化により増幅不能にされ、および約５０％を越える増幅検出可能な核酸が除去される。
【００５８】
もう１つの実施形態において、キットは、高級脂肪酸アルカリ金属セッケン、有機ビルダー塩から本質的になる別個の容器と、本質的に酸化剤からなる別個の容器とを含む。
【００５９】
以下の非制限的な実施例は、本発明に従う一定の表面に対する、溶液に関連した有効性および利点を示す。これらの実施例は、用途のみを示すためのものであり、および代替の実施形態が本発明の範囲内であることを意図するものである。
【実施例】
【００６０】
（実施例１：ＤＮＡ環境汚染の除去における漂白剤／ＡＬＣＯＮＯＸ溶液の有効性）
好ましいプロトコルは、一組の前洗浄用スワブを使用する工程、１％次亜塩素酸ナトリウム／０．７５％ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）洗剤溶液でその領域を洗浄する工程、一組の後洗浄スワブを使用する工程を伴う。スワブは、一般的に、データ収集の日に処理するが、２〜２７℃で貯蔵する場合、データ収集の４〜６日以内は保持し、そして使用することができる。スワブは、標準の核酸増幅緩衝溶液のような希釈液を含む、試験管のような適当な容器内に置かれ、希釈液中で約５〜１０秒にわたってかき混ぜた。容器の内壁でスワブを絞り、スワブ中に回収された任意の核酸を含む液体に等しい量を液体希釈液中に除去する。スワブを捨て、そして試験管を旋回振盪（ｖｏｒｔｅｘ）する。増幅方法による核酸の検出のために、試料を採取した。
【００６１】
本試験は、試験前／試験後の計画を用いて、ＤＮＡ除染剤として１％次亜塩素酸ナトリウム／０．７５％ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）洗剤溶液の有効性を評価した。試験前では、汚染された領域を１０回拭き取って、汚染の度合いを評価した。これらの領域は、次に１％次亜塩素酸ナトリウム／０．７５％ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）洗剤溶液で処理し、１０の試験後のスワブをデータ収集した。核酸の存在は、ＢＤＰｒｏｂｅＴｅｃ（登録商標）ＥＴテストキットを用いるストランド置換法（ｓｔｒａｎｄ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ）により、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（ＣＴ）およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ（ＧＣ）核酸を検出することであった。キット中に提供されるスワブ希釈液を用いた。陽性の汚染をモニタリングしたスワブの頻度が５０％減少すれば、有効な除染の指標と考えられる。＜２０００のＣＴ／ＧＣスコアは、実施されるようなストランド分離アッセイに対しては陰性であると考察される。
【００６２】
汚染された領域からのデータを、以下の表１に概略する。
【００６３】
【表１】
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【００６４】
【表２】
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【００６５】
この確認のための合格基準は、汚染をモニタリングした試料中の陽性の頻度が、少なくとも５０％減少することが必要とされる。個々の試験領域各々と、貯蔵データの組は、この基準を満たした。
【００６６】
これらのデータは、１％次亜塩素酸ナトリウム／０．７５％ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）洗剤溶液が、研究室の表面および装置からのＤＮＡ増幅産物の除去のための有用な薬剤であることを示す。
【００６７】
（実施例２：酸化剤としての過酸化物の使用）
過酸化水素をＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）と組み合わせて用いた。過酸化水素は、蒸留水中１％および３％の２種類の異なる濃度を用い、洗剤は同じ濃度で使用した。
【００６８】
【表３】
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【００６９】
（実施例３：洗浄前および洗浄後のアプリコンに対するスワブ試験の性能）
ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）および漂白剤の溶液を用いて、ＳＤＡ増幅アッセイで操作を行う機器を洗浄した。６００ｍｌの市販の漂白剤溶液（５％次亜塩素酸ナトリウム）を、３．５Ｌ容器に添加し、続いて２２．５ｇのＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）を添加することによって、溶液を調製した。温水（３０００ｍｌになるまで十分に）を添加して、汚染が疑われる機器の表面を隅々まで拭くために用いられる最終溶液を製造した。一定の領域をスワブで拭く前に、洗浄手順を３〜４回繰り返し、各々の洗浄の後、溶液とタオルを交換した。
【００７０】
スワブをスワブ試料希釈液に浸漬し、そして次に、アプリコンで汚染されていることが予め示されている異なる場所を隅々まで拭いた。漂白剤、洗剤および水を、実施例１のように添加した。表面拭き取るための手順も、手順を３回の代わりに４回繰り返すこと以外は、実施例１に規定されたものと同様にした。浸漬されたスワブを用いるアンプリコンのモニタリングは実施例１に記載したものと同様にした。
【００７１】
汚染された領域からのデータを、以下の表４に要約する。
【００７２】
【表４】
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【００７３】
機器から周辺機器は、汚染されていることが分かった。対象となる溶液で装置の各々の部分を徹底的に洗浄した後は、アンプリコンの汚染は見出されなかった。
【００７４】
（実施例４：機器における環境のスワブ試験）
機器および周辺機器における種々の領域をスワブで拭き取り、そしてＣＴ／ＧＣ  ＳＤＡアッセイを用いて試験した。結果を集めた後、機器および周辺機器を、ＡＬＣＯＮＯＸ（登録商標）および漂白剤の溶液を用いて洗浄した。その手順は、手順が２回繰り返される以外は実施例１と同様であった。
【００７５】
汚染された領域からのデータを、以下の表５に要約した。
【００７６】
【表５】
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【００７７】
対象となる溶液での洗浄を経た後、装置の全ての試験領域は、汚染されていないことがわかった。
【００７８】
（実施例５：追加試験）
汚染および除染に対して、ＳＤＡ機器を試験した。１４の領域を、次亜塩素酸１％溶液を含ませたスワブで拭き取った。実施例１において調製されたような対象となる溶液で洗浄した後、１０の領域を試験した。
【００７９】
漂白剤単独で試験した１４の部位のうち、７／１４が、ＧＣ陽性であり、０／１４がＣＴ陽性であった。一方で、対象となる溶液で洗浄された１０の領域のうち、ＣＴまたはＧＣ核酸を含む領域はなかった。
【００８０】
（実施例６：追加試験）
上記実施例に記載されたものと同様に、別の機器を試験した。洗浄する前に１２の部位を試験したが、３つの部位は機械の内側であり、洗浄することなく、以下の対象となる溶液にさらす試験をした。
【００８１】
【表６】
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【００８２】
本明細書に開示された実施形態に種々の変更をすることが可能であることが理解されるであろう。それ故に、上記の記載は、制限としてではなく、好ましい実施形態の単なる例示であると解釈されるべきである。当業者は、その他の変更が、本明細書に添付される特許請求の範囲の、範囲および精神の内で他の修飾が意図されるであろう。
【００８３】
本明細書に列挙される全ての特許文献および参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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