(57)【要約】細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを行うための試験片、およびこの試験片を作製および使用するための方法が提供される。この試験片は、商業的に、例えば、全血中の分析物の検出に関心のある場所での診断デバイスにおいて、使用可能である。本発明は、以下を備える試験片を提供する：（ａ）第１端部および第２端部を有するクロマトグラフィー片を含む第１のメンブラン；および（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター；ここで、該サンプルフィルターの該下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触し；該サンプルフィルターは、サンプル中の流体から該サンプル中の細胞を分離し得、そして該クロマトグラフィー片に、該流体を通過させ、そしてさらに、該試験片は、該クロマトグラフィー片の第２端部に向けた、該サンプルフィルターからの流体のラテラルフローを容易にする。
2004538453.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験片であって、以下：
（ａ）第１端部および第２端部を有するクロマトグラフィー片を含む第１のメンブラン；および
（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター
を備え、ここで、該サンプルフィルターの該下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触し；ここで、該サンプルフィルターは、サンプル中の流体から該サンプル中の細胞を分離し得、そして該クロマトグラフィー片に、該流体を通過させ、そしてさらに、ここで、該試験片は、該クロマトグラフィー片の第２端部に向けた、該サンプルフィルターからの流体のラテラルフローを容易にする、試験片。
【請求項２】
請求項１に記載の試験片であって、ここで、前記サンプルフィルターは、種々のサイズの細孔を含み、そして、ここで、前記サンプル中の細胞は、該サンプルフィルターにより保持され、そして前記サンプル中の流体は、該サンプルフィルターを通過する、試験片。
【請求項３】
請求項２に記載の試験片であって、ここで、前記サンプルフィルターは、第１の孔サイズを有する第１の細孔および第２の孔サイズを有する第２の細孔を含み、ここで、該第１の細孔は、該第２の細孔よりも大きく、そしてさらにここで、該第１の細孔は、該サンプルフィルターの上側表面に対して近く、そして該第２の細孔は、該サンプルフィルターの下側表面に対して近い、試験片。
【請求項４】
請求項１または２に記載の試験片であって、さらに、（ｃ）前記クロマトグラフィー片の第１端部に近接するサンプルパッドを備え、そしてここで、該サンプルパッドは、該クロマトグラフィー片に前記流体を通過させ、そしてさらにここで、前記試験片は、該クロマトグラフィー片の第２端部に向けた、該サンプルパッドからの該サンプル中の流体のラテラルフローを支持する、試験片。
【請求項５】
請求項３に記載の試験片であって、さらに、（ｃ）上側表面および下側表面を含むサンプルパッドを備え、ここで、該サンプルパッドの下側表面は、前記クロマトグラフィー片と毛管接触しており、そしてここで、該サンプルフィルターの下側表面が、該サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており、そしてさらにここで、該試験片は、該クロマトグラフィー片の第２の端部に向けた、該サンプルパッドからの該サンプル中の流体のラテラルフローを支持する、試験片。
【請求項６】
前記サンプルフィルターおよび前記サンプルパッドと毛管接触した選択性膜をさらに備える、請求項４または５に記載の試験片。
【請求項７】
前記が、前記サンプルフィルターの下に位置付けられる、請求項６に記載の試験片。
【請求項８】
前記選択性膜が、前記サンプルパッドの上部の上、または前記クロマトグラフィー片の上部の上に位置付けられる、請求項６に記載の試験片。
【請求項９】
前記選択性膜が、前記サンプル中の成分に選択的に結合し、そしてアッセイ環境から該成分を取出す薬剤を含む、請求項６に記載の試験片。
【請求項１０】
前記薬剤が、抗体、抗原、代謝生成物、ホルモン、酵素、ウイルス、プリオン、またはそれらの部分、およびこれらに結合する薬剤からなる群より選択される、請求項９に記載の試験片。
【請求項１１】
前記サンプルフィルターと前記クロマトグラフィー片との間に位置付けられた１つ以上のフィルターまたはメンブランをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項１２】
請求項４〜１１のいずれか一項に記載の試験片であって、さらに、以下：
（ｄ）上側表面および下側表面を含む結合体パッドであって、ここで、該結合体パッドは前記クロマトグラフィー片の第２の端部に、またはこの第２の端部の付近にあり、そしてここで、該結合体パッドの下側表面は、該クロマトグラフィー片と毛管接触している、結合体パッド；
（ｅ）上側表面および下側表面を含む試薬パッドであって、ここで、該試薬パッドの下側表面は、該結合体パッドの上側表面と毛管接触している、試薬パッド；ならびに
（ｆ）該クロマトグラフィー片の第１の端部での、かつ該結合体パッドから離れている前記サンプルパッドの側面に対する吸収パッドであって、該吸収パッドは、該クロマトグラフィー片と毛管接触している、吸収パッド；
を備え、そしてここで、該サンプルフィルターは、サンプル中の流体から細胞を分離し得、そして該試験片は、該結合体パッドに向けた、該サンプルパッドからの該サンプル中の流体のラテラルフローを支持する、試験片。
【請求項１３】
前記試薬パッドが、試薬をさらに含む、請求項１２に記載の試験片。
【請求項１４】
前記試薬が、緩衝液である、請求項１３に記載の試験片。
【請求項１５】
請求項１２に記載の試験片であって、前記結合体パッドが、該結合体パッドへの流体の適用の際に該結合体パッドから放出され得る結合体を含み、ここで、該結合体は、検出され得る分析物と結合して、検出可能なシグナルを形成し得る、試験片。
【請求項１６】
前記結合体が、分析物に結合し得る第１の結合薬剤を含む、請求項１２に記載の試験片。
【請求項１７】
前記結合薬剤が、抗体または抗原である、請求項１６に記載の試験片。
【請求項１８】
前記結合体が、第２の結合薬剤をさらに含む、請求項１６に記載の試験片。
【請求項１９】
前記第２の結合薬剤が、第１の結合薬剤または分析物のいずれかに結合する検出可能なマーカーを含む、請求項１８に記載の試験片。
【請求項２０】
前記検出可能なマーカーが定量可能である、請求項１９に記載の試験片。
【請求項２１】
前記結合体が、前記結合体パッドから流動して、前記サンプル由来の流体と接触し、そして固定された複合体を形成する、請求項１５に記載の試験片。
【請求項２２】
請求項１５に記載の試験片であって、ここで、前記結合体パッドが、前記サンプルフィルターと前記クロマトグラフィー片の第２端部との間に置かれ、そして該サンプルフィルターから該結合体パッドへの流体の流動は、該結合体パッドから前記結合体を放出する、試験片。
【請求項２３】
前記結合体パッドが、前記サンプルフィルターの下に置かれ、そして該サンプルフィルターと毛管接触している、請求項１５に記載の試験片。
【請求項２４】
前記クロマトグラフィー片が、接着層および該接着層のための裏材をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項２５】
前記メンブランが、ニトロセルロースを含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項２６】
前記サンプルフィルターが、血球／血漿分離メンブランである、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項２７】
前記サンプルが、流体および細胞を含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項２８】
請求項１〜２６のいずれか１項に記載の試験片であって、前記サンプルが、血液サンプル、唾液サンプル、尿サンプル、リンパ組織から得たサンプル、脊髄穿刺から得たサンプル、腹膜腔から得たサンプル、関節から得た滑液、または肺からの流体である、試験片。
【請求項２９】
前記サンプルが、赤血球である、請求項２８に記載の試験片。
【請求項３０】
前記サンプルフィルターが、該サンプルを接触する親水性表面を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項３１】
前記サンプルフィルターが、Ｓ／Ｇメンブランを含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の試験片。
【請求項３２】
試験片を作製する方法であって、以下の工程：
（ａ）第１の端部および第２の端部を有するクロマトグラフィー片を提供する工程；および
（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルターを提供する工程、
を包含し、
ここで、該サンプルフィルターの下側表面は、該クロマトグラフィー片と毛管接触しており；ここで、該サンプルフィルターは、サンプル中の流体から該サンプル中の細胞を分離し得、そして該クロマトグラフィー片に該流体を通過させ、そしてさらにここで、該試験片は、該クロマトグラフィー片の第２の端部へ向けた、該サンプルフィルターからの流体のラテラルフローを促進する、方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
（ｃ）前記サンプルフィルターと前記クロマトグラフィー片との間にサンプルパッドを置く工程を包含し、
ここで、該サンプルパッドは、該サンプルフィルターおよび該クロマトグラフィー片と毛管接触し、そして流体が、毛細管または浸透圧の力により、該サンプルフィルターから該サンプルパッドを通って、該クロマトグラフィー片へと流動する、方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
（ｄ）前記クロマトグラフィー片上に結合体パッドを提供する工程を包含し、
ここで該結合体パッドは、該クロマトグラフィー片と毛管接触し、そして流体が、毛細管または浸透圧の力により、該結合体パッドを通って、該クロマトグラフィー片へと流動する、方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
（ｅ）前記結合体パッド上に試薬パッドを提供する工程工程を包含し、
ここで、該試薬パッドは、該結合体パッドと毛管接触し、そして該試薬パッドから該結合体パッドへの流体の流動を可能にする、方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
（ｆ）前記サンプルフィルターと前記クロマトグラフィー片との間に選択性膜を提供する工程を包含し、
ここで、該選択性膜は、該サンプルフィルターおよび該クロマトグラフィー片と毛管接触し、そして該サンプルフィルターから該クロマトグラフィー片への流体の流動を可能にする、方法。
【請求項３７】
サンプル中の分析物の検出のためにラテラルフローアッセイを行うために、該サンプル中の流体から細胞を分離する方法であって、以下の工程：
（ａ）請求項１〜３１のいずれかに記載の試験片を提供する工程；および
（ｂ）該サンプルをサンプルフィルター上にアプライして、それにより、サンプル中の流体から細胞を分離する工程、
を包含する、方法。
【請求項３８】
細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを行うための方法であって、以下の工程：
（ａ）請求項１５〜３１のいずれかに記載の試験片を提供する工程；
（ｂ）該サンプルをサンプルフィルターにアプライする工程；
（ｃ）該サンプルフィルターから該クロマトグラフィー片へと、該クロマトグラフィー片の第２の端部に向けて、流体を流動させる工程；
（ｄ）緩衝液をアプライして、結合体パッド中の結合体を放出する工程；
（ｅ）該サンプル中の分析物に向けて該結合体を流動させて、複合体を形成する工程；および
（ｆ）該複合体の存在を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の方法であって、さらに以下の工程：
（ｇ）形成された複合体の量を定量する工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、医療分野および診断分野に関する。特に、本発明は、全細胞を含有するサンプル中の分析物（例えば、血液サンプル中の血液細胞）の検出のためのラテラルフロー（ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ）アッセイに関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ＰｒａｘＳｙｓ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓは、米国特許第６，１３６，６１０号に記載されるような、ＲｅＬＩＡ技術を開発した。ＰｒａｘＳｙｓデバイスは、分析されるサンプルが全細胞（例えば、赤血球細胞を含有する血液サンプル）を含む場合に使用するのに適していない試験片を含む。従って、全細胞を含有するサンプル中の分析物の検出のために使用され得る試験片に対する満たされていない必要性が残っている。
【０００３】
米国特許第５，２４０，８６２号は、血液分離物を記載する。しかし、この分離法は、デバイスにおいて分離膜および収集膜の使用、収集膜からの分離膜の除去、およびさらなる分析のための収集膜の使用を必要とする。この方法は、扱いにくく、ラテラルフローアッセイに使用するのに適していない。
【０００４】
従って、全細胞を含有するサンプル中の分析物の検出のためのより簡単な方法に対する必要性もまた、残っている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
満たされていない必要性に取り組み、そして先行技術の試験片の欠点を克服するために、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための、商業的に使用可能な試験片が、本明細書中で提供される。特定の実施形態において、この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており、サンプルフィルターは、サンプル中の流体からサンプル由来の細胞を分離し得、そしてこの流体が、クロマトグラフィー片を通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部への流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【０００６】
本発明の別の実施形態において、分析され得るサンプルが体液サンプルである、本明細書中に記載されるような試験片が提供される。本発明のさらなる実施形態において、サンプルは、血液サンプル、唾液サンプル、尿サンプル、リンパ組織から採取されたサンプル、脊椎穿刺から採取されたサンプル、または腹膜腔から採取されたサンプル、関節由来の滑膜液、もしくは肺由来の体液である。
【０００７】
本発明の別の実施形態において、サンプルフィルターが、サンプルと接触する表面を備え、そしてその表面は親水性である、本明細書中に記載されるような試験片が提供される。
【０００８】
本発明のさらに別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており、そしてサンプルフィルターは、異なる孔サイズの孔を備え、サンプル由来の細胞がサンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体がサンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【０００９】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面、ならびに第１孔および第２孔を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており、第１孔は、サンプルフィルターの上側表面により近く、第２孔は、サンプルフィルターの下側表面により近く、第１孔は、第１孔サイズを有し、第２孔は第２孔サイズを有し、そして第１孔サイズは、第２孔サイズよりも大きく、サンプルフィルターは、サンプル由来の細胞が、サンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体が、サンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１０】
本発明のなお別の実施形態において、赤血球を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており；そしてサンプルフィルターは、サンプル中の流体からサンプル中の赤血球細胞を分離し得、そして流体が、クロマトグラフィー片を通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部への流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１１】
本発明のさらに別の実施形態において、赤血球を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており、サンプルフィルターは、異なる孔サイズの孔を備え、サンプル由来の赤血球細胞がサンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体がサンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１２】
本発明の別の実施形態において、赤血球細胞を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片がさらに提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；ならびに（ｂ）上側表面および下側表面、ならびに第１孔および第２孔を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触しており、第１孔は、サンプルフィルターの上側表面により近く、第２孔は、サンプルフィルターの下側表面により近く、第１孔は、第１孔サイズを有し、第２孔は第２孔サイズを有し、そして第１孔サイズは、第２孔サイズよりも大きく、サンプルフィルターは、サンプル由来の細胞が、サンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体が、サンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１３】
本発明のさらに別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており；そしてサンプルフィルターは、サンプル中の流体からサンプル中の細胞を分離し得、そしてこの流体が通過するのを可能にし、そしてサンプルパッドはまた、流体がクロマトグラフィー片の方に通過するのを可能にし、そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１４】
本発明の別の実施形態において、サンプルは血液サンプルであり、細胞は血液細胞である、本明細書中に記載される試験片が提供される。
【００１５】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片がさらに提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており；サンプルフィルターは、異なる孔サイズの孔を備え、サンプル由来の細胞がサンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体がサンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片がさらに提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面ならびに第１孔および第２孔を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており、第１孔は、サンプルフィルターの上側表面により近く、第２孔は、サンプルフィルターの下側表面により近く、第１孔は第１孔サイズを有し、第２孔は第２孔サイズを有し、そして第１孔サイズは、第２孔サイズよりも大きく、サンプルフィルターは、サンプル由来の細胞が、サンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体が、サンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００１７】
本発明のさらに別の実施形態において、選択性膜をさらに備える、本明細書中に記載されるような試験片を提供する。選択性膜は、サンプルフィルターの下に配置される。本発明の実施形態において、サンプルパッドの上部に置かれた選択性膜が提供される。本発明の別の実施形態において、選択性膜は、クロマトグラフィー片の上部に置かれる。いかなる場合も、選択性膜は、サンプルフィルターおよびサンプルパッドまたはクロマトグラフィー片と毛管接触しており、流体が、毛細管力または浸透力の下で選択性膜を通過するのを可能にする。選択性膜は、サンプル中の成分に選択的に結合し得、アッセイ環境からその成分を効果的に除去する薬剤を含む。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、１つ以上の目的のために、サンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間に１つ以上の他のフィルターまたは膜が、さらに提供される。ただし、さらなる１つ以上の膜は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片への流体の毛細管流または浸透流を損なわず、そして合わせたフィルターまたは膜の高さは、試験片がカセットに適合し、機器において読み取られる能力を損なわない。
【００１９】
本発明の実施形態において、上記の選択性膜は、抗体、抗原、代謝産物、ホルモン、酵素、ウイルス、プリオン、もしくはそれらの部分である薬剤、またはそれらに結合する薬剤を含む。
【００２０】
本発明のさらに別の実施形態において、赤血球細胞を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており、そしてサンプルフィルターは、サンプル中の流体からサンプル中の赤血球細胞を分離し得、そして流体が通過するのを可能にし、サンプルパッドはまた、流体がクロマトグラフィー片を通過するのを可能にし、そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、また、サンプルパッドが流体を接触する表面を有し、その表面が親水性である、本明細書中に記載されるような試験片が提供される。
【００２２】
本発明の別の実施形態において、赤血球細胞を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触しており、サンプルフィルターは、異なる孔サイズの孔を備え、サンプル由来の赤血球細胞がサンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体がサンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００２３】
本発明のさらに別の実施形態において、血液細胞を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイを実施するための試験片が提供される。この試験片は、（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１膜（このクロマトグラフィー片は、第１端部および第２端部を有する）；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近くに位置するサンプルパッド（このサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、サンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触している）；ならびに（ｃ）上側表面および下側表面、ならびに第１孔および第２孔を有するサンプルフィルター（このサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドと毛管接触しており、第１孔は、サンプルフィルターの上側表面により近く、第２孔は、サンプルフィルターの下側表面により近く、第１孔は、第１孔サイズを有し、第２孔は第２孔サイズを有し、そして第１孔サイズは、第２孔サイズよりも大きく、サンプルフィルターは、サンプル由来の赤血球細胞が、サンプルフィルターに保持され、そしてサンプル中の流体が、サンプルフィルターを通過するのを可能にし；そして試験片は、サンプルパッドからクロマトグラフィー片の第２端部へのサンプル中の流体のラテラルフローを補助する）を備える。
【００２４】
さらに、本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するための試験片が提供される。ここでこの試験片は、以下：（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１の膜であって、ここでこのクロマトグラフィー片が、第１端部および第２端部を備える、第１の膜；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近傍に配置されるサンプルパッドであって、ここでこのサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこのサンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、サンプルパッド；（ｃ）上側表面および下側表面を備えるサンプルフィルターであって、ここでこのサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触する、サンプルフィルター；（ｄ）クロマトグラフィー片の第２端部にまたはその近傍に位置する結合体パッドであって、ここでこの結合体パッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこの結合体パッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、結合体パッド；（ｅ）上側表面および下側表面を備える試薬パッドであって、ここでこの試薬パッドの下側表面は、結合体パッドの上側表面と毛管接触する、試薬パッド；および（ｆ）クロマトグラフィー片の第１端部で結合体パッドから離れたサンプルパッドの一方の側に位置する吸収パッドであって、ここでこの吸収パッドは、クロマトグラフィー片と毛管接触する、吸収パッド、を備え；そしてここで、このサンプルフィルターは、サンプル中の流体から細胞を分離することが可能であり、そして試験片は、サンプルパッドから結合体パッドに向かうサンプル中の流体のラテラルフローを支持する。
【００２５】
さらに、本発明の１つの実施形態において、試薬パッドが結合体パッドから結合体を放出するための試薬（例えば、緩衝液）の適用に適している、本明細書中に記載される試験片が提供される。
【００２６】
本発明のさらなる実施形態において、サンプルフィルターと同じであり得るかまたは異なり得る、試薬パッドが提供される。試薬パッドがサンプルフィルターと同じである場合、サンプルは、結合体パッドから結合体を放出するための試薬パッドに適用され得るが、このサンプルは、結合体と反応して、アッセイの実施のためのクロマトグラフィー片上の流体の毛管流または浸透流を損なう、いずれの複合体も形成することはない場合のみである。
【００２７】
本発明の別の実施形態において、全細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するための試験片が提供され、ここでこの試験片は、以下：（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１の膜であって、ここでこのクロマトグラフィー片が、第１端部および第２端部を備える、第１の膜；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部に配置されるサンプルパッドであって、ここでこのサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこのサンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、サンプルパッド；（ｃ）上側表面および下側表面を備えるサンプルフィルターであって、ここでこのサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触し、そしてここでこのサンプルフィルターは、種々の孔サイズを備え、そして細胞をこのサンプルフィルター中に保持し、そしてこのサンプルフィルターを通して流体を通過させる、サンプルフィルター；（ｄ）クロマトグラフィー片の第２端部に位置する結合体パッドであって、ここでこの結合体パッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこの結合体パッドの下側表面は、クロマトグラフィー片の少なくとも一部と毛管接触する、結合体パッド；（ｅ）上側表面および下側表面を備える試薬パッドであって、ここでこの試薬パッドの下側表面は、結合体パッドの上側表面と毛管接触する、試薬パッド；および（ｆ）クロマトグラフィー片の第１端部で結合体パッドから離れたサンプルパッドの一方の側に位置する吸収パッドであって、ここでこの吸収パッドは、クロマトグラフィー片と毛管接触する、吸収パッド、を備え、そしてここで、試験片は、サンプルパッドから結合体パッドに向かうサンプル中のラテラルフローを支持する。
【００２８】
さらに、本発明の別の実施形態において、細胞全体および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するための試験片が提供され、ここで、この試験片は、以下：（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１の膜であって、ここでこのクロマトグラフィー片が、第１端部および第２端部を備える、第１の膜；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部に配置されるサンプルパッドであって、ここでこのサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこのサンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、サンプルパッド；（ｃ）上側表面および下側表面ならびに第１の孔および第２の孔を備えるサンプルフィルターであって、ここでこのサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触し、第１の孔は、サンプルフィルターの上側表面に接近しており、そして第２の孔は、サンプルフィルターの下側表面に接近しており、第１の孔は第１の孔サイズを有し、そして第２の孔は第２の孔サイズを有し、そして第１の孔サイズが第２の孔サイズより大きい場合、サンプルフィルターは、細胞をこのサンプルフィルター中に保持し、そしてこのサンプルフィルターを通して流体を通過させる、サンプルフィルター；（ｄ）クロマトグラフィー片の第２端部に位置する結合体パッドであって、ここでこの結合体パッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこの結合体パッドの下側表面は、クロマトグラフィー片の少なくとも一部と毛管接触する、結合体パッド；（ｅ）上側表面および下側表面を備える試薬パッドであって、ここでこの試薬パッドの下側表面は、結合体パッドの上側表面と毛管接触する、試薬パッド；および（ｆ）クロマトグラフィー片の第１端部で結合体パッドから離れたサンプルパッドの一方の側に位置する吸収パッドであって、ここでこの吸収パッドは、クロマトグラフィー片と毛管接触する、吸収パッド、を備え、そしてここで、試験片は、サンプルパッドから結合体パッドに向かうサンプル中の流体のラテラルフローを支持する。
【００２９】
本発明の別の実施形態において、血液細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するための試験片がさらに提供され、ここで、この試験片は、以下：（ａ）クロマトグラフィー片を含む第１の膜であって、ここでこのクロマトグラフィー片が、第１端部および第２端部を備える、第１の膜；（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部に配置されるサンプルパッドであって、ここでこのサンプルパッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこのサンプルパッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、サンプルパッド；（ｃ）上側表面および下側表面を備えるサンプルフィルターであって、ここでこのサンプルフィルターの下側表面は、サンプルパッドの上側表面と毛管接触し、このサンプルフィルターは、このサンプル中の流体から赤血球を分離し得る、サンプルフィルター；（ｄ）クロマトグラフィー片の第２端部に位置する結合体パッドであって、ここでこの結合体パッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこの結合体パッドの下側表面は、クロマトグラフィー片の少なくとも一部と毛管接触する、結合体パッド；（ｅ）上側表面および下側表面を備える試薬パッドであって、ここでこの試薬パッドの下側表面は、結合体パッドの上側表面と毛管接触する、試薬パッド；および（ｆ）クロマトグラフィー片の第１端部で結合体パッドから離れたサンプルパッドの一方の側に位置する吸収パッドであって、ここでこの吸収パッドは、クロマトグラフィー片と毛管接触する、吸収パッド、を備え、そしてここで、試験片は、サンプルパッドから結合体パッドに向かうサンプル中の流体のラテラルフローを支持する。
【００３０】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される試験片がさらに提供され、この試験片は、以下：（ｄ）サンプルパッドとクロマトグラフィー片の第２端部との間に位置する結合体パッドであって、ここでこの結合体パッドは、上側表面および下側表面を備え、そしてこの結合体パッドの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触する、結合体パッド；および（ｆ）クロマトグラフィー片の第２端部に位置する吸収パッドであって、ここでこの吸収パッドは、クロマトグラフィー片と毛管接触する、吸収パッド、をさらに備え、そしてここで、試験片は、サンプルパッドから結合体パッドに向かうサンプル中の流体ラテラルフローを支持し得る。
【００３１】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのクロマトグラフィー片に対する免疫アッセイの実施に適する、本明細書中に記載される試験片が提供される。本発明の１つの局面において、この試験片は、流体を結合体パッドに適用する際に結合体パッドから放出され得る結合体を含み、ここでこの結合体は、分析物の存在を示す、検出可能なシグナルを得るように検出される分析物と組み合わせられ得る。本発明の別の局面において、結合体は、分析物に結合し得る第１の結合薬剤を含む。分析物が抗体である場合、第１の結合薬剤の例として、抗体および抗原が挙げられる。本発明のさらなる局面において、結合体は、第２の結合薬剤を含み、ここで、この第２の結合薬剤は、検出マーカーを含み、そして第１の結合薬剤または分析物のいずれかに結合する。
【００３２】
本発明のさらなる実施形態において、検出シグナルは、定量され得る。このような例において、本発明のイムノアッセイは、定量的イムノアッセイである。
【００３３】
本発明のさらに別の実施形態において、本明細書中に記載される試験片が提供され、ここで、このクロマトグラフィー片は、クロマトグラフィー片の第１端部の近傍に位置するサンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部までの流体の毛管流を支持し、そしてクロマトグラフィー片の第２端部からクロマトグラフィー片の第１端部に向かう、結合体パッドから放出された結合体の毛管流を支持して、結合体がサンプルからの流体と接触するようになり、固定された複合体を形成させ、複合体の検出を可能にする。
【００３４】
本発明のさらに別の実施形態において、結合体パッドが、イムノアッセイを可能かつ容易にするようなクロマトグラフィー片上の任意の適切な位置に配置される、本明細書中に記載される試験片がまた適用される。
【００３５】
本発明のさらに別の実施形態において、サンプルフィルターとクロマトグラフィー片の第２端部との間に配置される結合体パッドが提供され、そしてこのクロマトグラフィー片は、結合体を放出するような、サンプルフィルターから結合体パッドへの流れを支持する。
【００３６】
本発明のさらなる実施形態において、結合体パッドが提供され、この結合体パッドは、サンプルフィルターの下の位置に存在し、そしてサンプルフィルターおよびクロマトグラフィー片と毛管接触し、サンプルフィルターから結合体パッドを通ってクロマトグラフィー片へ流体が流れることを可能にする。
【００３７】
本発明の１つの実施形態において、クロマトグラフィー膜、接着層および接着層の裏材（ｂａｃｋｉｎｇ）を備える、クロマトグラフィー片が提供される。
【００３８】
本発明の１つの実施形態において、ニトロセルロース製のクロマトグラフィー膜が提供される。
【００３９】
本発明のさらに別の実施形態において、Ｓｐｅｃｔｒａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．から入手可能なＳ／Ｇとコードされる、赤血球／血漿分離膜であるサンプルフィルターが提供される。
【００４０】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するための試験片の製造方法がさらに提供され、この製造方法は、以下：（ａ）第１端部および第２端部を有するクロマトグラフィー片を提供する工程；および（ｂ）クロマトグラフィー片の第１端部の近傍に上側表面および下側表面を備えるサンプルフィルターを提供する工程、を包含し、ここで、サンプルフィルターの下側表面は、クロマトグラフィー片と毛管接触し、流体の流れをサンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間で毛管接触させ、ここで試験片は、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片の第２端部までの流体のラテラルフローを支持する。
【００４１】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される試験片の製造方法がさらに提供され、この製造方法は、さらに以下：（ｃ）サンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間にサンプルパッドを配置する、工程を包含し、ここでサンプルパッドが、サンプルフィルターおよびクロマトグラフィー片と毛管接触し、そして流体は、毛管力または浸透圧によって、サンプルフィルターからサンプルパッドを通ってクロマトグラフィー片まで流れ得る。
【００４２】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される試験片の製造方法がさらに提供され、この製造方法は、さらに以下：（ｄ）クロマトグラフィー片上に結合体パッドを提供する工程、を包含し、ここで結合体パッドがクロマトグラフィー片と毛管接触され、そして流体は、毛管力または浸透圧によって、結合体パッドを通ってクロマトグラフィー片へ流れ得る。
【００４３】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される試験片の製造方法がさらに提供され、この製造方法は、さらに以下：（ｅ）結合体パッド上に試薬パッドを提供する工程、を包含し、ここで、試薬パッドは、結合体パッドと毛管接触され、そして試薬パッドから結合体パッドへの流体流れを可能にする。
【００４４】
本発明のさらなる実施形態において、本明細書中に記載される試験片の製造方法が提供され、この製造方法は、さらに以下：（ｆ）サンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間に選択性膜を提供する工程、を包含し、ここで選択性膜は、サンプルフィルターおよびクロマトグラフィー片と毛管接触され、そしてサンプルフィルターからクロマトグラフィー片への流体の流れを可能にする。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、サンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施するためのサンプル中の流体から細胞を分離する方法をまた提供し、この方法は以下：（ａ）本明細書中に記載される試験片を提供する工程；および（ｂ）サンプルフィルター上にサンプルを適用する工程、を包含する。
【００４６】
本発明の別の実施形態において、細胞および流体を含むサンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローを実施する方法をさらに提供し、この方法は以下：（ａ）本明細書中に記載される試験片を提供する工程；（ｂ）サンプルフィルター上にサンプルを適用する工程；（ｃ）サンプルフィルターからクロマトグラフィー片へ、そしてクロマトグラフィー片の第２端部に向かう流体の流れを可能にする工程；（ｄ）結合体パッドにおいて結合体を放出するための緩衝液を適用する工程；（ｅ）サンプル中の分析物に向かう結合体の流れを可能にし、複合体を形成する工程；および（ｆ）複合体の存在を検出する工程、を包含する。
【００４７】
本発明の別の実施形態において、上記のラテラルフローを実施する方法をさらに提供し、この方法はさらに以下：（ｇ）形成された複合体の量を定量する工程を包含する。
【００４８】
本発明のこれらおよび他の、局面および実施形態は、より詳細に特定の手順または組成物を記載する、本明細書中に示される以下の発明の詳細な説明、添付の図面および種々の参考を参照する際に、明らかになる。
【００４９】
（発明の詳細な説明）
本発明の試験片が、効果的かつ効率的にサンプル中の流体から細胞全体を分離し得、そして定性的および定量的にサンプル中の分析物を検出するために使用し得ることが発見されている。本発明の試験片は、治療診断（例えば、医院または診療所において）デバイスの要点として商業的に使用可能である。本明細書中に記載されるデバイスおよび方法は、例えば、感染因子（ＨＩＶおよびＨＣＶを含む）ならびに他の分子（例えば、デオキシピロジノリン、ヒト血清アルブミン、薬物の乱用、前立腺特異的抗原のようなタンパク質マーカー、乳酸デヒドロゲネートのような腎疾患タンパク質、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのような妊娠関連ホルモンまたは受精能関連ホルモンおよび尿路感染のマーカー）の検出に有用である。治療薬物、ホルモン、前立腺特異的抗原のような癌マーカー、心臓マーカー（トロポニンＩ、トロポニンＴ、ＣＫＭＢ）およびα−フェトプロテインのような血液に含まれる分析物の決定は、本発明に特に適している。さらに、このサンプルは、例えば、全血であり得る。したがって、本発明のデバイスおよび方法は、特定の分析物の存在について種々の流体（例えば、尿、唾液、汗または粘液）をアッセイするために適切であるが、血液が試験流体（例えば、指の穿刺（ｆｉｎｇｅｒ  ｓｔｉｃｋ）のような方法によって回収される場合の小さいサンプル容量を含む）であるアッセイに特に適切である。
【００５０】
本明細書および請求項において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容が明らかに他を示さない限り、複数の参照を含む。故に、例えば、「サンプルフィルター（ａ  ｓａｍｐｌｅ  ｆｉｌｔｅｒ）」は、１つ以上のサンプルフィルターを含む。
【００５１】
種々の例示的な図および方法への参照が、本明細書中でなされている。本明細書中に記載されるデバイスの構成要素が異なって構成され得ること、またはこの構成要素の異なる組合せが、使用され得ることが理解されるべきである。同様に、本方法の工程の順序が、これらの例から変わり得ることが理解されるべきである。
【００５２】
図面を参照して、図１は、本発明の試験片の１つの実施形態の側面図である。ポートＩ（１）は、サンプルフィルター（２）上へのサンプルの適用のためのものであり、これは、サンプルパッド（３）および（必要に応じて）さらなる膜（４）（これは、選択性膜であり得る）の上に位置する。このサンプルフィルターは、任意の適切な材料、例えば、流体から細胞（例えば、血球）を濾過し得る疎水性材料で作られ得る。市販のフィルターまたは膜（例えば、ガラス微小繊維フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ、Ｋｅｎｔ、ＵＫまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＰｌａｓｍａＳｅｐ（登録商標）（Ｗｈａｔｍａｎ）および／またはＳｐｅｃｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手可能なＣ／Ｓ膜、Ｃ／Ｑ膜、Ｓ／Ｇ膜などのようなフィルター）が、本明細書中に記載されるデバイスおよび方法における使用に適応され得る。好ましい実施形態において、このサンプルフィルターは、Ｓｐｅｃｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＵＳＡ，Ｗｈｉｔｅｓｔｏｎｅ，ＶＡ，ＵＳＡからの１つ以上のＳ／Ｇ膜を備える。サンプルフィルターの選択は、本明細書中に記載の教示を使用して、例えば、所望の流速および／または分離能を達成するように作製され得る。サンプル適用ゾーンは、疎水性材料であっても親水性材料であってもよい。特定の実施形態において、試験片システムへのサンプルの吸収を促進するために親水性である。本明細書中に記載される任意のデバイスにおいて、１つより多くのサンプルフィルターが、使用され得る。
【００５３】
選択性膜（４）は、クロマトグラフィー片（９）上に位置し得、クロマトグラフィー片（９）は、必要に応じて、接着層（１１）および接着層（１１）のためのプラスチック裏材（１２）を備え得る多層化裏材パッド（１０）によって支持される。代表的には、この裏材は、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレンまたは他の非吸収性疎水材料のような疎水性の無孔の材料（この上にこのデバイスの吸収剤部分が置かれる）である。適切な疎水性材料の限定的でない例としては、ポリテトラフルオロエチレンおよびパーフルオロエチレンおよびシラン化剤のような疎水性材料で表面処理された材料が挙げられる。
【００５４】
吸収剤パッド（５）がまた図１に示される。吸収剤パッド（５）は、ポートＩ（１）に近接して、好ましくはクロマトグラフィー片（９）上に位置する。吸収剤パッドは、好ましくは、親水性であり、任意の数の材料（セルロース、乾燥剤で処理されたセルロースおよび界面活性剤で処理された多孔性ポリマーを含む）に由来し得る。市販の材料（例えば、Ｗｈａｔｍａｎから入手可能な材料）が、本明細書中に記載のデバイスおよび方法において使用され得る。
【００５５】
サンプルまたは緩衝液のような試薬のいずれかをサンプルフィルター（２）上に適用するためのポートＩＩ（６）は、クロマトグラフィー片（９）の他方の端部にある。緩衝液パッド（７）は、一般的に、上のサンプルフィルター（２）と下の結合体パッド（８）との間に置かれる。結合体パッド（８）は、好ましくはクロマトグラフィー片（９）と毛管接触（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｃｏｎｔａｃｔ）している。
【００５６】
図２は、本発明の試験片の１実施形態の平面図であり、サンプル中の分析物の検出のための例示的なイムノアッセイの構成要素の位置を示す。図２中で右から左に以下が示される：吸収剤パッド（５）；ポートＩ（１）（サンプル（１３）が好ましく置かれる）；サンプル中の分析物を捕捉するための捕捉バンド（１４）、この片側または両側は、必要に応じて、例えば、ポジティブコントロールおよび／またはネガティブコントロールの位置に対するコントロール線（１５）である。ポート２（６）および（例えば、金結合体化抗体または抗原を含む）結合体パッド（１６）は、コントロール線（１５）の左側にある。
【００５７】
結合体パッドは、例えば、疎水性または親水性の吸収剤、多孔性材料（例えば、ガラス繊維）、ポリエステルあるいは他の編まれた合成材料または編まれていない合成材料（これを通って、流体試験サンプルが流れ得る）であり得、そして１つ以上の標識された特異的結合パートナーの１つ以上の移動可能結合体を含み得る。特異的結合パートナー（例えば、抗体）は、例えば、酵素、発光団（ｆｌｕｏｒｏｆｏｒ）、放射活性同位体または直接粒子標識（例えば、金粒子または色づけされたラテックス粒子）のような検出可能標識で標識され得る。
【００５８】
図３は、本発明に従う試験片の１実施形態の平面図であり、サンプル（１３）からの流体のラテラルフローの方向（１７）および結合体パッド（８）からの結合体（１６）のラテラルフローの方向（１８）を示す。
【００５９】
図４は、本発明の試験片の別の実施形態の側面図である。この実施形態において、サンプルフィルター（２）は、結合体パッド（８）の上に置かれて示され、そしてこの結合体パッド（８）は、クロマトグラフィー片（９）上に置かれて示され、このクロマトグラフィー片（９）は、必要に応じて、裏材（１９）および接着層（１１）ならびに接着層（１１）のためのプラスチック裏材（１２）を有し得る。吸収剤パッド（５）は、クロマトグラフィー片（９）の反対の端部に置かれて示される。
【００６０】
本明細書中に記載される試験片および試験片を構成する構成要素の全体サイズは、大きく変動し得る。特定の実施形態において、クロマトグラフィー片は、長さ約０．１〜５ｃｍの間（またはそれらの間の任意の値）、好ましくは約０．５〜２．５ｃｍの間（またはそれらの間の任意の値）、およびさらにより好ましくは長さ約１ｃｍである。明白であるように、この片の構成要素は、従って、例えば、１ｃｍのクロマトグラフィー片内のサイズに作られ、サンプルフィルターは、幅約５〜１０ｍｍ（またはそれらの間の任意の値）および長さ１０〜２０ｍｍ（またはそれらの間の任意の値）であり得る。
【００６１】
このような試験片を作製する方法は、本明細書中の下記（例えば、実施例を参照のこと）、利用可能な参考文献および本明細書中に援用される参考文献中に示される。例えば、本明細書中に記載される任意の試験片は、第１端部および第２端部を有するクロマトグラフィー片を提供すること；およびサンプルフィルターの下側表面がクロマトグラフィー片と毛管接触し、そしてこのサンプルフィルターが、（ｉ）サンプル中の流体からサンプル中の細胞を分離し得、（ｉｉ）流体がクロマトグラフィー片を通過することを可能にし、そして（ｉｉｉ）クロマトグラフィー片の第２端部に向かっての流体のラテラルフローを促進するように、上側表面および下側表面を有するサンプルフィルターを提供することによって作製され得る。存在する場合、サンプルパッドは、好ましくはサンプルパッドが、サンプルフィルターおよびクロマトグラフィー片と毛管接触し、そして流体が毛管力または浸透圧力によってサンプルフィルターからサンプルパッドを通ってクロマトグラフィー片への流動するように、例えば、サンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間に置かれ得る。同様に、結合体パッドもまた、結合体パッドがクロマトグラフィー片と毛管接触し、そして流体が毛管力または浸透圧力によって結合体パッドを通ってクロマトグラフィー片への流動するように、一般的にクロマトグラフィー片上に提供され得る。試薬パッドもまた、試薬パッドが結合体パッドと毛管接触し、そして試薬パッドから結合体パッドへの流体の流動を可能にするように、例えば、結合体パッド上に提供され得る。さらに、選択性膜は、選択性膜がサンプルフィルターおよびクロマトグラフィー片と毛管接触し、そしてサンプルフィルターからクロマトグラフィー片への流体の流動を可能にするように、例えば、サンプルフィルターとクロマトグラフィー片との間に提供され得る。
【００６２】
（例えば、サンプル中の分析物の検出のためのラテラルフローアッセイの実施について、サンプル中の流体から細胞を分離するための試験片を使用する方法もまた、本明細書中に記載される。代表的には、サンプル（例えば、流体および細胞を含むサンプル）が、本明細書中に記載される任意の試験片に適用され、そしてこの片が、例えば、サンプルフィルターからクロマトグラフィー片への流体の流動およびクロマトグラフィー片の第２端部へ向かっての流体の流動を可能にし；緩衝液を適用して、結合体パッド中の結合体を放出させ；サンプル中の分析物に向かって結合体を流動させて、複合体を形成させ；そして複合体の存在を検出することによって、サンプル中の流体から細胞を分離する。特定の実施形態において、定量的な量（ｑｕａｎｔｉｆｙｉｎｇ  ａｍｏｕｎｔ）の複合体が形成された。
【００６３】
故に、本発明のラテラルフローアッセイは、例えば、以下のように実施され得る：
（１）血清または血漿を、サンプルフィルターにサンプルを適用することによって、ポート１に添加される血液サンプルから得られる。この膜は、代表的には、クロマトグラフィー片上に直接にか、またはサンプルパッドを通ってのいずれかで、液体を通過させるが、血球（例えば、約６ミクロン）を保持する孔（例えば、約５ミクロン以下）を有する。上記のように、この膜は、好もしくはＳ／Ｇ膜（Ｓｐｅｃｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）である。
（２）血清試料または血漿試料を、予め被覆した化学物質との反応領域（捕捉レーンおよびコントロールレーン）に流す。
（３）試料中の抗原または抗体を、反応領域（捕捉レーンおよびコントロールレーン）において対応する試薬と反応させ、免疫複合体１を形成させる。
（４）結合体放出緩衝液またはサンプル（いくつかの試験において）を、ポート２に添加する。この液体（緩衝液またはサンプル）が、金結合体化試薬（抗原または抗体）を溶解し、次いで、この試薬は、反応領域（捕捉レーンおよびコントロールレーン）に向かって流れ、そして免疫複合体１と反応する。試料が、試験された品目についてポジティブである場合、コントロールバンドおよび捕捉バンド領域において、色彩に富むバンドが形成される。
（５）ポート１に近い端部に位置づけられた吸収剤が、クロマトグラフィー片によって吸収されなかった過剰の液体を吸収する。
【００６４】
以下の実施例は、本発明のよりよい理解を容易にする例示を目的として提供され、決して本発明を制限するように意図されない。
【実施例】
【００６５】
（実施例１）
この例において、クロマトグラフィー片は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ:／／ｗｗｗ．ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍ；ｔｅｃｈ  ｓｅｒｖｉｃｅ＠ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍ）からのニトロセルロース免疫クロマトグラフ試験片である。この試験片は、ＰｒａｘＳｙｓ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃに対する米国特許第６，１３６，６１０号（「’６１０特許」）（２０００年１０月２４日発行）（「Ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ａｐｐａｒａｔｕｓ  ｆｏｒ  ｐｅｒｆｏｒｍｉｎｇ  ａ  ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ  ａｓｓａｙ」と題され、その内容（’６１０特許に参考として援用される資料を含む）は、全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるカートリッジに組み立てられた。両面接着テープ（ｄｏｕｂｌｅ  ａｄｈｅｓｉｖｅ  ｔａｐ）は、ポリエステルで作られ、Ｇ＆Ｌ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｃｕｔｔｉｎｇから入手した。裏材パッドは、プラスチックで作られ、Ｇ＆Ｌ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｃｕｔｔｉｎｇから入手した。
【００６６】
サンプルフィルターは、血球／血漿分離膜Ｓ／Ｇで作製された。このサンプルフィルターをＳｐｅｃｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．（１３５−２  Ｔｈｅ  Ｗｅｓｔ  Ｍａｌｌ，Ｔｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ  Ｍ９Ｃ  １Ｃ２，Ｃａｎａｄａ）から入手し、そしてこれは、ｖａｎ  Ｏｕｄｈｅｕｓｄｅｎ，Ａ．Ｐ．Ｍ．およびＲｏｅｓｉｎｋ，Ｈ．Ｄ．Ｗ．，Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２８：５５−５９（１９９１）；およびＸ―Ｆｌｏｒ  Ｂ．Ｖ．およびＰｒｉｍｅｃａｒｅ  Ｂ．Ｖ．に譲渡された米国特許第５，２４０，８６２号（「’８６２特許」）（１９９３年８月３１日発行）（「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ａｎｄ  ｄｅｖｉｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｂｏｄｙ  ｆｌｕｉｄ  ｆｒｏｍ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ」と題される）に記載されている。使用される他の構成要素は、産業において慣習的であり、任意の適切な売手に注文し得る。例えば、コロイド状の金は、Ｂｒｉｔｉｓｈ  ＢｉｏＣｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅ，Ｔｙ  Ｇｌａｓｓ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｃａｒｄｉｆｆ  ＣＦ４  ５ＤＸ，Ｗａｌｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄａｍ）に注文し得る。
【００６７】
このサンプルパッドおよび緩衝液パッドを、親水性材料、Ｃｙｔｏｓｅｐ（これは、Ｐａｌｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓから入手された）で作製した。
【００６８】
結合体パッドを、結合体放出パッド（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．（４０１  Ｗｅｓｔ  Ｍｏｒｇａｎ  ｒｏａｄ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ  ４８１０８−９１０９，Ｕ．Ｓ．Ａ．）によって製造され、Ｐａｌｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓから入手されるガラスの疎水性材料）から作製した。
【００６９】
吸収剤を、Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．から入手された親水性材料で作製した。
【００７０】
（実施例２）
この実施例において、実施例１のサンプルフィルターおよび結合体パッドを、それぞれニトロセルロースクロマトグラフ膜の上に直接置き、そして別のサンプルフィルターを結合体パッドに直接置いた（介在サンプルパッド、選択性膜および緩衝液パッドを除く、構成中の全部が図１に示される）。この構成において、全血を、両方の位置においてサンプルフィルターに適用し、そしてこのアッセイを進行させた。血漿分離または血清分離は、同様に効果的かつ効率的であり、サンプル流体は、長さ１ｃｍのクロマトグラフィー片について反応領域（すなわち、捕捉線）内に約９０〜１５０秒で流れた。
【００７１】
（実施例３）
この実施例において、サンプルパッドを、サンプルフィルターの下に加え、そして緩衝液放出パッドを、結合体パッドの上に加えた。血漿分離または血清分離は、同様に効果的かつ効率的であり、サンプル流体は、長さ１ｃｍのクロマトグラフィー片について反応領域（すなわち、捕捉線）内に約９０〜１５０秒で流れた。
【００７２】
（実施例４）
この実施例では、血液サンプルを、抗凝固剤有りまたは無しで、実施例１のサンプルフィルターにアプライした。血漿または血清の分離は、１ｃｍの長さであるクロマトグラフィー片について、約９０〜１５０秒の間、サンプル流体は反応領域（すなわち、捕捉ライン（ｃａｐｔｕｒｅ  ｌｉｎｅ））へ流動し、同様に有効かつ効率的であった。血液サンプルが抗凝固剤を含まない場合、サンプルフィルターを抗凝固剤で前処理する必要はない。実際、抗凝固剤でのサンプルフィルターの前処理は、サンプルフィルターに損傷を与え、血球の漏出を引起す。
【００７３】
（実施例５）
この実施例では、単層のサンプルフィルターの使用を、二層のサンプルフィルターの使用と比較した。単層のサンプルフィルターの使用は、２つのサンプルフィルターの共用よりも、より速い流速を生じることを見出した。
【００７４】
（実施例６）
この実施例では、サンプルフィルターのサイズを変更して流速を最適化した。５０〜１５０μｌの血液サンプルの各サンプルについて、見出した最適なサイズは、７ｍｍ（幅）×１３ｍｍ（長さ）であった。相対的に、サンプルフィルターのサイズが大きくなるにつれて、流動時間は短くなった。
【００７５】
（実施例７）
この実施例では、緩衝液（５０〜１５０μｌ）を、血液サンプルをサンプルフィルターにアプライした約３０〜６０秒後に添加した。流動時間（すなわち、サンプルの適用の時間から流体が捕捉ラインに到達するまでの時間）は減少し、そしてバックグラウンドシグナルを低下させた。
【００７６】
（実施例８）
抗ＨＩＶ試験。ＥＩＡ抗ＨＩＶアッセイで確認した患者の血液標本を、抗凝固剤を用いて収集した。血漿を血液サンプルのアリコートから収集した。１００μｌの血液および５０μｌの血漿を、抗ＨＩＶアッセイ片のポート１にアプライした。５０μｌの緩衝液を、血液サンプルをアプライした２分後に、ポート１へと添加した。約２０分のインキュベーション時間の後、ＲｅＬＩＡ装置を走査し、そして捕捉バンドにより生じた密度を読取った。Ｓ／ＣＯのＣＶ％は７．８％であった。
【００７７】
本発明のこれらの局面の全ては、別々にまたは組合わせて実施され得る。さらに、本発明の好ましい実施形態は、いくらか詳細に記載されているが、明らかな改変が本発明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１は、本発明の試験片の１つの実施形態の側面図である。
【図２】図２は、本発明の試験片の１つの実施形態の上面図であり、サンプル中の分析物の検出のためのイムノアッセイの成分の配置を示す。
【図３】図３は、本発明の試験片の１つの実施形態の上面図であり、流体のラテラルフローを示す。
【図４】図４は、本発明の試験片の別の実施形態の側面図である。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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