(57)【要約】涙嚢中又は角膜上に挿入可能又は装着可能である、ドライアイの治療のためのインサート。
2004538056.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
涙嚢中に挿入可能であり、又は角膜上に装着可能であり、蛋白質及び／又はペプチドが眼に放出可能な形でその中に貯蔵されている、ドライアイの治療のためのインサート。
【請求項２】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドで負荷されたマトリックスを包含し、この際、蛋白質及び／又はペプチドはマトリックス中で、殊に、溶解又は懸濁している、請求項１に記載のインサート。
【請求項３】
蛋白質及び／又はペプチドは、マトリックス中で安定した形で存在し、そこを通って安定した形で放出可能である、請求項１又は2に記載のインサート。
【請求項４】
マトリックスは、放出可能なカルシウムイオンを包含する、請求項２又は３に記載のインサート。
【請求項５】
蛋白質及び／又はペプチド及び／又はカルシウムイオンは、一次関数で放出可能である、請求項１から４までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項６】
インサートは、異なる蛋白質−及び／又はペプチド−含有量及び／又はマトリックス材料を有する１以上の層から構成されていて、この際、殊に、蛋白質−及び／又はペプチド−負荷及び蛋白質−及び／又はペプチド−無し層が装備されている、請求項１から５までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項７】
蛋白質及び／又はペプチドは、粒子に結合して存在する、請求項１から６までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項８】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドを含有する貯蔵器を包含し、この際、貯蔵器は膜によって包囲されていて、この際、殊に、蛋白質及び／又はペプチドのほかに放出可能なカルシウムイオンが存在している、請求項１から７までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項９】
蛋白質及び／又はペプチドの放出は浸透ポンプによって行われる、請求項１から８までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１０】
インサートは、貯蔵器からの蛋白質及び／又はペプチドの放出を制御するマイクロチップを含有する、請求項１から９までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１１】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドを含有するその場でのゲル系を包含し、このゲル系は、投与前に液状であり、適用部位で、pH−値又は温度変化によってゲル化し、この際、その場−ゲル系は硬化状態で、殊に、蛋白質及び／又はペプチド−含有の沈積物を形成し、この際、殊に、蛋白質及び／又はペプチドの他に放出可能なカルシウムイオンが存在している、請求項１から１０までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１２】
蛋白質及び／又はペプチドは、殊に、増殖因子、殊に、表皮増殖因子（EGF）である、請求項１から１１までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１３】
インサートは、直径ｒ１＝０．１〜２０ｍｍ及びｒ２＝０．１〜２０ｍｍ及び厚さD1μｍ〜５ｍｍの円形又は卵形の筒状形を有する、請求項１から１２までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１４】
ｒ１＝０．５〜１８ｍｍ及びｒ２＝０．５〜１０ｍｍ及びD＝10μｍ〜１ｍｍである、請求項１３に記載のインサート。
【請求項１５】
インサートは、侵食可能である、請求項１から１４までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１６】
水溶性ゲルを製造し、殊に、アルギン酸塩ゲルを、蛋白質−及び／又はペプチド−溶液、殊に、増殖因子溶液、殊に、EGF−溶液と混合させ、蛋白質−及び／又はペプチド−負荷薄膜を形成させ、これを乾燥させ、その後に、薄膜からインサートを打ち出す又は切り取る、請求項１から１５までのいずれか１項に記載のインサートの製造。
【請求項１７】
ドライアイが、殊に、角結膜炎、ショーグレンシンドローム又は瞼板腺炎によって引き起こされている場合に、蛋白質及び／又はペプチド、殊に、増殖因子、殊に、EGFを眼に投与するための、請求項１から１５までのいずれか１項に記載のインサートの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドライアイの治療のためのインサート、その製造及びいわゆる”ドライアイシンドローム（Dry  Eye  Syndrome）”の治療のための眼への蛋白質又はペプチド、殊に増殖因子及び例えば、表皮増殖因子（Epidermal  Growth  Factor）（EGF）の投与のためのインサートの使用に関する。
【０００２】
次の記載は、例えば、本発明の範囲で使用することができる蛋白質及びペプチド、殊に増殖因子の群から成る有効な作用物質としてのEGFの発明を説明する。それによってEGFについて限定するものではない。任意の他の蛋白質及び／又はペプチド、殊に、増殖因子を使用することもできる。
【０００３】
健康な人に比べて、ドライアイに罹っている患者は、生理学的水準と比較して、角膜の上皮細胞中の表皮増殖因子（EGF）の生産がより少ないことを示す。
【０００４】
約５０年前に、Henrik  Sjoegrenは、涙腺組織の自己免疫疾患、減少された涙分泌及び眼表面疾患によって引き起こされる病気を記載し、この病気を乾性角結膜炎（KCS）と名付けた。そうした間に、KCS又は”ドライアイ”は、涙分泌を下げ、又は涙膜の蒸発を上昇させるいかなる症状からも由来する若干の不完全機能の要素であることが判明した。
【０００５】
定期刊行物Cornea 12、202、1994で、Tsubota et al. は、ドライアイ病の患者を３つの群、つまり、（１）ショーグレン（Sjoegren）−シンドロームと結び付いたドライアイ、（２）自己免疫陽性ドライアイ（循環性抗体）及び（３）単純ドライアイ（各種類の眼表面不完全機能；自己免疫疾患と結び付いていない）に分類した。
【０００６】
ドライアイ−疾患は、典型的には、異物によって眼中に引き起こされるのと同様の眼刺激、例えば、眼痛、眼炎等を生じさせる。
【０００７】
KCSの臨床的症状は、KCS−患者の角膜の病的に変化した上皮表面の結果である。KCS−患者の角膜上皮は、健康な人の上皮に比べて若干の相違を示すことが知られている、つまり、（１）正常な上皮代謝が変化されている；（２）上皮層の厚さが不均一である；（３）上皮表面が不規則である；（４）細胞間結合、例えば、ヘミデスモソームは、量及び質において充分には存在していない。
【０００８】
今にち、ドライアイ−疾患は、通例、いわゆる油性点眼剤又は徐々に溶け、人工涙としても知られている挿入剤で治療される。殆どの場合に、治療効果は満足できるものではない。この失敗は、特に、この種類の眼薬の短時間滞留によって説明することができる。ドライアイ−シンドロームの治療のための最初のこの種類の眼用製剤は、７０年代に、その油性効果により、ポリマー、例えば、ポリビニルアルコール、セルロース誘導体又はポリビニルピロリドン又は他のポリマーを包含する水溶液として開発された（US−PS４１２０９４９、US−PS４７４４９８０、US−PS４８８３６５８、US−PS５２０９９２７及びUS−PS５７７０６２８）。
【０００９】
更に、涙嚢中で破裂後に徐々に溶け、水溶性ポリマーから成るマトリックスを包含する”人工涙”が開発された（US−PS４３４３７３８）。
【００１０】
溶液又は固形インサートを別にして、一定の油性効果を引き起こすために、ポリマーを包含する半固形製剤も開発された（US−PS５０７５１０４）。
【００１１】
ドライアイ−シンドロームの治療のための他の手がかりは、涙液の生成を刺激する物質の開発であった（US−PS４８２０７３７）。更に、この病気の治療のために、他の医薬物質、例えば、レチノイド（US−PS４８２６８７１；US−PS４９６６７７３；及びUS−PS５１８５３７２）及びカルシウム塩（US−PS５２９０５７２；US−PS５５９５７６４）及びステロイド（US−PS５０４１４３４）も試験された。どの手がかりも、先に記載されたような角膜変化の著しい改善には結び付かなかった。組織損傷の後に続く症状を短時間で治療することだけができた。
【００１２】
医薬物質が眼に投与されるべき場合に、眼治療がその間有効である短時間での同様の問題が確認された。点眼剤は、点眼剤が眼中に滞留する短かい時間、約３０秒間だけを有する。この問題を克服するために、７０年代の初め頃に、延長された時間に渡って医薬物質を投与する最初の医薬剤が開発された。このインサートは涙嚢中に挿入され、本来は、分解及び／又は崩壊せず、及び／又は使用中に溶けない材料から出来ていた。従って、これは治療期間後に眼から徹底的に除去されねばならなかった（US−PS３６１８６０４；US−PS４０５７６１９）。若干の系は、例えば、磁気的に引きつけ可能な材料を備えることによって材料の除去が容易にされるように構成された（US−PS３６２６９４０）。医薬物質の投与は、固体の賦形材料の使用によって拡散に限定された。それによって、投与率は、微孔性材料の使用によって調整することができた（US−PS３８２８７７７）。更に、眼への適用中に溶けるインサート用の生物学的に分解可能な材料が使用された（US−PS３８６７５１９；US−PS４１７９４９７）。このインサートは、治療終了後に除去する必要はないという利点を有した。
【００１３】
その他の開発は、インサートの使用のための材料としてポリマーに反する脂質の使用（US−PS３９６８２０１）、使用の改善のための幾何学及び機械的特性の改善及び適合（US−PS３９６３０２５）及び固定要素を有する特殊挿入物（US−PS５３９５６１８）を包含した。
【００１４】
これから出発して、ドライアイ−患者の治療を改善することが本発明の課題である。この課題は、特許請求項１、１６及び１７によって解明される。
【００１５】
この際、EGFは、目の治療のための有効な治療薬であることが確認された。本発明により、眼中でのEGF−水準を引き上げ、しかも数時間にわたり有利に直線的な反応速度を有する決定的なEGF及びカルシウムを遊離させる薬剤が開発された。これは、角膜の上皮細胞を刺激し、ヘミデスモソーム及び他の細胞内接着分子を合成し、かつ、この細胞間結合を可能にするために必要である。
【００１６】
驚異的にも、この製剤は、ドライアイ患者の治療を明らかに改善することができることが確認された。本発明は、眼にEGFをより良好に供給することができる医薬剤のための投与系を包含する。
【００１７】
構築、正常な生理的代謝及び、必要な場合には、角膜上皮の創傷治癒過程は、サイトカインによって制御される。多数のサイトカインのうち、EGFは、前記の生理的機能と関係して、角膜上皮に正に重要であると思われる。EGFは、角膜上皮を維持し、涙腺中及び角膜上皮の基礎細胞中に生成される。眼中では、角膜、水晶体の上皮、及び角膜の内皮中にEGF−受容体が存在する。受容体は、EGFへの高い親和力を有し、飽和可能である。負傷した眼中では、EGFの上皮受容体の濃度が上昇する。従って、EGFは、負傷した眼の治療に提案された。それ以来、EGF以外の他の多数のサイトカインを含有する単独の血清製剤が、ドライアイシンドローム−治療で試験されてきた。
【００１８】
ドライアイ−患者では、涙液中及び角膜上皮細胞中のEGF水準は、正常な患者の場合よりも明らかに低い。それについて、涙液試料を取り出した。試料採取は、毛細管作用を利用して行われた。毛細管は、水平軸上１０〜３０°の角度で、下円蓋の表面に対して１０〜４０°の角度に保持された。毛細管の先端は、涙液表面に触れ、徐々に側方の眼角の方向で中央線から円蓋下方に導かれた。この際、眼球の表面が瞬きの際に触れないことに慎重に注意し、毛細管を速やかに円蓋から取り除いた。全試料を直接エッペンドルフ−試験管に移し、ドライアイスで凍結させ、EGF−濃度測定まで−７０℃で貯蔵した。異なった個々の試料を比較するために、試料採取のための時間を測定し、EGF−含量と相関させた。涙液中のEGF−濃度は、サンドイッチ−型（Sandwich−Typ）の超感受性免疫蛍光測定ELISA−Test（R&D  Systems、Minneapolis、USA）の使用下に測定した。この２段階固相法で、免疫反応性EGFは、先ず、固相に接着しているポリクローナル抗−EGF抗体に結合され、次いで、モノクローナル抗−ヒトEGF抗体の使用下に定量化される。この試験で、EGFの測定可能な最少量は、非希釈化試料については、０．２ｐｇ／ｍｌであり、希釈化試料については、４０ｐｇ／ｍｌである。
次の第１表は、正常患者及びドライアイ−患者の涙液中の分析されたEGF−量の結果を示す。
【００１９】
第１表
健康人（n＝３０）                                １．７〜４．３nｇ／ｍｌ
一次KCSの患者（n＝３０）                       ０．０２〜０．０３nｇ／ｍｌ
ショーグレンシンドロームの患者（n＝３０）        ０．０２〜０．２２nｇ／ｍｌ
瞼板腺炎の患者（n＝３０）                        ０．３〜０．９５nｇ／ｍｌ。
【００２０】
もう１つの実験で、角膜上皮細胞を、EGFの個々の製造又は合成に関する分子生物学的検査のために、EGFｍRNAの測定によって精査した。直径０．８ｍｍの組織細片を縁から約２ｍｍの距離で採取した。細片を、採取直後に、RNAｚoｌ（WAK  Chemie、Heidelberg、Deutschland）３００μｌと一緒に、エッペンドルフ−試験管に移した。EGFの定量的分析を公知技術によって実施し、この際、表皮増殖因子のｍRNAをPCR(ポリメラーゼ連鎖反応（Polymerase  Chain  Reaction））で強化し、次いで分析した。第２表は、正常な人及びドライアイ−患者の角膜上皮細胞中で分析したEGFｍRNA−水準の結果を示す。
【００２１】
第２表
健康人（n＝３０）                                ６．２５〜１３．１１単位
一次KCSの患者（n＝３０）                       ０．２３〜１．３４単位
ショーグレンシンドロームの患者（n＝３０）        ０．３１〜１．１１単位
瞼板腺炎の患者（n＝３０）                        ２．７８〜６．６９単位。
【００２２】
前記の結果は、一次ドライアイシンドローム（一次KCS)に罹っている患者及びショーグレン−シンドロームの患者が明らかに減少されたEGF−水準を有することを示す。この降下した限局的EGF−水準は、角膜範囲の変化を生じさせ、最終的にドライアイ−シンドロームを導くことが推定される。
【００２３】
この結果に基づき、１つの組織学的研究及び２つの臨床的研究が実施された。組織学的研究では、ヒト角膜を、EGF５％を含有する溶液に通して、異なる時間、３０秒間〜４時間にわたり曝した。点眼薬が角膜表面と接触する時間にほぼ相当する３０秒間の接触時間後に、ほんの少しの細胞内接着分子を有する弱小の上皮細胞構築が見出された。これに対して、角膜上皮表面上で、EGFとの４時間の接触時間後に、上皮は、多数の細胞内接着分子、例えば、ヘミデスモソームを有する最適構築を有することが確認された。EGF５％−点眼薬を使用した臨床研究では、１３人の患者に、患者の症状への陽性効果又は形態学的徴候は見出されなかった。これに対して、メチルセルロース中に溶かしたEGF５％を４時間にわたって連続して使用した場合には、患者症状及び角膜表皮の形態学的徴候の明らかな改善が５〜７日間確認された。
【００２４】
EGFは、細胞−対−細胞−接着分子の合成を引き起こし、従って、ドライアイ患者の治療のための使用に重要な作用物質である。従って、本発明の主要見解は、EGF−欠乏患者を、この種類の増殖因子又は他の蛋白質及び／又はペプチド、殊に増殖因子で処置することができる医薬剤投与系の開発である。
【００２５】
眼におけるEGFの局所投与は、確かに主要な手がかりであるが、EGFが全身的に多数の異なる投与法（例えば、経口又は腸管外）を経て投与することが将来重要であると思われる。更に、涙腺細胞又は角膜上皮幹細胞を、それがEGFを生産するように変えること、又はそのようなEGF−生産細胞を移植することが考えられる。
【００２６】
この際、本発明の範囲での”EGF"という概念は、有利に、ヒトEGFを意味するが、EGF−受容体に結合する他の生物又は物質、又はこのような物質の化学的変体、例えば、PEG化（PEGylierte）物質のEGFも意味することができる。ヒトEGFは、鎖内に３つのジスルフィド−結合を有する５３個のアミノ酸から成る６．０４５ｋDポリペプチド−鎖である。これまでは、EGFは、殊に角膜−及び屈折手術後の損傷治癒に影響する治療剤としてだけ提示されてきた。
【００２７】
従って、本発明の目的は、その作用部位にEGFを投与するための賦形剤系を製造することである。角膜上皮表面へのEGFの連続的投与は大変重要である。
【００２８】
EGFを局所的に眼に投与するために使用され得る眼薬は、点眼、軟膏、ゲル又は固形インサートである。このような製剤は、活性成分EGFを０．００００００１〜約２０質量％、有利に約０．０００１〜約１質量％、特に有利に０．０１〜０．５質量％の範囲で又は涙液中のEGF−水準が生理学的水準に上げられるような量で包含する。活性成分の用量は、様々な因子、例えば、投与法、必要量、年齢又は個人的所見に依存してよい。
【００２９】
点眼剤による投与は、２つの異なる原則的方法を可能にする：水中でのEGFの溶解又は例えば、油状賦形剤中での懸濁液としての適用。
【００３０】
点眼剤を製造するために使用され得る一連の添加剤が存在する。製薬学的に認容可能な賦形物質及び添加剤の例は公知であり、次に引用される。これは、賦形剤、等張剤、緩衝液、錯化剤、溶剤及び粘稠剤を包含する。更に、このような賦形剤及び添加剤の例は、WO９１／１５２０６又は製薬学的文献から引用することができる。
【００３１】
EGF−水溶液の製造のために、活性成分を、必要ならば、所望のｐH−値に緩衝される無菌の等張水溶液に溶かす。
【００３２】
EGFを包含する眼薬は、慣用の賦形剤を含有する。
【００３３】
可能な賦形剤は、殊に、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース及び／又はポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸又はその塩、例えば、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールである。点眼剤による投与のために、例えば、EGFの水溶液又は、例えば、EGFの油中懸濁液が好適である。好適な脂肪親和性溶剤又は賦形剤は、脂肪油、例えば、ゴマ油又は合成脂肪酸エステル、例えば、エチルオレエート又はトリグリセリド又は粘性を高める物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール及び／又はデキストラン及び所望の場合には、安定剤も含有する注射用水性懸濁液である。
【００３４】
他の賦形剤は、例えば、水又は水及び水と混合可能な溶剤、例えばC１〜C７−アルコール、植物油又は鉱物油の混合物であり、これは、ヒドロキシエチルセルロース、エチルオレエート、カルボキシメチル−セルロース、ポリビニルピロリドン又は眼用の非毒性の水溶性ポリマー、例えば、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースのアルカリ金属塩、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、キトサン、スクレログルカン（Skleroglukan）、アクリレート又はメタクリレート、例えば、ポリアクリル酸の塩又はエタクリレート、ポリアクリルアミド、天然産物、例えば、ゼラチン、アルギネート、ペクチン、トラガント、カラヤゴム、キサンタンゴム、カラジーナン、寒天及びアラビアゴム、澱粉誘導体、例えば、澱粉アセテート、ヒドロキシプロピル澱粉及び他の合成生成物、例えば、ポロキサマー（Poloxamer）、例えば、ポロキサマーF127、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキシド、有利に、架橋結合のポリアクリル酸、例えば、中性カルボポール（Carbopol）、又はこれらのポリマーの混合物０．５〜５質量％を含有する。有利な賦形剤は水である。セルロース誘導体は、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースのアルカリ金属塩、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、中性カルボポール又はその混合物である。賦形剤の濃度は、例えば、活性成分の濃度の０．１〜１０００００−倍である。
【００３５】
溶解助剤及び類似の助剤を同様に眼薬中に使用することができ、これは、例えば、チロキサポール（Tyloxapol）、脂肪酸グリセロール−ポリエチレン−グリコールエステル、脂肪酸ポリエチレン−グリコールエステル、脂肪酸ポリエチレン−グリコールエステル、ポリエチレングリコール、ポリグリセロールエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はこれらの成分から成る混合物である。溶剤の特に有利な例は、ひまし油及びエチレンオキシドから成る反応生成物、例えば、市販で得られる製品Cremophor  EL(登録商標）又はCremophor  RH  ４０（登録商標）である。ひまし油及びエチレンオキシドの反応生成物は、眼に著しく良好に認容される特に良好な溶剤として判明している。他の有利な溶剤はチロキサポールである。使用されるその濃度は、殊に、活性成分の濃度に依存する。添加量は、典型的には、活性成分を溶かすために十分であり、例えば、溶剤の濃度は、活性成分の濃度の０．１〜５０００−倍であって良い。
【００３６】
組成物のために重要である電解質は、組成物の貯蔵及び使用中にｐH−値を調整することができる物質及び蛋白質構造、従ってEGFの安定性に影響する電解質を包含する。緩衝液の例は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、硼酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、燐酸塩、プロピオン酸塩及びトリス（TRIS）−緩衝液である。トロメタミン（Tromethamine）及び硼酸塩緩衝液が有利な緩衝液である。緩衝液の添加量は、例えば、生理学的に認容可能なｐH−値を調整し、保持するために必要である量に相応してよい。そのpH−値は、典型的には、５〜９、有利に６〜８．５、特に有利に６．５〜８．２の範囲に定まっている。
【００３７】
更に、電解質は、浸透圧及び蛋白質立体配座に影響することができる。そのような電解質は、例えば、イオン成分、例えば、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属ハロゲン化物、例えば、CaCl２、KBｒ、KCｌ、LiCl、NaI、NaBr又はNaCl、Na２SO４又は硼酸である。張性を強化する非イオン性試薬は、例えば、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール又はデキストロースである。例えば、張性強化剤を、使用完成眼用製剤に、オスモル濃度約５０〜１０００ミリオスモル、有利に１００〜４００ミリオスモル、特に有利に２００〜４００ミリオスモル、殊に２５０〜３５０ミリオスモルを与えるために十分な量で添加する。
【００３８】
保存剤の例は、四級アンモニウム塩、例えば、塩化セパゾニウム（Sepazoniumchlorid）、セチルトリメチルアンモニウム−ブロミド（セトリミド（Zetrimide））、セチルピリジニウム−クロリド、ベンズオキソニウム−クロリド、ベンゼトニウム−クロリド、ドミフェンブロミド（ブラドソール（Bradosol）（登録商標））又はベンザルコニウム−クロリド、チオサリチル酸のアルキル水銀塩、例えば、チオメルサール（Thiomersal）、フェニル水銀ニトレート、フェニル水銀アセテート又はフェニル水銀ボレート、パラベン、例えば、メチルパラベン又はプロピルパラベン、アルコール、例えば、クロロブタノール、ベンジルアルコール又はフェニルエタノール、グアニジン誘導体、例えば、クロロヘキサジン、又はポリヘキサメチレンビグアニド、過炭酸ナトリウム（Sodiumperkabonat）、ゲルマル（Germal）（登録商標）又はソルビン酸である。有利な保存剤は、四級アンモニウム塩、アルキル−水銀塩及びパラベンである。適当であれば、細菌及び菌類によって引き起こされる使用中の二次感染に対する予防を確実にするために十分な量の保存剤を眼薬に添加することができる。
【００３９】
更に、眼薬は他の非毒性賦形物質、例えば、湿潤剤又は充填剤、例えば、分子量２００〜１００００又はそれ以上を有するポリエチレングリコール又はその誘導体（例えば、メチルPEG又はPEGアミン）を含有することができる。所望する場合に使用することができる他の賦形物質を次に挙げるが、この際、これらの列挙は、可能な賦形物質を限定するものではない。この際、殊に、錯化剤、例えば、二ナトリウム−EDTA又はEDTA、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、硫化水素ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン又はアルファ−トコフェロール−アセテート、安定剤、例えば、チオ尿素、チオソルビトール、ナトリウム−ジオクチル−スルホスクシネート又はモノチオグリセロール又は他の賦形物質、例えば、ラウリン酸ソルビトールエステル、トリエタノールアミンオレエート又はパーム酸エステル（Palmsaeureester）が重要である。有利な賦形物質は、錯化剤、例えば、二ナトリウム−EDTAである。添加される賦形物質の量及び種類は、個別の要求に依存し、一般に約０．０００１〜約９０質量％の範囲にある。
【００４０】
EGFは、眼の涙嚢中に挿入される装具を介して眼に投与され得る。そのような系は、蛋白質又はペプチド、殊に、増殖因子、例えば、EGFを、１時間〜2週間の期間にわたって放出する。放出のための特に有利な時間は、４時間〜１週間である。このようなインサートの形は、眼の解剖学及び生理学に適合している。インサートの形状は、例えば、円筒形、円形又は卵形又は眼の涙嚢中に入れられるための他のどんな形も有することができる。更に、インサートはコンタクトレンズの形を有することもでき、この際、コンタクトレンズはこの場合には眼の角膜上に載せられる。インサートの有利な形は、第１直径ｒ１  ０．１ｍｍ〜２０ｍｍ及び第２直径ｒ２  ０．１ｍｍ〜２０及び厚さｄ１μｍ〜５ｍｍを有する円形又は卵形である。ｒ１＝０．５ｍｍ〜１８ｍｍ、ｒ２＝０．５ｍｍ〜１０ｍｍ及び厚さｄ＝１０μｍ〜１ｍｍを有する卵形の形状が特に有利である。更に重要な特性は、全てのインサートがカルシウムイオンをEGFと一緒に放出することができることにあり、それは、カルシウムが角膜上皮中の細胞間接触の改善に必要であることが判明したからである。
【００４１】
EGFは、例えば、その中にEGFが入れられているポリマー薄膜から成る薄膜から放出されてよい。EGFは、マトリックス中に溶解又は懸濁されてよい。そのような薄膜は、それが大規模に簡単に製造されることができ、単一のインサートとして切断され又はより大きな薄膜から各々所望の形状に打ち抜かれることができるという利点を有する。
【００４２】
EGFの単層薄膜は、その中にEGFが入れられている単一のマトリックス材料又は材料混合物から成る。眼中での局所的EGF−放出のためのこのようなマトリックスを得るための簡単な１方法は、蛋白質を溶液中又は溶融されたマトリックス材料中に分散させることにある。溶剤の蒸発によって、又は溶解物の冷却によって、EGF富化のマトリックスが得られる。このような製造の１例は、ヒドロゲルである。EGFは、例えば、１％（ｗ／ｗ）のアルギン酸塩水溶液中に溶かされ得る。ヒドロゲルを一定の表面範囲を有する形に注型した後に、固形薄膜を形成するために乾燥させ、それから、インサートを所望の形状の断片の切断又は打ち抜きによって得る。薄膜厚は、アルギン酸塩含量の上昇によって又は成形表面の低減によって変化させることができる。
【００４３】
インサートは、選択されたマトリックス材料に依存して、侵食不可能（nicht errodierbar）又は侵食可能であってよい。後者の場合には、使用後にインサートを除去する必要がない。侵食不可能なインサートの製造のために使用され得る材料は、例えば、ポリアクリレート又はエチレンビニルアセテート−コポリマーである。そのようなマトリックスは、EGFの他に、孔形成体（Porogene）として作用し、EGFの放出を制御することができる水溶性物質を負荷されてよい。侵食不可能なマトリックス材料の場合には、EGFの放出は拡散制御されていて、孔形成体の種類及び量によって影響され得る。孔形成材料は、例えば、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、様々な多糖類又は蛋白質、例えば、コラーゲン又はゼラチンである。低分子量を有する他の水溶性物質は同じ目的を満たすことができる。
【００４４】
侵食可能な系の製造のために使用される材料は、例えば、眼の液状周囲中で溶け又は体温で軟化又は溶融するマトリックスを固形又は半固形で製造する水溶性ポリマーである。そのようなポリマーの例は、アルギン酸塩又はセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースである。分解可能なインサートの製造のために使用することができる有利な材料は、α−L−グルロン酸及びβ−D−マンヌロン酸から成るアルギン酸塩である。特性、例えば、機械的安定性及び医薬剤放出速度を調節するために、モノマー比率を使用することができる。カルボキシル−酸残基の存在に基づき、アルギン酸塩は荷電されていて、陽イオンの付加によって架橋結合され得る。陽イオンとして、カルシウム又はマグネシウムを用いることができる。架橋結合の程度によって、EGFの放出率及びインサートの侵食安定性を調節することができる。侵食可能なポリマーの１特例は、分解可能なポリマーであり、これは水性環境中で加水分解され、水溶性モノマー及びオリゴマーに分解する。軟化又は溶融する熱的変体を経て分解する物質は、例えば、脂肪、例えば、トリグリセリン又はリン脂質である。
【００４５】
薄膜からの蛋白質放出率を低減させる又は、例えば、更に直線的な放出速度論を達成させるように放出率を調節するために、異なる薄膜を組み合わせることができる。そのようなラミネートは少なくとも２層から成り、これらは互いに、それらがそれから成り立つマトリックス材料及び／又はそれらの個々のEGF−負荷において区別される。そのようなラミネートの１例は、僅少なEGF−含量を有する薄膜層によって両側が被覆されている、高いEGF−含量を有する中心層から成る構造である。EGF−負荷層及びEGF−無し層の交互配列を有するサンドイッチ様構造は、そのようなラミネートのもう１つの例である。
【００４６】
ラミネートは、例えば、異なるマトリックス溶液の圧押又は噴霧によって、ラミネート上に塗布されるべき材料の相応する溶液又は溶融物中への予備完成された薄膜のコアセルベーション又は浸漬によって連続して製造することができる。後者の場合には、逆に荷電している高分子電解質から成るポリマー溶液が製造される。荷電相互作用によってポリマー鎖の沈殿が生じる。従って、結合加入されたEGFは、相応するポリマーマトリックス中で固定される。更に、増殖因子、例えば、EGFはマトリックスによって同様に安定化され、適用中に安定した形で投与される。この際、作用物質の製造、貯蔵及び／又は適用中に活性の損失は生じない。分解可能な系を達成するために、少なくとも１種の高分子電解質は、分解可能なポリマーであるか、又は水溶性で又は生物学的に分解可能である第３の成分を混合物に添加させなければならない。高分子電解質組成物の例は、アルギン酸ナトリウム／キトサン、アルギン酸ナトリウム／ゼラチン及びアラビアゴム／ゼラチンである。
【００４７】
薄膜及びラミネートに対する二者択一は、インサートからのEGFの放出がそれによって調整され得る貯蔵器系である。貯蔵器系は、例えば、EGF−放出率を調整する膜によって包囲されている液状又は半固体のEGF−分散物から成る。EGF−貯蔵器のもう１つの例は、固体の水溶性混合物であり、これは、例えば、凍結乾燥によって得ることができ、インサートの挿入後に液状又は半固体系に溶解する。
【００４８】
放出を調整する膜は、再び、分解可能なポリマー、例えば、アルギン酸塩であり、これは安定性を高めるために、カルシウムイオンと架橋結合している。分解不可能な微細孔ポリマーは、貯蔵器からのEGFの放出を制御するために、拡散防止剤として使用することができる。
【００４９】
更に、薄膜、ラミネート及び貯蔵器系は、EGFの放出を調整する付加的な賦形剤と連結して使用することができる。１００μｍ以下の大きさの粒子、例えば、微小球、ナノパーティクル又はリポソームは、放出率を調節するために、EGFで負荷されていてよい。このような粒子が直接眼に与えられる場合には、通例これは非常に速やかに失われる。その粒子をインサート、例えば、薄膜、ラミネート又は貯蔵器様装具中へ入れることによって、この問題を克服することが可能である。このような系は、製造の際に、マトリックス溶液中又はインサートの製造のために使用される物質の溶融物中で容易に分散される。この粒子系は、非常に良好に薄膜、ラミネート又は貯蔵器系中に結合加入され得る。
【００５０】
更に、眼用インサートからのEGFの局所的投与に使用することができる若干の他の付加的な放出系があるが、これは薄膜、ラミネート又は貯蔵器系の群に分類することはできない。
【００５１】
その場で（in situ）−ゲル化系は、眼での使用前は、液状製剤であり、従って、患者によって容易に使用され得る。それが涙嚢中に挿入されている場合には、その粘度は上昇し、又はそれは硬化し、この際、EGF−豊富な蓄積物を形成する。このような系の例は、使用中に温度上昇下にゲル化するポロキサマー−溶液である。もう１つの例は、その荷電がpH−変化に基づいて変化する高分子電解質、例えば、ポリアクリレートであり、従って、水性環境中で沈殿する。
【００５２】
更に、EGFはマイクロチップから放出されることができ、これは、前以てプログラムされた時間構成に相応して開かれる小貯蔵器からの医薬物質の放出を行う。例えば、放出は、同一マイクロチップ上のプログラム可能な読取専用記憶装置（Read−Only  Speicher）を介して実施され得る（US−PS５７９７８９８）。更に、このような放出系は、局所的EGF−水準を測定し、そうしてこれを適応可能な放出率によって一定に保持するバイオセンサーと連結することができる。
【００５３】
最後に、浸透ポンプを使用することができる。
【００５４】
浸透ポンプは、例えば、EGF−用量の他に浸透活性物質を含有し、半透膜によって包囲されているEGF−貯蔵器を有する。このような系が眼中に装入されると、水が半透膜を通って進入し、EGF及び浸透活性物質を溶解又は希釈し始める。浸透圧の上昇によって、EGFは貯蔵器から押出される。この際、EGFは、例えば微細孔性であるか又は細開口を有する膜を通って系から出て行く。
【００５５】
次に、本発明を例及び図面につき詳説する。
【００５６】
例：EGF−含有アルギン酸塩薄膜の製造：
１．アルギン酸塩ゲルの製造：
アルギン酸ナトリウム（Protanal  SF  120、Fa.  Provona  Biopolymer、Norwegen）１ｇを正確に秤量し、蓋付き１００ｍｌ入り試験管に入れる。無菌の眼内洗浄液（BSS  sterile intraokkular Loesung Pharmacia & Upjohn、Niederlande）９９ｇを添加する。アルギン酸塩粉末が膨潤する間、混合物を磁気攪拌器で慎重に揺り動かす。アルギン酸塩が解けた後に、CaCl２ｘ２H２O  １５０ｍｇを添加し、ゲルを少なくとも更に２４時間、澄明又は不透明に見えて、粒子が無くなるまで攪拌する。
【００５７】
２．EGF−溶液の製造：
EGF（rEGF、Biomol、Hamburg、Deutschland）１ｍｇを二回蒸留した水１ｍｌ中に溶かす。完全に溶解した後に、更に水９ｍｌを添加する。
【００５８】
３．EGF−負荷アルギン酸塩薄膜の製造：
アルギン酸塩ゲル５，５０ｇをペトリシャーレ（直径７ｃｍ、高さ４ｃｍ）中に量り入れる。EGF−溶液（EGF−含量：１００μｇ／ｍｌ）１ｍｌを、ガラス棒での攪拌下にゲル中に混合加入させる。得られる混合物をテフロン−型（直径４ｃｍ、高さ５ｃｍ）中に加える。薄膜を、環境条件下に、薄層のエアーフィルム（Luftfilm）付きの作業台で４８時間かけて乾燥させる。
【００５９】
４．薄膜の架橋結合及びインサートの製造：
乾燥したEGF−負荷アルギン酸塩薄膜をテフロン型から取り出し、５％（ｗ／ｗ）の塩化カルシウム水溶液中に６０秒間浸漬させる。薄膜を再び薄層のエアーフィルム付きの作業台で２４時間かけて乾燥させる。卵形インサート（ｒ１＝長さ９ｍｍ、ｒ２＝４ｍｍ）を、最終的な厚さ約１００μｍを有する薄膜から切り抜く又は打ち抜く。
【００６０】
ここで、図に基づいて、インサートの最終的に可能な形状を説明する。
【００６１】
図１及び図２は、インサート１０の2種の異なる形、つまり円形及び卵形を示し、これは、それ以外では筒形であり、高さH＝１ｍｍである。この際、EGFはマトリックス材料１２中に入れられている。この際、円形インサート１０は、半径ｒ１＝１ｍｍである。卵形インサートは、半径ｒ１＝１．５ｍｍであり、半径ｒ２＝２ｍｍである。
【００６２】
図３は、例えば、2種の異なる層１４，１６から成る、図１及び図２による形を有することができるインサート１０を示し、この際、上層１４はEGF−無しであり、下層１６はEGF−負荷されている。
【００６３】
図４は、同様の構造を示し、この際、ここでは、EGF−負荷層１６は、２つのEGF−無し層１４によって包囲される。それによって、涙嚢中での眼へのEGFの放出は、その中にインサート１０を入れた後に良好に調節され得る。
【００６４】
図５は、例えば、その中でEGF−無し層１４及びEGF−負荷層１６が交互する拡大構造を示し、この際、EGF−負荷層１６はEGF−無し層１４の間に入れられている。
【００６５】
図６は、ここで、前記したような、貯蔵器系を示し、この際、EGF−含有溶液を有する貯蔵器１８は、眼へのEGFの放出を調節及び制御する膜２０によって包囲されている。マトリックス１２中へのEGFの挿入のためのもう１つの可能性は、EGF−負荷粒子２２がマトリックス１２中で分散されていて、マトリックス１２がEGFの放出を調節することにある（図７）。
【００６６】
最後に、最終図８は、インサート１０のもう１つの形成を示し、この際、インサート１０は、浸透ポンプとして形成されていて、この際、インサート１０は、EGF−負荷マトリックス１２及び浸透活性物質２４を包含し、EGF−負荷マトリックス１２は、浸透活性物質２４と、不透膜２６によって分離している。EGF−負荷マトリックス１２及び浸透活性物質２４は、一緒に、半透膜２８によって包囲されている。ここで、インサート１０を涙嚢中に加える場合には、水は半透膜２８を通って浸入し、EGF及び浸透活性物質２４を希釈し始める。この上昇した浸透圧によって、EGFは、半透膜２８中の開口３０を通って、貯蔵器１８から押出され、そうして、涙嚢中に、従って、眼中に到達する。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】円形インサートの形状を示す略図。
【図２】卵形インサートの形状を示す略図。
【図３】２層インサートの形状を示す略図。
【図４】３層インサートの形状を示す略図。
【図５】EGF−負荷層及びEGF−無し層を有するインサートの形状を示す略図。
【図６】貯蔵器様装具の形状を示す略図。
【図７】もう１種のインサートの形状を示す略図。
【図８】浸透ポンプ形インサートの形状を示す略図。
【符号の説明】
【００６８】
１０    インサート
１２    マトリックス
１４    EGF−無し層
１６    EGF−負荷層
１８    貯蔵器
２０    膜
２２    EGF−負荷粒子
２４    浸透活性物質
２６    浸透膜
２８    半透膜
３０    開口
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年3月24日(2003.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
涙嚢中に挿入可能であり、又は角膜上に装着可能であり、蛋白質及び／又はペプチドが眼に放出可能な形でその中に貯蔵されており、この場合蛋白質及び／又はペプチドは、増殖因子、殊に、表皮増殖因子（EGF）及び／又はサイトカインである、ドライアイの治療のためのインサート。
【請求項２】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドで負荷されたマトリックスを包含し、この際、蛋白質及び／又はペプチドはマトリックス中で、殊に、溶解又は懸濁している、請求項１に記載のインサート。
【請求項３】
蛋白質及び／又はペプチドは、マトリックス中で安定した形で存在し、そこを通って安定した形で放出可能である、請求項１又は２に記載のインサート。
【請求項４】
マトリックスは、放出可能なカルシウムイオンを包含する、請求項２又は３に記載のインサート。
【請求項５】
蛋白質及び／又はペプチド及び／又はカルシウムイオンは、一次関数で放出可能である、請求項１から４までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項６】
インサートは、異なる蛋白質−及び／又はペプチド−含有量及び／又はマトリックス材料を有する１以上の層から構成されていて、この際、殊に、蛋白質−及び／又はペプチド−負荷及び蛋白質−及び／又はペプチド−無し層が装備されている、請求項１から５までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項７】
蛋白質及び／又はペプチドは、粒子に結合して存在する、請求項１から６までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項８】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドを含有する貯蔵器を包含し、この際、貯蔵器は膜によって包囲されていて、この際、殊に、蛋白質及び／又はペプチドのほかに放出可能なカルシウムイオンが存在している、請求項１から７までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項９】
蛋白質及び／又はペプチドの放出は浸透ポンプによって行われる、請求項１から８までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１０】
インサートは、貯蔵器からの蛋白質及び／又はペプチドの放出を制御するマイクロチップを含有する、請求項１から９までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１１】
インサートは、蛋白質及び／又はペプチドを含有するその場でのゲル系を包含し、このゲル系は、投与前に液状であり、適用部位で、pH−値又は温度変化によってゲル化し、この際、その場−ゲル系は硬化状態で、殊に、蛋白質及び／又はペプチド−含有の沈積物を形成し、この際、殊に、蛋白質及び／又はペプチドの他に放出可能なカルシウムイオンが存在している、請求項１から１０までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１２】
インサートは、直径ｒ１＝０．１〜２０ｍｍ及びｒ２＝０．１〜２０ｍｍ及び厚さD1μｍ〜５ｍｍの円形又は卵形の筒状形を有する、請求項１から１１までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１３】
ｒ１＝０．５〜１８ｍｍ及びｒ２＝０．５〜１０ｍｍ及びD＝10μｍ〜１ｍｍである、請求項１２に記載のインサート。
【請求項１４】
インサートは、侵食可能である、請求項１から１３までのいずれか１項に記載のインサート。
【請求項１５】
水溶性ゲルを製造し、殊に、アルギン酸塩ゲルを、蛋白質−及び／又はペプチド−溶液、殊に、増殖因子溶液、殊に、EGF−溶液と混合させ、蛋白質−及び／又はペプチド−負荷薄膜を形成させ、これを乾燥させ、その後に、薄膜からインサートを打ち出す又は切り取る、請求項１から１４までのいずれか１項に記載のインサートの製造法。
【請求項１６】
ドライアイが、殊に、角結膜炎、ショーグレンシンドローム又は瞼板腺炎によって引き起こされている場合に、殊にEGF及び／又はサイトカインである増殖因子の蛋白質及び／又はペプチドを投与するための、請求項１から１４までのいずれか１項に記載のインサートの使用。
【国際調査報告】
2004538056.tif 000036
2004538056.tif 000037
2004538056.tif 000038
2004538056.tif 000039
2004538056.tif 000040
2004538056.tif 000041
2004538056.tif 000042
2004538056.tif 000043