(57)【要約】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した被験体におけるＨＩＶの免疫学的制御を促進する方法を提供する。この方法は、治療有効量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を含む薬学的組成物の投与と組み合わせて、少なくとも１サイクルの断続的な投薬レジメンの高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）を被験体に施す工程を包含する。ＩＬ−２（またはその改変体）の日周投与または断続的投与および断続的なＨＡＡＲＴの組み合わせは、ＨＡＡＲＴの非存在下でのウイルス複製の免疫学的制御を促進し、それによって、ウイルスリバウンドによりＨＡＡＲＴのさらなる施行が必要とされる前に、患者がＨＡＡＲＴを中断し得る期間を延長する。断続的なＨＡＡＲＴ投薬レジメンと組み合わせたＩＬ−２療法の施行は、ＨＩＶに感染した被験体を処置する有効な方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ感染した被験体におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の免疫学的制御を促進する方法であって、治療有効量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を含む薬学的組成物の投与と組み合わせて、少なくとも１サイクルの断続的な投薬レジメンの高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）を該被験体に施す工程を包含し、該投与は、該被験体内での該ＩＬ−２の基準レベルを提供する、方法。
【請求項２】
前記ＨＡＡＲＴが、少なくとも３つの抗レトロウイルス剤の日周投与を包含し、該抗レトロウイルス剤の各々の治療有効量が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗レトロウイルス剤が、リバーストランスクリプターゼインヒビターおよびプロテアーゼインヒビターからなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リバーストランスクリプターゼインヒビターが、ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、ジドブジン（ＡＺＴ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、ラミブジン（３ＴＣ）、スタブジン（Ｄ４Ｔ）、アバカビル、デラビルジン、エファビレンズ、およびネビラピンからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記プロテアーゼインヒビターが、インジナビル（ＩＤＶ）、アンプレナビル、サキナビル、リトナビル、ＡＢＴ−３７８、ネルフィナビル、およびＧＷ１４１からなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ＨＡＡＲＴの断続的投薬レジメンが、前記被験体中で血漿ウイルスＲＮＡが検出不可能になるまで該被験体にＨＡＡＲＴを施す工程、次いで、血漿ウイルスＲＮＡが該被験体中で許容可能な閾値レベルに達するまで該ＨＡＡＲＴの投与を中断する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記血漿ウイルスＲＮＡが、ＨＡＡＲＴの中断前の少なくとも約１ヶ月間、該被験体中で検出不可能であり、前記血漿ウイルスＲＮＡの前記許容可能な閾値レベルが、約１週間間隔で測定された２つの連続的な測定値において、約１０，０００分子／ｍｌである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＩＬ−２またはその改変体が皮下投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＬ−２またはその改変体が、毎日投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．６ｍＩＵ／ｍ２〜約３．５ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．７ｍＩＵ／ｍ２〜約３ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約１．２０ｍＩＵ／ｍ２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＬ−２またはその改変体が断続的に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−２またはその改変体を含む前記薬学的組成物が、安定化されたモノマーＩＬ−２の薬学的組成物、マルチマーＩＬ−２の組成物、安定化された凍結乾燥ＩＬ−２の薬学的組成物、および安定化された噴霧乾燥ＩＬ−２の薬学的組成物からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２またはその改変体のアミノ酸配列を有する組換え生成されたＩＬ−２である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＩＬ−２の改変体が、前記ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した被験体を処置する方法であって、治療有効量のインターロイキンー２（ＩＬ−２）またはその改変体を含む薬学的組成物の投与と組み合わせて、少なくとも１サイクルの断続的な投薬レジメンの高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）を該被験体に投与する工程を包含し、該投与は、該被験体内での該ＩＬ−２の基準レベルを提供する、方法。
【請求項１８】
前記ＨＡＡＲＴが、少なくとも３つの抗レトロウイルス剤の日周投与を包含し、該抗レトロウイルス剤の各々の治療有効量が投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗レトロウイルス剤が、リバーストランスクリプターゼインヒビターおよびプロテアーゼインヒビターからなる群より選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記リバーストランスクリプターゼインヒビターが、ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、ジドブジン（ＡＺＴ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、ラミブジン（３ＴＣ）、スタブジン（Ｄ４Ｔ）、アバカビル、デラビルジン、エファビレンズ、およびネビラピンからなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記プロテアーゼインヒビターが、インジナビル（ＩＤＶ）、アンプレナビル、サキナビル、リトナビル、ＡＢＴ−３７８、ネルフィナビル、およびＧＷ１４１からなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＡＡＲＴの断続的投薬レジメンが、前記被験体中で血漿ウイルスＲＮＡが検出不可能になるまで該被験体にＨＡＡＲＴを投与する工程、次いで、血漿ウイルスＲＮＡが該被験体中で許容可能な閾値レベルに達するまで該ＨＡＡＲＴの施行を中断する工程を包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記血漿ウイルスＲＮＡが、ＨＡＡＲＴの中断前の少なくとも約１ヶ月間、該被験体中で検出不可能であり、前記血漿ウイルスＲＮＡの前記許容可能な閾値レベルが、約１週間間隔で測定された２つの連続的な測定値において、約１０，０００分子／ｍｌである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＩＬ−２またはその改変体が皮下投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＩＬ−２またはその改変体が、毎日投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．６ｍＩＵ／ｍ２〜約３．５ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．７ｍＩＵ／ｍ２〜約３ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約１．２０ｍＩＵ／ｍ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＩＬ−２またはその改変体が断続的に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項３０】
ＩＬ−２またはその改変体を含む前記薬学的組成物が、安定化されたモノマーＩＬ−２の薬学的組成物、マルチマーＩＬ−２の組成物、安定化された凍結乾燥ＩＬ−２の薬学的組成物、および安定化された噴霧乾燥ＩＬ−２の薬学的組成物からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２またはその改変体のアミノ酸配列を有する組換え生成されたＩＬ−２である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＩＬ−２の改変体が、前記ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した被験体を処置する方法であって、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法と組み合わせて、少なくとも１サイクルの断続的な投薬レジメンの高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）を該被験体に施す工程を包含し、該ＩＬ−２療法は、該ＨＡＡＲＴの断続的な投薬レジメンの各サイクルを通して、治療有効量のＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、該投与は該被験体内での該ＩＬ−２の基準レベルを提供し、そして該ＨＡＡＲＴの断続的な投薬レジメンは、血漿ウイルスＲＮＡが、ＨＡＡＲＴの中断前の少なくとも約１ヶ月間、該被験体中で検出不可能になるまで該被験体にＨＡＡＲＴを施す工程、次いで、該血漿ウイルスＲＮＡが、約１週間間隔で測定された２つの連続的な測定値において、少なくとも約１０，０００分子／ｍｌに達するまで該ＨＡＡＲＴの施行を中断する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
前記ＩＬ−２またはその改変体が皮下注入により毎日投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．２ｍＩＵ／ｍ２〜約５ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約０．５ｍＩＵ／ｍ２〜約２ｍＩＵ／ｍ２の範囲である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が、約１．２０ｍＩＵ／ｍ２である、請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染のための治療の方法に関し、より特定すると、ＨＩＶの長期にわたる免疫学的制御を促進するための、インターロイキン−２（ＩＬ−２）と組み合わせた、断続的抗レトロウイルス治療の使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）への感染は、感染した被験体の大部分において、免疫系の進行性の悪化を生じる。疾患の進行の間、免疫系に付随する主要な細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、マクロファージ／単球、および神経膠細胞が挙げられる）が、ＨＩＶに感染する。延長されたＨＩＶ感染は、頻繁に、ＡＩＤＳに発展する。この疾患の後期段階において、免疫系は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の損失または機能不全に起因して、重篤に犠牲にされる（Ｓｈｅａｒｅｒら（１９９１）ＡＩＤＳ  ５：２４５−２５３）。
【０００３】
ＨＩＶ−１特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球は、感染の獲得の直後のＨＩＶ−１の免疫学的制御において重要であるようである。いくつかのＨＩＶ−１遺伝子産物（Ｇａｇ、Ｐｏｌ、およびＥｎｖ抗原が挙げられる）を発現する細胞に特異的なＣＴＬ前駆体は、原発性の感染症候群の３週間以内で検出可能である（Ｋｏｕｐら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：４６５０−４６５５）。ＣＴＬ活性は抗原により駆動されるので、時間の経過と共に一般的に起こる、Ｔ細胞サブセットに応答する際の衰えは、予測不可能である。ＨＩＶに対するこの細胞性免疫応答の臨床的有意性は、多数の研究において実証されており、そしてこの応答の欠陥は、より迅速な疾患の進行に関連するようである。ＨＩＶ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞によって洗練されるリンホカインは、ＨＩＶ−１に対する、これらの成熟した細胞傷害性Ｔリンパ球の発生を支持する際に重要であり（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７８：１４４７−１４５０）、ウイルス特異的Ｔヘルパー細胞が、ＨＩＶに対する効果的な免疫の維持のために必要であるという注意の裏づけとなる。
【０００４】
抗レトロウイルス薬物（例えば、リバーストランスクリプターゼインヒビター、ウイルスプロテアーゼインヒビター、およびウイルス移入インヒビター）が、ＨＩＶ感染を処置するために使用されてきた（Ｃａｌｉｅｎｄｏら（１９９４）  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８：５１６−５２４）。より最近は、これらの薬剤の組み合わせを用いる処置（高活性抗レトロウイルス治療（ＨＡＡＲＴ）として公知）が、ＨＩＶの複製を効果的に抑制するために、使用されている（Ｇｕｌｉｃｋら（１９９７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３７：７３４−９（注釈を参照のこと）；Ｈａｍｍｅｒら（１９９７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３７：７２５−７３３）。しかし、ＨＡＡＲＴは、主として、主として、感染していない細胞への感染の拡散の予防に関して効力がある。この治療は、宿主細胞ゲノムに取り込まれた、残りの、潜伏性のプロウイルスＤＮＡを効率的に減少させ得ない（Ｗｏｎｇら（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７８：１２９１−１２９５（注釈を参照のこと）；Ｆｉｎｚｉら（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７８：１２９５−１３００（注釈を参照のこと）；Ｆｉｎｚｉら（１９９９）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５：５１２−５１７；Ｚｈａｎｇら（１９９９）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４０：１６０５−１６１３）。
【０００５】
不連続なＨＡＡＲＴを受けた個体の逸話的な報告は、ウイルス血症の急速な再発を明らかにした（最も頻繁には、抗ウイルス治療の中止の数週間以内）（Ｒｕｉｚら（２０００）ＡＩＤＳ  １４：３９７−４０３）。その結果、ＨＡＡＲＴは、潜在的なウイルスの再活性化を防止するために、無期限に施されなければならない。ＨＡＡＲＴでの連続的な処置には、問題がある。なぜなら、ＨＡＡＲＴのレジメンは高価であり、完了することが困難であり、そして多くの副作用を有するからである。さらに、抗ウイルス薬剤での延長した処置は、しばしば、薬物耐性のウイルス株の発生をもたらす（Ｌａｒｄｅｒら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１１５５−１１５８；Ｋｅｌｌａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１９３４−１９３８；Ｓｔ．Ｃｌａｉｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１５５７−１５５９）。薬物耐性のウイルス株の発生は、ＨＩＶ複製サイクルにおける異なる時点で目標とされる組み合わせ処置によって遅くなる（Ｄ’Ａｑｕｉｌａ（１９９４）Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１４：３９３−４２２）。しかし、組み合わせ治療で処置された患者の有意な部分が、最終的に、多剤耐性を有するＨＩＶの株を保有し得る（Ｓｃｈｉｎａｚｉら（１９９４）Ｉｎｔ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｎｅｗｓ  ２：７２−５）。
【０００６】
組換えヒトインターロイキン−２（ＩＬ−２）は、１０年以上にわたって、ＨＩＶ疾患の状況において研究された。この免疫生物学的薬剤は、ＳＣまたはＣＩＶのいずれかの経路によって、抗レトロウイルス治療と組み合わせて断続的に投与される場合、最近研究されたＨＩＶに感染した患者の大部分において、ＣＤ４＋Ｔ細胞計数の、顕著な、持続した増加を生じる（Ｋｏｖａｃｓら（１９９６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３５：１３５０−１３５６；Ｄａｖｅｙら，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６８９，ＩＣＡＡＣ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ），１９９９年９月；Ａｒｎｏら（１９９９）ＪＩＤ  １８０：５６−６０；Ｃａｒｒら（１９９８）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７８（４）：９９２−９９９；Ｈｅｎｇｇｅら（１９９８）ＡＩＤＳ  １２：Ｆ２２５−Ｆ２３４；Ｌｅｖｙら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ  ３５３：１９２３−１９２９）。ＣＤ４＋Ｔ細胞の区画の増加は、ポリクローナルであり、そしてインビトロで機能するＣＤ４＋Ｔ細胞の発生によって特徴づけられる（Ｌｅｖｙら（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ  ３５３：１９２３−１９２９）。
【０００７】
ＩＬ−２の断続的なサイクルは、いく人かのＨＩＶ感染被験体において、血漿ウイルス負荷の一時的な上昇を生じるが（Ｄａｖｅｙら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：７８１−７８９）、ウイルス負荷に対する有害な長期間の影響を実証した制御された試験はなかった。実際に、近年のいくつかの研究は、ＩＬ−２が抗ウイルス効果を有し得ることを示す（Ｄａｖｅｙら（１９９９）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７９：８４９−８５８）。いくつかの近年の研究においてのみ、ＩＬ−２の抗ウイルス効果が観察されたことの理由は、使用されるアッセイのより高い感度および／またはＨＡＡＲＴの使用に関連し得る。
【０００８】
インビトロデータは、ＨＡＡＲＴによりウイルス学的に十分に制御された被験体のＣＤ４＋細胞の、ＩＬ−２への敏感さが、最適ではないウイルス学的制御での患者から抜粋された細胞の敏感さより大きいことを示した。しかし、過去に数サイクルのＩＬ−２治療を受けた患者におけるＨＡＡＲＴの中止は、頻繁に、ウイルス学的リバウンドをもたらす（Ｄａｖｅｙら（１９９９）Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６８９，ＩＣＡＡＣ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ），１９９９年９月）。
【０００９】
長期にわたるＨＡＡＲＴでの処置、およびこの組み合わせ治療の中止に続いて、過去にＩＬ−２治療を受けた患者においてさえも起こる迅速なウイルス性リバウンドの傾向に関する問題を考慮して、ＨＩＶの長期間の免疫学的制御を達成するための、より良好な方法が必要とされる。
【００１０】
（発明の要旨）
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した被験体において、ＨＩＶの免疫学的制御を促進するための方法が提供される。この方法は、ＨＩＶに感染した被験体に、高活性抗レトロウイルス治療（ＨＡＡＲＴ）または二重プロテアーゼインヒビター治療から選択される抗ウイルス治療を、断続的投薬レジメンの少なくとも１サイクルにわたって、治療有効量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を含有する薬学的組成物の投与と組み合わせて施す工程を包含する。ＨＡＡＲＴは、少なくとも３種の、治療有効量の抗レトロウイルス薬剤を、毎日投与する工程を包含する。断続的なＨＡＡＲＴ投薬レジメンは、血漿ウイルスＲＮＡが患者において検出不可能になるまで、ＨＡＡＲＴを投与し続ける工程、次いで、血漿ウイルスＲＮＡがその患者における許容可能な閾値レベルに達するまで、ＨＡＡＲＴの投与を中断する工程を包含する。治療有効用量のＩＬ−２またはその改変体が、断続的なＨＡＡＲＴまたは他の抗ウイルス投薬レジメンの各サイクルの間に、毎日かまたは断続的に、投与される。毎日かまたは断続的なＩＬ−２（またはその改変体）の投与と、断続的なＨＡＡＲＴとの組み合わせは、ウイルス複製の免疫学的制御を促進し、これによって、ウイルス性リバウンドがＨＡＡＲＴのさらなる実施を必要とする前に、患者がＨＡＡＲＴを中断し得る時間が長くなる。ＩＬ−２治療を、断続的なＨＡＡＲＴ投薬レジメンと組み合わせて施すことは、ＨＩＶに感染した被験体を処置するための効果的な方法を提供する。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＨＩＶに感染した患者における、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、より特定すると、ＨＩＶ−１の免疫学的制御を促進する方法に関する。「免疫学的制御」とは、抗レトロウイルス薬剤の非存在下で、活性に複製するＨＩＶに対する細胞免疫防御を効果的に開始する、ＨＩＶに感染した患者の能力を意図する。本発明の目的で、このような免疫学的制御は、活性に複製するＨＩＶに対する、増加した抗ウイルス免疫反応性の形態で、証明される。「抗ウイルス免疫反応性」とは、ウイルス負荷の増加（例えば、抗レトロウイルス治療の中断において見られるもの）に応答しての、抗原により選択されたリンパ球、より特定すると、Ｔ細胞のＨＩＶ抗原特異的ＣＤ８＋サブセットの、増殖性発現を意図する。ＣＤ８＋Ｔ細胞、特にＨＩＶ抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の、増殖性発現は、ウイルス負荷における引き続く低下をもたらし、その結果、活性に複製するウイルスの集団は、本明細書中の他の箇所で規定されるような、許容可能な閾値レベル未満に維持される。本発明の方法は、ＨＩＶに感染した個体を処置する際に有用である。
【００１２】
本発明の方法は、ＨＩＶに感染した被験体に、抗ウイルス治療を、断続的な投薬レジメンの少なくとも１サイクルにわたって、治療有効量のインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を含む薬学的組成物の投与と組み合わせて、施す工程を包含する。「抗ウイルス治療」とは、高活性抗レトロウイルス治療（ＨＡＡＲＴ）または二重プロテアーゼインヒビター治療を意図する。本発明の方法は、ＨＡＡＲＴの観点でより十分に議論されるが、この方法は、二重プロテアーゼインヒビター治療もまた同様に網羅することが意図されることが、認識される。ＨＡＡＲＴは、ＨＩＶに感染した患者において、活性に複製するＨＩＶの集団を、好ましくは検出不可能なレベルまで消耗させるために、施される。ＩＬ−２は、ＨＩＶに感染した患者において、このリンホカインのバックグラウンドレベルを維持するために投与され、ここで、このバックグラウンドレベルは、免疫系を刺激するために十分であり、これによって、処置される患者において免疫の再構築を提供する。断続的な投薬レジメンは、ＨＩＶに感染した被験体が、ＨＡＡＲＴのない期間を有することを可能にし、このことは、連続的なＨＡＡＲＴに付随する高価な、複雑なレジメン、および所望でない長期間の副作用を考慮すると、有利である。ＨＩＶに感染した患者を、ＨＡＡＲＴのある期間とない期間とに供することによって、活性に複製するＨＩＶウイルスの集団は、検出不可能なレベルと許容可能な閾値レベルとの間で揺動することが可能となる。ＨＡＡＲＴの中断の期間の間、複製するＨＩＶのバーストが存在する。しかし、ＩＬ−−２治療の結果として、患者は、ＨＡＡＲＴの中断の前に免疫が再構築されるので、効果的な免疫学的応答が、複製するウイルスに対して開始され得、これによって、ウイルス血症を、永久的にでなければ延長された期間にわたって、許容可能な閾値レベル以内に戻す。本発明の目的で、ウイルス血症を許容可能な閾値レベル以内に戻すこの能力は、ウイルスの免疫学的封じ込めと称される。免疫学的封じ込めの延長された期間に続いて、活性に複製するウイルスのリバウンドが、許容可能な閾値レベルより上で起こる場合、断続的ＨＡＡＲＴの引き続くサイクルが、患者に施される。本発明の方法は、以下にさらに詳細に説明される。
【００１３】
「ＨＡＡＲＴ」とは、少なくとも３種の抗レトロウイルス薬剤を用いる組み合わせ治療を意図し、これらの薬剤の各々は、治療有効量で被験体に投与される。本発明の目的で、抗レトロウイルス薬剤としては、細胞のレトロウイルス感染を阻害し得るか、低減し得るか、または排除し得る、任意の物質が挙げられる。製造業者の推奨する投薬量に従って投与されるために、多数のこれらの薬剤が、市販されている。このような抗レトロウイルス薬剤としては、リバーストランスクリプターゼインヒビターおよびプロテアーゼインヒビターとして公知の２つのクラス、ならびにウイルス移入のインヒビターである薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。これらの薬剤の３つ以上の任意の組み合わせが使用され得るが、好ましくは、ＨＡＡＲＴは、治療有効量の、少なくとも１種のリバーストランスクリプターゼインヒビター、および少なくとも１種のプロテアーゼインヒビターの、少なくとも１種のさらなる抗レトロウイルス薬剤と組み合わせての投与を包含する。例えば、本発明の１つの実施形態において、少なくとも２種のリバーストランスクリプターゼインヒビターが、少なくとも１種のプロテアーゼインヒビターと組み合わせて投与される。本発明の別の実施形態において、少なくとも２種のプロテアーゼインヒビターが、少なくとも１種のリバーストランスクリプターゼインヒビターと組み合わせて投与される。
【００１４】
多数のリバーストランスクリプターゼインヒビターが、ＨＡＡＲＴを投与する際に使用するために市販されている。例としては、ＨＩＶを阻害することが知られている化合物のクラスであるヌクレオシドアナログ、および非ヌクレオシド薬物が挙げられるが、これらに限定されない。ヌクレオシドアナログは、以下によって具体化される：ジダノシン（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ，Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ製のＶｉｄｅｘ（登録商標）として利用可能な、２’，３’−ジデオキシイノシンまたは［ｄｄＩ］）；ジドブジン（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｃｏ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａから利用可能な、３’−アジド−２’，３’−ジデオキシチミジンまたはアジドチミジン［ＡＺＴ］）；ザルシタビン（Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ製のＨｉｖｉｄ（登録商標）として利用可能な、２’，３’−ジデオキシシチジン［ｄｄＣ］）；ラミブジン（２’−デオキシ−３’−チアシチジン［３ＴＣ］（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｃｏ．から利用可能なＥｐｉｖｉｒ（登録商標））；スタブジン（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｉｂｂ製のＺｅｒｉｔ（登録商標）として入手可能な、２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン［Ｄ４Ｔ］）；および薬物ジドブジンとラミブジンの併用（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅから入手可能な、Ｃｏｍｂｉｖｉｒ（登録商標））。これらの特定の薬物は、２’，３’−ジデオキシヌクレオシドアナログとして知られている化合物のクラスに属し、２’，３’−ジデオキウリジン［ＤＤＵ］のような数種の例外が、ＨＩＶ複製を阻害することが知られているが、個々の任意のウイルスを明瞭に報告していない。他のヌクレオシドリバーストランスクリプターゼインヒビターとしては、アバカビル（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｃｏ．から利用可能な１５９２Ｕ８９，ＺｉａｇｅｎＴＭ）が挙げられる。非ヌクレオシドリバーストランスクリプターゼインヒビターとしては、以下が挙げられる：ネビラピン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から利用可能なＶｉｒａｍｕｎｅＴＭ）；デラビルジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，Ｍｉｃｈｉｇａｎから利用可能なＲｅｓｃｒｉｐｔｏｒ（登録商標））；およびエファビレンズ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）（ＤｕＰｏｎｔ  Ｍｅｒｃｋ製のＳｕｓｔｉｖａ（登録商標）として利用可能）。
【００１５】
本発明において有用なプロテアーゼインヒビターの例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：硫酸インジナビル（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ  ｓｕｌｆａｔｅ）（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ  Ｐｏｉｎｔ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ製のＣｒｉｘｉｖａｎＴＭカプセルとして利用可能）、サキナビル（Ｈｏｆｆｉｎａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅから利用可能な、Ｉｎｖｉｒａｓｅ（登録商標）およびＦｏｒｔｏｖａｓｅ（登録商標））、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓから利用可能なＮｏｒｖｉｒ（登録商標））；ＡＢＴ−３７８（新名称：ロピナビル（ｌｏｐｉｎａｖｉｒ）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから利用可能））；アンプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，Ｉｎｃ．から利用可能なＡｇｅｎｅｒａｓｅＴＭ）；ならびに、ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）（Ｖｉｒａｃｅｐｔ（登録商標））およびＧＷ１４１（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ／Ｖｅｒｔｅｘから利用可能）。
【００１６】
リバーストランスクリプターゼおよびプロテアーゼインヒビターのこのような例は、限定されることを意図しない。任意の公知なインヒビター、および開発中のインヒビターが、本発明の方法において使用され得ることが認識される。例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒ  ４２（２０００年１月１０日）：１〜６（本明細書中で参考として援用される）において開示されるＨＩＶ感染に対する薬物を参照のこ。
【００１７】
これらの化合物に適切なヒト投薬量は、広範囲に変化し得る。しかしながら、このような投薬量は、当業者によって容易に決定され得る。治療学的に有効量のこれらの薬物は、ＨＡＡＲＴの間に投与される。「治療学的に有効量」とは、ＨＩＶ感染の影響を低減するのに十分な抗レトロウイルス薬の量、またはＨＡＡＲＴプロトコルにおいて使用される、１種以上の他の抗レトロウイルス薬の薬物動態学プロフィールに好都合に影響を与えるのに十分な量を意図する。「好都合に影響を与える」とは、抗レトロウイルス薬が、治療学的に有効量で投与される場合に、ＨＡＡＲＴにおいて使用される１種以上の他の抗レトロウイルス薬の代謝に影響を与え、その結果、他の薬剤のバイオアベイラビリティが増強されることを意図する。このことによって、この様式においてバイオアベイラビリティが増強される抗レトロウイルス薬の投薬頻度の減少が可能になり得る。投薬頻度の減少は、バイオアベイラビリティを増強させる抗レトロウイルス薬の非存在下で投与される場合、望ましくない副作用を有する抗レトロウイルス薬に対して有益であり得る。ＨＡＡＲＴプロトコルにおいて使用される別の抗レトロウイルス薬の薬物動態に好都合に影響を与えるための、治療学的に有効用量の抗レトロウイルス薬は、代表的には、ＨＩＶに対する直接的な治療効果（例えば、ＨＩＶ複製の阻害）を有するように投与される量よりも低い。この様式において使用される場合、ＨＩＶ複製に対する治療的有効性に必要とされる総投薬量において望ましくない副作用を有する抗レトロウイルス薬は、わずかに有害な副作用を伴う低用量で治療的利益を提供し得る。
【００１８】
従って、１つの実施形態において、抗レトロウイルス薬は、ＨＩＶに感染した被験体に治療学的に有効量で投与される場合、例えば、ＨＩＶの複製を阻害して、それによって抗レトロウイルス治療を受ける被験体におけるウイルスの負荷を低減することによって、ＨＩＶ感染の影響を低減する。別の実施形態において、抗レトロウイルス薬は、ＨＩＶに感染した被験体に治療学的に有効量で投与される場合、ＨＡＡＲＴプロトコルにおいて使用される１種以上の他の抗レトロウイルス薬の薬物動態に好都合に影響を与える。
【００１９】
例えば、総用量で投与される場合、プロテアーゼインヒビターリトナビルは、血清およびリンパ節におけるＨＩＶの強力なインヒビターである。これらの目的のために投与される場合、有害反応（例えば、胃腸管の不耐性、高血糖症、インスリン抵抗性、新規の発病または悪化した糖尿病、血友病者における出血の増加、口周辺または末梢の感覚異常症、味覚の変化、ならびに吐気および嘔吐）が通例である。リトナビルは、低用量（例えば、１００〜４００ｍｇ  ｂｉｄ）にて、最小の内因性抗ウイルス活性で投与されて、血清濃度を増加させ、かつ他のプロテアーゼインヒビターの投薬頻度を低減し得る（Ｈｓｕら、（１９９８）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉ７ｅｔ．３５：２７５を参照のこと）、例えば、プロテアーゼインヒビターロピナビル（ＡＢＴ−３７８）に対するリトナビルの好都合な影響を参照のこと（Ｅｒｏｎら、（１９９９）ＩＣＡＡＣ  ３９補遺：１８，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＬＢ−２０）。
【００２０】
任意の所定の抗レトロウイルス薬に対する投薬量に関するガイダンスは、当該分野で利用可能であり、このガイダンスは、推奨された投薬量にて市販されている薬剤を投与することを含む。例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒ  ４２（２０００年１月１０日）：１〜６（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。従って、例えば、ＩＤＶは、約８００ｍｇの投薬量で、１日に３回投与され得；Ｄ４Ｔは、約３０〜４０ｍｇの投薬量で、１日に２回投与され得；そしてネルフィナビルは、約１２５０ｍｇの投薬量で、１日に２回、または７５０ｍｇの投薬量で１日に３回投与され得る。これらの薬剤は、一般に、経口処方物で投与されるが、当該分野で公知の、任意の適切な投与手段が、これらの送達に利用され得る。
【００２１】
本発明のために、ＨＡＡＲＴは、活発に複製されるウイルスのプールを、被験体から収集された血漿サンプル中で検出不可能な量まで効果的に減少させるために、ＨＩＶに感染した被験体に投与される。血漿中の「検出不可能な量」とは、活発に複製されるＨＩＶの量が、約５００ＲＮＡ分子／ｍｌ未満、好ましくは、約４００ＲＮＡ分子／ｍｌ未満、より好ましくは、約３００ＲＮＡ分子／ｍｌ未満、なおより好ましくは、約２００ＲＮＡ分子／ｍｌ、なおより好ましくは、約１００ＲＮＡ分子／ｍｌ、最も好ましくは、約５０ＲＮＡ分子／ｍｌであることを意図する。当業者に公知の任意の方法（本明細書中の他の箇所に記載される方法を含む）は、血漿中のウイルスの負荷を測定するために使用され得る。従って、例えば、血漿ウイルスの負荷は、分枝鎖ＤＮＡアッセイ（ｂＤＮＡ）（これは、５０  ＨＩＶ  ＲＮＡ分子／ｍｌの低い検出限界（ＬＬＤ）を有する）を使用して決定され得る（Ｊａｃｏｂｓｏｎら、（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１０４０５〜１０４１０（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。検出不可能な量の複製ウイルスが、ＨＩＶに感染した被験体から得られた血漿サンプル中に存在する場合、血漿ウイルスＲＮＡは、被験体中で「検出不可能である」と言われる。
【００２２】
本発明の方法に従って、ＨＩＶに感染した被験体は、本明細書中の他の箇所で規定されるようなＩＬ−２治療と組み合わせて、少なくとも１サイクルの断続的投薬レジメンについて、ＨＡＡＲＴを投与される。「断続的投薬レジメン」とは、前に規定されたように、ＨＡＡＲＴをＨＩＶに感染した被験体に、血漿ウイルスＲＮＡが検出不可能な量まで減少するのに十分な期間にわたって投与し、次いで、血漿ウイルスＲＮＡが被験体中で許容可能な閾値レベルに到達するまで、ＨＡＡＲＴの投与を中断する工程を包含する、投薬レジメンを意味する。「許容可能な閾値レベル」とは、少なくとも約２００ＲＮＡ分子／ｍｌ、好ましくは、少なくとも約５００ＲＮＡ分子／ｍｌ、より好ましくは、少なくとも約１，０００ＲＮＡ分子／ｍｌ、なおより好ましくは、少なくとも約５，０００ＲＮＡ分子／ｍｌ、最も好ましくは少なくとも約１０，０００ＲＮＡ分子／ｍｌの検出可能な量の血漿ウイルスＲＮＡを意図する。血漿ウイルスＲＮＡ
が許容可能な閾値レベルに到達した場合、続く断続的ＨＡＡＲＴ投薬レジメンは、元に戻される。
【００２３】
例えば、１つの実施形態において、本明細書中に示したＩＬ−２治療を受けている、ＨＩＶに感染した被験体は、血漿ウイルス負荷が検出不可能なレベルまで減少するまで、ＨＡＡＲＴを投与される。次いで、ＨＡＡＲＴは、血漿ウイルス負荷が少なくとも約５，０００ＲＮＡ分子／ｍｌ、好ましくは、少なくとも約１０，０００分子／ｍｌに到達するまで、中断され、このとき、ＨＡＡＲＴは、血漿ウイルス負荷が再び検出不可能なレベルまで減少するまで、元に戻される。
【００２４】
ＨＡＡＲＴの時間長は、血漿中の活発に複製するウイルスが検出不可能な量に到達するように投与され、そしてウイルスの反跳後のＨＡＡＲＴの中断に対する時間長は、いくつかの因子（疾患の重篤度、ＨＡＡＲＴのために投与される抗レトロウイルス薬の組み合わせおよび投薬量、ならびにＩＬ−２治療と組み合わせた、患者のＨＡＡＲＴの耐性（特に、プロトコルに対する副作用およびプロトコルの厳守に関する）を含むがこれらに限定されない）に依存する。一般的に、ＩＬ−２治療と組み合わせた断続的ＨＡＡＲＴサイクルを受容する患者において、血漿ウイルス負荷は、ＨＡＡＲＴを中断する前少なくとも約１週間、好ましくは、少なくとも約２週間、より好ましくは、少なくとも約３週間、なおより好ましくは、少なくとも約４週間検出不可能でなければならない。同様に、ＨＡＡＲＴの中断後、本発明の方法に従って、ＩＬ−２治療との併用処置を受けている、ＨＩＶに感染した被験体は、少なくとも２つの連続した決定の間（これら各々は、ＨＡＡＲＴを元に戻す前約１週間離れており、好ましくは、約１０日間離れており、より好ましくは、約２週間離れている）、許容可能な閾値レベルに到達する血漿ウイルス負荷を有するべきである。ＨＡＡＲＴ治療の期間中に血漿ウイルスＲＮＡレベルをモニタリングする（例えば、毎週または隔週の測定）ことは、ＩＬ−２治療によって支持される再構成した免疫系が、ウイルスの複製の初期バースト、続くＨＡＡＲＴの中断に対して十分な時間を有し、それによってＨＡＡＲＴの早期回復が妨げられることを確実にする。
【００２５】
前述のように、少なくとも１サイクルのＨＡＡＲＴの断続的投薬レジメンを用いた処置を受けている、ＨＩＶに感染した被験体は、ＩＬ−２治療を用いた処置を同時に受ける。「ＩＬ−２治療」とは、被験体へのＩＬ−２またはその変異体の投与を意図し、このような治療により、ＨＡＡＲＴの断続的投薬レジメンの各サイクル全体を通して、被験体内でのＩＬ−２またはその変異体の基準レベルが提供される。ＩＬ−２またはその変異体の「基準レベル」とは、免疫系を刺激するのに十分な薬剤の量を意図し、これによって、ＨＡＡＲＴ投与の存在または非存在下で処置された患者において免疫の再構築が提供される。免疫の再構成は、免疫機能、従って患者内の免疫応答性を回復させる。免疫機能の回復は、例えば、ヘルパー／インデューサＴ細胞機能の増強（ＣＤ＋４細胞レベルの増加、リンパ球機能の回復、および／またはＩＬ−２レセプターの発現の増加を含む）によって明らかにされ得る。
【００２６】
ＩＬ−２治療は、治療有効量のＩＬ−２もしくはその改変体を含む薬学的組成物または治療有効用量のＩＬ−２もしくはその改変体を含む薬学的組成物を、ＨＡＡＲＴを用いた断続的投与レジメンの各サイクルを通して特定の投与レジメンに従って、ＨＩＶ感染被験体に投与する工程を包含する。従って、任意の所定のサイクル内において、ＩＬ−２は、ＨＡＡＲＴ投与の間および続くＨＡＡＲＴ停止の間に投与される。本発明の目的のために、治療有効量のＩＬ−２もしくはその改変体または治療有効用量のＩＬ−２もしくはその改変体は、ＨＩＶ感染被験体において、投与レジメンに従って投与された場合に、免疫機能を回復させ、ゆえに免疫応答性を回復させるに十分な量の、ＩＬ−２またはその改変体である。ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物は、当該分野で公知の任意の受容可能な方法を用いて投与され得る。好ましくは、ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物は、注射によって投与され、より好ましくは、静脈内（ＩＶ）注射または皮下（ＳＣ）注射によって投与され、最も好ましくはＳＣ注射によって投与される。何が治療有効量のＩＬ−２もしくはその改変体または治療有効用量のＩＬ−２もしくはその改変体を構成するかは、投与経路および利用される特定の投与レジメンに依存する。投与様式および断続的ＨＡＡＲＴと組合わせて投与されるＩＬ−２（またはその改変体）のそれぞれの量に影響を与えるさらなる因子としては、ＨＩＶ感染の重篤度、病歴、ならびに治療を受ける患者の、年齢、身長、体重、健康、および身体の状態が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、本発明の記載を考慮すると、断続的ＨＡＲＲＴ投与レジメンの少なくとも１サイクルと組合わせて投与されるべきＩＬ−２またはその改変体の量を容易に決定して、ＨＩＶの免疫学的制御を改善し得る。
【００２７】
例えば、本発明の１つの実施形態において、ＩＬ−２治療は、低用量のＩＬ−２またはその改変体を毎日投与することによって提供される。「低用量」とは、約０．６ｍＩＵ／ｍ２〜約３．５ｍＩＵ／ｍ２の範囲、好ましくは約０．７ｍＩＵ／ｍ２〜約３．０ｍＩＵ／ｍ２の範囲、より好ましくは約０．９ｍＩＵ／ｍ２〜約１．５ｍＩＵ／ｍ２の範囲、なおより好ましくは約１．０ｍＩＵ／ｍ２〜約１．３ｍＩＵ／ｍ２の範囲、最も好ましくは約１．２０ｍＩＵ／ｍ２の、治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が意図される。このような低用量は、任意の受容可能な経路で投与され得るが、好ましくはＩＬ−２またはその改変体は、皮下投与される。この様式でＩＬ−２治療を提供することは、高用量のＩＬ−２投与または高いボーラスＩＬ−２投与でのＩＬ−２治療と通常関連する毒性応答を最小にする。このような毒性応答としては、慢性疲労、悪心、低血圧、熱、悪寒、体重増加、そう痒（ｐｒｕｒｉｔｉｓ）または発疹、呼吸困難、窒素血、錯乱、血小板減少、心筋梗塞、胃腸毒性、および脈管漏出症候群が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ａｌｌｉｓｏｎら（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７（１）：７５−８０；およびＧｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３（８）：２０８１−２０８５を参照のこと）。
【００２８】
本発明の別の実施形態において、ＩＬ−２治療は、中間用量のＩＬ−２またはその改変体の断続的投与によって提供される。「中間用量」のＩＬ−２とは、約３．０ｍＩＵ／日〜約１５．０ｍＩＵ／日の範囲、好ましくは約６．０ｍＩＵ／日〜約１２．０ｍＩＵ／日の範囲、より好ましくは約８．０ｍＩＵ／日〜約１０．０ｍＩＵ／日の範囲、最も好ましくは約９．０ｍＩＵ／日の、治療有効量のＩＬ−２またはその改変体が意図される。このような中間用量は任意の受容可能な経路によって投与され得るが、好ましくはＩＬ−２またはその改変体は、皮下投与される。「断続的」投与とは、中間用量のＩＬ−２またはその改変体がある期間投与され、次いで、投与をある期間控えることを意図する。従って、本発明の１つの実施形態において、中間用量のＩＬ−２の断続的投与は、ＨＡＡＲＴに対する断続的投与レジメンの少なくとも１サイクルと組合わせて、４週間置きに５日間、好ましくは６週間置きに５日間、より好ましくは８週置きに５日間、ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物をＳＣ投与することを含む。
【００２９】
従って、本発明の方法は、ＩＬ−２治療と組合わせたＨＡＡＲＴの断続的投与レジメンの少なくとも１サイクルにて、ＨＩＶ感染患者に投与する工程を包含する。ＩＬ−２治療は、患者においてその薬剤のベースラインレベルを提供し、その結果、有効な免疫防御が、抗レトロウイルス剤の非存在下において活発に複製しているＨＩＶに対して上昇し得る。ＨＡＡＲＴが中断される場合、免疫再構成された患者は、抗ウイルス反応性（この抗ウイルス反応性は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、より詳細にはＨＩＶ抗原特異的ＣＤ８＋  細胞の増大によって明らかである）を増大する。ＣＤ８＋  Ｔ細胞（詳細には、ＨＩＶ抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞）の増殖拡大は、ウイルス負荷に二次的な低下を効果的に誘導し、その結果、複製ウイルスの免疫学的封じ込めが達成される。
【００３０】
本発明の方法は、疾患の進行によってＨＩＶ特異的免疫の永久的な損失が生じていない限り、ＨＩＶ感染被験体（詳細には、一次感染の被験体および慢性感染の被験体）におけるＨＩＶの処置および／または管理に関して有益である。任意の所定の患者によって達成される免疫学的封じ込めの程度は、彼らの疾患の進行、病歴、および以前のＨＩＶ処置に依存する。一般的に、本発明の方法に従って断続的のＨＡＡＲＴおよびＩＬ−２治療の少なくとも１サイクルを受けたＨＩＶ感染被験体は、断続的のＨＡＡＲＴ治療またはＩＬ−２治療単独で受けた患者よりも、少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、さらには少なくとも約５０％長い期間にわたり、さらなる抗レトロウイルス剤の非存在下で、ウイルスの免疫学的封じ込めを示す。本発明の方法の効果および任意の副作用は、当該分野で利用可能な任意の方法（以下の実施例に記載される方法を含む）を用いて、被験体の処置全体にわたってモニターされ得る。被験体の生命徴候、腎機能および肝機能、グルコースレベルなどは、予め決定された時間間隔にて測定され得る。Ｔ細胞の活性化は、ＩＬ−２レセプター発現によって評価され得る。血液サンプルは、当業者に公知の任意のプロトコルを用いてＨＩＶに関して分析され得る。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、生物学的サンプル中のＨＩＶ核酸の存在を決定し得る。ＰＢＭＣは、特定の間隔（例えば、１週間毎または２週間毎）で被験体から収集され得、非感染ＣＤ４＋細胞との共培養によって感染性ＨＩＶについて試験され得る。以前未感染の細胞の感染は、被験体中の感染性ＨＩＶの存在を示す。これらの検出方法をさらに使用して、本発明の方法に従って処置を受けている被験体から得られたリンパ節サンプル中の複製ＨＩＶの存在を決定し得る。例えば、血漿中の複製ＨＩＶの存在は、分枝鎖ＤＮＡアッセイ（ｂＤＮＡ）を用いて決定され得、このアッセイは、５０ＨＩＶ  ＲＮＡ分子／ｍｌの低い検出限界を有する（Ｊａｃｏｂｓｏｎら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１０４０５−１０４１０を参照のこと；この文献は、本明細書中に参考として援用される）。リンパ節中の複製ＨＩＶの存在は、例えば、共培養アッセイ（Ｃｈｕｎ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ４０１：８７４−８７５（この文献は、本明細書中に参考として援用される）を用いて決定され得る。
【００３１】
本明細書中に使用される場合、用語「ＩＬ−２」は、正常末梢血リンパ球によって産生され、かつ低濃度で体内に存在するリンホカインをいう。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７−１００８によって最初に記載され、そして本来は、刺激Ｔリンパ球の増殖を誘導するその能力に起因して、Ｔ細胞増殖因子と呼ばれた。ＩＬ−２は、１３，０００〜１７，０００（ＧｉｌｌｉｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１７０９）の範囲の分子量が報告され、６〜８．５の範囲の等電点を有するタンパク質である。
【００３２】
本発明の方法における使用に関して本明細書中に記載される薬学的組成物中に存在するＩＬ−２は、ネイティブであり得るか、または組換え技術によって獲得され得、そして任意の供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒトなどの哺乳動物供給源を含む）由来であり得る。好ましくは、このようなポリペプチドは、ヒト供給源から誘導され、より好ましくは、微生物宿主からの組換えヒトタンパク質である。
【００３３】
本発明の方法において有用な薬学的組成物は、生物学的に活性なＩＬ−２改変体を含み得る。このような改変体は、ネイティブポリペプチドの所望の生物学的活性を保持するべきであり、その結果、この改変体ポリペプチドを含む薬学的組成物は、被験体に投与された場合に、ネイティブポリペプチドを含む薬学的組成物と同じ治療効果を有する。すなわち、この改変体ポリペプチドは、ネイティブポリペプチドについて観察されるものと類似の様式で、薬学的組成物中の治療的に活性な成分としてはたらく。改変体ポリペプチドが所望の生物学的活性を保持し、ゆえに、薬学的組成物中で治療的に活性な成分としてはたらくか否かを決定するための方法が、当該分野で利用可能である。生物学的活性は、ネイティブポリペプチドまたはネイティブタンパク質の活性を測定するために特別に設計されたアッセイ（本発明に記載されるアッセイを含む）を用いて測定され得る。さらに、生物学的に活性なネイティブポリペプチドに対して惹起された抗体は、改変体ポリペプチドに結合するその能力について試験され得る（ここで、有効な結合は、ポリペプチドがネイティブポリペプチドのコンフォメーションと類似のコンフォメーションを有することを示す）。
【００３４】
ネイティブＩＬ−２の適切な生物学的に活性な改変体または天然に存在するＩＬ−２の適切な生物学的に活性な改変体は、これらのポリペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体であり得る。「フラグメント」とは、インタクトなポリペプチド配列およびインタクトなポリペプチド構造の一部のみから構成されるポリペプチドを意図し、そしてネイティブポリペプチドのＣ末端欠失またはＮ末端欠失であり得る。「アナログ」とは、ネイティブポリペプチドまたはネイティブポリペプチドのフラグメントの、いずれかのアナログを意図し、ここで、これらのアナログは、１つ以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を有する、ネイティブポリペプチド配列およびネイティブポリペプチド構造を含む。「ムテイン」（例えば、本明細書中に記載されるようなムテイン）および１つ以上のペプトイド（ペプチド模倣物）を有するペプチドもまた、用語「アナログ」のに含まれる（国際公開番号ＷＯ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」とは、ネイティブポリペプチドの所望の生物学的活性が保持される限り、目的のネイティブポリペプチドもしくはネイティブポリペプチドのフラグメント、またはこれらの各アナログの、任意の適切な改変（修飾）（例えば、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合体化（例えば、ポリエチレングリコールとのポリマー結合体化）、または外来部分の他の付加）を意図する。ポリペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体を作製するための方法は、一般的に当該分野で利用可能である。
【００３５】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、目的のネイティブポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ配列中の変異によって、調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更のための方法は、当該分野で周知である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならびにこれらの文献に引用される参考文献；これらは、本明細書中に参考として援用される。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（これは、本明細書中に参考として援用される）のモデル中に見出され得る。保存的置換（例えば、あるアミノ酸と類似の特性を有する別のアミノ酸との置換）が、好ましい。保存的置換の例としては、以下：
【００３６】
【化１】
2004528271.tif 000002
が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの改変体を構築する場合、改変体が所望の活性を保持し続けるような改変が、作製される。明らかに、改変体ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製されるいかなる変異も、その配列のリーディングフレームをずらさないものでなければならず、好ましくは、二次的なｍＲＮＡ構造を生成し得る相補的領域を作製しない。ＥＰ特許出願公開番号７５，４４４を参照のこと。
【００３８】
ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体は、一般的に、参照ＩＬ−２ポリペプチド分子（例えば、比較のための基礎として役立つネイティブなヒトＩＬ−２）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、好ましくは、少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％〜９５％もしくはそれ以上、そして最も好ましくは、少なくとも約９８％、９９％もしくはそれ以上のアミノ酸配列同一性を有する。目的のネイティブＩＬ−２ポリペプチドの生物学的に活性な改変体は、わずか１〜１５アミノ酸、わずか１〜１０アミノ酸（例えば、６〜１０）、わずか５アミノ酸、わずか４、３、２もしくは１アミノ酸残基によってネイティブのポリペプチドと異なり得る。「配列同一性」は、改変体のアミノ酸配列の特定の連続したセグメントが、参照分子のアミノ酸配列と配列され、比較される場合、改変体ポリペプチドと、参照として役立つポリペプチド分子内に、同じアミノ酸残基が見い出されることを意図する。この２つのアミノ酸配列間の配列同一性％は、マッチした位置の数を生じる両方の配列において生じる同一なアミノ酸残基の位置の数を決定し、このマッチした位置の数を、参照分子に対して比較されるセグメント中の位置の全体の数で割って、その結果に１００を乗じることによって計算され、配列同一性％が求まる。
【００３９】
２つの配列の最適整列の目的のために、改変体のアミノ酸配列の連続したセグメントが、参照分子のアミノ酸配列に対して、追加のアミノ酸残基または欠失したアミノ酸残基を有し得る。参照アミノ酸配列に対する比較のために使用される連続したセグメントは、少なくとも２０連続したアミノ酸残基を含み、そして、３０、４０、５０、１００またはそれ以上の残基であり得る。改変体のアミノ酸配列におけるギャップの含有に関連して増加した配列同一性に対する補正は、ギャップペナルティーを割り当てることによって行われ得る。配列整列の方法は、両方のアミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に対して当該分野で周知である。
【００４０】
従って、任意の２つの配列間の同一性％の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成され得る。１つの好ましい、配列の比較のために利用される数学アルゴリズムの限定されない例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）（ＧＣＧ配列整列ソフトウェアパッケージの一部である）において利用される。アミノ酸配列を比較する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティー（ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｅｎａｌｔｙ）、および４のギャップペナルティー（ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）が、ＡＬＩＧＮプログラムとともに使用され得る。２つの配列を比較するのに使用するための、数学的アルゴリズムの限定されない別の好ましい例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４のアルゴリズムであり、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７として改変されている。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチドサーチは、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、語長＝１２を用いて行われ、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に対して相同なヌクレオチド配列が得られ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質サーチは、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、語長＝３を用いて行われ、目的のポリペプチドに対して相同なアミノ酸配列が得られ得る。比較目的のためにギャップ化した整列を得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９中に記載されるように利用され得る。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔは、分子間の距離の関係を検出する反復サーチを行うために使用され得る。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）（前出）を参照のこと。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用している場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）が使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。また、ＡＬＩＧＮプログラム（Ｄａｙｈｏｆｆ（１９７８）、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：補遺３（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．））およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから入手可能）中のプログラム、例えば、ＧＡＰプログラム（プログラムのデフォルトパラメータが使用される）を参照のこと。
【００４１】
アミノ酸配列同一性％を考える場合、いくつかのアミノ酸残基の位置が、保存的なアミノ酸置換（これは、タンパク質機能の性質に影響を与えない）の結果として、異なり得る。このような場合において、配列同一性％は、保存的に置換されたアミノ酸における類似性を説明するように上方向に調整され得る。このような調整は、当該分野で周知である。例えば、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７を参照のこと。
【００４２】
本発明の目的のために、好ましくは、改変体ＩＬ−２ポリペプチドおよび参照ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、ネイティブまたは天然に存在するＩＬ−２、さらに好ましくは、ネイティブなヒトＩＬ−２）の間の配列同一性％は、１２のギャップオープンペナルティー（ｇａｐ  ｏｐｅｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）および２のギャップオープンペナルティー、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いたアフィンギャップサーチを用いて、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性サーチアルゴリズムを用いて決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性サーチアルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９中に教示される。
【００４３】
ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの詳細な化学構造は、因子の数に依存する。イオン化可能なアミノ基およびカルボキシル基が分子中に存在する場合、特定のポリペプチドが、酸性塩または塩基性塩、または中性形態として得られ得る。これらの生物学的活性を保持する全ての調製物は、適切な環境条件におかれる場合、本明細書中で使用されるようなＩＬ−２活性を有するポリペプチドの定義中に含まれる。さらに、ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）を用いて誘導体化することによって、または脂質、ホスフェート、アセチル基などのような他の補充分子によって、増強され得る。また、糖類と結合することによっても増強され得る。このような増強の特定の局面は、産生宿主の翻訳後のプロセシング系を介して達成され；他のこのような改変は、インビトロで導入され得る。任意の事象において、このような改変は、ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限りにおいて、本明細書中で使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。このような改変は、種々のアッセイにおける活性に定量的または定性的に影響を与え得る（ポリペプチドの活性を高めるかまたは減少させるかのいずれかによって）ことが予想される。さらに、鎖中の個々のアミノ酸残基が、酸化、還元、または他の誘導体化によって改変され得、そしてポリペプチドを切断して活性を保持するフラグメントを得る。このような活性を破壊しない変更は、このポリペプチド配列を、本明細書中で使用されるような目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義から除去しない。
【００４４】
当該分野により、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的なガイダンスを提供される。ＩＬ−２改変体の調製において、当業者は、ネイティブタンパク質ヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する改変が、本発明の方法において使用される薬学的組成物の治療的に活性な成分として使用するために適切な改変体を生じることを容易に決定し得る。
【００４５】
本発明の方法において使用するためのＩＬ−２またはその改変体は、任意の供給源由来であり得るが、好ましくは、組換えＩＬ−２である。「組換えＩＬ−２」は、インターロイキン−２を意図し、これは、ネイティブ配列ＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有し、組換えＤＮＡ技術によって調製されたインターロイキン−２（例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０２：３０５〜３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１：４３０７−４３２３に記載される）または変異的に変更されたＩＬ−２（Ｗａｎｇら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：１４３１〜１４３３によって記載される）である。一般的に、ＩＬ−２をコードする遺伝子は、本明細書中で記載されるように、クローン化され、次いで、形質転換された生物、好ましくは微生物、最も好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現される。宿主生物は、発現条件下で、外来遺伝子を発現し、ＩＬ−２を産生する。合成的な組換えＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母またはヒト細胞）中で作製され得る。細胞からＩＬ−２を増殖し、収穫し、破壊または抽出するためのプロセスは、実質的に、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号；同第４，５３０，７８７号；同第４，５７２，７９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９３１，５４３号（これらは、本明細書中で、その全体を参考として援用される）に記載される。
【００４６】
改変体ＩＬ−２タンパク質の例としては、欧州特許出願番号１３６，４８９号；欧州特許出願番号８３１０１０３５．０（１９８３年２月３日出願）（公開番号９１５３９の下で、１９８３年１０月１９日に公開）；欧州特許出願番号８２３０７０３６．２（１９８２年１２月２２日出願）（公開番号８８１９５の下で、１９８３年９月１４日公開）；欧州特許出願番号８３３０６２２１．９（１９８３年１０月１３日出願、これは、ベルギー国特許第８９３，０１６号、共同所有される米国特許第４，５１８，５８４号と等価である）（出願番号１０９７４８の下で１９８４年５月３０日公開）中に記載される組換えＩＬ−２ムテイン；米国特許第４，７５２，５８５号およびＷＯ９９／６０１２８中に記載されるムテイン；そして本明細書中で例として使用され、米国特許第４，９３１，５４３号に記載されるＩＬ−２ムテイン（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２）とともに、この米国特許中に記載される、他のＩＬ−２ムテイン（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。さらに、ＩＬ−２は、ポリエチレングリコールを用いて改変され、溶解性を高められ、そして薬物動態プロフィールを変更される（米国特許第４，７６６，１０６（これは、本明細書中でその全体を参考として援用される）を参照のこと）。
【００４７】
治療的に活性な成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物は、本発明の方法において使用され得る。このような薬学的組成物は、当該分野で公知であり、そして限定されないが、以下に開示される組成物が挙げられる：米国特許第４，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；ならびに５，０７８，９９７号（これらは、本明細書中で参考として援用される）。従って、ＩＬ−２またはその改変体を含む、液体組成物、凍結乾燥した組成物、またはスプレー乾燥した組成物は、当該分野で公知であり、この組成物は、本発明の方法に従って、後で被験体に投与するために水溶液または非水溶液または懸濁液として調製され得る。これらの組成物の各々は、治療的に活性な成分または予防的に活性な成分として、ＩＬ−２またはその改変体を含む。「治療的に活性な成分または予防的に活性な成分」は、薬学的組成物が、被験体に投与される場合、被験体内の疾患または状態の処置または予防に対して、ＩＬ−２またはその改変体が、組成物に特異的に組込まれ、所望の治療応答または予防応答をもたらすことを意図する。好ましくは、薬学的組成物は、適切な安定化剤、膨張剤、またはその両方を含み、調製または保存の間のタンパク質安定性および生物学的活性の損失を関連した問題を最小化し得る。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の方法において有用なＩＬ−２を含む薬学的組成物は、安定化したモノマー性ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、マルチマー性ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、および安定化した凍結乾燥もしくはスプレー乾燥したＩＬ−２もしくはその改変体を含む組成物である。
【００４９】
安定化したモノマー性ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物は、同時係属中のＰＣＴ出願の表題「Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｌｉｑｕｉｄ  ３Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」、ＰＣＴ番号  ＰＣＴ／ＵＳ００／２７１５６に譲渡、２０００年１０月３日出願（この開示内容は、本明細書中で参考として援用される）中に開示される。「モノマー性」ＩＬ−２は、本明細書中で記載される薬学的組成物中で、タンパク質分子が、凝集体形態ではなく、そのモノマー形態で実質的に存在していることを意図する。それ故、ＩＬ−２の共有結合性または疎水性のオリゴマーまたは凝集体は、存在しない。簡単に言うと、これらの液体組成物中のＩＬ−２またはその改変体は、保存の間にＩＬ−２またはその改変体の凝集形成を減少させるのに十分な量のアミノ酸塩基を用いて処方される。アミノ酸塩基は、アミノ酸またはアミノ酸の組み合わせであり、任意の所定のアミノ酸は、その遊離塩基形態またはその塩形態のいずれかで存在する。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群から選択される。これらの組成物はさらに、液体組成物のｐＨをＩＬ−２またはその改変体の安定性のために許容可能な範囲内に維持するために緩衝剤を含み、この緩衝剤は、実質的にその塩形態の酸、その塩形態における酸、または酸およびその塩形態の混合物を含まない酸である。好ましくは、この酸は、コハク酸、クエン酸、リン酸、およびグルタミン酸からなる群から選択される。このような組成物は、本明細書中で安定化されたモノマー性ＩＬ−２薬学的組成物として参照される。
【００５０】
これらの組成物におけるアミノ酸塩基は、液体薬学的組成物の貯蔵の間の凝集物の形成に対して、ＩＬ−２またはその改変体を安定化するのに役立つが、実質的にその塩形態を含まない酸、その塩形態の酸、または緩衝剤としての酸およびその塩形態の混合物の使用は、ほぼ等張性の浸透圧を有する液体組成物を生じる。この液体薬学的組成物は、ポリペプチドの安定性をさらに増加するために、他の安定化剤、より詳細には、メチオニン、ポリソルベート８０のような非イオン性界面活性剤、およびＥＤＴＡをさらに取り込み得る。このような液体薬学的組成物は、実質的にその塩形態を含まない酸、その塩形態の酸、酸およびその塩形態の混合物と組み合わせたアミノ酸塩基の添加により安定化され、これらの２つの成分の組み合わせの非存在下で処方された液体薬学的組成物と比較して増加した貯蔵安定性を有する組成物を生じる。
【００５１】
安定化されたモノマーＩＬ−２またはその改変体を含む、これらの液体薬学的組成物は、水溶性形態で使用され得るか、または凍結状態、もしくは液体形態への後の再構成のための乾燥形態、もしくは本発明の方法に従って被験体に投与するのに適切な他の形態で後の使用のために貯蔵され得るかのいずれかである。「乾燥形態」は、液体薬学的組成物または処方物が、冷凍乾燥（すなわち、凍結乾燥；例えば、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＰｏｌｌｉ（１９８４）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３８：４８−５９を参照のこと）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第５版；Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｘ，Ｕ．Ｋ．）、４９１〜６７６頁；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９−１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０を参照のこと）、または風乾（ＣａｒｐｅｎｔｅｒおよびＣｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２５：４５９−４７０；ならびにＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）のいずれかによって乾燥されることを意図する。
【００５２】
多量体ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物の例は、共同所有の米国特許第４，６０４，３７７号（この開示は、本明細書中に参考として援用される）において開示される。「多量体（の）」は、タンパク質分子が、１０〜５０分子の平均分子会合を有する微小凝集形態で、薬学的組成物で存在することが意図される。これらの多量体は、緩く結合した、物理的に会合したＩＬ−２分子として存在する。これらの組成物の凍結乾燥形態は、商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で市販されている。この参考文献において開示される凍結乾燥処方物は、組換えＩＬ−２がバルクを提供するマンニトールのような水溶性キャリアと混合されている、選択的に酸化された微生物産生組換えＩＬ−２、および水中で組換えＩＬ−２の可溶性を保証するに十分な量のドデシル硫酸ナトリウムを包含する。これらの組成物は、非経口投与のための水性注射における再構成に適しており、安定であり、ヒト患者において十分に耐用性である。再構築される場合、ＩＬ−２またはその改変体は、その多量体状態を保持する。多量体ＩＬ−２またはその改変体を含むこのような凍結乾燥組成物または液体組成物は、本発明の方法によって包含される。このような組成物は、本明細書中で多量体ＩＬ−２薬学的組成物といわれる。
【００５３】
本発明の方法はまた、ＩＬ−２またはその改変体を含む安定化された凍結乾燥薬学的組成物または噴霧乾燥薬学的組成物を使用し得、これらは、本発明の方法に従う投与のための液体形態または他の適した形態に再構成され得る。このような薬学的組成物は、同時係属出願の表題「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２」、米国仮出願番号６０／１７３，９２２（１９９９年１２月３０日出願）（本明細書中に参考として援用される）において開示される。これらの組成物は、少なくとも１つのバルク剤、乾燥プロセスの間にタンパク質を安定化するに十分な量の少なくとも１つの薬剤、または両方をさらに含み得る。「安定化（された）」は、ＩＬ−２タンパク質またはその改変体が、そのモノマー形態または多量体形態、ならびに組成物の固体形態または乾燥粉末形態を得るための凍結乾燥または噴霧乾燥後の品質、量、および効力のその他の重要な特性を保持することが意図される。これらの組成物において、バルク剤としての使用のための好ましいキャリア物質としては、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン、またはその任意の組み合わせが挙げられ、最も好ましくは、グリシンである。バルク剤は、使用される薬剤に依存して、０％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲で処方物中に存在する。安定化剤としての使用のための好ましいキャリア物質としては、任意の糖または糖アルコールまたはアミノ酸が挙げられる。好ましい糖としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロース、またはその任意の組み合わせが挙げられ、好ましくは、スクロースである。安定化剤が糖である場合、これは、約０％〜約９．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．５％〜約５．０％、より好ましくは約１．０％〜約３．０％、最も好ましくは約１．０％の範囲に存在する。安定化剤がアミノ酸である場合、これは、約０％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．３％〜約０．７％、最も好ましくは約０．５％の範囲で存在する。これらの安定化された凍結乾燥組成物または噴霧乾燥組成物は、必要に応じて、メチオニン、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）もしくはＥＤＴＡ二ナトリウムのようなその塩の１つ、または他のキレート剤（これは、メチオニンの酸化に対してＩＬ−２またはその改変体を保護する）を包含し得る。この様式でのこれらの薬剤の使用は、同時係属中の米国仮出願番号６０／１５７６９６（本明細書中に参考として援用される）において記載される。安定化された凍結乾燥組成物または噴霧乾燥物は、緩衝化剤を使用して処方され得、この緩衝化剤は、液相に存在する場合（例えば、処方プロセスの間、組成物の乾燥形態の再構成の後など）、薬学的組成物中のｐＨを許容範囲内（好ましくは、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８．５の間）に維持する。緩衝液は、これらが乾燥プロセスに適合し、そして処理の間および貯蔵の際にタンパク質の品質、純度、効力、および安定性に影響しないように、選択される。
【００５４】
以前に記載された安定化された単量体、多量体、および安定化された凍結乾燥ＩＬ−２薬学的組成物または噴霧乾燥ＩＬ−２薬学的組成物は、本発明の方法における使用のための適切な組成物を表す。しかし、ＩＬ−２またはその改変体を治療的活性成分として含む、任意の薬学的組成物は、本発明の方法によって包含される。
【００５５】
以下の実施例は、限定のためでなく、例示のために提供される。
【００５６】
（実験）
ＨＩＶ疾患は、特に、より進行した疾患を有する被験体における、抗原誘導性ＩＬ−２生成の障害によって特徴付けられる。ＨＩＶ抗原と組み合わせた外因性ＩＬ−２は、ＨＩＶ特異的ＣＴＬの拡大を強化し、そしてこれらの細胞のエフェクターを増強するはずであり、これにより、ＨＩＶのより密接な免疫学的制御を生じる。ＩＬ−２の長期投与は、ＨＩＶ特異的細胞性免疫を実際に促進し得る。
【００５７】
小規模の未制御試験により、低用量の皮下ＩＬ−２を毎日受ける、９人のＨＩＶ感染の被験体におけるＨＡＡＲＴの中断の後に、ＨＡＡＲＴの中断の平均約１９日後に開始するウイルス血症が一過的に急増し、このおよそ２週後にピークに達することが示された（Ｅｍｅｒｔら、（２０００）「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｄａｉｌｙ  ｌｏｗ  ｄｏｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２（ＩＬ−２）ｒｅｖｅａｌｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＨＩＶ」、Ａｂｓｔｒａｃｔ，ＡＩＤＳ  ２０００  ＸＩＩＩ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＩＤＳ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｄｕｒｂａｎ，Ｊｕｌｙ９−１４，２０００）。血漿ウイルスのレベルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞における上昇に呼応して、引き続き減少する。ウイルス血症の開始後６週までに、平均ウイルス濃度は、ピーク濃度の１０％未満に減少した。これらのデータは、ＨＩＶ感染の免疫学的制御におけるＩＬ−２の潜在的な役割を支持する。
【００５８】
ＨＩＶ特異的ＣＴＬ応答は、ＨＩＶ感染を抑える際に重要である。強力かつ広範なＨＩＶ特異的ＣＴＬ応答を一貫して誘発するワクチンを構築する際に困難が存在する。溶液は、治療的「自己免疫」に存在し得る。抗ウイルス「薬物休暇」の間のＨＩＶのバーストへの制御された曝露を介して、ＨＡＡＲＴの中断は、ＨＩＶ特異的記憶ＣＴＬ応答を強化し得、それにより、ＨＩＶ感染のより持続的な免疫学的制御を促進する。ＩＬ−２はさらに、このＨＩＶ特異的ＣＴＬ応答を強化し得、そして感染の長期免疫学的封じ込めの目的を達成する可能性を強化し得る。永続性の免疫学的封じ込めが可能でなくても、抗ウイルス「薬物休暇」を有するＨＡＡＲＴへの曝露の減少は、患者によって歓迎され、これらの患者に対して、ＨＡＡＲＴ丸剤負荷量は重要であり得、これらの患者中で、ＨＡＡＲＴは、不必要な長期の副作用を生成する能力を明確に示す。
【００５９】
以下の制御された研究は、血漿および組織ウイルス負荷量ならびにＨＩＶ特異的免疫に対する、皮下（ＳＣ）ＩＬ−２と組み合わせた、高活性抗ウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）の断続的過程の効果を実証するために行われる。
【００６０】
（実施例１：初期臨床試験）
この研究で使用したＩＬ−２処方物は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎの商品名で、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａにより製造されている。この処方物中のＩＬ−２は、組換え生成されたヒトＩＬ−２ムテイン（アルデスロイキンと呼ばれる）であり、これは、最初のアラニン残基がなく、１２５位のシステイン残基がセリン残基で置換されている（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２と称される）点で、ネイティブなヒトＩＬ−２配列と異なる。このＩＬ−２ムテインを、Ｅ．ｃｏｌｉから発現し、米国特許第４，９３１，５４３号において記載されるように、引き続き、ダイアフィルトレーションおよび陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製する。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎとして市販されるＩＬ−２処方物を、１．３ｍｇのタンパク質（２２ＭＩＵ）を含むバイアル中に、滅菌した、ホワイト〜オフホワイトの保存剤を含まない凍結乾燥粉末として提供する。
【００６１】
少なくとも５００  ＣＤ４＋Ｔ細胞／ｍｍ３を有するＨＩＶ−１、および第３世代ｂＤＮＡアッセイを使用して検出不可能なウイルス血症に感染した１２０人の被験体を、３つの群の１つに無作為化する。
Ａ．連続ＨＡＡＲＴ×８か月
Ｂ．断続的ＨＡＡＲＴ×８か月
Ｃ．断続的ＨＡＡＲＴ＋毎日の低用量ＳＣ  ＩＬ−２、１．２ＭＩＵ／ｍ２×８か月
血漿ウイルス負荷を、研究に関して週に１回モニターする。Ｂ群およびＣ群において、ＨＡＡＲＴは、研究１日目に停止する。血漿ウイルス負荷が２回連続した判定において１０，０００コピー／ｍｌを超えて上昇する場合、および／または研究者の意見で、抗ウイルス治療の再開を指示する臨床疾患進行の証拠が存在する場合、ＨＡＡＲＴは、再開される。ＣＤ４＋Ｔ細胞数は、モニターされる。３５０細胞／ｍｍ３未満のＣＤ４＋Ｔ細胞数は、抗ウイルス治療の再開を引き起こす。この最後の分類の患者は、試験から除かれ、交換される。
【００６２】
ウイルスリバウンドに応答して、ＨＡＡＲＴは、Ｂ群またはＣ群の被験体について再開される場合、ウイルス負荷がその時間までに検出不可能となる場合に投与の１２週間後に停止される。ＨＡＡＲＴの再開の１２週後にウイルス負荷が検出可能となる場合、ＨＡＡＲＴは、ウイルスが検出不可能になるまで続く。抗レトロウイルス治療の２回目の中断後にいつＨＡＡＲＴを再開するかを決定するためのアルゴリズムは、１回目（すなわち、１日目）の中断後にいつＨＡＡＲＴを開始するかを決定するために使用されるアルゴリズムと同一である。研究に関して最初の８か月の間にＢ群およびＣ群におけるＨＡＡＲＴの２回未満の中断が存在する。
【００６３】
研究参加の８か月後、ＨＡＡＲＴ（ＵＶＨＡＡＲＴ）に関して検出不可能なウイルス血漿を有する患者は、抗ＨＩＶ薬を停止する。約８０％の参加患者がこの分類に入ることが予想される。これらの被験体は、さらに４か月研究が許可される。抗レトロウイルス薬は、ウイルス負荷が少なくとも２回連続した定量で少なくとも１０，０００コピー／ｍｌまで上昇する場合、またはＣＤ４＋Ｔ細胞数が３５０細胞／ｍｍ３以下になる場合、研究者の裁量で再開される。
【００６４】
８か月の終わりに、ＨＡＡＲＴを受けていない被験体（ＮＯＨＡＡＲＴ）およびＨＡＡＲＴで検出可能なウイルスを有する被験体（ＤＶＨＡＡＲＴ）は、続いて観察される。抗レトロウイルス薬治療およびウイルス負荷に関するデータを、これらの被験体に関して回収するが、抗レトロウイルス薬治療に関する決定は、研究者の権限内である。
【００６５】
抗レトロウイルス剤の選択は、研究者の責任であるが、被験体は、高活性抗レトロウイルス治療（ＨＡＡＲＴ）（３種類以上の抗レトロウイルス薬の使用として定義される）または二重のプロテアーゼインヒビター治療を構成しないレジメンで処置される。免疫調節効果を有する薬剤は、試験で許可されない。慣例的な（すなわち、緊急でない）ワクチン接種は、試験に関して許可されない。
【００６６】
主要な適性評価として以下が挙げられる：１）１ヶ月の研究全体内で少なくとも１週間離した２つの測定における第３世代ｂＤＮＡアッセイにより検出不可能なｐＶＬ；２）３ヶ月間の安定な抗レトロウイルス療法；３）少なくとも５００細胞／ｍｍ３のＣＤ４＋Ｔ細胞数；および４）ネガティブ血清試験または尿妊娠試験（ｕｒｉｎｅ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｔｅｓｔ）。
【００６７】
（効力の変動要因）
（一次）８月目にＨＡＡＲＴ中の検出不可能なウイルス負荷を有する被験体間でのウイルス学的リバウンドまでの時間
（二次）
・８月目および１２月目に検出不可能なｐＶＬを有する被験体の比率
・８月目のＨＡＡＲＴ中断後のウイルスリバウンドの速度論
・ＨＡＡＲＴ（研究中の）の期間
・８月目および１２月目にＨＡＡＲＴ中の被験体の比率
・共培養アッセイ（８月目および１２月目）を用いた休止ＣＤ４＋細胞中の複製コンピテントなＨＩＶ
・８月目および１２月目のリンパ節細胞における複製コンピテントなＨＩＶ
・８月目および１２月目のＨＩＶ特異的ＣＴＬ活性
・８月目および１２月目のＨＩＶ特異的ＣＤ４＋増殖応答
・８月目および１２月目のＣＴＬＣＤ３ゼータ発現
・１２月目におけるＣＤ４＋細胞数の基準からの平均変化
本明細書中で言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が関する分野の当業者のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願の各々が詳細かつ独立して本明細書中で参考として援用されることを意図しているのと同程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００６８】
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識し、また、慣用的な実験のみを使用して確認し得る。このような等価物は、特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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