(57)【要約】感染性疾患又は症状の治療を要する被験者の感染性疾患又は症状の治療方法が開示される。その方法は被験者に有効量のマンザミン、マンザミン誘導体もしくは類似体又はこれらの光学異性体もしくはラセミ体又は互変異性体或いはこれらの医薬上許される塩を投与することを特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染性疾患又は症状の治療を要する患者に有効量のマンザミン、マンザミン誘導体もしくは類似体又はこれらの光学異性体もしくはラセミ体又は互変異性体或いはこれらの医薬上許される塩を投与することを特徴とする感染性疾患又は症状の治療方法。
【請求項２】
疾患又は症状が寄生虫により引き起こされる請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項３】
寄生虫が熱帯熱マラリア原虫（マラリア）、プラスモジウム・ベルゲイ、プラスモジウム・ヨエリ、プラスモジウム・チャバウジ、トリパノソーマ・ブルーセイ（睡眠病）、ガンビア　トリパノソーマ、ロデシア　トリパノソーマ、クルーズ　トリパノソーマ（シャーガス病）、トリパノソーマ・コルブリフォルミス（フィラリア）、小児リーシュマニア（リーシュマニア）、又はドノバン　リーシュマニア線虫である請求の範囲第２項記載の方法。
【請求項４】
疾患又は症状が細菌により引き起こされる請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項５】
細菌がエンテロコッカス・コリ、エンテロコッカス・フェカーリス、バシラス・サチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルジノーサ、トリコフィトン・メンタグロフィテス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、サルモネラ種、マイコバクテリウム・ツベルクローシス又はマイコバクテリウム・イントラセルラーレである請求の範囲第４項記載の方法。
【請求項６】
疾患又は症状が日和見感染症である請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項７】
日和見感染症がカンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・ケフィール、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス・フラーブス、アスペルギルス・フミガーツス、ミクロスポルム・カニス、トリコフィトン・ルブルム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・キンケアナム、クリプトスポリジウム種又はトキソプラズマ・ゴンディにより引き起こされる請求の範囲第６項記載の方法。
【請求項８】
疾患又は症状がウイルスにより引き起こされる請求の範囲第１項記載の方法。
【請求項９】
ウイルスがＨＩＶ−１（ヒト後天性免疫不全ウイルス）、ＨＩＶ伝播抑制型、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＶＺＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＨＨＶ−８）、呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ、ＭＶ、ＨＲＶ、Ａｄ）、Ｂ型肝炎ウイルス及びＣ型肝炎ウイルス、オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）、特殊病原体：ＶＥＥ、プンタ・トロ、ピチンド、黄熱、ウェストナイル、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＨＣＭＶＳＣＩＤ−ｈｕ、ＭＣＭＶ、ＧＰＣＭＶ）、呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ−３、ＭＶ）、肝炎ウイルス（ＷＨＶ、ＨＤＶ、ＨＢＶトランスジェニック）、オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）、パピローマウイルス（ショープ、ＨＰＶＳＣＩＤ−ｈｕ）、水疱性口内炎ウイルス（ＢＨＫ／ＶＳＶ）、又はヒトライノウイルス（ＨＲＶ）である請求の範囲第８項記載の方法。
【請求項１０】
マンザミン又はマンザミン誘導体もしくは類似体がマンザミンＡ、エント−８−ヒドロキシマンザミンＡ、マンザミンＥ、（＋）−８−ヒドロキシマンザミンＡ、エント−８−ヒドロキシマンザミンＡｄｉＡｃ、１５，１６，３２，３３−テトラヒドロ−エント−８−ヒドロキシマンザミンＡ、８ＯＨＭＡα−ＯＨ，Δ１５，１６、８ＯＨＭＡβ−ＯＨ，Δ１５，１６、８ＯＨＭＡ−Ａｃ１、８ＯＨＭＡ−Ａｃ２、ＭＡ−Ａｃ、イルシナールＡ、８−ＨＯＭＡ代謝産物１、マンザミンＪ、６−デオキシマンザミンＸ、マンザミンＬ、ネオ−カウルアミン、エント−マンザミンＦである請求の範囲第１項〜第９項のいずれか記載の方法。
【請求項１１】
マンザミン又はマンザミン誘導体もしくは類似体又はこれらの異性体もしくはラセミ体又は互変異性体或いはこれらの医薬上許される塩及び医薬上許される担体又は賦形剤を含むことを特徴とする感染性疾患又は症状の治療のための医薬組成物。
【請求項１２】
疾患又は症状が寄生虫により引き起こされる請求の範囲第１１項記載の医薬組成物。
【請求項１３】
寄生虫が熱帯熱マラリア原虫（マラリア）、プラスモジウム・ベルゲイ、プラスモジウム・ヨエリ、プラスモジウム・チャバウジ、トリパノソーマ・ブルーセイ（睡眠病）、ガンビア　トリパノソーマ、ロデシア　トリパノソーマ、クルーズ　トリパノソーマ（シャーガス病）、トリパノソーマ・コルブリフォルミス（フィラリア）、小児リーシュマニア（リーシュマニア）、又はドノバン　リーシュマニア線虫である請求の範囲第１２項記載の医薬組成物。
【請求項１４】
疾患又は症状が細菌により引き起こされる請求の範囲第１１項記載の医薬組成物。
【請求項１５】
細菌がエンテロコッカス・コリ、エンテロコッカス・フェカーリス、バシラス・サチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス、シュードモナス・エルジノーサ、トリコフィトン・メンタグロフィテス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、サルモネラ種、マイコバクテリウム・ツベルクローシス又はマイコバクテリウム・イントラセルラーレである請求の範囲第１４項記載の医薬組成物。
【請求項１６】
疾患又は症状が日和見感染症である請求の範囲第１１項記載の医薬組成物。
【請求項１７】
日和見感染症がカンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・ケフィール、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス・フラーブス、アスペルギルス・フミガーツス、ミクロスポルム・カニス、トリコフィトン・ルブルム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・キンケアナム、クリプトスポリジウム種又はトキソプラズマ・ゴンディにより引き起こされる請求の範囲第１６項記載の医薬組成物。
【請求項１８】
疾患又は症状がウイルスにより引き起こされる請求の範囲第１１項記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ウイルスがＨＩＶ−１（ヒト後天性免疫不全ウイルス）、ＨＩＶ伝播抑制型、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＶＺＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＨＨＶ−８）、呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ、ＭＶ、ＨＲＶ、Ａｄ）、Ｂ型肝炎ウイルス及びＣ型肝炎ウイルス、オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）、特殊病原体：ＶＥＥ、プンタ・トロ、ピチンド、黄熱、ウェストナイル、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＨＣＭＶＳＣＩＤ−ｈｕ、ＭＣＭＶ、ＧＰＣＭＶ）、呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ−３、ＭＶ）、肝炎ウイルス（ＷＨＶ、ＨＤＶ、ＨＢＶトランスジェニック）、オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）、パピローマウイルス（ショープ、ＨＰＶＳＣＩＤ−ｈｕ）、水疱性口内炎ウイルス（ＢＨＫ／ＶＳＶ）、又はヒトライノウイルス（ＨＲＶ）である請求の範囲第１８項記載の医薬組成物。
【請求項２０】
エント（−）８−ヒドロキシマンザミンＡ、マンザミン二量体（新規カウルアミン）、及びエント−マンザミンＦから選ばれたマンザミン。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
関連出願の相互参照
この出願は２０００年８月２９日に出願された米国仮特許出願６０／２２８，８９２からの優先権を主張する。
米国政府財政援助
この研究は米国の国立健康協会からの援助２Ｒ０１ＡＩ３６５９６、５Ｒ２９ＡＩ３６５９６及び５Ｋ０２ＡＩ０１５０２により少なくとも一部支持される。米国政府はこの発明に或る種の権利を有し得る。
世界保健機構財政援助
この研究は国連の世界保健機構からの援助９０１９４により少なくとも一部支持される。
本発明は感染性疾患の治療における“マンザミン”として知られている海綿由来アルカロイド並びにこれらの誘導体及び類似体の使用に関する。マンザミン並びにこれらの誘導体及び類似体は抗寄生虫薬、抗菌薬／細菌学、抗ウイルス薬として、また日和見感染症（菌学）に対し有益であることがわかった。また、３種の新規マンザミン誘導体が開示される。
【０００２】
（背景技術）
エイズ日和見感染症ツベルクロシスは世界の人口の１／３を感染し、マラリアでは、能力障害適合生活年数（“ＤＡＬＹ”）の損失の１２の先導原因の中にランクされる。ツベルクロシス及びマラリアの薬剤耐性株の迅速な広がりは、これらの疾患を治療するのに利用できる極めて制限された数の薬剤と対になって、これらの障害脅威に対抗する新しい作用の様式を有する新規治療薬に対する緊急の要望を生じた。
咋世紀にわたる感染性疾患からの米国及び欧州におけるかなりの死亡率低下にかかわらず、過去２０年は絶え間ない用心についての要望を示す死亡率増大を示した。Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ， Ｇ．Ｌ．； Ｃｏｎｎ， Ｌ．Ａ．； Ｐｉｎｎｅｒ， Ｒ．Ｗ．， “２０世紀中の米国における感染性疾患死亡率の傾向”， ＪＡＭＡ １９９９， ２８１， ６１−６６を参照のこと。１９８０年から１９９０年代早期までの予知できない傾向は感染性疾患と関連する死亡率の驚くほどの５８％の増大をもたらした。感染性疾患からの咋世紀にわたる死亡率の多くのスパイクは如何に迅速に伝染病が集団中に移動し得るかを示す。その深刻さは薬剤耐性の増大及び従来の歴史ではヒトに感染性であることがなかったトリインフルエンザのような疾患の発生により更に複合化される。“疾患防除及び予防センター、最新情報：香港のヒトからのトリインフルエンザＡ（Ｈ５Ｎ１）ウイルスの単離”， １９９７−９８， Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ １９９８， ４６， １２４５−４７を参照のこと。
【０００３】
マラニアのリスクは今１００の国及び地域に存在し、これらのうちの９２がその疾患の悪性形態（熱帯熱マラリア原虫）に直面している。世界人口の４５％以上はマラリアが土地固有である世界の地域に生活している。世界的に、年間に３−５億の臨床例があり、１５０−２７０万人の死亡がマラリアに関連している。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｃｔｄ／ｈｔｍｌ／ｍａｌａｒｉａ．ｈｔｍｌ （２０００）を参照のこと。年間の死亡の殆どが５歳未満の年齢の幼児の中で起こる。１９５０年代及び１９６０年代中の世界的にマラリアを撲滅するための世界保健機構のプログラムの初期の成功にもかかわらず、これらの試みは普通使用される薬剤に対するマラリア寄生虫の増大する耐性及び殺虫剤に対する蚊の増大する耐性のためにたじろいだことが次第に明らかになった。新しい感染症の推定数は今それらの初期のレベルに達し、これらの多くが最も危険なマラリア寄生虫、熱帯熱マラリア原虫により引き起こされた“悪性”マラリアである。
【０００４】
近年、海洋環境がこの破壊的な疾患と闘うための新しい先導薬剤に有望な源として出現した。Ｅｌ Ｓａｙｅｄ， Ｋ．Ａ．； Ｄｕｎｂａｒ， Ｃ．Ｄ．； Ｇｏｉｎｓ， Ｋ．Ｄ．； Ｃｏｒｄｏｖａ， Ｃ．Ｒ．； Ｐｅｒｒｙ， Ｔ．Ｌ．； Ｗｅｓｓｏｎ， Ｋ．Ｊ．； Ｓａｎｄｅｒｓ， Ｓ．Ｃ．； Ｊａｎｕｓ， Ｓ．Ａ．； Ｈａｍａｎｎ， Ｍ．Ｔ．，“海洋環境：プロトタイプ抗マラリア薬の源泉”， Ｊ． Ｎａｔ． Ｔｏｘｉｎｓ． １９９６， ５， ２６１−２８５； Ｎａｓｕ， Ｓ．Ｓ．； Ｙｅｕｎｇ， Ｂ．Ｋ．Ｓ．； Ｍ．Ｔ． Ｈａｍａｎｎ； Ｓｃｈｅｕｅｒ， Ｐ．Ｊ．； Ｋｅｌｌｙ−Ｂｏｒｇｅｓ， Ｍ．； Ｇｏｉｎｓ， Ｋ．Ｄ．，“ハワイの海綿、ヒルチオス（Ｈｙｒｔｉｏｓ）種からのプッペヘノン（Ｐｕｕｐｅｈｅｎｏｎｅ）関連代謝産物”， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ６０， ７２９０−７２９２を参照のこと。マンザミンとして知られているかなり普通かつ容易に単離される海洋アルカロイドは上記のようにマウスでマラリアに対する活性の著しくかつ予期しない改良を示す。Ａｎｇ， Ｋ．Ｋ．Ｈ．； Ｈｏｍｅｓ， Ｍ．Ｊ．； Ｈｉｇａ， Ｔ．； Ｈａｍａｎｎ， Ｍ．Ｔ．； Ｋａｒａ， Ｕ．Ａ．Ｋ．，“β−カルボリンアルカロイド・マンザミンＡのｉｎ ｖｉｖｏ抗マラリア活性”， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ２０００， ４４， １６４５−１６４９を参照のこと。
【０００５】
マラリアはＨＩＶ感染患者では日和見感染症と考えられないが、ＨＩＶ陽性個体は熱帯熱マラリア原虫に一層感受性であり、一層症候性になることが示された。Ｖｅｒｈｏｅｆｆ， Ｆ．Ｈ．； Ｂｒａｂｉｎ， Ｂ．Ｊ．； Ｈａｒｔ， Ｃ．Ａ．； Ｃｈｉｍｓｕｋｕ， Ｌ．； Ｋａｚｅｍｂｅ， Ｐ．； Ｂｒｏａｄｈｅａｄ， Ｒ．Ｌ．，“ＨＩＶ感染妊婦におけるマラリアの増大された流行性及びマラリア防除に関するその密接な関係”， Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｉｎｔ Ｈｅａｌｔｈ １９９９， ４， ５１２を参照のこと。また、Ｆｒｅｎｃｈ， Ｎ．； Ｇｉｌｋｓ， Ｃ．，“ＨＩＶとマラリア、それらは相互作用するのか？”， Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ２０００， ９４， ２３３３７を参照のこと。加えて、血漿ウイルス負荷はＨＩＶで急性感染されたマラリア患者で一層高いことが示され（Ｈｏｆｆｍａｎ， Ｉ．Ｆ．； Ｊｅｒｅ， Ｃ．Ｓ．； Ｔａｙｌｏｒ， Ｔ．Ｅ．，“ＨＩＶ−１ ＲＮＡ血液血漿濃度に関する熱帯熱マラリア原虫マラリアの作用”， ＡＩＤＳ １９９９， １３， ４８７４９４を参照のこと）、マラリア感染症がＨＩＶトランスジェニックマウスでウイルス発現を誘発することが示された。Ｆｒｅｉｔａｇ， Ｃ．； Ｃｈｏｕｇｎｅｔ， Ｃ．； Ｓｃｈｉｔｏ， Ｍ．； Ｎｅａｒ， Ｋ．Ａ．； Ｓｈｅａｒｅｒ， Ｇ．Ｍ．； Ｌｉ， Ｃ．； Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ， Ｊ．； Ｓｈｅｒ， Ａ．，“マラリア感染症がＣＤ４ Ｔ細胞依存性免疫活性化によりヒト免疫不全ウイルストランスジェニックマウス中のウイルス発現を誘発する”， Ｊ． Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， ２００１， １８３， １２６０−１２６８を参照のこと。
【０００６】
結核（Ｍｔｂ）は今日では世界中で最も感染性の疾患の一種として留まる。世界の人口の１／３が結節生物により感染されると推定され、これは毎年２００−３００万人のヒトの生命を要求する。感染した人の大部分で、感染症が潜伏して留まり、わずかに１０％が活性結核を発生する。しかしながら、その生物は日和見であり、弱化免疫系の人、例えば、高齢エイズ患者、及び栄養不良を患っている人を攻撃するために出現する。その感染生物はマイコバクテリウム・ツベルクローシスとして知られている棒形細菌である。
比較的少ない薬剤が結核の治療に満足とわかったので、薬剤耐性結核菌の発生は驚異的な潜在性で急迫した様相を呈する。現在入手し得る抗結核薬の夫々に対する細菌の耐性がそれらの併用でもっても観察された。リファムピン及びピラジナミドを伴う治療の併用は潜在的に致死性であることが示された。Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２００１， ５０， ２８９−２９１を参照のこと。
【０００７】
死亡の最も普通の原因の中に一旦ランクされると、予防、検出、診断、及び治療の改良された方法が結核になる人の数及びこの疾患から死亡する人の数を大いに減少した。しかしながら、過去１０年で、結核が重大な関心事として再度出現した。即ち、着実な減少の数１０年の後に、新たな症例の数の復活があった。幾つかの病因及び刑務所で起こる、疾患、特に一層危険な多薬剤耐性（ＭＤＲ−ＴＢ）形態の集団に関する論文が現れた。多薬剤耐性の合併症は治療の失敗の主要な原因の一つを構成する。Ｈｕｔｔｏｎ， Ｍ．Ｄ．， Ｓｔｅａｄ， Ｗ．Ｗ．， Ｃａｕｔｈｅｎ， Ｇ．Ｍ．ら， “排膿瘍と関連する結核の診療所伝播”， Ｊ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ．， １９９０， １６１， ２８６−２９５； Ｓｅｌｗｙｎ， Ｐ．Ａ．，“エイズＥｒａにおける結核：高齢疾患からの新たな脅威”， Ｎ．Ｙ． Ｊ． Ｍｅｄ．， １９９１， ９１， ２３３−２３５； Ｓｅｌｗｙｎ， Ｐ．Ａ．， Ｈａｒｔｅｌ， Ｄ．， Ｌｅｗｉｓ， Ｖ．Ａ．ら，“ヒト免疫不全ウイルス感染症の静脈内薬剤使用者の中の結核のリスクの将来の研究”， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， １９８９， ３２０， ５４５−５５０； Ｓｔａｒｋｅ， Ｊ．Ｒ．，“結核の予防”， Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ， １９８９， ４（４）， ３１８−３２５を参照のこと。これは地域そして国内に広がる潜在性でもって重大な加速的な公衆健康問題の恐怖を高める。１９５３年に、ＴＢの８４，３０４の報告された症例があった。Ｂｌｏｃｈ， Ａ．Ｂ．， Ｒｉｅｄｅｒ， Ｈ．Ｌ．及びＫｅｌｌｙ， Ｇ．Ｄ．，“米国における結核の疫学”， Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ， １９８９， ４（３）， １５７−１７０を参照のこと。次の３１年間にわたって、新たな症例の数は着実な下向きのドリフトを示した。１９８４年まで、毎年の新たな発生の数は７４％減少した。次いで下向きの傾向が反転した。１９８０年代中に、結核の発生が一部エイズの広がりの結果として米国で増加し始めた。その疾患はまた次第に増大する数のホームレスの人及び麻薬常用者を攻撃した。１９８０年代後半まで、２５，０００の新たな症例が年間に報告され、約２，０００人がその疾患から死亡した。１９９２年まで、疾患の例は１９８５年の症例の数に対し２０％増加した。
【０００８】
エイズは結核の復活の重要な因子であった。ＴＢはエイズの最も普通の日和見感染症の一種であり、エイズ症例の約３０％のエイズ特定症状である。Ｈａｒｒｉｅｓ， Ａ．Ｄ．，“開発途上国における結核及びヒト免疫不全ウイルス感染症”， Ｌａｎｃｅｔ， １９９０， ３３５， ３８７−３９０を参照のこと。次の１０年にわたって、これはＴＢ及びエイズが地方特有である場所でＴＢからの死亡数の著しい増加を導き得た。世界保健機構（ＷＨＯ）によれば、世界中の４００万の人が結核及びＨＩＶの両方で感染される。Ｒａｖｉｇｌｉｏｎｅ， Ｍ．Ｃ．， Ｎａｒａｉｎ， Ｊ．Ｐ．及びＫｏｃｃｈｉ， Ａ．，“開発途上国におけるＨＩＶ関連結核：臨床上の特徴、診断、及び治療”， Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓｅａｓｅ， １９９２， ７０（４）， ５１５−５２６を参照のこと。ＨＩＶの患者のＴＢの治療は複雑さを加えた。同時に存する感染症及びその他のエイズ関連疾患はＴＢを治療するのに使用される抗生物質と相互作用し得る治療を要する。特にリファムピンによる、毒性及び薬物反応の高い比率がエイズのＴＢ患者で報告された。ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ， Ｊ．Ｍ．， Ｇｒｚｙｂｏｗｓｋｉ， Ｓ．及びＡｌｌｅｎ， Ｅ．Ａ．，“結核に関するヒト免疫不全ウイルス感染症の影響及びその防除”， Ｃｈｅｓｔ， １９９１， １００（１）， １９１−２００； Ｎｏｌａｎ， Ｃ．Ｍ．，“ヒト免疫不全感染症における結核の治療の失敗”， Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｓｃ．， １９９２， ３０４（３）， １６８−１７３； Ｓｍａｌｌ， Ｐ．Ｍ．， Ｓｃｈｅｃｔｅｒ， Ｇ．Ｆ．， Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｐ．Ｃ．ら，“進行ヒト免疫不全ウイルス感染症の患者の結核の治療”， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， １９９１， ３２４， ２８９−２９４を参照のこと。
【０００９】
別の複雑化因子はＴＢの種々の肺外型がＨＩＶの患者の中で一層普通であることが明らかであることである。Ｆｉｓｃｈｌ， Ｍ．Ａ．， Ｄａｉｋｏｓ， Ｇ．Ｌ．， Ｕｔｔａｍｃｈａｎｄａｎｉ， Ｒ．Ｂ．ら，“多薬剤耐性バチルスにより引き起こされたＨＩＶ感染症及び結核の患者の臨床上の提示及び結果”， Ａｎｎ． Ｉｎｔ． Ｍｅｄ．， １９９２， １１７， １８４−１９０； Ｐｉｔｃｈｅｎｉｋ， Ａ．Ｅ．及びＦｅｒｔｅｌ， Ｄ．，“結核及び非結核ミコバクテリア疾患”Ｍｅｄ． Ｃｌｉｎ． Ｎ． Ａｍ．， １９９２， ７６（１）， １２１−１７１を参照のこと。ＨＩＶ陽性患者中の結核の発生のリスクはＨＩＶ陰性個体中よりも１００倍以上高い。結核は特異な重大な疾患である。エイズ関連のその他の疾患と違って、それはエイズのおそれのない成人及び幼児に空気伝播により広げられる。１９９２年には、世界中の結核死亡率は８００万の新たな症例の報告に加えて２００万であった。
【００１０】
現行の抗結核療法に対する耐性が別の脅威の問題である。９種程度の多くの薬剤に耐性の、マイコバクテリウム・ツベルクローシスの多薬剤耐性株は、徹底的な治療でさえも５０−８０％致死性である。米国では、薬剤耐性株が１９８９年以来１７の州で同定された。米国におけるイソニアジド耐性が５．３％存在し、二次耐性が分離株の１９．４％で存在し、一方、リファムピンに関する数値は夫々０．６％及び３．２％である。薬剤耐性結核の復活が新しいプロトタイプ先導に関する戦略的な研究の重要な更新を開始した。化学的に多様な代謝産物を発生する、生物多様性の特異かつ広い範囲を有する、海洋が抗ミコバクテリア活性を有する新規薬剤の顕著な資源として現れる。Ｅｌ Ｓａｙｅｄ， Ｋ．Ａ．； Ｂａｒｔｙｚｅｌ， Ｐ．； Ｓｈｅｎ， Ｘ．； Ｐｅｒｒｙ， Ｔ．Ｐ．； Ｚｊａｗｉｏｎｙ， Ｊ．Ｋ．； 及びＭ．Ｔ． Ｈａｍａｎｎ，“抗結核薬としての海洋天然産物”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２０００， ５６， ９４９−９５３を参照のこと。
【００１１】
現在入手し得る抗マラリア薬として、キノリン誘導体キニン及びその（＋）ジアステレオ異性体（アステリスク付き炭素に対して）、キニジン（下記の式Ｉを参照のこと）が挙げられ、これらはキナ皮樹皮から得られた天然キノリンアルカロイドである。それらは４種のマラリア寄生虫（熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫及び四日熱マラリア原虫）の全てに対し活性な有効血液殺シゾント剤である。それらはまた熱帯熱マラリア原虫以外の全ての種について生殖体撲滅薬である。それらの作用のメカニズムは寄生虫ＤＮＡへの挿入によると考えられ、こうしてＤＮＡ及びＲＮＡ合成を抑制する。今、その活性はマラリア色素との錯生成のためであると考えられている。プラスモジウムは宿主赤血球ヘモグロビンの分解から必須アミノ酸を誘導する。フェリトプロトポルフィリン（ヘモグロビン分解産物）は膜に対し毒性であるので、寄生虫はこれらの産物をヘマゾイン（マラリア色素）としてキレート形成する。キニンはフェリトプロトポルフィリンＩＸと錯体を形成し、ヘマゾインキレート形成を防止し、細胞溶解をもたらす。キニンはまた哺乳類リソソームに影響し、重大な副作用を生じる。Ａｎｇｅｒｈｏｆｅｒ， Ｃ．Ｋ．； Ｋｏｎｉｇ， Ｇ．Ｍ．； Ｗｒｉｇｈｔ， Ａ．Ｄ．； Ｓｔｉｃｈｅｒ， Ｏ．； Ｍｉｌｈｏｕｓ， Ｗ．Ｋ．； Ｃｏｒｄｅｌｌ， Ｇ．Ａ．； Ｆａｒｎｓｗｏｒｔｈ， Ｎ．Ｒ．； Ｐｅｚｚｕｔｏ， Ｊ．Ｍ． １９９２ “天然産物化学の進歩”， ｐｐ３１１−３２９ Ａｔｔａ−ｕｒ−Ｒａｈｍａｎ編集， Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｇｍｂｈ， Ｃｈｕｒ．； Ｓｔａｈｌ， Ｐ．； Ｓｃｈｗａｒｔｚ， Ａ．Ｌ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． １９８６， ７７， ６５７； ｃ． Ｃｈａｗ， Ｍ．； Ｐａｎｏｓｉａｎ， Ｃ．Ｂ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖ．， １９９５， ８， ４２７を参照のこと。
【００１２】
【化１】
2004509082.tif 000002
【００１３】
スルファドキシン（上記式ＩＩを参照のこと）はスルホンアミドである。それは熱帯熱マラリア原虫に対し活性であるが、三日熱マラリア原虫に対しそれ程活性ではない血液殺シゾント剤である。マラリアの治療としての使用における唯一のスルホンはダプソン（下記の式ＩＩＩを参照のこと）であり、それはスルファドキシンに活性が似ている。ダプソンはプラスモジウム及びマイコバクテリウムの両方に対する活性を示す臨床上有益な薬剤の潜在性について大きな優位を与える。
抗マラリア薬の新規なクラストしてのエンドペルオキシドの発見はプロトタイプアルテミシニン（下記の式ＩＶを参照のこと）で始まった。アルテミシニンは最初に古代中国の薬草治療薬から単離された。Ｋｌａｙｍａｎ， Ｄ．Ｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９８５， ２２８， １０４９； Ｈｉｅｎ， Ｔ．Ｔ．； Ｗｈｉｔｅ， Ｎ．Ｊ．， Ｌａｎｃｅｔ， １９９３， ３４１， ６０３を参照のこと。アルテメサー、アルテエーテル及びアルテスネート（下記の式Ｖを参照のこと）を含む幾つかの半合成誘導体並びに合成誘導体アルテフレン（下記の式ＶＩを参照のこと）が既に開発中であり、又は臨床上使用される。Ａｓａｗａｍａｈａｓａｋｄａ， Ｗ．； Ｉｔｔａｒａｔ， Ｉ．； Ｐｕ， Ｙ．Ｍ．； Ｚｉｆｆｅｒ， Ｈ．； Ｍｅｓｈｎｉｃｋ， Ｓ．Ｒ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． １９９４， ３８， １８５４； Ｂｒａｄｌｅｙ， Ｄ．Ｊ．， Ｔｒｏｐ． Ｍｅｄ． Ｐａｒａｓｉｔｏｌ． １９９４， ４５， ２５９を参照のこと。アルテエーテルは脳マラリアの患者を含む、高リスクのマラリア患者に有益と判明した。エンドペルオキシド部分が抗マラリア活性に必要である。何とならば、この基を欠いている類似体が不活性であるからである。Ｂｒｏｓｓｉ， Ａ．； Ｖｅｎｕｇｏｐａｐｌａｎ， Ｂ．； Ｇｅｒｐｅ， Ｌ．Ｄ．； Ｙｅｈ， Ｈ．Ｊ．Ｃ．； Ｆｌｉｐｐｅｎ−Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｊ．Ｌ．； Ｌｕｏ， Ｘ．Ｄ．； Ｍｉｌｈｏｕｓｅ， Ｗ．； Ｐｅｔｅｒｓ， Ｗ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９８８， ３１， ６４５． ｂ． “抗マラリア薬としてのキンガオス及びその誘導体に関する中国共同研究グループ”， １９８２， Ｊ． Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄ． ２， ３を参照のこと。
【００１４】
エンドペルオキシド部分はマラリア寄生虫に対する選択的毒性を説明し得る。何とならば、寄生虫は鉄及びヘムに富んでおり、これらがエンドペルオキシドブリッジの還元的開裂を触媒作用し、遊離基及びその他の親電子性中間体を生じ、これらが順に特定マラリアタンパク質のアルキル化剤として作用するからである。Ｍｅｓｈｎｉｃｋ， Ｓ．Ｒ．； Ｙａｎｇ Ｙ．Ｚ．； Ｌｉｍａ， Ｖ．； Ｋｕｙｐｅｒｓ， Ｆ．； Ｋａｍｃｈｏｎ−ｗｏｎｇｐａｉｓａｎ， Ｓ．； Ｙｕｔｈａｖｏｎｇ， Ｙ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ． Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， １９９３， ３７， １１０８； Ｐｏｓｎｅｒ， Ｇ．Ｈ．； Ｃ．Ｈ．， Ｏｈ．； Ｗａｎｇ Ｄ．； Ｇｅｒｅｎａ Ｌ．； Ｍｉｌｈｏｕｓｅ Ｗ．； Ｍｅｓｈｎｉｃｋ Ｗ．； Ａｓａｗａｍａｈａｓａｋｄａ Ｗ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， １９９４， ３７， １２５６を参照のこと。このプロセスはモデル系でｉｎ ｖｉｔｒｏで、また無傷寄生虫で実証された。エンドペルオキシドが無毒性であるという臨床観察にもかかわらず、第一世代アルテミシン誘導体の幾つかが多投薬実験研究で神経毒性であるという証拠が提示された。Ｂｒｅｗｅｒ， Ｔ．Ｇ． Ａｍ． Ｊ． Ｔｒｏｐ． Ｍｅｄ． Ｈｙｇ．， １９９４， ５１， ２５１を参照のこと。神経毒性の原因は依然として研究中である。しかしながら、エンドペルオキシド抗マラリア薬は耐性が広がっているクロロキン（上記式ＶＩＩを参照のこと）の如き従来の抗マラリア薬を置換する許容できる候補におそらくなっている。
【００１５】
【化２】
2004509082.tif 000003
【００１６】
現在の抗結核薬は第一系列薬剤及び第二系列薬剤に分けられる。第一系列薬剤として、下記のものが挙げられる。
１）　イソニアジド（ＩＮＨ）：（下記の式ＶＩＩＩを参照のこと）　この合成イソニコチン酸誘導体の作用の明らかなメカニズムはミコール酸合成の抑制である。Ｓａｃｃｈｅｔｔｉｎｉ； Ｊ．Ｃ．， Ｂｌｕｎｃｈａｒｄ， Ｊ．Ｓ．，“マイコバクテリウム・ツベルクローシス中のイソニアジド標的の構造及び機能”， Ｒｅｓ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． １９９６， １４７， ３６−４３を参照のこと。ミコール酸はミコバクテリアの特別の一体の構造成分である。ＩＮＨはまたミコバクテリアのイソニアジド感受性株に特有であり、細胞代謝の組織崩壊をもたらす酵素であるカタラーゼ／ペルオキシダーゼと化合すると報告されている。ＩＮＨ治療に応答して、飽和ヘキサコサン酸（Ｃ２６：０）がミコール酸前駆体を通常有する１２キロダルトンのアシルキャリヤータンパク質（ＡｃｐＭ）に蓄積することがわかった。Ｍｄｌｕｌｉ， Ｋ．； Ｓｌａｙｄｅｎ， Ｒ．Ａ．； Ｚｈｕ， Ｙ．； Ｒａｍａｓｗａｍｙ， Ｓ．； Ｐａｎ， Ｘ．； Ｍｅａｄ， Ｄ．； Ｃｒａｎｅ， Ｄ．Ｄ．； Ｍｕｓｓｅｒ， Ｊ．Ｍ．； Ｂａｒｒｙ， Ｃ．Ｅ． ＩＩＩ，イソニアジドによるマイコバクテリウム・ツベルクローシスβ−ケトアシルＡＣＰシンターゼの抑制， Ｓｃｉｅｎｃｅ． １９９８， ２８０， １６０７−１６１０を参照のこと。ＫａｓＡタンパク質中のアミノ酸変化突然変異がこの薬剤に対する耐性と関連するその他の突然変異を欠いているＩＮＨ耐性患者分離株中で同定された。耐性はカタラーゼ活性の欠如及び低下された薬剤浸透のために生じ得る。Ｓｍｉｔｈ， Ｃ．Ｍ．； Ａ．Ｍ． Ｒｅｙｎａｒｄ， 結核の治療， Ｉｎ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， Ｗ．Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒｓ社：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， １９９５， ３９５−４０３頁を参照のこと。
【００１７】
【化３】
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【００１８】
２）　リファムピン（上記式ＩＸを参照のこと）は真核生物細胞ではなく原核生物細胞中でＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを抑制するリファマイシンＢの殺ミコバクテリア剤及び殺菌剤の半合成誘導体である。リファムピンは食細胞に侵入し、細胞内、洞内又は更には休眠の結核菌を死滅し得る。Ｒｉｅｐｅｒｓｂｅｒｇ， Ｗ． アミノグリコシド抗生物質の分子生物学、生化学、及び発酵， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， 第２編、改訂かつ拡大， Ｓｔｒｏｈｌ， Ｗ．Ｒ． Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｂａｓｅｌ， Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ， １９９７， ８１−１６３頁を参照のこと。リファムシンに対する耐性は迅速に生じることがあり、結果として、この薬剤は単独で投与されるべきではない。
３）　ピラジナミド（上記式Ｘを参照のこと）は結核療法における重要な第一系列薬剤として今認められているニコチンアミドの類似体である。それは酸性ｐＨでマクロファージ中の細胞内生物に対し活性であるにすぎない。食作用後に、生物が低いｐＨのファゴリソソーム中に含まれる。ピラジナミドはその他の薬剤と組み合わせて通常使用される。Ｒａｎｇ， Ｈ．Ｐ．， Ｍ．Ｍ． Ｄａｌｅ， Ｊ．Ｍ． Ｒｉｔｔｅｒ及びＰ． Ｇａｒｄｎｅｒ， 抗ミコバクテリア薬 Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ （第３編） Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ． １９９５， ７３８−７４３頁を参照のこと。
４）　エタムブトール（上記式ＸＩを参照のこと）はこのような活性についての化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングによる抗結核薬の発見の理想的な例である。それは疾患特定のメカニズムでミコール酸と干渉することにより作用する合成結核菌抑制化合物である。その（＋）異性体はエタムブトールの唯一の活性形態であり、それは独立に使用される場合に殆どのその他の抗結核薬のような耐性を発生する。
【００１９】
【化４】
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【００２０】
５）　ストレプトマイシン（上記式ＸＩＩを参照のこと）はアミノグリコシド抗生物質である。ストレプトマイシンは結核に利用できる最初の薬剤であったが、それは今ではその高い毒性及び耐性の迅速な出現のために第一系列薬剤のうち最も使用されていないものである。それは全てのミコバクテリア形態に対する殺菌剤である。Ｒｉｅｐｅｒｓｂｅｒｇ， Ｗ． アミノグリコシド抗生物質の分子生物学、生化学、及び発酵， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， 第２編， 改訂かつ拡大 Ｓｔｒｏｈｌ， Ｗ．Ｒ． Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｂａｓｅｌ， Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ， １９９７， ８１−１６３頁； Ｒｏｓｔ， Ｗ．Ｊ． アミノグリコシドの化学：構造／機能の関係、並びにＤｗｏｒｚａｃｋ， Ｄ．Ｌ． アミノグリコシド：作用及び耐性のメカニズム　アミノグリコシド抗生物質：治療の手引き Ｂａｒｎｅｓ， Ｗ．Ｇ．； Ｈｏｄｇｅｓ． Ｇ．Ｒ．編集 ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ． １９８４， ５−２２頁及び２３−４４頁を参照のこと。
【００２１】
第二系列抗結核薬として、下記のものが挙げられる。
１）　エチオナミド（上記式ＸＩＩＩを参照のこと）は結核菌に対する細菌抑制活性を有するイソニコチン酸の合成同族体である。エチオナミドはその他の薬剤と組み合わせて使用される必要がある。この物質の胃腸及び神経障害副作用がエチオナミドの使用を制限した。
２）　ｐ−アミノサリチル酸（上記式ＸＩＶを参照のこと）はフォレート代謝を変化することによりミコバクテリア成長を抑制する合成細菌抑制薬である。それは、その毒性にもかかわらず、経済的な理由のために開発途上国で使用される。
３）　Ｄ−シクロセリン（上記式ＸＶを参照のこと）は広いスペクトルのｐＨ感受性抗生物質である。Ｄ−アラニンとのＤ−シクロセリンの相同性はＮ−アセチルムラミン酸の初期のトリペプチド側鎖に加えられるＤ−アラニン及びＤ−アラニン−Ｄ−アラニンジペプチドの両方の生成を防止することにより細胞壁合成のその競合的抑制活性を説明する。これはペプチドグリカンの主要ブロックの完成を防止する。シクロセリンの中枢神経系（ＣＮＳ）副作用がその適用を制限する。
４）　アミノグリコシドカナマイシンＡ（上記式ＸＶＩを参照のこと）、アミカシン（上記式ＸＶＩＩを参照のこと）及びペプチド抗生物質；カプレオマイシン（下記の式ＸＶＩＩＩを参照のこと）、及びツベラクチノマイシン（ビオマイシン）（下記の式ＸＩＸを参照のこと）：交差耐性、費用並びに腎臓及び耳毒性のリスクが抗結核薬としてのアミノグリコシド及びペプチドの適用を制限した。
【００２２】
【化５】
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【００２３】
５）　シプロフロキサシン及びオフロキサシンはイソニアジド及びリファムピンの両方に対する耐性の存在下で一次薬剤として使用されるキノロンである。Ｕｌｕｂｅｌｅｎ， Ａ．； Ｅｖｒｅｎ， Ｎ．； Ｔｕｚｌａｃｉ， Ｅ． Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ， Ｃ． サルビア・ハイパルゲイア（Ｓａｌｖｉａ ｈｙｐａｒｇｅｉａ）の根からのジテルペノイド， Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． １９８８， ５１， １１７８−１１８３を参照のこと。キノロンの広範な使用がまた耐性を生じ得る。
１／１００，０００〜１／１００００００００のバチルスがＴＢに対して使用されるあらゆる単一薬剤に対し初期に耐性であると推定される。米国議会， Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ， “結核の絶え間ない挑戦”ＯＴＡ−Ｈ−５７４， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．， 米国政府印刷局， １９９３年９月， ７５頁を参照のこと。これと闘うために、ＴＢを治療するための組み合わせ化学療法の使用が通常の慣例であった。初期にＩＮＨ、ＳＭ、及びＰＡＳが投与され、続いてＩＮＨ、ＳＭ、及びＥＭＢが投与され、次いでＩＮＨ及びＲＩＦが投与される。Ｓｉｍｏｎｅ， Ｐ．Ｍ．及びＩｓｅｍａｎ， Ｍ．Ｄ．，“薬剤耐性結核菌：死亡の危険及び増大する危険”， Ｊ． Ｒｅｓｐ． Ｄｉｓ．， １９９２， １３（７）， ９６０−９７１； 健康及びヒトサービスの米国当局， ＰＨＳ， 疾患防除及び予防センター， “多薬剤耐性のＥｒａにおける結核の初期療法、結核の排除のためのアドバイザリィ・カウンセルの推奨”， Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ， １９９２， ４２ （ＲＲ−７）， １−８； Ｖｉｌｌａｒｉｎｏ， Ｍ．Ｅ．， Ｇｅｉｔｅｒ， Ｉ．Ｊ．及びＳｉｍｏｎｅ， Ｐ．Ｍ．，“結核を防除するための公衆保健努力に対する多薬剤結核菌挑戦”， Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｐｏｒｔｓ， １９９２， １０７（６）， ６１６−６２５を参照のこと。
【００２４】
このような多薬剤処置がＴＢ患者の９５％以上について適していると推定される。Ｂｌｏｃｈ， Ａ．Ｂ．，医療官， 査察兼疫学支局， 結核排除部門， 疾患防除及び予防センター， ＰＨＳ， 米国健康及びヒトサービス， Ａｔｌａｎｔａ， ＧＡ， 結核の排除会議のためのアドバイザリィ委員会， １９９２からのノートを参照のこと。残りの４〜５％は２種以上の薬剤に耐性であり、１１種程度に多くの薬剤に対する耐性の症例が報告された。Ｇｏｂｌｅ， Ｍ．， Ｉｓｅｍａｎ， Ｍ．Ｄ．， Ｍａｄｓｅｎ， Ｌ．Ａ．ら， “イソニアジド及びリファムピンに耐性の肺結核の１７１人の患者の治療”， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， １９９３， ３２８（８）， ５２７−５３２を参照のこと。
【００２５】
薬剤耐性ＴＢの発生は全く新しくないが（Ｒｅｅｖｅｓ， Ｒ．， Ｂｌａｋｅｙ， Ｄ．， Ｓｎｉｄｅｒ， Ｓ．Ｅ．ら，“多薬剤耐性ＴＢの伝播：学校及び共同体発生の報告”， Ａｍ． Ｊ． Ｅｐｉｄｅｍ．， １９８１， １１３， ４２３−４３５； 健康及びヒトサービスの米国当局， ＰＨＳ， 疾患防除及び予防センター， “多薬剤耐性結核の発生−テキサス、カリフォルニア、及びペンシルバニア”， Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ， １９９０， ３２（４０）， ５２１−５２３を参照のこと）、このような発生は一層ふつうになり、範囲が大きくなり、かつ一層危険になった。１９９０年以来、米国でＭＤＲ−ＴＢの少なくとも９の発生があり（健康及びヒトサービスの米国当局， ＰＨＳ， 疾患防除及び予防センター， “プログラム・ブリーフィング， １９９２：結核排除”， 健康及びヒトサービスの米国当局， Ａｔｌａｎｔａ， ＧＡ， 未公表の論文， １９９３年３月９日を参照のこと）、少なくとも７のその他の発生が報告されたが、研究されていなかった。これらの発生における活性ＭＤＲ−ＴＢを発生した個体の全てではないが、殆どがＨＩＶ血清反応陽性であった。これらの発生により冒された個体の大半（７９〜８９％）がその疾患により死亡し、健康看護作業者及び刑務所守衛を含んでいた。世界保健機構（ＷＨＯ）からのプレスレリースによれば、薬剤耐性Ｍｔｂの発生率が世界中で著しく増大した。ＮＩＡＩＤによれば、２種以上の第一系列薬剤に耐性の結核菌株が１００を越える国及び地域で検出された。“ルーターズ・メディカル・ニュース”＠ｈｔｔｐ：／／ｉｄ．ｍｅｄｓｃａｐｅ．ｃｏｍ／ｒｅｕｔｅｒｓ／ｐｒｏｆ／２０００／０３／０３．２４／ｐｂ０３２４０ａ．ｈｔｍｌを参照のこと。ＭＤＲ−Ｍｔｂのこの上昇する流行及びＨＩＶ患者のＭｔｂを治療する複雑さが新規な抗Ｍｔｂ薬に対する要望を高めた。
【００２６】
天然源、主として微生物及び植物から単離された二次代謝産物が、人類に現在市販されている治療薬の多くを提供した。これらの天然産物は薬剤として直接使用され、又は医薬製品の合成調製のための先導を与えた。現在、医薬工業におけるセールスの３７％が天然源から誘導された製品に由来した。Ｊｏｆｆｅ， Ｓ．及びＴｈｏｍａｓ， Ｒ．， Ａｇ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｎｅｗｓ Ｉｎｆｏｒｍ． １９８９， １， ６９７を参照のこと。市販され、又は感染性疾患もしくは癌の治療のための臨床試験の最後の段階にあるこれらの化合物の約６０％が天然産物起源のものである。Ｃｒａｇｇ， Ｇ．Ｍ．； Ｎｅｗｍａｎ， Ｄ．Ｊ．； Ｓｎａｄｅｒ， Ｋ．Ｍ． “薬剤発見及び開発における天然産物” Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． １９９７， ６０， ５２−６０を参照のこと。近年、研究者らの小グループが海洋脊椎動物、藻類、及び微生物から１２，０００を越える新規化合物を単離した。Ｆａｕｌｋｎｅｒ， Ｄ．Ｊ．， Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． Ｒｅｐｓ． １９９２， ９， ３２３ （及びこのシリーズの先の論文）を参照のこと。これらの化合物のうちの１２以上（アプリジン、アプリロニン、ドラスタチン１０、ブリオスタチン、エクテイナスシジン７４３、カハラリドＦ、ハリコンドリンＢ、ラメラリンＮ、サルコジクチンズ、チオカロアリン、スポンジスタチン等）が早期臨床開発又は後期予備臨床開発中である。Ｓｈｕ， Ｙ． “最近の天然産物をベースとする薬剤開発：医薬工業展望”１９９８， ６１， １０５３−１０７１， Ｕｒｂａｎ， Ｓ．； Ｈｉｃｋｆｏｒｄ， Ｓ．Ｊ．Ｈ．； Ｂｌｕｎｔ， Ｊ．Ｗ．； Ｍｕｎｒｏ， Ｍ．Ｈ．Ｇ．； Ｋｅｌｌｙ， Ｍ． “生物活性海洋アルカロイド”， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ２０００， ４， ７６５−８０７を参照のこと。
【００２７】
（発明の開示）
“マンザミン”として知られている海綿由来アルカロイドのクラスがクロロキン及びアルテミシニンの両方よりもマウスのマラリアに対し改良された活性を示す。マラリア感染動物に臨床上使用される薬剤に対するマンザミンの効力の有意な改良は一部予期されない免疫刺激応答のためである。マンザミンはまた結核菌及びトキソプラズマ・ゴンディに対し有意な活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで示した。しかしながら、マンザミンは感染性疾患及び寄生虫疾患の治療に役割を果たすと従来報告されていなかった。
海綿由来マンザミン、並びにこれらの誘導体及び類似体は感染性疾患の治療に有益であることがわかった。マンザミン、マンザミン誘導体及びマンザミン類似体は抗寄生虫薬、抗菌薬（細菌学）及び抗ウイルス薬として有益であり、また日和見感染症（菌学）に対し好適である。本発明はまた下記の３種の新規マンザミンに関する：
１．　エント（−）８−ヒドロキシマンザミンＡ；
２．　マンザミン二量体（新規カウルアミン）；及び
３．　エント−マンザミンＦ。
【００２８】
（発明を実施するための最良の形態）
マンザミンは沖縄海綿属ハリクロナからの１９８６年にＨｉｇａ及び共同研究者らにより最初に報告された複雑な多環式の海洋由来アルカロイドである。Ｓａｋａｉ， Ｒ．； Ｈｉｇａ， Ｔ．； Ｊｅｆｆｏｒｄ， Ｃ．Ｗ．； Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｅｌｌｉ， Ｇ． “マンザミンＡ；海綿からの抗腫瘍アルカロイド”， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９８６， １０８， ６４０４−６４０５を参照のこと。これらの化合物はβ−カルボリン部分に結合されている縮合され、ブリッジされた４環式又は５環式の環系を有する。マンザミンＡの最初の論文以来、追加の３０種のマンザミン型アルカロイドが海綿属プリアノス（Ｏｈｔａｎｉ， Ｉ．Ｉ．； Ｉｃｈｉｂａ， Ｔ．； Ｉｓｏｂｅ， Ｍ．； Ｋｅｌｌｙ−Ｂｏｒｇｅｓ， Ｍ．； Ｓｃｈｅｕｅｒ， Ｐ．Ｊ． “カウルアミン：インドネシア海洋海綿、プリアノス種からの前例のないマンザミン二量体” Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９９５， １１７， １０７４３−１０７４４を参照のこと）、ハリクロナ（Ｓａｋａｉ， Ｒ．； Ｋｏｈｍｏｔｏ， Ｓ．； Ｈｉｇａ， Ｔ．； Ｊｅｆｆｏｒｄ， Ｃ．Ｗ．； Ｂｅｒｎａｒｄｉｎｅｌｌｉ， Ｇ． “海綿ハリクロナ種からのアルカロイド、マンザミンＢ＆Ｃ” Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９８７， ２８， ５４９３−５４９６； Ｈｉｇａ， Ｔ．； Ｓａｋａｉ， Ｒ．； Ｋｏｈｍｏｔｏ， Ｓ．； Ｌｕｉ， Ｍ．Ｓ．， “海洋海綿からの抗腫瘍アルカロイド”， 欧州特許出願 ＥＰ ８７−３１０８７２８７１２１０ （１９８７年）； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｍ．； Ｃｈｅｎ， Ｙ．Ｊ．； Ａｏｋｉ， Ｓ．； Ｉｎ， Ｙ．； Ｉｓｈｉｄａ， Ｔ．； Ｋｉｔａｇａｗａ， Ｉ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９５， ５１， ３７２７−３７３６を参照のこと）、キセストスポンジア（Ｉｃｈｉｂａ， Ｔ．； Ｓａｋａｉ， Ｒ．； Ｋｏｈｏｍｏｔｏ， Ｓ．； Ｓａｕｃｙ， Ｇ．； Ｈｉｇａ， Ｔ． “キセストスポンジア属の海綿からの新規マンザミンアルカロイド”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９８８， ２９， ３０８３−３０８６； Ｅｄｒａｄａ， Ｒ．Ａ．； Ｐｒｏｋｓｃｈ， Ｐ．； Ｗｒａｙ， Ｖ．； Ｗｉｔｔｅ， Ｌ．； Ｍｕｌｌｅｒ， Ｗ．Ｅ．Ｇ．； Ｖａｎ Ｓｏｅｓｔ， Ｒ．Ｗ．Ｍ．， Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． １９９６， ５９， １０５６−１０６０を参照のこと）、
【００２９】
パチペリナ（Ｉｃｈｉｂａ， Ｔ．； Ｃｏｒｇｉａｔ， Ｊ．Ｍ．； Ｓｃｈｅｕｅｒ， Ｐ．Ｊ．； Ｋｅｌｌｙ−Ｂｏｒｇｅｓ， Ｍ． “海綿パチペリナ種からのβ−カルボリンアルカロイド、８−ヒドロキシマンザミンＡ”， Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． １９９４， ５７， １６８−１７０を参照のこと）、ペトロシア（Ｃｒｅｗｓ， Ｐ．； Ｃｈｅｎｇ， Ｘ．Ｃ．； Ａｄａｍｃｚｅｓｋｉ， Ｍ．； Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｊ．； Ｊａｓｐａｒｓ， Ｍ．； Ｓｃｈｍｉｔｚ， Ｆ．Ｊ．； Ｔｒａｅｇｅｒ， Ｓ．Ｃ．； Ｐｒｏｄｅｓｉｍｏ， Ｅ．Ｏ．， “２種の異なるハプロスクレリド海面からのアルカロイド、１，２，３，４−テトラヒドロ−８−ヒドロキシマンザミン”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９４， ５０， １３５６７−１３５７４を参照のこと）、クリブロチャリナ、イルシニア（Ｋｏｎｄｏ， Ｋ．； Ｓｈｉｇｅｍｏｒｉ， Ｈ．； Ｋｉｋｕｃｈｉ， Ｙ．； Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ， Ｍ．； Ｓａｓａｋｉ， Ｔ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ． “沖縄海洋海綿イルシニア種からのイルシナールＡ及びＢ：マンザミンアルカロイドの信頼できそうな生物遺伝的前駆体”， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９２， ５７， ２４８０−２４８３を参照のこと）、アンフィメドン（Ｔｓｕｄａ， Ｍ．； Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｎ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ．， “沖縄海洋海綿からのマンザミン関連アルカロイドの最初の対掌体、イルシノールＡ及びＢ”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９４， ５０， ７９５７−７９６０； Ｔｓｕｄａ， Ｍ．； Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｎ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ． “沖縄海洋海綿からの信頼できそうな生物遺伝的前駆体、ケラマフィジンＣ及びケラマミンＣ”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９４， ３５， ４３８７−４３８８；
【００３０】
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ．； Ｔｓｕｄａ， Ｍ．； Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｎ．； Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｋ．； Ａｄａｃｈｉ， Ｔ． “海洋海綿アンフィメドン種からの新規５環式アルカロイド、ケラマフィジンＢ：マンザミンアルカロイドの信頼できそうな生物遺伝的前駆体”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９４， ３５， ４３８３−４３８６； Ｔｓｕｄａ， Ｍ．； Ｉｎａｂａ， Ｋ．； Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｎ．； Ｈｏｎｍａ， Ｋ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ． “±ケラマフィジンＢのキラル分割及び海綿アンフィメドン種からの新規β−カルボリンアルカロイド、マンザミンＬの単離”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９６， ５２， ２３１９−２９２４； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ．； Ｗａｔａｎａｂｅ， Ｄ．； Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｎ．； Ｔｓｕｄａ， Ｍ． Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９７， ６２， ９２３６−９２３９； Ｔｓｕｄａ， Ｍ．； Ｗａｔａｎａｂｅ， Ｄ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ．， “アンフィメドン海綿からの新規マンザミンアルカロイド、メガンジンＡ”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９８， ３９， １２０７−１２１０を参照のこと）、及びペリナ（Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｈ．； Ｄｅｎｇ， Ｓ．； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ， Ｊ．； Ｏｈｉｚｕｍｉ， Ｙ．； Ｔｏｍｏｔａｋｅ， Ｙ．； Ｍａｔｓｕｚａｋｉ， Ｔ．， “沖縄海洋海綿ペリナ種からの新規抗菌性アルカロイド、ケラマミン−Ａ及び−Ｂ”， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９８７， ２８， ６２１−６２４を参照のこと）から報告されていた。
【００３１】
多様な無関連種からのマンザミンアルカロイドの単離は代謝産物の微生物起源についての強力な証拠を与える。先の刊行物にプリアノス及びパチペリナとして同定された海綿の再試験はこれらが本明細書で研究された海綿と同じ属の員であるが、種レベルで異なることを確かめた。少なくとも四つの種を含むこの新規属は−６０ｍまで下で、インドネシア、フィリピン、ミクロネシア、及び北パプアニューギニアで比較的普通である。マンザミンは抗菌性、抗ミコバクテリア性、細胞毒性並びに動物モデルでマラリアに対する刺激的かつ高度に推奨できる治癒活性を含む感染性生物に対する生物活性の多様な範囲を示す。
報告されたマンザミン生産海綿の多様性
2004509082.tif 000007
【００３２】
マンザミン及びそれらを含む組成物は当業者に現在又は将来知られているあらゆる好適な治療方法及び技術により投与し得る。更に、本発明における使用のための化合物はその他の有益な化合物及び組成物の調製のための出発物質としての用途を有する。
これらのマンザミンの構造の本開示の利益を有する熟練化学者らは海綿／微生物の抽出物から、又は合成変換もしくは生物触媒変換により主題化合物を調製するための操作を容易に使用し得る。このような操作を行なう際に、当業界で公知の好適な濾過、クロマトグラフィー、結晶化及びその他の精製技術が使用し得る。これらの技術として、例えば、好適なカラム、例えば、シリカゲル、セファデックスＬＨ−２０、アンモニア処理シリカゲル、結合相ＲＰ−１８、ＲＰ−８及びアミノカラムによる逆相クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）、カラムクロマトグラフィー、真空フラッシュクロマトグラフィー、中間圧力クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）及び高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が挙げられる。このようなカラムは好適な溶媒、例えば、ヘキサン、酢酸エチル、アセトン、塩化メチレン、メタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、水、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）及びこれらの種々の組み合わせで溶離される。
【００３３】
宿主に投与される投与量は感染の同一性、関係する宿主の型、その年齢、体重、健康、同時治療の種類（存在する場合）、治療の頻度及び治療割当量に依存するであろう。
主題発明の化合物は医薬上有益な組成物を調製するのに知られている方法に従って製剤化し得る。製剤は当業者に公知であり、容易に入手し得る幾つかの出典に詳しく記載されている。例えば、Ｅ．Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ著Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅは主題発明と関連して使用し得る製剤を記載している。一般に、主題発明の組成物は有効量の一種以上の生物活性化合物が組成物の有効な投与を促進するために好適な担体と合わされるように製剤化されるであろう。
本発明によれば、活性成分として、有効量の一種以上の主題化合物及び一種以上の無毒性の医薬上許される担体又は希釈剤を含む医薬組成物が、当業者により使用し得る。加えて、医薬組成物は当業界で知られている抗感染性化合物を含む第二又は第三の活性成分と一緒に第一の活性成分として一種以上のマンザミン化合物を含み得る。
【００３４】
抗感染薬としてのマンザミン化合物の投与及び投薬レジメの最も有効な様式は治療すべき症状の型、その症状の重度及び経過、先の治療、患者の健康状態及びマンザミンに対する応答並びに治療医師の判断に依存するであろう。マンザミン組成物は一度に、又は一連の治療にわたって患者に投与し得る。
本発明の医薬製剤は、必要により医薬上許される希釈剤又は担体と混合して、マンザミン又はマンザミン誘導体もしくは類似体或いはこれらの光学異性体もしくはラセミ体又は互変異性体或いはこれらの医薬上許される塩を含む。更に、本発明は感染性疾患又は症状を患っており、又はかかりやすい被験者に、治療有効量のマンザミン、マンザミン誘導体もしくは類似体、或いはこれらの光学異性体もしくはラセミ体又は互変異性体或いはこれらの医薬上許される塩を投与することを特徴とする感染性疾患又は症状の治療に関する。
同定されたマンザミン及びマンザミン誘導体又は類似体のいずれもがそれ自体で、又はそれが種々の感染性疾患を治療又は軽減するのに治療上有効な投与量で好適な担体又は一種以上の賦形剤と混合されている医薬組成物中で動物宿主（ヒト患者を含む）に投与し得る。更に、治療上有効な投与量はこのような疾患と関連する症候の軽減をもたらすのに充分な化合物のその量を表す。本件出願の化合物の製剤化及び投与に関する技術は“レミントン医薬科学”， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．，最終編に見られる。
【００３５】
本発明における使用に適した医薬組成物として、活性成分がその意図される目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物が挙げられる。更に詳しくは、治療有効量は治療される被験者の症候の発生を予防し、又は既存の症候を軽減するのに有効な量を意味する。有効量の決定は、特に本明細書に示された詳細な開示に鑑みて、当業者の能力の中にある。
本発明の方法に使用されるあらゆる化合物について、治療有効投与量は初期に細胞培養アッセイから推定し得る。例えば、投薬は細胞培養で測定したようなＩＣ５０（細胞の５０％が所望の効果を示す投与量）を含む循環濃度範囲を得るために動物モデルで製剤化し得る。このような情報がヒトに有益な投与量を一層正確に決めるのに使用し得る。
治療有効投与量は患者の症候の軽減又は生存の延長をもたらす化合物のその量を表す。このような化合物の毒性及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死性の投与量）及びＥＤ５０（集団の５０％で治療上有効な投与量）を決めるために、細胞培養又は実験動物で通常の医薬操作により測定し得る。毒性効果と治療効果の投薬比は治療インデックスであり、それはＬＤ５０とＥＤ５０の比として表し得る。高い治療インデックスを示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータがヒト用の投与量の範囲を製剤化するのに使用し得る。このような化合物の投与量はわずかな毒性又は無毒性のＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にあることが好ましい。投与量は使用される投薬形態及び利用される投与の経路に応じてこの範囲内で変化し得る。正確な製剤化、投与の経路及び投与量は患者の症状に鑑みて個々の医師により選ばれる（例えば、Ｆｉｎｇｌら， １９７５， “治療薬の薬理学的基礎”， １章， １頁を参照のこと）。投薬量及び間隔は所望の効果を維持するのに充分である活性部分の血漿レベルを与えるように個々に調節し得る。
【００３６】
局所投与又は選択的摂取の場合、薬剤の有効局所濃度は血漿濃度に関連しないかもしれない。
投与される組成物の量は、勿論、治療される被験者、被験者の体重、病気の重度、投与の様式及び処方する医師の判断に依存するであろう。
本発明の医薬組成物はそれ自体知られている様式で、例えば、通常の混合方法、溶解方法、造粒方法、糖剤製造方法、水ひ方法、乳化方法、カプセル化方法、閉じ込め方法又は凍結乾燥方法により製造し得る。
こうして、本発明に従って使用するための医薬組成物は医薬上使用し得る製剤への活性化合物の加工を促進する賦形剤及び助剤を含む一種以上の生理学上許される担体を使用して通常の様式で製剤化し得る。適当な製剤化は選ばれた投与の経路に依存する。
注射について、本発明の薬剤は水溶液、好ましくは生理学的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、又は生理食塩緩衝液中で製剤化し得る。経粘膜投与について、透過すべきバリヤーに適した浸透剤が製剤化に使用される。このような浸透剤は一般に当業界で知られている。
【００３７】
経口投与について、化合物は活性化合物を当業界で公知の医薬上許される担体と合わせることにより容易に製剤化し得る。このような担体は治療される患者による経口摂取のために、本発明の化合物が錠剤、ピル、糖剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として製剤化されることを可能にする。
経口使用のための医薬製剤は、必要により得られる混合物を粉砕し、所望により、好適な助剤を添加した後に、顆粒の混合物を加工して錠剤又は糖剤コアーを得ることにより、固体賦形剤から得られる。好適な賦形剤は、特に、充填剤、例えば、ラクトース、蔗糖、マンニトール、又はソルビトールを含む、糖；セルロース製剤、例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望により、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸又はその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムが添加されてもよい。
糖剤コアーは好適な被覆物を備えている。この目的のために、濃縮糖溶液が使用されてもよく、これらは必要によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含んでもよい。染料又は顔料が同定のため又は活性化合物投与量の異なる組み合わせを特徴づけるために錠剤又は糖剤被覆物に添加されてもよい。
【００３８】
経口使用し得る医薬製剤はゼラチンからつくられたプッシュ−フィットカプセルだけでなく、ゼラチン及び可塑剤、例えば、グリセロール又はソルビトールからつくられた軟質のシールされたカプセルを含む。プッシュ−フィットカプセルは充填剤、例えば、ラクトース、結合剤、例えば、澱粉、及び／又は滑剤、例えば、タルク又はステアリン酸マグネシウム及び、必要により、安定剤と混合して活性成分を含み得る。軟質カプセルでは、活性化合物が好適な液体、例えば、脂肪アルコール、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール中に溶解又は懸濁されてもよい。加えて、安定剤が添加されてもよい。経口投与のための全ての製剤はこのような投与に適した投与量であるべきである。
舌下投与について、組成物は通常の様式で製剤化された錠剤又はロゼンジの形態をとってもよい。
吸入による投与について、本発明による使用のための化合物は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はその他の好適なガスの使用により、加圧パック又はネブライザーからのエアゾール噴霧提示の形態で都合良く送出される。加圧エアゾールの場合、投薬単位はバルブを用意して計量された量を送出することにより測定し得る。例えば、吸入器又は注入器用のゼラチンのカプセル及びカートリッジは化合物と好適な粉末ベース、例えば、ラクトース又は澱粉の粉末混合物を含んで製剤化し得る。
【００３９】
化合物は注射、例えば、巨丸剤注射又は連続注入による非経口投与のために製剤化し得る。
注射用の製剤は単位投薬形態、例えば、添加された防腐剤とともに、アンプル又は多投薬容器中で提供し得る。組成物は油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルションの如き形態をとってもよく、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤の如き製剤化剤を含んでもよい。
非経口投与のための医薬製剤は水溶性形態の活性化合物の水溶液を含む。更に、活性化合物の懸濁液は適当な油性注射懸濁液として調製されてもよい。好適な親油性溶媒又はビヒクルとして、脂肪油、例えば、ゴマ油、又は合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、又はリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は懸濁液の粘度を増大する物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、又はデキストランを含んでもよい。必要により、懸濁液はまた化合物の溶解性を増大して高度に濃縮された溶液の調製を可能にする薬剤又は好適な安定剤を含んでもよい。
また、活性成分は使用前に好適なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質を含まない水による再生のための粉末形態であってもよい。
【００４０】
化合物はまた、例えば、ココアバター又はその他のグリセリドの如き通常の座薬ベースを含む、直腸組成物、例えば、座薬又は保持浣腸中で製剤化し得る。
前記製剤に加えて、化合物はデポー製剤として製剤化されてもよい。このような長く作用する製剤は移植（例えば、皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射により投与し得る。こうして、例えば、化合物は好適なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、許される油中のエマルションとして）又はイオン交換樹脂とともに、或いは難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として製剤化されてもよい。
本発明の疎水性化合物のための医薬担体はベンジルアルコール、非極性表面活性剤、水混和性有機ポリマー、及び水相を含む共溶媒系である。当然、共溶媒系の比率はその溶解性及び毒性特性を損なわないでかなり変化し得る。更に、共溶媒成分の同一性は変化し得る。
【００４１】
また、疎水性医薬化合物のためのその他の送出系が使用し得る。リポソーム及びエマルションが疎水性薬剤のための送出ビヒクル又は担体の公知の例である。また、ジメチルスルホキシドの如き或る種の有機溶媒が使用されてもよいが、通常大きな毒性を犠牲にし得る。更に、化合物は徐放系、例えば、治療薬を含む固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを使用して送出されてもよい。種々の型の徐放材料が確立され、当業者により公知である。
徐放カプセルは、それらの化学的性質に応じて、数週から１００日以上までにわたって化合物を放出する。治療薬の化学的性質及び生物学的安定性に応じて、タンパク質安定化のための付加的な戦略が使用されてもよい。
医薬組成物はまた好適な固相又はゲル相の担体又は賦形剤を含んでもよい。このような担体又は賦形剤の例として、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールの如きポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
本発明の化合物の多くは医薬上適合性の対イオンとの塩として提供されてもよい。
医薬上適合性の塩は塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含むが、これらに限定されない多くの酸で生成し得る。塩は相当する遊離塩基形態よりも水性溶媒又はその他のプロトン性溶媒に可溶性である傾向がある。
投与の好適な経路として、例えば、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、経皮投与、又は腸投与；筋肉内注射、皮下注射、髄内注射だけでなく、くも膜下注射、直接の心室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射、又は眼内注射を含む、非経口送出が挙げられる。
また、化合物を全身様式ではなく局所様式で、例えば、しばしばデポー製剤又は徐放製剤中で、冒された領域への化合物の直接の注射により投与してもよい。
更に、薬剤を標的薬剤送出系、例えば、冒された細胞に特異性の抗体で被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソームは細胞にターゲッティングされ、細胞により選択的に摂取されるであろう。
【００４３】
主題発明の化合物は下記のものを含む動物及びヒトの種々の感染性疾患を治療するのに使用し得る。
抗寄生虫薬
熱帯熱マラリア原虫（マラリア）
プラスモジウム・ベルゲイ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）
プラスモジウム・ヨエリ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｙｏｅｌｌｉ）
プラスモジウム・チャバウジ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｃｈａｂａｕｄｉ）
トリパノソーマ・ブルーセイ　　　　　（睡眠病）
ガンビア　トリパノソーマ
ロデシア　トリパノソーマ
クルーズ　トリパノソーマ　　　　　　（シャーガス病）
トリパノソーマ・コルブリフォルミス　（フィラリア）
小児リーシュマニア　　　　　　　　　（リーシュマニア）
ドノバン　リーシュマニア
線虫
抗菌薬／細菌学
エンテロコッカス・コリ
エンテロコッカス・フェカーリス
バシラス・サチリス
スタフィロコッカス・アウレウス
スタフィロコッカス・エピデルミディス
シュードモナス・エルジノーサ
トリコフィトン・メンタグロフィテス
ストレプトコッカス・ピオゲネス
サルモネラ種
マイコバクテリウム・ツベルクローシス
マイコバクテリウム・イントラセルラーレ
【００４４】
日和見感染症（ＯＩ）／菌学
カンジダ・アルビカンス
カンジダ・トロピカリス
カンジダ・ケフィール
クリプトコッカス・ネオフォルマンス
アスペルギルス・フラーブス
アスペルギルス・フミガーツス
ミクロスポルム・カニス
トリコフィトン・ルブルム
トリコフィトン・メンタグロフィテス
トリコフィトン・キンケアナム（Ｔ． ｑｕｉｎｋｅａｎｕｍ）
クリプトスポリジウム種
トキソプラズマ・ゴンディ
【００４５】
抗ウイルス薬
ＨＩＶ−１（ヒト後天性免疫不全ウイルス）；ＨＩＶ伝播抑制型
ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＶＺＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＨＨＶ−８）
呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ、ＭＶ、ＨＲＶ、Ａｄ）
Ｂ型肝炎ウイルス及びＣ型肝炎ウイルス
オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）
特殊病原体：ＶＥＥ、プンタ・トロ（Ｐｕｎｔａ Ｔｏｒｏ）、ピチンド（Ｐｉｃｈｉｎｄｅ）、黄熱、ウェストナイル
ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＨＣＭＶＳＣＩＤ−ｈｕ、ＭＣＭＶ、ＧＰＣＭＶ）
呼吸ウイルス（Ｆｌｕ Ａ＆Ｂ、ＲＳＶ、ＰＩＶ−３、ＭＶ）
肝炎ウイルス（ＷＨＶ、ＨＤＶ、ＨＢＶトランスジェニック）
オルトポックスウイルス（ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス）
パピローマウイルス（ショープ、ＨＰＶＳＣＩＤ−ｈｕ）
水疱性口内炎ウイルス（ＢＨＫ／ＶＳＶ）
ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）
【００４６】
標準操作方法
マンザミンＡ及びイルシナールＡの単離
以下はインド洋で収集された海洋海綿からのマンザミンＡ及びイルシナールＡの単離のための迅速、有効かつ安価な方法を記載する。
抽出
マンザミン含有海綿（０１ ＩＮＤ ０３５）は湿式又は乾式で加工し得る。抽出方法は凍結乾燥サンプル４．５ｋｇ（約２０ｋｇの湿潤重量）で開始する。海綿は極めて普通であり、マナド湾（スラウェシ、インドネシア）で−３ｍから−４０ｍまでの範囲の深さから収集し得る。それは粗表面を有する不規則な塊である。その組織は堅く、しかももろい。生存中の色は外部でえび茶色であり、内部で黄色である。骨格は非常に不規則であり、不規則な湾曲束中に固定された小さい丸いメッシュを含む。骨片は不規則な湾曲円虫体、８０−１ｍである。サンプルはペトロシイダエ科（ハプロスクレリダ目）の記載されていない属及び種に相当する。海綿のこのグループはキセストスポンジア種及びペトロシア種の骨格構造を連想させるが、一層不規則かつ索状である骨格構造、８０−１６０ｍの範囲である不規則な湾曲円虫体の存在、デリケートな繊維組織、及びマスタードイエローの内部の色を特徴とする。証拠標本がロンドンの博物館に寄託された（ＢＭＮＨ １９９７．１１．１１．９）。マンザミン化学が公表された標本、例えば、ハリクロナ種、キセストスポンジア種、及びペリナ種の慎重な再審査はこれらの標本の分類方式一致度、ひいては属グループに関する化学マーカーを明らかにし得る。
乾燥又は湿潤海綿はアセトンで４回抽出し得る。アセトン１６リットルが夫々の抽出に使用される。アセトン抽出液が合わされ、減圧下で蒸発、乾燥される。乾燥固体は乾燥海綿４．５ｋｇから粗マンザミン２１５ｇを与える。
【００４７】
クロマトグラフィー
シリカゲルによる真空フラッシュクロマトグラフィー：　カラムクロマトグラフィー中に必要とされる溶媒の量を減少するために、シリカゲルを使用し、ヘキサンで開始し、次第に増加する量のアセトンを使用するＶＬＣは油及び極性不純物の大半を除去するであろう。
逆相Ｃ１８による真空フラッシュクロマトグラフィー：　カラムクロマトグラフィー中に必要とされる溶媒を減少し、ステロールを有効に除去するために、高濃度のＨ２ＯでＣ１８から溶離するマンザミンの能力を利用する方法が開発されている。
カラムクロマトグラフィー：　粗抽出物（２１５ｇ）が粗大フリット、シリカゲル（２００−４００メッシュ）（ナットランド・インターナショナル社；カタログ番号８０００１−２０、電話：（９１９） ３８０−９７７５、ファックス：（９１９） ３８０−９８８６、ｗｗｗ．ｎａｔｌａｎｄ．ｃｏｍ）６ｋｇを含むカラム（長さ１５０ｃｍ、直径１３ｃｍ）によるカラムクロマトグラフィーにかけられ、最初にヘキサン−アセトン（９５：５） ３０リットル、ヘキサン−アセトン（９０：１０） １２８リットル、ヘキサン−アセトン（８５：１５） ３０リットル、ヘキサン−アセトン（７０：３０） ３０リットル、ヘキサン−アセトン（５０：５０） １０リットル、ヘキサン−アセトン（５０：５０） １０リットル、アセトン６リットル、メタノール−アセトン（５：９５） １０リットル、メタノール−アセトン（２０：９５） ４リットル次いでメタノール１０リットルで溶離する。溶媒混合物がロト−エパボレーターで蒸発させることにより回収され、反復して再利用される。蒸発、乾燥後に、標準マンザミンＡ及びイルシナールＡによる競合ＴＬＣが簡単なプロセス監視を可能にする。ヘキサン−アセトン（９０：１０）で溶離された最初の３種の画分（６リットル）がイルシナールＡ（１．５ｇ）を与え、１Ｈ ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにより監視し得る。ヘキサン−アセトン（９０：１０）で溶離された残りの画分（１２２リットル）はマンザミンＡを含むことがわかる。これらの画分が合わされ、１５ｇの重量である。
【００４８】
次いでマンザミンＡ含有画分（１５ｇ）がカラム（長さ１００ｃｍ、直径６ｃｍ）、アルミナＤＣＣ（６３−２００μｍ）２００ｇを使用して、ヘキサン−アセトン（８５：１５）の混合物で溶離することによりカラムクロマトグラフィーにかけられる。夫々５００ｍｌの７２の画分が回収され、乾燥され、マンザミンＡとの比較ＴＬＣによりチェックされる。マンザミンＡを含む画分１２−６２が合わされる（１１ｇ）。
ＨＰＬＣ：　マンザミンＡを含む画分（１１ｇ）がプレカラムルナＣ−８ １５μ、５０ｘ５０．００とともにフェノメネックス・ルナＣ−８ １５μ、２５０ｘ１００．００カラムを使用し、毎分２０．００ｍｌの流量でアセトニトリル−水（３：７）で無勾配溶離し、ＵＶ検出器で３８０ｎｍで監視することによりＲＰ−ＨＰＬＣにかけられて純粋なマンザミンＡ（１０ｇ）を得る。
このプロセス後に、記載されていないインド洋ペトロシイダエ海綿（ハプロスクレリダ目）の親油性抽出物が新規化合物エント−８−ヒドロキシ−マンザミンＡ（１．２４％）、エント−マンザミンＦ（０．００５％）、及びネオ−カウルアミン（０．００４８％）と一緒に既知のマンザミンＡ（０．６６％）、Ｅ（０．００３％）、Ｊ（０．００１７％）、及び６−デオキシマンザミンＸ（０．００２１％）を与えた。これらの格別のアルカロイドの誘導体の幾つかが微生物代謝、合成研究及び半合成研究を使用して生成された。表１及び２はこうして単離又は調製された天然産物、半合成生成物及び代謝産物のｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｍｔｂ及び抗マラリア活性を示す。Ｍｔｂに対し１−３μｇ／ｍｌの終点を有する３種の天然産マンザミンは合成修飾及び代謝修飾がリファムピン（半合成天然産物それ自体）に匹敵する活性を有する化合物を容易にもたらし得たことを明らかに示す。
【００４９】
【化６】
2004509082.tif 000008
【００５０】
【化７】
2004509082.tif 000009
【００５１】
これらの化合物を得る方法が、例えば、米国特許第４，８９５，８５２号、同第４，８９５，８５３号、及び同第４，８９５，８５４号、並びに国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／０７９７４号に記載されており、これらが参考としてそのまま本明細書に含まれる。
【００５２】
【表１】結核菌（Ｈ３７ＲＶ）に対する天然産物及び半合成生成物のｉｎ ｖｉｔｒｏ抑制活性及び最小抑制濃度（ＭＩＣ）
2004509082.tif 000010
【００５３】
【表２】熱帯熱マラリア原虫に対する天然産物及び半合成生成物のｉｎ ｖｉｔｒｏ抑制活性及び選択性インデックス（ＳＩ）（細胞毒性をベロ細胞に対し測定する）
2004509082.tif 000011
【００５４】
【化８】
2004509082.tif 000012
【００５５】
【表３】アッセイされたマンザミンアルカロイドの抗ＨＩＶ活性
2004509082.tif 000013
【００５６】
マンザミン半合成類似体。新規な半合成マンザミン類似体を生成しようと試みて、マンザミンＡ、マンザミンＦ及びエント−８−ヒドロキシマンザミンＡで開始する幾つかのルーチン化学反応を利用した。これらのうちで、過剰の酢酸ナトリウムの存在下で８０℃で、３０分間にわたる窒素雰囲気下の無水酢酸の反応は主要生成物（２４％）としての８，１２−ジ−Ｏ−アセチルエント−８−ヒドロキシマンザミンＡとともに少量の２種の新規Δ３４，３５生成物（９．８％及び１．５％）を与えた。
無水エタノール中で室温で１２時間にわたってＰｄ／カーボンの存在下でヒドラジン水和物を使用するエント−８−ヒドロキシマンザミンＡの還元は単一の主要生成物（１９％）を与えた。ＨＲＦＴＭＳスペクトルはｍ／ｚ ５６９．３７４４に分子イオンピーク（Ｍ＋Ｈ）＋を示し、分子式Ｃ３６Ｈ４９Ｎ４Ｏ２ ５６９．３８５６及び１５度の二重結合均等物を示唆した。１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲは生成物が１５，１６，３２，３３−テトラヒドロ−エント−８−ヒドロキシマンザミンＡであることを示した。何とならば、オレフィンのプロトン及び炭素シグナル１５、１６、３２、及び３３が上磁場の脂肪族シグナルにより置換されているからである。
無水テトラヒドロフラン中で室温でホウ水素化ナトリウムによるマンザミンＦの還元は２種の生成物（２７．５％及び６％）を与えた。ＨＲＦＴＭＳスペクトルは夫々ｍ／ｚ ５８３．３１００及び５８３．３６１５に分子イオンピーク（Ｍ＋Ｈ）＋を示し、分子式Ｃ３６Ｈ４７Ｎ４Ｏ３ 及び１６度の二重結合均等物を示唆した。夫々３．７７及び３．８６で共鳴する広いプロトン一重線を新しい酸素化されたＨ−３１と帰属した。Ｈ−３１のβ−配向はβ−配向Ｈ−３４とのそのＮＯＥＳＹ相関関係の比較に基づいて帰属される。これらの化合物はＣ−３１エピマーである必要がある。何とならば、両化合物の唯一のスペクトルの相違がＣ−３１に局在化されるからである。
【００５７】
マンザミン抗感染活性。マラリア。エント−８−ヒドロキシマンザミンＡ１００μモル／ｋｇの単一の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与量は寄生虫血症を有効に減少し、未治療の対照及びアルテミシニンで治療されたもので２−３日と比較して９−１１日までプラスモジウム・ベルゲイ感染マウスの平均生存日数を増大した。クロロキンで治療したマウスは治療後２日でマンザミンＡ及びネオ−カウルアミンと比較した場合に１００μモル／ｋｇで寄生虫血症の匹敵する減少でわずかに６日生存した。マンザミンＡとクロロキンの間の寄生虫血症の匹敵する減少続いてマンザミン治療マウスにおける寿命予想の有意な改善は免疫刺激活性がｉｎ ｖｉｖｏで見られる改善に重要であることを示唆する。マンザミンＡの３回の５０μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．の投与量は治癒性であり、寄生虫を完全に除くことがわかった。２回の経口投与量（１００μモル／ｋｇ）は対照マウスと較べた場合に寄生虫血症の９０％減少を与えることが示された。マンザミンＡ、エント（−）８−ヒドロキシマンザミンＡ及びネオ−カウルアミンの全てがクロロキン又はアルテミシニンよりも大きいプラスモジウム・ベルゲイに対するｉｎ ｖｉｖｏ活性を示す。Ａｎｇ， Ｋ．Ｋ．Ｈ．； Ｈｏｌｍｅｓ， Ｍ．Ｊ．； Ｈｉｇａ， Ｔ．； Ｈａｍａｎｎ， Ｍ．Ｔ．； Ｋａｒａ， Ｕ．Ａ．Ｋ．，“β−カルボリンアルカロイドマンザミンＡのｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏ抗マラリア活性”， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ＆ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ２０００， ４４， １６４５−１６４９を参照のこと。幾つかの場合には、マンザミンＡの単一投与量（１００μモル／ｋｇ）で治療されたマウスが寄生虫を完全に除くことができた。この同じ投与量で、アルテミシニン及びクロロキン治療動物は２−６日の寿命予想を有していた。加えて、マンザミンアルカロイドはクロロキンよりもｉｎ ｖｉｖｏで毒性ではなく、また白血球集団の著しい増加により見られるようなプラスモジウム感染マウスとの有意な免疫刺激応答を示す。マンザミンで治療された感染マウスのこの免疫応答は更なるスケールアップ単離及びその作用のメカニズムについての詳細な研究を明らかに正当化する。
【００５８】
マラリアに対するマンザミンの活性を確かめるために、世界保健機構はマウスでプラスモジウム・ヨエリＮＳマラリア株に対しマンザミンＡを調べた（Ｐｅｔｅｒｓ４日アッセイ−Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ９２章， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９９）。このモデルでは、マンザミンＡはＥＤ５０ ＜５ ｍｇ／ｋｇを有し、ＤＭＳＯ又は医薬上更に許されるカルボキシ−メチルセルロースをベースとする製剤中で経口投与された場合にＮａアルテスネートよりも活性であった。予備結果はまた８−ヒドロキシマンザミンがＤＭＳＯ中で経口活性であったことを示す（プラスモジウム・ベルゲイＮ株に対しＥＤ５０ ＜１０ ｍｇ／ｋｇ）。
エント−８−ヒドロキシマンザミンＡはＰ−３８８マウスリンパ腫細胞に対し強力な細胞毒性を有し（ＩＣ５０ ０．２５μｇ／ｍｌ）、一方、（＋）−８−ヒドロキシマンザミンＡは同細胞系に対し不活性と報告された。これは（−）−鏡像体に関する改良された生物活性の注目に値する指示である。ネオ−カウルアミンは、マンザミン二量体カウルアミン（これは不活性であった）と違って、ヒト肺癌細胞及び結腸癌細胞に対しＩＣ５０ １．０μｇ／ｍｌの細胞毒性を有する。これは更なる酸素化が代謝研究により生物活性及び促進された付加的な先導最適化を改良したかもしれないことを示唆した。微生物代謝産物（イルシナールＡ及び８−ＨＯＭＡ代謝産物１）は親化合物よりも細胞毒性ではなく、感染性病原体に対する先導のための新規かつ潜在的に無毒性のマンザミン誘導体を生じる生物変換反応の実用性を示す。
【００５９】
Ｍｔｂ。殆どのマンザミンはマンザミンＦ、ネオ−カウルアミン及び幾つかの誘導体を除いてＭＩＣ ＜１２．５μｇ／ｍｌで結核菌の９８−９９％抑制を誘発し、これはアザシクロオクタン環の付加的な酸素化がＴＢ活性を低下することを示した。イルシナールＡの活性はβ−カルボリン部分がｉｎ ｖｉｔｒｏ活性に必須ではないことを示すが、イルシナールＡはマラリアに対しｉｎ ｖｉｖｏの活性を示すことができなかった。これらの結果はピクテット−スペングラー反応を利用して一連のβ−カルボリン類似体及びイソキノリン類似体を生成することによる更なる開発について可能な抗マラリア／抗結核先導物質としてのイルシナールＡの候補を示唆する。結核菌（Ｈ３７Ｒｖ）に対する天然マンザミン、半合成マンザミン及び生物触媒誘導マンザミンのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が表１に報告される。ネオ−カウルアミン、Ｃ−３０及びＣ−３１’における二つの遊離α−ヒドロキシル基及びβ−ヒドロキシル基に加えて、アザシクロオクタン部位のＣ−３１／Ｃ−３４’炭素及びＣ−３０’／Ｃ−３４炭素で両方のモノマーを橋かけする二つのβ−配向エーテル結合を含む第二マンザミン二量体の夫々はまたそれ程活性を示さなかった（４４％抑制）。これはＣ−３１におけるα−ヒドロキシル化が活性を大いに増進し、一方、この位置におけるβ−ヒドロキシル化が活性を低下することを示唆する。Δ１５，１６系及びΔ３２，３３系の両方の還元は活性に効果を有さず、Ｃ−３３における置換はＭｔｂに対する活性を改善する。二量体ネオ−カウルアミンはマウスのマラリアに対し活性を示し、これはマンザミンＡ及びエント−８−ヒドロキシマンザミンＡに匹敵する。
【００６０】
このアルカロイドの脂肪族部分はｉｎ ｖｉｔｒｏの抗Ｍｔｂ活性及び抗マラリア活性に主要な薬作用発生団であることが明らかであり、β−カルボリンがまたｉｎ ｖｉｖｏ活性（マラリア）に寄与する。結果として、イルシナールＡのアルデヒドはこの官能性に由来する多数の生物活性誘導体を生成するための出発物質として利用し得る。これらの誘導体は感染性疾患だけでなく、先の特許に概説されたような癌及び炎症性疾患の治療に利用し得る。アルデヒド位置における酸化、還元、シッフ塩基の形成等は実際にエンドレスである。しかしながら、主たる焦点は付加的な複素環部分の形成にアルデヒドを利用することであろう。Ｊｏｕｌｅ， Ｊ．Ａ．； Ｍｉｌｌｓ， Ｋ．； Ｓｍｉｔｈ， Ｇ．Ｆ． “複素環化学”第３編 １９９５ ｐｐ Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。或る理由のために、ピクテット−スペングラー縮合が作用し得ない場合、この位置におけるその化学を研究するのに充分な量のイルシナールＡが海綿からの単離により入手し得るであろう。このプロジェクトの有益な局面は先に提案された分子学及び微生物学によりイルシナールＡへの遺伝子操作経路がまた考えられることである。その半合成の目標はアルデヒド位置における付加的なヘテロ芳香族官能基の導入に集中することであろう。このプロジェクトの有益な結果は複雑なアルカロイドの半合成生成にピクテット−スペングラー反応を使用する付加的な合成方法であろう。
【００６１】
トキソプラズマ・ゴンディ。致死用量のトキソプラズマ・ゴンディ（経口投与されたＣ５６株の１０シスト）で感染され、マンザミンＡ（感染後の１日に開始して８日間にわたって１日１回８ｍｇ／ｋｇ）で腹腔内治療されたマウスは死亡に至る時間の有意な延長を有していた。更に、全ての対照マウスが感染の１６日目までに死亡した時、全てのマンザミンＡ治療マウスは生存していた。対照グループ中の未治療感染マウスは感染後１０日に死亡し始めた。マンザミンＡで治療したマウスは治療が停止した後９日で死亡した。このデータはマンザミンＡが治療の期間にわたって感染症を防除することができたことを明らかに示し、最適化治療レジメが改善された結果を生じ得る。マウスの異常な兆候又は挙動（麻痺、失明、急に回ること）が治療中に生じなかったことを注目することが重要である。
【００６２】
【化９】
2004509082.tif 000014
【００６３】
【化１０】
2004509082.tif 000015
【００６４】
物質及び方法
抗マラリア活性のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価（天然産物研究のためのミシシッピー国立大学センター）。トラガー及びジェンセンの方法（１９７６）の改良を使用して、熱帯熱マラリア原虫のシエラ・レオンＤ６クローン（クロロキン感受性、メフロキン耐性）及びインドチャイナＷ２クローン（クロロキン耐性、メフロキン感受性）の原培養物を管理する。これらの生物を２５ ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液、Ｌ−グルタミン、２７ ｍＭ重炭酸塩、６０μｇ／ｍｌのアミカシン及び１０％の正常なＡ＋ヒト血漿（遠心分離により浄化し、５６℃で３０分間にわたって熱不活化した）を含むＲＰＭＩ １６４０培地中のＡ＋ヒト赤血球（ミシシッピー血液サービスから毎月新しく得られた）中で連続的に増殖する。培養物を６％赤血球懸濁液を含むＲＰＭＩ １６４０完全増殖培地５ｍｌを含む２５ｃｍ２の組織培養フラスコ（コーニング・グラス・ワークス、コーニング、ＮＹ）中で管理する。フラスコを９０％Ｎ２、５％Ｏ２、５％ＣＯ２からなるガス混合物（スタンダード・ウェルダーズ、ジャクソン、ＭＳ）で無菌フラッシし、シールし、３７℃で約２４時間インキュベートする。これらの生物を毎日継代培養し、これは古い増殖培地を慎重に除去し、感染赤血球のスミアをつくり、スミアをギムザ染色で染色して培養物の寄生虫血症の％を測定することを伴う。オリンパスＢＨＴ明視野顕微鏡（Ｃ２コーポレーション、ヒアリー、ＦＬ）の１００倍の油浸漬対物レンズを使用してスミアを分析する。寄生虫血症を一旦測定すると、感染赤血球の一部を捨て、新しい未感染赤血球及び増殖培地を夫々のフラスコに添加し、既に記載されたように処理する。
【００６５】
抽出物及び化合物をＤＭＳＯ又はＥｔＯＨに夫々５０ｍｇ／ｍｌ及び５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで溶解する。マトリックス・エレクトラペット・リキッド・ハンドリング・システム（マトリックス・テクノロジィズ、ロウェル、ＭＡ）を使用して連続３倍希釈液を完全増殖培地中で夫々のサンプルからつくり、次いで熱帯熱マラリア原虫の夫々のクローンを含む９６ウェル・ミクロタイタ・プレートに二重反復で添加する。ウェル中の最終濃度は抽出物について１１９，０００ｎｇ／ｍｌ、３９，６６６ｎｇ／ｍｌ及び１３，２２２ｎｇ／ｍｌであり、純粋な化合物について１１，９００ｎｇ／ｍｌ、３，９６６ｎｇ／ｍｌ及び１，３２２ｎｇ／ｍｌである。ＤＭＳＯ及びＥｔＯＨの濃度を夫々のウェル中で０．２％に固定し、これは寄生虫の増殖に効果を有しない。クロロキンジホスフェート（シグマ・ケミカル社、セントルイス、ＭＯ）、メフロキンＨＣｌ（ロッシェ・ラボラトリィズ、ＮＹ）及びアルテエーテル（ファーマコグノシィ部門、ＭＳ大学、米国）を対照薬剤として使用する。
【００６６】
ミクロタイタ・プレート製剤。夫々のクローンを新しいＡ＋未感染赤血球及び完全増殖培地で調節して２％ヘマトクリット及び２％寄生虫血症を生じる。Ｄｅｓｊａｒｄｉｎｓ， Ｒ．Ｅ．， Ｃａｎｆｉｅｌｄ， Ｃ．Ｊ．， Ｈａｙｎｅｓ， Ｊ．Ｄ．， Ｃｈｕｌａｙ， Ｊ．Ｄ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． １９７９， １６， ７１０を参照のこと。二つのミクロタイタ・プレートを夫々１２の試験サンプルについて調製する。一つのプレートはＤ６クローンを含み、その他はＷ２クローンを含む。夫々のクローンの懸濁液を下記のウェル以外の９６ウェルプレートの全てのウェルに２００μＬのアリコート中で添加する：Ｇ１−２、Ｈ１−２：培地ブランク；Ｇ３−４、Ｈ３−４：未感染ＲＢＣ対照。マトリックス・エレクトラペット・リキッド・ハンドリング・システム（マトリックス・テクノロジィズ、ロウェル、ＭＡ）を使用して夫々の薬剤希釈液の１０μＬのアリコートを夫々のミクロタイタ・プレートの隣接ウェルに添加する。次いでプレートを気密保湿モジュラーインキュベーター（ビラップス−ローセンベルグ、デル・マー、ＣＡ）に入れ、９０％Ｎ２、５％Ｏ２、５％ＣＯ２のガス混合物でフラッシし、３７℃で約４８時間インキュベートする。
【００６７】
寄生虫ＬＤＨアッセイ。４８時間のインキュベーション後に、培養物を再度懸濁させ、２０μＬのアリコートを夫々のウェルから除去し、マルスタットＴＭ試薬（フロー社、ポートランド、ＯＲ）の１００μＬのアリコートを含む別の９６ウェル・ミクロタイタ・プレートの相当するウェルに移す。プレートを約２０分間インキュベートし、次いでニトロブルーテトラゾリウムとフェナジンエソスルフェート（夫々、１ｍｇ及び０．０５ｍｇ／ｍｌ）の２０：１混合物２０μＬ（シグマ・ケミカル社、セントルイス、ＭＯ）をミクロタイタ・プレートの夫々のウェルに添加する。テトラゾリウム塩が青色のホルマザン生成物に充分に還元されるまでプレートを約６０分以上インキュベートする。５％酢酸１００μＬをミクロタイタ・プレートの夫々のウェルに添加することによりその反応を停止する。終点をバイオテク３１２ｅミクロプレート・リーダー（フィッシャー・サイエンティフィック、ノークロス、ＧＡ）で６３０ｎｍで読み取ることによりプレートを分析する。Ｍａｋｌｅｒ， Ｍ．Ｔ．； Ｒｉｅｓ， Ｊ．Ｍ．； Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｊ．Ａ．； Ｂａｎｃｒｏｆｔ， Ｊ．Ｅ．； Ｐｉｐｅｒ， Ｒ．Ｃ．； Ｇｉｂｂｉｎｓ， Ｂ．Ｌ．； Ｈｉｎｒｉｃｈｓ， Ｄ．Ｊ．， Ａｍ． Ｊ． Ｔｒｏｐ． Ｍｅｄ． Ｈｙｇ． １９９３， ４８， ７３９を参照のこと。
【００６８】
海洋抽出成分による色素の化学的還元により誘発し得る偽陰性結果はマルスタット試薬又はＮＢＴ／ＰＥＳとのこのような化学反応を明らかにしなかったマラリアのないこれらの試験抽出物の予備試験により回避される。抽出内容物による寄生虫ＬＤＨ失活に由来し得る偽陽性結果は寄生虫ＬＤＨを標準物質としてクローニングすることにより回避される。次いで陽性抽出物を酵素の一般的な失活があるかを見るために試験する。加えて、赤血球を抗マラリア活性について陽性であるこれらのウェル及び寄生虫が死滅されたかを測定するためにつくられたスミアから除去する。
【００６９】
哺乳類細胞についてのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性。ベロ細胞（ＡＴＣＣ ＃ＣＣＬ ８１）をＡＴＣＣから入手する。ベロ細胞は一般的な細胞毒性のインジケーターとして利用できた。ベロ細胞をグルタミン、重炭酸ナトリウム及び１０％ウシ胎児血清（ハイクローン・ラボラトリィズ）を補給したＲＰＭＩ １６４０培地（シグマ・ケミカル社、セントルイス、ＭＯ）中で３７℃で５％ＣＯ２保湿雰囲気中で増殖させる。細胞を４８−７２時間増殖させ、その時点で細胞を継代培養する。細胞を０．２５％トリプシンによるトリプシン処理により解離し、約５００，０００の細胞／ｍｌの濃度を得る容積の増殖培地中で再度懸濁させる。細胞約１００μＬを９６ウェル・ミクロタイタ・プレートの夫々のウェルに添加して５０，０００の細胞／ウェルの最終濃度を得る。細胞を含むプレートを約２４時間インキュベートし、次いで試験抽出物の連続希釈液（抗マラリアアッセイと同じ濃度）をつくり、二重反復ウェルに添加する。細胞を更に４８時間にわたって試験サンプルとともにインキュベートし、細胞の生存度を対照ウェルに対し測定する。アンフォテリシンＢを陽性対照として使用する。ニュートラルレッドアッセイを使用して細胞の生存度を測定する。Ｂｏｒｅｎｆｒｅｕｎｄ， Ｅ．； Ｂａｂｉｃｈ， Ｈ．； Ｍａｒｔｉｎ−Ａｌｇｕａｃｉｌ， Ｎ．， Ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｄｅｖ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １９８６， ２６， ４４９を参照のこと。プレートをバイオ−テクモデル３１２ｅミクロプレート・リーダーで読み取る。
【００７０】
抗マラリア活性のｉｎ ｖｉｖｏ評価（シンガポール国立大学Ｋｅｎｎｙ Ａｎｇ博士によるＷＨＯにおける活性の確認）。生後４週の雄のスイス・アルビノマウスに１０７のプラスモジウム・ベルゲイ感染マウス赤血球を腹腔内注射する。感染後２日目に、マウスを５０〜１，０００μモル／体重１ｋｇの濃度範囲内の試験化合物又は基準薬剤（クロロキン又はアルテミシニン）の単一の腹腔内注射で治療する。全ての試験化合物及び基準薬剤を５％トゥイーン６０食塩液中の懸濁液として注射した。経口投与について、試験化合物をトウモロコシ油中の懸濁液として投与し、マウスに感染後の２日目及び３日目に１００μモル／ｋｇの試験化合物の２回連続の投与量を投与する。対照マウスは感染後の２日目及び３日目に薬剤を受けた。対照マウスは５％トゥイーン６０食塩液又はトウモロコシ油のみを受けた。マウスの生存を毎日記録した。寄生虫血症％をメタノールで固定され、ギムザ染色で染色されたマウス尾部血液スミアから顕微鏡（倍率、１，０００倍）で測定する。
【００７１】
個々のプラスモジウム・ベルゲイ感染マウスからの血液サンプルを感染後の３日目のマンザミンＡ１００μモル／ｋｇの単一の腹腔内治療後の種々の時点で集めた。透過電子顕微鏡検査のために、血液サンプル約０．５ｍｌを０．１Ｍカコジレート緩衝液（ｐＨ ７．４）中の３％グルタルアルデヒドで固定し、１％四酸化オスミウム及び１％ウラニルアセテートで後固定し、段階的エタノールシリーズ中で脱水し、スパー樹脂に埋め込む。ガラスナイフを備えたレイチェルト−ユング・ウルトラカットを使用することにより、得られるブロックを切断する。超薄い切片を１５０メッシュの銅グリッドに取り付け、１％ウラニルアセテート及び１％クエン酸鉛で染色し、ＪＥＭ−１００ＣＸ電子顕微鏡で調べた。血漿中のマンザミンを液体クロマトグラフィー選択反応監視質量スペクトル法（ＬＣ−ＳＲＭ−ＭＳ）により検出した。プラスモジウム・ベルゲイ感染マウスは感染後の３日目にアルカロイド（腹腔内で１００μモル／ｋｇ）で治療されるであろう。血液サンプルを治療後の４８時間まで特定の時点で個々のマウスから集める。血漿を遠心分離により単離し、５ｍＭ 酢酸アンモニウムを含む９５％アセトニトリルで抽出した。
【００７２】
血漿抽出物を濾過し、サンプル５μｌをパーキン−エルマーＡＰＩ ３００ターボ−イオン−噴霧タンデム質量スペクトロメーターとインターフェースされたシマズＬＣ−１０ ＡＤ微小孔高圧液体クロマトグラフに注入する。サンプルを５ｍＭ酢酸アンモニウムを含む８６％アセトニトリルによる５０μｌ／分の溶離によりプロジギイＣ−１８カラム（３０ｘ１ｍｍ、内径５μｍ）で分離する。（Ｍ＋Ｈ）＋から（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋までのプロトン化マンザミン前駆体イオンの遷移を監視することによりマンザミンを検出することができる。生成物イオンクロマトグラムに関するピーク面積を積分し、濃度をスパイクされた血漿中のマンザミンに関する線形較正曲線から測定する。ＬＣ−ＳＲＭ−ＭＳによる血漿中のマンザミンに関する検出限界は２．５ｐｇである。マイクロソフト・エクセルにリンクされたアナライズ−イット・ソフトウェアを使用することにより、結果を９９％の信頼区間（ｐ＜０．０１）でノンパラメトリック統計評価にかける。そのプログラムはマン−ウィットニィＵ検定を使用してデータの二つのグループ間の有意差を測定する。
【００７３】
抗ミクロバクテリア活性のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価（ツベルクローシス・アンチミクロビアル・アクイジション＆コオーディネーティング・ファシリティ（ＴＡＡＣＦ））。精製化合物の予備評価がブロース微量希釈アッセイ、ミクロプレート・アラマー・ブルー・アッセイ（ＭＡＢＡ）を使用してＢＡＣＴＥＣ １２Ｂ培地中の結核菌Ｈ３７Ｒｖ（ＡＴＣＣ ２７２９４）に対し６．２５μｇ／ｍｌ（即ち一連の同族体中の最高分子量の化合物のモル当量）で行なわれるであろう。蛍光を示す化合物をＢＡＣＴＥＣ ４６０ラジオメトリック系中で試験する。Ｃｏｌｌｉｎｓ， Ｌ．； Ｆｒａｎｚｂｌａｕ， Ｓ．Ｇ． “結核菌及びマイコバクテリウム・アビウムに対する化合物の高処理量スクリーニングのためのミクロプレート・アラマー・ブルー・アッセイｖｓＢＡＣＴＥＣ ４６０系”， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． １９９７， ４１， １００４−９を参照のこと。一次スクリーン（ＭＩＣ＞６．２５μｇ／ｍｌ）で＜９０％抑制を示す海洋化合物（＞０．７ｍｇ）は更に評価されないであろう。一次スクリーンで少なくとも９０％抑制を示す海洋天然産物又は半合成化合物がＭＡＢＡを使用して実際のＭＩＣを測定するために結核菌Ｈ３７Ｒｖに対し更に低い濃度で再度アッセイされるであろう。ＭＩＣは対照に対し９０％の蛍光の減少に影響する最低濃度と定義される。
【００７４】
ＭＩＣの測定とともに、化合物は結核菌Ｈ３７Ｒｖについて６２．５μｇ／ｍｌ即ち１０倍のＭＩＣ以下の濃度（培地中の溶解を可能にする）でベロ細胞中の細胞毒性（ＩＣ５０）について試験されるであろう。７２時間の暴露後に、プロメガ・セルタイタ９６非放射性細胞増殖アッセイを使用して、生存度をホルマザン生成物へのＭＴＴの細胞変換に基づいて測定する。選択性インデックス（即ち、ＩＣ５０：ＭＩＣ比）ＳＩ＞１０の化合物がＢＡＣＴＥＣ ４６０で６．２５μｇ／ｍｌと確認されたｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を有するであろう。次いで化合物をマウス骨髄マクロファージの単層中の結核菌エードマン（ＡＴＣＣ ３５８０１）の死滅について試験する。Ｓｋｉｎｎｅｒ， Ｐ．Ｓ．； Ｆｕｒｎｅｙ， Ｓ．Ｋ．； Ｊａｃｏｂｓ， Ｍ．Ｒ．； Ｋｌｏｐｍａｎ， Ｇ．； Ｅｌｌｎｅｒ， Ｊ．Ｊ．； Ｏｒｍｅ， Ｉ．Ｍ．， “妥当な生理学的条件下で抗ミコバクテリア薬の効力を評価するための骨髄由来マウスマクロファージモデル”， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． １９９４， ３８， ２５５７−６３を参照のこと。ＭＩＣの０．２５倍、１倍、４倍及び１６倍に相当する４倍濃度で試験する（ＥＣ９０及びＥＣ９９；無薬剤対照と較べて７日でコロニー形成単位の夫々９０％及び９９％の減少を行なう最低濃度）。化合物をマクロファージでアッセイしているのと同時に、ＭＩＣをＭＡＢＡ中でマイコバクテリウム・アビウム（ＡＴＣＣ ２５２９１）の株及び単一薬剤耐性（ＳＤＲ）結核菌の３種の株に対し測定する。天然産物及び誘導体はイソニアジドに耐性のＴＢ株（ＡＴＴＣ ３５８２２）、リファムピンに耐性のＴＢ株（ＡＴＣＣ ３５８３８）、及び海洋天然産物の構造クラスに基づいて選ばれた一つの付加的なＳＤＲ株に対し試験し得る。また、確認試験を薬剤感受性結核菌Ｈ３７Ｒｖ及びエードマンに対し行なう。最小殺菌濃度（ＭＢＣ）は無薬剤固形培地で継代培養し、夫々の株の既に測定されたＭＩＣ以上の薬剤濃度への補給ミドルブルック７Ｈ９培地中の暴露後にコロニー形成単位を数えることにより結核菌Ｈ３７Ｒｖ及びエードマンについて測定されるであろう。初期ＭＩＣ測定は０．７ｍｇ程度に少量で行なわれ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ評価の残りは約１０ｍｇを必要とする。
【００７５】
抗マイコバクテリウム・アビウム活性のｉｎ ｖｉｖｏ評価（ＴＡＡＣＦアッセイ）。マイコバクテリウム・アビウムに対する海洋由来化合物の評価が６．２５μｇ／ｍｌ以下のマイコバクテリウム・アビウムＭＩＣを示す化合物について利用できる。ＭＡＢＡシステム及びＢＡＣＴＥＣ ４６０システムを使用して、拡大一次スクリーンをミドルブルック７Ｈ９ブロース中で５種のマイコバクテリウム・アビウム臨床分離株（１００、１０１、１０８、１０９、１１６）に対し１μｇ／ｍｌ−６４μｇ／ｍｌの範囲で行なう。試験した５種の株の少なくとも３種で８μｇ／ｍｌ以上のＭＩＣを有する化合物を、クラリスロマイシンに耐性の５種の株を含む３０種の株に対し更に低い濃度で再度アッセイする。パネルに対し有意な活性を示すこれらの海洋由来化合物をエイズ患者に見られる３種の血清型に相当する３種のマイコバクテリウム・アビウム株（１００、１０１、１０９）に対しヒト単球細胞系Ｕ９３７を使用する感染マクロファージモデルで細胞内活性について試験する。活性が株のいずれかに対し見られる場合、潜在的な相乗作用を調べるためにエタムブトール（４μｇ／ｍｌ）を最低濃度の活性を示した評価化合物と組み合わせて添加する。有望な分子について、ｉｎ ｖｉｖｏ活性をマイコバクテリウム・アビウム感染症に関するマウスモデルで研究する。ベージュ−Ｃ５７ＢＬ／ｊ ｂｇ雌マウスを３５１０７ ｃｆｕのバチルスでｉ．ｖ．感染させる。１週後に、治療を開始し、４週間続ける。次いで肝臓及び脾臓を無菌切開し、計量し、均一にする。連続希釈液を定量培養のための７Ｈ１１寒天に塗布する。マイコバクテリウム・アビウムに対する海洋由来化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価のために、２５−３０ｍｇが必要とされるであろう。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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