(57)【要約】本発明は、シクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療において有用な式（Ｉ）の新規化合物を包含する。本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物を含むある種の医薬組成物、ならびにシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式（Ｉ）の化合物を投与する段階を有してなる方法をも包含するものである。
2004505943.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【化１】
2004505943.tif 000023
［式中、
Ｘは、
（ａ）結合、
（ｂ）−（ＣＨ２）ｍ−（ｍ＝１または２）、
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）−、
（ｄ）−Ｏ−、
（ｅ）−Ｓ−および
（ｆ）−Ｎ（Ｒ５）−
からなる群から選択され；
Ｒ１は、
（ａ）
（１）水酸基、
（２）ハロ、
（３）Ｃ１−１０アルコキシ、
（４）Ｃ１−１０アルキルチオおよび
（５）ＣＮ
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いＣ１−１０アルキル、
（ｂ）フェニルもしくはナフチル、ならびに
（ｃ）Ｓ、ＯもしくはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する５原子の単環式芳香環；またはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する６原子の単環式環からなるヘテロアリール
からなる群から選択され；
上記の群（ｂ）および（ｃ）はそれぞれ、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；
Ｒ２は、
（ａ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル、
（ｂ）ＮＨ２および
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１−１０アルキル
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、
（ａ）水素、
（ｂ）ハロおよび
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から独立に選択され；
Ｒ５は、
（ａ）水素および
（ｂ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から選択される。］
【請求項２】
Ｘが結合である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが−Ｏ−である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが−Ｓ−である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＣＨ３である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ｍが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキル、および
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２がＣＨ３である請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３がＨである請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、Ｓ、ＯもしくはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する５原子の単環式芳香環；またはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する６原子の単環式環からなるヘテロアリールであり；ヘテロアリールが、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良い、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１が、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いピリジルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１が、水酸基で置換されていても良いＣ１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
（１）４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（２）３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（３）３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（４）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（５）６−ジフルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（６）６−フルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（７）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニルチオ−ピラン−２−オン、
（８）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェノキシ−ピラン−２−オン、
（９）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オン、
（１０）３−イソプロピルチオ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（１１）４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン、
（１２）３−イソプロピルチオ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン、
（１３）４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ピラン−２−オンおよび
（１４）３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
からなる群から選択される化合物。
【請求項１５】
製薬上許容される担体との組み合わせで請求項１ないし１３のいずれかに記載の式Ｉの化合物または該化合物の製薬上許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項１６】
治療または予防を必要とする哺乳動物患者における炎症性疾患の治療または予防方法であって、その炎症性疾患を治療または予防する上で有効な量の請求項１に記載の化合物をその患者に投与する段階を含む方法。
【請求項１７】
治療または予防を必要とする哺乳動物患者における、シクロオキシゲナーゼ−１より優先してシクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって有利に治療されるシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療または予防方法であって、そのシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患を治療または予防する上で有効な量の請求項１に記載の化合物をその患者に投与する段階を含む方法。
【請求項１８】
非ステロイド系抗炎症剤による治療に対して感受性である炎症性疾患の治療のための医薬品製造における請求項１ないし１３のいずれかに記載の式Ｉの化合物または該化合物の製薬上許容される塩の使用。
【請求項１９】
製薬上許容される担体と組み合わせて、許容される抗炎症量の請求項１４に記載の化合物を含む抗炎症医薬組成物。
【請求項２０】
非ステロイド系抗炎症剤による治療に対して感受性である炎症性疾患の治療のための医薬品製造における請求項１４に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
シクロオキシゲナーゼ−１より優先してシクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤によって有利に治療されるシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療または予防で使用される、請求項１ないし１３のいずれかに記載の式Ｉの化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【請求項２２】
請求項１ないし１３のいずれかに記載の式Ｉの化合物の製薬上許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
（背景技術）
非ステロイド系抗炎症薬は、シクロオキシゲナーゼとも呼ばれるプロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼの阻害によって、それの抗炎症活性、鎮痛活性および解熱活性のほとんどを行い、ホルモン誘発子宮収縮およびある種の癌増殖を阻害する。当初は、１種類のシクロオキシゲナーゼのみが知られており、それはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）すなわちウシ精嚢で最初に確認された構成酵素に相当する。最近になって、第２の誘導可能な形のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の遺伝子が、ニワトリ、マウスおよびヒトの入手源からクローニング、配列決定および特性決定された。その酵素は、ヒツジ、マウスおよびヒトなどの多様な入手源からクローニング、配列決定および特性決定されたＣＯＸ−１とは異なったものである。第２の形のシクロオキシゲナーゼであるＣＯＸ−２は、有糸分裂促進剤類、エンドトキシン、ホルモン類、サイトカイン類および成長因子類などの多くの作用物質によって急速かつ容易に誘発することができる。プロスタグランジン類は生理的役割および病理上の役割の両方を有することから、構成酵素ＣＯＸ−１がかなりの割合で、プロスタグランジン類の内因性基礎放出の原因となっており、従って消化管系の保全性および腎臓血流の維持などの生理機能において重要であるという結論に本発明者らは到達した。それとは対照的に、誘導可能な形であるＣＯＸ−２は、炎症性物質、ホルモン類、生長因子およびサイトカイン類などの作用物質に対する応答で、酵素の急速な誘発が起こると考えられるプロスタグランジンの病理効果の主たる原因となっているという結論に本発明者らは達している。そこで、ＣＯＸ−２の選択的阻害薬は、従来の非ステロイド系抗炎症薬と同様の抗炎症、解熱および鎮痛の特性を有するであろうし、さらには、ホルモン誘発子宮収縮を阻害し、抗癌効果を有する可能性があると考えられるが、その機序に基づく副作用の一部を誘発する能力は低くなるであろう。特に、そのような化合物では、消化管毒性の可能性が低下し、腎臓副作用の可能性が低下し、出血回数の低減効果があり、恐らくはアスピリン感受性喘息患者における喘息発作誘発能の低下があるはずである。
【０００２】
さらに、そのような化合物は、収縮性プロスタノイド類の合成を防止することでプロスタノイド誘発平滑筋収縮も阻害し、従って、月経困難症、早産、喘息および好酸球関連障害の治療に有用である可能性がある。その化合物はさらに、アルツハイマー病の治療、特に閉経後女性における骨損失の低減（すなわち、骨粗鬆症の治療）および緑内症治療において有用でもある。
【０００３】
シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬の可能な用途についての簡潔な説明がベインらの論文（Ｊｏｈｎ Ｖａｎｅ， Ｎａｔｕｒｅ， Ｖｏｌ． ３６７， ｐｐ． ２１５−２１６，１９９４）および別の論文（Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ ａｎｄ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ， Ｖｏｌ． ７， ｐｐ． ５０１−５１２，１９９４）にある。
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、シクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療において有用である式Ｉの新規な化合物またはそれの製薬上許容される塩を包含するものである。
【０００５】
【化２】
2004505943.tif 000003
式中、
Ｘは、
（ａ）結合、
（ｂ）−（ＣＨ２）ｍ−（ｍ＝１または２）、
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）−、
（ｄ）−Ｏ−、
（ｅ）−Ｓ−および
（ｆ）−Ｎ（Ｒ５）−
からなる群から選択され；
Ｒ１は、
（ａ）
（１）水酸基、
（２）ハロ、
（３）Ｃ１−１０アルコキシ、
（４）Ｃ１−１０アルキルチオおよび
（５）ＣＮ
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いＣ１−１０アルキル、
（ｂ）フェニルもしくはナフチル、ならびに
（ｃ）Ｓ、ＯもしくはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する５原子の単環式芳香環；またはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する６原子の単環式環からなるヘテロアリール
からなる群から選択され；
上記の群（ｂ）および（ｃ）はそれぞれ、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；
Ｒ２は、
（ａ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル、
（ｂ）ＮＨ２および
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１−１０アルキル
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、
（ａ）水素、
（ｂ）ハロおよび
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から独立に選択され；
Ｒ５は、
（ａ）水素および
（ｂ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から選択される。
【０００６】
本発明は、式Ｉの化合物を含むある種の医薬組成物ならびに処置を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を有するシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療方法をも包含するものである。
【０００７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、シクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療において有用である式Ｉの新規な化合物または製薬上許容される塩を包含するものである。
【０００８】
【化３】
2004505943.tif 000004
式中、
Ｘは、
（ａ）結合、
（ｂ）−（ＣＨ２）ｍ−（ｍ＝１または２）、
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）−、
（ｄ）−Ｏ−、
（ｅ）−Ｓ−および
（ｆ）−Ｎ（Ｒ５）−
からなる群から選択され；
Ｒ１は、
（ａ）
（１）水酸基、
（２）ハロ、
（３）Ｃ１−１０アルコキシ、
（４）Ｃ１−１０アルキルチオおよび
（５）ＣＮ
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いＣ１−１０アルキル、
（ｂ）フェニルもしくはナフチル、ならびに
（ｃ）Ｓ、ＯもしくはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する５原子の単環式芳香環；またはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する６原子の単環式環からなるヘテロアリール
からなる群から選択され；
上記の群（ｂ）および（ｃ）はそれぞれ、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良く；
Ｒ２は、
（ａ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル、
（ｂ）ＮＨ２および
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１−１０アルキル
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、
（ａ）水素、
（ｂ）ハロおよび
（ｃ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から独立に選択され；
Ｒ５は、
（ａ）水素および
（ｂ）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−６アルキル
からなる群から選択される。
【０００９】
本発明の１実施形態は、Ｘが結合であるものである。
【００１０】
本発明の別の実施形態は、Ｘが−Ｏ−であるものである。
【００１１】
本発明の別の実施形態は、Ｘが−Ｓ−であるものである。
【００１２】
本発明の別の実施形態は、Ｒ２がＣＨ３であるものである。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、Ｒ３が水素であるものである。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、ｍが１であるものである。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いフェニルである式Ｉの化合物を包含する。
【００１６】
この実施形態のある群は、Ｒ１が上記で定義の通りであり、Ｒ２がＣＨ３である化合物を包含する。この実施形態の別の群は、Ｒ１が上記で定義の通りであり、Ｒ３がＨである化合物を包含する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が、Ｓ、ＯもしくはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する５原子の単環式芳香環；またはＮである１個のヘテロ原子および場合により１、２もしくは３個の別のＮ原子を有する６原子の単環式環からなるヘテロアリールであり；ヘテロアリールは、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良い式Ｉの化合物を包含する。
【００１８】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が、
（１）ハロ、
（２）Ｃ１−１０アルコキシ、
（３）Ｃ１−１０アルキルチオ、
（４）ＣＮ、
（５）最大数までハロで置換されていても良いＣ１−１０アルキルおよび
（６）Ｎ３
からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていても良いピリジルである式Ｉの化合物を包含する。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が水酸基で置換されていても良いＣ１−６アルキルである式Ｉの化合物を包含する。
【００２０】
別の態様において本発明は、製薬上許容される担体との組み合わせで式Ｉの化合物を含む医薬組成物を包含する。
【００２１】
別の態様において本発明は、治療または予防を必要とする哺乳動物患者における炎症性疾患の治療または予防方法であって、その炎症性疾患を治療または予防する上で有効な量の式Ｉの化合物をその患者に投与する段階を有する方法を包含する。
【００２２】
別の態様において本発明は、治療または予防を必要とする哺乳動物患者における、シクロオキシゲナーゼ−１より優先してシクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって有利に治療されるシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療または予防方法であって、そのシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患を治療または予防する上で有効な量の式Ｉの化合物をその患者に投与する段階を有する方法を包含する。
【００２３】
別の態様において本発明は、非ステロイド系抗炎症剤による治療に対して感受性がある炎症性疾患の治療のための医薬品製造における式Ｉの化合物の使用を包含する。
【００２４】
本発明は、本明細書に開示の実施例の化合物ならびに表Ｉの化合物によって例示される。
【００２５】
本明細書に関して、下記の略称はここに示した意味を有する。
【００２６】
ＡＡ＝アラキドン酸
Ａｃ＝アセチル
ＡＩＢＮ＝２，２−アゾビスイソブチロニトリル
Ｂｎ＝ベンジル
ＣＨＯ＝チャイニーズハムスター卵巣
ＣＭＣ＝１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート
ＣＯＸ＝シクロオキシゲナーゼ
ＤＢＵ＝ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン
ＤＭＡＰ＝４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ３Ｎ＝トリエチルアミン
ＨＢＳＳ＝ハンクス液
ＨＥＰＥＳ＝Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ１−［２−エタンスルホン酸］
ＨＷＢ＝ヒト全血
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＫＨＭＤＳ＝ヘキサメチルジシラザンカリウム
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ＬＰＳ＝リポ多糖類
ｍＣＰＢＡ＝メタクロロ過安息香酸
ＭＭＰＰ＝モノペルオキシフタル酸マグネシウム
Ｍｓ＝メタンスルホニル＝メシル
ＭｓＯ＝メタンスルホネート＝メシレート
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモコハク酸イミド
ＮＣＳ＝Ｎ−クロロコハク酸イミド
ＮＩＳ＝Ｎ−ヨードコハク酸イミド
ＮＳＡＩＤ＝非ステロイド系抗炎症薬
ＯＤＣＢ＝ｏ−ジクロロベンゼン
オキソン（登録商標）＝ペルオキシモノ硫酸カリウム
ＰＣＣ＝クロロクロム酸ピリジニウム
ＰＤＣ＝重クロム酸ピリジニウム
ｒ．ｔ．＝室温
ｒａｃ．＝ラセミ
Ｔｆ＝トリフルオロメタンスルホニル＝トリフリル
ＴＦＡＡ＝無水トリフルオロ酢酸
ＴｆＯ＝トリフルオロメタンスルホネート＝トリフレート
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＴＭＰＤ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン
Ｔｓ＝ｐ−トルエンスルホニル＝トシル
ＴｓＯ＝ｐ−トルエンスルホネート＝トシレート
Ｔｚ＝１Ｈ（または２Ｈ）−テトラゾール−５−イル
ＳＯ２Ｍｅ＝メチルスルホン（ＳＯ２ＣＨ３とも書く）
ＳＯ２ＮＨ２＝スルホンアミド
【００２７】
アルキル基略称
Ｍｅ＝メチル
Ｅｔ＝エチル
ｎ−Ｐｒ＝ノルマルプロピル
ｉ−Ｐｒ＝イソプロピル
ｎ−Ｂｕ＝ノルマルブチル
ｉ−Ｂｕ＝イソブチル
ｓ−Ｂｕ＝セカンダリーブチル
ｔ−Ｂｕ＝ターシャリーブチル
ｃ−Ｐｒ＝シクロプロピル
ｃ−Ｂｕ＝シクロブチル
ｃ−Ｐｅｎ＝シクロペンチル
ｃ−Ｈｅｘ＝シクロヘキシル
【００２８】
用量関係略称
ｂｉｄ＝ｂｉｓ ｉｎ ｄｉｅ＝１日２回
ｑｉｄ＝ｑｕａｔｅｒ ｉｎ ｄｉｅ＝１日４回
ｉｄ＝ｔｅｒ ｉｎ ｄｉｅ＝１日３回
【００２９】
本明細書に関して「アルキル」とは、指定数の炭素原子を有する、直鎖、分岐および環状の構造ならびにそれらの組み合わせを意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−およびｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、エイコシル、３，７−ジエチル−２，２−ジメチル−４−プロピルノニル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−１−ビシクロ［４．４．０］デシルなどがある。
【００３０】
本明細書に関して「アルコキシ」とは、直鎖、分岐または環状の構造を有する指定数の炭素原子のアルコキシ基を意味する。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシなどがある。
【００３１】
本明細書に関して「アルキルチオ」とは、直鎖、分岐または環状の構造を有する指定数の炭素原子のアルキルチオ基を意味する。アルキルチオ基の例としては、メチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、シクロヘプチルチオなどがある。例を挙げると、プロピルチオ基は−ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３を意味する。
【００３２】
本明細書に関して「ハロ」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。
【００３３】
本発明の例としては、以下の化合物がある。
【００３４】
（１）４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（２）３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（３）３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（４）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（５）６−ジフルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（６）６−フルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン、
（７）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニルチオ−ピラン−２−オン、
（８）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェノキシ−ピラン−２−オン、
（９）６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オン、
（１０）３−イソプロピルチオ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン、
（１１）４−（４−メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン、
（１２）３−イソプロピルチオ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン、
（１３）４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ピラン−２−オン、および
（１４）３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン。
【００３５】
本明細書に記載の化合物の中には、１以上の不斉中心を有することから、ジアステレオマーおよび光学異性体を生じるものもある。本発明は、そのような可能なジアステレオマーならびにそれのラセミ体および分割されてエナンチオマー的に純粋な形、ならびにそれらの製薬上許容される塩を含むものとする。
【００３６】
本明細書に記載の化合物の中には、オレフィン系二重結合を有するものもあり、別段の断りがない限り、それはＥおよびＺの両方の幾何異性体を含むものとする。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、有効成分としての式Ｉの化合物またはその化合物の製薬上許容される塩を含むものであり、製薬上許容される担体および場合により他の治療成分を含有することができる。「製薬上許容される塩」という用語は、無機塩基および有機塩基などの製薬上許容される無毒性塩基から製造される塩を指す。無機塩基から誘導される塩には、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、第二マンガン塩類、第一マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩などがある。特に好ましいものとしては、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン塩、天然置換アミンを含む置換アミンの塩、環状アミンの塩などがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂類、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等ならびに塩基性イオン交換樹脂の塩がある。
【００３８】
以下に説明する治療方法の議論において、式Ｉの化合物に言及する場合、それは製薬上許容される塩も含むものであることは明らかであろう。
【００３９】
式Ｉの化合物は、リューマチ熱、インフルエンザその他のウィルス感染に関連する症状、感冒、腰痛および頸部痛、月経困難症、頭痛、歯痛、捻挫および筋違い、筋肉炎、神経痛、関節滑膜炎、慢性関節リウマチを含む関節炎、変形性関節疾患（変形性関節炎）、痛風および強直性脊椎炎、滑液嚢炎、火傷、手術および歯科手術後の創傷などの各種状態の疼痛、発熱および炎症の緩和に有用である。さらにそのような化合物は、細胞腫瘍性形質転換および転移性腫瘍成長を阻害することができ、従って、癌治療で使用することができる。式Ｉの化合物は、糖尿病性網膜症および腫瘍血管新成などのシクロオキシゲナーゼ介在増殖性障害の治療および／または予防において有用なものともなり得る。
【００４０】
式Ｉの化合物はさらに、収縮性プロスタノイド類の合成を阻止することで、プロスタノイド誘発平滑筋収縮を阻害することから、月経困難症、早産、喘息および好酸球関連障害の治療において有用なものとなり得る。その化合物は、アルツハイマー病の治療ならびに骨損失予防（骨粗鬆症の治療）および緑内障治療においても有用であろう。
【００４１】
高いシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性および／またはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）を上回るシクロオキシゲナーゼ−２に対する特異性により、式Ｉの化合物は、従来の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する代替薬として有用である。特に、消化性潰瘍、胃炎、限局性腸炎、潰瘍性大腸炎、憩室炎もしくは消化管病変の再発歴のある患者；消化管出血、低プロトロンビン血症などの貧血を含む凝血障害、血友病その他の血液関係の問題のある患者；腎臓疾患患者；手術前または抗凝血剤を服用している患者など、そのような非ステロイド系抗炎症薬が禁忌となり得る場合に有用である。
【００４２】
同様に式Ｉの化合物は、従来のＮＳＡＩＤが現在他の薬剤または成分と併用投与される製剤において、その従来のＮＳＡＩＤに対して部分的または完全に代わるものとして有用である。そこでさらに別の態様において本発明は、上記で定義のようなシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療のための医薬組成物であって、無毒性で治療上有効量の上記で定義の式Ｉの化合物と、アセトアミノフェンもしくはフェナセチンなどの別の疼痛緩和薬；カフェインなどの強化剤；水酸化アルミニウムもしくは水酸化マグネシウム、シメチコンなどのＨ２拮抗薬；フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、プソイドフェドリン（ｐｓｅｕｄｏｐｈｅｄｒｉｎｅ）、オキシメタゾリン、エピネフリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、プロピルヘキセドリンもしくはレボデスオキシエフェドリンなどの消炎薬；コデイン、ヒドロコドン、カラミフェン、カルベタペンタンもしくはデキストラメトルファン（ｄｅｘｔｒａｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）などの鎮咳薬；ミソプロストール（ｍｉｓｏｐｒｏｓｔｏｌ）、エンプロスチル（ｅｎｐｒｏｓｔｉｌ）、リオプロスチル（ｒｉｏｐｒｏｓｔｉｌ）、オルノプロストール（ｏｒｎｏｐｒｏｓｔｏｌ）もしくはロサプロストール（ｒｏｓａｐｒｏｓｔｏｌ）などのプロスタグランジン；利尿薬；鎮静性もしくは非鎮静性の抗ヒスタミン剤などの１以上の成分とを含有する組成物を含むものである。さらに本発明は、シクロオキシゲナーゼ介在疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を、任意に１以上の直前に挙げたような成分との併用で投与する方法を包含するものである。
【００４３】
上記のシクロオキシゲナーゼ介在疾患のいずれの治療においても、式Ｉの化合物は、従来の無毒性で製薬上許容される担体、補助剤および賦形剤を含む単位製剤で、経口、局所、非経口、吸入噴霧または直腸投与することができる。本明細書で使用する場合の非経口という用語は、皮下注射、静脈注射、筋肉注射、胸骨内注射または注入法を含むものである。マウス、ラット、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコなどの温血動物の治療に加えて、本発明の化合物はヒトの治療において有効である。
【００４４】
上記のように、ここで定義のシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療用の医薬組成物は、上記で挙げた１以上の成分を任意で含有することができる。
【００４５】
上記有効成分を含む医薬組成物は、例えば錠剤、トローチ、甘味入りの錠剤、水系もしくは油系の懸濁液、分散性粉剤もしくは粒剤、乳濁液、硬もしくは軟カプセル、またはシロップもしくはエリキシル剤などの経口使用に好適な剤型とすることができる。経口用組成物は、医薬組成物製造に関して当業界で公知のいずれかの方法に従って調製することができ、そのような組成物には、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１以上の薬剤を含有させて、製薬上見た目が良く、風味の良い製剤を提供することができる。錠剤は、錠剤製造に好適な無毒性で製薬上許容される賦形剤との混合で、上記有効成分を含有する。その賦形剤としては、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えばコーンスターチもしくはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；例えばデンプン、ゼラチンもしくはアカシアなどの結合剤；ならびに例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルクなどの潤滑剤などがあり得る。錠剤は未コーティングでもよく、あるいは公知の方法によってコーティングを施して、消化管における崩壊および吸収を遅延させ、それによって比較的長期間にわたって持続的作用を提供させることができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの遅延材料を用いることができる。その材料は米国特許第４２５６１０８号、同４１６６４５２号および同４２６５８７４号に記載の技術によってコーティングして、徐放用の浸透性治療錠剤を形成することもできる。
【００４６】
経口用製剤は、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンなどの不活性固体希釈剤と前記有効成分を混合した硬ゼラチンカプセルとして、あるいはプロピレングリコール、ＰＥＧおよびエタノールなどの水系溶媒もしくは水混和性溶媒または例えば落花生油、液体パラフィンもしくはオリーブ油などのオイル媒体と上記有効成分とを混合した軟ゼラチンカプセルとしても提供することができる。
【００４７】
水系懸濁液は、水系懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合で活性材料を含有する。そのような賦形剤は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムなどの懸濁剤であり；分散剤もしくは湿展剤は、例えばレシチンなどの天然ホスファチド、または例えばステアリン酸ポリオキシエチレンなどの脂肪酸とアルキレンオキサイドとの縮合生成物、または例えばヘプタデカエチレンオキシセタノールなどの長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキサイドとの縮合生成物、またはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなどの脂肪酸とヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物、または例えばモノオレイン酸ポリエチレンソルビタンなどの、脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物などがあり得る。水系懸濁液は、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピルなどの１以上の保存剤、１以上の着色剤、１以上の香味剤、ならびにショ糖、サッカリンもしくはアスパルテームなどの１以上の甘味剤を含有することもできる。
【００４８】
油性懸濁液は、有効成分を、落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油、あるいは液体パラフィンなどの鉱物油に懸濁させることで製剤することができる。油性懸濁液には、例えば蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含有させることができる。上記のものなどの甘味剤および香味剤を加えて、風味の良い経口製剤を提供することができる。このような組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を加えることで防腐することができる。
【００４９】
水の添加による水系懸濁液の調製に好適な分散性粉剤および粒剤は、分散剤もしくは湿展剤、懸濁剤および１以上の保存剤との混合で有効成分を提供するものである。好適な分散剤もしくは湿展剤および懸濁剤の例としては、既に上述したものがある。例えば甘味剤、香味剤および着色剤などの別の賦形剤も存在させることができる。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、水中油型乳濁液の剤型とすることもできる。その油相は、例えばオリーブ油もしくは落花生油などの植物油または例えば液体パラフィンなどの鉱物油あるいはこれらの混合物とすることができる。好適な乳化剤としては、例えば大豆レシチンなどの天然ホスファチド、ならびに例えばモノオレイン酸ソルビタンなどの脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されるエステルもしくは部分エステル、ならびに例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの前記部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物があり得る。乳濁液はさらに、甘味剤および香味剤を含有することもできる。
【００５１】
シロップおよびエリキシル剤は、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖などの甘味剤を加えて製剤することができる。そのような製剤には、粘滑剤、保存剤および香味剤ならびに着色剤を含有させることもできる。その医薬組成物は、無菌の注射用水もしくは油性懸濁液の剤型とすることができる。この懸濁液は、上述した好適な分散剤もしくは湿展剤および懸濁剤を用いて、公知の技術に従って製剤することができる。その無菌注射製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中溶液として、無毒性で非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒中での無菌注射溶液もしくは懸濁液とすることもできる。使用可能な許容される賦形剤および溶媒には、水、リンゲル液および生理食塩水などがある。エタノール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール類などの共溶媒を用いることもできる。さらに従来のように、溶媒もしくは懸濁媒体として、無菌の固定油を用いる。それに関しては、合成モノもしくはジグリセリド等のいかなる無菌の固定油も使用可能である。さらに、注射剤の製剤には、オレイン酸などの脂肪酸が用いられる。
【００５２】
式Ｉの化合物は、その薬剤の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。そのような組成物は、常温で固体であるが直腸温度では液体であることから、直腸で融解して上記薬剤を放出する好適な非刺激性の賦形剤と薬剤とを混和することで調製することができる。そのような材料は、カカオバターおよびポリエチレングリコール類である。
【００５３】
局所投与用には、式Ｉの化合物を含むクリーム、軟膏、ゲル、液剤または懸濁液などを用いる（その投与法に関して、局所投与は洗口剤および含嗽液を含むものとする）。局所投与製剤は、医薬担体、共溶媒、乳化剤、透過増強剤、保存系および皮膚軟化剤を含有することができる。
【００５４】
上記の状態の治療には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは別表現として患者当たり約０．５ｍｇ〜約７ｇ／日程度の投与レベルが有用である。例えば炎症は、当該化合物を約０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは別表現として、患者当たり約０．５ｍｇ〜約３．５ｇ／日にて投与することで、効果的に治療することができる。
【００５５】
単位剤型を得るために、担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療対象宿主および特定の投与形態に応じて変わるものである。例えばヒトの経口投与用製剤には、適切かつ使用しやすい担体材料（組成物総量の約５〜約９５％の範囲で変動し得る）と配合した活性薬剤０．５ｍｇ〜５ｇを含有させることができる。単位剤型は通常、有効成分を約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、代表的には２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇまたは１０００ｍｇ含有する。
【００５６】
しかしながら、いずれの特定患者についての具体的な用量レベルは、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時刻、投与経路、排泄速度、併用薬剤および治療対象の特定疾患の重度などの各種要素によって決まることは明らかであろう。
【００５７】
本発明の化合物は、下記の方法に従って製造することができる。
【００５８】
方法Ａ
適切に３−置換基５−ヒドロキシ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−５Ｈ−フラン−２−オンＩＩ（ＷＯ９６３６６２３）を、ＴＨＦなどの溶媒中、カリウムｔ−ブトキシドなどの塩基とメトキシメチルトリフェニルホスホニウム塩の反応から生成されるイリドと反応させて、ペンタ−２，４−ジエン酸中間体ＩＩＩを得る。次に、ｐ−トルエンスルホン酸などの酸性触媒とともにトルエンなどの溶媒中で還流することで、ピロンＩＶを得る。
【００５９】
【化４】
2004505943.tif 000005
【００６０】
方法Ｂ
ＣＨ３ＣＮなどの溶媒中、パラジウム（０）触媒、ＣｕＩなどの触媒量の銅（１）塩、触媒量のトリフェニルホスフィンおよびトリエチルアミンなどの塩基の存在下に、４−ブロモチオアニソールをアルク−１−イン−３−オールと反応させて、アルキン−オール中間体Ｖを得る。ＭｎＯ２などの酸化剤で酸化することでケトンＶＩを得て、それをエタノールなどのアルコール系溶媒中、活性化水酸化バリウムなどの塩基存在下にマロン酸ジエチルと反応させて、ピロン中間体ＶＩＩを得る。水酸化ナトリウム水溶液などの塩基でエステルを加水分解し、次にキノリン中で銅ブロンズによって脱炭酸することで、中間体ＶＩＩＩを得る。ＣＨ２Ｃｌ２などの溶媒中でＶＩＩＩを臭素化してＩＸを得る。パラジウム（０）触媒および炭酸ナトリウムなどの塩基の存在下に適切なボロン酸とＩＸとをカップリングさせ、次にｍＣＰＢＡなどの酸化剤で酸化することで、ピロンＸを得る。
【００６１】
【化５】
2004505943.tif 000006
【００６２】
方法Ｃ
スルフィドＩＸを、ｍＣＰＢＡなどの酸化剤で酸化してスルホンＸＩを得て、それを次に、ＮａＯＨなどのアルカリ塩基存在下またはＣｕＯを含むＫ２ＣＯ３などのアルカリ塩基存在下に、適切な求核剤と反応させて、ピロンＩを得る。
【００６３】
【化６】
2004505943.tif 000007
【００６４】
方法Ｄ
ｔｅｒｔ−ブチルアセトアセテートを水酸化ナトリウムで処理し、次にｎ−ブチルリチウムで処理し、得られたジアニオンをエステルと反応させて、ジケトエステル中間体ＸＩＩを得る。トリフルオロ酢酸で処理することで酸中間体が得られ、それを無水酢酸とともに撹拌することで、アセチル化ピラン−２−オン中間体を得る。次に、水酸化ナトリウムなどのアルカリ塩基水溶液で加水分解して、ヒドロキシルピラン−２−オン中間体ＸＩＩＩを得る。無水トリフルオロメタンスルホン酸との反応によってトリフレート中間体を得て、それをＰｄ（０）触媒および炭酸ナトリウムなどの塩基の存在下に４−（メチルチオ）フェニルボロン酸とカップリングさせて、中間体ＶＩＩＩを得る。その中間体ＶＩＩＩを、方法Ｂに記載の方法に従って、さらにピロンＸに変換する。
【００６５】
【化７】
2004505943.tif 000008
【００６６】
方法Ｅ
方法Ｄに記載のようにスズキ反応などの適切なカップリング反応によってピロン中間体ＩＸから得られたピロンＸＩＶを、二酸化セレンで酸化してアルデヒド中間体ＸＶを得る。ジエチルアミノ硫黄トリフルオリドで処理し、次にｍＣＰＢＡなどの酸化剤で酸化することで、ピロンＸＶＩを得る。
【００６７】
【化８】
2004505943.tif 000009
【００６８】
方法Ｆ
方法Ｅから得られたピロンＸＶを、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤で還元してアルコールＸＶＩＩを得る。ジエチルアミノ硫黄トリフルオリドで処理し、次にｍＣＰＢＡなどの酸化剤で酸化することで、ピロンＸＶＩＩＩを得る。
【００６９】
【化９】
2004505943.tif 000010
【００７０】
方法Ｇ
フッ化テトラブチルアンモニウムなどのフッ化物イオン存在下に、トリメチル（トリフルオロメチル）シランからトリフルオロメタノール中間体ＸＩＸを得る。アセトニトリルなどの溶媒中、ＤＭＡＰ存在下にクロロチオノギ酸フェニルで処理して、チオ炭酸エステル中間体ＸＸを得る。水素化ホウ素ナトリウムで塩化トリブチルスズからｉｎ ｓｉｔｕで発生させた水素化トリブチルスズでラジカル脱酸素することで、ＸＸＩを得る。次に、ｍＣＰＢＡなどの酸化剤で酸化することで、所望のピロンＸＸＩＩを得る。
【００７１】
【化１０】
2004505943.tif 000011
【００７２】
方法Ｈ
方法Ｂから得られたピロンＩＸを、Ｃｕ（Ｉ）およびＰｄ（ＩＩ）触媒存在下に２−メチル−３−ブチン−２−オールとカップリングさせて、中間体ＸＸＩＩＩを得る。次に、ピロンＸＸＩＩＩをＭＭＰＰなどの酸化剤で酸化し、その後水素化することで、所望のピロンＸＸＶを得る。
【００７３】
【化１１】
2004505943.tif 000012
【００７４】
代表的化合物
表Ｉに、本発明の新規化合物を示してある。
【００７５】
【表１】
2004505943.tif 000013
2004505943.tif 000014
2004505943.tif 000015
以下、実施例によって本発明を説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されるものではない。以下の実施例において、別段の断りがない限り、下記の（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）の通りとする。
【００７６】
（ｉ）操作はいずれも室温もしくは環境温度、すなわち１８〜２５℃の範囲の温度で行った。
【００７７】
（ｉｉ）溶媒蒸発は、６０℃以下の浴温で、減圧下（６００〜４０００パスカル；４．５〜３０ｍｍＨｇ）にて、ロータリーエバポレータを用いて行った。
【００７８】
（ｉｉｉ）反応の経過は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって追跡し、反応時間は例示のみを示した。
【００７９】
（ｉｖ）融点は未補正であり、「ｄ」は分解を示している。示した融点は、記載の方法に従って製造された材料について得られた融点である。一部の製造においては、多形によって、異なる融点を有する材料が単離される場合がある。
【００８０】
（ｖ）全ての最終生成物の構造および純度は、ＴＬＣ、質量スペクトル分析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル測定または微量分析データのうちの１以上の方法によって確認したものである。
【００８１】
（ｖｉ）収率は、例示のみを示したものである。
【００８２】
（ｖｉｉ）ＮＭＲデータがある場合、そのデータは、指定の溶媒を用いて３００ＭＨｚまたは４００ＭＨｚで測定した。内部標準としてのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するｐｐｍで得られる主要な特徴的プロトンについてのデルタ（？）値の形で示してある。信号の形状に関して使用される形式的な略称は、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（広い）などである。さらに、「Ａｒ」は芳香環の信号を表す。
【００８３】
（ｖｉｉｉ）化学記号はその通常の意味を有する。以下の略称も用いた；ｖ（容量）、ｗ（重量）、ｂ．ｐ．（沸点）、Ｍ．Ｐ．（融点）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｏｌ（モル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｅｑ（当量）。
【００８４】
実施例１
４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
段階１：５−メトキシ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−フェニル−ペンタ−２，４−ジエン酸
塩化（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウム（１３ｇ、３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍＬ）懸濁液に、１Ｍｔ−ＢｕＯＫ（４０ｍＬ）のＴＨＦ溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。５−ヒドロキシ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−５Ｈ−フラン−２−オン（ＷＯ９６３６６２３）（４．０ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を加えた。次に、混合物を室温で１．５時間撹拌し、Ｈ２Ｏで反応停止し、ＨＯＡｃで酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液で洗浄した（２回）。合わせたアルカリ洗浄液をＥｔＯＡｃで洗浄し（１回）、６Ｍ　ＨＣｌ水溶液で酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏとともに振り混ぜて、標題化合物３．５ｇ（８１％）を得た。
【００８５】
段階２：４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
５−メトキシ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−フェニル−ペンタ−２，４−ジエン酸（１９０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびｐ−ＴｓＯＨ（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のトルエン（１５ｍＬ）懸濁液を６時間還流させた。溶媒は真空下で蒸発させた。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：２）による溶出で、白色泡状物として標題化合物１１０ｍｇを得た。
【００８６】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８４（ｄ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．２５〜７．１０（ｍ、５Ｈ）、６．５７（ｄ、１Ｈ）、３．０９（ｓ、３Ｈ）。
【００８７】
実施例２
３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
段階１：４−（４−メチルチオ）フェニル−３−ブチン−２−オール
４−ブロモチオアニソール（４６ｇ、０．２ｍｏｌ）、３−ブチン−２−オール（１７．８ｇ、０．２５ｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（５８ｇ、０．５７ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（６００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（８００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（３００ｍＬ）中混合物を６０℃で３日間、８０℃で１日間加熱した。混合物を真空下で蒸発させた。残留物はＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をＨ２Ｏで洗浄し（２回）、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン／５％ＥｔＯＡｃによる溶出で、未反応の４−ブロモチオアニソールを除去し、次にヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１）で溶出して、標題化合物２８．５ｇ（７４％）を緑黄色油状物として得た。
【００８８】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．３２（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、４．６８（ｑ、１Ｈ）、４．３６（ｄ、１Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）、１．４４（ｄ、３Ｈ）。
【００８９】
段階２：４−（４−メチルチオ）フェニル−３−ブタン−２−オン
４−（４−メチルチオ）フェニル−３−ブチン−２−オール（２８ｇ、０．１５ｍｏｌ）のＴＨＦ（８００ｍＬ）溶液に、活性化ＭｎＯ２（６５ｇ、０．７４ｍｏｌ）を加えた。室温で３０分間撹拌後、追加のＭｎＯ２（３０ｇ、０．３５ｍｏｌ）を加えた。混合物をさらに１時間撹拌し、セライト濾過した。フィルターケーキをＥｔＯＡｃで洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（５：１）による溶出で、標題化合物２３ｇ（８３％）を黄色油状物として得た。
【００９０】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．５５（ｄ、２Ｈ）、７．３４（ｄ、２Ｈ）、２．５６（ｓ、３Ｈ）、２．３８（ｓ、３Ｈ）。
【００９１】
段階３：６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸エチルエステル
４−（４−メチルチオ）フェニル−３−ブチン−２−オン（５．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）、マロン酸ジエチル（２１ｇ、０．１３ｍｏｌ）および活性化水酸化バリウム（１．５ｇ、８．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）中混合物を９０℃で２日間加熱した。冷却して室温とした後、混合物をセライト濾過した。溶媒を真空下で除去した。残留物をＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏの間で分離させた。有機層を分液し、希ＨＣｌ水溶液、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン−ＥｔＯＡｃ（２．５：１）による溶出で、標題化合物２．９ｇ（３６％）を黄色固体として得た。
【００９２】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．４５〜７．３０（ｍ、４Ｈ）、６．３８（ｓ、１Ｈ）、４．１５（ｑ、２Ｈ）、２．５５（ｓ、３Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、１．１４（ｔ、３Ｈ）。
【００９３】
段階４：６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸
６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸エチルエステル（５．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）および１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−ＥｔＯＨ（１：１、１２０ｍＬ）中混合物を室温で１時間撹拌し、次に９０℃で１時間撹拌した。冷却して室温とした後、混合物をＨ２Ｏで希釈し、６Ｍ　ＨＣｌ水溶液で酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮し、Ｅｔ２Ｏと振り混ぜて、６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン４５０ｍｇを得た。アルカリ洗浄液を合わせ、ＥｔＯＡｃで洗浄し、６Ｍ　ＨＣｌ水溶液で酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮して、標題化合物３．５ｇ（７０％）を褐色泡状物として得た。
【００９４】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．４６（ｄ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、２Ｈ）、６．４０（ｓ、１Ｈ）、２．５６（ｓ、３Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）。
【００９５】
段階５：６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン
６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸（３．５ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）および銅ブロンズ（１ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）のキノリン（５０ｍＬ）中混合物を１８０〜１９０℃で３０分間加熱した。冷却して室温とした後、混合物をＨ２ＯとＥｔＯＡｃの間で分離させた。ＥｔＯＡｃ抽出液を希ＨＣｌ水溶液（３回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）により溶出し、Ｅｔ２Ｏと振り混ぜた後に標題化合物１．５ｇ（５１％）を暗褐色粉末として得た。
【００９６】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．７０（ｄ、２Ｈ）、７．３８（ｄ、２Ｈ）、６．５７（ｓ、１Ｈ）、６．３３（ｓ、１Ｈ）、２．５５（ｓ、３Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）。
【００９７】
段階６：３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン
６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｃ（１ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液に室温で、１Ｍ　Ｂｒ２のＣＨ２Ｃｌ２（５．５ｍＬ、５．５ｍｍｏｌ）溶液を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、追加のＢｒ２溶液（５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＨ２Ｏで希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）により溶出し、Ｅｔ２Ｏとの振り混ぜによって、標題化合物１．３ｇ（８０％）を淡黄色固体として得た。
【００９８】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．３８（ｄ、２Ｈ）、６．２７（ｓ、１Ｈ）、２．５５（ｓ、３Ｈ）、２．２７（ｓ、３Ｈ）。
【００９９】
段階７：３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン
３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン（３００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、４−フルオロフェニルボロン酸（２７０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）塩化メチレン錯体（５０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）および２Ｍ　Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）中混合物を８０℃で２時間加熱した。冷却して室温とした後、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１）により溶出し、標題化合物２８０ｍｇ（８９％）を黄色泡状物として得た。
【０１００】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．２０〜６．９０（ｍ、８Ｈ）、６．３３（ｓ、１Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）。
【０１０１】
段階８：３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
３−（４−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン（２４０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の溶液に０℃で、ｍＣＰＢＡ（５７〜８６％、４００ｍｇ）を加えた。混合物をゆっくり昇温させて室温とし、１時間撹拌した。追加のＣＨ２Ｃｌ２で希釈した後、混合物を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：３）により溶出し、Ｅｔ２Ｏとの振り混ぜによって、標題化合物２０５ｍｇ（７７％）を白色粉末として得た。
【０１０２】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．４５（ｄ、２Ｈ）、７．１８（ｍ、２Ｈ）、６．９８（ｍ、２Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、３．０９（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。
【０１０３】
実施例３
３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
段階１：３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン
実施例２段階７に記載の手順に従って、標題化合物を３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オンおよび３−フルオロフェニルボロン酸から製造した。
【０１０４】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．３０（ｍ、８Ｈ）、６．３４（ｓ、１Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）。
【０１０５】
段階２：３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
実施例２段階８に記載の手順に従って、標題化合物を３−（３−フルオロフェニル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オンの酸化から製造した。
【０１０６】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８６（ｄ、２Ｈ）、７．４８（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｍ、１Ｈ）、７．０５〜６．８５（ｍ、３Ｈ）、６．３８（ｓ、１Ｈ）、３．０９（ｓ、３Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）。
【０１０７】
実施例４
６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
段階１：６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
実施例２段階７に記載の手順に従って、標題化合物を３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オンおよびフェニルボロン酸から製造した。
【０１０８】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．２５〜７．０５（ｍ、９Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）、２．４５（ｓ、３Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）。
【０１０９】
段階２：６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
実施例２段階８に記載の手順に従って、標題化合物を６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オンの酸化から製造した。
【０１１０】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８２（ｄ、２Ｈ）、７．４４（ｄ、２Ｈ）、７．２５〜７．１０（ｍ、５Ｈ）、６．３６（ｓ、１Ｈ）、３．０８（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。
【０１１１】
実施例５
６−ジフルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
段階１：４−（４−メチルチオ）フェニル−６−オキソ−５−フェニル−６Ｈ−ピラン−２−カルボアルデヒド
実施例４段階１からの６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン（１．０ｇ、３．２ｍｍｏｌ）および二酸化セレン（１．０ｇ、９．０ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロベンゼン（３ｍＬ）中混合物を、１６０℃で１時間加熱した。冷却して室温とした後、混合物について、シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：２）により溶出して、黄色泡状物８００ｍｇを得た。その泡状物をＥｔ２Ｏと振り混ぜて、標題化合物６００ｍｇ（５８％）を黄色固体として得た。
【０１１２】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ９．６２（ｓ、１Ｈ）、７．４１（ｓ、１Ｈ）、７．３５〜７．１０（ｍ、９Ｈ）、２．４７（ｓ、３Ｈ）。
【０１１３】
段階２：６−ジフルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
４−（４−メチルチオ）フェニル−６−オキソ−５−フェニル−６Ｈ−ピラン−２−カルボアルデヒド（１７０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）に室温で、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（０．７ｍＬ、５．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６５℃で１５分間加熱し、氷水に注意深く滴下した。混合物全体をＥｔＯＡｃで抽出して、６−ジフルオロメチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン中間体を淡黄色固体として得た。
【０１１４】
上記固体を、実施例２段階８について記載の方法に従って常法にて酸化して、標題化合物１２５ｍｇ（６３％）を淡黄色固体として得た。
【０１１５】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８６（ｄ、２Ｈ）、７．５１（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｍ、５Ｈ）、６．９５（ｓ、１Ｈ）、６．７７（ｔ、１Ｈ）、３．１０（ｓ、３Ｈ）。
【０１１６】
実施例６
６−フルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
段階１：６−ヒドロキシメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
実施例５段階１からの４−（４−メチルチオ）フェニル−６−オキソ−５−フェニル−６Ｈ−ピラン−２−カルボアルデヒド（６８０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）溶液に室温で、ＮａＢＨ４（１００ｍｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、ＨＯＡｃ（３００μＬ）で反応停止した。溶媒を真空下で除去した。残留物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出して、標題化合物６８０ｍｇを淡黄色粉末として得た。
【０１１７】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．３０〜７．０５（ｍ、９Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、４．７５（ｔ、１Ｈ）、４．４５（ｄ、２Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）。
【０１１８】
段階２：６−フルオロメチル−４−４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン
６−ヒドロキシメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン（２５０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に室温で、ジメチルアミノ硫黄トリフルオリド（２５０μＬ、１．９ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を１５分間撹拌し、氷水で反応停止し、セライト濾過した。ＣＨ２Ｃｌ２層を分液し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）により溶出して、６−フルオロメチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−ピラン−２−オン１０５ｍｇを黄色泡状物（純度約７５％）として得た。
【０１１９】
上記残留物を、実施例２段階８に記載の方法に従って常法にて酸化して、標題化合物６５ｍｇを得た（純度約７５％）。
【０１２０】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．４８（ｄ、２Ｈ）、７．２８〜７．１５（ｍ、５Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、５．２９（ｄ、２Ｈ）、３．０９（ｓ、３Ｈ）。
【０１２１】
実施例７
６−メチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−ピラン−２−オン
段階１：３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン（２．５ｇ、８．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）溶液に０℃で、ｍＣＰＢＡ（５７〜８６％、６．０ｇ）を加えた。混合物をゆっくり昇温させて室温とし、１時間撹拌した。追加のＣＨ２Ｃｌ２で希釈後、混合物を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残留物を、少量のＥｔＯＡｃを含むＥｔ２Ｏと振り混ぜて、標題化合物２．７ｇを淡黄色固体として得た。
【０１２２】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．０９（ｄ、２Ｈ）、７．７６（ｄ、２Ｈ）、６．３１（ｓ、１Ｈ）、３．２０（ｓ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）。
【０１２３】
段階２：６−メチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−ピラン−２−オン
３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン（６５０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびチオフェノール（２３０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に室温で、１０Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（０．２３ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をＨ２Ｏで洗浄し、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：３）により溶出して、黄色固体を得た。ＥｔＯＨからの再結晶によって、３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オンを不純物として約３％含む標題化合物４５０ｍｇ（６４％）を得た。
【０１２４】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．００（ｄ、２Ｈ）、７．６９（ｄ、２Ｈ）、７．２８〜７．１０（ｍ、５Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、３．１６（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。
【０１２５】
実施例８
６−メチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−フェノキシ−ピラン−２−オン
実施例７段階１から得られた３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン（３００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、フェノール（１００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、粉末無水Ｋ２ＣＯ３（２４０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）およびＣｕＯ（１８０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のピリジン（２ｍＬ）中混合物を１４時間還流させた。冷却して室温とした後、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を分液し、１Ｍ　ＨＣｌ水溶液、ブラインで洗浄し、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：２）にて溶出し、標題化合物１０ｍｇ（純度約９５％）を泡状物として得た。
【０１２６】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．９９（ｄ、２Ｈ）、７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．２７（ｍ、２Ｈ）、７．０５〜６．９０（ｍ、３Ｈ）、６．４５（ｓ、１Ｈ）、３．１３（ｓ、３Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）。
【０１２７】
さらに溶出を行うことで、脱臭素化生成物である６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オンも得た。
【０１２８】
実施例９
６−メチル−４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オン
段階１：６−メチル−４−（メチルチオ）フェニル）−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オン
実施例２段階７に記載の手順に従って、標題化合物を３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オンおよびピリジン−３−イルボロン酸から製造した。
【０１２９】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．３８（ｍ、１Ｈ）、８．２８（ｍ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、７．２５（ｍ、１Ｈ）、７．１４（ｍ、４Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）。
【０１３０】
段階２：６−メチル−４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オン
実施例２段階８に記載の手順に従って、標題化合物を６−メチル−４−（メチルチオ）フェニル）−３−ピリジン−３−イル−ピラン−２−オンの酸化から製造した。
【０１３１】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．３９（ｍ、１Ｈ）、８．２９（ｍ、１Ｈ）、７．８７（ｄ、２Ｈ）、７．６１（ｍ、１Ｈ）、７．４９（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．４１（ｓ、１Ｈ）、３．１０（ｓ、３Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）。
【０１３２】
実施例１０
３−イソプロピルチオ−６−メチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−ピラン−２−オン
実施例７段階２に記載の手順に従って、標題化合物を３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オンおよび２−プロパンチオールのカップリングから製造した。
【０１３３】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．０４（ｄ、２Ｈ）、７．６５（ｄ、２Ｈ）、６．２７（ｓ、１Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｓ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）、１．０８（ｄ、６Ｈ）。
【０１３４】
実施例１１
４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
段階１：６，６，６−トリフルオロ−３，５−ジオキソ−ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
６０％ＮａＨ（２．２ｇ、５５ｍｍｏｌ；ヘキサンで洗浄）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）懸濁液に０℃で、ｔｅｒｔ−ブチルアセトアセテート（８．０ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下した。混合物を１５分間撹拌したところ、均一溶液が得られた。２．５Ｍ　ヘキサン中にｎ−ＢｕＬｉ溶液（２０．５ｍＬ、５１ｍｍｏｌ）を滴下した。１５分間撹拌後、２，２，２−トリフルオロエチルトリフルオロアセテート（１１ｇ、５６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌し、ＨＯＡｃで反応停止し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーにおいて、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１０：１）と次にヘキサン：ＥｔＯＡｃ（４：１）にて溶出し、標題化合物５ｇを赤褐色油状物として得た。
【０１３５】
段階２：４−ヒドロキシ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
６，６，６−トリフルオロ−３，５−ジオキソ−ヘキサン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５．０ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、濃縮して、粗酸中間体を得た。残留物を無水酢酸（２０ｍＬ）に溶かし、室温で２日間撹拌し、濃縮してアセチル化ピラン−２−オン中間体を得た。粗残留物をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶かし、１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ）で加水分解した。室温で３０分間撹拌後、混合物を６Ｍ　ＨＣｌ水溶液で酸性とした。溶媒を蒸発させた。残留物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を濃縮して、標題化合物３ｇを淡黄色粉末として得た。
【０１３６】
１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．５２（ｓ、１Ｈ）、６．９６（ｓ、１Ｈ）、５．７４（ｓ、１Ｈ）。
【０１３７】
段階３：４−（４−メチルチオ）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
４−ヒドロキシ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン（３．０ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）懸濁液に、２，６−ルチジン（２．５ｍＬ）を加えた。混合物を冷却して−７８℃とし、無水トリフルオロメタンスルホン酸（３．０ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下した。混合物をゆっくり昇温させて０℃とし、Ｈ２Ｏで反応停止した。ＣＨ２Ｃｌ２層を分液し、１Ｍ　ＨＣｌ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（６：１）にて溶出し、トリフレート中間体３．０ｇを油状物として得た。
【０１３８】
上記トリフレート中間体、４−（メチルチオ）フェニルボロン酸（１．６ｇ、９．５ｍｍｏｌ）、２Ｍ　Ｎａ２ＣＯ３水溶液（９ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１００ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中混合物を８０〜８５℃で２時間加熱した。冷却して室温とした後、混合物をＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏの間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２回）、１Ｍ　ＨＣｌ水溶液、ブラインで洗浄し、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：１）にて溶出し、標題化合物１．０ｇを明褐色固体として得た。
【０１３９】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８６（ｄ、２Ｈ）、７．４２（ｄ、２Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、２．５７（ｓ、３Ｈ）。
【０１４０】
段階４：３−ブロモ−４−（４−メチルチオ）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
４−（４−メチルチオ）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン（３．０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３（１２０ｍＬ）溶液にＢｒ２（１．５ｍＬ、２９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を７０〜７５℃で１６時間加熱した。冷却して室温とした後、混合物をＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルを使用したクロマトグラフィーとヘキサン：ＥｔＯＡｃ（６：１）にて溶出し、標題化合物２．２ｇを淡黄色固体として得た。
【０１４１】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．５８（ｄ、２Ｈ）、７．４２（ｄ、２Ｈ）、７．０７（ｓ、１Ｈ）、２．５７（ｓ、３Ｈ）。
【０１４２】
段階５：３−ブロモ−４−（４−メチルスルホニルフェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
３−ブロモ−４−（４−メチルチオ）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン（１．１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液に０℃で、ｍＣＰＢＡ（５７〜８６％、１．７ｇ）を加えた。混合物をゆっくり昇温させて室温とし、１時間撹拌した。追加のＣＨ２Ｃｌ２で希釈した後、混合物を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、乾燥させ（無水ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏと振り混ぜて、標題化合物０．８ｇを白色粉末として得た。
【０１４３】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．１５（ｍ、４Ｈ）、７．４６（ｓ、１Ｈ）、６．９８（ｓ、１Ｈ）、３．２０（ｓ、３Ｈ）。
【０１４４】
段階６：４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−フェニルチオ−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
３−ブロモ−４−（４−メチルスルホニルフェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン（３５０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、チオフェノール（１１０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）および１０Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（１０５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を室温で３０分間撹拌し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を希ＮａＯＨ水溶液（２回）、ブラインで洗浄し、濃縮した。シリカゲルでのヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：２）を溶離液とするクロマトグラフィーによって、黄色泡状物１３０ｍｇを得た。残留物をＥｔ２Ｏと振り混ぜて、標題化合物１１０ｍｇを淡黄色固体として得た。
【０１４５】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．００（ｄ、２Ｈ）、７．７８（ｄ、２Ｈ）、７．２４（ｍ、５Ｈ）、７．１５（ｓ、１Ｈ）、３．１６（ｓ、３Ｈ）。
【０１４６】
実施例１２
３−イソプロピルチオ−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オン
実施例１１段階６に記載の手順に従って、標題化合物を３−ブロモ−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−６−トリフルオロメチル−ピラン−２−オンおよび２−プロパンチオールのカップリングから製造した。
【０１４７】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．０９（ｄ、２Ｈ）、７．７６（ｄ、２Ｈ）、７．０７（ｓ、１Ｈ）、３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．２１（ｓ、３Ｈ）、１．１５（ｄ、６Ｈ）。
【０１４８】
実施例１３
４−（４−メチルスルホニル）フェニル−３−フェニル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ピラン−２−オン
段階１：実施例５段階１からの４−（４−メチルチオ）フェニル−６−オキソ−５−フェニル−６Ｈ−ピラン−２−カルボアルデヒド（３０９ｍｇ、０．８４４ｍｍｏｌ）の冷（０℃）ＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ＣＦ３ＳｉＭｅ３（１４２ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた。次にＴＢＡＦ（０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で０．５時間撹拌し、２時間で室温とするよう昇温させた。ＨＣｌ（６Ｎ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出液をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物についてシリカゲル上でクロマトグラフィーを行って、相当するトリフルオロメタノール中間体２７６ｍｇ（８３％）を得た。
【０１４９】
段階２：段階１の生成物（１２６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（０．５ｍＬ）溶液に、０℃でクロロチオノギ酸フェニル（６０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５１ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を昇温させて室温とし、２時間撹拌し、ＨＣｌ（１Ｎ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出液をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残留物についてシリカゲル上でクロマトグラフィーを行って、相当するチオカルボネート中間体１５７ｍｇ（９３％）を得た。
【０１５０】
段階３：段階２の生成物（１５７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のトルエン（１．５ｍＬ）溶液に、Ｂｕ３ＳｎＣｌ（３２５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ４（５６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（５ｍｇ）を加えた。混合物を２０時間加熱還流した。混合物のシリカゲル上でクロマトグラフィーによって、脱酸素化中間体５０ｍｇ（５８％）を得た。
【０１５１】
段階４：段階３の生成物（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、ｍＣＰＢＡ（５２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で０．５時間撹拌した。ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出液をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下に濃縮した。残留物についてシリカゲル上でクロマトグラフィーを行って、標題化合物２４．８ｍｇ（４６％）を得た。
【０１５２】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．２３（ｍ、５Ｈ）、６．７０（ｓ、１Ｈ）、３．７４（ｑ、２Ｈ）、３．０９（ｓ、３Ｈ）。
【０１５３】
実施例１４
３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
段階１：３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−インイル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン
３−ブロモ−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン（１ｇ、３．２ｍｍｏｌ）、２−メチル−３−ブチン−２−オール（０．６８ｍＬ、７．０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１．７８ｍＬ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．４５ｇ）およびＣｕＩ（６１ｍｇ）のＣＨ３ＣＮ（３２ｍＬ）中混合物を冷凍／解凍（３サイクル）して脱気し、次に３時間還流させた。冷却して室温とした後、ＥｔＯＡｃを加え、混合物を水、ブライン（２回）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物を５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、標題化合物５６９ｍｇを得た。
【０１５４】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ７．６５（ｄ、２Ｈ）、７．３７（ｄ、２Ｈ）、６．４０（ｓ、１Ｈ）、４．４６（ｓ、１Ｈ）、２．５６（ｓ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）、１．４５（ｓ、６Ｈ）。
【０１５５】
段階２：３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−インイル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン
３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−インイル）−６−メチル−４−（４−メチルチオ）フェニル−ピラン−２−オン（５６９ｍｇ）およびＭＭＰＰ（１．３４ｇ）の混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（２３ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５．７ｍＬ）中にて室温で２時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。ＣＨ２Ｃｌ２抽出液をブライン（２回）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ジエチルエーテル中で振り混ぜて、標題化合物４９６ｍｇを得た。
【０１５６】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．０８（ｄ、２Ｈ）、７．９８（ｄ、２Ｈ）、６．４５（ｓ、１Ｈ）、４．４８（ｓ、１Ｈ）、３．１８（ｓ、３Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、１．４０（ｓ、６Ｈ）。
【０１５７】
段階３：３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−６−メチル−４−（メチルスルホニルフェニル）−ピラン−２−オン
３−（３−ヒドロキシ−３−メチルブト−１−インイル）−６−メチル−４−（４−メチルスルホニル）フェニル−ピラン−２−オン（５０ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１ｍＬ）溶液に５％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を加え、混合物を約０．２０７ＭＰａ（３０ｐｓｉ）で１時間水素化した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、セライト濾過し、溶媒を減圧下にで蒸発させた。８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いたシリカゲルクロマトグラフィーによる精製後エーテル中での磨砕によって標題化合物を得た。
【０１５８】
１Ｈ　ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．０６（ｄ、２Ｈ）、７．６８（ｄ、２Ｈ）、６．１２（ｓ、１Ｈ）、３．１８（ｓ、３Ｈ）、２．４４（ｍ、２Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．０７（ｓ、６Ｈ）。
【０１５９】
以下のアッセイを用いて式Ｉの化合物を調べ、そのシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を確認することができる。
【０１６０】
シクロオキシゲナーゼ活性の阻害
ＣＨＯトランスフェクション細胞系を用いるＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１についての全細胞アッセイ
【０１６１】
このアッセイには、ヒトＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２ｃＤＮＡを含む真核細胞発現ベクターｐＣＤＮＡＩＩＩで安定にトランスフェクションされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系を用いる。これらの細胞系はそれぞれ、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］およびＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］と称する。シクロオキシゲナーゼアッセイでは、懸濁培養液からのＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］細胞とトリプシン処理によって得られる付着培養ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］細胞を、遠心によって回収し（３００×ｇ、１０分間）、１５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳで１回洗浄し、細胞濃度１．５×１０６個／ｍＬで、１５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳに再懸濁させる。被験薬剤をＤＭＳＯに溶かして、最高被験薬濃度の６６．７倍とする。化合物の試験は代表的には、最高薬剤濃度の３倍連続ＤＭＳＯ希釈液を用いて、８濃度で２度行う。細胞（０．３×１０６個／２００μＬ）を、３７℃で１５分間、被験薬またはＤＭＳＯ媒体３μＬとともにプレインキュベートする。高濃度ＡＡエタノール溶液中の１５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）含有ＨＢＳＳで１０倍希釈することで、過酸化物を含まないＡＡの作業溶液（ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］アッセイおよびＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］アッセイのそれぞれについて、５．５μＭおよび１１０μＭ　ＡＡを使用する）を調製する。次に、薬剤の存在下または非存在下で、細胞をＡＡ／ＨＢＳＳ溶液で惹起させ、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］アッセイにおいて０．５μＭ　ＡＡの最終濃度、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］アッセイにおいて１０μＭ　ＡＡの最終濃度とする。１Ｎ　ＨＣｌ（１０μＬ）を加えることで反応を停止し、０．５Ｎ　ＮａＯＨ（２０μＬ）によって中和する。サンプルを４℃で１０分間３００×ｇで遠心し、透明上清の一部を適切に希釈して、ＰＧＥ２についての酵素関連イムノアッセイを用いてＰＧＥ２レベルを求める（コレレートＰＧＥ２酵素イムノアッセイキット、Ａｓｓａｙ Ｄｅｓｉｇｎｓ， Ｉｎｃ．）。被験化合物非存在下でのシクロオキシゲナーゼ活性を、アラキドン酸で惹起した細胞でのＰＧＥ２レベルに対するエタノール媒体にて擬似惹起した細胞でのＰＧＥ２レベルの差として求める。被験化合物によるＰＧＥ２合成阻害は、陽性対照サンプルにおける活性に対する薬剤存在下での活性のパーセントとして計算する。
【０１６２】
Ｕ９３７細胞ミクロソームからのＣＯＸ−１活性のアッセイ
Ｕ９３７細胞を５００×ｇで５分間遠心することでペレット状とし、リン酸緩衝生理食塩水で１回洗浄し、再度ペレットとする。０．１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ　ＥＤＴＡ、２μｇ／ｍＬのロイペプチン、２μｇ／ｍＬの大豆トリプシン阻害剤、２μｇ／ｍＬのアプロチニンおよび１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオライドからなる均質化緩衝液に、細胞を再懸濁させる。細胞懸濁液を１０秒間４回超音波処理し、４℃で１０分間、１００００×ｇにて遠心する。上清を４℃で１時間、１０００００×ｇにて遠心する。１０００００×ｇミクロソームペレットを０．１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ　ＥＤＴＡに再懸濁させて、約７ｍｇ蛋白／ｍＬとし、−８０℃で保存する。
【０１６３】
ミクロソーム調整物は使用直前に解凍し、短時間の超音波処理を施し、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．５ｍＭのフェノール、１ｍＭの還元グルタチオンおよび１μＭのヘマチンを含む０．１ＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）に、１２５μｇ蛋白／ｍＬの濃度に希釈する。アッセイは、最終容量２５０μＬで２度行う。最初に、９６深型ウェル（ｄｅｅｐｗｅｌｌ）ポリプロピレンタイタープレートのウェルで、１０ｍＭ　ＥＤＴＡを含む０．１ＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）２０μＬに、ＤＭＳＯ媒体またはＤＭＳＯ溶液中の薬剤５μＬを加える。次に、ミクロソーム調製液２００μＬを加え、室温で１５分間プレインキュベートしてから、１Ｍアラキドン酸の０．１ＭトリスＨＣｌおよび１０ｍＭ　ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）溶液２５μＬを加える。サンプルを室温で４０分間インキュベートし、１Ｎ　ＨＣｌ（２５μＬ）を加えることで反応を停止する。１Ｎ　ＮａＯＨ（２５μＬ）を加えてサンプルを中和してから、ラジオイムノアッセイ（Ｄｕｐｏｎｔ−ＮＥＮまたはＡｍｅｒｓｈａｍのアッセイキット）によって、ＰＧＥ２含有量の定量を行う。シクロオキシゲナーゼ活性は、アラキドン酸存在下およびエタノール媒体存在下でインキュベートしたサンプル中のＰＧＥ２濃度差とする。
【０１６４】
精製ヒトＣＯＸ−２活性アッセイ
ＣＯＸ−２によるＰＧＧ２からＰＧＨ２への還元時における、Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン（ＴＭＰＤ）の酸化に基づく発色アッセイを用いて、酵素活性を測定する（Ｃｏｐｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， （１９９４） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ９１， １１２０２−１１２０６）。
【０１６５】
前述の方法に従って、Ｓｆ９細胞から組換えヒトＣＯＸ−２を精製する（Ｐｅｒｃｉｖａｌ ｅｔ ａｌ （１９９４） Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． １５， １１１−１１８）。アッセイ混合物（１８０μＬ）には、１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）、２ｍＭゲナポール（ｇｅｎａｐｏｌ）Ｘ−１００、１μＭヘマチン、１ｍｇ／ｍＬゼラチン、精製酵素８０〜１００単位（酵素１単位は、６１０ｎｍで０．００１／分のＯ．Ｄ．変化を生じるのに要する酵素量と定義される）および被験化合物のＤＭＳＯ溶液４μＬを含有させる。混合物を室温（２２℃）で１５分間プレインキュベートしてから、１ｍＭアラキドン酸（ＡＡ）および１ｍＭ　ＴＭＰＤのアッセイ緩衝液溶液を超音波処理したもの（酵素やヘマチンを含まない）２０μＬを加えることで酵素反応を開始する。反応の最初の３６秒間にわたるＴＭＰＤ酸化の初期速度を計算することで、酵素活性を求める。酵素非存在下で、非特異的酸化速度を観察し（０．００７〜０．０１０Ｏ．Ｄ．／分）、それを差し引いてから阻害％の計算を行う。対数用量−阻害％のプロットの４パラメータ最小二乗非線形回帰分析から、ＩＣ５０値を求める。
【０１６６】
ヒト全血アッセイ
理論的根拠
ヒト全血は、選択的ＣＯＸ−２阻害薬などの抗炎症化合物の生化学的効力の試験に適した蛋白と細胞豊富環境を提供する。研究により、正常なヒト血液にはＣＯＸ−２酵素が含まれないことが明らかになっている。これは、正常血液におけるＰＧＥ２産生に対してＣＯＸ−２阻害薬が効果を持たないという所見と一致するものである。そのような阻害薬は、ＣＯＸ−２を誘発するヒト全血のＬＰＳとのインキュベーション後にのみ活性である。このアッセイを用いて、ＰＧＥ２産生に対する選択的ＣＯＸ−２阻害薬の阻害効果を評価することができる。さらに、全血中の血小板は多量のＣＯＸ−１酵素を含む。血液凝固の直後、血小板はトロンビンが介在する機序によって活性化される。その反応により、ＣＯＸ−１の活性化を介して、トロンボキサンＢ２（ＴｘＢ２）が産生される。そこで、血液凝固後のＴｘＢ２レベルに対する被験化合物の効果を調べ、ＣＯＸ−１活性の指標として用いることができる。従って、同じアッセイで、ＬＰＳ誘発後のＰＧＥ２レベル（ＣＯＸ−２）および血液凝固後のＴｘＢ２レベル（ＣＯＸ−１）を測定することで、被験化合物による選択性の程度を求めることができる。
【０１６７】
方法
Ａ．ＣＯＸ−２（ＬＰＳ誘発ＰＧＥ２産生）
男性および女性の両方の志願者から、静脈穿刺によって、ヘパリンを塗った試験管に新鮮血液を採血する。被験者には外見上で炎症状態はなく、採血前の７日以上にわたってＮＳＡＩＤを服用していない。小分けした血液検体２ｍＬから直ちに血漿を得て、ブランクとして使用する（ＰＧＥ２の基底線レベル）。残りの血液を、室温で５分間、ＬＰＳ（最終濃度１００μｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ、大腸菌からの＃Ｌ−２６３０；０．１％ＢＳＡ（リン酸緩衝生理食塩水）で希釈）とともにインキュベートする。血液５００μＬずつを、３７℃で２４時間、１０ｎＭ〜３０μＭの範囲の最終濃度の媒体（ＤＭＳＯ）２μＬまたは被験化合物２μＬとともにインキュベートする。インキュベーション終了後、血液を１２０００×ｇで５分間遠心して血漿を得る。小分けした血漿１００μＬをメタノール４００μＬと混合して、蛋白を沈殿させる。上清を得て、それについて、メーカー指定の方法に従って、ＰＧＥ２をそれのメチルオキシメート誘導体に変換した後、ラジオイムノアッセイキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ， ＲＰＡ＃５３０）を用いて、ＰＧＥ２のアッセイを行う。
【０１６８】
Ｂ．ＣＯＸ−１（凝血誘発ＴｘＢ２産生）
抗凝血剤の入っていないバキュテーナーに新鮮血液を採血する。５００μＬずつを直ちに、１０ｎＭ〜３０μＭの範囲の最終濃度でＤＭＳＯまたは被験化合物２μＬを予め入れておいたシリコン処理微量遠心管に移し入れる。その遠心管を３７℃で１時間、渦攪拌およびインキュベートして、血液を凝固させる。インキュベーション終了後、遠心（１２０００×ｇで５分間）によって血清を得る。血清の小分けサンプル１００μＬをメタノール４００μＬと混合して、蛋白を沈殿させる。上清を得て、それについて、酵素イムノアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ， ＃５１９０３１）を用いて、メーカー指定の方法に従ってＴｘＢ２のアッセイを行う。
【０１６９】
ラット前足浮腫アッセイ
試験実施計画
雄のスプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）を終夜絶食させ、媒体（１％メトセル（ｍｅｔｈｏｃｅｌ）または５％Ｔｗｅｅｎ８０）または被験化合物のいずれかを経口投与する。１時間後、一方の後足首より上の高さに、永久的マーカーを用いて線を引いて、モニタリングする足の面積を決定する。水置換の原理に基づくプレシスモメーター（Ｕｇｏ−Ｂａｓｉｌｅ、イタリア）を用いて、足体積（Ｖ０）を測定する。次に動物に対して、２５ゲージ針を取り付けたインシュリン注射器を用いて、足に１％カラギーナンの生理食塩水溶液（ＦＭＣ Ｃｏｒｐ， Ｍａｉｎｅ）５０？Ｌを足底部皮下に（ｓｕｂｐｌａｎｔａｒｌｙ）注射する（すなわち、片足にカラギーナン５００？ｇ）。３時間後、足体積（Ｖ３）を測定し、足体積の増加（Ｖ３−Ｖ０）を計算する。動物をＣＯ２窒息によって屠殺し、胃病変の有無を評点する。データを媒体対照の値と比較して、阻害パーセントを計算する。投与群は全てコード化して、観察者の先入観を排除するようにする。
【０１７０】
非麻酔ラットにおけるＬＰＳ誘発発熱
雄スプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）を、使用前１６〜１８時間にわたって絶食させた。ほぼ午前９時３０分に、動物を一時的にプレキシガラス容器に入れ、デジタル温度計（０８５０２型、Ｃｏｌｅ Ｐａｒｍｅｒ）に接続された可撓性温度プローブ（ＹＳＩシリーズ４００）を用いて、動物の基底線直腸体温を記録した。全ての動物について同じプローブおよび温度計を用いて、実験誤差を低減するようにした。体温測定後、動物をケージに戻した。時間ゼロで、ラットに対して、生理食塩水またはＬＰＳ（２ｍｇ／ｋｇ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ）のいずれかを腹腔内注射し、ＬＰＳ注射から５時間後、６時間後および７時間後に直腸体温を測定した。体温上昇が横這いとなった５時間後の測定後、ＬＰＳ注射ラットに対して、媒体（１％メトセル）もしくは被験化合物を経口投与して、化合物が発熱状態を回復させることができるか否かを調べた。基準（ゼロ回復）点として、対照（媒体投与）群で７時間後に得られた直腸体温を用いて、発熱の回復パーセントを計算した。ＬＰＳ投与前の基底線値までの完全な発熱回復を１００％とする。
【０１７１】
非麻酔リスザルにおけるＬＰＳ誘発発熱
リスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）（１．０〜１．７ｋｇ）の群において、手術によって、腹部皮下に温度プローブを埋め込んだ。それにより、遠隔測定感知システム（Ｄａｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）によって、非麻酔・非拘束のサルで体温をモニタリングすることができる。使用前の１３〜１４時間にわたり動物を絶食させ、個々のケージに入れて馴致させた。埋込温度プローブからの信号を拾う電子受信装置を、ケージの側面に取り付けた。実験当日のほぼ午前９：００に、サルを一時的に訓練用椅子に拘束し、ＬＰＳ（６ｍｇ／ｋｇ、無菌生理食塩水に溶かしたもの）の静脈注射を行った。動物をケージに戻し、５分ごとに連続的に体温を記録した。体温が１．５〜２８Ｃ上昇したＬＰＳ注射から２時間後に、媒体（１％メトセル）または被験化合物（３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかをサルに経口投与した。１００分後、体温と基底線値の差を求めた。対照群における値を０％阻害として、阻害パーセントを計算した。
【０１７２】
ラットにおけるカラギーナン誘発の急性炎症性痛覚過敏
雄スプレーグ・ドーリーラット（９０〜１１０ｇ）を用いて実験を行った。３時間前にカラギーナンを足底皮下注射することで（片方の後足に４．５ｍｇ）、後足の機械的圧迫に対する痛覚過敏を誘発した。対照動物には、等量の生理食塩水（足底皮下に０．１５ｍＬ）を投与した。カラギーナン投与から２時間後に、被験化合物（０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．５％メトセルの蒸留水溶液に懸濁させたもの）または媒体（０．５％メトセル）を経口投与した（２ｍＬ／ｋｇ）。１時間後、痛覚計（Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ）を用いて、後足の圧迫に対する発声応答を測定した。
【０１７３】
一元ＡＮＯＶＡ（ＢＭＤＰ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）を用いて、カラギーナン誘発痛覚過敏についての統計解析を行った。痛覚過敏は、生理食塩水注射ラットでの発声閾値を、カラギーナン注射動物で得られた値から差し引くことで求めた。薬剤投与ラットについての痛覚過敏スコアは、その応答のパーセントとして表した。次に、ＧｒａＦｉｔ（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて平均データの非線形最小二乗回帰分析を行うことで、ＩＤ５０値（最大観察応答の５０％をもたらす用量）を計算した。
【０１７４】
ラットにおける補助剤誘発関節炎
１０匹の６．５〜７．５週齢の雌ルイスラット（Ｌｅｗｉｓ ｒａｔ；体重約１４６〜１７０ｇ）について体重を測定し、耳にマークを施し、各群内で体重が同等となるように、群（関節炎を誘発しなかった陰性対照群；媒体対照群；総１日用量１ｍｇ／ｋｇでインドメタシンを投与した陽性対照群ならびに総１日用量０．１０〜３．０ｍｇ／ｋｇで被験化合物を投与した４群）に割り付けた。それぞれラット１０匹からなる６群に対して、軽油（補助剤）０．１ｍＬに入ったＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ０．５ｍｇを後足に注射し、ラット１０匹からなる陰性対照には、補助剤は注射しなかった。補助剤注射の前（第−１日）および２１日後に、体重、反対側足体積（水銀置換プレシスモグラフィーによって測定）および側面Ｘ線撮像（ケタミンおよびキシラジン麻酔下で得たもの）を得て、補助剤注射の前（第−１日）および４日後および２１日後に、主たる試験足の体積を求めた。ラットには、Ｘ線撮影用にケタミン（８７ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１３ｍｇ／ｋｇ）を併用で０．０３〜０．１ｍＬ筋肉注射して麻酔を施し、補助剤を注射した。ファキシトロン（Ｆａｘｉｔｒｏｎ；４５ｋＶｐ、３０秒）およびコダック（Ｋｏｄａｋ）Ｘ−ＯＭＡＴ　ＴＬフィルムを用いて、第０日および第２１日に、両後足についてのＸ線撮影を行い、自動処理装置で現像した。実験投与について知らされていない試験担当者が、Ｘ線撮像について、軟組織および硬組織における変化を評価した。以下のＸ線撮像上の変化を、重度に応じて数値にて等級分けした。すなわち、軟組織体積の増加（０〜４）、関節窩の狭窄もしくは拡張（０〜５）、肋軟骨下びらん（０〜３）、骨膜反応（０〜４）、骨溶解（０〜４）、亜脱臼（０〜３）および変性性関節変化（０〜３）である。各Ｘ線撮像的変化について、個別の基準を用いて、重度の数値的等級分けを行った。片足当たりの最大可能スコアは２６であった。補助剤注射後の開始時点およびその後２１日間にわたって継続的に、総１日用量０．１、０．３、１および３ｍｇ／ｋｇ／日の被験化合物、総１日用量１ｍｇ／ｋｇ／日のインドメタシンまたは媒体（０．５％メトセルの無菌水溶液）を、１日２回経口投与した。化合物の製造は毎週行い、用時まで暗所で冷蔵し、投与直前に渦混合した。
【０１７５】
体重および足体積についての％変化ならびに等級変換Ｘ線撮像総スコアには、「時間」に関する反復計測を用いる２変量（「投与」および「時間」）分散分析を適用した。その後、ドゥネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ′ｓ）検定を行って、投与の効果を媒体と比較した。胸腺重量および脾臓重量には片側分散分析を適用し、次にドゥネット検定を行って、投与の効果を媒体と比較した。非線形最小二乗回帰を用いる４パラメータロジスティック関数によって、第４日、第１４日および第２１日での足体積における阻害％に関する用量−応答曲線の適合を行った。ＩＤ５０は、媒体からの５０％軽減に相当する用量と定義し、適合４パラメータ式からの内挿によって誘導した。
【０１７６】
ラットにおける薬物動態
ラットにおける経口薬物動態
指針（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）に従って、動物を飼育し、飼料を摂取させ、世話をする。雄スプレーグ・ドーリーラット（３２５〜３７５ｇ）を終夜絶食させてから、各経口血中レベル試験を行う。ラットを１回に１匹ずつ固定装置に入れ、箱をしっかりと固定する。尾先端から小切片を切り取ることで（１ｍｍ以下）、ゼロ血液検体を得る。次に尾を、強くしかしゆっくりとした動きで先端からつけ根までさすることで、血液を絞り出す。ヘパリンを塗ったバキュテーナ（ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ）管に血液約１ｍＬを採血する。
【０１７７】
化合物は、必要に応じて、標準的な投与容量１０ｍＬ／ｋｇで調製し、１６ゲージの３インチ強制経口投与用針を胃まで通すことで経口投与する。
【０１７８】
再度尾を切る必要がない点を除き、ゼロ採血の場合と同じ方法で、それ以後の採血を行う。尾を１枚のガーゼで清拭し、上記の方法に従って絞り出し／さすりを行って、適切にラベルを施した管に採血する。
【０１７９】
採血直後に、血液を遠心し、分離し、明瞭にマークを施した薬品瓶に入れ、分析時まで冷凍庫保管する。経口投与後のラット血中レベル測定についての代表的な時点は、０、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間および６時間である。
【０１８０】
４時間の時点での採血後、ラットには飼料を自由に摂取させる。試験中のいかなる時点でも飲料水は与える。
【０１８１】
媒体
経口ラット血中レベル測定では、以下の媒体を用いることができる。
【０１８２】
ＰＥＧ２００／３００／４００：２ｍＬ／ｋｇに制限
メトセル０．５％〜１．０％：１０ｍＬ／ｋｇ
Ｔｗｅｅｎ８０：１０ｍＬ／ｋｇ
経口血中レベル用の化合物は懸濁液の形とすることができる。溶解度を高めるため、液を約５分間超音波処理器で処理することができる。
【０１８３】
分析においては、小分けサンプルを等量のアセトニトリルで希釈し、遠心して、蛋白沈殿物を除去する。上清を、ＵＶ検出器を取り付けたＣ−１８ＨＰＬＣカラムに直接注入する。既知量の薬剤を入れた透明血液検体と比較して定量を行う。静脈投与と経口投与で曲線下面積（ＡＵＣ）を比較することで、生物学的利用能（Ｆ）を評価する。
【０１８４】
【数１】
2004505943.tif 000016
【０１８５】
クリアランス速度を、以下の関係式から計算する。
【０１８６】
【数２】
2004505943.tif 000017
ＣＬの単位はｍＬ／ｈ・ｋｇ（ミリリットル／時・キログラム）である。
【０１８７】
ラットにおける静脈投与薬物動態
指針（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）に従って、動物を飼育し、飼料を摂取させ、世話をする。雄スプレーグ・ドーリーラット（３２５〜３７５ｇ）を、吊り上げ床、ケージ上面、飲料水瓶および飼料のあるプラスチック製靴箱型ケージに入れる。
【０１８８】
化合物は必要に応じて、標準的投与容量１ｍＬ／ｋｇで調製する。
【０１８９】
ラットについてはゼロ採血用に採血し、ＣＯ２鎮静下で投与を行う。ラットを１回に１匹ずつ、準備しておいたＣＯ２室に入れ、ラットが立直り反射を失ったら直ちにＣＯ２室から出す。次に、ラットを拘束台に載せ、口輪の上にＣＯ２導入管を取り付けた円錐頭を置き、ラットをその台にゴムで拘束する。鉗子と鋏を用いて頸静脈を露出させ、ゼロ検体を採血し、次に所定用量の化合物を頸静脈に注射する。注射部位を指で軽く押さえ、円錐頭を外す。時間を記録し、これをゼロ時点とする。
【０１９０】
尾の先端から小切片を切り取ることで（１〜２ｍｍ）、５分間の放血で採血を行う。次に尾を、強くしかしゆっくりとした動きで先端からつけ根までさすることで、尾から血液を絞り出す。ヘパリンを塗った採血管に血液約１ｍＬを採血する。再度尾を切る必要がない点を除き、同じ方法で、それ以後の採血を行う。尾を１枚のガーゼで清拭し、上記の方法に従って、適切にラベルを施した管に採血する。
【０１９１】
静脈投与後のラット血中レベル測定についての代表的な時点は、
０、５分、１５分、３０分、１時間、２時間および６時間、あるいは
０、５分、３０分、１時間、２時間、４時間および６時間である。
【０１９２】
媒体
静脈投与ラット血中レベル測定では、以下の媒体を用いることができる。
【０１９３】
ブドウ糖：１ｍＬ／ｋｇ
モレキュロゾル（ｍｏｌｅｃｕｌｏｓｏｌ）２５％：１ｍＬ／ｋｇ
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：動物当たり０．１ｍＬの投与容量に制限　ＰＥＧ２００：４０％無菌水との混合で６０％以下−１ｍＬ／ｋｇ
ブドウ糖を用いる場合、溶液が濁っている場合は、重炭酸ナトリウムまたは炭酸ナトリウムを加えることができる。
【０１９４】
分析においては、小分けサンプルを等量のアセトニトリルで希釈し、遠心して、蛋白沈殿物を除去する。上清を、ＵＶ検出器を取り付けたＣ−１８ＨＰＬＣカラムに直接注入する。既知量の薬剤を入れた透明血液検体と比較して定量を行う。静脈投与と経口投与で曲線下面積（ＡＵＣ）を比較することで、生物学的利用能（Ｆ）を評価する。
【０１９５】
【数３】
2004505943.tif 000018
【０１９６】
クリアランス速度を、以下の関係式から計算する。
【０１９７】
【数４】
2004505943.tif 000019
ＣＬの単位はｍＬ／ｈ・ｋｇ（ミリリットル／時・キログラム）である。
【０１９８】
ラットにおけるＮＳＡＩＤ誘発胃疾患
試験実施の理由
従来のＮＳＡＩＤの主要な副作用は、ヒトにおいて胃病変を生じる能力である。その作用は、消化管でのＣｏｘ−１の阻害によって引き起こされると考えられている。ラットは、ＮＳＡＩＤの作用に対して特に感受性である。実際これまでに、現在使用されている従来のＮＳＡＩＤについての消化管副作用を評価するに当たっては、ラットモデルが一般的に用いられている。本アッセイでは、５１Ｃｒ標識赤血球の全身注射後における糞５１Ｃｒ排泄を測定することで、ＮＳＡＩＤ誘発消化管損傷を観察する。糞５１Ｃｒ排泄は確立された技術であり、動物およびヒトにおける消化管の完全性を検出する上で高感度の方法である。
【０１９９】
方法
雄スプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）に対して、１回投与（急性投与）または１日２回で５日間投与（慢性投与）のいずれかにて、被験化合物を経口投与する。最後の投与が終了したら直ちに、ラットに対して、供血ラットからの５１Ｃｒ標識赤血球０．５ｍＬを、尾静脈から注射する。動物を個別に代謝ケージに入れ、飼料および飲料水は自由に摂取させる。４８時間にわたって糞を採取し、５１Ｃｒ糞排泄を、総注射用量のパーセントとして計算する。５１Ｃｒ標識赤血球は、以下の手順で調製する。ヘパリンを塗った試験管に、供血ラットの大静脈からの血液１０ｍＬを採血する。遠心によって血漿を除去し、等量のＨＢＳＳで再度満たす。赤血球を、３７℃で３０分間、５１クロム酸ナトリウム（４００Ｃｉ）とともにインキュベートする。インキュベーション終了後、赤血球をＨＢＳＳ　２０ｍＬで２回洗浄して、遊離の５１クロム酸ナトリウムを除去する。最後に、赤血球をＨＢＳＳ　１０ｍＬで再生し、ラット１匹当たりに、その溶液０．５ｍＬ（約２０Ｃｉ）を注射する。
【０２００】
リスザルにおける蛋白損失性胃疾患
試験実施の理由
蛋白損失性胃疾患（消化管における循環細胞および血漿蛋白の出現として発現する）は、標準的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する重大な有害応答であって、それによって用量が限定される。それは、５１ＣｒＣｌ３溶液の静脈投与によって定量的に評価することができる。その同位体イオンは、細胞および血清グロブリン類ならびに細胞小胞体に強く結合することができる。従って、その同位体を投与してから２４時間にわたって採取した糞で認められる放射能の測定値は、蛋白損失性胃疾患の高感度かつ定量的な指標を提供するものである。
【０２０１】
方法
雄リスザル（０．８〜１．４ｋｇ）の群に、Ｈ２Ｏ媒体中の１％メトセルもしくは５％Ｔｗｅｅｎ８０（３ｍＬ／ｋｇ、１日２回）あるいは用量１〜１００ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の被験化合物のいずれかを５日間にわたって、強制経口投与する。最後の薬剤／媒体投与から１時間後に、５１Ｃｒ（１ｍＬ／ｋｇのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中５Ｃｉ／ｋｇ）を静脈投与し、代謝ケージで２４時間にわたって糞を採取し、γ線カウンティングによって排泄５１Ｃｒを評価する。最後の薬剤投与から１時間後および８時間後に静脈血を採血し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって、薬剤の血漿濃度を測定する。
【０２０２】
代表的生物データ
本発明の化合物はシクロオキシゲナーゼ−２の阻害薬であることから、上記で挙げたようなシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療において有用である。シクロオキシゲナーゼに対する化合物の活性は、以下に示す代表的結果で認めることができる。このアッセイでは、アラキドン酸、シクロオキシゲナーゼ−１またはシクロオキシゲナーゼ−２ならびに阻害薬候補剤の存在下で合成されるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の量を測定することで、阻害を求める。ＩＣ５０値は、ＰＧＥ２合成を未阻害対照と比較して得られる値の５０％まで回復させるのに必要な阻害薬候補剤の濃度を表す。
【０２０３】
生物アッセイのある種のものについての結果を表ＩＩに示してある。
【０２０４】
【表２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004505943.tif 000083
2004505943.tif 000084
2004505943.tif 000085
2004505943.tif 000086
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