(57)【要約】本発明は、ＦＳＨ受容体活性に対するアンタゴニスト活性を有する化合物を提供する。他の形態では、本発明は、例えば、卵胞成熟を抑制する方法、排卵を抑制する方法、避妊方法、子宮内膜症の治療方法、内分泌ホルモン依存性腫瘍の治療方法、子宮筋腫の治療方法における本発明の化合物の使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５０ダルトン〜約１０００ダルトンの分子量を有し、且つ２５μＭ以下のＩＣ５０基準で表されるＦＳＨアンタゴニスト活性を有する、ＦＳＨ受容体活性に対してアンタゴニスト活性を有する化合物であって、
そのＦＳＨ受容体アンタゴニスト活性が以下の式：
【化１】
2004505050.tif 000012
［式中、
Ｒ１は、アリール基、置換アリール基、アルキル基及び置換アルキル基からなる群より選択され；
Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３は、互いに独立して、水素、ハロゲン、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルコキシ基、置換低級アルコキシ基、フェニル基、置換フェニル基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アルキニル基、置換アルキニル基及びニトロ基からなる群より選択され；
Ｙは、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｒ２４）からなる群より選択され、この場合、 Ｒ２４は、Ｈ又は低級アルキル基であり；
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素、アルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、アリールアルキル基、置換アリールアルキル基、複素環アルキル基及び置換複素環アルキル基からなる群より選択され；
ＸはＳ（Ｏ）ｎであり、この場合、ｎは０、１又は２である］
で表される化合物により競合的に阻害される、上記化合物。
【請求項２】
Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３が、互いに独立して、水素及び以下の式：
【化２】
2004505050.tif 000013
［式中、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４及びＲ４５は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ及びトリフルオロメチルからなる群より選択される］
で表される基からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下に示す化合物：
【化３】
2004505050.tif 000014
2004505050.tif 000015
からなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
上記化合物が約２００ダルトン〜約１０００ダルトンの分子量を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が１１μＭ以下のＩＣ５０基準で表されるＦＳＨアンタゴニスト活性を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＦＳＨ受容体を含む細胞と請求項１に記載の化合物とを接触させることを含む、ＦＳＨ受容体を阻害する方法。
【請求項７】
ＦＳＨ受容体を含む未成熟卵胞細胞と有効量の請求項１に記載の化合物とを接触させることを含む、卵胞成熟を抑制する方法。
【請求項８】
排卵可能であり、ＦＳＨ受容体を含む細胞と有効量の請求項１に記載の化合物とを接触させることを含む、排卵を抑制する方法。
【請求項９】
有効量の請求項１に記載の化合物を被験体に投与することを含む避妊方法。
【請求項１０】
有効量の請求項１に記載の化合物を被験体に投与することを含む子宮内膜症の治療方法。
【請求項１１】
有効量の請求項１に記載の化合物を被験体に投与することを含む内分泌ホルモン依存性腫瘍の治療方法。
【請求項１２】
有効量の請求項１に記載の化合物を被験体に投与することを含む子宮筋腫の治療方法。
【請求項１３】
ＦＳＨ結合部位に関してＦＳＨと競合せずに、ＦＳＨ受容体の活性を阻害する、ＦＳＨ受容体アンタゴニスト。
【請求項１４】
約５０ダルトン〜約１０００ダルトンの分子量を有する有機分子である、請求項１３に記載のＦＳＨ受容体アンタゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、チアゾリジノン類（ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅｓ）及びその使用方法に関する。特に、本発明は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）調節活性を有するチアゾリジノン類に関する。
【０００２】
発明の背景
思春期のヒト女性の卵巣中には約４００，０００個の生殖細胞が蓄えられている。生殖細胞がそれ以上作られることはない。思春期に始まり閉経で終わるまでには、約４００回の排卵月経周期があり、これらのサイクルで、ヒト卵巣中の生殖細胞のほぼ全てが消費される。各月経周期毎に約１，０００個の生殖細胞が消費される。しかし、どの月経周期においても、たった１つの生殖細胞（優性卵胞になる卵胞中で発生する）が排卵され、妊娠に使われる。
【０００３】
詳細は正確には分かっていないが、各月毎に１つの卵が選択されて優性卵となるメカニズムは、卵巣、視床下部及び脳下垂体からの１種以上のホルモンの間の複雑な相互作用によるものである。３種の糖蛋白ホルモン（黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ））は、卵巣に作用してステロイドの合成及び分泌を刺激する。ＬＨ及びＦＳＨは脳下垂体によって分泌され、共に、月経周期及び排卵の調節において中心的な役割を果たす。ｈＣＧは妊娠の初期段階から発生中の胎盤により分泌され、その役割は黄体によるステロイドの分泌を維持することであり、これは妊娠中に排卵が起こらないようにするために必要である。
【０００４】
正常な周期では、周期半ばにＬＨ濃度が急激に高くなり（サージ）、その後排卵が起こる。エストロゲンレベルの上昇（内因性のＬＨ及びＦＳＨの分泌により引き起こされる）は、ＬＨのサージが起こるのに必要である。エストロゲンは、正のフィードバックメカニズムを媒介し、その結果ＬＨの分泌量が増える。
【０００５】
経口避妊薬は、全世界で２億人を超える女性に、米国においては４５歳以下の女性の４人に１人に使用されている。また経口避妊薬は、服薬の簡便性、低い妊娠率（１％未満）及び相対的に低い副作用の発生率を理由に人気がある。通常、経口避妊薬はＦＳＨとＬＨの分泌を抑制することにより排卵を妨げる。その結果として、エストロゲン、プロゲステロン及びアンドロゲンを含むすべての卵巣ステロイド類の分泌も抑制される。さらにこれらの薬剤は生殖管に弱い直接的効果を及ぼし、頸管粘液を変化させることにより、精子の侵入を減少させ、輸卵管及び子宮の運動及び分泌を減少させる。
【０００６】
チアゾリジノン類は、医薬として特定の用途を持つことが分かった低分子有機化合物類である。例えば、チアゾリジノン類は中枢神経系に作用することが分かっている（例えばＴｒｉｐａｔｈｉら， ”Ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ ｃｏｎｇｅｎｅｒｓ ａｓ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ．” Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ４３：６３２−５（１９９３）を参照されたい）。これまでに同定されたＣＮＳ活性としては、例えば抗精神病的特性が挙げられる（Ｍｕｔｌｉｂら， ”Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ａｎ ａｔｙｐｉｃａｌ ａｎｔｉｐｓｙｃｈｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ， ３−［４−［４−（６−フルオロベンゾ［ｂ］チエン−３−イル）−１−ピペラジニル］ブチル］−２，５，５−トリメチル−４−チアゾリジノン（ＨＰ２３６）．” Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ． Ｄｉｓｐｏｓ． ２４：１１３９−５０（１９９６）を参照されたい）。また、ＣＮＳ作用型の抗虚血剤である他のチアゾリジノン類も見出されている（Ｒｕｔｅｒｂｏｒｉｅｓら， ”Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ ＣＮＳ ａｎｔｉｉｓｃｈｅｍｉｃ ａｇｅｎｔ ＬＹ２５６５４８ ｉｎ ｒａｔｓ， ｍｉｃｅ， ｄｏｇｓ ａｎｄ ｍｏｎｋｅｙｓ．” Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ． Ｄｉｓｐｏｓ． １８：６７４−９（１９９０）を参照されたい）。またチアゾリジノン類は、抗菌剤としても使用されている（例えばＬｅｙら， ”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ ｂｙ ｓｅｖｅｒａｌ ａｎｔｉｔｈｙｒｏｉｄ ｄｒｕｇｓ．” Ａｍ． Ｒｅｖ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｄｉｓ． １１１：６５１−５ （１９７５） を参照されたい）。
【０００７】
新規チアゾリジノン類が合成されれば、例えば抗菌療法及びＣＮＳ抗虚血剤による発作の治療等の様々な分野で適用できる新しい薬剤を発見する展望が開ける。特に興味深いのは、哺乳動物の受精能（ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）の調節因子としての新規チアゾリジノン類の使用である。
【０００８】
多数の経口避妊薬が市販されているが、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏ両方の適用において有用である新しい受精能調節剤への需要は依然として存在する。製造コストが低く、精製が容易であり、服薬し易く、広範な活性を示す、低分子ＦＳＨ受容体アンタゴニスト化合物類が存在すれば、経口避妊薬の分野において重要な進歩をもたらすであろう。非常に驚くべきことに、本発明はそのような低分子チアゾリジノンＦＳＨ受容体アンタゴニストを提供する。
【０００９】
発明の概要
本発明は、広範な医薬用途及び活性を有する新規チアゾリジノン類、並びにその使用方法を提供する。すなわち、本発明の一態様は、式：
【化４】
2004505050.tif 000002
〔式中、
Ｒ１は、アリール基、置換アリール基、アルキル基及び置換アルキル基からなる群より選択され；
Ｒ２は、複素環基及び置換複素環基からなる群より選択され；
Ｒ３及びＲ４は、互いに独立して、水素及び式−（ＣＨ２）ｍＣＯＮＲ５Ｒ６で表される基からなる群より選択され；
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素、アルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、アリールアルキル基、置換アリールアルキル基、複素環アルキル基、及び置換複素環アルキル基からなる群より選択され；
ＸはＳ（Ｏ）ｎであり、この場合、ｎは０、１又は２であり；
ｍは０〜３の整数である］
で表される新規チアゾリジノン類を提供する。
【００１０】
他の態様において、本発明は、式：
【化５】
2004505050.tif 000003
〔式中、
Ｒ１は、アリール基、置換アリール基、アルキル基及び置換アルキル基からなる群より選択され；
Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３は、互いに独立して、水素、ハロゲン、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルコキシ基、置換低級アルコキシ基、フェニル基、置換フェニル基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アルキニル基、置換アルキニル基及びニトロ基からなる群より選択され、アリールオキシ基は好ましくはフェノキシ又はベンジルオキシであり、置換アリールオキシ基は好ましくは置換フェノキシ又は置換ベンジルオキシであり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｒ２４）からなる群より選択され、この場合、 Ｒ２４は、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素、アルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、アリールアルキル基、置換アリールアルキル基、複素環アルキル基及び置換複素環アルキル基からなる群より選択され；
ＸはＳ（Ｏ）ｎであり、この場合、ｎは０、１又は２である］
で表される新規チアゾリジノン類を提供する。
【００１１】
他の態様において、本発明は、ＦＳＨ受容体結合部位に関してＦＳＨと競合しないＦＳＨ受容体アンタゴニスト類を提供する。
【００１２】
更に他の態様において、本発明は、ＦＳＨホルモン活性を調節する化合物類であって、該化合物が、（ａ） 約２００ダルトン〜約１０００ダルトンの分子量を有し、且つ、（ｂ） ２５μＭ以下、好ましくは１１μＭ以下のＩＣ５０基準に相当するＦＳＨアンタゴニスト活性を有しており、
該化合物類のＦＳＨ受容体に対するアンタゴニスト活性が、上記化合物により競合的に阻害される、ＦＳＨホルモン活性を調節する化合物類を提供する。
【００１３】
好ましい実施形態では、この種類の化合物は約３００ダルトン〜約８００ダルトンの分子量を有している。他の好ましい実施形態では、この種類の化合物は、ＩＣ５０基準で表すと１１μＭ以下のＦＳＨ受容体アンタゴニスト活性を有する。
【００１４】
さらに他の態様において、本発明は、該化合物類、すなわちチアゾリジノン類を、例えばＣＮＳ抗虚血剤、抗精神病性若しくは他の神経賦活性を有する薬物、抗微生物剤、哺乳動物の受精能調節剤などの種々の医薬用途のために使用する方法を提供する。哺乳動物の受精能調節剤として使用する場合は、チアゾリジノン類は好ましくはＦＳＨ受容体のアンタゴニストである。
【００１５】
従って、他の態様において、本発明は、１種類以上の本発明の化合物を１種類以上の製薬上許容される賦形剤、担体、希釈剤等と一緒に含む医薬組成物を提供する。このような医薬製剤は、それ自体が薬理学的に活性である他の物質、及び、該医薬組成物の薬理学的作用を強化する、補う、低下させる、若しくは調節する働きをする物質も含み得る。
【００１６】
本発明の他の特性、目的及び有利な効果、並びにその好ましい実施形態については、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
【００１７】
発明の詳細な説明
Ａ．　略称及び定義
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＦＭＯＣ：フルオレニルメトキシカルボニル；
ＤＥＣＰ：シアノホスホン酸ジエチル；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン；
ＣＨＯ：チャイニーズハムスター卵巣；
ＲＢＦ：丸底フラスコ。
【００１８】
「独立して選択される」という語句は、本明細書中では、Ｒ基（例えばＲ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５）が同一であっても異なっていてもよいことを指す（例えば、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がすべて置換アルキルであってもよく、又は、Ｒ１及びＲ２が置換アルキルであり且つＲ３がアリールであってもよい）。
【００１９】
Ｒ基と称される基は、通常、その名を有するＲ基の構造であると当業者が認識する構造を有している。説明を目的として、これまでに挙げた代表的なＲ基をここで定義する。これらの定義は補足及び説明を意図しているのであって、当業者にとって公知の定義を排除するものではない。
【００２０】
本明細書において「アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素、好ましくは１〜６個の炭素を有する分岐又は直鎖の一価の飽和又は不飽和炭化水素基を指すために用いる。アルキル基が１〜６個の炭素を有している場合は「低級アルキル」と称する。好適なアルキルとしては例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、２−プロペニル（又はアリル）、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル（又は２−メチルプロピル）などが挙げられる。
【００２１】
「置換アルキル」とは、低級アルキル、アリール、アシル、ハロゲン（すなわち、ハロアルキル、例えばＣＦ３）、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルシアノ、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、カルボン酸、カルボン酸誘導体、カルボン酸アミド、スルホン酸、スルホン酸誘導体、飽和及び不飽和の環状炭化水素、複素環などの１種以上の官能基を有する上記のアルキルを指す。これらの基は、芳香族複素環などに縮合した任意のものに結合し得る。これらの基はアルキル部分の任意の炭素に結合し得る。
【００２２】
本明細書において「アリール」という用語は、単一の芳香環を有する芳香族置換基、又は、互いに縮合した、共有結合により連結した、又は、メチレン若しくはエチレン部分のような共通の基に連結した複数の芳香環を有する芳香族置換基を指すために用いる。共通の連結基はベンゾフェノンにおけるようにカルボニルであってもよい。芳香族環としては特にフェニル、ナフチル、ビフェニル、ジフェニルメチル、及びベンゾフェノンが挙げられる。
【００２３】
「置換アリール」は、低級アルキル、アシル、ハロゲン、ハロアルキル（例えばＣＦ３）、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、メルカプト、カルボン酸アミド、スルホン酸アミド、並びに、芳香族環と縮合した、共有結合により連結した、又は、メチレン若しくはエチレン部分のような共通の基に連結した飽和及び不飽和の環状炭化水素などの、１種以上の官能基を有する上記のアリールを指す。連結基は、シクロヘキシルフェニルケトンにおけるようにカルボニル基であってもよい。
【００２４】
本明細書において「アリールアルキル」という用語は、本明細書で定義するアルキル基を介してアリール基が結合している「アリール」のサブセットを指すために用いる。例としては、ベンジル基、フェニルエチル基及びフェニルプロピル基が挙げられるがこれらに限らない。
【００２５】
「置換アリールアルキル」は、アリールアルキル基のアリール部分が、本明細書でアリール基について規定するように置換された「アリールアルキル」のサブセットを規定する。
【００２６】
本明細書において「ハロゲン」という用語は、フッ素原子、臭素原子、塩素原子及びヨウ素原子を指すために用いる。
【００２７】
本明細書において「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を指すために用いる。
【００２８】
本明細書において「アミノ」という用語は、基−ＮＲＲ’を指すために用いる。式中、Ｒ及びＲ’は、独立して、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、又はアシルであり得る。
【００２９】
本明細書において「アルコキシ」という用語は、−ＯＲ基を指すために用いる。式中、Ｒは低級アルキル又は置換低級アルキルであり、アルキル及び置換低級アルキルは本明細書に記載した通りである。好適なアルコキシ基としては、例えば、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００３０】
本明細書において「アリールオキシ」という用語は、−ＯＲ基を指すために用いる。式中、Ｒは上記のアリール、置換アリール、アリールアルキル又は置換アリールアルキルである。例としては、フェノキシ、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ、及びそれらの置換誘導体が挙げられる。
【００３１】
「アルキルアミノ」という用語は、アルキル基が同一であるか又は異なっていてよく、且つ、直鎖又は分岐の、飽和又は不飽和の炭化水素からなっていてよい第二級又は第三級アミンを意味する。
【００３２】
本明細書において「複素環」という用語は、単一の環又は、環内に１〜１２個の炭素原子及び窒素、硫黄又は酸素から選択される１〜４個のヘテロ原子を有する縮合多環を有する一価の基を記載するために用いる。かかる複素環としては、例えば、テトラヒドロフラン、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、チオフェン、ピリジン、イソオキサゾール、フタルイミド、ピラゾール、インドール、フラン、これらの環のベンゾ縮合類似体（ｂｅｎｚｏ−ｆｕｓｅｄ ａｎａｌｏｇｓ）などが挙げられる。
【００３３】
本明細書中で使用する「置換複素環」という用語は、複素環骨格が、低級アルキル、アシル、ハロゲン、ハロアルキル（例えばＣＦ３）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、メルカプトなどの１種以上の官能基により置換された「複素環」のサブセットを表す。
【００３４】
本明細書において「複素環アルキル」という用語は、本明細書で定義するアルキル基を介して複素環基が結合している、「複素環」のサブセットを指すために用いる。
【００３５】
「置換複素環アルキル」は、複素環アルキル基の複素環部分が、複素環基について本明細書中で規定したように置換されている「複素環アルキル」のサブセットを規定する。
【００３６】
「薬学的に許容される塩」という用語は、遊離塩基の生物学的有効性及び性質を保持している塩であって、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸）及び有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サチリル酸など）との反応により得られたものを指す。薬学的に許容される塩としては例えば、ナトリウム及びカリウムのようなアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、並びにアンモニウム塩が挙げられる。
【００３７】
本明細書において「接触させる」という用語は、以下の、「組合わせる」、「添加する」、「混合する」、「通過させる」、「インキュベートする」、「流す」などと置換可能に使用する。さらにまた、本発明のチアゾリジノン化合物は、例えば、非経口経路、経口経路、局所経路、吸入経路などの任意の通常の方法により被験体に「投与」することができる。
【００３８】
「十分量」又は「有効量」は、チアゾリジノン類似体の、対象とする結合／活性を示す量、又は排卵（ｇａｍｅｔｅ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）に改善をもたらす量である。
【００３９】
「ＩＣ５０」は、阻害濃度、すなわちＦＳＨにより得られる最大応答の５０％が阻害される化合物濃度である。
【００４０】
「非競合的」とは、本発明の化合物により発揮されるアゴニスト活性の性質を指す。ここで、該化合物は、ＦＳＨのＦＳＨ受容体への結合の大きさ（ｍａｇｎｉｔｕｄｅ）を実質的に低減させること無く、ＦＳＨ受容体のアゴニストとして作用してそれを活性化する。「結合の大きさ」とは、受容体集団が結合するＦＳＨの量、及び／又は、ＦＳＨとＦＳＨ受容体との間の結合相互作用の強度を指す。
【００４１】
本発明は、一定の範囲の医薬活性を示す新規チアゾリジノン化合物に関する。現時点で好ましい実施形態では、該新規化合物は低分子ＦＳＨ受容体アンタゴニストである。これらの化合物は当該技術分野の現状よりも数多くの利点を提供する。例えば、本発明の化合物は高価でなく、容易に調製され且つ精製される。さらに、本発明の化合物は、ＦＳＨ受容体に対して一定の範囲の活性を示す。このような、活性が異なる種々の化合物は、受精能抑制物質の慎重な選択により受精能誘発を好ましいレベルに調節するための機会を臨床医に提供する。加えて、低分子である新規チアゾリジノン類は、従来のペプチドホルモン製剤とは異なる薬物動態学的プロフィールを示す。その薬物動態学的プロフィールはさらに、投与経路を慎重に選択することと、チアゾリジノン骨格上の置換基の性質を操作することとにより調節することができる。
【００４２】
従って、第一の態様において、本発明は、式：
【化６】
2004505050.tif 000004
〔式中、
Ｒ１は、アリール基、置換アリール基、アルキル基及び置換アルキル基からなる群より選択され；
Ｒ２は、複素環基及び置換複素環基からなる群より選択され；
Ｒ３及びＲ４は、互いに独立して、水素及び式−（ＣＨ２）ｍＣＯＮＲ５Ｒ６で表される基からなる群より選択され；
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素、アルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、アリールアルキル基、置換アリールアルキル基、複素環アルキル基、及び置換複素環アルキル基からなる群より選択され；
ＸはＳ（Ｏ）ｎであり、この場合、ｎは０、１又は２であり；
ｍは０〜３の整数である］
で表される新規チアゾリジノン類を提供する。
【００４３】
本発明の他の態様は、式：
【化７】
2004505050.tif 000005
〔式中、
Ｒ１は、アリール基、置換アリール基、アルキル基及び置換アルキル基からなる群より選択され；
Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３は、互いに独立して、水素、ハロゲン、低級アルキル基、置換低級アルキル基、低級アルコキシ基、置換低級アルコキシ基、フェニル基、置換フェニル基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アルキニル基、置換アルキニル基及びニトロ基からなる群より選択され、アリールオキシ基は好ましくはフェノキシ又はベンジルオキシであり、置換アリールオキシ基は好ましくは置換フェノキシ又は置換ベンジルオキシであり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｒ２４）からなる群より選択され、この場合、 Ｒ２４は、Ｈ又は低級アルキル基であり；
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、水素、アルキル基、置換アルキル基、シクロアルキル基、置換シクロアルキル基、アリールアルキル基、置換アリールアルキル基、複素環アルキル基及び置換複素環アルキル基からなる群より選択され；
ＸはＳ（Ｏ）ｎであり、この場合、ｎは０、１又は２である］
で表される新規チアゾリジノン類を提供する。
【００４４】
特に好ましい１実施形態において、本発明は、Ｃ−５上の置換基Ｒ４がＨの場合に、Ｃ−５上の第二の置換基（Ｒ３）はＨではなく、Ｃ−５上の該置換基Ｒ３とＣ−２上の置換基Ｒ２とがシス配置されている化合物を提供する。
【００４５】
現時点で好ましい特定の実施形態では、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３は、互いに独立して、水素及び式（ＶＩＩＩ）：
【化８】
2004505050.tif 000006
〔式中、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４及びＲ４５は、互いに独立して、水素、ハロゲン、ニトロ及びトリフルオロメチルからなる群より選択される〕
で表される基からなる群から選択される。
【００４６】
チアゾリジノン環構造の２位及び５位（すなわちＣ−２及びＣ−５）にある不斉炭素のために、本発明の化合物は多数の異なる異性体形態及び立体異性体形態で存在し得る。Ｃ−２及びＣ−５の配置は、その置換基がシス配置又はトランス配置となるような配置となり得る。好ましい実施形態では、化合物はシス配置で存在する。加えて、Ｃ−２及びＣ−５がとり得る絶対配置の組合わせは、４通りの組合わせのうちのいずれか１つであり得る。つまり、チアゾリジノン骨格は２Ｓ，５Ｓ； ２Ｒ，５Ｒ； ２Ｓ，５Ｒ； 又は２Ｒ，５Ｓであり得る。現時点で好ましい実施形態は、Ｃ−２及びＣ−５における配置が２Ｓ，５Ｒの形態である。
【００４７】
本発明の化合物は、例えば、ＣＮＳ抗虚血剤、抗精神病性若しくは他の神経賦活性を有する薬物、抗微生物剤、哺乳動物の受精能調節剤などの種々の医薬用途のために使用することができる。哺乳動物の受精能調節剤として使用する場合は、チアゾリジノン類は好ましくはＦＳＨ受容体のアンタゴニストである。
【００４８】
本発明のチアゾリジノン化合物の例を以下に示す。好ましい実施形態においては、アンタゴニスト活性を有する化合物のＩＣ５０値は１１μＭ未満である。
【００４９】
【化９】
2004505050.tif 000007
2004505050.tif 000008
【００５０】
他の態様において、本発明は、受容体アンタゴニスト活性がＦＳＨと非競合的であるＦＳＨ受容体アンタゴニスト類を提供する。好ましい実施形態では、非競合的ＦＳＨアンタゴニストは、約２００ダルトン〜約１０００ダルトンの分子量を有する有機分子である。他の好ましい実施形態において、本発明はＦＳＨと非競合的であるＦＳＨ受容体アンタゴニストを含む医薬製剤を提供する。この態様において、本発明は、本発明のチアゾリジノン類について本明細書中で記載した種々の用途に有用な哺乳動物の受精能の調節剤を提供する。
【００５１】
Ｂ．医薬組成物及び用途
他の実施形態において、本発明は、本発明の化合物のうち１種以上を、製薬上許容される賦形剤、担体、希釈剤等と一緒に含む医薬組成物を提供する。このような医薬組成物は、それ自体が薬理学的に活性である他の物質、及び該医薬組成物の薬理学的作用を強化する、補う、低下させる、若しくは調節する働きをする他の物質も含み得る。
【００５２】
本発明の化合物（すなわちチアゾリジノン類）は、単独で、薬学的に許容される塩として、又は医薬組成物として（この場合、該化合物は治療上有効な量で好適な担体又は賦形剤と混合される）、哺乳動物（例えばヒト被験体）に投与することができる。さらに本発明の化合物及び組成物は、月経を誘導する為、子宮内膜症を治療する為、月経困難症を治療する為、内分泌ホルモン依存性腫瘍を治療する為、子宮筋腫を治療する為、子宮内膜の増殖を抑制する為、分娩を誘導する為、ホルモン療法の為、及び男性と女性双方における避妊の為に投与することができる。
【００５３】
より具体的には、本発明の化合物は、月経周期におけるホルモン異常のコントロールの為、子宮内膜症及び月経困難症のコントロールの為、及び月経を誘導する為に特に有用である。更に、本発明の化合物は、閉経後の女性又は卵巣のホルモン産生が異常である女性に、単独又はエストロゲン性の物質と組み合わせて、ホルモン療法を提供する方法として使用することができる。
【００５４】
更に、本発明の化合物は、生殖周期全体における受精能の調節に使用することができる。長期にわたる避妊の為には、本発明の化合物は、用量に応じて、連続的又は周期的のいずれかにより投与することができる。更に、本発明の化合物は、性交後避妊薬として、インプラントに馴染まない子宮を慣れさせる為、及び「一ヶ月１回タイプの」避妊薬として有用である。
【００５５】
本発明の化合物の更なる重要な用途は、ホルモン依存性の癌の成長を遅くさせることができることである。ホルモン依存性の癌としては、腎臓、胸部、子宮内膜、卵巣の癌ならびにプロゲステロン受容体を有することを特徴とする前立腺癌が挙げられ、本発明の生成物に反応することが予想され得る。本発明の化合物の他の用途としては、胸部及び子宮の繊維嚢胞性疾患の治療が挙げられる。
【００５６】
セルトーリ細胞（すなわち卵巣の顆粒膜細胞に相当する雄細胞）に対して示されたゴナドトロピンの有効性からの類推によって、本発明の化合物及び組成物は、女性だけでなく男性の避妊にも使用することができる（例えばＲｅｉｃｈｅｒｔら， ”Ｔｈｅ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ （ＦＳＨ） ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｅｓｔｉｓ： ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＦＳＨ， ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ， ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，” Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ． ４０：１３−２６（１９８９）を参照されたい。その開示内容は参照により本明細書に組み入れるものとする）。
【００５７】
本発明の化合物は、治療目的で投与される種々の製剤中に組み込むことができる。より詳細には、本発明の化合物は、適当な製薬上許容される担体又は希釈剤と組み合わせて医薬組成物として製剤化することができ、固体状、半固体状、液体状又は気体状の調製物（例えば錠剤、カプセル、丸剤、粉末剤、顆粒剤、糖剤、ゲル、スラリー、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤及びエアロゾル等）として製剤化することができる。このようなものとして、化合物の投与は、経口、口腔内、直腸、非経口、腹腔内、皮内、経皮又は気管内（ｉｎｔｒａｃｈｅａｌ）投与等を含む様々な方法で行うことができる。さらに該化合物は、例えば、しばしばデポー剤若しくは持続放出製剤として化合物を卵巣の中に直接注入することにより、全身投与ではなく局所投与することができる。さらに該化合物は、ターゲッティングされた薬物送達系（例えば器官表面受容体特異的抗体でコーティングされたリポソーム等）の中に入れて投与することができる。このようなリポソームは、器官に向けてターゲッティングされ、該器官によって選択的に取り込まれる。
【００５８】
医薬剤形として、該化合物は、その薬学的に許容される塩の形態で投与することができる。あるいはこれらの化合物は、単独で、又は他の医薬有効成分と適当に会合させたり組み合わせたりして用いることもできる。簡潔にするために、以下の説明は避妊薬（ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）としての本発明の化合物の使用に基づいて行われる。新規チアゾリジノン類を含む医薬組成物は他の用途において有用であり、その用途は避妊薬としての使用に限られないことは、当業者には自明であろう。これらの更なる用途において、以下に記載する目的と同様の目的を果たす（即ちチアゾリジノンの治療的活性を強化する又は補う）補助剤も、製剤の中に含まれ得る。
【００５９】
本発明のチアゾリジノン類似体は、単独で、又は互いに組み合わせて投与することができる。あるいは、これらは他の公知化合物（例えば避妊薬）と組み合わせて用いることができる。本発明で使用するのに適した多くの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ， 第１７編（１９８５））に記載されており、当該文献は参照により本明細書に組み入れるものとする。さらに、薬物送達法の簡単な概要については、Ｌａｎｇｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９： １５２７−１５３３ （１９９０）（参照により本明細書に組み入れるものとする）を参照されたい。本明細書中に記載される医薬組成物は、当業者に公知である方法で（すなわち従来の混合法、溶解法、顆粒化法、糖剤作製法、研和法、乳化法、カプセル化法、エントラップ法（ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ）又は凍結乾燥法によって）製造することができる。以下の方法及び賦形剤は単に例示的なものであって限定的なものではない。
【００６０】
注射する場合、該化合物は、植物油若しくは他の同様の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル又はプロピレングリコール等の水性若しくは非水性溶媒の中に溶解、懸濁又は乳化させ、及び望ましい場合は、可溶化剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤及び保存剤剤等の従来添加物を加えることによって、調製剤として製剤化することができる。好ましくは、本発明の化合物は、水溶液（好ましくはハンクス溶液、リンガー溶液、又は生理食塩水などの生理適合緩衝液（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｂｕｆｆｅｒ）中の溶液）として製剤化することができる。経粘膜投与の場合、浸透させようとするバリアに適した浸透剤が製剤中で使用される。このような浸透剤は当分野において一般に公知である。
【００６１】
経口投与する場合、該化合物は、当分野で周知である製薬上許容される担体と組み合わせて容易に製剤化することができる。このような担体は、治療対象である被験体に経口摂取させるために、錠剤、丸剤、糖剤、カプセル、乳剤、親油性及び親水性の懸濁液、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として該化合物を製剤化させ易くする。経口使用用の医薬調製物は、該化合物を固体賦形剤と混合し、場合によりこの得られた混合物を粉砕し、望ましければ好適な補助剤を加えた後にこの粒状混合物を処理して錠剤又は糖剤のコア（ｃｏｒｅ）を得ることにより、得ることができる。好適な賦形剤としては、特に以下のものが挙げられる：乳糖、ショ糖、マンニトール又はソルビトールを含む糖等の充填剤；例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等のセルロース調製物。望ましい場合、架橋型ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩（アルギン酸ナトリウム等）等の崩壊剤を加えてもよい。
【００６２】
糖剤のコアには、好適なコーティングが施される。そのために、任意でアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタンを含み得る濃縮糖溶液、ラッカー溶液、及び好適な有機溶媒若しくは溶媒混合物等を用いることができる。有効成分の用量の様々な組合せを特徴付けるため又は識別するために、錠剤又は糖剤のコーティングに染料又は顔料を加えてもよい。
【００６３】
経口用に使用することができる医薬調製物としては、ゼラチン製のプッシュ−フィット式カプセル（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ ｃａｐｓｕｌｅ）、並びにゼラチン及び可塑剤（グリセロールやソルビトール等）でできた軟質密閉カプセルが挙げられる。プッシュ−フィットカプセルは、乳糖等の充填剤、デンプン等の結合剤、及び／又はタルクやステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、並びに場合により安定化剤と、有効成分との混合物を含み得る。軟質カプセルの中では、有効成分は、好適な液体（例えば脂肪油、パラフィン油、又は液体ポリエチレングリコール等）中に溶解又は懸濁されていてもよい。さらに、安定化剤を加えてもよい。経口投与用の全ての製剤は、このような投与に適した用量でなければならない。
【００６４】
口腔内投与の場合、該組成物は、従来法で製剤化された錠剤又は口内錠の形態であってもよい。
【００６５】
吸入による投与の場合、本発明に従って使用される化合物は、好適な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の好適な気体）を用いて圧縮パック又はネブライザーから、又は噴射剤を含まない乾燥粉末吸入器から、エアロゾルスプレーとして便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するためのバルブを設けることにより決定することができる。吸入器又は注入器で使用するための例えばゼラチン製のカプセル及びカートリッジは、該化合物と（乳糖やデンプン等の）好適な粉末基剤との混合粉末を含んで製剤化することができる。
【００６６】
該化合物は、例えばボーラス注射や連続注液等の注入による非経口投与用に製剤化することができる。注入用製剤は、単位投与形態として、例えば保存剤を加えたアンプル中又は複数回分の用量が入る容器中に入れて、提供され得る。該組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョン等の形態であってもよく、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤等の配合剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含んでもよい。
【００６７】
非経口投与用の医薬製剤としては、水溶性の有効成分を含む水溶液が挙げられる。さらに、適当な油性注射用懸濁液として、有効成分の懸濁液を調製することができる。好適な親油性の溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油等の脂肪油、オレイン酸エチルやトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル、又はリポソームが挙げられる。水性注射用懸濁液は、その懸濁液の粘性を高める物質（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン等）を含み得る。場合により、懸濁液は、好適な安定化剤、又は高濃縮溶液が調製できるように化合物の溶解度を高める物質も含み得る。あるいは、有効成分は、使用前に好適なビヒクル（例えば発熱物質を含まない滅菌水）を用いて構成するための粉末形態であってもよい。
【００６８】
化合物は、例えばカカオバター、カーボワックス、ポリエチレングリコール又は他のグリセリド等の従来の坐剤基剤（これらは全て体温で溶けるが室温では凝固する）を含む、坐剤や貯留浣腸等の直腸用組成物として製剤化してもよい。
【００６９】
上記に記載した製剤に加え、化合物はデポー調製物として製剤化してもよい。このような徐放性製剤は、体内移植（例えば皮下又は筋肉内）により、又は筋肉内注射により、投与することができる。このように、例えば化合物は、好適なポリマー材料又は疎水性材料と一緒に（例えば許容可能な油の中のエマルジョンとして）製剤化してもよいし、イオン交換樹脂と一緒に、又は例えば難溶性塩等の難溶性誘導体として、製剤化することができる。
【００７０】
あるいは、疎水性医薬化合物用の他の送達系を用いることができる。リポソーム及びエマルジョンは、疎水性薬物の送達用ビヒクル又は担体の周知例である。ジメチルスルホキシド等のある種の有機溶媒を用いることもできるが、通常は、毒性が高いという難点がある。さらに、化合物は、治療薬を含む固体疎水性ポリマー製半透性マトリックス等の持続放出系を用いて送達することができる。様々なタイプの持続放出性材料が確立されており、当業者の間では周知である。持続放出性カプセルは、その化学的性質によって数週間から１００日を越える期間、化合物を放出する。
【００７１】
また該医薬組成物は、好適な固相若しくはゲル相の担体又は賦形剤も含み得る。このような担体又は賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコール等のポリマーが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７２】
本発明で使用するのに適した医薬組成物としては、治療上有効量の有効成分を含む組成物が挙げられる。もちろん、投与される組成物の量は、治療対象となる被験体、被験体の体重、病気の重症度、投与方法、及び処方する医師の判断によって異なる。有効量の決定は、特に本明細書中に記載された詳細な開示内容を照らし合わせれば、十分に当業者の能力の範囲内で行うことができる。
【００７３】
本発明の方法で使用される任意の化合物について、治療上有効な用量は、まず細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、細胞培養中で決定されたＥＣ５０を含む循環濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて用量を処方することができる。このような情報を用いて、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。初回用量も、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏデータから推測することができる。
【００７４】
初回用量は、本明細書中に記載される化合物の細胞培養アッセイにおける有効性を、公知薬物の有効性と比較することによって処方することもできる。例えば、避妊薬として使用する場合、初回用量は、本明細書に記載される化合物の細胞培養アッセイにおける有効性を、公知の避妊薬の有効性と比較することによって処方することができる。この方法において、初回用量は、本発明の化合物及び公知の避妊薬について細胞培養アッセイで得られた有効濃度の比に、公知の避妊薬の有効用量を乗じることによって得ることができる。例えば、本発明の化合物が細胞培養アッセイにおいて公知避妊薬の２倍の効力を有する場合（即ちその化合物のＩＣ５０が同じアッセイにおいて公知避妊薬のＩＣ５０の半分に等しい場合）、本発明の化合物の初回有効投薬量は、公知避妊薬の公知投薬量の半分である。これらの初期段階のガイドライン（ｉｎｉｔｉａｌ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ）を用いて、当業者は、ヒト又は他の哺乳動物における有効投薬量を決定することができるであろう。
【００７５】
さらに、本明細書に記載される化合物の毒性及び治療的効力は、標準的な製薬学的手法によって、細胞培養又は実験動物において、例えばＬＤ５０（テストした被験体の５０％を死に至らしめるのに必要な用量）及びＥＤ５０（テストした被験体の５０％において特定の効果をあげる用量）を測定することによって、決定することができる。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との比で表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物実験から得たデータを、ヒトでの使用に適した投薬量範囲を処方するのに用いることができる。このような化合物の投薬量は、好ましくは毒性を殆ど若しくは全く示さないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投薬量は、使用する剤形及び用いられる投与経路に応じて、この範囲内で変更し得る。正確な配合、投与経路、及び投薬量は、被験体の状態を見て個々の医師が選択することができる。例えばＦｉｎｇｌら， Ｉｎ： Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｃｈ． １， ｐ．１ （１９７５）を参照されたい。
【００７６】
投薬量及び間隔は、治療効果を持続させるのに十分な有効成分の血漿レベルを提供するために、個人別に調節することができる。経口投与の場合、通常の被験体の投薬量は、約５０〜２，０００ｍｇ／ｋｇ／日、一般的には約１００〜１，０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１５０〜７００ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは約２５０〜５００ｍｇ／ｋｇ／日である。好ましくは、治療上有効な血清レベルは、各日毎に複数回投与することにより達成される。局所投与又は選択的摂取の場合、薬物の有効な局所濃度は血漿濃度とは関係がない場合がある。当業者であれば、過度の実験を行うことなく、治療上有効な局所投薬量を最適化することができるであろう。
【００７７】
女性において避妊薬として用いる場合、当技術分野で一般的に認められている多数のパラメータ（例えば卵胞の数、卵母細胞の数、移植することができる胚の数、妊娠回数、投与された総用量、及び治療期間の長さを含む）のうち任意のものを用いて、本発明の組成物の有効性を評価することができる。避妊薬の安全性を評価するために、同様に一般的に認められている判断基準を利用することができる。男性において避妊薬として使用する場合、精子の数及び精子運動能等の減少が、有効性を示す証拠となる。避妊薬として又は他の目的のために用いられる場合、チアゾリジノン含有医薬組成物の効力を評価するための更なる判断基準及び方法は、当業者には自明である。
【００７８】
チアゾリジノン類は、ジアステレオマーの混合物、鏡像異性体の混合物、又は立体化学的に異なる化合物として医薬製剤の中に導入することができる。異性の原因は、チアゾリジノンの環構造の２位及び５位にある炭素のキラリティーである（化学式Ｉ）。例えば、１つの好適な実施形態において、医薬組成物のチアゾリジノン成分は、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体の混合物である。他の好適な実施形態において、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体の混合物は、ｔｒａｎｓ異性体に比べてｃｉｓ異性体を豊富に含む。さらに好適な実施形態において、チアゾリジノンは、実質的に純粋なｃｉｓ異性体として存在する。
【００７９】
環構造の２位及び５位にある炭素原子の立体化学は、チアゾリジノン成分のさらに他の可変特徴である。好適な実施形態において、チアゾリジノン成分は、２Ｓ／５Ｒ及び５Ｓ／２Ｒ異性体の混合物である。より好適な実施形態において、チアゾリジノン成分は２Ｓ／５Ｒ異性体を豊富に含む。さらに他の好適な実施形態において、チアゾリジノン成分は、実質的に純粋な２Ｓ／５Ｒである。
【００８０】
上記に加え、本発明の化合物はｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＦＳＨの生物学的役割を理解するためのユニークなツールとして有用である。またこれには、ＦＳＨの生成及びＦＳＨとＦＳＨ−Ｒとの相互作用（例えばＦＳＨのシグナル伝達／受容体の活性化のメカニズム）と影響し合うと思われる、又は影響し合う多くの要因の評価が含まれる。また本発明の化合物は、ＦＳＨ−Ｒと相互作用する他の化合物の開発においても有用であり、なぜならば、その開発を容易にする重要な構造活性相関（ＳＡＲ）情報を提供するからである。
【００８１】
ＦＳＨ受容体に結合する本発明の化合物は、生細胞上、固定細胞上、生体液中、組織ホモジネート中、精製された天然の生体材料中等のＦＳＨ受容体を検出するための試薬として使用することができる。例えば、このような化合物を標識することにより、その表面上にＦＳＨ−Ｒを有する細胞を同定することができる。さらに、ＦＳＨ受容体に結合する能力に基づいて、本発明の化合物は、ｉｎ ｓｉｔｕ染色、ＦＡＣＳ（蛍光表示式細胞分取）、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ（固相酵素免疫検定法）等において使用することができる。さらに、ＦＳＨ受容体に結合する能力に基づいて、本発明の化合物は、受容体の精製、又は細胞表面上（又は透過性細胞の内側）にＦＳＨ受容体を発現する細胞の精製において用いることができる。
【００８２】
本発明の化合物は、種々の医学研究及び診断用途で用いるための市販用研究試薬として利用することができる。このような用途としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：（１）種々の機能アッセイにおいて候補ＦＳＨアンタゴニストの活性を定量するための較正標準としての使用；（２）無作為化合物スクリーニング（すなわちＦＳＨ受容体リガンドの新しいファミリーの探索）における遮断試薬としての使用（該化合物は特許請求の範囲に記載されたＦＳＨ化合物の回収を遮断するために使用することができる）；（３）ＦＳＨ受容体と一緒に結晶化させるための使用（すなわち本発明の化合物はＦＳＨ受容体に結合した該化合物の結晶を形成させ、Ｘ線結晶学による受容体／化合物構造の決定を可能にする）；（４）好ましくはＦＳＨ受容体が活性化される又はこのような活性化が既知の量のＦＳＨアンタゴニストに対して便宜的に較正される他の研究及び診断等での使用；（５）細胞表面上のＦＳＨ受容体の発現を測定するためのプローブとしてのアッセイにおける使用；並びに（６）ＦＳＨ受容体結合性リガンドとして同じ部位に結合する化合物を検出するためのアッセイの開発。
【００８３】
以下に挙げる具体的な実施例を使って本発明をさらに詳細に説明する。以下の実施例は例示目的で提供されるのであって、本発明を限定しようとするものではない。当業者であれば、実質的に同じ結果が得られるように変更又は修飾することができる、あまり重要ではない種々のパラメータを簡単に認識できるであろう。
【００８４】
【実施例】
以下の実施例は説明のためのものであって、本発明を限定するものではない。
【００８５】
実施例１
本実施例は光学上純粋なメルカプトコハク酸の製造およびこの前駆体からの光学上純粋なチアゾリジノンの合成を詳細に示す。
【００８６】
１．１　光学上純粋なメルカプトコハク酸の合成
ａ．　（Ｒ）−ブロモコハク酸の製造
５００ｍＬ丸底フラスコにＤ−アスパラギン酸（（Ｒ）−アスパラギン酸， ２５ｇ， １８８ｍｍｏｌ）および２４５ｍＬの５Ｎ ＨＢｒを加えた。反応物を氷浴で０〜５℃まで冷却した後、７５ｍＬの水中亜硝酸ナトリウム（２０．７ｇ， ３０１ｍｍｏｌ）を５時間にわたって滴下した。添加中、温度は５℃より低く維持した。添加が完了した後、反応物を ２３〜２５℃で１２時間攪拌した。反応物をジエチルエーテル（１２０ｍＬ）で希釈した。水層を除き、有機相を １Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄した。合した水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄した。合した有機抽出液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮して若干黄色がかった固体として生成物を得た。この固体をＥｔＯＡｃ（約１００ｍＬ）およびヘキサン（約１０ｍＬ）で再結晶させ、白色結晶固体として生成物を得た（１６．５８ｇ， ８４ｍｍｏｌ， ４５％）。
【００８７】
ｂ．　（Ｓ）−ブロモコハク酸の製造
５００ｍＬ丸底フラスコにＬ−アスパラギン酸（（Ｓ）−アスパラギン酸， ２５ ｇ， １８８ ｍｍｏｌ）および２４５ｍＬの５Ｎ ＨＢｒを加えた。反応物を氷浴で０〜５０℃まで冷却した後、７５ｍＬの水中亜硝酸ナトリウム（２０．７ｇ， ３０１ｍｍｏｌ）を５時間にわたって滴下した。添加中、温度は５０℃より低く維持した。添加が完了した後、反応物を ２３〜２５℃で１２時間攪拌した。反応物をジエチルエーテル（１２０ｍＬ）で希釈した。水層を除き、有機相を １Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄した。合した水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄した。合した有機抽出液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮して若干黄色がかった固体として生成物を得た。この固体をＥｔＯＡｃ（約１００ｍＬ）およびヘキサン（約１０ｍＬ）で再結晶させ、白色結晶固体として生成物を得た（１９．０３ｇ， ９７ｍｍｏｌ， ５１％）。
【００８８】
ｃ． （Ｓ）−メルカプトコハク酸の製造
６０℃の油浴にて、トルエン（５０ｍＬ）中のチオリン酸ナトリウム十二水和物（６ｇ， １５ｍｍｏｌ）懸濁液に（Ｒ）−ブロモコハク酸（０．５ｇ， ２．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を６０℃で３．５時間攪拌した（反応温度が６０℃に達したとき、チオリン酸ナトリウムが融解して二相反応媒質を形成する）。次にトルエンを減圧下で除去し、得られた白色の固体を水（２５ｍＬ）および１Ｎ塩酸（３０ｍＬ）、ｐＨ１〜１．５で希釈した。反応物を２３〜２５℃で１〜２時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。得られた白色の固体を水（３．０ｍＬ）に溶解し、０．２μｍナイロンフィルターで濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（１回のインジェクションあたり３．０ｍＬ、Ｗａｔｅｒｓ ＰｒｅｐＰａｋ ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ Ｃ１８コンプレッションカラム， １５μｍ ２５ｘ１００ｍｍ， ９５／５水／アセトニトリル， １２．０ｍＬ／分）により精製した。生成物を回収して凍結乾燥し、白色の固体として生成物を得た（２７６ｍｇ， １８．４ｍｍｏｌ， ７２．５％）。
【００８９】
ｄ．　（Ｒ）−メルカプトコハク酸の製造
６０℃の油浴にて、トルエン（５０ｍＬ）中のチオリン酸ナトリウム十二水和物（６ｇ， １５ｍｍｏｌ）懸濁液に（Ｓ）−ブロモコハク酸（０．５ｇ， ２．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を６０℃で３．５時間攪拌した（反応温度が６０℃に達したとき、チオリン酸ナトリウムが融解して二相反応媒質を形成する）。次にトルエンを減圧下で除去し、得られた白色の固体を水（２５ｍＬ）および１Ｎ塩酸（３０ｍＬ）、ｐＨ１〜１．５で希釈した。反応物を２３〜２５℃で１〜２時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合した有機抽出液をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。得られた白色の固体を水（３．０ｍＬ）に溶解し、 ０．２μｍナイロンフィルターで濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（１回のインジェクションあたり３．０ｍＬ、Ｗａｔｅｒｓ ＰｒｅｐＰａｋ ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ Ｃ１８コンプレッションカラム， １５μｍ ２５ｘ１００ｍｍ， ９５／５水／アセトニトリル， １２．０ｍＬ／分）により精製した。生成物を回収して凍結乾燥し、白色の固体として生成物を得た（２８０ｍｇ， １８．７ｍｍｏｌ， ７３．５％）。
【００９０】
ｅ．　鏡像異性体過剰率（ＥＥ）の決定
アセトン（２．０ｍＬ）中のＮα−（２，４−ジニトロフルオロフェニル）−Ｌ−バリンアミド（２．０ｍｌ）の１重量％溶液にメルカプトコハク酸（２．０ｍｇ）および０．５Ｍ ＮａＨＣＯ３（１．０ｍｌ）を加えた。この反応混合物を５７℃で４５分間加熱した。混合物を取り出し、０．５Ｎ ＮａＨＣＯ３（５．０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。水相を１Ｎ ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。次にこの付加物をＨＰＬＣで分析した。
【００９１】
１．２　光学上純粋なチアゾリノンの合成
１００ｍＬペプチド容器に２．０ｇのＡｒｇｏｇｅｌ−Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ−ＦＭＯＣ（０．３３ｍｍｏｌ／ｇ添加）を加えた。この樹脂をジクロロメタン（５０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）で洗浄した。次にこの樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中２０％ピペリジンで３０分間脱保護した。その後この樹脂をジクロロメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで十分に洗浄した。３−アミノ安息香酸（Ｎ−Ｆｍｏｃ保護， １．０ｇ， ２．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）中ＨＡＴＵ （１．１６ｇ， ３．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．５３ｍＬ， ６．０ｍｍｏｌ）とともに樹脂に１６時間結合させた。その後この樹脂をジクロロメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで十分に洗浄した。次にこの樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中２０％ピペリジンで３０分間脱保護した。その後この樹脂をジクロロメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで十分に洗浄した。
【００９２】
この樹脂を２等分し、各部分を１０当量の４−ベンジルオキシベンズアルデヒドおよび２０当量のＲ（７０％ＥＥ）またはＳ（７５％ＥＥ）いずれかのメルカプトコハク酸で処理した。アセトニトリル（５ｍＬ）を加え、反応物を室温で ４８時間、次いで５５℃で４８時間置いた。容器を冷却し、それらの内容物をＴＨＦとともにペプチド容器に移し、熱したＴＨＦで洗浄した。その後この樹脂をジクロロメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで十分に洗浄した。
【００９３】
各部分をさらにＤＣＭ中２０当量の３，４−ジメトキシフェネチルアミン、２０当量のＤＩＥＡおよび２０当量のジエチルシアノホスフェートと３時間反応させた。この樹脂をＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭで順次十分に洗浄した。生成物を９５％ＴＦＡ／ＤＣＭで１時間切断し、排水し、ＤＣＭ（２ ｘ ２ｍＬ）で洗浄した。減圧下で溶媒を除去すると黄色固体が得られ、これを分取ＨＰＬＣで精製した。Ｒ−メルカプトコハク酸はシス異性体として得られた（１８ｍｇ， ２Ｓ，５Ｒ：２Ｓ，５Ｓの９６：４混合物として）。Ｓ−メルカプトコハク酸はシス異性体（４ｍｇ， ２Ｒ，５Ｓ：２Ｓ，５Ｒの５５：４５混合物として）およびトランス異性体（２０ｍｇ， ２Ｓ，５Ｓ：２Ｒ，５Ｒの５５：４５混合物として）として得られた。鏡像異性体の純度は、流速０．７ｍｌ／分で溶離剤として６５％ＴＨＦ／３５％ヘキサンを用いるＰｉｒｋｌｅ Ｌｅｕｃｉｎｅカラムで測定した。
【００９４】
実施例２
本実施例は本発明のチオフェン化合物の合成を詳細に示す。
【００９５】
２５０ｍＬ ＲＢＦに３−アミノベンズアミド（１．６ｇ， １１．８ｍｍｏｌ）、５−（フェネチニル）チオフェン−２−カルボキシアルデヒド（２．５ｇ， １１．８ｍｍｏｌ）、メルカプトコハク酸（５．３ｇ， ３５．４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２００ｍＬ）を加えた。反応物を還流下で３日間加熱した。白色の固体が生じた。固体を濾過により回収し、アセトニトリルで洗浄した。この固体はトランス異性体（４．０ｇ， ８．６ｍｍｏｌ， ７３％）であることが分かった。濾液は廃棄した。このトランス異性体を２００ｍＬのＴＨＦおよび１０当量のＤＢＵとともに５００ｍＬ ＲＢＦに移した。反応物を還流下で加熱した後、２０ｍＬのメタノールを加えた。反応物を２４時間還流し、冷却し、減圧下で溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（２ ｘ ３００ｍＬ）で洗浄した。有機層を濾過してトランス異性体を取り出した後、減圧下で濃縮した。残った物質をアセトニトリルとともに粉砕し、濾過し、この工程を繰り返してシス：トランス比９５：５の物質を得た。次にこの物質をアセトニトリルで再結晶させ、シス異性体を得た（＞９７：３）。
【００９６】
２ｍＬバイアルにカルボン酸（２５ｍｇ， ０．０５４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のトリプタミン（２５ｍｇ）、ＤＥＣＰ（３０μＬ）、およびＤＩＥＡ（５０μＬ）を加えた。反応物を室温で２４時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析では、反応が完了したことが示された。この物質を分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８ カラム， ４０分間にわたって５〜９５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ， ３０ｍＬ／分）により精製し、白色の固体としてシス鏡像異性体を得た（ＡＦ２１６３９， ２８．０ｍｇ， ０．０４６ｍｍｏｌ， ８６％）。ＨＰＬＣ， ＭＳで生成物を確認した。
【００９７】
実施例３
本実施例は本発明のヨードベンジル誘導体の製造方法を示す。
【００９８】
５００ｍＬ ＲＢＦにスルファニルアミド（３．７１ｇ， ２１．６ｍｍｏｌ）、４−ヨードベンズアルデヒド（５ｇ， ２１．６ｍｍｏｌ）、メルカプトコハク酸（１０ｇ， ６４．８ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（３００ｍＬ）を加えた。反応物を還流下で３日間加熱した。反応物を冷却し、減圧下で濃縮すると黄色固体が得られた。この固体をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（２ ｘ ２５０ｍＬ）、水（３ ｘ ２５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム溶液（１ ｘ １００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮すると黄色固体が得られた。この固体をクロロホルム（３００ｍＬ）中で還流し、濾過し、乾燥させ、シス：トランス比１：８の鏡像異性体として生成物を得た（１０．５ｇ， ２０．２ ｍｍｏｌ， ９３％）。ＨＰＬＣ、ＭＳ、１Ｈ ＮＭＲ、および１３Ｃ ＮＭＲの全てで生成物を確認した。
【００９９】
５００ｍＬ ＲＢＦに、この主成分としてのトランス酸（５．２ｇ， １０ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）、ＤＢＵ（１５ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を加えた。反応物を還流下で４８時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、減圧下で溶媒を除去すると黄色のシロップが得られた。このシロップをＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（３ ｘ ２５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮すると黄色固体が得られた。この固体をクロロホルム（３００ｍＬ）中で還流し、濾過し、乾燥させ、シス：トランス比２：３の鏡像異性体として生成物を得た（２．２５ｇ， ４．３ｍｍｏｌ， ４３％）。ＨＰＬＣ、ＭＳ、１Ｈ ＮＭＲ、および１３Ｃ ＮＭＲの全てで生成物を確認した。
【０１００】
実施例４
本実施例は実施例３の化合物のヨウ素とアセチレンとの交換を示す。
【０１０１】
１００ｍＬの三つ口ＲＢＦに主成分としてのトランス酸（５．２ｇ， １０ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（７５ｍＬ）、ＤＩＥＡ（５１ｍｍｏｌ）、およびトリメチルシリルアセチレン（５１ ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を真空および窒素の交互適用によって脱酸素した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｏ）（１．１５６ｇ， １ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（７６０ｍｇ， ４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を再び脱酸素した。反応物を窒素下、室温で２０時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（３ ｘ ２５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮すると橙色のシロップが得られた。このシロップをＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）とともに粉砕すると、生成物（３．４ｇ， ７．０ｍｍｏｌ， ７０％）が灰白色の固体として沈殿した。ＨＰＬＣ、ＭＳ、１Ｈ ＮＭＲ、および１３Ｃ ＮＭＲの全てで生成物を確認した。
【０１０２】
カルボン酸（３．４ｇ， ７ｍｍｏｌ）の入った２００ｍＬ ＲＢＦにメタノール（１００ｍＬ）および炭酸カリウム（１０ｇ， ７０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で ４時間攪拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（３ ｘ ５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮すると黄色のシロップが得られた。このシロップをＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（２ｍＬインジェクション， Ｃ１８カラム， ５０％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ， ３０ｍＬ／分）で精製し、シス：トランス異性体の１：２混合物として生成物を得た（２．４ｇ， ５．８ｍｍｏｌ， ８２％）。ＨＰＬＣ、ＭＳの双方で生成物を確認した。
【０１０３】
実施例５
本実施例はピリジンと実施例４の化合物のアセチリン部分とのカップリングを示す。
【０１０４】
８ｍＬバイアルにカルボン酸（２５０ｍｇ， ０．６ｍｍｏｌ）、３−ヨードピリジン（２００ｍｇ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（４５ｍｇ， ０．０６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（４９ｍｇ， ０．２６ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（４ｍＬ）およびＤＩＥＡ（０．４４ｍＬ）を加えた。反応物を室温で２４時間攪拌した。この反応混合物を０．２ミクロンのＰＴＦＥフィルターで濾過し、分取ＨＰＬＣ（２ｍＬインジェクション， Ｃ１８カラム， ６０分間にわたって５〜９５％ＡｃＣＮ／Ｈ２０， ３０ｍＬ／分）で精製し、白色の固体として生成物を得た（２２５ｍｇ， ０．４６ｍｍｏｌ， ７６％）。ＨＰＬＣ、ＭＳ、１Ｈ ＮＭＲ、および１３Ｃ ＮＭＲの全てで生成物を確認した。
【０１０５】
実施例６
本実施例は実施例５の化合物のカルボン酸部分のアミンによる誘導体化を示す。
【０１０６】
２０ｍＬバイアルにカルボン酸（２２５ｍｇ， ０．４６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の３− エトキシ−４−メトキシフェネチルアミン（１０２μＬ， ０．５５ｍｍｏｌ）、ＤＥＣＰ（９０μＬ， ０．５５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（２４０μＬ， ０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２４時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析では、反応が完了したことが示された。この物質を分取ＨＰＬＣ（２．２５ｍＬインジェクション， Ｃ１８カラム， 無勾配３５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ， ３０ｍＬ／分）で精製し、若干黄色がかった粉末としてシス鏡像異性体を得た（ＡＰ２０６４５， ６１．９ｍｇ， ０．０９２ｍｍｏｌ， ２０％）。ＨＰＬＣ、ＭＳで生成物を確認した。
【０１０７】
実施例７
本実施例は本発明のチアゾリジノン化合物の環の硫黄の酸化を示す。
【０１０８】
４ｍＬバイアルにカルボン酸（２５ｍｇ， ０．０３８ｍｍｏｌ）、ＮＭＰ（１ｍＬ）、およびメタ−クロロ過安息香酸（４６ｍｇ）を加えた。反応物を６０℃で２４時間加熱した。この物質を分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム， ４０分間にわたって５％〜９５％ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏ， ３０ｍＬ／分）で精製し、白色粉末としてシス：トランス鏡像異性体１：１混合物を得た（ＡＦ１９４７０， １２．２ｍｇ， ０．０１７８ｍｍｏｌ， ４７％）。ＨＰＬＣ、ＭＳで生成物を確認した。
【０１０９】
実施例８
本実施例はチアゾリジノンライブラリー化合物のＦＳＨアゴニスト活性をアッセイするのに用いるプロトコールを詳細に示す。
【０１１０】
ＣＨＯ ＦＳＨ−Ｒ ６ＣＲＥ−ルシフェラーゼ細胞を、フェノールレッド不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２で洗浄し、フェノールレッド不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２ １ｍｌ当たり２ ｘ １０６細胞に再懸濁し、９６ウェルプレートのウェルに分注した（５０μｌ／ウェル）。化合物を、フェノールレッド不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２で、最終濃度が所望のアッセイ濃度の４倍となるように希釈し、細胞を含んだウェルに分注した（２５μｌ／ウェル）。３７℃で３０分間インキュベートした後、ＦＳＨ（フェノールレッド不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２中１２０ｐＭ）を２５μｌ加えて、最終アッセイ濃度を３０ｐＭ ＦＳＨとした。プレートを３７℃で４〜６時間インキュベートした。等量のＬｕｃＬｉｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、これらのプレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）で計測した。
【０１１１】
実施例１５
本実施例は本発明のチアゾリノン化合物がＦＳＨ受容体に対する結合についてＦＳＨと競合するかどうかを試験するのに用いる方法を示す。
【０１１２】
ａ．　ＣＨＯ細胞の表面で発現したヒトＦＳＨ受容体に対する１２５Ｉ ＦＳＨの結合を阻害する化合物の試験
ヒトＦＳＨ受容体遺伝子をα−Ｔ８−１２ＣＡ５−ＫＨ発現ベクター（Ｋｏｌｌｅｒら， ”Ａ ｇｅｎｅｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，” Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２５０：５１−６０ （１９９７）、なおこれは参照により本明細書に組み入れる）にクローニングし、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。Ｇ４１８により選択した後、細胞をＦＩＴＣ標識１２ＣＡ５抗体で染色し、ＦＳＨ 受容体を発現する細胞をＦＡＣＳにより回収した。個々のクローンを増殖し、１２５Ｉ標識ＦＳＨの結合に関して調べた。ＣＨＯ ＦＳＨ−Ｒクローン１Ｈ６を１５リットルのスピナー中で増殖し、Ｋｏｌｌｅｒら， Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２５０：５１−６０ （１９９７）に記載のようにして膜を調製した。
【０１１３】
以下のように、個々の化合物がこれらの膜に対する１２５Ｉ ＦＳＨの結合を阻害するかどうかを調べた。
混合：
・５０μｌの膜を結合バッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．２， １ｍＭ ＭｇＣｌ２， ０．１％ＢＳＡを含有する１ｍＭ ＣａＣｌ７）に希釈したもの−シグナル：ノイズ比１０：１となる膜の量を使用
・４μＭ非標識ＦＳＨ（Ｃｏｒｔｅｘ Ｂｉｏｃｈｅｍ）を含有する２５μｌのサンプルまたはバッファー
・２５μｌの１２５Ｉ ＦＳＨ（３０，０００ｃｐｍ／ウェル）
【０１１４】
室温で２時間インキュベートし、前処理したＧＦ／Ｂユニフィルタープレート（０．１％ＰＥＩで３０分間ブロッキングしたもの）で濾過する。フィルターを３７℃で乾燥させ、４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｅｎｔ ２０（Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔを用いて計測する。
【０１１５】
ｂ．　結果
上記のようにＦＳＨ−Ｒを発現したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から膜を調製した。これらの細胞は特異的に１２５Ｉ標識ＦＳＨと結合する。１００μＭチアゾリジノンの存在下で結合アッセイを行った場合には、放射性標識ＦＳＨの阻害は見られなかった。従って、チアゾリジノンはＦＳＨ受容体と結合して応答を引き起こすことができるが、ＦＳＨとその受容体との間の相互作用は遮断しない。
【０１１６】
実施例１６
本実施例はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂上での並行合成によるライブラリー作製の一般法を示す。
【０１１７】
ステップ１： Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂のＦｍｏｃ脱保護
Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂（添加量： ０．５３ｍｍｏｌ／ｇ； ２．４ｇ， １．２７２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液で処理し（２ ｘ ２５ｍｌ， １回目は１０分、２回目は２０分）、樹脂からＦｍｏｃ保護基を除去した。混合物を濾過し、樹脂をＤＭＦ（３ ｘ ２５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ ｘ ２５ｍｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（３ ｘ ２５ｍｌ）で洗浄した。
【０１１８】
ステップ２： 樹脂に対する種々のＦｍｏｃ保護アミノ酸の結合
樹脂（１．２７２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１０ ｍｌ）で膨潤させた。無水ＤＭＦ（１５ｍｌ）中、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（２当量， ２．５４４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（３８９．２ｍｇ， ２．５４４ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（９６４．２ｍｇ， ２．５４４ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に加えた後、ＤＩＥＡ（８８６．３　ｌ， ５．０８８ｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で回転式シェーカーにて一晩振盪した。この混合物を濾過し、樹脂をＤＭＦ（３ ｘ ２５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ ｘ ２５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３ ｘ ２５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させた。
【０１１９】
ステップ３： Ｆｍｏｃ基の脱保護
上記ステップ２に記載のように調製した樹脂（１．２７２ｍｍｏｌ）を再びＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液で処理し（２ ｘ ２５ｍｌ， １回目は１０分、２回目は２０分）、Ｆｍｏｃ保護基を除去した。この混合物を濾過し、樹脂をＤＭＦ（３ ｘ ２５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ ｘ ２５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３ ｘ ２５ｍｌ）で洗浄した。
【０１２０】
ステップ４： 種々のアルデヒドとの反応
上記のように調製した樹脂を、使用する異なるアルデヒドの数に応じた一定数のシンチレーションバイアルに分注した。Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂上の各アミノ酸（０．４２４ｍｍｏｌ）に、無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の１０当量のアルデヒド（４．２４ｍｍｏｌ）および２０当量のメルカプトコハク酸（１．２７ｇ， ８．４８ｍｍｏｌ）溶液を加えた。得られた反応混合物をＪ−ＫＥＭブロックにて６０℃で４８時間加熱し、混合物を濾過し、ＴＨＦ（３ ｘ １０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ ｘ １０ｍｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（３ ｘ １０ｍｌ）で洗浄した。
【０１２１】
ステップ５： 種々のアミンとの反応
またこの樹脂を、使用する異なるアミンの数に応じ、Ｒｏｂｂｉｎｓ装置の４８または９６ウェルに分注した。酸（０．０２７ｍｍｏｌ）を結合させた樹脂に、無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＨＯＢＴ（１６．５２ｍｇ， ０．１０８ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４１ｍｇ， ０．１０８ｍｍｏｌ）溶液を加えた。次に各ウェルにＤＩＥＡ（３７．６μｌ， ０．２１６ｍｍｏｌ）を、その後１０当量のアミン（０．２７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温にて回転式シェーカーで一晩回転させた。次にこの混合物を濾過し、樹脂をＤＭＦ（３ ｘ ２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ ｘ ２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３ ｘ ２ｍｌ）で洗浄し、乾燥させた。
【０１２２】
ステップ６： 固相支持体からの切断
以下の手順に従い、これらの生成物を特性決定のために固相支持体から切断した。各ウェルに９５％ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍｌ）を加えた。樹脂を１時間静置し、この溶液を４８または９６ウェルＲｏｂｂｉｎｓマイクロタイタープレートへ濾過した。各ウェル中の樹脂をジクロロメタン（２ｍｌ）で洗浄した。溶液を窒素気流下で濃縮し、Ｓａｖａｎｔにて真空下で乾燥させた。これらの化合物をＧｉｌｓｏｎ ｐｒｅｐ ＨＰＬＣで精製し、必要な画分をＳａｖａｎｔで濃縮した。最終生成物はＬＣ／ＭＳにより特性を決定した。作製されたライブラリーの構造を下表に示す。
【０１２３】
【化１０】
2004505050.tif 000009
【０１２４】
【表１】
2004505050.tif 000010
2004505050.tif 000011
【０１２５】
実施例１７
［３−（２−カルバモイル−エチル）−４−オキソ−２−（５−フェニルエチニル−チオフェン−２−イル）−チアゾリジン−５−イル］酢酸の製造
β−アラニンアミド塩酸塩（３．１１ｇ， ２５ｍｍｏｌ）、５−（フェニルエチニル）チオフェン−２−カルボキシアルデヒド（５．３１ｇ， ２５ｍｍｏｌ）、メルカプトコハク酸（１１．２６ｇ， ７５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．６ｇ， ２７．５ｍｍｏｌ）の混合物をアセトニトリル（３００ｍＬ）中、還流下で４８時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を２ Ｎ ＨＣｌ（５００ｍＬ）および酢酸エチル（３ ｘ ２００ｍＬ）とともに振盪した。この酢酸エチル溶液を水、その後ブラインで洗浄した後、乾燥（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。生成物を６００ｍＬシリカドライカラムで、ジクロロメタン：酢酸（９９：１）、次いでジクロロメタン：メタノール：酢酸（９５：５：１）で溶出することで精製した。適当な画分を濃縮した。残渣をエーテルで洗浄し、乾燥させ、標題化合物を白色の固体として得た（２．４４ｇ， ２３．５％）。融点１７５〜１７８℃。１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １２．６ （ｂｒｏａｄ， １Ｈ）， ７．５６−７．５７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ）， ７．５４−７．５５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．４−７．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２８−７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９０ （ｓ， １Ｈ）， ６．１５ （ｓ， ０．５Ｈ）， ６．１２−６．１３ （ｄ， ０．５Ｈ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ）， ４．２４−４．２８ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５−４．１９ （ｄｄ， ０．５Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ２．９７−３．０９ （ｍ， １Ｈ）， ２．６４−２．７４ （ｍ， １Ｈ）， ２．３６−２．４６ （ｍ， １Ｈ）， ２．０８−２．２１ （ｍ， １Ｈ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ４１３ ［Ｍ−Ｈ］， ４１５ ｛Ｍ＋Ｈ｝． 分析的 ＨＰＬＣ； カプセルパック Ｃ１８， ３０％ アセトニトリル： ７０％ ０．１％ＴＦＡ水溶液． ５１ トランス： ４９ シス． ＦＴＩＲ （ＡＴＲ） １６５０， １７２０ ｃｍ−１． 元素分析；（Ｃ２０Ｈ１８Ｎ２Ｏ４Ｓ２） 計算値：Ｃ， ５７．９５； Ｈ， ４．３８； Ｎ， ６．７６． 実測値：Ｃ， ５７．５９； Ｈ， ４．３４； Ｎ， ６．５６。
【０１２６】
実施例１８
３−［（２Ｓ＊，５Ｒ＊）−５−｛［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−４−オキソ−２−（５−フェニルエチニル−チオフェン−２−イル）−チアゾリジン−３−イル］プロピオンアミドの製造
［３−（２−カルバモイル−エチル）−４−オキソ−２−（５−フェニルエチニル−チオフェン−２−イル）−チアゾリジン−５−イル］酢酸（１．３６ｇ， ３．２８ｍｍｏｌ）、３−インドリルエチルアミン（０．７７ｇ， ４．８ｍｍｏｌ）、シアノホスホン酸ジエチル（０．７８１ｇ， ４．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．６２ｇ， ４．８ｍｍｏｌ）の混合物をＤＭＦ（５０ｍＬ）中で室温にて３時間攪拌した。この混合物を水（１００ｍＬ）に注いだ。生成物を酢酸エチル（２ ｘ １００ｍＬ）で抽出した。この抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、ブラインで順次洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させた。溶媒を蒸発させると褐色のガム質となり、これをメタノールで２回洗浄して暗色を取り除き、標題の化合物を灰白色の固体として得た（０．３ｇ， １６．８ ％）。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １０．８ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９−８．２３ （ｔ， １Ｈ）， ７．５１−７．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３３− ７．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２７−７．３１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１４−７．１５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ）， ７．０２−７．０７ （ｔ， １Ｈ）， ６．９１−６．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ６．１３ （ｓ， １Ｈ）， ４．１５−４．２０ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．１ Ｈｚ）， ３．５５−３．６４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２７−３．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９７−３．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７９−２．８４ （ｔ， ２Ｈ）， ２．６０ （ｓ， １Ｈ）， ２．５５−２．５６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， ２．３５−２．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．０８−２．１８ （ｍ， １Ｈ）、δ６．１３および４．１５−４．２０のピークに基づきシス９５％； ＭＳ （ＥＳＩ） ５５７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．．ＦＴＩＲ （ＡＴＲ） １６２０， １６６０ ｃｍ−１． 元素分析；（Ｃ３０Ｈ２８Ｎ４Ｏ３Ｓ２） 計算値：Ｃ， ６４．７２； Ｈ， ５．０７； Ｎ， １０．０６． 実測値：Ｃ， ６４．５５； Ｈ， ４．９８； Ｎ， ９．９３。
【０１２７】
実施例１９
３−［（２Ｓ＊，５Ｒ＊）−５−｛［２−（４−ブロモ−フェニル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−４−オキソ−２−（５−フェニルエチニル−チオフェン−２−イル）−チアゾリジン−３−イル］プロピオンアミドの製造
３−（３−アミノ−３−オキソプロピル）−４−オキソ−２−（５−（２−フェニルエチニル）チエン−２−イル）−１，３−チアゾリジン−５−イル）酢酸（１．３６ｇ， ３．２ｍｍｏｌ）、 ４−ブロモフェネチルアミン（１．３５ｇ， ４．８ｍｍｏｌ）、シアノホスホン酸ジエチル（０．７８２ｇ， ４．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．２４ｇ， ９．６ｍｍｏｌ）の混合物をＤＭＦ（５０ｍＬ）中、窒素雰囲気下で室温にて３時間攪拌した。この混合物を１Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）に注いだ。生成物を酢酸エチル（３ ｘ １００ｍＬ）で抽出した。この酢酸エチル抽出液を１Ｎ ＨＣｌ、Ｈ２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ３、およびブラインで順次洗浄した後、乾燥（ＭｇＳＯ４）させた。この酢酸エチル溶液を蒸発させるとガム質（０．９ｇ）が得られ、１Ｈ ＮＭＲで調べたところ、これには非常に少量の生成物しか含まれていなかった。ＭｇＳＯ４を水（２Ｌ）中で攪拌し、濾過した。不溶性の白色粉末を水で数回洗浄し、濾紙上で一晩風乾すると、標題化合物が白色の固体として得られた（０．９ｇ， ４７％）。融点２２４〜２２７℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．１０−８．１７ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２−７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４１−７．４８ （ｍ， ６Ｈ）， ７．２５−７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１５−７．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９ （ｓ， １Ｈ）， ６．１２ （ｓ， ０．６６Ｈ， シス）， ６．０７ （ｄ， ０．３３Ｈ トランス）， ４．２１−４．２３ （ｍ， ０．３３Ｈ トランス）， ４．１２−４．１７ （ｄｄ， ０．６５Ｈ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ シス）， ３．５０−３．６３ （ｍ， １Ｈ）， ３．１９−３．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９１−３．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５４−２．７０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．３５−２．４７ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０−２．１７ （ｍ， １Ｈ）； ＭＳ （ＥＳＩ） ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５９６／５９８ （１ Ｂｒ パターン）． ＦＴＩＲ （ＡＴＲ） １６５０， １６７０ ｃｍ−１。分析的ＨＰＬＣ： Ｍｅｔａｃａｐｓｉｌ Ｃ１８， １：１アセトニトリル：水。保持時間（分） １５．１（シス６６％）， １７．８（トランス３３％）。このシス異性体は加熱した酢酸エチルから、冷却時に結晶化した。融点２４１〜２４３℃。１ＨＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ６．１２ （ｓ， １Ｈ）， ４．１２−４．１７ （ｄｄ， １Ｈ）． 元素分析；（Ｃ２８Ｈ２６ＢｒＮ３Ｏ３Ｓ２ ２Ｈ２Ｏ）計算値：Ｃ， ５３．１６； Ｈ， ４．７８； Ｎ， ６．６４． 実測値：Ｃ， ５３．１６； Ｈ， ４．３０； Ｎ， ６．６４。
【０１２８】
以上の記載は説明のためのものであって、限定を意図するものではない。以上の記載を読めば、当業者には多くの実施形態が明らかとなろう。従って本発明の範囲は以上の記載に照らして判断されるものではなく、添付のクレームに照らして、かかるクレームに権利が与えられる均等物の全範囲で判断されるものである。特許出願および公報をはじめ全ての文献および引用の開示はあらゆる目的で参照により本明細書に組み入れる。
【０１２９】
本明細書に記載の実施例および実施形態は単に説明のためのものであって、それに対する種々の改良や変更が当業者に示唆され、それらは本願および添付のクレームの範囲の精神および範囲内に含まれるものとする。本明細書に挙げられた全ての刊行物、特許および特許出願はあらゆる目的で参照によりそのまま本明細書に組み入れる。
【国際公開パンフレット】
2004505050.tif 000016
2004505050.tif 000017
2004505050.tif 000018
2004505050.tif 000019
2004505050.tif 000020
2004505050.tif 000021
2004505050.tif 000022
2004505050.tif 000023
2004505050.tif 000024
2004505050.tif 000025
2004505050.tif 000026
2004505050.tif 000027
2004505050.tif 000028
2004505050.tif 000029
2004505050.tif 000030
2004505050.tif 000031
2004505050.tif 000032
2004505050.tif 000033
2004505050.tif 000034
2004505050.tif 000035
2004505050.tif 000036
2004505050.tif 000037
2004505050.tif 000038
2004505050.tif 000039
2004505050.tif 000040
2004505050.tif 000041
2004505050.tif 000042
2004505050.tif 000043
2004505050.tif 000044
2004505050.tif 000045
2004505050.tif 000046
2004505050.tif 000047
2004505050.tif 000048
2004505050.tif 000049
2004505050.tif 000050
2004505050.tif 000051
2004505050.tif 000052
2004505050.tif 000053
2004505050.tif 000054