(57)【要約】ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合される活性作用物質を含む組成物。患者への活性作用物質の送達方法であって、ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合される活性作用物質を含む組成物を患者に投与することを包含する方法も提供される。分解から活性作用物質を保護するための方法であって、活性作用物質をポリペプチドに共有結合することを包含する方法も提供される。組成物から活性作用物質を制御放出するための方法であって、活性作用物質をポリペプチドに共有結合することを包含する方法も提供される（図１）。
2004523480.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
ポリペプチド、および
該ポリペプチドに共有結合される活性作用物質
を含む組成物。
【請求項２】
前記活性作用物質が、表１に列挙した化合物からなる群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリペプチドが、天然アミノ酸のホモポリマーである、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、２つまたはそれ以上の天然アミノ酸のヘテロポリマーである、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、合成アミノ酸のホモポリマーである、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、２つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマーである、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、１つまたはそれ以上の天然アミノ酸および１つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマーである、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
前記活性作用物質が、前記ポリペプチドの側鎖、Ｎ末端またはＣ末端に共有結合される、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
前記活性作用物質がカルボン酸であり、前記活性作用物質が前記ポリペプチドのＮ末端に共有結合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
前記活性作用物質がアミンであり、前記活性作用物質が前記ポリペプチドのＣ末端に共有結合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記活性作用物質がアルコールであり、前記活性作用物質が前記ポリペプチドのＣ末端に共有結合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
前記活性作用物質がアルコールであり、前記活性作用物質が前記ポリペプチドのＮ末端に共有結合される、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
マイクロカプセル剤をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
前記マイクロカプセル剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アミノ酸、糖および塩からなる群から選択される、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
補助剤をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記補助剤が、腸輸送体を活性化する、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
前記活性作用物質が栄養分であり、前記組成物が栄養補助機能性食品組成物である、請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
前記活性作用物質が薬剤であり、前記組成物が薬剤組成物である、請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、摂取可能錠剤の形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、静脈内製剤の形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、経口懸濁液の形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項２３】
前記活性作用物質が、前記活性作用物質周囲の前記ポリペプチドのフォールディングにより構造的に保護される、請求項１記載の組成物。
【請求項２４】
前記ポリペプチドがｐＨ依存性方式で前記組成物から前記活性作用物質を放出し得る、請求項１記載の組成物。
【請求項２５】
分解から活性作用物質を保護するための方法であって、該活性作用物質をポリペプチドに共有結合する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
ポリペプチドを含む組成物からの活性作用物質の放出を制御するための方法であって、該活性作用物質を前記ポリペプチドに共有結合する工程を包含する、方法。
【請求項２７】
患者に活性作用物質を送達するための方法であって、以下：
ポリペプチド、および
該ポリペプチドに共有結合される活性作用物質
を含む組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記活性作用物質が、酵素触媒性放出により前記組成物から放出される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記活性作用物質が、前記酵素触媒性放出の薬物動態に基づいた時間依存性方式で放出される、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物が、マイクロカプセル剤をさらに含み、前記活性作用物質が、該マイクロカプセル剤の溶解により該組成物から放出される、請求項２７記載の方法。
【請求項３１】
前記活性作用物質が、前記ポリペプチドのｐＨ依存性変性により前記組成物から放出される、請求項２７記載の方法。
【請求項３２】
前記活性作用物質が、持効性放出で前記組成物から放出される、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物が、前記ポリペプチドに共有結合された補助剤をさらに含み、前記組成物からの前記補助剤の放出が該ポリペプチドにより制御される、請求項２７記載の方法。
【請求項３４】
ポリペプチドおよび前記ポリペプチドに共有結合された活性作用物質を含む組成物の製造方法であって、以下の：
（ａ）活性作用物質をアミノ酸の側鎖に結合する工程であって、それによって、活性作用物質／アミノ酸複合体を形成する工程；
（ｂ）該活性作用物質／アミノ酸複合体から活性作用物質／アミノ酸複合体Ｎ−カルボン酸無水物（ＮＣＡ）を形成する工程；および
（ｃ）該活性作用物質／アミノ酸複合体Ｎ−カルボン酸無水物（ＮＣＡ）を重合する工程、
を包含する方法。
【請求項３５】
前記活性作用物質が、薬剤または補助剤である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記工程（ａ）および（ｂ）が、工程（ｃ）の前に第２の活性作用物質を用いて反復される、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
前記活性作用物質および前記第２の活性作用物質が、前記工程（ｃ）において共重合される、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
前記アミノ酸がグルタミン酸であり、前記活性作用物質が前記ポリペプチドの加水分解時に二量体として前記グルタミン酸から放出され、前記活性作用物質が同時に生じる分子内アミノ基転移により前記グルタミン酸から放出される、請求項３４記載の方法。
【請求項３９】
前記グルタミン酸が、アスパラギン酸、アルギニン、アスパラギン、システイン、リジン、トレオニンおよびセリンからなる群から選択されるアミノ酸により置換され、前記活性作用物質が、アミノ酸の側鎖に結合されてアミド、チオエステル、エステル、エーテル、ウレタン、カルボネート、無水物またはカルバメートを形成する、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記グルタミン酸が、アミン、アルコール、スルフヒドリル、アミド、尿素または酸性官能基を含むペンダント基を有する合成アミノ酸により置換される、請求項３８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、活性作用物質送達系に関し、特に活性作用物質に共有結合されるポリペプチドを含む組成物、ならびに活性作用物質を保護し、投与するための方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
活性作用物質送達系は、適切な標的への生物学的に活性な作用物質（活性作用物質）の有効送達のためにしばしば重要である。患者のコンプライアンスおよび活性作用物質安定性が考慮される場合、これらの系の重要性は大きくなる。例えば、活性作用物質が注射または別の侵襲性技法の代わりに経口的に投与される場合、患者のコンプライアンスは顕著に増大すると予測される。保存寿命または胃中残存の延長といった活性作用物質の安定性増大は、投薬再現可能性を保証し、おそらくは必要とされる投薬回数を低減することさえあり、これが患者のコンプライアンスを改善し得る。
【０００３】
経口投与活性作用物質の吸収は、強酸性胃環境、ＧＩ管中の強力な消化酵素、細胞膜の透過性および脂質二重層を通した輸送によりしばしば遮断される。補助剤、例えばレゾルシノール、界面活性剤、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または胆汁酸の混入は、細胞膜の透過性を強化する。プロテイノイドミクロスフェア、リポソームまたは多糖を用いて活性作用物質をマイクロカプセル化することは、活性作用物質の酵素分解を軽減するのに有効であった。酵素阻害補助剤は、酵素分解を防止するためにも用いられてきた。腸溶性コーティングは、胃における薬剤の保護物として用いられてきた。
【０００４】
活性作用物質送達系は、活性作用物質の放出を制御する能力も提供する。例えばジアゼパムをグルタミン酸およびアスパラギン酸のコポリマーとともに配合すると、活性作用物質の持効性放出が可能になる。別の例として、乳酸とグルタル酸のコポリマーは、ヒト成長ホルモンの徐放性を提供するために用いられる。広範な薬剤が、二カルボン酸、修飾アミノ酸または熱縮合アミノ酸のアミド中の活性作用物質のマイクロカプセル化により持効性放出を提供するといわれている。徐放性付与添加剤も、錠剤配合物中に多数の活性作用物質とともに混ぜられ得る。
【０００５】
これらの技法の各々は、活性作用物質に安定性および徐放性の向上を付与する。残念ながら、これらの技法はいくつかの欠点を蒙る。活性作用物質の混入はしばしば、マイクロカプセルマトリックス中への拡散に左右され、これは定量的でなく、投薬量再現可能性を複雑にし得る。さらに封入薬剤はマトリックスからの拡散に左右され、これは活性作用物質の水溶性に大きく左右される。逆に、水溶性微小球（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）は、無限に膨潤し、残念ながら活性作用物質を一斉に放出し、ほとんどの活性作用物質が持効性放出に利用できない。さらにいくつかの技法においては、活性作用物質放出を必要とする分解過程の制御は当てにならない。例えば腸溶的被覆化活性作用物質は、ｐＨに依存して活性作用物質を放出するため、放出速度の制御は難しい。
【０００６】
過去においては、活性作用物質が結合され得るペンダント基としてポリペプチドのアミノ酸側鎖が用いられてきた。これらの技法は典型的には、アミノ酸ペンダント基と活性作用物質との間のスペーサー基の使用を必要とする。この種類の薬剤送達系のペプチド−薬剤結合体は、薬剤の放出のための血流中の酵素に頼っているため、経口投与には用いられない。注射用または皮下用薬剤の徐放性および標的化放出の例としては、以下のものが挙げられる：ヒドロキシプロピルスペーサーを介してのノルエチンドロンとポリグルタミン酸のγカルボキシレートとの連結；ならびにペプチドスペーサーを介しての、ナイトロジェンマスタードとポリグルタミンのγカルバミドとの連結。デキサメタゾンは、スペーサー基を伴わずに、ポリアスパラギン酸のβカルボキシレートと直接共有結合された。このプロドラッグ処方物は、薬剤が大腸中に存在する細菌加水分解酵素により放出される結腸特異的薬剤送達系として設計された。放出されたデキサメタゾン活性作用物質は次に、大腸障害を治療するよう標的化され、血流中で吸収されるようには意図されなかった。さらに別の技法は、有効成分がペプチドリンカーを介して高次脂質皮膜（ＨＡＲとして公知である）に結合されるリポソーム形成と共有薬剤結合の利点を併有する。したがって経口投与による血流中へのその標的化送達を用いて有効成分をポリペプチドペンダント基に結合するという概念を組入れた薬剤送達系は存在しなかったし、今まで報告されていない。
【０００７】
活性作用物質送達系の分子量、分子サイズおよび粒子サイズを制御することも重要である。可変性分子量は、予測不可能な拡散速度および薬物動態を有する。高分子量担体は、細菌酵素によりほとんど専ら結腸中で消化されるナプロキセン結合デキストランの場合と同様に、徐々にまたは遅く消化される。高分子量微小球は通常は高含水量を有し、これは水不安定性有効成分に伴う問題を示し得る。粒子サイズは、ＨＡＲ適用の場合と同様に、注射用薬剤に伴う問題を生じるだけでなく、腸の刷子縁膜を通しての吸収が５ミクロン未満に制限される。
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、ペプチドまたはアミノ酸のポリマーへの活性作用物質の共有結合を提供する。本発明は、例えば薬剤および栄養分を含めた活性作用物質を、本明細書中で担体ペプチドとも呼ばれるオリゴペプチドまたはポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端に、または直接アミノ酸側鎖に共有結合するという点で、上記の技法と区別される。ある用途においては、ポリペプチドは、配座的保護により、主に胃中で、活性作用物質を安定化する。これらの用途では、活性作用物質の送達は、一部は担体ペプチドの変性の動力学により制御される。上部腸管中への進入時に、固有（ｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓ）酵素は、担体ペプチドのペプチド結合を選択的に加水分解することにより、身体による吸収のために有効成分を放出する。この酵素作用は、二次持効性放出メカニズムを導入する。
【０００９】
本発明は、ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合された活性作用物質を含む組成物を提供する。好ましくは、ポリペプチドは、（ｉ）オリゴペプチド、（ｉｉ）２０の天然アミノ酸（ＬまたはＤ異性体）のうちの１つのホモポリマー、あるいはその異性体、類似体または誘導体、（ｉｉｉ）天然アミノ酸（ＬまたはＤ異性体）のうちの２つまたはそれ以上のヘテロポリマー、あるいはその異性体、類似体または誘導体、（ｉｖ）合成アミノ酸のホモポリマー、（ｖ）２つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマー、あるいは（ｖｉ）１つまたはそれ以上の天然アミノ酸および１つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマーである。
【００１０】
活性作用物質は、好ましくはポリペプチドの側鎖、Ｎ末端またはＣ末端に共有結合される。好ましい実施形態では、活性作用物質はカルボン酸であり、そしてポリペプチドのＮ末端に共有結合される。別の好ましい実施形態では、活性作用物質はアミンであり、ポリペプチドのＣ末端に共有結合される。別の好ましい実施形態では、活性作用物質はアルコールであり、そしてポリペプチドのＣ末端に共有結合される。さらに別の好ましい実施形態では、活性作用物質はアルコールであり、そしてポリペプチドのＮ末端に共有結合される。
【００１１】
本発明の組成物は、マイクロカプセル剤、補助剤および薬学的に受容可能な賦形剤のうちの１つまたはそれ以上も含み得る。マイクロカプセル剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アミノ酸、糖および塩から選択され得る。補助剤が組成物中に含まれる場合、補助剤は好ましくは腸輸送体を活性化する。
【００１２】
好ましくは本発明の組成物は、摂取可能錠剤、静脈内製剤または経口懸濁液の形態である。活性作用物質は、活性作用物質周囲のポリペプチドのフォールディングにより配座的に保護され得る。別の実施形態では、ポリペプチドは、ｐＨ依存性方式で組成物から活性作用物質を放出し得る。
【００１３】
本発明は、分解から活性作用物質を保護するための方法であって、活性作用物質をポリペプチドに共有結合することを包含する方法も提供する。
【００１４】
本発明は、ポリペプチドを含む組成物から活性作用物質を制御放出するための方法であって、活性作用物質をポリペプチドに共有結合することを包含する方法も提供する。
【００１５】
本発明は、ヒトまたは非ヒト動物である患者への活性作用物質の送達方法であって、ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合される活性作用物質を含む組成物を患者に投与することを包含する方法も提供する。好ましい実施形態では、活性作用物質は酵素触媒性放出により組成物から放出される。別の好ましい実施形態では、活性作用物質は酵素触媒性放出の薬物動態に基づいた時間依存性方式で放出される。別の好ましい実施形態では、組成物はマイクロカプセル剤をさらに含み、そして活性作用物質はマイクロカプセル剤の溶解により組成物から放出される。別の好ましい実施形態では、活性作用物質はポリペプチドのｐＨ依存性変性により組成物から放出される。別の好ましい実施形態では、活性作用物質は持効性放出で組成物から放出される。さらに別の好ましい実施形態では、組成物は、ポリペプチドに共有結合された補助剤をさらに含み、そして組成物からの補助剤の放出はポリペプチドにより制御される。補助剤は、有効成分の二相性放出のために担体ペプチド−薬剤結合体中にマイクロカプセル封入され得る。
【００１６】
本発明は、ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合された活性作用物質を含む組成物の製造方法も提供する。本方法は、以下の：
（ａ）活性作用物質をアミノ酸の側鎖に結合する工程であって、それによって、活性作用物質／アミノ酸複合体を形成する、工程と；
（ｂ）活性作用物質／アミノ酸複合体から活性作用物質／アミノ酸複合体Ｎ−カルボン酸無水物（ＮＣＡ）を形成する工程と；
（ｃ）活性作用物質／アミノ酸複合体Ｎ−カルボン酸無水物（ＮＣＡ）を重合する工程、
を包含する。
【００１７】
好ましい実施形態では、活性作用物質は薬剤または補助剤である。別の好ましい実施形態では、工程（ａ）および（ｂ）は、工程（ｃ）の前に第２の活性作用物質を用いて反復される。工程（ａ）および（ｂ）は、工程（ｃ）の前に第２の活性作用物質を用いて反復される場合、活性作用物質および第２の活性作用物質は、工程（ｃ）において共重合され得る。別の好ましい実施形態では、アミノ酸はグルタミン酸であり、そして活性作用物質はポリペプチドの加水分解時に二量体としてグルタミン酸から放出され、そして、活性作用物質は同時分子内アミノ基転移によりグルタミン酸から放出される。別の好ましい実施形態では、グルタミン酸は、アスパラギン酸、アルギニン、アスパラギン、システイン、リジン、トレオニンおよびセリンからなる群から選択されるアミノ酸により置換され、そして、活性作用物質はアミノ酸の側鎖に結合されて、アミド、チオエステル、エステル、エーテル、ウレタン、カルボネート、無水物またはカルバメートを形成する。さらに別の好ましい実施形態では、グルタミン酸は、アミン、アルコール、スルフヒドリル、アミド、尿素または酸性官能基を含むペンダント基を有する合成アミノ酸により置換される。
【００１８】
上記の一般的説明および下記の詳細な説明はともに本発明の例示であり、本発明を限定するものではない、と理解される。
【００１９】
本発明は、添付の図面と結び付けて読めば、以下の詳細な説明から最良に理解される。図面に含まれるのは以下の図である。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、活性作用物質送達のためのいくつかの利点を提供する。まず、本発明は活性作用物質を安定化し、そして胃中での消化を防止し得る。さらに、活性作用物質の遅延放出により、薬理学的効果が延長され得る。さらに活性作用物質は、相乗効果を生じるよう併用され得る。腸管中の活性作用物質の吸収も向上され得る。本発明は、特定の作用部位への活性作用物質の標的化送達も可能にする。
【００２１】
本発明の組成物は、ポリペプチドおよびポリペプチドに共有結合された活性作用物質を含む。活性作用物質は、表１の一覧から、単独でまたは一覧上の他の作用物質と組合せて、選択され得る。
【００２２】
表１
硫酸アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ  ｓｕｌｆａｔｅ）
アバレリックス（ａｂａｒｅｌｉｘ）
アカルボース
アセトアミノフェン
アセトアミノフェン；リン酸コデイン
アセトアミノフェン；プロポキシフェンナプシレート
アセチルサリチル酸
アシトレチン
活性化プロテインＣ
アシクロビル
アデフォビルジピボキシル（ａｄｅｆｏｖｉｒ  ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ）
アデノシン
副腎皮質刺激ホルモン
アルブテロール
アレンド酸ナトリウム
アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎａｌ）
α１プロテイナーゼ阻害剤
アルプラザロム（ａｌｐｒａｚａｌｏｍ）
アルプロスタジル
アルチニクリン（ａｌｔｉｎｉｃｌｉｎｅ）
アミホチン
アミオダロン
アミトリプチリンＨＣＬ
アムロジピンベシレート
アムロジピンベシレート；ベナゼプリル  ｈｃｌ
アモキシシリン
アモキシシリン；クラブン酸カリウム
アムプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）
塩酸アナグレリド
アナリチド
アナストロゾール
アンチセンスオリゴヌクレオチド
アリピプラゾール
アステミゾール
アテノロール
アトルバスタチンカルシウム
アトバクオン
アバシミベ
アザチオプリン
塩酸アゼラスチン
アジトロマイシン二水和物
バクロフェン
ベフロキサトン
塩酸ベナゼプリル
ベンザトロピンメシレート
ベタメタゾン
ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）
ビソプロロール／ヒドロクロロチアジド
ボセンタン（ｂｏｓｅｎｔａｎ）
ブロモクリプチン
塩酸ブプロピオン
ブスピロン
酒石酸ブトルファノール
カベルゴリン
カフィエン
カルシトリオール
カンデサルタンシレキセチル
カンドキサトリル
カペシタビン
カプトプリル
カルバマゼピン
カルビドパ／レボドパ
カルボプラチン
カリソプロドール
カルベジロール
カスポフンジン（ｃａｓｐｏｆｕｎｇｉｎ）
セファクロル
セファドロキシル；セファドロキシル半水和物
セファゾリンナトリウム
セフジニル
セフィキシム    １５５５；１５５５Ｕ８８
セフォタキシムナトリウム
セフォテタン二ナトリウム
セフォキシチンナトリウム
セフポドキシムプロキセチル
セフプロジル
セフタジジム
セフチブテン二水和物    ２６４Ｗ９４
セフロキシムアキセチル
セフロキシムナトリウム
セレコキシブ
セファレキシン
セリバスタチンナトリウム
塩酸セチリジン
クロラゼペートデポー剤
クロルジアゼポキシド
シクレソニド
シランセトロン（ｃｉｌａｎｓｅｔｒｏｎ）
シラスタチンナトリウム；イミペネム
シロミラスト（ｃｉｌｏｍｉｌａｓｔ）
シメチジン
シプロフロキサシン
シサプリド
シサトラクリウムベシレート（ｃｉｓａｔｒａｃｕｒｉｕｍ  ｂｅｓｙｌａｔｅ）
シスプラチン
臭化水素酸シタロプラム
クラリトロマイシン
クロミプラミン
クロナゼパム
クロニジンＨＣＬ
二硫酸クロピドグレル
４０３０Ｗ９２
タンニン酸クロルフェニラミン
クロザピン
コレスチポールＨＣＬ
コニバプタン（ｃｏｎｉｖａｐｔａｎ）
シクロベンザプリンＨＣＬ
シクロホスファミド
シクロスポリン
ダルテパリンナトリウム
ダピタント
酢酸デスモプレッシン
デソゲストレル；エチニルエストラジオール
硫酸デキストロアンフェタミン
デキストロメトルファン
ジアゼパム    ＡＢＴ５９４
ジクロフェナクナトリウム
ジクロフェナクナトリウム、ミソプロストール
ジシクロミンＨＣＬ
ジダノシン
ジゴキシン
塩酸ジルチアゼム
ジピリダモール
ジバルプロックスナトリウム
ｄ−メチルフェニデート
ドラセトロンメシレート一水和物
塩酸ドネペジル
ドーパミン／Ｄ５Ｗ
ドキサゾシン
塩酸ドキソルビシン
デュロキセチン
デュタステリド
エカドトリル
エコピパム（ｅｃｏｐｉｐａｍ）
エドデキンα（インターロイキン−１２）
エファビレンズ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）
ＡＢＴ７７３
エミビリン
エナラプリル
マレイン酸エナプリル（ｅｎａｐｒｉｌ）
ヒドロクロロチアジド
エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）
エノキサパリンナトリウム
エポエチンα組換え体
エプチフィバチド
酒石酸エルゴタミン
エリスロマイシン
ＡＬＴ７１１
エサテノロール
エステル化エストロゲン；  メチルテストステロン
エストロゲン、抱合エストロゲン、抱合酢酸メドロキシプロゲステロン
エストロピペート
エタネルセプト
エチニルエストラジオール／ノルエチンドロン
ＢＭＳ  ＣＷ１８９９２１
エチニルエストラジオール；    二酢酸エチノジオール
エチニルエストラジオール；レボノルゲストレル
エチニルエストラジオール；ノルエチンドロン
エチニルエストラジオール；酢酸ノルエチンドロン
エチニルエストラジオール；ノルゲスチメート
エチニルエストラジオール；ノルゲストレル
エチドロネート二ナトリウム
エトドラック
エトポシド
エトリコキシブ
エキセンジン−４
ファムシクロビル
ファモチジン
フェロジピン
フェノフィブレート
フェンレチニド
フェンタニル
塩酸フェキソフェナジン
フィルグラスチムＳＤ０１
フィナステリド
酢酸フレカイニド
フルコナゾール
酢酸フルドロコルチゾン
フルマゼニル
フルオキセチン
フルタミド
フルバスタチン
マレイン酸フルボキサミン
ホリトロピンα／β
ホルモテロール
ホシノプリル
ホスフェニトインナトリウム
フロセミド
ガバペンチン
ガドジアミド
ガドペント酸ジメグルミン
ガドテリドール
ガナキソロン
ガンシクロビル
ガントフィバン
ガストリンＣＷ１７免疫原
塩酸ゲムシタビン
ゲムフィブロジル
ゲンタマイシンイソトン
塩酸ゲピロン
酢酸グラチラメル
グリメピリド
グリピジド
グルカゴンＨＣＬ
グリブリド
塩酸グラニセトロン
ハロペリダール
ＢＭＳ  ２８４７５６
ヒドロクロロチアジド
ヒドロクロロチアジド；トリアムテレン
ヒドロモルホンＨＣＬ
硫酸ヒドロキシクロロキン
イブプロフェン
イダルビシンＨＣＬ
イロデカキン（ｉｌｏｄｅｃａｋｉｎ）
イロマスタット
イミグルセラーゼ（ｉｍｉｇｌｕｃｅｒａｓｅ）
イミプラミンＨＣＬ
硫酸インジナビル
インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）
インスリンリスプロ（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｓｐｒｏ）
インターフェロンアルファコン−１
インターフェロンβ−１ａ
インターロイキン−２
イオジキサノール
イオプロミド
ロキサグレート（ｌｏｘａｇｌａｔｅ）メグルミン；ロキサグレートナトリウム
イプラトロピウム
イルベサルタン
塩酸イリノテカン
二硝酸イソソルビド
イソトレチノイン
イスラジピン
イタセトロン
イトラコナゾール
ケトコナゾール
ケトプロフェン
ケトロラック
ケトチフェン
ラベタロールＨＣＬ
ラミブジン
ラミブジン；ジドブジン
ラモトリジン
ランソプラゾール
ランソプラゾール、アモキシシリン、クラリトロマイシン
レフルノミド
レソピトロン
酢酸ロイプロリド
レボカルニチン
レボセチリジン
レボフロキサシン
レボチロキシン
リンツズマブ
リシノプリル
リシノプリル；ヒドロクロロチアジド
ＣＳ８３４
ロペラミドＨＣＬ
ロラカルベフ
ロラタジン
ロラゼパム
ロサルタンカリウム
ロサルタンカリウム；    ヒドロクロロチアジド
ロバスタチン
マリマスタット
メカセルミン
酢酸メドロキシプロゲステロン
塩酸メフロキン
酢酸メゲストロール
ＣＶＴ  ＣＷ１２４
メルカプトプリン
メロペネム
メサラミン
メスナ
メタキサロン
メトフォミン
ＥＭ８００
メチルフェニデートＨＣＬ
酢酸メチルプレドニソロン
ＦＫ４６３
メトラゾン
コハク酸メトプロロール
ＭＫ８２６
メトロニダゾール
乳酸ミルリノン
ミノシクリンＨＣＬ
ミルタザピン
ミソプロストール
ミチグリニド
塩酸ミトキサントロン
塩化ミバクリウム
モダフィニル
塩酸モエキセプリル
モンテルカストナトリウム
硫酸モルヒネ
ミコフェノレートモフェチル
ナブメトン
ナドロール
ナプロキセンナトリウム
塩酸ナラトリプタン
塩酸ネファゾドン
ネララビン
ネルフィナビルメシレート
ネシリチド
ネビラピン
ニフェジピン
ニモジピン
ニソルジピン
ニトロフラントイン、ニトロフラントイン、マクロクリスタリン
ニトログリセリン
ニザチジン
ノルアステミゾール
ノルエチンドロン
ノルフロキサシン
ノルトリプチリンＨＣＬ
酢酸オクトレオチド
オキシコドン／ＡＰＡＰ
オフロキサシン
オランザピン
オメプラゾール
塩酸オンダンセトロン
オプレルベキン
オルリスタット
クエン酸オルフェナドリン
オキサプロジン
オキサゼパム
塩化オキシブチニン
オキシコドンＨＣＬ
ＧＭ６１１
Ｍ−ＣＳＦ
パゴクロン
パリビズマブ
パミドロネート二ナトリウム
パリカルシトロール
塩酸パロキセチン
ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）
ペモリン
ペニシリンＶ
ポリ硫酸ペントサンナトリウム
ペントキシフィリン
ペルゴリド
ＮＥ００８０
フェノバルビタール
フェニトインナトリウム
塩酸ピオグリタゾン
ピペラシリンナトリウム
プレコナリル
ポロキサマーＣＷ１８８
ポサコナゾール
ＮＮ３０４
二塩酸プラミペキソール
プラバスタチンナトリウム
プレドニソン
プレガバリン
プリミドン
プリノマスタット
マレイン酸プロクロルペラジン
プロメタジンＨＣＬ
ＰＤ  １３５１５８
プロポキシフェン−Ｎ／ＡＰＡＰ
プロプラノロールＨＣＬ
プロウロキナーゼ
フマル酸クエチアピン
塩酸キナプリル
ラベプラゾールナトリウム
塩酸ラロキシフィン
ラミプリル
ラニチジン
塩酸ラノラジン
レラキシン
レマセミド
レパグリニド
レピノタン
リバビリン＋ペギンテルフェロンα−２ｂ
リルゾール
リマンタジンＨＣＬ
リスペリドン
リトナビル
リザトリプタンベンキソエート
臭化ロクロニウム
ロフェコキシブ
塩酸ロピニロール
マレイン酸ロシグリタゾン
ゴセレリン
ルビテカン
サグラモスチム
サキナビル
ドセタキセル
サトラプラチン
セレジリンＨＣＬ
塩酸セルトラリン
塩酸セベラメル
セビルマブ
塩酸シブトラミン
クエン酸シルデナフィル
シムバスタチン
シナプルチド
シタフロキサシン
ポリスチレンスルホン酸ナトリウム
ソタロールＨＣＬ
スパルホシン酸（ｓｐａｒｆｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）
スピロノラクトン
スタブジン
スクラルフェート
スマトリプタン
タビモレリン
クエン酸タモキシフェン
塩酸タムスロシン
テマゼパム
テノフォビルジソプロキシル
テポキサリン
テラゾシンＨＣＬ
塩酸テルビナフィン
硫酸テルブタリン
テリパラチド
テトラサイクリン
サリドマイド
テオフィリン
チオテパ
トロンボポエチン、ＴＰＯ
塩酸チアガビン
塩酸チクロピジン
チファコギン
チラパザミン
塩酸チロフィバン
塩酸チザニジン
硫酸トブラマイシン
酒石酸トルテロジン
トモキセチン
トピラマート
トポテカンＨＣＬ
トレセミド（ｔｏｒｅｓｅｍｉｄｅ）
ｔＰＡ類似体
トラマドールＨＣＬ
トランドラプリル
トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）
トラザドンＨＣＬ
トリアムテレン／ＨＣＴＺ
トログリタゾン
トロバフロキサシンメシレート
ウロキナーゼ
ウルソジオール
塩酸バラシクロビル
バルデコキシブ
バルプロン酸
バルサルタン、ヒドロクロロチアジド
バルスポダル
バンコマイシンＨＣＬ
臭化ベクロニウム
塩酸ベンラファキシン
ベラパミルＨＣＬ
酒石酸ビノレルビン
ビタミンＢ１２
ビタミンＣ
ボリコナゾール（ｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅ）
ワルファリンナトリウム
キサリプロデン（ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎ）
ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｕｌｕｋａｓｔ）
ザレプロン（ｚａｌｅｐｌｏｎ）
ゼナレスタット（ｚｅｎａｒｅｓｔａｔ）
ジドブジン
ゾルミトリプタン（ｚａｌｍｉｔｒｉｐｔａｎ）
ゾルピデム
ブレオマイシン
フィトセテロール
パクリタキセル
フルチアゾン（ｆｌｕｔｉａｓｏｎｅ）
フルオロウラシル
プソイドエフェドリン
Ａ７８７７３
ＡＧＩ  １０６７
ＢＣＸ  ＣＷ１８１２
ＢＭＳ  ＣＷ１８８６６７
ＢＭＳ  ＣＷ１９３８８４
ＢＭＳ  ＣＷ２０４３５２
ＢＰＩ２１
ＣＤ１１ａ
ＣＥＢ９２５
プロポフォル
ＧＴ  １０２２７９
組換え肝炎ワクチン
Ｌ  １５９２８２
ＬＦＡ３ＴＩＰ
デイリーマルチビット（Ｄａｉｌｙ  Ｍｕｌｔｉ  Ｖｉｔ）
エリトロマイシン／Ｓｕｌｆｓｘ
エチニルエストラジオール；デソゲストレル
炭酸リチウム
ＬＹＭ  １
メチルプレドニソロンコハク酸ナトリウム
ロタウイルスワクチン
サキナビルメシレート
アルギニン
ヘパリン
チモシンα
モンテルカストナトリウムおよび塩酸フェキソフェナジン
ヨードチロニン
ヨードチロニンおよびチロキシン
コデイン
エチルモルヒネ
ジアセチルモルヒネ
ヒドロモルホン
ヒドロコドン
オキシモルホン
ジヒドロコデイン
ジヒドロモルヒネ
メチルジヒドロモルフィノン
コデインおよびプロメタジン
コデイン、フェニレフリンおよびプロメタジン
コデインおよびグアイフェネシン
コデイン、グアイフェネシンおよびプソイドエフェドリン
アスピリン、カリソプロドールおよびコデイン
ヒマトロピン（Ｈｉｍａｔｒｏｐｉｎｅ）メチルブロミドおよび二酒石酸ヒドロコドン
二酒石酸ヒドロコドンおよびフェニルプロパノールアミン
アセトアミノフェンおよび二酒石酸ヒドロコドン
マレイン酸クロルフェニラミン、二酒石酸ヒドロコドンおよびプソイドエフェドリン
グアイフェネシンおよびヒドロコドン
イブプロフェンおよびヒドロコドン
クロルフェニラミンポリスチレックスおよびヒドロコドンポリスチレックス
ナルトレキソン。
【００２３】
好ましくは、ポリペプチドは、（ｉ）オリゴペプチド、（ｉｉ）２０の天然に存在するアミノ酸（ＬまたはＤ異性体）のうちの１つのホモポリマー、またはその異性体、類似体もしくは誘導体、（ｉｉｉ）天然に存在するアミノ酸（ＬまたはＤ異性体）のうちの２つまたはそれ以上のヘテロポリマー、またはその異性体、類似体もしくは誘導体、（ｉｖ）合成アミノ酸のホモポリマー、（ｖ）２つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマー、あるいは（ｖｉ）１つまたはそれ以上の天然に存在するアミノ酸および１つまたはそれ以上の合成アミノ酸のヘテロポリマーである。
【００２４】
タンパク質、オリゴペプチドおよびポリペプチドは、一次、二次および三次構造を有するアミノ酸のポリマーである。タンパク質の二次構造は、ポリペプチド鎖の局所配座であり、螺旋、襞付シートおよび折返しからなる。タンパク質のアミノ酸配列および鎖の配座上の構造的制約は、分子の空間的整列を決定する。二次構造のフォールディングおよび側鎖の空間的整列は、三次構造を構成する。
【００２５】
タンパク質上の隣接原子と溶媒分子との間で関連した力学のために、タンパク質は折り重なる。タンパク質フォールディングおよび変性の熱力学は、特定のモデルによっているタンパク質の特定条件の自由エネルギーにより規定される。タンパク質フォールディングの過程は、とりわけ、疎水性コア中へのアミノ酸残基充填を包含する。タンパク質コア内部のアミノ酸側鎖は、それらがアミノ酸結晶中で占めるのと同一容積を占める。したがって折りたたまれたタンパク質内部は、油滴よりも結晶固体のようであり、したがってタンパク質安定性に寄与する力を決定するための最良モデルは、固体基準状態である。
【００２６】
タンパク質フォールディングの熱力学に寄与する主な力は、ファンデルワールス相互作用、水素結合、静電的相互作用、立体配置エントロピーおよび疎水性作用である。タンパク質安定性を考慮する場合、疎水性作用は、タンパク質内部から無極性基を除去し、それらを水に曝露するというエネルギー結果を指す。アミノ酸加水分解のエネルギーと固体基準状態のタンパク質変性とを比較する場合、疎水性作用は優勢な力である。水素結合はタンパク質フォールディング過程中に確立され、分子内結合は、水との水素結合を犠牲にして形成される。水分子は、充填疎水性タンパク質コアから「押し出される」。これらの力はすべて、併合し、折りたたまれたタンパク質の全体的安定性に寄与するが、この場合、理想的充填が起こる程度は、タンパク質の相対的安定性の程度を決定する。最大充填結果は、溶媒からの最大遮蔽を有する残基または疎水性コアの中心を生じることである。
【００２７】
親油性薬剤はペプチドの疎水性コア中に存在すると思われるため、薬剤が放出され得る前にペプチドを変性するためにはエネルギーを要する。変性過程は、アミノ酸を水和するかまたはタンパク質の融解温度を達成することにより、疎水性作用を克服する必要がある。水和の熱は、タンパク質の不安定化をもたらす。折りたたまれた状態のタンパク質は通常、折りたたまれていない状態より５〜１５ｋｃａｌ／モルしか有利でない。それにもかかわらず、中性ｐＨで室温でのタンパク質変性は、化学試薬を要する。実際、タンパク質の部分的変性は、不可逆的化学的または配座過程の開始前にしばしば観察される。さらに、タンパク質配座は一般に、有害化学反応の速度および程度を制御する。
【００２８】
タンパク質による活性物質の配座保護は、タンパク質の折りたたまれた状態の安定性およびその物質の分解に関連した熱力学に左右される。この物質の分解に必要な条件は、タンパク質変性の場合とは異なるはずである。
【００２９】
アミノ酸の選択は、所望される物理学的特性によって異なる。例えば、かさ高いかまたは親油性の増大が望ましい場合には、担体ポリペプチドが以下に提示される表中のアミノ酸中で濃化される。極性アミノ酸は、その一方で、ポリペプチドの親水性を増大するよう選択され得る。
【００３０】
アミノ酸のイオン化は、ｐＨ制御ペプチド変性のために選択され得る。アスパラギン酸、グルタミン酸およびチロシンは胃中では中性電荷を保有するが、しかし腸への進入時にイオン化する。逆に、塩基性アミノ酸、例えばヒスチジン、リジンおよびアルギニンは胃中でイオン化して、アルカリ性環境中では中性である。
【００３１】
他の因子、例えば芳香族残基間のπ−π相互作用、プロリンの付加によるペプチド鎖のもつれ、ジスルフィド架橋および水素結合はすべて、所定の用途のための最適アミノ酸配列を選択するために用いられ得る。線状配列の次数は、これらの相互作用が最大にされ得る方法に影響を及ぼし、ポリペプチドの二次および三次構造を指向するのに重要である。
【００３２】
さらに、反応性側鎖を有するアミノ酸（例えばグルタミン酸、リジン、アスパラギン酸、セリン、トレオニンおよびシステイン）が、同一の担体ペプチドに複数の活性作用物質または補助剤を結合するために組み込まれ得る。これは、２つまたはそれ以上の活性物質間の相乗作用が望ましい場合に、特に有用である。
【００３３】
上記のように、担体化合物の可変性の分子量は、活性作用物質の放出速度論に及ぼす顕著な作用を有し得る。その結果、低分子量活性作用物質送達系が好ましい。本発明の利点は、ポリペプチドの鎖長および分子量が、所望されるコンホメーション保護のレベルに基づいて最適化され得ることである。この特性は、一次放出機構の速度論と協力して最適化され得る。したがって本発明の別の利点は、担体ポリペプチドの分子量を増大することにより、放出時間延長が付与され得るということである。本発明の別の有意の利点は、活性作用物質放出の速度論が、担体ペプチドと活性作用物質との間の重要な結合の酵素的加水分解により主に制御されることである。
【００３４】
デキストランは、結腸特異的薬剤送達に関する薬剤の共有結合のための高分子担体として探究されてきたことで知られている唯一の多糖である。一般に、薬剤−デキストラン結合体重量全体の１／１０まで薬剤を負荷することができるに過ぎなかった。上記のように、多糖は主に結腸中で消化され、薬剤吸収は主として結腸に限定される。デキストランと比較した場合、本発明は２つの大きい利点を有する。第一にペプチドは、腸管腔中に見出されるかまたは刷子縁膜に関連したいくつかのアミノペプチダーゼのいずれか１つにより加水分解され、したがって活性作用物質放出およびその後の吸収は、空腸または回腸中で起こり得る。第二に、担体分子の分子量は制御され、したがって活性作用物質負荷も制御され得る。
【００３５】
実際の例として、以下の表は、親油性アミノ酸（水分子１未満）ならびに選択された鎮痛薬およびビタミンの分子量を列挙する。
【００３６】
（表２）
アミノ酸                            ＭＷ
グリシン                            ５７
アラニン                            ７１
バリン                              ９９
ロイシン                            １１３
イソロイシン                        １１３
フェニルアラニン                    １４７
チロシン                            １６３
活性作用物質                        ＭＷ
アセトアミノフェン                  １５１
ビタミンＢ６（ピロキシジン）        １６９
ビタミンＣ（アスコルビン酸）          １７６
アスピリン                          １８０
イブプロフェン                      ２０６
レチン酸                            ３００
ビタミンＢ２（リボフラビン）        ３７６
ビタミンＤ２                        ３９７
ビタミンＥ（トコフェロール）        ４３１
胃を通過するコンホメーション保護は、選択された活性作用物質（オリゴペプチドとの共有結合の容易さに基づいて選定された）のために重要であるため、親油性アミノ酸が好ましい。ポリペプチドへのアミノ酸の縮合が考察されるよう、アミノ酸の分子量から１８を差し引いた。例えばアスピリンに連結されたグリシン（分子量＝５８８）の十量体は、７５０の総分子量を有し、アスピリンは活性作用物質送達組成物の総重量の２４％を示すか、またはデキストランに関する最大薬剤負荷の２倍を上回る。これは、Ｎ末端またはＣ末端適用に関してのみ、デカグルタミン酸のペンダント基に結合された活性作用物質に関してだけである（例えば、１８０の分子量を有する薬剤は５８％の負荷を有すると考えられるが、しかし、これはまったく実際的でない場合がある）。
【００３７】
活性作用物質のアルコール、アミンまたはカルボン酸基は、オリゴペプチドまたはポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖に共有結合される。結合の位置は、多少は、官能基選択に左右される。例えば活性薬剤がカルボン酸である場合（例えばアスピリン）には、図１に示されているように、オリゴペプチドのＮ末端が好ましい結合点である。活性作用物質がアミンである場合（例えばアンピシリン）には、Ｃ末端が図２に示されているように安定ペプチド結合活性作用物質を達成するための好ましい結合点である。Ｃ末端およびＮ末端の例の両方において、ペプチドは、本質的には、新規のペプチド結合を形成する１つの単量体単位により延長される。活性作用物質がアルコールである場合には、Ｃ末端またはＮ末端は、安定組成物を達成するために、好ましい結合点である。アルコール、ノルエチンドロンがポリ（ヒドロキシプロピルグルタミン）に共有結合された上記の例の場合と同様に、アルコールはホスゲンによりアルキルクロロホルメートに転換され得る。次いで、本発明は、図３に示されているように、この重要な中間物質とペプチド担体のＮ末端との反応に関する。図１〜３はまた、腸ペプチダーゼによるペプチド担体からの有効成分の放出を示す。
【００３８】
アルコールはグルタミン酸のγカルボキシレートに選択的に結合され得、次いでこの結合体はペプチド担体のＣ末端に共有結合され得る。グルタミン酸−薬剤結合体は二量体であると考えられ得るため、この生成物はペプチド担体のＣ末端に２つの単量体単位を付加し、そこでグルタミン酸部分は図４に示されているようなペプチドと薬剤との間のスペーサーとして役立つ。重要なペプチド結合の腸酵素的加水分解は、ペプチド担体からグルタミン酸−薬剤部分を放出する。次いで、グルタミン酸残基の新規に生成された遊離アミンは、分子内アミノ基転移反応を受け、それにより図５に示されているように、ピログルタミン酸の同時生成を伴い、活性作用物質を放出する。あるいはグルタミン酸−薬剤二量体は、グルタミン酸Ｎ−カルボン酸無水物のγエステルに転換され得る。次いで、この中間物質は、図４に示されているように任意の適切な開始剤を用いて、上記のように重合され得る。この重合の産物は、有効成分が複数のペンダント基に結合されたポリグルタミン酸である。それゆえ、担体ペプチドの最大薬剤負荷が達成され得る。さらに、その他のアミノ酸−ＮＣＡはγエステルグルタミン酸ＮＣＡと共重合されて、薬剤送達系に特定の特性を付与し得る。
【００３９】
本発明はまた、機能性側鎖を含有するその他のポリペプチドに関する同一機構の作用を付与する方法も提供する。例としては、ポリリジン、ポリアスパラギン、ポリアルギニン、ポリセリン、ポリシステイン、ポリチロシン、ポリトレオニンおよびポリグルタミンが挙げられるが、これらに限定されない。当該機構は、ペンダント基上のスペーサーまたはリンカーを介してこれらのポリペプチドに翻訳でき、これは、好ましくはグルタミン酸−薬剤二量体により終了される。この担体ペプチド−薬剤結合体は、薬剤部分の一次放出がペプチダーゼに主に依存し、エステラーゼに依存しないという事実により、従来技術と区別される。あるいは活性作用物質はペンダント基に直接結合され得るが、この場合、消化管中のいくつかのその他の固有酵素が放出に影響を及ぼし得る。
【００４０】
活性作用物質は、公知の技術を用いてポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖に共有結合され得る。ペプチドのＮ末端型に有機化合物を連結する例としては、ＬＨ−ＲＨへのナフチル酢酸の結合、オピオイドペプチドへのクマリン酸の結合、そしてテトラガストリンおよびペンタガストリンへの１，３−ジアルキル−３−アシルトリアゼンの結合が挙げられるが、これらに限定されない。別の例としては、ペプチド結合ビオチンおよびペプチド結合アクリジンを生成するための公知の技術が存在する。
【００４１】
ポリペプチド担体は、従来技術を用いて調製され得る。好ましい技術は、アミノ酸Ｎ−カルボン酸無水物の混合物の共重合である。あるいは、特定配列が望ましい場合、固体状態自動ペプチド合成機が用いられ得る。
【００４２】
組成物への安定剤の添加は、ポリペプチドをさらに安定化する可能性を有する。安定剤（例えば、糖、アミノ酸、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および塩）は、タンパク質のアンフォールディングを防止することが示されている。本発明の別の実施形態では、多糖、アミノ酸複合体、ＰＥＧまたは塩中の担体ペプチド−活性作用物質結合体をマイクロカプセル封入することにより、活性作用物質の前一次放出が付与される。
【００４３】
親水性化合物は、専門化された輸送体を介して効率的に腸管上皮を通して吸収される、という証拠が存在する。膜輸送系全体は、本質的に非対称であって、補因子に対して非対称的に応答する。したがって、膜輸送系の励起は、活性作用物質の局在的送達を生じる何らかの種類の専門化された補助剤に関与する、と予測される。輸送支持体の物理的特性によって分類されるいくつかの公知の腸輸送系が存在する。それらの例としては、アミノ酸、オリゴペプチド、グルコース、一カルボン酸、ホスフェート、胆汁酸およびＰ−糖タンパク質輸送系が挙げられ、各々、それ自体の関連輸送機構を有する。機構は、水素イオン、ナトリウムイオン、結合部位またはその他の補因子に左右され得る。本発明はまた、活性作用物質の吸収を促すための腸管上皮輸送系に関する機構を標的化することが可能である。
【００４４】
本発明の別の実施形態では、組成物は、活性作用物質の生物学的利用能を強化するために１つまたはそれ以上の補助剤を含む。補助剤の添加は、別の方法では十分に吸収されない活性作用物質を用いる場合に、特に好ましい。適切な補助剤としては、例えば以下のものが挙げられる：パパイン（管腔中にアミノペプチダーゼＮの触媒ドメインを放出するための強力な酵素である）；糖認識物質（ＢＢＭにおいて酵素を活性化する）；ならびに胆汁酸（ペプチドの吸収を強化するためにペプチドに結合されている）。
【００４５】
好ましくは、得られるペプチド−活性作用物質結合体は、適切な賦形剤を用いて錠剤に処方され、造粒されるかまたは乾燥圧縮され得る。
【００４６】
本発明の組成物は、本質的には、酸およびアミンからのアミドの生成であり、以下の実施例により調製され得る。
【００４７】
（酸／Ｎ末端結合（図１））
酸性生物活性作用物質を窒素下でＤＭＦ中に溶解し、０℃に冷却し得る。次にこの溶液をジイソプロピルカルボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾールで処理し、その後アミンペプチド担体で処理し得る。次にこの反応物を室温で数時間攪拌し、尿素副産物を濾し取って、生成物をエーテル中で沈降させ、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）または透析を用いて精製し得る。
【００４８】
（アミン／Ｃ末端結合（図２））
ペプチド担体を窒素下でＤＭＦ中に溶解し、０℃に冷却し得る。次にこの溶液をジイソプロピルカルボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾールで処理し、その後アミン生物活性作用物質で処理し得る。次に反応物を室温で数時間攪拌し、尿素副産物を濾し取って、生成物をエーテル中で沈降させ、ＧＰＣまたは透析を用いて精製する。
【００４９】
（アルコール／Ｎ末端結合（図３））
以下の実施例において、アルコールとトリホスゲンの組合せは、クロロホルメートを生じ、これは、ペプチドのＮ末端と反応させると、カルバメートを生成する。これに続いて、アルコール生物活性作用物質を窒素下でドライＤＭＦ中でトリホスゲンで処理する。次に適切に保護したペプチド担体を徐々に添加して、溶液を室温で数時間攪拌する。次に生成物をエーテル中で沈降させる。粗製生成物を適切に脱保護し、ＧＰＣを用いて精製する。
【００５０】
その他の溶媒、活性作用物質、共触媒および塩基が用いられ得る。その他の溶媒の例としては、ジメチルスルホキシド、エーテル（例えば、テトラヒドロフラン）、または塩素化溶媒（例えば、クロロホルム）が挙げられる。その他の活性作用物質の例としては、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはチオニルクロリドが挙げられる。別の共触媒の例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドである。塩基の例としては、ピロリジノピリジン、ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミンまたはトリブチルアミンが挙げられる。
【００５１】
（γ−アルキルグルタメートの調製（図４））
３０を上回る異なるγ−アルキルグルタメートが調製されており、そのいずれもが、選択された薬剤アルコールに適し得る。例えばグルタミン酸、アルコールおよび濃塩酸の懸濁液を調製し、数時間加熱し得る。γ−アルキルグルタメート生成物をアセトン中に沈降させて、濾過し、乾燥して、温水から再結晶化し得る。
【００５２】
（γ−アルキルグルタメート／Ｃ末端結合（図４））
ペプチド担体を窒素下でＤＭＦ中に溶解し、０℃に冷却し得る。次にこの溶液をジイソプロピルカルボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾールで処理し、その後γ−アルキルグルタメート生物活性作用物質で処理し得る。次に反応物を室温で数時間攪拌し、尿素副産物を濾し取って、生成物をエーテル中で沈降させ、ＧＰＣまたは透析を用いて精製し得る。
【００５３】
（γ−アルキルグルタメート−ＮＣＡの調製）
トリホスゲンが添加された乾燥ＴＨＦ中にγ−アルキルグルタメートを懸濁し、混合物が均質になるまで混合物を窒素雰囲気下で還流させ得る。溶液をヘプタン中に注ぎ入れて、ＮＣＡ生成物を沈降させ、これを濾過して、乾燥し、適切な溶媒から再結晶化し得る。
【００５４】
（ポリ［γ−アルキルグルタメート］の調製）
粘性になるまで（代表的には、一晩）溶液に触媒量の第一アミンを添加したドライＤＭＦ中にγ−アルキルグルタメート−ＮＣＡを溶解し得る。溶液を水に注ぎ入れて濾過することにより、溶液から生成物を単離し得る。ＧＰＣまたは透析を用いて生成物を精製し得る。
【００５５】
（実施例１）
（ポリグルタミン酸のＮ末端に共有結合されたＴ３およびＴ４のコポリマーを含む、キャップされたヨードチロニン組成物の調製）
ポリグルタミン酸の合成は、種々の報告された方法により周知である。本実施例に関しては、ベンジルグルタミン酸ＮＣＡ（ＢｎＧｌｕ−ＮＣＡ）単量体の活性化により、ポリグルタミン酸を合成した。次にＢｎＧｌｕ−ＮＣＡを重合し、臭化水素を用いてベンジル基を除去する。ポリグルタミン酸をキャップする場合、遊離カルボン酸への望ましくない求核性の付与を伴わない臭化水素複合体からのそのＮ末端アミノ基の遊離が重要である。炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムおよび酢酸ナトリウムを用いた反応はグルタミン酸／Ｔ４／Ｔ３コポリマーを生じ、Ｔ４およびＴ３の組み込みはｐＫｂ増大に伴って低減する。酢酸ナトリウムは好ましい試薬であったが、これは、そのｐＫｂが臭化ナトリウム、ポリグルタミン酸およびナトリウム塩の間であるためであった。塩基性アルミナを用いた反応はＴ４−ＮＣＡおよびＴ３−ＮＣＡをインタクトなまま保持し、見かけのキャップまたは自己重合を伴わなかった。Ｔ４−ＮＣＡおよびＴ３−ＮＣＡの安定性は、グルタミン酸／Ｔ４／Ｔ３コポリマーを商業的に製造する方法に影響を及ぼす。酢酸ナトリウムは、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウム、ピバル酸ナトリウム、塩基性アルミナ、またはアミノ基で錯化された臭化水素を中和し得る任意のその他の弱塩基で置換され得る。
【００５６】
グルタミン酸／Ｔ４／Ｔ３コポリマーの合成を、ベンジルグルタミン酸、チロキシンおよびトリヨードチロニンを用いて開始した。これらのシントンの各々を、適切な有機溶媒中でトリホスゲンと別々に反応させた。開始剤としてナトリウムメトキシドを用いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で、ＢｎＧｌｕ−ＮＣＡを重合した。酢酸中の１５％臭化水素で、ポリベンジルグルタミン酸を脱保護した。この生成物は、それがＤＭＦ中に溶解され、酢酸ナトリウムで処理される場合、非錯化臭化水素を含有しないことが必要である。前に調製したＴ４−ＮＣＡおよびＴ３−ＮＣＡをブレンドし、溶液に添加した。次に、Ｔ４−ＮＣＡまたはＴ３−ＮＣＡが薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりもはや検出されなくなるまで、反応物を攪拌した。最終産物を水に添加し、沈殿物を水で洗浄して、真空乾燥し、白色非晶質粉末を得た。
【００５７】
いくつかの弱塩基を用いた実験は、カルボン酸の種々のナトリウム塩がポリグルタミン酸をキャップする上で作用することを明示した。酢酸ナトリウムの代わりにプロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリウムおよびピバル酸ナトリウムを用いて反応を試みたが、すべて、本質的に同一結果であった。
【００５８】
（ベンジルグルタミン酸−ＮＣＡの調製）
ベンジルグルタミン酸（２５ｇ）を、窒素下で無水酢酸エチル４００ｍＬ中に懸濁した。混合物を加熱還流し、３０ｇのトリホスゲンを６回に分けて等量ずつ添加した。反応物を、均質になるまで３時間還流させた。この溶液を室温まで冷却し、濾過して、真空濃縮した。熱無水酢酸エチル５０ｍＬから白色粉末を再結晶化して、１７．４ｇ（６３％）の白色粉末を得た。
【００５９】
（Ｔ４−ＮＣＡの調製）
窒素流入口を装備した丸底フラスコ中で、５ｇのチロキシンを２５ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および１．３ｇのトリホスゲンと一緒に攪拌し、混合物を均質になるまで４時間還流させた。この溶液を室温まで冷却し、攪拌しながらヘプタン２００ｍＬに滴下した。結晶を濾過し、真空乾燥して、４．７２ｇ（９１％）のオフホワイト色粉末を得た。
【００６０】
（Ｔ３−ＮＣＡの調製）
窒素流入口を装備した丸底フラスコ中で、４．２９ｇのトリヨードチロニンを２０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および１．４５ｇのトリホスゲンと一緒に攪拌し、混合物を均質になるまで４時間還流させた。溶液を室温に冷却し、攪拌しながらヘプタン２００ｍＬに滴下した。液体を黄色ゴムからデカントし、これを無水酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶化し、高真空下で乾燥して、２．５ｇ（５６％）の白色粉末を得た。
【００６１】
（ポリベンジルグルタミン酸の調製）
ベンジルグルタミン酸（１７．４ｇ）を窒素下で無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中に溶解し、２３８ｍｇのナトリウムメトキシドを一部ずつ添加した。この溶液を２日間攪拌すると、粘性が顕著に増大した。この溶液を、攪拌しながら１．５Ｌの石油エーテル中に注ぎ入れた。石油エーテルをデカントし、さらに１Ｌの石油エーテルを添加し戻した。混合物を手動で攪拌し、石油エーテルをデカントし、そして石油エーテル５００ｍＬを用いてこの過程を反復した。白色固体を風乾し、次に真空乾燥して、１４．７（９５％）の白色薄紙様固体（ｗｈｉｔｅ  ｆｌｕｆｆｙ  ｐａｐｅｒ−ｌｉｋｅ  ｓｏｌｉｄ）を得た。
【００６２】
（ポリグルタミン酸の調製）
酢酸（１０ｍＬ）を、酢酸中の０ｍＬ、３０重量％臭化水素（ＨＢｒ）とともに攪拌し、ここに１．９６のポリベンジルグルタミン酸を手で添加した。混合物を室温で１日攪拌し、次にエーテル５０ｍＬに添加した。白色沈殿物を濾過し、４×３０ｍＬのエーテルで洗浄して、高真空下で乾燥して、１．１１ｇ（９７％）の白色粉末を得た。
【００６３】
（グルタミン酸／Ｔ４／Ｔ３コポリマーの調製）
ポリグルタミン酸（３７５ｍｇ）を乾燥３ｍＬ  ＤＭＦ中に溶解した。酢酸ナトリウム（２４ｍｇ）を添加し、その後、１０５ｍｇのＴ４−ＮＣＡおよび８ｍｇのＴ３−ＮＣＡの配合物を添加した。溶液を２日間攪拌すると、ＴＬＣは、チロニン出発物質の非存在を示した。溶液を水３０ｍＬ中に注ぎ入れ、１０℃で一晩冷却した。沈殿物を濾過し、水で洗浄して、高真空下で乾燥して、４１３ｍｇ（８５％）の薄いベージュ色の粉末を得た。プロトンＮＭＲは、ポリグルタミン酸のＮ末端に共有結合されたＴ３およびＴ４のコポリマーを明らかにしたが、これは、プロナーゼ酵素系により２時間でほぼ完全に消化された。
【００６４】
（実施例２）
（ペプチドポリマーの調製）
ポリアスパラギン酸：Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）（１３ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）およびＡｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＮＣＡ（２００ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）中に溶解し、溶液をアルゴン下で室温にて一晩攪拌した。翌朝、２．５ｍｌの反応混合物を別個のフラスコ（フラスコＢ）に移した。Ｔ４−ＮＣＡ（２７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を元のフラスコ（フラスコＡ）に添加し、両溶液の攪拌を、アルゴン下でさらに２４時間、継続させた。次に、各フラスコに水（５０ｍｌ）を添加して、ポリマーを沈殿させた。得られた固体を濾過により収集し、真空下で一晩乾燥した。
【００６５】
次に、乾燥Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）ｎ（フラスコＢ）およびＴ４−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）ｎ（フラスコＡ）を、水（３ｍｌ）中の９５％トリフルオロ酢酸中に溶解し、室温で２時間攪拌した。次に、エチルエーテル（１０ｍｌ）の添加により脱保護ポリマーを沈殿させた後、４℃で２時間懸濁液を貯蔵した。次に濾過によりそれぞれのポリマーを収集し、固体を減圧下で一晩乾燥した。これは、４８ｍｇのＡｓｐｎ（フラスコＢ）および１２ｍｇのＴ４−Ａｓｐｎ（フラスコＡ）を生じた。ＭＡＬＤＩは、Ｔ４−Ａｓｐｎ（フラスコＡ）が種々の長さのポリマーの混合物：Ｔ４−Ａｓｐ３−１２から成ることを示した。
【００６６】
このプロトコールを用いて、ポリセリンおよびポリトレオニンも調製した。セリン反応混合物は、Ｎ−メチルモルホリン（１．１当量）を含有した。
【００６７】
【表１】
2004523480.tif 000003
反応物を分割する前に、元の反応物中の総アミノ酸含量に基づいて、収率を概算した。質量範囲は、ＭＡＬＤＩから決定した。１００％を超える収率は、反応混合物が分割された場合の塩の存在または不均一分布のいずれかを反映し得る。
【００６８】
ＨＰＬＣおよびプロナーゼ実験は、Ｔ４−Ａｓｐ３−１２、Ｔ４−Ｓｅｒ４−９およびＴ４−Ｔｈｒ１−８試料中に、遊離Ｔ４がほとんど〜全く存在しないことを、そしてＴ４が消化時に遊離されることを示す。
【００６９】
（Ｎ−カルボキシ無水物）
グルタミン酸に関して報告したプロトコールと同様のプロトコールを用いて、以下に列挙されるアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）を調製した。それらの最終精密検査における微量バリエーションを以下に示す。
【００７０】
【表２】
2004523480.tif 000004
【００７１】
【表３】
2004523480.tif 000005
（実施例３）
（（Ｇｌｕ）ｎ−セファレキシンの調製）
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）ＮＣＡ（１．０００ｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびセファレキシン・ＨＣｌ（０．１０６ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（５ｍｌ）中に溶解した。次に反応物をアルゴン下で室温で攪拌した。３日後、減圧下での回転蒸発により溶媒を除去した。次に、得られた固体をアルゴン下に置き、次にジオキサン（２ｍｌ）中の４Ｎ  ＨＣｌに溶解した後、アルゴンブランケット下で室温で攪拌した。１時間後、減圧下の回転蒸発により、ジオキサンおよびＨＣｌを除去した。次に固体をメタノール（２ｍｌ）中に懸濁して、残留ＨＣｌおよびジオキサンを除去するために、回転蒸発によりもう一度乾燥させた。次にこの物質をメタノール（２ｍｌ）中に再懸濁し、水（２０ｍｌ）を添加することにより沈殿させた。次に水性懸濁液を４℃で４時間貯蔵し、遠心分離により固体を単離した。次にペレット化物質を減圧下で一晩乾燥させた。この過程は、ＭＡＬＤＩによって決定されるように、（Ｇｌｕ）ｎおよび（Ｇｌｕ）ｎ−セファレキシン（４６４ｍｇ）の混合物を生じた。ＭＡＬＤＩは、ポリマー（Ｇｌｕ）７−１３および（Ｇｌｕ）５−１４−セファレキシンの混合物を示す。その他の鎖長が存在し得るが、それらはＭＡＬＤＩスペクトルでははっきり見えない。逆相ＨＰＬＣ（２６５ｎｍ検出、Ｃ１８カラム、１６％ＭｅＯＨ／４％ＴＨＦ／８０％水移動相）は、遊離セファレキシンが単離物質中に存在しないことを示した。ＨＰＬＣにおける「水」は、実際には、０．１％ヘプタンスルホン酸および１．５％トリエチルアミンの水性緩衝液をいう。
【００７２】
（実施例４）
（ナルトレキソン誘導体：）
【００７３】
【化１】
2004523480.tif 000006
３−メチル−ナルトレキソン：ナルトレキソン（６．０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を、蒸留水１００ｍｌ中に溶解した。この溶液を１ＮのＮａＯＨで滴定して、最終ｐＨを１１．８とした。滴定過程において、中性ナルトレキソンを溶液から沈殿させ、次に溶液に戻した。ｐＨが１１．８に達したら、高減圧下での回転蒸発により溶媒を除去し、得られた固体を減圧下で室温で一晩、貯蔵した。次に固体を無水テトラヒドロフラン（２００ｍｌ）中に懸濁／溶解し、アルゴン下で室温で攪拌した。テトラヒドロフラン５０ｍｌ中のヨードメタン（２．１ｍｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液を３０分の過程にわたって滴下した。次にこの反応物をアルゴン下で室温でさらに３時間、攪拌した。次に減圧下で回転蒸発により、溶媒を除去した。次に残留固体を４０ｍｌのＣＨＣｌ３中に溶解し、３０ｍｌの飽和ＮａＣｌで、３×３０ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨで、そして最後に３０ｍｌの飽和水性ＮａＣｌでさらに２回、有機溶液を洗浄した。有機溶液を収集し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。回転蒸発による溶媒の除去、ならびに減圧下での一晩乾燥により、純粋３−メチルナルトレキソン（５．６ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、収率９６％）を褐色残渣として得、その組成をＴＬＣおよび１Ｈ−ＮＭＲにより決定した。ナルトレキソンのスペクトルとの比較により化合物を同定するために用いた特徴を以下に示す：１Ｈ−ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．６７７（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、６．５９１（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、３．８７４（ｓ、３Ｈ、メトキシ基）、０．６〜０．５ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）および０．２〜０．１ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）。
【００７４】
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＮａＩ）−ＯｔＢｕ：固体Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ（０．９６ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）、ナルトレキソン（１．００ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）およびＰｙＢｒｏｐ（１．７３ｇ、３．７１ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ５ｍｌ中に溶解し、アルゴン下で室温で攪拌した。乾燥Ｎ−メチルモルホリン（１．０８ｍｌ、９．８１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を、アルゴン下で室温で攪拌し続けた。２日後、さらなるＢｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ（０．０９６ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｒｏｐ（０．１７３ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．１０ｍｌ、０．９８１ｍｍｏｌ）を添加した。さらに２日後、高減圧下で回転蒸発により、溶媒を除去した。得られた残渣を次にＣＨＣｌ３中に溶解し、得られた有機溶液を、２×２０ｍｌの飽和ＮａＣｌ、３×２０ｍｌの１０％Ｎａ２ＣＯ３で抽出し、そして２０ｍｌの飽和水性ＮａＣｌで最終洗浄した。有機溶液を収集し、硫酸ナトリウム上で乾燥した後、シリカ上に吸着させた。純粋ナルトレキソン結合体化アミノ酸（０．４８６ｇ、０．７８ｍｍｏｌ、２９％）を次に、フラッシュクロマトグラフィーおよびＣＨＣｌ３中の０〜１．５％のＣＨ３ＯＨ勾配により単離した。ＴＬＣ（６：１  ＣＨ３ＯＨ／ＣＨＣｌ３）により単離物質の純度を決定し、１Ｈ−ＮＭＲによりアミノ酸部分およびナルトレキソンの両方の存在を確証した。表示プロトン：１Ｈ−ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、６．６３（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、４．３〜４．２（ｍ、１Ｈ、グルタミン酸α−プロトン）、１．７〜１．３（ｂｓの対、１８Ｈ、Ｂｏｃ基およびＯｔＢｕ基）、０．６〜０．４ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）および０．２〜０．０ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）。
【００７５】
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＮａＩ）−ＯｔＢｕ：同様のプロトコールを用いて、単離収率４１％で、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＮａＩ）−ＯｔＢｕを得た。表示プロトン：１Ｈ−ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．８４（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、６．６６（ｄ、１Ｈ、ナルトレキソン芳香族）、４．６〜４．５（ｍ、１Ｈ、アスパラギン酸α−プロトン）、１．６〜１．３（ｂｓの対、１８Ｈ、Ｂｏｃ基およびＯｔＢｕ基）、０．７〜０．５ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）および０．４〜０．１ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）。
【００７６】
（ＮＭＲ特徴づけ：）
ナルトレキソンは複合ＮＭＲスペクトルを有する一方、別個の化学的シフトを有し、かつナルトレキソンに独特であるいくつかの重要なプロトンが存在する。
【００７７】
【化２】
2004523480.tif 000007
（実施例５）
【００７８】
【化３】
2004523480.tif 000008
（ポリ−Ｇｌｕ（アシクロビル））
ＤＭＦ（２５ｍｌ）中のポリ−ｇｌｕ１５（０．６００ｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（２．０７ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を周囲温度で１時間攪拌した。次に、Ｎ−メチルモルホリン（０．５１ｍｌ、４．７ｍｍｏｌ）を添加し、その後アシクロビル（１．７４ｇ、７．７５ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２５ｍｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．８５ｍｌ）の混合物を添加した。反応混合物を周囲温度で４日間攪拌した。この後、水（５０ｍｌ）を添加し、すべての溶媒を除去した。乾燥させた混合物に水（１００ｍｌ）を添加し、未処理アシクロビルの沈殿を生じた。固体を遠心分離し、上清を限外濾過（ＹＭ１膜）を用いて精製した。約３００ｍｌの水を膜に通した。ＮＭＲは、予期せぬアルキル−尿素側鎖結合不純物を示した。ポリ−ｇｌｕ（アシクロビル）（０．９７０ｇ）を、淡黄色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．１１（ｂｒ  ｍ、４Ｈ、尿素）、２．０１（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．３９（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、２．７２（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、尿素）、３．３２（ｂｒ  ｍ、６Ｈ、アシクロビルＣＨ２および尿素）、３．８３（ｂｒ  ｍ、３Ｈ、尿素）、４．３８（ｂｒ  ｄ、３Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、５．４７（ｂｒ  ｓ、２Ｈ、アシクロビル１’ＣＨ２）、７．９４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、アシクロビル８ＣＨ）。
【００７９】
（実施例６）
【００８０】
【化４】
2004523480.tif 000009
（ポリ−Ｇｌｕ（フェキソフェナジン））
ＤＭＦ（５ｍｌ）中のポリ−ｇｌｕ１５（０．０７８ｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．０３５ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。３０分間の攪拌後、Ｎ−メチルモルホリンを添加した（０．０３ｍｌ、０．２４ｍｍｏｌ）。１０分間の攪拌後、フェキソフェナジン（０．１００ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．０７ｍｌ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍｌ）の溶液をシリンジにより添加した。反応物を周囲温度で３日間攪拌した後、試料を水（２５ｍｌ）中に溶解した。固体沈殿物を形成したが、これは薬剤−結合体フェキソフェナジンおよび遊離フェキソフェナジンの両方であった。水を酸性にして、すべての固体を溶解した。限外濾過（ＹＭ１、その後ＹＭ３）、ならびにｐＨ７でＳｅｐｈａｄｅｘ−２５を用いたサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製して、ポリ−ｇｌｕ（フェキソフェナジン）（０．０１０ｇ）を白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．３７（ｓ、８Ｈ、ｆｅｘ．ＣＨ２およびＣＨ３）、１．５８（ｂｒ  ｍ、５Ｈ、ｆｅｘ．ＣＨおよびＣＨ２）、１．９９（ｂｒ  ｍ、２４Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．３１（ｂｒ  ｍ、２４Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、２．７０（ｂｒ  ｍ、１０Ｈ、ｆｅｘ．ＣＨおよびＣＨ２）、４．１４（ｂｒ  ｍ、２６Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、７．２５（ｂｒ  ｍ、１４Ｈ、ｆｅｘ．芳香族  Ｈ）。
【００８１】
（実施例７）
【００８２】
【化５】
2004523480.tif 000010
（ポリ−Ｇｌｕ（ザルシタビン））
ＤＭＦ（８ｍｌ）中のポリ−ｇｌｕ１５（０．１２３ｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．４０３ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、Ｎ−メチルモルホリン（０．１３ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。３５分後、ザルシタビン（０．２００ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．１０ｍｌ、０．９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２ｍｌ）の溶液を、シリンジにより添加した。得られた混合物を周囲温度で４８時間攪拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１５ｍｌ）中に溶解した。限外濾過（ＹＭ１、その後ＹＭ３）、ならびにｐＨ７でＳｅｐｈａｄｅｘ−２５を用いたサイズ排除は、ポリ−ｇｌｕ（ザルシタビン）（０．０８３ｇ）を明黄色固体として生じた：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６  ｗ／Ｄ２Ｏ）δ１．１４（ｂｒ  ｍ、２０Ｈ、尿素）、１．９０（ｂｒ  ｍ、３０Ｈ、ザルシタビン中Ｇｌｕ−βＨ、Ｇｌｕ−γＨ、およびＣＨ２）、２．６６（ｂｒ  ｍ、４Ｈ、尿素）、３．２４（ｂｒ  ｍ、３６Ｈ、ザルシタビン中尿素、ＣＨおよびＣＨ２）、４．２９（ｂｒ  ｍ、８Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、５．８７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ザルシタビン１’ＣＨ）、７．１８（ｂｒ  ｓ、１．１９Ｈ、ザルシタビンＮＨ２）、８．５２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ザルシタビン６ＣＨ）。
【００８３】
（実施例８）
【００８４】
【化６】
2004523480.tif 000011
（ポリ−Ｇｌｕ（スタブジン））
調製は、ポリ−ｇｌｕ（ザルシタビン）と同様であった。限外濾過（ＹＭ１）を用いた精製は、ポリ−ｇｌｕ（スタブジン）（０．０８９ｇ）を白色固体として生じた：１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．８７（ｓ、３Ｈ、スタブジン５ＣＨ３）、２．０６（ｂｒ  ｍ、３８Ｈ、Ｇｌｕ−βＨおよびＧｌｕ−γＨ）、２．４９（ｂｒ  ｍ、１２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、３．７５（ｂｒ  ｍ、１２Ｈ、尿素およびスタブジン、５’ＣＨ２）、３．９６（ｂｒ  ｍ、１２Ｈ、尿素）、４．４５（ｂｒ  ｄ、１３Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、５．９８（ｄ、１Ｈ、スタブジン、１’ＣＨ）、６．４８（ｄ、１Ｈ、スタブジン３’ＣＨ）、６．９６（ｄ、１Ｈ、スタブジン２’ＣＨ）、７．６３（ｓ、１Ｈ、スタブジン６ＣＨ）。
【００８５】
（実施例９）
【００８６】
【化７】
2004523480.tif 000012
（ポリ−Ｇｌｕ（メトロニダゾール））
調製は、ポリ−ｇｌｕ（ザルシタビン）と同様であった。限外濾過（ＹＭ１）を用いた精製は、ポリ−ｇｌｕ（メトロニダゾール）（０．３２６ｇ）を黄色固体として生じた：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．１８（ｂｒ  ｄ、１３Ｈ、尿素）、１．９３（ｂｒ  ｓ、１７Ｈ、Ｇｌｕ−βＨおよびＧｌｕ−γＨ）、２．７１（ｂｒ  ｓ、１６Ｈ、尿素）、４．０１（ｂｒ  ｍ、１８Ｈ、Ｇｌｕ−αＨおよびメトロニダゾールＣＨ２）、４．５８（ｂｒ  ｓ、２Ｈ、メトロニダゾールＣＨ２）、８．０５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、メトロニダゾール２ＣＨ）。
【００８７】
（実施例１０）
【００８８】
【化８】
2004523480.tif 000013
（メチルナルトレキソン−グルコースケタール結合体）
ジオキサン（２０ｍｌ）中のメチルナルトレキソン（０．２００ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−α−グルコース（２．０２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）、トリフルオロメタンスルホン酸（０．０５ｍｌ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＣｕＳＯ４（１．００ｇ）を添加した。反応混合物を周囲温度で４日間攪拌した。次に反応物を濾過し、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和して、再び濾過した。ジオキサンおよび水を除去し、残渣をＣＨＣｌ３中にとり、水（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で溶媒を除去した。粗製生成物をシリカゲル（ＣＨＣｌ３中０〜１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、遊離メチルナルトレキソンとの１：１混合物でケタール結合体（０．０１０ｇ）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．１４（ｂｒ  ｓ、４Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）、０．５３（ｂｒ  ｍ、４Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）、０．９０（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソンシクロプロピル）、１．４８（ｍ、６Ｈ、ナルトレキソン）、２．１９〜２．７８（ｍ、１２Ｈ、ナルトレキソン）、３．０３（ｍ、２Ｈ、ナルトレキソン）、３．７５（ｑ、２Ｈ、グルコース）、３．８７（ｍ、８Ｈ、ナルトレキソンＣＨ３およびグルコース）、３．９７（ｑ、２Ｈ、グルコース）、４．１４（ｑ、１Ｈ、グルコース）、４．３３（ｔ、１Ｈ、グルコース）、４．６６（ｓ、１Ｈ、ナルトレキソン）、６．６５（ｍ、４Ｈ、ナルトレキソン）。
【００８９】
（実施例１１）
【００９０】
【化９】
2004523480.tif 000014
（２−アミノ−ペンタンジオン酸５−（４−アセチルアミノ−フェニル）エステルまたはＧｌｕ（アセトアミノフェン））
ＴＨＦ（１５ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＳｕｃ）−ＯｔＢｕ（０．５００ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）およびアセトアミノフェン（０．９４４ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（１．４０ｍｌ、１２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を加熱還流し、還流で一晩攪拌した。次に溶媒を除去し、粗製化合物をシリカゲル（ヘキサン中５０〜７５％酢酸エチル）上で精製して、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（アセトアミノフェン）−ＯｔＢｕ（０．４３２ｇ、０．９００ｍｍｏｌ、７２％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４３（ｄ、１８Ｈ、ｔ−Ｂｕ）、１．９７（ｍ、１Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．１２（ｓ、３Ｈ、アセトアミノフェンＣＨ３）、２．２５（ｍ、１Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．６０（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、４．２５（ｍ、１Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、７．０４（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）、７．４８（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）。
【００９１】
ジオキサン（１０ｍｌ）中の４Ｎ  ＨＣｌ中のＢｏｃ−Ｇｌｕ（アセトアミノフェン）−ＯｔＢｕ（０．０９７ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液を、周囲温度で２時間攪拌した。溶媒を除去して、ｇｌｕ（アセトアミノフェン）（０．９０ｇ）をＨＣｌ塩として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ２．１９（ｓ、３Ｈ、アセトアミノフェンＣＨ３）、２．４１（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．９７（ｔ、２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、４．１８（ｔ、１Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、７．１９（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）、７．５１（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ２３．８０、２９．２５、５１．００、６６．２４、１１９．６８、１２１．６９、１３７．００、１４５．３５、１６８．２３、１７０．４２、１７０．７９。
【００９２】
（３−（２，５−ジオキソ−オキサゾリジン−４−イル）−プロピオン酸４−アセチルアミノフェニルエステルまたはＧｌｕ（アセトアミノフェン）ＮＣＡ）  ＴＨＦ（４０ｍｌ）中の２−アミノ−ペンタンジオン酸５−（４−アセチルアミノ−フェニル）エステル（１．５４ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）の混合物に、トリホスゲン（１．０２ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を還流で３時間攪拌した。反応中、生成物は沈殿し、これを濾し取って、ｇｌｕ（アセトアミノフェン）のＮＣＡ（１．０２ｇ、２．６４ｍｍｏｌ、６２％）をオフホワイト色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．０１（ｓ、３Ｈ、アセトアミノフェンＣＨ３）、２．１５（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．８１（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、３．７６（ｔ、１Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、７．０６（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）、７．６３（ｄ、２Ｈ、アセトアミノフェン芳香族）、８．５７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、アミド）、１０．１９（ｓ、１Ｈ、アミド）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ２３．８１、２９．２５、５２．１３、５４．６２、１１９．６６、１２１．７１、１３６．９８、１４５．３５、１６７．４４、１６８．１９、１７０．４６、１７０．７７。
【００９３】
（実施例１２）
【００９４】
【化１０】
2004523480.tif 000015
（Ｇｌｕ（ジピリマドール））
ＴＨＦ（３５ｍｌ）中のジピリマドール（０．５００ｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＳｕｃ）−ＯｔＢｕ（３．９６ｇ、９．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（０．０７２ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．２２ｍｌ、１．９８ｍｍｏｌ）を添加した。次に、この溶液を４８時間還流した。次に溶媒を除去し、粗製生成物をシリカゲル（ヘキサン中２５〜５０％酢酸エチル）上で精製した。２つの主要生成物（１つはＲ＝２〜３（０．５７ｇ）、もう１つはＲ＝３〜４（２．８０ｇ））を淡黄色油として単離した：［Ｒ＝２〜３に関しては、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４１（ｓ、４２Ｈ、ｔ−Ｂｕ）、１．６４（ｂｒ  ｓ、５Ｈ、ジピリマドール）、１．８５（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．０７（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．３７（ｍ、４Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、３．６０〜４．２４（ｍ、１２Ｈ、Ｇｌｕ−αＨおよびジピリマドール）］；［Ｒ＝３〜４に関しては、１．４４（ｓ、５６Ｈ、ｔ−Ｂｕ）以外は上記と同様である］。
【００９５】
ジオキサン（２０ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ジピリマドール）−ＯｔＢｕ（Ｒ＝２〜３、０．５７ｇ）および４Ｎ  ＨＣｌの溶液を、周囲温度で２．５時間攪拌した。溶媒を除去して、生成物（０．２８０ｇ）を淡黄色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．６５（ｂｒ  ｍ、４Ｈ、Ｇｌｕ−βおよびジピリマドール）、２．０４（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．４０（ｂｒ  ｍ、４Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、３．７５（ｂｒ  ｍ、８Ｈ、ジピリマドール）、３．９１（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、８．５５（ｂｒ  ｍ、２Ｈ、アミドＨ）
（実施例１３）
【００９６】
【化１１】
2004523480.tif 000016
（Ｇｌｕ（ＡＺＴ））
ジオキサン（７５ｍｌ）中のジドブジン（１．００ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＳｕｃ）−ＯｔＢｕ（３．００ｇ、７．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（０．１３７ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．８２ｍｌ、７．４９ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を６時間加熱還流し、７０℃で１２時間加熱した。次に溶媒を除去し、粗製生成物をシリカゲル（１００％ＣＨＣｌ３）上で精製して、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＡＺＴ）−ＯｔＢｕ（１．０９ｇ、１．９１ｍｍｏｌ、５１％）を黄色発泡体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４０（ｄ、３２Ｈ、ｔ−Ｂｕ）、１．８６（ｓ、３Ｈ、ＡＺＴ  ＣＨ３）、２．１１（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−βＨ）、２．３８（ｍ、４Ｈ、Ｇｌｕ−γＨおよびＡＺＴ２’ＣＨ２）、４．００〜４．３１（ｍ、４Ｈ、ＡＺＴ４’ＣＨ、５’ＣＨ２およびＧｌｕ−αＨ）、５．２１（ｄ、１Ｈ、ＡＺＴ３’ＣＨ）、６．０１（ｔ、１Ｈ、ＡＺＴ１’ＣＨ）、７．１６（ｓ、１Ｈ、ＡＺＴ６ＣＨ）。
【００９７】
ジオキサン（２０ｍｌ）中の４Ｎ  ＨＣｌ中のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＡＺＴ）−ＯｔＢｕ（１．０９ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の溶液を４時間攪拌し、溶媒を除去した。生成物Ｇｌｕ（ＡＺＴ）（０．８９ｇ、１．９９ｍｍｏｌ、定量的）を黄色ガラスとして得た：１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．８９（ｓ、３Ｈ、ＡＺＴ  ＣＨ３）、２．２１（ｍ、４Ｈ、Ｇｌｕ−βＨおよびＡＺＴ２’ＣＨ２）、２．５８（ｍ、２Ｈ、Ｇｌｕ−γＨ）、３．７０（ｔ、１Ｈ、Ｇｌｕ−αＨ）、４．０５〜４．４１（ｍ、４Ｈ、ＡＺＴ４’ＣＨ、３’ＣＨおよび５’ＣＨ２）、６．１８（ｔ、１Ｈ、ＡＺＴ１’ＣＨ）、７．５１（ｓ、１Ｈ、ＡＺＴ６ＣＨ）。
【００９８】
（実施例１４）
【００９９】
【化１２】
2004523480.tif 000017
（トレオニンＮＣＡ）
ＴＨＦ（２５ｍｌ）中のＴｈｒ−ＯｔＢｕ（０．５００ｇ、２．８５ｍｍｏｌ）の混合物に、トリホスゲン（０．６７７ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を還流で３時間攪拌した。溶液を蒸発乾燥して、Ｔｈｒ−ＮＣＡ（０．５００ｇ、２．４８ｍｍｏｌ、８７％）を白色固体として得た。さらに特性化せずに、Ｔｈｒ−ＮＣＡを用いた。
【０１００】
（実施例１５）
（重合用の出発シントンとしての薬物−ＧＬＵ結合体の調製）
非第一級アミン薬物候補を用いて、薬物−ポリ−Ｇｌｕ結合体の形成は問題があることを立証し得る。この難しさを克服するために、以下の計画を用いたが、この場合、薬物をまずＧｌｕに結合し、次にこのシントンを用いてカップリングを開始する。プロトコールはセルトラリンに、そしてメトクロプラミドに首尾よく適用された。
【０１０１】
（セルトラリンにＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨをカップリングするためのプロトコール）
１．Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（０．４４ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．８４ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解した。
【０１０２】
２．ＤＩＥＡ（０．３１ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を添加し、アミノ酸誘導体を１５分間活性化させた。
【０１０３】
３．塩酸セルトラリン（０．５０ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を攪拌混合物に添加し、その後、さらに０．３１ｍＬのＤＩＥＡを添加した。
【０１０４】
４．この混合物を１６時間攪拌した。
【０１０５】
５．この溶液を取り去り、褐色油を得た。
【０１０６】
６．この油をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に溶解し、得られた溶液を１０％ＨＣｌ（３×３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３、４Ｍ  ＮａＨＳＯ４およびブライン（それぞれ２×３０ｍＬ）で洗浄した。
【０１０７】
７．この溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で回転蒸発により溶媒を除去して、淡褐色油を得た。
【０１０８】
８．この油を真空マニホールド上で乾燥し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：５〜１：４溶媒系を用いたシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより、生成物を精製した。
【０１０９】
９．生成物分画をプールし、回転蒸発により溶媒を再び除去して、０．８５ｇ（９９％）の最終産物セルトラリン−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｇｌｕ−ＮＨ３＋を得た。
【０１１０】
１０．この調製物を真空マニホールドで乾燥した。
【０１１１】
（実施例１６）
（ポリ−リジンイブプロフェンの合成）
（Ｉ．イブプロフェン−Ｏ−スクシンイミドの調製（ＲＩ−１７２）（Ｇｒａｆｅ  ＆  Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  ５５：２８６−２９２，２０００））
【０１１２】
【化１３】
2004523480.tif 000018
室温でジオキサン５ｍＬ中のイブプロフェン（２．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジオキサン２５ｍＬ中のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、２．２７ｇ、１１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。１０分後、ジオキサン１５ｍＬ中のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、１．１６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で５時間攪拌し、次に焼結ガラス漏斗を通して濾過して、ジシクロヘキシルウレア（ＤＣＵ）を除去した。回転蒸発後、生成物を塩化メチレン／ヘキサンから結晶化して、２．３６ｇ（７８％）の無色固体を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）δ０．８６（ｄ、６、ＣＨ３）、１．４９（ｄ、３、α−ＣＨ３）、１．８１（ｍ、１、ＣＨ）、２．４３（ｄ、２、ＣＨ２）、３．３３（ｍ、４、ＣＨ２ＣＨ２）、４．２２（ｑ、１、ＣＨ）、７．１６（ｄ、２、ＡｒＨ）、７．２８（ｄ、ｓ、ＡｒＨ）。
【０１１３】
（ＩＩ．ポリ−リジンとイブプロフェン−Ｏ−スクシンイミドの結合（ＲＩ−１９７））
【０１１４】
【化１４】
2004523480.tif 000019
ポリ−リジンＨＢｒ（Ｓｉｇｍａ、１００ｍｇ、３４．５ｎｍｏｌ）を、炭酸水素ナトリウムでｐＨを８にしておいた水１ｍＬ中に溶解し、室温で攪拌した。この溶液に、ジオキサン２ｍＬ中のイブプロフェン−Ｏ−スクシンイミド（１１６ｍｇ、３８０ｎｍｏｌ）の溶液を添加した。一晩攪拌後、回転蒸発によりジオキサンを除去し、水中のｐＨ８炭酸水素ナトリウム１０ｍＬで希釈した。沈殿した生成物を焼結ガラス漏斗を通して濾過し、３×１０ｍＬの水および４×１０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄した。高真空により一晩乾燥後、固体生成物をこすり落として、１０５ｍｇ（６２％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）：δ０．８５（ｂｒ  ｓ、６、ＣＨ３）、１．２７（ｂｒ  ｓ、３、α−ＣＨ３）、１．４０〜１．７９（ｍ、５、ｉｂｕのＣＨならびにリジンγおよびδＣＨ２ＣＨ２）、２．３１（ｄ、２、βＣＨ２）、２．４１〜２．５２、ｄｍｓｏ下（ｍ、２、βＣＨ２）、２．７３〜３．０１（ｍ、２、εＣＨ２）、３．５１〜３．８５（ｍ、１  ｉｂｕ  ＣＨ）、４．０１〜４．４３（ｍ、１、αＣＨ）、７．１４（ｄ、２、ＡｒＨ）、７．６（ｄ、２、ＡｒＨ）、７．９０〜８．０６（ｍ、２、ＮＨ）。
【０１１５】
（実施例１７）
（［リジン］ＸＸ−［ゲムフィブロジルもしくはナプロキセン］または［Ｇｌｕ］ＸＸＬ−ＤＯＰＡの合成の概要）
（［Ｇｌｕ］１５−Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニンまたは［Ｇｌｕ］１５−Ｌ−ＤＯＰＡの合成）
Ｌ−ＤＯＰＡ（０．０５０ｇ、２５４  ｍｏｌ）およびＧｌｕＮＣＡ（０．６６６ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ６ｍｌ中に溶解した。アルゴン下で一晩攪拌後、薄層クロマトグラフィー（９：１  Ｈ２Ｏ：ＨＯＡｃ）により反応物を検査した。これは、多少の遊離薬物（Ｒｆ＝０．７０）およびポリマーであると推定されるより極性の高いスポット（Ｒｆ＝０．２７）を示した。１２ｍｌのＨ２Ｏの添加により、反応をフェンチした。１ＮのＨＣｌを用いて、ｐＨをｐＨ１〜２に調整した。回転蒸発により溶媒を除去し、粘性残渣を真空乾燥した。得られたシロップをＨ２Ｏ中の新しい容器に移し、凍結乾燥した。得られた結晶は、オフホワイトから淡褐色であった。収量：０．４７０ｇ、６２％。１Ｈ  ＮＭＲは、ピログルタミン酸夾雑を示した；従って、物質をＨ２Ｏ中に懸濁させ、限外濾過（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、再生セルロース、ＹＭ１、ＮＭＷＬ＝１０００）して、滞留物を真空下で乾燥した。収量：０．２９８ｇ。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）は、３０：１  Ｇｌｕ：Ｌ−ＤＯＰＡの相対比を示した。６．６（Ｌ−ＤＯＰＡ芳香族）、６．４（Ｌ−ＤＯＰＡ芳香族）、４．１（Ｇｌｕ、α）、１．８５（Ｇｌｕ、β）、２．２５（Ｇｌｕ、γ、Ｌ−ＤＯＰＡ）、２．３（Ｌ−ＤＯＰＡ、ベンジル（ｂｅｎｚｙｌｉｃ））、１２．４〜１１．５（Ｇｌｕ、ＣＯ２Ｈ）、８．０（Ｇｌｕ、アミド）。
【０１１６】
（［Ｇｌｕ］１０−Ｌ−ＤＯＰＡの合成）
０．４３９ｇのＧｌｕＮＣＡを用いた以外は、［Ｇｌｕ］１５−Ｌ−ＤＯＰＡの合成の場合と同様であった。精製物質の最終収量は０．００７ｇであった。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）は、８：１  Ｇｌｕ：Ｌ−ＤＯＰＡを示した。
【０１１７】
（ナプロキセン−スクシンイミドの合成）
ジオキサン５ｍｌ中のナプロキセン（２．３０３ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、ジオキサン１５ｍｌ中に溶解したＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．１６ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびジオキサン２５ｍｌ中のジシクロヘキシルカルボジイミド（２．２７ｇ、１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を一晩攪拌し、濾過により不溶性ジシクロヘキシルウレアを除去した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣を３０〜４０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。約１０ｍｌのヘキサンを添加し、混合物を４℃で２時間冷却した。小平板白色結晶が形成し始めるまで、さらなるヘキサンを滴下し、溶液を一晩冷蔵した。活性化エステルを収穫し、ヘキサンで洗浄して、真空乾燥した（２．３０ｇ、７０．０％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）１．７０（ｄ、３Ｈ、ＣＨ３）、２．９（ｓ、４Ｈ、スクシンイミド）、３．９１（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、４．１８（ｑ、１Ｈ、メチン）、７．７５〜７．１２（ｍ、６Ｈ、芳香族）。
【０１１８】
（ポリリジンナプロキセンの合成）
Ｈ２Ｏ（１０ｍｇ／ｍｌのＮａ２ＣＯ３を含有）１ｍｌ中の［Ｌｙｓ］１４・１４・ＨＢｒ（０．１００ｇ、３５ｍｍｏｌ）に、ジオキサン２ｍｌ中のナプロキセン−スクシンイミド（０．１２４ｇ、３７９ｍｍｏｌ）を添加した。一晩攪拌後、沈殿物を形成した。３０〜４０ｍｌのＨ２Ｏ（１０ｍｇ／ｍｌのＮａ２ＣＯ３を含有）の添加により、さらに沈殿物を形成し、濾過により単離して、５０ｍｌのＥｔ２Ｏで洗浄した。微細白色粉末を乾燥した（０．０９５ｇ、５３％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）８．１（ｍ、１Ｈ、リジン；アミド）、７．８〜７．０（ｍ、６Ｈ、芳香族）、４．４〜４．１（ｍ、２Ｈ、αメチン）、３．３（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、２．８（ｍ、２Ｈ、ε）、１．７〜１．０（ｍ、９Ｈ、β、γ、δ、ＣＨ３）。
【０１１９】
（ゲムフィブロジル−スクシンイミドの合成）
ジオキサン３０ｍｌ中のゲムフィブロジル（ＧＥＭ）（５．０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）に、ジオキサン２０ｍｌ中のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．３ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）およびジオキサン５０ｍｌ中のジシクロヘキシルカルボジイミド（４．５ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を一夜攪拌し、濾過により不溶性ジシクロヘキシルウレアを除去した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣を１５〜２０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。結晶形成が観察されるまでヘキサンを滴下し、混合物を４℃で一夜冷却した。さらに約３ｍｌのｎ−ヘキサンを添加し、混合物を−２０℃に一夜冷却した。活性化エステルは小平板結晶を形成し、これを収穫し、ヘキサンで洗浄して、真空乾燥した（５．８ｇ、８０％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）１．２、１．３（ｓ、６Ｈ、ＣＨ３）、１．８〜１．５（ｍ、６Ｈ、ＧＥＭ  ＣＨ２）、２．３〜２．１（ｓ、６Ｈ、芳香族ＣＨ３）、２．８５〜２．７（ｄ、４Ｈ、スクシンイミドＣＨ２）、７．０〜６．６（ｍ、３Ｈ、芳香族）。
【０１２０】
（ポリリジン−ゲムフィブロジルの合成）
Ｈ２Ｏ（１０ｍｇ／ｍｌのＮａ２ＣＯ３を含有）１ｍｌ中の［Ｌｙｓ］１１・１１・ＨＢｒ（０．１００ｇ、４３．５αｍｏｌ）に、ジオキサン２ｍｌ中のゲムフィブロジル−スクシンイミド（０．０９４ｇ、２６１．１αｍｏｌ）を添加した。一夜攪拌後、沈殿物が生じた。３０ｍｌのＨ２Ｏ（１０ｍｇ／ｍｌのＮａ２ＣＯ３を含有）の添加により、さらに沈殿物を生成し、単離して、５０ｍｌのＥｔ２Ｏで洗浄した。微細白色粉末を乾燥した（０．０１９ｇ、１％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）１．５〜１．０（ｍ、１２Ｈ、β、γ、δ、ＣＨ３）、１．８５〜１．５（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２）、２．３〜２．１（ｓ、６Ｈ、芳香族ＣＨ３）、３．３５（ｓ、２Ｈ、ε）、３．８５（ｓ、２Ｈ、ＯＣＨ２）、４．０５（ｓ、１Ｈ、α）、５．６（ｄ、１Ｈ、カルバメート）、７．０〜６．７（ｍ、３Ｈ、芳香族）、８．０（ｄ、１Ｈ、アミド）。
【０１２１】
（実施例１８）
すべての試薬を受け取った状態で用いた。内部標準としてテトラメチルシランを用いて、Ｂｒｕｋｅｒ３００ＭＨｚ（３００）またはＪＥＯＬ５００ＭＨｚ（５００）ＮＭＲ分光光度計で、１Ｈ  ＮＭＲを実行した。シリカゲル６０Ｆ２５４で予備被覆したプレートを用いて、薄層クロマトグラフィーを実施した。シリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーを実施した。
【０１２２】
（ポリＡｒｇの調製）
（方法１）
３．０ｍｌのドライＤＭＳＯ中のＨ−Ａｒｇ（Ｚ）２−ＯＨ（０．３００ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）に、ジフェニルホスホリルアジド（２１９μｌ、１．０２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２３６μｌ、１．６９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＡｒ下で４８時間攪拌し、この時点で溶液を１００ｍｌのＨ２Ｏ中に注ぎ入れた。その結果生じた不均質溶液を遠心分離して、白色沈殿物を単離し、これを３×１００ｍｌのＨ２Ｏ、３×１００ｍｌのＣＨ２ＯＨおよび１００ｍｌのＥｔ２Ｏで洗浄した後、真空乾燥して、１７２ｍｇのオフホワイト色固体を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．３１（ｍ、１０Ｈ）、５．２１（ｍ、１Ｈ、ベンジル系）、５．０１（ｍ、１Ｈ、ベンジル系）、３．８３（ｍ、１Ｈ、α）、３．３４（ｍ、２Ｈ、δ）、１．５４（ｍ、４Ｈ、β、γ）。
【０１２３】
この物質を１．５ｍｌのドライアニソール中に溶解し、０．３ｍｌの無水メタンスルホン酸ともに３時間攪拌し、この時点でさらに０．３ｍｌの無水メタンスルホン酸を添加し、溶液を１時間攪拌した。反応混合物を６ｍｌのＥｔ２Ｏ中に注ぎ入れ、１５分間冷蔵した。不均質二相混合物を回転蒸発により０．５ｍｌに濃縮した。３度さらなる８ｍｌのＥｔ２Ｏを添加し、二相混合物を遠心分離して、上清を除去すると、黄色味がかったゴムが残った。この残渣を６ｍｌアセトンで２回洗浄し、遠心分離して、上清を捨てると、その後に白黄色残渣が残った。残渣を０．３ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解し、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−４００とともに振盪した。樹脂を濾過して除去し、３ｍｌのＨ２Ｏで洗浄した。合わせた溶離液および洗浄液を真空乾燥して、黄色皮膜０．０６３ｇ（収率９０％）を得た：１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）４．３７（ｍ、１Ｈ、α）、３．２２（ｍ、２Ｈ、δ）、１．９４〜１．６６（ｍ、４Ｈ、β、γ）；ＭＡＬＤＩ−ＭＳは、６〜１４残基間で変化する重合度を示した。
【０１２４】
（方法２）
３．０ｍｌのドライＤＭＳＯ中のＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｚ）２−ＯＨ（０．０２５ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）およびＨ−Ａｒｇ（Ｚ）２−ＯＨ（０．２８０ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）に、ジフェニルホスホリルアジド（２１９μｌ、１．０２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２３６μｌ、１．６９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を４８時間攪拌し、次に１００ｍｌのＨ２Ｏ中に注ぎ入れた。不均質溶液を遠心分離して、沈殿物を３×１００ｍｌのＨ２Ｏ、３×１００ｍｌのＣＨ３ＯＨおよび１００ｍｌのＥｔ２Ｏで洗浄した後、真空乾燥して、１３２ｍｇの固体を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．３１（ｍ、１０Ｈ）、５．２１（ｍ、１Ｈ、ベンジル系）、５．０１（ｍ、１Ｈ、ベンジル系）、３．８３（ｍ、１Ｈ、α）、３．３４（ｍ、２Ｈ、δ）、１．５４（ｍ、４Ｈ、β、γ）。
【０１２５】
保護ポリマーを１．５ｍｌのドライアニソール中に溶解し、１．３ｍｌの無水メタンスルホン酸ともに４時間攪拌した。回転蒸発により溶液を０．５ｍｌに濃縮した。Ｅｔ２Ｏ（８ｍｌ）を添加し、二相系を遠心分離して、上清を捨てた。３度、１０ｍｌアセトンを添加し、溶液を遠心分離して、上清を廃棄した。ペレットを一夜真空乾燥した後、０．３ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解し、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−４００とともに振盪した。樹脂を濾過して除去し、３ｍｌのＨ２Ｏで洗浄した。合わせた溶離液および洗浄液を真空乾燥して、黄色皮膜０．０１９ｇ（収率２４％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）４．３７（ｍ、１Ｈ、α）、３．２２（ｍ、２Ｈ、δ）、１．９４〜１．６６（ｍ、４Ｈ、β、γ）；ＭＡＬＤＩ−ＭＳは、５〜１１残基間で変化する重合度を示した。
【０１２６】
（Ｔ４結合体の調製）
アミノ酸ポリマーに結合したＴ４を、市販のアミノ酸ホモポリマーに（保護）Ｔ４をカップリングすることにより調製するか、またはＴ４部分と対応するＮ−カルボン酸無水物アミノ酸との重合により組入れた。
【０１２７】
（予備形成ホモポリマーとのＴ４結合）
１ｍｌのドライＤＭＦ中のＮ−ＴｅｏｃＴ４（０．０１７ｇ、１７μｍｏｌ）に、ジクロロヘキシルカルボジイミド（０．００４ｇ、１８μｍｏｌ）を添加した。３０分間攪拌後、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．００４ｇ、３６μｍｏｌ）およびＧｌｙ１８（０．０１７ｇ、１７μｍｏｌ）を添加し、反応物を一夜攪拌した。混濁溶液を２０ｍｌのＨ２Ｏ中に注ぎ入れ、１０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出した。水性構成成分を１ＮのＨＣｌで酸性にしてｐＨ３とし、４℃に冷却した。物質を遠心分離により単離し、ペレットを８ｍｌのＨ２Ｏで３回洗浄した。ペレットを真空乾燥して、ジシクロヘキシルウレアおよびＮ−ＴｅｏｃＴ４−Ｇｌｙ１８を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）７．８（Ｔ４  芳香族）、７．１（Ｔ４  芳香族）、４．１（α）。
【０１２８】
不純保護ポリマーに、２ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加した。反応物を２時間攪拌し、回転蒸発により溶媒を除去した。残渣を１ｍｌのＤＭＦ中に溶解し、不溶性物質を濾過により除去した。回転蒸発によりＤＭＦを除去し、真空乾燥して、白色物質（０．０１２ｇ、４０％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）７．７５（Ｔ４  芳香族）、７．０８（Ｔ４  芳香族）、４．１１（ｂｓ、α）。
【０１２９】
（アミノ酸ＮＣＡの調製）
１００ｍｌのドライＴＨＦ中のＬ−アミノ酸（１．５ｇ）に、トリホスゲン（０．８当量）を添加した。反応は、灌流冷却器およびＮａＯＨトラップを装備した容器で実施し、３時間加熱灌流した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣をヘキサンで洗浄して、アミノ酸ＮＣＡを白色残渣として得た。
【０１３０】
ＬｅｕＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＣＤＣｌ３）６．６５（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．３３（ｄｄ、１Ｈ、α）、１．８２（ｍ、２Ｈ、β）、１．６８（ｍ、１Ｈ、γ）、０．９８（ｄｄ、６Ｈ、δ）。
【０１３１】
ＰｈｅＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＣＤＣｌ３）７．３６〜７．１８（ｍ、５Ｈ）、５．８４（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．５３（ｄｄ、１Ｈ）、３．２８（ｄｄ、１Ｈ、α）、２．９８（ｄｄ、１Ｈ、β）。
【０１３２】
Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）ＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＣＤＣｌ３）８．１４（ｄ、１Ｈ）、７．４９（ｄ、２Ｈ）、７．３６（ｔ、１Ｈ）、７，２７（ｍ、１Ｈ）、５．９０（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．５９（ｄｄ、１Ｈ、α）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、β）、３．０７（ｄｄ、１Ｈ、β）、１．６７（ｓ、９Ｈ、ｔ−Ｂｕ）。
【０１３３】
ＩｌｅＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（３００、ＣＤＣｌ３）６．６５（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．２５（ｄ、１Ｈ、α）、１．９４（ｍ、１Ｈ、β）、１．４３（ｄｍ、２Ｈ、γ−ＣＨ２）、１．０３（ｄ、３Ｈ、γ−ＣＨ３）、０．９４（ｔ、３Ｈ、δ）。
【０１３４】
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）ＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＣＤＣｌ３）６．６５（ｂｓ、１Ｈ、ＮｔＨ）、４．６４（ｓ、１Ｈ、カルバメートＮＨ）、４．３１（ｔ、１Ｈ、α）、３．１３（ｓ、２Ｈ、ε）、２．０４（ｍ、２Ｈ、β）、１．８４（ｍ、２Ｈ、δ）、１．４８（ｍ、１１Ｈ、γ、ｔ−Ｂｕ）。
【０１３５】
ＭｅｔＮＣＡ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＣＤＣｌ３）６．８９（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．５０（ｄｄ、１Ｈ、α）、２．６９（ｔ、２Ｈ、γ）、２．１０（ｍ、１Ｈ、β）、２．０８（ｍ、４Ｈ、β、δ）。
【０１３６】
（Ｔ４Ｎ−キャップホモポリマーの典型的調製：）
Ｔ４−Ｌｅｕ１５
２．５ｍｌのＤＭＦ中のＩｌｅＮＣＡ（０．２００ｇ、１．３μｍｏｌ）に、イソロイシン（０．０１２ｇ、０．１μｍｏｌ）を添加した。Ａｒ下で一夜攪拌後、Ｔ４−ＮＣＡ（０．０３７ｇ、０．０５０μｍｏｌ）を添加し、反応物をさらに７２時間攪拌した。白色溶液を８ｍｌのＨ２Ｏ中に添加した。不均質溶液を４℃に冷却し、遠心分離して、上清を捨て、ペレットを８ｍｌのＨ２Ｏで洗浄した。乾燥残渣を５０℃に温めた５０ｍｌエタノールで洗浄し、乾燥後に白色粉末（０．１２４ｇ、５５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００、ＤＭＳＯ）７．７５（ｓ、Ｔ４  芳香族）、７．０８（ｓ、Ｔ４  芳香族）、４．１１（ｄｄ、α）、１．７７（ｍ、β）、１．３８（ｍ、β、γ−ＣＨ）、０．９１（ｍ、γ−ＣＨ、γ−ＣＨ３、δ）。
【０１３７】
Ｔ４−Ｐｈｅ１５
白色粉末（５８％）：１Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．０〜８．１（ＮＨ、芳香族）、４．５（α）、３．０（β）；ＭＡＬＤＩ−ＭＳはＴ４−Ｐｈｅ１−５を示す。
【０１３８】
Ｔ４−Ｍｅｔ１５
白色粉末（１０％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）８．０〜８．５（アミド  ＮＨ）、４．４（α）、２．５（γ）、２．０５（ε）、２．０〜１．７（β）。
【０１３９】
Ｔ４−Ｖａｌ１５
白色粉末（１４％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．７５（Ｔ４芳香族）、７．０８（Ｔ４芳香族）、４．３５（α）、３．４５（β）、１．０５（γ）。
【０１４０】
保護ＮＣＡを用いた結合体に関しては、付加的な別個の脱保護段階が必要であった。
【０１４１】
１０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のＴ４−［Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］１５（０．２５６ｇ、６１μｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）とともに２時間攪拌した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣を３ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解し、限外濾過した（Ａｍｉｃｏｎ再生セルロース、ＹＭ１、ＮＭＷＬ  １０００、３０ｍｌのｐＨ５Ｈ２Ｏで洗浄）。滞留物を真空乾燥して、明褐色残渣を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  Ｄ２Ｏ）７．８２（ｓ、Ｔ４  芳香族）、７．４１（ｓ、Ｔ４  芳香族）、４．２９（ｂｓ、α）、３．００（ｂｓ、ε）、２．１３〜１．７０（ｍ、β、δ、γ）；ＭＡＬＤＩ−ＭＳは範囲Ｔ４−Ｌｙｓ４−１１を生じた。
【０１４２】
Ｔ４−Ｔｒｐ１５：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）８．２５〜６．８０（ｍ、芳香族）、４．５０（ｂｓ、α）、３．４０（ｂｓ、β）、３．００（ｂｓ、β）。
【０１４３】
（Ｔ４Ｃ−キャップホモポリマーの典型的調製：）
１０ｍｌのＤＭＦ中のＴ４（０．０７８ｇ、１００μｍｏｌ）に、Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）ＮＣＡ（０．５００ｇ、１．５１４ｍｍｏｌ）を添加した。Ａｒ下で６４時間攪拌後、３０ｍｌのＨ２Ｏを添加することにより反応をクエンチした。混濁白色溶液を４℃に冷却し、遠心分離して、ペレットを２５ｍｌのＨ２Ｏで３回洗浄した。残渣を真空乾燥して、Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）１５−Ｔ４を褐色固体として得た。この物質を限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ再生セルロース、ＹＭ１、ＮＭＷＬ  １０００、３０ｍｌのｐＨ５Ｈ２Ｏで洗浄）によりさらに精製して、［Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）］１５−Ｔ４を金褐色固体（０．４００ｇ、７９％）として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）８．２５〜６．８０（ｍ、芳香族）、４．５０（ｂｓ、α）、３．４０（ｂｓ、β）、３．００（ｂｓ、β）、１．５０（ｂｓ、ｔ−Ｂｕ）。
【０１４４】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：トリフルオロ酢酸８ｍｌ中の［Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）］１５−Ｔ４（０．５０９ｇ）を１．５時間攪拌した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣を真空乾燥して、褐色固体（０．３４７ｇ、９７％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）８．２５〜６．８０（ｍ、芳香族）、４．５０（ｂｓ、β）、３．４０（ｂｓ、α）、３．００（ｂｓ、β）。
【０１４５】
［Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）］１５−Ｔ４：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  Ｄ２Ｏ）７．８２（ｓ、Ｔ４  芳香族）、７．４１（ｓ、Ｔ４  芳香族）、４．２９（ｂｓ、α）、３．００（ｂｓ、ε）、２．１３〜１．７０（ｍ、β、δ、γ）。
【０１４６】
Ｌｙｓ１５−Ｔ４：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  Ｄ２Ｏ）７．８２（ｓ、Ｔ４  芳香族）、７．４１（ｓ、Ｔ４  芳香族）、４．２９（ｂｓ、α）、３．００（ｂｓ、ε）、２．１３〜１．７０（ｍ、β、δ、γ）。
【０１４７】
（無作為Ｔ４／ホモポリマーの典型的調製：）
Ｔ４ＮＣＡ（０．０６５ｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＴｒｐ（Ｂｏｃ）ＮＣＡ（０．４００ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を４ｍｌのドライＤＭＦ中で合わせた。トリエチルアミン（１１μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をＡｒ下で４４時間攪拌した。１０ｍｌのＨ２Ｏの添加によりクエンチ後、不均質混合物を４℃に冷却し、遠心分離した。ペレットを単離し、１０ｍｌのＨ２Ｏで３回洗浄して、真空乾燥した。
【０１４８】
無作為Ｔ４／［Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）］１５ポリマーに１０ｍｌの１：１のＣＨ２Ｃｌ２：トリフルオロ酢酸を添加し、反応物を１時間攪拌した。回転蒸発により溶媒を除去して、脱保護ポリマーを褐色固体（０．２６２ｇ、９１％）として提供し、これを限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ再生セルロース、ＹＭ１、ＮＭＷＬ  １０００、３０ｍｌのｐＨ５Ｈ２Ｏで洗浄）によりさらに精製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＤＭＳＯ）８．２５〜６．８０（ｍ、芳香族）、４．５０（ｂｓ、α）、３．４０（ｂｓ、β）、３．００（ｂｓ、β）。
【０１４９】
無作為Ｔ４／Ｌｙｓ１５：１Ｈ  ＮＭＲ（５００  Ｄ２Ｏ）７．８２（ｓ、Ｔ４  芳香族）、７．４１（ｓ、Ｔ４  芳香族）、４．２９（ｂｓ、α）、３．００（ｂｓ、ε）、２．１３〜１．７０（ｍ、β、δ、γ）。
【０１５０】
（ポリリジンデパコテの調製）
６：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ１４ｍｌ中のバルプロ酸（１．０ｇ、６．９ｍｍｏｌ）に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．８ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．６ｇ、７．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．９ｇ、８．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０時間攪拌し、この時点で溶液を濾過して白色沈殿物を除去し、回転蒸発により溶媒を除去した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０：１〜２：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により精製して、スクシニミジルエステルを透明油（１．０ｇ、５９％）として得た：Ｒｆ（３：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）０．４３；１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）２．７６（ｓ、４Ｈ、スクシンイミド）、２．６１（ｍ、１Ｈ、メチン）、１．６５〜１．１９（ｍ、８Ｈ、メチレン）、０．８８（ｔ、６Ｈ、メチル）。
【０１５１】
０．８ｍｌのＨ２Ｏ（ｐＨ８）中のＬｙｓ１４・ＨＢｒ（０．１０６ｇ、３７μｍｏｌ）に、０．４ｍｌＴＨＦ中に溶解したパルプロ酸スクシンイミジルエステル（０．１０４ｇ、４３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を一夜攪拌し、その時点で８ｍｌのＨ２Ｏを添加した。混合物を６ＭのＨＣｌでｐＨ３の酸性にして、２ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出した。水層を乾燥し、残渣を１ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解した。ＳＥＣ（Ｇ−１５、１０ｍｌ乾燥容量）により溶液を精製し、水で溶離した。結合体を含有する分画を併合し、乾燥して、白色固体（０．１７６ｍｇ）を得たが、これは、ＮＭＲにより、すべての１薬剤分子に対して２８リジンを示した；１Ｈ  ＮＭＲ  （Ｄ２Ｏ）４．２９（ｍ、１Ｈ、α）、３．００（ｍ、２Ｈ、ε）、１．８７〜１．６８（ｍ、４Ｈ、β、δ）、１．４３（ｍ、γ、メチレン）、０．８５（ｔ、メチル）。
【０１５２】
（ポリＧｌｕメバスタチンの調製）
ＡｃＮＧｌｕ１５（３−メバスタチン）２
３ｍｌのドライＤＭＦ中のポリＧｌｕ１５（０．１１６ｇ、６９μｍｏｌ）に、１ｍｌのピリジンおよび無水酢酸（２０μｌ、２０７μｍｏｌ）を添加した。２１時間攪拌後、ｐＨが１になるまで６ＮのＨＣｌを用いて混合物を酸性にした後、４℃に冷却した。白色沈殿物を遠心分離により収集し、Ｈ２Ｏで３回洗浄して、真空乾燥して、１１ｍｇのＮ−アセチル化ポリＧｌｕ１５を得た。
【０１５３】
４．８ｍｌのドライＤＭＦ中のＮ−アセチル化ポリＧｌｕ１５（０．０１１ｇ、７αｍｏｌ）に、ジクロロヘキシルカルボジイミド（０．０２２ｇ、１０８μｍｏｌ）を添加した。２０分間攪拌後、不均質溶液を濾過して、不溶性ジシクロヘキシルウレアを除去し、メバスタチン（０．０４２ｇ、１０８μｍｏｌ）およびＮ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．０１３ｇ、１０８μｍｏｌ）と合わせた。混合物を２３時間攪拌し、この時点で、２０ｍｌのＨ２Ｏの添加により反応をクエンチした。溶液を１０ｍｌのＣＨＣｌ３で２回抽出した。水性構成成分を１ＮのＨＣｌで酸性にしてｐＨ３とし、４℃に冷却した。その結果生じた白色沈殿物を遠心分離により単離し、８ｍｌのＨ２Ｏで３回洗浄した。固体を１ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解し、１ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２で、そして２ｍｌのＥｔＯＡｃで２回洗浄した。水層を１ＮのＨＣｌで酸性にしてｐＨ３とし、４℃に冷却して、沈殿物を遠心分離により単離し、２ｍｌのＨ２Ｏで２回洗浄した。乾燥結合体（２ｍｇ）は、１Ｈ  ＮＭＲ  により２個のメバスタチン分子に対して１５のＧｌｕを含有することが示された：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）５．９２（５’メバスタチン）、５．７２（３’メバスタチン）、５．１９（４’メバスタチン）、５．１７（８’メバスタチン）、５．１２（３メバスタチン）、４．４１（５メバスタチン）、４．０３（α、Ｇｌｕ）、２．２５（γ、Ｇｌｕ）、１．８８（β、Ｇｌｕ）、０．８２（４’’，２’アリル系メチルメバスタチン）、１．１７（２’’メバスタチン）。
【０１５４】
Ｇｌｕ１５（３−メバスタチン）（１６０）
３ｍｌのドライＤＭＦ中のＧｌｕ１５（０．１５１ｇ、７７μｍｏｌ）に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．２３９ｇ、１．１５９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をＡｒ下で４時間攪拌した。白色沈殿物を除去し、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．１４１ｇ、１．１５９ｍｍｏｌ）およびメバスタチン（０．２２２ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）を添加し、１０ｍｌＣＨＣｌ３中に溶解した。反応物をＡｒ下で２１時間攪拌し、この時点で沈殿物を除去した。溶液を回転蒸発により濃縮して、４０ｍｌの飽和ＮａＣｌ（水性）に添加して、ｐＨ８となるよう調整した。均質溶液を２０ｍｌのＨ２ＯのＣＨＣｌ３で３回抽出した後、限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ再生セルロース、ＹＭ１、ＮＭＷＬ  １，０００）した。滞留物を真空乾燥して８ｍｇの白色残渣を得たが、これは、１Ｈ  ＮＭＲ  により１個のメバスタチン分子に対して１５のグルタミン酸の比を示した：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  Ｄ２Ｏ）５．９２（５’メバスタチン）、５．７２（３’メバスタチン）、５．１９（４’メバスタチン）、５．１７（８’メバスタチン）、５．１２（３メバスタチン）、４．４１（５メバスタチン）、４．０３（α、Ｇｌｕ）、２．２５（γ、Ｇｌｕ）、１．８８（β、Ｇｌｕ）、０．８２（４’’，２’アリル系メチルメバスタチン）、１．１７（２’’メバスタチン）。
【０１５５】
ＢｏｃＧｌｕ（３−メバスタチン）−Ｏ−ｔ−Ｂｕ
４０ｍｌのＣＨＣｌ３中のＢｏｃＧｌｕ（ＯＳｕ）−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（０．１８１ｇ、４５３αｍｏｌ）およびメバスタチン（０．１７７ｇ、４５３μｍｏｌ）に、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．０５５ｇ、４５３μｍｏｌ）を添加した。反応物をＡｒ下で７時間加熱灌流した後、２０℃で８時間攪拌した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（８：１〜１：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により精製して、結合体を透明皮膜（０．０３８ｇ、１１％）として得た：Ｒｆ（３：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）０．２２；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）５．９７（ｄ、１Ｈ、５’）、５．７３（ｄｄ、１Ｈ、３’）、５．５５（ｓ、１Ｈ、４’）、５．３２（ｓ、１Ｈ、８’）、５．２４（ｄｄ、１Ｈ、３）、５．０９（ｄ、１Ｈ、ＮＨ）、４．４８（ｍ、１Ｈ、５）、４．２０（ｍ、１Ｈ、α）、２．７８（ｍ、２Ｈ、２）、２．３７（ｍ、４Ｈ、２’、２’’、γ）、１．４５（ｓ、１８Ｈ、ｔ−Ｂｕ）、１．１２（ｄ、３Ｈ、２’’−ＣＨ３）、０．８８（ｍ、６Ｈ、４’’、２’−ＣＨ３）。
【０１５６】
（ポリＧｌｕプレドニソンの調製）
ＢｏｃＧｌｕ（２１−プレドニソン）−Ｏ−ｔ−Ｂｕ
２０ｍｌのＣＨＣｌ３中のＢｏｃＧｌｕ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（０．４００ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．５４４ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間攪拌し、濾過して不溶性ジシクロヘキシルウレアを除去した。Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．３２０ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）およびプレドニソン（０．４７２ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０時間攪拌し、濾過した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０：１〜０：１  ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）により精製して、標的物を透明皮膜（０．２５６ｇ、３１％）として得た：Ｒｆ（６：１  ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ）０．５４；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）７．６８（ｄ、１Ｈ、１）、６．１６（ｄ、１Ｈ、２）、６．０４（ｓ、１Ｈ、４）、５．１５（ｄ、１Ｈ、ＮＨ）、５．０３（ｄ、１Ｈ、２１）、４．７１（ｄ、１Ｈ、２１）、４．０８（ｔ、１Ｈ、α）、１．４０（ｓ、１８Ｈ、ｔ−Ｂｕ）。
【０１５７】
Ｇｌｕ（２１−プレドニソン）
１５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のＢｏｃＧｌｕ（２１−プレドニソン）−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（０．０６０ｇ、９３μｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１．５ｍｌ）とともに１時間攪拌した。回転蒸発により溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（８：１  ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ）により精製して、透明皮膜を得た：Ｒｆ（６：１  ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ）０．１３；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）７．７２（ｄ、１Ｈ、１）、６．２５（ｄ、１Ｈ、２）、６．１４（ｓ、１Ｈ、４）、５．１４（ｄ、１Ｈ、２１）、４．７５（ｄ、１Ｈ、２１）、４．１０（ｔ、１Ｈ、α）。
【０１５８】
（実施例１９）
（Ｌ−グルタミン酸ＮＣＡのアミン開始性重合）
以下の手法を首尾よく用いて、アテノロールのポリグルタミン酸結合体を合成した。
【０１５９】
【化１５】
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ＤＭＦはジメチルホルムアミド（無水物）であり、Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。使用前にガラス容器をオーブン乾燥した。
１．  ＧｌｕＮＣＡ（５００ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を４ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、気体流入管を装備した１５ｍＬ丸底フラスコ中でＡｒ下で攪拌した。
２．  ＤＭＦ１ｍｌ中に溶解したアテノロールをＧｌｕ−ＮＣＡのこの溶液に添加して、室温で７２時間攪拌した。概して、反応は、ｔｌｃにより遊離アミン開始剤が認められなくなるまで、実行され得る。この反応に関しては、シリカプレートを用いて、酢酸エチル中の２０％メタノールで溶出して、ｔｌｃを実行した。
３．  水中（ｐＨ＝８）の１０％炭酸水素ナトリウム２０ｍＬ中に注ぎ入れることにより、反応をクエンチした。
４．  その水を３×２０ｍＬの塩化メチレンおよび３×２０ｍＬの酢酸エチルで洗浄した。
５．  合わせた水性層を、６ＮのＨＣｌを用いてｐＨを６にして、ロータリーエバポレーションにより容量を約２０ｍＬに低減した。この溶液を次に、冷蔵庫で３時間未満冷却した。
６．  高分子生成物を沈殿させるために、次に６ＮのＨＣｌを用いてｐＨ約２まで水性溶液を酸性にして、冷蔵庫に戻して１〜２時間置いた。
７．  懸濁液を一部ずつ１０ｍＬ試験管に注ぎ入れて、沈殿物が固体パックを試験管の底に生成するまで、１５分間遠心分離し、そこから水をデカントした（一般手法ではこの時点で、固体を濾過漏斗に通して、酸性水で洗浄するのが好ましい。固体が細過ぎて濾過されないために、アテノロールに関しては遠心分離管を用いた）。
８．  次に固体を酸性水（ｐＨ約２）中に再懸濁させ、ボルテックス後に、再び遠心分離し、水をデカントした。この手法を合計３回の洗浄で、もう一度反復した。
９．  次に固体を高真空で一夜乾燥して、２６２ｍｇ（５９％）のポリマーを得た。ＮＭＲ分析は、Ｇｌｕ／アテノロール比が約３０／１であることを示した。
【０１６０】
（実施例２０）
経口送達薬剤の吸収を予測するために、Ｃａｃｏ−２ヒト腸管上皮細胞の単一層が次第に用いられつつある。Ｃａｃｏ−２ｔｒａｎｓｗｅｌｌ系およびその他のインビトロアッセイを用いて、本研究者はポリスロイドの性能を評価した。ポリスロイドが、甲状腺機能低下障害の治療のための甲状腺ホルモンの経口送達を強化し得ることを本研究者の知見は示した。
【０１６１】
（インビトロ性能）
（Ｃａｃｏ−２ヒト腸管上皮細胞アッセイ）
２４ウエル方式でコラーゲン被覆ウエルの表面でＣａｃｏ−２細胞を成長させて、腸の小セグメントを示す集密的単一層を生成する。ウエルは取り外し可能であり、頂端側（腸の管腔に面している）を表す上部小室と側底側（漿膜薬剤吸収の部位）を現す底小室を含有する。上皮バリアの完全性は、単一層を横切る電気抵抗を試験することによりモニタリングされる。薬剤の吸収は、頂端側に試料を添加して、インキュベーション後の側底側小室中の薬剤濃度をアッセイすることにより試験され得る。
【０１６２】
（腸管上皮細胞プロテアーゼはポリスロイドを消化する）
ポリスロイドは、ペプチド結合により共有結合されたＴ４およびＴ３を伴うグルタミン酸の合成ポリマーである。このポリマーは、甲状腺ホルモンのための送達ビヒクルであり、腸バリア自体を横切るよう意図されない。むしろそれは、時間依存的方法でＴ４およびＴ３を放出するよう意図される。甲状腺ホルモンの放出は、グルタミン酸ポリマーの酵素的切断によっている。理論的には、これは、ポリスロイドが腸管を下降するときにタンパク質分解酵素に出くわすことに起因する。タンパク質は、胃のペプシンと小腸中に分泌される膵臓酵素により小さなポリペプチドに消化される。次に腸管上皮細胞はこの小さなポリペプチドをさらに分解するよう機能する。それらは、細胞表面に付着される刷子縁プロテアーゼと呼ばれるタンパク質分解酵素を用いてこれを達成される。
【０１６３】
ポリスロイドに及ぼす刷子縁ペプチダーゼの作用をモニタリングするには、ポリスロイドをポリグルタミン酸および甲状腺ホルモンと特異的に区別するためのアッセイの開発を要する。したがって、ポリスロイドを特異的に認識する酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を本研究者は開発した。このアッセイは、グルタミン酸ポリマーに対する抗体を用いて、ポリスロイドおよびＴ４またはＴ３に対する抗体を捕獲して、ポリスロイドの存在を検出する。アッセイはポリグルタミン酸または甲状腺ホルモン自体との交差反応性を有さない。その結果、ポリスロイドのタンパク質分解は、ポリマーからのＴ４およびＴ３放出、ならびにＥＬＩＳＡ反応性の対応する低減を生じる。したがってポリスロイド特異的ＥＬＩＳＡは、ポリスロイドの分解をモニタリングするために用いられ得る。
【０１６４】
ポリスロイド特異的アッセイを用いて、Ｃａｃｏ−２細胞培養中のポリスロイドのインサイチュでの消化を分析し得る。異なる濃度のポリスロイドをＣａｃｏ−２細胞の頂端側に添加して、３７℃でＰＢＳ中で４時間インキュベートした（ｎ＝４）。４時間のインキュベーションの前後に、ポリスロイド特異的ＥＬＩＳＡにより、頂端側ポリスロイド濃度を測定した（図６）。１００μｇという比較的高い濃度では、ポリスロイドの２６％が分解されたが、１０倍未満の濃度では、８４％のポリスロイドが分解された。０．５μｇという濃度（正常ヒト用量で腸で認められる濃度に近い）を添加した場合、４時間のインキュベーション後に残存するポリスロイドの量はＥＬＩＳＡに関する検出限度（１０ｎｇ）より低かったが、これは、本質的に完全消化を示す。頂端小室中のポリマーの損失は、側底側小室がいずれの実験においても検出可能ポリスロイドを含有しなかった（下記参照）ため、単一層を通してのポリスロイドの吸収によるものではなかった。ポリスロイドの細胞取込みを排除できないが、酵素的消化が、頂端側でのポリスロイド濃度の低減の、すべてでないとしても、ほとんどを説明すると思われる。より高い濃度では、残存するポリスロイドのこのような大きな差を細胞取込みが説明するのは難しい。
【０１６５】
（ポリスロイドはＣａｃｏ−２単一層を通してのＴ４の吸収を強化する）
Ｃａｃｏ−２ｔｒａｎｓｗｅｌｌ系でＴ４の吸収をモニタリングした（ｎ＝４）。ポリスロイド（１０μｇ）をｔｒａｎｓｗｅｌｌの頂端側に添加した。ポリスロイドのＴ４含量と等しい濃度で、Ｔ４を頂端側に添加した。Ｔ４用の市販のＥＬＩＳＡを用いて、３７℃で４時間インキュベーション後の側底側小室中のＴ４レベルを確定した（図７）。ポリマー中に含入される量と等しい量のＴ４とともにインキュベートされたＣａｃｏ−２細胞と比較した場合、有意に高い量のＴ４がポリスロイドから吸収された。
【０１６６】
（ポリスロイドはＣａｃｏ−２単一層を通り抜けない）
ポリスロイド自体がＣａｃｏ−２単一層を通り抜けるか否かを確定するために、本研究者はポリスロイド特異的ＥＬＩＳＡを用いて、高濃度（１００μｇ）でポリスロイドとともにインキュベーション後の側底側小室中のポリマーの量を測定した。４時間のインキュベーション後、側底側からの試料（ｎ＝４）は、ＥＬＩＳＡにおいて反応性を示さなかった（図８）。ポリスロイドの検出限界は、１０ｎｇであり、したがって、１／１０，０００未満のポリスロイドが吸収された。要するに、ＥＬＩＳＡ検出限界内では、ポリスロイドはＣａｃｏ−２単一層を通り抜けない。
【０１６７】
（胃および腸シミュレーターにおけるポリスロイドの消化）
胃粘膜により分泌されるペプシンは、胃の酸性条件中で活性な唯一のプロテアーゼである。膵臓は、タンパク質およびポリペプチドを分解する多数のタンパク質分解酵素を腸に分泌する。理論的には、これらの内因性プロテアーゼは、ポリマーが腸管を下降するときの、ポリスロイドからＴ４およびＴ３の放出に関与する。
【０１６８】
ＵＳＰ胃シミュレーターおよびＵＳＰ腸シミュレーターにおいてポリスロイドを試験し、異なる方法により合成されたポリスロイドに関する消化のレベルを比較した。ポリスロイドの試料は、甲状腺ホルモン結合の位置で変化した。ペプシンを含有する胃シミュレーター緩衝液中に、または膵臓酵素抽出物（パンクレアチン）を含有する腸シミュレーター緩衝液中に試料を溶解し、３７℃で２４時間インキュベートした。消化後、放出単量体Ｔ４およびＴ３の含量に関してＨＰＬＣにより試料を分析した。図９および１０は、胃および腸シミュレーターにおける消化後のＴ４およびＴ３のレベルを示す。放出は、甲状腺ホルモン結合の位置によって変わる。Ｃ末端に結合された（Ｃ保護）Ｔ４およびＴ３を有するポリスロイドは、最高レベルの消化を示した。他方、Ｎ末端結合を有する（Ｎ保護）ポリスロイドは、ポリスロイド胃シミュレーターにおいては消化を示さず、腸シミュレーターにおいては比較的低い量の消化を示した。無作為結合を伴うポリスロイドは、胃シミュレーターにおいてはわずかな消化のみを示し、腸シミュレーターでは中等度の消化を示した。要するに、ポリスロイドからの甲状腺ホルモン放出率は、合成の方法によって変わる。これは、経口送達の徐放性放出を制御（微調整）する考え得る手段を提供する。
【０１６９】
（結論および概要）
以下の結論が、インビトロ性能アッセイから引き出され得る：
・Ｔ４およびＴ３は、膵臓および小腸細胞プロテアーゼによりポリスロイドから放出される。
・ポリスロイドから放出されるＴ４およびＴ３は、腸単一層を通して吸収される。
・ポリスロイドは、インビトロでは腸管上皮を通り抜けるＴ４の吸収を高める。
・ポリスロイド自体は、インビトロでは腸管上皮バリアを通り抜けない。
・徐放性放出の動力学は、ポリスロイド合成の方法により制御され得る。
【０１７０】
ポリペプチドとのＴ４およびＴ３の共有結合は、甲状腺ホルモン置換療法のための経口送達に多数の考え得る利点をもたらす。膵臓細胞および腸管上皮細胞により産生されるタンパク質分解酵素は、ポリスロイドからＴ４およびＴ３を放出する。したがってＴ４およびＴ３は、それらが腸管を下降するときに、時間依存的方式で放出される。一旦放出されると、ホルモンは、Ｃａｃｏ−２細胞モデルにおいては腸管上皮を通して吸収される。さらにインビトロ腸管上皮モデルからのデータは、グルタミン酸のポリマーへのＴ４の結合が、おそらくは取込みの第２のメカニズムを提供し、そして／またはホルモンの可溶性を強化することによって、甲状腺ホルモンの吸収を増強し得ることを示唆する。ポリスロイド自体は、インビトロＣａｃｏ−２モデルにおける腸管上皮バリアを通り抜けない。したがって、血流中に吸収される必要がないため、ポリマーの全身性作用についての任意の懸念が最小限にされる。
【０１７１】
特定の実施形態を参照しながら例証し、説明してきたが、本発明は、示された詳細に限定されるよう意図されない。むしろ、本発明の精神を逸脱せずに、特許請求の範囲の等価物の範囲内で詳細に、種々の修正がなされ得る。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、本発明の酸活性作用物質／Ｎ末端スキームを示す。
【図２】
図２は、本発明のアミン活性作用物質／Ｃ末端スキームを示す。
【図３】
図３は、本発明のアルコール活性作用物質／Ｎ末端スキームを示す。
【図４】
図４は、本発明のアルコール活性作用物質／グルタミン酸二量体調製および結合スキームを示す。
【図５】
図５は、グルタミン酸二量体スキームからのアルコール活性作用物質のメカニズムを示す。
【図６】
図６は、腸管上皮細胞培養中のポリスロイドのインサイチュでの消化を示す。
【図７】
図７は、側底側Ｔ４濃度を示す。
【図８】
図８は、基底対側底側のポリスロイド濃度を示す。
【図９】
図９は、胃シミュレータ対腸シミュレータにおけるＴ４分析を示す。
【図１０】
図１０は、胃シミュレータ対腸シミュレータにおけるＴ３分析を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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