(57)【要約】本発明は、制御されていない細胞増殖により引き起こされる、癌および他の疾患を処置するために有用な化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、インビトロで抗腫瘍活性を示す環状ポリアミン化合物、ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。本発明は、細胞の制御されていない増殖によって引き起こされる疾患（例えば、癌であって、特に、前立腺癌）を処置するため、および他の障害の処置のために細胞内ＡＴＰ加水分解を誘導するための、化合物および組成物を提供する。本発明は、式（Ｉ）の新規な環状ポリアミン化合物を提供する。
2004505112.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2004505112.tif 000060
の化合物、ならびに全ての異性体およびそれらの塩であって、ここで、
Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで
ｋは、０、２、または３であり；そして、ここで、
Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、各Ｙ基が、−Ｈである、化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、各Ｙ基が、−ＣＨ３である、化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３が、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択される、化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、Ｍが、−ＣＨ２−である、化合物。
【請求項６】
以下の式：
【化２】
2004505112.tif 000061
の化合物、ならびに全ての異性体およびそれらの塩であって、ここで、
Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
Ａ２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ５〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そして、ここで
Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、
化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、各Ｙ基が、−Ｈである、化合物。
【請求項８】
請求項６に記載の化合物であって、各Ｙ基が、−ＣＨ３である、化合物。
【請求項９】
請求項６に記載の化合物であって、Ａ１およびＡ３が、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択され、そしてＡ２は、Ｃ２〜Ｃ３アルキルおよびＣ５アルキルからなる群から選択される、化合物。
【請求項１０】
請求項６に記載の化合物であって、Ｍが、−ＣＨ２−である、化合物。
【請求項１１】
以下の式：
【化３】
2004505112.tif 000062
の化合物、ならびに全ての異性体およびそれらの塩であって、ここで、
Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
Ａ２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ２〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そして、ここで
Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、
化合物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物であって、各Ｙ基が、−Ｈである、化合物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の化合物であって、Ａ１およびＡ３が、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択され、そしてＡ２は、Ｃ２〜Ｃ５アルキルからなる群から選択される、化合物。
【請求項１４】
請求項１１に記載の化合物であって、Ｍが、−ＣＨ２−である、化合物。
【請求項１５】
以下の式：
【化４】
2004505112.tif 000063
の化合物を合成する方法であって、
該化合物は、
Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３が、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙが、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍが、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで
ｋが、０、１、２、または３であり；そして、ここで、
Ｒが、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、化合物であって、
該方法は、以下の工程：
ω−ハロアルキルアルカノエートとアルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物とを反応させて、アルケン含有アルカノエート化合物を得る工程；
該アルケン含有アルカノエート化合物と２個の１級アミノ基を含有する化合物（必要に応じて、２級アミノ基を含む）とを反応させて、一方のアミノ基を二重結合に付加する工程；
他方のアミノ基と該アルカノエート基とを環化させて、アミド結合を形成する工程；および
必要に応じて、該２級アミノ基を、存在する場合に、アルキル化する工程、
を包含する、方法。
【請求項１６】
前記ω−ハロアルキルアルカノエートが、エチルブロモアセテートである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アルデヒド含有化合物または前記ケトン含有化合物が、アルデヒド含有化合物である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、ω−ハロアルキルアルカノエートとアルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物とを反応させて、アルケン含有アルカノエート化合物を得る前記工程が、前記ω−ハロアルキルアルカノエートとトリフェニルホスフィンとを反応させることによって実施される、方法。
【請求項１９】
請求項１６に記載の方法であって、２個の１級アミノ基を含有する前記化合物は、以下：
Ｈ２Ｎ−Ａ１−（ＮＨ−Ａ２）ｋ−ＮＨ−Ａ３−ＮＨ２
からなる群から選択され、ここで、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３が、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、そしてｋが、０、１、２、または３である、
方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、２個の１級アミノ基を含有する前記化合物は、スペルミン、スペルミジン、およびプトレシンからなる群から選択される、方法。
【請求項２１】
請求項１６に記載の方法であって、他方のアミノ基とアルキルアルカノエート基とを環化させて、アミド結合を形成する前記工程が、前記化合物とアンチモン（ＩＩＩ）エトキシドとを反応させることによって実施される、方法。
【請求項２２】
請求項１６に記載の方法であって、必要に応じて、任意の２級アミノ基を、存在する場合に、アルキル化する前記工程が、まず、前記化合物と脂肪族アルデヒドとを反応させて、シッフ塩基を得、次いで、該シッフ塩基を還元して、該２級アミノ基のアルキル化を生じることによって実施される、方法。
【請求項２３】
シッフ塩基を還元する前記工程が、試薬ＮａＣＮＢＨ３を使用することによって、実施される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
以下の式：
【化５】
2004505112.tif 000064
の化合物を合成する方法であって、
該化合物は、
Ａ１は、Ｃ３アルキルであり、そして各Ａ２（存在する場合）およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで
ｋは、０、１、２、または３であり；そして、ここで、
Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、化合物であって、
該方法は、以下の工程：
１級アミノ基およびヘキサヒドロピリミジン部分を含有する化合物とα，β−不飽和エステル化合物とを縮合し、該１級アミノ基を該不飽和エステル化合物のβ位に付加させて、これにより、該１級アミノ基を、２級アミノ基に転換する、工程；
該ヘキサヒドロピリミジン部分のメチレン架橋を切断して、２級アミノ基および新たに生成した１級アミノ基を生成する工程；ならびに
該新たに生成した１級アミノ基と該エステル基とを縮合して、アミド基を形成する工程、
を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、前記α，β−不飽和エステルが、以下の式：
（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ１〜Ｃ３２アルキル）
である、方法。
【請求項２６】
請求項２４に記載の方法であって、１級アミン基およびヘキサヒドロピリミジン部分を含有する化合物が、以下の式：
【化６】
2004505112.tif 000065
であって、ここで、
各Ａ２（存在する場合）およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そして、ここで、
ｊは、０、１、２、または３である、
方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、ｊが、０である、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、Ａ３が、Ｃ４アルキルである、方法。
【請求項２９】
請求項２４に記載の方法であって、ヘキサヒドロピリミジン部分のメチレン架橋を切断する前記工程が、アルコール溶媒中の無水ＨＣｌを用いて実施される、方法。
【請求項３０】
請求項２４に記載の方法であって、新たに生成した１級アミノ基とエステル基とを縮合して、アミド基を形成する前記工程が、試薬Ｂ（Ｎ（ＣＨ３）２）３を用いて実施される、方法。
【請求項３１】
処置の必要な個体において、制御されない細胞増殖によって特徴付けられる癌または疾患を処置する方法であって、該方法は、請求項１に記載の１つ以上の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
処置の必要な個体において、制御されない細胞増殖によって特徴付けられる癌または疾患を処置する方法であって、該方法は、請求項６に記載の１つ以上の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３３】
処置の必要な個体において、制御されない細胞増殖によって特徴付けられる癌または疾患を処置する方法であって、該方法は、請求項１１に記載の１つ以上の化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
癌細胞におけるＡＴＰを枯渇させる方法であって、該方法は、請求項１に記載の１つ以上の化合物を該細胞に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
癌細胞におけるＡＴＰを枯渇させる方法であって、該方法は、請求項６に記載の１つ以上の化合物を該細胞に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
癌細胞におけるＡＴＰを枯渇させる方法であって、該方法は、請求項１１に記載の１つ以上の化合物を該細胞に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
以下の式：
【化７】
2004505112.tif 000066
の化合物、ならびに全ての異性体およびそれらの塩であって、ここで、
Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、
Ａ４は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択されるか、または存在せず；
Ｘは、−Ｈ、−Ｚ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または−ＮＨＺから選択され、但し、Ａ４が存在しない場合、Ｘは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または−Ｚであり；
Ｚは、アミノ保護基、アミノキャップ基、アミノ酸、およびペプチドからなる群から選択され；ここで、
各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、
Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで
ｋは、０、１、２、または３であり；そして、ここで、
Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される、
化合物。
【請求項３８】
請求項３７に記載の化合物であって、Ａ４は、存在せず、Ｘは、−Ｚであり、そして−Ｚは、−Ｈであり、そして各Ｙは、−ＣＨ３である、化合物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の化合物であって、Ｍは、−ＣＨ２−であり、ｋは、１であり、Ａ１およびＡ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−であり、そして単独のＡ２基は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である、化合物。
【請求項４０】
請求項３９に記載の化合物であって、Ｒは、−Ｃ１３Ｈ２７である、化合物。
【請求項４１】
請求項３７に記載の化合物であって、Ａ４は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｘは、−ＮＨＺであり、そしてＺは、２０個の遺伝子によりコードされたアミノ酸のうちの一つ、式：アセチル−ＳＫＬＱＬ−のペプチド、式：アセチル−ＳＫＬＱ−β−アラニン−のペプチド、または式：アセチル−ＳＫＬＱ−のペプチドから選択される、化合物。
【請求項４２】
請求項３７に記載の化合物を合成する方法であって、Ａ４は、存在せず、そしてＸは、−Ｈであり、該方法は、以下の式：
【化８】
2004505112.tif 000067
の化合物（ここで、Ａ４は、存在せず、そしてＸは、−Ｈである）のアミド基のカルボニルを還元する工程を包含する、方法。
【請求項４３】
請求項３７に記載の化合物を合成する方法であって、Ａ４は、Ｃ２アルキルであり、各Ｙは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され、そしてＸは、−ＣＮであり、該方法は、以下の式：
【化９】
2004505112.tif 000068
の化合物（ここで、各Ｙは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択される）と式Ｈ２Ｃ＝ＣＨ−ＣＮの化合物とを反応させる工程を包含する、方法。
【請求項４４】
請求項３７に記載の化合物を合成する方法であって、Ａ４がＣ３アルキルであり、そしてＸが−ＮＨ２であり、該方法は、以下の式：
【化１０】
2004505112.tif 000069
の化合物（ここで、Ａ４は、Ｃ１〜Ｃ７アルキルから選択される）のニトリル基を、アミノ基に還元する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の引用）
本願は、２０００年８月２日に出願された、仮特許出願番号６０／２２２，５２２（その内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）の優先権を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、制御されていない細胞増殖により引き起こされる、癌および他の疾患を処置するために有用な化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、インビトロで抗腫瘍活性を示す環状ポリアミン化合物、ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。
【０００３】
（発明の背景）
癌は、先進国における主要な死因の１つである。１９９７年の米国における死の約四分の１が、癌に起因しており、癌は、心臓病に続いて二番目に主要な死因となっている。従って、癌に対する新規かつ有効な処置の開発は、健康管理の研究者に対する優先度の高い事項である。
【０００４】
癌はしばしば、化学療法を使用して、正常細胞に対してはより低い有害な効果を有しながら、癌細胞を選択的に殺傷するか、または癌細胞の増殖を選択的に妨げることによって、処置される。化学療法剤は、しばしば、迅速に分裂中の細胞（例えば、癌細胞）を殺傷する；さほど迅速に分裂していない細胞は、より低い程度で影響を受ける。他の薬剤（例えば、毒性薬剤に結合した抗体）が、癌に対する使用のために評価されている。これらの薬剤は、癌に特異的な特徴（例えば、正常より高い細胞分裂速度、または癌細胞表面で発現される独自の抗原）を利用することによって、癌細胞を標的にする。
【０００５】
悪性細胞の１つの独特の区別可能な特徴は、酸素の存在下でさえの、その高速の解糖である（いわゆる好気性解糖、またはワールブルク効果）。過去７０年にわたるＯｔｔｏ　Ｗａｒｂｕｒｇによる研究は、ヒトおよび動物のかなり多くの腫瘍が、高速の解糖を示すことを実証した。不完全な酸化的代謝がこの高速の解糖の基礎にあるという、ワールブルクの仮定は、最近の研究によっては支持されていないが、元の観察は十分に確認されている。Ｃｈｅｓｎｅｙ，Ｊ．ら，「Ａｎ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｆｏｒ　６−ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏ−２−ｋｉｎａｓｅ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ＡＵ−ｒｉｃｈ　ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ：ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌ　ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｗａｒｂｕｒｇ　ｅｆｆｅｃｔ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９９）９６（６）：３０４７−５２を参照のこと。ヒト腫瘍は、激しい低酸素症に耐え、従って、低酸素症の状態への適合は、腫瘍の進行における重大な工程である。従って、解糖によるエネルギー源としてのグルコースの嫌気性の使用は、大部分の固形腫瘍に対して共通の特徴である。Ｄａｎｇ，Ｃ．Ｖ．およびＳｅｍｅｎｚａ，Ｇ．Ｌ．，「Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．（１９９９）２４（２）：６８−７２ならびにＢｏｒｏｓ，Ｌ．Ｇ．ら，「Ｎｏｎｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｅｎｔｏｓｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｄｉｒｅｃｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｒｉｂｏｓｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒｓ：ｉｓ　ｃａｎｃｅｒ　ａ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ？」Ｍｅｄ．Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ（１９９８）５０（１）：５５−９を参照のこと。
【０００６】
磁気共鳴スペクトロスコピーおよび陽子射出断層撮影法は、腫瘍が正常組織と比較して増加したグルコースの取込みを有すること、ならびに腫瘍の攻撃性および予後がグルコース取込みと相関することを実証した。Ｉｍｄａｈｌ，Ａ．ら，「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｒｏｎ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　２−［１８Ｆ］ｆｌｕｏｒｏ−２−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｃａｎｃｅｒ」，Ｂｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．（１９９９）８６（２）：１９４−９およびＭａｕｂｌａｎｔ，Ｊ．ら，「Ｐｏｓｉｔｒｏｎ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ（ＰＥＴ）ａｎｄ（Ｆ−１８）−ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ　ｉｎ（ＦＤＧ）ｉｎ　ｃａｎｃｅｒｏｌｏｇｙ」，Ｂｕｌｌ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｐａｒｉｓ）（１９９８）８５（１１）：９３５−５０を参照のこと。グルコーストランスポータＧＬＵＴ１の発現もまた、癌細胞において増加される。Ｇｒｏｖｅｒ−ＭｃＫａｙ，Ｍ．ら，「Ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ　１　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ」，Ｐａｔｈｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．（１９９８）４（２）：１１５−２０およびＢｕｒｓｔｅｉｎ　Ｄ．Ｅ．ら，「ＧＬＵＴ１　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ：ａ　ｈｉｇｈｌｙ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ　ｉｎ　ｂｏｄｙ　ｃａｖｉｔｙ　ｅｆｆｕｓｉｏｎｓ」，Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．（１９９８）１１（４）：３９２−６を参照のこと。癌細胞における解糖経路を介するグルコースの利用は、正常細胞における場合と同様に、ピルビン酸の形成を導くが、酸素の非存在下では、ピルビン酸は、トリカルボン酸サイクルを介して代謝されない。このことは、癌細胞から、酸化的リン酸化によるＡＴＰの効率的な産生を奪う。癌細胞において、ピルビン酸は乳酸に還元され（ＮＡＤＰＨによる）、腫瘍の酸性環境を導く。しかし、腫瘍細胞の細胞質ゾルのｐＨは、正常細胞におけるｐＨと同様に維持される。Ｄａｎｇ，Ｃ．Ｖ．およびＳｅｍｅｎｚａ，Ｇ．Ｌ．，「Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」，Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．（１９９９）２４（２）：６８−７２を参照のこと。
【０００７】
低酸素症は、強い選択力であり、そして癌遺伝子および腫瘍抑制遺伝子を改変することによって、解糖を調節する。腫瘍脈管形成は、低酸素症および低血糖症によって刺激され、これは、脈管形成因子の発現を誘導し、この因子は、微小脈管を漸増させて、栄養および酸素の送達を可能にし、腫瘍塊の拡張を支持する。Ｍｏｓｅｒ，Ｔ．Ｌ．ら，「Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ　ｂｉｎｄｓ　ＡＴＰ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９９）９６（６）：２８１１−６を参照のこと。しかし、新たな微小脈管は制限されており、そして組織崩壊しており、そして酸素の消費速度が供給速度を越える。グルコースの剥脱は、形質転換された細胞における壊死の強力な誘発因子であり、そしてグルコース移送および主要な解糖酵素（例えば、ヘキソキナーゼＩＩ、乳酸デヒドロゲナーゼＡ）の活性を増加させることによって解糖を刺激する生理学的因子および癌遺伝子転写因子は、有害な腫瘍の微環境における癌細胞の生存の促進において、重大な役割を果たす。Ｂｌａｎｃｈｅｒ　Ｃ．ら，「Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｙｐｏｘｉａ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｐａｔｈｗａｙ：ｔｕｍｏｕｒ　ｈｙｐｏｘｉａ　ａｓ　ａ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｔａｒｇｅｔ」，Ｃａｎｃｅｒ　Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　Ｒｅｖ．（１９９８）１７（２）：１８７−９４を参照のこと。
【０００８】
従って、癌細胞は、主として解糖経路に依存して、酸素の存在下でさえも、成長のために必要なＡＴＰを生じさせる。１０ｇの細胞を産生するためには、１モルのＡＴＰによって提供されるエネルギーが必要とされることが公知である。１モルのグルコースを二酸化炭素に好気性に酸化することにより、約３８モルのＡＴＰの正味の増加が生じるが、１モルのグルコースをピルビン酸および乳酸に嫌気性に（解糖に）形質転換することにより、２モルのＡＴＰの増加のみを生じ、これは好気性の酸化の１９分の１である。細胞におけるグルコースの不完全な酸化（これは次に、腫瘍細胞における上昇した速度の解糖を必要とする）に起因して、ＡＴＰが、癌細胞において非常に珍重されていることが明らかである。
【０００９】
悪性細胞におけるＡＴＰに関する制限された供給および高い要求に起因して、ＡＴＰを加水分解し得る薬物は、癌の増殖を制御する手段を提供し得る。このような薬物は、癌細胞に不均的に影響を与え、一方で、ミトコンドリアにおける酸化的リン酸化によってＡＴＰ合成が定常的に補充される正常組織に対しては、さほど有害ではない。
【００１０】
初期には、環状ポリアミンが果たし得る種々の機能が注目された。これらの機能としては、金属イオンの選択的取り込みおよび移送を容易にすること、金属のキレート化、ならびに触媒および酵素の機能のモデルとして働くことが挙げられる。Ｋｉｍｕｒａ，Ｅ．，「Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ」，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９２）４８（３０）：６１７５を参照のこと。
【００１１】
環状ポリアミンは、ＡＴＰの加水分解に対して驚くべき効果を有することが観察された。環状ポリアミンは、プロトン化されると、ＡＴＰ、ＡＤＰ、およびＡＭＰを安定に結合し、そして広いｐＨ範囲にわたって、ＡＴＰの加水分解の速度を数桁増強する。線状ポリアミン（これは、ＡＴＰを結合しない）は、加水分解の速度を増加させない。環式化合物によって触媒される加水分解は、オルトリン酸およびＡＤＰを生成物として与える；次いで、このＡＤＰは、ＡＭＰにゆっくりと加水分解される。ＡＴＰの切断において、中間体のホスホロアミデートの形成が検出され、そして最初の「上に載った（ｐｅｒｃｈｅｄ）」複合体の可能な形状および加水分解の機構が仮定された。Ｍｅｒｔｈｅｓ，Ｍ．Ｐ．ら，「Ｐｏｌｙａｍｍｏｎｉｕｍ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ　ａｓ　ｃａｔａｌｙｓｔｓ　ｆｏｒ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒ：ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｍｉｍｉｃ」，Ａｃｃｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０）２３：４１３；Ｈｏｓｓｅｉｎｉ，Ｍ．Ｗ．ら，「Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃａｔａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＡＴＰ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｂｙ　ｐｒｏｔｏｎａｔｅｄ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ」，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ（１９８３）６６：２４５４；Ｐｒａｋａｓｈ，Ｔ．Ｐ．ら，「Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ｐｏｌｙａｍｉｎｅ［１６］−Ｎ３および［２１］−Ｎ４：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ＡＴＰ　ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ　ｂｙ　３１Ｐ　ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ」，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ．（１９９１）１：１２７３；Ｈｏｓｓｅｉｎｉ，Ｍ．Ｗ．ら，「Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃａｔａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＡＴＰ　ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ　ｂｙ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ　ｓｔｕｄｉｅｓ」，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９８７）１０９：５３７；ならびにＢｅｎｃｉｎｉ，Ａ．ら，「Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ＡＴＰａｓｅ　ｍｉｍｉｃｓ　ｂｙ　ｐｏｌｙａｍｍｏｎｉｕｍ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ：ｃｒｉｔｅｒｉａ　ｆｏｒ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍ．（１９９２）２０：８を参照のこと。これらの環状触媒は、ＡＴＰａｓｅの「機能的模倣物」であると記載された。ＡＴＰの加水分解は、ＡＴＰのβ−リン酸における酸素の交換を包含し、そしてカルシウムの存在下で起こった。これらの条件下で、ＡＤＰの引き続く加水分解が減少し、そしてリン酸化された環式化合物が蓄積した。この反応混合物をｐＨ４．５に調整すると、ピロリン酸が形成した。この環状ホスホロアミデートは、ＡＤＰをリン酸化してＡＴＰを与え得ることが示された。
【００１２】
環状ポリアミンのホスファターゼ活性もまた、他の生物学的リン酸エステルを使用して研究された。環状ポリアミン触媒がリン酸アセチルを切断してオルトリン酸にすることが示された；次いで、この反応は、ピロリン酸の合成に進行する。環状ポリアミンは、Ｃａ＋＋またはＭｇ＋＋の存在下で、ＡＴＰ依存性反応においてギ酸エステルを活性化させ得ることが観察された。この活性化は、ＡＴＰを加水分解して環状ホスホロアミデートを生じることによって進行するようであり、ここで環状ホスホロアミデート種は、提唱される中間体のリン酸ホルミルを形成し、次いでこのリン酸ホルミルが環上で切断されて、環状ホルムアミドを生成する（Ｎ−ホルミル化）。このセットの反応は、Ｎ１０−ホルミルテトラヒドロフォレートのＡＴＰ依存性の酵素合成を模倣し得、そしてホルミルテトラヒドロフォレートシンテターゼの性質に関連することが提唱された。Ｊａｈａｎｓｏｕｚ　Ｈ．ら，「Ｆｏｒｍａｔｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒａｌ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ａ　ｐｏｌｙａｍｍｏｎｉｕｍ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ」，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９８９）１１１：１４０９を参照のこと。
【００１３】
環状ポリアミンおよび環状ポリエーテル（Ｋｉｍｕｒａら、前出）に関する上記化学的研究とは無関係に、環状ポリアミンアルカロイド（大環状アミノラクタムともまた呼ばれる）が天然生成物の重要なクラスであることは、植物化学的文献から公知であった。これらは主として、フェニルプロパノイドの生合成経路（シキミ酸系路）とポリアミン（スペルミンおよびスペルミジン）経路との交差から派生する。従って、Ｃａｎｎａｂｉｓ（インド大麻）、Ｃｏｄｏｎｏｃａｒｐｕｓ、Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ（トクサ）、Ｌｕｎａｒｉａ、Ｍａｙｔｅｎｕｓ、Ｏｎｃｉｎｏｔｉｓ、Ｐｅｒｉｐｔｅｒｙｇｉａ、およびＰｌｅｕｒｏｓｔｙｌｉａの植物のファミリーから、とりわけ、以下の環状スペルミン由来のアルカロイドが単離された：ケノルヒン（ｃｈａｅｎｏｒｈｉｎｅ）、アフェランドリン（ａｐｈｅｌａｎｄｒｉｎｅ）、オランチン（ｏｒａｎｔｉｎ）、エフェドラジン（ｅｐｈｅｄｒａｄｉｎｅ）、およびペリフィリン（ｐｅｒｉｐｈｙｌｌｉｎｅ）。Ｇｅｒａｒｄｙ，Ｒ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９３）３２：７９；Ｚｅｎｋ，Ｍ．Ｈ．ら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８９）１７２５；Ｈｕｓｓｏｎ，Ｈ．−Ｐ．ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９７３）２９：１４０５；Ｓａｇｎｅｒ，Ｓ．ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７）３８：２４４３；Ｓｔａｃｈ，Ｈ．ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９８８）４４：１５７３；およびＫｒａｍｅｒ，Ｕ．ら，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（１９７７）８９：８９９を参照のこと。スペルミン由来のアルカロイドのうちでも、ホマリン（ｈｏｍａｌｉｎｅ）、およびピテコロビン（ｐｉｔｈｅｃｏｌｏｂｉｎｅ）と呼ばれるアルカロイドの混合物である。後者は、Ｐｉｔｈｅｃｏｌｏｂｉｕｍ　ｓａｍａｎの抽出物から単離され（Ｗｉｅｓｎｅｒ，Ｋ．ら，「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｉｔｈｅｃｏｌｏｂｉｎｅ　ＩＩ」，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．（１９６８）４６：１８８１およびＷｉｅｓｎｅｒ，Ｋ．ら，「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｉｔｈｅｃｏｌｏｂｉｎｅ　ＩＩＩ」，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．（１９６８）４６：３６１７を参照のこと）、そしてこれらの生合成は、スペルミンの代謝と、不飽和脂肪酸への代謝経路との交差に由来するようである。インドの植物であるＡｌｂｉｚｉａ　ａｍａｒａの種子からのメタノール抽出物は、ブドムンキアミン（ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅ）Ａ〜Ｉと呼ばれる９種のアルカロイドの混合物を含むことが示された。Ｐｅｚｚｕｔｏ，Ｊ．Ｍ．ら，「ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅｓ，ｎｏｖｅｌ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ａｌｂｉｚｉａ　ａｍａｒａ」，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ（１９９１）３２：１９６１−６８；Ｐｅｚｚｕｔｏ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９２）３１：１７９５−１８００を参照のこと。これらの構造は、物理的方法によって確立され、そしてピテコロビンと類似であることが見出された。Ａｌｂｉｚｉａ　ａｍａｒａの種子からの単離物は、可能な生物学的効果についての一般的なスクリーニングにおいて、細胞傷害性効果を有することが見出された。Ｍａｒ，Ｗ．ら，「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ（ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅｓ）ｆｒｏｍ　Ａｌｂｉｚｉａ　ａｍａｒａ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ＤＮＡ」，Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（１９９１）５４：１５３１。ブドムンキアミンに関する他の研究は、Ｒｕｋｕｎｇａ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５９（９）：８５０−３（１９９６）；Ｒｕｋｕｎｇａ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　４２（４）：１２１１−１５（１９９６）；Ｍｉｓｒａ，Ｌ．Ｎ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３９（１）：２４７−２４９（１９９５）；Ｄｉｘｉｔ，Ａ．Ｋ．ら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．６０（１０）：１０３６−１０３７（１９９７）；Ｒｕｋｕｎｇａ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｅｔｈｉｏｐｉａ　１０（１）：４７−５１（１９９６）；Ｃｏｒｄｅｌｌ，Ｇ．Ａ．ら，Ｐｕｒｅ　Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．６６（１０−１）：２２８３−２２８６（１９９４）；およびＯｎｕｋｉ，Ｈ．ら，Ｔｅｔｒ．Ｌｅｆｔ．，３４（３５）：５６０９−５６１２（１９９３）に記載されている。
【００１４】
しかし、上で参照した技術は、単離された環状ポリアミンの、癌治療のための使用を示唆せず、そして環状ポリアミンを、癌細胞における細胞内ＡＴＰの加水分解のインビボでの触媒として使用するガイダンスを提供しない。従って、本発明の環状ポリアミンは、癌治療のための新たなアプローチを表す。さらに、ブドムンキアミン化合物の合成は報告されておらず、そしてブドムンキアミンを用いる研究は、代表的に、複数の化合物の混合物を含む植物抽出物を用いて実施されてきた。本発明は、インビボでＡＴＰ−ａｓｅ様の活性を有する新規化合物を設計するため、および単離された化合物の研究を可能にするために、ピテコロビンおよびブドムンキアミンについて提唱された構造に類似の個々の化合物の合成を可能にする方法を提供する。癌および他の病理学的状態を処置する際に使用するための、このような新規化合物が、本発明の方法を用いて作製された。
【００１５】
（発明の開示）
本発明は、細胞の制御されていない増殖によって引き起こされる疾患（例えば、癌であって、特に、前立腺癌）を処置するため、および他の障害の処置のために細胞内ＡＴＰ加水分解を誘導するための、化合物および組成物を提供する。
【００１６】
１つの実施形態において、本発明は、以下の式の化合物：
【００１７】
【化１１】
2004505112.tif 000003
ならびにその全ての立体異性体および塩を提供し、ここで、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、ｋは、０、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。さらなる実施形態において、Ｙ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３である。別の実施形態において、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択される。なお別の実施形態において、Ｍは、−ＣＨ２−である。本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた、上記化合物の１つ以上の組成物を含む。
【００１８】
本発明はまた、以下の式の化合物：
【００１９】
【化１２】
2004505112.tif 000004
ならびにその全ての立体異性体および塩を提供し、ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここでＡ２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ５〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。さらなる実施形態において、Ｙ基は、−Ｈまたは−ＣＨ３である。別の実施形態において、Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択され、そしてＡ２は、Ｃ２〜Ｃ３アルキルおよびＣ５アルキルからなる群より選択される。なお別の実施形態において、Ｍは、−ＣＨ２−である。本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた、上記化合物の１つ以上の組成物を含む。
【００２０】
本発明はまた、以下の式の化合物：
【００２１】
【化１３】
2004505112.tif 000005
ならびにその全ての立体異性体および塩を提供し、ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、Ａ２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ２〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。さらなる実施形態において、各Ｙ基は、−Ｈである。別の実施形態において、Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｃ２〜Ｃ４アルキルから選択され、そしてＡ２は、Ｃ２〜Ｃ５アルキルからなる群より選択される。なお別の実施形態において、Ｍは、−ＣＨ２−である。本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた上記化合物の１つ以上の組成物を含む。
【００２２】
本発明はまた、以下の式の化合物：
【００２３】
【化１４】
2004505112.tif 000006
を合成する方法を提供し、ここで、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、ｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択され；ここで、この方法は、ω−ハロアルキルアルカノエートを、アルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物と反応させて、アルケン含有アルカノエート化合物を得る工程；このアルケン含有アルカノエート化合物を、２つの１級アミノ基を含み、そして必要に応じて２級アミノ基を含む化合物と反応させて、二重結合にまたがるアミノ基の１つの付加を引き起こす工程；他方のアミノ基を、アルカノエート基で環化させて、アミド結合を形成する工程；ならびに必要に応じて、２級アミノ基を、存在する場合には、アルキル化する工程を包含する。１つの実施形態において、このω−ハロアルキルアルカノエートは、ブロモ酢酸エチルである。別の実施形態において、このアルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物は、アルデヒド含有化合物である。なお別の実施形態において、ω−ハロアルキルアルカノエートをアルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物と反応させて、アルケン含有アルカノエート化合物を得る工程は、ω−ハロアルキルアルカノエートをトリフェニルホスフィンと反応させることによって実施される。なお別の実施形態において、２つの１級アミノ基を含む化合物は、Ｈ２Ｎ−Ａ１−（ＮＨ−Ａ２）ｋ−ＮＨ−Ａ３−ＮＨ２からなる群より選択され、ここで、Ａ１、各Ａ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され、そしてｋは、０、１、２、または３である。なお別の実施形態において、２つの１級アミノ基を含む化合物は、スペルミン、スペルミジン、およびプトレシンからなる群より選択され得る。なお別の実施形態において、他方のアミノ基をアルキルアルカノエート基で環化させて、アミド結合を形成する工程は、この化合物をアンチモン（ＩＩＩ）エトキシドと反応させることによって実施され得る。さらなる実施形態において、任意の２級アミノ基を、存在する場合に、必要に応じてアルキル化する工程は、この化合物を最初に脂肪族アルデヒドと反応させてシッフ塩基を得、次いでこのシッフ塩基を還元して、２級アミノ基のアルキル化を生じることによって実施され得る；シッフ塩基を還元する工程は、試薬ＮａＣＮＢＨ３を使用することによって、実施され得る。
【００２４】
本発明はまた、以下の式の化合物：
【００２５】
【化１５】
2004505112.tif 000007
を合成する方法を提供する。
【００２６】
ここで、Ａ１は、Ｃ３アルキルであり、そしてそれぞれのＡ２（存在する場合）およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択され；ここで、この方法は、第１級アミノ基およびヘキサヒドロピリミジン部分を含む化合物を、α，β−不飽和エステル化合物を縮合して、その結果、第１級アミノ基が、不飽和エステル化合物のβ位に付加し、それによって、第１級アミノ基が、第２級アミノ基に変換される、工程；ヘキサヒドロピリミジン部分のメチレン架橋を切断して、第２級アミノ基および新たに生成される第１級アミノ基を生成する、工程；およびこの新たに生成された第１級アミノ基をエステル基と縮合して、アミド基を形成する工程を包含する。α，β−不飽和エステルは、式（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ１〜Ｃ３２アルキル）のα，β−不飽和エステルであり得る。別の実施形態において、第１級アミノ基およびヘキサヒドロピリミジン部分を含む化合物が、式
【００２７】
【化１６】
2004505112.tif 000008
の化合物であり、
ここで、それぞれのＡ２（存在する場合）およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；そしてここで、ｊは、０、１、２、または３である。好ましい実施形態において、ｊは、０である。別の好ましい実施形態において、Ａ３は、Ｃ４アルキルである。ヘキサヒドロピリミジン部分のメチレン架橋を切断する工程は、アルコール性溶媒中の無水ＨＣｌで行われ得る。新たに生成される第１級アミノ基をエステル基と縮合して、アミド基を形成する工程は、試薬Ｂ（Ｎ（ＣＨ３）２）３を用いて行われ得る。
【００２８】
本発明はまた、式
【００２９】
【化１７】
2004505112.tif 000009
の化合物、ならびにその全ての立体異性体および塩を提供し、
ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、Ａ４は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは非存在から選択され；ここで、Ｘは、−Ｈ、−Ｚ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、またはＮＨＺから選択され、但し、Ａ４が存在しない場合、Ｘは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または−Ｚであり；ここで、Ｚは、アミノ保護基、アミノキャッピング（ｃａｐｐｉｎｇ）基、アミノ酸、およびペプチドからなる群より選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、ｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。特定の実施形態において、Ａ４は、非存在である。他の実施形態において、Ｘは、−Ｚであり、そして−Ｚは、−Ｈである。他の実施形態において、Ｙは、−ＣＨ３である。他の実施形態において、Ｍは、−ＣＨ２−である。なおさらなる実施形態において、ｋは１である。さらなる実施形態において、Ａ１およびＡ３は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。ならさらなる実施形態において、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。なおさらなる実施形態において、Ｒは、−Ｃ１３Ｈ２７である。なおさらなる実施形態において、Ａ４、Ｘ、Ｚ、Ｙ、Ｍ、ｋ、Ａ１、Ａ３およびＲの特定の制限の１つ以上が組み合わせられる。
【００３０】
これらの化合物のさらなる実施形態において、Ａ４は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｘは、−ＮＨＺであり、そしてＺは、２０個の遺伝的にコードされたアミノ酸（アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシン）、式アセチル−ＳＫＬＱＬ−のペプチド、式アセチル−ＳＫＬＱ−β−アラニン−のペプチド、または式アセチル−ＳＫＬＱ−のペプチドから選択される。
【００３１】
本発明はまた、式
【００３２】
【化１８】
2004505112.tif 000010
の化合物ならびにその立体異性体および塩を、式
【００３３】
【化１９】
2004505112.tif 000011
の化合物のアミド基のカルボニルを還元することによって合成する方法を提供し、
ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。水素化アルミニウムリチウムを、還元剤として使用し得る。ジボランはまた、還元剤として使用され得る。
【００３４】
本発明はまた、式
【００３５】
【化２０】
2004505112.tif 000012
の化合物を合成する方法を提供し、
ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択され、この方法は、式
【００３６】
【化２１】
2004505112.tif 000013
の化合物を、式Ｈ２Ｃ＝ＣＨ−ＣＮの化合物と反応させる工程を包含し、
ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される。
【００３７】
本発明はまた、式
【００３８】
【化２２】
2004505112.tif 000014
の化合物を合成する方法を提供し、
ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択され、この方法は、式
【００３９】
【化２３】
2004505112.tif 000015
の化合物（ここで、Ａ１、それぞれのＡ２（存在する場合）、およびＡ３は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキルから選択され；ここで、それぞれのＹは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここで、Ｍは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルから選択され；ここでｋは、０、１、２、または３であり；そしてここで、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３２アルキルから選択される）のニトリル基をアミノ基に還元することによる合成する方法である。好ましい還元試薬は、ラネーニッケル上での気体状水素である。
【００４０】
本発明はまた、制御されていない細胞増殖（例えば、癌、特に、前立腺癌）によって特徴付けられる疾患を、１つ以上の上記化合物の投与によって処置する方法を提供する。本発明はまた、ＡＴＰ（特に、癌細胞における）を、１つ以上の上記化合物の投与によって枯渇させる方法を提供する。本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリアまたは別の治療剤を伴う、１つ以上の上記化合物の組成物を含む。
【００４１】
（本発明を実施するための最良の形態）
詳細な説明全てを通じて、本明細書中に含まれる反応スケジュールおよび表に対する参照がなされる。明瞭性および簡潔性のために、参照数字は、記載されるそれぞれの化学構造に割り当てた。これらの参照数字は、考察される化学的実体をあいまいなく示すために本開示中を通じて一貫して使用される。
【００４２】
本発明は、本明細書中に記載される化合物の全ての塩を含む。薬学的に受容可能な塩が特に特に好ましい。薬学的に受容可能な塩は、遊離塩基の生物学的活性を保持し、生物学的またはそれ以外で望ましくないことがない塩である。所望の塩は、ポリアミンを酸で処理することによって、当業者に公知の方法によって調製され得る。無機酸の例としては、限定しないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸が挙げられる。有機酸の例としては、限定しないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、スルホン酸、およびサリチル酸が挙げられる。アミノ酸を有するポリアミンの塩（例えば、アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩）もまた調製され得る。
【００４３】
本発明はまた、化合物の全ての立体異性体（ジアステレオマーおよびエナンチオマーを含む）ならびに立体異性体の混合物（限定しないが、ラセミ混合物を含む）を含む。立体化学が構造に明白に示されない限り、この構造は、示される化合物の全ての可能な立体異性体を含むことが意図される。
【００４４】
用語「アルキル」とは、直鎖、分枝鎖、環式基、およびこれらの組み合わせを含む、飽和脂肪族基をいい、特定された炭素原子の数を有するか、数が特定されない場合、１２個までの炭素原子を有する。アルキル基の例としては、限定しないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびアダマンチルのような基が挙げられる。環式基は、１つの環（限定しないが、シクロヘプチルのような基を含む）、または多縮合環（限定しないが、アダマンチルまたはノルボルニルのような基を含む）からなり得る。アルキル基は、非置換であり得るか、または１つ以上の置換基（限定しないが、ハロゲン（フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨード）、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、ベンジルオキシ、フェニル、ベンジル、シアノ、ニトロ、チオアルコキシ、カルボキシアルデヒド、カルボアルコキシ、およびカルボキシアミドのような基、または本発明の目的のために必要な場合、保護基で適切にブロックされ得る官能基が挙げられる）で置換され得る。置換されたアルキル基の例としては、限定しないが、−ＣＦ３、−ＣＦ２−ＣＦ３、および他のペルフルオロ基およびペルハロ基が挙げられる。
【００４５】
用語「アルケニル」とは、直鎖、分枝鎖、環式基、およびこれらの組み合わせを含む、不飽和脂肪族基をいい、特定された炭素原子の数を有するか、数が特定されない場合、１２個までの炭素原子を有し、少なくとも１つの二重結合（−Ｃ＝Ｃ−）を含む。アルケニル基の例としては、限定しないが、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３および−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロヘキセニルが挙げられ、ここで、エチル基は、任意の利用可能な炭素価において、シクロヘキセニル部分に結合され得る。用語「アルキニル」とは、直鎖、分枝鎖、環式基、およびこれらの組み合わせを含む、不飽和脂肪族基をいい、特定された炭素原子の数を有するか、数が特定されない場合、１２個までの炭素原子を有し、少なくとも１つの三重結合（−Ｃ≡Ｃ−）を含む。「炭化水素鎖」または「ヒドロカルビル」とは、直鎖、分枝鎖、あるいは環式のアルキル基、アルケニル基またはアルキル基、およびこれらの任意の組み合わせの任意の組み合わせをいう。「置換アルケニル」、「置換アルキニル」および「置換炭化水素鎖」または「置換ヒドロカルビル」とは、１つ以上の置換基（限定しないが、ハロゲン、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、ベンジルオキシ、フェニル、ベンジル、シアノ、ニトロ、チオアルコキシ、カルボキシアルデヒド、カルボアルコキシ、およびカルボキシアミドのような基、または本発明の目的のために必要な場合、保護基で適切にブロックされ得る官能基が挙げられる）で置換されたそれぞれの基をいう。
【００４６】
「アリール」または「Ａｒ」とは、単環（限定しないが、フェニルのような基を含む）または多縮合環（限定しないが、ナフチルまたはアントリルのような基を含む）を有する、芳香族炭素環式基をいい、非置換アリール基および置換アリール基の両方を含む。置換アリールは、１つ以上の置換基（限定しないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭化水素鎖、ハロゲン、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、ベンジルオキシ、フェニル、ベンジル、シアノ、ニトロ、チオアルコキシ、カルボキシアルデヒド、カルボアルコキシ、およびカルボキシアミドのような基、または本発明の目的のために必要な場合、保護基で適切にブロックされ得る官能基が挙げられる）で置換され得る。
【００４７】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」、および「ヘテロアルキニル」とは、その基の主鎖、分枝鎖、または環式鎖の一部として１つ以上のヘテロ原子を含む、特定された炭素原子の数を含む（または、数字が特定されない場合、１２個までの炭素原子を有する）アルキル基、アルケニル基、およびアルキニル基をそれぞれいう。ヘテロ原子としては、限定しないが、Ｎ、Ｓ、Ｏ、およびＰが挙げられ；ＮおよびＯが好ましい。ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基、およびヘテロアルキニル基は、ヘテロ原子（価数が利用可能である場合）または炭素原子のいずれかでその分子の残りに結合し得る。ヘテロアルキル基の例としては、限定しないが、−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｓ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、１−エチル−６−プロピルピペリジノ、２−エチルチオフェニル、およびモルホリノのような基が挙げられる。ヘテロアルケニル基の例としては、限定しないが、−ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−のような基が挙げられる。「ヘテロアリール」または「ＨｅｔＡｒ」とは、単環（限定しないが、例えば、ピリジル、チオフェン、またはフリルを含む）または多縮合環（限定しないが、例えば、イミダゾリル、インドリジニルまたはベンゾチエニルを含む）を有し、少なくとも１つのヘテロ原子（限定しないが、Ｎ、Ｏ、Ｐ、またはＳのようなヘテロ原子を含む）を環内に有する、芳香族炭素環式基をいう。ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基、ヘテロアルキニル基およびヘテロアリール基は、非置換であり得るかまたは１つ以上の置換基（限定しないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、ベンジル、炭化水素鎖、ハロゲン、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、ベンジルオキシ、フェニル、ベンジル、シアノ、ニトロ、チオアルコキシ、カルボキシアルデヒド、カルボアルコキシ、およびカルボキシアミドのような基、または本発明の目的のために必要な場合、保護基で適切にブロックされ得る官能基が挙げられる）で置換され得る。このような置換ヘテロアルキル基の例としては、限定しないが、フェニル基またはベンジル基によって窒素または炭素で置換され、そして炭素または窒素の任意の利用可能な価数によってその分子の残りに結合したピペラジン、−ＮＨ−ＳＯ２−フェニル、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−アルキル、−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−アルキル−アリール、および−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−アルキルが挙げられる。その基のヘテロ原子および炭素原子は、置換され得る。ヘテロ原子はまた、酸化された形態であり得る。他に特定しない限り、ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基、ヘテロアルキニル基、およびヘテロアリール基は、１個と５個の間のヘテロ原子および１個と２０個の間の炭素原子を有する。
【００４８】
用語「アルキルアリール」とは、１個、２個、または３個のアリール基に付けられた、指定された炭素原子の数を有するアルキル基をいう。
【００４９】
用語「アルコキシ」とは、本明細書中で使用される場合、酸素原子に連結され、そして特定された炭素原子の数を有するか、数が特定されない場合、１２個までの炭素原子を有する、アルキル、アルケニル、アルキニル、または炭化水素鎖をいう。アルコキシ基の例としては、限定しないが、メトキシ、エトキシ、およびｔ−ブトキシのような基が挙げられる。
【００５０】
用語「アルカノエート」とは、本明細書中で使用される場合、イオン化されたカルボン酸基（例えば、アセテート（ＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（−１））、プロピオネート（ＣＨ３ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（−１））など）をいう。「アルキルアルカノエート」とは、アルコキシ基でエステル化されたカルボン酸（例えば、酢酸エチル（ＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ３））をいう。「ω−ハロアルキルアルカノエート」とは、カルボキシル基から最も遠いアルカノエート炭素原子上にハロゲン原子を有する、アルキルアルカノエートをいう；従って、エチルω−ブロモプロピオネートとは、エチル３−ブロモプロピオネートをいい、メチルω−クロロｎ−ブタノエートとは、メチル４−クロロｎ−ブタノエートをいう。
【００５１】
用語「ハロ」および「ハロゲン」とは、本明細書中で使用される場合、Ｃｌ置換基、Ｂｒ置換基、Ｆ置換基またはＩ置換基をいう。
【００５２】
「保護基」とは、以下の特徴を示す化学基をいう：１）良好な収率で所望の官能基と選択的に反応して、保護が望まれる計画された反応に対して安定である、保護された基質を与える；２）保護された基質から選択的に除去され得て、所望の官能基を生じる；そして３）このような計画された反応中に存在するかまたはこのような計画された反応において生成される他の官能基と適合性である試薬によって良好な収率で除去可能である。適切な保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅら、（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）に見出され得る。好ましいアミノ保護基としては、限定しないが、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＩＭＳ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、トシル、ベンゼンスルホニル、２−ピリジルスルホニル、または適切な光不安定性（ｐｈｏｔｏｌａｂｉｌｅ）保護基（例えば、６−ニトロベラトリルオキシ（ｎｉｔｒｏｖｅｒａｔｒｙｌｏｘｙ）カルボニル（Ｎｖｏｃ）、ニトロピペロニル、ピレニルメトキシカルボニル、ニトロベンジル、ジメチルジメトキシベンジル、５−ブロモ−７−ニトロインドリニルなど）が挙げられる。好ましいヒドロキシル保護基としては、Ｆｍｏｃ、ＴＢＤＩＭＳ、光不安定性保護基（例えば、ニトロベラトリルオキシメチルエーテル（Ｎｖｏｍ））、Ｍｏｍ（メトキシメチルエーテル）、およびＭｅｍ（メトキシエトキシメチルエーテル）が挙げられる。特に好ましい保護基としては、ＮＰＥＯＣ（４−ニトロフェネチルオキシカルボニル）およびＮＰＥＯＭ（４−ニトロフェネチルオキシメチルオキシカルボニル）が挙げられる。
【００５３】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「ポリペプチド部分」、「タンパク質」などは、任意の長さのアミノ酸残基の任意のポリマー（すなわち、２つ以上のアミノ酸のポリマー）をいうために、本明細書中において交換可能に使用される。ポリマーは、直線または非直線（例えば、分枝）であり得、改変アミノ酸またはアミノ酸アナログを含み得、そしてアミノ酸以外の化学部分によって中断され得る。この用語はまた、天然または介在によって（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、あるいは任意の他の操作または改変（例えば、標識成分または生物活性成分と結合）によって）改変されたアミノ酸を包含する。アミノ酸としては、２０個のコードされたアミノ酸（プロリン、イミノ酸を含む）、他のα−アミノ酸、ならびに他の天然アミノ酸および人工アミノ酸（例えば、ｐ−ヨードチロシンおよびβ−アラニン）が挙げられる。
【００５４】
（環式ポリアミンアナログ：合成アプローチ）
インビボのＡＴＰの加水分解に影響し得る環式ポリアミン誘導体は、スペルミン（ｓｐｍ）、その異性体およびその高級ホモログおよび低級ホモログ、ならびにスペルミジン（ｓｐｄ）およびその異性体およびその高級ホモログおよび低級ホモログを、α，β−不飽和脂肪酸鎖と縮合することによって構築される（スキーム１）。
【００５５】
【化２４】
2004505112.tif 000016
スキーム１は、まさに環状ポリアミン（例えば、ピテコロビンおよびブドムンキアミン（ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅ））の生合成経路のように見えるが、実際の合成アプローチは、異なる経路に従う。後者は、これらの一連の種々のアナログに関してスキーム２に図示されている。
【００５６】
エチルブロモアセテート１とトリフェニルホスフィンとの反応によって、Ｗｉｔｔｉｇ塩２を得た。Ｗｉｔｔｉｇ反応の手順に従う２と脂肪族アルデヒド３ａ〜３ｃの縮合によって、α，β−不飽和エステル４ａ〜４ｃを約９０％の収率で得た。４ａ〜４ｃとスペルミン（またはスペルミンアナログ）との反応によって、スペルミンの第１級アミノ基によって塩基１当量が二重結合に付加して、そのアミノエステル５ａ〜５ｃを約４０％の収率で得る。５ａ〜５ｃの６ａ〜６ｃへのラクタム化を、アンチモン（ＩＩＩ）エトキシドを用いて７６％の収率で達成した。最後に、６ａ〜６ｃの第２級アミノ残基のＮ−メチル化が必要な場合、ホルムアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元的アルキル化反応によって７ａ〜７ｃを得ることで達成され得る。この反応の収率は、約８０％である。ホルムアルデヒドのホモログを用いるＮ−アルキル化は、７ａ〜７ｃのホモログをより高い収率で与える。
【００５７】
【化２５】
2004505112.tif 000017
スキーム２において使用される条件および試薬は、以下の通りである：ａ）ＰＰｈ３、トルエン、２時間、８０℃（９４％収率）；ｂ）ＮａＯＥｔ、１０℃続いて室温まで加温（８８％収率）；ｃ）スペルミン、４０℃（４３％収率）；ｄ）Ｓｂ（ＯＥｔ）３、ベンゼン、還流（７６％収率）；ｅ）１．ホルマリン３７％、酢酸、０℃続いて室温まで加温；２．ＮａＣＮＢＨ３、室温（８３％収率）。
【００５８】
一般的に、本発明の化合物の合成は、ハロアルキルアルカノエート、好ましくは、ω−ハロアルキルアルカノエートとトリフェニルホスフィンを反応させることによって行われ、ホスホニウム塩を与える。上記ホスホニウム塩は、Ｗｉｔｔｉｇ反応の一般的な反応プロトコルに従って、アルデヒド含有化合物またはケトン含有化合物（好ましくは、アルデヒド含有化合物）と縮合して、α，β−不飽和アルケニルアルカノエートを与える。少なくとも２つの第１級アミノ基を有するポリアミンの二重結合への付加は、β−アミノアルキルアルカノエートを生じ、上記第１級アミノ基の１つは、二重結合に付加して、他のアミノ基は遊離のまま残る。遊離のアミノ基とエステル官能基との縮合は、環状化合物を与える。次いで、第２級アミノ基（環内に存在する場合）の誘導体化は、所望な場合に行われ得る。ポリアミンのアミノ基が直鎖アルキル基によって接続されている場合、上記アルキル基の長さを変えることによって、そして上記ポリアミンのアミノ基の数を変えることによって、上記ポリアミンの縮合によって異なる環の大きさを構築し得、環状化合物を得ることは、容易に理解され得る。
【００５９】
本発明の化合物を合成するための代替方法は、スキーム３に図示されており、試薬４ｃは、スキーム２に図示されている。
【００６０】
【化２６】
2004505112.tif 000018
容易に理解され得るように、スキーム３に従う合成は、第１級アミノ基およびヘキサヒドロピリミジン部分を含む化合物８を利用する。上記ヘキサヒドロピリミジン部分は、１，３−ジアミノプロパンの保護された形態とみなされ得；上記ヘキサヒドロピリミジン環中の２個の窒素間のメチレン架橋は、容易に開裂して遊離のアミノ基を生じる。上記の遊離の第１級アミノ基を含む分子の一部が、ヘキサヒドロピリミジン窒素の１つと結合し；上記第１級アミンは、任意のリンカーアーム（ｌｉｎｋｅｒ　ａｒｍ）によって上記ヘキサヒドロピリミジン窒素に結合され得る。好ましくは、上記リンカーアームは、少なくとも１つの炭素原子を含む。上記リンカーアームは、−Ａ３−（ＮＹ−Ａ２）ｊ−の形態であり得、各Ａ２（存在する場合）およびＡ３は、独立して、Ｃｌ〜Ｃ８アルキルから選択され、各Ｙは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、そして、ｊは、０、１、２、または３であり；この化合物は、構造式：
【００６１】
【化２７】
2004505112.tif 000019
によって表わされる。
【００６２】
さらに好ましくは、上記リンカーアームは、スキーム３の化合物８中のような−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。ヘキサヒドロピリミジン８は、スペルミジンおよびホルマリンから容易に調製される（Ｃｈａｎｔｒａｐｒｏｍｍａ，Ｋ．ら、「Ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓ．２．Ａ　ｔｏｔａｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｓｐｅｒｍｉｎｅ」、Ｔｅｔｒ．　Ｌｅｔｔ．（１９８０）、２１（２６）：２４７５−６を参照のこと）。第１級アミノ基の−Ｃ＝Ｃ−結合への付加は、遊離の第１級アミノ基を第２級アミノ基へと変換する。スキーム３において、上記第１級アミノ基は、α，β−不飽和エステル化合物のアルケン結合へ付加する。次いで、上記ピリミジン環は、開環し得、第２の第１級アミノ基を遊離し、この基は、上記分子のエステル官能基と縮合し得る。実施例１４〜１６は、スキーム３の合成において使用される実験条件を詳細に示す。
【００６３】
本明細書中に記載される合成法を用いて、表１に列挙される以下の化合物を合成した。
【００６４】
【表１】
2004505112.tif 000020
2004505112.tif 000021
（化合物の還元およびさらなる誘導体化）
上述の化合物は、ヒドリド試薬（例えば、リチウムアルミニウムヒドリドおよび当該分野で公知の他の還元剤）を用いて容易に還元されて、アミド基を第２級アミンへと変換し得る。アミド基を含む環状ポリアミン化合物に関して、非アミド窒素、すなわちアミノ基がアルキル化されている場合、上記アミド基は、第２級アミノ基に還元され、一方、他の窒素は、第３級アミノ基として存在する。この違いは、上記第２級アミノ基でのさらなる化学反応を行うために利用され得る。上記還元をスキーム４に示し、ここで、Ｙａｌｋは、アルキル基（例えば、水素を除く）を示す。（上記還元は、もちろん、非アミド窒素上の置換基が水素である場合に行われ得る。その後の段階において、上記化合物中の全ての（第２級）窒素の誘導体化が行われ、これは、以下に概要を述べるスキームでは、アミドとして元から存在している窒素のみが誘導体化されたのとは対照的であった）。
【００６５】
【化２８】
2004505112.tif 000022
次いで、スキーム５に概要を述べるように、得られる第２級アミンをアクリロニトリルのような化合物と反応させて第２級アミンを誘導体化し得る。あるいは、得られる第２級アミンを、次いで、ω−ハロアルキルニトリルのような化合物と反応させ得る。ω−ハロアルキルニトリルの例としては、以下に限られないが、アルキル基が、Ｃｌ〜Ｃ８アルキル基であり、そしてハロゲンが、ヨードまたはブロモである。あるいは、上記第２級アミンは、アシル基（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル）とアシル化され得るか、またはアミノ酸またはペプチドは、上記第２級アミンと直接的にカップリングされ得る。式（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル）の基を用いるアシル化反応において、上記アシル基は、リチウムアルミニウムヒドリドまたは他の有機金属薬剤を用いて還元されてアルキル基を形成し得る。ω−シアノアシル基（すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−ＣＮ）がまた導入され得、リチウムアルミニウムヒドリドによって還元して、−ＣＨ２−Ｃ１〜Ｃ８アルキル−ＣＨ２ＮＨ２の形態の基を生じ得る。あるいは、上記第２級アミンは、塩基存在下、アルキルハライドによってアルキル化され得る。
【００６６】
【化２９】
2004505112.tif 000023
次いで、シアノ基の第１級アミノ基への還元は、水素下、Ｒａｎｅｙ−Ｎｉ試薬を用いて簡便に行われる。
【００６７】
従って、合成される遊離第１級アミノ基は、種々の様式で誘導体化され得る。１つのこのような様式は、Ｎ−保護アミノ酸の遊離の酸の基とアミノアルキルシクロプロピルアミンの第１級アミノ基をカップリングさせることによって、ペプチド合成の出発点として使用することである。アミノ酸またはペプチドの種々のカップリング方法は、当該分野で公知である。上記ポリペプチドは、組換え方法（すなわち、単一ポリペプチドまたは融合ポリペプチド）または化学合成によって合成され得る。ポリペプチド、特に約５０アミノ酸までのより短いポリペプチドは、化学合成（例えば、ＦｍｏｃまたはＢｏｃ合成方法）によって簡便に作製される。例えば、ＡｔｈｅｒｔｏｎおよびＳｈｅｐｐａｒｄ、Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、１９８９；ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ：Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　第２版、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ：Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．、１９８４；およびＪｏｎｅｓ、Ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、Ｏｘｆｏｒｄ：Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１９９４を参照のこと。上記ポリペプチドは、固相方法（例えば、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ−Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａによって販売される）を使用して自動化ポリペプチド合成機によって合成され得るか、または当該分野で公知の方法によって溶液中で作製され得る。
【００６８】
アミノアルキル化環状ポリアミンの第１級アミンにアミノ酸を連続的にカップリングさせることによるペプチドの合成は、液相ペプチド合成技術（例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｍ．、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｂｅｒｌｉｎ、１９９３；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｍ．、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｔｅｘｔｂｏｏｋ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｂｅｒｌｉｎ、１９９３、およびＢｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｍ．、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ａ．、Ｔｈｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｂｅｒｌｉｎ、１９８４に広く述べられている）ならびに他の当該分野で周知の技術によって容易に行われる。ペプチドはまた、ペプチド合成におけるフラグメント縮合方法に関する広く知られている技術を用いて、保護された小さなペプチドフラグメントのカップリングによって、環状ポリアミンに結合し得る。個々のアミノ酸（例えば、ロイシン）はまた、第１のアミノ酸の結合の後に、ペプチド合成手順を停止することによって簡単に環状ポリアミンに連結され得る。より長いペプチド（例えば、アセチル−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−は、段階的合成またはフラグメントカップリング方法のいずれかによって環状ポリアミンに結合され得る。
【００６９】
このようなペプチド合成方法によって、以下：
【００７０】
【化３０】
2004505112.tif 000024
の化合物（ＳＬ−１１２４３）を合成した。ＳＬ−１１２４３中のペプチドのＮ末端からＣ末端までのペプチド配列は、アセチル−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−であって、上記Ｃ末端のロイシンは、シクロポリアミン化合物の（前の）第１級アミノ基とカップリングする。上述のペプチド誘導体化された化合物において使用するための目的のペプチドは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）またはカテプシンＢの基質であるペプチドを含む。２５アミノ酸長以下、または１０アミノ酸長以下のペプチドが、使用され得る。ＰＳＡによって切断されるこのような配列の例としては、ＨＳＳＫＬＱ、ＳＫＬＱ−β−アラニン、ＳＫＬＱＬ、またはＳＫＬＱがあり、これらは、Ｎ末端保護基またはキャッピング基（例えば、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、アセチル，または他のアシルキャッピング基）を有していても有していなくてもよく、そして側鎖保護基（例えば、リジンのε−アミノ基上にカルボベンジルオキシカルボニル、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ）を有していても有していなくてもよい。
【００７１】
カテプシンＢによって認識されて切断されるポリペプチドの例としては、ペプチド配列Ｚ１−Ｐ２−Ｐ１−が挙げられ、ここで、Ｚ１は、水素、アミノ保護基、またはＰ２のＮ末端に結合するアミノキャッピング基であり；ここで、Ｐ２は、Ｎ末端アミノ酸であり、そしてＰ１は、Ｃ末端アミノ酸であり；そしてここで、Ｐ２は、疎水性アミノ酸であり、そしてＰ１は、塩基性アミノ酸または極性アミノ酸である。別の実施形態において、上記ペプチド配列は、Ｚ１−Ｐ２−Ｐ１−Ｙ−であり、ここで、Ｚ１は、水素、アミノ保護基またはＰ２のＮ末端に結合するアミノキャッピング基であり；Ｐ２は、疎水性アミノ酸であり；Ｐ１は、塩基性アミノ酸または極性アミノ酸であり；そしてここで、Ｙは、ロイシン、β−アラニンまたは非存在である。さらなる実施形態において、Ｚ１は、４−モルホリノカルボニル基である。なお別の実施形態において、Ｐ２は、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、およびフェニルアラニンからなる群から選択され；そして、Ｐ１は、リジン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジンおよびシトルリンからなる群から選択される。
【００７２】
（抗新生物性薬剤としての環状ポリアミンの有用性）
新生物性細胞増殖の処置における対象化合物の有用性を評価するために、上記化合物が、一般的に使用される癌モデルのいくつかのインビトロ増殖特性を阻害する能力を研究した。例えば、対象の上記ポリアミンは、一般的に認められたＭＴＴアッセイによって決定されるようないくつかの培養されたヒト前立腺腫瘍細胞株（例えば、ＬｎＣａｐ、ＤｕＰｒｏ、およびＰＣ−３）において、細胞増殖阻害を誘導する（表２）。３種の細胞株は全て、５００ｎＭ〜２，６００ｎＭの範囲のＩＤ５０値を有する上記環状ポリアミンに感受性である。上記ＤｕＰｒｏ細胞株を用いた結果が得られ；これらの結果は、ヒト前立腺細胞株を用いた代表的な結果である。本発明の環状ポリアミンは、図１〜１４に示されるようなヒト前立腺癌細胞株の一般的に認められたインビトロ試験培養において細胞増殖を阻害し、そして細胞死を引き起こすことが示されている。これらの図は、以下の実施例に詳細に記載される。ＤｕＰｒｏ細胞による上記環状ポリアミンの取り込み、および細胞のポリアミンレベルに生じる変化は、表３ａおよび３ｂに示される。
【００７３】
ＡＴＰの加水分解は、細胞死のもっともらしい原因の一つであると考えられている。ＡＴＰの酸加水分解を測定するための標準化された方法において、天然由来の直鎖ポリアミンスペルミン存在下で、ＡＴＰ加水分解が十分でないことと比較して、上記環状ポリアミン存在下で、ＡＴＰ加水分解において、驚くべき増加が観測された（図１５〜２１を参照のこと）。上記環状ポリアミンはまた、癌細胞中、インビボでＡＴＰを加水分解することが見い出されている（図２２〜２４）。癌細胞における細胞内のＡＴＰを加水分解するために必要とされる環状ポリアミンの濃度は、細胞死を生じる環状ポリアミンの濃度に匹敵し（図６〜１４）、このことは、細胞死が細胞内のＡＴＰ枯渇に起因するという仮説を支持している。しかし、本発明は、生物学的活性または治療学的活性の任意の特定の理論によって限定されることを意図するものではない。
【００７４】
（ポリアミンアナログの治療的使用）
本発明のポリアミンアナログは、以下の処置のために有用であると考えられる：細胞（癌、特に前立腺癌および他の癌細胞株を含む）の制御されていない増殖によって引き起こされる種々の疾患。上記アナログは、哺乳動物、好ましくはヒトを処置するために使用される。本発明の環状ポリアミンを使用する疾患の「処置」は、上記疾患または疾患の症状のいずれかを予防、低減または除去するための、あるいは上記疾患または疾患の症状の進行を遅らせるための、本発明の１つ以上の環状ポリアミンの投与として規定され、追加の治療用薬剤を併用してもしなくてもよい。本発明の上記環状ポリアミンの「治療的使用」は、本発明の１つ以上の環状ポリアミンを使用して上に規定される疾患を処置することとして規定される。
【００７５】
特定の医療用途についての特定の新規環状ポリアミンの効力を評価するために、この化合物は、まず、適切に選択した試験細胞に対してインビトロで試験され得る。非限定的な例において、ポリアミンアナログは、腫瘍細胞（例えば、前立腺腫瘍細胞）に対して試験され得る。例示的な実験は、培養物中で、ならびに胸腺欠損ヌードマウス（例えば、ＬＮＣａＰ）においてインビボで増殖し得る細胞株を利用し得る。Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら（１９８３）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．４３：１８０９−１８１８。フローサイトメトリーに基づく癌細胞株の培養および処置、細胞周期ならびに細胞死の決定；ＯＤＣ、ＳＡＭＤＣおよびＳＳＡＴ活性を含む酵素アッセイ；ならびに天然のポリアミンおよびポリアミンアナログの高速液体クロマトグラフィー検出および定量化は、当該分野で記載されている（例えば、Ｍｉら（１９９８）Ｐｒｏｓｔａｔｅ　３４：５１−６０；Ｋｒａｍｅｒら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．５７：５５２１−２７；およびＫｒａｍｅｒら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２１２４−２１３２）。評価はまた、細胞の増殖および代謝に対する新規環状ポリアミンアナログの効果でなされ得る。
【００７６】
分析は、７２時間で行われる０．１〜１０００μＭの範囲の用量応答曲線に基づくＩＣ５０の決定により始まる。これらの研究から、約５０％の増殖阻害を生じる状態が規定され得、そして以下のために使用される：（ａ）細胞数の減少（これは、薬物誘導細胞死を示し得る）について特に注意しながら、６日までの間の増殖阻害の時間依存性を追跡するため；（ｂ）フローサイトメトリー（付着および脱着した細胞について行う分析）を使用する、細胞周期の進行および細胞死に対するアナログの効果の特徴付けのため；（ｃ）細胞の代謝のパラメータに対するアナログの効果を試験するため。アナログの効果は、細胞内濃度に対して正規化され得（ＨＰＬＣ分析によって）、これはまた、細胞に浸透するその相対的能力の表示を提供する。アナログ取り込みにおける顕著な差異は、Ｍｉら（１９９８）において以前に記載されたような、放射標識スペルミジンを使用する競合研究によって評価されるような、ポリアミントランスポーターを利用しそして調節するアナログの能力の研究によってさらに特徴付けられ得る。環状ポリアミンはまた、拡散機構によって細胞に侵入し得た。
【００７７】
（環状ポリアミンアナログのインビボ試験）
培養された癌細胞に対する強力な抗増殖活性をインビトロで有することが見出されたアナログは、インビボモデル系において評価され得る。最初の目的は、非腫瘍保有動物（例えば、ＤＢＡ／２マウス）におけるアナログの相対的毒性を決定することである。各群の３匹の動物に、例えば１０ｍｇ／ｋｇで開始する漸増濃度のアナログを腹腔内注射し得る。罹患率によって示される毒性を、最初の２４時間にわたって綿密にモニターする。十分に特徴付けられたポリアミンアナログ（例えば、ＢＥ−３３３）を、これらの研究において内部標準として使用し得る。なぜなら、毎日×５日間のスケジュールによる慢性の毒性と比較して、単回用量処置による急性毒性に関するデータベースが既に確立されているためである。従って、新しいアナログの場合、ＢＥ−３３３と比較した単回用量毒性は、毎日×５日間のスケジュールで使用されるべき用量の範囲を計画するために使用される。
【００７８】
毎日×５日間のスケジュールでの最大耐量を推論した後に、抗腫瘍活性を決定する。代表的に、腫瘍は、トロカールによってヌード胸腺欠損マウスに皮下移植され得、そして毎日×５日間の腹腔内注射による処置を開始する前に、１００〜２００ｍｍ３に達する。大部分のアナログは、１０ｍｇ／ｋｇと２００ｍｇ／ｋｇとの間の範囲で与えられ得る。アナログは、１群当たり１０〜１５匹の動物で、３回の処置用量で評価され得る（以下に記載する薬理学的研究のために、各々最低３匹が使用され得る）。マウスは、腫瘍のサイズおよび毒性を決定するために、週に２回モニターおよび秤量され得る。腫瘍のサイズは、多角的測定によって決定され、これから容量（ｍｍ３）が計算される。腫瘍は、各群の腫瘍容量の中央値が１５００ｍｍ３（すなわち、体重の２０％）に達するまで精察され得、この時点で、この動物を屠殺し得る。初期の抗腫瘍研究は、毎日×５日間のスケジュールに焦点を合わせるが、Ａｌｚｅｔポンプ送達を介して５日間の一定の注入が行われ得る。なぜなら、このスケジュールは、Ａ５４９ヒトラージ細胞懸架（ｈｕｎｇ）癌に対するＢＥ−３３３の抗腫瘍活性を劇的に改善するためである。Ｓｈａｒｍａら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．３：１２３９−１２４４。抗腫瘍活性の評価に加えて、腫瘍組織および正常組織における遊離アナログのレベルは、試験動物において決定され得る。
【００７９】
（環状ポリアミンアナログの投与方法）
本発明のポリアミンアナログは、哺乳類（好ましくはヒト）被験体に、当該分野で公知の任意の経路（本明細書中で開示される経路が挙げられるが、これらに限定されない）を介して投与され得る。好ましくは、新規ポリアミンアナログの投与は、静脈内である。他の投与方法としては、経口、動脈内（ｉｎｔｒａｒｔｅｒｉａｌ）、腫瘍内、筋内、局所的、吸入、皮下、腹腔内、胃腸、および特定器官または罹患した器官への直接投与が挙げられるがこれらに限定されない。本発明に記載される新規ポリアミンアナログは、錠剤、丸剤、粉末混合物、カプセル、顆粒、注射剤、クリーム、溶液、坐剤、乳濁液、分散剤、食品プレミックスの形態、および他の適切な形態で投与可能である。この化合物はまた、リポソーム処方物において投与され得る。この化合物はまた、プロドラッグとして投与され得、ここでこのプロドラッグは、処置された被験体において治療的に有効な形態に形質転換される。さらなる投与方法は、当該分野で公知である。
【００８０】
本明細書中に記載される化合物を含む薬学的投与形態は、無毒性の薬学的有機キャリアまたは無毒性の薬学的無機キャリアと好都合に混合される。代表的な薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、マンニトール、尿素、デキストラン、ラクトース、ジャガイモおよびトウモロコシのデンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレングリコール、エチルセルロース、ポリ（ビニルピロリドン）、炭酸カルシウム、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、安息香酸ベンジル、炭酸ナトリウム、ゼラチン、炭酸カリウム、ケイ酸、および他の好都合に利用される受容可能なキャリアが挙げられる。この薬学的投薬形態はまた、無毒性の補助物質（例えば、乳化剤、保存剤、または湿潤剤など）を含み得る。適切なキャリアは、耐えられない副作用を引き起こさないが、新規環状ポリアミンアナログが、体内でその薬理学的活性を保持し得るキャリアである。非経口的および経口的な薬物送達のための処方物は、当該分野で公知であり、そしてＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９０）に記載される。固体形態（例えば、錠剤、カプセルおよび粉末）は、従来の錠剤化機構およびカプセル充填機構使用して作製され得、これらの機構は当該分野で周知である、固体投薬形態（経口投与のための単回用量提示形態の錠剤およびカプセルを含む）は、当該分野で公知の多数のさらなる非活性成分を含み得、これらの成分としては以下のような従来の添加剤が挙げられる：賦形剤；乾燥剤（ｄｅｓｓｉｃａｎｔ）；顔料；結合剤（例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、またはポリビニルピロリドン）；充填剤（例えば、ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン）；錠剤化滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン）；または受容可能な湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ　ｌａｕｒｙｌ　ｓｕｌｐｈａｔｅ）。錠剤は、標準的な薬務において周知の方法に従ってコーティングされ得る。摂取のための液体形態は、公知の液体キャリア（水性キャリアおよび非水性キャリア、懸濁液、水中油型乳濁液および／または油中水型乳濁液などを含む）を使用して処方され得る。液体処方物はまた、多数のさらなる非活性成分（顔料、香料、矯味矯臭剤、粘度改善剤、保存剤、安定化剤などを含む）を含み得る。非経口投与について、新規の環状ポリアミンアナログは、さらなる界面活性剤またはアジュバントを用いてかまたは用いずに、生理学的に受容可能な希釈剤または滅菌液体キャリア（例えば、水または油）中のこの化合物の溶液または懸濁液の、注射可能な投薬形態として投与され得る。キャリア油の例示的な列挙としては、以下が挙げられる：動物油および植物油（ピーナツ油、ダイズ油）、石油由来の油（鉱油）、および合成油。一般に、注射可能な単位投薬量について、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液、ならびにエタノール溶液およびグリコール溶液（例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）が、好ましい液体キャリアである。選択される薬学的単位投薬量は、好ましくは、癌細胞と接触する時点で、１μＭ〜１０ｍＭの薬物最終濃度を提供するように作製および投与される。１〜１００μＭの濃度がより好ましい。新規環状ポリアミンアナログの最適有効濃度は、経験的に決定され得、そしてこれは疾患の型および重症度、投与経路、疾患の進行および健康状態、ならびに患者の体重または身体の領域に依存する。このような決定は、当業者の範囲内である。環状ポリアミンアナログは、単独活性成分として投与され得るか、または別の活性成分（細胞傷害剤、抗生物質、代謝拮抗剤、ニトロソ尿素、ビンカアルカロイド、ポリペプチド、抗体、サイトカインなどが挙げられるがこれらに限定されない）と組み合わせて投与され得る。
【００８１】
（実施例）
（化学合成実施例）
以下の実施例は、本発明に従ういくつかの化合物の製造の例示であり、そしていずれの様式においても、本発明を、本明細書中の開示および特許請求の範囲に限定するようには意図されない。本実施例は、単に本発明のより完全な理解を助けるために本明細書中に含まれる。参照番号１〜１１は、上記の反応スキーム２および３における化合物を参照する。参照番号１２〜１４は、本実施例において示され、そしてそのように標識される化合物を参照する。
【００８２】
全ての市販の試薬を、さらなる精製なしで使用した。全ての反応を、ＴＬＣ（プレコートしたシリカゲルＦ２６４，Ｍｅｒｃｋ）で追跡し；シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ　６０，０．０４０〜０．０６３メッシュ）を用いるカラムクロマトグラフィーを行った。検出を、ＵＶ光または以下の試薬のいずれかを用いて行った：ＫＭｎＯ４溶液（１％ＫＭｎＯ４水溶液と５％Ｎａ２ＣＯ３水溶液との１：１混合物）；アミドおよびアミンについて、Ｓｃｈｌｉｔｔｌｅｒ試薬（白金酸ヨウ素（ｉｏｄｉｎｅ　ｐｌａｔｉｎａｔｅ））（６ｍｌのＨ２Ｏ中１ｇのＨ２ＰｔＣｌ６，２０ｍｌの１Ｎ　ＨＣｌおよび２２５ｍｌのＨ２Ｏ中２５．５ｇのＫＩ、１Ｌに希釈）。ＩＲ測定は、［ｃｍ−１］の単位で表し、そしてＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　７８１機器に記録した。ＮＭＲスペクトルを、適切な溶媒を内部標準として使用して、Ｂｒｕｋｅｒ−３００またはＢｒｕｋｅｒ　ＡＭＸ−６００にδ（ｐｐｍ）で記録した。ＭＳスペクトルを、ＮＨ３を用いる化学イオン化（ＣＩ）および電子衝撃（ＥＩ；７０ｅＶ）を使用してＦｉｎｎｉｇａｎ　ＭＡＴ　ＳＳＯ　７００機器またはＦｉｎｎｉｇａｎ　ＭＡＴ　９０機器で、ならびにエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を使用してＦｉｎｎｉｇａｎ　ＴＳＱ　７００機器で、作製した。
【００８３】
構造図に含まれる数字は、他と区別される分光学的データのための原子の番号を示す；例えば、実施例１における化合物２についての番号１および２は、炭素核磁気共鳴の帰属についての炭素１および２と一致する。
【００８４】
（実施例１）
（（エトキシカルボニルメチル）トリフェニルホスホニウムブロミド（２））
【００８５】
【化３１】
2004505112.tif 000025
２００ｍｌのトルエン中の２２ｇ（８４ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンの懸濁液に、１４ｇ（８４ｍｍｏｌ）のブロモ酢酸エチルを添加した。この混合物を、８０℃で２時間加熱し、そして一晩室温で攪拌した。これを濾過し、トルエンで洗浄し、そして沈殿したホスホニウムブロミドを１０−５ｍｂａｒで１５時間乾燥させて、３４ｇ（９４％）の２を無色の結晶として得た。分析の目的で、３００ｍｇを（ＣＨＣｌ３／ヘキサン　１：２）から再結晶して、２９２ｍｇを得た。
【００８６】
Ｒｆ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ　９：１，ＵＶ２５４）：０．１６
ｍｐ．：１５０〜１５５℃（ＣＨＣｌ３／ヘキサン　１：２）
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：３３６０ｗ，２９１５ｓ，２７０５ｗ，２４００ｗ，１７２５ｓ，１５８５ｗ，１３３５ｍ，１３７０ｗ，１３０５ｍ，１２１０ｍ，１１１０ｓ，１０２０ｗ，９９５ｗ，８４５ｗ，６６０ｍ，６２０ｗ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．９３−７．３３（ｍ，１５　芳香族Ｈ）；５．４７（ｄ，Ｊ＝１３．８，Ｈ２Ｃ（１））；４．０２（ｑ，Ｊ＝７．１，ＯＣＨ２ＣＨ３），１．０５（ｔ，Ｊ＝７．２，ＯＣＨ２ＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１６４．２（ｓ，Ｃ（２））；１３５．１，１３３．９，１３３．７，１３０．２，１３０．１（５ｄ，１５　芳香族Ｃ）；１１８．４，１１７．２，（２ｓ，３　芳香族Ｃ）；６２．７（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；３３．４，３２．７（２ｔ，Ｃ（１））；１３．６（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）
ＥＳＩ−ＭＳ：３４９（［Ｍ−Ｂｒ］＋）。
【００８７】
（実施例２）
（２−テトラデカン酸エチル（４ａ））
【００８８】
【化３２】
2004505112.tif 000026
５７５ｍｇ（２５ｍｍｏｌ）のＮａおよび１００ｍｌのＥｔＯＨから調製したＮａＯＥｔの溶液に、１０℃で１０．７ｇ（２５ｍｍｏｌ）２を分割して添加し、そして室温で１時間攪拌した。２０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中の４．３７ｇ（２３．７５ｍｍｏｌ）のラウリンアルデヒド３を添加し、そして室温で一晩攪拌した後、この混合物をエバポレートし、そして５０ｇのＳｉＯ２を通してこの粗生成物を濾過（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　１：２）して、（Ｅ／Ｚ）混合物（約２：１）として５．１ｇ（８８％）の４ａを得た。分析の目的で、４５０ｍｇの４ａを、クロマトグラフィー（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　２：９８）で精製して、１４０ｍｇ（３１％）の（Ｚ）異性体および２８５ｍｇ（６４％）の（Ｅ）異性体を無色の油状物として得た。
【００８９】
Ｒｆ（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　３：９７，ＫＰＭ）：０．６７（Ｚ）異性体，０．４７（Ｅ）異性体
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：２９２０ｖｓ，２８５０ｓ，１７２０ｓ，１６４０ｍ，１４５５ｍ，１４１５ｍ，１３６０ｍ，１２９５ｗ，１２３５ｍ，１１７５ｓ，１１１５ｓ，１０３０ｍ，９２５ｗ，８２０ｍ，６６０ｍ，６２０ｗ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｚ）６．２１（ｄｔ，Ｊ＝１１．５，５．７，ＨＣ（３））；５．７５（ｄ，Ｊ＝１１．５，ＨＣ（２））；４．１６（ｑ，Ｊ＝７．２，ＯＣＨ２ＣＨ３）：２．６３（ｑ，Ｊ＝７．３，Ｈ２Ｃ（４））；１．４１（ｔ，Ｊ＝６．３，Ｈ２Ｃ（５））；１．３０−１．２５（ｍ，８ＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３），０．８８（ｔ，６．９，Ｈ３Ｃ（１４））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｚ）１６６．６（ｓ，Ｃ（１））；１５０．５（ｄ，Ｃ（２））；１１９．５（ｄ，Ｃ（３））；１０１．６　５９．６（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；３４．３（ｔ，Ｃ（４））；３１．８（ｔ，Ｃ（１２））；２９．６（ｔ，Ｃ（５））；２９．５，２９．４，２９．３，２９．２，２８．９，２３．４（６ｔ，６Ｃ）；２２．５（ｔ，Ｃ（１３））；１４．１（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３．９（ｑ，Ｃ（１４））
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｅ）６．９４（ｄｔ，Ｊ＝１５．６，７．０，ＨＣ（３））；５．８０（ｄ，Ｊ＝１５．６，ＨＣ（２））；４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１，ＯＣＨ２ＣＨ３）；２．１９（ｑ，Ｊ，７．０，Ｈ２Ｃ（４）），１．４４（ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ２Ｃ（５））；１．３２−１．２６（ｍ，８ＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；０．８７（ｔ，６．９，Ｈ３Ｃ（１４））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｅ）１６６．８（ｓ，Ｃ（１）），１４９．９（ｄ，Ｃ（２））；１２１．２（ｄ，Ｃ（３））；６０．１（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；３２．２（ｔ，Ｃ（４））；３１．９（ｔ，Ｃ（１２））；２９．６（ｔ，Ｃ（５））；２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２８．１．２３．５（６ｔ，６Ｃ）；２２．７（ｔ．Ｃ（１３））；１４．３（ｑ，Ｃ（１４））；１４．１（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）
ＥＩ−ＭＳ：２５４（５，［Ｍ＋・］），２０９（９，［Ｍ−ＯＥｔ］＋），１５７（１８），１２７（４６），１１３（２７），９９（４７），８１（３７），６７（２４），５５（５８），４３（１００）。
【００９０】
（実施例３）
（１６−アミノ−３−ウンデシル−４，８，１３−トリアザヘキサデカン酸エチル（５ａ））
【００９１】
【化３３】
2004505112.tif 000027
２０ｍｌのＥｔＯＨ中の３．４９ｇ（１３．７ｍｍｏｌ）の４ａの溶液を、１５０ｍｌのＥｔＯＨ中の２．７７ｇ（１３．７ｍｍｏｌ）のスペルミンの攪拌溶液に３０分間かけて添加し、そしてこの混合物を４０℃に３日間加熱した。溶媒のエバポレーションおよび１００ｇのＳｉＯ２上での残渣のクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ　６：３：１）により、２．５ｇ（４３％）の５ａを無色の油状物として得た。
【００９２】
Ｒｆ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／２５％水性ＮＨ４ＯＨ　７：４：１，Ｓｃｈｌｉｔｔｌｅｒ）：０．２６
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：２９２０ｖｓ，２８５０ｖｓ，１７２０ｖｓ，１５８０ｗ，１４６０ｓ，１３７０ｓ，１３００ｍ，１１８０ｍ，１１１５ｓ，１０２５ｍ，９２０ｍ，８８５ｍ，８４５ｍ，６５５ｓ，６２０ｗ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１，ＯＣＨ２ＣＨ３）；２．９２（五重線，Ｊ＝６．４，ＨＣ（３））；２．７８（ｔ，Ｊ＝６．８，Ｈ２Ｃ（１６））；２．６９（ｔ，Ｊ＝７．０，Ｈ２Ｃ（９），Ｈ２Ｃ（１２））；２．４５（ｔ，Ｊ＝６．８，Ｈ２Ｃ（５），Ｈ２Ｃ（７），Ｈ２Ｃ（１４））；２．３８（ｄ，Ｊ＝６．３，Ｈ２Ｃ（２））；２．１９（ｂｒ．ｓ，ＮＨ，ＮＨ２）；１．６６（五重線，Ｊ＝６．９，Ｈ２Ｃ（６），Ｈ２Ｃ（１５））；１．５４（五重線，Ｊ＝７．１，Ｈ２Ｃ（１０），Ｈ２Ｃ（１１））；１．２８−１．２３（ｍ，１０ＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；０．８８（ｔ，７．０，Ｈ３Ｃ（１１’））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１７２．５（ｓ，Ｃ（１））；６０．０（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；５４．７（ｄ，Ｃ（３））；４９．７（ｔ，Ｃ（１２））；４８．２（ｔ，Ｃ（１４））；４７．６（ｔ，Ｃ（９））；４５．２（ｔ，Ｃ（７））；４０．３（ｔ，Ｃ（５））；３９．１（ｔ，Ｃ（１６））；３４．３（ｔ，Ｃ（２））；３３．５（ｔ，Ｃ（１’））；３１．７（ｔ，Ｃ（９））；３０．３，２９．５，２９．４（３ｔ，６Ｃ）；２９．１（ｔ，Ｃ（６），Ｃ（１５））；２７．７（ｔ，Ｃ（２’），Ｃ（１０））；２５．６（ｔ，Ｃ（１１））；２２．４（ｔ，Ｃ（１０’））；１４．０（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３．９（ｑ，Ｃ（１１’））
ＥＳＩ−ＭＳ：４５７（２８，［Ｍ＋１］＋），２２９（１００，［Ｍ＋２］２＋）。
【００９３】
（実施例４）
（４−ウンデシル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（６ａ））
【００９４】
【化３４】
2004505112.tif 000028
１８０ｍｌの乾燥ベンゼン中の１．３ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）の５ａの溶液を、モレキュラーシーブ上で２時間加熱還流した。室温まで冷却した後、１０ｍｌのベンゼン中の９５０ｍｇ（３．７ｍｍｏｌ）のアンチモン（ＩＩＩ）エトキシドをアルゴン雰囲気下で添加し、そしてこの混合物を還流下で１６時間攪拌した。この混合物を１０℃に冷却し、ＥｔＯＨでクエンチし、そしてエバポレートした。残渣をクロマトグラフィー（５０ｇのＳｉＯ２，ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ　１５：４：１）によって精製して、９１５ｍｇ（７８％）の６ａを無色の油状物として得た。
【００９５】
Ｒｆ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／２５％水性ＮＨ４ＯＨ　７：４：１，Ｓｃｈｌｉｔｔｌｅｒ）：０．４７
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：３２４０ｗ，２９２０ｖｓ，２８５０ｖｓ，１６４０ｓ，１５２０ｍ，１４６０ｍ，１３７０ｍ，１２２０ｍ，１１２０ｍ，１０４５ｗ，９２５ｗ，８０５ｍ，６６０ｍ，６２０ｗ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．４４（ｂｒ．ｓ，ＮＨ），３．３７（ｔ，Ｊ＝７．７，Ｈ２Ｃ（１７））；２．８３（五重線，Ｊ＝７．０，ＨＣ（４））；２．７６−２．７２（ｍ，Ｈ２Ｃ（６），Ｈ２Ｃ（８））；２．６８（ｔ，Ｊ＝５．４，Ｈ２Ｃ（１０），Ｈ２Ｃ（１３），Ｈ２Ｃ（１５））；２．３７（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，３．３，ＨａＣ（３））；２．２５（ｂｒ．ｓ，ＮＨ）；２．１４（ｄｄ，Ｊ＝１５．３，７．２，ＨｂＣ（３））；１．６７（五重線，Ｊ＝６．１，Ｈ２Ｃ（７），Ｈ２Ｃ（１６））；１．５９（五重線，Ｊ＝８．０，Ｈ２Ｃ（１１），Ｈ２Ｃ（１２））；１．４１−１．２５（ｍ，１０ＣＨ２）；０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，Ｈ３Ｃ（１１））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１７２．２（ｓ，Ｃ（１））；５５．４（ｄ，Ｃ（４））；４８．４（ｔ，Ｃ（１３））；４８．２（ｔ，Ｃ（１５））；４８．０（ｔ，Ｃ（８））；４７．３（ｔ，Ｃ（１０））；４５．７（１，Ｃ（６））；４０．３（ｔ，Ｃ（３））；３７．６（ｔ，Ｃ（１７））；３４．０（ｔ，Ｃ（１’））；３１．７（ｔ，Ｃ（９’））；２９．６，２９．４（２ｔ，６Ｃ）；２９．２（ｔ，Ｃ（７））；２８．８（ｔ，Ｃ（１６））；２６．７（ｔ，Ｃ（２’））；２６．６（ｔ，Ｃ（１１））；２５．７（ｔ，Ｃ（１２））：２２．５（ｔ，Ｃ（１０’））；１３．９（ｑ，Ｃ（１１’））
ＥＳＩ−ＭＳ：４１１（４４，［Ｍ＋１］＋），２０６（１００，［Ｍ＋２］２＋）。
【００９６】
（実施例５）
（５，９，１４−トリメチル−４−ウンデシル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（Ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅ　Ａ）（７ａ））
【００９７】
【化３５】
2004505112.tif 000029
１０ｍｌのＡｃＯＨ中の９０ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）の６ａおよび３ｍｌのホルマリン（３７％）の溶液を、０℃で攪拌した。７分後、１ｍｌのＭｅＯＨ中の２５０ｍｇ（４ｍｍｏｌ）のＮａＣＮＢＨ３を添加し、そしてこの混合物を、室温で一晩攪拌した。５℃まで冷却した後、この混合物を２ＮのＨＣｌでクエンチし、そして有機溶媒をエバポレートした。残渣を５ｍｌの飽和Ｋ２ＣＯ３水溶液に溶解し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションおよび残渣のクロマトグラフィー（１０ｇのＳｉＯ２，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／２５％水性ＮＨ４ＯＨ　９０：１０：０．７）の後、７８ｍｇ（８３％）の７ａを無色の油状物として得た。
【００９８】
Ｒｆ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／２５％水性ＮＨ４ＯＨ　８５：１４：１，Ｓｃｈｌｉｔｔｌｅｒ）：０．４１
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：３４２０ｍ，２９２０ｖｓ，２８５０ｖｓ，２８００ｓ，１６４０ｖｓ，１５２０ｓ，１４６０ｓ，１３７０ｍ，１２３０ｍ，１１３５ｍ，１０５０ｍ，９２０ｗ，８４５ｗ，６８０ｗ，６５５ｍ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．５５（ｂｒ．ｓ，ＮＨ）；３．３２（ｄｔ，Ｊ＝６．６，６．８，Ｈ２Ｃ（１７））；２．８４（五重線，Ｊ＝４．７，ＨＣ（４））；２．６２（ｄｔ，Ｊ＝１２．３，７．０，ＨａＣ（６））；２．４９−２．４１（ｍ，Ｈ２Ｃ（１３））；２．４１（ｍ，ＨｂＣ（６））；２．３９（ｍ，Ｈ２Ｃ（８））；２．４１−２．３２（ｍ，Ｈ２Ｃ（１０））；２．４４−２．３４（ｍ，Ｈ２Ｃ（１５））；２．３７（ｍ，ＨａＣ（３））；２．２４（ｄｄ，Ｊ＝６．２，１．６，ＨｂＣ（３））；２．２７（ｓ，Ｈ３ＣＮ（９））；２．１９（ｓ，Ｈ３ＣＮ（１４），Ｈ３ＣＮ（５））；１．６７（五重線，Ｊ＝６．５，Ｈ２Ｃ（１６））；１．６４（五重線，Ｊ＝６．４，Ｈ２Ｃ（７））；１．５２（五重線，Ｊ＝６．７，Ｈ２Ｃ（１１），Ｈ２Ｃ（１２））；１．３０−１．１７（ｍ，１０ＣＨ２）；０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９，Ｈ３Ｃ（１１’））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１７２．５（ｓ，Ｃ（１））；６１．１（ｄ，Ｃ（４））；５６．３（ｔ，Ｃ（１０））；５６．２（ｔ，Ｃ（１３））；５５．８（ｔ，Ｃ（１５））；５４．５（ｔ，Ｃ（８））；５１．５（ｔ，Ｃ（６））；４２．８（ｑ，Ｈ３ＣＮ（９））；４２．３（ｑ，Ｈ３ＣＮ（１４））；３７．６（ｔ，Ｃ（１７））；３７．０（ｔ，Ｃ（３））；３５．１（ｑ，Ｈ３ＣＮ（５））；３１．８（ｔ，Ｃ（９’））：２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．２（５ｔ，６Ｃ）；２７．５（ｔ，Ｃ（１６））；２７．３（ｔ，Ｃ（２’））；２７．１（ｔ，Ｃ（１’））；２６．０（ｔ，Ｃ（７））；２４．４（ｔ，Ｃ（１１））；２３．３（ｔ，Ｃ（１２））；２２．５（ｔ，Ｃ（１０’））；１３．９（ｑ，Ｃ（１１’））
ＥＳＩ−ＭＳ：４５３（１００，［Ｍ＋１］＋），２２７（８０，［Ｍ＋２］２＋）
ＥＩ−ＭＳ：４５２（４０，［Ｍ＋・］），４３７（２８，［Ｍ−ＣＨ３］＋），３８０（１６），３６６（３１），２９５（２５），２７３（１９），２４３（３１），２３８（２０），２２６（２０），２１２（１９），２００（２８），１８６（１６），１６９（１５），１４９（３３），１２７（１８），１１２（２１），１００（２９），９８（３５），８６（７６），８４（１００），７０（３９），５８（５７），４９（９５），４３（６９）。
【００９９】
（実施例６）
（２−ドデセン酸エチル（４ｂ））
【０１００】
【化３６】
2004505112.tif 000030
実施例２と同様：２００ｍｌのＥｔＯＨ中の１．７ｇ（７４ｍｍｏｌ）のＮａ、３２ｇ（７４ｍｍｏｌ）の２および１０．８２ｇ（６９．３７ｍｍｏｌ）のカプリンアルデヒド３ｂから、１４．１ｇ（９０％）の４ｂを、後処理の後に（Ｅ／Ｚ）混合物（＝２：１）として無色の油状物として得た。分析の目的で、３２０ｍｇの４ｂを、クロマトグラフィー（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　２：９８）によって精製して、１０４ｍｇ（３２％）の（Ｚ）異性体および２０５ｍｇ（６４％）の（Ｅ）異性体を無色の油状物として得た。
【０１０１】
Ｒｆ（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　３：９７，ＫＰＭ）：０．６８（Ｚ）異性体、０．４７（Ｅ）異性体
ＩＲ（ＣＨＣｌ３）：２９２０ｖｓ，２８５０ｖｓ，１７１０ｖｓ，１６５０ｓ，１４６０ｍ，１３７０ｓ，１３１０ｓ，１２７５ｓ，１１７０ｍ，１１３０ｍ，１０３５ｍ，９８０ｍ，８２５ｗ，６６０ｗ，６２０ｗ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｚ）６．２２（ｄｔ，Ｊ＝１１．５，７．５，ＨＣ（３））；５．７４（ｄｔ，Ｊ＝１１．５，１．７，ＨＣ（２））；４．１６（ｑ，Ｊ＝７．１，ＯＣＨ２ＣＨ３）；２．６３（ｑ，Ｊ＝７．３，Ｈ２Ｃ（４））；１．４３（ｔ，Ｊ＝６．３，Ｈ２Ｃ（５））；１．３０−１．２５（ｍ，６ＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，Ｈ３Ｃ（１２））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｚ）１６６．４（ｓ，Ｃ（１））；１５０．４（ｄ，Ｃ（２））；１１９．５（ｄ，Ｃ（３））；５９．６（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３）；３１．７（ｔ，Ｃ（４））；２９．４（ｔ，Ｃ（１０））；２９．３，（ｔ，Ｃ（５））；２９．１，２９．０，Ｃ（８））；２８．９，（３ｔ，４Ｃ）；２２．５（ｔ，Ｃ（１１））；１４．１（ｑ，Ｃ（１２））；１３．９（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｅ）６．９５（ｄｔ，Ｊ＝１５．６，７．０，ＨＣ（３））；５．８０（ｄｔ，Ｊ＝１５．６，１．６，ＨＣ（２））；４．１６（ｑ，Ｊ＝７．２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；２．１８（ｑ，Ｊ＝７．１，Ｈ２Ｃ（４））；１．４５（ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ２Ｃ（５））；１．３２−１．２６（ｍ，６ＣＨ２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；０．８８（ｔ，６．９，Ｈ３Ｃ（１２））
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：（Ｅ）１６６．６（ｓ，Ｃ（１））；１４９．３（ｄ，Ｃ（２））；１２１．１（ｄ，Ｃ（３））；５９．９（ｔ，ＯＣＨ２ＣＨ３），３２．０（ｔ，Ｃ（４））；３１．７（ｔ，Ｃ（１０）），２９．３，（ｔ，Ｃ（５））；２９．２，２９．１，２９．０，２７．９（４ｔ，４Ｃ）；２２．５（ｔ，Ｃ（１１）），１４．１（ｑ，Ｃ（１２））；１３．９（ｑ，ＯＣＨ２ＣＨ３）
ＣＩ−ＭＳ：２２７（７６，［Ｍ＋１］＋），２２６（５２，［Ｍ＋ＮＨ４−Ｈ２Ｏ］＋），１８１（５２，［Ｍ−ＯＥｔ］＋），１３８（１６），１２７（１００），１４４（２２），９９（８０），８８（２８），８１（３０），５５（３９），４３（４１）。
【０１０２】
（実施例７）
（エチル１６−アミノ−３−ノニル−４，８，１３−トリアザヘキサンデカノエート（５ｂ））
【０１０３】
【化３７】
2004505112.tif 000031
実施例３と同様：５００ｍｌのＥｔＯＨ中の６．４６ｇ（３２ｍｍｏｌ）のスペルミンおよび７．２３ｇ（３２ｍｍｏｌ）の４ｂから、５．２ｇ（４０％）の５ｂを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１０４】
【数１】
2004505112.tif 000032
（実施例８）
（４−ノニル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（６ｂ））
【０１０５】
【化３８】
2004505112.tif 000033
実施例４と同様：１９０ｍｌのベンゼン中の４．２ｇ（９．８ｍｍｏｌ）の５ｂおよび３ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のアンチモン（ＩＩＩ）エトキシドから、２．８５ｇ（７６％）の６ｂを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１０６】
【数２】
2004505112.tif 000034
（実施例９）
（５，９，１４−トリメチル−４−ノニル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（Ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅ　Ｂ）（７ｂ））
【０１０７】
【化３９】
2004505112.tif 000035
実施例５と同様：８ｍｌのＡｃＯＨ中の、７０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の６ｂ、３ｍｌのホルマリン（３７％）および２００ｍｇ（３．２ｍｍｏｌ）のＮａＣＮＢＨ３から６２ｍｇ（８０％）の７ｂを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１０８】
【数３】
2004505112.tif 000036
（実施例１０）
（エチル２−ヘキサデカノエート（４ｃ））
【０１０９】
【化４０】
2004505112.tif 000037
実施例２と同様：２００ｍｌのＥｔＯＨ中の、１．１７ｇ（５１ｍｍｏｌ）のＮａ、２１．９ｇ（５１ｍｍｏｌ）の２、および１０ｇ（４７．１ｍｍｏｌ）のミリスチンアルデヒド３ｃから、（Ｅ／Ｚ）混合物（約２：１）としての１１．６ｇ（８６％）の４ｃを、後処理の後に無色の油状物として得た。分析の目的のために、３５０ｍｇの４ｃをクロマトグラフィー（Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン　２：９８）により精製して、１０９ｍｇ（３１％）の（Ｚ）異性体および２３０ｍｇ（６５％）の（Ｅ）異性体を無色の油状物として得た。
【０１１０】
【数４】
2004505112.tif 000038
（実施例１１）
（エチル１６−アミノ−３−トリデシル−４，８，１３−トリアザヘキサデカノエート（５ｃ））
【０１１１】
【化４１】
2004505112.tif 000039
実施例３と同様：９００ｍｌのＥｔＯＨ中の４．３ｇ（２１．２８ｍｍｏｌ）のスペルミンおよび６ｇ（２１．２８ｍｍｏｌ）の４ｃから、４．２５ｇ（４１％）の５ｃを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１１２】
【数５】
2004505112.tif 000040
（実施例１２）
（４−トリデシル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（６ｃ））
【０１１３】
【化４２】
2004505112.tif 000041
実施例４と同様：１８０ｍｌのベンゼン中の１．７ｇ（３．５ｍｍｏｌ）の５ｃおよび１．１６ｇ（４．５５ｍｍｏｌ）のアンチモン（ＩＩＩ）エトキシドから、１．２ｇ（７８％）の６ｃを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１１４】
【数６】
2004505112.tif 000042
（実施例１３）
（５，９，１４−トリメチル−４−トリデシル−１，５，９，１４−テトラアザシクロヘプタデカン−２−オン（Ｂｕｄｍｕｎｃｈｉａｍｉｎｅ　Ｃ）（７ｃ））
【０１１５】
【化４３】
2004505112.tif 000043
実施例５と同様：８ｍｌのＡｃＯＨ中の、７７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の６ｃ、３ｍｌのホルマリン（３７％）および２００ｍｇ（３．２ｍｍｏｌ）のＮａＣＮＢＨ３から、６５ｍｇ（８１％）の７ｃを、後処理の後に無色の油状物として得た。
【０１１６】
【数７】
2004505112.tif 000044
（実施例１４）
（Ｎ−（４）−（（３−エトキシカルボニル−１−トリデシル）エチル）アミノブチル）ヘキサヒドロピリミジン（９））
【０１１７】
【化４４】
2004505112.tif 000045
４００ｍｌの無水ＥｔＯＨ中の、エチル２−ヘキサデカノエート（４ｃ、２．８２ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＮ−（４−アミノブチル）ヘキサヒドロピリミジン（８、１．５７ｇ、１０ｍｍｏｌ；ＭｃＭａｎｉｓ，Ｊ．Ｓ．，Ｇａｎｅｍ，Ｂ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８０），４５：２０４２および米国特許第５，８６９，７３４号を参照のこと）の溶液を、４０℃で４日間撹拌した。エバポレーションの後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／２５％ＮＨ４ＯＨ水溶液（１００：１０：１））で精製して、１．２１ｇ（２７％）の９を無色の油状物として得た。
【０１１８】
【数８】
2004505112.tif 000046
（実施例１５）
（メチル１２−アミノ−３−トリデシル−４，９−ジアザドデカノエート（１０））
【０１１９】
【化４５】
2004505112.tif 000047
乾燥ＨＣｌガスで飽和したＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中の９（６６３ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液を、１０時間還流した。エバポレーションの後、残渣を減圧下で乾燥し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ／２５％ＮＨ４ＯＨ水溶液（７０：３０：５））により遊離塩基に変換して、５１７ｍｇ（８３％）の１０を無色の油状物として得た。
【０１２０】
【数９】
2004505112.tif 000048
（実施例１６）
（２−トリデシル−１，５，９−トリアザシクロトリデカン−４−オン（１１））
【０１２１】
【化４６】
2004505112.tif 000049
無水キシレン中の１０（１９０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂ（ＮＭｅ２）３（０．０９ｍｌ、７５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（５ｍｇ）を添加した。この混合物を、Ｎ２雰囲気下で１５時間還流し、室温まで冷却した後、５ｍｌのＥｔＯＨを添加した。エバポレーションの後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／２５％ＮＨ４ＯＨ水溶液（７０：３０：３））で精製して、８８ｍｇ（５０％）の１１を白色固体として得た。ｍ．ｐ．７２〜７３℃。
【０１２２】
【数１０】
2004505112.tif 000050
（実施例１７）
（環状ポリアミンの還元およびアルキル化）
【０１２３】
【化４７】
2004505112.tif 000051
乾燥ＴＨＦ（３２ｍＬ）中の７ｃ（２．０ｇ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（１１ｍＬ）中のＬＡＨ（９５％、４当量）の冷却（０℃）溶液に、慎重に添加した。この灰色の懸濁液を、０℃で１０分間撹拌し、次いで４時間加熱還流した（８５℃の油浴）。この反応物を０℃まで冷却し、エーテル（６０ｍＬ）で希釈し、水（４ｍＬ）でクエンチし、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、Ｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、そして減圧下で濃縮して、濃厚な油状物を得、これを溶離液としてＣＨＣｌ３−ＥｔＯＨ−２８％ＮＨ４ＯＨ（７０：２７：３）を使用するフラッシュカラムにかけて、１２（８１％）を透明な濃厚な油状物として得た。
【０１２４】
【数１１】
2004505112.tif 000052
（テトラアミン１２を、ＭｅＯＨ中に溶解し、等容量の濃縮ＨＣｌを加え、５分間攪拌し、そして乾燥するまでエバポレートすることによって、そのテトラ−ＨＣｌ塩（ＳＬ−１１２３８）に転換した。ＥｔＯＨからの、その結晶の融点は、２４１．５〜２４４．５℃であった。分析。Ｃ２９Ｈ７０Ｎ４Ｏ２Ｃｌ４についての計算値（４分子のＨＣｌおよび２分子のＨ２Ｏを加えた１２についての式）：Ｃ，５３．６９；Ｈ，１０．８８；Ｎ，８．６４。実測値：Ｃ，５３．２９；Ｈ，１１．０８；Ｎ，８．３２）。
【０１２５】
【化４８】
2004505112.tif 000053
アクリロニトリル（１．４ｍＬ）を、１２（１．０ｇ）を含有するＭｅＯＨ（５．５ｍＬ）の溶液に加え、この反応物を、室温で一晩（１８時間）攪拌した。この溶媒および過剰なアクリロニトリルを、減圧下で３５℃にてエバポレートし、そして残渣をＣＨＣｌ３−ＥｔＯＨ−２８％ＮＨ４ＯＨ（７０：２７：３）を溶出液として使用するフラッシュカラムによって精製し、透明な濃縮油状物として１３を得た（１００％）。
【０１２６】
【数１２】
2004505112.tif 000054
【０１２７】
【化４９】
2004505112.tif 000055
レーニーニッケル（水中で０．８ｇの懸濁液）を、Ｐａｒｒ振盪機中の、１３（１．０ｇ）およびＮａＯＨ（５．０当量）の溶液を含有する９５％のＥｔＯＨ水溶液（８０ｍＬ）に加えた。この懸濁液を、水素で５回パージし、次いで、水素下（５０ｐｓｉ）で一晩振盪した。触媒を、Ｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、２ＮのＨＣｌで破壊し、そして濾液を濃縮した。この残渣を、水中（１０ｍＬ）に溶解し、ＣＨＣｌ３（４×３０ｍＬ）で抽出し、分離しそして有機相を合わせ、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、透明な濃縮油状物として１４を得た（定量的、ＮＭＲ　＆　ＴＬＣ純粋）。
【０１２８】
【数１３】
2004505112.tif 000056
（ペンタアミン１４を、ＭｅＯＨ中に溶解し、等容量の濃縮ＨＣｌを加え、５分間攪拌し、そして乾燥するまでエバポレートすることによって、そのペンタ−ＨＣｌ塩（ＳＬ−１１２３９）に転換した。ＥｔＯＨからの、その結晶の融点は、２４２．３〜２４５．２℃であった。分析。Ｃ３２Ｈ７８Ｎ５Ｏ２Ｃｌ５についての計算値（５分子のＨＣｌおよび２分子のＨ２Ｏを加えた１４についての式）：Ｃ，５１．７８；Ｈ，１０．５９；Ｎ，９．４４。実測値：Ｃ，５１．６８；Ｈ，１０．９１；Ｎ，９．１４）。
【０１２９】
（実施例１８）
（抗腫瘍性剤としての環式ポリアミン）
新生細胞増殖の処置において、目的の化合物の有用性を評価するために、いくつかの通常使用される癌モデルに特徴的なインビトロ増殖を阻害する、化合物の性能を研究した。目的のポリアミンは、容認されているＭＴＴアッセイによって決定されるように（表２）、いくつかの培養されたヒト前立腺腫瘍細胞株（例えば、ＬｎＣａｐ、ＤｕＰｒｏおよびＰＣ−３）において細胞増殖阻害を誘導する（Ｈａｎｓｅｎ，Ｍ．Ｂ．ら、「Ｒｅ−ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｐｒｅｃｉｓｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｄｙｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ／ｃｅｌｌ　ｋｉｌｌ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８９）１１９（２）：２０３−１０）。３つ全ての細胞株は、５００ｎＭ〜２，６００ｎＭの範囲のＩＤ５０値を有する環式ポリアミンに感受性である。ＤｕＰｒｏを用いた結果は、ヒト前立腺細胞株を用いた結果を代表している。
【０１３０】
図１〜１４に示されるように、本発明の環式ポリアミンは、細胞増殖を阻害し、かつ容認されているヒト前立腺細胞癌のインビトロ試験培養物において、細胞死さえ引き起こすことが示されている。これらの図を、以下により詳細に記載する。ＤｕＰｒｏ細胞による環式ポリアミンの取り込み、および細胞ポリアミンレベルの得られた変化を、表３ａおよび表３ｂに示す。
【０１３１】
ＡＴＰの加水分解は、環状ポリアミンアナログの抗腫瘍活性のための可能な機構として提唱されるため、ＡＴＰ加水分解を測定するためのアッセイを行った。ＡＴＰの加水分解を測定するための規格化した方法において、ＡＴＰ加水分解の顕著な増加が、天然に存在する直鎖ポリアミンスペルミンと比較して、この環式ポリアミンの存在下で観察された（図１５〜２１）。
【０１３２】
細胞のＡＴＰ含有量に対する環式ポロアミンの効果を、Ｅｎｌｉｔｅｎ　ＡＴＰ　Ａｓｓａｙ試験キット（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して測定した。環式ポリアミンの濃度を変化させながら７２時間インキュベートした後の細胞のＡＴＰ測定の結果を、図２２〜２４に示す。全ての環式ポリアミンは、細胞のＡＴＰプールを使い果たした。細胞のＡＴＰプールを使い果たす際の環式ポリアミンの相対的な能力は、その相対的な細胞毒性に対応している。
【０１３３】
図１〜５および図１１〜１２において、Ｘ軸は、ＤｕＰｒｏ細胞を播種した後の日数を表し、Ｙ軸は、コントロール（薬物なし）条件下（図１〜５）、ならびに０μＭの薬物ＳＬ−１１１７４の存在下（図１）、５μＭのＳＬ−１１１９７の存在下（図２）、５μＭのＳＬ−１１１９９の存在下（図３）、１０μＭのＳＬ−１１２００の存在下（図４）、および５μＭのＳＬ−１１２０８の存在下（図５）、２μＭのＳＬ−１１２３８の存在下（図１１）および５μＭのＳＬ−１１２３９の存在下（図１２）で収集した細胞数を表す。
【０１３４】
図６〜１０および図１３〜１４のＸ軸は、環式ポリアミンの濃度を表し、Ｙ軸は、コロニー形成能力（ＣＦＥ）アッセイ（ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ａｓｓａｙ）（Ｗｉｌｓｏｎ　Ａ．Ｐ．，「Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｖｉａｂｌｉｔｙ　ａｓｓａｙｓ」。Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．（編）Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｘｆｏｒｄ：ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ，１９９２，ｐ．１８３を参照のこと）によって決定するように、薬物ＳＬ−１１１７４（図６）、ＳＬ−１１１９７（図７）、ＳＬ−１１１９９（図８）、ＳＬ−１１２００（図９）、ＳＬ−１１２０８（図１０）、ＳＬ−１１２３８（図１３）、およびＳＬ−１１２３９（図１４）での処理から５日後の生存細胞の画分を表す。
【０１３５】
図１５〜２１のＸ軸は、ポリアミンの濃度を表し、Ｙ軸は、任意のポリアミンの非存在下での同一条件下における同量のＡＴＰから放出された無機ホスフェートと比較して、スペルミンならびにＳＬ−１１１７４（図１５）、ＳＬ−１１１９７（図１６）、ＳＬ−１１１９９（図１７）、ＳＬ−１１２００（図１８）、ＳＬ−１１２０８（図１９）、ＳＬ−１１２３８（図２０）およびＳＬ−１１２３９（図２１）の存在下にて２４時間の１００μＭ　ＡＴＰから放出された無機ホスフェート（ＰＰｉ）の相対的な増加を表す。
【０１３６】
５μＭの低濃度で、全ての環式ポリアミンについて、顕著な増殖阻害および細胞殺傷が観察された。このような高い細胞内レベル、ならびにこのような強力な増殖阻害および細胞毒性効果は、これまでに試験された任意の他のポリアミンアナログについては報告されていない。全ての環式ポリアミンは、ＡＴＰの加水分解を触媒する際に、直鎖の天然に存在するポリアミンスペルミンよりも効率的であることが観察された。
【０１３７】
以下の規格化したプロトコルを使用して、試験培養物を評価し、そして図１〜１４に示したデータを作成した。図１〜５および図１１〜１２について、細胞を、１５ｍｌのイーグル最小必須培地（１０％のウシ胎児血清および非必須アミノ酸で補充されている）を含む７５ｃｍ２の培養フラスコに播種した。次いで、このフラスコを、湿度９５％空気５％のＣＯ２雰囲気下でインキュベートした。この細胞を少なくとも２４時間増殖させ、それらが増殖の対数期であることを確証し、次いでポリアミンアナログで処理した。細胞を、ＳＴＶ（生理食塩水Ａ、０．０５％　トリプシン、０．０２％　ＥＤＴＡ）で５分間３７℃にて処理することによって収集した。このフラスコを、研究室の卓上で叩き（ｒａｐｐｅｄ）、数回ピペットで取り、そして細胞懸濁液のアリコートを取り出し、そしてクールター粒子計数器（これは、血球計を使用して各細胞株をカウントするために規格化されている）を使用してカウントした。
【０１３８】
図６〜１０および図１３〜１４について、細胞を洗浄し、収集し、そして６０ｍｍのプラスチックのペトリ皿に適切な希釈で、４通りに再プレートした（ｒｅｐｌａｔｅ）。このペトリ皿を、４ｍｌの補充イーグル最小必須培地（５〜１０％のウシ胎児血清（各細胞株について規格化される）を含有する）を用いる２４時間以上前に調製した。細胞を、９５％空気５％ＣＯ２雰囲気下で先に規格化した日数、インキュベートした。このプレートを、メタノール中０．１２５％のクリスタルバイオレットを用いて染色し、そしてカウントした。
【０１３９】
図１５〜２１について、ＡＴＰ加水分解アッセイを規格化した。９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて、最初の２つのカラムを、検量線を作成するために慣用的に使用した。この検量線について、４０μｌの０〜７０μＭリン酸緩衝液を、１ＮのＨＣｌ中の１ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４溶液を連続的に希釈することによって使用した。ＡＴＰ加水水分解について、マイクロタイタープレートの残りを２つの区分に等しく分割し、同時に２つのアナログを泳動させた。各区分を、適切な数のカラムに分割し、２Ｎの最終濃度のＨＣｌについて、２９μｌの２Ｎ　ＨＣｌ中の０〜１０ｍＭの各アナログを連続的に希釈した。各薬物濃縮物を、４通りに泳動させた。等容量の５００μＭ　ＡＴＰ溶液（ｐＨ７．５）を各ウェルに加え、このプレートを、２〜２４時間の適切な時間、３７℃にてインキュベートした。インキュベーション期間の最後に、１６０μｌの着色剤（水中０．０４５％　Ｍａｌａｃｈｉｔｅ　Ｇｒｅｅｎおよび４Ｎ　ＨＣｌ中４．２％モリブデン酸アンモニウム（３：１ｖ／ｖ）を含有する）を加え、このプレートを、３７℃にて、さらに３０分間インキュベートした。全てのプレートを、Ｅｍａｘ精密マイクロプレートレーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅ，Ｓａｎ　Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、５９５ｎｍで読み取った。ＡＴＰのないアナログ溶液を含むコントロールプレートを、各実験について作製した。コントロールプレート読み取りを、各実験プレートから差し引き、全てのデータを、ポリアミンアナログのゼロ点濃度におけるＡＴＰ加水分解に対して規格化した。４通りの泳動に対する平均および標準偏差をプロットした。
【０１４０】
表２に示すデータについて、容認されているＭＴＴアッセイプロトコルを使用した。トリプシン処理した細胞懸濁液を希釈して、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルにおいて５００細胞を含有する８０μｌの懸濁液に播種し、そして５％ＣＯ２の加湿インキュベータ中で、３７℃にて一晩インキュベートした。各薬物の、適切に希釈した２０μｌのストック溶液を、マイクロタイタープレート中の細胞懸濁液の中間の８カラムに加えた。各薬物濃縮物を４通りに泳動させた。このプレートの外部カラムを緩衝液コントロールのために使用した。細胞を６日間３７℃にて、５％ＣＯ２／Ｈ２Ｏ雰囲気下で、薬物と共にインキュベートした。３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２、５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）の５ｍｇ／ｍｌ溶液の２５μｌを、各ウェルに加え、５％ＣＯ２／Ｈ２Ｏインキュベータ中で、３７℃にて４時間インキュベートした。細胞を、１００μｌの溶解緩衝液（５００ｍｌの溶解緩衝液：１００ｇのラウリル硝酸（ＳＤＳ）、２５０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを含有する２ｍｌの氷酢酸（ｐＨ４．８）、を含む）と共に、一晩インキュベートすることによって溶解した。この色を、室温にて５７０ｎｍで、Ｅ−ｍａｘ　Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　Ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）においてモニタリングし、そしてデータを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給される細胞生存ソフトウエアを用いて解析した。
【０１４１】
表３ａおよび表３ｂに示されるデータについて、細胞内ポリアミンレベルを、標準的なプロトコルを使用して決定した。約０．５〜１×１０６個の細胞を、収集サンプルから取り出し、４℃にて５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離した。この細胞を、冷却したダルベッコ等浸透圧性（ｉｓｏｔｏｎｉｃ）リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で、１０００ｒｐｍで４℃にて遠心分離することによって、２回洗浄し、そして同じ緩衝液中に再懸濁した。最後の遠心分離の後に、この上清をデカントし、２５０μｌの８％　スルホサリチル酸（ｓｕｌｆｏｓａｌｙｃｉｌｉｃ　ａｃｉｄ）を、細胞ペレットに加えた。次いで、この細胞を超音波処理し、そしてこの混合物を、４℃にて少なくとも１時間保った。８，０００ｇで５分間遠心分離した後、この上清を分析のために除去した。適切な容量（５０〜１００μｌ）を、塩化ダンシルを用いて誘導体化することによって蛍光標識した。標識したポリアミンを、Ｃ−１８高速液体クロマトグラフィーカラムに充填し、アセトニトリル／水で、５０℃にて勾配溶出することによって分離した。ピークを検出し、Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｐｈｙｓｉｃｓピーク積分器に連結されたＳｈｉｍａｄｚｕ　ＨＰＬＣ蛍光モニタを使用して定量化した。ポリアミンレベルは環境条件と共に変化するので、コントロール培養物を、各環境についてサンプリングした。
【０１４２】
図２２〜２４に示されるデータについて、プロトコルを、Ｅｎｌｉｔｅｎ　ＡＴＰ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して規格化した。各処理フラスコからのおよそ１×１０６個の細胞を収集し、カウントし、冷却したＰＢＳで２回洗浄し、そして細胞のペレットを４℃で一晩保存した。次の日に、このペレットを算出した容量の処理緩衝液（Ｅｎｌｉｔｅｎ　ＡＴＰ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｃｏｒｐ．）中に再懸濁して、細胞外ＡＴＰを除去した。５０，０００個の細胞を含む、１４０μｌの細胞懸濁液のアリコートを、９６ウェルの照度計プレートの各ウェルにプレートし、室温まで平衡化させた。各化合物濃縮物を、４通りにプレートした。各ウェルに、４０μｌのＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｅｎｌｉｔｅｎ　ＡＴＰ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ）を加え、このプレートをＥＧ＆Ｇ照度計（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ　Ｉｎｃ．，Ｂｕｎｄｏｏｒａ，Ｖｉｃｔｏｒｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に配置した。次いで、アッセイ緩衝液中のルシフェラーゼ／ルシフェリン混合物を含有する、４０μｌ　Ｌ／Ｌ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｅｎｌｉｔｅｎ　ＡＴＰ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ）を注入し、そして各ウェルを、１秒の遅れ時間の後に５秒間読み込んだ。細胞のＡＴＰ含有量の相対的な変化を、ルシフェラーゼ／ルシフェリン反応によって生成される相対光単位（ＲＬＵ）として測定した。
【０１４３】
（表２．前立腺腫瘍細胞増殖に対する環式ポリアミンの効果）
（ＩＤ５０値）
【０１４４】
【表２】
2004505112.tif 000057
Ｎｄ＝決定されず
（表３ａ．低濃度の環式ポリアミンアナログで処理されたＤｕＰｒｏ細胞におけるポリアミンレベル）
【０１４５】
【表３ａ】
2004505112.tif 000058
ＮＤ＝検出不可能。Ｐｕｔ＝プトレシン；Ｓｐｄ＝スペルミジン；Ｓｐｍ＝スペルミン；アナログは、最左の欄において示される。
【０１４６】
（表３ｂ．２μＭの環式ポリアミンアナログで処理されたＤｕＰｒｏ細胞におけるポリアミンレベル）
【０１４７】
【表３ｂ】
2004505112.tif 000059
ＮＤ＝検出不可能。Ｐｕｔ＝プトレシン；Ｓｐｄ＝スペルミジン；Ｓｐｍ＝スペルミン；アナログは、最左の欄において示される。
【０１４８】
本明細書中に言及される全ての参考文献、刊行物、特許および特許出願は、それら全てが本明細書中で参考として援用される。
【０１４９】
前記の本発明は、明確にして理解するために例示および実施例によっていくらか詳細に記載されているが、特定の変更および改変が実施され得ることが、当業者に明らかである。従って、記載および実施例は、本発明の範囲を限定するものとしてみなされるべきではなく、これらは、添付の特許請求の範囲によって示される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの増殖に対する、ＳＬ−１１１７４の濃度の増加のインビトロ効果を示すグラフである。
【図２】
図２は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの増殖に対する、ＳＬ−１１１９７の濃度の増加のインビトロ効果を示すグラフである。
【図３】
図３は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの増殖に対する、ＳＬ−１１１９９の濃度の増加のインビトロ効果を示すグラフである。
【図４】
図４は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの増殖に対する、ＳＬ−１１２００の濃度の増加のインビトロ効果を示すグラフである。
【図５】
図５は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの増殖に対する、ＳＬ−１１２０８の濃度の増加のインビトロ効果を示すグラフである。
【図６】
図６は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの生存に対する、ＳＬ−１１１７４の効果を示すグラフである。
【図７】
図７は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの生存に対する、ＳＬ−１１１９７の効果を示すグラフである。
【図８】
図８は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの生存に対する、ＳＬ−１１１９９の効果を示すグラフである。
【図９】
図９は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの生存に対する、ＳＬ−１１２００の効果を示すグラフである。
【図１０】
図１０は、培養されたヒト前立腺癌細胞ＤｕＰｒｏの生存に対する、ＳＬ−１１２０８の効果を示すグラフである。
【図１１】
図１１は、ＤｕＰｒｏ細胞増殖に対する、ＳＬ−１１２３８の効果を示す。
【図１２】
図１２は、ＤｕＰｒｏ細胞増殖に対する、ＳＬ−１１２３９の効果を示す。
【図１３】
図１３は、ＤｕＰｒｏ細胞の生存に対する、ＳＬ−１１２３８の効果を示す。
【図１４】
図１４は、ＤｕＰｒｏ細胞の生存に対する、ＳＬ−１１２３９の効果を示す。
【図１５】
図１５は、ＡＴＰ加水分解に対する、スペルミン（コントロール）およびＳＬ−１１１７４のインビトロ効果を示す。
【図１６】
図１６は、ＡＴＰ加水分解に対する、スペルミン（コントロール）およびＳＬ−１１１９７のインビトロ効果を示す。
【図１７】
図１７は、ＡＴＰ加水分解に対する、スペルミン（コントロール）およびＳＬ−１１１９９のインビトロ効果を示す。
【図１８】
図１８は、ＡＴＰ加水分解に対する、スペルミン（コントロール）およびＳＬ−１１２００のインビトロ効果を示す。
【図１９】
図１９は、ＡＴＰ加水分解に対する、スペルミン（コントロール）およびＳＬ−１１２０８のインビトロ効果を示す。
【図２０】
図２０は、ＡＴＰ加水分解に対する、ＳＬ−１１２３８のインビトロ効果を示す。
【図２１】
図２１は、ＡＴＰ加水分解に対する、ＳＬ−１１２３９のインビトロ効果を示す。
【図２２】
図２２は、種々の濃度のＳＬ−１１１７４、ＳＬ−１１１９７、ＳＬ−１１１９９、ＳＬ−１１２００、およびＳＬ−１１２０８で処理された、５０，０００の培養されたヒト前立腺腫瘍細胞（ＤｕＰｒｏ）の抽出物の存在下でのルシフェリン／ルシフェラーゼ活性の平均相対変化および標準偏差を示す。標準偏差は、見えない場合、記号のサイズよりも小さい。
【図２３】
図２３は、ルシフェリン／ルシフェラーゼ反応によって測定される細胞性ＡＴＰに対する、ＳＬ−１１２３８の効果を示す。
【図２４】
図２４は、ルシフェリン／ルシフェラーゼ反応によって測定される細胞性ＡＴＰに対する、ＳＬ−１１２３９の効果を示す。
【図１】
2004505112.tif 000070
【図２】
2004505112.tif 000071
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2004505112.tif 000077
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004505112.tif 000197
2004505112.tif 000198