(57)【要約】本発明は、全血試料の自動血液分析を用いて、血漿または血清に対する血液化学結果の干渉を自動補正する方法を記述する。そのような干渉誤差は、輸血された血液試料における外因性の酸素運搬血液代用物の存在に起因する。自動化法は、これらのパラメータの正確な定量を直接、迅速、かつ自動的に提供するために、血液化学の決定に際し、干渉による誤差を補正するために自動血液分析を用いて行われる。自動干渉補正法は、外傷後または手術時に代用血液を患者へ輸血した後、医学的および臨床的に用いるのに都合がよく、ならびに回復期の患者の血液試料を繰り返しまたは定期的にモニタリングするのに都合がよい。本発明の方法はまた、化学検査結果および細胞毎の測定の双方が同じ採血管からの血液について実施される場合には、如何なるインビボ溶血、または如何なる試験管内溶血も補正するために用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
自動血液アナライザーにおいて分析した、ヘム色の干渉物質を含む血液、血漿、または試料における平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）の値を自動的に補正する方法であって、
（a）赤血球ヘモグロビン濃度（gm/dL）を赤血球濃度（細胞/mm3）によって除する段階；
（b）平均赤血球ヘモグロビン（MCH）の補正値（gm/dL）を得るために、（a）の値に第1の定数を乗じて容積単位の差を補正する段階；
（c）赤血球ヘモグロビン濃度をヘマトクリット（HCT）（％）値によって除する段階；ならびに
（d）平均赤血球ヘモグロビン（MCHC）の補正値（gm/dL）を得るために、（c）の値に第2の定数を乗じて容積単位の差を補正する段階。
【請求項２】
血液試料中の干渉物質が細胞外ヘモグロビン製剤または酸素運搬血液代用物である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
血液試料が正常な血液試料または異常な血液試料である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
試料が血漿または血清試料である、請求項1記載の方法。
【請求項５】
異常な血液試料が病的な状態を有する個体に由来する、請求項4記載の方法。
【請求項６】
病的な状態が、手術時の出血、外傷時の出血、および出血性ショックからなる群より選択される、請求項5記載の方法。
【請求項７】
細胞外ヘモグロビン製剤または酸素運搬血液代用物が、組換え型ヒトヘモグロビン、架橋結合ヘモグロビン、重合した架橋結合ヘモグロビン、精製ウシヘモグロビン、およびポリエチレングリコールにカップリングしたヘモグロビン（PEG-HGB）からなる群より選択される、請求項2記載の方法。
【請求項８】
細胞不含細胞外ヘモグロビン製剤が、ヒトまたは動物の血液から単離および精製されたヘモグロビンである、請求項2記載の方法。
【請求項９】
外因性の血液代用物を含む血液試料における平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）値の補正が必要であることを医師に警告し、自動血液アナライザーを用いて該値を補正するシステムであって、
a）採血容器にラベルを貼り、容器の中に含まれる血液試料に外因性の血液代用物が含まれることを表す段階；ならびに
b）（a）のラベル表示に基づいて、平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）値を自動的に補正する段階であり、補正は、自動アナライザーによって行われ、式（1）：
（1）MCH(補正値)(ピコグラム/細胞)＝
2004535568.tif 000011
および式（2）：
（2）MCHC(補正値)(gm/dL)＝
2004535568.tif 000012
を含み、
平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）の補正値は、分析した血液試料中の平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）に関する当初の全血値を回復する、段階
を含むシステム。
【請求項１０】
外因性の血液代用物が、組換え型ヒトヘモグロビン、架橋結合ヘモグロビン、重合した架橋結合ヘモグロビン、精製ウシヘモグロビン、およびポリエチレングリコールにカップリングしたヘモグロビン（PEG-HGB）からなる群より選択される酸素運搬型ヘモグロビン代用物である、請求項9記載のシステム。
【請求項１１】
外因性の血液代用物が、ヒトまたは動物の血液から単離および精製されたヘモグロビンである、請求項10記載のシステム。
【請求項１２】
血液容器のラベルが、容器に添付されたステッカーを含み、ステッカーは色分けされ、および/またはバーコードを有し、容器の中に含まれる血液試料に外因性の血液代用物が含まれることを示す、請求項9記載のシステム。
【請求項１３】
ラベルがバーコードを含む、請求項12記載のシステム。
【請求項１４】
式1における容積単位を補正するための定数が10であって、式2における容積単位を補正するための定数が100である、請求項9記載のシステム。
【請求項１５】
血液、血漿、または血清試料中の外因性の血液代用物の存在によって起こる干渉を、自動血液アナライザーにおいて分析した血液、血漿、または血清試料中の血液化学値に対し、自動的に補正する方法であって、
a）試料採取容器にラベルを貼り、ラベルは血液化学値を補正する信号を送り、容器の中に含まれる試料に外因性の血液代用物が含まれることを示す段階；および
b）（a）の表示信号に基づいて血液化学値を自動的に補正する段階であり、補正は、自動血液アナライザーによって自動的に生成された血漿ヘモグロビン値を用いて自動血液アナライザーによって行われ、そして血液化学値の補正値は、分析した血液試料中の血液化学値に関する当初の全血の化学結果を回復する、段階
を含む方法。
【請求項１６】
試料中の外因性の血液代用物の存在によって起こる干渉を、血液、血漿、または血清試料において血液化学値に対し、自動的に補正する方法であって、
a）試料採取容器にラベルを貼り、ラベルは血液化学値を補正する信号を送り、容器の中に含まれる血液、血漿、または血清試料に外因性の血液代用物が含まれることを示す段階；ならびに
b）（a）の表示信号に基づいて血液化学値を自動的に補正する段階であり、補正は、アナライザーによって自動的に生成された血漿ヘモグロビン値を用いて自動アナライザーによって行われ；血液化学の補正値は、報告の化学結果から以下の積：（補正係数×報告された検体の適当な容積単位に比例させた、血漿または血清ヘモグロビン値）を差し引くことによって決定され；およびさらに、血液化学値の補正値は、分析した試料中の血液化学値に関する当初の血液化学結果を回復する、段階
を含む方法。
【請求項１７】
外因性の血液代用物が、組換え型ヒトヘモグロビン、架橋結合ヘモグロビン、重合した架橋結合ヘモグロビン、精製ウシヘモグロビン、およびポリエチレングリコールにカップリングしたヘモグロビン（PEG-HGB）からなる群より選択される酸素運搬型ヘモグロビン代用物である、請求項15または請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
外因性の血液代用物が、ヒトまたは動物の血液から単離および精製されたヘモグロビンである、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
血液容器のラベルが、容器に添付されたステッカーを含み、ステッカーは色分けされ、および/またはバーコードを有し、容器の中に含まれる血液試料に外因性の血液代用物が含まれることを示す、請求項15または請求項16に記載の方法。
【請求項２０】
ラベルがバーコードを含む、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
血液化学値が、アルブミン、アルカリホスファターゼ（ALP）、アラニントランスアミナーゼ（ALT）、アミラーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（AST）、尿素、カルシウム、クレアチニンキナーゼ（CK）、重炭酸塩、クレアチニン、クレアチニンホスホキナーゼ筋/脳（CKMB）、総ビリルビン、γグルタミルトランスフェラーゼ（GGT）、グルコース、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）、マグネシウム、リン酸塩、リパーゼ、平均赤血球ヘモグロビン（MHC）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）から選択される、請求項15または請求項16記載の方法。
【請求項２２】
血液化学値が、アルブミン、アルカリホスファターゼ（ALP）、アミラーゼ、カルシウム、重炭酸塩、γグルタミルトランスフェラーゼ（GGT）、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）、平均赤血球ヘモグロビン（MCH）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）および総ビリルビンから選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
補正された化学値が、報告の化学結果から以下の積：（補正係数×報告された検体の適当な容積単位に比例させた、血漿または血清ヘモグロビン値）を差し引くことによって決定される、請求項15記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は一般的に、血液学および臨床化学パラメータに対する干渉を補正する新規方法に関する。補助的な酸素運搬体として患者の血液に加えられた細胞不含血液代用物の存在により、全血、血漿、および血清試料の分析の際に干渉が起こりうる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
代用全血は、医学の分野において、特に輸血を必要とする外傷および/または手術後に用いるための全血の代用物として長い間探し求められていた。現在、1つまたはそれ以上の血液代用物の産生および/または単離に再び関心が集まっている。しかし、血液および全血を構成する様々な成分が複雑であるのみならず、そのような合成製剤の試験および使用を管理する連邦規則が厳格であることから、企業は、輸血された血液によって供給される他の機能を有する異なる多様な製剤の開発ではなくて、一時的に酸素を運搬する製剤の開発にその研究努力を注いできた。
【０００３】
ヒトもしくは動物（例えば、ウシ）血液から単離されたヘモグロビン（HGB）、または過フルオロ炭素（PFC）のような合成酸素運搬体は、現在臨床試験が行われている2つのタイプのヘモグロビン代用物である。他の赤血球代用物、すなわち酸素運搬型ヘモグロビン代用物も同様に開発されており、患者に用いるために特徴が調べられている。（例えば、「Red Blood Cell Substitutes」、1998、A.S. Rudolph, R. RabinoviciおよびG.Z. Feuerstein（編）、Dekker、ニューヨーク、ニューヨーク州を参照されたい）。そのような酸素運搬型ヘモグロビン代用物は、血液または血液産物の輸血のような標準的な医学的治療と組み合わせて用いてもよい。実際に、血液代用物として一時的な酸素運搬体を用いることに対する関心は、同種異系血液の必要性を減少させる手段として高まると期待される（Z. Maら、1997、Clin. Chem. 43：1732〜1737）。
【０００４】
特異的であるが非制限的な例において、エンゾン社（ピスキャタウェイ、ニュージャージー州）は、ポリエチレングリコール（PEG）改変ウシヘモグロビン、略してPEG-HGBを開発した。PEG-HGBは、例えばNhoらに対する米国特許第5,386,014号および第5,234,903号に開示されるように、HGB分子表面にPEG鎖を架橋結合させるプロセスによって産生される。
【０００５】
第一世代のHGB代用物は、一般的に手術時または外傷後の血液/酸素の喪失といった短期処置を意図したものであった。HGB代用物の1つの欠点は、これらの製剤に帰因して循環中の半減期が短いことである。例えば、輸血された血液の循環中半減期が30日までであるのに対し、血液に加えられたHGB代用物の循環中の半減期は、36時間までである。しかし、これらの代用物は短期間の治療目的のために主に適応されることから、半減期がこのように比較的短くても、典型的にそのような血液代用物の使用に関しては重篤な問題ではない。
【０００６】
一般的に、全血試料におけるヘモグロビンの測定は、市販の血液アナライザーによって行われる。今日まで、バイエル社から販売されているアナライザーのような特定の自動血液アナライザー、例えばADVIA 120（登録商標）自動血液アナライザーシステムを例外として、他の市販の血液アナライザーは、総ヘモグロビンしか測定できず、これには、外から加えたヘモグロビンのみならず、血液試料中の赤血球に由来する細胞内ヘモグロビンも含まれる。
【０００７】
2000年6月9日に提出された米国特許出願第60/210,625号は、信頼できる再現可能な方法で全血試料中の外因性ヘモグロビンを定量および測定する自動化法を記述している。そこに記述される自動化法により、患者の治療過程または治療計画のあいだに、患者の血液に加えられたヘム色のヘモグロビン、および/またはヘモグロビン製剤、細胞不含ヘモグロビン誘導体のような誘導体または代用物を、繰り返しまたは定期的にモニターする能力が提供される。同様に、患者にそのようなヘモグロビン製剤、細胞不含ヘモグロビン誘導体のような誘導体または代用物を患者に輸血した後に、ヘモグロビン製剤、または製剤を含む物質（例えば、血液、血漿、または生理的に許容される溶液もしくは組成物等）をモニターし、決定し、または定量する手段も記述される。開示ではさらに、添加されたまたは外因性のヘモグロビン製剤または血液代用物、例えばPEG-HGBの関与と、患者の赤血球に由来する細胞HGBの関与とを、個々にそして明確に区別して正確に測定するシステムが提供される。記述の自動分析法およびシステムは、ヘモグロビン製剤が添加されている血液試料、または検出すべき細胞外ヘモグロビンを含む血液試料において、所定の試料中に赤血球に由来する細胞ヘモグロビン成分が存在する場合であっても、細胞外ヘモグロビンの特異的濃度を計算して、細胞外ヘモグロビン成分の検出およびモニタリングを行うことが可能である。
【０００８】
臨床検査アッセイ法は、多くの周術期または術後の患者および外傷を負った患者の治療において重要な役割を有する。そのようなアッセイ法はまた、代用血液を投与される患者をモニターおよび治療するために必要である。溶血と脂肪血症はいずれも、臨床検査において用いられる多くの比色および分光光度法において干渉を引き起こすことが知られている（O. Sonntag、1986、J. Clin. Chem. Biochem. 24：127〜139；W.G. Guder、1986、J. Clin. Chem. Biochem. 24：125〜126；およびJ.P. Chapelleら、1990、Clin. Chem. 36：99〜101）。溶血は、ヘム色のヘモグロビン種の500〜600 nmのあいだで強い吸光度のために干渉を引き起こし、一方脂肪血症は、無色ではあるが光の散乱のために干渉を引き起こす。例えば、ウシヘモグロビンに基づく酸素運搬（HBOC）溶液を患者に投与すると、血漿中に可溶性ヘモグロビンが用量依存的に存在し、血漿が顕著に赤色となる。これらの患者において、血漿ヘモグロビン値は、50 g/Lもの高さとなり、これは、多くの臨床検査において干渉として記述されるヘモグロビン濃度を軽く超えている（上記を参照されたい）。
【０００９】
さらに、過フルオロ炭素乳剤を濃度3.0〜4.5 mL/kgで投与すると、血液中で過フルオロ炭素が約20倍〜25倍希釈され、これらの患者からの血漿試料は、脂肪血症の外観を呈しうる。脂肪血症も過フルオロ炭素乳剤の影響も、本発明では扱わない。
【００１０】
上記を考慮して、これらおよび他の代用血液を投与した患者の試料について臨床検査を行う場合には、試験および試験結果が有効であるか否かを決定することが重要である。
【００１１】
分析に関して標本または試料（例えば、血液試料）の許容性に影響を及ぼす最も一般的な分析前要因は、標本または試料内部における干渉物質の存在である。干渉物質、例えば外から加えたヘモグロビン誘導体および酸素運搬血液代用物が存在すれば、測定結果の正確な値が変化して、臨床介入が不適当となり、患者の転帰を損ねる可能性がある。（S.C. KazmierczakおよびP.G. Catrou、2000、「Analytical interference. More than just a laboratory problem.」、Am. J. Clin. Pathol. 113（1）：9〜11）。
【００１２】
血液試料中の外因性ヘモグロビンまたは酸素運搬血液代用物による、平均赤血球ヘモグロビン（MHC）値、平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）値の測定のみならず多くの血液化学アッセイ法における干渉は、抗凝固処理した全血試料を遠心して、血漿ヘモグロビンの測定値を得ることを必要とする手動の（自動化されていない）多段階プロセスによって補正することができる。次に、血漿ヘモグロビン（または血清ヘモグロビン）測定を用いて、誤った結果を手動で再計算する。例えば、血液学に関しては：
赤血球ヘモグロビン、または細胞ヘモグロビン(RBC HGBまたはCell HGB)[単位：gm/dL]＝総HGB−血漿HGB[単位：gm/dL]
MCH（補正値）[単位：ピコグラム/細胞]＝RBC HGB／RBC数[計数単位：細胞/mm3] (×10)
MCHC[単位：gm/dL]＝RBC HGB／ヘマトクリット(HCT)[％] (×100)；
および血液化学に関しては：
補正結果＝報告された結果−(補正係数×血清ヘモグロビンまたは血漿ヘモグロビン[単位：(gm/dL)]。
【００１３】
補正係数は、様々な血液学パラメータに関して個々の臨床検査値によって一般的および経験的に決定される。上記の等式およびこれらのパラメータが下記に明記される等式において、赤血球ヘモグロビン（RBC HGB）（細胞ヘモグロビンとも呼ばれる）の単位はgm/dLである；血漿HGBの単位は、gm/Lである；MCHの単位はピコグラム/細胞である；RBC濃度または細胞数の単位は細胞/mm3である；MCHCの単位はgm/dLである；およびヘマトクリット（HCT）の単位は％である。
【００１４】
本発明は、外因性の代用血液、例えばヘモグロビン代用物、または酸素運搬血液代用物を用いること、ならびに血液アナライザーによる血液、血漿および血清の分析に伴う問題に対する解決を提供する。問題は、干渉、例えば患者の試料において、細胞不含ヘモグロビン誘導体または代用血液、試料を着色させる化合物、および/または他の酸素運搬血液代用物によって引き起こされた干渉である。これらの物質により、特定の臨床化学および血液検査値および結果パラメータが干渉される。
【００１５】
本発明は、干渉誤差を説明するために血液分析パラメータ結果を補正する自動化法を発見して提供することによってこの問題を解決する。したがって、本発明は、代用血液を投与された患者から採取した血液、血漿、および血清試料の正確な臨床化学結果を得るためのより迅速で、より時間のかからない、完全に自動化された方法を提供する。
【発明の開示】
【００１６】
発明の概要
本発明の目的は、全血、血漿および血清試料の自動分析の際の干渉の問題を克服する自動化法を提供することである。本発明は、好ましくは、試料を着色させ、したがって特定の臨床検査および結果パラメータを干渉する、細胞不含ヘモグロビン誘導体化合物によって引き起こされる干渉を補正する。本発明は、干渉誤差を説明するために臨床化学結果および血液パラメータの結果および値、例えば平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）を補正する自動化法を提供する。本発明に従って、代用血液を投与した患者から採取した血液、血漿、および血清試料の臨床検査および分析において、干渉誤差のない自動化された正確な結果が提供される。
【００１７】
本発明によって与えられるさらなる目的および長所は、下記の詳細な説明から明らかとなるであろう。
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明は、血液学および臨床化学のパラメータおよび値に対する干渉を補って補正する自動化法およびシステムを提供する。そのような干渉は、全血試料のみならず血漿および血清試料において、異なるタイプのヘモグロビンを検出および定量する自動化法および血液検査システムによって、血液、血漿および血清試料を分析した場合に、外因性の代用血液、例えば、細胞不含ヘモグロビン誘導体および酸素運搬血液製剤の存在によって引き起こされる。
【００１９】
細胞不含ヘモグロビン誘導体は典型的に赤色を有し、特定の臨床検査を干渉する（Z. Maら、1997、Clin. Chem. 43：1732〜1737）。これらの化合物は、細胞特性ならびに血液および臨床パラメータ、例えば平均赤血球ヘモグロビン（MCH）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）の正確な報告を干渉する可能性がある。このように、干渉誤差は、自動血液アナライザーを用いて全血細胞アッセイ法を行う際に、酸素を運搬し、赤色を有する細胞不含ヘモグロビン誘導体の存在に関連している。
【００２０】
溶血および脂肪血症によって引き起こされる干渉誤差の他に、全血および血清分析の報告された結果における誤差は、以下によって引き起こされうる；黄疸、寒冷凝集、高血小板数、高白血球数（WBC）、および何らかの投薬。一般的に、これらの干渉はいずれも、本発明によって提供される自動計算では説明されない。その上、新規代用血液が現れると、それぞれの新規代用物に関する異なる干渉試験が必要となる可能性がある。
【００２１】
一般的に、干渉結果を手動で計算する場合、自動での計算および報告と比較して、常に誤差はより起こりやすくなる。さらに、血液試料に加えられた代用血液による干渉の手動での補正は、労力がかかり、しばしば無視または見過ごされる。本明細書に記載の自動干渉補正法は、手動での誤差の可能性を消失させ、より効率的に正確な結果を自動的に報告することができる。
【００２２】
本発明は、血液分析を受ける血液試料における、外から加えられた赤色、ヘム色の酸素運搬血液代用物を用いることによる干渉誤差の自動補正を提供する。さらに、本発明は、自動血液分析を受ける全血、血漿および/または血清試料における血液および臨床パラメータ値の補正に適用することができる。
【００２３】
代用血液は一般的に、血液の血漿または血清分画に分布しているため、そのような代用血液を含み、血液分析を受ける血液試料は溶血されるように思われる。代用血液を含む患者の血漿または血清試料中の赤色は、代用物、例えば精製ヘモグロビンまたはその誘導体に存在するヘモグロビンによる。しかし、代用血液を含む血液試料は、内因性の赤血球の溶血によって着色された血漿または血清において、そうでなければ通常、同様に存在する他の如何なる赤血球干渉物も含まない。
【００２４】
このことを考慮すると、干渉の補正は、それらの臨床的方法の場合に限って、ヘム色単独による干渉を有する外因性の代用血液を含むそれぞれの試料について適用しなければならない。本発明の自動補正法は、所望の血液パラメータの補正値を得るために、ADVIA 120（登録商標）のような自動アナライザーによって自動的に生成された血漿ヘモグロビン値（すなわち、下記に示すHGBデルタ）および適当な補正アルゴリズムを用いることによって、補正を必要とするそれらの試料に対して、そのような補正を都合よく特異的に行うことができる。
【００２５】
本発明に従って、可溶性のヘム色代用血液を輸血した患者の血液化学における誤差を補正するほかに、同じアルゴリズムを用いて、インビボ溶血（または血液化学および血球数を同じ試験管からの血液について行う特殊な場合での試験管内溶血）のそうでなければ有害な作用を補正することができる。
【００２６】
好ましい態様において、バイエル社が製造販売・代理人である自動血液アナライザーは、試料中の外因性の、すなわち細胞外のヘモグロビンの濃度を直接決定および測定できることが判明した。本発明の分析を行うために適した機器は、血液試料中のヘモグロビン濃度を測定する2つの分析チャンネルを有する。詳しくは、そして例として、血液アナライザー機器である、バイエルH*（商標）シリーズ、およびの血液アナライザー機器システムである、バイエルADVIA（登録商標）シリーズ（例えば、ADVIA 120（登録商標））は、血液の総ヘモグロビン含有量に関する定量適分析を行うことができ、赤血球に由来するヘモグロビン成分と、血漿に由来する成分とを区別することができる。
【００２７】
より詳しく述べると、バイエル社の血液アナライザーは、全血試料中の総ヘモグロビン（「HGB」として報告される）のみならず、細胞HGB（「算出HFB」として報告される）を個別にそして独立して決定することができる。これらの血液アナライザーは、全血試料において細胞ヘモグロビンと、非細胞ヘモグロビン、すなわち外から加えたヘモグロビンとを同時に検出することができ、このようにこれらの測定値の個々の値を報告することができる。
【００２８】
2000年6月9日に提出された米国特許出願第60/210,625号では、信頼できる再現可能な方法で、全血試料中の外因性ヘモグロビンを決定および測定する自動化法が新たに記述される。その特許において記述された方法は、患者の血液、血漿、および/または血清に加えられた細胞不含酸素運搬型ヘモグロビン代用物または誘導体のような、ヘモグロビン、またはヘモグロビン製剤、誘導体、もしくは代用物を、患者の治療の過程または計画において繰り返しまたは定期的にモニターすることができる。細胞不含酸素運搬型ヘモグロビン誘導体のような、そのようなヘモグロビン製剤、誘導体、または代用物を患者に輸血した後に、ヘモグロビン製剤、または製剤を含む物質（例えば、血液、血漿、血清、生理的に許容される溶液または組成物等）をモニター、決定、および/または定量する方法も同様に記述される。本開示はさらに、添加されるまたは外因性のヘモグロビン製剤または代用血液、例えば、PEG-HGBまたは精製ヘモグロビンの関与と、患者の赤血球に由来する細胞ヘモグロビンの関与とを個々に明確に区別して正確に測定するシステムを提供する。
【００２９】
記述される自動化分析法およびシステムは、ヘモグロビン製剤を輸血した患者の血液試料において、または検出すべき細胞外ヘモグロビンを含む試料において、所定の試料中の赤血球に由来する細胞ヘモグロビン成分が存在する場合であっても、血漿ヘモグロビンとも呼ばれる細胞外ヘモグロビンの特異的濃度を計算して、細胞外ヘモグロビン成分を検出およびモニターすることができる。
【００３０】
例えば輸血によって外因性のヘモグロビン、例えばPEG-HGBまたは精製ヘモグロビンを投与された患者における患者の経過のモニタリングは、他の市販のアナライザーが、外から加えられたヘモグロビン代用物と全血試料中の赤血球によって提供されるヘモグロビンとを区別することができないことから、これらのアナライザーおよび他の方法では行うことができない。しかし、本明細書に記載の自動アナライザーは、ヘモグロビン製剤が輸血されている患者の全血試料において細胞外ヘモグロビンの特異的濃度を計算することができ、それによって所定の試料中の赤血球に由来する細胞ヘモグロビン成分とは別に、外因性のヘモグロビンを検出およびモニターすることができる。このように、そのようなアナライザーは、添加したヘモグロビン製剤を含む血液試料に関して細胞ヘモグロビンおよび総ヘモグロビン値の双方を提供する。
【００３１】
本発明の好ましい態様において、記述の自動化法は、分析を受ける血液、血漿、または血清試料、好ましくは全血試料において異なるタイプの外因性ヘモグロビン代用物を特異的かつ正確に検出、定量、およびモニターするように設計された自動化法および血液検査システムに特に適用可能であり、都合がよい。本発明の方法は、HGBの添加を必要とする患者に輸血されている、またはそうでなければ血液試料に添加されている（すなわち、外因性ヘモグロビン）細胞不含ヘモグロビン誘導体または合成型ヘモグロビンによって引き起こされた干渉誤差を除去するために特に応用することができる。
【００３２】
外因性ヘモグロビンおよび他のヘム色酸素運搬血液代用物の存在によってしばしば影響を受ける多数の血液化学および血液検査パラメータは、アルブミン、アルカリホスファターゼ（ALP）、アラニントランスアミナーゼ（ALT；これまでのSGPT）、アミラーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（AST）、尿素、カルシウム、クレアチニンキナーゼ（CK）、重炭酸塩、クレアチニン、クレアチニンホスホキナーゼ筋/脳（CKMB）、総ビリルビン、γグルタミルトランスフェラーゼ（GGT）、グルコース、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）、マグネシウム、リン酸塩、リパーゼ、平均赤血球ヘモグロビン（MHC）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）、ならびに好ましくは、アルブミン、ALP、アミラーゼ、カルシウム、重炭酸塩、GGT、LDH、MCH、MCHCおよび総ビリルビンを含み、これらに限定されないが、これらの多数の血液化学および血液検査パラメータに関して患者の血液試料をアッセイしても、干渉の結果、完全には正確または正しくない可能性がある。したがって、本明細書に記載の自動化法を適用することによって、代用血液を含む血液試料の自動分析からのパラメータ結果は、そのような血液化学および血液検査パラメータ結果に関する有効かつ信頼できる値を得るために、干渉誤差を正確に説明するように補正することができる。
【００３３】
本発明の方法は、代用血液を投与された患者から採取した血液試料に関して、正確で、干渉のない自動化結果を提供する。本方法は、手動での計算より簡便であるが、まだ利用されていない。本発明の方法を用いて、代用血液を投与した患者の血液試料の自動化臨床分析および患者の経過のモニタリングが、血液化学および血液検査値、例えばこれらの試料に関して臨床的に決定および報告されているMCHおよびMCHC値の同時自動補正と共に行うことができる。
【００３４】
本発明の実践に従って、標準的な試験管ラベルの他に、代用血液を投与した患者からの採血試験管は、試験管に貼付または添付した1つまたはそれ以上のさらなる特別な説明用のステッカー、接着剤、ラベル等、例えば、テープ片、またはステッカー紙を有する。そのようなステッカー、接着剤、またはラベルは、色分けする、バーコードをつける、および/または他の容易に読み取り可能な印を含んでいてもよく、試料が代用血液を含むまたは含まないことを検査担当者に警告する。それぞれの試料容器または試験管には、それらを特定できるもの、例えば、試料に割付された試料番号（Sid#）、またはアナライザーにおいて他の試料に関連した試料の位置に関する順序番号（Seq#）を割付する。それぞれの試料の検査順序は、典型的に、データマネジャーまたは検査情報システム（LIS）によって作製される。
【００３５】
本発明にさらに従って、試験の選択性は、標準的な試験管ラベル上の1つまたはそれ以上の特異的な制御特徴、例えば、血液検査および/または臨床検査試料の場合にはバーコードの一部、によって得られる。例えば、特殊な特徴、印、コード等を、下記のようにヘモグロビン干渉に関して補正するために、補正式またはアルゴリズムを適用する信号を送るようにバーコードラベルに加える。特徴、印、コード等は、それが、ヘモグロビン代用物を含み、試験管においてアッセイを受ける試料の結果に対してなされる適当な自動干渉補正の信号を特異的に送る限り、数字、文字、記号、またはその一続きもしくは組み合わせとなりうる。本発明の方法において、代用血液を含む試料を入れたそれぞれの採血試験管は、代用血液を含む患者の試料を特定するために互いに異なる特有の特徴またはコードを割付される。特徴またはコードが、代用血液を含む試験管として所定の血液試料試験管を明確かつ適切に特定する限り、特徴またはコードは特異的または規定のタイプである必要はない。例えば、先に述べたように、特有の特徴またはコードは、採血用試験管に添付したバーコードラベルの一部として表すことが可能であろう。
【００３６】
このように、バーコードラベルは、限定されないが例えばMCHおよびMCHCを含む血液化学に関して、臨床/検査の補正値を得るために、本発明に従い、自動アナライザーのソフトウェアにおいて自動補正式（すなわちアルゴリズム）の適用の信号を送る、すなわち誘発する。このように、そのような信号または誘発の後、干渉の補正は、アナライザーによって自動的に提供された血漿ヘモグロビン値（またはHGBデルタ）を用いて自動アナライザーによって新たにそして自動的に行われる/決定される。次に、アナライザーは、検査情報システム（LIS）において既に保存または予定されている特定の血液化学値に関して、同時に採取した同じ患者からの任意の異なる血液試料に関して適当である補正係数を含む適したアルゴリズムまたは式を、例えばビリルビン化学検査結果（実施例4を参照されたい）、アルブミン化学検査結果、ALP化学検査結果、LDH化学検査結果、MCH結果、および/またはMCHC結果に自動的に適用して、外因性のヘモグロビン代用物の干渉により誤って上昇した値を補正する。
【００３７】
当業者によって認識されるように、特定の試験結果の補正は、血液化学の分析が行われる自動アナライザーからの報告結果またはパラメータに加える定数、そこから差し引く定数、および/または乗じる定数を含むアルゴリズムの形で適用される。例えば、検査化学の補正結果を得るために、特定の血液化学パラメータに関して報告された値を用いる；自動アナライザーは、自動的に決定された血漿ヘモグロビン（すなわち、HGBデルタ）および補正係数を用いて、最終的な化学検査結果、例えば総ビリルビンから外因性ヘモグロビンの干渉を除去する値を生じる（実施例4を参照されたい）。
【００３８】
したがって、局面の1つにおいて、本発明の自動化法は、試料、特にヘム色の干渉物質を含む全血試料において、平均赤血球ヘモグロビン（MCH）（単位：ピコグラム/細胞）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）（単位：gm/L）値のパラメータを補正するが、この方法は、赤血球ヘモグロビン濃度（単位：gm/dL）を赤血球濃度（単位：細胞/mm3）によって除して第1の値を得る段階；第1の値に、容積単位の差を補正するために第1の定数、例えば10を乗じてMCHの補正値を得る段階；赤血球ヘモグロビン濃度（単位：gm/dL）をヘマトクリット（HCT）値（％）によって除して第2の値を得る段階；および平均赤血球ヘモグロビン濃度の補正値を得るために、第2の値に容積単位の差を補正するための第2の定数、例えば100を乗じる段階、を含む。
【００３９】
本発明は、多くの細胞不含代用ヘモグロビンおよび誘導体が、特に外傷の場合に全血の代わりに用いられるように開発されているために、特に有利である。これらのヘモグロビン代用物および誘導体は、自動アナライザーから得られた血液および血液化学パラメータに関して報告された値との干渉を引き起こしうる。このように、本発明に従う方法は、全血の代用物として血液に外から加えられた、および患者に導入された（例えば、輸血された）そのような細胞不含ヘモグロビンおよび酸素運搬製剤のレベルを決定、測定、およびモニターする自動アナライザーによって報告された血液学および臨床検査値に関連した干渉誤差を補正するための都合のよい簡便な方法を提供する。
【００４０】
本発明の方法は、細胞不含赤血球代用物を投与した患者、すなわちヘモグロビン、ヘム色の酸素運搬血液代用製剤を、多様な医学的理由からその血液に加えられた患者の血液試料、好ましくは全血試料の分析に適用されると認識される。例えば、輸血、血液量の回復、急性出血の治療、手術、ショック（例えば、出血性ショック）、または腫瘍の酸素飽和のような様々な治療および治療条件のために、そのような赤血球または酸素運搬血液代用物を必要とする患者を治療するために、血液に加えることができる、または血液代用物として用いることができる、多くの細胞不含の、ヘモグロビンに基づく赤血球代用物が存在することがさらに認識される。
【００４１】
本発明の方法に従って全血試料において決定、測定、および/またはモニターすることができる細胞不含のヘモグロビンに基づく赤血球代用物または酸素運搬代用物の非制限的な例には、架橋結合、特に化学的に架橋結合したヒトヘモグロビン製剤（例えば、D.J. Nelson、1998、「HemAssist：Development and Clinical Profile」、Red Blood Cell Substitutes、1998、A.S. Rudolph, R. RabinoviciおよびG.Z. Feuerstein Dekker（編）、ニューヨーク、ニューヨーク州、353〜400頁；J. Adamsonら、1998、同書、335〜351頁；およびT.M.S. Chang、1998、同書、465〜473）；組換え型ヘモグロビン製剤、特に組換え型ヒトヘモグロビン（例えば、J.H. Siegelら、1998、同書、119〜164頁、ならびにJ. W. FreytagおよびD. Templeton、1998、同書、325〜222頁）；精製、好ましくは高度精製ヒトヘモグロビン製剤、および動物に基づく酸素運搬製剤、例えば精製動物（例えば、ウシ）ヘモグロビン、または組換え動物（例えば、ウシ）ヘモグロビンを含むウシヘモグロビンに基づく酸素運搬製剤、例えばHemopure（登録商標）（ケンブリッジ、マサチューセッツ州）が含まれる。（W.R. Lightら、1998、同書、421〜436頁、およびT. Standlら、1998、Br. J. Anaesth. 80(2)：189〜194）。本発明に従う方法において自動血液アナライザーを用いることは、本明細書において記載され、下記の実施例によって証明されるさらなる長所を提供する。
【００４２】
2000年6月9日に提出された米国特許出願第60/210,625号は、市販の自動血液アナライザーが、全血試料において細胞内（または細胞）ヘモグロビン（すなわち、「算出されたHGB」）、および細胞外HGB（すなわち、「HGBデルタまたはHGBΔ」）を同時に検出できる方法を記述している。このように、血液に加えられたヘモグロビン代用物は、血液の赤血球成分によって提供されるヘモグロビンとは無関係に、添加されたヘモグロビン代用物の量を自動的に決定することによってモニターすることができる（実施例1を参照されたい）。正常および異常な溶血していない血液試料の場合、適切に較正された自動化システムによって、HGBデルタはゼロに等しくなる。
【００４３】
細胞内および細胞外ヘモグロビンの同時検出を行うために適した血液アナライザー、例えばバイエルADVIA 120（登録商標）およびバイエルH*（商標）システムシリーズの血液アナライザーは、これらの機器が、そのそれぞれが全血試料において異なるタイプのヘモグロビン濃度を測定する2つの分析的または検出チャンネルを有することから、外因性の細胞外ヘモグロビンの濃度を直接測定することができる。
【００４４】
そのような機器において、分析または検出チャンネルの1つは、試料中の総ヘモグロビン濃度を測定するヘモグロビン（HGB）チャンネルであり、これは溶血させて、グロビンとのその生体複合体からヘムを抽出し、ライゲーションしたヘム第二鉄種を形成して、これを界面活性剤ミセルの中に捕獲して、分光光度法によって測定することによって行う（例えば、M. Malinらに対する米国特許第5,858,794号；M. Malinら、1992、Anal. Chim. Acta. 262：67〜77；およびM. Malinら、1989、Am. J. Clin. Path. 92：286〜294を参照されたい）。そのような機器における第2の分析または検出チャンネルは、赤血球約10,000個が2つの光散乱検出器を通過する際の赤血球濃度、平均細胞容積（MCV）および平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）を測定する赤血球（RBC）チャンネルである。
【００４５】
RBCsを含む血液試料がRBC光学チャンネルの中を通過する際に細胞毎に散乱した光を検出する二光散乱検出器と共に、HGBチャンネルとRBCチャンネルの双方を有する血液アナライザーの存在および設計によって、細胞内ヘモグロビンと細胞外ヘモグロビンとの差を決定して計算し、それによって血液試料中の外因性ヘモグロビン成分の自動決定を提供することができる。本発明の方法を行うことができる適した自動アナライザーの光学的メカニズムに関する記述については、KimおよびOrnstein、1983、Cytometry 3：419〜427；OrnsteinおよびKimに対する米国特許第4,412,004号；Tyckoら、1985、Appl. Optics 24：1355〜1365；Tyckoに対する米国特許第4,735,504号；ならびにMohandasら、1986、Blood 68：506〜513を参照されたい。
【００４６】
全血試料において細胞内対細胞外、または外から加えたHGB濃度のみならず、総HGB濃度を測定および決定する方法は、任意の市販のバイエルH*（商標）システムまたはADVIA 120（登録商標）血液アナライザー機器において用い、行うことができる。しかし、血液中のHGB濃度を測定する二チャンネルシステムを有する他の血液検査機器も、本明細書に記載の干渉補正法を行うために適したHGBデルタ値を自動的に決定するように設計することができる。さらに、二チャンネルヘモグロビン分析および補正システムに基づいて操作するように設計および/またはプログラムされた一連のまたは複合的な血液検査および臨床化学アナライザーも同様に用いることが企図される。
【００４７】
外から加えたヘモグロビン成分または誘導体のような1つまたはそれ以上の干渉物質を含む血液試料において、不正確な血液パラメータ値を補正するための本発明の自動化法は、自動血液分析を受ける試料から得た血液試料の値を含む。本発明に従う特定の局面において、MCHおよびMCHCパラメータ値は、以下のように自動補正法によってバイエルADVIA 120（登録商標）血液アナライザーにおいて補正される：
MCH(補正値)[単位：ピコグラム/細胞]＝
2004535568.tif 000002
および
MCHC(補正値)[単位：gm/dl]＝
2004535568.tif 000003
【００４８】
方法の上記の段階において、RBC HGBは、細胞HGBであり、RBCは赤血球濃度（細胞/mm3）、およびHCTはヘマトクリット、すなわち赤血球が占める血液容積の百分率である。（×10）および（×100）は、容積差を補正するための数値定数である。本発明に従って、細胞ヘモグロビンは、本明細書に記載の自動血液検査法において報告されたパラメータであり、本発明はこれらの値のより単純な自動補正を提供することから、MCHおよびMCHC値を補正するために血漿ヘモグロビン（HGBデルタとして報告される）は必要ではない。
【００４９】
本発明とは対照的に、MCHおよびMCHC値の非自動的補正は、手動での3つの段階を必要とする。さらに、血漿ヘモグロビン値を手動で個々に決定してから手動での計算のために用いられる（実施例2および3を参照されたい）。3つの段階を含むMCHおよびMCHCの手動での計算は、以下のように例示される：
（1）RBC HGB＝総HGB−血漿HGB[単位：gm/dL]；
（2）MCH(補正値)[単位：ピコグラム/細胞]＝
2004535568.tif 000004
および
（3）MCHC(補正値)[単位：gm/dL]=
2004535568.tif 000005
【００５０】
PEG-HGBを、血液試料における外因性ヘモグロビン代用物の特異的なおかつ非制限的な例として用いる実験において、本発明の自動干渉検出補正法を、外から加えたPEG-ヘモグロビンを含む血液試料を用いて証明した。本明細書に示す実施例は、患者の血液試料中の干渉を補正するために必要な手動での計算を示す。そのような手動での計算は、本発明によって提供されるより単純な自動補正法と比べると労力がかかり、非効率的である。
【００５１】
実施例
本明細書に記載する以下の実施例は、本発明を行うための様々な局面を説明して例示することを意味し、本発明を如何なるようにも制限するとは解釈されない。
【００５２】
実施例1
自動血液分析ADVIA 120（登録商標）血液アナライザー（バイエル社）
ADVIA 120（登録商標）アナライザー（バイエル社）のような自動血液アナライザー分析を用いることによって、抗凝固処理された全血試料に添加された細胞外（または非細胞由来）ヘモグロビン、例えばPEG-HGBの検出および測定を行うことができる。
【００５３】
血液試料に添加されたHGB成分は、総HGB（血液アナライザーのヘモグロビンチャンネルにおける比色吸光度から計算）と、計算された細胞HGB（血液アナライザーの赤血球チャンネルにおける赤血球（RBC）サイトグラムに由来）との差を決定することによって得るが、これは以下の式から計算された：（RBC×MCV×CHCM/1000）、式中、MCVは平均赤血球容積であり、CHCMは、溶血していない血液中のMCHCまたは平均赤血球ヘモグロビン濃度と同じ細胞特性を測定する赤血球ヘモグロビン濃度平均値である。CHCM値は、AVDIA 120（登録商標）血液検査システムのような血液アナライザーの赤血球チャンネルから得る。
【００５４】
特に、CHCMは、Mie理論に従って光散乱測定から得た（Tyckoら、1985、Appl. Optics 24：1355〜1365、およびTychoらに対する米国特許第4,735,504号を参照されたい）。対照的に、MCHCは、総HGBを積（MCV×RBC）によって除することによって得た。実際に、MCHCは、通常の試料においてCHCMとは正確に同一ではないが、これらの値は好ましくは厳密に一致する。例えば、添加したHGB成分に関連するMCHC値は、好ましくは、CHCM値の約0〜5 g/dL血液の範囲内であり、より好ましくは約0〜2 g/dL血液の範囲内である。総ヘモグロビンと細胞内ヘモグロビンとの差は「HGB デルタ」（「HGBΔ」）と呼ばれ、血液試料において外から加えたヘモグロビン濃度、例えばPEG-HGBを表す。
【００５５】
先に述べたようにMCHC値とCHCM値とのあいだに完全な同一性がないことに関する説明は以下の通りである。典型的な食事の後、例えば血漿がある程度の脂肪血症（すなわち、キロミクロンと呼ばれる脂質の小さい超顕微鏡的または顕微鏡的粒子の懸濁液）を生じることは珍しいことではない。粒子の存在は、微量の光散乱を引き起こし、それによってヘモグロビン計においてヘモグロビン溶液に透過される光の量が減少する。その結果、溶液は、実際よりわずかに多くのヘモグロビンを含むように思われる。バイエルADVIA 120（登録商標）血液アナライザーによって実行されるヘモグロビン濃度の細胞毎の測定には、この誤差がない。ADVIA 120（登録商標）は、ΔHGBが1.9 gm/dLより大きくなれば、試料が異常であると合図するように較正される；すなわち、この量を超える程度の脂肪血症は異常であると見なされる。同様に、患者においてインビボでまたは試験管において血液試料の一部が溶血した場合、ΔHGB値も同様に生成される。ADVIA 120（登録商標）アナライザーによって行われる2つのHGB測定によって、患者の試料における如何なる異常な脂肪血症または溶血の存在も医師または臨床医に警告する。
【００５６】
バイエルADVIA 120（登録商標）血液アナライザーは、総HGB濃度と細胞内HGB濃度の差（「HGBデルタ」または「HGBΔ」）を以下のように計算する（HGB濃度は全て、全血1デシリットルあたりのグラム、g/dLで表す）：
HGBΔ、g/dL＝総HGB、g/dLHGBチャンネル−細胞内HGB、g/dL赤血球チャンネル
【００５７】
上記の等式において、HGBΔは、血液試料中の細胞外HGB濃度を表す。通常の条件では、デルタHGBはゼロ（0）に等しい。
【００５８】
このように、血液検査機器のHGbチャンネルを用いて総ヘモグロビンを測定してモニターし、RBCチャンネルは血液試料の赤血球内に含まれる細胞内HGBのみを検出した。これらの2つの測定を差し引くと、HGBデルタが得られ、これは細胞外HGBを表す。
【００５９】
血液アナライザーによって自動的に計算された値である、血液試料中の細胞外ヘモグロビン（すなわち血漿ヘモグロビン）濃度に関する値を得るために、総および細胞内ヘモグロビン濃度値を用いて、総および細胞内ヘモグロビン濃度の差を計算した。血液アナライザーの赤血球チャンネルは、以下のように全血におけるヘモグロビン濃度を測定した：
[HGB]血液、赤血球チャンネル／細胞内(g/dL)＝
[CHCM(g/dL)×RBC数(細胞/mm3)×MCV(フェントリットル/細胞)／1000]。
ヘモグロビンチャンネルは総ヘモグロビン濃度、すなわち
[HGB]細胞内＋[HGB]細胞外
を測定した。
【００６０】
自動血液アナライザー、例えばADVIA 120（登録商標）（バイエル社）は、総HGB濃度と細胞内HGB濃度の差を計算して、HGBデルタを生じたが、これは細胞外または外因性のHGB濃度に対応する。
【００６１】
材料および方法
PEG HGB（エンゾン社、ピスキャタウェイ、ニュージャージー州）は凍結状態で購入してフリーザーにおいて凍結保存した。凍結バッグを使用前に融解して、50 mlポリプロピレン試験管5本に移した。チューブ3本を後に使用するために再度凍結した；他の2本を冷蔵庫で保存した。各実験に関して適当量を試験管に移して、使用前に室温と平衡にした。
【００６２】
本明細書に記載した実験は、バイエル社の較正したADVIA 120（登録商標）自動血液検査機器において行った。この機器におけるヘモグロビンチャンネルは、M. Malinらの米国特許第5,858,794号に記載されるようにシアニド含有HGB試薬、D. Zelmanovicらの米国特許第5,817,519号およびD. Zelmanovicらの1997年6月27日に提出された米国特許出願第08/884,595号に記載される赤血球希釈剤（RBC希釈剤）を用いた。
【００６３】
ADVIA 120（登録商標）血液検査システムを較正するために、較正材料（ADVIA 120（登録商標）セットポイント（登録商標）較正器）を10回吸引して、平均HGB値を決定した。システム較正因子は、平均較正値が較正器でのHGB（g/dL）の表示値に対応するように設定した。HGBチャンネルの精度を推定するために、新たに採取した全血試料を20回吸引して、平均値および標準偏差（SD）を計算した。許容可能な精度は以下の通りであった：SD≦0.11 g/dL。
【００６４】
健康なボランティアから得た血液試料を、好ましくは
2004535568.tif 000006
を用いて抗凝固処理した。
【００６５】
本明細書の実施例に記載した実験のほとんどは、PEG-HGB（エンゾン社）が6 g/dLウシヘモグロビンを含むことが報告されていることから、約6 g/dLのHGB濃度レベルで行った。回収したHGB値は5.4±2 g/dLであり、これは名目値6 g/dL血液とよく相関した。さらに、バイエル社の血液アナライザーを用いた全ての実施例において、各実験の前にPEG-HGBを2回吸引することによって、機器のヘモグロビン精度を較正前にチェックした。
【００６６】
実施例2
干渉の検出および計算（手動および本発明に従う自動）の適用により、MHCおよびMCHC値に対する干渉に関する血液分析結果が補正されることが、本実施例において証明される。PEG-HGB（エンゾン社）および希釈した全血（血漿で希釈）の直線性プールを作製した。
【００６７】
PEG-HGBの当初のアッセイ法は以下の通りであった：総HGB：5.4 g/dL；HGBデルタ：5.4 g/dL。20％PEG-HGBと80％希釈全血とを含む混合物の少量をバイエルADVIA 120（登録商標）血液検査装置においてアッセイした。表1Aおよび1Bは、対照、希釈全血試料（表1）、および20％PEG-HGBと80％希釈全血との混合物を含む試料から得た血液パラメータの比較を示す。表1Bは、本発明の自動化法に従って得られたMCHおよびMCHCの補正値を示す。
【００６８】
（表１Ａ）  希釈した全血
2004535568.tif 000007
（表１Ｂ）  20％PEG＋80％希釈全血
2004535568.tif 000008
【００６９】
少量の試料におけるMCHおよびMCHCに関する手動での自動でない補正は、以下の3つの段階に記載した通りに行った：
段階1）総HGB−血漿HGB(HGBデルタ)= 赤血球HGB
6.0−1.1 gm/L＝4.9 gm/dL
段階2）赤血球HGB／RBC (×10)＝MCH(補正)
4.9 g/dL／1.75 細胞/mm3 (×10)＝28.0ピコグラム/細胞
段階3）赤血球HGB／HCT (×100)＝MCHC(補正)
4.9 g/dL／14.8 (×100)＝33.1 gm/dL
【００７０】
自動ADVIA 120（登録商標）血液アナライザーを用いて、自動補正法を本発明に従って用いた。自動化法において、HGBは、自動化システムにおいて報告されたパラメータであるために、血漿HGBに関する計算を行う必要はなかった。自動化補正法において用いた計算は以下の通りであった：
段階1）細胞HGB／RBC濃度 (×10)＝MCH(補正値)
4.9 ／1.75 (×10)＝28.0ピコグラム/細胞
段階2）細胞HGB／HCT (×100)＝MCHC(補正)
4.9 ／14.8 (×100)＝33.1 gm/dL
【００７１】
自動二段階法によって計算されたように、MCHおよびMCHCの補正値は、当初の希釈された全血試料結果を回復した。
【００７２】
実施例3
実施例2の記述と類似のもう1つの実験において、等量のPEG-HGBを全血試料に加えた。MCHおよびMCHC値の手動および自動補正を、下記の表2Aおよび2Bに示す。表2Aおよび2Bは、対照の希釈した全血試料から得た血液パラメータ（表2A）と、50％PEG-HGBと50％希釈全血との混合物を含む試料から得た血液パラメータとの比較を示す。表2Bは、本発明の自動化法に従って得られたMCHおよびMCHCの補正値を表す。
【００７３】
（表２Ａ）  希釈した血液
2004535568.tif 000009
（表２Ｂ）  50％PEG＋50％希釈全血
2004535568.tif 000010
【００７４】
MCHおよびMCHC値に関する手動での補正は、以下の3つの段階を必要とした：
段階1）総HGB−血漿HGB(HGBデルタ)= RBC HGB
9.5−2.8＝6.7 gm/dL
段階2）RBC HGB／RBC濃度 (×10)＝MCH(補正値)
6.7／2.56 (×10)＝26.2ピコグラム/細胞
段階3）RBC HGB／HCT (×100)＝MCHC(補正値)
6.7／20.0 (×100)＝33.5 gm/dL
【００７５】
自動ADVIA 120（登録商標）（バイエル社）のような自動血液アナライザーにおいて血液試料の自動化分析に関連して2つの段階のみを用いて、自動アナライザーはMCHおよびMCHCに関する当初の全血値を回復した。このように、本発明に従って、自動補正法は、以下のように2つの計算段階を必要とした：
段階1）RBC HGB／RBC濃度 (×10)＝MCH(補正値)
6.7 ／2.56  (×10)＝26.2ピコグラム/細胞
および
段階2）赤血球HGB／HCT (×100)＝MCHC(補正値)
6.7／20.0 (×100)＝33.5 gm/dL
【００７６】
実施例4
本実施例は、検査を受ける血液試料における外因性のヘモグロビンの干渉により、誤って上昇したビリルビン化学結果を補正するために本発明の方法に従って用いられる計算を示す。本発明に従って、採血試験管のラベルは、自動アナライザーのソフトウェアに、総ビリルビンに対する干渉を補正するように誘発して、総ビリルビンの干渉補正値を計算するための補正係数定数を含むアルゴリズムの自動適用後に補正総ビリルビン結果を提供する。計算において、血漿/血清ヘモグロビン（例えば、HGBデルタ）を用いて補正値を得た。すなわち、
補正結果＝報告された結果−(補正係数×血漿／血清ヘモグロビン(g/L))。
【００７７】
報告された総ビリルビン値            10.8 mg/dL
測定された血漿/血清ヘモグロビン     20.0 g/L
補正係数                            0.13 mg/dL/gL
【００７８】
自動補正結果は以下の通りである：
10.8 mg/dL−(0.13 mg/dL/gL×20.0 g/L)＝8.2 mg/dL
【００７９】
本発明に従って、総ビリルビン値は、血液アナライザーでの分析後に自動的に補正される。
【００８０】
本実施例において、血液試料を含む試験管の1つまたはそれ以上のラベルおよび/または表示は、分析を受ける試料に代用血液が含まれること、そしてしたがって、ビリルビン化学結果に干渉補正が必要であることを示す信号を含み、アナライザーのコンピューターソフトウェアに信号を送る。したがって、ビリルビンおよび血漿/血清ヘモグロビンに関する補正係数を含むアルゴリズムまたは式は、本明細書において例示するように、干渉誤差に関して調節したビリルビンの補正値を得るために、自動血液/LISシステムのソフトウェアによって、同時に採血された同じ患者からの血液試料の異なる分析からの任意の未補正の総ビリルビン値に自動的に適用される。
【００８１】
本明細書において引用した全ての特許、特許出願、公表論文、書籍、参考マニュアルおよび抄録の内容物は、本発明が関する技術分野の現状をより詳しく説明するために、その全文が参照として本明細書に組み入れられる。
【００８２】
上記の主題には様々な変更を行うことができ、それらも本発明の範囲および趣旨に含まれるが、上記の説明に含まれるおよび添付の請求の範囲に定義される全ての主題は、本発明を記述して説明するとして解釈されることが意図される。上記の教示に照らして本発明の多くの改変および変更が可能である。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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