(57)【要約】新規ＩＬ−１７様ポリペプチドおよびそれをコードする核酸分子。本発明は、ベクター、宿主細胞、選択的結合剤、およびＩＬ−１７様ポリペプチドの製造方法も提供する。ＩＬ−１７様ポリペプチド、そのアゴニストまたはアンタゴニストで疾患を治療、診断、改善または予防するための方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列、
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
（ｃ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）または（ｂ）の相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項２】
（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドに対して少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列の対立遺伝子変異体またはスプライス変異体をコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチド断片をコードする配列番号１、配列番号３または配列番号９、（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドの断片を含む配列番号１、配列番号３または配列番号９、または（ａ）〜（ｃ）のヌクレオチド配列、
（ｅ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）〜（ｄ）のいずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｆ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項３】
（ａ）少なくとも１つの同類アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端短小化を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短小化およびＮ末端短小化よりなる群から選ばれる少なくとも１つの修飾を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドの断片を含む（ａ）〜（ｅ）のヌクレオチド配列、
（ｇ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）〜（ｆ）のいずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項４】
請求項１、２または３記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項５】
請求項４記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項６】
真核細胞である、請求項５記載の宿主細胞。
【請求項７】
原核細胞である、請求項５記載の宿主細胞。
【請求項８】
ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現させるために適切な条件下で請求項５記載の宿主細胞を培養すること、所望により該ポリペプチドを該培養から単離することを含んでなるＩＬ−１７様ポリペプチドの製造方法。
【請求項９】
請求項８記載の製造方法により製造されたポリペプチド。
【請求項１０】
該核酸分子が、該ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動的に結合した、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドのプロモーターＤＮＡ以外のプロモーターＤＮＡを含む、請求項８記載の製造方法。
【請求項１１】
該同一性（％）が、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔおよびスミス−ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズムよりなる群から選ばれるコンピュータープログラムを使用して測定される、請求項２記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
請求項５、６または７記載の宿主細胞を該化合物にさらし、該宿主細胞におけるＩＬ−１７様ポリペプチドの活性または産生を測定することを含んでなる、ある化合物がＩＬ−１７様ポリペプチドの活性または産生を抑制するか否かを判定するための方法。
【請求項１３】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０のオルソログアミノ酸配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるアミノ酸配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列の断片（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０、または（ａ）〜（ｃ）の少なくとも１つに記載のアミノ酸配列の対立遺伝子変異体またはスプライス変異体のアミノ酸配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）
よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
（ａ）少なくとも１つの同類アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端短小化を有する配列番号２に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短小化およびＮ末端短小化よりなる群から選ばれる少なくとも１つの修飾を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）
よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１、２または３記載の核酸分子にコードされた単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
該同一性（％）が、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔおよびスミス−ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズムよりなる群から選ばれるコンピュータープログラムを使用して測定される、請求項１４記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号２の６７位のアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号２の６９位のアミノ酸がアルギニン、リシン、グルタミンまたはアスパラギンである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号２の９４位のアミノ酸がセリン、アラニンまたはシステインである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号２の９６位のアミノ酸がセリン、アラニンまたはシステインである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号２の１０１位のアミノ酸がバリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、アラニンまたはノルロイシンである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２３】
配列番号２の１０４位のアミノ酸がセリンまたはトレオニンである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２４】
配列番号２の１２９位のアミノ酸がセリン、アラニンまたはシステインである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２５】
配列番号２の１４０位のアミノ酸がセリン、アラニンまたはシステインである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２６】
配列番号２の１８６位のアミノ酸がセリン、アラニンまたはシステインである、請求項１４または１５記載のポリペプチド。
【請求項２７】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドで動物を免疫することにより製造された抗体。
【請求項２８】
請求項１３、１４または１５記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメント。
【請求項２９】
モノクローナル抗体である、請求項２８記載の抗体。
【請求項３０】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチドに結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項３１】
請求項２７、２８または２９記載の抗ＩＬ−１７様抗体またはフラグメントを使用してＩＬ−１７様ポリペプチドの量を検出または定量する方法。
【請求項３２】
少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する選択的結合剤またはその断片であって、該ポリペプチドが、
（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列、および
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列の断片、および
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の天然に存在する変異体
よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含むことを特徴とする選択的結合剤またはその断片。
【請求項３３】
抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３４】
ヒト化抗体である、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３５】
ヒト抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３６】
ポリクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３７】
モノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３８】
キメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項３９】
ＣＤＲグラフティング抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項４０】
抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項４１】
可変領域フラグメントである、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項４２】
ＦａｂまたはＦａｂ’フラグメントである、請求項４１記載の可変領域フラグメント。
【請求項４３】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対する特異性を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含んでなる選択的結合剤またはその断片。
【請求項４４】
検出可能な標識に結合した、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項４５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性を拮抗する、請求項３２記載の選択的結合剤。
【請求項４６】
ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合を抑制する、請求項４５記載の選択的結合剤。
【請求項４７】
該ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３が配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を有する、請求項４５記載の選択的結合剤。
【請求項４８】
請求項３２記載の選択的結合剤の有効量を患者に投与することを含んでなる、疾患、状態または障害を治療、予防または改善するための方法。
【請求項４９】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含むポリペプチドで動物を免疫することにより製造された選択的結合剤。
【請求項５０】
請求項１、２または３記載のポリペプチドに結合しうる選択的結合剤を産生するハイブリドーマ。
【請求項５１】
請求項１３、１４または１５記載のポリペプチドと医薬上許容される製剤化剤とを含んでなる組成物。
【請求項５２】
医薬上許容される製剤化剤が担体、佐剤、可溶化剤、安定剤または抗酸化剤である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５３】
該ポリペプチドが、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５１記載の組成物。
【請求項５４】
請求項１３、１４または１５記載のポリペプチドの誘導体を含んでなるポリペプチド。
【請求項５５】
水溶性重合体で共有的に修飾された、請求項５４記載のポリペプチド。
【請求項５６】
該水溶性重合体が、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリビニルアルコールよりなる群から選ばれる、請求項５５記載のポリペプチド。
【請求項５７】
請求項１、２または３記載の核酸分子と医薬上許容される製剤化剤とを含んでなる組成物。
【請求項５８】
該核酸分子がウイルスベクター中に含有されている、請求項５７記載の組成物。
【請求項５９】
請求項１、２または３記載の核酸分子を含んでなるウイルスベクター。
【請求項６０】
異種アミノ酸配列に融合した請求項１３、１４または１５記載のポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチド。
【請求項６１】
該異種アミノ酸配列がＩｇＧ定常ドメインまたはそのフラグメントである、請求項６０記載の融合ポリペプチド。
【請求項６２】
請求項１３、１４もしくは１５記載のポリペプチドまたは請求項１、２もしくは３記載の核酸にコードされるポリペプチドを患者に投与することを含んでなる、医学的状態を治療、予防または改善するための方法。
【請求項６３】
対象における病理学的状態を又は病理学的状態に対する感受性を診断する方法であって、
（ａ）サンプル中の請求項１３、１４もしくは１５記載のポリペプチドまたは請求項１、２または３記載の核酸分子にコードされるポリペプチドの発現の存在または量を測定し、
（ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づき、病理学的状態を又は病理学的状態に対する感受性を診断することを含んでなる方法。
【請求項６４】
（ａ）移植に適した膜と
（ｂ）該膜内に封入された細胞とを含んでなり、
該細胞が請求項１３、１４または１５記載のタンパク質を分泌すること、および該膜が該タンパク質に対しては透過性であり、該細胞に有害な物質に対しては不透過性であることを特徴とする装置。
【請求項６５】
（ａ）請求項１３、１４または１５記載のポリペプチドを化合物と接触させ、
（ｂ）該化合物への該ポリペプチドの結合の度合を測定することを含んでなる、ポリペプチドに結合する化合物の同定方法。
【請求項６６】
請求項１、２または３記載の核酸分子を動物に投与することを含んでなる、動物におけるポリペプチドのレベルを調節する方法。
【請求項６７】
請求項１、２または３記載の核酸分子を含んでなるトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項６８】
配列番号１０のアミノ酸配列のヒトオルソログ。
【請求項６９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに特異的に結合する分子の治療的に有効な量を投与することを含んでなる、ＩＬ−１７様ポリペプチドにより媒介される病理学的状態を治療、予防または改善する方法。
【請求項７０】
該分子が請求項３２または３４記載の選択的結合剤である、請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
該病理学的状態が、免疫系機能不全、炎症または感染に関連している、請求項６９記載の方法。
【請求項７２】
ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合を抑制しうる分子の治療的に有効な量を投与することを含んでなる、ＩＬ−１７ＥリガンドとのＩＬ−１７受容体様ポリペプチドの望ましくない相互作用を抑制する方法。
【請求項７３】
該分子が請求項３２または３４記載の選択的結合剤である、請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
請求項１４もしくは１５記載のポリペプチドの有効量を、またはＩＬ−１７様ポリペプチドに対する特異性を有するＩＬ−１７様ポリペプチド選択的結合剤、小分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチドもしくはそれらの誘導体の有効量を投与することを含んでなる、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を拮抗する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、新規ＩＬ−１７様ポリペプチド、およびそれをコードする核酸分子に関する。本発明はまた、ベクター、宿主細胞、医薬組成物、選択的結合剤、およびＩＬ−１７様ポリペプチドの製造方法に関する。ＩＬ−１７様ポリペプチドに関連した疾患の診断、治療、改善および／または予防のための方法も提供する。
【０００２】
（発明の背景）
核酸分子の同定、クローニング、発現および操作ならびにヒトゲノムの解読における技術的進歩は、新規治療方法の発見を著しく加速している。迅速な核酸配列決定技術は、今や、前例のない速度で配列情報を生み出すことが可能であり、コンピューター解析と結びついて、部分的および全体的なゲノムへの重複配列の集合ならびにポリペプチドコード化領域の同定を可能にしうる。公知アミノ酸配列のデータベース編集物に対する推定アミノ酸配列の比較は、既に同定されている配列および／または構造的指標に対する相同性の度合を測定することを可能にする。核酸分子のポリペプチドコード化領域のクローニングおよび発現は、構造的および機能的解析のためのポリペプチド産物を与える。核酸分子およびコード化ポリペプチドの操作は、治療剤として使用するための産物に対して有利な特性を付与しうる。
【０００３】
過去１０年にわたるゲノム研究における著しい技術的進歩にもかかわらず、ヒトゲノムに基づく新規治療剤の開発の可能性は尚もほとんど実現されていない。潜在的に有益なポリペプチド治療剤をコードする多数の遺伝子またはそれらのコード化ポリペプチドは、治療用分子の「標的」として作用しうるが、未だ同定されていない。
【０００４】
したがって、診断上または治療上の利点を有する新規ポリペプチドおよびそれをコードする核酸分子を同定することが本発明の目的である。
【０００５】
（発明の概要）
本発明は、新規ＩＬ−１７様核酸分子およびコード化ポリペプチドに関する。
【０００６】
本発明は、
（ａ）配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列、
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
（ｃ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）または（ｂ）の相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【０００７】
本発明はまた、
（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドに対して少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列の対立遺伝子変異体またはスプライス変異体をコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチド断片をコードする配列番号１、配列番号３または配列番号９、（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドの断片を含む配列番号１、配列番号３または配列番号９、（ａ）〜（ｃ）のヌクレオチド配列、
（ｅ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）〜（ｄ）のいずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【０００８】
本発明は更に、
（ａ）少なくとも１つの同類アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端短小化を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短小化およびＮ末端短小化よりなる群から選ばれる少なくとも１つの修飾を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドの断片を含む（ａ）〜（ｅ）のヌクレオチド配列、
（ｇ）中等度または高度ストリンジェント条件下で（ａ）〜（ｆ）のいずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列（この場合、そのコード化ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列
よりなる群から選ばれるヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【０００９】
本発明はまた、
（ａ）配列番号２中に含有される成熟ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを含み、所望により更にアミノ末端メチオニンを含んでいてもよいアミノ酸配列、または配列番号４または配列番号１０中に含有される成熟マウスＩＬ−１７様ポリペプチドを含むアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０のオルソログアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列の断片（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｅ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０あるいは（ａ）〜（ｃ）の少なくとも１つに記載のアミノ酸配列の対立遺伝子変異体またはスプライス変異体のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）
よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドを提供する。
【００１０】
本発明は更に、
（ａ）少なくとも１つの同類アミノ酸置換を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、
（ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端短小化を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）、および
（ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短小化およびＮ末端短小化よりなる群から選ばれる少なくとも１つの修飾を有する配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列（この場合、そのポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの活性を有する）
よりなる群から選ばれるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドを提供する。
【００１１】
また、前記（ａ）〜（ｅ）のアミノ酸配列を含んでなる融合ポリペプチドも提供する。
【００１２】
本発明はまた、本明細書に記載の単離された核酸分子を含んでなる発現ベクター、本明細書に記載の組換え核酸分子を含んでなる組換え宿主細胞、および該宿主細胞を培養し、所望により、そのようにして産生したポリペプチドを単離することを含んでなるＩＬ−１７様ポリペプチドの製造方法を提供する。
【００１３】
ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなるトランスジェニック非ヒト動物も、本発明に含まれる。該ＩＬ−１７様核酸分子は、該ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を及びそのレベルの増加（これは循環レベルの増加を含みうる）を可能にする様態で該動物内に導入される。該トランスジェニック非ヒト動物は、好ましくは、哺乳動物である。
【００１４】
また、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの誘導体も提供する。
【００１５】
本発明においては、配列番号２のＩＬ−１７様ポリペプチドの同類および／または非同類アミノ酸置換から生じる該ＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体を提供する。そのような類似体には、例えば、配列番号２の６７位のアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンである、配列番号２の６９位のアミノ酸がリシン、グルタミン、アスパラギンまたはアルギニンである、配列番号２の９４位のアミノ酸がシステイン、セリンまたはアラニンである、配列番号２の９６位のアミノ酸がシステイン、セリンまたはアラニンである、配列番号２の１０１位のアミノ酸がイソロイシン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、アラニン、ノルロイシンまたはバリンである、配列番号２の１０４位のアミノ酸がトレオニンまたはセリンである、配列番号２の１２９位のアミノ酸がシステイン、アラニンまたはセリンである、配列番号２の１４０位のアミノ酸がシステイン、アラニンまたはセリンである、配列番号２の１５２位のアミノ酸がシステイン、アラニンまたはセリンであるＩＬ−１７様ポリペプチドが含まれる。
【００１６】
受容体結合活性またはサイトカイン生物活性を保有するＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体、断片または変異体が特に意図される。受容体に結合するがシグナルを伝達しないＩＬ−１７様ポリペプチドの類似体、断片または変異体も意図される。
【００１７】
本発明のヌクレオチド、ポリペプチドまたは選択的結合剤と１以上の医薬上許容される製剤化剤とを含んでなる医薬組成物も、本発明に含まれる。該医薬組成物は、本発明のヌクレオチドまたはポリペプチドの治療的に有効な量を投与するために使用する。本発明はまた、該ポリペプチド、核酸分子および選択的結合剤の使用方法に関する。
【００１８】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド、その抗体および誘導体、他の選択的結合剤、小分子ならびに核酸分子（アンチセンス核酸を含む）は、本明細書に記載のものを含む疾患および障害を治療、予防、改善および／または検出するために使用することができる。例えば、該ＩＬ−１７様ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、炎症活性を有し、したがって、炎症に関連した病理学的状態において何らかの役割を果たしうる。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現は、癌の進行において何らかの役割を果たしうる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドおよびポリヌクレオチドはリンパ腫状態において何らかの役割を果たしている可能性があり、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現の増加は前リンパ腫状態を示しうる。ＩＬ−１７様ポリペプチドのレベルまたは活性の減少は、自己免疫疾患を含む急性または慢性の炎症性病態において及びリンパ腫または前リンパ腫状態を含む癌病態において望ましいであろう。逆に、ＩＬ−１７様ポリペプチド活性の増加は、感染症のような他の疾患において望ましいであろう。
【００１９】
本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する試験分子を同定するために試験分子を分析する方法を提供する。該方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドを試験分子と接触させて、該ポリペプチドへの該試験分子の結合の度合を測定することを含む。該方法は更に、そのような試験分子がＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストであるか否かを判定することを含む。本発明は更に、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現に対する又はＩＬ−１７様ポリペプチドの活性に対する或る分子の影響を試験する方法を提供する。
【００２０】
本発明の１つの実施形態は、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３ポリペプチドとの相互作用のインヒビターを同定する方法を提供する。これらの方法は、試験化合物の存在下および不存在下、ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３ポリペプチド（例えば、配列番号１８もしくは２０の細胞外領域またはリガンド結合活性を保有するその断片、類似体もしくは変異体を含むポリペプチド）へのＩＬ−１７様ポリペプチド（例えば、配列番号２に記載の成熟タンパク質配列または受容体結合活性を保有するその断片、類似体もしくは変異体を含むポリペプチド）の結合を検出し、該化合物の存在下で該結合が減少する場合には該試験化合物を候補インヒビターとして同定する工程を含む。適切な試験化合物には、核酸分子、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、有機および無機化合物、公知のハイスループットスクリーニング法を用いてスクリーニングされうるライブラリーが含まれる。本発明は更に、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２もしくはＲＢ−３に特異的に結合する分子の治療的に有効な量を投与することを含んでなる、ＩＬ−１７様ポリペプチドにより媒介される病理学的状態を治療、予防または改善する方法を提供する。本発明はまた、ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３とのＩＬ−１７様ポリペプチドの望ましくない相互作用を抑制する方法であって、該ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２もしくはＲＢ−３に結合しうる分子の治療的に有効な量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２１】
これらの同定された候補インヒビターには、本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの選択的結合剤、断片、類似体または変異体、およびそれらの融合タンパク質が含まれる。典型的なＩＬ−１７様ポリペプチド媒介性病理学的状態は、本明細書中に更に詳しく記載されている。
【００２２】
本発明はまた、ＩＬ−１７受容体ＲＢ−２またはＲＢ−３とのＩＬ−１７様ポリペプチドの望ましくない相互作用を抑制する方法であって、該ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７受容体ＲＢ−２もしくはＲＢ−３に結合しうる分子の治療的に有効な量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２３】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調節する及びＩＬ−１７様ポリペプチドのレベルを調節する（すなわち、増加または減少させる）方法も、本発明に含まれる。１つの方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子またはアンチセンス核酸分子（例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはＲＮＡまたは調節配列に特異的に結合し、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を抑制するもの）を動物に投与することを含む。もう１つの方法においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調制または調節する要素を含む核酸分子を投与することができる。これらの方法の具体例には、本明細書中に更に詳しく説明されている遺伝子治療、細胞療法およびアンチセンス療法が含まれる。ＩＬ−１７様ポリペプチドのレベルまたは活性を減少させる更に他の方法は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を拮抗するために選択的結合剤（例えば、抗体およびその誘導体、例えばキメラ、ヒト化またはヒト抗体またはそれらのフラグメントのうち、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはその受容体結合部位に特異的に結合するもの）を投与することを含む。天然ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を拮抗するＩＬ−１７の類似体、断片または変異体、例えば、その融合タンパク質の投与も意図される。
【００２４】
本発明のもう１つの態様においては、該ＩＬ−１７様ポリペプチドを使用して、その受容体（「ＩＬ−１７様受容体」）を同定することができる。タンパク質リガンドに対する受容体をクローニングするために、種々の形態の「発現クローニング」が広く用いられている。例えば、Ｈ．ＳｉｍｏｎｓｅｎおよびＨ．Ｆ．Ｌｏｄｉｓｈ，Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５：４３７−４４１（１９９４）、ならびにＴａｒｔａｇｌｉａら，Ｃｅｌｌ，８３．１２６３−１２７１（１９９５）を参照されたい。該ＩＬ−１７様受容体の単離は、ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナリング経路の新規アゴニストおよびアンタゴニストを同定または開発するために有用である。そのようなアゴニストおよびアンタゴニストには、可溶性ＩＬ−１７様受容体（例えば、膜貫通および／または細胞質領域の全部または一部を欠く断片または細胞外領域の断片のうち、リガンド結合活性を保有するもの、それらの類似体または変異体、および異種ポリペプチド、例えば免疫グロブリンの定常ドメインに対するそれらの融合体、その断片または変異体のうち、循環中の半減期を延長する能力を保有するもの）抗ＩＬ−１７様受容体選択的結合剤（例えば、抗体およびその誘導体、例えばキメラ、ヒト化またはヒト抗体またはそれらの断片のうち、ＩＬ−１７受容体様ポリペプチドまたはそのリガンド結合部位に特異的に結合するもの）、小分子、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡあるいは調節配列に特異的に結合し、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を抑制するもの）、本明細書に記載のものを含む疾患または障害の１以上を治療するために使用しうるもののいずれかが含まれる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドアンタゴニストは、抗炎症治療剤として投与することができ、あるいは癌またはリンパ腫状態を治療するために使用することができる。
【００２５】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する２つの受容体が実施例８において同定されており、それらはＩＬ−１７ＲＢ−２およびＩＬ−１７ＲＢ−３と称される。それらのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１７〜１８（ＩＬ−１７ＲＢ−２）および配列番号１９〜２０（ＩＬ−１７ＲＢ−３）に記載されている。該推定膜貫通ドメインは、配列番号１８の残基２９３〜３１３および配列番号２０の残基３５１〜３７１に伸長する。該推定シグナルペプチドは配列番号１８および２０の１４残基に伸長する。したがって、該推定細胞外配列は、配列番号１８のアミノ酸１４〜２９２および配列番号２０のアミノ酸１４〜３５０に伸長する。これらの受容体は、共有されている同時に出願された米国特許出願第号（Ａｔｔｏｒｎｅｙ　Ｄｏｃｋｅｔ　Ｎｏ．０１０１７／３６９１７Ａ）および既に出願されている２０００年１１月２７日付け出願の米国特許出願第０９／７２３，２３２号、２０００年３月１６日付け出願の米国仮特許出願第６０／１８９，９２３号、および２０００年５月１２日付け出願の米国仮特許出願第６０／２０４，２０８号（それらのすべての全開示を参照により本明細書に組み入れることとする）に、更に詳しく記載されており特徴づけられている。
【００２６】
ある実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用してその活性を調節するタンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質または小分子量分子でありうる。
【００２７】
（図面の簡単な記載）
図１は、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号１）を示す。また、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）も記載されている。この図においては、推定シグナルペプチドが下線で示されており、アミノ酸１〜１６はリーダー配列を含むと考えられる。
【００２８】
図２Ａ〜２Ｃは、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を示す。また、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）も示されている。この図においては、推定シグナルペプチドが下線で示されており、アミノ酸１〜１８はリーダー配列を含むと考えられる。図２Ｂ〜２Ｃはまた、マウスＩＬ−１７様ｃＤＮＡの非分泌形態の核酸配列（配列番号９）およびその対応アミノ酸配列（配列番号１０）を示す。
【００２９】
図３Ａ〜３Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７のアミノ酸配列（配列番号５）との整列を示す。
【００３０】
図４は、ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−２０ファミリーメンバーｈＩＬ−２０のアミノ酸配列（配列番号６）との整列を示す。
【００３１】
図５は、ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７ｂのアミノ酸配列（配列番号７）との整列を示す。
【００３２】
図６Ａ〜６Ｂは、ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７ｃのアミノ酸配列（配列番号８）との整列を示す。
【００３３】
図７は、剖検されたトランスジェニック創始（ファウンダー）マウスにおけるＩＬ−１７様過剰発現トランスジーンの発現を検出するノーザンブロットを示す（番号１、１６、２７、２９、５５、６１、２０、５２および６６）。対照マウス（番号２、１７、５３および５５）は非トランスジェニック同腹子である。「ｂ１」で示されるレーンはブランクレーンである。陽性対照（＋）はＩＬ−１７様ｃＤＮＡであった。０．５４ｋｂのバンドの存在はトランスジーン（導入遺伝子）の発現を示す。
【００３４】
図８は、肝切除されたトランスジェニック創始マウスにおけるＩＬ−１７様過剰発現トランスジーンの発現を検出するノーザンブロットを示す（番号１０、１１、３０、３１、３３、３７、４６、６７および６８）。対照マウス（番号３２、３５、３６および４５）は非トランスジェニック同腹子である。「ＭＩ」で示されるレーンは、陽性対照としてローディングされたマイクロインジェクション断片を表す。０．５４ｋｂのバンドの存在はトランスジーンの発現を示す。
【００３５】
図９は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）または非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ）からのリンパ節（Ａ〜Ｈ）または骨髄（Ｉ、Ｊ）の、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ａ、Ｂ、Ｇ−Ｊ）、Ｂ２２０（Ｃ、Ｄ）ならびにＦ４／８０（Ｅ、Ｆ）で染色された切片を示す。パネルＡ〜Ｆは、多数のＢ２２０陽性Ｂリンパ球細胞（パネルＤ）およびいくつかのＦ４／８０染色マクロファージを含有する顕著な細胞浸潤（パネルＢにおけるアステリスク）により、ＩＬ−１７様トランスジェニックリンパ節が顕著に肥大して、その正常な構造が破壊されたことを示している。パネルＨは、この細胞浸潤物が多数の好酸球（矢頭）および多核浸潤巨細胞（矢印）を含有していたことを示している。
【００３６】
図１０は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｊ）または非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ）からのリンパ骨髄（Ａ、Ｂ）、脾臓（Ｃ〜Ｆ）および腎臓（Ｇ〜Ｊ）の、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ａ、Ｂ；Ｅ〜Ｉ）ならびにＢ２２０（Ｃ、Ｄ）で染色された切片を示す。パネルＡは、顕著な好酸性骨髄様過形成を示す。パネルＤは、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス脾臓におけるＢ２２０陽性Ｂ細胞（矢印）が優勢なリンパ様過形成を示し、パネルＦは、非トランスジェニック赤色脾臓（Ｅ）と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニック赤色脾臓における好酸性骨髄様過形成を示す。パネルＨおよびＪは、腎盂における顕著な好酸性炎症性浸潤（腎盂腎炎、パネルＪ）を伴う腎盂拡張（Ｈにおける矢印）を示す。
【００３７】
図１１は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の９匹中４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける末梢血中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の有意な増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００３８】
図１２は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の１０匹中５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける脾臓中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００３９】
図１３は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の僅かな減少を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００４０】
図１４は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の９匹中４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける末梢血中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００４１】
図１５は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける脾臓中のＣＤ４＋　Ｔリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００４２】
図１６は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスとその非トランスジェニック同腹子対照とに生じた変化を表す散布図（散布プロット）を示す。「Ａ」と表示された一番上の２つのプロットは二色フローサイトメトリードットプロットであり、ここで、ＣＤ４５Ｒ＋およびＩＬ−１７様−Ｆｃ標識がそれぞれの軸上に示されている。対照プロット「Ａ」は、領域Ｒ１におけるＣＤ４５Ｒ＋／ＩＬ−１７様−Ｆｃ＋　細胞の不存在を示し、一方、トランスジェニックプロット「Ａ」においては、この集団は領域Ｒ１に存在し、全顆粒球集団の８％に相当した。対応する前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図（「Ｂ」および「Ｃ」）においては、これらの細胞は桃色のドットとして示されている。この集団は対照プロット「Ｂ」には存在しなかった。
【００４３】
図１７は、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスとその非トランスジェニック同腹子対照とに生じた変化を表す散布図を示す。「Ａ」と表示された一番上の２つのプロットは二色フローサイトメトリードットプロットであり、ここで、ＣＤ４およびＩＬ−１７様−Ｆｃ標識がそれぞれの軸上に示されている。対照プロット「Ａ」は、領域Ｒ１におけるＣＤ４＋／ＩＬ−１７様−Ｆｃ＋　細胞の不存在を示し、一方、トランスジェニックプロット「Ａ」においては、この集団は領域Ｒ１に存在し、全顆粒球集団の１４％に相当した。対応する前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図（サイズ対顆粒度）、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ）においては、これらの細胞は、顆粒球が典型的に見出される領域（赤色のドット）の直上に位置する。これらの細胞は対照プロット「Ｂ」には存在しない。さらに、トランスジェニックマウス（Ａ）では、前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図「Ｂ」における顆粒球（緑色のドット）の左側に位置する、ＣＤ４＋でもＩＬ−１７様−Ｆｃ＋（領域Ｒ２）でもなかったが好酸球の散布特性を有する細胞の集団の出現が認められる。この集団は対照プロット「Ｂ」には存在しなかった。
【００４４】
図１８は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の１０匹中５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のｒｈＩＬ−１７様−Ｆｃ＋／ＣＤ４５Ｒ＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００４５】
図１９は、非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のｒｈＩＬ−１７様−Ｆｃ＋／ＣＤ４＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【００４６】
図２０は、典型的な前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図（サイズ対顆粒度）の一例を示す。ゲートにおける細胞は選別されて、精製された集団を与えうる。
【００４７】
図２１Ａ〜２１Ｂは、示されたリンパ様組織由来の細胞上のＣＤ５、ＣＤ３４およびＣＤ４発現の非トランスジェニック対照およびＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスのＦＡＣＳプロフィールを示す。示されているパーセントは二重陽性集団に関するものである。ＣＤ５＋ＣＤ１９＋、ＣＤ３４＋ＣＤ１９＋およびＣＤ４＋好酸球集団に関する細胞の絶対数は、集団の割合（％）（リンパ球の場合）および細胞（好酸球）の絶対数として表されている。
【００４８】
（発明の詳細な記載）
本明細書中に用いる小節の題名は、系統化のみを目的としたものであり、記載されている内容を限定するものではないと解釈されるべきである。本出願において引用されているすべての参考文献を、参照により明示的に本明細書に組み入れることとする。
【００４９】
定義
「ＩＬ−１７様遺伝子」または「ＩＬ−１７様核酸分子」または「ポリヌクレオチド」なる語は、配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および本明細書中に定められている核酸分子を含む又はそれらよりなる核酸分子を意味する。
【００５０】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび関連ポリペプチドを意味する。関連ポリペプチドには、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体およびＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体が含まれる。ＩＬ−１７様ポリペプチドは、本明細書中に定義されている成熟ポリペプチドであることが可能であり、それが製造される方法に応じてアミノ末端メチオニン残基を有していても有していなくてもよい。
【００５１】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体」なる語は、生物または生物集団の染色体上の与えられた遺伝子座を占める遺伝子の、いくつかの可能な天然に存在する代替形態の１つを意味する。
【００５２】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体」なる語は、化学的に修飾された、本明細書中に定義されている配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体またはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体を意味する。
【００５３】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド断片」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドアミノ酸配列と比較して１以上のアミノ酸の付加または置換または内部欠失（ここで、生じたポリペプチドは少なくとも６アミノ酸長以上である）を有する、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体および／またはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体のアミノ末端における短小化（リーダー配列を伴う又は伴わない）および／またはカルボキシ末端における短小化を含むポリペプチドを意味する。ＩＬ−１７様ポリペプチド断片は、選択的ＲＮＡスプライシングから又はインビボプロテアーゼ活性から生じうる。好ましい実施形態においては、短小化は、約１０アミノ酸、または約２０アミノ酸、または約５０アミノ酸、または約７５アミノ酸、または約１００アミノ酸、または約１００アミノ酸以上である。そのようにして生じたポリペプチド断片は、連続した約２５アミノ酸、または約５０アミノ酸、または約７５アミノ酸、または約１００アミノ酸、または約１５０アミノ酸、または約２００アミノ酸を含むであろう。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチド断片は、所望により、アミノ末端メチオニン残基を含みうる。そのような断片は例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドに対する抗体を産生させるために使用されうると理解されるであろう。
【００５４】
「ＩＬ−１７様融合ポリペプチド」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチド、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログ、ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体またはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体のうち配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１以上のアミノ酸の欠失、置換または内部付加を有するポリペプチドのアミノまたはカルボキシ末端における１以上のアミノ酸（例えば、異種ペプチドまたはポリペプチド）の融合体を意味する。
【００５５】
「ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログ」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列に対応する別の種に由来するポリペプチドを意味する。例えば、マウスＩＬ−１７様ポリペプチドとヒトＩＬ−１７様ポリペプチドとは、お互いのオルソログであるとみなされる。
【００５６】
「ＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドアミノ酸配列のＲＮＡ転写産物のイントロン配列の選択的スプライシングにより生じる核酸分子、通常はＲＮＡを意味する。
【００５７】
「ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体」なる語は、（リーダー配列を伴うまたは伴わない）配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して１以上のアミノ酸配列の置換、欠失（例えば、内部欠失および／またはＩＬ−１７様ポリペプチド断片）および／または付加（例えば、内部付加および／またはＩＬ−１７様融合ポリペプチド）を有するアミノ酸配列を含むＩＬ−１７様ポリペプチドを意味する。変異体は天然で生じたり（例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチド対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログおよびＩＬ−１７様ポリペプチドスプライス変異体）、あるいは人工的に構築されうる。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のＤＮＡ配列から相応に変化したＤＮＡ配列を有する対応核酸分子から製造することができる。好ましい実施形態においては、該変異体は、１〜３、または１〜５、または１〜１０、または１〜１５、または１〜２０、または１〜２５、または１〜５０、または１〜７５、または１〜１００、または１００アミノ酸以上の置換、挿入、付加および／または欠失を有し、ここで、該置換は、同類置換または非同類置換またはそれら任意の組合せでありうる。
【００５８】
「抗原」なる語は、抗体のような選択的結合剤により結合されうる及び更には各抗原のエピトープに結合可能な抗体の産生のために動物において使用されうる分子または分子の一部を意味する。抗原は１以上のエピトープを有しうる。
【００５９】
「生物学的に活性なＩＬ−１７様ポリペプチド」なる語は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特徴的な少なくとも１つの活性を有するＩＬ−１７様ポリペプチドを意味する。
【００６０】
「有効（な）量」および「治療的に有効な量」なる語はそれぞれ、観察可能なレベルの本明細書に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性の１以上を維持するために使用するＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様核酸分子の量を意味する。
【００６１】
「発現ベクター」なる語は、異種核酸配列の発現を指令および／または制御する核酸配列を含有する、宿主細胞内での使用に適したベクターを意味する。発現は、転写、翻訳、およびイントロンが存在する場合にはＲＮＡスプライシングのような過程を含むが、それらに限定されるものではない。
【００６２】
「宿主細胞」なる語は、核酸配列で形質転換された又は核酸配列で形質転換され次いで関心のある選択遺伝子を発現しうる細胞を意味するものとして用いられている。この用語は親細胞の後代を含み、この場合、該選択遺伝子が存在する限り、該後代が形態学または遺伝的構成において元の親と同一であるか否かには無関係である。
【００６３】
当技術分野において公知のとおり、「同一性」なる語は、２以上のポリペプチド分子または２以上の核酸分子の配列の間の、それらの配列の比較により判定される関係を意味する。当技術分野においては、「同一性」は、場合によっては、一連の２以上のヌクレオチドまたは２以上のアミノ酸配列の間のマッチにより判定される核酸分子またはポリペプチド間の配列の関連性の度合をも意味する。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により検討される（必要に応じて）ギャップアライメントを伴う２以上の配列の小さい方の同一マッチの割合（％）を示す。
【００６４】
「類似性」なる語は、関連した概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一マッチと同類置換マッチとの両方を含む類似性の尺度を意味する。２つのポリペプチド配列が、例えば、１０／２０の同一アミノ酸を有し、残りは全て非同類置換である場合には、同一性および類似性は共に５０％となろう。同じ例において、さらに５つの位置に同類置換が存在する場合には、同一性は５０％のままであるが、類似性は７５％となろう（１５／２０）。したがって、同類置換が存在する場合には、２つのポリペプチド間の類似性の度合（％）はそれらの２つのポリペプチド間の同一性（％）より高くなる。
【００６５】
「単離された核酸分子」なる語は、（１）全ＤＮＡが起源細胞から単離される場合にそれが天然で一緒に見出されるタンパク質、脂質、炭水化物または他の物質の少なくとも約５０％から分離された、（２）「単離された核酸分子」が天然で結合しているポリヌクレオチドの全部または一部に結合していない、（３）それが天然では結合していないポリヌクレオチドに作動的に結合した、または（４）大きなポリヌクレオチド配列の一部として天然では見出されない本発明の核酸分子を意味する。好ましくは、本発明の単離された核酸分子は、いずれの他の混入核酸分子をも実質的に含有せず、あるいは、ポリペプチドの製造におけるその使用または治療、診断、予防または研究におけるその使用を妨げるその天然環境中で見出される他の混入物を実質的に含有しない。
【００６６】
「単離されたポリペプチド」なる語は、（１）全ＤＮＡが起源細胞から単離される場合にそれが天然で一緒に見出されるポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の物質の少なくとも約５０％から分離された、（２）「単離されたポリペプチド」が天然で結合しているポリペプチドの全部または一部に（共有的または非共有的相互作用により）結合していない、（３）それが天然では結合していないポリペプチドに作動的に（共有的または非共有的相互作用により）結合した、または（４）天然では見出されない本発明のポリペプチドを意味する。好ましくは、単離されたポリペプチドは、いずれの他の混入ポリペプチドをも実質的に含有せず、あるいは治療、診断、予防または研究におけるその使用を妨げるその天然環境中で見出される他の混入物を実質的に含有しない。
【００６７】
「成熟ＩＬ−１７様ポリペプチド」なる語は、リーダー配列を欠くＩＬ−１７様ポリペプチドを意味する。成熟ＩＬ−１７様ポリペプチドはまた、他の修飾、例えば、アミノ末端（リーダー配列を伴う又は伴わない）および／またはカルボキシ末端のタンパク質分解性プロセシング、より大きな前駆体からの、より小さなポリペプチドの切断、Ｎ−結合型および／またはＯ−結合型グリコシル化などを含みうる。典型的な成熟ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドは配列番号２のアミノ酸配列内に見出されうる。典型的な成熟マウスＩＬ−１７様ポリペプチドは配列番号４および配列番号１０のアミノ酸配列内に見出される。「核酸配列」または「核酸分子」なる語は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列を意味する。これらの用語は、以下のような（それらに限定されるものではない）ＤＮＡおよびＲＮＡの公知塩基類似体のいずれかから形成される分子を含む：４−アセチルシトシン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニル−シトシン、プソイドイソシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシ−メチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソ−ペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチル−グアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノ−メチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボニル−メチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、オキシブトキソシン、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシンおよび２，６−ジアミノプリン。
【００６８】
核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞などのような生物学的物質に関して用いられている場合の「天然に生じる（天然に存在する）」または「天然」なる語は、天然で見出され人間により操作されていない物質を指す。同様に、本発明で用いる「非天然に生じる（非天然に存在する）」または「非天然」は、天然では見出されない又は人間により構造的に修飾または合成された物質を指す。
【００６９】
「作動的に結合（した）」なる語は、本発明においては、配列を隣接させる方法を指すものとして用いられ、ここで、そのように記載されている隣接（フランキング）配列は、その通常の機能を発揮するよう配置され又は集合している。したがって、コード配列に作動的に結合したフランキング配列は、該コード配列の複製、転写および／または翻訳を引き起こしうる。例えば、コード配列がプロモーターに作動的に結合しているのは、該プロモーターがそのコード配列の転写を指令しうる場合である。フランキング配列は、それが正しく機能する限り、該コード配列と接触している必要はない。したがって、例えば、介在する翻訳されないが転写される配列がプロモーター配列と該コード配列との間に存在することが可能であり、該プロモーター配列は尚も該コード配列に「作動的に結合」しているとみなされうる。
【００７０】
本発明で用いる「医薬上許容される担体」または「生理的に許容される担体」なる語は、医薬組成物としての該ＩＬ−１７様ポリペプチド、ＩＬ−１７様核酸分子またはＩＬ−１７様選択的結合剤の運搬を達成または増強するのに適した１以上の製剤化物質を意味する。
【００７１】
「選択的結合剤」なる語は、ＩＬ−１７様ポリペプチドに対する特異性を有する分子を意味する。ここで用いる「特異的」および「特異性」なる語は、該選択的結合剤がヒトＩＬ−１７様ポリペプチドには結合しうるがヒト非ＩＬ−１７様ポリペプチドには結合し得ないことを指す。しかし、該選択的結合剤は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドのオルソログ（すなわち、マウスおよびラットポリペプチドのようなその種間形態）にも結合しうると理解されるであろう。
【００７２】
「形質導入」なる語は、通常はファージによる、１つの細菌からもう１つの細菌への遺伝子の導入を意味するものとして用いられる。「形質導入」は、レトロウイルスによる真核細胞配列の獲得および導入をも意味する。
【００７３】
「トランスフェクション」なる語は、細胞による外来性または外因性ＤＮＡの取り込みを意味するものとして用いられ、細胞が「トランスフェクト」されているのは、該外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入されている場合である。多数のトランスフェクション技術が当技術分野でよく知られており、本明細書に開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６（１９７３）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，（１９８９）；Ｄａｖｉｓら，Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，（１９８６）；およびＣｈｕら，Ｇｅｎｅ，１３：１９７（１９８１）を参照されたい。そのような技術は、１以上の外因性ＤＮＡ部分を適切な宿主細胞内に導入するために用いることができる。
【００７４】
本発明で用いる「形質転換」なる語は、細胞の遺伝的特性の変化を意味し、細胞が形質転換されているのは、それが新たなＤＮＡを含有するように修飾されている場合である。例えば、細胞は、それがその天然状態から遺伝的に修飾されている場合に形質転換されている。トランスフェクションまたは形質導入の後、該形質転換ＤＮＡは、該細胞の染色体内に物理的に組込まれることにより該細胞のＤＮＡとの組換えを引き起こしたり、あるいは複製されることなくエピソーム要素として一過性に維持されたり、あるいは独立してプラスミドとして複製されうる。細胞は、該細胞の分裂と共にＤＮＡが複製される場合に、安定に形質転換されているとみなされる。
【００７５】
「ベクター」なる語は、コード情報を宿主細胞内に導入するために用いられる任意の分子（例えば、核酸、プラスミドまたはウイルス）を意味するものとして用いられる。
【００７６】
核酸分子および／またはポリペプチドの関連性
関連核酸分子は、配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載の核酸分子の対立遺伝子またはスプライス変異体を含み、前記ヌクレオチド配列のいずれかに相補的な配列を含むと理解される。関連核酸分子はまた、配列番号２、配列番号４または配列番号１０におけるポリペプチドと比較して１以上のアミノ酸残基の置換、修飾、付加および／または欠失を含む又はそれらより実質的になるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００７７】
断片は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０のポリペプチドの少なくとも約２５アミノ酸残基、または約５０、または約７５、または約１００、または約１００以上のアミノ酸残基のポリペプチドをコードする分子を含む。
【００７８】
また、関連ＩＬ−１７様核酸分子は、配列番号１、配列番号３または配列番号９の核酸分子の、またはポリペプチド（該ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む）をコードする分子の、または本明細書に記載の核酸断片の、または本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸断片の完全に相補的な配列に対して、本明細書に記載の中等度または高度ストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む分子を含む。ハイブリダイゼーションプローブは、ｃＤＮＡ、ゲノムまたは合成ＤＮＡライブラリーを関連配列に関してスクリーニングするために本発明で提供されるＩＬ−１７様配列を使用して調製することができる。公知配列に対する有意な同一性を示すＩＬ−１７様ポリペプチドのＤＮＡおよび／またはアミノ酸配列の領域は、本明細書に記載の配列アライメントアルゴリズムを使用して容易に決定され、それらの領域は、スクリーニング用のプローブを設計するために使用されうる。
【００７９】
「高度ストリンジェント条件」なる語は、高度に相補的な配列を有するＤＮＡ鎖のハイブリダイゼーションを許容するよう、および有意にミスマッチしたＤＮＡのハイブリダイゼーションを排除するよう設計された条件を意味する。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、主として、温度、イオン強度および変性剤（例えば、ホルムアミド）の濃度により決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための「高度ストリンジェント条件」の具体例としては、６５〜６８℃での０．００１５Ｍ　塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、または４２℃での０．０１５Ｍ　塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウムおよび５０％　ホルムアミドが挙げられる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ　＆　Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｙｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、およびＡｎｄｅｒｓｏｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ａ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｈ．４，ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９９）を参照されたい。
【００８０】
よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、より高いホルムアミドまたは他の変性剤）を用いることも可能であるが、ハイブリダイゼーションの速度が損なわれるであろう。非特異的および／またはバックグラウンドハイブリダイゼーションの目的に、該ハイブリダイゼーションおよび洗浄バッファー中に他の物質を含有させることが可能である。具体例としては、０．１％　ウシ血清アルブミン、０．１％　ポリビニル−ピロリドン、０．１％　ピロリン酸ナトリウム、０．１％　ドデシル硫酸ナトリウム（ＮａＤｏｄＳＯ４またはＳＤＳ）、フィコール、デンハルト液、音波処理されたサケ精子ＤＮＡ（またはもう１つの非相補的ＤＮＡ）およびデキストラン硫酸が挙げられるが、他の適切な物質も使用することができる。これらの添加物の濃度および種類は、該ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーを実質的に損なうことなく変更されうる。ハイブリダイゼーション実験は、通常は、ｐＨ６．８〜７．４で行われるが、典型的なイオン強度条件では、ハイブリダイゼーションの速度はｐＨにはほとんど無関係である。Ａｎｄｅｒｓｏｎら，前掲を参照されたい。
【００８１】
ＤＮＡ二重らせんの安定性に影響を及ぼす要因には、塩基の組成、長さ、塩基対ミスマッチの度合が含まれる。ハイブリダイゼーション条件は、これらの変数を調整するために及び種々の配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成しうるよう、当業者により調節されうる。完全にマッチしたＤＮＡ二重らせんの融解温度は、以下の式：
Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−６００／Ｎ−０．７２（％ホルムアミド）
［式中、Ｎは、形成した二重らせんの長さであり、［Ｎａ＋］は、該ハイブリダイゼーションまたは洗浄溶液中のナトリウムイオンのモル濃度であり、％Ｇ＋Ｃは、該ハイブリッド中の（グアニン＋シトシン）塩基の割合（％）である］により推定することができる。不完全にマッチしたハイブリッドに関しては、該融解温度は、それぞれの１％ミスマッチについて約１℃減少する。
【００８２】
「中等度ストリンジェント条件」なる語は、「高度ストリンジェント条件」下で生じるものより大きな度合の塩基対ミスマッチを有するＤＮＡ二重らせんが形成しうる条件を意味する。典型的な「中等度ストリンジェント条件」の具体例としては、５０〜６５℃での０．０１５Ｍ　塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウム、または３７〜５０℃での０．０１５Ｍ　塩化ナトリウム、０．００１５Ｍ　クエン酸ナトリウムおよび２０％　ホルムアミドが挙げられる。例えば、０．０１５Ｍ　ナトリウムイオン中で５０℃の「中等度ストリンジェント」な条件は約２１％のミスマッチを可能にするであろう。
【００８３】
「高度」ストリンジェント条件と「中等度」ストリンジェント条件との間に絶対的な相違は無いと当業者に理解されるであろう。例えば、０．０１５Ｍ　ナトリウムイオン（ホルムアミドは無し）では、完全にマッチした長いＤＮＡの融解温度は約７１℃である。６５℃で（同じイオン強度で）の洗浄では、これは、約６％のミスマッチを可能にするであろう。より遠縁の配列を捕捉するためには、当業者は、単に該温度を低下させたり、あるいは該イオン強度を上昇させることが可能である。
【００８４】
約２０ｎｔまでのオリゴヌクレオチドプローブに関する１Ｍ　ＮａＣｌ＊中での融解温度の良好な推定は、
Ｔｍ＝Ａ−Ｔ塩基対１個当たり２℃＋Ｇ−Ｃ塩基対１個当たり４℃
により与えられる（＊　６×クエン酸ナトリウム塩（ＳＳＣ）中のナトリウムイオン濃度は１Ｍである）。Ｓｕｇｇｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｕｓｉｎｇ　Ｐｕｒｉｆｉｅｄ　Ｇｅｎｅｓ，ｐ．６８３，ＢｒｏｗｎおよびＦｏｘ（編）（１９８１）を参照されたい。
【００８５】
オリゴヌクレオチドに関する高いストリンジェンシーの洗浄条件は、通常は、６×ＳＳＣ、０．１％　ＳＤＳ中の該オリゴヌクレオチドのＴｍより０〜５℃低い温度におけるものである。
【００８６】
もう１つの実施形態においては、関連核酸分子は、配列番号１、配列番号３または配列番号９に示すヌクレオチド配列に対して約７０％同一であるヌクレオチド配列を含む又はそれよりなるか、あるいは配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドに対して約７０％同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むか又は実質的にそれよりなる。好ましい実施形態においては、該ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載のヌクレオチド配列に対して約７５％、または約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９５、９６、９７、９８または９９％同一であるか、あるいは該ヌクレオチド配列は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチド配列に対して約７５％、または約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９５、９６、９７、９８または９９％同一であるポリペプチドをコードしている。
【００８７】
該核酸配列における相違は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列の同類的および／または非同類的修飾をもたらしうる。
【００８８】
配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列に対する同類的修飾（および該コード化ヌクレオチドに対する対応修飾）は、天然に存在するＩＬ−１７様ポリペプチドに類似した機能的および化学的特性を有するＩＬ−１７様ポリペプチドを与えるであろう。一方、ＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的および／または化学的特性における実質的な修飾は、（ａ）置換領域における分子バックボーンの構造（例えば、シートまたはらせんコンホメーションとしての構造）、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩高さを維持することに対するその効果の点で有意に異なる配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列における置換を選択することにより達成することができる。
【００８９】
例えば、「同類アミノ酸置換」は、置換位置のアミノ酸残基の極性または電荷に対する影響がほとんど又は全く存在しないよう天然アミノ酸残基を非天然残基で置換することを含みうる。さらに、「アラニン・スキャンニング突然変異誘発」に関して既に記載されているとおり、該ポリペプチド中の任意の天然残基はアラニンでも置換されうる。
【００９０】
同類アミノ酸置換はまた、典型的には生物学的系における合成によってではなく化学的ペプチド合成により取り込まれる非天然に存在するアミノ酸残基を含む。これらは、ペプチド模擬体および他の逆転または反転形態のアミノ酸部分を含む。
【００９１】
天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づき、以下のグループに分類される：
１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００９２】
例えば、非同類置換は、これらの１つのクラスのメンバーを別のクラスのものと交換することを含みうる。そのような置換残基は、非ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドオルソログと相同なヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの領域中、または該分子の非相同領域中に導入することができる。
【００９３】
そのような変化を施す際には、アミノ酸のヒドロパシー指数が考慮されうる。各アミノ酸には、その疎水性および電荷特性に基づき、ヒドロパシー指数が割り当てられている。それらは以下のとおりである：イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、トレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、リシン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）。
【００９４】
タンパク質に対する相互作用性生物学的機能の付与におけるヒドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当技術分野において理解されている（Ｋｙｔｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２））。あるアミノ酸は、同様のヒドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸で置換され、同様の生物活性を尚も保有しうることが公知である。該ヒドロパシー指数に基づき変化を施す際には、±２以内のヒドロパシー指数を有するアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものがより一層好ましい。
【００９５】
また、類似したアミノ酸の置換は、親水性に基づいても有効に行いうることが、当技術分野において理解されており、それにより生成した生物学的に機能等価なタンパク質またはペプチドが、本発明の場合のように免疫学的実施形態における使用を意図される場合には特にそうである。タンパク質の最大局所平均親水性は、その隣接アミノ酸の親水性により支配される場合には、その免疫原性および抗原性、すなわち、該タンパク質の生物学的特性と相関する。
【００９６】
以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リシン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、トレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）およびトリプトファン（−３．４）。同様の親水性値に基づいて変化を施す際には、±２以内の親水性値を有するアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものがより一層好ましい。また、親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを同定することが可能である。これらの領域は「エピトープコア領域」とも称される。
【００９７】
望ましいアミノ酸置換は（同類的であるか非同類的であるかにかかわらず）、そのような置換が望まれる時点で当業者により決定されうる。例えば、アミノ酸置換を用いて、ＩＬ−１７様ポリペプチドの重要な残基を同定したり、あるいは本明細書に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドのアフィニティーを増加または減少させることが可能である。
【００９８】
典型的なアミノ酸置換を表Ｉに記載する。
【００９９】
【表１】
2004504064.tif 000002
【０１００】
当業者は、よく知られた技術を用いて、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のポリペプチドの適切な変異体を決定しうるであろう。活性を損なうことなく改変されうる該分子の適切な領域を同定するためには、当業者は、活性に重要であるとは考えられない領域を標的化することができる。例えば、同じ種または他の種に由来する類似活性を有する類似ポリペプチドが公知である場合には、当業者は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をそのような類似ポリペプチドと比較することができる。そのような比較により、類似ポリペプチド間で保存されている該分子の残基および部分を同定することができる。そのような類似ポリペプチドに対して保存されていないＩＬ−１７様ポリペプチドの領域内の改変は、該ＩＬ−１７様ポリペプチドの生物活性および／または構造に悪影響を及ぼす可能性が低いと理解されるであろう。また、比較的保存された領域においても、活性を保有させたままで、天然に存在する残基を化学的に類似したアミノ酸で置換しうること（同類アミノ酸残基置換）が、当業者に公知であろう。したがって、生物活性または構造に重要でありうる領域でさえも、生物活性を損なうことなく又はポリペプチドの構造に悪影響を及ぼすことなく、同類アミノ酸置換に付されうる。
【０１０１】
また、当業者は、活性または構造に重要な類似ポリペプチド中の残基を同定する構造−機能研究を再検討することができる。そのような比較を考慮して、類似ポリペプチド中の活性または構造に重要なアミノ酸残基に対応するＩＬ−１７様ポリペプチド中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのそのような予測された重要なアミノ酸残基に対する、化学的に類似したアミノ酸の置換を選択することができる。
【０１０２】
また、当業者は、類似ポリペプチドにおけるその構造に関して三次元構造およびアミノ酸配列を分析することができる。そのような情報を考慮して、当業者は、三次元構造に関するＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸残基のアライメントを予測することができる。当業者は、該タンパク質の表面上に存在すると予測されるアミノ酸残基に根本的な変化をもたらさないように選択することができる。なぜなら、そのような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与している可能性があるからである。さらに、当業者は、望ましい各アミノ酸残基において単一のアミノ酸置換を含有する試験変異体を製造することができる。ついで、当業者に公知の活性アッセイを用いて、該変異体をスクリーニングすることができる。そのような変異体は、適切な変異体に関する情報を集めるために使用することが可能であろう。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化が、損なわれた活性、望ましくない活性減少または不適切な活性を引き起こすことが見出されたら、そのような変化を有する変異体は避けられるであろう。すなわち、そのような常套的実験から集めた情報に基づいて、当業者は、更なる単独の置換または他の変異と組合された置換を避けるべきアミノ酸を容易に決定することができる。
【０１０３】
多数の科学的刊行物が二次構造の予測について検討している。Ｍｏｕｌｔ　Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９６）；Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ　Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６、およびＣｈｏｕら，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ，２６：３６７−３８４（１９７９）を参照されたい。さらに、現在では、二次構造の予測を補助するために、コンピュータープログラムを利用することができる。二次構造を予測する１つの方法は相同性モデリングに基づく。例えば、３０％を超える配列同一性または４０％を超える類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、類似した構造トポロジーを有することが多い。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の最近の増大は、ポリペプチドまたはタンパク質の構造内のフォールドの潜在数を含む二次構造の予測可能性の増強をもたらしている。Ｈｏｌｍら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：２４４−２４７（１９９９）を参照されたい。与えられたポリペプチドまたはタンパク質中には一定数のフォールドが存在すること、および構造体の臨界数が一旦解析されれば、構造予測の精度が劇的に増加することが示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７））。
【０１０４】
二次構造を予測する追加的な方法には、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１９９７）；Ｓｉｐｐｌら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４（１）：１５−１９（１９９６））、「プロフィール解析」（Ｂｏｗｉｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４−１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８３：１４６−１５９（１９９９）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４（１３）：４３５５−４３５８（１９８７））、および「進化的連関（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｌｉｋａｇｅ）」（Ｈｏｌｍ，前掲（１９９９）およびＢｒｅｎｎｅｒ，前掲（１９９７）を参照されたい）が含まれる。
【０１０５】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチド類似体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列を関連ファミリーメンバーと比較することにより決定することができる。典型的なＩＬ−１７様ポリペプチド関連ファミリーメンバーとしては、ヒトＩＬ−１７（配列番号５）、ヒトＩＬ−２０（配列番号６）、ヒトＩＬ−１７Ｂ（配列番号７）およびヒトＩＬ−１７Ｃ（配列番号８）が挙げられる。この比較は、Ｐｉｌｅｕｐアライメント（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　ＧＣＧ　Ｐｒｏｇｒａｍ　Ｐａｃｋａｇｅ）、または保存または非保存領域内での複数のファミリーメンバーとの同等の（重複）比較を用いることにより達成することができる。
【０１０６】
図５に示すとおり、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの予想アミノ酸配列（それは配列番号２のアミノ酸３７〜１６０に相当する）は公知ヒトＩＬ−１７Ｂ（配列番号７）とアラインされる。当業者に公知のこれらの及び他の方法を用いて、他のＩＬ−１７様ポリペプチド類似体を決定することができる。これらの重複配列は、追加的なＩＬ−１７様類似体を与える同類および非同類アミノ酸置換のための指針を提供する。これらのアミノ酸置換は、天然に生じる又は非天然に生じるアミノ酸よりなりうると理解されるであろう。例えば、図５に示すとおり、関連ファミリーメンバーとのアライメントは、潜在的なＩＬ−１７様類似体においては、配列番号２の６７位（図５の１０１位）のＡｓｎ残基がＧｌｎ残基で置換され、配列番号２の６９位（図５の１０３位）のＡｒｇ残基がＬｙｓ、ＧｌｎまたはＡｓｎ残基で置換され、および／または配列番号２の９４位（図５の１２８位）のＣｙｓ残基がＳｅｒまたはＡｌａ残基で置換されうることを示している。さらに、潜在的なＩＬ−１７様類似体においては、配列番号２の９６位（図５の１３０位）のＣｙｓがＡｌａまたはＳｅｒ残基で置換され、配列番号２の１０１位（図５の１３２位）のＶａｌ残基がＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ａｌａまたはノルロイシン残基で置換され、配列番号２の１０４位（図５の１３８位）のＴｈｒ残基がＳｅｒ残基で置換され、配列番号２の１２９位（図５の１６３位）のＣｙｓ残基がＳｅｒまたはＡｌａ残基で置換され、および／または配列番号２の１４０位（図５の１７４位）のＣｙｓ残基がＳｅｒまたはＡｌａ残基で置換されうる。
【０１０７】
好ましいＩＬ−１７様ポリペプチド変異体には、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と比較してグリコシル化部位の数および／またはタイプが改変されたグリコシル化変異体が含まれる。１つの実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列より多数の又はより少数のＮ結合型グリコシル化部位を含む。Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ（ここで、Ｘで表されるアミノ酸残基は、プロリン以外の任意のアミノ酸残基でありうる）により特徴づけられる。この配列を得るためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合型炭水化物鎖の付加のための潜在的な新たな部位を与える。あるいは、この配列を除去する置換は、既存のＮ結合型炭水化物鎖を除去するであろう。また、１以上のＮ結合型グリコシル化部位（典型的には、天然に存在するもの）が除去され、１以上の新たなＮ結合型部位が生じる、Ｎ結合型炭水化物鎖の再構成がもたらされる。更なる好ましいＩＬ−１７様変異体には、配列番号２、配列番号４または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と比較して１以上のシステイン残基が欠失した又は別のアミノ酸（例えば、セリン）で置換されたシステイン変異体が含まれる。システイン変異体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドが生物学的に活性なコンホメーションにリフォールディングされなければならない場合（例えば、不溶性封入体の単離の後）に有用である。システイン変異体は、一般には、該天然タンパク質より少数のシステイン残基を有し、典型的には、不対システインから生じる相互作用を最小限に抑えるために偶数のシステイン残基を有する。
【０１０８】
また、配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体を、相同ポリペプチドに融合させてホモ二量体を形成させたり、異種ポリペプチドに融合させてヘテロ二量体を形成させることができる。異種ペプチドおよびポリペプチドは、ＩＬ−１７様融合ポリペプチドの検出および／または単離を可能にするエピトープ；膜貫通受容体タンパク質またはその一部、例えば、細胞外ドメイン、または膜貫通および細胞内ドメイン；膜貫通受容体タンパク質に結合するリガンドまたはその一部；触媒的に活性な酵素またはその一部；オリゴマー化を促進するポリペプチドまたはペプチド、例えば、ロイシンジッパードメイン；安定性を増加させるポリペプチドまたはペプチド、例えば、免疫グロブリン定常領域；および配列番号２、配列番号４もしくは配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体とは異なる治療活性を有するポリペプチドを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１０９】
融合は、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体のアミノ末端またはカルボキシ末端で行うことができる。融合は、リンカーまたはアダプター分子を伴わない直接的なもの、あるいはリンカーまたはアダプター分子を使用する間接的なものでありうる。リンカーまたはアダプター分子は、１以上のアミノ酸残基、典型的には約２０〜約５０アミノ酸残基でありうる。また、リンカーまたはアダプター分子は、該融合部分の分離を可能にするプロテアーゼに対する切断部位またはＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼに対する切断部位を有するように設計することができる。該融合ポリペプチドは、一旦構築されれば、本明細書に記載の方法に従い誘導体化されうると理解されるであろう。
【０１１０】
本発明のもう１つの実施形態においては、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体をヒトＩｇＧのＦｃ領域のドメインの１以上に融合させる。抗体は、２つの機能的に独立した部分、すなわち、抗原に結合する「Ｆａｂ」として公知の可変ドメインと、エフェクター機能、例えば補体活性化および食細胞による攻撃に関与する「Ｆｃ」として公知の定常ドメインとを含む。Ｆｃは、長い血清半減期を有し、一方、Ｆａｂは短寿命である（Ｃａｐｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３７：５２５−３１（１９８９））。Ｆｃドメインは、治療用タンパク質と共に構築される場合には、より長い半減期をもたらしたり、あるいはＦｃ受容体結合、プロテインＡ結合、補体結合および更には恐らくは経胎盤伝達のような機能を組込みうる（同誌）。
【０１１１】
表２に、当技術分野で公知の或るＦｃ融合体の用途を要約する。
【０１１２】
【表２】
2004504064.tif 000003
【０１１３】
１つの具体例においては、ヒトＩｇＧヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の全部または一部を、当業者に公知の方法を用いて、ＩＬ−１７様ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合させることができる。得られたＩＬ−１７様融合ポリペプチドは、プロテインＡアフィニティーカラムを使用して精製することができる。Ｆｃ領域に融合したペプチドまたはタンパク質は、未融合対応物より実質的に大きなインビボ半減期を示すことが判明している。また、Ｆｃ領域との融合は、該融合ポリペプチドの二量体化／多量体化を可能にする。該Ｆｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域であることが可能であり、あるいは治療的性質、循環時間、凝集の減少などのような或る性質を改善するために改変されうる。
【０１１４】
関連核酸分子およびポリペプチドの同一性および類似性は、公知方法により容易に計算することができる。そのような方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編，Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ　１，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｆｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編，Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ　Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９９１）；およびＣａｒｉｌｌｏら，ＳＩＡＭ　Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載の方法が含まれるが、それらに限定されるものではない。
【０１１５】
同一性および／または類似性を測定するための好ましい方法は、被検配列間で最大マッチを与えるように設計される。同一性および類似性を測定するための方法は、公に利用可能なコンピュータープログラムに記載されている。２つの配列間の同一性および類似性を測定するための好ましいコンピュータープログラム方法には、ＧＣＧプログラムパッケージ、例えばＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，１２：３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２１５：４０３−４１０（１９９０））が含まれるが、それらに限定されるものではない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の入手元（ＢＬＡＳＴ　Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら，ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ　Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ　２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，前掲（１９９０））から公に入手可能である。よく知られたＳｍｉｔｈ　Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも、同一性を測定するために使用することができる。
【０１１６】
２つのアミノ酸配列をアライン（整列）させるための或るアライメント法は、それらの２つの配列の短い領域のマッチしか与えないかもしれない。それらの２つの完全長配列間に、有意な関連性が存在しない場合であっても、この小さな整列領域は、非常に高い配列同一性を有しうる。したがって、好ましい実施形態においては、選択したアライメント法（ＧＡＰプログラム）は、該標的ポリペプチドの連続的な少なくとも５０アミノ酸に及ぶアライメントを与えるであろう。
【０１１７】
例えば、コンピューターアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、配列同一性（％）を測定したい２つのポリペプチドを、それらのそれぞれのアミノ酸の最適マッチング（該アルゴリズムにより測定される「マッチスパン（ｍａｔｃｈｅｄ　ｓｐａｎ）」）が得られるようにアラインさせる。ギャップ開始ペナルティ（これは３×平均ダイアゴナルである；「平均ダイアゴナル」は、使用される比較マトリックスのダイアゴナルの平均である；「ダイアゴナル」は、個々の比較マトリックスにより各完全アミノ酸マッチに割り当てられたスコアまたは数である）およびギャップ伸長ペナルティ（これは通常は該ギャップ開始ペナルティの１／１０倍である）、ならびに比較マトリックス、例えばＰＡＭ　２５０またはＢＬＯＳＵＭ　６２を、該アルゴリズムと共に使用する。標準比較マトリックス（ＰＡＭ　２５０比較マトリックスに関しては、Ｄａｙｈｏｆｆら，Ａｔｌａｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５（３）（１９７８）を、ＢＬＯＳＵＭ　６２比較マトリックスに関しては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ　ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）を参照されたい）も、該アルゴリズムにより使用される。
【０１１８】
ポリペプチド配列の比較のための好ましいパラメーターには、以下のものが含まれる：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−４５３（１９７０）；
比較マトリックス：Ｈｅｎｉｋｏｆｆら，前掲（１９９２）からのＢＬＯＳＵＮ　６２；
ギャップペナルティ：１２；
ギャップ長ペナルティ：４；
類似性の閾値：０。
【０１１９】
ＧＡＰプログラムは前記パラメーターで有用である。前記パラメーターは、ＧＡＰアルゴリズムを使用するポリペプチド比較（末端ギャップに関するペナルティを伴わない）のためのデフォルトパラメーターである。
【０１２０】
核酸分子配列の比較のための好ましいパラメーターには、以下のものが含まれる：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら，前掲（１９７０）；
比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０；
ギャップペナルティ：５０；
ギャップ長ペナルティ：３。
【０１２１】
ＧＡＰプログラムは前記パラメーターでも有用である。前記パラメーターは、核酸分子の比較のためのデフォルトパラメーターである。
【０１２２】
Ｐｒｏｇｒａｍ　Ｍａｎｕａｌ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　９（１９９７年９月）に記載されているものを含む他の典型的なアルゴリズム、ギャップ開始ペナルティ、ギャップ伸長ペナルティ、比較マトリックス、類似性の閾値などを使用することが可能である。行う個々の選択は当業者に明らかであり、行う具体的な比較（例えば、ＤＮＡとＤＮＡ、タンパク質とタンパク質、タンパク質とＤＮＡ）に左右され、また、該比較が、与えられた配列対の間でのものなのか（この場合には、ＧＡＰまたはＢｅｓｔＦｉｔが一般には好ましい）、あるいは１つの配列と大きな配列データベースとの間のものなのか（この場合には、ＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴＡが好ましい）に左右されるであろう。
【０１２３】
合成
本明細書に記載の核酸およびポリペプチド分子は組換え手段および他の手段により製造することができると当業者に理解されるであろう。
【０１２４】
核酸分子
該核酸分子は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、化学合成、ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリースクリーニング、発現ライブラリースクリーニングおよび／またはｃＤＮＡのＰＣＲ増幅を含む（これらに限定されるものではない）を含む種々の方法で容易に得ることができる。
【０１２５】
本発明で用いる組換えＤＮＡ法は、一般には、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）、および／またはＡｕｓｕｂｅｌら編，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｉｎｃ．ａｎｄ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）に記載されている方法である。本発明は、本明細書に記載の核酸分子、およびそのような分子の入手方法を提供する。
【０１２６】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子が１つの種から同定されている場合には、その遺伝子の全部または一部をプローブとして使用して、同じ種からの関連遺伝子またはオルソログを同定することができる。該プローブまたはプライマーを使用して、該ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現すると考えられる種々の組織に由来するｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることができる。また、配列番号１、配列番号３または配列番号９に記載の配列を有する核酸分子の一部または全部を使用して、ゲノムライブラリーをスクリーニングして、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子を同定し単離することができる。典型的には、スクリーニングには、該スクリーニングから得られる偽陽性の数を最小限に抑えるために、中等度または高度のストリンジェンシーの条件を使用する。
【０１２７】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、発現タンパク質の特性に基づく陽性クローンの検出を用いる発現クローニングにより同定することができる。典型的には、宿主細胞表面上で発現され提示されるクローン化タンパク質への抗体または他の結合相手（例えば、受容体またはリガンド）の結合により、核酸ライブラリーをスクリーニングする。所望のクローンを発現する細胞を同定するために、該抗体または結合相手を、検出可能な標識で修飾する。
【０１２８】
これらのポリヌクレオチドを製造し、該コード化ポリペプチドを発現させるためには、後記の説明に従い行う組換え発現技術に従うことができる。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列を適切なベクター内に挿入することにより、当業者は、大量の所望のヌクレオチド配列を容易に製造することができる。ついで該配列を使用して、検出プローブまたは増幅プライマーを得ることができる。別法として、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを発現ベクター内に挿入することができる。該発現ベクターを適切な宿主内に導入することにより、該コード化ＩＬ−１７様ポリペプチドを大量に製造することができる。
【０１２９】
適切な核酸配列を得るためのもう１つの方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。この方法では、逆転写酵素を使用して、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡまたは全ＲＮＡからｃＤＮＡを調製する。ついで２つのプライマー［これらは、典型的には、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ（オリゴヌクレオチド）の２つの別々の領域に相補的である］を、Ｔａｑポリメラーゼのようなポリメラーゼと共に該ｃＤＮＡに加える。該ポリメラーゼは、それらの２つのプライマーの間のｃＤＮＡ領域を増幅する。
【０１３０】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子を製造するもう１つの手段は、当業者によく知られた方法（例えば、Ｅｎｇｅｌｓら，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．ｅｄ．，２８：７１６−７３４（１９８９）に記載のもの）を用いる化学合成である。これらの方法には、とりわけ、核酸合成のためのホスホトリエステル、ホスホルアミダイトおよびＨ−ホスホナート法が含まれる。そのような化学合成のための好ましい方法は、標準的なホスホルアミダイト化学を用いる高分子担持合成である。典型的には、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡは数百ヌクレオチド長であろう。これらの方法を用いると、約１００ヌクレオチドより大きな核酸は幾つかの断片として合成されうる。ついで該断片を連結させて、ＩＬ−１７様ポリペプチドの完全長ヌクレオチド配列を形成させることができる。通常、該ポリペプチドのアミノ末端をコードするＤＮＡ断片は、メチオニン残基をコードするＡＴＧを有する。宿主細胞内で産生されたポリペプチドがその細胞から分泌されることを意図するか否かに応じて、このメチオニンは該ＩＬ−１７様ポリペプチドの成熟形態上に存在する又は存在しないことが可能である。当業者に公知の他の方法も用いることができる。
【０１３１】
ある実施形態においては、核酸変異体は、与えられた宿主細胞内でのＩＬ−１７様ポリペプチドの最適発現のために改変されたコドンを含有する。個々のコドンの改変は、発現のために選択したＩＬ−１７様ポリペプチドおよび宿主細胞に左右されるであろう。そのような「コドン最適化」は、種々の方法により、例えば、与えられた宿主細胞内での高度に発現される遺伝子における使用に好ましいコドンを選択することにより行うことができる。高度に発現される細菌遺伝子のコドン優先性に関する「Ｅｃｏｈｉｇｈ．ｃｏｄ」のようなコドン出現頻度表を含むコンピューターアルゴリズムを使用することが可能であり、それはＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｐａｃｋａｇｅ　Ｖｅｒｓｉｏｎ　９．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにより提供されている。他の有用なコドン出現頻度表には、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ　ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ　ｌｏｗ．ｃｏｄ」、「Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ　ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｈｕｍａｎ　ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｍａｉｚｅ　ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」および「Ｙｅａｓｔ　ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」が含まれる。
【０１３２】
ベクターおよび宿主細胞
ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、標準的な連結技術を用いて適切な発現ベクター内に挿入することができる。該ベクターは、典型的には、使用する個々の宿主細胞内で機能的であるものを選択する（すなわち、該遺伝子の増幅および／または該遺伝子の発現が生じうるよう、該ベクターは宿主細胞装置に和合性である）。ＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、原核生物、酵母、昆虫（バキュロウイルス系）および／または真核宿主細胞内で増幅／発現させることができる。該宿主細胞の選択は、１つには、ＩＬ−１７様ポリペプチドが翻訳後修飾（例えば、グリコシル化および／またはリン酸化）されることになるか否かに左右されるであろう。そうされる場合には、酵母、昆虫または哺乳類宿主細胞が好ましい。発現ベクターの総説としては、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，ｖｏｌ．１８５，Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ．，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）を参照されたい。
【０１３３】
典型的には、該宿主細胞のいずれかにおいて使用する発現ベクターは、プラスミドの維持のための並びに外因性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のための配列を含有する。そのような配列は、ある実施形態においては「フランキング配列」と総称され、典型的には、以下のヌクレオチド配列の１以上を含む：プロモーター、１以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、供与および受容スプライス部位を含有する完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、および選択マーカー要素。これらの各配列については後記で説明する。
【０１３４】
所望により、該ベクターは、「タグ」コード配列［すなわち、ＩＬ−１７様ポリペプチドコード配列の５’または３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子であり、該オリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（例えばヘキサＨｉｓ）、または商業的に入手可能な対応抗体が存在するＦＬＡＧ、ＨＡ（赤血球凝集素インフルエンザウイルス）またはｍｙｃのような別の「タグ」をコードしている］を含有していてもよい。このタグは、典型的には、該ポリペプチドの発現に際してポリペプチドに融合され、宿主細胞からのＩＬ−１７様ポリペプチドのアフィニティー精製のための手段として機能しうる。アフィニティー精製は、例えば、アフィニティーマトリックスとして該タグに対する抗体を使用するカラムクロマトグラフィーにより達成することができる。所望により、ついで切断用の或るペプチダーゼの使用のような種々の手段により、精製されたＩＬ−１７様ポリペプチドから該タグを除去することができる。
【０１３５】
フランキング配列は、相同（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または株に由来する）、異種（すなわち、宿主細胞の種または株以外の種に由来する）、ハイブリッド（すなわち、２以上の起源に由来するフランキング配列の組合せ）または合成体でありうる。あるいは、該フランキング配列は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調節するよう通常に機能する天然配列でありうる。そのような場合、フランキング配列の起源は、任意の原核または真核生物、任意の脊椎または無脊椎生物、あるいは任意の植物でありうる。ただし、該フランキング配列は該宿主細胞装置内で機能的であり、該宿主細胞装置により活性化されうるものでなければならない。
【０１３６】
本発明のベクター中で有用なフランキング配列は、当技術分野でよく知られたいくつかの方法のいずれかにより得ることができる。典型的には、ＩＬ−１７様遺伝子のフランキング配列以外の本発明で有用なフランキング配列は、マッピングおよび／または制限エンドヌクレアーゼ消化により予め同定されており、したがって、適切な制限エンドヌクレアーゼを使用して適切な組織源から単離されうる。いくつかの場合には、フランキング配列の完全なヌクレオチド配列が既知かもしれない。この場合、核酸合成またはクローニングのための本明細書に記載の方法を用いて、該フランキング配列を合成することができる。
【０１３７】
該フランキング配列の全部または一部のみが既知である場合には、ＰＣＲを用いて及び／又は適切な同じ若しくは別の種に由来するオリゴヌクレオチドおよび／またはフランキング配列断片でゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより、それを得ることができる。該フランキング配列が未知の場合には、フランキング配列を含有するＤＮＡの断片を、例えばコード配列または更には別の遺伝子を含有しうる、より大きなＤＮＡ断片から単離することができる。単離は、適切なＤＮＡ断片を与える制限エンドヌクレアーゼ消化、およびそれに続くアガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）または当業者に公知の他の方法による単離により達成することができる。この目的を達成するための適切な酵素の選択は、当業者に容易に明らかとなるであろう。
【０１３８】
複製起点は、典型的には、商業的に購入される原核性発現ベクターの一部であり、該起点は、宿主細胞内での該ベクターの増幅を助ける。あるコピー数までの該ベクターの増幅は、いくつかの場合には、ＩＬ−１７様ポリペプチドの最適な発現のために重要でありうる。選択したベクターが複製起点部位を含有しない場合には、公知配列に基づいて化学的に合成し、該ベクターに連結することができる。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｎｏ．３０３−３ｓ，Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの複製起点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適しており、種々の起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶ）またはパピローマウイルス、例えばＨＰＶまたはＢＰＶ）が、哺乳類細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般には、複製起点成分は、哺乳類発現ベクターには必要とされない（例えば、ＳＶ４０起点が使用されることが多いが、これは単に、それが初期プロモーターを含有するからである）。
【０１３９】
転写終結配列は、典型的には、ポリペプチドコード領域の末端の３’側に位置し、転写を終結するように機能する。通常、原核細胞における転写終結配列は、Ｇ−Ｃに富む断片、およびそれに続くポリＴ配列である。該配列はライブラリーから容易にクローニングされ、さらにはベクターの一部として商業的に購入されるが、本明細書に記載されているような核酸合成法を用いて、それを容易に合成することも可能である。
【０１４０】
選択マーカー遺伝子要素は、選択培地内で増殖させる宿主細胞の生存および増殖に必要なタンパク質をコードしている。典型的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素、例えばアンピシリン、テトラサイクリンまたはカナマイシンに対する耐性を原核宿主細胞に付与するタンパク質、（ｂ）該細胞の栄養要求性欠損を補うタンパク質、または（ｃ）複合培地からは入手不可能な決定的に重要な栄養素を供給するタンパク質コードしている。好ましい選択マーカーとしては、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子およびテトラサイクリン耐性遺伝子が挙げられる。ネオマイシン耐性遺伝子も、原核および真核宿主細胞における選択に使用することができる。
【０１４１】
発現される遺伝子を増幅するために、他の選択遺伝子を使用することが可能である。増幅は、増殖のために決定的に重要なタンパク質の産生のための要求性がより高い遺伝子が連続世代の組換え細胞の染色体内で縦列で反復される過程である。哺乳類細胞用の適切な選択マーカーの具体例には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）およびチミジンキナーゼが含まれる。該哺乳類細胞形質転換体を、該ベクター中に存在する選択遺伝子のおかげで該形質転換体だけが独自に生存するよう適応する選択圧下に配置する。培地内の選択剤の濃度が連続的に改変される条件下で該形質転換細胞を培養することにより選択圧を課し、それにより、該選択遺伝子と、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡとの両方の増幅を得る。その結果、増加した量のＩＬ−１７様ポリペプチドが該増幅ＤＮＡから合成される。
【０１４２】
リボソーム結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳の開始に必要であり、シャイン・ダルガルノ配列（原核生物）またはコザック配列（真核生物）により特徴づけられる。該要素は、典型的には、該プロモーターの３’側且つ発現されるＩＬ−１７様ポリペプチドのコード配列の５’側に位置する。シャイン・ダルガルノ配列は様々であるが、典型的にはポリプリンである（すなわち、高いＡ−Ｇ含量を有する）。多数のシャイン・ダルガルノ配列が同定されており、それらのそれぞれは、本明細書に記載の方法を用いて容易に合成し原核ベクター中で使用することができる。
【０１４３】
リーダーまたはシグナル配列は、ＩＬ−１７様ポリペプチドを宿主細胞の外へ導くために使用することができる。典型的には、該シグナル配列をコードするヌクレオチド配列は、ＩＬ−１７様核酸分子のコード領域内に位置するか、またはＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の直ぐ５’末端に位置する。多数のシグナル配列が同定されており、選択した宿主細胞内で機能的である任意のものを、ＩＬ−１７様核酸分子と共に使用することができる。したがって、シグナル配列は、ＩＬ−１７様遺伝子またはｃＤＮＡに対して相同（天然に存在する）または異種でありうる。また、シグナル配列は、本明細書に記載の方法を用いて化学的に合成することができる。ほとんどの場合、シグナルペプチドの存在による宿主細胞からのＩＬ−１７様ポリペプチドの分泌は、分泌されたＩＬ−１７様ポリペプチドからのシグナルペプチドの除去につながるであろう。該シグナル配列は該ベクターの成分でありうる。あるいはそれは、該ベクター内に挿入されるＩＬ−１７様核酸分子の一部でありうる。
【０１４４】
ＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域に結合した天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列をコードするヌクレオチド配列またはＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域に結合した異種シグナル配列をコードするヌクレオチド配列の使用が、本発明の範囲内に含まれる。選択した異種シグナル配列は、宿主細胞により認識されプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものであるべきである。天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列を認識せずプロセシングしない原核宿主細胞の場合には、該シグナル配列を、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼまたは耐熱性エンテロトキシンＩＩリーダーよりなる群から選ばれる原核性シグナル配列により置換する。酵母分泌のためには、該天然ＩＬ−１７様ポリペプチドシグナル配列を、酵母インベルターゼ、α因子または酸性ホスファターゼリーダーにより置換することができる。哺乳類細胞発現においては、該天然シグナル配列で十分であるが、他の哺乳類シグナル配列も適切でありうる。
【０１４５】
真核宿主細胞発現系においてグリコシル化が望まれる幾つかの場合には、グリコシル化または収率を改善するために種々のプレ配列を操作することができる。例えば、個々のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を改変したり、あるいはプレ配列を付加することが可能であり、これもグリコシル化に影響を及ぼしうる。最終タンパク質産物は、−１位（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）に、完全には除去されていない可能性がある発現に付随する１以上の追加的なアミノ酸を有しうる。例えば、該最終タンパク質産物は、Ｎ末端に結合した該ペプチダーゼ切断部位に見出される１または２アミノ酸残基を有しうる。あるいは、いくつかの酵素切断部位の使用は、該酵素が成熟ポリペプチド内のそのような領域で切断する場合には、若干トランケート化された形態の所望のＩＬ−１７様ポリペプチドを与えうる。
【０１４６】
多くの場合、該ベクター中の１以上のイントロンの存在により、核酸分子の転写が増強される。これは、ポリペプチドが真核宿主細胞、特に哺乳類宿主細胞内で産生される場合に特に当てはまる。使用するイントロンは、使用する遺伝子が完全長ゲノム配列またはその断片である場合には特に、該ＩＬ−１７様遺伝子内に天然に存在しうる。該イントロンが（ほとんどのｃＤＮＡの場合のように）該遺伝子内に天然に存在しない場合には、該イントロンは別の起源から得ることができる。該イントロンは、有効となるように転写されなければならないため、フランキング配列および該ＩＬ−１７様遺伝子に対する該イントロンの位置が一般に重要である。したがって、ＩＬ−１７様ｃＤＮＡ分子が転写されている場合には、該イントロンの好ましい位置は転写開始部位の３’側およびポリＡ転写終結配列の５’側である。好ましくは、該イントロンは、それが該コード配列を遮断しないよう、該ｃＤＮＡの一方の側または他方の側（すなわち、５’または３’）に位置する。本発明を実施するためには、ウイルス、原核生物および真核生物（植物または動物）を含む任意の起源に由来する任意のイントロンを使用することができる。ただし、それは、それが挿入される宿主細胞に和合性でなければならない。合成イントロンも本発明に含まれる。所望により、２以上のイントロンを該ベクター中で使用することができる。
【０１４７】
本発明の発現およびクローニングベクターはそれぞれ、典型的には、宿主生物により認識されＩＬ−１７様ポリペプチドコード化分子に作動的に結合したプロモーターを含有する。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御する該構造遺伝子の開始コドンの上流（５’側）（一般には、約１００〜１０００ｂｐ以内）に位置する非転写配列である。プロモーターは、通常、２つのクラス（誘導性プロモーターおよび構成的プロモーター）のうちの１つに分類される。誘導性プロモーターは、その制御下、培養条件中の何らかの変化（例えば、栄養素の存在または不存在、または温度の変化）に応答して、ＤＮＡからの、増強されたレベルの転写を開始する。一方、構成的プロモーターは、連続的な遺伝子産物の産生を開始する。すなわち、遺伝子発現に対する制御はほとんど又は全く存在しない。種々の潜在的宿主細胞により認識される多数のプロモーターがよく知られている。制限酵素消化により起源ＤＮＡからプロモーターを取り出し、所望のプロモーター配列を該ベクター内に挿入することにより、適切なプロモーターを、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動的に結合させる。ＩＬ−１７様核酸分子の増幅および／または発現を指令するためには、該天然ＩＬ−１７様遺伝子プロモーター配列を使用することができる。しかし、異種プロモーターが、天然プロモーターと比較して高い発現タンパク質の収率および転写を可能にする場合、およびそれが、使用のために選択した宿主細胞系に和合性である場合には、そのような異種プロモーターが好ましい。
【０１４８】
原核性宿主での使用に適したプロモーターには、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系；アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系；およびハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーターが含まれる。他の公知細菌プロモーターも適している。それらの配列は公開されており、当業者は、いずれかの有用な制限部位を供給するために必要に応じてリンカーまたはアダプターを使用して、それらを所望のＤＮＡ配列に連結することが可能である。
【０１４９】
酵母宿主で使用するための適切なプロモーターも当技術分野でよく知られている。酵母プロモーターと共に酵母エンハンサーが有利に使用される。哺乳類宿主細胞で使用するための適切なプロモーターはよく知られており、それらには、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、そして最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のようなウイルスのゲノムから得られるものが含まれるが、これらに限定されるものではない。他の適切な哺乳類プロモーターには、異種哺乳類プロモーター、例えば、熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーターが含まれる。
【０１５０】
ＩＬ−１７様遺伝子の転写の制御において関心が持たれる追加的なプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：３０４−３１０，（１９８１））、ＣＭＶプロモーター、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含有されるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら，Ｃｅｌｌ，２２：７８７−７９７（１９８０））；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１４４−１４５（１９８１））、メタロチオニン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２９６：３９−４２（１９８２））、β−ラクタマーゼプロモーターのような原核性発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５：３７２７−３７３１（１９７８））、またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：２１−２５（１９８３））が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、組織特異性を示し、トランスジェニック動物において利用されている以下の動物転写制御領域にも関心が持たれる：膵小胞体細胞中で活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域［Ｓｗｉｆｔら，Ｃｅｌｌ，３８：６３９−６４６（１９８４）；Ｏｒｎｉｔｚら，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，７：４２５−５１５（１９８７）］；膵β細胞中で活性なインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３１５：１１５−１２２（１９８５））；リンパ系細胞中で活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら，Ｃｅｌｌ，３８：６４７−６５８（１９８４）；Ａｄａｍｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３１８：５３３−５３８（１９８５））；Ａｌｅｘａｎｄｅｒら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６−１４４４（１９８７））；精巣細胞、乳細胞、リンパ系細胞およびマスト細胞中で活性なマウス乳癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒら，Ｃｅｌｌ，４５：４８５−４９５（１９８６））；肝臓中で活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｒｉｎｋｅｒｔら，Ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌ．，１：２６８−２７６（１９８７））；肝臓中で活性なα−フェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９−１６４８（１９８５））；Ｈａｍｍｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：５３−５８（１９８７））；肝臓中で活性なα１アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら，ＧｅｎｅｓおよびＤｅｖｅｌ，１：１６１−１７１，１９８７））；骨髄様細胞中で活性なβグロビン遺伝子制御領域［Ｍｏｇｒａｍら，Ｎａｔｕｒｅ，３１５：３３８−３４０（１９８５）；Ｋｏｌｌｉａｓら，Ｃｅｌｌ，４６：８９−９４（１９８６）］；脳内のオリゴデンドロサイト細胞中で活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら，Ｃｅｌｌ，４８：７０３−７１２（１９８７））；骨格筋中で活性なミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，Ｎａｔｕｒｅ��３１４：２８３−２８６（１９８５））；および視床下部中で活性な性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３４：１３７２−１３７８（１９８６））。
【０１５１】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡの、高等真核生物による転写を増加させるために、エンハンサー配列をベクター内に挿入することができる。エンハンサーは、プロモーターに作用して転写を増加させる通常は１０〜３００ｂｐ長のシス作用性のＤＮＡ要素である。エンハンサーは、配向および位置にはそれほど左右されない。それは、転写単位の５’側および３’側に見出されている。哺乳類遺伝子から入手可能ないくつかのエンハンサー配列が公知である（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテインおよびインスリン）。しかし、典型的には、ウイルス由来のエンハンサーを使用することになろう。ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが、真核性プロモーターの活性化のための典型的なエンハンサー要素である。エンハンサーは、ＩＬ−１７様核酸分子の５’側または３’側の位置でベクター中にスプライシングされうるが、それは典型的には、プロモーターの５’側の部位に位置する。
【０１５２】
本発明の発現ベクターは、商業的に入手可能なベクターのような出発ベクターから構築することができる。そのようなベクターは、所望のフランキング配列の全部を含有していても、あるいは必ずしもその全部を含有していなくてもよい。所望のフランキング配列の１以上が該ベクター中に予め存在しない場合には、それらを個々に得、該ベクター中に連結することができる。該フランキング配列のそれぞれを得るために用いる方法は、当業者によく知られている。
【０１５３】
本発明を実施するための好ましいベクターとしては、細菌、昆虫および哺乳類宿主細胞に和合性のものが挙げられる。そのようなベクターには、とりわけ、ｐＣＲＩＩ、ｐＣＲ３およびｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ｐＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＳＲ−アルファ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ　９０／１４３６３）およびｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ　Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）が含まれる。
【０１５４】
更なる適切なベクターには、コスミド、プラスミドまたは修飾ウイルスが含まれるが（これらに限定されるものではない）、該ベクター系は、選択した宿主細胞に和合性でなければならない。そのようなベクターには、プラスミド、例えばＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）プラスミド誘導体（高コピー数のＣｏｌＥ１に基づくファジミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｉｎｃ．，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ　ＣＡ）、Ｔａｑ増幅ＰＣＲ産物をクローニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えば、ＴＯＰＯ（商標）ＴＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ（登録商標）Ｋｉｔ、ＰＣＲ２．１（登録商標）プラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、および哺乳類、酵母またはウイルスベクター、例えば、バキュロウイルス発現系（ｐＢａｃＰＡＫプラスミド誘導体，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ，ＣＡ）が含まれる。
【０１５５】
該ベクターを構築し、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子を該ベクターの適切な部位内に挿入した後、増幅および／またはポリペプチド発現のために、完成したベクターを適切な宿主細胞に挿入することができる。選択した宿主細胞内へのＩＬ−１７様ポリペプチド用の発現ベクターの形質転換は、よく知られた方法、例えば、トランスフェクション、感染、塩化カルシウム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクションまたはＤＥＡＥ−デキストラン法または他の公知技術により達成することができる。選択する方法は、１つには、使用する宿主細胞のタイプに左右されるであろう。これらの方法および他の適切な方法は当業者によく知られており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲に記載されている。
【０１５６】
宿主細胞は原核宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））または真核宿主細胞（例えば、酵母、昆虫または脊椎動物細胞）でありうる。該宿主細胞は、適切な条件下で培養すると、ＩＬ−１７様ポリペプチドを合成し、ついでそれを培地から（該宿主細胞がそれを培地内に分泌する場合）、またはそれを産生する宿主細胞から直接的に（それが分泌されない場合）、集めることができる。適切な宿主細胞の選択は、所望の発現レベル、活性のために望ましい又は必要なポリペプチド修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）および生物学的に活性な分子へのフォールディングのし易さのような種々の要因に左右されるであろう。
【０１５７】
多数の適切な宿主細胞が当技術分野で公知であり、多くはＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ　２０１１０−２２０９から入手可能である。具体例には、哺乳類細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＣＬ６１）；ＣＨＯ　ＤＨＦＲ−細胞（Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：４２１６−４２２０（１９８０））；ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３または２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）；または３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＣＬ９２）が含まれるが、これらに限定されるものではない。適切な哺乳類宿主細胞、ならびに形質転換、培養、増幅、スクリーニング、産物の製造および精製のための方法は、当技術分野で公知である。他の適切な哺乳類細胞系としては、サルＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）およびＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ１６５１）細胞系、ならびにＣＶ−１細胞系（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＣＬ７０）が挙げられる。更なる典型的な哺乳類宿主細胞には、霊長類細胞系およびげっ歯類細胞系、例えば、形質転換細胞系が含まれる。正常な二倍体細胞、初代組織のインビトロ培養に由来する細胞株、および初代外植片も適している。候補細胞は、遺伝子型において該選択遺伝子を欠損していることが可能であり、あるいは優性作用性選択遺伝子を含有しうる。他の適切な哺乳類細胞系には、マウス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、３Ｔ３系（Ｓｗｉｓｓ、Ｂａｌｂ−ｃまたはＮＩＨマウスに由来するもの）、ＢＨＫまたはＨａＫハムスター細胞系（これらはＡＴＣＣから入手可能である）が含まれるが、これらに限定されるものではない。これらの細胞系のそれぞれは、タンパク質発現の分野の当業者に公知であり、入手可能である。
【０１５８】
本発明に適した宿主細胞として同様に有用なものとして、細菌細胞が挙げられる。例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の種々の株（例えば、ＨＢ１０１（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．３３６９４）ＤＨ５α、ＤＨ１０およびＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．５３３３８））が、バイオテクノロジーの分野において宿主細胞としてよく知られている。枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、シュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐｐ．）、他のバシラス種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐｐ．）、ストレプトマイセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐｐ．）などの種々の株も、この方法において使用することができる。
【０１５９】
また、当業者に公知の酵母細胞の多数の株は、本発明のポリペプチドの発現のための宿主細胞として利用可能である。好ましい酵母細胞には、例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｉｖｉｓａｅ）およびピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれる。
【０１６０】
さらに、所望により、昆虫細胞系を本発明の方法において使用することができる。そのような系は、例えば、Ｋｉｔｔｓら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１４：８１０−８１７（１９９３）；Ｌｕｃｋｌｏｗ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，４：５６４−５７２（１９９３）；およびＬｕｃｋｌｏｗら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：４５６６−４５７９（１９９３）に記載されている。好ましい昆虫細胞は、Ｓｆ−９およびＨｉ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｓｂａｄ，ＣＡ）である。
【０１６１】
また、グリコシル化ＩＬ−１７様ポリペプチドを発現させるために、トランスジェニック動物を使用することができる。例えば、トランスジェニック乳産生動物（例えば、乳牛またはヤギ）を使用し、該動物の乳中に本グリコシル化ポリペプチドを得ることができる。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドを産生させるために、植物を使用することもできるが、一般には、植物において生じるグリコシル化は、哺乳類細胞内で生じるものとは異なり、ヒトに対する治療用途には適さないグリコシル化産物を与えうる。
【０１６２】
ポリペプチドの製造
当業者によく知られた標準的な培地を使用して、ＩＬ−１７様ポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞を培養することができる。該培地は、通常は、該細胞の増殖および生存に必要なすべての栄養素を含有する。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞を培養するための適切な培地には、例えば、ルリアブロス（Ｌｕｒｉａ　Ｂｒｏｔｈ）（ＬＢ）および／またはテリフィックブロス（Ｔｅｒｒｉｆｉｃ　Ｂｒｏｔｈ）（ＴＢ）が含まれる。真核細胞を培養するための適切な培地には、ローズウェル・パーク・メモリアル・インスティチュート（Ｒｏｓｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）培地　１６４０（ＲＰＭＩ　１６４０）、最少必須培地（Ｍｉｎｉｍａｌ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ）（ＭＥＭ）および／またはダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）が含まれ、それらはすべて、培養されている個々の細胞系により示されているとおりに血清および／または増殖因子で補足することができる。昆虫培養のための適切な培地は、必要に応じてイーストラート（ｙｅａｓｔｏｌａｔｅ）、ラクトアルブミン水解物および／またはウシ胎仔血清で補足されたグレース（Ｇｒａｃｅ）培地である。
【０１６３】
典型的には、抗生物質、または形質転換細胞の選択的増殖に有用な他の化合物を、補足物として培地に加える。使用する化合物は、宿主細胞を形質転換したプラスミド上に存在する選択マーカー要素によって決まる。例えば、該選択マーカー要素がカナマイシン耐性である場合には、培地に加える化合物はカナマイシンとなる。選択的増殖のための他の化合物には、アンピシリン、テトラサイクリンおよびネオマイシンが含まれる。
【０１６４】
宿主細胞により産生されるＩＬ−１７様ポリペプチドの量は、当技術分野で公知の標準的な方法を用いて評価することができる。そのような方法には、ウエスタンブロット分析、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、非変性ゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分離、免疫沈降および／または活性アッセイ、例えばＤＮＡ結合ゲルシフトアッセイが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１６５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドが、宿主細胞から分泌されるように設計されている場合には、ポリペプチドの大部分は細胞培養培地内に見出されうる。しかし、該ＩＬ−１７様ポリペプチドが宿主細胞から分泌されない場合には、それは細胞質および／または核（真核宿主細胞の場合）、あるいはサイトゾル（細菌宿主細胞の場合）に存在するであろう。
【０１６６】
宿主細胞の細胞質および／または核（真核宿主細胞の場合）あるいはサイトゾル（細菌宿主細胞の場合）に存在するＩＬ−１７様ポリペプチドの場合には、当業者に公知の任意の標準的な技術を用いて、細胞内物質（グラム陰性菌の封入体を含む）を該宿主細胞から抽出することができる。例えば、フレンチプレス、ホモジナイゼーションおよび／または音波処理およびそれに続く遠心分離により、ペリプラズム／細胞質の内容物を遊離させるために、該宿主細胞を細胞溶解することができる。
【０１６７】
ＩＬ−１７様ポリペプチドがサイトゾル内に封入体を形成している場合には、該封入体は、しばしば、内部および／または外部細胞膜に結合することが可能であり、したがって主として、遠心分離後のペレット物質中に存在するであろう。ついで該ペレット物質を、極端なｐＨで処理したり、あるいは酸性ｐＨでのトリスカルボキシエチルホスフィンまたはアルカリ性ｐＨでのジチオトレイトールのような還元剤の存在下、カオトロピック剤（例えば、界面活性剤、グアニジン、グアニジン誘導体、尿素または尿素誘導体）で処理して、該封入体を遊離、解離および可溶化することができる。ついで、今や可溶性形態になったＩＬ−１７様ポリペプチドを、ゲル電気泳動、免疫沈降などを用いて分析することができる。該ＩＬ−１７様ポリペプチドを単離することが望ましい場合には、本明細書およびＭａｒｓｔｏｎら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８２：２６４−２７５（１９９０）に記載されているような標準的な方法を用いて、単離を達成することができる。
【０１６８】
いくつかの場合には、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、単離直後には生物学的に活性でないかもしれない。該ポリペプチドを「リフォールディング」する又は該ポリペプチドをその三次元構造に変換しジスルフィド結合を生成させるための種々の方法を用いて、生物活性を回復させることができる。そのような方法は、該可溶化ポリペプチドを、特定の濃度のカオトロープの存在下、通常は７以上のｐＨにさらすことを含む。カオトロープの選択は、封入体の可溶化に用いる選択に非常に類似しているが、通常、カオトロープは、より低い濃度で使用し、該可溶化に使用するカオトロープとは必ずしも同じでない。ほとんどの場合、該リフォールディング／酸化溶液はまた、該タンパク質のシステイン架橋の形成においてジスルフィド・シャフリングが生じるのを可能にするレドックス電位を生成するよう、還元剤を又は還元剤＋その酸化形態を特定の比で含有する。一般に使用されるレドックス対のいくつかには、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ、および２−２メルカプトエタノール（ｂＭｅ）／ジチオ−ｂ（Ｍｅ）が含まれる。該リフォールディングの効率を増加させるために、共溶媒を使用することが可能であり、この目的に使用する、より一般的な試薬には、グリセロール、種々の分子量のポリエチレングリコール、アルギニンなどが含まれる。
【０１６９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現に際して封入体が有意な程度で形成されない場合には、該ポリペプチドは、主として、該細胞ホモジネートの遠心分離後の上清中に存在するであろう。本明細書に記載されているような方法を用いて、該ポリペプチドを更に該上清から単離することができる。
【０１７０】
溶液からのＩＬ−１７様ポリペプチドの精製は、種々の技術を用いて達成することができる。該ポリペプチドが、それがタグ、例えばヘキサヒスチジン（ＩＬ−１７様ポリペプチド／ヘキサＨｉｓ）または他の小ペプチド、例えばＦＬＡＧ（Ｅａｓｔｍａｎ　Ｋｏｄａｋ　Ｃｏ．，Ｎｅｗ　Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）またはｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｓｂａｄ，ＣＡ）をそのカルボキシルまたはアミノ末端に含有するように合成された場合には、該タグに対して高いアフィニティーをカラムマトリックスが有するアフィニティーカラムに該溶液を通過させることにより、それを１工程で精製することができる。
【０１７１】
例えば、ポリヒスチジンは、大きなアフィニティーおよび特異性でニッケルに結合する。したがって、ニッケルのアフィニティーカラム（例えば、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）ニッケルカラム）を、ＩＬ−１７様ポリペプチド／ポリＨｉｓの精製に使用することができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１０．１１．８節，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９９３）を参照されたい。
【０１７２】
また、該ＩＬ−１７様ポリペプチドは、該ＩＬ−１７様ポリペプチドを特異的に認識しそれに結合しうるモノクローナル抗体を使用することにより精製することができる。
【０１７３】
したがって、精製のための適切な方法には、アフィニティークロマトグラフィー、免疫アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、電気泳動（天然ゲル電気泳動を含む）およびそれに続くゲル溶出、ならびに分取等電点電気泳動（「Ｉｓｏｐｒｉｍｅ」マシン／技術、Ｈｏｅｆｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。いくつかの場合には、純度を増加させるために、２以上の精製技術を組合せることができる。
【０１７４】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９（１９６３）、Ｈｏｕｇｈｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：５１３２（１９８５）、ならびにＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ，“Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（１９８４）に記載されているような当技術分野で公知の技術を用いる化学合成法（例えば、固相ペプチド合成）によっても製造することができる。そのようなポリペプチドは、アミノ末端にメチオニンを伴って又は伴わないで合成することができる。ジスルフィド架橋を形成するために、これらの参考文献に記載の方法を用いて、化学合成ＩＬ−１７様ポリペプチドを酸化することができる。化学合成ＩＬ−１７様ポリペプチドは、組換え的に製造された又は天然起源から精製された対応ＩＬ−１７様ポリペプチドに匹敵する生物活性を有すると予想され、したがって、組換え又は天然ＩＬ−１７様ポリペプチドと互換的に用いられうる。
【０１７５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドを得るもう１つの手段は、該ＩＬ−１７様ポリペプチドが天然で見出される起源組織および／または流体のような生物学的サンプルからの精製によるものである。そのような精製は、本明細書に記載のタンパク質精製のための方法を用いて行うことができる。精製中の該ＩＬ−１７様ポリペプチドの存在は、例えば、組換え的に産生されたＩＬ−１７様ポリペプチドまたはそのペプチド断片に対して調製された抗体を使用してモニターすることができる。
【０１７６】
核酸およびポリペプチドを製造するための多数の更なる方法が当技術分野で公知であり、該方法を用いて、ＩＬ−１７様に対する特異性を有するポリペプチドを製造することができる。例えば、ｍＲＮＡとそのコード化ペプチドとの融合タンパク質の製造を記載しているＲｏｂｅｒｔｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−１２３０３（１９９７）を参照されたい。また、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，３：２６８−２７３（１９９９）も参照されたい。さらに、米国特許第５，８２４，４６９号は、特異的な生物学的機能を発揮しうるオリゴヌクレオチドの入手方法を記載している。該方法は、５’ランダム化配列、中央の予め選択された配列および３’ランダム化配列をそれぞれが有するオリゴヌクレオチドの異種プールを得ることを含む。得られた異種プールを、所望の生物学的機能を示さない細胞の集団内に導入する。ついで該細胞の小集団を、所定の生物学的機能を示すものに関してスクリーニングする。その小集団から、所望の生物学的機能を発揮しうるオリゴヌクレオチドを単離する。
【０１７７】
米国特許第５，７６３，１９２号、第５，８１４，４７６号、第５，７２３，３２３号および第５，８１７，４８３号は、ペプチドまたはポリペプチドの製造方法を記載している。これは、確率的（ｓｔｏｃｈａｓｔｉｃ）遺伝子またはその断片を製造し、ついでこれらの遺伝子を、該確率的遺伝子にコードされる１以上のタンパク質を産生する宿主細胞内に導入することにより行う。ついで該宿主細胞をスクリーニングして、所望の活性を有するペプチドまたはポリペプチドを産生するクローンを同定する。
【０１７８】
ペプチドまたはポリペプチドを製造するためのもう１つの方法は、Ａｔｈｅｒｓｙｓ，Ｉｎｃ．により出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／２００９４（ＷＯ９９／１５６５０）に記載されている。該方法は、「遺伝子発見のための遺伝子発現のランダム活性化（Ｒａｎｄｏｍ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｇｅｎｅ　Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（ＲＡＧＥ−ＧＤ）」として公知であり、ｉｎ　ｓｉｔｕ組換え法による内因性遺伝子発現の活性化または遺伝子の過剰発現を含む。例えば、非相同的または変則的組換えにより遺伝子の発現を活性化しうる標的細胞内に調節配列を組込むことにより、内因性遺伝子の発現が活性化または増強される。まず、該標的ＤＮＡを放射に付し、遺伝的プロモーターを挿入する。該プロモーターは、最終的に、遺伝子の前方に切断を見出し、該遺伝子の転写を開始する。これは、所望のペプチドまたはポリペプチドの発現をもたらす。
【０１７９】
これらの方法はまた、包括的なＩＬ−１７様タンパク質発現ライブラリーを作製するためにも用いることが可能であり、ついでそれを、種々のアッセイ（例えば、生化学的アッセイ、細胞アッセイおよび全生物アッセイ（例えば、植物、マウスなど））におけるハイスループットな表現型スクリーニングに使用することができると理解されるであろう。
【０１８０】
化学誘導体
該ＩＬ−１７様ポリペプチドの化学修飾誘導体は、後記の開示に基づき、当業者により製造されうる。ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、該ポリペプチドに天然で結合している分子のタイプまたは位置の点で異なる様態で修飾される。誘導体は、１以上の天然で結合している化学基の欠失により形成される分子を含みうる。配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体は、１以上の重合体の共有結合により修飾することができる。例えば、選択される重合体は、それが結合しているタンパク質が水性環境（例えば、生理的環境）中で沈殿しないよう、典型的には水溶性である。重合体の混合物も、適切な重合体の範囲内に含まれる。好ましくは、最終産物製剤の治療用途には、該重合体は医薬上許容しうるものである。
【０１８１】
該重合体は、任意の分子量のものであってもよく、また、分枝状であっても非分枝状であってもよい。該重合体はそれぞれ、典型的には、約２ｋＤａ〜約１００ｋＤａの平均分子量を有する（「約」なる語は、水溶性重合体の調製物中、いくつかの分子は、示されている分子量より大きく、いくつかの分子は該分子量より小さいことを示す）。各重合体の平均分子量は、好ましくは約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、より好ましくは約１２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ、最も好ましくは約２０ｋＤａ〜約３５ｋＤａである。
【０１８２】
適切な水溶性重合体またはその混合物には、Ｎ結合型またはＯ結合型炭水化物；糖；ホスファート；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（タンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態、例えば、モノ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールを含む）；モノメトキシポリエチレングリコール；デキストラン（例えば、低分子量デキストラン、例えば約６ｋＤａのもの）；セルロース；または他の炭水化物に基づく重合体、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）およびポリビニルアルコールが含まれるが、これらに限定されるものではない。配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体の共有結合多量体を製造するために使用しうる二官能性架橋性分子も、本発明に含まれる。
【０１８３】
一般に、化学誘導体化は、タンパク質を活性化重合体分子と反応させるのに用いられる任意の適切な条件下で行なうことができる。ポリペプチドの化学誘導体の製造方法は、一般には、（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号１０のアミノ酸配列を含むポリペプチドあるいはＩＬ−１７様ポリペプチド変異体が１以上の重合体分子に結合する条件下、該ポリペプチドを該活性化重合体分子（例えば、該重合体分子の反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）と反応させ、（ｂ）該反応産物を得る工程を含む。最適な反応条件は、公知のパラメーターおよび所望の結果に基づいて決定される。例えば、重合体分子：タンパク質の比が大きくなればなるほど、結合重合体分子の比率は高くなる。１つの実施形態においては、該ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、アミノ末端に単一の重合体分子部分を有しうる（例えば、米国特許第５，２３４，７８４号を参照されたい）。
【０１８４】
該ポリペプチドのポリエチレングリコール化は、例えば以下の参考文献：Ｆｒａｎｃｉｓら，Ｆｏｃｕｓ　ｏｎ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ，３：４−１０（１９９２）；ＥＰ　０１５４３１６；ＥＰ　０４０１３８４および米国特許第４，１７９，３３７号に記載されているとおりの当技術分野で公知のポリエチレングリコール化反応のいずれかにより具体的に行なうことができる。例えば、ポリエチレングリコール化は、本明細書に記載の反応性ポリエチレングリコール分子（または類似した反応性水溶性重合体）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行なうことができる。該アシル化反応の場合には、選択する重合体は単一の反応性エステル基を有すべきである。還元的アルキル化の場合には、選択する重合体は単一の反応性アルデヒド基を有すべきである。反応性アルデヒドは、例えば、水溶性であるポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、またはそのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシまたはアリールオキシ誘導体である（米国特許第５，２５２，７１４号を参照されたい）。
【０１８５】
もう１つの実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドをビオチンに化学的に結合させることが可能であり、ついで、結合しているビオチン／ＩＬ−１７様ポリペプチド分子をアビジンに結合させて、四価のアビジン／ビオチン／ＩＬ−１７様ポリペプチド分子を得る。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドを、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）またはトリニトロフェノール（ＴＮＰ）に共有的に結合させ、得られたコンジュゲートを抗ＤＮＰまたは抗ＴＮＰ−ＩｇＭで沈殿させて、１０の結合価を有する十量体コンジュゲートを形成させることができる。
【０１８６】
一般には、本ＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体の投与により緩和または調節されうる状態には、ＩＬ−１７様ポリペプチドに関して本明細書に記載されている状態が含まれる。しかし、本明細書に開示するＩＬ−１７様ポリペプチド誘導体は、該非誘導体化分子と比較して追加的な活性、増強または減弱された生物活性、あるいは他の特性、例えば、増加または減少した半減期を有しうる。
【０１８７】
遺伝的に操作された非ヒト動物
さらに、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子が破壊（「ノックアウト」）されていてこの遺伝子の発現レベルが有意に減少または完全に喪失している非ヒト動物、例えばマウス、ラットまたは他のげっ歯類、ウサギ、ヤギまたはヒツジあるいは他の家畜も、本発明の範囲内に含まれる。そのような動物は、米国特許第５，５５７，０３２号に記載されているような技術および方法を用いて作製することができる。
【０１８８】
本発明は更に、非ヒト動物、例えばマウス、ラットまたは他のげっ歯類、ウサギ、ヤギまたはヒツジあるいは他の家畜であって、その動物の天然形態のＩＬ−１７様遺伝子または異種ＩＬ−１７様遺伝子が該動物により過剰発現されることにより「トランスジェニック」動物となったものを含む。そのようなトランスジェニック動物は、米国特許第５，４８９，７４３号およびＰＣＴ出願番号ＷＯ　９４／２８１２２に記載されているような良く知られた方法を用いて作製することができる。
【０１８９】
本発明は更に、天然ＩＬ−１７様ポリペプチドの１以上の発現レベルを改変するために本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドの１以上に対するプロモーターが活性化または不活性化（例えば、相同組換え法により）された非ヒト動物を含む。
【０１９０】
これらの非ヒト動物は、薬物候補のスクリーニングのために使用することができる。そのようなスクリーニングにおいては、該動物に対する薬物候補の影響を測定することができる。例えば、薬物候補は、該ＩＬ−１７様遺伝子の発現を減少または増加させうる。ある実施形態においては、該動物を該薬物候補にさらした後、産生されたＩＬ−１７様ポリペプチドの量を測定することができる。また、ある実施形態においては、該動物に対する該薬物候補の実際の影響を検出することができる。例えば、特定の遺伝子の過剰発現は、疾患または病理学的状態を招いたり、あるいはそれに関連している可能性がある。そのような場合、薬物候補が該遺伝子の発現を減少させる能力またはそれが病理学的状態を予防または抑制する能力を試験することができる。他の具体例においては、特定の代謝産物（例えば、ポリペプチドの断片）の産生が、疾患または病理学的状態を招いたり、あるいはそれに関連している可能性がある。そのような場合、薬物候補がそのような代謝産物の産生を減少させる能力またはそれが病理学的状態を予防または抑制する能力を試験することができる。
【０１９１】
マイクロアレイ
ＤＮＡマイクロアレイ技術を本発明おいて使用しうると理解されるであろう。ＤＮＡマイクロアレイは、ガラスのような固体支持体上に位置する核酸の小型高密度アレイである。該アレイ内の各細胞または要素は、対応ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーションの標的として作用する単一種のＤＮＡの多数のコピーを有する。ＤＮＡマイクロアレイ技術を用いる発現プロファイリングにおいては、まず、ｍＲＮＡを細胞または組織サンプルから抽出し、ついで蛍光標識ｃＤＮＡに酵素的に変換する。この物質を該マイクロアレイとハイブリダイズさせ、未結合ｃＤＮＡを洗浄により除去する。ついで、該アレイ上に表示された別個の遺伝子の発現を、各標的ＤＮＡに特異的に結合した標識ｃＤＮＡの量を定量することにより可視化する。このようにして、数千個の遺伝子の発現を、生物学的物質の単一サンプルからハイスループットで平行的に定量することができる。
【０１９２】
このハイスループットの発現プロファイリングは、本発明のＩＬ−１７様分子に関して広範囲の用途を有し、それらには、治療剤の標的としてのＩＬ−１７様疾患関連遺伝子の同定および証明、ＩＬ−１７様分子およびそのインヒビターの分子毒物学、臨床試験のための代用マーカーの生成および集団の階層化、ならびにハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）における選択的化合物の同定を補助することによるＩＬ−１７様関連小分子薬物発見の促進が含まれる。
【０１９３】
選択的結合剤
本発明で用いる「選択的結合剤」なる語は、１以上のＩＬ−１７様ポリペプチドに対する特異性を有する分子を意味する。適切な選択的結合剤には、抗体およびその誘導体、ポリペプチドおよび小分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。適切な選択的結合剤は、当技術分野で公知の方法を用いて製造することができる。本発明の典型的なＩＬ−１７様ポリペプチド選択的結合剤は、該ＩＬ−１７様ポリペプチドの或る部分に結合し、それによりＩＬ−１７様ポリペプチド受容体への該ポリペプチドの結合を抑制しうる。
【０１９４】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する抗体および抗体フラグメントのような選択的結合剤は、本発明の範囲内である。該抗体は、単一特異性ポリクローナル抗体を含むポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）、組換え抗体、キメラ抗体、例えばＣＤＲグラフティング抗体、一本鎖抗体および／または二重特異性抗体、ならびにそれらのフラグメント（断片）、変異体または誘導体でありうる。抗体フラグメントには、該ＩＬ−１７様ポリペプチド上のエピトープに結合する抗体の部分が含まれる。そのようなフラグメントの具体例には、完全長抗体の酵素的切断により生成するＦａｂおよびＦ（ａｂ’）フラグメントが含まれる。他の結合性フラグメントには、抗体可変領域をコードする核酸配列を含有する組換えプラスミドの発現のような組換えＤＮＡ技術により得られるものが含まれる。
【０１９５】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに対するポリクローナル抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドおよびアジュバントの複数の皮下または腹腔内注射により動物（例えば、ウサギまたはマウス）において産生される。ＩＬ−１７様ポリペプチドを、免疫する種において免疫原性である担体タンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清、アルブミン、ウシチログロブリンまたはダイズトリプシンインヒビター）に共役させることが有用であろう。また、免疫応答を増強するためには、ミョウバンのような凝集剤を使用する。免疫後、該動物を出血させ、該血清をＩＬ−１７様ポリペプチド抗体力価に関して分析する。
【０１９６】
ＩＬ−１７様ポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、培養内の連続継代細胞株による抗体分子の産生をもたらす任意の方法を用いて産生される。モノクローナル抗体を製造するための適切な方法の具体例には、Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７（１９７５）のハイブリドーマ法、およびヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）およびＢｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１９８７）が含まれる。本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドに反応性のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系も提供する。
【０１９７】
本発明のモノクローナル抗体は、治療剤として使用するために修飾することができる。１つの実施形態は「キメラ」抗体であり、この場合、重および／または軽鎖の部分は、特定の種に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同であるが、該鎖の残部は、別の種に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一または相同である。また、そのような抗体のフラグメント（断片）も、それが所望の生物活性を示す限り、本発明に含まれる。米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８５）を参照されたい。
【０１９８】
もう１つの実施形態においては、本発明のモノクローナル抗体は「ヒト化」抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は当技術分野でよく知られている（米国特許第５，５８５，０８９号および第５，６９３，７６２号を参照されたい）。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト起源からそれに導入された１以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は、例えば、当技術分野において記載されている方法（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ　３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））を用いて、げっ歯類相補性決定部（ＣＤＲ）の少なくとも一部をヒト抗体の対応領域で置換することにより行うことができる。
【０１９９】
本発明はまた、ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合するヒト抗体を含む。内因性免疫グロブリン産生の不存在下でヒト抗体のレパートリーを産生するトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して、そのような抗体を、所望により担体に共役していてもよいＩＬ−１７様抗原（すなわち、連続した少なくとも６アミノ酸を有するもの）での免疫により製造することができる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１−２５５５（１９９３）；Ｊａｃｏｂｏｖｉｔｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）およびＢｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら，Ｙｅａｒ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）を参照されたい。１つの方法においては、そのようなトランスジェニック動物は、それにおける重および軽免疫グロブリン鎖をコードする内因性遺伝子座を不能にし、ヒト重および軽鎖タンパク質をコードする遺伝子座をそのゲノム内に挿入することにより作製される。ついで、部分修飾動物、すなわち、修飾の必要因子の全てを有するには満たない動物を交雑育種させて、所望の免疫系修飾の全てを有する動物を得る。免疫原を投与すると、これらのトランスジェニック動物は、これらの抗原に免疫特異的である可変領域を含むヒト（例えば、マウスではない）アミノ酸配列を有する抗体を産生する。ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８およびＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６を参照されたい。更なる方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／２４５、ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７ならびにＥＰ　５４６０７３Ｂ１およびＥＰ　５４６０７３Ａ１に記載されている。また、ヒト抗体は、宿主細胞内での組換えＤＮＡの発現により又はハイブリドーマ細胞内での発現（本明細書に記載のとおり）により製造することができる。
【０２００】
もう１つの実施形態においては、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから製造することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）およびＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））。これらの方法は、線状バクテリオファージの表面上の抗体レパートリーの提示およびそれに続く選択抗原へのその結合によるファージの選択を介した免疫選択を模擬するものである。１つのそのような技術は、そのようなアプローチを使用してＭＰＬ−およびｍｓｋ−受容体に対する高アフィニティーかつ機能的な作動性抗体を単離することを記載しているいるＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／１７３６４に記載されている。
【０２０１】
キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体およびヒト化抗体は、典型的には、組換え法により製造する。該抗体をコードする核酸を宿主細胞内に導入し、本明細書に記載の材料および方法を用いて該核酸を発現させる。好ましい実施形態においては、該抗体を、ＣＨＯ細胞のような哺乳類宿主細胞内で産生させる。モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、宿主細胞内での組換えＤＮＡの発現により又はハイブリドーマ細胞内での発現（本明細書に記載のとおり）により製造することができる。
【０２０２】
本発明の抗ＩＬ−１７様抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの検出および定量のための競合結合アッセイ、直接的および間接的サンドイッチアッセイならびに免疫沈降アッセイ（Ｓｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｐ．１４７−１５８（ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７））のような任意の公知アッセイ法において使用することができる。該抗体は、使用しているアッセイ法に適したアフィニティーでＩＬ−１７様ポリペプチドに結合するであろう。
【０２０３】
診断用途の場合、ある実施形態においては、抗ＩＬ−１７様抗体を、検出可能な部分で標識することができる。該検出可能部分は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に生成しうる任意のものでありうる。例えば、該検出可能部分は、放射性同位体、例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓまたは１２５Ｉ；蛍光性または化学発光性化合物、例えばフルオレセインイソチオシアナート、ローダミンまたはルシフェリン；または酵素、例えばアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｂａｙｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８４：１３８−１６３（１９９０））でありうる。
【０２０４】
競合結合アッセイは、標識標準体（例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはその免疫学的に反応性の部分）が、一定量の抗ＩＬ−１７様抗体との結合に関して、試験サンプル被検体（ＩＬ−１７様ポリペプチド）と競合しうることに基づく。該試験サンプル中のＩＬ−１７様ポリペプチドの量は、該抗体に結合した標準体の量に反比例する。結合した標準体の量の測定を促進するために、該競合の前または後に、該抗体を典型的には不溶化して、該抗体に結合した標準体および被検体が、未結合のままの標準体および被検体から簡便に分離されうるようにする。
【０２０５】
サンドイッチアッセイは、典型的には、２つの抗体の使用を伴い、各抗体は、検出および／または定量されるタンパク質の、異なる免疫原性部分またはエピトープに結合しうる。サンドイッチアッセイにおいては、該試験サンプル被検体は、典型的には、固体支持体上に固定化された第１抗体に結合し、ついで第２抗体が該被検体に結合して、不溶性の三要素複合体を形成する。例えば、米国特許第４，３７６，１１０号を参照されたい。該第２抗体自体は、検出可能な部分で標識することが可能であり（直接サンドイッチアッセイ）、あるいは検出可能な部分で標識された抗免疫グロブリン抗体を使用して測定することが可能である（間接サンドイッチアッセイ）。例えば、１つのタイプのサンドイッチアッセイは、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）であり、この場合、該検出可能部分は酵素である。
【０２０６】
ＩＬ−１７様抗体を含む該選択的結合剤は、インビボイメージングにも有用である。検出可能な部分で標識された抗体を、動物に、好ましくは血流中に投与することが可能であり、該宿主内の該標識抗体の存在および位置を分析する。該抗体は、核磁気共鳴、放射線学または当技術分野で公知の他の検出手段のいずれによるかにかかわらず動物において検出可能な任意の部分で標識することが可能である。
【０２０７】
抗体を含む本発明の選択的結合剤は、治療剤として使用することができる。これらの治療剤は、一般には、それらがＩＬ−１７様ポリペプチドの生物学的活性（ＩＬ−１７様ポリペプチド前炎症活性を含む）の少なくとも１つを増強または減弱する点でそれぞれアゴニストまたはアンタゴニストである。１つの実施形態においては、本発明のアンタゴニスト抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドに特異的に結合しうる及びインビボまたはインビトロにおけるＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的活性を抑制または消失しうる抗体またはその結合性フラグメントである。好ましい実施形態においては、該選択的結合剤、例えば、アンタゴニスト抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの機能的活性を少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約８０％抑制する。もう１つの実施形態においては、該選択的結合剤は、ＩＬ−１７様結合相手（リガンドまたは受容体）と相互作用してインビトロまたはインビボにおけるＩＬ−１７様活性を抑制または消失しうる抗体でありうる。アゴニストおよびアンタゴニスト抗ＩＬ−１７様抗体を含む選択的結合剤は、当技術分野でよく知られたスクリーニングアッセイにより同定される。
【０２０８】
本発明はまた、ＩＬ−１７様選択的結合剤（例えば抗体）と、生物学的サンプル中のＩＬ−１７様ポリペプチドレベルを検出するのに有用な他の試薬とを含んでなるキットに関する。そのような試薬は、検出可能な標識、ブロッキング用血清、陽性および陰性対照サンプルならびに検出試薬を含みうる。
【０２０９】
本発明のＩＬ−１７様ポリペプチドは、発現クローニング法を用いてＩＬ−１７様受容体をクローニングするために使用することができる。ＩＬ−１７様受容体を発現する細胞型または細胞系または組織を同定するために、結合アッセイにおいて、放射能標識（１２５−ヨウ素）ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはアフィニティー／活性タグ化ＩＬ−１７様ポリペプチド（例えば、Ｆｃ融合体またはアルカリホスファターゼ融合体）を使用することができる。そのような細胞または組織から単離したＲＮＡをｃＤＮＡに変換し、哺乳類発現ベクター内にクローニングし、哺乳類細胞（例えば、ＣＯＳまたは２９３細胞）内にトランスフェクトして、発現ライブラリーを作製することができる。ついで放射能標識またはタグ化ＩＬ−１７様ポリペプチドをアフィニティーリガンドとして使用して、該ＩＬ−１７様受容体を表面上に発現する細胞のサブセットをこのライブラリーから同定し単離することができる。ついでＤＮＡをこれらの細胞から単離し、哺乳類細胞内にトランスフェクトして、ＩＬ−１７様受容体を発現する細胞の割合が元のライブラリーより何倍も高い第２発現ライブラリーを作製することができる。この富化工程を、ＩＬ−１７様受容体を含有する単一の組換えクローンが単離されるまで何度も繰返すことができる。該ＩＬ−１７様受容体の単離は、ＩＬ−１７様ポリペプチドのシグナリング経路の新規アゴニストおよびアンタゴニストを同定または開発するのに有用である。そのようなアゴニストおよびアンタゴニストには、可溶性ＩＬ−１７様受容体、抗ＩＬ−１７様受容体抗体、小分子、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質またはアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれ、それらは、本明細書に記載されているものを含む１以上の疾患または障害を治療、予防または診断するために使用することができる。
【０２１０】
ＩＬ−１７様ポリペプチド活性の他のモジュレーターに関するアッセイ
いくつかの場合には、Ｉｌ−１７様ポリペプチドの活性のモジュレーター、すなわち、アゴニストまたはアンタゴニストである分子を同定することが望ましいかもしれない。ＩＬ−１７様ポリペプチドを調節する天然または合成分子は、本明細書に記載されているような１以上のスクリーニングアッセイを用いて同定することができる。そのような分子は、エクスビボで、または注射によりインビボで、または経口運搬、移植装置などにより投与することができる。
【０２１１】
「試験分子」は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を調節（すなわち、増強または減弱）する能力に関して評価中の分子を意味する。最も一般的には、試験分子は、ＩＬ−１７様ポリペプチドと直接的に相互作用するであろう。しかし、試験分子はまた、例えば、ＩＬ−１７様遺伝子発現に影響を及ぼすことにより又はＩＬ−１７様結合相手（例えば、受容体またはリガンド）に結合することにより、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を間接的に調節しうることも予想される。１つの実施形態においては、試験分子は、少なくとも約１０−６Ｍ、好ましくは約１０−８Ｍ、より好ましくは約１０−９Ｍ、より一層好ましくは約１０−１０Ｍのアフィニティー定数で、ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する。
【０２１２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用する化合物を同定するための方法が、本発明に含まれる。ある実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドを試験分子と共に、該試験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドとの相互作用を許容する条件下でインキュベートし、該相互作用の度合を測定することができる。該試験分子は、実質的に精製された形態として又は粗混合物中でスクリーニングされうる。
【０２１３】
ある実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用してその活性を調節するタンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質または小分子量分子でありうる。ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を調節する分子には、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸に相補的であるか又はＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を指令もしくは制御する核酸配列に相補的である及び発現のアンチセンス調節体として作用する核酸が含まれる。
【０２１４】
一組の試験分子がＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用するものとして同定されたら、該分子を更に、それらがＩＬ−１７様ポリペプチド活性を増強または減弱する能力に関して評価することができる。試験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドとの相互作用の測定は、細胞に基づく結合アッセイ、膜結合アッセイ、液相アッセイおよびイムノアッセイを含むいくつかの様態で行うことができる。一般に、試験分子をＩＬ−１７様ポリペプチドと共に、定められた時間にわたりインキュベートし、ＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を、生物活性を測定するための１以上のアッセイにより測定する。
【０２１５】
試験分子とＩＬ−１７様ポリペプチドとの相互作用はまた、イムノアッセイにおいてポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用して直接的に分析することができる。あるいは、本明細書に記載のとおりのエピトープタグを含有するＩＬ−１７様ポリペプチドの修飾形態をイムノアッセイで使用することができる。
【０２１６】
ＩＬ−１７様ポリペプチドが結合相手（例えば、受容体またはリガンド）との相互作用を介して生物活性を示す場合には、種々のインビトロアッセイを用いて、対応結合相手（例えば、選択的結合剤、受容体またはリガンド）へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合を測定することができる。これらのアッセイを用いて、試験分子を、それが対応結合相手へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合の速度および／または度合を増強または減弱する能力に関してスクリーニングすることができる。１つのアッセイにおいては、ＩＬ−１７様ポリペプチドをマイクロタイタープレートのウェル内に固定化する。ついで放射能標識ＩＬ−１７様結合相手（例えば、ヨウ素化ＩＬ−１７様結合相手）および該試験分子を、１つずつ一度に（いずれの順序でもよい）または同時に該ウェルに加えることができる。インキュベーション後、該ウェルを洗浄し、放射能を計数して（シンチレーションカウンターを使用する）、該結合相手がＩＬ−１７様ポリペプチドに結合した度合を測定することができる。典型的には、該分子を或る範囲の濃度にわたり試験し、該結果の評価における正確さのために、該試験アッセイの要素の１以上を欠く一連の対照ウェルを使用することができる。この方法に代わる方法は、該タンパク質の「位置」を逆転させ、すなわち、ＩＬ−１７様結合相手を該マイクロタイタープレートに固定化し、該試験分子および放射能標識ＩＬ−１７様ポリペプチドと共にインキュベートし、ＩＬ−１７様ポリペプチド結合の度合に関して測定することを含む。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９５）の第１８章を参照されたい。
【０２１７】
放射能標識の代わりの手段として、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはその結合相手をビオチンに共役させ、ついでビオチン化タンパク質の存在を、比色法またはストレプトアビジンの蛍光タグ化により検出されうる酵素［例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼ（ＡＰ）］に結合したストレプトアビジンを使用して検出することができる。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドに対する又はＩＬ−１７様結合相手に対する、ビオチンに共役した抗体を使用し、それを、ＡＰまたはＨＲＰに結合した酵素結合ストレプトアビジンと共にインキュベートした後で検出することができる。
【０２１８】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様結合相手を、アガロースビーズ、アクリルビーズまたは他のタイプのそのような不活性固相基体への結合により固定化することができる。該基体−タンパク質複合体を、該相補的タンパク質と該試験化合物とを含有する溶液中に配置することができる。インキュベーション後、該ビーズを遠心分離により沈殿させ、ＩＬ−１７様ポリペプチドとその結合相手との結合の量を、本明細書に記載の方法を用いて評価することができる。あるいは、該基体−タンパク質複合体をカラム内で固定化し、該試験分子および相補的タンパク質を該カラムに通過させる。ついでＩＬ−１７様ポリペプチドとその結合相手との複合体の形成を、本明細書に記載の技術（すなわち、放射能標識、抗体結合など）のいずれかを用いて評価することができる。
【０２１９】
ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合相手との複合体の形成を増強または減弱する試験分子を同定するのに有用なもう１つのインビトロアッセイは、表面プラズモン共鳴検出系、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ系（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ系は、該製造業者のプロトコールを用いて実施することができる。このアッセイは、実質的には、検出器中に位置するデキストラン被覆センサーチップへのＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様結合相手の共有結合を伴う。ついで該試験化合物およびもう一方の相補的タンパク質を、該センサーチップを含有するチャンバー内に同時または連続的に注入することができる。結合する相補的タンパク質の量は、該センサーチップのデキストラン被覆側に物理的に会合した分子量の変化に基づき評価することができる。分子量の変化は、該検出系により測定されうる。
【０２２０】
いくつかの場合には、２以上の試験化合物を一緒に、それらがＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合相手との複合体の形成を増強または減弱する能力に関して評価することが望ましいかもしれない。これらの場合には、本明細書に記載のアッセイは、そのような追加的な試験化合物を第１試験化合物と同時にまたはそれに続いて加えることにより、容易に修飾することができる。該アッセイの残りの工程については、本明細書に記載されているとおりである。
【０２２１】
本明細書に記載されているようなインビトロアッセイは、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合相手とによる複合体形成に対する効果に関して多数の化合物をスクリーニングするのに有利に用いることができる。該アッセイは、ファージディスプレイ、合成ペプチドおよび化学合成ライブラリーにおいて精製した化合物をスクリーニングするために自動化することができる。
【０２２２】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドとＩＬ−１７様結合相手との複合体の形成を増強または減弱する化合物は、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様結合相手を発現する細胞および細胞系を使用して細胞培養内でスクリーニングすることができる。細胞および細胞系は任意の哺乳類から得ることができるが、好ましくは、ヒトまたは他の霊長類、イヌまたはげっ歯類に由来する。ＩＬ−１７様結合相手を表面に発現する細胞へのＩＬ−１７様ポリペプチドの結合は、試験分子の存在下または不存在下で評価し、結合の度合は、例えば、ＩＬ−１７様結合相手に対するビオチン化抗体を使用してフローサイトメトリーにより測定することができる。本明細書に記載のタンパク質結合アッセイにおいて陽性と評価された化合物を更に評価するためには、細胞培養アッセイを有利に用いることができる。
【０２２３】
また、薬物候補の影響をスクリーニングするためにも、細胞培養を使用することができる。例えば、薬物候補は該ＩＬ−１７様遺伝子の発現を増強または減弱しうる。ある実施形態においては、該細胞培養を該薬物候補にさらした後で、産生されたＩＬ−１７様ポリペプチドの量を測定することができる。ある実施形態においては、該細胞培養に対する該薬物候補の実際の影響を検出することができる。例えば、特定の遺伝子の過剰発現は、該細胞培養に特定の影響を及ぼしうる。そのような場合には、該遺伝子の発現を薬物候補が増強または減弱する能力または該細胞培養に対する特定の影響をそれが妨げたり抑制する能力を試験することができる。他の具体例においては、特定の代謝産物（例えば、ポリペプチドの断片）の産生が、疾患または病理学的状態を招く又はそれに関連している可能性がある。そのような場合には、細胞培養内で薬物候補がそのような代謝産物の産生を減少させる能力を試験することができる。
【０２２４】
Ｐ−３８インヒビター
細胞外刺激と細胞からのＩＬ−１および／またはＴＮＦαの分泌との間の介入が望ましい場合には、シグナル経路上に位置するキナーゼの抑制を介してシグナル伝達を遮断することにより、これを行うことができる。これは、例えば、公知セリン／トレオニン（ｓｅｒ／ｔｈｒ）キナーゼである「Ｐ−３８」（「ＲＫ」または「ＳＡＰＫ−２」とも称される；Ｌｅｅら，Ｎａｔｕｒｅ，３７２：７３９（１９９４））の抑制を介して達成することができる。Ｈａｎら，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ，１２６５：２２４−２２７（１９９５）を参照されたい。Ｐ−３８に対する競合結合アッセイにおける有効性と、ＬＰＳ刺激後の単球からのＩＬ−１分泌のレベルを減少させる同インヒビターとに関して、直線関係が示されている。単球のＬＰＳ刺激の後、ＴＮＦαのメッセンジャーＲＮＡのレベルは１００倍増加することが示されているが、ＴＮＦαのタンパク質レベルは１０，０００倍増加した。したがって、ＴＮＦシグナリングの顕著な増幅が翻訳レベルで生じている。Ｐ−３８の抑制は翻訳効率を減少させるらしく、ＴＮＦαが翻訳制御下にあるという更なる証拠がＢｅｕｔｌｅｒら及びＬｅｅの欠失実験において見出されており、該実験においては、３’非翻訳ｍＲＮＡ（３’ＵＴＲ）のセグメントが除去されて高い翻訳効率が得られている。注目すべきは、ＴＮＦα　ｍＲＮＡの適切なセグメントを欠失させた場合には、Ｐ−３８インヒビターがＴＮＦαのレベル（すなわち、翻訳効率）に影響を及ぼさなかったということである。
【０２２５】
上昇したレベルのＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１は、以下のものを含む（これらに限定されるものではない）多数の病態の開始、病因または悪化に寄与しうることが見出されている：慢性関節リウマチ；骨関節炎；リウマチ様脊椎炎；尿酸塩関節炎；炎症性腸疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；乾癬；クローン病；アレルギー性鼻炎；潰瘍性大腸炎；アナフィラキシー；接触皮膚炎；喘息；ＴＮＦα抑制に対して感受性ウイルス、例えばＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザ、アデノウイルスおよびヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２および帯状疱疹ウイルスを含む）に対するものを含む抗ウイルス療法；筋変性；悪疫質；ライター症候群；ＩＩ型糖尿病、骨吸収疾患；移植片対宿主反応；虚血再潅流傷害；アテローム性動脈硬化症；脳損傷；アルツハイマー病；多発性硬化症；脳マラリア；敗血症；敗血症ショック；毒素ショック症候群；感染による発熱および筋肉痛。
【０２２６】
置換イミダゾール、ピロール、ピリジン、ピリミジンなどの化合物が、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＴＮＦのような炎症性サイトカインの抑制によるサイトカイン媒介疾患の治療用に記載されている。サイトカイン媒介疾患の治療に使用する置換イミダゾールは、米国特許第５，５９３，９９２号、ＷＯ　９３／１４０８１、ＷＯ　９７／１８６２６、ＷＯ　９６／２１４５２、ＷＯ　９６／２１６５４、ＷＯ　９６／４０１４３、ＷＯ　９７／０５８７８、ＷＯ　９７／０５８７８に記載されている。
【０２２７】
炎症の治療に使用する置換イミダゾールは米国特許第３，９２９，８０７号に記載されている。サイトカイン媒介疾患の治療に使用する置換ピロール化合物はＷＯ　９７／０５８７７、ＷＯ　９７／０５８７８、ＷＯ　９７／１６４２６、ＷＯ　９７／１６４４１およびＷＯ　９７／１６４４２に記載されている。サイトカイン媒介疾患の治療に使用する置換アリールおよびヘテロアリール縮合ピロール化合物はＷＯ　９８／２２４５７に記載されている。サイトカイン媒介疾患の治療に使用する置換ピリジン、ピリミジン、ピリミジノンおよびピリダジン化合物はＷＯ　９８／２４７８０、ＷＯ　９８／２４７８２、ＷＯ　９９／２４４０４およびＷＯ　９９／３２４４８に記載されている。
【０２２８】
細胞内に取込まれるタンパク質
タンパク質を細胞内に取込ませるために、ｔａｔタンパク質配列（ＨＩＶ由来）を使用することができる。例えば、Ｆａｌｗｅｌｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：６６４−６６８（１９９４）を参照されたい。例えば、ＨＩＶ　ｔａｔタンパク質の１１アミノ酸の配列（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１３）（「タンパク質トランスダクションドメイン」またはＴＡＴ　ＰＤＴと称される）が、細胞の細胞膜および核膜を越える運搬を媒介するものとして記載されている。Ｓｃｈｗａｒｚｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１５６９−１５７２（１９９９）、およびＮａｇａｈａｒａら，Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４：１４４９−１４５２（１９９８）を参照されたい。これらの方法においては、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析により観察した場合に細胞に結合するＦＩＴＣ−構築物（ＦＩＴＣ−ＧＧＧＧＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１４）を製造する。これらの構築物は、ｉ．ｐ．投与後に組織を透過する。つぎにｔａｔ−ｂｇａｌ融合タンパク質を構築する。この構築物で処理された細胞はｂ−ｇａｌ活性を示す。注入後、肝臓、腎臓、肺、心臓および脳組織を含む多数の組織が、これらの方法を用いた場合に発現を示すことが判明している。これらの構築物は、該細胞内に進入するために或る程度の変性を受けたと考えられ、したがって、該細胞内への進入後にリフォールディングが要求されうる。
【０２２９】
したがって、所望のタンパク質またはポリペプチドを細胞内に取込ませるために、ｔａｔタンパク質配列を使用することができると理解されるであろう。例えば、ｔａｔタンパク質配列を使用して、ＩＬ−１７様分子の活性を抑制するためにＩＬ−１７様アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−１７様選択的結合剤、小分子、可溶性受容体またはアンチセンスオリゴヌクレオチド）を細胞内に投与することができる。本発明で用いる「ＩＬ−１７様分子」なる語は、本明細書中に定義されているとおりのＩＬ−１７様核酸分子およびＩＬ−１７様ポリペプチドの両方を意味する。所望により、これらの方法を用いて、該ＩＬ−１７様タンパク質自体を細胞内部に投与することができる。Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｅ．，“Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　Ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　Ｂｏｄｙ’ｓ　Ｃｅｌｌｓ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１４６６−１４６７（１９９９）も参照されたい。
【０２３０】
治療用途
該ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は以下の型の細胞において見出されている：精巣、前立腺、乳腺、リンパ節および大腿骨。マウスＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は以下の型の細胞において見出されている：Ｔ細胞および胚細胞。
【０２３１】
本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドならびにアゴニストおよびアンタゴニストで治療、診断、改善または予防されうる急性および慢性疾患の非限定的な一覧は、以下のものを含む。
【０２３２】
・免疫系機能不全に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、炎症性関節炎、骨関節炎、炎症性関節疾患、自己免疫疾患、例えば自己免疫脈管炎、多発性硬化症、狼瘡、糖尿病（例えば、インスリン糖尿病）、炎症性腸疾患、移植拒絶、移植片対宿主疾患、および炎症状態のうち、挫傷、捻挫、軟骨損傷、外傷、整形外科手術、感染または他の疾患過程から生じるもの。アレルギーを含む（これに限定されるものではない）、免疫系の機能不全により影響される他の疾患も、本発明の範囲内に含まれる。本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドならびにアゴニストおよびアンタゴニストは、Ｔ細胞増殖の抑制、Ｔ細胞活性化の抑制、および／またはＢ細胞増殖および／または免疫グロブリン分泌の抑制のために使用することができる。
【０２３３】
・感染に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、らい病、ウイルス感染症、例えば肝炎またはＨＩＶ、細菌感染症、例えばクロストリジウム関連疾患、例えばクロストリジウムに関連した下痢、肺結核、細菌またはウイルスによる急性熱性疾患、発熱、肝臓の急性期応答、敗血症、敗血症ショックが含まれるが、それらに限定されるものではない。感染に関わる他の疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３４】
・体重障害に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、肥満、食欲不振、悪疫質、例えばエイズ誘発性悪疫質、ミオパシー（例えば、筋タンパク質代謝、例えば敗血症）および低血糖症が含まれるが、それらに限定されるものではない。体重障害に関わる他の疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３５】
・ニューロン機能不全に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、アルツハイマー病、パーキンソン病、神経毒性（例えば、ＨＩＶにより誘発されるもの）、ＡＬＳ、脳損傷、ストレス、うつ病、侵害受容および他の疼痛（癌関連疼痛を含む）、痛覚過敏、てんかん、学習障害および記憶障害、睡眠障害、ならびに末梢および中枢ニューロパシーが含まれるが、それらに限定されるものではない。他の神経学的障害も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３６】
・肺に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、急性または慢性肺損傷、例えば間質性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧、肺気腫、嚢胞性線維症、肺線維症および喘息が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の肺疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３７】
・皮膚に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、乾癬、湿疹および創傷治癒が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の皮膚疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３８】
・腎臓に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、急性および慢性糸球体腎炎が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の腎臓疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２３９】
・骨に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、骨粗鬆症、大理石骨病、骨形成不全症、ページェット病、歯周病、顎関節症および高カルシウム血症が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の骨疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２４０】
・血管系に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、出血または卒中、出血性ショック、虚血、例えば、心臓虚血および脳虚血（例えば、それぞれ神経変性を招きうる外傷、てんかん、出血または卒中の結果としての脳損傷）、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全；再発狭窄症、再潅流傷害および血管新生が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の血管系の疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２４１】
・腫瘍細胞の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、リンパ腫、骨肉腫、慢性および急性骨髄性白血病（ＡＭＬおよびＣＭＬ）、例えば骨髄組織球性白血病（Ｍ４　ＡＭＬ）、および他の白血病、多発性骨髄腫、肺、乳癌、腫瘍転移、ならびに放射線療法からの副作用が含まれるが、それらに限定されるものではない。腫瘍細胞に関わる他の疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２４２】
・生殖障害の診断および／または予防。そのような疾患の具体例には、不妊症、流産、早期分娩および出産ならびに子宮内膜症が含まれるが、それらに限定されるものではない。生殖系に関わる他の疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２４３】
・眼障害の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、例えば角膜移植に関連している可能性がある炎症性眼疾患；網膜変性、盲、黄斑変性、緑内障、ぶどう膜炎および網膜神経症が含まれるが、それらに限定されるものではない。他の眼疾患も本発明の範囲内に含まれる。
【０２４４】
・炎症に関わる疾患の診断および／または治療。そのような疾患の具体例には、本明細書に記載のものが含まれるが、それらに限定されるものではない。
【０２４５】
本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドおよびアゴニストは、骨髄および脾臓細胞充実性、好酸球、コロニー形成細胞（ＣＦＣ）およびリンパ球産生を増加させうる。したがって、本ＩＬ−１７様核酸およびポリペプチドは、少なくとも１つの顆粒球および／または巨核球系に方向づけられた少なくとも１つの初期または多分化能前駆体の増殖および／または分化の刺激を含む造血細胞成長の調節をもたらす。逆に、ＩＬ−１７様アンタゴニストは、これらの細胞のレベルおよび／または産生を減少させうる。
【０２４６】
また、本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドおよびアゴニストは炎症活性を有する。該ＩＬ−１７様ポリペプチドは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６のような炎症性サイトカインの産生を誘導する。
【０２４７】
さらに、本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドならびにアゴニストおよびアンタゴニストは、造血および好中球、顆粒球または血小板の産生を刺激するために使用することが可能であり、したがって、化学療法を受けている患者に有用である。本発明のＩＬ−１７様核酸、ポリペプチドならびにアゴニストおよびアンタゴニストは、ウイルスまたは細菌感染症、免疫関連疾患、貧血、白血病、血小板減少症、尿毒症、フォン・ウィルブラント病、術後心血管機能不全、エイズ（後天性免疫不全症候群）関連骨髄不全、ならびに胃腸系、関節および肺の炎症性疾患を治療するためにも使用することができる。
【０２４８】
本発明の範囲内の物質を使用して治療可能な他の疾患には、急性膵炎、慢性疲労症候群、線維筋痛および川崎病（ＭＬＮＳ）が含まれる。
【０２４９】
望ましくないレベルのＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、本ＩＬ−１７様ポリペプチドのリガンドおよび／または本ＩＬ−１７様ポリペプチド自体の１以上に関連した他の疾患も、本発明の範囲内に含まれる。望ましくないレベルには、ＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａ、本ＩＬ−１７様ポリペプチドの受容体および／または本発明に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドの過剰レベルおよび／または正常以下のレベルが含まれる。
【０２５０】
ＩＬ−１インヒビターには、いくつものメカニズムから生じるＩＬ−１に対する細胞性応答の活性化を特異的に妨げうる任意のタンパク質が含まれる。そのようなメカニズムには、ＩＬ−１産生の下方制御、遊離ＩＬ−１の結合、対応受容体へのＩＬ−１結合の阻害、ＩＬ−１受容体複合体の形成（すなわち、ＩＬ−１受容体補助タンパク質とのＩＬ−１受容体の会合）の阻害、または対応受容体への結合後のＩＬ−１シグナリングの調節の阻害が含まれる。インターロイキン１インヒビターのクラスには以下のものが含まれる。
・インターロイキン１受容体アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ｒａ（本明細書に記載のとおり）；
・抗ＩＬ−１受容体モノクローナル抗体（例えば、ＥＰ　６２３６７４）；
・ＩＬ−１結合性タンパク質、例えば、可溶性ＩＬ−１受容体（例えば、米国特許第５，４９２，８８８号、米国特許第５，４８８，０３２号および米国特許第５，４６４，９３７号、米国特許第５，３１９，０７１号および米国特許第５，１８０，８１２号）；
・抗ＩＬ−１モノクローナル抗体（例えば、ＷＯ　９５０１９９７、ＷＯ　９４０２６２７、ＷＯ　９００６３７１、米国特許第４，９３５，３４３号、ＥＰ　３６４７７８、ＥＰ　２６７６１１およびＥＰ　２２００６３）；
・ＩＬ−１受容体補助タンパク質およびそれに対する抗体（例えば、ＷＯ　９６／２３０６７）；
・ＩＬ−１βの産生および分泌を抑制するために使用しうる、インターロイキン１β変換酵素（ＩＣＥ）またはカスパーゼＩのインヒビター；
・インターロイキン１βプロテアーゼインヒビター；
・ＩＬ−１のインビボ合成または細胞外放出を遮断する他の化合物およびタンパク質。
【０２５１】
典型的なＩＬ−１インヒビターは以下の参考文献に開示されている：
米国特許第５７４７４４４号、第５３５９０３２号、第５６０８０３５号、第５８４３９０５号、第５３５９０３２号、第５８６６５７６号、第５８６９６６０号、第５８６９３１５号、第５８７２０９５号、第５９５５４８０号；
国際（ＷＯ）特許出願９８／２１９５７、９６／０９３２３、９１／１７１８４、９６／４０９０７、９８／３２７３３、９８／４２３２５、９８／４４９４０、９８／４７８９２、９８／５６３７７、９９／０３８３７、９９／０６４２６、９９／０６０４２、９１／１７２４９、９８／３２７３３、９８／１７６６１、９７／０８１７４、９５／３４３２６、９９／３６４２６および９９／３６４１５；
欧州（ＥＰ）特許出願５３４９７８および８９４７９５；およびフランス国特許出願ＦＲ２７６２５１４。
【０２５２】
インターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）は、インターロイキン１の天然インヒビターとして作用するヒトタンパク質である。好ましい受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａならびにその変異体および誘導体を含む）、ならびにその製造方法および使用方法は、米国特許第５，０７５，２２２号、ＷＯ　９１／０８２８５、ＷＯ　９１／１７１８４、ＡＵ　９１７３６３６、ＷＯ　９２／１６２２１、ＷＯ　９３／２１９４６、ＷＯ　９４／０６４５７、ＷＯ　９４／２１２７５、ＦＲ　２７０６７７２、ＷＯ　９４／２１２３５、ＤＥ　４２１９６２６、ＷＯ　９４／２０５１７、ＷＯ　９６／２２７９３、ＷＯ　９７／２８８２８およびＷＯ　９９／３６５４１に記載されている。該タンパク質は、グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１受容体アンタゴニストを含む。
【０２５３】
特に、ＩＬ−１ｒａの３つの典型的な形態およびそれらの変異体は、該５，０７５，２２２特許に開示され記載されている。該５，０７５，２２２特許において「ＩＬ−１ｉ」と称されている、これらのうちの１番目のものは、Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．６）中の約５２ｍＭ　ＮａＣｌでＭｏｎｏＱ　ＦＰＬＣカラムから溶出する約４．８の等電点を有するＳＤ−ＰＡＧＥ上での２２〜２３ｋＤの分子として特徴づけられる。２番目のＩＬ−１ｒａβは、４８ｍＭ　ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する２２〜２３ｋＤのタンパク質として特徴づけられる。ＩＬ−１ｒａαおよびＩＬ−１ｒａβは共にグリコシル化体である。３番目のＩＬ−１ｒａｘは、４８ｍＭ　ＮａＣｌでＭｏｎｏＱカラムから溶出する２０ｋＤのタンパク質として特徴づけられ、非グリコシル化体である。米国特許第５，０７５，２２２号はまた、該インヒビターのコード化をもたらす遺伝子を単離するための方法、適切なベクターおよび細胞型内に該遺伝子をクローニングするための方法、および該遺伝子を発現させて該インヒビターを製造するための方法を開示している。
【０２５４】
得られる分子が生物学的に活性である（例えば、本明細書に列挙されているような疾患および障害の１以上に影響を及ぼす能力を有する）限り、ＩＬ−１ｒａのアミノ酸配列内に欠失、挿入および置換の多数の組合せ（本発明では個々に又はまとめて「変異体」と称される）を施すことが可能であると、当業者は認識するであろう。
【０２５５】
本発明により意図されるとおり、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−１７様選択的結合剤［例えば抗体］、ＩＬ−１７様ポリペプチド受容体［例えば可溶性ＩＬ−１７様受容体］、小分子およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを、他の療法の佐剤として、また、治療されている適応症に適した他の医薬組成物と共に投与することができる。ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト、および／またはＩＬ−１７様受容体自体、ならびに１以上の追加的な療法または医薬製剤のいずれかは、別々に、連続的に又は同時に投与することができる。
【０２５６】
特定の実施形態においては、本発明は、本明細書に列挙されている疾患および障害の治療または予防のための１以上のＴＮＦインヒビターのいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。
【０２５７】
そのようなＴＮＦインヒビターには、ＴＮＦのインビボ合成または細胞外放出を遮断する化合物およびタンパク質が含まれる。特定の実施形態においては、本発明は、以下のＴＮＦインヒビターの１以上のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する：ＴＮＦ結合性タンパク質（本明細書に記載のとおりの可溶性ＴＮＦ受容体Ｉ型および可溶性ＴＮＦ受容体ＩＩ型（「ｓＴＮＦＲ」））、抗ＴＮＦ抗体、顆粒球コロニー刺激因子；サイドマイド；ＢＮ　５０７３０；テニダップ；Ｅ　５５３１；チアパファント　ＰＣＡ４２４８；ニメスリド；パナビール；ロリプラム；ＲＰ　７３４０１；ペプチドＴ；ＭＤＬ　２０１，４４９Ａ；（１Ｒ，３Ｓ）−シス−１−［９−（２，６−ジアミノプリニル）］−３−ヒドロキシ−４−シクロペンテン塩酸塩；（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−（９−（２，６−ジアミノ）プリン）］−３−アセトキシシクロペンタン；（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−［９−アデニル］−３−アジドシクロペンタン塩酸塩および（１Ｒ，３Ｒ）−トランス−１−（６−ヒドロキシ−プリン−９−イル）−３−アジドシクロ−ペンタン。ＴＮＦ結合性タンパク質は当技術分野において記載されている（ＥＰ　３０８　３７８、ＥＰ　４２２　３３９、ＧＢ　２　２１８　１０１、ＥＰ　３９３　４３８、ＷＯ　９０／１３５７５、ＥＰ　３９８　３２７、ＥＰ　４１２　４８６、ＷＯ　９１／０３５５３、ＥＰ　４１８　０１４、ＪＰ　１２７，８００／１９９１、ＥＰ　４３３　９００、米国特許第５，１３６，０２１号、ＧＢ　２　２４６　５６９、ＥＰ　４６４　５３３、ＷＯ　９２／０１００２、ＷＯ　９２／１３０９５、ＷＯ　９２／１６２２１、ＥＰ　５１２　５２８、ＥＰ　５２６　９０５、ＷＯ　９３／０７８６３、ＥＰ　５６８　９２８、ＷＯ　９３／２１９４６、ＷＯ　９３／１９７７７、ＥＰ　４１７　５６３、ＷＯ　９４／０６４７６およびＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９７／１２２４４）。
【０２５８】
例えば、ＥＰ　３９３　４３８およびＥＰ　４２２　３３９は、「ｓＴＮＦＲ」と総称される可溶性ＴＮＦ受容体Ｉ型（「ｓＴＮＦＲ−Ｉ」または「３０ｋＤａ　ＴＮＦインヒビター」としても公知である）および可溶性ＴＮＦ受容体ＩＩ型（「ｓＴＮＦＲ−ＩＩ」または「４０ｋＤａ　ＴＮＦインヒビター」としても公知である）およびそれらの修飾形態（例えば、断片、機能的誘導体および変異体）のアミノ酸配列および核酸配列を教示している。ＥＰ　３９３　４３８およびＥＰ　４２２　３９９はまた、該インヒビターのコード化をもたらす遺伝子を単離するための方法、適切なベクターおよび細胞型内に該遺伝子をクローニングするための方法、および該遺伝子を発現させて該インヒビターを製造するための方法を開示している。また、ｓＴＮＦＲ−ＩおよびｓＴＮＦＲ−ＩＩの多価形態（すなわち、２以上の活性部位を含む分子）も開示されている。１つの実施形態においては、該多価形態は、少なくとも１つのＴＮＦインヒビターおよび別の部位を任意の臨床的に許容されるリンカー（例えば、ポリエチレングリコール）で化学的にカップリングすることにより（ＷＯ　９２／１６２２１およびＷＯ　９５／３４３２６）、ペプチドリンカーにより（Ｎｅｖｅら　（１９９６），Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，８（５）：３６５−３７０）、ビオチンに化学的に結合させ次いでアビジンに結合させることにより（ＷＯ　９１／０３５５３）、そして最後にキメラ抗体分子を合体させることにより（米国特許第５，１１６，９６４号、ＷＯ　８９／０９６２２、ＷＯ　９１／１６４３７およびＥＰ　３１５０６２）、構築することができる。
【０２５９】
抗ＴＮＦ抗体には、ＭＡＫ　１９５Ｆ　Ｆａｂ抗体（Ｈｏｌｌｅｒら　（１９９３），１ｓｔ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｉｎ　Ｂｏｎｅ　Ｍａｒｒｏｗ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１４７）、ＣＤＰ　５７１抗ＴＮＦモノクローナル抗体（Ｒａｎｋｉｎら　（１９９５），Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，３４：３３４−３４２）；ＢＡＹ　Ｘ　１３５１マウス抗腫瘍壊死因子モノクローナル抗体（Ｋｉｅｆｔら　（１９９５），７ｔｈ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｐ．９）、ＣｅｎＴＮＦ　ｃＡ２抗ＴＮＦモノクローナル抗体（Ｅｌｌｉｏｔｔら　（１９９４），Ｌａｎｃｅｔ，３４４：１１２５−１１２７およびＥｌｌｉｏｔｔら　（１９９４），Ｌａｎｃｅｔ，３４４：１１０５−１１１０）が含まれる。
【０２６０】
特定の実施形態においては、本発明は、分泌型もしくは可溶性ヒトｆａｓ抗原またはその組換え体（ＷＯ　９６／２０２０６およびＭｏｕｎｔｚら，Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５５：４８２９−４８３７；およびＥＰ　５１０　６９１）と組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。ＷＯ　９６／２０２０６は、分泌型ｆａｓ抗原（Ｉｇ融合タンパク質を含む組換え体および天然体）、該可溶性組換えヒトｆａｓ抗原のコード化をもたらす遺伝子を単離するための方法、適切なベクターおよび細胞型内に該遺伝子をクローニングするための方法、および該遺伝子を発現させて該インヒビターを製造するための方法を開示している。ＥＰ　５１０　６９１は、可溶性ｆａｓ抗原を含むヒトｆａｓ抗原をコードするＤＮＡ、該ＤＮＡを発現するベクターおよび該ベクターでトランスフェクトされた形質転換体を教示している。非経口投与の場合、分泌型または可溶性ｆａｓ抗原融合タンパク質の用量はそれぞれ、一般には、約１マイクログラム／ｋｇ〜約１００マイクログラム／ｋｇである。
【０２６１】
リウマチ疾患のような急性および慢性炎症を含む本明細書に記載の疾患および障害の現在の治療は、一般には、疼痛および炎症を制御するための第一線の薬物の使用を含む。これらの薬物は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）として分類される。二次的な治療薬には、副腎皮質ステロイド、遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）または疾患修飾（ＤＭ）薬が含まれる。以下の化合物に関する情報は、Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｙ，第１６版，Ｍｅｒｃｋ，Ｓｈａｒｐ　＆　Ｄｏｈｍｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｅｒｃｋ　＆　Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９９２）およびＰｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ，ＰＪＢ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ　Ｌｔｄに記載されている。
【０２６２】
特定の実施形態においては、本発明は、リウマチ疾患のような急性および慢性炎症ならびに移植片対宿主疾患を含む本明細書に記載の疾患および障害の治療のための、ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体、および１以上のＮＳＡＩＤのいずれかの使用に関する。ＮＳＡＩＤの抗炎症作用は、少なくとも部分的には、プロスタグランジン合成の抑制によるものである（Ｇｏｏｄｍａｎ　ａｎｄ　Ｇｉｌｍａｎ　ｉｎ　“Ｔｈｅ　Ｐｈｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａｓｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”ＭａｃＭｉｌｌａｎ　第７版（１９８５））。ＮＳＡＩＤは、少なくとも以下の９つの群に特徴づけられうる：（１）サリチル酸誘導体、（２）プロピオン酸誘導体、（３）酢酸誘導体、（４）フェナム酸誘導体、（５）カルボン酸誘導体、（６）酪酸誘導体、（７）オキシカム（ｏｘｉｃａｍ）、（８）ピラゾールおよび（９）ピラゾロン。
【０２６３】
もう１つの実施形態においては、本発明は、１以上のサリチル酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。そのようなサリチル酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：アセトアミノサロール、アロキシプリン、アスピリン、ベノリラート、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム（カルシウム　アセチルサリシラート）、コリン　マグネシウム　トリサリシラート、サリチル酸マグネシウム、サリチル酸コリン、ジフルシナール、エテルサレート、フェンドサール、ゲンチシン酸、グリコール　サリシラート、イミダゾール　サリシラート、リシン　アセチルサリシラート、メサラミン、モルホリン　サリシラート、１−ナフチル　サリシラート、オルサラジン、パルサルミド、フェニル　アセチルサリシラート、フェニル　サリシラート、サラセタミド、サリシラミド　Ｏ−酢酸、サルサラート、サリチル酸ナトリウムおよびスルファサラジン。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したサリチル酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６４】
更なる特定の実施形態においては、本発明は、１以上のプロピオン酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。該プロピオン酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸（Ｂｂｕｃｌｏｘｉｃ　ａｃｉｄ）、カルプロフェン、デキシノドプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルプロフェン、フルビプロフェン、フルクロプロフェン、イブプロフェン、イブブロフェン　アルミニウム、イブプロキサム、インドプロフェン、イソプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセン　ナトリウム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピメプロフェン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸（ｐｒｏｔｉｚｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ピリドキシプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸およびチオキサプロフェン。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したプロピオン酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６５】
さらにもう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上の酢酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。該酢酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：アセメタシン、アルクロフェナック、アムフェナック、ブフェキサマック、シンメタシン、クロピラック、デルメタシン、ジクロフェナック　カリウム、ジクロフェナック　ナトリウム、エトドラック、フェルビナック、フェンクロフェナック、フェンクロラック、フェンクロズ酸（ｆｅｎｃｌｏｚｉｃ　ａｃｉｄ）、フェンチアザック、フルオフェナック、グルカメタシン、イブフェナック、インドメタシン、イソフェゾラック、イソキセパック、ロナゾラック、メチアジン酸、オキサメタシン、オキシピナック、ピメタシン、プログルメタシン、スリンダック、タルメタシン、チアラミド、チオピナック、トルメチン、トルメチン　ナトリウム、ジドメタシンおよびゾメピラック。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連した酢酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６６】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上のフェナム酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。該フェナム酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：エンフェナム酸、エトフェナマート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、メドフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸、タルニフルマート、テロフェナマート、トルフェナム酸およびウフェナマート。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したフェナム酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６７】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上のカルボン酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。使用しうるカルボン酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、クリダナック、ジフルニサール、フルフェニサール、イノリジン、ケトロラックおよびチノリジンが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したカルボン酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６８】
さらにもう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上の酪酸誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。該酪酸誘導体、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェンおよびキセンブシンが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連した酪酸誘導体も、この群に含まれると意図される。
【０２６９】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上のオキシカム誘導体、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。該オキシカム、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、ドロキシカム、エノリカム、イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム、テノキシカムおよび４−ヒドロキシル−１，２−ベンゾチアジン−１，１−ジオキシド−４−（Ｎ−フェニル）−カルボキサミドが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したオキシカムも、この群に含まれると意図される。
【０２７０】
さらにもう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上のピラゾール、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。使用しうるピラゾール、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、ジフェナミゾールおよびエピリゾールが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したピラゾールも、この群に含まれると意図される。
【０２７１】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、１以上のピラゾロン、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。使用しうるピラゾロン、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、アパゾン、アザプロパゾン、エンズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペブゾン、プロピルフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾンおよびチアゾリノブタゾンが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したピラゾロンも、この群に含まれると意図される。
【０２７２】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、以下のＮＳＡＩＤの１以上のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する：ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、アニトラザフェン、アントラフェニン、ベンダザック、ベンダザック　リシナート、ベンジダミン、ベプロジン、ブロペラモル（ｂｒｏｐｅｒａｍｏｌｅ）、ブコローム、ブフェゾラック、シプロクワゾン、クロキシマート、ダジダミン、デボキサメット、デトミジン、ジフェンピラミド、ジフェンピラミド、ジフィサルアミン、ジタゾール、エモルファゾン、ファネチゾール　メシラート、フェンフルミゾール、フロクタフェニン、フルミゾール、フルニキシン、フルプロクワゾン、フォピルトリン、フォスフォサール、グアイメサール、グアイアゾレン、イソニキシルン、レフェタミンＨＣｌ、レフルノミド、ロフェミゾール、ロチファゾール、リシン　クロニキシナート、メセクラゾン、ナブメトン、ニクチンドール、ニメスリド、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサセプロール、オキサパドール、パラニリン、ペリソキサール、ペリソキサール、シトラート、ピフォキシム、ピプロキセン、ピラゾラック、ピルフェニドン、プロクワゾン、プロキサゾール、チエラビンＢ、チフラミゾール、チメガジン、トレクチン、トルパドール、トリプタミド、および４８０１５６Ｓ、ＡＡ８６１、ＡＤ１５９０、ＡＦＰ８０２、ＡＦＰ８６０、ＡＩ７７Ｂ、ＡＰ５０４、ＡＵ８００１、ＢＰＰＣ、ＢＷ５４０Ｃ、ＣＨＩＮＯＩＮ　１２７、ＣＮ１００、ＥＢ３８２、ＥＬ５０８、Ｆ１０４４、ＦＫ−５０６、ＧＶ３６５８、ＩＴＦ１８２、ＫＣＮＴＥＩ６０９０、ＫＥＭ４、ＬＡ２８５１、ＭＲ７１４、ＭＲ８９７、ＭＹ３０９、ＯＮＯ３１４４、ＰＲ８２３、ＰＶ１０２、ＰＶ１０８、Ｒ８３０、ＲＳ２１３１、ＳＣＲ１５２、ＳＨ４４０、ＳＩＲ１３３、ＳＰＡＳ５１０、ＳＱ２７２３９、ＳＴ２８１、ＳＹ６００１、ＴＡ６０、ＴＡＩ−９０１（４−ベンゾイル−１−インダンカルボン酸）、ＴＶＸ２７０６、Ｕ６０２５７、ＵＲ２３０１およびＭＹ４１７７０のような社内コード番号により表示されるもの。ＮＳＡＩＤと同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したＮＳＡＩＤも、この群に含まれると意図される。
【０２７３】
さらにもう１つの特定の実施形態においては、本発明は、急性および慢性炎症、例えばリウマチ疾患、移植片対宿主疾患および多発性硬化症を含む本明細書に記載の疾患および障害の治療のための１以上の副腎皮質ステロイド、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。副腎皮質ステロイド、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：ヒドロコルチゾンおよびヒドロコルチゾン由来の化合物、例えば２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメラゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、酪酸クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコン、デソニド、デソキシメラゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコルト、フルクロロニド、フルメタゾン、ピバリン酸フルメタゾン、フルシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオシノニド、フルオロシノロンアセトニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、ヘキサン酸フルオコルトロン、吉草酸ジフルコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、フルプレドニゾロン、フルランデノリド、ホルモコルタール、ハルシノニド、ハロメタゾン、酢酸ハロプレドン、ヒドロコルタマート、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン　２１−ナトリウムスクシナート、ｔ−ブチル酢酸ヒドロコルチゾン、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルバート、プレドニゾロン、プレドニゾロン　２１−ジエドリアミノアセタート、リン酸プレドニゾロンナトリウム、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、２１−ｍ−スルホ安息香酸プレドニゾロンナトリウム、２１−ステアログリコール酸プレドニゾロンナトリウム、ｔ−ブチル酢酸プレドニゾロン、２１−トリメチル酢酸プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、２１−ジエチルアミノ酢酸プレドニリデン、チクソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニドおよびトリアムシノロンヘキサアセトニド。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連した副腎皮質ステロイドも、この群に含まれると意図される。
【０２７４】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、急性および慢性炎症、例えばリウマチ疾患、移植片対宿主疾患および多発性硬化症を含む本明細書に記載の疾患および障害の治療のための１以上の遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）または疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。ＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には以下のものが含まれる：アロクプレイド　ナトリウム、オーラノフィン、オーロチオグルコース、オーロチオグリカニド、アザチオプリン、ブレキナール　ナトリウム、ブシラミン、カルシウム　３−オーロチオ−２−プロパノール−１−スルホナート、クロラムブシル、クロロキン、クロブザリット、クプロキソリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、ダプソン、１５−デオキシスペルグアリン、ジアセレイン、グルコサミン、金塩（例えば、シクロキン金塩、金ナトリウムチオマラート、金ナトリウムチオスルファート）、ヒドロキシクロロキン、硫酸ヒドロキシクロロキン、ヒドロキシ尿素、ケブゾン、レバミゾール、ロベンザリット、メリッチン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ミゾリビン、ミコフェノラート　モフェチル、ミオラール、ナイトロジェンマスタード、Ｄ−ペニシリンアミン、ピリジノールイミダゾール、例えばＳＫＮＦ８６００２およびＳＢ２０３５８０、ラパマイシン、チオール類、チモポイエチンおよびビンクリスチン。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤも、この群に含まれると意図される。
【０２７５】
もう１つの特定の実施形態においては、本発明は、急性および慢性炎症を含む本明細書に記載の疾患および障害の治療のための１以上のＣＯＸ２インヒビター、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。ＣＯＸ２インヒビター、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、例えば、セレコキシブが含まれる。同様の鎮痛および抗炎症特性を有する構造的に関連したＣＯＸ２インヒビターも、この群に含まれると意図される。
【０２７６】
さらにもう１つの特定の実施形態においては、本発明は、急性および慢性炎症を含む本明細書に記載の疾患および障害の治療のための１以上の抗微生物薬、それらのプロドラッグエステルまたはそれらの医薬上許容される塩のいずれかと組合された（治療前、治療後または同時治療）ＩＬ−１７様ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストおよび／またはＩＬ−１７様受容体の使用に関する。抗微生物薬、それらのプロドラッグエステルおよびそれらの医薬上許容される塩には、例えば、広範な種類のペニシリン、セファロスポリンおよび他のβラクタム、アミノグリコシド、アゾール、キノロン、マクロライド、リファマイシン、テトラサイクリン、スルホンアミド、リンコスアミドおよびポリミキシンが含まれる。該ペニシリンには、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フロキサシリン、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、アモキシシリン、アモキシシリン／クラブラナート、ヘタシリン、シクラシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、カルベニシリンインダニル、チカルシリン、チカルシリン／クラブラナート、アズロシリン、メズロシリン、ペペラシリンおよびメシシリナムが含まれるが、これらに限定されるものではない。該セファロスポリンおよび他のβラクタムには、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフラジン、セファゾリン、セファドロキシル、セファクロール、セファマンドール、セフォテタン、セフォキシチン、セルロキシム、セフォニシド、セフォラジン、セフィキシム、セフォタキシム、モキサラクタム、セフチゾキシム、セトリアクソン、セフォペラゾン、セフタジジム、イミペネムおよびアズトレオナムが含まれるが、これらに限定されるものではない。該アミノグリコシドには、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネチルミシン、カナマイシンおよびネオマイシンが含まれるが、これらに限定されるものではない。該アゾールにはフルコナゾールが含まれるが、これに限定されるものではない。該キノロンには、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、エノキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシンおよびテマフロキサシンが含まれるが、これらに限定されるものではない。該マクロライドには、エリスロマイシン、スピラマイシンおよびアジトロマイシンが含まれるが、これらに限定されるものではない。該リファマイシンにはリファンピシンが含まれるが、これに限定されるものではない。該テトラサイクリンには、スピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、デオキシサイクリン、グアメサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノサイクリンおよびテトラサイクリンが含まれるが、これらに限定されるものではない。該スルホンアミドには、スルファニルアミド、スルファメトキサゾール、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフィソキサゾールおよびコトリモキサゾール（トリメトプリム／スルファメトキサゾ��ル）が含まれるが、これらに限定されるものではない。該リンコサミドには、クリンダマイシンおよびリノコマイシンが含まれるが、これらに限定されるものではない。該ポリミキシン（ポリペプチド）には、ポリミキシンＢおよびコリスチンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２７７】
ＩＬ−１７様組成物および投与
治療用組成物は本発明の範囲内である。そのようなＩＬ−１７様医薬組成物は、治療的に有効な量のＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様核酸分子を、投与形態に適するよう選択される製薬上または生理的に許容される製剤化剤と共に含みうる。医薬組成物は、治療的に有効な量の１以上のＩＬ−１７様選択的結合剤を、投与形態に適するよう選択される製薬上または生理的に許容される製剤化剤と共に含みうる。
【０２７８】
許容される製剤化物質は、好ましくは、使用する投与量および濃度において被投与者に無毒性である。
【０２７９】
該医薬組成物は、例えば、該組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、清澄性、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着または浸透性を修飾、維持または保存するための製剤化物質を含有しうる。適切な製剤化物質には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン）；抗微生物剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）；バッファー（例えば、ホウ酸塩、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩または他の有機酸）；増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯生成剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）；充填剤；単糖類；二糖類；および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；着色、香味および希釈剤；乳化剤；親水性重合体（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、アスコルビン酸または過酸化水素）；溶剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパール）；安定性増強剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）；等張性増強剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは、塩化ナトリウムまたはカリウム、マンニトールソルビトール）；運搬ビヒクル；希釈剤；賦形剤および／または医薬佐剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０））。
【０２８０】
最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、運搬形態および所望の投与量に応じて、当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前掲を参照されたい。そのような組成物は、該ＩＬ−１７様分子の物理的状態、安定性、インビボ放出速度およびインビボクリアランスに影響を及ぼしうる。
【０２８１】
医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、水性または非水性の性質のものでありうる。例えば、適切なビヒクルまたは担体は、恐らくは非経口投与用組成物において一般的な他の物質で補足された注射用水、生理的食塩水または人工脳脊髄液でありうる。中性緩衝食塩水、または血清アルブミンと混合された食塩水が、更なる典型的なビヒクルである。他の典型的な医薬組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓバッファー、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸バッファーを含み、それは更に、ソルビトールまたはその適切な代替物を含みうる。本発明の１つの実施形態においては、ＩＬ−１７様ポリペプチド組成物は、所望の純度を有する選択した組成物を、所望により使用する製剤化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前掲）と混合することにより、凍結乾燥ケークまたは水溶液の形態で保存用に製造することができる。さらに、該ＩＬ−１７様ポリペプチド産物は、スクロースのような適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。
【０２８２】
該ＩＬ−１７様医薬組成物は、非経口運搬用に選択することができる。あるいは、該組成物は、吸入用または消化管を介する運搬（例えば経口）用に選択することができる。そのような医薬上許容される組成物の製造は、当技術分野の技量の範囲内のものである。
【０２８３】
該製剤化成分は、投与部位に許容しうる濃度で存在する。例えば、生理的ｐＨまたはそれより若干低いｐＨ、典型的には約５〜約８のｐＨ範囲内で該組成物を維持するために、バッファーを使用する。
【０２８４】
非経口投与が意図される場合には、本発明で使用する治療用組成物は、医薬上許容されるビヒクル中に所望のＩＬ−１７様分子を含む、発熱物質を含有しない非経口的に許容される水溶液の形態でありうる。非経口注射のための特に適切なビヒクルは、適切に保存された無菌等張溶液としてＩＬ−１７様分子が製剤化されている無菌蒸留水である。さらにもう１つの製剤化は、デポ注射により後に運搬されうる産物のコントロールリリースまたは徐放をもたらす注射可能なミクロスフェア、生分解性粒子、重合性化合物（例えば、ポリ酪酸またはポリグリコール酸）ビーズまたはリポソームのような物質で所望の分子を製剤化することを含みうる。ヒアルロン酸を使用することも可能であり、これは、循環中の持続時間の延長を促す効果を有しうる。所望の分子の導入のための他の適切な手段には、移植可能な薬物運搬装置が含まれる。
【０２８５】
１つの実施形態においては、医薬組成物を吸入用に製剤化することができる。例えば、吸入用の乾燥粉末として、ＩＬ−１７様分子を製剤化することができる。また、ＩＬ−１７様ポリペプチドまたはＩＬ−１７様核酸分子吸入溶液を、エアゾール運搬用の噴射剤で製剤化することができる。さらにもう１つの実施形態においては、溶液を噴霧化することができる。さらに、化学修飾タンパク質の肺運搬を記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５に、肺投与が記載されている。
【０２８６】
また、ある製剤は経口投与されうると意図される。本発明の１つの実施形態においては、このようにして投与するＩＬ−１７様分子は、錠剤およびカプセル剤のような固形剤形の調剤に一般に使用される担体を使用して又は使用しないで製剤化することができる。例えば、カプセル剤は、バイオアベイラビリティが最大であり前全身分解が最小となる胃腸管内部位で該製剤の活性部分を放出するよう設計することができる。該ＩＬ−１７様分子の吸収を促進するために、追加的な物質を含有させることができる。また、希釈剤、香味剤、低融点ロウ、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤および結合剤を使用することができる。
【０２８７】
もう１つの医薬組成物は、錠剤の製造に適した無毒性の賦形剤との混合物中に、有効量のＩＬ−１７様分子を含みうる。無菌水または他の適切なビヒクル中に該錠剤を溶解することにより、１回量形態の液剤を製造することができる。適切な賦形剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムのような不活性希釈剤、あるいは、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴムのような結合剤、あるいは、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような滑沢剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２８８】
徐放または制御運搬製剤中にＩＬ−１７様ポリペプチドを含有する製剤を含む追加的なＩＬ−１７様医薬組成物が、当業者に明らかであろう。また、種々の他の徐放または制御運搬手段、例えばリポソーム担体、生分解性微粒子または多孔性ビーズおよびデポー注射剤を製剤化するための技術は、当業者に公知である。例えば、医薬組成物の運搬用の多孔性高分子微粒子のコントロールリリースを記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号を参照されたい。徐放放出製剤の追加的な具体例には、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透性重合体マトリックスが含まれる。徐放性マトリックスには、ポリステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号およびＥＰ　０５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタマートとの共重合体（Ｓｉｄｍａｎら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）（Ｌａｎｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセタート（Ｌａｎｇｅｒら，前掲）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ　１３３，９８８）が含まれうる。また、徐放組成物には、当技術分野で公知のいくつかの方法のいずれかにより製造することができるリポソームが含まれうる。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）；ＥＰ　０３６，６７６；ＥＰ　０８８，０４６およびＥＰ　１４３，９４９を参照されたい。
【０２８９】
インビボ投与に使用するＩＬ−１７様医薬組成物は、典型的には無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜による濾過により達成することができる。該組成物を凍結乾燥する場合には、この方法を用いる滅菌を、凍結乾燥および再構成の前または後で行うことができる。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態または溶液中で保存することができる。また、非経口組成物は、一般には、無菌出入口を有する容器、例えば静脈内用液バッグ、または皮下注射針で突き刺すことができる栓を有するバイアル内に配置する。
【０２９０】
該医薬組成物を製剤化したら、それを、溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体または脱水もしくは凍結乾燥粉末として無菌バイアル内に保存することができる。そのような製剤は、すぐ使用できる形態、または投与前に再構成を要する形態（例えば、凍結乾燥形態）で保存することができる。
【０２９１】
特定の実施形態においては、本発明は、１回量投与単位を得るためのキットに関する。該キットはそれぞれ、乾燥タンパク質を有する第１容器と、水性製剤を有する第２容器との両方を含有しうる。また、単室および多室の予め充填されたシリンジ（例えば、液体シリンジおよび溶媒シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含有するキットも、本発明の範囲内に含まれる。
【０２９２】
治療用に使用するＩＬ−１７様医薬組成物の有効量は、例えば、治療の状況および目的に左右されるであろう。したがって、治療のための適切な投与量レベルは、例えば、運搬される分子、ＩＬ−１７様分子が使用されている適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、対表面積または器官サイズ）および状態（年齢および全身健康状態）に応じて様々となると当業者は理解するであろう。したがって、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を力価測定し、投与経路を修飾するかもしれない。典型的な投与量は、前記の要因に応じて、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲となりうる。他の実施形態においては、該投与量は、０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または５μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲となりうる。
【０２９３】
投与頻度は、使用する製剤中のＩＬ−１７様分子の薬物動態学的パラメーターに左右されるであろう。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで、該組成物を投与するであろう。したがって、該組成物は、１回量として、または経時的な２回以上の用量（これは、所望の分子の同じ量を含有すること又は含有しないことが可能である）として、または移植装置もしくはカテーテルを介した連続的注入として投与することができる。適切な投与量の更なる厳密化は、当業者により日常的に行われているものであり、当業者により日常的に行われている作業の範囲内である。適切な投与量は、適切な用量反応データを使用して確認することができる。
【０２９４】
該医薬組成物の投与経路は、公知方法、例えば、経口的経路、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門内または病変内経路による注射、徐放系、あるいは移植装置によるものである。所望により、該組成物は、ボーラス注射により、または注入により連続的に、または移植装置により投与することができる。
【０２９５】
その代わりに又はそれに加えて、該組成物は、所望の分子が吸収または封入された膜、スポンジまたは他の適切な物質の移植により局所的に投与することができる。移植装置を使用する場合には、該装置は、任意の適切な組織または器官内に移植することが可能であり、所望の分子の運搬は、拡散、時限（ｔｉｍｅｄ）放出ボーラスまたは連続的投与によるものでありうる。
【０２９６】
いくつかの場合には、エクスビボ様態でＩＬ−１７様医薬組成物を使用することが望ましいであろう。そのような場合には、患者から摘出した細胞、組織または器官をＩＬ−１７様医薬組成物にさらし、ついで該細胞、組織および／または器官を該患者内に再び移植する。
【０２９７】
他の場合には、ＩＬ−１７様ポリペプチド発現させ分泌させるために本明細書に記載されているような方法を用いて遺伝的に操作した或る細胞を移植することにより、ＩＬ−１７様ポリペプチドを運搬することができる。そのような細胞は、動物またはヒト由来であることが可能であり、自己由来、非相同または異種でありうる。所望により、該細胞は不死化されていてもよい。免疫応答の機会を減少させるために、該細胞をカプセル化（封入）して周辺細胞の浸潤を避けることができる。該カプセル化物質は、典型的には、該タンパク質産物の放出を可能にするが患者の免疫系による又は周辺組織からの他の有害要因による該細胞の破壊を妨げる生体適合性半浸透性重合体封入容器または膜である。
【０２９８】
本発明の更なる実施形態は、治療用ポリペプチドのインビトロ産生と、遺伝子治療または細胞療法による治療用ポリペプチドの産生および運搬との両方のための細胞および方法（例えば、相同組換えおよび／または他の組換え製造方法）に関する。相同および他の組換え方法を用いて、通常は転写的にサイレントなＩＬ−１７様遺伝子または過少発現遺伝子を含有する細胞を修飾し、それにより、治療的に有効な量のＩＬ−１７様ポリペプチドを発現する細胞を得ることができる。
【０２９９】
相同組換えは、元々は、転写的に活性な遺伝子内の突然変異を誘発しまたは同遺伝子を矯正するために遺伝子を標的送達するために開発された技術である（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，Ｐｒｏｇ．ｉｎ　Ｎｃｌ．Ａｃｉｄ　Ｒｅｓ．＆　Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３６：３０１（１９８９））。その基本技術は、特定の領域内に特定の突然変異を導入するための（Ｔｈｏｍａｎら，Ｃｅｌｌ，４４：４１９−４２８（１９８６）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｄｏｅｔｓｃｈａｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８５：８５８３−８５８７（１９８８））または欠損遺伝子内の特定の突然変異を矯正するための（Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３０：５７６−５７８（１９８７））方法として開発された。典型的な相同組換え技術は、米国特許第５，２７２，０７１号（ＥＰ　９１９３０５１、ＥＰ公開第５０５５００号およびＰＣＴ／ＵＳ９０／０７６４２、国際公開番号ＷＯ９１／０９９５５）に記載されている。
【０３００】
相同組換えにより、ゲノム内に挿入するＤＮＡ配列を、関心のある遺伝子の特定の領域に導くことができ、これは、それを標的送達ＤＮＡに結合させることにより行なうことができる。該標的送達ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡの領域に相補的（相同）なヌクレオチド配列である。ゲノムの特定の領域に相補的な標的送達ＤＮＡの小片を、ＤＮＡ複製過程中の親鎖と接触させる。細胞内に挿入されているＤＮＡの一般的な特性は、共有されている相同領域を介して他の内因性ＤＮＡ片とハイブリダイズし、したがってそれと組換えを引き起こすことである。この相補鎖が、突然変異または異なるＤＮＡ配列を含有するオリゴヌクレオチドに結合している場合には、組換えの結果、それもまた、新たに合成された鎖内に取込まれる。プルーフリーディング機能の結果、新たなＤＮＡ配列が鋳型として機能することが可能である。このようにして、該導入ＤＮＡがゲノム内に取込まれる。
【０３０１】
標的送達ＤＮＡの断片に結合しているのは、ＩＬ−１７様ポリペプチドと相互作用しうる又はその発現を制御しうるＤＮＡ領域（例えば、フランキング配列）である。例えば、プロモーター／エンハンサー要素、サプレッサー、または外因性転写調節要素が、所望のＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写に影響を及ぼすのに十分な接近性と配向で、意図される宿主細胞のゲノム内に挿入される。該制御要素は、該宿主細胞ゲノム内に存在するＤＮＡの部分を制御する。したがって、所望のＩＬ−１７様ポリペプチドの発現は、該ＩＬ−１７様遺伝子自体をコードするＤＮＡのトランスフェクションによってではなく、ＩＬ−１７様遺伝子の転写のための認識可能なシグナルを内因性遺伝子配列に与えるＤＮＡ調節セグメントと結合した標的送達ＤＮＡ（これは、関心のある内因性遺伝子に相同な領域を含有する）の使用により達成されうる。
【０３０２】
典型的な方法においては、細胞内の所望の標的送達遺伝子（すなわち、所望の内因性細胞性遺伝子）の発現は、少なくとも１つの調節配列、エキソンおよびスプライス供与部位を含むＤＮＡの導入による、予め選択した部位における細胞性ゲノム内への相同組換えにより改変される。これらの成分は染色体（ゲノム）ＤＮＡ内に導入され、該導入は、これが実際に、新たな転写単位の産生を引き起こすように生じる（この場合、該ＤＮＡ構築内の調節配列、エキソンおよびスプライス供与部位は該内因性遺伝子に作動的に結合している）。染色体ＤＮＡ内へのこれらの成分の導入の結果、所望の内因性遺伝子の発現が改変される。
【０３０３】
本明細書に記載の改変された遺伝子発現は、得られた細胞内で通常はサイレント（発現されない）である遺伝子を活性化する（または発現させる）こと、および得られたままの細胞内で生理的に有意なレベルでは発現されない遺伝子の発現を増強することを含む。該実施形態は更に、調節または誘導のパターンを変化させて、それが、得られた細胞内で生じる調節または誘導のパターンとは異なったものとなること、および得られた細胞内で発現される遺伝子の発現を減少（排除を含む）させることを含む。
【０３０４】
細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からのＩＬ−１７様ポリペプチド産生を増加させる又は引き起こすために相同組換えが利用されうる１つの方法は、まず、部位特異的組換え系（例えば、Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ，ＦＬＰ／ＦＲＴ）（Ｓａｕｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　Ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５：５２１−５２７（１９９４）およびＳａｕｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２５：８９０−９００（１９９３）を参照されたい）からの組換え配列を細胞の内因性ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の上流（すなわち、５’側）に配置するために相同組換えを用いることを含む。該ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の直上流に配置された部位に相同な組換え部位を含有するプラスミドを、適切な組換え酵素と共に該修飾細胞系内に導入する。この組換え酵素は、該プラスミドの組換え部位を介して、該ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の直上流に位置する組換え部位内に該プラスミドを組込ませる（ＢａｕｂｏｎｉｓおよびＳａｕｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．，２１：２０２５−２０２９，１９９３およびＯ’Ｇｏｒｍａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：１３５１−１３５５（１９９１））。転写を増強することが知られている任意のフランキング配列（例えば、エンハンサー／プロモーター、イントロンまたは翻訳エンハンサー）は、このプラスミド内に適切に配置されていれば、細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からｄｅ　ｎｏｖｏの又は増加したＩＬ−１７様ポリペプチド産生をもたらす新たな又は修飾された転写単位を生じるよう、組込まれるであろう。
【０３０５】
細胞の内因性ゲノムＩＬ−１７様ポリペプチドコード領域の直上流に部位特異的組換え配列が配置されている細胞系を使用するためのもう１つの方法は、該細胞系ゲノム内の他の位置に別の組換え部位を導入するために相同組換えを用いるものである。ついで適切な組換え酵素を該二組換え部位細胞系内に導入して、組換え事象（欠失、逆位または転座）を引き起こさせ（Ｓａｕｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　Ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，前掲（１９９４）およびＳａｕｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，前掲（１９９３））、これは、該細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からｄｅ　ｎｏｖｏの又は増加したＩＬ−１７様ポリペプチド産生をもたらす新たな又は修飾された転写単位を与えるであろう。
【０３０６】
細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からのＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を増強し又は引き起こさせるための更なるアプローチは、該細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からデノボの又は増加したＩＬ−１７様ポリペプチド産生をもたらす様態で、遺伝子（例えば、転写因子）の発現を増強し又は引き起こさせること、および／または遺伝子（例えば、転写リプレッサー）の発現を減少させることを含む。この方法は、細胞の内因性ＩＬ−１７様遺伝子からデノボの又は増加したＩＬ−１７様ポリペプチド産生がもたらされるよう、非天然に生じるポリペプチド（例えば、転写因子ドメインに融合した部位特異的ＤＮＡ結合ドメインを含むポリペプチド）を該細胞内に導入することを含む。
【０３０７】
本発明は更に、標的遺伝子の発現を改変する方法において有用なＤＮＡ構築物に関する。ある実施形態においては、典型的な該ＤＮＡ構築物は、（ａ）１以上の標的送達配列、（ｂ）調節配列、（ｃ）エキソン、および（ｄ）不対スプライス供与部位を含む。該ＤＮＡ構築物中の標的送達配列は、要素（ｂ）〜（ｄ）が該内因性標的遺伝子の配列に作動的に結合するよう、細胞内の標的遺伝子内への要素（ａ）〜（ｄ）の組込みを導く。もう１つの実施形態においては、該ＤＮＡ構築物は、（ａ）１以上の標的送達配列、（ｂ）調節配列、（ｃ）エキソン、（ｄ）スプライス供与部位、（ｅ）イントロン、および（ｆ）スプライス受容部位を含み、ここで、該標的送達配列は、（ｂ）〜（ｆ）の要素が該内因性遺伝子に作動的に結合するよう、細胞内の標的遺伝子内への要素（ａ）〜（ｆ）の組込みを導く。該標的送達配列は、相同組換えが生じることになる細胞性染色体ＤＮＡにおける予め選択した部位と相同である。該構築物においては、該エキソンは、一般には、該調節配列の３’側に存在し、該スプライス供与部位は該エキソンの３’側に存在する。
【０３０８】
本明細書に記載のＩＬ−１７様ポリペプチドの核酸配列のような特定の遺伝子の配列が既知である場合には、該遺伝子の選択領域に相補的なＤＮＡの断片を合成したり、あるいは、例えば、関心のある領域と境界をなす特定の認識部位における該天然ＤＮＡの適切な制限酵素処理により、該断片を得ることができる。この断片は、細胞内への挿入に際して標的送達配列として機能し、該ゲノム内のその相同領域にハイブリダイズするであろう。このハイブリダイゼーションがＤＮＡ複製中に生じる場合には、このＤＮＡ断片およびそれに結合した任意の追加的配列は岡崎フラグメントとして作用し、新たに合成された娘ＤＮＡ鎖内に取り込まれるであろう。したがって、本発明は、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするヌクレオチドを含み、該ヌクレオチドは標的送達配列として使用することができる。
【０３０９】
ＩＬ−１７様ポリペプチド細胞療法、例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドを産生する細胞の移植も意図される。この実施形態は、生物学的に活性な形態のＩＬ−１７様ポリペプチドを合成し分泌しうる細胞を移植することを含む。そのようなＩＬ−１７様ポリペプチド産生細胞は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの天然産物である細胞でありうる。あるいは、それは、所望のＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子での又はＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を増強する遺伝子での形質転換によりＩＬ−１７様ポリペプチド産生能が増強された組換え細胞でありうる。そのような修飾は、該遺伝子を運搬するのに並びにその発現および分泌を促進するのに適したベクターにより達成することができる。異種のポリペプチドの投与の場合に生じうるのと同様の、ＩＬ−１７様ポリペプチドが投与されている患者における潜在的免疫反応を最小限に抑えるために、ＩＬ−１７様ポリペプチドを産生する天然細胞はヒト由来でありヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを産生することが好ましい。同様に、ＩＬ−１７様ポリペプチドを産生する組換え細胞は、ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子を含有する発現ベクターで形質転換されることが好ましい。
【０３１０】
周辺組織の浸潤を避けるために、移植細胞をカプセル化（封入）することができる。ヒトまたは非ヒト動物細胞は、ＩＬ−１７様ポリペプチドの放出を可能にするが患者の免疫系による若しくは周辺組織からの他の有害因子による該細胞の破壊を妨げる膜中または生体適合性半浸透性重合体封入容器中で患者に移植することができる。あるいは、エクスビボでＩＬ−１７様ポリペプチドを産生するよう形質転換された該患者自身の細胞を、そのような封入を行うことなく、患者に直接的に移植することができる。
【０３１１】
生きた細胞の封入のための技術は当技術分野で公知であり、該カプセル化細胞の製造および患者へのその移植は通常の方法により達成することができる。例えば、Ｂａｅｔｇｅら（ＷＯ　９５／０５４５２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０９２９９）は、生物学的に活性な分子の有効な運搬のための、遺伝的に操作された細胞を含有する膜カプセルを記載している。該カプセルは生体適合性であり、容易に回収することができる。該カプセルは、哺乳類宿主内への移植に際してインビボで下方制御に付されないプロモーターに作動的に結合した生物学的に活性な分子をコードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子でトランスフェクトされた細胞をカプセル化する。該装置は、生きた細胞から受容者体内の特定の部位への該分子の運搬をもたらす。また、米国特許第４，８９２，５３８号、第５，０１１，４７２号および第５，１０６，６２７号を参照されたい。生きた細胞をカプセル化するための系は、ＡｅｂｉｓｃｈｅｒらのＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／００１５７に記載されている。また、ＡｅｂｉｓｃｈｅｒらのＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／００１５５、Ｗｉｎｎら，Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１１３：３２２−３２９（１９９１）、Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら，Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１１１：２６９−２７５（１９９１）、およびＴｒｅｓｃｏら，ＡＳＡＩＯ，３８：１７−２３（１９９２）も参照されたい。
【０３１２】
ＩＬ−１７様ポリペプチドのインビボおよびインビトロ遺伝子治療運搬も意図される。遺伝子治療技術の一例は、「遺伝子治療ＤＮＡ構築物」を形成するよう構成的または誘導性プロモーターに作動的に結合していてもよいＩＬ−１７様ポリペプチドをコードするＩＬ−１７様遺伝子（ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡおよび／または合成ＤＮＡ）を使用することである。該プロモーターは、該構築物が挿入される細胞または組織型においてそれが活性である限り、内因性ＩＬ−１７様遺伝子と同種（相同）または異種でありうる。該遺伝子治療ＤＮＡ構築物の他の成分は、所望により、部位特異的組込みのために設計されたＤＮＡ分子（例えば、相同組換えに有用な内因性配列）；組織特異的プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサー；親細胞に対して選択上の利点をもたらしうるＤＮＡ分子；形質転換細胞を同定するための標識として有用なＤＮＡ分子；陰性選択系；細胞特異的結合剤（例えば、細胞標的送達用のもの）；細胞特異的細胞内取込み因子；およびベクターによる発現を増強するための転写因子、およびベクターの製造を可能にする因子を含みうる。
【０３１３】
ついで遺伝子治療ＤＮＡ構築物を、ウイルス性または非ウイルス性ベクターを使用して（エクスビボまたはインビボで）細胞内に導入することができる。該遺伝子治療ＤＮＡ構築物を導入するための１つの手段は、本明細書に記載のウイルス性ベクターによるものである。レトロウイルスベクターのような或るベクターは該ＤＮＡ構築物を該細胞の染色体ＤＮＡに運搬し、該遺伝子は該染色体ＤＮＡ内に組込まれうる。他のベクターはエピソームとして機能し、該遺伝子治療ＤＮＡ構築物は細胞質内に維持されるであろう。
【０３１４】
さらに他の実施形態においては、標的細胞内での該ＩＬ−１７様遺伝子の制御発現のために、調節要素が含まれうる。そのような要素は適切なエフェクターに応答して有効となる。このようにして、必要に応じて治療用ポリペプチドが発現されうる。１つの通常の制御手段は、ＤＮＡ結合タンパク質または転写活性化タンパク質のような生物学的過程を開始しうるドメインと小分子結合ドメインとを含有するキメラタンパク質を二量体化するために使用する小分子二量体化因子またはラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）（ＷＯ　９６４１８６５（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０９９４８６）；ＷＯ　９７３１８９８（ＰＣＴ／ＵＳ９７／０３１３７）およびＷＯ　９７３１８９９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０３１５７）に記載されているもの）の使用を含む。該タンパク質の二量体化を用いて、該トランスジーンの転写を開始することができる。
【０３１５】
もう１つの調節技術は、関心のある遺伝子から発現されたタンパク質を凝集体またはクラスターとして細胞内部に貯蔵する方法を用いるものである。関心のある遺伝子は、小胞体内の該凝集タンパク質の保持をもたらす条件的凝集ドメインを含む融合タンパク質として発現される。該貯蔵タンパク質は細胞内で安定であり不活性である。しかし、該条件凝集ドメインを除去することにより該凝集体またはクラスターを特異的に切り離して該タンパク質を該細胞から分泌させる薬物（例えば、小分子リガンド）を投与することにより、該タンパク質を放出させることができる。Ｓｃｉｅｎｃｅ　２８７：８１６−８１７および８２６−８３０（２０００）を参照されたい。
【０３１６】
他の適切な制御手段または遺伝子スイッチは、以下の系を含むが、それらに限定されるものではない。ミフェプリストン（ＲＵ４８６）は、プロゲステロンアンタゴニストとして使用される。プロゲステロンアンタゴニストへの修飾プロゲステロン受容体リガンド結合ドメインの結合は、後に核内に進みＤＮＡに結合する２つの転写因子の二量体を形成することにより、転写を活性化する。該リガンド結合ドメインは、該天然リガンドへの該受容体の結合能を排除するように修飾される。該修飾ステロイドホルモン受容体系は更に、米国特許第５，３６４，７９１号、ＷＯ　９６４０９１１およびＷＯ　９７１０３７７に記載されている。
【０３１７】
さらにもう１つの制御系は、エクジソン受容体（細胞質受容体）に結合しそれを活性化するエクジソン（ショウジョウバエステロイドホルモン）を使用するものである。ついで該受容体は核に移動して、特異的ＤＮＡ応答要素（エクジソン応答遺伝子由来のプロモーター）に結合する。該エクジソン受容体は、転写を開始するためのトランス活性化ドメイン／ＤＮＡ結合ドメイン／リガンド結合ドメインを含む。該エクジソン系は更に、米国特許第５，５１４，５７８号、ＷＯ　９７３８１１７、ＷＯ　９６３７６０９およびＷＯ　９３０３１６２に記載されている。
【０３１８】
もう１つの制御手段は、陽性テトラサイクリン制御性トランスアクチベーターを使用するものである。この系は、転写を活性化するポリペプチドに結合した突然変異ｔｅｔリプレッサータンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（逆テトラサイクリン調節トランスアクチベータータンパク質を与える突然変異ｔｅｔ　Ｒ−４アミノ酸変化、すなわち、それはテトラサイクリンの存在下でｔｅｔオペレーターに結合する）を含む。そのような系は、米国特許第５，４６４，７５８号、第５，６５０，２９８号および第５，６５４，１６８号に記載されている。
【０３１９】
更なる発現制御系および核酸構築物は、Ｉｎｎｏｖｉｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ．の米国特許第５，７４１，６７９号および第５，８３４，１８６号に記載されている。
【０３２０】
インビボ遺伝子治療は、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子をＩＬ−１７様核酸分子の局所注射により又は他の適切なウイルス性もしくは非ウイルス性運搬ベクターにより細胞内に導入することにより達成することができる（Ｈｅｆｔｉ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２５：１４１８−１４３５（１９９４））。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸分子は、標的細胞への運搬のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター内に含有されうる（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，国際公開番号ＷＯ　９５／３４６７０および国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９５／０７１７８）。該組換えＡＡＶゲノムは、典型的には、ポリアデニル化配列および機能的プロモーターに作動的に結合したＩＬ−１７様ポリペプチドコード化ＤＮＡ配列に隣接するＡＡＶ逆向き末端反復を含有する。
【０３２１】
それらに代わる適切なウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、肝炎ウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルスおよびパピローマウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されるものではない。米国特許第５，６７２，３４４号は、組換え神経栄養性ＨＳＶ−１ベクターを使用するインビボウイルス媒介遺伝子導入系を記載している。米国特許第５，３９９，３４６号は、治療用タンパク質をコードするＤＮＡセグメントを挿入するためにインビトロで処理されたヒト細胞の運搬により治療用タンパク質を患者に投与するための方法の具体例を記載している。遺伝子治療技術の実施のための更なる方法および材料は、アデノウイルスベクターに関しては米国特許第５，６３１，２３６号に、レトロウイルスベクターに関しては米国特許第５，６７２，５１０号に、そしてサイトカインを発現するレトロウイルスベクターに関しては米国特許第５，６３５，３９９号に記載されている。
【０３２２】
非ウイルス性運搬方法は、リポソーム媒介導入、裸ＤＮＡ運搬（直接的注入）、受容体媒介導入（リガンド−ＤＮＡ複合体）、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈降法、および微粒子射撃（例えば、遺伝子銃）が含まれるが、これらに限定されるものではない。遺伝子治療の材料および方法はまた、誘導性プロモーター、組織特異的エンハンサー−プロモーター、部位特異的組込み用に設計されたＤＮＡ配列、親細胞に対する選択上の利点を付与するＤＮＡ配列、形質転換細胞を同定するための標識、陰性選択系および発現コントロール系（安全性の尺度）、細胞特異的結合剤（細胞標的送達用）、細胞特異的細胞内取込み因子、およびベクターによる発現を増強するための転写因子の使用、ならびにベクター製造の方法を含みうる。遺伝子治療技術の実施のためのそのような追加的な方法および材料は、エレクトロポレーション技術に関しては米国特許第４，９７０，１５４号に、核リガンドに関してはＷＯ　９６／４０９５８に、遺伝子治療用のリポタンパク質含有系に関しては米国特許第５，６７９，５５９号に、リポソーム担体に関しては米国特許第５，６７６，９５４号に、リン酸カルシウムトランスフェクションのための方法に関しては米国特許第５，５９３，８７５号に、そして、生物学的に活性な粒子が細胞の表面に浸透し該細胞の内部に取込まれる速度で該細胞において該粒子が噴射される米国特許第４，９４５，０５０号に記載されている。
【０３２３】
また、ＩＬ−１７様遺伝子治療または細胞療法は、同じ又は異なる細胞における１以上の追加的なポリペプチドの運搬を含みうると意図される。そのような細胞は、患者に別々に導入することが可能であり、あるいは該細胞は、前記のカプセル化膜のような単一の移植可能な装置内に含有されることが可能であり、あるいは該細胞は、ウイルスベクターにより別々に修飾されうる。
【０３２４】
遺伝子治療により細胞内の内因性ＩＬ−１７様ポリペプチドの発現を増強するための手段は、ＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーター内に１以上のエンハンサー要素を挿入するものであり、この場合、該エンハンサー要素は該ＩＬ−１７様遺伝子の転写活性を増強するよう機能しうる。使用するエンハンサー要素は、該遺伝子を活性化することを望む組織に基づいて選択され、その組織においてプロモーター活性化を付与することが知られているエンハンサー要素が選択されるであろう。例えば、ＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする遺伝子をＴ細胞内で「有効」にするためには、ｌｃｋプロモーターエンハンサー要素を使用することができる。この場合、加える転写要素の機能的部分は、標準的なクローニング技術を用いて、ＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーターを含有するＤＮＡの断片内に挿入（そして、所望により、ベクターおよび／または５’および／または３’フランキング配列内などに挿入）することができる。ついで、「相同組換え構築物」として公知のこの構築物を、エクスビボまたはインビボで所望の細胞内に導入することができる。
【０３２５】
遺伝子治療は、内因性プロモーターのヌクレオチド配列を修飾することによりＩＬ−１７様ポリペプチド発現を減少させるためにも用いることができる。そのような修飾は、典型的には、相同組換え法により達成される。例えば、不活性化のために選択されたＩＬ−１７様遺伝子のプロモーターの全部または一部を含有するＤＮＡ分子を操作して、転写を調節するプロモーターの断片を除去および／または置換することができる。例えば、該プロモーターの転写アクチベーターの結合部位および／またはＴＡＴＡボックスを、標準的な分子生物学的技術を用いて欠失させることができる。そのような欠失は、プロモーター活性を抑制し、それにより対応ＩＬ−１７様遺伝子の転写を抑制しうる。該プロモーター内の転写アクチベーター結合部位またはＴＡＴＡボックスの欠失は、該ＴＡＴＡボックスおよび／または転写アクチベーター結合部位ヌクレオチドの１以上が１以上のヌクレオチドの置換、欠失および／または挿入により突然変異したＩＬ−１７様ポリペプチドプロモーター（調節されるＩＬ−１７様遺伝子と同じ又は関連した種からのもの）の全部または関連部分を含むＤＮＡ構築物を作製することにより達成することができる。その結果、該ＴＡＴＡボックスおよび／またはアクチベーター結合部位は、減少した活性を有するか、または完全に不活性となる。該構築物は、典型的には、修飾されたプロモーターセグメントに隣接した天然（内因性）５’および３’ＤＮＡ配列に対応するＤＮＡの少なくとも約５００塩基を含有する。該構築物は、直接的に又は本明細書に記載のウイルスベクター（エクスビボまたはインビボで）により適切な細胞内に導入することができる。典型的には、該細胞のゲノムＤＮＡ内への該構築物の組込みは、相同組換えによるものであり、この場合、該プロモーター構築物中の５’および３’ＤＮＡ配列は、内因性染色体ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションにより該修飾プロモーター領域が組込まれるのを補助するように機能しうる。
【０３２６】
ＩＬ−１７様核酸およびポリペプチドの更なる用途
本発明の核酸分子（それ自体では生物学的に活性なポリペプチドをコードしていないものを含む）を使用して、染色体上のＩＬ−１７様遺伝子および関連遺伝子を位置付けすることができる。位置付けは、ＰＣＲ増幅およびｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションのような当技術分野で公知の技術により行うことができる。
【０３２７】
ＩＬ−１７様核酸分子（それ自体では生物学的に活性なポリペプチドをコードしていないものを含む）は、哺乳類組織または体液サンプル中のＩＬ−１７様ＤＮＡまたは対応ＲＮＡの存在に関して定性的または定量的に試験するための診断アッセイにおけるハイブリダイゼーションプローブとして有用でありうる。
【０３２８】
該ＩＬ−１７様ポリペプチドは、治療されている適応症に応じて１以上のサイトカイン、増殖因子、抗生物質、抗炎症剤および／または化学療法剤と組合せて（同時に又は連続的に）使用することができる。
【０３２９】
１以上のＩＬ−１７様ポリペプチドの活性を抑制することが望ましい場合には、他の方法も用いることができる。そのような抑制は、発現制御配列に（三重らせんを形成する）またはＩＬ−１７様ｍＲＮＡに相補的でありハイブリダイズする核酸分子により達成されうる。例えば、選択されたＩＬ−１７様遺伝子の少なくとも一部に相補的な配列を有するアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子を該細胞内に導入することができる。アンチセンスプローブは、本明細書に開示するＩＬ−１７様ポリペプチドの配列を使用する利用可能な技術により設計することができる。典型的には、それぞれのそのようなアンチセンス分子は、それぞれの選択されたＩＬ−１７様遺伝子の開始部位（５’末端）に相補的である。そして該アンチセンス分子が対応ＩＬ−１７様ｍＲＮＡにハイブリダイズする場合には、このｍＲＮＡの翻訳は妨げられたり又は減弱される。アンチセンスインヒビターは、細胞または生物内のＩＬ−１７様ポリペプチドの減少または不存在に関する情報を提供する。
【０３３０】
あるいは、１以上のＩＬ−１７様ポリペプチドのドミナントネガティブインヒビターを作製するために、遺伝子治療を用いることができる。この場合、それぞれの選択されたＩＬ−１７様ポリペプチドの突然変異ポリペプチドをコードするＤＮＡを調製し、本明細書に記載のウイルス的または非ウイルス的方法を用いて患者の細胞内に導入することができる。それぞれのそのような突然変異体は、典型的には、その生物学的役割において内因性ポリペプチドと競合するように設計される。
【０３３１】
また、ＩＬ−１７様ポリペプチドは、生物学的に活性であるか否かにかかわらず、免疫原として使用することができる。すなわち、該ポリペプチドは、抗体が産生されうる少なくとも１つのエピトープを含有する。（本明細書に記載のとおりの）ＩＬ−１７様ポリペプチドに結合する選択的結合剤を、インビボおよびインビトロ診断目的に使用することが可能であり、それらには、体液または細胞サンプル中のＩＬ−１７様ポリペプチドの存在を検出するための標識形態での使用が含まれるが、これらに限定されるものではない。該抗体はまた、本明細書に記載のものを含む多数の疾患および障害を予防、治療または診断するために使用することができる。該抗体は、ＩＬ−１７様ポリペプチドに特徴的な少なくとも１つの活性を減弱または遮断するようＩＬ−１７様ポリペプチドに結合したり、あるいは、（ＩＬ−１７様ポリペプチドの薬物動態学的特性の増強を含む）ＩＬ−１７様ポリペプチドに特徴的な少なくとも１つの活性を増強するようポリペプチドに結合しうる。
【０３３２】
以下の実施例は、単なる例示目的のものに過ぎず、本発明の範囲を何ら限定するものではないと解釈されるべきである。
【０３３３】
実施例１
ヒトＩＬ１７Ｅのクローニング
ＡｍｇｅｎおよびＧｅｎｂａｎｋ　ｄｂＥＳＴデータベースのＩＬ−８ファミリープロフィール検索を行って、マウスＥＳＴ、ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７が特定された（Ｓｍｉｔｈら，（１９９４），Ｃｅｌｌ，７６：９５９−６２；Ｌｕｅｔｈｙら（１９９４），Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，３：１３９−４６）。ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７推定アミノ酸配列とヒトＩＬ−８との間の全体的な相同性は低くかったが、システインおよび他の鍵残基の保存性は、ｚｍｇｂ−ａｉ４３０３３７が該ＩＬ−１７ファミリーの新規メンバーであることを示唆した。該マウスＥＳＴ配列に対応するクローンは、ＮＩＨ　Ｉ．Ｍ．Ａ．Ｇ．Ｅ．ＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍからＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　Ｃｏｍｐａｎｙ；Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を介して入手し、完全に配列決定された。ＢＬＡＳＴ検索は、該マウスＥＳＴ配列が、ヒト第１４染色体由来のゲノムＤＮＡ配列であるＧｅｎＢａｎｋ　ＢＡＣクローン配列ＣＮＳ００００Ｂの領域に対応することを示した。また、更なるＢＬＡＳＴ検索は、Ｃｅｌｅｒａヒトゲノム配列に対するマッチを示した。ＧｅｎＢａｎｋおよびＣｅｌｅｒａ配列の両方に対する類似性は、同定された新規マウスＩＬ−１７ファミリーメンバーに対するヒト対応物が存在することを示唆した。
【０３３４】
該ヒトゲノム配列に基づく２つのＰＣＲプライマーを、ＩＬ−１７関連ｃＤＮＡに関して種々のｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をスクリーニングするよう設計した。２３９２−７３と称されるフォワードプライマーは、配列ＡＧＡ　ＧＴＣ　ＣＴＧ　ＴＡＧ　ＧＧＣ　ＣＡＧ　ＴＧＡ　ＡＧＡ　ＴＧＧ（配列番号１５）を有する。２３７４−８８と称されるリバースプライマーは、配列ＴＡＣ　ＡＧＣ　ＣＴＧ　ＣＧＣ　ＴＣＣ　ＡＧＧ　ＣＡＧ　ＴＡＧ　ＣＣ（配列番号１６）を有する。このスクリーニングは、スクリーニングしたそれらのｃＤＮＡサンプルのなかでヒト精巣が最も豊富な起源であることを示した。
【０３３５】
完全長ヒトｃＤＮＡクローンを得るために、Ｒａｐｉｄ　Ｓｃｒｅｅｎヒト精巣ｃＤＮＡライブラリー（ＬＴＳ−１００１）をＯｒｉｇｅｎｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。該Ｏｒｉｇｅｎｅ　ｃＤＮＡライブラリーはベクターｐＣＭＶ６−ＸＬ４中のものであった。該ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングの全てには、標準的なＰＣＲ条件を用いた。Ｏｒｉｇｅｎｅの製品の説明書によると、該ライブラリーは、９６ウェル一次プレート内に整列した５００，０００個のクローンを含有していた。したがって、該一次プレートの各ウェルは約５，０００個のクローンを含有していた。該一次プレートのウェル３Ｂが陽性であった。該一次プレート上の陽性ウェル３Ｂに対応する二次サブプレートをＯｒｉｇｅｎｅから購入した。後続のスクリーニングは、該３Ｂ二次サブプレート上のウェル番号５５が陽性であることを示した。
【０３３６】
該Ｏｒｉｇｅｎｅ二次サブプレートは、５０個の元のクローンから増幅された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のグリセロールストックを含有していた。該陽性ウェル番号５５の系列希釈をＬＢ　Ａｍｐプレート上に１：１０、１：１００および１：１，０００の密度でプレーティングした。該ＬＢ　Ａｍｐプレートからのコロニー（９６個）を個々に拾い、プライマー２３９２−７３および２３７４−８８（前記）を使用するＰＣＲスクリーニングに使用した。この手法を用いて４個の陽性コロニーを同定した。該陽性コロニーはクローン７０、７８、８５および８９と称された。これらのコロニーに対応するプラスミドＤＮＡを調製し、ベクタープライマーと遺伝子特異的プライマーとの組合せを用いて配列決定した。クローン８９を完全に配列決定し、残りのクローンを末端およびコード配列において配列決定した。該データは、その４個のクローンが同一のコード配列を有することを示した。
【０３３７】
該ヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡ（クローンＯｒｉｇｅｎｅ−８９）は３９８７ｂｐ長であり、配列番号１に記載されている。このｃＤＮＡは、１６アミノ酸の推定シグナルペプチドと１４５アミノ酸の推定成熟タンパク質（配列番号２）とを有する１６１アミノ酸のオープンリーディングフレームをコードしている。該推定ＩＬ−１７様タンパク質配列でのＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースのＦＡＳＴＡ検索は、配列番号２がＩＬ−１７様に対しては１６０アミノ酸のオーバーラップ（重複）内で２５．０％の同一性を、ＩＬ−２０に対しては９０アミノ酸のオーバーラップ内で３６．７％の同一性を、ＩＬ−１７Ｂに対しては９０アミノ酸のオーバーラップ内で３５．６％の同一性を、そしてＩＬ−１７Ｃに対しては１７１アミノ酸のオーバーラップ内で３４．５％の同一性を示すことを示した。他のＩＬ−１７ファミリーメンバーど同様に、該新規ヒトＩＬ−１７様ポリペプチド（本発明においてはＩＬ−１７Ｅとも称される）は分泌タンパク質であると予想され、サイトカインであると予想される。
【０３３８】
実施例２
ＩＬ−１７様ポリヌクレオチド過剰発現トランスジェニックマウス
Ａ．トランスジーンの調製
開始ＡＴＧの直上流に改変コザック配列ＣＣＡＣＣを有するヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡ（配列番号１）のコード領域を肝特異的発現ベクター内に連結した。該発現ベクターは、第１９染色体上のヒトアポリポタンパク質（ａｐｏ）Ｃ−Ｉ／Ｃ−Ｉ’遺伝子間領域からの肝細胞制御領域（ＨＣＲ）を含有する７７４ｂｐのＤＮＡ断片よりなるものであった（Ｓｉｍｏｎｅｔら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：８２２１−８２２９，１９９３）。該ベクターは、ヒトａｐｏＥ遺伝子５’フランキング配列、第１エキソン、第１イントロン、および第２イントロンの一部（該ａｐｏＥ遺伝子のもの）よりなる１４５０ｂｐの連続的ＤＮＡ断片をも含有していた（Ｓｉｍｏｎｅｔら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９４：１３１０−１３１９，１９９４）。該ｃＤＮＡ挿入部位の下流にはＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが位置していた。当技術分野で公知の標準的な方法を用いる配列決定により、該ｃＤＮＡの完全性を確認した。
【０３３９】
Ｂ．トランスジェニックマウスの作製および分析
得られたプラスミド（本発明ではＡｐｏＥ−ｈＩＬ−１７と称される）を精製し、該トランスジーンインサートをマイクロインジェクション用に単離した。ＢＤＦ１×ＢＤＦ１交配マウスからの単細胞胚を、実質的にＢｒｉｎｓｔｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４４３８−４４４２，１９８５）に記載のとおりに注入した。胚を５％　ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で一晩培養した。ついで１５〜２０個の２細胞胚を１３匹の偽妊娠ＣＤ１雌マウスの卵管に移した。トランスジェニック後代を、Ｓｉｍｏｎｅｔら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９４：１３１０−１３１９，１９９４）に記載のとおり耳生検から調製したＤＮＡからのヒトａｐｏＥ第１イントロンの３６８ｂｐ断片を増幅するプライマーでのＰＣＲスクリーニングにより同定した。
【０３４０】
実施例３
該トランスジェニックマウスの剖検分析
８〜１０週齢で、１０匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスおよび５匹の非トランスジェニック同腹子を剖検した。該マウスからの肝サンプルを、剖検の時点で、液体窒素中でフラッシュ凍結した。ＲＮＡを、Ｐｅｒｆｅｃｔ　ＲＮＡ　Ｋｉｔ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を該製造業者の説明に従い使用して各サンプルから単離し、ノーザンブロット分析により分析した。
【０３４１】
該ノーザンブロットは、１％　ホルムアルデヒド−アガロースゲル上の１×ＲＮＡ　Ｌｏａｄｉｎｇ　Ｄｙｅ（Ｓｉｇｍａ）中で希釈された１０μｇのＲＮＡを泳動することにより作製した。該ゲルを５０ｍＭ　ＮａＯＨならびに１５０および５５ｍＭ　ＮａＣｌ中で変性させた。ついで該ゲルを０．１Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．０）および１５０ｍＭ　ＮａＣｌ中で中和し、Ｄｕｒａｌｏｎメンブレン上に製造業者の説明（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に従いブロットした。該ノーザンブロットを、Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）により作製された３２Ｐ標識ヒトＩＬ−１７様ｃＤＮＡでプローブした。ハイブリダイゼーションをＥｘｐｒｅｓｓ　Ｈｙｂ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中で行い、該製造業者の説明に従い洗浄した。そのハイブリダイズさせたブロットをＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に−８０℃で７２時間さらし、現像した。
【０３４２】
該ノーザンブロット分析は、該トランスジェニック創始（ファウンダー）マウスが、該非トランスジェニック同腹子と比較してＩＬ−１７様ＲＮＡの発現の増強を有することを示した。試験した１０匹のマウスのうち、番号２９、５２、５５、６１および６６として示されるマウスは、最高レベルのＩＬ−１７様ＲＮＡ発現を有していた（図７を参照されたい）。
【０３４３】
Ｂ．残りのファウンダー上での発現分析
残りのトランスジェニックファウンダーマウスおよび対照マウスからの肝臓を部分的肝切除術により得た。該マウスをイソフルランにより麻酔し、胸骨上の剣状突起下に小さな横断切開を施して肝臓を露出させた。付着点における切除のために選択した肝葉の周囲に縫合を配置した。肝葉を結紮し、該結紮下で切断することにより摘出し、液体窒素中でフラッシュ凍結した。ついで該マウスを出血に関して検査し、皮膚切開を１−２オートクリップ（皮膚ステープル）で閉じた。ＲＮＡを該肝臓から単離し、ノーザンブロット分析を前記のとおりに行った。そのハイブリダイズしたブロットをＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に−８０℃で２４時間さらし、ついで現像した。
【０３４４】
残りのファウンダー上でのノーザンブロット分析は、これらのマウスが、非トランスジェニック同腹子の場合より高いレベルのＩＬ−１７様ＲＮＡを肝臓内で発現することを示した。番号１１、３０、３３、４６および６８として表示されたマウスは最高レベルのＩＬ−１７　ＲＮＡを発現した（図８を参照されたい）。
【０３４５】
実施例４
ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスの病理学的分析
Ａ．剖検
この研究においては、７匹の６〜８週齢のＩＬ−１７様マウスおよび５匹の６〜８週齢の非トランスジェニック同腹子（２匹の雄および３匹の雌）を、潜在的ＩＬ−１７様表現型に関して病理学的に分析した。マウス番号２９、５２、６１および６６はＩＬ−１７様ｍＲＮＡの肝臓発現に関して強陽性であり、一方、マウス番号１、１６および５５は弱陽性であった。その５匹の非トランスジェニック対照マウス（番号２、１７、２８、５３および６５）は陰性であった。剖検時に、マウスを秤量し、血液学および血清化学的検査のために採血し、肝臓、脾臓、腎臓、心臓および胸腺を秤量した。肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣または精巣、子宮または精嚢、骨格筋、骨および骨髄の切片を、組織学的分析のために集めた。
【０３４６】
Ｂ．組織学
該ＩＬ−１７様トランスジェニックおよび非トランスジェニックマウスからの肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣または精巣、子宮または精嚢、骨格筋、骨および骨髄の切片を、通常の組織学的検査のために、１０％　中性緩衝亜鉛ホルマリン（Ａｎａｔｅｃｈ，Ｂａｔｔｌｅ　Ｃｒｅｅｋ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）中で一晩固定し、パラフィン包埋し、３μｍで切片化し、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０３４７】
Ｃ．免疫組織化学
免疫組織化学的染色を、自動ＤＰＣ　Ｍａｒｋ　５　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｔａｉｎｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｃｏｒｐ，Ｒａｎｄｏｌｐｈ，ＮＪ）を使用して、厚さ４μｍのパラフィン包埋切片上で行った。脱パラフィン化組織切片をＣＡＳ　ＢＬＯＣＫ（Ｚｙｍｅｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）でブロッキングし、マクロファージに対するラット抗マウスモノクローナル抗体（Ｆ４／８０，Ｓｅｒｏｔｅｃ　Ｉｎｃ．，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）または全ての型のＢ細胞に対するラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０モノクローナル抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と共にインキュベートした。該一次抗体を、ビオチン化ウサギ抗ラット免疫グロブリン二次抗体（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用して検出した。ついで切片を３％　過酸化水素でクエンチし、アビジン−ビオチン複合体（三次）（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と反応させた。該染色反応をジアミノベンジジン（ＤＡＢ，Ｄａｋｏ　Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）で可視化し、切片をヘマトキシリンで対比染色した。
【０３４８】
Ｄ．肉眼的病理学的所見
４匹の高発現ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（番号２９、５２、６１および６６）および１匹の低発現マウス（番号５５）からの腸間膜リンパ節は、サイズが顕著に増大していた。同様に、これらの５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスからの脾臓は肥大し、体重の有意な増加を示した（体重は１．０８±０．２７　ＳＤ％であり、一方、非トランスジェニック対照マウスの体重は０．３７±０．１２　ＳＤ％、ｐ＝０．０００７）。他の２匹の低発現トランスジェニックマウス（番号１および１６）からの腸間膜リンパ節および脾臓は正常のようであった。生器官重量データを表１に示し、有意差を表３に要約する。
【０３４９】
【表３】
2004504064.tif 000004
【０３５０】
Ｅ．血液学的所見
肥大した腸間膜リンパ節および脾臓を有する５匹中４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（マウス番号２９、５２、５５、６１および６６からの血液は凝固し評価不能であった）は、全白血球、好中球、リンパ球、好酸球および大型非染色細胞（おそらく大顆粒リンパ球）における中等度ないしは顕著な増加を有していた。これらの４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスに関する平均総白血球数は１１．９３×１０３（±４．４７×１０３　ＳＤ）であり、一方、非トランスジェニック対照マウスは、３．０９×１０３（±０．７９×１０３　ＳＤ，ｐ＝０．００３）の平均総白血球数を有していた。これらの４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける平均好中球数は２．２９×１０３（±０．６７×１０３　ＳＤ）であり、一方、非トランスジェニック対照マウスでは０．９２×１０３（±０．５３×１０３　ＳＤ）（ｐ＝０．０３２）であった。これらの４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスは、６．７６×１０３（±２．３２×１０３）の平均リンパ球数（一方、非トランスジェニック対照マウスでは１．９９×１０３（±０．３８×１０３　ＳＤ）（ｐ＝０．００２５））、１．３５×１０３（±０．９６×１０３　ＳＤ）の平均好酸球数（一方、非トランスジェニック対照マウスでは０．０３×１０３（±０．０１×１０３　ＳＤ）（ｐ＝０．０１７））、および１．４１×１０３（±１．１１×１０３　ＳＤ）の平均大型非染色細胞数（一方、非トランスジェニック対照マウスでは０．１０×１０３（±０．０５×１０３　ＳＤ）（ｐ＝０．０３１））を有していた。該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの２匹（番号５５および６６）はまた、赤血球数、ヘモグロビンおよびヘマトクリットにおける若干の減少ならびに血小板数の若干の上昇により特徴づけられる軽度の貧血を有していた。生血液学的データを表２に示し、有意差を表３に要約する。
【０３５１】
【表４】
2004504064.tif 000005
【０３５２】
【表５】
2004504064.tif 000006
【０３５３】
Ｆ．組織病理学的所見
７匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスおよび５匹の非トランスジェニック対照同腹子からの肝臓、脾臓、肺、脳、心臓、腎臓、副腎、胃、小腸、膵臓、盲腸、結腸、腸間膜リンパ節、皮膚、乳腺、気管、食道、甲状腺、上皮小体、唾液腺、膀胱、卵巣または精巣、子宮または精嚢、骨格筋、骨および骨髄のヘマトキシリンおよびエオシン染色切片を検査した。すべてのマウスからのリンパ節および脾臓のＢ２２０（すべてのＢ細胞に特異的）およびＦ４／８０（マクロファージに特異的）免疫染色切片も検査した。該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの５匹（番号２９、５２、５５、６１および６６）は、顕著な腸間膜リンパ節障害、脾性リンパ様過形成および赤脾髄好酸性骨髄様過形成、および骨髄好酸性過形成により特徴づけられる類似した組織学的所見を有していた。最も顕著な組織学的所見は、多数の好酸球、反応性Ｂ細胞（Ｂ２２０で染色される）および形質細胞、マクロファージ（Ｆ４／８０で染色される）および多核炎症性巨細胞を含有する炎症細胞の混合集団による髄拡大および正常な節構造の喪失を伴う大きな節肥大により特徴づけられる腸間膜リンパ節障害であった（図９を参照されたい）。また、これらの５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスは、顕著な骨髄好酸性骨髄様過形成（図１０Ｂ）、ならびに中等度ないしは顕著な脾性Ｂ細胞リンパ様過形成および赤脾髄好酸性骨髄様過形成（図１０Ｆ）を示した。また、該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの１匹（番号２９）はまた、一方の腎臓に腎盂拡張を、そしてもう一方の腎臓に中等度の慢性好酸性および化膿性腎盂炎を伴う、顕著な慢性好酸性および化膿性腎盂腎炎を示し（図１０Ｊ）、一方、もう１匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（番号５５）は、軽度の両側性慢性好酸性および化膿性腎盂炎を伴う重度の慢性好酸性および化膿性尿膀胱炎を示した。最後に、該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの４匹（番号２９、５５、６１および６６）は、最小ないしは軽度の好酸性およびリンパ形質細胞性大腸炎および／または回腸炎を示した。
【０３５４】
Ｇ．ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスにおける表現型所見の要約
該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの５匹（番号２９、５２、５５、６１および６６）は、好酸球、リンパ球および大型非染色細胞（これは大顆粒リンパ球でありうる）の顕著な上昇を伴う白血球増加、顕著な好酸性成分を伴う顕著なリンパ節障害、骨髄好酸性骨髄様過形成、ならびに脾性Ｂ細胞リンパ様過形成および好酸性骨髄様過形成により特徴づけられる類似した表現型を有していた。また、該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの２匹（番号５５および６６）は、軽度の貧血および血小板増加を示した。また、ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス番号５５および２９は、それらの腎臓および／または膀胱の好酸性および化膿性炎症を示した。最後に、該ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスのうちの４匹（番号２９、５５、６１および６６）は、最小ないしは軽度の好酸性およびリンパ形質細胞性大腸炎および／または回腸炎を有していた。これらの所見のすべては、該ＩＬ−１７様タンパク質が、炎症および骨髄発生において、特に好酸球およびＢリンパ球の発生、刺激および／またはリクルートメントにおいて、何らかの役割を果たしていることを示唆している。
【０３５５】
実施例５
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現マウスのトランスジェニック表現型
１０匹のトランスジェニックマウスおよび５匹の非トランスジェニック同腹子に関して、表現型分析を行った。大腿骨、末梢血（心臓穿刺により得た）および脾臓の縦半分を、各トランスジェニックマウスおよびそれらの同腹子対照から得た。分析したトランスジェニックマウスのうちの５匹（番号２９、５２、５５、６１および６６）は表現型変化を示した。
【０３５６】
該トランスジェニックマウスの表現型を分析するために、活性化Ｔ細胞を含む主要な造血集団を定量した。また、ＩＬ−１７様受容体、ＩＬ−１７ＲＢの組織および系統特異的発現を、本明細書の実施例６に記載のとおりに定量した。
【０３５７】
前記の測定を蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）で行うために、以下の抗体パネルを設計した。ヘルパーＴ細胞を検出するために、ＣＤ４−ＰＥ抗体を使用した。ＣＤ６９は初期活性化マーカーであり、活性化細胞を検出するためにＣＤ６９−ＦＩＴＣ抗体を使用した。すべてのＴ細胞を検出するために、ＣＤ３−ＦＩＴＣ抗体を使用した。キラーＴ細胞を検出するために、ＣＤ８−ＰＥ抗体を使用した。単球系列の細胞を検出するために、ＣＤ１４−ＦＩＴＣ抗体を使用した。Ｂ系列細胞（プレＢから成熟表面免疫グロブリン陽性Ｂ細胞）を検出するために、ＣＤ１９−ＰＥ抗体を使用した。顆粒球を検出するために、ＧＲ−１−ＦＩＴＣ抗体を使用した。ナチュラルキラー細胞を検出するために、ＮＫ１．１−ＰＥ抗体を使用した。ＩＬ−１７様サイトカイン受容体（ＩＬ１７ＲＢ）の発現パターンを、組換えＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質の結合により検出し、適切な抗ヒトＦＩＴＣ抗体で現像した。Ｂ細胞を検出するために、ＣＤ４５Ｒ−ＰＥ抗体を使用した。樹状細胞を検出するために、ＣＤ１１−ＰＥ抗体を使用した。ＣＤ５抗体を、ＣＤ１９と共発現させた場合の白血病／リンパ腫の可能な指標として使用した。また、ＣＤ３４抗体を、ＣＤ１９と共発現させた場合の白血病／リンパ腫の可能な指標として使用した（実施例１０に記載のとおり）。該抗体のすべてはＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手した。
【０３５８】
該トランスジェニックマウスおよび非トランスジェニック同腹子を犠牲にし、大腿骨および脾臓を解剖した。大腿骨髄および脾臓からの細胞懸濁液を作製し、２回洗浄し、ＰＢＳ／０．５％　ＢＳＡに再懸濁した。各細胞懸濁液の細胞数を、１００μｍの開口および低いほうの閾値設定（４μｍ）を用いるＣｏｕｌｔｅｒ　Ｚ１　Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｃｏｕｎｔｅｒで定量した。各細胞懸濁液の１０μｌ　アリコートを、３滴のＺａｐｏｇｌｏｂｉｎ（赤血球を細胞溶解するため）を含有する１０ｍｌのＩｓｏｔｏｎバッファーに加え、計数した。該細胞懸濁液をＦｃ−ブロック（ＣＤ１６／３２）と共に４℃で１５分間インキュベートした。ついで１×１０６個の細胞（ＰＢＳ／０．５％　ＢＳＡに懸濁させたもの）を９６ウェルプレート上の各抗体含有ウェルに加えた。
【０３５９】
また、該トランスジェニックマウスおよび非トランスジェニック同腹子からの末梢血サンプルを心臓穿刺により得、ＣＢＣ分析を行った。ついで残りの血液を、９６ウェルプレート上の該抗体を含有する８ウェルに等分割した。
【０３６０】
該細胞懸濁液および血液サンプルを、抗体の存在下、室温で３０分間インキュベートした。ついで該細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ細胞溶解バッファー（２００μｌ／ウェル；Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で室温で１５分間にわたり細胞溶解して、赤血球を除去した。細胞溶解後、該細胞を洗浄し、４００μｌのＦＡＣＳバッファーに再懸濁し、フローサイトメトリーにより分析した。
【０３６１】
表現型を示した５匹のトランスジェニックマウス（番号２９、５２、５５、６１および６６）において、該末梢血中のＣＤ１９＋細胞（Ｂ細胞）の顕著な増加が認められた。図１１に示すとおり、ＣＤ１９＋細胞の絶対数は、対照と比較して５倍にまで増加した。また、図１２に示すとおり、脾臓におけるＣＤ１９＋細胞の絶対数において２〜４倍の増加が認められた。大腿骨髄においては、ＣＤ１９＋細胞の若干の増加が認められた（図１３）。ＣＤ４５ｒに関する染色は同様の傾向に従った。また、該トランスジェニックマウスから単離した末梢血および脾臓は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋　Ｔリンパ球）の絶対数における２〜３倍の増加を示した（それぞれ図１４および１５を参照されたい）。
【０３６２】
該トランスジェニックマウスは、好酸球の場合に類似した光散乱特性を有する細胞（例えば、３３％　顆粒球）の大集団の一貫した出現を示した（図１６および１７）。また、該細胞は該顆粒球マーカーを発現しない。また、血液および骨髄中でＩＬ−１７ＲＢを発現する、より小さいが異なる顆粒球様細胞（例えば、８〜１７％の顆粒球）の集団の一貫した出現が認められた（図１８および１９を参照されたい）。散布図との相関性に基づき、該トランスジェニックマウスは以下の多系列表現型を有するらしい：ＣＤ４＋、ＣＤ４５Ｒ＋、ＣＤ１１ｃ＋、大きく顆粒状。
【０３６３】
この分析は、該トランスジェニックマウスにおいて、大腿骨髄および末梢血中の好酸球様集団の明らかな出現が認められることを示した。図２０に示すとおり、これらの細胞の散布プロフィールは、好酸球の前方対側方散布（サイズ対顆粒性）特性の「教科書」的具体例に酷似している。
【０３６４】
また、循環性および脾性ＣＤ１９＋Ｂ細胞の絶対数（および区画割合）における重要な増加が認められた。ＣＤ１９＋リンパ球は、活性化マーカーＣＤ６９＋に関して陽性ではなかったが、末梢における絶対数におけるそれらの増加、および骨髄における若干の減少は、増殖が生じている末梢組織への移動を示唆している。
【０３６５】
血液および骨髄における多系列表現型の出現は、リンパ腫様表現型を示唆している。これらの結果は実施例１０に更に詳しく説明されている。さらに、ＩＬ−１７ＲＢはこれらの細胞上でアップレギュレーションされるらしいため、この集団はＩＬ−１７様タンパク質の遍在に反応性でありうると示唆される。これらのマウスにおいては明かな好酸球増加が認められることと総合すると、該多系列表現型は、急性骨髄単球性白血病（Ｍ４　ＡＭＬ）の説明（Ｃａｍｐｅｎａ　＆　Ｂｅｈｍ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３４：５９−７５，２０００）と厳密に一致する。
【０３６６】
実施例６
組換えヒトＩＬ−１７様Ｆｃ融合タンパク質
組換え成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質を得るために、ＩｇＧ１重鎖定常領域（Ｆｃ）にインフレームで融合したヒトＩＬ−１７様の予想成熟タンパク質（配列番号２）にインフレームで融合したＥｐｏｇｅｎシグナルペプチド（ＥｐｏＳＰ）を操作した。アミノ酸配列ＭＧＶＨＥＣＰＡＷＬＷＬＬＬＳＬＬＳＬＰＬＧＬＰＶＬＧ（配列番号１１）をコードするＥｐｏＳＰ　ＤＮＡを、ｐＣＥＰ４発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内に、その５’末端のコンセンサスコザック配列（ＣＣＡＣＣ）とその３’末端のＡｓｃＩ部位との間に挿入した。また、配列番号１２に記載のアミノ酸配列とその配列の５’末端のＮｏｔＩ制限部位とをコードするＦｃ　ＤＮＡ断片を、ＥｐｏＳＰ（配列番号１１）の３’末端に挿入した。該コーディングフレームを同じに維持するために、該ＮｏｔＩ制限部位の直後にチミジンを挿入した。ｐＣＥＰ４中にＦｃおよびＥｐｏＳＰを含有する得られたベクターはｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−Ｆｃベクターと称される。
【０３６７】
５’末端にＡｓｃＩ制限部位を３’末端にＮｏｔＩ制限部位を含有し終結コドンを伴わずに成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質（配列番号２）をコードするＤＮＡ断片を、ＰＣＲにより作製した。該成熟ヒトＩＬ−１７様タンパク質は、開始メチオニンをアミノ酸番号１とした場合のアミノ酸番号１７（ａａ１７）から始まる。該コーディングフレームを同じに維持するために、チミジンを含有する該ＡｓｃＩ部位を、残基１７を含有するコドンの直前に挿入した。該ヒトＩＬ−１７様断片を、該ＡｓｃＩおよびＮｏｔ制限部位を使用して該ｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−Ｆｃ発現ベクター内に一定方向で連結し、それをｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−ｈｕＩＬ−１７様−Ｆｃと称することにした。該結合部位および該ＤＮＡの完全性を、当技術分野で公知の標準的な方法を用いるＤＮＡ配列決定により確認した。
【０３６８】
Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を該製造業者の説明に従い使用して、該ｐＣＥＰ４−ＥｐｏＳＰ−ｈｕＩＬ−１７様−Ｆｃプラスミドをヒト２９３／ＥＢＮＡ細胞内に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、無血清馴らし培地を該細胞から回収した。該成熟タンパク質のアミノ末端に位置するアミノ酸配列ＡＰＳを有すると予想される組換えヒトＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質を、ＨｉＴｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用するアフィニティークロマトグラフィーにより単離した。ついで、Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　ＭＷＣＯ　１０，０００（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、該組換えヒトＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質をＰＢＳバッファーに対して４℃で７２時間透析した。ついで、該組換えヒトＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質を１０％　アクリルアミドゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動し、クーマシーブルーで染色した。該染色ゲルをデンシトメーターでスキャンして、関心あるタンパク質バンドの呈示率（％）を測定した。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｌｏｗｒｙ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を該製造業者の説明に従い使用して、全タンパク質濃度を測定した。ついで、ＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質の割合（％）に該全タンパク質濃度を掛け算することにより、ヒトＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質の量を計算した。
【０３６９】
実施例７
組換えヒトＩＬ−１７受容体Ｂ−Ｆｃ融合タンパク質：
ＩＬ−１７受容体−Ｂポリペプチドを、２０００年１１月２７日付け出願の米国特許出願第０９／７２３，２３２号（その開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載のとおりにクローニングした。ＩＬ−１７受容体Ｂ−Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−１７ＲＢ−Ｆｃ）を製造するために、該ヒトＩＬ−１７受容体様ポリペプチドの細胞外ドメイン（ＩＬ−１７ＲＢ−２では配列番号１８のアミノ酸＃１−２９２、ＩＬ−１７ＲＢ−３では配列番号２０のアミノ酸＃１−３５０）をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（Ｆｃ）に融合させた。５’末端にＮｏｔＩ制限部位を３’末端にＸｈｏＩ制限部位を有する該ヒトＦｃ（配列番号１２に記載のアミノ酸配列）をコードするＤＮＡ断片を、ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩ部位を使用してｐＣＥＰ４ベクター内に一定方向で連結した。ｐＣＥＰ４中にＦｃコード配列を含有する得られたベクターはｐＣＥＰ４−Ｆｃベクターと称される。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびコザック配列（ＣＣＡＣＣ）を５’末端にＮｏｔＩ制限部位を３’末端に有し該ヒトＩＬ−１７ＲＢ−２またはＩＬ−１７ＲＢ−３の細胞外ドメインをコードするＤＮＡ断片（それぞれ配列番号１８および２０）を、ＰＣＴにより作製した。これらのＤＮＡ断片を、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｏｔＩ制限部位を使用してｐＣＥＰ４−Ｆｃ発現ベクター内に一定方向で連結し、それをｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−２様−ＦｃまたはｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−３様−Ｆｃと称することにした。該結合部位および該ＤＮＡの完全性を、当技術分野で公知の標準的な方法を用いるＤＮＡ配列決定により確認した。
【０３７０】
該ｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−２様−ＦｃプラスミドまたはｐＣＥＰ４−ｈｕＩＬ−１７ＲＢ−３様−Ｆｃプラスミド（それぞれＨＩＬ−１７ＲＢ−ＦｃおよびＨＩＬ１７ＲＢ−３−Ｆｃとも称され、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ　２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．にそれぞれ受託番号　および　で寄託されている）を、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を該製造業者の説明に従い使用して、ヒト２９３／ＥＢＮＡ細胞内に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、無血清馴らし培地を該細胞から回収した。該成熟タンパク質のアミノ末端に位置するアミノ酸配列ＡＰＳを有すると予想される組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様−Ｆｃ融合タンパク質を、ＨｉＴｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用するアフィニティークロマトグラフィーにより単離した。得られた融合タンパク質のアミノ酸配列を配列番号２１および２２に記載する。
【０３７１】
Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　ＭＷＣＯ　１０，０００（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、該組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様−Ｆｃ融合タンパク質をＰＢＳバッファーに対して４℃で７２時間透析した。ついで、該組換えヒトＩＬ−１７ＲＢ様−Ｆｃ融合タンパク質を１０％　アクリルアミドゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動し、クーマシーブルーで染色した。該染色ゲルをデンシトメーターでスキャンして、関心あるタンパク質バンドの呈示率（％）を測定した。Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｌｏｗｒｙ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を該製造業者の説明に従い使用して、全タンパク質濃度を測定した。ついで、ＩＬ−１７ＲＢ様−Ｆｃ融合タンパク質の割合（％）に該全タンパク質濃度を掛け算することにより、ヒトＩＬ−１７様受容体−Ｆｃ融合タンパク質の量を計算した。
【０３７２】
また、Ｅｐｏｇｅｎシグナルペプチド（ＭＧＶＨＥＣＰＡＷＬＷＬＬＬＳＬＬＳＬＰＬＧＬＰＶＬＧ（配列番号１１））を前記の天然細胞外ドメインに融合させる代わりに推定成熟タンパク質にインフレームで融合させて。該ＩＬ−１７ＲＢ融合タンパク質を得ることも可能である。
【０３７３】
実施例８
ＩＬ−１７様ポリペプチドはＩＬ−１７受容体Ｂに結合する
ＩＬ−１７様ポリペプチドがＩＬ−１７受容体Ｂ（ＩＬ−１７ＲＢ）ポリペプチド（配列番号１８および２０）に対するリガンドであるか否かを判定するために、ノーザンブロットおよびＲＴ−ＰＣＲ分析によりＩＬ−１７ＲＢを発現することが示されているヒトＢリンパ芽細胞系ＧＭ３１０４Ａで競合結合アッセイを行った。ＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質（前記実施例６に記載）を発現するようにトランスフェクトされた２９３Ｅ細胞からの馴らし培地を集め、濃縮し、該結合アッセイに使用した。リガンド結合の特異性を、可溶性遮断性受容体であるＩＬ−１７ＲＢ−２またはＩＬ−１７ＲＢ−３のいずれかとの競合により測定した。トランスフェクトされた２９３Ｅ細胞から集めた馴らし培地から、ＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−１７受容体の細胞外部分を含有する）を精製した。前記実施例７に記載のとおりにＩＬ−１７ＲＢ−２またはＩＬ−１７ＲＢ−３Ｆｃ（２００１年３月１４日にそれぞれ受託番号　および　でＡＴＣＣに寄託されている）でトランスフェクトされた２９３Ｅ細胞からの馴らし培地を、Ａｍｉｃｏｎの３ＫｄのカットオフのＣｅｎｔｒａｃｏｎ（＃４２０３）で濃縮（５×）し、また、ブロッキングに使用した。
【０３７４】
該結合アッセイの前に、（１×）馴らし培地を含有する０．５ｍｌのＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質を、ＲＰＭＩ　１６４０中の５μｇ／ｍｌ　ＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃタンパク質０．５ｍｌまたはＩＬ−１７ＲＢ−２−Ｆｃ、ＩＬ−１７ＲＢ−３−Ｆｃの５×馴らし培地０．５ｍｌをそれぞれが含有するバイアルに加えた。非特異的結合部位を予め遮断（ブロッキング）するために、各バイアルを氷上で２時間インキュベートした。
【０３７５】
ついでＧＭ３１０４Ａ細胞（１×１０６細胞／サンプル）を１ｍｌの８％　ＦＢＳ／ＰＢＳと共に４℃で１時間インキュベートした。ついで該細胞を０．５％　ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄し、１ｍｌの対照馴らし培地、ＩＬ−１７様−Ｆｃを含有する馴らし培地または遮断性受容体（ＩＬ−１７ＲＢ−２またはＩＬ−１７ＲＢ−３）で補足された馴らし培地と共に、穏やかに振とうしながら４℃で２時間インキュベートした。該インキュベーション後、該細胞を１ｍｌの氷冷０．５％　ＢＳＡ／ＰＢＳで３回洗浄した。
【０３７６】
各細胞サンプルを、０．５％　ＢＳＡ／ＰＢＳ中で希釈された２μｇ／１００μｌ　ヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ−ＦＩＴＣ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，ＡＰ１１３Ｆ）で染色した。該細胞を氷上で１時間インキュベートし、１ｍｌの氷冷０．５％　ＢＳＡ／ＰＢＳで３回洗浄した。ついでリガンド結合を、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用する蛍光活性化セルソーター分析で検出した。この分析は、ＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質がＧＭ３１０４Ａ細胞に結合することを示した。この結合はＩＬ−１７ＲＢ−２およびＩＬ−１７ＲＢ−３によっては抑制されたが、ＩＬ−１７Ｒによっては抑制されなかった。
【０３７７】
実施例９
ＩＬ−１７様ポリペプチドは炎症性サイトカインの発現を誘導する
ＩＬ−１７様−Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−１７Ｂ−Ｆｃ、ＩＬ−１７Ｃ−ＦｃまたはＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃを発現する２９３Ｅ細胞からの馴らし培地を、該アッセイにおけるリガンドとして使用するために集めた。ついで、ＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃ、ＩＬ−１７Ｄ−ＦｃおよびＩＬ−１７様−Ｆｃを含有する馴らし培地を、３ＫｄのカットオフのＣｅｎｔｒａｃｏｎ（Ａｍｉｃｏｎ，＃４０３２）を使用して濃縮（１５×）し、新鮮な２０％　ＦＢＳ／１６４０培地を加えることにより１×培地に再構成させた。
【０３７８】
ヒトＴリンパ芽細胞（ＧＭ３１０４Ａ，１×１０６細胞／サンプル）を、各ＩＬ−１７リガンド（ＩＬ−１７様ポリペプチド、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７ＤおよびヒトＦｃ）を含有する再構成濃縮馴らし培地内で培養した。３７℃および５％　ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、該培地を集め、適切なＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙキット（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）を該製造業者の説明に従い使用して、該培地内に放出されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、Ｇ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−αの量を測定した。結果を表４に要約する。ＩＬ−１７様−ＦＣ融合タンパク質は、試験したその他のＩＬ−１７リガンドより遥かに大きな度合で、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１αおよびＩＬ−６の放出を誘導した。ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γおよびＧ−ＣＳＦの誘導は該リガンドのいずれに関しても検出されなかった。
【０３７９】
【表６】
2004504064.tif 000007
【０３８０】
実施例１０
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスのＦ１世代の免疫表現型決定
該ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスの免疫表現型を、ＦＡＣＳ分析を用いて分析した。非トランスジェニック対照およびトランスジェニックマウスのリンパ節中のＣＤ１９＋リンパ球上のＣＤ５およびＣＤ１９＋リンパ球上のＣＤ３４の集団を測定した。また、非トランスジェニックおよびトランスジェニックマウスの骨髄中の好酸球上のＣＤ４発現も測定した。
【０３８１】
ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウス（８〜１０週）および非トランスジェニック対照から単離された特定されたリンパ様組織からの細胞上のＣＤ５、ＣＤ３４およびＣＤ４発現のプロフィールに関して、実施例４に記載のとおりに細胞懸濁液に対してＦＡＣＳ分析を行った。細胞（１×１０６）を、以下のマウス表面マーカーに対する共役抗体１μｇ／１０６細胞と共にインキュベートした：ＣＤ５−ＦＩＴＣ、ＣＤ３４−ＦＩＴＣ、ＣＤ１９−ＰＥおよびＣＤ４−Ｃｙｃｈｒｏｍｅ。すべての抗体はＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。染色処理を、既に記載されているとおり（実施例４を参照されたい）に行い、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｋｍａｎ）上で読み取った。マーカー発現レベルを、散布図上のリンパ球または好酸球（Ｅｏｓ）ゲート上で測定した（図２１を参照されたい）。示されている割合（％）は、二重陽性集団に関するものである。
【０３８２】
ＣＤ５＋／ＣＤ１９＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ１９＋およびＣＤ４＋Ｅｏｓ集団の細胞の絶対数を表５に示す。該リンパ球を測定するためには、該ＦＡＣＳはリンパ球に対してゲート化され、該データは、リンパ球の絶対数に対する割合（％）として示されている。好酸球を測定するためには、該ＦＡＣＳは全細胞型に対してゲート化され、したがって、該データは、細胞の総数に対する割合（％）として示されている。
【０３８３】
【表７】
2004504064.tif 000008
【０３８４】
前記表５に示すとおり、Ｆ１　ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスは、多数の白血病において同定されている造血マーカーを発現するリンパ球および好酸球集団を示した。特に、該トランスジェニックマウスからのリンパ節中のＣＤ１９＋リンパ球は、該対照マウスにおいては発現されないＣＤ５およびＣＤ３４マーカーを発現した。ＣＤ５およびＣＤ３４の両方の発現は、該対照に対して約１００倍の増加である（表５）。Ｂ細胞慢性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）においてはＣＤ５およびＣＤ１９の上向き制御が確認されており、一方、急性骨髄球様白血病（ＡＭＬ）ではＣＤ３４の上向き制御が報告されている（Ｘｉａら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　４２：１１４−７，２０００；ＣａｌｄｗｅｌｌおよびＬａｓｃｏｍｂｅ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ａｃｅｄｅｍｉｃ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｃ．，２０００；Ｎｅｕｂｅｒら，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ　１９２：１１０−５，１９９６を参照されたい）。
【０３８５】
また、該トランスジェニックマウスの骨髄中の好酸球上でＣＤ４発現が、該対照に対して１５％増加して見出され、これは、ＣＤ４発現好酸球の絶対数において５０倍の増加をもたらした。好酸球上のこの異常なＣＤ４発現は、対照群より高いＣＤ４＋およびＨＬＡ−ＤＲ＋好酸球を有する成人Ｔ細胞白血病患者で報告されている（Ｓａｋａｍｏｔｏら，Ｉｎｔｌ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ａｌｌｅｒｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１１１（Ｓｕｐｐｌ．１）：２６−８，１９９６）。これらの発現パターンから、ＩＬ−１７様ポリペプチド過剰発現トランスジェニックマウスのＦ１世代のリンパ節は前白血病状態の初期徴候を有するらしい。これらのマウスは、老化するにつれて健康状態を悪化させ、これらのマウスにおいて初期段階でありうるこれらの考えうる白血病のいずれかを発症する可能性がある。
【０３８６】
これらの結果は、ＩＬ−１７様ポリペプチドおよびポリヌクレオチドが、リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫およびホジキン病；急性骨髄性白血病（ＡＭＬおよびＣＭＬ）、例えば前骨髄球性白血病（Ｍ３　ＡＭＬ）、骨髄単球性白血病（Ｍ４　ＡＭＬ）、赤白血病（Ｍ６　ＡＭＬ）および巨核球性白血病（Ｍ７　ＡＭＬ）；急性リンパ球性白血病、例えば急性リンパ芽球性白血病；慢性リンパ球性白血病；毛髪様細胞白血病；および多発性骨髄腫の診断、治療および予防において有用でありうることを示唆している。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号１）およびヒトＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図２Ａ】マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）およびマウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図２Ｂ】マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）およびマウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図２Ｃ】マウスＩＬ−１７様ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）およびマウスＩＬ−１７様ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図３Ａ】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７のアミノ酸配列（配列番号５）との整列を示す。
【図３Ｂ】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７のアミノ酸配列（配列番号５）との整列を示す。
【図４】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−２０ファミリーメンバーｈＩＬ−２０のアミノ酸配列（配列番号６）との整列を示す。
【図５】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７ｂのアミノ酸配列（配列番号７）との整列を示す。
【図６Ａ】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７ｃのアミノ酸配列（配列番号８）との整列を示す。
【図６Ｂ】ＩＬ−１７様アミノ酸配列ｈＩＬ−１７Ｌ（配列番号２）と公知ヒトＩＬ−１７ファミリーメンバーｈＩＬ−１７ｃのアミノ酸配列（配列番号８）との整列を示す。
【図７】剖検されたトランスジェニック創始（ファウンダー）マウスにおけるＩＬ−１７様過剰発現トランスジーンの発現を検出するノーザンブロットを示す（番号１、１６、２７、２９、５５、６１、２０、５２および６６）。
【図８】肝切除されたトランスジェニック創始マウスにおけるＩＬ−１７様過剰発現トランスジーンの発現を検出するノーザンブロットを示す（番号１０、１１、３０、３１、３３、３７、４６、６７および６８）。
【図９】ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ）または非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ）からのリンパ節（Ａ〜Ｈ）または骨髄（Ｉ、Ｊ）の、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ａ、Ｂ、Ｇ−Ｊ）、Ｂ２２０（Ｃ、Ｄ）ならびにＦ４／８０（Ｅ、Ｆ）で染色された切片を示す。
【図１０】ＩＬ−１７様トランスジェニックマウス（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｊ）または非トランスジェニック対照マウス（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ）からのリンパ骨髄（Ａ、Ｂ）、脾臓（Ｃ〜Ｆ）および腎臓（Ｇ〜Ｊ）の、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ａ、Ｂ；Ｅ〜Ｉ）ならびにＢ２２０（Ｃ、Ｄ）で染色された切片を示す。
【図１１】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の９匹中４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける末梢血中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の有意な増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１２】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の１０匹中５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける脾臓中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１３】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の僅かな減少を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１４】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の９匹中４匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける末梢血中のＣＤ１９＋　Ｂリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１５】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける脾臓中のＣＤ４＋　Ｔリンパ球の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１６】ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスとその非トランスジェニック同腹子対照とに生じた変化を表す散布図（散布プロット）を示す。
【図１７】ＩＬ−１７様トランスジェニックマウスとその非トランスジェニック同腹子対照とに生じた変化を表す散布図を示す。
【図１８】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合の１０匹中５匹のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のｒｈＩＬ−１７様−Ｆｃ＋／ＣＤ４５Ｒ＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図１９】非トランスジェニック同腹子対照と比較した場合のＩＬ−１７様トランスジェニックマウスにおける骨髄中のｒｈＩＬ−１７様−Ｆｃ＋／ＣＤ４＋顆粒球様細胞の絶対数の増加を示す柱状ヒストグラムを示す。
【図２０】典型的な前方（Ｆｏｒｗａｒｄ）対側方（Ｓｉｄｅ）散布図（サイズ対顆粒度）の一例を示す。ゲートにおける細胞は選別されて、精製された集団を与えうる。
【図２１Ａ】示されたリンパ様組織由来の細胞上のＣＤ５、ＣＤ３４およびＣＤ４発現の非トランスジェニック対照およびＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスのＦＡＣＳプロフィールを示す。
【図２１Ｂ】示されたリンパ様組織由来の細胞上のＣＤ５、ＣＤ３４およびＣＤ４発現の非トランスジェニック対照およびＩＬ−１７様ポリペプチドを過剰発現するトランスジェニックマウスのＦＡＣＳプロフィールを示す。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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