(57)【要約】本発明は、敗血症及び脳卒中を効果的に予防及び治療できる薬学的組成物を提供する。前記組成物は有効成分としてリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩を含むことを特徴とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む敗血症の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物。
【請求項２】
有効成分としてリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む脳卒中の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物。
【請求項３】
敗血症の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物の製造のためのリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の用途。
【請求項４】
脳卒中の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物の製造のためのリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の用途。
【請求項５】
リゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の有効量を投与することにより敗血症を予防または治療する方法。
【請求項６】
リゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の有効量を投与することにより脳卒中を予防または治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リゾフォスファチジン酸(LPA)またはその薬剤学的に許容可能な塩を含むリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
初期に深刻な全身性炎症反応を伴う敗血症(Sepsis)は、細菌の感染(例:グラム陰性細菌の内毒素)に対し、哺乳動物のような宿主が過度な全身的反応をすることにより発生し、これによる宿主の死亡率は約４５％に至る。従来には敗血症を治療するために抗菌剤またはステロイド製剤が使用されてきたが、その効果が微弱であるため、敗血症による宿主の死亡率は依然として高いのが現状である。
【０００３】
脳卒中(Stroke)は、脳血管の異常により発生する疾患であって、急激な意識障害と諸般運動及び感覚障害などをもたらす最もありふれた中枢神経系疾患中の一つであり、悪性腫瘍、心臓疾患などと共に人類の３大死亡原因に属ずる。脳卒中は閉鎖性脳血管疾患(脳血栓症、脳塞栓症)と出血性脳血管疾患(脳内出血、蜘蛛膜下出血)に分類され、その中で閉鎖性脳血管疾患による虚血性脳卒中が全体患者の８０％程度を占める。
【０００４】
脳卒中において、血行障害により酸素の供給が遮断または減少して惹起された、脳虚血の中央部位(core region)の細胞は数秒〜数分内に機能障害が始まり、結局は非可逆性損傷を受けるようになる反面に、脳虚血の周辺(penumbra region)の細胞は代謝機能に障害を受けるものの、早期に適切な治療を開始する場合、非可逆的細胞損傷が遮断できるとされている（非特許文献１参照）。
【０００５】
脳許血による神経細胞損傷機序にはミトコンドリアの機能障害によるATPの生成減少、細胞膜透過性の変化、過多遊離した興奮性神経伝達物質であるグルタメート(glutamate)の作用、細胞内Ｃａ２＋の増加、Ｃａ２＋-依存性蛋白質分解酵素の活性化、遊離ラジカル(free radical)の生成、蛋白質合成障害、燐脂質代謝による免疫、炎症反応などが複雑に関与することと知られている（非特許文献２参照）。
【０００６】
現在臨床で使用されている脳卒中の治療剤には、組織プラスミノゲンアクチベーター(TPA)やウロキナーゼ(urokinase)のような血栓溶解剤をはじめとして血小板抑制剤、抗凝固剤、脳血管拡張剤、Ｃａ２＋-チャンネル(channel)遮断剤、脳浮腫抑制剤なと、多様な機序の薬剤がある（非特許文献３参照）。しかし、これら薬剤は、治療時期が遅延された場合、その効果が微弱であり、急性脳許血による脳梗塞の進行を効果的に遮断できず（非特許文献４参照）、非特異的出血、フィブリノゲン溶解及び急性再閉塞などの副作用を表すことと知られている。
【０００７】
最近にも脳許血による神経細胞損傷機序に基づいて非可逆的損傷が遮断または抑制できる新たな治療剤を開発するために多くの研究者が多角的な接近を試みている。すなわち、NMDAやAMPAのようなグルタメート受容体拮抗剤をはじめとしてＣａ２＋-チャンネル遮断剤、Ｎａ＋-チャンネル遮断剤、遊離ラジカル消去剤、カルパイン(calpain)抑制剤、一酸化窒素合成酵素抑制剤などが主要研究標的になっている（非特許文献５参照）。その結果として現在数種の薬剤が臨床試験段階にあるが、神経細胞の損傷機序が極めて複雑であるのみならず、薬剤の副作用、脳組織への浸透力など種々の問題により、未だ効果的な治療剤は開発されていないのが現状である。
【０００８】
【非特許文献１】
Choi DW (1992) Excitotoxic cell death. J. Neurobiol. 23: 1261-1276; Lipton P (1999) Ischemic cell death in brain neurons. Physiol Rev 79: 1431-1568
【非特許文献２】
Lipton P (1999) Ischemic cell death in brain neurons. Physiol Rev 79: 1431-1568
【非特許文献３】
Sandercock P, Lindley R and Wardlaw J (1992) Antiplatelet, anticoagulant and fibrinolytic agents in acute ischemic stroke and transient ischemic attack. Br. J. Hosp. Med. 47: 731-736
【非特許文献４】
Scheinberg P (1994) Stroke: The way things really are. Stroke 25: 1290-1294
【非特許文献５】
Leeson PD and Iversen LL (1994) The glycine site on the NMDA receptor: structure-activity relationships and therapeutic potential. J. Med. Chem. 37: 4053-4067; Muir KW and Lees KR (1995) Clinical experience with excitatory amino acid antagonist drugs. Stroke 26: 503-513
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これに、本発明者らは、数年間リゾフォスファチジン酸(LPA)の治療学的用途について研究を行った結果、LPAが敗血症及び脳卒中に対して治療及び予防効果を奏することを究明することにより本発明を完成した。
【００１０】
いままでLPAが敗血症及び脳卒中に治療及び予防効果を奏する事実は報告されていない。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、有効成分としてリゾフォスファチジン酸(LPA)またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む、敗血症の予防及び治療効果に優れたリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の他の目的は、有効成分としてリゾフォスファチジン酸(LPA)またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む、脳卒中の予防及び治療効果に優れたリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記のような本発明の目的を達成するために、本発明は有効成分としてLPAまたはその薬剤学的に許容可能な塩を含む敗血症予防及び治療用組成物を提供する。
【００１４】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は有効成分としてLPAまたはその薬剤学的に許容可能な塩を含む脳卒中予防及び治療用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、有効成分としてリゾフォスファチジン酸(LPA)またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む、敗血症の予防及び治療効果に優れたリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物を得ることができる。
【００１６】
また、本発明によれば、有効成分としてリゾフォスファチジン酸(LPA)またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む、脳卒中の予防及び治療効果に優れたリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００１８】
本発明の組成物の有効成分であるリゾフォスファチジン酸(LPA)は下記化学式１で示される。
【化学式１】
【００１９】
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【００２０】
前記式において、Ｒ１は置換または非置換の直鎖または分岐鎖のＣ４−３０アルキルである。
【００２１】
LPAは、商業的に容易に入手できる。また、LPAは植物や動物から単離することもでき、ホスファチジン酸からホスホリパーゼAを用いて得ていることのように当業界に公知された合成方法により製造され得る。
【００２２】
LPAの薬剤学的に許容可能な塩には、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのような無機塩基を有する塩及びアンモニウム塩、リシン、エタノールアミン、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、アンゲリカ酸(angelic acid)などのような有機塩基を有する塩があるが、これに限定されるものではない。
【００２３】
LPA及びその薬剤学的に許容可能な塩は、敗血症の予防及び治療効果に優れて、この疾患による死亡率を顕著に低下させる。また、LPA及びその薬剤学的に許容可能な塩は脳虚血による脳梗塞を顕著に低下させ、脳卒中の予防及び治療効果に優れている。LPAは、哺乳動物の体内における内在性物質であるため、安全性は立証されていると言える。
【００２４】
本発明の薬剤学的組成物は、多様な非経口または経口投与形態で剤形化することができる。非経口投与用剤形の代表的なものは注射用剤形として等張性水溶液または懸濁液が望ましい。また、経口投与用剤形には、例えば、錠剤、カプセル剤などがあるが、これら剤形は有効成分以外に希釈剤(例:ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／またはグリシン)、滑沢剤(例:シリカ、タルク、ステアリン酸及びこれらのマグネシウムまたはカルシウム塩及び／またはポリエチレングリコール)を含むことができる。錠剤は、またマグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／またはポリビニルピロリジンのような結合剤を含むことができ、場合に応じて澱粉、寒天、アルギン酸またはこれらのナトリウム塩のような崩解剤または沸騰混合物及び／または吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤を含むことができる。前記剤形は通常的な混合、顆粒化またはコーティング方法により製造することができる。
【００２５】
本発明の薬剤学的組成物は、滅菌され／されたり防腐剤、安定化剤、水和剤または乳化促進剤、滲透圧調節のための塩及び／または緩衝剤などの補助剤及びその他治療的に有用な物質を含有することができ、通常的な方法により製剤化することができる。
【００２６】
本発明の組成物の有効成分としてLPA及びその薬剤学的に許容可能な塩はヒトを含んで哺乳動物に対して0.1〜100ｍｇ／ｋｇの量で１日１回、または数回に分割して非経口または経口的経路を通じて投与することができる。
【実施例】
【００２７】
以下、本発明を実施例により詳しく説明する。
【００２８】
但し、下記の実施例は、本発明を例示するものとして、本発明の内容がこれに限定されるものではない。
【００２９】
以下の実施例において、固体／固体、液体／液体及び液体／固体混合物の全てのパーセント(percentages)は、それぞれ重量／重量、体積／重量及び重量／体積の％を基礎とする。全ての反応は特に記載がない限り、常温で実施する。
【００３０】
実施例１
盲腸結紮及び穿孔(Cecal Ligation and Puncture; CLP) モデル試験
本発明の組成物の有効成分であるLPAが敗血症の予防及び治療に優れた効果を奏することを確認するために、CLPモデル(人為的に盲腸を結紮及び穿孔して腹膜炎を誘発し、敗血症を起こしておいた動物)を用いて試験した。
【００３１】
１５匹のICRマウス(体重25〜30g;MJ Ltd.)をペントバルビタールで麻酔させた後、腹部の右側部位を１ｃｍの長さで切開して盲腸を露出させた後、回盲弁(ileocecal valve)の下部位を結紮した後、盲腸に２１ゲージの針で６個の孔をあけ、腹部を再縫合して敗血症を誘発した。
【００３２】
縫合してから２及び４時間後に、それぞれ１回ずつ１０％のDMSO溶液に溶かしたLPA(oleoyl-sn-glycerol-3-phosphate;Sigma Co.)を５匹には10ｍｇ／ｋｇの量で腹腔投与し(A群)、他の５匹には50ｍｇ／ｋｇの量で腹腔投与し(B群)、そして残りの５匹にはDMSO １０％溶液のみを投与した(対照群)。経時によるA群、B群及び対照群のICRマウスの生存率を調査した。その結果は下記表１の通りである。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
前記表１から明らかなように、LPAを投与した群のマウスは対照群のマウスに比べて生存率が遥かに高かった。したがって、リゾフォスファチジン酸は敗血症の予防及び治療効果を有することが確認できた。
【００３５】
実施例２
本発明の組成物の有効成分であるLPAが脳卒中の予防及び治療に優れた効果を奏することを確認するために、下記のように設計された中大腦動脈の閉塞による永久的局所脳虚血ラット(rat)モデルを用いて試験した。
【００３６】
中大腦動脈の閉塞による永久的局所脳虚血ラットモデル
１２匹の雄性ラット(Sprague-Dawley、体重250〜269g)を２％のイソフルラン(中外製薬ホラン液)を含有する７０％二酸化窒素及び３０％酸素ガス混合液を吸入させて麻酔した後、ナガサワ及びコグレの方法(Nagasawa H and Kogure K (1989) Correlation between cerebral blood flow and histologic changes in a new rat model of middle cerebral artery occlusion. Stroke 20: 1037-1043)を若干変形適用し、右側の中大腦動脈を閉塞させた。具体的に、麻酔されたラットを背が床部に向かうように横にしておいて首の中央線に沿って頸部を切開した後、迷走神経に損傷を加えないように注意しながら右側の總頸動脈と外頸動脈を分離して結紮した後、内頸動脈の分岐点をすこし切断し、シリコンゴムシリンダー(17mm長)を用心深く挿入してから挿入したシリコンゴムシリンダー上の内頸動脈部分を結紮した。このシリコンゴムシリンダーは4-0ナイロン手術糸(Nitcho Kogyo Co., Ltd. Japan)の一方の端部5mm程度をシリコン(Xantopren;Bayer Dental)と硬化剤(Optosil-Xantopren Activator;Bayer Dental)の混合液で0.25〜0.3mm程度の厚さで被膜を形成させ、他方の端部は熱処理により丸くさせたものであった。前記手術は１５分以内に実施し、手術が進行される間に保温パッドと白熱灯を用いてラットの体温を37±0.5℃に維持した。
【００３７】
ラットモデルを用いた脳梗塞に対するLPAの効果試験
脳梗塞に対するLPAの効果を調べるために、前記のように設計された中大腦動脈閉塞による永久的局所脳虚血ラットモデル中、実験群の4匹のラットに０．９％生理食塩水に溶解させたLPA(oleoyl-sn-glycerol-3-phosphate;Sigma Co.)を20ｍｇ／ｋｇの容量で手術１時間前と手術後２時間及び６時間にそれぞれ皮下注射した。対照群の８匹のラットには同量の生理食塩水を同一時間に同一方法で投与した。
【００３８】
脳梗塞面積及び容積測定
手術後２４時間が経過した後、断頭台で実験群及び対照群のラットの頭を切断した後、脳を迅速に摘出して冷ました生理食塩水に洗浄した。それから、脳マトリックス(Harvard Apparatus)を用いて前頭極(frontal pole)から1mmの地点から始めて2mm厚さの脳切片を７個作った。生理食塩水に溶解させた２％の2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド(triphenyltetrazolium chloride:TTC)でBedersonら(Bedersonetal.,(1986) Stroke 17:1304)の方法により、３７℃で３０分間染色した。染色した脳切片を１０％燐酸緩衝ホルマリン溶液で固定させた後、それぞれの脳切片の裏面でTTCにより染色されていない脳梗塞部位の面積を大脳皮質(cortex)と線条体(striatum)に分けて映像分析機(imageanalyser)を用いて測定した。
【００３９】
脳浮腫による不通面積の変化を補完するために中大腦動脈を閉塞していない左側半球の面積から閉塞した右側半球でTTCにより染色された梗塞がおきない面積を減じ、それぞれの梗塞部位の面積を計算した。それぞれの脳切片で測定した、大脳皮質と線条体で誘発された脳梗塞面積を合算した総脳梗塞面積を平均して図１にグラフで示した。図１によれば、実験群(LPA投与群)のラットは対照群のラットより総脳梗塞面積が顕著に減少していることが分かる。
【００４０】
脳梗塞容積は、それぞれの脳切片の梗塞面積に脳切片の厚さを乗じて計算し、対照群の８匹のラットと実験群の４匹のラットから得たデータの平均±標準誤差により求め、統計的有意性(unpaired Student's t-testにより)を評価した。それぞれの脳切片で測定した、大脳皮質及び線条体で誘発されたそれぞれの脳梗塞容積とこれを合算した総脳梗塞容積を図２に示した。図２によれば、大脳皮質と線条体の両方で、実験群のラットの脳梗塞容積は対照群ラットに比べてそれぞれ44.6±3.6％及び55.3±21.0％減少していることが分かる(p＜0.001)。これらを合算した総脳梗塞容積も実験群のラットは対照群のラットに比べて47.8±7.1％減少した(p＜0.001)。したがって、LPAの神経細胞保護効果により脳梗塞部位を減少させることを確認することができた。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
有効成分としてLPAまたはその薬剤学的に許容可能な塩を含有する本発明の組成物は敗血症及び脳卒中を効果的に予防及び治療できる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】対照群及び実験群(LPA投与群)ラット(rat)の総(大脳皮質+線条体)脳梗塞面積の平均値を表したグラフ
【図２】対照群及び実験群投与群ラットの大脳皮質と線条体におけるそれぞれの脳梗塞容積及び総脳梗塞容積を表したグラフ
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年6月23日(2003.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩を含む敗血症の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物。
【請求項２】
敗血症の予防及び治療用のリゾフォスファチジン酸を含む薬剤学的組成物の製造のためのリゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の用途。
【請求項３】
リゾフォスファチジン酸またはその薬剤学的に許容可能な塩の有効量を投与することにより敗血症を予防または治療する方法。
【国際調査報告】
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