(57)【要約】本発明は、血管形成の刺激によって利益を得る病状を治療する医薬の製造のための、式Ｉ：【化１】2004509148.tif 000007［式中、Ａ１は、Ｄ−又はＬ−Ｓｅｒに対応する基であり、Ａ２は、Ｄ−又はＬ−Ａｓｐ又はＧｌｕに対応する基であり、Ａ３は、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はＯｒｎに対応する基であり、Ａ４は、Ｄ−又はＬ−Ｐｒｏに対応する基であり、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキル、Ｒ４ＣＯ又はＲ４ＣＯＯ（ここで、Ｒ４は、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、又は置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキルである）から選択され；置換基のうち、ＯＨ、ＮＨ２、又はＣＯＯＨに言及すべきであり、Ｘ１及びＸ２は、ペプチド結合又は擬ペプチド結合であり、Ｘ３はＣＯ又はＣＨ２であり、及びＲ３は、ＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ１２−アルコキシ、又はＮＨ−Ｘ４−ＣＨ２−Ｚ（ここで、Ｘ４は、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−Ｃ１２炭化水素であり、及びＺは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ又はＣＯＮＨ２である）である］の化合物、又は基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含む対応するトリペプチド、及びまた、医薬上許容される塩の使用に関する。
2004509148.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管形成によって利益を得る病状を治療する医薬の製造のための、式Ｉ：
【化１】
2004509148.tif 000005
［式中、
Ａ１は、Ｄ−又はＬ−Ｓｅｒに対応する基であり、
Ａ２は、Ｄ−又はＬ−Ａｓｐ又はＧｌｕに対応する基であり、
Ａ３は、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はＯｒｎに対応する基であり、
Ａ４は、Ｄ−又はＬ−Ｐｒｏに対応する基であり、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキル、Ｒ４ＣＯ又はＲ４ＣＯＯ（ここで、Ｒ４は、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、又は置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキルである）から選択され；置換基のうち、ＯＨ、ＮＨ２又はＣＯＯＨに言及すべきであり、
Ｘ１及びＸ２は、ペプチド結合又は擬ペプチド結合であり、
Ｘ３はＣＯ又はＣＨ２であり、及び
Ｒ３は、ＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ１２−アルコキシ又はＮＨ−Ｘ４−ＣＨ２−Ｚ（ここで、Ｘ４は、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−Ｃ１２炭化水素であり、及びＺは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ又はＣＯＮＨ２である）である］の化合物、又は基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含む対応するトリペプチド、及びまた、医薬上許容される塩の使用。
【請求項２】
問題の病状が、血管の異常、特に虚血であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
問題の病状が、組織病巣、特に骨折の瘢痕化及び修復を含むことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項４】
問題の病状が、神経再生、再建手術、マテリアル（ｍａｔｅｒｉａｌ）又は器官移植の内皮形成であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項５】
式Ｉの化合物が、ペプチドＡｃＳＤＫＰ由来の擬ペプチドであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
式Ｉの化合物が、ペプチドＡｃＳＤＫＰ由来であり、かつ基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含むトリペプチドであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
化合物が、
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
から選択されることを特徴とする請求項１及び６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
化合物が、
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
から選択されることを特徴とする請求項１及び６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
ｅｘ　ｖｉｖｏ又はｉｎ　ｖｉｔｒｏの組織培養における血管形成誘発物質としての、式Ｉ：
【化２】
2004509148.tif 000006
［式中、
Ａ１は、Ｄ−又はＬ−Ｓｅｒに対応する基であり、
Ａ２は、Ｄ−又はＬ−Ａｓｐ又はＧｌｕに対応する基であり、
Ａ３は、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はＯｒｎに対応する基であり、
Ａ４は、Ｄ−又はＬ−Ｐｒｏに対応する基であり、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキル、Ｒ４ＣＯ又はＲ４ＣＯＯ（ここで、Ｒ４は、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、又は置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキルである）から選択され；置換基のうち、ＯＨ、ＮＨ２、又はＣＯＯＨに言及すべきであり、
Ｘ１及びＸ２は、ペプチド結合又は擬ペプチド結合であり、
Ｘ３はＣＯ又はＣＨ２であり、及び
Ｒ３は、ＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ１２−アルコキシ、又はＮＨ−Ｘ４−ＣＨ２−Ｚ（ここで、Ｘ４は、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−Ｃ１２炭化水素、及びＺは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ又はＣＯＮＨ２である）である］の化合物、又は基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含む対応するトリペプチド、及びまた、医薬上許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、血管形成を誘発する化合物及びその使用、特にある種の血管異常の治療におけるそれらのものに関する。
【０００２】
血管形成は、個体の生涯を通じて見られ、かつ該生物の構造的及び機能的完全性の維持を可能にする基本的な生理現象である。血管形成は、先在する血管から新しい血管の形成に到る一連の事象を誘発する局所刺激に応答して生じる。
【０００３】
血管新生の間、内皮細胞は、新しい血管の形成に必須の中枢要素を表す。それらの発生及び増殖は、ポジティブ（血管形成）因子及びネガティブ（血管形成抑制（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ））因子によって制御される。既に形成された血管では、内皮細胞は、静止状態にある。しかしながら、血管形成刺激に応答して、これらの細胞は増殖し始め、そして新しい血管の形成部位の方に移動し始める。このことは、周りの細胞との相互作用及び細胞外マトリックスの要素との相互作用の形成を必要とする。
【０００４】
成人において、血管形成は、生殖機能（黄体の形成、胎盤の形成、子宮内膜の発達）、並びに、特に外傷（瘢痕化）の間の組織修復及び虚血の鍵過程である。従って、外因性分子の投与により血管形成を刺激することによって、例えば、皮膚、骨、胃又は眼の傷の修復のようなある種の疾患の治療に相当の進歩が表れることは明白である。このような血管形成メディエーターの臨床的使用の前途は、虚血の病状と関連する組織の再生の促進に、又は人工器官の内皮形成にも開かれている。
【０００５】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ又は（ａｓ）ｉｎ　ｖｉｖｏで、血管形成の段階を誘発することができる幾つかの血管形成因子が同定された（アンジオジェニン、アンジオポエチン、インターロイキン８（ＩＬ−８）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦｓ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）α及びβ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来内皮増殖因子（ＰＤＧＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦｓ）及び胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）。事実上タンパク質であるこれら全ての因子の、ヒトにおける組織修復能力が熱心な研究の目的である。ＶＥＧＦｓ及びＦＧＦｓのフェーズＩ及びＩＩの臨床試験が始まった。特に、これらの因子の心臓及び脳の両方の虚血の病状に対する治療効果が評価される。これらの試験から得られた現在の結果は、これらの因子の投与方法が何であれ（組換えタンパク質の注入又は遺伝子治療）、後者は期待された治療の有効性を示さない（Ｆｅｒｒａｒａ Ｎ． Ａｌｉｔａｌｏ Ｋ．， １９９９ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ． Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．， ５：１３５９−１３６４） ということを示す。組織血管新生を刺激することを目的とした新しいアプローチは、現在、幾つかの血管形成因子を併用する治療に向けられている。
【０００６】
血管形成因子を組換えタンパク質の形態で利用できることにより、それらの局所での適用が傷の治癒を加速し得ることを示すことができた。最も優れていると思われる製品はＴＧＦβである。その瘢痕を形成する性質は、数年の間にしっかりと確立され、臨床試験が進行中である。
【０００７】
とにかく、これらの血管形成因子の大部分は、組換えアプローチによってしか得ることができない高分子量タンパク質であり、そのことがさらに治療の費用価格を増大させる。
【０００８】
幾つかのポリペプチドは血管形成を刺激することができるが、本発明者らは、小サイズの、より詳細には４個のアミノ酸のペプチド構造の真の血管形成活性を証明することに成功した。
【０００９】
式Ｉ又は少なくとも３個のアミノ酸（Ａ１、Ａ２、Ａ３に対応する基を含む）を含む、小サイズのペプチドもまた、本発明の一部であることは注目される。
【００１０】
この理由のために、本発明は、このタイプの適用のための小ペプチドの使用に関する。その化学合成に問題はなく、その費用価格はかなり低い。
【００１１】
さらに、産業的な観点から、これらのペプチドの使用は、幾つかの利点を有する。その中には、特に、タンパク質よりも取り扱い易いという事実がある。
【００１２】
本発明は、血管形成によって利益を得る病状の治療する医薬の製造のための、式Ｉ：
【００１３】
【化３】
2004509148.tif 000003
【００１４】
［式中、
Ａ１は、Ｄ−又はＬ−Ｓｅｒに対応する基であり、
Ａ２は、Ｄ−又はＬ−Ａｓｐ又はＧｌｕに対応する基であり、
Ａ３は、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ又はＯｒｎに対応する基であり、
Ａ４は、Ｄ−又はＬ−Ｐｒｏに対応する基であり、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキル、Ｒ４ＣＯ又はＲ４ＣＯＯ（ここで、Ｒ４は、置換されていてもいなくてもよいＣ１−Ｃ１２−アルキル、又は置換されていてもいなくてもよいＣ７−Ｃ２０−アリールアルキルである）から選択され；置換基のうち、ＯＨ、ＮＨ２、又はＣＯＯＨに言及すべきであり、
Ｘ１及びＸ２は、ペプチド結合又は擬ペプチド結合であり、
Ｘ３はＣＯ又はＣＨ２であり、及び
Ｒ３は、ＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ１２−アルコキシ、又はＮＨ−Ｘ４−ＣＨ２−Ｚ（ここで、Ｘ４は、直鎖又は分岐鎖Ｃ１−Ｃ１２炭化水素、及びＺは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ又はＣＯＮＨ２である）である］の化合物、又は基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含む対応するトリペプチド、及びまた、医薬上許容される塩の使用に関する。
【００１５】
「血管形成によって利益を得る」という表現は、血管形成の誘発によって、及び／又は血管形成の刺激によって利益を得ることを意味するように意図されている。
【００１６】
これらの式に対応するペプチド又は擬ペプチドは、テトラペプチドであるアセチル−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ（ＡｃＳＤＫＰ）の基本構造から誘導され、これらの誘導体は、特に、血管形成活性を増大させ、副作用を減少させ、及び／又は生理的媒質における寿命を増大させるように意図されている。
【００１７】
本発明の化合物のうちで、ペプチドＡｃＳＤＫＰ由来であり、かつ基Ａ１、Ａ２、Ａ３を含むトリペプチドに言及すべきである。
【００１８】
基本構造は、ウシ胎仔骨髄から単離された分子であり、その使用は、今まで、特に、ＷＯ ８８／００５９４に記載された、造血幹細胞の増殖を阻害する機能と結びついてきた。
【００１９】
「に対応する基」という表現は、アミノ酸に対応する式：ＮＨ２−ＣＨ（Ａ）−ＣＯＯＨの基Ａを意味するように解釈すべきである。
【００２０】
即ち、Ａは、
Ｓｅｒでは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ａｓｐでは−ＣＨ２ＣＯＯＨであり、
Ｇｌｕでは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり、
Ａｒｇでは−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ２であり、
Ｏｒｎでは−（ＣＨ２）３−ＮＨ２であり、そして
Ｌｙｓでは−（ＣＨ２）４−ＮＨ２であり、
末端アミノ酸Ａ４では、それは、構造：＝Ｎ−ＣＨ（Ａ）−ＣＯ−又はＮＨ−（ＣＨ）Ａ−ＣＯ−のいずれかである。
【００２１】
用語「擬ペプチド」は、基準のペプチドに類似するが、１つ以上のペプチド結合−ＣＯ−ＮＨ−が、ペプチド結合と等価な結合（それは擬ペプチド結合と呼ばれ、即ち、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＯ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＯ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、例えば、Ψ（ＣＨ２ＮＨ）により表される）で置き換えられた化合物を表すように意図される。
【００２２】
基Ｒ１及びＲ２のうちで、基：Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ３）−アルキル−ＣＯ−、特にＣＨ３ＣＯ及びＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｏもまた、より好ましい。
【００２３】
同様に、Ｒ３は、好ましくは、ＮＨ２、ＯＨ又はＮＨＣＨ３である。
【００２４】
化合物のうちで、
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ψ−（ＣＨ２Ｎ）−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＮＨ２
に言及すべきである。
【００２５】
以下の化合物：
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＯＨ
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＯＨ
Ｈ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ψ−（ＣＨ２ＮＨ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
ＣＨ３ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨＣＨ３
ＨＯＯＣＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
にも言及すべきである。
【００２６】
医薬上許容される塩のうち、特に、無機酸との塩；塩化物、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、塩酸塩（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒａｔｅ）、また有機酸との塩；特に、例えば、乳酸塩、クエン酸塩、及び塩基との塩にも言及すべきである。
【００２７】
本発明者らは、ここでこのテトラペプチド、又は式Ｉの関連ペプチドが、血管形成を誘発することができることを証明した。
【００２８】
血管形成の刺激によって利益を得る病状の治療のなかで、血管異常、特に、虚血の治療における血管異常に言及すべきである。即ち、本発明の化合物は、特に以下の場合に使用してもよい。
１．虚血の病状の場合の副行血管形成の誘発：
−心筋虚血（冠動脈疾患、心筋梗塞）、
−末梢虚血（末梢動脈閉塞）、
−脳虚血（脳血管疾患）
２．組織病巣の場合の骨折の瘢痕化及び修復：
−皮膚科学：火傷又は傷、慢性潰瘍、
−眼科学：角膜又は網膜病巣、
−胃腸病学：胃十二指腸潰瘍、
−骨手術：硬組織修復：骨＋軟骨、
３．神経形成、
４．再建手術及び形成手術、
５．血管インプラント及びバイオマテリアルの内皮形成、
６．器官移植（例えば、ランゲルハンス島）。
【００２９】
上記リストは、特に、併用治療の場合において、幾つかの可能な適用を構成するだけであり、血管形成の加速によって、治癒の加速が可能となり得る。
【００３０】
本発明の化合物はまた、例えば、皮膚の培養において、又は組織を用いたマテリアル（ｍａｔｅｒｉａｌ）の被覆において、血管形成誘発物質として、血管新生を必要とするｅｘ　ｖｉｖｏ又はｉｎ　ｖｉｔｒｏの組織培養において有用である。
【００３１】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて、ＡｃＳＤＫＰが、ヒト内皮細胞（ＨＵＶＥＣ及びＥＡ．ｈｙ９２６）及びウシ脳毛細血管（ＢＢＣ）由来の内皮細胞の増殖を有意に刺激することができることを示すことが可能となった。
【００３２】
ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、ＡｃＳＤＫＰの血管形成活性が、「ニワトリ胚漿尿膜」実験モデルで試験された。このモデルで、ＡｃＳＤＫＰは血管新生をかなり誘発する。
【００３３】
さらに、髄様細胞で行われた予備研究により、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでＡｃＳＤＫＰが、細胞外マトリックスの種々の成分（例えば、フィブロネクチン、コラーゲンＩＶ及びラミニンなど）へのこれらの細胞の付着を増大させることが明らかになった。同等の結果が、ＨＵＶＥＣヒト内皮細胞で行われた予備実験で得られた。内皮細胞と細胞外マトリックスとの間のこれらの相互作用は、血管新生を決定付けるものであり、血管形成の種々の段階に含まれるということがはっきりと確立されている。特に、細胞外マトリックスは、組織微細環境に合った新しい機能的な血管を形成するために、血管内皮細胞の増殖及び移動、並びに、分化して毛細血管中に組織化するそれらの能力にも影響を及ぼす。
【００３４】
本発明の化合物は、特に、瘢痕化を改善するように意図された組成物の製剤が所望のとき、対応する形態で（錠剤、注射用溶液、又は軟膏であろうとゲルであろうと）、適切な医薬形態で（例えば、経口、静脈内、経皮、肺、皮下、鼻又は他の経路によって）投与してもよい。
【００３５】
血管再形成の場合に、特に、虚血の治療において、注射経路、特に点滴での使用が好ましい。
【００３６】
もちろん、本発明の化合物は、血管形成が主要な治療のための（例えば、胃十二指腸潰瘍の治療において）サポート治療を構成するときだけ、直接病状を治療することをおそらく意図された他の有効成分と併用して使用してもよい。
【００３７】
投与量に関しては、使用したモデルにおいて、血管形成効果が最大に達し、投与する量を増やさないならば、次いで再び減少することが注目された。従って、投与量はおそらく、必要ならば、病状のタイプ及び患者に合うように調整しなければならないであろう。ＡｃＳＤＫＰの最適投与量は、１０−５〜１０−１１Ｍであり、好ましくは１０−６〜１０−９であろう。
【００３８】
本発明の化合物は、ペプチド又は擬ペプチドタイプの合成方法、特に、ＡｃＳＤＫＰ誘導体の合成を記載するＷＯ ８８／００５９４に記載の方法、及びＡｃＳＤＫＰに関する擬ペプチドの合成を記載する特許ＷＯ ９７／２８１８３に記載の方法を用いて合成してもよい。
【００３９】
実施例１
以下の試験を、テトラペプチドＡｃＳＤＫＰを用いて行った；以下の結果が観察された：
【００４０】
ＡｃＳＤＫＰは、ウシ脳毛細血管（ＢＢＣ）由来の内皮細胞及びヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の増殖、並びに不死化ＨＵＶＥＣ細胞系（ＥＡ．ｈｙ９２６）の増殖も有意に刺激する。ＡｃＳＤＫＰの細胞分裂効果は、１０−６〜１０−１１Ｍの範囲の濃度（最大１０−９Ｍ）で現れる。
【００４１】
これらの研究の結果を、図１ａ、１ｂ及び１ｃに示す。
【００４２】
全骨髄（とりわけ、内皮細胞を含む）で行ったさらなる研究により、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいてＡｃＳＤＫＰが、細胞外マトリックスの多様な成分（例えば、フィブロネクチン、コラーゲンＩＶ及びラミニンなど）への骨髄細胞の付着を増大させることが示された。
【００４３】
このタイプのモデルにおけるＡｃＳＤＫＰの最適濃度は１０−６〜１０−０Ｍである。
【００４４】
同等の結果が、ＨＵＶＥＣヒト内皮細胞で行われた予備実験で得られた。
【００４５】
内皮細胞と細胞外マトリックスとの間のこれらの相互作用が、血管新生を決定付けるものであり、血管形成の種々の段階に含まれることは十分に確立されている。特に、細胞外マトリックスは、組織微細環境に合った新しい機能的な血管を形成するために、血管内皮細胞の増殖及び移動、並びに分化して毛細血管中に組織化するそれらの能力にも影響を及ぼす。
【００４６】
実施例２
以下の実験がニワトリ胚漿尿膜実験モデルで行われ、このモデルにおいてＡｃＳＤＫＰ及びそのアナログの活性が試験された。ＡｃＳＤＫＰ及びそのタンパク質分解耐性のあるアナログであるＡｃＳＤＫＰ−ＮＨ２は、血管新生を有意に誘発するのに対し、その光学異性体であるＡｃＳＤＫＰは血管形成効果を有しないということを実証することができた。血管形成の密度の増加は研究された投与量によって異なり、１０−９Ｍ〜１０−７Ｍの濃度でＡｃＳＤＫＰ及びＡｃＳＤＫＰ−ＮＨ２は最大の効果を示した（図２ａ， ２ｂ 及び ２ｃ）。
【００４７】
実施例３
ラットを使って行われたｉｎ　ｖｉｖｏでの研究結果は、ＡｃＳＤＫＰが哺乳類においても血管新生を誘発することを示している。
【００４８】
これらの実験において、ＡｃＳＤＫＰを正常ラットの腹筋に注射した（５時間の処置を１日に２回）。８日目に殺された動物で行われた腹壁の血管造影によって、ＡｃＳＤＫＰを５μｇ／ｋｇ／注射の投与量で処置した動物において、より発達した血管形成（細かい血管の数の有意の増加）が明らかになった。強調すべきは、この効果は経時的に持続するということである（観察は処置を始めてから１ヶ月行われた）。ＡｃＳＤＫＰを５０μｇ／ｋｇ／注射の投与量で投与した後には、血管形成の有意の変化は見られなかった。
【００４９】
投与量の増加と結びついたＡｃＳＤＫＰの血管形成活性の喪失（それはｉｎ　ｖｉｔｒｏ（培養中の細胞）及びｉｎ　ｖｉｖｏ（ニワトリ胚及びラット胚）の両方で観察された）は、以前にも記載されたように、ＡｃＳＤＫＰに関する逆Ｕ字型の投与量反応の存在と一致する。［（Ｇｕｉｇｎｏｎ Ｍ．， Ｂｏｎｎｅｔ Ｄ， Ｌｅｍｏｉｎｅ Ｆ．， Ｋｏｂａｒｉ Ｌ．， Ｐａｒｍｅｎｔｉｅｒ Ｃ．， Ｍａｒｙ ＪＹ， Ｎａｊｍａｎ Ａ． （１９９０）　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｂｙ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ ＡｃＳＤＫＰ； Ｅｘｐ． Ｈｅｍａｔｏｌ． １８， １１１２； Ｊａｃｋｓｏｎ ＪＤ， Ｙａｎ Ｙ．， Ｅｗｅｌ Ｃ．， Ｔａｌｍａｇｅ ＪＥ． （１９９６）　Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｃｅｔｙｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ （ＡｃＳＤＫＰ） ｏｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｉｎ ｓｈｏｒｔ ｔｅｒｍ ａｎｄ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｍｕｒｉｎｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｕｌｔｕｒｅｓ．　Ｅｘｐ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， ２４， ４７５）］．
【００５０】
実施例４
内皮細胞の血管への組織化は、血管形成のための重要な段階を構成する。ＡｃＳＤＫＰがｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏの両方でマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）における管の形成を刺激するということが示された。
【００５１】
２タイプの内皮細胞を使ってｉｎ　ｖｉｔｒｏで行われた実験は、１０−９Ｍ及び１０−１１Ｍの濃度のＡｃＳＤＫＰが、対照値と比較して血管網の総表面積の増加を誘発することを示している。それぞれ６０％及び５８％の増加に対応する最大の刺激が、細胞をテトラペプチドに６時間暴露した後に観測された。これらの結果は１ｎｇ／ｍｌのＦＧＦｂによって生じたものと匹敵する（図３）。
【００５２】
ｉｎ　ｖｉｖｏでは、ＡｃＳＤＫＰは投与量依存性により、動物（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット）の皮膚の下に置かれたマトリゲルの血管浸潤を誘発する。この実験では、移植の前にＡｃＳＤＫＰをマトリゲルと混ぜた。７日後、動物を殺してマトリゲルサンプルを取り出し、ホルマリン（ｆｏｒｍｏｌ）で固定し、組織学的研究の被験物とした。染色及び免疫標識後の顕微鏡観察及び血管の定量により、対照マトリゲルと比較してＡｃＳＤＫＰを含んだマトリゲル内には、はるかに多い数の血管が存在することが明らかになった（表１）。定量に関しては、１番数の多かったところから１０連続領域（表面積＝３２ｍｍ２）で血管断面を数えた。
【００５３】
【表１】
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【００５４】
実施例５
ｉｎ　ｖｉｖｏで、血管形成の欠損によって特徴付けられる病巣域において、新しい管の形成を刺激する血管形成因子の能力を得て、本発明者らは皮膚弁モデルを使って組織病巣修復の促進におけるＡｃＳＤＫＰの有効性を研究した。実際には、皮膚弁の末端壊死（ｄｉｓｔａｌ ｎｅｃｒｏｓｉｓ）は、一般に血管網の破裂及びそれによる動脈流の機能不全（これは形成外科及び再建外科の分野でかなりの問題を有する）によって起こる。これらの皮膚弁の血管再生に寄与する血管形成因子の投与により、これらの生存を増やすことが証明された。
【００５５】
本発明者らはＡｃＳＤＫＰを皮膚弁の領域に皮下注射することにより、それらの壊死を減らせることを示した。有茎腹部皮膚弁（ｐｅｄｉｃｌｅｄ ｖｅｎｔｒａｌ ｓｋｉｎ ｆｌａｐｓ）（６ｘ６ｃｍ）（左鼠径部茎 （ｌｅｆｔ ｉｎｇｕｉｎａｌ ｐｅｄｉｃｌｅ））をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットで作った。
【００５６】
ＡｃＳＤＫＰを外科的介入の直後に５μｇ／ｋｇ／注射 （２５０μｌ／注射）の投与量で投与し、それからまた１２時間おきに５回投与した。得られた結果は、ＡｃＳＤＫＰで処理した動物における皮膚弁の生存が対照と比較して１０％上がっていることを示している。肉眼的な観点から見ると、壊死の減少は皮膚弁の内表面における血管形成の密度の増加と一致している。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１ａ、１ｂ及び１ｃ：ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて、ＡｃＳＤＫＰはウシ（ＢＢＣ）及びヒト（ＨＵＶＥＣ及びＥＡ．ｈｙ９２６）内皮細胞の増殖を刺激する。
【図２】
図２ａ、２ｂ及び２ｃ：ニワトリ胚漿尿膜（ＣＡＭ）の血管形成に対するＡｃＳＤＫＰ及びそのアナログの効果。
【図３】
ｉｎ　ｖｉｔｒｏでのマトリゲルにおける内皮細胞（ＥＡ．ｈｙ９２６）による血管形成に対するＡｃＳＤＫＰの効果。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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