(57)【要約】ほ乳類からの生体試料の少なくとも１成分についての調査方法及びその方法の実行のためのキットであって、前記方法が、（ａ）少なくとも１つのマーカ物質をほ乳類に投与し、（ｂ）前記少なくとも１つのマーカ物質が試料採取の部位に達するのに十分な時間待機し、（ｃ）前記ほ乳類から生体試料を採取し、（ｄ）前記少なくとも１つのマーカ物質又はその誘導体が前記生体試料中に検出可能なときに、少なくとも１つのマーカ物質若しくはその誘導体の存在及び／又は量について前記生体試料を調査し、（ｅ）分析物について前記生体試料を調査する、ステップを含むことを特徴とする。
2004535554.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ほ乳類からの生体試料の少なくとも１成分についての調査方法であって、
（ａ）少なくとも１つのマーカ物質をほ乳類に投与し、
（ｂ）前記少なくとも１つのマーカ物質が試料採取の部位に達する十分な時間待機し、
（ｃ）前記ほ乳類から生体試料を採取し、
（ｄ）前記少なくとも１つのマーカ物質又はその誘導体が前記生体試料中に検出可能なときに、少なくとも１つのマーカ物質若しくはその誘導体の存在及び／又は量について前記生体試料を調査し、
（ｅ）分析物について前記生体試料を調査する、
ステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのマーカ物質がイソプレノイド、脂質、糖類、多価アルコール、ポリエチレングリコール又はこれらの誘導体から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アラビノース、エリトルロース、ミオ−イノシトール、シス−イノシトール、マンニトール、ソルボース、ラムノース、ソルビトール、キシロース及びキシルロースが糖類として選択されることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも１つのポリエチレングリコールをマーカ物質として用いることを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つのマーカ物質を非経口又は経口で受容体に供給することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ほ乳類からの生体試料の採取を回収容器中の尿の回収により又は動脈から注入用注射器による若しくは静脈穿刺して採血管による血液の採取により行うことを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記生体試料が体の排泄物、体液又は組織を含むことを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記体の排泄物が尿であることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記マーカ物質又は複数のマーカ物質をＧＣ、ＧＣ／ＭＳ、ＨＰＬＣ又はＨＰＬＣ／ＭＳにより検出することを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
メタドンで治療した患者からの尿試料を麻酔剤について調査する方法であって、
（ａ）異なる分子量の２ｎ−１のポリエチレングリコールの配合剤をメタドンで治療した患者に経口で投与し、ここでｎは整数で０より大きく、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、特に好ましくは５であり、
（ｂ）少なくとも３０分間最大４時間まで待機し、
（ｃ）前記患者の排泄された尿から尿試料を採取し、
（ｄ）前記投与したポリエチレングリコールの存在について前記尿試料を調査し、場合により、
（ｅ）麻酔剤について前記尿試料の調査をする、
ステップを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記請求項のいずれかに記載の方法を行うためのキットにおいて、該キットは、容器内に、少なくとも１つのマーカ物質、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、特に好ましくは５つを含むことを特徴とするキット。
【請求項１２】
前記キットが異なる分子量の２ｎ−１のポリエチレングリコールの配合剤を１つ以上の容器内に含むことを特徴とする請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
前記キットが前記少なくとも１つのマーカ物質を投与する手段を更に含むことを特徴とする請求項１１又は請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記キットがほ乳類から採取された試料中の前記少なくとも１つのマーカ物質の検出のための手段を更に含むことを特徴とする請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記キットが前記少なくとも１つのマーカ物質の検出のための対照物質を更に含むことを特徴とする請求項１３に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ほ乳類の排泄物、体液から又は組織試料として採取された試料をその試料の起源に関して特定し、このようにして、試料の提供者を明白に決定する方法に係り、それにより試料を分析物について調査する方法に関する。更に、本発明の目的はこの方法を行うためのキットである。
【背景技術】
【０００２】
人の診断方法、治療の経過を監視する方法、予防的な決まりきった（ルーチン）調査及び法医学的調査は通常、研究室における、例えば被検者から採取した血液又は血清のような試料の分析調査及び例えば尿のような被検者の排泄物の調査を含む。動物の医学的な診断及び治療方法が複数存在しているため、動物の試料に対する分析方法の幅広い多様性は、今日では一般的なものである。特に、集中的牧畜と関連して発生した、動物性の粗粉を与えたり違法な食品添加物をホルモン及び／又は抗生物質の形態で家畜の飼料に混合したりすることによるＢＳＥ疾患のような問題は、農業における動物群についての定期的な管理調査の拡張を必要としている。
【０００３】
このような状況において、もし調査で得られる結果が、実験結果の評価に正確な応答を開始するために試料のそれぞれの提供者を明白に決定できるとすれば、試料の分析調査はいずれも意味を持つことに疑問はない。
【０００４】
新規な分析及びテスト方法は科学的−技術的進歩の一部として絶えず開発されている。分子生物学における進歩は、例えばＤＮＡ分析に基づく一連の検出法の完成を認め、これにより人又は動物の特定の疾患が診断され得る。
【０００５】
また多くの新しい分析、及び、検出方法も法医学に応用可能であり、すなわち、後者の困難な課題のため、例えば競技者のドーピング物質検出又は自動車運転者の薬物検出のための特異的なテスト方法の進展を見いだしている。
【０００６】
複数の分析方法がそれらの複雑さと同様に行われるため、これらの調査を行う研究室の人員ばかりではなく専門的設備に高度な規格が求められる。通常、多くの試料が最新の分析装置で同時に調査される。このため、試料の混同の問題がやむを得ず起こり、それにより試料提供者に関する調査結果の不正確な決定に至る。この問題は新しいものではなく、特に新しい分析方法の早急な開発及び付随したそれらの利用に対する要求の増大により悪化させられる。
【０００７】
分析されるべき試料の混同又は交換の結果は異なるもので通常は好ましくないので、既にこの問題を如何に解決するかについて全体の一連の提案が存在している。
【０００８】
これらの解決の試みは調査を行う研究室において、一定の規則に従い行動することで試料混同の危険を最小にしようとする、作業の流れの構成を向上させることに主として関連している。しかしながら、これらの分析方法における多くの規約（プロトコル）ステップは研究室の人員自身により行われるため、人為的間違いに起因する混同を完全に除くことはできない。
【０００９】
知られているように、試料に対して行われるべきそれぞれの規約ステップのコンピュータ管理による監視は広く行われており、例えば試料容器をコンピュータ読み取り可能なコードで標識（ラベリング）することによりそれぞれの試料は、試料の登録で開始され実験結果の分析処理及び保管を含む調査過程の全体の間で追跡され得る。このコンピュータ監視及びコンピュータ管理された試料の分析はそれゆえ混同の重大な危険を伴うことなく多数の異なる試料の並行した決定を可能にする。
【００１０】
しかしながら、研究室で調査されるべき試料を監視しこれらの試料に対するテスト結果を決定し、この決定に伴い試料提供者を決定する最も精巧なシステムでさえ、試料やテスト結果の不十分なマーキングだけでは同じ問題が起こるので、試料の混同又は交換を完全に排除することができないことは、当業者にとって明らかである。
【００１１】
上述した試料の混同又は交換の問題は、テスト結果が試料提供者又は、家畜動物を起源とする試料の場合には動物の所有者に対して罪になるような証拠として用いられる応用分野において特に誇張される。これらの場合、罪になるような証拠の発生を避けるためにテスト試料を不正に変更する被検者又は所有者の特別な関心が存在している。
【００１２】
しかしながら、これらの場合、特定の法規制がこのようにしばしば施行されるので、試料提供者に対するテスト結果の明白な決定は特に重要である。
【００１３】
この問題のため、試料を不正に変更することを回避するために従来技術に既に開示されている解決の試みは、試料採取を監視することに専ら関連する。例えば、メタドン治療を行っている被検者からの尿の提出を監視することは一般的な習慣である。
【００１４】
しかしながら、尿試料の提出の間における被検者の最も巧妙な監視及び監督でさえ、試料の交換を完全に回避することは難しい。ドイツでは１２０，０００〜１４０，０００の薬物中毒患者の２０，０００が既にメタドンで治療されている。この数の重要な増加は将来に期待されるべきである。メタドン患者はしばしば他のバルビツール酸系催眠剤のような麻酔剤及び鎮静剤を服用しているので、患者に服用させる物質の管理は治療上必要である。
【００１５】
メタドン治療の実施についてのガイドラインによると、尿は特定の環境下で少なくとも週１回、又はそれ以上に検査しなければならない。通常の医師の診療所では一般に小さな洗面所があるだけであり男性のメタドン患者に随伴する男性の医療人員が十分に配置されていないのが通常であるため、通常、監視下での尿試料の提出は実施できない。監視下で試料を提出するために適切な洗面所の構成は財務上高支出となる。デュッセルドルフの健康診療所におけるそのような支出経費は５０ＴＤＭになっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
提出された尿試料の不正な変更が一般に見られるため、作業は唾液分泌における薬物検出のための分析方法で行われることがますます増加している。テスト試料として血液、血清又は尿を用いるのと比較して、唾液試料は傷害となる強制を伴うことなく又は被検者のプライバシに立ち入ることなく得ることができるけれども、試料の不注意な混同の危険又は故意の不正な変更はまだ回避されていない。
【００１７】
本発明の目的は提供者に対する試料の明白な決定を導くことであり、このようにして従来技術に共通の問題又は不利益を克服することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明ではこの目的は、ほ乳類からの生体試料の少なくとも１成分についての調査方法であって、
（ａ）少なくとも１つのマーカ物質をほ乳類に投与し、
（ｂ）前記少なくとも１つのマーカ物質が試料採取の部位に達するのに十分な時間待機し、
（ｃ）前記ほ乳類から生体試料を採取し、
（ｄ）前記少なくとも１つのマーカ物質又はその誘導体が前記生体試料中に検出可能なときに、少なくとも１つのマーカ物質若しくはその誘導体の存在及び／又は量について前記生体試料を調査し、
（ｅ）分析物について前記生体試料を調査する、
ステップを含むことを特徴とする方法、を提供することにより満たされる。
【発明の効果】
【００１９】
従って、本発明の技術思想は、患者（ｌａｙｐｅｒｓｏｎ）に適用可能な方法によりこのマーカが試料から除かれることを防止しつつ、調査されるべき試料がマークされる可能性を見いだすことであった。それゆえ本方法は、例えばドーピング検査と同様にメタドン治療を監視するのに適している。好都合なマーキングする物質は一連の特異的な特性により一般に特徴付けられる。本発明によれば、これらのマーカ物質は血液中、尿中若しくは他の体液中、又は体の排泄物中におけるこれらのマーカ物質の検出に必要な濃度ではほ乳類の生体に薬学的副作用を示さない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
少なくとも１つのマーカ物質から特異的に形成される誘導体もまた後者の代わりに同じように用いられる。“誘導体”という用語は、被検者の生体又は採取された試料における化学的変化の結果として生ずるすべての後続生成物と理解されるべきであるが、しかしながら、被検者の生体又は採取された試料における特異的マーカの変化に専ら起因するものではないすべての後続生成物は排除される。
【００２１】
マーカ物質が液体に可溶であり、例えば汁のような液体の通常の味覚がその添加により変化せず、又は、水に溶解した後得られた液体の嫌な味覚がマーカ物質により引き起こされず、それゆえ被検者がマーカを含む液体を快く飲むことができるものであれば好都合である。
【００２２】
好都合なマーカ物質は、腸管の粘液性膜を通して速やかに吸収され被検者から尿中に排泄される点に特徴付けられる。尿試料中のこれらのマーカ物質が例えば臨床分析化学の一般的方法のような既に化学的調査の研究室で確立された検出方法によりできるだけ簡単な方法で検出されれば、更に好都合である。本発明では、被検者に吸収された後代謝されないマーカ物質を使用することが好ましい。
【００２３】
好ましいマーカ物質は、例えばアラビノース、エリトルロース、ミオ−イノシトール、シス−イノシトール、マンニトール、ソルボース、ラムノース、ソルビトール、キシロース及びキシルロースのような、水に可溶であり酵素的テストにより容易に検出され得る糖又は糖誘導体である。
【００２４】
また、イソプレノイド、脂質、糖類、多価アルコール、ポリエチレングリコール、これらの誘導体又は混合物をマーカ物質として用いることも好都合である。
【００２５】
特に好ましくは、尿試料の調査における本発明による方法の使用である。このとき、マーカ物質又は複数のマーカ物質の配合剤は液体に溶解され、尿提出の約３０乃至６０分前に被検者が液体を飲用することにより経口で投与される。ポリエチレングリコール又はこの混合物は尿試料の調査のためのマーカ物質として最も好ましく用いられる。
【００２６】
複数のマーカ物質を同時に投与することが特に好ましく、マーカ物質の配合剤によりそれぞれの試料に属する特定の数値コードを創りだすことが可能である。不正な変更に対する安全性を向上させるため、少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、特に好ましくは５つのマーカ物質の配合剤を同時に投与することが好ましい。
【００２７】
全ｎ個のマーカ物質を用いることで、２の乗数で表せば２ｎ−１の異なる配合が存在する。被検者による試料を不正に変更することは、被検者がマーカ物質の化学的性質、自身の尿試料の数値コード及びコードを構成する元のマーカ物質の配列を知らなければならないため、不可能である。
【００２８】
マーカ物質の投与は異なる方法で行われる。“投与”という用語は、試料提供者の生体に１つ又は複数のマーカ物質を導入することと理解されるべきである。本発明では、マーカ物質又は複数のマーカ物質は試料提供者に好ましくは非経口又は経口で投与される。マーカ物質又は複数のマーカ物質が消化管を経て吸収され、吸収の間にマーカ物質の代謝が起こらないことが特に好ましい。
【００２９】
投与された少なくとも１つのマーカ物質のタイプ及び採取されるべき試料のタイプに依存して、調査されるべき試料の採取前に、特定の“十分な長さの時間”待機することが必要である。この時間の長さは少なくとも１つのマーカ物質が試料採取の部位に達するのに要する時間に相当する。試料提供者とは別に存在する成分、例えば体の排泄物から試料採取する場合、時間は少なくとも１つのマーカ物質が別の成分中に存在しこの成分が試料提供者から離れるまでに要する時間であると理解されるべきである。待機しなければならない時間は実験的に決定される。しかしながら、ほとんどの場合、それらの決定に対応する数値又は方法は従来技術に開示されている（van Rossum, J. M.: Kinetics of Drug Action. Handbuch der experimentellen Pharmakologie, Vol.47. Springer, Berlin 1977（ファン  ロッスム、イョット．エム．：薬物作用の速度論、１９７７年にベルリンのスプリンゲルで発行された実験薬理学ハンドブック第４７巻）; Forth, W.: Allgemeine und spezielle Pharmakologie und Toxikologie. Bibliographisches Institut & F. A. Brockhaus, Mannheim 1988（フォルス、ヴェ．：１９８８年にマンハイムで書誌研究所＆エフ．ア．ブロックハウスにより発行された一般の特異的薬理学及び毒物学））。
【００３０】
試料採取は調査されるべき試料のタイプに応じて異なる方法で行われる。体の排泄物の分析の場合には、試料の一部が試料容器に採取され、この後、更に調査される。人の尿又は便の試料の調査においては、被検者には単に試料容器が与えられ、試料は被検者自身によりその容器で提出されるのが通常である。体液から又は組織試料からの試料採取については、被検者の直接手術が通常必要である。ここで、被検者からの血液の入手は使い捨て可能な治療器具による皮膚の穿刺若しくは切開に続いて吸引ピペットを用いて又は−より大量には−静脈穿刺後に注入用注射器若しくは採血管（ドイツ語：フェニューレ）を用いて行われる。髄液の調査については、後者が腰椎、後頭下又は心室の穿刺により得られる。
【００３１】
“生体試料”という用語は、分析調査のために指定されたほ乳類の成分を意味する。ここでは、体の排泄物、体液又は組織試料である。試料を構成する成分は上述したほ乳類の成分と同様に試料採取の時点でまだほ乳類に存在しているほ乳類の生体成分を含む。
【００３２】
“体の排泄物”又は“排泄物”という用語は、尿、便、唾液、乳、涙及び汗の腺の分泌液と理解されるべきである。
【００３３】
“体液”という用語は、血液、血清及び髄液のようなほ乳類の生体の細胞外液と理解されるべきである。
【００３４】
“ほ乳類”という用語は、この分類の動物に加えて人も同様と理解されるべきである。
【００３５】
好ましくは、ほ乳類から採取され又はほ乳類により排泄された試料は、体の排泄物、体液又は組織試料である。
【００３６】
“組織試料”という用語は、生きているほ乳類の生体に直接手術により得られた全く同じに分化した細胞の組織体、及びこれらの細胞の細胞間物質と理解されるべきである。毛髪試料及び皮膚のはがれ落ちた部分の試料もこの用語の意味に含まれると理解されるべきである。
【００３７】
試料及び検出されるべき少なくとも１つのマーカ物質のタイプに依存して、それぞれの試料は分析方法の前に調整されるべきである。調整ステップは、例えば尿のような液体試料中の固形分、非溶解性物質の分離のための遠心分離、例えば便のような固体試料の可溶化又は懸濁、セントリコン（Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎｓ）を用いるイオン交換クロマトグラフィによる濃縮、硫酸アンモニウムのような適切な薬剤での沈殿による分析方法に要求されるｐＨ値の調整、例えば元の無傷組織からの成分を調査可能とするための超音波処理による又は振動を用いる細胞粉砕器によるような試料の均質化処理、例えば界面活性剤のような試料を溶解することによる物質の分離及びその他の当業者に知られた調整ステップを含む。
【００３８】
多くの酵素的、免疫学的、質量スペクトル及び電気泳動の検出方法は、これらの方法の組み合わせと同様に、試料中の少なくとも１つのマーカ物質の存在又は不存在の決定に有効である。好ましくは、検出は、ＧＣ／ＭＳ若しくはＨＰＬＣ／ＭＳの組み合わせ法により、又は、ＨＰＬＣ若しくはＧＣにより行われる。これらの方法は、特に、液体試料又は調整により液体に変更された試料の非常に時間効率のよい調査を可能にする。同時に、これらの検出方法は高度の自動化を可能にし、それゆえ複数の試料を短時間で、対照物質の質量スペクトル分析の分画パターンが既にコンピュータ評価ユニットに存在する場合にはクロマトグラムだけで分析することができ、少なくとも１つのマーカ物質の実際の検出も非常に単純化される。
【００３９】
適用した分析方法の評価結果として元々投与した少なくとも１つのマーカ物質が調査した試料中に存在することが決定されるときに、これはこの試料の被検者に対する明白な決定を示す。この要件が満たされるときに、すなわち試料が調査された被検者から発したときに、この試料又は、選択的に、第２の試料の実際の調査が分析物について行われる。
【００４０】
“分析物”という用語は、試料中の存在について又は、場合により、濃度の情報が試料提供者の過去、予想される又は現在の状態についての結果を示す少なくとも１つの化学物質と理解されるべきである。一例として、被検者の腎尿細管による尿からのブドウ糖の再吸収の不正確な機能（糖尿）−不完全のため−についての結論は、例えば、通常はグルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）又はヘキソキナーゼにより酵素的に決定される尿試料中のブドウ糖濃度のような分析物の濃度の情報に基づいて可能とされる。分析物は更に麻酔剤、医薬、以前指定された物質の代謝物質であり、試料中の検出は患者の行動又は治療についての情報をもたらす。
【００４１】
本発明による方法の人の医学における利用に加えて、獣医学の分野及び農業においても複数の応用が存在する。この方法は家畜に飼料を与える（マスト）農業の飼料添加物の使用についての規制に密着した監視に有効に用いることができる。
【００４２】
例えば飼料を与えた豚から得られた試料を成長ホルモン若しくは抗生物質又はこれらの代謝産物の存在について調査するときに、本発明による方法の利用は飼料を与えた豚の群れの所有者による調査されるべき試料の不正な変更の問題を回避することができる。
【００４３】
ここで、特にそれらのマーカ物質は動物に長い時間−理想的な場合には飼料を与える（マスティング）全期間−残留するという点で利点がある。更に、例えば体の排泄物中に検出可能な量がまだ連続して存在している。このため、それらのマーカ物質は時間−放出薬剤として動物に投与され、その効能により例えば腸管の粘液膜を通して時間−遅れの連続的な再吸収が起こり、それゆえ少なくとも１つのマーカ物質が長い時間、例えば動物の糞便のような体の排泄物中に検出可能である点で利点がある。特に適切な試料は少なくとも１つのマーカ物質についての調査並びに少なくとも１つの分析物の検出又は濃度決定の両方を行うことのできる試料である。
【００４４】
本発明のもう一つの目的はほ乳類の試料識別の上述した方法を行うためのキットであり、本発明によるキットは錠剤容器のような容器内に入れたマーカ物質及び、場合により、ほ乳類に少なくとも１つのマーカ物質を投与するための手段を含む。
【００４５】
このキットがマーカ物質又は複数のマーカ物質の検出のための少なくとも１つの対照物質も含むようにすれば特に好都合である。
【００４６】
本発明によるキットは好ましくは、マーカ物質の経口投与のため、これらのマーカ物質をそれぞれ水可溶性で発泡性の錠剤の形態で含む。選択的に、これらの発泡性の錠剤は複数のマーカ物質の混合物としてマーカ物質を予め含むこともできる。それぞれの物質のコードは錠剤容器のラベルから得ることができる。
【００４７】
キットはマーカが投与されるべき人々の集団と関連してマーカ物質の濃度を変えて発泡性の錠剤を構成することができ、それによりこれらのマーカ物質は例えば子供たち及び成人者に対して被検者におけるマーカ物質の濃度が薬学的副作用を引き起こす濃度に達することなく適用され得る。
【００４８】
キットに含まれる錠剤容器がコンピュータ読み取り可能なコードを付与されていれば特に好都合である。メタドン患者の尿試料のマーキングについてのキットは好ましくは錠剤、カプセル、又は、投与されるべきメタドンの量及びマーカ物質の混合物が共に有効である同様の応用形態を含む。
【００４９】
本発明によるキットの更に好都合な実施形態は複数の対照物質を含み、これによりマーカ物質は、例えば尿試料の調査のように試料のクロマトグラフ分析で容易に識別される。
【００５０】
例えば、メタドンで治療された患者の尿試料の調査において、本発明によるキットにはアンプル容器も含まれており、アンプル容器は選択されたクロマトグラフの方法に応じて適切な輸送手段で可溶化されたマーカ物質の混合物を含み、この混合物は該当するメタドン錠剤に存在する混合物と全く一致する。
【００５１】
同じＧＣカラムで引き続き行うことで、ＧＣ分析におけるマーカ物質のクロマトグラフのピークのため、調査された尿試料がメタドンで治療された患者から発したものかを非常に速やかに確実に決定することができる。
【実施例】
【００５２】
（実施例１）
本発明の方法の更に典型的な説明について、調査されるべき試料のマーキングを行う実施形態を以下に示す。
【００５３】
本実施形態は調査されるべき尿試料のマーキング及びそれに続く調査に関する。被検者はマーカ物質として１ｇのポリエチレングリコール６００が溶解された１００−３００ｍｌの飲用の液体を受け取る。果汁、水、及びその他の人に風味のよい液体が飲用の液体として用いられている。
【００５４】
ポリエチレングリコール６００の代わりに、単分散分画又は単分散分画の混合物も用いられる。ここで、研究室は物質のコードを定める。そのようなコードは下表１に示すように５つの単分散ポリエチレングリコール分画に付与される。ここで、“０”は不存在を表し、“１”は存在を表す。
【００５５】
【表１】
2004535554.tif 000003
【００５６】
物質Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥはポリエチレングリコール分画に関連し、分子量は下表２に示す通りである。
【００５７】
【表２】
2004535554.tif 000004
【００５８】
経口摂取の後被検者は排尿前に少なくとも３０分間最大４時間待機した。被検者は待機時間に飲料又は固形食の飲食が認められた。被検者は待機時間中監視されなかった。被検者による尿試料の提出は監視なく行われた。
【００５９】
試料容器は添付のコンピュータ読み取り可能な付け札にも含まれるジョブ番号をコードしたバーコードラベルで特定された。添付の付け札には被検者名、要求される調査及びマーカ物質の配合剤又は物質のコードが記されている。送付者は、研究室のコンピュータのマスタデータにジョブ番号により記憶される。試料は添付の付け札と共に研究室に移された。添付の付け札はカード読み取り機でコンピュータに入力された。このようにしてジョブが記録された。ここで、物質配合剤又は物質のコードもコンピュータに入力された。
【００６０】
ポリエチレングリコールについての分析のために、尿を遠心分離し、上澄み液の１００μｌをヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ１００−（Ｃ１８）、３μｍ（４．６×１２５ｍｍ）に流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ（メタノール／水  ５／９５）で供給し、ＲＩ検出器での検出によりポリエチレングリコールについて調査した。クロマトグラフィのピークは対照のクロマトグラフィに基づいた保持時間（リテンションタイム）によりポリエチレングリコールとして特定した。
【００６１】
このように、用いた異なるポリエチレングリコール分画の物質コードを経て調査された各尿試料はそれぞれの被検者に明白に決定された。被検者は引き続き分析物、すなわちヘロイン又はその誘導体のように検出されるべき麻酔剤について調査された。
【００６２】
体液をマーキングするための砂糖はポリエチレングリコール分画について述べたのと同様にして用いられる。これらは尿又はその他の体液から酵素の検出反応を経て決定される。これに要求される分析的な検出方法は従来技術に開示されている（Methods of Enzymic Analysis, ed. Bergmeyer, H.U. VCH Verlagsgesellschaft
mbH, Weinheim 1986（１９８６年にベルクメイヤ、ハ．ウ．により編集され、ヴァインハイムのファウツェハ、フェルラークスゲゼルシャフト社により発行された「酵素分析の方法」））。
【００６３】
（実施例２）
前分析の患者の調整のために、薬物中毒の患者はポリエチレングリコール４００（“マーカＡ”）、６００（“マーカＢ”）又は４００と６００との混合剤（“マーカＣ”）１ｍｌを含む１００ｍｌの果汁が与えられた。飲用する間患者を監視し尿を排泄する前に少なくとも３０分間待機させた。その時間後患者に監視なく排尿を認めた。尿のチューブ容器はラベルされて直接分析場所に移された。
【００６４】
分析前に、試料は以下のように調整した：１０ｍｌの尿を１０５００×ｇで１０分間遠心分離した。
【００６５】
ポリエチレングリコール分析のために、クロマトグラフをカラム切り替えモードに環境温度で無勾配に準備した。ＲＩ検出器が無勾配移動層に限定するため、浄化用及び分析用ポンプの溶離液は４４％メタノール及び５６％水で構成される同一のものとした。遠心分離した尿の上澄み液１００μｌをヌクレオシル１００  Ｃ１８、５μｍで満たされた（６０×４．６ｍｍ）プレカラムに自動的に注入した。浄化用ポンプにより０．４ｍｌ／ｍｉｎの流量及び３６ｂａｒの圧力で送液された溶離液で、ＰＥＧ分画が固定層で遅れている間に基質の不純物を廃液に排出した。１２０秒後プレカラムを６方バルブにより分析用ポンプの溶離液の流れに切り替え、分析物を分離するために流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ及び圧力９６ｂａｒでヌクレオシル１００  Ｃ８  ５μｍの分析用カラムに逆流置換（ｂａｃｋｆｌｕｓｈ）した。分析時間は１８分間かかった。尿のクロマトグラフの溶離パターンの現象学的特徴付けは、４０°Ｃに合わせたＲＩ−検出により行った。得られたパターンにより、図１〜図３に示すようにマーカを“マーカＡ”、“マーカＢ”又は“マーカＣ”と診断した。
【００６６】
本実施形態では以下の材料及び装置を用いた：ドイツのダルムシュタットのメルク社から平均分子量４００又は６００のＰＨ  Ｅｕｒ品質のポリエチレングリコール；バーケル社からＨＰＬＣグレードのメタノール及びアセトニトリル；ミリポア  システムズのＥｌｉｘ３及びＭｉｌｌｉＱ  グラディエントＡ１０により脱イオン化及び精製した水、ドイツのバート  ホーネフのシャムベックＳＦＤ社からイナートシル（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ）Ｃ８−３  ５μｍ、（２５０×４．６）、及びヌクレオシル１００  Ｃ１８  ５μｍ（５０×４．６ｍｍ）のＨＰＬＣカラム。ＨＰＬＣ装置：１００μｌの注入環（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｌｏｏｐ）付きの試料注入器Ｓ  ５２００、プレカラム浄化用ポンプＳ  ２１００、一体化された脱ガス装置、６方のモータ切り替えバルブＰｒｏＬＡＢ、カラムオーブンＳＦＤ  １２５−６００、偏向タイプの屈折指数検出器、インラインフィルタエレメントＰＡＴＴＭ、ＰＥＥＫ  ３μｍのインラインフィルタはドイツのバート  ホーネフのシャムベックＳＦＤ社から入手した。分析用ポンプＭ４８０、脱ガスモジュールｄｅｇａｓｙｓ  ＤＧ１３１０及びウィンドウズ（登録商標）ＮＴ４．０用データ取得システムＣｈｒｏｍｅｌｅｏｎ６．１１はジンコテックから購入した。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】実施形態のマーカＡの溶離パターンを示すグラフである。
【図２】実施形態のマーカＢの溶離パターンを示すグラフである。
【図３】実施形態のマーカＣの溶離パターンを示すグラフである。
【図１】
2004535554.tif 000005
【図２】
2004535554.tif 000006
【図３】
2004535554.tif 000007
【国際公開パンフレット】
2004535554.tif 000008
2004535554.tif 000009
2004535554.tif 000010
2004535554.tif 000011
2004535554.tif 000012
2004535554.tif 000013
2004535554.tif 000014
2004535554.tif 000015
2004535554.tif 000016
2004535554.tif 000017
2004535554.tif 000018
2004535554.tif 000019
2004535554.tif 000020
2004535554.tif 000021
2004535554.tif 000022
2004535554.tif 000023
2004535554.tif 000024
2004535554.tif 000025
2004535554.tif 000026
2004535554.tif 000027
2004535554.tif 000028
2004535554.tif 000029
2004535554.tif 000030
2004535554.tif 000031
2004535554.tif 000032
2004535554.tif 000033
2004535554.tif 000034
2004535554.tif 000035
【手続補正書】
【提出日】平成15年6月13日(2003.6.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ほ乳類からの生体試料の少なくとも１成分についての調査方法であって、
（ａ）少なくとも２つのマーカ物質の配合剤をほ乳類に経口で投与し、
（ｂ）前記少なくとも２つのマーカ物質の配合剤が試料採取の部位に達する十分な時間待機し、
（ｃ）前記ほ乳類から生体試料を採取し、
（ｄ）前記少なくとも２つのマーカ物質の配合剤又はこれらの誘導体が前記生体試料中に検出可能なときに、前記少なくとも２つのマーカ物質の配合剤若しくはこれらの誘導体の存在及び／又は量について前記生体試料を調査し、
（ｅ）分析物について前記生体試料を調査する、
ステップを含み、
前記ほ乳類からの前記生体試料が尿であり前記尿の前記ほ乳類からの採取を回収容器中の尿の回収により行い、前記少なくとも２つのマーカ物質をイソプレノイド、脂質、糖類、多価アルコール、ポリエチレングリコール又はこれらの誘導体から選択することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記少なくとも２つのマーカ物質の配合剤が少なくとも３つ、好ましくは５つのマーカ物質を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アラビノース、エリトルロース、ミオ−イノシトール、シス−イノシトール、マンニトール、ソルボース、ラムノース、ソルビトール、キシロース及びキシルロースが糖類として選択されることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項４】
異なる分子量の少なくとも２つのポリエチレングリコールをマーカ物質として用いることを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記マーカ物質又は複数のマーカ物質をＧＣ、ＧＣ／ＭＳ、ＨＰＬＣ又はＨＰＬＣ／ＭＳにより検出することを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
メタドンで治療した患者からの尿試料を麻酔剤について調査する方法であって、
（ａ）異なる分子量の２ｎ−１のポリエチレングリコールの配合剤をメタドンで治療した患者に経口で投与し、ここでｎは整数で０より大きく、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、特に好ましくは５であり、
（ｂ）少なくとも３０分間最大４時間まで待機し、
（ｃ）前記患者の排泄された尿から尿試料を採取し、
（ｄ）前記投与したポリエチレングリコールの存在について前記尿試料を調査し、場合により、
（ｅ）麻酔剤について前記尿試料の調査をする、
ステップを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記請求項のいずれかに記載の方法を行うためのキットにおいて、該キットは、容器内に、イソプレノイド、脂質、糖類、多価アルコール、ポリエチレングリコール又はこれらの誘導体から選択される前記少なくとも２つのマーカ物質の、少なくとも２つ、好ましくは３つ、特に好ましくは５つのマーカ物質の配合剤を含むことを特徴とするキット。
【請求項８】
前記キットが異なる分子量の２ｎ−１のポリエチレングリコールの配合剤を１つ以上の容器内に含み、前記ｎが整数で０より大きく、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、特に好ましくは５であることを特徴とする請求項７に記載のキット。
【請求項９】
前記キットが前記少なくとも１つのマーカ物質を投与する手段を更に含むことを特徴とする請求項７又は請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記キットがほ乳類から採取された試料中の前記少なくとも２つのマーカ物質の検出のための手段を更に含むことを特徴とする請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記キットが前記少なくとも２つのマーカ物質の検出のための対照物質を更に含むことを特徴とする請求項１０に記載のキット。
【国際調査報告】
2004535554.tif 000036
2004535554.tif 000037
2004535554.tif 000038
2004535554.tif 000039