(57)【要約】抗ウイルス活性、抗腫瘍活性、および殺菌力を有するがムラミダーゼ活性を持たない、最小９アミノ酸配列を含むリゾチームのフラグメントを提供する。また、本発明は、このフラグメントを有効成分として用いたＨＩＶ感染を処置するためまたは腫瘍成長を阻害するための方法およびこのフラグメントを含む薬学的組成物にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウイルス活性および殺菌活性を有するがムラミダーゼ活性を欠く、配列番号８のアミノ酸配列を含むリゾチームのフラグメント。
【請求項２】
９〜５０アミノ酸残基の配列からなる、請求項１記載のフラグメント。
【請求項３】
９〜１８アミノ酸残基の配列からなる、請求項１記載のフラグメント。
【請求項４】
配列番号８を含む配列が、ヒトリゾチームに由来するアミノ酸配列である、請求項３記載のフラグメント。
【請求項５】
配列が配列番号１および配列番号８からなる群より選択される、請求項３記載のフラグメント。
【請求項６】
配列番号８のアミノ酸配列からなる、請求項１記載のフラグメント。
【請求項７】
配列番号８のすぐ周囲の領域において天然ヒトリゾチームのα−ヘリックス構造を保っている配列番号８のアミノ酸配列をフランキングするアミノ酸配列を更に含む、請求項１記載のフラグメント。
【請求項８】
天然哺乳動物リゾチームの変異体であって、配列番号８のアミノ酸配列をフランキングし、１〜５個のアミノ酸置換または欠失を有するフランキングアミノ酸配列を更に含む、請求項１記載のフラグメント。
【請求項９】
請求項１のフラグメント、および薬学的に許容され得る希釈剤、賦形剤、担体または補助剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
処置を必要とする対象に請求項１記載のフラグメントの有効量を投与することを含む、ウイルスもしくは細菌感染を処置するための方法。
【請求項１１】
処置を必要とする対象が、ウイルスに感染するものである、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
ウイルス感染が、ＨＩＶ感染である、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
処置を必要とする対象に請求項１記載のフラグメントの有効量を投与することを含む、腫瘍成長の阻害方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
政府のライセンス権
本出願で行った実験は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓにより一部援助を受けている（助成金番号ＲＯＩ　ＡＩ−３１３４３）。米国政府は、本発明においてロイヤリティ支払済ライセンスを所有し、限られた情況において、上記助成金の条件に準じて妥当な条件に基づいて、第３者にライセンスを付与するよう特許権者に要求する権利を有する。
【０００２】
（発明の属する技術分野）
本発明は、抗ウイルス性および抗腫瘍性のペプチドならびにポリペプチドに関する。
【０００３】
（従来の技術）
母から胎児へのＨＩＶ１型（ＨＩＶ−１）感染は、胎盤内でのヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）の分泌量が多い妊娠期間の最初の３ヶ月の間は滅多に起こらない（Ｄｅ Ｒｏｓｓｉら、１９９２； Ｋｒｉｖｉｎｅら、１９９５）。エイズ（ＡＩＤＳ）患者（Ｇｉｌｌら、１９９６）およびＨＩＶ−１トランスジェニックマウス（Ｄｅら、１９９７）において、ＨＩＶ−１ウイルス（Ｂｏｕｒｉｎｂａｒｉａｒら、１９９５）およびエイズ関連カポジ肉腫（Ｌｕｎａｒｄｉ−Ｉｓｋａｎｄａｒら、１９９５）に対して、ｈＣＧのβサブユニット（ｈＣＧβ）は活性を持つが、α−サブユニットは活性を持たないことが分かっている。これらの研究は、異なる原料物質について報告された異なる効力を有する市販のヘテロ調製物を用いて行っている。ｈＣＧβ調製物において見られるカポジ肉腫に対する活性が、ｈＣＧβ自体に起因するのか他のタンパク質に起因するのか、ということについては議論がある（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９７； ＤｅＭａｒｃｈｉら、１９９７； Ｈｏｐｐら、１９９７； Ｆｌａｍａｎｄら、１９９８）。近年、本発明者らは、リゾチームがｈＣＧのβコア調製物の抗ウイルス（抗−ＨＩＶ−１）活性および抗−ＨＩＶ８活性に貢献するという彼等の発見について報告している。
【０００４】
リゾチームは、自然に広く存在する酵素のファミリーである。鶏の卵白リゾチームは、この酵素ファミリーのよく知られた代表であり、鳥類や他の多くの動物（例えば哺乳動物、爬虫類および無脊椎動物等）において見られる関連酵素は、ニワトリ型（Ｃ−型または通常型）リゾチームと呼ばれる。リゾチームは、１９６０年代初期に配列決定されており、完全なＸ線結晶学分析が行われた最初の酵素である。全てのリゾチームは殺菌力を有し、これらは全て、ペプチドグリカンのＮ−アセチルグルコサミンのＣ−４とＮ−アセチルムラミン酸のＣ−１との間のβグルコシド結合（ｂａｎｄ）を切断するムラミダーゼ活性を有する。参考文献Ｌｙｓｏｚｙｍｅ： Ｍｏｄｅｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｅｄ． Ｐ． Ｊｏｌｌｅｓ， Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ Ｖｅｒｌａｇ， Ｂａｓｅｌ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ， １９９６は、このファミリーの酵素の概説を提供している。この文献の１０〜１１頁目に記載されている図１は、種々の生物に由来するリゾチームのアミノ酸配列のアラインメントを提供する。ヒトリゾチーム中の、ムラミダーゼ活性の活性部位は、Ｇｌｕ３５残基およびＡｓｐ５２残基の周りに形成された裂け目（ｃｌｅｆｔ）の中にある。
【０００５】
本明細書に引用されているいかなる文献も、このような文献が関連する先行技術であることを認めるものでもなければ、本出願の特許請求の範囲のいかなる請求項の特許性に関係するものとみなされるべきものでもない。これらの文献の内容または日付についてのあらゆる記載は、出願時に本願出願人が入手し得た情報に基づいており、このような記載の正確性について承認するものではない。
【０００６】
（発明の要約）
本発明は、本発明者らにより、リゾチームの抗ウイルス活性および抗腫瘍活性の全てを維持するために必要な最小９アミノ酸配列（配列番号８）であることが発見されたものを含むリゾチームのフラグメントを提供する。更に、リゾチームのこのフラグメントは、ムラミダーゼ活性を持たない。
【０００７】
また本発明は、本発明のリゾチームのフラグメントおよび薬学的に許容され得る希釈剤、賦形剤、担体、または補助剤を含む、薬学的組成物も提供する。
【０００８】
本発明により更に提供されるのは、処置を必要とする対象に本発明のリゾチームのフラグメントを投与することにより、ＨＩＶ感染などのウイルス感染または細菌感染を処置するための方法、ならびに腫瘍成長を阻害するための方法である。
【０００９】
（発明の詳細な説明）
以上、本発明者らは、全長リゾチームの抗ウイルス活性を全て維持するのに必要な、ヒトリゾチームの第１０７番残基〜第１１５番残基に対応する配列番号８で表される小さな９アミノ酸残基フラグメントである、ヒトリゾチームの最小フラグメントについて詳細に描写している。驚いたことにこの小さな９アミノ酸フラグメントは、全長ヒトリゾチームが持つ抗腫瘍活性および殺菌力を保持している。
【００１０】
本発明に従って、リゾチームの抗ウイルス活性、抗腫瘍活性および殺菌力を有するがムラミダーゼ活性を持たない、リゾチームのフラグメントが提供される。リゾチームのこのフラグメントは、配列番号８で表される９アミノ酸残基を含み、好ましくは９〜５０アミノ酸残基、より好ましくは９〜３０アミノ酸残基、および最も好ましくは９〜１８アミノ酸残基からなる。リゾチームのフラグメントが９アミノ酸残基からなる場合、このフラグメントは、配列番号８のアミノ酸配列を有する。本発明のリゾチームのフラグメントの第２の態様は、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなる。
【００１１】
配列番号８の９残基配列の片側または両側にフランキングアミノ酸配列がある場合、このようなフランキング配列は、天然ヒトリゾチームの第１０７番残基〜第１１５番残基のすぐ外側を囲む領域の中にαヘリックス構造を保持することが好ましい。
【００１２】
また本発明には、ヒトリゾチーム等の天然の哺乳動物リゾチームのフラグメントの変異体であって、配列番号８のアミノ酸配列のフランキング配列中に１〜５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加が存在する変異体も包含される。これらのフランキング配列中のアミノ酸置換は、限定する訳ではないが、好ましくは当業者がよく理解しているような保存的置換である。このような変異体は全て、配列番号８のアミノ酸配列を含み、そして全長天然ヒトリゾチームの抗ウイルス活性、抗腫瘍活性および殺菌力を保持する。
【００１３】
また本発明は、本発明のリゾチームのフラグメントの化学的誘導体および塩であって、リゾチームの抗ウイルス活性、抗腫瘍活性および殺菌力を保持するものも包含する。「化学的誘導体」は、通常はリゾチームのアミノ酸配列の一部ではない追加的な化学成分を含む。アミノ酸配列の共有結合による修飾も、本発明の範囲内に含まれる。このような修飾は、フラグメントの標的アミノ酸残基を、選択された側鎖または末端残基と反応することができる有機誘導体化試薬と反応させることによって、リゾチームのフラグメント中に導入することができる。
【００１４】
最も一般的なシステイニル残基は、クロロ酢酸やクロロアセトアミド等のα−ハロアセテート（および対応するアミン）と反応して、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を生成する。またシステイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミダゾイル）プロピオン酸、リン酸クロロアセチル、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル−２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリ安息香酸塩、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によっても誘導体化される。
【００１５】
ジエチルピロカルボン酸塩はヒスチジル側鎖に対して比較的特異的であるので、ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０でこの試薬と反応させることによって誘導体化される。臭化パラブロモフェナシルも有用である（反応は好ましくはｐＨ６．０で０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中で行われる）。
【００１６】
リジニル（ｌｙｓｉｎｙｌ）およびアミノ末端残基を、無水コハク酸または他の無水カルボン酸と反応させる。これらの試薬を用いた誘導体化は、リジニル残基の電荷を逆転させる効果を有する。α−アミノ酸含有残基を誘導体化させるのに適した他の試薬としては、メチルピコリンイミデート等のイミドエステル、リン酸ピリドキサル、ピリドキサル、水素化ホウ素塩化物、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素（Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｉｏｓｕｒｅａ）、２，４−ペンタンジオン、およびトランスアミナーゼにより触媒されるグリオキシル酸との反応が挙げられる。
【００１７】
アルギニル残基は、１種または数種の通常試薬（特にフェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、およびニンヒドリン）との反応により修飾される。グアニジン官能基のｐＫａが高いため、アルギニン残基を誘導体化する際は、アルカリ条件下で反応を行う必要がある。さらにこれらの試薬は、リシンの中の基、およびアルギニンのεアミノ基と反応することができる。
【００１８】
チロシル残基の特異的修飾自体はさかんに研究されており、特に興味深いのは、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によりチロシル残基の中にスペクトル標識を導入するものである。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミダゾールおよびテトラニトロメタンを用いて、それぞれＯ−アセチルチロシル種およびｅ−ニトロ誘導体を形成する。
【００１９】
１−シクロヘキシル−３−［２−モルホリニル−（４−エチル）］カルボジイミドや１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド等のカルボジイミド（Ｒ′Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ′）との反応により、カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）を選択的に修飾する。さらに、アンモニウムイオンとの反応によりアスパルチル残基およびグルタミル残基をアスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換する。
【００２０】
グルタミニル残基およびアスパラギニル残基はしばしば脱アミド化されて、それぞれグルタミル残基およびアスパルチル残基となる。または、これらの残基は、弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も、本発明の範囲内に含まれる。
【００２１】
二官能試薬を用いた誘導体化は、リゾチームのフラグメントを非水溶性支持体マトリックスまたは他の高分子担体に架橋させるのに有用である。一般的に用いられる架橋剤としては、例えば１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（例えば４−アジドサリチル酸とのエステル）、ホモ二官能イミドエステル［例えば、（３，３′−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオン酸塩）等のジスクシンイミジルエステル）を含む］、およびビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタン等の二官能マレイミドが挙げられる。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデート等の誘導体化試薬は、光の存在下で架橋を形成することができる光回復可能な中間体を生成する。または、例えば臭化シアン活性化炭水化物等の反応性の非水溶性マトリックス、ならびに米国特許第３，９６９，２８７号、第３，６９１，０１６号、第４，１９５，１２８号、第４，２４７，６４２号、４，２２９，５３７号、および第４，３３０，４４０号に記載された反応性物質等が、タンパク質の固定化に使用される。
【００２２】
他の修飾としては、プロリンおよびリシンの水酸化、セリル残基またはトレオニル残基の水酸基のリン酸化、リシン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， １９８３）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに場合により、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【００２３】
このように誘導体化された成分は、可溶度、吸収性、生物学的半減期等を向上させ得る。または、これらの成分は、上記フラグメント等の望ましくない副作用をなくすかまたは減ずることができる。このような効果を媒介することができる成分は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ． （１９８０）に開示されている。
【００２４】
本発明の他の側面は、本発明のリゾチームのフラグメントの抗ウイルス特性、抗腫瘍特性、および殺菌特性の用途を作ることである。リゾチームのフラグメントは、ＨＩＶ感染等のウイルス感染または細菌感染を処置するために処置を必要とする対象に投与することができる。あるいは、このようなフラグメントは、腫瘍成長を阻害するために投与することができる。
【００２５】
本発明のリゾチームのフラグメントは、その意図する目的を達成する任意の手段により投与することができる。例えば、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、脳内、鼻腔内、経口、経皮、または口腔内経路等を含む（ただしこれらに限定されない）多くの異なる非経口経路から投与を行うことができる。非経口投与は、ボーラス注射であっても、時間をかけて徐々に灌流させるものであってもよい。
【００２６】
投与される用量は、受容者の年齢、性別、健康状態、および体重、併用療法を行っている場合はその種類、処置頻度、ならびに所望の効果の性質によって異なることを理解されたい。各処置に必要な総投薬量は、複数回の投与により、または一回の投与で投与される。「有効量」とは、ウイルスもしくは細菌感染を阻害または減少させることができる、あるいは腫瘍成長を阻害することができる、リゾチームのフラグメントの濃度を意味する。このような濃度は、当業者によって常套手段により決定することができる。また当業者であれば、投与されるフラグメントの安定性によって用量が異なり得ることも分かるであろう。安定性が比較的低いフラグメントは、複数回投与することが必要となる場合がある。
【００２７】
経口投与用調製物としては、滅菌した水性もしくは非水性の溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられ、これらは当技術分野で公知である希釈剤、賦形剤、または補助剤を含んでいてもよい。錠剤およびカプセル等の薬学的組成物を、常套法に従って調製することもできる。
【００２８】
本発明のリゾチームのフラグメントを含む薬学的組成物は、意図した目的を達成するのに効果的な量のフラグメントが含まれている全ての組成物を含む。さらに、薬学的組成物は、薬学的に用いることができる調製物へと有効成分を処理し易くする賦形剤および補助剤を含む適当な薬学的に許容され得る担体を含み得る。適当な薬学的に許容され得るビヒクルは、当技術分野において周知であり、例えばＧｅｎｎａｒｏ， Ａｌｆｏｎｓｏ， Ｅｄ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ １９９０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ（この分野において標準的な参考テキスト）に記載されている。薬学的に許容され得るビヒクルは、投与方法、ならびにリゾチームのフラグメントの可溶度および安定性に応じて常套法により選択することができる。例えば、静脈内投与用製剤としては滅菌水溶液（緩衝液、希釈剤、および他の適当な添加剤を含んでいても良い）が挙げられる。
【００２９】
非経口投与に適した製剤としては、水溶性形態の有効成分（例えば水溶性塩）の水溶液が挙げられる。さらに、適当な注射用油性懸濁液等の活性化合物の懸濁液を投与してもよい。適当な親油性溶剤またはビヒクルとしては、脂肪油（例えばゴマ油等）または合成脂肪酸エステル（例えばオレイン酸エチルやトリグリセリド等）が挙げられる。懸濁液の粘性を高める物質を含み得る注射用水系懸濁液としては、例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランが挙げられる。場合により、懸濁液は安定化剤も含み得る。
【００３０】
これまで本発明について全体的に説明してきたが、本発明は、以下の実施例を参照すれば、より分かり易いであろう。実施例は例として記載するのであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３１】
実施例
ヒトリゾチームのクロストリパイン消化
ヒトリゾチーム（２ｍｇ）を、トリス緩衝液４００μｌ中のクロストリパイン（１０ユニット、シグマ社）でｐＨ７．６、３７℃にて２４時間処理した。ＰｒｏＲＰＣカラム上での逆相クロマトグラフィー（Ｈｒ５／１０）により消化物を解析した。全部で１０種のペプチドフラグメントを同定した。これらの画分を、Ｌｅｅ−Ｈｕａｎｇら、（１９９９）に記載されているように、ＨＩＶ−１に感染したＡＣＨ２　Ｔリンパ球中におけるｐ２４の産生によって、抗−ＨＩＶ活性を分析した。大きな抗−ＨＩＶ活性がピーク７の中に見られた。ピーク６は、ピーク７中に存在する抗−ＨＩＶ活性の約１０〜１５％を含んでおり、ピーク８は、微量の抗−ＨＩＶ活性しか含んでいなかった。ピーク８〜１０は、微量の未消化物質を表す。
【００３２】
ピーク７画分をプールし、アセトニトリル勾配溶出を用いたＰｒｏＲＰＣ（Ｈｒ５／５）カラム上での逆相クロマトグラフィーにより再精製した。大きなピークが得られた。抗−ＨＩＶ活性は、３０〜３６％アセトニトリルで溶出されたこの大きなピーク中に見られた。この領域は、１８アミノ酸（配列番号１）からなり、これは、ヒトリゾチームの第９８番残基〜第１１５番残基に対応する。これをＨＬ１８とする。ＨＬ１８の抗−ＨＩＶ　ＥＣ５０（５０％阻害濃度）は５８ｎＭであり、無処置のリゾチームの抗−ＨＩＶ　ＥＣ５０は５５ｎＭである。このことは、これらがほぼ同等であり、ほぼ同じ大きさの範囲内であることを示している（表１）。これは、リゾチームからの抗−ＨＩＶペプチドの初の同定および単離である。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
リゾチームフラグメントの分子モデリング
ＨＬ１８中の抗−ＨＩＶ活性に特異的なアミノ酸の役割についての見識を得るために、分子モデリングを行った。抗−ＨＩＶ活性にとっての電荷および疎水性の相対的重要性を検証するために、単一アミノ酸置換を行った。トリプトファン１０９または１１２を疎水性の低いチロシンで置換すると、抗−ＨＩＶ活性が完全に失われた。第１０７位、１１３位、または１１５位の正電荷のアルギニンをアスパラギンまたはリシンで置換すると、抗ウイルス活性が低下した（表１）。これらの結果は、疎水性アミノ酸であるトリプトファンおよび正電荷のアルギニン残基がいずれもＨＬ１８の抗−ＨＩＶ活性にとって必須であることを示している。これらの残基はペプチドＨＬ１８のＣ末端側半分の中に位置している。抗−ＨＩＶ活性に関与するＨＬ１８の正確な配列を画定するために、２つのペプチドフラグメントを合成し、抗−ＨＩＶ活性についてテストした。ペプチドＨＬ１８−Ｎ９は、ＨＬ１８のＮ末端９アミノ酸に対応する。これは、配列番号７のアミノ酸配列からなる。ペプチドＨＬ９（ＨＬ１８−Ｃ９）は、配列番号８のアミノ酸配列からなり、ＨＬ１８のＣ末端側半分を表す（Ｒ１０７〜Ｒ１１５）。ＨＬＮ９は抗−ＨＩＶ活性を示さないが、ＨＬ９は、ＨＬ１８および無傷のリゾチームのそれと匹敵する約５５ｎＭのＥＣ５０を有する完全な抗−ＨＩＶ活性を示した。ＨＬ１８について先に記載したのと同じアミノ酸置換をＨＬ９において行ったところ、抗−ＨＩＶ活性はほぼ同等であることが分かった（表２）。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
表３は、ＨＬ９の抗−ＨＩＶ活性は、広範囲のＨＩＶ−１（一次単離体、実験株、およびＥＣ５０値が５５〜６８ｎＭである耐性株を含む）に対して強力である。表４は、リゾチームフラグメントの生物活性を表しており、ここでは、このアッセイの用量範囲では毒性は見られないこと、ＨＬ１８およびＨＬ９は、カポジ肉腫を有するエイズ患者のＨＨＶ８感染細胞の増殖を阻害するが、ムラミダーゼ活性を持たないことが分かる。
【００３７】
【表３】
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【００３８】
これで本発明について全て記載したので、当業者であれば、本発明が同等のパラメータ、濃度、および条件の広い範囲内で、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、また過度の実験を行うことなく、実施することができるということが分かるであろう。
【００３９】
本発明は、その特定の態様に関して記載してきたが、本発明は更に変更を行うことができることを理解されたい。本出願は、本発明の原則に概ね追随する本発明のあらゆるバリエーション、用途、または適応形態を網羅するものとし、本発明が属する分野において知られているまたは慣習的に実施し得る範囲内であって、およびに上記に記載し特許請求の範囲にも記載した必須の特徴に当てはまるようなこれらの派生物を含むものとする。
【００４０】
本明細書に引用された全ての参考文献（雑誌の記事および抄録、公開されたまたは対応する米国もしくは外国特許出願、発行された米国もしくは外国特許、あるいは他の参考文献を含む）は、参照として本明細書に全て組み入れられる（引用文献に提示された全てのデータ、表、図、およびテキストを含む）。さらに、本明細書に引用される参考文献の中に引用された参考文献の全ての内容も、参照として全て組み入れられる。
【００４１】
既知の方法の工程、従来方法の工程、既知の方法、または従来方法を参考にするということは、本発明の側面、説明、または態様が、関連技術において開示、教示、または示唆されているということを認めるものではない。
【００４２】
特定の態様についての上記説明は、本発明の普遍的性質を十分に明らかにするものであるため、当技術分野の技術範囲内の知識（本明細書に引用された参考文献の内容を含む）を応用すれば、他者が、過度の実験を行うことなく、また本発明の普遍的概念から逸脱することなく、このような特定の態様を様々な用途に応用するために簡単に変更および／または脚色することができるであろう。したがって、このような脚色および変更は、本明細書に提示された教示およびガイダンスに基づいて、開示された態様の同等物の意味および範囲内にあるものとする。本明細書に用いられる専門用語および学術用語は、記載目的のためであって限定目的のためではないことを理解されたい。従って、本明細書の専門用語および学術用語は、本明細書に提示された教示およびガイダンスに照らし合わせ、当業者の知識を組み合せて、当業者により解釈されるものとする。
【００４３】
【表４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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